RS52710B - Lečenje poremećaja hrskavice sa fgf-18 - Google Patents

Abstract

FGF-18 jedinjenje za upotrebu u terapiji poremećaja hrskavice naznačeno time da to FGF-18 jedinjenje treba da se daje najmanje 3 uzastopne nedelje po terapijskom ciklusu, a ova davanja se primenjuju u razmacima od oko najmanje 6, 7 ili 8 dana.Prijava sadrži još 14 patentnih zahteva.

Description

POLJE TEHNIKE

[0001] Ovo Je pronalazak sa polja medicineiodnosi se na lečenje poremećaja hrskavice, a posebno osteoasrtritisa.

Konkretnije, odnosi se na upotrebu FGF-18 u terapijskim režimimaiza proizvodnju leka za terapiju pacijenata koji

imaju poremećaje kao Sto je osteoartritis, kao Sto je na primer osteoartritis kolenailisekundarni osteoartritis kuka.

Posebno se navodi preporučena terapijska shema koja uključuje davanje jedinjenja FGF-18 jednom nedeljno po

terapijskom ciklusu.

STANJE TEHNIKE

[0002] FGF18 Je identifikovan kao član porodice FGF koji je najsličniji FGF8iFGF17. Aktivnosti povezane sa

FGF18 uključuju stimulaciju ćelija iz mezenhlmne linije, a posebno srčanih miocita, osteoblastaihondrocita (U.S.

Patent br. 6,352,971). FGF18 vezujeiaktivira FGFR41 lile splajs (nadovezanu) varijantu FGFR3iFGFR2.

[0003] Remodelovanje kosti je dinamičan proces kojim se održavaju masa tkivaiskeletna arhitektura. Ovaj proces

predstavlja ravnotežu između resorpclje kosti I formiranja kosti, gde se smatra da su dve vrste ćelija glavni igrači.

Ove ćelije su osteoblasti i osteoklasti. Osteoblasti sintetizujuideponuju matrikskojipostaje nova kost. Aktivnosti

osteoblasta i osteoklasta se reguliSu brojnim faktorima, sistemskim I lokalnim, uključujući I faktore rasta.

[0004] Hrskavica Je vrsta gustog vezivnog tkiva. Sastoji se od ćelija koje se nazivaju hondrodti, koje su

dispergovane kao želatlnasfa temeljna supstanca koja se naziva matriks. Hrskavica Je avaskulama (ne sadrži krvne

sudove)ihranljlve materije se dopremaju kroz matriks. Hrskavica se nalazi u zglobovima, grudnom koSu, ušima,

nosu, u grluiizmeđu Intervertebralnih diskova. Postojetriosnovne vrste hrskavice: hijalinska, elastičnaifibrozna

hrskavica. Glavna svrha hrskavice je da obezbedi okvir na kome može da počne deponovanje kosti. Druga važna

uloga hrskavice Je da obezbedi glatke površine i mehaničku zaštitu za kretanje kostiju u zglobovima.

[0009] Zamena oStecene hrskavice, posebno hrskaviceuzglobovima, kao posledice bilo povredeilibolesti,

predstavlja glavni izazov za lekare, a raspoložive terapije se smatraju nepredvidljivimidelotvomima samo za

određeni ograničeni vremenski period. Praktično sve trenutno raspoložive terapije za oštećenje hrskavice fokusiraju

se na ublažavanje bola, gde nema nikakvogiliima zanemarijlvo malog dejstva na regeneracjju oštećenog tkiva.

Prema tome, većina mladih pacijenatailiuopSte ne traži terapiju,ili imse savetuje da se terapija odlaže Sto je

moguće duže. Kada je terapija potrebna, standardna procedura Je totalna zamena zglobailimikrofraktura,

procedura koja uključuje penetraciju subhondralne kosti da se stimuliSe deponovanje fibrozne hrskavice od strane

hondrocita.

[0006] Za pacijente sa osteoartritisom, nehlrurška terapija se sastoji od fizikalne terapije, promene načina života

(npr. smanjenje aktivnosti), noSenja proteza, potpornih sredstava, oralnihiinjekcionih lekova(npr.ne-steroldnih

anfi-inlfamatomih lekova),imedicinskog zbrinjavanja. Hfrurške opcije su veoma specifičneipovezane sa težinom

osteoartritisa, i one mogu da obezbede ublažavanje simptomaStoje po pravilu vrlo kratkog dejstva. Osteotomija

tibijeIlilemura (sečenje kosti da se uravnoteži .trošenje' zgloba) može da ublaži simptome, pomogne da se održi

aktivan način života, i odloži potreba za zamenom zgloba. Totalna zamena zgloba može da ponudi ublažavanje

simptoma uznapredovalog osteoartritisa, ali po pravilu Iziskuje promenu načina života pacijenta i/ili smanjenje nivoa

aktivnosti.

[0007] Prema tome, bilo bi poželjno da imamo metodu za lečenje, prevencijuiliublažavanje simptoma poremećaja

hrskavice koji bi omogućili da se regenerlSe oStećeno tkivo. Uz to, bilo bi poželjno da takve metode budu bezbedne I

Sto Je moguće efikasnije. ŠtaviSe, kako poremećaji hrskavice mogu da budu hronične bolesti, bilo bi poželjno da te

metode omogućavaju ponovno lečenje ovih pacijenata.

Kratak oni« pronalaaka

[0008] Ovaj pronalazak opisuje medicinsku upotrebu za terapiju pacijenata koji imaju poremećaj hrskavice,I

uključuje davanje jedinjenja FGF-18 naznačeno time da se jedlnjenje FGF-18 daje najmanje dva puta, a ta dva

davanja da budu u razmaku od 6, 7, 8,9ili10 dana.Upreporučenom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavice

koji treba lečHi je osteoartritis, FGF-18 jedlnjenje je FGF-18 fragment ovde označen kao FGF-18(170AA), a ciklus

doziranja Je 10 do 30 mcg po intra-artlkulamoj injekciji jednom nedeljno tokom 3 uzastopne nedelje (jedan terapijski

ciklus). U preporučenom obliku ovakvi terapijski ciklusi se mogu ponavljati posle 4ili6 meseci. Na primer. kada se

terapijski ciklus ponavlja posle 6 meseci, ako je prvi terapijski ciklus započeo npr. januara meseca date godine, onda

drugi terapijski ciklus može da se započne jula iste godine.

[0009] Ovde se dalje opisuje upotreba FGF-18 jedinjenja za proizvodnju medikamenta za terapiju pacijentakojiima

poremećaj hrskavice naznačeno time da se to FGF-18 jedlnjenje daje najmanje dva puta, a ova davanja se

primenjuju u razmacima od 6, 7, 8, 9 ili 10 dana. Ovde je takođe opisana upotreba FGF-18 jedinjenja za terapiju

pacijenta koji Ima poremećaj hrskavice naznačeno time da se to FGF-18 Jedlnjenje daje najmanje dva puta, a ova

davanja se primenjuju u razmacima od po 6,7,8,9ili 10dana.

[0010] Ovde se dalje opisujeupotrebaFGF-18 jedinjenja za proizvodnju medikamenta za terapiju pacijenta kojiima

poremećaj hrskavice,iovaj medikament je prilagođen tako da se daje najmanje dva puta, a ova davanja se

primenjujuurazmacima od 6,7, 8, 9ili 10dana.

DETALJNI OPIS PRONALASKA

[0011] Ovaj pronalazak nudi pogodne terapijske modalitete,uključujućipogodni režim davanja zaterapijurazličitih poremećaja hrskavice, kao sto je posebno osteoartritis, korištenjem FGF-18 jedinjenja, kaoStosu na primerFGF-18(170AA) proteinski fragment. U kontekstu ovog pronalaska sa iznenađenjem je otkriveno da FGF-18 jedinjenja

imaju optimalna dejstva na simptomeiliublažavanje bolesti kada se radi o poremećajima hrskavice kada se dajuu

skladu sa metodamaiupotrebama opisanim i otkrivenim ovde.Utvrđeno je da manje česti režimi doziranja od onih

navedenihuovom pronalasku mogu da ne budu potpuno efikasni, dok čeSće doziranje od onoga koje preporučuje

ovaj pronalazak može da izazove inflamaciju i/ili druga kontraproduktivna dejstva na hrskavicuiliokruženje zgloba

kada se koriste isteiliuporedive doze kao one koje preporučuje ovaj pronalazak.

[0012] Prema tome, jedan aspekt ovog pronalaska prikazuje metod za terapiju pacijenta koji ima poremećaj

hrskavice, a uključuje FGF-18 jedinjenja naznačeno time da se to FGF-18 jedinjenje daje najmanje dva puta,iova

davanja se primenjujuurazmacima od po 6, 7,8,9ili 10dana.

[0013] U posebno preporučenom obliku pomenuta davanja se primenjujuurazmacima od po oko 6, 7ili8 dana. U

jednom preporučenom obliku daju seurazmaku od po 7 dana.

[0014] JoS jedan aspekt ovog pronalaska opisuje upotrebu FGF-18 jedinjenja za proizvodnju medikamenta za

terapiju pacijenta koji ima poremećaj hrskavice naznačeno time da se to FGF-18 jedinjenje daje najmanje dva puta,

ova davanja se primenjujuurazmacima od po 8,7,8, 9ili 10dana.Uposebno preporučenom obliku pomenuta davanja se primenjuju u razmacima od po 6,7ili8 dana. U jadnom preporučenom obliku daju seurazmaku od po 7

dana.

[0015] U jednom preporučenom obHku daju seurazmaku od po7dana. Po mogućstvu, FGF-18 jedinjenje se dajeu

redovnim intervalima, jednom nedeljno.

[0016]Ujednom obliku ovog pronalaska opisuje se upotreba FGF-18 jedinjenja za proizvodnju medikamenta za

terapiju pacijentakojiima poremećaj hrskavice gde je ovaj medikament prilagođen tako da se daje najmanje dva

puta, ova davanja se primenjuju u razmacima od po6, 7,8, 9ili10 dana. U posebno preporučenom obliku pomenuta davanja se primenjujuurazmacima od po 6,7 ili8 dana.Ujednom preporučenom obliku daju seurazmaku od po 7

dana.

[0017] U jednom preporučenom obliku daju se u razmaku od po7dana. Po mogućstvu, FGF-18 jedinjenje se dajeu

redovnim intervalima, jednom nedeljno.

[0018] FGF-18 jedlnjenje treba davati najmanje tokom 3 uzastopne nedeljeilinajmanje 4 uzastopne nedelje po

terapijskom ciklusu. U jednom preporučenom obliku terapijski ciklus je broj uzastopnih nedelja naznačeno time da se

FGF-18 jedinjenje daje avake nedelje. U dodatnom preporučenom obliku ovo FGF-18 jedinjenje se daje tokom 3

uzastopne nedeljeili4 uzastopne nedelje po terapijskom ciklusu,itakva terapija može da uključi 1, 2. 3, 4, 5ili6

terapijskih ciklusa godišnje.UJednom preporučenom obliku FGF-18 jedinjenje se daje tokom 3 uzastopne nedelje po

terapijskom ciklusu. U jednom preporučenom obliku takva terapija uključuje 2 terapijska ciklusa godišnje.

[0019] U jednom preporučenom obliku ova terapija uključuje Intra-artikulamo davanje FGF-18 jedinjenja.

Alternativno, ova terapija može da uključi intravensko davanje FGF-18 jedinjenja.

[0020] U dodatnom preporučenom obliku ova terapija uključuje davanjeudozi od 1-100 mog.ili joSbolje 1-60 mikrograma (mcg),ili joSbolje 3-50 mog,ilijoš bolje 5-40 mcg,ilijoš bolje 10-30 mcg po jednom intra-artikulamom

davanju FGF-18 jedinjenja. U preporučenom obliku ova terapija uključuje davanjeudozi od oko 3, 5,10,15,20, 25,

30, 35,40.45,50, 55,60 mcg po jednom intra-artikulamom davanju FGF-18 jedinjenja. Preporučene doze uključuju

5,10,15, 20,25i30 po jednom intra-aritkulamom davanju FGF-18 jedinjenja.

[0021] U dodatnom preporučenom obliku ova terapija uključuje davanjeudozi od 50-200 mcg/kg, joS bolje 80-120

mcg/kg po jednom intravenskom davanju FGF-18 jedinjenja. U preporučenom obliku ova terapija uključuje davanjeu

doziod 80,90,100,110ili120 mcg/kg po jednom intravenskom davanju FGF-18 jedinjenja.

