RO106655B1 - Sistem tridimensional de cultura de tesuturi si celule - Google Patents
Sistem tridimensional de cultura de tesuturi si celule Download PDFInfo
- Publication number
- RO106655B1 RO106655B1 RO135557A RO13555787A RO106655B1 RO 106655 B1 RO106655 B1 RO 106655B1 RO 135557 A RO135557 A RO 135557A RO 13555787 A RO13555787 A RO 13555787A RO 106655 B1 RO106655 B1 RO 106655B1
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- cells
- tissue
- cell culture
- dimensional
- vitro
- Prior art date
Links
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 title description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 92
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims abstract description 73
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 39
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 36
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 61
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 30
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 claims description 24
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 12
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 11
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 11
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 11
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 claims description 11
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 10
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 9
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 7
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 7
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 5
- -1 polypropylene Polymers 0.000 claims description 5
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000007943 implant Substances 0.000 claims description 4
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 3
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims description 2
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 claims description 2
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 claims description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 claims description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 2
- 239000002729 catgut Substances 0.000 claims description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003668 pericyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 claims description 2
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 claims description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 claims description 2
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 claims description 2
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 claims description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 claims description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 2
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 claims description 2
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 claims description 2
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 claims 4
- 238000002513 implantation Methods 0.000 claims 4
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 claims 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 claims 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 claims 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 27
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 11
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 abstract description 5
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 abstract description 5
- 230000010076 replication Effects 0.000 abstract 2
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 abstract 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 15
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 14
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 9
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 6
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 6
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 4
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 4
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 4
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 4
- HHZQLQREDATOBM-CODXZCKSSA-M Hydrocortisone Sodium Succinate Chemical compound [Na+].O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)COC(=O)CCC([O-])=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 HHZQLQREDATOBM-CODXZCKSSA-M 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 3
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 229950006240 hydrocortisone succinate Drugs 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 210000002107 sheath cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 2
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 2
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 2
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 210000001865 kupffer cell Anatomy 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000004994 reproductive system Anatomy 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010048396 Bone marrow transplant rejection Diseases 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 206010008805 Chromosomal abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 101100117236 Drosophila melanogaster speck gene Proteins 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 102100033167 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 206010060872 Transplant failure Diseases 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 238000011256 aggressive treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008246 gaseous mixture Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000788 granulopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 238000012606 in vitro cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000008722 morphological abnormality Effects 0.000 description 1
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000013630 prepared media Substances 0.000 description 1
- 230000003014 reinforcing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0697—Artificial constructs associating cells of different lineages, e.g. tissue equivalents
- C12N5/0698—Skin equivalents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B90/00—Instruments, implements or accessories specially adapted for surgery or diagnosis and not covered by any of the groups A61B1/00 - A61B50/00, e.g. for luxation treatment or for protecting wound edges
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
- A61L27/60—Materials for use in artificial skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0647—Haematopoietic stem cells; Uncommitted or multipotent progenitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B10/00—Instruments for taking body samples for diagnostic purposes; Other methods or instruments for diagnosis, e.g. for vaccination diagnosis, sex determination or ovulation-period determination; Throat striking implements
- A61B10/02—Instruments for taking cell samples or for biopsy
- A61B10/0233—Pointed or sharp biopsy instruments
- A61B10/025—Pointed or sharp biopsy instruments for taking bone, bone marrow or cartilage samples
- A61B2010/0258—Marrow samples
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/09—Coculture with; Conditioned medium produced by epidermal cells, skin cells, oral mucosa cells
- C12N2502/094—Coculture with; Conditioned medium produced by epidermal cells, skin cells, oral mucosa cells keratinocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/13—Coculture with; Conditioned medium produced by connective tissue cells; generic mesenchyme cells, e.g. so-called "embryonic fibroblasts"
- C12N2502/1323—Adult fibroblasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/13—Coculture with; Conditioned medium produced by connective tissue cells; generic mesenchyme cells, e.g. so-called "embryonic fibroblasts"
- C12N2502/1394—Bone marrow stromal cells; whole marrow
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/30—Synthetic polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/30—Synthetic polymers
- C12N2533/40—Polyhydroxyacids, e.g. polymers of glycolic or lactic acid (PGA, PLA, PLGA); Bioresorbable polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/70—Polysaccharides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Surgery (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Prezenta invenție se referă la un sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, folosit în tratarea maladiilor care distrug celulele de măduvă osoasă sau reduc abilitatea lor funcțională sau de reproducere.
Se cunosc metode de transplant a măduvei osoase de la un donator sau pacient prin introducerea unei perechi de ace de aspirație și în legătură cu o pereche de seringi, presiunea fiind reglată pentru îndepărtarea selectivă a tnăduvei osoase și a sângelui sinusoidal printr-unul din acele de aspirație în timp ce se introduce o soluție inlravcnoasă prin celelalte ace de aspirație pentru a înlocui măduva osoasă îndepărtată. Măduva osoasă și sângele sinusoidal se introduc într-o cameră de amestec cu altă substanță (soluție) intravenoasă și apoi se introduc întrun sac de colectare.
Sunt cunoscute și alte procedee pentru transplantarea de măduvă osoasă. în general transplantele de măduvă osoasă se execută pe pacienți care suferă de o maladie ca de pildă cancer, care distruge celulele de măduvă de oase sănătoase sau reduce abilitatea lor funcțională. De asemenea, se mai cunosc tratamente cu chemoterapice sau terapia cu radiații ce afectează în mod nefavorabil măduva de oase chiar în cazurile când măduva de oase nu a fost direct afectată de maladia tratată. Metodele de transplantare de măduvă de oase au mai multe dezavantaje. o cauză majoră este respingerea transplantului de măduvă de oase care constă în influența reacției gazdă și are loc atunci când măduva de oase este luată de la o persoană și transplantată la o altă persoană. O altă cauză majoră a insuccesului transplantului de măduvă de oase este reprezentată de maladia vasooclusivă ce rezultă de la formarea emboliei de măduvă. Metodele pentru preluarea și stocarea unei măduve osoase. înain2 tea chemoterapiei și radiației combinate și reinfuziunea acesteia există în mod curent (adică transplant autolog). Deseori, pacientul suferă de revenirea maladiei chiar dacă grefarea are loc, deoarece măduva este deja îmbolnăvită când a fost preluată.
