RS55180B1 - 24-norudca za lečenje autoimunog hepatitisa - Google Patents
24-norudca za lečenje autoimunog hepatitisaInfo
- Publication number
- RS55180B1 RS55180B1 RS20160771A RSP20160771A RS55180B1 RS 55180 B1 RS55180 B1 RS 55180B1 RS 20160771 A RS20160771 A RS 20160771A RS P20160771 A RSP20160771 A RS P20160771A RS 55180 B1 RS55180 B1 RS 55180B1
- Authority
- RS
- Serbia
- Prior art keywords
- bile
- udca
- norudca
- liver
- mice
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Oscillators With Electromechanical Resonators (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
[0001]Ovaj pronalazak se odnosi na nove upotrebe 24-nor-ursodezoksiholne kiseline («o/-UDCA) u lečenju autoimunog hepatitisa (AIH).
[0002]Ursodezoksiholna kiselina (UDCA), žučna kiselina koja se nalazi u prirodi, koja se može naći u malim količinama u žuči i krvi ljudi, široko je korišćen lek za tretman bolesti jetre, gde je jedna od najvažnijih indikacija za UDCA rastvaranje kamena u žuči i tretman primarne ciroze žuči (PBC) i primarnog sklerotizujućeg holangitisa (PSC). UDCA je žučna kiselina koja se javlja u prirodi sa citoprotektivnim efektima, stabilizacijom membrane i anti-apoptotskim efektima. Dodatno, UDCA snižava nivoe bilirubina, transaminaza i alkalne fosfataze u serumu kao markera holestaze (Trauner & Graziadei 1999, Beuers & Paumgartner 2002).
[0003]Studije UDCA kod pacijenata koji boluju od bolesti jetre, naročito PBC pacijenata, pokazale su da administracija UDCA povećava stopu protoka žuči iz hepatocita, čime se bori sa holestazom i razblažuje i inhibira žučne kiseline, koje su uglavnom odgovorne za povredu hepatocita. Dodatno, UDCA je takođe sposobna da inhibira imuni odgovor u jetri smanjujući imunološku povredu žučnih kanala i jetre. UDCA - kao što je prethodno navedeno - je redovno korišćena za tretman PSC i PBC.
[0004]PSC, koji pogađa uglavnom muškarce, inflamatorna je bolest žučnih kanala, koja može voditi holestazi (blokiranje transporta žuči u creva). Blokiranje žučnih kanala vodi do akumulacije žučne kiseline u jetri i žuči, oštećuje jetru i eventualno izaziva otkazivanje jetre. Većina pacijenata koja boluje od PSC pokazuje takođe i hroničnu inflamaciju debelog creva (npr. colitis ulcerosa). Inflamacija žučnog kanala može takođe pogoditi okolno tkivo jetre i dovesti do cikatrizacije malih i velikih žučnih kanala, koji će izazvati konstrikciju žučnog trakta. Kao posledica toga, takva konstrikcija vodi poremećenoj sekreciji žučne tečnosti što dalje oštećuje jetru. Tokom bolesti mogu se razviti ciroza jetre i holangiokarcinom. Takođe PBC je inflamatorna bolest žučnih kanala, koja inicijalno pogađa manje žučne kanale i finalno će rezultovati u cirozi jetre. Za razliku od PSC, PBC pogađa uglavnom žene i nije u korelaciji sa inflamatornim bolestima debelog creva.
[0005]Najefikasniji postupak za tretiranje PBC i PSC je transplantaci ja jetre. Do sad je jedini obećavajući farmakološki tretman obe bolesti uključivao upotrebu UDCA. Trenutno, UDCA je jedini lek odobren za tretman holestatičkih bolesti jetre (Paumgartner & Beuers 2002). UDCA se koristi u PBC sa dozom od 12-15mg/kg/dan (generalno 1000-1500 mg) primenjenom oralno jednom ili dva puta dnevno. Ova upotreba je odobrena od strane U.S. Food and Drug Administration. Kolhicin je dodat UDCA tretmanu. Kolhicin se prepisuje u dozi od 0.6 mg dva puta dnevno zbog svog potencijalnog anti-inflamatornih i anti-fibrotičkih efekata. Nekoliko studija je demonstriralo blaga poboljšanja u testovima na jetri korišćenjem kolhicina. Ipak, niko nije našao korist za histološko stanje jetre ili preživljavanje PBC pacijenata. Metotreksat, imunosupresivni agens, je drugi lek koji testiran u PBC. Primenjuje se u dozi od 15 mg nedeljno. U malim studijama, metotreksat daje poboljšane simptome, testove krvi jetre i histološku progresiju kada se koristi nekoliko godina. Međutim, metotreksat izaziva teške sporedne efekte uključujući supresiju kostne srži, pogoršanje bolesti jetre i potencijalno fatalnu plućnu fibrozu.
[0006] UDCA ima ograničenu efikasnost u PSC i nije pokazano da produžava preživljavanje (bez transplantacije jetre Trauner & Graziadei 1999, Paumgartner & Beuers 2002). Tekuće studije testiraju đa li visoka doza UDCA može biti efikasnija. Značajno, UDCA smanjuje rizik od kancera debelog creva kod pacijenata sa PSC i ulceroznim kolitisom. Na osnovu hipoteze da PSC ima imunološki uzrok, testirani su kortikosteroidi i drugi imunosupresivi. Oralni kortikosteroidi dali su inicijalno poboljšanje biohemijskog profila. Međutim, nedostatak dokaza za dugoročnu korist kao i demineralizacija kostiju, argument je protiv upotrebe ovog režima. Drugi medikamenti kao što je azatioprin, ciklosporin, testirani zajedno sa kortikosteroidima i UDCA, nisu nikada procenjeni zasebno u terapiji PSC. Takođe je pokazano da su metotreksat i D-penicilamin neefikasni. Stoga, farmaceutska terapija za PSC i dalje treba da se optimizuje (Trauner & Graziadei 1999, Beuers & Paumgartner 2002).
[0007] Smatra se da endoskopski tretman kod pacijenata sa PSC sa simptomatskim dominantnim strukturama, kamenjem u žuči ili ostacima, vredna opcija kao dodatak medicinskom tretmanu. PSC pacijenti podvrgnuti endoskopskom tretmanu imali su povećano preživljavanje, koje je bilo mnogo više od onog predviđenog modelima preživl javanja.
[0008] Ortotopska transplantacija jetre je efikasna terapija za PSC i do sada jedina opcija za spašavanje života za krajnji stadijum bolesti. Nakon transplantacije, međutim. PSC ima tendenciju da se povrati kod 15-30% pacijenata, i postoji takođe visoka stopa ponovnog pojavljivanja suženja žučnih puteva, hroničnog odbacivanja i refiuksnog holangitisa. Nažalost, korišćenje imunosupresiva ne poboljšava preživljavanje i ponovno pojavljivanje bolesti. Stoga, postoji urgentna potreba za efikasnim lekom za tretman koji sprečava progresiju PSC kao i ponovno pojavljivanje nakon transplantacije jetre (Trauner & Graziadei 1999, Beuers & Paumgartner 2002).
[0009]Iako UDCA. koji se dobro toleriše sa izuzetkom retkih epizoda dijareje i pruriga (Trauner & Graziadei 1999, Beuers & Paumgartner 2002). predominantno korišćen za tretman holestatičkih bolesti jetre, efikasnost UDCA u PSC i kod pacijenata sa bolestima jetre kao što je progresivna porodična intrahepatička holestaza tipa 3 veoma je ograničena (Trauner & Graziadei 1999. Jacquemin, Hermans, et al. 1997. Jacquemin 2000, ismaii, Kalicinski. et al. 1999).
[0010]U EP 0 652 773 BI opisano je korišćenje derivata nor- i homo-žučnih kiselina, izborno konjugovanih sa taurinom, glicinom ili alaninom, za poboljšanje apsorpcije za medikamente enterainim ili drugim ne-parenteralnim putevima. Ovi derivati pokazuju lipofilne karakteristike i karakteristike deterdženta i ne metabolisu se intestinalnom bakterijskom florom.
[0011]EP 0 624 595 BI opisuje dimerne nor-derivate žučnih kiselina za upotrebu u medikamentu, naročito pogodne za tretman hiperlipidemije. Supstance koje su tu opisane sastoje se od pojedinačnih derivata žučnih kiselina, koje su međusobno kovalentno vezane.
[0012]US 4,892,868 opisuje 22-Metil-nor-ursodeozoksiholnu kiselinu i 23-Metil-ursodezoksiholnu kiselinu za upotrebu u tretmanu bolesti hepatobilijarne funkcije, sa naročitom referencom na metabolizam holesterola i proizvodnju žuči (npr. za tretman holcstaze).
