RS49831B - Farmaceutske kompozicije tizoksanida i nitazoksanida - Google Patents

Abstract

Farmaceutska kompozicija za oralnu primenu koja kao aktivno sredstvo barem jedno jedinjenje koje je odabrano iz grupe koju čine: jedinjenje formule (I) i jedinjenje formule (II) gde je pomenuto aktivno sredstvo u obliku aktivnih čestica čija je veličina manja od 200 μm i gde je srednja vrednost veličine čestice veća od 10μm.Prijava sadrži još 41 patentni zahtev.

Description

Oblast pronalaska

Pomenuti pronalazak spada u grupu farmaceutskih preparata (Medjunarodna klasifikacija patenata A61 K 31/425, C07D 277/58).

Dati pronalazak se odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže kao aktivno sredstvo najmanje jedno jedinjenje koje je izabrano od grupa

koje se sastoje od formule (I)

Xf

Aktivno sredstvo je po mogućstvu u obliku cestica koje imaju veličinu manju od 200 um i srednju veličinu cestice veću od 10 um. Pronalazak se odnosi i na farmaceutske kompozicije koje su stabilizovane sa barem jednom farmaceutski prihvatljivom kiselinom. Farmaceutske kompozicije su naročito korisne u lečenju oportunističkih infekcija (koje su prouzrokovane od strane nekog mikroorganizma) koje nastaju kod osoba sa ugroženim ili supresivnim imunim sistemima, i u lečenju infekcija izazvanih trematodama (pljosnatim glistama) .

Opis stanja tehnike

Postoji hitna potreba za razvojem postupaka lecenja brojnih parazitskih i bakterijskih infekcija kod ljudi sa ugroženim imunim sistemima (AIDS, oboleli od raka, stariji ljudi, pacijenti kojima su transplantirani organi i koji su na lekovima koji utiču na slabljenje imunog sistema). Druga oblast od značaja predstavljaju infekcije izazvane trematodama, naročito u tropskim klimatskim uslovima. Tako postoji potreba za farmaceutskom kompozicijom koja mogu da podnesu cak i ljudi sa oslabljenim imunim sistemom, i cije je čuvanje stabilno cak i u uslovima tropske klime. Jos odredjenije,Toxoplasma gondii\' eprotozoa i ona je medju najmoćnijim uzročnicima latentnih infekcija centralnog nervnog sistema po ćelom svetu.Mnogi zdravi ljudi su zaraženi sa parazitima, ali obično imuni sistem drzi organizam podkontrolom. T, gondiije najobičniji patogen (prouzrokovan od strane drugog mikroorganizma) i u mozgu pacijenata koji boluju od AIDS-a. Sada toksoplazmoza postaje sve veći problem ne samo zbog AIDS-a, vec i zbog širokog spektra koriscenja imunosupresivnih lekova (na primer.kod davanja pacijentima sa presadjenim organima). Toksoplazmoza se obično leci u kombinaciji pirimetaminom i sulfadiazinom. Dok su lekovi efikasni, oni ne ubijaju ciste parazita, tako da lecenje mora biti nastavljeno da bi se održala efikasnost doze. Toksičnost cesto ubrzava prestanak dejstva leka, naročito kod imunosupresivnih lekova.i vraća rezultat delovanja na početak. Statistike nisu dobre, sa izvestajima o stopama smrtnosti od oko 70 procenata kod pacijenata sa imunodeficijencijom i prosecnim vremenom preživljavanja od četiri meseca. Kriptosporidioza je uzrokovana parazitskom protozoomCryptosporidium parvumkoja je vidljiva pod mikroskopom. Kod osoba sa normalnom funkcijom imunog sistema, diareja izazvana od straneC. parvum,moze da se intezivira i prolongira ali je samoogranicavajuca. Kod pacijenata obolelih od AIDS-a, kriptosporidialna diareja cesto ugrožava život. Utvrdjeno je da 15-20 procenata obolelih od AIDS-a pati od ovih stanja. Do danas,nije bilo konzistentne i efikasne terapije za kriptosporidiozu. Najčešće identifikovani patogen kod pacijenata obolelih od AIDS-a jeEnterocytozoon bieneusi,mikrosporodijalni parazit, koji se moze pronaći kod približno jedne četvrtine pacijenata. Izgleda da ovaj sićušni parazit moze da bude uzročnik u velikom broju neobjasnjenih slučajeva smanjene absorpcije (nedovoljna absorpcija hranjivih materijala u crevima), diareje i slabljenja koja se javljaju kod pacijenata bolesnih od HlV-a. Jos uvek ne postoji efikasan način lecenja za ovo oboljenje. Nekoliko drugih vrsta mikrosporidija mogu da inficiraju HlV-pozitivne pacijente, uključujućiEncephalitozoon hellemicuniculi,i nove vrste označene kaoSeptata intestinalis.U skorijem izvestaju sugerise se da je rasprostiranje infekcija mikrosporidija u značajnijem porastu. Infekcije sa parazitom Isospora belli je klinički nemoguće razlikovati od kriptosporidioze. Jos rasprostranjenija u tropskim klimatskim uslovima,/. belli jebila prijavljena kod manje od 1% pacijenata u Sjedinjenim Državama, mada je stvarni opseg nalaženja verovatno visi.Pneumocvstis carinii je uopsteno klasifikovan kao protozooski parazit (protozoa);neke studije ukazuju da su to možda gljive, sa kojima dele izvesne genetičke sekvence.P. cariniiobično inficiraju pluća (Pneumocvstis Carnii Pneumonia (PCP)). Objavljeno je da je terapija uspesna kod 40-60 % pacijenata, sa problemima koji uključuju toksičnost leka naročito kod pacijenata sa ugroženim imunim sistemom. Medju mnogim ozbiljnim manifestacijama infekcije virusom humane imunodeficijencije (HIV) kod dece, PCP odudara zbog njegovog visokog opsega nalaženja, ravnomerne raspodele po godištima, i ucestanoj smrtnosti. PCPje najrasprostranjenija ozbiljna infekcija kod dece zaražene virusom HIV-a;opseg nalaženja PCP-a medju decom zaraženom HlV-om koje ne prihvataju profilaksu se procenjuje na barem 12 %u prvoj godini života. Mnoga deca umiru kratko nakon pogoršanja razvoja PCP. Mvcobacterium Avium kompleks (MAC) upućuje na infekcije familije vrlo sličnih mikobakterijskih organizama,Mycobacteruim aviumiM. intracellulare.Kada se MAC javlja kod ljudi koji nemaju ugrožen imuni sistem, to je obično u obliku infekcije respiratornog trakta. Kod pacijenata koji boluju od AIDS-a, MAC je veoma rasprostranjen (rasprostranjeni MAC ili DMAC)i skoro bilo koji sistem organa moze biti obuhvaćen. U skorijoj studiji, bakterijski MAC je nadjen kod 43% pacijenata koji su preziveli 2 godine nakon postavljanja dijagnoze za AIDS. Nije ustanovljena standardna terapija za rasprostranjeni MAC. Obično se prepisuje kombinacija lekova, i ukoliko je tretman uspesan, potrebno je da se lecenje nastavi do kraja života. Hitno je potreban jos efikasniji tretman. Zaraženi HlV-om su naročito osetljivi na infekcije Mvcobacterium tuberculosis, i tok bolesti je ubrzan. Dok je ekstrapulmonalna tuberkuloza neuobičajena kod pacijenata koji nisu zaraženi virusom HlV-a, ona se ucestano javlja kod HlV-pozitivnih ljudi. CDC pokazuje smenice budućeg toka lecenja TB-a koji pokazuje rastuću raširenost TB koji je otporan na veliki broj lekova (MDR-TB). Smrtnost medju pacijentima koji boluju od AIDS-a sa MDR-TBje veoma visoka (približno 80%) i sirenje bolesti je ekstremno brzo. Prema tome, postoji hitna potreba za razvojem postupka za lecenje ovih tako rasprostranjenih infekcija kod ljudi i životinja. Takodje postoji potreba za dobijanjem leka koji ima široki spektar dejstva kojim bi se pojednostavilo lecenje infekcija tremadama. Danas je neophodno utvrditi dijagnozu za specifični patogen (u ovom slučaju trematodu), i onda prepisati terapiju sa lekom koji je specifičan za datu trematodu. Mnogi manje razvijene zemlje nisu opremljene za postavljanje dijagnoze za specifičnu trematodu. Razvoj širokog spektra lekova koji deluju ce eliminisati potrebu za postavljanje dijagnoze.Schistosoma mansoni,krvni parazit (trematoda iz roda Schistosoma), je uzročnik sistozomiaze, druge najznačajnije tropske parazitske bolesti kod ljudi (posle malarije), i najznačajnije infekcije koje izazivaju trematode kod coveka. Schistosoma haematobium je jos jedna značajna vrsta koja inficira coveka. Preko 200 miliona individua pati od sistosomiazije sirom sveta, uključujući nekoliko stotina hiljada ljudi u Sjedinjenim Državama.Fasciola hepatica,uobičajeni parazit jetre, prvenstveno izaziva oboljenje kod ovaca, ali su ljudi slučajni domaćini. Paraziti se prilagodavaju da bi opstali u prisustvu snažnog imunog odgovora domaćina. Bitionol je predložen za lecenje, ali nije odobrena njegova

upotreba u Sjedinjenim Američkim Državama.

Tako postoji potreba za farmaceutskom kompozicijom cije je skladištenje stabilno cak i u tropskim sredinama, i koja ima širok spektar dejstva prema trematodama.

U izdanju posvećenom AIDS-u, 1996, 10 (2) , opisan je tretman lecenja pacijenata obolelih od AIDS-a sa oslabljenim imunim sistemom koji primaju dnevne oralne doze od 1000 ili 500 mg nitazoksanida.

Suština Pronalaska

Pokazano je u studijama sa životinjama i u humanim kliničkim studijama da je efikasnost lecenja, upotreba jedinjenja sa formulama (I) i (II) zavisna od veličine cestice aktivne supstance u leku kao i od stabilnosti jedinjenja. Opisani farmaceutski sastavi su pogodni za lecenje infekcija izazvanih Schistosoma trematodama kod ljudi i životinja, kao sto suSchistosoma mansoni, Schistosoma

haematobium, Schistosomamekongi, Schistosomajaponicum, Schistosoma

intercalatum;Fasciolakao s->to jeFasciola gigantica, Fasciolopsis

biskr,iDicrocoelium dentriticum, Heterophyes heterophyes,i

Metagonimus yokogawa.Farmaceutske kompozicije su takodje efikasne za lecenje imunokompromisnihi oportunističkih infekcijaizazvanih od straneCryptosporidium parvum, Isospora belli, Enterocytzoon

bieneusi, Encephalittozoon intestinalis, Mycobacterium tuberculosis,

Mycobacterium avium intacellulare, Pneumocystis cariniiiToxoplasma

gondii.

Farmaceutska kompozicija moze biti u obliku pogodnom za oralnu primenu, u čvrstom doznom obliku, u vidu tečnih suspenzija ili u obliku paste.

KRATAK OPIS CRTEŽA

Za potpunije razumevanje prirode i predmeta zaštite datog pronalaska , postoji referenca u okviru detaljnog opisa zajedno sa pratećim crtežima gde : Slik. 1 pokazuje inhibiciju u procentima i sposobnost rastenja ćelije domaćina od nitazoksamida premaE. intestinalis.

