RS55494B1 - Inhibitori hepatitis c virusa - Google Patents

Inhibitori hepatitis c virusa

Info

Publication number
RS55494B1
RS55494B1 RS20161182A RSP20161182A RS55494B1 RS 55494 B1 RS55494 B1 RS 55494B1 RS 20161182 A RS20161182 A RS 20161182A RS P20161182 A RSP20161182 A RS P20161182A RS 55494 B1 RS55494 B1 RS 55494B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
mmol
give
added
preparation
mixture
Prior art date
Application number
RS20161182A
Other languages
English (en)
Inventor
Kyla Bjornson
Eda Canales
Jeromy J Cottell
Kapil Kumar Karki
Ashley Anne Katana
Darryl Kato
Tetsuya Kobayashi
John O Link
Ruben Martinez
Barton W Phillips
Hyung-Jung Pyun
Michael Sangi
Adam James Schrier
Dustin Siegel
James G Taylor
Chinh Viet Tran
Martin Teresa Alejandra Trejo
Randall W Vivian
Zheng-Yu Yang
Jeff Zablocki
Sheila Zipfel
Original Assignee
Gilead Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=48803614&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS55494(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Gilead Sciences filed Critical Gilead Sciences
Publication of RS55494B1 publication Critical patent/RS55494B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/498—Pyrazines or piperazines ortho- and peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinoxaline, phenazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/095—Sulfur, selenium, or tellurium compounds, e.g. thiols
    • A61K31/10—Sulfides; Sulfoxides; Sulfones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/401—Proline; Derivatives thereof, e.g. captopril
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/06—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/36—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D498/16—Peri-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/081—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing O or S as heteroatoms, e.g. Cys, Ser
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0827—Tripeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

Oblast pronalaska
[0001]Novi mali molekuli inhibitori replikacije virusa su stavljeni na uvid javnosti, kao i kompozicije koje sadrže takva jedinjenja i terapeutske metode koje uključuju administriranie takvih jedinjenj a.
STANJE TEHNIKE
[0002]Virus hepatitisa C (HCV), predstavnik roda hepacivirus familijeFlaviviridae,je širom sveta vodeći uzrok hronične bolesti jetre (Boyer, N. et al. J Hepatol. 2000, 32, 98-112). Zbog toga je veliki deo u oblasti antivirusnih istraživanja usmeren ka razvoju poboljšanih metoda tretiranja hroničnih HCV infekcija kod ljudi. (Ciesek, S., von Hahn T., and Manns, MP., Clin. Liver Dis., 2011,15, 597-609; Soriano, V. et al, J. Antimicrob. Chemother., 2011, 66, 1573-1686; Brody, H., Nature Outlook, 2011,474, S1-S7; Gordon, C. P., et al J. Med. Chem. 2005,48,1-20; Maradpour, D., et al, Nat. Rev. Micro. 2007, 5, 453-463).
[0003]Virološko lečenje pacijenata sahroničnim HCV infekcijama se teško postiže zbog ogromne količine virusa koja dnevno nastaje kod zaraženih pacijenata i velikog broja spontanih mutacija HCV virusa. (Neumann, et al, Science 1998, 282, 103-7; Fukimoto, et al., Hepatologv, 1996, 24, 1351-4; Domingo, et al., Gene 1985, 40, 1-8; Martell, et al., J. Virol. 1992, 66, 3225-9). Tretiranje HCV-a je takođe izuzetno komplikovano i zbog činjenice daje HCV virus genski raznovrstan i izražen kroz nekoliko različitih genotipa i mnogo podtipova. Na primer, HCV je trenutno klasifikovan u šest glavnih genotipa (označeni 1-6), mnogo podtipova (označeni a, b, c, itd), i oko 100 različitih sojeva (označeni 1, 2, 3, itd).
[0004]HCV virus je u širom sveta rasprostranjen sa genotipima 1,2 i 3 koji se dominantno javljaju u SAD, Evropi, Austrailiji i Istočnoj Aziji (Japan, Tajvan, Tajland i Kina). Genotip 4 se uglavnom nalazi na Srednjem Istoku, Egiptu i Centralnoj Africi, dok se genotipi 5 i 6 javljaju u Južnoj Africi i Jugositočnoj Aziji, redom (Simmonds, P. et al. J Virol. 84: 4597-4610, 2010).
[0005]Kombinacija ribavirina, analoga nukleozida, i interferon-alfa (a) (IFN), se koristi za tretman multiplih genotipa hroničnih HCV infekcija kod ljudi. Međutim, promenljivi klinički odgovor primećen kod pacijenata kao i toksičnost ovog režima ograničava njihovu primenu. Dodatak inhibitora HCV proteaze (telaprevira ili boceprevira) ribavirinu i IFN protokolu značajno poboljšava stepen virološkog odgovora 12-nedelja nakon tretmana (SVR12). Međutim, efekat je poboljšan samo kod pacijenata obolelih od genotipa 1, dok toksičnost i ostali sporedni efekti ostaju nepromenjeni.
[0006]Primena direktnih antivirusnih agenasa za lečenje multiplih genotipa HCV infekcija ostaje veliki izazov zbog različitih aktivnosti antivirusnih agenasa prema različitim genotipima. Inhibitori HCV proteaze često obuhvataju aktivnost prema genotipima 2 i 3, u poređenju sa genotipom 1. (Videti, npr.Tablica 1 kod Summa, V. et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapv, 2012, 56,4161-4167; Gottwein, J. et al, Gastroenterologv, 2011,141, 1067-1079). U skladu sa tim, dokazana je promenljiva klinička aktivnost kod HCV genotipa. Na primer, izuzetno efikasne terapije kod genotipa 1 i 2, mogu biti ograničene ili da uopšte ne budu efikasne kod genotipa 3. (Moreno, C. et al, Poster 895, 61st AASLD Meeting, Boston, MA, USA, Oct. 29
- Nov. 2,2010; Graham, F., et al, Gastroenterologv, 2011, 141, 881-889; Foster, G.R. et al., EASL 45th Annual Meeting, April 14-18, 2010, Vienna, Austria.) U nekim slučajevima, antivirusni agensi imaju dobru kliničku efikasnost prema genotipu 1, ali nižu ili promenljivu prema genotipima 2 i 3. (Reiser, M. et al., Hepatologv, 2005, 41,832-835.) Da bi se prevazišla smanjena aktivnost prema genotipu 3, značajno veće doze su potrebne da bi se postiglo bitnije smanjenje količine virusa (Fraser, IP et al., Abstract #48, HEP DART 2011, Koloa, HI, December 2011.)
[0007]Postoji potreba i za antivirusnim agensima kod kojih bi se javljala manja rezistentnost. Na primer, mutacije povezane sa rezistencijom na položajima 155 i 168 kod HCV proteaza često izazivaju značajno smanjenje antivirusne efikasnosti inhibitora HCV proteaza. Mani, N. Ann Forum Collab fflV Res., 2012, 14, 1-8; Romano, KP et al, PNAS, 2010, 107, 20986-20991; Lenz O, Antimicrobial agents and chemotherapv, 2010, 54,1878-1887.)
[0008]WO2007/016441 stavlja na uvid javnosti makrociklične peptide koji bi se koristili kao inhibitori NS3 proteaze hepatitis C virusa (HCV), njihovu sintezu i primenu u lečenju ili sprečavanju HCV infekcija.
[0009]WO2010/011566 stavlja na uvid javnosti makrociklična hinoksalinska jedinjenja i njihovu primenu kao NS3 inhibitora proteaze hepatitis C virusa (HCV) i primenu u lečenju ili sprečavanju HCV infekcija.
[0010]U svetlu ograničenja postojećih terapija kod HCV, postoji potreba za razvijanjem efikasnijih anti-HCV terapija. Takođe bi bilo korisno obezbediti terapije koje su efikasne protiv multiplih HCV genotipa i podtipova.
REZIME
[0011]Nova jedinjenja koja inhibiraju NS3 proteazu hepatitis C virusa (HCV) su stavljena na uvid javnosti. U određenim prikazima, jedinjenja stavljena na uvid javnosti inhibiraju različite genotipe hepatitis C virusa. Ova jedinjenja se koriste za tretman HCV infekcije i simptoma koji su vezi sa njom.
[0012]Stavljeno na uvid javnosti je jedinjenje Formule (IV):
ili stereoizomer, ili smeša stereizomera, ili farmaceutski prihvatljiva so, gde:
J je C1-C4alkil ili C3-C6karbociklil, gde su C1-C4alkil ili C3-C6karbociklil po izboru supstituisani halogenom, -OH, arilom ili cijano grupom; ^ je C3-C5je karbociklilen koji je vezan za L i ostatak molekula preko dva susedna ugljenika, gde pomenuti C3-C6karbociklilen je po izboru supstituisan C1-C4alkilom, C1-C3haloalkilom, halogenom, -OH, ili cijano grupom ili; <®>C5-C8je biciklični karbociklilen koji je vezan za L i ostatak molekula preko dva susedna ugljenika; L je C3-C6alkilen, C3-C6alkenilen ili -(CH2)3-ciklopropil-, po izboru supstituisan sa 1-4 halogenom, -OH, ili cijano grupom; Q je C2-C4alkil ili C3-C6karbociklil po izboru supstituisan sa C1-C3alkilom, halogenom, -OH, ili cijano grupom;
E je C1-C3alkil ili C2-C3alkenil, po izboru supstituisan sa C1-C3alkilom, halogenom, -OH, ili cijano grupom;
W je H, -OH,-0(Ci-C3)alkil, -0(Ci-C3) haloalkil, halogen ili cijano grupa; i Z2a je H ili Ci-C3alkil, halogen, -OH, ili cijano grupa.
[0013] U jednom prikazu, jedinjenje Formule IVa, ili farmaceutski prihvatljiva soje prikazana:
[0014]U jednom prikazu, jedini enje Formule fVb, ili farmaceutski prihvatljiva soje prikazana:
[0015]U jednom prikazu, jedinj enje Formule fVc, ili farmaceutski prihvatljiva soje prikazana:
[0016]U jednom prikazu, jedinj enje Formule IVd, ili farmaceutski prihvatljiva soje prikazana:
[0017]U jednom prikazu, jedinj enje Formule IVe, ili farmaceutski prihvatljiva soje prikazana:
[0018]U jednom prikazu, jedinj enje Formule fVf, ili farmaceutski prihvatljiva soje prikazana:
[0019]U jednom prikazu, jedinjenje Formule IVg, ili farmaceutski prihvatljiva so je prikazana:
[0020]U jednom prikazu, jedinjenje Formule IVh, ili farmaceutski prihvatljiva so je prikazana:
[0021]U jednom prikazu, jedinjenje bilo koje Formule IVa, IVb, IVc, IVd, IVe, IVf, IVg, ili IVh, ili stereoizomer, ili smeša stereoizomera, ili farmaceutski prihvatljiva soje obezbeđena.
Metode tretmana:
[0022]Jedan prikaz obezbeđuje jedinjenje Formule IVa-IVh, ili farmaceutski prihvatljivu so tog jedinjenja, za primenu u medicinskoj terapiji (npr., za primenu u lečenjuFlaviviridaevirusne infekcije (npr., HCV virusne infekcije) ili proliferacije HCV virusa ili odlaganje pojave HCV simptoma kod pacijenta (npr.,sisara kao što je čovek). [00231Jedan prikaz obezbeđuje jedinjenje Formule IVa-IVh, ili farmaceutski prihvatljivu so tog jedinjenja, za primenu u proizvodnji lekova za lečenjeFlaviviridaevirusne infekcije (npr., HCV virusne infekcije) ili proliferacije HCV virusa ili odlaganje pojave HCV simptoma kod pacijenata kod kojih postoji takva potreba (npr.,sisara kao što je čovek).
[0024]Jedan prikaz obezbeđuje jedinjenje Formule IVa-IVh, ili farmaceutski prihvatljivu so tog jedinjenja, za primenu u profilaksi ili terapijskom tretmanu proliferacijeFlaviviridaevirusa, HCV virusa ili za primenu u terapiji odlaganja pojave HCV simptoma.
[0025]Jedan prikaz obezbeđuje jedinjenje Formule IVa-IVh, ili farmaceutski prihvatljivu so tog jedinjenja, za primenu u profilaksi ili terapeutskom tretiranjuFlaviviridaevirusne infekcije (npr., HCV virusne infekcije).
[0026]Jedan prikaz obezbeđuje jedinjenje Formule IVa-IVh, ili farmaceutski prihvatljivu so tog jedinjenja, za proizvodnju medikamenata zaFlaviviridaevirusne infekcije (npr., HCV virusne infekcije) kod sisara (npr.,čoveka).
[0027]U određenim prikazima, obezbeđeno je jedinjenje za upotrebu u metodama za tretiranje hronične infekcije hepatitisom C. Metod uključuje administriranie pacijentu kod koga postoji takva potreba, jedinjenja Formule IVa-IVh, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0028]U određenim prikazima, obezbeđeno je jedinjenje za upotrebu u metodi za lečenje infekcije hepatitisom C kod pacijenata koji do tada nisu bili tretirani. Metoda uključuje administriranje jedinjenja Formule IVa-IVh, ili stereoizomera, ili smeše stereoizomera ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, netretiranom pacijentu.
[0029]U određenim prikazima, obezbeđeno je jedinjenje za upotrebu u metodi za lečenje infekcije hepatitisom C kod već tretiranih pacijenata. Metoda uključuje administriranje jedinjenja Formule IVa-IVh, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, ranije tretiranom pacijentu.
[0030]U određenim prikazima, obezbeđeno je jedinjenje za upotrebu u metodi za lečenje infekcije hepatitisom C kod pacijenata koji ne reaguju ili su netolerantni prema interferonu. Metoda uključuje administriranje jedinjenja Formule IVa-IVh, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu.
[0031]U određenim prikazima, jedinjenje za primenu u lečenju koje je opisano ovde uključuje administraciju jedinjenja Formule IVa-IVh, ili farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja, pacijentu tokom određenog perioda. U nekim prikazima, određeni period će je 4 nedelje, 6 nedelja, 8 nedelja, 10 nedelja ili 12 nedelja. U drugim prikazima, određeni period neće biti duži od 12 nedelja.
[0032]U nekim prikazima, period administrirani a će biti oko 12 nedelja. U daljim prikazima, jedinjenje će biti administrirano oko 12 nedelja ili kraće, oko 10 nedelja ili kraće, oko 8 nedelja ili kraće, oko 6 nedelja ili kraće, ili oko 4 nedelje ili kraće.
[0033]Jedinjenje može biti adminsitrirano jednom dnevno, dva puta dnevno, jednom u dva dana, dva puta nedeljno, tri puta nedeljno, četiri puta nedeljno, ili pet puta nedeljno.
[0034]U određenim prikazima, opisane metode za lečenje uključuju administriranje jedinjenja Formule IVa-IVh, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, inficiranim HCV genotipom (GT) 1,2,3,4,5, ili 6 (tj.,metoda za lečenje GT 1,2,3,4,5, ili 6 HCV infekcije).
[0035]Jedan prikaz daje metodu za lečenje HCV infekcije kod pacijenta kod koga postoji takva potreba (npr.,sisari kao što je čovek), gde je pacijent inficiran genotipom 1 HCV virusa. Metoda uključuje administriranje jedinjenja Formule rVa-iVh, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu.
[0036]Jedan prikaz daje jedinjenje za primenu u metodi za lečenje HCV infekcije kod pacijenta kod koga postoji takva potreba (npr.,sisari kao čovek), gde je pacijent inficiran genotipom 2 HCV virusa. Metoda uključuje administriranje jedinjenja Formule IVa-IVh, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu.
[0037]Jedan prikaz daje jedinjenje za primenu u lečenju HCV infekcije kod pacijenta kod koga postoji takva potreba (npr.,sisari kao čovek), gde je pacijent inficiran genotipom 3 HCV virusa. Metoda uključuje administriranje jedinjenja Formule IVa-IVh, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu.
[0038]Jedan prikaz daje jedinjenje za primenu u metodi za lečenje HCV infekcije kod pacijenta kod koga postoji takva potreba (npr.,sisari kao čovek), gde je pacijent inficiran genotipom 4 HCV virusa. Metoda uključuje administriranje jedinjenja Formule IVa-IVh, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu.
[0039]Jedan prikaz daje jedinjenje za primenu u metodi za lečenje HCV infekcije kod pacijenta kod koga postoji takva potreba (npr.,sisara kao čovek), gde je pacijent inficiran genotipom 5 HCV virusa. Metoda uključuje administriranje jedinjenja Formule IVa-IVh, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu.
[0040]Jedan prikaz daje jedinjenje za primenu u metodi za lečenje HCV infekcije kod pacijenta kod koga postoji takva potreba (npr.,sisara kao čovek), gde je pacijent inficiran genotipom 6 HCV virusa. Metoda uključuje administriranje jedinjenja Formule IVa-IVh, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu.
[0041]U ovde opisanim metodama lečenja, korak administrirani a podrazumeva administraciju terapijski efikasne količine jedinjenja Formule IVa-IVh, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu kome je potreban tretman.
[0042]U određenim prikazima, metode za inhibiranje aktivnosti HCV virusa su obezbeđene. Te metode uključuju korak u kome se uzorak za koji se sumnja da sadrži HCV tretira sa ovde opisanim jedinjenjem ili kompozicijom.
[0043]U jednom prikazu, ovde opisana jedinjenja deluju kao inhibitori HCV-a, kao intermedijeri za takve inhibitore ili imaju druge primene, kao što je opisano ispod.
[0044]U određenim prikazima, jednjenja koja se vezuju u jetri se mogu vezati sa različitim stepenom reverzibilnosti.
[0045]U jednom prikazu, metoda za lečenje HCV-a uključuje dodavanje ovde opisanog jednjenja uzorku. Sledeći korak čini bilo koja metoda za administriranje, koja je gore opisana.
[0046]Po potrebi, HCV aktivnost nakon primene jedinjenja, može biti praćena bilo kojom metodom, uključujući direktne ili indirektne metode za određivanje aktivnosti HCV. Kvantitativne, kvalitativne, i semikvantitativne metode za određivanje aktivnosti HCV mogu biti uzete u obzir. Tipično, primenjena je neka od gore opisanih skrining metoda, međutim, bilo koja metoda kao što je praćenje fizioloških osobina živog organizma takođe može biti primenjena.
[0047]Mnogi organizmi sadrže HCV. Jedinjenja ovog pronalska su korisna u lečenju, ili profilaksi u stanjima koja su povezana sa aktivacijom HCV kod životinja ili ljudi.
Farmaceutske formulacije
[0048]"Farmaceutski prihvatljivo" znači daje pogodno za primenu u farmaceutskim preparatima, u smislu da je bezbedno za takvu upotrebu, zvanično odobreno od strane regulatornog tela, na nacionalnom ili državnom nivou, ili da je navedeno u američkoj farmakopeji ili drugim opšte priznatim farmakopejama za primenu kod životinja, a naročito kod ljudi.
[0049]"Farmaceutski prihvatljiv nosač" upućuje na rastvarač, adjuvant, pomoćno sredstvo, ili nosač ili drugi sastojak koji je farmaceutski prihvatljiv i sa kojim je jedinjenje predmetnog pronalaska primeneno.
[0050]Jedinjenja predmetnog pronalaska su formulisana sa konvencionalnim nosačima (npr., neaktivni sastojak ili pomoćno sredstvo) koji će biti izabrani u skladu sa uobičajenom praksom.
Tablete će sadržavati pomoćna sredstva, uključujući glidante, punioce, sredstva za vezivanje ili slično. Vodene formulacije su pripremljene u sterilnom obliku, i kada su namenjene za primenu drugim putem osim oralnog, biće izotonične. Sve formulacije će po izboru sadržati pomoćna sredstva, kao ona koja su navedena u knjizi "Handbook of Pharmaceutical Excipients" (1986). Pomoćna sredstva uključuju askorbinsku kiselinu ili druge antioksidanse, helatne agense kao EDTA, ugljene hidrate kao što je dekstrin, hidroksialkilcelulozu, hidroksialkilmetilcelulozu, stearinsku kiselinu i slično. Jedan prikaz predstavlja formulaciju u čvrstoj dozi uključujući formulaciju u čvrstoj dozi za oralnu upotrebu. pH može biti u opsegu od 3 do 11, ali je obično između 7 i 10.
[0051] Iako je moguće da se aktivni sastojak administrira samostalno, poželjno je da se primenjuje u farmaceutskim formulacijama (kompozicijama). Formulacije, za veterinarsku, kao i za primenu kod čoveka, predmetnog pronalaska sadrže najmanje jednu aktivnu komponentu, kao što je ranije definisano, zajedno sa jednim ili više prihvatljivih nosača i po izboru druge terapijske sastojke. Nosač(i) moraju da budu "prihvatljivi" u smislu da su kompatibilni sa ostalim sastojcima formulacije i fiziološki neškodljivi za primaoca.
[0052] Formulacije uključuju one koje su pogodne za pomenute puteve administrirani a. Formulacije mogu biti konvencionalno predstavljene u obliku dozne jedinice i mogu biti pripremljene bilo kojom metodom koja je dobro poznata u farmaceutskoj praksi. Tehnike i formulacije se u principu mogu naći u Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Te metode uključuju korak kombinovanja aktivnog sa neaktivnim sastojcima (tj. nosač, farmaceutsko pomoćno sredstvo itd.) koji predstavljaju jedno ili više pomoćnih sastojaka. U opštem slučaju, formulacije su pripremljene ujednačenim i potpunim spajanjem aktivnog sastojka sa tečnim nosačima ili fino podeljenim čvrstim nosačima ili oba, a onda, ako je potrebno, oblikovanjem proizvoda.
[0053] U određenim prikazima, formulacije pogodne za oralnu administraciju, su predstavljene kao diskretne jedinice, kao što su kapsule, škrobne kapsule ili tablete koje sadrže prethodno određenu količinu aktivne supstance.
[0054] U određenim prikazima, farmaceutske formulacije uključuju jedno ili više jedinjenja predmetnog pronalaska, zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača ili pomoćnih sastojaka ili po izboru druge terapeijske agense. Farmaceutske formulacije koje sadržie aktivnu supstancu može biti u bilo kom obliku koji je pogodan za planiranu metodu za administriranje. Kada se koristi za oralnu primenu, na primer, mogu biti pripremljene tablete, pastile, lozenge, vodene ili uljane suspenzije, disperzibilni praškovi ili granule, emulzije, tvrde ili meke kapsule, sirupi ili eliksiri. Smeše namenjenu za oralnu upotrebu, mogu biti pripremljene u skladu sa bilo kojom poznatom metodom u oblasti proizvodnje farmaceutskih kompozicija i takve kompozicije mogu sadržavati jedan ili više agenasa uključujući zasađivače, sredstva za poboljšanje ukusa, boje, konzervanse u cilju dobijanja preparata sa prijatnim ukusom. Prihvatljive su tablete koje sadrže aktivni sastojak u smeši sa netoksičnim farmaceutski prihvatljivim pomoćnim sastojkom koji je pogodan za izradu tableta. Ovi pomoćni sastojci, mogu, na primer, biti inertni rastvarači, kao kalcijum- ili natrijum-karbonat, laktoza, laktoza monohidrat, kroskarmelozni natrijum, povidon, kalcijum ili natrijum fosfat, agensi za granulaciju ili dezintegraciju, kao što je kukuruzni srob, alginska kiselina, vezujući agensi kao što je celuloza, mikrokristalna celuloza, škrob, želatin ili akacija; i lubrikanti kao što je magnezijum-stearat, stearinska kiselina ili talk, Mikroinkapulacija kojom se odlaže dezintegracija i adsorpcija u gastrointestinalnom traktu i tako obezbeđuje produženo dejstvo tokom dužeg perioda. Na primer, materijal koji odlaže delovanje, kao glicerilmonostearat ili glicerildistearat sa ili bez voska se mogu upotrebiti.
[0055]Količina aktivnog sastojka koja se kombinuje sa neaktivnim sastojcima u cilju pripremanja doznog oblika, će varirati u zavisnosti od domaćina koji se tretira i određenog načina administrirani a. Na primer, u nekim prikazima, dozni oblik za oralnu upotrebu kod ljudi sadrži približno od 1 do 1000 mg aktivnog materijala sa odgovarajućom i prikladnom količinom nosećeg materijala (npr.,neaktivnog sastojka ili pomoćnog materijala). U određenim prikazima, noseći materijal varira od 5% do oko 95% od ukupnih kompozicija (masa:masa). U nekim prikazima, ovde opisane farmaceutske kompozicije sadrže oko 1 do 800 mg, od 1 do 600 mg, od 1 do 400 mg, 1 do 200 mg, 1 do 100 mg ili 1 do 50 mg jednjenja Formule I, II, III ili IV (kao što je bilo koje od IVa-IVh), ili stereoizomera, ili smeša stereoizomera, ili farmaceutski prihvatljive soli. U nekim prikazima, farmaceutske kompozicije ovde opisane ne sadrži više od 400 mg jedinjenja Formule TVa-TVh, ili farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja. U nekim prikazima, farmaceutske formulacije ovde opisane sadrže oko 100 mg jedinjenja Formule IVa-IVh, ili farmaceutski prihvatljive soli.
[0056]Mora se razumeti da pored sastojaka koji su već pomenuti gore, formulacije ovde stavljene na uvid javnosti mogu da uključuju i druge supstance uobičajene u ovoj oblasti, u zavisnosti od formulacije koja je u pitanju, na primer, formulacija za oralnu upotrebu može sadržavati supstance za korigovanje ukusa.
[0057]Smeše namenjene upotrebi u veterini sadrže najmanje jednu aktivnu komponentu kao što je gore definisano zajedno sa nosačem koji se koristi u veterini.
[0058]Veterinarski nosači su materijali korisni za svrhu administriranja kompozicije i mogu biti čvrsti, tečni ili gasoviti materijali koji su inače inertni i prihvatljivi u veterinarskoj praksi i koji su kompatibilni sa aktivnim sastojkom. Ove veterinarske kompozicije mogu se administrirati oralno, parenteralno ili bilo kojim drugim željenim putem.
