PT99042A

PT99042A - Processo para a preparacao de purinas substituidas e de composicoes farmaceeuticas que as contem

Info

Publication number: PT99042A
Application number: PT99042A
Authority: PT
Inventors: James Leroy Kelley; James Andrew Linneed Williams
Original assignee: Wellcome Found
Priority date: 1990-09-26
Filing date: 1991-09-25
Publication date: 1992-08-31
Also published as: IL99561A0; EP0550574A1; ZA917666B; JPH06501253A; IE913360A1; GB9020931D0; AU8542991A; WO1992005180A1

Description

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Descrição referente à patente de in venção de THE WELLCOME FOUNDATION LIMITED, britânica, industrial e co mercial, com sede em Unicom House, 160 Euston Road, London NW1 2BP, In glaterra, (inventores: James Leroy Kelley, James Andrew LinneEd Williams McLean, residentes nos E.U.A.), para:"PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE PURINAS SUBSTITUÍDAS E DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE AS CONTÊM».

DESCRIÇÃO

A presente invenção refere-se a sis temas em anel aromáticos bicíclicos contendo átomos de azoto e em particular às purinas, substituídos por um resíduo fosfono-alquilbenzilo, os quais são inibidores da fosfori-lase do nucleósido da purina (PNP), à sua preparação, às com posições farmacêuticas que os contêm e à sua utilização em medicina. A PNP é uma enzima metabolizadora da purina a qual, sob condições normais in vivo cataliza a fosforolase reversível dos nucleôsidos da purina tais como (desoxi)inosina e (desoxi)guanosina para proporcionar as respectivas bases, hipoxantina e guanina e o correspondente (desoxi)ribose-l-fosfato. C.R. 1

Foi jã descrito (J. Clin. Invest., 74, (3), 951-5) que a deficiência de PNP nos seres humanos está associada à imunodeficiência das células T e que é pos sível induzir toxicidade selectiva para as células T em vez das células B administrando um substrato citotóxico de PNP (desoxiguanosina). Foi sugerido que esta toxicidade selectiva seria vantajosa para o tratamento das perturbações das células T, isto é, leucemia das células T, e doenças auto-imunes, isto é, na supressão da resposta do hospedeiro aos enxertos na transplantação de órgãos, artrite reumatóide, es clerose múltipla, lupus eritematoso sistémico, diabetes do tipo I e miastemia grave e ainda no tratamento da gota e de outros estados hiperuricémicos e psoriase.

Foi jã descrito e revelado que a 8--amina-9-benzil-guanina é um poderoso inibidor da PNP.

Verificou-se agora que uma série de derivados de fosfeno-alquil-benzil-guanina são poderosos inibidores da P.N.P.

Em consequência, a presente invenção proporciona um composto de fórmula geral (I):

(I) ou um seu sal ou éster farmacêuticamente aceitável, em que os símbolos 1 T . X e X~* são iguais ou diferentes e representam individualmente o átomo de azoto ou um grupo CH e o símbolo 2

X2 representa o átomo de azoto ou grupos CR4, em que o radical R4 representa hidrogénio, hidroxi, halo ou um grupo NHR5 em que o radical R5 representa hidrogénio, um grupo alquilo(C^-C^) ou alquilo(C^-C^)-carbonilo, representando pelo menos um dos símbolos X1, X2 e χ3 o átomo de azoto; o radical

RJ representa amino ou hidrogénio; o radical 2

R R" representa hidrogénio, halo, SH, um grupo NHR^ em que o radical RD representa hidrogénio, ou um grupo alquilo(c^--C4) ou alquil(C1-C4)-carbonilo ou o radical 7 representa um grupo OR em que o radical R7 representa hidrogénio, alquilo (C^-C^) alcoxi-al quilo ou benzilo; o radical R3 representa um grupo fenilo substituído na posição orto por um grupo X4P03H2 em que o símbolo X4 representa uma cadeia alquileno possuindo entre 1 e 3 átomos de carbono contendo opcionalmente uma ligação dupla e facultativamente substituido por um grupo oxo ou o símbolo X4 representa uma cadeia contendo um ou dois grupos meti leno facultativamente substituido por um grupo oxo e contendo um átomo de oxigénio, um grupo S(0)t em que o símbolo t representa o inteiro 0, l ou 2 ou um grupo NR8 em que o radical R8 representa hidrogénio, alquilo (C1-C4) ou benzilo substituido na posição meta por grupo X P03H2 em que o símbolo X5 representa uma cadeia alquileno contendo entre 2 e 4 átomos de carbono possuindo facultativamente uma ligação dupla e opcionalmente substituído por um grupo oxo ou o símbolo 3

X5 representa uma cadeia contendo dois ou três grupos me tileno facultativamente substituido por um grupo oxo e contendo um átomo de oxigénio, um grupo S(0)t em que o símbolo t representa o inteiro o, l ou 2 ou um grupo NR conforme antenormente definido, sendo ainda o grupo fenilo facultativamente substituido por um a quatro átomos do grupo halo, por um grupo alquilo (C^-C^) ou halo-alquilo (C1-C4) ou por uma cadeia -CH=CH-CH=CH- formando um grupo naftilo; ou o radical R3 representa um grupo tienilo facultativamente substi tuido nas posições orto ou meta por um grupo X4P03H2 c ou X P03H2 em que respectivamente os símbolos X4 e X5 possuem as significações anteriormente definidas.

Um grupo de compostos de fórmula (I) é constituído pelos compostos de fórmula (Ia).

Compostos de fórmula (Ia): 1

(Ia) ou pelos seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que os símbolos X1 e X3 são iguais ou diferentes e representam individualmente o átomo de azoto ou um grupo CH e o símbolo X2 representa o átomo de azoto ou um grupo CR4 em que o radical 4

R4 representa hidrogénio, hidroxi halo ou um grupo NHR5 em que o radical R^ representa hidrogénio, um grupo alquilo (C^-C4) ou alquil(C1-C4)carbonilo, representando pelo menos um dos símbolos X1, X2 e X3 o átomo de azoto; o radical R·1· representa amxno ou hidrogénio; o radical R2a representa hidrogénio, halo, SH, um grupo NHR6,em que o radical R6 representa hidrogénio ou um grupo alquilo(C1-C4) ou alquil(C^-C^)carbonilo; ou o radical R2a representa um grupo 0R7a em que o radical R7a representa hidrogénio,alquilo(C1-C4) ou benzilo; o radical R3a representa um grupo fenilo substituído na posição /a ^ orto por um grupo X P03H2 em que o símbolo /a , # X representa uma cadeia alquileno contendo entre 1 e 3 átomos de carbono facultativamente substituído por um grupo oxo ou o símbolo X4a representa uma cadeia contendo um ou dois grupos meti leno facultativamente substituído por um grupo oxo e possuindo um átomo de enxofre ou de oxigénio ou um grupo NR8 que o radical R8 representa hidrogénio, alquilo (C^-C^) ou benzilo substituído na posição meta por um grupo X5aPC>3-H2 em que o símbolo X5a representa uma cadeia alquileno contendo entre 2 e 4 átomos de carbono facultativamente substituído por um grupo oxo ou, o símbolo X5a representa uma cadeia contendo dois ou três grupos me tileno facultativamente substituído por um grupo oxo e possuindo um átomo de enxofre ou de oxigénio ou um grupo NR8 conforme anteriormente definido, sendo ainda o grupo fenilo facultativamente substituído por um a quatro átomos do grupo halo, por um grupo 5

alquilo (C^-C^) ou halo-alquilo (C^-C^) ou por uma cadeia -CH=CH-CH=CH- formando um grupo naftilo; ou o radical R3 representa um grupo tienilo facultativamente substi-tuido nas posições orto ou meta por um grupo X P03H2 ou X5aP03H2 em que respectivamente os símbolos X4a e X5a possuem as significações anteriormente definidas.

De preferência X1 e X3 representam azoto e o Χώ representa um grupo CH.

De preferência o radical R1 representa um grupo NH2·

Adequadamente os radicais R2 e R2a representam hidroxi ou halo, por exemplo, cloro ou bromo, e particularmente o bromo.

De preferência os radicais R2 e R2a representam um grupo hidroxi.

De preferência o radical R3 representa um grupo fenilo substituido na posição orto por um grupo X6aP03H2 ou na posição meta por um grupo x7P03H2 em que X6 e X7 contêm individualmente um átomo de oxigénio ou um grupo S(0)t conforme anteriormente definido e um ou dois grupos metileno. De preferência X6P03H2 repre- 7 senta um grupo 0CH2P03H e X P03H2 representa um grupo ch2sch2po3h2 ou ch2och2po3h2.

De preferência o radical p3a representa um grupo fenilo substituído na posição orto por um grupo X6aP03H2 na posição meta por um grupo X7aP03H2 em que X6a e X7a contêm individualmente um átomo de oxigénio ou de enxofre e um ou dois grupos metileno. De preferência X6aP03H2 representa um grupo OCH2P03H2 e X7aP03H2 representa um grupo CH20CH2P03H2. 0 termo "halo" significa fluor, cloro, bromo e iodo. 6

Os sais dos compostos da presente invenção, podem englobar os sais por adição de ácido derivados de um grupo amino ou espécies aniónicas derivadas de grupos hidroxi de fórmula (I), e um catião. Em ambos os tipos de sais os resíduos de actividade terapêutica no radical derivado do composto da presente invenção tal como anterior-mente definido e a identidade do outro componente é de menor importância embora para fins terapêuticos e profilácticos seja preferível que sejam farmaceuticamente aceitáveis para o paciente. Como exemplos de ácidos de adição farmaceuticamente aceitáveis refere-se os que derivam de ácidos minerais tais como os ácidos clorídrico, bromídrico, fosfórico, metafosfórico, nítrico e sulfúrico, e também de ácidos orgânicos, tais como os ácidos tartárico, acético, trifluoro -acético, cítrico, málico, láctico, fumárico, benzoíco, gli-cólico, glucónico, succínico, metano-sulfónico e aril-sulfó-nico, por exemplo o ácido p-tolueno-sulfónico. Como exemplos de sais que englobam as espécies aniónicas derivadas de um composto de fórmula (I) e um catião, refere-se os sais de amónio, os sais de metais alcalinos, tais como os sais de sódio e de potássio, os sais de metais alcalino-terrosos tais como os sais de magnésio e de cálcio, e os sais formados com bases orgânicas, por exemplo, os sais de grupo amino derivados de mono-, di- ou tri-(alquil inferior)- ou (alca-nol imferior)-aminas tais como a trietanol-amina e a dietil--amino-etil-amina, e os sais com aminas heterocíclicas tais como a piperidina, a piridina, a piperazina e a morfolina. Os sais farmacêuticamente aceitáveis em conjunto com os sais que não são aceitáveis possuem utilidade para o isolamento e/ou purificação dos compostos da presente invenção, sendo os sais que não são farmaceuticamente aceitáveis úteis também pelo facto de poderem ser convertidos em sais farmaceuticamente aceitáveis recorrendo a técnicas bem conhecidas na especialidade.

Os ésteres dos compostos da presente invenção englobam os ésteres alquílicos de cadeia linear ou ramificada possuindo entre 1 e 6 átomos de carbono (por exemplo, os ésteres metílico, etílico, n-propílico, i-pro- 7

pílico, t-butílico, etc.) os ésteres alcoxi-alquílicos possuindo entre 1 e 6 átomos de carbono (por exemplo, o éster metoxi-metílico) os ésteres aralquílicos possuindo 7 ou 8 átomos de carbono (por exemplo, o ester benzílico) ou o ester fenílico sendo cada um deles facultativamente substituído por halo, alquilo (C1~C4) , alcoxi (c;l-c4) , nitro ou amino. Como os compostos da presente invenção são ácidos fosfónicos, é possível que existam presentes um ou dois grupos éster. Os ésteres dos compostos de fórmula (I) constituem intermediários úteis para a preparação de compostos de fórmula (I).

Os compostos da presente invenção exibem uma actividade inibidora enzimática contra a fosfo-rilase do nucleósido da purina (PNP). Uma vez que as células T desempenham uma função central na resposta imunológica, a utilização de compostos da presente invenção é recomendada para a imunorregulação de doenças autoimunes tais como a artrite reumatóide, a artrite gotosa, a gota, o lupus eritema-toso sistémico, as doenças inflamatórias dos intestinos, es-clerose múltipla, miastemia grave, transplantação, psoriase juvenil, diabetes, cancro e doenças víricas. A utilização dos compostos da presente invenção também é recomendada para o tratamento de doenças víricas associadas com a disfunção do sistema imunológico, por exemplo, VIH, e para inibir o colapso de nucleósidos da purina anti-tumor ou anti-vírus. Também podem ser utilizados para potenciar agentes anti-tu-mor e anti-vírus. Em consequência a presente invenção proporciona um método para o tratamento de doenças tais como as doenças antoimunes caracterizadas por uma resposta imunológica anormal em animais, através da administração de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I).

Os compostos de fórmula (I) e os seus derivados farmaceuticamente aceitáveis (daqui em diante designados colectivamente por ingredientes activos) podem ser administrados por qualquer via adequada ao estado que se pretende tratar, incluindo as vias adequadas, a via oral, rectal,nasal, tópica (incluindo a via bucal, e sub-lingual), vaginal e parenteral (incluindo a via sub-cutânea, intramus- 8

cular, intravenosa, intradermal, intratecal e epidural). Faz-se observar que a via de preferencial pode variar, por exemplo, com o estado do paciente, mas em geral dá-se preferência à administração por via oral e parenteral.

Para cada uma das utilidades e indicações anteriormente referidas a quantidade necessária de ingrediente activo (tal como definido antes) dependerá de numerosos factores incluindo a gravidade do estado que se pretende tratar e a identidade do paciente em última instância dependerá do critério do médico assistente. Todavia, de uma forma geral, para cada uma dessas utilidades e indicações, considera-se adequada uma dose eficaz compreendida entre 0,1 e 600 mg por kg de peso corporal do paciente por dia, preferencialmente entre 7,0 e 200 mg de peso corporal por dia; considera-se óptima uma dose de aproximadamente 50 mg por kg de peso corporal por dia (salvo quando especificado de outro modo, todos os pesos de ingrediente activo são calculados tomando como base o composto original de fórmula (I); para os correspondentes sais e ésteres os números deverão ser acrescidos proporcionalmente). A dose desejada é apresentada preferencialmente sob a forma de duas, três, qua tro ou mais sub-doses administradas a intervalos adequados ao longo do dia.

Essas sub-doses podem ser administradas em formas de dosagem unitárias, por exemplo, contendo cada forma de dosagem unitária entre 200 e 1500 mg e preferencialmente entre 500 e 1000 mg de ingrediente activo.

Embora seja possível administrar os ingredientes activos isoladamente é preferível apresentá-los como formulações farmacêuticas. As formulações da presente invenção incorporam pelo menos um ingrediente activo tal como definido antes, em conjunto com um ou vários veículos aceitáveis e facultativamente com outros ingredientes terapêuticos. Os veículos devem ser "aceitáveis" significando isto que devem ser compatíveis com os outros ingredientes da formulação e não devem ser prejudiciais para os pacientes.

As formulações englobam as que são adequadas para administração oral, rectal, nasal, tópica (in 9

cluindo a via bucal e sub-lingual), vaginal ou parenteral (incluindo a via subcutânea, intramuscular, intravenosa, in-tradermal, intratecal e epidural).

As formulações podem ser apresentadas convenientemente numa forma de dosagem unitária e podem ser preparadas por quaisquer métodos bem conhecidos na especialidade farmacêutica. Esses métodos englobam o passo de associar o ingrediente activo com o veículo que ê constituído por ou vários ingredientes acessórios. Em geral, as formulações são preparadas misturando uniforme e inti-mamente o ingrediente activo com veículos líquidos ou com veículos sólidos finamente divididos ou com ambos e depois, se necessário, dando uma configuração adequada ao produto.

As formulações da presente invenção adequadas para administração oral podem ser apresentadas sob a forma de unidades discretas tais como cápsulas, comprimidos ou pastilhas contendo cada um deles uma quantidade pré -determinada de ingrediente activo; sob a forma de pó ou de grânulos; sob a forma de uma solução ou de uma suspensão num líquido aquoso ou não aquoso; ou sob a forma de uma emulsão de tipo óleo-em-água ou de uma emulsão líquida de tipo água--em-óleo. 0 ingrediente activo também pode ser apresentado sob a forma de âmpola grande, electuário ou pasta. É possível preparar uma pastilha por compressão ou por moldagem, facultativamente com um ou vários ingredientes acessórios. As pastilhas obtidas por compressão podem ser preparadas com primindo numa máquina adequada o ingrediente activo, numa forma que flua livremente tal como um pó ou os grânulos, mis turados facultativamente com um agente ligante (por exemplo, povidona, gelatina, hidroxi-propil-metil-celulose), um agen te lubrificante, um diluente inerte, um conservante, um agen te desintegrador (por exemplo,o glicolato do amido de sódio, povidona reticulada, carboxi-metil-celulose de sódio reticulada) um agente tensio-activo ou um agente dispersante. As pastilhas obtidas por moldagem podem ser preparadas moldando numa máquina adequada uma mistura pulverulenta do composto * humedecida com um diluente líquido inerte. As pastilhas po- • dem ser facultativamente revestidas ou drageificadas e podem 10

ser formuladas de modo a proporcionar a libertação lenta ou controlada do ingrediente activo nelas contido utilizando, por exemplo, hidroxi-propil-metil-celulose em proporções variáveis de modo a proporcionar o perfil de libertação desejado.

