PT95302A - Processo para a preparacao de derivados de {n-(gama-glutamil)-glicil}-alanina e de composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents

Description

A invenção refere-se a um composto de formula X *1 —COM—(jíH—COORg (çh25, I *2 *3 COM—CH—CONH—CH( CH^)—GOOR^

CH—CK ch2 *4 ÇH—01 coor4

I na qual é alquilo ou trifluormetilo;

Rg» 1^ e R^, independentemente uns dos outros, são hidrogénio ou um grupo de protecção de carboxij e R^ significa hidrogénio ou alanilo, opcionalmente protegido no seu agrupamento amino, com a condição de que, quando Rg* significam simultaneamente hidrogénio, então R^ é E3 e R4 hidrogénio, sob a forma livre ou, quando apropriado, sob a forma de sal.

Os átomos de carbono marcados com um asterisco m na fórmula I e o átomo de carbono do grupo alanilo como subs tituinte Rç estão substituídos assimetrieamente. Rodem portanto possuir a configuração R ou S»

Por conveniência, estes centros de assimetria são numerados de 1 a 4 na fórmula X depois de cada asterisco, 0 átomo de carbono alfa no alanilo com um substituinte R^ é a partir daqui designado como *5. Ã invenção compreende um composto de fórmula X tanto na forma racémica como numa forma opticamente pura* Os compostos preferidos são os compostos sob a forma ©ptieament€ pura, jkI apresenta de preferência a configuração R, *2 apre-

ração R. *5 de preferência apresenta-se na configuração S.

Como se torna evidente na fórmula I a dupla ligação tem a configuração trans (E)· de preferência é alquilo.

Rg» R^ e R^ de preferência são grupos de protecção de carboxi. Rç de preferência é alanilo opcionalmente protegido como se definiu acima, pref erencial^nente, alanilo não protegido. O grupo alquilo possui preferivelmente entre 1 e 15 átomos de carbono, mais preferivelmente entre 4 e 12, especialmente entre 5 e 11, e partieularmente entre 6 e 11 átomos de carbono. Re preferência, o alquilo é de cadeia linear.

Um grupo de protecção de carboxi é preferivelmente benzilo ou alquilo com 1 a 5 átomos de carbono, de preferência, com 1 a 4 átomos de carbono, espeeialmente benzilo.

Um grupo de protecção de amino I de preferência um grupo de bidroliticamente eliminável tal como formilo ou, espeeialmente, t-butiloxicarbonilo *

Um subgrupo dé compostos de fórmula I é constituído pelos compostos de fórmula Ia, como abaixo se definem, isto é compostos de fórmula I em que é hidrogénio, especialmen te, aqueles em que Rg, R^ e R^ são hidrogénio* 0 subgrupo de compostos de fórmula I em que é como acima se define e Rg a Rtj são hidrogénio é aqui definido como os compostos Ip.

Um subgrupo preferido de compostos de fórmula I ê formado pelos compostos de fórmula I em que R^ é alquilo de 5 a 11 átomos de carbono, sao um grupo R25 R3 e R^, independentemente uns dos outros, de protecção de carboxi e

é como acima se definia sol» a fórmula I.

Um outro subgrupo de compostos de fórmula I.ó constituído pelos compostos de fórmula Is sfêl

B, 8—CONH—CH—COOR«S ( 0H«) 2'2 %3 cora—CH—COM—CH( 0¾ )—COOR. s CH==CH(E) I *4

Is s

COOR s '4 na qual s R^ e alquilo com 4 a 12 átomos de carbono,

RgS é hidrogénio, alquilo com 1 a 4 átomos de carbono ou benzilo, R^s e R^s são hidrogénio ou alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, e

Is-8 é hidrogénio ou alanilo opeionalmente protegido no seu agrupamento amino por t-butiloxicarbonilo*

Rum subgrupo, RgS é hidrogénio, metilo ou benzilo.

Um composto de fórmula I pode estar sob a forma livre ou sob a forma de sal quando apropriado* Por exemplo, quando pelo menos um dos símbolos Rg, R^ e R^ é hidrogénio, o composto pode apresentar-se sob a forma de ácido carboxí-lico livre ou sob a forma aniónica* por exemplo, sob a forma de um sal de sódio e quando R^ é alanilo não protegido, este pode apresentar-se sob a forma de base livre ou sob a forma de um sal de adição de ácido, por exemplo, sob a forma de um cloridrato. Um composto de fórmula I sob a forma de ácido livre ou base livre pode ser transformado, quando apropriado,

num composto correspondente sob a forma de sal de adição de ácido ou sob a forma aniónica de acordo com a maneira de proceder convencional e vice-versa. Um composto de formula I pode ser obtido por um processo que compreende a) para a preparação de um composto de fórmula Ia

*1 —COM——C00R2 (ch2)2 I *2 *3 com—ch—com—ch( ch3 )—coor3 GH=s=kCH (E) I *4

Ia

GH2CH—OH

na qual R^, Rg, R3 e R^ são como acima se definiu, fazer-se reagir um composto de fórmula II *1 ^—COM—OH—-COORg ’ (ÇHj)® I *2 *3 COM—íjH—COM—CH( CH3 )—COOR3r CH0—CHeCHo

II R^ I como acima se definiu e Rg* .e R3f, independentemente um do outro, são grupos de pro· tecção de carboxi, com um composto de fórmula III — COOR^*

OHO

III

na qual R^* é um grupo de proteeção de earboxi, e, quando apropriado» fazerese a eliminação, em uma ou mais fases, dos grupos de proteeção de earboxi a partir do composto resultante de fórmula Ia* *1 R. I 2^2 *2 *3 COHH—CH—GOIH—CH( CS3 )—COOR3 * GH=GH (1)1 *4 CH2CH—OHV*

Ia* na qual Rp Rg1» %’ e R^f e&° como acima se definiu; ou b) para a preparação de um composto de fórmula Ib xl R1—COM—|H—COORg* (gh2}2 I £ * *2 *3 COM—CH—COM—CH( GH^ )—GOOR3 r CH=s=CH (E) | *4

Ib GELvGH—ORcr !<í na qual

Rp Rg#, y e R^* são como acima se definiu e R,-» é alanilo, opcionalmeate protegido no seu agrupamento amino, fazer-se reagir um composto de fórmula Ia1 como se definiu acima

com um composto de fórmula I? HOOG — CH(CH3) — IHRg I? na qual Rg é um grupo de proteeção de amino, e, quando apropriado, eliminar-se o grupo de protecção de amino do composto resultante de fórmula Tb* —OOIH—CH—000¾ *