[0013]Nakamura et al. (J. Gastroent. Hepatol. 13 (1998). 490-495) okarakterisali su autoimuni hepatitis (AIH) kao "kroničnu inflamatornu bolest jetre nepoznate etiologije".
[0014]Manns et al. (Hepatol. 43 (2006). S132-S144) opisuju relevantne mehanizme AIH i da je uloga UDCA "u AIH terapiji ili u kombinaciji sa imunosupresivnom terapijom još uvek nejasna".
[0015]Cilj predmetnog pronalaska je obezbediti alternativna farmaceutska sredstva za lečenje
AIH.
[0016]Stoga, ovaj pronalazak se odnosi na upotrebu 24-nor-ursodezoksiholne kiseline i/ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli za korišćenje u tretmanu i/ili prevenciji AIH.
[0017]Iznenađujuće je otkriveno da medikament ili farmaceutska kompozicija koja sadrži 24-nor-ursodezoksiholnu kiselinu, C23 analog sa skraćenim bočnim lancem prirodno prisutne C24 žučene kiseline ursodezoksiholne kiseline (UDCA), i/ili njihovih farmaceutski pihvatljivih soli mogu se uspešno upotrebiti u tretmanu različitih bolesti jetre, jer ovi analozi utiču na fiziološke karakteristike žučnih kiselina (Hofmann 1999. Schmassmann. Hofmann, et al. 1990, Yoon, Hagev. et al. 1986, Cohen. Hofmann. et al. 1986). lako su obe supstance strukturno veoma slične, obe supstance pokazuju različite karakteristike kada su primenjene na sisare (videti npr. Yoon YB. Hagey LR, et al., 1986).
|0018]24-nor-ursodezoksiholna kiselina i njihove soli dovode do indukcije sekrecije bikarbonata iz žuči, koji razblažuje toksični žučni sadržaj i štiti epitelne ćelije žučnog kanala od oksidativnog stresa jer je bikarbonat potentni sakupljač reaktivnih kiseoničkih vrsta. Ovo dovodi do rekonstitucije funkcije hoiangiocitne barijere i zaustaviće tekući periholangitis i naknadnu periduktalnu fibrozu minimizujući povredu epitelnih ćelija žučnog kanala sa strane lumena žučnog kanala. Dodatno, ispostavilo se da 24-nor-ursodezoksiholna kiselina i njene soli imaju takođe anti-inflamatorne i anti-fibrotičke efekte.
[0019]Za razliku od 24-nor-dezoksiholne kiseline i njenh soli. ursodezoksiholna kiselina poboljšava samo periduktalnu fibrozu lobularnih žučnih kanala i povećava nivoe alanin aminotransferaze (ALT) u serumu i indukujc infarkt žuči. Međutim, ursodezoksiholna kiselina ne poboljšava manje bolesti kanala. Divergentni efekti obe žučne kiseline u odnosu na povredu jetre mogu biti povezane sa razlikama u nivou sekrecije žuči tj. da 24-nor-ursodezoksiholna kiselina i njene soli primarno stimulišu duktusnu sekreciju, dok ursodezoksiholna kiselina stimuliše kanalikulamu sekreciju žuči ushodno od pogođenih kanala.
[0020]Primena 24-nor-dezoksiholne kiseline i njenih soli indukuje detoksifikaciju žučnih kiselina preko hidroksilacije, sulfacije i glukoroniđacije što rezultuje u boljoj rastvorljivosti u vodi i time manje toksičnim metabolitima žučne kiseline, koji razređuju toksične žučne kiseline u duktularnoj žuči i indukuju duktularnu bikarbonatom bogatu holerezu redukujući oksidativni stres.
[0021]Stvaranje bikarbonatom bogate holereze sa 24-nor-ursodezoksiholnom kiselinom i njenim solima ima takođe terapeutske implikacije u humanim holangiopatijama (npr. PSC, PBC, hroničnom odbacivanju grafta jetre, nesupurativnom destruktivnom holangitisu), jer holehepatički šanting rezultuje u kontinuiranom protoku molekula kroz epitel žučnog kanala što pomaže izmenjenim žučnim kanalima da bolje upravljaju sa toksičnim/oksidativnim stresom. Na primer, pokazano je da sulindak. NSA1D koji takođe biva podvrgnut holehepatičkom šantingu kod ljudi, poboljšava enzime jetre kod PBC pacijenata sa nepotpunim odgovorom na UDCA tretman.
[0022]Postupci za pripremu 24-nor-ursodezoksiholne kiseline i njenih soli poznati su stručnjacima i poželjno se mogu pripremiti postupkom kao što je opisan u Schteingart CD and Hofmann AF (J. Lip. Res. 29(1988): 1387-1395).
|0023]Naravno, lek prema ovom pronalasku može se koristiti kod ljudi kao i kod sisara (npr. svinje, konja, primata, stoke, mačke, psa).
[0024| Ne-steroidni anti-inflamatorni lek (NSAID) kao ibuprofen smanjuje portalnu i lobularnu inflamaciju u jetri (što dovodi do periduktalne fibroze i duktusne proliferaeije) i formiranja hepatocelularnog karcinoma (HCC) (Pikarsky, Porat. et al. 2004). Kako 24-nor-ursodczoksiholna kiselina i njene soli pokazuju takođe anti-inilamatme karakteristike, 24-nor-ursodezoksiholna kiselina može se koristiti sama ili u kombinaciji sa drugim anti-inflamatornim lekovima, kao što su NSAIDs (npr. ibuprofen. sulindak (Bolder. 1 rang, et al. 1999)).
[0025] Prema poželjnom primeru izvođenja ovog pronalaska 24-nor-ursodezoksiholna kiselina i njene soli mogu se formulisati za oralnu i intravensku primenu. gde ove formulacije dalje sadrže farmaceutski prihvatljive nosače, ađuvante, ekscipijente i/ili nosače.
[0026] Čvrsti dozni oblici za oralnu primenu mogu uključivati tablete, poželjno efervescentne ili tablete za žvakanje, kapsule, pilule, praškove i granule. U takvim čvrstim doznim oblicima, 24-nor-ursodezoksiholna kiselina može se pomešati sa redovno korišćenim supstancama kao sto je saharoza, manitol, sorbitol, škrob i derivati škroba, laktoza, lubrikanti (npr. magnezijum stearat), sredstva za raspadanje i pufere. Tablete i pilule se takođe mogu pripremiti sa gastrorezistentnim omotačem da bi se sprečilo da na 24-nor-ursodezoksiholnu kiselinu utiču želudačne kiseline i enzimi. Kao tablete sa trenutnim oslobađanjem, ove kompozicije mogu dalje sadržati mikrokristalnu celulozu i/ili diklacijum fosfat.
[0027] Tečni dozni oblici za oralnu primenu mogu uključivati farmaceutski prihvatljive emulzije, rastvore, suspenzije i sirupe koji sadrže inertne razblaživače koji se uobičajeno koriste u tehnici, kao što je voda. Ovi dozni oblici mogu sadržati mikrokristalnu celulozu za stvaranje mase, alginsku kiselinu ili natrijum alginat kao suspendujući agens, metilcelulozu kao sredstvo za poboljašnje viskoznosti, i zaslađivače/aromatizere. Kada se primenjuju nazalni aerosoli ili inhalacija, kompozicije prema ovom pronalasku mogu se pripremiti kao rastvori u slanom rastvoru, koji koriste benzil alkohol ili druge pogodne konzervanse. stimulatore apsorpcije da bi se poboljšala biodostupnost, fluorokarbone i/ili druge agense za povećanje rastvorljivosti ili agense za disperziju.
[0028] Supozitorije za rektalnu primenu 24-nor-ursodezoksiholne kiseline mogu se pripremiti mešanjem jedinjenja ili kompozicije sa pogodnim neirilirajućim ekscipijentom kao što je kakao puter i polietilen glikoli koji su čvrsti na sobnoj temperaturi, ati tečni na rektalnoj temperaturi, tako da će se istopiti u rektumu i osloboditi 24-nor-ursođezoksiholnu kiselinu i izborno druga aktivna jedinjenja prisutna u pomenutim supozitorijama.
[0029]Injektabilni preparati, na primer sterilne injektabilne vodene ili uljane suspenzije, mogu se formulisati prema poznatoj tehnici korišćenjem pogodnih agenasa za disperziju, sredstava za vlaženje i/ili suspendujućih agenasa. Sterilni injektabilni preparat može takođe biti sterilni injektabilni rastvor ili suspenzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču. Između prihvatljivih nosača i rastvarača koji se mogu koristiti su voda i izotonični rastvor natrijum hlorida. Sterilna masna ulja se takođe konvencionalno koriste kao rastvarač ili suspendujući medijum.
