RS51536B - Poboljšana bakterijska vakcina mycoplasma hyopneumoniae - Google Patents
Poboljšana bakterijska vakcina mycoplasma hyopneumoniaeInfo
- Publication number
- RS51536B RS51536B YUP-493/03A YUP49303A RS51536B RS 51536 B RS51536 B RS 51536B YU P49303 A YUP49303 A YU P49303A RS 51536 B RS51536 B RS 51536B
- Authority
- RS
- Serbia
- Prior art keywords
- mixture
- vaccine composition
- pigs
- vaccine
- mycoplasma hyopneumoniae
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0241—Mollicutes, e.g. Mycoplasma, Erysipelothrix
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/521—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
- Y10S424/825—Bacterial vaccine for porcine species, e.g. swine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Kompozicija vakcine za imunizaciju životinja protiv infekcije Mycoplasma hyopneumoniae, naznačena time, što uključuje imunizirajuću količinu bakterina Mycoplasma hyopneumoniae;smešu pomoćnih sredstava koju čine polimer akrilne kiseline i smeša metaboličnog ulja i polioksietilen-polioksipropilen blok kopolimera; ifarmaceutski prihvatljiv nosač, gde kompozicija vakcine posle jednog davanja izaziva zaštitni imunitet od Mycoplasma hyopneumoniae.Prijava sadrži još 17 patentnih zahteva.
Description
Pronalazak se odnosi na poboljšane postupke za izazivanje zaštitnog imuniteta protivMycoplasma hyopneumoniae,naročito koji uključuju inaktivanu bakterijuMycoplasma hyopneumoniaeu količini efikasnoj da imunizira životinju primaoca protiv infekcijeMycoplasma hvopneumoniaeu jednoj dozi.
Mycoplasma hyopneumoniaeje etiološki agens svinjske mikoplazmatiče upale pluća. Bolest je važan uzrok ekonomskog gubitka u industriji svinja zbog postignute smanjene težine i slabe efikasnosti hranjenja. Bolest uzrokuje hroničan kašalj, slabu životinjsku dlaku, zaostajanje u rastu i neuspešan izgled koji traje nekoliko nedelja. Kod zaraženih životinja primećene su površine karakterističnih lezija od crvenih do sivih koje se integrišu, naročito u prednjem vršnom i srčanom režnju. Mada bolest izaziva malo smrtnih slučajeva, napadnute svinje su često sklone sekundarnoj infekciji oportunističkih patogena, što rezultuje smrću ili stresom. Samo su ekonomski gubici procenjeni između 200 i 250 miliona dolara godišnje.
Mycoplasma hyopneumoniaeje izbirljiva bakterija koja polako raste i koja nema ćelijski zid. Veoma često ju je teško izolovati iz respiratornog trakta zbogMycoplasma hyorhinis,uobičajenog sekundarnog agensa koji je takođe smešten u respiratornom traktu. Bolest se prenosi aerosolom, dobijenim kaŠljanjem i direktnim kontaktom sa bolesnom ili konvalescentnom svinjom nosiocem. Mešanje zaraženih životinja i nezaraženim životinja dovodi do ranih i čestih ponovnih infekcija. Infekcija često počinje infekcijom prasića od noseće krmače prilikom prašenja. Zbog načina upravljanja krdom, infekcija ne mora da bude očigledna nego tek kasnije u životu. Dodatne infekcije uglavnom su primećene posle odbijanja od sisanja kada se svinje objedine. Očigledna bolest se normalno primeti kod svinja u šestoj nedelji starosti ili kasnije. Odnos rasta i odnos konverzije hrane su primetno smanjene kod bolesnih životinja. Lečenja sa antibioticima su skupa i zahtevaju produženu upotrebu. Ponovna infekcija je takođe problem. Vakcine su sada najefikasniji postupak za izbegavanje infekcija i njihovih posledica,
Fort Dodge Animal Health (FDAH) prodaje bakterijuMycoplasma hyopneumoniaepod imenom Suvaxyn® Respifend® MH koja se koristi kao vakcina da bi se zaštitile zdrave svinje od kliničkih znaka izazvanih saMycoplasma hyopneumoniae.Vakcina sadrži Carbopol kao pomoćno sredstvo i preporučena je kao vakcina u dve doze za svinje koje su stare bar jednu nedelju, sa drugom dozom dve ili tri nedelje posle prve vakcinacije. Međutim, vakcine u dve doze imaju očigledni nedostatak u tome što zahtevaju drugi postupak sa životinjama u cilju obezbeđivanja potpune zaštite protiv bolesti.
Prema tome predmet ovog pronalaska je da se obezbedi efikasna vakcina protivMycoplasma hyopneumoniaekoja izaziva zaštitni imunitet i sprečava bolest izazvanu sa organizmom davanjem jedne doze vakcine.
Drugi predmet ovog pronalaska je obezbeđivanje kompozicije vakcine pogodne za upotrebu kod svinja protiv infekcije i bolesti izazvane saMycoplasma hyopneumoniae,koja može biti korišćena u kombinaciji sa drugim bakterijama i/ili toksoidima.
Još jedan predmet ovog pronalaska je da obezbedi postupak za sprečavanje ili ublažavanje bolesti gde je organizam izazivačMycoplasma hyopneumoniae,korišćenjem formulacije sa pomoćnim sredstvima koja poboljšava imugeno svojstvo bakterije tako da izaziva zaštitni imunitet posle jedne doze vakcine.
Drugi predmeti i karakteristike pronalaska će postati očigledne iz dole izloženog detaljnog opisa.
Ovaj pronalazak se odnosi na kompoziciju vakcine za imuniziranje životinje protiv infekcijeMycoplasma hyopneumoniaekoja sadrži imunizirajuću količinu inaktivirane bakterijeMycoplasma hyopneumoniae\smešu pomoćnih sredstava koja obuhvata polimer akrilne kiseline i smešu metaboličnog ulja i polioksietilen-polioksipropilen blok kopolimera; i farmaceutski prihvatljivih nosača, gde kompozicija vakcine, posle jednog davanja, izaziva zaštitni imunitet protivMycoplasma h<y>opneumoniae.
U drugom aspektu, prikazani pronalazak obezbeđuje kompoziciju sa imunogenim svojstvom za imunizaciju životinje protiv infekcijeMycoplasma hyopneumoniae,koja se sastoji od inaktivirane bakterijeMycoplasma hyopneumoniaezajedno sa gore navedenim pomoćnim sredstvima i farmaceutski prihvatljivim stabilizatorima, nosačima ili razblaživačima. Pomoćno sredstvo je uglavnom prisutno u ovoj kompoziciji vakcine u krajnjoj koncentraciji od oko 1-25% (v/v) i poželjno oko 5-12%
(v/v). Kompozicija takođe može da uključuje druge komponente vakcine, uključujući inaktivirane bakterije ili prečišćene toksoide, iz jednog ili više patogena, kao što suHaemonphilus parasuis, Pasteurella multiocida,
Streptococcum suis, Actionobacillus plevropneumoniae, Bordetella
bronchiseptica, Salmonella choleraesuisi leptospira i može biti davana intramuskularno, subkutanozno, oralno, aerosolom ili intranazalnim putem.
U još jednom aspektu, prikazani pronalazak obezbeđuje postupak za zaštitu životinja protiv bolesti izazvaneMycoplasma hyopneumoniaedavanjem jedne doze gore pomenute vakcine koja sadrži inaktiviranu bakterijuMycoplasma hyopneumoniaei smešu pomoćnih supstanci.
Svi ovde citirani patenti, patentne prijave i druga literatura obuhvaćeni su referencom u svojoj celosti. U slučaju nedoslednosti, prikazani pronalazak će preoviadati.
Ovde korišćen izraz 'bakterijska vakcina' je sakupljena bakterija koja je inaktivirana i koja u kombinaciji sa izvesnim pomoćnim sredstvima može izazvati zaštitni imunitet protiv bolesti ili infekcije kada se daje životinjama.
'Pomoćno sredstvo' označava kompoziciju koja sadrži jednu ili više supstanci koje pojačavaju imugeno svojstvo i efikasnost bakterijeMycoplasma hyopneumoniaeu kompoziciji vakcine.
U opisu i zahtevima korišćen izraz MHDCE označavaMycoplasma hyopneumoniaeDNA ćelijske ekvivalente.
'Imunizirajuća količina' je količina bakterijske vakcine koja će obezbediti imunitetvis a vis Mycoplasma hyopneumoniae.'Imunizirajuća količina'će zavisiti od vrste, pasmine, starosti, veličine, zdravstvenog stanja i da li je životinja prethodno bila vakcinisana protiv istog organizma.