Sli. 2 pokazuje inhibiciju u procentima i sposobnost rasta ćelije domaćina za nitazoksanid premaV. corneae.

SI. 3 pokazuje inhibiciju u procentima i sposobnost rasta ćelije domaćina albendazola premaE. intestinalis.

Sli. 4 pokazuje procenat inhibicije i sposobnost za život ćelije domaćina albendazola naspram V.corneae.

SI. 5 pokazuje mapu vrednosti za OD dobijenu za svaku posudu sa kulturomT. gondii,naspram koncentracije leka u kulturi.

SI. 7 je tabela koja se zasniva na ogledu za efikasnost nitazoksanida naspram mikobakterija koje rastu u tečnoj sredini koja sadrži odgovarajuće hranjive sastojke za uzgajanje mikroorganizama. SI. 8 pokazuje procenat aktivnih cestica koje imaju veličinu manju od 0 um.

Detaljan opis pronalaska

Dati pronalazak obuhvata primenu farmaceutske kompozicije koja se sastoji od aktivnog sredstva, barem jednog jedinjenja izabranog iz<g>rupe koja se sastoji od dezacetil-nitazoksanida formule (I) :

Nitazoksanid (NTZ), jedinjenje koje ima formulu (II), je generičko ime za 2-(acetiloksi)-N-(5-nitro 2-tiazoli) benzamid, jedinjenje koje je prvi put sintetizovano odstrane Rossignol i Cavier-a 1975 godine. 2 mg nitazoksanida se moze rastvoriti u 1 ml DMSO. Nitazoksanid se lako absorbuje oralnim putem. Sve do sada nije bilo dokaza da jedinjenja sa formulama (I) i/ili (II) mogu da u širokom spektru budu efikasna u lečenju infekcija izazivanih trematodama, ili da mogu da budu dovoljno ne toksična da bi mogla da budu prihvaćena cak i od ljudi sa ugroženim imunim sistemom. Dobijanje i odredjena upotreba nitazoksanida je opisana u Američkom patentu 3,950,351, kao i u publikacijama datog pronalazača. Dezacetil-nitazoksanid, jedinjenje sa formulom (I), se ponekad odnosi na tizoksanid ili d-NTZ, i metabolit j e nitazoksanida. U W095/28393, dati pronalazač opisuje postupak za proizvodnju čistog jedinjenja sa formulom (II), kao i upotrebu jedinjenja koje sadrži smesu jedinjenja (I) i (II). Uočeno je da čvrste cestice jedinjenja sa formulom (I), jedinjenja sa formulom (II) ili njihove smese imaju cestice veličine izmedju 170 i 520 um (prosecna vrednost veličine cestice = 352 um) i veoma ograničenu efikasnost kada se primenjuju u oralnom obliku na životinje i ljude. Efikasnost takvih cestica je manja od postojećih farmaceutskih proizvoda i stoga j e neprihvatljiva za regulisanje ili za komercijalne svrhe. Takodje je uočeno kod pasa da oralna primena jedinične doze od 50 mg po kilogramu čvrstih cestica jedinjenja sa formulom (I) i jedinjenja sa formulom (II) sa veličinom cestice manjom od 5um, prouzrokuje snažnu reakciju kod životinja.

Sada je otkriveno da u cilju efikasanog i sigurnog lecenja infekcija uzrokovanih parazitima, bakterijama, gljivama i virusima kod ljudi i životinja, farmaceutska kompozicija, ili u čvrstom obliku ili u obliku vodene suspenzije, mora da sadrži efikasnu dozu aktivnog sredstva u obliku cestica u čvrstom stanju, koje imaju veličinu manju od 200um i jedinjenje formule (I) i / ili jedinjenje formule (II), srednja veličina aktivnih čvrstih cestica je veća od 10 um. Prisustvo velikog broja cestica aktivnog sredstva koje imaju veličinu veću od 200um u pogledu sadržaja cestica koje imaju veličinu izmedju 5 i 200 um značajno smanjuje hemoterapeutsku aktivnost jedinjenja. Po mogućstvu, farmaceutski sastavi iz pronalaska ne obuhvataju vise od 5% težine aktivnih cestica u čvrstom stanju koje imaju veličinu veću od 200 um. Najpoželjnije je da farmaceutski sastavi iz pronalaska ne sadrže aktivne čvrste cestice u čvrstom stanju koje imaju veličinu veću od 200 um. Prisustvo visokog sadržaja cestica sa aktivnim sredstvom koje imaju veličinu manju od 5um u pogledu sadržaja cestica koje imaju veličinu izmedju 5 i 200um moze da proizvede suprotan efekat kod životinja ili ljudi. Osim toga, uočeno je da se cestice koje imaju veličinu manju od 5um brze apsorbuju iz gastro-intestinalnog trakta u krvotok, i da stoga nisu tako efikasne protiv parazita, bakterija, gljiva i virusa koji obično zive unutar gastro-intestinalnog trakta životinja ili ljudi. Upućeni naučnik ne moze predvideti da veličina cestice jedinjenja sa formulom (I) i jedinjenja sa formulom (II) moze imati tako značajan efekat na njegovu mikrobiološku aktivnost kod životinja i ljudi Na primer, u studijama koje su sprovedene od strane pronalazača , antiparazitska jedinjenja takva kao sto su albendazol, mebendazol, niklozamid, prazikvantel i metronidazol ne pokazuju tako primetnu razliku u antiparazitskoj aktivnosti kod životinja i ljudi sto je zavisno od njihove veličine cestice. Pored toga, upućeni naučnik ne moze da predvidi da veličina cestice od jedinjenja sa formulom (I) i jedinjenja sa formulom (II) moze da ima tako suprotan efekat na sposobnost životinja ili ljudi da podnesu primenu pomenutog aktivnog sredstva. Jedinjenje (a) sa formulama (I) i (II) mogu se primeniti davanjem leka u dozama (u čvrstom obliku) ili u vidu vodene suspenzije, i poželjno je da farmaceutski sastav sadrži efikasnu dozu aktivnog sredstva u obliku cestica u čvrstom stanju sa formulom (I) i / ili (II) sa veličinom cestice manjom od 200 um, srednja vrednost veličine cestice za pomenute aktivne cestice u čvrstom stanju je veća od 10 um kao sto je odredjeno odstrane Coulter Counter LS100. Ova oprema koristi lasersko svetio n a 750 nm za cestice veličine od 0.4 do 900 um u precniku, pomoću difrakcije svetlosti. Uzorci su mereni u vodi sa malim količinama Triton X-100 da bi se povećala kvasljivost i deflokulacija

(smanjenjem stanja flokulencije dispergovanjem flokulovanih cestica)

praha. Od koristi je da je srednja vrednost veličine cestice za pomenute aktivne cestice u čvrstom stanju izmedju 10 i 100 um, po mogućstvu izmedju 20 i 50 um. Primeri poželjnih kompozicija su: kompozicija za koju manje od 10% od težine pomenutih čvrstih cestica ima veličinu veću od 100 um ; kompozicija gde najmanje 50 %tezine od pomenute aktivne čvrste supstance ima veličinu cestica manju od 50 um. Od koristi je da je srednja vrednost veličine cestica za pomenute aktivne cestice (u čvrstom stanju) izmedju 10 i 100 um, po mogućstvu izmedju 20 i 50 um. Prema poželjnom izvodjenju za kompoziciju, manje od 10 % pomenutih aktivnih cestica u čvrstom stanju ima veličinu manju od 5 um. Aktivno sredstvo ili sredstva koja su koriscena prilikom davanja leka u čvrstom doznom obliku ili u vidu suspenzija j e pogodna smesa cestica u čvrstom stanju od jedinjenja sa formulom (I) i formulom (II) sa veličinom cestice koja je manja od 200^m, težinski sadržaj jedinjenja sa fromulom (I) u pogledu težine jedinjenja sa formulom (I) i sa formulom (II) od pomenute smese je obuhvaćeno izmedju 0.5 i 20% po mogućstvu izmedju 0.5 i 10 %. Pronalazak se takodje odnosi i na ranije opisane farmaceutske sastave koji sadrže barem jednu od farmaceutski prihvatljivih kiselina. Primeri takvih kiselina su : limunska kiselina, glutaminska kiselina, cilibarna kiselina, etansulfonska kiselina, sircetna kiselina, vinska kiselina, askorbinska kiselina, metansulfonska kiselina, fumarna kiselina, adipinska kiselina, jabučna kiselina kao i njihove smese. Limunska kiselina je veoma pogodna za primenu. Prisustvo pomenute kiseline poboljšava stabilnost aktivnog sredstva ili sredstava.

Odnos težina farmaceutski prihvatljive kiseline prema/ težini pomenutih aktivnih čvrstih cestica je obično izmedju 0.01 i 0.5, po mogućstvu izmedju 0.03 i 0.2. Obično je količina kiseline dovoljna za regulisanje pH suspenzije izmedju 2 i 6, po mogućstvu izmedju 3 i 5,

najpoželjnije izmedju 3.5 i 4.5. Tehnike dobijanja kao i poželjni primeri, čvrsti i tečni oblik farmaceutske kompozicije opisani su u WO/

95/ 28393. Kompozicije koje sadrže sredstvo za kvašenje i ako je

moguće derivat škroba kao sto je onaj opisan u US Patent 5,578,621, ciji sadržaj je ovde u potpunosti obuhvaćen referencom, za otkrivanje mogućih sredstava za kvašenje i derivata škroba. Kao sto je opisano u US 5,578,621, sredstvo za kvašenje sluzi kao disperziono sredstvo.Takve farmaceutske kompozicije, ili davanjem u dozama u čvrstom ili u tečnom stanju ili u obliku pasti ili masti, mogu po slobodnom izboru da sadrže dodatna aktivna sredstva kao sto su antibiotici, anti-virusna sredstva ili inhibitori protonskih pumpi. Kada to nije pogodno, takodje je moguće i da takve farmaceutske formulacije sadrže aktivne čvrste cestice jedinjenja sa formulom (I) i / ili jedinjenje sa formulom (II) koje su veće od 200um. Kompozicije mogu da sadrže ekscipijente koji su kao takvi poznati za potrebe dobijanja oblika pogodnih za oralnu primenu. Da bi imali dobru efikasnost protiv širokog spektra parazita , bakterija i virusa, korisno je daje faktor raspodele za pomenute aktivne cestice bude izmedju 0.8 i 2, po mogućstvu izmedju 1.1 i 1.9, a najpoželjnije je da bude veći od 1.5, pomenuti faktor raspodele je izračunat pomoću sledece formule, :F9O%=(09O%-01O%)/(09O%+01O%)/2)u kojoj je F90% faktor raspodele na 90% ;09O je maksimalna veličina cestica frakcije koja odgovara 90% od pomenutih aktivnih čvrstih cestica, i 010 je maksimalna veličina cestica od frakcija cestica koje odgovaraju 10% od pomenutih aktivnih čvrstih supstanci. Prema specifičnom izvodjenju pronalaska, cestice jedinjenja sa formulom (I) i / ili (II) se dobijaju pomoću postupaka koji su ovde ranije opisani i koje se nakon toga samelju tako daje manje od 10 % aktivnih cestica veće od 100 um, manje od 50% od rečenih cestica je veće od 50um i manje od 10 % od pomenutih aktivnih cestica je manje od 5um u veličini, gde je srednja vrednost veličine cestica izmedju 20 i 50 um. Pomenute aktivne cestice se onda granulisu koriscenjem smese koja sadrži aktivne čvrste cestice i barem jedno sredstvo za granulaciju. Primeri za sredstva za granulaciju su : polivinilpirolidon, voda .alkohol, saharoza hidroksil celuloza i njihova smesa. Korisno je da se barem jedna farmaceutski prihvatljiva kiselina dodaje za vreme procesa granulacije. Pronalazak se odnosi na davanje doza u čvrstom stanju koje obuhvata kompoziciju pronalaska kao sto su tablete, disperzibilne tablete, tabete sa prevlakom, matriksi itd. Dozni oblik prema pronalasku sadrži, na primer : Aktivne cestice u čvrstom stanju sa veličinom cestice manjom od 200um, gde manje od 10% pomenutih cestica ima veličinu manju od 1 00 um, gde manje od 50 % od pomenutih cestica ima veličinu manju od 50 um i gde manje od 10% pomenutih cestica ima veličinu manju od 5 um, gde je srednja veličina cestice izmedju 20 i 50 um.barem jedno sredstvo za granulaciju; barem jedno sredstvo za kvašenje; i barem jedan derivat škroba, i barem jednu farmaceutski prihvatljivu kiselinu koja se po mogućstvu dobija za vreme procesa granulacije.