Para infecções dos olhos ou de outros tecidos externos, por exemplo, boca e pele, as formulações são aplicadas preferencialmente sob a forma de um unguento ou creme tópicos que contêm ingrediente activo numa quantidade compreendida, por exemplo, entre 0,075 e 20% p/p, de preferência entre 0,2 e 15% p/p e mais preferencialmente entre 0,5 e 10% p/p. Quando a formulação é sob a forma de um unguento, os ingredientes activos podem ser utilizados com uma base parafínica ou com uma base para unguentos miscível com água. Em alternativa, os ingredientes activos podem ser formulados em creme utilizando uma base para creme de tipo óleo-em-água.

Se desejado a fase aquosa do creme podem conter, por exemplo, pelo menos 30% p/p de um álcool poli-hidrico, isto ê, um álcool que possua dois ou vários grupos hidroxilo tal como o propileno-glicol, o butano-1,3--diol,o manitol, o sorbitol, o glicerol e o polietileno-gli-col e suas misturas. As formulações para aplicação tópica podem conter desejavelmente um composto que aumente a absorção ou a penetração do ingrediente activo através da pele ou através de outras áreas afectadas. Como exemplos desses agentes que melhoram a penetração dermal refere-se o dime-til-sulfóxido e compostos análogos. A fase oleosa das emulsões da presente invenção pode ser constituída a partir de ingredientes conhecidos por um processo conhecido. Apesar de a fase poder incorporar apenas um agente emulsionante (também conhecido como emoliente), incorporará desejavelmente uma mistura de pelo menos um agente emulsionante com uma gordura ou com um óleo ou simultaneamente com uma gordura e com um óleo. De preferência incorpora-se um emulsionante hidrofílico em con-• junto com um emulsionante lipofílico o qual actua como agen-. te estabilizador. Também é preferível incorporar simultanea- 11

mente um óleo e uma gordura. Em conjunto, os emulsionantes com ou sem estabilizadores constituem a designada cera emul-sionante, e essa cera em conjunto com o óleo e/ou gordura constituem a designada base de unguento emulsionante a qual forma da fase dispersa oleosa das formulações para cremes.

Os emolientes e os estabilizadores de emulsões adequados para utilização nas formulações da presente invenção englobam "Tween 60", "Span 80", álcool ce-tostearílico,álcool miristílico, mono-estearato de glicerilo e lauril-sulfato de sódio. A escolha de óleos ou gorduras adequados para a formulação baseia-se na intenção de conseguir as propriedades cosméticas desejadas, uma vez que a solubilidade do composto activo na maior parte dois óleos eventualmente utilizados em formulações de emulsões farmacêuticas é muito baixa. Deste modo, o creme deverá ser preferencialmente não gorduroso, não deverá provocar manchas e deverá ser um produto lavável com uma consistência adequada para evitar o derramamento a partir de tubo ou de outros recipientes. É possível utilizar ésteres alquílicos mono- ou di-básicos de cadeia linear ou ramificada tais como os di--isoadipatos, o estearato de isocetilo, o diester de pro-pileno-glicol com ácidos gordos de côco, o miristato de iso-propilo, o oleato de decilo, o palmitato de isopropilo, o estearato de butilo, o palmitato de 2-etil-hexilo ou ainda uma mistura de ésteres de cadeia ramificada conhecidos pela designação "Crodamol CAP", sendo preferíveis os últimos três ésteres. Estes adjuvantes podem ser utilizados individualmen te ou combinados, consoante as propriedades pretendidas. Em alternativa, é possível utilizar lípidos de elevado ponto de fusão tais como a parafina macia branca e/ou a parafina líquida ou outros óleos de origem mineral.

As formulações adequadas para administração tópica nos olhos englobam também as gotas oculares em que o ingrediente activo é dissolvido ou colocado em suspensão num veículo adequado, especialmente um solvente aquo so para o ingrediente activo. 12

Preferencialmente o ingrediente ac-tivo encontra-se presente nessas formulações numa concentração compreendida entre 0,5 e 20% vantajosamente entre 0,5 e 10% sendo particularmente cerca de 1,5% p/p.

As formulações adequadas para administração tópica na boca englobam os lozangos que incorporam o ingrediente activo numa base aromatizada, normalmente a sacarose e a goma de acácia ou a goma alcantira; as pastilhas que incorporam o ingrediente activo numa base inerte tal como a gelatina e a glicerina, ou a sacarose e a goma de acácia; e os líquidos para bochechar que incorporam o ingrediente activo num veículo líquido adequado.

As formulações para administração rectal podem ser apresentadas sob a forma de supositórios com uma base adequada constituída, por exemplo, por manteiga de cacau ou por um salicilato.

As formulações adequadas para administração nasal em que o veículo é um sólido englobam os pós grossos que possuem partículas cujas dimensões variam, por exemplo, entre 20 e 500 micra, os quais são administrados pelo processo da aspiração, isto é, por rápida inalação atra vés da passagem nasal a partir de um recipiente onde está contido o pó que é colocado próximo do nariz. As formulações adequadas em que o veículo é um líquido, por exemplo para administração sob a forma de uma aspersão nasal ou gotas nasais, englobam as soluções aquosas ou oleosas do ingrediente activo.

As formulações adequadas para administração vaginal podem ser apresentadas sob a forma de pessários, tampões, cremes, geles, pastas, espumas ou formu lações em aspersão contendo para além do ingrediente activo os veículos de tipo conhecido na especialidade, conforme fôr adequado.

As formulações adequadas para administração parenteral englobam as soluções para injecção estéreis de tipo aquoso ou não aquoso as quais podem conter agentes anti-oxidantes,tampões, bacteriostátos e solutos que podem tornar a formulação isotónica com o sangue do paciente 13

visado; e as suspensões estéreis de tipo aquoso ou não aquoso que podem conter agentes de suspensão e agentes espes-santes. As formulações podem ser apresentadas em recipientes de dose unitária ou em recipientes de dose múltipla, por exemplo, ampolas ou frascos vedados, e podem ser armazenadas em condições de secagem a seco (liofilizadas) que apenas exijam a adição de um veículo líquido estéril, por exemplo, água para injecções, imediatamente antes da sua utilização. As soluções e suspensões para injecção extemporânea podem ser preparadas a partir de pós, grânulos e pastilhas estéreis do tipo anteriormente descrito.

As formulações de dosagem unitária preferenciais são aquelas que contêm uma dose diária ou uma sub-dose unitária diária de ingrediente activo, conforme descrito antes, ou uma sua fracção adequada.

Faz-se observar que para além dos ingredientes particularmente referidos antes, as formulações da presente invenção podem conter outros agentes convencionais utilizados na especialidade tendo em consideração o tipo de formulação em questão, por exemplo, os agentes adequados para administração oral podem conter agentes aromatizantes. A presente invenção proporciona tam bém um processo para a preparação de um composto de fórmula I, ou de um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis, caracterizado por: a) No caso de X3 representar azoto, se fazer reagir um composto de fórmula LCH2R3, em que o radical R3 possui as significações definidas antes,sendo os grupos hidroxi protegidos e L um grupo removível, com um composto de fórmula (II): 14

em que R1 e X1 b) possuem as significações definidas antes e l2 e X2 conforme ante-riormente definido ou esses mesmos grupos substituídos por um grupo de protecção adequado, e se fazer depois facultativamente a remoção de quaisquer grupos de protecção presentes. No caso de X4 ou X5 conterem átomos de enxofre ou de oxigénio - O , ou um grupo de formula NR°, se fazer reagir um composto de fórmula R2b e x2b repreSentam grupos X8(CH2)r - í P - OR" I 9 OR9 com um composto de fórmula (III)

15 (III) em que os símbolos R1, R2b, X1, e X2b possuem as significações ante-riormente definidas, R9 representa um grupo alquilo (C-^-Cg) ou aralquilo (Cy-Cg), e o símbolo r representa o inteiro 1, 2, 3 ou 4, um dos símbolos X7 e X® representa um grupo S(0)tH, OH ou NR8H em que o símbolo t e o radical R8 possuem as significações an- teriormente definidas e o símbolo v representa o inteiro 0, 1, 2 ou 3, sendo a soma de r e v correspondente a l, 2 ou 3 no caso de

d R X e correspondente a 2, 3 ou 4 no caso de X , e depois se remover facultativamente quaisquer grupos de protecção presentes. c) Se fazer a conversão de um composto de fórmula (I) a partir de outro composto de fórmula (I), por exemplo, quando o radical R2 representa um grupo hidroxi, se fazer a hidrólise de um composto da fórmula (IV): R10

em que os símbolos 16

R1, R3, X1, X2 e X3 possuem as significações definidas antes e R10 representa um átomo do grupo halo. 0 processo (a) é realizado adequadamente a uma temperatura não extrema, isto é, a uma temperatura entre osc e 120QC e convenientemente a uma tempe ratura entre 50QC e 902C, num solvente aprótico dipolar tal como a dimetil-formamida em presença de uma base tal como o carbonato de césio. 0 grupo removível é convenientemente um átomo do grupo halo ou um grupo sulfonil-oxi substituído, por exemplo, um grupo metano-sulfonil-oxi.

No caso de o radical R2 representar um grupo hidroxi ou tiol e o radical R4 representar um grupo hidroxi, esses grupos são adequadamente protegidos por um grupo alcoxi-alquilo, por exemplo, um grupo metoxi-eti-lo.

Os grupos de protecção do éster fos fonato são adequadamente removidos por reacção como bromo--trimetil-silano a uma temperatura reduzida, por exemplo, a uma temperatura entre -1002C e osc.

Esta reacção ocorre convenientemente num solvente tal como a dimetil-formamida, a uma tempe ratura inicial compreendida entre -80^0 e -602C, deixando-se depois aquecer a mistura de reacção até à temperatura ambiente. 0 processo (b) realiza-se convenientemente a uma temperatura não extrema, isto é, a uma temperatura compreendida entre O^c e 1202C num solvente apró tico dipolar, tal como a dimetil-formamida, facultativamente em presença de uma base forte. Os grupos removíveis adequados são os mesmos anteriormente descritos para o processo (a).

No caso de o símbolo X8 representar S(0),j,H, OH ou NR8H a base forte convenien temente forma um sal, por exemplo, um sal de um metal 17

alcalino tal como o sal de sódio, in si tu. com o composto de fórmula X^(CH2)rP(0)(0R^)2·

De acordo com o processo (c) efec-tua-se adequadamente a conversão de um grupo R num grupo hidroxi na presença de um ácido, por exemplo, ácido clorídrico IN ou concentrado, a uma temperatura não extrema, isto é, compreendida entre osc e 120SC e adequadamente compreendida entre 70sc e 1002C.

Os intermediários de fórmula (III) e (IV) podem ser preparados convenientemente por um processo análogo ao processo (a).

Os exemplos que se seguem têm como objectivo ilustrar a presente invenção.

Exemplo 1

Preparação de ácido (2-((2-amino-1.6-di-hidro-6-oxo-9H-pu-rin-9-il)metil)-fenoxi)metil-fosfónico (Composto 1) A) Preparação de Hidroxi-metil-fosfonato de di-isopro-pilo

Preparou-se este composto por um processo análogo ao utilizado para a preparação de hidroxi-metil-fosfonato de dietilo conforme descrito por A.F. Kluge, Orga-nic Syntheses 64, 80 (1985). 0 composto em epígrafe está referenciado na literatura:Tr. Khim, Met. Inst., Akad. Nauk. Kaz. SSR 1969, 5, 50-8 (Russian) ; CA reg [24630-68-0]. Preparou-se uma mistura de parafor-maldeido (15,0 g, 0,500 moles)(MC&B), de fosfito de di-isopropilo (83,1 g, 0,500 moles) (TCI/Tokyo) e de trietil-amina (5,06 g, 0,050 moles)(Eastman) e agitou-se magneticamente sob uma atmosfera de azoto e depois aqueceu-se a uma temperatura entre 12 52c e 1302c durante três horas. Arrefeceu-se a mistura de reacção e removeu-se o excesso de trietil-amina por evaporação rotativa sob pressão reduzida. Destilou-se o líquido residual num alambique molecular horizontal sob vácuo intenso. Recolheu-se uma fracção de líquido a uma temperatura entre 902C e 1002c. 18

Após o arrefecimento para a temperatura ambiente obte ve-se 64,9 g (65%) de hidroxi-metil-fosfonato de di--isopropilo sob a forma de cristais liquescentes, p.f. 22,5-24,520; rmn(CDCl3) : Í4,74 (m, 2H, 2 x OCH) , 3,82 (d, 2H, J=6,08 Hz, CH2P), 3,78 (s, largo 1H, OH), 1,32 (d, 12H, 4 x CH3); em:m/e 197 (MH+),155 (MH-C3H6)+, 113 (MH -2 X (C3H6))+.

Preparação de 4-tolueno-sulfonato de ('di-isoorooil--fosfono)metilo

Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito por A. Holy e I. Rosenberg, Coll.Czech.Chem. Comm. 47, 3447-63 (1982) , para a preparação de 4-to-lueno-sulfonato (dietil-fosfono)metilo. Dissolveu-se cloreto de P-tolueno-sulfonilo (13,1 g, 68,7 mmoles) (Aldrich), purificado pelo método de S.W. Pelletier, Chem, Ind., 1034 (1953), em éter dietílico (100 ml) (Mallinckrodt). Adicionou-se a solução resultante len tamente, durante uma hora, a uma mistura agitada de hidroxi-metil-fosfonato de di-isapropilo (32U90) (13,2 g, 67,3 mmoles),de trietil-amina (9,60 ml, 68,9 mmoles) (Eastman) e de éter dietílico (100 ml) arrefecida para a temperatura de -702C, sob uma atmosfera de azoto. Deixou-se a mistura de reacção arrefecer até à temperatura ambiente e agitou-se durante 18 horas. Filtrou-se a mistura por sucção e procedeu-se à lavagem dos sólidos com éter dietílico (200 ml). Os filtrados combinados foram concentrados sob pressão reduzida para proporcionar um óleo que foi dissolvido em dicloro-metano (20 ml) . Filtrou-se a solução por sucção através de Gel de Sílica 60 (5 cm) num funil de vidro sinterizado e lavou-se a almofada com dicloro-metano (600 ml). Os filtrados combinados foram con centrados sob pressão reduzida para proporcionar um óleo com o peso de 18,6 g. Aplicou-se este óleo a uma coluna de Gel de Sílica 60 humedecida com uma mistura de acetato de etilo de etilo/hexano (1:1). Efectuou- 19

-se a eluição da coluna com a mistura de acetato de etilo/hexano (1:1) (2 1) e procedeu-se à recolha de fracções de 100 ml. Efectuou-se a combinação apenas das fracções que continham o produto (material com um valor Rf inferior) e evaporou-se rotativamente in vacuo para proporcionar 13,1 g (56%) de 4-tolueno-sulfonato de (di-isopropilo-fosfono)metilo; ccf, dicloro metano metanol (19:1); rmn (CDC13):d 7,56 (quarteto AB, 4H, ArH), 4,73 (m, 2H, 2 X OCH), 4,10 (d, 2H, J=10,l Hz, CH2P), 2,44 (S, 3H, ArCH3),l,29 (pseudo tripleto, 12H, 4 x CH3); em : m/e 351 (MH+), 309 (MH-C3H6)+ 267 (MH-2 X C3~ H6)+, 197 (MH-C7H7S02)+.

Preparação de (2-fhidroxi-metil^fenoxilmetil-fosfona-to de di-iso-propilo A uma dispersão agitada de hidreto de sódio lavado com pentano (dispersão a 60% em óleo mineral) (l,06g, 26,6 mmoles) em dimetil-formamida seca (20 ml) arrefecida para a temperatura de 02C adicionou-se uma solução de álcool 2-hidroxi-benzílico (3,00 g, 24,2 mmoles) (Aldrich) em dimetil-formamida seca (20 ml) sob uma atmosfera de azoto. Agitou-se a reacção durante 1,5 horas â temperatura ambiente e depois trans feriu-se com uma seringa para um funil de adição. Gota a gota, durante 0,5 horas, adicionou-se a solução de fenóxido de sódio/dimetil-formamida a uma solução de 4-tolueno-sulfonato de (di-isopropil-fosfo-no)metilo (8,47 g, 24,2 mmoles) em dimetil-formamida (30 ml) arrefecida para a temperatura de 02c. Agitou--se a mistura de reacção à temperatura de 402C durante 18 horas. Lentamente adicionou-se água (25 ml) à mistura de reacção arrefecida e evaporou-se os produtos voláteis rotativamente sob vacuo intenso. Tratou-se o resíduo com acetato de etilo (300 ml) e efectuou-se a remoção dos sólidos filtrando-os por sucção. Efectuou-se a lavagem dos sólidos com acetato de etilo (25 ml) e depois lavou-se os filtrados com- 20

binados utilizando uma solução saturada de bicarbonato de sódio (2 x 20 ml) e secou-se sobre sulfato de sódio. Filtrou-se a mistura e procedeu-se à remoção dos produtos voláteis sob pressão reduzida, por evaporação rotativa e filtrou-se novamente sob vacuo intenso para proporcionar 6,65 g de um óleo impuro. Aplicou-se esse óleo a uma coluna de Gel de Sílica 60 humedecida com uma mistura de acetato de etilo/hexano (1:1). Efectuou-se a eluição da coluna com uma mistura de acetato de etilo/hexano (1:1) (2,5 1), tendo sido recolhidas fracções de 100 ml. Procedeu-se à combinação das fracções que continham o produto (mate rial com o menor valor R^) e evaporou-se rotativamente in vacuo para proporcionar 1,92 g (25% de rendimento) de (2-hidroxi-metil)fenoxi)metil-fosfonato de di-isopropilo com o aspecto de um óleo amarelo claro o qual se verificou por rmn ser constituído por 95% de produto (41U90) e por 5% de acetato de etilo; ccf, dicloro-metanol/metanol (19:1), Rf = 0,44; rmn (CDC13): J 6,87-7,31 (m, 4H, Ar), 4,82 (m, 2H,2 x 0CH), 4,68 (s, 2H, CH2), 4,26 (d, 2H, J=9,8 Hz, CH2P), 2,98 (s,largo 1H, OH), 1,34 (pseudo-tripleto, 12H, 4 x CH3); em : m/e 303 (MH+), 285 (M-OH)+, 243 (M-OC3H7)+.

