RS50563B

RS50563B - Ne-peptidni bradikinin antagonisti i njihove farmaceutske mešavine

Info

Publication number: RS50563B
Application number: RSP-2008/0110A
Authority: RS
Inventors: Patrizia Felicetti; Christopher Ingo Fincham; Alessandro Giolitti; Carlo Alberto Maggi; Laura Quartara; Cristina Rossi
Original assignee: Istituto Luso Farmaco D'italia S.P.A.
Priority date: 2004-10-15
Filing date: 2005-09-27
Publication date: 2010-05-07
Also published as: BRPI0515983A; DE602005004039T2; EP1799214A1; ITMI20041963A1; GEP20115322B; IL182494A0; HRP20080107T3; US7645759B2; AU2005293881A1; DK1799214T3; SI1799214T1; PL1799214T3; CN101039671A; UA86091C2; AU2005293881B2; ES2299090T3; CA2583920C; CN101039671B; EA010913B1; NO339805B1

Abstract

Jedinjenja koja imaju opštu formulu (I) u kojoj je -R vodonik ili metil;-W je jednostruka (prosta) veza ili atom kiseonika;-n =3;-X je vodonik ili -NR1R2 amino grupa u kojoj R1 i R2 može da bude nezavisno vodonik ili grupa izdvojena iz metila, etila, n-propila, izopropila;-Y je -NR3R4R5 kvaternarna amonijum grupa u kojoj R3, R4, R5 može da bude nezavisno grupa izdvojena iz metila, etila, n-propila, izopropila, n-butila, izobutila, n-pentila; i njihove farmaceutski prihvatljive soli, enantiomeri i enantiomerne smeše. Prijava sadrži još 9 patentnih zahteva.

Description

OBLAST PRONALASKA

[0001]Ovajpronalazak se odnosi na ne-peptidna jedinjenja koja sadrže kvaternarnu amonijum grupu i koja deluju kao specifični antagonisti bradikinin (BK) B2 receptora, a odnosi se i na farmaceutske mešavine koje ih sadrže i na njihovu upotrebu za lečenje svih stanja kod kojih postoji aktivacija bradikinin B2 receptora..

PRETHODNO STANJE TEHNIKE

[0002] Bradikinin(BK) pripada kininima i formira, zajedno sa kalidinom i T-kininom, podgrupu kinina koja je prisutna kod sisara. Kinini igraju važnu ulogu kao medijatori bola i zapaljenja, kako u centralnom, tako i u perifernom nervnom sistemu. Bradikinin je, naročito, nonapeptid

koji organizam proizvodi u fiziopatološkim stanjima.

[0003] Postoje dva tipa kinin receptora, B1 i B2. Glavna karakteristika B1 receptora jeste to da je on više inducibilan nego konstitutivan. Pojavljuje se u tkivima kod zapaljenja ili stresnih stanja. S druge strane, B2 je konstitutivni receptor koji je obično prisutan u svim tkivima i koji deluje kao medijator tokom zapaljenskih procesa. Bradikinin i kalidin se oslobađaju iz svojih proteinskih prekursora (koji su poznati pod nazivom kininogeni), putem proteolitičkih enzima koji se nazivaju kininogenaze. Među njima, glavnu ulogu igraju kalikreini koji, pak, jednom oslobođeni od strane prekursora, mogu da ostvaruju svoje dejstvo samo kratko jer ih brzo uništava čitav niz cirkulišućih enzima i membrana koji se generički definišu kao kininaze. Jedna od ovih kininaza čepa bradikinin kod C-krajnjeg arginina i tako formira des-Arg-BK koji deluje kao agonist B1 receptora.

[0004]Aktivacija bradikinin B1 i B2 receptora dovodi do relaksacije vazalnih mišića sa rezultirajućom hipotenzijom, povećanja vaskularne permeabilnosti, kontrakcije glatkih mišića creva i respiratornog trakta, stimulacije nociceptivnih neurona, alteracije jonske epitelne sekcrecije, proizvodnje nitroksida i oslobađanja citokina od strane leukocita i ejkozanoida iz različitih tipova ćelija. Shodno tome, antagonistička jedinjenja BK receptora mogu da se smatraju za novu klasu lekova za koje se predpostavlja da deluju kod različitih poremećaja. Moguće terapijske primene za pomenute antagoniste jesu inflamatorni, alergijski i autoimuni poremećaji, kao što su, na primer, astma i hronični bronhitis (koje takođe izazivaju iritanti), alergijski, vazomotorni i virusni rinitis, opstruktivno oboljenje pluća (COPD), reumatski artritis, hronična inflamatorna oboljenja creva (Kronova bolest i ulcerativni kolitis), glomerulonefritis, psorijaza, osip, akutni i hronični cistitis; degenerativni poremećaji koje karakteriše fibroza, kao što su, na primer, ciroza jetre, glomerulopatije i plućna fibroza, arterioskleroza; zahvaljujući svom analgetskom dejstvu, u lečenju kako akutnog, tako i hroničnog bola, na primer kod opekotina, cefaleje, ujeda insekata, hroničnog bola kod pacijenata koji boluju od kancera; kod poremećaja kardiovaskularnog aparata, kao što su, na primer, septički, alergijski i post-traumatski šok, i ciroze jetre usled hepatorenalnog sindroma; kao anti-kancerogeni

lekovi i antiangiogenetici; u tečenju hipotenzije i alopecije.