Sistemul tridimensional de cultură de țesuturi, conform prezentei invenții, cuprinde celule stromale și proteine de țesut conjuctiv secretate natural de către celulele stromale atașate și care îmbracă substanțial un cadru compus dintr-un material biocompalibil lipsit de viață format dinlr-o structură tridimensională care are spații interstițiale legale prin celule stomale. Celulele stromale sunt fibroblaste, o combinație de fibroblaste și celule endoteliale, pericite, macrofage, monocite, leucocite, celule plasmatice, celule bazale sau adipocite. Cadrul poate fi un material biodegradabil cum ar fi bumbac, acid poliglicolic, structuri din catgut, celuloză, gelatină sau dextran sau un material ne-biodegradabil cum ar fi o poliamidă, un poliester, un polistiren, o polipropilenă, un poliacrilat, un polivinil, un policarbonat, o politetrafluoretilenă sau un compus nitrocelulozic. Cadrul este o rețea acoperită inițial cu colagen. Cultura tridimensională cuprinde celule parenchimale, cultura tridimensională de măduvă osoasă cuprinde celule hematopoetice, cultura din celule ale pielii cuprinde melanocite și cheratinocite iar cultura de ficat cuprinde hematocite, aceste celule sunt cultivate pe un țesut stromal viu, preparat in vitro. Cultivarea celulelor in vitro prevede înlocuirea celulelor parenchimale pe un țesut stomal viu, preparat in vitro și incubarea țesutului stromal viu, inoculat într-un mediu nutritiv astfel încât celulele inoculate să prolifereze în cultură. Țesutul stromal viu cuprinde celule stromale aderente. Cultura celulelor parenchimale derivate de la un tip de țesut pentru a fi transplantat sau implantat se face astfel încât celulele parenchimale să prolifereze in vitro pe un țesut stomal viu și apoi implantarea celulelor parenchimale proliferate in vivo.
Deci fazele de obținere a sistemului tridimensional de cultură conform prezentei invenții, sunt: obținerea unei probe de măduvă de oase de la un donator, reproducerea probei de măduvă de oase in vitro dând o măduvă de oase reprodusă ce conține celule de tulpină hematopoetică, având activitate de repopulare a măduvii (o porțiune care se poate prezerva prin frig, pentru folosirea ulterioară) și apoi infuzarea măduvii de oase reprodusă, conținând celule de tulpină hematopoetică de la persoana la care se urmărește refacerea hematopezei.
Se dă, in continuare, un exemplu de realizare a invenției: O cantitate de cca. 10-15 cm3 de măduvă de oase sau suspensie de sânge periferic, este aspirată de la vârful iliac al unui donator. Rezultatele procedeului sunt optime dacă individul este de vârstă sub 40 ani și nu suferă de aceeași maladie. Măduva de oase prelevată se reproduce sau se prezervă pentru reproducerea ei la o dată ulterioară. Dacă măduva de oase urmează a fi prezervată, aceasta se pote îngheța folosind un echipament criotehnologic computerizat. Măduva de oase proaspătă sau suspensia de sânge periferic se ia în volume egale, în tuburi sterile și se plasează întrun pahar cu gheață măcinată până ce camera de croprezervare este adusă la o temperatură similară (4°C). înaintea introducerii specimenului în cameră, în fiecare tub se adaugă o soluție de crioprotecție cum ar fi dimetilsulfoxid și glicerină în concentrații finale de 7% și respectiv 5%. Se pornește imediat programul de înghețare. Folosind această metodă, viabilitatea celulară, după înghețare și dezghețare rapidă în baia de apă la 80°C, depășește 90% (metoda de excludere cu albastru de tripan). După înghe țâre se poate recupera mai mult de 80% din colonia inițială ce formează unitatea de cultură (CFU-C). Exemple de sisteme pentru înghețarea de măduvă de oase și substanțe biologice în conformitate cu o temperatură precalculată și curba de timp sunt descrise în literatura de specialitate. De preferință celulele de măduvă de oase se stochează în fază lichidă, de azot lichid, la o temperatură de -196°C când ia sfârșit orice fel de activitate celulară metabolică.
După dezghețare celulele de măduvă osoasă se reinfuzează într-un individ sau se reproduc și apoi se reinfuzează.
Procedeul conform cu invenția de față prezintă mai multe avantaje pentru pacient la care este nevoie de un transplant de măduvă de oase. Dacă pacientul a primit celulele sale proprii, aceasta se numește un transplant autolog. Un astfel de transplant are o mică probabilitate de respingere. Transplantele autologe elimină o cauză majoră de respingere de transplant de măduvă de oase, adică grefa unei reacții gazdă. De asemenea, atunci când se dezvoltă în cultură, celulele hematopoetice se pot separa cu ușurință prin manipulare fizică și/sau tratament enzimatic. Aceasta diminuează riscul unei maladii vasooclusive ca rezultat de la o embolie de măduvă. De asemenea, procedeul conform cu invenția de față permite un tratament mai agresiv al tulburărilor cu agenți chimioterapici și radiație. Extinderea acestui tratament este, adeseori, limitată de toxicitatea măduvii de oase.
Sistemul de reproducere in vitro de măduvă de oase este astfel: Procedeul conform cu invenția de față mai cuprinde de asemenea faza de reproducere de celule de măduvă de oase in vitro, într-un sistem comparabil cu condițiile fiziologice. De asemenea, celulele de măduvă de oase, reproduse în acest sistem, cuprind toate celulele prezente în măduva de oase normală, presupunând că toate tipurile de celule se găsesc în inocul inițial de măduvă de oase.
Celulele de măduvă de oase, obținute, fie direct de la un donator sau de la stocul crioprezervativ, sunt mai întâi separate de reticolul lor prin metode fizice după care apoi sunt lăsate să crească, în culturi cu componente cu înveliș de măduvă normală, care cuprinde fitoblaste, macrofagi, celule reticulare și adipotice pe un suport tridimensional. La cultură se pot, de asemenea, adăuga factori derivați de mediu de cultură splenice și/sau hepatice (ficat) macrofage sau de la submulțimi de celule cu înveliș. Cu toate că celulele de măduvă sunt capabile să crească limitat dacă se cultivă singure, creșterea în termen lung a acestor culturi este posibilă numai dacă celulele cu înveliș sau dacă produsele lor de secreție sunt prezente.
Invenția de față caută să maximalizeze proliferarea de celule de tulpină multipotențială care prezintă capacitatea de repopulare de măduvă de oase atunci când măduva a fost distrusă prin maladie mediată intrinsec sau înconjurător sau prin tratamentul unei astfel de maladii cu chimioterapice și/sau radiații.