Preparação de (2-(cloro-metil)fenoxi)metil-fosfonato de di-isopropilo

Preparou-se uma solução de cloreto de tionilo (0,438 ml, 6,00 mmoles) (EM Science) em dicloro-metano (5 ml) e adicionou-se gota a gota a uma solução arrefecida com gelo constituída por (2-(hidroxi-metil)-fenoxi)metil-fosfonato de di-isopropilo (1,65 g, 5,46 mmoles) em dicloro-metano (25 ml) . Depois de se completar a adição manteve-se a reacção ao refluxo duran te 1,5 horas e agitou-se à temperatura ambiente duran te 18 horas. Procedeu-se à remoção dos produtos voláteis por evaporação rotativa in vacuo e depois co--evaporou-se o óleo residual conjuntamente com diclo- 21

ro-metano (2 x 50 ml) para proporcionarem 1,56 g (89%) de (2-(cloro-metil)fenoxi)metil-fosfonato de di-isopropilo com o aspecto de um ôleo amarelo claro; ccf, dicloro-metano, Rf = 0,24; rmn (CDC13):J 6,92-7,37 (m, 4H, ArH), 4,84 (m, 2H,2 x OCH), 4,68 (s, 2H, CH2C1), 4,28 (d, 2H, J = 10,1 Hz, CH2P), 1,37 (pseudo- -tripleto, 12H, 4 x CH3); em:m/e 321 (MH+), 285 (M-Cl)+, 243 (M-(Cl+C3H6)+, 201 (M-(Cl + 2 X C3H6))+.

Preoaracão de (2-(f2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)--metillfenoxi^metil-fosfonato de di-isopropilo Preparou-se uma solução de (2-(cloro-metil)fenoxi)-metil-fosfonato de di-isopropilo (1,55 g, 4,83 moles) em dimetil-formamida (5 ml) (Aldrich) e adicionou-se uma mistura agitada de 2-amino-6-cloro-9H-pu-rina 0,745 g, 4,39 mmoles) (Aldrich) de carbonato de césio (1,57 g, 4,83 mmoles) (Aldrich) e de dimetil--formamida (10 ml). Agitou-se a mistuta de reacção à temperatura ambiente durante 64 horas e depois verteu-se em água (50 ml). Extraiu-se a mistura aquosa com acetato de etilo (4 x 100 ml) e depois submeteu-se os extractos orgânicos combinados a uma lavagem com água (2 x 50 ml) com uma solução salina saturada (25 ml) , e depois secou-se com sulfato de sódio durante 18 horas. Filtrou-se a mistura e concentrou-se o filtrado por evaporação rotativa in vacuo utilizando um aspirador, submetendo-se depois a vácuo intenso para remoção dos vestígios de dimetil--formamida. Dissolveu-se o óleo impuro côr de âmbar em dicloro-metano (65 ml) e aplicou-se a solução a uma coluna de Gel de Sílica 60 humedecida com diclo ro-metano. Efectuou-se a eluição da coluna com 500 ml de dicloro-metano, 1 litro de metanol/dicloro-metano (3:97), e 500 ml de metanol/dicloro-metano (1:19), tendo sido recolhidas fracções de 50 ml. Efectuou-se a combinação das fracções que continham o produto lím pido (mancha principal de valor Rf mais elevado) e 22

evaporou-se rotativamente in vacuo para proporcionar 1,91 g (88%) de (2-((2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)--metil)fenoxi)metil-fosfonato de di-isopropilo ((92% de pureza) no estado sólido de côr branco sujo, contaminado com 7,3% de (2-(hidroxi-metil)-fenoxi)metil--fosfonato de di-isopropilo e com 0,89% de dimetil--formamida; p.f. 104-1072C; ccf, dicloro metano metanol (9:1),

Rj; = 0,63; rmn (DMS0-d6) : rj 8,12 (s, 1H, H-8 da purina), 6,9-7,4 (m, 4H, ArH),6,90 (s, 2H, NH2), 5,18 (s, 2H, CH2), 4,72 (m, 2H, 2 x OCH), 4,42 (d, 2H, J = 9,92 Hz, CH2P), 1,26 (pseudo tripleto, 12H,4 x CH3); em:m/e 454 (MH+), 418 (M-C1)+, 285 (MH-C5H4CIN5)+, 243 (C1;lH1604P)+, 201 (C8H10O4P)+.

Preparação de ácido (2-((2-amino-l.6-di-hidro-6--oxo-9H-purin-9-il)-metil)fenoxi)metil-fosfónico Gota a gota adicionou-se bromo-trimetil-silano (2,55 ml, 19,3 mmoles) (Aldrich) a uma solução agitada de (2 - ((2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)metil) fenoxi)metil -fosfonato de di-isopropilo (1,46 g, 3,22 mmoles) em dimetil-formamida (20 ml) (Aldrich) arrefecida para a temperatura de -752C, sob uma atmosfera de azoto. Aqueceu-se a mistura de reacção até à temperatura ambiente e agitou-se durante mais 20 horas. Procedeu-se â remoção dos produtos voláteis primeiro com um aspirador e depois sob vácuo tenso ( @ 0,1 mm de Hg ) (banho-maria : T = 75ec) durante 2 horas, para proporcionar uma espuma com o peso de 1,96 g. Adi-cionou-se a essa espuma ácido clorídrico IN (50 ml, 50 mmoles) (Fisher) e manteve-se a mistura ao refluxo suavemente durante 18 horas. Evaporou-se a água rotativamente sob pressão reduzida para proporcionar um sólido bege. O tratamento do sólido com bicarbonato de amónio 1M (200 ml)_seguido por evaporação rotativa in vacuo proporcionou um sólido de côr branco-sujo 23

com o peso de 2,11 g. Dissolveu-se este sólido em água destilada/desionizada (250 ml) e aplicou-se a solução a uma coluna de permuta iõnica carregada com Sephadex DEAE (sob a forma de bicarbonato) (Pharmacia) . Efectuou-se a eluição da coluna em gradiente linear (0, a 1M) de bicarbonato de amónio. Procedeu--se à recolha das fracções (22 ml cada uma) e efec-tuou-se a análise por CLER para verificação da sua pureza. (Hamilton PRP-1,5; coluna eluida com di-hidrogenofosfato de amónio Ο,ΙΝ/metanol (9:1)). As fracções límpidas correspondentes ao componente principal isolado a partir da coluna de permuta iónica foram combinadas e depois procedeu-se â remoção dos produtos voláteis por evaporação rotativa in vacuo. Tratou-se o resíduo sólido com acetona (250 ml) e depois recolheu-se os sólidos filtrando-se por sucção e efectuou-se a secagem no vácuo à temperatura de 60^0 para proporcionar 1,04 g, (81% sob a forma de sal de mono-amónio) de sal de mono-amónio com o ácido (2-((2. -amino-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)metil) fenoxijL metil-fosfónico, contaminado com água (4,5%) e com bicarbonato de amónio (3,0%), p.f. 2202C (amacia); >3002C (dec); uv (ácido clorídrico 0,1N);

Umax 256 (£9900) , 279 (£8500) ;

Amin 233 (£4000)/ 268 (£8000); (Tampão de pH 7) : Ámax 255 (£19900) , 273 (£9900);

Amin 235 (k6000)' 266 (£9500) ; (hidróxido de sódio 0,1 N) : A max 272 (£H1°0) 7

Amin 237 (£5100). ππη-^Ή (D20): J7.94 (s, 1H, H-8 da purina) , 6,8-7,4 (m,4H, ArH), 5,28 (s, 2H,CH2), 4,12 (d, 2H, J=9,8 Hz,CH2P); rmn13C (D20): : 158,68 (C-6), 156,74 (d, 3J=13,3 Hz, C-3’), 153,50 (C-4), 151,25 (C-2), 140,52 (C-8), 129,63 e 128,54 (C-5' e 24

C-7'), 123,72 (C-2'), 120,67 (C-6'), 115,47 (05), 111,54 ( 04'), 64,78 (d, %=156 Hz, OP) , 42,05 (Ol'); rmn-31P (D20): à 13,935; em : m/e 352 (MH+), 241 (M-CH304P)+, 202 (MH- C5H4N50)+, 185 (202-OH) +

Exemplo 2

Preparação de ácido ((3-((2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo-9H-PU-rin-9-il)metil^-benzil^oxi^metil-fosfónico (composto 2) Preparou-se este composto por um processo análogo ao do Exem pio I. 0 composto ((3-(cloro-metil)benzil)oxi)metil-fosfo-nato de di-isopropilo pretendido foi preparado num só passo a partir de pi, o(. ' -dicloro-m-xileno e de hidroxi-metil-fos-fonato de di-isopropilo (ver o Exemplo IA) conforme adiante descrito. A) Preparação de ((3-(cloro-metil)benzil)oxi-fosfonato de di-isopropilo

Preparou-se uma solução de hidroxi-metil-fosfonato de di-isopropilo (5.00g, 25,5 mmoles) em dimetil-for- mamida (20 ml) (Aldrich) e adicionou-se durante uma hora, a uma mistura arrefecida com gelo constituída por hidreto de sódio lavado com pentano (dispersão a 60% em óleo mineral) (1.22 g, 30,6 mmoles) (Aldrich) e por dimetil-formamida (30 ml), com agitação sob uma atmosfera de azoto. Aqueceu-se a mistura de reacção à temperatura ambiente e agitou-se durante uma hora, e depois tranferiu-se o conteúdo da mistura de reacção com uma seringa para um funil de adição. Adicionou-se a solução em diversas porções (1-2 ml) durante 30 minutos a uma solução agitada de OÍ, vL' -di cloro-m-xileno (13,4 g, 76,5 mmoles) (Aldrich) em dimetil-formamida (50 ml) arrefecida para a temperatura de 02C. Aqueceu-se a mistura de reacção à temperatura ambiente e agitou-se durante 20 horas e depois verteu-se em água (100 ml) . Extraiu-se a mistura aquosa utilizando éter dietílico (4 x 100 ml) (Mallinckro-dt) . Os extractos orgânicos combinados foram lavados com água (4 x 50 ml), uma solução salina saturada (50 25

ml) , e depois procedeu-se à secagem sobre sulfato de sódio. Filtrou-se a mistura e concentrou-se para proporcionar um óleo por evaporação rotativa in vacuo. Dissolveu-se esse óleo em dicloro-metano (50 ml) e aplicou-se a solução a uma coluna de Gel de sílica 60 humedecida com dicloro-metano. Efectuou-se a eluição da coluna com dicloro-metano (700 ml) ; depois com di-cloro-metano/metanol (19:1), (1 1); e depois com di- cloro/metanol (93:7), (500 ml); tendo-se recolhido fracções de 50 ml. Efectuou-se a combinação das frac-ções que continham o material de menor valor e eva porou-se rotativamente in vacuo para proporcionar 3,38 g (38%) de ((3-(cloro-metil)benzil)oxi)-metil--fosfonato de di-isopropilo com o aspecto de um óleo côr de âmbar claro, contendo 4% de metanol como con-taminante; ccf, dicloro-metano/metanol (19:1)

Rji = 0,60; rmn (CDC13): / 7,3-7,4 (m, 4H, ArH), 4,76 (m, 2H, 2 x OCH), 4,65 (s,2H, OCH2Ar), 4,58 (s,2H, CH2C1), 3,72 (d,2H, J = 8,6 Hz, CH2P), 1,33 (pseudo-tripleto, 12H, 4 x CH3) ; em : m/e 335 (MH+), 299 (M-C1)+, 293 (MH-C3H6)+, 139 (C8H8C1)+.

Preparação de í (3-f (2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)-l--metil) benzil)oxi)metil-fosfonato de di-isopropilo Preparou-se este composto por um processo análogo do descrito no Exemplo 1E. As fracções cromatográficas que continham o produto límpido foram combinadas e submetidas a evaporação rotativa in vacuo para proporcionar 3,84 g (64%) de ((3-((2-amino-6-cloro-9H--purin-9-il)metil)benzil)oxi)metil-fosfonato de di--isopropilo com o aspecto de um óleo amarelo claro, contendo 5,5% de metanol, 3,5% de dimetil-formamida, e 1% de dicloro-metano como contaminantes ; ccf, dicloro-metano/metanol (9:1),

Rf = 0,58; rmn (DMS0-d6):Je,20 (s,lH, H-8 da purina), 7,1-7,4 26

(m,4H,ArH), 6,93 (S, 2H, NH2), 5,28 (s,2H,NCH2), 4,55 (m, 2H, 2 x OCH), 4,51 (s, 2H, CH2Ar), 3,70 (d, 2H, J = 8,6 Hz, CH2P), 1,17 (pseudo tripleto, 12H, 4 x CH3); em : m/e 468 (MH+), 299 (M- C5H3C1N5)+, 147 (C6h5N5)+. C) Preparação de ácido ((3-((2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo--9H-purin-9-il^-metil)benzil^ oxi)metil-fosfónico Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1F. Efectuou-se a combinação das fracções adequadas provenientes da coluna de permuta iónica e submeteu-se a evaporação rotativa in vacuo. Recolheu-se o sólido residual filtrando-o por sucção utilizando acetona e secou-se para proporcionar 2,40 g (90%) de ácido ((3-((2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo-9H--purin-9-il)metil)benzil)oxi)metil-fosfónico sob a forma de sal de mono-amónio, p.f. 1702C (amacia), >2352C (dec.); uv (ácido clorídrico 0,1N):

Araax 255 (è 11300), 279 (â 7600); / min 231 (£ 3800), 274 (£7500); (Tampão a pH 7): /max 255 (£12100);

Amin 229 ( £ 4300); sh 272 (£9200); (hidróxido de sódio 0,IN): /max 270 (£ 10600); /min 234 (£ 480°); rmn-lH (D20) :^7,79 (s, 1H, H-8 da purina), 7,1-7,4 (m, 4H, ArH),5,16 (s, 2H, NCH2), 4,57 (S, 2H, OCH2Ar), 3,61 (d, 2H, J = 8,6 HZ, CH2P); rmn-13C (D20) :Jl58,54 (C-6), 153,49 (C-4), 151,13 (C—2) , 139,63 (C-8), 138,01 (C-4'), 135,74 (C-2'),128,89, 127,75, 127,03, 126,64 (C-3',C-5',C-6', C-7'), 115,70 (C-5),74,06 (d, 3J=ll,9 Hz, C-P),66,55 27

rmn-31P (020):/16,29/ em : m/e 366 (MH+) , 255 (M- CH304P)+, 202 (MH“ C6H6N50)+, 185 (C8H1003P)+/ 152 (C5H6N5°)+/ 110 (ch3o4p)+.

Exemplo 3

Preparação de ácido ((2-((2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo-9H- -purin-9-il)metil) -benzil)oxi)metil-fosfónico (Composto 3) A) Preparação de (í2-fcloro-metil)benzil)oxi)metil-fos-fonato de di-isopropilo

Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 2A fazendo-se a substituição do -dicloro-m-xileno no Exemplo 2A por tU r ^ ' - dicloro-o-xileno (Aldrich). Após a cromatografia combinou-se as fracções adequadas e procedeu-se â evaporação rotativa e in vacuo para proporcionar 5,13 g (58%) de ((2-(cloro-metil)benzil)oxi)metil-fosfonato de di-isopropilo com aspecto de um óleo claro (96% de pureza), contendo metanol como contaminante; ccf, di-cloro-metano/metanol (19:1),

Rf=0,58; rmn (CDC13):J 7,3-7,5 (m, 4H, ArH), 4,78 (s, 2H, 0CH2), 4,75 (m, 2H, 2x OCH), 4,72 (s, 2H, CH2C1), 3,73 (d, 2H, J = 8,5 Hz, CH2P), 1,32 (pseudo tripleto, 12H, 4 x CH3); em : m/e 335 ( MH+),299 (M-C1)+' 293 (MH-C3-H6)+, 251 (MH-2 x C3H6)+. B) Preparação de íf2-((2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)--metil)benzil)oxDmetil-fosfonato de di-isopropilo Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1E. Combinou-se as fracções cro-matográficas que continham o produto límpido e evaporou-se rotativamente in vacuo para proporcionar 5,07 g (78%) de ((2-((2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)-metil)-benzil)oxi)metil-fosfonato de di-isopropilo com o aspecto de um óleo amarelo claro, contendo 1,3% de água e 0,46% de dimetil-formamida como conta-minantes desprezáveis; 28

ccf, dicloro-metano/metanol (9:1),

Rf = 0,62) rmn (DMSO-dg) :<^8,16 (s,lH, H-8 da purina),6,85-7,45 (m,4H,ArH), 6,92 (s br,2H,NH2), 5,34 (s, 2H, NCH2), 4,79 (s, 2H, OCH2Ar), 4,62 (m, 2H, 2 x OCH), 3,84 (d, 2H, CH2P), 1,26 (pseudo tripleto, 12H, 4 x CH3); em : m/e 468 (MH+), 432 (M--Cl)+, 426 (MH-C3H6)+, 299 (M-CgH-j- cin5)+.