[0022] U preporučenom oblikuporemećajhrskavice iečen ma kojom od metoda ovog pronalaska je osteoartritis, kao Stoje na primer osteoartritis koji se klasifikuje kao stadijum IIilistadijumIIIpo OARSI. U preporučenom primaru osteoartritis može da bude osteoartritis kolenailiosteoartritis kuka, kaoStoje sekundarni osteoartritis kuka.

Stručnjak za ovu oblast dobro zna koje se klasifikacije osteoartritisa koriste u struci. U struci je posebno poznata

klasifikacija OARSI. Stručnjak za ovu oblast se upućuje naknjigu"Guidelines for the medical managementof

osteoartritis" (Mare C. Hochberg, Roy D. Altman, Kenneth D. Brandt, Bruce M. Clark, Paul A. Dieppe, Mane R.

Griffin, Roland W. Moskovvitz, ThomasJ.Schnitzer, Artritis & Rheumatism, Volume 38, izdanje11,1995. strane

1535-1546.)

[0023] Preporučena FGF-18 jedinjenja ovog pronalaska odabiraju seizhumanog divljeg tipa FGF-18iliFGF-18(170AA).

Jedinjenja ovog pronalaska

[0024] Nativniilidivlji tip FGF-18 je proteinkojieksprimiraju hondrociti artikulame hrskavice. Ovaj pronalazak se

uglavnom odnosi na Faktor rasta flbroblasta 18 (Fibroblast Growth Factor 18, skraćeno: FGF-18) jedinjenje za

terapiju osteoartritisa. FGF-18 jedinjenje ovog pronalaska uključuje, naprimernativniilidivlji tip FGF-18, a posebno

bioaktrivne varijante humanog FGF-18, kaoStosu bioaktivne alelne varijante, i bloaktivne tmnkovane (sažete) forme

FGF-18. Ovaj pronalazak može da se odnosi na ma koju varijantuilimodifikaciju dobijenu od FGF-18 koja zadržava

ovde opisanu Željenu bioaktivnost FGF-18, kao Sto je pre svega deponovanje hrskavice. Bioaktivnosti FGF-18

uključuju posebno one opisaneuPrimerima dole, kao Sto su pre svegain vivomodeli bolesti koje opisujemo.

[0025] Nukleotidna sekvenca humane FGF-18 cDNK opisana je u SEQ ID NO. 1, a njena oduzeta amino kiselinska

sekvenca opisana je u SEQ ID NO. 2. FGF18 je inicijalno opisan kao zFGF-5.idetaljno opisan u U. S. Patentima

US6.352.971, US5,989,866iUS objavljenom patentnom zahtevu US200570043234, gde sve ove dokumente treba

smatrati Integralnim detom ove prijave. Analiza cDNK koja enkodira humani FGF18 polipeptid(SEQID NO: 1)

otkrivaotvoreniokvir čitanja koji enkodira 207 amino kiseline (SEQIDNO: 2)i uključujezreli polipeptid 180amino

kiselina (ostatak 28 do ostatka 207 SEQ ID NO: 2).

[0026] Pokazano je da miSja FGF-18 polinukleotidna sekvenca kako je pokazanauSEQIDNO:3 iodgovarajuća

amino kiselinska sekvenca SEQIDNO: 4 imaju visoki stepen homologije sa humanim ortologom. Na nivou amino

kiseline, mišji i humani polipeptidi su približno 98% identični, sa tri amino kiselinske promene. Stručnjaci za ovu

oblast će prepoznati da sekvence opisaneuSEQ ID NO: 1iliSEQ ID NO: 3iSEQ ID NO: 2iSEQ ID NO: 4

predstavljaju jedan alel humanog, odnosno mišjeg FGF18 genaipolipeptida,ida se očekuje da dođe do varijacije

alela I alternativnog spajanja (splajsinga).

[0027] Kao što je već pomenuto, FGF-18 jedinjenje ovog pronalaska uključuje, na primer nativniilidivlji tip FGF-18,

a posebno humani FGF-18, njegove bioaktivne varijante, kao Sto su bioaktivne alelne varijante,ibioaktivne

tmnkovane (sažete) forme FGF-18. Ovaj pronalazak može da se odnosi na svaku varijantuilimodifikovanuformu

FGF-18 koja zadržava željenu FGF-18 bioaktivnost koja je ovde opisana, kaoStoje posebno deponovanje

hrskavice.

[0028] U jednom obliku ovog pronalaska FGF-18 jedinjenje je trunkovana forma humanog FGF-18.Ujednom

posebnom obliku ova truknovana forma FGF-18 uključujeiliobuhvata ostatke 28 do 175 SEQ ID NO: 2,ilijedan

funkcionalni derivat, ili varijantuilimutein kako je to ovde definisano. U drugom obliku pomenuta trunkovana forma

FGF-18 uključujeIHobuhvata ostatke 28 do 176, 28 do 177,28 do 178,28 do 179.28 do 180, 28 do 181,28 do 182,

28 do 183.28 do 184, 28 do 185, 28 do 186,28 do 187, 28 do 188, 28 do 189, 28 do 190, 28 do 191, 28 do 192, 28

do 193, 28 do 194 III 28 do 195. 28 do 196, 28 do 197, 28 do198,28 do 199, 28 do 200, 28 do 201, 28 do 202, 28

do 203, 28 do 204, 28 do 205, 28 do 208 ili 28 do 207 SEQ ID NO: 2, ili funkcionalni derivat, ili varijantuilimutein

kako je to ovde definisano. Ovi polipeptidi, funkcionalni derivat,ilivarijantailimutein mogu da uključeidodatni N-terminalni amino kiselinski ostatak, joS bolje metion'm. I stvarno, zavisno od sistema ekspresijeiuslova, polipeptidi

pronalaska mogu da budu eksprimirani u rekombinantnoj ćeliji domaćina sa početnim Metioninom.

[0029] Preporučeni oblik ovog pronalaska je trunkovana forma FGF-18, koja sadrži 170 amino kiselina (AA), u

daljem tekstu označeno i kao "FGF-18(170AA)".Divljitip ili prirodno nastajuća forma je duga 207AAod kojh prvih

27 AA su signalne sekvence, a poslednjih 11 AA se briSu u FGF-18(170AA) (kao Sto se može pokazatiiza prirodno

nastajući FGF-18In vivo).FGF-18(170AA) može da se eksprlmlrauE. coli,jer nema signalne sekvence,iova AA

sekvenca počinje sa metioninom, a sledi AA28izavršava se sa AA196. Molekulska težina FGF-18(170AA) iznosi

19.83 kDa. pl-10. FGF-18(170AA) se dalje opisujeuSEQIDNO. 5. dole. FGF-18(170AA) povećava proliferaclju/diferencijaciju hondrocitaideponovanje hrskavicaštodovodi do oporavkairekonstrukcije brojnih

hrskavičastih tkiva.

[0030] članovi porodice FGF odlikuju se domenima koji vezuju heparin. Putativni domen koji vezuje heparin za FGF-18 identifikovan je u regionu amino klsellnskog ostatka 148 (Gly)doamino kiselinskog ostatka 169 (Gln) SEQ ID

NO: 2iSEQ ID NO: 4. Smatra se da je receptorski posredovana signalizacija započeta po vezivanju FGF ligand

kompleksa za heparin sulfat proteoglikanlma napovršinićelije.

[0031] Mnogi članovi porodice FGF mogu da se smeste u dve srodne porodice na osnovu njihove strukturei

funkcija. aFGF i bFGF se sastoje odtrieksona razdvojenih sa dvaintronapromenljivih dužina. FGF-18 se sastoji od pet eksona, prvatriodnjihodgovaraju prvom eksonu aFGFibFGF.Svipoznati članovi porodice FGF se povezuju

splajsingom (nadovezivanjem) da se dobiju pojedinačni polipeptidi.

[0032] Analiza kompleksa ligand-receptorf FGF-18 pokazala je da FGF18 ima specifičnost za FGFR4i "lile"splajsvarijante FGFR3 i FGFR2. FGFR3-lllciFGFR2-lllc se eksprimiraju od strane hondrocita tkiva hrskavice, i posebno,

utvrđeno je da oba receptora postojeuhumanoj zglobnoj hrskavici. FGFR3iFGFR2 su nađenii uploči rasta sisarai

Igraju važne uloge u formiranju endohondralne I Intramembranske kosti. FGFR2 se prvo eksprimira kondenzujućem

mezenhimu, a eksprsija FGFR3 se inicira kako se hondrociti diferencirajuiproliferišu. Kada se razvijaju kranijalne

kosti, FGFR3 se nalaziudura materiperiosteumu, dok se FGFR2 eksprimirauosteoprogenitorskim ćelijama na

osteogenskom frontu razdvajajući suture (šavove). FGFR2 se eksprimirai utrabekulamoj kosti. Ranije je već

pokazano da je FGF18 proliferativni agens za hondrociteiosteoblaste, zavisnoiod stanja diferenciranosti ovih

vrsta ćelija i načina primene (Videti, U. S. Patenti 6,352,971i5,989,866; Ellsworth et al. Osteoartritis and Cartilage,

10:308-320,2002; Shimoaka et al.,J.Bio. Chem. 277 (9) 7493-500,2002).

[0033] Još bolje, FGF-18 jedinjenje ovog pronalaska povećava deponovanje hrskavice. Ovo povećanje se može

meritiivivo,i invitro. Generisanje hijalinske hrskavice, elastične hrskavice,ifibrohrskavice je vrednoikao terapijai

kao komponenta za biološke matrice. FGF-18 jedinjenja, kao što su FGF-18(170AA),isastavi koji uključuju FGF-18

jedinjenja ("FGF-18 sastavi") biće korisni za terapiju defekata zglobne hrskaviceusinovijalnim zglobovima koji su

posledica starosne površinske fibrilacije, degeneracije hrskavice zbog osteoartritisa,Ifokalnih hondralnihi

osteohondralnlh defekata koji su posledica povredeilibolesti.

[0034] FGF-18 Jedinjenja i sastavi mogu da budu korisniiza terapiju oboljenja zglobova izazvanih osteohondritisom

dissecansIdegenerativnom bolešću zglobova. Na polju rekonstruktivneiplastične hirurgije, sastavi FGF-ćebitikorisni za autogenuilialogenu ekspanziju hrskaviceitransfer za rekonstrukciju ekstenzlvnih defekata tkiva.

[0035] FGF-18 jedinjenjaisastavi mogu da budu korisniiza ekspanziju ćelijaiindukovanje produkcije elastične

hrskavice. Ekspanzija ćelijaiindukcija produkcija elastične hrskavice biće korisni za generisanjeipopravku tkiva uha

inosa. FGF-18 jedinjenja i sastavi mogu da se koriste za ekspanziju populacije hondrocita u kulturi za autogenuili

alogenu transplantaciju hondrocita, i potom da se daju bezilisa istovremenom terapijom koja se sastoji od davanja

FGF-18 sastava.Uovim procedurama, na primer, hondrociti se mogu ubirati artroskopski iz nepovređene manje

oblasti koja nosi teret oštećenog zgloba, i može da se gaji u prisustvu sastava FGF18 da se poveća broj ćelijapre

transplantacije. Proširene kulture će se onda mešati sa sastavima FGF-18,ipostavljatiuprostor zglobailidirektnousam defekt. FGF-18 sastavi mogu da se koristeukombinaciji sa periostealnimiliperihondrialnim graftovima koji sadrže ćefije koje mogu da formiraju hrskavicui/ilipomognu da se na mestu drže transplantirani hondrocitiilinjihove

prekursorske ćelije. FGF-18 sastavi mogu da se koriste za popravku oštećenja hrskaviceukombinaciji sa

ispiranjem zgloba, stimulacijom koštane srži, abrazlonom artroplastikom, subhondralnlm bušenjem,ili

mikrofrakturom subhondralne kosti. Uz to, posle rasta hrskavice kao posledica davanja FGF-1B sastava, možebiti

potrebna dodatna hirurška terapija da se primereno oblikuje novoformirana površina hrskavice.

[0036] FGF-18 jedinjenjeuskladu saovimpronalaskom može da budeifunkcionalni derivat, varijantailimutein

divljeg tipa FGF-18 proteina.

