RS50823B - Supstituisani 1h-pirolo[3,2-b, 3,2-c, i 2,3-c]piridin-2-karboksamidi i srodni analozi kao inhibitori kazein kinaze i epsilon - Google Patents

Description

Poreklo pronalaska

1. Polje pronalaska

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na serije supstituisanih lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksamida, lH-pirolo[3,2-c]piirdin-2-karboksamida i lH-pirolo[2,3-c|piridin-2-karboksamida. Još preciznije, pronalazak se odnosi na 3-ariltio-supstituisane i 3-heterociklotio-supstituisane lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksamide, lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksamide i lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksamide, i srodne analoge. Pronalazak se takođe odnosi na postupke za izradu ovih jedinjenja. Jedinjenja iz pronalaska su inhibitori aktivnosti fosforilacije humane kazein kinaze Ie i stoga su, kao farmaceutska sredstva, korisna, posebno u tretmanu i/ili prevenciji oboljenja i poremećaja povezanih sa centralnim nervnim sistemom.

2. Opis tehnike

[0002]Mnogi organizmi pokazuju ritmičke varijacije u ponašanju, počevši od jednoćelijskih organizama do čoveka. Kada ritam traje pod konstantnim uslovima i ima period od približno jedan dan, delimično u zavisnosti od temperature, ritam se naziva "cirkadijanski" (Konopka, RJ. i Benzer, S. (1971) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 68,2112-2116).

[0003]Cirkadijanski ritmovi su generisani endogenim biološkim pejsmejkerima (cirkadijanski satovi) i prisutni su u većini živih organizama, uključujući ljude, gljive, insekte i bakterije (Dunlap, J.C. (1999) Cell 96,271-290; Hastings, J.W. i saradnici Circadian Rhythms, The Physiology of Biological Timing. In: Prosser, CL. ed. Neural i Integrative Animal Physiology, Nevv York: Wiley-Liss (1991) 435-546; Allada, R. i saradnici (1998) Cell 93, 791-804; Kondo i saradnici (1994) Science 266,1233-1236; Crosthvvaite, S.K. i saradnici (1997) Science 276, 763-769; Shearman, L.P. i saradnici (1997) Neuron, 19,1261-1269). Cirkadijanski ritmovi su samo-regulišući i konstantni čak i u uslovima potpune tame, ali mogu da budu sinhronizovani (prilagođeni) novom dan/noć režimu signalima iz okoline, kao što su svetlosni i temperaturni ciklusi (Pittendrigh, C.S. (1993) Annu. Rev. Phvsiol., 55,16-54; Takahashi, J.S. (1995) Annu. Rev. Neurosci. 18, 531-553; Albrecht, U. i saradnici (1997) Cell, 91, 1055-1064). Cirkadijanski satovi su osnova za održavanje biološkog ritma i regulišu brojna cirkadijanska ponašanja kao što su dnevne oscilacije u ponašanju, uzimanje hrane i ciklus san/budno stanje, kao i fiziološke promene kao što su sekrecija hormona i oscilacije u telesnoj temperaturi (Hastings, M. (1997) Trends Neurosci. 20,459-464; Reppert, S.M. i Weaver, D.R. (1997) Cell 89,487-490).

[0004]Genetičke i molekularne studije na voćnoj mušiciDrosophila melanogasterdovele su do tumačenja nekih gena koji su uključeni u cirkadijansku ritmiku. Ove studije su dovele do razumevanja puta koji je blizak auto-regulaciji i uključuje negativnu povratnu spregu na bazi transkripcije/translacije (Dunlap, J.C. (1999) Cell, 96, 271-290; Dunlap, J.C. (1996) Annu. Rev. Genet. 30,579-601; Hali, J.C. (1996) Neuron, 17,799-802). Osnovni elementi cirkadijanskog oscilatora kodDrosophilasadrže dva stimulatorna proteina dCLOCK/dBMAL (CIKLUS) i dva inhibitoma proteina dPERlOD (dPER) i dTJJVIELESS (dTJJVI). dCLOCK i dBMAL heterodimerize koji formiraju faktor transkripcije dCLOCK/dBMAL koji promoviše pojavljivanje dva gena nazvanaDrosophila Period ( dper) i Drosophila Timeless ( dtim).Konačno, mRNAs iz ovih gena se transkribuju da se dobiju proteini dPER i dTJJVI, tim redom. U toku nekoliko sati produkti proteina dPER i dTJM se sintetišu i fosforilišu u citoplazmi, dostižu kritičnu vrednost i formiraju heterodimere koji se premeštaju u nukleus. Kada su u nukleusu, dPER i dTJJVI funkcionišu kao negativni regulatori sopstvene transkripcije, akumulacija dPER i dTJJVI opada, i aktiviranjedper i dtimod strane dCLOCK/dBMAL počinje ponovo (Zylka, M.J. i saradnici (1998) Neuron 20,1103-1110; Lowrey, P.L. i saradnici (2000) 288,483-491). Pokazano je dajedpergen neophodan element u kontroli cirkadijanskih ritmova u ponašanju odraslih oblika (pojavljivanje odrasle muve iz larve) i lokomotorne aktivnosti (Konopka, R.J., & Benzer, S. (1971) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 68,2112-2116). Genetskemutacije pergena mogu ili da skrate( pers) ilida produže( per1)period cirkadijanskih ritmova, dok beskorisne mutacije( per")izazivaju poremećaj ritma u njihovom ponašanju (Hali, J.C.

(1995) Trends Neurosci. 18, 230-240).

[0005]Kod sisara, suprahiazmatični nukleusi (SCN) prednjeg hipotalamusa su mesta glavnog biološkog sata (za pregled videti Panda i saradnici, (2002) Nature 417, 329 - 335; Reppert, S.M. i Weaver, D.R. (1997) Cell, 89,487-490). SCN sat je aktiviran 24 sata dnevno dnevnim ciklusom dan-noć, svetlom koje deluje i direktno i indirektno putevima od mrežnjače do SCN (Klein, D.C. i saradnici (1991) Suprachiasmatic Nuclei: The Mind's Clock, Oxford Univeristy Press, New York). U SCN glodara, triPergena su identifikovana i klonirana, i označena su kao mišjiPerl

( mPerl), mPer2i mPER3. Produkti proteina ovih gena sisara (mPERl, mPER2, mPER3) dele nekoliko međusobno homolognih regiona, a svakiPergen sisara enkodira protein sa dimerizacijom oblasti proteina označenog kao PAS (PAS jc akronim za prva tri proteina PER, ARNT i SIM za koje je nađeno da dele ovu funkcionalno važnu dimerizacijonu oblast) koji je visoko homologan sa PAS oblašću insekta PER. SviPerprenosioci signala RNAs (mRNAs) i vrednosti proteina osciliraju u toku cirkadijanskog dana i blisko su uključeni i u pozitivnu i u negativnu regulaciju biološkog sata, ali samo mPERl i mPER2 osciliraju kao odgovor na svetlost (Zylka, MJ. i saradnici (1998) Neuron 20, 1103-1110.; Albrecht, U. i saradnici, (1997) Cell 91,1055-1064; Shearman, L.P. i saradnici (1997) Neuron 19,1261-1269). Homolog sisaraDrosophila tintgena je kloniran i označen kaomTim.Međutim, nema dokaza za mPER-mTIM interakcije analogne sa interakcijama uočenim kodDrosophila,i to ukazuje da PER-PER interakcije mogu da zamene funkciju PER-TIM dimera u funkcionisanju molekula kod cirkadijanskog sata sisara (Zylka, MJ. i saradnici, (1998) Neuron 21,1115-1122). Druga mogućnost je da ritmovi u PERI i PER2 grade negativnu povratnu spregu koja reguliše transkripcionu aktivnost Clock proteina (preko njihovih PAS oblasti), što, nasuprot tome, dovodi do pojave jednog iliobaPergena (Shearman, L.P. i saradnici (1997) Neuron 19,1261-1269).

[0006] Razumevanje uloga trimPergena u radu biološkog sata kod sisara je bilo predmet mnogih istraživanja. Strukturna homologija mPER proteina sa dPER dovodi do očekivanja da će mPER proteini funkcionisati kao negativni elementi u povratnoj sprezi kod sisara. Veruje se da je PERI uključen u negativnu regulaciju sopstvene transkripcije u povratnoj sprezi, ali nedavni dokazi upućuju daje uključen u deo puta (Hastings, M.H. i saradnici (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 26,15211-15216). PER2 je najbolje okarakterisani protein, a mPER2 mutant miša( mPer2Br<iml),bez 87 ostataka na karboksilnom delu PAS oblasti dimerizacije, ima skraćeni cirkadijanski ciklus pri normalno podešenom ciklusu dan-noć, ali pokazuje neritmičnost u potpunom mraku. Mutacija takođe umanjuje oscilaciju pojavljivanja imPerl i mPer2u SCN, što ukazuje damPer2može da regulišemPerlin vivo (Zheng, B. i saradnici (1999) Nature 400,169-173). Pokazano je da PER2 ima dvostruku funkciju u regulaciji "brzine" centralnog časovnika (Shearman, L.P. i saradnici (2000) Science 288,1013-1018). U ovoj studiji je pokazano da se PER2 vezuje za kriptohrom (CRY) proteine i premešta u nukleus gde CRY negativno reguliše transkripciju koju pokreću CLOCK i BMAL1 pozitivnih transkripcionih kompleksa. Nakon ulaska u nukleus, PER2 pokreće pozitivnu stranu časovnika pozitivnom regulacijom transkripcije BMAL1 pomoću još neidentifikovanog mehanizma. Funkcija PER3 nije jasna; međutim, u mPER3 miša bez svesti uočen je suptilan efekat na cirkadijansku aktivnost, i stoga se smatralo daje PER3 uključen u izlazne puteve koje kontroliše cirkadijan (Shearman, L.P. i saradnici (2000) Mol. Cell. Biol. 17, 6269-6275). Zabeleženo je da su mPER proteini u međusobnoj interakciji i da mPER3 može da služi kao nosač mPERl i mPER2, da ih prenese u nukleuse, što je kritična tačka za generisanje cirkadijanskih signala u SCN (Kume, K. i saradnici (1999) Cell 98, 193-205; Takano, A. i saradnici (2000), FEBS Letters, 477,106-112).

[0007] Fosforilacija komponenti cirkadijanskog časovnika je neophodna za regulisanje trajanja ciklusa. Prva genetička evidencija koja je pokazala da specifična protein kinaza reguliše cirkadijanski ritamDrosophila jeotkriće novog gena doubletime( dbt),koji enkodira protein serin/treonin kinazu (Priče J.L. i saradnici (1998) Cell 94, 83-95; Kloss B. i saradnici (1998) Cell 94, 97-107). Genetske mutacije udbtimaju za rezultat izmenjen cirkadijanski ritam. Nula alelesa udbtima za rezultat hipofosforilaciju dPER i aritmiju. [0008J Kinaze sisara koje su najpribližnije sa DBT su kazein kinaza 18 (CK1 e ) i kazein kinaza 15 (CK15). Za obe kinaze je pokazano da se vezuju za mPERl, a nekoliko studija je pokazalo da CK18 fosforiliše i mišji i humani PERI (Priče J.L. i saradnici (1998) Cell 94, 83-95; Kloss B. i saradnici (1998) Cell 94, 97-107). U studiji sa humanim embrionim 293T ćelijama bubrega ko-transfektovanim sa "divljim" tipom hCKl£, hPERl pokazuje značajan porast u fosforilaciji (evidentiran promenom u molekularnoj masi). U ovoj studiji, fosforilisani hPERl je imao polu-život od aproksimativno dvanaest sati, dok nefosforilisani hPERl ostaje stabilan u ćeliji duže od 24 sata, što ukazuje da fosforilacija hPERl dovodi do smanajenja stabilnosti proteina (Kessler, G.A. i saradnici (2000) NeuroReport, 11, 951-955). Još jedna studija je takođe pokazala da posledice fosforilacije PERI sa hCKls obuhvataju i citoplazmatičnu retenciju, translokaciju jezgra i nestabilnost proteina (Vielhaber, E. i saradnici (2000) Mol. Cell. Biol. 13, 4888-4899; Takano, A. i saradnici (2000) FEBS Letters 477, 106-112).

[0009] Nije bilo biohemijskog razloga da se vrši izbor između CK1 s ili CK15 kao potencijalnog regulatora kod sisara sve dok Lowery i saradnici [(2000) Science 288, 483-491] nisu pronašli da kod Sirijskog zlatnog hrčka, semidominantne mutacije u CK1 z( taumutacije, Ralph, M.R. i Menaker, M. (1988) Science 241,1225-1227) dovode do skraćenja cirkadijanskog dana i kod heterozigotnih (22 h) i homozigotnih životinja (20 h). U ovom slučaju, smanjene vrednosti CKls aktivnosti dovode do manje PER fosforilacije uz verovatno veće vrednosti citoplazmatičnog PER proteina, što dovodi do poboljšanog ulaska u jezgra i izmenjenog cirkadijanskog ciklusa. U skorije vreme je sugerisano da CK15 može takođe da bude uključen u regulaciju cirkadijanske ritmike post-translacionom modifikacijom proteina hPERl i hPER2 časovnika sisara [Camacho, F. i saradnici, (2001) FEBS Letters 489(2,3), 159-165]. Prema tome, male molekule inhibitora CK1e i/ili CK18 obezbeđuju nova sredstva za izmenu cirkadijanskog ritma. Kako je niže objašnjeno, izmena cirkadijanskog ritma može da bude korisna za tretman poremećaja sna ili poremećaja raspoloženja.

[0010]U.S. patent 6,555,328 BI otkriva postupke praćenja u ćelijama da se identifikuju jedinjenja koja menjaju cirkadijanski ritam na bazi test jedinjenja koje menja sposobnost humane kazein kinaza 1bi/ili kazein kinaza 18 da fosforilišu hPERl, hPER2 i hPER3 proteine humanog časovnika. Na primer, HEK293T ćelije su ko-transfektovane sa hCKl e i Perl ili Per2. U svrhu procene značaja CK1 s inhibicije i CK1 s inhibitora za cirkadijansku biologiju, razvijeno je visoko-protočno celularno ispitivanje (33<rd>Annual Meeting, Soc. for Neurosci., November 8-12, 2003, Abstract numbers 284.1, 284.2, i 284.3) u kome cirkadijanski ritam može da se meri na uobičajeni način. Ispitivanje sadrži Rat-1 fibroblaste koji se stabilno pojavljuju naMperl- lucgrađi, čime se omogućava određivanje ritmičke aktivnostiMperJpromotera u živim ćelijama ponavlanjem procena aktivnosti luficeraze, praćenjem izlazne svetlosti u toku nekoliko dana. Mogućnost ponovljenog merenja u toku ispitivanja dozvoljava precizne i reproduktibilne rezultate efekta inhibitora CK1 e na cirkadijanski ritam, u zavisnosti od koncentracije i obezbeđuje način za povezivanje CK1 e inhibicije sa periodom cirkadijanske izmene.

[0011]Poremećaj sna je klasifikovan u četiri glavne kategorije koje uključuju primami piremećaj sna (disomnije i parasomnije), poremećaj sna povezan sa medicinskim/psihijatrijskim poremećajima i kategoriju predloženih poremećaja sna za poremećaje sna koji ne mogu da se klasifikuju zbog nedostatka podataka. Smatra se da primarni poremećaji sna proističu od abnormaliteta u unutrašnjim sistemima odgovornim za generisanje ciklusa san-budno stanje (homeostatički sistem) ili tempiranje vremena (cirkadijanski sistem). Disomnije su poremećaji u započinjanju ili održavanju sna i obuhvataju primarnu insomniju, hipersomniju (preteranu pospanost), narkolepsiju, poremećaj sna povezan sa disanjem, poremećaj cirkadijanskog ritma spavanja i disomnije koje nisu posebno pomenute. Primarna insomnija se karakteriše stalnom (> 1 mesec) teškoćom da se zaspi i održi san ili da se nastavi san. Teškoće u spavanju povezane sa primarnom insomnijom dovode do značajnih nadražaja ili pogoršanja, uključujući razdražljivost u toku dana, gubitak pažnje i koncentracije, umor i slabost i gubitak raspoloženja i motivacije. Poremećaj cirkadijanskog ritma sna uključuje sindrom umora i dezorijentacije kao posledica dugog letenja, poremećaj sna zbog rada u smenama, sindrom pomeranja sna unapred po vremenskoj osi i sindrom pomeranja faze sna unazad po vremenskoj osi (J. Wagner, M.L. VVagner i W.A. Hening, Annals of Pharmacotherapy (1998) 32, 680-691). Pojedinci u prisilnoj paradigmi spavanja pokazuju veću nesanicu, izraženo kao procenat vremena sna, u izvesnim periodima cirkadijanskog dana (Dijk i Locklev, J. Appl. Physiol. (2002) 92, 852-862). Generalno je prihvaćeno da sa godinama dolazi do pomeranja cirkadijanskog ritma sna unapred po vremenskoj osi, što često dovodi do lošijeg sna (Am J Physiol Endocrinol Metab. (2002)282,E297-E303). Prema tome, san koji odstupa od cirkadijanske faze može da bude lošiji i u kvalitativnom i u kvantitativnom smislu, kako je dalje primerima pokazano za poremećaje sna u radu po smenama i sindromu umora i dezorijentacije kao posledice dugog letenja. Poremećaj humanog cirkadijanskog časovnika može da dovede do poremećaja sna, a sredstva koja regulišu cirkadijanski ritam, kao što je inhibitor CK1 s i/ili CK18, mogu da budu korisna za tretman poremaćaja sna, a posebno poremaćaja cirkadijanskog ritma sna.

[0012]Poremećaji raspoloženja se dele na depresivne poremećaje ("unipolarna depresija"), bipolarne poremećaje i dva poremećaja na bazi etiologije koja uključuje poremećaje raspoloženja zbog opšteg zdravstvenog stanja i poremećaj raspoloženja izazvan supstancama. Depresivni poremećaji su dalje podeljeni na glavni depresivni poremećaj, distimični poremećaj i depresivni poremećaj koji nije na drugi način specificiran. Bipolarni poremećaji su dalje podeljeni na bipolarni 1 poremećaj i bipolarni II poremećaj. Uočeno je da odrednica "sezonski model" može da se primeni na većinu depresivnih poremećaja koji se ponavljaju i na model većine depresivnih epizoda u bipolarnom I poremećaju i bipolarnom II poremećaju. Nagli gubitak imuniteta, hipersomnija, prekomerno uzimanje hrane, gojenje i želja za ugljenim hidratima često karakterišu glavne depresivne epizode koje se dešavaju u sezonskom modelu. Nije jasno da li je sezonski model više sličan glavnom depresivnom poremećaju koji se ponavlja ili bipolarnim poremećajima. Međutim, u okviru bipolarnih poremećaja, izgleda daje sezonski model više sličan bipolarnom II poremećaju nego bipolarnom I poremećaju. Kod nekih pojedinaca, početak manijačnih ili hipomanijačnih epozoda može takođe da bude povezan sa određenom sezonom. Izgleda da se zimski tip sezonskog modela razlikuje u zavisnosti od klime, godina i pola. Preovladujući je porast sa većom geografskom širinom, mlađe osobe su pod većim rizikom za zimske depresivne epizode, a žene čine 60% do 90% osoba sa sezonskim modelom. Sezonski afektivni poremećaj (SAD), naziv koji se obično koristi u literaturi, je podgrupa poremećaja raspoloženja koji je u Dijagnostičkom i statističkom priručniku mentalnih poremećaja IV (DSM-IV) (American Psychiatric Association: "Diagnostic i Statistical Manual of Mental Dizorders", Fourth Edition, Text Revision. VVashington, DC, American Psvchiatric Association, 2000) označen pod nazivom "sa sezonskim modelom" kada opisuje sezonski model glavnih depresivnih epozoda u bipolarnom I poremećaju, bipolarnom 11 poremećaju ili ponovljenom glavnom depresivnom poremećaju (E. M. Tarn i saradnici, Can. J. Psychiatry (1995) 40,457-466). Karakteristike i dijagnoze depresivnih poremećaja, osnovnog depresivnog poremećaja, osnovne depresivne epizode, bipolarnog I poremećaja, bipolarnog II poremećaja i sezonskih efekata, su opisani u DSM-IV.

[0013]Pokazano je da pacijenti koji pate od osnovnih depresivnih poremećaja, uključujući SAD koga karakteriše povraćaj depresivnih epizoda obično zimi, imaju pozitivan odgovor na terapiju svetlošću (Kripke, Journal of Affective Dizorders (1998) 49(2), 109-117). Uspeh tretmana jakim svetlom kod pacijenata sa SAD i osvnovnom depresijom ima za rezultat razvijanje nekoliko različitih hipoteza da se opiše osnovni mehanizam delovanja terapeutskog efekta svetla. Ove hipoteze obuhvataju "hipoteze cirkadijanskog ritma" koje sugerišu da antidepresivni efekat jakog svetla može da bude povezan sa faznim promenama cirkadijanskog pejsmejkera u odnosu na san (E. M. Tarn i saradnici, Can. J. Psychiatry (1995) 40,457-466). Kao potvrda veze između terapije svetlošću i cirkadijanskog ritma, klinički efektivna terapija svetlošću kod osnovnih depresivnih poremećaja dovodi istovremeno do promena u cirkadijanskoj fazi i smatra se da klinička efikasnost terapije svetlošću zavisi od sposobnosti terapije svetlošću da promeni faze (Czeisler i saradnici, The Journal of Physiology (2000) 526 (Part 3), 683-694; Terman i saradnici, Arch. Gen. Psychiatry (2001) 58, 69-75). Dodatno, pokazano je da svetlosna terapija ubrzava i povećava efikasnost farmakološkog tretmana osnovnog depresivnog poremećaja (Benedetti i saradnici, J. Clin. Psychiatry (2003) 64, 648-653). Prema tome, očekuje se da inhibicija kazein kinaze 1zi/ili kazein kinaze 18, dovede do promene cirkadijanske faze i takva inhibicija predstavlja potencijalnu klinički efikasnu mono- ili kombinovanu terapiju za poremećaje raspoloženja.

[0014]Treba da se naglasi daje poremećaj sna simptom merila za mnoge psihijatrijske poremećaje (W.V. McCall, J. Clin. Psychiatry (2001) 62 (dodatak 10), 27-32). Poremećaji sna su česta karakteristika depresivnih poremećaja, a insomnija je poremećaj sna koji se često beleži kod depresije, javlja se kod preko 90% depresivnih pacijenata (M.E. Thase, J. Clin. Psychiatry

(1999) 60 (suppl 17), 28-31). Zbirni pokazatelji podržavaju opšte patogeneze za primarnu insomniju i osnovni depresivni poremećaj. Data je hipoteza da kortikotrofin oslobađajući faktor (CRF) hiperaktivnosti (zbog genetičke predispozicije ili mogućeg ranijeg stresa) i stres indukuju proces koji dovodi do preteranog i dugotrajnog poremećaja sna i eventualno do primarne insomnije. Cirkadijanski ritam u sekreciji CRF pod ne-stresnim uslovima, može da igra ulogu u pojavi normalnog ritma san-budno stanje (G.S. Richardson and T. Roth, J. Clin Psychiatry

(2001) 62 (suppl 10), 39-45). Prema tome, sredstva koja moduliraju cirkadijanski ritam, na primer inhibicijom kazein kinaze 1 e i/ili kazein kinase 1S, mogu da budu korisna u tretmanu depresivnih poremećaja zbog delovanja na sekreciju CRF. Dokument EP-A-0 186 367 otkriva jedinjenja indola i njihovu upotrebu kao antialergičnih sredstava. US patent 5,527,819 otkriva jedinjenja indola kao inhibitore HIV reverzne transkriptaze. Dokument WO 03/080608 otkriva kvinolin i aza jedinjenja indola koja imaju afinitet za 5-HT6 receptor. Dokument WO 03/078435 otkriva derivate pirazolo[l,5-a]piridina korisna kao antagonisti CRF1 receptora.

