RS107404A - Metod lečenja ishemične povrede izazvane poremećajem perfuzije upotrebom antagonista adenozinskog receptora - Google Patents

Abstract

Opisani su postupci korisni za sprečavanje, ograničavanje ili lečenje ishemične reperfuzione povrede kod sisara. Konkretnije, ovaj pronalazak se odnosi na davanje antagonista adenozinskog receptora A2b u cilju sprečavanja, ograničavanja ili lečenja ishemične reperfuzione povrede.

Description

POSTUPAK LEČENJAISHEMIČNE POVREDE IZAZVANE OBNAVLJANJEM PERFUZIJE UPOTREBOM ANTAGONISTA ADENOZINSKOG RECEPTORA

OBLAST PRONALASKA

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na kardiologiju, medicinsku herniju i farmakologiju. Preciznije, odnosi se na antagoniste adenozinskog receptora A2bi sprečavanje ili lečenje ishemične povrede izazvane obnavljanjem perfuzije.

OSNOVA PRONALASKA

[0002] Prekid krvotoka i dovoda kiseonika tkivu indukuje stanje poznato kao ishemija. Suštinska smanjenja dovoda kiseonika indukuju stanje poznato kao hipoksija. I ishemija i hipoksija, ako traju, mogu da rezultuju gubitak funkcije tkiva, pa čak i ćelijsku smrt. Ima mnogo uslova, i prirodnih i iatrogenih, koji izazivaju ishemiju i hipoksiju uključujući, ali ne ograničavajući se na, okluzivno vaskularno oboljenje, koronarnu tromobozu, cerebrovaskularnu trombozu, rupturu aneurizme, opšte krvarenje, kraš sindrom, sepsu, teške opekotine kože, vaskulookluzivne hirurške tehnike (kao što je ishemija kičme tokom torakoabdominalne operacije aneurizme), kardiopulmonarne procedure za bajpas, transplantaciju organa, kardiopulmonarni kolaps (iznenadna srčana smrt) i gušenje.

[0003] Konvencionalno lečenje ishemije i hipoksije uključuje obnavljanje krvotoka i dostavu kiseonika do normalnih nivoa, bilo povećanjem opšte oksigenacije, bilo uklanjanjem uzroka vaskularne blokade. Rezultat obnavljanja krvotoka je poboljšan ishod u odnosu na situacije u kojima je ishemija ili hipoksija trajala u toku dužeg perioda. Međutim, dobro je poznato da obnavljanje krvotoka i dovod kiseonika mogu da izazovu dodatnu ćelijsku smrt i gubitak funkcije, nezavisno od oštećenja izazvanog ishemijom ili hipoksijom. Ova dodatna oštećenja indukovana obnavljanjem krvotoka i dovodom kiseonika su poznata kao reperfuzione povrede. Paradoksalno oštećenje tkiva izazvano reperfuzionom povredom slično je akutnom zapaljenjskom stanju, koje je rezultat prianjanja inflamatornih ćelija za tkiva sa obnovljenom perfuzijom, aktivacijom ovih inflamatornih ćelija i stvaranjem slobodnih radkala koje zatim sledi (Granger et al.Ann. Rev. PhysioL, SI,311-332, (1995)). Stvaranje slobodnih radkala i drugih citotoksičnih biomolekula unutar reperfuzionog tkiva može da indukuje ćelijsku smrt bilo nekrozom, bilo aktivacijom apoptoznog mehanizma.

[0004] Adenozin je unutarćelijski i vanćelijski glasnik (messenger) koji stvaraju sve ćelije u telu. Stvara se i vanćelijski enzimskom konverzijom.

Ishemična i hipoksična tkiva stvaraju povećane količine adenozina, preko raspada adenozin trifosfata (ATP) tokom trošenja energije. Ovi adenozinski receptori su podeljeni na četiri poznata podtipa (tj., Ai, A2a, A2bi A3), na osnovu njihovog relativnog afiniteta za različite adenozinske receptorske ligande i analize sekvenci gena koji kodiraju ove receptore. Aktivacija svakog od ovih podtipova izaziva jedinstvene i nekad suprotne efekte.

[0005] Poznato je da tri od četiri adenozinska receptorska podtipa utiču na funkciju inflamatornih ćelija tokom reperfuzione povrede. Pokazano je da aktivacija adenozinskih receptora A2asuprimira oslobađanje kiseoničnih slobodnih radikala iz stimulisanih neutrofila, redukuje prianjanje neutrofila na vaskularni endotel i suprimira neutrofilno oslobađanje TNF i LTB4 (videti, npr., Cronstein et al.,J. Immunology,148, pp. 2201-2206 (1992); Thiel et al.,

(1995)J. Lab. Clin. Med.,126, pp. 275-282; Krump et al,J. Exp. Med.,186, pp. 1401-6

(1997)).

[0006] Nasuprot anti-inflamatornim efektima aktivacije adenozinskog receptora A2a, pokazano je da aktivacija A]receptora dovodi do hemotaksisa i fagocitoze preko stimulisanih neutrofila, (videti, npr., Cronstein et al. (1992), supra; Salmon et al.,J. Immunologv145, pp. 2235-2240. (1990)) i da dovodi do diferencijacije monocita u višejedarne džinovske ćelije(Merrill et al., Arth. Rhetm., 40, pp.1308-1315 (1997)). Štaviše, aktivacija Aireceptora na ćelijama vaskularnog endotela dovodi do upale i ozlede tkiva u modelu reperfuzione povrede srca (Becker et al.,Pharm. Pharmacol. Letters, 2,pp. 8-11 (1992); Schvvartz et al.,J. Mol. Cell. Cardiol,25, pp. 927-938 (1993); Zahler etal.,Cardiovascular Res.,28, pp. 1366- 1372 (1994) i Forman et al.,J. Pharmacol. Exp. Ther.,292 (3), pp. 929-38 (2000)).

[0007] Aktivacija A2breceptora takođe može dovesti do pro-inflamatornih aktivnosti kao što je povećana produkcija IL-6 (Sitaraman et al.,J. Clin. Invest,107, pp. 861-9 (2001), i degranulacija mast ćelija, obeležje lokalne upale (Linden et al.,Life Sci.,62, pp. 1519-24

(1998) i Auchampach et al.,Mol. Pharmacol.,52,846-60 (1997)). Pored toga, aktivacija A2breceptora u ćelijama vaskularnih glatkih mišića dovodi do gubitka ćelija putem direktne stimulacije apoptoze (Peyot et al.,Circ. Res.,86, pp. 76-85 (2000)).

[0008] Savremeni tretmani ishemične reperfuzione povrede adekvatno tretiraju samo ishemično oštećenje obnavljanjem krvotoka i oksigenacije. Međutim, oštećenje izazvano reperfuzionom povredom se u opštem slučaju slabo tretira. Eksperimentalni tretmani za ishemičnu reperfuziju uključuju upotrebu adenozina i adenozinskih analoga, kao i inhibiciju natrijum-kalcijum pumpe na ishemičnim miocitima. Ove terapije, međutim, nisu dovoljno adekvatne. Na primer, upotrebu adenozina i adenozinskih analoga je praćena neželjenim efektima depresorske aktivnosti i bradikardije. Slično, inhibicija natrijum-kalcijum pumpe na ishemičnim miocitima je neadekvatna zato što ona ne sprečava i ne leči zapaljenska stanja ni direktnu stimulaciju apoptoze. Dakle, ostaje potreba za novim farmaceutski prihvatljivim jedinjenjima i kompozicijama za sprečavanje, ograničavanje ili lečenje ishemične reperfuzione povrede.

PREGLED PRONALASKA

[0009] Podnosioci ove prijave su resili gornji problem otkrićem da su antagonisti adenozinskog receptora A2bsposobni za sprečavanje, ograničavanje ili lečenje ishemične reperfuzione povrede. Ovaj pronalazak se odnosi na postupak za sprečavanje, ograničavanje ili lečenje ishemične reperfuzione povrede kod sisara, koji je pretrpeo ishemiju ili kome preti ishemija, u kome se koriste antagonisti adenozinskog receptora A2b- Jedinjenja korisna u postupcima iz ovog pronalaska ispoljavaju svoje željene efekte specifično antagonizirajući ili blokirajući adenozinski receptor A2h.

[0010] U nekim izvođenjima, postupci iz ovog pronalaska sadrže davanje pacijentu terapijski efektivnu ili profilaktički efektivnu količinu antagonista adenozinskog receptora u okviru deset dana pre ili posle ishemičnog događaja.

[0011] U nekim izvođenjima pronalaska, antagonist adenozinskog receptora A2bje jedinjenje formule (I)

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov oksid azota,

gde:je

svaki od Ri, R2i R3, nezavisno:

a) vodonik; b) C1-6alkil, C2- 6 alkenil, ili C2- 6 alkinil; gde je navedeni alkil, alkenil ili alkinil ili

nesupstituisan ili supstituisan jednim ili više supstituenata odabranih iz grupe koju čine

hidroksi, alkoksi, amino, monoalkilamino, dialkilamino, cikloalkil, aril, heterociklil, aralkil, heterociklilalkil, acilamino, alkilaminokarbonil, alkilsulfonilamino i alkilaminosulfonil;

c) supstituisan ili nesupstituisan aril; ili

d) supstituisan ili nesupstituisan heterociklil;

R4jejednoguba veza, -O-, -(CH2),.3-, -0(CH2),.2-, -CH2OCH2, -(Cm^O-, -CH=CHCH2-, -

CH=CH-, ili -CH2CH=CH-;

R5je:

(a) fenil ili

(b) biciklična ili triciklična grupa odabrana iz grupe koju čine:

gde je fenil, biciklična, ili triciklična grupa bilo nesupstituisana, bilo supstituisana jednom ili više Ragrupa, odabranih iz grupe koju čine: (a) Ci_6alkil, C2-6alkenil, ili C2-6alkinil; gde je svaka navedena alkil, alkenil ili alkinil grupa bilo nesupstituisana, bilo supstituisana jednim ili više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, (amino)(Rb)acilhidrazinilkarbonil-, (amino)(Rb)aciloksikarboksi-, (hidroksi)(karboalkoksi)alkilkarbamoil, aciloksi, aldehido, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilaminoalkilamino, dialkilaminoalkilamino, alkilfosfono, alkilsulfonilamino, karbamoil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkilamino-, cijano, cijanoalkilkarbamoil, cikloalkilamino, dialkilfosfono, haloalkilsulfonilamino, heterociklilalkilamino, heterociklilkarbamoil, hidroksi, hidroksialkilsulfonilamino, oksimino, fosfono, supstituisan ili nesupstituisan aralkilamino, supstituisan ili nesupstituisan arilkarboksialkoksikarbonil, supstituisan ili nesupstituisan heteroarilsulfonilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, tiokarbamoil, i trifiuorometil i (b) (alkoksikarbonil)aralkilkarbamoil, aldehido, alkenoksi, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilkarbamoil, alkoksikarbonilamino, alkoksikarbonilalkilamino, alkilsulfonilamino, alkilsulfoniloksi, amino, aminoalkilaralkilkarbamoil, aminoalkilkarbamoil, aminoalkilheterociklilalkilkarbamoil, aminocikloalkilalkilcikloalkilkarbamoil, aminocikloalkilkarbamoil, aralkoksikarbonilamino, arilheterociklil, ariloksi, arilsulfonilamino, arilsulfoniloksi, karbamoil, karbonil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkiltio-, Rb-alkil(alkil)amino-, Rb-alkil(alkil)karbamoil-, Rb-alkilamino-, Rb-alkilkarbamoil-, Rb-alkilsulfonil-, Rb-alkil-sulibnilamino, Rb-alkiltio, Rb-heterocikliikarbonil, aminoalkilaminokarbonil, dialkilaminoalkilamino, alkilaminoalkilamino, cijano, cikloalkilamino, dialkilaminoalkilkarbamoil,

halogen, heterociklilalkilamino, hidroksi, oksimino, fosfat, supstituisan ili nesupstituisan aralkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilsulfonilamino, sulfoksiacilamino i tiokarbamoil;

Rbje odabran iz grupe koju čine -COOH, -C(CF3)2OH, -CONHNHS02CF3, -CONHORc, - CONHS02Rc, -CONHS02NHRc, -C(OH)RcP03H2, -NHCOCF3, -NHCONHS02Rc, - NHP03H2, -NHS02Rc, -NHS02NHCORc, -OP03H2, -OSO3H, -PO(OH)Rc,-P03H2, -S03H, - SO2NH.R0-S03NHCORc, -S03NHCONHC02Rci sledeće:

Rcje odabran iz grupe koju čine vodonik, -Cm alkil,-CMalkil-C02H, i fenil, gde su -Cmalkil, -Ci-4alkil-C02H i fenil grupa bilo nesupstituisane, bilo supstituisane jednim do tri supstituenta odabranih iz grupe koju čine halogen, -OH, -OMe, -NH2, -NO2, nesupstituisan benzil i benzil supstituisan jednim do tri supstituenta odabran iz grupe koju čine halogen, -OH, -OMe, -NH2, i -N02;

Xji X2su nezavisno odabrani iz grupe koju čine O i S i

X3je N ili CRdgde je R<jodabran iz grupe koju čine:

a) vodonik; b) Ci-6 alkil, C2-6alkenil, ili C2_6alkinil; gde su navedeni alkil, alkenil, ili alkinil bilo

nesupstituisani, bilo supstituisani jednim ili više supstituenata odabranih iz grupe koju čine

hidroksi, alkoksi, amino, monoalkilamino, dialkilamino, cikloalkil, aril, heterociklil, aralkiL heterociklilalkil, acilamino, alkilaminokarbonil, alkilsulfonilamino, i alkilaminosulfonil;

c) supstituisan ili nesupstituisan aril i

d) supstituisan ili nesupstituisan heterociklil.

[0012] U nekim izvođenjima ovog pronalaska,R{je Ci_6alkil. U nekim izvođenjima, R2 je Ci.6alkil. U nekim izvođenjima, R3je vodonik. U nekim izvođenjima, R4je jednoguba veza.