[0059]Efikasna doza aktivnog sastojka zavisi u najmanju ruku od prirode stanja koje se leči, toskičnosti, od toga da li se jedinjenje koristi za profilaksu (niže doze), načina isporuke, farmaceutske formulacije, i biće određena od strane kliničara koristeći uobičajene studije povećanja doze.
Putevi administrirani a
[0060] Jedno ili više jedinjenja Formula IVa-IVh, (ovde označena kao aktivni sastojci) ili njihova prihvatljiva farmaceutska so, se administriraju bilo kojim putem koji odgovara stanju koje se leči. Pogodni načini uključuju oralni, rektalni, nazalni, topikalni (uključujući bukalno i sublingvalno), vaginalni, parenteralni (uključujući subkutano, intramuskularno, intravenozno, intradermalno, intratekalno i epidiralno) i slično. Biće procenjeno da li preferirani način može varirati sa na primer, stanjem primaoca. Prednost jedinjenja predmetnog pronalaska je da su oralno bioraspoloživa i da oralno mogu biti dozirana. U skladu sa tim, u jednom prikazu, farmaceutske kompozicije ovde opisane su oralni dozni oblici. U nekim prikazima, farmaceutske kompozicije ovde opisane su oralni čvrsti dozni oblici.
[0061] Prosečan poznavalac ove oblasti, znaće da supstituenti i druge grupe jedinjenja ove opšte formule treba da se izaberu u cilju obezbeđivanja jedinjenja koje je dovoljno stabilno da bi se obezbedilo farmaceutski korisno jedinjenje koje može biti formulisano kao farmaceutska kompozicija prihvatljive stabilnosti. Supstance koje poseduju takvu stabilnost su obuhvaćene predmetnim pronalaskom. Prosečan poznavalac ove oblasti treba da razume da bilo koja kombinacija definicija i supstituenata koja je ovde opisana ne treba da ima kao rezultat vrstu ili jedinjenje koje ne može da se koristi.
Kombinovana terapija
[0062] U drugom prikazu, ova aplikacija stavlja na uvid javnosti farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje Formula IVa-IVh, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, u kombinaciji sa bar jednim dodatnim terapijskim agensom, (tj. aktivnim sastojkom) i farmaceutski prihvatljivim nosačem ili pomoćnim sastojkom. U određenim prikazima, dodatni terapijski agensi uključuju dodatne antivirusne agense.
[0063] Dodatni terapijski agens primenjen u kombinaciji sa ovde opisanim jedinjenj ima ukl jučuje, bez ograničenja, bilo koji agens koji ima terapijski efekat kada je primenjen sa jedinj enj em predmetnog pronalaska. Takve kombinacije su izabrane na osnovu stanja koje treba lečiti, unakrsne reaktivnosti sastojaka i farmako osobina kombinacije. Na primer, u određenim prikazima, terapijski agens korišćen u kombinaciji sa jedinj enj ima Formula rVa-IVh, uključuje, bez ograničenja, jedan ili više od sledećih: interferoni, analozi ribavirina, inhibitori NS3 proteaze, NS5a inhibitori, NS5b inhibitori, inhibitori alfa-glukozidaze 1, hepatoprotektanti, ne-nukleozidni inhibitori HCV, nucleozidni analozi, ili drugi lekovi za lečenje HCV infekcije. U određenim prikazima, dodatni terapijski agens uključuje, bez ograničenja, inhibitor NS3 proteaze, NS5a inhibitore, i/ili NS5b inhibitore. U nekim prikazima, farmaceutska kompozicija koja uključuje jedinjenje Formula IVa-IVh, ili njihovu farmaceuski prihvatljivu so, ijedan ili više inhibitora NS3 proteaze, NS5a inhibitora, i/ili NS5b inhibitora je obezbeđena. U nekim prikazima, farmaceutska kompozicija koja uključuje jedinjenja Formula IVa-iVh, ili njihovu farmaceuski prihvatljivu so, i jedan ili više NS5a inhibitora, i/ili NS5b inhibitora je obezbeđena. U nekim prikazima, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja uključuje jedinjenja Formula IVa-IVh, i jedan ili više dodatnih antivirusnih agenasa, gde dodatni antivirusni agens nije interferon, ribavirin, ili analog ribavirina. U daljim prikazima, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja uključuje jedinjenje Formula TVa-TVh, ijedan ili više dodatnih antivirusnih agenasa, gde dodatni antivirusni agens nije ribavirin, ili analog ribavirina.
[0064]U određenim prikazima, jedinjenja ovde stavljena na uvid javnosti se kombinuju sa jednim ili više aktivnih sastojaka (npr. jednim ili više dodatnih antivirusnih agenasa) u jediničnom doznom obliku za istovremenu ili uzastopnu administraciju pacijentu. Kombinovana terapija mora biti primenjena po istovremenom ili uzastopnim režimu. Kada se primenjuje uzastopno, kombinacija se primenjuje u dva ili više administrirani a. U određenim prikazima, aktivni sastojci su: (1) formulisani zajedno i primenjeni ili dati simultano u kombinovanoj farmaceutskoj kompoziciji; (2) dati su naizmenično ili paralelno kao odvojena farmaceutska formulacija; ili (3) po nekom drugom režimu. Kada se daje u naizmeničnij terapiji, aktivne supstance se administrairaju ili daju uzastopno, odnosno u odvojenim tabletama, pilulalama ili kapsulama, ili rezličitim injekcijama u odvojenim špricevima. Uopšteno, tokom ove naizmenične terapije, efikasna doza svakog od aktivnih sastojaka je administrirana uzastopno, t.j. u serijama, dok kod kombinovane terapije, efikasne doze dve ili više aktivnih sastojaka su administrirane zajedno.
[0065]Primeri interferona uključu, bez ograničenja, PEGilirani rIFN-alfa 2b (PEG-Intron), pegilirani rIFN-alfa 2a (Pegasvs), rIFN-alfa 2b (Intron A), rIFN-alfa 2a (Roferon-A), interferon alfa (MOR-22, OPC-18, Alfaferone, Alfanative, Multiferon, subalin), interferon alfacon-1 (Infergen), interferon alfa-nl (Wellferon), interferon alfa-n3 (Alferon), interferon-beta (Avonex, DL-8234), interferon-omega (omega DUROS, Biomed 510), albinterferon alfa-2b (Albuferon), IFN alfa XL, BLX-883 (Locteron), DA-3021, glikozilovani interferon alfa-2b (AVI-005), PEG-Infergen, Pegilirani interferon lambda (Pegilirani IL-29), ili belerofon, IFN alfa-2b XL, rIFN-alfa 2a, konsenzus IFN alfa, infergen, rebif, pegilirani IFN-beta, oralni interferon alfa, feron, reaferon, intermaks alfa, r-IFN-beta, i infergen + aktimun.
[0066]Primeri analoga ribavarina uključuju, bez ograničenja, ribavirin (Rebetol, Copegus), levovirin VX-497, i taribavirin (Viramidine).
[0067]Primeri NS5A inhibitora uključuju, bez ograničenja, ledipasvir (GS-5885), GS-5816, JNJ-47910382, daklatasvir (BMS-790052), ABT-267, MK-8742, EDP-239, IDX-719, PPI-668, GSK-2336805, ACH-3102, A-831, A-689, AZD-2836 (A-831), AZD-7295 (A-689), i BMS-790052.
[0068]Primeri NS5B inhibitora uključuju, bez ograničenja, inhibitor polimeraze je sofosbuvir (GS-7977), tegobuvir (GS-9190), GS-9669, TMC647055, ABT-333, ABT-072, setrobuvir (ANA-598), filibuvir (PF-868554), VX-222, IDX-375, IDX-184, IDX-102, BI-207127, valopicitabin (NM-283), R1626, PSI-6130 (R1656), PSI-7851, BCX-4678, nesbuvir (HCV-796), BILB 1941, MK-0608, NM-107, R7128, VCH-759, GSK625433, XTL-2125, VCH-916, JTK-652, MK-3281, VBY-708, A848837, GL59728, A-63890, A-48773, A-48547, BC-2329, BMS-791325, i BILB-1941.
[0069]Primeri inhibitoraNS3 proteaze uključuju, bez ograničenja, GS-9451, GS-9256, simeprevir (TMC-435), ABT-450, boceprevir (SCH-503034), narlaprevir (SCH-900518), vaniprevir (MK-7009), MK-5172, danoprevir (ITMN-191), sovaprevir (ACH-1625), neceprevir (ACH-2684), Telaprevir (VX-950), VX-813, VX-500, faldaprevir (BI-201335), asunaprevir (BMS-650032), BMS-605339, VBY-376, PHX-1766, YH5531, BILN-2065, i BILN-2061.
[0070]Primeri inhibitora alfa-glukozidaze 1 uključuju, bez ograničenja, celgosivir (MX-3253), Miglitol,iUT-231B.
[0071]Primeri hepatoprotektanata uključuju, bez ograničenja, IDN-6556, ME 3738, MitoQ, i LB-84451.
[0072]Primeri ne-nukleozidnih HCV inhibitora, uključuju, bez ograničenja derivate benzimidazola, benzo-l,2,4-tiadiazinske derivate, i derivate fenilalanina.
[0073]Primeri analoga nukleozida, uključuju, bez ograničenja, ribavirin, viramidin, levovirin, L-nukleozid, ili izatoribin ili je pomenuti interferon a-interferon ili pegilirani interferon.
[0074]Primeri drugih lekova za lečenje HCV infekcije uključuju, bez ograničenja, imikvimod, 852A, GS-9524, ANA-773, ANA-975, AZD-8848 (DSP-3025), PF-04878691, i SM-360320, ciklofilin inhibitore (npr., DEBIO-025, SCY-635, ili NIM811) ili HCV IRES inhibitore (npr., MCI-067).; emerikasan (IDN-6556), ME-3738, GS-9450 (LB-84451), silibilin, ili MitoQ. BAS-100, SPI-452, PF-4194477, TMC-41629, GS-9350, GS-9585, i roksitromicin.
[0070]Dodatni primeri drugih lekova za lečenja HCV infekcija uključuju, bez ograničenja, zadaksin, nitazoksanid (alinea), BIVN-401 (virostat), DEBIO-025, VGX-410C, EMZ-702, AVI 4065, bavituksimab, oglufanid, PYN-17, KPE02003002, actilon (CPG-10101), KRN-7000, civacir, GI-5005, ANA-975 (izatoribin), XTL-6865, ANA 971, NOV-205, tarvacin, EHC-18, i NIM811.
[0076]Dodatni primeri drugih lekova za lečenja HCV infekcija uključuju, bez ograničenja, timosin alfa 1 (Zadaxin), nitazoksanid (Alinea, NTZ), BIVN-401 (virostat), PYN-17 (altirex), KPE02003002, actilon (CPG-10101), GS-9525, KRN-7000, civacir, GI-5005, XTL-6865, BIT225, PTX-111, ITX2865, TT-033i, ANA 971, NOV-205, tarvacin, EHC-18, VGX-410C, EMZ-702, AVI 4065, BMS-650032, Bavituksimab, MDX-1106 (ONO-4538), Oglufanid, FK-788, VX-497 (merimepodib), DEBIO-025, ANA-975 (izatoribin), XTL-6865, iliNIM811.
Opšte sintetičkeprocedure
[0077]Sheme, procedure, i primeri ovde dati, opisuju sinteze jedinjenja stavljenih ovde na uvid javnosti, kao i intermedijere korišćene za dobijanje jedinjenja. Treba razumeti da individualni koraci opisani ovde mogu biti kombinovani. Takođe, treba razumeti da različiti serije jedinjenja mogu biti kombinovane i dalje korišćene u sledećim koracima sinteze.
[0078]Sledeće sheme opisuju metode koje su korisne za pripremanje jedinjenja ovde stavljenih na uvid javnosti.
[0079]Lf je "vezni fragment,"{ odnosno,prekursor od L) gde jedna vezana nezasićena ugljenik-ugljenik veza( npr.alken ili alkin) na Lfdelu distalno od<®>omogućava, kao neograničavajući primer, metalom katalizovanu reakciju, koja rezultuje u vezivanju Lfza U formirajući L grupu. Neograničavajući primeri metalom katalizovane reakcije koje rezultuju u ovom vezivanjenju uključuju Ru katalizovano metatezis zatvaranje prstena ili Pd katalizovanu reakciju unakrsnog kuplovanja (npr. Negishi, Heck, ili Sonagashira kuplovanja).
[0080]'H Nuklearno-magnetno-rezonancioni (NMR) spektri su u svim slučejevima bili u saglasnosti sa pretpostavlj enim strukturama. Karakteristična hemij ska pomeranj a (8) su data u ppm (milionitim delovima) odnosu na tetrametisilan, koristeći uobičajene skraćenice za označavanje glavnih pikova:npr.s, singlet; d, dublet; t, triplet; q, kvartet; m, multiplet; br, širok. Sledeće skraćenice se koriste za uobičejene rastvarače koji se koriste u nuklearno-magnetno rezonancionim eksperimentima: CDCh, deuterohloroform; CD3OD, perdeuterometanol; CD3CN, perdeuteroacetonitril; dć-DMSO, perdeuterodimetilsulfoksid. Maseni spektri su dobij eni korišćenjem Thermo Scientific ili Agilent Technologies masenih spektrometra opremljenih sa elektronsprej jonizacijom (ESI). Prikazene mase su date kao odnosi mase i naelektrisanja( m/ z),na primer, jon jedinjenja (prikazan kao [M]<+>), jon nastao iz jedinjenja sa drugim jonaom, kao jon vodonika, (prikazan kao [M+H]+), jon natrijuma (prikazan kao [M+Na]+), jon nastao iz jedinjenja gubitkom j ona, kao što je deprotonovano jedinj enje (prikazano kao [M-H]"), itd. Analitička HPLC merenja su izvedena na Agilent Technologies Series 1100 HPLC-u koristeći Phenomenex Kinetex C18, 2.6 um 100 A, 4.6 x 100 mm kolonu sa programom eluiranja od 2% rastvarača B za 0.55 min, gradjient to 98% rastvarača B tokom 8 min koji se održava na 98% rastvarača B tokom 0.40 min pre vraćanja na 2% rastvarača B tokom 0.02 min i održavanjem na 2% rastvarača B tokom 2.03 min sa protokom od 1.5 mL/min (Rastavrač A = MiliQ filtrirana H2O + 0.1% TFA, Rastvarač B = MeCN + 0.1 % TFA). Termin "tankoslojna hromatografija (TLC)" odnosi se na hromatografiju na slilka gelu koristeći silika gel ploče 60 F254. Retencioni faktor jedinjenja ("Rr") je odnos puta jednjenja i puta rastvarača na TLC pločici. Termini kao "rano eluiranje" i "kasno eluiranje" odnose se na redosled kojim se jedinjenje eluira ili obnavlja iz čvrste stacionarne faze / tečni rastvarač-mobilne faze bazirane hromatografske metode (npr. normalno fazna hromatografija na silika gelu ili reverzno fazna tečna hromatografija na visokom pritisku (HPLC)).
[0081]Shema 1 prikazuje opšti put do SI-3, gde su J, R<1>, R, M, L, T, U, W i Q ovde definisani, Z<2a>je definisan kao u Formuli IV or III, ili je H ili Z<2a>kao što je definisan u Formuli I ili II. U schemi 1, estar intermedijer Sl-1 hidrolizu)e sa bazom kao što je litijum-hidroksid kada je R Ci-C3alkil (npr., metil), ili sa kiselinom kao što je trifluorosirćetna kiselina kada je R terc-butil. Proizvod hidrolize estra se onda kupluje u intermedijer SI-2 reakcijom kuplovanja (npr. koristeći peptidni agens za kuplovanje kao što je HATU i bazu kao što je DIPEA) u cilju dobij anj a jedinjenja opšte strukture SI-3.
[0082]Na shemi 2 prikazana je opšta sinteza intermedijera S2-6 gde su U, W, R<1>, J, i Q ovde definisani. U shemi 2, odgovarajuće supstituisana i zaštićena prolinska specija S2-2 podleže reakciji eterifikacije kao što je SNAr( npr.tretiranje sa CS2CO3i S2-1 gde R<2>je H i LG2 je halogen), Sn2( npr.prekonverzija S2-2 u brozilat (R2 je Bs) praćeno tretiranjem sa S2-1 gde LG2 je -OH i baza kao što je DABCO), Mitsunobu reakcija( npr.tretiranje S2-2 sa DIAD i trifenilfosfinom praćeno S2-1 gde je LG<2>-OH) ili metalom katalizovana reakcija unakrsnog kuplovanja (LG<2>je halogen, R2 je H) u cilju dobijanja S2-3 intermedijera. Intermedijer S2-3 se deprotektuje( npr.4 N HC1 u dioksanu kada PG je Boe) u cilju formiranja S2-4 intermedijera. Formiranje amidne veze preko aktivacije karboksilne kiseline na S2-5 koristeći peptidne kuplujuće agense ili druge metode aktivacije karboksilne kiseline pre tretiranja sa S2-4, obezbeđuje intermedijer S2-6.
[0083]Shema 3 prikazuje opštu sintezu intermedijera S3-6 gde LF-CH2-CH2 je L, i U, W, R<1>, J, Q, M, T, i L su kao stoje ovde definisano. Na shemi 3, intermedijer S3-1 se kupluje preko reakcije formiranja amidne veze sa S3-2 intermedijerom obezbeđujući nastajanje intermedijera S3-3. Metalom katalizovano unakrsno kuplovanje( npr.Suzuki reakcija koristeći kalijum-viniltrifluoroborat, Et3N, Pd(dppf)Cl2) radi dobijanja S3-4, praćeno zatvaranjem prstena metatezom( npr.Zhan 1 B) kako bi se dobio S3-5, što je praćeno redukcijom dvostruke veze( npr.H2, 10% Pd/C) daje intermedijer S3-6.
[0084]U shemi 4 prikazana je opšta sinteza S4-5 intermedijera gde LF-CH2-CH2 je L, i U, W, R<1>, J, Q, Q i L su kao što je ovde definisano. Na schemi 4, intermedijer S4-1 je zaštićen zaštitnom grupom kao što je Boe. S4-1 podleže unakrsnom kuplovanju katalizovanom prelaznim metalom( npr.Sonogashira kuplovanje) sa intermedijerom S4-2 dajući intermedijer S4-3. Trostruka veza S4-3 intermedijera je redukuvana do proste veze, hidrogenizacijom( npr.H2, katalitički 10% Pd/C) dajući S4-4 intermedijer. Deprotekcija Boc-amina praćena kuplovanjem pod baznim uslovima( npr.trietilamin) daje intermedijer S4-5.
[0085]Na shemi 5 prikazana je opšta procedura sinteze S5-9 intermedijera gde je LF-CH2-CH2L, i U, W, R<1>, J, Q, T i L su kao što je ovde definisano. Na schemi 5 intermedijer S5-1 podleže unakrsnom kuplovanju katalizovanom metalom (kao što je Sonogashira reakcija) sa intermedijerom S5-2 dajući intermedijer S5-3. Trostruka veza S5-3 intermedijera se rudukuje do proste, pod odgovarajućim uslovima kao što je hidrogenizacija( npr.korišćenjem H2, katalitički 10% Pd/C) dajući intermedijer S5-4. Deprotekcija alkohola kako bi se dobio S5-5, praćena aktivacijom( npr.DSC pod baznim uslovima,npr.trietilamin) daje S5-6 intermedijer. Kuplovanje S5-6 i S5-7 pod baznim uslovima daje S5-8. Deprotekcija prolinskog azota( npr.HC1 u dioksanu gde je PG = Boe) praćeno makrolaktamizacijom( npr.agensom za kuplovanje kao što je HATU pod baznim uslovima) daje intermedijer S5-9.
[0086]Shema 6 prikazuje opštu sintezu S6-6 i S6-7 intermedijera, gde su U, R<1>, J, Q, M, T i L kao što je definisano ovde. Na shemi 6 intermedijer S6-1, W je OPG, gde je PG zaštitna grupa. S6-1 se najpre deprotektuje dajući S6-2 intermedijer. Alkilacija S6-2 intermedijera odgovarajućim elektrofilom kao što je S6-4 daje intermedijer S6-6. Reakcija S6-2 sa anhidridom triflatne kiseline daje S6-3, koji tada podleže unakrsnom kuplovanju katalizovanom metalom, sa odgovarajućim nukleofilnim kuplujućim partnerom kao što je S6-5( npr.Sonagashira ili Suzuki reakcija) dajući S6-7 intermedijer.
[0087]Na Shemi 7 dat je opšti postupak sinteze intermedijera S7-13 gde LF-CH2-CH2-CF2 je L, i W, R<1>, J, Q, M, i T su kao što je ovde definisano. U S7-13, L je C1-C3alkil. Na Schemi 7, intermedijer S7-1 prvo podleže litijum halogen zameni a onda se tretira sa S7-2 intermedijerom dajući S7-3, koji se onda kondenzuje sa intermedijerom S7-4 dajući hinoksalin intermedijer S7-5. Halogenovanje S7-5( npr.POCI3) obezbeđuje S7-6 intermedijer. Intermedijer S7-6 je vezan preko formiranja etra za S7-7 intermedijer preko SNAr reakcije( npr.CS2CO3) dajući intermedijer S7-8. Deprotekcija N-PG intermedijera S7-8 daje S7-10. Reakcija kuplovanja amidne veze intermedijera S7-9 i intermedijera S7-10( npr.EDC i HOBT, ili HATU, NMM, DJPEA) obezbeđuje intermedijer S7-11. Zatvaranje prstena metatezom S7-11 daje intermedijer S7-12. Redukcija dvostruke veze( tnpr.hidrogenacija preko paladijuma na ugljeniku) daje intermedijer S7-13.
[0088]Shema 8 prikazuje opštu sintezu intermedijera S8-5 gde odgovarajuće zaštićeni 4-okso prolin S8-1 reaguje sa Bredereck-ovim reagensom dajući enaminon S8-2. Dodatak organometala obezbeđuje enon S8-3, koji podleže redukciji do hidroksil intermedijera S8-4 na stereoselektivan način( npr.Luche redukcija ili CBS redukcija). Sledeća redukcija olefina daje 3-supstituisani hidroksi prolin interemedijer S8-5.
[0089]Shema 9 prikazuje opštu sintezu intermedijera S9-3 gde vinil triflat S9-1 (pripremljen na primer, metodama Kamenecka, T.M., et al. Tetrahedron Letters, 2001, 8571) podleže unakrsnom kuplovanju katalizovanim metalom( npr.Negishi kuplovanje) dajući intermedijer S9-2. Hidroboriranje a zatim oksidacija intermedijera S9-2 daje intermedijer S9-3.
[0090]Shema 10 prikazuje opštu proceduru sinteze supstituisanog sulfonamidnog intermedijera SI0-3. Terc-butil ciklopropilsulfonilkarbamat SI0-1 se deprotonuje( npr.77-BuLi) i reaguje sa elektrofilom( npr.alkil halidom) dajući zaštićeni supstituisani sulfonamidni intermedijer S10-2, koji se onda deprotektuje( npr.4 N HC1 u dioksanu) dajući intermedijer S10-3.
[0091]Shema 11 prikazuje opštu sintezu intermedijera SI 1-3 gde je E kao što je ovde definisano. Na Shemi 11, sulfonamid SI 1-1 se kupluje sa zaštićenom amino kiselinom SI 1-2 koristeći kuplujući agens kao što je CDI i bazu kao što je DBU.
[0092]Shema 12 prikazuje opštu sintezu intermedijera S12-10 i S12-17, gde Lf je C1-C3alkilen. Na Schemi 12, obe sinteze započinju monoprotekcijom intermedijera S12-1 dajući S12-2, praćeno oksidacijom( npr.Swern oksidacija) obezbeđujući intermedijer S12-3. Enantioselektivno alfa hlorovanje( npr.organokatalizator S12-4 i NCS) daju hloroaldehid S12-5. Reakcijom S12-5 sa derivativom bis-cinkiometana( npr.Nysted-ov reagens) daje ciklopropanski intermedijer S12-6. Intermedijer S12-6 je ortogonalno zaštićen dajući intermedijer S12-7. Deprotekcija -OPG na S12-7 daje intermedijer S12-8, koji se zatim dehidrira( npr.Grieco-ovim reagensom) do intermedijera S12-9 i konačno O-PG<2>se uklanja dajući intermedijer S12-10. Intermedijer S12-6 se alternativno aktivira( npr.DSC i baza kao što je piridin) dajući intermedijer S12-11 koji se kupluje sa intermedijerom SI2-12 dajući karbamatni intermedijer S12-13. Intermedijer SI2-13 je deprotektovan dajući intermedijer S12-14, koji se onda oksiduje( npr.Swern oksidacija) dajući aldehidni intermedijer i S12-15. Olefinacija( npr.Wittig reaction) intermedijera SI2-15 daje intermedijer S12-16. Hidrolizom estra( npr.LiOH kada je R metil, TFA kada je R =ferc-butil) dobij a se SI 2-17 intermedijer.
[0093]Shema 13 prikazuje opštu sintezu intermedijera gde SI3-5 gde su Q i T kao što je ovde definisano i Lf je C1-C3alkilen. Aktivacija S13-1 intermedijera( npr.DSC) praćeno formiranjem karbamata između intermedijera S13-2 i estra amino kiseline intermedijera S13-3 pod baznim uslovima daje intermedijer estra S13-4. Hidrolizom estra( npr.LiOH kada je R = metil ili TFA kada R = terc-butil) daje intermedijer SI3-5.
[0094]Shema 14 prikazuje opštu sintezu intermedijera S14-7 gde je Q kao što je ovde definisano i Lf je C1-C3alkilen. Oksidacija S14-1 intermedijera (npr. Dess-Martin perjodinan) daje keton S14-2. Tretman S14-2 sa S14-3( npr.R2 je -CF3) u prisustvu pogodnog reagensa (kao što je CsF) daje intermedijer S14-4. Deprotekcija S14-4( npr.TBAF) daje S14-5, koji se onda dodaje izocijanatu S14-6 i nastaje intermedijer S14-7.
