RS55337B1 - Jedinjenja za lečenje bolesti povezanih sa ishemijom-reperfuzijom - Google Patents

Description

Oblast pronalaska

[0001]Predmetni pronalazak se odnosi na oblast jedinjenja korisnih u lečenju patologija povezanih sa ishemijom-reperfuzijom.

Osnova pronalaska

[0002]Ishemija-reperfuzija je patološko stanje okarakterisano početnim ograničenjem protoka krvi do organa nakon čega sledi kasnija obnova perfuzije i istovremena reoksigenacija. Možda iznenađujuće, obnova protoka krvi i reoksigenacija često je povezana sa povećanjem u oštećenju tkiva i snažnim inflamatornim odgovorom ("reperfuziona povreda"). Ishemična-reperfuziona povreda postoji kod širokog opsega patoloških stanja (Tabela 1).

[0003]MODS (Multiple Organ Dvsfunction Svndrome): sindrom disfunkcije višestrukih organa;

CSE (Compartment Syndrome of the Extremity): kompartment sindrom ekstremiteta

CTE (chronic traumatic encephalopathy): hronična traumatska encefalopatija uzrokovana traumom od ponovljenih udaraca (npr., kod boksera, igrača ragbija itd.)

Gore opisana patološka stanja povezana sa ishemijom-reperfuzijom poreklom su od grupe biohemijskih događaja na ćelijskom nivou i nivou tkiva. Pošto je protok krvi zaustavljen u datoj oblasti, na primer na grani koronarne arterije, serija biohemijskih procesa se odigrava unutar ćelija ne-perfuzovanih tkiva. Dok su neka od njih suočena sa potpunom anoksijom, neka od njih prolaze kroz nekrozu, većina prolaze kroz tešku metaboličku neravnotežu koja je uglavnom okarakterisana brzim povećanjem intracelularnog sadržaja reaktivnih kiseoničnih vrsta (ROS, koje obuhvataju superoksid anjon, 022\ vodonik peroksid i hidroksil radikal), preko niskih nivoa proizvedenih pomoću elektron transportnog lanca u količinama štetnim za ćeliju. Ako je protok krvi ponovo uspostavljen (tj. reperfuzija), kao što se javlja posle operacije angioplastike, količina slobodnih radikala se dalje povećava, dajući ekstenzivno ćelijsko oštećenje, koje stvara "ishemično-reperfuziono" stanje. Ova situacija, koja je uglavnom masivni redoks šok, nije samo direktno štetna za različite makromolekule unutar ćelije (proteine, nukleinske kiseline, lipide), već je sposobna da pokrene unutrašnji put apoptoze.

[0004]Zaista, kod infarkta miokarda, do 80% ekstenzije krajnje lezije je povezano sa apoptotičkom smrću, koja se završava nekoliko časova do nekoliko dana posle početka ishemično-reperfuzionog stanja.

[0005]Sa biohemijske tačke gledišta, intenzivni metabolički šok aktivira veliki broj molekula koji deluju kao redoks senzori, kao što je ASK-1 kinaza. Ova kinaza se održava u neaktivnom stanju preko veze sa sniženim tioredoksinom i glutaredoksinom; njihova oksidacija određuje njihovo odvajanje od ASK-1 i posledičnu funkcionalnu aktivaciju kinaze.

[0006]Drugi putevi uključeni od početka procesa obuhvataju AMP kinazu i Rho GTPazu. Funkcionišući u sinergiji, ovi sistemi mogu recipročno da utiču jedan na drugog, na taj način značajno pojačavajući apoptotički proces. Funkcionalno koherentna familija kinaza locirana nishodno od gore opisanih metaboličkih puteva, sastoji se od JNK i p38 MAPK (MAP-kinaze) proteina, koji predstavljaju zajednički čvor lanca prenosa signala. Ovi molekuli imaju citosolne i jedarne supstrate, koji su delimično deljeni, koji učestvuju u različitim načinima u procesima ćelijske smrti preko autofagije ili apoptoze. Da navedemo samo nekoliko primera, JNK i p38 MAPK vezuju i fosforilišu Bcl-xL i Bcl-2, inaktivirajući njihov anti-apoptotički potencijal, događaj praćen oslobađanjem citohroma c iz mitohondrije, njegovim kombinovanjem sa molekulom Apaf-1 i posledičnom aktivacijom kaspaze-9. Druga kritična ciljna mesta dve MAP-kinaze su Beklin-1 i p53, oba blisko vezana sa početkom autofagne i apoptotičke ćelijske smrti, respektivno.

[0007]Na osnovu gore navedenih razmatranja, može se navesti da su MAP-kinaze kritične za generisanje ćelijskog oštećenja koje se odigrava u određenom broju kliničkih konteksta, naročito kod stanja ishemije-reperfuzije. Takođe je zanimljivo zapaziti da p38 MAPK i JNK dele zajednički biohemijski modulator, MKP-1, fosfatazu specifično sposobnu da inaktivira familiju enzima MAP-kinaze.

[0008]Određeni broj studija je direktno pokazao ovu tvrdnju; na primer, nokaut miševi za p38 MAPK, posle zatvaranja grana koronarne arterije, veoma su smanjili miokardijalne lezije u odnosu na normalne kontrole, nalaz koji ističe ulogu ovih kinaza u generisanju tkivnog oštećenja.

[0009]Prema tome stanje tehnike je da se za lečenje patologija povezanih sa ishemijom-reperfuzijom ili za upotrebu u medicinskim procedurama koji uključuju ishemiju-reperfuziju, može postići koristan farmakološki pristup preko upotrebe jedinjenja koja su sposobna da modifikuju aktivnost familije MAP kinaza. Patent WO2004000324 navodi da su derivati 3-azabiciklo[3.2.1]oktana aktivni kao agonisti humanih neurotrofina i da su prema tome korisni za pripremu farmaceutskih kompozicija za lečenje bolesti kod kojih su po pravilu uključene funkcije neutrofina, naročito funkcije NGF: neurodegenerativni poremećaji centralnog nervnog sistema, kao što je Alchajmerova bolest (AD), amiotrofna laterna skleroza (ALS), Hantingtonova bolest, neuropatije, neuralno oštećenje uzrokovano hipoksijom, ishemijom ili traumom, indukcija apoptoze nervnih ćelija; bolesti stečene imunodeficijencije povezane sa smanjenom biodostupnošću NGF, kao što je imunodeficijencija povezana sa starošću; bolesti kod kojih je stimulacija neoangiogeneze dokazana kao korisna, kao što je infarkt miokarda, šlog, ili periferne vaskularne bolesti; određene bolesti oka, kao što je keratitis različite etiologije, glaukom, degenerativna ili inflamatorna stanja mrežnjače. opisan je kao intermedijer za sintezu spiro-beta-laktama u A. Trabocchi, et al. Eur. J. Org. Chem. 2007, 4594-4599.

