RS50102B - Farmaceutske smeše koje sadrže plazma protein - Google Patents

Abstract

U vodi rastvoran produkt bez organskog rastvarača ili farmaceutska formulacija u čvrstom ili tečnom obliku i njihovi pravi vodeni rastvori bez organskog rastvarača uglavnom za parenteralnu primenu, naznačeni time, što sadrže: (A) terapeutski aktivno jedinjenje koje ima malu rastvorljivost u vodi (<1 "l0-4 mol/1) i znatan afmitetet vezivanja za plazma proteine (aktivnu supstancu), i (B) plazma proteinsku frakciju u kontrolisanom stanju agregacije, pri čemu su aktivna supstanca (A) i plažma proteinska frakcija (B) nekovalentno vezane jedna za drugu i što opciono dalje sadrži (C) farmaceutski prihvatljive i uglavnom parenteralno prihvatljive aditive za formulaciju - kao što su voda, stabilizatori i kontrolori agregacije proteina. Prijava sadrži još 35 patentnih zahteva.

Description

Ovaj pronalazak se odnosi na novi postupak, proizvode i formulacije za davanje u terapeutskoj primeni terapeutski aktivnih jedinjenja koja imaju slabu rastvorijivost u vodi i znatan afinitet vezivanja za plazma proteina i na postupke za dobivanja takvih proizvoda i formulacija.

Specifičnije su prvi predmeti ovog pronalaska proizvodi i farmaceutske formulacije u čvrstom ili tečnom obliku uglavnom za parenteralnu primenu koji se sastoje ili obuhvataju: a) terapeutski aktivnu supstancu koja ima malu rastvorijivost u vodi i znatan afinitet vezivanja za

plazma proteine (u sledećem »aktivna supstanca«) i

b) frakciju plazma proteina u kontrolisanom stanju agregacij e

pri čemu su pomejnuta aktivna supstanca i pomenuta proteinska frakcija vezane jedna za drugu nekovalentnim vezama i

b) opciono dalje farmaceutski prihvatljiv/e i uglavnom parenteralno prihvatljiv/e aditiv/e za

formulaciju - kao što su voda, stabilizator/i, kontrolor/i agregacije proteina.

Pronalaskom dati proizvodi koji su u homogenom čvrstom stanju i koji se sastoje od pomenutog proteina i pomenute supstance su rastvorni u vodi i njihovi vodeni rastvori se mogu koristiti parenteralno ili se mogu koristiti za dobivanje parenteralnih farmaceutika.

U nauci i tehnici je dobro poznato da neka biološki aktivna jedinjenja imaju snažnu terapijsku aktivnost ali nikad ne mogu pokazati njihove koristi zbog slabe rastvorijivosti u vodenim sredinima. Neka od njih čak nikad nisu formulisana dok je samo njih nekoliko dostiglo stupanj »faze I« u kliničkom razvoju. Neka od njih se javljaju u »teško biokompatibilnim« formulacijama relativno visoke toksičnosti koja je prouzrokovana materijama koje su upotrebljene za formulaciju. Tipičan primer za ovo predstavljaju grupe taksona specifično paklitaksel koji je snažan citostatik ali čija je primena, međutim, smanjena zbog toksičnosti njegove poznate formulacije u smešama: klucel:tween 80 ili klucel:razblaživač 12, koji predstavlja smešu kremafor (Cremaphor) El : etanol 1:1.[ Cancer Chemotherapy and Pharmacology34 (1994) 465-471;Journal of the National Cancer Institute(1990) 1247-1259]. Kremafor (Cremaphor) El (polioksi-etilovano ricinusovo ulje) ima inherentnu toksičnost, prouzrokujući vazodilataciju, letargiju, hipotenziju, itd. U" cilju smanjenja toksičnog sporednog efekta rastvarača i pomoćog sredstva (adjuvansa), sugerisan je niz specijalnih metoda: primena vrlo malih doza u dužem periodu vremena, prethodno lečenje pre samog lečenja, itd. (SAD patent 5665761; SAD patent 5621001; SAD patent 5670537 itd.). Dalja sugestija se sastojala u kombinaciji aktivne supstance sa sredstvom za dispergovanje unutar ljuske sa proteinskim zidom (SAD patent 5560933) koje se formira reagovanjem proteina sa nekim uljem kao što je sojino ulje - takve formulacije su predložene za paklitaksel (paclitaxel) i amfotericin. Međutim, čak i najnovija literatura sadrži opomene u odnosu na tok primene, npr., paklitaksela (videti npr., »Guidance for Industrv« koji je izdalo SAD ministarstvo zdravlja i humane službe CDER septembar 1997, OGD-L-8) gde stoji da - zbog reakcija preterane osetljivosti - svi pacijenti lečeni sa paklitakselom trebali bi prethodno biti tretirani sa kortikosteroidima, difenhidraminom i H2antagonistima.

Dalje je predloženo da se proizvedu parenteralne formulacije nekih u vodi nerastvornih dihidropiridina, njihovim rastvaranjem u nekom organskom rastvaraču ili u smeši organskog rastvarača sa vodom i dodavanjem vodenog HSP rastvora u pomenuti rastvor u cilju minimiziranja kristalizacije nerastvorne aktivne supstance (Mađarski patent br. 198381; DE Appl. 37 02105). Međutim, dobivena tečnost još uvek nije bila bistar rastvor i sadržala je organski rastvarač.

Prema japanskom publikovanom dokumentu br. 58216126 (videti EPO patentne apstrakte Japana) neki derivati karboksilne kiseline koji nose stereohemijski jako zaprečenu aromatičnu funkcionalnu grupu i imaju rastvorijivost u vodi od oko 0,1 mg/ml rastvoreni su dodavanjem u razblažen vodeni rastvor humanog serum albumina.

Takođe je poznato da su oralne farmaceutske smeše dobivene mešanjem aktivnog sastojka sa albuminom jaja pri velikoj brzini od 5.000 do 40.000 obrta u minuti u vodenom rastvaraču i zatim odestilovanjem rastvarača (EPA 326618). Kao rezultat je dobivena vodena suspenzije za oralnu primenu sa efektom smanjivanja nekih sporednih efekata aktivnog sastojka.

Dalje je poznato da neke od aktivnih supstanci nerastvornih u vodi imaju znatan afinitet prema proteinu ili serum proteinu. Ovde je pomenuto nešto literature za paklitaksel[Cancer Chem. and Pharm.34 (1994) 465-471]; mikonazol, flukonazol, amfotericin B[ Infection23(5)

(1995) 292-297 septembar]; karbamazepin[ J. Chromatograph. B Biomed. Appl.669(2)(1995, July 21) 281-288]; azatioprin[ Ann. N. Y. Acad. Sci.685(1993) 175-192]; propofol[ J. Chromatograph. Sci.(1992) 164-166]. Prema novoj literaturi[ The Lancet352(1998) 540-542] lek taksol (TaKol<®>) je prouzrokovao valjkastu formaciju (agregaciju) crvenih krvnih ćelija (eritrocita) i to isto je učinilo polioksietilovano ricinusovo ulje koje je služilo kao rastvarač pomenutog leka. Neki lekovi nerastvorni u vodi su formulisani uz primenu toksičnog kremafora (ciklosporin, tenipozid, paklitaksel, amfotericin B). Prema našem najboljem saznanju na tržištu do sada nije bio na raspolaganju niz visoko aktivnih, u vodi nerastvornih lekova u parenteralnim, intravenoznim oblicima davanja npr., ritonavit, karbamazepin, kamfotetin, azatiopin, mikonazol, flukonazol itd.

Otuda postoji potreba da se reši ovaj problem pri čemu bi se terapeutski dragocene, u vodi nerastvorne, supstance mogle davati u obliku rastvornom u vodi, pogodno parenteralno pacijentu koji treba da bude lečen sa pomenutim aktivnim sastojcima.

Cilj ovog pronalaska je da realizuje ovaj zahtev koji se odnosi na praktično u vodi nerastvorne aktivne sastojke koji imaju znatan afinitet vezivanja prema plazma proteinima.

Ovaj pronalazak se zasniva na saznanju da vezivanje aktivnih supstanci za odgovarajuće proteine sa nekovalentnim vezama pre davanja predstavlja nov i vrlo snažan sistem davanja za davanje aktivnih sastojaka sa malom rastvorijivošću u vodi. Prema ovom pronalasku su proizvedeni homogeni čvrsti produkti koji su zatim rastvoreni u vodi čime su dobiveni biokompatibilni, bistri, vodeni rastvori koji su pogodni za parenteralno davanje. Otuda ovaj pronalazak predstavlja sredstvo za davanje željenih aktivnih sastojaka nerastvornih u vodi bez uvođenja toksičnih elemenata i u nekim slučajevima u znatno efikasnijoj dozi nego ranije.

Definicije koje se koriste u ovoj prijavi a koje se ubuduće neće ponavljati su: R<1>označava amid ili benzoil-amid terc-butiloksi- karboksilne kiseline,

R<2>označava vodonik ili neku acil-grupu, pogodno

acetil-grupu,

mala rastvorijivost u vodi znači da je rastvorijivost u

vodi na sobnoj temperaturi < 1.10"<4>M,

znatan afinitet vezivanja prema plazma proteinima znači da je > 90% supstance vezano za proteine u vodenom medij umu u spontanoj ravnoteži na sobnoj

temperaturi ;

HSA humani serum albumin

VI voda za injekcije.

Jedan predmet ovog pronalaska je humana farmaceutska formulacija rastvorna u vodi uglavnom za parenteralnu primenu koja sadrži terapijski aktivno jedinjenje koje ima malu rastvorijivost u vodi i znatan afinitet vezivanja za plazma proteine ili frakciju humanih plazma proteina u kontrolisanom stanju agregacije.

Drugi predmeti ovog pronalaska su veterinarske farmaceutske formulacije rastvorne u vodi uglavnom za parenteralnu primenu koje sadrže terapijski aktivno jedinjenje koje ima malu rastvorijivost u vodi i znatan afinitet vezivanja za animalne plazma proteine u kontrolisanom stanju agregacije.