[0013] U nekim izvođenjima pronalaska, R5je supstituisan fenil. U nekim drugim izvođenjima, R5 je supstituisana biciklična ili triciklična grupa odabrana iz grupe koju čine:

A u nekim drugim izvođenjima, R5je gde je navedeni R5bilo nesupstituisan, bilo supstituisan jednom ili više Ragrupa odabranih iz grupe koju čine: (a) C1-6alkil, C2-6alkenil, ili C2-6alkinil; gde je svaka navedena alkil, alkenil, ili alkinil grupa ili nesupstituisana ili supstituisana jednim ili više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, (amino)(Rb)acilhidrazinilkarbonil-, (amino)(Rb)aciloksikarboksi-, (hidroksi)(karboalkoksi)alkilkarbamoil, aciloksi, aldehido, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilaminoalkilamino, dialkilaminoalkilamino, alkilfosfono, alkilsulfonilamino, karbamoil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkilamino-, cijano, cijanoalkilkarbamoil, cikloalkilamino, dialkilfosfono, haloalkilsulfonilamino, heterociklilalkilamino, heterociklilkarbamoil, hidroksi, hidroksialkilsulfonilamino, oksimino, fosfono, supstituisan ili nesupstituisan aralkilamino, supstituisan ili nesupstituisan arilkarboksialkoksikarbonil, supstituisan ili nesupstituisan heteroarilsulfonilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, tiokarbamoil, i trifluorometil; i (b) (alkoksikarbonil)aralkilkarbamoil, aldehido, alkenoksi, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilkarbamoil, alkoksikarbonilamino, alkoksikarbonilalkilamino, alkilsulfonilamino, alkilsulfoniloksi, amino, aminoalkilaralkilkarbamoil, aminoalkilkarbamoil, aminoalkilheterociklilalkilkarbamoil, aminocikloalkilalkilcikloalkilkarbamoil, aminocikloalkilkarbamoil, aralkoksikarbonilamino, arilheterociklil, ariloksi, arilsulfonilamino, arilsulfoniloksi, karbamoil, karbonil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkiltio-, Rb-alkil(alkil)amino-, Rb-alkil(alkil)karbamoil-, Rb-alkilamino-, Rb-alkilkarbamoil-, Rb-alkilsulfonil-, Rb-alkilsulfonilamino, Rb-alkiltio, Rb-heterociklilkarbonil, aminoalkilaminokarbonil, dialkilaminoalkilamino, alkilaminoalkilamino, cijano, cikloalkilamino, dialkilaminoalkilkarbamoil, halogen, heterociklilalkilamino, hidroksi, oksimino, fosfat, supstituisan ili nesupstituisan aralkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilsulfonilamino, sulfoksiacilamino i tiokarbamoil.

[0014] U nekim izvođenjima ovog pronalaska, Ra je odabran iz grupe koju čine: (a) Ci-6 alkil, C2-6alkenil, ili C2-6alkinil; gde je svaka navedena alkil, alkenil, ili alkinil grupa ili nesupstituisana, ili supstituisana jednim ili više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, (amino)(Rb)acilhydrazinilkarbonil-, (amino)(Rb)aciloksikarboksi-, (hidroksi)(karboalkoksi)alkilkarbamoil, aciloksi, aldehido, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilaminoalkilamino, alkilfosfono, alkilsulfonilamino, karbamoil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkilamino-, cijano, cijanoalkilkarbamoil, cikloalkilamino, dialkilaminoalkilamino, dialkilfosfono, haloalkilsulfonilamino, heterociklilalkilamino, heterociklilkarbamoil, hidroksi, hidroksialkilsulfonilamino, oksimino, fosfono, supstituisan aralkilamino, supstituisan arilkarboksialkoksikarbonil, supstituisan heteroarilsulfonilamino, supstituisan heterociklil, tiokarbamoil, i trifluorometil; i (b) (alkoksikarbonil)aralkilkarbamoil, aldehido, alkenoksi, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilkarbamoil, alkoksikarbonilamino, alkoksikarbonilalkilamino, alkilsulfonilamino, alkilsulfoniloksi, amino, aminoalkilaralkilkarbamoil, aminoalkilkarbamoil, aminoalkilheterociklilalkilkarbamoil, aminocikloalkilalkilcikloalkilkarbamoil, aminocikloalkilkarbamoil, aralkoksikarbonilamino, arilheterociklil, ariloksi, arilsulfonilamino, arilsulfoniloksi, karbamoil, karbonil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkil(alkil)amino-,Rb-alkil(alkil)-karbamoil-, Rb-alkilamino-, Rb-alkilkarbamoil-, Rb-alkilsulfonil-, Rb-alkilsulfonilamino, Rb-alkiltio, Rb-heterociklilkarbonil, cijano, cikloalkilamino, dialkilaminoalkilkarbamoil, halogen, heterociklilalkilamino, hidroksi, oksimino, fosfat, supstituisan aralkilamino, supstituisan heterociklil, supstituisan heterociklilsulfonilamino, sulfoksiacilamino, i tiokarbamoil.

[0015] U nekim drugim izvođenjima ovog pronalaska, Ra je odabran iz grupe koju čine: (a) Ci.6 alkil ili C2-6alkenil, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan jednim ili više supstituenata odabranim iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, Rb-, Rb-alkoksi- i supstituisan ili nesupstituisan heterociklil; i

(b) alkoksikarbonilalkilamino, cijano i hidroksi.

[0016] U nekim izvođenjima pronalaska, Xije O. U nekim izvođenjima, X2je 0. U nekim izvođenjima, X3je N.

[0017] U nekim izvođenjima pronalaska, svaki od Rji R2je C^alkil; R3je vodonik; R4je jednoguba veza; svaki od Xii X2je 0, a X3je N. U nekim drugim izvođenjima ovog pronalaska, svaki od Rji R2nezavisno je C2^alkil; R3 je vodonik; R4 je jednoguba veza; svaki od Xi i X2je 0, X3je N, a R5je fenil supstituisan sa Ra.

[0018] U nekim drugim izvođenjima ovog pronalaska, svaki od Rii R2je C2-4alkil; R3je vodonik; R4je jednoguba veza; svaki od Xii X2je 0; X3je N, a R5je fenil supstituisan sa Ra; a Raje odabran iz grupe koju čine: (a) Ci-6alkil ili C2- 6 alkenil, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan jednim ili više supstituenata, odabranim iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, Rb-, i Rb-alkoksi-; i (b) alkoksikarbonilalkilamino, Rb-alkoksi-, cijano, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil i hidroksi.

[0019] A u nekim drugim izvođenjima ovog pronalaska, svaki od Rii R2je C2a alkil; R3je vodonik; R4je jednoguba veza; svaki od Xii X2je 0, X3je N, a R5je fenil supstituisan sa Ra; a Raje cijano.

[0020] U nekim izvođenjima pronalaska, svaki od Rii R2nezavisno je C2-4alkil; R3je vodonik; R4 je jednoguba veza; svaki od Xi i X2je 0; X3je N, a R5je

gde je navedeni R5bilo nesupstituisan, bilo supstituisan sa jednom ili više Ragrupa odabranim iz grupe koju čine: (a) C1-6alkil, C2- 6 alkenil, ili C2- 6 alkinil; gde je svaka navedena alkil, alkenil, ili alkinil grupa ili nesupstituisana, ili supstituisana jednim ili više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, (amino)(Rb)acilhidrazinilkarbonil-, (amino,)(Rb)aciloksikarboksi-, (hidroksi)

(karboalkoksi)alkilkarbamoil, aciloksi, aldehido, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilaminoalkilamino, dialkilaminoalkilamino, alkilfosfono, alkilsulfonilamino, karbamoil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkilamino-, cijano, cijanoalkilkarbamoil, cikloalkilamino, dialkilaminoalkilamino, dialkilfosfono, haloalkilsulfonilamino, heterociklilalkilamino, heterociklilkarbamoil, hidroksi, hidroksialkilsulfonilamino, oksimino, fosfono, supstituisan ili nesupstituisan aralkilamino, supstituisan ili nesupstituisan arilkarboksialkoksikarbonil, supstituisan ili nesupstituisan heteroarilsulfonilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, tiokarbamoil i trifluorometil; i

(b) (alkoksikarbonil)aralkilkarbamoil, aldehido, alkenoksi, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilkarbamoil, alkoksikarbonilamino, alkoksikarbonilalkilamino, alkilsulfonilamino, alkilsulfoniloksi, amino, aminoalkilaralkilkarbamoil, aminoalkilkarbamoil, aminoalkilheterociklilalkilkarbamoil, aminocikloalkilalkilcikloalkilkarbamoil, aminocikloalkilkarbamoil, aralkoksikarbonilamino, arilheterociklil, ariloksi, arilsulfonilamino, arilsulfoniloksi, karbamoil, karbonil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkiltio-, Rb-alkil(alkil)amino-, Rb-alkil(alkil)karbamoil-, Rb-alkilamino-, Rb-alkilkarbamoil-, Rb-alkilsulfonil-, Rb-alkilsulfonilamino, Rb-alkiltio, Rb-heterociklilkarbonil, aminoalkilaminokarbonil, dialkilaminoalkilamino, alkilaminoalkilamino, cijano, cikloalkilamino, dialkilaminoalkilkarbamoil, halogen, heterociklilalkilamino, hidroksi, oksimino, fosfat, supstituisan ili nesupstituisan aralkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, supstituisan ili nesupstituisan hetero-

[0021] U nekim drugim izvođenjima ovog pronalaska, svaki od Rji R2je C2-4alkil; R3je vodonik; R4 je jednoguba veza; svaki od Xii X2 je 0; a X3 je N; a R5 je

gde je navedeni R5bilo nesupstituisan, bilo supstituisan jednom ili sa više Ragrupa odabranih iz grupe koju čine: (a) C1-6alkil ili C2_6alkenil, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, Rb-, i Rb-alkoksi-; i (b) alkoksikarbonilalkilamino, Rb-alkoksi-, cijano, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil i hidroksi. [0022] U jednom drugom izvođenju pronalaska, svaki od Rii R2je C2-4alkil; R3je vodonik; R4je jednoguba veza; svaki od Xii X2je 0; a X3je N; a R5je

gde je navedeni R5bilo nesupstituisan, bilo supstituisan jednom ili sa više Ragrupa odabranih iz grupe koju čine C2_5alkil koji je supstituisan jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino i dialkilamino.

[0023] U nekim izvođenjima pronalaska, svaki od R]i R2je C2-4alkil; R3je vodonik; R4je jednoguba veza; svaki od Xji X2je 0; a X3je N; a R5je gde je navedeni R5bilo nesupstituisan, bilo supstituisan jednom ili sa više Ragrupa odabranih iz grupe koju čine: (a) Cj_6alkil, C2-6alkenil, ili C2-6alkinil; gde je svaka navedena alkil, alkenil, ili alkinil grupa ili nesupstituisana, ili supstituisana jednim ili više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, (amino)(Rb)acilhydrazinilkarbonil-, (amino)(Rb)aciloksikarboksi-, (hidroksi)(karboalkoksi)alkilkarbamoil, aciloksi, aldehido, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilaminoalkilamino, dialkilaminoalkilamino, alkilfosfono, alkilsulfonilamino, karbamoil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkilamino-, cijano, cijanoalkilkarbamoil, cikloalkilamino, dialkilfosfono, haloalkilsulfonilamino, heterociklilalkilamino, heterociklilkarbamoil, hidroksi, hidroksialkilsulfonilamino, oksimino, fosfono, supstituisan ili nesupstituisan aralkilamino, supstituisan ili nesupstituisan arilkarboksialkoksikarbonil, supstituisan ili nesupstituisan heteroarilsulfonilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, tiokarbamoil, i trifluorometil; i (b) (alkoksikarbonil)aralkilkarbamoil, aldehido, alkenoksi, alkenilsulfonilainino, alkoksi, alkoksicafbonil, alkilkarbamoil, alkoksikarbonilamino, alkoksikarbonilalkilamino, alkilsulfonilamino, alkilsulfoniloksi, amino, aminoalkilaralkilkarbamoil, aminoalkilkarbamoil, aminoalkilheterociklilalkilkarbamoil, aminocikloalkilalkilcikloalkilkarbamoil, aminocikloalkilkarbamoil, aralkoksikarbonilamino, arilheterociklil, ariloksi, arilsulfonilamino, arilsulfoniloksi, karbamoil, karbonil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkiltio-, Rb-alkil(alkil)amino-, Rb-alkil-(alkil)karbamoil-, Rb-alkilamino-, Rb-alkilkarbamoil-, Rb-alkilsulfonil-, Rb-alkilsulfonilamino, Rb-alkiltio, Rb-heterociklilkarbonil, aminoalkilaminokarbonil, dialkilaminoalkilamino, alkilaminoalkilamino, cijano, cikloalkilamino, dialkilaminoalkilkarbamoil, halogen, heterociklilalkilamino, hidroksi, oksimino, fosfat, supstituisan ili nesupstituisan aralkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilsulfonilamino, sulfoksiacilamino, i tiokarbamoil.

[0024] U nekim drugim izvođenjima ovog pronalaska, svaki od Rii R2je C2-4alkil; R3je vodonik; R4 je jednoguba veza; svaki od Xi i X2 je 0; X3 je N; R5 je i gde je navedeni R5bilo nesupstituisan, bilo supstituisan jednom ili sa više Ragrupa odabranih iz grupe koju čine: (a) Ci-6alkil ili C2-6alkenil, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, Rb-, i Rb-alkoksi-; i (b) alkoksikarbonilalkilamino, Rb-alkoksi-, cijano, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, i hidroksi. [0025] U još nekim drugim izvođenjima pronalaska, svaki od R\i R2je C2-4alkil; R3je vodonik; R4je jednoguba veza; svaki od Xii X2je 0; X3je N; R5je i gde je navedeni R5bilo nesupstituisan, bilo supstituisan jednom ili sa više Ragrupa odabranih iz grupe koju čine: (a) Ci-4alkil ili C2^alkenil, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, i Rb-; i

(b) Rb-alkoksi- i supstituisan heterociklil.

[0026] U nekim izvođenjima pronalaska, svaki od Rii R2je propil; R3je vodonik; R4je jednoguba veza; R5 je fenil supstituisan jednom ili sa više Ragrupa

gde je navedena biciklična ili triciklična grupa bilo nesupstituisana, bilo supstituisana jednom ili sa više Ra grupa; i

Ra je odabran iz grupe koju čine:

(a) Ci_6alkil ili C2-6alkenil, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, Rb-, Rb-alkoksi- i supstituisan ili nesupstituisan heterociklil; i (b) alkoksikarbonilalkilamino, cijano, i hidroksi; svaki od Xii X2je 0, a X3je N.

[0027] U jednom poželjnom izvođenju pronalaska, jedinjenje formule (I), koje se koristi u postupku iz ovog pronalaska, je 3-[4-(2,6-diokso-l,3-dipropil-2,3,6,7-tetrahidro-lH-purin-8-il)-biciklo[2.2.2]okt-l-il]-propionska kiselina.

[0028] U nekim izvođenjima, antagonist adenozinskog receptora A2bse daje čoveku.

[0029] U nekim izvođenjima, antagonist adenozinskog receptora A2b, koji se koristi u postupku iz ovog pronalaska, se formuliše zajedno sa farmaceutski pogodnim nosačem u farmaceutski prihvatljivu kompoziciju.

[0030] Ovaj pronalazak je koristan u lečenju pacijenata koji su pretrpeli slučaj ishemičan ili kojima preti ishemičan slučaj. Primeri ishemičnih slučajeva uključuju akutan koronarni sindrom (uključujući infarkt miokarda), šlog, transplantaciju organa, ishemiju bubrega, šok i hirurgiju transplantacije organa.

[0031] U nekim izvođenjima, postupak iz ovog pronalaska uključuje davanje antagonista adenozinskog receptora A2bu okviru dva dana pre ili posle ishemičnih slučajeva. U jednom drugom izvođenju, postupak uključuje davanje antagonista adenozinskog receptora A2bu okviru dva dana posle ishemičnih slučajeva.

