RS49962B - Peroralne kompozicije koje kontrolisano oslobađaju levosimendan - Google Patents

Abstract

Kompozicija za kontrolisano oslobađanje, naznačena time, što sadrži a) terapeutski efikasnu količinu levosimendana i b) komponentu koja kontroliše oslobađanje leka za obezbeđivanje oslobađanja levosimendana u toku produženog perioda vremena i stabilnog stanja nivoa u plazmi metabolita (II) od manje od 20 ng/ml, prvenstveno manje od 10 ng/ml Prijava sadrži još 8 zahteva.

Description

TEHNIČKA OBLAST

Ovaj pronalazak se odnosi na peroralne farmaceutske kompozicije koje oslobadjaju levosimendan na kontrolisani način sa smanjenom pojavom nepoželjnih, efekata. Levosimendan, ili (-) T-//4-(1,4,5,6)-tetrah.±drO'-4«-raetil^6*-okso-3-piridazinil> - fenil/hiđrazono/propandinitril, je koristan u tretiranju kongestivnog srSanog udara.

OSNOVA PRONALASKA

Levosimendan, koji je O)-enantiomerU,4,5r6-tetraMdro«4t-roetil-r6.«okso«3«piridazinil) fenil/hiđrazono/- propandinitrila i postupak za njegovo đobijanje su opisani u EP 565546 BI. Levosimendan je snažan u tretiranju srčanog udara i ima značajno od kalcijuma zavisno vezivanje za tropin. Levosimendan je predstavljen formulom:

Hemođinamički efekti levosimendana kod ljudi su opisani u Sunđberg, S.i sarađ., Am.J.Carđiol., 1995; 75: 1061-1066, Farmakokinetika levosimendana kod ljudi posle I.V (intra venskog) i oralnog doziranja levosimendana kod ljudi opisana je u Sanđell, E.-P. išarad, J. Carđiovasc. Pharmacol., 26(Suppl. 1), S57-S62, 1995. Upotreba levodiraen-dana u tretiranju miokardijalne ishemije je opisana u WO 93/21921. Kliničke studije su potvrdile delotvorne efekte levosimendana kod pacijenata sa srčanim udarom.

Pokazalo se da je oralna prlmena levosimendana teška, naročito kada je cilj terapeutski efekat u toku produženog perioda vremena. Prvo, eliminaciono vreme poluraspada levosimendana kod ljudi je kratko, oko 1 sat. Stoga, pri upotrebi:konvencionalnih, oralnih formulacija koje trenutno oslobadjaju levosimendan, one treba da se primenjuju često tokom dana. Drugo, gastrointestinalna absorpcija levosimendana je brza. Stoga kada se upotrebljavaju oralne formulacije koje trenutno oslobadjaju levosimendan, postige se visok maksimum koncentracija levosimendana u plazmi brzo i naglo, tipično u toku 1 sata. Visoke koncentracije levosimendana u plazroi imaju tendenciju da povećaju brzinu rada srca,

§to je nepoželjan efekat kod pacijenata sa srčanim udarom.

Peroralne kompozicije sa dugim dejstvom obezbedjuju mnoge prednosti nad konvencionalnim peroralnim kompozicijama sa brzim oslobadjanjem. Takve prednosti obuhvataju manje varijacije koncentracija leka u plazmi, i kao rezultat, stabilan terapeutski odgovor, smanjenu £rekventnost primene i smanjenje sporednih efekata. Tipično, kompozicije dugog dejstva dobijaju se mešanjem leka, sredstva koje kontroliše oslobadjanje i mogućih ekscipijenata, i presovanjera smese u matriks tablete. Tipično kompozicije sa dugim dejstvom oslobadjaju lek u gornjem kao i u donjem gastrointestinalnom traktu.

Pokušaji da se primeni levosimendan u konvencionalnim preparatima dugog dejstva su bili razočaravajući. Neželjeni efekti kao Sto su jaka glavobolja, palpitacija

i povećana brzina rada srca se Cesto uočavaju kada se levosimendan primenjuje u preparatima sa dugim dejstvom koji se konvencionalno upotrebljavaju u tehnici da bi se postigao terapeutski efekat u toku produženog perioda vremena. Stoga postoji potreba za novim postupcima i kompozicijama za primenu levosimendana oralno, naročito za postupcima i kompozicijama koje obezbedjuju terapeutski efekat levosimendana u toku produženog perioda vremena i koje izbegavaju nepogodnosti vezane sa konvencionalnim preparatima levosimendana sa dugim dejstvom.