Davanje doza u tečnom obliku kao sto su vodene suspenzije iz pronalaska obuhvata, na primer : kao aktivno sredstvo, čvrste cestice koje sadrže u sebi jedinjenje sa formulom (I) i / ili jedinjenja sa formulom (II) imaju veličinu cestica manju od 200mm, manje od 10 % od pomenutih cestica ima veličinu veću od 100 mm, manje od 50 % pomenutih cestica ima veličinu veću od 50 mm i manje od 10% pomenutih cestica ima veličinu manju od 5 mm, i barem jedno sredstvo za granulaciju ; barem jedno sredstvo za kvašenje ; i barem jednu farmaceutski prihvatljivu so, pH suspenzije treba da je izmedju 2 i 6, po mogućstvu izmedju 3 i 5, najpoželjnije izmedju 3.5 i 4.5; barem jedno sredstvo za zgušnjavanje, na primer ksantan guma, agar guma, kristalna celuloza, karuba guma, karboksimetilceluloza ili njihove smese.

Pasta ili mast iz pronalaska koji su pogodni za oralnu primenu sadrže, na primer : kao aktivno sredstvo, čvrste cestice koje sadrže u sebi jedinjenje sa formulom (I) i / ili jedinjenje sa fromulom (II) imaju veličinu cestica manju od 200 um, gde manje od 10 % od pomenutih cestica ima veličinu veću od 100 um, gde manje od 50% od pomenutih cestica imaju veličinu veću od 50 um i manje od 10% od pomenutih cestica imaju veličinu manju od 5 um, i barem jedno sredstvo za kvašenje; barem jednu farmaceutski prihvatljivu so, pH suspenzije treba da je izmedju 2 i 6, po mogućstvu izmedju 3 i 5, najpoželjnije izmedju 3.5 i 4.5;barem jedno sredstvo za zgušnjavanje, na primer ksantan guma, aguar guma, kristalna celuloza, karuba guma, karboksimetilceluloza i I i njihove smese.Pasta i mast za lokalnu ili intravaginalnu primenu sadrže, na primer : kao aktivno sredstvo, čvrste cestice koje sadrže jedinjenje sa formulom (I) i / ili jedinjenje sa fromulom (II) koje imaju veličinu cestica koja je manja od 200 um, gde manje od 10 % od pomenutih cestica ima veličinu veću od 100 nm, gde manje od 50% od pomenutih cestica ima veličinu veću od 50 nm i gde manje od 10% od pomenutih cestica ima veličinu manju od 5 um, i

barem jedno sredstvo za kvašenje; barem jednu farmaceutski prihvatljivu so, gde pH suspenzije treba da je izmedju 2 i 6, po mogućstvu izmedju 3 i 5, najpoželjnije izmedju 3.5 i 4.5;

cetil alkohol i/ili derivate glicerida i/ili propilenglikola;

barem jedno sredstvo za zgušnjavanje, na primer ksantan guma, aguar guma, kristalnu celulozu, karuba guma, karboksimetilceluloza ili njihove smese.

Opis dobijanja farmaceutskih kompozicija

Osušeno prečišćeno jedinjenje sa formulom (I) i osušeno prečišćeno jedinjenje sa formulom (II) podvrgnuta su mlevenju i razvrstana su prema veličini mrezastog rešeta

Posle mlevenja, cestice jedinjenja sa formulom (I), ili formulom (II) i njihove smese imaju raspodelu veličine cestice kao sto je dato na si. 8. Slika 8 pokazuje procenat cestica koje imaju veličinu manju od 0 um.

Sa pomenute slike, se vidi da :

manje od 10% od ukupne težine cestica ima veličinu manju od približno 5 um; manje od 10% od težine cestica ima veličinu veću od približno 70 um; gde srednja veličina cestice iznosi približno 40 um ; gde faktor raspodele za cestice iznosi oko 1.73, dok je pomenuti faktor raspodele ukalkulisan u siedecu formulu :

u kojoj

je F90% faktor raspodele na 90% ;

090% je maksimalna veličina cestica frakcija za cestice koja odgovara 90% od pomenutih aktivnih čvrstih cestica, i

010% je maksimalna veličina cestica za frakcije cestica koje odgovaraju 10 % od pomenutih aktivnih čvrstih cestica.

Specifični primeri za takve kompozicije su predstavljeni u sledecim tabelama.

Omotač:

Topli.šećerni.rastvor.ili presvlaka sloja supstance.koji.je. raspršen.preko.površine

tableta .ili.granula.koje.sadrže..500.mg.aktivnog. sredstva.

Farmaceutske kompozicije u pronalasku su kompozicije sa širokim spektrom dejstava na parazite, bakterije, gljive i viruse, naročito kada se daju oralnim putem. Efikasnost i sigurnost farmaceutskih kompozicija koje su opisane ranije u ovom tekstu je izvanredna kod životinja i ljudi. U humanim kliničkim studijama, naročito je uočeno da je efikasnost ovde opisanih farmacetskih kompozicija značajno veća u lečenju parazitskih infekcija nego sto je to slučaj sa istim formulacijama koje koriste aktivna jedinjenja koja imaju veličinu cestica izmedju 170 i 520 um (srednja vrednost vellcine=352um), caki kada se cestice većih dimenzija daju pacijentima u dozama koje su do tri puta veće i za duzi period vremena. Dobijeni primeri izlecenja su pokazani u tabeli 6.

Tabela 6. Poredjenje rezultata ? humanih- kliničkih studija ? korišćenjem jedinjenja sa formulom (l) i formulom (II) koje imaju veličinu čestica- u osegu od -170 um do 520 um ( srednja=352 mm) sa koji su dobijeni ? korišćenjem formule-(I)-i-formule-(II)- koje imaju veličmu- čestica u-opsogu od-5 mm do-200-um (sredina =34-mm).

Jedintenie sa formulom fl) ( 98 % V- f iedinlenie sa formulom ( l \)( 2 % S

Parazit

Za. svaki. od. parazita, iz. table. 6,. proporcionalno, izlečenje. je. značajno, bolje, za pacijente, koji. su. lečeni.sa. aktivnim, česticama, izmedju. 5. i.200. mm.nego. za.one koje.su. lečeni. sa.aktivnim česticama, u. opsegu.od. 170.mm.do.520. mm. u.veličini, sa..statističkim..značajem za.svaki siučaj..gde.je.p<0.02.(.korišćenjem.standardnog X<2>testa)..Ovo.je. slučaj, čak.iako. doze aktivnih, sredstva.sa. velikim.česticama.je obično viša. i.trajanje lecenja. je često.duže. neko da..je.davano.pacijentima koji primaju.farmaceutske kompozicije od. aktivnih sredstava.koji. imaju, veličine.čestica koje su.manje od 200 mm. Nema ozbiljnih suprotnih efekata koji. se.javljaju za ne razgradjuju i da kompozicije zadržavaju svoju.efikasnost, za.period.vremena posle njihovog dobijanja koje je pogodno za medicinske i komercijalne svrhe.

U onome što sledi, biće predstavljena efikasnost farmaceutskih kompozicija.

PRIMERI

CRYPTOSPORIDIUM PARVUfvl

U preliminarnom kliničkom ispitivanju, 30 pacijenata obolelih od AIDS-a sa hroničnom kriptosporodijalnom dijarejom je lečeno sa oralnim nitazoksanidom od 500. do.2000. mg. dnevno.. Ukoliko, se. dijareja, nastavlja,.. pacijenti, primaju, dodatne, četiri.nedelje.. nitazoksanid,. do 2000. mg. na. dan.. Dvadeset, osmoro ljudi.. dovršava, terapiju.. za. dve. ili. više. nedelja.. i. šesnaestoro. njih. je. po. vrednosti. odredjeno. za. terapeutski.odgovor.osme.nedelje. lecenja.. U. ovoj.kasnijoj. grupi, 12 osoba ima.50

%-tno. ili. veće. smanjenje, u. frekvenciji.. pomeranja.creva.u.toku. dana. i. 10. individua, ima. znatno, smanjenje, ili. potpuno, odsustvo, parazita, u. izmetu,.. sa.. organizmom koji ostaje.neotkriven.kod.četvoro. ljudi.. Sestoro.pacijenata dostižukriterijum.i.za.klinički i za. parazitološki. odgovor, za. njihovu, korist. Više je verovatno. da. će pacijenti, koji. dobijaju. višu. dnevne doze leka za duži period da. pozitivnije. reaguju. na. lek. Otvorena studija, o nitazoksanidu. za.. kriptosporidialnu diareju. koja. se. odnosi, na. AIDS dokumentuje (navodi pismene dokaze) o. smanjenju.', crevnih. pokreta medju pacijentima.. koji uzimaju.. dnevno. 500,. 1000,. 1500. ili.2000. mg. leka.. Učesnici u ogledu, imaju srednju vrednost rezultata.CD4+. od. 42. ćelije / mm3 (opseg 0-303

ćelije./.mrn3)srednju vrednost..od .6.7..crevnih.pomeranja dnevno..za.prosek.od. 15

meseci,. jaja. cisti. Cryptosporidium. parvum u. stolici,. i. bez. prisustva, ostalih. patogena. iz. trbuha.. Skoro. svi. učesnici nemaju, uspeha. u. terapiji, sa. azitromicinom. ili paromomicinon. Posle 23 nedelje, 9. od. 13. ima. kompletan, klinički, odgovor (preovladjujuće.jedan .do.tri. pokreta.creva dnevno).i 4 od 13.ima..delimični.klinički odgovor(najmanje 50 praćen tno smanjenje, u pokretima creva dnevno, ili.. pramena u sastavu.stolice.tako. da. se.. barem.dobija.75.procenata).. Sa.završetkom.studije,. kod. 8 od. 11 pac. parazit, je. kompletno, iskorenjen. i. ostala, tri. imaju, značajno smanjenje, nivoa, oocisti.. Postojao.je.trend. ka. boljem, odgovoru, sa. dozama, od. 100 mg.dnevno.ili.više i sa.dužom.terapijom. Dva učesnika.ogleda imaju.osip.po.koži;, više od. 90. procenata se. pridezlavalo režima studije za više od četiri nedelje.