[0095]Shema 15 prikazuje opšti postupak sineteze 15 interemedijera (±)-S15-3, dobijenog Kulinkovich-evom reakcijom Grignard-ovog regaensa S15-1 i estra S15-2, prema standardnim procedurama opisanim u Kulinkovich, O.G. i Kananovich, D.G., Eur. J. Org, Chem. 2007, 2121.
[0096]Shema 16 prikazuje opštu sintezu intermedijera SI6-4 gde su Q, M, i T kao što je ovde definisano i Lf je C1-C3alkilen. Na Schemi 16, olefin SI6-1 podleže oksidativnom raskidanju( npr.OsOa, NalO/t) do aldehida SI6-2, koji se onda redukuje do alkohola SI6-3( npr.NaBEU) i na kraju dehidratiše( npr.Greico eliminacijom) dajući intermedijer SI6-4.
[0097]Shema 17 prikazuje dve opšte sintetičke strategije za dobijanje intermedijera SI7-3 gde je J kao što je ovde definisano. Na Shemi 17, odgovarajuće zaštićeni 4-oksoprolin S17-1 se deprotonuje i alkiluje( npr.LiHMDS praćeno sa J-LG). Drugo deprotonovanje bazom, praćeno ponovnim protonovanjem na niskoj temperaturi daje stereo obogaćeni intermedijer S17-2, na osnovu opisanog propisa (Blanco, M-J. et. al. J. Org. Chem. 1999, 64, 8786). Stereoselektivna redukcija ketona( npr.CBS redukcija) daje alkohol S17-3. Kada je J metil, Shema 17 prikazuje alternativnu opštu sintezu gde je intermedijer S17-4 hidrogenizovan dajući smešu S17-5 i S17-6. Stereoselektivna redukcija ketona S17-5( npr.CBS redukcija) daje intermediajer S17-3, gde je J metil.
[0098]Shema 18 prikazuje opštu proceduru sinteze intermedijera SI8-4 i SI8-5, gde je odgovarajuće zaštićeni 4-oksoproline SI8-1 stereoselektivno hidroksilovan («pr.MoOPh) dajući intermedijer SI 8-2, koji onda reaguje se alkilujućim agensom agent( npr.trimetiloksoniumtetrafluoroborat) dajući intermedijer SI8-3. Redukcijom ketona( npr.BH3»SMe2kompleks) dobijaju se SI8-4 i SI8-5 intermedijeri.
[0099]Shema 19 prikazuje opštu sintezu intermedijera SI9-7 gde je Q kao što je ovde definisano i Lfje C1-C3alkilen. Na schemi 19, epoksidini intermedijer S19-1 se konvertuje u( ±)- trans-intermedijer S19-3. Aktivacija alkoholnog intermedijera (±)-S19-3( npr.DSC) daje karbonat (±)-S19-4, koji tretiran sa intermedijerom S19-5 daje karbamat intermedijer S19-6. Intermedijer S19-6 tada podleže hidrolizi estra( npr.LiOH kada R = metil iliTFA kada R = terc-butil) dajući intermedijer S19-7.
[0100]Shema 20 prikazuje opštu sintezu intermedijera S20-3 gde Lf-0 je F, i U, W, R<1>, J, Q, M, T i L su ovde definisani. U schemi 20, intermedijer S20-1 najpre podleže reakciji oksidativnog raskidanja olefina( npr.Os04, Nal04) i zatim redukcijom dobij enog aldehida dobij a se( npr.NaBH4) intermedijer S20-2. Reakcija unakrsnog kuplovanja katalizovana prelaznim metalom daje intermedijer S20-3.
[0101]Shema 21 prikazuje opštu sintezu intermedijera S21-7 gde su Q i T kao što je ovde definisano. U shemi 21, aktivacija mono-zaštićenog diola S21-1( npr.DSC) praćena kuplovanjem sa amino estar intermedijerom S21-3, daje karbamatni intermedijer S21-4. Intermedijer S21-4 se tada deprotektuje u cilju oslobađanja alkoholne funkcionalne grupe (intermedijer S21-5) koji se onda aliluje do intermedijera S21-6. Intermedijer S21-6 podleže hidrolizi estra( npr.LiOH gde R = metil ili TFA gde R = terc-butil) radi dobijanja intermedijera S21-7.
[0102]Shema 22 prikazuje opštu sintezu intermedijera S22-3 gde su U, W, R<1>, J, i Q kao što je ovde definisano. U shemi 22 intermedijer S22-1 je potpuno deprotektovan u cilju dobijanja amino kiselinskog intermedijera S22-2. Kiselinska funkcionalnost S22-2 intermedijera se tada pretvori u bazno labilni estar karboksilne kiseline( npr..metil ester), intermedijer S22-3.
Dobijanje selektovanih intermedijera
Dobijanje IntermedijeraAl.
[0103]
[0104]Koraci 1-3. Dobijanje Intermedijera Al: Intermedijer Al je dobijen koristeći detaljan propis u Primeru 2.12 patentne prijave sa brojem internacionalne objave WO 2008/064066 (u daljem tekstu "WO '066") (str. 75-76) zamenjujući (lR,2S)-metil l-(terc-butoksikarbonilamino)-2-vinilciklopropan-karboksilat (dobijen prema Beaulieu, P.L., et al., J. Org. Chem. 2005, 70, 5869) za (lR,2S)-etil l-(terc-butoksikarbonilamino)-2-vinilciklopropan-karboksilat.
Dobijanje Intermedijera A2.
[0105]
[0106]Intermedijer A2 je dobijen slično kao Intermedijer Al, zamenjujući 1-metilciklopropan-l-sulfonamid (dobijen u skladu sa Primerom 1.2 WO '066, str. 47) za ciklopropansulfonamid. Dobijanje Intermedijera A3.
[0107] Korak 1. Dobijanje A3-1: Ciklopropan estar A3-1 je dobijen iz (lR,2S)-metil l-(terc-butoksikarbonilamino)-2-vinilciklopropankarboksilat (dobijen prema Beaulieu, P.L., et al., J. Org. Chem. 2005, 70, 5869) koristeći detaljan propis u Primeru 26 patentne prijave sa brojem internacionalne objave WO 2009/005677 (u daljem tekstu "WO '677") (str. 176).
Koraci 2-4. Dobijanje Intermedijera A3: Intermedijer A3 je dobijen slično kao (1R,2S)-1-amino-N-(ciklopropilsulfonil)-2-vinilciklopropankarboksamid hidrohlorid Primer 2.12 WO '066
(str. 75-76) zamenjujući A3-1 za (lR,2S)-etil l-(rerc-butoksikarbonilamino)-2-vinilciklopropan-karboksilat.
Dobijanje Intermedijera A4.
[0108]
[0109]Intermedijer A4 je dobijen slično kao Intermedijer A3, zamenjujući 1-metillciklopropan-1-sulfonamid (dobijen prema Primeru 1.2 WO '066, str. 47) za ciklopropansulfonamid. Dobijanje Intermedijera A5.
[0110]
[0111]Koraci 1-3. Dobijanje Intermedijera A5: Intermedijer A5 je dobijen slično kao (1R,2S)-1-amino-N-(ciklopropilsulfonil)-2-vinilciklopropan-karboksamid hidrohlorid Primera 2.12 WO '066 (str. 75-76) zamenjujući A5-1 (dobijen prema Primeru 104 WO '677, str. 265) za (lR,2S)-etill 1-(terc-butoksikarbonilamino)-2-vinilciklopropankarboksilat.
Dobijanje Intermedijera A6.
[0112]
[0113]Intermedijer A6 je dobijen slično kao Intermedijer A5, zamenjujući 1-metillciklopropan-1-sulfonamid (dobijen prema Primeru 1.2 od WO '066, str. 47) za ciklopropansulfonamid. Dobijanje Intermedijera A7.
[0114]
[0115]Intermedijer A7 je dobijen prema propisu Primera 97.1.6 od američke prijave sa brojem objave 2009/274652 (u daljem tekstu "US '652"), str. 72-73.
Dobijanje Intermedijera A8.
[0116]
[0117]Koraci 1-2. Dobijanje Intermedijera A8: Intermedijer A8 je dobijen slično kao (1R,2S)-1-amino-N-(ciklopropilsulfonil)-2-vinilciklopropan-karboksamid hidrohlorid Primera 2.12 od WO '066 (str. 75-76) zamenjujući A8-1 (dobijen prema detaljnom propisu Primera 97.1.4 od US '652, str. 72-3) za (lR,2S)-l-(terc-butoksikarbonilamino)-2-vinilciklo-propankarboksilne kiseline i zamenjujući 1-metilciklopropan-l-sulfonamid (dobijen prema Primeru 1.2 od WO "066, str. 47) za ciklopropansulfonamid. A8-1 'H NMR (400 MHz, CDC13) 8 9.22 (br s, 1 H), 6.05 - 5.75 (m, 1 H), 5.38 (br s,lH), 2.04 (m, 2H), 1.68 (m, 2H), 1.61 (m, 3H), 1.52 (m, 9H), 1.42 (m, 1 H), 1.28 (m, 1 H), 0.85 (m, 2H).
Dobijanje IntermedijeraA9.
[0118]
[0119]Koraci 1-2. Dobijanje Intermedijera A9: Intermedijer A9 je dobijen slično kao (1R,2S)-1-amino-N-(ciklopropilsulfonil)-2-vinilciklopropan-karboksamid hidrohlorid Primera 2.12 od WO '066 (str. 75-76) zamenjujući A9-1 (dobijen prema Primeru 1, Koraci 1L-10 patentne prijave sa brojem internacionalne objave WO 2009/134987, p. 75-77) za (lR,2S)-l-(terc-butoksikarbonilamino)-2-vinilciklopropankarboksilne kiseline.
Dobijanje Intermedijera A10.
[0120]
[0121]Intermedijer A10 je dobijen slično kao Intermedijer A9, zamenjujući 1-metillciklopropan-1-sulfonamid (dobijen prema Primeru 1.2 od WO '066, str. 47) za ciklopropansulfonamid. Dobijanje Intermedijera Ali.
[0122] Korak 1. Dobijanje All-1: U rastvor NaOH (46.2 g, 50% w/w u vodi) na rt, dodat je BnEi3NCl (10.5 g, 46 mmol), di-terc-butil malonat (10 g, 46 mmol) i 1,2-dibrompropan (14 g, 69.3 mmol). Smeša se meša preko noći na rt i ekstrahuje sa DCM (3x100 mL). Organski sloj se ispere vodom (80 mL) i zasićenim rastvorom natrijum-hlorida (50 mL) i suši preko anhidrovanog Na2S04. Koncentrovanjein vacuodaje All-1 koji se dalje koristi bez prečišćavanja. 'H NMR
(400 MHz, CDCb) 8 1.83-1.62 (m, 1 H); 1.42 (s, 9H); 1.40 (s, 9H); 1.24-1.05 (m, 2H); 1.03-1.02 (d, 3H).
Korak 2. Dobijanje All-2: U rastvor/-BuOK (175 g, 1.56 mol) u etru (1.2 L) na 0 °C dodata je voda (3.4 mL) a zatim diestar Al 1-1 (91 g, 0.35 mol). Smeša se meša tokom tri dana na rt a onda prekida smešom voda-led. Vodeni sloj se ekstrahuje etrom (2x400 mL), zakiseli limunskom kiselinom, i ekstrahuje pomoću EA (3X400 mL). Kombinovani etilacetatni ekstrakti se isperu vodom (2x100 mL), zasićenim rastvorom natrijum-hlorida (200 mL), suše preko anhidrovanog Na2S04, koncentrujuin vacuodajući All-2 koji se dalje koristi bez prečišćavanja.
'H NMR (400 MHz, DMSO-ife) 8 12.60 (s, 1 H); 1.70-1.64 (s, 1 H); 1.37 (s, 9H); 1.19-1.13 (m, 1 H); 1.03-1.00 (m, 4H). Korak 3. Dobijanje Al 1-3: U smešu Al 1-2 (33.5 g, 0.17 mol) i trietilamina (70 mL) u THF (200 mL) na 0 °C dodavan je etil hloroformat (22 mL). Smeša se meša na 0 °C tokom 1 h. Smeši na 0 °C se doda natrijum-azid (54 g, 0.83 mol, 4.9 eq) u vodi (100 mL), i meša tokom 40 min. Zatim se ekstrahuje sa EA (2x400 mL), ispere vodom (100 mL), slanim rastvorom (100 mL), suši preko anhidrovanog Na2S04i koncentrujein vacuodajući ostatak koji se razmuti u toleuenu (100 mL) i tretira benzil alkoholom (50 mL). Smeša se onda greje na 70°C tokom 2 h, ohladi do rt, pH podesi na 8 pomoću natrijum-bikarbonata, i ekstrahuje etrom (3x200 mL). Vodenom sloju se pH podesi na 5 pomoću 1 N HC1 i ekstrahuje EA (2x300 mL). Kombinovani etil-acetatni ekstrakti se isperu vodom (100 mL), slanim rastvorom (80 mL), suše preko anhidrovanog Na2S04, i koncentrujuin vacuodajući CBZ zaštićeni amin All-3 (16 g) koji se dalje koristi bez prečišćavanja. 'H NMR (400 MHz, DMSO-^) 8 7.85 (s, 1 H); 7.28-7.15 (m, 5H); 4.97-5.03 (m, 2H); 1.33 (s, 9H); 1.33-1.17 (m, 2H); 1.10( d, J=6.8 Hz, 3H); 0.90-1.00 (m, 1 H).
Koraci 4 i 5.Dobijanje Al 1-4: U Cbz zaštićeni amin All-3 (16 g, 52 mmol) u DCM (250 mL) u kapima se doda TFA (250 mL, 3.24 mol) na rt i smeša meša na rt preko noći. Nakon koncentrovanjain vacuo,pomoću vodenog rastvora natrijum-karbonata pH se podesi na 8-9, i ispere etrom (3x80 mL). Vodenom sloju se pH podesi 5-6 koristeći IN HC1 i ekstrahuje EA (2x300 mL). Kombinovane etil acetatne faze se isperu vodom (80 mL), slanim rastvorom (80 mL), suše preko anhidrovanog Na2SCMi koncentruju dajući 13 g neznatno žućkastog ulja koji se koristi u sledećim koracima bez daljeg prečišćavanja. Ovaj materijal (8.0 g, 32 mmol) je razmućen u metanolu (200 mL), tretiran tionil-hloridom (15 mL) na 0 °C, a zatim mešan na rt preko noći. Rezultujuća smeša se koncentrujein vacuoand prečišćava flash hromatografijom na siliki (eluent PE/EA 10:1-5:1) dajući metil estar Al 1-4 (6 g). 'H NMR (400 MHz, DMSO-J6) 8 7.97 (s, 1 H); 7.37-7.26 (m, 5H); 4.99 (s, 2H); 3.61 (s, 3H); 1.48-1.45 (m, 1 H); 1.17-1.08 (m, 2H); 1.06-1.04 (d, 3H).
Korak 6. Dobijanje All-5: Cbz karboksamid All-4 (36 g, 0.15 mol), B0C2O (40 g, 0.18 mol), i Pd/C (3.6 g, 10% w/w) se kombinuju u metanolu pod H2i mešaju na 32°C preko noći. Reakciona smeša se procedi u cilju uklanjanja katalizatora, dodatni B0C2O (40 g, 0.18 mol) i Pd/C (3.6 g, 10% w/w) su dodati i reakcija se dalje odvija u atmosferi H2na rt tokom vikenda. Reakciona smeša se procedi u cilju uklanjanja katalizatora, koncentrujein vacuoi prečišćava flash hromatografijom na siliki (eluent PE/EA 20:1-10:1) radi dobijanja Boe zaštićenog amina Al 1-5.
'HNMR(400 MHz, DMSO-c/6) 5 7.48 (s, IH), 3.59 (s, 3H), 1.43-1.41 (m, IH), 1.34 (s, 9H), 1.21-1.18 (m, IH), 1.07-1.01 (m,4H).
Korak 7. Dobijanje Al 1-6: U rastvor NaH2P04 (1.9 g) u vodi (160 mL) na 40°C, dodata je Alcalase (2.4 U/g, 16 mL). Smeši se pomoću 50% vodenog rastvora natrijum-hidroksida podesi pH na 8. Al 1-5 (2.80 g) u DMSO (32 mL) se tokom 30 min dodaje puferu u kapima. Smeša se meša na 40 °C i pH održava na 8 dodatkom 50% NaOH tokom 19 h. Smeša se ohladi do rt, sa etrom (3 x 100 mL) i organska faza ispere zasićenim NaHC03(2 x 40 mL), vodom (2 x 40 mL), slanim rastvorom (40 mL), suši preko anhidrovanog Na2S04, procedi i koncentrujein vacuodajući All-6. 'H NMR (300 MHz, DMSO-^) 5 5.18 (br s, 1 H); 3.71 (s, 3H); 1.43-1.18 (m, 2H); 1.34 (s, 9H); 1.07-1.01 (m, 4H). Analiza proizvoda koristeći chromegaChiral CC3 kolonu (0.46 cm I.D. X 25 cm L, 3 uL injekcija, 80/20 heksan/lPA, 1 mL/min, 34 °C, 220 nM UV detekcija) utvrdila daje enantiomerni višak bio 99.4% (željeno RT = 5.238 min, neželjeno RT = 6.745 min).
Koraci 8 i 9. Dobijanje Al 1-7: Čvrsti LiOH»H20 (19.1 g, 455 mmol) se razmuti u 50 mL MeOH/50 mL vode na rt Kada je sav LiOH rastvoren, metil estar All-6 (10.4 g, 45.5 mmol) razmućen u 100 mL THF-a se doda u reakcionu smešu i intenzivno meša preko noći. Rezultujući rastvor se razblaži vodom (150 mL), pH podesi na 3 pomoću 12 M HC1 i ekstrahuje sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi se isperu slanim rastvorom, suše preko anhidrovanog MgS04i koncentrujuin vacuodajući fini beli prah (9.2 g). Ovaj materijal (1.5 g, 7 mmol) se razmuti u THF (30 mL) i tretira sa CDI (1.47 g, 9.1 mmol). Rezultujući rastvor se zagreva na 65 °C tokom 2 h, ohladi do rt i tretira sa DBU (2.1 mL, 13.9 mmol) i 1-metilciklopropan-l-sulfonamidom (1.4 g, 10.5 mmol). Rezultujući rastvor se meša na rt preko noći. Pre uklanjanja najvećeg dela THFin vacuo,pH je podešen na 1 pomoću 1 M HC1. Rezultujuća smeša se ekstrahuje pomoću EtOAc i kombinovani organski slojevi isperu slanim rastvorom, suše preko anhidrovanog MgS04i koncentrujuin vacuodajući 2.29 g acil sulfonamida All-7. LCMS-ESL( m/ z) :[M+Na]<+>izračunato za Ci4H24N2NaOsS: 355.41; nađeno: 355.84.
Korak 10. Dobijanje Intermedijera Ali. Acil sulfonamid All-7 (0.25 g, 0.75 mmol) u dioksanu (1 mL) se tretira HCl-om (4 M in dioksan, 2.8 mL, 11.2 mmol) na rt. Posle 4 h, reakcija se koncentrujein vacuodajući 0.20 g Intermedijera A-ll koji se zatim koristi bez daljeg prečišćavanja. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 1.87-1.84 (m, 0.5 H); 1.77-1.65 (m, 1.5H); 1.58-1.46 (m, 2H); 1.54 (d, J = 8 Hz, 3H); 1.34-1.26 (m, 3+1 H); 1.02-0.92 (m, 1 H); 0.83-0.77 (m, 1
H).
Dobijanje Intermedijera A12.
[0123] Korak 1. Dobijanje A12-1: Sud u kome se nalazi rastvor karboksilne kiseline A9-1 (1 g, 4 mmol) u THF-u (15 mL) se tretira sa CDI (0.84 g, 5.2 mmol), zatvori i zageva na 75 °C tokom 2 h. Bistar rastvor se podeli na pola i koristi bez daljeg prečišćavanja u ostatku Koraka 1 u pripremanju Intermedijera 12, kao i za dobijanje Intermedijera 13, kako je ispod opisano. Ovaj rastvor je tretiran sa 1-fluorociklopropan-l-sulfonamidom (0.42 g, 3 mmol; dobijen u skladu sa Koracima 1, 4, i 9 Primera 7 internacionalne patentne prijave sa brojem objave WO 2009/14730, str. 107-110) i DBU (0.6 mL, 4 mmol) i ostavljeno da se meša preko noći na rt. Rastvor je zakišeljen do pH 1 pomoću IM HC1 i koncentrovanin vacuoda bi se uklonila većina THF-a. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc i kombinovani organski slojevi isprani slanim rastvorom, sušeni preko MgS04i koncentrovaniin vacuodo suva, dajući 0.73 g proizvoda A12-1 koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja.
Korak 2. Dobijanje intermedijera A12: Acil sulfonamid A12-1 (0.25 g, 0.67 mmol) je razmućen u 1 mL dioksana i tretiran sa HC1 (4 M u dioksan, 2.5 mL, 11 mmol). Reakcija se meša na rt tokom 2h i koncentruje do suvain vacuodajući kvantitativni prinos Intermedijera 12. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 6.04 (td, Jh-f= 55.6 Hz, J = 5.2 Hz, 1 H); 2.25-2.14 (m, 1 H); 1.78-1.62 (m, 2H); 1.52-1.38 (m, 4H).
Dobijanje Intermedijera A13.
[0124]
[0125]Intermedijer A13 je dobijen slično kao Intermedijer A12, zamenjujući 1-hlorociklopropan-1-sulfonamid (dobijen prema Li, J, etal. Svnlett, 2006, 5, str. 725-728) za 1-hlorociklopropan-l-sulfonamid u Koraku 1. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 6.03 (td, JH-f= 54.8 Hz, J = 6 Hz, 1 H); 2.32-2.18 (m, 1 H); 2.06-1.92 (m, 2H);1.80-1.68 (m, 2+1 H); 1.56-1.44 (m, 1 H); 1.44-1.37 (m, 1
H).
Dobijanje Intermedijera BI.
[0126]
[0127]Koraci 1 i 2. Dobijanje Intermedijera BI: EnaminonBl-1 (4.0 g, 11.8 mmol, dobijen prema Camplo, M., et al. Tetrahedron 2005, 61, 3725) je rastvoren u acetonu (120 mL) i reakcioni sud je produvan sa Ar. Pd/C (10 wt. % Pd, 820 mg) je dodat u jednoj porciji i reakcioni sud dva puta produvan sa H2. Reakcija se meša pod 1 atm Ehna rt tokom 15 h i onda procedi preko Celita i ispere acetonom. Filtrat se koncentruje i filtrira preko silika gela (sa 30% EtOAc u heksanima dajući~2:1 smešuketonaBl-2 iBl-3 (3.48 g)kaobelučvrstusupstancu. Ovasmeša(3.37 g, 11.3 mmol) se rastvori u THF (100 mL) pod Ar. 1 M rastvor (i?)-(+)-2-metill-CBS-oksazaborolidina u toluenu (11.3 mL, 11.3 mmol) se doda u jednoj porciji i dobijeni rastvor ohladi na - 78 °C. 1 M rastvor BH3»SMe2u CH2CI2(11.3 mL) se u kapima dodaje tokom 5 min. Dobijeni rastvor se meša tokom 20 minuta i skloni sa hladnog kupatila. Posle dodatnih 15 min, reakcija se premesti na vodeno kupatilo na ambijetalnu temperaturu. Nakon još 7 min, reakcija se prekida dodatkom MeOH (20 mL) u kapima. Posle mešanja tokom naredna 2.5 h, reakciona smeša se koncentruje, rastvori u EtOAc (300 mL), i ispere sa 0.2 M HC1 (200 mL). Faze se razdvoje, i vodena faza ekstrahuje pomoću EtOAc (100 mL). Kombinovane organske faze se procede, radi uklanjanja čvrstog ostatka, osuše preko Na2S04, procede, i koncentruju. Sirovi ostatak se rastvori u CH2CI2i koncentruje preko 20 g silica gela. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (25 do 40% EtOAc u heksanu) dovodi do deliemičnog razdvajanja Intermedijera BI od ostalih dijastereomernih proizvoda. Pomešane frakcije su sakupljene i koncentrovane na 9 g silika gela. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu rezultuje u Tntermedijeru BI u obliku čvrstog proizvoda minimalno onečišćenog dijastereomernim komponentama (1.96 g). 'H NMR (400 MHz, CDCI3, primećeni rotameri) 8 4.25 - 4.15 (m, 1 H), 4.13 - 4.04 (m, 1 H), 3.91 - 3.79 (m, 1 H), 3.28 - 3.09 (m, 1 H), 2.41 - 2.23 (m, 1 H), 2.04 (bs, 1 H), 1.51 - 1.39 (m, 18H), 1.09 - 1.01 (m, 3H).
Dobijanje Intermedijera B2.
[01281
Koraci 1 i 2. Dobijanje B2-1:?ra«s-3-Hidroksi-L-prolin (571 mg, 4.35 mmol, Chem-Impex International, Inc.) se suspenduje u MeOH i ohladi na 0 °C. Tionil-hlorid (1.6 mL, 22 mmol) se dodaje tokom 5 min i rastvor zagreje na rt. Nakon mešanja tokom 24 h, reakciona smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom dajući metil estar koji se koristi bez daljeg prečišćavanja. Sirovi estar se suspenduje u DCM (22 mL) i tretira sa TEA (1.3 mL, 9.57 mmol). Smeša koja se meša, se ohladi na 0 °C i doda se tritil-hlorid (1.21 g, 4.35 mmol). Reakciona smeša se postepeno dovede na rt tokom noći, a onda sipa u zasićeni vodeni NaHC03. Vodeni sloj se tri puta ekstrahuje pomoću DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2S04, procede i koncentruju pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečisti hromatografijom na silika gelu. (25% do 50% EtOAc/Hex dajući alkohol B2-1 (1.27 g).