PREGLED PRONALASKA

Nadjeno je da je levosimendan podložan da se metaboli-§e u nižem gastrointestinalnom traktu, naročito u debelom crevu, pomoću intestinalnih. bakterija. Takav metabolički put rezultuje na kraju u obrazovanju aktivnog metabolita prvog prolaska, CR)-N-/4- (1,4,5,6-tetrahidro-4-metil-6-okso-3-piridazinil)fenil/acetamida (II), koji ima vreme poluraspada suStinskl duže nego ono kod levosimendana. Nadjeno je da je akumuliranje aktivnog metabolita uzrok neželjenih efekata povezanih sa preparatima levosimendana dugog dejstva.

Otkriće aktivnog metabolita 1 njegovog puta obrazovanja, omogućili su sada da se projektuju preparati sa kontrollsanim oslobadjanjem koji pokazuju smanjenu pojavu neželjenih efekata i koji dobro zadovoljavaju u tretiranju pacijenata sa srčanim udarom.

Stoga je predmet ovog pronalaska da se obezbede peroralne kompozicije, naročito kompozicije koje obezbedjuju terapeutski efekat u toku produženog perioda vremena, iz kojih se levosimendan oslobadja stalno i, prvenstveno, suStinski potpuno pre nego Sto do spe u niži deo gastro-intestlnalnog trakta, naročito u debelo crevo, tako da obrazovanje aktivnog metabolita ostaje na nižem nivou.

Zbog toga, koncentracija aktivnog metabolita u

plazmi pacijenta ostaje na dovoljno niskom nivou tako da se izbegavaju neželjeni efekti izazvani akumulacijom aktivnog metabolita dok se postiže terapeutski efekat u toku produženog perioda vremena.

Kratak opis slika

SI. 1 prikazuje kalibracioni uzorak za aktivni raetabolit (II) kod dobrovoljca odredjen pomoću tandema tečne hromatograflje i masene spektrometrije.

SI 2 prikazuje uzorak post-doze u plazmi za aktivni metabollt (II) kod dobrovoljca odredjen pomoću tandema tečne hromatograflje i masene spektometrije

SI. 3 prikazuje krivu rastvorijivosti in vitro za formulaciju 1 iz Primera 1 u fosfatnom puferu pH5.8.

SI. 4 prikazuje krivu rastvorijivosti in vitro za formulaciju 2 iz Primera 1 u fosfatnom puferu pH 5.8.

Si. 5 prikazuje krivu rastvorijivosti in vitro za formulaciju 3 iz Primera 1 u fosfatnom puferu 5.8.

SI. 6 prikazuje krivu rastvor lj ivosti in vi tro za referentnu formulaciju iz Primera 4 u fosfatnom puferu pH 5.8.

DETALJAN OPIS

Ovaj pronalazak obezbedjuje poboljšani oralni sistem za odavanje levosimendana u poredjenju sa konvencionalnim preparatima za trenutno oslobadjanje i preperatima dugog dejstva. Prednosti obuhvataju: - niže maksimalne nivoe levosimendana u plazmi koji stoga smanjuju pojavu neželjenih efekata visokih nivoa levosimendana kao Sto je povećana brzina rađa srca,

- smanjuju frekventnost primene, i

- smanjuju akumulaciju aktivnog metabolita (II) što znaci veđu tolerantnost leka, tj. manje neželjenih efekata izazva-nih aktivnim metabolitom, kao što su jaka glavobolja, palpitacija i povećana brzina rada srca.

Nivo metabolita (II u plazmi u dobroj Je saglasnosti sa pojavom neželjenih efekata kao Sto su jaka glavobolja, palpitacija i povećana brzina rada srca. U optimalnom tretiranju levosimen-danom pacijenata sa Brfianim udarom stabilno stanje nivoa metabolita (II) u plazmi treba da bude manje od 20 ng/ml, prvenstveno manje od 10 ng/ml.

Prednosti se obezbedjuju prema pronalasku pomoću kompozicije sa kontrolisanim oslobadjanjem koja sadrži a)terapeutski efikasnu količinu levosimendana i b) komponentu koja kontroliše oslobadjanje leka, radi ohezbedjivanja oslobadjanja levosimendana kod pacijenta u toku produženog perioda vremena i stabilnog stanja nivoa metabolita (II) u plazmi od manje od 20 ng/ml, prvenstveno manje od 10 ng/ml.

Izraz "produženi period vremena" znafii iznad najmanje jednog sata, prvenstveno najmanje dva sata posle primene. Stabilno stanje u plazmi nivoa metabolita (II) kao što je def inisano gore označava prošek medju grupom pacijenata.

Prvenstveno komponenta koja kontroliše oslobadjanje leka, dopušta da se levosimendan oslobadje suštinski potpuno pre nego što kompozicija dospe u debelo crevo.