[0032] U nekim izvođenjima, jedinjenje koje se koristi u postupcima iz ovog pronalaska ispoljava afinitet prema adenozinskom receptom A2bkoji je bar 10 puta veći od afiniteta prema adenozinskom receptom A2aili adenozinskom receptom A3. U nekim dmgim izvođenjima, jedinjenje koje se koristi u postupcima iz ovog pronalaska dalje ispoljava afinitet prema adenozinskom receptoru A, koji je bar 10 puta veći od afiniteta prema adenozinskom receptom A2aili adenozinskom receptoru A3.

[0033] U nekim izvođenjima, jedinjenje koje se koristi u postupcima iz ovog pronalaska pokazuje vrednost Kjprema adenozinskom receptoru A2bmanju od 500 nM. U nekim drugim izvođenjima, jedinjenje koje se koristi u postupcima iz ovog pronalaska pokazuje vrednost Kjprema adenozinskom receptoru A2bmanju od 200 nM.

[0034] U nekim izvođenjima, ovaj pronalazak se odnosi na postupak lečenja oboljenja ili poremećaja u kojem učestvuje aktivacija adenozinskog receptora A2b, gde se postupak sastoji od davanja sisani kome je to potrebno efektivne količine jedinjenja formule (I) kao što je opisano gore.

[0035] U nekim izvođenjima, pronalazak se odnosi na postupak ograničavanja nekroze tkiva, koja je posledica ishemičnog slučaja, u sisani koji je pretrpeo ishemičan slučaj ili kome preti ishemični slučaj, upotrebom antagonista adenozinskog receptora A2b.

[0036] U nekim izvođenjima, pronalazak se odnosi na postupak ograničavanja veličine infarkta koji sledi infarkt miokarda, u sisani koji je pretrpeo infarkt miokarda ili kome preti infarkt miokarda, upotrebom antagonista adenozinskog receptora A2b.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0037] Slika 1 pokazuje podatke o veličini infarkta miokarda iz protokola I (videti Primer 2). Panel A pokazuje veličinu rizičnog regiona u četiri eksperimentalne grupe izraženu kao procenat leve komore. Panel B pokazuje veličinu infarkta kao procenat rizičnog regiona. Panel C prikazuje veličinu infarkta izraženu kao procenat leve komore. Panel D prikazuje grafik veličine infarkta izražene kao procenat rizičnog regiona i transmuralnog kolateralnog krovotoka merenog 30 minuta posle koronarne okluzije.

[0038] Slika 2 pokazuje podatke o veličini infarkta miokarda iz protokola II (Videti Primer 3). Panel A pokazuje veličinu rizičnog regiona u četiri eksperimentalne grupe izraženu kao procenat leve komore. U svrhu poređenja, kontrolna grupa iz protokola I je takođe uključena. Panel B pokazuje veličinu infarkta kao procenat rizičnog regiona. Panel C pokazuje veličinu infarkta kao procenat leve komore. Panel D prikazuje grafik veličine infarkta izražene kao procenat rizičnog regiona i transmuralnog kolateralnog krovotoka merenog 30 minuta posle koronarne okluzije.

[0039] Slika 3 pokazuje podatke o veličini infarkta miokarda iz protokola III (videti Primer 4). Panel A pokazuje veličinu rizičnog regiona u četiri eksperimentalne grupe izraženu kao procenat leve komore. Panel B pokazuje veličinu infarkta kao procenat rizičnog regiona. Panel C pokazuje veličinu infarkta izraženu kao procenat leve komore. Panel D prikazuje grafik veličine infarkta izražene kao procenat rizičnog regiona i transmuralnog kolateralnog krovotoka merenog 30 minuta posle koronarne okluzije.

[0040] Slika 4 pokazuje kompetitivno vezivanje BG9928 za rekombinantne humane adenozinske receptoreA\.Membrane (50 |j,g membranskog proteina) napravljene od HEK 293 ćelija koje stabilno eksprimiraju humane adenozinske receptore Ai, 0,92 nM radioliganda [<3>H]-DPCPX i varirajuće koncentracije BG9928 su inkubirani u triplikatu u 0,1 ml pufera HE plus 2 jedinice/mL adenozin dezaminaze 2,5 sata na 21°C. Nespecifično vezivanje je mereno u prisustvu 10 uM NECA. Eseji vezivanja su završeni filtracijom. (N=l).

[0041] Slika 5 pokazuje kompetitivno vezivanje BG9928 za rekombinantne humane adenozinske receptore A2a. Membrane (50 p.g membranskog proteina) napravljene od HEK 293 ćelija koje stabilno eksprimiraju humane adenozinske receptore A2a, 1,16 nM radioliganda [<3>H]-ZM241385 i varirajuće koncentracije BG9928 su inkubirani u triplikatu u 0,1 ml pufera HE plus 2 jedinice/mL adenozin dezaminaze 2,5 sata na 21°C. Nespecifično vezivanje je mereno u prisustvu 10 |jM XAC. Eseji vezivanja su završeni filtracijom. (N=l).

[0042] Slika 6 pokazuje kompetitivno vezivanje BG9928 za rekombinantne humane adenozinske receptore A2b. Membrane (40-70 jj,g membranskog proteina) napravljene od HEK 293 ćelija koje stabilno eksprimiraju humane adenozinske receptore A2b, 30- 40 nM radioliganda [<3>H]-ZM241385 i varirajuće koncentracije BG9928 su inkubirani u triplikatu u 0,1 ml pufera HE plus 2 jedinice/mL adenozin dezaminaze 2,5 sata na 21°C. Nespecifično vezivanje je mereno u prisustvu 10 uM NECA. Eseji vezivanja su završeni filtracijom. (N=3).

[0043] Slika 7 pokazuje vezivanje BG9928 u jednoj tački za rekombinantne humane adenozinske receptore A3. Membrane napravljene od HEK 293 ćelija koje stabilno eksprimiraju rekombinantne humane adenozinske receptore A3(50 jj.g membranskog proteina) i 0,12 nM radioliganda [<125>I]-AB-MECA bilo sami, sa 10^M JJB-MECA, bilo sa 10 uM BG9928, su inkubirani u triplikatu u 0,1 ml pufera HE plus 2 jedinice/mL adenozin dezaminaze 2,5 sata na 21°C. Eseji vezivanja su završeni filtracijom. (N=2).

[0044] Slika 8 pokazuje FLIPR esej BG9928 sa rekombinantnim humanim adenozinskim receptorima A]koji se stabilno eksprimiraju u CHO-K1 ćelijama. FLIPR eseji mere odgovor CHO-K1 ćelija, koje stabilno eksprimiraju rekombinantne humane adenozinske receptore Ai, na rastuće koncentracije agonista (CPA) (gornji grafik) da bi se odredile IC50(koncentracija pri kojoj se dobija 50%-ni odgovor), a zatim i vrednosti Kbza antagonist BG9928 pri stalnoj koncentraciji agonista (200 nM CP A) korišćenjem nultog metoda (donji grafik).

[0045] Slika 9 pokazuje FLIPR esej BG9928 sa rekombinantnim humanim adenozinskim receptorima A2bkoji se stabilno eksprimiraju u HEK-293 ćelijama. FLIPR eseji mere odgovor HEK-293 ćelija koje stabilno eksprimiraju rekombinantne humane adenozinske receptore A2b, na rastuće koncentracije agonista (NECA) (gornji grafik) da bi se odredile IC50(koncentracija pri kojoj se dobija 50%-ni odgovor), a zatim i vrednosti Kbza antagonist BG9928 pri stalnoj koncentraciji agonista (5 uM NECA) korišćenjem nultog metoda (donji grafik).

[0046] Slika 10 pokazuje FLIPR esej BG9928 sa rekombinantnim humanim adenozinskim receptorima A2bkoji se stabilno eksprimiraju u HEK-293 ćelijama. FLIPR eseji mere deo kontrolnog odgovora nađenog sa 10, 100, i 300 nM BG9928 u HEK-293 ćelijama, koje eksprimiraju adenozinske receptore A2bpacova, u prisustvu rastuće koncentracije agonista (NECA) (gornji grafik). Donji grafik je Schild-ova analiza podataka prikazanih na gornjem grafiku.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0047] Ako nije drukčije definisano, svi tehnički i naučni termini korišćeni ovde imaju značenje koje se obično podrazumeva u struci kojoj ovaj pronalazak pripada. Iako se postupci i materijali slični ili ekvivalentni onima opisanim ovde mogu koristiti u praksi ili testiranju ovog pronalaska, pogodni materijali i postupci su opisani niže. Sve publikacije, patentne prijave, patenti i druge reference, spomenuti ovde, su obuhvaćeni referencom u svojoj celini. Pored toga, materijali, postupci i primeri su samo ilustrativni i nisu predviđeni da ograniče.

[0048] Kroz celu specifikaciju, reč "sadrži" ili varijacije kao što su "sadrže" ili "sastoji se" će podrazumevati da implicira uključivanje navedenog pojma ili grupe pojmova, ali ne isključivanje bilo kojih drugih pojmova ili grupe pojmova.

[0049] Kao što se ovde koristi, "alkil" grupa je saturisana alifatična ugljovodonična grupa. Alkil grupa može biti pravolinijska ili razgranata i može da ima, na primer, od 1 do 6 ugljenikovih atoma u lancu. Primeri alkil grupa pravolinijskog lanca uključuju, ali nisu ograničeni na, etil i butil. Primeri alkil grupa razgranatog lanca uključuju, ali nisu ograničeni na, izopropil i t-butil. Alkil grupa može da bude po izboru supstituisana jednim ili sa više supstituenata kao što su alkoksi, amino, nitro, karboksi, karboalkoksi, cijano, halo, hidroksi, merkaptil, trihalometil, sulfoksi ili karbamoil.

[0050] Kao što se ovde koristi, "alkenil" grupa je alifatična ugljenična grupa koja ima bar jednu dvogubu vezu. Alkenil grupa može biti pravolinijska ili razgranata i može da ima, na primer, od 3 do 6 ugljenikovih atoma u lancu i 1 ili 2 dvogube veze. Primeri alkenil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, alil i izoprenil. Alkenil grupa može da bude po izboru supstituisana jednim ili sa više supstituenata kao što su alkoksi, amino, nitro, karboksi, karboalkoksi, cijano, halo, hidroksi, merkaptil, trihalometil, sulfoksi ili karbamoil.

[0051] Kao što se ovde koristi, "alkinil" grupa je alifatična ugljenična grupa koja ima bar jednu trogubu vezu. Alkinil grupa može biti pravolinijska ili razgranata i može da ima, na primer, od 3 do 6 ugljenikovih atoma u lancu i 1 do 2 trogube veze. Primeri alkinil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, propargil i butinil. Alkinil grupa može da bude po izboru supstituisana jednim ili sa više supstituenata kao što su alkoksi, amino, nitro, karboksi, karboalkoksi, cijano, halo, hidroksi, merkaptil, trihalometil, sulfoksi ili karbamoil.

[0052] Kao što se ovde koristi, "aril" grupa je fenil ili naftil grupa, ili njihov derivat. "Supstituisana aril" grupa je aril grupa koja je supstituisana jednim ili sa više supstituenata kao što su alkil, alkoksi, amino, nitro, karboksi, karboalkoksi, cijano, alkilamino, dialkilamino, halo, hidroksi, hidroksialkil, merkaptil, alkilmerkaptil, trihaloalkil, karboksialkil, sulfoksi ili karbamoil.

[0053] Kao što se ovde koristi, "aralkil" grupa je alkil grupa koja je supstituisana jednom aril grupom. Primer aralkil grupe je benzil.

[0054] Kao što se ovde koristi, "cikloalkil" grupa je alifatičan prsten od, na primer, 3 do 8 ugljenikovih atoma. Primeri cikloalkil grupa uključuju ciklopropil i cikloheksil.

[0055] Kao što se ovde koristi, "acil" grupa je pravolinijska ili razgranata alkil-C(=0)- grupa ili formil grupa. Primeri acil grupa uključuju alkanoil grupe (npr., koje imaju od 1 do 6 ugljenikovih atoma u alkil grupi). Acetil i pivaloil su primeri acil grupa. Acil grupe mogu biti supstituisane ili nesupstituisane.

[0056] Kao što se ovde koristi, "karbamoil" grupa je grupa koja ima strukturu H2N-CO2. "Alkilkarbamoil" i "dialkilkarbamoil" se odnose na karbamoil grupe u kojima azot ima jednu ili dve alkil grupe vezane na mestu vodonika, respektivno. Po analogiji, "arilkarbamoil" i "arilalkilkarbamoil" grupe uključuju aril grupu na mestu jednog od vodonika i, u ovom drugom slučaju, alkil grupu na mestu drugog vodonika.

[0057] Kao što se ovde koristi, "karboksil"grupa je -COOH grupa.

[0058] Kao što se ovde koristi, "alkoksi" grupa je alkil-O- grupa u kojoj je "alkil" kao što je prethodno opisan.

[0059] Kao što se ovde koristi, "alkoksialkil" grupa je alkil grupa kao što je prethodno opisana, gde je jedan vodonik zamenjen alkoksi grupom, kao što je prethodno opisano.

[0060] Kao što se ovde koristi, "halogen" ili "halo" grupa je fluor, hlor, brom ili jod.

[0061] Kao što se ovde koristi, "heterociklil" grupa je struktura prstena sa 5 do oko 10 članova, u kojoj je jedan ili više atoma u prstenu element različit od ugljenika, npr., N, O, S. Heterociklil grupa može biti aromatična ili nearomatična, tj., može biti saturisana, ili može biti delimično ili potpuno nesaturisana. Aromatična heterociklil grupa se može takođe nazivati "heteroaril" grupa. Primeri heterociklil grupa uključuju piridil, imidazolil, furanil, tienil, tiazolil, tctrahidrofuranil, tetrahidropiranil. morfolinil. tiomorfolinil, indolil. indolinil, izoindolinil, piperidinil, pirimidinil, piperazinil, izoksazolil, izoksazolidinil, tetrazolil i benzimidazolil.

[0062] Kao što se ovde koristi, "supstituisana heterociklil" grupa je heterociklil grupa gde je jedan ili više vodonika zamenjen supstituentima kao što su alkoksi, alkilamino, dialkilamino, karbalkoksi, karbamoil, karboksil, cijano, halo, trihalometil, hidroksi, karbonil, tiokarbonil, hidroksialkil ili nitro.

[0063] Kao što se ovde koristi, "hidroksialkil" označava alkil grupu supstituisanu hidroksi grupom.

[0064] Kao što se ovde koristi, "sulfamoil" grupa ima strukturu -S(0)2NH2. "Alkilsulfamoil" i "dialkilsulfamoil" se odnose na sulfamoil grupe u kojima azot ima jednu ili dve alkil grupe vezane na mestu vodonika, respektivno. Po analogiji, "arilsulfamoil" i "arilalkilsulfamoil" grupe uključuju aril grupu na mestu jednog od vodonika i, u ovom drugom slučaju, alkil grupu na mestu drugog vodonika.