Korak 3.Dobijanje B2-2: Alkohol B2-1 (1.23 g, 3.18 mmol) i 2 g 4 A MS se suspenduju u DCM (16 mL) i tretiraju sa NMO (560 mg, 4.78 mmol) i TPAP (76 mg, 0.218 mmol). Posle mešanja tokom 30 min, smeša se procedi preko silike i ispira sa 50% EtOAc/Hex. Filtrat se koncentruje i sirovi proizvod prečisti hromatografijom na silika gelu. (10% do 30% EtOAc/Hex dajući keton B2-2 (0.99 g).
Korak 4. Dobijanje B2-3: LiHMDS (1.0 M u THF-u, 5.8 mL, 5.8 mmol) je dodat u THF (22 mL) i rastvor koji se meša je ohlađen na -78 °C. Rastvor ketona B2-2 na rt (2.14 g, 5.55 mmol) u THF (6 mL) se tokom 5 mi dodaje u kapima kanilom. Balon u kome se nalazio B2-2 se onda ispere THF-om (4 mL) i taj rastvor se kanilom u kapima doda reakcionoj smeši. Nakon 35 min, A^5-hloro-2-piridil)bis(trifluorometansulfonimid) (2.40 g, 6.11 mmol) u THF (6 mL) se doda reakcionoj smeši špricem, u kapima tokom 5 min. Posle 1 h, reakciona smeša se zagreje na rt. Nakon dodatnih 30 min, reakcija se prekida dodatkom 20 mL H2O i razblaži pomoću Et20. Organski sloj se ispere sa 10% NaOH i suši preko K2CO3, procedi i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak se nanese na kolonu silika gela koja je bila preekvilibrisana sa 1% TEA/Hex. Materijal se prečisti hromatografijom na silika gelu (0% do 15% EtOAc/Hex dopiran sa 1 % TEA) dajući enol triflat B2-3 (1.89 g).
Korak 5. Dobijanje of B2-4: Enol triflat B2-3 (957 mg, 1.85 mmol) se rastvori u THF-u (9 mL) i tretira sa Pd(PPh3)4(107 mg, 0.0925 mmol) i dimetil cinkom (2.0 M in PhMe, 1.9 mL, 3.7 mmol). Reakciona smeša se meša na rt tokom 5 h, doda se još dimetil cinka (2.0 M in PhMe, 1.9 mL, 3.7 mmol) i reakcija zagreva na 50 °C tokom 15 min. Posle hlađenja do rt, smeša se razblaži sa Et20. Organski sloj se ispere sa 10% NaOH dva puta, suši preko MgS04, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi B2-4 ostatak se dalje koristi bez prečišćavanja. Koraci 6 i 7. Dobijanje B2-5: Jedinjenje B2-4 (1.85 mmol teorijski) se rastvori u 1:1 MeOH/DCM (20 mL) i tretira sa HC1 (4.0 M u dioksanu, 2 mL, 8.0 mmol). Posle mešanja tokom 2 h na rt, reakciona smeša se koncentruje i sirovi materijal koristi bez daljeg prečišćavanja. Sirovi proizvod amin hidrohlorid se tretira sa Boc20 (2.02 g, 9.25 mmol), DCM (18 mL), MeOH (1.8 mL) i TEA (0.52 mL, 3.7 mmol). Posle mešanja tokom 2 h na rt, reakciona smeša se rastvori u EtOAc, i ispere sa 10% HC1, zasićenim vodenim rastvorom NaHC03i slanim rastvorom. Organski rastvor se suši preko MgS04, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu (15% do 40% EtOAc/Hex) dajući karbamat B2-5 (331 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C12H20NO4: 242.14; nađeno: 243.26.
Korak 8. Dobijanje Intermedijera B2: Karbamat B2-5 (345 mg, 1.43 mmol) se rastvori u THF-u (7 mL) i ohladi na 0 °C. BH3»SMe2kompleks (2.0 M in THF, 0.79 mL, 1.58 mmol) se u kapima doda reakcionoj smeši i postepeno hladi do rt. Posle 15 h, reakcija se prekida dodavanjem H2O u kapima (dok ne prestane izdvajanje mehurića), i onda ohladi na 0 °C. Vodonik-peroksid (30% w/w u H20, 0.73 mL, 7.2 mmol) i NaOH (2.0 M in H20, 0.86 mL, 1.72 mmol) se u brzom pokretu doda i rastvor koji se meša zagreva se na 50°C tokom 35 min. Onda se smeša razblaži sa Et20 i ispere redom H20, zasićenim vodenim rastvorom NaHC03i slanim rastvorom, a onda suši preko MgS04, procedi i koncentruje pod sniženim pritiskom. Intermedijer B2 se nadalje koristi u reakcijama bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-EST<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za G2H22N05: 260.15; nađeno: 259.99.
Dobijanje Intermedijera B3.
[0129] Korak 1. Dobijanje B3-1: Enol triflat B2-3 (91 mg, 0.176 mmol) se rasvori u THF-u (1.7 mL) i tretira sa ciklopropil cink-bromidom (0.5 M in THF, 1.7 mL, 0.85 mmol) i Pd(PPli3)4 (20 mg, 0.018 mmol). Reakciona smeša koja se meša se zagreva na 50 °C tokom 2 h a onda ohladi do rt i razblaži sa EtOAc. Organski sloj se ispere redom zasićenim vodenim rastvorom NaHC03i slanim rastvorom, a onda suši preko MgS04, procedi i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu (0% do 20% EtOAc/Hex) dajući ciklopropan B3-1 (43 mg). LCMS-ESL (m/z): [M-Tr+H]<+>izračunato za C9H14NO2: 168.10; nađeno: 168.04.
Koraci 2 i 3. Dobijanje B3-2: Vinil ciklopropan B3-1 (43 mg, 0.11 mmol) se rastvori u 1:1 MeOH/DCM (10 mL) i tretira HCl-om (4.0 M u dioksanu, 1 mL, 4.0 mmol). Posle mešanja tokom 1.5 h na rt, reakciona smeša se koncentruje i sirovi materijal koristi bez daljeg prečišćavanja. Sirovi proizvod iz drugog koraka se tretira sa B0C2O (229 mg, 1.05 mmol), DMAP (13 mg, 0.105 mmol), DCM (5 mL) i TEA (0.293 mL, 2.10 mmol). Posle mešanja tokom 5 h na rt, reakciona smeša se razblaži sa EtOAc i ispere 10% HC1, dva puta zasićenim vodenim rastvorom NaHC03i slanim rastvorom. Organski rastvor se suši preko MgS04, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečišćava hromatografijom na silika gelu (10% do 30% EtOAc/Hex) dajući karbamat B3-2 (20 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M-(r-Bu)+H]<+>izračunato za C10H14NO4: 212.09; nađeno: 211.91.
Korak 4. Dobijanje Intermedijera B3: Karbamat B3-2 (152 mg, 0.569 mmol) se rastvori u THF (5.7 mL) i ohladi na 0 °C. BH3»SMe2kompleks (2.0 M in THF, 0.31 mL, 0.63 mmol) se u kapima doda i dozvoli reakcionoj smeši da postepeno dostigne rt. Posle 20 h, reakcija se prekida dodatkom H2O u kapima (dodaje se do prestanka izdvajanja mehurića), i onda ohladi na 0 °C. Vodonik-peroksid (30% w/w u H20, 0.29 mL, 2.85 mmol) i NaOH (2.0 M in H20, 0.43 mL, 0.86 mmol) se dodaju brzim pokretom i smeša meša na 50 °C tokom 30 min. Smeša se razblaži sa Et20 i ispere redom, H2O, zasićenim vodenim rastvorom NaHC03i slanim rastvorom, suši preko MgS04, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Intermedijer B3 se dalje koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M-(/-Bu)+H]<+>izračunato za C10H16NO5: 230.10; nađeno: 230.03.
Dobijanje Intermedijera B4.
[0130]
[0131]Intermedijer B4 ((2S,3S,4R)-di-terc-butil 3-etil-4-hidroksipirolidin-l,2-dikarboksilat) je dobijen prema Camplo, M., et al. Tetrahedron 2005, 61, 3725.
Dobijanje Intermedijera B5.
[0132] Korak 1. Dobijanje enona B5-2: U rastvor Bl-1 u tetrahidrofuranu (7.35 mL) doda se etilmagnezijum bromid (3 M u dietiletru, 1.47 mL 4.41 mmol) pomoću šprica -78 °C u atmosferi argona. Posle 2.5 h, reakciona smeša se zagreje do rt tokom 30 min, kada se reakciona smeša razblaži zasićenim vodenim rastvorom amonijum-hlorida (20 mL). Rezultujuća smeša se ekstrahuje etil-acetatom (20 mL dva puta), i kombinovani organski ekstrakti se suše preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrujuin vacuo.Sirovi ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu. (0-100% etil acetat/heksan gradijent) dajući Intermedijer B5-1 (308.8 mg) u obliku bezbojnog ulja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za Ci7H28N05: 326.2; nađeno: 326.2.
Korak 2. Dobijanje B5-2: U rastvor enona B5-1 (308 mg, 0.95 mmol) u metanolu (4.7 mL) dodat je cerium(III)-hlorid heptahidrat (566 mg, 1.52 mmol) na rt u atmosferi argona. Rezultujuća smeša se ohladi na -78 °C, i doda se čvrsti natrijumborohidrid (57.7 mg, 1.52 mmol). Posle 1 h, reakciona smeša se zagreje do 0 °C i zasićeni vodeni rastvor amonijum-hlorid (20 mL) se doda. Dobijena smeša se ekstrahuje etil-acetatom (20 mL dva puta), i kombinovani organski ekstrakti se suše preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrujuin vacuodajući alilni alkohol B5-2 (319.3 mg) u obliku bezbojnog ulja, koji se u daljim koracima koristi direktno bez prečišćavanja. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za G7H29NO5: 328.2; nađeno: 328.2.
Korak 3. Dobijanje Intermedijera B5: U rastvor alkohola B5-2 (319 mg, 0.98 mmol) u etanolu (4.9 mL) se doda Pd/C (10%, 103.9 mg, 0.097 mmol) na rt u atmosferi argona. Atmosfera se zameni vodonikom i reakciona smeša meša intenzivno na rt. Posle 16 h, reakciona smeša se razblaži etil-acetatom (25 mL) i procedi preko Celite-a i ispira etil-acetatom (10 mL tri puta). Filtrat se koncentrujein vacuodajući Intermedijer B5 (188 mg), koji se dalje koristi bez prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za G7H32NO5: 330.2; nađeno: 330.3.
Dobijanje Intermedijera B6.
[01331
Korak 1. Dobijanje B6-1: Rastvor izopropilmagnzijum-bromida (2.9 M u MeTHF, 3.2 mL, 9.3 mmol) se u kapima doda ohlađenom rastvoru Bl-1 (1.02 g, 3.00 mmol) u 60 mL etra na -78 °C pod argonom. Reakciona smeša se se zagreje do sobne temperature i meša tokom 3 časa. Reakcija se prekida zasićenim vodenim rastvorom NH4CI i tri puta ekstrahuje etrom. Kombinovani organski delovi se isperu zasićenim vodenim rastvorom NaHCCbi slanim rastvorom, suše (MgSCU), filtriraju, i koncentruju pod sniženim pritiskom. Rezultujući ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu (0-30% etil-acetat u heksanu) dajući B6-1 (743 mg) kao svetlo-žuto ulje. 'H NMR (400 MHz, CDCI3): 8 6.60 (dd, J = 10.8,2.4 Hz, 1 H), 5.14 i 5.06 (rotameri, d, J = 2.4 Hz, 1 H), 3.96 (m, 2H), 2.91 (m, 1 H), 1.46 (s, 9H), 1.27 (s, 9H), 1.04 (d, J = 8.8 Hz, 6H). Korak 2. Dobijanje B6-2 i B6-3: CeCl3'7H20 (1.32 g, 3.50 mmol) se doda u rastvor B6-1 (740 mg, 2.18 mmol) u 47 mL metanola na sobnoj temperaturi pod argonom. Posle hlađenja do -78 °C, natrijum-borohidrid (127 mg, 3.34 mmol) se polako dadaje u porcijama. Posle dva sata, reakciona smeša se zagreje do 0 °C. Posle petnaest minuta, reakcija se prekida zasićenim vodenim rastvorom NH4CI i tri puta ekstrahuje etil-acetatom. Kombinovani organski delovi se isperu slanim rastvorom, suvim (MgSCU), procede, i koncentruju pod sniženim pritiskom dajući~3:1 smešu B6-2 (glavni proizvod) i B6-3 (sporedni proizvod) u obliku bezbojnog filma (738 mg), koji se u sledećim koracima koristi bez daljeg prečišćavanja. 'H NMR (400 MHz, CDCI3): 8 5.68-5.48 (m, IH), 4.90-4.31 (m, 2H), 4.05-3.15 (m, 2H), 2.90-2.61 (m, 1 H), 1.50-1.39 (br s, 18H), 1.02 (d, J = 9.2 Hz, 6H).
Korak 3. Dobijanje Intermedijera B6: Smeša B6-2 i B6-3,~3:1, (341 mg, 1.00 mmol) se rastvori u 28 mL etil-acetata. Doda se paladijum na ugljeniku (10 wt %, 109 mg, 0.11 mmol) i smeša hidrogenizuje u atmosferi vodonika tokom devetnaest časova. Smeša se procedi preko Celita, ispere etil-acetatom, i filtrat koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu (0-50% etil-acetat u heksanu) dajući Intermedijer B6 (141 mg) kao bezbojno ulje. 'H NMR (400 MHz, CDCI3): 8 4.31-4.17 (m, 2H), 3.97-3.85 (m, 1 H), 3.21-3.07 (m, 1 H), 2.35-2.18 (m, 1 H), 1.92-1.78 (m, 1 H), 1.47-1.37 (m, 18H), 1.35-1.19 (m, 2H), 0.94 (d, J = 8.8 Hz, 6H).
Dobijanje Intermedijera B7.
[0134] Korak 1. Dobijanje B7-2: U rastvor alkohola B7-1 (500 mg, 1.33 mmol; dobijenom prema Barreling, P., et al. Tetrahedron 1995, 51, 4195) u DCM (6.65 mL) dodat je Dess-Martin perjodinan (564 mg, 1.33 mmol) na rt u atmosferi argona. Posle 2 h, reakciona reaction smeša se direktno prečisti hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan gradijent) dajući keton B7-2 (431 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato C21H30NO5: 376.2; nađeno: 376.2.
Korak 2. Dobijanje Intermedijera B7: U rastvor Intermedijera B7-2 (410 mg, 1.09 mmol) i (i?)-(+)-2-metil-CBS-oksazaborolidina (Aldrich, 1 M u toluenu, 1.09 mL, 1.09 mmol) u THF (5.45 mL) dodat je BH3-THF (1 M u toluenu, 2.18 mL, 2.18 mmol) na -78 °C u atmosferi argona. Posle 1 h, reakcija se prekida zasićenim vodenim rastvorom amonijum-hlorida (15 mL) i dobijena smeša se zagreje do rt. Faze se razdvoje i vodena faza dva puta ekstrahuje (20 mL) sa DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko anhidrovanog natrijum-sulfata, i koncentrujuin vacuo.Sirovi proizvod se prečisti hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan gradijent) dajući Intermedijer B7 (390.9 mg, 4:1 dijastereomerna smeša) kao bezbojno ulje. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato C21H32NO5: 378.2; nađeno: 378.5.
Dobijanje Intermedijera B8.
[0135] Korak 1. Dobijanje B8-1. n-BuLi (0.44 mL, 1.1 mmol, 2.5 M u heksanu) se doda hladnom (-78 °C) rastvoru (S)-metil 4-okso-l-(9-fenil-9H-fluoren-9-il)pirolidin-2-karboksilata (383 mg, 1 mmol, dobijenom kao što je opisano u Sardina, F.J., Blanco, M.-J. J. Org. Chem. 1996, 61, 4748) u THF/HMPA (3.8 mL/ 0.4 mL). Dobijeni rastvor se meša na -78 °C do -50 °C tokom 1.5 h, i onda se doda bromoacetonitril (0.2 mL, 3 mmol). Reakciona smeša se meša dok se dozvoli da temperatura dostigne -10 °C (4 h). Reakcionoj smeši se doda zasićeni vodeni rastvor NFUCI (1 mL) i EtOAc (15 mL). Organski slojevi se izdvoje, vodeni sloj ekstrahuje sa EtOAc (10 mL). Oba organska sloja se pomešaju, isperu sa FhO i slanim rastvorom, i suše preko Na2S04. Organski sloj se koncentruje i prečišćava hromatografijom na silika gelu dajući smešu dijastereomera B8-1 (170 mg) kao bezbojno ulje.
Korak 2. Dobijanje B8-2. KHMDS (0.4 mL, 0.4 mmol, 1 M in THF) se doda hladnom (-78 °C) rastvoru B8-1 (140 mg, 0.33 mmol) u THF/DMPU (1.5 mL/0.75 mL). Dobijeni rastvor se meša na -78 °C tokom 1.5 h. Tada se doda HOAc (0.1 mL). Reakcionoj smeši se doda zasićeni vodeni rastvor NH4CI (1 mL) i EtOAc (15 mL). Organski slojevi se odvoje, a vodeni sloj ekstrahuje pomoću EtOAc (10 mL). Oba organska sloja se pomešaju, isperu sa H2O i slanim rastvorom, i suše preko Na2S04. Organski sloj se koncentruje i prečišćava hromatografijom na silika gelu dajući keton B8-2 (120 mg) u obliku bezbojnog ulja.
Korak 3. Dobijanje Intermedijera B8. U balon, osušen u sušnici i ispran azotom, dodat je BH3'THF (0.28 mL, 0.28 mmol,) a zatim (i?)-(+)-2-metil-CBS-oksazaborolidin (0.012 mL, 0.03 mmol, 1.0 M u toluenu). Rastvor B8-2 (120 mg, 0.28 mmol) u THF (0.5 mL) je dodat u kapima. Reakciona smeša se meša na rt tokom 60 min, a onda prekida dodatkom vodenog rastvora 1.0 M HC1 (0.2 mL). EtOAc (20 mL) se doda i organska faza ispere zasićenim vodenim rastvorom NaHC03i slanim rastvorom, i suši preko Na2S04. Organski slojevi se koncentruju i prečiste hromatografijom na silika gelu dajući Intermedijer B8 (100 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESL( m/ z) :[M]<+>izračunato za C27H24N2O3: 424.49; nađeno: 424.77.
Dobijanje Intermedijera Cl.
[0136]
[0137]
Metil 3-metil-N-(oksometilen)-L-valinat (Intermedijer Cl) je dobijen prema Koraku 3 Intermedijera BI od internacionalne prijave sa brojem objave WO 2010/11566 (u daljem tekstu "WO'566"), str 14.
Dobijanje Intermedijera C2.
[0138]
[0139]Intermedijer C2 (terc-butil 3-metil-N-(oksometi1en)-L-valinat) je dobijen slično kao Intermedijer Cl, zamenjujući terc-butil 3-metil-L-valinat (Bachem AG) za metil 3-metil-L-valinat u Koraku 3 Intermedijera BI iz W0'566, str. 14.
Dobijanje IntermedijeraDl.
[0140] Koraci 1 i 2. Dobijanje toms-ciklopropanol smeše D1-2 i Dl-3: THF (1000 mL) se uvede u trogrli okrugli balon koji sadrži Mg (32.2 g, 1.34 mol). Rastvor 7-bromohept-l-en (216 g, 1.22 mol) u THF-u (600 mL) se stavi u levak za ukapavanje. Kristal joda i 20 mL 7-bromohept-l-en rastvora su dodati u reakcionu smešu. Rastvor se zagreje do refluksa i ostatak 7-bromohept-l-en rastvora se doda u kapima. Po završenom dodavanju, smeša se refluktuje dodatnih 2 h a onda ohladi do rt dajući rastvor Grignard-ovog reagensa Dl-1, koji je onda u kapima dodat u rastvor etil-formata (30 g, 0.41 mol) i Ti(0/-Pr)4(115.2 g, 0.41 mol) u THF (1200 mL) na rt. Posle mešanja preko noći, smeša se sipa u 1600 mL 10% vodenog rastvora H2SO4i ekstrahuje sa MTBE (1500 mL tri puta). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, sušeni preko MgS04, filtrirani i koncentrovaniin vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu dajući 31.0 g smeše/rara-ciklopropil alkohola Dl-2 i Dl-3 kao žuto ulje. 'H NMR: (400 MHz, CDCb): 5 5.77-5.70 (m, 1 H), 4.96-4.86 (m, 2H), 3.15-3.12 (m, 1 H), 2.03-1.98 (m, 2H), 1.75 (br s, 1 H), 1.45-1.37 (m, 2H), 1.20-1.15 (m, 1 H), 1.06-1.01 (m, 1 H), 0.89-0.82 (m, 1 H), 0.63-0.59 (m, 1 H), 0.24 (q,J=6.0 Hz, 1 H). Korak 3. Dobijanje ciklopropil acetatne smeše Dl-4 i Dl-5: U balon sa okruglim dnom od 1000 mL dodat je toms-ciklopropil alkoholna smeša Dl-2 i Dl-3 (60.3 g, 0.48 mol), 700 mL DCM i TEA (62.9 g, 0.62 mol) pre hlađenje rastvora u aceton/ledeno kupatilo do unutrašnje temperature od < 5 °C. Acetil hlorid (41.3 g, 0.53 mol) je dodat u kapima u rastvor tokom 30 min, uz održavanje unutrašnje temperature < 10 °C. Rezultujuća supspenzija se onda zagreje do rt i meša tokom 2 h. Reakciona smeša se razblaži 350 mL vode. Dvofazna smeša se prabaci u levak za razdvajanje i ukloni se vodeni sloj. Organski sloj se ispere sa 480 mL 2 N vodenog rastvora HC1 i onda sa 500 mL zasićenog vodenog rastvora NaHC03pre sušenja preko MgS04. Rastvarač se ukloniin vacuo.Ostatak se prečišćava hromatografijom na silika gelu dajući smešu Dl-4 i Dl-5 (56.3 g) u obliku žutog ulja. TLC podaci (PE/EtOAc =5/1) Rf(polazni materijal) = 0.4; Rf(proizvod) = 0.8.
Korak 4. Dobijanje Dl-3: U balon sa okruglim dnom od 1000 mL sipa se rastvor smeše Dl-4 i Dl-5 (39 g, 0.23 mol) u 680 mL MTBE zasićenog sa 0.1 M fosfatnim puferom, pH 7. Balon se drži na ledenom kupatilu u cilju održavanja temperature na približno 10 °C tokom reakcije hidrolize koja započinje dodatkom 3.0 g Novozvme 435. Reakcija se odvija na 10 °C tokom približno 6 h kada konverzija dostiže oko 40%. Reakciona smeša se procedi, i čvrsti imobilisani enzim ispere tri puta 200 mL MTBE. Dobijeni MTBE rastvor se koncentrujein vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu dajući Dl-3 (11.3 g) u obliku žutog ulja. 'H NMR: (400 MHz, CDCb) 5 5.80-5.75 (m, 1 H), 5.02-4.91 (m, 2H), 3.20-3.17 (m, 1 H), 2.09-2.03 (m, 3H), 1.50-1.43 (m, 2H), 1.26-1.22 (m, 1 H), 1.17-1.08 (m, 1 H), 1.07-0.89 (m, 1 H), 0.70-0.65 (m, 1 H), 0.32-0.27 (m, 1 H).
Korak 5. Dobijanje Dl-6: Ciklopropanol Dl-3 (17.7 g, 0.140 mol) se rastvori u 300 mL MeCN na 0 °C. U rastvor se doda DSC (72.0 g, 0.280 mol) i TEA (42.42 g, 0.420 mol). Reakciona smeša se zagreje 40 °C i meša preko noći a onda koncentrujein vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu dajući Dl-6 (25.8 g) kao žutu čvrstu supstancu. 'H NMR: (400 MHz, CDCb) 5 5.84-5.77 (m, 1 H), 5.05-4.96 (m, 2H), 4.09-4.03(d, J=24 Hz, 1 H), 2.86 (s, 4H), 2.12-2.06 (m, 2H), 1.58-1.51 (m, 2H), 1.33-1.27 (m, 3H), 1.09 (m, 1 H), 0.68-0.62 (m, 1 H).
Korak 6. Dobijanje Dl-7: U rastvor Dl-6 (10 g, 0.0374 mol) u THF (374 mL) dodat je L-terc-leucin metil estar hidrohlorid (10.2 g, 0.056 mol) i TEA (11.3 g, 0.112 mol). Rastvor se meša preko noći na 40 °C. Smeša se koncentrujein vacuo.Ostatak se razblaži sa EtOAc i ispere vodom i slanim rastvorom, suše preko anhidrovanog natrijum-sulfata, filtrira i koncentrujein vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu dajući Dl-7 (10.2 g) kao žuto ulje. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za Ci6H28N04: 298.2; nađeno: 298.0.
Korak 7. Dobijanje Intermedijera Dl: Rastvor Dl-7 (20 g, 0.067 mol) u 2:1 smeši MeOH/H20 (447 mL/223 mL), tretira se sa LiOH»H20 (11.3 g, 0.269 mol) i onda zagreva na 60 °C tokom 4 h. Reakciona smeša se ohladi, koncentruje na pola zapremine i ekstrahuje sa MTBE. Onda se vodeni rastvor zakiseli sa vodenim 1 N HC1 (400 mL) i ekstrahuje sa EtOAc (400 mL x 3), kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani, dajući Intermedijer Dl (18 g). 'H NMR: (400 MHz, CDCb) 8 10.5-9.4 (br, 1 H), 5.82-5.71 (m, 1 H), 5.20-5.17 (m, 1 H), 4.99-4.91 (m, 2H), 4.19-4.16 (m, 1 H), 3.86-3.68 (m, 1 H), 2.09-2.03 (m, 2H), 1.53-1.32 (m, 2H), 1.30-1.20 (m, 2H), 1.18-1.13 (m, 1 H), 1.11-0.99 (s, 9H), 0.80-0.75 (m, 1 H), 0.49-0.47 (m, 1 H).