Izraz "komponenta koja kontroliše oslobadjanje leka" odnosi se uglavnom na različite tehnologije koje se mogu upotrebiti za kontrolisanje i produžavanje oslobadjanja levosimendana prema pronalasku. Takve tehnologije uključu-

ju formulacije matriksa C na pr., tablete matriksa, granulo ili pelete) ili obložene formulacije (na pr. obložene table-

te, granule ili pelete, ili mikrokapsule). Komponente koje kontrolišu oslobadjanje leka, kao Sto su materijali za oblaganje i matriks materijali i postupci za dobijanje matriks i obloženih formulacija su dobro poznati u tehnici. Izbor materijala i količine koje se upotrebljavaju zavise od željenog uzorka za oslobadjenje i načina koji je poznat stručnjaku. Bilo koji materijali za kontrolisano oslobadjanje, materijali matriksa ili za oblaganje, ili njihove kombinacije koje su pogodne za dobijanje uzorka za oslobadjanje prema pronalasku,mogu da se upotrebe kao komponenta za kontrolisa-

no oslobadjanje leka. Tipične komponente za kontrolisano oslobadjanje korisne u pronalasku obuhvataju, ali nisu ograni-čene na, polimere koji obrazuju hidrofilni gel kao što su hidroksipropilmetil celuloza, hidroksipropil celuloza, karboksimetil celuloza, alginska kiselina ili njihove smešej biljne masti i ulja uključujući biljna čvrsta ulja kao Sto su hidrogenovano sojino ulje, stvrdnuto ricinusovo ulje, ulje iz ricinusovog semena (koje prodaje pod trgovačkim imenom CutinaGR) fulje iz semena pamuka (koje se prodaje pod trgo-vačkim imenima Sterotex ili Lubritab) ili njihove smeSe;

estri masnih kiselina kao Sto su trigliceridi zasićenih masnih kiselina i njihove smeSe na pr. gliceril tristearati, gliceril tripalmitati, gliceril trimiristati, gliceril tri-behenati (koji se prodaju pod trgovačkim imenom Campritol) i estar gliceril patmttosterinske kiseline.

Prema pronalasku, takodje je moguće da se upotrebe formulacije koje su projektovane tako da imaju produženo vreme otpornosti u gornjem gastrointestinalnom traktu, na pr. stomaku. Ovo smanjuje rizik od metabolizacije levosimendana u debelom crevu i sledeđe obrazovanje aktivnog metabolita (II). Takve kompozicije, na pr.plutajuđe ili koje mogu da plivaju formulacije imaju tu prednost da ukupno vreme oslobadjanja leka može da bude tako projektovano, da je suštinski duže, pošto je potrebno suštinski duže vreme pre nego što kompozicija dospe u niži đeo gastrointestinalnog trakta. Kompozicije koje imaju produženo vreme otpornosti u stomaku opisane su na pr. u US 4,126,672, US 4,814,178, US 4,777,033, US 5,232,704 i EP 539059.

Prema tome, bilo koja kompozicija sa kontrolisanim/ produženim oslobadjanjem levosimendana, koja daje stabilno stanje nivoa u plazmi za metabolit (II) od manje nego 20 ng/ml, prvenstveno manje nego 10 ng/ml, može da se upotrehi prema ovom pronalasku.

Stabilno stanje nivoa za metabolit (II) u plazmi može da se meri za bilo koju kompoziciju levosimendana primenam kompozicije levosimendana na dobrovoljca ili grupu dobrovoljaca jednom ili više puta na dan nekoliko dana sve dok se ne postigne stabilno stanje nivoa (II). Nivoi u plaz^ mi aktivnog metabolita (II) mogu da se mere prema postupku detaljno opisanom u Primeru 2.

Jedan aspekt pronalaska je kompozicija za kontrolisano oslobadjanje levosimendana za oralnu primenu koja ae karakteriSe pomoćNi njenog in vi tro uzorka rastvaranja.

Posebno, pronalazak se odnosi na kompoziciju za kontrolisano oslobadjanje za oralnu primenu koja sadrži a) terapeutski efikasnu količinu levosimendana i b) komponentu za kontrolisano oslobadjanje za obezbedjivanje oslobadjanja levosimendana u toku produženog perioda vremena,

a koja je kompozicija sposobna da obezbedi totalno in vitro vreme rastvaranja, odredjeno prema USP XXII postupku košare u fosfatnom puferu pH 5.8 (na 50 ili 100 opm), suštinski

izmedju 114 sata, za najmenje 90 procenata od sadržaja

levosImendana.

Još pogodnije, kompozicija prema pronalasku pokazuje

ukupno ln vitro vreme rastvaranja suštinski izmedju 113

sata, za najmanje 90 procenata od sadržaja levosimendana.

Komponenta ili komponente koje kontrolišu oslobadjanje leka mogu da budu odabrane kao što je opisano gore.

Ponovo, tipične komponente za kontrolisano oslobadjanje

obuhvataju, ali nisu ograničene na, polimere koji obrazuju

hidrofilni gel kao što su hidroksipropilmetil celuloza,

hidroksipropil celuloza, karboksimetil celuloza, alginska

kiselina ili njihove smeŠe; biljne masti ili ulja ili estre

masnih, kiselina, kao što su hidrogenovano ulje soje, stvrdnuto riclnuBovo ulje ili gliceril palmitostearatj.