Ovaj pronalazak obezbeđuje vakcinu protivMycoplasma hyopneumoniaekoja je pogodna za imunizaciju u jednoj dozi. Vakcina prema ovom pronalsku uključuje smešu pomoćnih sredstava koja povećava imugeno svojstvo bakterije i na taj način obezbeđuje jedno davanje za izazivanje zaštitnog imuniteta.
Vakcina može biti pripremljena od sveže sakupljenih kultura postupcima standardnim u stanju tehnike (videti, na primer, US patent 5,338,543 ili US patent 5,565,205 kao i dole primer 2). To jest, organizam može rasti u medijumu za kulture kao što je PPLO ('Pleuropneumonia-like organisam') kompletni medijum [Difico]. Laboratories]. Rast organizama je praćen standardnim tehnikama kao što je određivanje jedinica koje menjaju boju (CCU-color changing units) i sakupljanjem kada je postignut dovoljno visok titar. Štokovi moraju dalje biti koncentrovani ili liofilizirani konvencionalnim postupcima pre uključivanja u formulaciju vakcine. Mogu se koristiti drugi postupci, kao što su oni opisani kod Thomas,et al,Agri-Practice, Vol. 7 Br. 5, str.26-30,.
Vakcina prema ovom pronalasku se sastoji od inaktivirane bakterijeMycoplasma hyopnewnoniaeu kombinaciji sa smešom pomoćnih sredstava i jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača. Nosači pogodni za upotrebu uključuju vodeni medijum, na primer, rastvor soli, rastvor soli sa fosfatnim puferom, minimalni esencijalni medijum (MEM) ili MEM sa HEPES puferom.
Smeša pomoćnih sredstava za upotrebu u kompoziciji vakcine ovog pronalaska povećava imuni odgovor i sastoji se od smeše polimera akrilne kiseline sa smešom metaboličkog ulja, na pr. nezasićenih terpenskih ugljvodonika ili njihovim proizvoda hidrogenizacije, poželjno skvalana (2,3,10,15,19,23-heksametiltetrakozana) ili skvalena i polioksietilen-polioksipropilen blok kopolimera. Takav polimer akrilne kiseline može biti homopolimer ili kopolimer. Polimer akrilne kiseline je poželjno karbomer. Karbomeri su komercijalno dostupni pod komercijalnim imenom Carbopol. Polimeri akrilne kiseline su opisani, na primer, u US patentima 2,909,462 i 3,790,665 čiji opisi su uključeni ovde kao reference. Polioksietilen-polioksipropilen blok polimeri su površinski aktivna sredstva, poželjno tečna površinski aktivna sredstva, koja pomažu u suspendovanju čvrstih i tečnih komponenti. Površinski aktivne supstance su komercijalno dostupne kao polimeri pod komercijalriim imenom Pluronic®. Poželjno površinski aktivno sredstvo je poloksamer 401 koji je komercijalno dostupan pod imenom Pluronic® L121.
Smeša pomoćnih sredstava koja stimuliše imunogeno svojstvo je tipično prisutna u kompoziciji vakcine prema pronalasku u v/v količini od oko 1% do 25%, poželjno od oko 2% do 15%, poželjnije oko 5% do 12% v/v. Količina smeše pomoćnih sredstava koja se koristi i odnosa dve komponente pomoćnih sredstava može varirati u zavisnosti od dodavanja drugih bakterijskih vakcina ili prečišćenih toksoida. Smeše pomoćnih supstanci generalno se sastoje od metaboličkog ulja, polimera akrilne kiseline i polioksietilen-polioksipropilen blok kopolimera formulisanih kao emulzija u vodenom medijumu.
U ovoj smeši pomoćnih sredstava, metaboličko ulje i polimer akrilne kiseline mogu biti prisutni u količini u opsegu od oko 10 do 150 ml/l i oko 0.5 do 10 g/l, respektivno. U poželjnom izvođenju smeša pomoćnih supstanci, smeša metaboličnog ulja i polioksietilen-polioksipropilen blok kompolimernih komponenti je smeša skvalana i Pluronic® LI21 (poloxamer 401) koja može biti prisutna u količini od oko 50 do 100 ml/L i karboksimetilen polimer je Carbopol 934P (Carbamer 934P) koji može biti prisutan u količini od oko 2 ml/l. Tipično, smeša pomoćnih supstanci sadrži oko 1:25 do 1:50 polimera akrilne kiseline u odnosu na smešu metaboličkog ulja/polioksietilen-polioksipropilen blok kopolimera.
Poželjni polimeri akrilne kiseline su oni koje prodaje B. F. Goodrich kao Carbopol 934 P NF i 941 NF koji su polimeri akrilne kiseline umrežene sa polialilsaharozom i koji imaju hemijsku formulu (CH2CHOOOH)n. Ovi polimeri daju vodeni gel koji pogodno formuliše sa vodenim nosačima. Poželjni polioksietilen-polioksipropilen blok kompolimeri su nejonska površinski aktivna sredstva koje prodaje BASF kao Pluronic® L121, L61, L81 iliLIOl.
Vakcina prema ovom pronalsku može se davati intramuskularno, subkutanozno, intranazalno, intraperitonealno ili oralnim putem, poželjno intramuskularnim ili subkutanoznim putem.
Vakcina prema pronalasku generalno se sastoji od inaktiviraneMycoplasma hyopneumoniae,metaboličnog ulja, polioksietilen-polioksipropilen blok polimera i polimera akrilne kisleline u obliku ulja u vodenoj emulziji. Vakcina poželjno sadrži polimer akrilne kiseline u koncentraciji u opsegu od 0.5 do 10 g/l. Vakcina poželjno sadrži metaboličko ulje u koncentraciji u opsegu od 2 do 6 ml/l. Vakcina poželjno sadrži polioksietilen-propilen blok kopolimer u koncentraciji opsega od 1 do 3 ml/l.
Za jedinično davanje, vakcina bi poželjno sadržala količinu bakterijske vakcineMycoplasma hyopneumoniaekoja odgovara oko1x10 ado 3x10<ti>MHDCE/ml, poželjno oko lxl0<9>do 3xl0<9>MHDCE/ml. Oko jedan do pet ml, poželjno 2 ml, može se davati životinji, intramuskularno, subkutanozno ili intraperitonealno. Jedan do deset ml, poželjno 2 do 5 ml, može biti dato oralno ili intranazalno.
Sledeći primeri imaju nameru da dalje prikažu pronalazak bez ograničavanja negovog obima.
PRIMERI
PRIPREMANJE KOMPOZICIJE BAKTERIJSKE VAKCINE
MVCOPLASMA HVOPNEUMONIAE
OPIS VIRUSNIH ŠTOKOVA.Mycoplasma hyopneumoniaemože biti dobijena iz brojnih lako dostupnih izvora. U jednom izvođenju, može biti korišćen soj P-5722-3Mycoplasma hyopneumoniae.Kultura je dobijena od C. Armstrong, Purdue Universitv, West Lafavette, Indiana. Posle prijema kultureMycoplasma hyopnettmoniae,bila je dodata uMycoplasma hyopneumoniaebuljon, sedam puta da bi se ustanovilo originalno seme.
ĆELIJSKA KULTURA.Mycoplasma hyopneumoniaeje rasla u medijumu koji sardrži Bacto PPLO prah, ekstrakt kvasca, glukozu, L-cistein hidrohlorid, ampicilin, talijum acetat, fenol crveno, sredstvo protiv stvarnja pene, normalni sterilni svinjski serum i vodu u periodu od 18-144 sati. Za inaktivaciju, dodat je binarni etilenimin (BEI) direktno pri proizvodnji
kulture u fermentacioni sud. pH je prilagođen na 7.4 i zatim je sakupljena prema konvencionalnim postupcima da bi se obezbedila bakterija
Mycoplasma hyopneumoniae.
PRIPREMANJE KOMPOZICIJE VAKCINE
Kompozicija konzervanasa i korišćene proporcije. Sakupljena bakterija je konzervisana dodavanjem timerozala i tetranatrijumove soli etilen diamin tetra sirćetne kiseline (EDTA) ne više od 0,01% i 0.07% respektivno. U medijumu za rast prisutan je ampicilin U.S.P. sa 0.250 grama/litri. Koncentracija zaostalog ampicilina će varirati u krajnjem proivodu u zavisnosti od zapremine sakupljene tečnosti, tako da koncentracija zaostalog ampicilina u završnom proizvodu ne prelazi 30 ug/ml.
STANDARDIZACIJA PROIZVODA. KoncentratMycoplasma- eje kvantifikovan sa DNA fluorometriskim testom.
