RS20090104A

RS20090104A - Jedinjenja pirido (2,3-d) pirimidinona i njihova upotreba kao inhibitora p13

Info

Publication number: RS20090104A
Application number: RSP-2009/0104A
Authority: RS
Inventors: Mitchell David Nambu; Hengmiao Cheng; Dilip Bhumralkar; Klaus Ruprecht Dress; Jacqui Elizabet Hoffman; Mary Catherine Johnson; Robert Steven Kania; Phuong Thi Quy Le; Mason Alan Pairish; Michael Bruno Plewe; Khanh Tuan Tran
Original assignee: Pfizer Products Inc.
Priority date: 2006-09-15
Filing date: 2007-09-03
Publication date: 2010-06-30
Also published as: US7696213B2; CU20090040A7; NO20091141L; CU23783B7; WO2008032162A8; US20100137279A1; BRPI0716749B8; WO2008032162A1; IL197243A0; ES2366489T9; US8633204B2; SI2074122T1; IL197243A; BRPI0716749B1; CY1111911T1; HN2007000267A; CA2663401C; JP2010503653A; AP2710A; CN101573358B

Abstract

Ovaj pronalazak se odnosi na nova 4-metilpiridopirimidinon jedinjenja Formule (I) i na njihove soli, njihovu sintezu i njihovu upotrebu kao inhibitora fosfoinozitid 3-kinaze alfa (PI3- Kα).

Description

JEDINJENJA PIRIDO (2,3-D)PIRIMIDINONA I NJIHOVA UPOTREBA KAO INHIBITORA

PI3

Ova prijava koristi saznanja U.S. provizorne prijave broj 60/845,065 podnete 15. septembra 2006., U.S. provizorne prijave broj 60/947,852 podnete 3. jula, 2007. i U.S. provizorne prijave broj 60/952,628 podnete 30. jula, 2007., čiji su sadržaji ovde u celini inkorporirni u referenci.

Oblast pronalaska

Ovaj pronalazak se odnosi na nova jedinjenja 4-metilpiridopirimidinona, na njihove soli, njihovu sintezu i njihovu upotrebu kao modulatora ili inhibitora fosfoinozitid 3-kinaza alfa (PI3-Ka) enzima. Jedinjenja iz ovog pronalaska su korisna za modulaciju (na primer inhibiciju) aktivnosti PI3-Ka i za lečenje oboljenja i stanja u kojima je posrednik PI3-Ka, kao što su na primer, bolesna stanja povezana sa neprirodnim rastom ćelija, kao što je kancer.

Poreklo

Fosfoinozitid 3-kinaze (PI3-Ks) katalizuju sinteze fosfatidilinozitola (PI) drugih prenosilaca PI(3)P, PI(3,4)P2i PT(3,4,5)P3(PIP3). (Fruman i saradnici, Fosfoinozitid kinaze,Annu. Rev. Biochem.67 (1998), pp. 481-507; Knight i saradnici, A Pharmacological Map of the PI3-K Family Defines a Role for pl 10a in Insulin Signaling, Cell 125 (2006), pp. 733-747.) U odgovarajućem celularnom kontekstu, ova tri lipida kontrolišu različite fiziološke procese, uključujući rast ćelije, preživaljvanje, diferencijaciju i hemotaksu. (Katso i saradnici, Cellular funetion of fosfoinozitid 3-kinaze: implications for development, homeostasis i cancer,Annu. Rev. Cell Dev. Biol.17 (2001), pp. 615-675.) PI3-K familija uključuje najmanje 15 različitih enzima, podeljenih u podgrupe po strukturnoj homologiji, sa jasnim specifikacijama substrata, oblicima pojavljivanja i načinom regulacije. Glavni izooblik PI3-kinaze u kanceru je Klasa I PI3-Ka, koja se sastoji od katalitičke (pl 10a) i adaptivne (p85) podjedinice. (Stirdivant i saradnici, Cloning i mutagenesis of the pl 10a subunit of human fosfoinozitid 3'-hidroksikinaza,Bioorg. Med. Chem.5 (1997), pp. 65-74.)

3-Fosforilisani fosfolipidi (PIP3S) koje svojim delovanjem generišu PI3-Ks, deluju kao drugi prenosioci privlačeći kinaze oblastima koje vezuju lipid (uključujući plekstrin homologne (PH) regione), kao što su Akt i fosfoinozitid-zavisna kinaza-1 (PDK1). (Vivanco & Sawyers, The Phosphatidvlinozitol 3-Kinaza-Akt Pathway In Human Cancer,Nature Reviews Cancer 2

(2002), pp. 489-501.) Vezivanje Akt za membranu PIP3s dovodi do izmeštanja Akt u membranu plazme, dovodeći Akt u kontakt sa PDK1, koji je odgovoran za aktivaciju Akt. Fosfataza kao supresor tumora, PTEN, dovodi do defosforilacije PIP3i na taj način deluje kao negativni regulator aktiviranja Akt. PI3-Ks, Akt i PDK1 su važni u regulaciji brojnih celularnih procesa, uključujući regulaciju ćelijskog ciklusa, proliferaciju, preživljavanje, apoaptoze i motilitet i predstavljaju značajne komponente molekularnog mehanizma kod bolesti kao što su kancer, dijabetes i imuna inflamacija. Više komponenti PI3-K7Akt/PTEN oblika je implicirano u onkogenezi. Kao dodatak za faktor rasta receptora tirozin kinaze, adhezija ćelija zavisna od integrina i receptori udvojenih G-proteina aktiviraju PI3-K direktno ili indirektno preko adaptora molekula. Gubitak funkcije PTEN (najčešći mutirani gen supresora tumora u koncem posle p53), onkogene mutacije u PIK3CA genu koji enkodira PI3-Ka, amplifikacija PIK3CA gena i prekomerno pojavljivanje Akt su ustanovljeni u brojnim malignitetima, (videti, na primer, Samuels i saradnici, High frequency of mutations of the PIK3CA gene in human cancers,Science304(2004), p. 554; Broderick i saradnici, Mutations in PIK3CA in anaplastic oligodendrogliorhas, high-grade astrocvtomas i medulloblastomas, Cancer Research 64 (2004), pp. 5048-5050.)

PI3-Ka je stoga atraktivni cilj za razvoj leka protiv kancera jer se od takvih sredstava očekuje da inhibiraju proliferaciju i da nadvladaju rezistenciju na citotoksična sredstva u ćelijama kancera. Postoji potreba da se obezbcde novi PI3-Ka inhibitori koji su dobri kandidati za lek. Oni treba da budu bioraspoloživi, metabolički stabilni i da poseduju tražene farmakokinetičke osobine.

Kratak sadržaj

U jednom aspektu ovog pronalaska je jedinjenje Formule (I)

ili njegova so,

gde:

R<1>je H ili (Cido Ce) alkil grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<5>grupom; A je 3 do 10 člana cikloalkil grupa; R2 je (Cido C6) alkil grupa supstituisana sa najmanje jednom R<6>grupom, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C6do C14) aril, (C2do C9) heteroaril, - NR<7a>R<7b>, ili -N=CR<8a>R<8b>grupa, pri čemu je svaka od navedene (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C6do C14) aril i (C2do C9) heteroaril grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R<9>grupom; R3 je (Cido C6) alkil, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C2do C8) alkenil, (C2do C8) alkinil, halogen, cijano, -(CH2)nC(0)OR<10>, -(CH2)nC(0)N(R<lla>R<l>lb),COR<12>, (C6do C14) aril, ili (C2do C9) heteroaril grupa, pri čemu je navedena (Q doC&)alkil, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C2do Cg) alkenil, (C2do Cg) alkinil, ( C(, do C14) aril i (C2do C9) heteroaril grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<9>grupom; svaki R4 je nezavisno -OH, halogen, CF3, -NRllaR<l>lb,(C, do C6) alkil, (Cido C6) alkenil, (Cido C6) alkinil, (Cido Cd) alkoksi, cijano, (C3do C]0) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C6 do C14) airl, (C2 do Cg) heteroaril, -C(0)R<12>-C(0)NR<lla>Rll, -S(0)mR<12>, -S(0)mNR<lla>R<llb>, -NR<lla>S(0)mR<12->(CH2)nC(0)OR<10>, -(CH2)„C(0)N(R<lla>R<llb>), -OC(0)R<12>, -NR<Ua>C(0)R<12>ili -NR<lla>C(0)N(R<lla>R") grupa, pri čemu je svaka od navedene (Q do C6) alkil, (C, do C6) alkenil, (C, do C6) alkinil, (C, do C6) alkoksi, (C3do C,0) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C6do C]2) aril i (C2do C9) heteroaril grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R 13 grupom;

svaki R<5>je nezavisno -OH, halogen, CF3, -NR1 !aR! lb, (Cido C6) alkil, (Cido C6) alkoksi, cijano, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C6do Cj4) aril, (C2do C9) heteroaril,

-S(0)mR<12>, -S(0)mNR<lla>R<llb>, -C(0)R<12>ili -C(0)NR<lla>R<llb>grupa, pri čemu je svaka od navedene (Cido C6) alkil, (Cido C6) alkoksi, (C3do Cl0) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C6do

Cm) aril i (C2do C9) heteroaril grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R<9>grupom;

svaki R6 je nezavisno -OH, (Cido C6) alkinil, cijano, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C6do C,4) aril, (C2do C9) heteroaril, -C(0)R<12>-C(0)NR<lla>R<llb>, -S(0)mR<12>,

-S(0)mNR,<,a>R<nb>, -NR<lla>S(0)mR<12>-(CH2)nC(0)OR<10>, -(CH2)nC(0)N(R<Ua>R<llb>), -OC(0)R<12>, -NR<lla>C(0)R<12>ili -NR<lla>C(0)N(R<lla>R<llb>) grupa, pri čemu je svaka od navedene (Cido C6) alkinil, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C6do Ci2) aril i (C2do C9) heteroaril grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R grupom;R<7a>i R<7b>su svaki nezavisno H, (C, do C6) alkil, (C2do C6)alkenil, (C2do C6)alkinil, (C3do Cio) cikloalkil ili (Cćdo Cio)aril grupa, pri čemu je svaka od navedene (CidoC^)alkil, (C2do C6)alkenil, (C2do Ce)alkinil, (C3do Cio) cikloalkil i (C6do Cio)aril grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R<9>grupom; ili R<7a>i R<7b>mogu zajedno sa atomom azota da formiraju 5 do 8 člani heterociklični prsten, pri čemu taj heterociklični prsten ima 1 do 3 heteroatoma u prstenu izabranih iz grupe koja sadrži N, O i S i pri čemu je taj 5 do 8 člani cikloheteroalkil prsten opciono supstituisan sa najmanje jednom R9 grupom; R<8a>i R<8b>ssvaki nezavisno H, (CidoC6)alkil, ili (C3do Cio) cikloalkil grupa, pri čemu je svaka od navedene (CidoC(,)alkil i (C3do Cio) cikloalkil grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R<9>grupom; svaki R9 je nezavisno -OH, halogen, CF3, -NRllaR<!lb>, (Cido C6) alkil, (O do C6) alkenil, (Cido Cć) alkinil, (Cido C6) alkoksi, cijano, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C6do CH) aril, (C2do C9) heteroaril, -C(0)R<12>-C(0)NR<lla>R<Ub>, -S(0)mR<12>, -S(0)mNR<lla>R<llb>, -NR<lla>S(0)mR<12>, -(CH2)nC(0)OR<10>, -(CH2)nC(0)N(R,<la>R<Ub>), -OC(0)R<12>, -NR,<Ia>C(0)R<12>ili -NR<lla>C(0)N(R<lla>R<Ilb>) grupa, pri čemu je svaka od navedene (Cido C6) alkil, (Cido C6) alkenil, (Cido C6) alkinil, (Cido C6) alkoksi, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C6do Cn) aril i (C2do C9) heteroaril grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R<13>grupom;

svaki R10 je nezavisno H, ili (Cido C6) alkil grupa;

Rll<a>i R<Ub>su svaki nezavisno H, (Cido C6) alkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C2do C9) heteroaril ili (C6do C]2) aril grupa, pri čemu je svaka od navedene (Cido C6) alkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C2do C9) heteroaril i (C6do Ci2) aril grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R<13>grupom;

svaki od R12 je nezavisno (Cido C6) alkil, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C2do C9) heteroaril ili (C6do C]4) aril grupa, pri čemu je svaka od navedene (Cido C6) alkil, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C2do C9) heteroaril i (C6do Ci4) aril grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R<13>grupo<m>;

svaki od R<13>je nezavisno -OH, halogen, CF3, (Cido C6) alkil, (Cido C6) alkenil, (Cido C6) alkinil, (Cido C6) alkoksi, cijano, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C6do Ch) aril, (C2do C9) heteroaril, amino, karbonil, C-amido, sulfinil, S-sulfonamido, C-karboksil, N-amido ili N-karbamil grupa;

svaki m je nezavisno 1 ili 2;

svaki nje nezavisno 0,1, 2, 3 ili 4; i

svaki z je ceo broj nezavisno izabran od 0,1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8.

Jedan oblik ovog aspekta je jedinjenje u skladu sa Formulom (I), kako je prethodno opisano, gde je A izabran iz grupe koja sadrži ciklobutil, ciklopentil i cikloheksil grupu.

Još jedan oblik ovog aspekta je jedinjenje u skladu sa Formulom (I), kako je prethodno opisano, gde je R<3>(C6do C14) aril ili (C2do C9) heteroaril grupa, pri čemu je navedena (C6do C14) aril ili (C2do C9) heteroaril grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<9>grupom.

Još jedan oblik ovog aspekta je jedinjenje u skladu sa Formulom (I), kako je prethodno opisano, koje je izabrano iz grupe koja sadrži: 2-amino-6-(5-fluoro-6-metoksipiridin-3-il)-8-[trans-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-[trans-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-[trans-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metil-6-kvinolin-3-ilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-[trans-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-6-(2-metoksipirimidin-5-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-[trans-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metil-6-(lH-pirazol-4-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-6-bromo-8-[trans-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-[cis-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metil-6-(lH-pirazol-4-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-(trans-4-{[(2S)-2,3-d]hidroksipropil]oksi}cikloheksil)-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-[cis-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metil-6-kvinolin-3-ilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-6-(5-fluoro-6-metoksipiridin-3-il)-8-[cis-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-[cis-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-6-(2-metoksipirimidin-5-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-[cis-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-6-bromo-8-[cis-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metilpirido[2,3-d]pirimid 7(8H)-on;

2-amino-6-[6-(dimetilamino)piirdin-3-il^^ metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-({trans-4-[2-amino-6-(5-fluoro-6-metoksipiridin-3-il)-4-metil-7-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il]cikloheksil}oksi)acetamid;

metil ({trans-4-[2-amino-6-(5-fluoro-6-metoksipiridin-3-il)-4-metil-7-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il]cikloheksil} oksi)acetat;

2-amino-8-[trans-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metil-6-(lH-pirazol-3-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on, ,

2-amino-8-[trans-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metil-6-(l -metil-1 H-pirazol-4-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on,

2-({cis-4-[2-amino-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metil-7-oksopiirdo[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il]cikloheksil)oksi)acetamid,

2-({cis-4-[2-amino-6-(5-fluoro-6-metoksipiridin-3-il)-4-metil-7-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il]cikloheksil}oksi)acetamid,

2-({cis-4-[2-amino-4-metil-7-okso-6-(lH-pirazol-4-il)pirido[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il]cikloheksil} oksi)acetamid,

2-( {cis-4-[2-amino-4-metil-6-( 1 -metil-1 H-pirazol-4-il)-7-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il]cikloheksil} oksi)acetamid,

2-({cis-4-[2-amino-6-(2-metoksipirimidin-5-il)-4-metil-7-oksopiirdo[2,3-d]pirimidin-8 (7H)-il] cikloheksil} oksi)acetamiđ,

2-{[cis-4-(2-amino-4-metil-7-okso-6-kvinolin-3-ilpirido[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il)cikloheksil]oksi} acetamid,

2-({trans-4-[2-amino-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metil-7-oksopiirdo[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il]cikloheksil}oksi)acetamid,

2-{[trans-4-(2-amino-4-metil-7-okso-6-kvmolin-3-ilpirido[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il)cikloheksil]oksi}acetamid,

2-({trans-4-[2-amino-6-(2-metoksipirimidin-5-il)-4-metil-7-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il]cikloheksil} oksi)acetamid,

2-({trans-4-[2-amino-4-metil-7-okso-6-(lH-pirazol-441)pirido[2,3-d]pirim il]cikloheksil}oksi)acetamiđ,

2-({trans-4-[2-amino-4-metil-6-(l -metil- lH-pirazol-4-il)-7-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8 (7H)-il] cikloheksil} oksi)acetamid,

2-amino-8-[trans-3-(2-hidroksietoksi)ciklobutil]-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on,

2-amino-6-(5-fluoro-6-metoksipiirdin-3-il)-8-[trans-3-(2-hidroksietoksi)ciklobutil]-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on,

2-amino-8-[trans-3-(2-hidroksietoksi)ciklobutil]-6-(2-metoksipirimidin-5-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on,

2-({trans-3-[2-amino-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metil-7-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il]ciklobutil} oksi)acetamid,

2-({trans-3-[2-amino-6-(5-fluoro-6-metoksipiridin-3-il)-4-metil-7-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il]ciklobutil}oksi)acetamid,

2-({trans-3-[2-amino-6-(2-metoksipirimidin-5-il)-4-metil-7-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il]ciklobutil}oksi)acetamid, ili njegovu so.

Još jedan aspekt ovog pronalaska je jedinjenje Formule (II)

ili njegova so,

gde:

R1 je H ili (CidoCe)alkil grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<4>grupom;

R2 je (C, do C6) alkil, (C2do Cg) alkenil, (C3do C10) cikloalkil, (C5do C8) cikloalkenil, (C2do C9) cikloheteroalkil ili -(CH2)n(C6do C14) aril grupa, pri čemu je navedena (CidoC(,)alkil, (C2do Cg) alkenil, (C3do Cio) cikloalkil, (C5do Cg) cikloalkenil, (C2do C9) cikloheteroalkil i -(CH2)n(Cćdo C14) aril grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<4>grupom;

R<3>je (Ci do C6) alkil, (C2do C8) alkenil, cijano, -(CH2)nC(0)OR5aili

-(CH2)nC(0)N(R<5a>R5b) grua, pri čemu je navedena (C, do C6) alkil ili (C2do C8) alkenil grupa

opciono supstituisana sa najmanje jednom R<4>grupom;

svaki R4 je nezavisno -OH, halogen, CF3, -NR<5a>R<5b>, (Ci do C6) alkil, (C, do C6) alkoksi, cijano, (C3do C)0) cikloalkil, --S(0)mR<5a>, -S(0)mNR<5a>R5b,-C(0)R<5a>ili -C(0)NR<5a>R<5b>grupa;

R<5a>i R<Sb>su svaki nezavisno H, (Cido C6) alkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C2do C9) heteroaril ili( Cedo Cu) aril grupa;

svaki m je nezavisno 1 ili 2; i

svaki nje nezavisno 0, 1, 2, 3 ili 4.

Još jedan oblik ovog aspekta je jedinjenje Formule (II), pri čemu je R<3>

-(CH2)nC(0)N(R<5a>R<5b>) grupa.

Još jedan oblik ovog aspekta je jedinjenje Formule (II), gde je R<2>izabran iz grupe koja sadrži izopropil, alil, ciklopentil, ciklobutil, hidroksicikloheksil, hidroksiciklopentil, hidroksiciklobutil, hidroksicikloheptil, metoksietil, metoksipropil, etil, metil, ciklopropil, ciklopropilmetil, ciklopropiletil, 2-metil-2-hidroksipropil, 3-metil-3-hidroksilbutil, metoksibenzil i hlorobenzil grupu.

Još jedan aspekt ovog pronalaska je jedinjenje u skladu sa Formulom (II), kako je prethodno opisano, koje je izabrano iz grupe koja sadrži: 2-Amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-7-okso-N-lH-pirazol-5-il-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksamid;

2-amino-N-(l-etil-lH-pirazol-5-il)-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-7-okso-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksamid;

(lH-pirazol-3-il)-amid 8-Ciklopentil-4-metil-2-metilamino-7-okso-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksilne kiseline;

2-amino-8-izopropil-4-metil-7-okso-N-lH-pirazol-5-il-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksamid;

2-amino-N-(l-etil-lH-pirazol-5-il)-8-izopropil-4-metil-7-okso-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksamid;

8-ciklopentil-N-[(l-etil-lH-pirazol-4-il)metil]-4-metil-2-(metilamino)-7-okso-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksamid;

8-ciklopentil-4-metil-2-(metilamino)-7-okso-N-piridin-2-il-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksamid;

i 8-ciklopentil N-izoksazol-3-il-4-metil-2-(metilamino)-7-okso-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksamid, ili njegovu so.

Još jedan aspekt ovog pronalaska je jedinjenje Formule (III)

ili njegova so,

gde:

R<1>je H ili (CjdoC^)alkil grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<4>grupom; R je spirociklična grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R grupom; R<3>je (Cido C6) alkil, (C2do C8) alkenil, cijano, -(CH2)nC(0)OR<5>, -(CH2)nC(0)N(R<6a>R<6b>), (C6do Ci4) aril ili (C2do C9) heteroaril grupa, pri čemu je navedena (d do C6) alkil ili (C2do C8) alkenil grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<4>grupom i pri čemu je navedena (Cćdo C14) aril ili (C2do C9) heteroaril grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<7>grupom; svaki R4 je nezavisno -OH, halogen, CF3, -NR6aR<6b>, (Cido C6) alkil, (Ci do C6) alkoksi, cijano, (C3do C8) cikloalkil, -S(0)mR<6a>, -S(0)mNR<6a>R<6b>, -C(0)R6a ili -C(0)NR<6a>R<6b>grupa; svaki R<5>je nezavisno H ili (Cido C6) alkil grupa;R<6a>i R<6b>su svaki nezavisno H, (C, do C6) alkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C2do C9) heteroaril ili (C6do C]4) aril grupa; svaki od R7 je nezavisno -OH, halogen, -NR<6a>R<6b>, cijano, (Ci do Ce) alkil, (Cido C(,) alkoksi, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, -S(0)mR<6a>, -S(0)mNR<6a>R<6b>, -(CH2)nC(0)OR<5>, -(CH2)nC(0)N(R6<a>R<6b>),~OC(0)R<6b>ili -NR<6a>C(0)R<6b>grupa, pri čemu je svaka od navedene (CidoCe)alkil, (CidoCe)alkoksi, (C2do C9) cikloheteroalkil i (C3do Cio) cikloalkil grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R<4>grupom;

svaki m je nezavisno 1 ili 2; i

svaki nje nezavisno 0, 1, 2, 3 ili 4.

Još jedan aspekt ovog pronalaska je jedinjenje izabrano iz grupe koja uključuje: 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-(cis-4-hidroksicikloheksil)-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-6-[6-(dimetilamino)piridin-3-il]-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-6-kvinolin-3-ilpirid 7(8H)-on;

2-amino-6-[2,3-d]hidro-l,4-benzodioksin-6-il)-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-6-(5-fluoro-6-metoksipiridin-3-il)-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4 metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-(trans-4-mdroksicikloheksil)-4-m d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-6-(5-fJuoro-6-metoksipiridin-3-il)-8-(cis-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-6-(6-etoksipiridin-3-il)-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-6-[6-(dimetilamino)piridin-3-il]-8-(cis-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpiri d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-(trans-4-metoksicikloheksil)-4-metil-6-(lH-pirazol-4-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-(cis-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-4-metil-6-(lH-pirazol-4-il)piri d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-6-(lH-pirazol-3-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-(cis-4-hidroksicikloheksil)-6-(2-metoksipirimidin-5-il)-4-metilpiri d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-6-(2-meto^ d]pirimidin-7(8H)-on;

8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metil-2-(metilamino)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-(etilamino)-6-(5-fluoro-6-metoksipiridin-3-il)-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-(etilamino)-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-6-(2-metoksipirirnidiri-5-i])-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-6-( 1 -metil-1 H-pirazol-4-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-6-(lH-pirazol-4-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-[(2,2-difluoroetil)amino]-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-6-(6-metoksipiridm metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on, ili njegovu so.

U još jednom aspektu je bilo koji od prethodno opisanih aspekata u kombinaciji sa bilo kojim od prethodno opisanih aspekata koji međusobno nisu protivurečni.

Ovaj pronalazak se takođe odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja uključuje najmanje jedno jedinjenje kako je ovde opisano, ili njegovu so i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.

Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupak za lečenje neprirodnog rasta ćelija, ili bilo kog oboljenja ili stanja u kome je posrednik PI3-Ka, kod sisara kojima je to potrebno, koji uključuje fazu primene na tom sisaru terapeutski efektivne količine najmanje jednog jedinjenja kako je ovde opisano, ili njegove soli. Na primer, u jednom aspektu nepirirodan rast ćelija je kancerogeni rast. U narednom aspektu neprirodan rast ćelija nije kancerogen.

Ovaj pronalazak se dalje odnosi na postupak za inhibiciju enizmatičke aktivnosti PI3-Ka, koji uključuje dovođenje u kontakt PI3-Ka enzima sa količinom najmanje jednog ovde opisanog jedinjenja ili njegove soli koja inhibira PI3-Ka.

Ovaj pronalazak se dalje odnosi na upotrebu bilo kog ovde opisanog jedinjenja, ili njegove soli, u proizvodnji medikamenta za tretman neprirodnog rasta ćelija kod sisara.

Ovaj pronalazak se dalje odnosi na postupke za izradu ovde opisanih jedinjenja, koristeći postupke koji su ovde pokazani u specifičnim primerima i opštim postupcima sinteze A, B, C, D, E, F, H i I, kako je ovde opisano.

Ovaj pronalazak se dalje odnosi na bilo koje prethodno opisano jedinjenje, ili njegovu so, za upotrebu kao medikamenta. Ovaj pronalazak se dalje odnosi na upotrebu bilo kog ovde opisanog jedinjenja, ili njegove soli, za proizvodnju medikamenta za tretman neprirodnog rasta ćelija.

Kratak opis crteža

SLIKA 1 pokazuje primer anti-tumorne efikasnosti u zavisnosti od doze 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (Jedinjenje 152) u modelu PC3 tumora.

SLIKA 2 pokazuje primer anti-tumorne efikasnosti u zavisnosti od doze Jedinjenja 152 u modelu SKOV3 tumora.

SLIKA 3 pokazuje primer anti-tumorne efikasnosti u zavisnosti od doze Jedinjenja 152 u modelu U87MG tumora.

Detaljan opis

Kako se ovde koriste, nazivi "uključujući" i "obuhvatajući" se koriste u njihovom potpunom, ne-ograničenom značenju.

Nazivi "halo" i/ili "halogen" se odnose na tluor, hlor, brom ili jod.

Naziv "(CidoC( >)"alkil se odnosi na zasićeni alifatični ugljovodonični radikal koji uključuje grupe ravnog lanca ili račvastog lanca sa 1 to 6 atoma ugljenika. Primeri (CidoC$)alkil grupa obuhvataju metil, etil, propil, 2-propil, n-butil, izo-butil, terc-butil, pentil i slično. Nazivi "Me" i "metil," kako se ovde koristi, označavaju -CH3grupu. Nazivi "Et" i "etil," kako se ovde koristi, označavaju -C2H5grupu.

Naziv "(C2do Cg) alkenil", kako se ovde koristi, označava alkil deo koji uključuje 2 do 8 ugljenika koji imaju najmanje jednu ugljenik-ugljenik dvostruku vezu. Ugljenik-ugljenik dvostruka veza u ovakvoj grupi može da se nalazi bilo gde na lancu od 2 do 8 ugljenika koji će za rezultat da ima stabilno jedinjenje. Ove grupe obuhvataju i E i Z izomere ovog alkenil dela. Primeri ovih grupa obuhvataju, ali se ne ograničavaju samo na, etenil, propenil, butenil, alil i pentenil grupe. Naziv "alil," kako se ovde koristi, označava -CH2CH=CH2grupu. Naziv, "C(R)=C(R),<n>kako se ovde koristi, predstavlja ugljenik-ugljenik dvostruku vezu u kojoj je svaki ugljenik supstituisan sa nekom R grupom.

Kako se ovde koristi, naziv "(C2do C8) alkinil" označava alkil deo koji uključuje od 2 do 8 atoma ugljenika i ima najmanje jednu ugljenik-ugljenik trostruku vezu. Ugljenik-ugljenik trostruka veza u ovakvoj grupi može da bude bilo gde na lancu od 2 do 8 ugljenika koji će za rezultat da ima stabilno jedinjenje. Primeri ovakvih grupa uključuju, ali se ne ograničavaju samo na, etin, propin, 1-burin, 2-butin, 1-pentin, 2-pentin, 1-heksin, 2-heksin i 3-heksin.

Naziv "(Cido Cg) alkoksi", kako se ovde koristi, označava O-alkil grupu, pri čemu navedena alkil grupa sadrži od 1 do 8 atoma ugljenika i može da bude ravna, račvasta ili ciklična. Primeri ovakvih grupa uključuju, ali se ne ograničavaju samo na, metoksi, etoksi, n-propiloksi, izo-propiloksi, n-butoksi, izo-butoksi, terc-butoksi, ciklopentiloksi i cikloheksiloksi.

Naziv "(Cćdo Ch) aril", kako se ovde koristi, označava grupu dobijenu od aromatičnog ugljovodonika koji sadrži od 6 do 14 atoma ugljenika. Primeri ovakvih grupa uključuju, ali se ne ograničavaju samo na, fenil ili naftil. Nazivi "Ph" i "fenil," kako se ovde koristi, označavaju

-C6H5grupu. Naziv "benzil," kako se ovde koristi, označava -CH2C6H5grupu.

"(C2doCg)heteroaril", kako se ovde koristi, označava aromatičnu heterocikličnu grupu koja ukupno ima od 5 do 10 atoma u svom prstenu i sadrži od 2 do 9 atoma ugljenika i od jedan do četiri heteroatoma koji je svaki nezavisno izabran od O, S i N i uz uslov da prsten navedene grupe ne sadrži dva O atoma jedan pored drugog ili dva S atoma jedan pored drugog.

Heterociklične grupe obuhvataju sisteme spojenih benzol prstena. Primeri aromatičnih heterocikličnih grupa su piriđinil, imidazolil, pirimidinil, pirazolil, triazolil, pirazinil, tetrazolil, furil, tienil, izoksazolil, tiazolil, oksazolil, izotiazolil, pirolil, kvinolinil, izokvinolinil, indolil, benzimidazolil, benzofuranil, cinolinil, indazolil, indolizinil, ftalazinil, piridazinil, triazinil, izoindolil, pteridinil, purinil, oksadiazolil, tiadiazolil, furazanil, benzofurazanil, benzotiofenil, benzotiazolil, benzoksazolil, kvinazolinil, kvinoksalinil, naftiridinil i furopiridinil. C2do C9heteroaril grupe mogu da budu vezane preko C ili vezane preko N, kada je to moguće. Na primer, grupa dobijena od pirola može da bude pirol-l-il (N-vezana) ili pirol-3-il (C-vezana). Dalje, grupa dobijena od imidazola može da bude imidazol-l-il (N-vezana) ili imidazol-3-il ((Za-vezana).

"(C2do C9) cikloheteroalkil", kako se ovde koristi, označava alifatičnu, monocikličnu, bicikličnu, tricikličnu, spirocikličnu ili tetracikličnu grupu koja ukupno ima od 4 do 13 atoma u svom sistemu prstena i sadrži od 2 do 9 atoma ugljenika i od 1 do 4 heteroatoma od kojih je svaki nezavisno izabran od O, S i N i uz uslov da prsten ove grupe ne sadrži dva O atoma jedan pored drugog i dva S atoma jedan pored drugog. Osim toga, ovakve C2do C9cikloheteroalkil grupe mogu da sadrže neki okso supstituent na bilo kom raspoloživom atomu što za rezultat može da ima stabilno jedinjenje. Na primer, ovakva grupa može da sadrži okso atom na raspoloživom atomu ugljenika ili azota. Ovakva grupa može da sadrži više od jednog okso supstituenta ukoliko je to hemijski izvodljivo. Pored toga, jasno je da kada ovakva C2do C9cikloheteroalkil grupa sadrži atom sumpora, navedeni atom sumpora može da bude oksidisan sa jednim ili dva atoma kiseonika da se dobije ili sulfoksid ili sulfon. Primer 4 -člane cikloheteroalkil grupe je azetidinil (dobijen od azetidina). Primer 5-člane cikloheteroalkil grupe je pirolidinil. Primer 6-člane cikloheteroalkil grupe je piperidinil. Primer 9-člane cikloheteroalkil grupe je indolinil. Primer 10-člane cikloheteroalkil grupe je 4H-kvinolizinil. Dalji primeri ovakvih C2do C9cikloheteroalkil grupa uključuju, ali se ne ograničavaju samo na, tetrahidrofuranil, dihidrofuranil, tetrahidrotienil, tetrahidropiranil, dihidropiranil, tetrahidrotiopiranil, piperidino, morfolino, tiomorfolino, tioksanil, piperazinil, azetidinil, oksetanil, tietanil, homopiperidinil, oksepanil, tiepanil, oksazepinil, diazepinil, thiazepinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, 2-pirolinil, 3-pirolinil, indolinil, 2H-piranil, 4H-piranil, dioksanil, 1,3-dioksalanil, pirazolinil, ditianil, ditiolanil, dihidropiranil, dihidrotienil, dihidrofuranil, pirazolidinil, imidazolinil, imidazolidinil, 3-azabiciklo[3.1.0]heksanil, 3-azabiciklo[4.1.0]heptanil, 3H-indolil kvinolizinil, 3-oksopiperazinil, 4-metilpiperazinil, 4-etilpiperazinil i l-okso-2,8.diazaspiro[4.5]dec-8-il.

Naziv "(C3do Cio) cikloalkil grupa" označava zasićenu, monocikličnu, spojenu, spirocikličnu ili policikličnu strukturu prstena koja ima ukupno 3 do 10 atoma ugljenika u prstenu. Primeri ovakvih grupa uključuju, ali se ne ograničavaju samo na, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, ciklopentenil, cikloheksil, cikloheptil i adamantil.

Naziv "spirocikličan", kako se ovde koristi, ima svoje uobičajeno značenje, to jest, bilo koje jedinjenje koje sadrži dva iil više prstena, pri čemu dva prstena imaju jedan zajednički ugljenik u prstenu. Prstenovi spirocikličnog jedinjenja, kako se ovde definiše, nezavisno imaju 3 do 20 atoma u prstenu. Preferirano, imaju 3 do 10 atoma u prstenu. Ne-ograničavajući primeri spirocikličnog jedinjenja uključuju spiro[3.3]heptan, spiro[3.4]oktani spiro[4.5]dekan.

Naziv "(C5do C8) cikloalkenil" označava nezasićenu, monocikličnu, spojenu, spirocikličnu strukturu prstena koja ima ukupno od 5 do 8 atoma ugljenika u prstenu. Primeri ovakvih grupa uključuju, ali se ne ograničavaju smo na, ciklopentenil, cikloheksenil.

Naziv "cijano" se odnosi na -C=N grupu.

"Aldehid" grupa se odnosi na karbonil grupu u kojoj je R vodonik.

"Alkoksi" grupa se odnosi i na -O-alkil i -O-cikloalkil grupu, kako je ovde definisano. "Alkoksikarbonil" se odnosi na -C(0)OR.

"Alkilaminoalkil" grupa se odnosi na -alkil-NR-alkil grupu.

"Alkilsulfonil" grupa se odnosi na -S02alkil.

"Amino" grupa se odnosi na -NH2ili neku -NRR' grupu.

"Aminoalkil" grupa se odnosi na -alkil-NRR' grupu.

"Aminokarbonil" se odnosi na -C(0)NRR'.

"Arilalkil" grupa se odnosi na -alkilaril, gde su alkil i aril ovde prethodno definisani. "Ariloksi" grupa se odnosi i na -O-aril i na -O-heteroaril grupu, kako je ovde definisano. "Ariloksikarbonil" se odnosi na -C(0)Oaril.

"Arilsulfonil" grupa se odnosi na -S02aril.

"C-amido" grupa se odnosi na -C(0)NRR' grupu.

"Karbonil" grupa se odnosi na -C(0)R.

"C-karboksil" grupa se odnosi na -C(0)OR grupe.

"Karboksilna kisela" grupa se odnosi na C-karboksilnu grupu u kojoj je R vodonik. "Cijano" grupa se odnosi na -CN grupu.

"Dialkilamionalkil" grupa se odnosi na —(alkil)N(alkil)2grupu.

"Halo" ili "halogen" grupa se odnosi na fluor, hlor, brom ili jod.

"Heteroalicikloksi" grupa se odnosi na heteroalicikličnu-0 grupu sa heteroaliciklusom kako je ovde definisano.

"Heteroariloksil" grupa se odnosi na heteroaril-O grupu sa heteroaril grupom, kako je

ovde definisano.

"Hidroksi" grupa se odnosi na -OH grupu.

"N-amido" grupa se odnosi na -R'C(0)NR grupu.

"N-karbamil" grupa se odnosi na -ROC(0)NR-grupu.

"Nitro" grupa se odnosi na -N02grupu.

"N-Sulfonamido" grupa se odnosi na -NR-S(0)2R grupu.

"N-tiokarbamil" grupa se odnosi na ROC(S)NR' grupu.

"O-karbamil" grupa se odnosi na -OC(0)NRR' grupu.

"O-karboksil" grupa se odnosi na RC(0)0 grupu.

"O-tiokarbamil" grupa se odnosi na -OC(S)NRR' grupu.

"Okso" grupa se odnosi na karbonil deo tako da se alkil grupa supstituisana sa okso grupom odnosi na keto grupu.