[0010]Jedinj enj e (1 R,5 S,7R)-3-(p-metoksibenzil)-2-okso-6,8-dioksa-3 - azabiciklo[3.2.1]oktan-7-karboksilna kiselina opisano je kao peptidomimetik u Antonio Guarna, et al J. Org. Chem. 1999, 64, 7347-7364. [00111Jedinjenje (lR,5S,7R)-3-Benzil-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2.1]oktan-7-karboksilna kiselina i jedinjenje (lR,5S,7R)-3-(p-fenil)-benzil-2-okso-6,8-dioksa-3-azabicildo[3.2.1]oktan-7-karboksilna kiselina opisani su kao inhibiori metaloproteaza u C. Mannino et al. Bioorganic & Medicinal Chemistrv 14 (2006) 7392-7403. [0012JSinteza jedinjenja (lS,5R,7S)-3-etil-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2.1]oktan-7-karboksilne kiseline opisana je u Revmond, J-L.; et al. Tetrahedron Asymmetry 1990, 1(10), 729-736.

[0013]Cilj predmetnog pronalaska je obezbediti jedinjenja za lečenje patologija povezanih sa ishemijom-reperfuzijom ili za upotrebu u medicinskim procedurama koje uključuju ishemiju-reperfuziju, i naročito, ali ne isključivo, onih okarakterisanih neodgovarajućom varijacijom u aktivnosti MAP kinaza WO2004/009588 opisuje derivate 8-azabiciklo[3.2.1]oktana za upotrebu u lečenju bolesti povezanih sa familijom ishemije-reperfuzije.

Rezime pronalaska

[0014]Cilj predmetnog pronalaska su jedinjenja formule (I)

gde

Rije izabran iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci-salkil, Ci-salkenil, C2-8alkinil, cikloalkil, aril, heterociklus -Ci-galkil-aril, -Ci-galkil-heterociklus, -Ci-8alkil-NH2, -aril-NH2, -Ci-galkil-O-aril -aril-OH, Ci-8alkil-OH, -COOR, -Cr8alkil-OR, metiloksikarbonil-Ci-8alkil, karboalkiloksi-aril, alkil karbamoil aril i -(bočni lanci aminokiselina);

R2je izabran iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci-salkil, C2-8alkenil, C2-8alkinil, cikloalkil, aril, -Ci-8alkil-aril, -Ci-galkil-heterociklus, -Ci-8alkil-NRR', -aril-NRR', -Ci-galkil-OR, -Ci-galkil-COOR, -Ci-8alkil-OC(0)R, -Ci-8alkil-N(R)C(0)R', -aril-OR, -aril-COOR, -aril-COR, -aril-OC(0)R, -aril-N(R)C(0)R', -CH(bočni lanci aminokiselina)C02R, -CH(bočni lanci aminokiselina)C(O)NR), -CH(C02R)-bočni lanci aminokiselina i CH(CONRR')-bočni lanci aminokiselina,

R3jeCOOH;

R i R', isti ili međusobno različiti, su izabrani iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci-galkil, C2-8alkenil, C2-8alkinil, cikloalkil, aril, heterociklus, -Ci-8alkil-aril; -Ci-galkil-heterociklus; zaštitna grupa, -C(0)CH-(bočni lanci aminokiselina)-NHT, -NH-CH(bočni lanci aminokiselina)COOT i -CH(bočni lanci aminokiselina)COOT, gde T je izabran od H i Ci-8alkil;

i gde gore navedene alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, aril, heterociklus grupe mogu biti supstituisane sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od halogena, CN, N02, NH2, OH, COOH, CO i Ci.6alkila;

isključujući jedinjenja (1 S,5R,7S)-3-etil-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2. l]oktan-7-karboksilnu kiselinu, (lR,5S,7R)-3-(p-metoksibenzil)-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2.1]oktan-7-karboksilnu kiselinu, (lR,5S,7R)-3-benzil-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2.1]oktan-7-karboksilnu kiselinu i (lR,5S,7R)-3-(p-fenil)-benzil-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2.1]oktan-7-karboksilnu kiselinu.

[0015]U toku studija usmerenih ka razjašnjavanju patogenih mehanizama generisanih od nekontrolisane aktivacije enzima MAP-kinaze, u kliničkim uslovima određenim ishemijom-reperfuzijom, iznenađujuće i neočekivano je nađeno da bi se efikasna kontrola aktivacije p38 MAKP ili JNK mogla dobiti odin vitroiin vivoprimene određenih derivata 3-azabiciklo[3.2.1]oktana opšte formule (I) kao što je opisana u prethodnom tekstu i drugih sličnih jedinjenja koji pripadaju kolekcijama jedinjenja koja su bila predmet patenta WO2004000324.

[0016]Jedinjenja formule (I) kao što su opisana u prethodnom tekstu (sa R3=COOH), takođe uključujući jedinjenja (1 S,5R,7S)-3-etil-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2. l]oktan-7-karboksilnu kiselinu, (lR,5S,7R)-3-(p-metoksibenzil)-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2. l]oktan-7-karboksilnu kiselinu, (lR,5S,7R)-3-Benzil-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2.1]oktan-7-karboksilnu kiselinu i (lR,5S,7R)-3-(p-fenil)-benzil-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2.1]oktan-7-karboksilnu kiselinu, za upotrebu kao lek, su na taj način cilj pronalaska.

[0017]Jedinjenje derivat 3-azabiciklo[3.2.1]oktana opšte formule (I) je takođe prema tome cilj predmetnog pronalaska:

gde

Rije izabran iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci-galkil, Ci-galkenil, C2-8alkinil, cikloalkil, aril, heterociklus -Ci-salkil-aril, -Ci-salkil-heterociklus, -Ci-8alkil-NH2, -aril-NH2, -Ci-8alkil-0-aril, -aril-OH, Ci-8alkil-OH, -COOR, -Ci-galkil-OR, metiloksikarbonil-Ci-8alkil, karboalkiloksi-aril, alkil karbamoil aril i -(bočni lanci aminokiselina);

R2je izabran iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci-8alkil, C2-8alkenil, C2-8alkinil, cikloalkil, aril, -Ci-8alkil-aril, -d-galkil-heterociklus, -d-galkil-NRR', -aril-NRR', -Ci-galkil-OR, -Ci-galkil-COOR, -Ci-8alkil-OC(0)R, -Ci-8alkil-N(R)C(0)R', -aril-OR, -aril-COOR, -aril-COR, -aril-OC(0)R, -aril-N(R)C(0)R', -CH(bočni lanci aminokiselina)C02R, -CH(bočni lanci aminokiselina)C(O)NR), -CH(C02R)-bočni lanci aminokiselina i CH(CONRR')-bočni lanci aminokiselina,

R3je izabran iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci-salkil, C2-8alkenil, C2-8alkinil, cikloalkil, aril, -Ci-8alkil-aril, heterociklus, -Ci-salkil-heterociklus; -C(0)R,-C(0)OR, - C(0)NRR', CH2OR, CH2NRR', -C(0)NH-CH(bočni lanci aminokiselina)C(0)OR, CH2NRFmoc, CH2NR-Boc i CH2NR-CBz,

R i R', isti ili međusobno različiti, su izabrani iz grupe koja se sastoji od sledećih H, Ci-salkil, C2-8alkenil, C2-8alkinil, cikloalkil, aril, heterociklus, -Ci-8alkil-aril; -Ci-8alkil-heterociklus; zaštitne grupe, -C(0)CH-(bočni lanci aminokiselina)-NHT, -NH-CH(bočni lanci aminokiselina)COOT i -CH(bočni lanci aminokiselina)COOT, gde T je izabran od H i Ci-galkil;

i gde gore navedene alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, aril, heterociklus grupe mogu biti supstituisane sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od sledećih: halogen, CN, N02, NH2, OH, COOH, CO i Ci-6alkil;

za lečenje patologija povezanih sa ishemijom-reperfuzijom ili za upotrebu u medicinski procedurama koje uključuju ishemiju-reperfuziju, i naročito, ali ne isključivo, one okarakterisane neodgovarajućom varijacijom u aktivnosti familije MAP kinaza.