Preparação do ácido ((2-( (2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo--9H-purin-9-ill-metil)benzil)oxi)metil-fosfónico Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1F. Procedeu-se à combinação das fracções adequadas provenientes à da coluna de permuta iónica e depois liofilizou-se durante 72 horas para proporcionar l,80g (46%) de ácido ((2-((2-amino--1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)metil-benzil)oxi)-metil-fosfónico sob a forma de um sal de mono-amónio, p.f. 160-1652C (amacia), 275SC (dec.); u.v. (ácido clorídrico a 0,1N): kmax 256 ( i12200); ^min 230 ( £ 4100) ; sh 280 ( ê 8200); (tampão a pH 7) : kmax 254 ( í 131°0);

Kmín 229 ( t 4800) ;

Sh 272 (£ 9800); (hidróxido de sódio 0,1N): /-max 271 (ÊH500); k min 233 (t- 5300); ηηη-^Η (D2o + NaOD) : J7,67 (S, 1H, H-8 da purina),7,20-7,55 (m,3H,ArH),6,76-6,79 (m,1H,ArH), 5,38 (s,2H,NCH2),4,70 (s, 2H,OCH2Ar), 3,53 (d, 2H, J = 8,8 Hz, CH2P); rmn-13C (D20 + NaOD): j168,34 (C4 ou C-6),161,29 (C-6 ou C- 29

-4),151,67 (C-2), 138,76 (C-8),135,39 (C-2' OU C-3'), 135,14 (C3' ou C--2'),130,08, 128,80, 127,96,126,78 (C--470-570-670-7^, 117,49 (C-5), 72,26 (d, 3J=ll,5 Hz,(C-8')-P), 68,65 (d, 1J=150 Hz, (C-10')-P), 43,87 (C-“1'); rmn-31P (D20 + NaOD): /14,10; em : m/e 366 (MH+), 202 (MH- -c6H6N5°>+'185 (C8H10°3P)+' 152 (c5_ H6N5°)+' 110 (CH304P)+.

Exemplo 4

Preparação do ácido (O-f^-amino-l.e-di-hidro-e-oxo-gH--purin-9-il)metil)-fenoxi)metil-fosfónico (Composto 4) A) Preparação de (3-(hidroxi-metil^ fenoxi^metil-fosfona- to de dietilo

Preparou-se uma solução de trifluoro-metil-sulfonato (dietoxi-fosforil)metilo e S.S.Andrew, Tet.Lett. 27. (13) 1477-80 (1986) (7,26 g. 24,2 mmoles) em dimetil- -formamida (5 ml) e adicionou-se a uma mistura agitada de álcool 3-hidroxi-benzílico (2,00 g, 16,1 mmoles) (Aldrich), de carbonato de césio (7,88 g, 24,2 mmoles) (Aldrich) e de dimetil-formamida (20 ml) . Depois de se ter agitado à temperatura ambiente durante uma hora, verteu-se a mistura de reacção em água (50 ml) e extraiu-se com éter dietílico (3 x 100 ml). Pro cedeu-se à combinação das fases orgânicas e à sua lavagem com água (50 ml), e com uma solução salina saturada (50 ml) e depois secou-se com sulfato de sódio durante várias horas. Evaporou-se a fase orgânica rotativamente in vacuo para proporcionar um óleo côr de âmbar claro. Obteve-se mais produto por concentração da fase aquosa práticamente até à secagem e extraindo o resíduo com acetato de etilo (100 ml) . Filtrou-se a mistura e concentrou-se o filtrado até à secagem. Extraiu-se o resíduo semi-sólido utilizando dicloro-me tano (50 ml) e depois filtrou-se a mistura. Combinou--se o filtrado com um óleo obtido proveniente da ex- 30

tracção com éter e concentrou-se a mistura para proporcionar um óleo sob pressão reduzida originando finalmente um óleo côr de âmbar (5,45 g) . Dissolveu-se esse óleo em dicloro-metano (25 ml) e adicionou-se a solução a uma coluna intermitente (50 mm de diâmetro) carregada com Gel de Sílica 60 (40-63μ) humedecida de dicloro-metano. Efectou-se a eluição da coluna primeiro com dicloro-metano (500 ml) ; e depois com me-tanol/dicloro-metano (1:99) (500 ml); a seguir com metanol/dicloro-metano (2:98) (500 ml); e depois com metanol/dicloro-metano (3:97) (500 ml), recolhendo-se fracções de 25 ml. Recolheu-se o material de valor Rf intermédio constituído por uma mistura de dois componentes. Combinou-se esse material com o produto que havia sido preparado de modo idêntico para se obter uma produção combinada de 4,19 g de um óleo côr de âmbar. Dissolveu-se esse óleo em dicloro-metano (50 ml) e efectuou-se uma cromatografia antes de se fazer a eluição utilizando primeiro dicloro-metano (500 ml); e depois metanol/dicloro-metano (2:98) (500 ml); e finalmente com metanol/dicloro-metano (5:95) (500 ml). Recolheu-se o material de valor mais elevado, efectuou-se a combinação das fracções e procedeu-se à evaporação rotativa in vacuo para proporcionar 1,42 g (17%) de (3-(hidroxi-metil)fenoxi)metil-fosfonato de dietilo com aspecto de um óleo com uma coloração ligeira contendo 1,6% de água; ccf, dicloro-metano/metanol (19:1),

Rf = 0,36; rmn (CDC13):J 6,85-7,32 (m, 4H, ArH), 4,67 (s, 2H,

CH2Ar), 4,15-4,30 (m, 6H, CH2P + 2 X OCH2),l,36 (t, 6H, 2 x CH3); em:m/e 275 (MH+), 257 (M-0H)+, 107 (C7H70)+. B) Preparação de CS-fcloro-metil)fenoxi)metil-fosfonato de dietilo

Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1D. Após o processamento e a co--evaporação com dicloro-metano obteve-se 1,30 g 31

(100%) de (3-(cloro-metil)fenoxi)metil-fosfonato de dietilo com o aspecto de um óleo ligeiramente dourado; ccf dicloro-metono/metanol (19:1),

Rf = o,5l; rmn (CDC13):Jô,88-7,35 (m, 4H, ArH), 4,55 (s, 2H, CH2C1), 4,15-4,33 (m, 6H, CH2P + 2 x 0CH2), 1,36 (t, 6H, 2 x CH3); em: m/e 293 (MH+), 257 (M-C1)+, 107 (C?H70)+. C) Preparação de (3-((2-amino-6-cloro-9H-purin-9-illme-til-fenoxi)metil-fosfonato de dietilo

Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1E. Efectuou-se a combinação das fracções cromatográficas que continham o produto límpido e efectuou-se a evaporação rotativa in vacuo para proporcionar 1,28 g (60%) de (3-((2-amino-6-clo-ro-9H-purin-9-il)metil)-fenoxi)metil-fosfonato de die tilo com o aspecto de um óleo amarelo claro, contendo como contaminantes 19% de éter bis-(dietil-fosfono--metílico) e 6,0% de dimetil-formamida; ccf, dicloro-metono/metanol (19:1),

Rf —0,30; rmn (DMSO-dg):Je,24 (s, 1H, H-8 da purina), 6,8-7,4 (m,4H,ArH), 6,96 (s br,2H,NH2), 5,25 (s, 2H, CH2Ar) , 4,40 (d, 2H, %=9,9-Hz, CH2P), 4,10 (q, 4H, 2xOCH2), 1,23 (t, 6H, 2 x CH3) ; em : m/e 426 (MH+) , 390 (Μ-Cl)+, 275 (MH-C5H1203P)+, 257 (m-c5h3n5ci)+. D) Preparação do ácido (3-((2-amino-1.6-di-hidro-6-oxo--9H-purin-9-il)metil)-fenoxi)metil-fosfónico Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1F. Efectuou-se a combinação das fracçóes adequadas provenientes da coluna de permuta iónica e depois liofilizou-se durante 48 horas para proporcionar 0,410 g (40%) de ácido (3-((2-amino-l,6--di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)metil)-fenoxi)metil-fosfonico sob a forma de um sal de amónio parcial, 32

p.f.= 295-3002C (dec.); uv (ácido clorídrico 0,1N): IL max 255 (t 11500) ; / min 234 ( 8 5900) ; Sh 279 (Ô 9100); (tampão a pH 7): ^max 254 (£ 11600); ^min 236 (<5 7200) ; sh 273 (ê 10100); (hidróxido de sódio 0,1N): i maX 272 < £ 11300> '· rmn-^H (D20) : 238 (t 5700); sh 259 ( 8- 9800) mm <^7,81 (s br,lH,H-8 da purina) ,6,78-7,30 (m,4H,ArH), 5,18 (S, 2H, CH2Ar), 4,06 rmn -13, (d, 2H, XJ = 9,6 Hz, CH2P); (D20) ^159,31, 159, 14, 158,84 (C-6/C-4/C- 4'), 153,65 (C-2),137,32 (C-8), 130,06 (C-3' e C-5'), 119,84 (C2' eC-6'), 113,99, 113,58 (C-5/C-7'), 64,04 (d, rmn-31P (D20) s

Exemplo 5 Preparação do ácido J=158 Hz, C-8'), 46,58 (C-l'); 14,94; em : m/e 352 (MH+). (4-((2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo-9H-pu- rin-9-il^metil^-fenoxi^metil-fosfónico (composto 51 A) Preparação de í4-hidroxi-metil^fenoxilmetil-fosfonato de dietilo

Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo ic com substituição do composto--4-tolueno-sulfonato de (di-isopropil-fosfono)metilo no Exemplo 1B por 4-toluenosulfonato de (dietil-fos-fono)metilo A. Holy e I. Rosenberg, Coll. Czech. Chem. Comm. 47, 3447-63 (1982)), e depois agitou-se a mistura de reacção â temperatura ambiente em vez de se ter agitado à temperatura de 402C. As fracções 33

Β)

C) cromatográficas foram submetidas a evaporação rotativa in vacuo para proporcionar 2,18 g (28%) de (4--(hidroxi-metil)-fenoxi)metil-fosfonato de dietilo com o aspecto de um óleo claro, contaminado com 16% de 4-tolueno-sulfonato de (dietil-fosfono)metilo; ccf, dicloro-metano/metanol (19:1),

Rf = 0,31; rmn (CDC13):X 7,10 (quarteto AB, 4H, ArH), 4,62 (s, 2H, CH2Ar), 4,15-4,35 (multipletos sobrepostos, 7H, CH2P/2 X 0CH2/0H), 1,32 (t, 6H, 2 x CH3); em:m/e 275 (MH+), 257 (M-0H)+, 245 (M-Et)+.

Preparação de (4-cloro-metil)fenoxi)metil-fosfonato de dietilo

Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1D. Após o processamento e a co--evaporação com dicloro-metano (2 x 50 ml) , obteve-se 2,49 g (104%) de (4-cloro-metil)fenoxi)metil-fosfona-to de dietilo com aspecto de um óleo amarelo claro, contendo como contaminante 14% de 4-tolueno-sulfonato de (dietil-fosfono)metilo; ccf, dicloro-metano/metanol (19:1)

Rf = 0,74; rmn (CDC13):® 7,12 (quarteto AB, 4H, ArH), 4,55 (s, 2H, CH2Ar), 4,1-4,3 (multipletos so brepostos, 6H, CH2P/2 X OCH2), 1,32 (t, 6H, 2 x CH3); em : m/e 293 (MH+), 257 (M-C1)+, 107 (CyH70)+.

Preparação de (4-((2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)-me-til)-fenoxi)metil-fosfonato de dietilo Preparou-se este composto por ura processo análogo ao descrito no Exemplo 1E. Efectuou-se a combinação das fracções cromatográficas adequadas e procedeu-se â evaporação rotativa in vacuo para proporcionar 1,24 g (37%) de (4-((2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)metil)fe-noxi)metil-fosfonato de dietilo com o aspecto de um óleo claro contaminado com 1,3% de dimetil-formamida, 34

2,5% de acetona, 18% de dicloro-metano, e 1,3% de água; ccf, dicloro-metano/metanol (19:1) R jP = 0,32; rmn (DMSO-d6) ίείδ,ΐδ (s, 1H, H-8 da purina) , 7,11 (quarteto AB, 4H, ArH), 6,92 (s, 2H, NH2), 5,19 (S, 2H, CH2Ar), 4,36 (d,2H, J=9,8 Hz, CH2P), 4,10 (m, 4H, 2xOCH2), 1,21 (t, 6H, 2 X CH3).

Preparação do ácido (4-((2-amino-1.6-di-hidro-6-oxo--9H-purin-9-iDmetil-fenoxi^metil-fosfónico Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1F. Efectuou-se a combinação das fracções adequadas provenientes da coluna de permuta iónica e fez-se a liofilização durante 96 horas para proporcionar 0,645 g (79%) de ácido (4-((2-amino-l,6--di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)metil)fenoxi)metil-fos-fónico sob a forma de um sal de mono-amónio, p.f. 280-2852C (dec). uv (ácido clorídrico a 0,1N): Â.max 254 (£ 9600); À. min ( £ 6900); sh 278 (£ 6700); (tampão a pH 7): £max 252 ( 8. 9900); /.min 241 8200); sh 271 ( C 8000); (hidróxido de sódio 0,1N): k max 270 (£9100); k min 242 < 5 6000)/ sh 259 (£.8200) πηη-^-Η (D20) : <5-7,80 (s br, ih, H-8 da purina), 7,10 (quarteto AB,4H,ArH), 5,14 (s, 2H, CH2 Ar), 4,10 (d, 2H, J = 9,9 Hz, CH2P); rmn-13C (D20): & 158,90/158,64/153,73 (C-6/C-4/C-2), 135,15 (C-5'), 128,87 (C-8 & C-4' e 35

C-6'), 128,51 (C-2') , 114,87 (C-5 e C-3' e C-7'), 64,15 (d, J = 158 Hz, 09') , 46,37 (C-l') ; rmn-31P (D20): S 15,081; em : m/e 352 (MH+), 257 (MH- -ch4o3p)+.

Exemplo 6

Preparação do ácido ff4-(f2-amino-1.6-di-hidro-6-oxo-9H-pu-rin-9-il)metil)-benzil)oxi)metil-fosfónico (Composto 6) A) Preparação de (4-(cloro-metil)benzil)oxi)metil-fosfo-nato de di-isopropllo

Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 2A. Efectuou-se a combinação das fracções adequadas provenientes da cromatografia em coluna e realizou-se a evaporação rotativa in vacuo para proporcionar 4,06 g (39%) de ((4-(cloro-metil)-benzil)oxi)metil-fosfonato de di-isopropilo com o aspecto de um óleo amarelo fluorescente,contaminado com 17% de bis-4-di-isopropil (((fosfono)metoxi)metil) ben-zeno; ccf, dicloro-metano/metanol (19:1)

Rf = 0,63; rmn (CDCl3):á 7,3-7,4 (quarteto AB, 4H, ArH), 4,77 (m, 2H, 2xOCH), 4,64 (s, 2H, OCH2),4,57 (s, 2H, CH2C1), 3,70 (d, 2H, J=8,7 Hz, CH2P), 1,33 (d, 6H, 2 X CH3), 131 (d, 6H, 2 X CH3) . B) Preparação de ((4-((2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)me-til)benzil)oxi)metil-fosfonato de di-isopropilo Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1E. Efectuou-se a combinação das fracções adequadas provenientes da cromatografia em coluna e realizou-se a evaporação rotativa in vacuo para proporcionar 3,09 g (60%) de ((4-((2-amino-6-clo ro-9H-purin-9-il)metil)benzil)-oxi)metil-fosfonato de di-isopropilo com o aspecto de um sólido amarelo esverdeado, p.f. 103-1062C; 36 ccf, dicloro-metano/metanol (9:1 = 0,66; rmn (DMSO-d6) :Js, 21 (s, 1H, H-8 da purina), 7,26 (quarteto AB, 4H, ArH), 6,92 (s br,2H, NH2), 5,27 (s, 2H, NCH2), 4,54 (d,2H, 2 X OCH),4,52 (S, 2H, CH2Ar), 3,70 (d, 2H,J=8,4 HZ, CH2P), 1,21 (d, 6H, 2x CH3), 1,19 (d, 6H, 2xCH3); em: m/e 468 (MH+), 432 (M-C1)+, 426 (MH-C3H6)+. C) Preparação de ((A-( ('2-amino-1.6-di-hidro-6-oxo-9H-pu-rin-9-il^-metil^benzil^ oxi^metil-fosfónico Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1F, com a excepção de se ter efectuado uma tentativa infrutífera de purificação por permuta iónica com "Q Sepharose" antes de se terem bons resultados utilizando "Sephadex DEAE". Efec-tuou-se a combinação das fracções adequadas provenientes da coluna de permuta iónica e depois fez-se a liofilização durante 48 horas e a seguir secou-se no vácuo à temperatura de 70^0 durante 18 horas para proporcionar 0,329 g (15%) de ácido ((4-((2-amino--1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)metil)benzil)-oxi)--metil-fosfónico sob a forma de um sal parcial de amónio, p.f. 160SC (amacia), >2602C (dec.)/ uv (ácido clorídrico 0,1N): y(max 253,5 (B 11800), 278 (& 7700) { min 230,05 (£4000); (tampão a pH 7): L max 252 (£12800); ^min 229,5 (£ 4600);

Sh 273 (£ 9200); (hidróxido de sódio 0,1N): k max 267 (É 11400); ( min 227,5 (£ 2100);

