PT95733A - Processo para a preparacao de composicoes farmaceuticas contendo um derivado de uma benzodiazepina ou de uma fenilpirrilcetona para administracao por via oral ou parenterica no tratamento de doencas retrovirais infecciosas - Google Patents

Description

F. HOFFMANN-LA ROCHE AG "PROCESSO PARA A PREPARAÇiOf.D! COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS CONTENDO UM DERIVADO DE UMA BENZCDI-AZEPINA OU DE UMA FENILPIRRILCE TO^A PARA ADMINISTRAÇÃO POR VIA ORAL OU PAREM-TERICA NO TRATAMENTO DE DOENÇAS RETROVIRAIS INFECCIOSAS" A presentk invenção baseia-se no facto de os compostos do grupo constituído por 7-cloro-!?-( 2-pirril)-3H-l,k-benzodiazepin-2(lH)-ona (daqui em diante referido como composto A), descrita na paten te de invenção norte-americana Ns 3 ko5 122, 2-glicinamido-í?-clorofenil-(2-pirril)-cetona (daqui em diante referida como composto B), descrita na patente de invenção norte-americana Ns 3 k07 211, assim como os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, são utilizáveis para o tratamento e para a profilaxia de doenças infeciciosas causadas por retrovirus, especialmente para aliviar os efeitos citopáticos destrutivosrdas.-.refcretireães:,,^p&rtàeularmente as causadas por retrovirus HIV, em especial HIV 1.

Os sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico podem ser sais de ácidos orgânicos, tais como o ácido lác^ tico , o ácido acético, o ácido málico ou o ácido para-tolue-no-sulfónico ou de ácidos minerais, tais como o ácido clorídrico ou o ácido sulfárico. A presente invenção refere-se à utilização dos compostos citados anteriormente e dos seus sais para o tratamento de doenças infeceiosas como a SIDA ou o ARC (complexo rela eionado com a SIDA ). Estas doenças são causadas por re-trovírus, particularmente HIV , em especial ©s.com postos anteriormente citados e os seus sais são paírticularmen te áteis para aliviar os efeitos citopáticos destrutivos das doenças retrovirais, mas podem também ser administrados aos doentes infectados por HIV assintomáticos . A presente invenção refere-se ainda a composições anti--virais sob a forma de doses unitárias, particularmente apropriadas para administração oral ou parenteral, destinadas a© tratamento das doenças citadas anteriormente e contendo uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico de um dos compostos citados antes ou dos seus sais e, eventualmente, uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico de um segun do composto anti-HIV, especialmente um agente inibidor da transcriptase inversa (agente anti-RT) , tal como ddS, AZT, ddl ou ddA. A presente invenção também se refere a embalagens comerciais que contêm como ingrediente farmacêutico activo um dos compostos A e B ou um dos seus sais, citados anterior mente e, eventualmente, um segundo composto anti-HIV, conjun-tamente com as instruções para a sua utilização. A presente invenção refere-se ainda a um método de tra tamento das doenças infecciosas citadas antes, causadas por re trovírus, que consiste em administrar um composto A ou B ou um seu sal aceitável em farmácia, numa dose diária determinada individualmente pel© médico assistente, particularmente numa quantidade anti-viral eficaz compreendida entre 0,1 e 10 mg/kg de peso do corpo e por dia repartidos em uma ou mais

doses, de preferência numa quantidade entre 1 e 3 mg/kg de peso do corpo administrada uma ou mais vezes por dia, especial mente quando o nível terapêutico sanguíneo alcançado está compreendido entre 0,0? e 10, de preferência entre 0,1 e 5 ‘jM·

Esta dose pode administrar-se em uma ou mais doses, em intervalos variáveis tais como ks 2, k-, 6, 8, 12 ou 2k horas.

Os compostos citados anteriormente exibem actividade anti-retrovirâl particularmente como inibidores da proteína TAT transactivadora (agentes anti-TAT), Quando se administra também um agente anti-ET, tal como o ddC, isto pode ser feito num intervalo compreendido entre 0,0? JfM e 1,0 ^M, particularmente entre 0,00? e 0,2? mg/kg de peso do corpo. 0 intervalo preliminar de dose para administração oral vai de 0,00í.\a 0,2? mg/kg, administrado em uma ou mais doses com intervalos de 2, *+, 6, 8) 12 horas, etc. "^ormalmente, administra-se uma quantidade de 0,01 mg/kg de massa corporal de ddC, de 8 em 8 horas. Quando em terapêutica associada, pode administrar-se o agente anti-ET simultaneamente cem o agente aintiíljCT ou as doses podem ser espaçadas. Os dois fármacos podem também associar-se numa composição; as doses de cada um podem ser inferiores às utilizadas quando aplicados como agentes individuais.