[0030]Prema ovom pronalasku dozni oblik koji sadrži 24-nor-ursođezoksiholnu kiselinu može dodatno uključivati konvencionalne ekscipijente, poželjno farmaceutski prihvatljive organske ili neorganske supstance kao nosače koji ne reaguju sa aktivnim jedinjenjem. Pogodni farmaceutski prihvatljivi nosači uključuju, na primer. vodu, rastvore soli, alkohol, ulje, poželjno biljna ulja, polietilen glikole. želatin. laktozu. amilozu. magnezijum stearat. surfaktante, parfimisano ulje, monogliceride i digliceride masne kiseline, petroletarske estre masnih kiselina, hidroksimetil celulozu i polivinilpiroliđon. Farmaceutski preparati se mogu sterilisati i ukoliko je poželjno, mogu se pomešati sa pomoćnim agensima, kao što su lubrikanti, konzervansi, stabilizatori, sredstva za vlaženje, emulzifikatori, soli za delovanje na osmotski pritisak, puferi, boje, aromatizeri i/ili aromatične supstance i slično koje ne reaguju štetno sa aktivnim jedinjenjima. Za parenteralnu primenu, naročito pogodni nosači se sastoje od rastvora, poželjno uljanih ili vodenih rastvora, kao i suspenzija, emulzija, ili implanata.
|0031[Poznati su različiti sistemi dopremanja i mogu se koristiti za primenu 24-nor-ursodezoksiholne kiseline, uključujući, na primer, inkapsulaciju u lipozome, emulzije, mikročestice, mikrokapsule i mikrogranule (npr. EP l 317 925). Potrebna doza se može primeniti kao pojedinačna jedinica ili u obliku sa produženim oslobađanjem.
[0032]Bioraspoloživost 24-nor-ursodezoksiholne kiseline može se poboljšati mikronizacijom formulacija korišćenjem konvencionalnih tehnika kao što je mrvljenje, mlevenje i sušenje raspršivanjem u prisustvu pogodnih ekscipijenata ili agenasa kao što su fosfolipidi ili surfaktanti.
[0033]Prema pronalasku, 24-nor-ursodezoksiholna kiselina može se formulisati u farmaceutski prihvatljivom obliku soli. Farmaceutski prihvatljive soli 24-nor-ursodezoksiholne kiseline poželjno uključuju soli metala, naročito soli alkalnih metala, ili drugih farmaceutski prihvatljivih soli. Pogodne farmaceutski prihvatljive kisele adicione soli mogu se pripremiti od neorganskih kiselina, kao što je hlorovodonična, bromovođonična, jodovodonična, azotna, ugljena, sumporna i fosforna kiselina, ili organskih kiselina, kao što su alifatične, cikloalifatične. aromatične, heterociklične. karboksilne i sulfonske klase organskih kiselina, kao što su. mravlja, sirćetna, propionska. ćilibarna, glikolna. glukonska. mlečna, jabučna, vinska, limunska, askorbinska. glukuronska. maleinska. fumarna, piruvinska, asparaginska, glutaminska, benzojeva. etansulfonska. antranilna, bademova, metansulfonska, salicilna, p-hidroksibenzojeva. fenilsirćetna, metanstilfonska. benzensulfonska, pantotenska, toluensulfonska, 2-hidroksietansulfonska, alginska, sulfanilna. stearinska, p-hidroksibuterna, ciklohcksilaminosulfonska. galaktarna i galakturonska kiselina. Farmaceutski prihvatljive bazne adicione soli uključuju soli metala od litijuma. aluminijuma, kalcijuma, magnezijuma, kalijuma, natrijuma i cinka ili organske soli stvorene od primarnih, sekundarnih i tercijarnih amina i cikličnih amina. Sve soli 24-nor-ursodeozoksiholne kiseline mogu se pripremiti postupcima poznatim u tehnici (npr. Reakcijom 24-nor-ursodeoksihone kiseline sa odgovarajućom kiselinom ili bazom).
[0034]Postupci za proizvodnju leka prema ovom pronalasku koji sadrže 24-nor-ursodezoksiholnu kiselinu i koji su formulisani za primenu kao stoje ovde dato mogu se naći. na primer, u "Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formulations" (Sarfaraz K Niazi, CRC Press LLC. 2004).
[0035]Lek sadrži poželjno efikasnu količinu 24-nor-ursodezoksiholne kiseline i farmaceutski prihvatljivi nosač i/ili ekscipijent.
[0036]Prema poželjnom primeru izvođenja ovog pronalaska medikament sadrži 10 do 8000 mg, poželjno 25 do 5000 mg, poželjnije 50 do 1500 mg. naročito 250-500 mg, 24-nor-ursodezoksiholne kiseline.
[0037]U prošeku 24-nor-ursodezoksiholna kiselina i/ili njene farmaceutski prihvatljive soli mogu se poželjno primeniti na pacijenta u količini od 25 mg do 5 g, poželjno 100 mg do 2.5 g, naročito 800 mg do 1.5 g na dan. Međutim, 1 g 24-nor-ursodezoksiholne kiseline i/ili njene farmaceutski prihvatljive soli je najpoželjnije primenjena na pacijenta. Dalje je naznačeno da 24-nor-ursodezoksiholna kiselina i/ili njena farmaceutski prihvatljive soli mogu se primeniti na pojedinca u 1-100 mg/kg/d, poželjno 5-50 mg/kg/d. poželjnije 10-25 mg/kg/d, naročito 12-15 mg/kg/d. Pomenute količine su primenjene odjednom ili poželjno u više od jedne doze (najmanje 2, 3, 4, 5 ili 10 doza) na dan. Lek ili farmaceutska kompozicija prema ovom pronalasku mogu se primenjivati više od jedne nedelje. poželjno više od četiri nedelje, poželjnije više od šest meseci, najpoželjnije više od jedne godine, naročito doživotno.
[0038]24-nor-ursodezoksiholna kiselina može se primeniti ne samo u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačima i u doznim oblicima kao što je ovde opisano, ali, naravno, takođe u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih aktivnih sastojaka za koje je takođe poznato da su efikasni protiv iste ili slične bolesti koja se tretira.
[0039]Ovaj pronalazak je dalje ilustrovan sledećim primerima izvođenja, slikama i primerom. bez ograničavanja na njih.
SI. 1.norUDCA leči sklerozni holangitis kod Mdr2~ l~ miševa.(A) Histologija jetre (H&E bojenje) kod kontrolnih normalno hranjenihMdr2''~miševa (KO), UDCA-hranjenihMdrl~'~miševa (KO+UDCA), i norUDCA-hranjenihUdri1'miševa (KO+«orUDCA) (Uveličanje x 10). Izražena bolest velikog žučnog kanala kod KO (strelice) koji je značajno smanjen kod KO+UDCA (strelice) i odsutne kod KO+>?orUDCA. (B) Sklerozni holangitis kod KO sa periduktalnom fibrozom, izmenjenim epitelnim ćelijama žučnog kanala i mešanim inflamatornim infiltratom. Ove karkateristike su ublažene kod KO+ UDCA i odsutne kod KO+«orUDCA (Uveličanje x 40). (C) Bojenje sa Sirius crvenom koje pokazuje značajnu fibrozu sa periduktalnim kolagenim vlaknima (crveno) kod KO. Umereno smanjenje fibroze kod KO+UDCA i čak izraženije smanjenje kodKO+/wrUDCA(Uveličanje zab, cx 40); bd. žučni kanal.
SI. 2. norUDCA značajno smanjuje hidroksiprolinski sadržaj u jetri Mdr2~'\
Hidroksiprolinski sadržaj jetre kod divljeg tipa (WT), kontrolnih normalno hranjenihMdrl"'miševa (KO), UDCA-hranjenihMdrT'-miševa (KO+UDCA). i Nor-UDCA-hranjenihMdrT'miševa (KO+«orUDCA). Hidroksiprolinski sadržaj jetre je značajno povećan kod KO u poređenju sa WT i smanjena do osnovnog nivoa kodKO+/?orUDCA.Vrednosti predstavljaju srednje vrednosti <— SEM iz n=5 po grupi. p<0.05, WT vs. KO; KO vs. KO+norUDCA.
SI. 3.norUDCA značajno smanjuje portalnu infiltracijulekstravazaciju kod Mdr2- I-.Imunohistohemija za CDllb (crveno, bojenje neutrofila) kod kontrolnih normalno hranjenogMdrT<1>'miša (KO), UDCA-hranjenogMdrT'-miša (KO+UDCA), i/jorUDCA-hranjenogMdrT<1>'miša (KO+«orUDCA) (A) interlobulamih i (B) lobularnih žučnih kanala. (C) Kvantifikacija CD1 lb-pozitivnih ćelija po 20 portalnih polja.norUDCAznačajno smanjuje broj CD 1 lb-pozitivnih ćelija kodMdrT<1>''.Vrednosti predstavljaju srednju vrednost SEM iz n=3 po grupi. p<0.05,
SI. 4.norUDCA. inhibira ekspresiju portalnog vaskularnog ćelijskog adhezionog molekula ( VCAM) kod Mdr2'- miševa.Imunohistohemija VCAM (crveno) u interlobulamim (A) i lobulamim (B) žučnim kanalima kontrolnog normalno hranjenogMdrl<1>'miša (KO), UDCA-hranjenogMdrT<1->miša (KO+UDCA), i norUDCA-hranjenogMdrT1'miša (KO+norUDCA). (A) Nema očigledne razlike u ekspresiji portalnog VCAM između KO i KO+UDCA, dok KO+>?orUDCA prikazuje značajno nižu ekspresiju proliferata žučnog kanala. (B) Na nivou lobulanih žučnih kanala oba UDCA inorUDCAsmanjuju ekspresiju holangiocelularnog
VCAM.