[0015]Prema tome, jedan od ciljeva ovog pronalaska je da obezbedi serije supstituisanih 1H-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksamida, lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksamida i lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksamida koji su inhibitori kazein kinaze 1 s . Ovaj cilj i drugi predmeti ovog pronalaska postaju očigledni iz detaljne diskusije pronalaska koja sledi.

KRATAK SADRŽAJ PRONALASKA

[0016]Ovaj pronalazak obezbeđuje supstituisane lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksamide, 1H-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksamide, lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksamide i njihove analoge, i njihove farmaceutski prihvatljive soli ili stereoizomere, formule (I) kao inhibitore fosforilativne aktivnosti humane kazein kinaze 1 s i upotrebu ovih jedinjenja za izradu medikamenta korisnog u tretmanu oboljenja i poremećaja centralnog nervnog sistema, kao što su, na primer poremećaji raspoloženja koji uključuju osnovni depresivni poremećaj, bipolarni I poremećaj i bipolarni II poremećaj, i poremećaje sna uključujući poremećaje cirkadijanskog ritma sna kao što su, na primer, poremećaj sna zbog rada u smenama, sindrom umora i dezorijentacije kao posledice dugog letenja, sindrom poremećaja sna unapred po vremenskoj osi i sindrom poremećaja sna unazad po vremenskoj osi.

[0017]U skladu sa tim, u najširem aspektu, pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I)

gde:

Ri je H ili Ci^alkil grupa;

R2je NRSR6grupa;

R3je aril grupa ili heterociklus;

R4 je H, Ci.6alkil, C2-6-alkeniI, C2-6-alkinil, C,.6alkoksi, CF3, halogcn, SH, S-CN6alkil, N02, NH2ili NR5R6grupa;

R5je H ili Ci_6alkil grupa;

R6 je H ili Ci.6alkil grupa;

X je S ili S(0)n grupa;

jedan od K, L ili M je N, a druga dva člana od K, L ili M su svaki C, pri čemu je R4vezan samo za K, L, M ili drugi atom prstena koji je C; m je 1, 2 ili 3; i nje 1 ili 2;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili stereoizomer.

[0018]Jedan aspekt ovog pronalaska se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja uključuje farmaceutski nosač i terapeutski efektivnu količinu jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili stereoizomera.

[0019]Naredni aspekt ovog pronalaska se odnosi na postupak za izradu jedinjcnje formule (I).

[0020]Još jedan aspekt ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (I) izrađeno postupkom iz ovog pronalaska, kako je ovde otkriveno.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0021]Kako se ovde koristi, 'stereoizomer' je opšti naziv koji se koristi za sve izomere pojedinačnih molekula koji se razlikuju samo u orijentaciji njihovih atoma u prostoru. Naziv stereoizomer obuhvata izomere kao lik u ogledalu (enantiomere), mešavine izomera kao lik u ogledalu (racemate, racematne mešavine), geometrijske (cis/trans ili E/Z) izomere, i izomere jedinjenja sa više od jednim asimetričnim centrom koji jedan prema drugom nisu kao predmet i njegov lik u ogledalu (dijastereoizomeri).

[0022]Kako se ovde koristi, 'R' i 'S' se koriste kao što je uobičajeno u organskoj herniji da označe specifičnu konfiguraciju asimetričnog centra. Naziv 'R' (rektus) se odnosi na takvu konfiguraciju asimetričnog centra koji se nalazi u pravcu kretanja kazaljke na satu u odnosu na grupu prioriteta (od najviše do predposlednje) kada se gleda duž veze ka najnižoj prioritetnoj grupi. Naziv 'S' (sinister) se odnosi na konfiguraciju asimetričnog centra koji se nalazi nasuprot pravca kretanja kazaljke na satu u odnosu na grupu prioriteta (od najviše do predposlednje) kada se gleda duž veze ka najnižoj prioritetnoj grupi Prioritet grupa se bazira na pravilima sekvence pri čemu se prioritet prvo zasniva na atomskom broju (po opadajućem atomskom broju). Listing i diskusija prioriteta mogu da se nađu uStereochemistrj of Organic Compounds,Ernest L. Eliel, Samuel H. Wilen i Levvis N. Mander, editors, Wiley-Interscience, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994.

[0023] Kao dodatak (R)-(S) sistemu, ovde može takođe da se koristi stariji D-L sistem da označi apsolutnu konfiguraciju, posebno u vezi sa amino kiselinama. U ovom sistemu, Fischer-ova formula projekcije je orijentisana tako daje ugljenik broj 1 glavnog lanca na vrhu. Prefiks 'D' se koristi da predstavi apsolutnu konfiguraciju izomera u kome je funkcionalna (određujuća) grupa na desnoj strani ugljenika na asimetričnom centru, a 'L', je izomer u kome je ta funkcionalna grupa na levoj strani.

[0024] Kako se ovde koristi, "tautomer" ili "tautomerizam" se odnosi na koegzistenciju dva (ili više) jedinjenja koja se međusobno razlikuju samo po položaju jednog (ili više) mobilnih atoma i u distribuciji elektrona, na primer, keto-enol tautomeri ili tautomerizam.

[0025] Kako se ovde koristi, "alkil" označava zasićeni ravan ili račvast lanac alifatične ugljovodonične grupe koja ima od jedan do šest atoma ugljenika i uključuje metil, etil, propil, izopropil, butil, sec-butil, terc-butil grupu.

[0026] Kako se ovde koristi "alkenil" označava ravan ili račvast monovalentan nezasićen alifatični lanac koji ima od dva do šest atoma ugljenika i obuhvata etenil (takođe poznat kao vinil), 1 -metiletenil, 1-metil-1-propenil, 1-butenil, 1-heksenil, 2-metil-2-propenil, 2,4-heksadienil, 1-propenil, 2-propenil, 2-butenil, 2-pentenil grupu.

[0027] Kako se ovde koristi "alkinil" označava ravnu ili račvastu monovalentnu nezasićenu alifatičnu grupu koja ima dva do šest atoma ugljenika sa najmanje jednom trostrukom vezom i obuhvata etinil, 1-propinil, 1-butinil, 1-heksinil, 2-propinil, 2-butinil, 2-pentinil grupu.

[0028] Kako se ovde koristi, "alkoksi" označava monovalentni supstituent koji se sastoji od ravanog ili račvastog alkil lanca koji ima od jedan do šest atoma ugljenika vezanih preko atoma kiseonika etra i koji imaju slobodnu valentnu vezu od kiseonika etra i uključuju metoksi, etoksi, propoksi, izopropoksi, butoksi, sec-butoksi, terc-butoksi grupu.

[0029] Kako se ovde koristi, naziv C3-C8cikloalkil označava zasićenu ugljovodoničnu cikličnu strukturu koja sadrži od tri do osam atoma ugljenika, i uključuje ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptl grupu.

[0030] Kako se ovde koristi, "aril" ili "Ar" označava bilo koji stabilan monociklični, biciklični ili triciklični prsten ugljenika sa do sedam članova u svakom prstenu, pri čemu je najmanje jedan prsten aromatičan i nesupstituisan ili supstituisan sa od jedan do tri supstituenta izabrana iz grupe koja sadrži metilendioksi, hidroksi, Ci-6-alkoksi, halogen, C|.6-alkil, C2-6-alkenil, C2-6-alkin.il, trifluorometil, trifluorometoksi, -N02, -NH2, -NH(C(.6-alkil), -N(C|.6-alkil)2, -NH-acil, i -N(Ci_6-alkil)acil grupu. Primeri "aril" ili "Ar" uključuju fenil, 2-hlorofenil, 3-hlorofenil, 4-hlorofenil, 2-fluorofenil, 3-fluorofenil, 4-fluorofenil, 2-bromofenil, 3-bromofenil, 4-bromofenil, 2-trifluorometilfenil, 3-trifluorometilfenil, 4-trifluorometilfenil, 2-metoksifenil, 3-metoksifenil, 4-metoksifenil, 2-aminofenil, 3-aminofenil, 4-aminofenil, 2-metilfenil, 3-metilfenil, 4-metilfenil, 2-nitrofenil, 3-nitrofenil, 4-nitrofenil, 2,4-dihlorofenil, 2,3-dihlorofenil, 3,5-dimetilfenil, 2-trifluorometoksifenil, 3-trifluorometoksifenil, 4-trifluorometoksifenil, naftil, tetrahidronaftil i bifenil grupu. Naziv "aril-(C|-C6-alkil)" uključuje 2-metilfenil, 3-metilfenil, 4-metilfenil, fenilmetil (benzil), feniletil, p-metoksibenzil, p-fluorobenzil i p-hlorobenzil grupu.

[0031] Kako se ovde koristi, naziv "acil" označava zasićene alifatične ugljovodonične grupe i ravnog i račvastog lanaca koje imaju od jedan do šest atoma ugljenika vezanih za karbonil radikal i uključuje acetil, propionil, butiril, izobutiril grupu. ]0032] Kako se ovde koristi, "heterociklus" ili "heterociklični" označava stabilni 5- do 7-člani monociklični ili stabilni 8- do 11-člani biciklični heterociklični prsten koji je ili zasićen ili nezasićen, i koji sadrži atome ugljenika i od jedan do tri heteroatoma izabranih iz grupe koja sadrži N, O i S, i gde azot i sumpor heteroatomi mogu opciono da budu oksidovani, a azot heteroatom može opciono da bude kvaternizovan, i uključuju bilo koju bicikličnu grupu u kojoj je bilo koji od prethodno definisanih heterocikličnih prstenova spojen sa benzen prstenom. Heterociklični prsten može da bude vezan na bilo kom heteroatomu ili atomu ugljenika što dovodi do stvaranja stabilne strukture. Heterociklični prsten može da bude nesupstituisan ili supstituisan sa od jedan do tri supstituenta izabrana iz grupe koja sadrži Ci-6-alkoksi, hidroksi, halogen, Ci-6-alkil, C2-6-alkenil, C2^-alkinil, trifluorometil, trifluorometoksi, -N02, -NH2, - NH(Ci_6-alkil), -N(C|.6-alkil)2, -NH-acil, i -N(Ci.6-alkil)acil grupu. Primeri ovakvih heterocikličnih elemenata uključuju piperidinil, piperazinil, 2-oksopiperazinil, 2-oksopiperidinil, 2-oksopirolidinil, 2-oksoazepinil, azepinil, piroliil, pirolidinil, pirazolil, pirazolidinil, imidazolil, imidazolinil, imidazolidinil, piridil, pirazinil, pirimidinil, piridazinil, oksazolil, oksazolidinil, izoksazolil, izoksazolidinil, morfolinil, tiazolil, tiazolidinil, izotiazolil, kvinuklidinil, izotiazolidinil, indolil, kvinolinil, izokvinolinil, benzimidazolil, tiadiazolil, benzopiranil, benzotiazolil, bcnzoksazolil, furil, tetrahidrofuril, benzoffuranil, tetrahidropiranil, tienil, benzotienil, tiamorfolinil, i oksadiazolil.

[0033] Kako se ovde koristi, 'halogen<1>, 'hal' ili 'halo' označavaju fluor, hlor, brom ili jod.

[0034]Kada se bilo koja promenljiva grupa (na primer, aril, heterociklus, Ri, R2, R3, R4, itd.) javlja više od jedanput u bilo kom sastavnom delu ili ujedinjenju formule (I) iz ovog pronalaska, njegova definicija za svako pojavljivanje je nezavisna od definicije u bilo kom drugom pojavljivanju. Takođe, kombinacije supstituenata i/ili promenljivih su dozvoljene samo ukoliko takve kombinacije daju stabilna jedinjenja.

[0035]Kako se ovde koristi, 'tretman', 'lečenje' ili 'terapija' označava: (i) prevenciju da ne dođe do bolesti, poremećaja ili stanja kod pacijenta koji može da ima predispozicije za bolest, poremećaj ili stanaje, ali još uvek nije utvrđeno daje oboleo; (ii) zaustavljanje bolesti, poremećaja ili stanja, to jest, sprečavanje njegovog razvoja; i (iii) oslobađanje od oboljenja, poremećaja ili stanja, to jest, dovođenja do povlačenja oboljenja, poremećaja i/ili stanja.

[0036]Kako se ovde koristi, naziv 'pacijent' označava toplokrvnu životinju, kao što su sisari, koja je obolela od određenog oboljenja, poremećaja ili stanja. Izričito je jasno da su zamorci, psi, mačke, pacovi, miševi, konji, goveda, ovce i ljudi primeri životinja na koje se odnosi naziv.

[0037]Kako se ovde koristi, 'oboljenje' označava bolest, problem ili poremećaj, prestanak ili poremećaj telesnih funkcija, sistema ili organa.

[0038]Kako se ovde koristi, 'poremećaj' označava poremećaj funkcije, strukture ili oba nastale zbog genetskog ili embrionalnog oštećenja u razvoju, ili nastalih od egzogenih faktora kao što su otrov, povreda ili bolest.

[0039]Kako se ovde koristi, 'stanje' se odnosi na stanje zdravlja ili fizičke kondicije.

[0040]Kako se ovde koristi, 'profilaksa' označava prevenciju oboljenja.

[0041]Kako se ovde koristi, naziv, 'poremećaj sna', 'poremećaji sna' ili 'ometanje sna' označava insomniju.

]0042]Kako se ovde koristi, naziv 'insomnija' označava nemogućnost da se zaspi bez dodatnih eksternih nadražaja kao što su buka, jako svetio, itd., u periodu kada bi normalno trebalo da se spava, a nemogućnost spavanja može da varira u stepenu od uznemirenosti do poremećenog sna, ili do smanjenja normalne dužine sna ili apsolutne nesanice. Naziv 'insomnija' obuhvata primarnu insomniju, insomniju povezanu sa mentalnim poremećajem, insomniju indukovanu supstancama i insomniju cirkadijanskog ritma, to jest insomniju zbog promene normalnog rasporeda san-budno stanje (promena rasporeda, poremećaj sna zbog rada u smenama,

dezorijentacija kao posledica dugog letenja ili sindrom dezorijentacije kao posledice dugog letenja, itd.)

[0043] Kako se ovde koristi, naziv 'primarna insomnija' označava teškoću u započinjanju sna, u održavanju sna ili da se ima relaksirajući san koji nije izazvan mentalnim poremećajem ili fiziološkim efektima uzimanjem ili odbacivanjem određenih supstanci (insomnija indukovana supstancom). [0044J Kako se ovde koristi, naziv 'poremećaj cirkadijanskog ritma spavanja' obuhvata dezorijentacije kao posledice dugog letenja ili sindrom dezorijentacije kao posledica dugog letenja, poremećaj sna zbog smenskog rada, sindrom poremećaja sna unapred po vremenskoj osi i sindrom poremećaja sna unazad po vremenskoj osi.

[0045] Kako se ovde koristi, naziv 'efektivna inhibitorna količina jedinjenja' ili 'efektivna inhibitorna količina jedinjenja za kazein kinazu 1 e ' označava dovoljno jedinjenja da postane bioraspoloživo odgovarajućim načinom primene za lečenje pacijenta sa oboljenjem, poremećajem ili stanjem, kome je potreban ovakav tretman.

[0046] Kako se ovde koristi, naziv "terapeutski efektivna količina" označava količinu jedinjenja koja je efektivna u lečenju navedenog oboljenja, poremećaja ili stanja.

[0047] Kako se ovde koristi, naziv 'farmaceutski prihvatljiva so' se odnosi na bilo koju so, bilo daje već poznata ili će biti otkrivena u budućnosti, koju koristi stručnjak sa iskustvom u tehnici, koja je ne-toksična so nastala dodatkom organskih ili neorganskih kiselina ili baza, koja je pogodna za upotrebu kao farmaceutskih preparata. Kao ilustracija baza koje formiraju odgovarajuće soli mogu da se napomenu hidroksidi alkalnih metala ili zemno-alkalnih metala, kao što su hidroksidi natrijuma, kalijuma, kalcijuma ili magnezijuma; amonijak i alifatični, ciklični ili aromatični amini, kao što su metilamin, dimetilamin, trietilamin, dietilamin, izopropildietilamin, piridin i pikolin. Kao ilustracija kiselina koje formiraju pogodne soli mogu da se pomenu neorganske kiseline kao što su, na primer, hidrohloridna, hidrobromidna, sumporna, fosforna i slične kiseline i organske karboksilne kiseline kao što su, na primer, acetatna, propionatna, glikolatna, laktatna, piruviatna, malonatna, sukcinatna, fumaratna, malitna, tartaratna, citratna, askorbinska, maleinska, hidroksimaleinska i dihidroksimaleinska, benzoatna, fenilacetatna, 4-aminobenzoatna, 4-hidroksibenzoatna, antranilna, cinamatna, salicilatna, 4-aminosalicilatna, 2-fenoksibenzoatna, 2-acetoksibenzoatna, mandelatna i slične kiseline, i organske sulfonatne kiseline kao što su metansulfonatna i p-toluensulfonatna kiselina.

[0048]Kako se ovde koristi, 'farmaceutski nosač' se odnosi na farmaceutske ekscipijente korisne u formulaciji farmaceutski aktivnih jedinjenja za primenu i koja su uglavnom netoksična i ne-nadražujuća pod uslovima primene. Tačan odnos ovih ekscipijenata je određen rastvorljivošću i hemijskim osobinama aktivnog jedinjenja, izbranim načinom primene kao i standardnom farmaceutskom praksom. U primeni postupaka iz ovog pronalaska, aktivni sastojak je preferirano inkorporiran u kompoziciju koja sadrži farmaceutski nosač, mada su jedinjenja efektivna i mogu da se primene i kao takva. To znači, odnos aktivnog sastojka može da varira od približno 1 % do približno 90% težine.

[0049]Naredne skraćenice koje mogu da se sretnu u ovoj prijavi imaće sledeća značenja: Me (metil), Et (etil), Ph (fenil), Et3N (trietilamin), p-TsOH (para-toluen sulfonatna kiselina), TsCl (para-toluensulfonil hlorid), hept (heptan), DMF (dimetilformamid), NMP (l-metil-2-pirolidinon ili N-metil-2-pirolidinon), IP A (izopropanol ili izopropil alkohol), TFA (trifluoroacetatna kiselina), DBU (l,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en), DBN (1,5-diazabiciklo[4.3.0]non-5-en), rt ili r.t. (sobna temperatura ili temperatura sredine), min ili min.

(minuti), h (sat ili sati), UV (ultraljubičasti), LCMS (tečna hromatografija masene spektrometrije), t-Boc ili Boe (terc-butoksikarbonil), Bn (benzil), t-Bu (tercijerni butil), i-Pr (izopropil), HO Ac (acetatna kiselina), EtOAc (etil acetat), Et20 (dietiletar), EtOH (etanol), g (gram), mg (miligram), u.g (mikrogram), ng (nanogram), mL (mililitar), uL (mikrolitar), L (litar), HPLC (visoko efikasna tečna hromatografija), TLC, tlc ili TIc (hromatografija na tankom sloju), g/L (grami po litru), Si02(silika gel), L/min (litri po minutu), mL/min (mililitri po minuti), mmol (milimol), M (molarni), mM (milimolarni), uM (mikromolarni), nM (nanomolarni), uCi (mikroKiri), CPM (brojanje po minutu), rpm (obrtaji u minutu), mm (milimetar), um (mikrometar), u (mikron), nm (nanometer), ppm (delovi po milion), psi (funte po kvadratnom inču), eq. ili equiv. (ekvivalent), RT(vreme retencije), °C (stepeni Celzijusa) i K (Kelvin).

[0050]U skladu sa tim, opšti aspekt pronalaska je usmeren na jedinjenje formule (I) gde: R| jeH ili Ci^alkil grupa; Raje NRsR6grupa; R3 je aril ili heterociklus; R4je H, Cj^alkil, C2-6-alkenil, C2-6-alkinil, Ct.6alkoksi, CF3, halogen, SH, S-Ci^alkil, HO2, NH2ili NR5R6grupa; R5 je H ili Ci^alkil grupa; R&je H ili Cj_6alkil grupa; X je S ili S(0)n; jedan od K, L ili M je N a druga dva člana od K, L ili M su svaki C, pri čemu je R4vezan samo za K, L, M ili drugi atom prstena koji je C; m je 1, 2 ili 3; a nje 1 ili 2.

[0051] Jedan aspekt ovog pronalaska se odnosi na jedinjenja gde: L je N, a K i M su svaki C.

[0052] Još jedan aspekt ovog pronalaska se odnosi na jedinjenja gde: L je N, K i M su svaki C, Ri, R4, R5i R(, su svaki H, a R3je aril grupa. Naredna jedinjenja su reprezentativni primeri u okviru ovog pronalaska:

amid 3-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksilne kiseline,

amid 3-(3-fluoro-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-c]piridin-2- karboksilne kiseline i amid 3-(4-hloro-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-c]piridin-2- karboksilne kiseline.

[0053] Još jedan aspekt ovog pronalaska se odnosi na jedinjenja gde: M je N, a K i L su svaki C.

[0054] Još jedan aspekt ovog pronalaska se odnosi na jedinjenja gde: M je N, K i L su svaki C, Ri, R4, R5i Rćje svaki H, a R3 je aril grupaili heterociklus. Naredna jedinjenja su reprezentativni primeri u okviru ovog pronalaska:

amid 3-fenilsulfanil-1 H-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline,

amid 3-(3-fluoro-feniIsulfanil)-lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline,

amid 3-(3-metoksi-fenilsulfanil)-lH-pirolo[2,3-c]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(3-hloro-fenilsulfanil)-lH-pirolo[2,3-c]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(2-trifluorometil-fenilsulfanil)-lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(2-trifluorometoksi-fenilsulfanil)-l H-pirolo[2,3-c]piirdin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(2-metoksi-fenilsulfanil)-lH-pirolo[2,3-c]piridin-2- karboksilne kiseline, i amid 3-(piridin-2-sulfanil)-lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline.

[0055] Još jedan aspekt ovog pronalaska se odnosi na jedinjenja gde: K je N i L i M su svaki C.

[0056J Još jedan aspekt ovog pronalaska se odnosi na jedinjenja gde: K je N, L i M su svaki C, Ri je Ci-6alkil grupa, R5 je H, R6je H ili Ci_6alkil grupa, a R3 je aril grupa. Naredna jedinjenja su reprezentativni primeri u okviru ovog pronalaska:

metilamid l-metil-3-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline,

amid l-metil-3-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, i amid 3-fenilsulfanil-1 -propil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline.

[0057]Još jedan aspekt ovog pronalaska se odnosi na jedinjenja gde: K je N, L i M su svaki C, Rt, R4i R5 je svaki H, R3 je aril grupa i R6 je C|.6alkil grupa. Naredna jedinjenja su reprezentativni primeri u okviru ovog pronalaska: metilamid 3-(3-trifluorometioksifenilsulfanil-1 H-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline, metilamid 3-(3-hlorofenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, metilamid 3-(3-fluorofenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, i metilamid 3-fenilsulfanil-lH-pirolo [3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline.