[0005]Različitipeptidni i ne-peptidni antagonisti bradikinin B2 receptora su poznati u literaturi.WO03103671 podrazumeva veliku porodicu jedinjenja sa antagonističkim dejstvom na bradikinin B2 receptor. Jedinjenja ovog pronalaska, mada su uključena u opštu formulu VVO03103671, nisu opisana ili okarakterisana u pomenutom dokumentu.

DETALJAN OPIS

[0006]Ovajpronalazak se odnosi na ne-peptidna jedinjenja koja pokazuju visok afinitet prema i antagonističko dejstvo u odnosu na B2 receptor, i koja imaju opštu formulu (I):

u kojoj je:

- R vodonik ili metil; - W je jednostruka (prosta) veza ili atom kiseonika; -n = 3; - X je vodonik ili -NR^amino grupa u kojoj Rii R2može da bude nezavisno vodonik ili grupa izdvojena

iz metila, etila, n-propila, izopropila;

- Y je -NR3R4R5kvaternarna amonijum grupa u kojoj R3, R4, R5može da bude nezavisno grupa izdvojena iz

metila, etila, n-propila, izopropila, n- butila, izobutila, n-pentila; i

njihove soli sa farmaceutski prihvatljivim kiselinama.

[0007]Najradije, jedinjenja (I) se salifikuju sa neorganskim ili organskim kiselinama izdvojenim iz hlorovodonične, bromovodonične, jodovodonične, sumporne, fosforne, sirćetne, trifuorsirćetne, propionske, oksalne, jabučne, maleinske, ćilibarne, malonske, aspariginske, glutaminske kiseline. Štaviše, usled prisustva hiralnog centra, pronalazak takođe podrazumeva dva enantiomera ili njihove smeše, u bilo kojoj srazmeri, uključujući racemske smeše.

[0008]Jedinjenja sa opštom formulom (I) imaju iin vivoiin vitroantagonističko đejstvo u odnosu na B2 receptor veće nego strukturno sličniji analozi, kao što je opisano u WO03103671.

Poželjna su jedinjenja sa opštom formulom (I) u kojoj je:

- X = vodonik ili -NH2grupa; - Y = -N(CH3)3 + kvaternarna amonijum grupa;

s tim što su drugi supstituenti kao što je definisano gore;

Posebno su poželjna jedinjenja (I) u kojima je:

- R vodonik ili metil; - VVje atom kiseonika; - X je vodonik ili -NH2grupa;

- Y je -N(CH3)s + kvaternarna amonijum grupa.

[0009] Jedinjenja koja su predmet ovog pronalaska mogu da se pripremaju u skladu sa dobro poznatim načinima sinteze.

[0010] Najradije, jedinjenja koja imaju opštu formulu (I) kao što je definisano gore, pripremaju se,

u prisustvu prikladnog kondenzacionog agensa, kondenzacijom intermedijarnog jedinjenja koje ima opštu formulu (II), i koje se dobija kao što je opisano u VVO03103671

sa iedinieniem koje ima formulu (10)

ili njegovim derivatom u kome je karboksilna grupa prikladno aktivirana.

A

[0011]Proces sinteze je ilustrativno prikazan u Shemi 1

[0012] Jedinjenje koje ima formulu (2) se priprema kao što je opisano u časopisu J. Med. Chem. 2001, 44, 1674-1689, bromovanjem odgovarajućeg derivata toluola, koji se, sa svoje strane, dobija kao što je opisano u časopisu J. Fluorine Chemistrv, 2000, 101:85-89.

[0013]Prvi korak se odnosi na formiranje sulfamidne veze (4) koja se dobija kondenzacijom intermedijarnih jedinjenja (2) i (3). Ova reakcija se obavlja na sobnoj temperaturi, najradije u smeši acetonitril/voda (2:1), u prisustvu natrijumhidrokarbonata (NaHC03). Navedena reakcija se odigrava razmenom hlora i broma na pozicija benzila; smeša dobijenih produkata se direktno koristi u sledećem koraku. Reakcija smeše halogenih derivata sa disupstituisanim oksihinolinom (5), u prisustvu kalijumkarbonata (K2C03) i kalijumjodida (Kl), u acetonu pod refluksom, dovodi do derivata estra (6).

[0014] Jedinjenje koje ima formulu (5) odnosno 2,4-dimetil-8-oksihinolin, u kome je R4=R5=CH3, priprema se kao što je opisano u VVO03103671.

