RS20080076A - Kompozicije koje obezbeđuju otpornost na više herbicida i njihov postupak upotrebe - Google Patents

Kompozicije koje obezbeđuju otpornost na više herbicida i njihov postupak upotrebe

Info

Publication number
RS20080076A
RS20080076A RSP-2008/0076A RSP20080076A RS20080076A RS 20080076 A RS20080076 A RS 20080076A RS P20080076 A RSP20080076 A RS P20080076A RS 20080076 A RS20080076 A RS 20080076A
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
crop
herbicide
plant
glyphosate
als inhibitor
Prior art date
Application number
RSP-2008/0076A
Other languages
English (en)
Inventor
Billy Fred Mccutchen
Linda A. Castle
Timothy K. Chicoine
Hyeon-je Cho
Jon S. Claus
Jerry M. Green
Anthony D.Jr. Guida
Christine B. Hazel
Jeffrey M. Hegstad
James M. Hutchison
Donglong Liu
Albert L Lu
Wayne J. Mehre
York Moy
Paul D. Olson
Kenneth A. Peeples
David W. Saunders
Mark D. Vogt
Jack Q. Wilkinson
James F. H. Wong
Matthew J. Heckert
Original Assignee
Pioneer Hi-Brend International Inc.,
E. I. Du Pont De Nemours And Company,
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pioneer Hi-Brend International Inc.,, E. I. Du Pont De Nemours And Company, filed Critical Pioneer Hi-Brend International Inc.,
Priority to MEP-35/08A priority Critical patent/MEP3508A/xx
Publication of RS20080076A publication Critical patent/RS20080076A/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
    • C12N15/8202—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation by biological means, e.g. cell mediated or natural vector
    • C12N15/8205—Agrobacterium mediated transformation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
    • C12N15/8209—Selection, visualisation of transformants, reporter constructs, e.g. antibiotic resistance markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C12N15/8275—Glyphosate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C12N15/8278—Sulfonylurea
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1085—Transferases (2.) transferring alkyl or aryl groups other than methyl groups (2.5)
    • C12N9/1092—3-Phosphoshikimate 1-carboxyvinyltransferase (2.5.1.19), i.e. 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Catching Or Destruction (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Obezbeđen je postupak i kompozicije u vezi sa poboljšanim biljkama koje su otporne na više od jednog herbicida. Naročito, pronalazak obezbeđuje biljke koje su otporne na glifosat i koje su otprone na bar jedan ALS inhbitor i postupke za njihovu upotrebu. Biljke otoprne na glifosat/ALS inhbitor sadrže polinukleotid koji kodira polipeptid koji daje otpornost na glifosat i polinukleotid koji kodira polipeptid koji je otporan na ALS inhibitor. U specifičnim izvođenjima, biljka prema pronalsku eksprimuje GAT polipeptid i HRA polipeptide.Obezbeđeni su postupci suzbijanja korova, poboljšani prinosi biljke i povećana transformaciona efikasnost.