[0058]Još jedan aspekt ovog pronalaska se odnosi na jedinjenja gde: K je N, L i M su svaki C, Rt, R4, R5i R6 je svaki H i R3je heterociklus. Naredna jedinjenja su reprezentativni primeri u okviru ovog pronalaska:

amid 3-(kvinolin-8-ilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline,

amid 3-(piridin-2-sulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline,

amid 3-(piridin-4-sulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, i amid 3-(tiofen-2-ilsulfanil)- lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline.

[0059]Još jedan aspekt ovog pronalaska se odnosi na jedinjenja gde: K je N, L i M su svaki C, Ri, R5i R6 je svaki H i R3je aril grupa. Naredna jedinjenja su reprezentativni primeri u okviru ovog pronalaska:

amid 3-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(3-fluorofenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(3-hlorofenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(3-bromofenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(2-hlorofenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(4-hlorofenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(2,4-dihlorofenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline, amid 3-(2-fluorofenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(2,3-dihlorofenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline, amid 3-(2-trifluormetilfenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karbiksilne kiseline, amid 3-(3-trifluorometil-fenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline, amid 3-(2-aminofenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(2,5-dihloro-fenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline, amid 3-(2-metoksi-fenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(3-metoksi-fenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(3-amino-fenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(4-nitro-fenilsulfanil)-lH-pirolo [3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(3-nitro-fenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-o-tolilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-p-tolilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(3,5-dimetil-fenilsulfanil)-l H-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-m-tolilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(2-etil-fenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(3-trifluorometoksi-fenilsulfanil)-lH-pirolo [3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline,

amid 3-(3-fluoro-fenilsulfanil)-5-metoksi-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, i

amid 3-(3-metoksi-fenilsulfanil)-5-metoksi-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2- karboksilne kiseline.

[0060] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da se izrade procesima analognim sa procesima poznatim u tehnici. Seme reakcija 1, 2 i 3, i odgovarajući opisni tekst, opisuju izradu različitih jedinjenja iz pronalaska. Otkriveni postupci i primeri su dati u cilju ilustracije i ni na jedan način ne ograničavaju okvir ovog pronalaska. Alternativni reagensi, uslovi reakcija i druge kombinacije i permutacije ovde opisanih faza za dobijanje pojedinačnih jedinjenja su lako prihvatljive stručnjaku sa uobičajenim iskustvom u tehnici. Tabele 1, 2 i 3 daju zbirno jedinjenja iz primera, a biološki podaci za jedinjenja iz pronalaska data u primerima su sumirani u Tabeli 4.

HEMIJSKE SINTEZE

[0061]

[0062]Šema 1 otkriva sinteze za jedinjenja iz ovog pronalaska od komercijalno raspoloživih 2-hloro-3-nitropiridina(Ia-1gde: K je N a L i M su svaki C), 3-hloro-4-nitropiridina(Ib-1gde: L je N, a K i M su svaki C) ili 4-hloro-3-nitropiridina(lc-1gde: M je N, a K i L su svaki C), ili opciono supstituisanog hloro-nitropiridina 1. Prva cifra broja jedinjenja se odnosi na odgovarajuće jedinjenje ili broj strukture kako je pokazano u bilo kojoj od Šema 1 do 3, na primer, prva cifra 1 ula-1se odnosi na jedinjenje ili strukturu 1 u Šemi 1. Naredno slovo označeno sa "a", "b" ili "c" identifikuje jedinjenje kao prekursor za ili član lH-pirolo[3,2-b] piridin-2-karboksamid serija ("a", takođe poznat kao 4-azaindol serija), lH-pirolo[3,2-c] piridin-2-karboksamid serija ("b", takođe poznat kao 5-azaindol serija) i lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksamid serija ("c", takođe poznat kao 6-azaindol serija), tim redom. Poslednja cifra ili cifre nakon isprekidane linije u broju jedinjenja idenfikuju specifično jedinjenje u toj strukturnoj seriji. Kada je jedinjenje identifikovano samo sa brojem, broj se odnosi na odgovarajuće jedinjenje ili strukturu kako je pokazano u bilo kojoj od Šema 1-3, a jasno je da diskusija generalno uključuje tri strukturne serije označene sa "a", '"b" i "c" kako je prethodno diskutovano.

[0063] U Šemi 1, faza a, hloro-nitropiridin 1 se u porcijama doda u so alkalnog metala diestra malonatne kiseline u višku malonat diestra, kao stoje na primer natrijumova, kalijumova ili litijumov so diestra malonatne kiseline u višku diestra malonatne kiseline, kao što su na primer, dietil malonat ili dimetil malonat, na temperaturi od približno 50 °C do približno 70°C. So alkalnog metala diestra malonatne kiseline može da se izradi na primer, dodavanjem alkalnog metala kao što je, na primer, natrijum metal, u višak diestra malonatne kiseline, kako je dobro poznato stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Nakon približno tri sata na približno 50 °C do približno 70°C, mešavina se ostavi da stoji na temperaturi sredine, od približno 12 do približno 24 sata. Ukoliko reakcija nije završena, mešavina se zagreva na približno 80°C, od približno 2 sata do približno 4 sata, a nakon toga koncentruje da se ukloni višak diestra malonatne kiseline, a nakon toga tretira sa koncentrovanom mineralnom kiselinom kao što su, na primer, hidrohloridna kiselina ili sumporna kiselina i vodom. Mešavina se zagreva na približno 100 °C do približno 110°C, od približno 5 sati do približno 9 sati, da se izvrši dekarboksilacija. Nakon stajanja približno 12 do približno 24 sata na temperaturi sredine, mešavina se ispere sa pogodnim rastvaračem, kao što su na primer etil etar i etil acetat, zaalkališe od približno pH 8 do približno pH 9 sa hidroksidom alkalnog metala, kao što su na primer, natrijum hidroksid ili kalijum hidroksid, i ekstrahuje sa odgovarajućim organskim rastvaračem, kao što je na primer etil acetat. Organski ekstrakt se filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije željeni metil-nitropiridin 2. Izrada 2 sa ovom "faza a" procedurom je označena kao "sinteza jednog proizvoda u dve faze".

[0064]Alternativno, u Šemi 1, faza a, metil-nitropiridin 2 može da se izradi Suzuki udvajanjem 1 sa metilboratnom kiselinom. Prema tome, mešavina hloro-nitropiriđina 1, metilboratne kiseline, kalijum karbonata i tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) [Pd(PPh3)4] u odgovarajućem nejonskom rastvaraču, kao što je na primer dioksan, se zagreva na približno 110 °C do približno 120°C, od približno 12 sati do približno 16 sati. Reaktivna mešavina se ohladi na sobnu temperaturu, koncentruje i prečisti hromatografijom da se dobije metil-nitropiridin 2.

[0065]Kao korisno je sada otkriveno da jedinjenje 2 može takođe da se izradi u jednom proizvodu koji uključuje dve faze u skladu sa Šemom 1, faza a. U skladu sa tim, proizvod se doda u polarni rastvarač, kao što su na primer dimetilformamid ili N-metil-2-pirolidinon, sa približno 2 do približno 2.5 ekvivalenta baze, kao što su na primer kalijum t-butoksid, natrijum etoksid, natrijum hidrid, natrijum t-butoksid, ili natrijum heksametildisilazid, na temperaturi od približno 16°C i uz mešanje od približno 30 minuta. Mešavina se nakon toga tretira sa približno jedan do približno četiri ekvivalenta disetra malonatne kiseline, kao što je na primer dietil malonat, na temperaturi od približno 20°C do približno 35°C. Nakon približno 20 minuta, mešavina se tretira na približno 29°C do približno 44°C sa rastvorom približno jednog ekvivalenta jedinjenja 1 u polarnom rastvaraču kao što su na primer dimetilformamid ili N-metilpirolidon. Mešavina se zagreva na približno 50°C sve dok se reakcija ne završi, što se proverava HPLC analizom ili drugim hromatografskim analizama što je dobro poznato stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Najveća prednost je što se jedinjenje 1 kondenzuje sa približno 2.0 ekvivalenta dietil malonata, pri čemu je N-metil-2-pirolidinon preferirani rastvarač, gde je približno 2.2 do približno 2.5 ekvivalenata natrijum t-butoksida preferirana baza i gde su prethodno navedeni redosled dodavanja, temperature i vreme reakcija koršćeni za ovaj deo od mnogo veće koristi za "jedan proizvod, dve faze" (faza a) sinteze jedinjenja 2. Kada je reakcija završena, mešavina se tretira sa mineralnom kiselinom i vodom, preferirano sa priblilžno 4.2 ekvivalenta 6M rastvora sumporne kiselina, na približno 100°C, u toku približno 12 sati, da se izvrši dekarboksilacija. Reakcija se neutrališe sa ledenom vodom i ekstrahuje sa pogodnim rastvaračem kao stoje toluen, da se dobije jedinjenje 2. Sinteza jedinjenja2a-l(2-metil-3-nitropiridin) ovom pogodnom "faza a" procedurom dovodi do iznenađujuće velikog skraćenja vremena reakcije (približno 2 sata u odnosu na približno 3 dana) za kondenzacijula-1sa dietil malonatom, i dobija se2a-lu značajno povećanom ukupnom prinosu (približno 80% u odnosu na 30-68%) i značajno većoj čistoći dobijenog produkta (>96%) bez potrebe za prečišćavanjem hromatografijom. Postupak je pogodno reproduktibilan u odnosu na prinos i čistoću dobijenog produkta. Prednost je što ovaj postupak takođe izbegava upotrebu natrijum metala i relativno skupih reagenasa kao što je, na primer, tetrakis(trifenil-fosfin)paladijum(0), koji bi bili potrebni za izradu jedinjenja 2 drugim postupcima koji su prethodno otkriveni.

[0066}Kako je pokazano u Šemi 1, faza b, etil estar 2-hidroksi-3-(nitro-piridinil)-akrilatne kiseline 3 može da se izradi tretiranjem metil-nitropiridina 2 sa pogodnom bazom, kao što su na

primer natrijum etoksid, litijum etoksid, litijum t-butoksid, natrijum t-butoksid, kalijum t-butoksid ili litijum heksametildisilazid, u pogodnom rastvaraču, kao što su na primer etanol ili t-butanol, a nakona toga tretiranjem reaktivne mešavine sa diestrom oksalata kao što su na primer dimetil oksalat ili dietil oksalat, na temperaturi sredine, a nakon toga se reaktivna mešavina ostavi od približno 12 sati do približno 48 sati na temperaturi sredine. Reaktivna mešavina se nakon toga tretira sa mineralnom kiselinom, kao što su na primer hidrohloridna kiselina ili sumporna kiselina, do približno pH 1. Precipitat se sakupi filtriranjem, ispere po redu sa pogodnim rastvaračem, kao što su na primer etanol i di-izopropil etar, tim redom, da se dobije etil estar 2-hidroksi-3-(nitro-piridinil)-akrilatne kiseline 3 ili njegov tautomerni keto estar.

[0067]Prednost je što je nađeno da jedinjenje 3 može takođe da se sintetiše narednim postupkom u skladu sa Šemom 1, fazom b, laganim dodavanjem jedinjenja 2 u prethodno izmešani rastvor dietil oksalata i pogodne baze, u pogodnom rastvaraču, na približno 2°C do približno temperature sredine. U skladu sa tim, pogodna baza, kao što su na primer natrijum etoksid, litijum etoksid, litijum t-butoksid, natrijum t-butoksid, kalijum t-butoksid ili litijum heksametildisilazid, se doda u pogodan rastvarač kao što je na primer tetrahidrofuran, na približno 2°C. Mešavina se meša približno 20 minuta i nakon toga se dodaju približno 3 ekvivalenta dietil oksalata na približno -0.3°C do približno 4°C. Nakon približno 10 minuta, rastvor približno jednog ekvivalenta jedinjenja 2 i pogodnog rastvarača, kao što je na primer tetrahidrofuran, se doda na približno 4°C do približno 9°C. Mešavina se ostavi da se zagreje na temperaturu sredine. Kada je reakcija završena, što se utvrđuje HPLC analizom ili drugim hromatografskim analizama kako je dobro poznato stručnjaku sa iskustvom u tehnici, reaktivna mešavina se ohladi na približno 1 °C i tretira sa zasićenim rastvorom amonijum hlorida na približno 1°C do približno 9°C. Jedinjenje 3 se izdvoji daljim razblaživanjem sa vodom i/ili ko-rastvaračem, kao što je na primer izopropanol. Najveće prednosti su što se jedinjenje 2 kondenzuje sa dietil oksalatom, pri čemu je natrijum etoksid preferirana baza, a tetrahidrofuran je preferirani rastvarač, nakon prethodno opisanog redosleda dodavanja, i vremena i uslova reakcije. Sinteza jedinjenja3a-l(etil estar 2-hidroksi-3-(3-nitro-piridin-2-il)-akrilatne kiseline) ovom pogodnom "faza b" procedurom dovodi do iznenađujuće velikog skraćenja vremena reakcije (približno 2 sata u odnosu na približno 2 do 3 dana), a jedinjenje3a-lse dobija u značajno povećanom prinosu (približno 88% u odnosu na 32-68%).

[0068]Kako je pokazano u Šemi 1, faza c, željeni estar lH-pirolo[3,2-b]piirdin-2-karboksilne kiseline, estar lH-pirolo[3,2-c]piirdin-2-karboksilne kiseline ili estar lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline, međuproizvodi 4, mogu da se izrade katalitičkom ili hemijskom redukcijom nitro grupe odgovarajuće supstituisanog estra 2-hidroksi-3-(nitro-piridinil)-akrilatne kiseline 3, ili njegovog tautomernog keto estra, uz istovremeno formiranje pirol prstena da se dobije jedinjenje 4. Prema tome, mešavina jedinjenja 3 i pogodnog katalizatora, kao što je na primer paladijuma na ugljeniku, u pogodnom rastvaraču, kao što su na primer etanol ili metanol, se hidrogenizuje na način koji je dobro poznato stručnjaku sa iskustvom u tehnici, od približno jedan do tri sata, pod pritiskom od približno 45 psi do približno 1200 psi, da se dobije, nakon prečišćavanja, međuproizvod jedinjenje 4. Prednost je što se jedinjenje 4 dobija ovim postupkom, pri čemu je apsolutni alkohol preferirani rastvarač, a paladijum na ugljeniku je preferirani katalizator. Pod ovim uslovima, rezultat se postiže upotrebom manje količine katalizatora za 10 težinskih procenata.

[0069] Alternativno, etil estar 2-hidroksi-3-(nitro-piridinil)-akrilatne kiseline 3, ili njegov tautomerni keto estar, može hemijski da se redukuje da se dobije međuproizvod jedinjenje 4. Na primer, mešavina jedinjenja 3, SnCl2i TiCl4u pogodnom rastvaraču, kao što je na primer etanol, se zagreva pod refluksom približno 4 sata da se dobije, nakon prečišćavanja postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici, međuproizvod jedinjenje 4.

[0070] Kada se za izradu jedinjenja 3 koristi dietil oksalat, naknadnom redukcijom jedinjenja 3 dobija se međuproizvod jedinjenje 4 u obliku etil estra. Međuproizvod etil estar 4 može opciono da se konvertuje u druge pogodne estre postupcima transesterifikacije koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Kako je pokazano u Šemi 1, faza d, metil estar 5 može da se izradi tretiranjem metanolnog rastvora etil estra 4 u prisustvu baze, kao što su na primer kalijum karbonat ili natrijum karbonat, zagrevanjem mešavine na približno 50 °C do približno 80°C, u toku približno jedan sat, ili dok se reakcija ne završi, što se određuje hromatografijom na tankom sloju ili drugim pogodnim hromatografskim analizama, kako je dobro poznato stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Razblaživanjem reaktivne mešavine sa vodom i izdvajanjem metil estra 5 postupcima filtracije ili ekstrakcije, što je dobro poznato stručnjaku sa iskustvom u tehnici, dobija se metil estar 5. [0071 ] Kako je pokazano u Šemi 1, faza e, estri međuproizvoda 4ili5 mogu da se konvertuju u amid 6 postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Prema tome, tretiranjem rastvora estra 4 ili 5 u pogodnom polarnom rastvaraču, kao što su na primer metanol ili etanol, sa približno 5N do približno 7N rastvorom amonijum hidroksida, u toku približno jedan dan do približno tri dana, na temperaturi sredine, ili zagrevanjem rastvora na približno 55 °C u toku približno 10 sati, nakon izdvajanja postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici, dobija se primarni amid 6. Alternativno, estar 4 ili 5 može da se suspenduje u mešavini koncentrovanog rastvora amonijum hidroksida i litijum hlorida na temperaturi sredine, u toku približno tri do približno pet dana, sve dok se hromatografijom na tankom sloju ili drugim pogodnim hromatografskim analizama koje su dobro poznate stručnjaku sa iskustvom u tehnici, ne pokaže daje reakcija potpuno završena. Amid 6 se iz reaktivne mešavine izdvoji postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. N-Ci-6-alkil-supstituisani amidi 6 se izrađuju tretiranjem međuproizvoda azaindol estra 4 ili 5 sa C|_6-alkil aminom, postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Na primer, međuproizvod azaindol estar 4 ili 5 može da se tretira sa C|_6-alkil aminom, kao što je na primer metilamin, kao koncentrovani vodeni rastvor ili čist, sa Ci_6-alkil aminom u višku, i praćenjem završetka reakcije hromatografijom na tankom sloju ili drugim hromatografskim postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Željeni N-Ci-6-alkil amid 6 se izdvoji nakon razblaživanja reakcije sa vodom ili postupcima ekstrakcije koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Sličnim tretmanom međuproizvoda azaindol estra 4 ili 5 sa C|_6-dialkil aminom, dobija se odgovarajući N-Ci.(,-dialkil amid 6. [0072J Prednost je što se primarni amid 6 izrađuje u skladu sa Semom 1, faza e, dodavanjem azaindol etil estra 4 u rastvor amonijaka u metanolu i zagrevanjem pod pritiskom sve dok se reakcija ne završi. Upotreba metanola kao rastvarača obezbeđuje značajno veću rastvorljivost početnog materijala i značajno kraće vreme reakcije. Azaindol etil estar 4 se takođe transesterifikuje pod ovim uslovima u odgovarajući azaindol metil estar 5, ali se oba estra 4 i 5 konvertuju u traženi primarni amid 6 pod uslovima reakcije. Reakcija se preferirano izvodi koristeći 7N rastvor amonijaka u metanolu, temperatura reakcije je približno 50°C a početni pritisak je približno 35 psi, u toku približno 49 sati. U toku ovog vremena, pritisak u reaktivnoj posudi pada na približno 16 psi. Završetak reakcije se određuje pomoću HPLC hromatografske analize ili drugim hromatografskim analizama koje su dobro poznate stručnjaku sa iskustvom u tehnici.

[0073] Kako je pokazano u Šemi 1, faza f, međuproizvod amid 6 je tioarilovan na položaju 3 pirol prstena postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Na primer, suspenzija međuproizvoda amida 6 u pogodnom rastvaraču, kao što su na primer dimetilformamid ili NMP, se tretira sa pogodnom bazom, kao što su na primer natrijum hidrid ili litijum hidrid, na temperaturi sredine, a nakon toga tretmanom sa pogodnim diarildisulfidom, a nakon toga se mešavina zagreva na približno 90 °C do približno 100°C, u toku približno 12 sati do približno 20 sati. Tok reakcije se prati hromatografijom na tankom sloju ili drugim hromatografskim postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Reakcija se nakon toga koncentruje, razblaži sa vodom, a traženo jedinjenje formule (I) se izdvoji i prečisti hromatografijom, postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici.

[0074]Alternativno, mešavina međuproizvoda amida 6 i približno 1.5 ekvivalenata cezijum karbonata u pogodnom rastvaraču, kao što su na primer dimetilformamid ili NMP, se tretira sa pogodnim diaridisulfidom (približno 1.1 ekvivalent), a nakon toga se mešavina zagreva na približno 90 °C do približno 100°C, u toku približno 12 sati do približno 20 sati. Reakcija se prati pomoću hromatografije na tankom sloju ili drugim hromatografskim postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Jedinjenje formule (I) se izdvoji i prečisti hromatografijom, postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Jedinjenja formule (I) gde je R3-X heterociklus-S grupa, se izrađuju na sličan način koristeći odgovarajuće supstituisane diheterociklildisulfide.

[0075]Prednost može da bude što se jedinjenje formule (I) sintetiše u skladu sa Semom 1, faza f, dodavanjem u preferirani rastvarač NMP, u jednoj porciji, približno 1.5 ekvivalenata diarildisulfida, približno dva ekvivalenta cezijum karbonata i približno jedan ekvivalent amida 6. Mešavina se zagreva na približno 120°C, u toku približno 21 sat, a reakcija se prati pomoću HPLC ili drugim hromatografskim postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Ukoliko se zahteva da se reakcija izvrši do kraja, doda se opciono približno 0.5 ekvivalenta cezijum karbonata i zagrevanje se nastavi približno 4 sata. Kada je završetak reakcije potvrđen hromatografskom analizom, reakcija se ohladi, neutrališe sipanjem u vodu, a traženo jedinjenje formule (I) se izdvoji i prečisti postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Kada se na ovaj način izrađuje jedinjenje formule (I), vreme reakcije je iznenađujuće značajno skraćeno, a jedinjenje formule (I) se dobija u većem prinosu (85% u odnosu na 59%) i značajno je čistije tako da naknadno prečišćavanje hromatografijom nije potrebno.

[0076]Kako je pokazano u Šemi 1, faza g, azot pirol prstena jedinjenja formule (I) može da bude N-alkilovan tretiranjem rastvora jedinjenja formule (I) gde je R]= H i pogodnog rastvarača, kao što je na primer l,3-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2(lH)-pirimidinon, sa Ci_6-dialkilsulfatom i pogodnom bazom, kao stoje na primer cezijum karbonat, na temperaturi sredine, od približno 12 sati do približno 20 sati. Završetak reakcije se određuje hromatografijom na tankom sloju ili drugim hromatografskim postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Kada je reakcija završena, reaktivna mešavina se razblaži sa vodom, a jedinjenje formule (I) gde je RiCi-6-alkil grupa, se izdvoji i prečisti postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Azot pirol prstena jedinjenja formule (I) može takođe da se alkiluje tretiranjem rastvora jedinjenja formule (I) gde je Rj= H upiridinu, sa C|-C6-alkil halidom, u prisustvu pogodne baze kao što je na primer cezijum karbonat, uz zagrevanje od približno 0.25 sati do približno 3 sata. Reaktivna mešavina se ohladi, razblaži sa vodom ili koncentruje do sušenja i ekstrahuje sa etil acetatom. Koncentracijom i prečišćavanjem hromatografskim postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici, se obezbeđuje jedinjenje formule (I) gde je R, = CrC6-alkil grupa. Mogu da se primene i drugi postupci za N-alkilaciju azota pirol prstena jedinjenja formule (I) gde je Rt= H, koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici, na primer tretman jedinjenja formule (I) gde je Rt= H u pogodnom polarnom rastvaraču kao što su na primer dimetilformamid ili NMP, sa pogodnom bazom, kao što su na primer natrijum hidrid ili kalijum t-butoksid, a nakon toga dodavanjem Ci_f,-alkil halida, kao što je na primer, propil jodid. Završetak reakcije se određuje hromatografijom na tankom sloju ili drugim hromatografskim postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Kada je reakcija završena, reaktivna mešavina se razblaži sa vodom, a jedinjenje formule (I) gde je Rj= Cj-6-alkiI grupa se izdvoji i prečisti postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. [00771Kako je pokazano u Šemi 2, diarilđisulfidi se izrađuju tretiranjem rastvora odgovarajućeg arilsulfida u pogodnom organskom rastvaraču, kao što je na primer metanol, sa vodenim rastvorom natrijum perborata i mešavina se ostavi da stoji od približno 12 do približno 24 sata na temperaturi sredine. Diarildisulfid može da se izdvoji i prečisti postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Diheterociklildisulfidi, kao što je na primer bis(2-tienil)disulfid se izrađuju na sličan način.