[0015]Metilestar koji ima formulu (6) se hidrolizuje u baznim uslovima u karbonsku kiselinu (7), koja se kondenzuje sa Boc-piperazinom (8) da bi se dobilo intermedijarno jedinjenje (9). Navedena kondenzaciona reakcija se obavlja u skladu sa poznatom procedurom za peptidnu sintezu, korišćenjem oksibenzotriazola da bi se aktivirao karbonski uđeo, kondenzacioni agens, kao stoje, na primer, 1-etil-3-(3'-dimetilpropil) karbodiimid i određena količina tercijarnog amina, i to diizopropiletilamin, od tri ekvivalenta na bazi kondenzacionog agensa. Jedinjenje (II) se dobija cepanjem Boe grupe iz intermedijarnog jedinjenja (9), pomoću rastvora hlorovodonične kiseline (4N) u dioksanu i izolovanjem slobodnog amina umesto hlorhidrata.

[0016] Derivat (11) se dobija kondenzacijom intermedijarnog jedinjenja (10) sa aminokiselinom (11), u skladu sa procedurom opisanom za pripremu (9) od (7). Svaka prisutna Boe grupa može da se ukloni iz intermedijarnog jedinjenja (11), rastvorom hlorovodonične kiseline (4N) u dioksanu, čime se dobija finalno jedinjenje. U slučaju da trialkilamonijum grupa nije prisutna ni u kom komercijalno raspoloživom intermedijarnom jedinjenju, ona može da se sintetizuje od odgovarajućeg amina primenom poznatih procedura (Rapport et al, J. Org. Chem, 1977, 42:139-141; Chen etal, J. Biochem, 1978, 56:150-152).

[0017]Jedinjenja ovog pronalaska se koriste u lečenju svih poremećaja kod kojih aktivacija bradikinin receptora mora da se blokira ili redukuje. Ona su naročito prikladna za lečenje inflamatornih, alergijskih i autoimunih poremećaja, kao što su, na primer, astma i hronični bronhitis, alergijski, vazomotorni i virusni rinitis, hronično opstruktivno oboljenje pluća (COPD), reumatski artritis, hronična inflamatorna oboljenja creva (Kronova bolest i ulcerativni kolitis), glomerulonefritis, psorijaza, osip, akutni i hronični cistitis, ciroza jetre,glomerulopatije i plućna fibroza, arterioskleroza, kako akutni, tako i hronični bol, septički, alergijski i post-traumatski šok, ciroza jetre usled hepatorenalnog sindroma, hipotenzija, alopecija, ili kao kao anti-kancerogeni lekovi i antiangiogenetici.

[0018]Za upotrebu u terapiji, jedinjenja ovog pronalaska će biti prikladno formulisana zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačima/ekscipijentima. Poželjne su farmaceutske forme prikladne za oralnu primenu, kao što su, na primer, tablete, kapsule, granule, prahovi, rastvori, suspenzije, sirupi i slično. Ovi farmaceutski preparati mogu da se pripremaju primenom konvencionalnih procedura uz korišćenje sastojaka poznatih u tehnici, kao što su, na primer, ligandi, dezintegranti, lubrikanti, punioci, stabilizacioni agensi, razređivači, boje, aromati, sredstva za ovlaživanje i drugi ekscipijenti poznati osobama koje su vešte u ovog tehnici. Oralne formulacije takođe podrazumevaju forme za produženim oslobađanjem, kao što su, na primer, enterične-obložene tablete ili granule. Čvrste oralne mešavine mogu da se pripremaju primenom konvencionalnih metoda mešanja, punjenja ili komprimovanja. Tečni oralni preparati mogu da budu, na primer, u formi vodenih ili uljnih suspenzija ili rastvora, emulzija, sirupa, ili mogu da imaju formu suvog produkta za rekonstituisanje sa vodom ili drugim prikladnim nosačem pre upotrebe.

[0019]Doziranje može da varira u zavisnosti od starosti i opšteg stanja pacijenta, prirode i težine oboljenja ili poremećaja i načina i tipa primene. Po pravilu, u slučaju oralne primene kod čoveka, odraslog pacijenta, jedinjenja ovog pronalaska će se u principu primenjivati u ukupnoj dnevnoj dozi koja se kreće u opsegu od 1 do 1000 mg, najradije od 5 do 300 mg, u jednoj dozi ili u dozama podeljenim na manje delove.

[0020]Sledeći primeri ilustrativno prikazuju ovaj pronalazak detaljnije.

PRIMER 1

(4-(S)-amino-5-(4-{4-[2,4-dihlor-3-(2,4-dimetil-hinolin-8-iloksimetil)-benzolsulfonilamino]tetrahidropiran-4-karbonil}piperazin-1-il)-5-okso-pentil]trimetil-amonijumhlorid, dihlorhidrat

(Jedinjenje koje ima opštu formulu I u kojoj je R = CH3, W = -O-, X = NH2, n = 3, Y = N(CH3)3<+>CI),

[0021] Ovojedinjenje se sintetizuje primenom načina sinteze koji je ilustrativno prikazan u Shemi 2

[0022JOPŠTI METODI: analitički HPLC:Protok:1 ml/min;Mobilna faza:A-0,1% trifluorsirćetna kiselina u vodi, B-0,1% trifluorsirćetna kiselina u acetonitrilu;Kolona:Zorbax Eclipse XDB C8, 5 mikrona, 150 x 4,6 mm.