As composições anti-virais da presente invenção com-têm pelo menos um dos agentes anti-TAT citados anteriormente e, eventualmente, outros agentes terapêuticos, por exemplo um agente anti-ET, conjuntamente com um ©u mais veículos aceitáveis em farmácia. Estes veículos incluem os veículos conheci dos da técnica para a administração oral, rectal, nasal, t<5- pica, bucal, sublingual, vaginal ou parenteral (incluindo a via subcutânea, intramuscular, endovenosaye intradérmica). Exem pios de composições da presente invenção são as soluções do ingrediente activo em água, solução de cloreto de sódio ou sumo de laranja; cápsulas, por exemplo cápsulas de gelatina mole';/ carteiras ou comprimidos contendo cada um, uma quantidade prede terminada do ingrediente activo, por exemplo sob a forma de grã nulos; soluções ou suspensões num líquido aquoso ou sob a forma de uma emulsão líquida de õleo-em-água ou de ãgua-em-õleo.

Os comprimidos podem incluir um ou mais excipientes cons tituídos por lactose, celulose microcristalina, diõxido de silício coloidal, croscarmelose sõdica, estearato de magnésio, ácido esteárico, ou outros excipientes, agentes corantes e outros veículos farmacologicamente compatíveis. As composições apropriadas para administração tópica incluem as pastilhas que contêm o ingrediente activo num agente apaladante, normalmente a sacarose e a acácia ou a tragacanta; as pastilhas que contêm o ingrediente activo numa base inerte, tal como a gelatina e a gliceri na, ou a sacarose ea acácia; e elixires para a boca que contem o ingrediente activo num veículo líquido apropriado. As composições para administração rectal podem apresentar-se sob a forma de supositórios numa base apropriada contendo, por exemplo, manteiga de cacau ou salicilato. As composições apropriadas para administração vaginal podem .apresentar-se sob a forma de pessã-rios, tampões, cremes, geles, pastas, espumas ou fórmulas para pulverizar contendo , além do ingrediente activo, os veículos que são próprios para este tipo de composições.

As composições apropriadas para administração parenteral incluem soluções injectáveis aquosas ou não aquosas, isoténicas estéreis que podem conter agentes antioxidantes, agentes tampão, bacteriostáticos e solutos que tornam a composição isoténica com o sangue do recipiente a que se destina; e suspensões esté reis aquosas ou não aquosas que podem incluir agentes suspenso res e agentes espessantes. As composições podem apresentar-se sob a forma de dose unitária ou multidose em recipientes fecha dos, por exemplo em ampolas ou em frascos-ampola e podem conservar-se sob uma forma liofilizada que apenas requere a adição de um veículo líquido estéril, por exemplo água para injec; táteis, imediatamente antes do uso. As soluções injectáveis extemporâneas, assim como as suspensões podem preparar-se a partir de pés, grânulos ou comprimidos estéreis do tipo dos des critos anteriormente.

Os compostos da presente invenção foram ensaiados relativamente à sua activídade antiSTAT num ensaio que consiste nas seguintes fases: a) - colocação tanto da expressão do gene 5 da Fosfatase Alca lina Segregada (SeAP) como do gene TAT transactivador vi ral sob controlo d© promotor LTR de Hl? que responde à acção do transactivador TAT de HIV; b) - transferência de células de mamífero cultivadas com pias mídeos que contêm as construções de genes de Ca) citados e causadores da produção celular do factor TAT de trans activação e SeAP;

c) - adicionar 0 agente a ensaiar, aqui os compostos A e B tal como se definiu anteriormente, a determinar a quan- tidade de SeAP produzida de acordo com a avaliação da actividade enzimátiea de SeAP, de modo que a inibição da produção de SeAP se correlaciona com a actividade inibi-dora de .anti-TAT. Weste ensaio, a inibição de SeAP eor-relaciona-se positivamente com a actividade Bnti-ΤΑΤ. Quanto maior é a capacidade de um agente para inibir SeAP, maior é a sua actividade anti-TAT.