[0078jŠema 3 otkriva sintezu metil estra lH-pirolo[3,2-c]piirdin-2-karboksilne kiseline5b-l.U Šemi 3, faza h, mešavina 1,1-dimetiletil estra (3-jodo-piridin-4-il)karbamatne kiseline (7b-l), 3,3-dietoksi-l-propina, baze kao što su na primer trietilamin ili Hunig-ova baza (N,N-diizopropiletilamin), dihlorobis(trifenilfosfin)paladijuma(II) i bakar jodida se zagreva u pogodnom rastvaraču kao što je na primer bezvodni DMF, u inertnoj atmosferi, na približno 90 °C, u toku približno tri sata. Reaktivna mešavina se ohladi na približno 70 °C i tretira sa pogodnom bazom kao što su na primer l,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en (DBU) ili 1,5-diazabiciklo[4.3.0]non-5-en (DBN), a nakon toga se meša približno tri sata na približno 70 °C a nakon toga se mešanje nastavi približno dvanaest sati na sobnoj temperaturi. Reaktivna mešavina se sipa u etil acetat, ispere sa vodom i slanim rastvorom, organska faza se suši, filtrira i koncentruje da se dobije 1,1-dimetiletil estar 2-(dietoksimetil)-lH-pirolo[3,2-c]piridin-l-karboksilne kiseline(8b-l)koji se prečisti hromatografijom ili drugim postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Kako je pokazano u Šemi 3, faza i, hidroliza jedinjenja8b-lse izvodi pod kiselim uslovima da se dobije lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-

karboksaldehid. Tretmanom 8b-l sa mineralnom kiselinom kao što je na primer hidrohloridna kiselina, u toku pogodnog vremenskog perioda kao što je približno 20 sati, na sobnoj temperaturi, dobija se mešavina, a nakon izdvajanja i hromatografskog razdvajanja produkata mešavine postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici, dobijaju se 1H-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksaldehid (9b-l) i 1,1-dimetiletil estar 2-formil-lH-pirolo[3,2-c]piridin-l-karboksilne kiseline. Kiselom hidrolizom 1,1-dimetiletil estra 2-formil-lH-pirolo[3,2-c]piridin-l-karboksilne kiseline, refluksovanjem sa pogodnom kiselinom kao što je na primer trifluoroacetatna kiselina i pogodnim rastvaračem kao što je na primer dihlorometan, dobija se 1 H-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksaldehid, 9b-l. Kako je pokazano u Šemi 3, faza j, tretmanom lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksaldehida (9b-l), u pogodnom rastvaraču kao što jc metanol, sa natrijum cijanidom i mangan dioksidom, uz hlađenje na približno 0 °C i mešanje u toku približno pet sati, nakon filtriranja, ispiranja sa vodom i izdvajanja postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici, dobija se metil estar lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksilne kiseline 5b-I.

[0079] Svi od različitih aspekata jedinjenja korišćenih u postupcima iz ovog pronalaska, kako je ovde otkriveno, mogu da se koriste u postupku lečenja različitih oboljenja i poremećaja, kako je ovde objašnjeno. Kako je ovde navedeno, jedinjenja iz ovog pronalaska su sposobna da inhibiraju efekte kazein kinaza 1 s . Jedan aspekt ovog pronalaska obezbeđuje upotrebu ovih jedinjenja za izradu medikamenta korisnog za lečenje poremećaja raspoloženja i poremećaja sna. U još jednom aspektu ovog pronalaska, poremećaj raspoloženja može da bude depresivni poremećaj ili bipolarni poremećaj. Još jedan aspekt ovog pronalaska se odnosi na tretman depresivnog poremećaja, kada je depresivni poremećaj osnovni depresivni poremećaj. Naredni aspekt ovog pronalaska se odnosi na tretman bipolarnog poremećaja, kada je bipolarni poremećaj bipolarni I poremećaj ili bipolarni II poremećaj. Naredni aspekt ovog pronalaska se odnosi na treteman poremećaja sna. Još jedan aspekt ovog pronalaska se odnosi na tretman poremećaja sna, kada je poremećaj sna poremećaj cirkadijanskog ritma sna. Još jedan aspekt ovog pronalaska se odnosi na tretman poremećaja cirkadijanskog ritma sna, kada je poremećaj cirkadijanskog ritma sna poremećaj sna zbog rada u smenama, sindroma umora i dezorijentacije kao posledice dugog letenja, sindroma poremećaja sna unapred po vremenskoj osi i sindroma poremećaja sna unazad po vremenskoj osi. Stručnjak sa iskustvom u tehnici će jednostavno da prihvati da oboljenja i poremećaji koji su ovde izričito navedeni ne treba da ograniče već da ilustruju efikasnost jedinjenja iz ovog pronalaska. Prema tome, jasno je da jedinjenja iz pronalaska mogu da se koriste za lečenje bilo kog oboljenja ili poremećaja koje može da se popravi inhibicijom kazein kinaze ls .

[0080]U još jednom aspektu ovog pronalaska, farmaceutske kompozicije jedinjenja formule (I) iz ovog pronalaska, se izrađuju na način koji je dobro poznat stručnjaku sa iskustvom u farmaceutskim tehnikama. Nosači ili ekscipijenti mogu da budu čvrsti, polučvrsti ili tečni materijali koji mogu da budu vehikulum ili medijum za aktivni sastojak. Pogodni nosači ili ekscipijenti su dobro poznati u tehnici. Farmaceutska kompozicija može da bude prilagođena za oralnu, inhialacionu, parenteralnu ili topičnu upotrebu, i može da se primeni na pacijentu u obliku tableta, kapsula, suspenzija, sirupa, aerosola, inhalahata, supozitorija, melema, praškova, rastvora i slično. Kako se ovde koristi, naziv "farmaceutski nosač" označava jedan ili više ekscipijenata. Kako je ovde opisano, farmaceutske kompozicije iz pronalaska obezbeđuju inhibiciju kazein kinaze 1 s i stoga su korisne za tretman oboljenja ili poremećaja koji mogu da se poprave inhibicijom kazein kinaze 1 e .

[0081]U izradi formulacija jedinjenja iz pronalaska, treba da se obrati pažnja na osiguranje bioraspoloživosti efektivne količine aktivnog jedinjenja ili aktivnih jedinjenja izabranim načinom primene, uključujući oralni, parenteralni i subkutani način primene. Na primer, efikasni načini primene mogu da uključe subkutani, intravenozni, transdermalni, intranazalni, rektalni, vaginalni i slično, koji uključuju oslobađenje iz implanta kao i iz injekcije aktivnog sastojka i/ili kompozicije direktno u tkivo.

[0082]Za oralnu primenu, jedinjenja mogu da se formulišu u obliku čvrstih ili tečnih preparata, sa ili bez inertnih razblaživača ili jestivih nosača, kao što su kapsule, pilule, tablete, troheje, praškovi, rastvori, suspenzije ili emulzije. Kapsule, pilule, tablete, troheje i slično mogu takođe da sadrže jedno ili više od sledećih pomoćnih sredstava: vezivna sredstva kao što su mikrokristalna celuloza, tragakanta guma; ekscipijente kao što su škrob ili laktoza, sredstva za raspadanje kao što su alginatna kiselina, kukuruzni škrob i slično; lubrikanse kao što su stearatna kiselina, magnezijum stearat ili Sterotex®,(Stokely-Van Camp Inc., Indinapolis, Indiana), glidanse kao što je koloidni silicijum dioksid; sredstva za zaslađivanje kao što su saharoza ili saharin; i sredstva za korigovanje ukusa kao što su pepermint, metil salicilat ili voćni ukus. Kada je jedinična doza u obliku kapsule, može takođe da sadrži tečni nosač kao što su polietilen glikol ili masno ulje. Korišćeni materijali treba da budu farmaceutski čisti i netoksični u količinama u kojima se koriste. Alternativno, farmaceutske kompozicije mogu da se izrade u obliku za produženo oslobađanje kako bi se obezbedila terapeutska količina jedinjenja formule (I) iz pronalaska u obliku pogodnom za primenu jednom dnevno, jednom nedeljno ili jednom mesečno, postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Na primer, može da se predvidi erozivni polimer koji sadrži aktivni sastojak.

[0083] Za parenteralnu primenu, jedinjenje može da se primeni u obliku injektibilnih doza rastvora ili suspenzije jedinjenja u fiziološki prihvatljivom razblaživaču, sa farmaceutskim nosačem koji može da bude sterilna tečnost kao stoje emulzija voda u ulju, ili bez dodavanja surfaktanta i drugih farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata. U primere ulja koja mogu da se koriste u preparatima spadaju parafin, životinjska, biljna ili sintetička ulja, kao što su na primer, kikirikijevo ulje, ulje semena soje i mineralno ulje. Generalno, voda, so, hidrantna dekstroza i odgovarajući rastvori šećera, etanol i glikoli, kao što jepropilen glikol, su preferirani tečni nosači, posebno za injektibilne rastvore. Parenteralni preparati mogu da se pakuju u ampulama, špricevima za jednokratnu upotrebu ili u višedoznim bocama izrađenim od inertne plastike ili stakla.

[0084] Prethodno opisani rastvori ili suspenzije mogu takođe da uključe jedan ili više od sledećih pomoćnih sredstava: sterilne razblaživače kao što su voda za injekcije, rastvor soli, neutralisana ulja, polietilen glikoli, glicerin, propilen glikol ili drugi sintetički rastvarači, antibakterijska sredstva kao što su askorbinska kiselina ili natrijum bisulfit; helatna sredstva kao što je etilendiamintetra-acetatna kiselina; pufere kao što su acetati, citrati ili fosfati i sredstva za podešavanje tonusa kao što su natrijum hlorid ili dekstroza.

[0085] Jedinjenja mogu da se primene u obliku flastera za kožu, depo injekcija ili implant preparata koji mogu da se formulišu na takav način da obezbede kontinuirano oslobađanje aktivnog sastojka. Aktivni sastojak može da bude komprimovan u obliku peleta ili malih cilindara i implantiran subkutano ili intramuskulamo kao depo injekcije ili implanti. Implanti mogu da sadrže inertne materijale kao što su biorazgradivi polimeri i sintetički silikoni. Pogodni farmaceutski nosači i tehnike stvaranja formulacija se nalaze u standardnoj literaturi, kao što suRemington: The Science i Practice ofPharmacy,19<th>edition, Volumes 1 i 2, 1995, Mack Publishing Co., Easton, Pennsvlvania, U.S.A., koji je ovde inkorporiran u referenci.

[0086] U tretmanu različitih bolesnih stanja, kako je ovde opisano, pogodan nivo doze je

približno 0.01 mg/kg po danu do približno 250 mg/kg po danu, preferirano približno 0.05 mg/kg po danu do približno 100 mg/kg, a posebno približno 0.05 mg/kg po danu do približno 40 mg/kg po danu. Jedinjenja mogu da se primene u režimu od 1 do 4 puta dnevno u zavisnosti od prirode oboljenja ili poremećaja koji se tretira.

PRIMERI

[0087]Naredni primeri služe samo kao detaljnija ilustracija pronalaska. Tabele 1, 2 i 3 pokazuju sumirane primere jedinjenja koja su ovde izrađena. Sa nitro jedinjenjima, koja su ovde opisana, se rukuje pažljivo zbog uočenog potencijala da iziazovu nestabilnost ovih jedinjenja.

[0088]Ukoliko nije drugačije navedeno, svi početni materijali, reagensi i rastvarači su dobijeni od komercijalnih dobavljača i korišćeni su bez naknadnog prečišćavanja. Sve reakcije su izvedene u inertnoj atmosferi sa bezvodnim reagensima i rastvaračima. Gasna hromatografija je izvođena koristeći EM Science silika gel 60 (40 - 63 mm) u skladu sa literaturom i koristeći sisteme rastvarača kako je opisano (Still, W. C; Kahn, M.; Mitra, A. Rapid Chromatographic Technique for Preparative Separations with Moderate Resolution. J. Org. Chem., 1978, 43, 2923-2925). Hromatografija na tankom sloju je izvođena na 60F-254 pločama (EM) obloženim silika gelom debljine 0.25 mm a vizuelizovana pomoću pare joda, UV svetla ili reagensom za bojenje kao što je rastvor KMn04(drugi rastvori za bojenje, kada su pomenuti, su izrađeni na način koji je opisan u: "Thin-Layer Chromatographv, A Laboratory Hanđbook", Egon Stahl, Ed.; Springer-Verlag Berlin-Heidelberg-New York, 1969).

[0089]infracrveni (IR) spektar je beležen na Nexus 670 FTIR (Nicolet) spektrometru sa uzorcima izrađenim kako je navedeno, i zabeleženi su u brojevima talasne dužine (cm"1). 'H NMR spektar je beležen na Varian Gemini i/ili mercury 300, Unity 400, ili Unity plus i/ili Inova 500MHz spektrometrima sa hemijskim promenama (5) zabeleženim u ppm u odnosu na tetrametilsilan (0.0 ppm) ili hloroform (CDC13,7.26 ppm) kao referencama.<I3>C NMR spektar je zabeležen na Varian Unity instrument (100.57 MHz, 13C frekvencija) sa hemijskim promenama (5) zabeleženim u ppm u odnosu na CDCI3(77.0 ppm), ukoliko nije drugačije navedeno. Maseni spektar (MS) je dobijen na Finnigan MAT Model TSQ 700 Mass Spectrometer sistemu hemijskom jonizacijom na 120 eV koristeći metan (Cl, 120 eV). Tečna hromatografija masene spektrometrije (LCMS) je izvođena na Micromass LCT povezanim sa Gilson 215 tečnim upravljačem. Analize masene spektrometrije visoke rezolucije (tačan maseni spektar) su vršene u ESI modu na masenoj rezoluciji od 10,000 koristeći Micromass QTOF maseni spektrometar. Tačne masene vrednosti su određene za pozitivne molekularne jone (M+ 1) pri čemu se M odnosi na molekularni jon.

Izrada pirolo[ 3, 2- b| piridina ( 4- AzaindoIa)

2- metil- 3- nitro- piridin, 2a- l ( Šema 1, faza a)

[0090|U bocu sa 3 grla koja sadrži 79 mL dietil malonata zagrejanog na 90 °C u atmosferi azota se u porcijama, u toku 1 sat doda natrijum metal (3.5g). Temperatura se snizi na 60°C i u porcijama se, u toku 15min dodaje 2-hloro-3-nitropiriđin (la-1, 25.0 g). Boja reakcije prelazi u

tamno crvenu. Rastvor se održava 3h na 60°C, a nakon toga ostavi da stoji na sobnoj temperaturi u toku noći. Tlc analiza ukazuje daje preostalo početnog materijala. Rastvor se zagreva još 3h na 80°C (da se kompletira reakcija). Dietil malonat se ukloni pod sniženim pritiskom a tamno smeđi ostatak se prenese u mešavinu koncentrovane H2SO4(18 mL) i H2O (32 mL). Mešavina se

zagreva 7 h na 105 °C (dekarboksilacija), a nakon toga se ostavi na sobnoj temperaturi u toku noći. Mešavina se ispere sa 3xl50mL Et20 i 2x200mL EtOAc a ispirci se odbace. Vodena faza se zaalkališe do pH 8-9 sa NaOH i ekstrahuje sa 3x200mL EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti se filtriraju preko Celite® (diatomejska zemlja) (Celite Corporation, 137 West Central Avenue, Lompor, California 93436), a rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom. Ostatak kristališe da se dobije 2a-l (15.0 g, 68%), temperatura topljenja 29-31 °C.

2- Metil- 3- nitro- piridin, 2a- l ( Sv ema L faza a)

[0091] Mešavina 2-hloro-3-nitro-piridina (la-1, 7.9 g, 49.8 mmol), metilboratne kiseline (1.10 ekvivalent 54.8 mmol, 3.30 g), K2C03(3.0 ekvivalenta, 150 mmol, 20.7 g) i Pd(PPh3)4(1.2 g, 1.2 mmol) se zagreva 16 h na 110°C u dioksanu (250 mL). Reakcija se ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu, koncentruje do ulja tamne boje i prečisti gasnom hromatografijom na Si02(mešavina heptan/Et20 3:1, ulje se razblaži sa ograničenim količinama CH2C12da se nanese u kolonu) da se dobije jedinjenje 2a-I (Niu, C; Li, J.; Doyle, T. W.; Chen, S-H. Tetrahedron, 1998, 6311-6318).

2- MetU- 3- nitropiridin, 2a- I ( Šema L faza a)

[0092] NMP (2.0 L) se doda u bocu sa 3 grla zapremine 12-L opremljenu sa mešalicom, termometrom i kondenzatorom refluksa koji sadrži adapter gasa za N2i ohladi na 16 °C. Doda se natrijum terc-butoksid (0.675 kg, 6.81 mol, 2.2 ekvivalenta, corrected for 97% puritv) u jednoj porciji pri čemu dolazi momentalno dolazi do povećanja temperature na 29 °C (egzotermna reakcija). Mešavina se meša 30 min da se delimično rastvori NaOt-Bu, a nakon toga se na 20 °C do 35 °C, u toku 70 min, doda dietil malonat (0.943 L, 6.19 mol, 2.0 ekvivalenta) uz neprekidno hlađenje pri čemu se formira homogeni rastvor. Meša se 20 min i u reaktivnu mešavinu se na 29 °C do 44 °C, u toku 70 min, dodaju rastvor 2-hloro-3-nitropiridina (la-1, 0.491 kg, 3.09 mol, 1.0 ekvivalent) i NMP (1.0 L). Reaktivna mešavina se zagrejc na 50 °C. Razvoj reakcije se prati pomoću HPLC (Agilent serija 1100; Waters Symmetry C8 (5 n) kolona (3.9 x 150 mm), brzina protoka 1.0 mL/min. Isocratic: CH3CN/0.1% aq. TFA, 50/50;X =220 nm. RT: dietil malonat =

2.6 min, 2-hloro-3-nitropiridin = 2.7 min, dietil estar 2-(3-nitro-piridin-2-il)-malonske kiseline = 3.9 min). Uobičajeno, >99% konverzije se izvrši u toku 1 -2 h. Zagrevanje se prekida i doda se 6M rastvor H2S04(2.17 L) na 50 °C do 59 °C, u toku 45 min. U toku dodavanja se formira debeo čvrsti precipitat. Mešavina se zagreva na 100 °C. Dolazi do razvoja gasa. Odvijanje reakcije se prati pomoću HPLC kako je prethodno opisano (RT: 2-metil-3-nitropiridin 2a-l = 2.0 min, dietil estar 2-(3-nitro-piridin-2-il)-malonska kiselina = 3.9 min). Uobičajeno, >99% konverzije se izvrši u toku 12 h. Mešavina se ostavi da se ohladi na 40 °C i sipa u ledenu vodu (20 kg, pH 1.5). Na -11 °C do -6 °C, u toku 20 min se dodaje 25% vodeni rastvor NaOH (2.65 L), do pH 11. Doda se toluen (4.0 L) i mešavina meša 10 min. Mešavina se filtrira kroz Celite® da se uklone neorganske čvrste supstance, a filter pogača se ispere sa toluenom (6.0 L). Faze se razdvoje i vodena faza se ekstrahuje dva puta sa toluenom (6.0 L i 4.0 L). Kombinovane toluen faze se filtriraju preko Celite® i filter pogača se ispere sa toluenom (1.0 L). Filtrati toluena se kombinuju i isperu sa vodom (2 x 3.0 L). Toluen faza se suši (MgS04), filtrira i koncentruje da se dobije 2-metil-3-nitropiridin 2a-l (0.34 kg, 80% prinos, korigovan za rezidualni NMP i toluen) kao ulje. HPLC analize pokazuju daje materijal čistoće 96%. 'H NMR (CDC13) 6 2.87 (s, 3H), 7.35 (dd, IH, 7-4.8, 8.1 Hz), 8.27 (dd, IH, 7=1.4, 8.1 Hz), 5 8.72 (dd, IH, 7=1.4, 4.8 Hz).

etil estar 2- hidroksi- 3-( 3- nitro- piridin- 2- il)- akrilatne kiseline, 3a- l ( Sv ema 1, faza b)

[0093] U bocu sa 3 grla zapremine 500mL sa apsolutnim etanolom, u atmosferi N2, se doda 2.2g (0.0956 g-atom) natrijuma. Nakon što sav natrijum reaguje, u kapima se doda dietil oksalat (98mL), a nakon toga se doda jedinjenje 2a-I (jedan ekvivalent). Tokom dodavanja, boja prelazi iz svetio žute u smeđu. Dobijeni rastvor se ostavi dva dana na sobnoj temperaturi. Narandžasta mešavina se tretira sa 5N rastvorom HC1 (pH =1), precipitat se sakupi filtriranjem i filter pogača ispere sa 100 mL EtOH i 200 mL di-izopropil etrom da se dobije 3a-l kao etil estar 2-hiđroksi-3-(3-nitro-piridin-2-il)-akrilatne kiseline (R4=H, 20g, 86%) ili njegov tautomerni ketoestar ili kao mešavina keto-enol tautomera.<*>H NMR (DMSO-ds) 5 8.83 (dd, IH, J=l.l, 5.0 Hz), 8.65 (dd, IH, J=1.5, 8.4 Hz), 7.56 (dd,IH, J=5.0, 8.4 Hz), 7.11 (s, IH), 3.47 (bs, IH), 4.28 (q, 2H, J= 7.1 Hz), 1.30 (t,3H,J = 7.0 Hz).

etil estar 2- hidroksi- 3-( 3- nitro- piridin- 2- il)- akrilatne kiseline, 3a- l ( Šema 1, faza b)

[0094] Tetrahidrofuran (2.7 L) se doda u, bocu sa 3 grla zapremine 22-L opremljenu sa mešalicom, termometrom i dodatnim levkom opremljenim sa adapterom ulaznog gasa za N2, i ohladi na približno 2 °C. Doda se natrijum etoksid (0.409 kg, 6.02 mol, 2.0 ekvivalent) u jednoj porciji. Uočava se laka egzotermna reakcija do 2.7 °C. Mešavina se meša 20 min, u toku 50 min na -0.3-4 °C se dodaje dietil oksalat (1.22 L, 9.03 mol, 3.0 ekvivalent) (blago egzotermna) i nakon toga mešavina meša 10 min. U toku 22 min, bez hlađenja se na 4-9 °C dodaje rastvor 2-metil-3-nitropiridina (2a-l, 0.415 kg, 3.01 mol, 1.0 ekvivalent) i THF (0.625 L). Mešavina se ostavi 1 h da se zagreje na sobnu temperaturu. Tok reakcije se prati pomoću HPLC (Agilent serija 1100 koristeći sledeće uslove: Waters Symmetry C8 (5 u) kolona (3.9 x 150 mm), brzina protoka 1.0 mL/min; CH3CN/0.1% aq. TFA, 55/45;X= 210 nm; RT: 2-metil-3-nitropiridin 2a-l = 1.8 min, 3a-l = 2.7 min). Uobičajeno se uočava >99% konverzije u produkt u toku 2-3 h. U toku reakcije, formira se čvrst crveni precipitat. Reaktivna mešavina se ohladi na približno 1°C i doda se zasićeni rastvor NH4CI (2.0 L) na 1 °C do 9°C. Doda se voda (5.9 L) (pH 7.4) a nakon toga se doda IPA (3.5 L). Mešavina se meša 1 h i čvrsta supstanca crvene boje se sakupi filtriranjem. Filter pogača se ispere sa IPA/H20 (1:4, 8.0 L), H20 (15 L) i suši na vazduhu. Filter pogača se suši (40 °C/0.1 u Hg) da se dobije 3a-l (0.635 kg, 89%). 'H NMR (CDCI3) 5 1.40 (t, 3H, J = 7 Hz), 4.38 (q, 2H, J = 7 Hz), 7.36 (m, 2H), 8.42 (dd, IH, J= 1.5, 8.4 Hz), 8.66 (dd, IH, J =1.5,4.8 Hz), 14.52 (2, IH, OH).

etil estar lH- piroIo[ 3, 2- b] piridin- 2- karboksilne kiseline, 4a- l ( Sv ema 1, faza c)

[0095] 3a-l (20g) se hidrogenizuje preko 10% paladijuma na ugljeniku (5.5g) u EtOH (350mL) na sobnoj temperaturi, 3 sata, pod pritiskom od 1200 psi. Reaktivna mešavina se filtrira preko Celite® i filtrat koncentruje da se dobije estar 4a-l (R(=H) u prinosu od 39%.