(çh2)2 I *2

Hf3 GGHH—CH-—COUH—CH( GH^ )—COC®3r

Tb* GBssssGH (E)| *4 OSgCH—015tt

R-j_, R2S R^1 e R^r são como acima se definiu e Rçjw é alanilo protegido no seu agrupamento amino, e recuperar-se o composto resultante de fórmula I sob a forma livre ou, quando apropriado, sob a forma de sal. 0 processo da invenção pode ser realizado de acordo com as técnicas conhecidas. & variante do processo a) é uma reacção perlcíclica (reacção En). % por exemplo, realizada.fazendo reagir um composto de fórmula II num dissolvente Inerte sob as condições reaccionais, por exemplo, um hidrocarboneto clorado tal como diclorometano, eom um éster de ácido glioxflico de fórmula III. Á temperatura pode variar dentro do intervalo compreendido entre 10°C a 25°C, sendo de preferência aproxima-damente igual à temperatura ambiente. Podem ser usados os ΐ

grupos de protecçãò de carboxi convencionais, por exemplo, benzido, me tilo, etilo ou bmtilo. São. obtidos compostos que possuem a dupla ligação com configuração trans (E). 1 fase de desproteeçao opcional subsequente é também realizada de forma convencional, por exemplo, por hidrólise com uma base tal como hidróxido de sódio. Ê realizada de preferência em uma ou mis fases sucessivas* A variante do processo b) I uma esterificação. É por exemplo realizada fazendo reagir um.composto de fórmula Iaf num dissolvente inerte sob as condições reaccionais, tais como um hidrocarboneto clorado, por exemplo, diclorometano, com uma alanina protegida. De preferência, a reacçao é realizada em presença de uma dlimida tal como diciçlo-hexil-carbodiimida. Podem ser usados grupos de protecção de amino convencionais, tal como t-butiloxicarbonilo. A fase de desproteeçao opcional subsequente é também levada a cabo de forma convencionai, por exemplo, por hidrólise com um ácido tal eomo o ácido trifluoraeétieo.

Como aoima se indicou, quando é hidrogénio, os compostos de fórmula I possuem pelo menos quatro centros de assimetria e, quando R^ é alanilo opcionalmente protegido, eles possuem pelo menos cineo.dos centros referidos. Quando as fases do processo da invenção são levadas a cabo, a configuração mantém-se inalterada, isto é, partindo de um composto com a configuração R ou, respecttvamente, com a configuração S num centro de assimetria, particular, obtém-se um produto com a mesma configuração nesse centro. Os compostos produzidos numa fase reaceional que tem como resultado a formação de um novo centro de assimetria, sao normalmente obtidos sob a forma duma mistura de compostos que possuem as configurações R e S nesse centro, isto é, uma mistura ra-cémica. Essas misturas podem ser fraceionadas da maneira con vencional nas diastereoisómeros individuais, por exemplo, - 10 - τ

por eromatografia.

Os materiais de partida podem ser obtidos àe forma convencional, por exemplo, para os compostos de fórmula II, de acordo com o seguinte esquema reaccional:

CM O tá I o o í I o o 1 V_/ o Cd H-í I-M V_' w CM tá O o— -o IO' 1 > 1 1 ϋ « § I ÍS5 I i 1 1 1 tó I Ρη em que Rg* e R^r são como acima se definiu; R* e R” são, cada um deles, um grupo de protecção, X é um grupo elimina-vel tal como halogéneo; è AI é alanina ou alanina protegida.

Assim, partindo do ácido ^-aminomalónico protegido de fórmula V, a á-alquilação, a. saponif icaçao parcial e a descarboxilação conduzem à formação da mistura racemica do éster de oí-glicina de fórmula VII, Este composto é saponifi cado, por exemplo, a 0°C com hidróxido de sódio II e acoplado com um derivado (R)- ou (S)-alanina ou -alanina apropriado. As misturas diastereoisoméricas resultantes são fraccio- \ ** nadas por meio de cromatografia, em que a configuração do agrupamento glicina I determinada por exemplo por hidrólise 1 enzimática, Os produtos estericamente homogéneos resultantes de fórmula VIII (RR, SR, RS e SS) reagem com o anidrido misto de fórmula IX, por exemplo, o anidrido misto do éster de henzilo do ácido I-(R^CO)-(R)-glutâmico e o éster de isobu-tilo ácido clorofórmio© para se obter os diastereoisómeros de fórmula II.

Tendo em conta que a sua preparação não é aqui es-pecificamente descrita, por exemplo nos Exemplos, um composto usado como material de partida é conhecido ou pode ser preparado da maneira convencional a partir de compostos conhecidos.

Os Exemplos que se seguem ilustram a invenção mas não a limitam. Todas as temperaturas estão expressas em °C. As abreviaturas têm os seguintes significados:

Ala BOC Bu ou butilo Bz DMSO Et Hex alanilo terc-butiloxicarbonilo n-butilo; · · benzilo; sulfóxido de dimetilo etilo; n-hexilo - 13 - Ί

Fe metilo , na não aplicável,

Phe fenilo; TJnd n-undecilo.

Quando um composto se encontra sob a forma opticamei. te pura num centro.de assimetria específico, isto é, quando possui a configuração R ou S nesse centro mas a configuração absoluta não é conhecida, é indicado pelo símbolo f,Z" ou ”Y". Quando a configuração num centro específico de assimetria I

I racémica é indicado pelo símbolo "RSW.

Exemplo 1: Éster de etllo de ll- /íT-Heptanoil-ÇR)- y-gluta- mil-(éster de gc-benzilo)7-(R)/2-(RS)-hÍdroxi-•pent-4-enoato de 5~butilo7~glicill-(S)-alanina fórmula I: R^ = Hex; .Bg = Bz; R^ = Et; - Bu, R^ = H; configuração: ad: R; *2: R, a6: S; *4: RS7 /Variante do Processo a/7 A uma solução de 1,17 g de éster de n-butilo de ácido glioxílieo (composto de fórmula III em que R^f é Bu) e 3,12 g de tetracloreto de estanho em 20 ml de cloreto de me-tileno absoluto a 20°C adiciona—se lentamente e gota a gota uma solução de 1,06 g de Ister de etilo de {F-/Ft-heptanoil-- (R)- íf-glutamil-(éster de or-benzllo/7-CR)-°í-alilglicil}-( S )--alanina (composto de fórmula II em que R^ = H®f; Rg* st Bz; R^’ = Et; configuração: *1: R; m2: R; *3: S) em 10 ml de cloreto de metileno absoluto. Irês horas depois e após o processamento da mistura de maneira convencional, efectua-se a cromatografía em gel de sílica (eluente: diclorometano/Iso-propanol/ciclo-hexano 3:2:7). É obtido o composto indicado em título (incolor, amorfo):

Espectro de ressonância magnética nuclear protóniea (DMSO): 8,4, 8,38 (2d, 1H, EH); 8,22 (d, 1H, EH, 6 Hz); 8,12 (d, 1H, EH, 7 Hz); 7,38 (s, 5H, CgH5); 5,β8 (m, 1H, defina); 5,5 (m, 1H, defina); 5,13 (s, 2H, OBz); 4,92 (bt, 1H, rt-H-Gly); 4,21 (quin, 1B, d-H-Ala, 6 Hz); 4.24 (m, 1H, oí-H-Gly); 4,05 (m, 4H, OEt e OBu); 1,27 (d, 3H, Et, 6 Hz); 1,18 (t, 3H, OEt); 0,88 (t, 3H, OBu); 0,85 (t, 3H, Kex). 0 composto de fórmula II usado como material de partida é obtido de forma análoga ao composto de fórmula II para o Exemplo 3 (ver nota na Tabela que se segue):

Espectro de ressonância magnética nuclear protóniea (BI5S0): 8,39 (d, 1H, EH, 6 Hz); 8,23 (d, 1H, EH, 6 Hz); 7,98 (d, !Ht EH, 7 Hz), 7,37 (s, 5H, Phe); 5,75 (m, 1H, olefina), 5,12 (s, 2H, OBz); 5,08 (m, 2H> olefina); 4,23 (quin, 1H, oí-H-Ala, 6 Hz); 4,25 (m, 1Η, <*-H-Glu); 4,36 (m, 1H, ot-H-Gly); 4,06 (q, 2H, OEt, 6 Hz); 1,28 (d, 3H, CHCH^); 1,17 (t, 3H» OEt); 0,84 (t, 3H, Hex).