PRIMER II

CRYPTOSPORIDIUM PARVUM

In Vitro Informacija o davanju leka Nitazoksanid se. rastvara u sterilnom dimetilsulfoksidu.(DMSO) i proba protiv nedirnutih.jaja.cisti C.parvum sa.zaraženim jednoslojnim ćelijama u koncentracij. od 100.u.g/ml,. 10 ug/ml/1 u,g/mli.0.1 u.g./.I..Druga.proba.(test) je izveden sa.testiranim.nUazoksanidom.u.dodatnim.

koncentracijama.od.20,.2,.0.2.l.0.02.m^^ rastvaranjem, sa. komletnim. DMEM. medijumom. da. bi. se. dobila, krajnja. DMSO. koncentracija.od.0.5.%..Kontrolni.medijum.isto dolazi.u.dodir sa. 0.5. %,DMSO-a

Eksperiment..koristi.kulturu ćelije.od.MDBKF5D2..Ćelije.rastu.u.komori, od.7 mm,.i.

kao. Crvptosporidium. parvum:. GCH1. oociste. (umehureno. zigotno. stanje, u. životu.

nekih sporozoa),.5.x. 104 po.posudi,.je.praćeno.da.bi.se.uporedio..paromomicin.(.

pozitivna, kontrola), prema, nltazoksanidu. (eksperimentalni, lek).. Materijali, uključuju, imuni. anti-Cryptosporidium.parvum. sporozoit( jedan. od. sićušnih, tela. u. kojima, se. dele.spore.od. izvesnih.sporozoa,.od.kojih.se.svaka razvija.u.odraslu.individuu).od.. zečijeg. seruma. (0.1%). i.antitela. koze. koje. je.obeleženo.fluorosceinom. i. vezano, za..

antitelo.zeca.(1%)

Ogled provere toksičnosti

200. u.l.medijuma.koji. sadrži, nitazoksanid. na. koncentracijama od 100, 10,. 1.. ili. 0.1

ug /.ml. i. odgovarajuće, kontrole, su. uvedene u. dva"bunarčića". od. posude, sa.96.. primarnih, zasada, koji sadrže MDBKF5D2 jednoslojnih ćelija i. dve. posude, bez...

Lek.se.inkubira na sloju.ćelija na.37 °C.i 8% CO2. Na 24 h (proba. 1) i 48 h (proba 2),.MTS. (Owensov. rastvor). PMS.se. dodaje, u svaku. od. posuda, u. koncentracijama.

od.333 ug./.ml.i.25 u.M za.svakog posebno.u.vezi.sa.drugim. Posuda.je.vraćena u. inkubator, u. mrak. da. bi. se. razvijao, dva sata.. Na. dva. sata,. 100. ml. od. svakog, supernatanta. se. prenese, u..novu.posudu.za mikrotitraciju.i.očitava.se..na.ELISA, čitaču, na 490 nm.. Rezultati, su snimljeni, i. analizirani. Procenat. toksičnosti, je. izračunat, oduzimanjem, srednje, vrednosti. optičke, gustine. (OD) za supernatante leka od. srednje, vrednosti. optičke gusine. (OD), supernatanata iz. kontrolnog medijuma. (nema leka), deljenjem. sa OD kontrolnog, medijuma. i množenjem sa 100.

OD mediiuma - OD leka x 100

OD medijuma

Ogled sa netaknutim C. parvum oocislama 5 X 104 C.parvum.OOCista. po "bunarčiću" se inkubira. u nitazoksanidu.(. 100, 20 ,10,.2,. 1,0.2. 0.1 i 0.02 ug / ml) na 37°C (8% CO2) na. konfluentnom.ćelijskom sloju. MDBKF5D2.Nivo infekcije, za svaku, ćeliju, je odredjen i analiziran imunofluoroscentnim ogledom na 24 do 48 h. Procenat inhibicije je uračunat, oduzimanjem srednje vrednosti broja parazita/ 10 polja u posudama za testiranje leka. od srednje vrednosti broja parazita/ 10 polja u kontrolnom medijrnu (nema leka), deljenjem broja za kontrolni medijum , i zatim množenjem, sa. 100.

broj za kontrolni medijum - broj za test sa lekom x.100

Ukupni. Broj. za. kontrolni, medijum

Rezultati:

Proba. 1.:.24.h

Utiskivanje nitazoksanida na nedodirnutim ocistama C. parvum

U probi 1, nitazoksanid. na koncentracijama od 10, 1 ili 0.1 rezultuje u nivoima.parazitske, inhibicije od 94.4, 77.2 i.51.8 %, svaki za sebe u vezi sa drugim, i nivoima ćelijske toksičnosti iz 65.1, 8.3 i 19.3 % za svakog posebno u. vezi sa drugim. Mada se gotovo, kompletna, inhibicija parazitskih infekcija, javlja, u 10 ug/ I, visoka, toksičnost je očigledna.. Na 1ug/ I nitazoksanida,. parazitska, inhibicija i ćelijska toksičnost je. uporedjena sa paromomicinom.na.koncentraciji od .2 mg./,ml , u. korist.prvog. (77.2. % parazitske, inhibicije i 8.3. %. toksičnosti, za nitazoksanid na 1. mg/, ml. je. poredjeno. sa. 51. %. parazitskom inhibicijom i.23.8%.ćelijske toksičnosti, za.paramomicin na.2 mg/ ml).U ogledu 2, lek je promenjen.da. bi se dobila bolja raspodela doze sa minimalnom toksičnošću..Stoga,. kulture..postaju sposobne.za. razvoj..za.48 h.umesto.24 h.kao i. u. probi. 1.. Inkubacija.za 48. h.jasno, rezultuje. u.višoj.. relativnoj.ćelijskoj.toksičnosti, kao. što. je. očigledno, sa. ispitivanjem paromomicina u. oba. ogleda... Koncentracija nitazoksanida.. od. 20. mg. /. ml. je. i. dalje, suviše, toksična.. na. 48. h. inkubacije, mada. jednoćelijski, sloj. ostaje, i. dalje, netakn ut.. Moguće, je.. da. visoka, toksičnost.. koja. mora.. da. utiče.na.ćelijsku.funkciju takodje. ubija, infekciju parazita/ razvoj.. Na. 2. mg./. I nitazoksanida,.,. postojala je. značajna.. inhibicija. parazitske, infekcije, sa. relativno niskom, ćelijskom toksičnošću. Dalja, razblaživanja takodje rezultuju. značajnom, inhibicijom i niskom, toksičnošću.Pri koncenraciji. leka. od. 2. mg. / ml. ublažena ćelijska.toksičnost.i.inhibitorska.aktivnost..od.94.90 %.pokazuju..da.je.nitazoksanid. na.2.mg/, ml.superiorniji.od. paromomicina.za. infekciju.in.vitro.C.parum.na.2 mg/lm.

(na. primer 1000.puta. viša koncentracija).

PRIMER III CRYPTOSPORIDIUM PARVUM

In vitro doza i informacija o informacija o skladištenju

Zalihe nitazoksanida i dezacetil-nitazoksanida (NTZ i NTZdes) su testirane protiv neokrnjenih, ooocista. C.parvum i isečenih. jednoslojnih. ćelija, zaraženih sporozoitama.na.koncentracijama.od..10,1 ,0.1 i.0.01 mg./ ml.. Svako, jedinjenje. se. rastvara u. 100.%. dimetil. sulfoksidu. (DMSO). i. razblažuje.. do. željen ih. koncentracija, sa. sterilnim. DMEM.. Svaka.. koncentracija, nitazoksanida. i.. kontrolora, medijuma. sadrži..0.025. %. DMSO. kao. stalnu, količinu. Eksperiment.. koristi.celijsku. kulturu, od. MDBKF5D2..Ćelije.rastu.u.komori.od.7.mm, i kao Crvptosporidium.parvum.; GCH1