[0096] Alternativno, 3a-l se 4h redukuje sa SnCl2(5.0 ekvivalenata), TiCU (2.5 ekvivalenta) u EtOH pod refluksom, ohladi na temperaturu sredine, koncentruje i prečisti hromatografijom na silika gelu da se dobije estar 4a-l (R4=H) u prinosu od 81 %. 'H NMR (DMSO-d&) 8 13.48 (bs, IH), 8.80 (dd,IH, 7=0.7, 5.4Hz), 8.56 (dd, IH, J=0.7, 8.4 Hz), 7.80 (dd, IH, J = 5.5, 8.4 Hz), 7.37 (s, IH), 4.40 (q, 2H, J = 7.0 Hz), 1.38 (t, 3H,J= 7.0 Hz).

etil estar lH- pirolo[ 3, 2- b| piridin- 2- karboksilne kiseline, 4a- l ( Sv ema 1. faza c)

[0097] U Parr reaktor debelih zidova zapremine 2 L se dodaju jedinjenje 3a-l (56.8 g, 0.24 mol), etanol (200 jačine, 850 mL, 15 delova) i 10 % Pd/C (5.7 g, 10% težinski). Reaktivna posuda sc poveže sa Parr hidrogenatorom, očisti sa vodonikom i podvrgne oranž žitku masu pritisku od 45 psi. Mućka se 1 h na sobnoj temperaturi za koje vreme temperatura poraste na 57 °C. Kada se temperatura reaktivne mešavine stabilizuje na 35 °C, reakcija se polako zagreva 3 h na 40 °C. Kada je reakcija završena što se utvrđuje pomoću TLC (silika gel, 1% MeOH u CH2C12), reaktivna mešavina se ohladi na sobnu temperaturu, žitka masa se filtrira kroz Celite®, a filter pogača ispere sa EtOH (4 x 200 mL). Žuti filtrat se koncentruje da se dobije čvrsta supstanca (41.6 g), doda se etil acetat (302 mL) i zagreva u parnom kupatilu. Mešavina se ohladi na sobnu temperaturu i doda se heptan (600 mL) da produkt precipitira. Mešavina se meša u ledenom kupatilu 1 h, filtrira i filter pogača ispere sa heptanom (100 mL). Filter pogača se 24 h suši (50°C/0.1 u Hg) da se dobije 4a-l kao svetio siva čvrsta supstanca (36.6 g, 81% prinos). 'H NMR (DMSO-dft) 1,36 (t, 3H, J= 7.0 Hz), 4.36 (q, 2H, J = 7.0 Hz), 7.19 (s, 1H),7.25 (dd, IH, J = 4.5, 8.1Hz), 7.82 (d, IH, J = 8.1 Hz), 8.44 (d,IH, 7= 4.5 Hz), 512.11 (s, IH).

amid lH- pirolo[ 3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline, 6a- l ( Sv ema 1, faza e)

[0098| Estar 4a-l se rastvori u 5N rastvoru amonijaka u MeOH i zagreva lOh na 55 °C da se, nakon završene reakcije, dobije amid 6a-l (R2=NH2, R4=H) u prinosu od 44%, temperatura topljenja 332 °C (dec).<l>H NMR (DMSO-4) 5 11.72 (bs, IH), 8.36 (dd, IH, J=1.5,4.5 Hz), 8.10 (bs, IH), 7.76 (dd,IH, 7 = 2.2, 8.2 Hz), 7.52 (bs,IH), 7.24 (s, IH), 7.17 (dd, IH, J= 4.5, 8.2 Hz).

amid lH- piroIof3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline, 6a- l ( Sema 1. faza e)

[0099] Estar 4a-l se rastvori u 7N rastvoru amonijaka u MeOH i meša na sobnoj temperaturi nekoliko dana uz praćenje pomoću tlc (10% MeOH/CH2Cl2). Kada je završena, reakcija se koncentruje do minimalne zapremine, razblaži sa viškom H20, precipitat se sakupi filtriranjem i suši da se dobije amid 6a-l (R2=NH2, R4=H) u približno kvantitativnom prinosu.

amid lH- pirolo[ 3, 2- b] piridin- 2- karboksilne kiseline, 6a- l ( Šema 1, faza e)

[0100] Estar 4a-l se suspenduje u koncentrovanom NH4OH i meša na sobnoj temperaturi nekoliko dana uz praćenje pomoću tlc (10% MeOH/CH2Cl2). Kada je završena, reakcija se koncentruje do minimalne zapremine, razblaži sa viškom H20, precipitat se sakupi filtriranjem i suši da se dobije amid 6a-l (R2=NH2, R4=H) u približno kvantitativnom prinosu.

amid lH- pirolo| 3, 2- b] piridin- 2- karboksilne kiseline, 6a- l ( Šema 1, faza e)

[0101[ 7 N rastvor NH3u MeOH (1.5 L, 10.5 mol, 20 ekvivalenata) se na sobnoj temperaturi doda u reaktor pod pritiskom zapremine 3-L i nakon toga se doda azaindol estar 4a-l (100 g, 0.53 mol) u čvrstom obliku. Žitka masa se polako zagreje na 50°C da se dobije bistar rastvor. Uočava se da početni pritisak od 35 psi pada na 16 psi u toku 4 h. Reakcija se održava 49 h na 50°C. Uočava se koknačni pritisak odlO psi. Odvijanje reakcije se prati pomoću HPLC (Agilent serija 1100 koristeći sledeće uslove: Waters Symmetry C8 (5 u) kolona (3.9 x 150 mm), brzina protoka 1.0 mL/min, uslovi eluacije gradijenta: vreme (minuti), odnos voda:acetonitril-metanol (acetonitirl-metanol se koristi kao 1:1 rastvor) 0 min., 70:30; 10 min., 20:80; 15 min., 70:30; 20 min., 70:30;Xj=210 nm, A2= 220 nm, brzina protoka 1.0 mL/min, R-r: etil estar 4a-l = 5.6 min, metil estar 5a-l = 4.2 min, amid 6a-l = 2.2 min). Uočava se da se u reakciji formira odgovarajući metil estar 5a-l, a 5a-l takođe služi kao međuproizvod u reakciji. Reakcija se ohladi na 4°C, a nastali precipitat se izdvoji filtriranjem pod vakuumom. Filter pogača se ispere sa metil terc-butil

etrom (2 x 100 mL) i suši (40°C/0.1u Hg) 20 h da se dobije 6a-l kao siva čvrsta supstanca (78.6 g, 93%). 'H NMR (DMSCKk) 8 7.17 (dd, IH, J = 4.5, 8.4 Hz), 7.53, 8.11 (2s, 2H, NH2), 7.76 (d, IH, J = 8.1 Hz), 8.37 (d, IH, J= 1.5 Hz), 11.72 (s, IH, NH).

metilamid lH- pirolo[ 3, 2- b| piridin- 2- karboksilne kiseline, 6a- 2

[0102] Čist 4-azaindol estar 4a-l (R=Et, R4=H) se meša u metilaminu (40 mt % rastvor u H20) na sobnoj temperaturi 16h uz praćenje pomoću tlc (10% MeOH/CH2Cl2). Kada je završena, reakcija se razblaži sa viškom H20, precipitat se sakupi filtriranjem i suši da se dobije 6a-2 (R2=NHCH3, R4=H) kao čvrsta supstanca boje slonovače (videti Opštu proceduru sinteze VI). MSObs 176.07 (M + 1).

Opšta izrada početenih materijala diarildisulfida i diheterociklildisulfida ( Šema 2)

[0103] U rastvor nesupstituisanog ili odgovarajuće supstituisanog feniltiola (17.2 milimola, 1.0 ekvivalent) i MeOH (30mL), uz mešanje se doda rastvor natrijum perborata (22 milimola) i vode (20mL), a nakon toga reakcija ostavi na sobnoj temperaturi u toku noći. Čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem i ispere sa metanolom da se dobije traženi diarildisulfid. Drugi disulfidi uključujući diheterociklildisulfiđe (na primer bis(2-tienil)disulfid) mogu da se izrade na sličan način kako je opisano za izradu traženih diarildisulfida.

Opšta procedura sinteze I ( transesterifikacija, Sema 1, faza d)

[0104] U etil 4-azaindol-2-karboksilat 4a (42.3 mmol) u MeOH (50 mL), se doda K2C03(1.20 ekvivalenta, 50.7 mmol) i suspenzija meša lh uz zagrevanje na 55 °C. Reakcija se prati pomoću tlc (Et20/hept). Kada je završena, reakcija sekoncentruje pod vakuumom,razblaži sa H20 i meša 15 min. Čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem i suši 3h u pećnici pod vakuumom na 65 °C da se dobije približno 90% do približno 100% traženog metil 4-azaindol-2-karboksilata 5a.

Opšta procedura sinteze II ( amidacija uz korišćenje NK4OH, Šema 1, faza e)

[0105] estar 4-azaindol karboksilata 4a ili 5a (40.0 mmol) se kao suspenzija na sobnoj temperaturi meša 16 h u koncentrovanoj NFLtOH(100 mL) i LiCl (1.0 ekvivalent). Čvrsta supstanca boje slonovače se sakupi filtriranjem, ispere sa H20 i suši na vazduhu da se dobije primarni amid 6a (60-75%).

Opšta procedura sintezeIH( amidacija uz korišćenje NHvMeOH, Šema 1, faza e)

[0106] etil 4-aza-2-indol karboksilat 4a (4.67 mmol) se meša u 7N rastvoru NH3/MeOH (20 mL) i doda se LiCl (1.0 ekvivalent, 4.67 mmol). Reakcija se meša 5 dana na sobnoj temperaturi i prati pomoću tlc (10% MeOH/CH2Cl2) za koje vreme se formira precipitat. Mešavina se koncentruje do minimalne zapremine, razblaži sa H20, a čvrsti delovi se sakupe filtriranjem. Filter pogača se ispere sa H20 i suši pod vakuumom na 60°C da se dobije primarni amid 6a (>90%).

Opšta procedura sinteze IVa ( 3- tioarilacija uz korišćenje NaH kao baze, Sema 1, faza f)

[0107] U izmešanu suspenziju NaH (60% disperzija u ulju, 1.2 ekvivalenta, 9.8 mmol) u DMF (75 mL) u atmosferi N2se na sobnoj temperaturi doda 4-aza-indol-2-karboksamid 6a (8.18 mmol) kao rastvor u DMF (5mL). Nakon 5 minuta, doda se diarildisulfid (1.0 ekvivalent, 8.18 mmol) u jednoj porciji i nakon toga reakcija zagreva 16h, uz mešanje, na 95°C. Nakon toga reakcija se nastavlja deljenjem alikvota reaktivne mešavine između EtOAc/H20 i prati pomoću tlc (10% MeOH/CH2Cl2). Kada je završena, reaktivna mešavina se koncentruje pod vakukumom, razblaži sa H20, meša 30 min, filtrira i filter pogača suši na vazduhu. Hromatografijom sirove čvrste supstance na Si02uz eluiranje sa 9:1 CH2Cl2/MeOH dobija se 3-ariltioetar la (R| = H).

Opšta procedura sinteze IVb ( 3- tioarilacija uz korišćenje Cs?CQ3Sema 1, faza f)

[0108] U 4-aza-indol-2-karboksamidu 6a (0.42 mmol) rastvorenom u bezvodnom DMF (10 mL) se doda Cs2CX>3 (100 mg, 0.31 mmol) i nakon toga se doda diarildisulfid (1.1 ekvivalent, 0.46 mmol). Reakcija se zagreva 16 h na 95°C u atmosferi N2(prati pomoću tlc/LCMS da se utvrdi završetak reakcije). Reakcija se ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu, a nakon toga uz mešanje sipa u ledeno hladnu H20. Precipitat se sakupi filtriranjem i suši u pećnici pod vakuumom na 40°C da se dobije sirovi produkt kao žuto smeđa kristalna čvrsta supstanca. Prečišćavanjem hromatografijom na Si02dobija se 3-ariltioetar la (Ri= H).

Opšta procedura sinteze V ( metilaciia N Pirol prstena, Šema 1.faza g)

[0109] U amid 3-supstituisane-4-azaindol-2-karboksilne kiseline la (Ri=H, 0.24 mmol) i 1,3-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2(lH)-pirimidinon (5.0 mL), se uz mešanje dodaju dimetilsulfat (1.5 ekvivalenta, 0.36 mmol) i Cs2C03(2.0 ekvivalenta, 0.48 mmol). Reakcija se meša na sobnoj temperaturi 16 h uz praćenje pomoću tlc (10% MeOH/CH2Cl2). Kada je završena, reaktivna mešavina se koncentruje do minimalne zapremine, razblaži sa H20 i precipitat se sakupi filtriranjem. Filter pogača se ispere sa dodatnom količinom H20 i suši pod vakuumom na 40 °C da se dobije amid l-metil-3-supstituisane-4-azaindol-2-karboksilne kiseline la (Ri=CH3, 65%).

[0110] Mogu da se primene i drugi postupci za N-alkilaciju azota u pirol prstenu jedinjenja formule (I) koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Na primer, tretmanom jedinjenja formule (I) gde je Ri = H u pogodnom polarnom rastvaraču, kao što su na primer dimetilformamid ili NMP, sa pogodnom bazom, kao što su na primer natrijum hidrid ili kalijum t-butoksid, i nakon toga dodavanjem alkil halida, kao što je na primer propil jodid, dobija se jedinjenje formule (I) gde jeK\= propil.

Opšta procedurasinteze VI: Opšta Izrada indol- 2- metilamida i drugih sekundarnih amida

( Šema 1, faza e)

[0111] Estar 4-azaindola 4 ili 5 se meša 16h sa C|.6alkilaminom (na primer metil amin 40 mt % rastvor u H2O ili čist) na sobnoj temperaturi uz praćenje pomoću tlc (10% MeOH/CH2Cl2). Kada je završena, reakcija se razblaži sa viškom H2O, čvrsti precipitati se sakupe filtriranjem i suše da se dobije sekundarni amid 6 (R2=NH-Ci-6alkil) u približno kvantitativnom prinosu.

amid 3- fenilsulfanil- lH- pirolo] 3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline, la- 1.

[0112] U amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline (6a-l, R*=H; 1.0 ekvivalent) u DMF (100 mL) se doda difenildisulfid (1.0 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije la-1 kao žuto smeđa kristalna čvrsta supstanca (81%), temperatura topljenja 251 °C, tlc Rf = 0.49.<*>H NMR (DMSO-de) 8 12.48 (bs, IH), 8.45 (dd, IH, J =1.5,4.4 Hz), 8.11 (bs, IH), 7.89(dd, IH,.7 = 1.5,4.0 Hz preklapanje sa bs, IH), 7.31 (dd, IH, J =1.4, 4.5 Hz), 7.28 (dd, J =1.5, 4.5 Hz, IH) 7.21 (m, 2H), 7.13-7.05 (m, 3H); m/z = 270.06 (M + H). Analiza. Izračunato za Ci4HnN3SO: C, 62.44; H, 4.12; N, 15.6. Dobijeno: C, 62.31; H, 4.08: N, 15.39.

amid 3- fenilsulfanil- lH- pirolo[ 3, 2- blpiridin- 2- karboksilna kiselina, la- 1 uz korišćenje

Cs^ C03 u višku

[0113] NMP (1.20 L) se doda u bocu sa 3 grla zapremine 3-L opremljenu sa mehaničkom mešalicom, termometrom i refluks kondenzatorom, u atmosferi azota. U jednoj porciji se dodaju difenildisulfid (177.8 g, 1.5 ekvivalent), Cs2C03(351.9 g, 2.0 ekvivalent) i amid 6a-l (87.5 g, 0.54 mol). Reaktivna mešavina se zagreva 21 h na 120 °C. Odvijanje reakcije se prati pomoću HPLC (Agilent serija 1100 koristeći sledeće uslove: Waters Symmetry C8 (5 u) kolona (3.9 x 150 mm), brzina protoka 1.0 mL/min, uslovi eluacije gradijenta: vreme (minuti), odnos voda:acetonitril-metanol (acetonitril-metanol se koriste kao 1:1 rastvor) 0 min., 70:30; 10 min., 30:70; 15 min., 30:70; 20 min., 70:30; 25 min., 70:30;X,= 210 nm,X2= 300 nm, brzina protoka: 1.0 mL/min. (RT: amid 6a-l = 2.1 min, produkt la-1 = 5.7 min, PhSSPh = 14.0 min, NMP = 1.9 min). Ukoliko reakcija nije završena, doda se još Cs2C03(87.97 g, 0.5 ekvivalenta) i reakcija održava još 4 h na 120°C. Reaktivna mešavina se ohladi na sobnu temperaturu, sipa u ledenu vodu i meša 1 h. Čvrste braon čestice se sakupe filtriranjem, filter pogača se ispere dva puta sa vodom i suši 6 h na vazduhu. Čvrste čestice se dva puta prevode u žitku masu sa 20% EtOAc/heptan na sobnoj temperaturi, da se ukloni PhSSPh. Sirovi produkt u THF se obezboji sa drvenim ugljem pod refluksom u toku 1 h, filtrira i podvrgne reakciji da se dobije la-1 kao svetio smeđa čvrsta supstanca. la-1 se prevede u žitku masu u etanolu (12 delova), refluksuje jedan sat i uz mešanje ohladi u ledenom kupatilu. Čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem, ispere sa hladnim EtOH i suši (40 °C/0.1 u Hg) da se dobije la-1. (H NMR (DMSO-d«) 8 7.05-7.32 (m, 6H), 7.91 (m, 2H), 8.12 (s, IH, NH2), 8.45 (dd, IH, 7 = 4.5, 0.9 Hz), 12.50 (s, IH, NH). Analize: C12HnN3OS: 62.44%C, 4.12%H, 15.60%N; Dobijeno: 62.31%C, 4.08%H, 15.39%N

amid 3-( 3- FIuorofenilsulfonil)- lH- pirolol3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 2

[0114]amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiselina 6a-l (1.20g, 74.4 mmol) u DMF (100 mL) se tretira sa bis-(3-fluorofenil)disulfidom (1,90g, 1.0 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije Ia-2 kao čvrsta supstanca boje slonovače (1.73g, 80.8%), temperatura topljenja 235-237 °C, tlc Rf = 0.49.<!>H NMR (DMSO-4) 8 12.52 (bs, IH), 8.45 (dd, IH, 7 =1.2,4.5 Hz), 8.10 (bs, IH), 7.90 (dd, IH, 7=1.2, 8.2 Hz), 7.83 (bs, IH), 7.27 (preklapanje dd, IH, 7 = 4.5, 8.2 Hz i dd, 7= 7.8,14.0 Hz, IH), 6.97-6.82 (m, 3H); MS Obs 288 (M + 1); LC/MS: a = 100%. Analize: Izračunato za Cj4H|oFN3SO: C, 58.53; H,3.51; N, 14.62. Dobijeno: C, 57.95; H, 3.54; N, 14.25.

amid3- f3- hlorofeniIsulfonil)- lH- pirolof3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline,Ia- 3

[0115]amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline 6a-l (1.20g, 74.4 mmol) u DMF (100 mL) se tretira sa bis-(3-hlorofenil)disulfidom (2.13g, 1.0 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije Ia-3 kao čvrsta supstanca boje slonovače (1.95g, 86.3%), temperatura topljenja 246.5-248 °C, tlc Rf = 0.49.<*>H NMR (DMSO-ds) 8 12.54 (bs, IH), 8.45 (dd, IH, 7 =1.2,4.5 Hz), 8.11 (bs, IH), 7.90 (dd, IH, 7=1.3, 8.3 Hz) preklapanje sa 7.84 (bs, IH), 7.31 (dd, IH, 7 = 4.5, 8.2 Hz) 7.22 (m, 2H), 7.06-6.99 (m, 2H). Analize: Izračunato za Cj4HioCTN3SO: C, 55.36; H, 3.32; N, 13.83. Dobijeno: C, 54.94; H, 3.26; N, 13.62.

amid 3-( 3- Bromofenilsulfonil)- lH- pirolo[ 3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 4

[0116]amid lH-pirolo[3,2-b]piirdin-2-karboksilne kiseline 6a-l (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(3-bromofenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri

sinteze IVb, da se dobijeIa-4kao čvrsta supstanca boje slonovače. 'H NMR (DMSO-aV) 8 12.55 (bs, IH), 8.46 (dd, IH, 7=1.2,4.5 Hz), 8.10 (bs, IH), 7.91 (dd, IH, 7=1.2, 8.2 Hz) preklapanje sa 7.85 (bs, IH), 7.33 (dd, IH, 7 = 4.7, 8.5 Hz), 7.20 (m, 2H), 7.05-7.00 (m, 2H). MS Obs 348.1 (M + !)■

amid 3-( 2- hlorofenilsulfonil)- lH- pirolo[ 3. 2- blpiridin- 2- karboksiIne kiseline, Ia- 5

[0117]amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline6a-l(1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(2-hlorofenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobijeIa-5kao čvrsta supstanca boje slonovače. 'H NMR (DMSO-d&) 8 12.61 (bs, IH), 8.46 (dd, IH, 7=1.0,4.5 Hz), 8.09 (bs, IH), 7.95 (d, IH, 7=8.0 Hz), 7.76 (bs, IH), 7.49

(dd, IH, 7 = 1.5, 7.5 Hz), 7.34 (dd, IH, 7 = 4.5, 8.0 Hz), 7.14 (dt, IH, 7= 1.5, 7.5 Hz), 7.08 (dt, IH, 7= 1.5, 7.5 Hz), 6.49 (dd, IH, 7= 1.5, 7.5 Hz). MS Obs 304.7 (M + 1).

amid 3-( 4- hlorofcnilsulfonil)- lH- pirolo| 3. 2- b| piridin- 2- karboksilne kiseline, fa- 6

[0118]amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiselina 6a-1 (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(4-hlorofenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobijeIa-6kao čvrsta supstanca boje slonovače, temperatura topljenja = 266 °C, MSObs 304.7 (M + 1).

amid 3-( 2, 4- dihlorofenilsuIfonil)- lH- pirolo[ 3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 7

[0119Jamid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline6a-l(1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(2,4-dihlorofenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze TVb, da se dobije Ia-7 kao čvrsta supstanca boje slonovače, temperatura topljenja = 266 °C, MSObs 339.2 (M + 1).