"Perfluoroalkil grupa" se odnosi na alkil grupu u kojoj su svi atomi vodonika zamenjeni sa atomima fluora.

"Fosforni" grupa se odnosi na -P(0)(OR)2grupu.

"Silil" grupa se odnosi na -Si(R)3grupu.

"S-sulfonamido" grupa se odnosi na -S(O)2NR-grupu.

"Sulfinil" grupa se odnosi na -S(0)R grupu.

"Sulfonil" grupa se odnosi na -S(O)2R grupu.

"Tiokarbonil" grupa se odnosi na -C(=S)-R grupu.

"Trihalometankarbonil" grupa se odnosi na Z3CC(0) grupu, gde je Z halogen. "Trihalometansulfonamido" grupa se odnosi na Z3CS(0)2NR-grupu. "Trihalometansulfonil" grupa se odnosi na Z3CS(0)2grupu.

"Trihalometil" grupa se odnosi na -CZ3grupu.

"C-karboksil" grupa se odnosi na -C(0)OR grupe.

Naziv "supstituisan," označava da određena grupa ili deo ima jedan ili više supstituenata. Naziv "nesupstituisan," označava da određena grupa nema supstituente. Naziv "opciono supstituisan" označava daje određena grupa nesupstituisana ili supstituisana sa jednim ili više supstituenata. Jasno je da ujedinjenjima iz ovog pronalaska, kada se za grupu kaže daje "nesupstituisana," ili "supstituisana" sa manje grupa nego što to dozvoljavaju slobodne valence svih atoma ujedinjenju, na preostalim valencama ove grupe se nalazi vodonik. Na primer, ukolko je Cćaril grupa, takođe ovde označena kao "fenil", supstituisana sa jednim dodatnim supstituentom, stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici zna da ovakva grupa ima 4 otvorena položaja koji su ostali na atomima ugljenikaCearil prstena (6 početnih položaja, minus jedan za koji je ostatak jedinjenja iz ovog pronalaska vezan, minus jedan dodatni supstituent, da ostane 4). U ovakvim slučajevima, svaki od preostala 4 atoma ugljenika je vezan sa po jednim atomom vodonika kako bi se popunile njihove valence. Slično tome, ukoliko se kaže da je C6 aril grupa u ovom jedinjenju "disupstituisana," stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici će znati da to znači da naCearil grupi ostaje 3 atoma ugljenika koji nisu supstituisani. Svaki od ova tri nesupstituisana atoma ugljenika vezuje po jedan atom vodonika da popuni svoje valence.

Naziv "solvat," se koristi da opiše molekularni kompleks između jedinjenja iz ovog pronalaska i molekula rastvarača U primere solvata spadaju, ali bez ograničenja na, jedinjenja iz pronalaska u kombinaciji sa vodom, izopropanolom, etanolom, metanolom, dimetilsulfoksidom (DMSO), etil acetatom, acetatnom kiselinom, etanolaminom ili njihovim mešavinama. Naziv "hidrat" može da se koristi kada je navedeni rastvarač voda. Posebno se ima u vidu da u ovom pronalasku jedna molekula rastvarača može da se poveže sa jednom molekulom jedinjenja iz ovog pronalaska, kao što je hidrat. Osim toga, posebno se ima u vidu da u ovom pronalasku, više od jedne molekule rastvarača može da se poveže sa jednom molekulom jedinjenja iz ovog pronalaska, kao što je dihidrat. Dodatno, posebno se ima u vidu da u ovom pronalasku manje od jedne molekule rastvarača može da se poveže sa jednom molekulom jedinjenja iz ovog pronalaska, kao što je hemihidrat. Osim toga, solvati iz ovog pronalaska se razmatraju kao solvati iz ovog jedinjenja koji zadržavaju biološku efikasnost ne-hidratnog oblika jedinjenja.

Naziv "farmaceutsku prihvatljiva so," kako se ovde koristi, označava so jedinjenja iz ovog pronalaska koja zadržava biološku efikasnost slobodne kiseline i baze navedenog derivata, a koja nisu biološki ili na drugi način nepoželjna.

Naziv "farmaceutski prihvatljiva formulacija," kako se ovde koristi, označava kombinaciju jedinjenja iz pronalaska, ili njene soli ili solvata, i nosača, razblaživača i/ili ekscipijenta(ata) koji su kompatibilni sa jedinjenjem iz ovog pronalaska i nisu štetni za primaoca. Farmaceutske formulacije mogu da se izrade po procedurama koje su poznate stručnjaku sa uobičajenim iskustvom u tehnici. Na primer, jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da se formulišu sa uobičajenim ekscipijentima, razblaživačima ili nosačima i da se formiraju u obliku tableta, kapsula i slično. Primeri ekscipijenata, razblaživača i nosača koji su pogodni za ovakve formulacije uključuju sledeće: punioce i sredstva za dopunjavanje kao što su škrob, šećeri, manitol i derivati silicijuma; vezivna sredstva kao što su karboksimetil celuloza i drugi derivati celuloze, alginati, želatin i polivinil pirolidon; sredstva za vlaženje kao što je glicerol; sredstva za raspadanaje kao što su povidon, natrijum škrob glikolat, natrij um karboksimetilceluloza, agar, kalcijum karbonat i natrijum bikarbonat; sredstva za usporeno rastvaranje kao što je parafin; sredstva za ubrzavanje resorpcije kao što su kvaternerna jedinjenja amonijaka; površinski aktivna sredstva kao što su cetil alkohol, glicerol monostearat; adsorptivne nosače kao što su kaolin i bentonit; i lubrikanse kao što su talk, kalcijum i magnezijum stearat i čvrsti polietilen glikoli. Finalni farmaceutski oblici mogu da budu pilule, tablete, praškovi, lozenge, sahete, kahete ili sterilni upakovani praškovi i slično, u zavisnosti od tipa ekscipijenta koji je korišćen. Dodatno, posebno se ima u vidu da farmaceutski prihvatljive formulacije iz ovog pronalaska mogu da sadrže više od jednog aktivnog sastojka. Na primer, ovakve formulacije mogu da sadrže više od jednog jedinjenja u skladu sa ovim pronalaskom. Alternativno, ovakve formulacije mogu da sadrže jedno ili više jedinjenja iz ovog pronalaska i jedno ili više dodatnih sredstava koja redukuju neprirodan rast ćelije.

Naziv "količina koja inhibira PI3-Ka" kako se ovde koristi, se odnosi na količinu jedinjenja iz ovog pronalaska, ili njegove soli ili solvata, koja je potrebna da inhibira enizmatičnu aktivnost PI3-Kain vivo,kao što je kod sisara, iliin vitro.Količina ovih jedinjenja koja je potrebna da dovede do ovakve inhibicije može da se odredi bez nepotrebnog eksperimentisanja postupcima koji su ovde opisani i koji su poznati stručnjacima sa uobičajenim iskustvom u tehnici.

Naziv "inhibicija aktivnosti PI3-Ka enzima," kako se ovde koristi, označava smanjenje aktivnosti ili funkcionisanja PI3-Ka enzima iliin vitroiliin vivo,kao što je kod sisara, na primer ljudi, dovođenjem u vezu enzima sa jedinjenjem iz ovog pronalaska.

Naziv "PI3-Ka", kako se ovde koristi označava PI3-Ka, ili njegove mutante, ili bilo koju poznatu PI3-Ka izoformno spojenu varijantu.

Naziv "terapetuski efektivna količina," kako se ovde koristi, označva količinu jedinjenja iz ovog pronalaska, ili njegovu so, koja je, kada se primeni na sisara kome je takav tretman potreban, dovoljna da dovede do lečenja, kako je ovde definisano. Prema tome, terapetuski efektivna količina jedinjenja iz ovog pronalaska, ili njegova so, je količina dovoljna da modulira ili inhibira aktivnost PI3-Ka enzima tako da se bolesno stanje u kome je posrednik aktivnost PI3-Kct enzima smanji ili poboljša.

Nazivi "lečenje", "tretman" i "tretiranje" u odnosu na neprirodan rast ćelija, ili na bilo koje oboljenje ili stanje u kome je posrednik PI3-Ka kod sisara, posebno ljudi, obuhvata: (i) prevenciju da ne dođe do oboljenja ili stanja kod subjekta koji ima predispozicije za takvo stanje, tako da tretman čini profilaktički tretman za patološko stanje; (ii) moduliranje ili inhibiciju oboljenja ili stanja, to jest, zaustavljanje njegovog razvoja; (iii) oslobađanje od bolesti ili stanja, to jest, izazivanje regresije oboljenja ili stanja; ili (iv) oslobađanje i/ili olakšavanje oboljenja ili stanja ili simptoma koji su rezultat oboljenja ili stanja, na primer, oslobađanaje inflamatornog odgovora bez usmeravanja na određeno oboljenje ili stanje. U vezi sa neprirodnim rastom ćelija, kao što je kancer, ovi nazivi jednostavno znače da se očekivano preživljavanje pojedinca sa neprirodnim rastom ćelija produžava ili da se jedan ili više simptoma bolesti smanjuju.

Ukoliko nije drugačije naznačeno, sve reference koje su ovde date za inventivna jedinjenja uključuju reference za soli, solvate i njihove komplekse, ukljčujući njihove polimorfne, stereoizomerne, tautomerne i izostopno obeležene verzije. Na primer, jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da budu farmaceutski prihvatljive soli i/ili farmaceutski prihvatljivi solvati.

"Neprirodan rast ćelija", kako se ovde koristi, ukoliko nije drugačije navedeno, se odnosi na rast ćelija koji je nezavistan od normlnih regulatornih mehanizama (na primer, gubitak kontaktne inhibicije), uključujući neprirodan rast normalnih ćelija i rast neprirodnih ćelija. Ovo obuhvata, ali se ne ograničava samo na, neprirodan rast: ćelija tumora (tumori) koji se razvijaju pojavljivanjem mutirane tirozin kinaze ili povećanim pojavljivanjem receptora tirozin kinaze; benigne i maligne ćelije drugih proliferativnih bolesti u kojima dolazi do aktiviranja nenormalne tirozin kinaze; bilo koje tumore koji se razvijaju pomoću receptora tirozin kinaze; bilo koje tumore koji se razvijaju nenormalnim aktiviranjem serin/treonin kinaze; benigne i maligne ćelije drugih proliferativnih bolesti u kojima dolazi do nenormalnog aktiviranja serin/treonin kinaze; tumore, i benigne i maligne, u kojima se pojavljuje aktivirani Ras onkogen; ćelije tumora, i benignih i malignih, u kojima je Ras protein aktiviran kao rezultat onkogene mutacije u drugom genu; benigne i maligne ćelije drugih proliferativnih bolesti u kojima dolazi do nenormalnog aktiviranja Ras. Primeri ovakvih benignih proliferativnih bolesti su psorijaza, benigna hipertrofija prostate, humani papiloma virus (HPV) i restenoze. "Neprirodan rast ćelija se takođe odnosi i uključuje neprirodan rast ćelija, i benignih i malignih, koji nastaje aktiviranjem enzima farnesil protein transferaze.

Nazivi "neprirodan rast ćelija" i "hiperproliferativno oboljenje" se u ovoj aplikaciji koriste u istom značenju.

Naziv "stereoizomeri" se odnosi na jedinjenja koja imaju identičnu hemijsku konstituciju, ali se razlikuju prema rasporedu njihovih atoma ili grupa u prostoru. Posebno, naziv "enantiomeri" se odnosi na dva stereoizomera jedinjenja koji se međusobno odnose kao predmet i lik u ogledalu. Nazivi "racemat" ili "racematna mešavina," kako se ovde koristi, se odnosi na 1:1 mešavinu enantiomera određenog jedinjenja. Naziv "diastereomeri", s druge strane, se odnosi na međusoban odnos između para stereoizomera što uključuje dva ili više asimetričnih centara i nisu međusobno u odnosu kao predmet i lik u ogledalu.

U skladu sa uobičajenom upotrebom u tehnici, oznaka^se ovde koristi u strukturnim formulama da opiše vezu koja je mesto vezivanja dela ili supstituenta za jezgro ili osnovnu strukturu. U skladu sa drugom konvencijom, u nekim ovde datim strukturnim formulama atomi ugljenika i za njih vezani atomi vodonika nisu posebno opisani, na primer

predstavlja metil grupu, predstavlja etil grupu,

predstavlja

ciklopentil grupu, itd.

Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da imaju asimetrične atome ugljenika. Veze ugljenik-ugljenik u jedinjenjima iz ovog pronalaska mogu da se opišu koristeći punu liniju ( '

ispunjeni klin * ""^" ^ ili isprekidani klin * Upotreba pune linije za opis veza na asimetričnim atomima ugljenika treba da ukaže da su uključeni svi mogući stereoizomeri (na primer specifični enantiomeri, racematne mešavine, itd.) na tom atomu ugljenika. Korišćenje ili popunjenog ili isprekidanog klina za opis veza na asimetričnim atomima ugljenika treba da pokaže daje obuhvaćen samo pokazani stereoizomer. Moguće je da jedinjenja iz pronalaska mogu da sadrže više od jednog asimetričnog atoma ugljenika. U tim jedinjenjima, upotreba pune linije za opis veza na asimetričnim atomima ugljenika treba da označi da su uključeni svi mogući stereoizomeri. Na primer, ukoliko nije drugačije navedeno, to označava da jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da egzistiraju kao enantiomeri i diastereomeri ili kao racemati i njihove mešavine. Upotreba pune linije da opiše veze najednom ili više asimetričnih atoma ugljenika u jedinjenju iz pronalaska i upotreba popunjenog ili isprekidanog klina da opiše veze na drugim asimetričnim atomima ugljenika u istom jedinjenju, treba da ukaže daje prisutna mešavina diastereomera.

Ukoliko je grupa, kao na primer "R", opisana kao "plutajuća" na A sistemu prstenova u formuli:

tada, ukoliko nije drugačije navedeno, supstituent "R" može da se nalazi na bilo kom atomu prstena, podrazumevajući zamenu opisanog, podrazumevanog ili jasno definisanog atoma vodonika najednom od atoma u prstenu, sve dok se formira stabilna struktura. Prsten A može da bude, na primer, bez ograničenja na, aril, heteroaril, cikloalkil, cikloheteroalkil, spirociklil ili spojeni sistem prstenova.

Ukoliko je grupa "R" opisana kao "plutajuća" u A sistemu prstenova koji sadrži zasićene atome ugljenika, tada "z" može da bude veći od jedan, predpostavljajući da svaki zamenjuje ovde opisani, uključeni, i jasno definisani vodonik u prstenu A; nakon toga, ukoliko nije drugačije navedeno, ako je nastala struktura stabilna, dva "R's" mogu da se nalaze na istom ugljeniku. Na primer, kada je R metil grupa, na ugljeniku prstena A može početnu da egzistira dimetil grupa. U još jednom primeru, dva "R's" na istom ugljeniku, uključujući taj ugljenik, mogu da formiraju prsten i na taj način stvore spirociklični prsten ("spirociklična grupa").

Uobičajene tehnike za izradu/izdvajanje pojedinačnih enantiomera uključuju asimetrične sinteze iz odgovarajućeg optički čistog prekursora ili rezoluciju upotrebljenog racemata, na primer, asimetričnom visoko efikasnom tečnom hromatografijom HPLC). Alternativno, racemat (ili racematni prekursor) može da reaguje sa odgovarajućim optički aktivnim jedinjenjem, na primer, alkoholom ili, u slučaju kada jedinjenje sadrži kiseli ili bazni deo, sa kiselinom ili bazom kao što su tartaratna kiselina ili 1-feniletilamin. Dobijena diastereomerna mešavina može da se razdvoji hromatografijom i/ili frakcionom kristalizacijom, a jedan ili oba diastereoizomera da se konvertuju u odgovarajući čist enantiomer(e) sredstvima koja su dobro poznata stručnjacima u tehnici. Asimetrična jedinjenja iz pronalaska (i njihovi asimetrični prekursorsi) mogu da se dobiju u enantiomerno-obogaćenom obliku koristeći hromatografiju, uobičajeno HPLC, na asimetričnoj smoli, sa mobilnom fazom koja sadrži ugljovodonik, obično heptan ili heksan, uz prisustvo od 0 do 50% izopropanola, obično od 2 do 20% i od 0 do 5% nekog alkilamina, obično 0.1% dietilamina. Koncentracijom eluata se dobija obogaćena mešavina. Stcreoizomcrni konglomerati mogu da se razdvoje uobičajenim tehnikama koje su poznate stručnjacima sa iskustvom u tehnici. Videti, na primer "Stereochemistrv of Organic Jedinjenjes" od E L Eliel (Wiley, New York, 1994), čije je otkriće ovde u celini inkorporirano u referenci.

Kada jedinjenje iz pronalaska sadrži neku alkenil ili alkenilen grupu, mogući su geometrijskicis/ trans(ili Z/E) izomeri. Kada jedinjenje sadrži, na primer, keto ili oksim grupu ili aromatični deo, može da dođe do tautomernog izomerizma ('tautomerizam'). Primeri tautomerizma uključuju keto i enol tautomere. Pojedinačno jedinjenje može da pokaže više od jednog tipa izomerizma. Okvirom pronalaska su obuhvaćeni svi stereoizomeri, geometrijski izomeri i tautomerni oblici inventivnih jedinjenja, uključujući jedinjenja koja pokazuju više od jednog tipa izomerizma i mešavine jednog ili više njih. Cis/trans izomeri mogu da se razdvoje uobičajenim tehnikama koje su dobro poznate stručnjacima sa iskustvom u tehnici, na primer, hromatografijom i frakcionom kristalizacijom.

Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da se primene kao prolekovi. Prema tome, izvesni derivati Formule (I), koji kao takvi mogu da imaju malu ili nikakvu farmakološku aktivnost, kada se primene na sisaru, konvertuju se na primer, hidrolitičkim cepanjem ujedinjenje Formule (I) koje ima željenu aktivnost. Ovakvi derivati su označeni kao "prolekovi". Prolekovi mogu, na primer, da se izrade zamenom odgovarajućih funkcionalnih grupa koje su prisutne ujedinjenju Formule (I) sa izvesnim radikalima koji su poznati stručnjacima sa iskustvom u tehnici. Videti, na primer "Pro-drugs as Novel Deliverv Svstems", Vol. 14, ACS Svmposium Series (T Higuchi i W Stella) i "Bioreversible Carriers in Drug Design", Pergamon Press, 1987 (ed. E B Roche, American Pharmaceutical Association), čija su otkrića ovde u celini inkorporirana u referenci. Neki primeri ovakvih prolekova obuhvataju: estarsku grupu umesto kisele karboksilne funkcionalne grupe; etarsku grupu ili amidnu grupu umesto alkoholne funkcionalne grupe i amidnu grupu umesto primarne ili sekundarne amino funkcionalne grupe. Na primer, jedinjenje niže pokazano kao Primer 31 je jedan primer gde je vodonik u alkoholnoj grupi zamenjen sa amidnom funkcionalnom grupom. Drugi primeri zamenjenih grupa su poznati stručnjacima sa iskustvom u tehnici. Videti, na primer "Design of Prodrugs" od H Bundgaard (Elsevier, 1985), čije je otkriće ovde u celini inkorporirano ureferenci. Takođe je moguće da izvesna jedinjenja Formula (I) mogu sama da deluju kao prolekovi drugih jedinjenja Formule (I).

Soli iz ovog pronalaska mogu da se izrade u skladu sa postupcima koji su poznati stručnjacima sa iskustvom u tehnici. Primeri soli uključuju, ali se ne ograničavaju samo na, acetatne, akrilatne, benzensulfonatne, benzoatne (kao što su hlorobenzoat, metilbenzoat, dinitrobenzoat, hidroksibenzoat i metoksibenzoat), bikarbonatne, bisulfatne, bisulfitne, bitartaratne, boratne, bromidne, butin-l,4-dioatne, kalcijum edetatne, kamsilatne, karbonatne, hloridne, kaproatne, kaprilatne, klavulanatne, citratne, dekanoatne, dihidrohloridne, dihidrogenfosfatne, edetatne, edisilatne, estolatne, esiliatne, etilsukcinatne, formatne, fumaratne, gluceptatne, glukonatne, glutamatne, glikolatne, glikolilarsanilatne, heptanoatne, heksin-1,6-dioatne, heksilrezorcinatne, hidrabaminne, hidrobromidne, hidrohloridne, y-hidroksibutiratne, jodidne, izobutiratne, izotionatne, laktatne, laktobionatne, lauratne, malatne, maleatne, malonatne, mandelatne, mesilatne, metafosfatne, metan-sulfonatne, metilsulfatne, monohidrogenfosfatne, mukatne, napsilatne, naftalen-l-sulfonatne, naftalen-2-sulfonatne, nitratne, oleatne, oksalatne, pamoatne (embonatne), palmitatne, pantotenatne, fenilacetatne, fenilbutiratne, fenilpropionatne, ftalatne, fosfatne/difosfatne, poligalakuronatne, propansulfonatne, propionatne, propiolatne, pirofosfatne, pirosulfatne, salicilatne, stearatne, subacetatne, suberatne, sukcinatne, sulfatne, sulfonatne, sulfitne, tanatne, tartaratne, teoklatne, tosilat, trietiododne i valeratne soli.

Jedinjenja iz ovog pronalaska koja su po prirodi bazna su sposobna da formiraju veliki broj različitih soli sa različitim neorganskim i organskim kiselinama. Mada ove soli moraju da budu farmaceutski prihvatljive za primenu na životinjama, često je u praksi poželjno da se prvo iz reaktivne mešavine izoluje jedinjenje iz ovog pronalaska u obliku farmaceutski neprihvatljive soli, a nakon toga se jednostavno konvertuje natrag u slobodnu bazu jedinjenja tretmanom sa alkalnim reagensom, a nakon toga se slobodna baza konvertuje u farmaceutski prihvatljivu so dodatkom kiseline. Soli baznih jedinjenja iz ovog pronalaska nastale dodatkom kiselina mogu da se izrade tretiranjem baznog jedinjenja sa tačno ekvivalentnom količinom izabrane neorganske ili organske kiseline u vodenom rastvaraču ili u odgovarajućem organskom rastvaraču, kao što su metanol ili etanol. Nakon evaporacije rastvarača, dobija se željena so u čvrstom obliku. Željena kisela so može takođe da precipitira iz rastvora slobodne baze u nekom organskom rastvaraču dodavanjem u rastvor odgovarajuće mineralne ili organske kiseline.

Ona jedinjenja iz ovog pronalaska koja su kisela po prirodi su sposobna da formiraju bazne soli sa različitim farmakološki prihvatljivim katjonima. Primeri ovakvih soli uključuju soli alkalnih metala ili soli zemno-alkalnih metala, a posebno soli natrijuma i kalijuma. Sve ove soli se izrađuju uobičajenim tehnikama. Hemijske baze koje se koriste kao reagensi za izradu farmaceutski prihvatljivih važnih soli iz ovog pronalaska su one koje formiraju netoksične bazne soli sa kiselim jedinjenjem iz ovog pronalaska. Ovakve netoksične bazne soli uključuju one koje su dobijene od takvih farmakološki prihvatljivih katjona kao što su natrijum, kalijum, kalcijum i magnezijum, itd. Ove soli mogu da se izrade tretiranjem odgovarajućih kiselih jedinjenja sa vodenim rastvorom koji sadrži farmakološki prihvatljive katjone, a nakon toga evaporacijom nastalog rastvora do sušenja, preferirano pod sniženim pritiskom. Alternativno, ove soli mogu takođe da se izrade mešanjem nižih zaalkalisanih rastvora kiselih jedinjenja zajedno sa alkoksidom željenog alkalnog metala, a nakon toga evaporacijom dobijenog rastvora do sušenja, na isti način kao i prethodno. U drugom slučaju, preferirano se koriste stehiometrijske količine reagenasa kako bi se osigurala potpuna reakcija i maksimum prinosa željenog finalnog produkta.

Ukoliko je inventivno jedinjenje baza, željena so može da se izradi bilo kojim pogodnim postupkom raspoloživim u tehnici, na primer, tretmanom slobodne baze sa nekon neorganskom kiselinom kao što su hidrohloridna kiselina, hidrobromidna kiselina, sumporna kiselina, azotna kiselina, fosforna kiselina i slično, ili sa nekom organskom kiselinom, kao što su acetatna kiselina, maleatna kiselina, sukcinatna kiselina, mandelatna kiselina, fumaratna kiselina, malonatna kiselina, piruvijatna kiselina, oksalna kiselina, glikolatna kiselina, salicilatna kiselina, piranozidilna kiselina, kao što su glukuronatna kiselina ili galakturonatna kiselina, nekom alfa-hidroksi kiselinom, kao što su citratna kiselina ili tartaratna kiselina, nekom amino kiselinom, kao što su aspartatna kiselina ili glutamatna kiselina, nekom aromatičnom kiselinom, kao što su benzoatna kiselina ili cinamatna kiselina, nekom sulfonatnom kiselinom, kao što su p-toluensulfonatna kiselina ili etansulfonatna kiselina, ili slično.

Ukoliko je inventivno jedinjenje kiselina, željena so može da se izradi bilo kojim pogodnim postupkom, na primer, tretmanom slobodne kiseline sa nekom neorganskom ili organskom bazom kao što su amin (primarni, sekundarni ili tercijerni), hidroksid alkalnog metala ili hidroksid zemno alkalnog metala, ili slično. Ilustrativni primeri odgovarajućih soli uključuju organske soli dobijene od amino kiselina, kao što su glicin i arginin, soli amonijaka, primarnih, sekundarnih i tercijernih amina i cikličnih amina, kao što su piperidin, morfolin i piperazin i neorganske soli dobijene od natrijuma, kalcijuma, kalijuma, magnezijuma, mangana, gvožđa, bakra, cinka, aluminijuma i litijuma.

U slučaju kada su sredstva koja se koriste u čvrstom stanju, stručnjaku sa iskustvom u tehnici je jasno da inventivna jedinjenja, sredstva i soli mogu da egzistiraju u različitim kristalnim ili polimorfnim oblicima od kojih su svi obuhvaćeni okvirom ovog pronalaska i navedeni u formulama.

Pronalazak takođe uključuje izotopno-obeležena jedinjenja iz pronalaska, gde je jedan ili više atoma zamenjeno sa nekim atomom koji ima isti atomski broj, ali je atomska masa ili maseni broj različit od atomske mase ili masenog broja koji se uobičajeno nalazi u prirodi. Primeri izotopa pogodnih za uključivanje u jedinjenja iz pronalaska obuhvataju izotope vodonika kao što su<2>H i<3>H, ugljenika, kao što su<n>C,<13>C i1<4>C, hlora, kao što je<36>C1, fluora, kao što je 18F, joda, kao što su 123I i<125>I, azota, kao što su<13>N i<I5>N, kiseonika, kao što su<15>0, nO i<ls>O, fosfora, kao što je<32>P i sumpora, kao što jc<35>S. Izvesna izotopno-obeležena jedinjenja iz pronalaska, na primer, ona u kojima je inkorporiran radioaktivni izotop su korisna za studije distribucije leka i/ili substrata tkiva. U ovu svrhu su posebno pogodni radioaktivni izotopi tricijum,<3>H i ugljenik-14,<14>C, imajući u vidu njihovo lako inkorporiranje i jednostavan način detekcije. Substitucija sa težim izotopima, kao što je deuterijum,<2>H, može da omogući izvesne terapeutske prednosti koje su rezultat veće metaboličke stabilnosti, na primer, povećanja polu-životain vivoili smanjenje zahtevanih doza, i stoga mogu da budu preferirani u nekim situacijama. Substitucija sa izotopima koji emituju pozitrone kao što su C, F, O i N,može da bude korisna u studijama topografije emisije pozitrona (PET) za ispitivanje broja receptora u substratu.

Izotopno-obeležena jedinjenja iz pronalaska mogu generalno da se izrade uobičajenim tehnikama koje su poznate stručnjacima sa iskustvom u tehnici ili procesima koji su analogni ovde opisanim, koristeći odgovarajući izotopno-obeleženi reagens umesto ne-obeleženog reagensa koji se inače koristi.

Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da se formulišu u farmaceutske kompozicije kako je opisano u daljem tekstu u bilo kom farmaceutskom obliku za koji stručnjak sa iskustvom u tehnici proceni daje odgovarajući. Farmaceutske kompozicije iz pronalaska uključuju terapeutski efektivnu količinu najmanje jednog jedinjenja iz ovog pronalaska i neki inertni, farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač

Za lečenje ili prevenciju oboljenja ili stanja u kojima je posrednik PI3-Ka, farmaceutska kompozicija iz pronalaska se primenjuje u odgovarajućoj formulaciji izrađenoj kombinacijom terapeutski efektivne količine, (to jest, količine koja modulira, reguliše ili inhibira PI3-Ka tako da postiže terapeutsku efikasnost) najmanje jednog jedinjenja iz ovog pronalaska (kao aktivnog sastojka) sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača koji mogu da budu izabrani, na primer, od razblaživača, ekscipijenata i pomoćnih materija da se postigne prerada aktivnih jedinjenja u finalne farmaceutske preparate.

Korišćeni farmaceutski nosači mogu da budu ili čvrsti ili tečni. Primeri čvrstih nosača su laktoza, saharoza, talk, želatin, agar, pektin, akacija, magnezijum stearat, stearatna kiselina i slično. Primeri tečnih nosača su sirup, kikirikijevo ulje, maslinovo ulje, voda i slično. Slično tome, inventivne kompozicije mogu da obuhvate materijale za vremenski odloženo ili vremenski određeno oslobađanje koji su poznati u tehnici, kao što su gliceril monostearat ili gliceril distearat sami ili sa voskom, etilceluloza, hidroksipropilmetilceluloza, metilmetakrilat ili slično. Drugi aditivi ili ekscipijenti mogu da se dodaju kako bi se postigle željene osobine formulacije. Na primer, može da se doda bioraspoloživ pojačivač, kao što su Labrasol, Gelucire ili slično, ili učvršćivač, kao što su CMC (karboksi-metilceluloza), PG (propilenglikol), ili PEG (polietilenglikol). Gelucire®, polu-čvrsti vehikulum koji štiti aktivne sastojke od svetlosti, vlage i oksidacije, može na primer da se doda kada se izrađuje formulacija u obliku kapsule.

Ukoliko se koristi čvrsti nosač, preparat može da bude tabletiran, stavljen u čvrstu želatinsku kapsulu u obliku praška ili peleta ili formiran u obliku troheja ili lozengi. Količina čvrstog nosača može da varira, ali generalno može da bude od približno 25 mg do približno 1 g. Ukoliko se koristi tečni nosač, preparat može da bude u obliku sirupa, emulzije, meke želatinske kapsule, sterilnog injektibilnog rastvora ili suspenzije u ampulama ili bočicama, ili u obliku ne-vodene tečne suspenzije. Ukoliko se koristi polu-čvrsti nosač, preparat može da bude u obliku formulacija čvrstih i mekih želatinskih kapsula. Inventivne kompozicije se izrađuju u jediničnim doznim oblicima koji odgovaraju načinu primene, na primer, parenteralna ili oralna primena.

Kako bi se dobio stabilan dozni oblik rastvorljiv u vodi, so jedinjenja iz ovog pronalaska može da se rastvori u vodenom rastvoru neke organske ili neorganske kiseline, kao što je 0.3 M rastvor sukcinatne kiseline ili citratne kiseline. Ukoliko nije raspoloživ oblik rastvorljive soli, sredstvo može da se rastvori u odgovarajućem ko-rastvaraču ili kombinacijama ko-rastvarača. Primeri pogodnih ko-rastvarača uključuju alkohol, propilen glikol, polietilen glikol 300, polisorbat 80, glicerin i slično, u koncentracijama u rasponu od 0 do 60% ukupne zapremine. U aspektu koji služi kao primer, jedinjenje iz ovog pronalaska se rastvori u DMSO i razblaži sa vodom. Kompozicija može takođe da bude u obliku rastvora aktivnog sastojka u obliku soli u odgovarajućem vodenom vehikulumu, kao što su voda ili izotonični rastvor soli ili dekstroze.

Izbor odgovarajuće formulacije zavisi od predviđenog načina primene. Za injekcije, sredstva jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da se formulišu u vodenim rastvorima, preferirano u fiziološki kompatibilnim puferima kao što je Hanksov rastvor, Ringerov rastvor, ili fiziološki slani pufer. Za transmukalnu primenu, u formulaciji se koriste penetranti koji potpomažu da barijera postane permeabilna. Ovakvi penetranti su generalno poznati u tehnici.

Za oralnu primenu, jedinjenja mogu da se formulišu kombinacijom aktivnih jedinjenja sa farmaceutski prihvatljivim nosačima poznatim u tehnici. Ovakvi nosači omogućavaju da se jedinjenja iz pronalaska formulišu u obliku tableta, pilula, dražeja, kapsula, tečnosti, gelova, sirupa, magmi, suspenzija i slično, za oralno uzimanje od strane subjekta koji se tretira. Farmaceutski preparati za oralnu upotrebu mogu da se dobiju upotrebom čvrstog ekscipijenta u mešavini sa aktivnim sastojkom (sredstvom), opciono mlevenjem dobijene mešavine i preradom granulatne mešavine nakon dodavanja odgovarajućih pomoćnih sredstava, ukoliko se želi, da se dobiju tablete ili jezgra dražeja. U pogodne ekscipijente spadaju: punioci kao što su šećeri, uključujući laktozu, saharozu, manitol ili sorbitol; i preparati celuloze, na primer, kukuruzni škrob, žitni škrob, pirinčani škrob, krompirov škrob, želatina, guma, metil celuloza, hidroksipropilmetil-celuloza, natrijum karboksimetilceluloza ili polivinilpirolidon (PVP). Ukoliko se želi, mogu da se dodaju sredstva za raspadanje, kao što su poprečno vezani polivinil pirolidon, agar ili alginatna kiselina ili njena so, kao što je natrijum alginat.

Jezgra dražeja su prekrivena odgovrajućim omotačima. U ovu svrhu mogu da se koriste koncentrovani rastvori šećera koji opciono mogu da sadrže arapsku gumu, polivinil pirolidon, karbopol gel, polietilen glikol i/ili titanijum dioksid, rastvore laka i pogodne organske rastvarače i mešavine rastvarača. U tablete ili omotače dražeja mogu da se dodaju sredstva za bojenje ili pigmenti radi identifikacije ili za karakterizaciju različitih kombinacija aktivnih sredstava.

Farmaceutski preparti koji mogu da se koriste oralno obuhvataju dvodelne kapsule izrađene od želatine kao i meke zalivene kapsule izrađene od želatina i plastifikatora, kao što su glicerol ili sorbitol. Dvodelne kapsule mogu da sadrže aktivne sastojke u mešavini sa puniocima kao što je laktoza, vezivnim sredstvima kao što su škrobovi i/ili lubrikansima kao što su talk ili magnezijum stearat i, opciono, stabilizatorima. U mekim kapsulama, aktivna sredstva mogu da budu rastvorena ili suspendovana u pogodnim tečnostima, kao što su masna ulja, tečni parafin ili tečni polietilen glikoli. Kao dodatak, mogu da se dodaju stabilizatori. Sve formulacije za oralnu primenu bi trebalo da budu u dozama pogodnim za ovakvu primenu. Za bukalnu primenu, kompozicije mogu da budu u obliku tableta ili lozengi formulisanih na uobičajeni način.

Za primenu intranazalno ili inhalacijom, jedinjenja za upotrebu u skladu sa ovim pronalaskom mogu uobičajeno da budu u obliku aerosol spreja koji se oslobađa iz kontejnera pod pritiskom ili nebulizera, uz upotrebu odgovarajućeg propelanta, na primer, dihlorodifluorometana, trihlorofluorometana, dihlorotetrafluoroetana, ugljendioksida ili drugog pogodnog gasa. U slučaju aerosola pod pritiskom, dozna jedinica može da se odredi stavljanjem ventila koji oslobađa odmerenu količinu. Kapsule i kartridži od želatine za upotrebu u inhaleru ili insuflatoru i slično, mogu da se formulišu tako da sadrže praškastu mešavinu jedinjenja i odgovarajuće praskaste baze kao što su laktoza ili škrob.

Jedinjenja mogu da se formulišu za parenteralnu primenu pomoću injekcije, na primer, jedne injekcije ili kontinuirane infuzije. Formulacije za injekcije mogu da budu u jedno-doznom obliku, na primer, u ampulama ili u više-doznim kontejnerima, uz dodatak konzervansa. Kompozicije mogu da budu u oblicima suspenzija, rastvora ili emulzija u uljanim ili vodenim vehikulumima i mogu da sadrže sredstva za poboljšanje formulacije kao što su sredstva za suspendovanje, stabilizaciju i/ili disperziju.

Farmaceutske formulacije za parenteralnu primenu obuhvataju vodene rastvore aktivnih jedinjenja u obliku rastvorljivom u vodi. Dodatno, suspenzije aktivnih sredstava mogu da se izrade kao odgovarajuće uljane suspenzije za injekcije. Pogodni lipofilni rastvarači ili vehikulumi obuhvataju masna ulja kao što je sezamovo ulje, ili sintetičke estre masnih kiselina, kao što su etil oleat ili trigliceridi, ili lipozomi. Injekcije u obliku vodenih suspenzija mogu da sadrže supstance koje povećavaju viskozitet suspenzije, kao što su natrijum karboksimetil celuloza, sorbitol, ili dekstran. Opciono, suspenzija može takođe da sadrži odgovarajuće stabilizatore ili sredstva koja povećavaju rastvorljivost jedinjenja kako bi se omogućila izrada rastvora veće koncentracije.

Alternativno, aktivni sastojak može da bude u obliku praška sa konstituciju sa pogodnim vehikulumom, na primer sterilnom apirogenom vodom, pre upotrebe.