Celula cu tulpina care prezintă activitate de repopulare de măduvă (MRA) s-a dovedit că persistă și se reproduce în culturi de măduvă de oase pe termen lung. Dar celulele cu tulpină, celulele cu progenitori hematopoetice, celulele precursori hematopoetic, toate se reproduc și proliferează în sistemul conform cu invenția de față. Difernțierea se poate desfășura în acest sistem în mod fiziologic. De pildă, colonii eritoide, mieloide. limfoide, macrofage și megacriocitice se pot obține în același sistem de cultură folosind sistemele considerate în invenția de față. în conformitate cu o formă dc executare preferată a invenției de față, creșterea dc celulă de tulpină hematopoetică se face după cum urmează:
1. Stabilirea stratului de suport cu înveliș Suspensia de măduvă de oase se centrifughează la 3000 x g timp de 20 min și se preia baza albă de celule ce conține macrofage, fibroblaste, adipocite, celule de sânge mononucleare, celule reticulare, celule endoteliale și alte celule existente. Celulele se suspendă în mediul de cultură RPMI 1640 care este suplimentat cu 10% ser fetal de bovine, 10% ser de cal, hemisuccinat de hidrocortizon și antibioticele corespunzătoare. IO6 din aceste celule se plasează pe o rețea de nylon sterilă care se introduce într-o cutie Petri. Rețeaua a fost tăiată pentru a se potrivi cu dimensiunile interioare ale unui flacon de cultură dintr-un material plastic de 25 mm2. Rețeaua are o suprafață de sitare de 400 pm și un diametru al fibrei de 100 pm. Rețeaua inoculată se înfășoară apoi și se introduce într-un flacon de cultură ce conține 5 ml din mediul descris mai sus. Rețeaua se înfășoară în cultură așa încât să acopere complet fundul vasului. Culturile se lasă la 37°C într-un mediu ce conține 5% CO2 și o umiditate relativă ce depășește 90%. Celulele cu înveliș care sunt îndeosebi fibroblaste cresc mai întâi în lungime și cuprind toate fibrele de nylon începând să crească în deschiderile de ochiuri. Acest proces necesită circa 14 la 18 zile. Gradul de subconfluență al celulelor cu înveliș va fi consistent față de cel dinaintea inoculării celulelor hematopoetice.
Celulele învelitoare suspendate se pot prezerva prin frig folosind aceeași metodă descrisă mai sus pentru celulele de măduvă de oase. Pentru prezervarea prin frig a celulelor confluente pe rețea, rețeaua dc nylon trebuie să fie rulată și introdusă în tub (Nune) care conține mediu de cultură RPMI 1640 cu adaos de crioprotectanți dimetilsulfoxid și glicerina în concentrații finale de 5% și respectiv 15%. înghețarea celulelor cu înveliș pe rețea se poate face cu rate inițiale de răcire de - FC/min de la + 1°C la -40°C. O rată de răcire de -2°C la -3°C/min este optimă și se folosește până ce s-a atins stadiul final de temperatură de -84°C. Se vor detașa de pe rețeaua de nylon circa 20-25% din celulele cu înveliș.
2. Inocularea cu celule hematopoetice Celule de măduvă de oase se suspendă într-un mediu modificat Fischer suplimentat cu 5-10% ser fetal de bovine și 5-10% ser de cal, vitamine, hidrocortizon, glutamină și antibiotice. Aceste celule pot fi proaspete sau derivate de la o probă mai înainte crioprezervată și care a fost repede dezghețată într-o baie cu apă fierbinte la 80°C. Apoi 2 la 5 x IO6 celule se inoculează pe rețele de celule cu înveliș subconfluente în baloane de cultură din material plastic de 25 mm2 și lăsate să crească la 33-34°C într-o atmosferă ce conține 5% CO2, iar umiditatea relativă a acestor culturi trebuie să fie mai mare decât 90%. După 3 zile, temperatura culturii se ridică la 35-37°C. Celulele hematopoetice cresc în buzunare naturale formate de celulele cu înveliș subconfluente, iar celulele progenitoare rămân în stratul aderent de celule. Stratul aderent sunt acele celule atașate direct de rețea sau acelea legate indirect prin atașare de celulele care sunt și ele atașate direct de rețea. După 4 până la 5 zile apar în stratul neaderent granulocite mature, celule mononucleare și eritrocite. După 7 până la 10 zile se pot observa numeroase colonii hematopoetice în interstițiile rețelei și sunt morfologic consistente CFU-C, colonii mixte și colonii limfoide. Creșterea megacariocitică este limitată, dar se poate observa și în această matrice. O cultură medie va produce 450 până la 950 CFU-C pe săptămână.
Culturile care constau din celule cu înveliș și celule hematopoetice de la același individ (autolog) trebuie să fie aduse de două ori pe săptămână. Culturile care s constau dintr-o măduvă de oase de la un pacient și care au fost inoculate pe o rețea de celule cu înveliș derivat de la alt individ (indivizi), deci halogeneic, trebuie să fie aduse de 3 ori pe săptămână pentru a asigura depopularea adecvată de celule imunocompetente mature de la stratul neaderent.
3. Variații în sistemul de reproducere in vitro de măduvă osoasă îmbunătățirea creșterii de celule acoperitoare de măduvă.
Factorul primar de limitare a ratei în creșterea celulelor de măduvă cu înveliș este indicele mitotic relativ mic al fibroblastelor cuprinse printre celule de măduvă cu înveliș. Creșterea acestor celule și depunerea lor pe componente extracelulare de matrice se poate îmbunătăți prin adăugarea de hemisuccinat de hidrocortizon și/sau factori autoregulatori de creștere derivați de la mediul de fibroblaste uman fetale cultivate care au o mare rată de divizare de celule.
Atașarea și creșterea de fibroblaste pe rețea se poate, de asemenea, îmbunătăți prin preacoperirea rețelei cu colagen tip IIV solubilizat sau folosind o rețea care este acoperită sau cuprinsă de colagen secretat de fibroblaste fetale umane sau de fibroblaste adulte (menționate mai jos ca fibroblaste cu creștere ameliorată) care au fost destinate prin abilitatea lor la sinteza anumitor tipuri de colagen. în legătură cu aceasta, fibroblastele care îmbunătățesc creșterea sunt ridicate prin tripsinizare blândă de pe rețea după atingerea confluenței (5 la 7 zile pentru fibroblaste umane fetale și 14 la 18 zile pentru fibroblaste adulte ) și se pot fie inocula cu celule de măduvă cu înveliș așa cum este descris mai sus sau crioprezervate pentru o folosire viitoare.
într-o formă de executare conform cu invenția de față, fibroblastele care îmbunătățesc creșterea și care sintetizează colagenul și alte componente de matrice extrace lulară, se dezvoltă pe rețea până ce atinge subconfluența. Un amestec din ambele celule de măduvă de oase hematopoetice și cu înveliș se inoculează apoi pe rețeaua de fibroblaste care îmbunătățește subconfluența de creștere.