SI. 5. norUDCA inhibira proliferaciju hepatocita i holangiocita kod Mdr2~<!>~miševa.
Imunohistohemija za Ki-67 (crveno) u hepatocitima (A) i holangiocitama (B) kod kontrolnog normalno hranjenogMdrl' 1'miša (KO). UDCA-hranjenogMdrl' 1'miša (KO+UDCA). i norUDCA-hranjenogMdrl' 1'miša (KO+norUDCA). (A) Brojni Ki-67 pozitivni hepatociti kod KO i KO+UDCAi raštrkani pozitivni nukleusi kod KO+norUDCA. (B) Brojne Ki-67 pozitivne holangiocite kod KO, nekoliko pozitivnih holangiocita (strelice) kod KO+UDCA i KO+/70/TJDCA, respektivno. (C) Broj Ki-67 pozitivnih hepatocita po 30 HPFs i (D) broj Ki-67 pozitivnih holangiocita po 20 portalnih polja. Samo norUDCA značajno smanjuje broj proliferišućih hepatocita i holangiocita. Vrednosti predstavljaju srednje vrednosi *— SEM iz n=3 po grupi. p<0.05,<*>WT vs. KO; t WT vs. KO+UDCA; :t:KO vs. KO+norUDCA.
SI. 6.Pozitivna korelacija između proizvodnje žučnog bikarbonata i protoka žuči kod Mdr2~ f~.Proizvodnja žučnog bikarbonata plotovana je nasuprot protoka žuči kod kontrolnih normalno hranjenihMdr2'''miševa (Kontrola, prazni krugovi), UDCA-hranjeniMdrl'''miševi (UDCA. przani trouglovi), i NorUDCA-hranjeniMdrl' 1'miševi (norUDCA, puni krugovi). Uočiti pozitivnu korelaciju između proizvodnje bikarbonata i protoka žuči kao i grupisanja Nor-UDCA-tretiranih životinja koje pokazuju najveću proizvodnju bikarbonata gore desno.
SI. 7. Predloženi terapeutski mehanizmi norUDCA kodMdr2''miševa. norUDCA preuzimaju hepatociti i izlučuju ga u kanalikule i žučne kanale gde ga preuzimaju holangiocite što vodi do sekrecije bikarbonata u kanalu. norUDCA se povratno izlučuje u prebilijarni pleksus i šantovan je nazad do hepatocita (helopatski Šanting). NorUDCA indukuje ekspresiju Sult2al itd. i Mrp3 i Mrp4 koji detoksifikuju žučne soli i čine ih podložnim za eliminaciju preko bubrega.
SI. 8. Hemijska struktura norUDCA (3-alfa,7-alfa-di-hidroksi-24-nor-5-beta-holan-23-oinska kiselina).
PRIMER 1:
[0040] Miševi sa ciljanom disrupcijomMdrl ( Abcb4)gena koji kodira kanikulamu fosfolipidnu flipazu razvijaju sklerozni holangitis sa makroskopskim i mikroskopskim karakteristikama koje su veoma slične onima koje se mogu videti kod humanog skleroznog holangitisa (npr. primarni sklerozni holangitis. PSC) (Fickert, Zollner, et al. 2002. Fickert, Fuchsbichler. et al. 2004). Povreda žučnog kanala kod ovih miševa je povezana sa defektnom žučnom sekrecijom fosfolipida u povećanoj koncentraciji slobodnih ne-micelarnih žučnih kiselina koje naknadno izazivaju povredu epitelnih ćelija kanala (holangiocita), periholangitis. periduktalnu fibrozu sa dukusnom proliferacijom i konačno sklerozni holangitis (Fickert, Fuchsbichler, et al. 2004, Lammert, Wang. et al. 2004). Kao dodatak prilici da se proučavaju nove strategije tretmana za PSC ovaj model može biti relevantan za testiranje terapija za široki spektar humanih bolesti jetre koje rezulluju izMDR3mutacija (humani ortologMdrl)od neonatalne holestaze do adultne bolesti jetre (Jansen & Sturm 2003).
[0041 ]Trenutno, UDCA je jedini lek odobren za tretman holestatskih bolesti jetre (Paumgartner & Beuers 2002). Međutim efikasnost UDCA u PSC i kod pacijenata sa bolestima jetre usledMDR3mutacija (npr. progresivna porodična intrahepatička holestaza tipa 3) je ograničena (Trauner & Graziadei 1999. Jacquemin. Hermans, et al. 1997, Jacquemin 2000, Ismail, Kalicinski, et al. 1999). Skraćivanje bočnog lanca UDCA moglo bi povećati terapulsku efikasnost jer modifikacija značajno utiče na fiziološke karakteristike žučnih kiselina (Hofmann 1999, Schmassmann, Hofmann. et al. 1990, Yoon. flagev, et al. 1986, Cohen, Hofmann, et al. 1986).norUDCA.C23 analog UDCA sa skraćenim bočnim lancem, potentni je holeretički agens kod različitih glodara (npr. hrčak, pacov, zamorac) koji su podvrgnuti ekstenzivnom holehepatičkom šantingu i indukciji sekrecije žučnog bikarbonata na nivou žučnog kanala (Yoon, Hagev, et al. 1986, Cohen, Hofmann. et al. 3986). Za razliku od UDCA, efektinorUDCAnikada nisu proučavani u holestazi. Da bi se testirala hipoteza da holehepatički šanting netoksičnih žučnih kiselina može biti koristan u tretmanu holangiopatija istraživani su efektinorUDCAkodMdrl<1>'miševa kao model skleroznog holangitisa (Fickert, Fuchsbichler, et al. 2004). U ovom primeru ispitivani su pozitivni efekat norUDCA u tretmanu humanih bolesti jetre izazvanihMDR3mutacijama i humanih holangiopatija kao što je sklerozni holangitis (npr. PSC).
1.1. Materijali i Metode
1. 1. 1. Eksperimenti na životinjama.
[0042]Mdrl''miševi (FVB/N osnova) dobijeni su od Jackson Laboratorv (The Jackson Laboratorv, Bar Harbor, ME. USA). Miševi su smešteni sa ciklusom 12:12-časova svetlo-mrak i dozvoljena im je ad libitum konzumacija vode i standardne ishrane za miševe (Sniff. Soest, Germanv).
1. 1. 2. Ishrana za žučne kiseline kod Mdr2~'' miševa.
[0043] Dva meseca stariMdr2'<!>'(vreme kad je sklerozni holangitis već potpuno uspostavljen kod ovih životinja (Fickert, Zollner. et al. 2002) hranjeni su ili ishranom sa dodatkomnorUDCA(0.5%, tež/tež.) ili sa UDCA kao kliničkim komparatorom (0.5%. tež./tež.) 4 nedelje i upoređivani su sa standardnom hranom hranjenihMdr2~'~i kontrolama divljeg tipa.
/. 1. 3. Histologija jetre.
[0044] Za konvencionalnu svetlosnu mikroskopiju, jetre su fiksirane u 4% neutralno puferovanom rastvoru formaldehida i ukalupljene su u parafin. Preseci (4 um debljine) obojeni su sa H&E i Sirius crvenom bojom, respektivno. Preseci su kodirani i ispitivani od strane patologa (H.D.) koji nije upoznat sa tretmanom životinje.
1. 1. 4. Rutinska biokemija seruma.
[0045] Uzorci seruma su uskladišteni na -70°C do analize alanin transaminaze (ALT) i alkalne fosfataze (AP) rutinskom kliničkom hernijom izvedenom na Hitachi 717 analizatoru (Boehringer Mannheim, Mannheim, Germanv). Za određivanje ukupnog nivoa žučne kiseline u serumu, korišćen je komercijalni test 3-alfa-hidroksisteroid dehidrogenaze (Ecoline S+: DiaSvs, Holzheim, Germanv).