Sh 256 {t 10500) rmn-1H (D20 + NaOD): 7,73 (s, 1H, H-8 da purina), 7,21 37

(quarteto AB,4H,ArH), 5,10(s,2H,NCH2), 4,55 (s, 2H, CH2Ar), 3,54 (d, 2H, J = = 8,6 Hz, CH2P) ,* rmn-13C (D20 + NaOD): S158,88 (C-6), 153,85 (C-4), 151,12 C- -2), 139,58 (C-8), 137,79 (C-5'), 134,98 (C-2'),128,42 e 127,17 (C-3/C--47, C-6'10.-17) , 115,81 (C-5) , 73,94 (d, 3J=ll,5 Hz, C-87), 68,43 (d, ^-J = = 151 Hz, (C-107), 46,43 (C-l7); rmn-31P (D20 + NaOD): í-14,11; em : m/e 366 (MH+)

Exemolo 7

Preparação do ácido 2-((3-((2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo-9H--purin-9-il^metil^-benzil)oxi)etil-fosfónico (Composto 7) A) Preparação de 2-((3íhidroxi-metil)benzil)oxl)etil- -fosfonato de dletilo

Adicionou-se vinil-fosfonato de dietilo (6,18 ml,39,0 mmoles) (Aldrich) a uma mistura agitada magneticamente constituída por 1,3-benzeno-dimetanol (5,00g, 35,5 mmoles) (Aldrich) e por carbonato de potássio (0,491 g, 3,55 mmoles) (Mallinckrodt). Aqueceu-se a mistura de reacção a uma temperatura entre 110 e 1202C durante 20 horas, arrefeceu-se para a temperatura ambiente e depois extraiu-se com éter dietilico (200 ml) . Decantou-se a fase líquida e lavou-se com água (2 x x 25 ml) e depois secou-se com sulfato de sódio durante 18 horas. Filtrou-se a mistura e concentrou-se o filtrado por evaporação rotativa in vacuo utilizando um aspirador para proporcionar um óleo. Dissolveu-se esse óleo em acetato de etilo (75 ml) e depois aplicou-se a solução a uma coluna de Gel de Sílica 60 humedecida com acetato de etilo. Fez-se a eluição da coluna utilizando 1 litro de acetato de etilo, 1 1 de metanol/acetato de etilo (1:49), 1 1 de metanol/acetato de etilo (1:24), 1 1 de metanol/ace-tato de etilo (1:19) e 2 1 de metanol/acetato de etilo (1:9) tendo-se recolhido fracções de 50 ml. 38

Efectuou-se a combinação das fracções que continham o produto límpido (mancha principal com o valor Rf mais elevado) e evaporou-se por rotação in vacuo para proporcionar 1,98 g (18%) de 2-((3-(hidroxi-metil)-ben-zil)oxi)etil-fosfonato de dietilo com o aspecto de um óleo claro contaminado com 2,1% de água; ccf, acetato de etilo/metanol (19:1)

Rf = 0,62; rmn (CDC13):J 7,2-7,4 (m, 4H, ArH), 4,68 (s, 2H, 0CH2), 4,52 (s, 2H, 0CH2),4,08 (m, 4H, 2 X CH2), 3,72, (m, 2H, OCH2), 2,4 (s br, 1H, OH), 2,12 (m, 2H, CH2P); 1,29 (m, 6H, 2 x CH3); em: m/e 303 (MH+),285 (M-0H)+, 211 (C10H12O3P)+.

Preparação de 2-((3-(cloro-metil)benzil)oxi)etil-fos-fonato de dietilo

Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1D. Após o processamento obteve--se 2,44 g (102%) de 2-((3-(cloro-metil)benzil)oxi)-etil-fosfonato de dietilo (98% de pureza verificado por rmn), com o aspecto de um óleo; ccf, dicloro-metano/metanol (19:1)

Rf = 0,33; rmn (CDC13)7,2-7,4 (m, 4H, ArH), 4,59 (s, 2H, CH2C1), 4,53 (s, 2H, OCH2),4,10 (m, 4H, 2 X CH2), 3,76, (m, 2H, OCH2), 2,16 (m, 2H, CH2P), 1,31 (m, 6H, 2xCH3); em: m/e 321 (MH+),285 (M-C1)+, 166 (C6H1503P)+, 139 (C8H8C1)+.

Preparação de 2-((3-((2-amino-6-cloro-9H-ourin-9-i))-metil)benzil)oxi)etil-fosfonato de dietilo Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1E. Efectuou-se a combinação de fracções cromatográficas que continham um produto lím pido e evaporou-se por rotação in vacuo para proporcionar 2,07 g (68%) de 2-((3-((2-amino-6-cloro-9H--purin-9-il)(metil)benzil)oxi)etil-fosfonato de dieti lo com o aspecto de um óleo contaminado com 0,9% de 39

água; ccf, dicloro-metano/metanol (9:1);

Rf = 0,57; rmn (DMSO-dg) 8,24 (s,lH, H-8 da purina), 7,1- 7,4 (m, 4H, ArH), 6,96 (s, 2H, NH2), 5,31 (s, 2H, CH2), 4,46 (s,2H, OCH2), 3,97 (m, 4H, 2xCH2), 3,61 (m,2H,OCH2), 2,10 (m, 2H, CH2P), 1,22 (m,6H, 2xCH3); em: m/e 454 (MH+), 418 (M-Cl)+, 285 (C14~ H22o4P)+.

Preparação do ácido 2-((3-((2-amino-l.6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)metil}benzil)oxi^ etil-fosfónico Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1F. Efectuou-se a combinação das fracções adequadas provenientes da coluna de permuta iónica tendo sido efectuada uma lavagem com acetona e depois evaporou-se por rotação in vacuo. Dissolveu-se o sólido residual em água destilada desionizada (150 ml) e depois adicionou-se à mistura hidróxido de amónio concentrado (1 ml). Liofilizou-se a solução para proporcionar 1,34 g (77%) de ácido 2-((3-((2-amino--1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)-metil)benzil)oxi)-etil-fosfónico sob a forma de sal de mono-amónio, p.f. 1002C (amacia), >160QC (dec). uv (ácido clorídrico a 0 / IN) : A max 255 (£ 13200); Amin 230 ( í 4500); Sh 278 (& 8900); (tampão a pH 7): k max 254 (£ 13500); λ min 227 (t 100); sh 270 (t10500); (hidróxido de sódio 0,1N) • k max 269 (£ 12600); k min 232 (6 5600); sh 257 (t 11700) πηη-1!! (DMSO-dg) : 40

^7,78 (s, 1H, H-8 da purina), 7,0-7,4 (m, 4H, ArH), 6,73 (s br, 2H, NH2), 5,18 (s, 2H, CH2), 4,40 (s, 2H, OCH2), 3,59 (m, 2H, OCH2), 1,75 (m, 2H, J = 9 Hz, CH2P); rxnn-13C (DMSO-dg) : d 157,10 (C-6), 153,94 (C-4), 151,26 (C--2), 139,13 (C-4'), 137,40 (C-8), 137,21 (C-2'),128,46, 126,60, 126,15, 125,82 (C-3', C-5', C-6', C-7'), 116,36 (C-5),71,16 (C-8'), 66,60 (C--10'), 45,66 (C-l'), 30,54 (d, XJ = = 126 Hz, (C-P); rmn-31P (DMSO-dg): cP7,51; em : m/e 380 (MH+) , 254 (MH- -C2H6°4P>+·

Exemplo 8

Preparação do ácido fí3-((2-amino-1.6-di-hidro-6-oxo-9H- -purin-9-iHmetil)-benzil) tio)metil-fosfónico (Composto 8) A) Preparação de 2-amino-6-(2-metoxi-etoxi)-9H-purina Preparou-se este composto em conformidade com o método descrito por J. Kjellberg e N.G. Johansson, Núcleo sides & Nucleotides 8 (2) , 225-256 (1989). B) Preparação de 2-amino-9-(3-(cloro-metil)benzil)-6-(2--metoxi-etoxi^-9H-purina

Adicionou-se,* -dicloro-m-xileno (0,250 g, 1,43 mmo-les) (Aldrich) a uma mistura agitada magneticamente constituída por 2-amino-6-(2-metoxi-etoxi)-9H-purina (0,100 g 0,478 mmoles) por carbonato de césio anidro (0,171 g, 0,526 mmoles) (Aldrich) e por dimetil-for-mamida (2 ml) (Aldrich) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de azoto e durante 18 horas. Filtrou-se a mistura de reacção através de uma almofada de Gel de Sílica 60 e depois lavou-se essa almofada com di-cloro-metano (2 x 75 ml) . Submeteu-se os filtrados combinados a evaporação rotativa in vacuo utilizando um aspirador e depois submeteu-se a vácuo intenso para proporcionar um óleo côr de âmbar. Dissolveu-se 41

esse óleo em dicloro-metano (5 ml) e aplicou-se a solução a uma coluna de Gel de Sílica 60 humedecida com dicloro-metano. Efectuou-se a eluição da coluna com 100 ml de dicloro-metano e com 150 ml de metanol/di-cloro-metano, (1:19), recolhendo-se fracções de 20 ml. Efectuou-se a combinação das fracções que continham o produto líquido (mancha com o valor Rf inter médio) e submeteu-se a evaporação rotativa in vacuo proporcionar 0,041 g (23%) de 2-amino-9-(3-(cloro-metil)-benzil)-6-(2-metoxi-etoxi)-9H-purina no estado sólido e de côr branca com o aspecto semelhante ao do vidro, contaminado com 10% de d '-dicloro-m-xileno e 3% de metanol, p.f. 123-125SC; ccf, dicloro-metano/metanol (19:1)

Rf = 0,25; rmn (DMS0-dg) :J7,98 (s, 1H, H-8 da purina), 7,1-7,4 (m, 4H, ArH), 6,45 (S br,2H,NH2), 5,27 (S, 2H, NCH2), 4,73 (S,2H, CH2Cl),4,53 (m, 2H, OCH2), 3,70 (m, 2H, OCH2),3,31 (s, 3H, OCH3); em: m/e 348 (MH+), 312 (M-C1)+, 139 (C8H8C1)+. C) Preparação de (acetil-tio)metil-fosfonato de di-iso- propilo

Adicionou-se fosfito de tri-isopropilo (15,7 ml, 60,3 mmoles) (Aldrich) a uma quantidade de acetil-sulfeto de bromo-metilo (10,2 g, 60,3 mmoles) cuja preparação foi feita em dois passos a partir de ácido tio-acético e de paraformaldeído em conformidade com o método descrito por G.K. Farrington, A. Kumar e F.C Wedler, Org. Prep. Proced. Int. 21 (3), 390-392 (1989). Agitou-se a mistura magneticamente e aqueceu-se à tem peratura de 130SC durante 3 horas utilizando um sifão de Dean-Stark para remoção do sub-produto 2-bromo-pro pano. Depois destilou-se a mistura em diversas fracções. Procedeu-se à recolha das duas fracções mais límpidas tendo-se obtido uma quantidade de 8,9 g de produto. Dessas fracções aquela que possuía o ponto 42

de ebulição superior proporcionou 2,7 g (18%) de (ace til-tio)metil-fosfonato de di-isopropilo no estado líquido e incolor; p.e. 115-1252C (0,65 mm Hg); rmn (CDC13):§ 4,71 (m, 2H, 2 x OCH), 3,18 (d, 2H, CH2P), 2,37 (S, 3H, CH3), 1,31 (m, 12H, 4 X ch2); em: m/e 255 (MH+),213 (MH-C3-H6)+, 171 (MH-2 X C3H6)+. D) Preparação de ((3-(f2-amino-6-f2-metoxi-etoxi)-9H-pu- rin-9-il)metil)benzil)tio)metil-fosfonato de di-iso-propilo

Dissolveu-se sódio metálico (0,089 g, 3,9 mmoles) (AI drich), sob aquecimento, numa mistura de 2-propa-nol/etanol (2 ml/0,5 ml). A esta solução adicionou-se gota a gota (acetil-tio)metil-fosfonato de di-isopropilo (0,989 g, 3,89 mmoles). Decorridos 15 minutos adicionou-se esta solução a uma outra solução de 2-amino-9-(3-(cloro-metil)benzil)-6-(2-metoxi-etoxi)--9H-purina (1,23 g, 3,01 moles) e de dimetil-forma-mida seca (20 ml) (Aldrich) à temperatura ambiente. Agitou-se a mistura magneticamente durante 18 horas à temperatura ambiente e depois verteu-se em água (100 ml). Extraiu-se a mistura aquosa com dicloro-metano (3 x 125 ml), utilizando uma solução salina saturada para desfazer a emulsão. O extracto orgânico foi submetido a lavagem com água (2 x 50 ml), e com uma solução salina e depois secou-se com sulfato de sódio durante 2 horas. Concentrou-se a mistura filtrada para proporcionar um óleo por evaporação rotativa in vacuo utilizando um aspirador e depois sob vácuo intenso. Dissolveu-se esse óleo em 25 ml de uma mistura de metanol/dicloro-metano (1:19) e depois aplicou-se a solução a uma coluna de Gel de Sílica 60 humedecida com uma mistura de metanol/dicloro-metano (1:19). Fez -se a eluição da coluna com 500 ml de metanol/-dicloro-metano (1:19), 500 ml de metanol/dicloro-metano (7:93) e 500 ml de metanol/dicloro-metano (1:9), recolhendo-se fracções de 50 ml. Procedeu-se à combi- 43

nação das fracções que continham a mancha principal de valor Rf mais elevado e evaporou-se por rotação in vacuo à temperatura de 65 2C sob vácuo intenso durante 0,5 horas para proporcionar 0,36 g (21%) de ((3- ((2-amino-6-(2-metoxi-etoxi)-9H-purin-9-il)metilX benzil)-tio)-metil-fosfonato de di-isopropilo com o aspecto de um óleo amarelo claro contaminado com 6% de metanol; ccf, dicloro-metano/metanol (9:1) uv (CH30H): ^ max 283, 248: / min 262, 233; rmn (DMS0-d6): /7,96 (s, 1H, H-8 da purina), (m, 4H, ArH), 6,44 (s br, 2H, NH2), 5,26 (S,2H, NCH2),4,56 (m, 4H, 2XOCH+ +0CH2), 3,88 (S,2H, SCH2),3,70 (m, 2H, 0CH2), 2,67 (d, 2H, CH2P),1,24 (m,12H, 4 x CH3); em: m/e 524 (MH+), 492 (M--0CH3)+, 213 (C7H1803PS)+, 171 (C4H12-03PS)+, 129 (CH603PS)+.

Preparação do ácido ((3~( ('2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo--9H-purin-9-il)-metil)benzil)tio)metil-fosfónico Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1E. Procedeu-se à combinação das fracções indicadas provenientes da coluna de permuta iónica efectuando uma lavagem com acetona e depois evaporou-se por rotação in vacuo. Dissolveu-se o sólido branco em água destilada e desionizada (50 ml) e depois liofilizou-se a solução. Secou-se o sólido no vácuo à temperatura de 902C durante 6 horas para proporcionar 0,141 g (49%) de ácido ((3-((2-amino-l,6 -di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)metil)benzil)tio)-metil -fosfónico sob a forma de mono-hidrato de sal de amónio parcial, p.f. 154-1602C (amacia), >200^0 (dec.); uv (ácido clorídrico a 0,1N): 44

^ max 254 (S 12500) / min 232 (â 6700) ; sh 279 (£-8300) ; (tampão a pH 7): h max 255 (£ 11900) λ- min 230 ( S 8600); sh 271 (è 9700); (hidróxido de sódio 0,1N) • • A max 269 (£’ 11800); h min 235 (£ 7300); sh 256 (ê 11100) πηη-^Ή (DMS0-d6) :

Jl0,8 (s br, 1H, NH) , 7,80 (S, lH,H-8 da purina), 7,0-7,4 (m, 4H# ArH)/ 6,65 (S br, 2H, NH2), 5,17 (s, 2H, NCH2), 3,82 (s, 2H, SCH2),2,39 (d, J = 13 Hz, 2H, CH2P); rmn-13C (DMSO-dg): J157,27 (C-6), 154,12 (C-4), 151,58 (C--2),139,41 (C-2' OU C-4'),137,79(C-8), 137,57 (C-4' OU C-2'),128,92, 128,58, 128,30, 125,65 (C-3',C-5',C-6',C-7'), 116,75 (C-5), 45,98 (C-l'), 36,02 (C--8'), 27,26 (d, = 138 Hz, (C-P); rmn-31P (DMSO-dg): S17,74; em : m/e 382 (MH+), 255 (MH- -ch4o3ps)+.