Humane ili animalne plazme koje mogu biti prisutne u produktima i farmaceutskim formulacijama prema ovom pronalasku i koje prema tome mogu biti primenjene u postupcima da se proizvedu ovi proizvodi i smeše mogu biti bilo koji od proteina ili frakcija plazme koji se nalaze u prirodi kao što su serum albumin, imunoglobulin, glikoprotein, interferon i/ili interleukin kao i njihovi rekombinantni analozi. Mogu se primeniti humani i animalni proteini. U jedinjenjima i smešama namenjenim za lečenje ljudi pogodni su prirodni humani serum proteini i rekombinantni humani serum proteini.

Aktivni sastojci koji su praktično nerastvorni u vodi dati ovim pronalaskom obuhvaraju širok opseg jedinjenja pri čemu je jedino ograničenje da ona pokazuju znatan afinitet prema plazma proteinu koji je odabran da se koristi. Primeri takvih aktivnih sastojaka uključuju sledeće grupe terapeutskih agenasa: citostatik kao što je taksonoid, antibiotik, vitamin, antizapaljivi agens, analgetik, agens protiv grčeva, prigušivač (suzbijač) imuniteta, antiepileptik, anksiolitik, hipnotik, agens protiv gljivica, antikoagulans, inhibitor lipidne peroksidaze, koronarni vazodilator, antiaritmički agens, kardiotonik, urikosurik, antitrombotik, steroidni hormon (progestogen, androgen, testogen) i/ili fotosenzibili-zator. Pri tome se nekoliko aktivnih sastojaka može koristiti istovremeno posle pažljivog razmatranja i podešavanja (adaptiranja) terapijskih doza i razmatranja afiniteta vezivanja prema odabranim proteinima koji moraju da zadovolje takve promenjene zahteve.

Prema jednom oličenju ovog pronalaska dati su proizvodi i farmaceutske formulacije prema gore datom koje sadrže najmanje jednu od sledećih aktivnih supstanci: amfotericin B, analog adriamicina, apazon, azatioprin, bromazepam, kamptotecin, karbamazepin, klonazepam, ciklosporin A, diazepam, dikumarol, digitoksin, dipiridamol, disopiramid, flunitrazepam, gemfibrozil, ketohlorin, ketokonazol, mikonazol, niflumna kiselina, oksazepam, fenobarbital, fenitoin, progesteron, propofol, ritonavir, sulfinpirazon, suprofen, takrolimus, tamoksifen, taksonoid, testosteron, tirilazad,

triokssalen, valproinska kiselina i/ili varfarin.

Pogodno oličenje ovog pronalaska sastoji se u proizvodu ili formulaciji kao što su gore opisani koji sadrže taksonoid opšte formule I.

Drugo pogodno oličenje prema ovom pronaalsku sadrži ili se sastoji od paklitaksela i humanog serum albumina,

Gde

R<1>označava terc-butioksikarbonilamino ili benzilamino

i

R<2>označava vodonik ili acil-grupu, najbolje acetil-grupu.

imunoglobulina, glikoproteina, interferona i/ili interleukina ili neke druge frakcije humanih plazma proteina.

Dalji naročito značajni predstavnici ovog pronalaska su homogeni, čvrsti, u vodi rastvorni produkti koji se sastoje od najmanje jedne aktivne supstance iz grupe amfotericina B, analoga adriamicina, apazona, azatioprina, bromazepama, kamptotecina, karbamazepina, klonazepama, ciklosporina A, diazepama, dikumarola, digitoksina, dipiridamola, disopiramida, flunitrazepama, gemfibrozila, ketohlorina, ketokonazola, mikonazola, niflumne kiseline, oksazepama, fenobarbitala, fenitoina, progesterona, propofola, ritonavira, sulfinpirazona, suprofena, takrolimusa, tamoksifena, taksonoida, testosterona, tirilazada, triokssalena, valproinske kiseline i/ili varfarina i koji se takođe sastoje od najmanje jednog proteina iz grupe humanog serum albumina, imunoglobulina, glikoproteina, interferona i/ili interleukina ili neke druge frakcije prirodnih ili rekombinantnih humanih plazma proteina pri čemu su pomenuta aktivna supstanca i pomenuta proteinska frakcija vezane jedna za drugu pomoću nekovalentnih veza i pri čemu je molarni odnos pomenute aktivne supstance i pomenute proteinske frakcije unutar opsega od 1:0,05 do 1:100, pogodno od 1:0,1 do 1:50.

Pogodni predstavnici gore datih su sledeći homogeni, čvrsti, u vodi rastvorni produkti koji se sastoje od sledećih parova aktivnih supstanci i proteina:

taksonoid opšte formule I - u kojoj

R<1>označava amid ili benzoil-amid terc-butiloksi-karboksilne kiseline,

R<2>označava vodonik ili acil-grupu pogodno acetil-

grupu,

i frakcija plazma proteina,

paklitaksel i humani serum albumin, rekombinantni humani plazma albumin i/ili y-globulin,

amfotericin B i humani serum albumin, rekombinantni humani plazma albumin i/ili y-globulin,

kamptotecin i humani serum albumin, rekombinantni humani plazma albumin i/ili y-globulin,

karbamazepin i humani serum albumin, rekombinantni humani plazma albumin i/ili y-globulin,

ciklosporin A i humani serum albumin, rekombinantni humani plazma albumin i/ili y-globulin,

propofol i humani serum albumin, rekombinantni humani plazma albumin i/ili y-globulin.

Iz gornjih objašnjenja proizlazi da ovaj pronalazak pokriva farmaceutske formulacije kao što su gore date kako u čvrstom stanju tako i u obliku vodenih rastvora.

U vezi sa njihovom prirodnom strukturom - naročito sa njihovim hemijskim sastavom - proteinski molekuli teže da se udružuju (stvaraju agregate) preko njihovih specifičnih mesta vezivanja. Stepen agregacije zavisi od parametara (temperature, sastava, relativne i apsolutne koncentracije komponenta, konsekventno vrednosti pH, jonske jačine) rastvora u kojem je protein prisutan.

Plazma proteini koji se koriste prema ovom pronalasku pogodno se nalaze u stabilizovanom ili kontrolisanom stanju agregacije. Cilj je da se izbegne takva agregacija proteina koja bi inhibirala optimalno vezivanje aktuelno upotrebijenog aktivnog sastojka. Neželjena agregacija proteina može se suzbiti

(kontrolisati) prisustvom drugih molekula koji mogu da zauzmu neka ili sva mesta vezivanja na makromolekulima koji su uključeni u agregaciji tako da se izbegne mnogostruka asocijacija tipa protein-protein. Neki proteini su raspoloživi na tržištu u kontrolisanom stanju agregacije: sadržeći stabilizatore da izbegnu agregaciju. Međutim, ovo stanje nije uvek optimalno stanje za ulaženje u vezivanje sa aktivnom supstancom koje mi nameravamo da koristimo prema ovom pronalasku.

Prema ovom pronalasku termin »kontrolisano stanje agregacije« predstavlja najbolje stanje vezivanja kada je protein u stanju da veže aktivnu supstancu tačno na način koji se želi za nameravanu svrhu. Nije neophodno da ovo stanje bude ono u kojem je maksimalni broj molekula aktivne supstance vezan za protein - ali postoje sluča-jevi kada je poželjna najveća proporcija vezivanja.

To znači da u nekim slučajevima moramo ukloniti druge ekscipijense iz, napr., komercijalno raspoložive frakcije serum albumina, kao što su stabilizatori, jonske komponente, itd. Ovo može biti neophodan polazni stupanj ovog procesa kada se vrši postupak prema pronalasku. Potrebni uslovi da se utvrdi ogovarajući stupanj agregacije striktno zavise od aktuelne aktivne supstance i relevantne proteinske frakcije.

Dole dati primeri demonstriraju (npr., paklitaksel i ciklosporin A) da oni pokazuju veće vezivanje za frakciju plazma proteina u odsustvu drugih ekscipijenasa (kao što su stabilizatori, jonske komponente, soli, itd.). Među-tim, postoje druge aktivne supstance (npr., amfotericin B i propofol) koje nisu pokazale interferenciju sa vezivanjem npr., stabilizatora proteina.

Otuda se odgovarajuće stanje agregacije upotreblje-nog proteina mora utvrditi za svaki par aktivna supstanca/protein koji se koristi prema ovom pronalasku.

Kada se upotrebljava par paklitaksel i HSA važno je eliminisati sve stabilizatore koji prate komercijalno raspoloživ HSA: kao što su N-acetil-D,L-triptofan, alkalni kaprilati koji su korišćeni da stabilizuju protein za vreme pasterizacije na 60°C. Amfotericin B ili propofol mogu biti vezani za HSA takođe u prisustvu ovih stabilizatora. U nekim slučajevima, kada se željeno stanje agregacije može postići vodom, druge komponente se moraju ukloniti, radeći npr., prema proceduri koja je dole detaljno data u jednom od primera.

Sledeći aspekti se moraju razmatrati za optimalnu kombinaciju specifičnih supstanci sa frakcijama specifičnih plazma proteina datu ovim pronalaskom: a) karakteristike mesta vezivanja na proteinu zauzetog supstancom, b) moguće druge komponente prisutne u rastovru koje zauzimaju isto mesto vezivanja ili čak konkurišu za isto, c) fizičko-hemijski uslovi za konformaciju aktuelnog mesta vezivanja i posledica vezivanja,

d) poznati terapeutski aspekti npr.,

i) paklitaksel na HSA koji ima jedinstvene

transportne karakteristike,

ii) paklitaksel na interleukinima sa dokazanom terapijskom aktivnošću nosača,

iii) ciklosporin A na gama-imunoglobulinu sa dokazanom terapijskom aktivnošću nosača,

iv) ritonavir na gama-imunogiobulinu sa dokazanom terapijskom aktivnošću nosača,

stabilnost formulacije.

Jedan od najprostijih agenasa za kontrolisanje agregacije je voda. Korišćenjem odgovarajuće količine vode može se inhibirati neželjena agregacija i protein je gotov za primenu prema ovom pronalasku - on je u »kontrolisanom stanju agregacije«.

