RS49905B

RS49905B - Derivati ehinokandina, postupak za njihovo dobijanje i njihova primena kao antifungicida

Info

Publication number: RS49905B
Application number: YUP-339/00A
Authority: RS
Inventors: Olivier COURTIN; Patrick FAUVEAU; Astrid Markus; Dominique MELON MANGUER; Jean-Marc MICHEL; Laurent SCHIO
Original assignee: Aventis Pharma,
Priority date: 1997-12-10
Filing date: 1998-12-09
Publication date: 2008-08-07
Also published as: SK286916B6; NZ504614A; IL172412A; PE130099A1; JP2001525421A; AP1260A; HRP20000384B1; AU755033B2; AP1567A; CZ301919B6; GEP20032975B; JP4361679B2; PT1036090E; TR200001655T2; YU33900A; PL196889B1; KR20010032924A; MA26575A1; DE69834057D1; TNSN98222A1

Description

Predmetni pronalazak se odnosi na nove derivate ehinokadnina, na postupak za njihovo dobijanje i na njihovu primenu kao antifungicida.

Zahtevi patanta EP-A-0736541, EP-A-0561639, GB-A-2241955, WO9608267, W09613272, i W09622784 se odnose na derivate cikloheksapeptida koji pokazuju antifugicidnu aktivnost.

Pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), u svim mogućim izomernim oblicima kao i njihovim jedinjenjima

gde su:

ili Ri i R2 identični ili različiti jedan od drugog, a predstavljaju atom vodonika, hidroksil radikal, alkil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika, normalnog, račvastog ili cikličnog niza, po potrebi prekinut sa jednim atoma kiseonika koji je po potrebi supstituisan jednim atomom halogena, OH radikal,

gde su a i b identični ili različiti jedan u odnosu na drugi,

predstavljaju atom vodonika ili alkil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika, a i b po potrebi mogu da sa atomom azota da formiraju heterocikl koji po potrebi sadrži jedan ili više heteroatoma,

ili RJ formira dvostruku vezu sa endocikličnim atomom ugljenika koji nosi

i R2 predstavlja XRaradikal, gde X predstavlja atom kiseonika ili NH ili N-alkil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika i Rapredstavlja atom vodonika, linearan, račvast ili cikličan alkil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika koji je po potrebi supstituisan jednim ili više atoma halogena, jednim ili više radikala OH, CO2H C02alc radikalima, gde a' i b' predstavljaju atom vodonika, alkil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika, a' i b' mogu da formiraju heterocikl koji sadrži jedan ili više heteroatoma i/ili sa heterociklo koji sadrži jedan ili više heteroatoma, ili R2 predstavlja

gde su đ, e, f i g, atom vodonika ili alkil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika, f i g mogu u drugom slučaju da predstvaljaju acil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika, i e i f takođe mogu da grade prsten koji po potrebi sadrži jedan ili više heteroatoma,

R3 predstavlja atom vodonika, metil ili hidroksil radikal;

R4 predstavlja atom vodonika ili hidroksil radikal

R predstavlja normalan ili račvast ili ciklični lanac koji sadrži do 30 atoma ugljenika, koji po potrebi sadrži jedan ili više heteroatoma, jedan ili više heterocikala ili normalan, račvast ili ciklični acil radikal, koji sadrži do 30 atoma ugljenika i koji po potrebi sadrži jedan ili više heteroatoma i/ili jedan ili više heterocikla,

T predstavlja atom vodonika, metil radikal, CH2CONH2, CH2C=N radikal, (CH2)2NH2ili (CH2)2Nalc2<+>X" radikal, X je atom halogena, a aleje radikal alkil koji sadrži do 8 atoma ugljenika,

Y predstavlja atom vodonika, hidroskilni radikal ili atom halogena ili OSO3H radikal ili jednu od soli ovog radikala,

W predstavlja atom vodonika ili OH radikal,

Z predstavlja atom vodonika ili metil radikal,

kao i adicione soli kiselina proizvoda formule I.

Od adicionih soli kiselina, mogu se navesti soli dobijene sa mineralnim kiselinama, kao što je hlorovodonična, bromovodonična, sumporna ili fosforna kiselina ili sa organskim kiselinama takvim kao što su mravlja, sirćetna, trifluorsirćetna, propionska, benzojeva, maleinska, fumarna, ćilibarna, vinska, limunska, oksalna, glioksilna, asparaginska kiselina, alkansulfonske kisline, kao što je metan ili etan sulfonske kiseline, arilsulfonske kiseline, kao što je benezen ili paratoluensulfonska kiselina.

U definicijama supstituenata,

- alkil, alkenil ili alkinil radikal je poželjno metil, etil, propil, izopropil, n-butil, izobutil, terbutil, decil ili dodecil, vinil, alil, etinil, propinil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil radikal,

- halogen je poželjno fluor ili hlor ili brom.

- aril radikal je poželjno fenil radikal,

- heterociklični radikal je poželjno pirolil, pirolidinil, piridil, pirazinil, pirimidil, piperidinil, piperazinil, hinuklidinil, oksazolil, izooksazolil, morfolinil, inđolil, imidazolil, benzimidazolil, triazolil, tiazolil, azetidinil, aziridinil radikal.

Kao so SO3H radikala, mogu da se navedu soli natrijuma, kalijuma kao i soli amina. Među preferentna jedinjenja pronalaska, mogu se posebno navesti

- jedinjenja formule I, u kojoj T predstavlja atom vodonika,

jedinjenja formule I, u kojoj Y predstavlja atom vodonika,

- jedinjenja formule I, u kojoj W predstavlja atom vodonika,

- jedinjenja formule I, u kojoj Z predstavlja metil radikal,

- jedinjenja formule 1, u kojoj R3 predstavlja metil radikal,

- jedinjenja formule I, u kojoj R4 predstavlja hidroksil radikal,

- jedinjenja formule I, u kojoj R predstavlja radikal:

a posebno ona u kojima R predstavlja lanac ili ona u kojima R predstavlja lanac jedinjenja formule (I) u kojoj Rl gradi dvostruku vezu sa endocikličnim ugljenikom za koji je vezan NRlR2radikal, i uglavnom ona u kojima R2 predstavlja radikal gde n predstvalja celi broj od 1 do 8,a posebno ona u kojima n predstavlja broj 2, a Y' predstavlja atom vodonika ili alkil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika i ona u kojima R2 predstavlja

Pronalazak dalje ima za predmet jedinjenja formule (I) u kojoj R2 predstavlja:

(CH2)PNY2" radikal

gde Y" predstavlja atom vodonika ili alkil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika i p

predstavlja broj koji varira od 1 do 8, a posebno jedinjenja u kojima p predstavlja broj 2.