Smeša metaboličkog ulja koja se sastoji od jednog ili više terpenskih ugljovodonika i polioksietilen-polioksipropilen blok kopolimera,na pr. ysmeša Skvalan/Pluronic L121, je pripremljena rastvaranjem 10 g natrijum hlorida, 2.72 dibaznog natrijum fosfata, 0.25 monobaznog natrijum fosfata, 20 ml Pluronic L121 (BASF Corporation), 40 ml skvalana (Kodak), 3.2 ml Tween 80 i 900 ml prečišćene vode, do 1000 ml. Posle mešanja, sastojci su bili u autoklavu. Smeša je zatim homogenizirana dok nije nastala stabilna emulzija. Može biti dodat formalin do krajnje koncentracije od 0.2% ili može biti dodat timerozal do krajnje koncentracije od 1:10,000.
SPAJANJE JEDINICA DA BI SE NAPRAVILA SERIJA.
Zadovoljavajući koncentratiMycoplasma hyopneumoniaesu aseptički spojeni sa pomoćnim sredstvima, konzervansima i razblaživačima u sterilnim posudama snabdevenim sa mešalicom i mešanim ne manje od 30 minuta.
MHDCE=MycopIasma hyopneumoniaeDNA ćelijski ekvivalenti
POSTUPAK I TEHNIKE PUNJENJA I ZATAPANJA KRAJNJIH
POSUDA. Proizvod može biti ceo proceđen kroz sterilni filter od 200-500 mikrona i punjen pod uslovima navedenim u 9 CRF 114.6 u sterilne krajnje posude u sobi označenoj za operaciju punjenja. Staklene ili plastične posude su zatvorene sa gumenim zapušačem i savijanjem zatvorene sa aluminijumskim zatvaračem. Svaka doza od 2.0 ml će sadržati ne manje od 2 x 109Mycoplasma hyopneumoniaeDNA ćelijskih ekvivalenata.
TESTIRANJE AKTIVNOSTI. Uzorci glavne mase ili iz krajnjih posuda završnog proivoda mogu biti testirani na aktivnost na sledeći način: Proba postupka za testiranje aktivnosti: Korišćeni su ICR ženski miševi, šest do sedam nedelja stari, jedne konsignacije od Harlan Sprague Dawley-a ili drugog prihvatljivog snabdevača. Minimum od 20 miševa je potreban za imunizaciju sa svakom nepoznatom i referentnom bakterijom. Minimum od pet miševa je uzet kao kontrola bez ubrizgavanja. Testirane i referentne bakterije su pojedinačno potpuno promešane. Sterilni, špricevi za jednu upotrebu, za odmeravanje 25, sa iglama od 5/8 inča su korišćeni za ubrizgavanje miševima subkutanozno u region prepona 1/10 (jedne desetine) doze životinje domaćina (0.2 ml). Svaka grupa miševa je smeštena u zasebnu jedinicu i omogućen joj je slobodan prilaz hrani i vodi u toku 14 dana. Svaki miš je zatim anesteziran. Anestezirani miševi su smešteni na leđa. Koristeći jednu ruku, glava je držana dole i jedna prednja noga je ispružena u odnosu na telo. Korišćenjem skalpela, napravljen je rez na koži približno dugačak<l>Ainča, između ispružene prednje noge i toraksa, prekidajući ručnu arteriju. Korišćenjem šprice od 3.0 ml, bez igle, sakupljena je krv koja je curila iz reza. Krv je ispuštena u obeleženu epruvetu za testiranje i omogućeno je da se zgruša. Epruvete sa zgrušanom krvi su centrifugirane na l,000xg da bi se odvojio serum od ugruška. Individulani serumi su čuvani na -20°C ili na još hladnijem do testiranja.
SEROLOŠKO TESTIRANJE: ELISA postupak je korišćen za merenje odgovora antitela miša na referentnu i/ili nepoznatu bakteriju. ELISA Postupak je izvođen korišćenjem jednokratnih Immulon II mikrotitarskih ploča sa ravnim dnom (Disposable Immulon II Flat-Bottom Microtiter Plates) od Dynatech-a ili ekvivalentnih i čitača za ELISA ploča.
REAGENSIZATEST:
Rastvor soli puferisan sa fosfatima-Tvveen (PBST-Phosphate Buffered Saline-Tween) (pH podešen na 7.2 do 7.4 sa 5M NaOH ili 5M HC1).
Puferisani rastvor soli i glicina (GBS-Glycine Buffered Saline) (pH podešen na 9.5 do 9.7 sa 5M NaOH ili 5M HC1).
Serum za pozitivnu kontrolu: Serum za pozitivnu kontrolu su objedinjeni serumi iz miševa vakcinisanih sa bakterijomMycoplasma hyopneumoniae.
Koniugat i supstrat
Afinitetno prečišćen, anti-miŠ IgG peroksidazno-obeležen konjugat je dobijen iz Kirkegaard and Perry Laboratories, Inc. (Kataloški br. 074-1802). Postupak za određivanje optimalnog razblaženja konjugata je detaljno opisan dole. Rastvori supstrata peroksidaze (ABTS) su dobijeni od Kirkegaard and Perry, Inc. Titracija konjugata: Imulon II ploča sa ravnim dnom je prevučena sa 100 ul po otvoru 20 ug po mlMycoplasma hyopneumoniaecelim ćelijski antigenom razblaženim u 10 mM GBS. Ploča je inkubirana ne manje od jednog sata na 37°C+2°C i premeštena je na 2-7°C za ne manje od 18 sati i ne više od jedne nedelje. Pre korišćena ploča je isprana tri puta sa PBST, sa vremenom od jednog minuta za natapanje između svakog ispiranja i lupkana je da se osuši. Pripremljeno je razblaženje seruma za pozitivnu kontrolu 1:40 u PBST i razblaženi pozitivni serum (100 ul/otvoru) je dodat u jednu polovinu otvora na ploči. PBST je dodat u drugu polovinu otvora. Ploča je inkubirana u toku jednog sata na sobnoj temperaturi, posle čega je ploča isprana tri puta. Konjugovani serum je serijski razblažen sa PBST dvostruko, polazeći od 1:100 razblaženjem i završavanjem sa razblaženjem 1:10,240. 100 ul od svakog razblaženja konjugata je dodato u četiri otvora pozitivnog seruma i četiri otvora PBST-a i omogućeno je da reaguju pola sata na sobnoj temperaturi. Ploče su isprane četiri puta i dodato je 100 ul rastvora supstrata peroksidaze (abts) u otvore. Ploča je čitana na dvojnoj talasnoj dužini podešenoj na T A,=450. Razblaženje konjugata je izabrano da daje očitavanja od 0.850 do 1.050 za serum pozitivne kontrole kada se vrednost PBST kontrole oduzme od vrednosti seruma pozitivne kontrole.
Testantigen:
AntigenMycoplasma hyopneumoniae jeceli ćelijski preparat i dobijen je od Fort Dodge Ajnimal Health.
ELISA je izveden na sledeći način: Korišćene su Immulon II mikrotitarske ploče sa ravnim dnom (Dvnatech Immulon II Flat-Bottom Microtiter Plates). Jedna fiola liofiliziranog antigena cele ćelijaMvcoplasma hyopneumoniae jerekonstruisana do deset ml sa puferisanim rastvorom soli i glicina (GBS). Koncentracija rekonstruisanogMycoplasmaproteina je 20 jal/ml. 100 jal (2 ul) razblaženog antigena je zatim dodato u sve otvore na ploči. Ploča je inkubirana na 37°C ± 2°C ne manje od jednog sata i zatim je premeštena na 2-7°C za najmanje 18 sati i maksimalno jednu nedelju. Ploče su isprane tri puta sa PBST, sa natapanjem od jednog minuta između svakog ispiranja, i zatim lupkanjem da se osuše. Serumi su razblaženi 1:40 u PBST. Serum pozitivne kontrole će biti uključen u kvadriplikatu na svakoj ploči. Zapremina uzorka po otvoru je 100 ul. Uzorci serije testiranog seruma i uzorci referentnog seruma će biti testirani u duplikatu na istoj ploči. Ploče su inkubirane u toku jednog sata na sobnoj temperaturi i isprane su tri puta sa PBST. Dodato je 100 ul anti-miš IgG peroksidazno-obeleženog konjugata (Kirkegaard and Perry), razblaženog u PBST u sve otvore i otvori su inkubirani u toku 30 minuta na sobnoj temperaturi. Ploče su isprane četiri puta sa PBST-om. U sve otvore dodato je 100 ul rastvora supstrata peroksidaze (ABTS) i ploče su inkubirane dok serum za pozitivnu kontrolu ne dostigne OD405(450) 0.850 do 1.050 kada je u mašini PBST iz kontrolnog otvora. Ploče su čitane naspram PBST otvora. Da bi test bio validan, serum miševa kojima je ubrizgana referentna bakterija mora proizvesti minimum prosečne vrednosti od 0.500 i serum nevakcinisanih kontrolnih miša ne srne preći maksimalnu prosečnu vrednost od 0.100. Ili, razlika između prosečne vrednosti seruma miševa kojima je ubrizgana referentna bakterija i seruma nevakcinisanih kontrolnih miševa mora biti veća nego ili jednaka 0.400.