7.7.5. Imunohistohemija za alfa- SMA.
[0046] Imunohistohemija za alfa-SMA izvedena je na parafinskim presecima (4 um debljine) tretiranim mikrotalasima (0.01 mmol/L citratni pufer pH 6.0) korišćenjem monoklonskog mišjeg anti alfa-SMA (razblaženje 1:500, Sigma. St Louis, MO). Vezivanje antitela je detektovano korišćenjem ABC sistema (Dako, Glostrup. Denmark) korišćenjem B-amino-9-etil-karbazola (AEC; Dako) kao supstrata.
7.7.6. Imunohistohemija zaproliferacioni marker Ki- 67.
|0047] Imunohistohemija Ki-67 izvedena je na parafinskim presecima (4 pm debljine) tretiranim mikrotalasima (0.01 mmol/L citratni pufer pH 6.0) korišćenjem poliklonskog zečjeg anti-Ki-67 antitela (razblaženje 1:750. Novocastra, Nevvcastle upon Tyne, UK). Vezivanje antitela je detektovano korišćenjem ABC sistema (Dako) korišćenjem AEC (Dako) kao supstrata. Broj proliferiŠućih hepatocita izračunat je brojanjem pozitivnih nukleusa u 30 polja visoke snage na presecima 3 životinje u svakoj grupi. Broj proliferiŠućih epitelnih ćelija žučnog kanala izračunata je brojanjem pozitivnih nukleusa u 20 portalnih polja na presecima 3 životinje u svakoj grupi.
1. 1. 7. Imunohistohemija za neutrofilni marker CD- llb.
[004S] Da bi se kvantifikovali neutrofili CD 1 lb-pozitivne ćelije su detektovane kao što je prethodno opisano (Fickert. Fuchsbichler, et al. 2004) uz modifikaciju daje vezivanje antitela detektovano korišćenjem ABC sistema (Dako) korišćenjem AEC (Dako) kao supstrata. Broj neutrofila je izračunat brojanjem pozitivnih ćelija u 20 portalnih polja u presecima 3 životinje u svakoj grupi.
1. 1. 8. Imunohistohemija za adhezioni molekul ( VCAM) vaskulame ćelije.
[0049] Imunohistohemija za VCAM izvedena je na poprečnim presecima fiksiranim u acetonu korišćenjem monoklonskog pacovskog anti CD 106 (VCAM-1. razlblaženje 1:30. PharMingen, San Diego, CA, USA) i vezivanjem antitela je detektovano ABC sistemom (Dako) korišćenjem AEC (Dako) kao supstrata.
1. 1. 9. Imunohistohemija za 4- hidroksinonenal- proteinske adukte.
[0050] Preseci jetre su deparafinisani i zatim inkubirani sa Iminunopure supresorom peroksidaze (Pierce, Rockford, IL) 30 min i zatim proteinskim blokom (DAKO, Carpenteria, CA) 2 č. Ovo je praćeno inkubacijom preko noći sa primarnim anti-4-hidroksinonenal antitelom (Calbiochem, San Diego. CA) na sobnoj temperaturi i vezivanje antitela je detektovano korišćenjem ABC sistema (Dako) sa AEC (Dako) kao supstratom.
1. 1. 10. Određivanje hidroksiprolinskog sadržaja jetre.
[0051] Da bi se kvantitativno odredila fibroza jetre u našem modelu određen je hidroksiprolinski sadržaj u jetri. Desni lobus jetre je homogenizovan u 6-normalnoj HC1 (200 mg tkiva jetre/4 ml HC1) i hidrolizovano na 110°C 16 e. Nakon filtracije 50 pi je dodato u 450 ul 2.2% NaOH rastvorenog u citrat-acetat puferu (50 g limunske kiseline xIhO.12 mi sirćetne kiseline, 120 g natrij um acetata x 3 HoO, 34 g NaOH u 1 litar destilovane vode; pH 6.0). Nakon dodavanja 250 ul perhlorne kiseline i 12 min inkubacije na sobnoj temperaturi 250 ul rastvora p-dimetilaminobenzaldehda dodato je i inkubirano na 60°C 20 min. Hidroksiprolinski sadržaj je meren na 565 nm korišćenjem hidroksiprolinske standardne krive.
1. 1. 11. Analiza iRNK i PCR kljčnih gena za fibrozu.
[0052J Izolacija RNK, sinteza cDNK i Taqman® real time PCR izvedeni su kao što je prethodno opisano (Wagner. Fickert, et al. 2003). Korišćeni su sledeći prajmeri i 5' FAM, 3' TAMRA obeležene probe: Collal fwd: caatgcaatgaagaactggactgt (Seq ID No. 1), Collal rev: tcctacatcttctgagtttggtga (Seq ID No. 2) i Collal proba: cagaaagcacagcactcgccctcc (Seq ID No. 3); TIMP-1 fwd: catggaaagcctctgtggatatg (Seq ID No. 4), TIMP-1 rev: aagctgcaggcattgatgtg (Seq ID No. 5) i TIMP-1 proba: ctcatcacgggccgcctaaggaac (Seq ID No. 6); MMP-2 fwd: ctttgagaaggatggcaagtatgg (Seq ID No. 7), MMP-2 rev: ttgtaggaggtgccctggaa (Seq ID No. 8) i MMP-2 proba: cagatggacagccctgcaagttccc (Seq ID No. 9).
1. 1. 12. Meren je protoka žuči.
[0053] Protok žuči određen je gravimetrijski i normalizovan za težinu jetre kao što je prethodno opisano (Fickert, Zollner, et al. 2001). Koncentracija fosfolipida u žuči je određena korišćenjem komercijalno dostupnog kita (Phospholipid B; Wako, Neuss, Germanv) prema uputstvima proizvođača. Koncentracija holestrola u žuči određena je korišćenjem komercijalno dostupnog kita (Cholesterol liquicolor; Human, Wiesbaden, Germanv) prema uputstvima proizvođača. Koncentracija glutationa (GSH) u žuči je određena nakon precipitacije proteina u 5% metafosfornoj kiselini korišćenjem Glutathione Assay Kit (Calbiochem, San Diego, US) prema uputstvu proizvođača. Koncentracija žučne kiseline u žuči analizirana je korišćenjem testa 3-alfa-hidroksisteroid dehidrogenaze (Ecoline St. DiaSys) prema uputstvu proizvođača.
1. 1. 13. Statistička analiza.
|0054] Podaci su dati kao aritmetičke sredine +/- SD. 4 do 6 životinja je proučavano u svakoj grupi. Statistička analiza je izvršena korišćenjem Stuđent-ovog t-testa kada je to bilo odgovarajuće ili sa ANOVA i Bonferroni post-testiranjem kada su poređene tri ili više grupa. p-vrednost<0.05 smatrana je značajnom.
1.2. Rezultati
1. 2. 1. norUDCA. značajno poboljšava povredu jetre, smanjuje fibrozu, i leci sklerozni
holangitis kod Mdr2''~miševa.
[0055] Nivoi ALT i AP u serumu (kao biohemijski markeri za povredu jetre i holestazu) bili su značajno povećani kod standardno hranjenihMdrl' 1' upoređenju sa kontrolama divljeg tipa (Tabela 1).
[0056]norUDCA je značajno poboljšao nivoe ALT i AP u serumu u poređenju sa standardno hranjenimMdrl' 1-(Tabela 1). Paralelno standardno hranjeniMdrl' 1'pokazivali su izraženi sklerozni holangitis (SI. 1) sa proliferacijom kanala i fibrozom jetre što se odražavalo preko značajno povećanog sadržaja hidroksiprolina u jetri (Si. 2). norUDCA-hranjeniMdrl' 1'pokazivali su regularne žučne kanale velike i srednje velličine bez ili samo sa malom periduktalnom fibrozom (SI. 1); duktusna proiiferacija bila je praktično odsutna (nije prikazano). Zajedno sa ovim histološkim promenama.norl DCAje značajno smanjio sadržaj hidroksiprolina u jetri kodMdrl' 1'(SI. 2) sto je paralelno praćeno sa značajnim smanjenjem ekspresije iRNK za kolagen 1 i 3 jetre (Tabela 2).
|0057| UDCA tretman kodMdrT1'kao kliničkog komparatora i trenutno standardnog tretmana holestatičkih bolesti jetre (uključujući PSC) simultano su proučavane. Za razliku od norUDCA, UDCA značajno je povećala ALT i AP aktivnost kodMdrl' 1'(Tabela 1) i 2 od 5 životinja pokazale su infarkt žuči zajedno sa prethodnim opservacijama (Fickert, Zollner, et al. 2002). Izgleda da UDCA smanjuje periduktalnu fibrozu lobularnih i interlobularnih žučnih kanala (SI. 1), ali je pokazala trend samo za niži hidroksiprolinski sadržaj jetre bez dostizanja statističke značajnosti (SI. 2). Ovi nalazi jasno ukazuju danorUDCA(ali ne UDCA) značajno smanjuje povredu jetre, periholangitis, i periduktalnu fibrozu kodMdrl' 1'što konačno dovodi do zaceljivanja skleroznog holangitisa.