[0037] "Funkcionalni derivati" u smislu u kome se ovde koriste uključuju derivate FGF-18,injegove varijante ili

muteineifuzirane proteine, koji mogu da budu pripremljeni od funkcionalnih grupa koje nastaju kao bočni lanci na

ostacimailiNiliC termlnalriim grupama, na način koji je poznatu ovojstruci. Ovi funkcionalni derivati su uključeniuovaj pronalazak se dok ostaju farmaceutskiprihvatljivi,t.j. dok ne uništavaju aktivnost ovog proteina, koja je supstancijalno slična/istailibolja od aktivnosti FGF-18,ine donosi toksična svojstva sastavimaukojima se nalazi

[0038] Ovi derivati mogu.na primer, da uključe polietilenske giikolne bočne lance, koji mogu da unaprede druga

svojstva ovog proteina, kao Što su stabilnost, polu-žlvot, biološka raspoloživost, podnošenje od strane ljudskog

organizma, ili da smanje imunogenost. Da bi se postigao ovajcilj,FGF-18 može da se veže za npr. Polietilenglikol

(PEG). PEGIlacija se može obaviti poznatim metodama, kao što su na primer opisaneuWO 92/13095. Posebno se

PEG-IFN može pripremiti u skladu sa postupkom opisanimuWO 99/55377.

Prema tome, u preporučenom obliku, funkcionalni derivat FGF-18 uključuje najmanje jedan deoiliviše funkcionalnih

grupa koji se javljaju na kao jedanIliviše bočnih lanaca na amino kiselinskim ostacima. Oblik u kome je ovaj deo

polietten glikolni (PEG) deo se smatranajboljim. Uskladu saovimpronalaskom, nekoliko PEG mogu da se zakačezaFGF-18.

Drugi derivati uključuju modifikovani FGF-18 protein, kao što je dugodelujuća forma FGF-18. Posebno se

dugodelujucf FGF-18 može odbrati iz pegiliranog FGF-18, FGF-18-HAS fuzionih proteina,iFGF-18-Fc-fuzionih

proteina.

Dragi derivati uključuju alrfatične estre karboksilne grupe, karboksllne grupe, amide karboksilnih grupa reakcijom sa

amonijakomIliprimamimIlisekundarnim aminima, N-acIlnim derivatima slobodnih amino grupa amino klselfnskrh ostataka formiranih sa acilnim delovima (npr. alkanoililikarboclklične aroilne grupe )iliO-acil derivati slobodnih

hidrokallnih grupa (na primer sertnihIlitreonilnih ostataka) formiranih sa acilnim delovima.

[0039] "Varijante" ili "muteini", kako se koriste u okviru ovog pronalaska, odnose se na analoge FGF-18, gde je

jedaniliviše amino klselinsklh ostataka prirodnog FGF-18 zamenjenorazličitimamino kiselinskim ostacimailise briše (delecija),ilise jedaniliviše amino kiselinskih ostataka dodaje naprirodnusekvencuFGF-18,ne smanjujući znatnije aktivnost rezultujućeg proizvodaupoređenju sadivljim tipomFGF-18.Ovimuteini se pripremaju poznatom sintezomi/ilitehnikom lokacijski usmerene, ciljane mutageneze,ilima kojom drugom primerenom tehnikom.

Izraz "varijanta" ili "mutein" u skladu sa ovim pronalaskom uključuje proteine enkodirane nukleinskom kiselinom, kao

što su DNK ili RNK. koja se hibridlzuje u DNKiliRNA i enkodira FGF-18 kaoštoje otkrivenounpr.US5,989,886

pod strogim uslovima. Izraz "strogi uslovi" odnosi se na hibridizacijuipotom uslove pranja, koje oni koji se inače

ovim bave, ljudiustruci konvencionalno nazivaju "strogim". Videti Ausubel et al.. Current ProtocolsinMolecular

Biologv, Interscience, N.Y., §§6.3i6.4 (1987,1992). Između ostalog,uprimere strogih uslova spadajuuslovipranja12-20<*>0 ispod izračunate Trn hibrida koji se ispituje u, npr., 2 x SSCi0.5% SDS tokom 5 minuta, 2 x SSCi0.1 %;SDS tokom 15 minuta; 0.1 x SSCi0.5% SDS na 37<*>C tokom 30-60 minutaionda, 0.1 x SSCi0.5% SDS na 68°C

tokom 30-60 minuta. Svi prosecni stručnjaci za ovu oblast razumeju da strogost usiova zavisi i od dužine DNK

sekvenci, oligonukleotidnih proba (kao Sto su 10-40 baza)ilimeSovitih oligonukleotidnih proba. Ako se koriste

meSovite probe, preporučuje se upotreba tetrametil amon'rjum hlorida (TMAC) umesto SSC. Videti Ausubel, supra.

Identičnost oslikava odnos između dveilivifte polipeptidnih sekvenciilidveilivise polinukleotldnih sekvenci,Stose

određuje poređenjem tih sekvenci. Po pravilu, identičnost se odnosi na tačnu korespodenciju nukleotJda prema

nukleotiduiliamino kiseline prema amino kiselini u dve polinukleotidneilidve polipeptidne sekvence, nadužini

sekvenci koje se porode.

Za sekvence gde nema tačne korespodencije, može seodrediti "%identičnosti". Po pravilu, dve sekvence koje se

porede se postave tako da se dobije maksimalna korelacija izmeđutihsekvenci. Ovo može da se postigne

Insercijom "praznih prostora" u bilo jednuili uobe sekvence, da se poveća stepen preklapanja. Ovaj procenat%identičnosti može da se određuje za celu dužinu svake sekvence koja seporadi(takozvano globalno preklapanje),

Sto je posebno pogodno za sekvence iste ili veoma slične dužine,iliza kraće, definisane dužine (takozvano lokalno

preklapanje), koje je pogodnije za sekvence nejednake dužine. Metode za poređenje identičnosti i homologijei/ili

sličnosti dveiliviSe sekvenci dobro su poznateustruci. Tako na primer, postoje programi u paketu VVisconsin

Seauence Anah/sis, verzija 9.1 (Devereux J et al., 1984), Na primer programi BESTFITiGAP, mogu da se koriste

da se odredi % identičnosti između dva polinukleotidai% identičnostii% homologije između dve polipeptidne

sekvence. BESTFIT koristi algoritam "lokalne homologije" koji su ponudili SmithiVVaterman (1981)inalazi najbolji

region sličnosti između dve sekvence. U struci su poznati i drugi programi za određivanje identičnostii/ilisličnosti

između sekvenci, pa primer porodica BLAST programa (Aitschul SFet al; 1990, Altschul S F et al, 1997, kojima se

može pristupiti preko internet stanice NCBI na adresi www.ncbi.nlm.nih.gov)iFASTA (Pearson W R, 1990).

izrazi "varijanta"ili"mutein"uskladu sa ovim pronalaskom uključuju proteinekojiimaju sekvence amino kiseline

dovoljno duplikativne za FGF-18, tako da imaju suštinski istu aktivnost kaoisam FGF-18.

[0040]Upreporučenom obliku, svaka takva varijantaili muteinima najmanje 40% identičnostiilihomologije sa sekvencom FGF-18.JoSbolje, ima najmanje 50%, najmanje 60%, najmanje 70%, najmanje 80%ili,najbolje, najmanje 90% identičnostiilihomologije sanjim.

Muteini FGF-18, koji mogu da se koriste u skladu sa ovim pronalaskom,ilinukleinska kiselina koja kodira za njega,

uključuje konačni skup supstancijalno korespodentnih sekvenci kao supstitucionih peptidailipolinukleotida koji se

rutinski mogu dobiti u svakoj laboratoriji koja se ovim bavi, bez nepotrebnog eksperimentisanja, na osnovu

uputstavaiusmerenja koja dajemo ovde. Preporučene promene za muteineuskladu saovimpronalaskom su ono Sto je poznato kao "konzervativne" supstitucije. Konzervativne supstitucije amino kiselinaFGF-18polipeptida mogu da uključe sinonimneamino

kiseline u okviru grupe koja ima dovoljno slična fizikohemijska svojstva da će supstitucija između članova grupe da

očuva biološku funkciju molekula(Grantham,1974), Jasno je dainsercije idelecije amino kiselina mogu da se

obave iugore definisanim sekvencama ne menjajući njihovu funkciju, a posebno ako te insercijeidelecije menjaju

samo po nekoliko amino kiselina, npr., manje od trideset,ijoš bolje manje od deset, i ne uklanjaju i ne pomeraju one

amino kiseline koje su kritične za funkcionalnu konformaciju,npr..cisteinske ostatke. Proteinii muteinikoji se produkuju takvim delecijamal/iliinsercijama spadaju u okvire ovog pronalaska. JoS bolje, sinonimne grupe amino kiselina su one koje sedefiniSuna Tabeli A. JoS bolje, sinonimne grupe amino

kiselina su one koje se definiSu na Tabeli B;inajbolje sinonimne grupe amino kiselina su one koje se definiSu na

Tabeli C.

[0041] Primeri produkcije amino klselinskih supstitucija u proteinima koje su korišćene za dobijanje muteina FGF-18

za upotrebuuovom pronalasku uključuju sve korake poznatih metoda kao što su one prikazaneuUS patentima

4,959,314, 4,588,585i4,737,462čijisu nosioci Mark et al; 5,116,943-Koths et al., 4,965,195-Namen et al; 4,879,111-Chong et al;i5,017,891-Lee et al; i lizinom supstituisani proteini prikazani u US patentu br. 4,904,584

(Shaw et al).

Formulacija Jednog FGF18«JedlnJenJa I njegova primena

[0042] FGF-18 jedinjenja mogu da budu formulisana kao farmaceutska jedinjenja t.j. zajedno sa farmaceutski

prihvatljivim nosačem, ekscipijensomilislično. Definicija "farmaceutski prihvatljivi" ima zaciljda obuhvati svaki nosač, koji ne utiče na delotvomost biološke aktivnosti aktivnog sastojkaikojinijetoksičan po domaćina kome se

daje. Na primer, za parenteralnu primenu, aktivni protein(i) mogu da budu formulisaniujedinici doziranja za

ubrizgavanje (injekcije) u nosačima kao što su fiziološki rastvor, rastvor dekstroze, serumski albummiRingerov

rastvor. Takve formulacije FGF-18 jedinjenjauključujućinajmanje jedandodatnifarmaceutski prihvatljivi nosač, eksclpijensilislično ovde se takođe nazivaju "FGF-18 sastavi".

[0043] FGF-18 jedinjenjaisastavi mogu da se primenjuju direktnim ubrizgavanjem u sinovijalnu tečnost zglobaiH

direktno u defekt, bilo samHi ukompleksu sa odgovarajućim nosačem za produženo oslobađanje proteina (kaošto

su, na primer odgovarajući eksclpijens! za formulacije sa usporenim oslobađanjem, kao što je, npr. ciklodekstrin)ili

ograničenim lokalnim oslobađanjem (kaoštoje, na primer, oslobađanje kroz biokompatjbilnu spužvu, sličnebio-matrice, enkapsulirane ćelijeilislično).

[0044] Formulacije za intraartikulamu (IA) primenu će ispunjavati najveći broj zahteva koji se odnoseina druge

formulacije za Injekcije,t.J.,moraju da budu sterilneikompatibilne sa fiziološkim uslovima na mestu primene(npr.,

zglob kolena, sinovijalna tečnost). Sterilnost formulacije rastvora može da se postigne pomoću autoklava (ako su

sve komponente formulacije dovoljno otporne na termički stres)ilisterilnomfiltracijom,dok za druge formulacije,

procesi proizvodnje potrebni da se obezbedi sterilnost proizvoda mogu da budu složeniji. Na primer, sterilna fHtracija

nije izvodljiva za formulacije koje sadrže čestice (suspenzije), polu-čvrsteiličvrste formulacije. Za kompatibilnost

formulacije sa fiziološkim uslovima na mestu ubrizgavanja moraju se uzeti uobzirkarakteristike sinovijalne točnosti(SF).Još bolje je ako su formulacije ovog pronalaska Izotone. pHovihformulacija jeili blizupHSF (t.j.,pH 7.4) ili

neznatno niža, ali je bolje da ne bude Ispod pH -5.5. da se omogući optimalna stabilnost aktivnog sastojka,a da se

na najmanju meni svedu moguća neželjena dejstva nefizioloških vrednosti pH kao što su aktivacija proteolitičkih

enzima, npr., katepsina. Ekscipijensikojise koriste za IA Injekcije mogu da buduprisutni i udrugim formulacijama za injekcije, npr., za intramuskulamuilisupkutanu primenu

[0045] U jednom obliku ovog pronalaska, način davanja FGF-18 jedinjenja koji se ovde opisuje: intra-aurikulama

primena, peri-aurikulama primena, intra-nazalna primena, peri-nazalna primena, endosinusijalna primena, intra-

kostalna primena, peri-kostalna primena, Intra-torakaina primena, peri-torakalna primena, epiduralna primena, peri-

vertebralna primena, peri-sinovijalna primena, intra-slnovijalna primena, endosinusijalna primena, peri-artikulama

primenaiintra-artikulama primena.Upreporučenom obliku, FGF-18 jedinjenje koje je ovde opisano primenjuje se

peri-artikulamo (primena oko zgloba)iliintrartikulamo (primenauzglobu).Ujednom obliku ovog pronalaska, periartikulamailiintraartikulama primena se radi oko zglobaili uzglobkojise odabiraizsledećih: zglob kuka,

kolena, lakta, ručja, skočnog zgloba, kičme, stopala, prstiju na rukama, prstiju na nogama šake, ramena, rebara,

lopatica, bedara, potkolenice, petaiuz koštane delove kičme.Ujoš jednom preporučenomoblikuovakve periarrjkulameiliintraartikulame primene, ovo se radi oko zgloba kukailikolenaili uove zglobove.