Pronalazak takođe obuvhata jedinjenja u kojima Ri predstavlja atom vodonika.

Među poželjna jedinjenja pronalaska, mogu se navesti proizvodi iz primera 8, 9,11, 13 i 14.

Jedinjenja formule (I) poseduju interesantne antifungicidne osobine; ova jedinjenja su uglavnom aktivna naCandida alhicansi druge kandide kao što suCandida glabrata, krusei,

tropicalis, pseudotropicalis, parapsilosis i Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus,

Crvptoccus neoformans.

Jedinjenja formule (I) mogu da se koriste kao lekovi za ljude ili životinje, za borbu uglavnom protiv digestivnih, urinarnih, vaginalnih ili kožnih kandidoza, kriptokokoza, na primer, na neuromeninglane, pulmonarne ili kožne kriptokokoze, bronhopulmonarne i pulmoname aspergiloze i aspergiloza invazivnih imunodefieijencija.

Jedinjenja pronalaska mogu da se koriste i u prevenciji mikoznih manifestacija kod ljudi sa urođenim ili stečenim bolestima nedostatka imuniteta (imunodeficijencijama).

Jedinjenja pronalaska nisu ograničena na farmaceutsku primenu, ona mogu takođe da se koristi kao fungicidi i u drugim domenima pored farmacije.

Pronalazak takođe opisuje, kao antifungicidna jedinjenja, jedinjenja formule (I) kao i njihove adicione soli kiselina.

Pronalazak opisuje i jedinjenja formule (I) kao lekove.

Pronalazak se odnosi i na farmaceutske preparate koji kao aktivni princip sadrže bar jedno jedi nj enje formule (I) ili jednu od njegovih adicionih soli faramcauetski prihvatljivih kiselina.

Ovi preparati se mogu administrirati oralnim, rektalnim, parenteralnim putem ili lokalnom topikalnom ađmisnitracijom na kožu i sluzokožu, a preferentan načinje oralna administracjia.

Ova jedinjenja mogu da budu čvrsta ili tečna i prisutna u farmaceutskim oblicima koji se trentutno koriste u humanoj medicini, kao na primer, tablete ili dražeje, granule, supozitorije, preparati koji se mogu injektirati, pomade, kremovi, gelovi; mogu se dobiti prema uobičajenim postupcima. Aktivni principi mogu da budu ugrađeni u ekscipijense koji se uobičajeno koriste u ovim farmaceutskim preparatima, kao što su talk, gumi arabika, laktoza, škrob, magnezijum stearat, kakao buter, vodeni ili nevodeni medijumi, masti životinjskog ili biljnog porekla, derivati parafina, glikol, razblaživači, reagensi za dispergovanje ili emulgovanje, konzervansi.

Ovi preparati mogu takođe da budu u obliku praha koji je namenjen za rastvaranje neposredno pre primene u odgovarajućem medijumu, na primer u sterilnoj vodi bez pirogena.

Doza koja se administrira varira zavisno od stanja koje se tretira, uzročnika koji je u pitanju, načina primene i razmatranog proizvoda. Za proizvode iz primera 8,9, 11,13 i 14, doza može da, na primer, iznosi od 50 mg do 300 mg na dan oralno administriranih odraslima.

Pronalazak takođe za objekat ima postupak za dobijanje jedinjenja formule I, koji je okarakterisan time što jedmjenje formule (II)

gde R, R3, R4. T. W, Y i Z zadržavaju svoja predhodno data značenja, reaguju sa aminom ili derivatima amina koji je podesan za uvođenje

gde Rl i R2 zadržavaju svoja predhodno data značenja i po potrebi reaguje sa agensom za redukciju i/ili agensom za funkcionalizaciju amina,

i/ili kiselinama za građenje soli đobijenog proizvoda,

i/ili agensima za razdvajanje različitih izomera radi đobijanja traženog jedinjenja formule I

gde Rl,R2TWYRiZ zadržavaju svoja prethodno data značenja u svim mogućim izomemim oblicima kao i njihovim jedinjenjima i/ili u obliku soli sa kiselinama.

Jedinjenja formule (II) koja se koriste kao polazna jedinjenja u procesima predmetnog pronalaska su novi proizvodi i kao takvi takođe deo predmetnog pronalaska, njihovo dobijanje je shematski opisano na sledeći način:

Može da se upotrebi ISi-(CH3)3ili druga Lewis-ova kiselina.

U eksperimentalnom delu je dat detaljan primer odbijanja jedinjenja formule (II) i predmetni pronalazak se posebno odnosi na novi hemijski proizvod l-[4-okso-N2-(12-metil-1-oksotetradecil) L-ornitin] 4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin}-5-L-serin ehinokandin B.

Proizvod (IV) koji odgovara polaznom proizvodu preparata 1 je poznat proizvod opisan u u evropskom patentu 438813.

Primeri koji slede ilustruju pronalazak bez ikakvog ograničavanja.

Pronalazak takođe obuhvata postupak za dobijanje, koji je okaraterisan time Što jedinjenje formule (III)

u kojoj različiti supstituenti zadržavaju svoja predhodna značenja, reaguje sa agensom koji može da zamcni NH2sa NHR, gde R zadržava prethodno dato značenje pri čemu se dobij a jedinjenje formule (IV)

gde različiti supstituenti zadržavaju svoja predhodno data značenja, i koje se podvrgava dejstvu trimetil silil jodida pri čemu se dobijan jedinjenje formule (II).