Dobijanje Intermedijera D2.
[0141]
[0142]Korak 1. Dobijanje Intermedijera D2: U suspenziju Dl-6 (600 mg, 2.25 mmol) i (S)-2-amino-2-ciklopentilacetatne kiseline u obliku hidrohlorida (386 mg, 2.7 mmol, Betapharma Inc.) u THF (20 mL) doda se destilovana voda (6 mL) i trietilamin (0.94 mL, 6.74 mmol). Homogeni rastvor se meša tokom~18 h. THF se ispari i vodeni ostatak razblaži vodom (20 mL). Smeša se zaalkali pomoću IN NaOH (pH > 10) i dva puta ispere (20 mL) etil-acetatom. Vodena faza se onda zakiseli sa rastvorom IN HC1 (pH < 2) i dobijeni rastvor dva puta ekstrahuje (20 mL) etil-acetatom. Kombinovane organske faze se suše preko anhidrovanog MgS04i koncentruju dajući intermedijer D2 (500 mg) kao braon ulje. Ono je korišćeno bez daljeg prečišćavanja u sledećim koracima. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za Ci6H26N04: 296.2; nađeno: 296.3.
Dobijanje Intermedijera D3.
[0143]
[0144]Korak 1. Dobijanje Intermedijera D3: U suspenziju Dl-6 (800 mg, 3 mmol) i (S)-2-amino-2-cikloheksilacetatne kiseline (519 mg, 3.3 mmol; Alfa Aesar) u vodi (15 mL), dodat je K3PO4(1.27 g, 6 mmol). Homogeni rastvor se meša na rt tokom 5 h. Reakcionoj smeši se doda voda (15 mL) i EtOAc (15 mL). Organski sloj se izdvoji, vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc (10 mL). Organski slojevi se pomešaju, isperu sa 1 N HC1, H2O i slanim rastvorom, i suše preko Na2S04. Koncentrovanje organskih rastvora dalo je Intermedijer D3 (850 mg) u obliku ulja koje se koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za Ci7H28N04: 310.4; nađeno: 310.3.
Dobijanje IntermedijeraD4.
[0145] Korak 1. Dobijanje D4-2: Biciklični alkohol D4-1 (2.9 g, 29.5 mmol, dobijen prema delu A, Intermedijera 1 od amričkog patenta sa brojem 8,178,491 B2 (u daljem tekstu "US '491"), str 192.) je rastvoren u DCM (60 mL) i TEA (8.2 mL, 59 mmol) je dodat. Rastvor koji se meša se ohladi na 0 °C i MsCl (3.4 mL, 44 mmol) se doda. Reakciona smeša se postepeno zagreje do rt. Posle 18 h, reakciona smeša se prespe u H2O. Vodeni sloj se ekstrahuje 2 x sa DCM, i kombinovani organski slojevi se suše preko MgSCU, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (20% to 50% EtOAc/Hex) dajući D4-2 (3.73
g)<.>
Korak 2. Dobijanje D4-3: NaH (1.69 g, 42.3 mmol) je suspendovan u 100 mL THF i smeša ohlađena na 0 °C. Dietil-malonat (6.4 mL, 47 mmol) je dodavan u kapima tokom 4 min i smeša uz mešanje zagreje do rt. Posle jednog sata, mezilat D4-2 (3.73 g, 21.2 mmol) u 20 mL THF se doda i reakciona smeša se greje uz refluks tokom 15 h. Posle tog perioda, reakciona smeša se ohladi do rt i sipa u zasićeni vodeni rastvor NaHCCh. Vodeni sloj se ekstrahuje 2 x sa EtOAc. Onda, organski slojevi su osušeni preko MgS04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi material je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0% do 15% EtOAc/Hex) dajući D4-3 (4.64 g).
Korak 3. Dobijanje D4-4: Malonat D4-3 (4.64 g, 19.3 mmol) je rastvoren u 20 mL DMSO a onda je dodat NaCl (1.24 g, 21.2 mmol) i voda (0.694 mL, 38.6 mmol). Smeša koja se meša, zagreva se do 170 °C tokom 48 h, onda ohladi do rt i razblaži sa Et20. Organski sloj se ispere sa H2O dva puta, onda slanim rastvorom, osuši preko MgS04, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal se prečisti hromatografijom na silika gelu (5% do 15% EtOAc/Hex) dajući D4-4 (2.83 g).
Koraci 4 i 5. Dobijanje D4-5: Rastvor etil estra D4-4 (2.83 g, 16.8 mmol) i LiOH (1 M u H2O, 34 mL, 34 mmol) u EtOH (68 mL) se meša na rt a onda koncentruje pod sniženim pritiskom radi uklanjanja EtOH. Preostali materijal se razblaži sa H2O i ispre dva puta sa DCM. Vodena faza se zakiseli do pH 1-2 sa 10% HC1 a onda tri puta ekstrahuje sa DCM. Ovaj DCM rastvor se suši preko MgS04, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijena sirova karboksilna kiselina je rastvorena u DCM (100 mL) i tretirana sa DMF (5 kapi). Oksalil-hlorid (2.2 mL, 25 mmol) je pažljivo dodat. Posle mešanja tokom noći, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom dajući D4-5, koji se koristi bez daljeg prečišćavanja.
Korak 6. Dobijanje D4-6: (5)-4-Benzil-2-oksazolidinon (3.57 g, 20.2 mmol) je rastvoren u THF (80 mL) i ohlađen do -78 °C. «-BuLi (1.6 M u heksanu, 12.6 mL, 20.2 mmol) je dodavan u kapima tokom 7 min i reakciona smeša se meša na -78 °C tokom 30 min. Ovaj rastvor, koji sadrži litijum-oksazolidinon se kanilom dodaje u rastvor kiselog hlorida D4-5 na -78 °C (16.8 mmol) u THF (80 mL) tokom 6 min. Posle mešanja na -78 °C tokom dodatnih 30 min, reakcija se prekida dodatkom 1 M vodenog rastvora NaHS04. Vodena faza se ekstrahuje sa EtOAc i organski sloj suši preko MgS04, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi material je prečišćen hromatografijom na silika gelu (10% do40% EtOAc/Hex) dajući D4-6 (4.32 g). LCMS-ESL (m/z):
[M+H]<+>izračunato za C18H22NO3: 300.16; nađeno: 300.14.
Korak 7. Dobijanje D4-7: Rastvor KHMDS (0.5 M u PhMe, 3.4 mL, 1.7 mmol) u THF (5 mL) se ohladi do -78 °C i odvojeni rastvor oksazolidinona D4-6 (465 mg, 1.55 mmol) u THF (5 mL) na -78 °C se dodaje kanilom u kapima. Posle 30 min, rastvor triazil-azida (576 mg, 1.86 mmol) u THF (5 mL) na -78 °C se doda kanilom. Tri minuta kasnije, reakcija se prekida dodatkom AcOH (0.41 mL, 7.13 mmol) i reakciona smeša se greje na 30 °C tokom2 h. Posle hlađenja, smeša se sipa u slani rastvor. Vodeni sloj se ekstrahuje tri puta sa DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko MgS04, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Sirovi material je prečišćen hromatografijom na silika gelu (4% do 25% EtOAc/Hex) dajući azid D4-7 (367 mg). LCMS-ESI<+>
( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C18H21N4O3: 341.16; nađeno: 341.10.
Korak 8. Dobijanje D4-8: Azid D4-7 (367 mg, 1.08 mmol) u di-terc-butil dikarbonatu (471 mg, 2.16 mmol) se rastvori u EtOAc (20 mL). 10% Pd/C (197 mg) se dodaje u atmosferi H2. Suspenzija se meša pod 1 atm H2tokom 20 h, tada filtrira preko Celite i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (15% do 30% EtOAc/Hex) dajući D4-8 (376 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M-(/-Bu)+H]<+>izračunato za C19H23N2O5: 359.16; nađeno: 359.43.
Koraci 9 i 10. Dobijanje D4-9: Karbamat D4-8 (376 mg, 0.907 mmol) je rastvoren u THF (9 mL) i ohlađen na 0 °C. H2O2(30% u H20, 0.463 mL, 4.54 mmol) i LiOH (1 M in H20, 2.7 mL, 2.7 mmol) se dodaju. Reakcija se meša na 0 °C tokom 2 h i onda koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni koncentrat se sipa u H2O i vodeni rastvor se ispere dva puta sa Et20, onda zakiseli do pH 1-2 i tri puta ekstrahuje sa DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko MgS04, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi ostatak je rastvoren u DCM (8 mL) i MeOH (1 mL) i tretiran sa trimetilsilildiazometanom (2 M u heksanu, 0.9 mL, 1.8 mmol). Posle mešanja tokom 40 min na rt, reakcija se prekida dodatkom 10% AcOH/MeOH i koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (4% do 25% EtOAc/Hex) dajući D4-9 (167 mg).<*>H NMR (400 MHz, CDCb) 5 4.98 (d,J=7.8 Hz, 1 H), 4.22 (t,J=7.0 Hz, 1 H), 3.70 (s, 3H), 1.89 (m, 1 H), 1.77-1.46 (m, 4H), 1.42 (s, 9H), 1.22 (m, 2H), 0.28 (dd, J = 7.2 Hz, 13.3 Hz, 1 H), 0.13( d, J=3.7 Hz, 1 H).
Korak 11. Dobijanje D4-10: Karbamat D4-9 (223 mg, 0.828 mmol) je rastvoren u DCM (4 mL) i tretiran sa HC1 (4.0 M u dioksanu, 1 mL, 4.0 mmol). Posle mešanja na rt tokom 17 h, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom dajući amin hidrohloridnu so D4-10, koja se dalje koristi bez prečišćavanja. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C9H16NO2: 170.12; nađeno: 170.04.
Koraci 12 i 13. Dobijanje Intermedijera D4: Amin hidrohloridna so D4-10 (0.828 mmol, teorijski) u H2O (1.4 mL) se tretira sveže pripremljenim rastvorom Dl-6 (1.35 mmol) u DMF (1.4 mL). K3PO4(703 mg, 3.31 mmol) se doda i reakciona smeša se meša 2h na rt. Posle razblaživanja sa EtOAc, organski slojevi se isperu 10% rastvorom HC1 i slanim rastvorom, suše preko MgS04, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0% do 25% EtOAc/Hex) dajući očekivani karbamat (239 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C18H28NO4: 322.20; nađeno: 323.00. Ovaj materjial (239 mg, 0.744 mmol) je rastvoren u MeOH i tretiran sa LiOH (1.0 M u H2O, 5.0 mL, 5.0 mmol). Posle mešanja tokom 1 h na rt, MeOH je uklonjen pod sniženim pritiskom. Vodeni rastvor se zakiseli do pH 1-2 sa 10% vodenim rastvorom HC1 i tri puta ekstrahuje sa DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko MgS04, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom dajući Intermedijer D4 (229 mg). LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C17H26NO4: 308.2; nađeno: 307.9.
Dobijanje Intermedijera D5.
[0146]
[0147]Intermedijer D5 je pripremljen prema postupku navedenom u Li, H., et al. Svnlett 2011, 10, 1454.
Dobijanje Intermedijerne smeše D6.
[0148] Korak 1. Dobijanje dijastereomerne karbamatne smeše D6-1: Intermedijer C2 (1.34 g, 6.31 mmol), (±)-trans-l-metil-2-(pent-4-enil)ciklopropanol (590 mg, 4.208 mmol; dobijen prema propisu za Intermedijer C3, WO2011014487, str. 36), DMAP (514 mg, 4.21 mmol), i D1PEA (2.93 mL, 16.83 mmol) se pomešaju u toluenu (14 mL). Reakcija se zagreva na 90 °C tokom 18 h. Reakciona smeša se razblaži sa Et20 (25 mL) i 1 N vodenim rastvorom HC1 (75 mL), dobro promeša, i ukloni organski sloj. Vodeni sloj se tri puta ekstrahuje etrom (50 mL), organski delovi pomešaju, isperu slanim rastvorom, suše preko MgS04, filtriraju, i koncentruju da bi dali sirovo ulje, koje je prečišćeno hromatografijom na silika gelu dajući 1:1 dijastereomernu smešu D6-1 kao bistro ulje (820 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+Na]<+>izračunato za C2oH35NNa04: 376.3; nađeno: 376.2.
Korak 2: Dobijanje dijastereomerne Intermedijerne smeše D6. Dijastereomerna smeša D6-1 se razmuti u DCM (2 mL) i tretira sa TFA (2 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 1.5 h, reakciona smeša se koncentrujein vacuoi ispari zajedno sa hloroformom u više ponavljanja da bi se uklonio ostatak TFA i prečisti hromatografijom na silika gelu dajući 1:1 dijastereomernu smeša Intermedijera D6 u obliku braon ulja. (536 mg). LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+Na]<+>izračunato za Ci6H27NNa04: 320.2; nađeno: 320.1.
Dobijanje Intermedijera D7.
[0149]
[0150]Korak 1. Dobijanje D7-1: (lR,2R)-l-metil-2-(pent-4-enil)ciklopentanol (220.9 mg, 1.313 mmol; dobijen prema propisu za Intermedijer B26, Internacionalna patentna prijava sa brojem objave WO 2008/057209 (u daljem tekstu "WO '209"), str. 45) i Intermedijer Cl (337.1 mg, 1.969 mmol) se tretiraju sa DIPEA (0.91 mL, 5.252 mmol) i DMAP (160.4 mg, 1.313 mmol) u toluenu (4.4 mL). Smeša se zagreva na 85 °C tokom 21 h. Rastvor je razblažen sa etrom (80 mL). Rastvor je ispran sa IN vodenim rastvorom HC1 (30 mL) i slanim rastvorom (30 mL). Dobijeni organski sloj se suši preko NaiSCU. Posle uklanjanja sušila ceđenjem, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (13% etil-acetat u heksanu) dajući D7-1 (249.5 mg, 0.735 mmol) kao bezbojno ulje. 'H NMR (300 MHz, CDCb, rotameri izraženi kao ukupna H vrednost x prisutna frakcija) 8 5.76-5.92 (m, 1 H), 5.12 (d,J=9.6 Hz, 1 H), 5.02(d, J=16.8 Hz, 1 H), 4.96( d, J=9.6 Hz, 1 H), 4.13(d, J=9.6 Hz, 1 H), 3.81 (s, 3 x4/10H), 3.73 (s, 3 x 6/10H), 1.80-2.15 (m, 7H), 1.04-1.74 (m, 6H), 1.36 (s, 3H), 1.04 (s, 9 x 4/10H), 0.97 (s, 9 x 6/10H). Korak 2. Dobijanje Intermedijera D7: Estar D7-1 (249.5 mg, 0.735 mmol) je tretiran sa 2 M vodenim rastvorom LiOH (2 mL, 4.0 mmol) u MeOH/THF (4 mL/4 mL) na rt tokom 25 h. Reakciona smeša je onda tretirana sa 1 N vodenim rastvorom HC1 (5 mL) i vodenim slani rastvor (25 mL) blago zakišeljenja. Smeša se ekstrahuje tri puta sa CH2CI2(30 mL). Organski sloj se ispere vodenim slanim rastvorom (30 mL). Dobijeni organski sloj suši preko Na2S04. Nakon uklanjanja sredstva za sušenje filtriranjem, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom dajući Intermedijer D7 (191.2 mg, 0.587 mmol) u obliku bezbojnog ulja koje se dalje koristi bez prečišćavanja. NMR (300 MHz, CDCb) 8 9.00 (br s, 1 H), 5.72-5.90 (m, 1 H), 5.12 (d,J =9.6 Hz, 1 H), 5.00 (d,J =16.8 Hz, 1 H), 4.94(d, J=9.6 Hz, 1 H), 4.13( d, J=9.6 Hz, 1 H), 1.80-2.16 (m, 7H), 1.04-1.74 (m, 6H), 1.35 (s, 3H), 1.02 (s, 9H).
Dobijanje Intermedijerne smeše D8.
[0151] Korak 1. Dobijanje D8-2: U rastvor Intermedijera D8-1 (500 mg, 3.24 mmol, pripremljenom prema WO '209, str. 36) u DCM (6.65 mL) dodat je Dess-Martin perjodinan (1.37 g, 3.24 mmol) na rt u atmosferi argona. Posle 6 h, reakciona smeša se procedi preko Celita i direktno prečisti na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan gradjient) dajući keton D8-2 (252 mg) kao bezbojnu tečnost. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 5.81 (ddt,J=16.9, 10.2, 6.6 Hz, 1 H), 5.05 - 4.92 (m, 2H), 2.38 - 1.93 (m, 7H), 1.87 - 1.68 (m, 2H), 1.60 - 1.37 (m, 3H), 1.35 - 1.20 (m, 1 H). Korak 2. Dobijanje dijastereomerne smeše D8-3: U rastvor ketona D8-2 (385 mg, 2.53 mmol) i TMSCF3(749 uL, 5.07 mmol) u THF (2.3 mL) dodat je CsF (7.0 mg, 46 umol) na rt u atmosferi argona. Posle 2.5 h, reakciona smeša je razblažena vodom (10 mL) i dobijena smeša dva puta ekstrahovana sa DCM (10 mL). Kombinovani organski slojevi se suše preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrujuin vacuo.Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan gradjient) dajući silil etar D8-3 (714 mg, 1:1 dijastereomerna smeša) kao bezbojna tečnost. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 5.67 (ddt,J=13.3, 10.1, 6.7 Hz, 1 H), 4.91 - 4.76 (m, 2H), 2.02 - 1.00 (m, 13H), 0.00 (s, 9H). Korak 3. Dobijanje dijastereomerne smeše D8-4: U rastvor D8-3 (700 mg, 2.38 mmol) u THF (11.9 mL) dodat je TBAF (1 M u THF, 2.38 mL, 2.38 mmol) na rt u atmosferi argona. Posle 30 min, reakciona smeša je razblažena sa dihlorometanom (100 mL). Dobijena smeša se ispere zasićenim vodenim rastvorom natrijum-bikarbonata (75 mL), suši preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrujein vacuo.Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan gradijent) dajući alkohol D8-4 (418 mg, 1:1 dijastereomerna smeša) u obliku bezbojne tečnosti. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 5.81 (dt,/=16.8, 6.6 Hz, 1 H), 5.09 - 4.88 (m, 2H), 2.20 - 1.91 (m, 4H), 1.86 - 1.08 (m, 10H). Korak 4. Dobijanje diastereomerne smeše D8-5: Rastvor od D8-4 (380 mg, 1.72 mmol), Intermedijera Cl (295.7 mg, 1.72 mmol), DIPEA (1.20 mL, 6.88 mmol), i DMAP (210 mg, 1.72 mmol) u toluenu (8.6 mL) se zagreva na 85 °C u atmosferi argona. Posle 20 h, reakciona smeša se ohladi do rt i razblaži sa etil-acetatom (100 mL). Dobijena smeša se ispere sa rastvorom IN HC1 (50 mL), zasićenim vodenim rastvorom natrijum-bikarbonata (50 mL), i slanim rastvorom (50 mL). Organski sloj se suši preko anhidrovanog natrijum-sulfata i onda se koncentrujein vacuo.Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan gradijent) dajući karbamat D8-5 (550 mg, 1:1 dijastereomerna smeša) kao bezbojno ulje. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 5.81 (ddt, J= 16.7,9.8, 6.6 Hz, 1 H), 5.37 (d, J= 9.4 Hz, 1 H), 5.06 - 4.89 (m, 2H),4.16 - 4.07 (m, 1 H), 3.75 (s, 3H), 2.84 - 2.29 (m, 2H), 2.27 - 1.89 (m, 3H), 1.85 - 1.12 (m, 8H), 0.98 (s, 9H). Korak 5. Dobijanje dijastereomerne smeše Intermedijera D8: U rastvor karbamata D8-5 (500 mg, 1.27 mmol) u DCE (6.4 mL) dodat je trimetilkalaj-hidroksid (2.30 g, 12.7 mmol) na rt u atmosferi argona, i dobijena smeša zagrejana na 65 °C. Nakon 21 h, reakciona smeša se ohladi do rt i razblaži se rastvorom IN HC1 (50 mL). Dobijena smeša se ekstrahuje etil-acetatom (2*50 mL). Kombinovani organski ekstrakti se suše anhidrovanim natrijum-sulfatom i koncentrujuin vacuodajući Intermedijer D8 (575 mg, 1:1 dijastereomerna smeša) kao bezbojno ulje, koji se koristi bez daljeg prečišćavanja. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 5.90 - 5.71 (m, 1 H), 5.32 (d,J =9.3 Hz, 1 H), 5.07 - 4.89 (m, 2H), 4.16 (d,J =9.8 Hz, 1 H), 2.83 - 2.30 (m, 2H), 2.27 - 1.87 (m, 3H), 1.83 - 1.12 (m, 8H), 1.04 (s, 9H).
Dobijanje Intermedijera smeša D9 i DIO.
[0152]
[0153]Koraci 1 i 2: Dobijanje racemata D9-1: Metalni magnezijum (1.32 g, 54.3 mmol) se stavi u dvogrli balon opremljen refluks kondenzatorom i ispere argonom. Doda se THF (42 mL), a zatim jod (ca. 5 mg). Suspenzija se zagreje na 45 °C uz mešanje i doda se 5-brompent-l-en (1.2 g, 8.1 mmol) u jednoj porciji. Posle mešanje nekoliko minuta, još 5-brompent-l-en (5.5 g, 37 mmol) je dodat brzinom dovoljnom da se održi umereni refluks. Dobijena smeša se meša na 50 °C tokom 15 min i onda ohladi do ambijetalne temperature i odmah koristi u sledećem koraku. Suspenzija Cul (630 mg, 3.3 mmol) u THF (24 mL) pod argonom je ohlađena -5 °C. Alikvot od pent-4-enilmagnezijum bromida (ca. 0.95 M, 20 mL, 19 mmol) dobijen u Koraku 1 se dodaje tokom 5 min, i dobijena smeša meša dodatnih 15 min. Reakciona smeša se onda ohladi -20 °C, i (±)-egzo-2,3-epoksinorbornan (1.5 g, 14 mmol) se dodaje u obliku rastvora u THF (5 mL) tokom 1 min. Dve dodatne porcije THF-a (2.5 mL each) se koriste da bi se kompletirao prenos, i smeša meša tokom 20 min. Reakcija se skine sa hladnog kupatila i zagreva do sobne temperaure. Nakon mešanja dodatnih 1.75 h, reakcija se prekida zasićenim vodenim rastvorom NH4CI (5 mL) i procedi se sa EtOAc (100 mL) i H2O (100 mL) preko Celita. Faze su odvojene i organska faza je osušena preko Na2S04, filtrirana, i koncentrovana dajući (±)-D9-1 u obliku bezbojnog ostatka (813 mg). 'H NMR (300 MHz, CDCb) 8 5.90 - 5.67 (m, 1 H), 5.04 - 4.86 (m, 2H), 3.12 (s, 1 H), 2.20 - 1.92 (m, 5H), 1.69 - 1.57 (m, 1 H), 1.55 - 1.12 (m, 9H), 1.03 - 0.84 (m, 1 H). Korak 3. Dobijanje dijastereomerne Intermedijerne smeše D9 i DIO: Smeša alkohola (±)-D9-l (813 mg, 4.51 mmol) je rastvorena u DMF (4.5 mL). Piridin (370 uL, 4.5 mmol) je dodat, a zatim i DSC (1.5 g, 5.8 mmol). Reakciona smeša je zagrejana do 45 °C i mešana tokom 4 h. Reakciona smeša se onda ohladi na 0 °C i voda (4.5 mL) se dodaje u kapima tokom 2 min. Reakciona smeša se meša tokom 5 min i ukloni sa vodenog kupatila. Posle dodatnih 5 min, reakciona smeša se uhladi na 0 °C i L-terc-leucin (835 mg, 6.37 mmol) i K3PO4(2.70 g, 12.7 mmol) se dodaju. Smeša se meša tokom 10 min a onda ukloni sa hladnog kupatila. Posle mešanja tokom 24 h, the smeša se razblaži sa EtOAc (30 mL), zakiseli vodeni rastvorom 1 M HC1 (15 mL), i razblaži vodenim rastvorom 0.2 M HC1 (15 mL). Faze se odvoje, i organska faza se ispere sa vodenim rastvorom 0.2 M HC1 (2 x 20 mL), suši preko Na2S04, filtrira, i koncentruje dajući dijastereomernu smešu Intermedijera D9 i DIO (1.64 g). LCMS-ESr( m/ z) :[M-H]" izračunato za C19H30NO4: 336.2; nađeno: 336.0.
Dobijanje Intermedijera Dl 1.
[0154]Korak 1. Dobijanje Dl 1-1: U smešu Dl (1.0 g, 3.53 mmol), natrijum-perjodata (2.26 g, 10.59 mmol) u 24 mL THF i 12 mL vode doda se Os EnCat™ 40 (0.25 mmol/g punjenja, 282 mg, 0.071 mmol, Sigma-Aldrich). Smeša se meša 3 dana. Voda (50 mL) se doda i smeša se procedi. Kolač od taloga se ispere vodom (ukupna zapreina 400 mL) i etil-acetatom (ukupna zapremina 600 mL). Filtratni slojevi se odvoje. Organska faza se suši preko natrijum-sulfata, filtrira i koncentruje dajući Dl 1-1 (1.56 g) koji se koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :
[M+H]<+>izračunato za Ci4H24N05: 286.2 nađeno: 286.1.
Korak 2. Dobijanje Dl 1-2: U rastvor Dl 1-1 (3.05 g, 10.7 mmol) u MeOH (50 mL) na 0 °C doda se natrijum-borohidrid u porcijama (809 mg, 21.4 mmol). Reakciona smeša se meša na rt tokom 6 h. Smeša je razblažena sa 50 mL etil-acetata i 50 mL slanog rastvora i razdvojeni su slojevi. Organska faza se ekstrahuje sa 2 porcije 25 mL etil-acetata. Kombinovane organske faze se suše preko natrijum-sulfata, cede i koncentruju. Smeša sirovog proizvoda se prečisti hromatografijom na silika gelu (EtOAc u heksanu: 10% do 100%) dajući Dl 1 -2 (380 mg). LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za Ci4H26N05: 288.2; nađeno: 288.1.