1. 2. 2. norUDCA smanjuje zapaljenje, oksidativni stres i ćelijsku proliferaciju kod Mdr2~'~
miševa.
[0058) S obzirom da portalna inflamacija može predstavljati glavni okidač za periduktualnu fibrozu kodMdrl' 1'(Pikarskv. Porat. et al. 2004) analizirano je smanjenje portalne inflamacije sanorUDCA.Kontrolni normalno hranjeniMdrl' 1'imali su značajno povećani broj portalnih neutrofila u poređenju sa kontrolama divljeg tipa (SI. 3).norUDCAje takođe poboljšao periholangilis kodMdrl' 1'što se odrazilo u značajno smanjenom broju portalnih neutrofila u poređenju sa standardno hranjenimMdrl' 1'(SI. 3). Ovi vidljivi anti-inflamtorni efektinorUDCAparalelno su praćeni sa značajno nižom ekspresijom VCAM u epitelnim ćelijama žučnog kanala interlobularnih i lobularnih žučnih kanala norUDCA-hranjenihMdrT1'(SI. 4). Kako je prethodno pokazano da inflamacija takođe pokreće proliferaciju u jetriMdrT'
(Pikarskv, Porat, et al. 2004) testirano je da li je na ovo uticala norUDCA. Standardno hranjeniMdrT1'pokazali su značajno povećan broj Ki-67 pozitivnih hepatocita i holangiocita u poređenju sa kontrolama divljeg tipa (SI. 5). norUDCA značajno smanjuje stepen proliferacije hepatocita i epitelnih ćelija žučnog kanala do blizu nivoa kod kontrola divljeg tipa (SI. 5). UDCA nije imala značajne efekte na portalnu inflamaciju (SI. 3), ekspresiju VCAM (SI. 4), i proliferaciju hepatocita (SI. 5). Međutim, UDCA je smanjila proliferaciju epitelnih ćelija žučnog kanala u velikim žučnim kanalima (SI. 5). Opet, ovi podaci ukazuju da su anti-infiamatorni i anti-proliferativni efekti norUDCA superiorni u odnosu na UDCA.
[0059]1. 2. 3. norUDCA. indukuje izlučivanje bikarbonata u žuči kod MdrT<1>'miševa.Da bi se odredilo da li holereza bogatim bikarbonatom koja rezultuje od holehepatičnog šantinga norUDCA može biti odgovorna za uočene terapeutske efekte, određeni su protok i sastav žuči (Tabela 3). Napomena.Vrednosti su izražene kao srednja vrednost ± SD. KO,Mdr2,,knock-out mice", KO+UDCA, UDCA-hranjeniMdrl,,knock-out" miševi; KO+norUDCA,MoHJDCA-hranjeniMdr2,,knock-out" miševi.
•<*>p<0.05, KO vs. KO+UDCA (ANOVA sa Bonferroni post-testiranjem)
• #p<0.05, KO vs.KO+«orUDCA(ANOVA sa Bonferroni post-testiranjem)
[0060J U poređenju sa normalno hranjenim i UDCA-hranjenim Mdr2"'" norUDCA je značajno indukovala žučnu sekreciju bikarbonata u skladu sa konceptom danorUDCAprolazi kroz relevantan holehepatički šanting kod Mdr2"'" (Bolder. Trang. et al. 1999). UDCA, ali ne i norUDCA. stimulisala je eksreciju žučne kiseline iz žuči. Nisu zabelcžcni značajni efekti na proizvodnju žučnih kiselina, holesterola, fosfolipida i glutationa. Ovi nalazi pokazuju danorUDCAdovodi do ispiranja povređenih žučnih kanala sa bikarbonatom obogaćenom manje toksičnom žuči kodMdrT1".
[0061]1. 2. 4. norUDCA indukuje puteve detoksikacije faze II i alternativne puteve
izlučivanja za žučne kiseline kod Mdr2~'~miševa.
[0062] Da bi se testirala hipoteza da indukcija faze I/II puta biotransformacije i alternativnih putcva efluksa potencijalno toksičnih žučnih kiselina mogu takođe doprineti uočenim korisnim efektimanorUDCAkodMdrl' 1'proučavana je ekspresija ključnih metaboličkih enzima (Tabela 4) i sastav seruma, jetre i žučne kiseline žuči kod norUDCA-hranjenihMdrT'~
Napomena.Vrednosti su izražene kao srednja vrednost ± SD; n=5 u svakoj grupi. n.d.. ne može se detektovati, KO,Mdr2,,knock-oul" miševi, KO+UDCA, UDCA-hranjeniMdrl..knock-out" miševi; KO+nwUDCA, rtorUDCA-hranjeniMdrl,,knock-out" miševi.
■<*>p<0.05,KOvs.KO+UDCA i KOvs.KO+noHJDCA (ANOVAsaBonferroni post-testiranjem)
• #p<0.05,KO+UDCAvs.KO+norUDCA (ANOVAsaBonferroni post-testiranjem)
[0063]Naročita pažnja je usmerena na Sult2al i Mrp4. jer su sulfatacija i transport sulfatiranog jedinjenja međusobo povezani i formiraju koordinisano regulisani put za ekskreciju sulfatisanog steroida i žučnih kiselina (Schuetz, Strom, et al. 2001). norUDCA nije imala značajne efekte na ekspresiju iRNK hepatocelularnog preuzimanja (Ntcp, Oatpl) i sisteme kanikularnog efluksa (Bsep. Mrp2) za žučne kiseline i organske anjone (podaci nisu prikazani). Međutim,norUDCAje rezultovala u robusnoj indukciji faze I i II enzima detoksikacije (Tabela 4) sa najizraženijim efektima na Sult2al ekspresiju. Dodatno,norUDCAje suštinski povećao ekspresiju alternativnih bazolateralnih efluksnih sistema kao što je Mrp4 i - u manjem stepenu - Mrp3 (Tabela 4. SI.7). Efekti UDCA bili su manje izraženi (Tabela 4, SI.7). Ova koordinisana indukcija puteva biotransformacije i efluksnih sistema sanorUDCApraćena je pojavom glukuronida žučne kiseline i takođe sulfata što odražava funkcionalne implikacije uočenih promena ekspresije.
1.3. Diskusija
[0064]Moguće je pokazati da norUDCA leći sklerozni holangitis kodMdrl<1>'miševa, dobro okarakterisani sistem za PSC, u okviru od 4 nedelje. Dodatno, moglo se pokazati da je norUDCA zanačajno efikasnija od UDCA.
[0065]Razvoj skleroznog holangitisa kodMdrl' 1'direktno je povezan sa defektnom sekrecijom fosfolipida u žuči i istovremeno povećanim nivoima ne-micelarno-vezanih toksičnih žučnih kiselina u žuči izazivajući povredu žučnog kanala i periholangitis (Fickert, Zollner, et al. 2002, Fickert, Fuchsbichler, et al. 2004). Indukcija sekrecije bikarbonata u žuči kod norUDCA-branjenihMdrl' 1'predstavljena ovim primerom u snažnoj je saglasnosti sa holehepatičnim šantingom norUDCA (Hofmann 1977. Yoon, Hagev. et al. 1986). Povećana sekrecija bikarbonata u žuči (i) razblažuje toksični žučni sadržaj kodMdrT1'i (ii) štiti epitelne ćelije žučnog kanala od oksidativnog stresa jer je bikarbonat potentni akceptor za reaktivne kiseoničke vrste. norUDCA stoga zaustavlja periholangitis u progresu i naknadnu periduktalnu fibrozu kodMdrT1'minimizujući povredu epitelnih ćelija žučnog kanala od strane lumena kanala. Ovo dovodi do rekonstitucije funkcije holangiocita kao barijere što bi značilo da su uočeni anti-inlfamatorni i anti-fibrotički efekti norUDCA kodMdrT'sekundarni. Međutim, očigledno je da norUDCA takođe ima direktne anti-inflamatorne i anti-fibrotičke efekte.
[0066]Nalazi ovog primera demonstriraju da inhibici ja periduktalne fibroze, kada je praćena modulacijom sadržaja žuči (tj. povećavanjem sadržaja hidrofilnih žučnih kiselina zajedno sa povećanom koncentracijom bikarbonata unutar kanala), značajno poboljšava povredu jetre kodMdrT<1->.