[0065] Kao što se ovde koristi, "antagonist" je molekul koji se vezuje za receptor, a ne aktivira ga. U kompeticiji je sa endogenim ligandom za ovo vezivno mesto i, prema tome, smanjuje sposobnost endogenog liganda da stimuliše receptor.

[0066] Kao što se ovde koristi, "selektivni antagonist" je antagonist koji se vezuje za specifičan podtip adenozinskog receptora sa većim afinitetom nego za druge podtipove. "Selektivan antagonist A2b", kao što se ovde koristi, je antagonist koji ima visok afinitet za A2breceptore i ima (a) nanomolarni afinitet vezivanja za A2breceptorski podtip i (b) bar 10 puta, poželjnije 50 puta, a najpoželjnije 100 puta, veći afinitet za A2bpodtip nego za A2ai A3receptorske podtipove. Selektivni antagonist A2bmože opciono da ima afinitet za Aireceptorski podtip i da ima (a) nanomolarni afinitet vezivanja za Aireceptorski podtip i (b) bar 10 puta, poželjnije 50 puta, a najpoželjnije 100 puta, veći afinitet za A[podtip nego za A2ai A3receptorske podtipove.

[0067] Kao što se ovde koristi, "infarkt" znači lokalizovana nekroza, nastala opstrukcijom snabđevanja tkiva (npr., miokarda) krvlju.

[0068] Kao što se ovde koristi, "ishemija" znači neadekvatno snabdevanje krvlju (cirkulacija) u lokalnoj oblasti (tj., organu ili tkivu) zbog blokade krvnih sudova u toj oblasti. Ishemija uključuje potpun prestanak krvotoka i dovoda kiseonika tkivu kao i hipoksiju, koja znači suštinsku redukciju dovoda kiseonika tkivu.

[0069] Kao što se ovde koristi, "reperfuzija" znači obnavljanje dotoka krvi organu ili tkivu.

[0070] Kao što se ovde koristi, "ishemična reperfuziona povreda" se odnosi na povredu tkiva izazvanu ishemijom, praćenu reperfuzijom.

[0071] Kao što se ovde koristi, "farmaceutski prihvatljiv" znači količinu efektivnu u lečenju ili sprečavanju stanja koje se odlikuje povišenom koncentracijom adenozina i/ili povećanom senzitivnošću na adenozin.

[0072] Kao što se ovde koristi, termin "pacijent" označava životinju, uključujući sisara (npr., čoveka).

[0073] Kao što se ovde koristi, "farmaceutski prihvatljiv nosač ili adjuvant" znači netoksičan nosač ili adjuvant koji se srne dati životinji, zajedno sa jedinjenjem iz ovog pronalaska, a koji ne uništava njegovu farmakološku aktivnost.

[0074] Farmaceutski prihvatljive anjonske soli uključuju soli sledećih kiselina: metansulfonske, hlorovodonične, bromovodonične, sumporne, fosforne, azotne, benzoeve, limunske, vinske, fumarne, maleinske, CH3-(CH2)n-COOH, gde je n 0-4, HOOC-(CH2)n-COOH, gde je n kao stoje definisano gore.

[0075] Kad se koriste parovi rastvarača, proporcije upotrebljenih rastvarača su date kao zapremina/zapremina (v/v, od volume).

[0076] Kad se govori o rastvorljivosti čvrste supstance u rastvaraču, proporcije čvrste supstance prema rastvaraču su date kao težina/ zapremina (wt/v, od weight/volume).

[0077] Pored toga, sledeće skraćenice će se koristiti kroz celu specifikaciju:

BCA se odnosi na bicinhoninsku kiselinu.

BG9928 se odnosi na 3-[4-(2,6-diokso-l,3-dipropil-2,3,6,7-tetrahidro-lH-purin-8-il)-biciklo [2.2.2]okt-l-il]-propionsku kiselinu.

(Ca<2+>)i se odnosi na unutarćelijski kalcijum.

CCD se odnosi na naelektrisan kuplovani uređaj (Charged Coupled Device).

CPA se odnosi na N6-ciklopentiladenozin.

CPM se odnosi na otkucaja u minutu.

DPM se odnosi na raspad u minutu.

DR se odnosi na odnos koncentracija, tj., na koncentraciju agonista koji izaziva definisan odgovor (obično, ali ne nužno, 50% maksimalnog) u prisustvu antagonista, podeljenu koncentracijom koja izaziva isti odgovor u odsustvu antagonista.

EDTA se odnosi na etilendiamintetrasirćetnu kiselinu.

FLIPR se odnosi na čitač ploča fluorescentnog snimanja (Fluorescence Imaging Plate Reader).

[<3>H]-BG9928 se odnosi na BG9928 obeležen tricijumom.

[ H]-DPCPX se odnosi na 8-ciklopentil-l,3-dipropilksantin obeležen tricijumom, kompetitivni supstrat za adenozinske receptore Aii A2b.

[<3>H]-ZM241385 se odnosi na 4-(2-[7-amino-2-(furil)(l,2,4)triazolo(2,3-a)(l,3,5) triazin-5-ilaminoetil)fenol obeležen tricijumom, kompetitivni supstrat za adenozinske receptore A2a.

[I] se odnosi na koncentraciju slobodnog radioliganda.

[<125>I]AB-MECA se odnosi na N6-(4-aminobenzil)-9-(5-(metilkarbonil)-p-D-ribo-furanozil)adenin obeležen<125>jodo<m.>

IB-MECA se odnosi na l-dezoksi-l-[6-[[(3-jodofenil)metil]amino]-9H-purin-9-il]-N-metil-(3N6- (4-aminobenzil)-9-(5-(metilkarbonil)-[3-D-ribofuranuronamid.

IC50se odnosi na koncentraciju agensa koji inhibira 50% aktivnosti koja se meri.

Kbse odnosi na konstantu disocijacije antagonista.

KDse odnosi na konstantu disocijacije radioobeleženog leka, određene saturacionom analizom.

Kise odnosi na konstantu inhibicije leka; koncentracija kompetitivnog Uganda, u testu kompeticije, koji bi zauzeo 50% receptora u odsustvu svih radioliganada.

AB-MECA se odnosi na N6-(4-aminobenzil)-9-(5-(metilkarbonil)-P-D-ribofuranozil)-adenin.

N se odnosi na broj posmatranja.

NECA se odnosi na 5'N-etilkarboksamidoadenozin.

pA2se odnosi na logaritamsku meru potentnosti antagonista; negativni log koncentracije antagonista koji bi izazvao dvostruko pomeranje na krivoj odgovora u zavisnosti od koncentracije agonista.

PMSF se odnosi na fenilmetil sulfonil fluorid.

RFU se odnosi na jedinice relativne fluorescencije (Relative Fluorescence Units).

<3>H-R-PIA se odnosi na [<3>H]-R-N6-fenilizopropiladenozin (radioligand za adenozinske receptore A3).

Schild-ov grafik se odnosi na grafik log (odnos koncentracija -1), tj., log (DR-1), prema log (koncentracije antagonista). Intercept na osi log koncentracija je jednak pA2vrednosti, dok nagib daje informaciju o prirodi antagonizma.

SD se odnosi na standardnu devijaciju.

SEM se odnosi na standardno odstupanje od srednje vrednosti.

XAC se odnosi na istovrsnik (congener) ksantin amina.

[0078] U opštem slučaju, ovaj pronalazak predstavlja visoko potentne i selektivne antagoniste adenozinskog receptora A2b. U nekim izvođenjima, jedinjenja iz pronalaska mogu opciono biti selektivni antagonisti adenozinskog receptora A\.

Sinteza jedinjenja adenozinskih antagonista

[0079] Jedinjenja koja se koriste u ovom pronalasku mogu se dobijati konvencionalnim postupcima poznatim u struci. Na primer, sinteza jedinjenja formule I je opisana u International Publication Nos. WO01/34604 i WO01/34610.

[0080] Ovde su opisana dva opšta postupka. U svakom od njih se koristi uobičajen početni materijal, l,3-disupstituisan-5,6-diaminouracil (jedinjenje (VI)), kao što je pokazano na dve šeme, niže. l,3-disupstituisan-5,6-diaminouracil se može dobiti tretiranjem odgovarajuće simetrično ili nesimetrično supstituisane uree cijanosirćetnom kiselinom, iza čega sledi nitrozacija i redukcija (videti, npr.,J. Org. Chem.16, 1879, 1951;Can J. Chem.46, 3413, 1968, obuhvaćene ovde referencom). Nesimetrično supstituisani ksantini se mogu dobiti postupkom Mueller-a{ J. Med. Chem.36,3341, 1993, obuhvaćen ovde referencom). U ovom postupku, 6-aminouracil je monoalkilovan specifično na N3 uracila pod Vorbruggen-ovim uslovima. Alternativno, nesupstituisana NI ili N3 pozicija može da bude funkcionalizovana (npr., alkilacija) u poslednjem stupnju sinteze.

[0081] U prvom opštem postupku, l,3-disupstituisan-5,6-diaminouracil (jedinjenje (VI)) može prvo da se podvrgne reakciji zatvaranja prstena da bi se dobio ksantin kao intermedijer, koji je nesupstituisan na poziciji 8. Ovaj intermedijer, sa svoje strane, može da se kupluje sa prekursorskim jedinjenjem Z-R3grupe da proizvede željene 8-supstituisane ksantine. Na šemi 1 niže, početni materijal l,3-disupstituisan-5,6-diaminouracil (tj., jedinjenje (VI)) prvo reaguje sa HC(OEt)3da bi se podvrgao reakciji zatvaranja prstena da bi se dobio ksantin kao intermedijer, koji je nesupstituisan na poziciji 8 (tj., jedinjenje (A)). Ovaj intermedijer, pošto biva zaštićen amino zaštitnom grupom (npr., sa THP ili BOM na N7 poziciji), dalje prolazi kroz reakciju kuplovanja, u prisustvu jake baze (npr. , n-butil-litijum (nBuLi) ili litijum di-izopropil-amid (LDA)), sa prekursorskim jedinjenjem Z-R3grupe (npr., aldehid ili keton) da da alkohol (tj., jedinjenje (C)). Hidroksilna grupa alkohola može zatim reagovati da pretvori alkohol u amin, merkaptan, etar, lakton (npr., jedinjenje (E)), ili drugo funkcionalizovano jedinjenje, postupcima dobro poznatim stručnjaku uobičajenog nivoa. Zaštita na N7 se zatim može ukloniti da bi se dobio proizvod bez zaštite (tj., jedinjenje (F)), koje se dalje može funkcionalizovati da da jedinjenja iz ovog pronalaska.

[0082] U drugom opštem postupku, jedinjenja iz pronalaska se mogu dobiti reagovanjem početnog materijala, l,3-disupstituisanog-5,6-diaminouracila, sa prekursorskim jedinjenjem Z-R3grupe (npr., aldehidi ili karboksilne kiseline ili hloridi karboksilne kiseline) da bi se formirao intermedijer 6-amid supstituisan uracil, koji dalje može da se podvrgne reakciji zatvaranja prstena da bi se dobilo željeno ksantinsko jedinjenje. Na šemi 2 niže, početni materijal l,3-disupstituisan-5,6-diaminouracil (tj. , jedinjenje (VI)) se prvo kupluje sa di-karboksil/estar-supstituisano prekursorsko jedinjenje Z-R3grupe, HOOC-Z-R3-COORa(tj., jedinjenje (G); Rapredstavlja H, Ci^alkil ili benzil, gde je fenilov prsten po izboru supstituisan sa 1-3 supstituenata odabranih iz grupe koju čine halogen, hidroksil ili Ci_3alkoksi) da bi se dobio 6-amid supstituisan uracil kao intermedijer (tj. , jedinjenje (H)) reakcijama koje su dobro poznate stručnjaku uobičajenog nivoa (npr., upotrebom kuplujućih reagenasa kao što je benzotriazol-l-iloksitris (dimetilamino)-fosfonijum heksafluorofosfat (BOP), 0-benzo-triazol-l-il-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HBTU), ili O-(7-azabenzotriazol-l-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU)). Primeri jedinjenja (G) uključuju monometil estar biciklo [3.2.1]oktan-l,5-dikarboksilne kiseline i monoetil estar biciklo [2.2.2]oktan-l,4-dikarboksilne kiseline. Uracilni intermedijer zatim može da se podvrgne reakciji zatvaranja prstena u baznim uslovima (npr., upotrebom KOH i izopropil alkohola) da bi se dobilo ksantinsko jedinjenje (tj., jedinjenje (J)), koje može da se podvrgne daljoj funkcionalizaciji da bi se dobila različita jedinjenja iz ovog pronalaska.

Željeni aldehidi, ketoni, karboksilne kiseline i hloridi karboksilne kiseline su komercijalno dostupni (npr., od Aldrich Chemical Co., Inc., Mihvaukee, Wisc.) ili se mogz lako napraviti od komercijalno dostupnih materijala dobro poznatim postupcima sinteze. Takvi postupci sinteze uključuju, ali nisu ograničeni na, oksidaciju, redukciju, hidrolizu, alkilaciju i Wittig-ove reakcije homologizacije. Za reference za dobijanje bicikloalkanskih karboksilnih kiselina iz pronalaska (npr., jedinjenje (III), koje je primer jedinjenja (G)), videti, npr.,Aust. J. Chem.38, 1705,1985; Aust J. Chem. 39, 2061, 1986; J. Am. Chem. Soc.75,637, 1953; J. Am.

Chem. Soc.86, 5183, 1964;J. Am. Chem. Soc.102, 6862,1980;J. Org. Chem.46, 4795,1981i J. Org. Chem.60, 6873, 1995.

[0083] Postoje mnogi postupci za dalju funkcionalizaciju jedinjenja (J), koje sadrži karboksilnu kiselinu ili estar vezan za R3grupu. Na primer, jedinjenje (J) se može pretvoriti u odgovarajući derivat akrilne kiseline. Jedan način je da se prvo hidrolizuje estarska grupa jedinjenja (J) (uz uslov da Ranije H) da bi se dobila odgovarajuća karboksilna kiselina, redukuje karboksilna kiselina do odgovarajućeg alkohola, oksiduje alkohol do odgovarajućeg aldehida, a zatim izvede Wadsworth-Horner-Emmons-ova ili Witting-ova reakcija da bi se formirao odgovarajući derivat akrilne kiseline. Jedinjenje (J) se takođe može direktno prevesti u svoj odgovarajući alkohol. Različita varijacija je da se jedinjenje (J) direktno prevede u svoj odgovarajući aldehid. Dalja varijacija je da se jedinjenje (J) koje sadrži estar prevede u svoju odgovarajuću karboksilnu kiselinu, a zatim direktno u aldehid. Alternativno, može se funkcionalizovati prekursorsko jedinjenje Z-R3grupe pre kuplovanja sa 1,3-disupstituisanim-8-nesupstituisanim ksantinom sašeme 1 ili l,3-disupstituisanim-5,6-diaminouracilom sa šeme 2. Dalje, jedinjenja iz ovog pronalaska se mogu dobiti na čvrstoj podlozi (npr., Wang-ovoj smoli).