Kao dodatak prethodno opisanim formulacijama, jedinjenja iz ovog pronalaska mogu takođe da se formulišu kao depo preparati. Ovakve dugo-delujuće formulacije mogu da se primene implantacijom (na primer, subkutano ili intramuskularno) ili intramuskularnom injekcijom. Prema tome, na primer, jedinjenja mogu da se formulišu sa odgovarajućim polimernim ili hidrofobnim materijalima (na primer, kao emulzije u prihvatljivom ulju) ili smolama jonskih izmenjivača ili kao slabo rastvorljivi derivati, na primer, kao slabo rastvorljiva so. Farmaceutski nosač za hidrofobna jedinjenja je sistem ko-rastvarača koji uključuje benzil alkohol, ne-polarni surfaktant, organski polimer koji se meša sa vodom i vodenu fazu. Sistem ko-rastvarača može da bude VPD sistem ko-rastvarača. VPD je rastvor 3% m/v benzil alkohola, 8% m/v nepolarnog surfaktanta polisorbata 80 i 65% m/v polietilen glikola 300, i do ukupne zapremine dopunjen sa apsolutnim etanolom. VPD sistem ko-rastvarača (VPD: 5W) sadrži VPD razblažen u odnosu 1:1 sa 5% vodenim rastvorom dekstroze. Ovaj sistem ko-rastvarača dobro rastvara hidrofobna jedinjenja a sam produkuje nisku toksičnost nakon sistemske primene. Proporcije u sistemu ko-rastvarača mogu da variraju na odgovarajući način bez uticaja na njegovu sposobnost rastvaranja i karakteristike toksičnosti. Osim toga, identitet komponenti ko-rastvarača može da varira: na primer, umesto polisorbata 80 mogu da se koriste drugi nepolarni surfaktanti male toksičnosti; veličina frakcije polietilen glikola može da varira; drugi biokompatibilni polimeri mogu da zamene polietilen glikol, na primer polivinil pirolidon; i drugi šećeri ili polisaharidi mogu da zamene dekstrozu.

Alternativno, mogu da se uključe drugi sistemi oslobađanja za hidrofobna farmaceutska jedinjenja. Lipozomi i emulzije su poznati primeri vehikuluma za oslobađanje ili nosača hidrofobnih lekova. Takođe mogu da se koriste izvesni organski rastvarači kao što je dimetilsulfoksid, mada to obično dovodi do veće toksičnosti zbog toksične prirode DMSO. Dodatno, jedinjenja mogu da se oslobađaju pomoću sistema za odloženo oslobađanje, kao što su polupropustljivi matriksi od čvrstih hidrofobnih polimera koji sadrže terapeutsko sredstvo. Koriste se brojni materijali za odloženo oslobađanje i poznati su stručnjacima sa iskustvom u tehnici. Kapsule sa odloženim oslobađanjem mogu, u zavisnosti od svoje hemijske prirode, da oslobađaju jedinjenje u toku nekoliko nedelja pa do preko 100 dana. U zavisnosti od hemijske prirode i biološke stabilnosti terapeutskog reagensa, mogu da se primene dodatne strategije za stabilizaciju proteina.

Farmaceutske kompozicije mogu takođe da uključe odgovarajuće nosače ili ekscipijente čvrste ili gel faze. Ovi nosači i ekscipijenti mogu da obezbede značajna poboljšanja u bioraspoloživosti teško rastvorljivih lekova. Primeri ovakvih nosača ili ekscipijenata uključuju kalcijum karbonat, kalcijum fosfat, šećere, škrobove, derivate celuloze, želatinu i polimere kao što su polietilen glikoli. Osim toga, mogu da se koriste aditivi ili ekscipijenti kao što su Gelucire®, Caprvol®, Labrafil®, Labrasol®, Lauroglikol®, Plurol®, Peceol® Transcutol® i slično.

Pored toga, farmaceutska kompozicija može da bude inkorporirana u flaster na koži za oslobađanje leka direktno na kožu.

Razumljivo je da će konkretne doze sredstava iz ovog pronalaska varirati u skladu sa određenim sredstvom koje se koristi, određene kompozicije koja se formuliše, načina primene i određenog položaja, domaćina i bolesti koja se tretira. Stručnjak sa iskustvom u tehnici koji koristi uobičajene testove za određivanje doza u skladu sa eksperimentalnim vrednostima za dato jedinjenje može da odredi optimalne doze za datu grupu stanja. Za oralanu primenu, primer dnevne doze koja se generalno koristi je od približno 0.001 do približno 1000 mg/kg telesne težine, uz ponavljanje tretmana u odgovarajućim intervalima.

Osim toga, farmaceutski prihvatljive formulacije iz ovog pronalaska mogu da sadrže jedinjenje iz ovog pronalaska, ili njegovu so ili solvat, u količini od približno 10 mg do približno 2000 mg, ili od približno 10 mg do približno 1500 mg, ili od približno 10 mg do približno 1000 mg, ili od približno 10 mg do približno 750 mg, ili od približno 10 mg do približno 500 mg, ili od približno 25 mg do približno 500 mg, ili od približno 50 do približno 500 mg, ili od približno 100 mg do približno 500mg.

Dodatno, farmaceutski prihvatljive formulacije iz ovog pronalaska mogu da sadrže jedinjenje iz ovog pronalaska, ili njegovu so ili solvat, u količini od približno 0.5 m/m% do približno 95 m/m%, ili od približno 1 m/m% do približno 95 m/m%, ili od približno 1 m/m% do približno 75 m/m%, ili od približno 5 m/m% do približno 75 m/m%, ili od približno 10 m/m% do približno 75 m/m%, ili od približno 10 m/m% do približno 50 m/m%.

Jedinjenja iz ovog pronalaska, ili njihove soli ili solvati, mogu da se primene na sisaru koji pati od neprirodnog rasta ćelija, kao stoje čovek, ili sama ili kao deo farmaceutski prihvatljive formulacije, jednom dnevno, dva puta dnevno, tri puta dnevno ili četiri puta dnevno, ili čak još češće.

Stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici će razumeti da u vezi sa jedinjenjima iz ovog pronalaska, određene farmaceutske formulacije, doze i broja doza datih dnevno sisaru kome je potreban takav tretman, su unutar znanja stručnjaka sa uobičajenim iskustvom u tehnici i mogu da se odrede bez nepotrebnog eksperimentisanja.

Jedinjenja iz ovog pronalaska su korisna za moduliranje ili inhibiciju aktivnosti PI3-Ka. U skladu sa tim, ova jedinjenja su korisna za prevenciju i/ili tretman bolesnih stanja povezanih sa neprirodnim rastom ćelija, kao što je kancer, sama ili u kombinaciji sa drugim anti-kancerogenim sredstvima.

Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupak za tretman neprirodnog rasta ćelija kod sisara, uključujući ljude, koji uključuje primenu na tom sisaru neke količine jedinjenja Formule (I) kako je prethodno definisano, ili njegove soli ili solvata, koja je efikasna u lečenju neprirodnog rasta ćelija.

U jednom aspektu ovog postupka, neprirodan rast ćelija je kancer, uključujući ali bez ograničenja na, mestoheliomu, hepatobilijarni (hepatični ili bilijarni kanal) kancer, primarni ili sekundarni tumor CNS, primarni ili sekundarni tumor mozga, kancer pluća (NSCLC i SCLC), kancer kostiju, kancer pankreasa, kancer kože, kancer glave ili vrata, kutanozni ili introkularni melanom, kancer ovarijuma, kancer kolona, kancer rektuma, kancer analnog regiona, kancer stomaka, gastrointestinalni (gastrični, kolorektalni i duodenalni) kancer, kancer dojke, kancer materice, karcinom jajovoda, karcinom endometrijuma, karcinom grlića materice, karcinom vagine, karcinom vulve, Hočkinsova bolest, kancer jednjaka, kancer tankog creva, kancer endokrinog sistema, kancer tiroidne žlezde, kancer paratiroidne žlezde, kancer nadbubrežne žlezde, srakom mekog tkiva, kancer uretera, kancer penisa, kancer prostate, kancer testisa, hronična ili akutna leukemija, kronična mijeloidna leukemija, limfocitni limfomi, kancer bešike, kancer bubrega ili uretera, karcinom renalnih ćelija, karcinom renalne karlice, neoplazme centralnog nervnog sistema, (CNS), primarni limfom CNS, hočkinsova limfoma, tumori kičmene moždine, glioma malog mozga, pituitarni adenom, adrenokortikalni kancer, kancer žučne kese, multiple mijeloma, holangiokarcinom, fibrosarkom, neuroblastom, retinoblastom ili kombinacija jednog ili više prethodno navedenih kancera.

U jednom aspektu iz ovog pronalaska, kancer je izabran od kancera pluća (NSCLC i SCLC), kancera glave ili vrata, kancera jajnika, kancera kolona, kancera rektuma, kancera analnog regiona, kancera stomaka, kancera dojke, kancera bubrega ili uretera, karcinoma renalnih ćelija, karcinoma renalne karlice, neoplazmi centralnog nervnog sistema (CNS), primarne limfome CNS non hočkinsove limfome, tumora kičmene moždine ili kombinacije jednog ili više prethodno pomenutih kancera.

U još jednom aspektu iz ovog pronalaska, kancer je izabrn od kancera pluća (NSCLC i SCLC), kancera ovarijuma, kancera kolona, kancera rektuma, ili kombinacije jednog ili više prethodno pomenutih kancera.

U još jednom aspektu ovog postupka, navedeni neprirodni rast ćelija je benigno proliferativno oboljenje, uključujući, ali bez ograničenja na, psorijazu, benignu hipertrofiju prostate ili restenozu.

Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupak za tretman neprirodnog rasta ćelija kod sisara koji uključuje primenu na tom sisaru one količine jedinjenja iz ovog pronalaska, ili njegove soli ili solvata, koja je efektivna u tretiranju neprirodnog rasta ćelija, u kombinaciji sa anti-tumornim sredstvom izabranim iz grupe koja sadrži inhibitore mitoze, sredstva za alkilaciju, anti-metabolite, interkalatne antibiotike, inhibitore faktora rasta, inhibitore ćelijskog ciklusa, enzime, inhibitore topoizomeraze, modifikatore biološkog odgovora, antitela, citotoksine, anti-hormone i anti-androgena sredstva.

U jednom aspektu ovog pronalaska, anti-tumorno sredstvo koje se koristi u konjukciji sa jedinjenjem iz ovog pronalaska i ovde opisanim farmaceutskim kompozicijama je anti-angiogenezno sredstvo, inhibitor kinaze, inhibitor pan kinaze ili inhibitor faktora rasta. Preferirani inhibitori pan kinaze uključuju Sutent™ (sunitinib), opisan u U.S. patentu broj 6,573,293 (Pfizer, Ine, NY, USA). Anti-angiogenezna sredstva, uključuju ali bez ograničenja na, sledeća sredstva, inhibitore EGF, inhibitore EGFR, inhibitore VEGF, inhibitore VEGFR, inhibitore TIE2, inhibitore IGF1R, inhibitore COX-II (ciklooksigenaze II), inhibitore MMP-2 (matriks-metaloproteinaze 2) i inhibitore MMP-9 (matriks-metaloproteinaze 9).

Preferirani inhibitori VEGF, uključuju na primer, Avastin (bevacizumab), anti-VEGF monoklonalno antitelo proizvodjača Genentech, Inc. South San Francisco, California. Dodatni VEGF inhibitori uključuju CP-547,632 (Pfizer Inc., NY, USA), AGI 3736 (Pfizer Inc.), ZD-6474 (AstraZeneca), AEE788 (Novartis), AZD-2171, VEGF Trap (Regeneron/Aventis), Vatalanib (takođe poznat kao PTK-787, ZK-222584: Novartis & Schering AG), Macugen (pegaptanib oktanatrijum, NX-1838, EYE-001, Pfizer Inc./Gilead/Eyetech), IM862 (Cvtran Inc. of Kirkland, Washington, USA); i angiozim, sintetički ribozim od Ribozim-a (Boulder, Colorado) i Chiron (Emervville, California) i njihove kombinacije.

Inhibitori VEGF koji su korisni u primeni ovog pronalaska su opisani u US patentima broj 6,534,524 i 6,235,764, koji su ovde u celini uključeni u referencama za sve namene. Dodatno, inhibitori VEGF su opisani u, na primer WO 99/24440, WO 95/21613, WO 99/61422, U.S. patentu 5,834,504, WO 98/50356, U.S. patentu 5,883,113 U.S. patentu 5,886,020, U.S. patentu 5,792,783, U.S. patentu 6,653,308, WO 99/10349, WO 97/32856, WO 97/22596, WO 98/54093, WO 98/02438, WO 99/16755 i WO 98/02437, koji su svi ovde u celini uključeni u reference.

Druga anti-angiogenična jedinjenja obuhvataju acitretin, fenretiniđ, talidomid, zoledronatnu kiselinu, angiostatin, aplidin, cilengtid, kombretastatin A-4, endostatin, halofuginon, rebimastat, removab, Revlimid, skvalamin, ukrain, Vitaxin i njihove kombinacije.

Druga antiproliferativna sredstva koja mogu da se koriste u kombinaciji sa jedinjenjima iz ovog pronalaska uključuju inhibitore enzima farnesil protein transferaze i inhibitore receptora tirozin kinaze PDGFr, uključujući jedinjenja otkrivena i zaštićena u sledećim: U.S. patentu 6,080,769; U.S. patentu 6,194,438; U.S. patentu 6,258,824; U.S. patentu 6,586447; U.S. patentu 6,071,935; U.S. patentu 6,495,564; i U.S. patentu 6,150,377; U.S. patentu 6,596,735; U.S. patentu 6,479,513; WO 01/40217; U.S. 2003-0166675. svaki od navedenih patenata i svaka patentna prijava jc ovde u celini uključena u referencama.

PDGRr inhibitori uključuju, ali bez ograničenja na, one inhibitore koji su otkriveni u internacionalnim patentnim prijavama objavljenim pod brojevima WO01/40217 i

WO2004/020431, čiji su sadržaji u celini uključeni u referencama, za sve name. Preferirani PDGFr inhibitori uključuju Pfizer-ove CP-673,451 i CP-868,596 i njihove soli.

Preferirani GARF inhibitori uključuju Pfizer-ov AG-2037 (pelitreksol i njegove soli). Inhibitori GARF korisni u primeni ovog pronalaska, su otkriveni u US patentu broj 5,608,082 koji je u celini ovde uključen za sve namene.

Primeri korisnih inhibitora COX-II koji mogu da se koriste u konjukciji sa jedinjenjem Formule (I) i ovde otkrivenim farmaceutskim kompozicijama uključuju CELEBREX™

(celekoksib), parekoksib, derakoksib, ABT-963, MK-663 (etorikoksib), COX-189 (Lumirakoksib), BMS 347070, RS 57067, NS-398, Bextra (valdekoksib), parakoksib, Vioxx (rofekoksib), SD-8381, 4-Metil-2-(3,4-dimetilfenil)-l-(4-sulfamoil-fenil)-lH-pirol, 2-(4-etoksifenil)-4-metil-l -(4-sulfamoilfenil)-lH-pirol, T-614, JTE-522, S-2474, SVT-2016, CT-3, SC-58125 i Arcoxia (etorikoksib). Dodatno, inhibitori COX-II su otkriveni u U.S. patentnim prijavama US 2005-0148627 i US 2005-0148777, čiji su sadržaji ovde uključeni u celini za sve namene.

U posebnom aspektu, anti-tumorno sredstvo je celekoksib (U.S. patent broj 5,466,823), valdekoksib (U.S. patent broj 5,633,272), parekoksib (U.S. patent broj 5,932,598), derakoksib

(U.S. patent broj 5,521,207), SD-8381 (U.S. patent broj 6,034,256, Primer 175), ABT-963 (WO 2002/24719), rofekoksib (CAS No. 162011-90-7), MK-663 (ili etorikoksib) kako je otkriveno u WO 1998/03484, COX-189 (Lumirakoksib) kako je otkriveno u WO 1999/11605, BMS-347070 (U.S. patent 6,180,651), NS-398 (CAS 123653-11-2), RS 57067 (CAS 17932-91-3), 4-Metil-2-(3,4-dimetilfenil)-1 -(4-sulfamoil-fenil)-1 H-pirol, 2-(4-etoksifenil)-4-metil-1 -(4-sulfamoilfenil)-lH-pirol, ili meloksikam.

Drugi korisni inhibitori kao anti-tumorna sredstva, koji se koriste u kombinaciji sa jedinjenjem iz ovog pronalaska i ovde otkrivenim farmaceutskim kompozicijama, uključuju aspirin i ne-steroidne anti-inflamatorne lekove (NSAIDs) koji inhibiraju enzim koji stvara prostaglandine (ciklooksigenaza I i II), što dovodi do sniženja nivoa prostaglandina, uključuju ali bez ograničenja na, sledeće: Salsalate (Amigesic), Diflunisal (Dolobid), Ibuprofen (Motrin), Ketoprofen (Orudis), Nabumetone (Relafen), Piroxicam (Feldene), Naproxen (Aleve, Naprosvn), Diclofenac (Voltaren), Indometacin (Indocin), Sulindac (Clinoril), Tolmetin (Tolectin), Etodolac (Lodine), Ketorolac (Toradol), Oxaprozin (Davpro) i njihove kombinacije.

Preferirani inhibitori COX-I uključuju ibuprofen (Motrin), nuprin, naproksen (Aleve), indometacin (Indocin), nabumeton (Relafen) i njihove kombinacije.

Ciljana sredstva koja se koriste u kombinaciji sa jedinjenjem iz ovog pronalaska i ovde otkrivenim farmaceutskim kompozicijama uključuju inhibitore EGFr kao što su Iressa (gefitinib, AstraZeneca), Tarceva (erlotinib ili OSI-774, OSI Pharmaceuticals Inc.), Erbitux (cetuksimab, Imclone Pharmaceuticals, Tnc), EMD-7200 (Merck AG), ABX-EGF (Amgen Inc. i Abgenix Ina), HR3 (Cuban Government), IgA antitela (University of Erlangen-Nuremberg), TP-38 (IVAX), EGFR spojeni protein, EGF-vakcina, anti-EGFr imunolipozomi (Hermes Biosciences Inc.) i njihove kombinacije. Preferirani EGFr inhibitori obuhvataju Iressa, Erbitux, Tarceva i njihove kombinacije.

Druga anti-tumorna sredstva uključuju sredstva izabrana od inhibitora pan erb receptora ili inhibitora ErbB2 receptora, kao što su CP-724,714 (Pfizer, Inc.), CI-1033 (kanertinib, Pfizer, Inc.), Herceptin (trastuzumab, Genentech Inc.), Omitarg (2C4, pertuzumab, Genentech Inc.), TAK-165 (Takeda), GW-572016 (lonafarnib, GlaxoSmithKline), GW-282974 (GlaxoSmithKline), EKB-569 (Wyeth), PKI-166 (Novartis), dHER2 (HER2 Vakcina, Corixa i GlaxoSmithKline), APC8024 (HER2 Vakcina, Dendreon), anti-HER2/neu bispecifično antitelo (Decof Cancer Center), B7.her2.1gG3 (Agensys), AS HER2 (Research Institute for Rad Biology & Medicine), trifunkcionalna bispecifična antitela (University of Munich) i mAB AR-209 (Aronex Pharmaceuticals Ine) i mAB 2B-1 (Chiron) i njihove kombinacije.

Preferirana erb selektivna anti-tumorna sredstva uključuju Herceptin, TAK-165, CP-724,714, ABX-EGF, HER3 i njegove kombinacije. Preferirani inhibitori pan erbb receptora uključuju GW572016, CI-1033, EKB-569 i Omitarg i njihove kombinacije.

Dodatno, inhibitori erbB2 uključuju inhibitore otkrivene u WO 98/02434, WO 99/35146, WO 99/35132, WO 98/02437, WO 97/13760, WO 95/19970, U.S. patentu 5,587,458 i U.S. patentu 5,877,305, od kojih je svaki ovde u celini uključen u reference. Inhibitori ErbB2 receptora koji su korisni u ovom pronalasku su takođe otkriveni u U.S. patentima 6,465,449 i 6,284,764 i u WO 2001/98277 od kojih je svaki ovde u celini uključen u reference.

Dodatno, druga anti-tumorna sredstva mogu da budu izabrana od sledećih sredstava, BAY-43-9006 (Onyx Pharmaceuticals Inc.), Genasense (augmerosen, Genta), Panitumumab (Abgenix/Amgen), Zevalin (Schering), Bexxar (Corixa/GlaxoSmithKline), Abarelix, Alimta, EPO 906 (Novartis), diskodermolid (XAA-296), ABT-510 (Abbott), Neovastat (Aeterna), enzastaurin (Eli Lilly), Combrestatin A4P (Oxigene), ZD-6126 (AstraZeneca), flavopiridol (Aventis), CYC-202 (Cyclacel), AVE-8062 (Aventis), DMXAA (Roche/Antizoma), Thymitaq (Eximibs), Temodar (temozolomid, Schering Plough) i Revilimd (Celegene) i njihovih kombinacija.

Druga anti-tumorna sredstva mogu da budu izabrana od sledećih sredstava, CyPat (ciproteron acetat), Histerelin (histrelin acetat), Plenaixis (abareliks depo), Atrasentan (ABT-627), Satraplatin (JM-216), talomid (Thalidomide), Theratope, Temilifene (DPPE), ABI-007

(paklitaksel), Evista (raloksifen), Atamestane (Biomed-777), Xyotax (poliglutamat paklitaksel), Targetin (beksarotin) i njihovih kombinacija.

Dodatno, druga anti-tumorna sredstva mogu da budu izabrana od sledećih sredstava, Trizaone (tirapazamin), Aposvn (eksisulind), Nevastat (AE-941), Ceplene (histamin dihidrohlorid), Orathecin (rubitekan), Virulizin, Gastrimmune (G17DT), DX-8951f (eksatekan mesilat), Onconase (ranpirnaza), BEC2 (mitumoab), Xcytrin (moteksafin gadolinijum) i njihovih kombinacija.

Druga anti-tumorna sredstva mogu da budu izabrana od sledećih sredstava, CeaVac (CEA), NeuTrexin (trimetresat glukuronat) i njihovih kombinacija. Dodatna anti-tumorna sredstva mogu da budu izabrana od sledećih sredstava, OvaRex (oregovomab), Osidem (IDM-1) i njihovih kombinacija. Dodatna anti-tumorna sredstva mogu da budu izabrana od sledećih sredstava, Advexin (ING 201), Tirazone (tirapazamin) i njihovih kombinacija. Dodatna anti-tumorna sredstva mogu da budu izabrana od sledećih sredstava, RSR13 (efaproksiral), Cotara (1311 chTNT 1/b), NBI-3001 (IL-4) i njihovih kombinacija. Dodatna anti-tumorna sredstva mogu da budu izabrana od sledećih sredstava, Canvaxin, GMK vakcina, PEG Interon A, Taxoprexin (DHA/paklitaksel) i njihovih kombinacija.

Druga anti-tumorna sredstva uključuju Pfizer-ov MEKI/2 inhibitor PD325901, Array Biopharms MEK inhibitor ARRY-142886, Bristol Myers CDK2 inhibitor BMS-387,032, Pfizer-ov CDK inhibitor PD0332991 i AstraZeneca AXD-5438 i njihove kombinacije.

Dodatno, inhibitori mTOR mogu takođe da se koriste kao CCI-779 (Wyeth) i derivati rapamicina RAD001 (Novartis) i AP-23573 (Ariad), inhibitori HDAC, SAHA (Merck Inc/Aton Pharmaceuticals) i njihove kombinacije. Dodatna anti-tumorna sredstva uključuju aurora 2 inhibitor VX-680 (Vertex) i Chkl/2 inhibitor XL844 (Exilixis).

Sledeća citotoksična sredstva, na primer, jedno ili više izabrano iz grupe koja sadrži epirubicin (Ellence), docetaksel (Taxotere), paklitaksel, Zinecard (deksrazoksane), rituksimab (Rituxan) imatinib mesilat (Gleevec) i njihove kombinacije, mogu da se koriste u kombinaciji sa jedinjenjem iz ovog pronalaska i ovde otkrivenim farmaceutskim kompozicijama.

Pronalazak takođe ima u vidu upotrebu jedinjenja iz ovog pronalaska, zajedno sa hormonalnom terapijom, uključujući ali bez ograničenja na, eksemestan (Aromasin, Pfizer Inc.), leuprorelin (Lupron ili Leuplin, TAP/Abbott/Takeda), anastrozol (Arimidex, Astrazeneca), gosrelin (Zoladex, AstraZeneca), dokserkalciferol, fadrozol, formestan, tamoksifen citrat (tamoksifen, Nolvadex, AstraZeneca), Casodex (AstraZeneca), Abarelix (Praecis), Trelstar i njihove kombinacije.

Pronalazak se takođe odnosi na upotrebu jedinjenja iz ovog pronalaska zajedno sa sredstvima za hormonalnu terapiju, kao što su anti-estrogeni, uključujući, ali bez ograničenja na, fulvestrant, toremifen, raloksifen, lasofoksifen, letrozol (Femara, Novartis), anti-androgeni kao što su bikalutamid, flutamid, mifepriston, nilutamid, Casodex™(4'-cijano-3-(4-fluorofenilsulfonil)-2-hidroksi-2-metil-3'-(trifluorometil) propionanilid, bikalutamid) i njihove kombinacije.

Pored toga, pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz ovog pronalaska samo ili u kombinaciji sa jednim ili više produkata za podršku, na primer, produkt izabran iz grupe koja sadrži Filgrastim (Neupogen), ondansetron (Zofran), Fragmin, Procrit, Aloxi, Emend, ili njihove kombinacije.

U posebno preferirana citotoksična sredstva spadaju Camptosar, Erbitux, Iressa, Gleevec, Taxotere i njihove kombinacije.

Naredni inhibitori topoizomeraze I mogu da se koriste kao anti-tumorna sredstva: kamptotecin; irinotekan HC1 (Camptosar); edotekarin; oratecin (Supergen); eksatekan (Daiichi); BN-80915 (Roche); i njihove kombinacije. Posebno preferirani inhiibtori topoizomeraze II uključuju epirubicin (Ellence).

Sredstva za alkilaciju uključuju, ali se ne ograničavaju samo na, azot slačice, N-oksid, ciklofosfamid, ifosfamid, melfalan, busulfan, mitobronitol, karbokvon, tiotepa, ranimustin, nimustin, temozolomid, AMD-473, altretamin, AP-5280, apazikvon, brostalicin, bendamustin, karmustin, estramustin, fotemustin, glufosfamid, ifosfamid, KW-2170, mafosfamid i mitolaktol; platina-koordinisana jedinjenja za alkilaciju uključujući ali bez ograničenja na, cisplatin, Paraplatin (karboplatin), eptaplatin, lobaplatin, nedaplatin, Eloxatin (oksaliplatin, Sanofi) ili satrplatin i njihove kombinacije. Posebno preferirana sredstva za alkilaciju uključuju Eloxatin (oksaliplatin).

Antimetaboliti uključuju ali bez ograničenja na, metotreksat, 6-merkaptopurin ribozid, merkaptopurin, 5-fluorouracil (5-FU) sam ili u kombinaciji sa leukovorinom, tegafur, UFT, doksifluridin, karmofur, citarabin, citarabin okfosfat, enocitabin, S-l, Alimta (premetreks dinatrijum, LY231514, MTA), Gemzar (gemcitabin, Eli Lilly), fludarabin, 5-azacitidin, kapecitabin, kladribin, klofarabin, decitabin, eflornitin, etinilcitidin, citozin arabinozid, hidroksiurea, TS-1, melfalan, nelarabin, nolatreksed, okfosfat, dizodijum premetreksed, pentostatin, pelitreksol, raltitreksed, triapin, trimetreksat, vidarabin, vinkristin, vinorelbin; ili na primer, jedno od preferiranih anti-metabolita otkrivenih u evropskoj patentnoj prijavi broj 239362 kao što je N-(5-[N-(3,4-dihidro-2-metil-4-oksokvinazolin-6-ilmetil)-N-metilamino]-2-tenoil)-L-glutamatna kiselina i njegove kombinacije.

Antibiotici obuhvataju interkalatne antibiotike i uključuju, ali se ne ograničavaju samo na: aklarubicin, aktinomicin D, amrubicin, anamicin, adriamicin, bleomicin, daunorubicin, doksorubicin, elzamitrucin, epirubicin, galarubicin, idarubicin, mitomicin C, nemorubicin, neokarzinostatin, peplomicin, pirarubicin, rebekamicin, stimalamer, streptozocin, valrubicin, zinostatin i njihove kombinacije.

Anti-tumorne supstance derivati biljaka, uključuju na primer one koji su izabrani od inhibitora mitoze, na primer vinblastin, docetaksel (Taxotere), paklitaksel i njihove kombinacije.

Sredstva koja inhibiraju citotoksičnu topoizomerazu uključuju jedno ili više sredstava izabranih iz grupe koja sadrži aklarubicn, amonafid, belotekan, kamptotecin, 10-hidroksikamptotecin, 9-aminokamptotecin, diflomotekan, irinotekan HC1 (Camptosar), edotekarin, epirubicin (Ellence), etopozide, eksatekan, gimatekan, lurtotekan, mitoksantron, pirarubicin, piksantron, rubitekan, sobuzoksan, SN-38, taflupozid, topotekan i njihove kombinacije.

Preferirana sredstva koja inhibiraju citotoksičnu topoizomerazu uključuju jedno ili više sredstava izabranih iz grupe koja sadrži kamptotecin, 10-hidroksikamptotecin, 9-aminokamptotecin, irinotekan HC1 (Camptosar), edotekarin, epirubicin (Ellence), etopozid, SN-38, topotekan i njihove kombinacije.

Imunologikali uključuju interferone i brojna druga sredstva koja pojačavaju imunitet. Interferoni obuhvataju interferon alfa, interferon alfa-2a, interferon alfa-2b, interferon beta, interferon gama-la, interferon gama-lb (Actimmune), ili interferon gama-nl i njihove kombinacije. Druga sredstva uključuju filgrastim, lentinan, sizofilan, TheraCvs, ubenimeks, WF-10, aldesleukin, alemtuzumab, BAM-002, dakarbazin, daklizumab, denileukin, gemtuzumab ozogamicin, ibritumomab, imikvimod, lenograstim, lentinan, melanoma vakcina (Corixa), molgramostim, OncoVAX-CL, sargramostim, tasonermin, tekleukin, timalazin, tositumomab, Virulizin, Z-100, epratuzumab, mitumomab, oregovomab, pemtumomab (Y-muHMFGI), Provenge (Dendreon) i njihove kombinacije.

Modifikatori biološkog odgovora su sredstva koja modifikuju odbrambene mehanizme živih organizama ili biološke odgovore, kao što su preživljavanje, rast ili diferencijacija ćelija tkiva, kako bi se usmerili da imaju anti-tumorno delovanje. Ovakva sredstva uključuju krestin, lentinan, sizofiran, picibanil, ubenimeks i njihove kombinacije.

Druga anti-kancerogena sredstva koja mogu da se koriste u kombinaciji sa jedinjenjem iz ovog pronalaska uključuju alitretinoin, ampligen, atrasentan beksaroten, bortezomib, Bosentan, kalcitriol, eksisulind, finasterid, fotemustin, ibandronatnu kiselinu, miltefosin, mitoksantron, 1-asparaginaza, prokarbazin, dakarbazin, hidroksikarbamid, pegaspargaza, pentostatin, tazarotne, Tclcvta (TLK-286, Telik Inc.), Velcade (bortemazib, Millenium), trctinoin i njihove

kombinacije.

Platina-koordinisana jedinjenja uključujui ali bez ograničenja na, cisplatin, karboplatin, nedaplatin, oksaplatin i njihove kombinacije.

Derivati kamaptotecina uključuju ali bez ograničenja na, kamptotecin, 10-hidroksikamptotecin, 9-aminokamptotecin, irinotekan, SN-38, edotekarin, topotekan i njihove kombinacije. Druga antitumorna sredstva uključuju mitoksantron, 1-asparaginaza, prokarbazin, dakarbazin, hidroksikarbamid, pentostatin, tretinoin i njihove kombinacije.

Mogu takođe da se koriste anti-tumorna sredstva sposobna da pojačaju antitumorne imune odgovore, kao što su CTLA4 (citotoksični limfocitni antigen 4) antitela i druga sredstva sposobna da blokiraju CTLA4, kao što su MDX-010 (Medarex) i CTLA4 jedinjenja otkrivena u U.S. patentu 6,682,736; i anti-proliferativna sredstva kao što su drugi inhibitori farnesil protein transferaze, na primer inhibitori farnesil protein transferaze. Dodatno, specifična CTLA4 antitela koja mogu da se koriste u kombinaciji sa jedinjenjima iz ovog pronalaska uključuju ona koja su otkrivena u U.S. patentima 6,682,736 i 6,682,736 koja su oba ovde u celini uključena u reference.

Specifična IGF1R antitela koja mogu da se koriste u kombinovanim postupcima ovog pronalaska uključuju ona koja su otkrivena u WO 2002/053596, koje je ovde u celini uključeno u reference.

Specifična CD40 antitela koja mogu da se koriste u ovom pronalasku uključuju ona koja su otkrivena u WO 2003/040170, koje je ovde u celini uključeno u reference.

Sredstva za gensku terapiju mogu takođe da se koriste kao antitumorna sredstva, kao što je TNFerade (GeneVec), koji ispoljava TNFalfa u odgovoru na radioterapiju.

U jednom aspektu iz ovog pronalaska statini mogu da se koriste u kombinaciji sa jedinjenjem iz ovog pronalaska i njegovim farmaceutskim kompozicijama. Statini (inhibitori HMG-CoA reduktaze) mogu da se izaberu iz grupe koja sadrži Atorvastatin (Lipitor™, Pfizer Inc.), Provastatin (Pravachol™, Bristol-Myers Squibb), Lovastatin (Mevacor™, Merck Inc.), Simvastatin (Zocor™, Merck Inc.), Fluvastatin (Lescol™, Novartis), Cerivastatin (Bavcol™, Bayer), Rosuvastatin (Crestor™, AstraZeneca), Lovostatin i Niacin (Advicor™, Kos Pharmaceuticals), i njihove derivate i kombinacije.

U preferiranom aspektu, statin je izabran iz grupe koja sadrži Atovorstatin i Lovastatin, njihove derivate i kombinacije. U druga sredstva korisna kao anti-tumorna sredstva spada Caduet.

U narednim Izradama i Primerima, "Ac" označava acetil, "Me" označava metil, "Et" označava etil, "Ph" označava fenil, "BOC", "Boe" ili "boe" označava N-terc-butoksikarbonil, "DCM" (CH2C12) označava metilen hlorid, "DIPEA" ili "DIEA" označava diizopropil etil amin, "DMA" označava N,N-dimetilacetamid, "DMF" označava N-N-dimetil formamid, "DMSO" označava dimetilsulfoksid, "DPPP" označava l,3-bis(difenilfosfino)propan, "HOAc" označava acetatnu kiselinu, "IPA" označava izopropil alkohol, "NMP" označava 1-metil 2-pirolidinon, "TEA" označava trietil amin, "TFA" označava trifiuoroacetatnu kiselinu, "DCM" označava dihlorometan, "EtOAc" označava etil acetat, "MgSOV' označava magnezijum sulfat, "Na2S04<M>označava natrijum sulfat, "MeOH" označava metanol, "Et20" označava dietil etar, "EtOH" označava etanol, "H2O" označava vodu, "HC1" označava hidrohloridnu kiselinu, "POCI3" označava fosfor oksihlorid, "K2C03" označava kalijum karbonat, "THF" označava tetrahidrofuran, "DBU" označava l,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en, "LiHMDS" ili "LHMDS" označava litijum heksametildisilazid, TBME" ili "MTBE" označava terc-butil metil etar, "LDA" označava litijum diizopropilamid, "N" označava Normal, "M" označava molar, "mL" označava mililitre, "mmol" označava milimole, "umol" označava mikromole, "eq." označava ekvivalent, "°C" označava stepene Celzijusa, "Pa" označava paskale.

Postupci izrade

Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da se izrade koristeći niže opisane načine reakcija i šeme sinteza, uključujući tehnike raspoložive u tehnici, koristeći sirovine koje su lako dostupne. Izrada određenih jedinjenja je detaljno opisana u primerima koji slede, ali će stručnjak sa iskustvom u tehnici prepoznati da opisane izrade mogu jednostavno da se prilagode za izradu drugih jedinjenja iz ovog pronalaska. Na primer, sinteze jedinjenja u skladu sa ovim pronalaskom, a koja nisu navedena u primerima, mogu da se izvedu modifikacijama od strane stručnjaka sa iskustvom u tehnici, na primer, uključivanjem odgovarajućih zaštitnih grupa, zamenom sa drugim pogodnim reagensima poznatim u tehnici, ili vršenjem rutinskih modifikacija uslova reakcija. Alternativno, druge reakcije povezane sa ovima, ili koje su poznate u tehnici, mogu zbog prilagodljivosti da se koriste za izradu drugih jedinjenja iz ovog pronalaska.

U jednom opštem procesu sinteze, jedinjenja opšte strukture predstavljena sa 3 se izrđuju u skladu sa Postupkom A.

Jedinjenje 1, u kome je X Cl, Br ili I, a izrada je opisana u WO2005105801, se konvertuje u jedinjenje 2 tretmanom sa aminom formule RiNH2u pogodnom rastvaraču, na primer, dioksanu, u prisustvu baze, na primer, trietil amina, na povišenoj temperaturi u rasponu od 40°C do 220°C, u vremenskom periodu u rasponu od nekoliko sati do nekoliko dana. Jedinjenje 2 se konvertuje u jedinjenje 3 tretmanom sabornom kiselinom formule R3-B(OH)2ili odgovarajućim bornim estrom, a nakon toga modifikovanom Suzuki reakcijom pod uslovima koji su poznati stručnjacima sa iskustvom u tehnici.