Preparat1:l-[N2-(12-metil-l-oksotetradecil)-4-okso-L-ornitin] 4-[4-(4-hidroksifenil)- L-treonin|-5-L-serin ehinokandin B

U 25 ml acetonitrila uvodi se, uz mešanje na magnetnoj mešalici i u atmosferi azota, 1 g 1 -[(4R, 5R)-4,5-dihidroksi-N2-( 12-metil-l-oksotetradecil)-L-ornitin] 4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandina B. Doda se 455 ul trimetilsilil jodida. Zagreva se 40 minuta na 55°C. Hidrolizuje se dodatkom 3% rastvora natrijum tiosulfata. Posle 10 minuta mešanja, upari se do suva pod sniženim pritiskom i prečisti hromatografijom na slilicijum dioskidu. Dobija se 62% traženog proizvoda.

CCM: Rf = 0,25 (eluent: CH2C12- MeOH - H20 86-13-1).

Primer 1:Trifluoroacetat 1~l4-amino-N2-( 12-metil-l -oksotetradecil)-L-ornitin] 4-[4-(4-hidroksifeniI)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandina B (izomer B).

Uvodi se 50 mg proizvoda iz preparata 1 u 2,5 ml metanola u prisustvu aktiviranog molekulskog sita 4A. Na 20°C doda se 158 mg amonijum acetata. Dobijeni rastvor se zagreje na 50°C i doda se 5,5 mg NaBHjCN. Meša se 3 sata i 15 minuta, doda se 1 ml destilovane vode i ratsvor se koncentruje do suva. Dobija se 166 mg proizvoda koji se dalje prečišćava pomoću HPLC (Os) uz eluiranje sa smešom CH3CN - H20 - TFA (50 - 50 -0,02). Dobija se 17 mg traženog proizvoda. MH<+>= 975.

Primer2: Trifluoroacetat 1 -|4-|2-dimetilaminoetil-amino-N2-( 12-metiI-l - oksotetradeciI)-L-ornitin] 4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandina B (izomeri A i B).

Na 20°C, uvodi se 80 mg proizvoda iz preparata 1 u rastvor koji sadrži I ml metanola, 160 ul 2-đimetil-aminoetilamina, 8 ml rastvora IM hlorovodonične kiseline u metanolu u prisustvu molekulskog sita 4A. Doda se 35 mg natrijum cijanoborohidrida i meša 20 sati na 20°C. Profiltrira se, ispere u metanolu i koncentruje do suva. Dobija se 325 mg proizvoda koji se prečišćava pomoću HPLC (C,8) (eluent CH3CN - H20 - TFA (45 - 55 -0,02) zatim CH,CN - HaO - TFA 42 - 58~- 0,02). Dobija se 8,1 mg traženog izomera A proizvoda i 9,4 mg traženog izomera B proizvoda.

Maseni spektar:

MH+- 1046

MNa+ = 1068.

Primer 3: Trifluoroacetatl-[4-[(3-aminopropil)amino| -N2-(I2-metii-l-oksotetradecil)-L-ornitin] 4-(4-(4-hidroksifenil)-L-treonin|-5-L-serin ehinokandina B (A i B izomeri).

Na 0°C uvodi se 30 cm<3>rastvor IM hlorovodonične kiseline u metanolu u rastvor koji sadrži 200 mg prozvoda iz preparata 1,2 ml metanola i 300 ul diaminopropana. Meša se 15 minuta na 0°C i doda se 84 mg 95% natrijum cijanoborohidrida. Ostavi se 6 sati na sobnoj temperaturi uz mešanje 1 osuši pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se suspenduje u acetonitrilu, procedi se i osuši se pod sniženim prtiskom. Dobija se 312 mg proizvoda koji se prečišćava pomoću HPLC -a (d«) (eluent CH3CN - H20 - TFA (45 -55 - 0,02) i dobija se 15mg izomera A i 10 mg izomera B.

Maseni spektar: MH<+>= 1032.

Primer 4: (Z + E) Triflaoroacetatl-|4-l(4,5-dihidro-IH-imidazol-2-iI)hidra2ono|- N2-(12-metil-l -oksotetradecil)-L-ornitin] 4-|4-(4-hidroksifenil)-l,-trconinj-5-L-serin ehinokandina B

350 mg proizvoda iz preparata 1, 12 ml metanola i 130 mg 2-hidrazino-2-imidazolin

hidrobromida se refluksuje, uz mešanje, dva sata. Posle uparavanja do suva, dobija se 510 mg proizvoda koji se prečišćava hromatografijom na silicijum dioskidu uz eluiranje sa smešom CH2C12- MeOH - H20 (86 - 13 - 1), a zatim semi-preparativnom HPLC-om (Cis) uz eluiranje sa smešom CH3CN - H20 - TFA (55 - 45 - 0,02). Tako se dobija 133 mg traženog proizvoda.

Maseni spektar:

MH<+>= 1056

MNa<+>= 1078.

Primer5;(Z)l-[4-[(2-dihidroksietoksi)imino]- N2-(12-metiM-oksotetradeciI)-L-ornitin] 4-[4-(4-hidroksifeniI)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandina B i odgovarajućiE

izomer

Smeša 36 mg 0-(2-hidroksietil) hidroksilamina, 5 ml etanola, 12 ul piridina, 4 ul čiste sirćetne kiseline i 150 mg proizvoda iz preparata 1 se refulksuje 4 sata, uz mešanje. Dobija se 205 mg proizvoda koji se prečišćava hromatografijom na silicijum dioksidu uz eluiranje sa smešom metilen hlorid - metanol - voda (86 -13 -1). Izoluju se dva proizvoda Rf=0,2 i Rf = 0,25 (izomer E i izomer E).

Maseni spektar:

MHM033

MNa+= 1055.