[0018JNaročito, derivati 3-azabiciklo[3.2.1]oktana opšte formule (1), neočekivano i nepredvidivo određuju izrazito povećanje u MKP-1 proteinu u određenom broju ćelijskih tipova koji eksprimiraju Trk receptore (naročito, kardiomiocite, neuronske ćelije, ćelije bubrežnog parenhima, itd.); ovaj događaj je postignut u odsustvu značajne aktivacije drugih metaboličkih puteva, kao što su, na primer, put fosfatidilinozitol-3 kinaze/protein-kinaze B, koji dovodi do povećanih nivoa intracistolnog kalcijuma. Humani memorijski B limfociti bez svog autokrinog faktora preživljavanja, NGF, bivaju podvrgnuti jakoj aktivaciji p38 MAPK, nakon čega sledi apoptotička smrt ćelija. Ovo oštećenje je izrazito smanjeno dodavanjem 3-derivata azabiciklo[3.2.1]oktana ošte formule (I), koji izazivaju izrazito povećanje u nivoima MKP-1 i intenzivnu modulaciju p38 MAPK; posledično, ćelije su zaštićene od programirane ćelijske smrti. Na isti način, ćelije miokarda kultivisane 30 minuta pod izrazito hipoksičnim uslovima (pO2<0.1%), zatim dovedene do normalnih nivoa kiseonika, bivaju podvrgnute kroz izraziti redoks šok, okarakterisan aktivacijom p38-MAPK, aktivacijom kaspaze i apoptozom. Ipak, ako se derivati 3-azabiciklo[3.2.1]oktana opšte formule (I), primenjuju se pre hipoksije ili neposredno posle, intenzitet redoks promena ostaje nepromenjen, ali p38 MAPK fosforilacija je izrazito smanjena i apoptoza je kontrolisana; zaista, u istim kulturama zabeležen je paralelno, izrazito povećanje nivoa MKP-1 proteina. Gore opisane studije pokazuju mogući biološki pristup usmeren ka ublažavanju ishoda nekontrolisane aktivacije proteina familije MAP-kinaza, što je potencijalno korisno u određenom broju kliničkih stanja okarakterisanih ishemijom-reperfuzijom, gde se naročito javlja neodgovarajuća varijacija u aktivosti familije MAP kinaza.

[0019]Ovi neočekivani nalazi omogućavaju identifikaciju farmakološke upotrebe derivata 3-azabiciklo[3.2.1]oktana opšte formule (I) u svim onim patologijama koje su povezane sa ishemijom-reperfuzijom, kod kojih posle ishemičnih stanja generisanih od bilo koje redukcije ili prestanka protoka krvi, sledi kasnije obnova priliva kiseonika/hranljivih sastojaka do tkiva.

[0020]Dodatne karakteristike i prednosti jedinjenja prema pronalasku biće detaljno navedene u sledećem opisu.

Detaljan opis pronalaska

[0021]

Sledeći cilj predmetnog pronalaska je prema tome farmaceutska kompozicija koja sadrži kao aktivni sastojak najmanje jedan od derivata 3-azabiciklo[3.2.1]oktana opšte formule (I) kao što su opisani u prethodnom tekstu za lečenje patologija povezanih sa ishemijom-reperfuzijom. Naročito, patologije povezane sa ishemijom-reperfuzijom kao što su definisane u prethodnom tekstu su na primer: - akutna ishemija miokarda; - ishemija centralnog nervnog sistema (CNS) uzrokovana trombozom ili embolijom intrakranijalnih arterija ili srčanim zastojem, uključujući stalan ili privremeni prekid protoka krvi u nekim cerebralnim arterijskim oblastima ili u ćelom encefalonu; - hirurške procedure pri čemu operacija obezbeđuje da određene arterijske oblasti budu privremeno zatvorene, kao što se naprimer javlja u operaciji ablacije bubrežnog tumora; - protokoli eksplantacije, prezervacije i ponovne implantacije za organe namenjene za transplantaciju, kao što su bubrezi, srce, pluća, jetra, crevo, itd.; - sve druge ishemične patologije okarakterisane smanjenjem ili zaustavljanjem protoka krvi, nakon čega zatim sledi obnavljanje influksa kiseonika/hranljivih materija do tkiva; - stanja hipoksije cerebralnog tkiva, kao što su na primer, trovanje ili gušenje ugljen monoksidom, pri čemu je posle normalne medicinske intevencije, moguće povratiti normalne nivoe oksigenacije; - oštećenja drugih tkiva uzrokovana hipoksijom, ishemijom ili traumom, sposobna da izazovu smrt apoptozom ili autofagijom, do tačke generisanja značajnih anatomskih i funkcionalnih lezija

- hronična traumatska encefalopatija (CTE).

[0022]Sledeći cilj pronalaska je medijum ćelijske kulture koji sadrži najmanje jedan derivat 3-azabiciklo[3.2.1]oktana opšte formule (I).

[0023]Sledeći cilj pronalaska je medijum za čuvanje za prezervaciju transplantiranih organa namenjenih za transplantaciju, pri čemu navedeni medijum sadrži najmanje jedan derivat 3-azabiciklo[3.2.1]oktana opšte formule (I).

[0024]Cilj pronalaska je takođe derivat 3-azabiciklo[3.2.1]oktana opšte formule (1) obeležen pogodnim reagensom (kontrastni agensi, radioaktivni izotopi, fluorescentni agensi itd.), za upotrebu u bilo kojoj od procedura korisnih za svrhe medicinskog imadžinga, analizu za imadžing tkiva i organain vitroiliin vivo,za procenu i relevantnost ishemične reperfuzione povrede i, naročito, za praćenje upotrebe i efikasnosti medicinskih proizvoda.

[0025]U predmetnom pronalasku, izraz "bočni lanac aminokiseline" označava grupe L ili D bočnih lanaca aminokiselina u prirodi ili aminokiselina koje su retke ili nisu prisutne u prirodi.