Metodele pentru fibroblaste care îmbunătățesc creșterea, submulțimea și crioprezervarea sunt următoarele:
a) Cultură de fibroblaste care îmbunătățesc creșterea: fibroblastele se dezvoltă în mediul de cultură RPMI 1640, suplimentat cu 2-10% ser fetal de bovine, 210% ser de cal la care s-a mai adăugat 1 pg/ml hemisuccinat de hidrocortizon și 2 pg/ml gentamicină, penicilină, streptomicină. Culturile se lasă să crească la 37°C într-un mediu ce conține 5% CO2 și o umiditate relativă mai mare decât 90%.
b) Submulțime de fibroblaste care îmbunătățesc creșterea: 5,0 x 106, derivate de la înveliș galben dintr-o suspensie de măduvă de oase, fibroblaste dermale și fibroblaste derivate de la ficat de cadavru, se așază în vase cu microtitru (1 mm2) și se Iasă să se dezvolte până la confluență. Aceste celule se preiau de pe vasele de cultură și se spală în mod repetat (de obicei de 4 la 5 ori) cu soluție de sare Hank care nu conține Ca++ sau Mg++. Matricea ce rămâne pe plăcile cu microtitru se examinează prin imunoinflorescență indirectă folosind anticorpi monoclonali cu diferite componente de matrice și se marchează cu izotiocianat de fluoresceină, imunoglobulină G de iepure antișoareci pentru a asigura tipurile de colagen existente. Celulele suspendate se tratează cu anticorpi monoclonali îndreptate către tipuri de colagen L-LV, elastin, tropoelastin și fibronectin, pentru izolarea de subpopulații de celule capabile să sintetizeze fiecare produs. Celulele se tratează cu complement de cobai care va deteriora sau distruge celulele la care este atașat anticorpul monoclonal. Celulele vi to abile se reașază pe vasele cu microtitru așa cum s-a descris mai sus, se lasă să crească la confluență după care se îndepărtează. Eficiența metodei de izolare se verifică prin examinarea matricei secretată de celulele cu anticorpi monoclonali și imunofluorescență indirectă. Pentru o creștere optimă a celulelor hematopoetice, matricea trebuie să conțină tipurile de colagen III, IV și I într-un raport aproximativ de 6:3:1.
c) Crioprezervarea de fibroblaste ce îmbunătățesc creșterea: fibroblastele ce îmbunătățesc creșterea se pot prezerva prin frig folosind metodele descrise mai sus pentru celulele cu înveliș. La fel ca și celulele cu înveliș, unele din fibroblastele ce îmbunătățesc creșterea se vor desprinde de rețea în timpul înghețării. Această matrice însă contribuie și la atașarea celulelor cu înveliș de măduvă și de aceea reduc timpul necesar pentru stabilirea unei matrice care contribuie la creșterea celulelor hematopoetice.
Inocularea cu celulele mononucleare: pentru îmbunătățirea creșterii pe termen lung a culturii de măduvă de oase, celulele mononucleare de sânge periferic se prepară dintr-o suspensie heparinizată. Celulele de sânge periferic și celulele hematopoetice de măduvă de oase derivă de la același individ (autolog). Acestea se vor prelua prin venipunctură și se crioprezervă în momentul când se ia specimenul de măduvă de oase. Celulele de sânge periferic suplimentare se pot procura de la pacientul îmbolnăvit dacă este nevoie în timpul producerii de cultivare. Dacă se suspectează maladia metastazică, proba trebuie supusă mai întâi purjării, așa cum s-a menționat mai înainte. 5 x 105 până la IO6 celule mononucleare (subpopulația monocită este tipul de celulă preferat din stratul de celule mononucleare pentru această fază) se inoculează pe rețele timp de 4 la 5 zile după inocularea inițială cu celule hematopoetice de mădu106655 vă de oase și apoi în fiecare a treia săptămână. Această procedură îmbunătățește hematopoeza cu 10 la 13% (observație săptămânală).
Perpetuarea culturii și depunerea celulelor de progenitori: culturile de celule cu înveliș confluente nu vor suport hematopoeza. Creșterea indefinită de progenitori hematopoetici umani este posibilă dacă se prevăd factori regulatori cu înveliș derivați de la creștere. De pildă, proba inițială de măduvă se împarte într-un număr de alicote conținând circa IO6 celule hematopoetice. Fiecare din acestea se inoculează pe o rețea de celule cu înveliș subconfluent. Culturile se înregistrează prin observare directă cu un microscop de fază invertit, iar citirile diferențiale ale celulelor neaderente așa cum se văd pe preparatul de citospin după fiecare alimentare. înainte de atingerea confluenței, culturile se tratează cu colagen și se supun ultrasonicării blânde, timp de 6-10 min. Celulele hematopoetice și celulele cu înveliș se separă prin metode cu gradient de densitate. Celulele hematopoetice se numără folosind un hemacitometru și circa 50% se prezervează prin frig, folosind metodele descrise mai sus. Restul de 50% din celulele hematopoetice se împart în alicote constând din circa IO6 celule și se inoculează pe culturi de celule cu înveliș subconfluente care au fost dispuse și lăsate să crească în paralel. Când acestea încep să atingă concentrația dorită, se procedează ca mai sus. Această metodă perpetuează creșterea de celule hematopoetice prevăzând un mediu microînconjurător care produce factori de creștere necesari și, de asemenea, formează o bancă continuuă pe care progenitorii hematopoetici se pot depune până ce se obțin numerele potrivite pentru grefare.
Modularea creșterii de celule hematopoetice cu produse celulare: în prezent există tehnologie pentru subcultură a diferitelor componente celulare de măduvă osoasă umană ca culturi separate. Macrofagi, celule reticulate, adipocite și fibroblaste se pot lăsa să crească separat și activitatea lor de secreție se poate modifica prin tratament cu diferiți agenți. Modularea activității de fibroblaste a fost descrisă mai înainte. Hematopoeza în culturi de măduvă umană de termen lung, pe rețea tridimensională, se poate, de asemenea, modula prin secreții de macrofagi extramodulari (celule Kupffer) atunci când se dezvoltă în cultură în următorul mod: celulele Kupffer se separă de pe învelișul lor organic după digerarb cu pronază. Pe scurt, specimenele de țesut se vor incuba timp de o oră în soluție 0,2% de pronază și în soluție de sare Geya (BSS) în timp ce se agita ușor. pH-ul soluției este menținut la 7,3 până la
7,5 cu hidroxid de sodiu IN. La intervale de 30 min se adaugă 0,5 mg deoxiribonuclează și suspensia de celule rezultată se filtrează și se centrifughează la 350 rot/min, timp de 10 min. Paietul se resuspendă din sare Geya și celulele litorale (macrofagi și celulele endoteliale) se separă de deșeul celular și de celulele de sânge mature, folosind un gradient Percol. Fracțiunea de celule rezultată se spală de 3 ori câte 3 min cu mediu Dulbecco modificat și îmbunătățit cu 10% ser de bovine fetal și se așază pe capsule de cultură din material plastic, la un volum ce conține 3 la 4 x 106 celule. După incubare, timp de o zi, celulele neaderente se îndepărtează prin spălare cu mediul de cultură și celulele aderente se mențin la 33°C, într-un amestec gazos ce conține 6% CO2 și peste 80% umiditate relativă. Activitatea de creștere și/sau secreție a acestor celule se poate stimula, fie variind raportul CO,: O,, fie prin tratarea culturilor cu granule de latex sau silice, fie prin adăugare de prostaglandină E2, E( sau F, tll(a la mediu sau prin suplimentarea mediului cu interleukin 1 sau interleukin 2. Produsele macrofage de secreție se pot modula tot prin aceste pro ceduri. Mediul condiționat cu produsele de secreție ale acestor mocrofagi se pot folosi pentru suplimentarea raportului critropoetic/granulopoetic de cultură de măduvă de oase de termen lung, în același mod cum are loc in vivo.