amid 3-( 2- FluorofeniIsuIfanil)- lH- pirolo[ 3, 2- blpiridin- 2- karboksilnekiseline,Ia- 8

[0120] amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline6a-l(1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(2-fluorofenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri

sinteze IVb, da se dobijeIa-8kao čvrsta supstanca boje slonovače. 'H NMR (DMSO-aV) 5 12.57 (bs, IH), 8.45 (dd, IH, 7=1.2,4.2 Hz), 8.15 (bs, IH), 7.90 (dd, IH, 7=1.2, 8.1 Hz) preklapanje sa 7.84 (bs, IH), 7.31 (dd, IH, 7 = 4.5, 8.2 Hz), 7.20 (m, 2H), 6.98 (m, IH), 6.69 (m, IH). MS Obs 288.2 (M+ 1).

amid3- f23- dihlorofeniIsulfonil)- lH- pirolo[ 3, 2- b] piridin- 2- karboksilnekiseline,Ia- 9

[0121Jamid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline6a-l(1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(2,3-dihlorofenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobijeIa-9kao čvrsta supstanca boje slonovače. 'H NMR (DMSO-d&) 8 12.62 (bs, IH), 8.44 (dd, IH, 7=1.2,4.5 Hz), 8.10 (bs, IH), 7.93 (dd, IH, 7=1.2, 8.3 Hz), 7.75 (bs, IH), 7.35 (m, 2H), 7.07 (t, IH, 7 = 8.1 Hz), 6.40 (dd, IH, 7=1.4, 8.1 Hz). MSObs 338.1 (M + 1).

amid 3-( 2- Trilfuormetilfenilsulfonil)- lH- pirolo[ 3, 2- b| piridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 10

[0122]amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline6a-l(1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(2-trifluorometilfenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobijeIa-10kao čvrsta supstanca boje slonovače.<!>H NMR (DMSO-dt.) 8 12.65 (bs, IH), 8.47 (dd, IH, 7=1.5, 4.5 Hz), 8.15 (bs, IH), 7.92 (dd, IH, J=1.2, 8.2 Hz), 7.75 (bs, preklapanje dd, 2H), 7.34 (m, 3H), 6.75 (d, IH, 7 = 7.8 Hz); MS Obs 338.2 (M + 1).

amid 3-( 3- Trilfuorometil- fenilsulfanil)- lH- pirolo[ 3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline, la- 11

[0123J amid lH-pirolo[3,2-b]piirdin-2-karboksilne kiseline 6a-l (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(3-trifluorometilfenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije Ia-11 kao čvrsta supstanca boje slonovače. MS Obs 338.06 (M+ 1).

amid 3-( 2- Aminofenilsulfonil)- lH- pirolot3, 2- blpiridin- 2- karboksilnekiseline,Ia- 12

[0124J amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline (1.0 ekvivalent) 6a-l u DMF se tretira sa bis-(2-aminofenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobijeIa-12kao čvrsta supstanca boje slonovače. 'H NMR (DMSO-ds) 8 12.29 (bs, IH), 8.49 (dd, IH, 7=1.3, 4.5 Hz), 8.18 i 8.15 (preklapanje bs, 2H), 7.83 (dd, IH, 7=1.4, 8.2 Hz), 7.28 (dd, IH, 7 = 4.5, 8.3 Hz), 7.15 (dd, IH, 7= 1.4, 7.8 Hz), 6.93 (m, IH), 6.62 (d, IH, 7 = 6.9 Hz), 6.39 (m, IH), 5.74 (preklapanje bs, 2H); MS Obs 288.2 (M + 1).

amid 3-( 2, 5- Đihloro- fenilsulfonil)- lH- pirolot3, 2- blpiridin- 2- karboksilnekiseline,Ia-13

(0125J amid lH-pirolo[3,2-b]piirdin-2-karboksilne kiseline 6a-l (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(2,5-dihlorofenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobijeIa-13kao čvrsta supstanca boje slonovače. *H NMR (DMSO-d6) 5 12.68 (bs, IH), 8.46 (dd, IH, 7=1.3,4.5 Hz), 8.10 (bs, IH), 7.94 (dd, IH, 7=1.2, 8.2 Hz), 7.77 (bs, IH), 7.52 (prividan d, IH, 7 = 8.5 Hz), 7.35 (dd, IH, 7 = 4.5, 8.4 Hz), 7.20 (dd, IH, 7 = 2.5, 8.5 Hz), 6.37 (prividan d, IH, 7= 2.5 Hz); MS Obs 338.1 (M + 1).

amid 3-( 2- metoksi- fenilsulfonil)- lH- pirolo| 3, 2- h| piridin- 2- karboksilne kiseline, la- 14

[0126] amid lH-pirolo[3,2-b]piirdin-2-karboksilne kiseline 6a-l (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(2-metoksifenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobijeIa-14kao čvrsta supstanca boje slonovače.<*>H NMR (DMSO-d^) 8 12.48 (bs, IH), 8.44 (dd, IH, 7=1.5, 4.5 Hz), 8.10 (bs, IH), 7.90 (dd, IH, 7=1.2, 8.0 Hz), 7.60 (bs, IH), 7.30 (m, 3H), 6.71 (prividan t, IH), 6.50 (prividan d, IH), 3.91 (s, 3H); MS Obs 300.3 (M+ 1).

amid 3-( 3- metoksi- fenilsulfonil)- lH- pirolof3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline,Ia- 15

[0127] amid lH-pirolo[3,2-b]piirdin-2-karboksilne kiseline 6a-l (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(3-metoksifenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobijeIa-15kao čvrsta supstanca boje slonovače.<!>H NMR (DMSO-de) 5 12.51 (bs, IH), 8.46 (dd, IH, 7=1.5,4.5 Hz), 8.10 (bs, IH), 7.89 (dd, IH, 7=1.5, 8.3 Hz preklapanje sa bs, IH), 7.32 (dd, IH, 7 = 4.5, 8.2 Hz), 7.13 (prividan t, IH, 7= 8.0 Hz) 6.62 (m, 3H), 3.64 (s, 3H); MS Obs 300.3 (M + 1).

amid 3-( 3- Amino- fenilsulfanil)- lH- pirolo[ 3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 16

[0128] amid lH-pirolo[3,2-b]piirdin-2-karboksilne kiseline 6a-l (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(3-aminofenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije Ia-16 kao čvrsta supstanca boje slonovače, 'h NMR (DMSO-aV) 5 12.40 (bs, IH), 8.44 (dd, IH, 7 =1.5,4.5 Hz), 8.10 (bs, IH), 7.86 (dd, IH, 7 = 1.5, 8.3 Hz preklapanje sabs, IH), 7.28 (dd, IH, 7 = 4.5, 8.2 Hz), 7.13 (prividan t, IH, 7= 7.8 Hz) 6.28 (m, 3H), 5.08 (bs, 2H); MS Obs 288.08 (M + 1).

amid 3-( 4- Nitro- fenilsulfonil)- lH- pirolo[ 3, 2- b] piridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 17

[0129] amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline 6a-l (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(4-nitrofenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije Ia-17 kao čvrsta supstanca boje slonovače. 'H NMR (DMSO-d6) 5 12.63 (bs, IH), 8.43 (dd, IH, 7=1.5, 4.5 Hz), 8.05 (m, 3H), 7.91 (m, IH), 7.50 (bs, IH), 7.32 (dd, IH, 7 = 4.5, 8.1 Hz), 7.18 (prividan d, 2H, 7 = 9.0 Hz); MS Obs 315.05 (M + 1).

amid 3-( 3- Nitro- fenilsulfonil)- lH- pirolol3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 18

[0130] amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline 6a-l (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(3-nitrofenil)disulfiđom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobijeIa-18kao čvrsta supstanca boje slonovače. 'H NMR (DMSO-dć) 5 12.59 (bs, IH), 8.45 (dd, IH, J =1.5,4.6 Hz), 8.11 (bs, IH), 7.96-7.81 (m, 4H), 7.50 (m, 2H), 7.33 (dd, IH, 7 = 4.5,8.4 Hz); Obs 315.1 (M + l).

amid 3- p- tolilsulfonil- lH- pirolo[ 3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 19.

[0131]amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline 6a-I (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(o-tolil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobijeIa-19kao čvrsta supstanca boje slonovače :<*>H NMR (DMSO-d&) 6 12.5 (bs, IH), 8.41 (dd, IH, J =1.5, 4.5 Hz), 8.05 (bs, IH), 7.90 (dd, IH, 7= 1.5, 8.3 Hz) preklapanje sa 7.87 (bs, IH), 7.31 (m, IH), 7.29 (m, IH), 7.00 (m, 2H), 6.4 (m, IH), 3.3 (s, 3H). MS Obs 284.3 (M + 1).

amid 3- p- tolilsulfanil- lH- piroio[ 3, 2- blpiridin- 2- karboksilnekiseline,Ia- 20

[0132]amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline 6a-1 (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(p-tolil)disulfiđom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije Ia-20 kao čvrsta supstanca boje slonovače.<*>H NMR (DMSO-dć) 5 12.42 (bs, IH), 8.44 (dd, IH, J =1.5,4.5 Hz), 8.10 (bs, IH), 7.91 (bs, IH) preklapanje sa 7.86 (dd, IH, 7 = 1.5,7.9 Hz), 7.28 (dd, IH, J= 3.7, 8.3 Hz), 7.00 (preklapanje ds, 4H, J = 12.5 Hz), 3.31 (s, 3H); MS Obs 284 (M+l).

amid 3-( 3, 5- Dimetil- feniIsulfanil)- lH- pirolof3, 2- blpiridin- 2- karboksilnekiseline, Ia-21

[0133]amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline 6a-l (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(3,5-dimetilfenil)disulfiđom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije la-21 kao čvrsta supstanca boje slonovače.<*>H NMR (DMSO-dć) 5 12.45 (bs, IH), 8.45 (dd, IH, 7 =1.2, 4.5 Hz), 8.12 (bs, IH), 7.90 (dd, IH, 7=1.2, 8.0 Hz) preklapanje sa (bs, IH), 7.3 (dd, IH, 7 = 4.5, 8.2 Hz), 6.76 (s, IH), 6.7 (s, 2H), 2.05 (s, 6H). MS Obs 298.3 (M+l).

amid 3- m- tolilsulfonil- lH- pirolo] 3, 2- b] piridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 22

[0134] amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline 6a-l (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(m-tolil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije Ia-22 kao čvrsta supstanca boje slonovače.<!>H NMR (DMSO-oV,) 8 10.2 (bs, IH), 8.62 (dd, IH, 7 =1.0,4.4 Hz), 8.19 (bs, IH), 7.85 (dd, IH, 7=1.3, 8.4 Hz), 7.28 (preklapanje dd, IH, 7 = 4.5, 8.3 Hz i 7.24 (s, IH), 7.1-6.9 (m, 4H), 2.22 (s, 3H). MS Obs 284 (M + 1).

amid 3-( 2- etil- fenilsulfanil)- lH- pirolo[ 3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 23

[0135] amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline 6a-l (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(2-etilfenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije Ia-23 kao čvrsta supstanca boje slonovače. 'H NMR (DMSO-d^) 8 12.5 (bs, IH), 8.42 (dd, IH, 7=1.5,4.4 Hz), 8.1 (bs, IH), 7.91 (dd, IH, 7= 1.5, 8.1 Hz), 7.82 (bs, IH), 7.30 (m, IH), 7.2 (m, IH), 7.05 (m, IH), 6.95 (m, IH), 6.5 (m, IH), 2.9 (q, 2H), 1.3 (t, 3H). MS Obs 298.3 (M + l).

amid 3-( 3- Trifluorometoksi- fenilsuIfanin- lH- pirolo[ 3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline,

Ia- 24

[0136] amid lH-pirolo[3,2-b]piirdin-2-karboksilne kiseline 6a-l (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(3-tirfluorometoksifenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije Ia-24 kao čvrsta supstanca boje slonovače.<!>H NMR (DMSO-4)5 12.56 (bs, IH), 8.45 (dd, IH, 7=1.5,4.5 Hz), 8.12 (bs, IH), 7.92 (dd, IH, 7=1.5, 8.3 Hz), 7.85 (bs, IH), 7.33 (dd, IH, 7 = 4.4, 8.3 Hz) preklapanje sa 7.32 (m, IH), 7.1 (m, IH) preklapanje sa 7.03 (m, 2H). MS Obs 354.1 (M+l).

amid 3-( kvinolin- 8- ilsulfonil)- lH- piroIo[ 3. 2- b] piridin- 2- karboksilne kiseline, la- 25

[0137] amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline 6a-I (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(8-kvinolil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije la-25 kao čvrsta supstanca boje slonovače, MS Obs 321.1 (M + 1).

amid 3-( piridin- 2- sulfonil)- lH- pirolo[ 3, 2- b[ piridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 26

[0138Jamid lH-pirolo[3,2-b]piirdin-2-karboksilne kiseline 6a-l (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa 2,2'-dipiridil disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije Ia-26 kao čvrsta supstanca boje slonovače.<*>H NMR (DMSO-df,) 5 12.51 (bs, IH), 8.42 (dd, IH, 7 =1.4,4.5 Hz), 8.34 (dd, IH, 7 =1,4 Hz) 8.06 (bs, IH), 7.89 (dd, IH, 7=1.4, 8.3 Hz) preklapanje sa 7.82 (bs, IH), 7.53 (dd, IH, 7 = 1.8, 7.5 Hz), 7.30 (dd, IH, 7= 4.3, 8.2 Hz), 7.10 (dd, IH, 7 = 4.9, 7.4 Hz), 6.74 (d, IH, 7 = 8.1 Hz). MS Obs 271.1 (M + 1).

amid S- Cpiridin^- sulfaniD- lH- pirololS^- blpiridin^- karboksilne kiseline, Ia- 27

[0139} amid lH-pirolo[3,2-b]piirdin-2-karboksilne kiseline 6a-l (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa 4,4'-dipiridil disulfidom (Aldritiol 4) (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj

proceduri sinteze IVb, da se dobije Ia-27 kao čvrsta supstanca boje slonovače.<l>H NMR (DMSO-d6) 5 12.5 (bs, IH), 8.44 (dd, IH, 7=1.5,4.5 Hz), 8.27 (dd, 2H, 7=1.5, 4.5 Hz), 8.07 (bs, IH), 7.93 (dd, IH, 7 =1.4, 8.3 Hz), 7.73 (bs, IH), 7.33 (dd, iH, 7 = 4.5, 8.2 Hz), 6.94 (dd, 2H, 7 = 1.5, 4.5 Hz). MSObs 271.07 (M+l).

amid 3-( tiofen- 2- ilsulfonil)- lH- pirolo[ 3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 28

[0140] amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline 6a-l (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa 2,2'bis(tienil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije Ia-28 kao čvrsta supstanca boje slonovače. 'H NMR (DMSO-đć,) 6 12.34 (bs, IH), 8.50 (d, IH, 7 = 4.4 Hz), 8.21 (bs, IH), 8.00 (bs, IH), 7.83 (d, IH, 7= 8.3 Hz), 7.42 (d, IH, 7= 5.3 Hz), 7.26 (dd, 2H, 7 = 4.5, 8.2 Hz), 6.92 (dd, IH, 7 = 3.6, 5.2 Hz). MS Obs 276.01 (M + 1).

metilamid l- metil- 3- feniisulfonil- lH- pirolo[ 3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 29

[0141] metilamid 3-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline Ia-33 (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa dimetilsulfatom (1.5 ekvivalenta), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze V, da se dobije Ia-29 kao čvrsta supstanca boje slonovače, MS Obs 298.09 (M + 1).

metilamid l- metil- 3- fenilsulfanil- lH- pirolol3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 29

[0142] Metil jodid (20 mg, 0.164 mmol) se na sobnoj temperaturi doda u mešavinu metilamida 3-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilnc kiseline (Ia-33, 47 mg, 0.166 mmol), CS2CO3(65 mg, 0.2 mmol) i piridina (1.5 ml). Reakcija se zagreva 3 sata na 60°C u zatvorenoj posudi. Doda se još metil jodida (20 mg) i progres reakcije prati hromatografijom. Kada je reakcija završena, mešavina se ohladi, koncentruje do sušenja i ekstrahuje iz slanog rastvora u etil acetat. Organska faza se razdvoji i koncentruje. Ostatak se dva puta prečisti gasnom hromatografijom (Si02,3 gm, eluira sa MeOH 0-4% u DCM; i Si02,l gm, eluira sa mešavinom heptan:DCM, 1:1) da se dobije naslovljeno jedinjenje (10 mg) kao bela čvrsta supstanca, "H NMR (CDCI3) i LC-MS (m/e = 297) su konzistentni sa strukturom naslovljenog jedinjenja.

metilamid 3-( 3- TrifluorometoksifenilsulfaniI- lH- pirolo[ 3, 2- b] piridin- 2- karboksilne

kiseline, Ia- 30.

[0143] metilamid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline 6a-2 (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(3-trifluormetoksi-fenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije Ia-30 kao čvrsta supstanca boje slonovače, MS Obs 368.03 (M+l).

metilamid 3- t3- hlorofenilsulfanil- lH- pirolo[ 3, 2- b] piridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 31

[0144] metilamid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline 6a-2 (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(3-hlorofenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije Ia-31 kao čvrsta supstanca boje slonovače, MS Obs 318.03 (M + 1).

metilamid 3-( 3- FIuorofenilsulfanil- lH- pirolo[ 3, 2- b] piridin- 2- karboksilne kiseline, Ia-32

[0145] metilamid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline 6a-2 (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(3-fluorofenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije Ia-32 kao čvrsta supstanca boje slonovače, MS Obs 305.05 (M +1).

metilamid 3- fenilsulfanil- lH- piroIo[ 3, 2- b] piridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 33

[0146] metilamid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline 6a-2 (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa bis-(fenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije Ia-33 kao čvrsta supstanca boje slonovače.<*>H NMR (DMSO-d^) 5 12.48 (bs, IH), 8.45 (dd, IH, 7=1.5,4.4 Hz), 8.11 (bs, IH), 7.89 (dd, IH, J=l.5,4.0 Hz preklapanje saabs, IH), 7.31 (dd, IH, 7= 1.4,4.5 Hz), 7.28 (dd, 7= 1.5,4.5 Hz, IH) 7.21 (m, 2H), 7.13-7.05 (m, 3H), 2.9 (d, 3H, 7 = 4.2 Hz); MS Obs 284.06 (M + 1).

amid l- metil- 3- fenilsulfonil- lH- pirolol3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 34

[0147] amid 3-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline la-1 (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa dimetilsulfatom (1.5 ekvivalenta), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze V da se dobije Ia-34 kao čvrsta supstanca boje slonovače, MS Obs 284.06 (M + 1).

amid l- metil- 3- fenilsulfonil- lH- pirolo[ 3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 34 ( Sema I,

faza g)

[0148] Metil jodid (20 mg, 0.14 mmol) se na sobnoj temperaturi doda u mešavinu amida 3-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline (la-1,27 mg, 0.1 mmol), CS2CO3(43 mg, 0.13 mmol) u piridinu (0.5 ml). Reakcija se zagreva 15 minuta na 80°C u zatvorenoj posudi. Mešavina se ohladi i ekstrahuje sa etil acetatom iz vode. Organski rastvor se izdvoji i upari. Ostatak se prečisti (33 mg) gasnom hromatografijom (silika gel, 3 gm, eluira sa MeOH 0-4% u dihlorometanu) da se dobije naslovljeno jedinjenje (11 mg) kao bela čvrsta supstanca,<*>H NMR (CDCI3) i LC-MS (m/e = 283) su konzistentni sa strukturom naslovljenog jedinjenja.

amid 3-( 3- FIuoro- feniisuIfoniI)- 5- metoksi- lH- pirolol3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline,

Ia- 35

[0149] amid 5-metoksi-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline (1.0 ekvivalent, izrađen od odgovarajućeg etil estra, Frvdman, B.; Reil, S. J.; Boned, J.; Rapoport, H. J. Org. Chem. 1968, 33, 3762-6) u DMF se tretira sa bis-(3-fluorofenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije Ia-35 kao čvrsta supstanca boje slonovače, MSObs 318.03 (M+ 1).

amid 3-( 3- metoksi- fenilsulfonil)- 5- metoksi- lH- pirolo[ 3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline,

la- 36

[0150] amid 5-metoksi-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline (1.0 ekvivalent, izrađen od odgovarajućeg etil estra, Frvdman, B.; Reil, S. J.; Boned, J.; Rapoport, H. J. Org. Chem. 1968,33, 3762-6) u DMF se tretira sa bis-(3-metoksifenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri sinteze IVb, da se dobije la-36 kao čvrsta supstanca boje slonovače, MS Obs 330.01 (M + 1).

amid 3- fenilsulfanil- l- propil- lH- pirolo[ 3, 2- blpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 37

[0151] amid 3-fenilsulfanil- lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline la-1 (1.0 ekvivalent) u DMF se tretira sa propiljodiđom (1.5 ekvivalenta) u prisustvu CS2CO3(1.5 ekvivalent), according do General Procedure V, da se nakon hromatografije dobije Ia-37 kao čvrsta supstanca boje slonovače, MS Obs 312.06 (M+l).

amid 3- fenilsulfonil- l- propil- lH- pirolo[ 3, 2- b| piridin- 2- karboksilne kiseline, Ia- 37 ( Šema I.

faza g)

]0152] 1-bromopropan (19 mg, 0.154 mmol) se na sobnoj temperaturi doda u mešavinu amida 3-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline (la-1, 31.5 mg, 0.12 mmol) i CS2CO3(60 mg, 0.185 mmol) u piridinu (0.5 ml). Reakcija se zagreva 1 sat na 80°C u zatvorenoj posudi. Mešavina se ohladi i ekstrahuje sa etil acetatom iz vode. Organska faza se izdvoji i upari. Ostatak se prečisti (33 mg) gasnom hromatografijom (Si02, 2,2 gm, eluira sa mešavinom heptan:DCM, nakon toga sa MeOH 0-4% u DCM) da se dobije naslovljeno jedinjenje (11.5 mg) kao bela čvrsta supstanca,<1>H NMR (CDC13) i LC-MS (m/e = 311) su konzistentni sa strukturom naslovljenog jedinjenja.