U narednom opštem procesu sinteze, jedinjenja opšte strukture predstavljena sa 8 se izrađuju u skladu sa Postupkom B.

Jedinjenje 4 se konvertuje u jedinjenje 5 reakcijom sa akrilat estrom u prisustvu N-cikloheksil-N-metilcikloheksanamina, tri-terc-butilfosfonijum tetrafluoroborata, litijum hlorida i tris(dibenzilđenaceton)dipaladijuma(0), u pogodnom rastvaraču, na primer, 1.4-dioksanu, na temperaturi u rasponu od 50°C do 75°C, u toku pola sata do nekoliko dana. Jedinjenje 5 se konvertuje u jedinjenje 6 hidrogenacijom. Hidrolizom derivata estra 6, a nakon toga formiranjem amida, dobija se jedinjenje formule 8.

U još jednom opštem procesu sinteze, jedinjenja opšte strukture predstavljena sa 11 se izrađuju u skladu sa Postupkom C.

Jedinjenje 9 se konvertuje u jedinjenje 10 tretmanom sa trimetilboratom i butil litijumom u pogodnom rastvaraču, na primer, THF, na niskoj temperaturi u rasponu od -40°C do -90°C. Jedinjenje 10 se konvertuje u jedinjenje 11 reakcijom sa R.3-X, a nakon toga Suzuki reakcijom pod uslovima koji su poznati stručnjacima sa iskustvom u tehnici.

U još jednom opštem procesu sinteze, jedinjenja opšte strukture predstavljena sa 16 se izrađuju u skladu sa Postupkom D.

Jedinjenje 12 reaguje sa alkoholom formule R2OH u prisustvu trifenilfosfina i dietil azodikarboksilata (DEAD), u pogodnom rastvaraču, na primer THF, na temperaturi u rasponu od sobne temperature do 60°C, da se dobije jedinjenje formule 13. Jedinjenje 13 se konvertuje u jedinjenje 14 tretmanom sa bornom kiselinom formule R3-B(OH)2ili odgovarajućim bornim estrom, a nakon toga modifikovanom Suzuki reakcijom pod uslovima koji su poznati stručnjacima sa iskustvom u tehnici. Jedinjenje 14 se oksiduje da se dobije jedinjenje 15 koristeći reagense kao što je, na primer, m-hloroperbenzoeva kiselina (MCPBA). Tretmanom jedinjenja 15 sa aminom formule R1NH2, dobija se jedinjenje 16.

U još jednom opštem procesu sinteze jedinjenja predstavljena sa 21 se izrađuju u skladu sa Postupkom E.

Jedinjenje 17 se konvertuje u jedinjenje 18 tretmanom sa R2X, gde je X = Cl, Br ili I, u prisustvu baze, na primer, natrijum hidrida, u pogodnom rastvaraču kao što je, na primer DMF, na temperaturi u rasponu od 25°C do 100°C. Jedinjenje 18 se konvertuje u jedinjenje 19 tretmanom sa bornom kiselinom formule R3-B(OH)2ili odgovarajućim bornim estrom, a nakon toga Suzuki reakcijom pod uslovima koji su poznati stručnjacima sa iskustvom u tehnici. Jedinjenje 19 se oksiduje da se dobije jedinjenje 20, koristeći reagense kao što je, na primer, MCPBA. Tretmanom jedinjenja 20 sa aminom formule RjNH2u pogodnom rastvaraču kao što je, na primer THF, pod uslovima refluksa se dobij a jedinjenje formule 21.

U još jednom opštem procesu sinteze, jedinjenja opšte strukture predstavljena sa 28 se izrađuju u skladu sa Postupkom F.

Jedinjenje 22, koje je raspoloživo na tržištu, se konvertuje ujedinjenje 23 reakcijom sa aminom formule R2-NH2u pogodnom rastvaraču kao što je, na primer dimetilacetamid, u prisustvu baza kao što su kalijum karbonat i diizopropiletil amin, na povišenoj temperaturi u rasponu od 40°C do 220°C, u vremenskom periodu u rasponu od nekoliko sati do nekoliko dana. Jedinjenje 23 se konvertuje ujedinjenje 24, gde je X = Cl, Br ili I, tretmanom sa N-halosukcinamidom, u pogodnom rastvaraču kao što su hloroform ili ugljen tetrahlorid, na sobnoj temperaturi, u vremenskom periodu u rasponu od 30 min do nekoliko sati. Jedinjenje 24 se konvertuje u jedinjenje 25 reakcijom sa akrilatnim estrom u prisustvu tri-o-tolilfosfina, paladijum (II) acetata i trietilamina, na povišenoj temperaturi. Jedinjenje 25 se konvertuje u jedinjenje 26 zagrevanjem rastvora jedinjenja 25, tiofenola ili KOtBu i organskih baza kao što su trietilamin i DBU, u pogodnom rastvaraču kao što je dimetilacetamid, na povišenoj temperaturi u rasponu od 40°C do 220°C, u vremenskom periodu u rasponu od nekoliko sati do nekoliko dana. Jedinjenje 26 se konvertuje u jedinjenje 27 tretmanom sa N-halosukcinamidom u pogodnom rastvaraču kao što je DMF, na sobnoj temperaturi, u vremenskom periodu u rasponu od 30 min do nekoliko sati. Jedinjenje 27 se nakon toga konvertuje u jedinjenje 28 reakcijom sa bornom kiselina formule R3-B(OH)2ili odgovarajućim bornim estrom, u prisustvu baze, na primer, kalijum karbonata i bis(trifenilfosfin) paladijum (II) hlorida, u pogodnom rastvaraču kao što su DMF i vodeni rastvor, na povišenoj temperaturi u rasponu od 70°C do 120°C, u vremenskom periodu od nekoliko sati do nekoliko dana.

Postupak F može da se koristi, na primer, za izradu jedinjenja 28 u kome je R2opciono supstituisana spirociklična grupa.

U aseptičnoj komori, u Personal Chemistrv Microwave reaktivnu kivetu zapremine 2.0 mL se doda sledeće: jedna trokraka mešalica, odgovarajući rastvor aril halida 29 u DMF (300 uL, 75 umol, 1.0 eq., 0.25 M), odgovarajuća boratna kiselina ili borni estar u DMF (300 uL, 75 umol, 1.0 eq., 0.25 M), katalizator Pd(PPh3)4 u anhidrovanom THF (300 uL, 3.75 umol, 0.05 eq., 0.0125 M) i K2C03u degasiranoj Dl vodi (94 uL, 188 umol, 2.5 eq., 2.0 M). Mikrotalasna kiveta se zatvori sa zatvaračem sa pregradom i izvan aseptične komore se reaktivna mešavina zagreva u Personal Chemistrv Microwave sintesajzeru na 130 °C, u toku 15 minuta. Reaktivne mešavine se prenesu u test kivete 13 x 100 mm. Mikrotalasne kivete se isperu sa DMF (1.0 mL) a DMF iskorišćen za ispiranje se kombinuje sa osnovnim prenetim materijalom. Rastvarači se uklone, a u svaku kivetu se dodaju EtOAc (1 mL) i Dl voda (1 mL). Nakon mešanja i centrifugiranja, supernatant se prenese u nove test kivete 13 x 100 mm. Vodena faza se ekstrahuje još dva puta sa svežim EtOAc (1 mL). Kombinovane organske faze se ponovo ekstrahuju sa Dl vodom (1 mL) i vodenim rastvorom NaCl (1 mL). Organska faza se filtrira kroz membranski filter a filtrat se upari. Ostaci se rekonstituišu u DMSO i sirovi materijal se podvrgne HPLC prečišćavanju koristeći mešavinu acetonitril/voda sa 0.05% TFA kao mobilnom fazom na Agilent Zorbax Extend Cl 8 koloni.

Jedinjenje 31, koje je raspoloživo na tržištu, se konvertuje u jedinjenje 32 reakcijom sa aminom formule R2-O-A-NH2, gde je A opciono supstituisana C3.10cikloalkil grupa, u pogodnom rastvaraču kao što je, na primer dimetilacetamid, u prisustvu baza kao što su kalijum karbonat i diizopropiletil amin, na povišenoj temperaturi u rasponu od 40°C do 220°C, u vremenskom periodu u rasponu od nekoliko sati do nekoliko dana. Jedinjenje 32 se konvertuje u jedinjenje 33 u kome je X = Cl, Br ili I, tretmanom sa N-halosukcinamidom, u pogodnom rastvaraču kao što su hloroform ili ugljen tetrahlorid, na sobnoj temperaturi, u vremenskom periodu u rasponu od 30 min do nekoliko sati. Jedinjenje 33 se konvertuje ujedinjenje 34 reakcijom sa akrilatnim estrom u prisustvu tri-o-tolilfosfina, paladijum (II) acetata i trietilamina, na povišenoj temperaturi. Jedinjenje 34 se konvertuje u jedinjenje 35 zagrevanjem rastvora jedinjenja 34, tiofenola ili KOtBu i organskih baza kao što su trietilamin i DBU, u pogodnom rastvaraču kao što je dimetilacetamid, na povišenoj temperaturi u rasponu od 40°C do 220°C, u vremenskom periodu u rasponu od nekoliko sati do nekoliko dana. Jedinjenje 35 se konvertuje u jedinjenje 36 tretmanom sa N-halosukcinamidom, u pogodnom rastvaraču kao što je DMF, na

sobnoj temperaturi, u vremenskom periodu u rasponu od 30 min do nekoliko sati. Jedinjenje 36 se nakon toga konvertuje ujedinjenje 37 reakcijom sa bornom kiselinom formule R3-B(OH)2ili

odgovarajućim bornim estrom, u prisustvu baze, na primer, kalijum karbonata i bis(trifenilfosfin) paladijum (II) hlorida, u pogodnom rastvaraču kao što su DMF i vodeni rastvor, na povišenoj temperaturi u rasponu od 70°C do 150°C, u vremenskom periodu od nekoliko sati do nekoliko dana.

Jedinjenje formule 34 može takođe da se izradi kako je opisano uPostupku I.Jedinjenje 38 se konvertuje u jedinjenje 39 reakcijom sa aminom formule HO-A-NH2, u pogodnom rastvaraču kao što je, na primer, dimetilacetamid, u prisustvu baze kao što su kalijum karbonat i diizopropiletil amin, na povišenoj temperaturi u rasponu od 40°C do 220°C, u vremenskom periodu u rasponu od nekoliko sati do nekoliko dana. Jedinjenje 39 se konvertuje u jedinjenje 40 reakcijom sa R.2X, u pogodnom rastvaraču kao što je DMF, u prisustvu baze kao što je natrijum hidrid, na temperaturi u rasponu od sobne temperature do 100°C. Jedinjenje 40 se konvertuje u jedinjenje 41 tretmanom sa hidroksilaminom u razblaženom etanolu, na temperaturi u rasponu od sobne temperature do 80°C. Jedinjenje 41 se konvertuje u jedinjenje 34 reakcijom sa akrilatnim estrom u prisustvu tri-o-tolilfosfina, paladijum (II) acetata i trietilamina, na povišenoj temperaturi. Jedinjenje 34 se nakon toga konvertuje u jedinjenje formule 37 po postupcima koji su opisani uPostupku H.

Primeri

Niže dati primeri i izrade dalje ilustruju i objašnjavaju primerom jedinjenja iz ovog pronalaska i postupke za izradu ovih jedinjenja. U Primerima 1 do 100 su detaljno date faze sinteza za izradu Jedinjenja 101, 104-107,109,113-114,116,120-121,123,129-130, 132-133,147-152,179,192,193, 247-252, 263-264, 267-270, 275,284 i 285 iz ovog pronalaska. Tabela 1 pokazuje jedinjenja iz ovog pronalaska koja su izrađena po opštim ovde opisanim postupcima A-1. Tabela 2 pokazuje biohemijske i celularne vrednosti za jedinjenja iz ovog pronalaska. Tabela 3 pokazuje vrednosti efikasnosti ksenografta kod miša za tipično Jedinjenje 152 iz ovog pronalaska. Tabela 4 daje podatke za farmakokinetičku i farmakodinamičku (PK-PD) korelaciju u modelima ksenografta.

Jasno je da okvir ovog pronalaska nije na bilo koji način ograničen okvirom narednih primera i načina izrade. Naredni primeri molekula sa jednim asimetričnim centrom, ukoliko drugačije nije napomenuto ili navedeno strukturnom formulom ili hemijskim nazivom, egzistira kao racematna mešavina. One molekule sa dva ili više asimetričnih centara, ukoliko drugačije nije napomenuto ili navedeno strukturnom formulom ili hemijskim nazivom, egzistiraju kao racematna mešavina diastereomera. Pojedinačni enantiomeri/diastereomeri mogu da se dobiju postupcima koji su poznati stručnjacima sa iskustvom u tehnici.

Brojni početni materijali i drugi reagensi su nabavljeni na tržištu od kompanija kao što su Aldrich Chemical Companv, i korišćeni su bez naknadnog prečišćavanja, ukoliko nije drugačije navedeno. 'H-NMR spektri su zabeleženi na Bruker instrumentu koji radi ili na 300 MHz, ili 400 MHz, a<13>C-NMR spektri su zabeleženi na 75 MHz. NMR spektri su dobijeni kao CDC13rastvori (izraženo u ppm), koristeći hloroform kao referentni standard (7.25 ppm i 77.00 ppm) ili DMSO-D6(2.50 ppm i 39.51 ppm) ili CD3OD (3.4 ppm i 4.8 ppm i 49.3 ppm), ili interni tetrametilsilan (0.00 ppm) kada je odgovarajuće. Ako je bilo potrebno, korišćeni su drugi NMR rastvarači. Kada su zabeleženi višestruki pikovi, korišćene su sledeće skraćenice: s (singlet), d (dablet), t (triplet), m (multiplet), br (široka), dd (dablet od dableta), dt (dablet od tripleta). Kada su date, konstante udvajanja su izražene u Hercima (Hz).

Primer 1. 2- Amino- 8- ciklopentil- 6-( 3- hidroksifenil)- 4- meti1piridor2, 3- d] pirimidin- 7( 8/ f)- on

( Jedinjenje 147)

U rastvor 2-amino-6-bromo-8-ciklopentil-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (100 mg, 0.31 mmol), 3-hidroksifenilboratne kiseline ( 50 mg, 1.2 ekvivalenta), dihlorobis(trifenilfosfin)paladijum(ll) (6.5 mg, 009 mmol), DMF (2 mL) u mikrotalasnoj posudi zapremine 10 mL se doda kalijum karbonat (3 M, 0.8 mL). Rastvor se degasira 10 min sa N2pre nego što se zatvori i 10 min zagreva u mikrotalasnom reaktoru na 120 °C. Kada se završi, reakcija se razblaži sa 1 N rastvorom NaOH (10 mL) i EtOAc (50 mL). EtOAc sloj se izdvoji, suši preko MgS04, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se podvrgne prečišćavanju hromatografijom. Dobija se naslovljeno jedinjenje (82.1 mg, 79% prinos). LRMS: 337 (M+H)<+>.

'HNMR(DMSO-d6, 400 MHz): 9.37 (IH, s), 7.87 (IH, s), 7.19 (3H, m), 7.11 (IH, s), 7.03 (IH, d), 6.74-6.71 (IH, m), 6.04-5.99 (IH, m), 2.55 (3H, s), 2.24-2.22 (2H, m), 2.02 (2H, m), 1.77-1.75 (2H, m), 1.60-1.58 (2H, m).

Primer 2. 2- Amino- 6- bromo- 8- ciklopentil- 4- metilpirido [ 2, 3 - d] pirimidin- 7( 8H)- on

U rastvor 6-bromo-8-ciklopentil-4-metil-2-(metilsulfinil)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (0.80 g, 2.16 mmol) u dioksanu (5 mL) se doda amonijum hidroksid (30%, 2.6 mL). Mešavina se nakon toga zagreva 30 minuta na 110 °C u zatvorenoj epruveti. Rastvor sekoncentruje pod vakuumomi ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 30 mL). Kombinovani organski ekstrakti se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, suše (anhidrovani natrijum sulfat), filtriraju i koncentruju do sušenja da se dobije naslovljeno jedinjenje kao smeđa kristalna čvrsta supstanca (0.65 g, 93%).

LRMS: 324 (M+H)<+>.

'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 8.34 (IH, s), 7.27 (2H, bs), 6.01-5.93 (IH, m), 2.51 (3H, s), 2.16-2.13 (2H, m), 2.00-1.98 (2H, m), 1.75-1.72 (2H, m), 1.57-1.54 (2H, m).

Primer 3. 6- Bromo- 8- ciklopentil- 4- metil- 2-( metilamino) pirido[ 2, 3- d] pirimidin- 7( 8H)- on

Po istom postupku koji je opisan u Primeru 2, koristeći metilamin (2M rastvor u THF)

umesto amonijum hidroksida, dobija se naslovljeno jedinjenje u prinosu od 90%.

LRMS: 338 (M+H)<+>.

'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 8.36 (IH, s), 7.82 (IH, bs), 5.98-5.94 (IH, m), 2.86 (3H, s), 2.51 (3H, s), 2.28 (2H,m), 1.99-1.97 (2H, m), 1.75-1.72 (2H, m), 1.62 (2H, m).

Primer 4. 6- Bromo- 8- ciklopentil- 4- metil- 2-( etilamino) piirdo[ 2, 3- d] pirimidin- 7( 8H)- on

Po istom postupku opisanom u Primer 2, koristeći etilamin (2M rastvor u THF) umesto amonijum hidroksida, dobija se naslovljeno jedinjenje u prinosu od 93%. LRMS: 352 (M+H)<+>.

'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 8.35 (IH, s), 7.90 (IH, bs), 6.01-5.93 (IH, m), 3.34 (2H, m), 2.51 (3H, s), 2.27 (2H, m), 1.96 (2H, m), 1.75 (2H, m), 1.62 (2H, m), 1.15 (3H, m).

Primer 5. Izrada 2- amino- 8- ciklopentil- 6-( lH- pirazol- 4- il)- 4- metiIpirido[ 2, 3- d1pirimidin-7( 8HVona ( Jedinienie 101)

U rastvor 2-amino-6-bromo-8-ciklopcntil-4-mctilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (100 mg, 0.31 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)-lH-pirazol-l-karboksilata (110 mg, 1.2 ekvivalenta), dihlorobis(trifenilfosrin)paladijum(ll) (6.5 mg, 009 mmol), DMF (2 mL) u mikrotalasnoj posudi zapremine 10 mL se doda kalijum karbonat (3 M rastvor, 0.8 mL). Rastvor se degasira 10 min sa N2pre nego što se zatvori i zagreva u mikrotalasnom reaktoruu 10 min na 120 °C. Kada se završi, reakcija se razblaži sa 1 N rastvorom NaOH (10 mL) i EtOAc (50 mL). EtOAc sloj se ispere sa 3N rastvorom HC1, suši preko MgS04, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se podvrgne prečišćavanju hromatografijom da se dobije naslovljeno jedinjenje (62.5 mg, 65% prinos). LRMS :311 (M+H)+.

'H NMR (DMSO-de, 400 MHz): 8.26 (2H, bs), 8.13 (IH, s), 7.09 (2H, bs), 6.04-5.99 (IH, m), 2.59 (3H, s), 2.27-2.23 (2H, bm), 2.04 (2H, bm), 1.77-1.74 (2H, bm), 1.62 (2H, bm).

Primer 6. 2- Metilamino- 6- karbonitril- 8- ciklopentil- 4- metilpiridof2, 3- dlpirimidin- 7( 8H)- on

( Jedinjenje 133)

Rastvor 6-Bromo-8-ciklopentil-4-metil-2-metilamino-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (150 mg, 0.15 mmol) i tetraetilamonijum cijanida (946 mg, 0.30 mmol), DABCO (33 mg, 0.30 mmol) u acetonitrilu (2 mL) se meša 3 dana na 22 °C. Kada se pomoću LCMS utvrdi daje reakcija završena, mešavina se upari i podvrgne hromatografiji. (70.6 mg, 61% prinos). LRMS: 284 (M+H)+.

'H NMR (CDCI3, 400 MHz): 8.68 (IH, s), 8.31 (IH, m), 5.90-5.85 (IH, m), 2.91 (3H, m), 2.51 (3H, s), 2.28 (2H, bm), 1.96 (2H, bm), 1.77 (2H, bm), 1.62 (2H, bm).

Primer 7. 8- Ciklopentil- 4- metil- 2-( metilamino)- 7- okso- 7. 8- dihidropirido[ 2, 3- d] pirimidin- 6-

karboksamid ( Jedinjenje 123)

Rastvor 2-metilamino-6-karbonitirl-8-ciklopentil-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (90 mg, 3.20 mmol) u 3M rastvoru HC1 (10 mL) se meša 24 h na 110 °C. Kada se pomoću LCMS utvrdi daje reakcija završena, mešavina se upari i podvrgne hromatografiji. (32.2 mg, 45% prinos).

LRMS: 302 (M+H)<+>.

'H NMR (CDCI3, 400 MHz): 8.80 (IH, bs), 8.68 (IH, s), 8.13 (IH, m), 7.62 (IH, bs), 5.98-5.96 (IH, m), 2.91 (3H,m),2.51 (3H, s), 2.33 (2H,bm), 1.99 (2H, bm), 1.78 (2H, bm), 1.65 (2H, bm).

Primer 8. ( E)- 8- ciklopentil- 6-( 2- hidroksivinil)- 4- metil- 2-( metilamino) pirido[ 23- d

7( 8FD- on ( Jedinjenje 120)

6-Bromo-8-ciklopentil-4-metil-2-(metilamino)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on (336 mg, 1.0 mmol), l-(viniloksi)butan (501 mg, 5.0 mmol), N-cikloheksil-N-metilcikloheksanamin (254 mg, 1.3 mmol), tri-terc-butilfosfonijum tetrafluoroborat (8.70 mg, 0.03 mmol), litijum hlorid (127 mg, 3.0 mmol), tris(dibenzilidenaeeton)dipaladijum(0)) (27.5 mg, 0.03 mmol) i 1,4-dioksan (10 ml) se dodaju u reaktivnu posudu opremljenu mešalicom. Reaktivna posuda se ispere sa azotom, zatvori i zagreva 75 min na 75 °C. LCMS vrednosti pokazuju da su dobijeni i međuproizvod vinil etar i produkt (4:6). Reaktivna mešavina se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira preko Celite™ i ispere sa dioksanom (10 ml). Filtrat i ispirak se kombinuju i doda se monohidratna para-toluen sulfonatna kiselina (761 mg, 4.0 mmol). Reakcija se meša 1 h na sobnoj temperaturi. Na ovom stadijumu, vrednosti LCMS pokazuju daje ukupna količina međuproizvoda vinil etra hidrlizirala u željeni produkt. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom, a u ostatak se doda etil acetat (120 ml) i ispere sa vodenim rastvorom kalijum karbonata (5 mt/v %), vodom i slanim rastvorom. Organski sloj se suši preko natrijum sulfata a rastvarač se ukloni sniženim pritiskom da se dobije čvrsti žuti ostatak, koji kristališe iz ključalog heptana. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, formiraju se žuti kristali koji se sakupe filtriranjem da se nakon dve faze dobije naslovljeno jedinjenje (190 mg, 62 % prinos).

LCMS: 301 (M+H)<+.>

'H NMR (CDC13, 400 MHz) 8.49 (s, 1 H) 5.79 - 6.19 (m, 1 H) 5.23 - 5.76 (m, 1 H) 3.10 (d,J =4.78 Hz, 3 H) 2.72 (s, 3 H) 2.60 (s, 3 H) 2.34 - 2.54 (m, 2 H) 1.98 - 2.15 (m, 2 H) 1.80 - 1.94 (m, 2 H) 1.65 - 1.78 (m, 2H).<*>H NMR (DMS0-d6, 400 MHz) 8.35 (s, 1 H) 7.81 - 8.21 (m, 1 H) 5.75

- 6.05 (m, 1 H) 2.90 (t,J= 5.41 Hz, 3 H) 2.60 (s, 1 H) 2.53 - 2.57 (m, 5 H) 2.20 - 2.42 (m, 2 H) 1.91 -2.11 (m,2H) 1.70- 1.85 (m, 2 H) 1.52-1.69 (m, 2 H). Primer 9. ( E)- Etil 3-( 8- ciklopentil- 4- metil- 2-( metilamino)- 7- okso- 718- dihidropiirdo[ 2. 3-dl pirimidin- 6- il) akrilat

6-Bromo-8-ciklopentil-4-metil-2-(metilamino)pirido[23-d]pirimid (375 mg, 1.1 mmol), etil akrilat (442 mg, 4.42 mmol), N-cikloheksil-N-metilcikloheksanamin (280 mg, 1.43 mmol), tri-terc-butilfosfonijum tetrafluoroborat (9.61 mg, 0.03 mmol), litijum hlorid (42.4 mg, 3.3 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0)) (30.3 mg, 0.03 mmol) i 1,4-dioksan (10 ml) se dodaju u reaktivnu posudu opremljenu mešalicom. Reaktivna posuda se ispere sa azotom, zatvori i zagreva 75 min na 75 °C. Reaktivna mešavina se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira preko Celite™ i ispere sa etil acetatom. Filtrat i ispirak se kombinuju. a isparljivi delovi se uklone pod sniženim pritiskom da se dobije čvrsti žuti ostatak. Ovaj čvrsti ostatak se kristališe iz ključale mešavine heptametil acetat (50 ml: 50 ml). Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, formiraju se žuti kristali slični iglicama i sakupe filtriranjem da se dobije naslovljeno jedinjenje kao beta-trans izomer (356 mg, 90 % prinos).

LCMS: 357 (M+H)<+>.

'HNMR(CDC13, 400 MHz) 7.88 (s, 1 H) 7.71 (d,J=15.86 Hz, 1 H) 6.96( d, J=15.86 Hz, 1 H) 6.03 (s, 1 H) 5.46 (s, 1 H) 4.25 (q,J= 7.22 Hz, 2 H) 3.09 (d,J= 5.04 Hz, 3 H) 2.58 (s, 3 H) 2.42 (s, 2 H) 1.91 - 2.19 (m, 3 H) 1.86 (s, 2 H) 1.28 -1.37 (m, 3 H).

Primer 10. Etil 3-( 8- ciklopentil- 2-( etilamino)- 4- metil- 7- okso- 7, 8- dihidropirido[ 213- d] pirimidin-6- il) propanoat ( Jedinjenje 132)

(E)-etil 3-(8-ciklopentil-2-(etilamino)-4-metil-7-okso-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-il)akrilat (525 mg, 1.4 mmol) dobijen analogno načinu iz Primera 9 se rastvori u etanolu (150

ml) u Parr™ reaktivnoj posudi zapremnine 500 ml i rastvor se 5 min degasira sa azotom. Doda se Pd/C (450.0 mg) (Aldrich 330108-50G, serija 08331KC, paladijum, 10 mt % suvabaza na aktivnom ugljeniku, vlažno, Degussa type E101 NE/W, voda ukupno 50 %). Reakcija se hidrogenizuje 18 h pod pritiskom vodonika od 50 psi na sobnoj temperaturi. Katalizator se izdvoji filtriranjem i ispere sa etanolom (20 ml). Filtrat i ispirak se kombinuju a isparljivi delovi

se uklone pod sniženim pritiskom da se dobije čvrsti ostatak. Ostatak se kristališe iz ključalog heptana (30 ml). Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, formiraju se beli kristali slični iglicama i sakupe filtriranjem da se dobije naslovljeno jedinjenje (338 mg, 64 % prinos).

LCMS: 373 (M+H)<+>.

'HNMR (CDC13,400 MHz) 7.55 (s, 1 H) 5.83-6.12 (m,/= 17.88, 8.81, 8.56 Hz, 1 H) 5.21 (s,

1H) 4.12 (q, J= 7.13 Hz, 2 H) 3.38 - 3.63 (m, 2 H) 2.87 (t, J = 7.30 Hz, 2 H) 2.67 (t, J = 7.30

Hz, 2 H) 2.53 (s, 3 H) 2.31 - 2.46 (m, 2 H) 1.99 - 2.10 (m, 2 H) 1.77 -1.91 (m, 2 H) 1.63 -1.74 (m,2H) 1.19-1.31 (m, 6H).

Primer 11. 3-( 8- Ciklopentil- 2-( etilamino)- 4- metil- 7- okso- 7, 8- dihidropirido[ 2, 3- d] pirimidin-6- il) propanoatna kiselina ( Jedinjenje 130)

Etil 3-(8-ciklopentil-2-(etilamino)-4-metil-7-okso-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-il)propanoat (167 mg, 0.45 mmol) se rastvori u THF (5 ml) u reaktivnoj posudi opremljenoj mešalicom. Litijum hidroksid (35 mg, 1.46 mmol) se rastvori u vodi (5 ml) a nakon toga doda u reaktivnu posudu. Reaktivna mešavina se meša 3 h na sobnoj temperaturi. Isparljivi delovi se uklone pod sniženim pritiskom da se dobije beli čvrsti ostatak. Doda se vodeni rastvor hidrohloridne kiseline (3.26 mmol, 3.26 ml 1.0 M rastvor). Filtriranjem se sakupi bela čvrsta supstanca kao naslovljeno jedinjenje (125 mg, 81 % prinos).

LCMS: 345 (M+H)<+>.

'H NMR (D20, 400 MHz) 7.54 (s, 1 H) 5.56 - 5.81 (m, 1 H) 3.22 (q,J=7.22 Hz, 2 H) 2.60 (t,J= 7.55 Hz 2 H) 2.31 - 2.38 (m, 5 H) 1.91 - 2.05 (m, 2 H) 1.77 -1.90 (m, 2 H) 1.58 - 1.71 (m, 2 H) 1.46 - 1.58 (m, 2 H; 1.06 (t, J = 7.30 Hz, 3H).

Primer 12. 3-( 8- Ciklopcntil- 2-( etilamino)- 4- mctil- 7- okso- 7. 8- dihidropirido[ 2. 3- dlpirimidin- 6-

il)- N. N- dimetilpropanamid ( Jedinjenje 121)

3-(8-ciklopentil-2-(etilamino)-4-metil-7-okso-7,8^ il)propanoatna kiselina (94 mg, 0.27 mmol), dimetilamin (1.09 mmol, 0.55 ml 2.0 M rastvor u THF), trietilamin (27.6 mg, 0.27 mmol), 0-(7-Azabenzotriazol-l-il)-N,N,N'N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU, 104 mg, 0.27 mmol) i DMF (3.0 ml) se dodaju u reaktivnu posuduo premljenu mešalicom. Reaktivna mešavina se zagreva 26 h na 50 °C. Reakcija se neutrališe sa vodom (2 ml) a isparljivi delovi se uklone pod sniženim pritiskom do ostatka. Dodaju se etil acetat (70 ml) i voda (30 ml) i mešavina dobro promućka. Organski sloj se izdvoji, ispere sa vodom (2 x 30 ml), slanim rastvorom (30 ml) i suši preko natrijum sulfata. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom do ostatka, koji se prečisti koristeći silika gel (100 % petrol etar do 100 % etil acetat). Frakcije se kombinuju a isparljivi delovi se uklone da se dobije bezbojno ulje kao naslovljeno jedinjenje (55 mg, 54 % prinos).

LCMS: 372 (M+H)<+>.

<*>H NMR (CDC13, 400 MHz) 7.66 (s, 1 H) 5.85 - 6.07 (m, 1 H) 3.38 - 3.60 (m, 2 H) 3.03 (s, 3 H)

2.94 (s, 3 H) 2.88 (t, J = 7.30 Hz, 2 H) 2.68 (t, J = 7.43 Hz, 2 H) 2.54 (s, 3 H) 2.34 - 2.48 (m, 2

H) 1.97 - 2.14 (m, 2 H) 1.78 - 1.91 (m, 2 H) 1.62 -1.75 (m, 3 H) 1.27(t, J =7.18 Hz, 3 H). Primer 13. 8- Ciklopentil- 2-( etilamino)- 6-( 3- hidroksipropil)- 4- metilpirido[ 2, 3- d] pirimidin- 7( 8H)-on ( Jedinjenje 129)

Etil-3-(8-ciklopentil-2-(etilamino)-4-metil-7-okso-7,8-dihidropirido[2,3-d]piirmidin-6-il) propanoat (60 mg, 0.16 mmol) se rastvori u etanolu (5 ml) i metanolu (2 ml). U reaktivni rastvor se polako dodaje natrijum borohidrid (18 mg, 0.48 mmol). Razvoj reakcije se prati pomoću LCMS. Nakon 20 h na sobnoj temperaturi u porcijama se doda još natrijum borohidrida da se podstakne završetak reakcije. Reakcija se neutrališe sa vodom a rastvarači se ukloni pod sniženim pritiskom do sušenja. Doda se voda (15 ml) i produkt se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 30 ml). Organski sloj se suši preko natrijum sulfata a rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom do ostatka, koji se nakon toga prečisti sa HPLC. Produkt u obliku TFA soli se oslobodi baze da se dobije naslovljeno jedinjenje (34 mg, 61 % prinos).

LCMS: 331 (M+H)<+>.

<!>H NMR (CDCI3, 400 MHz) 7.53 (s, 1 H) 5.85 - 6.12 (m, 1 H) 3.57 - 3.65 (m, 2 H) 3.51 - 3.57

(m, 2 H) 2.96 (s, 1 H) 2.71 (t, J= 7.05 Hz, 2 H) 2.58 (s, 3 H) 2.35 (s, 2 H) 1.99 - 2.12 (m, 2 H)

1.79-1.91 (m, 4 H) 1.61 -1.77 (m, 3 H) 1.28 (t, J = 7.18 Hz, 3 H).

Primer 14. 8- Ciklopentil- 2-( 2- hidroksi- 2- metilpropilamino)- 6-( 3- hidroksifenil)- 4-

metilpirido[ 2, 3- d]- pirimidin- 7( 8H)- on ( Jedinjenje 114)

U rastvor 6-bromo-8-ciklopentil-2-(2-hidroksi-2-metilpropilamino)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (52.5 mg, 0.133 mmol), 3-hidroksifenilboratne kiseline (20.5 mg, 0.149 mmol) i kalijum karbonata (3 M, 0.06 mL) u DMF (1.2 mL) se doda dihlorobis(trifenilfosfm)paladijum(ll) (5 mg, 0.007 mmol). Mešavina se degasira sa N2, zatvori i zagreva 30 min na 110 °C. Mešavina se sipa u slani rastvor i ekstrahuje sa EtOAc. EtOAc sloj se suši (anhidrovani natrijum sulfat), filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti hromatografijom da se dobije naslovljeno jedinjenje (12 mg, 22%).

LRMS: 409 (M+H)<+>.

'H NMR (CDCI3, 400 MHz): 7.73 (IH, s), 7.28-7.33 (IH, m), 7.09-7.20 (2H, m), 6.79-6.89 (IH, m), 5.90-6.10 (IH, m), 5.13-5.88 (IH, m), 3.54 (2H, d,J=6.32 Hz), 2.58 (3H, s), 2.25-2.49 (2H, m), 1.96-2.18 (2H,m), 1.79-1.95 (2H, m), 1.63-1.77 (4H, m), 1.31 (6H, s).

Primer 15. 6- Bromo- 8- ciklopentil- 2-( 2- hidroksi- 2- metilpropilamino)- 4- metilpirido[ 2, 3-d1pirimidin- 7( 8H)- on

U rastvor 6-bromo-8-ciklopentil-4-metil-2-(metilsulfmil)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (600 mg, 1.62 mmol) i l-amino-2-metilpropan-2-ola (294 mg, 2.34 mmol) u dioksanu (6 mL) se doda trietilamin (1.2 mL, 8.6 mmol). Mešavina se nakon toga 1 h zagreva na 110 °C u zatvorenoj epruveti. Rastvor se sipa u slani rastvor i ekstrahuje sa etil acetatom. Organski sloj se suši (anhidrovani natrijum sulfat), filtrira i koncentruje do sušenja. Sirovi produkt se prečisti gasnom hromatografijom na silika gelu da se dobije naslovljeno jedinjenje kao čvrsta supstanca (565 mg, 88%).

LRMS: 395, 397 (M+H)<+>.

'H NMR (CDC13) 400 MHz): 8.07 (IH, s), 5.91-6.13 (IH, m), 5.46-5.90 (IH, m), 3.52 (2H, d,J=6.32 Hz), 2.54 (3H, s), 2.17-2.43 (2H, m), 1.95-2.16 (2H, m), 1.76-1.95 (2H, m), 1.56-1.74 (3H, m), 1.30 (6H, s).

Primer 16. 8- Ciklopentil- 2-( 2- hidroksi- 2- metilpropilamino)- 6-( 6- metoksipiridin- 3-

il)- 4- metilpirido[ 2, 3- d] pirimidin- 7( 8H)- on ( Jedinjenje 116)

U rastvor 6-bromo-8-ciklopentil-2-(2-hidroksi-2-metilpropilamino)-4-metil-pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (50 mg, 0.126 mmol), 6-metoksipiridin-3-ilboratne kiseline ( 21 mg, 0.137 mmol) i kalijum karbonata (3 M, 0.06 mL) u DMF (1.2 mL) se doda dihlorobis(trifenilfosfin)paladijum(ll) (4.5 mg, 0.0064 mmol). Mešavina se degasira sa N2, zatvori i zagreva 30 min na 110 °C. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom. Sirova mešavina se prečisti hromatografijom da se dobije naslovljeno jedinjenje (23.6 mg, 44%). LRMS: 424 (M+H)<+>.

<!>H NMR (CDCI3, 400 MHz): 8.31 (IH, d,J=2.27 Hz), 7.97 (IH, dd,J=8.59, 2.53 Hz), 7.72 (IH, s), 6.81 (IH, d,J=8.59 Hz), 5.88-6.12 (IH, m), 5.28-5.86 (IH, m), 3.97 (3H, s), 3.55 (2H,d, J=6.32 Hz), 2.59 (3H, s), 2.26-2.47 (2H, m), 1.98-2.17 (2H, m), 1.79-1.98 (2H, m), 1.65-1.77 (3H, m), 1.32 (6H, s).