Srednje vrednosti za serijsko vakcinisanje, referentno vakcinisanje i kontrole je izračunato i procenjeno na sledeći način: Da bi se smatrao zadovljavajućim, bakterijski test mora pokazivati prošek srednje vrednosti optičke gustine jednak ili veći od referentne. Ili, korišćenjem Studentovog T-testa sa jednim krajem, bakterijski test ne mora značajno biti (p<0.05 nivo pouzdanosti) niži nego za referentnu bakteriju. Bilo koja izračunata T-vrednost jednaka, ili veća od 1.686 će pokazivati značajnu razliku između referentne i testirane bakterije, i prouzrokovaće da bakterijski test bude odbačen. Bilo koja izračunata T-vrednost manja od 1.686 će ukazivati na zadovoljavajući serijal. Bilo koji bakterijski test određen testom da je nezadovoljavajući iz bilo kog razloga nevezanog sa efikasnošću proizvoda je ponovo testiran i inicijalni test se smatra nevažećim.
PRIMER 2
TEST VAKCINA:
Vakcina za testiranje je pripremljena prema postupcima opisanim u primeru 1 korišćenjem 5% smeše mataboličnog ulja koje se sastoji od jednog ili više terpenskih ugljovodonika i polioksietilen-polioksipropilen blok kopolimera (Skvalan/Pluronic L121 smeša) i 0.2% polimera akrilne kiselina (Carbopol) kao pomoćnog sredstva i 2xl0<9>M. hyopneumoniaeDNA ćelijskog ekvivalenta (MHDCE) po dozi.
PRIMER 3
Ova studija je osmišljena da pokaže trajanje imuniteta (DOI) u toku četiri meseca kod svinja indukovanog vakcinacijom sa jednom dozom vakcine Primera 2 u trećoj nedelji starosti.
Dva odvojena eksperimenta na životinjama su izvedena za ovu studiju. Sve svinje u oba eksperimenta su bile sero-negativne (titar antitela<10) u vreme vakcinacije, ukazujući da su životinje bile osetljive naMycoplasma hyopneumoniae.Sve svinje u kontrolnoj grupi ostale su sero-negativne pre izazivanja. Ovo ukazuje daje imuni odgovor kod vakcinisanih svinja poticao od vakcine, a ne zbog izlaganja okolini.
U prvom eksperimentu, vakcina prema primeru 2 je procenjena zajedno sa komercijalno dostupnim proizvodom, Ingelvac M. hypo® proizvedenim od Boehringer Ingelheim (BI), izazivanjem sa visokim nivoom virulentneM hyopneumoniae(.4xl0<6>organizma). Dvadeset dve (22) svinje starosti od 18-21 dana su vakcinisane sa vakcinom iz primera 2 intramuskularno (IM) i osam (8) svinja sa Ingelvac M. hyo®[serija 271 032]. Dvadeset dve (22) svinje su služile kao izazivana kontrola i 10 svinja kao ne-izazivana kontrola. Svinje u vakcinisanoj i izazvanoj kontrolnoj grupi su izazivane sa virulentnim M. hvopneumoniae četiri meseca posle vakcinacije. Svinje vakcinisane sa vakcinom iz primera 2 imale su prosečno plućne lezije 15.9% a izazivane kontrolne svinje imale su u prošeku plućne lezije 19.6%. Prošek plućnih lezija u vakcinisanoj grupi sa vakcinom iz primera 2 je bio manji nego kod kontrolnih i ako su snažne svinje bile izazivane sa višom dozom nego što je preporučena od strane Univerziteta države Ajova (Iowa State University(ISU)), međutim razlika nije bila značajna (p=0.19). Prema tome, kada je komercijalni proizvod, Ingelvac M hyo®, procenjivan u istoj grupi životinja izazivanjem sa istom dozom, takođe je primećen sličan nivo plućnih lezija (14.6%). Takođe nije postojala značajna razlika između grupe vakcinisane sa Ingelvac M. hyo® i kontrolne grupe (p=0.27) i između grupe vakcinisane sa Inglevac M. hypo® i grupe vakcinisane sa vakcinom iz primera 2.
U drugom eksperimentu, vakcina iz primera 2 je procenjena izazivanjem sa virulentomM. hyopneumoniaepri nivou sugerisanom od ISU (1.0xl0<6>organizama) četiri meseca posle vakcinacije. Dvadeset tri (23) svinje su vakcinisane sa jednom dozom vakcine pri starosti od 21 dan, 25 svinja je služilo kao izazivana kontrola i 7 svinja kao neizazivana kontrola. Svinje u vakcinisanoj i izazvanoj kontrolnoj grupi su izazivane sa virulentnomM. hyopneumoniaečetiri meseca posle vakcinacije. Kontrolna grupa je imala prosečno plućne lezije 10.4% a vakcinisana grupa je imala prosečno plućne lezije 5.5%. Bila je značajna razlika između vakcinisane grupe i kontrolne grupe (p=0.031). Ovo ukazuje da je vakcina iz primera 2 efikasna u stimulaciji zaštitinog imuniteta, koji može trajati četiri meseca posle vakcinacije jednom dozom kod svinja starih tri nedelje.
Kada su sakupljeni i analizirani podaci oba eksperimenta koji se odnose na vakcinu iz primera 2, prosečne plućne lezije vakcinisane grupe su značajno niže nego kontrolne grupe.
U zaključku, vakcina iz primera 2 izaziva zaštitni imunitet protiv izazivanja sa virulentnomM. hyopneumoniaečetiri meseca posle vakcinacije sa jednom dozom kod svinja u trećoj nedelji starosti.
EKSPERIMENTALNIPODACI
Dva odvojena eksperimenta su izvedena u ovoj studiji. U prvom eksperimentu, šezdeset sedam (67) svinja je dodeljeno u četiri grupe korišćenjem Microsoft Exel programa za nasumičnu raspodelu. Dvadeset četiri (24) svinje starosti od 18-21 dana su vakcinisane sa jednom dozom vakcine pripremljenom prema primeru 2 intramuskularno (EM). Dvadeset četiri (24) svinje su služile kao izazivana kontrola i deset (10) svinja kao ne-izazivana kontrola. Devet svinja je vakcinisano IM sa komercijalnim proizvodima, Inglevac M. hyo®, [serija 271 032, proizvedenim od Boehringer Ingelheim (BI)], po navedenom uputstvu. Pet svinja (dve svinje vakcinisane sa vakcinom iz primera 2, jedna sa BI vakcinom i dve kontrole) su uginule u toku perioda vakcinacije iz razloga koji nisu u vezi sa vakcinacijom. Preostale svinje u vakcinisanim grupama i izazivanoj kontrolnoj grupi su izazivane sa 14 ml virulentneM. hyopneumoniae(1.4 xl0<6>organizama) četvrtog meseca posle vakcinacije. Svinje u sve četiri grupe su eutanizirane 30 dana posle izazivanja i procenjene su plućne lezije za svaku svinju u eksperimentu.
U drugom eksperimentu, dvadeset pet (25) svinja starosti 21 dan je vakcinisano IM sa jednom dozom vakcine pripremljene prema primeru 2, Dvadeset pet (25) svinja je služilo kao izazivane kontrole i 10 svinja kao neizazivane kontrole. Dve svinje su uginule iz razloga koji nisu u vezi sa vakcinacijom i jedna svinja je greškom prodata u toku perioda vakcinacije. Preostale svinje u vakcinisanoj i izazivanoj kontrolnoj grupi su izazivani sa 10 ml virulentnogM. hyopneumoniae(1.0xl06 organizama) četiri meseca posle vakcinacije. Dve svinje su umrle u toku posmatranja posle izazivanja iz razloga koji nisu u vezi sa vakcinacijom/izazivanjem. Preostale svinje u sve tri grupe su eutanizirane 30 dana posle izazivanja i procenjene su plućne lezije za svaku svinju u eksperimentu.
Vakcinaciia:
Svakoj svinji u vakcinisanoj grupi je data jedna doza od 2 ml testirane vakcine IM sa strane u vrat.
Izazivanjei autopsija:
VirulentniM. hyopneumoniaeštok za izazivanje, smrznuti (-70°C) homogenat pluća je pripremila Dr. Eileen Thacker sa Univerziteta države Ajova (ISU). Rastvor za izazivanje je potvrđeno da je čist i daje sadržao približno IO<7>M. hyopneumoniaeorganizama po ml. Preporučena doza za izazivanje je 10 ml 1:100 razblaženog štoka (tj. 1.0x 106 organizma).
Svinje u vakcinisanim i izazivanim kontrolnim grupama u prvom eksperimentu su izazavane sa 14 ml 1:100 razblaženog štoka, (tj. 1.4 xl0<6>organizama). Svinje u drugom ispitivanju su izazvane sa 10 ml 1:100 razblaženog štoka (tj. 1.0x 106 organizama) kao što je preporučeno.