Prema jednom oličenju ovog pronalaska ova jedinjenja i smeše mogu kao aditiv sadržati kontrolor agregacije proteina ili stabilizator proteina i/ili pomoćni aditiv za stabilizovanje rastvora. Primeri za takve aditive su sledeći: voda, natrijum-hlorid, pufer, polialkohol kao što je glicerol, derivat šećera rastvoran u vodi pogodno manitol, sorbitol i/ili dulcitol i drugi.

Dalji predmet pronalaska uključuje postupak za dobivanje novih proizvoda i farmaceutskih smeša prema ovom pronalasku. Ovaj postupak obuhvata sledeće stupnj eve: a) rastvaranje terapeutski aktivnog jedinjenja koje ima malu rastvoljivost u vodi i znatan afinitet vezivanja za plazma proteine (»aktivna supstanca«) u farmaceutski prihvatljivom organskom rastvaraču koji se meša sa vodom,

b) kombinovanje pomenutog rastvora sa vodenim rastvorom frakcije plazma proteina u kontrolisanom stanju

agregacije, i opciono

c) dalji farmaceutski prihvatljiv pomoćni aditiv - kao što je kontrolor agregacije proteina i/ili

stabilizator -

pri čemu je dobiven pravi rastvor koji sadrži pomenutu aktivnu supstancu i pomenutu frakciju proteina zajedno vezane nekovalentnim vezama,

d) uklanjanje organskog rastvarača pogodno ultrafiltriranjem, dijalizom, dijafiltriranjem i/ili

liofiliziranjem rastvora ili njegovog koncentrata ili kombinovanjem ovih tretmana

pri čemu se dobiva homogen, u vodi rastvoran tečni ili čvrst proizvod ili farmaceutska formulacija koji sadrže aktivnu supstancu i frakciju plazma proteina,

e) opciono rastvaranje ili razblaživanje čvrstog ili tečnog produkta vodom pri čemu se dobiva bistra tečna

smeša koja je pogodna za terapijsko davanje i

f) opciono finaliziranje ovog proizvoda u parenteralnu formulaciju (dozirajući oblik) za direktnu

primenu.

Kada se prave ovi novi homogeni čvrsti proizvodi koji se sastoje od aktivnih supstanci i proteina vezanih pomoću nekovalentnih veza prema pronalasku pogodno je koristiti postupak koji obuhvata sledeće stupnjeve prema pronalasku: a) rastvaranje terapeutski aktivnog jedinjenja u farmaceutski prihvatljivom organskom rastvaraču koji se

meša sa vodom,

b) kombinovanje pomenutog rastvora sa vodenim rastvorom odabrane frakcije plazma proteina u

kontrolisanom stanju agregacije,

pri čemu se dobiva pravi rastvor koji sadrži pomenutu aktivnu supstancu i pomenutu frakciju proteina zajedno vezane nekovalentnim vezama, c) uklanjanje organskog rastvarača i liofiliziranje rastvora ili njegovog koncentrata.

Odgovarajući način da se najbolje eliminiše organski rastvarač zavisi od aktivne supstance i uključenog proteina. Iz prirode aktivnog proizvoda (para koji uključuje aktivnu supstancu i protein) sledi da primenjeni postupci moraju obezbediti blage uslove. Liofilizacija vodi do homogenih, čvrstih proizvoda koji su rastvorni u vodi i koji se nakon ponovnog rastvaranja u vodi mogu davati intraperitonalno. Moglo bi biti pogodno da se kombinuju gornji stupnjevi, npr., da se postupak načini ekonomičnijim prvo pravljenjem koncentrata para aktivna supstanca/protein i potom podvrgavanjem pomenutog koncentrata liofilizaciji. Neki od parova aktivna supstanca/protein (npr., par amfotericin B/serum albumin) mogu se uspešno koncentrovati primenom ultrafiltriranja ili dijalize. Neki drugi parovi (npr., paklitaksel/HSA) se pogodno tretiraju liofilizacijom. Neki parovi se trebaju prvo ultrafiltrirati a dobiveni koncentrat se zatim treba podvrgnuti liofilizaciji.

Za stručnjaka u ovoj oblasti je jasno da u toku dobivanja parenteralnih farmaceutika razblaživanje vodom uključuje razblaživanje takvim vodenim rastvorima koji sadrže dalje parenteralno prihvatljive aditive kao što je, npr., natrijum-hlorid.

Odgovarajući rastvarač koji se koristi prema ovom pronalasku da rastvori aktivni sastojak prema gornjem stupnju a) treba da ima sledeće osobine: • on treba da potpuno rastvori aktivni sastojak u njegovoj sraeši sa vodom i • njegova smeša sa >50% vode ne treba da denaturiše upotrebljeni protein.

Pre započinjanja izvođenja postupka prema ovom pronalasku uz primenu aktivnog sastojka i odabranog proteina na bazi gore datog treba odrediti odgovarajući rastvarač. Pogodno je da se koriste rastvarači sa kojima su smeše koje sadrže >50% vode još uvek u stanju da rastvore aktivni sastojak.

Pogodni rastvarači koji se mogu koristiti za stupanj

a) gornjeg postupka su, na primer, bilo koji rastvarač iz grupe koja se sastoji od alifatičnih C2-4monoaikohola ili

polialkohola, 70-100%-nog etanola, dimetilformamida,

metilformamida.

Kada se pravi rastvor koji sadrži protein može biti prisutan kontrolor agregacije i/ili stabilizator rastvora. Takvi aditivi uključuju dalju ili optimalnu količinu vode. Oni takođe uključuju sredstva koja su u stanju da parcijalno zauzmu neka od vezivnih mesta proteina tako da se izbegne agregacija, kao što je bilo koje od sledećih sredstava: natrijum-hlorid, pufer, polialkohol kao što je glicerol i/ili neki derivat šećera koji je rastvoran u vodi, pogodno manitol, sorbitol, dulcitol.

Kad se odabiraju optimalni uslovi u slučaju bilo kakvog aktivnog sastojka optimalni vezivni afiniteti i odgovarajuće agregacione osobine moraju da budu određeni putem premliminarnih odmeravanja. U primerima niže mi otkrivamo potpuni postupak takvih određenja.

Prema poželjnom ostvarenju pronalaska jedinjenja korišćena u stupnju a) su paklitaksel i jedna komponenta prirodne plazme kao što je serum albumina, imunoglobulin, glikoprotein, interferon i/ili interleukin ili se upotrebljavaju rekombinacije istih. Dalja ostvarenja prema pronalasku obuhvataju uključivanje kao aktivne supstance u vodi nerastvorni citostatik kao što je taksonoid, antibiotik, vitamin, sredstvo protiv zapaljenja, analgetik, sredstvo protiv grčeva, imunosupresant, antiepileptik, anksiolitik, hipnotik, antigljivičasti agens, antikoagulant, inhibitor lipid-peroksidaze, koronarni vazodilator, antiaritmički agens, kardiotonik, urikosurik, antitrombotik, hormon steroida (progestogen, androgen, testogen) i/ili fotoosetljivo sredstvo. Poželjne aktivne supstance koje mogu biti korišćene u postupku prema pronalasku obuhvataju sledeće: amfotericin B, analog adriamicina, apazcn, azatioprin, bromazepam, kamptotecin, karbamazepin, klonazepam, ciklosporin A, diazepam, dikumarol, digitoksin, dipiridamol, dizopiramid, flunitrazepam, gemfibrozil, ketohlorin, ketokonazol, mikonazol, niflumična kiselina, oksazepam, fenobarbital, fenitoin, progesteron, propofol, ntonavir, sulf inpirazon, suprofen, takrolimus, tamoksifen, taksonoid, testosteron, tiriiazad, trioksalen, valproična kiselina i/ili varfarin.

Poželjno ostvarenje pronalaska sastoji se u dobivanju homogenog, čvrstog, u vodi rastvornog proizvoda koji se sastoji od paklitaksela i humanog serum albumina u kojem aktivni sastojak i frakcija plazma proteina mogu biti u nekovalentnoj vezi. Dalje pogodno oličenje ovog pronalaska se sastoji u dobivanju homogenog čvrstog produkta rastvornog u vodi koji se sastoji od taksonoida opšte formule I i frakcije plazma proteina u kojem su aktivni sastojak i frakcija plazma proteina u nekovalentnoj vezi.

Iz gornjih objašnjenja je jasno da ovaj pronalazak nije ograničen na bilo koju od ovih aktivnih supstanci niti na bilo koji od gore navedenih proteina.

Dalji predmet ovog pronalaska obuhvata postupak primene proizvoda i formulacija prema ovom pronalasku za lečenje humanih ili veterinarskih pacijenata. Postupak se sastoji u davanju pacijentu, koji treba da se leći aktivnim sastojkom, efektivne doze smeše prema ovom pronalasku ili napravljene prema ovom pronalasku. Doze koje se moraju primeniti zavise od aktivnog sastojka kao i od upotrebijenog proteina. Mogu se davati doze da obezbede najmanje iste krvne nivoe (koncentracije) za koje je poznato da su efektivne kada se primenjuju specifične poznate supstance preko( via)drugih puteva davanj a.

Dat je pogodan postupak za parenteralno lečenje humanih ili veterinarskih pacijenata sa terapeutski aktivnom supstancom koja je nerastvorna u vodi i ima znatan afinitet vezivanja prema plazma proteinu primenom parenteralnog davanja pacijentu, koji treba lečenje sa pomenutom aktivnom supstancom, efektivne doze sledećih produkata pogodno primenjujući sledeće odgovarajuće opsege doze (obračunate u odnosu na aktivnu supstancu): paklitaksel/albumin 70-280 mg/tretman; propofol/albumin 6-10 mg/kg/sat; kamptotecin/albumin, gemfibrozil/albumin, ciklosporin A/albumin 3-5 mg/kg/dan; amfotericin B/albumin do 1,5 mg/kg/dan, pri čemu su isti opsezi doza primenjeni za jedinjenja koja sadrže odnosne rekombinantne proteine.

Jedinjenja, smeše i postupci prema ovom pronalasku daju prednosti uključujući sledeće: • postaje moguće da se izbegne upotreba biološki nekompatibilnih prenosnih sredstava, da se smanje ili potpuno izbegnu sporedni efekti koji ograničavaju dozu, u odnosu na takve komponente kao što su toksični rastvarači, površinski aktivni agensi, emulgatori i

slično

• primena frakcija plazma proteina kao prenosnika lekova ne daje dodatne toksične efekte - nasuprot tome oni mogu poboljšati toleranciju pacijenata, napr., u

slučaju hemoterapije

• u željenim slučajevima primenjena doza se može povećati u poređenju sa lekovima koji su sada na tržištu dajući tako mogućnost poboljšanja ukupnog ishoda terapije.