[0026]Osim ukoliko nije drugačije naznačeno, termini alkil, alkenil, alkinil, aril, arilalkil, cikloalkil i heterociklus, kao što su korišćeni u predmetnom pronalasku, trebalo bi da se razumeju kao što sledi: - alkil Ci_8, alkenil Ci_8i alkinil Co- s označavaju linearne granate alkil radikale, respektivno koji imaju samo jednogube veze najmanje jednu dvogubu vezu, najmanje jedu trogubu vezu. Primeri alkil grupa prema predmetnom pronalasku obuhvataju, ali bez ograničenja na, metil, etil, propil, izopropil, butil, pentil, heksil, heptil, oktil. Primeri alkenil grupa prema predmetnom pronalasku obuhvataju, ali bez ograničenja na=CH2, etenil, propenil, 1-butenil, cis-2-butenil, trans-2-butenil, 2-metil-1 -propenil, 1-pentenilel, cis-2-pentenil, trans-2-pentenil, 2-metil-2-butenil. Primeri alkinil grupa prema predmetnom pronalasku obuhvataju, ali bez ograničenja na, etinil, propinil, 1-butenil, 2-butinil, 1-pentenil, 3-metil-l-butinil; - termin "cikloalkil" označava prsten koji sadrži atome ugljenika, koji generalno imaju između 3 i 8 članova, i poželjno između 5 i 6 članova. Primeri cikloalkil grupa obuhvataju, ali bez ograničenja na, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil, norbornanil, kamfanil, adamantanil; - termin "aril" označava grupu koja sadrži jedan ili više nezasićenih prstenova, pri čemu svaki prsten ima između 5 i 8 članova, poželjno 5 ili 6 članova. Primeri aril grupa obuhvataju, ali bez ograničenja na, fenil, bifenil i naftil; - termin "heterociklus" označava zasićene ili aromatične heterocikluse koji sadrže jedan ili više heteroatoma, i poželjno jedan ili više N atoma. Primeri heterociklusa obuhvataju, ali bez ograničenja na, piridin, imidazol, pirol, indol, triazole, pirolidin, piperidin;

[0027]U predmetnom pronalasku, fluorenilmetoksikarbonil grupe, t-butiloksikarbonil, karboksibenzil, benzil, fenil i acetil su respektivno naznačene upotrebom uobičajenih termina Fmoc, Boe, Cbz, Bn, Ph i Ac.

[0028]Prema predmetnom pronalasku, alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, aril i heterociklus grupe mogu biti supstituisane sa jednom ili više grupa, i poželjno jednom ili dve grupe izabrane iz grupe koja se sastoji od halogena, cijano, nitro, amino, hidroksi, karboksilne kiseline, karbonila i Ci_6alkila. Termin "halogen" označava fluor, hlor, brom i jod.

[0029]Od jedinjenja formule (I) sa R3=COOH prednost se daje onima kod kojih: Rije izabran iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci-8alkil, Ci-8alkenil, -Ci-8alkil-fenil, - Ci-galkil-OH i -Ci-8alkil-OR;

R2 je izabran iz grupe koja se sastoji od aril, -Ci-8alkil-aril.

[0030]Naročito su poželjna ona kod kojih Rjje izabran iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci-galkil, C2-8alkenil, -Ci-8alkil-fenil, -Ci-8alkil-OH and -Ci-8alkil-OR;

Roje izabran iz grupe koja se sastoji od arila, -Ci-galkil-arila;

Od jedinjenja formule (I) za upotrebu u medicinskim stanjima koja su rezultat ishemije-reperfuzije, poželjna su ona jedinjenja u kojima je Ri izabran iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci-8alkil, C2-8alkenil, -Ci-8alkil-fenil, -Ci-8alkil-OH i -Ci-8alkil-OR;

R2 je izabran iz grupe koja se sastoji od arila i -Ci-8alkil-arila;

R3je izabran iz grupe koja se sastoji od C(0)OR, -C(0)NRR';

R i R', jednaki ili međusobno različiti, su izabrani iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci-8alkil, -Ci-8alkil-NH2, -Ci-8alkil-OH; R i R' međusobno kombinovani mogu da formiraju cikloalkil.

[0031]Naročito su poželjna ona jedinjenja u kojima

Ri je H, Me, =CH2, CH2Ph, CH2OH, CH2OBn;

R2je Ph, CH2Ph, CHPh2;

R3 je COOH, COOMe, CONHCH2CH2NH2, CONHCH2CH2OH,

[0032] Jedinjenja 1-96 opšte formule (I) prema pronalasku prikazana u sledećim Tabelama 1-2 su rezultati od posebnog interesa na račun njihovih aktivnosti po tome što ona određuju izrazito povećanje u MKP-1 proteinu; i ona su prema tome jedinjenja koja se poželjno koriste za pripremu farmaceutskih kompozicijama prema pronalasku. (I)

[0033]Gore navedena jedinjenja 1-4, 11-30, 35-52 i 59-78 su opisana u J. Org. Chem. 1999, 64, 7347, Organic Letters, 2000, 2, 3987-3990, Bioorganic &Med Chem 2001, 9, 1625-1632, Eur. J. Org. Chem. 2002, 873-880, u međunarodnoj patentnoj prijavi br. WO 2001064686; i u međunarodnoj patentnoj prijavi br. WO2004000324; postupci za pripremu jedinjenja formule (I) gde se R3 razlikuje od COOH su takođe opisani u ovim dokumentima. Jedinjenje 5 je navedeno u J. Org. Chem. 1999, 64, 7347.

[0034]Jedinjenja 6-10, 31-34, 53-58 i 79-96 formule I sa R3 koji je jednak COOH su nova.

[0035]Jedinjenja formule (I) u kojima je R3 = COOH mogu biti pripremljena od jedinjenja formule (I) gde je R3 = COOMe hidrolizom sa NaOH u vodi i u prisustvu linearnih ili cikličnih etara kao rastvarača. Natrijumova so je slabo rastvorljiva u vodi i može biti izolovana filtracijom posle uklanjanja organskog rastvarača. Zakišeljavanjem jedinjenja formule (I) gde je R3 = COONa, ona mogu biti transformisana tretmanom sa vodenim rastvorom HC1 u odgovarajuća jedinjenja formule (I) gde je R3 = COOH.

[0036]Predmetni derivati 3-azabiciko[3.2.1]oktana opšte formule (I) u slobodnom obliku ili u obliku farmaceutski prihvatljivih soli mogu biti korišćeni za pripremu farmaceutskih kompozicija posle uobičajenih postupaka farmaceutske pripreme.

[0037]Ove farmaceutske kompozicije mogu biti pogodno formulisane, i mogu da obuhvataju jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata i/ili razblaživača. Primena ovih formulacija može biti izvedena preko bilo kog konvencionalnog puta, kao što je parenteralni put, u obliku rastvora ili suspenzije, oralnom, okularnom, nazalnom, topikalnom, itd.

[0038]Formulacija derivata 3-azabiciklo[3.2.1]oktana formule (I) prema pronalasku obuhvata

tablete, kapsule, pilule, pelete, rastvore, disperzije, suspenzije, lipozomalne formulacije, mikrosfere, nanosfere, kreme i masti, emulzije i aerosolove, koji takođe mogu biti pripremljeni na način koji omogućava kontrolisano ili odloženo oslobađanje aktivnog jedinjenja.

[0039]Ove farmaceutske kompozicije mogu da sadžre najmanje jedno od predmetnih jedinjenja formule (I), ili njihove smeše, kao aktivni sastojak ili adjuvant, moguće u kombinaciji sa drugim aktivnim sredstvom ili adjuvantom, izabranim prema patološkim stanjima.