Exemplo 9

Preparação do ácido (E)-3-(3-((2-amino-l.6-di-hidro-6-oxo- -9H-purin-9-il)-metil)fenil)-2-propenil-fosf6nico (Composto 91 A) Preparação de 2-propenil-fosfonato de di-isopropilo

Durante 3 horas aqueceu-se à temperatura de 120SC uma mistura magneticamente agitada constituída por brometo de alilo (10,0ml, 0,0116 mmoles) (Aldrich) e por fosfito de tri-isopropilo (30,1 ml, 0,116 moles) (Aldrich) . Com um sifão de Dean-Stark recolheu-se o sub--produto 2-bromo-propano. Destilou-se a mistura de 45

reacção sob vácuo intenso para proporcionar diversas fracções. Apenas a fracção final recolhida estava i-senta de fosfito de tri-isopropilo,tendo proporcionado 8,6 g (36%) de 2-propenil-fosfonato de di-isopro-pilo no estado líquido e incolor, p.e, 51-56eC (0,5-0,6 mm Hg); rmn (CDC13):J 5,78 (m, 1H, H de vinilo), 5,17 (m, 2H, CH2 do Vinilo), 4,68 (m,2H,2xOCH), 2,55 (rn, 2H, CH2P), 1,30 (m, 12H, 4 x CH3). B) Preparação de f3-(3-fhidroxi-metil)fenil-2-propenil)- -fosfonato de fE)-di-isopropilo

Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito por Y. Xu, X. Jin, G. Huang, e Y. Huang, Syn thesis 7, 556-558 (1983), para a preparação de 2-a-ril-eteno-fosfonatos de dietilo a partir de brometos de arilo e de vinil-fosfonato de dietilo. Neste exemplo fez-se o acopolamento do álcool 3-iodo-benzílico ao vinil-fosfonato de dietilo. Após um processamento adequado dissolveu-se o óleo impuro (10,8 g) em 100 ml do dicloro-metano e depois aplicou-se a solução a uma coluna de Gel de Sílica 60 humedecida com dicloro-metano. Fez -se a eluição da coluna com 500 ml de dicloro-metano, 500 ml de metanol/dicloro-metano (1: :99), 500 ml de metanol/dicloro-metano (1:49), 500 ml de metanol/dicloro-metano (3:97), 500 ml de metanol/ /dicloro-metano (1:24) e 1 1 metanol/dicloro-metano (1:19), recolhendo-se fracções de 50 ml. Procedeu-se à combinação das fracções que continham a marcha prin cipal e evaporou-se por rotação in vacuo para proporcionar 9,64 g (67%) de (3-(3-(hidroxi-metil)-fe-nil)-2-propenil)-fosfonato de (E)-di-isopropilo com o aspecto de um óleo dourado contaminado com 7% de 2--propenil-fosfonato de di-isopropilo; ccf, dicloro-metano/metanol (19:1)

Rf ·— 0,23;

rmn (CDC13):Ç 7,2-7,4 (m, 4H, ArH), 6,50 (m, 1H, H do vinilo),6,18 (m, 1H, H do vinilo), 4,68 (m, 4H, OCH2+2xOCH), 2,71, (m,2H, 46

12Η, 4 x CH3); em: m/e 313 (MH+),295 (M-OH)+, 271 (MH-C3H6)+, 207 (CgH20“ 03P)+, 165 (C6H1403P)+, 123 (C3Hg- 03P)+.

Preparação de (3-(3-cloro-metil)fenil-2-propenil)fos-fonato de (E)-di-isopropilo

Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1D. Fez-se uma tentativa infrutífera de purificar o óleo impuro proveniente do proces sarnento, em coluna de Gel de Sílica 60, utilizando como solvente de eluição uma mistura de dicloro-me-tano/metanol. Procedeu-se à combinação das fracções adequadas que continham o produto e depois evaporou--se por rotação in vacuo. Dissolveu-se o óleo residual em acetato de etilo (100 ml) e depois filtrou-se a solução por sucção através de uma almofada de 5 cm de Gel de Sílica 60 recorrendo a lavagens sucessivas com acetato de etilo, (3 x 250 ml) . Efectuou-se a combinação dos filtrados de acetato de etilo e depois evaporou-se por rotação in vacuo para proporcionar 2,57 g (79%) de 3-(3-(cloro-metil)-fenil)-2-propenil-fosfonato de (E)-di-isopropilo com aspecto de um óleo amarelo claro contaminado com 1,3% de acetato de etilo e 1,3% de água; ccf, dicloro-metano/metanol (19:1)

Rf = 0,52;

rmn (CDC13):i 7,2-7,4 (m, 4H, ArH), 6,50 (m, 1H, H do vinilo),6,19 (m,lH,H de vinilo),4,72 (m, 2H, 2 X OCH) , 4,57, (s, 2H, Ct^C1) , 2,72 (m, 2H, CH2P), 1,32 (m, 12H, 4 x CH3); em: m/e 331 (MH+), 295 (M-C1)+, 289 (MH-C3H6+, 247 (MH-2 x C3H6)+. Preparação de 3-(3-(f2-amino-6-cloro-9H-purin-9-ill-metil)fenil)-2-propenil-fosfonato de (E)-di-isopropi-lo

Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1E. Efectuou-se a combinação das 47

fracções cromatográficas que continham o produto límpido e evaporou-se por rotação à temperatura de 70sc durante 0,5 horas sob vácuo para proporcionar 2,18 g (68%) de 3-(3-((2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)metill fenil)-2-propenil-fosfonato de (E)-di-isopropilo com aspecto de um vidro incolor contaminado com 2% de água, p.f. 35-422C; ccf, dicloro-metano/metanol (9:1) = 0,55; rmn (DMS0-d6) :^8,26 (s, 1H, H-8 da purina), 7,1-7,4 (m, 4H, ArH), 6,97 (s br,2H,NH2), 6,53 (m, 1H, H de vinilo), 6,09 (m, 1H,H de vinilo), 5,31 (s, 2H, NCH2), 4,56 (m, 2H, 2 x OCH), 2,75 (m, 2H, CH2P); 1,22 (m, 12H, 4xCH3); em: m/e 464 (MH+),428 (M-C1)+, 422 (MH-C3H6)+.

Preparação do ácido (Έ)-3-(3-((2-amino-1.6-di-hidro--6-oxo-9H-purin-9-il)metil)fenil)-2-propenil-fosfõni-co

Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1F. Efectuou-se a combinação das fracções adequadas provenientes da coluna de permuta iónica e depois evaporou-se por rotação in vacuo. Dis solveu-se o sólido residual em água destilada e de-sionizada (150 ml) e adicionou-se à mistura uma quantidade de 1 ml de hidróxido de amónio concentrada para efectuar a dissolução. Liofilizou-se a solução durante 72 horas para proporcionar 1,08 g (62%) 1,5 hidrato do ácido (E)-3-(3-((2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo--9H-purin-9-il)metil)fenil)-2-propenil-fosfónico sob a forma de sal de mono-amónio, p.f. 1802C (amacia), >200^0 (dec.); uv (ácido clorídrico a 0,IN): k max 254 (£ 31100); /vmin 229 (£ 11600) ; sh 283 (t- 10600) ; (tampão de pH 7): 48

k max 255 (t 32700); λ min 229 (& 820°); (hidróxido de sódio 0,1N); Ãmax 259 ( 8 31400) ; A. min 232 (£ 11700) ricin-1H (DMS0-d6) : } 7,77 (s, 1H, H-8 da purina), 6,9-7,4 (m, 4H, ArH),6,74 (s br, 2H,NH2),6,29 (m, 2H, 2 x H de vinilo), 5,11 (s, 2H, NCH2), 2,40 (m,2H, CH2P); rxnn-13C (DMSO-d6) : S 157,16 (C-6), 153,92 (C-4), 151,21 (C--2), 137,95 (C-27 OU C-47)/ 137,37 (C--8), 137,26 (C-47 OU C-2), 129,85 (d, 3 J=13 HZ, P-C-87), 126,46 (d, 2J = 10 Hz, P-C-97), 128,65, 125,13, 124,86, 124,59 (C-37, C-5',C-67,C-77), 116,33 (C-5) , 45,70 (C-l7), 35,02 (d, ^=132 Hz, C-P); rmn-31P (DMS0-d6): S17,85; em : m/e 362 (MH+), 282 (MH- -H03P)+.

Exemplo 10

Preparação do ácido 2-(3-(f2-amino-1.6-di-hidro-6-oxo-9H--purin-9-il)itietil) anilino) -2-oxo-etil-fosfónico (Composto 10^ A) Preparação de 2-cloro-acetato de 3-f2-cloro-acetami- do)benzilo

Gota a gota adicionou-se uma solução de cloreto de cloro-acetilo (6,47 ml, 82,7 mmoles) (Aldrich) em di-cloro-metano (50 ml) a uma mistura agitada magneticamente constituída por álcool 3-amino-benzílico (5,00 g, 39,4 mmoles) (Aldrich), por 4-dimetil-amino-piri-dina (0,486 g, 3,94 mmoles) (Aldrich) por trietil-a-mina (11,5 ml, 82,7 mmoles) (Eastman) e por di-cloro--metano (50 ml) à temperatura de 52C. Depois de se ter completado a adição (45 minutos) agitou-se a mistura de reacção durante 72 horas à temperatura ambi- 49

ente. Verteu-se a mistura de reacção numa massa de gelo/ãgua (150 ml) e depois extraiu-se a mistura com dicloro-metano (150 ml) . Lavou-se o extracto de diclo ro-metano utilizando ácido clorídrico 0,1N (3 x 100 ml). Extraiu-se novamente a fase aquosa combinada uti lizando dicloro-metano (100 ml) e depois evaporou-se a fase orgânica combinada submetendo-a a rotação in vacuo. Dissolveu-se o óleo residual em dicloro-metano (100 ml) e aplicou-se a solução a uma coluna de Gel de Sílica 60 humedecida com dicloro-metano. Fez -se a eluição da coluna com 500 ml de dicloro-metano, 500 ml de metanol/dicloro-metano (1:99), 500 ml de metanol /dicloro-metano (1:49), e 1 1 metanol/dicloro- metano (3:97), recolhendo-se fracções de 50 ml. Procedeu-se à combinação das fracções que continham o produto límpido (mancha principal de valor mais elevado) e depois fez-se a evaporação por rotação in vacuo para proporcionar 5,87 g de um sólido amarelo claro. Uma porção deste sólido (0,138 g) recristali-zou a partir de hexano/acetato de etilo (20 ml; 10 ml) , seguindo-se depois a diluição com hexano (10 ml) . Após o arrefecimento sobre gelo recolheu-se o produto sólido por filtração e secou-se no vácuo à temperatura de 502C para proporcionar 0,0931 g (67%) de 2-cloro-acetato de 3-(2-cloro-acetamido)benzilo, p.f. 84-852C; ccf, dicloro-metano/metanol (19:1)

Rf = 0,65; rmn (CDC13): 1 8,26 (s br,ΙΗ,ΝΗ),7,15-7,65 (m,4H, ArH) 5,22 (s, 2H, OCH2), 4,20 (s, 2H, O(C0)- CH2), 4,12, (s, 2H, N(CO)CH2); em: m/e 275 (M+), 183 (M-C2H3C1N0)+, 182 (M- c2h2cio2)+.

Preparação de 2-(di-isopropoxi-fosforoil)acetato de -3-(2-(di-isopropoxi-fosforoil))acetamido)-benzilo Preparou-se uma mistura de fosfito de tri-isopropilo (10,5 ml, 42,5 mmoles) (Aldrich) e de 2-cloro-acetato 50

de 3-(2-cloro-acetamido)benzilo (5,59 g, 20,2 mmoles) e aqueceu-se a uma temperatura entre 110 e 1202C durante 4 horas em balão aberto. Dissolveu-se a mistura de reacção em dicloro-metano (100 ml) e depois aplicou-se a solução a uma coluna carregada com Gel de Sílica 60 humedecida com dicloro-metano. Fez-se uma tentativa infrutífera de efectuar a resolução dos produtos da mistura utilizando como eluente uma mistura de metanol/dicloro-metano. Efectuou-se a combinação das fracções que continham o produto e evaporou-se por rotação in vacuo e depois dissolveu-se o óleo residual em acetato de etilo (100 ml). Aplicou--se a solução a uma coluna de Gel de Silica 60 humedecida com acetato de etilo. Fez-se a eluição da coluna com 2 1 de acetato de etilo, 500 ml de meta-nol/acetato de etilo (1:49), 500 ml de metanol/ /acetato de etilo (3:97), 500 ml de metanol/acetato de etilo (1:24), e 1 1 metanol/acetato de etilo (1: :19), recolhendo-se fracções de 50 ml. Efectuou-se a combinação das fracções que continham o produto lím pido (mancha principal de valor Rf inferior) e depois evaporou-se por rotação in vacuo para proporcionar 5,32 g (47%) de 2-(di-isopropoxi-fosforoil)-acetato de 3-(2-di-isopropoxi-fosforoil)acetamido)benzilo com aspecto de um óleo côr-de-laranja claro contaminado com 3% de acetato de etilo e 2% de água; ccf, dicloro-metano/metanol (19:1)

Rf = 0,2; rmn (CDC13): / 9,05 (s br,ΙΗ,ΝΗ), 7,1-7,6 (m,4H,ArH), 5,13 (S, 2H, 0CH2), 4,73 (m,2H, 2xOCH), 2,98, (d, 2H, CH2P), 2,96 (d,2H, CH2P), 1,32 (m, 24H, 8 x CH3); em: m/e 536 (MH+), 494 (MH-C3H6)+,452 (MH-2xC3Hg)+. C) Preparação de 2-(3-hidroxi-metil)anilino)-2-oxo-etil- -fosfonato de di-isopropilo

Dissolveu-se sódio metálico (0,197g, 8,55mmoles) (Al-drich) em etanol absoluto (25 ml). Preparou-se uma so lução de 2-(di-isopropoxi-fosforoil)-acetato de 3— (2— 51

-di-isopropoxi-fosforoil)acetamido) benzilo (4,16 g, 7,77 nnoles) em etanol absoluto (25 ml) e adicionou-~se gota a gota, durante 5 minutos, a uma solução a-gitada magneticamente constituida por etóxido de sô-dio/etanol. Após 3 horas de agitação à temperatura ambiente adicionou-se à mistura de reacção, gota a gota, ácido clorídrico IN (8,55 ml). Evaporou-se a mistura de reacção por rotação in vacuo e triturou-se o resíduo e extraiu-se com éter dietílico (2 x 150 ml). O extracto orgânico combinado foi submetido a evaporação por rotação in vacuo para proporcionar um óleo amarelo. Dissolveu-se esse óleo em acetato de etilo (100 ml) e depois aplicou-se a solução a uma coluna Gel de Sílica 60 humedecida com acetato de eti lo. Fez-se a eluição da coluna com 1 1 de acetato de etilo e com 1,5 1 de metanol/acetato de etilo (1:19), recolhendo-se fracções de 50 ml. Efectuou-se a combinação das fracções que continham o produto límpido (mancha principal de valor Rf inferior) e depois evaporou-se por rotação in vacuo utilizando um aspirador e depois sob vácuo intenso à temperatura de 60SC para proporcionar 2,12 g (77%) de 2-(3-hidroxi-metil)a-nilino)-2-oxo-etil-fosfonato de di-isopropilo com aspecto de ura óleo amarelo claro, contaminado com 4% de acetato de etilo e 2,5% de água; ccf, dicloro-metano/metanol (19:1)

Rf = 0,18; rmn (CDCI3): cf 9,17 (s br,ΙΗ,ΝΗ), 7,0-7,5 (m,4H,ArH), 4,76 (m, 2H, 2X0CH), 4,62 (m,2H, 0CH2), 2,99, (d, 2H, CH2P), 1,8 (s br,lH, OH), 1,36 (m, 12H, 4 x CH3); em: m/e 330 (MH+), 312 (M-0H)+, 288 (MH-C3H6)+, 246 (MH-2 X C3H6)+.

Preparação de 2-f3-ícloro-metil)anilino)-2-oxo-etil--fosfonato de di-isopropilo

Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1D. Dissolveu-se em acetato de etilo (75 ml) o óleo residual proveniente do processa 52

mento e depois aplicou-se a solução a uma coluna de Gel de Sílica 60 humedecida com acetato de etilo. Fez, -se a eluição da coluna com 2 1 de acetato de etilo, tendo sido recolhidas primeiro fracções de 50 ml (# 1-8) e depois fracções de 25 ml. Procedeu-se à combinação das fracções que continham o produto límpido (mancha principal do valor superior) e depois evaporou-se por rotação in vacuo para proporcionar 1,71 g de um sólido branco. Uma porção deste sólido (0,100 g) recristalizou a partir de hexano (20 ml), e depois arrefeceu-se a solução sobre gelo. Recolheu-se o sólido por filtração e secou-se no vácuo à temperatura de 502C durante 18 horas para proporcionar 0,0738 g (74%) de 2-(3-cloro-metil)-anilino)-2-oxo-etil-fosfo-nato de di-isopropilo no estado sólido e de côr branca, p.f. 106-1082C; ccf, dicloro-metano/metanol (19:1)

Rf = 0,23; rmn (CDC13): cf 9,02 (s br,ΙΗ,ΝΗ), 7,1-7,7 (m,4H,ArH), 4,76 (m,2H, 2XOCH), 4,56 (S,2H, CH2Cl), 2,97 (d, 2H, CH2P), 1,36 (m, 12H, 4 x CH3); em: m/e 348 (MH+), 312 (M-C1)+, 306 (MH-C3H6)+, 264 (MH-2 x C3H6)+, 141 (c7h8cin)+. E) Preparação de 2-(3-((2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)- metil)anilino)-2-oxo-etil-fosfonato de di-isopropilo Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1E. Dissolveu-se em acetato de etilo (100 ml) o óleo obtido a partir do processamento e depois aplicou-se a solução a uma coluna de Gel de Sílica 60 humedecida com metanol/acetato de etilo (1:19). Fez-se a eluição da coluna com 1 1 de meta-nol/acetato de etilo (1:19) e com 2 1 de meta- nol/acetato de etilo (1:9), recolhendo-se fracções de 50 ml. Procedeu-se à combinação das fracções que continham o produto límpido (mancha principal do valor Rf mais elevado) e depois evaporou-se por rotação 53 in vacuo para proporcionar 1,43 g (66%) de uma espuma branca. Uma porção deste sólido (0,120 g) recrista-lizou a partir de acetato de etilo/hexano/metanol e depois arrefeceu-se a solução sobre gelo. Procedeu-se à recolha dos sólidos por filtração e à sua secagem no vácuo à temperatura de 70sc durante 18 horas para proporcionar 0,0914 g (76%) de 2-(3-((2-amino-6-clo-ro-9H-purin-9-il)metil)anilino)-2-oxo-etil-fosfonato de di-isopropilo no estado sólido e de côr branca, contaminado com 1,8% de acetato de etilo, p.f. 194-195QC; ccf, dicloro-metano/metanol (9:1), R^ = 0,36; rmn (DMSO-d6) 10,03 (s br, 1H, NH), 8,25 (s, 1H, H-8 da purina), 6,9-7,6 (m, 4H, ArH), 6,98 (s br, 2H, NH2), 5,33 (s,2H,CH2), 4,63 (m, 2H, 2 x OCH), 2,99 (d, 2H, CH2P); 1,24 (m,12H,4xCH3); em: m/e 481 (MH+), 445 (M-C1)+, 439 (M-C3H6)+. F) Preparação do ácido 2—(3— Γf2-amino-l.6-di-hidro-6- -oxo-9H-purin-9-il)metil)anilino)-2-oxo-etil-fosfóni-co

Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1F. Efectuou-se a combinação das fracções adequadas provenientes da coluna de permuta iónica e depois fez-se a evaporação por rotação in vacuo. O sólido residual foi submetido a co-evapo-ração com etanol (2 x 50 ml) até à secagem e depois dissolveu-se em água destilada e desionizada (50 ml) . Adicionou-se à mistura hidróxido de amónio concentrado (0,5 ml) para efectuar a dissolução e depois lio-filizou-se a solução durante 18 horas para proporcionar 0,258 g (24%) de di-hidrato do ácido 2-(3-((2--amino-l,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)metil)anilino) -2-oxo-etil-fosfónico sob a forma de um sal parcial de amónio (0,75), p.f. 205-2252C (dec.); uv (ácido clorídrico 0,1N): 54

X max ^49 (£22300); / min 226 (g-H300); sh 278 (£-9700); (tampão de pH 7): λ max 249 (£ 24000); k min 224 (£6300); sh 274 (0 15000); (hidróxido de sódio 0,1 N): k max 249 <E 28100); /vmin 228 (£.13200); sh 269 ( t 1500); rim-1! (DMSO-dg): o 10,73 (s br, 1H, H-8 da purina), 7,75 (s, 1H, H-8 da purina),6,7-7,6 (m, 4H,

ArH), 6,60 (s br, 2H, NH2), 5,14 (s, 2H, CH2), 2,57 (d, 2J=20 Hz, 2H,CH2P). rmn-13C (DMSO-dg): £167,35 (d, 2J=4 Hz, C-8' amida) , 157,14 (C-6),153,90 (C-4),151,37 (C-2),139,93 (C-2' ou C-4'), 137,64 (C-8), 137,60 (C-4' OU C-2'),128,90, 120,95, 118,02, 117,48, (C-3',C-5',C-6', C-7'), 116,46 (C-5), 45,82 (C-l'), 40,32 (d, J=117 Hz, C-9'); rmn-31P (DMS0-d6): £ 11,61; em : m/e 379 (MH+).

Exemplo 11

Preparação do ácido 3-(í2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin- -9-il^metil)-benzil-fosfónico fComposto 11^ A) Preparação de 3-cloro-metil)benzil-fosfonato de di- -isopropilo

Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito para preparação de 3-(cloro-metil)benzil-fos fonato de dietilo em conformidade com C.F. Bigge et al., J.Med.Chem. 32, 1580 (1989). Durante 2 horas aqueceu-se à temperatura de 1302C uma mistura dec>t,o£^ -dicloro-m-xileno (10,4 g, 59,4 mmoles) (Aldrich) e de fosfito de tri-isopropilo (4,89 ml, 19,8 mmoles) 55

(Aldrich). Deixou-se volatilizar o sub-produto 2-clo-ro-propano libertando-o do recipiente de reacção. Adicionou-se à mistura de reacção dicloro-metano (50 ml) após o primeiro arrefecimento até à temperatura ambiente e depois aplicou-se a solução a uma coluna de Gel de Sílica 60 humedecida com dicloro-metano. Fez-se a eluição da coluna com 500 ml de dicloro-metano e com 1 1 de metanol/dicloro-metano (5:95), recolhendo-se fracções de 50 ml. Procedeu-se à combinação das fracções que continham o produto (mancha principal de valor Rf intermédio) e depois evaporou--se por rotação in vacuo para proporcionar 5,59 g (89%) de 3-(cloro-metil)benzil-fosfonato de di-isopro pilo com o aspecto de um óleo amarelo claro contaminado com 3% de água e com 0,4% de metanol; ccf, dicloro-metano/metanol (19:1)

Rf = 0,6; rmn (CDCI3) : S 7,2-7,4 (m,4H,ArH), 4,59(m,2H,2XOCOH), 4,56 (s,2H, CH2C1), 3,10 (d, J=22 Hz, 2H, CH2P), 1,21 (m, 12H, 4x CH3); em: m/e 305 (MH+), 269 (M-C1)+, 263 (MH-C3H6)+, 221 (MH-2 x C3-H6)+, B) Preparação de 3-f(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)me- til)benzil-fosfonato de di-isopropilo

Preparou-se este composto por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1E. Efectuou-se a combinação das fracções cromatográficas que continham o produto límpido e depois evaporou-se por rotação in vacuo para proporcionar 5,33 g de um óleo amarelo o qual não pos suia pureza suficiente. Dissolveu-se uma porção desse óleo (3,8 g) em acetato de etilo (100 ml) e depois aplicou-se a solução a umaa coluna de Gel Sílica 60 humedecida com acetato de etilo. Fez-se a eluição da coluna com 500 ml de acetato de etilo, 500 ml de me-tanol/acetato de etilo (1:49), 500 ml de meta-nol/acetato de etilo (3:97), 500 ml de metanol/ /acetato de etilo (1:24), 500 ml de metanol/acetato de etilo (1:19), 500 ml de metanol/acetato de etilo 56

(3:47) e 500 ml de metanol/acetato de etilo (7:93) recolhendo-se fracções de 50 ml. Procedeu-se à combinação das fracções que continham o produto límpido e depois evaporou-se por rotação in vacuo para proporcionar 3,08 g (49%) de um óleo que cristalizou lentamente. Uma porção deste sólido (3 g) recristalizou a partir de acetato de etilo/pentano (75 ml:250 ml). Arrefeceu-se a solução com gelo e decorridas 2 horas procedeu-se à recolha dos sólidos por filtração e à sua secagem à temperatura de 502C no vácuo durante 3 horas para proporcionar 250g de 3-((2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)metil)-benzil-fosfonato de di-isopro-pilo no estado sólido e de côr branca, p.f. 99-1012C; ccf, dicloro-metano/metanol (19:1),

Rf — 0,22; uv (ácido clorídrico 0,1N): k max 312 (£ 7500); k min 268 <£ 1500> '· sh 245 (£ 6100); (tampão a pH 7): λmax309 (fe 7600); k min 266 «Ç 1200) ;

Sh 247 (t 5400) ,* (hidróxido de sódio 0,1 N): /Vmax 309 (£ 7400); Á min 266 (£H00); sh 247 (£5300); rmn (DMSO-dg): ^8,18 (s, 1H, H-8 da purina), 7,0-7,4 (m, 4H, ArH), 6,90 (S, 2H, NH2), 5,25 (s, 2H, CH2), 4,38 (m, 2H, 2 X OCH), 3,09 (d, J=22 Hz, 2H, CH2P), 1,05 (m, 12H, 4 x CH3); em m/e: 438 (MH+), 404 (MH2-C1)+.

Preparação do ácido 3-((2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo--9H-purin-9-il)-metil)benzil-fosfónico 57

Preparou-se este composto por um processo análogo do descrito no Exemplo 1F. Procedeu-se à combinação das fracções adequadas provenientes da coluna de permuta iónica e depois evaporou-se por rotação in vacuo. D is solveu-se o sólido residual em água destilada e desio nizada (80 ml) e depois liofilizou-se a solução duran te 48 horas. Procedeu-se à secagem dos sólidos à temperatura de 509C no vácuo para proporcionar 0,859 g (66%) de hidrato parcial (1,6) do ácido 3-((2-amino--1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)metil)benzil-fosfó- nico sob a forma de um sal parcial de amónio (0,75) p.f. 2302C (amacia), 265-3002C (dec.); uv (ácido clorídrico 0 r IN) : ^ max 254 (í 6900)? λ ^ min 230 (c 2500) ; Λ sh 278 (£ 4700); (tampão de pH 7): ^ max 253 (í 7500) ; ^ min 231 (£ 3300) ; sh 270 (S 5700) ; (hidróxido de sódio 0,1 N) : ^max 268 (í 6800) ; ^ min 235 (t 3400); sh 256 (£ 6300) ,· rim-1!! (D20) : à 7,71 (s, 1H, H-8 da purina), 7,2-7,3 (m, 3H, ArH),6,88 (s br, 1H, ArH),5,19 (s, 2H, CH2), 2,81 (d, J = 20 Hz, 2H, ch2p). rmn-13C (D20): ^ 168,18 (C-6), 161,16 (C-4), 151,38 (C--2), 139,10 (d, 2J=8 Hz, C-4'),138,52 (C-8), 135,96 (C-2'), 129,02, 128,50, 128,32, 123,36, (C-3',C-5',C-6',C-7'), 117,41 (C-5), 46,54 (C-l'); 37,12 (d, 1J=122 HZ, C-P); rmn-31P (D20): F 101 dl ^ 7,93; em : m/e 336 (MH+), 186 (MH- 58

-c5h4n50)+.

Exemplo 12

Preparação do ácido ((3-(f2-amino-8-bromo-l.6-di-hidro-6--oxo-9H-purin-9-il)metil)benzil) oxi)metil-fosfónico (Composto 12 ^ A) Preparação do ácido ((3-(í2-amino-8-bromo-l.6-di-hi-

» dro-6-oxo-9H-Purin-9-il^metil^ oxi^metil-fosfónico Gota a gota adicionou-se a uma solução aquosa saturada de bromo (17 ml) e uma solução agitada magneticamente constituída por sal de mono-amónio com o ácido ((3-((2-amino-l, 6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)metil)_ benzil)-oxi)metil-fosfónico (0,88 g, 2,30 mmoles e por água (100 ml) à temperatura ambiente. Formou-se um precipitado e depois concentrou-se a mistura até ao volume de 25 ml por evaporação rotativa in vacuo. Arrefeceu-se a mistura sob gelo durante 30 minutos e efectuou-se a recolha dos sólidos por filtração. Permaneceu uma goma amarela sobre a almofada e evaporou--se o filtrado por rotação in vacuo para proporcionar 1,36 g de um sólido amarelo claro. Esse sólido foi parcialmente dissolvido em água destilada e de-sionizada (500 ml) e depois adicionou-se hidróxido de amónio concentrado (0,5 ml) à mistura para efectuar a dissolução. Submeteu-se a solução a cromatografia por um processo análogo ao descrito no Exemplo 1F. Efec-tuou-se a combinação das fracções adequadas provenientes da coluna de permuta iónica e depois evaporou-se por rotação in vacuo. Dissolveu-se o sólido residual em água destilada e desionizada (50 ml) e depois liofilizou-se a solução durante 64 horas para proporcionar 0,369 g (34%) de mono-hidrato do ácido ((3-((2-amino-8-bromo-l,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9--il)metil)benzil)oxi)-metil-fosfónico sob a forma de sal de mono-amónio, p.f. >1922c (dec.); uv (ácido clorídrico 0,1N): i max 259 ( í 14500); K min 228 (&5100); 59

sh (£ 10400); 277 k (tampão de pH 7): i max 259 (í 14700); kmín 227 (fcl800);

Sh 276 (έ 11000); (hidróxido de sódio 0,1 N): h max 273 (fc 1240°)! / min 234 (6 5500); sh 263 (& 11500); rmn—^H (DMS0-d6) : ^7,2-7,4 (m, 3H, ArH) , 6,97 (s br, 3H, NH2 + ArH), 5,13 (s, 2H, CH2), 4,50 (s, 2H, CH20), 3,37 (d, XJ = 8 Hz, 2H, CH2P); rmn-13C (DMS0-d6): í155,96, 154,53, 152,75, (C-2, C-4, C- -6), 139,41 (C-4'), 135,88 (C-2'), 128,48, 126,82, 126,48, 125,37 (C-3', C-5', C-6',C-7'),120,68 (C-8), 116,72 (C-5), 72,78 (d, 3J = 10 Hz, C-8'), 66,76 (d, XJ = 171 Hz, C-P), 46,41 (C--1'); em : m/e 444 (79Br), 446 (81Br), (MH)+.

Exemplo 13

Preparação de ((3-((2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9--il)metil)benzil)oxilmetil-fosfonato de di-isopropilo ^Composto 13) A) Preparação de ((3-((2-amino-1.6-di-hidro-6-oxo-9H-PU- rin-9-il)metiHbenzil^oxi^roetil-fosfonato de di-isopropilo

Adicionou-se 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano (0,886 g, 7,66 mmoles) (Aldrich) a uma solução agitada magneticamente constituída por ((3-((2-amino-6-cloro-9íí-pu-rin-9-il)metil)benzil)oxi)metil-fosfonato de di-isopropilo (1,71 g, 3,65 mmoles) e por dicloro-metano seco (25 ml) à temperatura ambiente. Decorridas gua-tro horas adicionou-se mais 1,4-diazabiciclo[2.2.2]-octano (0,443 g, 3,83 mmoles). Depois de se ter agi- 60 »

tado durante 1 hora, adicionou-se à mistura o composto 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (0,601 ml, 4,02 mmoles) (Aldrich) e manteve-se a agitação durante 18 horas. Os produtos voláteis foram libertados por evaporação rotativa in vacuo e depois submeteu-se o resíduo a co-evaporação com acetona/água (50 ml:5 ml) , acetona (30 ml) e dicloro-metano (2 x 30 ml) . Dissolveu-se o óleo amarelo residual em dicloro-metano (50 ml) e depois adicionou-se a mistura a uma coluna Gel de Sílica 60 humedecida com dicloro-metano. Fez-se a eluição da coluna com 500 ml de dicloro--metano, 500 ml de metanol/dicloro-metano (1:99), 500 ml de metanol/dicloro-metano (1:49), 1 1 de meta nol/dicloro-metano (1:19), 500 ml de metanol/dicloro--metano (7:93), e 1 1 metanol/dicloro-metano (1:9), recolhendo-se fracções de 50 ml. As fracções que continham o produto (mancha principal do valor mais elevado) estavam contaminadas com cloridrato de l,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno. Efectuou-se a combinação das fracções que continham o produto e eva porou-se por rotação in vacuo para proporcionar 1,7 g de óleo amarelo claro. Tratou-se esse óleo com água/ /acetona (35 ml:5 ml) e depois arrefeceu-se a mis tura sobre gelo durante 10 minutos. Recolheu-se por filtração produtos sólidos de côr branca e lavou-se a almofada com água fria (15 ml). Após secagem por sucção durante 18 horas deixou-se o produto sólido re-cristalizar a partir de acetona/metanol (50 ml:2 ml) e filtrou-se a solução quente. Adicionou-se água ao filtrado e reduziu-se o volume da solução para 10 ml por evaporação por rotação in vacuo♦ Adicionou-se isoprapanol (5 ml) à solução e reduziu-se novamente o volume para 5 ml por evaporação por rotação in vacuo. Tratou-se a mistura com tolueno (25 ml) e submeteu--se a evaporação rotativa in vacuo até se obter um resíduo sólido humedecido. Triturou-se o sólido com éter dietílico (100 ml) , recolheu-se por filtração e secou-se à temperatura de 70sc no vácuo durante 18 61

horas para proporcionar 0,389 g (23%) de ((3-((2-ami no-1,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)metil)benzil)oxil metil-fosfonato de di-isopropilo no estado sólido e de côr branca contaminado com 2% de água, p.f. 80-842C (amacia), 90-1002C; ccf, diclorometano/metanol (9:1),