Description

KOMPOZICIJE KOJE OBEZBEĐUJU OTPORNOST NA VIŠE HERBICIDA I NJIHOV
POSTUPAK UPOTREBE
Ovaj pronalazak je iz oblasti molekularne biologije. Određenije, ovaj pronalazak se odnosi na otpornost na više herbicida koja je pripisana ekspresiji sekvence koja daje otpornost na glifosat zajedno sa ekspresijom bar jednog drugog gena za otpornost na herbicide.
U komercijalnoj proizvodnju useva, poželjno je lako i brzo eliminisanje neželjenih biljaka( tj.korova) sa polja ratarskih biljaka. Idealan postupak bi bio onaj koji bi bio primenjen na celo polje, ali koji bi eliminisao samo neželjene biljke dok bi ratarske biljke ostale neoštećene. Jedan takav skup postupaka bi uključivao upotrebu ratarskih biljaka koje su otporne na herbicide tako da kada je herbicid raspršen na polje ratarskih biljaka koje su otporene na herbicid, ratarske biljke će nastaviti da napreduju, dok korovi koji nisu otporni na herbicid će biti uništeni ili ozbiljno oštećeni. Idealno, takvi skupovi postupaka bi imali prednost u odnosu na variranje osobina herbicida, tako da bi suzbijanje korova obezbeđivalo najbolju moguću kombinaciju fleksibilnosti i ekonomičnosti. Na primer, individualni herbicidi imaju različito vreme zadržavanja na polju i neki herbicidi opstaju i deluju relativno dugo pošto su naneti na polje dok se ostali herbicidi brzo raspadnu na druga i/ili neaktivana jedinjenja. Idealan skup postupaka bi dozvoljavao upotrebu različitih herbicida tako da uzgajivači mogu odabirati herbicide za odgovarajuće situacije.
Otpornost useva na specifične herbicide može se postići genetskim inžinjeringom na usevima, u delu koji kodira odgovarajuće enzime koji metaboliziraju herbicid i/ili čini ciljno mesto herbicida neosetljivim. U nekim slučajevima ovi enzimi i nukelinske kiseline koje ih kodiraju, stvaraju se u biljki. U drugim slučajevima, oni potiču iz drugih organizama, kao što su mikrobi.Videti, na pr.Padgetteet al.(1996) ' New weed control opportunities: Development of sovbeans with a Roundup Ready<®>gene' i Vasil (1996) 'Phosphinothricin-resistant crops' oba uHerbicide-Resistant Crops,ed. Duke (CRC Press, Boca Raton, Florida) str. 54-84 i str. 85-91. Zaista, transgenske biljke su stvorene da eksprimuju gene raličite otpornosti na herbicide iz različitih organizama, uključujući gen koji kodira himerni protein citohroma P4507A1 pacova i NADPH-citohroma P450 oksidoreduktaze kvasca (Shiotaet al.(1994)Plant Physiol.106: 17). Drugi geni koji doprinose otpornosti na herbicide uključuju acetohidroksi kiselu sintetazu ('AHAS'), a nađeno je da mutacije u prirodnoj sekvenci doprinose otpornosti na više tipova herbicida u biljkama koji ih eksprimuju i uneti su u različite biljke( videti, na pr.,Hattoriet al.(1995)Mol. Gen. Genet.246:419); glutation reduktaza i superoksid dismutaza (Aonoet al.(1995)Plant Cell Physiol.36: 1687); i geni za različite fosfotransferaze (Dattaet al.(1992)Plant Mol. Biol.20:619).
Jedan herbicid koji je bio intenzivno ispitivan je N-fosfonometilglicin, koji se obično zove glifosat. Glifosat je herbicid širokog spektra koji uništava širokoliste biljke i biljke tipa trave usled inhibicije enzima 5-enolpiruvilšikimat-3-fosfat sintetaze (na koju se takođe poziva kao na 'EPSP sintetazu' ili 'EPSPS'), enzim koji je deo biosintetskog puta za proizvodnju aromatičnih amino kiselina, hormona i vitamina. Dobijene su transgenske biljke koje su otporne na glifosat i koje pokazuju komercijalno značajan nivo otpornosti na glifosat usled uvođenja modifikovaneAgrobacteriumCP4 EPSPS. Ovaj modifokovani enzim cilja u hloroplast gde, čak u prisustvu glifosata, nastavlja da sintetiše EPSP iz fosfoenolpirogrožđane kiseline ('PEP') i šikimat-3-fosfata. Sada su u komercijalnoj upotrebi transgenske biljke CP4 soje otporne na glifosat( npr.prodaje ih Monosanto pod imenom 'Roundup Ready<®>').
Ostali herbici koji su od interesa za komercijalnu proizvodnju useva uključuju herniju glufosinata (fosfinotricin) i acetolaktat sintetaze (ALS) kao što su herbicidi sulfoniluree. Glufosinat je herbicid širokog spektra koji takođe deluje na enzim hloroplasta glutamat sintetazu. Dobijene su transgenske biljke koje su otporne na glufosinat koje nosebargen izStreptomyces hygroscopicus.Enzim kodiran od stranebargena ima N-acetilacionu aktivnost i modifikuje i detoksifikuje glufosinat. Biljke otporne na glufosinat su sada u komercijalnoj upotrebi( npr.prodaje ih Bayer pod imenom 'Liberty Link<®>'). Herbicidi sulfoniluree inhibiraju rast viših biljki blokiranjem acetolaktat sintetaze (ALS). Biljke koje sadrže odgovarajuće mutacije u ALS su otporne na ALS herbicide uključujući sulfonilureu. Prema tome, na primer, herbicidi sulfoniluree kao što je Synchrony (smeša hlorimuron-etil plus tifenilsulfuron-metil) mogu biti korišćeni zajedno sa biljkama otpornim na ALS kao što je sorta STS<®>soje (soja otporna na Synchrony) koja ima osobinu da poboljšava prirodnu otpornost soje na herbicide sulfoniluree soje.
Dok su trenutno dostupne brojne ratarske biljke otporne na herbicide, jedan problem koji se javio kod mnogo komercijalnih herbicida i kombinacija herbicid/usev je da pojedinačni herbicidi tipično imaju nekompletan spektar aktivnosti naspram uobičajenih vrsta korova. Za većinu pojedinačnih herbicida koji su bili korišćeni neko vreme, postala je prevolađujuća populacija vrsta otpornih na herbicid i biotipova (videti,npr.Tranel and Wright (2002)Weed Science50:700-712; Owen and Zelaya (2005)Pest Manag. Sci.61: 301-311). Opisane su transgenske biljke koje su otporne na više od jednog herbicida (videtinpr.,WO2005/012515). Međutim, poboljšanja u svakom aspektu proizvodnje useva, opcija suzbijanja korova, produženog suzbijanja zaostalih korova i poboljšanja u prinosu useva su kontinualni zahtevi.
Naročito, usled lokalne i regionale varijacije dominantnih vrsta korova kao i poželjnih vrsta useva, postoji kontinualna potreba za prilagođenim sistemima zaštite useva i suzbijanja korova koji mogu biti prilagođeni potrebama odgovarajućeg regiona, geografije i/ili lokaliteta. Na primer, postoji kontinualna potreba za postupcima za zaštitu od korova i suzbijanje korova koji bi smanjili: broj primene herbicida neophodan za suzbijanje korova u polju; količinu herbicida neophodnu za suzbijanja korova u polju; obim obrade zamljišta neophodan da bi se proizveo usev; i/ili programe koji odlažu ili sprečavaju razvoj i/ili pojavu korova otpornih na herbicide. Postoji kontinualna potreba za postupcima za zaštitu useva i suzbijanje korova koji omogućavaju ciljanu upotrebu odgovarajućih herbicidinih kombinacija.
Obezbeđeni su postupci i kompozicije koji se odnose na poboljšane biljke koje su otporne na više od jednog herbicida ili klasu ili podklase herbicida. Kompozicije uključuju biljke koje su otporne na glifosat kao i bar jedan drugi herbicid ili klasu ili podklasu herbicida, kao i postupke za njihovu upotrebu. Dodatne kompozicije sadrže biljke koje sadrže polinukleotide koji kodiraju polipeptid koji može dovesti do otpornosti na glifosat i polinukleotid koji kodira polipeptid otporan na ALS inhibitor. U jednom neograničavajućem izvođenju, kompozicije sadrže biljku koja eksprimuje polinukleotid koji kodira GAT (glifosat-N-acetiltransferazu) polipeptid i tolerantna je na bar jedan dodatni herbicid. U nekim izvođenjima, biljka prema pronalasku eksprimuje GAT polipeptid i HRA polipeptid.
Obezbeđeni su postupci za suzbijanje korova u oblasti gajenja biljka prema pronalasku. Dalje su obezbeđeni poboljšani postupci transformacije.
Slika 1 prikazuje primer konstrukta koji ima element 35S pojačivač.
Slika 2 je šema koja prikazuje efekat 35S pojačivača na TX efikasnost.
Slika 3 je šema koja prikazuje efekat 35S pojačivača na TO efikasnost.
Slika 4 je šema koja pokazuje efekat 35S pojačivača na broj kopije slučaja.
Slika 5 je tabela koja pokazuje efekat 35S pojačivača na T2 efikasnost.
Slika 6 prikazuje test procene insekticidnog gena.
Slika 7 je šema koja prikazuje razvijanje GAT selekcione šeme.
Slika 8 pokazuje da GAT može biti korišćen kao selektivni marker.
Slika 9 je šema koja pokazuje efikasnost GAT transformacije.
Prikazani pronalazak obezbeđuje postupke i kompozicije za pripremanje i korišćenje biljaka koje su otporne na više od jednog herbicida ili klasu ili podklasu herbicida. U nekim izvođenjima, obezbeđena je biljka koja je otporna i na glifosat i bar jedan drugi herbicid (ili klasu ili podklasu herbicida) ili drugu hemikaliju (ili klasu ili podklasu druge hemikalije). Takve biljke nalaze upotrebu na primer, u postupcima gajenja ratarskih biljaka koji uključuju tretiranje sa različitim herbicidima. Prema tome, pronalazak obezbeđuje poboljšane biljke koje su otporne na tretiranje sa herbicidima ili kombinacije herbicida (uključujući kombinaciju herbicida koji deluju na različite načine; tj. primena smeša koje imaju 2, 3, 4 ili više herbicida različitog načina delovanja) ili kombinacije bar jednog herbicida i bar jedne druge hemikalije, uključujući fungicide, insekticide, regulatore rasta biljaka i slično. Na ovaj način, pronalazak obezbeđuje poboljšane postupke gajenja ratarskih biljaka, gde su korovi selektivno suzbijani. U jednom izvođenju, biljke prema pronalasku sadrže polinukleotid koji kodira polipeptid koji doprinosi otpornosti na glifosat i polinukleotid koji kodira polipeptid koji je otporan na inhibitor ALS. Kao što je dole detaljnije razmatrano, na takve biljke se ovde poziva kao na ,biljke koje su otporne na glifosat/ALS inhibitor'.
Biljke prema pronalasku pokazuju modifikovanu otpornost na herbicide i prema tome omogućavaju primenu herbicida u odnosima koji bi značajno oštetili biljku, a dalje omogućavaju primenu smeša herbicida u nižim koncentracijama nego što se normalno koriste, ali koji nastavljaju da selektivno suzbijaju korov. Pored toga, biljke koje su otporne na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku mogu biti korišćene u kombinaciji sa tehnologijom herbicidnih mešavina i na taj način čine primenu hemijskih pesticida pogodnijom, ekonomičnijom i efikasnijom za proizvođača. U slučaju useva koji su otporni na glifosat/ALS inhibitor, tehnologija mešavina će obezbediti lako formulisanje proizvoda za zaštitu useva, na primer od ALS herbicida, u suvim granulama koje omogućavaju dostavljanje uobičajenih smeša namenjenih da reše odgovarajući problem zajedno sa usevom otpornim na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku. Pored jake otpornosti na ALS biljaka prema pronalasku, omogućena je dalja upotreba ALS herbicida, dok je eliminisan odgovor useva na herbicid. Jedinstvena ponuda odabranih herbicida zajedno sa usevima koji su otporni na glifosat/ALS inhibitor koji su ovde opisani, može sada biti planirana i prilagođena da ispunjava potrebe suzbijanja stalno promenjivih korova. Ova činjenica sada omogućava da mnoštvo herbicidnih mešavina, uključujući na primer mešavine ALS inhibitora, koje mogu biti prilagođenje za poboljšano suzbijanje korova (s obzirom da hernija ALS inhibitora ima različite herbicidne karakteristike) uključujući povećani spektar korova, sposobnost obezbeđivanja specifične zaostale aktivnosti, drugog načina delovanja u borbi ili odlaganju otpornosti korova (komplementarne glifosatu, glifosinatu i slično), kao i novim ponudama koje mogu biti napravljene i pre-pojavljivanja ili posle-pojavljivanja. Mešavine takođe daju mogućnost dodavanja ili mešanja drugih agrohemikalija u rezervoaru u obeleženim upotrebnim količinama, a namenjenih za primenu kao dodatnih herbicida trećeg ili četvrtog mehanizma dejstva, da bi se popravile rupe u spektru ili izjednačila sposobnost uključivanja fungicida, insekticida, regulatora rasta biljaka i slično, na taj način smanjujući cene u vezi sa dodatnom primenom. Kao što je dole detaljnije diskutovano, postupci prema pronalasku mogu biti prilagođeni za odgovarajuće lokacije ili regione. Takođe su obezbeđeni poboljšani postupci transformacije.
I. Biljke otporne na glifosat/ ALS inhibitor
a) Otpornost na glifosat
Obezbeđene su biljke koje sadrže polipeptid koji daje otpornost na glifosat i polinukleotid
koji kodira polipeptid koji je otporan na ALS inhibitor. Različite sekvence koje daju otpornost na glifosat mogu biti korišćene u postupcima i kompozicija prema pronalasku.
U jednom izvođenju obezbeđen je mehanizam otpornosti na glifosat ekpresijom polinukleotida koji ima aktivnost transferaze. Ovde korišćen izraz ,transferazni' polipeptid ima sposobnost da prenosi acetil grupu sa acetil CoA na N glifosata, prenosi propionil grupu propionil CoA na N glifosata ili da katalizuje acetilaciju glifosatnih analoga i/ili metabolita glifosata,npr.aminometilfosfonske kiseline. Opisani su postupci za test ove aktivnosti, na primer u US objavi br. 2003/0083480, US objavi br. 2004/0082770 i US prijavi 10/835,615, podnete 29 aprila 2004, WO2005/012515, WO2002/36782 i WO2003/092360. U jednom izvođenju, transferazni polipeptid sadrži glifosat-N-acetiltransferazni 'GAT' polipeptid.
Ovde korišćen izraz, GAT polipeptid ili enzim obuhvata polipeptid koji ima glifosat-N-acetiltransferaznu aktivnost ('GAT' aktivnost), tj. sposobnost da katalizuje acetilaciju glifosata. U specifičnim izvođenjima, polipeptid koji ima glifosat-N-acetiltransferaznu aktivnost može preneti acetil grupu sa acetil CoA na N glifosata. Pored toga, neki GAT polipeptidi prenose propionil grupu propionil CoA na N glifosata. Neki GAT polipeptidi su takođe sposobni da katalizuju acetilaciju glifosatnih analoga i/ili metabolita glifosata,npr. aminometilfosfonskekiseline. GAT polipeptidi su karakterisani njihovom međusobnom strukturnom sličnošću,npr.u smislu sličnosti sekvence kada su GAT polipeptidi poravnati jedan sa drugim. Primeri GAT polipeptida i polinukleotida koji ih kodiraju su poznati u ovoj oblasti tehnike i posebno su opisani na primer u US prijavi br. 10/004,357 podnetoj 29 oktobra 2001, US prijavi br. 10/427,692, podnetoj 30 aprila, 2003 i US prijavi br. 10/835,615 podnetoj 29 aprila, 2004 koji su uključeni ovde kao referenca u svojoj celovitosti. U nekim izvođenjima, GAT polipeptidi korišćeni u stvaranju biljaka prema pronalasku obuhvataju amino kiselinsku sekvencu prikazanu kao SEQ ID br: 5, 14, 11, 8, 21, 27, 17, 24, 30, 35, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 39, 42, 45 ili 54. Svaka od ovih sekvenci je takođe opisana u US prijavi br. 10/835,615 podnetoj 29 aprila 2004. U nekim izvođenjeima, korišćeni su odgovarajući GAT polinukleotidi koji kodiraju ove polipeptide; ove polinukleotidne sekvence su prikazane kao SEQ ID br: 3, 12, 9, 6, 19, 15, 25, 22, 28, 33, 4, 7, 10, 13, 16, 18, 20, 23, 26, 29, 32, 34, 36, 38, 41, 44, 43, 56, 31, 37, 40, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 ili 64. Svaka od ovih sekvenci je takođe opisana u US prijavi br. 10/835,615 podnetoj 29 aprila 2004. Kao što je ovde na dalje detaljnije diskutovano, upotreba fragmenata i varijanti GAT polinukleotida i drugih poznatih polinukleotida koji su otporni na herbicicde i polipeptida koje kodiraju, je takođe obuhvaćena sadašnjim pronalaskom.
U specifičnim izvođenjima, biljke otporne na glifosat/ ALS inhibitor prema pronalasku eksprimuju GAT polipeptid,tj.polipeptid koji ima glifosat-N-acetiltransferaznu aktivnost, gde acetil grupa iz acetil CoA se prenosti na N glifosata. Prema tome, biljke prema pronalasku koje mogu biti tretirane sa glifosatom sadrže glifosatni metabolit N-acetilglifosat ('NAG'). Prema tome, pronalazak takođe obezbeđuje biljke koje sadrže NAG kao i postupak proizvodnje NAG-a tretiranjem biljaka koje sadrže GAT gen( tj.ekspimuju GAT polipeptid) sa glifosatom. Prisustvo N-acetilglifosata može služiti kao dijagnostički marker na prisustvo aktivnog GAT gena kod biljaka i može biti procenjivan postupcima poznatim u ovoj oblasti tehnike, na primer, masenom spektrometrijom ili imuno testovima. Generalno, nivo NAG u biljkama koje sadrže GAT gene koje su tretirane sa glifosatom je u korelaciji sa aktivnošću GAT gena i količinom glifosata sa kojom su biljke bile tretirane.
Biljke prema pronalasku mogu sadržati više GAT polinukleotida (tj. bar 1, 2, 3, 4, 5, 6 ili više). Priznaje se daje korišćeno više GAT polinukleotida, GAT polinukleotidi mogu kodirati GAT polipeptide koji imaju različite kinetičke parametre,tj.GAT varijanta koja ima niži Kmmože biti kombinovana sa onom koja ima više kcat. U nekim izvođenjima, različiti polinukleotidi mogu biti kuplovani sa tranzitnom sekvencom hloroplasta ili drugom signalnom sekvencom koja obezbeđuje polipetidnu ekspresiju u različitim ćelijskim delovima, organelama ili sekreciju jednog ili više polipeptida.
GAT polipeptid kodiran GAT polinukleotidom može imati poboljšanu enzimsku aktivnost u poređenju sa ranije identifikovanim enzimaima. Enzimska aktivnost može biti karakterisana korišćenjem konvencionalnih kinetičkih parametara kcat, Kmi kcat/KM. kcatse može smatrati kao mera odnosa acetilacije, naročito pri visokim koncentracijama substrata; Kmje mera afiniteta GAT enzima za njegove susptrate( npr.acetil CoA, propionil CoA i glifosat); i kcat/KM je mera katalitičke efikasnosti koja uzima u obzir afinitet oba susptrata i katalitičku brzinu. kcat/KM je naročito važana u situaciji gde koncentracija substrata je bar delimično ograničena brzinom. Generalno, GAT sa višom kcatili Kcat/KM je efikasniji katalizator nego drugi GAT sa nižim kcatili kcat/KM. GAT sa nižom KMje efikasniji katalizator nego drugi GAT sa višom Km- Prema tome, da bi se odredilo da li je jedan GAT efikasniji od drugog, mogu se upoređivati kinetički parametri za dva enzima. Relativna važnost kcat, kcat/KMi Kmće variarati u zavisnosti od konteksta u kome će biti očekivano da GAT funkcioniše,npr.očekivana efiksana koncentracija glifosata u odnosu na KMza glifosat. GAT aktivnost može biti takođe karakterisana bilo kojom od brojnih karakteristika, uključujući ali bez ograničenja stabilnost, podložnost inhibiciji ili aktivaciju drugim molekulima.
Prema tome, na primer, GAT polipeptid može imati niži Kmza glifosat nego prethodno identifikovani enzimi, na primer manji of 1 mM, 0.9 mM, 0.8 mM, 0.7 mM, 0.6 mM, 0.5 mM, 0.4 mM, 0.3 mM, 0.2 mM, 0.1 mM, 0.05 mM ili manji. GAT polipeptid može imati veći kcatza glifosat nego prethodno identifikovani enzimi, na primer, kcatod bar 500 min"<1>, 1000 min"<1>, 1100 min"<1>, 1200min"<1>, 1250 min"<1>, 1300 min'<1>, 1400 min"<1>, 1500min"<1>, 1600 min"<1>, 1700min"<1>, 1800 min"<1>1900 min"<1>ili 2000 min"<1>ili viši. GAT polipeptidi koji se koriste prema pronalaski mogu imati viši kcat/KMza glifosat nego prethodno identifikovani enzimi, na primer, kcat/KMbar 1000 mM"'min"<1>, 2000 mM^min"1, 3000mM"<1>min"<1>, 4000 mlvr'min"<1>, 5000 mM"1!™1, 6000 mM-'min"<1>, 7000 mM" 'min'<1>, ili 8000 rrnVf'min"1 ili viši. Aktivnost GAT enzima je narušena, na primer, sa pH i koncentracijom soli; odgovarajući postupci testiranja i uslovi su poznati u oblasti tehnike (videtinpr.WO2005012515). Takvi poboljšvani enzimi mogu naročito naći upotrebu u postupcima gajenja useva na polju gde bi upotreba odgovarajućih herbicida ili kombinacije herbicida i/ili drugih poljoprivrednih hemikalija dovela do oštećenja biljke daje enzimska aktivnost bila manja( npr.kcat,<K>m<i><k>cat</K>M-)-
Biljke otporne na glifosat mogu takođe biti dobijene modifikovanjem biljke da bi se povećao kapacitet proizvodnje 5-enolpiruvilšikimat-3-fosfonat sintetaze (EPSPS) do viših nivoa, kao što je potpunije opisano u US patentu br. 6,248,876; 5, 627,061; 5,804,425; 5,633,435; 5,145,783; 4,971,908; 5,312,910; 5,188,642; 4,940,835; 5,866,775; 6,225,114; 6,130,366; 5,310,667; 4,535,060; 4,769,061; 5,633,448; 5,510,471; Re. 36,449; RE 37,287 E; i 5,491,288; i međunarodnih objava WO 97/04103; WO 00/66746; WO 01/66704; I WO 00/66747, koji su uključeni ovde kao celi kao referenca za sve svrhe. Otpornost na glifosat može takođe biti umanjena kod biljaka koja eksprimuju gen koji kodira glifosat oksido-reduktazni enzim kao što je potpunije opisano u US patentu br. 5,776,760 i 5,463,175 koji su ovde za sve svrhe uključeni celi kao referenca. Dodatno, biljke koje su otporne na glifosat mogu biti stvorene preko selekcije mutacija koje se javljaju u prirodi koje doprinose otpornosti na glifosat.
Zna se da postupci i kompozicije prema pronalasku mogu koristiti bilo koju kombinaciju sekvenci (tj. sekvenci koje deluju na isti ili različit način) koje daju otpornost na glifosat poznatu u oblasti tehnike da bi se dobile biljke i biljne kulture tkiva sa superiornom otpornošću na glifosat.
b. Otpornost na acetolaktat sintetazni ( ALS) inhibitor
Obezbeđene su biljke koje su otporne na glifosat/ALS inhibitor koje sadrže polinukleotid koji kodira polipeptid koji daje otpornost prema glifosatu i dalje obuhvata polinukleotid koji kodira peptid otporan na acetolaktat sintetazni (ALS) inhibitor. Ovde korišćen izraz 'polipeptid otporan na ALS inhibitor' obuhvata bilo koji polipeptid koji kada se eksprimuje u biljci daje otpornost na bar jedan ALS inhibitor. Poznati su raznovrsni ALS inhibitori i uključuju, na primer, sulfonilureu, imidazolinon, triazolopirimidine, priimidinioksi(tio)benzoate i/ili sulfonilaminokarboniltriazolinon herbicide. Poznati su dodatni ALS inhibitori i ovde su dalje opisani. U oblasti tehnike je poznato da ALS mutacije spadaju u različite klase u odnosu na otpornost na sulfoniluree, imidazolinone, triazolopirimidine i pirimidinil(tio)benzoate, i uključujući mutacije imaju sledeće karakteristike: (1) široku otpornost na sve četiri od ovih grupa; (2) otpornost na imidazolinone i pirimidinil(tio)benzoate; (3) otpornost na sulfoniluree i triazolopirimidine; i (4) otpornost na sulfoniluree i imidazolinone.
Mogu biti korišćeni različiti peptidi koji su otporni na ALS inhibitore. U nekim izvođenjima polinukleotidi koji su otporni na ALS inhibitor sadrže bar jednu mutaciju nukleotida koja rezultuje u promeni jedne amino kiseline u ALS polipeptidu. U specifičnim izvođenjima, promena se dešava u jednom od sedam suštinski konzervativnih regiona acetalaktat sintetaze. Videti, na primer, Hattoriet al.(1995)Molecular Genetics and Genomes246:419-425; Leeet al.(1998)EMBO Journal 7:1241-1248; Mazuret al.(1989)Ann. Rev. Plant Phys.40:441-470; i US patent br. 5,605,011, od kojih je ovde svaki uključen kao referenca u svojoj celovitosti. Polipeptid koji je otporan na ALS inhibitor može biti kodiran sa, na primer, SuRA ili SuRB lokusom ALS. U specifičnim izvođenjima, peptid koji je otporan na ALS inhibitor obuhvata C3 ALS mutant, HRA ALS mutant, S4 mutant ili S4/HRA mutant ili bilo koju njihovu kombinaciju. Poznato je da različite mutacije u ALS daju otpornost na različite herbicide i grupe (i/ili podgrupe) herbicida; videti npr. Tranel and Vvright
(2002)Weed Science50:700-712. Videti takođe, US patent br. 5,605,011, 5,378,824, 5,141,870 i 5,013,659 od kojih je svaki ovde uključen kao referenca u svojoj celovitosti. Videti takođe, SEQ ID br:65 koja obuhvata HRA sekvencu soje; SEQ ID br:66 koja sadrži HRA sekvencu kukuruza; SEQ ID br: 67 kojaobuhvata ArabidopsisHRA sekvencu; i SEQ ID br:86 koja sadrži HRA sekvenci koja se koristi u pamuku. HRA mutacija u ALS nalazi odgovarajuću upotrebu u jednom izvođenju pronalaska. Mutacija dovodi do proizvodnje polipeptida acetolaktat sintetaze koji je otporan na bar herniju jednog inhibitora ALS u poređenju sa prirodnim proteinom. Na primer, biljka koja eksprimuje polipeptid koji je otporan na ALS inhibitor može biti otporna na doze sulfoniluree, imidazolinona, triazolopirimidina, pirimidiniloksi(tio)benzoata i/ili sulfonilaminokarboniltriazolinon herbicida koji je bar 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 70, 80, 100, 125, 150, 200, 500 ili 1000 puta veća od doze herbicida koji bi izazvao oštećenje na odgovarajućoj kontrolnoj biljki. U nekim izvođenjima, peptid koji je otporan na ALS inhibitor obuhvata brojne mutacije. Dodatno, biljke koje imaju peptid otporan na ALS inhibitor mogu biti stvorene pomoću selekcije mutacija koja se javljaju u prirodi koje doprinose otpornosti na glifosat.
U nekim izvođenjima, peptid koji je otporan na ALS inhibitor doprinosti otpornosti na sulfonilureu i imidazolinonske herbicide. Sulfonilurea i imidazolinonski herbicidi inhibirajur rast viših biljaka blokiranjem acetolaktat sintetaze (ALS), takođe poznate kao acetohidroksi kisela sintetaza (AHAS). Na primer, biljke koje sadrže odgovarajuće mutacije u ALS( npr.S4 i/ili HRA mutacije su otporne na herbicide sulfoniluree. Proizvodnja biljaka otpornih na sulfoniluree i biljaka otpornih na imidazolinone je potpunije opisana u US patentu br. 5,605,011; 5,013,659; 5,141,870; 5,767,361; 5,731,180; 5,304,732; 4,761,373; 5,331,107; 5,928,937 i 5,378,824 i međunarodnoj objavi WO96/33270 koje su ovde uključeni celi kao reference za sve svrhe. U specifičnim izvođenjima, peptidi koji su otporni na ALS inhibitor obuhvataju acetolaktat sintetazu otpornu na sulfonamide (drugačije poznatu kao acetohidroksi kiselu sintetazu otpornu na sulfonamide) ili acetolaktat sintetazu otpornu na imidazolinone (drugačije poznatu kao acetohidroksi kiselu sintetazu otpornu na imidazolinone).
Biljka prema pronalasku koja sadrži bar jednu sekvencu koja daje otpornost na glifosat i bar jednu sekvencu koja daje otpornost na ALS inhibitor se ove naziva 'biljka otporna na glifosat/ALS inhibitor'. Biljka prema pronalasku koja sadrži bar jedan GAT polipeptid i bar jedan HRA polipeptid ovde se naziva 'GAT-HRA biljka'.
c. Dodana otpornost na herbicide
U nekim izvođenjima, obezbeđene su biljke koje imaju povećanu otpornost na glifosat i bar jedan herbicid ALS inhibitor, kao i, otpornost na bar jedan dodatni herbicid. U specifičnim izvođenjima, otpornost na dodatne herbicide je usled ekspresije bar jednog polipeptida koji daje otpornost na dodatni herbicid. U nekim izvođenjeima, kompozicija prema pronalasku (na pr. biljka) može sadržati dva, tri, četiri, pet, šest, sedam ili više osobina koje doprinose otpornosti na bar jedan herbicid, tako da biljka prema pronalasku može biti otporna na bar dve, tri, četiri, pet, šest ili sedam ili više različitih tipova herbicida. Prema tome, biljka prema pronalasku koja je otporna na više od dva različita herbicida može biti otprona na herbicide koji imaju različite načine dejstva i/ili različita mesta dejstva. U nekim izvođenjima, sve ove osobine su transgenske osobine, dok u drugim izvođenjima, bar jedna od ovih osobina nije transgenska.
U nekim od ovih izvođenja, svaki gen otpornosti na herbicid daje otpornost na različiti herbicid ili klasu ili podklasu herbicida. U nekim od ovih izvođenja, bar dva gena otpornosti na herbicid daju otpornost na isti herbicid ili članove iste klase ili podklase herbicicda. Prema tome, dalje su obezbeđene biljke koje imaju polinukleotide koji kodiraju polipeptid koji daje otpornost na glifosat i polinukleotid koji kodira polipeptid koji je otporan na ALS inhibitor koji dalje obuhvata bar jedan dodatni polinukleotid otporan na dodatni herbicid koji kada eksprimuje doprinosi otpornosti na dodatni herbicid. Takvi dodatni herbicdi, uključuju ali bez ograničenja samo na njih , acetil Co-A karboksilazni inhibitor kao što je kizalofop-P-etil, sintetski auksin kao što je kinklorak, herbicid protoporfirinogen oksidazni (PPO) inhibitor (kao što je sulfentrazon), herbicid inhibitor sinteze pigmenta kao što je hidroksifenilpiruvat dioksigenazni inhibitor (na pr. mezotrion ili sulkotrion), fosfinotricin acetiltransferaza ili fitoen desaturazni inhibitor kao diflufenikan ili inhibitor sinteze pigmenta. Razume se da pronalazak nije ograničen mehanizmom dejstva herbicida, dokle god je postignut cilj pronalaska( na pr.hcrbicidna otpornost na glifosat i bar na ALS inhibitor). Ovde, dalje su opisani dodatni herbicidi od interesa.
U nekim izvođenjima, kompozicije prema pronalasku dalje obuhvataju polipeptide koji daju otpornost na herbicide koji ihibiraju enzim glutamin sintetazu, kao što je fosfinotricin ili glufosinat( na pr. bargenili patgen). Glutamin sintetaza (GS) se javlja kao esencijalni enzim neophodan za razvijanje i život većine biljnih ćelija i inhibitori GS su toksični za biljne ćelije. Herbicidi glufosinata su razvijeni na osnovu toksičnog efekta usled inhibicije GS u biljkama. Ovi herbicicdi nisu selektivnii; to jest, oni ihbibiraju rast svih prisutnih različitih vrsta biljaka. Razvitak biljaka koje sadrže eksogenu fosfinotricin acetiltransferazu su opisni u US patenttima 5.969,213; 5,489,520; 5,550,318; 5,874,265; 5,919,675; 5,561,236; 5,648,477; 5,646,024; 6,177,616 i 5,879,903, koji su uključeni celi ovde referencom za sve svrhe. Takođe je opisana mutirana fosfinotricin acetiltransferaza koja ima ovu aktivnost.
U drugim izvođenjima, kompozicije prema pronalasku dalje obuhvataju polipeptide koji daju otpornost na herbicicde koji inihibiraju protoks (protoporfirinogen oksidazu). Protoks je neophodan za proizvodnju hlorofila, koji je neophodan za opstanak svih biljaka. Enzim protoks služi kao meta za različite herbicidne kompozicije. Ovi herbicidi takođe inhibiraju rast svih različitih vrsta prisutnih biljaka. Razvoj biljaka koje sadrže izmenjenu aktivnost protoksa koje su otporne na ove herbicide su opisani u US patentima br. 6,288,306; 6,282,837; i 5,767,373 i međunarodnoj objavi WO 01/12825, koji su uključeni ovde celi kao refernaca za sve svrhe.
U drugim izvođenjima, kompozicije prema pronalasku mogu sadržati polipeptide koji obuhvataju druge vidove otpornosi na herbicide. Na primer, hidroksifenilpiruvatdioksigenaze su enzimi koji katalizuju reakciju u kojoj se parahidroksifenilpiruvat (HPP) transformiše u homogentistat. Molekuli koji inhibiraju ovaj enzim i koji se vežu za enzim u cilju inhibicje transformacije HPP u homogentistat su korisni kao herbicidi. Biljke otporne na izvesne herbicide su opisane u US patentima br. 6,254,968; 6,268,549; i 6,069,115; i međunarodnoj objavi WO 99/23886, koji su ovde uključeni celi kao referenca za sve svrhe. Takođe je opisana mutirana hidroksifenilpiruvatdioksigenaza koja ima ovu aktivnost.
d. Fragmenti i Varijante sekvenci koji daju otpornost na herbicicde
U zavisnosti od konteksta 'fragment' se odnosi na deo polinukleotida ili deo aminokiselinske sekvence i prema tome na protein koji one kodiraju. Fragmenti polinukleotida mogu kodirati proteinske fragmente koji zadržavaju biološku aktivnost originalnog proteina i prema tome daju otpornost na herbicicde. Prema tome, fragmenti nukleotidne sekvence mogu biti u opsegu od bar oko 20 nukleotida, oko 50 nukleotida, oko 100 nukleotida i do pune dužene polinukleotida koji kodira polipetid herbicidne otpornosti.
Fragemet polinukleotida herbicidne otpornosti koji kodira biološki aktivan deo polipeptida otpornog na herbicicd će kodirati bar 15, 25, 30, 50, 100, 150, 200 ili 250 susednih amino kiselina, ili svih amino kiselina prisutnih u polipeptidu otpornom na herbicid u punoj dužini. Biološki aktivan deo polipeptida otpornog na herbicid može biti pripremljen izolovanjem dela polinukleotida otpornog na herbicicd, koji eksprimuje kodirani deo polipeptida otpornog na herbicid( na pr.rekombinantnom ekspresijomin vitro)i procenivanjem aktivnosti kodiranog dela polinukleotida otpornog na herbicid. Polinukleotidi koji su fragmenti polinukleotida otpornog na herbicid obuhvataju bar 16, 20, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300 ili 1400 susednih nukleotida ili do broja polinukleotida prisutnih u polinukleotidu otpornom na herbicid cele dužine.
Izraz 'Varijante' odnosi se na u suštini slične sekvence. Za polinukleotide, varijanta obuhvata polinukleotide koji imaju delecije( tj.skraćenja) na 5' i/ili 3' kraju; delecije i/ili adicije jednog ili više nukleotida na jednom ili više unutrašnjih mesta u prirodnom polinukleotidu; i/ili supstitucije jednog ili više nukleotida na jednom ili više mesta u prirodnom polinukleotidu. Ovde korišćen 'prirodni' polinukleotid ili polipeptid obuhvata nukleotidnu sekvencu koja se javlja u prirodi ili amino kiselinsku sekvencu, respektivno. Za polinukleotide, konzervativne varjante uključuju sekvence koje, zbog degeneracije genetskog koda, kodiraju amino kiselinske sekvence polipeptida otpornog na herbicicde. Alelne varijante koje se javljaju u prirodi kao što su one koje mogu biti identifikovane sa upotrebom dobro poznatih tehnika molekularne biologije, kao, na primer, sa polimeraznom lančanom reakcijom (polvmerase chain reaction - PCR) i hibridizacionim tehnikama. Varijantni polinukleotidi takođe uključuju polinukleotide koji su sintetički dobijeni, kao što su oni stvoreni, na primer, korišćenjem mutageneze usmerene na mesto ili 'mešanja'
(schuffling). Generalno, varijante odgovarajućih polinukleotida imaju bar oko 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili više identične sekvence sa odgovarajućim polinukleotidom kao što je određeno programima poravnavanja sekvence i parametrima koji su ovde dalje opisani.
Varijante odgovarajućih polinukleotida( tj.referentnog polinukleotid) mogu takođe biti procenjivane upoređivanjem procenta identičnosti sekvence između polipeptida kodiranog varijantnim polinukleotidom i polipeptida kodiranim referentnim polinukleotidom. Procenat identičnosti sekvence između bilo koja dva polipeptida može biti izračunata korišćenjem programa poravnanja sekvence i prametrima opisanim ovde. Gde bilo koji dati par polinukleotida prema pronalasku je procenjivan upoređivanjem procenta identičnosti sekvence deljene od strane dva kodirana polipeptida, a procenat identičnosti sekvence između dva kodirana polipeptida je bar oko 405, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili više identičnosti sekvence.
'Varijantni' protein odnosi se na protein koji potiče iz prirodnog i/ili originalnog proteina delcecijom (takozvanim skraćenjem) jedne ili više amino kiselina na N-terminalnom i/ili C-terminalnom kraju proteina; delecije i/ili adicije jedne ili više amino kisleina na jednom ili više unutrašnjih mesta u proteinu; ili supstitucija jedne ili više amino kiselina najednom ili više mesta u proteinu. Varijantni proteini obuhvaćeni prikazanim pronalaskom su biološki aktivni, tako da će nastaviti da poseduju željenu aktivnost otpronosti na herbicid kao što je ovde opisano. Biološki aktivne varijante polipeptida otpornih na herbicicde prema pronalasku će imati bar oko 40%, 45%, 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili više identičnosti sekvence prema amino kiselinskoj sekvenci za prirodni protein kao što je određeno programom poravnanja sekvence i ovde dalje opisanim parametrima. Biološki aktivna varijanta polipeptida otpornog na herbicid može se razlikovati od polipeptida u nekoliko 1-15 amino
kiselinskih ostataka, 1-10, kao što je 6-10, nekoliko kao što je 5, nekoliko kao što je 4, 3, 2 ili čak 1 amino kiselinski ostatak. Varijante polipeptida otporne na herbicide kao i na polinukleotide koji kodiraju ove varijante su poznati u stanju tehnike.
Peptidi koji su otporni na herbicide mogu biti izmenjeni na različite načine uključujući amino kiselinske supstitucije, delecije, skraćenja i umetanja. Postupci za ovakve manipulacije su opšte poznati u tehnici. Na primer, varijante amino kiselinske sekvence i fragmenti peptida koji su otporni na herbicide mogu biti pripremljeni mutacijom u kodirajućem polinukleotidu. Postupci za mutagenezu i polinukleotidne zamene su dobro poznati u tehnici. Videti na primer Kunkel (1985)Proc. Natl. Acad Sci. USA82: 488-492; Kunkelet al.(1987)methods in Enzymol.154: 367-382; US Patent br. 4,873,192; Walker and Gaastra, eds. (1983)Techniques in Molecular Biology(MacMillan Publishing Companv, New York) i reference citirane u njima. Vodič za supstitucije amino kisleina koje ne utiču na biološku aktivnost proteina od interesa mogu se naći u modelu Davhoffet al.(1978)Atlas of Protein Sequence and Structure(Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC), koji je ovde uključen kao referenca. Mogu biti učinjene konzervativne supstitucije, kao što je izmena amino kiseline sa drugom koja ima slične osobine. Osoba iz struke bi procenila da aktivnost peptida otpornog na herbicide može biti procenjivana rutinskim testovima za odabiranje. To jest, aktivnost može biti procenjena određivanjem da li je transgenska biljka ima povećanu tolerantnost na herbicide, na primer, kao što je prikazano u radnom primeru 1, ili sain vitrotestom, kao što je proizvodnja acetilglifosfata iz glifosata sa GAT polipeptidom (videtina pr.WO 02/36782).
Varijantni polinukleotidi i polipeptidi takođe obuhvataju sekvence i proteine koji potiču od mutagenih i rekombinantnih postupaka kao što je DNK mešanje. Sa takvim postupkom, jedan ili više različitih peptida otpornih na herbicid koji kodiraju sekvence mogu biti obrađeni da stvore nove polipeptide otporne na herbicid koji poseduje željene osobine. Na sličan način, biblioteke rekombinantnih proteina su stvorene od populacije srodnih sekvenci polinukleotida koji obuhvataju regione sekvenci koje imaju suštinski identičnost sekvence i mogu biti homologo rekombinovanein vitroiliin vivo.Na primer, korišćenjem ovog prilaza, motivi sekvenci koje kodiraju domen od interesa mogu biti mešane između polipeptida sa otponošću na herbicide i drugim poznatim genima, da bi se dobio novi gen koji kodira protein sa poboljšanim osobinama od interesa, kao što je Kmu slučaju enzima. Strategije za takvo DNK mešanje su poznate u tehnici. Videti na primer, Stemmer
(1994)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:10747-10751; Stemmer (1994)Nature370:389-391; Crameriet al.(1997)Nature Biotech.15:436-438; Mooreet al.(1997)J. Mol. Biol.272: 336-347; Zhanget al. ( 1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA94: 4504-4509; Crameriet al.(1998)Nature391:288-291; i US patent br. 5,605,793 i 5,837,458.
Sledeći izrazi su korišćeni da opišu odnos sekvence između dva ili više polinukleotida ili polipeptida: (a) 'referentna sekvenca' (b) 'komparativni prozor' (c) 'identičnost sekvence' i (d)' procenat identičnosti sekvence'. (a) Ovde korišćen izraz 'referentna sekvenca' je definisana sekvenca korišćena kao osnova za upoređivanje sekvence. Referentna sekvenca može biti podset ili cela navedena sekvenca; na primer, kao segment C-DNK pune dužine ili sekvence gena, ili kompletne cDNK ili sekvence gena. (b) Ovde korišćen izraz 'uporedni prozor' poziva se na susedni i specifični segment polinukleotidne sekvence, gde polinukleotidna sekvenca u komparativnom prozoru može sadržati adicije ili delecije (na pr. praznine) u poređenju sa referentnom sekvencom (koja ne sadrži adicije ili delecije) za optimalno poravnavanje dva polinukleotida. Generalno, komparativni prozor je dužine bar 20 uzastopnih susednih nukleotida i opciono može biti 30, 40, 50, 100 ili duži. Ljudi iz struke znaju da da bi se izbegla visoka sličnost sa referentnom sekvencom usled uključenih praznina u polinukleotidnu sekvencu, 'kazna' za praznine se tipično unosi i oduzima se od broja poklapanja.
U tehnici su dobro poznati postupci poravnavanja sekvenci radi upoređivanja. Prema tome, određivanje procenta identičnosti sekvence bilo koje dve sekvence može biti postignuto korišćenjem matematičkog algoritma. Ne-ograničavajući primeri takvih matematičkih algoritama su algoritmi Myers-a i Miller-a (1988)CABIOS:11-17; algoritam lokalnog poravnavanja od Smithet al.(1981)Adv. Appl. Maih.2:482; algoritam opšteg poravnavanja od Needleman-a i Wunsch (1970)J. Mol. Biol. 48:443-453; postupak pretraživanja lokalnog poravnavanja od Pearson-a i Lipman-a (1988)ProcNatl. Acad. Sci.85: 2444-2448; algoritam Karlin i Altschul (1990)Proc. Natl. Acd. Sci. USA87: 2264-2268, modifikovan kao u Karlin i Altschul (1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA90:5873-5877.
Kompijuterska primerna ovih matematičkih algoritana može biti korišćena za upoređivanje sekvenci za određivanje identiteta sekvence. Takva primena uključuje, ali bez ograničenja: CLUSTAL u PC/Gene programu (nabavljen od Intelligenetics Mountain View, California); ALIGN program (Verzija 2.0) i GAP, BESTFIT, BLAST; FASTA i TFASTA u GCG Wisconsin Genetics Sofhvare Package, Version 10 (nabavljen od Accelrys Inc. 9685 Scranton Road, San Diego, California, USA). Poravnavanja pomoću ovih programa mogu biti izvedena korišćenjem podrazumevajućih parametara. CLUSTAL program je dobro opisan kod Higginset al.(1988)Gene73:237-244 (1988); Higginset al.(198905/05 5:151-153;Corpetet al.(1988)Nucleic Acid Res.16:10881-90; Huanget al.(1992)CABIOS8: 155-65; i Pearsonet al.(1994)Meth. Mol. Biol. 24:307-331. ALIGN progran je zasnovan na algoritmu Myers-a i Miller-a (1988)supra.PAM120 tabela težine ostataka, 'kazna' za dužinu praznine 12 i 'kazna' za praznine 4 mogu biti korišćeni sa ALIGN programom kada se porede amino kiselinske sekvence. BLAST programi Altschulet al.
(1990)J. Mol. Biol.215:403 su zasnovani na algoritmu Karlin i Altschul (1990)supra.BLAST nukleotidna pretraživanja mogu biti izvedena sa BLASTIN programom, rezultat = 100, dužina reći =12, da bi se dobila homologa nukleotidna sekvenca nukleotidnoj sekvenci koja kodira protein prema pronalasku. BLAST proteinsko pretraživanje može biti izvedeno sa BLSDTX programom, rezultat = 50, dužina reči = 3, da bi se se dobila homologna amino kiselinska sekvenca sa proteinom ili polipeptidom prema pronalasku. Da bi se postiglo poravnavnje praznina za svrhe upoređivanja, Gappped BLAST (u BLASTu 2.0) može biti korišćen kao što je opisano u Altschulet al.(1997)Nucleic Acids Res.25:3389. Alternativno, PSI-BLAST (u BLAST 2.0) može biti korišćen da se izvede ponovo pretraživanje koje otkriva udaljene odnose između molekula. Videti Altschulet al.
(1997)supra.Kada se koristi BLAST, Gapped BLAST, PSI-BLAST, mogu biti korišćeni podrazumevajući prametri odgovarajućih programa( na pr.BLASTN za nukleotidne sekvence, BLASTX za proteine). BLAST softver je javno dostupan naNCBI web lokaciji. Poravnavanje može takođe biti izvedeno ručnim pregledanjem. Ukoliko nije drugačije navedeno, ovde obezbeđene vrednosti identičnost sekvence/sličnosti se odnose na vrednosti dobijene korišćenjem GAP Verzije 10 pomoću sledećih parametara: % identičnosti i % sličnosti za nukleotidnu sekvencu korišćenjem GAP težine od 50, težine dužine 3 i nwsgapdna.cmp matrice za procenu; % identičnosti i % sličinosti za amino kiselinsku sekvencu korišćenjem GAP težine 8 i težine dužine 2 i BLOSUM62 matrice za procenu ili bilo kog njegovog ekvivalentnog programa. Pod ,ekvivalentnim programom' se podrazumeva bilo koji program za poređenje sekvence, za bilo koje dve sekvence koje su u pitanju, koji stvara poravnavnje identičnih nukleotidnih ili amino kiselinskih ostatka koji se slažu i identični procenat sekvence identičnosti kada se porede sa odgovarajućim poravnavanjem koje je stvoreno sa GAP verzijom 10. GAP koristi algoritam Needleman-a i Wunsch-a (1970)J. Mol. Biol.48:443-453, da bi se našlo poravnavanje dve kompletne sekvence koje maksimiziraju broj slaganja i smanjuju broj praznina. GAP uzima u obzir sve moguća poravnavanja i položaje praznina i stvara poravnavanja sa najvećim brojem sparivanja baza i nekoliko praznina. Omogućava određivanje 'kazne' za otvaranje praznine i 'kazne' za produživanje praznine u jedinicama sparenih baza. GAP mora ostvariti dobitak u broju sparivanja 'kazne' za stvaranje praznina za za svaku umetnutu prazninu. Ukoliko je izabrana 'kazna' za produživanje praznine veća od nule, GAP mora dodatno napraviti korist za svaku umetnutu prazninu, dužina praznine puta 'kazna' za produživanje praznine. Podrazumevajuće vrednosti 'kazne' za stvaranje praznina i vrednosi 'kazne' za produživanje praznine u Verziji 10 GCG Winsconsin Genetics Softvvare Package za proteinske sekvence su 8 i 2, respektivno. Za nukleotidne sekvence podražumevajuća 'kazna' za stvaranje praznine je 50, dok je podrazumevajuća 'kazna' za produživanje praznine 3. 'Kazne' za stvaranje praznine i produživanje praznine mogu biti izražene kao celi broj izabrane iz grupe celih brojeva od 0 do 200. Prema tome, na primer 'kazne' za stvaranje praznine i produživanje praznine, mogu biti 0, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 ili više. GAP predstavlja jedan član familije najboljih poravnavanja. Može biti mnogo članova ove familije, ali ni jedan drugi član nema bolji kvalitet. GAP pokazuje četiri činioca zaslužna za poravnavanje: Kvalitet, Odnos, Identičnost i Sličnost. Kvalitet je metarski maksimiziran u cilju poravnavanja sekvenci. Odnos je kvalitet podeljen brojem baza u kraćem segmentu. Procentna identičnost je procenat simbola koji je u stvari sparen. Procentna sličnost je procenat simbola koji su slični. Simboli koji su preko puna praznina se ne uzimaju u obzir. Sličnost je postignuta kada vrednost matrice za procenu za par simbola je veći od ili jednak 0.50, pragu sličnosti. Matrica za procenu korišćena u Verziji 10 GCG Winsconsin Genetics Software Package je BLOSUM62 (videti Henikoff i Henikoff (1989)Proc. Natl. Acad. Sci. USA89:10915). (c) Ovde korišćen izraz 'identičnost sekvence' ili 'identičnost' u konetekstu dve polinukleotidne ili polipeptidne sekvence se poziva na ostatke u ove dve sekvence koji su isti kada su poravnti za maksimalno predstavljanje preko navedenog komparativnog prozora. Kad je korišćen procenat identičnosti sekvence u vezi sa proteinima razume se da položaji ostataka koji nisu identični se često razlikuju na osnovu konzervatitnih amino kiselinskih supstitucija, gde amino kiselinski ostatci su supstituisani sa drugim amino kiselinskim ostatcima sa sličnim hemijskim osobinama( na pr.naelektrisanje ili hidrofobnost) i prema tome ne menjaju funkcionalne osobine molekula. Kada se sekvenca razlikuje u konzervativnim supstitucijama, procenat identičnosti sekvence može biti prilagođen na gore da ispravi konzervativnu prirodu supstitucije. Sekvence koje se razlikuju u takvim konzervativnim supstitucijama se kaže da imaju 'slične sekvene' ili su 'slične'. Sredstva za ovakva prilagođavanja su dobro poznata ljudima iz struke. Tipično ovo uključuje beleženje konzervativnih supstitucija kao parcijalnog pre nego potpunog nesparivanja, na taj način povećavajući procenat identičnosti sekvence. Prema tome, na primer, gde su date identične amino kiseline rezultat je 1 i rezultat ne-konzervativne supstitucije je 0, a konzervativnoj supstituciji dat je rezultat između 0 i 1. Beleženje rezultata konzervativnih supstitucija je izračunato,na pr.ugrađeno u program PC/GENE (Intelligenetics, Mountain View, California). (d) Ovde korišćen izraz 'procenat identičnosti sekvence' označava vrednost određenu upoređivanjem dve optimalno poravnate sekvence prema komparacionom prozoru, u kome deo polinukleotidne sekvence u komparacionom prozoru može sadržati adicije ili delecije( na pr.praznine) pri poređenu sa referentnom sekvencom (koja ne sadrži adicije ili delecije) za optimalno poravanavanje dve sekvence. Procenat je izračunat određivanjem broja položaja u kojima se javljaju identične nukleinske baze ili amino kiselinski ostaci u obe sekvence da bi se dobio broj sparenih položaja, deljenjem broja sparenih položaja sa ukupnim brojem položaja u komparacionom prozoru i množenjem rezultata sa 100 da bi se dobio procenat identičnosti sekvence. Upotreba izraza 'polinukleotid' nema nameru da se ograniči na polinukleotide koje sadrži DNK. Ljudi iz struke će znati da polinukleotidi mogu sadržati ribonukleotide i kombinacije ribonukleotida i dezoksiribonukleotida. Takvi dezoksiribonukleotidi i ribonukleotidi uključuju oba i prirodne molekule i sintetičke analoge. Prema tome, polinukleotidi takođe obuhvataju sve oblike sekvenci uključujući, ali bez ograničenja, jednolančane oblike, dvolančane oblike, strukture ukosnice, stabljike, petlje i slično.
e. Otpornost na herbicide
'Herbicid' je hemikalija koja izaziva privremeno ili trajno oštećenje biljke. Neograničavajući primeri herbicida koji se mogu koristiti u različitim postupcima i kompozicijama pronalaska su dole diskutovani do detalja. Herbicid može biti u biljci ili može delovati na biljku bez da je u njoj ili njenoj ćeliji. 'Aktivni sastojak' je hemikalija u herbicidnoj formulaciji primarno odgovorna za njenu fitotoksičnost i koja je identifikovana kao aktivna supstanca na etiketi proizvoda. Informacija na etiketi proizvoda je dostupna u US Enviromental Protection Agency i ažurira 'on line' na uri oaspub.epa.gov/pestlabl/ppls.own; informacija sa etikete proizvoda je takođe dostupna 'on line' na uri www. cdms. net. Izraz 'ekvivalent kiseline' izražava odnos ili kvantitet herbicidno aktivne osnovne kiseline. Na primer, 2,4-D kiselina je često formulisana u obliku natrijumove ili amino soli
odgovarajući stupanj razvitka (na pr. svilanje, cvetanje ili raznošenje polena) ili vremena proteklog dok se biljka oporavi od tretiranja sa odgovarajućim hemikalijama i/ili herbicidom.
U pravljenju ovih procena, odgovarajuće vrednosti mogu biti procenjene do odgovarajućeg stepena oštećenja tako da statistička analiza ili kvantitativno upoređivanje može biti učinjeno. Upotreba opsega i vrednosti da bi se opisao odgovarajući stepen oštećenja su poznati u tehnici i mogu biti korišćeni bilo koji pogodni opseg ili skala. Na primer, rezultat herbicidne povrede (takođe nazivan rezultat otpornosti) može biti procenjivan kao što je prikazano u Primeru 1 korišćenjem skale iznete u Tabeli 7. U ovoj skali ocena 9 ukazuje da herbicidni tretman nije utcao na usev,tj.da ne postoji smanjenje u usevu niti su primećena oštećenja posle tretmana sa herbicicdom. Prema tome, u ovoj skali, ocena 9 ukazuje da usev nije pokazao oštećenje usled herbicida i prema tome da je usev otporan na herbicid. Kao što je gore pokazano, otpornost na herbicid je takođe pokazana drugom occnom u ovoj skali, gde odgovarauća kontrolna biljka pokazuje niži rezultat na skali, ili gde grupa odgovarajućih kontrolnih biljaka pokazuju statitstički niži rezultat u odgovoru na tretiranje herbicidom nego grupa izloženih biljaka.
Oštećenje izazvano sa herbicidima ili drugim hemikalijama može biti procenjivano u različitim vremenskim intervalima posle tretiranja biljke sa herbicidom. Cesto, oštećenje je procenjeno u vreme kada kontrolna biljka pokazuje maksimalno oštećenje. Ponakad, oštećenje je procenjeno posle vremenskog perioda u kome kontrolna biljka koja nije tretirana sa herbicidom ili drugom hemikalijom je merljivo porasla i/ili se razvila u poređenju sa veličinom ili stupnjem u kome je primenjeno tretiranje. Oštećenje može biti procenjeno u različito vreme, na primer, 12 sati ili 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 dana ili tri nedelje, četiri nedelje ili duže posle tretiranja biljke sa herbicicdom. Bilo koje vreme za procenu je pogodno dokle god omogućava detekciju razlika kao odgovor na tretiranje testiranih i kontrolnih biljaka.
Herbicid 'značajno ne oštećuje' biljku kada ili ne utiče na biljku ili kada utiče na biljku ali se ona kasnije oporavi, ili kada ima štetan uticaj koji je izjednačen, na primer, sa uticajem odgovarajućeg herbicida na korove. Prema tome, na primer, ratarska biljka nije 'značajno oštećena sa' herbicidom ili drugim tretmanom ukoliko pokazuje manje od 50%, 40%, 30%), 25%, 20%), 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% ili 1% smanjenja u bar jednom od pogodnih parametara koji su indikativni za zdravlje biljke i/ili produktivnost u poređenju sa odgovarajućom kontrolnom biljkom( na pr.netretiranom ratarskom biljkom). Pogodni parametri koji su pokazatelji zdravlja biljke i/ili produktivnosti uključuju na primer, visinu biljke, težinu biljke, dužinu lišća, vreme potrebno za odgovarajući stupnja razvića, cvetanje, prinos, proizvodnju semena i slično. Procena parametara može biti vizuelnim pregledanjem i/ili statističkom analizom bilo kog pogodnog parametra. Upoređivanje može biti učinjeno vizuelnim pregledanjem i/ili statističkom analizom. Prema tome, ratarska biljka nije 'značajno oštećena sa' herbicidom ili drugim tretmanom ukoliko pokazuje smanjenje bar jednog parametra, ili je smanjenje po prirodi privremeno i biljka se brzo potpuno opravi posle 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje ili 6 nedelja.
Suprotno, biljka je zanačajno oštećena sa herbicidom ili drugim tretmanom ukoliko pokazuje više od 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 110%, 120%, 150%, 170% smanjenja bar jednog pogodnog parametra koji je pokazatelj zdrave biljke i/ili produktivnosti u poređenju sa odgovarajućom kontrolnom biljkom( na pr.netretirani korov iste vrste). Prema tome, biljka je značajno oštećena ukoliko pokazuje smanjenje bar jednog parametra i biljka se potpuno ne oporavi posle 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje ili 6 nedelja.
Oštećenje koje je posledica herbicida ili drugog hemijskog tretmana biljke može biti procenjena vizuelnim pregledanjem osobe iz štuke i može biti procenjena statističkom analizom pogodnih parametara. Biljka koja je procenjivana se ovde naziva 'testirana biljka'. Tipično, odgovarajuća kontrolna biljka je ona koja eksprimuje isti protein(e) otpornosti na herbicid kao biljka koja je procenjivana za otpornost na herbicide (tj. 'testirana biljka'), ali koja nije bila tretirana sa herbicicdom. Na primer, u procenivanju biljke koja je otporna na herbicicde prema pronalasku koja daje otpornost na glifosat i ALS inhibitor, odgovarajuća kontrolna biljka bi bila biljka koja eksprimuje svaku od ovih sekvenci, ali nije tretirana sa herbicidom. U nekim okolnostima, kontrolna biljka je ona koja je podvrgnuta istom tretmanu sa herbicidom kao biljka koja je procenjivana( tj.testirana biljka), ali koja ne eksprimuje enzim koji obezbeđuje otpornost na herbicid od interesa u testiranoj biljci. Osoba iz struke će biti sposobna da napravi, izvede i proceni prikladno kontrolisan eksperiment da bi se procenila otpornost na herbicid biljaka od interesa, uključujući selekciju odgovarajućih testiranih biljka, kontrolnih biljaka i tretmana.
Prema tome, 'testirana biljka ili biljna ćelija' je ona u kojoj su genetske alternacije bile postignute na bar jednom genu od interesa, ili je biljka ili biljna ćelija koja potiče iz biljke ili ćelije tako izmenjene, a koja sadrži alternaciju. Genetska alternacija može biti uvedena u biljku oplemenjivanjem ili transformacijom. 'Genetska alternacija' ima nameru da označi njen gen ili mutaciju koja daje fenotip biljke koja se razlikuje od fenotipa biljke koja ne sadrži genetsku alternaciju.
'Kontrola' ili 'kontrolna biljka' ili 'kontrolna biljna ćelija' predstavlja referentnu tačku u merenju izmena u fenotipu predmetnih biljaka ili biljnih ćelija, i može biti bilo koja pogodna biljka ili biljna ćelija. Kontrolna biljka ili biljna ćelija mogu sadržati, na primer: (a) prirodnu biljku ili ćelijutj.istog genotipa kao polazni materijal za genetske alternacije koje dovode do predmetne biljke ili ćelije; (b) biljka ili biljna ćelija istog genotipa kao polazni materijal ali koja je bila transformisana sa nultim konstruktom( tj.sa konstuktom koji nema efekta na osobinu od interesa, kao što je konstrukt koji sadrži marker gen); (c) biljka ili biljna ćelija koja je netransformisani segregant među potomstvom izloženih biljka ili biljnih ćelija; (d) biljka ili biljna ćelija koja je genetski identična sa predmetnom biljkom ili biljnom ćelijom koja nije izložena istom tretmanu( na pr.tretmanu sa herbicidom) kao predmetna biljka ili biljna ćelija; (e) predmetna biljka ili biljna ćelija pod uslovima u kojima gen od intersa nije eksprimovan; ili (f) predmetna biljka ili biljna ćelija, pod uslovima u kojima nije izložena odgovarajućem tretmanu kao što je na primer, herbicid ili kombinacija herbicida i/ili drugih hemikalija. U nekim slučajevima odgovarajuća kontrolna biljka ili kontrolna biljna ćelija mogu imati različite genotipove u odnosu na predmetne biljke ili biljne ćelije, ali mogu deliti karakteristike osetljivosti na herbicide polaznog materijla za genetske aleternacije koje dovode do predmetnih biljaka ili ćelija( videti na pr.,Green (1998)Weed Technology12: 474-477; Green i Ulrich (1993)Weed Science41: 508-516). U nekim slučajevima, odgovarajuća kontrolna kukuruzna biljka sadrži NK603 slučaj (Nielsonet al.(2004)European Food Research and Technology219:421-427 i Ridlevet al.(2002)Journal of Agriculture and Food Chemistry50:7235-7243) elitna biljka prirodno tvrdog stabla, P3162 biljka (Pioneer Hi-Bred International), 39T66 biljka (Pioneer Hi-Bred International) ili 34M91 biljka (Pioneer Hi-Bred International). U nekim slučajevima, odgovarajuća kontrolna biljka soje je biljka 'Jack' soje (Illinois Foundation Seed, Champaign, Illinois).
Biljke prema pronalasku eksprimuju polipeptide koji daju otpornost na glifosat i bar jedan drugi polipeptid koji daje otpornost na ALS inhibitor. Biljka prema pronalasku prikazuje bar jednu poboljšanu osobinu u odnosu na odgovarajuću kontrolnu biljku, kao što je na primer, poboljšana otpornost na herbicide, smanjeno stanište, povećana visina, smanjeno vreme zrenja i poboljšani prinos. Biljka ima poboljšane osobine kada pokazuje statistički značajnu razliku u odnosu na odgovarajuću kontrolnu biljku, gde je razlika u smeru koji predstavlja poboljšanje u odnosu na kontrolu biljku. Na primer, biljka ima poboljšane osobine kada pokazuje porast u prinosu koji je statistički značajan u poređenju sa kontrolnim biljkama i/ili kada pokazuje smanjenje oštećenja koje se javlja usled tretiranja herbicida. Tehnike za takvu procenu su poznate u oblasti tehnike. Bilo koje pogodne statističke analize mogu biti korišćene, kao što je na primer, ANO VA (dostupna kao komercijalni paket iz SAS Instituta, Inc., 100 SAS Campus Drive, Cary, NC).
/ Biljke
Ovde korišćeni izraz 'biljka' uključuje biljne ćelije, biljne protplaste, kulture ćelija biljnog tkiva iz kojih biljke mogu biti regenerisane, biljni kali ('calli'), biljne grupe, biljno tkivo i biljne ćelije koje su netaknute u biljci ili delovima biljke kao što su embioni, polen, ovule, semena, lišće, cveće, grane, voće, jezgra, klasje, klipovi, mahune, stabljike, korenje, vrhovi korenja, prašnice i slično. Zrno ima nameru da označava matično seme proizvedeno od komercijalnih uzgajivača za svrhe koje su drugačije od uzgajanja ili reprodukcije vrsta. Potomci, varijante i mutanti regenerisanih biljaka su takođe uključeni u obim pronalska, uz uslov da ovi delovi sadrže predstavljeni polinukleotid. Prema tome, pronalazak obezbeđuje transgensako seme proizvedeno od strane biljaka prema pronalaku.
Prikazani pronalazak može biti korišćen za transformaciju bilo koje biljne vrste, uključujući ali bez ograničenja, monokotiledone i dikotiledone. Primeri biljnih vrsta od interesa uključuju, ali bez ograničenja, kukuruz( Zea mays,na koji se ovde poziva kao na kukuruz),Brassicaspp.( na pr. B. napus, B. rapa, B. juncea).Naročito oneBrassicavrste korisne kao izvori uljanog semena (takođe poznatog kao canola - ulje Kanadske uljane repice), lan( Linumspp.), alfaalfa( Medicago sativa),riža( Oryza sativa),raž( Secale cereale),kineska šećerna trska( Sorghum bicolor, Sorghum vulgare),proso( na pr.crnačko proso( Pennisetum glaucum),proso( Panicum miliaceum),italijansko proso( Setaria italica),Afričko proso( Eleusine coracana)),suncokret( Helianthus annuus),šafranika( Carthamus tinetorius),pšenica( Triticum aestivum),soja( Glycine max),duvan( Nicotiana tabacum),krompir( Solanum tuberosum),kikiriki( Arachis hypogaea),pamuk( Gossypium barbadense, Gossypium hirsutum),slatki krompir( Ipomoea batatus),kasava( Manihot esculenta),kafa( Coffeaspp.), kokos( Cocos nucifera),ananas( Ananas comosus),limunovo drvo( Citrus spp.),kakao( Theobroma cacao),čaj( Camellia sinensis),banana( Musaspp.), avokado( Persea americana),smokva( Ficus casica),guava( Psidium guajavd),mango( Mangifera indica),maslina( Olea europaea),papaja( Carica papaya),kašu( Anacardium oceidentale),makadamija( Macadamia intergrifolid),badem( Prunus amygdalus),šećerna repa( Beta vulgaris),šećerna trska( Saccharumspp.), ovas, ječam, povrće, voće, ukrasno cveće, šećerna trska, četinari,Arabidopsis.
Povrće uključuje paradajz( Lycopersicon esculentum),zelenu salatu( na pr. Lactuca sativa),boraniju( Phaseolus vulgaris),pasulj( Phaseolus limensis),grašak( Lathyrusspp.) i članove rodaCucumiskao stoje krastvac (C.sativus),dinja ( C.cantalupensis)i mirisna dinja ( C.melo).Ukrasno cveće uključuje azaleju( Rhododendronsppj, hortenziju( Macrophylla hydrangea),hibiskus( Hibiscus rosasaneensis),ruže( Rosaspp.), lale( Tulipaspp.), žuti narcis( Narcissusspp.), petonije( Petunia hybrida),karanfil( Dianthus caryophyllus),mlečiku( Euphorbia pulcherrima)i hrizantemu.
Bilo koje drvo može biti uključeno. Četinari mogu biti uključeni u primeni ovog pronalaska uključujući na primer, borove kao što je 'loblollv' bor( Pinus taeda),'slesh' bor( Pinus elliotti),'ponderosa' bor( Pinus ponderosa),Kalifornijski bor( Pinus contorta)i Monterev bor( Pinus radiata) ;Douglas jela( Pseudotsuga menziesii) ;Zapadna kukuta( Tsuga canadensis) ;Sitka omorika( Picea glauca) ;sekvoja( Sequoia sempervirens) ;prave jele kao što je srebrna jela( Abies amabilis)i balzam jela( Abies balsamea) ;i kedar kao što je zapadni crveni kedar( Thuja plicata)i Aljaska žuti kedar( Chamaecyparis nootkatensis).Tvrda drva takođe mogu biti korišćena uključujući jasen, jasiku, bukvu, lipu, brezu, crnu trešnju, crni orah, divlji kesten, Američki kesten, Kanadsku topolu, svibu, brest, koprivić, hikori, zeleniku, drvo rogača, magnoliju, javor, hrast, topolu, crvenu jovu, 'redbud', 'royal paulovvnia', sasafras, 'sweetgum', 'svcamore', 'tupelo', vrbu, žutu topolu.
U specifičnim izvođenjima prikazanog pronalaska su ratarske biljke (na primer, kukuruz, alfaalfa, suncokret,Brassica,soja, pamuk, šafranika, kikiriki, kineska šećerna trska, pšenica, proso, duvan itd.)
Druge biljke od interesa uključuju žitarice koje daju važna seme od interesa, uljarice i leguminozne biljke. Seme od interesa uključuje zrnasta semena, kao što su kukuruz, žito, pšenica, ječam, rižu, kinesku šećernu trsku, rižu itd. Uljarice uključuju pamuk, soju, šafraniku, suncokret,Brassica,kukuruz, alfaalfa, palma, kokositd.Leguminozne biljke uključuju pasulj i grašak. Pasulj uključuje guar, rogač, peskavicu, soju, ukrasni pasulj, vignu, Azijski pasulj, lima pasulj, fava pasulj, sočivo, leblebiju itd.
Druge biljke od interesa uključuju travnate biljke iz roda Poa, Agrostis, Festuca, Lolium i Zoysia. Dodatno travnate biljke mogu biti iz podfamilije Panicoideae. Travnate biljke mogu dalje uključivati, ali bez ograničenja, modru travu( Bouteloua gracilis(H.B.K) Lag. Ex Griffiths); prerijsku travu( Buschloe dactyloids(Nutt.) Engelm.); Slender creeping red fescue( Festuca rubraspp. Litoralis) ;crvenkasta vlasulja( Festuca rubra) ;Co\ on\ dXbentgrass( Agrostis tenuisSibth.); ovsenica( Agrostis palustrisHuds.); grebenasta pirevina( Agropyron cristatum(L.) Gaertn.); Hard fescue( Festuca longifoliaThuill.); livadarka( Poa pratensisL.); Engleski ljulj( Lolium perenneL.); obična livadarka( Poa trivialisL.); Sideoats grama( Bouteloua curtipendulaMichx. Torr.); bezosna klasača( Bromus inermisLeyss.); barski vijuk( Festuca arundinaceaSchreb.); jednogodišnja livadarka( Poa annuaL.); Italijanski ljulj( Lolium multiflorumLam.); bela rosulja( Agrostis albaL.); Japanesc lawn grass( Zoysia japonicd) ;zubača( Cyndon dactylon; Cyndon spp.L.C. Rich;Cyndron transvaalensis) ;Seashore paspalum( Paspalum vaginatumSvvartz); Zoysiagrass - višegodišnje trave jugoistočne Azije( Zoysia spp.Willd;Zoysia japonicai Z.matrellavar.matrella) ;Bahiagrass( Paspalum notatumFlugge); ćilim trava( Axonopus affinisChase); Centipedegrass( Eremochloa ophiuroidesMunro Hack); Kikuyugrass( Pennisetum clandesinumHochst Ex Chiov); rosulja obična( Agrostis tenuistakođe poznat kaoA. capillaris) ;pasja rosulja( Agrostis canina) ;Engleski ljulj( Lolium perenne) ;i St. Aigustingrass( Stenotaphrum secundatumWalt. Kuntze). Dodatna trave uključuju konopljinu travu( Panicum virgatum).
g. Slaganje osobina i dodatne osobine od interesa
U nekim izvođenjima, polinukleotid koji daje otpornost na glifosat i otpornost na ALS inhibitor u biljkama prema pronalasku je planiran za molekulsko slaganje. U drugim izvođenjima, molekulsko slaganje dalje obuhvata bar jedan dodatni polinukleotid koji daje otpornost na treći herbicid. Dalje, ovde su opisane takve sekvence. U jednom izvođenju, sekvenca dalje otpornost na glufosinat i 2 u specifičnom izvođenju, sekvenca čini patent.
U drugom izvođenju, biljke otporne na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku obuhvataju jednu ili više osobina od interesa i u više specifičnih izvođenja, biljke su slagane sa bilo kojom kombinacijom polinukleotidnih sekvenci od interesa u cilju stvaranja biljka sa željenom kombinacijom osobina. Osobina, kada se ovde koristi, odnosi se na fenotip koji potiče od odgovarajuće sekvence ili grupe sekvenci. Na primer, polinukleotidi koji daju otpornost na herbicicd mogu biti složeni sa bilo kojim drugim polinukleotidom koji kodira polipeptide koji imaju pesticidnu i/ili insekticidnu aktivnost, kao što su toksični proteiniBacillus thuringiensis(opisani u US patentu br. 5,366,892; 5,747,450; 5,737,514; 5,723,756; 5,593,881;Geiser et al. (1986) Gene 48:109; Leeet al.(2003)Appl. Environ. Microbiol.69: 4648-4657( Vip3A) ;Galitzkyet al.(2001)Acta Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 57:1101-1109( Cry3Bbl) ;i Hermanet al.(2004)J. Agric. Food Chem.52: 2726-2734( CrylF),lecitini (Van Dammeet al.(1994)Plant Mol. Biol.24:825, pentin
(opisan u US patentu br. 5,981,722) i slično. Stvorene kombinacije mogu takođe uključivati višestruke kopije bilo kog od polinukleotida od interesa.
U nekim izvođenjima, polinukleotidi koji su otproni na herbicide iz biljaka otpornih na glifosat/ALS inhibitor (tj. biljke koje sadrže GAT i HRA) mogu biti složeni sa drugim osobinama otpronosti na herbicid da bi se stvorila transgenska biljka prema pronalasku sa još boljim osobinama. Drugi polinukleotidi koji su otporni na herbicide koji mogu biti korišćeni u takvim izvođenjima uključuju one koji daju otpornost na glifosat ili ALS inhibitore drugim načinom delovanja kao što je na primer, gen koji kodira glifosat oksido reduktazni enzim kao što je potpunije opisano u US patentu br. 5,776,760 i 5,463,175. Druge osobine koje mogu biti kombinovane sa polinukleotidima koji su otporni na herbicide iz biljaka koje su otporne na glifosat/ALS inhibitor (tj. kao što su GAT i HRA sekvence) uključuju one koji potiču iz polinukleotida koji daju biljci sposobnost da proizvode viši nivo 5-enolpiruvilšikimat-3-fosfat sintetaze (EPSPS), na primer, kao što je potpunije opisano u US patentu br. 6,248,876 BI; 5,627,061: 5,804,425; 5,633,435; 5,145,783; 4,971,908; 5,312,910; 5,188,642; 4,940,835; 5,866,775; 6,225,114 BI; 6,130,366; 5,310,667; 4,535,060; 4,769,061; 5,633,448; 5,510,471; Re. 36,449; RE 37,287 E; i 5,491,288; i međunarodne prijave WO 97/04103; WO 00/66746; WO 01/66704; i WO 00/66747. Druge osobine koje mogu biti kombinovane sa polinukleotidima koji su otporni na herbicide iz biljki koje su otporne na glifosat/ALS inhibitor (tj. kao što su GAT i HRA sekvence) uključuju one koje daju otpornost na sulfonilureu i/ili imidazolinone, na primer, kao što je potpunije opisano u US patenti br. 5,605,011; 5,013,659; 5,141,870; 5,767,361; 5,731,180; 5,304,732; 4,761,373; 5,331,107; 5,928,937 i 5,378,824; i međunarodna prijava WO 96/33270.
U nekim izvođenjima, polinukleotidi koji su otporni na herbicide iz biljaka otpornih na glifosat/ALS inhibitor (tj. kao što je GAT i HRA sekvenca) mogu biti složeni sa, na primer, hidroksifenilpiruvatdioksigenazama koji su enzimi koji katalizuju rekaciju u kojoj je parahidroksifenilpiruvat (HPP) transformisan u homogentistat. Molekuli koji inhibiraju ovaj enzim i koji vežu ovaj enzim u cilju inhibiranja transformacija HPP u homogentistat su korisni kao herbicidi. Osobine koje daju otpornost na takve herbicide kod biljaka su opisane u US patentu br. 6,245,968 BI; 6,268,549 i 6,069,115; i međunarodnoj objavi WO 99/23886. Drugi primeri pogodnih osobina otpornosti na herbicid koje mogu biti složene sa polinukleotidima otpornosti na herbicide biljaka otpornih na glifosat/ALS inhibitor (tj. takve GAT i HRA sekvence) uključuju ariloksialkanoat dioksigenazne polinukleotide (koji navodno daje otpornost na 2,4-D i druge fenoksi auksin herbicide kao i ariloksifeniloksipropionat herbicide kao što je opisano na primer, u WO2005/107437) i polinukleotide otporne na dikamb kao što je opisano, na primer, kod Hermanet al.(2005)J. Biol. Chem.280: 24759-24767.
Drugi primeri osobina otpornosti na herbicid koje mogu biti kombinovane sa polinukleotidima otpornim na herbicide iz biljaka otpornih na glifosat/ALS inhibitor (tj. GAT i HRA biljke) uključuju one koje daju polinukleotidi koji kodiraju eksogene fosfinotricin acetiltransferaze, kao što je opisano u US patentu br. 5,969,213; 5,489,520; 5,550,318; 5,874,265; 5,919,675; 5,561,236; 5,648,477; 5,646,024; 6,177,616 i 5,879,903. Biljke koje sadrže egzogenu fosfinotricin acetiltransferazu mogu pokazati poboljšanu otpornost na glufosinat herbicide, koji inhibiraju enzim glutamin sintetazu. Drugi primeri osobina otpornih na herbicide koji mogu biti kombinovani sa polinukleotidima otpornim na herbicide iz biljka otpornih na glifosat /ALS inhibitor (tj. GAT i HRA biljkama) uključuju one koje daju polinukleotidi koji daju izmenjenu protoporfirinogen oksidaznu (protoks) aktivnost, kao što je opisano u US patentu br. 6,288,306 BI; 6,282,387 BI i 5,767,373; i međunarodnoj objavi WO 01/12825. Biljke koje sadrže takve polinukleotide mogu pokazivati poboljšanu otpornost na bilo koju vrstu herbicida koji ciljaju protoks enzim (takođe se poziva kao na 'protoks inhibitore').
Drugi primeri osobina otpornosti na herbicide koje mogu biti kombinovani sa polinukleotidima otpornim na herbicide iz biljaka otpornih na glifosat/ALS inhibitor (tj. GAT i HRA biljaka) uključuju one koji doprinose otpornosti na bar jedan herbicid kod biljaka kao što su , na primer, kukuruz ili hudoletnica kanadska. Korovi otporni na herbicide su poznati u tehnici, kao i biljke čija osetljivost varira na odgovarajuće herbicide. Videti,na pr.Green i Williams (2004) 'Correlation of Corn( Zea mays)Inbred Response to Nicosulfuron and Mesotrione', poster predstavljen u WSSA Annual Meeting u Kansas City, Missouri, februara 9-12, 2004; Green (1998)Weed Technology12: 474-477; Green and Ulrich (1993)Weed Science41: 508-516. Osobine odgovorne za ovu otpornost mogu biti kombinovane oplemenjivanjem ili drugim postupcima sa polinukleotidima otpornim na herbicide biljaka otpornih na glifosat/ALS inhibitor (tj. GAT i HRA biljke) da bi se dobila biljka prema pronalasku kao i postupci za njenu upotrebu.
Na ovaj način, pronalazak obezbeđuje biljke koje su otpornije na glifosat i druge hemikalije ALS inhibitore i takođe obezbeđuju biljke koje su otpornije na herbicide kod kojih svaka od gore diskutovanih osobina doprinosi otpornosti. Prema tome, pronalazak obezbeđuje postupke za gajenje useva( tj.za selektivno suzbijanje korova u oblasti gajenja) koji obuhvata tretiranje u oblasti od interesa (na pr. polje za gajenje) sa bar jednim herbicidom na koga je biljka prema pronalasku otporna, kao što je na primer, glifosat, hemikalija ALS inhibitor, smeša hemikalija ALS inhibitora, ili smeša glifosata i hemikakalije ALS inhibitora. U nekim izvođenjima, postupci prema pronalasku dalje obuhvataju tretiranje sa dodatnim herbicidima na koje su biljke prema pronalasku otporne. U takvim izvođenjima, gerneralno postupci prema pronalasku dozvoljavaju selektivno suzbijanje korova bez značajnog oštećenja useva. Ovde korišćen izraz 'oblast gajenja' obuhvata region u kome neko želi da gaji biljku. Takva oblast gajenja uključuje, ali bez ograničenja, polje na kome se gaje biljke (kao što je ratarsko polje, letina, šumarak, kontrolisana šumu, polje za gajenje voća i povrća itd.), staklenik, komora za vešački uzgoj itd.
Osobine otpornosti na herbicide takođe mogu biti kombinovane sa bar jednom osobinom da bi se dobile biljke prema prikazanom pronalasku koje dalje obuhvataju kombinacije različitih željenih osobina uključujući, ali bez ograničenja, osobine poželjne za životinjsku hranu kao što je visoki sadržaj ulja (na pr. US patent br. 6,232,529); uravnotežen sadržaj amino kiselina( na pr.hordotionini (US patent br. 5,990,389; 5,885,801; 5,885,802; i 5,703,409; US patent br. 5,850,016); ječam bogat lizinom (Williamsonet al.(1987)Eur. J. Biochem.165:99-106; i WO 98/20122) i visoki sadržaj metioninskih proteina (Pedersenet al.(1986)J. Biol. Chem.261:6279; Kiriharaet al.
(1988)Gene71:359; i Musumuraet al.(1989)Plant Mol. Biol.12:123)); povećana svarljivost( na pr.modifikovani skladištem proteini (US prijava serijski br. 10/053,410 podneta 7 novembra 2001) i tioredoksini (US prijava serijskog br. 10/005,429 podneta 3 decembra 2001)); čiji su opisi ovde uključeni kao referenca. Poželjne kombinacije osobina takođe uključuju LLNC (niski sadržaj linolenske kiseline;videti na pr.Dyeret al(2002)Appl. Microbiol. Biotechnol.59:224-230) i OLCH (visok sadržaj oleinske kiseline; videti na pr. Fernadez-Moyaet al.(2005)J. Agric. Food Chem.53:5326-5330).
Osobine otpornosti na herbicide koje su od interesa mogu takođe biti kombinovane sa drugim poželjnim osobina kao što su na primer, geni detoksifikacije fumonizima i (US patent br. 5,792,931) avirulentni geni i geni otpornosti na bolesti (Joneset al.(1994)Science 266:789; Martinet al.(1993)Science262.1432; Mindrinoset al.(1994)Celi78:1089) i osobine poželjne za obrađivanje ili obrađeni proizvodi kao što su modifikovana ulja( na pr.geni desaturaze masnih kiselina (US patent br. 5,952,544; WO 94/11516)); modifikovani škrobovi( na pr.ADPG pirofosforilaze (AGPaze), sintetaze škroba (SS), enzime granjanja škroba (SBE) i enzimi smanjenja granjanja škroba (SDBE)); i polimeri ili bioplastike( na pr.US patent br. 5,602,321; beta-ketotiolaza, polihidroksibutirat sintetaza i acetilacetil-CoA reduktaza (Schubertet al.(1988)J. Bacteriol.170:5867-5847) olakšava ekspresiju polihidroksialkanoata (PHAs); čiji su opisi ovde uključeni kao reference. Neko može takođe kombinovati polinukletotide koji su otporni na herbicide sa polinukleotidima koji obezbeđuju poljoprivredne osobine kao što su muška sterilnost( na pr.US patent br.5.583,210), jačina stabljike, vreme cvetanja ili osobine transformacione tehnologije kao što su regulisanje ćelijskog ciklusa ili gensko ciljanje( na pr.WO 99/61619, WO 00/17364 i WO 99/25821; čiji su opisi ovde uključeni kao reference.
U drugom izvođenju, osobine otpornosti na herbicide od interesa mogu takođe biti kombinovane sa Rcgl sekvencom ili biološki aktivnom varijantom ili njegovim fragmnetom. Rcg 1 sekvenca je gen otpornosi drške korena na antrahnozu kukuruza. Videti na primer, US patentnu prijavu br. 11/397,153, 11/397,275 i 11/397,247 od kojih je svaka ovde uključena kao referenca.
Ove slagane kombinacije mogu biti stvorene bilo kojim postupkom uključujući, ali bez ograničenja, oplemenjivanje biljka sa bilo kojom konvencionalnom TopCross metodologijom ili genetskom transformacijom. Ukoliko su sekvence slagane u genetski transformisanim biljkama, polinukleotidne sekvence od interesa mogu biti kombinovane u bilo koje vreme i bilo kojim redom. Na primer, transgenska biljka koja sadrži jedan ili više poželjnih osobina koje mogu biti korišćene kao meta za uvođenje daljih osobina naknadnom transformacijom. Osobine mogu biti uvođene simultano u ko-transformacionom protokolu sa interesantnim polinukleotidima obezbeđenim bilo kojom kombinacijom transformacionih kaseta. Na primer, ukoliko će biti unete dve sekvence, dve sekvence mogu biti sadržane u odvojenim transformacionim kasetama (trans) ili sadržane u istoj transformacionoj kaseti (cis). Ekspresija sekvence može biti vođena sa istim promoterom ili različitim promoterima. U izvesnim slučajevima, može biti poželjno da se uvede transformaciona kaseta koja će potisnuti ekspresiju polinukleotida od interesa. Ovo može biti kombinovano sa bilo kojom kombinacijom drugih supresionih kaseta ili prekomerno eksprimovanih kaseta da bi se stvorila željena kombinacija osobina u biljci. Dalje se zna da polinukleotidna sekvenca može biti slagana na željenoj genomskoj lokaciji rekombinacionih sistema specifičnih za to mesto. Videti, na primer, W099/25821, W099/25854, WO99/25840, W099/25855 i W099/25853 od kojih su svi ovde uključeni kao referenca.
Različite promene u fenotipu od interesa uključuju modifikovani sastav masnih kiselina u biljci, menjanje sadržaja amino kisleina u biljci, menjanje biljnog odbranbenog mehanizma od patogena i slično. Ovi rezultati mogu biti postignuti obezbeđivanjem ekspresije heterolognih proizvoda ili povećanom ekspresijom endogenih proizvoda u biljci. Alternativno, rezultati mogu biti postignuti obezbeđvanjem redukcije ekspresije jednog ili više endogenih proizvoda, naročito enzima ili kofaktora u biljkama. Ove promene dovode do promene u fenotipu tranformisane biljke.
Geni koji su od interesa odražavaju komercijalna tržišta i interese onih koji su uključeni u razvijanje useva. Usevi i tržište od interesa se menjaju, dok se takođe javljaju nacije u razvoju koje se otvaraju ka svetskim tržištima, novim usevima i tehnologijama. Pored toga, izbor gena za transformaciju će se izmeniti u skladu sa razumevanjem poljoprivrednih osobina i karakteristika kao što su prinos i porast kapaciteta rasta. Opšte kategorije gena od interesa uključuju, na primer, one gene uključene u informacije kao što su cinkovi prsti, oni uključeni u komunikaciju, kao što su kinaze, i oni koji su uključeni u održavanje, kao što su šok proteini. Specifičnije kategorije transgena, na primer, uključuju gene koji kodiraju značajne osobine za poljoprivredu, otpornost na insekte, otpornost prema bolestima, otpornost prema herbicidima, sterilnost, karakteristike zrna i komercijalne proizvode. Geni od interesa će uključivati, generalno, one uključene u ulja, škrob, ugljene hidrate ili metabolizam hranjive materije kao i one koje utiču na veličinu jezgra, opterećenje saharazom i slično. Poljoprivredno važne osobine kao što su ulje, škrob i sadržaj proteina mogu biti genetski menjani pored tradicionalno korišćenih postupaka oplemenjivanja. Modifikacije uključuju povećanje sadržaja oleinske kiseline, zasićenih i nezasićenih ulja, povećane nivoe lizina i sumpora, obezbeđivanje esencijalnih amino kisleina i takođe modifikaciju škroba.
Derivati kodirajućih sekvenci mogu biti napravljeni mutagenezom usmerenom na mesto, da bi se povećao broj prethodno odabranih amino kisleina u kodiranom polipeptidu. Na primer, gen koji kodira polipeptid ječma bogat lizinom (BHL-barley high lisine polvpeptide) potiče iz himotripsin inhibitora ječma, US prijava serijski br. 08/740,682 podnete 1 novembra 1996 i WO 98/20133 čiji su opisi ovde uključeni kao reference. Drugi proteini obuhvataju biljne proteine bogate metioninom kao što su iz semena suncokreta (Lilleyet al.(1989)Proceedings of the World Congress on Vegetable Protein Utilization in Human Foods and Animal Feedstuffs.,ed Applewhite (American Oil Chemists Society, Champaign, Illinois) str. 497-502; ovde uključen kao referenca); kukuruz (Pedersenet al.(1986)J. Biol. Chem.261:6279; Kiriharaet al.(1988)Gene71:359; oba su uključena ovde kao referenca. Drugi poljoprivreno važni geni kodiraju lateks, brašno 2, faktore rasta, faktore skladištenja semena i transkripcione faktore.
Geni otpornosti prema insektima mogu kodirati otpornost na štetočine koje ošećuju prinos kao što su kukuruzna zlatica, larve moljaca, kukuruzni moljac i slično. Takvi geni uključuju, na primer, gene toksičnog proteinaBacillus thuringiensis(US patent br. 5,366,892; 5,747,450; 5,736,514; 5,723,756; 5,593,881; i Geiseret al.(1986)Gene48: 109); i slično.
Geni koji kodiraju osobinu otpornosti na bolesti uključuju gene detoksifikacije, kao što su protiv fumonozina (US patentni br. 5,792,931); gene avirulence (avr) i otpornosti na bolesti (R)
(Joneset al,(1994)Scinece266: 789; Martinet al.(1993)Science262; 1432 i Mindrinoset al.
(1994)Celi 78:1089);i slično.