Especificamente no que se refere aos resultados referi dos nas Figuras 1 e 2 para os compostos A e B , o ensaio foi realizado do seguinte modo:

Adicionaram-se 1, 10 e 100 " do composto em ensaio 2*+ horas após a transfecção, ao meio de cultura de células COS transfectadas com dois plasmídeos, um destes contendo o gene correspondente que codifica para SeAP sob o controlo de HIV-LTR e o outro contendo o gene TAT também sob controlo de HIV-LTR. A actividade de fosfatase alcalina do meio doseou-se decorridas ^8 horas após a adição dos compostos em ensaio. Os resultados estão indicados nas Figuras 1 e 2 que representam três doseamen tos independentes desses compostos. A actividade anti-TAT mediu-se de acordo com a percentagem de inibição da expressão do gene de SeAP sob o contrôlo de HIV-LTR. Determinou-se a cito-toxieidade do composto num doseamento paralelo em que a expressão do gene de SeAP foi submetida ao contrôlo do vírus de Sarcoma Rous (RVS)-LTR que não responde a TAT . Os resultados in dicados nas Figuras 1 e 2 demonstram que os compostos A e B são inibidores específicos de TAT e não exibem citotoxicida-de não específica.

Os compostos A e B foram também ensaiados para .deter

minar a inibição do efeito cito^átíoo· de HIV e a redução dos antigénibss virais associadosMs células, numa experiência que^ se realizou do seguinte modo:

Desenvolveram-se bancos de vírus de título elevado (estirpe ATIT de HIV-1) em células CRIO CDU· em meio RMPI-—16*+0 (Gibco Laboratories) suplementado com soro de vitela fetal a 10 % e 0,1 mg/ml de gentamicina. Filtraram-se os meios recolhidos e isolaram-se os vírus |ue se concentraram 100 vezes e se conservaram ã temperatura de -80°C. As células CEM propagadas no mesmo meio incubaram-se durante 60 mi nutos à temperatura de 37°C com banco de vírus diluído a M0I=1. Lavaram-se as células com solução de cloreto de sódio tamponada com fosfato e ressuspenderam-se no meio a uma concentração de ς

2X10 células/ml. Adicionaram-se diversas quantidades dos com postos A e B . Decorridos três dias após a infecção, contou--se o ndmero de células vivas por exclusão com azulide tripan (Proe. ITatl. Acad, Sci.T 88, (1986), 1911. Simultaneamente fixaram-se alíquotas de células com acetona e coraram-se com anti-aorpcâc-preivenientes de doentes com SIDA , seguida de uma segunda coloração com IgG anti-humana desenvolvida na cabra e conjugada com fluoresceína (Cappel). Contaram-se as células cora das com o anticorpo fluorescente, por meio de um microscópio de fluorescência e exprimiram-se os resultados sob a forma de percentagem do ndmero de células totais contadas. (J. Med.

Virol., 12, (1986), 325).

Para se ensaiar a citotoxicidade, trataram-se células CEM não infectadas com os compostos A e B com concentrações idênticas e determinou-se a toxicidade dos compostos pela con- tagem das células vivas. Ensaiaram-se em paralelo com o compos- " to A, dois compostos, AZT e ddC, com potência conhecida para α tratamento da SIDA. Para testar o efeito de um tratamento a longo prazo com o composto A, replaquearam-se as células tratadas com o composto, citadas anteriormente, ao terceiro diayem meio contendo o composto e repetiu-se o ensaio no sexto dia.

Os resultados dos ensaios' estão representados nas Figuras 3 e 4 para o composto A e na Figura 5 para o composto B.

Analisou-se ainda o composto A relativamente à activi-dade anti-viral num ensaio de captura do antigénio virai p24.·

Utilizou-se o ensaio de imuno-absorção ligada em enzima (ELISA) para ensaiar o composto A relativamente ã actividade anti-HIV, medindo-se a replicação do vírus em linfõcitos T CD4 , mediante a detecçao do antigénio virai p24 libertado no sobrenadante da cultura de tecido de células infectadas.

Desenvolveram-se bancos de vírus de título elevado, estirpe RF de HIV/HTLV III, em células H9 em meio RPMI-1640 (Flow Laboratories) suplementado com soro de .vitela fetal a 10%, 100 Ul/ml de penicilina e 1000 jag/ml de estreptomicina. Remove ram-se por centrifugação as células desagregadas e conservou-se o sobrenadante à temperatura de -70°C. A linha de células hospedeiras que se utilizou nos ensaios anti-virais foi a linha de células T CD4+ C8166 que é particularmente' susceptível ã infec-ção por HIV. Incubaram-se as células com 10 TCID5Q, HIV/HTLV (III) (RF) à temperatura de 37°C durante 90 minutos e em seguida lavaram-se com PBS. 5