[0084] Sinteza 3-[4-(2,6-diokso-l,3-dipropil-2,3,6,7-tetrahidro-lH-purin-8-il)-biciklo[2.2.2]-okt-l-il]-propionske kiseline (BG9928) je opisana u International publication WO01/34610.

[0085] U nekim izvođenjima pronalaska, jedinjenja mogu biti u formi ahiralnog jedinjenja, optički aktivnog jedinjenja, čistog dijastereomera, smese dijastereomera, proleka ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0086] U nekim izvođenjima, jedinjenja formule I ispoljavaju afinitet prema adenozinskom receptoru A2bkoji je bar 10 puta veći od afiniteta prema adenozinskom receptoru A2aili adenozinskom receptoru A3. U nekim drugim izvođenjima, jedinjenja formule I ispoljavaju afinitet prema adenozinskom receptoru A2bkoji je bar 50 puta veći od afiniteta prema adenozinskom receptoru A2aili adenozinskom receptoru A3. A u još nekim drugim izvođenjima, jedinjenja formule I ispoljavaju afinitet prema adenozinskom receptoru A2bkoji je bar 100 puta veći od afiniteta prema adenozinskom receptoru A2aili adenozinskom receptoru A3. U nekim izvođenjima, pored afiniteta prema adenozinskom receptoru A2b, jedinjenja formule I opciono ispoljavaju afinitet prema adenozinskom receptoru Aj.

[0087] U nekim izvođenjima ovog pronalaska, jedinjenja formule I imaju vrednost Ki za adenozinski receptor A2bkoja je ispod 500 nM. U nekim drugim izvođenjima pronalaska, jedinjenja formule I imaju vrednost Ki za adenozinski receptor A2bkoja je ispod 200 nM. A u još nekim drugim izvođenjima, jedinjenja formule I imaju vrednost Ki za adenozinski receptor A2bkoja je ispod 10 nM.

Proizvodnja antitela na adenozinski receptor A?h

[0088] Ovaj pronalazak takođe obuhvata upotrebu antitela izazvanih protiv adenozinskog receptora A2b, kao što su antagonisti receptora. Takva antitela blokiraju vezivno mesto liganda (npr., adenozin) na adenozinskom receptoru A2bili sprečavaju ligand (npr., adenozin) da se vezuje za receptor.

[0089] Adenozinski receptor A2bse može koristiti da izazove poliklonska ili monoklonska antitela koja se vezuju za adenozinski receptor A2bkoristeći niz tehnika dobro poznatih u struci. Alternativno, peptidi koji odgovaraju specifičnim regionima adenozinskog receptora A2bmogu se sintetisati i koristiti za kreiranje imunoloških reagenasa u skladu sa dobro poznatim postupcima.

[0090] Humani adenozinski receptor A2bje kloniran i sekvenca DNK koja kodira receptor, kao i proteinska sekvenca receptora su identifikovane (Rivkee et al.,Mol. Endocrinol,6, pp. 1598-1604 (1992); Pierce et al.,Biochem. Biophys. Res. Commun.,187, pp. 86-93 (1992); Reppert et al., U. S. patent 5,516,894).

[0091] Antitela usmerena protiv adenozinskog receptora A2biz ovog pronalaska su molekuli imunoglobulina ili njegovi delovi koji su imunološki reaktivni sa adenozinskim receptorom A2biz ovog pronalaska. Poželjnije, antitela koja se koriste u postupcima iz pronalaska su imunološki reaktivna sa domenom za vezivanje liganda adenozinskog receptora A2b.

[0092] Antitela usmerena protiv adenozinskog receptora A2bmogu se generisati imunizacijom pogodnog domaćina. Takva antitela mogu biti poliklonska ili monoklonska. Poželjno je da su monoklonska. Proizvodnja poliklonskih i monoklonskih antitela je u okviru uobičajenog stepena znanja u struci. Za pregled postupaka korisnih u primeni ovog pronalaska, videti, npr., Harlow and Lane (1988),Antibodies, A Laboratorj Manual,Yelton, D. E. et al. (1981);Ann. Rev. of Biochem., 50, pp. 657-80., i Ausubel et al. (1989);Current Protocols in Molecular Biology(New York: John Wiley & Sons), koji se godišnje dopunjuje. Određivanje imunoreaktivnosti sa adenozinskim receptorom A2bse može uraditi pomoću bilo kog od nekoliko postupaka dobro poznatih u struci, uključujući, npr., imunoblot esej i ELISA-u.

[0093] Monoklonska antitela sa afinitetima od IO"<8>M"<1>ili, poželjno, IO"<9>tolO"<10>M"<1>ili većim, se obično prave standardnim procedurama kao što je opisano u, npr., Harlow and Lane,

(1988)supra.Ukratko, izaberu se odgovarajuće životinje i prati se željeni imunizacioni protokol. Posle odgovarajućeg vremenskog perioda, izvade se slezine takvih životinja i pojedinačne ćelije slezine se fuzionišu, obično, sa imortalizovanim ćelijama mijeloma pod odgovarajućim uslovima selekcije. Posle toga, ćelije se klonski razdvoje i supernatanti svakog klona se testiraju na proizvodnju odgovarajućeg antitela specifičnog za željeni region antigena.

[0094] Druge pogodne tehnike uključujuin vitroizlaganje limfocita antigenskom adenozinskom receptoru A2b, ili alternativno, selekciji biblioteka antitela u fagu ili sličnim vektorima. Videti Huse et al.,Science,246, pp. 1275-81 (1989). Antitela korisna u ovom pronalasku mogu se koristiti sa ili bez modifikacija. Antigeni (u ovom slučaju adenozinski receptor A2b) i antitela mogu se obeležavati dodatkom, bilo kovalentno ili nekovalentno, supstance koja obezbeđuje detektabilni signal. Različiti obeleživači i tehnike konjugacije su poznati u struci i mogu se koristiti u primeni ovog pronalaska. Pogodni obeleživači uključuju radionuklide, enzime, supstrate, kofaktore, inhibitore, fluorescentne agense, hemiluminescentne agense, magnetne čestice i slično. Patenti u kojima je opisana upotreba ovakvih obeleživača uključuju U. S. Patents 3,817,837; 3,850,752; 3,939,350; 3,996,345; 4,277,437; 4,275,149 i 4,366,241. Takođe se mogu praviti rekombinantni imunoglobulini (videti U. S. Patent 4,816, 567).

[0095] Antitelo iz ovog pronalaska može biti i hibridan molekul, formiran od imunoglobulinskih sekvenci iz različitih vrsta (npr., miša i čoveka) ili od delova imunoglobulinskih sekvenci lakog i teškog lanca iz iste vrste. Antitelo može biti jednolančano antitelo ili humanizovano antitelo. Ono može biti molekul koji ima višestruke vezivne specifičnosti, kao što je bifunkcionalno antitelo, dobijeno bilo kojom od brojnih tehnika poznatih u struci, uključujući proizvodnju hibridnih hibridoma, disulfidnu izmenu, hemijsko unakrsno vezivanje, dodavanje peptidnih linkera između dva monoklonska antitela, uvođenje dva skupa imunoglobulinskih lakih i teških lanaca u određenu ćelijsku liniju i tako dalje. Antitela iz ovog pronalaska mogu biti i humana monoklonska antitela, na primer ona koja proizvode imortalizovane humane ćelije, SCID-hu miševi ili druge životinje koje su sposobne da proizvode "humana" antitela, ili dobij ena ekspresijom kloniranih humanih imunoglobulinskih gena. Dobijanje humanizovanih antitela je opisano u U. S. Pat. Nos. 5,777,085 i 5,789,554.

[0096] Da sumiramo, stručnjaku je, sa uputstvima iz ovog pronalaska, dostupan niz postupaka koji se mogu koristiti za menjanje bioloških osobina antitela iz ovog pronalaska, uključujući postupke kojima se povećava ili smanjuje stabilnost ili poluživot, imunogeničnost, toksicitet, afinitet ili prinos datog molekula antitela, ili za njegovo menjanje na bilo koji drugi način, koji će ga mogao učiniti pogodnijim za određenu primenu.

Upotrebe antagonista adenozinskog receptora A?h

[0097] Postupci i kompozicije iz ovog pronalaska se mogu koristiti za sprečavanje, ograničavanje ili lečenje pacijenata koji su pretrpeli ishemičan slučaj ili kojima preti ishemičan slučaj. Ishemičan slučaj može biti, na primer, akutan koronarni sindrom (uključujući infarkt miokarda), šlog, transplantacija organa, ishemija bubrega, šok i hirurgija transplantacije organa. U nekim izvođenjima, ishemičan slučaj je infarkt miokarda.

[0098] U nekim izvođenjima ovog pronalaska, antagonist adenozinskog receptora A2bse daje u okviru od deset dana pre ili posle ishemičnog slučaja. U nekim drugim izvođenjima ovog pronalaska, antagonist adenozinskog receptora A2bse daje u okviru od pet dana pre ili posle ishemičnog slučaja. A u nekim drugim izvođenjima ovog pronalaska, antagonist adenozinskog receptora A2bse daje u okviru od dva dana pre ili posle ishemičnog slučaja. U nekim drugim izvođenjima, antagonist adenozinskog receptora A2bse daje u okviru od dva dana posle ishemičnog slučaja.

[0099] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje postupak lečenja oboljenja ili poremećaja u kojima dolazi do aktivacije adenozinskog receptora A2b, davanjem sisani kome je to potrebno farmaceutski efektivne ili profilaktički efektivne količine antagonista adenozinskog receptora A2biz ovog pronalaska.

[0100] Ishemičan slučaj često izaziva nekrozu pogođenog tkiva. Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje postupak ograničavanja nekroze tkiva, koja je posledica ishemičnog slučaja, koji se sastoji od identifikovanja sisara koji je pretrpeo ishemičan slučaj ili kome preti ishemičan slučaj i davanja terapijski efektivne ili profilaktički efektivne količine antagonista adenozinskog receptora A2biz ovog pronalaska. U nekim izvođenjima, antagonist adenozinskog receptora A2bse daje u okviru od deset dana pre ili posle ishemičnog slučaja. U nekim drugim izvođenjima, antagonist adenozinskog receptora A2bse daje u okviru od pet dana pre ili posle ishemičnog slučaja. U nekim drugim izvođenjima, antagonist adenozinskog receptora A2bse daje u okviru od dva dana pre ili posle ishemičnog slučaja.

[0101] Infarkt miokarda je razvoj nekroze miokarda, izazvan neravnotežom između snabdevanja kiseonikom i potrebe miokarda, čiji je rezultat nekroza miokarda. Infarkti miokarda su često izazvani rupturom naslage sa trombičnom formacijom u koronarnom sudu, čiji je rezultat akutno smanjenje snabdevanja dela miokarda krvlju. Ovo može da dovede do delimične ili totalne okluzije suda, a zatim do ishemije miokarda. Totalna okluzija koronarnog suda nekoliko sati (npr., 4-6 sati) dovodi do ireverzibilne nekroze miokarda. Međutim, reperfuzija u toku ovog perioda može da spase miokard i smanji morbiditet i mortalitet. Prema tome, pronalazak takođe obezbeđuje postupak ograničavanja veličine infarkta koji sledi infarkt miokarda identifikovanjem sisara koji je pretrpeo ishemičan slučaj ili kome preti ishemičan slučaj i davanja terapijski efektivne ili profilaktički efektivne količine antagonista adenozinskog receptora A2biz ovog pronalaska. U nekim izvođenjima, antagonist adenozinskog receptora A2biz ovog pronalaska se daje u okviru od deset dana pre ili posle ishemičnog slučaja. U nekim izvođenjima, antagonist adenozinskog receptora A2bse daje u okvira od pet dana pre ili posle ishemičnog slučaja. A u nekim drugim izvođenjima, antagonist adenozinskog receptora A2bse daje u okviru od dva dana pre ili posle ishemičnog slučaja.

Farmaceutske kompozici je

[0102] Antagonisti adenozinskog receptora A2bse mogu formulisati u farmaceutske kompozicije za davanje životinjama, uključujući ljude. Poželjno je da ove farmaceutske kompozicije uključe količinu antagonista adenozinskog receptora A2befektivnu za lečenje, ograničavanje ili sprečavanje ishemične reperfuzione povrede i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0103] Farmaceutski prihvatljivi nosači koji se mogu koristiti u ovim farmaceutskim kompozicijama uključuju, npr., jonoizmenjivače, aluminijum oksid, aluminijum stearat, lecitin, serumske proteine, kao što je humani serumski albumin, puferne supstance kao što su fosfati, glicin, sorbinsku kiselinu, kalij um sorbat, parcijalne gliceridne smese saturisanih biljnih masnih kiselina, vodu, soli ili elektrolite, kao što su protamin sulfat, dinatrijum vodonik fosfat, kalijum vodonik fosfat, natrijum hlorid, cinkove soli, koloidni silicijum dioksid, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, supstance na bazi celuloze, polietilen glikol, natrijum karboksimetilcelulozu, poliakrilate, voskove, polietilen-polioksipropilen-blok polimere, polietilen glikol i lanolin.

[0104] kompozicije iz ovog pronalaska se mogu davati parenteralno, oralno, preko sprejeva za inhalaciju, topično, rektalno, nazalno, bukalno, vaginalno ili preko implantiranog rezervoara. Termin "parenteralno", kao što se ovde koristi, uključuje subkutane, intravenozne, intramuskularne, intraartikularne, intrasinovijalne, intrasternalne, intratekalne, intrahepatične, intralezijske i intrakranijalne injekcije ili infuzione tehnike. Poželjno je da se kompozicije daju oralno, intraperitonealno ili intravenozno.

[0105] Sterilne injektabilne forme kompozicija iz ovog pronalaska mogu biti vodene ili uljne suspenzije. Ove suspenzije se mogu formulisati u skladu sa tehnikama poznatim u struci, uz upotrebu pogodnih disperzionih agenasa ili agenasa za kvašenje i suspenzivnih agenasa. Sterilan injektabilni preparat može biti i sterilan injektabilan rastvor ili suspenzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer, kao rastvor u 1,3-butandiolu. Među prihvatljivim nosačima i rastvaračima koji se mogu koristiti su voda, Ringer-ov rastvor i izotoničan rastvor natrijum hlorida. Pored toga, sterilna, neisparljiva ulja se konvencionalno koriste kao rastvarač ili medijum za suspenziju. U ove svrhe, bilo koje blago, neisparljivo ulje može da se koristi, uključujući sintetičke mono- ili di-gliceride. Masne kiseline, kao što je oleinska kiselina i njeni gliceridni derivati se koriste u pripremanju injekcija, kao što su prirodna farmaceutski prihvatljiva ulja, kakvo je maslinovo ili ricinusovo ulje, naročito u njihovim polioksietilovanim verzijama. Ovi uljni rastvori ili suspenzije mogu sadržati i dugolančani alkohol u svojstvu razblaživača ili disperzanta, kao što je karboksimetil celuloza ili slične disperzione agense koji se obično koriste u formulacijama farmaceutski prihvatljivih oblika doza, uključujući emulzije i suspenzije. Ostali obično korišćeni surfaktanti, kakvi su Tweens, Spans i drugi agensi za pravljenje emulzija ili pojačivači biodostupnosti, koji se obično koriste u proizvodnji farmaceutski prihvatljivih čvrstih, tečnih, ili drugih oblika doza, mogu se takođe koristiti za formulacije.