Primer 17. 8- Ciklopentil- 4- metil- 2-( metilamino)- 6-( pirimidin- 5- il) pirido[ 2. 3- d] pirimidin- 7( 8H)-on ( Jedinjenje 107)

Po istom postupku koji je opisan za izradu Primera 14, koristeći 6-bromo-8-ciklopentil-4-metil-2-(metilamino)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on umesto 6-bromo-8-ciklopentil-2-(2-hidroksi-2-metilpropilamino)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona, pirimidin-5-ilboratnu kiselinu umesto 3-hidroksifenilboratne kiseline, dobija se naslovljeno jedinjenje u prinosu od 10%.

LRMS: 337 (M+H)<+>.

'H NMR (CDC13, 400 MHz): 9.19 (IH, s), 9.03 (IH, s), 7.80 (IH, s), 5.69-6.29 (IH, m), 3.11 (3H, d,J= 5.05 Hz), 2.65 (3H, s), 2.27-2.54 (2H, m), 1.97-2.25 (4H, m), 1.82-1.97 (2H, m), 1.51-1.80 (2H, m).

Primer 18. 8- Izopropil- 6-( 6- metoksipiridin- 3- il)- 4- metil- 2-( metilamino) pirido[ 2, 3-d] pirimidin- 7( 8H)- on ( Jedinjenje 113)

Po istom postupku koji je opisan za izradu Primera 14, koristeći 6-bromo-8-izopropil-4-metil-2-(metilamino)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on umesto 6-bromo-8-ciklopentil-2-(2-hidroksi-2-metilpropilamino)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona, dobija se naslovljeno jedinjenje u prinosu od 11%.

LRMS: 340 (M+H)+.

'H NMR (CDCI3, 400 MHz) 8.31 (IH, d,J=2.02 Hz), 7.99 (IH, dd,J= 8.72, 2.40 Hz), 7.71 (IH, s), 6.80 (IH, d,J=8.59 Hz), 5.72-6.03 (IH, m), 3.97 (3H, s), 3.09 (3H, d,J=5.05 Hz), 2.58 (3H, s), 1.65 (6H, d, J = 6.82 Hz).

Primer 19. 6- Bromo- 8- izopropil- 4- metil- 2-( metilamino) pirido[ 2, 3- d] pirimidin- 7( 8H)- on

U izmešani rastvor 6-bromo-8-izopropil-4-metil-2-(metilsulfinil)pirido[2,3-d]piirrnidin-7(8H)-ona (175 mg, 0.508 mmol) u 1,4-dioksanu (2.5 mL) se doda metil amin (0.80 mL, 2.0 M rastvor u THF, 1.6 mmol). Mešavina se zatvori i zagreva 15 min na 110 °C u mikrotalasnom reaktoru. Rastvarač se upari a sirovi produkt se ispere sa mešavinom EtOAc/heksan da se dobije naslovljeno jedinjenje (158 mg, 76%).

LRMS:311,313(M+H)<+>.

'H NMR (CDC13, 400 MHz): 8.06 (IH, s), 5.55-6.19 (IH, m), 5.19-5.46 (IH, m), 3.07 (3H,d, J=5.05 Hz), 2.52 (3H, s), 1.62 (6H, d,J=6.32 Hz).

Primer 20. 6- Bromo- 8- izopropil- 4- metil- 2-( metilsulfinil) pirido[ 2. 3- d] pirimidin- 7( 8H)- on

U izmešan i ohlađen (-20 °C) rastvor 6-bromo-8-izopropil-4-metil-2-(metiltio)-pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (380 mg, 1.16 mmol) u CH2C12(25 mL) se doda MCPBA (340 mg, 77%, 1.52 mmol). Nakon 30 min mešanja (-20°C do 0 °C), mešavina se neutrališe sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCCh, ekstrahuje sa EtOAc, suši i upari. Sirovi produkt se ispere sa mešavinom EtOAc/heksan da se dobije naslovljeno jedinjenje (190 mg, 48%). LRMS: 344, 346 (M+H)<+>.

'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 8.78 (IH, s), 5.60-5.97 (IH, m), 2.92 (3H, s), 2.79 (3H, s), 1.56 (6H,d, J =6.82 Hz).

Primer 21. 6- Bromo- 8- izopropil- 4- metil- 2-( metiltio) pirido[ 2, 3- d] pirimidin- 7( 8H)- on

U suspenziju NaH (120 mg, 5.00 mmol) u DMF (15 mL) se doda 6-bromo-4-metil-2-(metiltio)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on (572 mg, 2 mmol). Mešavina se zagreje do 46 °C. Rastvor se polako ohladi i doda se 2-jodopropan (0.30 mL, 3.0 mmol). Mešavina se zagreva 30 min na 46 °C, a nakon toga ohladi na sobnu temperaturu i podeli između vode i etil acetata. Organska faza se suši (MgS04) i koncentruje. Sirovi produkt se prečisti gasnom hromatografijom na silika gelu, koristeći mešavinu EtOAc/heksan, da se dobije naslovljeno jedinjenje (390 mg, 59%).

LRMS: 328, 330 (M+H)<+>.

'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 8.60 (IH, s), 5.45-5.99 (IH, m), 2.64 (3H, s), 2.58 (3H, s), 1.54 (6H, d,J= 6.82 Hz).

Primer 22. 6-( 5-( Aminometil)- 2- lfuorofenil)- 8- ciklopentil- 4- metil- 2-( metilamino) pirido[ 2, 3-d lpirimidin- 7( 8H)- on ( Jedinjenje 104)

U rastvor 8-ciklopentil-4-metil-2-(metilamino)-7-okso-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-ilboratne kiseline (30 mg, 0.099 mmol), 3-bromo-4-fluorobenzilamin hidrohlorida ( 28.7 mg, 0.119 mmol) i kalijum karbonata (3 M, 0.10 mL) u DME (0.5 mL) i EtOH (0.5 mL) se doda tetrakis(trifenilfosfin) paladijum(O) (6 mg, 0.005 mmol). Mešavina se degasira sa N2, zatvori i zagreva lh na 100 °C u mikrotalasnom reaktoru. Mešavina se ukloni pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti hromatografijom da se dobije naslovljeno jedinjenje (16.4 mg, 43.3%). LRMS: 382 (M+H)<+>.

'H NMR (CDC13, 400 MHz): 7.73 (IH, s), 7.46 (IH, d,J=6.06 Hz), 7.29-7.40 (IH, m), 7.07 (IH, t, J= 8.84 Hz), 6.14-6.73 (IH, m), 5.78-6.12 (IH, m), 3.84-4.11 (2H, m), 3.08 (3H,d, J =4.80 Hz), 2.48-2.67 (4H, m), 2.32 (3H,d, J= 6.57 Hz), 1.91 -2.06 (2H, m), 1.75-1.91 (2H, m), 1.51 -1.72 (2H, m).

Primer 23. 8- Ciklopentil- 4- metil- 2-( metilamino)- 7- okso- 7. 8- dihidropirido[ 2. 3- d1pirimidin- 6-

iPboratna kiselina

U izmešan i ohlađen (-78 °C) rastvor 6-bromo-8-ciklopentil-4-metil-2-(metilamino)-pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (1.00 g, 2.94 mmol) i trimetilborata (1.40 mL, 12.6 mmol) u THF (60 mL) se doda BuLi (9.5 mL, 1.6 M, 15.2 mmol). Nakon 20 min mešanja, mešavina se neutrališe sa malom količinom 2 N rastvora HC1 i vodom, ekstrahuje sa EtOAc (3 puta), suši i upari. Sirova mešavina se prečisti hromatografijom na silika gelu da se dobije naslovljeno jedinjenje (157.2 mg, 18%).

LRMS: 303 (M+H)<+>.

'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 8.58 (IH, s), 8.57 (IH, s), 8.36 (IH, s), 7.58-8.03 (IH, m), 5.64-6.14 (IH, m), 2.79-2.98 (3H, m), 2.52-2.62 (3H, m), 2.12-2.41 (2H, m), 1.87-2.12 (2H, m), 1.44-1.86 (4H, m).

Primer 24. 6-( 6- Metoksipiridin- 3- il)- 4- metil- 2-( metilamino) pirido[ 2, 3- d] pirimidin- 7( 8H)- on

( Jedinjenje 153)

U rastvor 6-(6-metoksipiirdin-3-il)-4-metil-2-(metilsulfinil)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (147 mg, 0.445 mmol) u 1,4-dioksanu (2.5 mL) se doda metilamin (1.1 mL, 2.0 M rastvor u THF, 2.2 mmol). Mešavina se zatvori i zagreva 10 min na 110 °C u mikrotalasnom reaktoru. Mešavina se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije čvrsta supstanca. Sirova čvrsta supstanca se ispere sa vodom i EtOAc, rekristališe iz mešavine DMSO/EtOAc da se dobije naslovljeno jedinjenje (80 mg, 61%).

LRMS: 298 (M+H)<+>.

'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 11.68-12.05 (IH, m), 8.50 (IH,d, J=1.77 Hz), 8.05 (IH, dd,J=8.59, 2.53 Hz), 8.02 (IH, s), 7.23-7.71 (IH, m), 6.86 (IH, 6,J =8.59 Hz), 3.89 (3H, s), 2.86 (3H,d, J=4.29 Hz), 2.54 (3H, s).

Primer 25. 6-( 6- Metoksipiridin- 3- il)- 4- metil- 2-( metilamino) pirido[ 23- d] pirimidin- 7( 8H)- on

Po istom postupku koji je opisan u Primeru 20, koristeći 6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metil-2-(metiltio)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on umesto 6-bromo-8-izopropil-4-metil-2-(metiltio)-pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona, dobija se naslovljeno jedinjenje koje se koristi kao sirovo u sledećoj fazi.

LRMS: 331 (M+H)+.

Primer 26. 6-( 6- Metoksipiridin- 3- il)- 4- metil- 2-(' metiltio) pirido[ 2, 3- d] pirimidin- 7( 8H)- on

U rastvor 6-bromo-4-metil-2-(metiltio)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona ( 50 mg, 0.17 mmol), 6-metoksipiridin-3-ilboratne kiseline (40.1 mg, 1.1 ekvivalenta), dihlorobis(trifenilfosfin) paladijuma(ll) (6.13 mg, 0.008 mmol) i DMF (2 mL) u mikrotalasnu posudu zapremine 5 mL se doda kalijum karbonat (3 M rastvor, 1.1 ekvivalenta). Rastvor se degasira sa N2, 10 min pre nego što se zatvori i zagreva lh u mikrotalasnom reaktoruu na 100 °C. Reakcija se sipa u 20 ml slanog rastvora, a precipitat se sakupi filtriranjem. Precipitat se dalje prečisti hromatografijom (80% etilacetat/heksan). Naslovljeno jedinjenje se dobija kao čvrsta supstanca (30 mg, 55% prinos).

LRMS: 315.0 (ES+)

'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 12.54 (IH, s), 8.56 (IH, d, J= 2.27 Hz), 8.20 (IH, s), 8.10 (IH, dd,J =8.72, 2.40 Hz), 6.90 (IH, d,J=8.59 Hz), 3.90 (3H, s), 2.70 (3H, s), 2.57 (3H, s).

Primer 27. 8- Ciklobutil- 6-( 6- metoksipiridin- 3- il)- 4- metil- 2-( metilamino) piirdo[ 2. 3- d] pirimidin-7( 8H)- on ( Jedinjenje 109)

Po istom postupku koji je opisan u Primeru 22, koristeći 8-ciklobutil-6-(6-metoksipiridin-3- il)-4-metil-2-(metilsulfinil)pirido[2,3-d]piirmidin-7(8H)-on umesto 6-(6-metoksipiirdin-3-il)-4- metil-2-(metilsulfinil)pirido[2,3-d)pirimidin-7(8H)-ona, dobija se naslovljeno jedinjenje u prinosu od 35%.

LRMS: 352 (M+H)<+>.

'H NMR (CDCI3, 400 MHz): 8.31 (IH,d, J =2.02 Hz), 7.98 (IH, dd,J=8.72, 2.40 Hz), 7.71 (IH, s), 6.8 (IH, d, J= 8.59 Hz), 5.76-6.10 (IH, m), 5.41 (IH, s), 3.97 (IH, s), 3.18-3.44 (2H, m), 3.12 (3H, d, .7=5.0 Hz), 2.56 (3H, s), 2.24-2.46 (2H,m),2.01(IH, q, J=10.36 Hz), 1.78-1.93 (IH, m).

Primer 28. 8- Ciklobutil- 6-( 6- metoksipiridin- 3- il)- 4- metil- 2-( metilsulfinil) pirido[ 2, 3- d] pirimidin-7( 8H)- on

Po istom postupku koji je opisan u Primeru 24, koristeći 8-ciklobutil-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metil-2-(metiltio)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on umesto 6-bromo-8-izopropil-4-metil-2-(metiltio)-pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona, dobija se naslovljeno jedinjenje koje se koristi kao sirovo u sledećoj fazi.

LRMS: 385 (M+H)<+>.

Primer 29. 8- Ciklobutil- 6-( 6- metoksipiridin- 3- il)- 4- metil- 2-( metiltio) pirido[ 2, 3- d] pirimidin-7( 8HVon

Po istom postupku koji je opisan u Primeru 12, koristeći 6-bromo-8-ciklobutil-4-metil-2-(metiltio)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on umesto 6-bromo-8-ciklopentil-2-(2-hidroksi-2-metilpropilamino)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona, dobija se naslovljeno jedinjenje u prinosu od 78%.

LRMS: 369 (M+H)+.

<*>H NMR (CDCU, 400 MHz): 8.35 (IH, d,J=2.53 Hz), 7.99 (IH, dd,J=8.59, 2.53 Hz), 7.79 (IH, s), 6.82 (IH, d,J=8.59 Hz), 5.80-6.13 (IH, m), 3.98 (3H, s), 3.07-3.41 (2H, m), 2.69 (3H, s), 2.68 (3H, s), 2.29-2.52 (2H, m), 1.78-2.11 (2H, m).

Primer 30. 6- Bromo- 8- ciklobutil- 4- mctil- 2-( metiltio) pirido[ 2, 3- d] pirimidin- 7( 8H)- on ( Jedinjenje

100) ; 6- bromo- 7- ciklobutoksi- 4- metil- 2-( metiltio) pirido[ 2, 3- d] pirimidin ( Jedinjenje 99)

U rastvor 6-bromo-4-metil-2-(metiltio)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (500 mg, 1.75 mmol) i ciklobutanola (164 mg, 2.27 mmol) u THF (40 mL) se doda trifenilfosfin (917 mg, 3.49 mmol) i DEAD (852 mg, 4.89 mmol). Nakon 2h, mešavina se sipa u slani rastvor, ekstrahuje sa etil acetatom, suši (anhidrovani NaiSC^) i upari. Mešavina se prečisti hromatografijom da se dobiju Jedinjenje 100 (97 mg, 16%) i Jedinjenje 99 (180 mg, 30%).

LRMS: 340, 342 (M+H)<+>.

Jedinjenje 100:

'H NMR (CDCI3,400 MHz): 8.18 (IH, s), 5.78-6.12 (IH, m), 3.03-3.34 (2H, m), 2.66 (3H, s), 2.65 (3H, s), 2.25 -2.48 (2H, m), 1.95-2.18 (IH, m), 1.71 -1.95 (IH, m).

Jedinjenje 99:

"H NMR (CDCI3, 400 MHz): 8.38 (IH, s), 5.45-5.74 (IH, m), 2.77 (3H, s), 2.69 (3H, s), 2.53-2.66 (2H, m), 2.17-2.37 (2H, m), 1.81-1.98 (IH, m), 1.65-1.81 (IH, m).

Primer 31. 2- Amino- 8- ciklopentil- 6-( l -( 2- hidroksietil)- lH- pirazol- 4- il)- 4- metilpirido[ 2, 3-

dlpirimidin- 7( 8H)- on ( Jedinjenje 106)

U rastvor 8-ciklopentil-6-(l-(2-(metoksimetoksi)etil)-lH-pirazol-4-il)-4-metil-2-(metilsulfonil)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (80 mg, 0.17 mmol) u 5 ml 1,4-dioksanu se u toku 10 minuta u mehurićima propušta gas amonijak. Reaktivna epruveta se zatvori i zagreva 30 minuta na 100 °C. Reaktivna mešavina se sipa u slani rastvor, a precipitat se sakupi filtriranjem. Čvrsti deo se nakon toga ponovo rastvori u 5 ml metanola i doda se nekoliko kapi koncentrovane HC1 i mešavina se zagreva 5 sati na 50 °C. Reaktivna mešavina se ohladi na sobnu temperaturu. Rastvarač se ukloni rotacionim evaporatorom, a ostatak se triturira sa mešavinom etil acetat/heksan da se dobije naslovljeno jedinjenje (33 mg, 54% prinos).

LCMS: 355.20 (ES+)

'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 8.44 (s, 1 H), 8.17 (d,J=4.29 Hz, 2 H), 7.11 (s, 2 H), 6.21 - 6.02 (m, 1 H), 4.96 (s, 1 H), 4.23 (t,J=5.56 Hz, 2 H), 3.81 (t,J=5.18 Hz, 2 H), 2.64 (s, 3 H), 2.39 - 2.22 (m, 2 H), 2.19 - 2.06 (m, 2 H), 1.88 -1.74 (m, 2 H), 1.74 -1.56 (m, 2 H).

Primer 32. 8- Ciklopentil- 6-( l-( 2-( metoksimetoksi) etilVlH- pirazol- 4- ilV4- metil- 2-( metilsulfonil) pirido[ 2, 3- dlpirimidin- 7( 8H)- on

m-CPBA (209 mg, 2.0 ekvivalent) se na sobnoj temperaturi doda u rastvor 8-ciklopentil-6-(l-(2-(metoksimetoksi)etil)-lH-pirazol-4-il)-4-metil-2-(metiltio)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (200 mg, 0.46 mmol) u 10 ml metilen hloridu. Rastvor se meša 2 sata na sobnoj temperaturi. Rastvarač se ukloni rotacionim evaporatorom, a ostatak se prečisti hromatografijom (30 do 80% mešavina etilacetat/heksan) da se dobije naslovljeno jedinjenje (166 mg, 77% prinos).

LCMS: 462.1 (ES+)

'H NMR (CDCI3, 400 MHz): 8.51 (s, 1 H), 8.04 (s, 1 H), 8.01 (s, 1 H), 6.13 - 6.00 (m, 1 H),

4.61 (s, 2 H), 4.40 (t, J= 5.31 Hz, 2 H), 3.97 (t, J= 5.31 Hz, 2 H), 3.39 (s, 3 H), 3.30 (s, 3 H),

2.91 (s, 3 H), 2.40 - 2.28 (m, 2 H), 2.24 - 2.12 (m, 2 H), 2.03 - 1.91 (m, 2 H), 1.81-1.70 (m, 2 H).

Primer 33. 8- Ciklopentil- 6-( l -( 2-( metoksimetoksi) etil)- lH- pirazol- 4- il)- 4- metil- 2-( metiltio) pirido|" 2, 3- d] pirimidin- 7( 8H)- on

U rastvor 6-bromo-8-ciklopentil-4-metil-2-(metiltio)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (200 mg, 0.56 mmol), l-(2-(metoksimetoksi)etil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)-lH-pirazola (239 mg, 1.5 ekvivalenta), paladijum (0) tetrakis(trifenilfosfina) (6.13 mg, 0.05 ekvivalent) i DMF (2 mL) u mikrotalasnoj posudi zapremine 5 mL se doda kalijum karbonat (3 M rastvor, 3.0 ekvivalenta). Rastvor se degasira 10 min sa N2pre nego što se zatvori i zagreva 30 min u mikrotalasnom reaktoruu na 100 °C. Reakcija se sipa u 20 ml slanog rastvora i precipitat se sakupi filtriranjem. Naslovljeno jedinjenje se dobija kao čvrsta supstanca (208 mg, 86% prinos). Jedinjenje se koristi u sledećoj fazi bez naknadnog prečišćavanja.

LRMS: 430.0 (ES+).

Primer 34. 8- Ciklopentil- 6-( 1 - f2- hidroksietilVlH- pirazol- 4- ilM- metil- 2-( metilamino) pirido[ 2, 3- dlpirimidin- 7( 8H)- on ( Jedinjenje 105)

8-ciklopentil-6-(l -(2-(metoksimetoksi)etil)-1 H-pirazol-4-il)-4-metil-2-(metilsulfonil)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on (80 mg, 0.17 mmol) se rastvori u 3 ml metilamina u THF (1.0 M). Reaktivna mešavina se nakon toga zagreva 30 minuta na 100 °C u mikrotalasnom reaktoru. Rastvarač se ukloni rotacionim evaporatorom, a ostatak se ponovo rastvori u 5 ml metanola. Doda se nekoliko kapi koncentrovane HC1 i mešavina se zagreva 5 sati na 50 °C. Reaktivna mešavina se ohladi na sobnu temperaturu. Rastvarač se ukloni rotacionim evaporatorom, a ostatak se triturira sa mešavinom etil acetat/heksan da se dobije naslovljeno jedinjenje (45 mg, 70% prinos).

LRMS: 369.20 (ES+)

'H NMR (CDC13, 400 MHz): 8.33 (s, 1 H), 7.91 (s, 1 H), 7.84 (s, 1 H), 6.11 - 5.98 (m, 1 H), 4.34 - 4.24 (m, 2 H), 4.08 - 4.00 (m, 2 H), 3.09 (d,J= 5.05 Hz, 3 H), 2.65 (s, 3 H) 2.50 - 2.37 (m, 2 H) 2.15 - 2.04 (m, 2 H) 1.94 - 1.83 (m, 2 H) 1.79 - 1.64 (m, 2 H).

Primer 35. 8- Ciklopentil- 6-( 3-( hidroksimetil) fenil)- 4- metil- 2-( metilamino) pirido[ 2, 3-d] pirimidin- 7( 8H)- on ( Jedinjenje 148)

6-Bromo-8-ciklopentil-4-metil-2-metilamino-8H-pirido[2,3-d]pirimid^ (5.00 g, 14.83 mmol), 3-(hidroksimetil)fenilboratna kiselina (3.38 g, 22.24 mmol) i Pd(PPh3)4(0.685 g, 0.593 mmol) se suspenduju u toluenu (20 mL), MeOH (10 mL) i zasićenom rastvoru NaHC03(10 mL), a nakon toga zagrevaju na 100 °C u toku noći. Pomoću MS i TLC se proceni daje reakcija završena. Organski sloj se prenese direktno na kolonu uz eluiranje sa CH2CI2, a nakon toga sa 4 % MeOH u CH2CI2. Frakcije koje sadrže željeni materijal, kako se proceni pomoću MS, se kombinuju iupare pod vakuumomda se dobije zelenkasta bež čvrsta supstanca. Supstanca se triturira sa MeCN i filtrira da se dobije prva količina, 4.7 g. Dobija se 0.25 g druge količine. Dobija se 0.10 g treće količine. Na bazi NMR's se proceni da su sve tri količine dovoljno čiste, kombinuju se i ponovo isperu sa MeCN da se dobije čvrsta supstanca (4.39 g, 81.24 %). Osnovne analize: Izračunato za C2iH24N402, C 69.21 / 69.00, H 6.64/6.65, N 15.37/15.16.

LRMS(M + H)+: 365.1

<!>H NMR (CDCI3, 400 MHz): 7.73 (1 H, s) 7.61 (1 H, s), 7.53 (1 H, d,J=7.57 Hz), 7.40 (1 H, t,J=7.69 Hz), 7.34 (1 H, d,J=7.57 Hz), 6.04 (1 H, m), 5.27 (1 H, s), 4.74 (2 H, d,7=6.11 Hz), 3.06 (3 H, d, J = 5.13 Hz), 2.56 (3 H, s), 2.40 (2 H, m), 2.05 (2 H, m), 1.66 (2 H, m).

Primer 36. 6- Bromo- 8- ciklopentil- 4- metil- 2-( metilamino) pirido[ 2, 3- d] pirimidin- 7( 8H)- on

6-Bromo-8-ciklopentil-2-metansulfinil-4-metil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-on (8.00 g, 22.04 mmol) se rastvori u 100 mL CH2CI2, a nakon toga se 3 minuta u mehurićima propušta NH2Me. Reakcija se razblaži sa CH2C12i ispere sa vodom. Organski sloj se suši preko Na2S04i rastvaračupari pod vakuumomda se dobije beličasta čvrsta supstanca. Materijal se razblaži sa CH2CI2i prečisti hromatografijom na silika gelu da se dobije beličasta čvrsta supstanca (7.33 g, 98.42%).

LRMS: 337.1, 339.1 (M+H)+.

'H NMR (CDCI3, 400 MHz): 8.06 (IH, s), 6.04 (IH, s), 5.31 (IH, br s), 3.04 (3H, d,J =4.88 Hz), 2.51 (3H, s), 2.29 - 2.36 (2H, m), 2.03 - 2.13 (2H, m), 1.80 - 1.89 (2H, m), 1.61 - 1.68 (2H, m).

Primer 37. 8-( 4- Metoksibenzil)- 6- bromo- 4- metil- 2-( metiltio) pirido[ 2, 3- d] pirimidin- 7( 8H)- on

U mešavinu natrijum hidrida (60% disperzija u mineralnom ulju) (90 mg, 1.5 ekvivalent) i anhidrovanog DMF (5 mL) se doda 6-bromo-4-metil-2-(metiltio)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on (429 mg, 1.5 mmol) i mešavina meša 30 minuta na 50 °C. Rastvor se nakon toga malo ohladi i u kapima se zatim doda p-metoksibenzilhlorid (281 mg, 1.2 ekvivalenta) u lmL DMF. Zagreva se 3 sata na 50 °C i nakon toga meša u toku noći na sobnoj temperaturi. Ohladi se na sobnu temperaturu, podeli između vode i AcOEt, vodeni sloj se ispere sa AcOEt, odvojeni organski ekstrakti se isperu sa zasićenim natrijum bikarbonatom, slanim rastvorom i suše preko MgS04. Filtriranjem i uklanjanjem rastvarača dobija se sirovi materijal koji se koristi bez naknadnog prečišćavanja. Prinos 675 mg.

LRMS (APCI) 406.3/408.3 (M+H)<+>.

'H NMR (CDCI3, 400MHz) 8.19 (s, IH), 7.45 (d, 2H), 6.79 (d, J= 8.72 Hz, 2H), 5.62 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 2.64 (s, 3H), 2.63 (s, 3H).

Primer 38. 8-( 4- Metoksibenzil)- 4- metil- 2-( metiltio)- 6- fenilpirido[ 2, 3- dlpirimidin- 7( 8H)- on

Ref. JMC 2004, 47 (16), s. 4097

U mešavinu bromolefina (203 mg, 0.5 mmol) u toluenu (5 mL) i etanolu (5 mL) se dodaju zasićeni natrijum bikarbonat (5 mL), paladijum tetrakis(trifenilfosfin) (29 mg, 5 mol. %), a nakon toga fenilboratna kiselina (73 mg, 1.2 ekvivalent). Mešavina se zagreva 3 sata na 100 °C. Mešavina se ohladi na sobnu temperaturu, razblaži sa EA i vodom, faze se razdvoje, vodena faza ispere 2x sa 10 mL EA, kombinovane organske faze isperu sa slanim rastvorom i suše preko MgSCv Filtriranjem i sakupljanjem ostatka se dobija svetio mrka čvrsta supstanca (166 mg, 82%). Koristi se bez prečišćavanja.

'H NMR (CDC13,400 MHz) 7.87 (s, IH), 7.65 (d, J=7.89 Hz, 2H), 7.38 - 7.48 (m, 5H), 7.11 - 7.20 (m, 2H), 2.70 (s, 3H), 2.60 (s, 3H), 2.35 (s, 3H).

Primer 39. 8-( 4- Metoksibenzil)- 4- metil- 2-( metilsulfonil)- 6- fenilpirido[ 2, 3- d1pirimidin- 7( 8H)- on

Mešavina metil sulfida (150 mg, 0.372 mmol) i m-hloroperbenzoeve kiseline (129 mg, 2 ekvivalent) u dihlorometanu (5 mL) se meša 4 sata na sobnoj temperaturi. Rastvarač se nakon toga ukloni, a sirovi materijal (232 mg) se koristi u sledećoj fazi bez prečišćavanja.

Primer 40. 8-( 4- Metoksibenzil)- 2- amino- 4- metil- 6- fenilpiirdo[ 2, 3- d] pirimidin- 7( 8H)- on

( Jedinjenje 149)

Sirovo sulfon jedinjenje (220 mg) se rastvori u sveže izrađenom zasićenom rastvoru amonijak/THF i mešavina se zagreva pod refluksom u toku noći. Mešavina se sakupi, podeli između EA i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata, organski deo se ispere sa slanim rastvorom, suši preko MgS04, filtrira i izdvoji. Prečisti se gasnom hromatografijom na Biotage koloni koristeći mešavinu 1:2 heksan/EA. Dobija se žuta pena, 55 mg (prinos 76%).

LRMS (APCI): 373.4 (M+H)<+>.

'H NMR (CDCI3, 400 MHz) 7.77 (s, IH), 7.62 (d, J=7.06 Hz, 2H), 7.51 (d, J=8.72 Hz, 2H), 7.32

- 7.43 (m, 3H), 6.79 (d, J=8.72 Hz, 2H), 5.55 (s, 2H), 5.31 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 2.59 (s, 3H)

Primer 41. 8-( 4- HlorobenzilV6- bromo- 4- m^

U rastvor NaH (90 mg, 2.25 mmol, 1.5 ekvivalent) u DMF (5 mL) se na sobnoj temperaturi doda jedinjenje laktama (429 mg, 1.5 mmol) i mešavina zagreva 30 minuta na 50 °C. Mešavina se ohladi na sobnu temperaturu, doda se p-hlorobenzil bromid (370 mg, 1.8 mmol, 1.2 ekvivalent) kao rastvor u DMF (1 mL). Zagreva se 3 sata na 50 °C. Ohladi, razblaži sa vodom i ekstrahuje 3x. Organski delovi se kombinuju i isperu sa slanim rastvorom, suše preko MgS04, filtriraju i izdvoje. Dobija se narandžasto mrka čvrsta supstanca (605 mg, 98% (sirova). Koristi se bez naknadnog prečišćavanja.

LRMS (APCI) 410.3/412.3 (M+ H)<+>

'H NMR (CDC13) 8.22 (s, IH), 7.40 (d, J=8.72 Hz, 2H), 7.22 - 7.31 (m, 2H), 5.63 (s, 2H), 2.65 (s, 3H), 2.58 (s, 3H).

Primer 42. 8-( 4- Hlorobenzil)- 4- metil- 2-( metiltio)- 6- fenilpirido[ 2, 3- dlpirimidin- 7( 8H)- on

U rastvor jedinjenja broma (205 mg, 0.5 mmol) u mešavini toluen/EtOH (5 i 5 mL) se dodaju zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (3 mL), paladijum tetrakis(tirfenilfosfin (29 mg, 5 mol %) i fenilboratna kiselina (73, 0.6 mmol, 1.2 ekvivalent). Zagrevaju se 2 sata na 100 °C, a nakon toga ostave 72 sata na sobnoj temperaturi. Razblaže se sa EA i vodom, faze se razdvoje, organska faza se ispere sa slanim rastvorom i suši preko MgS04. Nakon filtriranja i izdvajanja dobija se svetio žuta čvrsta supstanca, 162 mg (80%). Sirovi materijal se koristi bez naknadnog prečišćavanja.

LRMS (M + H)<+>: 408.5

Primer 43. 8-( 4- Hlorobenzil)- 4- metil- 2-( metilsulfonil)- 6- fenilpirido[ 2, 3- dlpirimidin- 7( 8H)- on

U rastvor metilsulfida (160 mg, 0.39 mmol) u dihlorometanu (5 mL) se doda m-hloroperbenzoeva kiselina (203 mg, 3 ekvivalent) u nekoliko malih porcija a dobijena reakcija ostavi uz mešanje u toku noći. Reaktivna mešavina se nakon toga ispere sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (2x), slanim rastvorom i suši preko MgS04. Filtriranjem i koncentrisanjem dobija se materijal u obliku bele staklaste čvrste supstance (185 mg) koji se odmah koristi bez prečišćavanja. Izgleda daje produkt mešavina sulfoksida i sulfona (LC MS). LRMS (APCI) (M + H)<+>: 440.5.

Primer 44. 8-( 4- Hlorobenzil)- 2- amino- 4- metil- 6- fenilpirido[ 2, 3- d] pirimidin- 7( 8H)- on

( Jedinjenje 150)

Sirovi materijal iz prethodnog eksperimenta (150 mg, 0.35 mmol) se rastvori u sveže izrađenom rastvoru amonijak/THF i zagreva pod refluksom. Nakon 3 sata, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom, produkt se izdvoji na SCX kertridžu i prečisti gasnom hromatografijom na Biotage koloni koristeći mešavinu EA/heksan 1:1. Dobija se svetio žuta pena (90 mg, 70%). LRMS (APCI) 377.4 (M+H)<+>,

'H NMR (400 MHz, CDC13): 7.80 (s, IH), 7.62 (d, 2H), 7.33 - 7.46 (m, 5H), 7.22 (d, 2H), 5.57 (s, 2H), 5.27 (bs, 2H, NH2), 2.60 (s, 3H).

Primer 45. 8-( 4- Hlorobenzil)- 4- metil- 2-( metiltio)- 6-( piridin- 4- il) piridor2. 3- d1pirimidin- 7( 8H)- on

U rastvor jedinjenja broma (150 mg, 0.366 mmol), izrađenog kako je opisano u Primeru 41, u mešavini toluen/EtOH (2 i 2 mL) se doda zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (1 mL), paladijum tetrakis(trifenilfosfin (21 mg, 5 mol. %) i 4-piridilboratna kiselina (54 mg, 1.2 ekvivalent). Reaktivna mešavina se zagreva 2 sata na 100 °C i nakon toga ostavi na sobnoj temperaturi 72 sata. Razblaži se sa EA i vodom, faze se razdvoje, organska faza ispere sa slanim rastvorom i suši preko MgS04. Sirovi materijal (148 mg, 96%) se analizira pomoću TLC i LC MS i koristi bez naknadnog prečišćavanja.

LRMS(M + H)<+>: 409.2

Primer 46. 8-( 4- Hlorobenzil)- 4- metil- 2-( metilsulfonil)- 6-( piridin- 4- il) pirido[ 2, 3- d] pirimidin-7( 8H)- on

Mešavina početnog materijala (100 mg, 0.244 mmol) i m-CPBA (84 mg, 2 ekvivalent) u dihlorometanu se meša 3 sata na sobnoj temperaturi. Upari se do sušenja i dalje koristi bez naknadnog prečišćavanja za aminolizu. Prinos 110 mg, 93%.

LRMS(APCI)(M + H)<+>:441.2

Primer 47. 8-( 4- Hlorobenzil)- 2- amino- 4- metil- 6-( piridin- 4- il) pirido[ 2, 3- dlpirimidin- 7( 8H)-on ( Jedinjenje 151)

U rastvor sirovog produkta iz prethodnog eksperimenta (sulfon, 80 mg, 0.181 mmol) u

THF (4 mL) se u toku 2 minuta uz mehuriće propušta amonijak, rastvor zatvori i ostavi da stoji 72 sata na sobnoj temperaturi. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom, ostatak podeli između EA i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (da se ukloni PhCOOH iz prethodnog eksperimenta). Organska faza se ispere sa slanim rastvorom i suši preko MgS04. Materijal se prečisti gasnom hromatografijom koristeći 100% EA kao eluent. Dobija se produkt u obliku žutog praška, 42 mg (61%).

LRMS (APCI) m/z 378.4 (M+H)<+>

'H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8.55 (bs, 2H), 8.23 (s, IH), 7.75 (d,J=5.81 Hz, 2H), 7.33 (q, 4H), 5.73 (s, 2H), 5.45 (s, 2H), 2.58 (s, 3H).

<*>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 1.23 -1.34 (m, 2 H) 1.45 -1.55 (m, 2 H) 1.89 -1.98 (m, 2 H) 2.55 (s, 3 H) 2.70 - 2.82 (m, 2 H) 3.48 - 3.60 (m, 1 H) 3.82 - 3.91 (m, 3 H) 4.61 (d, J=4.29 Hz, 1 H) 5.16 - 5.62 (m, 1 H) 6.84 (d, .7=8.59 Hz, 1 H) 7.16 (s, 2 H) 7.97 (s, 1 H) 8.00 (dd, J=8.72, 2.40 Hz, 1 H) 8.42 (d, J=2.53 Hz, 1 H)

Primer 48. Trans- 4-( 2- amino- 6- metilpirimidin- 4- ilamino) cikloheksanol

Mešavina 2-amino-4-hloro-6-metil pirimidina (1.18 g, 8.24 mmol),trans- A-aminocikloheksanola (1.00 g, 6.60 mmol), kalijum karbonata (1.82 g, 13.2 mmol) i diizopropiletil amina (1.44 mL, 8.24 mmol) u dimetilacetamidu (20.0 mL) se zagreva u toku noći na 160°C u zatvorenoj epruveti. Reaktivna mešavina se razblaži sa etil acetatom, filtrira i filtrat se koncentruje. Ostatak se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom hloroform/7 N rastvor amonijaka u metanolu (0.5-5%) đa se dobije naslovljeno jedinjenje kao penasta čvrsta supstanca (1.47 g, 99%).