Postupak za odredjivArf in vitro uzorka rastvaranja

kompozicija prema pronalasku opisan je u Primeru 3.

Kompozicija prema pronalasku može da bude na pr. u

obliku tablete, kapsule, granula ili praška.

Naročito pogodna realizacija pronalaska se dobija

kombinovanjem porcije koja brzo oslobadja koja sadrži levosimendan zajedno sa ekscipijentam sa porcijom koja kontrolisano oslobadja koja sadrži levosimendanikomponentu koja

kontrolisano oslobadja lek. Komponenta koja kontrolisano

oslobadja lek može da se odabere kao što je opisano gore,

ali prvenstveno od polimera koji obrazuje hidrofilni gel.

Naročito je pogodna komponenta koja sadrži a) porciju koja

brzo oslobadja u obliku praška koji sadrži levosimendan

zajedno sa najmanje jednim ekscipijentom, i b) porciju koja

kontrolisano oslobadja u obliku granula, koje sadrže

levosimendan i polimer koji obrazuje hidrofilni gel koji

kontroliše oslobadjanje. Porcija koja brzo oslobadja lek u

obliku praška i porcija koja kontroliše oslobadjanje lekau

obliku granula su prvenstveno u obliku srneSe koja slobodno

teče koja se može punitiukapsule, kao što su želatinske

kapsule ili HPHC kapsule.

Naročito pogodna kompozicija prema pronalasku sadrži 0.05 - 20%, prvenstveno 0.1 - 10%, još pogodnije 0.2 - 3%, težinski kompozicije levosimendana. Doza leka se deli izmedju porcije koja brzo oslobadja i porcije koja kontrolisano oslobadja. Uglavnom oko 25 - 75%, prvenstveno oko 30 - 70%, još pogodnije oko 40 - 60% težinski leka je u porciji koja kontrolisano oslobadja.

Uglavnom, dnevna doza levosimendana kod ljudi u oralnoj primeni je od oko 0.1 do 20 mg, tipično od oko 0.5 do 10. mg, u jednoj dnevnoj dozi ili podeljena u nekoliko doza na dan.Doziranje zavisi na pr. od starosti, telesne težine 1 stanja pacijenta. Kompozicija prvenstvene realizacije sadrži od oko 0.1 do 5 mg, tipično od oko 0.2 do 2 mg, levosimendana podeljenog izmedju porcijekoja brzo oslobadja i porcije koja kontrolisano oslobadja lek. Prvenstveni maksimalni nivoi levosimendana u plazmi u stabilnom stanju za tretiranje kongeštivnog srčanog udara su u granicama od oko 1 do oko 100 ng/ml, pogodnije od oko 5 do oko 60 ng/ml, i najpogodnije od oko LQ do oko 50 ng/ml.

Pogodan ekscipijent u porciji koja brzo oslobadja je punilac kao Sto su mikrokristalna cellloza ili laktoza. Mikrokristalna celuloza je prvenstveni ekscipijent i dostupna je u različitim vrstama kao što su Avicel PH101, Avicel PH102 ili Avicel PH200. Količina ekscipijenata u porciji koja brzo oslobadja je oko 20 - 70%, prvenstveno oko 30 - 60.%, od težine kompozicije. Pogodno mazivo kao stearinska kiselina ili magnezijum stearat može da se dodaje u porciju koja brzo oslobadja. Stearinska kiselina je prvenstveno mazivo.

Polimeri koji obrazuju hidrofilni gel koji kontro-liše oslobadjanje obuhvataju, ali nisu ograničeni na hidroksipropilmetil celulozu, hidroksipropil celulozu, karboksimetil celulozu, alginsku kiselinu i njihove smeSe. Prvenstvena je smeša alginske kiseline sa nekim drugim polimerora koji obrazuje hidrofini gel, naročito smeša alginske kiseline i hidroksipropilmetil celuloze. Hidroksipropilmetil celuloza je komercijalno dostupna u različitim tipovima, na pr.kao Methocel K100 (.mol. tež. 26,000 g/mol), Methocel K4M (mol. tež. 86,000 g/mol, Methocel K15M tmol. te<g>. 120,000 g/mol) iMethocel K100M. Viskozitet ovih vrsta u 2% vodenom rastvoru na 120°C) je 100 cP, 4000 cP, 15000

cP i 100000 cP. Hidroksipropilmetil celuloza sa viskozitetom izmedju 50 - 2000 cP je prvenstvena. Methocel K100 je prvenstvena vrsta hidroksipropilmetil celuloze.

Prvenstveno mazivo kao što je stearinska kiselina ili magnezijumstearat može da se doda u porciju koja kontroli-še oslobađjattfestearinska kiselina je prvenstveno mazivo.