Intermedijarno jedinjenje ( 2)2, 4- Dihlor- 3- brommetil- benzolsulfohlorid

[0023]10 ml hlorsulfonske kiseline se kapljičasto dodaje u 4,8 ml 2,6-dihlortuolola tokom dva sata, uz magnetsko mešanje na sobnoj temperaturi. Posle završetka dodavanja, ova smeša se zagreva na 40° C, tokom 2 sata, čime se dobija purpurni rastvor, koji se ohladi i pažljivo sipa u ledenu vodu (0,5 I), uz energično mešanje. Odvojena bela čvrsta masa se filtrira, melje u prah, pere vodom, suši iznad KOH i prečišćava pranjem sa n-heksanom, dodavanjem 200 ml rastvarača uz snažno mešanje. Ova smeša se filtrira, čvrsta masa se odbacuje, a rastvarač se isparava do suvog stanja kako bi se dobio 2,4-dihlor-3-metil-benzolsulfohlorid kao kristalna bela čvrsta masa. Prinos: 85%.

HPLC čistoća: 86% (30% B, 3%/min, Rt=19,7 min).

<1>H-NMR (CDCI3): 8 (ppm) 2,6 (s, 3H), 7,5 (d, 1H), 7,95 (d, 1H);

ESI(+)MS: m/z 260 [M+H]<+>.

[0024]Ovointermedijarno jedinjenje se bromuje u sledećim uslovima: 20 mmol 2,4-dihlor-3-metil-

benzolsulfohlorida se rastvori u acetonitrilu. 2 eq NBS se doda uz mešanje na sobnoj temperaturi dok se ne završi rastvaranje NBS. Na kraju se doda 0,1 eq azo-bisizobutironitrila (AIBN) i smeša se zagreva na 70° C tokom približno 6 sati. Ovaj rastvor se isparava, a ostatak se apsorbuje sa etilacetatom, pere sa H20 i 5% NaHC03, suši iznad Na2S04i filtrira. Organska faza se isparava, čime se dobija viskozna tečnost svetle boje koja se apsorbuje u petroleum-etar. Ostatak se filtrira, i dobija se rastvor (2') kao kristalna čvrsta masa svetle boje.

HPLC čistoća: 95% (50% B do 5%/min, Rt=18,72).

<1>H-NMR (CDCI3): 5 (ppm) 4,85 (s, 2H), 7,58 (d, 1H), 8,08 (d, 1H);

ESI(+)MS: m/z 338,1 [M+H]+.

Intermedijarno jedinjenje ( 3')4- Amino- 3- tetrahidropiran- 4- karbonska kiselina

metilestar hlorhidrat

[0025]4-Amino-3-tetrahidropiran-4-karbonska kiselina hlorhidrat (0,025 mola) se suspenduje u 13 ml CH3OH, ohladi na -60° C i kapljičasto se dodaje u SOCI2(3 eq) uz mešanje. Posle završetka dodavanja, ova smeša se ostavi da se zagreje do sobne temperature, a zatim se postepeno zagreva do burnog ključanja, da bi se dobio bistar rastvor (približno 2 sata), koji se ohladi, a ostatak se filtrira i koncentruje u vakuumu.

Prinos: 80%. Čistoća (NMR): 85%.

<1>H-NMR (DMSO-de): 5 (ppm) 1,91-2.04 (m, 4H), 3,78 (s, 3H), 3,60-3,85 (m, 4H), 9,00 (s, 3H).

ESI(+)MS: m/z 160,1 [M+H]<+>.

Intermedijarno jedinjenje ( 4')4-( Brommetil- 2, 4- dihlor- benzolsulfonilamino)-tetrahidropiran- 4- karbonska kiseli na metilestar

[0026] Intermedijarnojedinjenje (3') (1,1 eq) se rastvori u vodi zajedno sa 4 ekvivalenta K2C03. Ovaj rastvor se doda u rastvor od 1 ekvivalenta (10 mmol) intermedijarnog jedinjenja (2) u acetonitrilu i meša se na sobnoj temperaturi sve dok se ne formira talog (4 sata). Rastvarač se ispari, a ostatak se rastvori u etilacetatu i 0,1M HCI (1/1). Organska faza se odvoji i suši iznad Na2S04. Rastvarač se ispari, a dobijena čvrsta masa se pere cikloheksanom, čime se dobija bela čvrsta masa u kojoj su hlor/brom derivati prisutni u odnosu 10/1.

Prinos: 60%. HPLC čistoća: 88% (20% B pri 3%/min; Rt=14,11 (Br) i 14,47 (Cl)).