Ovaj pronalazak je detaljnije ilustrovan u sledećim primerima koji ni u kojem slučaju ne ograničavaju njegov opseg.

PRIMERI

I. PREPARATIVNE METODE, ANALIZE

Sledeće metode su primenjene da se odredi vezivanje pojedinog aktivnog sastojka (supstance) za neki protein:

a) Ultrafiltriranje

Uzorak od 1 ml bistrog rastvora formiranog mešanjem

vodenog rastvora koji sadrži protein u kontrolisanom stanju agregacije i rastvora aktivnog sastojka u odgovarajućem rastvaraču se filtrira kroz membranu za ultrafiltriranje (granica propuštanja membrane >30.000 Da) i aktivni sastojak se određuje u frakciji ultrafiltrata. Kada se meri koncentracija aktivnog sastojka u nefiltriranom rastvoru ukupna količina (>90%) se izdvaja u nepromenjenom obliku.

Liofilizacija

Liofilizira se 1 ml gornjeg rastvora. Posle liofiliziranja čvrst ostatak se rastvara u oko 1,00 ml destilovane vode dajući bistar rastvor. Merenjem koncentracije aktivnog sastojka ovog rastvora nije nađen aktivni sastojak u vodenoj fazi ali se 100% može izdvojiti iz proteinske frakcije.

c) Analiza aktivnog sastojka

Analize za određivanje aktivnog sastojka se vrše

pomoću HPLC (tečne hromatografije sa visokim perfor-mansama) uz detekciju sa UV (ultraljubičastom) spektroskopij om.

Analize pomoću HPLC mogu se vršiti npr., na HPLC sistemu Waters Millennium (Waters, Ma, SAD). Njegove komponente su: pumpa Waters 616, kontrolor Waters 600S, automatski injektor uzoraka fa'aters 717 plus sa setom termostata podešenim na +5°C, UV/VIS detektor Waters 996 sa diodom sa antenskom rešetkom. Sistem se startuje i akvizicija podataka se vrši pomoću programa Waters Millennium v.2.02.0 koji radi na personalnom računaru Digital P486/166 (Digital Eguipments, Irvin, Engleska). Za svako jedinjenje pojedinačno se moraju optimizirati uslovi, kao što je dole ilustrovano za nekoliko proizvoda.

d) Dokaz hemijske strukture

Da se dokaže da je hemijska struktura supstance

izolovane iz vezane frakcije ostala nepromenjena korišćena je LC/MS metoda. Analize pomoću LC/MS su izvršene na singl četvoropolnom LC/MS masenom spektrometru Finnigan Navigator (Finnigan, Manchester, Engleska) uz primenu ES ili APCI + način jonizacije, sa MassLab v.2.0 sistemom za akviziciju podataka koji radi na Digital Venturis FX/166 (Digital Equipments, Irvin, Engleska) personalnom računaru. Za svaku specifičnu supstancu moraju se pojedinačno optimizirati primenjeni uslovi, na bazi referenci - kao što je ilustrovano u nekoliko sledećih primera.

e) Priprema uzoraka

U sledećem je data tipična metoda za pripremu uzoraka,

koja se koristi da se odredi odnos ukupna koncentracija/količina supstance iz nekog uzorka pomoću HPLC i/ili LC/MS analize.

Sadržaj čvrste materije iz fiole za liofilizaciju je rekonstruisan sa vodom, rastvor je pomešan sa apsolutnim etanolom u odnosu 1:1 (zapr:zapr), taložeći plazma proteine, dok su se supstance rastvorile. Posle brzog centrifugiranja, rastvor je pogodan za HPLC ili LC/MS analizu. U LC/MS analizi uzorak je analiziran direktnim uvođenjem uzorka ili je pomoću HPLC prvo izvršeno odvajanje komponenata jedne od druge. Obe metode daju dragocenu informaciju o hemijskoj strukturi polaznog (roditeljskog) jedinjenja i/ili mogućih proizvoda degradacije, kao što je dole detaljnije ilustrovano za nekoliko proizvoda.

Hromatografski i maseno-spektroskopski podaci iz HPLC i LC/MS proučavanja mogu potvrditi hemijsku jednakost između poznate biološki aktivne supstance koja je upotrebljena kao polazna materija i jedinjenja izdvojenog pošto je bilo vezano za proteinsku frakciju datu ovim poronalaskom.

f) Upotrebijeni materijali

Sve upotrebijene aktivne supstance su kvaliteta SADP

XXIII (u odnosu na čistoću).

U eksperimentima su korišćene sledeće frakcije plazma proteina: (<*>= kvalitet Ph. Eur.)

II. DOBIVANJE I HEMIJSKE ILI FIZIČKE ANALIZE

U sledećim primerima odnosi vezivanja plazma protein:supstrat su u prosečnom opsegu nalazeći se između 1 : 0,1-100. Odnosi vezivanja supstanca:HSA su izračunati na osnovu pretpostavke da je za HSA MT = 66500, i za humani gama globulin MT = 150.000 [videti 11Science244

(1989) 1195-1198;Vok Sang70 (1996) 203-209].

Primer II.1

Rastvor humanog serum albumina (20%-ni, 3,08xlO~<3>M) u kontrolisanom stanju agregacije i rastvor paklitaksela (1 mg/ml, l,17xl0"<3>M) u apsolutnom etanolu su pomešani u odnosu 4:1 i smeša je mešana dok nije dobiven bistar rastvor.

Rastvor je liofiliziran; čvrst ostatak je ponovo rastvoren u dovoljnoj količini vode da se osigura dobivanje bistrog rastvora koji ima koncentraciju 20% u odnosu na humani serum albumin. Vezivanje je određeno iz UF filtrata i retentatnih frakcija, pokazujući 99%-no vezivanje paklitaksela za humani serum albumin. Ovo predstavlja odnos humani serum albumin:paklitaksel od 1:0,1.

Primer II. 2

Rastvor humanog serum albumina (4,44%-ni, 6,67x10"'' M) u kontrolisanom stanju agregacije i rastvor paklitaksela (2,0 mg/ml, 2,34xl0"<3>M) (MT 853,92) u apsolutnom etanolu su pomešani u odnosu 9:1 i smeša je mešana dok nije dobiven bistar rastvor. Rastvor je dalje tretiran kao što je opisano u primeru II.1.

Vezivanje je određeno iz UF filtrata i retentatnih frakcija, pokazujući 99%-no vezivanje paklitaksela za humani serum albumin. Ovo predstavlja odnos humani serum albumin:paklitaksel od 1:0,39.

Primer II.3

Rastvor rekombinantnog humanog serum albumina (4,44%-ni, 6,67xlO~<4>M) u kontrolisanom stanju agregacije i rastvor paklitaksela (2,0 mg/ml, l,40xl0~<3>M) u apsolutnom etanolu su pomešani u odnosu 9:1 i smeša je mešana dok nije dobiven bistar rastvor.

Rastvor je liofiliziran; čvrst ostatak je ponovo rastvoren u dovoljnoj količini vode da se osigura dobivanje bistrog rastvora koji ima koncentraciju 20% u odnosu na rekombinantni humani serum albumin. Vezivanje je određeno iz UF filtrata i retentatnih frakcija, pokazujući 99%-no vezivanje paklitaksela za rekombinantni humani serum albumin. Ovo predstavlja odnos rekombinantni humani serum albumin:paklitaksel od .1:0,24.

Primer II.4

Rastvor humanog gama globulina (2,25%-ni, l,5xlO~<4>M) u kontrolisanom stanju agregacije i rastvor paklitaksela (0,1 mg/ml, l,171xl0"<4>M) u apsolutnom etanolu su pomešani u odnosu 9:1 i smeša je mešana dok nije dobiven bistar rastvor.

Rastvor je liofiliziran; čvrst ostatak je ponovo rastvoren u dovoljnoj količini vode da se osigura dobivanje bistrog rastvora koji ima koncentraciju 16% u odnosu na humani gama globulin.

Vezivanje je određeno iz UF filtrata i retentatnih frakcija, pokazujući 98%-no vezivanje paklitaksela za humani gama globulin. Ovo predstavlja odnos humani gama globulin:paklitaksel od 1:0,71.

U gore datim primerima II.1-II.3 količina paklitaksela je merena pomoću HPLC radeći prema sledećem postupku:

Supstanca je određena i pomoću LC/MS i nađeno je da je nepromenjena [videtiRapid Communications in Mass Spectrometry11 (1997) 1025-1032 iRapid Communications in Mass Spectrometry9 (1995) 495-502]. Komparativni rezultati su prikazani na slikama 6: Slika 6A prikazuje maseni spektar standarda, Slika 6B prikazuje krivu ponovo rastvorenog uzorka. Slika 6C prikazuje fragmentaciju paklitaksela.

Parametri LC/MS: jonizacija: APCI + interfejs;

brzina protoka gasovitog azota: 300 l/h; rastvarač: acetonitril:pufer = 60:40, gde je pufer 10 mM amonijum-formijat pH 5,0 koji je podešen sa 10%-nom mravljom kiselinom; brzina protoka: 0,300 ml/min.

Analiza za određivanje paklitaksela:

Za kvantitativno određivanje paklitaksela iz različitih rastvora primera II.1-II.27 primenjena je HPLC metoda sa reversnom fazom Ci8. Uzorci su ubrizgavani u HPLC sistem u >50% rastvoru etanola, sprečavajući bilo kakvo taloženje supstance.

Vezivanje

Vezivanje supstance za plazma proteine je određeno posle 15 minuta uravnotežavanja na 8±2°C.

Raspodela supstance se može meriti posle ultrafiltriranja kroz odgovarajuću membranu (granica propuštanja membrane mora biti > nego MT proteina), određujući koncentraciju supstance u ultrafiltratnoj frakciji (što predstavlja nevezanu supstancu) i u prethodno filtriranom rastvoru, oslobađajući vezani deo nakon denaturacije proteina (predstavljajući ukupnu količinu). Da se denaturiše protein i oslobodi vezana frakcija koristi se prethodno ohlađen (8±2°C) apsolutni etanol u odnosu 1:1. Tačne vrednosti koncentracije i količina su izračunati uzevši u obzir i faktor razblaživanj a.