Količina polimera koji obrazuje hidrofilni gel u naročito prvenstvenoj realizaciji pronalaska je oko 20 - 80%, prvenstveno 30 - 70%, težinski od kompozicije. Prvenstveno, polimer koji obrazuje hidrofilni gel je smeša alginske kiseline i hidroksipropilmetil celuloz ePogodna količina alginske kiseline je od oko 10 do 50%, prvenstveno od oko 20 do 40%, težinski od ukupne količine polimera koji obrazuje hidrofilni gel.

Količina porcije koja brzo oslobadja u posebno prvenstvenoj realizaciji pronalaska je od oko 20 do 80%, prvenstveno od oko 30 - 70%, još pogodnije od oko 40 do 60%, težinski od kompozicije. Količina maziva, ako je prisutno, je od oko a.3 do 10%, pogodnije od oko 0.4 do 5%, težinski od kompozicije.

Jedna druga prvenstvena realizacija pronalaska se dobija mešanjem komponente koja kontroliše oslobadjanje leka, levosimendana 1 ekscipijenata na pr. svih u obliku praška, i punjenjem smeše u kapsule, ako što su želatinske kapsule ili JIPMC kapsule. Komponenta koja kontroliše oslobadjanje može da budo odabrana kao što je opisano gore. Prvenstveno komponenta koja kontroliše oslobadjanje leka jc polimer koji obrazuje hidrofilni gel, koji se u ovoj realizaciji upotrebljava u količini od oko 10 do 70%, prvenstveno od oko 15 do 6 0%, najpogodnije od oko 20 do 40%, procenata od kompozicije.Poliraeri koji obrazuju hidrofilni gel koji kontrolišu oslobadjanje obuhvataju, ali nisu ograničeni na hidroksipropilmetil celulozu, hidroksipropil celulozu, kar-karboksimetil celulozu, alginsku kiselinu ili njihove smeše. Najpogodnija komponenta koja kontroliše oslobadjanje leka je hidroksipropilmetil celuloza, i naročito hidroksipropilmetil celuloza sa viskozitetom izmedju 50 - 2000 cP, kao što je Methocel K100, i alginska kiselina ili njihova smeša. Količina ekscipijenta (na pr. mikrokristalne celuloza ili laktoze) koja se upotrebljava u ovoj realizaciji je u koli-čini od oko 30 do 90%, prvenstveno od oko 40 do 80%, najpogodnije od oko 50 do 70%, težinski od kompozicije. Levosimendan se upotrebljava u količini opisanoj za prethodnu prvenstvenu realizaciju.

Još jedna druga prvenstvena realizacija pronalaska je u obliku matriks tablete koja se dobija mešanjem komponente koja kontroliše oslobadjanje leka, levosimendana i ekscipijenata, kao što su mikrokristalna celuloza, laktoza i/ili stearinska kiselna i presovanjem smeše u matriks tablete sa pogodnom tabletirkom. Ponovo, komponenta koja kontroliše oslobadjanje može da se odabere kao što je opisano gore. Prvenstveno, komponenta koja kontroliše oslobadjanje leka je polimer koji obrazuje hidrofilni gel ili biljna mast ili ulje ili estar masne kiseline kao što je definisano gore. U ovoj realizaciji komponenta koja kontro-liše oslobadjanje leka upotrebljava se u količini od oko 0.5 do 60% težinski od kompozicije, a količina ekscipijenta (na pr. mikrokristalne celuloza) se pogodno upotrehljava u količini od oko 30 do 99% , težinski od kompozicije. Ako je komponenta koja kontroliše oslobadjenje leka polimer koji obrazuje hidrofilni gel, na pr.hidroksipropilmetil celuloza, a prvenstveno hidroksipropilmetil celuloza sa viskozitetom izmedju 50 - 2000 cP kao Sto je Methocel K100, alginska kiselina ili njihova smeša, komponenta koja kontroliše oslobadjanje leka upotrebljava se u količini od oko 5 do 60%, prvenstveno od oko 10 do 50%, najpogodnije od oko 15 do 40%, težinski od kompozicija, a količina ekscipijenta (na pr. mikrokristalne celuloza} se pogodno upotrebljava u količini od oko 30 do 95%, prvenstveno od oko 50 do 90%, najpogodnije od oko 60 do 85%, težinski od težine kompozicije. Ako je komponenta koja kontroliše oslobadjanje leka biljna msat ili ulje ili estar masne kiseline, na pr. hidrogenovano ulje soje, očvrsnuto ricinusovo ulje ili gliceril palmitostearat, komponenta koja kontroliše oslobadjanje leka, upotrebljava se u količini od oko 0.5 do 30%, pogodnije od oko 2 do 20%-, najpogodnije od oko 3 do 15%, težinski od kompozicije, a količina ekscipijenta (na pr. mikrokristalne celuloze) se pogodno upotrebljava u količini od oko 70 do 99%, pogodnije od oko 80 do 98%, najpogodnije od oko 85 do 97%, težinski od kompozicije. Levosimendan se upotrebljava u količini kao što je opisano u prethodnoj prvenstvenoj realizaciji.