<1>H-NMR (CDCI3): 8 (ppm) 1,81-1,99 (2H, m), 2,07-2,25 (2H, m), 3,49-3,71 (7H, m), 4,81 (1,5H, s, [Br]), 4,94 (0,3H, s, [C1]), 5,30 (1H, br), 7,47-7,53 (1H, m), [7,49 (d, J 8,5Hz, X = Br), 7,51 (d, J 8,5Hz, X = Cl], 7,91-7,98 (1H, m), [7,94 (d, J 8,5Hz, X = Br), 7,96 (d, J 8,5Hz, X = Cl]; _

Intermedijarno j edinjenje( 6') 4- r2, 4- Dihlor- 3-( 2, 4- dimetil- hinolin- 8- iloksimetil)-benzolsulfonilamino] tetrahidropiran- 4- karbonilna kiselina metilestar

[0027]Hinolin (5') (0,48 mmol) i LiOH (2,5 eq) se mešaju na sobnoj temperaturi u pristustvu azota u metil-etilketonu (MEK). Ova smeša se meša u prisustvu azota tokom 90 min. Intermedijarno jedinjenje (4) se rastvori u MEK/suvom DMF (2/1) (42 ml, 12 ml/mmol), a rastvor sa sadržajem hinolina se kapljičasto dodaje u reagujuću smešu, uz mešanje. Mešanje se vrši tokom 16 sati. Reagujuća smeša se koncentruje u vakuumu, a ostatak se rastvori u etilacetatu (50 ml, 100 ml/mmol). Organska faza se pere (3x50 ml) puferskim rastvorom pH=4,2, suši iznad Na2S04, filtrira i koncentruje u vakuumu, da bi se dobilo žuto ulje. Prinos: 33%. HPLC čistoća: 77%

(20% B, 3%/min; Rt=9,54).

'H-NMR (DMSO-de): 5 (ppm) 1,80-1,95 (m, 4H), 2,56 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 3,32-3,40 (m, 2H), 3,42-3,55 (m, 2H), 3,60 (s, 3H), 5,57 (s, 2H), 7,30 (s, 1H), 7.39 (d, 1H), 7,50 (dd, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,78 (d, 1H), 8,02 (d, 1H), 8,77 (bs, 1H); ESI(+)MS: m/z 553,1

[M+H]\

Intermedijarno jedinjenje( 7') 4- f2, 4- Dihlor- 3-( 2, 4- dimetil- hinolin- 8- iloksimetil)-benzoisulfonilamino] tetrahipiran- 4- karbonska kiselina

[0028] Intermedijarnojedinjenje koje ima formulu (6') se rastvori u THF i taj rastvor se doda u 10 eq 1M LiOH u vodi. Ova smeša se meša tokom 4 sata na 40° C, a onda se rastvarač ispari. Ostatak se rastvori u vodi, a 0,1M HCI se dodaje do pH=4. Vodena faza se ekstrahuje dihlormetanom, a organska faza se suši iznad Na2S04. Rastvarač se ispari, da bi se dobio žuti čvrsti ostatak. Prinos: 90%. HPLC čistoća: 99% (20% B, 3%/min; Rt=7,72). <1>H-NMR (DMSO-d6): 6 (ppm) 1,75-1,90 (m, 4H), 2,56 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 3,10-3,35 (m, 2H), 3,38-3,50 (m, 2H), 5,58 (s, 2H), 7,30 (s, 1H), 7,37 (d, 1H), 7,46 (t, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 8,03 (d, 1H), 8,64 (bs, 1H); ESI(+)MS: m/z 539,1 [M+H]\

Intermedijarno jedinjenje( 9') 4- terc- butoksikarbonil-(( 4-( 2, 4- dihlor- 3-( 214- dimetil-

hinolin- 8- iloksimetil)- benzolsulfonilamino)- tetrahidropiran- 4- karbonil)- piperazin- 1- il

[0029] (7') (1,3 mmol) i HOBt (1,1 eq) se suspenduju u 50 ml suvog DMF u boci sa okruglim dnom od 100 ml u prisustvu azota. Ova smeša se ohladi na +4° C i u nju se doda EDCI. HCI (1,1 eq) uz mešanje. Mešanje na +4° C se nastavi tokom jednog sata, a onda se dodaju DIPEA (2 eq) i Boc-piperazin (1 eq) i smeša se ostavi da se zagreje do sobne temperature, uz mešanje. Posle 12 h rastvarač ispari, ostatak se rastvori u 40 ml DCM, a organska faza se pere slanim rastvorom (20 ml) i suši iznad Na2S04. Rastvarač se ispari da bi se dobilo ulje koje se prečišćava u Varian Mega Bond (glavni sistem za rektifikaciju lakih frakcija) 70 g kolona (etilacetat, Rf=0,50), čime se dobija žuta čvrsta masa.

Prinos: 96%. HPLC čistoća: 98% (20% B, 3% B/min; Rt=11,14).

<1>H-NMR (CDCL3): 8 (ppm) 1,45 (s, 9H), 1,55-1,80 (m, 2H), 2,05-2,20 (m, 4H), 2,56 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 3,38-3,90 (m, 10H), 5,58 (s, 2H), 7,10 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,37

(d, 1H), 7,46 (t, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 8,03 (d, 1H), 8,64 (bs, 1H); ESI(+)MS: m/z 707,2 [M+H]<+>.