Poremećaji hrskavice

[0046] Ovaj pronalazak se odnosi na metode letenja, prevencijeiliublažavanja simptoma poremećaja hrskavice

kod sisara. Po mogućstvu, takvi poremećaji hrskavice su rezultat oštećenja usled traumatske povredeili

hondropatije. Jasno je da je još bolje da ljudi budu pacijenti koji te se letitiuskladu sa ovim pronalaskom; međutim,

jasno jeida drugi sisari, uključujući između ostalih, pse, konjeislično mogu takođe da se lece metodamauskladu

sa ovim pronalaskom.

[0047] U primere poremećaja hrskavice koji se mogu lečiti, preveniratiiliublažiti terapijom koja je ovde opisana

spadaju, između ostalih: artritis, osteohondritis, kostohondritis (kao Sto je Tietzeov sindrom), osteomijelitis,

polihondritis, recidivirajući polihondritisiOsteohondritis Dissecans.

[0048} U jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavice koji se leci, prevenira ili ublažuje je artritis. Po

mogućstvu, ova bolest se odabira iz grupe koja uključuje ankilozirajući spondilitis, difuznu idiopatsku skeletnu

hiperoatozu (DISH), giht, pseudogiht, infektivni artritis, osteoartritis,reumatoidniartritis, psorijatični artritis, reaktivni artritis, sklerodermu, Sjogrenov sindromiStiD-ovu bolest. U preporučenomobliku,ovakav poremećaj hrskavice koji se leći, prevenirailiublažuje je reumatoidni artritisiliosteoartritis.Uposebno preporučenom obliku, ovakav poremećaj hrskavice koji se leci, prevenirailiublažuje je osteoartritis.

[0049] Artritis je povezan sa oštećenjem artJkulamih struktura (zglobova) u telu i srodnim zapaljenskim procesima.

Artritis, uključujućiiosteoartritis, reumatoidni artritis, arthritične zglobove kao posledice povrede,islično,

predstavljaju česta zapaljenska stanja kojabimogla da imajukoristiod terapijske primene FGF18uskladu saovim

pronalaskom.

[0050] U jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavicekojise leči, prevenirailiublažuje je ankilozirajući

spondvlitls. Ankilozirajući spondilitJs (AS) je artritis koji uključujeikičmu. On izaziva boliukočenost leđa, i savijen

položaj. Ovo je rezultat trajnog otoka I iritacije kičmenih prSljenova (vertebrae). U teSkim slučajevlma.upala kičmenih

prSljenova može na kraju da dovde do toga daonisrastu Sto za posledicu Ima jako ograničenu pokretljivost. Upala

tetivaIIfcjamenata koji spajaju zgloboveipružajufmoslonac dovodi do bolaibolne osetljivosti rebara, lopatica,

kukova, bedara, potkolenica, petaiduž koStanih tačaka kičme.

Ankilozirajući spondilitJs je hronlčna zapaljenska forma artritisa koja utiče na kičmene zglobove. Glavna osobina AS

je zahvatenost zglobova u bazi kičme gde se kičma spaja sa karticom-sakroilijačni(SI)spojevi.

Tok bolesti može jako da varira,idok neki pojedinci Imaju samo epizode prolaznog bolauleđima, drugi imaju

hroničnijl teži boluleđima koji dovodi do različitih stepena ukočenosti kičme tokom vremena. U skoro svim

slučajevima, ova bolest se odlikuje akutnimbolnimepizodama i remisijama (periodima kada se ovaj problem

smiruje).

Tokom godina AS se pominje pod različitim imenima uključujući pokerska leđa, reumatoidni spondilitis,iMarie-Strumpells spondilitis. Od ranih sedamdesetih godina proSlog veka, znamo sve viSe ovoj bolesti, pa se od tada

skoro univerzalno koristi izraz ankilozirajući spondilitis. AS je član porodice bolesti koje napadaju kičmu.

[0051] U jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavice koji se leči, prevenirailiublažuje je difuzna idiopatska

skeletna hiperostoza. Difuzna idiopatska skeletna hlperostoza (DISH) se odlikuje prekomemim rastom kostiju duž

kičmenih prSljenova. Ova bolest uključuje i inflamacijuirast kostiju na mestima na kojima se tetiveiligamenti spajaju

sa kostima, kao Sto su lakat, kolenoipeta na stopalu. IzraStaji na kostima su česti među ljudima koji boluju od

DISH.

DIŠH (koja sa nekada nazivaiForestlerova bolest) smatra se formom degenerativnog artritisaiodlikuje se

prekomemim rastom kostiju na stranama kičmenih prSljenova. Povezuje seisa imflamacijorrmikalcrfikacljom

(rastom kostiju) na drugim delovima tela gde se tetiveiligamenti spajaju za kosti, kao Sto su lakat, kolenoipeta na

stopalu. Ovo može da dovede do pojave koStanih IzraStaja. IzraStaji na kostima su, na primer, česti među ljudima

koji boluju od DISH.

[0052] U Jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavicekojise leči, prevenirailiublažuje je giht. Giht je vrsta

artritisa kod koga mokraćna kiselina, otpadni proizvod koji prirodno nastaje u organizmu, raste preko normalnih

nivoa. Umesto da se Isplra preko bubrega i mokraćom, kao Sto je to normalno slučaj, ona pravi kristaleideponuje

seuzglobovima. Te naslage dovode do upale zglobova, izazivajućibol,otoke, crveniloibolnu osetljivost cele

oblasti. Najfipičnije biva zahvaćen palac na nozi, ali giht može da napadneiskočni zglob, koleno, stopalo, Saku,

ručjeilakat. Kristali mokraćne kiseline mogu da mogu da prave depoziteina drugim mestima, kao Sto su ispod kože

ili udrugim mekim tkivimaili ububrezima ili urinarnom traktu.Giht tipičnonapada zglobukorenu palca na nozi.U

skoro polovini Inicijalnih napada, to je prvi napadnuti zglob. Mogu da budu napadnutiiskoro svi drugi zglobovi, ali

zglobovi donjih udova bivaju napadnuti češće nego gornjih udova.

Većina inicijalnih napada gihta zahvata samo jedan zglob,i,uz terapiju, povlači seuroku odtrido deset dana.Preko50% ljudi koji su imali akutni napad gihta imate recidivuroku od godine dana. Tokom vremena ovi napadi

postaju češći, duže traju I često zahvataju više zglobova.

Kod nekih ljudi ovi napadi duže taju,ibolest postaje hronična. Kristali mokraćne kiseline koji se deponuju u zglobu I

okolnim mekim tkivima dovode do destruktivnih promena u zglobuidovode do trajne inflamacije.

[0053] U jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavice koji se led, prevenirailiublažuje je pseudogiht.

Pseudogiht je vrsta artritisa koju uzrokuje proizvodnja kalcijumautelu. Pseudogiht dovodi do naslaga kristalakalcijuma (kalcijum pirofbsfat dlhidrat) u zglobu. Ovaj kalcijum formira kristale koji se deponuju u zglobovima između

kostiju. Ovo dovodi do otokaibola u toj regiji. Depoziti kalcijumaihronična inflamacija mogu da dovedu do toga da

delovi strukture zgloba oslabeiraspadnu se.

Kod pseudoglhta hrskavica može da počne da pucaida seunjoj pojavljuju rupe, pa to dovodi do dodatnog bolai

otoka u zglobovima. Tokom vremena hrskavica može potpuno da seistroši ida se kosti taru jedna o drugu. Jak bol kod pseudogihta je rezultat toga štomišići idruga tkiva koja pomažu zglobovima da se kreću (kaoštosu

tetiveiligamenti) bivaju prisiljeni da rade na način koji Inače nije predviđen, a sve zbog toga što je oštećena

hrskavica. Hrskavica sama po sebi ne sadrži nervne ćelije,izato ne može da izaziva osećaj bola, alimišići,tetive,

ligamentiikosti mogu. Posle mnogo godina erozije hrskavice može doći dotle da se kosti taru jedna o drugu. Ovo

naleganje i trenje kostiju dovodi do dodatnog bola. Kosti mogu i da zadebljaju i razvijaju izraslineiliosteofite koji se

takođe taru Jedni o druge.

Kaoibolest giht,ipseudogiht može da se pojavi uviduiznenadnih, recidivirajućih napada bolaiotokausamo

jednom zglobu.

[0054] U jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavice koji se leči, prevenirailiublažuje jeinfektivniartritis.

Infektivni artritis izaziva boliotokeuzglobovima. Ovu upalu izaziva mikroorganizam. Taj mikroorganizam može da

bude bakterija, virus, ili neka gljivica. Obično je zahvaćen samo jedan zglob, iako ponekad mogu da budu inficiranai

dvaili trizgloba. Ovo obično ne traje dugo ako se rano leči.

Najčešće, infektivni artritis zahvata velike zglobove (ramena, kukove, kolena),alimogu da budu napadnutiimali

zglobovi (prsti, skočni zglobovi).

[0055] U preporučenom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavicekojise leči, prevenirailiublažuje je

osteoartritis. Osteoartritis je najčešći oblik artritisa. On može da bude uzrokovan razlaganjem hrskavice. Komadići

hrskavice mogu da se odvojeiizazovu boliotok u zglobovima između kostiju. Tokom vremena, hrskavica može

potpuno da se istrošiida se kosti taru jednaodrugu.

Osteoartritis može da napadne svaki zglob, ali obično se zadržava na zglobovima šakaizglobovima koji nose teret,

kao što su kukovi, kolena, stopalaikičma.

Starije bolesti kod osteoartritisa (OA) je složena, multi-faktorska progresivna bolest koja nije zapaljenske prirode,i

koja se odlikuje opštom degradacijom artikularne hrskavice u zglobovima što dolazi sa starenjem. OA se odlikuje I

aktivacijom hondrocita, što dovodi do proliferacije ćelijaiapoptoze, ekspresije proteazeiabnormalne produkcije

matriksa, neuspešnog zarastanja hrskavice, što dovodi do gubitka ekstracelulalmog matrlksa, kalcrfikacije matriksai

stvaranja osteofita. Degradacija hrskaviceiekstracelulamih matričnih struktura dovodi do pojačane frikcije između

kostiju i nerava zahvaćenih zglobova. OA izaziva različite nivoe bolaiprogresivnog invaliditeta ljudi napadnutih

ovom bolešću. Tekuće terapije za OA su palijativnaihirurška.

Uzdravim zglobovima hrskavica deluje kao amortizer za udare kada se zglob optereti težinom. Klizava površina

hrskavica omogućava kostima da se glatko kreću. Kada zglob razvije osteoartritis hrskavica postepeno postaje

hrapava i tanka, a kost pod njom zadebljava.

lako u ranom stadijumu obično nema otoka, kako artritis progredira, može doći do inflamacije. Komadi hrskavice

mogu da se odvojeiplutaju unutar zgloba. To remeti stanje okolnih mekih tkiva unutar zglobaimože da izazovebol iotok Između kostiju.

Tokom vremena, kako se hrskavica haba i troši, kosti na krajevima mogu da stvaraju izrasline. Ove izrasline se zovu

koštani IzraStaji.Ili,hrskavica može potpuno da se istroši,ida kosti direktno budu u kontaktu jedna sa drugom. OA može da dovede i do drugih problema kao što su:mišićikoji drže zglob na mestu postepeno slabe jer se ne

koriste, pa tokom vremena zglob gubi oblikine funkcioniše uopšte.