Geni sterilnosti takođe mogu biti kodirani u ekspresionoj kaseti i obezbeđivati alternativno do fizičog odstranjivanja metlica. Primeri gena korišćeni na takve načine uključuju poželjne gene muških tkiva i gene fenotipa muške sterilosti kao što su QM, opisane u US patentnu br. 5,583,210. Drugi geni uključuju kinaze ili one koji kodiraju jedinjenja toksična za ili muški ili ženski gametofitni razvoj.
Kvalitet zrna se odražva na osobine kao što su nivoi i tipovi ulja, zasićenih i nezasićenih, kvalitet i kvantitet esencijalnih amino kiselina i nivoi celuloze. U kukuruzu, modifikovani proteini hordotiona su opisani u US patentu br. 5,703,049, 5,885,801, 5,885,802 i 5,990,389.
Komercijalne osobine mogu takođe biti kodirane na genu ili genima koji mogu povećavati na primer, škrob za proizvodnju etanola ili obezbeđivati ekspresiju proteina. Još jedna komercijalna upotreba transformisanih biljaka je u proizvodnju polimera ili bioplastike kao što je opisano u US patentu br. 5,602,321. Geni kao što je P-ketotiolaza, PHBaza (polihidroksibutirat sintetaza) i acetoacetil-CoA reduktaza (videti Schubertet al.(1988)J. Bacteriol.170:5837-5847) olakšava ekspresiju polihidroksialkanoata (PHAs).
Eksogeni proizvodi uključuju enzime biljaka i proizvode kao i one iz drugih izvora uključujući prokariote i druge eukariote. Takvi proizvodi uključuju enzime, kofaktore, hormone i slično. Može biti povećan nivo proteina, naročito modifikovanih proteina koji imaju poboljšanju raspoređenost amino kiselina da bi se poboljšala hranjiva vrednost biljke. Ovo je postignuto ekspresijom takivh proteina koji imaju povećani sadržaj amino kiselina.
II. Polinukleotidni konstrukti
U specifičnim izvođenjima, jedan ili više polinukleotida otpornih na herbicide korišćenih u postupcima i kompozicijama mogu biti obezbeđeni u ekspresionoj kaseti za ekspresiju u biljci ili drugom organizmu od interesa. Kaseta će uključivati 5' i 3' regulatorne sekvence operativno vezane za polinukleotid otporan na herbicid. 'Operativno vezan' ima nameru da znači funkcionalnu vezu između dva ili više elemenata. Na primer, operativna veza između polinukleotida od interesa i regulatorne sekvence( na pr.promotera) je funkcionalna veza koja omogućava ekspresiju polinukleotida od interesa. Operativno povezani elementi mogu biti susedni ili nisu susedni. Kada se koriste da se odnose na spajanje dva regiona kodiranja proteina, pod 'operativnom vezom' se označva da kodirajući regioni su u istom okviru čitanja ('readig frame'). Kada se odnose na efekat pojačivača, 'operativno vezani' ukazuje da pojačivač povećava ekspresiju odgovarajućeg polinukleotida ili polinukleotida od interesa. Gde polinukleotid ili polinukleotidi od interesa kodiraju polipeptid, kodirani polipeptid je proizveden u većem nivou.
Kaseta može dodatno sadržati bar jedan dodatni gen da bude kotransformisana u organizmu. Alterativno, dodatni gen(i) može/mogu biti obezbeđeni na višestrukim ekspresinom kasetama. Takva ekspresija kasete je obezbeđena sa mnoštvom restrikcionih mesta i/ili rekombinantnih mesta za umetanje polinukleotida otpornog na herbicid da bude pod transkripcionom regulacijom regulatornih regiona. Ekspresiona kaseta može dodatno sadržati druge gene, uključujući druge selektivne marker gene. Gde kaseta sadrži više od jednog polinukleotida, polinukleotidi u kaseti mogu biti transkribovani u istom pravcu ili u različitom pravcu (takođe nazvana ,divergentna' transkripcija).
Ekspresiona kaseta koja sadrži polinukleotid otporan na herbicid će uključivati transkripciju u 5'-3' pravcu transkripcionih i translacionih regiona inicijacije( tj.promotera), polinukleotida otporanog na herbicid( na pr. GATpolinukleotid, polinukleotid otporan na ALS inhibitor, HRA polinukleotid, ili bilo koju njihovu kombinaciju itd.), i transkripcionog i translacionog terminacionog regiona( tj.terminacioni region) funkcionalan u biljkama ili drugim organizmima od interesa. Prema tome, biljke koje imaju takve ekspresione kasete su takođe obezbeđene. Regulatorni regioni( tj.promoteri, transkripcioni regulatorni regioni i translatorni terminacioni regioni) i/ili polinukleotidi otporni na herbicide mogu biti prirodni( tj.analogni) za ćeliju domaćina ili jedni za druge. Alternativno, regulatorni regioni i/ili polinukleotidi otpornosti na herbicide prema pronalasku mogu biti heterologni u odnosu na ćeliju domaćina ili jedni na druge. Ovde korišćen izraz, ,heterologni' u vezi sa sekvencom je sekvenca koja potiče iz stranih vrsta, ili , ukoliko je iz iste vrste, suštinski je modifikovan u odnosu na prirodni oblik u sastav i/ili genomskom lokusu sa promišćljenom humanom intervencijom. Na primer, promoter operativno vezan za heterologne polinukleotide je iz vrste različite od vrsta iz kojih polinukleotid potiče, ili ukoliko je iz iste( tj,.analogne) vrste, jedan ili dva su suštinski modifikovani u odnosu na njihov originalni oblik i/ili genomskih lokus, ili promoter nije prirodni promoter za operativno vezani polinukleotid.
Dok može biti optimalno eksprimovanje polinukleotida korišćenjem heterolognih promotera, može biti korišćena prirodna sekvenca promotera. Takvi konstrukti mogu promeniti ekspresione nivoe i/ili ekspresione modele kodiranih polipeptida u biljki ili ćeliji biljke. Ekspresioni nivoi i/ili ekspresioni modeli kodiranih polipeptida mogu takođe biti promenjeni kao rezltat dodatnih regulacionih elemenata koji su deo konstrukta, kao što je na primer, pojačivač. Prema tome, fenotip biljke ili ćelije može biti menjan čak iako je korišćen prirodni promoter.
Terminacioni region može biti prirodan sa transkripcionim inicijalnim regionom, može biti prirodan sa operativno povezanim polinukleotidom od interesa, može biti prirodan sa biljkom domaćinom, ili može poticati iz drugog izvora( tj.stranog ili heterolognog) u odnosu na promoter polinukleotida otpornog na herbicide od interesa, biljke domaćina ili bilo koje njihove kombinacije. Pogodni terminacioni regioni su dostupni od Ti-plazmidaA. tumefaciens,kao što su terminacioni regioni oktopin sintetaze i nopalin sintetaze, ili mogu biti dobijeni iz biljnih gena kao što suSolanum tuberosumproteinazni inhibitor II gena. Videti takođe Guierineauet al.(1991)Mol. Gen. Genet.262: 141-144; Proudfoot (1991)Celi 64:671-674; Sanfaconet al.(1991)Genes Dev. 5:(141-149) Mogenet al.(1990)Plant Celi 2:1261- 1272; Munroeet al.(1990)Gene91:151-158; Ballaset al.
(1989) Nucleic Acid Res.17: 7891-7903;i Joshi et al. (1987) Nucleic Acids res.15:9627-9639.
Brojni promoteri mogu biti korišćeni praktično u pronalasku, uključujući prirodni promoter polinukleotidne sekvence od interesa. Promoteri mogu biti selektovani na osnovu željenog ishoda. Polinukleotidi od interesa mogu biti kombinovani sa konstitutivnim, ka tkivu preferencijalnim ili drugim promoterima za ekspresiju biljaka.
Takvi konsekutivni promoteri uključuju na primer, promoter jezgra Rsyn7 promotera i druge konsekutivne promotere opisane u WO 99/43838 i US patent br. 6,072,050; promoter jezgra CaMV 35S (Odellet al(1985)Nature313: 810-812); aktin riže (McElroyet al.(1990)Plant Celi 2:163-171); promoter kukuruznog aktina; promoter ubihitina (videti na pr. Christensenet al.(1989)Plant Mol. Biol.12: 619-632; Christensenet al.(1992)Plant Mol. Biol.18: 675-689; Calliset al.(1995)Genetics139: 921-39); pEMU (Lastet al.(1991)Theor. Appl. Genet.81: 581-588); MAS (Veltenet al.(1984)EMBO J.3: 2723-2730); ALS promoter (US patent br. 5,659,026) i slično. Drugi konsekutivni promoteri uključujući, na primer, one opisane u US patentu br. 5,608,149; 5,608,144; 5,604,121; 5,569,597; 5,446,785; 5,399,680; 5,268,463; 5,608,142; i 6,177,611. Neki promoteri pokazuju poboljšanu ekspresiju kada se koriste u konjukciji sa prirodnim 5'netranslatornim regionom i/ili drugim elementima kao što je na primer, intron. Na primer, kukuruzni promoter ubihitina je često smešten uzvodno ('up stream') od polinukleotida od interesa zajedno sa bar delom od 5' netranslatornog regiona ubihitin gena, uključujući prvi intron kukuruznog ubihitin gena.
Hemijski regulisani promoteri mogu biti korišćeni da moduliraju ekspresiju gena u biljci preko primene eksogenog hemijskog regulatora. U zavisnosti od cilja, promoter može biti hemijski-inducibilan promoter gde se primenom hemikalije indukuje ekspresija gena ili promoter može biti hemijski-represibilan promoter gde se primenom hemikalije vrši represija ekspresije gena. Hemijski inducibilni promoter su poznati u tehnici i uključuju, ali bez ograničenja, kukuruzn In2-2 promoter koji je aktiviran sa benzensulfonamidnim herbicidnim sejfnerom, kukuruzni GST promoterom, koji je aktiviran hidrofobim elektorfilnim jedinjenjima koja su korišćena kao herbicidi pre nicanja i duvanski PR-la promoter, koji je aktiviran sa salicilnom kiselinom. Drugi hemijski regulacioni promoteri od interesa uključuju promotere koji reaguju na stereoide (videti na primer, glukokokortikoidno inducibilan promoter u Schenaet al.(1991)Proc. Natl. Acad. Sci. USA88: 10421-10425 i McNelliset al.(1998)Plant J.14(2): 247-257) i tetraciklin inducibilni i tetraciklin represibilni promoteri (videti na primer, Gatzet al.(1991)Mol, Gen, Genet.227: 229-237 i US patent br. 5,814,618 i 5,789,156) ovde uključeni kao referenca.
Promoteri za preferencijalna tkiva mogu biti korišćeni da ciljaju ekspresiju polipeptida otpornih na herbicide u odgovarajućem tkivu ćelije. Promoteri za preferencijalna tkiva uključuju Yamamotoet al.(1997)Plant J.12(2): 255-265; Kavvamataet al.(1997)Plant Celi Physiol.28(7):792-803; Hansenet al.(1997)Mol. Gen Genet.254(3):337-343; Russellet al.(1997)Transgenic Rev.6(2): 157-168; Rinehartet al.(1996)Plant Physiol.112(3): 1331-1341; Van Campet al.(1996)Plant Physiol.112(2):525-535; Canevasciniet al.(1996)Plant Physiol.112(2): 513-524; Yamamotoet al.(1994)Plant Celi Physiol.35(5): 773-778; Lam (1994)Results Probi. Celi Differ.20: 181-196; Orozcoet al.(1993)Plant Mol. Biol.23(6):1129-1138; Matsuokaet al.(1993)Proc Natl. Acad. Sci. USA90(20): 9586-9590; i Guevara-Garciaet al.(1993)Plant J.4(3):495-505. Takvi promoteri mogu biti modifikovani,ukoliko je potrebno, za slabu ekspresiju.
Promoteri preferencijalni za lišće su poznati u tehnici. Videti na primer Yamamotoet al.
(1997)Plant J.12(2):255-265; Kvvonet al.(1994)Plant Physiol105: 357-67; Yamamotoet al.
(1994)Plant Celi Physiol.35(5):773-778; Gotoret al(1993)Plant J.3:509-18; Orozcoet al.
(1993)Plant Mol. Biol.23(6): 1129-1138 i Matsuokaet al.(1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA90(20): 9586-9590.
Promoteri preferencijalni za koren su poznati i mogu biti izabrani od mnogih dostupnih u literaturi ili izolovanih de novo iz različitih kompatibilnih vrsta. Videti na primer, Hireet al.(1992)Plant Mol. Biol.20(2): 207-218 (gen glutamin sintetaze specifičan za koren soje); Keller i Baumgartner (1991)Plant Celi3(10): 1051-1061 (kontrolni element specifičan za koren u GRP 1.8 genu Francuskog pasulja); Sangeret al.(1990)Plant Mol. Biol.14(3): 433-443 (promoter manopin sintetaze (MAS) specifičan za korenAgrobacterium tumefaciens)i Miaoet al.(1991)Plant Celi3(1): 11-22 (cDNK klon pune dužine koji kodira glutamin sintetazu (GS) koja je eksprimovana u korenima i kvržicama korena soje). Videti takođe Boguszet al.(1990)Plant Celi2(7): 633-641, gde su opisana dva promotera koji su specifični za koren iz gena hemoglobina iz azot fiksirajuće neleguminozeParasponia andersoniii sa njima u vezi neleguminoza koje ne fiksiraju azotTrema tomentosa.Promoteri ovih gena su povezani za (3-glukuronidazni reporterski gen i uneti su u neleguminozuNicotiana tabacumi leguminozuLotus corniculatus,i u oba slučaja je očuvana promoterska aktivnost specifična za koren. Leach i Aovagi (1991) opisuju njihove analize promotera visoko eksprimovanih rolC i rolD koren indukujućih genaAgrobacetrium rhizogenes(videtiPlant Scinece(Limerick) 79(1): 69-76). Oni su zaključili da pojačivač i DNK determinante preferencijelnih tkiva su disosovani u ovim promoterima. Teeret al.(1989) korišćeni gen spojen sa lacZ da pokaže daAgrobacteriumT-GNK gen kodira oktopin sintetazu je naročito aktivan u epidermisu vrha korena i da TR2' gene je specifičan za koren u nedirnutoj biljci i stimulisan oštećivanjem tkiva lišća, naročito poželjnoj kombinaciji karakteristika za upotrebu sa insekticidnim ili larvicidnim genom (videtiEMBO J.8(2):343-350). TRI' gen spojen zanptll(neomicin fosfotransferaza II) pokazuje slične karakteristike. Dodatni promoteri preferencijalni za koren uključuju VfENOD-GRP3 gen promoter (Kusteret al.(1995)Plant. Mol. Biol.29(4): 759-772) i rolB promoter (Capanaeta/.(1994)Plant Mol. Biol.25(4):681-691. Videti takođe US patent br. 5,837,876; 5,750,386; 5,633,363; 5,459,252; 5,401,836; 5,110,732 i 5,023,179.
Promoteri 'preferencijalani za seme' uključuju oba, promotere 'specifične za seme' (oni promoteri koji su aktivni u toku razvoja semena kao što su promoteri skladištenja proteina semena) kao i promoteri 'klijanja semena' (promoteri aktivni u toku klijanja semena). Videti Thompsonet al.
(1989)BioEssays10: 108, koji je uključen ovde kao referenca. Takvi promoteri preferencijalni za seme uključuju, ali bez ograničenja, Cimi (citokin-izazvana poruka); cZ19Bl (kukuruz 19 kDa zein); milps (mio-inozitol-1 -fosfat sintetaza) (videti W0 00/11177 i US patent br. 6,225,529; uključen ovde kao referenca). Gama zein je endosperm-specifičan promoter. Globulin 1 (Gib 1) je reprezentativni embrio-specifični promoter. Za dikotile, promoteri specifični za seme uključuju, ali bez ograničenja, P-faseolin pasulja, napin, P-konglicin, lecitin soje, kruciferin i slično. Za monokotile, promoteri specifični za seme uključuju, ali bez ograničenja kukuruz 15 kDa zein, 22 kDa zein, 27 kDa zein, gama zein, vosak, šruken 1, šruken 2, globulin 1itd.Videti takođe WO 00/12733, gde su opisani promoteri preferencijeni za seme izendliend2gena; ovde uključeni referencom.
Dodatni promoteri od interesa uključuju SCP1 promoter (US 6,072,050), HB2 promoter (US 6,177,611) i SAMS promoter (US20030226166 i SEQ ID br:87 i biološki aktivne varijante i njihove fragmente); od kojih je svaki ovde uključen kao referenca. Pored toga, kao što je ovde dalje diskutovano, različiti pojačivači mogu biti korišćeni sa ovim promoterima, uključujući na primer, ubihinon intron (tj. kukuruzni ubihinon intron 1 (videti na primer, NCBI sekvencu S94464), omega pojačivač ili omega primarni pojačivač (Gallieet al.(1989)Molecular Biology of RNAed. Cech (Liss, New York) 237-256 i Gallieet al. Gene(1987) 60:217-25) ili 35S pojačivač; od kojih svaki je uključen kao referenca.
Ekspresiona kaseta može takođe uključivati selektivni marker gen za selekciju transformisanih ćelija. Selektivni marker geni su korišćeni za selekciju transformisanih ćelija ili tkiva. Marker geni uključuju gene koji kodiraju antibiotsku otpornost, kao što je ona koja kodira neomicin fosfotransferazu II (NEO) i higromicin fosfotransferazu (HPT) kao i gene koji daju otpornost na herbicidna jedinjenja, kao što su glufosinat amonujum, bromoksinil, imidazolinoni i 2,4-dihlorofenoksiacetat (2,4-D). Dodatni selektivni markeri uključuju fenotipske markere kao što su P-galaktozidaza i fluorescentni proteini kao što je zeleni fluorescentni protein (GFP) (Suet al.
(2004)Biotechnol Bioeng85: 610-9 i Fetteret al.(2004)Plant Celi16: 215-28), ciljan fluorescentni protein (CYP) (Bolteet al.(2004)J. Celi Science117: 943-54 i Katoet al.(2002)Plant Physiol129: 913-42) i žuti fluorescentni protein (PhiYFP iz Evrogen, videti Bolteet al.(2004)J. Celi Science117:943-54) Za dodatne selektabilne markere, videti generalno, Yarranton (1992)Curr. Opin. Biotech.3: 506-511; Christophersonet al.(1992)Proc. Natl. Acad. Sci. USA89: 6314-6318; Yaoet al.(1992)Celi71: 63-72; Reznikoff (1992)Mol. Microbiol.6: 2419-2422; Barkleyet al.
(1980) uThe operon, str. 177-220; Huet al.(1987)Celi48:555-566; Brovvnet al.(1987)Celi49:603-612; Figget al.(1988)Celi52:713-722; Deuschleet al.(1989)Proc. Natl. Acad. Aci. USA86: 5400-5404; Fuerstet al.(1989)Proc. Natl. Acad. Sci. USA86:2549-2553; Deuschleet al.
(1990)Science248:480-483; Gossen (1993) Ph. D. Thesis, University of Heidelberg; Reineset al.
(1993)Proc. Natl. Acad, Sci. USA90: 1917-1921; Labovvet al.(1990)Mol. Celi Biol.10: 3343-3356; Zambrettieta/.(1992)Proc. Natl. Acad. Sci. USA89:3952-3956; Baimet al.(1991)Proc. Natl. Acad. Sci. USA88:5072-5076; Wyborskiet al.(1991)Nucleic Acids Res.19: 4647-4653; Hillenand-Wissman (1989)Topics Mol. Struc. Biol.10: 143-162; Degenkolbet al.(1991)Antimicrob. Agents Chemother.35: 1591-1595; Kleinschnidtet al.(1988)Biochemistry27: 1094-1104; Bonin (1993) Ph. D. Thesis, University of Heidelberg; Gossenet al.(1992)Proc. Natl. Acad, Sci. USA89: 5547-5551;Olivae/a/. (1992) Antimicrob. Agents Chemother.36:913-919;Halvaka et al.(1985)Handbook of Experimental Pharmacologyvol. 78 (Springer-Verlag, berlin); Gillet al
(1988)Nature334: 721-724. Ovi opisi su uključeni ovde kao referenca. Gornja lista selektivnih marker gena nije ograničavajuća. Bilo koji selektivni marker gen može biti korišćen u ovom pronalasku, uključujući GAT gen i/ili HRA gen.
Poznati su postupci u tehnici povećanja ekspresionih nivoa polipeptida prema pronalasku kod biljke ili biljne ćelije, umetanje u sekvencu koja kodira polipeptid jedan ili dva G/C-bogata kodona (kao što su GCG ili GCT) momentalno susednih za i nizvodno ('downstream') od inicirajućeg metionin ATG kodona. Kada je pogodno, polinukleotidi mogu biti optimizirani za povećanu ekspresiju u transformisanoj biljci. To jest, polinukleotidi mogu biti sitetizovani supstitucijom u sekvenci kodirajućeg polipeptida jednog ili više kodona koji su manje često korišćeni u biljkama za kodone koji kodiraju iste amino kiselina koje se češće koriste u biljkama i uvode modifikovane kodirajuće sekvence u biljku ili biljnu ćeliju i eksprimovanje modifikovane kodirajuće sekvence. Videti na primer Cambell i Gowri (1990)Plant Physiol.92: 1-11 za diskusiju korišćena poželjnog kodona domaćina. Postupci su dostupni u tennici za sintezu gena poželjnih za biljke. Videti na primer US patent br. 5,380,831 i 5,436,391 i Murrayet al.(1989)Nucleic Acids Res.17:477-498, koji je ovde uključen kao referenca. Izvođenja koja sadrže ove modifikacije su takođe karakteristika pronalaska.
Poznate su dodatne modifikacije sekvence za poboljšavanje ekspresije gena u ćeliji domaćina. One uključuju eliminaciju sekvenci koje kodiraju lažne poliadenilacione signale, egzon-intron spojene signale, transpoziona ponavljanja i druge tako dobro karakterisane sekvence koje mogu biti štetne za ekspresiju gena. G-C sadržaj sekvence može biti prilagođen na nivoe prosečne za datu ćeliju domaćina, kao što je sračunato na poznatu ekspresiju gena u ćeliji domaćina. Kada je moguće, sekvenca je modifikovana da bi se izbegla predviđena sekundarna struktura ukosnice mRNK. 'Pojačivači' kao što su CaM 35S pojačivač mogu takođe biti korišćen (videti na pr. Benfevet al.(1990)EMBO J.9: 1685-96) ili drugi pojačivači mogu biti korišćeni. Na primer, sekvenca izneta u SEQ ID br.: 1, 72, 79, 84, 85, 88 ili 89 ili biološki aktivna varijanta ili njen fragment mogu biti korišćene. Videti na pr. US prijavu korisnog modela br. , podnazivom ' Methods and Compositions of the Expression of a Polynucleotide of Interesf,oblasti koja se pokalapa sa ovom, i koja je ovde uključena u njenoj celovitosti. Izraz 'promoter' ima nameru da označi regulacioni region DNK koji sadrži transkripcioni iniciacioni region, koji u nekim izvođenjima sadrži TATA box sposoban za usmeravanje RNK polimeraze II da inicira RNK sintetazu u odgovarajućem transkripcionom inicijacionom mestu za odgovarajuću kodirajuću sekvencu. Promoter može dalje biti operativno povezan za dodatni regulatorne elemetne koji utiču na transkripciju, uključujući, ali bez ograničenja, introne, 5'-netranslatorne regionc i elemente pojačivača. Ovde korišćeni izrazi 'sekvenca pojačivača', 'domen pojačivača', 'element pojačivač' ili 'pojačivač' kada je operativno vezan za odgovarajući promoter modulisaće nivo transkripcije operativno vezanog polinukleotida od interesa. Biološki aktivni fragmenti i varijante domena pojačivača mogu zadržati biološku aktivnost moduliranja (povećanja ili smanjenja) nivoa transkripcije kada je opertivno vezan za odgovarajući promoter.
Fragmenti polinukleotida za domen pojačivača ili promoter mogu biti u opsegu od bar oko 50 nukleotida, oko 100 nukleotida, oko 150 nukleotida, oko 200 nukleotida, oko 250 nukleotida, oko 300 nukleotida, oko 350 nukleotida, oko 400 nukleotida, oko 450 nukleotida, oko 500 nukleotida i do pune nukleotidne sekvence dužine prema pronalasku za domen pojačivača prema pronalasku. U drugim izvođenjima, fragmenti domena pojačivača obuhvataju dužinu oko 50 do oko 100, 100 do oko 150, 150 do oko 200, 200 do oko 250, oko 250 do oko 300, oko 300 do oko 350, oko 350 do oko 400, oko 400 do oko 450, oko 450 do oko 500, oko 500 do oko 535 nukleotida. Generalno, varijante ili odgovarajući polinukleotidi prema pronalasku će imati bar oko 40%, 45%>, 50%o, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili više identičnosti sekvence u odnosu na odgovarajuće polinukleotide kao što je određeno sa programom poravnavanja sekvence i ovde opisanim parametarima. Biološki aktivna varijanta ili pojačivač ili promoter mogu se razlikovati od sekvence u nekoliko, 1-15 ostataka nukleinskih kiselina, 1-10, kao što je 6-10, kao što je 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ili čak 1 ostatku nukleinske kiseline. Takve aktivne varijante i fragmenti će nastaviti da moduliraju transkripciju.
Višestuke kopije domena pojačivača ili aktivnih varijanti i njegovih fragmenata mogu se operativno vezati za promoter. U specifičnom izvođenju, himerni translacioni regulacioni kontrolni regioni obuhvataju bar 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili više kopija domena pojačivača. U daljim izvođenjima, korišćeni domen pojačivača ne sadrži sekvencu iznetu u SEQ ID br. 5. Pored toga, pojačivač može biti orijentisan u bilo kom smeru (tj. sens ili reverznom).
Rastojanje između promotera i pojačivača domena može varirati, dokle god himerni transkripcioni regulacioni region nastavlja da usmerava transkripciju operativno vezanih polinukleotida od interesa na željeni način. Na primer, domen pojačivača može biti smešten na bar oko 10000 do okko 15000, oko 10000 do oko 9000, oko 9000 do oko 8000, oko 8000 do oko 7000, oko 7000 do oko 6000, oko 6000 do oko 5000, oko 5000 do oko 4000, oko 4000 do oko 3000, oko 3000 do oko 2000, oko 2000 do oko 1000, oko 1000 do oko 500, oko 500 do oko 250, oko 250 do neposredno vezanog za promoter. Dalje se zna da jedna ili više kopija pojačivača može biti smeštena uzvodno ('upstream') (5') od promotera ili alternativno, jedna ili više kopija pojačivača mogu biti smeštene 3' od promotera. U specifičnim izvođenjima, kada je smeštena 3' od promotera, pojačivač je nizvodno ('downstream') od terminacionog regiona. U još drugim izvođenjima, jedan ili više pojačivača može biti razmešteno ili u 5' ili 3' položaju (kao što je pokazano na SEQ ID br. 1 ili 72) ili u 3' ka 5' položaju.
Ukoliko su korišćeni višestruki pojačivači, pojačivači mogu biti smešteni u konstruktu u odnosu na promoter tako da željeno utiču na postignutu ekspresiju. Na primer, pojačivači mogu biti neposredno jedan pored drugog ili bar između 1 do 100, 100 do 300, 300 do 500, 500 do 1000 nukleotida razmaka.
Dalje se zna da korišćeni pojačivač u pronalasku može biti smešten u DNK konstruktu između operativno vezanih za prvi i drugi promoter. U takvim izvođenjima, pojačivač omogućava modulaciju u ekspresiji oba i prvog i drugog promotera iz divergentnog pravca. Primeri, ali nisu ograničavajući, primeri takvih DNK konstrukta obuhvataju 5' do 3' ili 3' do 5' orijantaciju: prvi polinukleotid od interesa operativno veže za bar jednu kopiju pojačivača prema pronalasku, operativno vezan za drugi promoter, operativno vezan za drugi polinukleotid od interesa. U specifičnim izvođenjima, pojačivač sekvence je heterologni prvom i drugom pojačivaču sekvece. U drugim izvođenjima, prvi promoter je operativno vezan za polinukleotide koji kodiraju ALS inhibitor i drugi promote je operativno vezan za polinukleotid koji kodira polipeptid koji daje otpornost na glifosat. Takvi polinukleotidi su dalje ovde opisani.
Ekspresiona kaseta može dodatno obuhvatati 5' lider sekvencu. Takva lider sekvenca može delovati da poboljša translaciju. Translacioni lideri su poznati u tehnici i uključuju: lidere pikornavirusa, EMCV lider (Encephalomvocarditis 5' nekodirajući region) (Elroy-Steinet al.(1989)Proc. Natl. Acad. Sci. USA86: 6126-6130); lidere potivirusa, na primer, TEV lider (Tobacco Etch Virus-) (Gallieet al.(1995)Gene165(2): 233-238), MDMV lider (Maize Dvvarf Mosaic Virus-virus mozaične kržljavosti kukuruza)( Virology154: 9-20) i vezujući protein teškog lanca humanog imunoglobulina (BiP) (Macejaket al.(1991)Nature353: 90-94); netraslacioni lider iz proteina obloge mRNK alfaalfa virusa mozaika (AMV RNA 4) (Joblinget al.(1987)Nature325: 622-625); lider virusa mozaika duvana (TMV) (Gallieet al.(1989) uMolecular Biology of RNAed. Cech.
(Liss, new York), str. 237-256); i lider virusa maize chlorotica mottle (MCMV) (Lommelet al.
(1991)VirologyU:382-395).Videti takođe, Della-Cioppa et al. (1987) Plant Physiol.84: 965-968.
U pripremanju ekspresione kasete, različiti polinukleotidni fragmenti mogu biti manipulisani, tako da obezbede da sekvence budu u pogodnoj orijentaciji i kada je odgovarajuće, u pogodnom okviru čitanja ('reading frame'). Naspram ovog kraja, adapteri ili linkeri mogu biti korišćeni da spoje fragmente ili druge manipulacije mogu biti uključene da se obezbede pogodna restrikciona mesta, uklanjanje suvišnih materijala kao što je uklanjanje restrikcionih mesta ili slično. Za ovu svrhu mogu biti korišćene,inv//romutageneza, reparacija prajmera, restrikcija, topljenje, resupstitucija,na pr.tranzicije i transverzije. Ovde su korišćene tehnike standardne rekombinante DNK i molekulskog kloniranja dobro poznate u oblasti tehnike i potpunije su opisane za na primer, u Sambooket al.(1989)Molecular Cloning: A Lahoratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor) (takođe poznat kao 'Maniatis').
U nekim izvođenjima, polinukleotid od interesa cilja hloroplast za ekspresiju. Na ovaj način, gde polinukleotid od interesa nije direktno umetnut u hloroplast, ekspresiona kaseta će dodatno sadržati nukleinsku kiselinu koja kodira tranzitni polipeptid koji se odnosi na genski proizvod od interesa za hloroplaste. Takvi tranzitni polipeptidi su takođe poznati u oblasti tehnike. Videti, na primer, Von Heijneet al.(1991)Plant Mol. Biol. Rep.9: 104-126; Clarket al.(1989)J. Bol. Chem.264: 17544-1755; Della-Cioppaet al.(1987)Plant Physiol.84: 965-968; Romeret al.(1993)Biochem. Biophys. Res. Commun.196: 1414-1421; iShah et al. (1986) Science233: 478-481.
Sekvence koje ciljaju u hloroplast su poznate u oblasti tehnike i uključuju male podjedinice hloroplasta od ribuloza-l,5-bisfosfat karboksilaze (Rubisco) (de Castro Silva Filhoet al.(1996)Plant Mol. Biol.30: 769-780; Schnellet al.(1991)J. Biol. Chem.266(5): 3335-3342); 5-(enolpiruvil)šikimat-3-fosfat sintetaze (EPSPS) (Archeret al.(1990)J. Bioenerg. Biomemb. 22(6):789-810): triptofan sintetaza (Zhaoet al,(1995)J. Biol. Chem.270(11): 6081-6087); plastocijanin (Lavvrenceet al.(1997)J. Biol, Chem.272(33): 20357-20363); horizmat sintetaza (Schmidtet al.
(1993) 7: Biol. Chem.268(36):27447-27457); i vezujućeg proteina hlorofila a/b koji sakuplja svetio (LHBP) (Lamppaet al.(1988)J. Biol. Chem.263: 14996-14999). Videti takođe Von Heijneet al.
(1991)Plant Mol. Biol. Rep.9: 104-126; Clarket al.(1989)J. Biol. Chem.264: 17544-17550; Della-Cioppaet al.(1987)Plant Physiol.84:965-968; Romeret al.(1993)Biochem. Biophys. Res. Commun.196: 1414-1421;i Shah et al.(1986)Zdence233: 478-481.
Postupci za transformaciju hloroplasta su poznati u oblasti tehnike. Videti, na primer, Svabet al.(1990)Proc. Natl. Sci. USA87: 8526-8530; Svab i Maliga (1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA90:913-917; Svab i Maliga (1993)EMBO J.12: 601-606. Postupci se zasnivaju na davanju DNK pomoću ,pištolja za čestice' (particle gun) koji sadrži selektivni marker i cilja DNK plastidnog genoma preko homolognih rekombinacija. Dodatno, transformacija plastida može biti postignuta transaktivacijom tihog plastidno stvorenog transgena sa ekspresijom u preferencijalnim tkivima nuklearno kodirane RNK polimeraze usmerene na plastid. Ovakav sistem je zabeležen u McBrideet al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA91: 7301-7305.
Polinukleotidi od interesa koji bi ciljali u hloroplast mogu biti optimizirani za ekspresiju u hloroplastu da se opravdaju razlike u korišćenju kodona između jezgra biljke i ovih organela. Na ovaj način, polinukleotidi od interesa mogu biti sintetizovani korišćenjem kodona preferencijalnih za hloroplast. Videti na primer, US patent br. 5,380,831, koji je uključen ovde referencom. ,Gen' ovde označava polinukleotid koji eksprimuje specifični protein, generalno uključujući regulatornu sekvencu koja prethodi (5'-nekodirajuće sekvence) i koja sledi (3' ne-kodirajuće sekvence) kodirajuće sekvence( tj.deo sekvence koja kodira specifični protein). ,Nativni gen' odnosi se na gen koji se nalazi u prirodi, generalno sa svojom regulatornom sekvencom. ,Transgen' je gen koji je bio unet u genom transformacionim postupkom. Prema tome ,transgenska biljka' je biljka koja sadrži transgen, bez obzira da li je transgen uveden u tu odgovarajuću biljku transformacijom ili oplemenjivanjem; prema tome, potomci originalo transformisane biljke su obuhvaćeni definicijom.
III.Postupci unošenja
Biljke prema pronalasku su stvorne unošenjem polipeptida ili polinukleotida u biljku.,Unošenje' ima nameru da označi stavljanje u biljku polinukleotida ili polipeptida na takav načn da sekvenca ima pristup u unutrašnjost ćelije biljke. Postupci pronalaska ne zavise od odgovarajućeg postupka za unošenje sekvence u biljku, nego samo da polinukleotid ili polipeptid ima pristup u unutrašnjost bar jedne ćelije biljke. Postupci za unošenje polinukleotida ili polipeptida u biljke su poznati u stanju tehnike uključujući, ali bez ograničenja, stabilne transformacione postupke, postupke trenutne transformacije, postupke posredovane virusima i oplemenjivanje.
'Stabilna transformacija' ima nameru da označi da nukleotidni konstrukt unet u biljku integriše se u genom biljke i sposoban je da se nasledi njegovim progenom. ,Trenutna transformacija' ima nameru da označi da je polinukleotid unet u biljku i ne integriše se u genom biljke ili polipeptid unet u biljku.
Transformacioni protokoli, kao i protokoli za uvođenje polipeptida ili polinukleotidnih sekvenci u biljke mogu varirati u zavisnosti od tipa biljke ili biljne ćelije( tj.monokotile ili dikotile) ciljane za transformaciju. Pogodni postupci unošenja polipeptida i polinukleotida u biljne ćelije uključuju mikroinjekciju (Crosswayet. al.(1986)Biotechniques4: 320-334), elektroporaciju (Riggs iet al.(1986)Proc. Natl. Acad. Sci. USA83: 5602-5606, transformacije posredovane saAgrobacterium(US patent br. 5,563,055 i US patent br. 5,981,840), usmereni transfer gena (Paszkowskiet a/.(1984) EMBO J.3: 2717-2722) balističko ubrzavanje čestica (videti na primer US patent br. 4,945,050; US patent br. 5,879,918; US patent br. 5,886,244; i 5,932,782; Tomeset al.
(1995) uPlant Celi, Tissue and Organ Culture: Fundamental Methodesed. Gamborg i Phillips (Spring-Verlag, Berlin); McCabeet al.(1988)Biotechnology6:923-926); i Leci transformacija (WO 00/28058). Takođe videti Weissingeret al.(1988)Ann. Rev. Genet.22:421-477; Sanfordet al.
(1987)Particulate Science and Technoloy5: 27-37 (luk); Christouet al.(1988)Plant Physiol. 87:671-674 (soja); MacCabeet al.(1988)Bio/ Technology6: 923-926 (soja); Finer i McMullen (1991)In Vitro Celi Dev. Biol.27P: 175-182 (soja); Singhet al.(1998)Theor. Appl. Genet.96: 319-324 (soja); Dattaet al.(1990)Biotechnology8: 736-740 (riža); Kleinet al. (1988) proc. Natl. Acad. Sci. USA85:4305-4309 (kukuruz); Kleinet al.(1988)Biotechnology6: 559-563 (kukuruz); US patent br. 5,240,855; 5,322,783; i 5,324,646; Kleinet al.(1988)Plant Physiol.91: 440-444 (kukuruz); Frommet al.(1990)Biotechnology8: 833-839 (kukuruz); protokli objavljeni elektronski TP.com' pod permantentnim identifikacionim objavama IPCOM000033402D, IPCOM000033402D i IPCOM000033402D i dostupna na web stranici 'IP.com' (pamuk); Hooykaas-Van Slogterenet al.
(1984)Nature ( London)311: 763-764; US patent br. 5,736,369 (ceralije); Bvtebieret. al.(1987)Proc. Natl. Acad. Sci. USA84: 5345-5349 (Liliaceae); De Wetet al.(1985) uThe Experimental Manipulating of Ovule Tissuesed. Chapmanet al.(Logman, New York), str. 197-209 (polen); Kaeppleret al.(1990)Plant Celi Reporters9: 415-418 i Kaeppleret al.(1990)Theor. Appl. Genet.84: 560-566 ('vvhisker' posredovana transformacija); D'Halluinet al.(1992)Plant Celi4: 1495-1505 (elektroporacija); Liet al.(1993)Plant Celi Reports12; 250-255 i Christou i Ford (1995)Annals of Botany75: 407-413 (riža); Osjodaeta/.(1996)Nature Biotechnology14: 745-750 (kukuruz viaagobacterium Tumefaciens) ;od kojih su svi uključeni kao referenca.
U specifičnim izvođenjima, otpornost na herbicide ili druge poželjne sekvence može biti obezbeđena za biljke koje koriste različite privremene transformacione postupke. Takvi privremeni transformacioni postupci uključuju, ali bez ograničenja, unošenje polipeptida ili varijanti i njegovih fragmentata, direktno u biljku ili unošenje transkripta u biljku. Takvi postupci uključuju, na primer, mikroinjekcije ili bombardovanje česticama. Videti na primer, Crosswayet al.(1986)Mol. Gen. Genet.202: 179-185; Nomuraet al.(1986)Plant Sci.44: 53-58; Hepleret al.(1994)Proc. Natl. Acad. Sci.91: 2176-2180 i Hushet. al.(1994)The Journal ofCell Scinence107: 775-784, od kojih su svi bili uključeni ovde kao referenca. Alterativno, polinukleotidi koji su otporni na herbicide mogu biti privremeno transformisani u biljku korišćenjem tehnika poznatim u stanju tehnike. Takve tehnike uključuju virusni sistem vektora i precipitaciju polinukleotida na način koji sprečava naknadno oslobađanje DNK. Prema tome, transkripciija sa čestice vezane za DNK može se desiti, ali frekfenca sa kojom se oslobađa da postane integrisana u genom je u većoj meri smanjena. Takvi postupci uključuju upotrebu čestica obloženih sa polietiliminom (PEI; Sigma #P3143).
U drugim izvođenjima, polinukleotidi mogu biti uneseni u biljke dovođenjem u kontakt sa biljkama sa virusnim ili viralnim nukleinskim kiselinama. Generalno, takvi postupci uključuju ugrađivanje nukleotidnog konstrukta u okviru virusnog DNK ili RNK molekula. Razume se da polipeptidi od interesa mogu biti inicijalno sintetizovani kao deo virusnog poliproteina, koji kasnije može biti obrađen proteolizomin vivoiliin vitroda bi se dobio željeni rekombinantni protein. Dalje, razume se da korisni promoteri mogu uključivati promotere korišćene za transkripciju virusne RNK polimeraze. Postupci za uvođenje polinukleotida u biljke i eksprimovanje polipeptida koji ih kodiraju, uključujući virusne DNK ili RNK molekule, su poznati u oblasti tehnike. Videt na primer, US patent br. 5,889,191, 5889,190, 5,866,785, 5,589,367, 5,316,931 i Portaet. al.(1996)Molecular Biotechnology5: 209-221; ovde uključe kao referenca.
Postupci koji su poznati u oblasti tehnike za ciljano umetanje polinukleotida na specifičnom mestu u biljnom genomu. U jednom izvođenju, umetanje polinukleotida u poželjnoj genomskoj lokaciji je postignuto korišćenjem rekombinantnog sistema specifičnog za mesto. Videti, na primer W099/25821, W099/25854, WO99/25840, W099/25855 i W099/25853, od kojih su svi uključeni ovde kao referenca. Ukratko, polinukleotidi mogu biti u transfer kasetama praćeni sa svake bočne strane sa ne-rekombinogenim rekombinantnim mestima. Transfer kaseta je uneta u biljku koja ima uključen u svoj genom stabilno ciljno mesto koje je sa svake bočne strane sa dve ne-rekombinogena rekombinantna mesta koja odgovaraju mestima transfer kaseta. Odgovarajuća rekombinaza je obezbeđena i transfer kaseta je integrisana u ciljno mesto. Polinukleotid od interesa je tako integrisan na specifično meso u hromozomu u biljnom genomu. Ćelije koje su bile transformisane mogu biti gajene u biljkama saglasno sa konvencionalnim načinima. Videti, na primer, McCormicket al. (1986) plant Celi Reports5: 81-84. Ove biljke zatim mogu biti gajene i ili oprašene sa istim transformacionim sojem ili različitim sojem i rezultujuće potmstvo ima konstitutivnu ekspresiju željenih identifikovanih karakteristika fenotipa. Dve ili više generacija mogu biti gajene da osiguraju da ekspresija željenih fenotipskih karakteristika je pogodno održavana i nasleđivana i zatim je sakupljeno seme da bi se osigurala ekspresija željenih fenotipskih karakteristika koje su postignute. Na ovaj način, prikaza pronalazak obezbeđuje transformisano seme (na koje se takođe poziva kao na 'transgensko seme') koje ima polinukleotide prema pronalasku, na primer, ekspresionu kasetu prema pronalasku, stabilno uključenu u njihov genom.
U specifičnim izvođenjima, polipeptid ili drugi polinukleotid od interesa je unet u biljnu ćeliju. Zatim, biljna ćelija koja unetu sekvencu prema pronalasku je izabrana korišćenjem postupaka poznatih ljudima iz struke kao što je, ali bez ograničenja, Souther blot analiza, DNK sekvenciranje, PCR analize ili fenotipske analize. Biljka ili biljni delovi izmenjeni ili modifikovani izvođenjima koji slede su gajeni pod uslovima gajenja biljke za vreme dovoljno da modulira koncentraciju i/ili aktivnost polipeptida u biljki. Uslovi gajenja biljke su dobro poznati u oblasti tehnike i dalje su ukratko diskutovani.
Takođe se zna da nivo ili aktivnost polipeptida od interesa može biti modulisana korišćenjem polinukleotida koji nisu sposobni da usmere, u transformisanoj biljci, ekspresioni protein ili RNK. Na primer, polinukleotidi prema pronalasku mogu biti korišćeni da osmisle polinukleotidne konstrukte koji mogu biti korišćeni u postupcima za menjanje ili mutiranje genomskih nukleotidnih sekvenci u organizmu. Takvi polinukleotidni konstrukti uključuju, ali bez ograničenja, RNK:DNK mutacione vektore, RNK:DNK reparacione vektore, mešovite-dupleks oligonukleotide, samo-komplementarne RNK:DNK oligonukleotide i rekombinantene oligonukleotide. Takvi nukleotidni konstrukti i postupci upotrebe su poznati u oblasti tehnike. Videti, US patent br. 5,565,350; 5,731,181; 5,756,325; 5.760,012; 5,795,972; i 5,871,984; od kojih su svi ovde uključeni referencom. Videti takođe WO 98/49350, WO 99/07865, WO 99/25821 i Beethamet al.(1999)Proc. Natl. Acad. Sci. USA96: 8774-8778; ovde uključen kao referenca.
Prema tome zna se da postupci prema ovom pronalasku ne zavise od uključivanja celog polinukleotida u genom, nego samo da je biljka ili njena ćelija izmenjena kao rezltat unošenja polinukleotida u ćeliju. U jednom izvođenju pronalaska, genom može biti izmenjen, a zatim praćen unošenjem polinukleotida u ćeliju. Na primer, polinukleotid, ili bilo koji njegov deo, može biti uključen u genom biljka. Promene genoma prema prikazanom pronalasku uključuju, ali bez ograničenja, adicije, delecije i supstitucije nukleotida u genomu. Dok postupci prema ovom pronalasku ne zavise od adicija, delecija i supstitucija bilo kog određenog broja nukeleotida, podrazumeva se da takve adicije, delecije ili supstitucije obuhvataju bar jedan nukleotid.
Biljke prema pronalasku mogu biti proizvedena bilo kojim pogodnim postupkom, uključujući oplemenjivanje. Oplemenjivanje biljaka može biti korišćeno da se unesu željene karakteristike (na pr. stabilno inkorporisani transgen ili genetska varijanta ili genetska alternacija od interesa) u odgovarajuću biljnu liniju od interesa i može biti izvedena na bilo koji od nekoliko različitih načina. Olemenjavanja pedigriranjem ('pedigree') počinje ukrštanjem dva genotipa, kao što je odabrana linija od interesa i jedna druga odabrana inbred linija koja ima jednu ili više željenih karakteristika( tj.ima stabilno inkorporisan polinukleotid od interesa, ima izmenjenu aktivnost i/ili nivo proteina od interesaitd.)koje odgovaraju odabranoj biljnoj liniji od interesa. Ukoliko dva originalna roditelja ne obezbeđuju sve željene karakteristike, mogu biti uključeni drugi izvori u populaciju dobijenu oplemenjivanjem. U postupku pedigriranja, superiorne biljke su samooprašivane i odabirane u uzastopnoj filijalnoj generaciji. U uspešnoj filijalnoj generaciji heterozigotni uslovi daju put do homogenih linija kao rezulfat samooprašivanja i odabiranja. Tipično pri oplemenjivanju u postupku pedigriranja, praktikuje se samooprašivanje i odabiranje pet ili više uzastopnih filijalnih generacija: Fl—»F2; F2-»F3; F3—>F4; F4-»F5,itd.Posle značajne količine ukrštanja, uzastopne filijalne generacije će služiti da povećaju inbred razvijeno seme. U specifičnom izvođenju, inbred linija sadrži homozigotne alale sa oko 95% ili više njihovih lokusa. Različite tehnike poznate u ovoj oblasti su korišćene da olakšaju i ubrzaju postupak oplemenjivanja (na pr. backcrossing -povratno ukrštanje) uključujući na primer, upotrebu staklenika ili komore za gajenje sa ubrzanim ciklusima noć/dan, analize molekulskih markera da bi se identifikovalo poželjno potomstvo i slično.
Pored toga što je korišćeno da stvori konverziju povratnim ukrštanjem, povratno ukrštanje može takođe biti korišćeno u kombinaciji sa oplemenjivanjem pedigriranjem da bi se modifikovala odabrana linija od interesa i hibrid koji je stvoren korišćenjem modifikovane odabrane linije. Kao što je ranije diskutovano, povratno ukrštanje može biti korišćeno da prenese jednu ili više specifičnih poželjnih osobina iz jedne linije, roditelja donora u inbred nazvan povratna roditeljska linija, koji ima celokupno dobre agronomske karakteristike kojima nedostaje željena karakteristika ili karakteristike. Međutim, isti postupak može biti korišćen da se pomeri potomstvo prema genotipu povratne roditeljske linije, ali u isto vreme zadržava mnogo komponenti nepovratne roditeljske linije zaustavljanjem povratnog ukrštnja u ranom stadij umu i nastavljanjem sa samooprašivanjem i odabiranjem. Na primer, stvorenje Fl, kao komercijalni hibrid. Ovaj komercijalni hibrid može biti povratno ukršen u jednu od njegovih roditeljskih linija da stvori BC1 ili BC2. Potomstvo je samooprašivano i odabrano tako da novi razvijeni inbred ima mnogo karakteristika povratnih roditeljskih linija i još nekoliko željenih karakteristika nepovratnih roditeljskih linija. Ovaj prilaz daje vrednost i snagu povratnim roditeljskim linijama za upotrebu u novim hibridima i oplemenivanju.
Prema tome, izvođenje prema ovom pronalasku je postupak za pripremanje konverzijom povratnim ukrštanjem inbred linije od interesa koja obuhvata stupnjeve ukrštanja biljke iz inbred linije od interesa sa biljkom donorom koja obuhvata bar jedan gen mutant ili transgen koji daje željenu osobinu( na pr.otpornost prema herbicidima), odabiranje Fl potomka biljke koji sadrži gen mutant ili transgen koji daje željenu osobinu i povratno ukrštanje selektovane Fl biljke potomka u biljku inbred linije od interesa. Ovaj postupak dalje obuhvata stupanj dobijanja molekularnog marker profila inbred linije od interesa i korišćenje molekulskog marker profila da bi se odabrala biljka potomak sa željenom osobinom i molekularni marker profil inbred linije od interesa. Na isti način, ovaj postupak može biti korišćen da se dobije seme Fl hidrida dodavanjem krajnjeg stupnja ukrštanja željene osobine konverzijom inbred linije od interesa sa različitim biljkama da bi se načinilo seme Fl hibrida koji sadrži mutirani gen ili transgen koji daje željenu osobinu.
Povratno odabiranje je postupak korišćen u programu oplemenjivanja biljki da bi se poboljšala populacija biljki. Ovaj postupak zahteva unakrsno oprašivanje individualnih biljki jedne sa drugom da bi se obrazovalo potomstvo. Potomstvo je gaj eno i superiorno potomstvo je odabirano bilo kojom od brojnih selekcionih postupaka, koji uključuju individualne biljke, potomstvo polusestri, potomstvo sestri, potomstvo dobijeno samooprašivanjem i 'topcrossing'-om. Odabrano potomstvo je unakrsno oprašivano jedno sa drugim da bi se dobilo potomstvo za sledeću populaciju. Ova populacija je zasađena i ponovo su superiorne biljke odabrane za unakrsno oprašivanje jedna sa drugom. Povratno odabiranje je ciklični postupak i prema tome može biti ponovljen onoliko puta koliko je potrebno. Cilj povratnog odabiranja je da poboljša osobine populacije. Poboljšana populacija može zatim biti korišćena kao izvor materijala za oplemenjivanje da bi se dobile inbred linije koja će se koristiti u hibridima ili će se koristiti kao roditelji za veštačke vrste. Veštačka vrsta je proizvod potomstva obrazovanog međusobnim ukrštanjem nekoliko odabranih inbreda.
Masovno odabiranje je korisna tehnika kada se koristi zajedno sa odabiranjem unapređenim molekularnim markerom. Masovno odabiranje semena od individua je zasnovana na odabiranju fenotipa i/ili genotipa. Ova odabrana semena su zatim sakupljena i korišćena za gajenje sledeće generacije. Odabiranje sakupljanjem zahteva gajenje populacije biljaka na velikom zemljištu, omogućavanjem samooprašivanje biljka, sakupljanje rasutog semena i zatim korišćenje uzorka semena sakupljenog da bi se zasadila slcdeća generacija. Umesto samooprašivanja, dirigovano oprašivanje može biti korišćeno kao deo programa oplemenjivanja.
Mutaciono oplemenjivanje je jedan od mnogo postupaka koji mogu iti korišćeni da se unesu nove osobine u odabranu liniju. Mutacije koje se javljaju sponatano ili su veštački izazvane mogu biti korisni izvori promenjivosti za oplemenjivače biljaka. Cilj veštačke mutageneze je da se poveća odnos mutacija za željnu karakteristiku. Stopa mutacije može biti povećana na mnogo različitih načina uključujući temperaturu, dugoročno skladištenje semena, uslovi kulture tkiva, zračenje kao što su X-zraci, gama zraci (na pr. kobalt 60 ili cezijum 137), neutroni (proizvod nuklearne fisije urana 235 u atomskom reaktoru), beta zračenje (emitovano radioizotopima kao što su fosfor 32 ili ugljenik 14) ili ultraljubičasto zračenje (poželjno od 2500 do 2900 nm) ili hemijskim mutagenima (kao što su analozi baza (5-bromo-uracil), srodna jedinjenja (8-etoksi kafein), antibiotici (streptonigrin), alkilaciona sredstva (sumporni iperiti, azotni iperiti, epoksidi, etilenamini, sulfati, sulfonati, sulfoni, laktoni), azid, hidroksilamin, azotna kiselina ili akridini. Jednom kada je željena osobina primećena preko mutageneze, osobina može biti ugrađena u postojeću germplazmu tradicionalnim tehnikama oplemenivanja, kao što je povratno ukrštanje. Detalji mutacionog oplemenjivanja mogu biti nađeni u 'Principal of Cultivar Development' Fehr, 1993 Macmillan Publishing Companv čije je opis ovde uključen kao referenca. Pored toga, mutacije nastale u drugim linijama mogu biti korišćene da se dobije konverzija povratnim ukrštanjem odabranih linija koje sadrže takve mutacije.
IV. Postupci moduliranja ekspresije
U nekim izvođenjima, aktivnost i/ili nivo polipeptida je moduliran( tj.povećan ili smanjen). Porast u niva i/ili aktivnosti polipeptida može biti postignut obezbeđivanjem polipeptida u biljci. Kao što je ovde dalje diskutovano, poznato je mnogo postupaka u ovoj oblasti za obezbeđivanje polipeptida u biljci koji uključuju, ali bez ograničenja, direktno uvođenje polipeptida u biljkuu, uvođenje u biljku (trenutno ili stalno) polinukleotidnog konstrukta koji kodira polipeptid koji ima željenu aktivnost. Takođe se zna da postupci prema pronalasku mogu koristiti polinukleotid koji nije sposoban da diriguje, u transformisanoj biljci, ekspresiju proteina ili RNK. Prema tome nivo i/ili polipeptid mogu biti modulirani menjanjem gena koji kodira polipeptid ili njegov promoter. Videtina pr.Kmiec, US patent 5,565,350; Zarlinget al,PCT/US93/03868. Prema tome, obezbeđene su mutirane biljke koje nose mutaciju u genima, gde mutacija povećava ekspresiju gena ili povećava aktivnost kodiranog polipeptida.
U drugim izvođenjima, aktivnost i/ili nivo polipeptida je smanjen ili eliminisana uvođenjem u biljku polinukleotida koji inhibira nivo ili aktivnost polipeptida. Polinukleotid može inhibirati ekspresiju polipeptida direktno sprečavanjem translacije odgovarajuće mesindžer RNK ili indirektno kodiranjem polipeptida koji inhibira transkripciju ili translaciju gena koji kodira protein. Postupci za inhibiciju ili eliminaciju ekspresije gena u biljci su dobro poznati u ovoj oblasti i bilo koji takav postupak može biti korišćen u prikazanom pronalasku da inhibira ekspresiju gena u biljci. U drugim izvođenjima prema pronalasku, aktivnost polipeptida je smanjena ili eliminisana transformacijom biljne ćelije sa sekvencom koja kodira polipeptid koji inhibira aktivnost polipeptida. U drugim izvođenjima, aktivnost polipeptida može biti smanjena ili eliminisana remećenjem gena koji kodira polipeptid. Pronalazak obuhvata mutirane biljke koje nose mutacije u genima od interesa, gde mutacije smanjuju ekspresiju gena ili inhibiraju aktivnost kodiranih polipeptida.
Smanjenje aktivnosti specifičnih gena (takođe poznata kao umirivanje gana ili supresija gena) je poželjno iz nekoliko aspekata genetskog inžinjeringa kod biljaka. Mnoge tehnike za umirivanje gena su dobro poznate ljudima iz struke, uključujući, ali bez ograničenja, antisence tehnologiju (videtina pr.Sheehyet al.(1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA85:8805-8809; i US patent br. 5,107,065; 5,453,566; i 5,759,829); kosupresija( na pr.Tavlor (1997)Plant Celi9: 1245; Jorgensen (1990)Trends Biotech.8(12):340-344; Flavell (1994)Proc. Natl. Acad. Sci. USA91:3490-3496; Finneganet al.(1994)Bio/ Technology12:883-888; i Neuhuberet al.(1994)Mol. gen. Genet.244: 230-241); ometanje RNK (Napoliet al.(1990)Plant Celi 2:279-289; US patent br. 5,034,323; Sharp (1999)Genes Dev.13: 139-141; Zamoreet al.(2000)Celi101: 25-33; i Montgomeryet al.(1998)Proc. Natl. Acad. Sci. USA95: 15502-15507) umirivanje gena izazvano virusom (Burtonet al.(2000)Plant Celi.12: 691-705; i Baulcombe (1999)Curr. Op. Plant Bio. 2:109-113) ciljni-RNK-specifični ribozimi(Haseloff et al.(1988)Nature334:585-591); strukture ukosnice (Smithet al.(2000)Nature407:319-320; WO 99/5350; WO 02/00904; WO 98/53083; Chuang i Meyerowitz (2000)Proc. Natl. Acad. Sci. USA97:4985-4990; Stoutjesdijket al.(2002)Plant Physiol.129:1723-1731; Waterhouse i Hellivvell (2003)Nat. Rev. Genet.4: 29-38; Pandolfiniet al. BMC Biotechnology3: 7, US patentna objava pod br. 20030175965; Panstrugaet al.(2003)Mol. Biol, Rep.30: 135-140; Wesleyet al.(2001)Plant J.27: 581-590; Wang i Waterhouse (2001)Curr. Opin. Plant Biol.5: 146-150; US patentna objava broj 20030180945; i WO 02/00904 od kojih su svi ovde uključeni kao referenca); ribozimi (Steineckeet al.(1992)EMBO J.11: 1525; i Perrimanet al.(1993)Antisense Res. Dev.3:253) oligonukleotidno posredovana ciljana modifikacija( na pr.WO 03/076574 i WO 99/25853); molekuli ciljani sa Zn-prstima( na pr.WO 01/52620; WO 03/048345 i WO 00/42219); obeležavanje transpozona (Maeset al.(1999)Trends Plant Sci.4: 90-96; Dharmapuri and Sonti(1999) FEMS Microbiol. Lett.179: 53-59;Meissner et al.
(2000)Plant J.22:265-274; Phogatet al.(2000)J. Biosci. 25:57- 63;Walbot (2000)Curr. Opin. Plant Biol.2:103-107; Gaiet al.(2000)Nucleic Acids Res.28: 94-96; Fitzmauriceet al.(1999)Genetics153: 1919-1928; Bensenet al.(1995)Plant Celi7: 75-84; Menaet al.(1996)Science 274:1537-1540; i US patent br. 5.962,764; od kojih je svaki ovde uključen kao referenca; i ostali postupci ili kombinacije gornjih postupaka poznatih ljudima iz struke.
Zna se da antisens konstrukcije komplementarne sa bar delom mesindžer RNK (mRNK) za polinukleotid od interesa mogu biti konstruisane. Antisens nukleotidi su konstruisani da hibridizuju sa odgovarajućom mRNK. Modifikacije antisens sekvenci mogu biti napravljene sve dok sekvenca hibridizuje i ometa ekspresiju odgovarajuće mRNK. Na ovaj način, mogu biti korišćene antisens konstrukcije koje imaju bar 70%, optimalno 80%>, optimalnije 85% identičnu sekvencu sa odgovarajućom antisens sekvencom. Pored toga, delovi antisens nukleotida mogu biti korišćeni da ometaju ekspresiju ciljanog gena. Generalno, sekvence od bar 50 nukleotida, 100 nukleotida, 200 nukleotida, 300, 400, 450, 500, 550 ili više mogu biti korišćene.
Polinukleotidi mogu takođe biti korišćeni u sens orijentaciji da suprimuju ekspresiju endogenih gena u biljkama. Postupci za supresiju ekspresije gena kod biljaka korišćenjem polinukleortida u sens orijentaciji su poznati u oblasti tehnike. Postupci generalno uključuju transformisanje biljaka sa DNK konstruktom koji sadrži promoter koji vodi ekspresiju u biljci operativno vezanim sa bar delom polinukleotida koji odgovara transkriptu endogenih gena. Tipično, takva nukleotidna sekvenca ima suštinski identitet sekvence transkripta endogenog gena, generalno veći od oko 65%, 85% ili 95% identičnosti sekvence. Videti, US patent br. 5,283,184 i 5,034,323; uključen ovde kao referenca. Prema tome, mnogo postupaka može biti korišćeno da smanji ili eliminiše aktivnost polipeptida. Više od jednog postupka može biti korišćeno da smanji aktivnost jednog polipeptida. Pored toga, kombinacije postupaka mogu biti korišćene da se smanji ili eliminiše aktivnost polipeptida.
U jednom izvođenju, ekspresioni nivo polipeptida može biti meren direktno, na primer, testiranjem nivoa polinukleotida ili polipeptida ili poznatih metabolita u biljci (na pr.testiranjem nivoa N-acetilglifosata (,NAG') u biljci koja sadrži GAT gen) ili indirektno, na primer, procenjivanjem biljke koja ga ima osobinu koju daje polipeptid,na pr.otpornost na herbicid.
V.Postupci suzbijanja korova
Obezbeđeni su postupci za suzbijanje korova u oblasti gajenja, koji sprečavaju razvoj ili pojavu korova koji je otporan na herbicid u oblasti gajenja, proizvodnje useva i povećavanja sigurnosti useva. Izraz, suzbijanje' i iz njega izvedeni izrazi, na primer, kao ,suzbijanje korova' odnosi se na jedan ili više postupaka inhibicije rastva, klijanja, reprodukcije i/ili proliferacije; i /ili ubijanja, ukanjanja, uništavanja ili na drugi način smanjivanja javljanja i/ili aktivnosti korova.
Glifosat/ALS inhibitor biljke prema pronalasku pokazuju modifikovanu otpornost na herbicide i prema tome omogućavaju primenu jednog ili više herbicida u odnosima koji bi značajno oštetili kontrolne biljke i dalje omogućiju primenu kombinacija herbicida u nižim koncentracijama nego normalno primenjenim koji i dalje nastavljaju da selektivno suzbijaju korov. Pored toga, biljke otporne na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku mogu biti korišćene u kombinaciji sa tehnologijom herbicidnih mešavina i na taj način čine primenu hemijskih pesticida pogodnijom, ekonomičnijom i efikasnijom za proizvođača.
Postupci prema pronalasku obuhvataju sađenje semena ili biljke useva otpornog na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku u oblasti gajenja i u specifičnim izvođenjima, primenjivanje na bilo koji usev, deo useva, korov ili oblast njegovog gajenja efikasne količine herbicida od interesa. Zna se da herbicid može biti primenjen pre ili posle sađenja u oblasti gajenja. Takve primene herbicida mogu uključivati primenu glifosata, hemikalije ALS inhibitore ili njihove kombinacije. U specifičnim izvođenjima, smeša hemikalija ALS inhibitora u kombinaciji sa glifosatom je primenjivana na biljke otporne na glifosat/ALS inhibitor, gde efikasna koncentracija bar dve hemikalije ALS inhibitora bi značajno oštetila odgovarajuću kontrolnu biljku. U jednom neograničavajućem izvođenju, herbicid obuhvata bar jedan od sulfonilaminokarboniltrazolinon; triazolopirimidin; pirimidinil(tio)benzoat; imidazolinon; triazin; i/ili fosfinsku kiselinu.
U još jednom neograničavajućem izvođenju, kombinacija herbicida obuhvata glifosat, imazapir, hlorimuron-etil, kizalofop i fomesafen, gde je pomenuta efikasna količina tolerisana sa usevom i kontrolim korovima. Kao što je ovde na drugom mestu opisano, bilo koja efikasna količina ovih herbicida može biti primenjena. U specifičnim izvođenjima, ova kombinacija herbicida obuhvata efiksanu količinu glifosata koji obuhvata oko 1110 do oko 1130 g a.m./hektaru; efikasnu količinu imazapira koja obuhvata oko 7.5 do oko 27.5 g a.m./hektaru; efikasnu količinu hlorimuron-etila koja obuhvata oko 7.5 do oko 27.5 g a.m./hektaru; efikasnu količinu kizalofopa koji obuhvata oko 50 do oko 70 g a.m./hektaru; i efikasnu količinu fomesafena koji obuhvata oko 240 do oko 260 g a.m./hektaru.
U drugim izvođenjima, kombinacija bar dva herbicida je primenjena, gde kombinacija ne uključuje glifosat. U drugim izvođenjima, bar jedan ALS inhibitor i glifosat su primenjeni na biljku, Više detalja u vezi sa različitim kombinacijama herbicida koje mogu biti korišćene u postupcima prema pronalasku su dalje diskutovane.
U jednom izvođenju, postupak suzbijanja korova obuhvata sađenje semena ili biljke useva koji je otpran na glifosat/ALS inhibitor u oblasti i nanošenja na usev, deo useva, seme pomenutog useva ili oblasti gajenja, efikasne količine herbicida, gde pomenuta efikasna količina obuhvata: i) količinu koja nije tolerisana od strane prvog kontrolnog useva kada se nanosi na prvi kontrolni usev, deo useva, seme ili oblast gajenja, gde prvi kontrolni usev pokazuje prvi polinukleotid koji daje otpornost na glifosat i ne eksprimuje drugi polinukleotid koji kodira peptid otporan na ALS inhibitor;
ii) količinu koja nije tolerisana od strane drugog kontrolnog useva kada se nanese na drugi usev, deo useva, seme ili oblast gajenja, gde pomenuti drugi usev eksprimuje drugi polinukleotid i ne eksprimuje prvi polinukleotid; i
iii) količina koja je tolerisana kada se primeni na usev koji je otporan na glifosat/ALS inhibitor, deo useva, seme ili oblast gajenja. Herbicid može obuhvatati kombinaciju herbicida koji ili uključuju ili ne uključuju glifosat. U specifičnim izvođenjima, kombinacija herbicida obuhvata hemikalije ALS inhibitore kao stoje dalje detaljnije diskutovano.
U drugom izvođenju, postupak suzbijanja korova obuhvata sađenje u odgovarajućoj oblasti semena ili biljke useva koji je otporan na glifosat/ALS inhibitor i nanošenja na usev, deo useva, seme pomenutog useva ili oblast gajenja, efikasne količine herbicida, gde pomenuta efikasna količina obuhvata nivo koji je iznad preporučenog nivoa odnosa upotrebe za useve, gde je pomenuta efikasna količina tolerisana kada se primenjuje na usev otporan na glifosat/ALS inhibitor, deo useva, seme ili oblast njegovog gajenja. Primenjeni herbicid može obuhvatati kombinacije herbicida koje ili uključuju ili ne uključuju glifosat. U specifičnim izvođenjima, kombinacija herbicida obuhvata bar jednu hemikaliju ALS inhibitor kao što je dalje detaljnije diskutovano. Drugi herbicidi i njihove kombinacije mogu biti korišćne u različitim postupcima prema pronalasku i dalje su detaljnije diskutovane.
U drugom neograničavajućem izvođenju, herbicid primenjen u bilo kojim ovde opisanom postupkom ne sadrži glifosat, hlorimuron-metil, rimsulfuron, tribenuron-metil ili tifensufuron-metil.
a. Tipovi herbicida
Bilo koji herbicid može biti primenjen na usev koji je otporan na glifosat/ALS inhibitor, deo useva ili oblast gajenja koja sadrže ovu ratarsku biljku. Klasifikacija herbicida( tj.grupisanje herbicida u klase i podklase) je dobro poznato u ovoj oblasti i uključuje klasifikaciju prema HRAC (Herbicide Resistance Action Committee) i WSSA (the Weed Science Societv of America) (videti takođe, Retzinger i Mallory-Smith (1997)Weed Technology11: 384-393. Skraćena verzija HRAC klasifikacije (sa primedbama za odgovarajuću WSSA grupu) je dole data u Tabeli 1.
Herbicidi mogu biti klasifikovani po njihovom načinu dejstva i/ili mestu dejstva i mogu takođe biti klasifikovani po vremenu u kome se nanose (pre nicanja ili posle nicanja), po načinu primene( napr.nanošenje na lišće ili nanošenje na zemlju) ili kako ih biljka uzima ili kako utiču na biljku. Na primer, tifensulfuron-metil i tribenuron-metil su nanošeni na lišće useva( na pr.kukuruza) i generalno su tako metabolizirani, dok rimsulfuron i hlorimuron-etil su generalno uzimani preko korena i lišća biljke. ,Način dejstva' generalno se odnosi na metaboličke ili fiziološke procese u biljci koje herbicid inhibira ili na drugi način oštećuje, gde ,mesto dejstva' generalno se odnosi na fiziološku lokaciju ili biohemijsko mesto u biljci gde herbicid deluje ili direktno interereaguje. Herbicidi mogu biti klasifikovani na različite načine, uključujući način dejstva i/ili mesto dejstva( videti napr.Tabela 1).
Često gen otpronosti na herbicide koji daje otpornost na odgvoarajući herbicid ili drugu hemikaliju na biljki koja ga eksprimuje će takođe dati otpornost na druge herbicide ili hemikalije iste klase ili podklase, na primer, klase ili podklase iznete u Tabeli 1. Prema tome, u nekim izvođenjima prema pronalasku, transgenska biljka prema pronalasku je otporna na više od jednog herbicida ili hemikaliju u istoj klasi ili podklasi, kao što je na primer, inhibitor PPO, sulfonil uree ili sintentsi auksin.
Tipično, biljke prema prikazanom pronaslaku mogu biti otporne na različite tipove herbicida( tj.herbicide koji imaju različite načine dejstva i/ili različita mesta dejstva) kao i više količine herbicida koji ranije poznate biljke, na taj način omogućavajući poboljšanu strategiju suzbijanja korova u cilju smanjenja pojavljivanja i preovalađivanja korova koji je otporan na herbicide. Specifične kombinacije herbicida mogu biti korišćene za efikasno suzbijanje korova.
Pronalazak na taj način obezbeđuje transgensku ratarsku biljku moja može biti odabrana za upotrebu u proizvodnji useva na osnovu preo vladi vanj a herbicidno otpornih korova u oblasti gde transgenski usev traba da raste. Postupci za procenjivanje otpornosti na herbicicde različitih vrsta korova su poznati u ovoj oblasti. Tehnike suzbijanja korova su takođe poznate u oblasti tehnike, kao što su na primer, zamena useva korišćenjem useva koji je otporan na herbicid na koji lokalne vrste korova nisu otporne. Brojna tela nadziru i javno beleže učestalost i karakteristike korova otpronih na herbicide, uključujući Herbicide Resistance Action Committee (HRAC), the Weed Science Societv of America i različite državne agencije( videti na pr.rezultate otpornosti na herbicide različitih širokolistih korova iz 2004 Illinois Agricultural Pest Management Handbook) i ljudi iz struke bi bili sposobni da upotrebljavaju ovu informaciju da odrede koja kombinacija useva i herbicida bi bila korišćena na odgvoarajućoj lokaciji.
Ova tela takođe objavljuju savete i vodiče za sprečavanje razvoja i/ili pojavljivanja i suzbijanja rasprostiranjenostia korova koji je otporan na herbicide (videtina pr.Owen and Hartzler
(2004),2005 Herbicide Manual for Agricultural Professionals,Pub. WC 92 Revised (Iowa State Universitv Extension, Iowa State Universitv of Science and technologv, Ames, Iowa);Weed Control for Corn, Soybeans, and Sorghum,Poglavlje 2 '2004 Illinois Agricultural Pest Management Handbook' (Universitv of Illinois Extension, Universitv of Illinois at Urbana-Champaign, Illinois);Weed Controlin Guide for Field Crops,MSU Extension Bulletin E434 (Michigan State Universitv, east Lansing, Michigan)).
Tabela 1: Skraćena verzija HRAC herbicidne klasifikacije
I. ALS inhibitori (WSSA grupa 2)
A. Sulfoniluree
1. Azimsulfuron
2. Hlorimurn-etil
3. Metsulfuron-metil
4. Nikosulfuron
5. Rimsulfuron
6. Sulfuometuron-metil
7. Tifensulfuron-metil
8. Tribenuron-metil
9. Amidosulfuron
10. Bensulfuron-metil
11. Hlorsulfuron
12. Cinosulfuron
13. Ciklosulfamuron
14. Etametsulfuron-metil
15. Etoksisulfuron
16. Flazasulfuron
17. Flupirsulfuron-metil
18. Foramsulfuron
19. Imazosulfuron
20. Jodosulfuron-metil
21. Mezosulfuron-metil
22. Oksasulfuron
23. Pirimisulfuron-metil
24. Prosulfuron
25. Pirazosulniron-etil
26. Sulfosulfiiron
27. Triasulfuron
28. Trifloksisulfuron 29. Triflusulfuron-metil
30. Tritosulfliron
31. Halosulfuron-metil
32. Flucetosulfuron
B. Sulfonilaminokarboniltriazolinoni
1. Flukarbazon
2. Prokarbazon
C. Triazolopirimidini
1. Kloransulam-metil
2. Flumetsulam
3. Diklosulam
4. Florasulam
5. Metosulam
6. Penoksulam
7. Piroksulam
D. Pirimidiniloksi(tio)benzoati
1. Bispiribak
2. Piriftalid
3. Piribenzoksim
4. Piritiobak
5. Piriminobak-metil
E. Imidazolinoni
1. Imazapir
2. Imazetapir
3. Imazakin
4. Imazapik
5. Imazametabenz-metil
6. Imazamoks
II. Ostali herbicidi - Aktivni sastojci/
Dodatni načini dejstva
A. Inhibitori Acetil CoA karboksilaze (ACCaze) (WSSA grupa 1)
1. Ariloksifenoksipropionati (,FOPs') a. Kizalofop-P-etil b. Diklfop-metil c. Klodinafop-propargil
d. Fenoksapropil-P-etil e. Fluazifop-P-butil f. Propakizafop g. Haloksifop-P-metil h. Cihalofop-butil i. Hizalofop-P-etil
2. Cikloheksandioni (,DIMs') a. Aloksidim b. Butroksidim c. Celtodim
d. Cikloksidim e. Setoksidim f. Tepraloksidim g. Traloksidim
B. Inhibitori fotosistema II-HRAC Grupa C1AVSSA grupa 5
1. Triazini a. Ametrin b. Atrazin c. Cinazin
d. Desmetrin e. Dimetametrin f. Prometon g. Prometrin h. Propazin i. Simazin j. Simetrin k. Terbumeton 1. Terbutilazin
m. Terbutrin n. Trietazin
2. Triazinoni a. Heksazinoni b. Metribuzin c. Metamitron 3. Triazolinon a. Amikarbazon 4. Uracili a. Bromacil b. Lenacil c. Terbacil 5. Piridazinoni a. Pirazon 6. Fenil karbamati a. Desmedifam b. Fenmedifam C. Inhibitori fotositema II- -HRAC Grupa C2AVSSA grupa 7 1. Uree a. Fluometuron b. Linuron c. Hlorobromuron d. Hlorotoluron e. Hloroksuron f. Dimefuron g. Diuron h. Etidimuron i. Fenuron j. Izoproturon k. Izouron 1. Metabenztiazuron m. Metobromuron n. Metoksuron o. Monolinuron p. Neburon q. Siduron r. Tebutiuron 2. Amidi a. Propanil b. Pentanohlor D. Inhibitori fotosistema II-HRAC Grupa C3/WSSA grupa 6 1. Nitrili a. Bromofenoksim b. Bromoksinil c. Joksinil 2. Benzotiadiazinon (Bentazon) a. Bentazon 3. Fenilpiridazini a. Piridat b. Piridafol
E. Fotosistem-I-elektronska diverzija (Bipiridiliumi) (WSSA grupa 22)
1. Dikuat
2. Parakuat
F. Inhibitori PPO (protoporifnirogen oksidaza) (VVSSA grupa 14)
Difeniletri
1. Difeniletri a. Acifluorfen-Na b. Bifenoks c. Hlometoksifen
d. Fluoroglikofen-etil e. Fomesafen f. Halosafen g. Laktofen h. Oksifluorfen
2. Fenilpirazoli a. Fluazolate b. Piraflufen-etil 3. N-fenilftalimidi a. Cinidon-etil b. Flumioksazin c. Flumiklorak-pentil 4. Tiadiazoli a. Flutiacet-metil b. Tidiazimin 5. Oksadiazoli a. Oksadiazon b. Oksadiargil 6. Triazolinoni a. Karfentrazon-etil b. Sulfentrazon 7. Oksazolidindioni a. Pentoksazon
8. Pirimidindioni a. Benzfendizon b. Butafenicil
9. Ostali a. Pirazogil b. Profluazol
G. Izbeljivači: Inhibicija karotenoidne biosinteze u stupnju fitoen desaturaze (PDS) (VVSSA grupa 12)
1. Piridazinoni a. Norflurazon 2. Piridinkarboksamidi a. Diflufenikan b. Pikolinafen 3. Ostali a. Beflubutamid b. Fluridon c. Flurohloridon
d. Flurtamon
H. Izbeljivači: Inhibicija 4-hidroksifenil-piruvat-dioksigenaze (4-HPPD)
(VVSSA grupa 28)
1. Triketoni a. Mezotrion b. Sulkotrion 2. Izoksazoli a. Izoksahlortol b. Izoksaflutol 3. Pirazoli a. Benzofenap b. Pirazoksifen c. Pirazolinat
4. Ostali
a. Benzobiciklon
I. Izbeljivači: Inhibicija karotenoidne biosinteze (meta nepoznata) (VVSSA grupa 11 i 13)
1. Triazoli (VVSSA grupa 11) a. Amitrol 2. Izoksazolidinoni (VVSSA grupa 13) a. Klomazon 3. Uree a. Fluometuron
3.Difeniletar
a. Aklonifen
J. Inhibicija EPSP sintetaze 1. Glicini (VVSSA grupa 9) a. Glifosat b. Sulfosat
K. Inhibicija glutamin sintetaze 1. Fosfinske kiseline a. Glufosinat-amonijum b. Bialafos
L.Innibicija DHP (dihidropteroat)
sintetaze (VVSSA grupa 18)
1. Karbamati
a. Asulam
M. Inhibicija spajanja mikrotubula
(VVSSA grupa 3)
1. Dinitroanilini a. Benfluralin b. Butralin c. Dinitramin
d. Etalfluralin e. Orizalin f. Pendimetalin g. Trifuralin
2. Fosforoamidati a. Amiprofos-metil b. Butamifos 3. Piridini a. Ditiopir b. Tiazopir 4. Benzamidi a. Pronamid b. Tebutam 5. Benzendikarboksilne kiseline a. Klortal-dimetil
N. Inhibicija mitoze/organizacije mikrotubula
(VVSSA grupa 23)
1. Karbamati a. Hlorprofam b. Propfam c. Karbetamid
O. Inhibicija ćelijskog deljenja (Inhibicija veoma dugačkog lanca masnih kiselina prema predloženom mehanizmu; VVSSA grupa 15) 1. Hloroacetamidi a. Acetohlor b. Alahlor
c. Butahlor
d. Dimetahlor e. Dimetanamid f. Metazahlor g. Metolahlor h. Petoksamid i. Pretilahlor j. Propahlor k. Propizohlor 1. Tenilhlor 2. Acetamidi a. Difenamid b. Napropamid c. Naproanilid 3. Oksiacetamidi a. Flufenacet b. Mefenacet 4. Tetrazolinoni a. Fentrazamid 5. Ostali a. Anilofos b. Kanfenstrol c. Indanofan
d. Piperofos
P. Inhibicija sinteze ćelijskog zida (celuloza) 1. Nitrili (WSSA grupa 20) a. Dihlobenil b. Hlortiamid 2. Benzamidi (izoksaben (WSSA grupa 21)
a. Izoksaben
3. Triazolokarboksamidi (flupoksam) a. Flupoksam
Q. Rasparivanje (prekidanje membrane):
(WSSA grupa 24)
1. Dinitrofenoli a. DNOC
b. Dinoseb c. Dinoterb
R. Drugačija inhibicija sinteze lipida od ACC inhibicije
1. Tiokarbamati (WSSA grupa 8) a. Butilat b. Cikloat c. Dimepiperat
d. EPTC
e. Esprokarb f. Mol inat g. Orbenkarb h. Pebulate i. Prosulfokarb j. Bentiokarb k. Tiokarbazil I. Trialat
m. Vernolat
2. Fosforoditioalati a. Bensulid 3. Benzofurani a. Benfuresat b. Etofumesat 4. Halogene alkanske kiseline a. TCA b. Dalapon c. Flupropanat
S. Sintetički auksini (slični IAA) (VVSSA
(grupa 4)
1. Fenoksikarboksilne kiseline a. Klomeprop b. 2,4-D
c. Mekoprop
2. Benzoeve kiseline a. Dikamba b. Hloramben c. TBA 3. Piridin karboksilne kiseline a. Klopiralid b. Fluoriksipir c. Pikloram
d. Triciklopir
4. Hinolin karboksilne kiseline a. Hinklorak b. Hinmerak
5. Ostali (benazolin-etil)
a. Benazolin-etil
T. Inhibicija auksin transporta
1. Ftalamati; semikarbazoni
(VVSSA grupa P)
a. Naptalam b. Difflufenzopir-Na
U. Ostali mehanizmi dejstva
1. Arilaminopropionske kiseline a. Flamprop-M-metil /izopropil 2. Pirazolium a. Difenzokuat 3. Organoarsenici a. DSMA
b. MSMA
4. Ostali a. Bromobutid
b. Cinmetilin
c. Cumiluron
d. Dazomet
e. Daimuron-metil
f. Dimuron
g. Etobenanid
h. Fozamin
i. Metam
j. Oksaiklomefon
k. Oleinska kiselina
1. Pelargonska kisleina
m. Piributikarb
U jednom izvođenju, jedan ALS inhibitor ili bar dva ALS inhibitora su primenjivani na useve otporne na glifosat/ALS inhibitor ili oblast gajenja. U jednom neograničavajućem izvođenju, kombinacija ALS herbicida ne uključuje glifosat. ALS inhibitor može biti nanet u bilo kom efikasnom odnosu koji ozbiljno suzbija korov i značajno ne oštećuje usev. U specifičnim izvođenjima, bar jedan ALS inhibitor je nanet u količini koja bi značajno oštetila kontrolnu biljku. U drugim izvođenjima, bar jedan ALS inhibitor je nanet u obeleženoj preporučenoj količini za usev. U drugim izvođenjima, smeša ALS inhibitora je naneta u nižem odnosu nego što je preporučeno i korov je i dalje selektivno suzbijan. Herbicidi koji inhibiraju acetolaktat sintetazu (takođe poznati kao acetohidroksi kiselu sintetazu) i prema tome su korisni u postupcima prema pronalasku uključuju sulfoniluree kao stoje dato u Tabeli 1, uključujući njihove poljoprivredno prihvatljive soli( na pr.natrijumove soli); sulfonilaminokarboniltriazolinone kao što je prkazano u Tabeli 1, uključujući njihove poljoprivredno prihvatljive soli( na pr.natrijumove soli); triazolopirimidine kao stoje prikazano u Tabeli 1, uključujući njihove poljoprivredno prihvatljive soli( na pr.natrijumove soli); pirimidiniloksi(tio)benzoate kao što je dato u Tabeli 1, uključujući njihove poljoprivredno prihvatljive soli( na pr.natrijumove soli); i imidazolinone prema Tabeli 1, uključujući njihove poljoprivredno prijhvatljive soli( na pr.natrijumove soli). U nekim izvođenjima, postupci prema pronalasku obuhvataju upotrebu sulfonilurea koje nisu hlorimuron-etil, hlorsulfuron, rimsulfuron, tifensulfuron-metil ili tribenuron-metil.
U ostaljim postupcima, glifosat u kombinaciji sa drugim herbicidima od interesa može biti nanet na biljke koje su otporne na glifosat/ALS inhibitor ili njihovu oblast gajenja. Neograničavajući primeri formulacija glifosata su izneti u Tabeli 2. U specifičnim izvođenjima, glifosat je u obliku soli, kao što je amonijum, izopropilamonijum, kalijum, natrijum (uključujući seskvinatrijum) ili trimezijum (alternativno nazvan sulfosat). U drugim izvođenjima, smeša sinergijski efikasne količine kombinacije glifosata i ALS inhibitora (kao što sulfonilurea) je nanet na biljke otporne na glifosat/ALS inhibitor ili oblast gajenja. Prema tome u nekim izvođenjima transgenske biljke prema pronalasku su korišćene u postupku rasta useva koji su otporni na glifosat/ALS inhibitor nanošenjem herbicicda na koji su biljke otprone. Na ovaj način, tretiranje u kombinaciji sa jednim ili više herbicida će uključivati, ali bez ograničenja: acetohlor, acifluorfen i njenu natrijumovu so, aklonifen, akrolein (2-propenal), alahlor, aloksidim, ametrin, amikarbazon, amidosulfuron, aminopiralid, amitrol, amonijum sulfamat, anilofos, asulam, atrazin, azimsulfuron, beflubutamid, benazolin, benazolin-etil, benkarbazon, benfluralin, benfurezat, bensulfuron-metil, bensulid, bentazon, benzobiciklon, benzofenap, bifenoks, bilanafos, bispiribak i njihove natrijumove soli, bromacil, bromobutid, bromofenoksim, bromoksinil, bromoksinil oktanoat, butahlor, butafenacil, butamifos, butralin, butroksidim, butilat, kafenstrol, karbetamid, karfentrazon-etil, katehin, hlometoksifen, hloramben, hlorbromuron, hlorflurenol-metil, hloridazon, hlorimuron-etil, hlorotoluron, hlorprofam, hlorsulfuron, hlortal-dimetil, hlortiamid, cinidon-etil, cinmetilin, cinosulfuron, kletodim, klodinafop-propargil, klomazon, klomeprop, klopiralid, klopiralid-olamin, kloransulam-metil, CUH-35 (2-metoksietil 2-[[[4-hloro-2-fluoro-5-[(l-metil-2-propinil)oksi]fenil](3-fluorobenzoil)amino]karbonil]-l-cikloheksen-l-karboksilat), kumiluron, cianazin, cikloat, ciklosulfamuron, cikloksidim, cihalofop-butil, 2,4-D i njihove butotil, butil, izoktil i izopropil estri i njihovi dimetilamonijum, diolamin i trolamin soli, daimuron, dalapon, dalapon-natrijum, dazomet, 2,4-DB i njihove dimetilamonijum, kalijumove i natrijumove soli, dezamedifam, desmetrin, dikamba i njihove diglikolamonijum, dimetilamonijum, kalijum i natrijumove soli, dihlobenil, dihlorprop, diklofop-metil, diklosulfam, difenzokuat metilsulfat, diflufenikan, diflufenzopir, dimefuron, dimepiperat, dimetahlor, dimetametrin, dimetenamid, dimetenamid-P, dimetrin, dimetilarsenova kiselina i njihove natrijumove soli, dinitramin, dinotreb, difenamid, dikuat dibromid, ditiopir, diuron, DNOC, endotal, EPTC, esprokarb, etalfluralin, etametsulfuron-metil, etofumesat, etoksifen, etoksisulfuron, etobenzanid, fenoksaprop-etil, fenoksaprop-P-etil, fentrazamid, fenuron, fenuron-TCA, flamprop-metil, flamprop-M-izopropil, flamprop-M-metil, flazasulfuron, florasulam, fluazifop-butil, fluazifop-P-butil, flukarbazon, flucetosulfuron, fluhloralin, flufenacet, flufenpir, flufenpir-etil, flumetsulam, flumiklorak-pentil, flumioksazin, fluometuron, fluoroglikofen-etil, flupirsulfuron-metil i njegova natrijumova so, flurenol, flurenol-butil, fluridon, fluorohloridon, fluroksipur, flurtamon, flutiacet-metil, fomezafen, foramsulfuron, fozamin-amonijum, glufosinat, glufosinat-amonijum, glifosinat i njegove soli kao što je amonijum, izopropilamonijum, kalijum, natrijum (uključujući seskvinatrijum), i trimezijum (alternativno nazvan sulfosat), halosulfuron-metil, haloksifop-etotil, halokifop-metil, heksazinon, HOK-201 (V-(2,4-difiuorofenil)-l,5-dihidro-^-(l-metiletil)-5-okso-l-[(tetrahidro-2/f-piran-2-il)metil]-4//-l,2,4-triazol-4-karboksamid), imazametabenz-metil, imazamoks, imazapik, imazapir, imazakin, imazakin-amonijum, imazetapir, imazetapir-amonijum, imazosulfuron, indanofan, jodosulfuron-metil, joksinil, ioksinil, joksinil-natrijum, izoproturon, izouron, izoksaben, izoksaflutol, izoksahlortol, laktofen, lenacil, linuron, melinski hidrazid, MCPA i njegove soli (na pr. MPA-dimetilamonijum, MCPA-kalijum i MCPA-natrijum, estri (na pr. MCPA-2-etilheksil, MCPA-butotil) i tioestri (na pr. MCPA-tioetil), MCPB i njegove soli (na pr. MCPB-natrijum) i estri (na pr, MCPB-etil), mekoprop, mekoprop-P, mefenacet, mefluidid, mezosulfuron-metil, mezotrion, metam-natrijum, metamifop, metamitron, metazahlor, metabenztiazuron, metilarsinska kiselina i njene kalcijumove, monoamonijum, monoanatrijum i dinatrijum soli, metildimron, metobenzuron, metobromuron, metolahlor, S-metolahlor, metosulam, metoksuron, metribuzin, metsulfuron-metil, molinat, monolinuron, naproanilid, napropamid, naptalam, neburon, nikosulfuron, norflurazon, orbenkarb, orizalin, oksadiargil, oksadiazon, oksasulfuron, oksaziklomcfon, oksifluorfen, parakat dihlorid, pebulat, pelargonska kiselina, pendimetalin, penoksulam, pentanohlor, pentoksazon, perfluidon, petoksamid, fenmedifam, pikoram, natrij um-pikoram, pikolinaften, pinoksaden, piperofos, pretilahlor, primisulfuron-metil, prodiamin, profoksidim, prometon, prometrin, propahlor, propanil, propahizafop, propazin, profam, propizohlor, propoksikarbazon, propizamid, prosulfokarb, prosulfuron, piraklonil, piraflufen-etil, pirasulfotol, pirazogil, pirazolinat, pirazoksifen, pirazosulfuron-etil, piribenzoksim, piributikarb, piridat, piriftalid, piriminobak-metil, pirimisulfan, piritiobak, natrijum-piritiobak, piroksulam, hinklorak, hinmerak, hinoklamin, hizalofop-etil, hizalofop-P-etil, hizaolofop-P-tefuril, rimsulfuron, setoksidim, siduron, simazin, simetrin, sulkotrion, sulfentrazon, sulfometuron-metil, sulfosulfuron, 2,3,6-TBA, TCA, TCA-natrijum, tebutam, tebutiuron, tefuriltrion, tembotrion, tepraloksidim, terbacil, terbumeton, terbutilazin, terbutrin, tenilhlor, tiazopir, tienkarbazon, tifensulfuron-metil, tiobenkarb, tiokarbazil, topramezoon, tralkoksidim, tri-alat, triasulfuron, triaziflam, tribenuron-metil, triklopir, triklopir-butotil, triklopir-trietilamonjum, tridifan, trietazin, trifloksisulfuron, trifluralin, triflusulfuron-metil, tritosulfuron i vernolat.
Drugi pogodni herbicidi i poljoprivredne hemikalije su poznati u ovoj oblasti, kao što su na primer, one opisane u WO 2005/041654. Drugi herbicidi takođe uključuju bioherbicide kao što suAlternaria destruensSimmons,Colletotrichum gloeosporiodes(Penz.) Penz & Sacc,Drechsiera monoceras(MTB-951),Myrothecium verrucaria(Albertini & Schvveinitz) Ditmar: Fries,Phytophthora palmivora(Butl.) Butl. iPuccinia thlaspeosSchub. Kombinacije različitih herbicida mogu dovesti do više nego aditivnog( tj.sinergijskog) efekta na korove i/ili manje nego aditivnog efekta( tj.zaštitnog) na useve ili druge poželjne biljke. U izvesnim slučajevima, kombinacije glifosata sa drugim herbicidima koji imaju sličan spektar suzbijanja, ali drugačiji način delovanja će biti naročito korisni za sprečavanje razvijanja otpornih korova. Herbicidno efikasne količine bilo kog odgovarajućeg herbicida mogu biti lako određene od strane ljudi iz struke pomoću jednostavnih eksperimenata.
Herbicidi mogu biti klasifikovani u grupe i/ili podgrupe kao što je ovde gore opisano sa pozivanjem na njihov način delovanja, ili mogu biti klasifikovani u grupe i/ili podgrupe u vezi sa njihovom hemijskom strukturom.
Herbicidi sulfonamidi imaju u suštini molekulsku strukturu koju karakteriše sulfonamidna grupa (-S(0)2NH-). Kao što se ovde pominje, sulfonamidni herbicidi naročito obuhvataju herbicide sulfoniluree, herbicide sulfonilaminokarboniltriazolinona i herbicide triazolopirimidina. U herbicidima sulfoniluree sulfoamidni deo je komponenta u mostu sulfoniluree (-S(0)2NHC(0)NH(R)-). U herbicidima sulfoniluree sulfonilni kraj mosta sulfoniluree je povezan ili direktno ili preko kiseonikovog atoma ili opciono supstituisane amino ili metilenske grupe sa tipično supstituisanom cikličnom ili acikličnu grupu. Na suprotnom kraju mosta sulfoniluree, amino grupa, koja ima supstituent kao što je metil (R je CH3) umesto vodonika, je povezan za heterocikličnu grupu, tipično simetrični pirimidinski ili triazinski prsten, koji ima jedan ili dva susptituenta kao što su metil, etil, trifluorometil, metoksi, etoksi, metilamino, dimetilamino, etilamino i halogeni. U sulfonilaminokarboniltriazolinonskim hebicidima, komponenta sulfonamidne grupe, je sulfonilaminokarbonilni most (-S(0)2NHC(0)-). U sulfonilaminokarboniltriazolinonskim herbicidima sulfonilni kraj sulfonilaminokarbonilnog mosta je tipično povezan za supstituisani fenilni prsten. Na suprotnom kraju sulfonilaminokarbonilnog mosta, karbonil je vezan za položaj 1 triazolinonskog pstena, koji je tipično supstituisan sa grupama kao što su alkil i alkoksi. U triazolopirimidinskim herbicidima, sulfonilni kraj sulfonamidnog dela je vezan za položaj 2 supstituisanog [l,2,4]triazolopirimidinskog sistema prstena i amino kraj sulfonamidnog dela je povezan sa supstituisanim aril, tipično fenil, grupom ili aletrativno amino kraj sulfonilamidnog dela je vezan za položaj 2 supstituisanog [l,2,4]triazolopirimidinskog sistema prstema i sulfonilni kraj sulfonilamidnog dela je vezan za supstituisani aril, tipično piridinil grupu.