Izrada pirolo] 3, 2- clpiridina ( 5- Azaindola)

1, 1- dimetiletil estar 2-( Dietoksimetil)- lH- pirolo| 3, 2- c1piridin- l- karboksiine kiseline, 8b- l

( Šema 3,faza h)

[0153]Rastvor 1,1-dimetiletil estra (3-jodo-piridin-4-il)karbamatne kiseline (13.3 g, 41.56 mmol, Darnbrough, Shelley; Mervic, Miljenko; Condon, Stephen M; Burns, Christopher J. Synthetic Communications (2001) 31(21), 3273-3280), 3,3-dietoksi-l-propina (5.96 ml, 41.56 mmole), trietilamina (23 ml, 166 mmol), dihlorobis(trifenil-fosfin)paladijuma(II) (1.46 g, 2.08 mmol) i bakar jodiđa (237mg, 1.25mmol) u bezvodnom DMF se zagreva 3h na 90 °C u atmosferi argona. Reaktivna mešavina se ostavi da se ohladi na 70 °C i doda se DBU (12.5ml, 83.12 mmol). Reakcija se meša 3 h na 70 °C, a nakon toga meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna mešavina se sipa u EtOAc, ispere sa vodom (2x) i slanim rastvorom, suši preko MgS04, filtrira i koncentruje da se dobije naslovljeno jedinjenje kao ulje. Ulje se prečisti gasnom hromatografijom (silika, eluira sa mešavinom 10-20% EtOAc/n-heptan) da se dobije 9.8 g naslovljenog jedinjenja kao bistro ulje, tlc (silika, mešavina 30% EtOAc/heptan, Rf = 0.30).

lH- pirolof3, 2- clpiridin- 2- karboksaldehid, 9b- l ( Sema3, fazai)

[0154]U rastvor 1,1-dimetiletil estra 2-(dietoksimetil)-lH-pirolo[3,2-c]piridin-l-karboksilne kiseline (8b-l, 9.8 g, 30.6 mmol) u lOOml THF, se doda 6ml koncentrovane HC1. Reaktivna mešavina se meša 20h na sobnoj temperaturi, zaalkališe sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, sipa u EtOAc, ispere sa zasićenim natrijum bikarbonatom i slanim rastvorom, organska faza se suši preko MgS04, filtrira i koncentruje da se dobije mešavina 1,1-dimetiletil estar 2-formil-lH-pirolo[3,2-c]piridin-l-karboksilne kiseline i lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksaldehida 9b-l kao čvrsta supstanca. Mešavina se razdvoji gasnom hromatografijom (silika, 1-3% MeOH/CHaCfc) da se dobije 1,1-dimetiletil estar 2-formil-lH-pirolo[3,2-c]piridin-1-karboksilne kiseline (5.0 g ) kao ulje i lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksatdehid9b-l(1.0 g) kao žuto smeđa čvrsta supstanca. U rastvor 1,1-dimetiletil estra 2-formil-lH-pirolo[3,2-c]piridin-1-karboksilne kiseline (5.0 g, 20.3 mmol) u 250 ml dihlorometana se u kapima doda TFA (5.0 mL). Reaktivna mešavina se zagreva 3 sata pod refluksom, koncentruje, ostatak se razblaži sa 300 ml EtOAc, ispere sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (3x) i slanim rastvorom, organska faza se suši (MgS04), filtrira i koncentruje da se dobije lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksaldehid9b-l(2.24 g) kao čista čvrsta supstanca.

metil estar lH- pirolo[ 3, 2- clpiridin- 2- karboksilne kiseline, 5b- l ( SV ema 3, fazaj)

{0155] U rastvor lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksaldehida (9b-l, 3.24g, 22.19 mmol) u metanolu se na 0 °C, u atmosferi argona, dodaju natrijum cijanid (5.44g, 111 mmol) i mangan dioksid (9.65g, 111 mmol). Reaktivna mešavina se meša 5h, filtrira preko Celite® i razblaži sa 500ml EtOAc. Organski sloj se ispere sa vodom (2x) i slanim rastvorom, suši preko natrijum karbonata, filtrira i koncentruje da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.27 g) kao čista čvrsta supstanca žuto mrke boje. Amid lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksilne kiseline 6b-l se izrađuje od 5b-l po bilo kom od prethodno navedenih postupaka za sinteze jedinjenje 6a-l od etil estra 4a-I.

amid tH- pirolof3, 2- c| piridin- 2- karboksilne kiseline, 6b- l ( R4 =H, Sema 1, faze a-ce)

|0156] 3-metil-4-nitro-piridin (2b-l) se izrađuje od 3-hloro-4-nitro-piridina lb-1 kako je

prethodno opisano za sinteze izomernog 2-metil-3-nitro-piridin analoga 2a-l od jedinjenja la-1. Estar 2-hidroksi-3-(4-nitro-piridin-3-il)-akrilatne kiseline (3b-l) se iozrađuje od jedinjenja 2b-l po bilo kom od prethodno navedenih postupaka za dobijanje jedinjenja 3a-l od jedinjenja 2a-I. Etil estar lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksilne kiseline, 4b-l, se izrađuje od jedinjenja 3b-l po bilo kom od prethodno navedenih postupaka za dobijanje jedinjenja 4a-l od jedinjenja 3a-l. Amid lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksilne kiseline 6b-l se izrađuje od jedinjenja 4b-I po bilo kom od prethodno navedenih postupaka za sinteze jedinjenje 6a-l od jedinjenja 4a-l.

amid 3- fenilsulfonil- lH- pirolo| 3, 2- clpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ib- 1

[0157] amid lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksilne kiseline 6b-l (1.0 ekvivalent) u DMF (100 mL) se tretira sa difenildisulfidom (1.1 ekvivalent), kako je prethodno opisano u Opštoj proceduri IVb, da se dobije Ib-1 kao čvrsta supstanca boje slonovače: 'H NMR (DMSO-de,) 8 12.48 (bs,IH), 8.70 (s, IH), 8.29 (d, J=5.8 Hz, IH), 8.04 (bs, IH), 7.76 (bs, IH), 7.44 (dd, J = 1.1, 5.7 Hz, IH), 7.26 (m, 2H), 7.14 (m, 3H); m/z = 270.1 (M + H).

amid S- CS- Fluoro- fenilsulfonil- lH- pirolofS^- clpiridin^- karboksilne kiseline, Ib- 2

[0158] amid lH-pirolo[3,2-c]piirdin-2-karboksilne kiseline 6b-l (1.0 ekvivalent) u DMF (100 mL) se tretira sa bis-(3-fluorofenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je prethodno opisano u Opštoj proceduri IVb, da se dobije Ib-2 kao čvrsta supstanca boje slonovače:<!>H NMR (DMSO-d6)8 12.63 (bs, IH), 8.71 (s, IH), 8.31(d, J=5.8 Hz, IH), 8.06 (bs, IH), 7.74 (bs, IH), 7.46 (d,J= 5.8 Hz, IH), 7.3 (m, IH), 6.99-6.89 (preklapanje m, 3H); m/z = 288.06 (M+l).

amid 3-( 4- hloro- fenilsulfanil- lH- pirolo] 3, 2- c) piridin- 2- karboksiine kiseline, Ib- 3

[0159] amid lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksiIne kiseline 6b-l (1.0 ekvivalent) u DMF (100 mL) se tretira sa bis-(4-hlorofenil)disulfidom (1.1 ekvivalent), kako je prethodno opisano u Opštoj proceduri IVb, da se dobije Ib-3 kao čvrsta supstanca boje slonovače: 'ri NMR (DMSO-ck) 8 12.61 (bs, IH), 8.71 (bs, IH), 8.30 (d, IH, J= 4.5 Hz), 8.07 (bs, IH), 7.76 (bs, IH), 7.45 (d,IH, J=5.7 Hz), 7.32 (d, 2H, J= 8.7 Hz), 7.12 (d, 2H, J = 8.5 Hz), m/z = 304 (M + 1).

Izrada pirolo[ 2. 3- clpiridina ( 6- Azaindola)

amid lH- pirolo[ 2, 3- clpiridin- 2- karboksilne kiseline, 6c- l( R4=H, Sema 1, fazea- c, e)

[0160]4-metil-3-nitro-piridin (2c-l) se izrađuje od 4-hloro-3-nitro-piridina lc-1, kako je prethodno opisano za sinteze izomemog 2-metil-3-nitro-piridin analoga2a-Iod jedinjenjala-1.Estar 2-hidroksi-3-(3-nitro-piridin-4-il)-akrilatne kiseline (3c-l) se izrađuje od jedinjenja2c-lpo bilo kom od prethodno navedenih postupaka za dobijanje jedinjenja 3a-l od jedinjenja 2a-l. Etil estar 1 H-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline(4c-l)se izrađuje od jedinjenja 3c-l po bilo kom od prethodno navedenih postupaka za dobijanje jedinjenja4a-lod jedinjenja 3a-l. Amid lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline6c-lse izrađuje od jedinjenja4c-lpo bilo kom od prethodno navedenih postupaka sinteza jedinjenja6a-lod jedinjenja 4a-l.

amid3- fenilsulfonil- lH- pirolo[ 2, 3- clpiridin- 2- karboksilnekiseline, Ic- 1

[0161] U amid lH-pirolo[2,3-c]piirdin-2-karboksilne kiseline6c-l(1.0 ekvivalent) u DMF (100 mL), se doda (difenil)disulfid (1.0 ekvivalent), kako je prethodno opisano u Opštoj proceduri IVb, da se dobijeIc-1kao žuto smeđa kristalna čvrsta supstanca:<!>H NMR (DMSO-aV) 8 12.4 (bs, IH), 8.86 (s, IH), 8.18 (m, 2H), 7.84 (bs, IH), 7.42 (d, J= 5.5 Hz, IH), 7.24 (m, 2H), 7.14 (m, IH), 7.03 (d, 8.3 Hz, 2H); m/z = 270.1 (M + H).

amid 3- Benzenesulfonil- lH- piroloI2, 3- clpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ic- 2

[0162]amid 3-fenilsulfanil-lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline6c-l(1.0 mmol) se tretira sa H2O2(30% w/v, 131 uL, 2.5 mmol) i Na2C03(212 mg, 2.0 mmol). Meša se na sobnoj temperaturi 16 h, quench the reaction sa H20 i ekstrahuje sa EtOAc. Ekstrakt se ispere sa slanim rastvorom, organska faza suši (MgS04) i koncentruje da se dobijeIc-2kao čvrsta supstanca boje slonovače; MS Obs 303 (M+l).

amid 3-( 3- Fluoro- fenilsulfonil)- lH- pirolo[ 2, 3- c| piridin- 2- karboksilne kiseline,Ic- 3

[0163]amid lH-pirolo[2,3-c]piirdin-2-karboksilne kiseline6c-l(1.0 ekvivalent) u DMF (100 mL) se tretira sa bis-(3-fluorofenil)disulfidom (1.0 ekvivalent), kako je prethodno opisano u Opštoj proceduri IVb, da se dobije Ic-3 kao čvrsta supstanca žuto mrke boje: 'H NMR (DMSO-de) 8 12.77 (bs, IH), 8.87 (s, IH), 8.2 (d, 7= 5.2 Hz, IH) delimično preklapanje sa 8.13 (bs, IH), 7.81 (bs, IH), 7.42 (d, 7 = 5.5 Hz, IH), 7.26 (m, IH), 6.96 (m, IH), 6.84 (m, 2H); m/z = 288.04

(M + H).

amid 3-( 3- metoksi- fenilsulfanil)- lH- pirolo] 2, 3- clpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ic- 4

[0164] amid lH-pirolo[2,3-c]piirdin-2-karboksilne kiseline 6c-l (1.0 ekvivalent) u DMF (100 mL) se tretira sa bis-(3-metoksifenil)disulfidom (1.0 ekvivalent), kako je prethodno opisano u Opštoj proceduri IVb, da se dobije Ic-4 kao čvrsta supstanca žuto mrke boje: 'H NMR (DMSO-d«)8 12.8 (bs, IH), 8.89(s, IH), 8.2(d,7 = 5.3 Hz, IH) preklapanje sa 8.19 (bs, IH), 7.81 (bs, IH), 7.41 (d, 7= 5.4 Hz, IH), 7.19 (m, IH), 6.61 (s, IH), delimično preklapanje sa 6.56 (m, 2H), 3.65 (s, 3H); m/z = 300.1 (M + H).

amid 3-( 3- hloro- fenilsulfanil)- lH- pirolo[ 2, 3- clpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ic- 5

[0165] amid lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline 6c-I (1.0 ekvivalent) u DMF (100 mL) se tretira sabis-(3-hlorofenil)disulfidom (1.0 ekvivalent), kako je prethodno opisano u Opštoj proceduri IVb, da se dobije Ic-5 kao čvrsta supstanca boje slonovače: 'H NMR (DMSO-dfe) S 12.8 (bs, IH), 8.87 (s, IH), 8.2 (d, 7 = 5.3 Hz, IH) preklapanje sa 8.17 (bs, IH), 7.82 (bs, IH), 7.41 (d,7= 5.4 Hz, IH), 7.2 (m, 2H), 7.05 (s, IH), 6.95 (d, J = 7.3 Hz, IH); m/z = 304 (M

+ H).

amid 3- f2- Trilfuorometil- fenilsuIfanil)- lH- pirolol2, 3- clpiridin- 2- karboksilne kiseline, Ic- 6

[0166] amid lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline 6c-l (1.0 ekvivalent) u DMF (100 mL) se tretira sa bis-(2-trifiuorometildifenil)disulfidom (1.0 ekvivalent), kako je prethodno opisano u Opštoj proceduri IVb, da se dobije Ic-6 kao čvrsta supstanca boje slonovače: 'H NMR (DMSO-dt,) 5 12.9 (bs, IH), 8.9 (bs, IH), 8.19 (m, 2H), 7.79 (m, IH), 7.33 (m, 2H), 7.46 (d, 7 = 5.5 Hz, IH), 7.14 (m, IH), 6.75 (dd, 7= 1.3, 7.5 Hz, IH); m/z = 338 (M + H).

amid 3-( 2- Trilfuorometoksi- feniIsulfaniI)- lH- pirolo[ 2, 3- clpiridin- 2- karboksilne kiseline, 1c- 7

[0167] amid lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline 6c-l (1.0 ekvivalent) u DMF (100 mL) se tretira sa bis-(2-tirf!uorometoksifenil)disulfidom (1.0 ekvivalent), kako je prethodno opisano u Opštoj proceduri IVb, da se dobije Ic-7 kao čvrsta supstanca žuto mrke boje:<!>H NMR (DMSO-d6)5 12.8 (bs, IH), 8.89 (s, IH), 8.2 (d,7= 5.3 Hz, IH) preklapanje sa 8.14 (bs, IH), 7.8 (bs, IH), 7.36 (m, 2H), 7.1 (dd, 7 = 1.0, 8.3 Hz, IH), 6.98 (m, 2H); m/z = 354 (M + H).

amid 3-( 2- metoksi- Dhenvlsulfonil)- lH- pirolo[ 2. 3- clpiridin- 2- karboksilne kiseline. Ic- 8

[0168] amid lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline 6c-l (1.0 ekvivalent) u DMF (100 mL) se tretira sa (2-metoksi-difenil)disulfidom (1.0 ekvivalent), kako je prethodno opisano u Opštoj proceduri IVb, da se dobije Ic-8 kao čvrsta supstanca boje slonovače:<*>H NMR (DMSO-de) 5 12.40 (bs, IH), 8.89 (bs, IH), 8.3-8.16 (m, IH), 7.86 (s, IH) preklapanje sa 7.77 (m, IH), 7.46 (d, 7 = 5.5 Hz, IH), 7.14 (m, IH), 7.03 (dd, 7= 1.0, 8.3 Hz, IH), 6.75 (dd, 7= 1.3, 7.5 Hz, IH), 6.50 (dd, 7= 1.5, 7.8 Hz, IH), 3.89 (s, 3H); m/z = 300.1 (M + H).

amid3-( piridin- 2- sulfonil)- lH- piroIo[ 2, 3- c] piridin- 2- karboksilne kiseline, Ic- 9

[0169] U amid lH-pirolo[2,3-c]piirdin-2-karboksilne kiseline (1.0 ekvivalent) u DMF (100 mL), se doda 2,2'-đipiridil disulfid (Aldritiol 2,1.1 ekvivalent), kako je opisano u Opštoj proceduri IVb, da se dobije Ic-9 kao čvrsta supstanca boje slonovače: (H NMR (DMSO-ds) 5 12.75 (bs, IH), 8.86 (s, IH), 8.35 (dd, IH, 7=14,4.5 Hz), 8.19 (dd, IH, 7=1,4 Hz), 8.1 (bs, IH), 7.85 (bs, IH), 7.54 (dd, IH, 7 = 1.8, 7.5 Hz), 7.42 (d, 7 = 5.5 Hz, IH), 7.10 (dd, IH, 7 = 4.9, 7.4 Hz), 6.74 (d, IH, 7 = 8.1 Hz), m/z = 271.1 (M + H).

Biološki primeri

Is pitivanje 33P- ATP filter ploča sa kazein kinazom epsilon za praćenje inhibitora CKl£

[0170] Cilj: Ovim ispitivanjem se meri efekat jedinjenja da inhibira fosforilaciju kazein supstrata sa enzimom kazein kinaza 1skoristećiin vitroanalizu<33>P-ATP filtracije. Jedinjenja se testiraju u pet različitih koncentracija u duplikatu, kako bi se odredile IC50vrednosti ili % inhibicije za 10 mikromolarnih koncentracija koje su sumirane u Tabeli 4. Materijali:

[0171]

Oprema:

Beckman Biomek 2000 Liquid Handling Robot Beckman

Multimek 96 Automated 96 Channel Pipettor Millipore Vacuum

Manifold Basic Kit # MAVM0960R Titertek Multidrop Liquid

Dispenser Packard TopCount NXT Liquid Scintillation Counter

Ploče:

Costar EIA/RIA Plate #9018

Falcon 96 well U bottom Polystyrene Plate #353910

Millipore Multiscreen 96 well Filtration Plates #MAPHNOB50

Millipore Multiscreen TopCount Adapter Plates #SE3M203V6

Chemicals:

EGTA od firme SIGMA #E-3889

Kazein (defosforilisan) od firme SIGMA #C-4032

ATP od firme SIGMA #A-7699

DTT od firme Fisher Biotech #BP1725

Trihloroacetatna kiselina od firme SIGMA #T-6399

y-<33>P-ATP lmCi / 37MBq od firme Perkin Elmer Life Sciences #NEG-602H Enzim: Kazein Kinaza 1 s konačne koncentracije od 0.58mg/ml dobijen fermentacijom i prečišćavanjem procesima koje je izvršila firma Aventis Pharmaceuticals Inc., France. Enzim se čuva u alikvotama od po lOOpL, na minus 80°C.

Jedinjenja:

Jedinjenja za testiranje su dobavljena kao zamrznuti osnovni rastvor od lOmM jedinjenja

rastvorenog u 100% DMSO.

Uslovi ispitivanja:

[0172J Konačna ukupna zapremina analize po otvoru je 50 uL dobijena na sledeći način:

5 uL razblaženog jedinjenja iz osnovnog rastvora (10,1,0.1,0.01 ili O.OOluM),

5 uL defosforilisanog kazeina konačne koncentracije od 0.2ug/uL,

20 uL CK1 e finalne koncentracije od 3 ng/p.L, i

20 uL y-<33>P-ATP finalne koncentracije od 0.02 uCi/uL izmešane sa hladnim ATP (lOpM

konačno)

Metodologija:

10173] 1. Izradi se 500 mL svežeg pufera za analizu: 50mM Tris pH 7.5, lOmM MgCh, 2 mM DTT i 1 mM EGTA 2. Jedinjenja za procenu su dobijena u koncentraciji od lOpL od lOmM osnovnog rastvora rastvorenog u 100% DMSO. Koristeći Biomek 2000 liquid handling robot, izradi se serija razblaženja da se dobije 10,1, 0.1, 0.01 i 0.001 uM finalnog razblaženja jedinjenja koja se po 5uL dodaju u Falcon ploče sa U dnom. Obično se testira Sjedinjenja po ploči sa 96 otvora gde kolone 1 i 12 služe kao kontrolni otvori. Uobičajena analiza procene sadrži 32 jedinjenja, što znači da treba 4 ploče za ispitivanje.

3. Raspored ploča za ispitivanje se podesi po sledećem uzorku CKlePlateMap. xls

4. Kada je 5 uL jedinjenja dodato kako je naznačeno, u odgovarajuće otvore se doda 5uL defosforilisanog kazeina (rastvoren u destilovanoj H2O)(0.2ug/uL) i 20uL CK1£(3ng/pL). 5. Konačno se doda 20pL y-<33>P-ATP (0.02uCi/uX)/10uM hladnog ATP (što je jednako aproksimativno 2xl0<6>CPM po otvoru). 6. Falcon U-Bottom ploča za ispitivanje koja sadrži pomenutih 50 pL reaktivne zapremine se centrifugira, a nakon toga inkubira 2 sata na sobnoj temperaturi. 7. Nakon 2 sata, reakcija se zaustavlja dodavanjem 65 pL ledeno hladnog 2mM ATP (izrađen u puferu za analizu) u ploče za ispitivanje koristeći Beckman Multimek 8. U isto vreme se 25 uL 100% ledeno hladnog TCA izrađenog u destilovanoj H20, doda u odgovarajući broj Millipore MAPH filter ploča. 9. Koristeći ručni 8-kanalni pipetor, 100 pL reaktivne mešavine se transfektuje iz Falcon U-Bottom Plate u Millipore MAPH filter ploče prethodno obložene sa TCA. 10. Millipore MAPH filter ploče se pažljivo mešaju i ostave da stoje na sobnoj temperaturi

najmanje 30 minuta, kako bi se proteini istaložili.

11. Nakon 30 minuta, filter ploče se stave na Millipore višestruki vakuum i filtriraju na

pritisku ne većem od 8mm Hg jer MAPH filteri imaju tendenciju da "uvuku vazduh" pri jače podešenom vakuumu.

12. Filter ploče se po redu isperu i filtriraju sa 2xl50uL 20% TCA, 2x150 uL 10% TCA i

2xl50pL 5% TCA (ukupno 6 ispiranja po ploči/900pL po otvoru).

13. Ploče se ostave da se suše u toku noći na sobnoj temperaturi. Narednog dana se u svaki

otvor doda po 40pL Packard Microscint-20 fluida za scintilaciju koristeći Titertek Multidrop dispenzer; ploče se zatvore i broje po 2 minuta/otvor u Packard Topcount NXT brojaču

scintilacije (CPM vrednosti/otvor se beleže).

Izračunavanje:

[0174]1. Vrednosti brojanja po minuti (CPM) sc beleže i koriste u odgovarajućem izračunavanju vrednosti i arhiviraju u bazi podataka (Activitv Base od IDBS verzija 5.0). 2. U koloni 1 svake ploče su podaci aktivnosti enzima na ukupnu fosforilaciju bez prisustva bilo kog inhibitornog jedinjenja i stoga predstavljaju 100%. Kolona 12 predstavlja bilo koju aktivnost nespecifične fosforilacije/zadržane radioaktivnosti bez prisustva inhibitornog jedinjenja i enzima. Uobičajeno se vidi aproksimativno 1% od ukupnog CPMs koji su "nespecifični". 3. Kada su određeni "ukupni" i "nespecifični" CPMs za svaku ploču, može da se odredi % inhibicije, kao rezultat sposobnosti enzima da fosforiliše supstrat za svaku koncentraciju test jedinjenja. Ova vrednosti % inhibicije se koristi za izračunavanjeIC50vrednosti (koncentracija pri kojoj je jedinjenje sposobno da inhibira aktivnost enzima za 50%) za jedinjenje, koristeći rit program ne linearne krive koji uključuje protokol izračunavanja Activitvbase (DG0027-CK1-D-BL) (Study: RESR0290). 4. Studijama kinetike je određeno daje Kmvređnost za ATP 21 pM u ovom sistemu ispitivanja.

Ispitivanje Kazein Kinaza 16 Streptavidin Affinitv Membrane plate na inhibitore CKld

[0175] Cilj:Da se procene test jedinjenja na aktivnost CK1S u Streptavidin Affinity Membrane (SAM) Biotin Capture Plate (Promega V7542)

Dobavljači i reagensi

[0176]HEPES Sigma # H3375 MW = 238.3; (p-glicerol fosfat Sigma # G-9891 MVV = 216.0; EDTA 0.5M, pH 8.0 GibcoBRL; natrijum ortovanadat ACROS # 205330500 MW = 183.9; DTT (DL-ditiotreitol) Sigma # D-5545 MW = 154.2; magnezijum hlorid ACROS # 41341-5000 MVV = 203.3; ATP Sigma # A-7699 MW = 551.1; y<33>P ATP NEN # NEG602H; Kazein Kinaza 15 Sigma # C4455; Kazein Kinase 1 supstrat New England Peptide Biotin-RRKDLHDDEEDEAMSITA MVV = 2470

[0177JKinaza pufer (KB, 100 mL) se izrađuje kako sledi:

[0178]ATP osnovna mešavina se izrađuje na sledeći način:

Izradi se lmL IM ATP rastvora u vodi (IM ATP osnovni rastvor).