LRMS (M + H)<+>: 223

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1.14-1.24 (m, 4 H) 1.77 - 1.86 (m, 4 H) 1.97 (s, 3 H) 3.35

- 3.40 (m, 1 H) 3.57 - 3.69 (m, 1 H) 4.52 (d, J=4.55 Hz, 1 H) 5.53 (s, 1 H) 5.73 (s, 2 H) 6.43 (d, J=4.29 Hz, 1 H)

Primer 49. Trans- 4-( 2- amino- 5- bromo- 6- metilpirimidin- 4- ilamino) cikloheksanol

U rastvor (trans-4-(2-amino-6-metilpirimidin-4-ilamino)cikloheksanola (1.33 g, 5.98 mmol) u hloroformu (15 mL) se doda N-bromosukcinamid (1.08 g, 6.04 mmol). Nakon 1.5 h mešanja na sobnoj temperaturi, rastvor se koncentruje. Ostatak se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom hloroform/7 N rastvor amonijaka u metanolu (0.5-5%) da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.14 g, 63%).

LRMS (M + H)+: 301,303

<*>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1.14-1.25 (m, 2 H) 1.34 - 1.45 (m, 2 H) 1.74 - 1.85 (m, 4 H) 2.17 (s, 3 H) 3.34 - 3.43 (m, 1 H) 3.79 - 3.89 (m, 1 H) 4.55 (d, J=4.55 Hz, 1 H) 5.83 (d, J=8.34Hz, 1 H) 6.11 (s, 2H)

Primer 50. ( E)- etil 3-( 2- amino- 4-( trans- 4- hidroksicikloheksilamino)- 6- metilpirimidin- 5- il) akrilat

Iz zatvorene epruveta u kojoj se nalaze trans-4-(2-amino-5-bromo-6-metilpirimidin-4-ilamino)cikloheksanol (655 mg, 2.17 mmol), tri-o-tolilfosfin (298 mg, 0.979 mmol), etil akrilat (355 uL, 3.26 mmol) i paladijum (II) acetat (73 mg, 0.33 mmol) u trietilaminu (20 mL) se ispumpa vazduh i ponovo ubaci azot (3 x). Reaktivna mešavina se zagreva u toku noći na 130°C, filtrira i koncentruje. Ostatak se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom hloroform/7 N rastvor amonijaka u metanolu (0.5-5%) da se dobije naslovljeno jedinjenje (364 mg, 52%).

LRMS (M + H)+: 321

'HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1.13-1.22 (m, 2 H) 1.24 (t, J=7.07 Hz, 3 H) 1.34 - 1.45 (m, 2 H) 1.80 (m, 4 H) 2.21 (s, 3 H) 3.34 - 3.41 (m, 1 H) 3.90 - 4.01 (m, 1 H) 4.15 (q, J=7.07 Hz, 2 H) 4.52 (d, J=4.55 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=15.92 Hz, 1 H) 6.27 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 6.37 (s, 2 H) 7.58 (d, J=15.92 Hz, 1 H)

Primer 51. 2- Amino- 8-( trans- 4- hidroksicik^

( Jedinjenje 153)

U rastvor (E)-etil 3-(2-amino-4-(trans-4-hidroksicikloheksilamino)-6-metilpirimidin-5-il)akrilata (233 mg, 0.727 mmol) u dimetilacetamidu se doda l,5-diazbiciklo[5,4,0]undec-5-en (544 uL, 3.64 mmol) a nakon toga kalijum terc-butoksid (1 M rastvor u THF, 364 uL, 364 mmol). Dobijeni rastvor se zagreva u toku noći na 150°C, a nakon toga koncentruje. Ostatak se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom hloroform/7 N rastvor amonijaka u metanolu (0.5-5%). Produkt se nakon toga triturira sa mešavinom 1:1 hloroform:heksan da se dobije naslovljeno jedinjenje (119 mg, 60%).

LRMS (M + H)<+>: 275

<l>U NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1.18-1.30 (m, 2 H) 1.37 - 1.48 (m, 2 H) 1.87- 1.94 (m, 2 H) 2.45 (s, 3 H) 2.70 (m, 2 H) 3.46 - 3.57 (m, 1 H) 4.59 (d, J=4.29 Hz, 1 H) 5.08 - 5.61 (m, 1 H) 6.13 (d, J=9.60 Hz, 1 H) 7.09 (s, 2 H) 7.81 (d, J=9.35 Hz, 1 H)

Primer 52. 2- Amino- 6- bromo- 8-( trans- 4- hidroksicikloheksil- 4- metilpirido[ 2, 3- d] pirimidin-7( 8H)- on

U rastvor 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-cl]pirimidin-7(8H)-ona (115 mg, 0.419 mmol) u dimetilformamidu (2.0 mL) se doda N-bromosukcinimid (75 mg, 0.42 mmol). Nakon 1.5 h mešanja na sobnoj temperaturi, rastvor se koncentruje. Ostatak se prevede u žitku masu u metanolu, čvrsti delovi se izdvoje filtriranjem, a filtrat se koncentruje i prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom hloroform/7 N rastvor amonijaka u metanolu (0.5-3%). Čvrste supstance se kombinuju da se dobije naslovljeno jedinjenje (120 mg, 81%).

LRMS (M + H)+: 353/355

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 1.21 -1.32 (m, 2 H) 1.43 - 1.53 (m, 2 H) 1.86 - 1.96 (m, 2 H) 2.48 (s, 3 H) 2.59 - 2.71 (m, 2 H) 3.46 - 3.57 (m, 1 H) 4.62 (d, J=3.03 Hz, 1 H) 5.08 - 5.76 (m, 1 H) 7.26 (s, 2 H) 8.34 (s, 1 H)

Primer 53. 2- Amino- 8-( trans - 4- hidroksicikloheksil)- 6-( 6- metoksipiridin- 3- il)- 4 -

metilpirido[ 2, 3- dlpirimi din- 7( 8H)- on

Iz boce u kojoj se nalaze 2-amino-6-bromo-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on (105 mg, 0.297 mmol), kalijum karbonat (123 mg, 0.892 mmol) i 2-metoksi-5-piridin boratna kiselina (52 mg, 0.34 mmol) se ispumpa vazduh i ponovo ubaci azot (2 x). Rastvor 5:1 dimetilformad: voda (1.8 mL) kroz koji se 15 min propušta argon u mehurićima se doda u bocu a nakon toga se doda bis(trifenilfosfin) paladijum (II) hlorid (10 mg, 0.015 mmol). Boca se ohladi, vazduh se ispumpa i ponovo napuni sa azotom (2 x) nakon toga zagreva 4 h na 100°C. Mešavina se ohladi u toku noći, razblaži sa metanolom i hloroformom nakon toga filtrira kroz filter od staklenih vlakana da se izdvoji paladijum. Filtrat se koncentruje a ostatak se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom hloroform/7 N rastvor amonijaka u metanolu (0.5-6%) da se dobije naslovljeno jedinjenje (80, 71%).

LRMS (M + H)<+>: 382

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 1.23 - 1.34 (m, 2 H) 1.45 - 1.55 (m, 2 H) 1.89 - 1.98 (m, 2 H) 2.55 (s, 3 H) 2.70 - 2.82 (m, 2 H) 3.48 - 3.60 (m, 1 H) 3.82 - 3.91 (m, 3 H) 4.61 (d, J=4.29 Hz, 1 H) 5.16 - 5.62 (m, 1 H) 6.84 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 7.16 (s, 2 H) 7.97 (s, 1 H) 8.00 (dd, J=8.72, 2.40 Hz, 1 H) 8.42 (d, J=2.53 Hz, 1 H)

Primer 54. 6- Bromo- 4- metil- 2-( metiltio)- 8-(( tetrahidrofuran- 3- il) metil) pirido[ 2. 3-d] pirimidin- 7( 8H)- on

U mešavinu 6-bromo-4-mctil-2-(mctiltio)piirdo[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (900 mg, 3.15 mmol) i 3-(bromometil)-tetrahidrofurana (571 mg, 3.46 mmol) u DMF se doda CSCO3(1.13g, 3.46 mmol). Nakon 7 h mešanja na 70 °C, mešavina se neutrališe sa vodom i ekstrahuje sa f-butil etil etrom (4 puta) i koncentruje. Sirova mešavina se prečisti gasnom hromatografijom, koristeći 0-2% MeOH/CHCl3, da se dobije naslovljeno jedinjenje (715 mg, 61%).

LRMS: 370, 372 (M+H)<+>.

<l>U NMR (400 MHz, CDC13) 8.25 (IH, s), 4.56 (2H, m), 3.96 (IH,dt, J=8.15, 5.68 Hz), 3.72-3.83 (2H, m), 3.66 (IH, dd,7= 8.59, 5.81 Hz), 2.81-2.95 (IH, m), 2.68 (3H, s), 2.62 (3H, s), 1.91-2.04 (IH, m), 1.71-1.85 (IH, m).

Primer 55. 2- Amino- 8- ciklobutil- 4- metil- 7- okso- 7. 8- dihidropiridof2, 3- dlpirimidin- 6-

karbonitril ( Jedinjenje 269)

U rastvor 2-amino-6-bromo-8-ciklobutil-4-metil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (371 mg, 1.20 mmol) u NMP (4 mL) se doda CuCN (480 mg, 5.36 mmol). Mešavina se zatvori i zagreva 30 min na 220 °C koristeći mikrotalasno zračenje. Mešavina se sipa u slani rastvor i filtrira da se dobije čvrsta supstanca. Vodena faza se ekstrahuje sa t-butil metil etrom (3 puta), suši i upari. Komb ino vani čvrsti delovi se prečiste gasnom hromatografijom, koristeći 0 do 3% mešavinu MeOH/CHCl3, da se dobije naslovljeno jedinjenje (240 mg, 78%).

LRMS: 256 (M+H)<+>.

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8.66 (IH, s), 7.77 (2H, d, J = 21.47 Hz), 5.68-5.85 (IH, m), 2.90-3.11 (2H, m), 2.12-2.28 (2H, m), 1.85-2.02 (IH, m), 1.62-1.80 (IH, m).

Primer 56. 2- Amino- 8- ciklobutil- 4- mctil- 6-( 2-( trimetilsilil) etinil) pirido[ 2. 3- d] pirimidin- 7( 8H)- on

U bocu se stave Pd(PPh3)2Cl2(84.2 mg, 0.120 mmol) i bakra jodid (34.3 mg, 0.180 mmol). U ovo se pipetom dodaju 1,4-dioksan (12 mL) i diizopropiletilamin (0.84 mL, 4.8 mmol). Uvede se 2-amino-6-bromo-8-ciklobutil-4-metil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-on (371 mg, 1.20 mmol) i u dobijeni žuti rastvor se 10 min pažljivi raspršuje azot. Nakon tog se pipetom doda TMS-acetilen (0.50 mL, 3.6 mmol) i dobijeni crni rastvor se meša 1 h na 70 °C. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom. Sirova čvrsta supstanca se prečisti gasnom hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa CHCI3a nakon toga sa 3% MeOH u CHCI3da se dobije naslovljeni produkt (322 mg).

LRMS: 327 (M+H)<+>.

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8.06 (IH, s), 7.39 (2H, s), 5.74-5.97 (IH, m), 2.92-3.13 (2H, m), 2.49 (3H, s), 2.09-2.23 (2H, m), 1.86-1.97 (IH, m), 1.63-1.81 (lH,m), 0.22 (9H, s).

Primer 57. 2- Amino- 8- ciklobutil- 6- etinil- 4- metilpirido[ 2, 3- d] pirimidin- 7( 8H)- on ( Jedinjenje

270)

U izmešani rastvor 2-amino-8-ciklobutil-4-metil-6-(2-(trimetilsilil)etinil)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (105 mg, 0.322 mmol) u MeOH (7 mL) se doda K2C03(50 mg, 0,36 mmol) i mešavina se meša 5 h. LC-MS ukazuje daje konverzija završena. Rastvarač se upari a ostatak se prečisti gasnom hromatografijom, koristeći CHCI3, da se dobije naslovljeno jedinjenje (81 mg, 99%).

LRMS: 255 (M+H)<+>.

'H NMR (400 MHz, CDC13) 7.95 (IH, s), 5.78-5.98 (IH, m), 5.25 (2H, s), 3.31 (IH, s), 3.04-3.25 (2H, m), 2.56 (3H, s), 2.23-2.40 (2H, m), 1.96-2.13 (IH, m), 1.73-1.91 (IH, m).

Primer 58. ( 4-( 2- Amino- 8- izopropil- 4- metil- 7- okso- 7. 8- dihidropirido[ 2, 3- d] pirimidin- 6- il)- lH-1. 2. 3- triazol- l- il) metil dietilkarbamat ( Jedinjenje 263)

2-Amino-6-etinil-8-izopropil-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on (75 mg, 0.31 mmol) i azidometil dietilkarbamat (80 mg, 0.46 mmol) se suspenduju u mešavini1: \ t-BUOH/H2O (4 mL). U ovo se doda zasićeni rastvor bakar sulfata (0.05 mL) i mešanje nastavi 24 h. Mešavina se koncentruje i razblaži sa 5 mL vode. Mešavina se razdvoji, a organska faza se ispere sa vodom i upari. Prečišćavanjem ostatka gasnom hromatografijom preko silika gela, koristeći 0-5% mešavinu MeOH/CHCl3, dobija se naslovljeno jedinjenje (88 mg, 69%). LRMS:415(M+H)<+>. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8.67 (IH, s), 8.61 (IH, s), 7.28 (2H, br. s), 6.34 (2H, s), 5.88 (IH, br. s), 3.10-3.29 (4H, m), 2.60 (3H, s), 1.55 (6H, d,J=6.82 Hz), 1.05 (3H,t, J=6.95 Hz), 0.99 (3H, t,J=6.95 Hz). Primer 59. 2- Amino- 8- izopropil- 4- metil- 6-( lH- l. 2. 3- triazol- 4- il) pirido[ 2, 3- d] pirimidin-7( 8HVon ( Jedinjenje 264)

U rastvor (4-(2-amino-8-izopropil-4-metil-7-okso-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-il)-lH-l,2,3-triazol-l-il)metil dietilkarbamata (38 mg, 0.092 mmol) u MeOH (0.5 mL) se doda vodeni rastvor NaOH (LOM, 0.20 mL, 0.20 mmol) i reaktivna mešavina se meša 2 dana na 85 °C. Pomoću LCMS se utvrdi daje izvršeno približno 90% konverzije. Rastvarač se upari a ostatak se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom MeOH/CHCl3(0-5%) da se dobije naslovljeno jedinjenje (8 mg, 30%).

LRMS: 286 (M+H)<+>.

<*>H NMR (400 MHz, DMSO-de) 8.50 (IH, br. s), 8.38 (IH, br. s), 7.27 (2H, br. s), 5.77-6.03 (IH, m), 2.59 (3H, s), 1.55 (6H, d, J = 6.82 Hz).

Primer 60. 2- Amino- 6-( 2- hidroksipirimidin- 5- il)- 4- metil- 8-( tetrahidro- 2H- piran- 4

dl pirimidin- 7(( HVon ( Jedinjenje 267)

Mešavina 2-amino-6-(2-metoksipirimidin-5-il)-4-metil-8-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirido-[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (42.2 mg, 0.115 mmol), TMSI (0.10 mL, 0.70 mmol) i bezvodnog acetonitrila (2.3 mL) se zagreva 1 h na 82 °C. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, mešavina se tretira sa 20% rastvorom NH4OH i koncentruje. Mešavina se prečisti analitičkom grupom (HPLC) da se dobije naslovljeno jedinjenje (12 mg, 30%).

LRMS: 355 (M+H)<+>.

IH NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8.63 (2H, br. s.) 8.10 (IH, s) 7.23 (2H, br. s.) 5.54-5.84 (IH, m) 3.99 (2H, dd,J=11.12, 3.79 Hz) 3.36-3.53 (3H, m) 2.83-3.06 (2H, m) 2.56 (3H, s) 1.46 (2H, d,J=9.85 Hz).

Primer 61. 5- Bromo- 4- hloro- 6- metilpirimidin- 2- amin

U mešavinu 2-amino-4-hloro-6-metil pirimidina (5.00 g, 34.8 mmol) u dihlorometanu (240 mL) se dodabrom (1.88 mL, 36.6 mmol). Dobijena suspenzija se meša 1.5 sat na sobnoj temperaturi. Mešavina se razblaži sa dihlorometanom (1.3 L) i ispere sa zasićenim natrijum bikarbonatom (2 x 200 mL) i slanim rastvorom (200 mL), suši (MgS04), filtrira i koncentruje da se dobije 5-bromo-4-hloro-6-metilpirimidin-2-amin (7.5 g, 97%).

LCMS (M+H): 223

'H NMR (400 MHz, HLOROFORM-c/) 8 ppm 2.54 (s, 3 H) 5.10 (s, 2 H)

Primer 62. 5- Bromo- 4- hloro- 2-( 2, 5- dimetil- lH- pirol- l- ilV6- metilpirimidin

Na bocu u kojoj se nalaz mešavina 5-bromo-4-hloro-6-metilpirimidin-2-amina (34.8 mmol), 2, 5-heksandiona (6.15 mL, 52.2 mmol) i p-toluensulfonatne kiseline (330 mg, 1.74 mmol) u toluenu (100 mL) se stave Dean-stark aparatura i kondenzator i mešavina se zagreva pod refluksom. Nakon refluksovanja u toku noći, rastvor se ohladi na sobnu temperaturu i koncentruje. Ostatak se prevede u žitku masu u heksanima, filtrira i filtrat se koncentruje. Precipitat se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom heksani/hloroform (0-50%) da se dobije 5-bromo-4-hloro-2-(2, 5-dimetil-lH-pirol-l-il)-6-metilpirimidin (1.60 g, 15%). Koncentrovani filtrat se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom heksani/hloroform (10-40%) da se dobije 5-bromo-4-hloro-2-(2, 5-dimetil-lH-pirol-l-il)-6-metilpirimidin (5.22 g, 50%).

LRMS (M + H)<+>: 302

'H NMR (400 MHz, HLOROFORM-c/) 5 ppm 2.39 (s, 6 H) 2.72 (s, 3 H) 5.90 (s, 2 H)

Primer 63. trans- 4-( 5- bromo- 2-( 2, 5- dimetil- lH- pirol- l- il)- 6- metilpirimidin- 4-

ilamino) cikloheksanol

Mešavina 5-bromo-4-hloro-2-(2,5-dimetil-lH-pirol-l-il)-6-metilpirimidina (1.50 g, 4.99mmol), trans-4-aminocikloheksanol hidrohlorida (1.17 g, 6.24 mmol) i diizopropiletil amina (2.61 mL, 15.0 mmol) u dimetilacetamidu (25.0 mL) se zagreva u toku noći na 160°C u zatvorenoj epruveti. Reaktivna mešavina se razblaži sa metiltercbutil etrom (400 mL), ispere sa zasićenim amonum hloridom (2 x) i slanim rastvorom, suši (MgS04), filtrira i koncentruje. Kombinovani vodeni slojevi se ekstrahuju sa dihlorometanom (3 x 150 mL), suše (MgS04), filtriraju i koncentruju. Sirovi produkt se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom hloroform/metanol (0.5-3%) da se dobije/ra«5,-4-(5-bromo-2-(2,5-dimetil-lH-pirol-l-il)-6-metilpirimidin-4-ilamino)cikloheksanol (1.76 g, 93%).

LCMS LRMS (M + H)<+>: 379/381

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 1.15 - 1.26 (m, 2 H) 1.46 - 1.57 (m, 2 H) 1.74 - 1.80 (m, 2 H) 1.81 -1.87 (m, 2 H) 2.26 (s, 6 H) 2.41 (s, 3 H) 3.35 - 3.45 (m, 1 H) 3.86 - 3.96 (m, 1 H) 4.57 (d, J=4.29 Hz, 1 H) 5.76 (s, 2 H) 6.82 (d, J=8.34 Hz, 1 H)

Primer 64. 5- Bromo- 2-( 2. 5- dimetil- lH- pirol- l - il)- N-( trans- 4- metoksicikloheksil)- 6-

metilpirimidin- 4- amin

U ohlađeni (0°C) rastvor trans-4-(5-bromo-2-(2,5-dimetil-lH-pirol-l-il)-6-metilpirimidin-4-ilamino)cikloheksanola (1.45 g, 3.82 mmol) u tetrahidrofuranu ( 40 mL) se doda natrijum hidrid (60% disperzija u ulju, 459 mg, 11.5 mmol). Nakon 40 minuta, doda se metil jodid (262 uL, 4.21 mmol) i mešavina se meša 2 sata na 0°C. Ledeno kupatilo se ukloni i nastavi sa mešanjem 3 sata, a nakon toga neutrališe sa metanolom i koncentruje. Ostatak se rastvori u etil acetatu i ispere sa zasićenim amonijum hloridom (2x), slanim rastvorom, suši (MgS04), filtrira i koncentruje. Sirovi produkt se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom heksani/metiltercbutil etar (5-25%) da se dobije 5-bromo-2-(2,5-dimetil-lH-pirol-1 -il)-N-(trans-4-metoksicikloheksil)-6-metilpirimidin-4-amin (1.1 Og, 73%).

LRMS (M + H)<+>: 293/295

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6)8ppm 1.11 - 1.22 (m, 2 H) 1.47 - 1.58 (m, 2 H) 1.78 - 1.87 (m, 2 H) 1.97 -2.07 (m, 2 H) 2.26 (s, 6 H) 2.41 (s, 3 H) 3.04 - 3.14 (m, 1 H) 3.23 (s, 3 H) 3.90 - 4.00 (m, 1 H) 5.76 (s, 2 H) 6.87 (d, J=8.34 Hz, 1 H)

Primer 65. 5- Bromo- N4-( trans- 4- metoksicikloheksil)- 6- metilpiirmidin- 2. 4- diamin

Rastvor 5-bromo-2-(2,5-dimetil-lH-pirol-l-il)-N-(trans-4-metoksicikloheksil)-6-metilpirimidin-4-amina (1.07 g, 2.72 mmol) i hidroksilamin hidrohlorida (945 mg, 13.6 mmol) u mešavini 10:1 etanokvoda (27.5 mL) se zagreva pod refluksom 7 sati, a nakon toga na sobnoj temperaturi u toku noći. Doda se novih 0.5 eq hidroksilamin hidrohlorida i rastvor se refluksuje još 4 sata, nakon toga ohladi na sobnu temperaturu i koncentruje. Sirovi produkt se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom hloroform/metanol (0.5-3%) da se dobije 5-bromo-N4-(trans-4-metoksicikloheksil)-6-metilpirimidin-2,4-diamin (767 mg, 89%). LRMS (M + H)+: 315/317 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 1.09 - 1.20 (m, 2 H) 1.35 - 1.46 (m, 2 H) 1.78 - 1.88 (m, 2 H) 1.96 -2.04 (m, 2 H) 2.17 (s, 3 H) 3.03 - 3.14 (m, 1 H) 3.23 (s, 3 H) 3.82 - 3.92 (m, 1 H) 5.91 (d, J=8.34 Hz, 1 H) 6.12 (s, 2 H) Primer66 .( E)- etil 3-( 2- amino- 4-( trans- 4- metoksicikloheksilamino)- 6- metilpirimidin- 5- il) akrilat

U zatvorenoj kiveti se u toku -10 minuta u mehurićimaa propušta argon kroz rastvor 5-bromo-N4-(trans-4-metoksicikloheksil)-6-metilpirimidin-2,4-diamina (811 mg, 2.57 mmol) i etil akrilata (559 uL, 5.15 mmol) u trietilaminu (25 mL). Doda se tetrakis(trifenilfosfin)-paladijum (0) (297 mg, 0.257 mmol), posuda se zatvori i reakcija se zagreva na 130°C u toku noći. Reaktivna mešavina se ohladi na sobnu temperaturu, razblaži sa etil acetatom (450 mL), ispere sa vodom, 0.1 N rastvorom hidrohloridne kiseline, slanim rastvorom, suši (MgS04), filtrira i koncentruje. Sirovi produkt se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom hloroform/metanol (0-10%) da se dobije (E)-etil 3-(2-amino-4-(trans-4-metoksicikloheksilamino)-6-metilpirirnidin-5-il)akrilat (674 mg, 78%).

LRMS (M + H)+: 335

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1.09 - 1.20 (m, 2 H) 1.24 (t, J=7.07 Hz, 3 H) 1.34 - 1.46 (m, 2 H) 1.79 - 1.89 (m, 2 H) 1.96 - 2.05 (m, 2 H) 2.21 (s, 3 H) 3.03 - 3.12 (m, 1 H) 3.23 (s, 3 H) 3.92 - 4.03 (m, 1 H) 4.15 (q, J=7.07 Hz, 2 H) 5.96 (d, J=15.92 Hz, 1 H) 6.31 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 6.37 (s, 2 H) 7.59 (d, J=15.92Hz, 1 H)

Primer 67. 2- Amino- 8-( trans- 4- metoksicikloheksil)- 4- metilpirido[ 2, 3- dlpirimidin- 7( 8H)- on

Rastvor (E)-etil 3-(2-amino-4-(trans-4-metoksicikloheksilamino)-6-metilpirimidin-5-il)akrilata (674 mg, 2.02 mmol) tiofenola (621 ul, 6.05 mmol), l,5-diazabiciklo(5,4,0)undec-5-ena (1.81 mL, 12.1 mmol) i trietilamina (1.69 mL, 12.1 mmol) u N',N-dimetilformamidu (15 mL) se zagreva 30 minuta na 100°C u mikrotalasnom reaktoru, a nakon toga u uljanom kupatilu u toku noći na 100°C. Reaktivna mešavina se razblaži sa metiltercbutiletrom i ispere sa zasićenim natrijum karbonatom, slanim rastvorom, 0.1 N rastvorom hidrohloridne kiseline, slanim rastvorom, suši (MgS04), filtrira i koncentruje. Kombinovani vodeni sloj se esktrahuje sa dihlorometanom (2 x). Organski sloj se suši (MgS04), filtrira i koncentruje. Sirovi produkt se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom hloroform/metanol (0-5%) da se dobije 2-amino-8-(trans-4-metoksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on (482 mg, 83%).

LRMS (M + H)<+>: 289

<]>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1.14 - 1.25 (m, 2 H) 1.45 - 1.55 (m, 2 H) 2.05 - 2.14 (m, 2 H) 2.46 (s, 3 H) 2.66 - 2.77 (m, 2 H) 3.26 (s, 3 H) 3.29 - 3.33 (m, 1 H) 4.97 - 5.61 (m, 1 H) 6.14 (d, J=9.35 Hz, 1 H) 7.11 (s, 2 H) 7.82 (d, J=9.35 Hz, 1 H)

Primer 68. 2- Amino- 6- bromo- 8-( trans- 4- metoksicikloheksil)- 4- metilpirido[ 2, 3- d] pirimidin-7( 8H)- on

U rastvor 2-amino-8-(trans-4-metoksicikloheksil)-4-metil^^ ona (482 mg, 0.1.67 mmol) u dimetilformamidu (15 mL) se doda N-bromosukcinimid (300 mg, 1.69 mmol). Nakon 1 sat mešanja na sobnoj temperaturi, rastvor se razblaži sa

metiltercbutiletrom i ispere sa 50% natrijum karbonatom (2 x) i slanim rastvorom. Kombinovani vodeni slojevi se ekstrahuju sa dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi se suše (MgS04) filtriraju i koncentruju. Čvrsti delovi se trituriraju sa dietil etrom da se dobije 2-amino-6-bromo-8-(trans-4-metoksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on (594 mg, 97%).

LRMS (M + H)<+>: 367/369

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1.15 -1.26 (m, 2 H) 1.49 - 1.59 (m, 2 H) 2.06 - 2.15 (m, 2 H) 2.49 (s, 3 H) 2.61 - 2.73 (m, 2 H) 3.17 - 3.26 (m, 1 H) 3.27 (s, 3 H) 5.15 - 5.67 (m, 1 H) 7.26 (s, 2 H) 8.34 (s, 1 H)

Primer 69. 2- Amino- 8-( trans- 4- metoksicikloheksil)- 6-( 6- metoksipiridin- 3- il)- 4- metilpirido[ 2, 3-d] pirimidin- 7( 8H)- on ( Jedinjenje 179)

U posudu koja sadrži 2-amino-6-bromo-8-(trans-4-metoksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on (75 mg, 0.20 mmol), 2-metoksi-5-piridinboratnu kiselinu (37.5 mg, 0.245 mmol) i cezijum karbonat se doda mešavina PdCl2(dppf) 1:1IT1/CH2CI2a nakon toga mešavina 5:1 dimetoksietan:voda (3 mL, degasirano uvođenjem argona). Posuda se zatvori i zagreva u mikrotalasnom reaktoru 30 minuta na 100°C. Reaktivna mešavina se koncentruje, a sirovi produkt se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom hloroform/metanol (0-5%). Frakcije koje sadrže željeni produkt se koncentruju i čvrsti delovi se trituriraju sa metiltercbutil etrom da se dobije 2-amino-8-(trans-4-metoksicikloheksil)-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on (33 mg, 40%).

LRMS (M + H)<+>: 396

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1.16 -1.28 (m, 2 H) 1.52 - 1.62 (m, 2 H) 2.07 - 2.17 (m, 2 H) 2.55 (s, 3 H) 2.72 - 2.83 (m, 2 H) 3.26 (s, 3 H) 3.30 - 3.33 (m, 1 H) 3.88 (s, 3 H) 5.30 - 5.63 (m, 1 H) 6.84 (d,J=8. 59Hz, 1 H) 7.17 (s, 2 H) 7.98 (s, 1 H) 8.00 (dd, J=8.59, 2.53 Hz, 1 H) 8.42

(d,7=2.53Hz, 1 H)

Primer 70. Kalijum lH- pirazol- 5- trifluoroborat

Mešavina lH-pirazol-5-borne kiseline (150 mg, 1.34 mmol) i kalijum hidro fluorida (262 mg, 3.35 mmol) u mešavini 1:3 metanol/voda (2 mL) se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Mešavina se prenese u posudu, posuda se zatvori i mešavina se zagreva 2 sata na 100°C u uljanom kupatilu da se dobije rastvor. Rastvor se ohladi i koncentruje. Čvrsti delovi se prevedu u žitku masu sa toplim acetonom, filtriraju i filtrat se koncentruje da se dobije kalijum lH-pirazol-5-trifluoroborat (234 mg, 100%).

Primer 71. 2- Amino- 8-(( trans)- 4- hidroksicikloheksil)- 4- metil- 6-( lH- pirazol- 3- il) pirido[ 2, 3-d] pirimidin- 7( 8H)- on ( Jedinjenje 186)

Kroz mešavinu 2-amino-6-bromo-8-((trans)-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (100 mg, 0.283 mmol), kalijum lH-pirazol-5-trifluoroborata (98.5 mg, 0.566 mmol) i trietilamina (197 uL, 1.42 mmol) u etanolu (3.0 mL) se u mehurićima propušta argon. Doda se mešavina PdCl2(dppf)l :1 m/CTkCk, posuda se zatvori a kroz mešavinu se ponovo u mehurićima propušta argon, nakon toga zagreva 30 minuta u mikrotalasnom reaktoru na 100°C, a zatim 60 minuta na 150°C. Reaktivna mešavina se koncentruje i prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom 1:1 etil acetat:hloroform/ 7 N rastvor amonijaka u metanolu (0.5-7%). Frakcije koje sadrže željeni produkt se kombinuju i koncentruju a čvrsti deo se rekristališe iz mešavine metanol/hloroform da se dobije 2-amino-8-((trans)-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-6-(lH-pirazol-3-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on (32 mg, 33%). LRMS (M + H)4:341

<*>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 1.24 - 1.35 (m, 2 H) 1.44 - 1.55 (m, 2 H) 1.90 - 1.99 (m, 2 H) 2.56 (s, 3 H) 2.73 - 2.84 (m, 2 H) 3.50 - 3.62 (m, 1 H) 4.62 (d, J=4.04 Hz, 1 H) 5.12 - 5.74 (m, 1 H) 6.93 (s, 1 H) 7.14 - 7.26 (m, 2 H) 7.62 (m, 1 H) 8.34 (s, 1 H) 12.97 (m, 1 H)

Primer 72. 1 -( 5- Bromo- 2-( 2, 5- dimetil- l H- pirol- 1 - il)- 6- metilpirimidin- 4- il) hidrazin

U mikrotalasnu posudu se dodaju 5-bromo-4-hloro-2-(2,5-dimetil-l H-pirol-1 -il)-6-metilpirimidin (4.95 g, 16.5mmol), hidrazin (0.57 ml, 18.1 mmol), hunig-sova baza (95.74 ml, 32. 9 mmol) i dimetilacetamid ( 24 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon toga se mešavina zagreva

30 min na 100°C u mikrotalasnom reaktoru. Reaktivna mešavina se koncentruje pod sniženim pritiskom do sušenja, a ostatak se triturira sa mešavinom 1:1 etil acetafmetanol da se dobije željeni produkt kao bela čvrsta supstanca težine 2820 mg. Osnovna tečnost se prečisti hromatografijom na koloni uz eluiranje sa 30% EtOAc:heksan da se dobije dodatna količina željenog produkta. Oba lota se kombinuju da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca težine 3620mg 74%

'H NMR (400 MHz, MeOD) 8 ppm 2.30 (s, 6 H) 2.51 (s, 3 H) 5.79 (s, 2 H)

Primer 73. 5- Bromo- 2-( 2, 5- dimetil- lH- pirol- l- il)- 6- metil- N-( pirolidin- l- il) pirimidin- 4- amin

U bocu se dodaju l-(5-bromo-2-(2,5-dimetil-lH-pirol-l-il)-6-metilpirimidin-4-il)hidrazin (lOOmg, 0.34 mmol), 1,4-dibromobutan (0.04 ml, 0.37 mmol), hunig-ova baza (0.18 ml, 1.01 mmol) i DMAC (1.0 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon zagrevanja na 60 °C u toku noći, reaktivna mešavina se ohladi na sobnu temperaturu i razblaži sa EtOAc (2 ml), bela čvrsta supstanca se filtrira a osnovna tečnost se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na koloni uz eluiranje sa 30% EtOAc:hex da se dobije naslovljeno jedinjenje težine 76mg 64%<*>H NMR (400 MHz, MeOD) 5 ppm 1.78 (ddd, J=6.95, 3.41, 3.28 Hz, 4 H) 2.15 (s, 6 H) 2.41 (s, 3 H) 2.85 -2.92 (m, 4 H) 5.67 (s, 2 H)

Primer 74. N-( 5- Bromo- 2-( 2. 5- dimetil- 1 H- pirol- 1 - il)- 6- metilpirimidin- 4- il)- N-( pirolidin- 1 -

iPakrilamid

U reaktivni rastvor 5-bromo-2-(2,5-dimetil-l H-pirol-l-il)-6-metil-N-(pirolidin-l-il)pirimidin-4-amina (3.14g, 8. 97 mmol) u anhidrovanom metilen hloridu (120 ml) i hunig-sovoj bazi (4.68 ml) se polako, u kapima, na sobnoj temperaturi dodaje rastvor akriloil hlorida (0. 80 ml, 9.86 mmol) u metilen hloridu (30 ml). Nakon 60 min mešanja na sobnoj temperaturi, reaktivna mešavina se koncentruje pod sniženim pritiskom, a ostatak se prečisti na koloni od 120g uz eluiranje sa 40%mešavinom etil acetat:heksan da se dobije naslovljeni produkt težine 3.5 g kao bela čvrsta supstanca 97%<!>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1.72 -1.77 (m, 4 H) 2.28 (s, 6 H) 2.70 (s, 3 H) 3.17 - 3.20 (m, 4 H) 5.79 (d, J=l 1.12 Hz, 1 H) 5.85 (s, 2 H) 6.30 (dd, J=17.18, 2.02 Hz, 1 H) 6.75 (bs, 1 H) Primer 75. 2-( 2. 5- Dimetil- lH- pirol- l- il)- 4- metil- 8-( pirolidin- l- il) pirido[ 2. 3- dlpirimidin- 7( 8H)- on

U mikrotalasnu posudu se dodaju N-(5-bromo-2-(2,5-dimetil-lH-pirol-l-il)-6-metilpirimidin-4-il)-N-(pirolidin-l-il)akrilamid (2.0g, 4.95mmol), srebro karbonat (2.73 g, 9.89 mmol) i anhidrovani THF (lOOml). Kroz reaktivnu suspenziju se u toku 2 minuta u mehurićima propušta azot a nakon toga se doda paladijum tetrakis terc-(trifenilfosfin) (286 mg, 0.25 mmol). Nakon 3h mešanja na 70 °C u uljanom kupatilu, reaktivna mešavina se ohladi na sobnu

temperaturu i razblaži sa 20 ml slanog rastvora. Nakon 5 minuta mešanja na sobnoj temperaturi, reaktivna mešavina se filtrira kroz celite ploču. Pogača se ispere sa etil acetatom. Slojevi se razdvoje. Organski sloj se ispere sa 20 ml slanog rastvora, suši sa kalijum karbonatom, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na koloni uz eluiranje sa 40% mešavinom EtOAc:hex da se dobije naslovljeno jedinjenje težine 480 mg u prinosu od 30%

'H NMR (400 MHz, MeOD) 5 ppm 2.01 - 2.13 (m, 4 H) 2.39 (s, 6 H) 2.80 (s, 3 H) 3.32 - 3.39 (m, 4 H) 5.86 (s, 2 H) 6.72 (d, J=9.85 Hz, 1 H) 8.15 (d, J=9.60 Hz, 1 H)

Primer 76. 2- Amino- 4- metil- 8- pirolidin- l- ilpirido[ 2, 3- d1pirimidin- 7( 8H)- on

U mikrotalasnu posudu se dodaju 2-(2,5-dimetil-lH-pirol-l-il)-4-metil-8-(pirolidin-l-il)pirido[2,3,d]pirimidin-7(8H)-on (530 mg, 1.64 mmol) hidroksamin hidrohlorid (1.14 g, 16.4 mmol) etanol (20ml) i voda (2.92 ml). Posuda se zatvori i refluksuje na 100 °C. Nakon 3 h, reaktivna mešavina se koncentruje do sušenja pod sniženim pritiskom, a dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na koloni uz eluiranje sa 10% 7N rastvorom NH3u mešavini MeOH:CHCl3da se dobije željeni produkt težine 296 mg u prinosu od 74% LRMS (M + H)+: 246.1

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1.90 - 2.00 (m, 4 H) 2.47 (s, 3 H) 3.16 - 3.24 (m, 4 H) 6.20 (d, J=9.60 Hz, 1 H) 7.21 (br. s., 2 H) 7.84 (d, J=9.60 Hz, 1 H)

Primer 77. 2- Amino- 6- bromo- 4- metil- 8-( pirolidin- l- il) pirido[ 2, 3- dlpirimidin- 7( 8H)- on

U suspenziju 2-amino-4-metil-8-pirolidin-l-ilpirido[2,3-d]piirmidin-7(8H)-ona (22.0 mg, 0.09 mmol) u anhidrovanom DMF (1.0 ml) i CC14 (1.0 ml) se pipetom na sobnoj temperaturi dodaju dve kapi broma. Nakon 3 minuta mešanja na sobnoj temperaturi, u reaktivnu mešavinu se doda TEA (0.08 ml). Nakon 1.5 h mešanja na sobnoj temperaturi, reaktivna mešavina se koncentruje pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na koloni uz eluiranje sa 10% 7N rastvorom NH3u mešavini MeOFECHCb da se dobije naslovljeno jedinjenje produkta 13.0 mg težine u prinosu od 45%.