[0106] Parenteralne formulacije mogu biti jednobolusne doze, infuzione ili bolusne doze za punjenje, posle čega sledi doza za održavanje. Ove kompozicije se mogu davati jednom dnevno ili po potrebi.

[0107] Farmaceutske kompozicije iz ovog pronalaska mogu se davati oralno u bilo kom oralno prihvatljivom obliku doze, uključujući kapsule, tablete, vodene suspenzije ili rastvore. U slučaju tableta za oralnu upotrebu, nosači koji se obično koriste uključuju laktozu i škrob. Lubrikanti, kao što je magnezijum stearat, se takođe obično dodaju. Za oralno davanje u vidu kapsule, upotrebljivi razblaživač uključuju laktozu i suvi škrob. Kad su potrebne vodene suspenzije za oralnu upotrebu, aktivni sastojak se kombinuje sa emulzifikatorima i agensima za suspenzije. Po želji, mogu se dodati i određeni zaslađivači, dodaci ukusa ili boje.

[0108] Alternativno, farmaceutske kompozicije iz ovog pronalaska mogu se davati u vidu supozitorija za rektalnu administraciju. Ove se mogu praviti mešanjem agensa sa pogodnim neiritirajućim ekscipijentom koji je čvrst na sobnoj temperaturi, ali tečan na rektalnoj temperaturi i koji će se zato istopiti u rektumu da oslobodi lek. Takvi materijali uključuju kakao puter, pčelinji vosak i polietilen glikole.

[0109] Farmaceutske kompozicije iz ovog pronalaska se mogu davati i u vidu nazalnog acrosola ili inhalacije. Takve kompozicije se prave u skladu sa tehnikama dobro poznatim u struci farmaceutske formulacije i mogu se praviti kao slani rastvori, uz upotrebu benzil alkohola ili drugih pogodnih prezervativa, stimulatora apsorpcije da bi se povećala biodostupnost, fluorougljenika, i/ili drugih uobičajenih sredstava za rastvaranje ili pravljenje disperzija.

[0110] Količina antagonista adenozinskog receptora A2bkoja se može kombinovati sa materijalima nosača da bi se dobio pojedinačan oblik doze će varirati u zavisnosti od domaćina koji se tretira i određenog načina davanja. Kompozicije se mogu formulisati tako da se doza od između 0,01-100 mg/kg telesne težine antagonista adenozinskog receptora A2bda pacijentu koji prima ove kompozicije. U nekim izvođenjima pronalaska, doza je 0,1-10 mg/kg telesne težine. Kompozicija se može davati kao pojedinačna doza, višestruke doze ili tokom utvrđenog vremenskog perioda u infuziji.

[0111] Specifična doza i režim lečenja za svakog pojedinačnog pacijenta će zavisiti od niza faktora, uključujući konkretan antagonist adenozinskog receptora A2b, starost pacijenta, telesnu težinu, opšte zdravlje, pol i dijetu, i vreme administracije, brzinu ekskrecije, kombinaciju lekova i težinu konkretnog oboljenja koje se tretira. Procena ovih faktora, koju prave medicinski radnici, je u okviru uobičajenog znanja u struci. Količina antagonista će takođe zavisiti od konkretnog pacijenta koji se leči, načina davanja, tipa formulacije, karakteristika jedinjenja koje se koristi, težine oboljenja i željenog efekta. Količine antagonista se mogu odrediti pomoću farmakoloških i farmakokinetičkih pravila, dobro poznatih u struci.

[0112] U skladu sa nekim izvođenjima, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za sprečavanje, ograničavanje ili lečenje ischemične reperfuzione povrede, koji sadrži stupanj davanja pacijentu jedne od gore opisanih farmaceutskih kompozicija.

[0113] Da bi se pronalazak opisan ovde potpunije razumeo, dati su sledeći primeri. Podrazumeva se da su ovi primeri dati samo kao ilustracija i da ni na koji način ne ograničavaju ovaj pronalazak.

PRIMERI

1. Animalni model i opšte procedure

[0114] Istraživanja su sprovedena na psima otvorenog grudnog koša, anesteziranih barbitalom, sa ciljem da se mere srčani puls, krvni pritisak, pritisak leve komore i lokalni krvotok miokarda (radioaktivne mikrosfere). Mehanički okluder je postavljen u blizinu proksimalnog dela anteriorne silazne koronarne arterije, da bi se izazvale ishemija i reperfuzija. Na kraju eksperimenata, veličina infarkta je određivana histohemijskim bojenjem (patent plava i trifeniltetrazolijum) i izražavana kao procenat regiona u riziku ili kao procenat cele leve komore.

2. Eksperimentalni protokol predtretmana

[0115] U protokolu predtretmana (videti Sliku 1, protokol I), psi su podvrgnuti okluziji

koronarne arterije u trajanju od 60 minuta i reperfuziji u trajanju od 3 sata, posle koje su srca odstranjena i određivana je veličina infarkta. Psi su nasumično raspoređeni u četiri grupe kojima je dat nosač, CPX (8-ciklopentil-l,3-dipropil -3,7-dihidro-purin-2,6-dion), BG 9719 (8-(2S-5,6-egzo-epoksi-endo-norborn-2-il)-l,3-dipropil-3,7-dihidro-purin-2,6-dion), ili BG 9928 (3-[4-(2,6-diokso-l,3-dipropil-2,3,6,7-tetrahidro-lH-purin-8-il)-biciklo [2.2.2]okt-l-il]-propionska kiselina), 10 minuta pre okluzije. Svi antagonisti su dati u dozi od 1 mg/kg kao i. v. bolus, iza čega je usledila infuzija od 10 p.g/kg/min, koja je trajala sve do reperfuzije (ukupno 70 minuta).

[0116] Nije bilo značajnih razlika između četiri grupe u sistemskoj hemodinamici (srčani puls

i krvni pritisak), maksimalnom levom ventrikularnom dP/dt, ili lokalnom krvotoku miokarda (videti Tabele 1, 4 i 5), pokazujući da na hemodinamičke varijable nisu delovali antagonisti. Nije bilo razlika ni u delu leve komore, koji je pretrpeo ishemiju tokom koronarne okluzije (veličina regiona pod rizikom; Slika 1A). Međutim, veličina infarkta izražena bilo kao procenat regiona u riziku (Slika 1B), bilo kao procenat leve komore (Slika 1C), je bila znatno manja u dve grupe pasa tretiranih CPX-om (smanjenje od 51%) ili BG-om 9928 (smanjenje od 49%). Veličina infarkta u grupi pasa tretiranih BG-om 9928 je bila slična onoj u kontrolnoj grupi. Kad je veličina infarkta, izražena kao procenat regiona u riziku, grafički prikazana u odnosu na transmuralni kolateralni krvotok (Slika 1D), uočena je obrnuta proporcionalnost koja je mogla da se fituje pomoću linearne regresione analize. U grupama tretiranim CPX-om i BG-om 9928, ovaj odnos je pomeren naniže u poređenju sa kontrolnom grupom, ukazujući na to da je veličina infarkta manja u ove dve grupe za bilo koju datu vrednost kolateralnog krvotoka. Odnos između veličine infarkta i kolateralnog krvotoka je bio sličan između kontrolne grupe i grupe tretirane BG-om 9719. Prema tome, tretman CPX-om ili BG-om 9928 (ali ne i tretman BG-om 9719), pre okluzije, dao je značajno smanjenje veličine infarkta koje nije bilo vezano za promene u sistemskoj hemodinamici, ni za lokalni kolateralni krvotok.

3. Pripremni eksperimentalni protokol

[0117] U pripremnom protokolu (videti Sliku 2, protokol II), svi psi su podvrgnuti okluziji koronarne arterije u trajanju od 60 minuta i reperfuziji u trajanju od tri sata. Priprema je rađena pomoću četiri ciklusa 5-minutna okluzija/5-minutna reperfuzija, urađena 10 minuta pre 60-minutne okluzije. Psi su nasumično raspoređeni u četiri grupe kojima je dat nosač, CPX, BG 9719, ili BG 9928, 10 minuta pre prve pripremne okluzije. Antagonisti su dati u dozi od 1 mg/kg kao i. v. bolus, iza čega je usledila infuzija od 10 lig/kg/min, koja je trajala do puštanja produžene okluzije (ukupno 115 minuta).

[0118] Slično grupi sa predtretmanom, nije bilo značajnih razlika u sistemskoj hemodinamici, lokalnom krvotoku miokarda, ni u veličini rizičnih regiona između četiri grupe u pripremnom protokolu (videti Tabele 2, 4 i 5, Slika 2A). Priprema sa ciklusima 5-minutna okluzija<5->minutna reperfuzija pre 60-minutne okluzije je izazvala znatno smanjenje veličine infarkta (smanjenje~65%) u poređenju sa kontrolnom grupom bez pripreme iz Protokola I (Slike 2B i 2C). Prosečne veličine infarkta (izražene bilo kao procenat rizičnog regiona, bilo kao procenat leve komore) u grupama pasa tretiranih antagonistima adenozinskog receptora su takođe bile značajno manje u poređenju sa kontrolnom grupom bez pripreme i bile su slične ili malo manje nego u kontrolnoj grupi sa pripremom (Slike 2B i 2C). Priprema je pomerila odnos između veličine infarkta i kolateralnog krvotoka naniže u poređenju sa kontrolnom grupom bez pripreme (Slika 2D). Ovaj odnos je pomeren još više naniže u grupama pasa tretiranih CPX-om ili BG-pm 9928, ali ne i BG-om 9719. Ovi rezultati pokazuju da tretman CPX-om, BG-om 9719, ili BG-om 9928 nije blokirao protektivne efekte ishemične pripreme, izazvane višestrukim ciklusima okluzija/reperfuzija. Rezultati takođe sugerišu da je tretman CPX-om ili BG-om 9928 (ali ne i BG-om 9719) dodao protektivnom efektu ishemične pripreme.

4. Reperfuzioni eksperimentalni protokol

[0119] U reperfuzionom protokolu (videti Sliku 3, protokol III), psi su podvrgnuti okluziji koronarne arterije u trajanju od 60 minuta, a zatim reperfuziji u trajanju od tri sata. Psi su nasumično raspoređeni u četiri grupe kojima je dat nosač, CPX, BG 9719, ili BG 9928, 10 minuta pre otpuštanja okluzije. Antagonisti su dati u dozi od 1 mg/kg kao i. v. bolus, iza čega je usledila infuzija od 10 p,g/kg/min, jedan sat.

[0120] Nije bilo značajnih razlika u hemodinamičkim varijablama, lokalnom krvotoku miokarda, ni u veličinama rizičnog regiona između četiri grupe pasa u ovom eksperimentalnom protokolu (videti Tabele 3-5 i Sliku 3A). Veličina infarkta, izražena kao procenat rizičnog regiona, je značajno smanjena davanjem CPX ili BG 9928 tokom rane faze reperfuzije (Slika 3B). Međutim, davanje BG 9719 nije imalo protektivan efekat. Odnos između veličine infarkta i kolateralnog krvotoka je pomeren naniže u dve grupe pasa tretiranih CPX-om ili BG-om 9928 u poređenju sa kontrolnom grupom (Slika 3C). Smanjenje veličine infarkta proizvedeno CPX-om i BG-om 9928 u ovom protokolu je manje po veličini (42% i 44%, respektivno) u poređenju sa Protokolom I, kad su oni dati pre ishemije i nije uočeno značajno smanjenje veličine infarkta kad su podaci izraženi kao procenat cele leve komore (Slika 3D), možda zbog malog broja izučavanih životinja. Ovi podaci pokazuju da CPX i BG 9928 (ali ne i BG 9719) smanjuju veličinu infarkta kad se daju u vreme reperfuzije.

5. Priprema membrana

[0121] Membrane sa HEK 293 (od engl. human embrvonic kidney, humani embrionski bubreg), koje eksprimiraju humane adenozinske receptore A2b, su kupljene od Receptor Biologv; ćelijske membrane HEK 293 koje eksprimiraju humane receptore A2asu kupljene od PerkinElmer (Boston, MA); ćelijske membrane CHO-K1 koje eksprimiraju humane receptore Aii ćelijske membrane HEK 293 koje eksprimiraju humane receptore A3su napravljene od odgovarajućih stabilno transfektovanih ćelija dobijenih interno.

6. Eseji sa vezivanjem radioliganda

[0122] Membrane (40-70 p.g membranskog proteina), radioligandi i različite koncentracije kompetirajućih liganada su inkubirane u triplikatu u 0,1 ml pufera HE, plus 2 jedinice/mL adenozin deaminaze, 2,5 sata na 21°C. Radioligandi korišćeni za eseje za kompetitivno vezivanje su bili: [<3>H]-8-ciklopentil-l,3-dipropiksantin([<3>H]-DPCPX) (NEN, Boston, MA) za adenozinske receptore Aii A2b, [3H]-4-(2-[7-amino-2-(furil)(l,2,4)triazol(2,3-a)(l,3,5)triazin-5-ilaminoetili)fenol([<3>H]ZM241385) za adenozinske receptore A2a(Tocris, Bristol, UK),-i N6-(4-aminobenzil)-9-(5-(metilkarbonil)-(3-D-ribofuranozil)adenin([12<5>I]-AB-MECA) obeležen [ 125 jod]-om i■ h • [ 3 H]-R-N6-fenilizopropiladenozin([ 3HJ-R-PIA) za adenozinske receptore A3(oba od NEN, Boston, MA). Nespecifično vezivanje je mereno u prisustvu 10 uM 5'N-etilkarboksamidoadenozina (NECA, od RBI-Sigma, Natick, MA) za Aii A2breceptore, ili 10 uM isto vrsnika ksantin amina (XAC, od RBI-Sigma, Natick, MA) za A2areceptore. Eseji za vezivanje su završeni filtracijom preko VVhatman GF/C filtra od staklenih vlakana uz upotrebu BRANDEL skupljača ćelija (Gaithersburg, MD). Filtri su isprani tri puta pomoću 3-4 mL ledene 10 mM Tris-HCl, pH 7,4 i 5 mM magnezijum hlorida (MgCl2) na 4°C i izmereni su u Wallac |3-brojaču (Perkin Elmer, Boston, MA).