Primer6: (E)l-[4-(dihidroksiimino)- N2-(12-metil-l-oksotetradecil)-L-ornitin] 4-14-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandina B i odgovarajućiZ izomer

Smeša koja sadrži 200 mg proizvoda iz preparata 1, 8 ml etanola, 36 mg hidroksilamin hidrohlorida se refluksuje l sat, uz mešanje. Osuši se i prečisti hromatografisanjem HPLC-om (C,8) (eluent CH3CN - H20 60 - 40). Dobija se 60 mg izomera E.

Maseni spektar:

MH<+>= 989

MNa<+=>1011

Primer7: Trifluoroacetatl-(4-(hidroksiamino]-N2-(12-metil-l-oksotetradeeil)-L-ornitinj 4-[4-(4-hidroksifeniI)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandina B (izomer A i izomer

B)

70 mg smeše oksima E + Z dobijene u predhodnom primeru, 1 cm<3>trifluorosirćetne kiseline, 12 mg 95% natrijum cijanoborohidrida se refluksuje 3 sata, uz mešanje. Osuši se pod sniženim pritiskom. Prečišćava se pomoću HPLC -a (Cig). Dobijaju se traženi proizvodi. Maseni spektar: MH' = 991

Primer 8: (Z) hlorhidrat H(S)- N2-(12-metil-l-oksotetradecil) 4-[[(3-piperidiniI)oksi|-imino]-L-ornitin] 4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-S-L-serin ehinokandina B

Stu panj A:

146 mg proizvoda preparata 1 i 60 ul sirćetne kiseline se doda u rastvor koji sadrži 45mg fenilmetil R-3-(aminooksi)-l-piperidin karboksilata i 2 ml metanola. Meša se dva sata na sobnoj temperaturi. Rastvor se koncentruje, prečišćava hromatografijom na silicijum dioksidu uz eluiranje sa smešom metilen hlorid - metanol (98 - 2). Tako se dobija traženi proizvod.

Maseni spektar:

MH<+=>1206

MNa' - 1228.

Stupanj B:

Smeša koja sadrži 61 mg proizvoda koji je dobijen u stupnju A, 20 mg paladijuma na ugljeniku i 1 ml sirćetne kiseline se u atmosferi vodonika jako se meša pet sata. Profiltrira se i koncentruje. Tako se dobija 65% traženog proizvoda.

Maseni spektar

MH<+>= 1072.

Primer9: Trifluoroacetat 1 -[4-[(2-aminoetil)amino]-N2-( 12-metil-l - oksotetradecil)-L-ornitin] 4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandina B

(izomer A i izomer B)

U rastvor 300 mg proizvoda iz preparata 1 u 6 ml metanola u prisustvu 375 ul etilendiamina se doda 63 ml rastvora 1 M hlorovodonične kiseline u metanolu. Posle 15 minuta mešanja, doda se 126 mg natrijum cijanoborohidrida (NaBH3CN). Reakcioni medijum se mešanja 5 sati. Profiltrira se i osuši, proizvodi se tada prečiste pomoću HPLC-a (Cjg) eluiranjem sa smešom CH3CN - H2O - TFA (40 - 60 - 0,02). Tako se dobijaju traženi proizvodi.

Maseni spektar:

MHM018

MNa+= 1040.

Primer 10: (E) l-[4-[(2-bromoetoksi)imino)-N2-(12-metiI-l-oksotetradecil)-L-ornitin] 4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonm]-5-L-serin ehinokandina B i odgovarajući Z izomer

Doda se 402 mg bromo-2-etoksiamin bromhidrata u rastvor koji sadrži 710 g proizvoda iz preparata 1 i 28 ml apsolutnog metanola. Smeša je refulksovana 55 minuta. Koncentruje se pod sniženim pritiskom. Očekivani proizvod se prečišćava brzom (flash) hromatografijom na silicijum dioksidu uz eluiranje sa smešom metilen hlorid - metanol (9 - 1). Tako se dobijaju traženi proizvodi izomer A: Rf = 0,54 i izomerB: Rf = 0,47.

Maseni spektar:

MH<+>=1095

MNa* = 1117.

Primer 11: (±) trifluoroacetat l-(4-[(aminoimmometil)hidrazonoJ-N2-(12-metiI-l-oksotetradecil)-L-ornitin) 4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandina B

Doda se 162 mg aminogvanidin hidrohlorida u rastvor koji sadrži 260 g proizvoda iz preparata 1 i 10 ml n-butanola. Reakciona smeša refluksuje 2 sata 30 minuta. Koncentruje se pod sniženim pritiskom. Dobijeni proizvod se prečišćava pomoću semi-preparativne HPLC. Dobija se 225 mg proizvoda kao smeša izomera 50/50.

Primer12: (Z) Trifluoroacetat 1 -[4-[[2-(dimetilamino)etoksiiminoJ-N2-( 12-metiI-l - oksotetradecil)-L-ornitin] 4-[4-(4-hidroksifeniI)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandina B i odgovarajući E izomer

80,5 mg proizvoda iz primera 10 se doda u 32 ml etanolnog rastvora dimetilamina. Reakciona sredina se održava na refuksu 45 minuta. Koncentruje se. Dobijeni proizvod se prečišćava HPLC -om (C!8) (CH3CN - H20 - TFA 60 - 40 - 0,02). Tako se dobijaju traženi proizvodi.

Maseni spektar:

MH<+>= 1060.

Primer 13: (E) trifluoroacetatl-(4-[(aminoetoksi)imino]-N2-(12-metoksotetradecil)-L-ornitin] 4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandina B i odgovarajući Z izomer

U amonijak se doda 50 mg proizvoda iz primera 10. Meša se pod sniženim pritiskom 16 sati i ostavi se dostigne sobnu temperaturu. Reakcioni medijum se doda u smešu CH3CN - H20 (45 - 55) radi prečišćavanja HPLC-om (Cig). Tako se dobijaju traženi proizvodi. Maseni spektar: MH<+=>1032.