Reprezentativni herbicidi sulfonilurea korisni za ovaj pronalazak su oni formula:
gde:
J je odabran iz grupe koju čine
Jje R13S02N(CH3)-;
RjeHili CH3;
R<1>je F, Cl, Br, N02, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, C3-C4cikloalkil, C2-C4haloalkenil, C1-C4alkoksi,
C1-C4haloalkoksi, C2-C4alkoksialkoksi, C02R<14>, C(0)NR<15>R<16>, S02NR17R<18>, S(0)nR<19>,
C(0)R<20>, CH2CN ili L;
R2 je H, F, Cl, Br, I, CN, CH3, OCH3, SCH3, CF3ili OCF2H;
R<3>je Cl, N02, C02CH3, C02CH2CH3, C(0)CH3, C(0)CH2CH3, C(0)-ciklopropil, S02N(CH3)2,
S02CH3, S02CH3, S02CH2CH3, OCH3ili OCH2CH3;
R<4>je C-C3 alkil, C,-C2haloalkil, CrC2alkoksi, C2-C4haloalkenil, F, Cl, Br, N02, C02R<14>,
C(0)NR<15>R<16>, S02NR<17>R<18>, S(0)„R<19>, C(0)R<20>ili L;
R5jeH, F, Cl, Br ili CH3;
R6 je C]-C3alkil opciono supstituisan sa 0-3 F, 0-1 Cl i 0-1 C3-C4alkoksiacetiloksi, ili R6 je Ci-C2
alkoksi, C2-C4haloalkenil, F, Cl, Br, C02R<14>, C(0)NR<15>R<16>, S02NR,<7>R<18>, S(0)nR<19>,
C(0)R<20>ili L;
R7jeH, F, Cl, CH3 ili CF3;
R8 je H, CrC3alkil ili piridinil;
R9 je C,-C3alkil, CrC2alkoksi, F, Cl, Br, N02, C02R<14>, S02NR<17>R18,S(0)nR<19>, OCF2H, C(0)R<20>,
C2-C4haloalkenil ili L;
R10 je H, Cl, F, Br, CrC3alkil ili C,-C2alkoksi;
R" je H, CrC3alkil, C,-C2alkoksi, C2-C4haloalkenil, F, Cl, Br, C02R<14>, C(0)NR<15>R<16>,
S02NR<17>R<18>, S(0)nR<19>, C(0)R<20>ili L;
R12 je halogen, C,-C4alkil ili Ci-C3alkilsulfonil;
R13jeCi-C4 alkil;
R<14>je alil, propargil ili oksetan-3-il; ili R<14>je Ci-C3alkil opciono susptituisan sa bar jednim
nezavisno izabranim halogenom, C1-C2alkoksi i CN;
R15 je H, C1-C3alkil ili Ci-C2alkoksi;
R<,6>jeCi-C2alkil;
R17 je H, C1-C3alkil, C1-C2alkoksi, alil ili ciklopropil;
R18jeH ili C1-C3 alkil;
R19 je C1-C3alkil, C1-C3haloalkil, alil ili propargil;
R 20je Ci-C4alkil, CrC4 haloalkil ili C3-C5cikloalkil opciono supstituisan sa halogenom;
nje 0 ili 1 ili 2;
Lje
L'jeCKb, NH ili O;
R21 je H ili C1-C3 alkil;
X je H, C1-C4alkil, C1-C4alkoksi, CrC4 haloalkoksi, Ci-C4haloalkil, C1-C4haloalkiltio, Ci-C4
alkiltio, halogen, C2-C5alkoksialkil, C2-C5alkoksialkoksi, amino, C1-C3alkilamino ili di(Ci-C3alkil)amino;
Y je H, C1-C4alkil, C1-C4alkoksi, Ci-C4haloalkoksi, C1-C4alkiltio, C1-C4haloalkiltio, C2-C5
alkoksialkil, C2-C5alkoksialkoksi, amino, C1-C3alkilamino, di(Ci-C3alkil)amino, C3-C4alkeniloksi, C3-C4alkiniloksi, C2-Csalkiltioalkil, C2-Csalkilsulifnilalkil, C2-Cs
alkilsulfonilalkil, C1-C4haloalkil, C2-C4alkinil, C3-C5cikloalkil, azido ili cijano; i
ZjeCH ili N;
uz uslov da (i) kada jedan ili oba X i Y su C| haloalkoksi, tada Z je CH; i (ii) kada X je halogen, tada Z je CH i Y je OCH3, OCH2CH3, N(OCH3)CH3, NHCH3, N(CH3)2ili OCF2H. Od značaja je navedena tečna herbicidna kompozicija koja sadrži jedan ili više sulfonilurea formule I gde kada R6 je alkil, pomenuti alkil je nesupstituisan.
Reprezentativni triazolopirimidin herbicidi razmatrani za uporebu u ovom pronalaski su oni formule:
gde
R2<2>i R<23>su svaki nezavisno halogen, nitro, C1-C4alkil, C1-C4haloalkil, C1-C4alkoksi, C1-C4
haloalkoksi ili C2-C3alkoksikarbonil;
R24 je H, halogen, C1-C2alkil ili C1-C2alkoksi;
W je -NHS(0)2- ili -S(0)2NH-;
Y' je H, C1-C2alkil ili Ci-C2alkoksi;
Y2 je H, F, Cl, Br, d-C2 alkil ili Ci-C2 alkoksi;
Y3 je H, F ili metoksi;
Z'jeCH ili N; i
Z2jeCH ili N;
1*2 • *
uz uslov daje bar jedan od Y 1 Y drugačiji od H.
U gornjem Markušovom opisu reprezentativnih triazolopirimidinskih herbicida, kada je W - NHS(0)2- sulfonilni kraj sulfonamidne grupe je vezan za [l,2,4]triazolopirimidinski sistem prstenova i kada je W -S(0)2NH- amino kraj sulfonamidne grupe je vezan za [l,2,4]triazolopirimidinski sistem prstenova.
U gornjim navođenjima, izraz 'alkil' korišćen sam ili u složenim rečima kao što je 'alkiltio' ili 'haloalkil' uključuje ravnolančani ili razgranati alkil, kao što je metil, etil, «-propil, z'-propil ili različite butil izomere. ,Cikloalkil' uključuje, na primer ciklopropil, ciklobutil i ciklopentil. 'Aleknil' uključuje ravnolančane ili razgranate alkene kao što su etenil, 1-propenil, 2-propenil i različite butenil izomere. 'Alkenil' takođe uključuje poliene kao što su 1,2-propandienil i 2,4-butadienil. 'Alkinil' uključuje ravnolančane ili razgranate alkinile kao što je etinil, 1-propinil, 2-propinil i različite butinil izomere. 'Alkinil' može takođe uključivati grupe koje sadrže višestruke trostruke veze kao što je 2,5-heksadienil. 'Alkoksi' uključuje, na primer, metoksi, etoksi,n-propoksi, izopropoksi i različite butoksi izomere. 'Alkoksialkil' označava alkoksi supstituciju alkila. Primeri 'alkoksialkil' uključuje CH3OCH2, CH3OCH2CH2, CH3CH2OCH2, CH3CH2CH2CH20CH2i CH3CH2OCH2CH2. 'Alkoksialkoksi' označava alkoksi supstituciju alkoksi. 'Alkeniloksi' uključuje ravnolačnu ili razgranatu alkeniloksi grupu. Primeri 'alkeniloksi' obuhvataju H2C=CHCH20, (CH3)CH=CHCH20 i CH2=CHCH2CH20. 'Alkiniloksi' uključuje ravnolančane ili razgranate alkiniloksi grupe. Primeri 'alkiniloksi uključuju HC=CCH20 i CH3C=CCH20. 'Alkiltio' uključuje razgranate ili ravnolančane alkiltio grupe kao što su metiltio, etiltio i različite propiltio izomere. 'Alkiltioalkil' označava alkiltio supstituciju alkila. Primeri 'alkiltioalkil' uključuje CH3SCH2, CH3S CH2CH2, CH3CH2SCH2, CH3CH2CH2CH2SCH2i CH3CH2SCH2CH2; 'alkilsulifnilalkil' i 'alkilsulfonilalkil' obuhvataju odgovarajuće sulfokside i sulfone, respektivno, Drugi supstituenti kao što su 'alkilamino', 'dialkilamino' su analogno definisani.
Ukupan broj ugljenikovih atoma u grupi supstiteuneta je naveden sa 'Q-Cj' prefiksom gde i i j su brojevi od 1 do 5. Na primer, C1-C4obuhvata metil do butil, uključujući različite izomere. Kao sledeći primeri, C2alkoksialkil označava CH3OCH2; C3alkoksialkil označava na primer CH3CH(OCH3), CH3OCH2CH2ili CH3CH2OCH2; i C4alkoksialkil označava različite izomere alkil grupe supstituisane sa alkoksi grupom koja sadrži ukupno četiri ugljenikova atoma, primeri uključuju CH3CH2CH2OCH2i CH3CH2OCH2CH2.
Izraz 'halogen', ili sam ili u kombinaciji reči kao što je 'haloalkil' uključuju fluor, hlor, brom ili jod. Dalje, kada se korišćena u složenim rečima kao što je 'haloalkil', pomenuti alkil može biti delimično ili potpuno supstituisan sa atomima halogena koji mogu biti isti ili različiti. Primeri 'haloalkil' uključuju F3C, C1CH2,CF3CH2i CF3CC12. Izrazi 'haloalkoksi', 'haloalkiltio' i slično, su definisani analogno izrazu 'haloalkil. Primeri 'haloalkoksi' uključuje CF3O, CCl3CH20, HCF2CH2CH20 i CF3CH20. Primeri 'haloalkiltio' uključuju CC13S, CF3S, CC13CH2S i C1CH2CH2CH2S.
Sledeći herbicidi sulfoniluree prikazuju sulfoniluree korisne za ovaj pronalazak: amidosulfuron( N- [ [[[(4,6-dimetoksi-2-pirimidinil)amino] karbonil] amino] -sulfonil] - N-metilmetansulfonamid), azimsulfuron (A-[[(4,6-dimetoksi-2-pirimidinil)amino]karbonil]-1 -metil-4-(2-metil-2//-tetrazol-5-il)-l//-pirazol-5-sulfonamid), bensulfuron-metil (metil 2-[[[[[(4,6-dimetoksi-2-pirimidinil)amino]karbonil]amino]sulfonil]metil]benzoat), hlorimuron-etil (etil 2-[[[[(4-hloro-6-metoksi-2-pirimidinil)amino]karbonil]amino]sulfonil]benzoat), hlorsulfuron (2-hloro-A^-[[(4-metoksi-6-metil-l,3,5-triazin-2-il)amino]karbonil]benzensulfonamid), citosulfuron (#-[[(4,6-dimetoksi-l,3,5-triazin-2-il)amino]karbonil]-2-(2-metoksietoksi)-benzensulfonamid), ciklosulfamuron (A^-[[[2-(ciklopropilkarbonil)fenil]amino]-sulfonil]-A''/-(4,6-dimetoksipirimidin-2-il)urea), etametsulfuron-metil (metil 2-[[[[[(4-etoksi-6-(metilamino)-l,3,5-triazin-2-il]amino]karbonil]amino]sulfonil]benzoat), etoksisulfuron (2-etoksifenil [[(4,6-dimetoksi-2-pirimidinil)amino]karbonil]sulfamat), flazasulfuron (A^-[[(4,6-dimetoksi-2-pirimidiniljamino]karbonil]-3-(trilfuorometil)-2-piridinsulfonamid), flucetosulfuron (l-[3-[[[[(4,6-dimetoksi-2-pirimidinil)amino]karbonil]amino]sulfonil]-2-piridinil]-2-lfuoropropil metoksiacetat), flupirsulfuron-metil (metil 2-[[[[(4,6-dimetoksi-2-pirimidinil)amino]karbonil]amino]-sulfonil]-6-
(trifluorometil)-3-piridinkarboksilat), foramsulfuron (2-[[[[(4,6-dimetoksi-2-pirimidinil)amino]karbonil]amino]sulfonil]-4-(formilamin^ halosulfuron-metil (metil3-hloro-5-[[[[(4,6-dimetoksi-2-pirimidinil)amino]karbonil]amino]sulfonil]-l-metil- IH-pirazol-4-karboksilat), imazosulfuron (2-hloro-Ar-[[(4,6-dimetoksi-2-pirimidinil)-amino]karbonil]imidazo[l ,2-a]-piridin-3-sulfonamid), jodosulfuron-metil (metil 4-jodo-2-[[[[(4-metoksi-6-metil-l,3,5-triazin-2-il)amino]karbonil]amino]-sulfonil]-benzoat), mezosulfuron-metil (metil 2-[[[[(4,6-dimetoksi-2-pirimidinil)amino]karbonil]amino]-sulfonil]-4-[[(metilsulfonil)-amino]metil]benzoat), metsulfuron-metil (metil 2-[[[[(4-metoksi-6-metil-l,3,5-triazin-2-il)amino]karbonil]amino]-sulfonil]-benzoat), nikosulfuron (2-[[[[(4,6-dimetoksi-2-pirimidinil)amino]karbonil]amino]-sulfonil]-^ oksasulfuron (3-oksetanil 2-[[[[(4,6-dimetil-2-pirimidinil)amino]karbonil]amino]sulfonil]benzoat), pirimisulfuron-metl (metil 2-[[[[(4,6-bis(trifluorometoksi)-2-pirimidinil)amino]karbonil]amino]sulfonil]benzoat), prosulfuron (A^[(4-metoksi-6-metil-l,3,5-triazin-2-il)am benzensulfonamid), pirazosulfuron-ctil (etil 5-[[[[(4,6-dimetoksi-2-pirimidinil)amino]karbonil]-amino] sulfonil] -1 -metil-1 ///-pirazol-4-karboksilat), rimsulfuron( N- [ [(4,6-dimetoksi-2-pirimidinil)amino]karbonil] -3 -(etilsulfonil)-2-piridinsulfonamid), sulfometuron-metil (metil 2-[[[[(4,6-dimetoksi-2-pirimidinil)amino]karbonil]amino]sulfonil]benzoat), sulfosulfuron (#-[[(4,6-dimetoksi-2-pirimidinil)amino]karbonil]-2-(etilsulfonil)imidazo[l,2-a]piridin-3-sulfonamid),
tifensulfuron-metil (metil 3-[[[[(4-metoksi-6-metil-l,3,5-triazin-2-il)amino]karbonil]amino]-sulfonil]-2-tiofenkarboksilat), triasulfuron (2-(2-hloroetoksi)-#-[[(4-metoksi-6-metil-l,3,5-triazin-2-il)amino]karbonil]benzensulfonamid), tribenuron-metil (metil 2-[[[[#-(4-metoksi-6-metil-1,3,5-triazin-2-il)-#-metilamino]karbonil]amino]sulfonil]benzoat), trifloksisulfuron (7V-[[(4,6-dimetoksi-2-pirimidinil)amino]karbonil]-3-(2,2,2-trifluoroetoksi)-2-piridinsulfonamid), triflusulfuron-metil (metil 2-[[[[[4-dimetilamino)-6-(2,2,2-trifluoroetoksi)-l,3,5-triazin-2-il]amino]karbonil]amino]-sulfonil]-3-metilbenzoat) i tritosulfuron (#-[[[4-metoksi-6-(trifluorometil)-l,3,5-triazin-2-il]amino]karbonil]-2-(trifluorometil)benzen-sulfonamid).
Sledeći triazolopirimidinski herbicidi prikazuju triazolopirimidnine korisne za ovaj pronalazak: kloransulam-metil (metil 3-hloro-2-[[(5-etoksi-7-fluoro[l,2,4]-triazolo[l,5-c]pirimidin-2-il)sulfonil]amino]benzoat, diklosulam (#-(2,6-dihlorofenil)-5-etoksi-7-fluoro[l,2,4]triazolo[l,5-c]pirimidin-2-sulfonamid, florasulam (7V-(2,6-difluorofenil)-8-fluoro-5-metoksi[l,2,4]triazolo[l,5-c]pirimidin-2-sulfonamid), flumetsulam (A^^^-difluorofeni^-S-metilfl^^jtriazolofl^-a]pirimidin-2-sulfonamid), metosulam (A,-(2,6-dihloro-3-metilfenil)-5,7-dimetoksi[l,2,4]-triazolo[l,5-a]pirimidin-2-sulfonamid), penoksulam (2-(2,2-difluoroetoksi)-#-(5,8-dimetoksi-[l,2,4]triazolo[l,5-c]pirimidin-2-il)-6-(trifluorometil)benzensulfonamid) i piroksulam(#-(5,7-dimetoksi[l,2,4]triazolo[l,5-a]pm
Sledeći sulfonilaminokarboniltriazolinonski herbicidi prikazuju sulfonilaminokarboniltriazolinone korisne za ovaj pronalazak: flukarbazon (4,5-dihidro-3-metoksi-4-metil-5-okso-#-[[2-(trifluorometoksi)fenil]sulfonil]-1 H-1,2,4-triazole-1 -karboksamid)i prokarbazon (metil 2-[[[(4,5-dihidro-4-metil-5-okso-3-propoksi-l//-l,2,4-triazol-l-il)karbonil] amino] sulfoniljbenzoat).
Dodatni herbicidi uključuju fenmedifam, triazolinone i herbicide opisane u WO2006/012981, koji su ovde uključeni referencom u potpunosti.
Postupci dalje obuhvataju nanošenje na usev i korov na polju dovoljne količine bar jednog herbicida na koji je seme useva ili biljka otporna, kao što su na primer, glifosat, hidroksifenilpiruvatdioksigenazni inhibitor{ na pr.mezotrion ili sulkotrion), fitoenski desaturazni inhibitor{ na pr.diflufenikan, inhiitor sinteze pigmenta, sulfonamid, imidazolinon, bialafos, fosfinotricin, azafenidin, butafenacil, sulfosat, glufosinat, triazolopirimidin, pirimidiniloksi(tio)benzoat ili sulonilaminokarboniltriazolinon, inhibitor acetil Co-A karboksilaze kao što je kizalofop-P-etil, sintetski auksin kao što je kinklorak ili inhibitor protoksa za suzbijanje korova bez značajnog oštećenja ratarske biljke.
b. Efikasna količina herbicida
Generalno, efikasna količina herbicida primenjena na polje je ona koja je dovoljna da selektivno suzbija korove bez značajnog oštećenja useva. Izraz 'korov' koji je ovde korišćen se odnosi na biljku koja nije poželjna u odgovarajućoj oblasti. Suprotno, ,ratarska biljka' se ovde odnosi na biljku koja je poželjna u odgovarajućoj oblasti, kao što je na primer, biljka soje. Prema tome, u nekim izvođenjima, korov nije ratarska biljka ili ratarska vrsta, dok u nekim izvođenjima, korov je vrsta useva koja se traži da bude eliminisana iz odgovarajuće oblasti, kao što je na primer, inferiorna i/ili netransgenska biljka kukuruza na polju zasađenom sa transgenskim kukuruzom, ili biljka soje na polju zasađenom sa kukuruzom. Korov može biti ili klasifikovan u dve glavne grupe: monokotiledoni i dikotiledoni.
Mnoge biljne vrste mogu biti suzbijene( tj.uništene ili oštećene) ovde opisani herbicidima. Prema tome, postupci prema pronalasku su korisni u suzbijanju ovih biljnih vrsta gde su one nepoželjne( tj.gde su korov). Ove biljne vrste uključuju ratarske biljke kao i vrste koje se uobičajeno smatraju korovima, uključujući ali bez ograničenja vrste kao što su: mišiji repak( Alopecurus myosuroides),lisičiji rep( Setaria faberi),svračica crvena( Digitaria sanguinalis),Surinam grass( Brachiaria decumbens),ovas njivski( Avena fatua),dikica( Xanthium pensylvanicum),pepeljuga obična( Chenopodium album),crveni ladolež( Ipomoea coccinea),štir( Amaranthus spp.),lipica teofrastova( Abutilion theophrasti),veliki muhar( Echinochloacrus- galli),zubača obična( Cyndon dactylori),klasača crvena( Bromus tectorium),goosegrass( Eleusineindica),muhar zeleni( Setaria viridis),Italijanski ljulj( Lolium multiflorum),divlji sirak( Sorghum halepense),lesser canarvgrass( Phalaris minor),strsac obični( Apera spica- venti),wooly cupgrass (Erichloa villosa), yellow nutsedge( Cyperus esculentus),mišjakinja( Stellaria media),pelenasta ambrozija( Ambrosia artemisiifolia), Kochia scoparia,horsevveed( Conyza canadensis),tvrda ljuljica( Lolium rigidum),goosegrass( Eleucine indica),hairy fleabane( Conyza bonariensis),bokvica( Plantago lanceolata),tropski spidevvort( Commelina benghalensis),poponac obični( Concolvidus arvensis),zubača( Cyperus rotundus),redvine( Brunnichia ovata),hemp sesbania( Sesbania exalata),sicklepod( Senna obtusifolia),Texas blevveed( Helianthus ciliaris)i Devil's claws( Proboscidea louisianica).U drugim izvođenjima, korov obuhvata ljuljicu otpornu na herbicide, na primer ljuljicu otpornu na glifosat, ljuljicu otpornu na parakuat, ljuljicu otpornu na ACCazni inhiitor i ljuljicu otpornu na neselektivne herbicide. U nekim izvođenjima, neželjene biljke su najbliže biljakama useva.
Ovde korišćen izraz ,selektivno suzbija' znači da većinu korova u oblasti gajenja značajno ošteti ili uništi, dok ukoliko su ratarske biljke takođe prisutne na polju, većina ratarskih biljaka nije značajno oštećena. Prema tome, smatra da postupak koji selektivno suzbija korov kada je bar 55%, 60%, 65%, 70%o, 75%, 80%), 85%>, 90%, 95%> ili više korova značajno oštećeno ili uništeno, dok je od ratarskih biljka takođe prisutnih na polju, manje od 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% ili 1% zanačajno oštećeno ili uništeno.
U nekim izvođenjima, biljke otporne na glifosat/ALS inhibitror prema pronalasku nije značajno oštećena tretiranjem sa odgovarajućim herbicidima primenjenim na biljku u dozi koja je ekvivalentna odnosu od bar 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 150, 170, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 800, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000 ili više grama ili unci (1 unca = 29.57 ml) aktivne materija ili komercijalnog proizvoda ili herbicidne formulacije po jutru ili po hektaru, gde odgovarajuća kontrolna biljka je značajno oštećena istim tretmanom.
U specifičnim izvođenjima, efikasna količina herbicida ALS inhibitora obuhvata bar oko 0.1, 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000 ili više grama ili unci (1 unca = 29.57 ml) aktivne materije po hektaru. U drugim izvođenjima, efikasna količina ALS inhibitora obuhvata bar oko 0.1-50, oko 25-75, oko 50-100, oko 100-110, oko 110-120, oko 120-130, oko 130-140, oko 140-150, oko 150-200, oko 200-500, oko 500-600, oko 600-800 ili više grama ili unci (1 unca = 29.57 ml) aktivne materije po hektaru. Bilo koji ALS inhibitor, na primer oni pomenuti u Tabeli 1 može biti primenjen u ovim količinama.
U drugim izvođenjima, efikasna količina sulfoniluree sadrži barO.l, 1,5, 10, 25,50,75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 5000 ili više grama ili unci (1 unca = 29.57 ml) aktivne materije po hektaru. U drugim izvođenjim, efikasna količina sulfoniluree obuhvata oko 0.1-50, oko 25-75, oko 50-100, oko 100-110, oko 110-120, oko 120-130, oko 130-140, oko 140-150, oko 150-160,oko 160-170, oko 170-180, oko 190-200, oko 200-250, oko 250-300, oko 300-350, oko 350-400, oko 400-450, oko 450-500, oko 500-550, oko 550-600, oko 600-650, oko 650-7000, oko 700-800, oko 800-9000, oko 900-1000, oko 1000-2000 ili više grama ili unci (1 unca = 29.57 ml) aktivne materije po hektaru. Reprezentativne sulfoniluree koje mogu biti primenjene u ovim količinama su date u Tabeli 1.
U drugim izvođenjima, efikasna količina sulfonilaminokarboniltriazolinona, triazolopirimidina, pirimidiniloksi(tio)benzoata i imidazolinona može obuhvatati bar oko 0.1, 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1500, 1550, 1600, 1650, 1700, 1800, 1850, 1900, 1950, 2000, 2500, 3500, 4000, 4500, 5000 ili više grama ili unci (1 unca = 29.57 ml) aktivne materije po hektrau, efikasna količina sulfoniluminokarboniltriazolini, triazolopirimidini, pirimidiniloksi(tio)benzoati ili imidazolinoni obuhvataju bar oko 0.1-50, oko 25-75, oko 50-100, oko 100-110, oko 110-120, oko 120-130, oko 130-140, oko 140-150, oko 150-160, oko 160-170, oko 170-180, oko 190-200, oko 200-250, oko 250-300, oko 300-350, oko 350-400, oko 400-450, oko 450-500, oko 500-550, oko 550-600, oko 600-650, oko 650-700, oko 700-800, oko 800-900, oko 900-1000, oko 1000-2000 ili više grama ili unci (1 unca = 29.57 ml) aktivne materije po hektaru.
Dodatni opsezi efikasnih količina herbicida mogu se naći na primer u različitim publikacijama iz Universitv Extension services. Videti na primer, Bernardset al.(2006)Guide for WeedManagement in Nebraska( www. iam- pubs. url. edu/ sendlt/ ecl30) Regheret al.(2005)Chemical Weed Control for Fields Crops, Pastures, Rangeland and Noncropland,Kansas State Universitv Agricultural Extension Station and Corporate Extension Service; Zollingeret al.(2006)North Dakota Weed Control Guide,North Dakota Extension Service i Iowa State Universitv extension na www. weeds. iastate. edu, od kojih je svaki ovde uključen kao referenca.
U nekim izvođenjima pronalska, glifosat je nanošen na oblast gajenja i/ili na bar jednu biljku u oblasti gajenja u odnosu između 8 i 32 unce kiselinskih ekvivalenata po jutru, ili u odnosu između 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, i 30 unci kiselinskih ekvivalenata po jutru na najnižem kraju opsega primene i između 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30 i 32 unce kiselinskih ekvivalenata na najvišem kraju primenjenog opsega (1 unca = 29.57 ml). U ostalim izvođenjima, glifosat je primenjen pri bar 1,5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ili više unci aktivne materije po hektaru (1 unca = 29.57 ml). U nekim izvođenjima pronalaska, herbicid sulfoniluree je nanet na polje i/ili na biljku na polju u odnosu između 0.04 i 1.0 unce aktivne materije po jutru ili u odnosu između 0.1, 0.2, 0.4, 0.6 i 0.8 unci aktivne materije po jutru na najnižem kraju primenjenog opsega i između 0.2, 0.4, 06, 0.8 i 1.0 unce aktivne materije po jutru na najvišem kraju primenjenog opsega (1 unca = 29.57 ml).
Kao što je poznato u ovoj oblasti, glifosatni herbicidi kao klasa sadrže isti aktivni sastojak , ali je aktivan sastojak prisutan kao jedna od brojnih različitih soli i/ili formulacija. Međutim, herbicidi poznati da inhibiraju ALS variraju u njihovom aktivnom sastojku kao i u njihovoj hemijskoj formulaciji. Ljudi iz štuke znaju da odrede količinu aktivne materije i/ili kiselinskog ekvivalenta prisutnog u odgovarajućoj zapremini i/ili težini herbicidnog preparata.
U nekim izvođenjima korišćen je ALS inhibitor. Odnosi u kojima je ALS inhibitor primenjivan na usev, deo useva, seme ili oblast gajenja može biti u bilo kojim ovde opisanim odnosima. U specifičnim izvođenjima, odnos herbicida ALS inhibitora je oko 0.1 do oko 5000 g a.m./hektaru, oko 0.5 do oko 300 g a.m./hektaru ili oko 1 do oko 150 g a.m./hektaru.
Generalno odgovarajući herbicid je primenjivan na odgovarajuće polje (i bilo koju biljku koja na njemu raste) ne više od 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 puta godišnje, ili ne više od 1, 2, 3, 4 ili 5 puta u sezoni gajenja.
Pod 'tretiranjem sa kombinacijom' ili 'primena kombinacije' herbicicda na usev, oblast gajenja ili polje' ima nameru da odgovarajuće polje, usev ili seme tretira sa svakim od herbicida i/ili hemikalija navedenih kao deo kombinacije tako da se postigne željeni efekat, tj. tako da su korovi selektivno suzbijani, dok usev nije značajno oštećen. U nekim izvođenjima, korovi koji su podložni svakom od herbicida pokazuju oštećenja usled tretiranja sa svakim od herbicida koji su aditivni ili sinergijska. Primena svakog herbicida i/ili hemikalije može biti simultana ili primena može biti u raličitim vremenima, toliko dugo dok se ne postigne željeni efekat. Pored toga, primena može biti pre sađenja useva.
Odnosi herbicida korišćenih u postupcima prema pronalasku sa drugim herbicdnim aktivnim sastojcima u herbicicdnoj kompoziciji su generalno u odnosu od 5000:1 do 1:5000, 1000:1 do 1:1000, 100:1 do 1:100, 10:1 do 1:10 ili 5:1 do 1:5 težinski. Optimalni odnosi mogu biti lako određeni od strane ljudi iz struke na osnovu željenog spektra suzbijanja korova. Povrh toga, bilo koja kombinacija opsega različitih herbicida opisanih u Tabeli 3 može takođe biti primenjena u postupcima prema pronalasku.
Prema tome u nekim izvođenjima, postupak obazbeđuje poboljšane postupke za selektivno suzbijanje korova na polju gde ukupna primena herbicida može biti manja od 90%, 85%, 75%, 70%>, 65%, 60%, 55%, 45%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% ili 1% korišćenih u drugim postupcima. Slično, u nekim izvođenjima, količina odgovarajućih herbicida korišćena za selektivno suzbijanje korova na polju može biti manja od 90%, 85%, 80%o, 15%, 70%>, 65%, 60%), 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% ili 1% količine odgovarajućeg herbicicda koji bi bio korišćen u drugim postupcima,tj.postupcima koji ne koriste biljku prema pronalasku.
U nekim izvođenjima, biljka koja je otporna na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku ima koristi od sinergijskog efekta, pri čemu otpornost na herbicide koju daje polipeptid koji daje otpornost na glifosat (tj. GAT) i bar jedan polipeptid otporan na ALS inhibitor je veća nego što je očekivano jednostavnim kombinovanjem otpornosti herbicida koju daje svaki gen odvojeno u transgenskoj biljki koja ih pojedinačno sadrži. Videti, na pr. Mc.Cutchenet al.(1997)J. Econ. Entomol.90: 1170-1180; Priesleret al.(1999)J. Econ. Entomol.92: 598-603. Ovde korišćeni izrazi 'sinergija', 'sinergijsko', 'sinergijki' i slično, kao što su ,sinergijski efekat' ili 'sinergijska herbicidna kombinacija' ili 'sinergijska herbicidna kompozicija' odnose se na okolnosti prema kojima biološka aktivnost kombinacije herbicida, kao što je bar prvi herbicid i drugi herbicid je veća nego zbir bioloških aktivnosti pojedinačnih herbicida. Sinergija, izražena kao 'sinergijski indeks (SI)' generalno može biti određena postupkom opisanim kod F. C. Kull, et al.Applied Microbiollogy9, 538 (1961). Videti takođe Colbv, S. R., 'Calculating Svnergistic and Antagionistic Responces of Herbicide Combinations',Weeds15, 20-22 (1967).
U drugim slučajevima, herbicidna otpornost koju imaju biljke otporne na glifosat/ALS inhibitor prema pronlasku je aditivna; to jest, profil herbicidne otpornosti koju daju geni otpornosti na herbicide je kao što bi se očekivalo jednostavnom kombinacijom herbicidne otpornosti koju daje svaki gen odvojeno transgenskoj biljki koja ih odvojeno sadrži. Aditivna i/ili sinergijska aktivnost za dva ili više herbicda protiv glavih vrsta korva će povećati celokupnu efikasnost i/ili smanjiti stvarnu količinu aktivnog sastojka potrebnog(ih) za suzbijanje pomenutih korova. Gde je takva sinergija primećena, biljke prema pronalasku mogu pokazati otpornost na više doze ili odnose herbicida i/ili biljke mogu pokazati otpornost na dodatne herbicide ili druge hemikalije pored onih na koje bi se očekivalo da pokazuju otpornost. Na primer, biljke sadrže GAT gen i HRA gen mogu pakazivati otpornost na organofosfatna jedinjenja kao što su insekticidi i/ili inhibitori 4-hidroksifenilpiruvat dioksigenaze.
Prema tome, na primer, biljke otporne na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku mogu pokazivati veću nego što je očekivano otpornost na različite herbicide, uključujući ali bez ograničenja glifosat, hemikalije ALS inhibitora i herbicide sulfoniluree. Biljke otporne na glifosat/ALS inhibitore prema pronalasku mogu pokazati otpornost na odgovarajuće herbicide ili kombinacije herbicida koja je bar 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%. 8%, 9%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 22%, 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 80%, 90%, 100%, 125%, 150, 175%, 200%, 300%, 400% ili 500% ili viša nego otpornost odgovarajućih kontrolnih biljaka koje sadrže samo jedan gen otpronosti na herbicide koji daju otpornost na isti herbicid ili herbicidnu kombinaciju. Prema tome, biljke otprone na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku mogu pokazati smanjeno oštećenje sa istom dozom herbicida u poređenju sa odgovarajućom kontrolnom biljkom, ili mogu pokazati isti stepen oštećenja kao odgovor na mnogo veću dozu herbicida nego kontrolna biljka. Prema tome, u specifičnim izvođenjima, odgovarajući herbicid korišćen za selektivno suzbijanje korova na polju je viši od 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% ili viša u odnosu na količinu odgovarajućeg herbicida koja bi bila korišćena u drugim postupcima, tj. postupcima koji ne koriste biljku prema pronalasku.
Na isti način, u nekim izvođenjima, biljka koja je otporna na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku prikazuje povećanu otpornost na odgovarajuću formulaciju herbicidno aktivnog sastojaka u poređenju sa odgovarajućom kontrolnom biljkom. Herbicidi koji se komercijalno prodaju kao formulacije, tipično uključuju druge sastojke pored herbicidno aktivnih sastojaka; ovi sastojci često nameravaju da pojačaju efikasnost aktivnog sastojka. Takvi dugi sastojci mogu uključiti, na primer, sejfnere i adjuvante (videti,na pr.Green and Foy (2003) 'Adjuvants: Tools for Enhancing Herbicide Performance' uWeed Biology and Management,ed. Inderjit (Kluvver Academic Publisher, The Netherlands)). Prema tome, biljka otporna na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku može pokazati otpornost na odgvoarajuću formulaciju herbicida( na pr.odgovarajući komercijalni dostupni herbicidni proizvod) koja je bar 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 22%, 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 80%, 90%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 300%, 400%, 500%, 600%, 700%, 800%, 900%, 1000%, 1100%, 1200%, 1300%, 1400%, 1500%, 1600%, 1700%, 1800%, 1900% ili 2000% ili viša u odnosu otpornost na odgovarajuću kontrolnu biljku koja sadrži samo jedan gen otpronosti na herbicid koji daje otpornost na istu herbicidnu formulaciju.
U nekim izvođenjima, biljka koja je otprona na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku prikazuje poboljšanju otpronost na herbicid ili klasu hernbicida na koju bar jedan drugi gen otpronosti na herbicid daje otpornost kao i povećanu otpornost na bar jedan drugi herbicid ili hemikaliju koja ima drugačiji mehanizam ili osnovu delovanja u odnosu na glifosat ili herbicid koji odgovara pomenutom bar jednom drugom genu otpronosti na herbicid. Ova iznenađujuća korist prema pronalasku nalazi upotrebu u postupcima gajenja useva koji obuhvataju tretiranje sa različitim kombinacijama hemikalija, uključujući na primer, druge hemikalije korišćene za gajenje useva. Prema otme, na primer, biljka kukuruza otporna na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku (tj. GAT/HRA biljka) može takođe pokazati povećanu otpornost na hlorpirifos, sistemski organofosfatni insketicid koji utiče na sposobnost kukuruza da metaboliše herbicid preko ometanja citohrom P450 gena. Prema tome, pronalazak takođe obezbeđuje transgensku biljku koja sadrži sekvencu koja daje otpornost na glifosat( tj.GAT gen) i gen otpornosti na herbicide sulfoniluree koja pokazuje poboljšanu otpornost na hemikalije koje utiču na gen citorom P450 i postupke za nejgovu upotrebu. U nekim izvođenjima, biljke otprone na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku obuhvataju na primer, GAT gen i gen otpornosti na herbicide sulfoniluree takođe pokazuju povećanu otpornost prema dikambi. U ovim izvođenjima, poboljšana otpornost prema dikambi može biti zabeležena u prisustvu glifosata i herbicida sulfoniluree.
U drugim postupcima, herbicidna kombinacija je primenjena na biljku otpornu na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku, gde herbicidna kombinacija proizvodi ili aditivne ili sinergijske efekte pri suzbijanju korova. Takve kombinacije herbicida mogu omogućiti da primenjena količina bude smanjema, širi spektar suzbijanja neželjene vegetacije, poboljšano suzbijanje neželjene vegetacije, poboljšano suzbijanje neželjene vegetacije sa nekoliko primena, brži početak herbicidne aktivnosti ili prolongirana herbicidna aktivnost.
'Aditivna herbicidna kompozicija' ima herbicidnu aktivnost koja bi bila jednaka primećenim aktivnostima pojedinačnih komponenti, 'Sinergijska herbicidna kombinacija' ima herbicidnu aktivnost koja je viša nego što bi se očekivalo na osnovu primećenih aktivnosti pojedinačnih komponenti kada se same koriste. Prema tome, sada opisani predmet obezbeđuje sinergijsku herbicidnu kombinaciju, gde stepen suzbijanja korova sa smeše prevazilazi zbir suzbijanja pojedinačnih herbicida. U nekim izvođenjima, stepen suzbijanja korova smeše prevazilazi zbir suzbijanja pojedinačnih herbicida bilo koje statistički značajne količine uključujući na primer, oko 1% do 5%, oko 5% do oko 10%, oko 10% do oko 20%, oko 20% do oko 30%, oko 30% do 40%, oko 40% do oko 50%, oko 50% do oko 60%, oko 60% do oko 70%, oko 70% do oko 80%, oko 80% do oko 90%, oko 90% do oko 100%, oko 100% do 120% ili više. Dalje 'sinergijski efikasna količina' herbicida odnosi se na količinu jednog herbicida neophodnog da izazove sinergijski efekat kod drugog prisutnog herbicida u herbicidnoj kompozicii. Prema tome, izraz 'sinergist' kao i oni iz njega izvedeni, odnose se na supstance koje povećavaju aktivnost aktivnog sastojka (a.s.), tj. supstance u formulaciji koja daje biološki efekat, na primer, herbicida.
Prema tome u nekim izvođenjima, sada opisan predmet obezbeđuje postupak suzbijanja korova u oblasti gajenja. U nekim izvođenjima, postupak obuhvata: (a) sađenje semena ili biljke useva u oblasti, gde seme ili biljke useva sadrže: (i) prvi polinukleotid koji kodira polipeptid koji daje otpornost na glifosat operativno vezan za promoter aktivan u semenu ili biljkama useva; i (ii) drugi polinukleotid koji kodira polipeptid otporan na ALS inhibitor operativno vezan za promoter aktivan u semenima ili biljkama useva; i (b) nanošenje na korov, ratarsku biljku, deo useva, oblast gajenja ili njihova kombinacija, efiksane količine herbicidne kompozicije koja obuhvata jednu sinergijski efikasnu količinu glifosata i sinergijski efikasnu količinu ALS inhibitora (na primer, ali bez ograničenja na, herbicide sulfoniluree) ili njihove farmaceutskih prihvatljive soli, gde bar jedna od (i) sinergijski efikasna količina glifosata niža u odnosu na količina glifosata potrebnu da suzbije korov bez herbicida sulfoniluree; (ii) sinergijski efikasna količina herbicida ALS inhibitora je niža nego količina ALS inhbitora potrebna da suzbije korov bez glifosata; i (iii) njihova kombinacije; i gde efikasna količina herbicidne kompozicije je tolerisana od strane semena ili biljke useva i suzbija korove u oblasti gajenja.
Kao što je ovde kasnije detaljnije opisano, u nekim izvođenjima, prvi polinukleotid kodira glifosat-N-acetiltransferazu. Određenije, u nekim izvođenjima, prvi polinukleotid kodira glifosat-otpornu 5-enolpiruvafšikimat-3-fosfat sintetazu ili glifosat otpornu oksido reduktazu. Dalje, kao što je gore opisano u više detalja, polipetid otpornosti na ALS inhibitor obuhvata mutirani polipeptid acetolaktat sintetaze. U nekim izvođenjima, mutirani acetolaktat sintetazeni polipeptidi obuhvata
HRA.
U nekim izvođenjim, herbicidna kompozicija korišćena u sada opisanom postupku za suzbijanje korova obuhvata sinergijski efikasnu količniu glifosata i herbicida sulfoniluree. U daljim izvoeđenjima, sada opisana sinergijska herbicidna kompozicija glifosata i herbicida sulfoniluree izabrnaog iz grupe koju čine metsulfuron-metil, hlorsulfuron i triasulfuron.
U odgovarajućim izvođenjima, sinergijska herbicidna kombinacija dalje obuhvata adjuvant kao što je na primer, adjuvant koji je zasnovan na amonijum sulfatu, na pr. ADD-UP<®>(Wenkem S.A. Halfway House, Midrand Sauth Africa). U dodatnim izvođenjima, sada opisana sinergijska herbicidna kompozicija obuhvata dodatne herbicide, na primer, efikasnu količinu pirimidiniloksi(tio)benzoat herbicida. U nekim ivzođenjima, primidiniloksi(tio)benzoat herbicid obuhvata bispiribak, na pr. (VELOCITY<®>, Valent U.S.-A. Crop, Walnut Creek, California, United States of America) ili njihovu poljoprivredno prihvatljivu so.
U nekim izvođenjima ovde opisanog postupaka suzbijanja neželjenih biljka, glifosat se nanosi pre nicanja, posle nicanja ili pre i posle nicanja na neželjene biljke ili ratarske biljke; i herbicid ALS inhibitor (tj. herbicid sulfoniluree) je nanošen pre nicanja, posle nicanja, pre i posle nicanja na neželjne biljke ili useve. U drugim izvođenjima herbicid ALS inhibitor (tj. herbicid sulfoniluree) je primenjen zajedno ili odvojeno. U drugim izvođenjima, sinergijska herbicidna kompozicija je primenjena, na pr. stupanj (b) iznad, bar jednom pre sađenja useva od interesa, na pr. stupanj (a) iznad.
Dok biljke otporne na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku su otporne na mnogo herbicida, nisu otporne na nekoliko herbicida, kao što su na primer, dinitroanilin, ACCaza i hloracetamidne herbicide. Prema tome, postupci prema pronalasku koji obuhvataju suzbijanje korova mogu takođe koristiti ove tretmane za suzbijanje biljaka otpornih na glifosat/ALS inhibitor, kao što su na primer, 'dobrovljno' izrasle biljke otporne na glifosat/ALS inhibitor na polju koje je bilo zasađeno ili ponovo zasađene sa različitim usevom.
Korovi koje je teško suzbiti samo sa glifosatom na polju gde je gajen usev (kao što je na primer usev soje) uključuju ali bez ograničenja sledeće: horsevveed( Conyza canadensis),tvrda ljuljica( Lolium rigidum),goosegrass( Eleucine indica),Italijanski ljulj( Lolium multiflorum),hairv fleabane( Conyza bonariensis),bokvica( Plantago lanceolata),pelenasta ambrozija( Ambrosia artemisiifolia),morning glory( na. pr. Ipomoea spp.),štir (na pr.Amaranthus spp.) ;poponac njivski( na pr. Convolvulus arvensis) ;yellow nutsedge( napr. Cyperus esculentus) ;pepljuga obična( napr. Chenopodium album) ;vijušac obični( na pr. Polygonium convolvulus) ;lipica teofrastova( na pr. Albutilon theophrasti) ;metla obična( na pr. Kochia scoparia)i Asiatic daxflower( na pr. Commelina spp.).U oblastima gde se nalaze takvi korovi, biljke koje su otporne na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku (GAT-HRA biljke) su naročito korisne u omogućavanju tretiranja polja (i prema tome bilo kog useva gajenog na polju) sa kombinacijom herbicida koji bi izazvali neočekivana oštećenja na ratarskim biljkama koje ne sadrže oba ova polineukelotida. Biljke prema pronalasku koje su otporne na glifosat i druge herbicide kao što su na primer, sulfonilurea, imidazolinon, triazolopirimidin, pirimidinil(tio)benzoat i/ili sulfonilaminokarboniltriazolin herbicide pored njihove otpornosti na bar jedan drugi herbicid sa različitim načinom dejstva ili mestom dejstva su naročito korisni u situacijama gde je korov otporan na dva ista herbicida na koje su biljke otporne. Na ovaj način, biljke prema pronalasku čine mogućim poboljšano suzbijanje korova koji su otporni na više od jednog herbicida.
Na primer, neki uobičajeno korišćeni postupci suzbijanja korova na polju gde su gajeni sadašnji komercijalni usevi (uključujući na primer, soju) uključuju glifosat i opciono, 2,4-D; ova kombinacija međutim ima neke nedostatke. Naročito, postoje vrste korova koje se nc suzbijaju dobro i takođe ne suzbijaju dobro korove pri hladnom vremenu. Još jedan uobičajno korišćeni tretman za suzbijanje korova na poljima soje je herbicid sulfoniluree, hlorimuron-etil, koji ima značaju zaostalu aktivnost u zemljištu i prema tome zadržava selektivan pritisak na sve vrste korova koje kasnije niču, stvarajući pogodnu okolinu za rast i širenje korova otpornih na sulfonilureu. Međutim, biljke otporne na glifosat/ALS inhibitor (tj. GAT-IIRA biljke prema pronalasku) uključujući biljke soje otporne na glifosat/ALS inhibitor (tj. biljke GAT-HRA soje) mogu biti tretirane sa herbicidima( na pr.hlorimuron-etil) i kombinacijama herbicida koje bi izazvale neprihvatljiva oštećenja na standardnim biljnim vrstama. Prema tome, na primer, polja koja sadrže biljke soje otporne na glifosat/ALS inhibitor (tj. biljke GAT-HRA soje) mogu biti tretirana sa sulfonilureom, imidazolinonom, triazolopirimidinima, pirimidini(tio)benzoatima i/ili sulfonilaminokarboniltriazonlinom kao što su sulfonilurea hlorimuron-etil, ili sam ili u kombinaciji sa drugim herbiciedima. Na primer, polja koja sadrže biljke soje prema pronalasku, mogu biti tretirana sa kombinacijom glifosata i tribenuron-metila (komercijalno dostupnog kao Express®). Ova kombinacija ima nekoliko prednosti u suzbijanju korova pod odgovarajućim uslovima, uključujući upotrebu herbicida sa različitim načinima dejstva i upotrebu herbicida koji imaju relativno kratak period zaostale aktivnosti u zemljištu. Herbicid koji ima relativno kratak period zasotale aktivnosti je poželjan na primer, u situacijama gde je važno da se smanji selektivni pritisak koji bi doprineo rastu korova otpornih na herbicicde. Naravno u bilo kojoj odgovarajućoj situaciji gde je potrebno suzbijanje korova, druga razmatranja mogu biti mnogo važnija, kao što su na primer, potreba za sprečavanjem razvijanja i/ili javljanja korova na polju pre sađenja useva korišćenjem herbicida sa relativno dugim periodom zasotale aktivnosti. Biljke soje otporne na glifosat/ALS inhibitor mogu takođe biti tretirane sa kombinacijama herbicida koje uključuju bar jedan od nikosulfuron, metsulfuron-metil, tribenuron-metil, tifensulfuron-metil i/ili rimsulfuron. Postupci koji uključuju i tribenuron-metil i tifensulfuron-metil mogu biti naročito korisni.
Drugi postupci uobičajeno korišćeni za suzbijanje korova na polju gde su gajene sadašnje komercijane vrste useva (uključujući na primer, soju) uključuju trifensulfuron-metil herbicid sulfoniluree (komercijalno dostupan kao Harmonv GT®). Međutim, jedan nedostatak tirfensulfuron-metila je da veće primenjene količine potrebne za upornije korove često izazivaju oštećenja useva koji se gaji na istom polju. Biljke otprone na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku, uključujući biljke soje, mogu biti tretirane sa kombinacijom glifosat i tiensulfuron-metila, koja ima prednost jer koristi herbicide sa različitim načinima delovanja. Prema tome, korovi koji su otporni na bilo koji pojedinačni herbicid su suzbijani kombinacijom dva herbicida i biljke otporne na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku nisu značajno oštećene ovim postupkom.
Drugi herbicidi koji su korisni u suzbijanju korova na polju gde se gaje sadašnje komercijane vrste useva (uključujući na primer soju) su tirazolopirimidinski herbicid kloransulfam-metil
(komercijalno dostupan kao FirstRate®) i imidazolinonski herbicid imazakin (komercijalno dostupan kao Sceptor®). Kada su ovi herbicidi korišćeni pojedinačno mogu obezbediti samo marginalno suzbijanje korova. Međutim, polja koja imaju biljke koje su otporne na glifosat/ALS inihibitor prema pronalasku, uključujući biljke soje, mogu biti tretirane sa kombinacijom glifosat( na pr.Roundap® (izopropilamin so glifosata), imazapir (trenutno komercijalno dostupan kao Arsenal®), hlorimuron-etil (trenutno komercijalno dostupan kao Classic®), hizalofop-P-etil (trebutno komercijalno dostupan kao Assure®) i fomesan (trenutno komercijalno dostupan kao Flexstar®). Ova kombinacija ima prednost upotrebe herbicida sa različitinim načinom dejstva. Prema tome korovi koji su otporni na jedan ili nekolino ovih herbicida su suzbijani kombinacijom pet herbicida, a biljke otporne na glifosat/ALS inihibitor prema pronalasku nisu značajno oštećene tretiranjem sa ovom herbicidnom kombinacijom. Ova kombinacija obezbeđuje ekstremno širok spektar zašite u odnosu na korove otporne na herbicide koji se očekuje da mogu izrasti i raširiti se na osnovu sadašnje prakse suzbijanja korova.
Polja koja sadrže biljke otporne na glifosat/ALS inihibitor prema pronalasku (tj. GTA/HRA biljke), uključujući biljke soje, mogu takođe biti tretirane, na primer, sa kombinacijom herbicida koja obuhvata glifosat, rimsulfuron i dikambu ili mezotrion. Ova kombinacija može biti naročito korisna u suzbijanju korova koju su razvili neku otpornost na herbicide koji inhibiraju ALS. Druga kombinacija herbicida koji mogu biti naročito korisni u suzbijanju korova uključuje glifosat i bar jedan od sledećih : metsulfuron-metil (komercijalno dostupan kao Ally®), imazapir (komercijalno dostupan kao Arsenal®), imazetapir, imazakin i sulfentrazon. Razume se da bilo koje gore ili dole diskutovane kombinacije mogu takođe biti korišćene za tretiranje oblasti u kombinaciji sa bilo kojim drugim herbicidom ili poljoprivrednom hemikalijom.
Neki obično korišćeni postupci suzbijanja korova na polju gde su gajeni sadašnji komercijalni usevi (uključujući na primer, soju) uključuju glifosat (trenutno kormercijalno dostupan kao Roundup®), rimsulfuron (trenutno komercijalno dostupan kao Resolve® ili Matrix), dikamba (komercijalno dostupan kao Clarity ®), atrazin i mezotrion (komercijalno dostupan kao Callistro®). Ovi herbicidu su ponekad korišćeni pojedinačno, usled slabe otpornosti na više herbicida. Nažalost, kada se koriste pojedinačno, svaki od ovih herbicida ima značajne nedostake. Naročito, nastavlja da raste učestalost korova koji su otporni na pojedinačne herbicide, čineći glifosat manje efikasnim nego što je to poželjno u nekim situacijama. Rimsulfuron obezbeđuje bolje suzbijanje u višim dozama koje mogu izazvati oštećenja useva, a alternative kao što je dikamba su često skuplje nego drugi uobičajno korišćeni herbicidi. Međutim, biljke otporne na glifosat/ALS inihibitor (tj. GAT-HRA biljke) prema pronalasku, uključujući biljku kukuruza otpornu na glifosat/ALS inihibitor mogu biti tretirane sa herbicidima i kombinacijama herbicida koji bi izazvali neprihvatljiva oštećenja na standardnim biljnim vrstama, uključujući kombinacije herbicida koje sadrže rimsulfuron i/ili dikambu. Druge pogodne kombinacije herbicida za upotrebu sa biljkama otpornim na glifosat/ALS inihibitor prema pronalasku uključuju glifosat, sulfonilureu, imidazolinon, triazolopirimidin, pirimidiniloksi(tio)benzoati i/ili sulfonilaminokarboniltriazolinon herbicide, uključujući na primer bar jednu od sledećih: metsulfuron-metil, tribenuron-metil, hlorimuron-etil, imazetapir, imazapir i imazakin.
Na primer, biljke kukuruza otporne na glifosat/ALS inihibitor (tj, GAT/HRA biljke) prema pronalasku mogu biti tretirane sa kombinacijom glifosat i rimsulfuron ili kombinacijom rimsulfurona i bar jedanog drugog herbicida. Biljke otporne na glifosat/ALS inihibitor (tj. GAT-HRA biljke) mogu takođe biti tretirane sa kombinacijom glifosata, rimsulfurona i dikambe ili kombinacijom glifosata, rimsulfurona i bar jednog drugog herbicida. U nekim izvođenjima, bar jedan od herbicida ima drugačiji način dejstva nego oba, i glifosat i rimsulfuron. Prednost kombinacije glifosata, rimsulfurona i dikambe je da ovi herbicidi imaju različite načine dejstva i kratku rezidualnu aktivnost, koja smanjuje rizik javljanja i širenja korova otpornih na herbicide.
Neki uobičajeno korišćeni postupci suzbijanja korova na polju gde se gaje sadašnji komercijalni usevi (uključujući na primer, soju) uključuju glifosat (trenutno kormercijalno dostupan kao Roundup®), hlorimuron-etil, tribenuron-metil, rimsulfuron (trenutno komercijalno dostupan kao Resolve® ili Matrix®), imazetapir, imazapir i imazakin. Nažalost, kada se koriste pojedinačno, svaki od ovih herbicida ima značajne nedostatke. Naročito, raste učestalost korova koji su otporni na pojedinačne herbicide nastavlja da raste, čineći svaki pojeidnačni herbicid manje efikasnim nego što je poželjno u nekim situacijama. Međutim, biljke otporne na glifosat/ALS inihibitor prema pronalasku, uključujući biljku pamuka, mogu biti tretirane sa kombinacijom herbicida koji bi izazvali neprihvatljivo oštećenje standardnih biljnih vrsta, uključujući kombinacije herbicida koje obuhvataju bar jedanu od gore pomenutih.
c. Postupci primene herbicida
U postupcima prema pronalasku, herbicidi mogu biti formulisani i primenjeni na oblast od interesa kao što je, na primer, polje ili oblast gajenja, na bilo koji pogodan način. Herbicid može biti primenjen na polje u bilo kom obliku, kao stoje na primer, tečni sprej ili čvrsti prašak ili granule. U specifičnim izvođenjeima, herbicid ili herbicidne kombinacije koje su korišćene u postupcima obuhvataju tankmiks ili premiks. Herbicid može takođe biti formulisan, na primer kao 'homogena mešavina granula' proizvedena korišćenjem tehnologije mešanja (videti na pr, US pat br. 6,022,552, pod nazivom 'Uniform Mixtures of Pesticide Granules'). Tehlologija mešanja prema US patentu br. 6,022,552 daje neodvojive mešavine (tj. 'homogene mešavine granula') formulisanih hemikalija za zaštitu useva u suvim granulama koje omogućavaju primenjivanje uobičajenih mešavina napravljenih da se reši specifični problem. Homogena mešavina granula može biti prevožena, prodavana, poduzorkovana i primenjivana na isti način kao tradicionalni proizvod premiks gde su višestruki aktivni sastojci formulisani u istu granulu.
Ukratko, 'homogena mešavina granula' je pripremljena zajedno mešanjem bar dva proizvoda ekstrudirano formulisanih granula. U nekim izvođenjima, svaki granulisani proizvod obuhvata registrovanu formulaciji koja sadrži pojedinačni aktivni sastojak koji je na primer, herbicid, fungicid i/ili insekticid. Jednoobraznost (homogenost) 'homogene mešavine granula' može biti optimizirana kontrolisanjem relativne veličine i raspoređenosti granula korišćenih u mešavini. Prečnih ekstrudiranih granula je kontrolisan veličinom rupa u ekstruderskom kalupu, a postupak centrifugalnog sejanja može biti korićen da se dobije populacija ekstrudiranih granula željne raspoređenosti dužine (videti na priemUS pat. br. 6,270,025).
Homogena mešavina granula se smatra 'homogenom' kada se može poduzorkovanti u odgovarajuće alikvote i sastav svakog alikvota će ispuniti potrebne testirane specifikacije. Da bi se pokazala homogenost, veliki uzorak homogenih granula je pripremljen i zatim poduzorkovan u alkivote veće od minimalne statističke veličine uzorka (videti primer 4).
U neograničavajućim primerima, biljke otporne na glifosat/ALS inihibitor (tj. GAT-HRA biljke), uključujući biljku soje, mogu biti tretirane sa herbicidima( na/?r.hlorimuron-etilom i kombinacijom drugih herbicida koji bi bez biljka otpornih na glifosat/ALS inihibitor izazvali neprihvatljiv odgovor vrste ratarske biljke bez genetike otpornosti na glifosat/ALS inhibitor). Prema tome, polja zasađena sa sojom koja jc otprona na glifosat/ALS inhibitor, kukuruzom ili sortama pamuka (tj. GTA/HRA biljkama) mogu biti tretirana sa sulfonilureom, imidazolinonom, triazolopirimidinom, pirimidinil(tio)benzoatom i/ili sulfonilaminokarboniltriazolion herbicidima, ili zajedno ili u kombinaciji sa drugim herbicidima. Dok hemikalije ALS inhibitori imaju različite herbicidne osobine, mešavine ALS sa drugim hemikalijama će obezbediti superiornu strategiju suzbijanja korova uključujući variranje i povećavanje spektra korova, sposobnosti obezbeđivanja specifične rezidualne aktivnosti (hernija SU/ALS inhibitora sa rezidualnom aktivnošću dodvodi do poboljšane foliarne aktivnosti koja vodi do širih razmaka između nanošenja glifosata kao i dodatnog perioda kontrole ukoliko vremenski uslovi zabranjuju primenu na vreme).
Mešavne takođe daju mogućnost dodavanja drugih agrohemikalija u normalnim, obeleženim odnosima primene, tako da dodatni herbicidi (treći, četvrti mehanizam dejstva), fungicidi, insekticidi, regulatori rasta biljka i slično smanjuju cene u vezi sa dodatnim primenama.
Bilo koje herbicidne formulacije primenjene na biljke otporne na glifosat/ALS inihibitor mogu biti pripremljene kao 'tank-miks' kompozicija. U takvim izvođenjima, svaki sastojak ili kombinacija sastojaka može biti čuvan odovjeno jedna od druge. Zatim sastojci mogu biti pomešani sa jedan sa drugim pre primene. Tipično, takvo mešanje se dešava neposredno pre primene. U postupku tank-miksa svaki sastojak, pre mešanja, tipično je prisutan u vodi ili pogodnom organskom rastvaraču. Za dodatna uputstva u pogledu formulisanja, videti T.S. Woods 'Formulatior's Toolbox—Product Forms for Modern Agriculture'Pesticide Chemistry and Bioscience, the Food-Enviroment ChallengeT. T. R. Roberts, Eds. proceedings of 9th International Congress on Pesticide Chemistrv, The Royal Society of Chemistry, Cambridge, 1999, str. 120-133. Videti takođe Pat. br. 3,235,361, kol. 6, red 16 do kol.7, red 19 i Primere 10-41; US pat. br. 3,309,192, kol.5, red 43 do kol.7, red 62 i Primeri 8, 12, 15, 39, 41, 52, 53, 58, 132, 138-140, 162-164, 166, 167 i 169-182; US pat. br. 2,891,855, kol.3, red 66 do kol.5, red 17 i Primeri 1-4; Klingman,IVees Control as a Science,John Wiley and Sons, Inc., Nevv York, 1961, str. 81-96; i Hanceet al. JVeed Control Handbook,8thEd., Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1989, od kojih se na svaku ovde poziva u celosti.
Postupci prema pronalasku dalje omogućavaju razvijanje kombinacije herbicida koje bi se koristile sa biljkama otpornim na glifosat/ALS inihibitor. U takvim postupcima, procenjivani su ekološki uslovi u oblasti gajenja. Ekološki uslovi koji mogu biti procenjeni uključuju, ali bez ograničenja, brigu o zagađenju podzemnih i nadzemnih voda, nameravanu upotrebu useva, otpornost useva, zaostanje u zemljišti, prisutan korov u oblasti gajenja, teksturu zemljišta, pH zemljišta, količinu organskih materija u zemlji, primenjenu opremu i postupak obrađivanja zamlje. Posle procene ekoloških uslova, efikasna količina kombinacije herbicida može biti naneta na useve, delove useva, srne useva ili oblast gajenja.
d. Proračunavanje vremena primene herbicida
U nekim izvođenjima, herbicid nanet na biljke otporne na glifosat/ALS inihibitor prema pronalasku služi da spreči početak rasta osetljivih korova i/ili služi da izazove oštećenja na korovima koji rastu u oblasti od interesa. U nekim izvođenjima, herbicid ili smeša herbicida delujući na korov oštećujući useve koji se naklon toga sade u oblasti od interesa( tj.polje ili oblast gajenja). U postupacima prema pronalasku, primena kombinacije herbicida treba da se desi u isto vreme. Dokle god polje na kome je zasađen usev sadrži količine prvog herbicida koje se mogu detektovati, a drugi herbicid se nanosi u neko vreme u toku tog perioda u kome je usev u oblasti gajenja, usev se smatra da je tretiran sa smešom herbicida prema pronalasku. Prema tome, postupci prema pronalasku obuhvataju primenu herbicida koje su 'pre nicanja', 'posle nicanja', 'predsetveno unošenje' i/ili koji uključuju tretiranje semna pre sađenja.
U jednom izvođenju, obezbeđeni su postupci za oblaganje semena. Postupci obuhvataju oblaganje smena sa efikasnom količinom herbicida ili kombinacije herbicida (kao što je dalje opisano). Seme može biti zasađeno u oblast gajenja. Dalje je obezbeđeno seme koje ima oblogu koja se sastoji od efiksane količine herbicida ili kombinacije herbicida (kao što je dalje opisano).
'Pre nicanja' odnosi se na herbicide koji su naneti na oblast od interesa( napr.polje ili oblast gajenja) pre nego što biljka iznikne vidno iz zemlje. 'Posle nicanja' odnosi se na herbicid koji se nanosi na oblast posle vidljivog nicanja biljke iz zemlje. U nekim slučajevima, izraz'pre nicanja' i 'posle nicanja' su korišćeni u vezi sa korovima u oblasti od interesa, a u nekim sulučajevma ovi izrazi su korišćeni pozivanjem na ratarsku biljku u oblasti od interesa. Kada se koristi u vezi sa korovima, ovi izrazi se mogu primenti samo na odgovarajući tip korova ili vrstu korova koja je prisutna ili se veruje daje prisutna u oblasti od interesa. Dok bilo koji herbicid može biti primenjen u postupku pre nisanja i/ili posle nicanja, poznato je da su neki herbicidi efikasniji u suzbijanju korova kada se primene pre nicanja ili posle nicanja. Na primer, rimsulfuron ima dejstvo i pre nicanja i posle nicanja, dok drugi herbicidi imaju pretežno dejstvo pre nicanja (metolahlor) ili posle nicanja (glifosat). Ove osobine odgovarajućih herbicida su poznate u oblasti tehnike i osoba iz struke će ih lako odrediti. Dalje, osoba iz struke će je sposobna da lako odabere odgovarajuće herbicide i vremena primene sa transgenskim biljkama prema pronalasku i/ili oblastima u kojima su transgenske biljke prema pronalasku zasađenje. 'Predsetveno unošenje' uključuje unošenje jedinjenja u zemlju pre sađenja.
Prema tome, pronalazak obezbeđuje pobljšane postupke rasta useva i/ili kontrolisanja korova kao što su na primer, 'predsetveno spaljivanje' gde je oblast tretirana sa herbicidima pre sađenja useva od interesa u cilju boljeg suzbijanja korova. Pronalazak takođe obezbeđuje postupke rasta useva i/ili suzbijanja korova koji su 'bez obrađivanja' ili sa 'malim obrađivanjem' zemljišta (takođe se naziva 'smanjeno obrađivanje'). U takvim postupcima, zemlja nije kutivisana ili je manje često kultivisana u toku ciklusa rasta u poređenju sa tradicionalnim postupcima; ovi postupci mogu smanjiti cene koje bi na drugi način bile napravljene usled dodatne kultivaciije, uključujući cene rada i goriva.
Postupci prema pronalasku obuhvataju upotrebu simultane i/ili sekvencionalne primene višestrukih klasa herbicida. U nekim izvođenjima, postupci prema pronalasku uključuju tretiranje biljke prema pronalasku i/ili oblasti od interesa( na pr.polja ili oblasti kultivisanja) i/ili korova sa samo jednim herbicidom ili drugim hemikalijama, kao što je na primer, herbicid sulfonil uree.
Vreme u kome je herbicid nanošen u oblast od interesa (i bilo koja biljka u njemu) može biti važna za optimiziranje suzbijanja useva. Vreme u kome se primenjuje herbicid može biti određeno pozivanjem na veličinu biljaka i/ili stadijum rasta i/ili razvoj biljaka u oblasti od interesa,na pr.ratarske biljke ili korova koji rastu u oblasti. Stadij umi rasta i/ili razvića biljka su poznati u oblasti tehnike. Na primer, biljke soje normalno napreduju preko stadijuma vegetativnog rasta poznatog kao Ve(nicanje), Vc(kotiledon), Vi(jednolisnost) i V2do VN. Soja zatim prelazi u fazu reproduktivnog rasta kao odgovor na fotoperiod; reproduktivni stupnjevi uključuju Ri(početak cvetanja), R2(puno cvetanjc), R3(početak mahune), R4(puna mahuna), R5(početak smena), R6(puno seme), R7(početak zrelosti) i R8(puna zrelost). Biljke kukuruza normalno napreduju preko sledećih vegetativnih stupnjeva VE (nicanje); Vi(prvi list); V2(drugi list); V3(treći list); V(n) (Nti/list); i VT (metlica). Napredovanje kukuruza preko reproduktivne faze je kao što sledi: Rl (svilanje); R2 (nalivanje zrna); R3 (mlečna zrelost); R4 (popunjavanje zrna); R5 (voštana zrelost); i R6 (fiziološka zrelost). Biljke pamuka normalno napreduju preko VE(nicanje), Vc(kotiledon), V, (prvi pravi list) i V2do VN. Zatim, reproduktivni stupnjevi koji počinju oko V14uključuju Ri(početak cvetanja), R2(puno cvetanje), R3(početak loptice), R4(stvaranje, razvitak loptice), R5(početak zrelosti, prva otvorena loptica), R6(zrelost, 50% otvorenih loptica) i R7(puna zrelosti, 80-90%) otvorenih loptica). Prema tome, na primer, vreme u kome herbicid ili druge hemikalije su primenjene na oblast od interesa u kojoj biljke rastu mogu biti vreme u kome neke ili sve biljke u odgovarajućoj oblasti su dostigle bar odgvoarajuću veličinu i/ili stupnj rasta i/ili razvoja, ili vreme, u kojem neke ili sve biljke u odgovovarajućoj oblasti nisu još uvek dostigle odgovarajuću veličinu i/ili rast i/ili razvoj.
U nekim izvođenjima, biljke koje su otporne na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku pokazuju poboljšanu otpornost na tretiranje sa herbicidima posle nicanja. Na primer, biljke prema pronalasku mogu biti otporne na više doze herbicida, otporne na širi opseg herbicida (tj. otpornost na više hemikalija ALS inhibitora), i/ili mogu biti otporne na doze herbicida nanete u vreme ranijeg ili kasnijeg razvića u poređenju sa odgovarajućom kontrolnom biljkom. Na primer, u nekim izvođenjima, biljke otporne na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku pokazuju povećanu otpornost na morfološke defekte koji su poznati kao rezultat tretiranja odgovarajućih stupnjeva razvitka. Prema tome, na primer pojava poznata kao 'uvrnuto uvo' je često rezultat kada je biljka kukuruza tretirana sa herbicidom u stupnju koji je kasniji od V5, V6, V7, V8, V9, VIO, VI1, V12, VI3 ili kasnijem stupnju, gde biljke koje su otporne na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku pokazuju smanjenje u javljanju 'uvrnuto uva' kada se tretiraju u istom stupnju. Prema tome, biljke koje su otporne na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku imaju primenu u postupcima koji uključuju tretiranje sa herbicidom u kasnijem stupnju razvoja nego što je ranije bilo izvodljivo. Prema tome, biljke prema pronalasku mogu biti tretirane sa odgvoarajućim herbicidma koji izazivaju morfološke defekte u kontrolnoj biljci koja je tretirana u istom stupnju razvitka, ali biljke otprone na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku neće biti značajno oštećene istim tretmanom.
Različite hemikalije kao što su herbicidi imaju različite 'rezidualne'efekte, tj. različito vreme u kome tretiranje sa hemikalijama ili herbicidima nastavlja da ima efekat na biljke koje rastu na tretiranoj oblasti. Takvi efekti mogu biti poželjni ili nepoželjni, u zavisnosti od buduće željene namene tretiranih površina( na pr.polje ili oblast gajenja). Prema tome, šema rotacije useva može biti izabrana na osnovu rezidualnog efekta postupaka koji će biti korišćeni za svaki usev i njihovog efekta na usev koji će zatim rasti u istoj oblasti. Osobi iz štuke su poznate tehnike koje mogu biti korišćene u procenjivanju rezidualnog efekata herbicida; na primer, generalno glifosat ima veoma malu rezidualnu aktivnost u zemljištu ili je uopšte nema, dok nivo rezidualne aktivnosti herbicida koji deluju kao inhibitori ALS varira. Rezidualne aktivnosti različitih herbicida su poznate u oblasti tehnike i takođe je poznato da variraju sa različitim faktorima okoline, kao što su na primer, nivoi vlažnosti zemljišta, temperature, pH i sastava zemljišta (strukture i organske materije). Biljke koje su otporne na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku imaju naročitu upotrebu u postupcima gajenja useva gde je korisna poboljšana otpornost na rezidualnu aktivnost herbicida.
Na primer, u jendom izvođenju, biljke koje su otporne na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku imaju poboljšanu otpornost na glifosat kao i hemikalije ALS inhibitore (kao što su herbicidi sulfonil uree) kada se pojedinačno nanose, a dalje obezbeđuju poboljšanu otpornost na kombinacije herbicida kao što su glifosat i/ili hemikalije ALS inhibtori. Povrh toga, transgenske biljke prema pronalasku obezbeđuju poboljšanu otpornost na tretiranje sa dodatnim hemikalijama uobičajeno korišćenim za useve zajedno sa tretiranjem sa herbicidima, kao što su sejfneri, adjuvanti kao što su amonijum sulfonat i uljani koncentrati za useve i slično.
e. Sejfneri i adjuvanti
Izraz 'sejfner' se odnosi na supstancu koja kada je dodata u herbicidnu formulaciju eliminiše ili smanjuje fitotoksični efekat herbicida na odgovarajuće useve. Prosečan stručnjak bi znao da izbor zaštitnih supstanci zavisi delom od useva od interesa i odgovarajućeg herbicida ili kombinacije herbicida uključene u sinergijsku herbicidnu kompoziciju. Primeri zaštitne supstance pogodne za upotrebu sa ovde opisanim herbicidnim kompozicijama uključuju, ali bez ograničenja, one opisane u US patentu br. 4,808,208; 5,502,025; 6,124,240 i US patenta prijava objavljena pod br. 2006/148647; 2006/0030485; 2005/0233904; 2005/0049145; 2004/00224849; 2004/0224848; 2004/0224844; 2004/0157737, 2004/0018940; 2003/0171220; 2003/0130120; 2003/0078167 čiji opisi su uključeni ovde referencom u njihovoj celovitosti. Postupci prema pronalasku uključuju upotrebu herbicida u kombinaicji sa herbicidnim sejfnerima kao što su benoksakor, BCS (1-bromo-4-[(hlorometil)sulfonil]benzen), klohinocet-meksil, cinometrinil, dihlormid, 2-(dihlorometil)-2-metil-l,3dioksolan (MG 191), fenhlorazol-etil, fenklorim, flurazol, fluksofenim, furilazol, izoksadifen-etil, mefenpirdietil, metoksifenon ((4-metoksi-3-metilfenil)(3-metilfenil)-metanon, anhidrid naftalinkarbonskilne kiselne (anhidrid 1,8-naftalinkarbonske kiseline) i oksabetrinil da bi se povećala zaštita useva. Efikasne protivotrovne količine herbicidnih sejfnera mogu biti nanete u isto vreme kao i jedinjenja prema pronalasku, ili nanete tretiranjem semena. Prema tome aspekt prikazanog pronalska odnosi se na upotrebu smeše koja sadrži glifosinat, bar jedan drugačiji herbicid i dodatno efikasnu količinu herbicidnog sejfnera.
Tretiranje semena je naročito korisno u selektivnom suzbijanju korova, jer je fizički ograničava protivotrov na ratarsku biljku. Prema tome naročito korisno izvođenje prikazanog pronalaska je postupak za selektivno suzbijanje rasta kroova na polju koje obuhvata seme iz kog usev raste sa protivotrovnom efikasnom količinom sejfnera, a polje se tretira sa efikasnom količinom herbicida da bi se suzbio korov. Efikasne protivotrovne količine sejfnera mogu biti lako određene od strane ljudi iz štuke pomoću jednostavnih eksperimenata. Efiksana protivotrovna količina zaštitne materije je prisutna gde je željena biljka tretirana sa sejfnerom tako da efekat herbicida na biljku opadne u poređenju sa efektom herbicida na biljku koja nije tretirana sa sejfnerom; generalno efikasna protivotrovna količina sejfnera sprečava oštećenje ili ozbiljno oštećenje biljke tretirane sa sejfnerom. Osoba iz struke je spodobna da odredi da li je upotreba sejfnera odgovarajuća i odredi dozu pri kojoj bi sejfner trebao da bude korišćen na usevu.
U specifičnim izvođenjima, herbicid ili herbicidna kombinacija primenjana na biljku prema pronalasku deluje kao sejfner. U ovom izvođenju, prvi herbicid ili herbicidna smeša je primenjena u efikasnoj protivotrovnoj količini nabiljku. Prema tome, obezbeđen je postupak suzbijanja korova u oblasti gajenja. Postupak obuhvata sađenje u oblasti semena useva ili biljke koja obuhvata prvi nukelotid koji kodira polipeptid koji daje otpornost na glifosat operativno vezan za promoter aktivan u biljci; i drugi polinukleotid koji kodira polipeptid otporan na ALS inhibitor operativno vezan za promeoter aktivan u biljci. Kombinacija herbicida koja obuhvata bar jednu efikasnu količin prvog i drugog herbicida je naneta na usev, deo useva, korov ili oblast njegovog gajenja. Efikasna količina herbicidne kombinacije suzbija korove; i efikasna količina prvog herbicida nije tolerisana od strane useva kada se primenjuje sama ili kada se poredi sa kontrolnim usevom koji nije bio izložen prvom herbicidu; i efikasna količina drugog herbicida dovljna da proizvede zaštitni efekat, gde zaštitni efekat obezbeđuje porast u otpronosti useva posle primene prvog i drugog herbicida u poređenju sa otornošću useva kada se prvi herbicid primenjuje sam.
U specifičnim izvođenjima, kombinacija zaštitnih herbicida obuhvata prvi ALS inhibitor i drugi ALS inhbitor. U drugim izvođenjima, zaštitni efekat je postignut nanošenjem efikasne količine kombinacije glifosata i bar jedne hemikalije ALS inhibitora. U drugm izvođenjima, zaštitni efekat je postignut kada su usevi otporni na glifosat/ALS inhbitor, delovi useva, seme useva, korov ili oblast gajenja je tretirana sa bar jednim herbicidom iz familije hemikalija sulfonilurea u kombinaciji sa bar jednim herbicidom od hemikalija ALS familije (kao što jc na primer, imidazolinon.
Takve smeše obezbeđuju povećanu otpornost useva (tj. pad herbicidnog oštećenja). Postupak omogućava povećanu primenu odnosa hemikalija posle ili pre tretmana. Takvi postupci nalaze primenu za povećano suzbijanje neželjene ili nepoželjne vegatacije. U drugim izvođenjima, efekat zaštite je postignut kada biljka otporna na glifosat/ALS inhibitor, deo useva, seme useva, korov ili oblast njegovog gajenja je tretirana bar jednim herbicidom hemikalije iz familije sulfonilurea u kombinaciji sa bar jednim herbicidom iz familije imidazolionoa. Ovaj postupak obezbeđuje povećanu otprornost useva (tj. pad herbicidnog oštećenja). U specifičnim izvođenjima, sulfonilurea obuhvata rimsulfuron i imidazolinon obuhvata imazetapir. U drugim izvođenjima, glifosat je takođe nanošen na usev, deo useva ili oblast gajenja.
Ove korišćen izdraz 'adjuvant' je bilo koji materijal koji se dodaje u rastvor za sprej ili formulaciju da bi se modifikovalo dejstvo poljoprivredne hemiklaije ili fizičke osobine rastvora za spreja. Videti na primer, Green and Foy (2003) 'Adjuvant: Tools for Enhancing Herbicide Performance' uWeed Biology and Management'ed. Inderjit (Kluvver Academic Publishers, The Netherlands). Adjuvanti mogu biti kategorizovani ili podklasifikovani kao aktivatori, zakišeljivači, puferi, aditivi, adhezivi, antiflokulanti, sredstva protv stvaranja pene, uništivači pene, antifrizi, atraktanti, osnovne mešavine, helatna sredstva, izbistrivači, koloranti ili boje, kompatibilna sredstva, korastvarači, kupleri, uljani koncentrati za useve, sredstva za depoziciju, detergenti, disperzanti, sredstva za kontrolu nanošenja, emulgatori, smanjivači isparavanja, ekstenderi, fertilizatori, indikatori pene, formulanti, inertne materije, sredstva za održavanje vlažnosti, metilovna ulja semena, visoki sadržaj COCs, polimeri, modifikovana biljna ulja, penetratori, repelenti, koncentrati petroleum ulja, konzervansi, rainfast adjuvanti, retenciona pomoćna sredstva, sredstva za pospešivanje rastvorljivosti, površinski aktivna sredstva, rasturači, stikeri, rasturač stikeri, sinergisti, zgušnjivači, translokaciona pomoćna sredstva, UV zaštitna sredstva, biljna ulja, vremenski kondicioneri i sredstva za kvašenje.
/ Dodatne poljoprivredne hemikalije
Dodatno, postupci prema pronalasku mogu obuhvatati upotrebu herbicida ili smeše herbicida, kao i, jedan ili više drugih insekticida, fungicida, nematocida, baktericida, akaricida, regulatora rasta, hemosterilanti, semiohemikalije, repelenti, atraktanti, feromoni, stimulatori ishrane ili drugih biološki aktivnih jedinjenja ili entomopatogenih bakterija, virusa ili gljiva da bi se obrazovala smeša sa više komponenti koja daje jednak široki spektar poljoprivredne zaštite. Primeri takvih poljoprivrednih protektanta koji mogu biti korišćeni u postupcima prema pronalasku uključuju: insekticide kao stoje abamektin, acefat, acetamiprid, amidoflumet (S-1955), avermektin, azadiraktin, azinfos-metil, bifentrin, bifenazat, buprofezin, karbofuran, kartap, hlorfenapir, hlorfluazuron, hlorpirifos, hlorpirifos-metil, hromafenozid, klotianidin, ciflumetofen, ciflutrin, beta-ciflutrin, cihalotrin, lamda-cihalotrin, cipermetrin, ciromazin, deltametrin, diafentiuron, diazinon, dieldrin, diflubenzuron, dimeflutrin, dimetoat, dinotefuran, diofenolan, emamektin, endosulfan, esfenvalerat, etiprol, fenotiokarb, fenoksikarb, fenpropatrin, fenvalerat, fipronil, flonikamid, flubendiamid, flucitrinat, tau-fluvalinat, flufenerim (UR-50701), flufenoksuron, fonofos, halofenozid, heksaflumuron, hidrametilnon, imidakloprid, indoksakarb, izofenfos, lufenuron, malation, metaflumizon, metaldehid, metamidofos, metidation, metomil, metopren, metoksihlor, metoflutrin, monokrotofos, metoksifenozid, nitenpiram, nitiazin, novaluron, noviflumuron (XDE-007), oksamil, paration, paration-metil, permetrin, forat, fosalon, fosmet, fosfamidon, pirimikarb, profenofos, proflutrin, pimetrozin, pirafluprol, piretrin, piridalil, piriprol, piriproksifen, rotenon, rianodin, spinosad, spirodiklofen, spiromezifen (BSN 2060), spirotetramat, sulprofos, tebufenozid, teflubenzuron, teflutrin, terbufos, tetrahlorvinfos, tiakloprid, tiametoksam, tiodikarb, tiosultap-natrijum, tralometrin, triazamat, trihlorfon i triflumuron; fungicidi kao što je acibenzolar, aldimorf, amisulbrom, azakonazol, azoksistrobin, benalaksil, benomil, bentiavalikarb, bentiavalikarb-izopropil, binomial, bifenil, bitertanol, blasticidin-S, Bordovska čorba (tribazni bakar sulfat), boskalid/nikobifen, bromukonazol, bupirimat, butiobat, karboksin, karpropamid, kaptafol, kaptan, karbendazim, hloroneb, hlorotalonil, hlozolinat, klotrimazol, bakar oksihlorid, soli bakra kao što su bakar sulfat i bakar hidroksid, ciazofamid, ciflunamid, cimoksanil, ciprokonazol, ciprodinil, dihlofluanid, diklocimet, diklomezin, dikloran, dietofenkarb, difenokonazol, dimetomorf, dimoksistrobin, dinikonazol, dinikonazol-M, dionkap, diskostrobin, ditianon, dodemorf, dodin, ekonazol, etakonazol, edifenfos, epoksikonazol, etaboksam, etirimol, etridiazol, famoksadon, fenamidon, fenarimol, fenbukonazol, fenkaramid, fenfuram, fenheksamid, fenoksanil, fenpiklonil, fenpropidin, fenpropimorf, fentin acetat, fentin hidroksid, ferbam, ferfurazoat, ferimzon, fiuazinam, fludioksonil, flumetover, fluopikolid, fluoksastrobin, flukinokonazol, flukinokonazol, flusilazol, flusulfamid, flutolanil, flutriafol, folpet, fosetil-aluminijum, fuberidazol, furalaksil, furametapir, heksakonazol, himeksazol, guazatin, imazalil, imibenkonazol, iminoktadin, jodikarb, ipkonazol, iprobenfos, iprodion, iprovalikarb, izokonazol, izoprotiolan, kasugamicin, kresoksim-metil, mankozeb, mandipropamid, maneb, mapanipirin, mefenoksam, mepronil, metalaksil, metkonazol, metasulfokarb, metiram, metminostrobin/fenominostrobin, mepanipirim, metrafenon, mikonazol, miklobutanil, neo-asozin, (feri metanarsonat), nuarimol, oktilinon, ofurank, orizastrobin, oksadiksil, oksolinska kiselina, okspokonazol, oksikarboksin, paklobutrazol, penkonazol, pensikuron, pentiopirad, perfurazoat, fosforna kiselina, ftalid, pikobenzamid, pikoksistrobin, polioksin, probenazol, prohloraz, procimidon, propamokarb, propamokarb-hidrohlorid, propikonazol, propineb, prokinazid, protiokonazol, piraklostrobin, priazofos, pirifenoks, pirimetanil, pirifenoks, pirolnitrin, pirokilon, kinkonazol, kinoksifen, kintozen, siltiofam, simekonazol, spiroksamin, streptomicin, sumpor, tebukonazol, tehrazen, tekloftalam, teknazen, tetrakonazol, tiabendazol, tifluzamid, tiofanat, tiofanat-metil, tiram, tiadinil, tolklofos-metil, tolifluanid, triadimefon, triadimenol, triarimol, triazoksid, tridemorf, trimoprahamid triciklazol, trifloksistrobin, triforin, tritikonazol, unikonazol, validamicin, vinklozolin, zineb, ziram i zoksamid; nematocidi kao što su aldikarb, oksamil i fenamifos; baktericidi kao što je streptomicin; akaricidi kao što su amitraz, hinometionat, hlorobenzilat, ciheksatin dikofol, dienohlor, etoksazol, fenazakin, fenbutatin oksid, fenpropatrin, fenpiroksimat, heksitiazoks, propargit, piridaben i tebufenpirad; i biološka sredstva uključujući entomopatogenu bakteriju, kao što jeBacillus thuringiensissubspec,Aizawai, Bacillus thuringiensissubspec,Kurstakii inkapsulirani delta-endotoksiniBacillus thuringiensis(na pr. Cellcap, MPV, MPVII); entomopatogene gljive kao što je green muscaridine fungus; i cntomopatogeni virus uključujući bakulovirus, nukleopolihedro virus (NPV) kao što je HzNPV, AfNPV; i virus granuloze (GV) kao što je CpFV. Odnos težine ovih različitih sastojaka prema drugim kompozicijama( na pr.herbicidima) korišćenim u postupcima prema pronalasku tipično su između 100:1 i 1:100, ili između30: 1 i 1:30, između 10:1 i 1:10, iliizmeđu4:l i 1:4.
Prikazani pronalazak se takođe odnosi na kompoziciju koja obuhvata biološki efikasnu količinu herbicida od interesa ili smešu herbicida i efikasnu količinu bar jednog dodatnog biološki aktivnog jedinjenja ili sredstva i može dalje obuhvatati bar jedno površinski aktivno sredstvo, čvrsti razblaživač ili tečni razblaživač. Primeri takvih biološki aktivnih jedinjenja ili sredstava su; insekticidi kao što je abamektin, acefat, acetamiprid, amidoflumet (S-1955), avermektin, azadiraktin, azinfos-metil, bifentrin, binfenazat, buprofezin, karbofuran, hlorfenapir, hlorfluazuron, hlorpirifos, hlorpirifos-metil, hromafenozid, klotianidin, ciflutrin, beta-ciflutrin, cihalotrin, lamda-cihalotrin, cipermetrin, ciromazin, deltametrin, diafentiuron, diazinon, diflubenzuron, dimetoat, diofenolan, emamektin, endosulfan, esfenvalerat, etiprol, fenotikarb, fenoskikarb, fenpropatrin, fenvalerat, fipronil, flonikamid, flukitrinat, tau-fluvalinat, flufenerim (UR-50701), flufenoksuron, fonofos, halofenozid, heksaflumuron, imidaklopid, indoksakarb, izofenfos, lufenuron, malation, metaldehid, metamidofos, metidation, metomil, metopren, metoksihlor, monokrotofos, metoksifenozid, nitiazin, novaluron, noviflumuron (XDE-007), oksamil, paration, paration-metil, permetrin, forat, fosalon, fosmet, fosfamidon, pirimikarb, profenofos, pimertrozin, piridalil, piriproksifen, rotenon, spinosad, spiromesifm (BSN 2060), sulprofos, tebufenozid, teflubenzuron, teflutrin, terbufos, tetrahlorvinfos, tiakloprid, tiametoksam, tiodikarb, tiosultap-natrijum, tralometrin, trihlorfon i trflumuron; fungicidi kao što je acibenzolar, azoksistrobin, benomil, blasticidin-S, Bordovska čorba (tribazni bakar sulfat), bromukonazol, karpropamid, kaptafol, kaptan, karbendazim, hloroneb, hlorotalonil, bakar oksi hlorid, soli bakra, ciflufenamid, cimoksanil, ciprokonazol, ciprodinil, (S)-3,5-dihloro-7V-(3-hloro-1 -etil-1 -metil-2-oksopropil)-4-metilbenzamid (RH 7281), diklocimet (S-2900), diklomezin, dikloran, difenokonazol, (S)-3,5-dihidro-5-metil-2-(metiltio)-5-fenil-3-(fenil-arnino)-4H-imidazol-4-on (RP 407213), dimetomorf, dimoksistrobin, dinikonazol, dinikonazol-M, dodin, edifenfos, epoksikonazol, famoksadon, fenamidon, fenarimol, fenbukonazol, fenkaramid (SZX0722), fenpiklonil, fenpropidin, fenpropimorf, fentin acetat, fentin hidroksid, fluazinam, fludioksonil, flumetover (RPA 403397), flumorf/flumorlin (SYP-L190), fluoksastrobin (HEC 5725), flukinkonazol, flusilazol, flutolanil, flutrifol, flopet, fozetil-aluminijum, furalaksil, furametapir (S-82658), heksakonazol, ipkonazol, iprobenfos, iprodion, izoprotiolan, kasugamicin, krezoksim-metil, mankozeb, maneb, mefenoksam, mepronil, metalaksil, metkonazol, metomino-strobin/fenominostrobin (SSF-126), metrafenon (AC375839), miklobutanil, neo-asozin (feri metan-arsonat), nikobifen (BAS 510), orizastrobin, oksadiksil, penkonazol, pencikuron, probenazol, prohloraz, propamokarb, propikonazol, prohinazid (DPX-KQ926), protiokonazol (JAU 6476), pirifenoks, piraklostrobin, pirimetanil, pirohinol, hinoksifen, spiroksamin, sumpor, tebukonazol, tetrakonazol, tiabendazol, tifluzamid, tiofanat-metil, tiram, tiadinil, triadimefon, triadimenol, triciklazol, trifloksistrobin, tritikonazol, validamicin i vinklozolin; nematocide kao što su aldikarb, oksamil i fenamifos; baktericidi kao što je streptomicin; akaricidi kao što su amitraz, hinometionat, hlorobenzilat, ciheksatin, dikofor, dienohlor, etoksazol, fenazahin, fenbutatin oksid, fenpropatrin, fenpiroksimat, heksitiazoks, propargit, piridaben i tebufenpirad; i biološka sredstva koja uključuju entomopatogene bakterije, kao što suBacillus thuringiensissubsp.Aizawai, Bacillus thuringiensis subsp. Kurstakiii inkapsulirani delta-endotoksiniBacillus thuringiensis ( na pr.Cellcap, MPV, MPVII); entomopatogene gljive kao što jc green muscardine fungus; i entomopatogeni virus uključujući bakulovirus, nukleopoliedo virus (NPV) kao što je HzNPV, AfNPV; i virus granuloze (GV) kao što je CpGV. Postupci prema pronalasku mogu takođe obuhvatati upotrebu biljaka genetski transformisanih da eksprimuju proteine toksične za štetočine beskičmenjake (kao što suBacillus thuringiensisdelta-endotoksini). U takvim izvođenjima, efekat egzogeno primenjenih jedinjenja za suzbijanje štetočina beskičmenjaka može biti sinergističan sa eksprimovanim proteinima toksina.
Generalno, pozivanje na ova poljoprivredna zaštitna sredstva uključujeThe Pesticide Manual 13<th>Edition,CD. S. Tomlin, British Crop Protection Council, Farngham, Surrey, UK, 2003 iThe BioPesticide Manual, 2" d Edition.,L.G. Copping, Ed. British Crop Protection Council, Farnham, Surrev, UK 2001.
U izvesnim slučajevima, kombinacije sa drugim jedinjenjima koja suzbijaju štetočine beskičmenjake ili sredstva koja imaju sličan spektar kontrole, ali različiti način dejstva će biti naročito pogodna za planirano suprotstavljanje. Prema tome, kompozicije prema sadašnjem pronalasku mogu dalje obuhvatati biološki efikasnu količinu bar jednog jedinjenja za suzbijanje štetočina beskičmenjaka ili sredstva koje ima sličan spektar suzbijanja, ali različiti način dejstva. Dovođene genetski modifikovane biljke da eksprimuje jedinjenja za zaštitu bilja( na pr.proteina) ili lokusa biljke sa biološki efikasnom količinom jedinjenja prema ovom pronalasku može takođe obezbediti širi spektar zaštite bilja i koristan za planirano suprotstavljanje.
Prema tome, postupci prema pronalasku koriste herbicid ili herbicidnu kombinaciju i mogu dalje obuhvatati upotrebu insekticida i/ili fungicida, i/ili druge poljoprivredne hemikalije kao što su đubriva. Upotreba takvih kombinovanih tretmana prema pronalasku može proširiti spektar aktivnosti protiv dodatnih vrsta korova i suzbiti proliferaciju bilo kojih otpornih biotipova.