Korak 3. Dobijanje Intermedijera Dl 1: U rastvor Dl 1-2 (283 mg, 0.98 mmol) u THF (2.8 mL) na 0 °C dodat je l-nitro-2-selenocijanatobenzen (336 mg, 1.47 mmol) i tributilfosfina (363 uL, 1.47 mmol). Kupatilo za hlađenje je sklonjeno i smeša se meša tokom 25 minutes na rt. Reakciona smeša se opet ohladi na 0 °C i onda tretira sa 30% vodonik-peroksida (0.665 mL, 5.85 mmol) i meša tokom 1 h na rt i onda zagreje na 60 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i željeni proizvod je ekstrahovan vodenim rastvorom natrijum-bikarbonata. Bikarbonatni ekstrakt je zakišeljen sa 2N HC1 i ekstrahovan etil-acetatom. Organska faza se suši preko natrijum-sulfat i koncentruje dajući Intermedijer Dl 1 (136 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C14H24NO4: 270.2; nađeno: 270.1.
Dobijanje smeše Intermedijera D12 and D13.
[0155] Korak 1: Dobijanje D12-1: U rastvor K2O2O7(121 g, 0.41 mol) u H2O (1.5 L) u kapimaje dodata H2SO4(143 g, 1.46 mol) na rt i smeša je mešana tokom 1 h. Smeša se onda ohladi na 0 °C i D4-1 (80 g, 0.814 mol; dobijeno prema delu A, Intermedijera 1 u US '491, str. 192.) u MTBE (1.5 L) se doda u kapima. Reakciona smeša se meša na rt tokom 2 h. Vodena faza se ekstrahuje sa MTBE (3 x 500 mL), suši preko MgS04, filtrira i koncentrujein vacuo.Sirovi prozvod se prečisti destilacijom (20 mmHg, tk: 60 - 62 °C) dajući Dl 2-1 kao svetio žutu tečnost (60 g). 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 2.57 - 2.63 (m, 2H), 2.14 - 2.19 (d,J=20 Hz, 2H), 1.52 - 1.57 (m, 2H), 0.89 - 0.94 (m, 1 H), -0.05 - -0.02 (m, 1 H).
Korak 2: Dobijanje (±)-D12-2: Pod Ar, smeša THF (4.4 mL) i HMPA (1.8 mL) se ohladi
-78 °C. 1 M rastvor LiHMDS u THF (2.2 mL, 2.2 mmol) se doda. Keton D12-1 (202 mg, 2.10
mmol) se doda kao rastvor u THF (2 mL) tokom 1 min, ispirajući sa dodatnim THF (2x1 mL) da bi se obezbedilo potpuno prenošenje. Nakon 25 min, 5-jodopent-l-en (dobijen prema Jin, J. et. al. J. Org. Chem. 2007, 72, 5098-5103) (880 mg, 4.5 mmol) se dodaje špricem tokom 30 s. Posle 10 min, reakcija se stavi na hladno kupatilo na -45 °C i zagreva na -30 °C tokom 1.5 h. Reakcija se prekida zasićenim vodenim rastvor NH4CI (15 mL) i razblaži sa EtOAc (30 mL) i H2O (15 mL). Faze se odvoje i vodena faza ekstrahuje sa EtOAc (30 mL). Kombinovani organski delovi se suše preko Na2S04, filtriraju i koncentruju, dajući sirovi ostatak koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0% do 15% EtOAc u heksanu) dajući (+/-) -D12-2 bezbojno ulje.(162 mg). 'H NMR (400 MHz, CDCb) 5.82 - 5.67 (m, 1 H), 5.03 - 4.87 (m, 2H), 2.61 - 2.51 (m, IH), 2.11 (d, /= 19.1 Hz, 1 H), 2.08 - 1.99 (m, 3H), 1.61 -1.40 (m, 5H), 1.36 - 1.28 (m, 1 H), 0.92 - 0.81 (m, 1 H), -0.03 --0.11 (m, 1 H). Korak 3: Dobijanje (±)-D12-3 i (±)-D12-4: Rastvor od (±)-D12-2 (142 mg, 0.865 mmol) u THF (4 mL) se ohladi na -78 °C. 1 M rastvor LiBHEb u THF (1.3 mL, 1.3 mmol) se dodaje u kapima tokom 30 s. Reakcija se meša tokom 15 min a onda ukloni sa hladnog kupatila. Nakon zagrevanja do rt (15 min), reakcija se prekida zasićenim vodenim rastvorom NH4CI (1 mL). Dobijena smeša se razblaži Et20 (20 mL) i H2O (20 mL). Faze se odvoje i vodena faza ekstrahuje sa Et20 (20 mL). Kombinovane organske faze se suše preko MgS04, filtriraju i koncentruju do sirovog ostataka. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (0% do 10% EtOAc u heksanu) dalo je 133 mg smeše diajstereomera (±)-D12-3 i (±)-D12-4. Kombinovani materijal iz dva eksperimenta (253 mg) dalje je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0% do 15% EtOAc u heksanu) dajući (±)-D12-3 (150 mg) i (±)-D12-4 (58 mg) bezbojnog ulja. 'H NMR for (±)-D12-3 (300 MHz, CDCb) 8 5.91 - 5.69 (m, 1 H), 5.07 - 4.88 (m, 2H), 3.97 (d,J=6.7 Hz, 1 H), 2.19 - 1.99 (m, 3H), 1.84 - 1.73 (m, 1 H), 1.62 (d,J=14.1 Hz, 1 H), 1.54 - 1.40 (m, 2H), 1.32 - 1.17 (m, 3H), 1.16-1.06 (m, 1 H), 0.60 - 0.43 (m, 2H). 'H NMR for (±)-D12-4 (300 MHz, CDCb) 8 5.95 - 5.73 (m, 1 H), 5.09 - 4.88 (m, 2H), 4.05 - 3.86 (m, 1 H), 2.17 -1.84 (m, 4H), 1.72 - 1.34 (m, 5H), 1.28 - 1.08 (m, 3H), 0.49 - 0.36 (m, IH), 0.21 - 0.11 (m, 1 H).
Korak 4: Dobijanje dijastereomerne smeše Intermedijera D12 i D13: Smeša (±)-D12-3 (150 mg, 0.90 mmol) je rastvorena u DMF (1.0 mL). Piridin (75 uL, 0.92 mmol) i DSC (302 mg, 1.18 mmol) se dodaju, i reakciona smeša meša na 45 °C tokom 21.5 h. Reakcija se stavi na ledeno kupatilo i dodaje se H2O (1.0 mL) u kapima pomoću šprica tokom 1 min. Smeša se ukloni sa hladnog kupatila i meša tokom 5 min. Smeša se ponovo ohladi na ledenom kupatilu i doda se L-terc-leucin (154 mg, 1.17 mmol), a onda K3PO4(502 mg, 2.36 mmol). Reakciona smeša se ukloni sa hladnog kupatila i meša na rt tokom 24 h. Smeša se onda razblaži sa EtOAc (40 mL) i 1 M vodenim rastvorom HC1 (20 mL). Faze se odvoje, i vodena faza ekstrahuje sa EtOAc (30 mL). Kombinovane organske faze se isperu sa 0.2 M rastvorom HC1 (2 x 20 mL), suše preko MgS04, filtriraju, i koncentruju dajući dijastereomernu Intermedijernu smešu D12 i D13 (300 mg) u obliku bezbojnog ulja. LCMS-ESI"( m/ z) :[M-H]" izračunato za C18H28NO4: 322.2; nađeno: 322.0).
Dobijanje Intermedijera D12.
[0156J
Korak 1: Dobijanje D12-5: U rastvor (lS,4R)-cis-4-acetoksi-2-ciklopent-l-ol (Aldrich, 10 g, 70.4 mmol), trietilamin (48.8 mL, 350 mmol), i DMAP (4.29 g, 35.2 mmol) u dihlorometanu (352 mL) se doda pivaloil-hlorid (10.8 mL, 87.75 mmol) u kapima špricem na 0 °C u atmosferi argona. Posle 2 h, reakciona smeša se razblaži zasićenim vodenim rastvorom natrijum-bikarbonata (500 mL), i ekstrahuje dihlorometanom (2 x 500 mL). Kombinovani organski ekstrakti se suše preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrujuin vacuodajući D12-5 (15.0 g) u obliku bezbojnog ulja. 'H NMR (300 MHz, CDCb) 5 6.08 (br s, 2H), 5.54 (td,J=8.0, 4.1 Hz, 2H), 2.88 (dt,J=14.9, 7.5 Hz, 1 H), 2.07 (s, 3H), 1.69 (dt,J=14.7, 4.1 Hz, 1 H), 1.20 (s, 9H). Korak 2: Dobijanje D12-6: U rastvor D12-5 (15.0 g, 70.4 mmol) u metanolu (352 mL) doda se kalijum-karbonat (9.73 g, 70.4 mmol) na rt u atmosferi argona. Posle 5 h, reakciona smeša se procedi i koncentrujein vacuo.Ostatak se rastvori u etil-acetatu (500 mL) i dobijena smeša ispere vodom (500 mL) i slanim rastvorom (500 mL), suši preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrujein vacuo.Sirovi proizvod se prečisti hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan) dajući D12-6 (12.0 g) kao bezbojno ulje. 'H NMR (300 MHz, CDCb) 8 6.11 (br d,J=5.5 Hz, 1 H), 5.97 (brd, J=5.6 Hz, IH), 5.48 (br s, IH), 4.73 (br s, IH), 2.82 (dt,J=14.6, 7.3 Hz, IH), 1.67 (s, IH), 1.61 (dt,/= 14.5, 4.0 Hz, IH), 1.20 (s,/=3.8Hz, 9H).
Korak 3: Dobijanje D12-7: U rastvor bakar(I)-cijanida (5.10 g, 57.0 mmol) u dietiletru (95 mL) doda se pent-4-enilmagnezijumbromid (Novel Chemical Solutions, 0.5 M u THF, 114 mL, 57.0 mmol) u kapima kanilom tokom 30 min na 0 °C u atmosferi argona. Posle 10 min, rastvor D12-6 (3.50 g, 19.0 mmol) u dietiletru (10 mL) se kanilom polako doda. Reakciona smeša se pusti da se polako zagreje do rt. Posle 16 h, reakcija se prekida zasićenim vodenim rastvorom amonijum-hlorida (400 mL) i rezultujuća smeša ekstahuje u etil-acetatu (2x400 mL). Kombinovane organske faze se isperu slanim rastvorom (400 mL), suše preko anhidrovanog natrijum-sulfata, i koncentrujuin vacuo.Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan) dajući D12-7 (2.4 g) u obliku bezbojnog ulja. 'H NMR (400 MHz, CDC13) 8 5.80 (ddt,J=16.9, 10.2, 6.7 Hz, 1 H), 5.69 (dd,J=5.8, 1.7 Hz, IH), 5.65 (d, / = 7.2 Hz, IH), 5.00(dd, J= 17.1,1.3 Hz, IH), 4.94(d, J=10.2 Hz, IH), 4.12 - 4.05 (m, IH), 2.69 (ddd,/= 17.2, 6.4, 1.5 Hz, IH), 2.54 - 2.45 (m, 1 H), 2.24 (d, /= 17.2 Hz, 1 H), 1.69 (br s, 1 H), 1.52-1.19 (m, 6H).
Korak 4: Dobijanje (lS,2R,3R,5S)-D12-3: U rastvor D12-7 (20 mg, 0.13 mmol), i dietilcinka (1 M u heksanu, 132 uL, 0.132 mmol) u dietiletru (0.66 mL) se doda dijodometan (21 uL, 0.26 mmol) na rt u atmosferi argona. Posle 2 h, reakciona smeša se prekida IN vodenim rastvorom HC1 (0.66 mL). Posle 5 min, rezultujuća žuta smeša se razblaži sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum-bikarbonata (5 mL) i dobijena smeša ekstrahuje dihlorometanom (3x5 mL). Kombinovani organski ekstrakti se suše preko anhidrovanog natrijum-sulfata, i rastvor koncentrujein vacuo.Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan) dajući (lS,2R,3R,5S)-D12-3 (10 mg) kao bezbojno ulje. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 5.83 (ddt,J=16.9, 10.2, 6.7 Hz, 1 H), 5.02 (d,J=17.2 Hz, 1 H), 4.96 (d,J=11.3 Hz, 1 H), 4.00(d, J=6.7 Hz, 1 H), 2.19 - 2.02 (m, 3H), 1.82 (t, /= 7.2 Hz, 1 H), 1.64 (d, /= 14.2 Hz, 1 H), 1.55 - 1.42 (m, 2H), 1.38 - 1.20 (m, 4H), 1.19 - 1.08 (m, 1 H), 0.62 - 0.47 (m, 2H).
Korak 5: Dobijanje Intermedijera Dl2: Alkohol (lS,2R,3R,5S)-D12-3 (0.450 g, 2.7 mmol) je razmućen u DMF (2.7 mL) i tretiran, redom, sa DSC (0.92 g, 3.52 mmol) i piridinom (0.22 mL, 2.8 mmol). Reakcija se onda greje na 50 °C tokom noći. Reakciona smeša se onda ohladi na 0 °C i voda (5.5 mL) dodaje u kapima tokom 1 min. Dobijena mutna suspenzija se meša na rt tokom 10 min pre ponovnog hlađenja na 0 °C. Reakciona smeša se onda redom tretira sa L-terc-leucinom (0.462 g, 3.5 mmol) i K3PO4(1.5 g, 7.0 mmol) i pusti da se zagreje do rt preko noći uz intenzivno mešanje. Rezultujuća mutna suspenzija se razblaži sa EtOAc i 1 M vodenim rastvorom HC1. Dodatni HC1 (12 M) se doda u kapima radi podešavanja na pH~3. Vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc i kombinovani organski slojevi isperu slanim rastvorom i suše preko anhidrovanog MgS04. Nakon koncentrovanjain vacuo,Intermedijer D12 je dobijen (1.72 g) kao viskozno bezbojno ulje onečišćeno sa malom količinom DMF i EtOAc. Materijal je korišćen za dalje reakcije bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C18H30NO4: 324.2; found 324.7.
Dobijanje Intermedijera D14.
[0157]
[0158]Korak 1. Dobijanje Intermedijera D14. Karbonat Dl-6 (862 mg, 3.23 mmol) je tretiran sa hidrohloridom (S)-2-amino-2-(l-metilciklopentil)acetatne kiseline (750 mg, 3.87 mmol; dobijenom prema Robi, J.A., et al. J. Med. Chem., 2004, 47, 2587), THF (28 mL), H20 (8.4 mL) i TEA (1.4 mL, 9.7 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 16 h i THF je uklonjenin vacuo.Preostali materijal je razblažen H20 i pH podešen na~10-12 dodatkom 10% vodenog rastvora NaOH. Vodena faza je isprana dva puta sa EtOAc i onda zakišeljena do pH - 1-2 pomoću 10% vodenog rastvora HC1. Kiseli rastvor se ekstrahuje 3x sa EtOAc. Kombinovani ekstrakti se suše preko anhidrovanog MgS04, filtriraju i koncentrujuin vacuo.Polazna EtOAc ispiranja (od baznog vodenog rastvora) su isprana sa 10% vodenim rastvorom HC1, osušena preko MgS04, filtrirana i koncentrovanain vacuo.Kombinovani koncentrati se prečišćavaju hromatografijom na silika gelu (50% do 100% EtOAc/Heksan) dajući Intermedijer D14 (980 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za Ci7H28N04: 310.2; found 310.0.
Dobijanje Intermedijerne smeše Dl5.
[0159] Korak 1. Dobijanje (±)-D15-l: U rastvor titan(IV)-izopropoksida (11.3 g, 40.0 mmol) u THF (160 mL) dodat je metil magnezijum bromid (3 M u Et20, 20 mL, 60.0 mmol) u kapima, špricem, na rt u atmosferi argona. Posle 10 min, reakciona smeša se ohladi na 0 °C i rastvor metil-propionata (3.80 mL, 40.0 mmol) u THF (10 mL) je polako dodat špricem. Posle 5 min, hept-6-enilmagnezijumbromid (Novel Chemical Solutions, 0.5 M u THF, 160 mL, 80 mmol) je dodavan u kapima, preko levka za dodavanje tokom 1 h. Nakon 2.5 h, reakcija je prekinuta vodenim rastvorom 10% sumporne kiseline (100 mL) i dobijena reakciona smeša ekstrahovana dietil-etrom (2 x 200 mL). Organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovanain vacuo.Sirovi proizvod se prečisti hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan) dajući (±)-D15-l (3.03 g, 50%) u obliku bezbojnog ulja. 'H NMR (300 MHz, CDCb) 6 5.77 (ddt,J=16.9, 10.2, 6.7 Hz, 1 H), 5.03 - 4.86 (m, 2H), 2.04(q, J=6.1 Hz, 2H), 1.75 - 1.14 (m, 6H), 1.04 (t, /= 7.4 Hz, 3H), 1.01 - 0.91 (m, 1 H), 0.89 - 0.71 (m, 2H), 0.02 (t,J=5.5 Hz, 1 H).
Korak 2. Dobijanje dijastereomerne Intermedijerne smeše Dl5: Racemska alkoholna smeša (±)-D15-l (2.00 g, 13.0 mmol) je rastvorena u DMF (13.0 mL). Doda se piridin (1.05 mL, 13.0 mmol), a zatim DSC (4.00 g, 15.6 mmol). Reakciona smeša se zagreva do 50 °C i meša tokom 20 h. Reakciona smeša se onda ohladi do rt i dodaje voda (13 mL) u kapima tokom 2 min. L-terc-leucin (2.17 g, 13.0 mmol) i K3PO4(8.28 g, 39.0 mmol) se dodaju i reakciona smeša zagreje na 50 °C. Posle 5 h, pusti se da se reakciona smeša ohladi do rt i razblaži vodom (500 mL). Dobijena smeša se ispere dihlorometanom (100 mL). Vodena faza se zakiseli do pH 2 pomoću 2 N vodenog rastvora HC1, i ekstrahuje sa DCM (2 x 400 mL). Kombinovani organski ekstrakti se suše preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom dajući dijastereomernu Intermedijernu smešu D15 (4.5 g) kao svetlo-narandžasto ulje, koje je potom korišćeno bez daljeg prečišćavanja.
Dobijanje Intermedijera D16:
[0160]
[0161]Intermedijer D16 je dobijen na sličan način kao Intermedijer D12, zamenjujući but-3-enilmagnezijum bromid za pent-4-enilmagnezijum bromid u Koraku 3. LCMS-ESL( m/ z) :
[M+H]<+>izračunato za C17H28NO4: 310.2; neđeno 310.8.
Dobijanje Intermedijera D17:
[0162]
[0163]Korak 1. Dobijanje Intermedijerne smeše D17. (±)-trans-l-metil-2-(but-3-enil)ciklopropanol (900 mg,. 13 mmol), dobijen prema propisu za Intermedijer B2, Internacionalna patentna prijava sa brojem objave WO 2012/40040 (u daljem tekstu "WO '040"), str. 38, je rastvoren u DMF (6 mL). Doda se piridin (577 uL, 7.13 mmol) a zatim DSC (2.37 g, 9.27 mmol). Reakciona smeša se zagreva na 40 °C i meša tokom 18 h. Reakciona smeša se onda ohladi na 0 °C i dodaje se voda (6 mL) u kapima tokom 5 min. Reakciona smeša se meša tokom 5 min i onda ukloni sa hladnog kupatila. Nakon još 5 min, reakciona smeša se ohladi do 0 °C i dodaju se L-terc-leucin (1.21 g, 9.27 mmol) i K3PO4(4.69 g, 22.1 mmol). Smeša se meša tokom 10 min i ukloni sa hladnog kupatila. Posle mešanja tokom 6 h, smeša je razblažena EtOAc (30 mL), zakišeljena 1 M vodenim rastvorom HC1 (25 mL), i razblažena 0.2 M vodenim rastvorom HC1 (25 mL). Faze su razdvojene i organska faza isprana sa 0.2 M vodenim rastvorom HC1 (2 x 20 mL), sušena preko Na2S04, filtrirana i koncentrovana dajući dijastereomernu karbamatnu smešu D17 (2.10 g). LCMS-ESL( m/ z) :[M+Na]<+>izračunato za Ci5H25NNa04: 306.2; nađeno: 306.1.
