RS50622B - Tretman limfoma t-ćelija primenom 10-propargil-10-diazaaminopterina - Google Patents

Abstract

Primena 10-propargil-l0-deazaaminopterina u formulaciji farmaceutskog sredstva za lečenje T ćelijskog limfoma. Prijava sadrži još 2 patentna zahteva.

Description

TRETMAN LIMFOMA T-

ĆELIJA PRIMENOM 10-PROPARGIL-10-DIAZAAMINOPTERINA

Opis

Ova prijava ima prioritet iz US privremene prijave br. 60/521,593, pođnete 30.05.2004.

OSNOVA PRONALASKA

Ova prijava se odnosi na primenu kombinacije 10-propargil-10-deazaamino-pterina i na tretman limfoma T-ćelija.

10-Propargil-10-deazaaminopterin ("PDX" ili " 10-propargil-1 OdAM") je Član velike klase jedinjenja koja je testirana i u nekim slučajevima je nađeno da su korisna u tretmanu tumora. Ovo jedinjenje, koje ima strukturu prikazanu na SI. 1, opisano je od strane DeGraw et al., "Svnthesis and Antitumor Activitv of 10-Propargil-10-deazaaminopterin," J. Medical Chem. 36: 2228-2231 (1993) i pokazano je da deluje kao inhibitor rasta u mišjoj L1210 ćelijskoj liniji i u manjem stepenu enzima dihidrofolat reduktaze ("DHFR"). Pored toga, neki rezultati su predstavljeni za antitumorska svojstva jedinjenja primenom E0771 modela tumora mlečne žlezde miševa. Ovi podaci su bili nepouzdani zbog malog broja miševa korišćenih u testu (3 po dozi), odsustvo informacija o standardnoj devijaciji koje bi kvantifikovala pouzdanost rezultata, i činjenice daje najviša korišćena doza ustvari bila toksična za miševe. Ipak, uz pretpostavku da ovi rezultati imaju određenu prediktivnu vrednost za efikasnost leka u lečenju humanih tumora, oni bi u najboljem slučaju predvideli lek koji je, na ekvivalentnim nivoima tolerancije, imao osobine koje su slične ili možda neznatno bolje od metotreksata.

PCT objava br. WO98/02163, otkriva iznenađujuće zapažanje daje veći broj visoko prečišćenih PDX kompozicija, kada je testiran u modelu ksenografta u pogledu njihove efikasnosti protiv humanih tumora, sada mnogo superiorniji od metotreksata ("MTX") i čak superiorniji od edatreksata ("ETX"), novijeg kliničkog kandidata. Pored toga, 10-propargil-lOdAM pokazao je iznenađujuću sposobnost da leči tumore tako da nije bilo dokaz rasta tumora nekoliko nedelja posle prestanaka terapije. Tako, visoko prečišćena kompozicija koja sadrži 10-propargil-10dAM može biti korišćena u skladu sa pronalaskom za lečenje tumora, uključujući kako čvrste tumore tako i leukemije. Kompozicija je ilustrovana za primenu u tretmanu humanih tumora mlečne žlezde i humanog kancera pluća.

Kasnije studije na PDX pokazale su daje on koristan sam po sebi i u kombinacijama sa dragim terapeutsldm sredstvima Na primer, Sirotnak et al„ Clinical Cancer Research Vol. 6, 3705-3712 (2000) objavljuje da ko-primena PDX i probenecida, inhibitora cMOAT/MRP-slične ATPaze iz plazma membrane, veoma povećava efikasnost PDX protiv humanih čvrstih tumorain vivo.Pokazano je da su PDX i kombinacije PDX sa hemoterapeutskim sredstvima na bazi platine efikasni protiv mezotelioma (Khokar, et al., Clin. Cancer Res. 7: 3199-3205

(2001).

Termin "limfomi'1 se odnosi na niz različitih bolesti, uključujući ne-Hodgkin-ov lirnfom (NHL); difiizini limfom velikih B-ćelija (DLBCL); folikularni limfom (FL); Hodgkinova bolest; Burkitt-ov limfom; kutani limfom T ćelija; primarni limfom centralnog nervnog sistema i limfomatozne metastaze. U većini slučajeva, limfom je okarakterisan prisustvom kanceroznih B ćelija. Međutim, u limfomima T ćelija, bolest karakterišu kancerozni T limfociti.