Postupci prema pronalasku dalje obuhvataju upotrebu regulatora rasta biljka kao što su aviglicin, #-(fenilmetil)-l//-purin-6-amin, etefon, epoholeon, gibcrelinska kiselina, giberlin A4i A7, protein 'ukosnice', mepikuat hlorid, proheksadion kalcijum, prohidrojasmon, natrijum nitrofenolat i trineksapak-metil i organizme koji modifikuju rast biljaka kao što jeBacillus cereussoj BP01.
VI.Upotreba selektivnih marker a i postupci transformacije
U nekim izvođenjima prema pronalasku, konstrukt prema pronalasku obuhvata GAT polinukleotid ili polipeptid otporan na ALS inhibitor kao selektivni marker,na pr.u biljci, bakteriji, aktinomiceti, kvascu, algi ili drugoj gljivi. Na primer, organizam koji je bio transformisan sa vektorom uključujući GAT polinukleotid može biti selektovan na osnovu njegove sposobnosti da raste u prisustvu glifosata. Alternativno, organizam koji je transformisan sa vektorom koji sadrži polinukleotid koji je otporan na ALS inhibitor može biti izabran na osnovu njegove sposobnosti da raste u prisustvu ALS inhhibitora. U nekim izvođenjima pronalaska, konstrukt prema pronalasku obuhvata GAT polinukleotid i druge polinukleotide otporne na herbicide (na pr. polinukleotid koji kodira polinukleotid koji je otporan na ALS-inhibitor, polinukleotid koji kodira HRA polipeptid itd.) koji funkcionišu kao selektivni markeri,na pr.u biljci, bakteriji, aktinomiceti, kvascu, algi ili drugoj gljivi. Na primer, organizam koji je transformisan sa vektorom uključujući GAT polinukleotid i druge polinukleotide otporne na herbicid mogu biti izabrani na osnovu njegove sposobnosti da raste u prisustvu glifosata i odgovarajućih drugih herbicida. Kao što je pokazano u Primeru 10 i slici 7, takvi postupci selekcije omogućavaju da se proceni ekspresija bilo kog polinukleotida od interesa, u, na primer, ranom stupnju transformacionog procesa u cilju identifikacije potencijalnih problema sa ekspresijom. Dok bilo koji od polinukleotida od interesa može biti korišćen, u specifičnim izvođenjima, korišćen je insekticidni gen.
Konstrukt prema pronalasku obuhvata GAT polinukleotid i/ili polinukleotid koji kodira polipeptid koji je otporan na ALS ihnibitor može pokazati veoma visoku transormacionu efikasnost, kao što je bar 20%, 30%, 40%>, 50% ili 60% ili višu. Na ovaj način, obezbeđeni su poboljšani postupci transformacije. Povrh toga, kada konstrukt prema pronalasku obuhvata GAT polinukleotid i/ili polinukleotid koji je otporan na ALS inhibitor, transfomanti koji su dobijeni mogu pokazati veoma visoku frekfencu otpornosti na glifosat ili ALS inhibitor, tako da, na primer, bar 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 100% transformanata je otporno na glifosat i/ili ALS-inhibitor. Ovde korišćen izraz 'transformaciona efikasnost' je definisan kao procenat TO događaja koji su otporni na specifične koncentracije selekcionih sredstava, kao što je glifosat i/ili hemikalije ALS inhibitori. Kada konstrukt prema pronalasku obuhvata GAT polinukleotide i/ili polinukleotide koji su otporni na ALS inhibitor operativno vezan za pojačivač, kao što je 35S pojačivač. Transformanti koji su dobijeni mogu pokazivati veoma visoku učestalost otpornosti na glifosat i/ili ALS inhibitor, tako da na primer, bar 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 100% transformanata je otporno na glifosat ili ALS inhibitor. Pored toga, kada konstrukt prema pronalasku obuhvata GAT polinukleotid i/ili polinukleotid koji je otporan na ALS inhibitor, učestalost transformacionih slučaja u kojima je samo jedna kopija konstrukta umetnuta u genom može biti visoka bar 35%, 40%, 50%, 60%, 70%o, 80%o, 90% ili viša. Gde konstrukt prema pronalasku obuhvata GAT polinukleotide i/ili polinukleotide otporne na ALS inhibitor operativno vezane za pojačivač, kao što je 35S pojačivač, učestalost transformacionih događaja u kojima je samo jedna kopija konstrukta umetnuta u genom može biti visoka bar 35%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili viša. Na ovaj način, pronalazak takođe obezbeđuje poboljšane postupke transformacije. Zna se da kada je korišćen pojačivač u konstruktu (kao što je S<35>pojačivač) mogu biti korišćene višestruke kopije, uključujući 1, 2, 3, 4, 5, 6 ili više. U takvim postupcima, transformanti mogu biti selektovani uključujući glifosat i/ili ALS inhibitor, ili mogu biti selektovani koristeći drugo jedinjenje, kao što je drugi herbicid za koji transformisan konstrukt sadrži osobinu otpornosti.
VII. Kitovi
Pronalazak dalje obezbeđuje kit koji obuhvata bar jedan konstrukt nukleinske kiseline koji obuhvata polinukleotid koji kodira polipeptid koji daje otpornost na glifosat i/ili polinukleotid koji kodira polipeptid otporan na ALS inhibitor za upotrebu u stvaranju biljka otpornih na glifosat/ALS inhibitor prema pronalasku. U specifičnim izvođenjima, kit može sadržati polinukleotid koji kodira GAT ili kit može sadržati polinukleotid koji kodira GAT i polinukleotid koji kodira polinukleotid otporan na ALS inhibitor (tj. HRA). U nekim aspektima konstrukt prema pronalasku će obuhvatati T-DNK sekvencu. Konstrukt može opciono uključivati regulatornu sekvencu( napromoter) operativno vezan za polinukleotid koji daje otpornost na glifosat, gde je promoter heterologni u odnosu na polinukleotid i efikasan da izazove dovoljnu ekspresiju kodiranog polipeptida da bi se povećala otpornost na glifosat transformisane biljne ćelije sa konstruktom nukleinske kiseline.
Ovde korišćen izraz jedan' odnosi se na jedan ili više od( tj.na bar jedan). Kao na primer ,element' označava jedan ili više elemenata.
Sve objave i patentne prijave pomenute u opisu ukazuju na nivo stručnjaka u oblasti na koju se pronalazak odnosi. Sve objave i patentne prijave na koje se ovde poziva kao i svaka pojedinačna objava ili patenta prijava na koje je ovde specifično i individualno ukazano je uključena refencom.
Mada je izneti pronalazak bio opisan do detalje kroz primenu i primere za svrhe jasnoće razumevanja, biće očigledno da izvesne promene i modifikacije mogu biti učinjene u okviru obima priloženih zahteva.
EKSPERIMENTALNI DEO
Primer 1 - GAT- HRA biljke kukuruza su otporne na različine herbicide i poljoprivredne hemikalije
Za transformaciju kukuruza posredovanu saAgrobacteriumsa ekspresionom kasetom koja sadrži GAT polinukleotid (DEQ ID br. 4) i HRA polinukleotid (SEQ ID br. 66) operativno vezanim za konstitutivni promoter, korišćen je Zhao-ov postupak (US patent br. 5,981,840 i PCT patentna objava WO 98/32326; na čiji se sadržaj ovde poziva referencom). Ekspresione kasete su napravljene da sadrže GAT polinukleotid i HRA polinukleotid. U nekim ekspresionim kasetama, GAT i HRA polinukleotidi su operativno vezani za bar jednu kopiju 35S pojačivača [SEQ ID br.72]. U nekim ekspresionim kasetama, GAT i HRA polinukleotidi su operativno vezani za dve ili tri kopije 35S pojačivača SEQ ID. br.l. U nekim ekspresionim kasetama, GAT polinukelotid je operativno vezan za promoter ubihitina i HRA polinukleotid je operativno vezan za promoter prirodne kukuruzne acetolaktat sintetaze (ALS).
Ukratko, nezreli zameci su izolovani iz kukuruza i dovedeni su u kontakt saAgrobacterium,gde je bakterija sposobna da prenese GAT i HRA sekvencu bar jednoj ćeliji bar jednog nezrelog zametka (stupanj 1: stupanj infekcije). U ovom stupnju nezreli embrioni su zaronjeni u suspenzijuAgrobacteriumza inicijaciju inokulacije. Zametci su ko-kultivisani u isto vreme saAgrobacterium(stupanj 2: stupanj ko-kultivacije). Nezreli zameci su kultivisani na čvrstom medijumu posle stupnja infekcije. Posle perioda ko-kultivacije opciono razmatranje stupanj ,odmaranja'. U ovom stupnju odmaranja, zameci su inkubirani u prisustvu bar jednog antibiotika poznatog da inhibira rastAgrobacteriumbez dodatka selektivnog sredstva za transformaciju biljka (stupanj 3: stupanj odmaranja). Nezreli zametci su kultivisani na čvrstom medijumu sa antibioticima, ali bez selektivnih sredstava za eliminacijuAgrobacteriumi za fazu odmaranja inficiranih ćelija. Sledeće, inokulirani zameci su kultivisani u medijumu koji sadrži selektivna sredstva i rastom transformisan kalus je regenerisan (stupanj 4: selecioni stupanj). Nezreli zameci su kultivisani na čvrstom medijumu sa selektivnim sredstvima koji dovode do selektivnog rasta transformisanih ćelija. Kalus je zatim regerisan u biljke (stupanj 5: regeneracioni supanj) i kali koji je rastao na selektivnom medijumu je kultivisan na čvrstom medijumu da se regenerišu biljke.
Procenjivane otpornosti na herbicide
GAT-HRA Biljke kukuruza su procenjivane na otpornost na glifosat i druge herbicide. Jedan protokol korišćen u ovom procenivanju je kao što sledi. U stupnju V2 (Ritchie and Hanway (1982), ,How a corn develops'Spec. Rep. 48(Coop. Ext. Ser., IowaState Univ., Ames, Iowa)), visina biljka je merena i herbicidi su primenjivani prskanjem. Deset do četrnest dana posle prskanja, transgenske biljke su procenjivane prema simptomima oštećenja i merena je ponovo visina biljka u cilju određivanja odnosa rasta biljka. U nekim serijama testova, GAT-HRA kukuruz i kontrolne biljke su tretirane (posle nicanja) sa jednim od sledećih herbicida: tribenuron (kao Express®, u primenjenom odnosu od 0 i 200 grama aktivne materije po hektaru (g a.m./ha); hlorimuron (kao Classic® pri 0 i 200 g a.m/ha); imazapir (kao Arsenal® pri 0 i 200 g a.m/ha); metsulfuron-metil (kao Ally® pri 0.5 unce a.m/ha (36.9 ml a.m./ha) ili 35 g a.m./ha). Za svaki tretman GAT-HRA kukuruz ne pokazuje značajno oštećenje usled tretmana, dok kontrolni kukuruz je bio ozbiljno oštećen ili uništen.
Biljke GAT-HRA kukuruza su takođe tretirane sa različitim drugim herbicidima i kombinacijama herbicida kao i drugim poljoprivrednim hemikalijama, uključujući glifosat (kao WeatherMax® u primenjenom odnosu od 64.4 unce a. m. /jutru (4.7 1 a.m./ha)); rimsulfuron (kao Matrix® u primenjenom odnosu od 1.9 unce a.m./jutru (140 ml a.m./ha)); sulfometuron-metil (kao Oust® u primenjenom odnosu od 4.5 unce a.m./jutru (332 ml a. m/ha); Basis® (kombinacija rimsulfurona i tifensulfuron-metila u primenjenom odnosu od 1.4 unce a.m./jutru (103 ml a.m./ha)); i hlorpirfos (kao Lorsban® u primenjenom odnosu 14.4 unce/jutru (1.06 1 a.m./ha)). Biljke su zatim procenjivne u različita vremena posle tretiranja, kao što je 10 ili 14 dana posle tretiranja. Otporne biljke su one koje su pokazale malno ili nimalo oštećenja posle tretmana sa herbicidima ili kombinacijom herbicida. Procenivanje identifikovanih GAT-HRA biljaka koje su bile otporne na više hemikalija sulfoniluree i glifosata. GAT-HRA biljke nisu pokazale bilo koje značajne razlike u rastu ili količini semena( tj.prinosu) u poređenju sa kontrolnim biljkama. Uzorci lišća su uzeti sa GAT-HRA biljaka i korišćeni u kvantitativnim PCR analizama i drugim analizama da bi se odredio broj i raspored kopija GAT i HRA polinukleotida koji su bili integrisani u biljni genom.
Drugi protokli za procenjivanje uključuju tretman sa imidazolinon herbicidima, kao što su komercijalni herbicidi Lightning® (kombinacija imazapira i imazetapira) koji je primenjen na GTAHRA kukuruz u V2 stadijumu lišća u četvorostrukom obeleženom odnosu (250 g a.m/ha). Biljke su procenjivane četrnaest dana posle primene herbicida i četiri od šest testiranih transgenskih slučaja nije pokazalo simptome oštećenja od herbicida. Drugi protokol za procenu uključuje tretman sa imidazolinon herbicidima kao i herbicidima sulfoniluree i glifosata. U ovim testovima, GAT-HRA kukuruz je tretiran sa različitim kombinacijama Lightning® (imazapir i imazetapir), Basis®
(rimsulfuron i tifensulfuron-metil) i WeatherMAX® (glifosat kalijumova so). Ovi herbicidi su primenjeni u V2 stupnju kao što sledi: Lightning® u dvostrukom obeleženom odnosu primene (1.8 unci a. m./jutru (133 ml a.m./ha)), Basis® u dvostrukom obeleženom odnosu primene (0.5 unci a.m./jutru (36.9 ml a.m./ha)) i WeatherMax® u četvorostrukom obeleženom odnosu primene (43 unce a.m./jutru). Četrnaest dana posle primene tretmana, biljke su procenjivane. Biljke koje sadrže jedanaest od dvanaest transgenskih slučaja ne pokazuju simptome herbicidnog oštećenja. 'Obeleženi odnos primene' odnosi se na odnos primene naveden na proizvođačkoj nalepnici. Gde je odnos primenjen za odgovarajuću situaciju u opsegu odnosa, ovde korišćenih, izraz 'obeleženi odnos primene' pokazuje na gornji kraj tog opsega. Proizvođačka informacija na nalepnici za pesticide je dostupna u U.S: Environmenral Protection Agencv i ažurira se online na uri oaspub.epa.gov/pestlabl/ppls.own; informacije o proizvodnu na nalepnici su takođe dostupne online na uri. www. cdms. net.
Dalji testovi potvrđuju da višestruka otpornost na herbicide GAT-HRA biljki kukuruza je stabilno nasleđena. TI seme je sakupljno od 20 transgenskih TO biljki koje pokazuju odličnu otpornost na herbicide u procenama u stakleniku. Kao što je poznato u tehnici, biljke otporne na herbicide mogu varirati sa okolinom, i herbicidnim tretmanima u sredini staklenika mogu imati veći uticaj na tretirane biljke nego herbicidni tretmani na polju. Prema tome, TI seme je dalje procenjivano u uslovima na polju. TI biljke su poprskane u stupnju lista V4 sa četiri različite kombinacije herbicidnih tretmana uključujući sulfoniluree i glifosat herbicide. U nekim testovima, korišćena je transgenska kontrolna linija za koju se znalo daje otporna na glifosat, ali osetljiva na druge herbicide. Testirane TI biljke takođe pokazuju odličnu otpornost na herbicide u uslovima polja, potvrđujući stabilno nasleđivanje herbicidne otpornosti.
Procenjivanje otpornosti na opses herbicida
GAT-HRA Biljke kukuruza su zatim procenjivane da bi se odredilo da li su takođe otpone na druge herbicide. Izveden je test primene herbicida i pre i posle nicanja. Specifično, sedam semena kukuruza svake linije koja je procenjivana, zasađeno je 1 cm dubine, u plastične sudove povšine 5.5 kvadratnih inča u Tama muljevitu ilovaču. Postupci opisani u Tabelama 3 i 4 su primenjeni pre navodnjavanja. Nedelju dana posle nicanja, biljke nikle iz semena su proređene tako daje svaki sud imao dve jednoobrazne biljke. Kukuruz nikao iz semena je navodnjavan i đubren zbog brzog rasta i gajen u fotoperiodu od 16-h. Kada je intenzitet prirodne svetlosti pao ispod 500 uE/m<2>/s, dodavano je svetio metalnog halogenida sa 160 uE/m fotosintetski aktivnog zračenja. Temperatura je održavana na 28±2 °C u toku dana i 22±2°C u toku noći. Relativna vlažnost je generalno u opsegu od 50 do 90%.
Pri ispitivanjima primene herbicida pre nicanja korišćene su komercijalne herbicidne formulacije. Smeše spreja su pripremljene korišćenjem dejonizovane vode na sobnoj temperaturi i mešane su u toku bar 15 minuta. Ratvori su prskani 1 do 2h posle pripremanja. Svi tretmani su primenjeni u zapremini spreja od 374 l/ha sa pljosnatom brizgaljkom na 51 cm sa pritiskom prskanja podešenim na 138 kPa i sa osnovnom mešavinom adjuvanata sa visokom pH da bi se osiguralo rastvaranje. Biljke su vizualno procenjivane na oštećenja i sveže ponike su merene 4 nedelje posle tretmana (rezultati prikazani u Tabeli 1). Oštećenje useva je takođe procenjivano vizualno na skali od 0% do 100%, gde 0% označava da nije bilo oštećena, a 100%) znači daje biljka uginula. Rezultati su prikazani u Tabeli 3 i izraženi su kao srednja vrednost četiri ponavljanja.
U studijama primene herbicida posle nicanja korišćeni su takođe komercijalne herbicidne formulacije. Specifično, četiri semena kukuruza svake linije koja je procenjivana, zasađeno je u 1 cm dubine, u plastične sudove povšine 5.5 kvadratnih inča sa sintetčkim medij umom za rast. Veoma mlade transgenske biljke nikle iz semena su prethodno tretirane sa glifosatom da bi se eliminisali segreganti koji su veoma osetljivi na glifosat. Biljke oštećene tretmanom sa glifosatom su uklonjene i proređene do dve jednoobrazne biljke u svakom sudu. Sađeni su dodatni sudovi tako da su samo sudovi sa dve jednoobrazne i nepovređene biljke korišćeni u eksperimentu. Kukuruz nikao iz semena je navodnjavan i đubren zbog brzog rasta i gajen u fotoperiodu od 16-h. Kada je intenzitet prirodne svetlosti pao ispod 500 uE/m /s, dodavano je svetio metalnog halogenida sa 160 uE/m fotosintetski aktivnog zračenja. Temperatura je održavana na 28±2 °C u toku dana i 22±2°C u toku noći. Relativna vlažnost je generalno u opsegu od 50 do 90%.
U ispitivanjima posle nicanja korišćene su komercijalne herbicidne formulacije i primenjivane su dve nedelje posle sađenja. Smeše spreja su pripremljene korišćenjem dejonizovane vode na sobnoj temperaturi i mešane su u toku bar 15 minuta. Rastvori su prskani 1 do 2h posle pripremanja. Svi postupci sa ALS herbicidima su primenjeni u zapremini spreja od 374 l/ha sa ravnom brizgaljkom na 51 cm sa pritiskom raspršivanja podešenim na 138 kPa i sa osnovnom mešavinom adjuvanata sa visokim pH da bi se osiguralo rastvaranje i foliamo prodiranje. Glifosat i glifosat herbicidni preparati uključujući sisteme adjuvanta i njihove komercijalne formulacije da bi se osigurala visoka folirana aktivnost. Sveže ponike su merene 2 nedelje posle tretmana (podaci prikazani u Tabeli 5) i biljke su vizualno procenjivane na oštećenje na skali od 0%> do 100% na kojoj, gde 0% označava da nije bilo oštećenja, a 100%) znači daje biljka uginula (podaci prikazani u Tabeli 6). Rezultati su prikazani u Tabelama 5 i 6 su srednja vrednost četiri ponavljanja.
Dodatni testovi koji uključuju drufie poljoprivredne hemikalije
Drugi protokoli su korišćeni da se proceni da li su GAT-HRA biljke, pored toga što su otpornije na različite herbicide nego kontrolne biljke, bile otpornije na druge poljoprivredne hemikalije u odnosu na kontrolne biljke.Na primer, jedan protokol uključuje tretiranje GAT-HRA kukuruza sa herbicidima sulfoniluree rimsulfuronom i tifenilsulfuron-metilom pored postupka sa organofosfatnim insekticidom hlorpirifosom (Lorsban®). U ovom testu, biljke su procenjivane 14 dana posle tretmana, i svih 20 GAT-HRA transgenih biljaka je pokazalo dobru do odličnu otpornost na ove hemikalije dok kontrolne biljke pokazuju značajna oštećenja kao rezultate tretmana (videti Tabelu 8). Rezultati herbicidnog oštećenja (takođe nazvani rezultati otpornosti) su dodeljivani na osnovu grafika na skali 1 do 9, sa procenom 9 koja ukazuje na biljke koje nisu pokazale simptome, a procena 1 ukazuje na potpuno uništenu biljku. Procena 5 ukazuje na umerenu oštećenost lišća. Ovde je korišćena skala koja je dalje obljašnjena dole u Tabeli 7.
Četrnaest dana posle nanošenja spreja, merena je visina 20 transgenskih biljaka na osnovu parcela. Sakupljene su visine biljki četiri ista najotpornija GAT HRA slučaja zajedno sa ne-GAT HRA kontrolom. Četiri transgenska slučaja prikazuju jednoobrazni rast biljka pri svim herbicidnim tretmanima. Ne-GAT HRA kontrola pokazala je smanjenje u rastu biljke sa tretmanima sulfoniluree. Prosečna visina prema parceli koja potiče od ovih merenja je prikazana u Tabeli 9.
Upoređivanje odgovora GAT- HRA biljki na opseg herbicidnih doza
GAT-HRA biljke kukuruza su proizvedene korišćenjem različitih ekspresionih kaseta i testova kao što je gore opisano za otpornost na više hemikalija sulfoniluree u kombinaciji sa glifosatom (videti Tabelu 10).
Primer 2— GAT- HRA biljke soje su otporne na različite herbicide i poljoprivredne hemikalije
Transformacija i regeneracija transgenskih biljki
Sojini zametci su bombardovani sa ekspresionom kasetom koja sadrži GAT (SEQ ID. br.68) i HRA polinukleotide (SEQ ID br. 65) operativno vezane za konstitutivni promoter kao što sledi. Promoter korišćen za GAT sekvencu je SCP1 promoter i promoter korišćen za HRA sekvencu je SAMS promoter. Kombinacije 2 promoter/gen su podešene u tandemsku orijentaciju sa HRA promoter/gen nizvodno (,downstream') od GAT promoter/gena. Da bi izazvali somatske zametke, kotiledoni manji od 4 mm dužine secirani iz površinski sterilizovanog, zrelog semena soje vrste Jack koji su bili kultivisani u svetlu ili mraku, na 26°C u odgovarajućem medijumu agara u toku šest do deset nedelja. Somatski zameci koji proizvode sekundarne zametke su zatim izrezani i smeštenu u pogodni tečni medijum. Posle ponovljene selekcije za klastere somatskih zametaka koji se umnožavaju kao rani zametci u globularnom stupnju, suspenzije su održavane kao što je dole opisano. Ovde, osobine otpornosti na herbicid koje bi trebalo da poseduju transformisane biljke su korišćni kao selektivni markeri.
Suspenzije kultura zametaka soje su održavane u tečnom medijumu od 35 ml na rotacionoj mućkalici, 150 oum, na 26°C sa fluorescentnim svetlima sa ciklusom 16:8 dan/noć. Kulture su subkultivisane svake dve nedelje inokulacijom približno 35 mg tkiva u 35 ml tečnog medij uma.
Suspenzija kulture zametaka je zatim transformisana postupkom bombardovanja česticama iz pištolja (Kleinet al.(1987)Nature ( London)327: 70-73, US patent br. 4,945,050).
U 50 ul 60 mg/ml 1 ug suspenzije zlatnih čestica dodato je (redom): 5ul DNK (1 ug/ul), 20 ul spermidina (0.1 M) i 50 ul CaCl2(2.5 M). Preparat sa česticama je zatim mešan tri minuta, podvrgnut mikrocentrifugi 10 sekundi i supernatant je uklonjen. Čestice obložene sa DNK su zatim jednom isprane u 400 ul 70% etanola i resuspendovane u 40 ul anhidrovanog etanola. Suspenzija DNK čestica je podvrgnuta tri puta po jedan sekund svaka. Pet mikrolitara DNK obloženih zlatnih čestica je zatim naneto na svaki makro disk nosač.
Približno 150-200 mg suspenzije dve nedelje starih kultura je smešteno u praznu Petrijevu šolju od 60 x 15 mm, a zaostala tečnost je uklonjena iz tkiva sa pipetom. Za svaki transformacioni eksperiment, približno 5-10 ploča tkiva je normalno bombardovano. Pritisak pucanja membrane je podešen na 1100 psi (77.356 kg/cm) i komora je evakuisana do vakuma od 28 inča žive. Tkivo je smešteno približno 8.89 cm udaljeno od retencionog zaklona i bombardovano tri puta. Posle bombardovanja, tkivo je podeljeno na pola i smešteno natrag u tečnost i kultivisano kao što je gore opisano.
Pet do sedam dana posle bombardovanja, tečni medijum je zamenjen sa svežim medijumom i jedanaest do dvanaest dana posle bombardovanja sa svežim medijom koji sadrži 30-50 mg/l higromicina i 100 ng/ml hlorsulfurina je korišćeno kao selekcionog agensa. Selektivni medijum je nedeljno osvežen. Sedam do osam nedelja posle posle bombardovanja, zeleno, transformisano tkivo je primećeno da raste iz netransformisanih, nekrotičnih embriogenih klastera. Izolovano zeleno tkivo je uklonjeno i inokulisano u pojedinačnim balonima da stvore novu, kloniju propagacione, transformisane embriogene suspenzije kultura. Svaka nova kultura koja potiče iz odvojenih oblasti transformisanog tkiva je tretirana kao nezavisni transformacioni slučaj; individualna kultura kao i inicijalna (TO) biljka koja potiče iz jedne zone transformisanog tkiva kao i njihovi potomci su generalno predstavljali pojedinačni 'slučaj'. Ove suspenziije su zatim subkultivisane i održavane kao klasteri nezrelih klica ili regenerisani u cele biljke zrenjem i germinacijom pojedinačnih somatskih klica.
Herbicidni tretmani
Mlade regenerisane transgenske biljke su zaprašene sa lx glifosatom (lx odnos glifosata je 1120 g/ha glifosat izopropilamina) do odabranih segreganata. Četiri replikanta su pripremljena u svakom tretmanu. Biljke su zatim tretirane sa različitim herbicidima, uključujući glifosat i herbicide ALS-inhibitore. Kada su tretirani sa tribenuron-metil herbicidom, transgenska soja koja sadrži GAT-i HRA tretirana sa 0 i 35 g/ha ne pokazuje značajna oštećenja, dok ne-transgenska kontrolna soja tretirana sa herbicidom je bila uništena sa tretmanom. Biljke su zatim tretirane 8x sa glifosatom i 35 g/ha tribenuron-metilom kao i 35 g/ha rimsulfuronom i dobijeni su slični rezultati.
Šest semena soje svake linije koja je procenjivana, zasađeno je na 1 cm dubine, u plastične sudove povšine 5.5 kvadratnih inča (13.97 cm) sa sintetčkim medijumom za rast. Veoma mlade transgenske biljke nikle iz semena su prethodno tretirane sa glifosatom da bi se eliminisali segreganti koji nisu osetljivi na glifosat; biljke oštećene ovim tretmanom su uklonjene. Kada je to bilo moguće, sudovi su proređivani do dve jednoobrazne biljke. Netransgenske linije su proređene do dve jednoobrazne biljke u sudu. Biljke iznike iz semena soje su navodnjavane i đubrene radi brzog rasta. Biljke su gajene u fotoperiodu od 16-h, i kada je intenzitet prirodne svetlosti pao ispod 500 uE/m<2>/s, dodavano je svetio metalnog halogenida sa 160 uE/m<2>fotosintetski aktivnog zračenja. Temperatura je održavana na 28±2 °C u toku dana i 22±2°C u toku noći. Relativna vlažnost je generalno u opsegu od 50 do 90%.
U ispitivanjima posle nicanja korišćene su komercijalne herbicidne formulacije i primenjivane su dve nedelje posle sađenja. Smeše spreja su pripremljene korišćenjem dejonizovanc vode na sobnoj temperaturi i mešane su u toku bar 15 minuta. Rastvori su prskani 1 do 2h posle pripremanja. Tretmani sa 35 g/ha rimsulfurona i tribenuron-metil herbicida su primenjeni kao sprej u zapremini od 374 l/ha sa ravnom brizgaljkom na 51 cm sa pritiskom prskanja podešenim na 138 kPa i imaju osnovnom mešavinu adjuvanata visokog pH, da bi se osiguralo rastvaranje i foliarno prodiranje. Komercijalne formulacije glifosat tretmana takođe su primenjene kao sprej zapremine 374 l/ha sa ravnom brizgaljkom na 51 cm sa pritiskom podešenim na 138 kPa. Biljke su vizualno procenjivane na oštećenje na skali od 0% bez oštećenja, i 100% biljka je uginula. Rezultati su prikazani dole u Tabeli kao srednja vrednost četiri ponavljanja.
Primer 3- Transgenski GAT- HRA pamuk je otporan na nekoliko herbicida
Pamuk( Gossypium hirstum)Coker 312 je transformisan sa GAT polinukleotidom( gat 4621)zajedno saHrapolinukleotidom (SEQ ID br.86), a oba su operativno vezani za jake, konstitutivne biljne virusne promotere. Promoter povezan zagat4621sadrži duplirane delove transkripcione promotere Strawberry Vein Banding Virusa (Wang et al. Virus Genes 20: 11-17, 2000; Genbanek X97304).Hragen je vođen sa dupliranim delom transkipcionog promotera pune dužine Mirabilis Mosaic Caulimovirus (US patent 6,420,547; Dey and Maiti 3: 61-70, 1999). U transfomacionom postupaku je korišćenAgrobacterium Tumefacienskoji sadrži ekspresionu kasetu sa genima koji su transformisani i kalus koji potiče iz kotiledonskih izdanaka sa kapacitetom da podlegne embriogenezi. Kalus je izloženAgrobacteriumu toku 48-721 sata. Kalus je zatim izložen selekcionoj transforamciji ćelija sa 50-200 ug/1 hlorosulfurona i/ili 50/450 uM glifosata u čvrstom medijumu. Glifosat može biti takođe korišćen u koncentracionom opsegu od oko 5 do oko 450 uM. Primenjena je selekcija do obrazovanja somatskih zametaka i selekcija je ponovo primenjena u embrionskom germinacionom stupnju i opciono u toku stvaranja korenja mladica. Dobijeno je preko 450 GAT-HRA transformacionoh slučaja korišćenjem selekcije sa hlorsulfuronom i glifosatom.
Transformacione biljke pamuka su korenjene i zatim premeštene u zemlju za dalji rast. Biljke su zatim podvrgnute herbicidnom tretmanu u stakleniku. U jednom tretmanu glifosat je prskan preko biljki u stadijumu razvitka sa 4-6 lista u primenjenom odnosu od 1.5 lb kiselinskih ekvivalenata po jutru (2.58 kg kiselinskih ekvivalenata po hektaru). Kontrolne biljke netransformisani Coker 312 su uginule 2 nedelje posle primene glifosata. Nasuprot tome, približno 50% GAT-HRA transgenskih biljka (od kojih svaka odgovara odvojenom transformacionom slučaju) nije pokazala štetne simptome tretmana sa glifosatom 14 dana posle primene. Preko biljaka transformisanih sa GAT i HRA dalje su primenjeni herbicidi sulfoniruree rimsulfurona u odnosu 16 g aktivnog sastojka / hektaru. Ponovo, približno 35% transgenskih biljki nije pokazivalo štetne simptome usled dvojne herbicidne primene 14 dana posle primene rimsulfurona i 28 dana posle primene glifosata. Netransformisane Coker 312 biljke su pokazivale ozbiljna oštećenja posle primene rimsulfurona, čak u odsustvu bilo koje primene glifosata. U daljim ekspreimentima primenjeno je 32 g a.m./ha rimsulfurona na pamuk.
Prisustvo svakog GAT i HRA polinukleotida je dalje potvrđeno u transgenskim biljkama koje su otporne na herbicide korišćenjem testova polimerazne lančane reakcije ('PCR') i korišćenjem Western Blot analiza da bi se detektovali GAT i HRA polipeptidi.
Primer 4 - Formulisanje homogne mešavine granula
Herbicidna kompozicija korisna u sadašnjem pronalasku može biti formulisana na bilo koji pogodni način, na primer, kao 'homogena mešavina granula' (videti na pr. US pat br. 6,022,552 pod imenom 'Uniform Mixtures of Pesticide Granules'). Herbicidna kompozicija formulisana kao mešavina homogenih granula prema US pat. 6,022,552 može biti pripremljena mućkanjem ili mešanjem na drugi način dve ili više grupa suštinski cilindričnih granula, tipično napravljenih ekstruzijom ili peletizacijom, gde jedna grupa ima aktivni sastojak koji obuhata bar jedan herbicid, a jedna ili više grupa imaju različite sadržaj aktivnih sastojaka ili inertnih materija, a granule u okviru svake grupe imaju jednoobrazne prečnike i longitudinalne dužine od 1 do 8 puta prečnik sa prosečnom dužinom granula od 1.5 do 4 puta prečnik, i prosečnim prečnikom svake grupe koja se razlikuje od druge grupe ali ne više od 30%. U nekim izvođenjima, svaka granula se sastoji od registrovanog formulisanog proizvoda koji sadrži pojedinačni aktivni sastojak, koji je na primer herbicid, fungicid i/ili insekticid. 'Suštinski cilindričan' je u obliku šipke ili cevi gde poprečni presek može biti kružan, osmougli, pravougaoni ili bilo kog drugog prihvatljivog oblika i gde longitudinalna površina je spiralna, zakrivljena ili ravna. Razlika u prosečnom prečniku je izračunata oduzimanjem prosečog prečika granula u grupi koji imaju manji prečnik od prosečnog prečnika granula u grupi koja ima veći prečnik, zatim deljenje izračunate razlike sa prosečnim prečnikom granula u grupi koja ima manji prečnik i na kraju množenje izračunatog koeficijenta sa 100%.
Jednoobraznost 'homogene mešavine granula' može biti optimizirana kontrolisanjem relativnih veličina i raspoređenošću veličina granula korišćenih u mešavini. Razlike u gustini su komparativno nevažne (videina pr.Rhodes (1990)Principles of Power Technologypp. 71-76 (John Wiley & Sons)). Prečnik ekstrudiranih granula je kontrolisan veličinom rupa u matrici ekstrudera, a centrifugalni postupak prosejavanja može biti korišćen da se dobije populacija ekstrudiranih granula sa željenom raspoređenošću dužine (videti.na pr.US pat. Br. 6,270,025). Poželjno prosečan prečnik svake grupe granula se razlikuje od druge grupe ne više od 20%, poželjnije ne više od 10%. Takođe poželjno longitudinalna dužina svake grupe je od 1.5 do 4 puta prečnik granula.
Aktivni sastojak svake formulacije ima sa njim u vezi tolerantnost na promenjivost na osnovu direktive Food and Agriculture Organization of United Nations (FAO) kao što je dole prikazano u Tabeli 12.
Sadržaj aktivnog sastojka u homogenoj mešavini granula je određen na osnovu sadržaja aktivnog sastojka u komponeti granula i odnosu u kome su komponente pomešane u granulu. Homogene mešavine granula su proizvedene pretpostavljajući da su tačne nominalne vrednosti aktivnih sastojaka komponeti mešavine. Ulsed promenjivosti u svakodnevnom životu u vezi sa testovima aktivnih sastojaka kao i promenjivosti u mešanju i uzorkovanju, razvijeni su postupci za izračunavanje opsega sadržaja aktivne materije u homogenim mešavinama granula kao što sledi.
1. Definisanje registrovane FAO specifikacija za svaku od komponenti mešavine ('%
A.M. u komponenti').
2. Primena FAO otpornosti da bi se ustanovile proizvodne granice za količine svake komponete u mešavini ('% komponente u mešavni'). 3. Izračunati maksimalnu granicu za aktivni sastojak u smeši ('% AM u mešavini') umnožavajući maksimalnu granicu za '% AM u komponenti' sa maksimalnom granicom za '% komponente u mešavini'. Slično su učinjena minimalna i nominalna izračunavanja.
Slede primeri izračunavanja za nekoliko proizvoda homogenih mešavina granula. Poslednja kolona u svakom primerku prikazuje standardni opseg FAO testa koji bi bio primenjen u tradicionalnom proizvodu premiksa koji sadrži isti sadržaj aktivne materije kao mešavina homogenih granula u primeru. Širi opseg za proizvod homogene mešavine granula (% AM u mešavini) omogućava promenjivost korišćenjem registrovanih proizvoda u priloženom opsegu sadržaja aktivnih materija kao komponente u proizvodu.
Postupci su takođe razvijeni da bi se odredilo da li odgovarajuća homogena mešavina granula spada u željene opsege. Homogene mešavine granula su nasumično mešane granule; prema tome u cilju tačnog predstavljanja sastava, izvesan broj granula mora biti procenjivan. Minimalni broj granula za uzorke može biti procenjem korišćenjem statističkih jednačina (videti Rhodes
(1990),Principles of Power Technology(John Wiles & Sons), str. 71-76), gde je s= standardna devijacija za odnos komponenti u mešavini, P=težinski procenat komponenti i n) broj granula u uzorku (~400 1-mm prečnika granula = 1 gram). Veličina uzorka potrebna da predstavlja kompoziciju mešavine za odgovarajući izabrani nivo promenjivosti može biti dobijena rešavanjem za n i pretvaranjem ove vrednosti u grame deljenjem'n' sa prosečnim brojem 1-mm granula ekstrudirane paste 1-g uzorka( napr.400).
Ukoliko je standardna devijacija u ovom izračunavanja zasnovana na FAO otpornosti za količinu komponenti u odgovarajućoj smeši odgovarajućih granula, može biti izračunata minimalna veličina uzorka za tu mešavinu granula. Za pouzdanost 95%, otpornost oko '% komponenti u smeši' je podešena na 2 standardne devijacije. Razume se daje ovo teoretska statistička procena.
Za mešavinu granula koja bi bila izvodljiv komercijalni proizvod, statistika veličina uzorka mora biti ekvivalentna ili manja od najmanje količina koja bi bila izmerena od farmera ili onoga ko je primenjuje, tipično hektarske doze. Primeri izračunavanja veličine uzorka za gore diskutovane mešavine granula su dole prikazene.
Detaljna izračunavanje za minimalnu veličinu uzorka DPX- CDQ73. 39. 1WG mešavine:
Za manji sadržaj komponente mešavine (Quantum 75PX) FAO otpornost ± 5% relativno daje opseg od 5% x 34.8 =1.7
Za 95% sigurnost, 2 standardne devijacije su podešene na 1.7 dajući standardnu devijaciju od = 0.85 za izračunavanje:
n= 31240 granula = 7.8 grama (zasnovano na 400 granula/gram)
Izračunata minimalna veličina statističkog uzorka od oko 8 grama je manja nego odnos korišćenja proizvoda 38 g/ha.
Homogena mešavina granula se smatra 'homogenom' kada može biti poduzorkovana u alikvote odgovarajuće veličine, a sastav svakog alikvota će ispunjavati zahtevane testirane specifikacije. Da bi se pokazala homogenost, veliki uzorak homogene mešavine granula je pripreman i zatim je poduzorkovan u alikvote veće od minimalne statističke veličine uzorka. Drugi uzorak mešavine je pripremljen i podvrgnut simulaciji transporacionog testa (ASTM D 4728-87, Standardni Postupak za nasumičnu vibraciju testiranja prenosnih kontejnera) i zatim poduzorkovana u alikvore. Alikvoti su analizirani na aktivne sastojke koristeći tečni hromatogran. Simulacioni transporacioni test mućka boce specifičnom frekfencom za standarno vreme, dajući granulama mogućnost da se kreću. Kada komponente mešavine granula nisu odgovarajuće veličine, javlja se segregacija i sastav alikvota neprihvatljivo varira.
Podaci analize alikvota iz testa homogenosti za DPX-CDQ73 39.1V/G Mešavine su prikazane dole u Tabeli 17. Sve testirane tačke podataka u alikvotima mešavine granula spadaju u njihove odgovarajuće izračunate specifikacione odnose, ukazujući da su mešavine homogene.
Homogene mešavine granula su bile proizvedena u serijskom postupku korišćenjem mešalice sa valjcima. Jednom pomešana, mešavina granula je raspoređena u odgovarajuće sudove (boce, vreće, itd.) za komercijlanu prodaju. Testiranjem proizvedene homogene mešavine granula DPX-CDQ73 WG pokazano je da su svi podaci za različite serije mešavine u okviru odgovarjućih predloženih testiranih opsega aktivnih sastojka.
Primer 5. Procenjivanje nivoa efikasnosti glifosata i herbicida ALS inhibitora na biljkama soje koje
nose različite GAT i HRA sekvence
Tri GAT7 slučaja kod soje su poređena sa četiri odabrana slučaja GAT111 soje da se odredi da li mogu biti detektovane razlike u otpornosti na tretman glifosat + sulfonilurea u visokim odnosima. Tokom kombinacija za tretiranje, GAT7 konstrukt je imao značano manji odgovor na prskanje u poređenju sa GATU konstruktima 7, 14 i 28 DPP. Tokom 8 x Touchdown®+ lx Resolve® tretmana i 8X Touchdovvn® + 2x Resolve® + 4x Express tretmana, GAT7 slučaj EAFS 3560.4.3 ima najniži ocenjeni odgovor na prskanje u odnosu na sve slučajeve 7, 14 i 28 DPP.
Materijali i Postupci
Za svaki tretman, gajene su sa tri ponavljanja na dve parcele od 12 stopa za tri odabrana GAT7 slučaja i četiri odabrana GAT11 slučaja u RCB režimu (blokirane tretmanom) na dve lokacije na Havajima. Individulane linije, slučajevi i testirani konstrukti su dati dole u Tabeli 18.
Tri različita tretmana primenja u V3 stupnju rasta su bila; 1. 8 x Touchdown® Hi-Tech (8630.55 g/ha a.m. glifosata) + IX Resolve® (35.0 g/ha a.m. rimsulfurona) + 2X Express®(17.5 g/ha tribenuron), 2,8 x Touchdovvn® Hi-Tech (8630.55 g/ha a.m. glifosata) + 2x Resolve® (70.0 g/ha a.m. rimsulfurona) + 4X Express® (35.0 g/ha tribenurona) i 3. Neprskana kontrola. Svi tretmani prskanja su obuhvatali lx nejonski površinski aktivnu materiju i amonijum sulfat. 7, 14 i 28 dana posle prskanja, na parcelama je data procena vizualnog oštećenja posle primećene hloroze, nekroze i/ili kržljavosti biljke (0% = nije promećen efekat do 100% celokupna parcela propala). Podaci vizualno ocene su podvrgnuti ANO VA i srednjem odvajanju pomoću SAS.
Rezultati i diskusija
Tokom tri tretmana, ciklus GAT (7 vs. 11), DNK konstrukt, slučaj, tretiranje, GAT<*>tretman, konstukt<*>tretman i slučaj<*>tretman su značano različiti 7 DPP i 14 DPP (podaci nisu pokazani). 28 DPP ciklus GAT, konstrukt, slučaj, tretman, GAT<*>tretman i slučaj *tretman su bili značajno različiti (podaci nisu prikazani) GAT7 linije imaju značajno manji odgovor zabeležen tokom ti tretmana 7, 14 i 28 DPP (podaci nisu prikazani).
Tokom 8x Touchdown®+ IX Resolve® + 2X Express® trtmana, GAT7 konstrukt PHP20163A ima značajno manje ocenjeni odgovor na prskanje u poređenju sa GAT11 konstruktom PHP22021A 7, 14 i 28 DPP (podaci nisu pokazani). PHP20163A ima značajno veću otpornost na ovaj tretman u poređenju sa PHP22117A samo 28 DPP (podaci nisu prikazani). Među upoređivanim slučajevima, GAT7 slučaj EAFS 3560.4.3 ima početnu otpornost najpre primećenu 7 i 14 DPP i imao je najbolju ocenu oporavka 28 DPP (podaci nisu pokazani). U ispitivanju razlike između poslednjih kvadrata srednje vrednosti (LSsrednje vrednosti), svaki od tri GAT7 slučaja ima značano manji odgovor na prskanje 7 DPP u poređenju sa GAT11 EAFS 3961.2.3 i GAT11 EAFS 3862.5 i ocenjene su statistički slično GAT 11 EAFS 3862.2.5 i GATU EAFD 3876.8.1 (podaci nisu pokazani). 14 DPP, 3 GAT7 slučaja ima značajno manje ocenjeni odgovor u poređenju sa GAT11 EAFS 3862.4.2, ali samo GAT7 EAFS 3560.4.3 ima značajno manji odgovor u poređenju sa EAFS3861.2.3 i EAFS 3862.2.5 (podaci nisu prikazani). 28 DPP, sva tri GAT7 slučaja imaju znatno bolji oporavak u poređenju sa GATU sučajem EAFS 3861.2.3, EAFS 3862.4.2 i EAFS 3876.8.1 (podaci nisu pokazani). Pored toga, GAT7 slučaj EAFS 3560.4.3 ima značano manji odgovor na prskanje u poređenjus a GAT11 slučajem EAFS 3862.8.5 28 DPP (podaci nisu prikazani).
U ispitivanju 8x Touchdown®+ 2X Resolve® + 4X Express® tretmana, GAT7 PHP20163A ima značano manji odgovor u poređenju sa GATU PHP22021 7, 14 i 28 DPP i PHP20163A ima značajno manji odgovor u poređenju sa GAT11 PHP22117A 28 DPP (podaci nisu prikazani). Među slučajevima, GAT7 EAFS 3560.4.3 ima značajno bolju otpornost u poređenju sa svih dugim slučajevima 7 i 14 DPP i GAT7 EAFS 3559.2.1 i EAFS 3560.4.3 imaju značano niši odgovor na prskanje u poređenju sa svim drugim slučajevima 28 DPP (podaci nisu prikazani). Upoređivanjem razlika u LSsrednjoj vrednosti, 7 DPP i 14 DPP GAT7 EAFS 3560.4.3 ima značajno manji odgovor u poređenju na sve GAT 11 slučaje (podaci nisu prikazani). Druga 2 GAT7 slučaja su bili značajno niži u odgovoru u poređenju sa GAT11 slučajem EAFS 3862.4.2 7 i 14 DPP (podaci nisu prikazani). 28 DPP, GAT7 slučaji EAFS 3559.2.1 i EAFS 3560.4.3 imaju značajno bolju regeneraciju u poređenju sa svim GATU slučajevima (podaci nisu prikazani). GAT7 slučaj EAFS 3561.1.1 je jedini značajno bolji nego GAT11 slučaj EAFS 3862.4.2 (podaci nisu prikazani).
Primer 6. Analize podataka ispitivanja jačine soje
Ispitivane su interakcije između sulfoniluree i imidazolinona u uslovima ispitivanja u polju. Antagonizam između hemizma sulfoniluree i imidazolinona je viđen u prošlosti na komercijalnim STS® vrstama soje. Tifensulfuron kao SU na STS® soji je normalno siguran. Dodavanjem IMI kao imazetapira (Pursuit) smeša postaje manje sigurna (antagonizirana sigurnost useva). U slučaju GAT Rd7, rimsulfuron izaziva uništavanje useva. Dodavanje IMI kao Pursuit-a i smeša postaje sigurnija (antagonizira oštećenje useva). Dole opisana ispitivanja u polju pokazuju da postoji povećana sigurnost useva kada normalno štetne količine, na primer, rimsulfurona su pomešane sa na primer imazetapirom, normalno'sigurnog' imidazolinon herbicida. Primer 6A obuhvata ispitivanja na polju koja prikazuju ovaj efekat. Primer 6B obezbeđuje podatke iz staklenika koji se slažu sa podacima ispitivanja u polju.
Primer 6A
T6 generacija soje vodećeg GAT7 slučaja (SEQ ID br: 68 takode ima HRA (SEQ ID br.65)[SCP:GAT7::SAMS:ALS] je poređena sa 95B25 da bi se odredili nivoi jačine kada se prskaju sa različitim kombinacijama i odnosima sulfoniluree, hlorpirifosa i/ili imazetapir hemikalija. Tokom svih kombinacija tretmana osim 16 x Harmonv® (nije otkrivena značajnost), GAT7 je imao znatno niži odgovor na prskanje u poređenju sa STS® 7, 14 i 28 dana posle prskanja (DPP). Primenjivanje IX Resolve® sa ili bez Lorsban® stvara veliki odgovor GAT7 i STS® 7 DPP. GAT7 je bio sposoban da se značajno oporavi od ovih tretmana 14 i 28 DPP, dok STS® linija je ostala teško oštećena. GAT7 linija je imala značajno manji odgovor na prskanje 4X Pursuit® u poređenju sa STS® linijom 7 DPP, dok obe linije nisu se značajno razlikovale 14 i 28 DPP. Kada je primenjen IX Resolve® + 4X Pursuit®, GAT7 linija ima značajno manje visok otpor u poređenju sa STS® linijom, 7, 14 i 28 DPP. 7, 14 i 28 DPP 16 x Harmony®nije primećen jak odgovor ni GAT7 ni STS®linije. Podaci tretmana koji kombinuju 16x Harmony® sa 4x Pursuit® ili 16x Harmony® sa 4X Express® ukazuju da GAT7 ima značajno manji odgovor na prskanje u porećenju sa STS® linijom 7, 14 i 28 DPP. Pored toga 7, 14 i 28 dan od 0.25X Resolve® + 1.5 XExpress® tretmana prikazani GAT7 ima značajno veću otpornost u poređenju sa STS®. Generalno, podaci ove studije ukazuju da GAT7 obezbeđuje značajno veću otpornost u poređenju sa STS® u odnosu na više herbicida i insekticidnih hemikalija.
Materijali i postupci
Za svaki tretman, gajeni su sa tri ponavljanja na dve parcele od 12 stopa vodeći slučaj GAT7 (EAFS 3560.4.3; GEID=JH 12862528) i 92B25 (STS®) u RCB režimu (blokirani tretmanom) na dve lokacije na Hawaii. Devet različitih tretmana primenjenih u V3 stupnju rasta su bili: 1. IX Resolve®(2 unce) (35.0 g/ha a.m. rimsulfurona). 2. IX Resolve® (35.0 g/ha a.m. rimsulfurona) + IX Lorsban® 4E (560.0 g/ha a.m. hlorpirifosa), 3. 4X Pursuit® (211.8 g/ha a.m. imazetapira), 4. IX Resolve® (35.0 g/ha a.m. rimsulfurona) + 4X Pursuit® (211.8 g/ha a.m. imazetapira), 5. 16X Harmony® (70.0 g/ha a.m. tifensulfurona) + 4X Pursuit® (211.8 g/ha a.m. imazetapira), 7. 16X Harmony® (70.0 g/ha a.m. tifensulfurona) + 4X Express® (35.0 g/ha a.m. tribenurona), 8. 0.25X Resolve® (2,157 g/ha a.m. glifosata) + 1.5X Express® (13.1 g/ha a.m. tribenurona) 9. Neprskana kontrola. Svi tretmani za prskanje su takođe sadržali IX nejonsku površinski aktivnu supstancu i amonijum sulfid. 7, 14 i 28 dana posle prskanja, parcele su vizuelno ocenjene na oštećenja na osnovu primećenih hloroza, nekroza i/ili kržljavosti biljke (0% = nisu primećen efekti do 100%^cela parcela je uginula). Podaci vizualne ocena su bila podvrgnuti ANOVA i srednjem odvajanje pomoću SAS.
Rezultati i diskusija
U toku svih tretmana 7 i 14 DPP, lokacija, GEID, tretmani i efekti GEID<*>tretmana su značajno različiti (podaci nisu prikazani). GAT7 linija je ocenjena znatno niže nago STS® linija tokom svih tretmana 7 i 14 DPP (podaci nisu pokazani). 28 DPP, GEID, loc<*>GEID, tretmani i efekti GEID<*>tretman su značajno različiti (podaci nisu pokazani). U toku svih tretmana, GAT7 linije je ocenjena sa značajno manje oštećenja od prskanja u poređenju sa STS® linijom 28 DPP (podaci nisu prikazni).
Tretman IX Resolve® (rimsulfurona) stvorio je jak odgovor obe linije GAT7 (70%); i STS®
(83%>) 7DPP (podaci nisu prikazani). 14 DPP, GAT7 linija (74%) je imala znatno manji odgovor u poređenju sa STS® linijom (93%o) (podaci nisu prikazani). 28 DPP, GAT7 se oporavio i ocenjen je znatno manje oštećenja u poređenju sa STS® linijom (32% vs. 93%o) (podaci nisu prikazani).
Kada su ispitivani podaci Lorsban® (hlorpirifos) + IX Resolve® tretmana, GAT7 linije nije imala značajnije manji odgovor u poređenju sa odgovorom STS® linije do 14 i 28 DPP (podaci nisu prikazani). 28 DPP, GAT linija prskana sa Lorsban® i Resolve® ( 56%) se nije oporavila tako brzo kao u slučaju tretmana IX Resolve® (32%) na GAT7 liniji (podaci nisu prikazani).
Primenjivanje 4X Pursuit® (imazetapir) obezbedio je jak odgovor od STS® liniju (72%) 7 DPP, dok GAT7 linija (29%) je imala znatno manji odgovor (podaci nisu prikazani). 14 DPP i 28 DPP, razlika između GAT17 i STS® nije bila značajna (podaci nisu prikazani).
Tankmiks IX Resolve® + 4X Pursuit® doveo je do znatno manjeg odgovora na prskanje GAT7 linije u poređeju sa STS® linijom 7, 14 i 28 DPP (podaci nisu prikazani). IX Resolve® + 4X Pursuit® tretman na GAT7 je označen sa sveukupno manje oštećenja 7, 14 i 28 DPP u poređenju sa samo IX Resolve® i IX Resolve® + Lorsban® tretmanom (podaci nisu prikazani). Koristeći upređivanje u parovima ovih tretmana na samo GAT7 liniji IX Resolve® + 4X Pursuit® tretman je ocenjen značajno niže nego IX Resolve® + Lorsban® tretman 14 i 28 DPP. Pored toga upoređivanjem u parovima IX Resolve® + 4X Pursuit® sa IX Resolve® tretmanom je bilo samo manje značajno 14 DPP.
Primenjivanje 16 X Harmonv® nije stvorilo veliki odgovor iz GAT7 ili STS® linija tri dana ocenjivanja (podaci nisu prikazani). GAT7 nije bio značajno različit od STS® za sve 16X Harmony®ocene (podaci nisu prikazani). Tretman primenjivanja 4X Pursuit®pomešanog sa 16X Harmonv® nije stvorilo značajno niže ocenjeni odgovor za GAT7 liniju u poređenju sa STS® linijom 7, 14 i 28 DPP (podaci nisu prikazani). Smeša 4X Express® sa 16X Harmonv® je ocenjena značajno niže nego GAT7 linija u poređenju sa STS® linijom 7, 14 i 28 DPP (podaci nisu prikazani). Generalno, GAT7 linija obezbeđivala je odličnu celokupnu otpornost na 16X Harmonv®, 16XHarmony® + 4XPursuit®, i 16X Harmonv® + 4X Express® tretmane svih dana ocenjivanja.
Smeša 0.25X Resolve® + 1.5X Express® stvorila je odgovor useva GAT7 linije 7 DPP (53%) i 14 DPP (47%>) koji nisu bili očigledni 28 DPP (12%) (podaci nisu prikazani). STS® linija je imala značano viši odgovor u poređenju sa GAT7 7 DPP (79%>) i 14 DPP (90%>) (podaci nisu pokazani). STS® linija se nije oporavila 28 DPP (87%>) i imala je značajno veći odgovor u poređenju sa GAT7 linijom (podaci nisu prikazani). Ispitivajući samo GAT7 liniju, upoređivanjem parova 0.25X Resolve® + 1.5X Express® tretmana primećen je znatno manji odgvor u poređenju sa IX Resolve® tretmanom 7, 14 i 28 DPP.
Tabela 19 Kratak prikaz protokla tretiranja
Primer 6B
Primer 6B obezbeđuje podatke iz staklene bašte koji potvrđuju podatke ispitivanja na polju obezbeđene u primeru A. Soja je bila vodeći GAT7 slučaj i takođe je imala HRA kada je korišćena u ispitivanjima.
Tabela 20. Kratak prikaz uslova tretiranja
Primer 7. Postupci transformacije koji koriste GAT sekvencu u kukuruzu
I.Pripremanje Agrobacterium master ploče
1. Nabavljen je izmenjeniAgrobacterium tumefacienssoj sa GAT komponentama (SEQ ID br. 70 ili SEQ ID br. 55) i čuvan je u zamrzivaču -80°C na kao 50% štok glicerola. Korišćen transkripcioni kontrolni region je bio 3X35S ENH (-) operativno vezan za ZmUbi PRO-5UTR-ZmUbi intron 1 promoter (SEQ ID br. 78). Ovaj transkripcioni kontrolni region (SEQ ID br.78) je iznet dole označavajući položaj različitih regiona regulatornog regiona: a) 35S pojačivač (3X) u suprotnom pravcu je jednom podvučen; b) UBI promoter je dvostruko podvučen i c) UBI intron je italik. 2. Pripremanje master ploče iz stoka glicerola rezanjem bakterije da se proizvedu pojedinačne kolonije na #800 medijumu i inkubiranje bakterije na 28°C u mraku u toku 3-4 dana. 3. Pripremanje radne ploče rezanjem kolonije sa master ploče u #810 medijumu. Inkubiranje bakterije na 28°C u mraku u toku 1-2 dana.
II. Pripremanje bakterije za infekciju klica
1. Pripremanje tečne kultureAgrobacterijum1 dan pre izolacije klice. Pripremiti balon sa 30 ml 557A medijuma, 30ul 2% acetosiringona i 30 ul 5% spektinomicina. 2. Inokulat sa 1 'punom petljom'Agrobacteriumiz 810 medijuma je smešten u mućkalicu (200 oum) u tamnoj sobi na 28°C u toku noći. 3. Tokom jutra infekcije, uzeti uzorke tečne kultureAgrobacteriumi napraviti razblaženje od 1/4 sa 557A. Upotreba razblaženih tečnih kultura za OD čitanje pomoću vidljivog svetla na 550 nm. 4. Napraviti razblaženja kultureAgrobacteriumkada je to odgovarajuće prema OD čitanju da bi se održalo OD čitanje između 0.2-0.8 u toku izolacije klica. 5. Kada sepriprema Agrobacteriumza infekciju, ponoviti OD čitanje tečne kulture. Korišćenje OD čitanja izračunava se broj mililitara potreban da se dobije 5 E10 cfu/ml (cfu/broj obrazovanih kolonija) korišćenjem formule Exponent (1.755<*>(InOD) + 21.77) što potiče iz standardne krive. Pipetirana izračunata količinaAgrobacterijum tečnostikulture u 14 ml epruvete i centrifugiranje na 4500 oum na 4-20° u toku deset minuta. Ukloniti superanatant i resuspendovatiAgrobacterijumu odgovarajućoj količini 100 uM acetosiringonskog rastvora
u561Q.
III. Izolacija nezrelih klica
1. Sakupljanje GS3 klasova 9-11 dana posle oprašivanja sa klicama veličine 1-2 mm dužine. 2. Sterilizacija klasova u 50% belilu i 1 kapi Tween u toku 20-30 minuta. Isprati 3-5 puta u sterilnoj vodi.
3. Izolovati klice iz jezgra i staviti u mikroepruvete sa 2 ml 561Q
IV. Infekcija klica Agrobacterium- om
1. Uklanjanje 561Q sa pipetom iz mikroepruveta sa izolovanim klicama i dodavanje 1 ml suspenzije Agrobacterijum na gore opisanom OD.
2. Mešanje vorteksom u toku oko 30 sekundi.
3. Omogućena infekcija 5 minuta na sobnoj temperaturi.
V. Ko- kultivacija
1. Posle uklanjanja tečnog medijuma, premeštanja klica i orijentisanja klica sa embrionskom osom dole na površinu 562P ko-kultvacionog medijuma. 2. Smeštanje embriona u inkubator na 20°C u toku 3 dana. Transfer na 28°C u toku dodatna 3 dana.
VI. Selekcija transgenskih pretpostavljenih kalusnih slučajeva
1. Posle ko-kultivaacije, premeštene su klice u medijum za selekciju 5631 koji sadrži 1 mM glifosara. Klice su kultivisane na 28°C u mraku. 2. Svakih 14-21 dan klice su premeštane u sveži 5631 medijum. Selekcioni postupak može trajati oko 2 meseca do identifikacije aktivno naraslog pretpostavljenog kalusnog slučaja.
Pretpostavljeni kalusni slučaj je održan na 5631 medijumu i uzorku kalusa za PCR.
VII. Regeneracija TO biljki
1. Premeštanje slučaja kalusa u 2871 medijum koji sadrži 0.1 mM glifosata do zrenja somatskih klica. Kultivisati kalus na 28°C u mraku. 2. Premeštanje zrelih klica u 2731 medijum za germinaciju klica koji sadrži 0.1 mM glifosata u pločama. Kultivisanje ploča na 28°C na svetlu. 3. Kada se jave ponike i koreni, pojedinačne biljke se premeste u 2731 koji sadrži 0.1 mM glifosata u epruveti. Kultivisane su epruvete na 28°C na svetlu. 4. Mlade biljke sa formiranim ponikama i korenjem mogu biti premeštene u staklenik za dalji rast i proizvodnju TI semena.
Primer 8. Efekat 35S pojačivača na transformacionu efikasnost i efikasnost GAT i ALS kod
kukuruza
Materijali i Postupci
Četiri konstrukta 35S pojačivača (PHP20118, PHP20120, PHO20122, PHP20124) ijedan konstrukt ne-35S (PHP19288) su korišćenda se dobije slučaj u kome bi se proceno efekat 35S pojačivača na transformacionu efikasnost i efikasnost GAT (SEQ ID br.70) (SI. 1). Razlike između četiri konstrukta 35S pojačivača su brojevi kopija 35S pojačivača i orijentacija 35S pojačivača u konstruktuima. Dole je obezbeđen kratak prikaz svakog 35S pojačivača.
PHP20118obuhvata 35S ENH(+):ZmUBI PRO-5UTR-UB1INTRONI (+ označava pozitivni smer 35S pojačivača). Dole je iznet ovaj transkripcioni kontrolni region (SEQ ID. br.80) sa označenim mestima različitih regiona regulatornog regiona: a) 35S pojačivač u pozitivnom smeru je jednom podvučen; b) UBI promoter je dva puta podvučen i c) UBI intron je italik. PHP20118obuhvata 3X35S ENH(+):ZmUBI PRO-5UTR-UBI INTRONI (+ označava pozitivni smer 35S pojačivača). Dole je iznet ovaj transkripcioni kontrolni region (SEQ ID. br.81) sa označenim mestima različitih regiona regulatornog regiona: a) 35S pojačivač u pozitivnom smeru je jednom podvučen; b) UBI promoter je dva puta podvučen i c) UBI intron je italik. PHP20120obuhvata 35S ENH(-):ZmUBI PRO-5UTR-UBI INTRONI (- označava suprotni smer 35S pojačivača). Dole je iznet ovaj transkripcioni kontrolni region (SEQ ID. br.82) sa označenim mestima različitih regiona regulatornog regiona: a) 35S pojačivač u suprotnom smeru je jednom podvučen; b) UBI promoter je dva puta podvučen i c) UBI intron je italik. PHP20124obuhvata 3X35S ENH(-):ZmUBI PRO-5UTR-UBI INTRONI (- označava suprotni smer 35S pojačivača). Dole je izneta ovaj transkripcioni kontrolni region (SEQ ID. br.83) sa označenim mestima različitih regiona regulatornog regiona: a) 35S pojačivač u suprotnom smeru je jednom podvučen; b) UBI promoter je dva puta podvučen i c) UBI intron je italik.
Transformacioni eksperimenti su vođeni paraleno koristeći iste klice iz istih klasova. Nezrele klice GS3 linije su aseptički uklonjene iz svakog klasa i podeljene u pet porcija. Svaka porcija klica je zatim inficiranasa A. tumefacientssojem LBA4404 koji sadrži ekspresione kasete svakog od pet kontrukta, respektivno. Posle 6 dana ko-kultivacije, klice su premeštene u svež selekcioni medijum koji sadrži glifosat. Transformisane ćelije, koje su preživele selekciju glifosatom, proliferisane i proizvode somatski embriogenski kali. Posle oko dva meseca subkultivisanja, kali je zatim obrađivan da regeneriše celu transgensku biljku sa prisustvom glifosata i premešteni su u staklenik. TO biljke su zatim podvrgnute prskanju sa glifosatom 6X (156 unci/jutru) Roundup Ready UltraMax™ u V3 ili V4 stupnju u stakleniku. Pozitivne biljke su uzorkovane za kvantitativni PCR za broj kopije i vvestern za ekspresiju, TO biljke su zatim ukrštane sa inbred linijama da bi se dobilo seme za dalje procenjivanje.Rezultati
Transformaciona efikasnost je merena u procentima inficiranih klica koji daju otporan kali posle selekcije. Prosečne transformacione efikasnosti za PHP19288, PHP20118, PH20120, PHP20122 i PHP20124 su bile 58%, 63%, 59%, 57% i 51% respektivno. Podaci ukazuju da svi konstrukti imaju dosta visoku i sličnu tranformacionu efikasnost, mada PHP20118 pokazuje blagi porast (Slika 3).
Efikasnost TO biljke je definisana kao procenat TO slučaja koji su kompletno otporni na 6x prskanje glifosatom. Efikasnot ne-35S konstrukta (PHP19288) je bila 48.1%. Nasuprot tome, efikasnot konstrukta 35S pojačivača (PH20118, PHP20120, PHP20122 i PHP20124) su bile 96.6%, 93.5%o, 89.1%o i 91.1%> respektivno (SI. 4). Podaci pokazuju da svi konstrukti 35S pojačivača značajno povećavaju efikasnost biljke naspram glifosata.
Drugo značajno poboljšanje korišćenja 35S pojačivača je integracioni uzorak transgena. Procenat testiranih slučajeva koji su jedna kopija konstrukta ne-35S pojačivača je bila samo 38%>, ali za četiri konstrukta 35S pojačivača (PH20118, PHP20120, PHP20122 i PHP20124) jedna kopija slučaja predstavlja 65%>, 63%>, 71% i 88%> slučaja, respektivno (Slika 4).
Podset slučaja svih pet konstrukta je uzorkovana sa Western analizama da bi se pogledala bilo koja uporedna razlika u GAT ekspresiji između ne 35S i 35S slučaja. Ova analiza pokazuje da slučajevi konstrukta ne-35S pojačivača imaju veoma niske nivoe GAT espresije gde većina slučajeva kostrukta 35S pojačivača pokazuje veoma visoke nivoe GAT ekspresije (SI.5).
Primer 9. Korišćenje 35S pojačivača GAT u razvijanju novog kalusa zasnovanog na sistemu
procenjivanja gen/ konstrukt
Materijali i postupci
Ovaj test je razvijen da poboljša procenjivanje ekspresije insekticidnog gena u veoma ranom stadijumu u procesu transformacije u cilju identifikacije potencijalnih problema sa ekspresijom. Osnova za ovaj test je upotreba glifosat acetil transferaznog (GAT) gena (SEQ ID br:55) kao selektivnog markera . Oba GAT i insekticidni testirani gen će biti vođeni jakim konstitutivnim promoterom i vezani u isti konstrukt. Korišćeni promoter obuhvata ZmUBI PRO-5UTR-UBI INTRONI sa 3X35S pojačivačem kao što je opisano gore u Primeru 7. Kao rezultat, očekivano je da selekcija na visokim nivoima glifosata će identifikovati visoke ekspresore insekticidnih testiranih gena. Kalusno tkivo iz ovih navodnih visokih ekspresora će zatim biti korišćeno u biotestu sa insektima da sc odredi da li je genski proizvod funkcionalan. Ovi konstrukti koji pokazuju efikasnost mogu biti unapređeni u transformacije. Ukoliko konstrukt ne pokazuje efikasnost zatim biohemijskih analiza i molekularnih analiza može biti izvedeno da identifikuje problem i gen će biti redizajniran i ponovo testiran u sistemu (SI. 6).
Rezultati
Test se trenutno razvija. Preliminarni podaci su pokazali da aktivnost na efikasnost gena za suzbijanje insekata mogu biti detektovani u stupnju kalusa. Korelacija između aktivnosti kalusa i efikasnosti biljke je trenutno procenjivana.
Primer 10 . GAT kao selektivni marker i
Materijali i postupci
Transformacije saAgrobacteriumsu korišćene da se uvedeGAT(SEQ ID NO:55) ekpresiona kaseta u genom kukuruza.GATekspresiona kaseta obuhvata promoter koji sadrži ZmUBI PRO-5UTR-UBI INTRONI sa 3X35S pojačivačem (kao što je opisano gore u Primeru 1). Operativno vezan zagatgen i pinll terminator.Agrobacterium tumefacientssoj LBA4404, je patogeno onesposobljen uklanjanjem njegovog prirodnog T-DNK. Umesto toga T-DNK mesto na Ti plazmidu je sadržiGATekspresionu kasetu.
Nezrele klice kukuruza su aseptički uklonjene iz razvojnog suvog semena (kariopsisa) i tretiranesa A' tumefacienssojem LBA4404 koji sadrži GAT ekspresione kasete. Posle perioda klice i ko-kultivacije saAgrobacteriumna čvrstom medijumu za kultivisanje bez prisustva glifosata, klice su premeštene u sveži selekcioni medijum koji sadrži antibiotike i glifosat. Antibiotici ubijaju bio koje preostaleAgrobacterium.Selekcioni medijum je stimulator somatske embriogeneze kukuruza i selektivan za one ćelije koje sadrže integrisanigatgen. Prema tome, kalus koji preživaljava glifosat i razmnožava se i proizvodi embriogensko tkivo je verovatno genetski transformisan. Uzorci kalusa su uzeti za molekulske analize da bi se potvrdila prisutnost transgena sa PCR. Embrionsko tkivo je zatim obrađivano da se regeneriše transgenska biljka u prisustvu glifosata, a zatim je premešteno u staklenik. TO biljke su prskane sa glifosatom u različitim koncentracijama. Pozitivne biljke su uzorkovane za molekulske analize za transgenski broj kopije i ukrštane sa inbred linijama da bi se dobila semena iz inicijalno transformisanih biljaka.
Kriva uništavanja glifosatom je ustanovljena testiranjem odgovora netransformisanih klica na medijumu sa različitim nivoima glifosata. GS3 klice su izolovane iz nezrelog uva i smeštenc na medijum koji sadrži glifosat od 0.0, 0.5, 1.0 i 2.0 mM. Posle oko 40 dana kultivisanja, odgovor klica je posmatran i beležen. Slično, inficirani GS3 embirioni sa GAT konstruktom su smešteni na medijum koji sadrži glifosat pri 0.0, 0.5, 1.0 i 2.0 mM. Posle oko 40 dana kultivisanja, odgovor zaraženih klica je posmatran i zabeležen (SI.7).
Paralelni eksperimenti su izvođeni da se uporedi transformaciona efikasnsot GAT, 'bar' i 'mopat'. Nezreli embrioni GS3 linije su aseptički uklonjeni iz svakog klasa i podeljeni u tri dela.
Svaki deo klica je zatim inficiransa A. Tumefacienssojem LBA4404 koji sadrži ekspresione kasete GAT, 'bar' ili 'mopat' respektivno. Druge ko-kultivacije, inficiranih klica sa GAT konstruktom su selektovane na rutinskom medijumu glifosata i inficirane klice sa 'bar' ili 'mopat' konstruktima su selektovana u rutinskom glufosinatnom medijumu. Subkulture su rađene svake 2 nedelje. Oko 50. dana selektovanja primećen je i zabeležen odgovor klica.
Rezultati
Iz ekspreimentalne krive uništavanja sa glifosatom, sve klice na medijumu sa 0.0 mM glifosata su započele zdrav kalus, dok oko polovine embriona na medijum sa 0.5 mM glifosata pokazuje začetak kalusa. Rast kalusa je bio mali sa klicama na medijumima koji sadrže 1.0 i 2.0 mm glifosata. Ovo ukazuje da 0.5 mM nije dovoljno da inhibira sav rast embriona, ali 1 mM ili 2 mM je dovoljno jak da uništi netransformisane klice. U eksperimentu sa inficiranim embronima, više je narasto kalus u medijum sa 0.0 i 0.5 glifosata, ali neke klice su stvorile rezistentni kalus na medijumu 1.0 mM ili 2.0 mM glifosata. Western ili PCR analize su potvrdile daje ovaj rezistentni kali bio transformisan. Trenutno, GAT se kozistentno pokazao kao efikasan selektivni marker sa odličnom transformacionom efikasnošću u oba G3 i introEF09B genotipa (SLIO i Tabela 45).
U paralelnim ekspreimentima za upoređivanje GAT, 'bar' i 'mopat', GAT je dao najbolju transformacionu efiksanost od oko 64%, 'bar' oko 34%> i 'mopat' 30%>. Kali sa GAT selekcijom izgleda da raste brže nego oni selektovani sa glufosinatom (SI.8).
Primer 11 - Interakcija između glifosata, metsulfuron- metila i dva aditiva na suzbijanje ljuljice
Primer je izvođen na ljuljici koja nije otporna na glifosat. Kao što je dato u Tabeli 23, svi tretmani koji uključuju glifosat [180 g a. m. 1 ha"<1>(0.5 1 glifosata (SCAT®))] plus metsulfuron-metil (BRUSH-OFF®) (5 i 10 g ha"<1>) daje 100% suzbijanje ljuljice. Metsulfuron-metil (BRUSH-OFF®) nije ništa učinio osim blage kržljavosti biljaka ljuljice. Mada 15 od 16 biljka (12%) u tretmanu glifosata (SCAT®) 0.5 1 ha"<1>je eventualno uginulo, trebalo im je mnogo duže da uginu. Ovi rezultati ukazuju da postoji mogući sinergizam između glifosata (SCAT®) i metsulfuron-metila (BRUSH-OFF®). Dva aditiva, na pr. ADD-UP i VELOCITY , nisu pokazali razliku u stepenu suzbijanja bilo kog tretmana.
Biotip: ljuljica neotporna na glifosat
Primer 12 - Interakcija između glifosata, metsulfuron- metila i dva aditiva na suzbijanje Hairv
Fleabane( Convza bonariensis)
Ovaj primer uključuje iste tretmane korišćene u Primeru 11, osim što su ovi tretmani izvedeni na biotipovima osetljivim na glifosat Kleinskraalhans( Conyza bonariensis).Glifosat sam po sebi daje slabo suzbijanje, uništavajući samo 1 od 16 biljki (12%). U ovom primeru, međutim, adjuvant koji je na bazi amonijum sulfata (ADD-UP®) je bolji od bispiribak-natrijuma (VELOCITY®) u smeši.
Primer 13 - Interakcija između glifosata, metsulfuron- metila i dva aditiva na suzbijanje ljuljice
otporne na glifosat, parakuat i ACCazne inhibitore
Primer je izvođen na najotpronijem tipu ljuljice na svetu, ljuljici koja je otporna na neselektivne herbicide, na pr. Fairview (Tulbagh), koja je otporna na glifosat, parakuat i ACC-azne inhibitore. U ovom primeru, dodatak metsulfuron-metila (BRUSH-OFF®) 5 i 10 g ha"<1>) sa 1% adujuvanta na bazi amonijum sulfata (ADD-UP®) do 0.5 1 Roundup-a poboljšane kontrole do 44%
(na pr. 50% do 94%>). Dalje, adjuvant koji je na bazi amonijum sulfata (ADD-UP®) je bio superiorniji nego bispiribak-natrijum (VELOCITY®) kao aditiv.
Primer 14 - Interakcija između glifosata i reprezentativnih SU na suzbijanje ljuljice otporne na
glifosat, parakuat i ACCazne inhibitore
U ovom primeru, četiti različita SU su primenjena zajedno sa glifosatom (SCAT®) na otpornu ljuljicu. Na osnovu razultata nije se moglo zaključiti koji bi SU bio najbolji za kombinovanje sa glifosatom, ali prosečna korist primene SU sa glifosatom na ljujlicu otpornu na herbicide je bila 39% (na pr. 34% kontrola sa glifosatom (SCAT®) samo i 57-83%) kontrola sa glifosatom (SCAT®) plus metsulfuron-metil (BRUSH-OFF®), hlorsulfuron (GLEAN®) ili triasulfuron (LOGRAN®).
Primer 15. GAT ne utiče na prinos izolinija soje
Ap str akt
Izolinije dvanaest odabranih SCP:GAT7::SAMS:ALS slučaja su testirane na prinos u 3 ambijenta u Iowa u 2004 i 6 ambijenata srednjeg zapada u 2005. Kada se podaci prinosa za ove ambijente zajedno kombinuju, ne postoji začajna razlika u prinosu između GAT7 pozitivne linije i GAT7 negativne linje u konstruktu i u okviru specifičnog slučaja. Za tri vodeća slučaja (EAFS 3559.2.1, EAFS 3560.4.3, EAFS 3561.1.1) nije bilo zabeleženih statističkih razlika u prinosu kada GAT7 pozitine linije su poredane sa GAT7 negativnim sestrinskim linijama, U celini, podaci za testirane linije ukazuju da prisustvo GAT7 transgena ne utiče na krajnji prinos.
Materijali i postupci
2004 D test materijali i postupci:
Vrsta Jack je transformisana sa konstitutivnim promoterom (SCP1) koji vodi ekspresiju glifosat acetil transferaze kruga 7 (GAT7), povezanog za insert selektivnog markera SAMS:ALS. Četrdeset početnih slučaja SCP:GAT::SAMS:ALS je unapređeno u T2 generaciji. Zigotnost napredne T2 linije je inicijalno određena odabirom 12 nasumičnih biljaka u liniji za PCR amplifikaciju GAT inserta. 454 linije su probno izabrane da budi ili homozigotno pozitivne ili homozigotno negativne za GAT. Odabrane linije su blokirane sa slučajem i gajene u D nivou testa prinosa (1 ponavljanje dva reda od 10 stopa) u Cedar Falls (zasađenih 6/5/04), Dallas Center (zasađenih 6/4/04) i Johnston, IA (zasađenih 6/9/04) u toku 2004. Odabrano je dvanest ostataka T3 semena svake linije korišćenjem ili spreja glifosata u stupnju rasta V3 ili ostataka potapanja semena u rastvor sulfoniluree. Na osnovu tretmana sa glifosatom ili SU potapanja semena, 342 SCP:GAT7::ALS linije iz 30 slučaja je potvrđeno da su homozigotno pozitivne ili homozigotno negativne. Za sve slučajeve u Dallas Center i Johnston lokacijama sakupljeni su ocene zrelosti. Podaci o prinosu su sakupljeni i podvrgnuti višestrukoj regresiji, ANOVA i srednjem odvajanju korišćenjem SAS.
2005 C test materijali i postupci
Na osnovu dobijenog prinosa i ocenjene efiksanosti herbicida u 2004, 12 GAT7 slučaja je unapređeno u C nivo testiranja prinosa u 2005. Iz ovih odabranih dvanest slučaja, odabrano je 28 pozitivnih i 23 negativnih izolinija. Testovi 2005 C su stvoreni kao nasumično kompletni blok (po slučaju) i gajeni u Cedar Falls, IA; Johnston, IA; Stuart, IA; Monmouth, II; Princenton, IL; i Napoleon, OH. Ocena zrelosti i podaci o prinosu su sakupljeni i podvrgnuti višestrukoj regresiji, ANOVA i srednjem odvajanju korišćenjem PRISM i/ili SAS.
Rezultati i diskusije
Kada su 2004 podaci o prinosu za odabrane testirane linije podvrgnute ANOVA, lokacija, slučaji, lokacija* slučaj i i GAT (pozitivan ili negativn) promenjive su značajno različite (podaci nisu pokazani). Srednja vrednost svih pozitivnih linija nije bila značajno niža za prinos u poređenju sa srednjom vrednošću svih negativnih linija testiranih u 2004. U 2005, lokacija, slučaj, lokacija<*>slučaj, GAT i GAT<*>lokacija promenjive su značajno različite (podaci nisu prikazani). Srednje vrednosti svih pozitivnih testiranih linija nisu bili značajno različite od srednje vrednosti svih negativnih testiranih linija u 2005 (podaci nisu prikazani). Kada su podaci iz 2004 i 2005 kombinovani, godina, lokacija, slučaj, godina<*>slučaj, lokacija<*>slučaj, godina<*>GAT i lokacija<*>GAT promenjive su značajno različite (podaci nisu pokazani). Srednja vrednost svih GAT pozitivnih linija nije bila značajno različita od srednje vrednosti svih negativnih linija testiranih u toku 9 oblasti srednjeg zapada (podaci nisu prikazani).
Na osnovu prinosa 2004, herbicidne efikasnosti i molekulske analize, 3 vodeća GAT7 slučaja su odabrani za potencijalne regulatorne i proizvodno razvojne eksperimente. Kada se podaci o prinosu izolinija iz 2005 kombinuju sa podacima iz 2004, lokacije su bile zanačajno različite u okviru EAFS 3559.2.1 (podaci nisu prikazani). Pozitivne GAT linije u okviru EAFS 3559.2.1 nisu bile značajno različite u prinosu u poređenju sa negativnim sestrinskim izolinijama (podaci nisu prikazani). U okviru EAFS 3560.4.3, 9 lokacija i lokacija<*>GAT interakcije su značajno različite. Međutim, GAT pozitivne izolinije nisu značajno različite u prinosu u poređenju sa GAT negativnim linijama u okviru istog slučaja (podaci nisu pokazani). U okviru slučaja EAFS 3561.1.1, lokacije su bile značajno različite, dok GAT ocena i lokacija<*>GAT interakcija nije značajno različita (podaci nisu pokazani). U okviru EAFS 3561.1.1, GAT pozitivne linije nisu značajno različite u prinosu u poređenju sa GAT negativnim sestrinskim linijama (podaci nisu prikazani).
Višestruka regresija prinos x zrelost testirana u 6 oblasti u 2005 je izvođena na 3 vodeća slučaja da bi se odredio celokupni potencijal prinosa. Generalno, GAT pozitivne i GAT negativne linije od kojih je svaka u okviru 3 vodeća slučaja javaljaju se nasumično (podaci nisu prikazani). Ovo sugeriše da se prinos ne menja značajno kada je prisutan GAT7 transgen.
Modifikovani t-test je korišćen za poređenje GAT pozitivnih linija sa srednom vrednošću GAT7 negativnih linija u okviru svakog specifičnog slučaja u svakoj testiranoj lokaciji (podaci nisu prikazani). U okviru 9 testiranih lokacija, nije bilo očiglednih smetnji na prinos GAT7 pozitivnih linija u poređenju sa GAT negativnim sestrinskim linijama u okviru istog slučaja. Za 3 vodeća slučaja, GAT pozitivne linije su u okviru 2.6% negativne srednje vrednosti, što ukazuje da celokupni obračun prinosa postoji u svi testiranim oblastima (podaci nisu pokazani). ANOVA i LSD analize izvedene u individualnim linijama ne ukazuju na izrazite razlike među testiranim linijama u svakom slučaju, osim za EAFS 3560.3.2 (podaci nisu prikazani). U celini, nije bilo razlika u prinosu između GAT7 pozitivnih linija i GAT7 negativnih linija.
Primer 16 GAT soja je otporna na glifosat i glifosat + SU tretmane
Ciljevi eksperimenta su da se proceni otpornost na herbicid sulfoniluree (SU) vodećih GAT7 slučaja u direktnom poređenju sa otpornošću sa STS i određivanju da li bi razlike u otpornosti mogle biti detektovane među vodećim GAT7 slučajevima u toku različitih tretmana glifosat (Gly), Gly+SU i SU. U toku svih tretmana, četiri vodeća GAT7 slučaja su procenjena sa značajno manjim odgovorom oštećenja useva u poređenju sa netransformisanog Jack i STS 7 dana posle prskanja i ponovo 14 dana posle prskanja. U toku 4 vodeća GAT7 slučaja, bilo je nešto detektovnih razlika u odgovoru, a EAFS 3560.4.3 se pokazao kao najbolji u svim tretmanima i EAFS 3560.3.2 je pokazao najveći odgovor na herbicide. Generalno, javlja se da postoji značajno bolja otpornost na nekoliko SU hemikalija za SAMS:ALS konstrukte u porećenju sa STS. Pored toga testirani GAT7 slučajevi imali su dobru otpornost na promenjive odnose u tretmanima glifosata, sulfoniluree i glifosata plus hemikalije sulfonilure.
MA TE RIJ A LI I POSTUPCI
GAT krug 7 (GAT/) transgenskog slučaja iz konstrukta PHP20163A su bile procenjivane u 2004 na efikasnost herbicida (JHM464TGATEFF) i potencijalni prinos (JHD4 GAT7 testove). Na osnovu ovih preliminarnih rezultata i komercijalizacije potencijala, četiri vodeća slučaja su odabrana za testiranje dodatne efikasnosti u eksperimentima 2005 JHM5G030. 92M90 je odabran kao STS vrsta da se upoređuje direktno sa SAMS:ALS konstruktom u GAT7 slučaju. Vrsta Jack je korišćena kao netransformisana negativna kontrola.
Selektovane linije su gajene u eksperimentu JHM5G030 u dve replikacije sparenih redova od dvanaet stopa, sa jedanaest primenjenih tretmana. Linije su blokirane slučajem i tretmanom da bi se obezbedilo parelno upoređivanje jedanest različitih tretmana prskanja, sa 2 dva reda granice između svakog tretmana da bi se uhvatio nanos prskanja. Tretiranja prskanjem (u V3 ukoliko nije navedeno) su bila 0X (kontrola), 35.03 g/ha a.m. Synchrony, 140.11 g/ha a.m. Synchrony, 8.75 g/ha a.m. tribenurona, 35.0 g/ha a.m. tribenurona, 8.75 g/ha a.m. rimsulfurona, 35.0 g/ha a.m. rimsulfurona, 3360.0 g/ha a.m. glifosata, 3360.0 g/ha a.m. glifosta pri V3, a zatim sa 3360.0 g/ha a.m. glifosata pri RI, 3360.0 g/ha a.m. glifosata plus 35.0 g/ha a.m. tribenurona (tank miks) i 3360 g/ha a. m. glifosata plus 70.0 g/ha a.m. rimsulfurona (tank miks). Linijama je data vizualna ocena 100 (potpuna osetljivost, 100% štete) do 0 (potpuna otpornost, 0%> oštećenja) 7 dana posle tretiranja i ponovo 14 dana posle tretiranja. Vizualno ocenjivanje je zasnovanao na celokupnom stepenu hloroze, nekroze i kržljavosti biljke (ukoliko je evidentno) u tretiranim redovima u poređenju sa odgovarajućim neprskanim kontrolim redovima. Podaci ocenjivanja 7 i 14 dana posle prskanja su podvrgnuti ANOVA i srednjem odvajanju korišćenjem SAS.
REZULTA TI I DISKUSIJA
Kada su svi podaci ocene prskanja za različite tretmane 7 i 14 dana posle primene podvrgnuti ANOVA, slučajevi i tretmani su značajno različiti dok replikacija nije bila značajno različita (podaci nisu prikazani). Jack ima značajno više odgovor na prskanje (ocenjena oštećenja) u poređenju sa STS i GAT slučajevima 7 i 14 dana posle prskanja (DAS) (podaci nisu pokazani). 4 GAT linije su ocenjene sa značajno manje oštećenja nego Jack i STS za sve tretmane i 7 i 14 dana posle prskanja (podaci nisu prikazani).
U ispitivanju pojedinačnih tretmana, kontrolna parcela je imala isti slučaj nanošenja pri prskanju, a obe parcele Jack i STS su ocenjeni sa znatno višim oštećenim od prskanja u poređenju sa 4 GAT slučaja 7 DPP (podaci nisu prikazani) i 14 DPP (podaci nisu prikazani). Nanošenje pri prskanju bi potencijalno uticalo na rezultate sa drugih parcela, ali je na sreću minimizirano upotrebom granice od 2 reda između tretmana.
Između tretmana sa 8.75 g/ha a.m. rimsulfurona, 4 GAT slučaja je zabeleženo sa znatno manje oštećenja pri prskanju u poređenju sa Jack i STS i 7 DPP (podaci nisu prikazani) i 14 DPP (podaci nisu prikazani). Između 4 GAT slučaja, nije bilo značajnije zabležene razlike u toku oba vremena ocenjivanja (podaci nisu prikazani). Ispitivanje tretmana sa 35.0 g/ha a.m. rimsulfurona, 4 GAT slučaja je ocenjeno sa znatno manje oštećena od prskanja u poređenju sa Jack i STS i 7 DPP (podaci nisu prikazani) i 14 DPP (podaci nisu prikazani). GAT7 slučaj EAFS 3560.4.3 je ocenjen sa manje oštećenja u poređenju sa GAT7 slučajima EAFS 3559.2.1 i EAFS 3561.1.1 i 7 DPP (podaci nisu prikazani) i 14 DPP (v).
Posle tretmana sa 35.03 g/ha a.m. Synchrony, 4 GAT slučaja su ocenjena sa značajno manje oštećenja posle prskanja u poređenju sa Jack i STS i 7 DPP (podaci nisu prikazani i 14 DPP (podaci nisu prikazani). U toku 4 GAT slučaja, nije bilo zabeležene statističke razlike i 7 DPP (podaci nisu prikazani) i 14 DPP (podaci nisu prikazani). U ispitivanju tretmana sa 140.11 g/ha a.m. Synchrony, 4 GAT slučaja su ocenjna sa značajno manje oštećenja od prskanja u odnosu na Jack i STS i 7 DPP (podaci nisu prikazani) i 14 DPP (podaci nisu prikazani). GAT7 slučajevi EAFS 3560.4.3 i EAFS 3561.1.1. su ocenjeni sa manje oštećenja u poređenju sa GAT7 slučajevima EAFS 3559.2.1 i EAFS 3560.3.2 7 DPP (podaci nisu prikazani). 14 DPP tretman sa 140.11 g/ha a. m. Synchrony, GAT7 slučajevi EAFS 3560.4.2, EAFS 3559.2.1 i EAFS 3561.1.1 su ocenjeni bez oštećenja, dok EAFS 3560.3.2. je ocenjen slično STS (podaci nisu prikazani).
U ispitivanju tretmana 8.75 g/ha a.m. tribenurona, 4 GAT7 slučaja ima značajno manje vizualnih oštećenja u poređenju sa STS i Jack 7 DPP (podaci nisu prikazani) i 14 DPP (podaci nisu prikazani). GAT7 slučajevi nisu bili značajno različiti 7 DPP (podaci nisu prikazani), ali Evens EAFS 3560.4.3 i EAFS 3559.2.1 su imali značajno manje oštećenje u poređenju sa EAFS 3560.3.2 14 DPP (podaci nisu prikazani). Za tretman 35.0 g/ha a.m. tribenurona, 4 GAT7 slučaja je ocenjeno sa značajno manjim odgovormom na prskanje u poređenjus a Jack i STS 7DPP (podaci nisu prikazani) i 14 DPPP (podaci nisu prikazani). 4 GTA slučaja nisu statistički različita jedan od drugog 7 DPP (podaci nisu prikazani), ali EAFS 3560.3.2 je ocenjen sa značajno više oštećenja od prskanja nego drugi 3 GAT7 slučaja 14 DPP (podaci nisu prikazani).
Za 3360.0 g/ha a.m. glifosat i 3360.0 g/ha a.m. glifosat pri V3, a zatim 3360.0 g/ha glifosata u RI tretmanima, Jack i STS vrste su uništene posle 7 dana, kao što je očekivano (podaci nisu prikazani). 4 GAT7 slučaja nije pokazivalno primetna oštećenja od prskanja u toku tretmana sa 3360.0 g/ha a.m. glifosata 7 DPP (podaci nisu prikazani) i 14 DPP (podaci nisu prikazani). Minimalna oštećenja od prskanja su zabeležena za 4 GAT7 slučaja 7DPP za tretman (podaci nisu prikazani) i slučajevi EAFS 3560.4.3 i EAFS 3559.2.1 su ocenjeni značajno bolje nego EAFS 3560.3.2 14 DPP (podaci nisu prikazani).
Dva tank-miks tretmana sa glifosatom plus herbicidom sulfonil uree obezbeđuju slične rezultate 7 DPP i 14 DPP. U toku 3360.0 g/ha a.m. glifosata plus tretman 70.0 g/ha a.m. rimsulfurona, 4 GAT slučaja su imali slični herbicidni odgovor 7 DPP od oko 40% oštećenja (podaci nisu prikazani) i približno 35% oštećenja 14 DPP (podaci nisu prikazani). Manje od celokupnog odgovora useva je posmatrano u toku tretmana 3360.0 g/ha a.m. plus 35.0 g/ha a. m. tribenurona i 4 GAT slučaja nisu bili statistički različiti 7 DPP (podaci nisu prikazani) i 14 DPP (podaci nisu prikazani).
Srednja vrednost vizualnog cenjivanja 7 DPP i 14 DPP su grafički prikazane za četiri vodeća GAT slučaja Jack i STS linije da bi se omogućila vizualna interpretacija podataka (podaci nisu prikazani). Za tretmane sa rimsulfuronom, primećen je odgovor useva sa 4 vodeća GAT slučaja, sa EAFS 3560.4.3 koji ima najveću zabeleženu otpronost (podaci nisu prikazani).
U ispitivanju srednje vrednosti ocenjenih odgovora na IX i tretmane 140.11 g/ha a.,. Synchrony, nije bilo očiglednog oštećenja za GAT7 slučajeve EAFS 3560.4.3 i EAFS 3561.1.1 i minimalnog odgovora GAT 7 slučajeva EAFS 3559.2.1 i EAFS 3560.3.2 (podaci nisu prikazani). Svi GAT slučajevi imaju znatno manji odgovor useva u poređenju sa Jack i STS linijom (podaci nisu prikazani).
Četiri GAT7 slučaja imao je značajno manji odgovor useva do IX i 35.0 g/ha a.m. tribenurana primena 7 DPP i 14 DPP kada je poređen sa Jack i STS (podaci nisu pokazani). Među GAT7 slučajevima, EAFS 3560.4.3 su se pokazali kao najbolji, dok EAFS 3560.3.2 se javlja da pokazuje najbolji celokupni odgovor (podaci nisu prikazani).
Za primenu 3360.0 g/ha a. m. glifosata, nije bilo očiglednog odgovora useva za sve 4 GAT7 slučajeve 7DPP i 14 DPP (podaci nisu prikazani). Za 3360.0 g/ha a.m. glifosata pri V3, a zatim 3360.0 g/ha a.m. glifosata u RI nije bilo zabeleženih statističkih razlika među četiri GAT7 slučaja 7 DPP, ali EAFS 3560.4.3 i EAFS 3559.2.1 se javlja da ima manji odgovor u poređenju sa EAFS 3561.1.1 i EAFS 3560.3.2 14 DPP (podaci nisu prikazani).
Od dva tank miks tretmana, 70.0 g/ha a.m. rimsulfurona plus 3360.0 g/ha a.m glifosata je izazvalo veći nivo odgovora oštećenja useva u poređnju sa 35.0 g/ha a.m. tribenurona plus 3360.0 g/ha glifosatnog tretmana (podaci nisu prikazani). Među četiri vodeća GAT7 događaja, nije bilo primećeih statističkih razlika primećenih u vizualnom ocenjivanju 7DPP i 14DPP (podaci nisu prikazani).
Sve objave i patentne prijave pomenute u opisu ukazuju na nivo stručnjaka u oblasti na koju se pronalazak odnosi. Sve objave i patentne prijave na koje se ovde poziva kao i svaka pojedinačna objava ili patenta prijava na koje je ovde specifično i individualno ukazano je uključena refencom.
Mada je izneti pronalazak bio opisan do detalje kroz primenu i primere za svrhe jasnoće razumevanja, biće očigledno da izvesne promene i modifikacije mogu biti učinjene u okviru obima priloženih zahteva.