Sledeđi primeri su namenjeni da dalje ilustruju pronalazak bez ograničenja.

U gornjim primerima materijal za porciju granula

se prosejava i meša sve dok ne postane homogena u pogodnom

mikseru kao Sto je Turbula mikser ili Zanshetta kontejner

mikser. Smeša praška se prosejava kroz sito od 0.6 mm. Masa

se suva granuliše pomoćukvašenja Cpresuje se upotreb-

ljavajući tabletirku). u ovom postupku masa se kompaktlra

upotrebljavajući Bepex Pharmapac or L200/50P, sila preso-

vanja je približno 45 kN. Kompaktirana masa se prosejava i

sakupljaju se granule od 0.7-1.7 mm.

Materijal za porciju praška osim stearinske kiseline

sa prosejava i meša sve dok ne postane homogen u pogodnom

mikseru kao što je Turbula mikser ili Zanchetta kontejner

mikser. Masa se puni u tvrde želatinske kapsule no. 3.

Umesto tvrdih želatinskih kapsula mogu se takodje upotrebiti

HPMC kapsule kućišta no. 3.

PRIMER 2. Odredjivanje aktivnog metabolita CII) u

humanoj plazmi pomoću tandema tečna hromatografija-masena

spektometrija

Dohijanje kalibracionih uzoraka

Aktivni metabolit UD se dodaje u 20 ni fosfatnog

pufera, pH 7.2 u 0.5 ml plazme bez analiziranesupstance.

Dodaju se količine analizirane supstance od 0.100, 0.250, 0.500, 1.00, 2.50, 3.75, 5.00, 7.50 i 12.5 ng. Posle mešanja 20 sekundi i stajanja od 10 minuta, dodaje se 2500 pg internog standarda (R)-N-/4-(1,4,5,6-tetrahidro-4-etil-6-oksOT-3-piridazinil)fenil/acetamida u 20 ul fosfatnog pufera, pH 7.2. Smeša se meša 1 minut 1 ostavi da stoji 15 minuta. Kalibracioni uzorci . se zaalkallšu sa 50 ul 0.1 M natrijum hiđroksida i mešaju 20 sekundi. Kalibracioni uzorci se ekstrahuju sa 5 ml etil acetata:heksana (8:2) mešanjem 3 minuta. Posle centrifugiranja 7 minuta organski sloj je odvoji i koncentruje na 40°C upotrebljavajući TurboVap uparivač. Kada su kalibracioni uzorci suvi, dodaje se 200 ul etil acetata:heksana (8:2) meša se 1 minut i koncem-truje na 40°C upotrebljavajući TurboVap uparivač. Pošto se doda 200 ul metanola-2 mM amonijum acetata (IsDf kalibracioni uzorci se mešaju 1 minut i ostave da stoje 5 minuta. Posle centrifugiranja 7 minuta gornji sloj tečnosti se prebaci u nekorišćene konične ampule za uzorke za tandem analizu tečna hromatografija'-masena spektrometrija.

Dobijanje uzoraka

Uzorci se procesiraju kao što je opisano gore ali je prvo dodavanje pufera bez analizirane supstance

Tandem tečna hromatografija-masena spektrometrija

Analize se izvode upotrebljavajući PE Sciex API 300. tandemski kvadrlpolni maseni spektometar snabdeven sa zagrejanom razdelnom površinom raspršivača. ZaHPLC se upotrebljava Hevlett-<p>ackard HP1090L sistem. Primenjena kolona je LiChrosorb RP-18 reverzno fazna kolona (260 x 4 mm ID, 1Q pm čestice, Merck) Mobilna faza se sastoji od metanola-2 mM amonijum acetata pH 5, (60:40 v/v). Brzina protoka je 1 ml/min. Alikvot od 100 ul ekstrakta se injcktira u kolonu za tečnu hromatografiju.

Eluent iz kolone se unosi u maseni spektrometar

bez razdvajanja. Igla za ispuštanje protoka se podešava na 4 kv. Upotrebljava se pritisak gasa (azota) raspršivača od 5 bara.Grejac razdelne površine se podešava na 500° c. Volta<g>a ploče dijafragme je 25 V. Pozitivni joni se uzor-ku ju u kvađrupolnom masenom analizatoru.