Obtêm-se os seguintes compostos de fórmula (I) procedendo de acordo com a variante de processo a) de uma maneira análoga à do Exemplo 1? 15 - 1 § f 1 1 •Η 1 » *s F 1 o 03 1 fO Μ 1 ΓΠ Ρ4 1 H Φ 03 1 r -ρ cd I o ο ο 1 ro © η 1 H S 1 ©'F I o /*N /—·. ο ρί 1 ?© H H jH H J CP 1 © Pd Pd fyf 1¾ © 1 1 Sí § pj s 03 ο 1 íS!' fq Pd <© ο 1 •Η 1 <D 03 03 I ©Ή ! U «Η 1 O Ο Η 03 PS .cd cd J o Ρ* ο ! | βι ΙΑ I 1 © 03 cd cã cd X 1 1 Pd sd sd Pd sd 1 ω EQ co 03 ca X 1 I Pd Pí Pd Pd Pd m 1 1 1 X 1 1 1 ra Pd Pd Pd ca CM 1 1 1 X 1 m Pd ca 03 Pd Η 1 I 1 X 1 1 1 1 Pd Pd Pd Pd Pd ΙΑ I 1 1 Pd 1 1 1 Pd Pd Pd 1¾ Pd τΦ 1 1 2 í3 pi ps 2 Pd 1 1 m PP Pd Pd m ΓΟ 1 1 f 0) © © F Pd 1 1 1 S •Si <=« fS K 04 1 t 1 KJ N tst 03 N Pd r 1 1 pq Pd Pd Pd « rd ! f 1 K N «tí *© Pd 1 Φ © © ΰ Λ t-r* HH Pd Pd fc> í© O ♦ J H ‘ 1¾ 1 r\ arx yi-v *"N =**"v S I m eo m CO CO Φ * 1 CM co IA V0 Μ oi 1 1

tA Λ ή tA tsi H w 'd- CM ca H ©. H tn Λ «0 « ♦ P» •v Kf* /-N H © Já M tó •v d ·». r-l © »~3 Jxj •H H CÍ5 td Pd IA «F IA i. © hf* m M #* H 1 w ra © tf m V^r » «V /“N n «% IA H-» f-M 13¾ . 0-F ca H H W « C5 Γ0 0- J o o- tí h*i CM C0 V *v *© r K «V >_< O O cd « O pd H-t KH 04 Ή va íd A r^v. \D * H F S CA P3 Pd ta M ·« O o pd w ,«v S £3 ___r m, © m fd-; © •t Pd IA IA rO o ω VD 0Ά Pd Ή H IV «k- *v fd iH "3- 0 F Ό Pd V^r F 04 t w O H r^V CM IA 03 fc © «V cn p, «· Pd •V V0 tó o O fc vt ?d ittl © V0 •H •k •V Pd © *H P-*-f t~~4 © H 4·»» Φ 04 f—i <A O iTN H «d «V g O ** t, O pd 1¾ m Pd «fc K^S 1 • *> cd ta ts /-N Pd o td H m F Ή 04 H Mi m F «k Pd o '© M «© LA 1—i d J3 F n © V—' 3 «V « Pd /-s Pd ca ã IA 0- 1SÍ •r-t m 00 Hr4 HW Pi *k © ** A ©< -P •H V0 CA VD V—/ © O .1=3 íd ** «d **N> sd ro o H © O ,φ © n s © o u V—' © 04 *EÍ M O © © r4 w Í4 A F s © © © H A m © cd Pd Η

Exemplo 3 (MSO)s 5» 74 (td, 1H, olefina, 12 Hz, 7 Hz); 5,57 (dd, 1H, olefina, 12 Hz «1 ri ««V * A ✓-H ri rri ri n •k- «tí co ***· — -ri ÍS f-I-l S *k /"N CM Cá «V íxs 1 ro rH rri í=> ri" ,φ ri ri *d H ss *1 cô A *k H •V «w» t ts •V 1 n ri* A o • tA *Ν ri «t CM «d ÍS ÍS /—s Φ ri lf\ «d ·>-✓ i ÍS JÍV ro N «t H 4Λ <H ri CM «d *« •k £ 1¾ l-H Ι-4-l B /-N O 1 — v_-< w ri CS O s A rO w N t“z-t KM H H w ro «k H O -P vo H-s Kri *k 1 O n ÍS 1 VJ· «k #v ís tf »«k — A H H H •k K-> t-#-í A ra rii tA ri IA tri d 1 CM d v_^ ro Vk * '___ Lf\ CO »k i—! CTi - ri •k w\ Kr* KH *> f» ro <d cd n ri ri- ·% !*j*4 t-M «d H O H í*S CM ♦ .Λ A «d 1 .kk O VO -P O -P ω ri •ri- r—V H ÍS J—j w i-m «» '—* <w *k •k ts ri — CM 1 i-t A I Μ •V ri w ri- ÍS ϊ t\ <3V ·» O £ ri- ÍS 00 •H co «% ο σν *k σν • tv OO H vo ri K*. μ-* 0) t κ ι -P «k •k a a- A í> .A ET1 ro H #<^S. O ts ri- w o ÍXi s-w KM O a •ri- - Vjt ri O ri O H H cO d •>S«^ ·» «ri tk V«k CM 9*k O v-' .·» IA -P -Λ CS ÍS .•k /^V CM zx a CMr-x CM CM CM v/ i-r-í t—I J -ri- Kri d «d •k Φ -Τ Η-! ri ri* tri »k VO H ts ro tí «d ri- •H o © ri- A ri- «k ri 1 «V -ri o ri o o n. ri- m co fk. V a #k «H * Λ o D·! IA — *k a N-^· -P Φ rO ^-s o n ύ «k H #k '_- rri tA ri l-r-4 H-i « . n ri ÍS r~i O A Ari t—í •k rO 9 m S>5 ri ts r«k c- H •k CT> -ri· KrH KM CO ÍS N ri cri O rs 9S H A IA m «V o •V ÍS 1 iS •k. tn •k *v ts CM ri- -P JL KM KM O ri a ,Λ H H •k •k • -_< MD ÍS 1 PS oK •—y ri VO CD Z\ • A !S I tf •k o W •k fS cô <r-s ΓΟ ov — s t> ri ω O tr a •k H 3 Hrt K4 #k ri ri- J H Xe^Z' A cd CM ri ri A o ts **. «k COM •H •V «k ÍS H KO I cri a frí KM ts O ro «N ri- J H I>- CM ri «k φ l CM H ri CM CD tf A 1 ro ÍS ri ts «k r4 £ »k tA •k ÍS 1 00 N ·» •k O •P O <—v ·* ri 1 ♦k s o ts -P a O V-- N ÍS *n tf rH Φ *» <d V*- w «k ÍS H VD ft "<Γ vo ri ÀV ω ÍS to d CM A •k fâ •H σν VO ÍS ro r-( 'Μ ♦» s H ts ro «k H «A rO <H co CM ro — a ' *k •ri •k H ÍIJ ÍS n — H ψ% η ts Pt tA o«* ro ·« ri o H •ri- -ri- *v s N co Φ A ZN a ri íx! o S β Λ ÍS CM H tív D* 1 ik- cri O «•k. C«k CM «k O r-S •χζ CM *d 1 *k Z^k ri cr* tí\ k% -P N ts k> VD KM «V m ts ca ro ts n n •ri- V—' A Krt KH LTV O ω 1 ÍS ri © ts O irv Ir JS o co e% Ò ro o •K vo a«k* CM « H ri* «k 1 ro *$- *k vo •ri- ** n *s σν n *k ·* »d ♦k ·% /~k ri •k. 0) - *k «k rri • 9> Kjri «d «d ÍS ** m 4° H ri H-t t—- O H B ri * *v hri KM /N fH ·>—» CM Λ (S ·« Φ -ri ÍS ri- A tsl !S N co t tA o 1 K- ts ** cO LT\ *k ss Λ M l-M CM <3V CO ov LA íd tk fO a «k •k m CM ts vo 1 n n ts •k s A c^· V/ r4 LA v_y H vo PO P IS vo O O IA t> IA tri VD O *«