Preparat 2: "nukleus" dezoksimulundokandin

Rastvori se 2 g dezoksimulundokandina u 20 ml DMSO-a. Ovaj ratsvor se sipa u suspenziju koja sadrži 120 g FH2264 Utahensis actinoplanes u 870 ml KH2PO4, pufer K2IIPO4 (pH:6,8). Reakciona smeša se meša 70 sati na 30°C. Profiltrira se. Micelijum se ispere fosfatnim puferom (pH: 6,8). Kombinuju se tečnosti od ispiranja i filtrat. Dobijeni proizvod se hromatografiše na Diaion HP 20 smoli i dobija se proizvod koji se kasnije koristi kao takav.

Primer14: Trifluoroacetat l-l4-[(2-aminoetil)amino]-N2-[l4'-(oktiIoksi)[l,l '-bifenil]-4-il]-karbonil] -L-ornitin] -4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin] -5-L-serin ehinokandina B

(izomer A)

Stupanj A: 1 -[(4R, 5R)-4,5-dihidroksi-N2-[[4'-(oktiloksi) [1 ,l'-bifenil]-4-il] karbonil]-L-ornitin]-4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serinehinokandin B

1. Dobijanje estra

632 mg 2,3,4,5,6 pentafluorofenola u 695 mg N,N'-dicikloheksilkarbodiimida se doda u 1 g 4'-oktiloksi-[l,r-bifenil] 4-karboksilne kiseline u 22 ml tetrahidrofurana, meša se 22 sata na sobnoj temperaturi, profiltrira se, rastvarači se uklone pod sniženim pritiskom, ostatku se doda etar, meša na oko 35°C, profiltrira se, rastvarač upari, osuši i dobija se 1,46 g očekivanog proizvoda koji se kao takav koristi. 2. Kuplovanje 677 mg "nukleusa" dezoksimulundokandina koji je dobijen u preparatu 2 se doda u 16 ml DMF-a. Dobijeni rastvor se mesa pet minuta i doda se 793 mg 4'-(oktiloksi) -[1,1 '-bifenil]-4- pentafluorofenil karboksilata koji je prethodno dobijen.

Reakciona smeša se 24 sata meša i odražava u atmosferi azota. Profiltrira se i koncentruje. Ostatku se doda etar, spraši se, meša 25 minuta, procedi se, ispere u etil etru, hromatografiše na silicijum dioksidu uz eluiranje sa smešom metilen hlorida, metanola, vode (86/13/1) zatim (80/20/1). Tako se dobija traženi proizvod. Prinos 73%.

Stupanj B: l-[N2-[[4'-(oktiloksi) [1,1' -bifenil] -4-il]karbonil] -L-okso-L-ornitin] -4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandin B

311 ul trimetilsilil jodida se doda u suspenziju koja sadrži 809 mg proizvoda iz stupnja A i 19 mi acetonitrila. Reakciona smeša se mešal5 minuta na 60°C pod atmosferom azota. Smeša se sipa u zasićen rastvor natrijum tiosulfata. Upari se i hromatografiše se na silicijum dioksidu dobijeni ostatak se eluira sa smešom metilen hlorid -metanol - voda 86-13-1. Dobija se traženi proizvod. Prinos 55%.

Stupanj C: Trifluoroacetatl-[4 [(2-aminoetil)amino]-N2-[[4 '-(oktiloksi) [1,1<*->bifenil]-4-il] karbonil]-L-ornitin]-4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandin B (izomer A)

560 ul sirćetne kiseline se doda u rastvor koji sadrži 900 mg priozvoda iz predhodnog stupnja, 16 ml metanola i 250 ul diamin etilena, meša se 15 minuta i doda 64 mg natrijum

ciajnoborohidrida. Meša se 18 sati. Profiltrira se i koncentruje se. Ostatku se doda minimalna količina vode, spraši se, procedi se i prečišćava se preparativnom HPLC uz eliuranje sa smešom CH3CN / H20 / TFA (55 - 45 - 0,2). Tako se dobija traženi proizvod. Prinos 26%. NMR CDCl3spektar

9,07 (m, velika) IH; 8.48 (dl, J = 8) IH; 8.00 (dl, J - 8) 2H; 7.96 (dl, J = 8.5) 2H; 7.71 (dl, J - 8.5) 2H; 7.64 (dl, J = 8.5) 2H; 7.60 (dl, J = 9) IH; 7.37 (dl, J = 9,5) IH; 7.02 (dl, J = 8.5) 2H; 6.97 (dl, J = 8.5) 2H; 6.65 (dl, J = 8.5) 2H; 4.90 (m) IH; 4.77 (m) IH; 4.66 (m) IH; 4.45 (m); IH; 4.42 (m) IH; 4.39 (m) IH; 4.34 (si) IH; 4.26 (m) IH; 4.22 (m) IH; 4.08 (m) IH; 4.01 (t, J - 6.5) 2H; 3.88 (m) 3H; 3.70 (m) 2H; 3.51 (m) 2H; 3.48 (m) IH; 3.31 (m) 2H; 3.28 (m) IH; 3.16 (m) 2H; 2.53 (dd, J = 6 i 13.5) IH; 2.44 (dd, J = 7.5 i 13.5) IH; 2.27 (m) IH; 2.25 (m) lH;2.15(m)2H; 1.94 (m) IH; 1.74 (m)2H; 1.44 (m)2H; 1.22 do 1.40 (m) 8H; 1.13 (d, J=6) 3H; 0.99 (d, J=6.5) 3H; 0,88 (t, J -7) 3H.