Odredjivanja se vrše upotrebljavajući selektovanu tehniku "praćenja reakcije. Prvi kvadrupolni filter masenog spektrometra, Ql, je podešen da propusti protonizovane molekule na m/z 246 za aktivni metabolit (II) i m/z 260 za interni standard za sudarima izazvanu fragmentaciju u Q2. Zatim se dopusti da respektivni joni proizvoda, na m/z 204

i m/z 218 prodju Q3 radi praćenja.Upotrebljava se vreme zadržavanja od 200 ms i vreme zaustavljanja od 100 ms. Selektovani reakcioni hromatogrami koji su pratili hroma-tograme se bcleže koristećiPESciex API 300 Data Sistem.

Kvantitativno odredjivanje i izračunavanje

Odnosi maksimalne površine za analiziranu supstancu

i njeni interni standardi se nanose prema koncentracijama. Odredjivanje jednačina kalibracione krive i koncentracija nepoznatih uzoraka vrši se pomoću PE Sclex API 300 Data Sistema i PE SciexMacQuan 1.4 programa. Granica kvantitativ-nog odredjivanja je 0.200ng/ml. Pripremljena je kallbraciona kriva za aktivni metabolit (II).

Specifičnost

Joni proizvoda aktivnog metabolita (II) i njegovog internog standarda se prate upotrebljavajući selektovanu reakcionu tehniku praćenja. Postupak je specifičan s obzi-rom na pozadinu koja se javlja od plazme. Nisu uočeni mak-simumi koji ometaju u slepim probama plazme. Slike 112 prikazuju kalibracioni uzorak plazme i uzorak plazme posle primene doze kod dobrovoljca.

PRIMKR 3. In vitro i in vivo eksparimenti za kompozicije prema pronalasku.

Formulacije 1, 2 i 3 iz Primera 1 su podvrgnuti testu rastvorljivosti. Brzina rastvaranja za formulacije je testirana pomoću postupka prema U.S. Farmakopeji XXII (postupak košare) u fosfatnom puferu pH5.8 pri 50 opm. Rezultati za formulacije 1, 2 i 3 su prikazani na Slikama

3, 4 1 odnosno 5.

Formulacije 1, 2 i 3 iz Primera 1 se primenjuju na zdrave dobrovoljce kao jedna oralna doza od 2 mg levosimendana. Svaka grupa se sastoji od 9 pojedinaca. Nivo u plazmi metabolita (II) je odredjivan 12 sati posle primene. Rezultati su prikazani uTabeli 1.

PRIMER 4. In vitro i in vivo eksperimenti za referentnu kompoziciju

Referen na formulacija koja se sastoji od

podvrgava se testu rastvorljivosti. Formulacija se dobija prosejavanjem i mcšanjem praškastog materijala dok ne postane homogen i punjenjem u tvrde želatinske kapsule no 3.

Brzina rastvaranja formulacije se testira prema postupku u U.S. Farmakopeji XXII (postupak košare) u fosfatnom puferu pH 5.8 pri 100 opm. Rezulati su prikazana na Slici 6.

Referentna formulacija se zatim primenjuje kod 8 zdravih dobrovoljaca kao jedna doza od 2 mg levosimendana. Nivo u plazmi metabolita (II) se odredjuje 12 sati posle primene. Rezultati su prikazani u Tabeli 2.

Prema tome, formulacije prema pronalasku koje imaju ukupno vreme rastvaranja in vitro kao Sto je ođredje-no prema USP XXII postuku košare u fosfatnom puferu pH 5.8 suštinski izmedju 114 sata za najmanje 90 procenata od sadržaja levosimenadna daju značajo niži nivo u plazmi metabolita (II) in vivo nego onaj referentne formulacije koja ima sporiju brzinu rastvaranja.

PRIMER 5. Nivoi u plazmi levosimendana i aktivnocr metabolita (II) posle 7 dana od primene levosimendana.

U klinifikoj studiji stabilnog stanja, 1 mg levosimendana se primenjuje oralno na zdrave dobrovoljce tri puta na dan u toku 7 dana. Nivoi u plazmi levosimendana i metabolita (II) se prate tokom tretiranja. Upotrebljena formulacija je bila formulacija 3 iz Primera 1 osim što je ukup-na količina levosimendana bila 1 mg i mikrokristalne celuloze (Avicel PH-20.0) 51.a mg. Srednji nivoi u plazni, levosimendana 114 sata posle poslednje doze (dan 7) i metabolita (II) 8 sati posle poslednje doze (dan 7) su prikazani u Taveli 3.

Rezultati pokazuju da formulacije prema pronalasku obezbedjuju stabilne i terapeutski efikasne nivoe u plazmi levosimendana u toku produženog perioda vremena dok stabilno stanje nivoa metabolita (II) ostaje na zadiviljavajuđim nivoima.

PRIMER 6. Dalji primeri formulacije.