[0040]Pored upotrebe u prethodno naznačenim patologijama, derivati 3-azabiciklo[3.2.1]oktana opšte formule (I) i njihove smeše, i na taj način kompozicije koje ih sadrže, mogu biti korišćeni za pripemu medijuma kulture i sredstva za čuvanje korisnog za prezervaciju eksplantiranih oragana namenjenih za transplantaciju.

[0041]Sledeći priemri su objavljeni radi obezbeđivanja neograničavajuće ilustracije predmetnog pronalaska.

Kratak opis crteža

[0042]SL. 1 - prikazuje western blotting autofosforilacije TrkA receptora na PC12 ćelijama kada je inkubiran sa NGF ili sa mimetikom (jedinjenje formule (I)) prema pronalasku. SL. 2 - prikazuje western blotting za procenu u PC 12 ćelijama za indukciju povećanja ekspresije MKP-1 proteina pomoću mimetika (jedinjenja formule (I)) prema pronalasku. SL. 3 - prikazuje određivanje WB fosforilacionih nivoa p38 MAPK proteina u PC 12 ćelijama izloženih lišavanju serumom tokom 6 časova i zatim mimetiku (jedinjenje formule (I)) ili rekombinantnom humanom NGF u trajanju od 30 minuta. SL. 4 - prikazuje vrednosti intenziteta traka dobijenih u WB sa naznačenim antitelima, analiziranjem uzoraka ćelija izloženih ishemiji-reperfuziji (T/R), u prisustvu ili odsustvu mimetičkog jedinjenja (jedinjenje formule (I)), u poređenju sa ćelijama kultivisanim u normalnim kontrolnim uslovima SL. 5 - prikazuje histološku procenu na 24 časa nekrotičkog oštećenja (gornji paneli) ili apoptotičkog oštećenja (donji paneli) desnog bubrega životinja podvrgnutih unilateralnoj ligaciji hilusa desnog bubrega u prisustvu ili u odsustvu mimetičkog jedinjenja (jedinjenje formule (I)) (levi bubreg je služio kao kontrola) za naznačena vremena.

[0043]U gore opisanim crtežima, mimetik je derivat 3-azabiciklo[3.2.1]oktana opšte formule (I) i naročito

Mimetik 1 odgovara jedinjenju 65;

Mimetik 2 odgovara jedinjenju 83;

Mimetik 3 odgovara jedinjenju 19;

Mimetik 4 odgovara jedinjenju 20;

Mimetik 5 odgovara jedinjenju 38.

PRIMER 1

REFERENTNI PRIMER

Priprema( ISAR , 5R , 7S )- 3 , 4- dibenzil- 2- okso- 6, 8- dioksa- 3- azabiciklo[ 3. 2. 1 ] oktan- 7- natrijum

karboksilata ( jedinjenje formule ( I) u kome je Ri =R? PhCH?R3 =( COONa))

[0044JU rastvor jedinjenja formule (1), u kome je Ri=R2PhCH2R3=(COOMe) u THF ukapavanjem je dodavan rastvor NaOH u vodi. Posle oko dva časa pod sniženim pritiskom rastvarač potpuno isparavan i voda je dodata u ostatak i ostavljena da se meša magnetnom mešalicom u trajanju od 1 časa. Dobijena čvrsta supstanca je filtrirana i sušena da bi se dobilo jedinjenje formule (I), gde je Ri= R2PhCH2R3=(COONa)

t.t. 311.2-313.4°C (step.) [alfa]D<21>+ 34.3 (c 1.02, DMSO)

PRIMER 2

Priprema ( lS, 4R, 5R, 7S)- 3, 4- dibenzil- 2- okso- 6, 8- dioksa- 3- azabiciklo[ 3. 2. 11oktan- 7- metil

karboksilata ( jedinjenje formule ( I), u kome je Rj =R? PhCH?R3 =( COOMe))

[0045]U suspenziju jedinjenja T u kome je Ri= R2PhCH2R3=COONa u metanolu koji sadrži kap DMF, dodat je tionil hlorid, bez prelaženja 40°C. Posle 30 minuta rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, ostatak je apsorbovan sa toluenom i rastvarač je ponovo uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je rastvoren u toluenu i rastvor, ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHC03, sušen sa MgS04, je isparavan pod sniženim pritiskom, na taj način dobijajući jedinjenje I sa Ri= R2PhCH2, R3= COOMe u obliku žutog ulja.

PRIMER 3

Priprema ( 16', 4j?, 5i?, 7^'- 3, 4- dibenzil- 2- okso- 6, 8- dioksa- 3- azabiciklo[ 3. 2. 11oktan- 7-

karboksilne kiseline ( jedinjenje formule ( I) u kome je Rj = R?PhCH?R3=( COOH))

[0046]U suspenziju jedinjenja formule (I) u kome je Ri= R2PhCH2R3=(COONa) u H2, lagano je dodavana IN HC1 sve dok se nije dostigla pH 2. Proizvod je ekstrahovan sa dihlorometanom uz održavanje konstantne pH, i organska faza je sušena preko Na2S04. Posle filtracije i isparavanj a Jedinjenje formule (I) u kome je Ri= R2PI1CH2 R3=(COOH), dobij eno je kao bela čvrsta supstanca.

PRIMER 4

Priprema ( lS, 4R, 5R, 7S)- 3, 4- dibenzil- 2- okso- 6, 8- dioksa- 3- azabiciklo[ 3. 2. 1] oktan- 7- lizin

karboksilata ( jedinjenje formule ( I) u kome je Rj = R?PhCH?R r= ( COO) lizin<+>)

[0047]U rastvor jedinjenja formule (I), u kome je Ri= R2PhCH2R3=(COOH) u izopropanolu, održavanom na 65-70°C brzo je dodat ekvivalentan rastvor L-lizina u vodi. Hlađen je u ledenom kupatilu i proizvod je izolovan filtracijom, posle ispiranja sa hladnim izopropanolom. Dobijeno je jedinjenje proizvod formule (I), u kome je R1=R2 PhCH2 R3=(COO-) lizin<+>. [alfa]D<25>+ 29.3 (c 1.0, H20)

[0048]U sledećim primerima, čiji su rezultati takođe grafički predstavljeni na slikama 1-5, mimetik označava derivat 3-azabiciklo[3.2.1]oktana opšte formule (I) i naročito

Mimetik 1 odgovara jedinjenju 65;

Mimetik 2 odgovara jedinjenju 83;

Mimetik 3 odgovara jedinjenju 19;

Mimetik 4 odgovara jedinjenju 20;

Mimetik 5 odgovara jedinjenju 38.