LCMS (APCI +) 324.0

'H NMR (400 MHz, MeOD) 5 ppm 2.02 - 2.14 (m, 4 H) 2.57 (s, 3 H) 3.32 - 3.38 (m, 4 H) 8.36

(s, 1 H)

Primer 78. 2- Amino- 4- metil- 6-( lH- pirazol- 4- il)- 8- fpirolidin- l- il) piridof2, 3- d1pirimidin- 7( 8H)-on ( Jedinjenje 193)

U bocu se dodaju 2-amino-6-bromo-4-metil-8-(pirolidin-l-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on (21.0 mg, 0.06 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)-lH-pirazol-l-karboksilat ( 20. 9mg, 0.07 mmol) i kalijum karbonat (25.6 mg, 0.19 mmol) u mešavinu DMAC (1.20 ml) :H20 (0.1 ml). Reaktivna mešavina se degasira ili pomoću N2ili vakuumom. U reaktivnu mešavinu se doda PdCl2(PPli3)2 (4.3 mg). Nakon 60 min zagrevanja na 100°C u mikrotalasnom reaktoru, reaktivna mešavina se koncentruje pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti na koloni sa reverznom fazom uz eluiranje sa mešavinom acetonitril: 0.1% acetatna kiselina u vodi da se dobije naslovljeno jedinjenje težine 2.5mg

'H NMR (400 MHz, MeOD): 2.07 - 2.18 (m, 4 H) 2.66 ( s, 3 H) 3.35 - 3.46 (m, 4 H) 8.18 (s, 1 H) 8.28 (bs, 2H)

Primer 79. Terc- butil- 4-( 2- amino- 4- metil- 7- okso- 8-( piroIidin- l- il)- 7. 8- dihidropiri

d 1pirimidin- 6- il)- lH- pirazol- l- karboksilat ( Jedinjenje 192)

Ovo naslovljeno jedinjenje se dobija reakcijom kojom se dobija primer 78, težine 3.1 mg.

'H NMR (400 MHz, MeOD): 1.58 (s, 9 H) 2.00 - 2.05 (m, 4 H) 2.57 (s, 3 H) 3.27 - 3.34 (m, 4 H) 8.07 H) 8.21 (s, 1 H) 8.32 (s, 1 H)

Primer 80. 8- Ciklopentil- 6- H -( 2- hidroksi- 2- metil- propil)- lH- pirazol- 4- ill- 4- metil- 2-

metilsulfanil- 8H- pirido[ 2, 3- d] pirimidin- 7- on

U rastvor 8-Ciklopentil-4-metil-2-metilsulfanil-6-(lH-pirazol-4-il)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (100 mg, 0.29 mmol) u 5 ml DMSO se dodaju 2,2-dimetil-oksiran (0.03 ml, 1.20 eq.) i kalijum karbonat (40.5 mg, 1.00 eq.) u atmosferi azota. Reaktivna mešavina se meša na sobnoj temperaturi. Nakon dva sata, reakcija je završena. Reaktivna mešavina se zagreva 30 min na 100 °C Formira se neki produkt. Zagrevanje se nastavi još 1 sat. Početni materijal je utrošen. Reaktivna mešavina se podeli u mešavini EA/slani rastvor. EA sloj se suši i koncentruje. On se dalje prečisti hromatografijom (10% MeOH/DCM). Dobija se 15 mg produkta u prinosu od 12%.

LCMS: 414.20 (ES+)

'H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) 5 ppm 8.19 (1 H, s) 7.77 (2 H, d, J=20.72 Hz) 7.48 (1 H, t) 5.78 -5.96 (1 H, m) 3.92 (2 H, s) 2.54 (3 H, s) 2.43 (3 H, d, J=1.26 Hz) 2.21 (2 H, s) 1.91

(2 H, s) 1.70 (2 H, s) 1.52 (2 H, s) 1.01 (6H, s)

Primer 81. 2- Amino- 6-( 6- metoksi- piridin- 3- il)- 4- metil- 8- pirolidin- 3- il-

d] pirimidin- 7- on ( Jedinjenje 247)

TFA (0.56 ml, 10 eq.) se na sobnoj temperaturi doda u rastvor terc-butil estra 3-[2-amino-6-(6-metoksi-piridin-3-il)-4-metil-7-okso-7H-piirdo[2,3-d]piirmidin-8-il]-pirolidin-l-karboksilne kiseline (328 mg, 0.725 mmol) u 2 ml dihlorometana. Reaktivna mešavina se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Kada je reakcija završena rastvarač se ukloni. Ostatak se podeli u mešavini EA/zasićen natrijum bikarbonat. EA sloj se suši i koncentruje da se dobije naslovljeno jedinjenje kao čvrsta supstanca (237 mg, 92.8% prinos).

LCMS: 353.20 (ES+)

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 8.46 (1 H, d, J=2.53 Hz) 8.07 (1 H, s) 8.02 (1 H, dd, J=8.72, 2.40 Hz) 7.39 (2 H, br. s.) 6.87 (1 H, d, J=8.59 Hz) 6.23 - 6.43 (1 H, m) 3.88 (3 H, s) 3.63 - 3.77 (2 H, m) 3.36 -3.45 (2 H, m) 3.14 - 3.26 (1 H, m) 2.58 (3 H, s) 2.24 - 2.37 (2 H, m)

Primer 82. 8-( l- Acetil- pirolidin- 3- il)- 2- amin- 6-( 6- metoksi- piridin- 3- il)- 4- metil- 8H-pirido[ 2, 3- d] pirimidin- 7- on ( Jedinjenje 248)

U rastvor 2-Amino-6-(6-metoksi-piirdin-3-il)-4-metil-8-pirolidin-3-il-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (100 mg, 0.284 mmol) u 5 ml DMF se dodaju acetatna kiselina (17 mg, 1.0

eq.), HATU (108 mg, 1.0 eq.) i TEA (0.04 ml, 1.0 eq.). Reaktivna mešavina se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna mešavina se podeli u mešavini EA/slani rastvor. EA sloj se ispere sa natrijum bikarbonatom i slanim rastvorom, suši i koncentruje. Ostatak se dalje prečisti hromatografijom (10% MeOH/DCM i 0.5% TEA) da se dobije naslovljeno jedinjenje (37 mg, 31% prinos).

LCMS: 395.20 (ES+)

<l>UNMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 8.44 (1 H, s) 7.94 - 8.12 (2 H, m) 7.23 (2 H, br. s.) 6.85 (1 H, d, J=8.59 Hz) 6.07 - 6.41 (1 H, m) 3.83 - 4.08 (4 H, m) 3.47 - 3.81 (3 H, m) 2.62 - 2.82 (4 H, m) 2.53 - 2.62 (3 H, m) 2.02 - 2.23 (1 H, m)

Primer 83. Butil- 2- amino- 8-( trans- 4- hidroksicikloheksil)- 4- metil- 7- okso- 7. 8- dihidropirido[ 2, 3-d lpirimidin- 6- karboksilat

U mikrotalasnu posudu se unesu Mo(CO)6 (264 mg, 1.0 mmol), Herrmann-ov

paladaciklus (23 mg, 0.025 mmol), [(t- Bu)3PH]BF4 (15 mg, 0.050 mmol), 2-amino-6-bromo-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on (353 mg, 1.0 mmol), DMF (5 mL) i butanol (5 mL). Doda se DBU (412 ml, 3.0 mmol), a nakon toga se posuda brzo zatvori u struji vazduha. Posuda se nakon toga zagreva 30 minuta na 120 °C mikrotalasnom radijacijom. Nakon hlađenja, reaktivna mešavina se prevede u žitku masu sa vodom i filtrira. Precipitat se

ispere sa etrom i suši da se dobije 253 mg butil 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-7 -okso-7,8-dihidropirido [2,3 -d]pirimidin-6-karboksilata.

LRMS (M + H)<+>: 375

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 0.93 (t, J=7.33 Hz, 3 H) 1.24 - 1.33 (m, 2 H) 1.37 - 1.49 (m, 4 H) 1.58 - 1.69 (m, 3 H) 1.92 (dd, J=10.74, 3.41 Hz, 3 H) 2.52 (s, 3 H) 3.47 (s, 1 H) 3.54 (s, 1 H) 4.18 (t, J=6.69 Hz, 2 H) 4.61 (d, J=4.55 Hz, 1 H) 7.51 (s, 2 H) 8.31 (s, 1 H)

Primer 84. 2- Amino- 8-( trans- 4- hidroksicikloheksil)- 4- metil- 7- okso- 7, 8- dihidropirido[ 2, 3-d lpirimidin- 6- karboksilna kiselina

IM rastvor LiOH u H2O (0.81 mL, 0.81 mmol) se doda u suspenziju butil 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-7-okso-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksilata (0.25 g, 0.68 mmol) u THF (7 mL) i MeOH (2 mL). Nakon 2.5 h, dodaju se DCM, EtOH, voda, slani rastvor, celite i 0.7 mL 1 M rastvor HC1. Mešavina se filtrira. Organski sloj se izdvoji i koncentruje rotacionom evaporacijom da se dobije 0.25 g 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-7-okso-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksilne kiseline. LRMS(M + H)+:319

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1.15-1.36 (m, 3 H) 1.57 (d, J=l 1.12 Hz, 2 H) 1.56 (br. s., 1 H) 1.94 (t, J=9.73 Hz, 2 H) 2.62 (s, 3 H) 2.67 (br. s., 1 H) 3.55 (br. s., 1 H) 4.69 (br. s., 1 H) 7.92 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 7.89 (d, J=2,78 Hz, 1 H) 8.68 (s, 1 H) 14,14 (br, s., 1 H)

Primer 85. 2- Amino- 8-( trans- 4- hidroksicikloheksil)- 4- metil- 7- okso- N- lH- pirazol- 5- il- 7. 8-

dihidropiirdof2, 3- d] pirimidin- 6- karboksamid ( Jedinjenje 251)

HATU (105 mg, 0.28 mmol) se doda u mešavinu 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-7-okso-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksilne kiseline (80 mg, 0.25 mmol), DMF (2.5 mL) i TEA (38uL, 0.28 mmol). Nakon 5 minuta, doda se rastvor 1H-pirazol-5-amina (46 mg, 0.55 mmol) u DMF (0.55 mL). Nakon 19 sati, mešavina se razblaži sa vodom (-10 mL) i nakon dekantovanja centrifugira. U precipitat se doda još vode i postupak se ponovi. Dobijeni precipitat se suspenduje u mešavini DCM i metanola i koncentruje rotacionom evaporacijom da se dobije 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-7-okso-N-lH-pirazol-5-il-78-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksamid (35 mg, 37%).

LRMS (M + H)<+>: 384

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1.31 (q, J=12.13 Hz, 2 H) 1.56 (d, J=9.85 Hz, 2 H) 1.96 (d, J=8.34 Hz, 2 H) 2.61 (br. s., 3 H) 2.64 - 2.84 (m, 2 H) 3.58 (br. s, 1 H) 4.66 (br. s., 1 H) 5.54 (br. s., 1 H) 6.65 (s, 1 H) 7.71 (d, J=5.81 Hz, 1 H) 7.67 (br. s., 2 H) 8.79 (s, 1 H) 11.90 (s, 1 H)

Primer 86. etil estar 8- Ciklopentil- 4- metil- 2- rnetilsulfanil- 7- okso- 7. 8- dihidro- piirdo[ 2, 3-d] pirimidin- 6- karboksilne kiseline

Rastvor 4-ciklopentilamino-6-metil-2-metilsulfanil-pirimidin-5-karbaldehida (20.8 g,

0.083 mol), piperidina (8.2 mL) i AcOH (9.4 mL) u dietil estru malonatne kiseline (150 mL) se meša 72 sata na 130 °C. TLC (petrol etar/EtOAc 4:1) ukazuje daje približno polovina početnog materijala utrošena. Reaktivna mešavina se nakon togakoncentruje pod vakuumom,a ostatak se prečisti hromatografijom na koloni (silika gel, petrol etar/EtOAc 4:1) da se dobije naslovljeno

jedinjenje (11.3 g, 39.4%) kao žuta čvrsta supstanca.

LRMS: 348 (M+H)<+>.

<!>H NMR (400 MHz, CDC13): 8.38 (s, IH), 5.96-5.91 (m, IH), 4.38-4.32 (q, 2H), 2.63 (s, 3H), 2.55 (s, 3H), 2.31-2.28 (m, 2H), 2.04-2.00 (m, 2H), 1.83-1.75 (m, 2H), 1.62-1.58 (m, 2H), 1.36-1.32 (t,3H)

Primer 87. etil estar 8- Ciklopentil- 2- metansulfmil - 4- metil- 7- okso- 7. 8- dihidro- pirido[ 2, 3-d] pirimidin- 6- karboksilne kiseline

U izmešani rastvor jedinjenja 86 (17.0 g, 0.049 mol) u CHC13(200 mL) se na 10 °C u porcijama doda m-CPBA (11.0 g, 0.050 mol). Nakon dodavanja, dobijena mešavina se meša na sobnoj temperaturi 2 sata. TLC (petrol etar/EtOAc 2:1) ukazuje daje početni materijal u potpunosti utrošen. Reaktivna mešavina se nakon toga po redu ispere sa zasićenim vodenim rastvorom Na2S03(100 mLx3), zasićenim vodenim rastvorom NaHCC>3 (100 mL) i slanim rastvorom (100 mL), suši preko Na2S04ikoncentruje pod vakuumomda se dobije naslovljeno jedinjenje (16.0 g, 90.0%) kao žuta čvrsta supstanca.

Primer 88. etil estar 8- Ciklopentil- 4- metil- 2- metilamino- 7- okso- 7. 8- dihidro- piirdo[ 2, 3-d] pirimidin- 6- karboksilne kiseline

Rastvor iz primera 87 (16.0 g, 0.044 mol), metilamin (10.15 g, 0.088 mol, 27% u EtOH) Et3N (8.9 g, 0.088 mol) i katalitička količina DMF u acetonitrilu (60 mL) se refluksuje 48 sati u atmosferi N2. TLC (petrol etar/EtOAc 1:2) ukazuje daje početni materijal u potpunosti utrošen. Reaktivna mešavina se nakon togakoncentruje pod vakuumom,a ostatak se prečisti hromatografijom na koloni (silika gel, petrol etar/EtOAc od 15:1 do 4:1) da se kao prinos dobije sirovi produkt. Rekristalizacijom iz mešavine CH2Cl2/petrol etar (10 mL/150 mL) dobija se čisto naslovljeno jedinjenje (10.5 g, 72.2%) kao bela čvrsta supstanca.

Primer 89. 8- Ciklopentil- 4- metil- 2- metilamino- 7- okso- 7. 8- dihidro- pirido|" 2, 3- d1pirimidin- 6-

karboksilna kiselina

Rastvor iz primera 88 (10.5 g, 0.032 mol) i LiOH H20 (2.67 g, 0.064 mol) u EtOH (350 mL) i vodi (50 mL) se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. TLC (petrol etar/EtOAc 1:2) ukazuje daje početni materijal u potpunosti utrošen. EtOH seukloni pod vakuumomi ostatak se zakiseli do pH~5 sa 1 N vodenim rastvorom HC1 (20 mL). Dobijena mešavina se filtrira. Pogača se ispere sa petrol etrom (100 mLx3) isuši pod vakuumomda se dobije naslovljeno jedinjenje (6.53 g, 68.0%) kao bela čvrsta supstanca.

LRMS: 303 (M+H)<+>.

'H NMR (400 MHz, DMSO): 8.59 (s, IH), 8.12-7.87 (d, IH), 6.00-5.97 (m, IH), 2.89 (s, 3H), 2.61-2.56 (d, 3H), 2.31 -2.17 (m, 2H), 2.05-1.90 (m, 2H), 1.83-1.70 (m, 2H), 1.70-1.52 (m, 2H)

Primer 90. ( lH- pirazol- 3- il)- amid 8- ciklopentil- 4- metil- 2- metilamino- 7- okso- 7. 8- dihidropiridof2, 3- d1pirimidin- 6- karboksilna kiselina ( Jedinjenje 250)

U 110 uL 0.1 M rastvora iz primera 89 u DMF u test kiveti (10 x 95 mm) se doda 100 uL 0.1 M rastvora 3-aminopirazola u DMF, a nakon toga 110 uL svakog od 0.1 M rastvora HATU i trietilamina, tim redom. Reaktivna mešavina se meša 8 h na 80 °C. Nakon uklanjanja rastvaračapod vakuumom,ostatak se rekonstituiše u 1.2 mL DMSO i podvrgne prečišćavanju sa HPLC da se dobije naslovljeno jedinjenje.

LRMS: 368 (M+H)<+.>

<X>H NMR (500 MHz, DMSO-d6); 11.89 (s, 1 H) 8.78 (s, 1 H) 8.11 (s, 1 H) 7.63 (s, 1 H) 6.64 (s, 1 H) 5.95 -6.05 (m, 1 H) 2.92 (s, 3 H) 1.96 - 2.14 (m, 2 H) 1.74 -1.94 (m, 2 H) 1.54 -1.74 (m, 2 H).

Primer 91. 2-( 2. 2- Difluoroetilamino)- 8-( 4- hidroksicikloheksil)- 6-( 6- metoksipiridin- 3-

il)- 4- metilpirido[ 2, 3- d1pirimidin- 7( 8H)- on ( Jedinjenje 275)

U rastvor 2-amino-8-(4-hidroksicikloheksil)-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-[7(8H)-ona (50 mg, 0.13 mmol) u anhidrovanom DMA (1.0 ml) na sobnoj temperaturi se doda IM rastvor kalijum terc-butoksida u THF (0.14 ml). Nakon 1 sat mešanja na sobnoj temperaturi, u reaktivnu mešavinu se doda l-bromo-2,2-difluoroetan (20.9 mg, O.Hmmol). Nakon 16 h mešanja na sobnoj temperaturi i 4.5 h na 80 °C, reaktivna mešavina se ohladi na sobnu temperaturu i dodaju se IM rastvor kalijum terc-butoksida u THF (0.16 ml) i 1

-bromo-2,2-difluoroetan (41.8 mg, 0.28mmol). Nakon 16h mešanja na 80°C, u reaktivnu mešavinu se dodaju još IM rastvora kalijum terc-butoksida u THF (0.1 ml) i l-bromo-2,2 difluoroetan (62.7 mg, 0.42mmol). Nakon 16h mešanja na 80°C, u reaktivnu mešavinu se dodaju još 3 ekvivalenta IM rastvora kalijum terc-butoksida u THF i 3 ekvivalenta l-bromo-2,2-difluoroetana. Nakon 20 min zagrevanja na 120°C u mikrotalasnom reaktoru, reaktivna mešavina se ohladi na sobnu temperaturu i razblaži sa DMSO, a precipitat se ukloni filtriranjem. Filtrat se kombinuje i prečisti koristeći kolonu sa reverznom fazom uz eluiranje sa acetonitrilom (0.1%

acetatna kiselina) i vodom (0.1% acetatna kiselina) da se dobije naslovljeno jedinjenje kao čvrsta supstanca težine 14.6 mg.

LCMS(APCI+1) 446.3.

'HNMR (400 MHz, MeOD): 1.38 -1.54 (m, 2 H) 1.61 - 1.76 (m, 2 H) 2.04 - 2.15 (m, 2 H) 2.84 (br. s., 2 H) 3.63 - 3.72 (m, 1 H) 3.86 (t, J=14.53 Hz, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 5.58 (br. s., 1 H) 6.05 (t,J=56.08 Hz, 1 H) 6.82 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 7.91 - 7.99 (m, 2 H) 8.33 - 8.41 (m, 1 H).

Primer 92. trans- 4-( 2- Amino- 5- jodo- 6- metilpirimidin- 4- ilamino) cikloheksanol

Faza 1: Sinteza trans-4-(2-amino-6-metilpirimidin-4-ilamino)cikloheksanola

Suspenzija mešavine 2-amino-4-hloro-6-metil pirimidina (144 g, 1.0 mol),trans- A-aminocikloheksanola (140 g, 1.2 mol) i AcOH (5 mL) u vodi (0.6 L) se zagreva na 99 °C u boci zapremine 3.0 L. Nakon 6 h na istoj temperaturi, u reaktivnu mešavinu se doda natrijum acetat (82.0 g, 1 mol). Nakon 48 h, na istoj temperaturi se doda vodeni rastvor NaOH (50 mL, 10 N). Reaktivna mešavina se zagreva još 2 dana na 99 °C. Reakcija može da se zaustavi ukoliko HPLC analiza pokaže daje sadržaj 2-amino-4-hloro-6-metil pirimidina manji od 2%. Ukoliko je reakcija spora, u reaktivnu mešavinu može da se doda još jedna porcija vodenog rastvora NaOH sve dok je pH~7 do 8. Reaktivna mešavina se nakon toga neutrališe sa natrijum bikarbonatom i ohladi na 0 °C. Filtriranjem se dobija trans-4-(2-amino-6-metilpiirmidin-4-ilamino)cikloheksanol (~85%). Vlažni material se koristi u sledećoj fazi.

<!>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1.14-1.24 (m, 4 H) 1.77 -1.86 (m, 4 H) 1.97 (s, 3 H) 3.35

- 3.40 (m, 1 H) 3.57 - 3.69 (m, 1 H) 4.52 (d, J=4.55 Hz, 1 H) 5.53 (s, 1 H) 5.73 (s, 2 H) 6.43 (d, J=4.29 Hz, 1 H) (M+H)<+>223

Faza 2: Sinteza trans-4-(2-amino-5-jodo-6-metilpirimidin-4-ilamino)cikloheksanola

U žitku masu (lr,4r)-4-(2-amino-6-metilpirimidin-4-ilamino)cikloheksanola (58 g, 0.26 mol) u vodi (0.5 L) se na 10 °C u toku nekoliko sati polako dodaje 1.0 ekvivalent N-jodosukcinimida ( 59 g, 0.26 mol). Nakon 4 h mešanja na 10 °C, reaktivna mešavina se meša u toku noći i zagreva nekoliko sati na 40 °C. Suspenzija mešavine se nakon toga ohladi na sobnu temperaturu, neutrališe sa NaHSCh, doda se 0.8 ekvivalenta NaOH (formira se natrijum sukcinimid) i produkt se filtrira da se dobije 100 g vlažnog produkta. Produkt se prečisti žitkom masom sa t-butilmetiletrom i rekristališe u 100 mL metanola i suši da se dobije čist trans-4-(2-amino-5-jodo-6-metilpirimidin-4-ilamino)cikloheksanol (65 g, 72% prinos).

'HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 1.10 -1.45 (m, 4 H) 1.74 -1.90 (m, 4 H) 2.21 (s, 3 H) 3.34

- 3.43 (m, 1 H) 3.79 - 3.91 (m, 1 H) 4.55 (d, J=4.55 Hz, 1 H) 5.40 (d, J=8.34 Hz, 1 H) 6.11 (s, 2 H) (M+H)<+>349

Primer 93:2- amino- 8-( trans- 4- hidroksicikloheksil)- 6-( 6- metoksipiridin- 3- il)- 4- metilpirido[ 2, 3-d] pirimidin- 7( 8H)- on ( Jedinjenje 152)

Faza 1: Izrada (E)-etil 3-(2-amino-4-(trans-4-hidroksicikloheksilamino)-6-metilpirimidin-5-il)akrilata

Postupak:

1. Boca zapremine 500 mL, sa okruglim dnom i 3 grla u peni za zagrevanje se opremi sa mehaničkom mešalicom, dodatnim levkom za odvajanje, pirometrom i ulazom za azot. 2. U bocu se stave trans-4-(2-amino-5-jodo-6-metilpirimidin-4-ilamino)cikloheksanol (35 g), DMF (80 mL), paladijum acetat (675 mg), etil acetat (22 mL) i trietilamin (28 mL) i reakcija se zagreva 6 sati uz mešanje na~90 °C. HPLC analize ukazuju daje početni materijal utrošen i da je reakcija završena. Reaktivna mešavina se filtrira kroz drveni ugalj, celite i silikat da se uklono najveći deo crnog paladijuma. Ekstrakcijom filtrata sa heptanom (2X100 mL) se uklone preostali etil acetat i trietilamin. DMF frakcije se podvrgne destilaciji na rotacionom evporatoru da se ukloni preostali etil akrilat. Preostali DMF rastvor (~150 mL) se direktno koristi u sledećoj fazi bez ikakvog prečišćavanja.

Faza 2: Izrada 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on

Postupak:

1. Boca zapremine 500 mL, sa okruglim dnom i 3 grla se opremi sa mehaničkom mešalicom, dodatnim levkom za odvajanje, pirometrom, ulazom za azot i uređajem za destilaciju, stavi se u penu za zagrevanje. 2. Boca se napuni sa rastvorom DMF iz poslednje faze, PhSNa (13.2 g), PhSH (11 mL), DBU (61 mL), diizopropiletil aminom i DMF (100 mL). Reaktivna mešavina se zagreva 3 sata na 110 °C. HPLC analiza ukazuje daje utrošen početni materijal i daje reakcija završena. 3. DMF rastvor se koncentruje pod visokim vakuumom (5 psi) na 55 °C da se dobije~150 mL rastvora, koji se ispere sa 500 mL t-butil metil etra. Etarski sloj se izdvoji. U reaktivnu mešavinu se dodaju 100 mL MeOH, 600 mL vode i 300 mL toluena, mešavina se meša u toku noći u struji vazduha. Filtriranjem se dobija vlažni sirovi 2-amino-8-((lr,4r)-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on koji se direktno koristi u sledećoj fazi (16g, 50%, sirovi). Faza 3: Izrada 2-amino-6-bromo-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona

Postupak:

1. Boca zapremine 500 mL, sa okruglim dnom opremljena mehaničkom mešalicom

2. U rastvor 2-amino-8-((lr,4r)-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (11.0 g, 34 mmol) u mešavini 1:1 acetonitril/voda (200 mL) se doda N-bromosukcinimid (9.2 g, 52 mmol). Nakon 6 sati mešanja na sobnoj temperaturi rastvor se koncentruje. Filtriranjem se dobija sirovi produkt. 3. Sirovi produkt se prevede u žitku masu u 50 mL t-butil metil etra. Filtriranjem se dobija 2-amino-6-bromo-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on visoke čistoće (~8g, 70%).

Faza 4: Izrada 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (Jedinjenje 152)

Postupak:

1. Boca zapremine 1 L, sa okruglim dnom i 3 grla opremljena mehaničkom mešalicom, reflksnim kondenzatorom, epruvetom za sušenje, pirometrom i ulazom za azot, se postavi u penu za zagrevanje. 2. U bocu se stave 2-amino-6-bromo-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on (13.2 g), 6-metoksipiridin-3-ilboratna kiselina za bor (7.15 g), CS2CO3(36.5 g), PdCl2(PPh3)2(916 mg) i 1, 2-dimetoksietan (DME)/voda (240 mL/50 mL), reaktivna mešavina se zagreva 2 sata pod refluksom na 80 °C. HPLC analiza ukazuje daje utrošen početni materijal i da je reakcija završena. 3. Reaktivna mešavina se ohladi na sobnu temperaturu. Filtriranjem se uklone nerastvorne neorganske soli. Neorganska filter pogača se dobro ispere sa vrućim THF i kombinuje sa filtratom. Vodeni sloj se izdvoji i ekstrahuje sa THF. THF se upari i doda se bezvodni etanol koji nakon toga upari da se dobije tamna čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se rastvori u 400 mL THF i zagreva na 80 °C sa 60 g silicijuma. Filtriranjem i koncentrovanjem THF dobija se sirovi finalni produkt. 4. Sirovi produkt (12.0 g) se prevede u žitku masu u 20 mL THF i 150 mL metanola, a nakon toga se zagreva pod refluksom 30 min. Uzorak se ostavi da se polako ohladi na 23 °C u toku noći. Čvrste supstance se sakupe filtriranjem i suše na 55 °C pod visokim vakuumom da se dobije 9.0 g 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (Jedinjenje 152). Pomoću HPLC se potvrdi daje čistoća jedinjenja 94%.

Primer 94. cis- 4-( 5- Bromo- 2-( 2, 5- dimetil- lH- pirol- l- il)- 6- metilpiirmidin- 4-

ilamino) cikloheksanol

Mešavina 5-bromo-4-hloro-2-(2,5-dimetil-lH-pirol-l-il)-6-metilpirimidina (5.00 g, 17.0 mmol), cis-4-aminocikloheksanol hidrohlorida (2.77 g, 18.3 mmol) i diizopropiletil amina (8.69 mL, 49.9 mmol) u dimetilacetamidu (60.0 mL) se zagreva u toku noći na 160°C u zatvorenoj epruveti. Reaktivna mešavina se koncentruje, a ostatak se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom hloroform/metanol (0-3%). Kombinovane frakcije koje sadrže željeni produkt se koncentruju. Dobijena guma se rastvori u metil terc-butil etru (450 mL) i rastvor se ispere sa 50% slanim rastvorom, suši (MgSC^), filtrira i koncentruje da se dobije naslovljeno jedinjenje kao narandžasta penasta čvrsta supstanca (5.53 g, 88%).

(M+H)<+>379,381

IH NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 1.46 -1.57 (m, 4 H) 1.59 -1.69 (m, 2 H) 1.79 - 1.90 (m, 2 H) 2.25 (s, 6 H) 2.41 (s, 3 H) 3.77 (d, J=2.27 Hz, 1 H) 3.90 - 4.00 (m, 1 H) 4.40 (d, J=2.78 Hz, 1 H) 5.75 (s, 2 H) 6.74 (d, J=8.08 Hz, 1 H)

Primer 95. 2- cis- 4-( 5- Bromo- 2-( 2. 5- dimetil- 1 H- pirol- 1 - il)- 6- metilpirimidin- 4-

ilamino) cikloheksiloksi) etanol

U ohlađeni (0°C) rastvor cis-4-(5-bromo-2-(2,5-dimetil-l H-pirol-l-il)-6-metilpirimidin-4-ilamino)cikloheksanola (2.50 g, 6.59 mmol) u dimetilformamidu (17.0 mL) se doda natrijum hidrid (60% disperzija u ulju, 527 mg,13.2 mmol). Nakon 2.5 h na 0°C, u kapima se u toku 1 sat dodaje rastvor 1,3,2-dioksatiolan 2,2 dioksana (1.23 g, 9.89 mmol) u dimetilformamidu (7.0 mL). Nakon mešanja na 0°C u toku noći, doda se još 4 eq natrijum hidrida, a nakon toga 1,3,2-dioksatiolan 2,2 dioksan u porcijama od 0.25 eq svakih 15 min sve do 2.25 eq. Reakcija se neutrališe sa metanolom i koncentruje. Ostatak se nakon toga razblaži sa 1,4 dioksanom (200 ml) i vodom (5.0 ml), doda se p-toluensulfonatna kiselina (g mmol) i mešavina se zagreva 1.5 sat na 40°C. Rastvor se ohladi na 0°C i zasiti sa čvrstim natrijum bikarbonatom. Rastvor se razblaži sa vodom (100 mL) i ekstrahuje sa dihlorometanom (3 x 500 mL). Kombinovani organski delovi se isperu sa slanim rastvorom (150 mL), suše (MgS04), filtriraju i koncentruju. Sirovi produkt se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom heksani/metil terc-butiletar (15-75%) da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.27 g, 45%). IH NMR (400 MHz, DMSO-d6)5ppm 1.40-1.50 (m, 2 H) 1.51 -1.61 (m, 2 H) 1.72 -1.80 (m, 2 H) 1.80 -1.88 (m, 2 H) 2.26 (s, 6 H) 2.41 (s, 3 H) 3.39 (t, J=5.43 Hz, 2 H) 3.48 - 3.57 (m, 3 H) 3.94 - 4.03 (m, 1 H) 4.50 (t, J=5.56 Hz, 1 H) 5.75 (s, 2 H) 6.80 (d, J=8.08 Hz, 1 H) (M+H)<+>424

Primer 96. 2-( cis- 4-( 2- Amino- 5- bromo- 6- metilpirimidin- 4- ilamino) cikloheksiloksi) etanol

Rastvor 2-(cis-4-(5-bromo-2-(2,5-dimetil-lH-pirol-l-il)-6-metilpirimidin-4-ilamino)cikloheksiloksi)etanola (1.23 g, 2.91 mmol) i hidroksilamin hidrohlorida (1.01 g, 14.5 mmol) u mešavini 10:1 etanokvoda (22.0 mL) se zagreva pod refluksom u toku noći. Reaktivna mešavina se koncentruje, a ostatak se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom hloroform/7 N rastvor amonijaka u metanolu (0-4%) da se dobije naslovljeno jedinjenje (697 mg, 70%).

(M+H)<+>345, 347

IH NMR (400 MHz, DMSO-d6)8ppm 1.41 -1.50 (m, 2 H) 1.51 - 1.60 (m, 2 H) 1.60-1.70 (m, 2 H) 1.72-1.81 (m, 2 H) 2.17 (s, 3 H) 3.38 (t, J=5.43 Hz, 2 H) 3.44 - 3.47 (m, 1 H) 3.49 (q,J=5. 39Hz, 2 H) 3.86 -3.96 (m, 1 H) 4.50 (t, J=5.68 Hz, 1 H) 5.76 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 6.09 (s, 2 H)

Primer 97. ( E)- Etil 3-( 2- amino- 4-( cis- 4-( 2- hidroksietoksi) cikloheksilamino)- 6- metilpirimidin- 5-

iPakrilat

U zatvorenu epruvetu u kojoj se nalazi rastvor 2-(cis-4-(2-amino-5-bromo-6-metilpirimidin-4-ilamino)cikloheksiloksi)etanola (695 mg, 4.03 mmol) i etil akrilata (438 uL, 4.03 mmol) u trietilaminu (10 mL) se u toku~5 minuta u mehurićima propušta argon. Doda se tetrakis(trifenilfosfin)-paladijum (0) (232 mg, 0.201 mmol), posuda se zatvori i u mešavinu se ponovo ubacijuje argon u mehurićima (5 minuta). Reakcija se zagreva u toku noći na 130°C, ohladi na sobnu temperaturu i koncentruje. Ostatak se rastvori u hloroformu (500 mL) i ispere sa vodom i slanim rastvorom, suši (MgS04), filtrira i koncentruje. Sirovi produkt se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom hloroform/7 N rastvor amonijaka u metanolu (0-4%) da se dobije naslovljeno jedinjenje (615 mg, 84%).

(M+H)<+>365

IH NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1.24 (t, J=7.07 Hz, 3 H) 1.38 -1.48 (m, 2 H) 1.51 - 1.59 (m, 2 H) 1.62 -1.73 (m, 2 H) 1.77 - 1.86 (m, 2 H) 2.21 (s, 3 H) 3.39 (t, J=5.43 Hz, 2 H) 3.47 - 3.53 (m, 3 H) 3.97 - 4.06 (m, 1 H) 4.15 (q, 7=7.07 Hz, 2 H) 4.50 (t, J=5.56 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=15.92 Hz, 1 H) 6.30 - 6.37 (m, 3 H)7.61 (d, J=15.92Hz, 1 H)

Primer 98. 2- Amino- 8-( cis- 4-( 2- hidroksietoksi) cikloheksil)- 4- metilpirido[ 2, 3- d] pirimidin- 7( 8H)- on

Rastvor (E)-etil 3-(2-amino-4-(cis-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksilamino)-6-metilpirimidin-5-il)akrilata (615 mg, 1.69 mmol), tiofenola (173 ul, 1.69 mmol), benzentiola, natrijumove soli (248 mg, 1.69 mmol), l,5-diazabiciklo(5,4,0)undec-5-ena (1.01 mL, 6.75 mmol) i diizopropiletil amina (1.76 mL, 10.1 mmol) u N',N-dimetilformamidu (11.2 mL) se zagreva u toku noći na 120°C. Reaktivna mešavina se koncentruje, a ostatak se podeli između metil terc-butiletra (500 mL) i zasićenog natrijum bikarbonata (50 mL). Organski sloj se izdvoji i ispere sa 50% slanim rastvorom, suši (Na2S04), filtrira i koncentruje. Kombinovani vodeni slojevi sc ekstrahuju sa hloroformom (3 x 175 mL). Kombinovani ekstrakti se isperu sa slanim rastvorom (50 mL), suše (Na2S04), filtriraju i koncentruju. Sirovi produkt se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom hloroform/7N rastvor amonijaka u metanolu (0-6%) da se dobije naslovljeno jedinjenje (411 mg, 77%).