ooociste. (umehureno. zigotno. stanje, u. životu, nekih, sporozoa),. 5.x. 10* po. posudi,, ;je. praćeno, da. bi. se. uporedio.. paromomicin. (. pozitivna, kontrola), prema, nitazoksanidu. (eksperimentalni, lek).. Materijali, uključuju . imuni, anti-Crvptosporidium. parvum.. sporozoit. (jedan. od. sićušnih, tela. u. kojima, se. dele. spoVe. od. izvesnih. sporozoa,. od. kojih. se. svaka, razvija, u. odraslu, individuu), seruma, zeca. ;(0.1%). i. antitela. koze. koje. je. obeleženo. fluorescentnom, bojom. i. povezano, sa. antitelom. zeca. (1 %). ;Ogled provee rtoksičnosti ;200 u,l. medijuma sadrži rastvor nitazoksanida u predhodno. pomenutim koncentracijama, i. odgovarajuće kontrole su. uvedene u dva.'bunarčića" u. posudi od 96. primarnih, zasada, koji. sadrže.. MDBKF5D2 jednoslojne. ćelije, i. dve. posude bez jednoslojnih. ćelija.. Lek. se inkubira na 37 °C i 8%. CO2. Na. 48. h,. MTS ;(Ovvensov. rastvor), i. PMS su dodati, u svaku od posuda u koncentracijama od 333 ;ug/ml.i 25 u.M.za.svakog.<p>osebno.u.vezi.sa.dru<g>im..Tanjir..je.vraćen.u.inkubator u mrak.da.bi.se.razvijao.dva sata. Na.dva.sata,. 100.ml.od.svakog, supernatanta se prenese, u . novu.posudu, za. mikrotitraciju. i očitava se..na. ELISA.crtaču, na. 490. nm. Rezultati, su. snimljeni, i analizirani.. Procenat toksičnosti, je izračunat, oduzimanjem srednje.vrednosti.optičke, gustine. (OD), za. supernatante. leka. od.srednje vrednosti optičke, gusine. (OD). supernatanata. iz. kontrolnog. medijuma. (nema. leka),.. deljenjem sa.OD.kontrolnog.medijuma i.množenjem.sa 100. ;OD meriiiuma - OD leka x 100 ;OD.medijuma ;Rezultati.o.citotoksičnosti.su.označeni kao.što sledi.:.0.6.%. toksičnosti =.0,6-25 % toksičnosti=1,.26-50%. toksičnosti=2,.51-75 %. toksičnosti=3. i. 76-100%. toksičnosti. = -4..Kao.standard,.skor.od.0.ili. 1 treba.da se.smatra.prihvatljivim.nivoom.toksičnosti. Rezultati..za.toksičnost, od 2,. 3. ili. 4. uzimaju, u. obzir.visok. nivo. toksičnosti, za jednoslojne. ćelije. ;Ogled sa netaknutim C.parvum oocistama ;5 x 104. C.parvum oocista se. inkubira. po. posudi, na. predhodno. pomenutim nitazoksanida. na. 37°C. (8% CO2). na. konfluentnom. sloju, ćelija MĐBKF5D2.Nivo infekcije.za.svaku.ćeliju.je.odredjen.i.analiziran..im unofluoroscentnim. ogledom na 48h. Procenat. inhibicije je. uračunat.. oduzimanjem . srednje, vrednosti.. broja, parazita/. 10 polja. u. posudama, za testiranje, leka. od. srednje, vrednosti. broja parazita/. 10. polja u kontrolnom, medijumu (nema. leka),. deljenjem.. broja, za kontrolni.medijum ,.i množenjem sa 100. ;Rezultati:;Oaled sa C. parvum oocistama<A8hl ;Konc. -mg/ ml: Parazit/ Srednja vrednost br.. parazita/ polje ( analizirano. 12. polja); % Inhibicije-procenat. inhibicija parazitskih, infekcija; %. Toks-Procenat toksičnosti ćelija od. lekova Može.se.videti. iz gornje tabele.da .inhibitorska aktivnost NTZida.je ista.kao.i. za. NTZ u.primeru II..I nitazoksanid. i. dezacetil. nitazoksanid. su. jednako efikasniin.vftro.naspram C/yp/ospo/yc/,/t//77 parvum. kada su.isprobavani uporedno sa 98i 94%inhibicijama. koje.sudobijene.sa 10 i.1u.g/.ml za.svako,jedinjenje. posebno.u.vezi sa. drugim.. Za. nitazoksanid 1 mg/mi je. najniža koncentracija dajući više. od 90. % inhibicije dok. se 50%. inhibicija može. dobiti, sa. nižim koncentracijama, ;nitazoksanida.kao što.su.0.2, 0.1 i 0.02.ug./.ml. Sa.istim eksperimentalnim.uslovima paromomicin koji se.koristi.kao kontrolno sredstvo.je.2,000.puta manje.efikasan.sa inhibitorskim. koncentracijama.. koje su. unutar, opsega.. od 51 % do. 83. %. na koncentraciji od 2,000 u.g/.ml ;PRIMER.IV ;E.INTESTINALIS.i.V.CORNEA ;2RK-13. ćelije (ćelijska. linija.. zečiji bubreg) se. dodaju, u. posude, sa. 24 primarna zasada.sa. koncentracijama.od.2.6 x 105. ćelija.po. posudi. (1 .o. ml.medijuma;.RPMI 1640 sa.2mM.L-glutamina.i.5% seruma.fetusa.govečeta.koji.se inaktivira.toplotom). ;Sudovi se. inkubiraju na. 37°C. u. CO2inkubatoru, preko, noći za. koje vreme se bunarčići. prelivaju jedan u drugi ( sa udvostručavanjem, 5 x 10^ ćelija po . bunarčicu). ;Septata intestinalis(kultura izvedena iz tkiva) organizmi, se dodaju u ćeliju domaćina u odnosu 3 :1 i porede. se sa. procenjenim ćelijama ili 15 x. 10<6>;organizama po. bunarčiću. Ovaj odnos rezultuje u. približno. 50 % zaraženih ćelija domaćina.Lekovi.su rastvoreni u.DMSO,.vodi i metanolu.( zavisno od rastvorljivosti) ;da bi se stvorile, zalihe, od. 1.0. mg/, ml.. Zalihe su. čuvane na. -70°C. Razblaženi rastvori iz eksperimenata su potpuno.napravljeni u sredini kulture tkiva..Svi su.oni testirani, u trostrukom. bunarčiću.Medijum. se. zamenjuje. svaka.. tri. do.četiri, dana (sadrži, sveže, rastvorene, lekove).Šestoga. dana(posle. dodavanja, parazita, i lekova),. ćelije, su. ispitivane.na.toksičnost.. Kontrolne, ćelije, daju lekove. ali.paraziti, ;nisu. ispitivani, na. konfluentnost, morfologiju, ćelije,, i. prisustvo, mrtvih, ili. plutajućih. ćelija.. Samo. su. ćelije koje. su inkubirane. sa. parazitima, ispitivane da. bi. se. potvrdilo da su paraziti, zarazni. (. tj.. prisustvo, parazitpfosfornih. vakuola).. Ćelije, koje. inkubiraju.parazite, i. lekove. su.procenjene. za.toksičnost, ćelija, domaćina.. i relativan, broj. parazitofosfornih. vakuola. (. tj.. viši,, medijum,. ili. niže).Desetog. dana,. 100. mg. od. 10%. SDS (0.5. %. krajnja, koncentracija) se. dodaje, u. bunarčiće za. kulture, da. discrupt.. membrane, ćelija, domaćina, i. uzrokuju, oslobadjanje. mikrosporidija. Ukupan, broj. parazita, koji. su. prisutni u. svakom, bunarčiću.je. odredjen.. brojanjem alikvota. na. hemacitometra. Rezultati, su. izraženi, kao. procenat. inhibicije. (. koji. se odnosi, na inficirane, ćelije, koje ne.daju. lek).. Rezultati.su.pokazani, na. crtežima. 1 -4. ;........................ PRIMERV TOXOPLASMA.GONDII ;Nitazoksanid. i.dezacetil. nitazoksanid.su.testirani.protiv, parazita,, i. još. odredjenije,. RH. sojevi, od. Toxoplasma gondii,..su.održavani, pomoću niznih.kanalima.u.mišu.. Kulture, ćelija, od. MRC5. fibroplasta. (Bio-Merieux„ France). koje. su. uzgajane.. u. mikroposudi. sa. 96. bunarčića. su. nakalemljene, sa. T.gondii. 200. sveže . uzgajenih. takizoita. se dodaje, u svaki. od. bunarčića sa kulturom,, izuzev, u 8. kontrolnih, bunarčića (. negativni kontrolori).. Posle 4. sata. inkubacije, . razblaženi. lekovi. se. dodaju, u. kulture.. Nitazoksanid. (NTZ). i.dezacetil. nitazoksanid. (dNTZ). su. probani, u koncentracijama, u. opsegu, izmedju. 8.. 10"4.i.40.mg././L. Lekovi. na. početku, rastvoreni u DMSO,. u.. koncentraciji, od. 2. mg/. mL, zatim. su. razblaženi. rastvo.. po. redu.. dobijani. u. kulturnoj, sredini.. Nije. dobijen. precipitiat.. Razblaženi. lekovi. su. dodavani. u. kulture. (. 8. bunarčića. za. svaki.. razblaženi). zatim. su. tanjiri. sa. kulturama.. inkublranl.. 72. h.. Kulture, su. onda. fiksirane, sa. hladnim.. metanolom.. Procena. rasta, za T.. gondii je. izvršena.. pomoću. ELISA, korišćenjem.. peroksidaze. koja. obeležava.. anti. tela.T..gondn:kod. zeca.. Vrednosti. optičke, gustine. su.zabeležene. za. svaki. bunarčić. Rezultati su predstavljeni, pomoću dobijenih OD vrednosti koje su podeljene za svaki bunarčić sa kulturom, naspram, koncentracije leka. u kulturi. Statističke, analize.koje su sadržane u. regresionoj analizi sa 95. % intervala.koji su pouzdani, i. odredjivanja . krivih za dozni odgovor, od OD vrednosti koje su proizvedene, za. svaki lek.. Jedan tanjir je obojen, sa. Giemsa za ispitivanje citopatičkog efekta u kulturama.Tri odvojena eksperimenta su ostvarena.. U svakom.eksperimentu,.dva.tanjira sa.kulturama.se.koriste za.svako jedinjenje; u svakom, tanjiru. sa kulturom,. 8.. repliciranih, bunarčića. se koristi, za. svaku, koncentraciju, leka. ;Rezultati: ;Slični, rezultati, su. dobijeni. u. tri. niza. eksperimenata.. Grafičko predstavljanje.. rezultata.za.jedan.. reprezentativan, eksperiment..za.svaki. lek. je. pokazano, na.slik. ;5.a,.b,.c.i.6.a,.b,.c. ;Nitazoksanid ( slik. 5 a. b. cV: ;Nije. uoče.. inhibitorski. efekat.. za. koncentracije, u. opsegu, izmedju. 10-4.mg./. I. i 0.3 mg./. I..Značajan efekat. je. uočen, za koncetracije. >0.6 mg./. L,. sa kompletnom inhibicijom rasta Toxoplasme za koncetracije.>.2.5. mg./. L. Kako bilo, . uočena je znatna, toksičnost.. ćelijskog. monosloja. za. koncentracije. >2.5. mg/. L. Mikroskopska ispitivanja, monosloja. pokazuje da.. NTZ,. u. koncentraciji, od. 1.25 mg. /L. izaziva . citopatički. efekat. na. ćelijama, koje. žive. kao. paraziti, na. telu. domaćina,, sa. (fižičkim. povećanjem. parazitofosforskih. vakuola. i. smanjenje.. broja.. intra-celularnih. parazita.. Od.regresione.analize,, može da.se. proceni.oko.50%. inhibiranih. koncentracija na 1.2 mg /L ;Deacetil nitazoksanid (slik. 7 a.b.cV; ;Slični, rezultati, su. dobijeni. sa. deacetil. nitazoksanidom. :. nema. efekta za koncentracije.. koje. su. u. opsegu, izmedj.. 10"4. i. 0,3. mg./. L,. inhibicije. koncentracij ;>0.6. mg/L,, i.. značajna, toksičnost.. za. koncentracije.. >.2.5. mg./. L.. 50%. inhibirane koncentracije.. može. se. proceniti. na. 1.2. mg/L.. Dobijeni. rezultati, su.. reproduktibilni.. za. tri. odvojena, eksperimenta,, sa. procenom. inhibitorskog. efekta, leka na. ponovoljenim. kulturama, za. svaku, koncenraciju. leka.. I. za. NTZ. i. deacetil. NTZ, . značajna, inhibicija. rasta. Toxoplasma.. se. može. dobiti na... na. koncentracijama, od. približno. 1.2. mg/L,, sa. pramenom.. parazitofosforaste. vakuole. ali. ne. i. značajnijih pramena, .samog, parazita.. Ovi. rezultati.. pokazuju, da. ovi, lekovi. imaju, dobru aktivnost, protiv. T.. gondii,. i. da. se. može. očekivati. In.vrvo. terapeutski. efekat. na. osnovu, dobijanja. koncentracija, od. približno. 1 mg/. I. u serumu ili. tkivima. ;PRIMER.VI ;. MYCOBACTERIA ;Nadjeno.je.da. Nitazoksanid. ima. antimikrobsku. aktivnost, naspram. TB. organizama.. Sledeća. tabela, pokazuje, ogled. za. MIC. od. nitazoksanid. i. tizoksanid. naspram. Mvcobacterium. intracellular. tehnikom.. sa. razblaženim. agarom.. Ovi. rezultati, su. zasnovani.na. nekoliko, eksperimenata.,. od.kojih svaki.traaje.3 nedelje za. postupak razblaživanja. agarom sa Middlebrook agarom.. Rezultati, koji su dobijeni.. pokazuju da.nitazoksanid.ima.MIC.naspram.Micobacteria.od.2..|xg/.ml.i.tiazoksanid ima.MIC od.4 ug/. ml,.korišćenjem..soja.standardnih. Mvzobacterium. intracellular. iz. ATCC, korišćenjem. standardnog, ogleda.. razblaženog. agara.. MIC. za. Nitazoksanid. i. tizoksanid. za. Mvcobacteria. intracellulare ; ;<*>MIC. su. odredjeni standardnim razblaženjem.. agara. korišćenjem. Middlebrook 7H11. agara. za. tri. nedelje.. Za. ovaj. eksperiment, je. korišćen,. stanardni. soj,. M.. intracellular. ATCC. 13950.. Slik.. 7 je. grafikon.. zasnovan, na. ogledu, za. efikasnost naspram, mvcobacteria. koje rastu na. tečnom medijumu. koji sadrži, hranljive. sastojke pogodne, za uzgajanje, mikoroorganizama. Koristi se. MTS. kolorimetrijski. ogled. koji.dozvoljava, da.se.odredi.rast. za.4.dana.pre.nego.za.3.nedelje. kao.i.sa postupkom, brojanja, na. agaru.. Kao/što. se. može.videti iz. rezultata.. na. šlic. 7, kada se. 72. h. pošto. je. kultura.. začeta, dodaje, nitazoksanid,. odmah. se. javlja, efekat.. na produženi, rast.. poredjenjem. sa. rastom, u. jedinstvenom.. kontrolnom, medijumu.