Na dan izazivanja, homogenat je brzo otopljen u toploj vodi i razblažen prema preporukama ISU korišćenjem sterilnog medij uma za rastM hyopneumoniae.Svinjama je dat sedativ, smeša Xylazine-Ketamine-Telazol™ koja se sastoji od 50 mg/ml Xylazine-a, 50 mg/ml Ketamine-a i 100 mg/ml Telazol-a. Anestetička smeša je data IM pri 0.01-0.02 ml/lb telesne težine. Svakoj svinji đato je pojedinačno 14 ml (prvi eksperiment) ili 10 ml doze (drugi eksperiment) materijala za izazivanje, intra-trahealno. Da bi se osiguralo ispravno postavljanje igle, vazduh je izvučen iz šprica pre davanja doze za izazivanje. Nevakcinisane neizazivane kontrolne svinje su zadržane u odvojenim sobama i nisu izazivane.
Tridesetog dana posle izazivanja (DPI), sve svinje su eutanizirane. Pluća su uklonjena i većina plućnih lezija je procenjena individualno bez znanja o testiranoj grupi.
Sakupljanje uzoraka i testiranje
Uzorci krvi su sakupljeni od svih svinja na dan vakcinacije (0 DPV), jedan mesec posle vakcinacije (1 MPV), 4 MPV/0 DPI i 30 DPI zbog serumskih antitela protivM. hyopneumoniaekoja su detektovana sa kompetativnim ELISA kit-om (napravljenim od DAKO Co.). Pre nego što su testirani, uzorci seruma su čuvani na -20°C.
Analizepodataka
Procene plućnih lezija su poređene između vakcinisanih i nevakcinisanih grupa analizom varijanse (ANOVA). Plućne procene su transformisane sa arcsin-om da bi se poboljšala raspodela ostataka.
REZULTATII DISKUSIJA
Serolo<g>iia: Sve svinje u oba eksperimenta su testirane na serumska antitela protivM. hyopneumoniaekomercijalnim kompetitivnim ELISA kitom, korišćenjem 1:10 serumskog razblaženja za sva testiranja. Sve svinje su bile seronegativne (titar antitela <10) u vreme vakcinacije, ukazujući da su životinje bile osetljive naM. hyopneumoniae.Sve svinje u kontrolnoj grupi su ostale seronegativne pre izazivanja. Ovo ukazuje da imuni odgovor kod vakcinisanih svinja je poticao od vakcine, a ne zbog izlaganja okolini. Sve svinje u vakcinisanoj grupi i većina svinja u izazivanoj kontrolnoj grupi (18 od 22 svinje u prvom eksperimentu i 15 od 25 u drugom eksperimentu) sero-konvertovaneM. hyopneumoniaeposle izazivanja dok neizazivane životinje su ostale sero-negativne. Ovo ukazuje da je izazivanje biloM. hyopneumoniaespecifično. Serološki status testiranih životinja je ukratko prikazan u Tabeli 1.
Testiranje imunogenog svojstvauprvom eksperimentu:
Prvi eksperiment je izveden da se odredi da li vakcina iz primera 2 može da stimuliše jak imunitet koji može štititi naspram višeg nivoa izazivanja nego onog preporučenog od ISU četiti meseca posle vakcinacije. Ovaj eksperiment takođe upoređuje vakcinu iz primera 2 sa komercijalno dostupnom, Ingelvac M. hyo®, u sposobnosti stimulisanja zaštitnog imuniteta četiri meseca posle vakcinacije.
Dvadeset dve svinje vakcinisane sa FDAH Suvaxyn MH-One i osam svinja sa licenciranim proizvodom, Ingelvac M. hyo® serija 271,032 su izazivane sa 1.4xl0<6>organizama po svinji materijala za izazivanje (1.0xl0<6>organizama po svinji je preporučeno od ISU, videti Odeljak 5.5). Dvadeset i dve svinje su služile kao izazivane kontrole i 10 svinja kao neizazivane kontrole. Procenti plućnih lezija su ukratko dati u Tabeli 2. Svinje vakcinisane sa vakcinom prema primeru 2, imaju prosečno plućne lezije 15.9% a izazivane kontrolne svinje imaju prosečno plućne lezije 19.6%. Bilo je manje plućnih lezija u grupi vakcinisanoj sa vakcinom iz primera 2 nego kod kontrolnih čak i kada su svinje izazivane višim dozamaM. hyopneumoniae.Međutim, razlika nije bila značajna (p=0.19). Prema tome, kada je procenjivan komercijalni proizvod Ingelvac M. hyo® u istoj grupi životinja izazivanjem sa istom dozom, dobijen je sličan nivo plućni lezija (14.6%). Ne postoji značajna razlika između grupa vakcinisanih sa Ingelvac M. hyo® i kontrolne grupe (p=0.27) i između grupe vakcinisane sa Ingelvac
M. hyo® i grupe vakcinisane sa vakcinom iz primera 2 (p=0.88).
Mada je neznatno numeričko smanjenje u lezijama zabeleženo u grupi koja je primila vakcinu iz primera 2, podaci dobijeni u ovom eksperimentu sugerišu da viša doza za izazivanje (1.4 xIO<6>organizama) korišćena u ovom eksperimentu je verovatno ekstremna, čak i za imunitet svinja stimulisan sa komercijalnim Inglavec proizvodom. Ovaj nivo izazivanja verovatno nije odgovarajući za studije procene vakcinacije/izazivanja korišćenjem veličine grupe od 20-25, mada sa većom grupom moguće da bi značaj bio dokazan.
Testiranje imunogenog svojstva u drugom eksperimentu:
Svinje u vakcinisanoj i izazivanoj kontrolnoj grupi u drugom eksperimentu su procenjivane sa dozom za izazivanje (1.0xl0<6>organizama) kao što preporučuje ISU, četiri meseca posle vakcinacije da bi se pokazao četvoromesečni DOL Procenat plućnih lezija je ukratko izložen u Tabeli 3. Kontrolna grupa je imala prosečno plućnih lezija 10.4%. Vakcinisana gupa je imala prosečno plućnih lezija 5.5%. Postoji značajna razlika između vakcinisanih i kontrolnih grupa (p=0.031). Ovo ukazuje da je vakcina iz primera 2 efikasna u stimulisanju zaštitnog imuniteta, koji može trajati bar četiri meseca posle vakcinacije sa jednom dozom, kod svinja koje su stare tri nedelje.
Proceniivanie sakupljenih rezultata iz oba eksperimenta:
Dok su dva eksperimenta bila značajno različita, efekat eksperimenta na grupu nije bio značajan. Magnituda efekta grupe je bila slična između dva eksperimenta. Prema tome, efekat grupe može biti procenjivan bez obzira na eksperimant. S obzirom da analize potpunog modela pokazuju da interakcija imeđu grupe i eksperimenta nije bila značajna, ovo podržava mišljenje da je efekat grupe bio isti u oba eksperimanta i opravdava spajanje podataka iz dva eksperimenta u jednu analizu. Tako, kada su podaci koji se odnose na vakcinu primera 2 iz oba eksperimenta spojeni i varjabla transformisana arcsin-om za plućne lezije je analizirana sa grupom, a eksperiment kao nezavisna promenjiva (redukovan model), grupa je statistički značajna (p=0.013).
Primer 4
Procenjivanie dugotrajnog imuniteta izazvanog sa kompozicijom
vakcine prema pronalsku protiv virulentnog izazivanja šest meseci posle
davanja jedne doze
Korišćenjem suštinski istog postupka opisanog u primerima 1 i 2 i korišćenjem dole prikazane količine, pripremljena je test vakcina A.
KRATAK PREGLED
Trideset tri svinje od 21 dan su upisane za ovo procenjivanje. Dvadeset svinja starosti od tri nedelje je vakcinisano sa jednom dozom vakcine A intramuskularno (IM). Deset svinja je poslužilo kao nevakcinisane kontrole i tri svinje kao neizazivana kontrola okoline.
Sve svinje su bile seronegativne (titar antitela <10) u vreme vakcinacije ukazuje da su životinje bile osetljive naM. hyopneumoniae.Sve svinje u kontrolnim grupama su ostale seronegativne pre izazivanja. Ovo ukazuje da je imuni odgovor kod vakcinisanih svinja bio od vakcine, a ne zbog izlaganja okolini.
Šest meseci posle vakcinacije, 20 vakcinisanih svinja i 10 nevakcinisanih kontrolnih svinja je izazivano sa virulentnimM. hyopneumoniae(1.0xl0<6>organizama po svinji). Tri svinje su služile kao neizazivane kontrole. Vakcinisane svinje su imale u prošeku procenjene plućne lezije 3.6%, a izazivane kontrolne svinje su imale u prošeku procenjene plućne lezije 14.6%. Plućne lezije u vakcinisanoj grupi su bile značajno manje nego kontrolnim (p=0.0215).