Procedeul conform cu invenția de față prezintă mai multe avantaje pentru un pacient ce necesită un transplant de măduvă de oase.
Folosirea unui sistem de reproducere in vitro de măduvă de oase pentru a controla condiția unui pacient: La un pacient cu cancer sau alte maldii este adeseori eficace să se controleze condiția pacientului prin aspirarea unei porțiuni din măduva de oase și examinarea probei. în acest mod o metastază se poate detecta înainte de a fi evident clinic. Pacienții, care au alte boli, care se pot detecta prin examinarea celulelor de măduvă de oase, se pot de asemenea controla pe această cale. Creșterea în termen lung a celulelor într-un specimen de măduvă de oase aspirat, folosind sistemul de reproducere de măduvă de oase, conform cu invenția de față, îmbunătățește posibilitatea detecției unor celule metastazice clonale și celule hematopoetice cu abnormalități cromosonale. Aceste celule pot să scape de detecția dinlr-o porțiune obișnuită de măduvă de oase aspirată proaspăt (necultivată).
Folosirea unui sistem de reproducere in vitro de măduvă de oase în sistem citotoxic: Citotoxicitatea față de măduva de oase a produselor farmaceutice, a agenților antineoplastici, carcinogeni, aditivi alimentari și a altor substanțe față de măduva de oase, se testează prin folosirea sistemului de reproducere in vitro de măduvă de oase conform cu invenția de față. Se stabilesc mai întâi culturi stabile de creștere de celule de măduvă de oase (cuprinzând atât celule cu înveliș cât și celule hematopoetice). Apoi, culturile se expun diferitelor concentrații ale agentului testat. După incubarea cu agenții testați, cultura se examinează prin microscopie de fază pentru a determina doza cea mai tolerată (HTD) de concentrație a agentului testat la care apar primele anormalități morfologice. Testarea citotoxicității se poate executa folosind o varietate de coloranți supravitali pentru a stabili viabilitatea celulelor în acest sistem tridimensional, folosind metode binecunoscute specialiștlor în materie. Determinarea de HTD prevede un interval de concentrație pentru testarea mai departe. Odată ce s-a stabilit intervalul de testare, variind concentrațiile agentului testat, se poate examina cu privire la efectul lor asupra viabilității creșterii și/sau morfologiei diferitelor tipuri de celule ce constituie cultura de măduvă de oase prin mijloace binecunoscute specialiștilor în materie. Pentru folosire, la testarea citotoxicității, se poate adopta și un alt sistem tridimensional de cultură de celule așa cum este descris în invenția de față.
Stabilirea unui sistem tridimensional de cultură de celule. în invenția de față se descrie un suport tridimensional și folosirea sa ca rețea pentru un sistem tridimensional de cultură de celule în mai multe straturi, în sistemele de cultură de țesut cunoscute mai înainte, celulele se lasă să crească într-un singur strat. Celulele crescute pe un suport tridimensional în conformitate cu invenția de față se dezvoltă în mai multe straturi formând o matrice celulară. Acest sistem tridimensional de cultură de celule se apropie de condițiile fiziologice găsite in vivo în măsură mai mare decât în sistemele de cultură de țesut într-un singur strat, descrise mai înainte. într-o formă de executare, conform cu invenția de față, sistemul tridimensional de cultură de celule se poate trece pe/sau într-un organism viu. Suportul poate fi din orice fel de material care permite celulelor să se atașeze de el (sau poate fi modificat pentru a permite celulelor să se atașeze de el) și de asemenea permite celulelor să se dezvolte în mai mult decât un strat. Suportul tridimensional este o rețea într-o formă de executare preferată a invenției de față. S-a luat în considerare că sistemul tridimensional de cultură de celule se poate aplica măduvei de oase, bilei, ficatului și multor altor tipuri de celule și țesuturi. De pildă, un sistem tridimensional de cultură de celule de piele este produs după cum urmează: fibroblastul este lăsat să se atașeze de o rețea și să crească timp de 7 la 9 zile, depunând colagen tipurile I și III așa cum este descris mai înainte cu privire la fibroblast, ce îmbunătățește creșterea, folosit în sistemele reproduse in vitro de măduvă de oase. Melanocitele se așază pe rețeaua trasată și se lasă să crească timp de 5 zile. Cheratinocitele se inoculează pe melanocite subconfluente.
Cu toate că invenția de față este descrisă în amănunt cu referire la forme de executare specifice ale ei, se înțelege că se pot face variații fără a se depărta de scopul urmărit de invenția de față așa cum este descris mai sus. Invenția de față se poate înțelege mai bine și din figura care arată o fotomicrodiagramă de electron de explorare la o mărime de 1,65 mii ori, prezentând o rețea de celule cu înveliș de măduvă de oase.
Pentru o mai bună înțelegere a invenției se mai pot arăta și următoarele:
Procedeul conform cu invenția de față cuprinde fazele de: aspirarea unei mici cantități de măduvă de oase de la un pacient sănătos; prezervarea prin frig a acestor celule; reproducerea celulelor de măduvă de oase in vitro pentru mărirea numărului de celule de măduvă de oase la un număr suficient pentru reinfuzarea autologă care este mai mare decât numărul inițial preluat de la pacient și apoi reinfuzarea celulelor de măduvă osoasă & pacient. în conformitate cu o formă de executare a invenției de față, celulele de măduvă de oase se prezervă prin frig, îngheață imediat după aspirarea de la pacient și se dezgheață și apoi se reproduc, în conformitate cu o altă formă de executare a invenției de față, un transplant de măduvă de oase alogenic se execută prin aspirarea de măduvă de oase de la o persoană, reproducerea celulelor de măduvă de oase in vitro și reinfuzarea apoi a celulelor de măduvă reproduse la altă persoană.
Sistemul de reproducere de măduvă de oase in vitro conform cu invenția de față prevede, de asemenea, un mijloc pentru observarea unui pacient cu privire la bolile care afectează măduva de oase. De pildă, o mică probă de oase este aspirată de la un pacient cu cancer tratat și reprodus în sistemul in vitro conform cu invenția de față pentru a controla o apariție sau o metastază a aspectului malign inițial.