REZIME PRONALASKA

U skladu sa predstavljenim pronalaskom, T ćelijski ne-Hodgkin-ov limfom se tretira primenom PDX. Tako, u skladu sa jednim aspektom pronalaska, obezbeđen je postupak za lečenje T ćelijskog ne-Hodgkin-ovog limfoma koji sadrži primenu na pacijenta koji pati od limfoma terapeutski efikasne količine PDX. Preliminarni klinički rezultati kod ljudi su pokazali daje ovaj tretman posebno efikasan, čak i s obzirom na limfome koji su bili otporni na druge terapeutske modalitete.

KRATAK OPIS CRTEŽA

SI. 1 pokazuje strukturu PDX i metotreksata;

SI. 2 pokazuje HPLC nečistog 10-propargil-10dAM preparata koji je pripremljen u skladu sa ranijom tehnikom;

SI. 3 pokazuje HPLC visoko prečišćenog PDX preparata u skladu sa pronalaskom;

SI. 4 pokazuje sintetičku šemu korisnu za pripremu jedninjenja u skladu sa pronalaskom;

DETALJAN OPIS PRONALASKA

Ova prijava se odnosi na primenu 10-propargjl-10-deazaaminopterina u letenju T-ćelijskog limfoma. T-ćelijski limfomi su limfomi kod kojih su T ćelije pacijenta određene kao kancerozne. T ćelijski limfomi obuhvataju niz različitih stanja uključujući bez ograničenja: (a) limfoblastične limfome kod kojih se malignitet javlja u primitivnim limfoidnim progenitorima iz timusa; (b) neoplazme zrelih ili perifernih T ćelija, uključujući T ćelijsku prolifmocitnu leukemiju, T-ćelijsku granularnu limfocitau leukemiju, agresivnu NK-ćelijsku leukemiju, kutani T ćelijski lirnfom (Mvcosis fungoides/Sezarv sindrom), anaplastični limfom velikih ćelija, T ćelijskog tipa, T-ćelijski limfom tipa enteropatije, adultnu T-ćelijsku leukemiju /limfom uključujući one povezane sa HTLV-1, i angioimunoblastični T ćelijski limfom i subkutani panikulitički T ćelijski limfom; i (c) periferni T ćelijski limfomi koji početno uključuju parakorteks limfnog čvora i nikada ne se ne razvijaju po pravoj folikularnoj šemi.

U jednoj varijanti pronalaska, kompozicija sadrži "visoko prečišćeni" PDX. Kao Stoje korišćeno u specifikaciji i patentnim zahtevima, kompozicije koje su "visoko prečišćene" sadrže PDX značajno bez drugih derivata folne kiseline, naročito 10-deazaaminopterina, koji može da utiče na antitumorsku aktivnost PDX. Kompozicija u okviru obima pronalaska može obuhvatati nosače ili inertne punioce za formulaciju PDX u pogodni oblik jedinične doze za terapeutsku primenu, kao i dodatna, ne-folatna terapeutska sredstva.

PDX može biti sintetisan primenom postupka opisanog u radu koji je dao DeGravv, u prethodnom tekstu ili u primeru 7 US Patenta br. 5,354,751. HPLC procena proizvoda pripremljenog ovim postupkom pokazuje prisustvo značajne količine (~4.6%) nečistoće A (SI. 2) koja ima vreme zadržavanja u skladu sa 10-đeazaamino-pterinom. Tako, ako je korišćen sintetički pristup neophodno je dodatno prečišćavanje pored onog opisanog u radu koji su dali DeGravv et al. Takvo prečišćavanje se može izvesti dodatnom HPLC ili kristalizacijom da bi se uklonio 10-deazaaminopterin i drugi derivati folne kiseline koji mogu biti prisutni.