Doza.od.3 jig / ml nitazoksanida. zaustavlja rast. u. naredna. 24. h. a. onda. se naknadno u naredna. 2. dana,, javlja slab. rast... Doza. od. 50. mg/ ml je kompletno bakteriostatska.za sve.vreme.od.144 h m, za.kulturu.

...PRIMER VII CRYPTOSPORIDIUM. PARVUM

Efekat.od.nitazoksanida.se proba, protiv. Crvptosporidium.parvum kod miša. koji.je zaražen, za potrebe eksperimenta.Nitazoksanid. je zastupljen, od Romark Laboratories, L.C., Tampa,.Florida..Puna doza.za.čoveka.(1 g/ na dan za t dana tj. 7

g).je.modifikovan.za upotrebu.kod miševa.prema.Padžetu.i.Barnsu. Covečija doza je pomnožena sa 0.0026. za miša (težina, približno. 20. g). da. bi se. dobila ukupna

količina, leka potrebna. za svakog domaćina ujutro i uveče . za. 7 narednih. dan..

Svaki.miš. prima 2.6. mg/, dan. (7000. mg. x. 0.0026/7).. Doze. su. davane, preko. usta. plastičnom, brizgalicom. sa. okruglim.vrhom.. Dvadesetero odojčadi. miševa.starih, dva. dana. su. zaraženi, davanjem, oralnim, putem. 100,. OOo. oocista. od. Crvptosporidium. parvum. koji. su. dobijeni.. od. zaraženog, mladog, govečeta.. Pre. nego. što. su. davani, mišu,, oocisti su. sakupljani, korišćenjem. šećernog, rastvora, prema, tehnici.. opisanoj, od. strane.. Fayer-a. &. Ellisa.. Uzet. je. Analni, bris. od. svakog, miša. i. ispitivano . je. dnevno, korišćenje.. modifikovane. Niehl-Neelsen. tehnike, bojenja, opisane, od. Graczvk. et. al.. Košuljica, od. oocista. postaje, vidljiva, u.fekalijama. posle.2.dana. po.inficiranju.oralnim.putem.životinje.. Trećeg.dana. prateći.Infekciju životinja. ,10.miševa.. prima. 1.3.mg.nitazoksanida,..od.jutra.do. mraka,, u.sedam, narednih, dana.. dok. su. preostalih. 10. miševa, čuvani.. kao.. nelečeni. kontrolni, primorci.. Analni bris se. dnevno, dobija.za svaki.od.7.dana. od. lečenja. i.svaki od.7 dana. dovodi, do. kraja, eksperimenta.. Oocisti. su. suspendovani. u. ulju. i. prebrojavani,

na po 100 polja pod mikroskopom. Rezultati:

Rezultati.prikazani.u.tabeli.koja.sledi.jasno.pokazuju.da.nitazoksanid koji.je.davan. u vidu dnevne doze od 2.6. mg./. dan. za sedam, uzastopnih, dana. efikasan, protiv Criptosporidium. parvum. u. smanjenju, broja.. oocista. u.fekalijama.. zaraženog, miša. kada. se. uporedi sa. kontrolnim, životinjama.. Probni, lek. snižava.. broj. košuljica, oocista.u 6od.10.miševa.koji.su.podvrgnuti.tretmanu.na.kraju.trećeg.dana.lečenja.. Na. kraju tretmana. 7 dana,.. postoji, potpun, smanjenje.. košuljica oocista,.. sve. životinje, koje. su. podvrgnute, tretmanu, imaju.. negativno, prisustvo, oocista. u. stolici, kada se.. uporede. sa. kontrolnim, miševima koji. nisu. podvrgnuti, tretmanu... Ovaj. efekat traje, najmanje 7 dana po tretmanu kao što. je. pokazano ispitivanja, o negativnom prisustvu.oocista..posmatranim.3 i 7.dana.po završetku.tretmana.

PRIMER VIII

MVCOBACTERIUM

Nitazoksanid. je. uporedjen. naspram, joniazidnih. antibiotika.. Protokol, koji. koristi BC(3.(Bacille de.CaImette.et.Guerin).kao.soj.mikobakterija..Osetljivost..ovog.sloja.je ista kao, i. od. M.tuberculosis, ali.je. ovaj. soj. neškodljiv, i tako. ne.. zahteva.viši.nivo sadržaja, sredstva za.tuberkulozu.. 4mg/. na. dan. po. mišu.u. 0.2. ml. suncokretovog ulja.je.davano.mišu..Rezultati.kod.miševa .tretiranih.nitazoksanidom.su..uporedivi sa. grupom, primljenih, joniazida.

PRIMER IX

FASCI0LA.HEPATICA

Dejstvenost In. vitro. za. nitazoksanid. i. dezacetil-nitazoksanid je. testirana, protivFasciola. Hepatrca.Odrasla. F. hepatica. je. dobijena. iz žučnih kanala, jetre. od. tri govečeta. koja. su. proglašena, neižlečivim naspram.fasciolosis.(genom.trematode koja živi. u. jetri), u. laboratoriji, za medicinsku, dijagnostiku, u veterini, u. Lujzijani. kod Hardy's. Meat.Packers,. Bunkie,. LA.; Trematode.su. ispirane, u. sterilnom, sonom rastvoru.lh.i.prenesene.u.sterilan.rastvor od RPMI.(pH 7.4) dodatna 3 h..Trematode su.držane.u.sterilnom.RPMI-zečijem.serumu.(50.:50.v/v) ili.sterilnom RPMI (pH 7.4)

preko, noći na 37 °C. sa.5. % C02. Kultura, in. vitro (37 °C C02) su. napredovale prema, modifikaciji postupka.od. Ibarra i Dženkinsa.(Z. Parasitenkd. 70 :655-661, 1984).. Koristeći, tehniku, u. sterilnim uslovima,. trematode su ispirane, dva.puta 2-3 minuta u Hanksovom uravnoteženom rastvoru soli (pH 7.2) i. stavljane su pojedinačno.u."bunarčiće" od.posude.sa.šest.primamih.zasada Linbro.kulture koji sadrži lO.ml.alikvota od označenih razblaženih rastvora lekova u sredini kulture. Potonji se sastoji od..steirlnog RPMI-zečijeg seruma (50: 50 v/v) sa

sa. 2%. zečijim. serumom, plus. 100. ppm. penicilina, i. 100. ppm. streptomicina. Korišćene.su. samo. one. trematode.. koje. su. imale, normalnu, aktivnost, i. morfologiju.. Zalihe.rastvora.NTZ.ili.njegovog.D-NTZ.metabolita.obezbedjene.od.strane.Romark,.

su.rastvorene.u.DMSO.(2000 u.g/. ml).i. razblažene.u.kulturnoj.sredini,.korišćenjem. volumetrijskih.. balona, od. 100. ml, da. bi. se. dobile, specifične, koncentracije, leka. (.

100,. 50,. 25, 10,. 5,. 3, 1 u.g /. ml). Dve. trematode. koje su. služile za. kontrolu, (proba eksperimenta.pomoću.paralelnog.eksperimenta).su bile.uključene.u svaki replikat, jedna. u. sredinu kulture, sa. RBC. koja nije. bila Isposredovana. i. jedna. u. sredinu kulture, sa. RBC. koja. nije. bila. natopljena. lekovima.Trematode. su. ispitivane, na efikasnost, lečenja. lekom. što. se. manifestuje. smrću,, narušenom, pokretljivošću.. ili. morfološkim, promenama. ako. se. uporedi. sa kontrolnim, trematodama. koje. nisu tretirane,, korišćenjem. panela. osvetljenog. odpozadi. i osvetljenih. 3X. uvećanih, sočiva.

Rezultati: Eksperiment 1 : Za D-NTZ. trematode u tretmanima .od 50 i 100.ua.su

na umoru ili su mrtve, untar jednog sata. 4 od. 7 parazita, iz. roda. trematoda. sa tretmanom, od. 25 ug. su. na. umoru,, dva. su. aktivna,, i.jedan.tromi, parazit, ostaje, živ.

posle.četiri.sata.. Na. 10.\ ig,.. uočena.je.smanjena.aktivnost na. 1,3. ili. 4:časa. i.svi.su. na.umoru.ili.mrtvi.za.7.h..Smanjena.aktivnost..kod.nekih.individua.se. vidi.za.24.h. u grupama.od.5.mg.i.3u.g.sa. nešto.sporijim.početkom.na.3.u,g.;.za.50h.sve.su.mrtve.

u.posudama.za.tretman od.3.u,g i.5u,g,. izuzev jednog.usporenog.parazita , u.svakoj grupi.. Nešto, usporenija. aktivnost, je. uočena, u. grupi. od. 1 u.g. na. 42-74. h. i. samo 3 aktivna.i.jedan.parazit.koji.je.na umoru.ostaju.živi.posle.91 h;.za 115.sati.preostaje samo.jedan.usporeni.parazit.u.grupi. od.1./ g. Posmatrana.je.smrtnost. u.kontrolnim uzorcima.sa.RBC grupom .za.66.h.(.jedan.parazit),.91.h.(.jedan.parazit).i. 115.h.(. četiri.parazita)..Kod.onih.kontro..uzoraka.bez.RBC.grupe,.svi su.živi za.91 h.i.jedan. je.umro. posle. 115.h. Eksperiment 2: Za NTZ,.uočena je.nešto veća. aktivnost.sa ranijim, efektima na.. ukupan.rezultat, pokretljivosti i smrtnosti, u osam. replikata. kada

se.poredi.sa.rezultatima .za.D-NTZ..U.grupama .od. 100, 50125. \ ig svi.paraziti su

mrtvi.ili.skoro.mrtvi za. 1h,.izuzev.jednog.parazita.iz.grupe.od 25.u.g.koji.je.uginuo za. tri. sata.. Smanjenje, pokretljivosti koje. je. izazvano, davanjem, leka. u. dozama, moze. se videti. u svakoj, od. ostalih, grupa. koje. su. lečene. lekovima.sa. početkom.

posle.sat vremena. Na. 10.ug,.samo je.jedan.parazit.opstao 16 h..U grupi.od 5 |ig,

samo.sli.tri parazita.aktivna.posle šest sati.i.nijedan nije.aktivan za 16 .h..Po.isteku 23.h,.samo.2.usporena.parazita.u.grupi.od.3 ug.ostaju.živa,.oni.umiru..po.isteku.41 h..Za.grupu.od. 1 .mg/. I,, jedan, parazit, umire.. posle. 16. h,.tri... posle.41. h. i. pet.. posle 74.h.;. 3.. parazita., ostaju., aktivna., posle.91. h.i.jedan. parazit, ima.aktivnost.posle. 115.