Primer 15:l-[4-|(aminoiminometiI) hidrano] -N2-[(4-J4-[4-(pentiIoksi)-feniljpiperazinil] -fenil|karbonil)-L-ornitin]-4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin)-5-L-serin

ehinokandin B

Stupanj A: 1 -[(4R, 5RJ-4,5-dihtdroksi-N2-[[4-[4-[4-(pentiloksi)-fenil]-l-piperazinil]fenil]-karbonil]-L- ornitin] -4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin] -5-L-serin ehinokandin B

1. Dobijanje estra

55 mg pentafluorofenola se doda i 61 mg N.N'-đicikloheksil karbodiimida u smešu 100 mg 4-[4-[4-[4-(pentiloksi)fenil]-l-piperazinil]fenil] karboksilne kiseline i 3 ml tetrahidrofurana. Reakciona smeša se meša 16 sati na 20°C, profiltrira, ispere u THF i koncentruje se do suva. Osatatku se doda dietil etar, profiltrira se i koncentruje. Tako se dobija 71 mg proizvoda.

2-Kuplovanje

Suspenzija koja sadrži 71 mg estra prethodno dobijen, 70 mg "nukleusa" dezoksimulundokandina dobijen u preparatu 2, 2,5 ml DMF u prisustvu aktiviranog molekulskog sita 4A se meša na 20°C preko noći. Koncentruje se, dobijenom proizvodu se doda etar i profiltrira. Dobija se proizvod koji se hromatografiše na silicijum dioskidu uz eluiranje sa smešom acetonitril - voda - trifluorosirćetna kiselina (60 - 40 - 0,02). Tako se

dobija 30 mg traženog proizvoda.

Stupanj B: l-[N2-[[4-[4-[4-(pentiloksi)fenil]-l-piperazinil]fenil]-karbonil] 4-okso-L-ornitin] -4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin] -5-L-serin ehinokandin B

1- Dobijanje estra

Na 55°C zagreva se smeša 1 g proizvoda iz stupnja A, 25 ml acetonitrila, u prisustvu aktiviranog molekulskog sita 4A. Doda se 430 ml trimetilsilan jodida. Meša se 45 minuta, posle čega se doda 150 ul 30% vodenog rastvora natrijum tiosulfata. Meša se 40 minuta na 20°C i koncentruje. Ostatak se ekstrahuje vodom, meša se 1 sat na 20°C, procedi i ispere. Dobija se proizvod koji se hromatografiše na silicijum dioskidu uz eluiranje sa smešom metilen hlorid - metanol -voda (86 - 13- 1). Dobija se 497 mg traženog proizvoda. Prinos iznosi 42%.

Stupanj C: 1 -[4 [(aminoiminometil)hidrazono]-N2-[[4-[4-[4-(pentiloksi)-fenil]-l - piperazinil] -fenilj-karbonil] -L-omitin] -4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin] -5-L-serin-ehinokandin B

Na 130°C, 3 sata se zagreva suspenzija koja sadrži 400 mg proizvoda iz stupnja B, 4,8ml n-butanola i 221 mg aminogvanidin hidrohlorida. Koncentruje se i dobija se 705 mg proizvoda koji se prečišćava hromatografijom na silicijum dioskidu uz eluiranje sa smešom metilen hlorid - metanol 85-15, a zatim pomoću semi-preparativne HPLC (kromasil Cl 8) sa smešom acetonitril-voda-trifluorosirćetna kiselina (40 - 60 - 0,02). Tako se dobija 64 mg traženog proizvoda.

RMN CDCljspektar

10.75 (s) 0,66H; 10.45 (s) 0,33H; 8.39 (d, J - 8) 0.33H; 8.34 (m) IH; 8.10 (d, J = 7.5) 0.66H; 8.08 (d, J - 8) 0.33H; 7.79 (d, J = 8.5) 0.66H; 7.74 (d, J = 8.5) 1.33H; 7.71 (d, J = 8.5) 0.66H; 7.60 (d, J = 8,5) 0.66H; 7.50 (m) 1.33H; 7.00 (m) 6H; 6.86 (d, J = 8.5) 2H; 6.65 (d, J = 8) 2H; 5.08 (dt, J - 2 i 11.5) 0.66H; 4.94 (m) IH; 4.88 (m) 0.33H; 4.75 (dm, J =8) 0.33H; 4.67 (dd, J = 3 i 7.5) 0.66H; 4.43 (m) IH; 4.38 (m) 1.66H; 4.33 (m) 0.66H; 4.26 do 4.20 (masivna)

2.33H; 4.12 (d, J = 9) 0.66H; 4.00 do 3.68 (masivna) 7.33H; 3.90 (t, J = 7) 2H; 3.62 (d, J=12) 0.33H; 3.43 (si) 2H; 3.30 do 3.20 (m) IH; 3.20 (si) 2H; 2.91 (d, J = 14) 0.66H; 2.86 (m) 0.33H; 2.76 (m) 0.33H; 2.63 (dd, J - 14 i 12.5) 0.66H; 2.52 (dt, J = 6 i 13) IH; 2.44 (dd, J = 8 i 13) IH; 2.35 (m) 0.33H; 2.25 (m) 1.66H; 1.93 (t velika, J -13) IH; 1.69 (m) 2H; 1.42 do

1.30 (masivna) 4H; 1.15 (d, J=6) 1.98H; 1.10 (d, J=6) 0.99H; 0.98(d, J = 6.5) 3H; 0,90 (t, J = 7)3H.

Primer 16:l-[4-|(2-aminoetiI)amino)-N2-l4-|4"-(pentiloksi)[l.l':4'l" -terfenilJ-4-iIJ-

karbonil] -L-ornitin] -4-[4-(4-hidroksifeniI)-L-treonin]-5-L-serinehinokandin B(izomer A i izomer B)

Radi se kao što je predhodno dato, polazeći od "nukleusa" dezoksimulundokandina koji je dobijen kao što je naznačeno u preparatu 2 i koji je dobijen kao intermedijerni proizvod 1-[(4R, 5R)-4,5-dihidroksi-N2-[[4"-(pentiloksi) [1,1<*>: 4',1 "-terfenilj-4-il]karbonil]-L-ornitin]-4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serin-ehinokandin B i odgovarajući 4-okso derivat, radi dobijanja traženog proizvoda.