Sistemul de reproducere in vitro a măduvei de oase este, de asemenea, adaptabil pentru citotoxicitatea produselor farmaceutice, a aditivilor alimentari, a agenților antineoplastici și carcinogeni. O doză proporțională la scară mică a agentului ce urmează să fie testat se adaugă la sistemul in vitro de măduvă de oase conform cu invenția de fața și se notează efectul său pe diferite tipuri de celule. Tipuri de celule, altele decât celulele de măduvă de oase, se substituie pentru testarea unui agent special, la nevoie.
Invenția de față mai descrie, de asemenea, un suport tridimensional pentru creșterea de celule în cullură. Creșterea de celule în prezența acestui suport se poate, de asemenea, îmbunătăți prin adăugarea de proteine, glicoproteine, glicoaminoglicani, o matrice celulară și alte materiale la suportul ca atare sau prin acoperirea suportului cu aceste materiale. Folosirea unui suport tridimensional permite celulelor să crească în straturi multiple, creându-se, astfel, sistemul tridimensional de cultură de celule conform cu invenția de față. Suportul tridimensional se poate folosi pentru crearea de sisteme tridimensionale de cultură de celule pentru măduvă de oase, piele, ficat și multe alte tipuri de țesuturi de celule. Intr-o formă de executare, conform cu invenția de față, sistemul tridimensional de cultură de celule se poate transfera pe/sau într-un organism viu. Suportul tridimensional este, de preferință, sub forma unei rețele. Suporturile preparate se pot prezerva pentru folosirea ulterioară într-un sistem tridimensional fiziologic de cultură celulară. într-o formă de executare, pentru creșterea de celule de măduvă de oase hematopoetică, rețeaua se prepară prin dezvoltarea unui strat de celule de măduvă învelite pe rețea până ce celulele de măduvă cu înveliș ajung la subconfluență.
Cu referire la singura figură din descriere, se arată o rețea 10 ce conține fire de urzeală 12 și fire de bătătură 13. După cum se vede din figură, celulele de înveliș 14 se dezvoltă pe firele 12 și 13.
în ceea ce privește reproducerea și prezervarea prin frig a maduvei de oase, pentru folosirea la transplante de măduvă de oase, invenția de față se referă și la un procedeu pentru tratarea maladiilor sau condițiilor care distrug celulele de măduvă de oase sănătoase sau care reduc abilitatea lor funcțională. Procedeul este eficace îndeosebi în tratamentul bolilor maligne hematologice și a altor neoplasme care dau metastază la măduva de oase. Procedeul conform cu invenția de față este, de asemenea, eficace, în tratarea pacienților a căror măduvă de oase a fost afectată în mod negativ prin chimoterapie și/sau terapie cu radiații necesitată de o maladie care nu afectează, în mod direct, măduva de oase. Procedeul conform cu invenția de față mai prevede, de asemenea, un mijloc pentru preluarea și prezervarea de celule de măduvă de oase de Ia un pacient sănătos, reproducerea și reinfuzarea celulelor de măduvă de oase la un pacient care are o stare bolnavă care fie că distruge măduva de oase direct sau al cărui tratament afecteză negativ măduva de oase.
Revendicări
Claims (20)
1. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, caracterizat prin aceea că cuprinde celule stromale și proteine de țesut conjunctiv, secretate natural de către celule stromale atașate și care îmbracă substanțial un cadru compus dintr-un material biocompatibil lipsit de viață format dintr-o structură tridimensională care are spații interstițiale legate prin celule stromale.
2. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că celulele stromale sunt fibroblaste, o combinație de fibroblaste și celule endoteliale, pericite, macrofage, monocite, leucocite, celule plasmatice, celule bazale sau adipocite.
3. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că cadrul este compus dintr-un material biodegradabil.
4. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că materialul biodegradabil poate fi bumbac, acid poliglicolic, structuri din catgut, celuloză sau dextran.
5 transplantarea sau implantarea celulelor pielii prevede cultivarea ce cuprinde inocularea melanocitelor și keratinocitelor pe un țesut stromal viu preparat in vitro și incubarea țesutului stromal viu într-un mediu 10 nutritiv astfel încât celulele inoculate să prolifereze în cultură.
24. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării I, caracterizat prin aceea că metoda pentru
5. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, cadrul este compus dintr-un material ne-biodegradabil.
6. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că materialul nebiodegradabil este o poliamidă, un polies ter, un polistiren, o polipropilenă, un poliacrilat, un polivinil, un policarbonat, o politetrafluoretilenă sau un compus nitrocelulozic.
7. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, cadrul este acoperit inițial cu colagen.
8. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, cadrul este o rețea.
9. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că cultura tridimensională de celule cuprinde celule parenchimale cultivate pe un țesut stromal viu preparat in vitro.
10. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că cultura tridimensională de măduvă osoasă cuprinde celule hematopoetice cultivate pe un țesut stromal viu preparat in vitro.
11. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că cultura tridimensională din celule ale pielii cuprinde melanocite și keratinocite cultivate pe un țesut stromal viu preparat in vitro.
12. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că cultura tridimensională de ficat cuprinde hepatocite, cultivate pe un țesut stromal viu preparat in vitro.
13. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că metoda pentru cultivarea celulelor in vitro prevede înlocuirea celulelor parenchimale pe un țesut stromal viu preparat in vitro și incubarea țesutului stromal viu inoculat întrun mediu nutritiv astfel încât celulele inoculate să prolifereze în cultură.
14. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că metoda pentru cultivarea celulelor de măduvă osoasă prevede inocularea celulelor hematopoetice pe un țesut stromal viu, preparat in vitro și incubarea acestuia pe un mediu de cultură nutritiv în scopul proliferării.
15 transplantarea sau implantarea celulelor de ficat in vivo cuprinde cultivarea hepatocitelor in vitro astfel încât acestea să prolifereze pe un țesut stromal viu și, apoi, implantarea lor in vivo.
15. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că metoda pentru cultivarea celulelor pielii prevede inocularea melanocitelor și keratinocitelor pe un țesut stromal viu și incubarea țesutului stromal viu, inoculat in vitro într-un mediu nutritiv, astfel încât celulele inoculate să prolifereze în cultură.
16. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 15, caracterizat prin aceea că țesutul stromal viu cuprinde celule stromale aderente.
17. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi'și celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că metoda de cultivare a celulelor de ficat prevede inocularea hepatocitelor pe un țesut stromal viu preparat in vitro și incubarea țesutului stromal viu inoculat pe un mediu de cultură în vederea proliferării.
18. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi de celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că metoda pentru transplantarea sau implantarea de celule in vivo prevede cultura celulelor parenchimale, derivate de la un tip de țesut, pentru a fi transplantat sau implantat astfel încât celulele parenchimale să prolifereze in vitro pe un țesut stromal viu și, apoi, implantarea celulelor parenchimale proliferate in vivo.
19. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 18, caracterizat prin aceea că metoda pentru transplantarea sau implantarea prevede inocularea celulelor parenchimale pe un țesut stromal viu preparat in vitro inoculat într-un mediu nutritiv astfel încât celulele inoculate să prolifereze.
20. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că metoda pentru transplantarea sau implantarea măduvei osoase in vivo cuprinde cultivarea celulelor hematopoetice in vitro astfel încât acestea să prolifereze pe un țesut stromal viu și apoi implantarea lor in vivo.
21. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 20, caracterizat prin aceea că metoda pentru transplantarea sau implantarea celulelor de măduvă osoasă prevede cultivarea ce cuprinde inocularea celulelor hematopoetice pe un țesut stromal viu preparat in vitro și incubarea țesutului stromal viu într-un mediu nutritiv astfel încât celulele inoculate să prolifereze în cultură.
22. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că metoda, pentru transplantarea sau implantarea in vivo a celulelor pielii, cuprinde cultivarea in 25 vitro de melanocite și keratinocite astfel încât acestea să prolifereze pe un țesut stromal viu și, apoi, implantarea lor in vivo.
23. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 22, caracterizat prin aceea că metoda pentru
20 25. Sistem tridimensional de cultură de țesuturi și celule, conform revendicării 24, caracterizat prin aceea că metoda pentru transplantarea sau implantarea celulelor de ficat cuprinde inocularea hepatocitelor întrun țesut stromal viu preparat in vitro și incubarea țesutului stromal viu într-un mediu de cultură nutritiv astfel încât celulele inoculate să prolifereze în cultură.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US85356986A | 1986-04-18 | 1986-04-18 | |
| US07/036,154 US4721096A (en) | 1986-04-18 | 1987-04-03 | Process for replicating bone marrow in vitro and using the same |
| US3811087A | 1987-04-14 | 1987-04-14 | |
| PCT/US1987/000869 WO1987006120A1 (en) | 1986-04-18 | 1987-04-15 | Process for replicating bone marrow |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO106655B1 true RO106655B1 (ro) | 1993-06-30 |
Family
ID=27364979
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RO135557A RO106655B1 (ro) | 1986-04-18 | 1987-04-15 | Sistem tridimensional de cultura de tesuturi si celule |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0309456B1 (ro) |
| JP (2) | JP2857392B2 (ro) |
| KR (1) | KR0142885B1 (ro) |
| AT (1) | ATE127692T1 (ro) |
| AU (3) | AU615414B2 (ro) |
| BG (1) | BG51337A3 (ro) |
| BR (1) | BR8707673A (ro) |
| DE (1) | DE3751519T2 (ro) |
| DK (1) | DK665687D0 (ro) |
| FI (1) | FI100249B (ro) |
| HK (1) | HK1007684A1 (ro) |
| HU (1) | HU202578B (ro) |
| NO (1) | NO179181C (ro) |
| RO (1) | RO106655B1 (ro) |
| WO (1) | WO1987006120A1 (ro) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5902741A (en) * | 1986-04-18 | 1999-05-11 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Three-dimensional cartilage cultures |
| AU644578B2 (en) * | 1986-04-18 | 1993-12-16 | Marrow-Tech Incorporated | Three-dimensional cell and tissue culture system |
| US5736372A (en) * | 1986-11-20 | 1998-04-07 | Massachusetts Institute Of Technology | Biodegradable synthetic polymeric fibrous matrix containing chondrocyte for in vivo production of a cartilaginous structure |
| US5804178A (en) * | 1986-11-20 | 1998-09-08 | Massachusetts Institute Of Technology | Implantation of cell-matrix structure adjacent mesentery, omentum or peritoneum tissue |
| US6309635B1 (en) | 1986-11-20 | 2001-10-30 | Children's Medical Center Corp. | Seeding parenchymal cells into compression resistant porous scaffold after vascularizing in vivo |
| US5567612A (en) * | 1986-11-20 | 1996-10-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Genitourinary cell-matrix structure for implantation into a human and a method of making |
| WO1993007913A1 (en) * | 1991-10-24 | 1993-04-29 | Children's Medical Center Corporation | Neomorphogenesis of urological structures in vivo from cell culture |
| US5436151A (en) * | 1992-04-03 | 1995-07-25 | Regents Of The University Of Minnesota | Method for culturing human hematopoietic stem cells in vitro |
| US5460964A (en) * | 1992-04-03 | 1995-10-24 | Regents Of The University Of Minnesota | Method for culturing hematopoietic cells |
| US7214654B1 (en) | 1994-12-07 | 2007-05-08 | Karlheinz Schmidt | Agent for the manufacture of biological parts including an active ingredient complex and carrying materials suitable for the active ingredient complex |
| US5709854A (en) * | 1993-04-30 | 1998-01-20 | Massachusetts Institute Of Technology | Tissue formation by injecting a cell-polymeric solution that gels in vivo |
| US6123727A (en) | 1995-05-01 | 2000-09-26 | Massachusetts Institute Of Technology | Tissue engineered tendons and ligaments |
| US5855610A (en) | 1995-05-19 | 1999-01-05 | Children's Medical Center Corporation | Engineering of strong, pliable tissues |
| US5728581A (en) * | 1995-06-07 | 1998-03-17 | Systemix, Inc. | Method of expanding hematopoietic stem cells, reagents and bioreactors for use therein |
| US5741685A (en) * | 1995-06-07 | 1998-04-21 | Children's Medical Center Corporation | Parenchymal cells packaged in immunoprotective tissue for implantation |
| ATE383417T1 (de) * | 1998-11-12 | 2008-01-15 | Cytomatrix Llc | Produktion lymphoider gewebsspezifischer zellen von hämatopoietischen vorläuferzellen in einem dreidimensionalen system |
| BR0009403A (pt) * | 1999-02-04 | 2001-11-27 | Technion Res & Dev Foundation | Método de expansão/conservação das células detronco hemopoiéticas indiferenciadas ou dascélulas progenitoras, método de preparação deum meio condicionado de célula estomacal útil naexpansão/conservação das células de troncohemopoiéticas indiferenciadas ou das célulasprogenitoras, método de transplante de célulasde tronco hemopoiéticas indiferenciadas ou decélulas progenitoras em um recipiente, tampão debiorreator e biorreator |