'n

h. Smrt parazita, u. grupama, sa. visokim dozama. (25,. 50,. 100. mg), je bila. brza. i praćena, je. sa. kontrakcijama, i. "uvijanjem, trbuha".. Pri. nižim, nivoima, davanja, leka, većina, parazita, je. usporena, za. neko. vreme. i postaje, mlitavija, kada. su. mrtve. ili. skoro, mrtve.. Kontaminacija, postaje, ograničena.. eksperimentalnim, rezultatima, kod. nekih, replikata. počev. od. 91h.. Za. eksperiment, sa. D-NTZ,. glavni, bakterijski, i. fungicidalni.. prekomerni.rast.. koji. ide.zajedno sa.smrtnošću..se javlja..posle. 115.h, u.dva."replika.plejta".(sekundarni.zasadima). Za.eksperiment.sa.NTZ,.prekomerna smrtnost, parazita, u. svim. sekundarnim. zasadima(replika. plejt).. se. javlja.. posle. 91. (. dva. replikata). i. 115. h. (5. replikati).. 139. sati. posmatranja.. se. ne. smatraju, validnim zbog.generalne, kontaminacije .najvećeg, broja..tanjira..

Zaključci;

Snažna, efikasnost, nitazoksanida. kod. parazita je. utvrdjena. eksperimentima, sa obadva.testirana. leka... Nešto.veća. aktivnost u. uništavanju.parazita.je.posmatrana. protiv.F.. hepatica,.za. nitazoksanid. a zatim. za. dezacetil-nitazoksanid,. glavni, metabolit,.koji .treba.da.je.aktivan. na.nivou.jetre. Brza.smrt.parazita.se.javlja. za. 1 h.

u.in.vitro D-NTZ.opsegu.davanja.leka.>.50 ug,.za.4.sata.na.25 u.g.i.6-7.sata.na. 10.

u.g.. Deset.. u.g,. može. da. bude. obim. isporuke, ciljnog, leka. kroz. odgovarajući, jednokratni, tretman, ukoliko farmakokinetički rezultat, pokazuje, da. je. nivo. tkiva, održavan. >. 6-8. sati po pojedinačnom tretmanu. Snažna, aktivnost, usmrćivanja parazita.od. 74. h. ( tri.dana ).je. posmatrana za oba.jedinjenja. u. opsegu, davanja leka. u. dozama, od.3. i. 5. mg.. Pristup, produženog, opstanka,. koji. nije. Isti. za. kontrolne parazite, koji. nisu. lečeni. lekovima. je. posmatran.. na. nivou, davanja.. leka. u. dozama od.1.mg.;.isporuka.ovih..nivoa.leka..parazitima.u.tkivima.jetre..u.3.do.4.dana..može zato. imati, neodgovarajući, terapeutski. efekat.. na. parazite.

FASCIOLA GIGANTICA

Nitazoksanid.je.proban.protiv.nesazrelih.i.odraslih. Fasciola.gigantica.u zečevima koji su. zaraženi u eksperimentu.. Učaurene larveFasciola. gigantica.(EMC), su sakupljane, na listu, celofana. 28-35 dana posle infekcije, od. puža.L. calludi.od stranelarve Fasciola. giganticakoja. se. izleže. iz jaja. parazita, korišćenjem . tehnike opisane od Abdel-Gani. kada su larve dnevno izložene veštačkom.svetlu, 30 minuta, u. čistoj, dehtorizovanoj. vodi.. Rezultujuće. učaurene. larve. (EMC), su.

zaštićene, na. 4. °C. u. frižideru. 5. do. 8. dana. ispod, površine, vode. sve. dok. su korišćene..za.inficiranje.eksperimentalnih životinja.. Četrdeset.(40).Boscat. zečeva,, svaki, težine, od. 1.5. do. 2. kg,, su. uključeni, u. studiju, i. dodeljeni. dvema. tretiranim, grupama.. od. 20. životinja.. Životinje, iz. grupe. 1. su. zaražene, oralnim, putem. sa.35-40. učaurenih. larvi, zamotanih, u. list. loćike.. i. gurnutih.. na. koren.jezika.životinja... Usta. od. životinje.su. rukom držana, zatvorenim sve dok nisu.progutale, učaurene larve.. Ova. grupa. 1. životinja, je. korišćena. da. testira.. efikasnost, nitazoksanida. protiv (larvi)u.nezrelom, stadijumu. (. starih.4-5. nedelja).Fasciola.. gagantica..Životinje..iz.grupe. 2. su. zaražene, oralnim, putem. sa. 10-15. učaurenih. larvi,, kao. što. je. ranije naznačeno,, i. korišćene. su.. za. testiranje.. efikasnosti.. nitazoksanida. protiv... rano. sazrelih, parazita (>. starih. 10. nedelja).. Deset, životinja, iz. grupe. 1. prima. 35. mg nitazoksanida,. ujutro, i. uvede,, u. 7. uzastopnih, dana. 4. nedelje. po. njihovom inficiranju.. u. nezreloj.fazi ciklusa, parazita.. Deset.preostalih, životnja. iz. grupe. 1..su. čuvani.kao. kontrolni.uzorci, koji.nisu.podvrgnuti.tretmanu.. Deset.životinja.iz.grupe. 2 primaju.35 mg.nitazoksanida,.ujutro.i.uveče,.u sedam.narednih.dana..lO.nedelja. po.njihovom.inficiranju, u.zreloj.(razvijenoj).fazi..parazita.. 10.preostalih..životinja.iz. grupe..2..su.. sačuvane kao. kontrolni, uzorci, koji. nisu.. podvrgnuti, tretmanu..Sve. životinje.. su. hranjene, sa.. suvirn. obrocima, do kraja, eksperimenta.. Sedam. dana.. po. davanju, zadnje, doze. nitazoksanida,. svi. zečevi.. iz. svake. od. grupa. su. žrtvovani.. Površina, jetre, ispitivana, je. na. prisustvo, nekrotičnih. migrirajućih. brazdi.. koji se. premeštaju naročito, u. nezreloj, fazi. ciklusa, parazita.. Ove. nekrotične. oblasti, su isptivane. korišćenjem. dve. hirurške igle. da. bi. se. izvukli, premešteni. juvenilni . paraziti, prema, tehnici, opisanoj, od El-Bahy.. Jetre. su. isečene. u. male. komade naračito. oko migrirajućih. brazdi.. i. potopljene, pod. mikroskopom, da. bi.. se. izvukli, postojeći, paraziti. Abdomalna. šupljina, i. crevne. površine.. su. ispirane.. sa.toplom, vodom.. Voda. se. onda. sakuplja,, prosejava. i. ispituje radi. identifikacije, juvenilnih. parazita.. Svi. sakupljeni, paraziti,. kao.i.njihovi, delovi su.. sakupljeni, i.kod.. tretitanih.i. netretiranih životinja u obadve grupe 1 i.2..Živi.paraziti.se pojavljuju kao obojene glave, čiode,. jasno.. pokazujući. netaknute, delove. opne,. koji. se. lako. izvlače, iz.. tkiva.. jetre.korišćenjem tople. vode,, dok su.mrtvi, paraziti prilikom.gubitka, boje. sivkasti, i. pokazuju.. slomljenu, nekrotičnu. površinu.. Efikasnost, nitazoksanida. se. izračunava, korišćenjem fomule koja.je pokazana ispod :

% efikasnosti, a- b .. x100

Gđe je : a = broj parazita dobijenih iz fekalija kontrolnih životinja

b= broj parazita dobijenih iz fekalija tretiranih životinja

Rezultati

Rezultati, studije, kao što.je naznačeno u tabeli 7 pokazuju.značajan pad u. broju nezrelih, parazita, dobijenih iz jetre zeca u obradjenoj grupi. kada. se uporede sa.kontrolnom.grupom. Srednja vrednost.procenta.redukcije..je izračunata kao.46.77%. (opseg. :.40-60 %).

Na. početku potpuno razvijenog, stadijuma infekcije, nitazoksanid pokazuje kompletan.efekat.(100.% smanjenje ).i posle ispitivanja, jetre tretiranog.zeca se ne mogu videti crvi.uporedjenjem. sa kontrolnim, životinjama, koje. nisu.lečene. kao što je pokazano, u tabeli.8.

Tabela 8.. Efikasnost, nitazoksanida. protiv potpuno, zrelih. (10 nedelja/ star) F.

gigantica. kod. eksperimentalno zaraženih zečeva

Nitazoksanid koji je davan, u dozama, od. 70 mg/ dan. za. 7. uzastopnih, dana umoreno, je. efikasan protiv . nezrelog, stadijuma Fasciola gigantica i potpuno efikasan, protiv, potpuno, zrelog stanja, parazita.

PRIMER XIII

SCHISTOSOMA

Nitazoksanid je. testiran protiv.Schistosoma mansoni} Schistosoma hematobiumna eksperimentalno zaraženom mišu. Četrdeset (40).belih miševa, teških 30 do 50 grama su odredjeni za dve.grupe za tretman od 20. životinja po grupi. Prva.grupa, je inficirana sa. 300-500 oslobodjenih aktivnih larvi.Schistosoma mansoni koje. su suspendovane u 0.25. ml destilovane. vode i. davane svakom mišu intraperitonealnim. ubrizgavanjem.. Druga, grupa . je. zaražena na. isti. način ali sa larvamaSchistosoma hemotobium.Ove dve. grupe.. su onda čuvane.. ukupno. 70. dana u laboratoriji. Sedamdeset dana po inficiranju životinja,.deset miševa, iz.svake grupe je tretirano sa. 1.3. mg nitazoksanida. koji. je.davan oralnim putem,, ujutro, i uveče,. za. sedam, uzastopnih, dana. Sedam. dana.. po. završetku, tretmana veliki miševi su žrtvovani, i.. gliste su izvadjene iz.jetre, svake od. životinja.. polivanjem korišćenjem mlake. vode. (37°C). Brojane. su ekstrahovane. šistozome. za. sve tretmane i kontolne. životinje.. Efikasnost, nitazoksanida je izračunata, primenom formule koja je. pokazana niže:

Gde su a:=broj šizostoma. dobijenih iz. fekalija kontrolnih životinja

b-broj šizostoma dobijenih iz fekalija.tretiranih životinja

Rezultati

Rezultati,<p>okazani u. tabeli. 9 i 10.jasno, pokazuju, da. nitazoksanid koji. je. davan u dnevnim dozama od.2.6. mg./ dan za sedam, uzastopnih.dana.efikasniji .protiv

Schistosoma hematobium gde je.posmatrano. smanjenje (broja), glista od 82.85 %

kada se uporedi. sa. kontolnim životinjama, dok . protiv.Schistostoma mansoni,smanjenje.broja.glista.dostiže.samo 59.91 %.protiv kontrolnih.miševa. Ovi rezultati su saglasni sa izveštajem Abaza et al., kod pacijenata.. gde. nitazoksanid nije. bio efikasan protiv.S. mansonikao što je pokazano, pozitivnim računom za. broj jaja posle tretmana nitazoksanidom.

Tabe!a9.Efikasnost.nitazoksanida protiv zrelih (13 nedelja/ starih).Schistosoma mansoni.kod miša. Br. parazita koji su uklonjeni iz jetre od

Claims (42)

1. Farmaceutska kompozicija za oralnu primenu koja kao aktivno sredstvo sadrži barem jedno jedinjenje koje je odabrano iz grupe koju cine: jedinjenje formule (I) i jedinjenje formule (II) gde je pomenuto aktivno sredstvo u obliku aktivnih cestica cijaje veličina manja od 200 um i gde je srednje vrednost veličine cestice veću od 10 um.

2. Kompozicija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time, sto je srednja vrednost veličine cestica za pomenute aktivne cestice izmedju 10 i 100 um.

3. Kompozicija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time, sto je srednja vrednost veličine cestica za pomenute aktivne cestice izmedju 20 i 50 um.

4. Kompozicija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time, sto manje od 10% težine pomenutih cestica ima veličinu veću od 100 um.