Primeri II.S-II.21

Rastvor humanog serum albumina sa koncentracijom u opsegu od 20% (3,08xl0~<3>M) do 0,02% (3,08xl0"<s>M) je spojen sa rastvorom paklitaksela u apsolutnom etanolu u opsegu koncentracije od 20 mg/mi (2,34xl0~<2>M) do 0,01 mg/ml (l,17xl0~<5>M) dobijajući uvek bistre rastvore. Detalji su predstavljeni na Tabeli 1. Sva merenja su izvršena tri puta i iz izračunatih rezultata je uzeta srednja vrednost.

Legenda:

[T]Tukupna koncentracija paklitaksela posle

dodavanja humanom serum albuminu

[HSA] koncentracija humanog serum albumina n(TB)/n(HSA) broj molova paklitaksela vezanih na mol

humanog serum albumina

n (Tb)/n/TT/100% procenat vezanog paklitaksela.

Varijacija koncentracije paklitaksela (sa 0,08% HSA, 10 % etanol, 0,002 mg/ml paklitaksela) je prikazana na Slici 7; varijacija koncentracije albumina (sa 0,004-16% HSA, 20 % etanol, 0,2 mg/ml paklitaksela) je prikazana na Slici 8. Varijacija vezivanja paklitaksela za HSA (sa 0,8% HSA, 10 % etanol, 0,1-2,0 mg/ml paklitaksela) kao funkcija pH pri vrednostima pH 4,0-8,5 je prikazana na Slici 9. Sledeći znaci na grafiku odgovaraju sledećim primerima:

primer 11.18 -'t-?-

primer 11.19 -Q-0~

primer 11.20 -x-x-

primer 11.15 -0-0-

primer 11.21-a-a_

Primer 11.22

Slične metode onima koje su gore date u primerima II.2-II.21 primenjene su sa animalnim serum albuminom, imunoglobulmom, glikoproteidima, interferonima i interleukinima.

Primer 11.23

Tretiranje komercijalno raspoloživog humanog serum albumina ili rekombinantnog humanog serum albumina (u sledećem albumina) da se postigne kontrolisano stanje agregacije sa najboljim uslovima vezivanja ovog molekula uključuje uklanjanje stabilizatora, kao što su natrijum-kaprilat, N-acetil-D,L-triptofan i druge jonske komponente i soli.

a)Metoda ultrafiltriranja

Podesiti pH rastvora koji sadrži 10% albumina do vrednosti pH 3,0 dodavanjem hlorovodonične kiseline i razblažiti na sadržaj proteina od 5% dodavanjem bidestilovane vode. Koncentrovati rastvor do 10% u odnosu na sadržaj proteina koristeći ultrafiltriranje (granica propuštanja membrane 30.000 kD).

Razblažiti rastvor nazad na sadržaj proteina od 5% dodavanjem 1,0 mM hlorovodonične kiseline. Koncentrovati rastvor do 10% u odnosu na sadržaj proteina koristeći ultrafiltriranje (granica propuštanja membrane 30.000 kD) .

Ponoviti postupak 12x, zatim podesiti pH vrednost do 6,9 dodavanjem 2,0 M vodenog rastvora natrijum-hidroksida i razblažiti rastvor na sadržaj proteina od5%dodavanjem bidestilovane vode. Ponovo koncentrovati rastvor do 10% u odnosu na sadržaj proteina koristeći ultrafiltriranje

(granica propuštanja membrane 30.000 kD) .

Razblažiti rastvor nazad na sadržaj proteina od 5% dodavanjem bidestilovane vode. Koncentrovati rastvor do 10% u odnosu na sadržaj proteina koristeći ultrafiltriranje (granica propuštanja membrane 30.000 kD). Ponoviti postupak 10x, dobijajući frakciju čistog proteina, dovoljno oslobođenog od drugih ekscipijenasa. Od tog momenta, provodijivost ultrafiltrata je bliska provodijivosti bidestilovane vode koja se koristi za razblaživanje. Ovaj protein je odgovarajući za primenu da veže npr., paklitaksel ni uj.KJ.osporin.

b) Metoda dijalize

Umesto ultrafiltriranja primena dijalize daje slične rezultate. Ovaj tretman zahteva oko 48 sati.

Primer 11.24

Rastvor humanog serum albumina (HSA) (0,8%-ni, l,203xlO~<4>M) i rastvor amfotericina B (4,0 mg/ml, 4,33xl0"<3>M) (MT = 924,09) u DMF su pomešani u odnosu 9:1 i smeša je mešana dok nije dobiven bistar rastvor.

Rastvor je liofiliziran; čvrst ostatak je ponovo rastvoren u dovoljnoj količini vode da se osigura dobivanje bistrog rastvora koji ima koncentraciju 20% za humani serum albumin (HSA). Vezivanje je određeno iz UF filtrata i retentatnih frakcija, pokazujući 99,7%-no vezivanje amfotericina B za humani serum albumin (HSA). Ovo predstavlja odnos humani serum albumin (HSA): amfotericin B od 1:4.

Primer 11.25

Rastvor rekombinantnog humanog serum albumina (0,8%-ni, l, 203xl0~4 M) i rastvor amfotericina B (40,0 mg/ml, 4,33xl0"<2>M) u DMF + HC1 su pomešani u odnosu 9:1 i smeša je mešana dok nije dobiven bistar rastvor.

Rastvor je liofiliziran; čvrst ostatak je ponovo rastvoren u dovoljnoj količini vode da se osigura dobivanje bistrog rastvora koji ima finalnu koncentraciju 20% za rekombinantni humani serum albumin (HSA). Vezivanje je određeno iz UF filtrata i retentatnih frakcija, pokazujući 99,5%-no vezivanje amfotericina B za humani serum albumin. Ovo predstavlja odnos rekombinantni humani serum albumin : amfotericin B od 1:40.

Amfotericin B je meren pomoću HPLC radeći prema donjem postupku:

Supstanca je određena i pomoću LC/MS je nađeno da je nepromenjena. Komparativni rezultati su prikazani na slikama 2: Slika 2A prikazuje maseni spektar standarda, Slika 2B prikazuje krivu ponovo rastvorenog uzorka. Slika 2C prikazuje fragmentaciju amfotericina B.

Parametri LC/MS: jonizacija: ESI + interfejs, brzina protoka gasovitog azota: 300 l/h, rastvarač: 20 mM amonijum-formijat pH 4,0 koji je podešen sa

10%-nom mravljom kiselinom, brzina protoka: 0,300 ml/min.

Primer 11.26

Rastvor humanog serum albumina (0,4%-ni, 6,015xl0~<5>M) u kontrolisanom stanju agregacije i rastvor kamptotecina (0,14 mg/ml, 4,02xl0"<4>M) (MT = 348,36) u apsolutnom etanolu su pomešani u odnosu 4:1 i smeša je mešana dok nije dobiven bistar rastvor. Rastvor je liofiliziran; čvrst ostatak je ponovo rastvoren u dovoljnoj količini vode da se osigura da finalna koncentracija bude 20% za humani serum albumin, čime se dobiva bistar rastvor. Vezivanje je određeno iz UF filtrata i retentatnih frakcija, pokazujući 98%-no vezivanje kamptotecina za humani serum albumin (HSA). Ovo predstavlja odnos humani serum albumin : kamptotecin od 1: 5,34 .

Primer11.27

Rastvor rekombinantnog humanog serum albumina (0,4%-ni, 6,015xl0~<5>M) u kontrolisanom stanju agregacije i rastvor kamptotecina (0,14 mg/ml, 4,02xl0~<4>M) u apsolutnom etanolu su pomešani u odnosu 4:1 i smeša je mešana dok nije dobiven bistar rastvor.

Rastvor je liofiliziran; čvrst ostatak je ponovo rastvoren u tolikoj količini vode da se osigura da finalna koncentracija bude 20% za rekombinantni humani serum albumin, čime se dobiva bistar rastvor. Vezivanje je određeno iz UF filtrata i retentatnih frakcija, pokazujući 98%-no vezivanje kamptotecina za humani serum albumin (HSA). Ovo predstavlja odnos humani serum albumin : kamptotecin od 1:5,34.

Mi smo merili kamptotecin pomoću HPLC na sledeći način:

ciono vreme 6,9 min, k' = 2,45

Supstanca je određena i pomoću LC/MS je nađeno da je nepromenjena[Cancer Research56 (1996) 3689-3694].

Primer11.29

Rastvor humanog serum albumina (4,0%-ni, 6,015xl0"<4>M) u kontrolisanom stanju agregacije i rastvor karbamazepina (8,0 mg/ml, 3,39xl0~<2>M) (MT 236,27) u apsolutnom etanolu su pomešani u odnosu 19:1 i smeša je mešana dok nije dobiven bistar rastvor. Rastvor je liofiliziran; čvrst ostatak je ponovo rastvoren u dovoljnoj količini vode da se osigura da finalna koncentracija bude 20% za humani serum albumin, čime se dobiva bistar rastvor. Vezivanje je određeno iz UF filtrata i retentatnih frakcija, pokazujući 98%-no vezivanje karbamazepina za humani serum albumin (KSA). Ovo predstavlja odnos humani serum albumin : karbamazepin od 1:2,8.

Karbamazepin je meren pomoću HPLC na sledeći način:

Supstanca je određena i pomoću LC/MS je nađeno da je nepromenjena[ Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem.35(10)

(1997) 755-759]. Komparativni rezultati su prikazani na slikama 3: Slika 3A prikazuje maseni spektar standarda, Slika 3B prikazuje krivu ponovo rastvorenog uzorka. Slika 3C prikazuje fragmentaciju karbamazepina.

Parametri LC/MS: jonizacija: ESI + interfejs, brzina protoka gasovitog azota: 300 l/h, rastvarač: 2 mM amonijum-formijat, brzina protoka: 0,250 ml/min.