OA često napada zglobove koji nose teret, kaoštosu kukovi, kolena, stopalaikičma. Međutim,izglobovi koji ne

nose teret, kao Sto su zglobovi prstiju na rukamaizglob u korenu palca na nozi mogu da budu napadnuti. Ova bolest

obično ne napada druge zglobove, osim kada su povređeniiliizloženi neuobičajenom naporu.

[0056] U jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavice koji se leči, prevenirailiublažuje je reumatoidni

artritis. Reumatoidni artritis (RA) je hronična, sistemska, autolmuna inflamatoma bolest koja uglavnom napada

sinovijalnu membranu brojnih zglobova što za posledicu ima povredu zgJobne hrskavice. Patogeneza ove bolesti

zavisi odTlimfbcitaipovezana je sa produkcijom reumatoidnih faktora, auto-antitela usmerenih protiv sopstvenog

IgG, s posledičnim formiranjem imunih kompleksa koji dostižu visoke nivoeuzglobnoj tečnostii ukrvi.Ovi

kompleksi u zglobovima mogu da indukuju izraženu infiltraciju limfbcita I monocitausinovijumipotom do izraženih

sinovijalnlh pramena; prostor zgloba/zglobna tečnost biva infiltrirana sličnim ćelijama uz dodatak brojnih neutrofila.

Napadnuta tkiva su prvenstveno zglobovi, često na simetričan način. Zapaljenske ćelije oslobađaju enzime koji

mogu da digestiraju kost i hrskavicu. Kao rezultat reumatoidnog artritisa, obloga napadnutog zgloba, sinovijum,

može da napadneiošteti kostihrskavicuStodovodi do destrukcije zglobaijakog bola, uz druga fiziološka dejstva. Zahvaćeni zglob može da Izgubi oblik i strukturu, što dovodi do bolaigubitkapokretljivosti.Prema tome, RA može

da dovede do teškog invaliditetaipovećanja mortaliteta.

Oštećenje zgloba javlja se čakiu slučajevima kadabolnije jak. Ovo može da se desi čakiu ranim stadijumima

bolesti. Za mnoge ljude sa RA, oštećenje je vidljivo na rentgenskim snimcima Sakaistopala u roku od dve godine

po početku bolesti. Ali terapija može da bude već zakasnela ako se čeka da se na rentgenu otkrije problem.

TeSko oštećenje može da dovede dotrajnogdeformiteta zglobaiinvaliditeta.Bol i otokmogu da dovedu do

otežanog hodanja.

[0057] U reumatoidnim zglobovima proizvodi se niz različitih citokina. Brojne studije su pokazale da IL-1 i TNF-alfa,

dva prototipska pro-infiamatoma citokina, igraju važnu ulogu u mehanizmima uključenim u sinovijalnu inflamacijui u

progresivnoj destrukciji kostiju.Istvarno, davanje TNF-alfai IL-1inhibitora pacijentima sa RA dovelo je do

dramatičnog poboljšanja kliničkihibioloških znakova inflamacije,ismanjenja radioloških znakova erozije kostijui

destrukcije hrskavice. Međutim, uprkos ovim ohrabrujućim rezultatima, značajan procenat pacijenata ne reaguje na

ove agense, Sto govori da suidrugi medijatori uključeniu patofiziologijuartritisa. Jedan važan način da se razlikuje

RA od drugih oblika artritisa je po načinu na koji zglobovi bivaju napadnuti. Na primer, RA napada zglob ručjai

mnoge zglobove šake, ali ne distalnlje zglobove.

[0058] Kod RA, zglobovi pokazuju tendenciju simetrične zahvaćenosti. Odnosno, ako su zglobovi desne šake

napadnuti, vrlo je verovatno da su upaljeniina levoj Saci.Udruge zglobove koje RA napada često spadaju laktovf.

ramena, vrat, vilica, skočni zglobovi, kolenaikukovi. Izuzev vrata, RA ne napada kičmu.

[0059] U Jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavice koji se leči, prevenirailiublažuje je psorijatični artritis.

Psorijatičnl artritis je stanje koje izaziva otoki bolu zglobuioko njega.Onuzrokujeiospu kože sa Ijustenjem. Može da zahvati veliki broj zglobova uključujući prste naruci,ručje, prste na nogama, kolena, skočne zglobove, taktove,iramena, kaoikičmuizglobove na donjem delu leđa (koji se nazivaju sakroilijačni zglobovi).

[0060] Psorijatični artritis napada tkiva oko zglobova, uključujući tetiveiligamente. Ovo može da dovede do otoka

celog prsta, pa se to zove prst kao "kobasica". Tu jeiupala kože, posebno na laktovima, kolenimaikoži poglavine.

Psorijatični artritis je povezan sa psorijazom, poremećajem koji izazva upalu delova kože koja onda biva pokrivena

sivimilisrebrnastim Ijuspicama/krastama.

[0061] U jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavicekojise leči, prevenirailiublažuje jereaktivniartritis.

Reaktivni artritis se odnosi na bol, ukrućenost, crveniloiotok zgloba kao posledica prethodne infekcije. Ovo se

najčešće javlja u zglobovima donjih udova (kolena, skočni zglobovi, prsti na nogama), ali može da se javiina

gornjim udovima. Problemi mogu da budu samouzglobovimailimogu da budu uključeniidrugi telesni sistemi kao

što su oči, koža, mišići ili tetive. Kada zahvata oblastiiizvan zglobova, reaktivni artritis se onda naziva Reiter-ov

sindrom.

[0062] U jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavice koji seJeči,prevenirailiublažujejeskleroderma.

Skleroderma je stanje kada koža zadebljava i otvrdnjuje. Ima dva glavna tipa skleroderme. Jedantipje lokaBzovana

skleroderma, koja uglavnom zahvata kožu. Može da zahvatiimiSićeizglobove. Drugi tip, generalizovana

skleroderma, koja zahvata kožu kao i unutrašnje organe, kao Sto su srce, plućaibubrezi.

Najkarakteirstičnija osobina skleroderme je nagomilavanje ožiljnog, tvrdog fibroznog tkiva na koži. U manje vidljive

promane spadaju oštećenje ćelijskih slojeva koji oblažu zidove malih krvnih sudova. Ovo može da oštetiivažne

organe.

[0063] U jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavice koji seleči,prevenirailiublažuje jeSjOgrenov

sindrom. SjOgrenov sindrom je hronični poremećaj koji izaziva oštećenje pljuvačnih žlezda Sto ima za posledicu suva

usta, i suznih žlezda, Sto ima za posledicu suveoči.Ovo može da zahvati i druge delove tela, uključujući zglobove,

mišićeinerve, organe kao Sto su pluća, bubrezi, jetra, pankreas, želudacimozak,ižlezde kao što je tiroidna

žlezda. SjOgrenov sindrom može da izazove kompletnu destrukciju ma koje od ovih oblasti. Budući da SjOgrenov

sindrom može da napadneijetruipankreas, veća Je šansa da se razvijeikancer limfnog tkiva. Međutim, ovo je neuobičajenoi retko.SjOgrenov sindrom može da se javi na dva načina. Imamo 'sekundarni' SjOgrenov sindrom kada se javlja kod ljudi koji imaju neko reumatsko stanjeilibolest vezivnog tkiva, kaoStoje lupus, sklerodermaili

polimiozitjs. Naziva se 'primami' SjOgrenov sindrom kada suva ustaisuve oči nisu povezani sa reumatskim

stanjem.

[0064] U Jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavice koji se leči, prevenirailiublažuje je Stillova bolest.

Stillova bolest Je jedna forma artritisa koja se odlikuje naglim skokovima visoke temperature, ružičastom ospomi

upalom zglobova. Ova bolest je najčešća kod deceikodnjihse zato naziva sistemski juvenilni idiopatski artritis.

Stillova bolest može da se javi i kod odraslih, iako mnogo rede nego kod dece.Utom slučaju naziva se Stillova

bolest sa početkom kod odraslihiliAOSD.

[0065] Kao što je gore već otkriveno, poremećaji hrskavicekojise mogu lečiti, preveniratiiliublažavati terapijom koja

je ovde opisana uključujuiOsteohondritis Dissecans, kostohondritis (kao što je Tietze-ov sindrom), osteomijelitis,i

recidrvirajući polihondritis.

[0066] U jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavicekojise leči. preveniraIIIublažuje je Osteohondritis

Dissecans. Osteohondritis dissecans (OCD) je izraz za osteohondralnu frakturu. Jedan osteohondralni fragment

može da bude prisutanin situ,nepotpuno odvojen, ili kompletno odvojen. OCD je oblik osteohondroze ograničen na

artJkulamu epifizu. Artikularna epifiza ne uspeva kao rezultat kompresije. U patologiju su najverovatnije uključenii

traumaIishemija. Trauma je najverovatnije primami pokretač, a ishemija je onda sekundama povreda.

Trauma može da bude uzrokovana direktnom traumom, kao Sto je impaktna fraktura,ilirepetitivnom mikrotraumom,

kao Stoje ekscesh/ni normalni kompresivni stres.

Najčešće je napadnuto koleno. Međutim, lakatni zglob, skočni zglob, tarzalni navikularni, kuk, rameni zglob, GlenokJ.

zglob ručja takođe mogu da budu napadnuti.

OCD ima sklonost da napada mlađe pacijente. Kod OCD lakta, pacijentiuprošeku imaju 23 godine, a raspon im se

kreće od 4-47 godine. Kada je napadnut skočni zglob, pacijentiuprošeku imaju 20 godina, a rasponimsekrećeod

8-50 godina. Kada je napadnut kuk, pacijentiuprošeku imaju 24 godine, a rasponimse kreće od 14-39 godina.

Pacijenti obično prijavljuju bol pri ekstremnim rasponima pokreta. Periartjkulami edem je često prisutaniblago Je

topao na dodir. Kada je zahvaćen neki donji ud, pacijenti često hramlju.Simptomise često ublažavaju kada se zglob

zaštiti Imobillzacijom.

[0067] U jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavicekojise leči, prevenirailiublažuje je kostohondritis. KostohondritJs je upala spojeva gde se gornja rebra spajaju sa hrskavicom kojaihvezuje za grudnu kostilistemum.

Uzrok obično nije poznat. Kada je bol kod kostohondritisa praćeniotokom, naziva se Tietze-ov sindrom.

[0068] U jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavice koji se leči, prevenirailiublažuje je osteomijelitis.

Osteomijelitis je akutniilihroničnl inflamatorni procesukostimainjegovim strukturama zbog infekcije piogenim

mikroorganizmima.

Infekcija povezana sa osteomijelitisom može da bude lokalizovanailimože da se raširi kroz periosteum, korteks,

koštanu srž I kanceloznu kost (spužvasti deo). Bakterijski patogen varira zavisno od uzrasta pacijentaimehanizma

nastanka infekcije.

Hematogeni osteomijelitis je infekcija uzrokovana rasejavanjem bakterija iz krvi. Akutni hematogeni osteomijelitis se

odlikuje akutnom infekcijom kosti izazvano zasejavanjem bakterije u kost iz udaljenog izvora.Ovostanje nastaje

prvenstveno kod dece. Najčešće mesto je brzo rastuća i visoko vaskularizovaha metafiza kostiju koje rastu. Vidljivo

usporavanje Hi začepljenje krvnih sudova kako se oštro savijaju na distalnoj metafizi predisponira ove krvne sudove

za trombozu, a samu kost za lokalizovanu nekrozuizasejavanje bakterija. Akutni hematogeni osteomijelitis, uprkos

svom imenu, može da ima spor tok kliničkog razvojaidosta podmukao početak.

DirektnaHikontiguozna lnokulacija osteomljelitisa izazvana je direktnim kontaktom ovog tkivaibakterija tokom

operacijeilipovrede (traume).. Direktno zasejani (od izvora zaraze) osteomijelitis je infekcija kosti izazvana

inokulacijom mikroorganizama putem direktne povrede (traume), širenjem sa zaraznog žarišta,ilisepsom posle

hirurškog zahvata. Kliničke manifestacije direktno zasejanog osteomljelitisa su lokalizovanije nego što je to slučaj sa

hematogenim osteomijelitisom, i često je uključen veći brojrazličitihmikroorganizama.

U dodatne kategorije spadajuhroničnlosteomijvelitisiosteomijelitis kao posledica periferne vaskulame bolesti. Hronični osteomijelitis perzistirailirecidivira, nezavisno od inicijalnog uzrokai/ilimehanizmaiuprkos agresivnoj

intervenciji, lako je navedena kao etiologija, periferna vaskulama bolest je zapravo predisponirajući faktor, a ne pravi

uzročnik infekcije.