Podaci dobijeni u ovom procenjivanju pokazuju da test vakcina A izaziva dugoročni zaštitini imunitet protiv izazivanja sa virulentnom M hvopneumoniae šest meseci posle vakcinacije sa jednom dozom.
Plan eksperimenta
Trideset tri svinje stare 21 dan su nasumično raspoređene u tri grupe (vakcinisanu grupu, izazivanu kontrolnu grupu i neizazivanu kontrolnu grupu okoline) korišćenjem Microsoft Excel programa nasumične raspodele od Iitter-a. Dvadeset svinja starosti od tri nedelje je bilo vakcinisano sa jednom dozom test vakcine A intramuskularno. Deset svinja je poslužilo kao izazivane kontrole i tri svinje kao neizazivane kontrole okoline. Svinje u vakcinisanoj grupi i izazivanoj kontroli su izazivane sa 10 ml virulentneM. hyopneumoniae(1.0xl0<6>organizama) kulturom po svinji, šest meseci posle vakcinacije. Tri nevakcinisane svinje su korišćene kao neizazivana kontrola. Izazivane svinje i neizazivane kontrole su eutanazirane 26 dana posle izazivanja i procenjene su plućne lezije kod svake svinje.
Svakoj svinji u vakcinisanoj grupi je data doza od 2 ml test vakcine IM sa strane u vrat.
Izazivanje i autopsija
Virulentni štokM. hyopneumoniae zaizazivanje, i zamrznuti (<-70°C) homogenat pluća je pripremila Dr. Eileen Thacker sa Univerziteta države Ajova (ISU). Potvrđeno je da je štok za izazivanje čist i da sadrži približno IO<7>M. hyopneumoniaeorganizama po ml.
Svinje su izazivane sa 10 ml štoka razblaženja 1:100 (tj., približno 1.0xl0<6>organizama).
Na dan izazivanja, homogenat je otopljen brzo pod toplom vodom i razblažen prema preporukama ISU korišćenjem sterilnog medijuma za rastM. hyopneumoniae.Svinjama je dat sedativ, smeša Xylazine-Ketamine-Telazol koja se sastoji od 50 mg/ml Xylazine-a, 50 mg/ml Ketamine-a i 100 mg/ml Telazol-a. Anestetička smeša je data IM pri 0.01-0.02 ml/lb telesne težine. Svakoj svinji data je pojedinačna doza 10 ml materijala za izaivanje (lxl0<6>organizama), intra-trahealno. Da bi se osiguralo ispravno postavljanje igle, vazduh je izvučen iz šprica pre davanja doze za izazivanje. Nevakcinisane neizazivane kontrolne svinje su zadržane u odvojenim sobama i nisu izazivane.
26-tog dana posle izazivanja (DPI), sve svinje su eutanazirane. Pluća su uklonjena i procenjena je većina plućnih lezija kao Što je opisano u Primeru 3.
Sakupljanjeuzorkaitestiranje
Uzorci krvi su sakupljeni od svih svinja na dan vakcinacije (0 DPV), 35 DPV, -1 DPI i 26 DPI za određivanje serumskih antitela protiv Mhyopneumoniaešto je detektovano sa kompetativnim ELISA kitom (napravljenim od DAKO Co.). Uzorci seruma su čuvani na <-20°C pre testiranja.
Analiza podataka
Procene lezija pluća su poređene između vakcinisanih i kontrola sa jednosmernim ANO VA. Procene plućnih lezija su bile transformisane sa are sin-om da bi se poboljšala raspodela ostataka. S obzirom da je normalna pretpostavka za plućne lezije dovedena u pitanje, i procene plućnih lezija i are sin transformisane procene plućnih lezija su analizirane sa Wilcoxon Rank sumarnim testom. Nivo značajnosti je podešen na p<0.05. Rezultati iz neparametarskog, Wilcoxon Rank sumarnog testa su bili korišćeni za svrhe izveštavanja.
REZULTATI IDISKUSUJA
Serologiia
Sve svinje su testirane na serumska antitela protivM. hyopneumoniaesa komercijalnim kompetirivnim ELISA kitom, korišćenjem razblaženja seruma 1:10 za sva testiranja. Uzorci sa sumljivim rezultatima testa po instrukcijama kita su tretirani kao pozitivni u analizi podataka. Sve svinje su bile sero-negativne (titar antitela <10) u vreme vakcinacije, ukazujući da su životinje bile osetljive na Mhyopneumoniae.Sve svinje u kontrolnoj grupi su ostale sero-negativne pre izazivanja. Posle vakcinacije, petnaest od dvadeset vakcinanata (15/20) su postali sero-pozitivni naM. hyopneumoniaebar jednom (uzorci sakupljeni 35 DPV i -1DPC). Ovo ukazuje daje imuni odgovor kod vakcinisanoh svinja bio usled vakcine, a ne zbog izlaganja okolini. Sve vakcinisane svinje i četiri od deset svinja u izazivanoj kontrolnoj grupi su postale seropozitivne naM. hyopneumoniaeposle izazivanja dok neizazivane životinje su ostale sero-negativne. Serološki status je ukratko prikazan u Tabeli 4.
Proceniivanie plućnih lezija
Dvadeset vakcinisanih svinja sa test vakcinom A i deset nevakcinisanih kontrolnih svinja su bile izazivane sa virulentimM. hyopneumoniae(1.0x IO<6>organizama po svinji), šest meseci posle vakcinacije. Tri svinje su služile kao neizazivane kontrole. Osam od dvadeset vakcinanata (40%) nije razvilo plućne lezije posle izazivanja dok u kontrolnoj grupi samo jedna od 10 svinja (10%) nema plućne lezije. Procenti plućnih lezija su ukratko dati u Tabeli 5. Vakcinisane svinje imaju prošek procenjenih plućnih lezija 3.6% i izazivne kontrolne svinje imaju prošek procenjenih plućnih lezija 14.6%. Plućne lezije u vakcinisanoj grupi su bili značajno manje nego u kontrolnim (p=0.0215). Kao što se može videti iz podataka rjrikazanih u tabeli 4 i 5, test vakcina A izaziva zaštitni imunitet protiv virulentneM hyopneumoniaizazivane šest meseci posle davanja jedne doze svinjama vakcinisanim u trećoj nedelji starosti.
Claims (18)
1. Kompozicija vakcine za imunizaciju životinja protiv infekcijeMycoplasma hyopneumoniae,naznačena time, što uključuje
imunizirajuću količinu bakterinaMycoplasma hyopneumoniae\smešu pomoćnih sredstava koju čine polimer akrilne kiseline i smeša metaboličnog ulja i polioksietilen-polioksipropilen blok kopolimera; i
farmaceutski prihvatljiv nosač, gde kompozicija vakcine posle jednog davanja izaziva zaštitni imunitet odMycoplasma hyopneumoniae.
2.Kompozicija vakcine prema zahtevu 1, naznačena time, što se smeša pomoćnih sredstava sastoji od polimera akrilne kiseline i smeše metaboličnog ulja koje se sastoji od jednog ili više terpenskih ugljovodonika i polioksietilen-polioksipropilen blok kopolimera u odnosu od oko 1:25 do 1:50 polimera akrilne kiseline u odnosu na smešu metabolično ulje/polioksietilen-polioksipropilen blok kopolimer.
3. Kompozicija vakcine prema zahtevu 1, naznačena time, što je smeša pomoćnih sredstava prisutna u koncentraciji od oko 1-25% v/v kompozicije vakcine.
4. Kompozicija vakcine prema zahtevu 3, naznačena time, što je polimer akrilne kiseline prisutan u koncentraciji od oko 1% v/v i smeša terpenski ugljovodonici/polioksietilen-polioksipropilen blok kopolimer je prisutna u krajnjoj koncentraciji od oko 5% do 10% v/v.
5. Kompozicija vakcine prema zahtevu 3, naznačena time, što je smeša pomoćnih sredstava prisutna u koncentraciji od oko 2%-15% v/v kompozicije vakcine.
6. Kompozicija vakcine prema zahtevu 5, naznačena time, što je smeša pomoćnih sredstava prisutna u koncentraciji od oko 5%-12% v/v kompozicije vakcine.
7. Kompozicija vakcine prema zahtevu 1, naznačena time, što je metabolično ulje skvalan ili skvalen.
8. Kompozicija vakcine prema zahtevu 6 i 7, naznačen time, što je polimer akrilne kiseline karbomer.
9. Kompozicija vakcine prema bilo kom zahtevu 1-8, naznačena time, što dalje uključuje bar jedan bakterin izabran iz grupe koju čineHaemophilus parasuis, Pasteurella multiocida, Streptococcum suis, Actionobacillus pleuropneumoniae, Bordetella bronchiseptica, Salmonella choleraesuisi bakterija leptospire.