Rf = 0,28; uv (ácido clorídrico 0,1N): k max 255 (B12700); k min 230 (B 5100); sh 279 (£ 8600); (tampão a pH 7): L 'v max 254 (3 14300) ; k min 227 (t 2800) ; sh 271 (í 11000); (hidróxido de sódio 0,1 N) : k max 268 (^ 11300) ; k min 237 (8 6400); sh 257 ((^ 10600) ; rmn-lH (DMSO- d6): <Ç 10, 56 (s br, 1H, NH), 7 ,75 (s, 1H, H- -8) , 7,1- 7,4 (m, 4H, ArH), 6,45 (s br, 2H, nh2) , 5,19 (s, 2H, ch2 ), 4, 59 (m, 2H, 2 X OCH), 4,54 (s, 2H, och2 )/ 3,74 (d, XJ = 8 HZ, 2H, CH2P ), 1,22 (m, 12H, 4 x ch3) ; rmn-13C (DMSO :d6): ( à 156 ,77 (C -6), 153,63 (C -4) , 151 ,20 (C- -2) , 137, 92 (C-8), 137, 40 (d, 4 J=2 Hz, C-4 '), 128,67, 126,96, 126 ,48, 126 ,19 (c- 2', C- 3', C-5', C-6' ,c- 7'), 116,50 (c- 5), 73 ,69, (d, 3J = 13 HZ, C-8 70, 17 (d, 2J = 6 Hz, 2 X C -13') , 64,12 (d, % = 165 HZ, C-10') , 45,60 (c- 1'), 23, 72 (4 X C-14'); rmn31P (DMSO- p®) ^ 20, 19; em - m/e 450 (MH+ ), 408 (MH- c3- %) + , 194 (C7H15O4P)+/ 153 (c4h 9°4 P)+. 62 gweBaá

bSSsíE f^^pTSBSssamaa i

Exemplo 14

Preparação do ácido 3-(3-((2-amino-lr6-di-hidro-6-oxo-9H-pu-rin-9-il^metil^ fenil^-propil-fosfónico A) Preparação do ácido 3-(3-((2-amino-l,6-di-hidro-6- -oxo-9H-purin-9-il)metil)fenil)-propil-fosfónico Preparou-se uma mistura de sal de monoamónio do ácido (E) 3-(3-((2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)- metil)fenil)-2-propenil-fosfónico (0,488 g, 1,35 mmo-les) de hidrato de óxido de platina ( 0,200 g) (EM Science) e de uma solução aquosa de etanol a 50% (50 ml) e agitou-se numa garrafa de vidro de paredes espessas num aparelho de hidrogenação de Parr em atmosfera de hidrogénio à pressão de 3 atmosferas durante 20 horas. Filtrou-se a mistura de reacção através de uma almofada de celite com a espessura de 2,5 cm e lavou-se com etanol absoluto (50 ml). Adicionou-se hidróxido de amónio concentrado (0,1 ml) aos filtrados combinados e evaporou-se a solução rotativamente no vácuo. Evaporou-se o resíduo conjuntamente com eta nol absoluto (1 x 25 ml ) para proporcionar um sólido branco que foi dissolvido em água destilada desio-nizada (50 ml). Adicionou-se hidróxido de amónio (0,1 ml) à mistura e depois aqueceu-se a mistura para efeç. tuar a dissolução. Filtrou-se a solução através de papel de filtro canelado e depois liofilizou-se o fil trado durante 18 horas para proporcionar 0,353 g (72%) do ácido 3-(3-((2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo-9H--purin-9-il)metil)fenil)-propil-fosfónico como hidrato (1,95 moles) de sal parcial de amónio (0,5 moles), p.f. 165-1752C (amacia), >240^C (decomposição); uv (ácido clorídrico 0,1N): A max 255 ( έ 12000); / min 230 (^ 4400); (tampão a pH 7): 12200); 2000); ^ max 254 <£ X min 228 ( (hidróxido de sódio 0,1 N): k max 269 (£ 10900); 63

λ min 232 < 4600); ritin- 1Η (DMSO-d6) : J 7,75 (s, 1H, H-8 da purina), 6,9-7,2 (m, 4H, ArH), 6,75 (s br,2H,NH2)/ 5,11 (S, 2H, NCH2)/ 2,54 (t, 2H, CH2Ar), 1,70 (m, 2H, CH2P), l/35 (m' 2H' CH2^' rmn-13C (DMSO-d6): ^157,49 (C-6), 154,29 (C-4), 151,65 (C--2), 142,96 (C-2' OU C-4'), 137,72 (C--8), 137,34 (C-4' ou C-2'), 128,77, 127,95, 127,82, 124,62 (C-3', C-5', C--6',C-7'),116,72 (C-5), 46,06, (C-l'), 36,40 (d, J = 15 Hz, C-8'), 28,80 (d, % =136 Hz, C-P), 25,77 (d, J = 2,4

Hz, C-9') , rmn31P (DMSO-d6): J-22,843; em: m/e 364 (MH+) .

Enzimoloaia

Efectuou-se a purificação de fosfo-rilase dos nucleósidos da purina (PNPase) a partir de eritrocitos humanos recorrendo ao procedimento de Agarwal et al. (l). Antes da utilização dessalificou-se a PNPase e a oxidase da xantina (2) . As preparações da enzima dessali-ficada apresentaram-se estáveis pelos menos durante seis meses quando armazenadas a uma temperatura de -702C em tampão Tris-HCl 10mM,pH 7,5. Submeteu-se a PNPase a um ensaio espectrofotométrico conforme anteriormente descrito (2). Para além da PNPase, as misturas de reacção continham inosina 0,1 M, fosfato de potássio lmM, tampão Tris=HCl 100 mM (pH 7,5) e oxidase da xantina na proporção de 0,2 U/ml. Efectuou-se a medição da fosforilase da inosina a 293 nm (/\2 = — 1 —1 . 12,5 nM ,-cm ). Medxu-se a percentagem de inibição (%I) da PNP com uma concentração única de inibidor (3). Adicionou-se a quantidade suficiente de inibidor à mistura de reacção com o objectivo de proporcionar uma percentagem de inibição de aproximadamente 50% sempre que possível. A constante de inibição aparente (K^.), foi calculada a partir da percentagem de inibição assumindo uma inibição competitiva (4), tal 64

como foi observado para o aciclovir e seus análogos e seus derivados fosforilados (2). 1. Agarwal, R.P., Agarwal, K.C. and Parks, R. E., Jr. (1978) Methods Enzvmol. 51, 581-586. 2. Tuttle J.V and Krenitsky,T.A. (1984) J.Biol.Chem 259, 4065-4069 (100/%I)-1 3. %I - 100 [I] -------------; em que [I] -concentração 1 + ([S]/!^') do inibidor [S] = inosina

concentração = 0,1mMf e = Km aparente para a inosina=0,04 mM.

Inibição da fosforilase dos nucleosidos da purina

Composto NB. Ki (μΜ) Composto 1 0,013 Composto 3 0,22 Composto 4 0,90 Composto 2 0,006 Composto 5 68 Composto 6 5,8 Composto 7 0,091 Composto 8 0,0011 Composto 9 0,073 Composto 10 0,150 Composto 11 0,460 Composto 12 0,0046 Composto 13 1,4

Os exemplos que se seguem ilustram . formulações farmacêuticas de acordo com a presente invenção. 65

Solução iniectável É possível preparar uma solução para injecção intramuscular misturando:

Composto de fórmula (I) Dimetil-sulfóxido mono-oleato de sorbitano óleo de milho 9,5 partes em peso 19,0 partes em peso 4,5 partes em peso 67,0 partes em peso 100,0

Solução iniectável Composto de fórmula (I) N-metil-pirrolidona Tween 8 0 Span 80 peso Miglyol 812 5 partes em peso 48,3 partes em peso 2 partes em peso 4,7 partes em 40 partes em peso100,0

Comprimido Composto de fórmula (I) Lactose BP Celulose microcristalina BP ("Avicel pH 101") Hidroxi-propil-celulose substituída inferior BP ("LHPC LH-11") Glicolato de amido de sódio BP ("Explotab") Povidona BP ("K30n) Esterarato de magnésio BP 25.0 mg 48,5 mg 10.0 mg 10.0 mg 3.0 mg 3.0 mg 0,5 mg 100,0 mg . Suspensão oral 66

50 mg 75 mg 3,5 ml 5 mg 0,01% w/v 0,1 % v/v 0,2 % v/v 5 ml até

Composto de fórmula (I) Avicel RC 591 Xarope de sacarose Hidroxi-benzoato de metilo Corante

Aroma de cereja Tween 80 Água

Suspensão iniectável 100 mg 170 mg 0,2% v/v 0,1% v/v 3 ml

Composto de fórmula (I) Polivinil-pirrolidona (PVP) Tween 80

Hidroxi-benzoato de metilo Água para injecções até Cápsula

Composto de fórmula (I) 100 mg Amido 1500 150 mg Estearato de s magnésio 2,5 mg em cápsulas de gelatina rígida

Suspensão para nebulizacão

Composto de fórmula (I) 1,0 mg esteril Água para injecções até 10,0 ml

Dispersou-se o composto de fórmula (I) em água para injecções previamente esterilizada num recipiente estéril. Procedeu-se ao enchimento de ampolas de vidro estéreis, numa quantidade de 10 ml / âmpola sob condições asépticas e depois vedou-se cada ampola fundindo o vidro.

Formulação para aerossol 1,0 mg até 5,0 ml

Composto de fórmula (I), micronizado

Propulsor para aerossol 67 i

Com o composto de fórmula (I) micronizado preparou-se uma suspensão no propulsor para um aerossol. Com esta suspensão procedeu-se ao enchimento de recipientes para aerossóis, na quantidade de 5 ml/recipiente sob pressão, através do orifício da válvula. Pó para inalação

Composto de fórmula (I) , micronizado 1,0 mg

Lactose 29,0 mg

Triturou-se e misturou-se o composto de fórmula (I) micronizado conjuntamente com a lactose. Com a mistura pulverulenta resultante procedeu-se ao enchimento de cápsulas de gelatina rígida, na quantidade de 30 mg por cápsula.

Gotas nasais

Composto de fórmula (I) 100,0 mg Hidroxi-benzoato de metilo 10,0 mg Água para injecções até 10,0 ml

Preparou-se uma dispersão do composto de fórmula (I) e de hidroxi-benzoato de metilo em água para injec-ções. Com esta suspensão procedeu-se ao enchimento de frascos conta-gotas adequados, na quantidade de 10 ml/frasco, e fechou-se cada frasco resguardando o bocal de gotejamento e a tampa do frasco. 68

Claims

REIVINDICAÇÕES - lã - Processo para a preparação de um composto de fórmula geral (I)

ou de um seu sal ou um seu éster farmacêuticamente aceitáveis, em que os símbolos X1 e X3 os quais são iguais ou diferentes, e representam individualmente o átomo de azoto ou um grupo CH e o símbolo

X2 representa o átomo de azoto ou grupos CR4, em que o radical R4 representa hidrogénio, hidroxi, halo ou um grupo NHR^ em que o radical R5 representa um átomo de hidrogénio, ou um grupo alquilo(C^-C^) ou alquil(C1-C4)-carbonilo, representando pelo menos um dos símbolos X1, X2 e O X o átomo de azoto; o radical R1 representa um grupo amino ou o átomo de hidrogénio; o radical R2 representa hidrogénio, halo, SH, um grupo NHR6 em que o radical R6 representa o átomo de hidrogénio, ou um grupo al quilo(C1-C4) ou alquil(C1-C4)-carbonilo ou o radical 69

? 7 ♦ R representa um grupo OR em que o radical 7 , R representa o atomo de hidrogénio, ou um grupo al quilo (C1-C4); alcoxi-alquilo (C1-Cg) ou ben-zilo; o radical ^ _ R representa um grupo fenilo substituído na posição orto por um grupo X4P03H2 em que o símbolo X4 representa uma cadeia alquileno possuindo entre 1 e 3 átomos de carbono contendo opcionalmente uma ligação dupla e facultativamente substituído por um grupo oxo ou o símbolo X4 representa uma cadeia contendo um ou dois grupos meti leno opcionalmente substituído por um grupo oxo e contendo um átomo de oxigénio, um grupo S(0)t em que o símbolo Q t representa 0, 1 ou 2 ou um grupo NR em que o radical R8 representa o átomo hidrogénio ou um grupo alquilo (C^-c^) ou benzilo ou substituído na posição meta por grupo X5P03H2 em que o símbolo X representa uma cadeia alquileno contendo entre 2 e 4 átomos de carbono contendo opcionalmente uma ligação dupla e facultativamente substituído por um grupo oxo

ou o símbolo 5 X representa uma cadeia contendo dois ou três grupos me tileno opcionalmente substituído por um grupo oxo e contendo um átomo de oxigénio, um grupo S(0)t em que o símbolo t representa 0, 1 ou 2 ou um grupo NR8 confor me anteriormente referido, sendo o grupo fenilo opcionalmente substituído por um a quatro átomos de halogéneo, por um grupo alquilo (C1~C4) ou halo-alquilo(C1-C4) ou por uma cadeia -CH=CH-CH=CH- formando um grupo naftilo; ou o radical R representa um grupo tienilo opcionalmente substituí do na posição orto ou meta por um grupo X4P03H2 ou X5P03H2 respectivamente 70

em que os símbolos X4 e X5 possuem as significações anteriormente definidas, caracterizado por no caso de o símbolo X3 representa o átomo de azoto, • 9 T se fazer reagir um composto de fórmula LCH2R , em que o radical 3 .... . . . R possui as significações anteriormente definidas, no qual os grupos hidroxi são protegidos e L representa um grupo removível, com um composto de fórmula (II) R2»

em que os símbolos R1 e X1 possuem as significações anteriormente definidas e os símbolos R2*5 e X2*3 são grupos R2 e X2 tal como anteriormente definido ou correspondem a esses grupos substituídos por um grupo de protecção adequado, e depois se remover facultativamente quaisquer gru pos de protecção presentes: no caso dos radicais X4 ou X5 conterem átomos de enxofre ou oxigénio ou um grupo NR8, se fazer reagir um composto de fórmula 0 com um composto 11 X8(CH2)r-P-OR9 de fórmula (III): OR9 71

em que os símbolos R2t\ X1 e X2b possuem as significações anteri-ormente definidas e R representa um grupo alquilo(Cy-Cg) ou aralqui- lo(C7-Cg) e o símbolo r representa o inteiro 1, 2, 3 ou 4, um dos símbolos 7 „ v8 X representam um grupo de fórmula S(0)tH, OH • Q /-v ni w r\ Ί λ + λ λ κ»/4 η /1-¾ 1 e X Q , ou NR Η em que o símbolo t e o radical R possuem as significações anteriormente definidas e o símbolo v representa o inteiro 0, 1, 2 ou 3, sendo a soma de r e v correspondente a 1, 2 ou 3, no caso de X4 e sendo correspondente a 2, 3 ou 4 no caso de X , apos o que se pode fazer remover facultativa-mente quaisquer grupos de protecção; c) se fazer a conversão de um composto de fórmula (I) a partir de outro composto de fórmula (I) , por exemplo no caso de o radical R representar o grupo hidroxi, ou se fazer a hidrólise de um composto de fórmula (IV) ;

72 (XV)

em que os símbolos R1, R3, X1, X2 e X3 possuem as significações anteriormente definidas e o radical R10 representa halo. - 2ã - Processo de acordo com a reivindica ção 1 para a preparação de um composto de fórmula (Ia): R2a

ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, caracterizado pelo facto de X e XJ serem iguais ou diferentes e representarem mdivi-dualmente o átomo de azoto ou um grupo CH e X2 representar o átomo de azoto ou um grupo CR^ em que o radical R^ representa hidrogénio, hidroxi,halo ou um grupo NHR5 em que o radical R representa o átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo (C1-C4) ou alquil(C1-C4)carbonilo, representando pelo menos um dos símbolos X1, X2 e X3 o átomo de azoto; R representar o grupo amino ou o átomo de hidrogénio; R2a representar hidrogénio, halo, SH, um grupo de fórmula NHR6 em que o radical R representa o átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo (C^-C^) ou alquil (C^-C^) -carbonilo ou R2a representa um grupo 0R7a em que o radical 73

R7a representa o átomo de hidrogénio ou um grupo al quilo (C^C^) ou benzi lo; R3a representar um grupo fenilo substituído na posição orto por um grupo de fórmula X4aP03H2 em que X4a representa uma cadeia alquileno contendo entre 1 e 3 átomos de carbono opcionalmente substituído por um grupo oxo ou X4a representa uma cadeia contendo um ou dois grupos meti leno opcionalmente substituído por um grupo oxo e contendo um átomo de enxofre ou de oxigénio ou um gru po NR8 que o o radical R8 representa o átomo de hidrogénio ou um grupo al quilo(C-^-C^) ou benzilo ou substituído na posição meta por um grupo X5aP03H2 em que X5a representa uma cadeia alquileno contendo entre 2 e 4 átomos de carbono opcionalmente substituído por um grupo oxo ou, X5a representa uma cadeia contendo dois ou três grupos me tileno opcionalmente substituído por um grupo oxo e contendo um átomo de enxofre ou de oxigénio ou um Q ... grupo NR conforme anteriormente definido, sendo ainda o grupo fenilo opcionalmente substituído por um a quatro átomos de halogéneo, por um grupo alquilo (C^— C^) ou halo-alquilo (C1~C4) ou por uma cadeia -CH=CH--CH=CH- formando um grupo naftilo; ou R3 representar um grupo tienilo facultativamente substituído na posição orto ou meta por um grupo de fórmula X4aP03H2 ou X5aP03H2 em que respec-tivamente X4a e X5a possuem as significações anteriormente definidas. - 3^ - Processo de acordo com qualquer das reivindicações anteriores caracterizado pelo facto de X1 e X3 representarem o átomo de azoto. 74

- 48 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações anteriores caracterizado pelo facto de X2 representar o grupo CH. _ 5a _ Processo de acordo com qualquer das reivindicações anteriores caracterizado pelo facto de R1 representar o grupo NH2. - 6ã - Processo de acordo com qualquer das reivindicações anteriores caracterizado pelo facto de R2 e R representarem o grupo hidroxi. - 7 a - Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 ou 3 a 6 caracterizado pelo facto de R3 representar um grupo fenilo substituído na posição orto por um grupo de fórmula X6P03H2 ou na posição meta por um grupo de fórmula X7P03H2 em que X6 e X7 contêm individualmente um átomo de oxigénio ou um grupo S (0)^, tal como anteriormente definido e um ou dois grupos metileno. - 8^ - Processo de acordo com com qualquer das reivindicações anteriores caracterizado por se preparar o ácido ((3-((2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo-9H-purin-9-il)me-til)benzil)metil-fosfónico. - 9a - Processo para a preparação de uma composição farmacêutica caracterizado por se incorporar como ingrediente activo um composto quando preparado de acordo com qualquer das reivindicações anteriores em conjunto com um veículo farmaceuticamente aceitável. 75 » A requerente reivindica a prioridade do pedido de patente britânico apresentado em 26 de Setembro de 1990, sob ο N2. 9020931.3. Lisboa, 25 de Setembro de 1991

76