Dobijanje Intermedijera D18:
[0164] Korak 1. Dobijanje D18-1: (Dobijenom prema WO2011013141). U rastvor (S)-4-amino-2-hidroksibutanske kiseline (15 g, 126 mmol) u metanolu (95 mL) doda se koncentrovana sumporna kiselina (8 mL) i zagreje do refluksa. Posle 18 h, rezultujuća smeša se pusti da se ohladi do sobne temperature i koncentrujein vacuo.Ostatak je razmućen u etil-acetatu (95 mL) i D18-1 se sakupi vakuum ceđenjem. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 5.69 (br s, 1 H), 4.31 (ddd,J=9.2, 8.1, 2.2 Hz, 1 H), 3.49(d, J=5.6 Hz, 1 H), 3.41(tt, J=9.2, 1.7 Hz, 1 H), 3.33 (td, J = 9.4, 6.5 Hz, 1 H), 2.81 (br s, 1 H), 2.59 - 2.48 (m, 1 H), 2.09 (dq,J=12.9, 9.1 Hz, 1 H). Korak 2. Dobijanje D18-2: U rastvor D18-1 (4.5 g, 44 mmol), 4-nitrobenzoeve kiseline (8.19 g, 49 mmol), i trifenilfosfina (22.4 g, 132 mmol) u tetrahidrofuranu (220 mL) dodaje se diizopropil azodikarboksilat (12.1 mL, 61.6 mmol) u kapima špricem na 23 °C u atmosferi argona. Posle 20 h, rezultujuća narandžasto-mutna reakciona smeša se koncentrujein vacuoi doda metanol (200 mL) a zatim kalijum-karbonat (15 g, 109 mmol) i reakcija meša na 23 °C. Posle dodatnih 5 h, smeša se razblaži sa hloroformom (200 mL) i procedi. Filtrat se koncentrujein vacuoi sirovi proizvod se razmuti u vodi (150 mL) i IN vodenom rastvoru hlorovodonične kiseline (50 mL). Vodeni sloj se ispere etil-acetatom (3x200 mL) u cilju odvajanja organskih sporednih proizvoda i koncentruje sein vacuodajući sirovi Dl8-2 koji je korišćen direktno u sledećem Koraku. 'H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 4.28 (t,J=8.4 Hz, 1 H), 3.43 - 3.20 (m, 1 H), 2.56 - 2.39 (m, 1 H), 1.96 (dq,/ = 12.7, 8.7 Hz, 1 H). Korak 3. Dobijanje D18-3: U rastvor sirovog D18-2 (5 g, 49.5 mmol) i imidazola (3.4 g, 49.5 mmol) u DMF-u (247 mL), doda se TBSCI (7.5 g, 49.5 mmol) na 0 °C u atmosferi argona. Dobijena smeša se zagreje na 23 °C. Posle 7 h, doda se redom, još imidazola (7 g, 102 mmol) i TBSCI (16 g, 106 mmol). Posle dodatnih 16 h, smeša se razblaži sa IN vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (1L) i ekstrahuje etil-acetatom (1L). Organski sloj se izdvoji, ispere slanim rastvorom (1L), suši preko anhidrovanog natrijum-sulfata, i koncentrujein vacuo.Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan gradjient) dajući D18-3. 'H NMR (300 MHz, CDCb) 8 5.99 (s, 1 H),4.26 (t,7=7.7Hz, 1 H), 3.44-3.33 (m, 1 H), 3.30 - 3.19 (m, 1 H), 2.45 - 2.29 (m, 1 H), 2.11 - 1.95 (m, 1 H), 0.91 (s, 9H), 0.02 (s, 3H), 0.00 (s, 3H). Korak 4. Dobijanje D18-4: U rastvor od D18-3 (1.00 g, 4.65 mmol), DMAP (57.8 mg, 0.465 mmol), i trietilamina (1.29 mL, 9.3 mmol) u dihlorometanu (23.3 mL) doda sedi- terc-butildikarbonat (1.5 g, 6.97 mmol) na 23 °C u atmosferi argona. After 20 h, reakciona smeša je prečišćena hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan gradijent) dajući D18-4. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 4.31(dd, J=9.4, 7.9 Hz, 1 H), 3.79 (ddd,J=11.0, 8.9, 2.2 Hz, 1 H), 3.53 - 3.41 (m, 1 H), 2.34 - 2.21 (m, 1 H), 1.92 (dq,/= 12.2, 9.2 Hz, 1 H), 1.53 (s, 9H), 0.91 (s, 9H), 0.17 (s, 3H), 0.13 (s, 3H). Korak 5. Dobijanje D18-5: U rastvor od D18-4 (700 mg, 2.22 mmol) u tetrahidrofuranu (11.1 mL) doda se pent-4-enilmagnezijum bromid (Novel Chemical Solutions, 0.5 M u 2-MeTHF, 4.89 mL, 2.44 mmol) na -78 °C u kapima, špricem, u atmosferi argona. Posle 1 h, reakcija se prekida zasićenim vodenim rastvorom amonijum-hlorida (50 mL) i pusti se da se zagreje do sobne temperature. Rezultujuća smeša se ekstrahuje etil-acetatom (2 x 100 mL), i spojeni organski ekstrakti se isperu slanim rastvorom (100 mL), suše preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrujuin vacuo.Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan gradjient) dajući D18-5. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 5.77 - 5.62 (m, 1 H), 4.95 (d,J=15.8 Hz, 1 H), 4.92 (d,/=10.2 Hz, 1 H), 4.26 (app t,J=8.4 Hz, 1 H), 3.77 - 3.69 (m, 1 H), 3.41 (td,J= 10.4, 6.7 Hz, IH), 2.48 (t,/= 7.4 Hz, 2H), 2.28 - 2.17 (m, 1 H), 1.91 - 1.78 (m, 2H), 1.77 - 1.65 (m, 1 H), 1.60(quin, J=13 Hz, 2H), 1.47 (s, 9H), 0.85 (s, 9H), 0.11 (s, 3H), 0.07 (s, 3H). Korak 6. Dobijanje D18-6: U rastvor D18-5 (740 mg, 1.92 mmol) i trietilsilana (6.10 mL, 38.4 mmol) u dihlormetanu (9.6 mL) doda se bor-trifluorid-dietileterat (308 uL, 2.50 mmol) na - 78 °C špricem u kapima u atmosferi argona. Nakon 1 h, ostavi se reakciona smeša da se zagreje do sobne temperature. Posle dodatnih 4 h, reakcija se prekida zasićenim vodenim rastvorom amonijum-hlorida (10 mL), razblaži zasićenim rastvorom natrijum-bikarbonata (50 mL). Dobijena smeša se ekstrahuje etil-acetatom (50 mL), i organski sloj suši preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrujein vacuodajući sirovi slobodni amin koji se direktno koristi u sledećem Koraku. U rastvor sirovog slobodnog amina i trietilamina (535 |uL, 3.84 mmol) u tetrahidrofuranu (9.6 mL), dodat je anhidrid sirćetne kiseline (146.5 uL, 1.55 mmol) na sobnoj temperaturi atmosferi argona. Posle 1 h, dobijena smeša se koncentrujein vacuoi sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan gradjient) dajući Dl8-6 (2:1 dijastereomerna smeša u kojoj je favorizovan željeni l-((2S,3R)-3-(terc-buti1dimeti1si11oksi)-2-(pent-4-enil)pirolidin-l-il)etanon dijastereomer). 'H NMR (400 MHz, CDCb, Sporedni dijastereomer je označen sa<*>) 8 5.80 - 5.64 (m, 1 H, IH<*>), 5.01 - 4.82 (m, 2H, 2H<*>), 4.10 (d,/=4.2 Hz, IH<*>), 4.04 (d,/=3.7 Hz, 1 H), 3.82 (dd,/= 10.3, 4.0Hz, 1 H), 3.66 - 3.56 (m, IH<*>), 3.55 - 3.29 (m, 2H, IH<*>), 3.24 - 3.16 (m, IH<*>), 2.37 - 2.25 (m, IH<*>), 2.08 - 1.88 (m, 2H, IH<*>), 2.03 (s, 3H<*>), 2.00 (s, 3H), 1.81-1.61 (m, 2H, 2H<*>), 1.50 -1.01 (m, 4H, 4H<*>), 0.85 (s, 9H<*>), 0.80 (s, 9H), 0.10 (s, 3H<*>), 0.09 (s, 3H<*>), 0.00 (br s, 6H). Korak 7. Dobijanje D18-7: U rastvor od D18-6 (338 mg, 1.08 mmol) u tetrahidrofuranu (21 mL), dodat je TBAF (1 M u tetrahidrofuranu, 21 mL, 21 mmol) na 0 °C u atmosferi argona. Posle 17 h, reakciona smeša se koncentrujein vacuoi direktno prečišćava hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan gradijent) dajući Dl8-7 (102 mg, 2:1 dijastereomerna smeša u kojoj je favorizovan željeni 1 l-((2S,3R)-3-hidroksi-2-(pent-4-enil)pirolidin-l-il)etanon dijastereomer). 'H NMR (400 MHz, CDCb Sporedni dijastereomer je označen sa<*>) 8 5.84 - 5.70 (m, 1 H, IH<*>), 5.06 - 4.91 (m, 2H, 2H<*>), 4.25 (d,/ =3.7 Hz, IH<*>), 4.20 (d,/=3.7 Hz, 1 H), 3.98 (dd,J=9.2, 4.2 Hz, 1 H), 3.76 - 3.68 (m, IH<*>), 3.67 - 3.59 (m, IH, IH<*>), 3.55 - 3.46 (m, IH, 2H<*>), 3.02 - 2.94 (m, 1 H), 2.22 - 1.85 (m, 2H, 2H<*>), 2.10 (s, 3H<*>), 2.07 (s, 3H), 1.82 - 1.59 (m, 2H, 2H<*>), 1.55 - 1.13 (m, 4H, 4H<*>). Korak 8. Dobijanje D18-8: U rastvor D18-7 (102 mg, 0.518 mmol) i piridina (8 uL, 0.104 mmol), doda se DSC (159.2 mg, 0.621 mmol) na sobnoj temperaturi, i dobijena smeša zagreje na 45 °C. Posle 16 h, pusti se reakciona smeša da se ohladi do sobne temperature i redom dodaju, voda (518 uL), L-terc-leucin (86.5 mg, 0.518 mmol), i K3PO4(330 mg, 1.55 mmol), i dobijena smeša se zagreje na 50 °C. Nakon 6 h, ostavi se reakciona smeša da se ohladi do sobne temperature, i razblaži sa IN vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (10 mL). Rezultujuća semša se ekstrahuje dihlormetanom (2 x 10 mL), i kombinovani organski ekstrakti se suše anhidrovanim natrijum-sulfatom i koncentrujuin vacuodajući D18-8 (2:1 dijastereomerna smeša u kojoj je favorizovana željena (S)-2-(((2S,3R)-l-acetil-2-(pent-4-enil)pirolidin-3-iloksi)karbonilamino)-3,3-dimetilbutanska kiselina). 'H NMR (400 MHz, CDCb, Sporedni dijastereomer je označen sa
<*>) 8 5.85 - 5.65 (m, IH, IH<*>), 5.39 (d,/=9.3 Hz, IH<*>), 5.34 (d,/ =9.2 Hz, 1 H), 5.07 - 4.87 (m, 3H, 3H<*>), 4.16 - 4.03 (m, IH, IH<*>), 3.83 - 3.45 (m, 3H, 3H<*>), 2.30 - 1.95 (m, 8H), 2.30 - 1.95 (m, 2H, 3H<*>), 1.82 - 1.65 (m, 2H, IH*), 2.11 (s, 3H), 2.09 (s, 3H*), 1.58 - 1.13 (m, 4H, 4H*), 1.01 (br s, 9H, 9H<*>).
Dobijanje Intermedijerne smeša Dl9.
[0165] Koraci 1 i 2: Dobijanje D19-1: 1.0 M THF rastvor KHMDS-a (10 mL, 10 mmol) je razblažen THF-om (10 mL) pod Ar i dobijeni rastvor je ohlađen do -78 °C u CChiacetonskom kupatilu. Biciklo[3.1.1]heptan-2-on (1.0 g, 9.1 mmol, vidi: Yin, et. al. J. Org. Chem. 1985, 50, 531) se doda kao rastvor u THF (5 mL) tokom 2 min, ispirajući dodatnim THF-om (2 x 2.5 mL) da bi se sve prenelo. Dobijena smeša se meša tokom 30 min, i 7V-(5-hloro-2-piridil)bis(trifluorometansulfonimid) (3.8 g, 9.7 mmol) se doda kao rastvor u THF-u (10 mL) tokom 2 min, ispirajući sa dodatnim THF-om (2 x 2.5 mL). Dobijena smeša meša se tokom 5 min i skloni sa hladnog kupatila. Posle mešanja tokom dodatnih 30 min, reakciona smeša je razblažena sa Et20 (70 mL) i IM vodenim rastvorom HC1 (50 mL). Razdvojene su faze, i organska faza je isprana sa IM vodenim rastvorom NaOH (2 x 30 mL). Kombinovane organske faze su osušene preko MgS04, filtrirane i koncentrovane dajući sirovi proizvod. On se procedi preko silike sa 30% EtOAc u heksanu dajući sirovi proizvod (1.24 g) koji se direktno koristi u nerednom Koraku. Korak 2: U rastvor 3-butenal dietilacetala (1.4 mL, 8.3 mmol) pod Ar ohlađenom na ledenom vodenom kupatilu dodavanje 0.5 M THF rastvor 9-borabiciklo[3.3.1]nonan (15.9 mL, 7.95 mmol) tokom 3 min. Reakcija se meša tokom 20 h, a pusti se da se ledeno kupatilo otopi preko noći. Doda se 3M vodeni rastvor NaOH (2.9 mL, 8.7 mmol) i posle mešanja 20 min, dobijeni rastvor se potpuno prenese u balon u kome se nalazi proizvod iz Koraka 1 (ca. 5.16 mmol) i PdCb(dppf) CH2Cl2 (420 mg, 0.51 mmol). Rezultujuća smeša se zagreje na 60 °C. Posle mešanja 14 h, reakciona smeša je razblažena sa Et20 (50 mL) i H2O (50 mL). Faze se razdvoje, i organska faza suši preko MgS04, filtrira, i koncentruje. Prečišćavanjem hromatografijom na silika gelu (0% do 10% EtOAc u heksanu nakon prethodnog ekvilibrisanja sa 1% Et3N u EtOAc) dobijen je Intermedijer D19-1. 'H NMR (300 MHz, CDCb) 5.36 - 5.28 (m, 1 H), 4.59(t, J=5.6 Hz, 1 H), 3.73 - 3.58 (m, 2H), 3.54 - 3.39 (m, 2H), 2.72 - 2.60 (m, 1 H), 2.45 - 2.34 (m, 3H), 2.23 - 2.08 (m, 4H), 1.89 - 1.76 (m, 2H), 1.67 (dt,/=16.1, 6.9 Hz, 2H), 1.58 - 1.47 (m, 2H), 1.23 (t,/=7.0 Hz, 6H).
Korak 3: Dobijanje D19-2: Rastvor olefina D19-1 (660 mg, 2.77 mmol) u THF (25 mL) ohlađen je na ledenom vodenom kupatilu. Doda se BH3-Me2S kao IM rastvor u CH2CI2(2.9 mL, 2.9 mmol) tokom 1 min. Dobijeni rastvor se meša tokom 2 h u ledenom vodenom kupatilu a onda ostavi da se zagreje do rt. Posle mešanja dodatnih 3 h, reakciona smeša se ponovo ohladi u ledenom vodenom kupatilu a onda razblaži 2M vodenim rastvorom NaOH (7 mL) a zatim 30 % vodenim rastvorom H202(7 mL). Dobijena smeša se meša dodatnih 16 h a pusti se da se led postepeno otopi. Smeša se onda razdvoji između Et20 (100 mL) i H2O (50 mL), razdvoje se faze, organska faza ispere 0.5 M vodenim rastvorom NaOH (50 mL). Organska faza se osuši preko MgS04, filterira, i koncentruje dajući sirovi ostatak koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu (15% do 40% EtOAc u heksanu) dajući 570 mg Intermedijera D19-2. 'H NMR (300 MHz, CDCb) 8 4.60 (t,J=5.6 Hz, 1 H), 3.76 - 3.60 (m, 3H), 3.58 - 3.42 (m, 2H), 2.39 - 2.05 (m, 4H), 1.91 - 1.48 (m, 9H), 1.43 - 1.35 (m, 1 H), 1.25 (t,J=7.0 Hz, 6H), 1.06 - 0.98 (m, 1 H).
Koraci 4 i 5: Dobijanje D19-3: Acetal D19-2 (360 mg, 1.4 mmol) je rastvoren u THF (8 mL) i H2O (2 mL)./»ara-Toluensulfonska kiselina kao monohidrat (40 mg, 0.2 mmol) je dodata i dobijeni rastvor je mešan 16 h na rt. Reakciona smeša je razblažena sa Et20 (50 mL) i H2O (30 mL) i odvojene su faze. Rastvor vodene faze je ekstrahovan pomoću Et20 (30 mL) i kombinovane organske faza su isprane zasićenim vodenim rastvorom NaHC03(15 mL). Organska faza je osušena preko MgS04, filtrirana, i koncentroavan dajući sirovi ostatak koji se odmah koristi u narednom Koraku. Korak 5: Metil trifenilfosfonjium bromid (1.66 g, 4.6 mmol) se suspenduje u THF (40 mL) pod Ar i ohladi na C02/aceton kupatilu do -78 °C. IM rastvor NaHMDS u THF-u (4.2 mL, 4.2 mmol) se u kapima doda i dobijena žuta suspenizija meša tokom 5 min. Smeša se ukloni sa hladnog kupatila i mešanje nastavi dodatnih 30 min. Smeša se onda opet ohladi do -78 °C i sirovi proizvod iz prethodnog Koraka (ca. 1.4 mmol) se dodaje kao rastvor u THF (5 mL) tokom 5 min, ispere sa dodatnim THF-om (2 x 2.5 mL) da bi se obezbedilo potpuno prenošenje. Dobijena smeša se meša tokom 5 min i stavi u ledeno vodeno kupatilo i meša dodatnih 1 h. Reakcija se prekida zasićenim vodenim rastvorom NH4C1 (20 mL), i razblaži sa Et20 (30 mL) i H2O (20 mL). Razdvoje se faze i organska faza se suši preko MgS04, filtrira, i koncentruje na 5 g silika gela. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (10% do 30% EtOAc u heksanu) daje D19-3. 'H NMR (300 MHz, CDCb) 8 6.01 - 5.81 (m, 1 H), 5.22 - 5.05 (m, 2H), 3.79 - 3.66 (m, 1 H), 2.43 - 2.25 (m, 2H), 2.24 - 2.04 (m, 4H), 1.83 - 1.16 (m, 10H).
Korak 6: Intermedijer Dl9-3 (270 mg, 1.5 mmol) je rastvoren u DMF (2.0 mL). Piridin (125 uL, 1.5 mmol) i DSC (500 mg, 1.9 mmol) su dodati i reakcija se meša na 45 °C tokom 15 h. Reakcija se onda stavi na ledeno kupatilo i dodaje se H2O (2.0 mL) u kapima tokom 30 s. Smeša se ukloni sa hladnog kupatila i meša 10 min. The smeša je ponovo ohlađena na ledenom vodenom kupatilu i L-fere-leucine (259 mg, 1.97 mmol) je dodat što je praćeno sa K3PO4(835 mg, 3.93 mmol). Reakciona smeša se skloni sa hladnog kupatila i omogući mešanje na rt tokom 5.25 h. Smeša se onda razblaži sa EtOAc (40 mL), IM vodenim rastvorom HC1 (20 mL), i H20 (15 mL). Faze se razdvoje, i vodena faza ekstrahuje EtOAc-om (30 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu 0.2 M vodenim rastvorom HCl-a (2 x 25 mL), suše preko Na2S04, filtriraju, i koncentruju dajući smešu dijastereomera D19 (505 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C19H32NO4: 338.2; nađeno: 337.8.
Dobijanje Intermedijera El.
[0166]
[0167]Intermedijer El (2-hloro-6-metoksi-3-(metilsulfonil)hinoksalin) je dobijen prema Mahata, P.K., et al. Org. Lett. 2005, 7, 2169.
Dobijanje Intermedijera E2.
[0168] Korak 1. Dobijanje E2-1: U balon sa okruglim dnom, sipa se 3-(benziloksi)anilin (4.025 g, 20.20 mmol) i l,1-bis(metiltio)-2-nitroetilen (3.338 g, 20.20 mmol) u etanolu (40 mL) i refluktuje tokom 24 h uz konstantno mešanje. Reakciona smeša se ohladi na ledenom kupatilu i razblaži etrom (150 mL). Smeša se procedi, ispere etrom dajući E2-1 (3.32 g) kao žutu čvrstu supstancu koja se direktno koristi u sledećem Koraku. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C16H17N2O3S: 317.1; nađeno: 317.1.
Korak 2. Dobijanje E2-2: U suspenziju E2-1 (3.32 g, 10.49 mmol) u 25 mL MeCN, POCh (2.93 mL, 31.5 mmol) se dodaje u kapima tokom 15 min uz konstantno mešanje. Reakciona smeša se zagreje na 80 °C i meša tokom 5 h. Reakcija se onda ohladi do ambijentalne temperature i neutrališe sa ledom ohlađenim zasićenim vodenim rastvorom NaHCCb, ekstrahuje tri puta sa CH2C12(100 mL), ispere vodom, slanim rastvorom i suši preko anhidrovanog Na2S04. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom. Sirovi materjial se eluira preko silike pomoću CH2CI2. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i čvrsta supstanca ispere sa MeCN dajući E2-2 (1.56 g)Kao belu čvrstu supstancu. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato3a C16H14CIN2OS: 317.1; nađeno: 317.3.
Korak 3. Dobijanje Intermedijera E2. Rastvor mCPBA (1.87 g, 10.83 mmol) u CH2CI2(40 mL) se u kapima doda u rastvor E2-2 (1.56 g, 4.92 mmol) u CH2CI2(40 mL) koji se meša na 0 °C tokom 30 min. Reakciona smeša onda meša na ambijentalnoj temperaturi tokom 5 h. Zatim se sipa u ledom ohlađeni zasićeni vodeni rastvor NaHC03i parcioniše pomoću CH2CI2. Organski sloje se onda redom, ispere vodom, slanim rastvorom i suši preko anhidrovanog Na2S04. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i sirovi materijal je prečišćen normalno-faznom hromatografijom sa CH2CI2kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova Intermedijer E2 u obliku svetlo-žute čvrste supstance. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C16H14CIN2O3S: 349.0; nađeno: 349.0.
Dobijanje Intermedijera E3.
[0169] Korak 1. Dobijanje E3-1: U rastvor 3-bromo-3,3-difluoroprop-l-ena (25.0 g, 159 mmol) i dietiloksalata (21.6 mL, 159 mmol) u THF (380 mL), dietiletar (90 mL) i «-pentan (90 mL) na - 100 °C se u kapima dodaje n-butllitijum (2.5 M u heksan, 67 mL, 167.6 mmol) tokom 30 min. Reakciona smeša se meša na -95 °C tokom 1 h i na -78 °C tokom 2 h, i prekida sa vodenim rastvorom NH4CI (11 g u 150 mL vode). Smeša se ekstrahuje etrom (tri puta). Organski slojevi se isperu IN vodenim rastvorom HC1, slanim rastvorom, i suše preko Na2S04, i koncentruju dajući sirovi ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc u heksanu: 0% to 40%) dajući E3-1 (7.0 g). 'H NMR (300 MHz, CDCb) 8 5.98-6.18 (m, 1 H), 5.78 (dd, J = 0.9 Hz, 13 Hz, 1 H), 5.60 (dd, J = 0.9 Hz, 11 Hz, 1 H), 4.38 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 1.37 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
Korak 2. Dobijanje E3-2 i E3-3: U rastvor E3-1 (14.0 g, 78.6 mmol) i 4-metoksibenzen-1,2-diamin dihidrohlorid (15.08 g, 71.4 mmol) u EtOH (360 mL) na rt je dodat trietilamin (19.9 mL, 142.8 mmol). Reakciona smeša se meša tokom noći na rt. Smeša se onda koncentruje. Razmućivanje u dihlormetanu (30 mL) i ceđenje daje donekle razdvajanje regioizomera sa E3-2 kao specijom koja se taloži. (16.5 g ukupnog prinosa iz filtriranja i sledstvene hromatografije). 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 11.940 (br s, 1 H), 7.850 (d, J = 9 Hz, 1 H), 6.985 (dd, J = 3 Hz, 9 Hz, 1 H), 6.754 (d, J = 2 Hz, 1 H), 6.625-6.498 (m, 1 H), 5.907 (dt, J = 17, 2 Hz, 1 H), 5.601 (d, J = 11 Hz, 1 H), 3.938 (s, 3H). Smeša je razmućena, proceđena i ponovo koncentrovana, a onda prečišćena hromatografijom na silika gelu (EtOAc u heksanu: 5% do 34%) dajući E3-3 (2.07 g) kao komponentu koja se prvo eluira. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 12.05 (br s, 1 H), 7.850 (d, J = 9 Hz, 1 H), 6.986 (dd, J = 3 Hz, 9 Hz, 1 H), 6.761 (d, J = 3 Hz, 1 H), 6.597-6.526 (m, 1 H), 5.91 (dt, J = 17, 2 Hz, 1 H), 5.601 (d, J = 11 Hz, 1 H), 3.939 (s, 3H).
Korak 3. Dobijanje Intermedijera E3: Rastvor E3-3 (2.07 g, 8.2 mmol) u 1 mL DMF se tretira sa POCb (0.8 mL) i zagreva na 65 °C tokom 2.5 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i reakcija prekinuta sipanjem u ledenu vodu. Organske faze se redom isperu zasićenim vodenim rastvorom natrijum-bikarbonata i slanim rastvorom, suše preko natrijum-sulfata i koncentruju dajući 2.1 g Intermedijera E3. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 8.028 (d, J = 10 Hz, IH), 7.46 (dd, J = 3 Hz, 9 Hz, 1 H), 7.32(d, J = 3 Hz, 1 H), 6.549-6.478 (m, 1 H), 5.86 (dt, J = 17, 2 Hz, 1 H), 5.67 (d, J= 11 Hz, 1 H), 3.981 (s, 3H).
Dobijanje Intermedijera E4.
[0170]
[0171]Intermedijer E4 (2-hloro-3-(l,l-difluoroalil)hinoksalin) je dobijen na sličan način kao Intermedijer E3, zamenjujući 1,2-diaminobenzen za 4-metoksibenzen-l,2-diamin dihdrohlorid u Koraku 2.
Dobijanje Intermedijera E5.
[0172]
[0173]Intermedijer E5 (2,6-dihloro-3-(metilsulfonil)hinoksalin) je dobijen kao što je opisao Mahata, P.K., et al. Org. Lett. 2005, 7, 2169.
Dobijanje Intermedijera E6.
[0174] Korak 1. Dobijanje E6-1: U trogrli balon sa okruglim dnom od 1L sipanje rastvor 3-bromo-3,3-difluoroprop-l-ena (25 g, 159.3 mmol) u DMF (360 mL) i voda (90 mL). Dobijeni rastvor je tretiran etil-2-oksoacetatom (33 mL,l M u toluenu) i In (25 g). Reakciona smeša se mešala preko noći na rt i onda je ekstrahovana sa 3x300 mL etra. Organski slojevi su spojeni, isprani sa 1x100 mL zasićenog vodenog rastvora NH4CI i 1x100 mL slanog rastvora, sušeni preko anhidrovanog Na2S04i koncentrovaniin vacuodajući E6-1 koji je dalje korišćen bez dodatnog prečišćavanja.
Korak 2. Dobijanje E6-2. U hidroksiestar E6-1 (58.1 g, 323 mmol) dodat je DCM (700 mL) u trogrlom balonu od 2L opremljenim mešanjem i unutrašnjim merenjem temperature. Tada su TEMPO (5.4 g, 35 mmol), puferski rastvor (dobijen rastvaranjem 4.2 g NaHC03i 0.53 g Na2C03u 100 mL voda, 700 mL, 7v), i NaOCl (Clorox 6.15% wt, 422 mL, 395 mmol) redom dodavani u balon na 20 °C. Nakon 2h, odvojen je organski sloj a vodena faza ekstrahovana etil-acetatom (2 x 300 mL). Kombinovani organski slojevi se suše preko anhidrovanog Na2S04i koncentrujuin vacuodajući E6-2. 'H-NMR (300 MHz, CDCb) 8 5.98-6.18 (m, 1 H), 5.78 (dd, J = 0.9 Hz, 13 Hz, 1 H), 5.60 (dd, J = 0.9 Hz, 11 Hz, 1 H), 4.38 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 1.37 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
Korak 3. Dobijanje E6-3. U rastvor etil-3,3-difluoro-2,2-dihidroksipent-4-enoata E6-2 (57.4 g, 292 mmol) u THF-u (725 mL) i vodi (131 mL), doda se LiOH«H20 (22 g, 529 mmol) na 20 °C. Posle 2.5 h, reakciona smeša se koncentrujein vacuo.Čvrsti ostatak se suspenduje u vodi (300 mL) i dobijena smeša se zakiseli do pH = 1 koncentrovanim rastvorom hlorovodonične kiseline. Dobijena smeša se onda meša dok se sva čvrsta supstanca ne rastvori (1.5 h), a onda se dodaje natrijum-hlorid do zasuićenja. Dobijeni rastvor se ekstrahuje sa MTBE (2x500 mL) i etil-acetatom (2 x 500 mL) i kombinovani organski slojevi se suše preko anhidrovanog Na2S04i koncentrujuin vacuo.Sirovi čvrsti ostatak se suspenduje u DCM-u (100 mL) i meša do finog raspoređivanja čvrste supstance, nakon čega se dodaje heksan (75 mL) preko levka za ukapavanje. Čvrsta supstanca se skupi vakuum ceđenjem preko srednje-poroznog levka i ispere sa smešom 1:1 dihlormetan/heksan (2 x 10 mL) dajući željeni proizvod. 'H-NMR (400 MHz, DMSO-de) 8 13.17 (bs, 1 H), 6.18-6.01 (m, 1 H), 5.64-5.52 (m, 2H).