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CM - 18 -

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'ti *titá fcO ò H ©-p d •P ti tj0 ωa o r-I Pt 3 ©a a o HS © « o H Pt S Φ (¾ cáu cá Pi cá ti cá pi cá ti cá p

para o Exemplo 6 (C^OD/OgDg 3sl)j 5,8 (m, 1H, olefina); 5,1 (m, 2.H, oleflna); 5,11 (s,

A ctí rH <! N (TÍ ►M M-i 1 (A * CM *s * fr*—1 VA H n •t H σ* 1 rn f-i W sr O Td- * J-~r Φ ΓΟ s—^ t—V O !>s «t o H *C> 1 -w' -Cf J Pi W lt\ Í3 1 ΓΟ r «h •t. H w *% cO ,n H •h e •P HP I m o 1 CTi X μ ω It*{ n i\ CM o CM ·» **% O1 /“V #» v-✓ F a vy [— o O tn *» «* •'d- H*4 »*% rO « ** 9% N -P tg « W w in vo Wt CvJ fi M fX, Λ sv CM vo i-J

Exemplo T: I-/ÈP-Heptanoil-(R)-if-glutamil7-( R)-o(-/acido 2-(RS)-M.droxi-pent-4-enéico-5-il7-glicil --R-alanina formula I: R^ » Hex; .Rg, Ry R^» R^ =H; configuração: *1: R; *2: Rj *3: R? *4: RS? /Variante do processo a), operação d© despro-

Dissolvem-se 270 miligramas de éster de metilo de {l-/β *~heptanoil-(R)-^f-glutamil- (éster de oC-benzilo27~(R)~· /2-(RS)-hidroxi-pent-4-enoato de butil-5-i]J7-glioil}-(R) --alanina (composto do Exemplo 3) numa mistura de 10 mililitros de tetra-bidrofurano e 1>2 mililitros de laOH II e sa-ponifica-se a 0o durante 3 toras. Acidula-se a mistura reac-eional a pH 4>5 com H01 II e liofiliza-se. Cromatografa-se o resíduo em HP20 (RAICEL) usando um gradiente de água/acetona (até 15$ de acetona)* Depois de nova liofilização, obtênt -se o composto indicado em 'título*

Espectro de ressonância magnética nuclear protónica (ígO): 5,95 (m, 1I-I, olefina); 5,66 (âãi 1H, olefina, 12 Hz, β Hz); 4,18 (m, 3H> <*-H-Ala, oC-H-CJlu); 1,36, 1,38 (d, 3H; CHCHy 5 Hz); 0,85 (t, 3H, Hex).

Obtêm-se os seguintes compostos de_formula 1, de acordo com a variante de processo' a) (operação de desprotec-ção) procedendo de maneira análoga à que se descreveu no Exemplo 7: - 21 -

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Exemplo 13; Éster âe metilo -heptano 11-(R)-/-glutam.il- -(éster âe g-benzilo )7- (S) - c<-/2-(X)-(terc.-bu-tiloxicarbonil- (S )-alaniloxl)-pent-4-enoato de butil-5~il7~glieilV (R)-alanina e Éster de metilo âe {II-/1 ^heptanoil-(R)-fl-gluta-mil-féster de oÇ-benzÍlo)-(S)-o^/f-(T)-(tero--butlloxicarbonll-( S)-alaniloxi )-pent-4-enoato âe butil-5-ilT-glicil)-f R)-alanina fórmula I; R^ ='Hex, R2 = Bz; R^ ~ Me; ss Bu, Rj- = BOC- (S) -alanilo;

Configuração: *1: R; *2: S; *3: R; *4: Xe re s pe c ti vamente X; *5: S7 /fariante âe processo bJ7 A uma solução de 0,99 g âe éster âe metilo âe |H--/pff-heptanoil-(R)-)f-glutamil-(éster âe cK-benziloJfT-í S)-°<-* -^-(RS)-éster âe butilo âe ácido h.iàroxipen.t-4-enóico-5--ilT-glicil}-(R)-alanina (composto do Exemplo 4), 0,28 g âe BOC-(S)-alanina e 15 mg âe 4-âimetilamirtopiridina (base de Steglich) em 15 ml âe âiclorometano absoluto adiciona-se a 0o em várias porções 0,31 g âe diciclo-hexilearboâiimida* Depois âe quinze horas a 15°, a ureia precipitada é removida por filtração, a solução é concentrada e os diastereoisómeros são fraccionados por meio âe cromatografia sobre gel âe sílica (eluente: ciclo-hexano/isopropanol/âiclorometano 10:1:3). Obtêm-se os compostos indicados em títulos: (x)-âiastereoisomero: ** +28,5° (c = 1 em metanol):

Ponto de fusão 121-122°;

Espectro de ressonância magnética nuclear protónica (CD30D/C6D6 3:1): 5,9 (m, 1H, oíefina); 5,7 (m, 1H, olefina); 5,1 (s, 2H, Bz); 5,02 (d, 1H, «-H-G-ly, 6,25 Hz); 5,07 (t, 1H, CHgCHOCO, 5 Hz); 4,52 (dd, 1H, tf-H-Glu, 8,75 Hz, 5 Hz); 4,45

(q, 1Η, c{-H-Ala, 6,25 Hz); 4,32 (m, 1H, <x~H-Ala); 4,08 (t, 2H, OOOBu); 3,60 (s, 3H, OMe); 1,37 (d,6H, 2 x Me-Ala, 6.25 Hz); 0,87 (t, 3H, Hex); (Y)-diastereoisómero ~ 4-16,5° (c = 1 em metanol);

Espectro de ressonância magnética nuclear protónica (CD^OB/CgBg 3:1): 5,9 (m, 1H, olefina); 5,7 (m, 1H, olefina) 5,16 (s, 2H, Bz); 4,94 (d, 1H, q-H-Gly, 6,25 Hz); 5,08 (t, 1H, -CH2CH0C0, 5Hz); 4,42 (m, 2H, <x-H-Ala, oi-H-Glu); 4,2 (q, 1Η, <x-H-Ala, 6,25 Hz); 4,12 (t, 2H, COOBu); 3,69 (s, 3H, OMe); 1,4 (d, 3H, Me-Ala, 6,25 Hz); 1,38 (d, 3H, Me-Ala, 6.25 Hz); 0,95 (t, 3H, OBu); 0,90 (t, 3H, Hex).