NMR spektar CDClj

9,00 (velika) IH; 8.37 (dl, J = 8.5) IH; 8.28 (m) IH; 8.10 (dl, J - 6) IH; 8.02 (dl, J = 8) 2H; 7.82 (m) 4H; 7.73 (dl, J = 8) 2H; 7.66 (dl, J - 8) 2H; 7.38 (dl, J = 9) IH; 7.32 (dl, J = 9) IH; 7.03 (dl, J = 8.5) 2H; 6.96 (dl, J = 8.5) 2H; 6.66 (dl, J = 8) 2H; 5.03 (m) IH; 4.84 (m) IH; 4.67 (m) IH; 4.45 (m) 2H; 4.36 (dd, J = 7.5 i 10.5) IH; 4.23 (m) 12; 4.18 (si) IH; 4.04 (m) IH; 4.04 (m) IH; 4.02 (t, J = 6.5) 2H; 4.00 (m) IH; 3.87 (dl, J = 9.5) IH; 376 (m) IH; 3.72 (m) 2H; 3.55 (m) IH; 3.44 (m) IH; 3.35 (m) 2H; 3.3 (m) IH; 3.19 (m) 2H; 3.12 (m) IH; 2.53 (m) IH; 2.45 (m) IH; 2.12 do 2.30 (m) 3H; 1.90 do 2.05 (m) 2H; 1.74 (m) 2H; 1.30 do 1.55 (m) 4H; 1.20 (d, J = 5.5) 3H; 0.96 (d, J = 6.5) 3H; 0.91 (t, 1=1) 3H.

PRIMER: Farmaceutski preparat

Pripremljene se tablete koje obuhvataju:

(Detalj koji se odnosi na ekscipijens: škrob, talk, magnezijum stearat).

FARMAKOLOŠKOISPITIVANJE

A. - Inhibicija glukanske sintazeCandida albicans- n

Prečiste se membraneCandida albicans- aprema postupku koji su opisali Tang et al. Antimicrob. Agents Chemother 35,99-103, 1991. 22,5 ug membranskih proteina je inkubirano u smeši 2 Mm 14C-UDP glukoze (specifična aktivnost = 0,34 mCi/mmol), 50 pg a-amilaze, 1 mM ditiotreitola(DTT), l mM EDTA, 100 raM NaF,7 pM GTP-y-S, IM saharoze i 50 mM Tris - HCl (pH 7,8) u zapremini od 100 ul. Medijum je inkubiran jedan sat na 25°C i reakcija je završena dodatkom TCA pri krajnjoj koncentraciji od 5%. Reakciona smeša je preneta na filter od staklenih vlakana koji je predhodno nakvašen. Filter je ispran, osušen i imerena mu je radioaktivnost.

Mulundokandin je korišćen kao pozitivna kontrola.

Kontrola za medijum je tretirana sa istom količinom 1%. DMSO.

Ddbijeni rezultati pokazuju da proizvodi pronalaska pokazuju u ovom testu dobru aktivnost i to posebno proizvodi iz primera 9,11 i 14.

B. Aktivnost enzimaAspergillus fumigatus

Enzim je pripremljen prema postupku koji su dali Beaulieu et al. (Antimicrob. Agensts Chenother 38, 937 - 944, 1994.

Protokol koji je korišćen je identičan onom koji je prethodno opisan za enzimCandida Albicanssa izuzetkom što nije korišćen ditiotreitol u reakcionoj smeši.

Proizvodi u ovom testu pokazuju dobru aktivnost.

Claims

1. Jedinjenja formule (I) u svim mogućim izomemim oblicima kao i njihove smeše, gde su: -ili RI i R2 identični ili različiti, predstavljaju atom vodonika, hidroksil radikal, normalani, račvasti ili ciklični alkil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika, po potrebi prekinut atomom kiseonika koji je po potrebi supstituisan atomom halogena, OH radikal, gde a i b su identični ili različiti, predstavljaju atom vodonika ili alkil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika, a i b mogu po potrebi da grade sa atomom azota heterocikl koji po potrebi sadrži jedan ili više heteroatoma, -ili Rl gradi dvostruku vezu sa endocikličnim atomom ugljenika za koji je vezan ili R2 predstavlja XR„ radikal, gde X predstavlja atom kiseonika ili NH ili N-alkil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika i Rapredstavlja atom vodonika, linearan, račvast ili cikličan alkil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika koji je po potrebi supstituisan jednim ili više atoma halogena, jednim ili više OH, CO2H, COialc radikala, radikalom, gde a' i b' predstavljaju atom vodonika, alkil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika, a' i b' mogu da grade heterocikl koji po potrebi sadrži jedan ili više heteroatoma i/ili heterociklom koji sadrži jedan ili više heteroatoma ili R2 predstavlja radikal, gde d, e, f i g predstavljaju atom vodonika ili alkil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika, f i g mogu da predstvaljaju acil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika, i e i f takođe mogu da grade prsten koji sadrži po potrebi jedan ili više heteroatoma, R3 predstavlja atom vodonika, metil ili hidroksil radikal, R4 predstavlja atom vodonika ili hidroksil radikal, R predstavlja normalan ili račvast ili ciklični lanac koji sadrži do 30 atoma ugljenika. koji po potrebi sadrži jedan ili više heteroatoma, jedan ili više heterocikla ili normalan, račvast ili cikličan acil radikal, koji sadrži do 30 atoma ugljenika i koji sadrži po potrebi jedan ili više heteroatoma i/ili jedan ili više heterocikla, T predstavlja atom vodonika, metil radikal, -CH2CONH2radikal, CH2CHN radikal (CFh^NHa ili (CH2)2Nalk2+X" radikal, gde je X, atom halogena, a alk je alkil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika. Y predstavlja atom vodonika, hidroskil radikal ili atom halogena ili -OSO3H radikal ili jednu od soli ovog radikala, W predstavlja atom vodonika ili OH radikal, Z predstavlja atom vodonika ili metil radikal, kao i adicione soli sa kiselinama proizvoda formule I.