5. Kompozicija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time, sto najmanje 50% težine pomenutih aktivnih cestica u čvrstom stanju ima srednju vrednost veličine cestica koja je manja od 50 um.

6. Kompozicija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time, sto manje od 10% težine pomenutih aktivnih cestica u čvrstom stanju ima srednju vrednost veličine cestica koja je manja od 5 um.

7. Kompozicija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time, sto je faktor raspodele za pomenute aktivne cestice u čvrstom stanju izmedju 0.8 i 2, gde se pomenuti faktor raspodele moze izračunati pomoću sledece formule: F90% = (4>90% - 4>10%)/((€>90% + <E>io%)/2) u kojoj je F90% faktor raspodele na 90%; <Ž>90% je maksimalna veličina cestice za frakcije cestica koje odgovaraju 90% pomenutih ? aktivnih cestica u čvrstom stanju, i Oi0% je maksimalna veličina cestice za frakcije cestica koje odgovaraju 10% pomenutih aktivnih cestica u čvrstom stanju. S. Kompozicija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time, sto je faktor raspodele za pomenute aktivne cestice u čvrstom stanju izmedju 1.1 i 1.9, gde se pomenuti faktor raspodele moze izračunati pomoću sledece formule: u kojoj je F90% faktor raspodele na 90%; <J>90% je maksimalna veličina cestice za frakcije cestica koje odgovaraju 90% pomenutih aktivnih cestica u čvrstom stanju, i

$10%je maksimalna veličina cestice za frakcije cestica koje odgovaraju 10% pomenutih aktivnih cestica u čvrstom stanju.

9. Farmaceutska kompozicija za oralno davanje naznačena time, sto kao aktivno sredstvo sadrži barem jedno jedinjenje izabrano iz grupe koju cine: jedinjenje formule (I) i jedinjenje formule (II) i stabilizujuca količina farmaceutski prihvatljive kiseline.

10. Kompozicija premapatentnom zahtevu 9, naznačena time, sto je farmaceutski prihvatljiva kiselina odabrana iz grupe koju cine limunska kiselina, glutaminska kiselina, cilibarna kiselina, etansulfonska kiselina, sircetna kiselina, vinska kiselina, askorbinska kiselina, metansulfonska kiselina, fumarna kiselina, adipinska kiselina, jabučna kiselina kao i njihove smese.

11. Kompozicija prema patentnom zahtevu 9, naznačena time, sto je odnos težine farmaceutski prihvatljive kiseline/ prema težini pomenutih aktivnih cestica izmedju 0.01 i 0.5.

12. Kompozicija prema patentnom zahtevu 9, naznačena time, sto je odnos težine farmaceutski prihvatljive kiseline/ prema težini pomenutih aktivnih cestica izmedju 0.03 i 0.2.

13. Upotreba barem jednog jedinjenja koje je odabrano iz grupe koju cine jedinjenje formule (I): i jedinjenje formule (II): kao aktivnog sredstva za proizvodnju farmaceutske kompozicije za lecenje infekcije kod sisara sa oslabljenim imunim sistemom pomoću mikroorganizama odabranih iz grupe koju cineCryptosporidium parvum, Isospora belli,Enterocytzoon bieneusi, Encephalitozoon intestinalis, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium intracellulare, Pneumocystis carinii, i Toxoplasma gondii, gde je pomenuto aktivno sredstvo u obliku aktivnih cestica koje imaju veličinu manju od 200 uju i gde je srednja veličina cestice veća od 10 urn.

14. Upotreba prema patentnom zahtevu 13, gde je pomenuto aktivno sredstvo u obliku cestica koje imaju srednju veličinu izmedju 20 i 50 um.

15. Upotreba prema patentnom zahtevu 13, naznačena time, sto je pomenuta farmaceutska kompozicija ima barem jednu farmaceutski prihvatljivu kiselinu.

16. Upotreba prema patentnom zahtevu 15, naznačena time, sto je farmaceutski prihvatljiva kiselina CKlabrana iz grupe koju cine limunska kiselina, glutaminska kiselina, cilibarna kiselina, etansulfonska kiselina, sircetna kiselina, vinska kiselina, askorbinska kiselina, metansulfonska kiselina, fumarna kiselina, adipinska kiselina, jabučna kiselina kao i njihove smese.

17. Upotreba prema patentnom zahtevu 13, naznačena time, sto je pomenuto aktivno sredstvo jedinjenje formule (I),

18. Upotreba prema patentnom zahtevu 13, naznačena time, sto je pomenuto aktivno sredstvo jedinjenje formule ( U).

19. Upotreba prema patentnom zahtevu 13, naznačeno time, sto jepomenuti sisar covek i gde se pomenuto aktivno sredstvo primenjuje u količini od 500-2000 mg dnevno.

20. Upotreba barem jednog jedinjenja odabranog iz grupe koju cine jedinjenje formule (I): i jedinjenje formule (II): kao aktivnog sredstva za proizvodnju farmaceutske kompozicije za lecenje parazitske infekcije izazvane od strane trematoda gde je pomenuto aktivno sredstvo u obliku aktivnih cestica koje imaju veličinu manju od 200 um i gde je srednja vrednost veća od 10 jun.

21. Upotreba prema patentnom zahtevu 20, naznačena time, sto je trematoda odabrana iz grupe koju sačinjavaju Schistosoma Fasciola, Fasciolopsis, Dicrocoelium, Heterophves, i Matagonimus.

22. Upotreba prema patentnom zahtevu 21, naznačena time, sto su tretmaode odabrane iz grupe koju cine Schistosoma mansoni, Schistosoma haematobium, Schistosoma mekongi, Schistosoma japonicum, Schistosoma intercalatum, Fasciola hepatica, Fasciola gigantica, Fasciolopsis biski, Dicrocoelium dendriticum, Heterophves heterophves, i Metagonimus yokogawa.

23. Upotreba prema patentnom zahtevu 21, naznačena time, sto je pomenuto aktivno sredstvo u obliku cestica sa srednjom vrednoscu veličine cestica izmedju 20 i 50 um.

24. Upotreba prema patentnom zahtevu 21, naznačena time, sto je pomenuta famraceutska kompozicija sadrži barem jednu farmaceutski aktivnu kiselinu.

25. Upotreba prema patentnom zahtevu 24, naznačena time sto je pomenuta farmaceutski prihvatljiva kiselina odabrana iz grupe koju cine limunska kiselina, glutaminska kiselina, cilibarna kiselina, etansulfonska kiselina, sircetna kiselina, vinska kiselina, askorbinska kiselina, metansulfonska kiselina, fumarna kiselina, adipinska kiselina, jabučna kiselina kao i njihove smese.

26. Upotreba prema patenntom zahtevu 21, naznačen time, sto je odnos težina farmaceutski prihvatljive kiseline/tezina pomenutih aktivnih cestica izmedju 0.01 i 0.5.

27. Upotreba prema patentnom zahtevu 21, naznačena time, sto je pomenuto aktivno sredstvo jedinjenje formule (I).

28. Upotreba prema patentnom zahtevu 21, naznačena time, sto je pomenuto aktivno sredstvo jedinjenje formule (II).

29. Farmaceutska pasta za lokalnu primenu, gde pomenuta pasta obuhvata: kao aktivno sredstvo, čvrste cestice od najmanje jednog jedinjenja odabranog iz grupe koja se sastoji od: jedinjenja sa formulom (I) jedinjenja sa formulom (II) gde pomenute cestice imaju veličinu cestica manju od 200um i gde je srednja vrednost veličine cestica manju od 10 urn; barem jedno sredstvo za zgušnjavanje (tecnosti); barem jedno sredstvo za kvašenje; i barem jednu farmaceutski prihvatljivu kiselinu, gde je pH vrednost paste izmedju 2 i 6.

30. Farmaceutska pasta prema patentnom zahtevu 29, naznačena time, sto pomenuta pasta dalje obuhvata barem jedan aditiv koji je odabran iz grupe koja se sastoji cetil alkohola, derivata glicerida, propilen glikola, i njihovih smesa.

31. Farmaceutska kompozicija za oralnu primenu koja sadrži aktivno sredstvo koje je granulisano u prisustvu sredstva za granulaciju, u kojem je: pomenuto aktivno sredstvo u obliku čvrstih aktivnih cestica od barem jednog jedinjenja koje je odabrano iz grupe koju cine: jedinjenje sa formulom (I) jedinjenje sa fromulom (U) i u kojem pomenute aktivne cestice imaju veličinu koja je manja od 200 um i srednju vrednost veličine cestice koja je veća od 10 um.

32. Kompozicija prema patentnom zahtevu 31, naznačen time sto je pomenuto aktivno sredstvo izabrano iz grupe koja se sastoji od polivinilpirolidona, vode, alkohola, saharoze, hidroksil celuloze i njihove smese.

33. Kompozicija prema zahtevu 31, u kojoj pomenute granulirane aktivne čvrste cestice sadrže barem jednu farmaceutski prihvatljivu kiselinu.

34. Kompozicija prema patentnom zahtevu 33, naznačena time, sto je pomenuta farmaceutski prihvatljiva kiselina odabrana iz grupe koja cine limunska kiselina, glutaminska kiselina, cilibarna kiselina, etansulfonska kiselina, sircetna kiselina, vinska kiselina, askorbinska kiselina, metansulfonska kiselina, fumarna kiselina, adipinska kiselina, jabučna kiselina i njihove smese.

35. Kompozicija prema patentnom zahtevu 33, naznačena time.sto je odnos težine farmaceutski prihvatljive kiseline/ težine pomenutog sredstva izmedju 0.01 i 0.5.

36. Farmaceutska kompozicija za oralnu primenu koja sadrži aktivno sredstvo, sredstvo za kvašenje i derivat škroba, u kojoj je : pomenuto aktivno sredstvo u obliku čvrstih aktivnih cestica od barem jednog jedinjenja koje je izabrano od grupe koju cine: jedinjenje formule (I) jedinjenje formule (II) i u kojem pomenute cestice imaju veličinu manju od 200 um i srednju vrednost veličine cestice koja je veća od 10 um.

37. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 36, naznačena time, sto dalje obuhvata barem jednu farmaceutski prihvatljivu kiselinu.

38. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 36, naznačena time, sto su aktivne cestice granuliraneu prisustvu sredstva za granuliranje da bi se formiralo aktivno sredstvo za granulaciju koje sadrži od 2 do 99.97% težine akivnogjedinjenja i od 0.03 do 10 % od težine sredstva za granuliranje.

39. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 38, naznačen time, sto je pomenuto sredstvo za granuliranje izabrano iz grupe koju cine polivinilpirolidon, vod, alkohol, saharoze, hidroksil celuloze i njihove smese.

40. Tečna suspenzija aktivnog sredstva za oralnu primenu, gde pomenuta suspenzija sadrži: aktivno sredstvo, čvrste cestice od barem jednog jedinjenja koje je izabrano iz grupe koju cine: jedinjenje formule (I) jedinjenje formule (II) gde pomenute cestice imaju veličinu manju od 200 um i gde je sredja vrednost veličine cestice veću od 10 um; i barem jedno farmaceutski prihvatljivu kiselinu, gde je pH vrednost suspenzije izmedju 2 i 6.

41. Suspenzija prema patentnom zahtevu 40, naznačen time, sto je pH vrednost suspenzije izmedju 3 i 5.

42. Suspenzija prema patentnom zahtevu 42, naznačena time, sto dalje obuhvata sredstvo za granulaciju.