SI. 3 prikazuje HPLC visoko prečišćenog preparata koji se uglavnom sastoji od 10-propargil-lOdAM u skladu sa pronalaskom pripremljenim primenom postupka opisanog u Primeru 1. U ovom slučaju, količina PDX (kao što je određeno pomoću HPLC vršne oblasti) približava se 98%, i maksimum koji odgovara 10-deazaaminopterinu nije detektovan pomoću softvera za obradu iako u ovoj oblasti postoji mala talasasta promena osnovne linije.

PDX je korišćen u Fazi LTl strudije u koju su bili uključeni pacijenti sa agresivnim limfomom, uključujući tri pacijenta sa T ćelijskim limfomom koji je otporan na lek. Dobijeni su sledeći rezultati za pojedinačne slučajeve. Svaki od ovih pacijenata je takođe tretiran folnom kiselinom (1 mg/m<2>dnevno počevši 1 nedelju pre tretmana sa PDX) i dodavanje B12 (1 mg/m<2>mesečno).

Pacijent 1.

Dijagnoza: periferni T ćelijski limfom, stadijum IV

Demografski podaci: žena starosti 48 godina

Prethodni tretman: CHOP x 4 ciklusa (juli 2002. - novembar 2002.) - refraktomi ICE x 2 ciklusa (decembar 2002.) - refraktomi Campath (mart 2003. - jun 2003.) - mešovit odgovor Određivanje stadij uma bolesti pre tretmana: Ekstenzivna kožna bolest

Tretman u toku studije: PDX 135 mg/m<2>x 1 doza

Toksičnost: stomatitis 3. stepena; neutropenija 3. stepena; sepsa

Odgovor: Uglavnom postupno poboljšanje što je utvrđeno pomoću PET skeniranja Komentar: Ovaj pacijent je na kraju umro posle razvoja bakteremije i sepse od otvorenih kožnih lezija sa Gram pozitivnim bakterijama.

Pacijent 2.

Dijagnoza: limfoblastični limfom, prekursorskih T-ćelija, stadijum IV

Demografski podaci: žena starosti 65 godina

Prethodni tretman: L20 - složena kombinovana hemoterapija od maja 2002., primenjivana u toku dve godine. Primala MTX od maja 2002. do februara 2004. Recidiv decembar 2004. Određivanje stadij uma bolesti pre tretmana: Ekstenzivni široko rasprostranjeni recidiv Tretman u toku studije: PDX 30 mg/m<2>x 3 nedelje, svake 4 neđelje. Završena 3 ciklusa do danas.

Toksičnost: nema

Odgovor: Kompletno poboljšanje što je utvrđeno pomoću PET i CT skenera.

Komentar: Pacijent sa bolešću uglavnom otpornom na metotreksat sa ekstenzivnom bolešću sa osnovom u sinusima koja je pozitivno počela da reaguje na terapiju posle jedne doze PDX.

Pacijent 3.

Dijagnoza: HTLV povezani T-ćelijski limfom

Demografski podaci: muškarac starosti 38 godina

Prethodni tretman: EPOCH - infuziona kombinovana terapija oktobar 2003. do februara 2004.

Određivanje stadijuma bolesti pre tretmana: bolest levog pazuha

Tretman u toku studije: PDX 30 mg/m<2>nedeljno x 3 svake 4 nedelje x 2 ciklusa

Toksičnost: nema

Odgovor: Kompletno poboljšanje

Komentar: Potpuni nestanak klinički vidljive bolesti od kraja prvog ciklusa, veoma dobro tolerisan, bez toksičnosti.