10. Upotreba bakterinaMycoplasma hyopneumoniaeu kombinaciji sa smešom pomoćnih sredstava koju čine polimer akrilne kiseline i smeša metaboličnog ulja i polioksietilen-polioksipropilen blok kopolimera i farmaceutski prihvatljiv nosač u dobijanju kompozicije vakcine za zaštitu životinja protiv bolesti izazvanih saMycoplasma hyopneumoniae,gde kompozicija vakcine posle jednog davanja izaziva zaštitni imunitet od infekcijeMycoplasma hyopneumoniae.
11. Upotreba prema zahtevu 10, naznačen time, što je imunizirajuća količina bakterinaMycoplasma hyopneumoniaeoko 1x10<8>do 3xlOn MHDCE/ml, gde je MHDCE broj ćelijskih ekvivalenata DNKMycoplasma hyopneumoniae.
12. Upotreba prema zahtevu 11, naznačen time, što je imunizirajuća količina pomenutog bakterina oko 1x10 do 3x10 MHDCE/ml.
13. Upotreba prema zahtevu 10, naznačen time, što je kompozicija vakcine namenjena za intramuskularno, subkutanozno, intraperitonealno, aerosolno, oralno ili intranazalno davanje.
14. Upotreba prema zahtevu 10, naznačen time, što se smeša pomoćnih sredstava sastoji od polimera akrilne kiseline i smeše metaboličnih ulja koju čine jedan ili više terpenskih ugljovodonika i polioksietilen-
polioksipropilen blok kopolimera prisutnih u krajnjoj koncentraciji od oko 1-25% v/v.
15. Upotreba prema zahtevu 14, naznačen time, što je polimer akrilne kiseline smeše pomoćnih sredstava karbomer.
16. Upotreba prema zahtevu 14, naznačen time, što je metabolično ulje smeše pomoćnih sredstava terpenski ugljovodonik izabran iz grupe koju čine skvalen i skvalan.
17. Upotreba prema bilo kom od zahteva 10-16, naznačen time, što dalje kompozicija vakcine obuhvata bar jednan dodatni bakterin izabran iz grupe koju čineHaemophilus parasuis, Pasteurella multiocida, Streptococcum suis, Actionobacillus pleuropneumoniae, Bordetella bronchiseptica, Salmonella choleraesuisi bakterija leptospire.
18. Vakcina prema zahtevu 1, naznačena time, što je polimer akrilne kiseline u obliku emulzije ulja u vodi.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US25663700P | 2000-12-19 | 2000-12-19 | |
| PCT/US2001/047865 WO2002049666A2 (en) | 2000-12-19 | 2001-12-11 | Mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| YU49303A YU49303A (sh) | 2006-08-17 |
| RS51536B true RS51536B (sr) | 2011-06-30 |
Family
ID=22972978
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| YUP-493/03A RS51536B (sr) | 2000-12-19 | 2001-12-11 | Poboljšana bakterijska vakcina mycoplasma hyopneumoniae |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US20020131980A1 (sr) |
| EP (1) | EP1343525B1 (sr) |
| JP (2) | JP5074656B2 (sr) |
| KR (1) | KR100874119B1 (sr) |
| CN (1) | CN1296095C (sr) |
| AR (1) | AR033410A1 (sr) |
| AT (1) | ATE359813T1 (sr) |
| AU (2) | AU2002228993B2 (sr) |
| BG (1) | BG66213B1 (sr) |
| BR (1) | BRPI0116249B1 (sr) |
| CY (1) | CY1106669T1 (sr) |
| CZ (1) | CZ307075B6 (sr) |
| DE (1) | DE60127994T2 (sr) |
| DK (1) | DK1343525T3 (sr) |
| ES (1) | ES2283452T3 (sr) |
| HR (1) | HRP20030585B1 (sr) |
| HU (1) | HU227431B1 (sr) |
| ME (1) | ME00570B (sr) |
| MX (1) | MXPA03005357A (sr) |
| MY (1) | MY129765A (sr) |
| NZ (1) | NZ526904A (sr) |
| PL (1) | PL211174B1 (sr) |
| PT (1) | PT1343525E (sr) |
| RS (1) | RS51536B (sr) |
| TW (1) | TWI308872B (sr) |
| WO (1) | WO2002049666A2 (sr) |
| ZA (1) | ZA200305545B (sr) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MY129765A (en) * | 2000-12-19 | 2007-04-30 | Wyeth Corp | Improved mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
| US7018638B2 (en) * | 2000-12-19 | 2006-03-28 | Wyeth | Mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
| GB0400264D0 (en) * | 2004-01-07 | 2004-02-11 | Polytherics Ltd | Complexes |
| US7700285B1 (en) | 2005-12-29 | 2010-04-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | PCV2 immunogenic compositions and methods of producing such compositions |
| UA95602C2 (ru) | 2004-12-30 | 2011-08-25 | Берингер Ингельхейм Ветмедика, Инк. | Иммуногенная композиция цвс2 и способы приготовления такой композиции |
| US7833707B2 (en) | 2004-12-30 | 2010-11-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Methods of overexpression and recovery of porcine circovirus type 2 ORF2 |
| US8834891B2 (en) | 2005-03-14 | 2014-09-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Immunogenic compositions comprising Lawsonia intracellularis |
| MX338626B (es) | 2005-12-29 | 2016-04-26 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Uso de una composicion inmunogenica de pcv2 para producir los sintomas clinicos en cerdos. |
| EP1968630B1 (en) | 2005-12-29 | 2018-01-24 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Multivalent pcv2 immunogenic compositions |
| EP2859900A1 (en) | 2006-12-11 | 2015-04-15 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Effective method of treatment of porcine circovirus and lawsonia intracellularis infections |
| JP5200223B2 (ja) | 2006-12-15 | 2013-06-05 | ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ インコーポレイテッド | Ｐｃｖ２抗原によるブタの処置 |
| EP1941903A1 (en) | 2007-01-03 | 2008-07-09 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Prophylaxis and treatment of PRDC |
| EP1958644A1 (en) | 2007-02-13 | 2008-08-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Prevention and treatment of sub-clinical pcvd |
| US7829274B2 (en) | 2007-09-04 | 2010-11-09 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Reduction of concomitant infections in pigs by the use of PCV2 antigen |
| UA98812C2 (ru) | 2007-11-06 | 2012-06-25 | Вайет Ллк | Авирулентная активированная живая вакцина mycoplasma hyopneumoniae |
| KR20100113582A (ko) | 2008-01-23 | 2010-10-21 | 베링거잉겔하임베트메디카인코퍼레이티드 | Ｐｃｖ2 마이코플라즈마 히오뉴모니에 면역원성 조성물 및 당해 조성물의 생산 방법 |
| US8444989B1 (en) * | 2008-04-18 | 2013-05-21 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | One dose vaccination against mycoplasma infections of pigs |
| NZ590010A (en) * | 2008-06-25 | 2013-01-25 | Braasch Biotech Llc | Compositions and methods treating growth hormone deficiency and/or an insulin-like growth factor 1 deficiency with somatostatin and an adjuvant |
| WO2010132932A1 (en) * | 2009-05-19 | 2010-11-25 | Bioproperties Pty Ltd | A temperature sensitive vaccine strain of mycoplasma hyopneumoniae and uses thereof |
| KR101795524B1 (ko) | 2009-06-04 | 2017-11-08 | 고쿠리츠칸센쇼켄쿠죠 | 마이코플라즈마 감염증용 백신 |
| AR078253A1 (es) | 2009-09-02 | 2011-10-26 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Metodos para reducir la actividad antivirica en composiciones pcv-2 y composiciones pcv-2 con mejor inmunogenicidad |
| UA107940C2 (en) * | 2009-09-10 | 2015-03-10 | Merial Ltd | The vaccine composition that includes the saponin-containing adjuvant |
| EP2563389B1 (en) | 2010-04-30 | 2015-07-08 | Temasek Life Sciences Laboratory Limited | Universal vaccine against h5n1 lineages |
| WO2013149017A1 (en) * | 2012-03-28 | 2013-10-03 | Kansas State University Research Foundation | Vaccine adjuvant |
| US9120859B2 (en) | 2012-04-04 | 2015-09-01 | Zoetis Services Llc | Mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
| UA114504C2 (uk) | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv, mycoplasma hyopneumoniae та prrs |
| UA114503C2 (uk) | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv та mycoplasma hyopneumoniae |
| CN103623400B (zh) * | 2012-08-24 | 2016-08-17 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 抗猪支原体肺炎、传染性胸膜肺炎疫苗组合物及制备方法 |
| SG11201505086QA (en) * | 2012-12-28 | 2015-07-30 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Immunogenic composition comprising mycoplasma antigens |