Primer II.30

Rastvor humanog serum albumina (4,0%-ni, 6,0I5xl0"<4>M) u kontrolisanom stanju agregacije i rastvor ciklosporina A (MT 1202,63) (1,0 mg/ml, 8,33x10"- M) u apsolutnom etanolu su pomešani u odnosu 9:1 i smeša je mešana dok nije dobiven bistar rastvor.

Rastvor je liofiliziran; čvrst ostatak je ponovo rastvoren u dovoljnoj količini vode da se osigura dobivanje bistrog rastvora koji ima finalnu koncentraciju od 20% za humani serum albumin. Vezivanje je određeno iz UF filtrata i retentatnih frakcija, pokazujući 97%-no vezivanje ciklosporina A za humani serum albumin. Ovo predstavlja odnos humani serum albumin : ciklosporin A od 1:0,14.

Primer 11.31

Rastvor rekombinantnog humanog serum albumina (2,0%-ni, 3,008xl0"<4>M) u kontrolisanom stanju agregacije i rastvor ciklosporina A (1,0 mg/ml, 8,33xl0"<4>M) u apsolutnom etanolu su pomešani u odnosu 9:1 i smeša je mešana dok nije dobiven bistar rastvor.

Rastvor je liofiliziran; čvrst ostatak je ponovo rastvoren u dovoljnoj količini vode da se osigura finalna koncentracija od 20% za rekombinantni humani serum albumin čime se dobiva bistar rastvor. Vezivanje je određeno iz UF filtrata i retentatnih frakcija, pokazujući 98%-no vezivanje ciklosporina A za rekombinantni humani serum albumin. Ovo predstavlja odnos rekombinantni humani serum albumin : ciklosporin A od 1:0,29.

Primer II.32

Rastvor humanog gama globulina (2,25%-ni, 1,50x10"'' M) i rastvor ciklosporina A (1,0 mg/ml, 8,33xlO"<4>M) u apsolutnom etanolu su pomešani u odnosu 9:1 i smeša je mešana dok nije dobiven bistar rastvor.

Rastvor je liofiliziran; čvrst ostatak je ponovo rastvoren u dovoljnoj količini vode da se osigura finalna koncentracija od 16% za humani gama globulin čime se dobiva bistar rastvor. Vezivanje je određeno iz UF filtrata i retentatnih frakcija, pokazujući 98%-no vezivanje ciklosporina A za humani gama globulin. Ovo predstavlja odnos humani gama globulin : ciklosporin A od 1:0,56.

Ciklosporin A je meren pomoću HPLC na sledeći način:

Supstanca je određena i pomoću LC/MS [1] je nađeno da je nepromenjena, kao što to pokazuju dobiveni rezultati. Komparativni rezultati su prikazani na slikama 4: Slika 4A prikazuje maseni spektar standarda, Slika 4B prikazuje krivu ponovo rastvorenog uzorka. Slika 4C prikazuje fragmentaciju ciklosporina A.

parametri LC/MS: jonizacija: ESI + interfejs, brzina protoka gasovitog azota: 300 l/h, rastvarač: acetonitril/voda = 60/40; brzina protoka rastvarača:

0,350 ml/min.

Primer 11.33

Rastvor humanog serum albumina (0,4%-ni, 6,015xl0~<5>M) i rastvor propofola (MT 178,27) (2, 0 mg/ml, l,12xl0"<2>M) u apsolutnom etanolu su pomešani u odnosu 9:1 i smeša je mešana dok nije dobiven bistar rastvor.

Rastvor je liofiliziran; čvrst ostatak je ponovo rastvoren u dovoljnoj količini vode da se osigura finalna koncentracija od 20% za humani serum albumin čime se dobiva bistar rastvor. Vezivanje je određeno iz UF filtrata i retentatnih frakcija, pokazujući 99%-no vezivanje propofola za humani serum albumin. Ovo predstavlja odnos humani serum albumin : propofol od 1:18,3.

Primer 11.34

Rastvor rekombinantnog humanog serum albumina (0,4%-ni, 6,015xlO"<5>M) i rastvor propofola (2,0 mg/ml, l,12xl0~<2>M) u apsolutnom etanolu su pomešani u odnosu 9:1 i smeša je mešana dok nije dobiven bistar rastvor.

Rastvor je liofiliziran; čvrst ostatak je ponovo rastvoren u dovoljnoj količini vode da se osigura finalna koncentracija od 20% za rekombinantni humani serum albumin čime se dobiva bistar rastvor. Vezivanje je određeno iz UF filtrata i retentatnih frakcija, pokazujući 99%-no vezivanje propofola za rekombinantni humani serum albumin. Ovo predstavlja odnos rekombinantni humani serum albumin : propofol od 1:18,3.

Propofol je meren pomoću HPLC na sledeći način:

Supstanca je određena i pomoću LC/MS je nađeno da je nepromenjena[ J. of Chromatography B669(1995) 358-365]. Komparativni rezultati su prikazani na slikama 5: Slika 5A prikazuje maseni spektar standarda, Slika 5B prikazuje krivu ponovo rastvorenog uzorka. Slika 5C prikazuje fragmentaciju propofola.

parametri LC/MS: jonizacija: APCI + interfejs, brzina protoka gasovitog azota: 300 l/h, rastvarač: acetonitril/voda = 73/27; brzina protoka rastvarača:

0,300 ml/min.

Primer II.35

9,0 ml rastvora humanog serum albumina (0,8%-ni, I, 213xl0~4 M) i 1,0 ml rastvora amfotericina B (4,0 mg/ml, 4,33xl0~<3>M) u dimetilformamidu su pomešani dajući bistar rastvor. Ovaj rastvor je dijaliziran nasuprot 2,0 litra vode (vode za injekcije) pri 4°C u toku perioda od 20 sati uz zaštitu od svetlosti.

Primenjujući postupak za određivanje iz primera II. 24 nađeno je da je vezivanje 99,6%-no, predstavljajući odnos HSA: amfotericin B od 1:3,5.

Ponavljajući postupak dijalize pet puta koncentracija DMF u rastvoru je smanjena na vrednost ispod njegove granice detekcije (2xl0~<9>M) .

III. OBLICI DOZIRANJA

Primeri III.1-III.6

Radeći prema postupku za dobivanje uz primenu liofilizacije kao što je gore opisano dobivena je odgovarajuća farmaceutska formulacija. Ponovo rastvarajući čvrstu materiju u odgovarajućoj zapremini vode za injekcije (VI) tako da se dostigne koncentracija od 20 % za HSA, rastvor postiže koncentraciju pogodnu za terapeutsku primenu kao što je dole sabrano za neke aktivne supstance:

Gornji oblici doziranja mogu se dalje finalizirati u fiolama za injekcije koje se mogu ubrizgavati i davati infuzij om.

IV. BIOLOŠKIPRIMERI

Proučavanja biološke ekvivalentnosti

Biološka ekvivalentnost je određena upoređivanjem novih formulacija prema ovom pronalasku sa poznatim formulacijama primenjenim u terapiji koje sadrže istu aktivnu supstancu sa malom rastvorijivošću u vodi. Takve poznate formulacije su dobivene u polioksietilovanom ricinusovom ulju (kremofor EL) i apsolutnom etanolu.

Upotrebljeni materijali:

Paklitaksel rastvoren u smeši polioksietilovano ricinusovo ulje (kremofor EL):apsolutni etanol = 1:1, poređen je sa vodenim rastvorom paklitaksel/HSA datim ovim pronalaskom, koji je dobiven prema primeru II.2.

Primer IV.1Proučavanjain vi tro

Komparativna proučavanja su izvršenain vitro

da se odredi antiproliferativna i citotoksična aktivnost na nizovima ćelija humanog tumora. Poređene su formulacija paklitaksela u smeši kremofor EL/apsolutni etanol i HSA formulacija paklitaksela u odnosu na nizove ćelija K562 humane mijeloidne leukemije, MCF-7 i MDA-231 karcinoma grudi (dojke) i OVCAR-5 karcinoma jajnika[ Anticancer Research16 (1996) 2469-2478],

Postupak:

Analiza inhibicije rasta kolonije: Monoslojne kulture nizova ćelija su tretirane sa osam različitih koncentracija leka u dve gornje formulacije plus u rastvoru u DMSO/rastvor soli kao referenci. Kulture su inkubirane u toku 24, 48, 72, 96 i 120 časova. Kolonije su obojene kristalnom violet bojom i preostatak tretiranih ćelija je izračunat kao procenat kolonija formiranih sa netretiranim ćelijama. Tabele IIA-IVB pokazuju rezultate dobivene na različitim nizovima ćelija. U svakom proučavanju je prikazan preostatak tretiranih ćelija izračunat kao procenat kolonija formiranih sa netretiranim ćelijama. Sve vrednosti su srednja vrednost iz tri eksperimenta.

Primer IV.2In vivofarmakokinetički test

Sa teraeputske tačke gledišta bioekvivalennost se može razmatrati, demonstrirajući jednake farmakokinetičke karaketristike kao što su AUC (površina pod krivom), eliminacione konstante, poluživot plazme posle davanja iste doze istim vrstama. Takav eksperiment je izvršen na pacovima za dve formulacije kao u primeru IV.1[ Semin Oncol.21 (5 suppl. 8) (1194) 53-62].

AUC označava površinu pod krivom koja je funkcija koncentracije plazme u zavisnosti od vremena. Ovaj dijagram se može proizvesi merenjem koncentracije plazme jedinjenja datog u različitim tačkama vremena.

Farmakokinetičko proučavanje kod pacova:

Postupak: Doza od 2,5 mg/kg paklitaksela je data u 1,0 ml zapremine i.v. u velikoj piluli za životinje CR. (Wi) BR pacovima (telesne težine između 380-420 grama) i izvađen je uzorak krvi od 1,0 ml u hepariniziranu epruvetu za eksperimente iz tri životinje na svakoj tački vremena kao što je dole pokazano:

Frakcija plazme je odvojena brzim centrifugiranjem na +5°C i držana zamrznuta na -70°C dok nije prerađena za analitičko merenje.