| US7087431B2 (en) | 2000-03-02 | 2006-08-08 | University Of Rochester | Ex vivo generation of functional leukemia cells in a three-dimensional bioreactor |
| DE10203644A1 (de) * | 2002-01-30 | 2003-08-07 | Fraunhofer Ges Forschung | Kryokonservierung an textilen Geweben |
| US8765169B2 (en) | 2004-02-13 | 2014-07-01 | Smith & Nephew, Inc. | Wound healing profile |
| KR101318965B1 (ko) * | 2005-03-01 | 2013-10-17 | 타타 인스티튜트 오브 펀더멘탈 리서치 | 인공적인 골수-유사 환경을 형성하는 조성물 및 그의 용도 |
| JP4977854B2 (ja) * | 2005-10-21 | 2012-07-18 | 国立大学法人名古屋大学 | 組織形成用複合材料およびその製造方法 |
| US20110294215A1 (en) * | 2008-10-22 | 2011-12-01 | Regenemed, Inc. | Culture systems |
| AU2012262139B2 (en) * | 2011-06-02 | 2017-02-23 | Children's Medical Center Corporation | Methods and uses for ex vivo tissue culture systems |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3997396A (en) * | 1973-07-02 | 1976-12-14 | Monsanto Company | Method for the in vitro propagation and maintenance of cells |
| US4144126A (en) * | 1975-05-21 | 1979-03-13 | Beecham Group Limited | Cell culture method |
| JPS51151384A (en) * | 1975-06-20 | 1976-12-25 | Olympus Optical Co Ltd | Process for cultivating organic tissue or cells automatically |
| US4024020A (en) * | 1975-12-15 | 1977-05-17 | Monsanto Company | Method of cell culture on polyacrylonitrile surface |
| US4184922A (en) * | 1977-11-11 | 1980-01-22 | The Government Of The United States | Dual circuit, woven artificial capillary bundle for cell culture |
| US4228243A (en) * | 1978-07-13 | 1980-10-14 | Toray Industries, Inc. | Cell culture propagation apparatus |
| MX163953B (es) * | 1984-03-27 | 1992-07-03 | Univ New Jersey Med | Procedimiento para preparar una matriz biodegradable a base de colageno |
-
1987
- 1987-04-15 RO RO135557A patent/RO106655B1/ro unknown
- 1987-04-15 JP JP62502719A patent/JP2857392B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-15 BR BR8707673A patent/BR8707673A/pt unknown
- 1987-04-15 DE DE3751519T patent/DE3751519T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-15 AT AT87903124T patent/ATE127692T1/de active
- 1987-04-15 HU HU872758A patent/HU202578B/hu not_active IP Right Cessation
- 1987-04-15 WO PCT/US1987/000869 patent/WO1987006120A1/en not_active Ceased
- 1987-04-15 AU AU73568/87A patent/AU615414B2/en not_active Ceased
- 1987-04-15 KR KR1019870701161A patent/KR0142885B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1987-04-15 EP EP87903124A patent/EP0309456B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-15 HK HK98106932A patent/HK1007684A1/en not_active IP Right Cessation
- 1987-12-17 NO NO875286A patent/NO179181C/no not_active IP Right Cessation
- 1987-12-17 DK DK665687A patent/DK665687D0/da not_active Application Discontinuation
-
1988
- 1988-10-17 FI FI884783A patent/FI100249B/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-10-17 BG BG085721A patent/BG51337A3/bg unknown
-
1990
- 1990-12-18 AU AU68159/90A patent/AU6815990A/en not_active Abandoned
- 1990-12-18 AU AU68160/90A patent/AU6816090A/en not_active Abandoned
-
1997
- 1997-10-01 JP JP9268792A patent/JP3032492B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3032492B2 (ja) | 2000-04-17 |
| DK665687A (da) | 1987-12-17 |
| WO1987006120A1 (en) | 1987-10-22 |
| FI100249B (fi) | 1997-10-31 |
| KR0142885B1 (ko) | 1998-07-15 |
| DE3751519T2 (de) | 1996-03-28 |
| BR8707673A (pt) | 1989-08-15 |
| NO875286D0 (no) | 1987-12-17 |
| HUT48112A (en) | 1989-05-29 |
| AU7356887A (en) | 1987-11-09 |
| JPH10114664A (ja) | 1998-05-06 |
| JPH01503195A (ja) | 1989-11-02 |
| KR880701093A (ko) | 1988-07-25 |
| EP0309456A1 (en) | 1989-04-05 |
| EP0309456B1 (en) | 1995-09-13 |
| JP2857392B2 (ja) | 1999-02-17 |
| HU202578B (en) | 1991-03-28 |
| NO875286L (no) | 1987-12-17 |
| NO179181C (no) | 1996-08-21 |
| AU6815990A (en) | 1991-03-14 |
| FI884783L (fi) | 1988-10-17 |
| DE3751519D1 (de) | 1995-10-19 |
| DK665687D0 (da) | 1987-12-17 |
| ATE127692T1 (de) | 1995-09-15 |
| NO179181B (no) | 1996-05-13 |
| EP0309456A4 (en) | 1989-06-27 |
| BG51337A3 (bg) | 1993-04-15 |
| HK1007684A1 (en) | 1999-04-23 |
| AU6816090A (en) | 1991-03-14 |
| FI884783A0 (fi) | 1988-10-17 |
| AU615414B2 (en) | 1991-10-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RO106655B1 (ro) | Sistem tridimensional de cultura de tesuturi si celule | |
| US4721096A (en) | Process for replicating bone marrow in vitro and using the same | |
| CA1335657C (en) | Three-dimensional cell and tissue culture system | |
| US5518915A (en) | Three-Dimensional mucosal cell and tissue culture system | |
| US5160490A (en) | Three-dimensional cell and tissue culture apparatus | |
| RU2236855C2 (ru) | Композиции подвергнутых рестрикции клеток, способных к быстрому росту, которые продуцируют вещества, подавляющие пролиферацию клеток, и их применение | |
| US4423145A (en) | Enhanced growth medium and method for culturing human mammary epithelial cells | |
| HK1007684B (en) | Stromal tissue | |
| RU2160112C1 (ru) | Способ приготовления клеточного трансплантата из фетальных тканей | |
| US20040052768A1 (en) | Vascularised tissue graft | |
| AU595813B2 (en) | Process for replicating bone marrow in vitro | |
| CN106074604A (zh) | 用于修复机体机能老化和延缓脏器功能衰退的治疗剂 | |
| CN107446891B (zh) | 一种以自身脐带间充质干细胞作为基质细胞扩增人类脐带血造血干细胞的方法 | |
| Askenasy et al. | The topologic and chronologic patterns of hematopoietic cell seeding in host femoral bone marrow after transplantation | |
| CA1310926C (en) | Process for replicating bone marrow and other tissues in vitro and using the same | |
| KR0156685B1 (ko) | 3차원 배양물을 이용한 약물의 효과를 테스트하는 방법 | |
| PT87136B (pt) | Processo para a replicacao de medula ossea | |
| KR0156571B1 (ko) | 3차원 세포 및 조직 배양계 | |
| IL91536A (en) | Three-dimensional cell and tissue culture system comprising parenchymal cells cultured on a living stromal tissue methods for preparing said culturing system and uses thereof |