[0123] Vrednosti Kiza BG9928, DPCPX i BG9717 su bile 12,2 nM, 5,3 nM i 10,3 nM, respektivno, u esejima sa kompetitivnim vezivanjem sa rekombinantnim humanim adenozinskim receptorima Aii [<3>H]-DPCPX u svojstvu radioliganda (videti Tabelu 7 i Sliku 4). Vrednosti Kiza BG9928, DPCPX i BG9717 su bile 4059 nM, 156 nM i 9152 nM, respektivno, u esejima sa kompetitivnim vezivanjem sa rekombinantnim humanim adenozinskim receptorima A2ai [<3>H]-ZM241385 u svojstvu radioliganda (videti Tabelu 7 i Sliku 5). Vrednosti fQza BG9928, DPCPX i BG9717 su bile 88,53 + 21,03 nM (N=3), 56 nM i 853 ± 270 nM (N=3), respektivno, u esejima sa kompetitivnim vezivanjem sa rekombinantnim humanim adenozinskim receptorima A2bi [<3>H]-ZM241385 u svojstvu radioliganda (videti Tabelu 7 i Sliku 6).

[0124] Eseji sa vezivanjem u jednoj tački su rađeni da bi se odredio efekat 10 u.M BG9928 na vezi* vanj* e [ 125I]-AB-MECA za membrane sa rekombinantnim humanim adenozinskim receptorom A3. U eseju sa vezivanjem u jednoj tački sa rekombinantnim humanim adenozinskim receptorima A3, 10 uM BG9928 je dalo 30%-nu inhibiciju vezivanja [<3>H]-ZM241385 (Slika 7).

7. Esej sa vezivanjem radioliganda

[0125] Membrane (50 |ig membranskog proteina), radioligandi i različite koncentracije kompetirajućih liganada su inkubirane u triplikatu u 0,1 ml pufera HE, plus 2 jedinice/mL adenozin deaminaze, 2 sata na 21 °C. Radioligand korišćen u esejima za kompetitivno vezivanje za humane adenozinske receptore A2bje bio: [<3>H]-8-ciklopentil-l,3-dipropiksantin([<3>H]-DPCPX, 30-40 nM) (NEN, Boston, MA). Nespecifično vezivanje je mereno u prisustvu 10 uM 5'N-etilkarboksamidoadenozina (NECA, od RBI-Sigma, Natick, MA). Eseji za vezivanje su završeni filtracijom preko Whatman GF/C filtra od staklenih vlakana uz upotrebu BRANDEL skupljača ćelija (Gaithersburg, MD). Filtri su isprani tri puta pomoću 3 do 4 mL ledene 10 mM Tris-HCl, pH 7,4 i 5 mM magnezijum hlorida (MgCl2) na 4°C i izmereni su u Wallac P-brojaču (Perkin Elmer, Boston, MA).

[0126] Podaci o kompetitivnom vezivanju su fitovani na model sa vezivanjem na jednom mestu i prikazani grafički pomoću Prizm GraphPad. Jednačina Cheng-Prusoff-a Ki= IC50/

(1+[I]/Kd) je korišćena za računanje vrednosti Kiiz vrednosti IC50, gde je Kikonstanta afiniteta za kompetirajući ligand, [I] je koncentracija slobodnog radioliganda, a KDje konstanta afiniteta za radioligand (Cheng i Prusoff 1973). Vrednosti Kinekoliko jedinjenja iz ovog pronalaska su dati u Tabeli 8.

8. Funkcionalni eseji sa čitačem ploče flourescentnog snimanja ( FLIPR)

[0127] Eseji sa čitačem ploče flourescentnog snimanja (FLIPR) za određivanje kalcijuma su rađeni sa HEK 293 ćelijama koje ispoljavaju stabilnu ekspresiju humanih i pacovskih adenozinskih receptora A2bi CHO-K1 ćelijama koje ispoljavaju stabilnu ekspresiju rekombinantnih humanih adenozinskih receptora Ai. Ćelije su zasejane na ploče za kulturu sa 96 ležišta, sa crnim zidovima i providnim dnom i gajene do 80-90%-og konfluentnog monosloja. Ne uklanjajući medijum, dodata je ista zapremina boje (iz kompleta za kalcijum, kupljenog od Molecular Devices). Ploče sa ćelijama su inkubirane 1 sat na 37°C, a zatim premeštene na FLIPR (Molecular Devices).

[0128] Za esej sa rekombinantnim humanim adenozinskim receptorima Ai, CHO-K1 ćelije su inkubirane sa rastućim dozama agonista (N6-ciklopentiladenozin, CP A) da bi se odredila koncentracija agonista koji izaziva 50% maksimalnog odgovora. Ova koncentracija agonista

r• • • 12 5

(200 nM CP A) je zatim inkubirana sa rastućim koncentracijama (10_" M do 10"<J>M) antagonista, BG9928. Za esej sa rekombinantnim humanim i pacovskim adenozinskim receptorima A2b, HEK-293 ćelije su inkubirane sa rastućim dozama agonista (5'N-etilkarboksamidoadenozin, NECA) da bi se odredila koncentracija agonista koji izaziva 50% maksimalnog odgovora. Ova koncentracija agonista (5 uM NECA za humane A2breceptore) ili varirajuće koncentracije (za pacovske A2breceptore) su zatim inkubirane sa rastućim koncentracijama antagonista, BG9928 (IO"<12>M do 5 x IO"<6>M) za humane A2breceptore i 10, 100, ili 300 nM za pacovske A2breceptore).

[0129] FLIPR integriše argonski laser kao izvor ekscitaeije, pipeter sa 96 ležišta i sistem za detekciju pomoću CCD (od engl. Charged Coupled Device, naelektrisani kuplovani uređaj) kamere. Emisija fluorescencije sa 96 ležišta je praćena simultano na talasnim dužinama ekscitaeije i emisije, 488 i 520 nm, respektivno. Podaci o fluorescenciji su skupljeni u intervalima od 1 sekunde pre i posle brze adicije jedinjenja na ploči sa 96 ležišta. Rezultati su čitani u relativnim jedinicama fluorescencije (RFU).

[0130] Funkcionalni eseji FLIPR su rađeni sa BG9928 uz upotrebu rekombinantnih humanih adenozinskih receptora Ai, koji se stabilno eksprimiraju u CHO-K1 ćelijama. Konstanta disocijacije antagonista (KB) za BG9928 je bila 0,60 nM, a za BG9719 je bila 0,46 nM, na rekombinantnom humanom adenozinskom receptoru Aj, dobijena korišćenjem nulte metodologije (videti Tabelu 9 i Sliku 8).

[0131] Funkcionalni eseji FLIPR su rađeni sa BG9928 uz upotrebu rekombinantnih humanih adenozinskih receptora A2b, koji se stabilno eksprimiraju u HEK-293 ćelijama. Kbantagonista za BG9928 je bila 3,36 nM, za BG9719 je bila 182 nM, a za DPCPX 23,6 nM, na rekombinantnim humanim adenozinskim receptorima A2b, dobijena korišćenjem nulte metodologije (videti Tabelu 9 i Sliku 9).

[0132] Funkcionalni eseji FLIPR su rađeni sa BG9928 uz upotrebu rekombinantnih pacovskih adenozinskih receptora A2b, koji se stabilno eksprimiraju u HEK-293 ćelijama. KBantagonista za BG9928 je bila 257 nM, dobijena korišćenjem nulte metodologije, a pA2je bio 6,59, dobijen pomoću Schild-ove analize (videti Tabelu 9 i Sliku 10).

9. Analiza podataka

[0133] Podaci su predstavljeni kao srednja vrednost ± standardna greška od srednje vrednosti (SEM) ili standard devijacija (SD). Podaci o saturaciji su analizirani pomoću Marquardt-ovih nelinearnih metoda najmanjih kvadrata i prikazani grafički pomoću Prizm GraphPad. Podaci o kompetitivnom vezivanju su fitovani prema modelu vezivanja u jednoj tački i prikazani grafički pomoću Prizm GraphPad. Jednačina Cheng-Prusoff-a Ki= IC50/ (1+ [I] /KD) je korišćena za računanje vrednosti Kiiz vrednosti IC50, gde je Kikonstanta afiniteta za kompetirajući ligand, [I] je koncentracija slobodnog radioliganda, a KD je konstanta afiniteta za radioligand (Cheng i Prusoff 1973).

[0134] U funkcionalnim esejima FLIPR, krive agonista koncentracija - odgovor su fitovane prema logističnoj jednačini pomoću programa nelinearne regresije u Prizm GraphPad-u. Konstanta disocijacije antagonista (Kb) je procenjena pomoću nultog metoda, koji su razvili Lazareno i Roberts (1987). Schild-ova analiza je rađena da bi se procenila potentnost jedinjenja kao antagonista (pA2). pA2je negativni logaritam koncentracije antagonista koja može da izazove dvostruko pomeranje na krivoj koncentracija - odgovor, gde je odgovor defmisan kao 50% maksimalnog odgovora.

Claims (37)

1. Postupak sprečavanja, ograničavanja ili lečenja ischemične reperfuzione povrede kod sisara, koji obuhvata: identifikovanje sisara koji je pretrpeo ishemičan slučaj ili kome preti ishemičan slučaj i davanje sisaru terapijski efektivne ili profilaktički efektivne količine antagonista adenozinskog receptora A2bu okviru od deset dana pre ili posle ishemičnog slučaja; gde je antagonist adenozinskog receptora A2b jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov oksid azota, gde je: svaki od Ri, R2, i R3, nezavisno: a) vodonik; b) Ci-6alkil, C2_6alkenil, ili C2-6alkinil; gde je navedeni alkil, alkenil, ili alkinil ili nesupstituisan ili supstituisan jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine hidroksi, alkoksi, amino, monoalkilamino, dialkilamino, cikloalkil, aril, heterociklil, aralkil, heterociklilalkil, acilamino, alkilaminokarbonil, alkilsulfonilamino, i alkilaminosulfonil; c) supstituisan ili nesupstituisan aril; ili d) supstituisan ili nesupstituisan heterociklil; R4 je jednoguba veza, -O-, -(CH2),.3-, -0(CH2)i-2-, -CH2OCH2-, -(CH2)i-20-, -CH=CHCH2-, - CH=CH- ili -CH2CH=CH-; R5je: (a) fenil, ili (b) biciklićna ili triciklična grupa odabrana iz grupe koju čine: gde je fenil, biciklična, ili triciklična grupa ili nesupstituisana, ili supstituisana jednim ili sa više Ragrupa, koje su odabrane iz grupe koju čine: (a) Cj-6alkil, C2-6alkenil, ili C2-6alkinil; gde je svaka navedena alkil, alkenil, ili alkinil grupa ili nesupstituisana, ili supstituisana jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, (amino)(Rb)acilhidrazinilkarbonil-, (amino)-(Rb)aciloksikarboksi-, (hidroksi)(karboalkoksi)alkilkarbamoil, aciloksi, aldehid, alkenil-sulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilaminoalkilamino, dialkilaminoalkilamino, alkilfosfono, alkilsulfonilamino, karbamoil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkilamino-, cijano, cijanoalkilkarbamoil, cikloalkilamino, dialkilfosfono, haloalkilsulfonilamino, hetero-ciklilalkilamino, heterociklilkarbamoil, hidroksi, hidroksialkilsulfonilamino, oksimino, fosfono, supstituisan ili nesupstituisan aralkilamino, supstituisan ili nesupstituisan arilkarboksialkoksikarbonil, supstituisan ili nesupstituisan heteroarilsulfonilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, tiokarbamoil, i trifluorometil; i (b) (alkoksikarbonil)aralkilkarbamoil, aldehido, alkenoksi, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilkarbamoil, alkoksikarbonilamino, alkoksikarbonilalkilamino, alkilsulfonilamino, alkilsulfoniloksi, amino, aminoalkilaralkilkarbamoil, amino-alkilkarbamoil, aminoalkilheterociklilalkilkarbamoil, aminocikloalkilalkilcikloalkilkar-bamoil, aminocikloalkilkarbamoil, aralkoksikarbonilamino, arilheterociklil, ariloksi, arilsulfonilamino, arilsulfoniloksi, karbamoil, karbonil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkiltio-, Rbalkil(alkil)amino-, Rb-alkil(alkil)karbamoil-, Rb-alkilamino-, Rb-alkilkarbamoil-, Rb-alkilsulfonil-, Rb-alkilsulfonilamino, Rb-alkiltio, Rb-heterociklilkarbonil, aminoalkil-aminokarbonil, dialkilaminoalkilamino, alkilaminoalkilamino, cijano, cikloalkilamino, dialkilaminoalkilkarbamoil, halogen, heterociklilalkilamino, hidroksi, oksimino, fosfat, supstituisan ili nesupstituisan aralkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilsulfonilamino, sulfoksiacilamino i tiokar-bamoil; Rbje odabran iz grupe koju čine -COOH, -C(CF3)2OH, -CONHNHS02CF3, -CONHORc, - CONHS02Rc, -CONHS02NHRc, -C(OH)RcP03H2, -NHCOCF3, -NHCONHS02Rc, - NHP03H2, -NHS02Rc, -NHS02NHCORc,-OP03H2, -OS03H, -POCOH^, -P03H2, -S03H, - S02NHRc, -S03NHCORc, -S03NHCONHC02Rci sledeće: Re je odabran iz grupe koju čine vodonik, -Cmalkil, -Cmalkil-C02H i fenil, gde su -Ci^alkil, -Ci-4alkil-C02H i fenil grupa ili nesupstituisane, ili supstituisane jednim do tri supstituenta odabranih iz grupe koju čine halogen, -OH, -OMe, -NH2, -N02, nesupstituisan benzil i benzil supstituisan jednim do tri supstituenta odabranih iz grupe koju čine halogen, -OH, -OMe, - NH2i -N02; Xii X2su nezavisno odabrani iz grupe koju čine O i S; a X3 je N ili CRd, gde je R<j odabran iz grupe koju čine: a) vodonik; b) Ci-ealkil, C2.6alkenil, ili C2-6alkinil; gde je navedeni alkil, alkenil, ili alkinil ili nesupstituisan ili supstituisan jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine hidroksi, alkoksi, amino, monoalkilamino, dialkilamino, cikloalkil, aril, heterociklil, aralkil, heterociklilalkil, acilamino, alkilaminokarbonil, alkilsulfonilamino, i alkilaminosulfonil; c) supstituisan ili nesupstituisan aril i d) supstituisan ili nesupstituisan heterociklil.