(M+H)<+>319

IH NMR (300 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1.15 - 1.28 (m, 2 H) 1.35 -1.50 (m, 2 H) 1.91 - 2.04 (m, 2 H) 2.46 (s, 3 H) 2.83 - 3.13 (m, 2 H) 3.41 (t, J=5.09 Hz, 2 H) 3.50 - 3.61 (m, 3 H) 4.65 (t, J=15.26 Hz, 1 H) 5.26 -5.43 (m, 1 H) 6.14 (d, J=9.42 Hz, 1 H) 6.86 - 7.15 (m, 2 H) 7.81 (d,J=9.42Hz, 1 H)

Primer 99. 2- Amino- 6- bromo- 8-( cis- 4-( 2- hidroksietoksi) cikloheksil)- 4- metilpirido[ 2. 3-d] pirimidin- 7( 8H)- on ( Jedinjenje 284)

U rastvor 2-amino-8-(cis-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil )-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (411 mg, 1.29 mmol) u dimetilformamidu (10 mL) se doda N-bromosukcinimid (253 mg, 1.42 mmol). Nakon 1 sat mešanja na sobnoj temperaturi, rastvor se koncentruje. Ostatak se rastvori u hloroformu (250 mL) i ispere sa 1 N rastvorom natrijum karbonata (2 x 25 mL) i slanim rastvorom (25 mL). Organski sloj se suši (Na2S04), filtrira i koncentruje. Sirovi produkt se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom 1:1 etil acetat:hloroform/7N rastvor amonijaka u metanolu (0-4%) da se dobije naslovljeno jedinjenje (382 mg, 75%).

(M+H)+397, 399

IH NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1.22 - 1.31 (m, 2 H) 1.37 - 1.48 (m, 2 H) 1.94-2.04 (m, 2 H) 2.49 (s, 3 H) 2.78 - 3.03 (m, 2 H) 3.42 (t, J=5.31 Hz, 2 H) 3.53 - 3.61 (m, 3 H) 4.53 - 4.79 (m, 1 H) 5.33 - 5.56 (m, 1 H) 7.08 - 7.32 (m, 2 H) 8.33 (s, 1 H)

Primer 100. 2- Amino- 8-( cis- 4-( 2- hidroksietoksi) cikloheksil)- 6-( 6- metoksipiridin- 3- il)- 4-

metilpirido[ 2, 3- dlpirimidin- 7( 8H)- on ( Jedinienie 285)

U mešavinu 2-amino-6-bromo-8-(cis-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (50 mg, 0.13 mmol), kalijum karbonata (52 mg, 0.38 mmol) i 2-metoksi-5-piridin borne kiseline (38 mg, 0.25mmol) u mešavini 5:1 dimetilformamid: voda (1.3 mL) se u toku 5 minuta ubacuju mehurići argona. U mešavinu se doda bis(trifenilfosfin) paladijum (II) hlorid (9 mg, 0.13 mmol) i mikrotalasna posuda se odmah zatvori i u mešavinu se ponovo ubacuju mehurići argona. Nakon 20 min zagrevanja na 100°C u mikrotalasnom reaktoru, mešavina sekoncentruje pod vakuumom.Ostatak se rastvori u CHCI3(60 mL) i ispere sa vodom (10 mL) i slanim rastvorom (10 mL). Organski sloj se suši (Na2S04), filtrira i koncentruje. Sirovi produkt se prečisti gasnom hromatografijom uz eluiranje sa mešavinom hloroform/7 N rastvor amonijaka u metanolu (0-5%) da se dobije naslovljeno jedinjenje (50 mg, 93%).

(M+H)<+>426

'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1.25 -1.33 (m, 2 H) 1.39- 1.50 (m, 2 H) 1.95 -2.04 (m, 2 H) 2.55 (s, 3 H) 2.89 - 3.12 (m, 2 H) 3.42 (t, J=5.18 Hz, 2 H) 3.52 - 3.61 (m, 3 H) 3.88 (s, 3 H) 4.52 - 4.79 (m, 1 H) 5.37 - 5.55 (m, 1 H) 6.85 (d, J=8.59 Hz, 1 H) 6.97 - 7.20 (m, 2 H) 7.97 (s, 1 H) 8.00 (dd, J=8.72, 2.40 Hz, 1 H) 8.42 (d, .7=2.02 Hz, 1 H)

Primer 101. Biohemijsko ispitivanje PB- Ka

Jedinjenja iz ovog pronalaska se procenjuju prema potenciji u odnosu na PI3-Ka koristeći ispitivanje kinazein vitro.Aktivnost PI3-Ka sein vitromeri određivanjem nivoa fosforilacije substrata PI(4,5)P2. Formiranje produkta PI(3,4,5)P3se prati vezivanjem za Gripi PH oblast u ligandu analizom izmene fluorescentne polarizacije (FP), gde je TAMRA-obeleženi PI(3,4,5)P3kompleksiran za Gripi PH oblast zamenjen sa PI(3,4,5)P3koji se formira reakcijom PI3-Ka, što dovodi do smanjenja FP signala. PI3-Ka Pl 10 i P85 podgrupe miša se zajedno pojavljuju u ćelijama insekta i zajedno prečiste do homogenizacije. PI(4,5)P2su dobijeni od firme Cavman. TAMRA-obeleženi PI(3,4,5)P3su dobijeni od firme Echelon, Gripi PH oblast od firme Dundee, a drugi reagensi su dobijeni od firme Sigma.

Sva ispitivanja se izvode u Corning-ovoj polovini čvrste crne ploče sa 96 otvora pomoću LJL analizatora (Molecular Devices), na sobnoj temperaturi. Pufer za ispitivanje sadrži 50 mM HEPES, pH 7.4, 150 mM NaCl, 5 mM DTT i 0.05% CHAPS. Suvi prah PI(4,5)P2se rastvori u 50 mM TRIS, pH 8, da se dobije osnovni rastvor koncentracije 1 mM. Osnovni rastvor PI(4,5)P2se nakon toga razblaži sa puferom za ispitivanje do koncentracije od 60 pM i sonicira 30 sec pre upotrebe. U ploču za ispitivanje se po redu dodaju sledeći reagensi: 10 ul 60 pM PI(4,5)P2, 5 pL 4 nM PI3-Ka, 2 pL jedinjenja u 25% DMSO, 3 pL mešavine koja sadrži 200 uM ATP i 33 mM MgCl2. Konačna zapremina za reakciju je 20 pL. Reaktivna mešavina se inkubira 35 min na sobnoj temperaturi. Nakon toga se reakcija zaustavi dodavanjem 20 pL 20mM EDTA. Nakon što je reakcija zaustavljena, 15 pL mešavine koja se ispituje se prenese u jednu polovinu ploče sa 96 otvora u čijim se otvorima nalazi po 15 pL mešavine za detekciju koju čine 480 nM Gripi PH oblasti i 12 nM TAMPvA-obeleženog PI(3,4,5)P3. FP signal se ostavi da se razvije 40 min pre očitavanja na LJL analizatoru pri ekstinkciji od 535 nm i emisiji od 580 nm.

Procenat inhibicije se izračunava na bazi sledeće jednačine

% inhibicije=[1 - (FPjedinjenja- FPmax)/(FPmin- FPmax)] X 100,

gde FPjedinjenje predstavlja FP očitavanja pri datoj koncentraciji jedinjenja, FPmjn je FP signal reakcije PI3-Ka bez prisustva jedinjenja, a FPmax je povratni FP signal bez prisustva PI3-Ka i jedinjenja. IC50se određuje nanošenjem FP signala u odnosu na koncentraciju jedinjenja u sigmoidalnu jednačinu odgovora na dozu, koristeći program GraphPad Prism izrade krive.

Primer 102. Celularno ispitivanje PI3- Kot

Jedinjenja iz ovog pronalaska se procenjuju na potenciju u odnosu na PI3-K koristeći sledeće celularno ispitivanje. Aktivnost PI3-K u ćelijama se određuje merenjem nivoa fosforilacije AKT na serinu 473. Fosforilacija AKT Ser se meri pomoću anti-fosfo-AKT (Ser473) antitela (Cell Signaling #4058) u ELISA formatu.

Za ovo ispitivanje se koriste potpuno zdrave odrasle ćelije BT20 (PI3K mutirane) kancera dojke ljudi. BT20 se odgajajuu 10% FBS+ GLN (1:100) + PS (1:100) + 1 mM natrijum piruvijat + 0.1 mM natrijum bikarbonat + rastvor ne-esencijalnih amino kiselina (1:100) MEM medijum (MEM+sve). Kada su ćelije blizu 85%+ gomilanje, ćelije se jedanput isperu sa PBS i 3 minuta tripsiniziraju sa tripsin EDTA. Ćelije se re-suspenduju u 10%FBS MEM + sve i istalože centrifugiranjem 5 minuta na 1400 opm. Ćelije se re-suspenduju u 0.5%FBS MEM + sve i izbroje na brojaču ćelija. Ćelije se zaseju po 25,000 ćelija/otvor u zapremini od 100 pL/otvor 0.5%FBS MEM + sve u ploči sa 96 otvora ravnog dna. U otvorima za negativnu kontrolu se nalazi samo 100 pL 0.5%FBS MEM + sve medijuma bez ćelija. Ploča se inkubira u toku noći u inkubatoru za ćelijsku kulturu sa 5% C02, na 37°C.

Drugog dana se jedinjenja za ispitivanje pripreme u 0.5%FBS MEM + sve medijumu i serijski razblaže u odnosu 1:3 za svih 11 test koncentracija. Svaka koncentracija jedinjenja se ispituje u duplikatu. Rastvori jedinjenja se dodaju u količini od 25 pL/otvor u odgovarajuće otvore u ploči, a 25 pL/otvor vehikuluma (0.5% DMSO u 0.5%FBS MEM + sve) se doda u otvore za negativnu kontrolu (nema ćelija) i u otvore za pozitivnu kontrolu (ćelije bez jedinjenja). Ploča se inkubira 1 sat u inkubatoru za ćelijsku kulturu na na 37°C sa 5% C02. Nakon 1 sat inkubacije, medijum se ukloni, u otvore ploče se doda po 100 pL/otvor pufera za liziranje ćelija i mućka 15 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon 15 minuta, lizati ćelija se prenesu u ELISA ploču [prethodno obložena sa anti-fosfo-AKT (Ser473) zečljim monoklonalnim antitelom, Cell signaling, catalog #4058] i ploča se inkubira 2 sata na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje. Nakon 2 sata, sadržaji otvora se isprazne, ploče se 4 puta isperu sa puferom za ispiranje i u svaki otvor se doda po 100 pL anti-AKTl mišjeg monoklonalnog antitela za detekciju (Cell signaling, catalog #2967) i inkubira 1 sat na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje. Nakon 1 sat, sadržaji otvora se isprazne i ploča ispere 4 puta sa puferom za ispiranje i u svaki otvor se doda po 100 pL anti- mišjeg IgG HRP-vezanog antitela (Cell Signaling, catalog #7076) i ploča inkubira 1 sat na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje. Nakon 1 sat, sadržaji otvora se isprazne i ploča ispere 4 puta sa puferom za ispiranje i u svaki otvor se doda po 100 pL TMB rastvora substrata (catalog # T0440, Sigma) i inkubira 20 minuta na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje. Nakon 15 minuta, boja se razvije i u svaki otvor se doda po 100 pL rastvora za zaustavljanje reakcije (IN rastvor hidrohloridne kiseline) i ploča očitava na 450 nm na čitaču ELISA ploče.

Primer 103. Studije efikasnosti ksenografta kod miša

In vivo efikasnost 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-ona (Jedinjenje 152) otkriveno u Primeru 53, je ispitana na s.c. modelu ksenografta. Ćelijske linije humanog tumora PC3 (PTEN brisanje)), U87MG (PTEN brisanje) i SKOV3 (PI3Ka H1047K) su izabrane za studije efikasnosti in vivo zbog svog različitog genetskog porekla i relativno visokih vrednosti fosfo AKT S473 signala. Ćelije se implantiraju u zadnji bok miša sa odstranjenim timusom i tumori ostave da rastu do veličine od 100-200 mm<3>pre nego što se počne sa dnevnim oralnim tretmanom sa Jedinjenjem 152. Jedinjenje 152 pokazuje anti-tumornu efikasnost zavisnu od doze u svakom modelu tumora, dovodeći do smanjenja PC3 i inhibicije rasta SKOV3 i U87MG tumora. Podaci su sumirani u Tabeli 3, a predstavljeni reprezentativni primeri su pokazani na Slikama 1-3. Za sve testirane modele, efikasna doza je bila 1 mg/kg.

Nadzor nad životinjama: ženke i mužjaci miševa bez timusa (6-8 nedelja starosti) težine~22 g su dobijeni od Charles River Laboratorv. Životinje se čuvaju pri 12 h ciklusu svetio/mrak u Pfizer-ovom vivarijumu i sve procedure su izvršene u skladu sa Pfizer Institutional Animal Care i US Committee (IACUC). Životinjama je omogućeno slobodno uzimanaje hrane i vodead libitumi čuvane su u čistim prostorijama. Pre početka studije, životinje se pripremaju najmanje 48 h.

Ćelijske linije: ćelijske linije se gaje na 37 °C, u inkubatoru sa 5% CO2. Ćelijska linija U87 MG glioblastoma tumora je dobijena od American Type Culture Collection (ATCC) i odgajana u DMEM medijumu obogaćenom sa 15 % FBS i 2 mM glutamina. Ćelijska linija PC3 kancera prostate je dobijena od National Cancer Institute i odgajana u RPMI medijumu obogaćenom sa 10% FBS i 2 mM glutamina. Ćelije SKOV3 kancera ovarijuma su dobijene od ATCC i više puta su prošle kroz miševe, a odgajane su u McCov's 5A medijumu obogaćenom sa 10% FBS i 2 mM glutaminom. Sve ćelijske linije su ispitane u Universitv of Missouri Research Animal Diagnostic Laboratorv na kontaminaciju poznatim vrstama virusa pacova i mikoplazmom.

Modeli ksenografta miša: ćelijske linije u U87MG (glioblastoma), PC3 (kanceraprostate) i SKOV3 (kancera ovarijuma) u kulturi se sakupe tripsinizacijom. Ukratko, 2.5-4 x IO6 ćelija tumora se suspenduje u medijumu koji se koristi za kulturu svake ćelijske linije, bez seruma i sub-kutano (s.c) implantira u region zadnjeg boka miša na dan 0. Dnevni tretman sa Jedinjenjem 152, formulisanom u 10% etanolu, 40% PEG i 50% puferu natrijum citrata ili sa samim vehikulumom, počinje da se primenjuje 10-14 dana nakon implantacije, kada je prosečna veličina tumora 100-200 mm<3>.

Tumori se mere dva puta nedeljno, a zapremina tumora se izračunava kao produkt (dužina x širina<2>)/2. Studije se obično završavaju kada tumor kod životinja koje su tretirane samo vehikulumom dostigne veličinu od >1500 mm<3>ili kada se proceni da negativno deluje na životinje. Na kraju studije, vrednosti inhibicije rasta tumora u procentima se izračunavaju kao 100 x (1 - [(zapremina tumorakonačna -<z>apremina tumorapočetna za grupu tretiranu jedinjenjem) /

(zapremina tumorakonačna - zapremina tumorapocetnaza grupu tretiranu vehikulumom)]). Kada je primenljivo, procenat regresije tumora za svaku grupu se izračunava kao 100 x (zapremina tumorapočetna- zapremina tumorakonačna/ (zapremina tumorapocetna). Kako bi se postigla efikasnost studije, za svaku doznu grupu je korišćena grupa od po 12 životinja. Reprezentativne grupe životinja su žrtvovane u navedeno vreme, tumori su isečeni, a uzorak krvi se uzima iz leve srčane komore i odmah stavlja u epruvetu u kojoj se već nalazi heparin sulfat. Obično se jedna polovina tumora fiksira u 10% neutralnom puferovanom formalinu, prekrije parafinom i odredi za imunohistohemiju. Druga polovina se zamrzne u tečnom azotu i kasnije koristi za stvaranje lizata ćelija za ciljane studije modulacije.

Primer 104. Studije ciljane modulacijein vivo

Izvedene suin vivostudije ciljane modulacije za određivanje efekta tretmana Jedinjenjem 152 na fosforilaciju AKT na S473 sa ELISA i S6 na S235/S236 sa IHC. Isečeni tumori se zamrznu na suvom ledu i usitne pomoću FAST PREP instrumenta (Qbiogene). Ukratko, zamrznuti tumori se stave u Fast Prep matriks epruvete, doda se hladan pufer za liziranje [20 mM HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 1.0 mM natrijum EDTA, 1% Triton X-100, 2.5 mM natrijum pirofosfat, 1 mM natrijum ortovanadat, 1 pg/ml leupeptin i lmM PMSF] i uzorci se centrifugiraju 5 sekundi, izmešaju i proces ponovi još dva puta. Uzorci se centrifugiraju 20 min u hladoj zaleđenoj Eppendorf centrifugi pri 14,000 opm. Supernatant se sakupi i pomoću ELISA se odrede vrednosti i ukupnih i fosfoAKT (S473) proteina. Stepen fosforilacije u tumorima izvađenim iz tretiranih životinja se poredi sa fosforilacijom u tumorima izvađenim iz životinja tretiranih samo vehikulumom u istom vremenskom trenutku. Uzorci plazme, dobijeni centrifugiranjem pojedinačnih uzoraka krvi pri 3000 xg,u toku 5 min, na 4°C, u Eppendorf 5417R centrifugi, se čuvaju na -80°C sve dok se ne upotrebe za ispitivanje koncentacije leka. Ukratko, uzorci plazme (50 pl) ili standardi Jedinjenja 152 u plazmi miša se izmešaju sa acetonitrilom (3 pl) i prenesu na LC/MS/MS sistem gde se razdvajanje vrši na C-l 8 SB fenil (5 pM, 2.1 X 50 mm, Agilent) koloni za reverzno-faznu visoko efikasnu tečnu hromatografiju. Količina inhibitora i unutrašnjeg standarda (0.5 pM buspiron) u svakom uzorku plazme miša se kvantifikuje na bazi standardne krive dobijene korišćenjem poznatih količina jedinjenja. Tretman sa Jedinjenjem 152 dovodi do inhibicije zavisne od doze pAKT na S473 kod sva 3 modela koji su prethodno diskutovani. Vreme i odgovor na dozu u in vivo ciljanoj modulaciji i koncentracije inhibitora u plazmi su određeni nakon poslednje doze na kraju prethodno opisane studije efikasnosti, a podaci su sumirani u Tabeli 4. Za U87MG model, EC50Jedinjenja 152 koncentracije u plazmi za ciljanu modulaciju pAKT S473 je izračunata kao 24 nM i u korelaciji je sa 50% inhibicije rasta tumora.

Claims

Tražimo patentnu zaštitu za: 1. Jedinjenje Formule (I) ili njegova so, gde: R<1>je H ili (Cido C6) alkil grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<5>grupom; A je 3 do 10 člana cikloalkil grupa; R je (Cido C6) alkil grupa supstituisana sa najmanje jednom R grupom, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C6do C14) aril, (C2do C9) heteroaril, - NR<7a>R<7b>, ili -N=CR<8a>R<8b>grupa, pri čemu je svaka od navedene (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (Cćdo C14) aril i (C2do C9) heteroaril grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R<9>grupom; R<3>je (Cido C6) alkil, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C2do C8) alkenil, (C2do C8) alkinil, halogen, cijano, -(CH2)nC(0)OR<10>, -(CH2)nC(0)N(RllaRllb), COR<12>, (Cćdo C14) aril, ili (C2do C9) heteroaril grupa, pri čemu je navedena (Cido Ce) alkil, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C2do C8) alkenil, (C2do C8) alkinil, (C6do CH) aril i (C2do C9) heteroaril grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<9>grupom; svaki R4 je nezavisno -OH, halogen, CF3, -NRllaRllb, (Ci do C6) alkil, (C, do C6) alkenil, (CidoCe)alkinil, (CidoC&)alkoksi, cijano, (C3do Cj0) cikloalkil, (C2do Cy) cikloheteroalkil, (C6 do C,4) aril, (C2doC9) heteroaril, -C(0)R<12>-C(0)NR<lla>R<llb>, -S(0)mR<12>, -S(0)mNR<1>,<a>R<llb>, -NR<1>,<a>S(0)mR,<2->(CH2)nC(0)OR<10>, -(CH2)nC(0)N(R<lla>R<Ilb>), -OC(0)R<12>, -NR,<la>C(0)R<12>ili -NR<Ua>C(0)N(R<lla>R<nb>) grupa, pri čemu je svaka od navedene (Cido C6) alkil, (Cido C6) alkenil, (C, do C6) alkinil, (d do C6) alkoksi, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil,( C(,do Ci2) aril i (C2do C9) heteroaril grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R<13>grupo<m>;

svaki R5 je nezavisno -OH, halogen, CF3, -NRllaR<1Ib>, (Cido C6) alkil, (Cido C6) alkoksi, cijano, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C6do Q4) aril, (C2do C9) heteroaril, -S(0)mR<12>, -S(0)mNR<lla>R<Ilb>, -C(0)R<12>ili -C(0)NR<1>,<a>Rllgrupa, pri čemu je svaka od navedene (C, do C6) alkil, (Cido C6) alkoksi, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C6do C14) aril i (C2do C9) heteroaril grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R<9>grupom;

svaki R6 je nezavisno -OH, (Ci do C6) alkinil, cijano, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C6do C,4) aril, (C2do C9) heteroaril, -C(0)R<12>-C(0)NR<1>,<a>Rll, -S(0)mR<12>, -S(0)mNR<lla>R<1Ib>, -NR<lla>S(0)mR<12>-(CH2)nC(0)OR<10>, -(CH2)nC(0)N(R<Ua>R<l>lb), -0C(0)<R12,>-NR<lla>C(0)R<12>ili -NR<lla>C(0)N(R<lla>R<llb>) grupa, pri čemu je svaka od navedene (d do C6) alkinil, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (Cćdo Ci2) aril i (C2do C9) heteroaril grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R<13>grupom;

R<7a>i R<7b>ssvaki nezavisno H, (C, do C6) alkil, (C2do C6)alkenil, (C2do C6)alkinil, (C3do Cio) cikloalkil ili (C6do Cio)aril grupa, pri čemu je svaka od navedene (CidoC(,)alkil, (C2do C6)alkenil, (C2do C6)alkinil, (C3do Cio) cikloalkil i( C^do Cio)aril grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R<9>grupom; iliR7ai R<7b>mogu zajedno sa atomom azota da formiraju 5 do 8 člani heterociklični prsten, pri čemu taj heterociklični prsten ima 1 do 3 heteroatoma u prstenu izabranih iz grupe koja sadrži N, O i S i pri čemu je taj 5 do 8 člani cikloheteroalkil prsten opciono supstituisan sa najmanje jednom R<9>grupom;

R<8a>i R<8b>su svaki nezavisno H, (CtdoCe)alkil ili (C3do Cio) cikloalkil grupa, pri čemu je svaka od navedene (CidoC(,)alkil i (C3do Cio) cikloalkil grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R<9>grupom;

svaki R9 je nezavisno -OH, halogen, CF3, -NR<lla>R<llb>, (Cido C6) alkil, (C, do C6) alkenil, (Cido Ce) alkinil, (Cido C6) alkoksi, cijano, (C3do C]0) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C6do C,4) aril, (C2do C9) heteroaril, -C(0)R<12>-C(0)NR<lla>R<llb>, -S(0)mR<12>, -S(0)mNR<l>laR,<lb>, -NR<Ua>S(0)mR<12>, -(CH2)nC(0)OR<10>, -(CH2)nC(0)N(R,<la>R<llb>), -OC(0)R<12>, -NR<l>,<a>C(0)R'<2>ili -NR<lla>C(0)N(R<lla>R<llb>) grupa, pri čemu je svaka od navedene (C, do C6) alkil, (Cido C6) alkenil, (d do C6) alkinil, (Cido C6) alkoksi, (C3do C[0) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (Cć do Ci2) aril i (C2do C9) heteroaril grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R<13>grupom;

svaki R10 je nezavisno H ili (Cido CA) alkil grupa;

R<lla>iR<llb>susvaki nezavisno H, (Cido Cg) alkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C2do C9) heteroaril ili (C6do C!2) aril grupa, pri čemu je svaka od navedene (C| do C6) alkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C2do C9) heteroaril i (C6do Ci2) aril grupe opciono supstituisana sa najmanje 1 "1 jednom R grupom;

svaki od R12 je nezavisno (Cido Cć) alkil, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C2do C9) heteroaril ili (C6do Ch) aril grupa, pri čemu je svaka od navedene (Cido C6) alkil, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C2do C9) heteroaril i (C6do C14) aril grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R 13 grupom;

svaki od R13 je nezavisno -OH, halogen, CF3, (Cido Ce) alkil, (CidoCe)alkenil, (Cido C6) alkinil, (Cido C6) alkoksi, cijano, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil,( C(,do C14) aril, (C2do C9) heteroaril, amino, karbonil, C-amido, sulfinil, S-sulfonamido, C-karboksil, N-amido ili N-karbamil grupa;

svaki m je nezavisno 1 ili 2;

svaki nje nezavisno 0,1, 2, 3 ili 4; i

svaki z je ceo broj nezavisno izabran od 0,1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8.
2. Jedinjenje ili so u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je A je cikloheksil grupa.
3. Jedinjenje ili so u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili 2, naznačeno time što što je R<3>(C6do C14) aril ili (C2do C9) heteroaril grupa, pri čemu je navedena (C6do Cj4) aril ili (C2do C9) heteroaril grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<9>grupom.
4. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je izabrano iz grupe koja sadrži:

2-amino-6-(5-fluoro-6-metoksipiirdin-3-il)-8-[trans-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-[trans-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-[trans-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metil-6-kvinolin-3-ilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-[trans-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-6-(2-metoksipirimidin-5-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-[trans-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metil-6-(lH-pirazol-4-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-6-bromo-8-[trans-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-[cis-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-mctil-6-(lH-pirazol-4-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-(trans-4-{[(2 S)-2 ^ il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-[cis-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metil-6-kvinolin-3-ilpiri^ d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-6-(5-fluoro-6-meto metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-[cis-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-6-(2-metoksipiirmidin-5-i metilpirido[2,3 -d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-8-[cis-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-amino-6-bromo-8-[cis-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metilpirido[2,3-d]piri 7(8H)-on;

2-amino-6-[6-(dimetilamino)piridin-3-il]-8-[trans-4-(2-hidroksi metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on;

2-({trans-4-[2-amino-6-(5-fiuoro-6-metoksipiridin-3-il)-4-metil-7-oksopiri d]pirimidin-8(7H)-il]cikloheksil}oksi)acetamid;

metil ({trans-4-[2-amino-6-(5-fluoro-6-metoksipiridin-3-il)-4-metil-7-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il] cikloheksil} oksi)acetat;

2-amino-8-[trans-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metil-6-(lH-pirazol-3-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on, ,

2-amino-8-[trans-4-(2-hidroksietoksi)cikloheksil]-4-metil-6-(l-metil-lH-pirazol-4-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on,

2-({cis-4-[2-amino-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metil-7-oksopiirdo[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il]cikloheksil}oksi)acetamid,

2-({cis-4-[2-amino-6-(5-fluoro-6-metoksipiridin-3-il)-4-metil-7-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il]cikloheksil}oksi)acetamid,

2-({cis-4-[2-amino-4-metil-7-okso-6-(lH-pirazol-4-il)pirido[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il] cikloheksil} oksi)acetamid, 2-( {cis-4-[2-amino-4-metil-6-( 1 -metil-1 H-pirazol-4-il)-7-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il]cikloheksil}oksi)acetamid,

2-({cis-4-[2-amino-6-(2-metoksipirimidin-5-il)-4-metil-7-oksopiirdo[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il] cikloheksil} oksi)acetamid,

2-{[cis-4-(2-amino-4-metil-7-okso-6-kvinolin-3-ilpirido[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il)cikloheksil]oksi}acetamid,

2-({trans-4-[2-amino-6-(6-meto^ 8(7H)-il] cikloheksil} oksi)acetamid,

2-{[trans-4-(2-amino-4-metil-7-okso il)cikloheksil]oksi}acetamid,

2-({trans-4-[2-amino-6-(2-metoksipirimidin-5-il)-4-metil-7-oksopirido[2,3-d]pirim 8(7H)-il]cikloheksil}oksi)acetamid,

2-({trans-4-[2-amino-4-metil-7-okso-6-(lH-pirazol-4-il)pirido[2,3-d]pirimidin-8(7H) il]cikloheksil }oksi)acetamid, 2-( {trans-4-[2-amino-4-metil-6-(l-m 8(7H)-il]cikloheksil} oksi)acetamid,

2-amino-8-[trans-3-(2-hidroksietoksi)ciklobutil]-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on,

2-amino-6-(5-fluoro-6-metoksipiridin-3-il)-8-[trans-3-(2-hidroksietoksi)ciklobutil]-4-rnetilpirido[2,3-d]pirirriidin-7(8H)-on,

2-amino-8-[trans-3-(2-hidroksietoksi)ciklobutil]-6-(2-metoksipirimidin-5-il)-4-metilpirido [2,3 -d]pirimidin-7( 8H)-on,

2-({trans-3-[2-amino-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metil-7-oksopiirdo[2,3-d]pirimidin^8(7H)-il] ciklobutil} oksi)acetamid,

2-({trans-3-[2-amino-6-(5-fluoro-6-metoksipiridin-3-il)-4-metil-7-oksopirido[2,3-d]pirimidin-8(7H)-il]ciklobutil}oksi)acetamid, 2-({trans-3-[2-amino-6-(2-metoksipirimidin-5-il)-4-metil-7-oksopirido[2,3-d]piri il]ciklobutil}oksi)acetamid, ili njihovu so.
5. Jedinjenje Formule (II) ili njegova so, gde: R<1>je H ili (CidoCs)alkil grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<4>grupom; R2 je (Cido C6) alkil, (C2do C8) alkenil, (C3do C,0) cikloalkil, (C5do C8) cikloalkenil, (C2do C9) cikloheteroalkil ili -(CH2)n(C6do Cm) aril grupa, pri čemu je navedena (CidoC^)alkil, (C2do C8) alkenil, (C3do C,0) cikloalkil, (C5do C8) cikloalkenil, (C2do C9) cikloheteroalkil i -(CH2)n(C6do C14) aril grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<4>grupom; R<3>je (Ci do C6) alkil, (C2do C8) alkenil, cijano, -(CH2)nC(0)OR<5a>ili -(CH2)nC(0)N(R<5a>R<5b>) grupa,ri čemu je navedena (Cido C6) alkil ili (C2do C8) alkenil grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<4>grupom; svaki R4 je nezavisno -OH, halogen, CF3, -NR<5a>R<5b>, (Cido C6) alkil, (Cido C6) alkoksi, cijano, (C3do Cio) cikloalkil, -S(0)mR<5a>, -S(0)mNR<5a>R<5b>, -C(0)R<5a>ili -C(0)NR<5a>R<5b>grupa; R<5a>i R<5b>su svaki nezavisno H, (Cido C6) alkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C2do C9) heteroaril ili (C6do C14) aril grupa; svaki m je nezavisno 1 ili 2; i svaki nje nezavisno 0, 1, 2, 3 ili 4.
6. Jedinjenje ili so u skladu sa patentnim zahtevom 5, naznačeno time što je R<3>-(CH2)nC(0)N(R<5a>R<5b>) grupa.
7. Jedinjenje ili so u skladu sa patentnim zahtevom 5 ili 6, naznačeno time što je R<2>izabran iz grupe koja sadrži izopropil, alil, ciklopentil, ciklobutil, hidroksicikloheksil, hidroksiciklopentil, hidroksiciklobutil, hidroksicikloheptil, metoksietil, metoksipropil, etil, metil, ciklopropil, ciklopropilmetil, ciklopropiletil, 2-metil-2-hidroksipropil, 3-metil-3-hidroksilbutil, metoksibenzil i hlorobenzil grupu.
8. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 5, naznačeno time što je izabrano iz grupe koja sadrži: 2-Amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-7-okso-N-lH-pirazol-5-il-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksamid; 2-amino-N-(l-etil-lH-pirazol-5-il)-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-7-okso-7,8-dihidropirido[2,3-d]piirmidin-6-karboksamid; (lH-pirazol-3-il)-amid 8-Ciklopentil-4-metil-2-metilamino-7-okso-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksilnu kiselinu; 2-amino-8-izopropil-4-mctil-7-okso-N-lH-pirazol-5-il-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksamid; 2-amino-N-(l-etil-lH-pirazol-5-il)-8-izopropil-4-metil-7-okso-7,8-dihidro^ d]pirimidin-6-karboksamid; 8-ciklopentil-N-[(l-etil-lH-pirazol-4-il)metil]-4-metil-2-(metilamino)-7-okso-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksamid; 8-ciklopentil-4-metil-2-(metilamino)-7-okso-N-piridin-2-il-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksamid; i 8-ciklopentil N-izoksazol-3-il-4-metil-2-(metilamino)-7-okso-7,8-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-6-karboksamid, ili njihovu so.
9. Jedinjenje Formule (III) ili njegova so, gde: R<1>je H ili (CidoC(,)alkil grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<4>grupom; R<2>je spirociklična grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<4>grupom; R3 je (C, do C6) alkil, (C2do C8) alkenil, cijano, -(CH2)nC(0)OR<5>, -(CH2)nC(0)N(R<6a>R<6b>), (C6do Cm) aril ili (C2do C9) heteroaril grupa, pri čemu je navedena (Cido C6) alkil ili (C2do C8) alkenil grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<4>grupom i pri čemu je navedena( C(,do C14) aril ili (C2do C9) heteroaril grupa opciono supstituisana sa najmanje jednom R<7>grupom; svaki R4 je nezavisno -OH, halogen, CF3, -NR<6a>R<6b>, (Cido C6) alkil, (Cido C6) alkoksi, cijano, (C3do C8) cikloalkil, -S(0)mR<6a>, -S(0)mNR<6a>R<6b>, -C(0)R<6a>ili -C(0)NR<6a>R<6b>grupa; svaki R5 je nezavisno H ili (Cido C(,) alkil grupa;R6ai R<6b>su svaki nezavisno H, (C, do C6) alkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, (C2do C9) heteroaril ili( Ccdo C14) aril grupa; svaki od R7 je nezavisno -OH, halogen, -NR<6a>R<6b>, cijano, (d do C6) alkil, (Cido C6) alkoksi, (C3do Cio) cikloalkil, (C2do C9) cikloheteroalkil, -S(0)mR<6a>, -S(0)mNR<6a>R<6b>, -(CH2)nC(0)OR<5>, -(CH2)nC(0)N(R<6a>R<6b>), -OC(0)R6bili -NR<6a>C(0)R<6b>grupa, pri čemu je svaka od navedene (CidoCe)alkil, (Cido C<,) alkoksi, (C2do C9) cikloheteroalkil i (C3do Ci0) cikloalkil grupe opciono supstituisana sa najmanje jednom R<4>grupom; svaki m je nezavisno 1 ili 2; i svaki nje nezavisno 0, 1, 2, 3 ili 4.
10. Jedinjenje, naznačeno time što izabrano iz grupe koja sadrži: 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 2-amino-8-(cis-4-hidroksicikloheksil)-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 2-amino-6-[6-(dimetilamino)piridin-3-il]-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-6-kvinolin-3-ilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 2-amino-6-[2,3-d]hidro-l,4-benzodioksin-6-il)-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 2-amino-6-(5-fluoro-6-metoksipiridin-3-il)-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-6-(6-pirolidin-l-ilpiridin-3-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 2-amino-6-(5-fluoro-6-metoksipiridin-3-il)-8-(cis-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 2-amino-6-(6-etoksipiridin-3-il)-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 2-amino-6- [6-(dimetilamino)piridin-3 -il] -8-(cis-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido [2,3 - d]pirimidin-7(8H)-on; 2-amino-8-(trans-4-metoksicikloheksil)-4-metil-6-(lH-pirazol-4-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 2-amino-8-(cis-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)-4-metil-6-(lH-pirazol-4-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-6-(lH-pirazol-3-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 2-amino-8-(cis-4-hidroksicikloheksil)-6-(2-metoksipirimidin-5-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-6-(2-metoksipirimidin-5-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metil-2-(metilamino)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 2-(etilamino)-6-(5-lfuoro-6-metoksipiridin-3-il)-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 2-(etilamino)-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-6-(2-metoksipirimidin-5-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-6-(l-metil-lH-pirazol^ d]pirimidin-7(8H)-on; 2-amino-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-4-metil-6-(lH-pirazol-4-il)pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on; 2-[(2,2-difluoroetil)amino]-8-(trans-4-hidroksicikloheksil)-6-(6-metoksipiridin-3-il)-4-metilpirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on, ili njihovu so.
11. Farmaceutska kompozicija naznačena time što uključuje najmanje jedno jedinjenje ili so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva od 1 do 10 i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.
12. Postupak za lečenje neprirodnog rasta ćelija kod sisara kojima je to potrebno, naznačen time što uključuje fazu primene na tom sisaru terapeutski efektivne količine najmanje jednog jedinjenja ili soli u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 10.
13. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 12, naznačen time što je neprirodni rast ćelija kancerogen.
14. Postupak za inhibiciju enizmatične aktivnosti PI3-Ka, naznačen time što uključuje kontakt enzima PI3-Ka sa onom količinom najmanje jednog jedinjenja ili soli u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva od 1 do 10 koja inhibira PI3-Ka.
15. Upotreba jedinjenja ili soli u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 10, u proizvodnji madikamenta za tretman neprirodnog rasta ćelija kod sisara.