[0067] Za razliku od norUDCA, UDCA je poboljšala samo periduktalnu fibrozu lobularnih kanala žuči, ali je povećala nivoe ALT u serumu i indukovala infarkt žuči kodMdrT'.U prethodnoj studiji sa kraćim periodom tretmana zaključeno je da ovo može biti primarno povezano sa holeretičkim efektima UDCA u prisustvu nerešenih žučnih opstrukcija što je uporedivo sa nalazima kod CBDL UDCA-hranjenih miševa (Fickert, Zollner, et al. 2002). Za razliku od prethodne pretpostavke, pronađen je samo trend za povećani protok žuči kod UDCA- i čak još više kod norUDCA-hranjenihMdrl' 1'u ovoj studiji korišćenjem nižih doza. Međutim, kako UDCA nije poboljšala bolest u malim kanalima kodMdr2'''ovo ne isključuje mogućnost povećanog žučnog pritiska na nivou kanala Heringa kod UDCA-hranjenihMdrT'stoje moglo dovesti do uočenih infarkta žuči. Divergentni efekti obe žučne kiseline u odnosu na povredu žuči povezani su sa razlikama u nivou sekrecije žuči tj. da norUDCA primarno stimuliše sekreciju iz kanala, dok UDCA stimuliše kanalikularnu žučnu sekreciju ushodno od pogođenih kanala.
[0068] Nedavno je demonstriran uzročni odnos između portalne i lobularne inflamacije koji dovodi do periduktalne fibroze i duktusne proliferacije kao i do formiranja hepatocelularnog karcinoma (HCC) kodMdrT'-(Fickert, Fuchsbichler, et al. 2004, Pikarskv, Porat, et al. 2004). U ovoj studiji norUDCA normalizovala je proliferaciju hepatocita i epitelnih ćelija žuči. Pikarskv et al. su demonstrirali smanjenje inflamacije i povezano HCC formiranje korišćenjem ne-steroidnog anti-inflamatornog leka (NSA1D) ibuprofena u ovom modelu (Pikarskv, Porat, et al. 2004). Terapeutski efekti NSAlDs i norUDCA mogu se kombinovati i čak pojačati sa sulindakom, NSA1D. koji podleže holehepatičnom šantingu kod pacova (Bolder, Trang. et al. 1999).
[0069] Prirodne žučne kiseline su efikasno N-acil amidovane (konjugovane) amidnom vezom sa glicinom ili taurinom i zatim izlučene u kanalikulus žuči. Nasuprot tome,nor(C23) žučne kiseline imaju izraženu razliku u njenoj biotransformaciji i fizioloških karkateristika u poređenju sa njenim prirodnim (C24) homolozima. Pokazano je danorUDCArezultuje u koordinisanoj i robusnoj indukciji Sult2al (transferaze koja preferencijalno sulfatira steroide i žučne kiseline) i Mrp4 (transporter sulfatiranih steroida i žučnih kiselina) (Schuetz. Strom, et al. 2001, Zelcer, Reid, et al. 2003). Funkcionalne implikacije ovih nalaza su podržane pojavom sulfata i glukuronida žučne kiseline u urinu kod norUDCA hranjenihMdrl' 1'.Adaptivna indukcija detoksifikacije žučne ksieline sa norUDCA preko faze I (hidroksilacija) i II (sulfatacija, glukuronidacija) metabolizma može rezultovati u bolje rastvorljivim u vodi i stoga manje toksičnim metabolitima žučne kiseline koji se eliminišu alternativnim hepatocelularnim efluksnim pumpama (npr. Mrp4) praćeno sa njihovom renalnom ekskrecijom kao što je demonstrirano u ovom primeru. Indukcija takvih mehanizama sa norUDCA bila je mnogo više izražena nego ona kod UDCA (u ovom primeru) ili agonističkih liganada CAR prethodno registrovanih (Assem et al. 2004). Ovo pokazuje da norUDCA suštinski indukuje Sult2al-posredovanu detoksikaciju žučne kiseline i eksportovanje preko adaptivne prekomerne ekspresije Mrp4. dok sama norUDCA podleže kontinuiranom holehepatiČnom šantingu. Ovo ima dvostruki koristan efekat preko (i) izmeštanja i razblaživanja toksičnih žučnih kiselina u duktusnoj žuči i (ii) indukcije duktusne bikarbonatom-bogate holereze koja smanjuje oksidativni stres.
[0070]Stvaranje bikarbonatom bogate holereze sa norUDCA ima takođe terapeutske implikacije u humanim holangiopatijama (npr. PSC. PBC. hronično odbacivanje grafta jetre, supurativni destruktivni holangitis), jer holehepatični šanting rezultuje u kontinuiranom fluksu molekula preko epitela žučnog kanala što pomaže izmenjenim žučnim kanalima da se bolje nose sa toksičnim/oksidativnim stresom. Na primer, pokazano je da sulindak, NSAID koji takođe podleže holehepatiČnom šantingu kod ljudi, poboljšava enzime jetre kod PBC pacijenata sa nepotpunim odgovorom na UDCA tretman.
[0071]Od intersa su đve paralele koje postoje u metabolizmu norUDCA kod miševa i ljudi koje su suprotne prethodnim opservacijama kod drugih glodara i eksperimentalnih životinja (npr. pacovi sa bilijamom fistulom, hrčak, zamorac). Prvo. i miševi i takođe ljudi, pokazuju znatnu renalnu ekskreciju norUDCA. Dodatno, pronađeno je da jc glavni metabolitnorUDCAkod miševa glukuronid stoje takode u saglasnosti sa nalazima kod ljudi.
[0072]Drugo, za razliku od pacova (Yoon, Hagev, et al. 1986) procenjena holeretička potencija norUDCA kod miševa i ljudi leži oko tri puta iznad one kod normalnog protoka žuči u obe vrste. Međutim,norUDCAje indukovao žučni protok do mnogo višeg stepena kod pacova (I60ml/min-kg). Ipak, uzimajući zajedno ove nalaze može se pokazati da se efekti norUDCA kod Mdr2"'"mogu direktno ekstrapolirati na humane holestatske bolesti jetre.
[0073]Ukratko, može se pokazati da norUDCA leci sklerozni holangitis kodMdrl' 1'.norUDCA je efikasno jedinjenje za holestatske bolesti jetre neročito za humane PSC i bolesti jetre vezane zaMDR3mutacije.
<400> 2 tgatgcactg gaagaggaac 20 <210>3 <2U>20 <212> DNK <213> Veštačka <220> <223> Prajmer <400> 3 ccaccagtag cacactttcc 20 <210>4 <211> 22 <212>DNK <213> Veštačka <220> <223> Prajmer <400> 4 ttccatctcc atcacagtat ca 22 <210>5 <211> 22 <212> DNK <213> Veštačka <220> <223> Prajmer <400> 5
Claims (3)
1. Nor-ursodezoksiholna kiselina i/ili njene farmaceutski prihvatljive soli za upotrebu u tretmanu i/ili prevenciji autoimunog hepatitisa.
2. Nor-ursodezoksiholna kiselina i/ili njene farmaceutski prihvatljive soli za upotrebu u tretmanu i/ili prevenciji autoimunog hepatitisa prema patentnom zahtevu 1,naznačeni time danor-ursodezoksiholna kiselina i/ili njene farmaceutski prihvatljive soli je/su formulisani za oralnu, parenteralnu, potkožnu, intravensku, intramuskularnu. nazalnu, topikalnu ili rektalnu primenu.