Pacijent 4:

Dijagnoza: panikulitički T-ćelijski limfom

Demografski podaci: muškarac starosti 25 godina

Prethodni tretman: Ontak (refraktorno), 9/02-11/02; Targretin i IFNa 1/03-10/03 (trajno delimično poboljšanje); CHOP 4/04 - 6/04; ICE 6/04, CyPen 7/04-8/04, Targretin/MTX 9/04 do 2/05

Tretman u toku studije: PDX 30 mg/m<2>nedeljno x 4

Odgovor: Kliničko potpuno poboljšanje što je utvrđeno pomoću PET

Toksičnost: nema

Komentar: izlečenje subkutanih lezija, previše brojne da bi se izbrojile, velika ulcerativna granulirajuća lezija

Do danas, samo 4 pacijenta sa T-ćelijskim limfomom je tretirano sa PDX, i sva četiri su ispunila kriterijume za potpunu remisiju, čak i na osnovu osetljivih tehnika PET skeniranja. Zanimljivo, pacijent tretiran sa 135 mg/m<2>primio je samo jednu dozu leka sa dramatičnim odgovorom na terapiju, dok su ostali primili samo male umerene doze po nedeljnom režimu.

Za primenu u predstavljenom pronalasku, PDX je korisno formulisan kao deo farmaceutskog preparata. Specifični oblik doze zavisiće od postupka primene, ali može da obuhvata tablete, kapsule, oralne tečnosti, i injektabilne rastvore za intravenoznu, intramuskularnu ili intrapeirtonealnu primenu. Jedan pogodan režim doziranja obuhvata primenu 150 mg/m<2>svake dve nedelje. Niži nivoi mogu naravno biti naznačeni u zavisnosti od tolerancije pojedinačnog pacijenta, ili ako je prihvaćena učestalija primena. Na primer, nivoi reda veličine od 40 do 120 mg/m<2>telesne površine/dan su odgovarajući. Doze od 30 mg/m<2>nedeljno svake 3 nedelje nakon čega sledi jedna nedelja odmora, 30 mg/m<2>nedeljno x 6 nedelja nakon čega sledi jedna nedelja odmora, ili postepeno povećanje doza PDX po režimu - jednom nedeljno x 6 nedelja su takođe pogodni. Viši nivoi bi se mogli koristiti ako se koristi manje učestana primena. Tako, u opštem smislu, doze od 30 do 275 mg/m se pogodno koriste sa različitim režimima doziranja, na primer 135 do 275 mg/m za dvonedeljne doze, i 30 do 150 mg/m<2>za doze od jednom nedeljno. Određivanje ugodnih doza primenom protokola sličnih onima opisanim u US Patentu br. 6,323,205, u okviru je poznate tehnike.

PDX se može koristiti u kombinacijama sa drugim citotoksičnim i ajiutumorskim jedinjenjima, uključujući alkaloide vinke kao što su vinblastin, navelbin i vindezin; probenicid, nukleotidne analoge kao što su gemcitabin, 5-fluorouracil i citarabin; alkilujuća sredstva kao što je ciklofosfamid ili ifosfamid; cisplatin ili karboplatin; leukovorin; taksani kao što je paklitaksel ili docetaksel; anti-CD20 monoklonalna antitela, sa ili bez radioizotopa, i antibiotici kao što su doksorubicin i mitomicin. Kombinacije PDX sa nekoliko od ovih drugih antitumorskih sredstava ili sa inhibitorima faktora rasta i anti-angiogenim sredstvima takođe se mogu koristiti.

PDX i druga sredstva se mogu istovremeno primenjivati ili koristiti u kombinaciji kao deo zajedničkog režima lečenja, u kome se PDX i drugo sredstvo (sredstva) primenjuju u različito vreme. Na primer, drugo sredstvo može biti primenjeno pre, neposredno posle ili posle vremenskog perioda (na primer 24 časa) u odnosu na primenu PDX. Tako, u svrhe ove prijave, termin primena se generalno odnosi na istovremenu primenu ili na uzastopnu primenu lekova po bilo kom redosledu u paralelnom režimu lečenja sa ili bez vremenskog odvajanja između lekova osim ukoliko nije drugačije naznačeno.

PDX se pogodno koristi u kombinaciji sa folnom kiselinom i dodatkom vitamina B12 da bi se smanjili sporedni efekti tretmana. Na primer, pacijenti mogu biti tretirani folnom kiselinom (1 mg/m<2>dnevno počevši 1 nedelju pre tretmana sa PDX) i B12 (1 mg/m<2>mesečno).