2. Jedinjenja formule (I) definisana u zahtevu 1, naznačena time, što T predstavlja atom vodonika,

3. Jedinjenja formule (I) definisana u zahtevu 1 ili 2, naznačena time, što W predstavlja atom vodonika.

4. Jedinjenja formule (I) definisana u nekom od zahteva 1 do 3, naznačena time, što Z predstavlja metil radikal.

5. Jedinjenja formule (I) definisana u nekom od zahteva 1 do 4, naznačena time, što Y predstavlja atom vodonika.

6. Jedinjenja formule (I) definisana u nekom od zahteva l do 5, naznačena time, Što R3 predstavlja metil radikal.

7. Jedinjenja formule (I) definisana u nekom od zahteva 1 do 6, naznačena time, što R4 predstavlja hidroksil radikal.

8. Jedinjenja formule (I) koja su definisana u nekom od zahteva 1 do 7, naznačena time, što R predstavlja:

9. Jedinjenja formule (I) definisana u zahtevu 8, naznačena time, Što R predstavlja lanac

10. Jedinjenja formule (I) definisana u zahtevu 8, naznačena time, što R predstavlja lanac

11. Jedinjenja formule (I) definisana u jednom od zahteva 1 do 10, naznačena time, što Rl gradi dvostruku vezu sa atomom endocikličnog ugljenika koji nosi radikal -NR1R2.

12. Jednjenja formule (I) definisana u zahtevu 11, naznačena time, što R2 predstavlja gde n predstvalja broj od 1 do 8 i Y' predstavlja atom vodonika ili alkil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika.

13. Jedinjenja formule (I) definisana u zahtevu 12, naznačena time, što n predstavlja broj 2.

14. Jedinjenja formule (I) definisana u zahtevu 8, naznačena time, što R2 predstavlja

15. Jedinjenja formule (I) definisana u jednom od zahteva 1 do 10, naznačena time, što R2 predstavlja: gde Y" predstavlja atom vodonika ili alkil radikal koji sadrži do 8 atoma ugljenika, a p predstavlja broj od 1 do 8.

16. Jedinjenja formule (I) definisana u jednom od zahteva 1 do 10, naznačena time, što Rl predstavlja atom vodonika.

17. Jedinjenja formule (I) definisana u zahtevu 15, naznačena time, što p predstavlja broj 2.

18. Jedinjenja formule (I) koja su definisana u zahtevu 1: • 1 [(S)-N2-( 12-metil-1 -oksotetradecil) 4-[[(3-piperidini 1) oksi]-imino]-L-ornitin] 4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandin B, • 1 -[4-[(2-aminoetil) amino]-N2-( 12-metil-1 -oksotetradecil)-L-ornitin] 4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandin B (A izomer i B izomer), • l-[4-[(aminiminomoetil)hidrazono]-N2-(12-metil-l-oksotetradecil)-L-ornitin] 4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandin B, • l-[4-[(2-aminoetoksi)imino]-N2-(l2-metil-l-oksotetradecil)-L-ornitin] 4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandin B i odgovarajući Z izomer. ■ l-[4-[(2-aminoetil) amino]-N2-[[4'-(oktiloksi)[l ,l'-bifenil]-4-il]karbonil]-L- ornitin]-4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandin B (A izomer) kao i njihove adicione soli sa kiselinama.

19. Jedinjenje formule (I) kao što je definisano u zahtevu 1, naznačeno time što su T, W, Y i Rl, atom vodonika, Z i R3 su metil radikal, R2 je -CH2-CH2-NH2 radikal, R4 je hidroksil radikal, a R je grupa kaoi njegove adicione soli sa kiselinama.

20. Postupak za dobijanje jedinjenja formule I, definisana u nekom od zahteva 1 do 18, naznačen time, što jedinjenje formule II gde R, R3, R4, T, W, Y i Z zadržavaju svoja predhodno data značenja, reaguje sa aminom ili derivatom amina koji je podesan za uvođenje gde Rl i R2 zadržavaju svoja predhodno data značenja, i po potrebi reaguje sa agensom za redukciju i/ili agensom za funkcionalizaciju amina, i/ili kiselinom radi dobijanja soli nastalog proizvoda, i/ili agensom za razdvajanje različitih izomera koji su dobijeni, pri čemu se dobija jedinjenje formule 1 gde Rl, R2; T, W, Y, R i Z zadržavaju svoja predhodno data značenja i, po potrebi, jedinjenje formule (I) se reaguje sa kiselinom radi formiranja soli i, po potrebi, dobijeni izomeri se razdvoje.

21. Kao novi hemijski proizvodi, jedinjenja formule (II) definisana u zahtevu 20.

22. Kao nov hemijski proizvod koji je definisan u zahtevu 21, jedinjenja formule (II) i to: • 1 -([4-okso-N2-(l 2-metil-l -oksotetradecil)-L-ornitin]-4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandin B, • 1 -[N2-[[4'-(oktiloksi)-[l, 1 '-bifenil]-4-il]karbonil]-4-okso-L-ornitin]-4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandin B, • 1 -[N2-[[4-[4-[4-(pentiloksi)fenil]-1 -piperazinil]-fenil]karbonil]-4-okso-L-ornitin]-4-[4-(4-hidroksifenil)-L-treonin]-5-L-serin ehinokandin B.

23. Postupak prema zahtevu 20, naznačen time, što jedinjenje formule III čiji supstituenti zadržavaju svoja prethodno data značenja, reaguju sa agensom koji može da zameni -NH2sa NHR, gde R zadržava prethodno značenje, radi dobijanja jedinjenja formule (IV) koje se podvrgava dejstvu trimetilsilil jodida radi dobijanja odgovarajućeg jedinjenja formule (II)

24. Kao antifungicidna jedinjenja, jedinjenja formule I, definisana u jednom od zahteva 1 do 19, kao i njihove adicione soli sa kiselinama.

25. Farmaceutski preparati koji kao lek sadrže bar jedno jedinjenje formule (I) definisano prema jednom od zahteva 1 do 19, kao i njihove adicione soli sa farmaceutski prihvatljivim kiselinama.