Os seguintes compostos de fórmula (I) são obtidos de acordo com a variante de processo b) procedendo de maneira análoga à do Exemplo 13*

A Ctf 1¾ s\ tí H ✓*N A «Ά •M cis « A ctf LA í d1 A -P m H -P CA Φ te a <} te h H 1 1_í ,1 o O O % ω H *. H ro ctf o H •P ra te te A H Ή I a CM ,1 a ftA A A $4 1 <s d H-I H-i HMr M- Φ 1 A te •P H H A A •p m 1 c- m A o M ;*> O (tf 1 o te O «V A « ctf o ή H A d te O 1 '—^ /“S tA CM h«i H-í «V •d *d o ctf a ! H H H H A «Φ te V-> O te OM t Pí te te Λ O1 ro H I Γ* i 8 § m s_/ «* cr» H (tf Φ σ' r h te te (tf a A VD o A H *0 I l tí 3 Λ P n A N <4 o A in LA te 1 ra o te KJ íH te o-H 1 Φ te •V σ\ «A - A LA f •d a H .* A H /*N κ-\ X (tf M 1 O IA a o A w te<M 1 A &3 t*-«V H I-rM P o d A 1 A C- te ✓""V o t—1 IP-Í 1 te Ό tí Λ tA te e H 1 i-t o O r-j o 1 IA I H te KJ CM te Á * 1 K) KS KJ A H 1, J*S*{ Pi A Ρι 1 1 a CÍ5 A os & O X· 'W 1 JL N H IA te L/ 1 te te <« O A A 'φ a*& 1 , . KS t- 1 I t- IA t£! í-rt HM m Φ 3tE 1 M }>i te a tA te a H r*M A LA 1 )V c- •Φ o 1 A A ctf A Ά ?ctf 1 4 n te rs H K a te A A in 03 I ω S N £ O K ω te oro ctf * KJ KJ tó i. •M H te ctf —<d d v-' •H CD <H O in Φ ·> tA rl IA « Ο -Φ 5 •H Cvl 3* O o H m LT\ te

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I

Exemplo 14: jSeter de metilo de ÍH-Z^-bentanoil-f R)-Y-glu- éster de oc-benzllo )7-(S )-oç- /istés? de butilo do ácido 2-(Y)-(S)-alanlloxi)pent-4-enóieo-5-il7-gllci l) -R)-aIanina fórmula I: R^ = Hex, Rg = Bz, R^ = 5!fe» R4 = Bu; R5 = (S)-AIa configuração; *1: R; sk2: S; &3: Rj *4: T; *5: S? ^ariante do processo b), operação de desprotec- ** "**1 çaoy

Adicionam-se 200 mg de éster de metilo de -heptanoil-(1)-^"-glutamil-(éster de o(-benzilo27~(S)-o^·βί-(Y)--(éster de butilo de ácido terc-butiloxicarbonil-(3)-alani-loxi)-pent-4-enoico-5~il7-glieil}-(R)-alanina (composto do Exemplo 13» diastereoisomero( Y) ) a 0°G em várias porções a 5 ml de ácido trifluoracltieo. Três minutos depois, evapora-se a mistura àsecura sob pressão reduzida, toma-se 0 resíduo em dielorometano e lava-se esta solução com uma solução de bicarbonato de sódio a 10$. Seca-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio e evapora-se novamente à secara; retoma-se o resíduo em dioxano /HC1 a 5$ e liofiliaa-se* Obtém-se.0 composto indicado em título (sob a forma de sal de adição de ácido clorídrico). /¾¾20 * -f-23>6° (c = 1 em metanol);

Ponto de fusão 85-87°;

Espectro de ressonância magnética nuclear proténica (CR^OR/OgRg 3:1): 5,83 (td, 1H> olefina, 7,5 Hz, 15 Hz); 5,7 (da, 1H, olefina, 5 Hz, 15 Hz); 5,14 (da, 1H, CHgCHOOO, 4 Hz, 7,5 Hz); 5,0 (d, 1H, (χ-Η-Gly, 6,25 Hz); 4,54 (dd, 1H, ot-H-01u, 5 Hz, 3,75 Hz); 4,4 (q, 1H,

<X-H-.41a, 6,25 Hz); 4,0? (t, 2H, OBu); 3,69 (q, 1H, oMÍ-Ala-IÍL,); 3,62 (s, 3H, OMe); 1,4» 1,34 (2 x d, ie-Ala, 6,25 Hz, 0,88, 0,90 (2 x t, 2 x 3H, Hex, OBu). OBtêm-se os seguintes compostos de fórmula I, de acordo com a variante âe processo fc), (operação de desprotec-ção) procedendo de maneira análoga à que se descreveu no Exen. pio 14*

ri t- 1 Ή ri* © 1 ri- «Ρ Ο ΓΟ Φ 1 Α ® «V C3 1 €0^ Η ΙΑ Α •Η i ΠγΙ Ο Õ3 -Ρ 1 1 + g k β> m 03 <=R η g «V VI 1 1« ES3 ΙΑ ri 1 Η R φ 1 ο Α

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Obtêm-se produtos Intermediários necessários, por exemplo, como se descreve abaixo para compostos representati vos. A) 2-Butiloxicarbonilafflino-2-alilmalonato de dietilo fórmula IIv E* == St, -R" = BOCj A seguir à formação de alcoolato a partir da dissolução de 1,8 g de sódio em 100 ml de etanol absoluto, adiciona-se gota a gota uma solução de 20,5 g de 2-tere-butilo-xlcarbonil-aminomalonato dé dietilo. Adieionam-se então 9 g •de brometo de alilo e aquece-se a mistura reaceional sob refluxo durante 4 boras. 0 brometo de sódio precipitado I separado por filtração e a solução 4 concentrada sob pressão reduzida e processada de acordo com a maneira de proceder convencional. Obtém-se o composto indicado em título sob a forma de produto bruto que pode ser usado sem posterior purificação. Cromatografa-se sobre gel de sílica (eluente he-xano/acetato de etilo 4:1) para caracterização:

Espectro de ressonância magnética nuclear proiónica (CECl^): 5,9 (m, 1H, HE). 5,65 (m, 1H, olefina); 5,13 (m, 2H, olefina); 4,25 (m, 4H, OEt); 3,04 (d, 2H, CH2=CHCH2, 7 Hz); 1,44 9H, (OH3)3C7, 1,26 (t, 6H, OEt)*. B) lUster de etilo de terc-butiloxicarbonil-(RS)-^-alil-glicina fórmula VII; R» = Et; R" - BOC, configuração em a*2: SS7 14» 5 g do composto indicado em título na fase anterior A) são tomados numa solução de 30 ml de etanol e 46 ml de hidróxido de sódio 1ΙΓ e mantidos a 20°C durante 16 horas* 0 etanol é então separado a partir da mistura reaceional sob pressão reduzida* a mistura é acidulada a plí 3,5 eom ácido clorídrico 11 e extraída com acetato de etilo. Depois do pro - 30 -

eessamento convencional, obtém-se um produto que é submetido a descarboxilação no seio de xileno (2 horas sob refluxo) sem posterior purificação» A mistura I concentrada até à secura sob pressão reduzida e filtrada através de uma curta coluna contendo gel de sílica (eluente: hexano/acetato de etilo 6:1). Obtém-se o composto indicado em título.