Primer 5

Autofosforilacija Trk A receptora i definicija tirozina uključenih u proces

[0049]Ćelije kontinuirane linije PC12 feohromocitoma pacova su kultivisane u koncentraciji od 4 x 10<5>/ml u RPMI 1640 medijumu, dopunjenom sa 5% glutaminom, antibioticima i u odsustvu seruma, u 24-komornim pločama u trajanju od 6 časova. Zatim, NGF u krajnjoj koncentraciji od 10 ng/ml ili alternativno jedinjenja formule (I), u krajnjoj koncentraciji od 10 um, dodati su u ove kulture. Posle 20 minuta, ćelije su na taj način lizirane u RIPA puferu (20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1 mM Na2EDTA, 1 mM EGTA, 1% NP-40, 1% natrijum deoksiholat, 25 mM natrijum pirofosfat, 1 mM P-glicerofosfat, 1 mM Na3V04, 1 ug/ml leupeptina) za biohemijsku analizu pomoću Western blotting (WB) tehnike, upotrebom specifičnih antitela za fosforilisani oblik tirozina 490, 674/675 ili 785.

[0050]Analiza rezultata omogućava ustanovljavanje da dok je NGF nepromenljivo indukovao fosforilaciju svih tirozina, jedinjenja formule I su indukovala fosforilaciju jednog od ispitivanih tirozina, ali ne i drugih, u različitim kombinacijama (SLIKA 1). Grafikoni prikazuju vrednosti fosforilacije naznačenih tirozina (Y490, Y674/675, Y785), izražene kao odnos intenziteta traka zabeleženih u WB, razvijenih sa odgovarajućim anti-fosfotirozin antitelima, prema traci koja se odnosi na ukupni TrkA protein. Jasno je da mimetici veoma snažno indukuju fosforilaciju Y490 i mnogo manje fosforilaciju drugih tirozina. Nivoi fosforilacije Y490, ali ne oni od Y674/675 i Y785, indukovani mimetikom su značajno viši od kontrole (p< 0.01 ).

[0051]Isti eksperiment, sa sličnim rezultatima, je ponovljen upotrebom klonova NIH-3T3 fibroblasta stabilno transficiranih sa DNK koja kodira humani TrkA receptorni protein.

Primer 6

Procena sposobnosti jedinjenja formule ( I) da indukuju povećanje u ekspresiji MKP- 1

proteina

[0052]PCI2 ćelije su kultivisane u odsustvu seruma, tačno kao što je opisano u prethodnom tekstu u primeru 5, i zatim tretirane 30 minuta sa NGF, u krajnjoj koncentraciji od 10 ng/ml, ili alternativno sa jedinjenjima formule (I), u krajnjoj koncentraciji od 10 um; zatim, ćelije su lizirane, i analizirane pomoću WB, upotrebom antitela specifičnih za MKP-1 protein. Rezultati pokazuju da su mimetici sposobni da indukuju povećanje u sintezi MKP-1, do stepena sličnog onome zabeleženom sa NGF (SLIKA 2). Gel pokazuje ranu indukciju (20 minuta) MKP-1 proteina u PC12 ćelijama tretiranim mimetičkim jedinjenjem ili sa rekombinantnim humanim NGF. Grafikon prikazuje kvantitativno određivanje, izvedeno pomoću denzitometrije, trake gela koje je izraženo kao odnos gustine MKP1 trake prema gustini trake P-aktina. Nivoi MKP-1 proteina indukovani pomoću NGF ili pomoću mimetika su značajno viši od kontrole (p < 0.001).

Primer 7

Procena sposobnosti da indukuje defosforilaciju p38 MAPK proteina ( aktiviran ćelijskim

stresom).

[0053]PC 12 ćelije su kultivisane u odsustvu seruma, tačno kao što je opisano u prethodnom tekstu u primeru 5, i tretirane 30 minuta sa NGF, u krajnjoj koncentraciji od 10 ng/ml, ili alternativno sa jedinjenjima formule 1, u krajnjoj koncentraciji od 10 um; ćelije su zatim lizirane i analizirane pomoću WB, upotrebom antitela specifičnih za fosforilisani oblik enzima. Rezultati pokazuju da su mimetici nepromenljivo indukovali izrazitu defosforilaciju p38 MAPK, kao nativnog neurotrofina.

[0054]Slika 3 prikazuje određivanje u WB nivoa fosforilacije p38 MAPK proteina u PC12 ćeljama izloženim lišavanju serumom u trajanju od 6 časova i zatim mimetiku (jedinjenju formule (I)) ili rekombinantnom humanom NGF u trajanju od 30 minuta. Kontrola homogenosti punjenja proteina na gelu zabeležila je normalizaciju sa P-aktivnom. (SLIKA 3).

Primer 8

Procena aktivnostiin vitromodela ishemije- reperfuzije na mišje kardiomiocite.

[0055]Mišji kardiomiciti, dobijeni od neotanalnih miševa ili od kontinuiranih kultura HL1 ćelija (mišji atrijalni miksom), su kultivisane u tri ponavljanja u koncentraciji od 4 x 10<5>/ml u RPMI 1640 medijumu dopunjenom sa 5% glutaminom, antibioticima i 10% fetusnim telećim serumom, u 24-komornim pločama, do stanja konfluentnosti. Neke ploče su zatim postavljene na 37°C u trajanju od 30 minuta u inkubatoru koji sadrži veštačku atmosferu vazduha sa delimičnim pritiskom kiseonika jednakim 0.5%; drugi deo ćelija je kultivisan pod normalnim uslovima kao negativna kontrola.

[0056]Kada je period kulture u dubokoj hipoksiji protekao, neke od kultura su odmah podvrgnute ćelijskoj lizi u RIPA puferu da bi se dobio neophodan materijal za biohemijsku analizu, dok su druge kultivisane u prisustvu ili odsustvu jednog od mimetika u koncentraciji od 5 um, dodatna 3 časa u normalnoj atmosferi, da bi se procenio efekat reoksigenacije/reperfuzije, i zatim su lizirane kao što je navedeno u prethodnom tekstu; lizati su dobij eni paralelno od kontrolnih ćelija kultivisanih u normalnoj atmosferi. Tri grupe lizata (hipoksija, hipoksija/reperfuzija, kontrola) su zatim obrađene u WB, dobijajući membrane koje su izložene specifičnim antitelima za p38 MAPK proteine, u fosforilisanom ili nefosforilisanom obliku, MKP-1, Bcl-2, Bcl-xL i, kao kontrola za standardizaciju, aktinu. Posle dalje obrade za dobijanje slika, izvedena je kvantitativna procena eksperimentalnih rezultata.

(SLIKA 4).

[0057JGrafikon prikazuje vrednosti intenziteta traka dobijenih u WB sa naznačenim antitelima, analiziranjem uzoraka ćelija izloženih ishemiji-reperfuziji (I/R), u prisustvu ili u odsustvu mimetičkog jedinjenja, u poređenju sa ćelijama kultivisanim u normalnim kontrolnim uslovima. U uzorcima tretiranim mimeticima, postoji očigledna indukcija sinteze MKP-1 proteina i posledično slabljenje fosforilacije p38 MAPK proteina. Pod istim uslovima, NGF indukuje slične rezultate.