U 12 mLKB:

Doda se 12 pl IM ATP rastvora, nakon toga

Doda se 12 pl<33>P ATP (10 pCi/ul), NEG602H, Perkin Elmer

[0179]Reaktivne ploče se izrade na sledeći način a ispitivanje se izvrši kako sledi: 1. Doda se 10 pL KB po otvoru sa ili bez inhibitora test jedinjenja u otvore reaktivne ploče

2. Doda se 60 pL KB po otvoru

3. Doda se 10 pL od 500 pM supstrata peptida po otvoru

4. Ploče se inkubiraju na 37°C

5. Doda se 10 pL 1:10 razblaženja CK15 po otvoru = 0.42pg ili 0.68 jedinica

6. Reakcija se započinje sa 10 pL ATP osnovnog rastvora po otvoru

7. Reaktivna ploča se ostavi 10 minuta u inkubatoru na 37°C.

8. Reakcija se zaustavi sa 10 pL IM rastvora ATP. 20 pL se prenese u SAM Plate i ostavi da stoji 10 minuta na sobnoj temperaturi. 9. Ispere se tri puta sa po 100 pL 2M rastvora NaCl, nakon toga tri puta sa po 100 pL 2M rastvora NaCl i 1% H3PO4, a nakon toga tri puta sa po lOOpl vode na višestrukom

vakuumu.

10. Filter ploče se suše pod lampom 30 minuta.

11. Doda se 20 pL MicroScint 20 i ploča zatvori

12. Čita se na TOPCOUNT

Eksperimentalne procedure ispitivanja cirkadijanskog ritma ćelije

[0180] Ćelijska kultura:kulture fibroblastaMperl- lucpacova-1 (P2C4) se podele svaka 3-4 dana (~10-20% prirasta) u polistirenske otvorene posude površine 150 cm za kulturu tkiva (Falcon # 35-5001) i održavaju u medijumu za rast [EMEM (Cellgro #10-010-CV); 10% seruma fetusa govečeta (FBS; Gibco #16000-044); i 50I.U./mL penicilin-streptomicin (Cellgro #30-001 - Cl)] na 37°C i 5% C02.

[0181] Stabilna transfekcija:kulture fibroblasta pacova-1 pri prirastu od 30-50% se transfektuju zajedno sa vektorima koji sadrže Zeocin rezistentni selektibilni marker za stabilnu transfekciju i luciferaza reporter gen koji pokreće mPer-1 promoter. Nakon 24-48 sati, kulture se podele na pločama sa 96 otvora i održavaju u medijumu za rast obogaćenim sa 50-100 pg/mL Zeocina (Invitrogen #45-0430) u toku 10-14 dana. Zeocin-rezistentni stabilni transfektanti se ispituju prema zabeleženom pojavljivanju dodavanjem medijuma za rast obogaćenim sa 100 pM luciferina (Promega #E1603), a aktivnosti luciferaze se ispituju na TopCount brojaču scintilacije (Packard Model #C384V00). Rat-1 klonovi koji ispoljavaju i rezistenciju na Zeocin i aktivnost luciferaze koja pokrećemPerl,se sinhroniziju sa 50% konjskog seruma [HS (Gibco #16050-122)] i ispituje cirkadijan reporter aktivnost. Klon P2C4Mperl- lucRat-1 fibroblasta se izdvoji za testiranje jedinjenja.

[0182] Protokol sinhronizacije:Mperl- lucRat-1 fibroblasti (P2C4) se prenesu (40-50% prirasta) na neprovidne ploče za kulturu tkiva sa 96 otvora (PerkinElmer #6005680) i održavaju u medijumu za rast obogaćenim sa 100pg/mLZeocina (Invitrogen #45-0430) sve dok kulture ne postignu 100% prirasta (48-72 h). Kulture se sinhronizuju sa 100 pL medijuma za sinhronizaciju [EMEM (Cellgro #10-010-CV); 100 I.U./mL penicilin-streptomicin (Cellgro #30-001-0); 50% HS (Gibco #16050-122)] u toku 2 sata, na 37°C i 5% C02. Nakon sinhronizacije, kulture se ispiraju sa 100 pL EMEM (Cellgro #10-010-CV) u toku 10 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon ispiranja, medijum se zameni sa 300 pL medijuma bez C02[C02I (Gibco #18045-088); 2mM L-glutamin (Cellgro #25-005-Cl); 100 I.U./mL penicilin-streptomicin (Cellgro #30-001-Cl); 100 pM luciferin (Promega #E1603)]. Jedinjenja koja se ispituju na cirkadijanske efekte se dodaju u medijum bez C02u 0.3% rastvoru DMSO (finalna koncentracija). Kulture se odmah zatvore sa TopSeal-A filmom (Packard #6005185) i prenesu za merenje aktivnosti luciferaze.

[0183] Automatsko merenje cirkadijan reportera:Nakon sinhronizacije, ploče sa analizama se održavaju na 37°C u inkubatoru za kulturu tkiva (Forma Scientific Model #3914). In Vivo aktivnost luciferaze se procenjuje merenjem odnosa izlaznog svetla na TopCount brojaču scintilacije (Packard Model #C384V00). Ploče se prenesu iz inkubatora u čitač pomoću ORCA mehaničke ruke (Beckman Instruments) i SAMI-NT automatizovanog programskog softvera (Verzija 3.3; SAGIAN/Beckman Instruments).

[0184] Analiza podataka:Microsoft Excel i XLfit (Verzija 2.0.9; IDBS) se koriste za unošenje, manipulaciju i predstavljanje podataka. Periodična analiza se vrši ili određivanjem intervala između minimuma odnosa izlaznog svetla u toku nekoliko dana ili pomoću Fourier Transform. Oba postupka daju skoro identičan period procene u određenim cirkadijanskim periodima. Sposobnost se beleži kao ECAt+ih, koja predstavlja efektivnu mikromolarnu koncentraciju koja indukuje produžavanje perioda za 1 sat. Podaci se analiziraju nanošenjem dobijenih vrednosti na hiperboličnu krivu kao period promene (y-osa) u odnosu na koncentrciju test jedinjenja (x-osa) u XLfit, a ECAt+ihse izvode iz ove krive.

Claims (43)

1. Jedinjenje formule (I) gde: Ri je H ili Ci.6alkil grupa; R2 je NR5R6 grupa; R3 je aril grupa koja je monociklični, biciklični ili triciklični prsten ugljenika sa do sedam članova u svkom prstenu i gde je najmanje jedan prsten aromatičan, navedena aril grupa je opciono supstituisana sa od jedan do tri supstituenta izabrana iz grupe koja sadrži metilendioksi, hidroksi, Cr6-alkoksi, halogen, Ci-6-alkil, C2-6-alkenil, C2-6-alkinil, trifluorometil, trifluorometoksi, -N02, -NH2, -NH(C,-6-alkil), -N(Ci-6-alkil)2, -NH-acil, i -N (C i -6-alkil)acil grupa, navedena acil grupa je zasićena alifatična ugljovodonična grupa koja ima od jedan do šest atoma ugljenika vezanih za karbonil radikal; C5.7monociklični heterociklus ili Cs-i 1 biciklični heterociklus, navedeni heterociklus koji ima od jedan do tri heteroatoma izabrana iz grupe koja sadrži N, O i S, i navedeni heterociklus je opciono supstituisan sa od jedan do tri supstituenta izabrana iz grupe koja sadrži Ci-6-alkoksi, hidroksi, halogen, C|-6-alkil, C2-6-alkenil, C2-6-alkinil, trifluorometil, trifluorometoksi, -N02, -NH2, -NH(C,-e-alkii), -N(Ci-6-alkil)2, -NH-acil i-N(C,-6-alkil)acil grupu, navedena acil grupa je zasićena alifatična ugljovodonična grupa koja ima od jedan do šest atoma ugljenika vezanih za karbonil radikal; R4 je H, Cj.6alkil, C2-6-alkenil, C2-6-alkinil, Ci-6alkoksi, CF3, halogen, SH, S-Ci-6alkil, N02,NH2ili NR5R6grupa; R5 je H ili C[.6alkil grupa; Rć je H ili Ci^alkil grupa; X je S ili S(0)n grupa; jedan od K, L ili M je N, a druga dva člana od K, L ili M su svaki C, pri čemu je R4vezan samo za K, L, M ili drugi atom prstena koji je C; m je 1, 2 ili 3; i nje 1 ili 2; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili stereoizomer.

2. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je L = N, a K i M su svaki C.

3. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 2, naznačeno time što su Rj, R4, R5iR(,svaki H i R3je aril grupa koja je monociklični, biciklični ili triciklični prsten ugljenika sa do sedam članova u svakom prstenu i pri čemu je najmanje jedan prsten aromatičan, navedena aril grupa je opciono supstituisana sa od jedan do tri supstituenta izabrana iz grupe koja sadrži metilendioksi, hidroksi, Ci-6-alkoksi, halogen, Ci-6-alkil, C2-6-alkenil, C2-6-alkinil, trifluorometil, trifluorometoksi, -N02, -NH2, -NH(d-6-alkil), -N(Cj-6-alkil)2, -NH-acil i -N(Cr6-alkil)acil grupu, navedena acil grupa je zasićena alifatična ugljovodonična grupa koja ima od jedan do šest atoma ugljenika vezanih za karbonil radikal.

4. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 3, naznačeno time što je izabrano iz grupe koja sadrži: amid 3-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(3-fluoro-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksilne kiseline i amid 3-(4-hloro-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksilne kiseline.

5. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je M = N, a K i L su svaki C.

6. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 5, naznačeno time što su Rj, R4, R5i R6svaki H i R3je aril grupa koja je monociklični, biciklični ili triciklični prsten ugljenika sa do sedam članova u svakom prstenu i pri čemu je najmanje jedan prsten aromatičan, navedena aril grupa je opciono supstituisana sa od jedan do tri supstituenta izabrana iz grupe koja sadrži metilendioksi, hidroksi, Ci-6-alkoksi, halogen, C|-6-aIkil, C2-6-alkenil, C2-ć-alkinil, trifluorometil, trifluorometoksi, -N02, -NH2, - NH(Cj-6-aIkil), -N(Ci-6-alkil)2, -NH-acil i -N(C,-6-alkil)acil grupu, navedena acili grupa je zasićena alifatična ugljovodonična grupa koja ima od jedan do šest atoma ugljenika vezanih za karbonil radikal; C5.7monociklični heterociklus ili C8-nbiciklični heterociklus, navedeni heterociklus je opciono supstituisan sa od jedan do tri supstituenta izabrana iz grupe koja sadrži C|-6-alkoksi, hidroksi, halogen, Cj-6-alkil, C2-6-alkenil, C2-6-alkinil, trifluorometil, trifluorometoksi, -N02, -NH2, -NH(Ci-6-alkil), -N(Ci-6-alkil)2, -NH-acil i -N(C|-6-alkil)acil grupu, navedena acil grupa je zasićena alifatična ugljovodonična grupa koja ima od jedan do šest atoma ugljenika vezanih za karbonil radikal.

7. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 6, naznačeno time što je izabrano iz grupe koja sadrži: amid 3-fenilsulfanil-lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(3-fluoro-fenilsulfanil)-1 H-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(3-metoksi-fenilsulfanil)-lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(3-hloro-fenilsulfanil)-lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(2-trifluorometil-fenilsulfanil)-lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(2-trifluorometoksi-fenilsulfanil)-lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(2-metoksi-fenilsulfanil)-lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline, i amid 3-(piridin-2-sulfanil)-lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline.

8. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je K = N, a L i M su svaki C.

9. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 8, naznačeno time što je Ri= C|_ćalkil, R5 je H, R6 je H ili C^alkil, a R3 je aril grupa koja je monociklični, biciklični ili triciklični prsten ugljenika sa do sedam članova u svakom prstenu i pri Čemu je najmanje jedan prsten aromatičan, navedena aril grupa je opciono supstituisana sa od jedan do tri supstituenta izabrana iz grupe koja sadrži metilendioksi, hidroksi, Ci.6-alkoksi, halogen, Ci_6-alkil, C2.6-alkenil, C2-6-alkinil, trifluorometil, trifluorometoksi, -N02, -NH2, -NH(Ci^-alkil), -N(Ci.6-alkil)2, -NH-acil i - N(C|.6-alkil)acil grupu, navedena acili grupa je zasićena alifatična ugljovodonična grupa koja ima od jedan do šest atoma ugljenika vezanih za karbonil radikal.

10. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 9, naznačeno time što izabrano iz grupe koja sadrži: metilamid l-metil-3-fenilsulfanil- lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 1-metil-3-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, i amid 3-fenilsulfanil-1-propil-1 H-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline.

11. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 8, naznačeno time što su R|, R4i R5svaki H, R3je aril grupa koja je monociklični, biciklični ili triciklični prsten ugljenika sa do sedam članova u svakom prstenu i pri čemu je najmanje jedan prsten aromatičan, navedena aril grupa je opciono supstituisana sa od jedan do tri supstituenta izabrana iz grupe koja sadrži metilendioksi, hidroksi, C|.6-alkoksi, halogen, Cj_6-alkil, C2_6-alkenil, C2-6-alkinil, trifluorometil, trifluorometoksi, -N02, -NH2, -NH(C]_6-alkil), -N(Cj_6-alkil)2, -NH-acil i -N(Ci_6-alkil)acil grupu, navedena acil grupa je zasićena alifatična ugljovodonična grupa koja ima od jedan do šest atoma ugljenika vezanih za karbonil radikal, iRe jeCi^alkil grupa.

12. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 11, naznačeno time što je izabrano iz grupe koja sadrži: metilamid 3-(3-trifluorometioksifenilsulfanil-1 H-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, metilamid 3-(3-hlorofenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, metilamid 3-(3-fluorofenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, i metilamid 3-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline.

13. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 8, naznačeno time što su Rj, R4, R5i R$svaki H a R3 je C5.7monociklični heterociklus ili Cg.u biciklični heterociklus, a navedeni heterociklus je opciono supstituisan sa od jedan do tri supstituenta izabrana iz grupe koja sadrži C|-6-alkoksi, hidroksi, halogen, Ci-6-alkil, C2-6-alkenil, C2-6-alkinil, trifluorometil, trifluorometoksi, -NO2, -NH2, -NH(Ci-6-alkil), -N(Cj-6-alkil)2, -NH-acil i-N(Cj-6-alkil)acil grupu, navedena acil grupa je zasićena alifatična ugljovodonična grupa koja ima od jedan do šest atoma ugljenika vezanih za karbonil radikal.

14. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 13, naznačeno time što izabrano iz grupe koja sadrži: amid 3-(kvinolin-8-ilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(piridin-2-sulfanil)-l H-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(piridin-4-sulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, i amid 3-(tiofen-2-ilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline.

15. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 8, naznačeno time što su Ri, Rsi Rćje svaki H a R3je aril grupa koja je monociklični, biciklični ili triciklični prsten ugljenika sa do sedam članova u svakom prstenu i pri čemu je najmanje jedan prsten aromatičan, navedena aril grupa je opciono supstituisana sa od jedan do tri supstituenta izabrana iz grupe koja sadrži metilendioksi, hidroksi, Ci-6-alkoksi, halogen, Ci.6-alkil, C2_<s-alkenil, C2-6-alkinil, trifluorometil, trifluorometoksi, -N02, -NH2, -NH(C,.6-alkil), -N(C,.6-alkil)2, -NH-acil i -N(C,.6-alkil)acil grupu, navedena acil grupa je zasićena alifatična ugljovodonična grupa koja ima od jedan do šest atoma ugljenika vezanih za karbonil radikal.

16. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 15, naznačeno time što izabrano iz grupe koja sadrži: amid 3-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(3-lfuorofenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(3-hlorofenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(3-bromofenilsulfanil)-1 H-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(2-hlorofenilsulfanil)-l H-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(4-hlorofenilsulfanil)-lII-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(2,4-dihlorofenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(2-fluorofenilsulfanil)-l H-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(2,3-dihlorofenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(2-trifluormetilfenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(3-trifluorometil-fenilsulfanil)-lH-piroIo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(2-aminofenilsulfanil)-l H-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(2,5-dihloro-fenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(2-metoksi-fenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(3-metoksi-fenilsulfanil)-l H-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(3-amino-fenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(4-nitro-fenilsulfanil)-1 H-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline,

3 amid -(3-nitro-fenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-o-tolilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-p-tolilsulfanil-1 H-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(3,5-dimetil-fenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-m-tolilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(2-etil-fenilsulfanil)-1 H-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(3-trifluorometoksi-fenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid 3-(3-fluoro-fenilsulfanil)-5-metoksi-l H-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, i amid 3-(3-metoksi-fenilsulfanil)-5-metoksi-1 H-pirolo[3,2-b]piriđin-2-karboksilne kiseline.

17. Farmaceutska kompozicija naznačena time što uključuje farmaceutski nosač i farmaceutski efektivnu količinu jedinjenja u skladu sa patentnim zahtevom l ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili stereoizomera

18. Upotreba jedinjenja u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačena time što se koristi za izradu medikamenta korisnog u tretmanu poremećaja zbog inhibicije aktivnosti kazein kinaze ls .

19. Upotreba jedinjenja u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačena time što se koristi za izradu medikamenta korisnog u tretmanu oboljenja ili poremećaja poboljšanih inhibicijom kazein kinaze 1 s .

20. Upotreba jedinjenja u skladu sa patentnim zahtevom 19, naznačena time što je oboljenje ili poremećaj, poremećaj raspoloženja ili poremećaj sna.

21. Upotreba jedinjenja u skladu sa patentnim zahtevom 20, naznačena time što je poremećaj, poremećaj raspoloženja.

22. Upotreba jedinjenja u skladu sa patentnim zahtevom 21, naznačena time što je poremećaj raspoloženja izabran od depresivnog poremećaja ili bipolarnog poremećaja.

23. Upotreba jedinjenja u skladu sa patentnim zahtevom 22, naznačena time što je depresivni poremećaj, osnovni depresivni poremećaj.

24. Upotreba jedinjenja u skladu sa patentnim zahtevom 22, naznačena time što je bipolarni poremećaj izabran iz grupe koja sadrži bipolarni I poremećaj i bipolarni II poremećaj.

25. Upotreba jedinjenja u skladu sa patentnim zahtevom 20, naznačena time što je poremećaj, poremećaj sna.

26. Upotreba jedinjenja u skladu sa patentnim zahtevom 25, naznačena time što je poremećaj sna, poremećaj cirkadijanskog ritma sna.

27. Upotreba jedinjenja u skladu sa patentnim zahtevom 26, naznačena time što je poremećaj cirkadijanskog ritma sna izabran iz grupe koja sadrži poremećaj sna zbog rada u smenama, sindroma umora i dezorijentacije kao posledice dugog letenja, sindroma poremećaja sna unapred po vremenskoj osi i sindroma poremećaja sna unazad po vremenskoj osi.

28. Postupak za izradu jedinjenja formule (I) gde: RijeH; R2je NH2grupa; Xje S; R3, R4, R5, Rć, K, L, M, N i m su definisani kao u patentnom zahtevu 1; naznačen time što uključuje fazu tretiranja malonatnog diestra sa pogodnom bazom u pogodnom rastvaraču, dodavanje nesupstituisanog ili supstituisanog 2-hloro-3-nitropiridina, 3-hloro-4-nitropiridina ili 4-hloro-3-nitropiridina, zagrevanje reaktivne mešavine sve do završetka reakcije, tretiranje reaktivne mešavine sa mineralnom kiselinom i zagrevanje reaktivne mešavine sve do završetka dekarboksilacije, da se dobije nesupstituisani ili supstituisani 2-metil-3-nitropiridin, 3-metil-4-nitropiridin ili 4-metil-3-nitropiridin.

29. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 28, naznačen time što je malonatni diestar dietil malonat, baza je natrijum t-butoksid, rastvarač je N-metil-2-pirolidinon, a mineralna kiselina je sumporna kiselina.

30. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 29, naznačen time što se izrađuje 2-metil-3-nitropiridin.

31. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 28, naznačen time što dalje uključuje fazu dodavanja nesupstituisanog ili supstiruisanog 2-metil-3-nitropiridina, 3-metil-4-nitropiriđina ili 4-metil-3-nitropiridina u mešavinu pogodnog rastvarača, pogodne baze i oksalatnog diestra, da se dobije nesupstituisani ili supstituisani estar 2-hidroksi-3-(3-nitro-piridin-2-il)-akritatne kiseline, estar 2-hidroksi-3-(4-nitro-piridin-3-il)-akrilatne kiseline ili estar 2-hidroksi-3-(3-nitropiridin-4-il)-akrilatne kiseline, ili njihov odgovarajući tautomerni keton.

32. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 31, naznačen time što oksalatni diestar dietil oksalat, rastvarač je tetrahidrofuran, a baza je natrijum etoksid.

33. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 32, naznačen time što se izrađuje etil estar 2-hidroksi-3-(3-nitro-piridin-2-il)-akrilatne kiseline.

34. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 28, naznačen time što dalje uključuje fazu redukcije nesupstituisanog ili supstiruisanog estra 2-hidroksi-3-(3-nitro-piridin-2-il)-akrilatne kiseline, estra 2-hidroksi-3-(4-nitro-piridin-3-il)-akrilatne kiseline ili estra 2-hidroksi-3-(3-nitropiridin-4-il)-akrilatne kiseline, u pogodnom rastvaraču, sa pogodnim katalizatorom, da se dobije nesupstituisani ili supstituisani estar lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, estar 1H-piro!o[3,2-c]piridin-2-karboksilne kiseline ili estar lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline.

35. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 34, naznačen time što je rastvarač apsolutni alkohol, a katalizator je paladijum na ugljeniku.

36. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 35, naznačen time što se izrađuje etil estar 1H-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline.

37. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 28, naznačen time što dalje uključuje fazu dodavanja nesupstituisanog ili supstituisanog estra lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseliner, estra lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksilne kiseline ili estra lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline, u amonijaku, u pogodnom rastvaraču, da se dobije nesupstituisani ili supstituisani amid lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amid lH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksilne kiseline ili amid lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline.

38. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 37, naznačen time što je rastvarač metanol.

39. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 38, naznačen time što se izrađuje amid 1H-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline.

40. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 28, naznačen time što dalje uključuje fazu dodavanja nesupstituisanog ili supstituisanog amida lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline, amidalH-pirolo[3,2-c]piridin-2-karboksilne kiseline ili amida lH-pirolo[2,3-c]piridin-2-karboksilne kiseline, odgovarajuće baze u višku i diarildisulfida ili diheterociklildisulfida u pogodan rastvarač i zagrevanja da se dobije jedinjenje formule (I), gde je Rivodonik.

41. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 40, naznačen time što je količina viška baze približno 2.0 do približno 2.5 ekvivalenata, baza je cezijum karbonat, a diarildisulfid je difenildisulfid ili bis-(3-fluorofenil)disulfid.

42. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 41, naznačen time što se izrađuje amid 3-fenilsulfanil-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2-karboksilne kiseline.

43. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 41, naznačen time što se izrađuje amid 3-(3-fluorofenilsulfanil)-lH-pirolo[3,2-b]piridin-2 -karboksilne kiseline.