Espectro de ressonância magnética nuclear protónica (CEOl^): 5,65 (m, 1H defina), 5,12 (m, 3H, HH, defina); 4*35 (a, 1H, H)* 4,2 (q, 2H,.0Et); 2,53 (a, 2H, b~H), 1,45 /£, 9H, (OH3)3S7, 1,28 (t, 3Hi OEt). C) Éster de me tilo da (ter c-butoxicarbonil- (R)-c*-alilgli-cil)-(R)-alaáina e éster de metilo de ftero-butiloxlcarbonil-(s)-c{-alil^ll-cil)- (R)-alanlna fórmula VIII: R" = BOC; R3' = Me; configuração: *2: E e, respectivamente, S; *3: E7 Á toaa solução de 4,3 g de terc-butiloxiearbonil-~(RS)-oí-alilglicina /composto indicado no título da fase B) saponifiçado acima/, 2,75 g de éster de metilo de (E)-ala-nina e 2 g de !T-metilmorfolina em 100 ml de diclorometano adicionam-se, em várias porções, a 20 0 4*1 g de diciclo--hexilcarbodiimida. Vinte e quatro.horas depois a dicielo--hexll-ureia e separada por filtração, a solução s concentrada até à secura e o resíduo cromatografado em gel de sílica (eluente: hexano/acetato de etilo 5:1). Obtêm-se os dois compostos diastereoisoméricos indicados em título. R-Diastereoisómero: JjJ 20 s +17,4° (c « 1 em metanol); Espectro de ressonância magnética nuclear protónica (CBCl^): 6,72 (d, 1H, M, 7,5 Hz), -5,78 (m, III, olefina); 5,15 (m, 2H, olefina); 4,62 (quina, 1H, oí-E-Ala, 7,2 Hz); 4,2 (q, 1Η, «-E-Oly, 7,2 Hz), 3,8 (s, 3H, CMe); 2,55 (m, 2H, alilo; 1,5 β* 9H, (CH3)3ç7; 1,4 '(d, 3H, CfH3CH); β

31 - S-Biastereoisómero: £&.7·$^ ~ +13»9° (c = 1 em metanol); Espectro de ressonância magnética nuclear protónica: (CDOl^): 6,75 (d, 1H» M, 7,5 Hz), 5,75 (m, 1H, olefina); 5,18 (m, 3H» GH3CIí). 2H, olefina); 4,6 (quina, .Iff, oí-H-Ala, 7,5 Hz); 4,2 (q, 1H» ot-F-Gly, 7,2 Hz); 7,76 ,(s,' 3H, OMe); 2,52 (m, 2H, alilo); 1,45 /s, 9H, (CH,hc7; 1,4 (d, O*) Éster de etilo de tere-butiloxicarbonil-(R)~(X--alil!g;li-eil)~S)~alanina e éster de etilo de terc-butilcarbonil- (S )-o(-alilglicil )--(S)-alaaina fórmula VIU: !« = BOC; R3» = Et; configuração: mZi R e, respect ivamente, S; *3? S7 3s compostos indicados em título são obtidos de uma maneira análoga à descrita na alínea C) acima, usando éster de etilo de (S)-alanina em vez de éster de metilo de (R)~ -alanina: R-IJiastereoisómero: Γ°£Ι-^ ~ +12»Io (e - I em metanol); Espectro de ressonância magnética nuclear protónica (CBCl^): 6,78 (d, 1H, HE, 7,5 Hz); 5,78 (m, 1H; olefina), 5,15 (m, 2H, olefina); 4,57 (quina, 1H, c<-H-Ala, 6,25 Hz); 4,2 (q, 2H, OEt, 7,5 Hz), 4,2 (m, 1H, o/~H-£ly); 2,52 (m, 2H, alilo); 1,45 B> 9H, (CH3)3Ç7; 1,4 (d, 3H, GH3GH, 6,25 Hz); 1,26 (t, 3¾ OEt, 7,5 Hz); S-Biastereoisómero: fkj = +24,3° (c = 1 em metanol); Espectro de ressonância magnética nuclear protónica (CDC13): 6,8 (d, 1H» M; 7,5 Hz); 5,78 (m, 1H, olefina); 5,15 (m, 2E, olefina); 4,55 (quina, 11, oKH-Ala, 6,52 Hz), 4,2 (q, 2H, OEt, 7,5 Hz), 4,2 (m, 1H, ot-H-Sly)·; 2,5 (m, 2H, alilo); 1,45 9H, (CH3)3G7; 1,4 (d, 3H, 0E3CH, 6,25 Hz); 1,26 (t, 3H, OEt, 7,5 Hz)·

Os compostos de fórmula I sob a forma livre ou, quer do apropriado» sob a forma de sal farmaeeuticamente aceita—

vel, a partir daqui designados como nos compostos da invenção” na presente memória descritiva, possuem actividade farmacológica, estando eònsequentemente indicados para uso como fármacos.

Em particular, modulam a resistência antimicrobiana não especifica e possuem actividade antitumoral e antivlral como imunomoduladores e possuem ainda um grau de pirogenicidade particularmente reduzido.

As actividades podem, por exemplo, ser determinadas através dos processos de ensaio que se descrevem em seguida. 1. Pirogenicidade t) ensaio realisa-se de acordo com a farmacopeia Norte-Americana de 1985 (US3? I Ί) .a seguir à administração intravenosa da substância a ensaiar com várias concentrações em grupos de 3 coelhos. Uma substância é considerada como pirogénica quando a soma de temperatura corporal aumenta em 3 animais dentro de 3 boras depois da injecção I nitidamente maior do que cerca de 1,5°0. Não foi encontrada pirogenieidaâe no caso dos compostos de invenção até dosagens compreendidas no intervalo entre cerca de 500 Mg/kg e 1 mg/fcg de peso corporal* 2* Modulação de resistência antimicrobiana não especifica

Aumento de resistência não específica contra a septicemia microbiana em ratos neutropénieos 0 método de ensaio é essencialmente como se descreve na Patente Britâniea G-B 2 179 945 A e na Batente Alemã BE 37 30 905.

Os compostos da invenção exercem após a administração por via parentérica e/ou oral (uma vez por dia durante 3 dias) um aumento significativo (>80^) nas taxas de sobre-

- 33 — vivência de ratos uma dosagem compreendida no intervalo de entre cerca de 12,5 mg/kg e cerca de 50 mg Ag. 3* Actividade imunomoduladora

Indução dos factores de estimulação de colónias fogg) C método de ensaio é essencialmente o descrito na Patente Britânica sffl, 2 179 945 A e na Batente Alemã - 37 30 905. .Be acordo com este método de ensaio,.os compostos da invenção possuem um elevado efeito de indução de actividade de CSP após a administração de uma, dose única ou repetida por via parentérica e/ou oral em ratos com dosagens com presndidas entre 0,2 mg/kg a 50 mg/kg. 4. Actividade Antitumoral 4.1· Indução do faetor de necrose de tumores (Tlff) , A indução de Itlf é determinada em culturas de células de medula óssea de ratos. Células da medula óssea de ratos são cultivadas durante 8 a 10 dias em sacos de