[0058]Bilo je očigledno da je postojao očigledan proces fosforilacije p38 MAPK proteina u ishemičnoj fazi, u poređenju sa kontrolama kultivisanim u normalnoj atmosferi; ova aktivacija je dalje povećana posle uzastopna tri časa izlaganja normalnoj atmosferi, proceduri koja stimuliše stanje reperfuzije. Fenomen povećanja u stopi fosforilacije p38 MAPK bio je u velikoj meri kontrolisan izlaganjem mimetiku. Pored toga, izrazito povećanje MKP-1 proteina, specifične fosfataze za p38 MAPK enzim, koji se na taj način smatra odgovornim za inaktivaciju same kinaze, je očigledno u istim tretiranim kulturama.

Primer 9

Procena efikasnosti jedinjenja formule ( I) u kontroli apoptotskog fenomena indukovanog

visokim prisustvom kiseoničnih reaktivnih vrsta ( ROS).

[0059]Na drugoj alikvoti ćelija kultivisanih u hipoksiji, sa ili bez tretmana, tretiranih kao što je opisano u primeru 9, izvedeni su eksperimetni da bi se procenila efikasnost mimetika u kontroli apoptotskog fenomena indukovanog visokim prisustvom reaktivnih kiseoničnih vrsta (ROS), što je zauzvrat uzrokovano ishemijom i pogoršano repefuzijom. Na kraju perioda reperfuzije, ćelije su obojene aneksinom -V obeleženim fluoresceinom u trajanju od 10 minuta, isprane, resuspendovane u specijanom puferu i analizirane pomoću protočne citometrije da bi se istakle ćelije pozitivne na boju i na taj način u aktivnoj fazi razvoja apoptotskog procesa. Analogno gore objavljenim rezultatima, kulture tretirane sa NGF ili sa mimetičkim jedinjenjima formule I, sposobnim da indukuju povećanu sintezu MKP-1, pokazale su mnogo niži procenat apoptotičnih ćelija nego kontrole. Ovi rezultati potvrđuju sposobnost nekih mimetika za kontrolu programirane ćelijske smrti indukovane ishemijom-reperfuzijom ili metaboličkim stresom u širem smislu reči.

Primer 10

Procena efekta jedinjenja 1 uin vivomodelu ishemije- reperfuzije organa

[0060] Za svrhe prikazivanja efikasnosti mimetika formule (I) u kontroli apoptotičkog fenomena indukovanog ishemijom-reperfuzijom u organu, korišćen je model tople ishemizacije mišjeg bubrega. Ukratko, 6 C57B16 mužjaci miševa starosti osam nedelja podvrgnuti su unilateralnom zatvaranju, putem stezanja, bubrežnog hilusa, uz održavanje organain situ("tople" ishemije); ovo stanje je održavano 40 minuta, na kraju čega je obnovljen protok krvi. Tri životinje su injektirane sa jednim od mimetika formule (I) sposobnog da indukujein vivopovećanje u sintezi MKP-1 proteina, u dozi od 1 mg/kg telesne težine, dok je ostalim životinja injektirana slična zapremina pufera korišćenog za solublizaciju jedinjenja, kao kontrola. Životinje su zatim držane pod posmatranjem 24 časa i, zatim eutanazirane. Ishemizovani organ i kontralateralni organ, kao kontrola, su zatim pripremljeni za histološko ispitivanje, sa pogledom u određivanju intenziteta nekrotičkog i apoptotičkog oštećenja indukovanog ishemijom-reperfuzijom, oba procenjena pomoću upotrebe skale koja se tipično koristi za izvođenje ocenjivanja histološkog oštećenja. Ekstenzivna analiza histoloških preparata istakla je veliki nivo ćelijskog oštećenja, nekrotičkog i apoptotičkog, glomerularnih struktura i tubularnih struktura, u kontrolnim organima. U organima dobij enim od životinja tretiranih mimeticima, sa druge strane, postojala je očigledna izrazita redukcija intenziteta apoptotičkog oštećenja, dok su nivoi nekrotičkog oštećenja bili slični onima kod kontrolnih organa (SLIKA 5). Očigledno je da je nekrotičko oštećenje značajno nepromenjeno tretmanom sa mimetikom, dok je apoptotičko oštećenje snažno modulirano farmakološkom aktivnošću jedinjenja, na statistički značajnim nivoima (p < 0.001). Ova zapažanja potvrđuju, čak i uin vivomodelu ishemije-reperfuzije, efikasnost određenih mimetika formule 1 u modulaciji apoptotičkog oštećenja i na taj način indukuju produženje njihove upotrebe za tretman organa namenjenih za transplantaciju, za svrhe dobijanja njegove poboljšane prezervacije.

Claims (15)

1. Jedinjenje formule (I) u kojoj Rije izabran iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci_8alkil, Ci_8alkenil, C2.8alkinil, cikloalkil, aril, heterociklus -Ci_8alkil-aril, -Ci_8aMi-heterociklus, -Ci_8alkil-NH2, - aril-NH2, - Ci.8alkil-0-aril, -aril-OH, Ci.8alkil-OH, -COOR, -Ci.8alkil-OR, metiloksikarbonil-Ci.8alkil, karboalkiloksi-aril alkil karbamoil aril i -(bočnih lanaca aminokiselina); R2je izabran iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci_8alkil, C2.8alkenil, C2.8alkinil, cikloalkil, aril, -Ci_8a1kil-aril, -Ci_8alkil-heterociklus, -Ci_8alkil-NRR', -aril-NRR', - Ci_8alkil-OR, -Ci.8alkil-COOR, -d_8alkil-OC(0)R, -Ci.8alkil-N(R)C(0)R', -aril-OR, -aril-COOR, - aril-COR, -aril-OC(0)R, -aril-N(R)C(0)R', -CH(bočni lanci aminokiselina)C02R, -CH(bočni lanci aminokiselina)C(0)NR, -CH(C02R)-bočni lanci aminokiselina i CH(CONRR')-bočni lanci aminokiselina, R3je COOH; R i R', međusobno isti ili različiti, su izabrani iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci_8alkil, C2.8alkenil, C2.8alkinil, cikloalkil, aril, heterociklus, -Ci.8alkil-aril; -Ci.8heterociklus alkil; zaštitne grupe, -C(0)CH-(bočni lanci aminokiselina)-NHT, -NH-CH(bočni lanci aminokiselina)COOT i -CH(bočni lanci aminokiselina)COOT, gde T je izabran od H i Ci_8alkil; R i R' međusobno spojeni mogu da formiraju cikloalkil; i gde gore navedene alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, aril, heterociklus grupe mogu biti supstituisane sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od halogena, CN, N02, NH2, OH, COOH, CO i Ci-6alkil; isključujući jedinjenja (lS,5R,7S)-3-etil-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2.1]oktan-7-karboksilnu kiselinu, (lR,5S,7R)-3-(p-metoksibenzil)-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2. l]oktan-7-karboksilnu kiselinu, (lR,5S,7R)-3-Benzil-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2.1]oktan-7-karboksilnu kiselinu i (lR,5S,7R)-3-(p-fenil)-benzil-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2. l]oktan-7-karboksilnu kiselinu.

2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što Ri je izabran iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci-salkil, Ci-salkenil, -Ci-salkilfenil, -Ci_8alkil-OH i -Ci.8alkil-OR; R2 je izabran iz grupe koja se sastoji od arila, -Ci-salkil-arila;

3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 2, naznačeno time što Rije H, Me, =CH2, CH2Ph, CH2OH, CH2OBn; R2je Ph, CH2Ph, CHPh2.