Stanja bolesti za koje se zna da predisponlraju pacijente za osteomijelitisuključujudiabetes mellitus, bolest srpastih

ćelija, sindrom stečene imunodeficijencije (AIDS), zloupotreba droga intravenskim putem, alkoholizam, hronična

upotreba steroida, imunosupresijaihronična bolest zglobova. Uz to, prisustvo ortopedskog protetičkog pomagala je

nezavisni faktor rizika kao što su toisvaka nedavna ortopedska operacijailiotvoreni prelom.

[0069] U jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavice koji se leči, prevenirailiublažuje je recidivirajući

polihondritis. Recidivirajući polihondritis (RP) je retkoiteško epizodično zapaljensko stanje koje zahvata

hrskavičaste strukture, pretežno oneu uhu,nosuilaringotraheobronhijalnom stablu.Udruge strukture koje mogu da budu napadnute spadaju oko, kardiovaskularni sistem,perifernizglobovi, srednje uhoi unutrašnjeuho.

Etiologija ove bolesti nije poznata; međutim, patogeneza je autoimune prirode. Dokazi za autoimunu etiologiju

uključuju njenu kliničku povezanost sa drugim autoimunim poremećajima, njegovu povezanost sa HLA-DR4

haplotipom, patološki nalaz infHtriranih CD4Tćelijaikompleksa antigen-antltelouzahvaćenoj hrskavici, celulamimi

humoralnim odgovorima protiv kolagena tipaII idrugih kolagenskih antigena, I opažanjem da imunosupresivni režimi

najčešće suprimlraju ovu bolest.

[9070] U Jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavice koji se leči, prevenirailiublažuje je oštećenje

hrskavice kao posledica traume. Povrede hrskavice mogu da nastanu kao rezultat traumatske mehaničke

destrukcije. Direktni udaracilidruga trauma mogu da povrede hrskavicu. Hrskavica nema direktno snabdevanje

krvlju, pa zato ImaImalu sposobnost da se sama regeneriše. Metode ovog pronalaska poboljšavaju regeneraciju

hrskavice. Prema tome,ujednom obliku ovog pronalaska, oštećenje hrskavice usled traume može da bude

posledica udesailihlrurške intervencije.Ujednom posebnom obliku ovog pronalaska, oštećenje hrskavice usled traume može da bude posledica udesailihirurške Intervencije, a posebno ortopedske operacijeiliplastične

operacije. Ovaj pronalazak uzima u obziriterapiju sportskih povredaisportom izazvano trošenje tkiva zgloba.

[0071] U jednom obliku ovog pronalaska, poremećaj hrskavice koji seleči,prevenirailiublažuje Je poremećaj

neestetskog izgleda. U takvom obliku, metodIupotreba ovog pronalaska mogu da se koriste u kombinaciji sa

plastičnom hirurgijom.

[0072] Pošto smo sada potpuno opisali ovaj pronalazak, stručnjacima za ovu oblast ćebitijasno da se isto može

uraditi sa širokim spektrom ekvivalentnih parametara, koncentracijaistanja ne odstupajući od duhaiobima ovog

pronalaska! beznepotrebnogeksperimentisanja.

[0073] lako je ovaj pronalazak bio opisan u vezi sa njegovim konkretnim oblicima, jasno je da se on može dodatno

modrRkovati. Ova primena ima zaciljda obuhvati sve varijacije, upotrebeiliadaptacije ovog pronalaska kojeu

opitim crtama prate principe pronalaskaiuključuju takva odstupanja od ovog otkrivanja koja spadajuuokvire

poznateiliuobičajene prakse ove struke na koju se sam pronalazak odnosi,ikako se mogu primeniti njegove suštinske osobine koje su navedeneikoje slede uokvirudodatih zahteva.

[0074] Pozivanje na poznate korake metoda, konvencionalne korake metoda, poznate metodeilikonvencionalne

metodenina koji način ne predstavlja priznaje da je makojiaspekt, opisili oblikovog pronalaska već otkriven, predstavljenilisugerisan u relevantnoj struciinauci.

[0075] Gore navedeni opisi konkretnih oblika će tako potpuno daotkriju opStuprirodu pronalaska koju drugi mogu,

primenjujućl znanja iz struke (uključujućiisadržaj citiranih referentnih literatumih jedinica) da lako modifikuju i/ili

adaptiraju za različite primene kaoStosu posebni oblici, bez nepotrebnog eksperimentisanja,ine odstupajući od opSteg koncepta ovog pronalaska. Prema tome, ovakve modifikacije imaju zaciljda se uklopeuznačenjeiraspon

ekvtvalenata otkrivenih oblika, na osnovu uputstavaiusmeravanja koji su ovde predstavljeni. Treba razumeti da

jezik i terminologija koji se ovde koriste služe opisu, a nemaju ograničavajući smisao, tako da sve termineilifrazeu

ovo] specifikaciji treba da tumači stručnjak za ovu oblastkojirazume uputstvaiusmeravanja koja su ovde

predstavljena, u kombinaciji sa prosečnim stručnim znanjima za datu oblast.

PRIMER 1: Modeli bolesti kod životinjaIproširena farmakologija

[0076]In vivo,FGF-18(170AA) je ispitivan u različitim modelima bolesti OAioštećene hrskavice, uz značajnu

terapijsku efikasnost korištenjem intra-artikulamog Q. a.) doziranja. Sveukupna terapijski efikasna doza od 3-40 ug

i A po žrvotinji/nedeljno pokazana je različitim vrstama (pacov, pas). Rezultatiizgore navedenih životinjskih modela

bolesti (OA kao i defekti hrskavice) rezimirani su dole

PRIMER 1.1: Model OA sa cepanjem menlsKusakodpacova

Afetođ

[0077] Levvis pacovi muškog pola (5-10/grupl) podvrgnuti su operaciji da se indukuje medijalno cepanje meniskusa u desnom kolenom zglobu. Doziranje je primenjeno i.a. i započeto 19-21 dan posle operacije u dozama od 0.3,1, 3ili10 ug (formulisano u fiziološkom rastvoru) da se utvrdi farmakodlnarničko dejstvo povezano sa režimom doziranja. Ove ukupne doze bile su davane kao (i) jedna doza, (ii) jednom nedeljno (1/3 ukupne doze po injekciji) tokom 3 nedelje, ili (Ili) 3 puta nedeljno tokom 3 nedelje (1/9 ukupne doze po injekciji). Po zaključivanju terapije ili 3 nedelje po okončanju terapije, desna kolena su uzeta za histopatološku procenu potencijalnih efekata. Procena lezija obavljena je u 3 različite zone: regionalne razlike po medijalnim tibijalnim platoima uzete su u obzir, tako što je svaki deo podeljen u 3 zone (1-spolja, 2-u sredini, 3-unutra). U hirurškom modelu OA, spoljna (z1) i srednja (z2) trećina su obično najteže zahvaćene, a blaže promene su prisutne u unutrašnjoj trećini (z3).

Eksperimentalni dizajn

[0078] Životinje (5-10/gmpi), smeštene po 2-3/kavezu, anestezirane su izofluranom, a desno koleno je pripremljeno

za operaciju. Incizlja na koži rađena je preko medijalnog aspekta kolena, pa je medijalni kolateralni ligamentizložen

tupom disekcfjom, a potom presečen. Medijalni meniskus je prosecen oslom debljinom da se simulira kompletno

cepanje. Koža i potkožno tkivo su zaSiveni koncem 4-0Vicrylkorištenjem subkutikularne metode. Doziranje na intra-artikulami način započeto je 19-21 dana posle operacijeiobustavljeno pošto je data jedna dozailinastavljeno tokom 3 nedelje sa intra-artikulamim injekcijama jednom nedeljnoili3 puta nedeljno. Pacovi su potom žrtvovani (g1-16)ili

imje dozvoljeno da se oporave u naredne 3 nedelje pred žrtvovanje (g17-32). Četiri sata pred nekropsiju, svim

pacovima je dato 50 mg/kg BRDU da se obeleže ćelije koje suufazi aktivne proliferacije.Uzorcikrvi su uzeti da se

analizira serum neposredno pred nekropsiju, audesnom kolenu rađena je sinovijalna lavaža. Na samoj nekropsiji,

sa desnog (operisanog) kolenog zgloba skinuto jemišićnotkivoivezivno tkivoistavljenou 10%neutralnog

puferovanog formalina. Patela Je uklonjena da se omogući ispravno fiksiranje zglobova .Uformalin su stavljenii

trahea, sternum,iuzorci uha.

Rezultati proeenjonl 6 nedelja posle operacije

Netretlrane kontrole ( procenjeno6nedelje posle operacije)

[0079] Netretirane životinje sa pocepanim medijalnim meniskusom koje su žrtvovane € nedelja posle operacije imale

su degeneraciju tibijalne hrskavice koja je bila težauspoljašnjem delu2/3tibijalnog platoa, a manje teškauunutrašnjoj trećini. OsteofrrJ subiliveliki (srednja vrednost 468 pm). Degeneracijafemoralnehrskavice bila je blažai

promenljivija od tibijalne degeneracije. Životinje tretirane fiziološkim rastvorom jednom nedeljno imale su značajno

niže skorove degeneracije zone 3 ukupne tibijalne hrskavice (18%), značajnonižikoeficijent dubine(16%), i

značajno veću površinu vijabilne hrskaviceulateralnoj tibijiuporađanju sa netretiranim životinjama (13%). Životinje

tretirane fiziološkim rastvorom 3 puta nedeljno imale su značajno niže skorove degeneracije zone 2 ukupne tibijalne

hrskavice (24%), značajnonižikoeficijent dubine (13%),iznačajno veću površinu vijabilne hrskaviceumedijalnoji ulateralnojtibiji uporađanju sa netretiranim životinjama (15i14%). Ove razlikeukontrolnim grupama su verovatno

rezultat ponavljanih anestezija što je uticalo na ukupnu aktivnost ovih životinja, iako se ne može isključiti ni

mogućnost i. da je ponavljano ubrizgavanje fiziološkog rastvorauticalonatežinulezija takoštoje olakšavalo

uklanjanje medijatoraiotpadnog materijala.

Jedna doza kao tretman ( procenjeno 6 nedelja posle operacije)

[0080] Životinje kojima je data po jedna doza 10 ug FGF-18(170AA) imale su značajno većuširinuukupne degeneracije hrskavice (16%) zbog povećanog gubitka proteoglikanau zoni3. Skorovi osteofitaimerenja subiliznačajno povećani (19, odnosno 25%) kodživotinja kojimaje data jedna doza od 10 ug FGF-18(170AA). Površina vijabilnog matriksa hrskavice u medijalnojtibijibila je značajno povećana za 27% kod životinja koje su primile 10ug.

Imunoprebojavanje otkrilo je bromodeoksiuridinsku (BRDU) Imunopozitivnost u fibroznoj srži uz lezije hrskavicei u

ćelijama koštane srži, fibroblastima,iosteofitnoj hrskavici, sa sličnim modelom prebojavanjauzglobovimakojisu tretirani fiziološkim rastvorom i FGF-18(170AA).Ovirezultati govore da jedna injekcija10ug FGF-18(170AA)imadefinitivno anaboličko dejstvo, što se dokazuje povećanjem osteofitaipovećanompovršinommedijalnetibijalne

hrskavice. Međutim, ove promenenisubile dovoN/ie da se poprave sveukupni skorovi degeneracije hrskavice.

Verovatno je da je povećanje površine medijalne hrskavice rezultat povećane debljine hrskavice napovršinikoja

nosi teret, uz osteofit.