Intermedijarno jedinjenje ( 1') 4-( 4-( 2, 4- Dihlor- 3-( 2, 4- dimetil- hinolin- 8- iloksimetil)-benzolsulfonilamino)- tetrahidropiran- 4- karbonil)- piperazin- 1- il

[0030]0,62 mmol intermedijarnog jedinjenja (9') se doda u 10 ml HCI/dioksana 4M, i ova smeša se 10 meša tokom 3 sata. Rastvarač se ispari, a ostatak se suši na temperaturi ispod 0° C, da bi se dobio hlorhidrat (1') kao žuta čvrsta masa. Prinos: 98%. HPLC čistoća: 92% (20% B, 3%/min; Rt=5,34). <1>H-NMR (D20): 5 (ppm) 1,55-2,10 (m, 7H), 2,90-3,10 (m, 9H), 3,20-3,55 (m, 9H), 6,0 (s, 3H), 7,60-8,10 (m, 8H), 8,95 (d, 1H).

ESI(+)MS: m/z 609,1 [M+H]<+>.

Intermedijarno jedinjenje ( 10')4- terc- butoksikarbonilamino- 4- karboksi- butil)-trimetilamonijum

[0031]10 mmol Boc-Orn-OH se suspenduje u metanolu (20 ml) i ova suspenzija se doda u 44 mmol izuree. Boca se zapuši i podvrgava mešanju na sobnoj temperaturi tokom 2 dana. Dobijeni rastvor se prati pomoću TLC (eluent: CHCI3/CH3OH/NH4OH 40/54/6; Boc-Orn-OH Ref=0,29; (10') Rf: 0,11, detekcija KMn04).

[0032]Metanol se ispari u vakuumu, a ostatak se digestira u 150 mmol vode i filtrira. Boca sa okruglim dnom i čvrsta masa se peru vodom (2x50ml) i sve vodene frakcije za pranje se pomešaju, a zatim se koncentruju u vakuumu (40 ml). Dobijena čvrsta masa (4,068 g) se suspenduje u vodi (40 ml), filtrira (da bi se uklonili svi tragovi uree) i prečišćava pomoću FCC u obratnoj fazi LiChroprep RP-18 (40-63 mikrona). Kolona (19x7 cm) se ispira sa 3% CH3CN u vodi, a frakcije (približno 100 ml) se analiziraju pomoću TLC. Frakcije koje sadrže čisti produkt (500 ml) se pomešaju, koncentruju u vakuumu da bi se uklonio CH3CN, suše na temperaturi ispod 0° C, i na kraju isparavaju iz 150 ml apsolutnog etanola, da bi se dobilo 442 mg bele, visoko higroskopne čvrste mase. Prinos: 16%. <1>H-NMR (DMSO-d6): 5 (ppm) 1,38 (s, 9H), 1,58-1,75 (m, 4H), 3,03 (s, 9H), 3,29 (m, 2H), 3,45 (m, 1H), 6,49 (d, d, 1H);

ESI(+)MS: m/z 275,2 [M+H]<+>.

Intermedijarno jedinjenje ( 111)4-( S)- terc- Butoksikarbonilamino- 5-( 4-( 4-[ 2, 4-

dihlor- 3-( 2, 4- dimetil- hinolin- 8- iloksimetil)- benzolsulfonilamino] tetrahidropiran- 4-

karbonil} piperazin- 1- il)- 5- okso- pentil] trimetil- amonijumhlorid

[0033] Intermedijarnojedinjenje{10'),1,2 mmol, rastvori se u DMF i ovaj rastvor se doda u bicikloheksilkarbodiimid (1,2 eq) i HOBt (1,2 eq). Ova smeša se meša tokom 30 min, a onda se doda u diizopripilaminometilpolistirol (1,5 eq) i intermedijarno jedinjenje (1') (1 eq). Ova smeša se ostavi da se meša tokom 24 sata. Smola se filtrira, rastvarač se ispari, a ostatak se rastvori u vodi i etilacetatu. Vodena faza se odvoji i suši na temperaturi ispod 0° C. Sirovi produkt se prečišćava preparativnim HPLC (kolona Vydac 218TP, C18, 250x50 mm, protok 60 ml/min, gradient 10% do 70% CH3CN/o,1% TFA tokom 120 min, detektor UV pri 240 nm, kolektovanje 55 do 75 min) čime se omogućava dobijanje intermedijarnog jedinjenja (11') koje se suši na temperaturi ispod 0° C kao bela čvrsta masa. Prinos: 46%. HPLC čistoća: 98% (20% B, 3%/min; Rt=7,68). <1>H NMR (DMSO-de): 6: 1,4 (s, 9H), 1,8-1,45 (m, 6H), 1,95-1,85 (m, 2H), 2,81 (m, 6H), 3,08 (s, 9H), 3,70- 3,18 (m, 7H), 4,01-3,56 (5H, m), 4,57-4,45 (m, 1H), 5,59 (s, 2H), 7.25 (d, 1H), 7,90-7,43 (m, 4H), 8,02 (d, 1H), 8,85 (s, 1H). ESI(+)MS: m/z 863,2 [M

+H]<+.>

( 4-( S)- Amino- 5-( 4- f4-[ 2. 4- dihlor- 3-( 2. 4- dimetil- hinolin- 8- iloksimetil)-benzolsulfonilamino| tetrahidropiran- 4- karbonil} piperazin- 1- il)- 5- okso- pentil] trimetil-

amonijumhlorid, dihlorhidrat

[0034]0,45 mmol intermedijarnog jedinjenja (11') se doda u 10 ml HCI/dioksana 4M. Ova smeša se meša tokom 6 sata, rastvarač se ispari, a ostatak se suši na temperaturi ispod 0° C, čime se dobija finalno jedinjenje kao bela čvrsta masa. Prinos: 87%. HPLC čistoća: 98% (20% B, 3%/min; Rt=5,14). <1>H NMR (DMSO-de): 5: 1,95-1,60 (m, 8H), 2,81 (m, 6H), 3,08 (s, 9H), 3,70-3,18 (m, 12H), 4,57-4,45 (m, 1H), 5,59 (s, 2H), 7,90-7,60 (m, 4H), 8,02 (d, 1H), 8,5 (s, 3H), 8,85 (s, 1H).