Claims (113)

1. Postupak suzbijanja korova u oblasti gajenja, naznačen time, što obuhvata a) sađenje oblasti sa semenom ili biljkom useva koja sadrži i) prvi polinukleotid koji kodira polipeptid koji daje otpornost na glifosat operativno vezan za promoter aktivan u pomenutoj biljki; i ii) drugi polipeptid koji kodira polipeptid otporan na ALS inhibitor operativno vezan za promoter aktivan u pomenutoj biljki; b) nanošenje na bilo koji usev, deo useva, korov ili oblast njegovog gajenja kombinacije herbicida koja obuhvata bar jednu efikasnu količinu prvog herbicida i efikasnu količinu drugog herbicida, gde u pomenutoj kombinaciji herbicida nije uključen glifosat i gde pomenuta efikasna količina pomenutog prvog i pomenutog drugog herbicida je tolerisana od strane useva i suzbija korove.
2. Postupak prema zahtevu 1, naznačen time, što pomenuti prvi herbicid obuhvata ALS inhibitor.
3. Postupak prema zahtevu 2, naznačen time, što pomenuti drugi herbicid obuhvata drugi ALS inhibitor.
4. Postupak prema zahtevu 2 ili 3, naznačen time, što pomenuta količina prvog ALS inhibitora obuhvata oko 0.1 do oko 5000 g a.m./hektaru.
5. Postupak prema zahtevu 4, naznačen time, što pomenuta efikasna količina prvog ALS inhibitora obuhvata oko 0.5 do oko 350 g a.m./hektaru ili oko 1 do oko 150 g a.m./ hektaru.
6. Postupak prema zahtevu 3, naznačen time, što pomenuta efikasna količina drugog ALS inhibitora obuhvata oko 0.1 do oko 5000 g a.m./hektara, oko 0.5 do oko 350 g a.m./hektaru ili oko 1 do oko 150 g a.m. /hektaru.
7. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-6, naznačen time, što pomenuti prvi polinukleotid kodira glifosat-N-acetiltransferazu.
8. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-6, naznačen time, što pomenuti prvi polinukleotid kodira 5-enolpiruvilšikimat-3-fosfat sintetazu otpornu na glifosat ili glifosatoksido reduktazu otpornu na glifosat.
9. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-6, naznačen time, što pomenuti polipeptid otporan na ALS inhibitor obuhvata mutirani polipeptid acetolaktat sintetaze.
10. Postupak prema zahtevu 9, naznačen time, što pomenuti mutirani polipeptid acetolaktat sintetaze obuhvata HRA.
11. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-10, naznačen time, što pomenuta kombinacija herbicida obuhvata ALS inhibitor odabran iz grupe koju čine sulfonilurea, triazolopirimidin, pirimidiniloksi(tio)benzoat, imidazolinon i sulfonilaminokarboniltriazolinon.
12. Postupak prema zahtevu 11, naznačen time, što pomenuti ALS inhibitor je odabran iz grupe koja sadrži: a) Azimsulfuron; b) Hlorimurn-etil; c) Metsulfuron-metil; d) Nikosulfuron; e) Rimsulfuron; f) Sulfometuron-metil; g) Tifensulfuron-metil; h) Tribenuron-metil; i) Amidosulfuron; j) Bensulfuron-metil; k) Hlorsulfuron; I) Cinosulfuron; m) Ciklosulfamuron; n) Etametsulfuron-metil; o) Etoksisulfuron; p) Flazasulfuron; q) Flupirsulfuron-metil; r) Foramsulfuron; s) Imazosulfuron; t) Jodosulfuron-metil; u) Mezosulfuron-metil; v) Oksasulfuron; w) Pirimisulfuron-metil; x) Prosulfuron; y) Pirazosulfuron-etil; z) Sulfosulfuron; aa) Triasulfuron; bb) Trifloksisulfuron; cc) Triflusulfuron-metil; dd) Tritosulfuron; ee) Halosulfuron-metil; ff) Flukarbazon; gg) Prokarbazon; hh) Kloransulam-metil; ii) Flumetsulam jj) Diklosulam kk) Florasulam; II) Imazamoks; mm) Bispiribak; nn) Piriftalid; oo) Piribenzoksin; pp) Piritiobak; qq) Piriminobak-metil; rr) Imazapir; ss) Imazetapir; tt) Imazakin; uu) Imazapik; w) Imazametabenz-metil; ww) Imazamoks; xx) Flucetosulfuron; yy) Metosulam; zz) Penoksulan; i aaa) Piroksulam.
13. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-12, naznačen time, što pomenuta kombinacija herbicida obuhvata bar triazin ili fosfinsku kiselinu.
14. Postupak prema bilo kom od zahteva 1, 2, 4 ili 7-12, naznačen time, što pomenuti drugi herbicid i pomenuti prvi herbicid imaju različite mehanizme dejstva.
15. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-13, naznačen time, što pomenuti drugi herbicid i pomenuti prvi herbicid imaju isti mehanizam dejstva.
16. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-15, naznačen time, što pomenuta kombinacija herbicida obuhvata bar efikasnu količinu trećeg herbicida.
17. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-16, naznačen time, što pomenuti prvi herbicid je primenjen pre nicanja, posle nicanja ili pre i posle nicanja na korove ili usev; i pomenuti drugi herbicid je primenjen pre nicanja, posle nicanja ili pre ili posle nicanja na korov ili usev.
18. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-17, naznačen time, što pomenuti prvi i drugi herbicid su primenjeni zajedno ili su primenjeni odvojeno.
19. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-17, naznačen time, što bar pomenuti prvi i drugi herbicid obuhvataju homogenu mešavinu granula.
20. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-19, naznačen time, što pomenuti postupak dalje obuhvata nanošenje poljopreivredne hemikalije odabrane iz grupe koju čine fungicid, nematicid, regulator rasta, sejfner, adjuvant, insekticid i bilo koja njihova kombinacija.
21. Postupak prema zahtevu 20, naznačen time, što je pomenuta poljoprivredna hemikalija primenjena pre nicanja, posle nicanja ili i pre i posle nicanja na korov ili usev.
22. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-21, naznačen time, što pomenuta poljoprivredna hemikalija je primenjena zajedno ili odvojeno sa prvim herbicidom, pomenutim drugim herbicidom ili pomenutim prvim i drugim herbicidom.
23. Postupak prema bilo kome od zahteva 1-22, naznačen time, što prvi herbicid obuhvata sulfonilureu i drugi herbicid obuhvata ALS inhibitor.
24. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-22, naznačen time, što prvi herbicid obuhvata sulfonilureu i drugi herbicid obuhvata imidazolinon.
25. Postupak prema zahtevu 23 ili 24, naznačen time, što efikasna količina prvog ili drugog pomenutog herbicida obezbeđuje zaštitini efekat.
26. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-25, naznačen time, što bar jedan od pomenutog prvog ili drugog polinukleotida je operativno vezana za bar jednu kopiju pojačivača sekvence prikazane kao SEQ ID br: 72.
27. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-26, naznačen time, što je pomenuti usev dikotila.
28. Postupak prema zahtevu 27, naznačen time, što pomenuti dikotila je soja, kanola, suncokret, pamuk, alfaalfa, ukrasna biljka, voće, povrće, šećerna repa iliArabidopsis.
29. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-26, naznačen time, što je pomenuta biljka monokotila.
30. Postupak prema zahtevu 29, naznačen time, što je monokotila kukuruz, pšenica, pirinač, ječam, sorgum, šećerna trska, Svvitchgrass ili raž.
31. Postupak prema bilo kom oda zahteva 1, naznačen time, što je pomenuti usev kukuruz i pomenuti prvi herbicid je primenjen u V7 stupnju ili kasnije.
32. Postupak prema zahtevu 1, naznačen time, što je stupanj (b) izveden bar jednom pre stupnja (a).
33. Postupak za suzbijanje korova u oblasti gajenja, naznačen time, što obuhvata a) procenjivanje uslova okoline i oblasti gajenja; b) odabiranje efikasne količine kombinacije herbicida koju čine bar jedna efikasna količina prvog herbicida i efikasna količina drugog herbicida, gde pomenuta kombinacija herbicida ne uključuje glifosat i gde pomenuta efikasna količina pomenutog prvog i drugog herbicida je tolerisana od useva i suzbija korove; i c) nanošenje kombinacije herbiciida na usev, deo useva, seme ili oblast gajenja pomenutog useva, kada pomenuti usev obuhvata biljku koja ima i) prvi polinukleotid koji kodira polipeptid koji daje otpornost na glifosat operativno povezan sa promoterom aktivnim u pomenutoj biljci; i ii) drugi polinukleotid koji kodira polipeptid otporan na ALS inhibitor operativno vezan za promoter aktivan u pomenutoj biljci.
34. Postupak prema zahtevu 33, naznačen time, što pomenuti prvi herbicid obuhvata ALS inhibitor.
35. Postupak prema zahtevu 34, naznačen time, što pomenuti drugi herbicid obuhvata drugi ALS inhibitor.
36. Postupak prema zahtevu 34 ili 35, naznečan time, što pomenuta efikasna količina prvog ili pomenutog drugog ALS inihibitora obuhvata oko 0.1 do oko 5000 g a.m./hektaru.
37. Postupak prema zahtevu 34 ili 35, naznačen time, što pomenuta efikasna količina prvog ili drugog ALS inhibitora obuhvata oko 1 do oko 150 g a. m./hektaru.
38. Postupak prema zahtevu 34 ili 35, naznačen time, što pomenuta efikasna količina prvog ili drugog ALS inihibitora obuhvata oko 0.5 do oko 350 g a.m./hektaru.
39. Postupak prema bilo kom od zahteva 33-38, naznačen time, što pomenuti prvi polinukleotid kodira glifosat-N-acetiltransferazu.
40. Postupak prema bilo kom od zahteva 33-38, naznačen time, što pomenuti polipeptid otporan na ALS inhibitor obuhvata mutirani polipeptid acetolaktat sintetaze.
41. Postupak prema zahtevu 40, naznačen time, što pomenuti mutirani polipeptid acetolaktat sintetaze obuhvata HRA.
42. Postuapka prema bilo kom od zahteva 33-41, naznačen time, što pomenuta kombinacija herbicida obuhvata ALS inhibitor izabran iz grupe koja se sastoji od sulfoniluree, triazolopirimidina, pirimidiniloksi(tio)benzoata, imidazolinona i sulfonilaminokarboniltriazolinona.
43. Postupak prema zahtevu 42, naznačen time, što pomenuti ALS inhibitor je odabran iz grupe koju čine: a) Azimsulfuron; b) Hlorimurn-etil; c) Metsulfiiron-metil; d) Nikosulfuron; e) Rimsulfuron; f) Sulfuometuron-metil; g) Tifensulfuron-metil; h) Tribenuron-metil; i) Amidosulfuron; j) Bensulfuron-metil; k) Hlorsulfuron; 1) Cinosulfuron; m) Ciklosulfamuron; n) Etametsulfuron-metil; o) Etoksisulfuron; p) Flazasulfuron; q) Flupirsulfuron-metil; r) Foramsulfuron; s) Imazosulfuron; t) Jodosulfuron-metil; u) Mezosulfuron-metil; v) Oksasulfuron; w) Pirimisulfuron-metil; x) Prosulfuron; y) Pirazosulfuron-etil; z) Sulfosulfuron; aa) Triasulfuron; bb) Trifloksisulfuron; cc) Triflusulfuron-metil; dd) Tritosulfuron; ee) Halosulfuron-metil; ff) Flukarbazon; gg) Prokarbazon; hh) Kloransulam-metil; ii) Flumetsulam jj) Diklosulam kk) Florasulam; 11) Imazamoks; mm) Bispiribak; nn) Piriftalid; oo) Piribenzoksin; pp) Piritiobak; qq) Piriminobak-metil; rr) Imazapir; ss) Imazetapir; rt) Imazakin; uu) Imazapik; w) Imazametabenz-metil; ww) Imazamoks; xx) Flucetosulfuron; yy) Metosulam; zz) Penoksulan; i aaa) Piroksulam.
44. Postupak prema bilo kome od zahteva 33-43, naznačen time, što drugi herbicid i pomenuti prvi herbicid imaju isti ili različiti mehanizam dejstva.
45. Postupak prema bilo kome od zahteva 33-44, naznačen time, što pomenuti prvi herbicid je primenjen pre nicanja, posle nicanja ili pre i posle nicanja na korove ili usev; i pomenuti drugi herbicid je primenjen pre nicanja, posle nicanja ili pre i posle nicanja na korov ili usev.
46. Postupak prema bilo kom od zahteva 33-44, naznačen time, što pomenuti prvi i drugi herbicid su primenjeni zajedno ili su primenjeni odvojeno.
47. Postupak prema bilo kom od zahteva 33-44, naznačen time, što bar jedan pomenuti prvi i pomenuti drugi herbicid obuhvataju homogenu mešavinu granula.
48. Postupak prema bilo komod zahteva 33-47, naznačen time, što pomenuti postupak dalje obuhvata nanošenje poljoprivredne hemikalije odabrane iz grupe koju sadrži fungicid, nematicid, regulator rasta, sejfner, adjuvant, insekticid ili bilo koja njihova kombinacija.
49. Postupak prema bilo kom od zahteva 33-48, naznačen time, što bar jedan od prvog ili drugog polinukleotida je operativno vezan za bar jednu kopiju pojačivača sekvence prikazane kao SEQ ID br: 72.
50. Postupak prema bilo kom od zahteva 33-49, naznačen time, što je pomenuti usev dikotila.
51. Postupak prema zahtevu 50, naznačen time, što je pomenuta dikotila soja, kanola, suncokret, pamuk, alfaalfa, ukrasna biljka, voće, povrće, šećerna trska iliArabidopsis.
52. Postupak prema bilo kome od zahteva 33-39, naznačen time, što je pomenuta biljka monokotila.
53. Postupak prema zahtevu 52, naznačen time, što je pomenuta monokotila kukuruz, pšenica, riža, ječam, sorgum, šećerna trska, Svvitchgrass ili raž.
54. Postupak za suzbijanje korova u oblasti gajenja, naznačen time, što obuhvata a) sađenje oblasti sa semenom useva ili biljkom koja sadrži i) prvi polinukleotid koji kodira polipeptid koji daje otpornost na glifosat, operativno vezan za promoter aktivan u biljci; i ii) drugi polinukleotid koji kodira polipeptid otporan na ALS inhibitor operativno vezan za promoter aktivan u biljci; b) nanošenje na usev, deo useva, korov ili oblast njegovog gajednja kombinacije herbicida koja obuhvata bar jednu efikasnu količinu prvog i drugog herbicida ALS inhibitor, gde i) efikasna količina kombinacije herbicida suzbija korove; ii) efikasna količina prvog ALS inhibitora nije tolerisana od useva kada se primenjuje sama u poređenju sa kontrolnim usevom koji nije bio izložen prvom ALS inhibitoru; i iii) efikasna količina drugog ALS inhibitora je dovoljna da proizvede zaštitni efeakt, gde pomenuti zaštitni efekat obezbeđuje povećanje u otpornosti useva posle primene prvog i drugog ALS inhibitora u poređenju sa otpornošću useva kada je prvi ALS inhibitor primenjen sam.
55. Postupak prema zahtevu 54, naznačen time, što bar jedan prvi ili pomenuti drugi ALS inhibitor obuhvata sulfonilureu.
56. Postupak prema zahtevu 54, naznačen time, što pomenuti drugi ALS inhibitor obuhvata sulfonilureu i prvi ALS inhibitor obuhvata imidazolinon.
57. Postupak prema zahtevu 54, naznačen time, što pomenuta kombinacija herbicida dalje obuhvata glifosat.
58. Postupak za suzbijanje korova u oblasti gajenja, naznačen time, što obuhvata: a) procenjivanje uslova okoline u oblasti gajenja; b) odabiranje kombinacije herbicida koja obuhvata bar jednu efikasnu količinu prvog i drugog ALS inhibitora, gde pomenuta efikasna količina kombinovanog suzbijanja useva i efikasne količine prvog ALS inhibitora nije tolerisana od strane useva kada se primeni sama, u poređenju sa kontrolnom biljkom na koju je primenjen prvi ALS inhibitor i efikasna količina drugog ALS inhibitora je dovoljna da proizvede zaštitni efekat, gde pomenuti zaštitni efekat obezbeđuje porast u otpornosti useva posle primene prvog i drugog ALS inhibitora u poređenju sa otpornošću useva kada se prvi ALS inhibitor primeni sam; i c) primenjivanje kombinacije herbicida na usev ili deo useva, seme ili oblast gajenja pomenutog useva, kada usev obuhvata biljku koja ima i) prvi polinukleotid koji kodira polipeptid koji daje otpornost na glifosat operativno vezan za promoter aktivan u biljci; i ii) drugi polinukleotid koji kodira polipeptid operativno vezan za promoter aktivan u pomenutoj biljci.
59. Postupak prema zahtevu 58, naznačen time, što je bar jedan prvi ili pomenuti drugi ALS inhibitor obuhvata sulfonilureu.
60. Postupak prema zahtevu 58, naznačen time, što pomenuti drugi ALS inhibitor obuhvata sulfonilureu i prvi ALS inhibitor obuhvata imidazolinon.
61. Postupak suzbijanje korova u oblasti gajenja, naznačen time, što obuhvata a) sađenje oblasti sa semenom ili biljkama useva koji obuhvataju i) prvi polinukleotid koji kodira polipeptid koji daje otpornost na glifosat operativno vezan za promoter aktivan u biljci; i ii) drugi polinukleotid koji kodira polipeptid operativno vezan za promoter aktivan u pomenutoj biljci; b) nošenje na usev, deo useva, korov ili oblast njihovog gajenja efikasne količine kombinacije herbicida odabrane iz grupe koju čine: i) kombinacija herbicida koji obuhvataju glifosat, imazapir, hlorimuron-etil, kuizalofop i fomesafen, gde pomenuta efiaksna količina je tolerisana od strane useva i suzbija korove; ii) kombinacija herbicida obuhvata glifosat, imazapir, hlorimuron-etil, kuizalofop i fomesafen, gde je pomenuta efikasna količina tolerisana sa usevom i suzbija korove. iii) kombinacija herbicida obuhvata glifosat, hlorimuron-etil i trifensulfuron-metil, gde pomenuta efikasna količina je tolerisana od strane useva i suzbija korove.
62. Postupak prema zahtevu 61, naznačen time, što pomenuti usev je soja, kukuruz ili pamuk.
63. Postupak prema zahtevu 59, naznačen time, što efikasna količina kombinacije herbicida iz dela (b)(i) obuhvata glifosat koji se sastoji od 1110 do oko 1130 g a. m./hektaru; efikasna količina imazapira obuhvata oko 7.5 do oko 27.5 g a.m./hektaru; efikasne količine hlorimuron-etila obuhvata oko 7.5 do oko 27.5 g a.m./hektaru, efikasna količina kizalofopa sadrži oko 50 do oko 70 g a.m./hektaru i efikasna količina fomesafena obuhvata oko 240 do oko 260 g a.m./hektaru.
64. Biljka, naznačena time, što sadrži polinukleotid koji kodira polipeptid koji daje otpornost na glifosat ili polinukleotid koji kodira i ALS inhibitor koji kodira i ALS inhibitor koji kodira polipeptid otporan na ALS inhibitor, gde pomenuti polinukleotid je operativno vezan za a) promoter koji pokreće ekspresiju u biljci; i b) bar jednu kopiju pojačivača sekvence iznete u SEQ ID No.l, 72, 85, 88 ili 89 ili pojačivač sekvence koja ima bar 90% identičnu sekvencu SEQ ID br.l 72, 85, 88 ili 89, gde pomenuti pojačivač sekvence moduliše nivo transkripcije gde pomenuta biljka je otporna na glifosat ili ALS inhibitor primenjen u nivoima efikasnim da inhbira rast ili kontrole biljaka koji ne sadrži pomenuti polinukleotid operativno vezan za pomenuti pojačivač sekvence.
65. Biljka prema zahtevu 64, naznačena time, što pomenuti polinukleotid koji daje otpornost na glifosat kodira glifosat-N-acetiltransferazu.
66. Biljka prema zahtevu 64, naznačena time, što pomenuti polinukleotid koji daje otpornost na glifosat kodira 5-enolpiruvilšikimat-3-fosfat sintetazu otpornu na glifosat ili glifosat oksido reduktazu otpornu na glifosat.
67. Transgenska biljka prema zahtevu 64, naznačena time, što pomenuti polipeptid otporan na ALS inhibitor obuhvata HRA.
68. Transgenska biljka prema bilo kom od zahteva 64-67, naznačena time, što pomenuti polinukleotid je operativno vezan za bar tri kopije pojačivača sekvence prikazane kao SEQ ID br. 72.
69. Transgenska bilja prema bilo kom od zahteva 64-67, naznačen time, što pomenuti promoter je ubihitin promoter.
70. Transgenska biljka prema bilo kom od zahteva 64-68, naznačena time, što pomenuti pojačivač je heterologni u odnosu na pomenuti promoter.
71. Transgensaka biljka prema bilo kome od zahteva 64-70, naznačena time, što je pomenuti promoter ubihitin promoter kukuruza ili ubihitin promoter Arabidopsis-a.
72. Biljka prema bilo kome od zahteva 64-71, naznačena time, što je pomenuti usev dikotila.
73. Biljka prema zahtevu 72, naznačena time, što je pomenuta dikotila soja, kanola, suncokret, pamuk, alfaalfa, ukrasna biljka, voće, povrće, šećerna trska iliArabidopsis.
74. Biljka prema bilo kome od zahteva 64-70, naznačena time, što je pomenuta biljka monokotila.
75. Biljka prema zahtevu 74, naznačena time, što je pomenuta monokotiledona kukuruz, pšenica, pirinač, ječam, sorgum, šećerna trska, Svvitchgrass ili raž.
76. Ekspresiona kaseta, naznačena time, sadrži prvi polinukleotid koji kodira polipeptid koji daje otpornost na glifosat ili polinukleotid koji kodira peptid otporan na ALS-inhibitor, gde je pomenuti polinukleotid operativno vezan za: (a) promoter koji vodi ekspresiju u biljci; i (b) bar jednu kopiju za sekvencu pojačivača prikazanu kao SEQ ID br. 1, 72, 85, 88 ili 89, ili sekvencu pojačivača koja ima sekvence bar 90% identičnu sa SEQ ID br. 1, 72, 85, 88 ili 89, gde pomenuta sekvenca pojačivača modulira transkripciju i pomenuta sekvenca pojačivača je heterologna sa pomenutim promoterom; gde pomenuta ekspresiona kaseta čini otpornost prema glifosatu ili otpronost prema ALS u biljci koja ga sadrži, gde je pomenuta otpornost prema glifosatu ili ALS inhbitoru primenjena u nivou efikasnom da inhibira rast kontrolne biljke koja ne sadrži pomenutu ekspresionu kasetu.
77. Ekspresiona kaseta pema zahtevu 76, naznačena time, što pomenuti polinukleotid koji daje otpornost na glifosat kodira glifosat-N-acetiltransferazu.
78. Ekspresiona kaseta prema zahtevu 76, naznačena time, što pomenuti polinukelotid koji daje otpornost na glifosat kodira 5-enolpiruvilšikimat-3-fosfat sintetazu otpornu na glifosat ili glifosat oksido-reduktazu otpornu na glifosat.
79. Ekspresiona kaseta prema bilo kom od zahteva 76-78, naznačena time, što je pomenuti polinukleotid operativno vezan za bar tri kopije pojačivača sekvence iznete u SEQ ID br. 72.
80. Ekspresiona kaseta prema bilo kom od zahteva 76-79, naznačena time, što je pomenuti promoter ubihitin promoter.
81. Ekspresiona kaseta prema bilo kom od zahteva 76-79, naznačena time, što je pomenuti pojačivač heterologni za pomenuti promoter.
82. Ekspresiona kaseta prema zahtevu 81, naznačena time, što je pomenuti promoter ubihitin promoter Arabidopsis ili ubihitin promoter kukuruza.
83. Ekspresona kaseta prema bilo kom od zahteva 76-83, naznačena time, što pomenuti polipeptid obuhvata sekvencu iznetu u SEQ ID br. 45.
84. Ekspresiona kaseta prema bilo kom od zahteva 76-83, naznačena time, što pomenuta ekspresiona kaseta obuhvata polinukleotid koji daje otpornost na glifosat i polinukleotid koji kodira polipeptid koji je otporan na ALS inhibitor.
85.
86. Ekspresiona kaseta prema zahtevima 76 ili 84, naznačena time, što pomenuti polipeptid otporan na ALS inhibitor obuhvata HRA.
87. Postupak odabiranja pamuka koji je transformisan sa prvim nukleotidom koji kodira prvi polipeptid koji daje otpornost ne glifosat i drugim polinukleotidom koji kodira polipeptid otporan za ALS inhibitor, naznačen time, što pomenuti postupak obuhvata stupanj gajenja transformisanog kalusa pamuka dok se izlaže glifosatu i/ili herbicidu ALS inhibitoru.
88. Postupak prema zahtevu 87, naznačen time, što pomenuti polipeptid koji daje otpornost prema glifosatu obuhvata GAT i pomenuti polipeptid koji daje otpornost na ALS inhibitor obuhvata HRA.
89. Postupak prema zahtevu 88, naznačen time, što pomenuti kalus je gajen dok je izložen medijumu koji sadrži hlorsulfuron u koncentraciji od 50-200 mikrograma po litri.
90. Postupak prema zahtevu 88, naznačen time, što je kalus gajen dok je izložen medijumu koji sadrži glifosat u koncentraciji od 450uM.
91. Postupak za suzbijanje korova u oblasti kultivacije, naznačen time, što sadrži a) sađenje polja sa semenom ili biljkom useva koja obuhvata i) prvi polinukleotid koji kodira polipeptid koji daje otpornost na glifosat operativno vezan za promoter aktivan u biljci; i ii) drugi polinukleotid koji kodira polipeptid koji je otporan na ALS inhibitor operativno vezan za promoter aktivan u biljci; b) nanošenje na pomenuti usev, deo useva, seme pomenutog useva ili njegovu oblast gajenja efikasne količine herbicida, gde pomenuta efikasna količina je tolerisana od strane useva i suzbija korove, gde pomenuti herbicid nije glifosat, hlorimuron-etil, rimsulfuron, tribenuron-metil ili tifensulfuron-metil.
92. Postupak prema zahtevu 91, naznačen time, što je pomenuti herbicid odabran iz grupe koja se sastoji od (i) sulfonilaminokarboniltriazolinona; (ii) triazolopirimidina; (iii) pirimidinil(tio)benzoata; (iv) imidazolinon; (v) triazina; i (vi) fosfinske kiseline.
93. Postupak za suzbijanje korova u oblast koja sadži usev, naznačen time, što obuhvata a) sađenje na polju semena ili biljaka useva koji obuhvataju i) prvi polinukleotid koji kodira polipeptid koji daje otpornost na glifosat; i ii) drugi polinukleotid koji kodira polipeptid otporan na ALS inhibitor; i b) nanošenje na bilo koji usev i korove na polju efikasne količine prvog herbicida koji obuhvata ALS inhibitor i efikasne količine bar jednog dodatnog poljoprivrednog sredstva izabranog iz grupe koju čine fungicid, nematicid, insekticid, sejfneri ili adjuvanti, gde pomenuta efikasna količina pomenutog herbicida ALS inhibitora je tolerisana od strane useva i gde pomenuta efikasna količina pomenute kombinacije nije tolerisana od strane kontrolne biljke koja ne eksprimuje oba i pomenuti prvi i pomenuti drugi polipeptid.
94. Postupak prema zahtevu 93, naznačen time, što stupanj (b) je izveden bar jednom pre stupnja (a).
95. Postupak za poboljšavanje transformacione efikasnosti, naznačen time, što uključuje jednu kopiju integracionog slučaja, ili povećanu transformacionu efikasnost biljke koja sadrži: a) uvođenje u biljku kasete koja sadrži polinukleotid koji kodira polipeptid koji daje otpornost sa glifosatom ili polinukleotid koji kodira polipeptid koji daje otpronost na ALS inhibitor, gde pomenuti polinukleotid je operativno vezan za promoter aktivan u pomenutoj biljci i operativno je vezan za bar jednu kopiju sekvence pojačivača prikazane kao SEQ ID br. 1, 72, 85, 88 ili 89 ili sekvence pojačivača koji ima bar 90% identičnu sekvence sa SEQ ID br. 1, 72, 85, 88 ili 89, gde pomenuta sekvenca moduliše transkripciju; b) dovođenje u kontakt pomenute biljke sa efikasnom koncentracijom odgovarajućeg herbicida; i c) odabiranje biljke koja eksprimuje pomenuti polipeptid.
96. Postupak prema zahtevu 95, naznačen time, što pomenuta kaseta dalje obuhvata polinukleotid od interesa.
97. Postupak prema zahtevu 95 ili 96, naznačen time, što pomenuti polipeptid daje otpornost na glifosat koji obuhvata GAT polipeptid ili polipeptid koji je otporan na ALS inhibitor i sadrži HRA.
98. Postupak za suzbijanje korova, naznačen time, što obuhvata a) sađenje u oblasti semena ili biljke useva koji sadrži i) prvu nukleotidnu sekvencu koja kodira polipeptid koji daje otpornost na glifosat; i ii) drugu nukleotidnu sekvencu koja kodira polipeptid otporan na ALS inhbitor; b) nanošenje na pomenuti usev, deo useva, seme pomenutog useva ili oblasti gajenja, efikasne količine herbicida, kada pomenuta efikasna količina obuhvata i) količinu koja nije tolerisana od strane prvog kontrolnog useva kada je primenjena na prvi kontrolni usev, dela useva, smena ili oblasti gajenja, gde pomenuti prvi kontrolni usev eksprimuje prvi polinukleotid koji daje otpornost na glifosat i ne eksprimuje drugi polinukleotid koji kodira polipeptid otporan na ALS inhibitor; ii) količinu koja nije tolerisana od strane drugog kontrolnog useva kada je primenjena na drugi usev, deo useva, seme ili oblast gajenja, gde pomenuti drugi kontrolni usev eksprimuje drugi polinukleotid i ne eksprimuje prvi polinukleotid; i iii) količinu koja je tolerisana kada se primenjuje na usev, deo useva, seme ili oblast njihovog gajenja u stupnju (b).
99. Postupak za suzbijanje korova u oblasti gajenja, naznačen time, što sadrži: a) procenjivanje uslova okoline u oblasti gajenja; b) selekcija efikasne količine herbicida, gde efikasna količina herbicida sadrži i) količinu koja nije tolerisana od strane prvog useva kada se primeni na prvi kontrolni usev, deo useva, seme ili oblast gajenja, gde pomenuta prva kontrola korova eksprimuje prvi polinukleotid koji daje otpornost na glifosat i ne eksprimuje drugi nukleotid koji kodira polipeptid koji je otporan na ALS inhibitor; ii) količinu drugog useva koja nije tolerisana od kada je naneta na drugi usev, deo useva, semena ili oblast gajenja, gde pomenuti drugi kontrolni usev eksprimuje drugi polinukleotid i ne eksprimuje prvi nukleotid; i iii) količina koja je tolerisana kada se primeni na usev od interesa, deo useva od interesa, seme useva od intersa, oblast njenog gajenja, gde pomenuti usev od interesa eksprimuje prvu nukleotidnu sekvencu koja kodira polipeptid koji može dati otpornost na glifosat; i drugu nukleotidnu sekvencu koja kodira polipeptid otporan na ALS inhibitor. c) nanošenje useva od interesa, dela useva od intersa, korova ili oblasti njegovog gajenja, efikasne količine pomenutog herbicida.
100. Postupak suzbijanja korova u oblasti gajenja, naznačen time, što postupak obuhvata a) sađenje oblasti sa semenom ili biljkom useva, gde seme ili biljka useva obuhvataju: i) prvi polinukleotid koji kodira polipeptid koji daje otpornost na glifosat operativno vezan za promoter aktivan u semenu useva ili biljkama useva; i ii) drugi polinukleotid koji kodira polipeptid koji je otporan na ALS inhibitor operativno vezan za promoter aktivan u semenu useva ili biljkama useva; i b) nanošenje na bilo koji usev, deo useva, seme, njihovu oblast gajenja ili njihovu kombinaciju, efikasne količine herbicidne kompozicije koja obuhvata bar jednu sinergijski efikasnu količinu glifosata i sinergijski efikasnu količinu herbicida sulfoniluree ili njihove poljoprivredno prihvatljive soli, gde bar jedna od: i) sinergijski efikasne količine glifosata je niža nego količina glifosata potrebna da suzbija korove u nedostatku herbicida sulfoniluree; ii) sinergijski efikasna količina herbicida sulfoniluree je niža nego količina sulfoniluree potrebna da kontroliše useve u odsustvu glifosata; i iii) njihova kombinacija; i gde efikasna količina herbicidne kompozicije je tolerisana sa semenom useva ili biljkama useva i suzbija korove u oblasti gajenja.
101. Postupak prema zahtevu 100, naznačen time, što prvi nukleotid kodira glifosat-N-acetiltransferazu.
102. Postupak prema zahtevu 100 ili 101, naznačen time, što polipeptid otporan na ALS inhibitor obuhvata mutirani polipeptid acetolaktat sintetaze koja sadrži HRA.
103. Postupak prema zahtevima 100, 101 ili 102, naznačen time, što je herbicid sulfoniluree odabran iz grupe koja se sastoji od metsulfuron-metil, hlorsulfurona i triasulfurona.
104. Postupak prema zahtevu 100, 101, 102 ili 103, naznačen time, što je glifosat primenjen pre nicanja, posle nicanja ili pre i posle nicanja na korove ili biljke useva; i herbicid sulfoniluree je primenjen pre nicanja, posle nicanja ili pre i posle nicanja na korove ili biljke useva.
105. Postupak prema bilo kom od zahteva 100-104, naznačen time, što glifosat i herbicidi sulfoniluree su primenjeni zajedno ili su primenjeni odvojeno.
106. Postupak prema zahtevu 100, naznačen time, što je stupanj (b) izveden bar jednom pre stupnja (a).
107. Postupak prema bilo kom od zahteva 100-106, naznačen time, što herbicidna kompozicija obuhvata adjuvant na bazi amonijum sulfata.
108. Postupak prema zahtevu 107, naznačen time, što herbicidna kompozicija sadrži efikasnu količinu pirimidiniloksi(tio)benzoat herbicida.
109. Postupak prema zahtevu 108, naznačen time, što pirimidiniloksi(tio)benzoat herbicid obuhvata bispiribak ili njegove poljoprivredno prihvatljive soli.
110. Postupak prema zahtevu 54, 58, 61, 93, 98 ili 100, naznačen time, što je biljka useva dikotila.
111. Postupak prema zahtevu 110, naznačen tme, što je dikotila soja, kanola, suncokret, pamuk, alfaalfa, ukrasna biljka, voće, povrće, šećerna trksa iliArabidopsis.
112. Postupak prema zahtevu 54, 58, 61, 93, 98 ili 100, naznačen time, što je biljka useva monokotila.
113. Postupak prema zahtevu 112, naznačen time, što je monokotila kukuruz, pšenica, pirinač, ječam, sogrum, šećerna trska, Svvitchgrass ili raž.
RSP-2008/0076A 2005-08-24 2006-08-22 Kompozicije koje obezbeđuju otpornost na više herbicida i njihov postupak upotrebe RS20080076A (sr)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MEP-35/08A MEP3508A (xx) 2005-08-24 2006-08-22 Kompozicije koje obezbjeđuju otpornost na više hibricida i njihov postupak upotrebe