Jednom nedeljno tokom 3 nedelje ( procenjeno6nedelje posle operacije)

[0081] Životinje koje su primale 3 ug FGF-18(170AA) jednomnedeljnoimale su značajnonižeskorove degeneracije hrskavice od kontrolnih životinja koje su primale fiziološki rastvor jednom nedeljnouzoni 2 medijalne tibije.Životinjekoje su primale 10 pg FGF-18(170AA) imale su značajno manjuširinudegeneracije (37%), a one koje su primale 3 ug (28%)Ili1 ug (15%) pokazale su istuinhibiciju.Skoroviimere osteofitabilisu srazmemi doziiznačajno povećani

terapijom sa 10 (32i53%) ili 3 (21 i 32%) pg FGF-18(170AA). Površina vijablnog matriksa hrskaviceumedijalnoj

tibijibila je značajno povećana terapijom sa 10 pg FGF-18(170AA)(27%).Blag do izražen hronlčni aktivni sinovitis sa fibrozom bio je vidljiv i zglobovima u koje je ubrizgavano 10ili3 ug, auonimaukoje je ubrizgano1pg sinovitis jebiominimalan. Subhondralna resorpclja kosti bila je minimalno povećanaunekoliko zglobova tretiranih sa 10 ug. Životinje tretirane sa 3Ili10 ug FGF-18(170AA) imale su povećano obeležavanje BRDUufibrotičnoj srži, sinovijumu,

isvim poljima hondrogenezeiliosteofita, u porađanju sa kontrolama koje su primale fiziološki rastvor. Ovi rezultati su

pokazali značajnu korist od terapijeiodgovor na dozu kada je korištena paradigma doziranja jednom nedeljno na

širinudegeneracije hrskavice. Ovaj parametar najbolje ukazuje na prisustvo vijabilnog matriksa određenogtipa u

oblasti pogođenoj oštećenjem,iuz površine medijalne tibijalne hrskavice pokazuje anabolički odgovor. Rezultati

obeležavanja BRDU ukazuju na produženi proliferativni odgovoriposle prestanka doziranja.

Tri puta nedeljno tokom3nedelje ( procenjeno6nedelja posle operacije)

[0082] Tretman sa 1, 3 ili 10 ug FGF-18(170AA) koji se daje u vidu 3 injekcije nedeljno doveo je do značajnog

smanjenja skora degeneracije tibijalne hrskavice u poređenju sa kontrolnim životinjama koje su primale 3 puta

nedeljno fiziološki rastvor u zoni 1 (životinje tretirane sa 10 ug), zoni 2 (1 ili 3 ug), i zoni 3 ukupno (1 ili 3 ug).

Tretman sa 10 ug značajno Je povećao ukupnu širinu degeneracije tibijalne hrskavice za 24%. Tretman sa 1 ili 3 ug

smanjio je na statistički insignifikantan način širinu degeneracije hrskavice za 24%, odnosno 21%, ukazujući na

određeno korisno dejstvo. Životinje tretirane sa 1 ili 3 pg FGF-18(170AA) takođe su imale značajno manji koeficijent

dubine (17%, odnosno 18%) od kontrola koje su primale fiziološki rastvor. Skor medijalnih tibijalnih osteofita bio je

povećan posle tretmana sa 0.3, 1, 3 ili 10 ug FGF-18(170AA) (13%, 7%, 13%, odnosno 15%), dok su sve 4 doze

(0.3,1, 3 ili 10 ug FGF-18(170AA)) značajno povećale mere osteofita (12,18, 60, odnosno 62 %). Tretman sa 10

ug značajno je povećao skor degeneracije femoralne hrskavice za 114%. Skorovi kostiju bili su značajno povećani

tretmanom sa 3 (60%) ili 10 (88%) pg FGF-18(170AA). Ukupan skor zglobova bez femura bio je značajno smanjen

tretmanom sa 3 pg FGF-18(170AA) (13%), al kada je dodat i femur u ukupan skor zglobova, ova varijacija je

eliminisana. Tretman sa 1, 3 ili 10 pg FGF-18(170AA) značajno je povećavao površinu vijabilne hrskavice u

medijalnoj tibiji (13%, 29% i 29%), a tretman sa 3 ili 10 pg značajno je povećavao površinu u lateralnoj tibiji (22% i

13%). Zglobovi u koje je ubrizgano 3 Ili 10 pg imali su izražen do težak sinovitis sa povećanom subhondralnom

re8orpcijom kosti, a slične ali blage do umerene promene zabeležene su u zglobovima tretiranime sa 1 pg. Životinje

tretirane sa 1, 30 ili 10 pg FGF-18(170AA) imale su obeležavanje sa BRDU u brojnim oblastima, uključujući koštanu

srž, osteofite, meniskus, sinovijum, i polja hondrogeneze. Ovi rezultati pokazali su najizraženije anabollčke efekte

svih terapijskih paradigmi, ali su bili praćeni i teškom sinovijalnom upalom i povećanom resorpcijom subhondrafne

kosti.

Rezultati procenjeno 9 nedelja posle operacije

Netretlrane kontrole ( procenjeno 9 nedelje posle operacije)

[0083] Netreu'trane životinje sa poderotinom medijalnog meniskusa koje su žrtvovane 9 nedelje imale su

degeneraciju tibijalne hrskavice koja je bila najteža u spoljašnje 2/3 tibijalnog platoa, a manje teška u unutrašnjoj 1/3.

Degeneracija femoralne hrskavice bila je manje teška i ova je bila vijabilnija. Skorovi su po pravilu bili viši nego kod

netretiranih životinja koje su žrtvovane 6. nedelje. Kontrolne životinje koje su primile samo jednu dozu fiziološkog

rastvora imale su značajno niže skorove degeneracije hrskavice u zoni 2 tibije (12%) od kontrolne životinja koje su

primale dozu fiziološkog rastvora jednom nedeljno (18%). Kontrolne životinje koje su primile samo jednu dozu

fiziološkog rastvora imale su i značajno veću širinu umerene degeneracije kolagena (92%). Životinje koje su primale

dozu fiziološkog rastvora jednom nedeljno imale su značajno niži zbir teških, izraženih, umerenih i blagih

degeneracija kolagena (15%), od onih kontrolnih životinja koje su primale dozu fiziološkog rastvora 3 puta nedeljno

(22%). Ove razlike su bile relativno minorne, jer je u svakoj od ovih grupa bilo samo po 5 pacova, pa je to moglo biti i

rezultat individualnih varijacija u progresiji bolesti.

Jedna doza ( procenjeno9nedelja posle operacije, uključujući 13 nedelje posle terapije)

[0084] Nije bilo značajnih dejstava terapije ni kod jedne od životinja kojima je data po jedna doza FGF-18(170AA) i

koje su žrtvovane 9 nedelja posle operacije, lako je u nekoliko zglobova u koje je ubrizgano po 10 pg bilo dokaza o

anaboličkom odgovoru na lateralnoj tibiji.

Jednom nedeljno tokom 3 nedelje ( procenjeno 9 nedelja posle operacije, uključujući I 3 nedelje posle

terapije)

[0085] Posle tretmana sa 10 pg FGF-18(170AA) jednom nedeljno, zabeleženo je značajno smanjenje skora

degeneracije hrskavice u zoni1i zoni 3 ukupno u medijalnoj tibiji i to za 38, odnosno 31%. Tretman sa 0.3 pg FGF-18(170AA) značajno je smanjio ove skorove u zoni 2 u poređenju sa kontrolama koje su primale fiziološki rastvor

jednom nedeljno. Životinje tretirane sa 10 pg FGF-18(170AA) imale su signifikantno manju širinu degeneracije

hrskavice (38%), Koeficijenti dubine bili su značajno smanjeni tretmanom sa 10 pg FGF-18(170AA) (22%). Tretman

sa 3 ili 10 pg FGF-18(170AA) signifikantno i identično je povećao skorove osteofita (25%), ali su životinje kojima je

dato 10 pg imale i signifikantno povećana merenja osteofita (53%). Zabeleženo je značajno smanjenje od 23%

ukupnog skora zglobova sa femurom kod životinja kojima je dato 10 pg FGF-18(170AA). Površina vijabilne

hrskavice bila je signifikantno povećana kod životinja kojima je dato 10 pg FGF-18(170AA) i u medijalnoj (40%) i u

lateralnoj (81%) tibiji. Tretman sa 10 pg FGF-1B(170AA) signifikantno je smanjio širinu teške i minimalne

degeneracije kolagena, kao i širinu teške, izražene I umerene degeneracije računato zajedno, i širinu zajednički

računate teške i izražene degeneracije. Sinovijalna inflamacija je bila minimalna u zglobovima u koje je ubrizgano 3

ili 10 pg, a nije Je uopšte bilo sa nižim dozama. Anabolički odgovori su bili evidentni u nekima ili u svim zglobovima,

sa svim dozama. Obeležavanje BRDU viđeno je uglavnom u koštanoj srži I fibroblastima kontrola koje su primale

fiziološki rastvor, a pojačano obeležavanje (hrskavica I osteofiti) zabeleženo je u zglobovima u koje je ubrizgano 10

pg. Ovi rezultati ukazuju da se regeneraclja hrskavice /anabolički odgovor nastavljaju i posle perioda terapije, a da

sa sinovitis povukao, iako su merenja osteofita bila slična posle 8 ili 0 nedelja u zglobovima tretiranim ovom dozom.

Poboljšana korist od odgovora na dozu zabeležena je korišćenjem parametra značajne degeneracije hrskavicei

teškog gubitka matriksa, mereno degeneracijom kolagena.

Tri puta nedeljno tokom 3 nedelje ( procenjeno9nedelja posle operacije, uključujući I 3 nedelje posle

terapfje)

[0086] U zoni 3 ukupni skor degeneracije tibijalne hrskavice scorebioje signifikantno smanjen za 38% kod životinja

koje su primale 10 pg FGF-18(170AA) u vidu 3 injekcije nedeljno,upoređenju sakontrolnimživotinjama koje su primale fiziološki rastvor 3 puta nedeljno. Tretman sa10pg FGF-18(170AA) takođe je signifikantno smanjioširinu

degeneracije hrskavice (48%). Koeficijent dubine bio je signifikantno smanjen za 27% kod životinja tretiranih sa 10

pg FGF-18(170AA). Osteofrtna merenja bila su signifikantno povećana kod životinja tretiranih sa 3 (57%)ili10

(103%) pg FGF-18(170AA). Tretman sa1,3,ili10 pg FGF-18(170AA) signifikantno je povećao površinu vijabilne hrskaviceumedijalnoj tibiji (34%, 37%, odnosno 71%), dok je tretman sa 0.3ili10 pg FGF-18(170AA) signifikantno

povećao površineulateralnoj tibiji (46%i67%). širina blage degeneracije kolagena bila je signifikantno povećana

kod životinja tretiranih sa 3ili10 pg FGF-18(170AA), kao što jetobio slučajisa blagomiminimalnom

degeneracijom kombinovano, kod životinja koje su primale10pg. Blagi sinovitis bio je prisutanusvim zglobovima u

koje js ubrizgano 10 pg (podeljeno), a minimalni do blagi sinovitis bio je prisutan kodonihkoji su primali 1Ili3 pg.

Anabolički odgovori bili su evidentni od doze1pg naviše. Obeležavanje BRDU uglavnom je zabeleženo u koštanoj

sržiifibroblastima kontrola koje su primale fiziološki rastvor, a pojačano obeležavanje (hrskavicaiostaofiti)

zabeleženo je u zglobovimaukoje je ubrizgano 10 pg.Ovirezultati ukazuju da se regeneracija hrskavice /anabolički

odgovor nastavljajuiposle perioda terapije, a da se sinovitis povukaoupoređenju sa vremenskom tačkom od 6

nedelja. Korisna dejstva na gubitak kolagena bila su manje izražena, lako je bio vidljiv jasan trend ka manjim

merenjima za oblasti izraženog do teškog gubitka.

PRIMER 1.2: OA model menisektomije kod pasa

[0087] Ženke pasa rase zečara (n-3/grupi)kojisu podvrgnuti unilateralnoj parcijalnoj medijalnoj menlsektomiji na

levom kolenu mesec dana pre započinjanja terapije, primale sufiziološkirastvorili3, 10,ili30 pgFGF-18(170AA)samo jednom, Jednom nedeljno,ili3 puta nedeljno (podeljenou 1/3doze) tokom 3 nedelje da se utvrde korisna

dejstva na potvrđeni OA.

[0088] Posle 3 nedelje tretmana, leva kolena su procenjlvana na dejstva na makroskopske (n-3/grupi)i

mikroskopske (n=3/grupi) promene indukovane menisektomijomida se nađu dokazi anaboličkog dejstva. Svi psi

osim jednog imali su normalan apetit 11 aktivnost tokom celog trajanja ovog istraživanja. Jedan pas (YLI-8)izgrupe

12 preminuo je pre završetka ispitivanja(17.dana) zbog aspiracione pneumonije povezane sa ponavljanom

anestezijom zbog ubrizgavanja u zglobove. Tipične degenerativne promene koje seodlikujulokalnim, dobro

ograničenim lezijama degeneracije hrskavice bile su prisutne na medijalnim tibijama svih operisanih pasausvim

grupama. Sporadično su postojaleifemoralne lezije.