2. Postupak prema zahtevu 1, gde jeR\Ci.6alkil.

3. Postupak prema zahtevu 1, gde j e R2C i .6 alkil.

4. Postupak prema zahtevu 1, gde je R3vodonik.

5. Postupak prema zahtevu 1, gde j e R4j ednoguba veza.

6. Postupak prema zahtevu 1, gde je R5fenil supstituisan sa Ra.

7. Postupak prema zahtevu 1, gde je R5supstituisana biciklična ili triciklična grupa odabrana iz grupe koju čine:

8. Postupak prema zahtevu 1, gde j e R5 gde je R5ili nesupstituisan, ili supstituisan jednom ili sa više Ragrupa odabranih iz grupe koju čine: (a) Cj_6alkil, C2-6alkenil, ili C2.6alkinil; gde je svaka navedena alkil, alkenil, ili alkinil grupa ili nesupstituisana, ili supstituisana jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, (amino)(Rb)acilhidrazinilkarbonil-, (amino)(Rb)aciloksikar-boksi-, (hidroksi)(karboalkoksi)alkilkarbamoil, aciloksi, aldehido, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilaminoalkilamino, dialkilaminoalkilamino, alkilfosfono, alkilsulfonilamino, karbamoil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkilamino-, cijano, cijanoalkil-karbamoil, cikloalkilamino, dialkilfosfono, haloalkilsulfonilamino, heterociklilalkil-amino, heterociklilkarbamoil, hidroksi, hidroksialkilsulfonilamino, oksimino, fosfono, supstituisan ili nesupstituisan aralkilamino, supstituisan ili nesupstituisan arilkarboksi-alkoksikarbonil, supstituisan ili nesupstituisan heteroarilsulfonilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, tiokarbamoil, i trifluorometil; i (b) (alkoksikarbonil)aralkilkarbamoil, aldehido, alkenoksi, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilkarbamoil, alkoksikarbonilamino, alkoksikarbonilalkilamino, alkilsulfonilamino, alkilsulfoniloksi, amino, aminoalkilaralkilkarbamoil, amino-alkilkarbamoil, aminoalkilheterociklilalkilkarbamoil, aminocikloalkilalkilcikloalkilkar-bamoil, aminocikloalkilkarbamoil, aralkoksikarbonilamino, arilheterociklil, ariloksi, arilsulfonilamino, arilsulfoniloksi, karbamoil, karbonil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkiltio-, Rb-alkil(alkil)amino-, Rb-alkil(alkil)karbamoil-, Rb-alkilamino-, Rb-alkilkarbamoil-, Rb-alkilsulfonil-, Rb-alkilsulfonilamino, Rb-alkiltio, Rb-heterociklilkarbonil, aminoalkil-aminokarbonil, dialkilaminoalkilamino, alkilaminoalkilamino, cijano, cikloalkilamino, dialkilaminoalkilkarbamoil, halogen, heterociklilalkilamino, hidroksi, oksimino, fosfat, supstituisan ili nesupstituisan aralkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilsulfonilamino, sulfoksiacilamino, i tiokarbamoil.

9. Postupak prema zahtevu 1, gde je Raodabran iz grupe koju čine: (a) Ci-6alkil, C2-6alkenil, ili C2- 6 alkinil; gde je svaka navedena alkil, alkenil, ili alkinil grupa ili nesupstituisana, ili supstituisana jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, (amino)(Rb)acilhidrazmilkarbonil-, (amino)(Rb)aciloksikar-boksi-, (hidroksi)(karboalkoksi)alkilkarbamoil, aciloksi, aldehido, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilaminoalkilamino, dialkilaminoalkilamino, alkilfosfono, alkilsulfonilamino, karbamoil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkilamino-, cijano,ci;;.r....!!-.-!!:...-N.,.^>:<_ ...-'-i •••.!i:i]:»mi!T\(i;-.u-;ir0.-r..v,. i-»!^.,!i,:iio,,io-1nir,n-.;nn. heterociklilalkilamino, heterociklilkarbamoil, hidroksi, hidroksialkilsulfonilamino, oksimino, fosfono, supstituisan aralkilamino, supstituisan arilkarboksialkoksikarbonil, supstituisan heteroarilsulfonilamino, supstituisan heterociklil, tiokarbamoil, i trifluorometil i (b) (alkoksikarbonil)aralkilkarbamoil, aldehido, alkenoksi, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilkarbamoil, alkoksikarbonilamino, alkoksikarbonilalkilamino, alkilsulfonilamino, alkilsulfoniloksi, amino, aminoalkilaralkilkarbamoil, aminoalkilkarbamoil, aminoalkilheterociklilalkilkarbamoil, aminocikloalkilalkilcikloalkilkarbamoil, aminocikloalkilkarbamoil, aralkoksikarbonilamino, arilheterociklil, ariloksi, arilsulfonilamino, arilsulfoniloksi, karbamoil, karbonil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkil(alkil)amino-, Rb-alkil(alkil)karbamoil-, Rb-alkilamino-, Rb-alkilkarbamoil-, Rb-alkilsulfonil-, Rb-alkilsulfonilamino, Rb-alkiltio, Rb-heterociklilkarbonil, cijano, cikloalkilamino, dialkilaminoalkilkarbamoil, halogen, heterociklilalkilamino, hidroksi, oksimino, fosfat, supstituisan aralkilamino, supstituisan heterociklil, supstituisan heterociklilsulfonilamino, sulfoksiacilamino i tiokarbamoil.

10. Postupak prema zahtevu 1, gde je Raodabran iz grupe koju čine: (a) Ci-6alkil ili C2-6alkenil, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, Rb-, Rb-alkoksi-, i supstituisan ili nesupstituisan heterociklil; i (b) alkoksikarbonilalkilamino, cijano i hidroksi.

11. Postupak prema zahtevu 1, gde je XiO.

12. Postupak prema zahtevu 1, gde je X2O.

13. Postupak prema zahtevu 1, gde j e X3N.

14. Postupak prema zahtevu 1, gde je svaki od R, i R2C2.4alkil; R3je vodonik; R4je jednoguba veza; svaki od Xii X2je O i X3je N.

1 5. Postupak prema zahtevu 14. gde jeR-fenil supstituisan sa Ra.

16. Postupak prema zahtevu 15, gde je Raodabran iz grupe koju čine: (a) Cj-6 alkil ili C2-6 alkenil, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, Rt,- i Rb-alkoksi;- i (b) alkoksikarbonilalkilamino, Rb-alkoksi-, cijano, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil i hidroksi.

17. Postupak prema zahtevu 16, gde je Racijano.

18. Postupak prema zahtevu 14, gde j e R5 gde je navedeni R5ili nesupstituisan ili supstituisan jednom ili sa više Ragrupa odabranih iz grupe koju čine: (a) C1-6alkil, C2-6alkenil, ili C2-6alkinil; gde je svaka navedena alkil, alkenil, ili alkinil grupa ili nesupstituisana, ili supstituisana jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, (amino)(Rb)acilhidrazinilkarbonil-, (amino)(Rb)aciloksi-karboksi-, (hidroksi)(karboalkoksi)alkilkarbamoil, aciloksi, aldehido, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilaminoalkilamino, dialkilaminoalkilamino, alkilfosfono, alkilsulfonilamino, karbamoil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkilamino-, cijano, cijanoalkilkarbamoil, cikloalkilamino, dialkilfosfono, haloalkilsulfonilamino, heterociklilalkilamino, heterociklilkarbamoil, hidroksi, hidroksialkilsulfonilamino, oksimino, fosfono, supstituisan ili nesupstituisan aralkilamino, supstituisan ili nesupstituisan arilkarboksialkoksikarbonil, supstituisan ili nesupstituisan heteroarilsulfonilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, tiokarbamoil, i trifluorometil; i (b) (alkoksikarbonil)aralkilkarbamoil, aldehido, alkenoksi, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilkarbamoil, alkoksikarbonilamino, alkoksikarbonilalkilamino, alkilsulfonilamino, alkilsulfoniloksi, amino, aminoalkilaralkilkarbamoil, aminoalkilkarbamoil, aminoalkilheterociklilalkilkarbamoil, aminocikloalkilalkilcikloalkilkarbamoil, aminocikloalkilkarbamoil, aralkoksikarbonilamino, arilheterociklil, ariloksi, arilsulfonilamino, arilsulfoniloksi, karbamoil; karbonil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkiltio-, Rb-alkil(alkil)amino-, Rb-alkil(alkil)karbamoil-, Rb-alkilamino-, Rb- alkilkarbamoil-, Rb-alkilsulfonil-, Rb-alkilsulfonilamino, Rb-alkiltio, Rb-heterociklilkarbonil, aminoalkilaminokarbonil, dialkilaminoalkilamino, alkilaminoalkilamino, cijano, cikloalkilamino, dialkilaminoalkilkarbamoil, halogen, heterociklilalkilamino, hidroksi, oksimino, fosfat, supstituisan ili nesupstituisan aralkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilsulfonilamino, sulfoksiacilamino i tiokarbamoil.

19. Postupak prema zahtevu 18, gde je Raodabran iz grupe koju čine: (a) Ci-6 alkil ili C2-6 alkenil, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, Rb-, i Rb-alkoksi-; i (b) alkoksikarbonilalkilamino, Rb-alkoksi-, cijano, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil i hidroksi.

20. Postupak prema zahtevu 19, gde je RaC2-salkil koji je supstituisan jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino i dialkilamino.

21. Postupak prema zahtevu 14, gde j e R5 gde je navedeni Rs ili nesupstituisan ili supstituisan jednom ili sa više Ragrupa odabranih iz grupe koju čine: (a) Ci-6alkil, C2-6alkenil, ili C2-6alkinil; gde je navedena alkil, alkenil, ili alkinil grupa ili nesupstituisana, ili supstituisana jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, (amino)(Rb)acilhidrazinilkarbonil-, (amino)(Rb)aciloksi-karboksi-, (hidroksi)(karboalkoksi)alkilkarbamoil, aciloksi, aldehido, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilaminoalkilamino, dialkilaminoalkilamino, alkilfosfono, alkilsulfonilamino, karbamoil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkilamino-, cijano, cijanoalkilkarbamoil, cikloalkilamino, dialkilfosfono, haloalkilsulfonilamino, heterociklilalkilamino, heterociklilkarbamoil, hidroksi, hidroksialkilsulfonilamino, oksimino, fosfono, supstituisan ili nesupstituisan aralkilamino, supstituisan ili nesupstituisan arilkarboksialkoksikarbonil, supstituisan ili nesupstituisan heteroaril-sulfonilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, tiokarbamoil, i trifluorometil; i (b) (alkoksikarbonil)aralkilkarbamoil, aldehido, alkenoksi, alkenilsulfonilamino, alkoksi, alkoksikarbonil, alkilkarbamoil, alkoksikarbonilamino, alkoksikarbonilalkilamino, alkilsulfonilamino, alkilsulfoniloksi, amino, aminoalkilaralkilkarbamoil, aminoalkilkarbamoil, aminoalkilheterociklilalkilkarbamoil, aminocikloalkilalkilcikloalkilkarbamoil, aminocikloalkilkarbamoil, aralkoksikarbonilamino, arilheterociklil, ariloksi, arilsulfonilamino, arilsulfoniloksi, karbamoil, karbonil, Rb-, Rb-alkoksi-, Rb-alkiltio-, Rb-alkil(alkil)amino-, Rb- alkil(alkil)karbamoil-, Rb-alkilamino-, Rb-alkilkarbamoil-, Rb-alkilsulfonil-, Rb-alkilsulfonilamino, Rb-alkiltio, Rb-heterociklil-karbonil, aminoalkilaminokarbonil, dialkilaminoalkilamino, alkilaminoalkilamino, cijano, cikloalkilamino, dialkilaminoalkilkarbamoil, halogen, heterociklilalkilamino, hidroksi, oksimino, fosfat, supstituisan ili nesupstituisan aralkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilsulfonilamino, sulfoksiacilamino i tiokarbamoil.

22. Postupak prema zahtevu 21, gde je Raodabran iz grupe koju čine: (a) C1-6alkil ili C2-6alkenil, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, Rb- i Rb-alkoksi-; i (b) alkoksikarbonilalkilamino, Rb-alkoksi-, cijano, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil i hidroksi.

23. Postupak prema zahtevu 21, gde je Raodabran iz grupe koju čine: (a) C1-4 alkil ili C2-4 alkenil, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil i Rb-; i (b) Rb-alkoksi- i supstituisan heterociklil.

24. Postupak prema zahtevu 1, gde je: svaki od Rii R2propil; R3 je vodonik; R4je jednoguba veza; R5 je fenil supstituisan saRa, gde je navedena biciklična ili triciklična grupa po izboru supstituisana sa Ra; Raje odabrana iz grupe koju čine: (a) C1-6alkil ili C2-6alkenil, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan jednim ili sa više supstituenata odabranih iz grupe koju čine amino, monoalkilamino, dialkilamino, supstituisan ili nesupstituisan heterociklilaminokarbonil, Rb-, Rb-alkoksi- i supstituisan ili nesupstituisan heterociklil; i (b) alkoksikarbonilalkilamino, cijano, i hidroksi; svaki od X] i X2 je O; i X3jeN.

25. Postupak prema zahtevu 1, gde je jedinjenje formule (I) 3-[4-(2, 6-diokso-l,3-dipropil-2,3,6,7-tetrahidro-lH-purin-8-il)-biciklo[2.2.2]okt-l-il]- propionska kiselina.

26. Postupak prema zahtevu 1, gde je ishemičan slučaj odabran iz grupe koju čine akutni koronarni sindrom, slog, transplantacija organa, ishemija bubrega, šok i hirurgija transplantacije organa.

27. Postupak prema zahtevu 26, gde je akutni koronarni sindrom infarkt miokarda.

28. Postupak prema zahtevu 1, gde se antagonist adenozinskog receptora A2bdaje u okviru od dva dana pre ili posle ishemičnog slučaja.

29. Postupak prema zahtevu 28, gde se antagonist adenozinskog receptora A2bdaje u okviru od dva dana posle ishemičnog slučaja.

30. Postupak prema zahtevu 1, gde je sisar čovek.

31. Postupak iz zahteva 1, gde jedinjenje formule (I) ispoljava afinitet za adenozinski receptor A2bkoji je najmanje 10 puta veći nego afinitet za adenozinski receptor A2aili za adenozinski receptor A3.

32. Postupak prema zahtevu 31, gde jedinjenje formule (I) dalje ispoljava afinitet za adenozinski receptor Aikoji je najmanje 10 puta veći nego afinitet za adenozinski receptor A2aili za adenozinski receptor A3.

33. Postupak prema zahtevu 1, gde jedinjenje formule (I) ima vrednost Kiza adenozinski receptor A2bispod 500 nM.

34. Postupak prema zahtevu 1, gde jedinjenje formule (I) ima vrednost Kiza adenozinski receptor A2bispod 200 nM.

35. Postupak tretiranja oboljenja ili poremećaja posredovanog aktivacijom adenozinskog receptora A2b, koji se sastoji od davanja efektivne količine jedinjenja formule (I) prema zahtevu 1 sisaru kome je ono potrebno.

36. Postupak ograničavanja nekroze tkiva, nastale usled ishemičnog slučaja, koji se sastoji od: identifikovanja sisara koji je pretrpeo ishemičan slučaj ili kome preti ishemičan slučaj; i davanja terapijski ili profilaktički efektivne količine antagonista adenozinskog receptora A2bsisaru u okviru od deset dana pre ili posle ishemičnog slučaja; gde je anOtagonist adenozinskog receptora A2b jedinjenje formule (I) prema zahtevu 1.

37. Postupak ograničavanja veličine infarkta posle infarkta miokarda, koji se sastoji od: identifikovanja sisara koji je pretrpeo infarkt miokarda ili kome preti infarkt miokarda; i davanja terapijski ili profilaktički efektivne količine antagonista adenozinskog receptora A2bsisaru u okviru od deset dana pre ili posle infarkta miokarda; gde je antagonist adenozinskog receptora A2b jedinjenje formule (I) prema zahtevu 1.