ESI(+)MS: m/z 763,1 [M+H]<+>.

PRIMER 2

(4-(S)-Amino-5-(4-(4-(2.4-dihlor-3-(2-metil-hinolin-8-iloksimetil)-benzolsulfonilamino)tetrahidropiran-4-karbonil)-piperazin-1-il-)5-okso-pentil)-trimetil amonijumhlorid, dihlorhidrat

[0035]<1>H NMR (DMSO-d6): 5: 8,90 (1H, s), 8,47-8,34 (4H, m), 8,02 (1H, d), 7,81 (1H,

d), 7,73-7,37 (4H, m), 5,62 (2H, s), 4,57-4,45 (1H, m), 4,01-3,56 (5H, m), 3,43-3,18 (7H, m), 3,06 (9H, s), 2,78-2,61 (4H, m), 2,89 (1H, s), 1,97-1,60 (9H, m). HPLC: tR =

9.26 min. MS: [M]<+>749.

PRIMER 3

[5-(4-{2,4-Dihlor-3-(2,4-dimetil-hinolin-8-iloksimetil)-benzol-sulfonilamino]tetrahidropiran-4-karbonil)-piperazin-1-il)-5-okso-pentil]-trimetil-amonijumtrifluoroacetat.

[0036]<1>H NMR (DMSO-de): 6 (ppm) 1,53 (s, 2H); 1,68 (m, 4H); 1,90 (m, 2H); 2,45 (t, 2H); 2,78 (m, 6H); 3,04 (9H, s); 3,23-3,57 (7H, m); 5,68 (2H, s); 7,38-8,18 (5H, m); 8,04 (1H, d, J = 8,42 Hz); 8,82 (1H, s). HPLC: tR= 5,65 min. MS: [M]<+>748.

PRIMER 4

(4-(S)-Amino-5-(4-{1-[2,4-dihlor-3-(2,4-dimetil-hinolin-8-iloksimetil)-benzolsulfonilamino]ciklopentankarbonil}piperazin-1-il)-5-okso-pentil]-trimetil-amonijumhlorid, dihlorhidrat

[0037]<1>H NMR (DMSO-d6): 5: 8,90 (1H, s), 8,48 (3H, s), 8,02 (1H, d), 7,95-7,63 (3H, m), 5,59 (2H, s) 4,57-4,45 (1H, m), 3,97-3,24 (10H, m), 3,08 (9H, s), 2,95-2,61 (5H, m), 1,97-1,72 (8H, m), 1,42 (4H, s); HPLC: tR= 5,88 min. MS: [M]<+>747,2.

Biološko dejstvo

[0038] Evaluacijaafiniteta jedinjenja ovog pronalaska prema B2 receptom je vršena u studijama vezivanja za humani B2 receptor koji se pojavljuje u CHO ćelijama, prema proceduri koji su opisali Bellucci et al, u časopisu Br. J. Pharmacol. 2003, 140;500-506; prijavljene vrednosti u pogledu vezivanja su izražene kao pKi.

[0039]Antagonističko dejstvo (izraženo kao pA2) je evaluirano kao inhibicija bradikininom-indukovane produkcije inozita u CHO ćelijama transfektiranim B2 humanim receptorom, u skladu sa procedurom koja je opisana kod autora Bellucci et al, u časopisu Br. J. Pharmacol. 2003, 140:500-506.

[0040] In vivodejstvo jedinjenja ovog pronalaska evaluirano je kao delotvornost u inhibiranju BK-indukovanog bronhospazma kod zamorca (Tramontana et al., J. Pharmacol. Exp. Therap., 296:1051-1057, 2001),

merenjem it doze (it= intratrahealna primena) (u nmol/kg) koja je za 80% inhibirala bronhijalnu konstrikciju tokom najmanje 210 min.

[0041] Poželjnajedinjenja ovog pronalaska su poređena sa onima koja su strukturno sličnija, a koja su opisana u VVO03103671. Na opšte iznenađenje, otkriveno je da jedinjenja ovog pronalaska imajuin vivoiin vitrodejstvo veće nego strukturno srodni analozi iz VVO03103671. I test antagonističkog dejstva na ćelijama transfektiranim humanim receptorom iin vivotest su veoma prediktivni u smislu očekivane doze za terapijske primene kod ljudi.