Formulacija 6 (kapsule)

Levosimendan, Methocel K 100 LV i mikrokristalna celuloza (Avicel) se proseju i IzmeŠaju u pogodnom mikseru (Turbula ili ekvivalentnom). Stearinska kiselina se tada proseje i pomeša sa masom u pogodnom mikseru (Turbula ili ekvivalentnom). Masa se tada puni u bele želatinske kapsule kućišta br 3 upotrebljavajući mašinu za punjenje Harro Hoflinger, MG2 ili ekvivalentnu.

Rezultati rastvorijivosri gornje formulacije (USP XXII, fosfatni pufer, pH 5.8, 100 opm) su prikazani u Tabeli 4: Formulacija 7 (matriks tableta)

Levosimendan, Methocel K 100LV, natrijum kros-karmeloza i Mikrokristalna celuloza (Avicel) se izmešaju u pogodnom mikseru (Turbula ili ekvivalentnom). SmeSa praška iz stupnja se zatim proseje iizmeša u pogodnom mik-mikseru (Turbula ili ekvivalentnom). Zatim se proseje stearinska kiselin i izmeša sa smešom praška u pogodnom mikseru (Turbula ili ekvivalentnom). Zatim se masa presuje u tablete sa pogodnom tabletirkom (prečnik ptobojca 7 mm i radijum konkavnosti 10,5 mm, tvrdoća 60 N).

Rezultati rastvorljivosti za gornju formulaciju (USP XXII, fosfatni pufer, pH 5.8, 100 opm) su sledeći Formulacija 8 (matriks tableta,<1>

Levosimendan, natrijm kroskermeloza i mikrokristalna celuloza (Avicel) se izmešaju u pogodnom mikseru (Turbula ili ekvivalentnom). Smeša praška iz stupnja se zatim proseje i izmeša u pogodnom mikseru (Turbula ili ekvivalentnom) Zatim se proseje Akofin NF (hidrogenovano biljno ulje) i izmeša sa smešom praška u pogodnom mikseru (Turbula ili ekvivalentnom. Masa se zatim presuje u tablete u pogodnoj tabletirci (prefinik probojca 7 mm, radijus konkavnossti 10.5 mm, tvrdoća 60 N) .

Mogu se učiniti različite modifikacije i varijacije za otkrivene realizacije bez odstupanja od predmeta pronalaska kao što je đeflnisan u sledećim zahtevima.

Claims (9)

1. Kompozicija za kontrolisano oslobađanje, naznačena time. Sto sadrži a) terapeutski efikasnu količinu levosimendana i b) komponentu koja kontroliše oslobađanje leka za obezbeđivanje oslobađanja levosimendana u toku produženog perioda vremena i stabilnog stanja nivoa u plazmi metabolita (II) od manje od 20 ng/ml, prvenstveno manje od 10 ng/ml.

2. Kompozicija prema zahtevu 1, naznačena time, Sto je komponenta koja kontroliše oslobađanje leka polimer koji obrazuje hidrofilni gel ili biljna mast ili ulje ili estar masne kiseline.

3. Kompozicija za kontrolisano oslobađanje, naznačena time, što sadrži a) terapeutski efikasnu količinu levosimendana i b) komponentu koja kontroliše oslobađanje leka za obezbeđivanje oslobađanja levosimendana tako da se najmanje 90 procenata od sadržaja levosimendana suštinski rastvori između 1 i 4 sata.

4. Kompozicija za kontrolisano oslobađanje, naznačena time, što sadrži a) porciju koja brzo oslobađa koja sadrži levosimendan opciono zajedno sa najmanje jednim ekscipijentom i b) porciju sa kontrolisanim oslobađanjem koja sadrži levosimendan i komponentu koja kontroliše oslobađanje leka.

5. Kompozicija prema zahtevu 4, naznačena time, što sadrži a) porciju koja brzo oslobađa u obliku praška koji sadrži levosimendan zajedno sa najmanje jednim ekscipijentom i b) porciju koja kontroliše oslobađanje u obliku granulata koji sadrži levosimendan i polimer koji obrazuje hidrofilni gel koji kontroliše oslobađanje.

6. Kompozicija prema zahtevu 4 ili 5, naznačena time, što porcija koja brzo oslobađa sadrži levosimendan i mikrokristalnu celulozu.

7. Kompozicija prema zahtevu 5 ili 6, naznačena time, što je polimer koji obrazuje hidrofilni gel koji kontroliše oslobađanje hidroksipropilmetil celuloza, alginska kiselina ili njihova smeša.c

8. Kompozicija prema bilo kojem od zahteva 4-7, naznačena time, što je oko 25 -75%, prvenstveno oko 30 - 70%, još pogodnije oko 40 - 60% težinski od leka porcija koja kontroliše oslobađanje leka.

9. Kompozicija prema bilo kojem od zahteva 4-8, naznačena time, što je količina polimera koji obrazuje hidrofilni gel oko 20 - 80%, prvenstveno oko 30 - 70% težinski od kompozicije.