Teflon^ num meio de proliferação ^®1SM H21 + 10$ de soro de feto de gado bovino + 5$ de soro de cavalo + 15$ de sobrena-dante de células I· 929 (= CS?) + 10 TT/ml de penicilina + 100 Mg/ml de_estreptomieina7. As células são então lavadas por centrifugação e diluídas ate 1 x 10^ células/ml no meio de indução (B.PII 1640 + 5$ de soro de fetos de gado bovino + + 10 U/ml de penicilina + 100 mg/ml de estreptomieina + 1$ de glutamina), distribuem-se alíquotas de 1 ml em 24 reentrâncias de placas Gostar e efectua-se a incubação durante 24 horas a 37°C com 5$ de COg com e sem ^-interferão (100 U/ml) de inurina recoiabinante (rm). As culturas de células são então lavadas duas vezes com o meio de indução isento de soro de feto de gado bovino e incubadas durante 4 boras — com as substâncias de ensaio diluídas no mesmo meio e com 34 - *

uma concentração compreendida entre 0*1 ug/ml e 100 .teg/n£L (intervalos de diluição 1:10). Os sobrenadantes são coleeta-dos e ou mantidos a -70°C ou investigados directamente relativamente à actividade de III /f. J. Sayers et* al., J. Immunol* 136 (1987) 2935-2940?* 4*2 Ensaio do faotor de necrose de tumores ffHP) 0 processo de ensaio é essencialmente o descrito na Patente Alemã PS 37 30 905*

Em cada ensaio, um padrão de TIE? (TM de murina re-combinante de Gensyme) é também usado, a uma concentração inicial de 1000 TT/rnl. Os resultados expressos em unidades internacionais de PIF humano referem-se a comparações com flf humano (ABI recombinante) com o número de código 86/659 do WHO International laboratory for Bíological Standards, Ilerdfordshire, EU 6 3QG, Grã-Bretanha* leste ensaio, os compostos da invenção com concentrações compreendidas no intervalo entre 0,1 /ug/ml a 10 yug/ml não revelaram indução de libertação de EIB-oí, a partir de ma-crófagos pré-aetivados (interferão-/), raas são induzidas pequenas quantidades (10 a 30 unidades/ml) em maerófagos pré--activados no caso de concentrações ^10 /ul/ml. Os compostos da invenção possuem çonsequentemente um potencial endotóxico desejavelmente baixo acoplado com a activação de maerófagos para respostas imunes* 4*3 Indução da toxicidade de maerófagos contra células Ae tumores (B 815) lum sistema em que se cultivam maerófagos de ratos aderentes elicitados juntamente com células de tumores, lipo-· polissaeãridos ou substâncias imunoestimulantes podem activai? os maerófagos, que então lisam as células tumorais ou inibem a sua proliferação,

Esta activação pode ser posteriormente I ι

aumentada pela adição de ^f-interferão. 0 número de células sobreviventes pode ser determinado pela medição da incorpo-ração de H-timidina 24 boras depois visto que só estas eé- „ "3 lulas sao capazes de incorporar H-timidina. lima comparação oom o controlo negativo e eom um controlo positivo de lipo-polissacáridos indica a actividade de lise ou citotóxiea de uma dada concentração da substância em ensaio em $.

Os compostos da invenção possuem actividade de lise superior a 80$ contra células de tumores no caso de uma concentração compreendida no intervalo entre 1 /ug/ml e 10 /ug/ml, em combinação eom 5 ou 10 unidades de rrn Jf-interferão. Este efeito ”in vitro” I indicativo de uma actividade anti-tumo-ral interessante· 4*4 odeio melanoma de rato Blóffl

Este método de ensaio I essencialmente como se refere na ííemória Descritiva da Patente Britânica 0B 2 179 945 A e da Patente Alemã DE 37 30 905.

As substâncias em ensaio são administradas sob a forma de solução em solução alcalina fisiológica por via pa-rentériea (i.p., i.v«, s*c.) ou por via oral. Para o ensaiada actividade profiláctica o tratamento.efe ctua-se repetida-aente nos dias -5 a -1 antes da inoculação do tumor» e para o ensaio da actividade terapêutica nos dias +3 a +15 sucessivamente com vários intervalos após a implantação do tumor*

Os compostos da invenção produzem reduções significativas na formação de metastases nos pulmões dos animais teste após a administração oral e após a administração pa-rentériea a uma dosagem compreendida no intervalo entre 5 * Actividade Anti-viral

Infeccão de llerpes no rato

0 processo de ensaio é essencialmente como se descreveu na Memória Descritiva da Patente Britânica 2 179 945 i e da Patente Alemã DE 37 30 905*

Os compostos da invenção melhoram claramente o decurso da doença, a sua duração e a taxa de sobrevivência a seguir à infecção experimental com ,ISYrl em comparação com controles não tratados após administração entre os dias 0 ou -1 e +6* β. Endotoxieidade 6*1 Actividade Proc- oagulant e (PCA)

Muito embora não se tenha detectado actividade en-dotóxica pelo ensaio do lisato de Dimulus-amibóeitos, investigo u-se a actividadeprocoagulante (POA) como um segundo indicador muito sensível para a endotoxieidade.e para as propriedades inibitórias dos compostos da invenção. 6*1*1 In vltro

Após a estimulação com lipopolissacáridos, as células, endoteliais humanas produzem PCA, medido como uma diminuição no tempo requerido para coagulação do plasma*

Os macrófagos, a seguir ao tratamento com lipopolissacáridos e ps leucócitos peritoneais (obtidos de coelhos) a seguir a reacção de Schwartzman generalizada têm também este efeito sobre o plasma recalcificado.

Hum ensaio a) especialmente elaborado para investigar o efeito sobre o PCA induzido por lipopolissacáridos, macrófagos peritoneais de ratos BgDgE^ estimulados com tio-gllcolatos são tratados durante a noite com lipopolissacáridos ou sozinhos ou em conjunto com a substância a ensaiar num meio DMSM isento de soro de feto de bovino.

Hum ensaio b), esses macrófagos de ratos são trata-

dos durante 24 horas com lipopolissaeáridos ou» respeetiva-mente, com a substância a ensaiar e depois da troca do meio, são estimulados durante a noite coai lipopolissaeáridos. 0 tempo de coagulação do plasma humano recalcificado de controlo a seguir à adição de uma suspensão de macro-fagos submetida à acção de ultrassons e repetidamente congel^ da é deta,;...ânado usando o método de Háckchen. A adição dos compostos da invenção redus o PCA desencadeado por polissacáridos para um nível inferior ao de controlo (aumento da duração da coagulação). 0 pré-tratamento com um composto da invenção origina também uma, redução da PCA. 6,1.2 In vivo 0 efeito é determinado em leucócitos peritoneais de ratos após pré-tratamento com a substância a ensaiar procedendo como se segues Ratos são tratados nos dias 1, 2 e 3 com lipopolissaeáridos ou, respectivamente, com a substância ensaiada administrada por via intraperitoneal. Io dia 3 todos os animais recebem adicionalmente 1,5 ml de tio-glicolato i.p. Io dia 6, recuperam-se os macrófagos intra-peritoneais, a amostra de cada animal ê levada a uma concentração igual a 1x10^ células/ml e estimulados durante 24 horas com BPS num meio de BMfSM isento de soro de feto de bovino. 0 PCA destas células é determinado como se descreveu acima. 0 pré-tratamento com LPS ou com os compostos da invenção originam uma redução significativa do PCA. Ohegou-se à mesma conclusão usando coelhos. 6.2 Indução do chocne por enclotoxina no rato 0 método de ensaio é. essencialmente como se descreve na Memória Descritiva da Patente Britânica 2 179 945 A e - 38 -

na Patente Alem DE 37 30 905*

Para o composto do Exemplo 1, observa-se uma DL^q igual a 12 mg/kg.