Dobivanje uzorka: Uzorci zamrznute plazme su

zagrejani na 8°C, centrifugirani 5 minuta pri 5.000 obrta na minut. Uzeto je 0,300-0,500 ml bistrog rastvora plazme i napunjeno na Oasis HLB 1 cc SPE (čvrsta faza) čaure za ekstrakciju. Pre nego što je uzorak plazme napunjen

čaura za ekstrakciju je isplahnuta sa 1 ml metanola, čemu je sledilo ispiranje sa 1 ml vode za prethodno kondicioniranje. Sadržaj paklitaksela je apsorbovan na SPE čauri, dok je preostali deo komponenata uzorka isplahnut sa 1 ml vode i 1 ml 30%-og rastvora aceto-nitril/voda. Čaura za ekstrakciju je osušana duvanjem sa vazduhom. Paklitaksel je eluiran iz SPE čaure za

ekstrakciju sa 1 mi apsolutnog etanola. Uzorak je uparen do suva sa azotom, skladišten (-20°C) za analizu. Ostatak je rastvoren u 0,200 ml apsolutnog etanola i ubrizgan za HPLC analizu.

Uslovi rada HPLC su bili isti kao što je primenjeno za identifikaciju supstance.

Rezultati :

Dobivene tačke predstavljaju srednju vrednost iz tri merenja iz uzoraka tri pojedinačne životinje. Kao rezultat toga, razlika između dve krive koje su dobijene iz farmakokinetičkog proučavanja za jednaku dozu dve različite formulacije, ostala je unutar devijacije pojedinačnih uzoraka. Ista kriva dobija oblik dijagrama svih pojedinačnih vrednosti, ukazujući na nikakvu ili minornu razliku u farmakokinetičkim karakteristikama ove dve formulacije.

Primer IV.3

In vivoprocenjivanje ispitivanja antiproliferativne i citotoksične aktivnosti pokazuje da ove nove formulacije pokazuju pozitivan efekat protiv humanih tumorskih stranih kalema (ksenokalema) CH1 i CHltaxu golim miševima.

Primer IV.4

Testovi preosetljivosti

Oko 45% pacijenata tretiranih paklitakselom je

pokazalo reakcije preosetljivosti. Dokazano je da su ovi sporedni efekti u vezi sa ekscipijensom ove formulacije, kremoforom EL, kao što je primećeno sa drugim farmaceutskim proizvodima koji sadrže ovu istu komponentu. Ova reakcija preosetljivosti je određena kao anafilaktička toksičnost izražena kroz indukciju oslobađanja histamina od strane kremofora EL.

Naša studija je izvršena na CRL (Wi) BR pacovima mužjacima težine 130-150 g [14]. Data doza je izračunata oko 7,0 mg/kg za paklitaksel, data i.v. u 1,0 ml ukupne zapremine. Grupa za svaku vremensku tačku i dozu sadržala je 5 životinja. Uzorci krvi su sakupljeni u epruvete koje sadrže heparin posle 2, 5 i 10 minuta nakon tretmana. Plazma je odvojena brzim centrifugiranjem. Uzorci su skladišteni na -70°C.

Saržaj histamina ovog uzorka je<14>C-metilovan sa specifičnim enzimom histamin-N-metil-transferaza. Koncentracija histamina je određena u uzorcima plazme merenjera<i4>C radioaktivnosti u uzorcima.

Dobivene vrednosti pokazuju da kremofor EL i formulacija koja ga sadrži imaju znatnu indukciju oslobađanja histamina, dok HSA i formulacija koja sadrži HSA i sam paklitaksel ne pokazuju takav efekat.

Primer IV.5

Isti fenomen kao u primeru IV.4 je nađen primenjujućiin vitrohumane eksperimente iz uzoraka humane krvi u odnosu na kvantitativnu analizu aktivacije hromatina krvnih limfočita [Metoda:Analytical and Quantitative Cytology and Histology8 (1986) 1].

Claims (36)

1. U vodi rastvoran produkt bez organskog rastvarača ili farmaceutska formulacija u čvrstom ili tečnom obliku i njihovi pravi vodeni rastvori bez organskog rastvarača uglavnom za parenteralnu primenu,naznačeni time,što sadrže: (A) terapeutski aktivno jedinjenje koje ima malu rastvorlj ivost u vodi (<1 -IO*4 mol/l) i znatan afinitetet vezivanja za plazma proteine (aktivnu supstancu), i (B) plazma proteinsku frakciju u kontrolisanom stanju agregacije, pri čemu su aktivna supstanca (A) i plazma proteinska frakcija (B) nekovalentno vezane jedna za drugu i što opciono dalje sadrži (C) farmaceutski prihvatljive i uglavnom parenteralno prihvatljive aditive za formulaciju - kao što su voda, stabilizatori i kontrolori agregacije proteina

2. Produkti i farmaceutske formulacije prema zahtevu 1,naznačeni time,stoje plazma proteinska frakcija (B) humana plazma proteinska frakcija.

3. Produkti i farmaceutske formulacije prema zahtevu 1,naznačeni time,stoje plazma proteinska frakcija (B) animalna (životinjska) plazma proteinska frakcija.

4. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-3,naznačeni time,što je plazma proteinska frakcija (B) komponenta prirodne plazme, kao stoje serum albumin ili rekombinantni serum albumin, prirodni imunoglobulin, glikoprotein, interferon i/ili interleukin ili rekombinantni imunoglobulin, glikoprotein, interferon i/ili interleukin.

5. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-4,naznačeni time,što je aktivna supstanca (A) odabrana od citostatika kao što su taksonoidi, antibiotika, vitamina, antiinflamatomih (antizapaljivih) agenasa, analgetika, antivirusnih agenasa, antikonvulzanata (sredstava protiv grčeva), imunosupresanata, antiepileptika, anksiolitika, hipnotika, antigljivičnih agenasa, antikoagulanasa, inhibitora lipidne peroksidaze, koronarnih vazodilatora, antiaritmičkih agenasa, kardtotoničnih agenasa, urikosurika, antitromboznih agenasa, steroidnih hormona (progesterona, androgena, testogena) i fotosenzivatora.

6. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-5,naznačeni time,što sadrže najmanje jednu od sledećih aktivnih supstanci (A): amfotericin B, analog adriamicina, apazon, azatioprin, bromazepam, kamptotecin, karbamazepin, klonazepam, ciklosporin A, diazepam, dikumarol, digitoksin, dipiridamol, dizopiramid, tlunitrazepam, gemfibrozil, ketohlorin, ketokonazol, mikonazol, nifluminsku kiselinu, oksazcpam, fenobarbital, fenitoin, progesteron, propofol, ritonavir, sulfinpirazon, suprofen, takrolimus, tamoksilen, taksonoid, testosteron, tirilazid, triokssalen, valproinsku kiselinu i varfarin, i pri čemu je molarni odnos aktivne suspstance (A) prema plazma proteinskoj frakci ji (B) unutar opsega od 1:0,05 do 1:100 i najbolje 1:0,1 do 1:50.

7. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-6, naznačeni time,što kao aktivnu supstancu (A) sadrže taksonoid opšte formule I u kojoj R1 označava/erc-butiloksikarbonilamino ili benzoilamino i R"označava vodonik ili acil-grupu , najbolje acetil-grupu.

8. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-7,naznačeni time,što kao aktivnu supstancu (A) sadrže taksonoid paklitaksel i kao plazma proteinsku frakciju (B) humani serum albumin, imunoglobulin, glikoprotein, interferon i/ili interleukin ili neku drugu prirodnu ili rekombinantnu humanu plazma proteinsku frakciju, pri čemu je molarni odnos aktivne supstance (A) prema plazma proteinskoj frakciji (B) 1:0,05 do 1:100 i najbolje 1:0,1 do 1:50.

9. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-7,naznačeni time,što kao aktivnu supstancu (A) sadrže azatioprin i kao plazma proteinsku frakciju (B) humani serum albumin, imunoglobulin, glikoprotein, interferon i/ili interleukin ili neku drugu prirodnu ili rekombinantnu humanu plazma proteinsku frakciju, pri čemu je molarni odnos aktivne supstance (A) prema plazma proteinskoj frakciji (B) 1:0,05 do 1:100 i najbolje 1:0,1 do 1:50.

10. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-7,naznačeni time,što kao aktivnu supstancu (A) sadrže kamptotecin i kao plazma proteinsku frakciju (B) humani serum albumin, imunoglobulin, glikoprotein, interferon i/ili interleukin ili neku drugu prirodnu ili rekombinantnu humanu plazma proteinsku frakciju, pri čemu je molarni odnos aktivne supstance (A) prema plazma proteinskoj frakciji (B) 1:0,05 do 1:100 i najbolje 1:0,1 do 1:50.

11. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-7,naznačeni time,Što kao aktivnu supstancu (A) sadrže gemfibrozil i kao plazma proteinsku frakciju (B) humani serum albumin, imunoglobulin, glikoprotein, interferon i/ili interleukin ili neku drugu prirodnu ili rekombinantnu humanu plazma proteinsku frakciju, pri čemu je molarni odnos aktivne supstance (A) prema plazma proteinskoj Frakciji (B) 1:0,05 do 1:100 i najbolje 1:0,1 do 1:50.

12. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-7,naznačeni time,što kao aktivnu supstancu (A) sadrže mikonazol i kao plazma proteinsku frakciju (B) humani serum albumin, imunoglobulin, glikoprotein, interferon i/ili interleukin ili neku drugu prirodnu ili rekombinantnu humanu plazma proteinsku frakciju, pri Čemu je molarni odnos aktivne supstance (A) prema plazma proteinskoj frakciji (B) 1:0,05 do 1:100 i najbolje 1:0,1 do 1:50.

13. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-7,naznačeni time,što kao aktivnu supstancu (A) sadrže propofol i kao plazma proteinsku frakciju (B) humani serum albumin, imunoglobulin, glikoprotein, interferon i/ili interleukin ili neku drugu prirodnu ili rekombinantnu humanu plazma proteinsku frakciju, pri čemu je molarni odnos aktivne supstance (A) prema plazma proteinskoj frakciji (B) 1:0,05 do 1:100 i najbolje 1:0,1 do 1:50.

14. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-7,naznačeni time,što kao aktivnu supstancu (A) sadrže takomoksifen i kao plazma proteinsku frakciju (B) humani serum albumin, imunoglobulin, glikoprotein, interferon i/ili interleukin ili neku drugu prirodnu ili rekombinantnu humanu plazma proteinsku frakciju, pri čemu je molarni odnos aktivne supstance (A) prema plazma proteinskoj frakciji (B) 1:0,05 do 1:100 i najbolje 1:0,1 do 1:50.

15. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-7,naznačeni ( ime,što kao aktivnu supstancu (A) sadrže ritonavir i kao plazma proteinsku frakciju (B) humani serum albumin, imunoglobulin, glikoprotein, interferon i/ili interleukin ili neku drugu prirodnu ili rekombinantnu humanu plazma proteinsku frakciju, pri čemu je molarni odnos aktivne supstance (A) prema plazma proteinskoj frakciji (B) 1:0,05 do 1:100 i najbolje 1:0,1 do 1:50.

16. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-7,naznačeni time.,što kao aktivnu supstancu (A) sadrže takrolimus i kao plazma proteinsku frakciju (B) humani serum albumin, imunoglobulin, glikoprotein, interferon i/ili interleukin ili neku drugu prirodnu ili rekombinantnu humanu plazma proteinsku frakciju, pri čemu molarni odnos aktivne supstance (A) prema plazma proteinskoj frakciji (B) iznosi 1:0,05 do 1:100 i najbolje 1:0,1 do 1:50.

17. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-7,naznačeni time,što kao aktivnu supstancu (A) sadrže tirilazid i kao plazma proteinsku frakciju (B) humani serum albumin, imunoglobulin, glikoprotein, interferon i/ili interleukin ili neku drugu prirodnu ili rekombinantnu humanu plazma proteinsku frakciju, pri čemu molarni odnos aktivne supstance (A) prema plazma proteinskoj frakciji (B) iznosi 1:0,05 do 1:100 i najbolje 1:0,1 do 1:50.

18. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-7,naznačeni time,što kao aktivnu supstancu (A) sadrže triokssalen i kao plazma proteinsku frakciju (B) humani serum albumin, imunoglobulin, glikoprotein, interferon i/ili interleukin ili neku drugu prirodnu ili rekombinantnu humanu plazma proteinsku frakciju, pri čemu molarni odnos aktivne supstance (A) prema plazma proteinskoj frakciji (B) iznosi 1:0,05 do 1:100 i najbolje 1:0,1 do 1:50.

19. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-18. naznačeni time,što su prisutni u čvrstom obliku ili u obliku vodenog rastvora.

20. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-19,naznačeni time,što kao aditiv sadrže agens koji stabilizuje rastvor i/ili proteinsku komponentu.

21. Produkti i farmaceutske formulacije prema zahtevu 20,naznačeni time,što kao agens koji stabilizuje rastvor i/i li protein sadrže neki od sledećih agenasa: natrij um- hlorid, pufer, alkohol kao stoje glicerol i/ili u vodi rastvoran derivat šećera, najbolje manitol, sorbitol, dulcitol.

22. Homogeni, čvrsti, u vodi rastvorni produkti prema bilo kojem od zahteva 1-19 za farmaceutsku upotreebu,naznačeni lime,što se sastoje od najmanje jedne aktivne supstance (A) odabrane između amfotericina B, analoga adriamicina, apazona, azatioprina, bromazepama, kamptotecina, karbamazepina, klonazepama, ciklosporina A, diazepama, dikumarola, digitoksina, đipiridamola, dizopiramida, flunitrazepama, gemfibrozila, ketohlorina, ketokonazola, mikonazola, nifluminske kiseline, oksazepama, fenobarbitala, fenitoina, progesterona, propofola, ritonavira, sulfinpirazona, suprofena, takrolimusa, tamoksifena, nekog taksonoida, testosterona, tirilazida, triokssalena, valproinske kiseline i varfarina, i najmanje jedne plazma proteinske frakcije (B) odabrane između humanog serum albumina, imunoglobulina, glikoproteina, interferona i/ili interleukina ili neke druge prirodne ili rekombinantne humane plazma proteinske frakciju, i pri čemu je molarni odnos aktivne supstance ( A) prema plazma proteinskoj frakciji (B) unutar opsega od 1:0,05 do 1:100 i najbolje 1:0,1 do 1:50.

23. Homogeni, čvrsti, u vodi rastvorni produkti prema zahtevu 22,naznačeni lime,što se sastoje od taksonoida opštc formule 1 u kojoj R<1>označavaterc-butiloksikarbonilaminoili benzoilamino i R<2>označava vodonik ili acil-grupu , najbolje acetil-grupu, kao aktivne supstance (A) i plazma proteinske frakcije (B).

24. Homogeni, čvrsti, u vodi rastvorni produkti prema zahtevu 22,naznačeni time,što se sastoje od paklitaksela kao aktivne supstance (A) i humanog serum albumina, rekombinatnog humanog plazma albumina i/ili y-globuJina kao plazma proteinske frakcije (B).

25. Homogeni, čvrsti, u vodi rastvorni produkti prema zahtevu 22,naznačeni time,što se sastoje od amfotericina B kao aktivne supstance (A) i humanog serum albumina, rekombinatnog humanog plazma albumina i/ili y-globulina kao plazma proteinske frakcije (B).

26. Homogeni, čvrsti, u vodi rastvorni produkti prema zahtevu 22,naznačeni time,što se sastoje od kamptotecina kao aktivne supstance (A) i humanog serum albumina, rekombinatnog humanog plazma albumina i/ili y-g!obulina kao plazma proteinske frakcije (B).

27. Homogeni, čvrsti, u vodi rastvorni produkti prema zahtevu 22,naznačeni time,što se sastoje od karbamazepina kao aktivne supstance (A) i humanog serum albumina, rekombinatnog humanog plazma albumina i/ili y-globulina kao plazma proteinske frakcije (B).

28. Homogeni, čvrsti, u vodi rastvomi produkti prema zahtevu 22,naznačeni time,što se sastoje od ciklosporina A kao aktivne supstance (A) i humanog serum albumina, rekombinatnog humanog plazma albumina i/ili y-globulina kao plazma proteinske frakcije (B).

29. Homogeni, čvrsti, u vodi rastvorni produkti prema zahtevu 22,naznačeni time,što se sastoje od propofola kao aktivne supstance (A) i humanog serum albumina, rekombinatnog humanog plazma albumina i/ili y-globulina kao plazma proteinske frakcije (B).

30. Produkti i farmaceutske formulacije prema bilo kojem od zahteva 1-29,naznačeni time,što su formulisani u dozirajućim oblicima za davanje i najbolje parenteralno davanje, u humanoj terapiji u sledećim dozama, pri čemu je svaka izračunata na bazi aktivne supstance (A): pri čemu su isti opsezi doze upotrebljeni za kompozicije koje sadrže rekombinantne proteine.

31. Postupak za proizvodnju u vodi rastvornih produkata i farmaceutskih formulacija u čvrstom ili tečnom obliku i njihovih pravih vodenih rastvora bez. organskog rastvarača prema bilo kojem od zahteva 1-30,naznačen time,što obuhvata sledeće stupnjeve: a) rastvaranje aktivne supstance (A) u farmaceutski prihvatljivom organskom rastvaraču koji se meša sa vodom, b) kombinovanje dobivenog rastvora sa vodenimn rastvorom odabrane plazma proteinske frakcije (B) koja je u kontrolisanom agregatnom stanju, opciono sa daljim, farmaceutski prihvatljivim u vodi rastvornim pomoćnim aditivom, kao što je kontrolor agregacije proteina i/ili stabilizator, pri čemu se dobiva pravi rastvor koji sadrži aktivnu supstancu (A) i plazma proteinsku frakciju (B) koji su vezani zajedno pomoću nekovalentnih veza, c) udaljavanje (uklanjanje) organskog rastavarča i opciono vode, najbolje ultrafdtriranjem, dijalizom, dtjafiltriranjem i/ili liofilizacijom rastvora ili njegovog koncentrata ili kombinacijom ovih tretiranja, čime se dobiva homogen, u vodi-rastvoran tečni ili čvrsti farmaceutski produkt koji sadrži aktivnu supstancu (A) neko valentno vezanu za plazma proteinsku frakciju (B), d) opciono rastvaranje ovog čvrstog produkta u vodi ili razblaživanje tečnog produkta sa vodom, čime se dobiva bistar, pravi vodeni rastvor, bez bilo kojeg organskog rastvarača koji je pogodan za terapeutsko davanje, i e) opciono dovršenje (obrada) ovog produkta u parenteralnu formulaciju/dozirajući oblik za direktnu upotrebu.

32. Postupak prema zahtevu 31,naznačen time, što se u stupnju (b) upotrebljava rastvor koji dalje sadrži farmaceutski prihvatljiv pomoćni aditiv, kao što je kontrolor agregacije proteina i/ili stabilizator, i/ili u stupnju (c) liofilizira rastvor ili njegov koncentrat.

33. Postupak prema zahtevu 31 ili 32,naznačen time,što se u stupnju (a) upotrebljava rastvarač koji ima sledeće osobine da rastvori aktivnu supstancu (A): (i) on može potpuno da rastvori aktivnu supstancu (A) u njenoj smeši sa vodom, i (ii) njegova smeša sa <50% vođe ne denaturiše upotrebljenu plazma proteinsku frakciju (B).

34. Postupak prema zahtevu 33,naznačen time,što se kao rastvarač u stupnju (a) upotrebljava alifatični monohidroksilni ili polihidroksilni C2-4-alkohol, 70-100%-ni etanol, dimetilformamid i/ili metilformamid.

35. Postupak prema bilo kojem od zahteva 31-34,naznačen time,što se kao kontrolor agregacije proteina ili stabilizator i/ili pomoćni aditiv koji stabilizuje rastvor u stupnju (b) upotrebljava voda, natrijum-hlorid, pufer, polihidroksilni alcohol kao što je glicerol i/ili u vodi rastvoran derivat šećera, najbolje manitol, sorbitol i/ili dulcitol.

36. Postupak prema bilo kojem od zahteva 31-35,naznačen time,što se u stupnju (a) upotrebljavaju paklitaksel i komponenta prirodne plazme, kao stoje serum albumin, imunoglobulin, glikoprotein, interferon L/ili interleukin ili rekombinantni serum albumin, imunoglobulin, glikoprotein, interferon i/ili interleukin.