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US71085405P 2005-08-24 2005-08-24
US81701106P 2006-06-28 2006-06-28
PCT/US2006/032606 WO2007024782A2 (en) 2005-08-24 2006-08-22 Compositions providing tolerance to multiple herbicides and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS20080076A true RS20080076A (sr) 2009-07-15

Family

ID=37772256

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RSP-2008/0076A RS20080076A (sr) 2005-08-24 2006-08-22 Kompozicije koje obezbeđuju otpornost na više herbicida i njihov postupak upotrebe

Country Status (22)

Country Link
US (8) US7803992B2 (sr)
EP (2) EP1931791B1 (sr)
JP (1) JP2009505654A (sr)
KR (1) KR20080052606A (sr)
AP (1) AP2008004392A0 (sr)
AR (2) AR057091A1 (sr)
AT (1) ATE544861T1 (sr)
AU (1) AU2006283504B2 (sr)
BR (2) BRPI0615087A2 (sr)
CA (2) CA2625371C (sr)
CL (1) CL2009001635A1 (sr)
CR (1) CR9757A (sr)
EA (2) EA200800622A1 (sr)
EC (1) ECSP088304A (sr)
MA (1) MA29777B1 (sr)
ME (1) MEP3508A (sr)
MX (2) MX2008002615A (sr)
NZ (1) NZ568867A (sr)
RS (1) RS20080076A (sr)
TW (1) TW200730625A (sr)
UY (1) UY29761A1 (sr)
WO (2) WO2007024782A2 (sr)

Families Citing this family (660)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7462481B2 (en) * 2000-10-30 2008-12-09 Verdia, Inc. Glyphosate N-acetyltransferase (GAT) genes
NZ550322A (en) * 2004-03-30 2012-02-24 Monsanto Technology Llc Methods for controlling plant pathogens using glyphosate
US20070197474A1 (en) * 2004-03-30 2007-08-23 Clinton William P Methods for controlling plants pathogens using N-phosphonomethylglycine
US7405074B2 (en) * 2004-04-29 2008-07-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Glyphosate-N-acetyltransferase (GAT) genes
US8314290B2 (en) 2004-12-21 2012-11-20 Monsanto Technology Llc Temporal regulation of gene expression by MicroRNAs
EP1931791B1 (en) 2005-08-24 2012-02-08 Pioneer-Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions for the expression of a polynucleotide of interest
US7855326B2 (en) 2006-06-06 2010-12-21 Monsanto Technology Llc Methods for weed control using plants having dicamba-degrading enzymatic activity
US7851670B2 (en) 2006-06-06 2010-12-14 Monsanto Technology Llc Method for selection of transformed cells
US7968770B2 (en) 2006-06-28 2011-06-28 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods for improving yield using soybean event 3560.4.3.5
US7951995B2 (en) * 2006-06-28 2011-05-31 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Soybean event 3560.4.3.5 and compositions and methods for the identification and detection thereof
CN101600798A (zh) 2006-08-31 2009-12-09 孟山都技术有限公司 相位型小rna
US7939721B2 (en) 2006-10-25 2011-05-10 Monsanto Technology Llc Cropping systems for managing weeds
US7928296B2 (en) * 2006-10-30 2011-04-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize event DP-098140-6 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof
US7897846B2 (en) * 2006-10-30 2011-03-01 Pioneer Hi-Bred Int'l, Inc. Maize event DP-098140-6 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof
CL2007003744A1 (es) 2006-12-22 2008-07-11 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende un derivado 2-piridilmetilbenzamida y un compuesto insecticida; y metodo para controlar de forma curativa o preventiva hongos fitopatogenos de cultivos e insectos.
CL2007003743A1 (es) 2006-12-22 2008-07-11 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende fenamidona y un compuesto insecticida; y metodo para controlar de forma curativa o preventiva hongos fitopatogenos de cultivos e insectos.
US7838729B2 (en) * 2007-02-26 2010-11-23 Monsanto Technology Llc Chloroplast transit peptides for efficient targeting of DMO and uses thereof
EP1969929A1 (de) 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience AG Substituierte Phenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP1969931A1 (de) * 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Fluoalkylphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
US8080688B2 (en) 2007-03-12 2011-12-20 Bayer Cropscience Ag 3, 4-disubstituted phenoxyphenylamidines and use thereof as fungicides
EP1969930A1 (de) 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience AG Phenoxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
WO2008110279A1 (de) 2007-03-12 2008-09-18 Bayer Cropscience Ag Dihalogenphenoxyphenylamidine und deren verwendung als fungizide
EP1969934A1 (de) 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience AG 4-Cycloalkyl-oder 4-arylsubstituierte Phenoxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
JP2008237025A (ja) * 2007-03-23 2008-10-09 Research Institute Of Innovative Technology For The Earth 植物において根特異的に発現誘導するプロモーターおよびその利用
WO2008128639A1 (de) * 2007-04-19 2008-10-30 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Thiadiazolyloxyphenylamidine und deren verwendung als fungizide
US8097774B2 (en) * 2007-05-30 2012-01-17 Syngenta Participations Ag Cytochrome P450 genes conferring herbicide resistance
WO2009015064A2 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Gowan Co. Improved processes for the control of undesired vegetation
DE102007045955A1 (de) 2007-09-26 2009-04-09 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045953B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045957A1 (de) 2007-09-26 2009-04-09 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akarziden Eigenschaften
DE102007045919B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045956A1 (de) 2007-09-26 2009-04-09 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombination mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045920B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Synergistische Wirkstoffkombinationen
DE102007045922A1 (de) 2007-09-26 2009-04-02 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
EP2090168A1 (de) 2008-02-12 2009-08-19 Bayer CropScience AG Methode zur Verbesserung des Pflanzenwachstums
EP2052603A1 (de) 2007-10-24 2009-04-29 Bayer CropScience AG Verwendung des 2-lodo-N-[(4-methoxy-6-methyl-1,3,5-triazin-2-yl)carbamoyl] benzolsulfonamids und/oder dessen Salze zur Bekämpfung von unerwünschtem Pflanzenwuchs in ausgewählten Nutzpflanzenkulten oder Nichtkulturland
EP2052604A1 (de) 2007-10-24 2009-04-29 Bayer CropScience AG Salz des 2-lodo-N-[(4-methoxy-6-methyl-1,3,5-triazin-2-yl)carbamoyl] benzolsulfonamids,Verfahren zu deren Herstellung, sowie deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumregulatoren
US8097712B2 (en) 2007-11-07 2012-01-17 Beelogics Inc. Compositions for conferring tolerance to viral disease in social insects, and the use thereof
EP2064952A1 (en) 2007-11-29 2009-06-03 Bayer CropScience AG Method for reducing mycotoxin contamination in maize
EP2070411A1 (en) 2007-12-11 2009-06-17 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2070413A1 (en) 2007-12-11 2009-06-17 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2070415A1 (en) 2007-12-11 2009-06-17 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2070414A1 (en) 2007-12-11 2009-06-17 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2072506A1 (de) 2007-12-21 2009-06-24 Bayer CropScience AG Thiazolyloxyphenylamidine oder Thiadiazolyloxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
CN102026545A (zh) * 2008-02-12 2011-04-20 北美爱利思达生命科学有限责任公司 控制多余植物的方法
EP2092824A1 (de) 2008-02-25 2009-08-26 Bayer CropScience AG Heterocyclyl-Pyrimidine
EP2103615A1 (de) 2008-03-19 2009-09-23 Bayer CropScience AG 4'4'-Dioxaspiro-spirocyclisch substituierte Tetramate
EP2103216A1 (de) 2008-03-19 2009-09-23 Bayer CropScience AG Ausgewählte Salze des 3-(5,6-dihydro-1,4,2-dioxazin-3-yl)-N-[(4,6-dimethoxypyrimidin-2-yl)carbamoyl] pyridin-2-sulfonamids, Verfahren zur deren Herstellung, sowie deren Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren
BRPI0910837B1 (pt) 2008-04-30 2017-03-07 Bayer Cropscience Ag ésteres e tioésteres tiazol-4-carboxílicos, seus usos, e método e composição para controlar fungos fitopatogênicos prejudiciais
EP3120695A1 (en) * 2008-05-06 2017-01-25 Agriculture Victoria Services Pty Ltd Herbicide resistant barley
WO2009156074A2 (de) 2008-06-27 2009-12-30 Bayer Cropscience Ag Thiadiazolyloxyphenylamidine und deren verwendung als fungizide
EP2168434A1 (de) 2008-08-02 2010-03-31 Bayer CropScience AG Verwendung von Azolen zur Steigerung der Resistenz von Pflanzen oder Pflanzenteilen gegenüber abiotischem Stress
US9371564B2 (en) 2008-08-08 2016-06-21 Bayer Bioscience N.V. Methods for plant fiber characterization and identification
EP2321262A1 (de) 2008-08-14 2011-05-18 Bayer CropScience AG Insektizide 4-phenyl-1h-pyrazole
DE102008041695A1 (de) 2008-08-29 2010-03-04 Bayer Cropscience Ag Methoden zur Verbesserung des Pflanzenwachstums
EP2161259A1 (de) 2008-09-03 2010-03-10 Bayer CropScience AG 4-Halogenalkylsubstituierte Diaminopyrimidine als Fungizide
PE20100269A1 (es) * 2008-09-05 2010-04-30 TransAlgae Ltd Resistencia a herbicida para mantener cultivos axenicos por manipulacion genetica
US8367392B2 (en) * 2008-09-05 2013-02-05 Transalgae Ltd. Genetic transformation of algal and cyanobacteria cells by microporation
GB0816880D0 (en) * 2008-09-15 2008-10-22 Syngenta Ltd Improvements in or relating to organic compounds
CN102216296B (zh) * 2008-10-01 2015-03-18 拜耳作物科学公司 作为作物保护剂的杂环取代的噻唑类
PL2386203T3 (pl) * 2008-10-15 2014-05-30 Bayer Ip Gmbh Zastosowanie ditiino-tetrakarboksyimidów do zwalczania fitopatogennych grzybów
EA019439B1 (ru) * 2008-10-21 2014-03-31 Басф Се Применение карбоксамидов на культивируемых растениях
WO2010046419A2 (en) * 2008-10-22 2010-04-29 Basf Se Use of acetolactate synthase inhibitors on cultivated plants
WO2010046420A2 (en) * 2008-10-22 2010-04-29 Basf Se Use of protoporphyrinogen oxidase inhibitors on cultivated plants
WO2010046423A2 (en) * 2008-10-22 2010-04-29 Basf Se Use of sulfonylurea herbicides on cultivated plants
EP2184273A1 (de) 2008-11-05 2010-05-12 Bayer CropScience AG Halogen-substituierte Verbindungen als Pestizide
TW201031327A (en) 2008-11-14 2010-09-01 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations having insecticidal and acaricidal properties
EP2201838A1 (de) 2008-12-05 2010-06-30 Bayer CropScience AG Wirkstoff-Nützlings-Kombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
WO2010066353A1 (de) 2008-12-11 2010-06-17 Bayer Cropscience Ag Thiazolyoximether und -hydrazone asl pflanzenschutzmittel
WO2010069495A1 (de) * 2008-12-18 2010-06-24 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Atpenine
EP2198709A1 (de) 2008-12-19 2010-06-23 Bayer CropScience AG Verfahren zur Bekämpfung resistenter tierischer Schädlinge
EP2198710A1 (de) 2008-12-19 2010-06-23 Bayer CropScience AG Verwendung von 5-Pyridin-4yl-(1,3)Thiazole zur Bekämpfung phytopathogener Pilze
EP2223602A1 (de) 2009-02-23 2010-09-01 Bayer CropScience AG Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials genetisch modifizierter Pflanzen
EP2204094A1 (en) 2008-12-29 2010-07-07 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants Introduction
AU2009335333B2 (en) 2008-12-29 2015-04-09 Bayer Intellectual Property Gmbh Method for improved use of the production potential of genetically modified plants
EP2039770A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
EP2039772A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants introduction
EP2039771A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
WO2010081645A2 (de) 2009-01-15 2010-07-22 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Fungizide wirkstoffkombinationen
WO2010081646A2 (de) 2009-01-15 2010-07-22 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Fungizide wirkstoffkombinationen
WO2010081689A2 (en) 2009-01-19 2010-07-22 Bayer Cropscience Ag Cyclic diones and their use as insecticides, acaricides and/or fungicides
EP2389442A4 (en) * 2009-01-22 2012-07-04 Syngenta Participations Ag MUTED HYDROXYLPHENYLPYRUVATE DIOXYGENASE POLYPEPTIDES AND METHOD OF THEIR USE
EP2227951A1 (de) 2009-01-23 2010-09-15 Bayer CropScience AG Verwendung von Enaminocarbonylverbindungen zur Bekämpfung von durch Insekten übertragenen Viren
JP5592398B2 (ja) 2009-01-28 2014-09-17 バイエル・クロップサイエンス・アーゲー 殺菌剤ｎ−シクロアルキル−ｎ−二環式メチレン−カルボキサミド誘導体
AR075126A1 (es) 2009-01-29 2011-03-09 Bayer Cropscience Ag Metodo para el mejor uso del potencial de produccion de plantas transgenicas
EP2223917A1 (de) 2009-02-02 2010-09-01 Bayer CropScience AG Isothiazolyloxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
CN102361559B (zh) 2009-02-03 2013-11-06 拜尔农作物科学股份公司 含硫杂芳族酸类似物作为杀细菌剂的用途
EP2218717A1 (en) 2009-02-17 2010-08-18 Bayer CropScience AG Fungicidal N-((HET)Arylethyl)thiocarboxamide derivatives
CN102317259B (zh) 2009-02-17 2015-12-02 拜尔农科股份公司 杀真菌n-(苯基环烷基)羧酰胺，n-(苄基环烷基)羧酰胺和硫代羧酰胺衍生物
ES2344185B1 (es) * 2009-02-18 2011-08-11 Consejo Superior De Investigaciones Cientificas (Csic) (95%) Uso de una secuencia nucleotidica que regula el momento de la floracion, plantas que la expresan y metodo para producirlas.
TW201031331A (en) 2009-02-19 2010-09-01 Bayer Cropscience Ag Pesticide composition comprising a tetrazolyloxime derivative and a fungicide or an insecticide active substance
DE102009001469A1 (de) 2009-03-11 2009-09-24 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
ES2632567T3 (es) 2009-03-11 2017-09-14 Bayer Intellectual Property Gmbh Cetoenoles sustituidos con haloalquilmetilenoxi-fenilo
DE102010000662A1 (de) 2009-03-18 2010-10-21 Bayer Cropscience Ag Aminopropylthiazol-Derivate als Fungizide
DE102009001681A1 (de) 2009-03-20 2010-09-23 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
DE102009001728A1 (de) 2009-03-23 2010-09-30 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
DE102009001732A1 (de) 2009-03-23 2010-09-30 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
DE102009001730A1 (de) 2009-03-23 2010-09-30 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
EP2410849A1 (de) 2009-03-25 2012-02-01 Bayer CropScience AG Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden eigenschaften
EP2232995A1 (de) 2009-03-25 2010-09-29 Bayer CropScience AG Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
BRPI0924436B1 (pt) 2009-03-25 2017-06-06 Bayer Cropscience Ag combinações de substâncias ativas com propriedades inseticidas e acaricidas e seu uso, bem como método para o controle de pragas e animais
EP2410850A2 (de) 2009-03-25 2012-02-01 Bayer Cropscience AG Synergistische wirkstoffkombinationen
US8828906B2 (en) 2009-03-25 2014-09-09 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations having insecticidal and acaricidal properties
EP2239331A1 (en) 2009-04-07 2010-10-13 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
US8835657B2 (en) 2009-05-06 2014-09-16 Bayer Cropscience Ag Cyclopentanedione compounds and their use as insecticides, acaricides and/or fungicides
EP2251331A1 (en) 2009-05-15 2010-11-17 Bayer CropScience AG Fungicide pyrazole carboxamides derivatives
AR076839A1 (es) 2009-05-15 2011-07-13 Bayer Cropscience Ag Derivados fungicidas de pirazol carboxamidas
WO2010135324A1 (en) 2009-05-18 2010-11-25 Monsanto Technology Llc Use of glyphosate for disease suppression and yield enhancement in soybean
WO2010133337A1 (de) 2009-05-19 2010-11-25 Bayer Cropscience Ag Herbizide spiroheterocyclische tetronsäurederivate
EP2253617A1 (de) 2009-05-20 2010-11-24 Bayer CropScience AG Halogen-substituierte Verbindungen als Pestizide
EP2255626A1 (de) 2009-05-27 2010-12-01 Bayer CropScience AG Verwendung von Succinat Dehydrogenase Inhibitoren zur Steigerung der Resistenz von Pflanzen oder Pflanzenteilen gegenüber abiotischem Stress
CN105165832B (zh) 2009-06-02 2019-08-13 拜耳知识产权有限责任公司 琥珀酸脱氢酶抑制剂在控制核盘菌属真菌中的应用
EP2264011A1 (de) 2009-06-03 2010-12-22 Bayer CropScience AG Heteroarylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP2264012A1 (de) 2009-06-03 2010-12-22 Bayer CropScience AG Heteroarylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP2264010A1 (de) 2009-06-03 2010-12-22 Bayer CropScience AG Hetarylamidine
AU2010259295B2 (en) 2009-06-10 2015-05-07 Temasek Life Sciences Laboratory Limited Virus induced gene silencing (VIGS) for functional analysis of genes in cotton.
AU2010260518A1 (en) * 2009-06-15 2011-11-03 Agragen Llc Herbicide resistant Camelina sativa
WO2010145789A1 (en) 2009-06-18 2010-12-23 Bayer Cropscience Ag Propargyloxybenzamide derivatives
EP2272846A1 (de) 2009-06-23 2011-01-12 Bayer CropScience AG Thiazolylpiperidin Derivate als Fungizide
EP2277868A1 (de) 2009-06-24 2011-01-26 Bayer CropScience AG Phenyloxy(thio)phenylamidbenzoxa(thia)zole
EP2277869A1 (de) 2009-06-24 2011-01-26 Bayer CropScience AG Cycloalkylamidbenzoxa(thia)zole als Fungizide
EP2277870A1 (de) 2009-06-24 2011-01-26 Bayer CropScience AG Substituierte Benzoxa(thia)zole
US20120288914A1 (en) 2009-07-07 2012-11-15 Pioneer Hi Bred International Inc. Crystal structure of glyphosate acetyltransferase (glyat) and methods of use
EA021808B1 (ru) 2009-07-08 2015-09-30 Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх Производные фенил(окси/тио)алканола, способ борьбы с фитопатогенными вредными грибами, средство для борьбы с фитопатогенными вредными грибами и способы получения производных фенил(окси/тио)алканола
BR112012000170A2 (pt) 2009-07-08 2019-09-24 Bayer Cropscience Ag derivados de fenil (oxi/tio) alcanol substituídos
AU2010272872B2 (en) 2009-07-16 2014-08-28 Bayer Intellectual Property Gmbh Synergistic active substance combinations containing phenyl triazoles
WO2011006604A1 (de) 2009-07-17 2011-01-20 Bayer Cropscience Ag Substituierte aminothiazole und deren verwendung als fungizide
WO2011015524A2 (en) 2009-08-03 2011-02-10 Bayer Cropscience Ag Fungicide heterocycles derivatives
US11096345B2 (en) 2009-09-01 2021-08-24 Basf Se Method for treating post-emergent rice
TW201113376A (en) * 2009-09-01 2011-04-16 Basf Agrochemical Products Bv Herbicide-tolerant plants
EP2292094A1 (en) 2009-09-02 2011-03-09 Bayer CropScience AG Active compound combinations
AR077956A1 (es) 2009-09-14 2011-10-05 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos
WO2011032656A1 (de) 2009-09-18 2011-03-24 Bayer Cropscience Ag 5-fluor-2-thio-substituierte pyrimidin-derivate
US20110081706A1 (en) * 2009-10-02 2011-04-07 TransAlgae Ltd Method and system for efficient harvesting of microalgae and cyanobacteria
AR078502A1 (es) 2009-10-02 2011-11-09 Pioneer Hi Bred Int Regulacion hacia abajo de acc (acido 1-aminociclopropano-1-carboxilico) sintasa para el rendimiento mejorado de plantas
EP2308866A1 (de) 2009-10-09 2011-04-13 Bayer CropScience AG Phenylpyri(mi)dinylpyrazole und ihre Verwendung als Fungizide
US8962584B2 (en) 2009-10-14 2015-02-24 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. Compositions for controlling Varroa mites in bees
JP6027442B2 (ja) 2009-10-15 2016-11-16 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 活性化合物の組み合わせ
JP5940452B2 (ja) 2009-10-16 2016-06-29 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 殺菌剤としてのアミノプロペン酸化合物
WO2011051243A1 (en) 2009-10-29 2011-05-05 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations
BR112012010242B1 (pt) 2009-10-30 2018-03-20 Bayer Intellectual Property Gmbh Derivados de heteroarilpiperidina e heteroarilpiperazina
WO2011051198A2 (de) 2009-10-30 2011-05-05 Bayer Cropscience Ag Pyridin-derivate als pflanzenschutzmittel
MX2012005638A (es) 2009-11-17 2012-06-13 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos.
US8581046B2 (en) 2010-11-24 2013-11-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Brassica gat event DP-073496-4 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof
EP2343280A1 (en) 2009-12-10 2011-07-13 Bayer CropScience AG Fungicide quinoline derivatives
WO2011082941A1 (de) 2009-12-16 2011-07-14 Bayer Cropscience Ag Benzylsubstituierte thiadiazolyloxyphenylamidiniumsalze als fungizide
EP2515649A2 (en) 2009-12-16 2012-10-31 Bayer Intellectual Property GmbH Active compound combinations
PL2516426T3 (pl) 2009-12-21 2016-03-31 Bayer Cropscience Ag Bis(difluorometylo)pirazole jako fungicydy
CN102762551A (zh) 2009-12-21 2012-10-31 拜尔农作物科学股份公司 噻吩基吡(嘧)啶基吡唑及其用于防治植物致病菌的用途
AR079883A1 (es) 2009-12-23 2012-02-29 Bayer Cropscience Ag Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd
UY33140A (es) 2009-12-23 2011-07-29 Bayer Cropscience Ag Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd
CN102762724A (zh) 2009-12-23 2012-10-31 拜尔知识产权有限公司 对hppd抑制剂型除草剂耐受的植物
CA2785225C (en) 2009-12-23 2019-01-22 Bayer Intellectual Property Gmbh Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides.
CA2785126C (en) 2009-12-23 2019-07-02 Bayer Intellectual Property Gmbh Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides
US9000012B2 (en) 2009-12-28 2015-04-07 Bayer Cropscience Ag Fungicide hydroximoyl-heterocycles derivatives
MX2012007540A (es) 2009-12-28 2012-07-23 Bayer Cropscience Ag Derivados de hidroximoil-tetrazol fungicidas.
US8796463B2 (en) 2009-12-28 2014-08-05 Bayer Cropscience Ag Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
NZ601341A (en) 2010-01-22 2014-02-28 Bayer Ip Gmbh Acaricide and/or insecticide active substance combinations
US9611485B2 (en) 2010-01-26 2017-04-04 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Polynucleotide and polypeptide sequences associated with herbicide tolerance
JP5892949B2 (ja) 2010-02-10 2016-03-23 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ ビフェニル置換環状ケトエノール類
ES2545113T3 (es) 2010-02-10 2015-09-08 Bayer Intellectual Property Gmbh Derivados de ácido tetrámico sustituidos de manera espiroheterocíclica
CN102843905B (zh) * 2010-02-19 2015-04-22 陶氏益农公司 包含某些吡啶羧酸和某些杀真菌剂的除草剂/杀真菌剂协同组合物
WO2011107504A1 (de) 2010-03-04 2011-09-09 Bayer Cropscience Ag Fluoralkyl- substituierte 2 -amidobenzimidazole und deren verwendung zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
WO2011107445A1 (de) 2010-03-04 2011-09-09 Bayer Cropscience Ag Hydrat und wasserfreie kristallform des natriumsalzes des 2-iodo-n-[(4-methoxy-6-methyl-1,3,5-triazin-2-yl)carbamoyl]benzolsulfonamids, verfahren zu deren herstellung, sowie deren verwendung als herbizide und pflanzenwachstumsregulatoren
UA108638C2 (uk) 2010-03-04 2015-05-25 Застосування солей імідів малеїнової кислоти для боротьби з фітопатогенними грибами
PL2545182T4 (pl) 2010-03-08 2017-11-30 Monsanto Technology Llc Cząsteczki polinukeotydu do regulacji genów w roślinach
WO2011114232A2 (en) * 2010-03-17 2011-09-22 Basf Agrochemical Products B.V. Herbicide-tolerant plants
BR112012023551A2 (pt) 2010-03-18 2015-09-15 Bayer Ip Gmbh aril e hetaril sulfonamidas como agentes ativos contra estresse abiótico em plantas
WO2011117184A1 (de) 2010-03-24 2011-09-29 Bayer Cropscience Ag Fludioxonil-derivate
BR112012025714A2 (pt) 2010-04-06 2015-09-08 Bayer Ip Gmbh uso de ácido 4-fenilbutírico e/ou sais do mesmo para aumentar a tolerância a estresse de plantas
AR081810A1 (es) 2010-04-07 2012-10-24 Bayer Cropscience Ag Piridinilpirazoles biciclicos
WO2011124553A2 (de) 2010-04-09 2011-10-13 Bayer Cropscience Ag Verwendung von derivaten der (1-cyancyclopropyl)phenylphosphinsäure, deren ester und/oder deren salze zur steigerung der toleranz in pflanzen gegenüber abiotischem stress
EP2377867A1 (de) 2010-04-14 2011-10-19 Bayer CropScience AG Dithiinopyridazinon-Derivate
PH12012502061A1 (en) 2010-04-14 2017-08-09 Bayer Ip Gmbh Active compound combinations
ES2483132T3 (es) 2010-04-14 2014-08-05 Bayer Cropscience Ag Derivados de tienoditiina como fungicidas
WO2011128301A1 (de) 2010-04-14 2011-10-20 Bayer Cropscience Ag Dithiin-derivate als fungizide
CN102947314B (zh) 2010-04-14 2015-08-26 拜尔农作物科学股份公司 二噻英并哒嗪二酮衍生物
CA2796167A1 (en) 2010-04-14 2011-10-20 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations
ES2613066T3 (es) 2010-04-28 2017-05-22 Bayer Intellectual Property Gmbh Derivados de cetoheteroarilpiperidina y -piperazina como fungicidas
WO2011134911A2 (en) 2010-04-28 2011-11-03 Bayer Cropscience Ag Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
EP2563784A1 (en) 2010-04-28 2013-03-06 Bayer CropScience AG Fungicide hydroximoyl-heterocycles derivatives
CN102971309A (zh) 2010-04-28 2013-03-13 拜尔农科股份公司 杀真菌剂肟基-杂环衍生物
US8815775B2 (en) 2010-05-18 2014-08-26 Bayer Cropscience Ag Bis(difluoromethyl)pyrazoles as fungicides
CA2800634A1 (en) 2010-05-27 2011-12-01 Bayer Intellectual Property Gmbh Heterocyclic alkanol derivatives as fungicides
EP2576526A1 (de) 2010-05-27 2013-04-10 Bayer Intellectual Property GmbH Heterocyclische thiosubstituierte alkanolderivate als fungizide
EA201291261A1 (ru) 2010-05-27 2013-06-28 Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх Гетероциклические производные алканола в качестве фунгицидов
EA021116B1 (ru) 2010-05-27 2015-04-30 Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх Гетероциклические производные алканолов в качестве фунгицидов
CN103025723A (zh) 2010-05-27 2013-04-03 拜尔农作物科学股份公司 作为杀真菌剂的吡啶基羧酸衍生物
AU2011257340B2 (en) 2010-05-27 2015-07-23 Bayer Intellectual Property Gmbh Heterocyclic alkanol derivatives as fungicides
UA110703C2 (uk) 2010-06-03 2016-02-10 Байєр Кропсайнс Аг Фунгіцидні похідні n-[(тризаміщений силіл)метил]-карбоксаміду
CA2796194A1 (en) 2010-06-03 2011-12-08 Bayer Cropscience Ag N-[(het)arylalkyl)] pyrazole (thio)carboxamides and their heterosubstituted analogues
MX2012013897A (es) 2010-06-03 2012-12-17 Bayer Cropscience Ag N[(het)ariletil)]pirazol (tio)carboxamidas y sus analogos heterosustituidos.
AU2011264074B2 (en) 2010-06-09 2015-01-22 Bayer Cropscience Nv Methods and means to modify a plant genome at a nucleotide sequence commonly used in plant genome engineering
RU2639512C2 (ru) 2010-06-09 2017-12-21 Байер Кропсайенс Нв Способы и средство модификации растительного генома в нуклеотидной последовательности, широко используемой в геномной инженерии растений
WO2011161035A1 (de) 2010-06-22 2011-12-29 Bayer Cropscience Ag 3-aryl-4-(2-thienylmethylen)-isoxazol-5(4h)-one als fungizide
WO2011161034A1 (de) 2010-06-22 2011-12-29 Bayer Cropscience Ag 3-aryl-4-(2,6-dimethylbenzyliden)-isoxazol-5(4h)-one als fungizide
PH12012502551A1 (en) 2010-06-28 2017-08-23 Bayer Ip Gmbh Heterocyclic compounds as agents for pest control
KR20130041225A (ko) 2010-07-20 2013-04-24 바이엘 크롭사이언스 아게 항진균제로서의 벤조시클로알켄
EP3058824B1 (en) 2010-08-05 2018-08-01 Bayer CropScience AG Active compound combinations comprising prothioconazole and fluxapyroxad for controlling corn diseases
US20120122928A1 (en) 2010-08-11 2012-05-17 Bayer Cropscience Ag Heteroarylpiperidine and -Piperazine Derivatives as Fungicides
US9187762B2 (en) 2010-08-13 2015-11-17 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods comprising sequences having hydroxyphenylpyruvate dioxygenase (HPPD) activity
US8759527B2 (en) 2010-08-25 2014-06-24 Bayer Cropscience Ag Heteroarylpiperidine and -piperazine derivatives as fungicides
EP2423210A1 (de) 2010-08-25 2012-02-29 Bayer CropScience AG Heteroarylpiperidin- und -piperazinderivate als Fungizide
KR20130100142A (ko) 2010-08-26 2013-09-09 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 5-요오도트리아졸 유도체
AU2011298423B2 (en) 2010-09-03 2015-11-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Substituted fused pyrimidinones and dihydropyrimidinones
BR112013006611B1 (pt) 2010-09-22 2021-01-19 Bayer Intellectual Property Gmbh método para o controle do nematoide de cisto de soja (heterodera glycines) infestando uma planta de soja resistente a nematoide compreendendo a aplicação de n- {2- [3-cloro-5- (trifluorometil)-2-piridinil]etil}-2-(trifluorometil) benzamida (fluorpiram
EP2460406A1 (en) 2010-12-01 2012-06-06 Bayer CropScience AG Use of fluopyram for controlling nematodes in nematode resistant crops
WO2012045726A2 (en) 2010-10-07 2012-04-12 Bayer Cropscience Ag 5-heteroarylimino-1,2,3-dithiazoles
US9408391B2 (en) 2010-10-07 2016-08-09 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicide composition comprising a tetrazolyloxime derivative and a thiazolylpiperidine derivative
HRP20171866T4 (hr) 2010-10-15 2021-11-26 Bayer Intellectual Property Gmbh Uporaba herbicida inhibitora als za kontrolu neželjene vegetacije kod biljaka beta vulgaris koje su razvile toleranciju na herbicide s inhibitorom als
MX2013004286A (es) 2010-10-21 2013-06-05 Bayer Ip Gmbh 1(heterociclico carbonil) piperidinas.
UA107865C2 (ru) 2010-10-21 2015-02-25 Байєр Інтелекчуал Проперті Гмбх Гетероциклические карбоксамиды
BR112013010497B1 (pt) 2010-10-27 2018-07-17 Bayer Intellectual Property Gmbh derivados de heteroaril - piperidina e - piperazina enquanto fungicidas, composição os compreendendo, bem como processo para a produção de composições para controle de fungos fitopatogênicos nocivos e método para controle de fungos fitopatogênicos nocivos
BR112013010683B1 (pt) 2010-11-02 2018-06-26 Bayer Intellectual Property Gmbh Composto, composição fungicida e método para controlar fungos fitopatogênicos de safras
EP2669370B1 (en) 2010-11-10 2016-06-01 Bayer CropScience AG HPPD variants and methods of use
CN107266368A (zh) 2010-11-15 2017-10-20 拜耳知识产权有限责任公司 5‑卤代吡唑甲酰胺
WO2012065944A1 (en) 2010-11-15 2012-05-24 Bayer Cropscience Ag N-aryl pyrazole(thio)carboxamides
US20130231303A1 (en) 2010-11-15 2013-09-05 Bayer Intellectual Property Gmbh 5-halogenopyrazole(thio)carboxamides
US8575431B2 (en) 2010-11-24 2013-11-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Brassica GAT event DP-061061-7 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof
EP2460407A1 (de) 2010-12-01 2012-06-06 Bayer CropScience AG Wirkstoffkombinationen umfassend Pyridylethylbenzamide und weitere Wirkstoffe
CN103281900A (zh) 2010-12-01 2013-09-04 拜耳知识产权有限责任公司 氟吡菌酰胺用于防治作物中的线虫以及提高产量的用途
CN103561564B (zh) 2010-12-03 2016-11-16 陶氏益农公司 叠加的除草剂耐受性事件8264.44.06.1、相关转基因大豆系、及其检测
JP2014502611A (ja) 2010-12-29 2014-02-03 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 殺菌剤ヒドロキシモイル−テトラゾール誘導体
EP2474542A1 (en) 2010-12-29 2012-07-11 Bayer CropScience AG Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
EP2471363A1 (de) 2010-12-30 2012-07-04 Bayer CropScience AG Verwendung von Aryl-, Heteroaryl- und Benzylsulfonamidocarbonsäuren, -carbonsäureestern, -carbonsäureamiden und -carbonitrilen oder deren Salze zur Steigerung der Stresstoleranz in Pflanzen
BR112013018053A2 (pt) * 2011-01-14 2016-07-12 Dow Agrosciences Llc inibição de crescimento de algodão com penoxsulam
BR112013019667B1 (pt) 2011-02-01 2019-07-02 Bayer Intellectual Property Gmbh Compostos derivados de heteroaril-piperidina e -piperazina, seus usos, composição, processos de produção de compostos e de composições, método para o controle de fungos fitopatogênicos prejudiciais
US8946124B2 (en) 2011-02-17 2015-02-03 Bayer Intellectual Property Gmbh Substituted 3-(biphenyl-3-yl)-8,8-difluoro-4-hydroxy-1-azaspiro[4.5]dec-3-en-2-ones for therapy and halogen-substituted spirocyclic ketoenols
EP2494867A1 (de) 2011-03-01 2012-09-05 Bayer CropScience AG Halogen-substituierte Verbindungen in Kombination mit Fungiziden
KR101789527B1 (ko) 2011-03-01 2017-10-25 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 2-아실옥시피롤린-4-온
EP2683239A1 (en) 2011-03-10 2014-01-15 Bayer Intellectual Property GmbH Use of lipochito-oligosaccharide compounds for safeguarding seed safety of treated seeds
EP2499911A1 (en) 2011-03-11 2012-09-19 Bayer Cropscience AG Active compound combinations comprising fenhexamid
JP2014509599A (ja) 2011-03-14 2014-04-21 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 殺菌剤ヒドロキシモイル−テトラゾール誘導体
MX350121B (es) 2011-03-18 2017-08-28 Bayer Ip Gmbh Derivados de n-(3-carbamoilfenil)-1h-pirazol-5-carboxamida y el uso de los mismos para el control de plagas de animales.
HUE038497T2 (hu) 2011-03-23 2018-10-29 Bayer Ip Gmbh Hatóanyag-kombinációk
MX2013010908A (es) 2011-03-25 2013-10-07 Bayer Ip Gmbh Uso de n-(tetrazol-4-il)- o n-(triazol-3-il)arilcarboxamidas o de sus sales para combatir plantas no deseadas en areas de plantas de cultivo trangenicas tolerantes a los herbicidas inhibidores de la hppd.
MX356792B (es) * 2011-03-25 2018-06-12 Monsanto Technology Llc Elementos de regulacion de plantas y sus usos.
US20140066307A1 (en) 2011-03-25 2014-03-06 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of n-(1,2,5-oxadiazol-3-yl)benzamides for controlling unwanted plants in areas of transgenic crop plants being tolerant to hppd inhibitor herbicides
JP2014508792A (ja) 2011-03-25 2014-04-10 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 活性化合物の組み合わせ
EP2694494A1 (en) 2011-04-08 2014-02-12 Bayer Intellectual Property GmbH Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
AR085587A1 (es) 2011-04-13 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos
AR085588A1 (es) 2011-04-13 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos
EP2510787A1 (en) 2011-04-15 2012-10-17 Bayer Cropscience AG Propenoates as fungicides
AR090010A1 (es) 2011-04-15 2014-10-15 Bayer Cropscience Ag 5-(ciclohex-2-en-1-il)-penta-2,4-dienos y 5-(ciclohex-2-en-1-il)-pent-2-en-4-inos sustituidos como principios activos contra el estres abiotico de las plantas, usos y metodos de tratamiento
AR085568A1 (es) 2011-04-15 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag 5-(biciclo[4.1.0]hept-3-en-2-il)-penta-2,4-dienos y 5-(biciclo[4.1.0]hept-3-en-2-il)-pent-2-en-4-inos sustituidos como principios activos contra el estres abiotico de las plantas
AR085585A1 (es) 2011-04-15 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag Vinil- y alquinilciclohexanoles sustituidos como principios activos contra estres abiotico de plantas
EP2511255A1 (de) 2011-04-15 2012-10-17 Bayer CropScience AG Substituierte Prop-2-in-1-ol- und Prop-2-en-1-ol-Derivate
HRP20160061T1 (hr) 2011-04-22 2016-02-12 Bayer Intellectual Property Gmbh Kombinacije aktivnih spojeva koje sadrže derivat karboksamida i fungicidni spoj
CN103502269A (zh) 2011-04-29 2014-01-08 先锋国际良种公司 下调同源域-亮氨酸拉链i类同源盒基因以改进植物性能
EP2524599A1 (en) 2011-05-17 2012-11-21 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2524600A1 (en) 2011-05-17 2012-11-21 Bayer CropScience AG Active compound combinations comprising phosphorous acid or a derivative thereof and Tebuconazole or Myclobutanil
EP2524601A1 (en) 2011-05-17 2012-11-21 Bayer CropScience AG Active compound combinations comprising a phosphorous acid derivative and cyazofamid
PL2709454T3 (pl) 2011-05-17 2018-01-31 Bayer Ip Gmbh Kombinacje związków aktywnych
EP2524598A1 (en) 2011-05-17 2012-11-21 Bayer CropScience AG Active compound combinations comprising dithianon
CN103597082B (zh) 2011-06-06 2017-09-15 拜尔作物科学公司 用于在预选位点修饰植物基因组的方法和手段
EP2532233A1 (en) 2011-06-07 2012-12-12 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2720543B1 (en) 2011-06-14 2018-08-22 Bayer CropScience AG Use of an enaminocarbonyl compound in combination with a biological control agent
WO2012175513A1 (en) 2011-06-20 2012-12-27 Bayer Intellectual Property Gmbh Thienylpyri(mi)dinylpyrazole
EP2540165A1 (en) 2011-06-30 2013-01-02 Bayer CropScience AG Use of a halogenated pesticide in combination with a biological pest control agent
EP2729007A1 (de) 2011-07-04 2014-05-14 Bayer Intellectual Property GmbH Verwendung substituierter isochinolinone, isochinolindione, isochinolintrione und dihydroisochinolinone oder jeweils deren salze als wirkstoffe gegen abiotischen pflanzenstress
US9303270B2 (en) 2011-07-22 2016-04-05 Ricetec Aktiengesellschaft Rice resistant to HPPD and accase inhibiting herbicides
AU2012293636B2 (en) 2011-08-10 2015-12-03 Bayer Intellectual Property Gmbh Active compound combinations comprising specific tetramic acid derivatives
JP6042433B2 (ja) 2011-08-11 2016-12-14 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ １，２，４−トリアゾリル置換されたケトエノール類
BR112014002988A2 (pt) 2011-08-12 2017-03-01 Bayer Cropscience Nv expressão específica de célula de proteção de transgenes em algodão
CN107287234A (zh) 2011-08-22 2017-10-24 拜尔作物科学公司 修饰植物基因组的方法和手段
EP2748161A1 (en) 2011-08-22 2014-07-02 Bayer Intellectual Property GmbH Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
EP2561759A1 (en) 2011-08-26 2013-02-27 Bayer Cropscience AG Fluoroalkyl-substituted 2-amidobenzimidazoles and their effect on plant growth
CN103781353B (zh) 2011-09-09 2016-10-19 拜耳知识产权有限责任公司 用于改良植物产量的酰基高丝氨酸内酯衍生物
MX347562B (es) 2011-09-12 2017-05-03 Bayer Ip Gmbh Derivados fungicidas de 3-fenil[(heterociclilmetoxi)imino]metil}-1 ,2,4-oxadiazol-5(4h)-ona sustituidos en 4.
US10760086B2 (en) 2011-09-13 2020-09-01 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
UA115535C2 (uk) 2011-09-13 2017-11-27 Монсанто Текнолоджи Ллс Спосіб та композиція для боротьби з бур'янами (варіанти)
US9840715B1 (en) 2011-09-13 2017-12-12 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for delaying senescence and improving disease tolerance and yield in plants
CA2848680C (en) 2011-09-13 2020-05-19 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
US10806146B2 (en) 2011-09-13 2020-10-20 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
US10829828B2 (en) 2011-09-13 2020-11-10 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
MX377067B (es) 2011-09-13 2025-03-07 Monsanto Technology Llc Métodos y composiciones para el control de malezas.
WO2013040005A1 (en) 2011-09-13 2013-03-21 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
EP2755988B1 (en) 2011-09-13 2018-08-22 Monsanto Technology LLC Methods and compositions for weed control
US9920326B1 (en) 2011-09-14 2018-03-20 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for increasing invertase activity in plants
IN2014CN01860A (sr) 2011-09-16 2015-05-29 Bayer Ip Gmbh
US10301257B2 (en) 2011-09-16 2019-05-28 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of acylsulfonamides for improving plant yield
CA2848622A1 (en) 2011-09-16 2013-03-21 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of 5-phenyl- or 5-benzyl-2-isoxazoline-3-carboxylates for improving plant yield
BR112014006940A2 (pt) 2011-09-23 2017-04-04 Bayer Ip Gmbh uso de derivados de ácido 1-fenilpirazol-3-carboxílico 4-substituído como agentes contra estresse abiótico em plantas
US20150082495A1 (en) 2011-10-04 2015-03-19 Bayer Intellectual Property Gmbh RNAi FOR THE CONTROL OF FUNGI AND OOMYCETES BY INHIBITING SACCHAROPINE DEHYDROGENASE GENE
WO2013050434A1 (en) 2011-10-06 2013-04-11 Bayer Intellectual Property Gmbh Heterocyclylpyri(mi)dinylpyrazole
WO2013050324A1 (de) 2011-10-06 2013-04-11 Bayer Intellectual Property Gmbh Abiotischen pflanzenstress-reduzierende kombination enthaltend 4- phenylbuttersäure (4-pba) oder eines ihrer salze (komponente (a)) und eine oder mehrere ausgewählte weitere agronomisch wirksame verbindungen (komponente(n) (b)
UA114490C2 (uk) 2011-10-06 2017-06-26 Байєр Інтеллектуал Проперті Гмбх Гетероциклілпіри(mі)динілпіразоли як фунгіциди
MX2014005976A (es) 2011-11-21 2014-08-27 Bayer Ip Gmbh Derivados de n-[(silil trisustituido)metil]-carboxamida fungicidas.
CA2857438A1 (en) 2011-11-30 2013-06-06 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicidal n-bicycloalkyl and n-tricycloalkyl (thio)carboxamide derivatives
CA2859467C (en) 2011-12-19 2019-10-01 Bayer Cropscience Ag Use of anthranilic acid diamide derivatives for pest control in transgenic crops
EP2606732A1 (en) 2011-12-19 2013-06-26 Bayer CropScience AG Use of an anthranilic diamide derivatives with heteroaromatic and heterocyclic substituents in combination with a biological control agent
US9204645B2 (en) 2011-12-20 2015-12-08 Bayer Intellectual Property Gmbh Insecticidal aromatic amides
ES2647442T3 (es) 2011-12-27 2017-12-21 Bayer Intellectual Property Gmbh Compuestos intermedios para la preparación de derivados de heteroarilpiperidina y de heteroarilpiperazina como fungicidas
MX343818B (es) 2011-12-29 2016-11-24 Bayer Ip Gmbh Derivados de 3-[(1,3-tiazol-4-ilmetoxiimino)(fenil)metil]-2-sustit uido-1,2,4-oxadiazol-5(2h)-ona fungicidas.
MX343871B (es) 2011-12-29 2016-11-25 Bayer Ip Gmbh Derivados de 3-[(piridin-2-ilmetoxiimino)(fenil)metil]-2-sustituid o-1,2,4-oxadiazol-5(2h)-ona fungicidas.
US9204638B2 (en) 2011-12-30 2015-12-08 Plant Health Care, Inc. Method for increasing plant yield, and yield improving compositions
AU2013209738A1 (en) 2012-01-17 2014-08-07 Australian Center For Plant Functional Genomics, Pty, Ltd Plant transcription factors, promoters and uses thereof
EP2806739A1 (en) 2012-01-25 2014-12-03 Bayer Intellectual Property GmbH Active compound combinations containing fluopyram and biological control agent
US9433214B2 (en) 2012-01-25 2016-09-06 Bayer Intellectual Property Gmbh Active compounds combination containing fluopyram Bacillus and biologically control agent
EP2622961A1 (en) 2012-02-02 2013-08-07 Bayer CropScience AG Acive compound combinations
PT2816897T (pt) 2012-02-22 2018-04-02 Bayer Cropscience Ag Utilização de fluopiram para controlar doenças da madeira em uvas
PE20190342A1 (es) 2012-02-27 2019-03-07 Bayer Ip Gmbh Combinaciones de compuestos activos
WO2013138358A1 (en) 2012-03-13 2013-09-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Genetic reduction of male fertility in plants
WO2013138309A1 (en) 2012-03-13 2013-09-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Genetic reduction of male fertility in plants
WO2013139949A1 (en) 2012-03-23 2013-09-26 Bayer Intellectual Property Gmbh Compositions comprising a strigolactame compound for enhanced plant growth and yield
WO2013153143A1 (en) 2012-04-12 2013-10-17 Bayer Cropscience Ag N-acyl- 2 - (cyclo) alkylpyrrolidines and piperidines useful as fungicides
EP2838363A1 (en) 2012-04-20 2015-02-25 Bayer Cropscience AG N-cycloalkyl-n-[(trisubstitutedsilylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
CN104428294B (zh) 2012-04-20 2017-07-14 拜尔农科股份公司 N‑环烷基‑n‑[(杂环基苯基)亚甲基]‑(硫代)羧酰胺衍生物
US11518997B2 (en) 2012-04-23 2022-12-06 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Targeted genome engineering in plants
EP2662362A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole indanyl carboxamides
US9375005B2 (en) 2012-05-09 2016-06-28 Bayer Cropscience Ag 5-halogenopyrazole indanyl carboxamides
EP2662370A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole benzofuranyl carboxamides
EP2662360A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole indanyl carboxamides
EP2662364A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole tetrahydronaphthyl carboxamides
EP2847170B1 (en) 2012-05-09 2017-11-08 Bayer CropScience AG Pyrazole indanyl carboxamides
EP2662363A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole biphenylcarboxamides
EP2662361A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazol indanyl carboxamides
AR091104A1 (es) 2012-05-22 2015-01-14 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos que comprenden un derivado lipo-quitooligosacarido y un compuesto nematicida, insecticida o fungicida
AR091143A1 (es) 2012-05-24 2015-01-14 Seeds Ltd Ab Composiciones y metodos para silenciar la expresion genetica
WO2013178662A1 (en) 2012-05-30 2013-12-05 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a biological control agent and an insecticide
KR20150021537A (ko) 2012-05-30 2015-03-02 바이엘 크롭사이언스 아게 생물학적 방제제, 및 복합체 i 또는 ii에서의 호흡 연쇄의 억제제로 이루어진 군으로부터의 살진균제를 포함하는 조성물
CN104507316B (zh) 2012-05-30 2018-03-06 拜尔农作物科学股份公司 包含生物防治剂和杀真菌剂的组合物
PT2854549T (pt) 2012-05-30 2018-11-28 Bayer Cropscience Ag Composição que compreende um agente de controlo biológico e fluopicolida
EP2854548B1 (en) 2012-05-30 2018-08-01 Bayer Cropscience AG Composition comprising a biological control agent and a fungicide selected from metalaxyl and metalaxyl-m
PT2854547T (pt) 2012-05-30 2018-11-16 Bayer Cropscience Ag Composição que compreende um agente de controlo biológico e trifloxistrobina
HUE044560T2 (hu) 2012-05-30 2019-11-28 Bayer Cropscience Ag Biológiai kontroll szert és aminosav- vagy fehérje- bioszintézis inhibitorok, ATP elõállítás inhibitorok és sejtfal szintézis inhibitorok körébõl választott gombaölõ szert tartalmazó kompozíció
US9907312B2 (en) 2012-05-30 2018-03-06 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a biological control agent and an insecticide
WO2013188291A2 (en) 2012-06-15 2013-12-19 E. I. Du Pont De Nemours And Company Methods and compositions involving als variants with native substrate preference
WO2014009322A1 (en) 2012-07-11 2014-01-16 Bayer Cropscience Ag Use of fungicidal combinations for increasing the tolerance of a plant towards abiotic stress
US8889591B2 (en) 2012-07-24 2014-11-18 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl)pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and bromobutide, daimuron, oxaziclomefone or pyributicarb
US8846570B2 (en) * 2012-07-24 2014-09-30 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl)pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and microtubule inhibiting herbicides
US8841233B2 (en) * 2012-07-24 2014-09-23 Dow Agrosciences Llc Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and 4-hydroxyphenyl-pyruvate dioxygenase (HPPD) inhibitors
US8901035B2 (en) 2012-07-24 2014-12-02 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and cellulose biosynthesis inhibitor herbicides
US8916499B2 (en) 2012-07-24 2014-12-23 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and a protoporphyrinogen oxidase inhibitor
US8906825B2 (en) 2012-07-24 2014-12-09 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and triazolopyrimidine sulfonamides
US8871681B2 (en) * 2012-07-24 2014-10-28 Dow Agrosciences Llc Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and certain sulfonylureas
US8791048B2 (en) * 2012-07-24 2014-07-29 Dow Agrosciences Llc Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and clomazone
US9644469B2 (en) 2012-07-24 2017-05-09 Dow Agrosciences Llc Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and VLCFA and lipid synthesis inhibiting herbicides
US8906826B2 (en) 2012-07-24 2014-12-09 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and imidazolinones
US8796177B2 (en) 2012-07-24 2014-08-05 Dow Agrosciences Llc Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl)pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and acetyl-CoA carboxylase (ACCase) inhibitors
US8871680B2 (en) * 2012-07-24 2014-10-28 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and a di-methoxy-pyrimidine and derivatives thereof
US8895470B2 (en) 2012-07-24 2014-11-25 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and glyphosate or glufosinate
US8912120B2 (en) 2012-07-24 2014-12-16 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and synthetic auxin herbicides
US8809232B2 (en) * 2012-07-24 2014-08-19 Dow Agroscience Llc Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and halosulfuron, pyrazosulfuron and esprocarb
US8912121B2 (en) 2012-07-24 2014-12-16 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl)pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and certain PS II inhibitors
US8883682B2 (en) 2012-07-24 2014-11-11 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl)pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and auxin transport inhibitors
WO2014019983A1 (en) 2012-07-31 2014-02-06 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a pesticidal terpene mixture and an insecticide
AU2013311826A1 (en) 2012-09-05 2015-03-26 Bayer Cropscience Ag Use of substituted 2-amidobenzimidazoles, 2-amidobenzoxazoles and 2-amidobenzothiazoles or salts thereof as active substances against abiotic plant stress
EP2895601A1 (en) 2012-09-14 2015-07-22 Bayer Cropscience LP Hppd variants and methods of use
MX364070B (es) 2012-10-18 2019-04-10 Monsanto Technology Llc Métodos y composiciones para el control de plagas vegetales.
DE102012219029A1 (de) 2012-10-18 2014-04-24 Bayer Cropscience Ag Verwendung von Dithiin-tetracarboximiden zum Bekämpfen von neuer Blattfallkrankheit Marssonia coronaria
PT2908641T (pt) 2012-10-19 2018-04-16 Bayer Cropscience Ag Método para o tratamento de plantas contra fungos resistentes a fungicidas utilizando derivados de carboxamida ou tiocarboxamida
CN104735985B (zh) 2012-10-19 2018-10-16 拜尔农科股份公司 使用羧酰胺或硫代羧酰胺衍生物增强植物中对非生物胁迫的耐受性的方法
CA2888556C (en) 2012-10-19 2020-07-07 Bayer Cropscience Ag Method of plant growth promotion using carboxamide derivatives
EP2908639A1 (en) 2012-10-19 2015-08-26 Bayer Cropscience AG Active compound combinations comprising carboxamide derivatives
WO2014079957A1 (de) 2012-11-23 2014-05-30 Bayer Cropscience Ag Selektive inhibition der ethylensignaltransduktion
EP2735231A1 (en) 2012-11-23 2014-05-28 Bayer CropScience AG Active compound combinations
CA3105365A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Bayer Cropscience Ag Binary fungicidal mixtures
US9775351B2 (en) 2012-11-30 2017-10-03 Bayer Cropscience Ag Ternary fungicidal and pesticidal mixtures
CA2892701A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Bayer Cropscience Ag Binary pesticidal and fungicidal mixtures
MX2015006328A (es) 2012-11-30 2015-09-07 Bayer Cropscience Ag Mezcla fungicida o pesticida binaria.
MX382421B (es) 2012-11-30 2025-03-13 Bayer Cropscience Ag Mezclas fungicidas ternarias.
CA2893027A1 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising biological control agents
WO2014086747A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and a fungicide
WO2014086758A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and an insecticide
ES2770775T3 (es) 2012-12-03 2020-07-03 Bayer Cropscience Ag Procedimiento para el control de plagas aplicando una combinación de Paecilomyces lilacinus y Fluopyram
US20150289518A1 (en) 2012-12-03 2015-10-15 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and an insecticide
WO2014086753A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising biological control agents
JP2015535532A (ja) 2012-12-03 2015-12-14 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 生物農薬および殺菌剤を含む組成物
CA2893083A1 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and an insecticide
EP2740356A1 (de) 2012-12-05 2014-06-11 Bayer CropScience AG Substituierte (2Z)-5(1-Hydroxycyclohexyl)pent-2-en-4-insäure-Derivate
CN105072903A (zh) 2012-12-05 2015-11-18 拜耳作物科学股份公司 取代的1-(芳基乙炔基)-环己醇、1-(杂芳基乙炔基)-环己醇、1-(杂环基乙炔基)-环己醇和1-(环烯基乙炔基)-环己醇用作抵抗非生物植物胁迫的活性剂的用途
EP2740720A1 (de) 2012-12-05 2014-06-11 Bayer CropScience AG Substituierte bicyclische- und tricyclische Pent-2-en-4-insäure -Derivate und ihre Verwendung zur Steigerung der Stresstoleranz in Pflanzen
US9149037B2 (en) * 2012-12-12 2015-10-06 Dow Agrosciences Llc Synergistic weed control from applications of aminocyclopyrachlor and 2,4 dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D)
WO2014090765A1 (en) 2012-12-12 2014-06-19 Bayer Cropscience Ag Use of 1-[2-fluoro-4-methyl-5-(2,2,2-trifluoroethylsulfinyl)phenyl]-5-amino-3-trifluoromethyl)-1 h-1,2,4 tfia zole for controlling nematodes in nematode-resistant crops
LT2931902T (lt) * 2012-12-13 2018-09-10 Sesvanderhave N.V. Herbicidams atsparių augalų - cukrinių runkelių sukūrimo būdas
US20140173781A1 (en) 2012-12-13 2014-06-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions for producing and selecting transgenic wheat plants
RS57806B2 (sr) * 2012-12-13 2022-07-29 Bayer Cropscience Ag Upotreba als inhibitora herbicida za kontrolu neželjene vegetacije kod beta vulgaris biljaka tolerantnih na als inhibitore herbicida
EP2931045B1 (en) 2012-12-14 2018-12-26 Dow AgroSciences LLC Synergistic weed control from applications of aminopyralid and clopyralid
US10412964B2 (en) 2012-12-14 2019-09-17 Dow Agrosciences Llc Synergistic weed control from applications of aminopyralid and clopyralid
AR093996A1 (es) 2012-12-18 2015-07-01 Bayer Cropscience Ag Combinaciones bactericidas y fungicidas binarias
KR102273360B1 (ko) * 2012-12-19 2021-07-06 몬산토 테크놀로지 엘엘씨 식물 조절 요소 및 그의 용도
CN104995174A (zh) 2012-12-19 2015-10-21 拜耳作物科学股份公司 二氟甲基-烟酰-四氢萘基胺
AU2013361220A1 (en) 2012-12-21 2015-04-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods for auxin-analog conjugation
CN105358695B (zh) 2013-01-01 2019-07-12 A.B.种子有限公司 将dsRNA引入植物种子以调节基因表达的方法
US10683505B2 (en) 2013-01-01 2020-06-16 Monsanto Technology Llc Methods of introducing dsRNA to plant seeds for modulating gene expression
BR102013021210B1 (pt) 2013-01-25 2015-12-01 Fundação Universidade Fed De São Carlos processo de obtenção de nanopartículas biopoliméricas contendo óleo e extratos de azadirachta indica a. juss (neem), nanopartículas biopoliméricas e micropartículas em pó
US9247707B2 (en) * 2013-01-25 2016-02-02 Barenbrug Usa, Inc. Kentucky bluegrass variety named ‘Barvette’ selected for healthy turf
US10000767B2 (en) 2013-01-28 2018-06-19 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for plant pest control
KR102191469B1 (ko) 2013-02-06 2020-12-16 바이엘 애니멀 헬스 게엠베하 해충 방제제로서의 할로겐-치환된 피라졸 유도체
CA2898725A1 (en) 2013-02-11 2014-08-14 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising a streptomyces-based biological control agent and an insecticide
WO2014124361A1 (en) 2013-02-11 2014-08-14 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising a streptomyces-based biological control agent and another biological control agent
KR20150119032A (ko) 2013-02-11 2015-10-23 바이엘 크롭사이언스 엘피 스트렙토미세스-기반 생물학적 방제제 및 살진균제를 포함하는 조성물
BR112015019666A2 (pt) 2013-02-25 2017-07-18 Dow Agrosciences Llc métodos de controle de ervas daninhas em abacaxi
US10221429B2 (en) 2013-03-07 2019-03-05 Bayer Cropscience Lp Toxin genes and methods for their use
WO2014135608A1 (en) 2013-03-07 2014-09-12 Bayer Cropscience Ag Fungicidal 3-{phenyl[(heterocyclylmethoxy)imino]methyl}-heterocycle derivatives
EP2971185A4 (en) 2013-03-13 2017-03-08 Monsanto Technology LLC Methods and compositions for weed control
UA121846C2 (uk) 2013-03-13 2020-08-10 Монсанто Текнолоджи Ллс Спосіб та гербіцидна композиція для контролю видів рослини роду lolium
CA2905743C (en) 2013-03-13 2021-09-28 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Glyphosate application for weed control in brassica
BR112015023286A2 (pt) 2013-03-14 2018-03-06 Arzeda Corp polipeptídeo recombinante com atividade da dicamba descarboxilase, construto de polinucleotídeo, célula, método de produção de uma célula hospedeira compreendendo um polinucleotídeo heterólogo que codifica um polipeptídeo tendo atividade da dicamba descarboxilase, método para descarboxilar dicamba, um derivado de dicamba ou um metabolito de dicamba, método para a detecção de um polipeptideo e método para a detecção da presença de um polinucleotideo que codifica um polipeptideo tendo atividade da dicamba descarboxilase
US20140283211A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Monsanto Technology Llc Methods and Compositions for Plant Pest Control
EA029279B1 (ru) 2013-03-14 2018-03-30 Пайонир Хай-Бред Интернэшнл Инк. Композиции и способы контроля насекомых-вредителей
US20160024513A1 (en) 2013-03-14 2016-01-28 Pioneer Hi-Bred International Inc. Maize stress related transcription factor 18 and uses thereof
US20160219823A1 (en) * 2013-03-14 2016-08-04 J.R. Simplot Company Turfgrass varieties having desirable looking turf when mowed infrequently
US20160053277A1 (en) 2013-03-14 2016-02-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions Having Dicamba Decarboxylase Activity and Methods of Use
US20160029585A1 (en) * 2013-03-14 2016-02-04 J.R. Simplot Company Turfgrass varieties having desirable looking turf when mowed infrequently
BR112015023709A2 (pt) 2013-03-15 2017-07-18 Pioneer Hi Bred Int polipeptídeo phi-4, polinucleotídeo, composição, método para inibir o crescimento, método para controlar uma população, planta, semente, cassete de expressão, método para expressar em uma planta um polinucleotídeo, método para proteger uma planta, proteína de fusão
US8841234B1 (en) * 2013-03-15 2014-09-23 Dow Agrosciences, Llc. Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and fungicides
US10568328B2 (en) 2013-03-15 2020-02-25 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
US9730445B2 (en) 2013-03-15 2017-08-15 Dow Agrosciences Llc Herbicidal compositions comprising 4-amino-3-chloro-5-fluoro-6-(4-chloro-2-fluoro-3-methoxyphenyl) pyridine-2-carboxylic acid or a derivative thereof and fungicides
US20160017350A1 (en) 2013-03-15 2016-01-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods of use of acc oxidase polynucleotides and polypeptides
WO2014161821A1 (en) 2013-04-02 2014-10-09 Bayer Cropscience Nv Targeted genome engineering in eukaryotes
EP2984080B1 (en) 2013-04-12 2017-08-30 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Novel triazolinthione derivatives
WO2014167009A1 (en) 2013-04-12 2014-10-16 Bayer Cropscience Ag Novel triazole derivatives
MX358633B (es) 2013-04-19 2018-08-28 Bayer Cropscience Ag Metodo de uso mejorado del potencial de produccion de plantas transgenicas.
US9554573B2 (en) 2013-04-19 2017-01-31 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Binary insecticidal or pesticidal mixture
TW201507722A (zh) 2013-04-30 2015-03-01 Bayer Cropscience Ag 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類
WO2014177514A1 (en) 2013-04-30 2014-11-06 Bayer Cropscience Ag Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides
EP2801575A1 (en) 2013-05-07 2014-11-12 Bayer CropScience AG Heteroaryldihydropyridine derivatives as fungicides
BR112015031235A2 (pt) 2013-06-26 2017-07-25 Bayer Cropscience Ag derivados de n-cicloalquil-n-[(biciclil-fenil)metileno]-(tio)carboxamida
MX2016000141A (es) 2013-07-09 2016-03-01 Bayer Cropscience Ag El uso de piridonacarboxamidas seleccionadas o sales de las mismas como sustancias activas contra el estres abiotico de las plantas.
MX359191B (es) 2013-07-19 2018-09-18 Monsanto Technology Llc Composiciones y métodos para controlar leptinotarsa.
US9850496B2 (en) 2013-07-19 2017-12-26 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for controlling Leptinotarsa
EP2837287A1 (en) 2013-08-15 2015-02-18 Bayer CropScience AG Use of prothioconazole for increasing root growth of Brassicaceae
BR112016003225B1 (pt) 2013-08-16 2022-10-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Polipeptídeo pip-47, polipeptídeo pip-47 quimérico, composição, proteína de fusão, método para controlar uma população de inseto-praga, método para inibir o crescimento ou matar um inseto-praga, construto de dna, polinucleotídeo isolado, cassete de expressão, método de obtenção de uma planta transgênica e método para controlar infestação de inseto
BR122020001770B1 (pt) 2013-09-13 2022-11-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc Construto de dna, método de obtenção de planta transgênica, proteína de fusão, método para controlar uma população de praga de inseto, método para inibir o crescimento ou matar uma praga de inseto
CA2925033A1 (en) 2013-09-24 2015-04-02 Bayer Cropscience Nv Hetero-transglycosylase and uses thereof
RU2654634C2 (ru) 2013-09-25 2018-05-21 ДАУ АГРОСАЙЕНСИЗ ЭлЭлСи Способы борьбы с сорняками в цикории
US10602742B2 (en) * 2013-10-17 2020-03-31 Sumitomo Chemical Company, Limited Method for cultivating corn or soybean
CA2927180A1 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Glyphosate-n-acetyltransferase (glyat) sequences and methods of use
UY35817A (es) 2013-11-04 2015-05-29 Us Agriculture ?composiciones y métodos para controlar infestaciones de plagas y parásitos de los artrópodos?.
US10071967B2 (en) 2013-12-05 2018-09-11 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft N-cycloalkyl-N-{[2-(1-substitutedcycloalkyl)phenyl]methylene}-(thio)carboxamide derivatives
JP6507165B2 (ja) 2013-12-05 2019-04-24 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト Ｎ−シクロアルキル−ｎ−｛［２−（１−置換シクロアルキル）フェニル］メチレン｝−（チオ）カルボキサミド誘導体
UA119253C2 (uk) 2013-12-10 2019-05-27 Біолоджикс, Інк. Спосіб боротьби із вірусом у кліща varroa та у бджіл
US20160309708A1 (en) * 2013-12-11 2016-10-27 Oxiteno S.A. Indústria E Comércio Polycarboxylic acid ester alkyl derived from branched and straight alcohol of plant origin, and use of an alkyl ester in agrochemical formulations
TW201527314A (zh) 2013-12-31 2015-07-16 Dow Agrosciences Llc 新穎玉米泛素啓動子（三）
TW201527313A (zh) 2013-12-31 2015-07-16 Dow Agrosciences Llc 新穎玉米泛素啓動子（二）
TW201527312A (zh) * 2013-12-31 2015-07-16 Dow Agrosciences Llc 新穎玉米泛素啓動子（一）
TW201527315A (zh) * 2013-12-31 2015-07-16 Dow Agrosciences Llc 新穎玉米泛素啓動子（四）
EP3116303B1 (en) 2014-01-15 2020-07-22 Monsanto Technology LLC Methods and compositions for weed control using epsps polynucleotides
US10227608B2 (en) 2014-02-07 2019-03-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins from plants and methods for their use
BR112016018103B1 (pt) 2014-02-07 2024-01-16 E.I. Du Pont De Nemours And Company Polipeptídeo e seu uso, polinucleotídeo, composição, proteína de fusão, método para controlar uma população, método para inibir o crescimento, método para controlar a infestação, método para obtenção de uma planta ou célula vegetal, construto
BR112016020889B1 (pt) 2014-03-11 2022-10-04 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Molécula de ácido nucleico recombinante, célula hospedeira bacteriana, proteína hppd recombinante, uso do ácido nucleico recombinante e produto de base
US10055700B2 (en) 2014-03-30 2018-08-21 Trimble Inc. Intelligent tool for collecting and managing data during manual harvesting of fruits and vegetables
EP3420809A1 (en) 2014-04-01 2019-01-02 Monsanto Technology LLC Compositions and methods for controlling insect pests
WO2015160620A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and an insecticide
WO2015160618A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and a biological control agent
WO2015160619A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and a fungicide
US10595479B2 (en) * 2014-04-24 2020-03-24 Purdue Research Foundation Induced mutagenesis
AU2015280252A1 (en) 2014-06-23 2017-01-12 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for regulating gene expression via RNA interference
WO2015200539A1 (en) 2014-06-25 2015-12-30 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for delivering nucleic acids to plant cells and regulating gene expression
WO2016000237A1 (en) 2014-07-03 2016-01-07 Pioneer Overseas Corporation Plants having enhanced tolerance to insect pests and related constructs and methods involving insect tolerance genes
AR101214A1 (es) 2014-07-22 2016-11-30 Bayer Cropscience Ag Ciano-cicloalquilpenta-2,4-dienos, ciano-cicloalquilpent-2-en-4-inas, ciano-heterociclilpenta-2,4-dienos y ciano-heterociclilpent-2-en-4-inas sustituidos como principios activos contra el estrés abiótico de plantas
WO2016018887A1 (en) 2014-07-29 2016-02-04 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for controlling insect pests
US20170247719A1 (en) 2014-09-17 2017-08-31 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods to control insect pests
UA126192C2 (uk) 2014-10-16 2022-08-31 Піонір Хай-Бред Інтернешнл, Інк. Інсектицидний білок та спосіб його застосування
WO2016064347A1 (en) 2014-10-22 2016-04-28 Temasek Life Sciences Laboratory Limited Terpene synthases from ylang ylang (cananga odorata var. fruticosa)
AR103024A1 (es) 2014-12-18 2017-04-12 Bayer Cropscience Ag Piridoncarboxamidas seleccionadas o sus sales como sustancias activas contra estrés abiótico de las plantas
WO2016099916A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 E. I. Du Pont De Nemours And Company Polylactic acid compositions with accelerated degradation rate and increased heat stability
MX369475B (es) 2015-01-15 2019-11-08 Pioneer Hi Bred Int Proteinas insecticidas y metodos para sus usos.
PL3256589T3 (pl) 2015-01-22 2022-02-21 Monsanto Technology Llc Kompozycje i sposoby kontrolowania leptinotarsa
US10876132B2 (en) 2015-03-11 2020-12-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal combinations of PIP-72 and methods of use
WO2016166077A1 (en) 2015-04-13 2016-10-20 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft N-cycloalkyl-n-(biheterocyclyethylene)-(thio)carboxamide derivatives
CN108064233B (zh) 2015-05-19 2022-07-15 先锋国际良种公司 杀昆虫蛋白及其使用方法
EP3302053B1 (en) 2015-06-02 2021-03-17 Monsanto Technology LLC Compositions and methods for delivery of a polynucleotide into a plant
EP3302030A4 (en) 2015-06-03 2019-04-24 Monsanto Technology LLC METHOD AND COMPOSITIONS FOR INTRODUCING NUCLEIC ACIDS IN PLANTS
EP3310803A1 (en) 2015-06-16 2018-04-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods to control insect pests
JP6274161B2 (ja) 2015-06-25 2018-02-07 トヨタ自動車株式会社 薬剤誘導性プロモーター及びこれを用いた遺伝子発現誘導方法
CN109475096B (zh) 2015-08-06 2022-08-23 先锋国际良种公司 植物来源的杀昆虫蛋白及其使用方法
BR112018004779A8 (pt) 2015-09-11 2022-08-09 Bayer Cropscience Lp Variantes de hppd e métodos de uso
BR112018006543B1 (pt) 2015-09-30 2022-04-05 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Uso de isotianil para o controle da zebra da batata frita
CA3002995A1 (en) 2015-12-18 2017-06-22 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
EP3416487A4 (en) * 2016-02-08 2019-12-11 Colorado Wheat Research Foundation, Inc. HERBICIDAL SAFENER COMBINATIONS FOR ACETYLCOENZYME-A-CARBOXYLASE-HERBICIDE-RESISTANT PLANTS
WO2017178407A1 (en) 2016-04-13 2017-10-19 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Fungicidal combinations
BR112018072417B1 (pt) 2016-05-04 2023-03-14 E. I. Du Pont De Nemours And Company Polipeptídeo inseticida recombinante, polipeptídeo quimérico, composição, polinucleotídeo recombinante, construtos de dna, métodos para obter uma planta transgênica, métodos para inibir o crescimento ou extermínio de uma praga de inseto ou população de praga, método para obter uma célula procariótica transformada, célula procariótica transformada e método para modificar geneticamente o polipeptídeo inseticida
CA3022858A1 (en) 2016-06-16 2017-12-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods to control insect pests
PH12018502706B1 (en) 2016-07-01 2024-05-24 Pioneer Hi Bred Int Insecticidal proteins from plants and methods for their use
WO2018013333A1 (en) 2016-07-12 2018-01-18 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods to control insect pests
CN109688816A (zh) 2016-07-29 2019-04-26 拜耳作物科学股份公司 活性化合物结合物和保护植物的繁殖材料的方法
CN108884471A (zh) 2016-08-05 2018-11-23 赖斯泰克有限公司 组合水稻中与除草剂抗性/耐受性相关的突变的方法和组合物
CN106148558B (zh) * 2016-09-19 2019-08-02 山东农业大学 一种玉米烟嘧磺隆抗感分子标记及其应用
EP3515907A1 (en) 2016-09-22 2019-07-31 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Novel triazole derivatives
WO2018054829A1 (en) 2016-09-22 2018-03-29 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Novel triazole derivatives and their use as fungicides
US20190225974A1 (en) 2016-09-23 2019-07-25 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Targeted genome optimization in plants
BR112019008455A2 (pt) 2016-10-26 2019-07-09 Bayer Cropscience Ag uso de piraziflumida para o controle de sclerotinia spp. em aplicações de tratamento de semente
WO2018084936A1 (en) 2016-11-01 2018-05-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
CA3200552A1 (en) * 2016-11-16 2018-05-16 Floratine Products Group, Inc. Method to use a colored photoluminescent composition in agricultural applications
CA3043493A1 (en) 2016-11-23 2018-05-31 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Axmi669 and axmi991 toxin genes and methods for their use
WO2018104392A1 (en) 2016-12-08 2018-06-14 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Use of insecticides for controlling wireworms
WO2018108627A1 (de) 2016-12-12 2018-06-21 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Verwendung substituierter indolinylmethylsulfonamide oder deren salze zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
EP3332645A1 (de) 2016-12-12 2018-06-13 Bayer Cropscience AG Verwendung substituierter pyrimidindione oder jeweils deren salze als wirkstoffe gegen abiotischen pflanzenstress
CA3044404A1 (en) 2016-12-14 2018-06-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
MX2019007491A (es) 2016-12-22 2019-09-06 Pioneer Hi Bred Int Proteinas insecticidas y metodos para su uso.
KR20190095411A (ko) 2016-12-22 2019-08-14 바스프 아그리컬쳐럴 솔루션즈 시드 유에스 엘엘씨 선충 해충의 방제를 위한 ｃｒｙ１４의 용도
UY37570A (es) 2017-01-18 2018-08-31 Bayer Cropscience Lp Uso de bp005 para el control de patógenos de planta
US11279946B2 (en) 2017-01-18 2022-03-22 Basf Argicultural Solutions Seed Us Llc BP005 toxin gene and methods for its use
WO2018148001A1 (en) 2017-02-08 2018-08-16 Pioneer Hi-Bred International Inc Insecticidal combinations of plant derived insecticidal proteins and methods for their use
BR112019018056A2 (pt) 2017-03-07 2020-08-11 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC molécula de ácido nucleico recombinante, cassete de expressão, célula hospedeira, plantas, sementes transgênicas, polipeptídeo recombinante, métodos para conferir tolerância e para controlar ervas daninhas, produto de utilidade e uso da sequência de nucleotídeos
BR112019023628A2 (pt) 2017-05-11 2020-06-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Polipeptídeo inseticida recombinante, proteína inseticida quimérica, proteína de fusão, composição agrícola, polinucleotídeo recombinante, construto de dna, planta transgênica, método para inibir o crescimento ou exterminar uma praga de inseto ou população de praga, método para controlar os danos por praga de inseto, método para controlar infestação de praga e método para melhorar o rendimento de uma cultura
WO2019025153A1 (de) 2017-07-31 2019-02-07 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Verwendung von substituierten n-sulfonyl-n'-aryldiaminoalkanen und n-sulfonyl-n'-heteroaryldiaminoalkanen oder deren salzen zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
WO2019057661A1 (en) 2017-09-19 2019-03-28 Bayer Aktiengesellschaft USE OF ISOTIANIL AGAINST PANAMA'S DISEASE
US11279944B2 (en) 2017-10-24 2022-03-22 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Of herbicide tolerance to 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase (HPPD) inhibitors by down-regulation of HPPD expression in soybean
US20210032651A1 (en) 2017-10-24 2021-02-04 Basf Se Improvement of herbicide tolerance to hppd inhibitors by down-regulation of putative 4-hydroxyphenylpyruvate reductases in soybean
US11834466B2 (en) 2017-11-30 2023-12-05 5Metis, Inc. Benzoxaborole compounds and formulations thereof
WO2019169150A1 (en) 2018-03-02 2019-09-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant health assay
CN116410286A (zh) 2018-03-14 2023-07-11 先锋国际良种公司 来自植物的杀昆虫蛋白及其使用方法
EP3764798B1 (en) 2018-03-14 2025-12-17 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins from plants and methods for their use
CN111902547B (zh) 2018-03-23 2024-06-14 先锋国际良种公司 鉴定、选择和产生疾病抗性作物的方法
WO2019203942A1 (en) 2018-04-18 2019-10-24 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of identifying, selecting, and producing bacterial leaf blight resistant rice
EP3802521A1 (de) 2018-06-04 2021-04-14 Bayer Aktiengesellschaft Herbizid wirksame bizyklische benzoylpyrazole
CN112351679B (zh) 2018-06-06 2023-06-13 华中农业大学 鉴定、选择和产生南方玉米锈病抗性作物的方法
UA128698C2 (uk) 2018-07-26 2024-10-02 Баєр Акціенгезельшафт Застосування інгібітора сукцинатдегідрогенази флуопіраму для боротьби з комплексом кореневої гнилі та/або комплексом диплодіозної гнилі, спричиненим rhizoctonia solani, видом fusarium та видом pythium у рослин виду brassicaceae
BR112021003037A2 (pt) 2018-08-18 2021-05-11 Boragen, Inc. formas sólidas de benzoxaborol substituído e composições do mesmo
CN119060146A (zh) 2018-08-29 2024-12-03 先锋国际良种公司 杀昆虫蛋白及其使用方法
CN109220774B (zh) * 2018-09-12 2021-05-07 烟台市林业科学研究所 一种黑松化学去雄方法
EP3852532A1 (en) 2018-09-17 2021-07-28 Bayer Aktiengesellschaft Use of the fungicide isoflucypram for controlling claviceps purpurea and reducing sclerotia in cereals
US20220039383A1 (en) 2018-09-17 2022-02-10 Bayer Aktiengesellschaft Use of the Succinate Dehydrogenase Inhibitor Fluopyram for Controlling Claviceps Purpurea and Reducing Sclerotia in Cereals
MX2021009954A (es) 2019-02-19 2021-12-10 Gowan Company L L C Composiciones liquidas estables y metodos para usar las mismas.
UY38795A (es) 2019-07-22 2021-02-26 Bayer Ag 5-amino pirazoles y triazoles como plaguicidas
PH12022550179A1 (en) 2019-07-23 2022-11-14 Bayer Ag Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides
EP4003973B1 (en) 2019-07-23 2024-11-20 Bayer Aktiengesellschaft Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides
EP3701796A1 (en) 2019-08-08 2020-09-02 Bayer AG Active compound combinations
WO2021041077A1 (en) 2019-08-23 2021-03-04 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of identifying, selecting, and producing anthracnose stalk rot resistant crops
US20220403410A1 (en) 2019-09-26 2022-12-22 Bayer Aktiengesellschaft Rnai-mediated pest control
JP2022550564A (ja) 2019-10-02 2022-12-02 バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト 脂肪酸を含んでいる活性化合物組み合わせ
AU2020363355A1 (en) 2019-10-07 2022-05-19 Innopix, Inc. Spectral imaging and analysis for remote and noninvasive detection of plant responses to herbicide treatments
BR112022006791A2 (pt) 2019-10-09 2022-06-28 Bayer Ag Novos compostos heteroaril-triazol como pesticidas
MX2022004366A (es) 2019-10-09 2022-05-06 Bayer Ag Nuevos compuestos de heteroarilo-triazol como pesticidas.
AU2020367523A1 (en) 2019-10-14 2022-04-28 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Novel insect resistant genes and methods of use
BR112022007119A2 (pt) 2019-10-14 2022-07-05 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Molécula de ácido nucleico, ácido nucleico, polipeptídeos, vetor, célula hospedeira, planta transgênica, semente transgênica, composição, métodos para controlar uma população de pragas, para matar uma praga, para produzir um polipeptídeo, para proteger uma planta e para aumentar o rendimento em uma planta, planta, uso do ácido nucleico e produto básico
CN110656114B (zh) * 2019-10-18 2022-07-01 云南中烟工业有限责任公司 一种烟草色素合成相关的基因及其应用
CN114641467A (zh) 2019-11-07 2022-06-17 拜耳公司 用于防治动物有害物的取代的磺酰胺
WO2021097162A1 (en) 2019-11-13 2021-05-20 Bayer Cropscience Lp Beneficial combinations with paenibacillus
US12507693B2 (en) 2019-11-18 2025-12-30 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations comprising fatty acids
TW202134226A (zh) 2019-11-18 2021-09-16 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物
TW202136248A (zh) 2019-11-25 2021-10-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物
CN111153974A (zh) 2020-01-15 2020-05-15 华中农业大学 玉米抗病基因和分子标记及其应用
AR121242A1 (es) 2020-01-31 2022-05-04 Pairwise Plants Services Inc Supresión de la respuesta de escape a la sombra en plantas
CN111154748B (zh) * 2020-02-06 2022-06-10 江南大学 一种提高l-异亮氨酸合成纯度的乙酰羟酸合酶突变体
CN115551839B (zh) 2020-02-18 2024-06-04 拜耳公司 作为农药的杂芳基-三唑化合物
EP3708565A1 (en) 2020-03-04 2020-09-16 Bayer AG Pyrimidinyloxyphenylamidines and the use thereof as fungicides
WO2021211227A1 (en) 2020-04-15 2021-10-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant pathogen effector and disease resistance gene identification, compositions, and methods of use
WO2021209490A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Bayer Aktiengesellschaft Cyclaminephenylaminoquinolines as fungicides
CA3180157A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for controlling meristem size for crop improvement
KR20230007398A (ko) 2020-04-21 2023-01-12 바이엘 악티엔게젤샤프트 해충 방제제로서 2-(헤트)아릴-치환된 축합 헤테로시클릭 유도체
US12552748B2 (en) 2020-05-06 2026-02-17 Bayer Aktiengesellschaft Pyridine (thio)amides as fungicidal compounds
TWI891782B (zh) 2020-05-06 2025-08-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基三唑化合物
JP2023525349A (ja) 2020-05-12 2023-06-15 バイエル、アクチエンゲゼルシャフト 殺真菌性化合物としてのトリアジンおよびピリミジン（チオ）アミド化合物
US20230192617A1 (en) 2020-05-19 2023-06-22 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Azabicyclic(thio)amides as fungicidal compounds
BR112022024489A2 (pt) 2020-06-02 2023-01-31 Pairwise Plants Services Inc Métodos para o controle do tamanho do meristema para melhora da cultura agrícola
JP2023528891A (ja) 2020-06-04 2023-07-06 バイエル、アクチエンゲゼルシャフト 新規殺真菌剤としてのヘテロシクリルピリミジンおよびトリアジン
WO2021249995A1 (en) 2020-06-10 2021-12-16 Bayer Aktiengesellschaft Azabicyclyl-substituted heterocycles as fungicides
WO2021257775A1 (en) 2020-06-17 2021-12-23 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for controlling meristem size for crop improvement
KR20230026388A (ko) 2020-06-18 2023-02-24 바이엘 악티엔게젤샤프트 작물 보호를 위한 살진균제로서의 3-(피리다진-4-일)-5,6-디히드로-4h-1,2,4-옥사디아진 유도체
WO2021255118A1 (en) 2020-06-18 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft Composition for use in agriculture
UY39275A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazol pirimidinas como fungicidas, procesos e intermediarios para su preparación, métodos de uso y usos de los mismos
WO2021255089A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,3,4-oxadiazole pyrimidines and 1,3,4-oxadiazole pyridines as fungicides
UY39276A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag Uso de compuestos de 1,3,4–oxadiazol–2–ilpirimidina para controlar microorganismos fitopatógenos, métodos de uso y composiciones.
WO2021255091A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,3,4-oxadiazoles and their derivatives as fungicides
EP3929189A1 (en) 2020-06-25 2021-12-29 Bayer Animal Health GmbH Novel heteroaryl-substituted pyrazine derivatives as pesticides
JP2023532548A (ja) 2020-07-02 2023-07-28 バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト 有害生物防除剤としてのヘテロサイクレン誘導体
US12168774B2 (en) 2020-07-14 2024-12-17 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use
WO2022033991A1 (de) 2020-08-13 2022-02-17 Bayer Aktiengesellschaft 5-amino substituierte triazole als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2022040510A1 (en) 2020-08-21 2022-02-24 Bayer Cropscience Lp Combinations of trichoderma and bradyrhizobium
WO2022053453A1 (de) 2020-09-09 2022-03-17 Bayer Aktiengesellschaft Azolcarboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2022058327A1 (en) 2020-09-15 2022-03-24 Bayer Aktiengesellschaft Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents
EP3974414A1 (de) 2020-09-25 2022-03-30 Bayer AG 5-amino substituierte pyrazole und triazole als schädlingsbekämpfungsmittel
EP3915971A1 (en) 2020-12-16 2021-12-01 Bayer Aktiengesellschaft Phenyl-s(o)n-phenylamidines and the use thereof as fungicides
WO2022129188A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,2,4-oxadiazol-3-yl pyrimidines as fungicides
WO2022129196A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft Heterobicycle substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
WO2022129190A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft (hetero)aryl substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
KR20230121792A (ko) 2020-12-18 2023-08-21 바이엘 악티엔게젤샤프트 작물에서 저항성 식물병원성 진균을 방제하기 위한dhodh 억제제의 용도
EP4036083A1 (de) 2021-02-02 2022-08-03 Bayer Aktiengesellschaft 5-oxy substituierte hetereozyklen, als schädlingsbekämpfungsmittel
MX2023009468A (es) 2021-02-11 2024-01-31 Pairwise Plants Services Inc Metodos y composiciones para modificar niveles de citoquinina oxidasa en plantas.
EP4298118A1 (en) 2021-02-25 2024-01-03 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying root architecture in plants
BR112023019400A2 (pt) 2021-03-30 2023-12-05 Bayer Ag 3-(hetero)aril-5-clorodifluorometil-1,2,4-oxadiazol como fungicida
BR112023019788A2 (pt) 2021-03-30 2023-11-07 Bayer Ag 3-(hetero)aril-5-clorodifluorometil-1,2,4-oxadiazol como fungicida
CN115216554A (zh) 2021-04-16 2022-10-21 华中农业大学 植物病原体效应子和疾病抗性基因鉴定、组合物和使用方法
WO2022233777A1 (en) 2021-05-06 2022-11-10 Bayer Aktiengesellschaft Alkylamide substituted, annulated imidazoles and use thereof as insecticides
EP4337661A1 (de) 2021-05-12 2024-03-20 Bayer Aktiengesellschaft 2-(het)aryl-substituierte kondensierte heterocyclen-derivate als schädlingsbekämpfungsmittel
UY39822A (es) 2021-06-17 2022-12-30 Pairwise Plants Services Inc Modificación de factores de transcripción de la familia de factores reguladores del crecimiento en s
KR102307187B1 (ko) * 2021-06-17 2021-10-01 주식회사 명주산업 살균 및 살충 효과를 갖는 친환경 제초제 조성물 및 이를 이용한 잡초 제거방법
UY39827A (es) 2021-06-24 2023-01-31 Pairwise Plants Services Inc Modificación de genes de ubiquitina ligasa e3 hect para mejorar los rasgos de rendimiento
WO2023278651A1 (en) 2021-07-01 2023-01-05 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for enhancing root system development
WO2023012342A1 (en) 2021-08-06 2023-02-09 Kws Vegetables B.V. Durable downy mildew resistance in spinach
WO2023019188A1 (en) 2021-08-12 2023-02-16 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits
AU2022326207A1 (en) 2021-08-13 2024-02-15 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations and fungicide compositions comprising those
PY2270221A (es) 2021-08-17 2023-03-20 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar genes de histidina quinasa receptores de citoquinina en plantas
AU2022335669A1 (en) 2021-08-25 2024-02-01 Bayer Aktiengesellschaft Novel pyrazinyl-triazole compounds as pesticides
US12359215B2 (en) 2021-08-30 2025-07-15 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of ubiquitin binding peptidase genes in plants for yield trait improvement
EP4144739A1 (de) 2021-09-02 2023-03-08 Bayer Aktiengesellschaft Anellierte pyrazole als schädlingsbekämpfungsmittel
AR126938A1 (es) 2021-09-02 2023-11-29 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para mejorar la arquitectura de las plantas y los rasgos de rendimiento
CN118382634A (zh) 2021-09-21 2024-07-23 成对植物服务股份有限公司 用于减少油菜荚果开裂的方法和组合物
US20230108968A1 (en) 2021-10-04 2023-04-06 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for improving floret fertility and seed yield
CA3234455A1 (en) 2021-10-07 2023-04-13 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for improving floret fertility and seed yield
WO2023078915A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Bayer Aktiengesellschaft Bis(hetero)aryl thioether (thio)amides as fungicidal compounds
US20250042886A1 (en) 2021-11-30 2025-02-06 Bayer Aktiengesellschaft Bis(hetero)aryl thioether oxadiazines as fungicidal compounds
UY40060A (es) 2021-12-09 2023-07-14 Pairwise Plants Services Inc Métodos para mejorar la fertilidad de floretes y el rendimiento de semillas
UY40132A (es) 2022-01-31 2023-08-31 Pairwise Plants Services Inc Supresión de la respuesta de evitación de la sombra en las plantas
WO2023148028A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests
WO2023148031A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests in cotton
WO2023148029A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests in cereals
WO2023148033A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests in oilseed rape
WO2023148030A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests in corn
US20250127163A1 (en) 2022-02-01 2025-04-24 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests in soybean
CN118973396A (zh) 2022-02-01 2024-11-15 环球化学股份有限公司 控制水稻上害虫的方法和组合物
UY40171A (es) 2022-03-02 2023-09-29 Pairwise Plants Services Inc Modificación de genes del receptor de brasinoesteroides para mejorar rasgos de rendimiento
WO2023192838A1 (en) 2022-03-31 2023-10-05 Pairwise Plants Services, Inc. Early flowering rosaceae plants with improved characteristics
AU2023251095A1 (en) 2022-04-07 2024-10-17 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for improving resistance to fusarium head blight
CN119278208A (zh) 2022-04-21 2025-01-07 成对植物服务股份有限公司 用于改善产量性状的方法和组合物
UY40250A (es) 2022-05-02 2023-11-15 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para mejorar el rendimiento y la resistencia a enfermedades
WO2023213626A1 (en) 2022-05-03 2023-11-09 Bayer Aktiengesellschaft Use of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine for controlling unwanted microorganisms
US20250304566A1 (en) 2022-05-03 2025-10-02 Bayer Aktiengesellschaft Crystalline forms of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine
UY40255A (es) 2022-05-05 2023-11-15 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar la arquitectur radicular y/o mejorar los rangos de rendimient
UY40326A (es) 2022-06-27 2023-12-29 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar el escape a la sombra en plantas
UY40336A (es) 2022-06-29 2023-12-29 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para controlar el tamaño del meristemo para el mejoramiento de cultivos
UY40337A (es) 2022-06-29 2023-12-29 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para controlar el tamaño del meristemo para el mejoramiento de cultivos
CN119768514A (zh) 2022-08-04 2025-04-04 成对植物服务股份有限公司 用于改善产量性状的方法和组合物
UY40388A (es) 2022-08-11 2024-03-15 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para controlar el tamaño del meristema para la mejora de los cultivos
UY40418A (es) 2022-09-08 2024-04-02 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para mejorar características de rendimiento en plantas
WO2024068520A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
EP4295688A1 (en) 2022-09-28 2023-12-27 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combination
WO2024068517A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068519A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068518A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-heteroaryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
EP4385326A1 (en) 2022-12-15 2024-06-19 Kimitec Biogorup Biopesticide composition and method for controlling and treating broad spectrum of pests and diseases in plants
AR131409A1 (es) 2022-12-19 2025-03-19 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Genes de toxina de insecto y métodos de uso de estos
WO2024173622A1 (en) 2023-02-16 2024-08-22 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants
UY40661A (es) 2023-03-02 2024-10-15 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar la evitación de la sombra en plantas
UY40664A (es) 2023-03-09 2024-10-15 Pairwise Plants Services Inc Modificación de genes de la vía de señalización de brasinoesteroide para mejorar rasgos de rendimien
UY40746A (es) 2023-05-18 2024-12-13 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para mejorar las características de rendimiento de las plantas
WO2025008774A1 (en) 2023-07-05 2025-01-09 Takeda Pharmaceutical Company Limited Viral vectors encoding recombinant fviii variants with increased expression for gene therapy of hemophilia a
WO2025008447A1 (en) 2023-07-05 2025-01-09 Bayer Aktiengesellschaft Composition for use in agriculture
WO2025008446A1 (en) 2023-07-05 2025-01-09 Bayer Aktiengesellschaft Composition for use in agriculture
PY2455894A (es) 2023-07-18 2025-03-28 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar la arquitectura radicular en plantas
PY2461802A (es) 2023-07-27 2025-05-19 Monsanto Tech Llc Métodos y composiciones para modificar rasgos de rendimiento de las plantas
WO2025026738A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Bayer Aktiengesellschaft 6-[5-(ethylsulfonyl)-1-methyl-1h-imidazol-4-yl]-7-methyl-3-(pentafluoroethyl)-7h-imidazo[4,5-c]pyridazine derivatives as pesticides
EP4501112A1 (en) 2023-08-01 2025-02-05 Globachem NV Plant defense elicitors
AU2024316993A1 (en) 2023-08-01 2026-01-22 Globachem Nv Insecticidal mixtures
CN121693504A (zh) 2023-08-09 2026-03-17 拜耳公司 作为新杀真菌剂的氮杂联芳基取代的4,5-二氢-1h-2,4,5-噁二嗪
WO2025032038A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 Bayer Aktiengesellschaft Pyridazin-4-yloxadiazines as novel fungicides
AR133901A1 (es) 2023-09-21 2025-11-12 Pairwise Plants Services Inc Plantas de frambuesa negra de floración temprana con características mejoradas
WO2025080600A1 (en) 2023-10-11 2025-04-17 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving crop yield traits
WO2025078128A1 (en) 2023-10-11 2025-04-17 Bayer Aktiengesellschaft Pyridazin-3-one-4-yloxadiazines as novel fungicides
WO2025090606A1 (en) 2023-10-27 2025-05-01 Basf Agricultural Solutions Us Llc Use of novel genes for the control of nematode pests
TWI865152B (zh) * 2023-11-03 2024-12-01 正瀚生技股份有限公司 熱力學水解之羽毛角蛋白水解胜肽液用於提昇小麥抗乾旱逆境之用途
WO2025098875A1 (en) 2023-11-10 2025-05-15 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2025098874A1 (en) 2023-11-10 2025-05-15 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having fungicidal/insecticidal/acaricidal properties
WO2025098876A1 (en) 2023-11-10 2025-05-15 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2025122750A1 (en) * 2023-12-06 2025-06-12 Inari Agriculture Technology, Inc. Morphogenic regulator combinations for improved plant transformation
WO2025168620A1 (en) 2024-02-07 2025-08-14 Bayer Aktiengesellschaft Heteroaryl-substituted 4,5-dihydro-1h-2,4,5-oxadiazines as novel fungicides
US20250270578A1 (en) 2024-02-22 2025-08-28 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield characteristics in plants
WO2025186065A1 (en) 2024-03-05 2025-09-12 Bayer Aktiengesellschaft Heteroaryl-substituted (aza)quinoxaline derivatives as pesticides
WO2025190927A1 (en) 2024-03-14 2025-09-18 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
EP4652842A1 (en) 2024-05-21 2025-11-26 Kimitec Biogroup S.L Biopesticide composition, procedure of obtain thereof, and method for controlling and treating broad spectrum of pests, diseases and weeds in plants
EP4652843A1 (en) 2024-05-21 2025-11-26 Kimitec Biogroup S.L Biopesticide composition, procedure of obtain thereof, and method for controlling and treating broad spectrum of pests in plants
WO2025257121A1 (en) 2024-06-12 2025-12-18 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2025257122A1 (en) 2024-06-12 2025-12-18 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2026010930A1 (en) 2024-07-05 2026-01-08 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Use of axmi277 for the control of rotylenchulus reniformis nematode pests
WO2026027375A1 (de) 2024-07-29 2026-02-05 Bayer Aktiengesellschaft Hydroxy-dihydropyridinon carboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel

Family Cites Families (113)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4535060A (en) * 1983-01-05 1985-08-13 Calgene, Inc. Inhibition resistant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthetase, production and use
US4658093A (en) * 1983-07-11 1987-04-14 Hellman Martin E Software distribution system
DE3587548T2 (de) 1984-12-28 1993-12-23 Bayer Ag Rekombinante DNA, die in pflanzliche Zellen eingebracht werden kann.
US4685131A (en) * 1985-03-11 1987-08-04 General Instrument Corp. Program blocking method for use in direct broadcast satellite system
US4940835A (en) 1985-10-29 1990-07-10 Monsanto Company Glyphosate-resistant plants
ATE85360T1 (de) 1985-08-07 1993-02-15 Monsanto Co Glyphosat resistente pflanzen.
US4822146A (en) * 1986-04-07 1989-04-18 Canon Kabushiki Kaisha Optical modulation element
US5605011A (en) * 1986-08-26 1997-02-25 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
US5378824A (en) * 1986-08-26 1995-01-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
IL83348A (en) 1986-08-26 1995-12-08 Du Pont Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
US5013659A (en) 1987-07-27 1991-05-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
US5010571A (en) * 1986-09-10 1991-04-23 Titan Linkabit Corporation Metering retrieval of encrypted data stored in customer data retrieval terminal
US5145783A (en) 1987-05-26 1992-09-08 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-endolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US4971908A (en) * 1987-05-26 1990-11-20 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US5312910A (en) 1987-05-26 1994-05-17 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US4999806A (en) * 1987-09-04 1991-03-12 Fred Chernow Software distribution system
US4868877A (en) * 1988-02-12 1989-09-19 Fischer Addison M Public key/signature cryptosystem with enhanced digital signature certification
US5084082A (en) * 1988-09-22 1992-01-28 E. I. Du Pont De Nemours And Company Soybean plants with dominant selectable trait for herbicide resistance
US5310667A (en) * 1989-07-17 1994-05-10 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthases
US5097025A (en) 1989-08-01 1992-03-17 The Rockefeller University Plant promoters
US5138712A (en) * 1989-10-02 1992-08-11 Sun Microsystems, Inc. Apparatus and method for licensing software on a network of computers
DE3938937A1 (de) 1989-11-24 1991-05-29 Wacker Chemitronic Verfahren und vorrichtung zur herstellung von siliciumstaeben mit hohem sauerstoffgehalt durch tiegelfreies zonenziehen, dadurch erhaeltliche siliciumstaebe und daraus hergestellte siliciumscheiben
ES2173077T3 (es) * 1990-06-25 2002-10-16 Monsanto Technology Llc Plantas que toleran glifosato.
US5058162A (en) * 1990-08-09 1991-10-15 Hewlett-Packard Company Method of distributing computer data files
US5633435A (en) 1990-08-31 1997-05-27 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases
US5866775A (en) 1990-09-28 1999-02-02 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthases
US5599769A (en) * 1990-11-13 1997-02-04 Hoechst Aktiengesellschaft Synergistic herbicidal compositions comprising glyphosate or glufosinate in combination with a sulfonylurea herbicide
JPH0799497B2 (ja) * 1990-12-14 1995-10-25 インターナショナル・ビジネス・マシーンズ・コーポレイション ソフトウェアの使用を管理するための装置及び方法
FR2673643B1 (fr) * 1991-03-05 1993-05-21 Rhone Poulenc Agrochimie Peptide de transit pour l'insertion d'un gene etranger dans un gene vegetal et plantes transformees en utilisant ce peptide.
FR2673642B1 (fr) 1991-03-05 1994-08-12 Rhone Poulenc Agrochimie Gene chimere comprenant un promoteur capable de conferer a une plante une tolerance accrue au glyphosate.
US5237614A (en) * 1991-06-07 1993-08-17 Security Dynamics Technologies, Inc. Integrated network security system
US5731180A (en) 1991-07-31 1998-03-24 American Cyanamid Company Imidazolinone resistant AHAS mutants
JPH05201815A (ja) * 1991-08-02 1993-08-10 Monsanto Co 除草剤組成物、その製造方法およびその使用方法
US5521815A (en) * 1992-01-31 1996-05-28 K.L.E. Irrevocable Trust Uniform system for verifying and tracking articles of value
US5276735A (en) * 1992-04-17 1994-01-04 Secure Computing Corporation Data enclave and trusted path system
US5235642A (en) * 1992-07-21 1993-08-10 Digital Equipment Corporation Access control subsystem and method for distributed computer system using locally cached authentication credentials
CN1061376C (zh) 1993-11-19 2001-01-31 生物技术研究及发展有限公司 用于植物体内基因表达的嵌合调节区和基因盒
WO1995016971A1 (en) * 1993-12-16 1995-06-22 Open Market, Inc. Digital active advertising
EP0736203A1 (en) * 1993-12-23 1996-10-09 Diacom Technologies, Inc. Method and apparatus for implementing user feedback
US5608147A (en) * 1994-01-11 1997-03-04 Kaphammer; Bryan J. tfdA gene selectable markers in plants and the use thereof
US5509074A (en) * 1994-01-27 1996-04-16 At&T Corp. Method of protecting electronically published materials using cryptographic protocols
US5505461A (en) * 1994-04-19 1996-04-09 Caesars World, Inc. Method for meeting IRS reporting requirements related to an electronic gaming machine
US5563946A (en) * 1994-04-25 1996-10-08 International Business Machines Corporation Method and apparatus for enabling trial period use of software products: method and apparatus for passing encrypted files between data processing systems
JP3638309B2 (ja) * 1994-06-23 2005-04-13 株式会社シマノ 自転車用ハブブレーキ
RU2144269C1 (ru) * 1994-07-19 2000-01-10 Сертко, Ллс Способ секретного использования цифровых подписей в коммерческой криптографической системе
EP0706275B1 (en) * 1994-09-15 2006-01-25 International Business Machines Corporation System and method for secure storage and distribution of data using digital signatures
US5717923A (en) * 1994-11-03 1998-02-10 Intel Corporation Method and apparatus for dynamically customizing electronic information to individual end users
US5630131A (en) * 1994-11-14 1997-05-13 Object Technology Licensing Corp. Method and apparatus for importing and exporting archive files for a graphical user interface
JPH08263438A (ja) * 1994-11-23 1996-10-11 Xerox Corp ディジタルワークの配給及び使用制御システム並びにディジタルワークへのアクセス制御方法
US5629980A (en) * 1994-11-23 1997-05-13 Xerox Corporation System for controlling the distribution and use of digital works
US6367013B1 (en) * 1995-01-17 2002-04-02 Eoriginal Inc. System and method for electronic transmission, storage, and retrieval of authenticated electronic original documents
US5677955A (en) * 1995-04-07 1997-10-14 Financial Services Technology Consortium Electronic funds transfer instruments
ATE187602T1 (de) 1995-04-10 2000-01-15 Monsanto Co Etheramintenside enthaltende glyphosatformulierungen
ZA964248B (en) 1995-06-23 1997-11-27 Du Pont Uniform mixtures of pesticidal granules.
FR2736926B1 (fr) 1995-07-19 1997-08-22 Rhone Poulenc Agrochimie 5-enol pyruvylshikimate-3-phosphate synthase mutee, gene codant pour cette proteine et plantes transformees contenant ce gene
JP2000503154A (ja) * 1996-01-11 2000-03-14 エムアールジェイ インコーポレイテッド デジタル所有権のアクセスと分配を制御するためのシステム
EA001150B1 (ru) * 1996-03-29 2000-10-30 Монсанто Эроп С.А. Способ повышения урожайности сельскохозяйственных культур с использованием глифосата и его производных
US6072050A (en) 1996-06-11 2000-06-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Synthetic promoters
US5727920A (en) * 1996-07-19 1998-03-17 Hull, Deceased; Harold Lawrence Vertical lift towing dolly including variable, attachable platforms
US5821195A (en) * 1996-08-16 1998-10-13 Monsanto Company Sequential application method for enhancing glyphosate herbicidal effectiveness with reduced antagonism
JP4191250B2 (ja) * 1996-08-16 2008-12-03 モンサント・テクノロジー・エルエルシー 外因性化学物質で植物を処置するための順次適用方法
US6093680A (en) * 1996-10-25 2000-07-25 Monsanto Company Composition and method for treating plants with exogenous chemicals
US20030041357A1 (en) * 1996-11-07 2003-02-27 Zeneca Limited Herbicide resistant plants
US6376754B1 (en) * 1997-03-07 2002-04-23 Asgrow Seed Company Plants having resistance to multiple herbicides and its use
US7022896B1 (en) * 1997-04-04 2006-04-04 Board Of Regents Of University Of Nebraska Methods and materials for making and using transgenic dicamba-degrading organisms
CA2297749A1 (en) * 1997-07-30 1999-02-11 Monsanto Company Process and compositions promoting biological effectiveness of exogenous chemical substances in plants
DE19754929A1 (de) * 1997-12-10 1999-06-17 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Verfahren zur Herstellung transgener Pflanzen mit veränderter 5-Aminolävulinsäure-Biosynthese und Verfahren zur Identifizierung von Effektoren der 5-Aminolävulinsäure Synthese
AU759037B2 (en) * 1998-03-06 2003-04-03 Syngenta Mogen Bv Method for the induction of pathogen resistance in plants
ATE241274T1 (de) 1998-03-09 2003-06-15 Monsanto Technology Llc Mischungen zur unkrautbekampfung in glyphosat- tolerante sojabohnen
US5914451A (en) 1998-04-06 1999-06-22 Monsanto Company Efficiency soybean transformation protocol
BR9910174A (pt) * 1998-05-01 2001-03-06 Maxygen Inc Processo para se obter um gene recombinante otimizado de resistência à praga, biblioteca, e, processo para se obter um organismo que seja patogênico a uma praga de vegetal
CZ301970B6 (cs) * 1998-06-16 2010-08-18 Basf Aktiengesellschaft Synergická herbicidní smes
AU749571B2 (en) * 1998-07-02 2002-06-27 Astropower Inc. Silicon thin-film, integrated solar cell, module, and methods of manufacturing the same
KR20010083077A (ko) 1998-08-12 2001-08-31 추후제출 제초제 선택성 작물을 생성하는 ｄｎａ 재편성
US6333449B1 (en) 1998-11-03 2001-12-25 Plant Genetic Systems, N.V. Glufosinate tolerant rice
DE69941009D1 (de) 1998-11-17 2009-07-30 Monsanto Technology Llc Phosphonat metabolisierende pflanzen
ATE285680T1 (de) * 1998-11-30 2005-01-15 Flamel Tech Sa Förderung der biologischen effektivität exogener chemischer substanzen in pflanzen
RU2235778C2 (ru) 1999-04-29 2004-09-10 Синджента Лимитед Выделенный полинуклеотид, способный придавать растению устойчивость или толерантность к глифосатному гербициду, вектор, способ получения растений, толерантных или устойчивых к глифосатному гербициду, способ регенерации трансформированного растения и способ селективной борьбы с сорняками
AU4134000A (en) * 1999-04-29 2000-11-17 Syngenta Limited Herbicide resistant plants
IL146063A0 (en) 1999-04-29 2002-07-25 Marlow Foods Ltd Herbicide resistant plants
CZ20013859A3 (cs) 1999-04-29 2002-04-17 Syngenta Ltd. Herbicidně rezistentní rostliny
US6369001B1 (en) 1999-08-11 2002-04-09 Monsanto Technology, Llc Microemulsion coformulation of a graminicide and a water-soluble herbicide
US6908882B1 (en) * 1999-09-09 2005-06-21 Monsanto Company Enhanced method of killing weeds with glyphosate herbicide
US6842863B1 (en) * 1999-11-23 2005-01-11 Microsoft Corporation Certificate reissuance for checking the status of a certificate in financial transactions
WO2001066704A2 (en) 2000-03-09 2001-09-13 Monsanto Technology Llc Methods for making plants tolerant to glyphosate and compositions thereof
WO2001065922A2 (en) * 2000-03-09 2001-09-13 E. I. Du Pont De Nemours And Company Sulfonylurea-tolerant sunflower plants
US6943280B2 (en) 2000-05-10 2005-09-13 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Resistance to acetohydroxycid synthase-inhibiting herbicides
DE10022989A1 (de) * 2000-05-11 2001-11-22 Aventis Cropscience Gmbh Kombinationen von Pflanzenschutzmitteln mit organischen oder anorganischen Trägermaterialien
BR122013026754B1 (pt) 2000-06-22 2018-02-27 Monsanto Company Molécula de dna e processos para produzir uma planta de milho tolerante à aplicação do herbicida glifosato
WO2002020811A2 (en) 2000-09-09 2002-03-14 Basf Plant Science Gmbh Modified tet-inducible system for regulation of gene expression in plants
EP2072526B1 (en) 2000-10-06 2012-05-30 Novozymes, Inc. Methods for disrupting a gene involved in PGA synthesis in Bacillus licheniformis
US20090011938A1 (en) * 2000-10-30 2009-01-08 Pioneer Hi--Bred International, Inc. Novel glyphosate-n-acetyltransferase (gat) genes
AU2002220181B2 (en) * 2000-10-30 2007-12-20 E. I. Du Pont De Nemours And Company Novel glyphosate n-acetyltransferase (gat) genes
US7462481B2 (en) 2000-10-30 2008-12-09 Verdia, Inc. Glyphosate N-acetyltransferase (GAT) genes
BR0115712A (pt) * 2000-11-29 2003-09-09 Kumiai Chemical Industry Co Genes codificando acetolactato sintase, proteìna de acetolactato sintase, vetor recombinante, transformante, planta, método para cultivar a planta, bem como método para selecionar um transformante
US7356690B2 (en) * 2000-12-11 2008-04-08 International Business Machines Corporation Method and system for managing a distributed trust path locator for public key certificates relating to the trust path of an X.509 attribute certificate
US7687434B2 (en) * 2000-12-22 2010-03-30 Monsanto Technology, Llc Method of improving yield and vigor of plants
US7395430B2 (en) * 2001-08-28 2008-07-01 International Business Machines Corporation Secure authentication using digital certificates
US20020144108A1 (en) * 2001-03-29 2002-10-03 International Business Machines Corporation Method and system for public-key-based secure authentication to distributed legacy applications
WO2002092856A1 (en) 2001-05-15 2002-11-21 Monsanto Technology Llc A method of selecting dna constructs for herbicide tolerance in plants
EP1492405A1 (en) * 2002-04-03 2005-01-05 Syngenta Participations AG Herbicidal composition comprising phenylpropynyloxypyridine compounds
WO2003092360A2 (en) 2002-04-30 2003-11-13 Verdia, Inc. Novel glyphosate-n-acetyltransferase (gat) genes
US20040023802A1 (en) * 2002-05-16 2004-02-05 Monsanto Technology, L.L.C. Increasing plant yield and/or vigor by seed treatment with a neonicotinoid compound
JP2007500514A (ja) 2003-04-29 2007-01-18 パイオニア ハイ−ブレッド インターナショナル， インコーポレイテッド 新規なグリホセートｎ−アセチルトランスフェラーゼ（ｇａｔ）遺伝子
EP1681932B1 (de) 2003-11-03 2008-03-19 Bayer CropScience AG Herbizid wirksames mittel
ATE516295T1 (de) * 2004-01-20 2011-07-15 Monsanto Technology Llc Chimäre promotoren zur verwendung in pflanzen
US7405074B2 (en) * 2004-04-29 2008-07-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Glyphosate-N-acetyltransferase (GAT) genes
CN1984558B (zh) 2004-04-30 2011-01-12 美国陶氏益农公司 新除草剂抗性基因
US7306946B2 (en) 2004-07-02 2007-12-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Antifungal polypeptides
US7496887B2 (en) * 2005-03-01 2009-02-24 International Business Machines Corporation Integration of data management operations into a workflow system
EP1931791B1 (en) * 2005-08-24 2012-02-08 Pioneer-Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions for the expression of a polynucleotide of interest
CN1313614C (zh) 2005-10-17 2007-05-02 中国农业科学院生物技术研究所 草甘膦乙酰转移酶基因及其应用
US7928296B2 (en) * 2006-10-30 2011-04-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize event DP-098140-6 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof

Also Published As

Publication number Publication date
EA201000757A1 (ru) 2010-12-30
MEP3508A (xx) 2010-02-10
US20070130641A1 (en) 2007-06-07
US20080234130A1 (en) 2008-09-25
WO2007024866A2 (en) 2007-03-01
MX2008002616A (es) 2008-03-14
JP2009505654A (ja) 2009-02-12
US8203033B2 (en) 2012-06-19
CA2620002C (en) 2012-04-10
WO2007024782A3 (en) 2007-08-09
AU2006283504B2 (en) 2011-08-25
ATE544861T1 (de) 2012-02-15
BRPI0615087A2 (pt) 2011-05-03
US20090264290A1 (en) 2009-10-22
US7973218B2 (en) 2011-07-05
US20130288898A1 (en) 2013-10-31
CA2620002A1 (en) 2007-03-01
CL2009001635A1 (es) 2009-12-11
US7622641B2 (en) 2009-11-24
US20070074303A1 (en) 2007-03-29
MA29777B1 (fr) 2008-09-01
KR20080052606A (ko) 2008-06-11
AR057091A1 (es) 2007-11-14
CA2625371C (en) 2012-06-26
CA2625371A1 (en) 2007-03-01
AP2008004392A0 (en) 2008-04-30
EP1931791B1 (en) 2012-02-08
US20070061917A1 (en) 2007-03-15
UY29761A1 (es) 2007-03-30
US20120157308A1 (en) 2012-06-21
AR055128A1 (es) 2007-08-08
ECSP088304A (es) 2008-04-28
BRPI0615088A2 (pt) 2009-07-14
EP1931791A2 (en) 2008-06-18
WO2007024866A3 (en) 2007-06-21
MX2008002615A (es) 2008-03-14
EA200800622A1 (ru) 2008-08-29
US20070079393A1 (en) 2007-04-05
EP1917360A2 (en) 2008-05-07
CR9757A (es) 2008-05-09
NZ568867A (en) 2010-12-24
TW200730625A (en) 2007-08-16
WO2007024782A2 (en) 2007-03-01
AU2006283504A1 (en) 2007-03-01
US7803992B2 (en) 2010-09-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7803992B2 (en) Methods and compositions for expressing an herbicide-tolerant polynucleotide
US20240368611A1 (en) Dual transit peptides for targeting polypeptides
JP6133011B2 (ja) 除草剤抵抗性のａｈａｓ突然変異体及び使用の方法
CN110382702A (zh) 具有增加的除草剂耐性的植物
UA123757C2 (uk) Мутована протопорфіриногеноксидаза, що надає рослинам стійкості до ппо-інгібуючого гербіциду
CA2666323A1 (en) Maize event dp-098140-6 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof
US20150351390A1 (en) Compositions and methods for auxin-analog conjugation
JP2013516193A (ja) 除草剤耐性植物
CA2655914A1 (en) Soybean event 3560.4.3.5 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof
UA120741C2 (uk) Рослина з мутованою протопорфіриногеноксидазою
US20090011938A1 (en) Novel glyphosate-n-acetyltransferase (gat) genes
US10294487B2 (en) Methods and compositions involving ALS variants with native substrate preference
CN105874062B (zh) 草甘膦-n-乙酰转移酶(glyat)序列以及使用方法
CN101297040A (zh) 提供对多种除草剂的耐受性的组合物和其使用方法
CN120529828A (zh) 对除草剂具有增加的耐受性的植物
BR112017027179B1 (pt) Método para controlar vegetação indesejada em um local de cultivo de plantas, método para produzir uma célula vegetal transgênica e método para produzir uma planta transgênica