3. Nor-ursodezoksiholna kiselina i/ili njene farmaceutski prihvatljive soli za upotrebu u tretmanu i/ili prevenciji autoimunog hepatitisa prema patentnim zahtevima 1 ili 2,naznačeni time danor-ursodezoksiholna kiselina i/ili njene farmaceutski prihvatljive soli se primenjuju na pacijenta u količini od 25 mg do 5 g. poželjno 100 mg do 2,5 g, naročito 800 mg do 1,5 g na dan.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP11176271.2A EP2392336B1 (en) | 2005-05-12 | 2005-05-12 | 24-norUDCA for treating autoimmune hepatitis |
| PCT/EP2005/052178 WO2006119803A1 (en) | 2005-05-12 | 2005-05-12 | USE OF 24-nor-UDCA |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RS55180B1 true RS55180B1 (sr) | 2017-01-31 |
Family
ID=35457032
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RS20160771A RS55180B1 (sr) | 2005-05-12 | 2005-05-12 | 24-norudca za lečenje autoimunog hepatitisa |
| RS20150511A RS54185B1 (sr) | 2005-05-12 | 2005-05-12 | Upotreba 24-norudca |
| RS20150495A RS54140B1 (sr) | 2005-05-12 | 2005-05-12 | Upotreba 24-norudca |
Family Applications After (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RS20150511A RS54185B1 (sr) | 2005-05-12 | 2005-05-12 | Upotreba 24-norudca |
| RS20150495A RS54140B1 (sr) | 2005-05-12 | 2005-05-12 | Upotreba 24-norudca |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8951995B2 (sr) |
| EP (4) | EP1890705B1 (sr) |
| AU (1) | AU2005331734B2 (sr) |
| CY (4) | CY1116831T1 (sr) |
| DK (4) | DK2392337T3 (sr) |
| EA (1) | EA014077B1 (sr) |
| ES (4) | ES2590333T3 (sr) |
| HR (3) | HRP20150949T1 (sr) |
| HU (4) | HUE025409T2 (sr) |
| LT (1) | LT2392336T (sr) |
| ME (3) | ME02256B (sr) |
| NO (1) | NO340318B1 (sr) |
| PL (4) | PL1890705T3 (sr) |
| PT (3) | PT2392335E (sr) |
| RS (3) | RS55180B1 (sr) |
| SI (4) | SI2392337T1 (sr) |
| WO (1) | WO2006119803A1 (sr) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080275030A1 (en) | 2007-01-19 | 2008-11-06 | Sveinbjorn Gizurarson | Methods and Compositions for the Delivery of a Therapeutic Agent |
| SI2182954T1 (sl) * | 2007-07-25 | 2019-04-30 | Medizinische Universitat Graz | Uporaba nor-žolčnih kislin pri zdravljenju arterioskleroze |
| EP2468762A1 (en) * | 2010-11-30 | 2012-06-27 | Dr. Falk Pharma Gmbh | Optimized synthesis of pure, non-polymorphic, crystalline bile acids with defined particle size |
| EP3461485A1 (en) * | 2017-09-28 | 2019-04-03 | Dr. Falk Pharma Gmbh | Use of nor-ursodeoxycholic acid for reducing liver fat |
| GB201911821D0 (en) | 2019-08-16 | 2019-10-02 | Provost Fellows Found Scholars And The Other Members Of Board Of The College Of The Holy And Undivid | Compounds for use in the treatment of liver disease |
| US11372809B2 (en) | 2019-09-27 | 2022-06-28 | Oracle International Corporation | System and method for providing correlated content organization in an enterprise content management system based on a training set |
| WO2021130232A1 (en) | 2019-12-23 | 2021-07-01 | Medizinische Universität Wien | Bile acid derivatives in the medical intervention of anxieties and/or stress symptoms |
| MX2022009182A (es) * | 2020-01-28 | 2022-08-17 | Shilpa Medicare Ltd | Metodo de administracion del acido ursodeoxicolico. |
| CN114195850B (zh) * | 2020-09-18 | 2024-08-16 | 成都贝诺科成生物科技有限公司 | 一种用于防治肝病的化合物及其制药用途 |
| AU2023313512A1 (en) * | 2022-07-25 | 2025-01-30 | Shilpa Medicare Limited | Pharmaceutical compositions of nor-udca |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4892868A (en) | 1984-08-17 | 1990-01-09 | Gipharmex, S.P.A. | Derivatives of biliary acids, process for the production thereof and corresponding pharmaceutical compositions |
| IT1229569B (it) * | 1989-04-17 | 1991-09-04 | Giuliani Spa | Derivati di acidi biliari, loro preparazione e composizioni farmaceutiche che li contengono. |
| IT1255449B (it) | 1992-06-30 | 1995-10-31 | Fabio Berlati | Uso di nor- e omo-derivati di acidi biliari come promotori di assorbimento di farmaci. |
| TW289020B (sr) | 1993-05-08 | 1996-10-21 | Hoechst Sktiengesellschaft | |
| ITMI20012572A1 (it) | 2001-12-06 | 2003-06-06 | Istituto Biochimico Italiano | Microgranuli di acido ursodesossicolico |
-
2005
- 2005-05-12 ME MEP-2016-198A patent/ME02256B/me unknown
- 2005-05-12 PL PL05749537T patent/PL1890705T3/pl unknown
- 2005-05-12 EP EP05749537.6A patent/EP1890705B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2005-05-12 HU HUE11176272A patent/HUE025409T2/en unknown
- 2005-05-12 ES ES11176271.2T patent/ES2590333T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2005-05-12 DK DK11176272.0T patent/DK2392337T3/en active
- 2005-05-12 LT LTEP11176271.2T patent/LT2392336T/lt unknown
- 2005-05-12 RS RS20160771A patent/RS55180B1/sr unknown
- 2005-05-12 PL PL11176271.2T patent/PL2392336T3/pl unknown
- 2005-05-12 SI SI200532003T patent/SI2392337T1/sl unknown
- 2005-05-12 AU AU2005331734A patent/AU2005331734B2/en not_active Ceased
- 2005-05-12 SI SI200532036T patent/SI1890705T1/sl unknown
- 2005-05-12 EP EP11176272.0A patent/EP2392337B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2005-05-12 DK DK11176270.4T patent/DK2392335T3/da active
- 2005-05-12 PT PT111762704T patent/PT2392335E/pt unknown
- 2005-05-12 EP EP11176270.4A patent/EP2392335B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2005-05-12 PT PT111762712T patent/PT2392336T/pt unknown
- 2005-05-12 EP EP11176271.2A patent/EP2392336B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2005-05-12 US US11/914,211 patent/US8951995B2/en active Active
- 2005-05-12 DK DK11176271.2T patent/DK2392336T3/en active
- 2005-05-12 RS RS20150511A patent/RS54185B1/sr unknown
- 2005-05-12 SI SI200532092A patent/SI2392336T1/sl unknown
- 2005-05-12 DK DK05749537.6T patent/DK1890705T3/en active
- 2005-05-12 HU HUE05749537A patent/HUE028336T2/en unknown
- 2005-05-12 ES ES11176270.4T patent/ES2547127T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2005-05-12 RS RS20150495A patent/RS54140B1/sr unknown
- 2005-05-12 PL PL11176272T patent/PL2392337T3/pl unknown
- 2005-05-12 ME MEP-2015-495A patent/ME02737B/me unknown
- 2005-05-12 ME MEP-2016-228A patent/ME02544B/me unknown
- 2005-05-12 HU HUE11176271A patent/HUE030010T2/en unknown
- 2005-05-12 ES ES05749537.6T patent/ES2561614T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2005-05-12 PL PL11176270T patent/PL2392335T3/pl unknown
- 2005-05-12 ES ES11176272.0T patent/ES2550204T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2005-05-12 EA EA200702336A patent/EA014077B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2005-05-12 SI SI200531997T patent/SI2392335T1/sl unknown
- 2005-05-12 WO PCT/EP2005/052178 patent/WO2006119803A1/en not_active Ceased
- 2005-05-12 HU HUE11176270A patent/HUE025184T2/en unknown
- 2005-05-12 PT PT111762720T patent/PT2392337E/pt unknown
-
2007
- 2007-12-12 NO NO20076405A patent/NO340318B1/no not_active IP Right Cessation
-
2015
- 2015-09-08 HR HRP20150949TT patent/HRP20150949T1/hr unknown
- 2015-09-23 CY CY20151100834T patent/CY1116831T1/el unknown
- 2015-10-16 HR HRP20151091TT patent/HRP20151091T1/hr unknown
- 2015-10-21 CY CY20151100939T patent/CY1116840T1/el unknown
-
2016
- 2016-02-10 CY CY20161100107T patent/CY1117174T1/el unknown
- 2016-09-02 CY CY20161100863T patent/CY1117959T1/el unknown
- 2016-09-19 HR HRP20161197TT patent/HRP20161197T1/hr unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8318811B2 (en) | Method for treating an inflammatory bowel disease using 2-amino-2-[4-(3-benzyloxyphenylthio)-2-chlorophenyl]ethyl-1,3-propanediol or a salt thereof | |
| CN102712672B (zh) | 用于治疗胆疾病的多羟基化胆汁酸 | |
| US10940125B2 (en) | Methods and compositions for the treatment of steatosis-associated disorders | |
| NO340318B1 (no) | Anvendelse av 24-nor-UDCA | |
| KR20180104123A (ko) | 비알콜성 지방간염 (NASH)의 치료를 위한 sGC 자극제의 용도 | |
| WO2013062544A1 (en) | Cysteamine in the treatment of fibrotic disease | |
| JP2024016228A (ja) | アセトアミノフェン（ａｐａｐ）によって引き起こされる毒性を予防、低減または根絶するための方法および組成物 | |
| HK1161121B (en) | 24-norudca for treating autoimmune hepatitis | |
| HK1161122B (en) | Use of 24-norudca | |
| HK1161121A (en) | 24-norudca for treating autoimmune hepatitis | |
| JP7719476B2 (ja) | Ｃｂｐ／カテニン阻害剤の肝線維症治療レジメン | |
| WO2005055997A1 (ja) | 炎症性疾患の治療及び予防用医薬組成物 | |
| AL‐SWAYEH et al. | Sucralfate attenuates gastric mucosal lesions and increased vascular permeability induced by ischaemia and reperfusion in rats | |
| RS65546B1 (sr) | Tretman holangiopatija sa seladelparom | |
| HK1176622B (en) | Polyhydroxylated bile acids for treatment of biliary disorders | |
| HK1176622A (en) | Polyhydroxylated bile acids for treatment of biliary disorders |