PRIMER 1

SI. 4 prikazuje sintetičku šemu korisnu u pripremi 10-propargil-10-dAM u skladu sa pronalaskom. Smeša 60% NaH u uljanoj disperziji (1.06 g, 26.5 mmol) u 18 mL THF osušenog na filteru je hlađena do 0°C. Hladna smeša je tretima sa rastvorom dimetil estra homotereftalne kiseline (5.0 g, 24 mmol. Jedinjenje 1 na SI. 4) u suvom THF (7 mL), i smeša je mešana 1 čas na 0°C. Propargil bromid (26.4 mmol) je dodat, i smeša je mešana na 0°C još 1 čas, i zatim na sobnoj temperaturi 16 časova. Dobijena smeša je tretirana sa 2.4 mL 50% sirćetne kiseline i zatim sipana u 240 mL vode.smeša je ekstrahovna sa etrora (2 X 150 mL). Etarski ekstrakti su spojeni, sušeni preko Na2SC>4, i koncentrovani do narandžasto-žutog ulja. Hromatografija na silika gelu (600 mL 230-400 mreža) uz eluiranje sa cikloheksanom-EtOAc (8:1) dala je proizvod dimetil estar a-propargimomotereftalne kiseline (jedinjenje 2) kao bela čvrsta supstanca (4.66) za koji je pomoću TLC (cikloheksan-EtOAc, 3:1) pokazano da je homogen. Rezultati masenog spektra ovog proizvoda, međutim, pokazali su da je to smeša željenog proizvoda 2, i dipropargilovanog jedinjenja. Nije detektovan početni materijal 1. HPLC je pokazala da je odnos mono- prema di -propargilovanim proizvodima oko 3:1. S obzirom da dipropargilovani proizvod, za razliku od jedinjenja 1, ne može da proizvede neželjeni koproizvod u sledećem koraku reakcije, ovaj materijal je bio pogodan za konverziju ujedinjenje 3. Odsustvo početnog jedinjenja 1 u proizvodu koji se koristi za nastavak sinteze je veoma značajno da bi se izbeglo sekvencijalno formiranje 10-dAM u toku transformacija koji se nakuplja u krajnjem proizvodu, zbog toga što je potpuno uklanjanje 10-dAM iz 10-propargil-l-dAM veoma teško.

Smeša je formirana spajanjem 0.36 g 60% NaH (9 mmol) u uljanoj disperziji sa 10 mL suvog DMF i hlađena do 0-5°C. Hladna smeša je tretirana ukapavanjem rastvora proizvoda prve reakcije (jedinjenje 2) (2.94 g, 12 mmol) u 10 mL suvog DMF i zatim mešana na 0°C 30 rninuta. Posle hlađenja do -25°C, rastvor 2,4,diamino-6-(bromometil)-pteridin hidrobromid-0.2 2-propanola (1.00 g, 2.9 mmol) u 10 mL suvog DMF je ukapavan dok je temperatura održavana blizu -25°C. Temperatura mešane smeše je ostavljena da raste do -10°C u toku perioda od 2 časa. Posle dodatnih 2 časa na -10°C, temperatura je ostavljena da raste do 20°C; mešanje na sobnoj temperaturi je 2 časa duže. Reakcija je zatim podešena do pH 7 dodavanjem čvrstog CO2. Posle koncentrovanjain vacuoda bi se uklonio rastvarač, ostatak je mešan sa dietil etrom i materijal koji je nerastvorljiv u etru je sakupljen, isparn vodom i sušenin vacuoda bi se dobilo 1.49 g sirovog proizova. Ovaj sirovi proizvod je rastvoren u CHCI3-MeOH (10:1) za nanošenje na kolonu silika gela. Eluiranje sa istim sistemom rastvarača dalo je metil estar 10-propargil-10-karbometoksi-4-deoksi-4-amino-10-deazapteroinske kiseline (jedinjenje 3) koje je prema TLC bilo homogeno i u prinosu od 40% (485 mg).