| PT2938747T (pt) | 2012-12-28 | 2019-08-01 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Método de preparação de uma vacina de micoplasma |
| CN104338128B (zh) * | 2013-07-31 | 2017-09-05 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 一种疫苗组合物及其制备方法和应用 |
| US9505808B2 (en) | 2013-10-02 | 2016-11-29 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | PCV2 ORF2 protein variant and virus like particles composed thereof |
| EP3454893A4 (en) * | 2016-05-11 | 2020-01-01 | Phibro Animal Health Corporation | A composition comprising antigens and a mucosal adjuvant and a method for using |
| EP3720489A1 (en) * | 2017-12-04 | 2020-10-14 | Intervet International B.V. | Canine lyme disease vaccine |
| CN108324941A (zh) * | 2018-04-03 | 2018-07-27 | 林淑卿 | 猪疾病疫苗用佐剂及其制备方法 |
| CN117100851A (zh) * | 2023-10-23 | 2023-11-24 | 成都依思康生物科技有限公司 | 一种佐剂、疫苗组合物及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2909462A (en) | 1955-12-08 | 1959-10-20 | Bristol Myers Co | Acrylic acid polymer laxative compositions |
| US3790665A (en) | 1968-02-23 | 1974-02-05 | Haver Lockhart Labor Inc | Injectable adjuvant,method of preparing same and compositions including such adjuvant |
| US4606918A (en) | 1983-08-22 | 1986-08-19 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants |
| JPH0832637B2 (ja) | 1985-02-14 | 1996-03-29 | アクゾ・エヌ・ヴエー | 合成免疫原 |
| ES2052685T3 (es) | 1987-03-17 | 1994-07-16 | Akzo Nv | Metodo para producir un adyuvante libre. |
| NZ226811A (en) * | 1987-11-03 | 1991-06-25 | Syntex Inc | Adjuvant emulsion comprising a glycopeptide and non-toxic tetra-polyol or pop-poe block copolymer wherein oily particle size is less than 800am |
| US5240706A (en) | 1989-04-07 | 1993-08-31 | Ml Technology Ventures, L.P. | Intranasal administration of Mycoplasma hyopneumoniae antigen |
| US6113916A (en) * | 1990-05-29 | 2000-09-05 | American Cyanamid Company | Method of enhancing cell mediated immune responses |
| CA2082155C (en) | 1990-05-29 | 2008-04-15 | Krishnaswamy I. Dayalu | Swine pneumonia vaccine and method of preparation |
| US5695769A (en) * | 1990-06-13 | 1997-12-09 | Pfizer Inc. | Pasteurella multocida toxoid vaccines |
| US5565205A (en) * | 1990-08-16 | 1996-10-15 | Solvay Animal Health, Inc. | Inactivated Mycoplasma hypopneumoniae bacterin and method of use thereof |
| EP0669971B1 (en) | 1991-11-15 | 2003-03-19 | Pfizer Inc. | Method of producing gram-negative bacterial vaccines |
| US5338543A (en) | 1992-02-27 | 1994-08-16 | Ambico, Inc. | Thimerosal inactivated mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
| US5534256A (en) * | 1992-07-02 | 1996-07-09 | University Of Saskatchewan | Haemophilus somnus outer membrane protein extract enriched with iron-regulated proteins |
| JP3265095B2 (ja) * | 1993-11-19 | 2002-03-11 | 本田技研工業株式会社 | キャニスタ |
| PT759780E (pt) * | 1994-05-10 | 2001-01-31 | American Home Prod | Vacina melhorada de vsrb vivo modificado |
| US5820869A (en) * | 1995-06-07 | 1998-10-13 | American Home Products Corporation | Recombinant raccoon pox viruses and their use as an effective vaccine against feline immunodeficiency virus infection |
| DE19601754A1 (de) * | 1996-01-19 | 1997-07-24 | Hoechst Ag | Dictyocaulus viviparus Antigen zur Diagnose des Lungenwurmbefalls und zur Vakzinierung |
| US5846735A (en) * | 1996-04-18 | 1998-12-08 | University Of Iowa Research Foundation | Hepatitis C virus Fc-binding function |
| EP0948625B1 (en) * | 1996-12-20 | 2011-01-26 | The Board Of Regents, The University Of Texas System | Uspa1 and uspa2 antigens of moraxella catarrhalis |
| FR2775601B1 (fr) * | 1998-03-03 | 2001-09-21 | Merial Sas | Vaccins vivants recombines et adjuves |
| US6342231B1 (en) * | 1998-07-01 | 2002-01-29 | Akzo Nobel N.V. | Haemophilus parasuis vaccine and diagnostic |
| US6632439B2 (en) * | 1999-09-29 | 2003-10-14 | Novartis Animal Health, Inc. | Fusobacterium necrophorum vaccine and method for making such vaccine |
| US6585981B1 (en) | 2000-07-27 | 2003-07-01 | Regents Of The University Of Minnesota | Temperature-sensitive live vaccine for Mycoplasma hyopneumoniae |
| MY129765A (en) * | 2000-12-19 | 2007-04-30 | Wyeth Corp | Improved mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
| US7018638B2 (en) * | 2000-12-19 | 2006-03-28 | Wyeth | Mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
| WO2003003941A2 (en) * | 2001-07-02 | 2003-01-16 | Pfizer Products Inc. | One dose vaccination with mycoplasma hyopneumoniae |
| EP1480619B1 (en) * | 2002-03-07 | 2013-08-07 | Biocompatibles UK Limited | Drug carriers comprising amphiphilic block copolymers |
| ITMI20030269A1 (it) * | 2003-02-14 | 2004-08-15 | Advance Holdings Ltd | Sale di cetilpiridino di un agente antiinfiammatorio |
| US8052762B1 (en) * | 2010-09-02 | 2011-11-08 | Kelly Van Gogh, LLC | Compositions for dyeing keratin-containing fibers |
-
2001
- 2001-11-27 MY MYPI20015418A patent/MY129765A/en unknown
- 2001-12-11 CZ CZ2003-1721A patent/CZ307075B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-12-11 HU HU0400687A patent/HU227431B1/hu unknown
- 2001-12-11 WO PCT/US2001/047865 patent/WO2002049666A2/en not_active Ceased
- 2001-12-11 PT PT01990123T patent/PT1343525E/pt unknown
- 2001-12-11 KR KR1020037008293A patent/KR100874119B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-11 DE DE60127994T patent/DE60127994T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-11 MX MXPA03005357A patent/MXPA03005357A/es active IP Right Grant
- 2001-12-11 PL PL363220A patent/PL211174B1/pl unknown
- 2001-12-11 ME MEP-2008-859A patent/ME00570B/me unknown
- 2001-12-11 CN CNB018226345A patent/CN1296095C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-11 AU AU2002228993A patent/AU2002228993B2/en not_active Expired
- 2001-12-11 EP EP01990123A patent/EP1343525B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-11 HR HR20030585A patent/HRP20030585B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-12-11 BR BRPI0116249A patent/BRPI0116249B1/pt active IP Right Grant
- 2001-12-11 AT AT01990123T patent/ATE359813T1/de active
- 2001-12-11 NZ NZ526904A patent/NZ526904A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-12-11 DK DK01990123T patent/DK1343525T3/da active
- 2001-12-11 JP JP2002551004A patent/JP5074656B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-11 ES ES01990123T patent/ES2283452T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-11 AU AU2899302A patent/AU2899302A/xx active Pending
- 2001-12-11 RS YUP-493/03A patent/RS51536B/sr unknown
- 2001-12-14 TW TW090131039A patent/TWI308872B/zh not_active IP Right Cessation
- 2001-12-18 AR ARP010105861A patent/AR033410A1/es not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-01-08 US US10/039,383 patent/US20020131980A1/en not_active Abandoned
-
2003
- 2003-06-11 BG BG107898A patent/BG66213B1/bg unknown
- 2003-07-17 ZA ZA200305545A patent/ZA200305545B/en unknown
-
2006
- 2006-08-21 US US11/507,231 patent/US7666439B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-06-21 CY CY20071100827T patent/CY1106669T1/el unknown
-
2008
- 2008-11-13 JP JP2008291001A patent/JP2009073855A/ja active Pending
-
2010
- 2010-01-22 US US12/692,275 patent/US8187588B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-04-27 US US13/458,541 patent/US9238065B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RS51536B (sr) | Poboljšana bakterijska vakcina mycoplasma hyopneumoniae | |
| RS54390B1 (sr) | Kombinovana vakcina protiv mycoplasma hyopneumoniae i svinjskog cirkovirusa | |
| HK1056513B (en) | Improved i mycoplasma hyopneumoniae /i bacterin vaccine | |
| HK1111103B (en) | Combined vaccine against mycoplasma hyopneumoniae and porcine circovirs |