Svi psi su imali minimalno zadebljanje medijalne kapsule zgloba. Oštećenje meniskusa (približnoV4nedostaje na

nekropslji. gde regeneracijeiliuopšte nijebilo ilije bila umerena) bilo je sličnousvim grupama.

Mikroskopska procena otkrila je dainetretirana kolenaikolena koja su tretirana samo nosačem često su imala

hipertrofiju hrskavice sa kloniranjemuzoni1nivoa 1i 2.Definitivno anaboličko dejstvo (pojačano kloniranje,

celulamost i prebojavanje proteoglikanom u poljima sa lezijom) zabeleženo jeukolenima koja su tretirana sa 30 pg

(10 pg 3 puta nedeljno) FGF-18(170AA),iove promene su bile najupadljivije na femoralnim kondilima. Manje, alii

dalje uverljivo anaboličko dejstvo zabeleženo je na nekim kolenima tretiranim 3 puta nedeljnonižimdozama FGF-18(170AA), ili u kolenima tretiranim sa 30 ili 10 pg jednom nedeljno. Kada su bile prisutne ove promene indukovane

FGF-18(170AA) po pravilu su bile većeugornjoj1/3do 1/2 hrskaviceili umatriksima uz duže procepe.

Rezultati ove studije pokazuju definitivno anaboličko dejstvo i.a. tretmana sa 10 pg FGF-18(170AA) 3 puta nedeljno

(30 pg ukupno za nedelju dana)usvim kolenimaimanje dejstvounekim kolenima koja su tretirana nižim dozama3puta nedeljnoHi30ili10 pg jednom nedeljno. Ove promene su se sastojale od kloniranja, pojačane sinteze proteogfikana u gornjoj 1/3 to1/2hrskaviceili umatriksima uz duže procepe. Blage proliferativne promene

marginalne zone zabeležene su u nekim zglobovima, ali nije bilo prekomemih promena sličnih onima koje su

zabeleženo kod pacova. AnaboliČke promeneuzglobnoj hrskavici bile su veće od anaboličkih promenau

marginalnim zonamausvim slučajevima. Merenja oštećenja kolagena takođe su ukazala na određenu zaštitu

integriteta matriksa

PRIMER 1.3: Model prednjeg ukrštanog ligamenta (ACL) kod paaa

[0089] Za ispitivanje teškog progresivnog osteoartritisa, korišćen je model prednjeg ukrštenog ligamenta (ACL) za

predklinička farmakološka ispitivanja, uključujućiiMRI praćene nakrajuterapijeiperiod naknadnog praćenja. Ovaj model daje podatke o efikasnosti (histopatološkeiMRI tokom vremena,inaknadno praćenje)uzpodatkeo funkciji

pomoću analize hoda.

[0090] Koristeći neinvazivna očitavanja MRI već na kraju terapijevidise smanjenje lezija hrskavice u poređenju sa

početnim zdravim stanjem (-13.3, -7.5, -9.3i-8.8 za placebo,3pg/zglob,10pg/zglobi30 pg/zglobu,). Isto tako,

funkcionalno poboljšanje mereno analizom hoda na odgovarajućem aparatu.pločiza merenje sile" može da se

pokaže na kraju terapije: Analiza hoda obavljena je merenjem na platformi koja meri pritisaki silu(Matscan® Svstem, TekscanIne,Boston,

MA, USA).

Procedure prikupljanja podataka za analizu hoda

[0091] MatscanO Sistem uključuje 4 displeja za hod na podu, gde svaki ima po 2.288 senzorna elementa uključena

u senzomu površinu 432 mm X 368 mm, koja daje prostorun rezoluciju od 1.4 sensela/cm2. Ova naprava je

kalibrlsana prethodno definisanom težinom na početku Ispitivanja, a ista kalibracija je koriSćena za sve pse tokom

trajanja ove studije.

[0092] Za zadnju nogu sa indukovanim osteoartritisom, vrsna vertikalna silaikontaktna površina zabeleženi su

tokom hoda kasom brzinourasponu od 1.9 do 2.2 metara/sec. Brzina je potvrđena korištenjem hronometra.

Beleženje podataka o hodu u okviru 3 sekunde rađeno je sa brzinom uzorkovanja podešenom na 44 herca, čime je

dobijeno ukupno 132 ramova. Prvih 5 validnih ispitivanja dobijeno je za svakog psa, a potom je izračunat prošek da

seutvrdiprofil za svakog psa u datoj vremenskoj tačci. Vršna vertikalna sila izražena jeuprocentu telesne težine

(%BW), a kontaknta površina je izraženaukvadratnim santimetrima (cm2).

[0093] Kada se radi o vršnoj vertikalnoj sili koju postiže zadnji udukasuukome je indukovan osteoartritis, ovaj

model osteoartritisa kod psa dao Je abnormalni hod (4. nedelje) koji se razlikovao od preoperathmih vrednosti

(početne vrednosti). Vršna vertikalna silaikontaknta površinabilisu smanjeni 4i8 nedelja posle operacije, jer su

negativne promene zabeleženo u svim grupama (Tabele 3 & 4). Međutim, u grupi IV 8 nedelje posle operacije kod

pasa je zabeležen trend manje teškog slabljenja u poređenju sa početnim vrednostima, nego kod ostalih grupa.

[0094] Rezultatiin vitrofarmakologije pokazali su specifičnu aktivnost na hondrocita (proliferacija i regeneracijahrskavice/ sinteza kolagena) i odsustvo neželjenih dejstava kao Sto je proliferacija leukocita ili oslobađanje citokina od strane različitih vrsta ćelija posle izlaganja FGF-18(170AA).

PRIMER 1.4: Ispitivanja u kojima se koristiradioaktivno obeleženi FGF18 [3HJ-FGF18

[0095] Nivoi radioaktivnosti nađeni u zglobu kolena posle intra-artikulamog davanja [3HJ-FGF18 prikazani su u tabeli 5 (u vidu koncentracija ukupnog radioaktiviteta, izraženo u ekvivalentima ng/g) i u tabeli 6 (izraženo u procentima date doze); na ovim tabelama zabeleženi su nivoi radioaktiviteta utvrđeni u tretiranim zglobovima analizirano i kao intaktni koleni zglob i po uzimanju slnovijalne teCnosti. Odgovarajući farmakoklnetički parametri u zglobu kolena, bilo sa sinovijalnom tečnoSću ili bez nje prikazani su na tabeli 7.

[0096] Nivoi ukupnog radioaktiviteta u tretiranim zglobovima opadali su bi-fazno (sa terminalnim polu-životom od 20 sati). Uporedive vrednosti su dobijene uzimajući u obzir celu artikulaciju bez slnovijalne točnosti (16 časova). Sve ukupno, rezultati su ukazali da je ukupni radioaktivitet distribuiran izvan slnovijalne tečnostl u tkivima kolenog zgloba. Rezultati dobijeni posle autoradioluminografske analize tretiranih kolenih zglobova pokazali su na je najveći deo radioaktiviteta bio lokalizovan u neposrednoj blizini zgloba.

[0097] Rezultati autoradioluminografske analize celog tela posle intravenske primene i Intra-artikulamog davanja r/H]-FGF18 prikazani su na tabeli 8, odnosno tabeli 9. Koncentracije ukupnog radioaktiviteta u tkivima i organimaizražene su kao ekvivalenti ng /g (srednjavrednost ±SD).

[0098] Posle intravenske primene ukupni radioaktivitetukrviiserumu dostigao Je najveću vrednost 4 sata, odnosno

24 sati posle primene, u serumu, odnosno krvi. Merenje polu-životauserumu pokazalojeoko 55 časova. Posle

intra-artikulame primene srednje vrednosti ukupnog radioaktiviteta povećavale su se sporoidostižu najviše

koncentracije 24 sata, odnosno 48 sati posle primene,userumu, odnosnokrvi.Sistemsko Izlaganje iznosilo jepribližno20% od onoga koje se nalazi posle intravenske primene.

[0099] Ukupni radioaktivitet u serumu bio jeuprošekuvisinegou krvi,Sto govori da osnovno jedinjenjei/ilinjegovi

metabolltl imaju niski afinitet za krvne ćelijeiradioaktivitetucirkulaciji bio je uglavnom u serumu.

[0100] Nivo ukupnog radioaktivitetautretiranim zglobovima opadao je bi-fazno sa terminalnimpolu-životomod 20

časova. Sve ukupno, rezultati su pokazali da Je ukupni radioaktivitet izvan sinovijalne tečnostiukolenom zglobu.

[0101] Sve ukupno, na osnovu ne-kliničkih farmakoloških modela kod pacovaipasa, utvrđeno je da je posebno

primerenl režim doziranja jednom nedeljno tokom3nedelje. Delotvoma doza kreće seurasponu od 3-30 pg/zglob.

PRIMER 2: Primert FGF-18 Jedinjenja ovog pronalaska

[0102] Sekvence preporučenih FGF-18 jedinjenja ovog pronalaska date su ulistisekvenci koju dajemo dole.

Claims (15)

1.FGF-18 jedinjenje za upotrebu u terapiji poremećaja hrskavice naznačeno time da to FGF-18 jedinjenje treba da se daje najmanje 3 uzastopne nedelje po terapijskom ciklusu, a ova davanja se primenjuju u razmacima od oko najmanje 6,7 ili 8 dana.

2. FGF-18 jedinjenje za upotrebu u skladu sa zahtevom 1, naznačeno time da se su pomenute primene razdvojene pauzom od najmanje po 7 dana.

3. FGF-18 jedinjenje za upotrebu u skladu sa ma kojim od prethodnih zahteva, naznačeno time da to FGF-18 jedinjenje treba davati 3 uzastopne nedelje ili 4 uzastopne nedelje po terapijskom ciklusu.

4. The FGF-18 jedinjenje za upotrebu u skladu sa ma kojim od prethodnih zahteva, naznačeno time da se terapijski ciklusi ponavljaju posle 2,4,6 ili 8 meseci.

5. The FGF-18 jedinjenje za upotrebu u skladu sa ma kojim od zahteva 1 to 3, što uključuje 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 terapijskih ciklusa godišnje.

6. FGF-18 jedinjenje za upotrebu u skladu sa ma kojim od prethodnih zahteva, naznačeno time da to FGF-18 jedlnjenje treba davati intra-aritkularno.

7. FGF-18 jedinjenje za upotrebu u skladu sa zahtevom 6, naznačeno time da to FGF-18 jedinjenje treba davati u dozi od 1-100 mcg, Još bolje 5-40 mcg. još bolje 10-30 mcg po jednoj inta-artikularnoj primeni.

8. FGF-18 Jedinjenje za upotrebu u skladu sa zahtevom 7, naznačeno time da to FGF-18 jedinjenje treba davati u dozi od oko 3,5,10,15,20,25, 30,35,40,45, 50,55,60 mcg po jednoj inta-artikulamoj primeni FGF-18 jedinjenja.

9. FGF-18 jedinjenje za upotrebu u skladu sa ma kojim od zahteva 1 do 5, naznačeno time da to FGF-18 jedinjenje treba davati intravenski u dozi od 50-200 mcg/kg, još bolje 80-120 mcg/kg po jednoj intravenskoj primeni FGF-18 jedinjenja.

10. FGF-18 jedinjenje za upotrebu u skladu sa ma kojim od prethodnih zahteva naznačeno time da je taj poremećaj hrskavice osteoartritis.

11. FGF-18 Jedinjenje za upotrebu u skladu sa zahtevom 10, naznačeno time da je osteoartritis klasifikovan kao bilo blag ili umeren osteoartritis, stadijum II ili stadijum III OARSI, teški progresivni osteoartritis ili i/ili stadijum IV OARSI.

12. FGF-18 jedinjenje za upotrebu u skladu sa zahtevom 10 ili 11, naznačeno time da je taj osteoartritis zahvatio koleno ili kuk (osteoartritis kolena ili osteoartritis kuka) kao što je sekundarni osteoartritis kuka.

13. FGF-18 jedinjenje za upotrebu u skladu sa ma kojim od zahteva 1-9, naznačeno time da je taj poremećaj hrskavice povreda hrskavice,

14. FGF-18 jedinjenje za upotrebu u skladu sa ma kojim od prethodnih zahteva, naznačeno time da se FGF-18 jedinjenje odabira iz humanog FGF-18 zrele forme i da uključuje ostatke 28-207 SEQ ID NO:2 ili FGF-18(170AE1).

15. FGF-18 jedinjenje za upotrebu u skladu sa ma kojim od prethodnih zahteva, naznačeno time da FGF-18 jedinjenje treba davati jednom nedeljno tokom 3 nedelje.