Os compostos da invenção são eonse quentemente indicados para uso na prevenção e no tratamento de_condições què requerem imunomodulação, por exemplo, a modulação da resistência antimierobiana não específica, e como agentes anti--tumorais e anti-virais.

Para estas indicações a dosagem apropriada varia, evidentemente, dependendo, por exemplo, do hospedeiro, do modo de administração e da natureza e gravidade da condição a ser tratada. Sb entanto, em geral, indica-se que se obtêm resultados satisfatórios sistemicamente com dosagens diárias compreendidas no intervalo entre 1,5 /ug/kg e 100 mg/kg de peso corporal do animal* Uma dosagem diária indicada está compreendida no intervalo entre 0,1 mg a cerca de 7»0 mg, convenientemente administrada, por exemplo, em doses divididas até quatro vezes por dia ou sob uma forma retardada*

Os compostos da invenção podem ser administrados por qualquer via convencional, em particular, por via paren-térica, por exemplo por via oral, por exemplo sob a forma de comprimidos ou de cápsulas, ou sob a forma de soluções infectáveis.

As composições farmaeêuticas que compreendem um composto da invenção em associação com, pelo menos, uma subs tância veicular ou diluente farmaceuticamente aceitável pode ser produzida da maneira convencional misturando-as com uma substância veicular ou diluente farmaceuticamente aceitável e são parte da presente invenção, formas de unidades de do- 9 sagem unitárias contêm, por exemplo, entre cerca de 0,025 mg e cerca de 35 mg da substância aetiva*

Os compostos preferidos no caso das indicações anteriores são os dos Exemplos 15 e 16, isto é, - 39 -

- éster de metilo de {ll-β»-heptanoil-(R)- ^-glutamil- fa--benzil-ester^-(3)-0(-7^-(¥)·*( (S)-alaniloxi)-pent-4-enoat0 de butil-5-ilT-glicll} -R)-alanÍna e - éster de metilo de {H-^*-heptanoil-(R)-íf-glutamil-(<*--benzil-ester)7“ (3 )-0(-72- (X)—((S )-alaniloxi )-pent-4~ -enoato de butil-5-il7-glieilf -(R)-alanina de preferência, sob a forma do respectivo eloridrato. A invenção também compreende os compostos da invenção, para uso como'fármaeos, espeeialmente, para uso na prevenção e tratamento de condições que requerem imunomodu-laçao, por exemplo, de resistência antimicrobiana não específica e como agentes anti-tumorais e anti-virais. A invenção compreende ainda um processo de tratamento de condições que requerem a imunomodulação, por exem a» plo, a modulação ia resistência antimicrobiana não específic e de condiçoes que requerem terapia anti—tumoral e antivi-ral, que compreende a administração de uma quantidade tera-peutieamente efectiva, de um composto da invenção a um pa ciente que necessita tal tratamento.

Claims (2)

— 40 ~ REIVIISI CAPÕES 1§. - Processo para a preparação de derivados de JÊ-(gama-glut amil)-glicilT-alanina de fórmula (I) *1 CS(c%)2 Rj—CORH—CI5—000S2 *2 *3 GOPH—CH—C0HH-—CH ( CH^ )—COOR^ OH=OH(i) I m CH2GH—0R5 (I) OOR, na qual R^ é alquilo ou trifluormetilo; R2» R3 e R^, independentes uns doa.outros» sao Hidrogénio ou um grupo de protecção de carboxi·, e significa Hidrogénio ou alanilo, opcionalmente protegido no seu agrupamento amino, com a condição de que, quanio 12» e R^ significam simultaneamente Hidrogénio, então S5 é Hidrogénio, sob a forma livre ou, quando isso for apropriado, sob a forma de sal, caracterlzado pelo facto de compreender a) para a preparação de um composto de fórmula (Ia) - 41 - *1 R-j^—CONH—(jH—-COOR2 a6 (oh2)2 \ á á *2 CGM—CH—COIH—CH( CH3 )-0001^ dl Ia (B)| *4 CHgíjSH—OH coor4 na qual R^ a têm as significações acima indicadas, a reac ção dum composto de fórmula (II) *1 —COM—CH—(0¾) p ip | *2 *3 COHH—|I—COIH—CH( CH3 )-0001^ 0H2—CH= zOEr (II) na qual R^ é como se definiu acima e R2r e.R^1 são, independentemente um do outro, um grupo de protecção de carboxi, com um com posto de fórmula III OHC - C00R4* (III) na qual R^* ê um grupo de protecção de carboxi, e, quando for conveniente» a eliminação realizada numa ou várias operações, dos grupos de protecção de carboxi do composto resultante de fórmula (la1) - 42 - - 42 - *1 —com—ch—cooRg ’ na qual R» Rg’» R^* e R^1 (GHp)2 j *2 *6 σΟΗΗ—CH—COM—CH( CH3 )—COOP^ * CHsískCH (B) I *4 CHgOH—OH são como se definiu acimaj ou b) para a preparação de um composto de fórmula (Ib) Rx—QOHH—CH—COORp' 5ffl -CH- *2 (CHg)g COM—CH—-COIE—CH( 0¾)— OOOR^f CHssbksCH (S) | *4 CHgCH—ORçf COOR^ * na qual %* %*» Sjf e são como se definiu acima mencionadas e Rç* significar alanilo opcionalmente protegido no seu agrupamento amino, a reacção de um composto de fórmula Ia* como se definiu acima com um composto 'de fórmula (IV) *5 HOOC - CH(CH3) - NHRg (IV na qual Rg é um grupo.de protecção de amino, e quando for apropriado, a eliminação do grupo de protecção de amino do composto resultante de fórmula (Ib1) 43 - * ϊ ϊ :
1. *1 Rj—COIH—CH—C00R2 r (0¾) 2'2
2. #2 COM—-CH—CONH—CH( CH. )—OOOR- A !H=CH (1)1 *4 v 'ch2ch—or5« ) COOR^’ na qual Rp RgS R^1 e Κφ* são como se definiu acima e Rçn significa alanilo protegido no seu agrupamento amino, e se recuperar o composto de fórmula I resultante, sob a forma livre ou, se for adequado, sob a forma de sal* 2~* - Processo de acordo com a reivindicação 1, ea-racterizado pelo facto de, na referida fórmula I, R^ a R^ significarem respectivamente Hex, Bz, Me, Bu e alanilo e a configuração nos átomos de carbono *1 a *5 ser, respectiva-mente, ou R, S, R, T e S, ou R, S, R, X e S, sob a forma livre ou, se for adequado, sob a forma de sal* 3®. - Processo para a preparação de composições farmacêuticas, caraeterizado pelo facto de compreender a operação de mistura de, pelo menos, um composto de fórmula (I) de acordo com asreivindicações 1 ou 2, sob a forma livre ou, se for adequado, sob a forma de sal farmaceutica-mente aceitável, com, pelo menos, um agente veicular ou di-luente farmaceuticamente aceitável. Lisboa, 13 de Setembro de 1990 0 Agente Oficial da Propriedade Industrial L Américo da Silva Carvalho Agente Ofioial de Propriedade Iftduoiria! R. Castilho, 201-3. E.-1000 USBOA Telefe. 65 13 39 - 65 46 13