4. Jedinjenja prema patentnom zahtevu 2, formule (Ia) u kojoj ili formule (Tb) u kojoj

5. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, koje takođe obuhvata jedinjenja (lS,5R,7S)-3-etil-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2.1]oktan-7-karboksilnu kiselinu, (1 R,5S,7R)-3-(p-metoksibenzil)-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2. l]oktan-7-karboksilnu kiselinu, (1R,5S,7R)-3-Benzil-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2.1]oktan-7-karboksilnu kiselinu i (lR,5S,7R)-3-(p-fenil)-benzil-2-okso-6,8-dioksa-3-azabiciklo[3.2.1]oktan-7-karboksilnu kiselinu za upotrebu kao lek.

6. Jedinjenje formule (I) u kojoj Rije izabran iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci-salkil, Ci.8alkenil, C2-8alkinil, cikloalkil, aril, heterociklus, -Ci_8alkil-aril, -Ci_8alkil-heterociklus, -Ci.8alkil-NH2, - aril-NH2, -Ci.galkil-0-aril, -aril-OH, Ci.8alkil-OH, -COOR, -Ci.8alkil-OR, metiloksikarbonil-Ci.8alkil, karboalkiloksi-aril, alkil karbamoil aril i -(bočnih lanaca aminoksielina); R2je izabran iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci-salkil, C2-8alkenil, C2-8alkinil, cikloalkil, aril, -Ci.8alkil-aril, -Ci_8alkil-heterociklus, -Ci.8alkil-NRR', -aril-NRR', - Ci_8alkil-OR, -Ci-8alkil-COOR, -Ci_8alkil-OC(0)R, -Ci.8alkil-N(R)C(0)R', -aril-OR, -aril-COOR, - aril-COR, -aril-OC(0)R, -aril-N(R)C(0)R', -CH(bočni lanci aminokiselina)C02R, -CH(bočni lanci aminokiselina)C(0)NR, -CH(C02R)-bočni lanci aminokiselina i CH(CONRR')-bočni lanci aminoksielina, R3je izabran iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci_8alkil, C2-8alkenil, C2-8alkinil, cikloalkil, aril, -Ci_8alkil-aril, heterociklus, -Ci_8alkil-heterociklus; -C(0)R, - C(0)OR, - C(0)NRR\ CH2OR, CH2NRR', -C(0)NH-CH(bočni lanci aminokiselina)C(0)OR, CH2NR-Fmoc, CH2NR-B0Ci CH2NR-CBz, R i R', međusobno isti ili različiti, su izabrani iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci_8alkil, C2-8alkenil, C2-8alkinil, cikloalkil, aril, heterociklus, -Ci_8alkil-aril; -Ci_8heterociklus alkil; zaštitne grupe, -C(0)CH-(bočnih lanaca aminokiselina)-NHT, -NH-CH(bočni lanci aminokiselina)COOT i -CH(bočni lanci aminokiselina)COOT, gde je T izabran od H i Ci-salkil; R i R' međusobno kombinovani mogu da formiraju cikloalkil; i gde gore navedene alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, aril, heterociklične grupe mogu biti supstituisane sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koja se sastoji od halogena, CN, N02, NH2, OH, COOH, CO i Cr6alkila; za upotrebu u lečenju patologija povezanih sa ishemijom-reperfuzijom ili za upotrebu u medicinskim procedurama koje uključuju ishemiju-reperfuziju.

7. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 6, naznačeno time što Rije izabran iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci^alkil, Ci-salkenil, -Ci-salkilfenil, -Ci-salkil-OH i -Ci.8alkil-OR; R2je izabran iz grupe koja se sastoji od arila i -Ci.galkil-arila; R3je izabran iz grupe koja se sastoji od C(0)OR, -C(0)NRR'; R i R', međusobno isti ili različiti, su izabrani iz grupe koja se sastoji od sledećih: H, Ci-salkil, -Ci_8alkil-NH2, -Ci.galkil-OH; R i R' međusobno kombinovani mogu da formiraju cikloalkil.

8. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 7, naznačeno time što Rije H, Me, =CH2, CH2Ph, CH2OH, CH2OBn; R2je Ph, CH2Ph, CHPh2; R3 je COOH, COOMe, CONHCH2CH2NH2, CONHCH2CH2OH,

9.Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 8,naznačenoformulom (Ia) u kojoj ili naznačeno formulom (lb) u kojoj

10.Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 6-9, naznačena time što su navedene patologije ili medicinske procedure izabrane od: - akutne ishemije miokarda; - ishemije centralnog nervnog sistema (CNS) uzrokovane trombozom ili embolijom u cerebralnoj oblasti intrakranijalnih arterija ili srčanim zastojem, uključujući stalan ili privremeni prekid protoka krvi u nekim cerebralnim arterijskim oblastima ili u ćelom encefalonu; - svih drugih ishemičnih patologijanaznačenihsniženim ili zaustavljenim protokom krvi nakon čega sedi ponovno uspostavljanje influksa kiseonika i/ili hranljivih materija do tkiva; - stanja hipoksije cerebralnog tkiva kod kojih normalni nivoi oksigenacije mogu biti ponovo uspostavljeni pomoću medicinske intervencije, kao što su na primer, trovanje ili gušenje ugljen monoksidom; - oštećenja drugih tkiva uzrokovana hipoksijom, ishemijom ili traumom, sposobna da izazovu smrt apoptozom ili autofagijom, do tačke generisanja značajnih anatomskih i funkcionalnih lezija.

11. Jedinjenja za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 6-9, naznačena time što su navedene patologije ili medicinske procedure izabrane od: - hirurških procedura u kojima operacija obezbeđuje da određene arterijske oblasti budu privremeno zatvorene, kao što se naprimer javlja u operaciji ablacije bubrežnog tumora; - protokola eksplantacije, prezervacije i ponovne implantacije za organe namenjene za transplantaciju, kao što su bubrezi, srce, pluća, jetra, crevo, itd.; - hronične traumatske encefalopatije (CTE).

12.Farmaceutska kompozicija koja sadrži najmanje jedno jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 6-11.

13.Medijum ćelijske kulture koji sadrži najmanje jedno jedinjenje formule (I) kao što je opisano u bilo kom od patentnih zahteva 6-9.

14.Sredstva za čuvanje za prezervaciju eksplantiranih organa namenjenih za transplantaciju, pri čemu navedena sredstva za čuvanje sadrže najmanje jedno jedinjenje formule (I) kao što je opisano u bilo kom od patentnih zahteva 6-9.

15.Jedinjenje formule (I), kao što je opisano u bilo kom od patentnih zahteva 6-9, označeno pogodnim reagensom, za upotrebu u bilo kojoj proceduri korisnoj za svrhe medicinskog imadžinga, za analize za imadžingin vitroiliin vivotkiva i organa, za procenu i kvantitativno određivanje ishemične-reperfuzione povrede i za praćenje upotrebe i efikasnosti lekova.