Mešana suspenzija jedinjenja 3 (400 mg, 0.95 mmol) u 2-metoksietanolu (5 mL) je tretirana sa vodom (5 mL) i zatim sa 10% rastvorom natrijumhidroksida (3.9 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 časa, za koje vreme se javio rastvor. Rastvor je podešen do pH 8 sa sirćetnom kiselinom i koncentrovan pod visokim vakuumom. Dobijem' ostatak je rastvoren u 15 mL vode i zakišeljen do pH 5.5-5.8 što ima za rezultat formiranje taloga. Talog je sakupljen, ispran vodom i sušenin vacuoda bi se dobilo 340 mg jedinjenja 4 (91% prinos). HPLC analiza je pokazala čistoću proizvoda od 90%.

Jedinjenje 4 (330 mg) je dekarboksilovano zagrevanjem u 15 mL DMSO na 115-120°C 10 minuta. Test pomoću HPLC posle 10 minuta potvrdio je da je konverzija uglavnom bila potpuna. DMSO je uklonjen destilacijomin vacuo(kupatilo na 40°C). Ostatak je mešan sa 0.5 N NaOH da bi se dobio bistar rastvor. Zakišeljavanje do pH 5.0 sa IN HC1 dalo je 10-propargil-4-deoksi-4-amino-10-deazapteroinske kiselinu (jedinjenje 5) kao žutu čvrstu supstancu u prinosu od 70%. HPLC je pokazao čistoću proizvoda na ovom stadijumu kao 90%.

Jedinjenje 5 (225 mg, 0.65 mmol) je kuplovano sa dimetil L-glutamat hidrohloridom (137 mg, 0.65 mmol) primenom BOP reagensa (benzotriazol-l-iloltsitris(dimetilarnino) fosfonijum heksafluorofosfata (287 mg, 0.65 mmol, Aldrich Chemical Co.) u DMF (10 mL) koji sadrži trietilamin (148 mg, 1.46 mmol). Smeša je mešana 3 časa na 20-25°C i zatim isparavana do sušenja. Ostatak je mešan sa vodom, i sirovi proizvod koji je nerastvorljiv u vodi je sakupljen i sušenin vacuo.Sirovi proizvod (350 mg) je prečišćen hrormtografijom na silika gelu eluiranjem sa CHCh- MeOH (10:1) koji sadrži trietilamin (0.25% po zapremini) da bi se dobilo 165 mg 10-propargil-10-deazaaminopterin dimetil estra Gedinjenje 6, 50% prinos) koji je prema TLC bio homogen (CHCl3-MeOH 5:1).

Jedinjenje 6 (165 mg, 0.326 mmol) je suspendovano u 10 mL mešanog MeOH kome je dodato 0.72 mL (0.72 mekv) IN NaOH. Mešanje na sobnoj temperuri je nastavljeno sve dok se posle nekoliko časova nije pojavio rastvor. Rastvor je održavan na 20-25°C 8 časova, zatim je razblažen sa 10 mL vode. Isparavanjem pod sniženim pritiskom uklonjen je metanol,

i koncentrovani vodeni rastvor je ostavljen na 20-25°C još 24 časa. HPLC je zatim pokazala daje hidroliza estra bila kompletna. Bistar vodeni rastvor je zakišeljen sa sirćetnom kiselinom do pH 4.0 da bi se istaložio 10-propargil- 10-deazaaminopterin kao bledo žuta čvrsta supstanca. Sakupljeni proizvod koji je ispran vodom i sušenin vacuotežio je 122 mg (79% prinos). Testiranje preko elementarne analize, proton NMR i masena spektroskopija su u potpunosti bili u skladu sa određenom strukturom. HPLC analiza je pokazala čistoću od 98% i ustanovljeno je daje proizvod bez 10-deazaaminopterina.

Claims (3)

1. Primena 10-propargil- 10-deazaaim^opterina u formulaciji farmaceutskog sredstva za lečenje T ćelijskog limfoma.

2. Primena prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što je 10-propargil-10-deazaaminopterin značajno bez 10-deazaarmnopterina.

3. Primena prema patentnom zahtevu 1 ih 2, naznačena time što se farmaceutsko sredstvo formuliše za primenu 10-propargil-10-deazaaminopterina u količini od 30 do 275 mg/m<2>po dozi.