SKRAĆENICE

[0042]it = intratrehealna primena; iv = intravenska primena; eq = ekvivalent; DCM = dihlormetan; MeOh = metanol; THF = tetrahidrofuran; DMSO = dimetilsulfoksid; DMF = dimetilformamid; AcOEt = etilacetat; AcOH = sirćetna kiselina; TFA = trifluorsirćetna kiselina; NBS = Na-bromosukcinimid; bpo = benzoilperoksid; Boe = terc-butoksikarbonil; HOBt = oksibenzotriazol; EDC = 1-etil-3-(3'-dimetilpropil) karbodiimid; DIPEA = diizopropiletilamin; HPLC = hromatografija tečnosti pod visokim pritiskom; TLC = hromatografiija tankog sloja; NMR = nuklearna magnetna rezonanca; ESI = jonizacija raspršivanjem elektrona; MS = masena spektrometrija; FCC = hromatografija kolone za rektifikaciju lakih frakcija; Rt = vreme zadržavanja.

Claims

1.Jedinjenja koja imaju opštu formulu (I)

u kojoj je - R vodonik ili metil; - W je jednostruka (prosta) veza ili atom kiseonika; -n = 3; - X je vodonik ili -NRiR2amino grupa u kojoj Rii R2 može da bude nezavisno vodonik ili grupa izdvojena iz metila, etila, n-propila, izopropila; - Y je -NR3R4R5kvaternarna amonijum grupa u kojoj R3, R4, R5može da bude nezavisno grupa izdvojena iz metila, etila, n-propila, izopropila, n- butila, izohutila, n-pentila; i njihove farmaceutski prihvatljive soli, enantiomeri i enantiomerne smeše.

2. Soli jedinjenja koja imaju opštu formulu (I) sa neorganskim ili organskim kiselinama izdvojenim iz hlorovodonične, bromovodonične, jodovodonične, sumporne, fosforne, sirćetne, trifuorsirćetne, propionske, oksalne, jabučne, maleinske, ćilibarne, malonske, aspariginske, glutaminske kiseline.

3. Jedinjenja kao što se traži u zahtevima 1 ili 2, u kojima je: VV jednostruka (prosta) veza; n = 3; X je izdvojeno iz vodonika ili -NH2 grupa; Y je N(CH3)3 + kvaternarna amonijum grupa; s tim što su drugi supstituenti kao što je definisano u tvrdnji 1.

4. Jedinjenja kao što se traži u zahtevima 1 ili 2, u kojima je: R izdvojeno iz vodonika ili metila; Wje atom kiseonika; n = 3; X je izdvojeno iz vodonika ili -NH2 grupa; Y je -N(CH3)3 + kvaternarna amonijum grupa; s tim što su drugi supstituenti kao što je definisano u tvrdnji 1.

5. Sledeća jedinjenja kao što se traži u zahtevu 3: [4-(S)-amino-5-(4-{1-[2,4-dihlor-3-(2,4-dimetil-hinolin-8-iloksimetil)benzolsulfonilamino]- ciklopentankarbonil}piperazin-1-il)-5-okso-pentiljtrimetil-amonijumhlorid, dihlorhidrat

6. Sledeća jedinjenja kao što se traži u zahtevu 4: •(4-(S)-amino-5-(4-{4-[2,4-dihlor-3-(2,4-dimetil-hinolin-8-iloksi-metil)benzolsulfonilamino] tetrahidropiran-4-karbonil}piperazin-1-il)-5-okso-pentiljtrimetil-amonijumhlorid, dihlorhidrat; •(4-(S)-amino-5-(4-{4-[2,4-dihlor-3-(2-metil-hinolin-8-iloksi-metil)benzolsulfonilamino]- tetrahidropiran-4-karbonil)-piperazin-1-il-)5-okso-pentil)-trimetil-amonijumhlorid, hlorhidrat; •[5-(4-{4-[2,4-dihlor-3-(2,4-dimetil-hinolin-8-iloksimetil)benzolsulfonilamino] tetrahidropiran-4-karbonil}piperazin-1-il)-5-okso-pentil]trimetil-am on ij u mtrif luoroacetat.

7. Farmaceutske mešavine koje sadrže kao aktivni sastojak jedinjenje kao što se traži u zahtevima od 1 do 6 zajedno sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijentima.

8. Upotreba jedinjenja kao što se traži u zahtevima od 1 do 6 za pripremu farmaceutskih mešavina za lečenje svih stanja kod kojih postoji aktivacija bradikinin B2 receptora.

9. Upotreba jedinjenja kao što se traži u zahtevu 8 za pripremu farmaceutskih mešavina za lečenje inflamatornih, alergijskih i autoimunih stanja.

10. Upotreba jedinjenja kao što se traži u zahtevu 8 za pripremu farmaceutskih mešavina za lečenje astme i i hroničnog bronhitisa, alergijskog, vazomotornog i virusnog rinitisa, hroničnog opstruktivnog oboljenja pluća (COPD), reumatskog artritisa, hroničnih inflamatornih oboljenja creva (Kronova bolest i ulcerativni kolitis), glomerulonefritisa, psorijaze, osipa, akutnog i hroničnog cistitisa, ciroze jetre, glomerulopatija i plućne fibroze, Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5