Ressuspenderam-se alíquotas das células de 2 x 10 em 1,5 ml de meio de crescimento e adicionaram-se as quantidades apropriadas no composto A e incubáram-se ã temperatura de 37°C. Decorridas 72 horas pés-infeeção, analisaram-se os-.soera brenadantes das culturas celulares para o antigénio p2^·. Realizaram-se os ensaios de captura de antigénio nos sobrena-dantes provenientes das culturas de células infectadas, -incluiu-se em cada ensaio um controlo positivo conjuntamente com um controlo de sobrenadante proveniente de células não infectadas. Leram-se as placas por meio de um sistema de detecção espectro fotométrico. Verificou-se que o composto A , em dois ensaios separádos, exibiu uma actividade anti-viral aproximadamente com 0,1 θ com 6jM de composto A dando uma inibição de replica ção virai de 50 %·

Podem preparar-se de um modo conhecido as composições galénicas seguintes contendo os componentes aetivos, tal como se definiu anteriormente.

Composição para Comprimidos:

Componentes mg/comprimido Componente A ou B 20 mg Lactose 180 mg Amido pré-gelatinizado 15 mg Formulação Líquida Oral: Cemponeolae mg/composição Composítcr A ou B 20,0 mg Metilparabeno 20,0 mg Sacarose q.b.p. Agente apaladante q.b.p. Tampão de citrato q.b.p. Agua purificada q.b.p. 5,0 ml

Composições para comprimidos Componentes mg/comprimido mg/comprimido Composto A ou B 20 mg 20 mg ddC 5 mg Amido *+0 mg *+0 mg Avicel 80 mg 80 mg Lactose 269 mg 27^ mg Estearato de magnésio 2 mg 2 mg 16 mg *+l6 mg Composição para comprimidos

Componentes mg/comprimido

Composto A ou B 20 mg ddC 5 mg

Lactose 175 mg

Amido p:ré^.géiãtin}iz ado 15 mg

Celulose microcristalina 72 mg

Amido modificado 10 mg

Estearato de magnésio 3 mg 300 mg • · ·

Composições para cápsulas de gelatina mole Componentes mg/Cápsula 20 mg 0 ou 5 mg .· 500 mg 100 mg 1.0 ml

J

Composto A ou B ddC Ácidos gordos etoxilados PBG *+000 (íleos vegetais q.b.p. Composição líquida oralí

Componentes mg/ml *+,0 mg 1.0 mg 2.0 mg 0,2 mg 100,0 q.b.p. q.b.p.

J

Composto A ou B ddC Metilparabeno Propilparabenò -:-Sacarose Agente apaladante Tampão de citrato 5.0 mg

Agua purificada q.b.p. ' 1,0 ml

Composição parenteral:

Componentes mg/ml Composto A ou B 20 ,0 mg ddC 5,0 mg Propilenoglicol 20 ,0 mg Emulphor 2,0 mg Agua para injéctáveis q.b.p. 1,0 mg

Claims (2)

12

REIVINDICAÇÕES 1.- Processo para- a preparação de composições farmacêuticas para administração por via oral ou parentérica no tratamento ou profilaxia de doenças, infecciosas provocadas por retro virus como, por exemplo, SIDA ou CRS, especialmente para aliviar os efeitos citopãticos’destas doenças, especialmente das provocadas por retrovirus HIV, e mais especialmente HIV-1 ou HIV-2, caracterizado pelo facto de se converter em uma forma de dosagem galénica uma quantidade terapeuticamente eficaz compreendida entre 0,1 e 10 mg de um composto derivado da 7-cloro-5-(2--pirril)-3H-1,4-benzodiazepin-2(1H)-ona ou da 2-glicinamido-5- 13

“dorofenil (2-pirril) -cetona ou dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, em-associação .com um ou mais veiculo s aceitáveis em farmácia e, eventualmente·, uma quantidade também eficaz sob o ponto de vista terapêutico de .um outro com posto anti-HIV, especialmente de um inibidor da transcriptase .inversa, especialmente do ddc.

2.- Método para o tratamento ou profilaxia de doenças infecciosas provocadas por· retrovirus, especialmente para aliviar os efeitos citopáticos. de doenças retrovirais, especialmen te das provocadas por-retrovirus HIV, particularmente HIV-1, ca racterizado pelo façto de se administrar uma. quantidade compreendida entre 0,1 e 10 mg/Kg de peso do corpo e por dia em uma ou mais doses, de preferência entre 1 e 3 mg/Kg de peso do corpo,, administrados uma. ou duas vezes por dia, de um composto derivado da 7-'cloro-5- (2^pirril)~3E[-l,4-benzodiázepin-2 (1H)--ona ou da 2-glicinamido-5-clorofenil (2-pirril) -cetona ou dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico. Lisboa, 29 de Outubro de 1990 O Agente Oficial da Propriedade Industriai