Korak 4. Dobijanje E6-4 i E6-5: Rastvor E6-3 (0.5 g, 3.3 mmol) u EtOH (12 mL) se tretira sa 3,4-diaminobenzonitrilom (0.47 g, 3.5 mmol). Reakciona smeša se zagreva na 80 °C tokom 1 h, a onda koncentrujein vacuo.Dobijeni ostatak se apsorbuje na silika gelu, a onda prečišćava hromatografijom na koloni dajući E6-4 (0.5 g) kao komponentu koja se prva eluira. 'H-NMR (400 MHz, CD3OD) 8 8.01 (d, IH), 7.65 (dd, 2H), 6.49 (m, IH), 5.80 (dt, IH), 5.60 (d, IH). E6-5 (0.2 g) je obnovljena kao druga eluirajuća komponenta. 'H-NMR (400 MHz, CD3OD) 8 8.25 (d, 1 H), 7.87 (dd, 1 H), 7.41 (d, 1 H), 6.49 (m, IH), 5.80 (dt, IH), 5.59 (d, 1 H). Korak 5. Dobijanje Intermedijera E6: Rastvor E6-4 (0.5 g, 2 mmol) u 4.5 mL DMF se tretira sa POCb (3 mL) i zagreva na 65 °C tokom 3 h. Reakciona smeša se razblaži sa EtOAc i prekida sipanjem u ledenu vodu. Organska faza se ispere redom zasićenim vodenim rastvorom NaHC03i slanim rastvorom, suši preko anhidrovanog Na2S04i koncentrujein vacuodajući 0.48 g Intermedijera E6 (3-hloro-2-(l,l-difluoroalil)hinoksalin-6-karbonitril). 'H-NMR (400 MHz, CD3OD) 8 8.52 (s, 1 H), 8.30 (d, 1 H), 8.13 (dd, 1 H), 6.55 (m, 1 H), 5.84 (dt,lH), 5.72 (d, 1 H). Dobijanje Intermedijera E7[01751
Korak 1. Dobijanje E7-1: U rastvor E3-1 (1.84 g, 10.93 mmol) i 4-(difluorometoksi)benzen-l,2-diamina (1.90 g, 10.93 mmol, dobijen prema Referentnom Primeru 30y od WO2003035065, str. 511.) u DMF-u (40 mL) na rt doda se DIPEA (9.5 mL, 54.65 mmol) i HATU (6.23 g, 16.4 mmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 24 h, razblaži etil-acetatom (100 mL), ispere vodom (100 mL) i slanim rastvorom (50 mL). Smeša se koncentrujein vacuo.Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (EtOAc u heksanu: 20% do 60%) deje E7-1 (800 mg) kao frakcija koja se, od dve koje imaju slične masene spektre, kasnije eluira. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izračunato za G2H9F4N2O: 289.2; nađeno: 289.0.
Korak 2: Dobijanje Intermedijera E7: Hidroksihinoksalin E7-1 (800 mg, 2.8 mmol), POCb (1.65 mL, 3.0 mmol) i DMF (10 mL) se pomešaju na rt i onda zagrevaju na 65 °C tokom 2.5 h tokom kojih se doda još POCb (0.2 mL, 0.36 mmol). Reakcija se onda zagreva dodatnih 3 h na 65 °C a onda ohladi do rt. Reakcija se prekida dodatkom hladne vode (30 mL), a onda razmuti u etil-acetatu (50 mL), ispere zasićenim vodenim rastvor Na2C03 (100 mL), zatim slanim rastvorom (50 mL), i suši preko anhidrovanog MgS04. Dobijeni rastvor se koncentrujein vacuodajući Intermedijer E7 (859 mg) koji se dalje koristi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESI<+>( m/ z) :
[M+H]<+>izračunato za G2H8CIF4N2O: 307.0; nađeno: 307.0.
Dobijanje Intermedijera E8.
[0176]
[0177]Intermedijera E8 (2-hloro-6-fluoro-3-(metilsulfonil)hinoksalin) je dobijen kao što je opisao Mahata, P.K., et al. Org. Lett. 2005, 7, 2169.
Dobijanje Intermedijera E9.
[0178]
[0179]2,7-dihloro-3-(prop-2-en-l-il)hinazolin-4(3H)-on (Intermedijer E9) je dobijen prema Koraku 3 Intermedijera D5 od WO '040 str. 53-4.
Dobijanje Primera
[0180]Jedinjenja IVa-IVn su u skladu sa izumom. Sve druge supstance su referentni primeri.
[0181]Primer 1. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -9-etil- 14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 1-1: Smeša koja sadrži Intermedijer B4 (2.03 g, 6.44 mmol), Intermedijer El (1.6 g, 5.85 mmol), i cezijum-karbonat (3.15 g, 9.66 mmol) u MeCN (40 mL) se intenzivno meša na rt u atmosferi Ar tokom 16 h. Reakciona smeša se onda procedi preko Celita i filtrat koncentrujein vacuo.Sirovi materjial je prečišćen hromatografijom na silika gelu kako bi se dobio 1-1 kao bela čvrsta supstanca (2.5 g). LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M-Boc+2H]<+>izračunato za C20H27CIN3O4: 408.9; nađeno: 408.6.
Korak 2. Dobijanje 1-2: U rastvor 1-1 (2.5 g, 4.92 mmol) u dioksanu (10 mL) doda se hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M, 25 mL, 98.4 mmol) i reakcija meša na rt tokom 5 h. Sirova reakcija se koncentrujein vacuodajući 1-2 kao belu čvrstu supstancu (2.49 g) koja je dalje korišćena bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M]<+>izračunato za C20H26CIN3O4: 407.9; nađeno: 407.9.
Korak 3. Dobijanje 1-3: U DMF (35 mL) rastvor 1-2 (2.49 g, 5.61 mmol), Intermedijer Dl (1.75 mg, 6.17 mmol) i DIPEA (3.9 mL, 22.44 mmol) dodat je COMU (3.12 g, 7.29 mmol) i reakcija se meša na rt tokom 3 h. Reakcija se prekida sa 5% vodenim rastvorom limuske kiseline i ekstrahuje sa EtOAc, ispere slanim rastvorom, suši preko anhidrovanog MgS04, filtrira i koncentruje dajući 1-3 kao narandžastu penu (2.31 g) koja se koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M]<+>izračunato za C35H49CIN4O7: 673.3; nađeno: 673.7.
Korak 4. Dobijanje 1-4: U rastvor 1-3 (2.31 g, 3.43 mmol), TEA (0.72 mL, 5.15 mmol) i kalijum-vinltrifluoroborata (0.69 mg, 5.15 mmol) u EtOH (35 mL) doda se PdCl2(dppf) (0.25 g, 0.34 mmol, Frontier Scientific). Reakciona smeša se zasiti argonom tokom 15 min i zagreva na 80 °C tokom 2 h. Reakciona smeša se adsorbuje direktno na silika gelu i prečisti hromatografijom na silika gelu dajući 1-4 u obliku žutog ulja (1.95 g). LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C37H53N4O7: 665.4; nađeno: 665.3.
Korak 5. Dobijanje 1-5: U rastvor 1-4 (1.95 g, 2.93 mmol) u DCE (585 mL) dodat je Zhan 1B katalizator (0.215 g, 0.29 mmol, Strem) i reakciona smeša zasićena argonom tokom 15 min. Reakciona smeša se zagreva na 80 °C tokom 1.5 h, ohladi do rt i koncentruje. Sirovi proizvod se prečišćava hromatografijom na silika gelu dajući 1-5 kao žuto ulje (1.47 g; LCMS-ESI<+>( m/ z) :
[M+H]<+>izračunato za C35H49N4O7: 637.4; nađeno: 637.3).
Korak 6. Dobijanje 1-6: Rastvor 1-5 (0.97 g, 1.52 mmol) u EtOH (15 mL) se tretira sa Pd/C (10 wt % Pd, 0.162 g). Atmosfera se zameni vodonikom i meša na rt tokom 2 h. Reakciona smeša se procedi preko celita, ispere EtOAc i koncentruje dajući 1-6 u obliku braon penaste čvrste supstance(0.803 g) koja se koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C35H5iN407: 639.4; nađeno: 639.3.
Korak 7. Dobijanje 1-7: U rastvor od 1-6 (0.803 g, 1.26 mmol) u DCM (10 mL) se doda TFA (5 mL) i meša na rt tokom 3 h. Doda se 2 mL TFA i reakcija meša dodatnih 1.5 h. Reakciona smeša se koncentruje do braon ulja koje se razmuti u EtOAc (35 mL). Organski sloj se ispere vodom. Posle razdvajanja slojeva, doda se zasićeni vodeni rastvor NaHC03uz mešanje dok vodeni rastvor ne dostigne pH~7-8. Slojevi se opet razdvoje i vodeni rastvor dva puta ekstrahuje EtOAc. Kombinovani organski slojevi se isperu sa IM vodenim rastvorom limunske kiseline, slanim rastvorom, suše preko anhidrovanog MgS04, filtriraju i koncentruju dajući 1-6 kao braon penastu čvrstu supstancu (0.719 g) koja se koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C31H43N4O7: 583.3; nađeno: 583.4 .
Korak 8. Dobijanje Primera 1: U rastvor od 1-7 (0.200 g, 0.343 mmol), Intermedijer A10 (0.157 g, 0.515 mmol), DMAP (0.063 g, 0.51 mmol) i DIPEA (0.3 mL, 1.72 mmol) u DM-u (3 mL), doda se HATU (0.235 g, 0.617 mmol) i reakcija meša na rt tokom noći. Reakciona smeša se razblaži sa MeCN i prečišćava reverzno-faznim HPLC-om (Gemini, 30-100% MeCN/H20 + 0.1 % TFA) i liofilizuje dajući Primer 1 (118.6 mg) kao čvrstu TFA so. Analitički HPLC RetTime: 8.63 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C4oH55F2N609S: 833.4; nađeno: 833.5. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 9.19 (s, IH); 7.80 (d, J= 8.8 Hz, IH); 7.23 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, IH); 7.15 (d, J= 2.4 Hz, IH); 5.89 (d, J= 3.6 Hz, IH); 5.83 (td, Jh-f= 55.6 Hz, J= 6.4 Hz, IH); 4.56 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 4.40 (s, 1H) 4.38 (ap d, J = 7.2 Hz, 1 H); 4.16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H); 3.93 (s, 3H); 3.75 (dt, J= 7.2, 4 Hz, IH); 3.00-2.91 (m, IH); 2.81 (td, J = 12, 4.4 Hz, IH); 2.63-2.54 (m, IH); 2.01 (br s, 2H); 1.88-1.64 (m, 3H); 1.66-1.33 (m, 11H) 1.52 (s, 3H); 1.24 (t, J= 7.2 Hz, 3H); 1.10 (s, 9H); 1.02-0.96 (m, 2H); 0.96-0.88 (m, 2H); 0.78-0.68 (m, 1 H); 0.55-0.46 (m, 1 H).
[0182]Primer 2. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(l R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropl]-9-etil- 14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0183]Primer 2 je dobijen na sličan način kao Primer 1, zamenom Intermedijera A9 sa Intermedijerom A10 u Koraku 8. Primer 2 je izolovan (37.9 mg) sa približno 85% čistoće u obliku TFA soli. Analitički HPLC RetTime: 8.54 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C39H53F2N6O9S: 819.35; nađeno: 819.51. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 5 10.26 (s, IH); 7.90 (d, J = 9.2 Hz, IH); 7.26 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, IH); 7.10 (d, J = 2.4 Hz, IH); 6.68 (br s, IH); 6.01 (td, Jh-f= 55.6 Hz, J = 6.8 Hz, IH); 5.87 (d, J = 3.6 Hz, IH); 5.38, (d, J = 10 Hz, IH); 4.50-4.40 (m, 3H); 4.10 (dd, J = 12, 3.6 Hz, 1 H); 3.95 (s, 3H); 3.79-3.72 (m, IH); 2.96-2.82 (m, 3H); 2.63-2.56 (m, IH); 2.14 (t, J = 6.8 Hz, IH); 1.98-1.86 (m, IH); 1.84-1.28 (m, 13H); 1.23 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 1.16-0.92 (m, 3H); 1.09 (s, 9H); 0.74-0.64 (m, IH); 0.48 (q, J = 6.4 Hz, IH).
[0184]Primer 3. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-etilciklopropil}-9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0185]Primer 3 je dobijen na sličan način kao Primer 1, zamenom Intermedijera A3 sa Intermedijerom A10 u Koraku 8. Primer 3 je izolovan (0.035 g) sa približno 88% čistoće kao TFA so. Analitički HPLC RetTime: 8.63 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C40H57N6O9S: 797.4; nađeno: 797.5. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 8.98 (s, H); 7.80 (d, J = 9.2 Hz, IH); 7.23 (d, J = 9.2, 2.8 Hz, IH); 7.15 (d, J = 2.8 Hz, IH); 5.89 (d, J = 3.6 Hz, IH); 4.58 (d, J = 7.6 Hz, IH); 4.41-4.32 (m, 2H); 4.16 (dd, J = 12.4 Hz, 3.6 Hz, IH); 3.93 (s, 3H); 3.74 (dt, J = 6.8, 2.8 Hz, IH); 3.20-2.91 (m, 2H); 2.86-2.76 (m, IH); 2.61-2.53 (m, IH); 1.88-1.68 (m, 4H); 1.66-1.34 (m, 9H); 1.34-1.20 (m, 5H); 1.18-1.04 (m, 3H); 1.10 (s, 9H); 1.00-0.92 (m, 7H); 0.79-0.69 (m, 1 H); 0.50 (br d, J = 7.2 Hz, 1 H).
[0186]Primer 4. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-9-etil-N-[(lR,2R)-2-etil-l-{[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0187]Primer 4 je dobijen slično Primeru 1, zamenom Intermedijera A4 sa Intermedijerom A10 u Koraku 8. Primer 4 je izolovan (0.018 g) sa približno 88% čistoće kao TFA so. Analitički HPLC RetTime: 8.75. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C41H59N6O9S: 811.4; nađeno: 811.6. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 8.91 (s, IH); 7.80 (d, J = 9.2 Hz, IH); 7.23 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, IH); 7.16 (d, J = 2.8 Hz, IH); 5.90 (d, J = 3.6 Hz, IH); 4.59 (d, J = 6.8 Hz, IH); 4.38 (s, IH); 4.37 (d, J = 11.6 Hz, IH), 4.16 (dd, J = 11.6, 6.8 Hz, IH), 3.93 (s, 3H); 3.74 (dt, J = 6.8, 3.6 Hz, IH); 3.10-2.91 (m, IH); 2.90-2.7 (m, IH); 2.63-2.55 (m, IH); 1.86-1.69 (m, 3H); 1.65-1.36 (m, 13H), 1.52 (s, 3H); 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 1.16-1.06 (m, 2H); 1.10 (s, 9H); 1.02-0.85 (m, 7H); 0.79-0.68 (m, IH); 0.50 (br d, J = 6.8 Hz, IH).
[0188]Primer 5. Dobijanje (3aR,7S,10S,llS,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(l R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-11 -etil-16-metoksi-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-1OH-9,12- metanociklopenta[ 18,19] [ 1,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 5-1: HAT U (555 mg, 1.46 mmol, Oakvvood) i D1PEA (1.10 mL, 6.35 mmol) se dodaju u smešu 1-2 (533 mg, 1.20 mmol) i Intermedijera D5 (414 mg, 1.33 mmol) u 12 mL DMF pod argonom. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša se sipa u vodu i tri puta ekstrahuje sa etil-acetatom. Kombinovani organski slojevi se isperu vodom, slanim rastvorom, osuše (MgSCU), procede, i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu (0-35% etil-acetat u heksanu) dajući 5-1 (713 mg) kao belu čvrstu supstancu. LCMS-EST<+>(m/z): [M+H]<+>izračunato za C37H54CIN4O7: 701.36; nađeno: 701.58.
Korak 2. Dobijanje 5-2: Pd(dppf)Cl2»CH2Cl2 (94 mg, 0.115 mmol, Strem) se stavi u deoksigenovanu smešu 5-1 (710 mg, 1.01 mmol), kalijum-viniltrifluoroborata (213 mg, 1.59 mmol), i trietilamina (0.210 mL, 1.52 mmol) uli mL EtOH na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša se zagreva na 78 °C pod argonom tokom jednog sata. Posle hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša se sipa u vodu i tri puta ekstrahuje etil-acetatom. Kombinovani organski slojevi se isperu vodom, slanim rastvorm, osuše (MgS04), procede i koncentruju pod sniženim pritiskom dajući 5-2 (699 mg), koji se u sledećem Koraku koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C39H57N4O7: 693.41; nađeno: 693.47.
Korak 3. Dobijanje 5-3: Smeša 5-2 (699 mg, 1.01 mmol) i Zhan 1 B katalizatora (81 mg, 0.111 mmol, Strem) u 200 mL DCE je deoksigenovana pod argonom tokom 25 minuta. Smeša se onda zagreva na 95 °C tokom 45 minuta. Reakciona smeša je zagrevana na 95 °C tokom dodatnih 10 minuta, ohlađena do sobne temperature, i onda koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu (0-30% etil-acetata u heksanu) dajući 5-3 (336 mg) ka svetlo-braon čvrstu supstancu. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C37H53N4O7: 665.38; nađeno: 665.53.
Korak 4. Dobijanje 5-4: Paladijum na ugljeniku (10 wt. % Pd, 102 mg, 0.096 mmol) se doda u rastvor 5-3 (330 mg, 0.497 mmol) u 8 mL etanola i 3.5 mL etil-acetata. Smeša se meša pod atmosferom vodonika 100 minuta i onda procedi preko celita, ispirajući etil-acetatom. Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom dajući 5-4 (64 mg) kao svetio žuto-braon čvrst film, koji se koristi u sledećem Koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C37H55N4O7: 667.40; nađeno: 667.52.
Korak 5. Dobijanje 5-5: TMSOTf (0.53 mL, 2.91 mmol) u kapima doda rastvoru 5-4 (329 mg, 0.494 mmol) u 10 mL dihlormetana pod argonom na sobnoj temperaturi. Posle 1 sata, dodatnih 0.3 mL TMSOTf se doda. Posle još jednog sata, reakciona smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni film se razmuti u 12 mL toluena i koncentruje pod sniženim pritiskom. Ovaj postupak se još jednom ponovi dajući 5-5 (301 mg), koji se koristi u sledećem Koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C33H47N4O7: 611.34; nađeno: 611.46.
Korak 6. Dobijanje Primera 5: HATU (129 mg, 0.339 mmol) i DIPEA (0.22 mL, 1.27 mmol) se dodaju u smešu 5-5 (134 mg, 0.22 mmol) i Intermedijera A9 (95 mg, 0.328 mmol) u 6.6 mL MeCN pod argonom. Nakon mešanja tokom 5 h, reakciona smeša se sipa u vodu i tri puta ekstrahuje etil-acetatom. Kombinovani organski slojevi su isprani vodom i slanim rastvorom, osušeni (MgS04), filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen reverzno-faznim preparativnim HPLC-om (15-100% acetonitril u vodi, sa 0.1% trifluorosirćetni puferom) dajući Primer 5 (43 mg) u obliku svetlo-žute čvrste supstance, soli trifluorosirćetne kiseline, posle lofilizacije. Analitički HPLC RetTime: 9.11 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izračunato za C41H57F2N6O9S: 847.38; nađeno: 847.62. 'H NMR (400 MHz, CD3OD): 8 9.31 (s, IH), 7.80 (d, J = 9.2 Hz, IH), 7.23 (dd, J = 15.4, 2.8 Hz, IH), 7.19 (d, J = 2.8 Hz, IH), 5.87 (td, Jh-f= 56 Hz, J = 6 Hz, IH), 5.87-5.83 (m, IH), 4.59 (d, J = 7.6 Hz, IH), 4.38 (s, IH), 4.23-4.14
(m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.06-2.94 (m, 2H), 2.77-2.67 (m, IH), 2.65-2.58 (m, IH), 2.07-2.01 (m, 2H), 1.98-1.74 (m, 4H), 1.72-1.52 (m, 4H), 1.50-1.20 (m, 12H), 1.18-1.02 (m, 8H), 1.06 (s, 9H).
[0189]Primer 6. Dobijanje (3aR,7S,10S,llS,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -11 -etil-16-metoksi-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-1 Oh-9,12- metanociklopenta[ 18,19] [ 1,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
[0190]Primer 6 je dobijen na sličan način kao Primer 5, zamenom Intermedijera A10 sa Intermedijerom A9 u Koraku 6. Primer 6 je izolovan (29 mg) kao bela čvrsta supstanca. Analitički HPLC RetTime: 9.26 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H59F2N6O9S: 861.40; nađeno: 861.20. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 9.91 (s, IH), 7.82 (d, J = 12Hz, IH), 7.18 (d, J = 12 Hz IH), 7.13-7.06 (m, IH), 6.48 (s, 1 H), 5.95 (td, Jh-f= 56 Hz, J = 6 Hz, 1 H), 5.82 (d, J = 4.4 Hz, 1 H), 5.33 (d, J = 10 Hz, 1 H), 4.95-4.91 (m, 1 H), 4.38-4.31 (m, 2H), 4.10-3.88 (m, 2H), 3.98 (s, 3H), 2.98-2.89 (m, 1 H), 2.67-2.59 (m, 1 H), 2.05-1.65 (m, 4H), 1.64-1.21 (m, 12H), 1.40 (s, 3H), 1.17-0.80 (m, 12H), 1.09 (s, 9H).
[0191]Primer 7. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(l R,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -9-etil- 14-metoksi-1 a-metil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida. Korak 1. Dobijanje 1-2 (slobodna baza): Karbamat 1-1 (350 mg, 0.689 mmol) je dodat balonu koji sadrži 4:1 smešu t-butil acetata:DCM (3.5 mL). U ovaj rastvor se onda doda metansulfonska kiselina (447 uL, 6.89 mmol). Reakciona smeša se meša tokom 20 min na rt, a onda je razblažena metilenhloridom (20 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum-bikarbonata (20 mL). Rastvor se meša do prestanka izdvajanja gasa, ukloni se organski sloj, a vodeni rastvor dva puta ekstrahuje metilenhloridom (20 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu slanim rastvorom, suše preko Na2S04, filtriraju, i koncentrujuin vacuo.Dobijena bela čvrsta supstanca 1-2 (slobodna baza, 280 mg) se koristi u narednoj reakciji bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C20H27CIN3O4: 408.2; nađeno: 408.1 Korak 2. Dobijanje smeše 7-1: Amin 1-2 (281 mg, 0.689 mmol) se pomeša sa smešom dijastereomera Intermedijera D6 (266 mg, 0.895 mmol), DIPEA (600 uL, 3.45 mmol) i DMF (2 mL). HATU (340 mg, 0.895 mmol) se onda doda reakcionoj smeši, koja se meša na 40 °C tokom 5 h. Reakciona smeša se onda razblaži vodom (10 mL) i razmuti u metilenhloridu (10 mL). Odvojeni su organski slojevi, a sloj vodenog rastvora ekstrahovan metilenhloridom (10 mL). Kombinovani organski delovi su isprani slanim rastvorom, sušeni preko MgS04, filtrirani, i koncentrovaniin vacuo.Sirovi ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu dajući 7-1 kao 1:1 smešu dijastereomera (280 mg). LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H52CIN4O7: 687.4; nađeno: 687.3. Korak 3. Dobijanje 7-2: Pd(dppf)Cb (29 mg, 0.0407 mmol) se doda u degaziranu smešu 7-1 (280 mg, 0.407 mmol), kalijum-viniltrifluoroborata (55 mg, 0.733 mmol), i trietilamina (91 uL, 0.651 mmol) u 2 mL etanola na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša se zagreva na 80 °C pod azotom tokom jednog sata. Nakon hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je razblažena toluenom (10 mL), koncentrovanain vacuodo male zapremine rastvarača, i ponovo razblažena toluenom (1 mL). Smeša je onda direktno nanesena na silika kolonu i prečišćavana hromatografijom na silika gelu dajući 7-2 kao 1:1 smešu dijastereomera koja se onda koristi u sledećem Koraku bez koncentrovanja do suva. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C38H55N4O7: 679.4; nađeno: 679.4. Korak 4. Dobijanje 7-3 i 7-4: Smeša dijastereomera 7-2 (276 mg, 0.407 mmol) i Zhan 1 B katalizator (32 mg, 0.0407 mmol, Strem) su rastvoreni u 80 mL DCE i degazirani N2tokom 25 minuta. Smeša se onda zagreva na 100 °C tokom 1 h. Reakcija je onda ohlađena do sobne temperature i koncentrovanain vacuo.Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0% do 30% etil-acetata u heksanu) dajući dijastereomer 7-3 (20 mg, frakcija koja se ranije eluira) i 7-4 (25 mg, frakcija koja se kasnije eluira) kao svetio braon ostatak. Frakcija koja se ranije eluira: LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H51N4O7: 651.4; nađeno: 651.3. Frakcija koja se kasnije eluira: LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C36H51N4O7: 651.4; nađeno: 651.3. Korak 5. Dobijanje 7-5: Paladijum na ugljeniku (10% w/w, 25 mg) se doda u rastvor 7-3 (20 mg, 0.0307 mmol) u 1:1 smeši etil-acetata i dioksana (2 mL). Smeša se meša u atmosferi vodonika tokom 30 min i onda procedi preko Celita i ispere etil-acetatom. Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom dajući 7-5 (16 mg) u obliku svetlo-braon filma koji se koristi u sledećem Koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H53N4O7: 653.4; nađeno: 653.4. Korak 6. Dobijanje 7-6: Intermedijer 7-5 (16 mg, 0.023 mmol) je rastvoren u 2 M HC1 u dioksanu (2 mL) i zagreva na 80 °C tokom 1.5 h u mikrotalasnom reaktoru. Reakciona smeša se onda koncentrujein vacuodajući 7-6 (15 mg) u obliku braon ostatka, koji se koristi u narednom Koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C32H44N4O7: 597.3; nađeno: 597.3. Korak 7. Dobijanje Primera 7: HATU (11.9 mg, 0.031 mmol) i DIPEA (22 uL, 0.126 mmol) su dodati u smešu od 7-6 (15 mg, 0.025 mmol) i A10 (11.5 mg, 0.0377 mmol) u 1 mL DMF-a. Posle mešanja tokom noći na sobnoj temperaturi, reakciona smeša se sipa u vodu, zakiseli do pH 1 pomoću IN vodenog rastvora HC1, i tri puta ekstrahuje metilenhloridom (15 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu vodom, slanim rastvorom, suše preko MgS04, filtriraju, i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen reverzno-faznim preparativnim HPLC-om (5-100% acetonitrilom u vodi, sa 0.1% trifluorosirćetnim puferom) a zatim hromatografijom na silika gelu dajući Primer 7 (4.3 mg) u obliku belog čvrstog filma. Analitički HPLC RetTime: 9.07 min. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C41H57F2N6O9S: 847.4; nađeno: 847.4. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 5 9.88 (s, IH), 7.83 (d, J = 9.1 Hz, IH), 7.20 (dd, J = 9.1 Hz, 2.8 Hz, IH), 7.07 (d, J = 2.7 Hz, IH), 6.56 (s, IH), 5.98 (td, Jh-f= 55.7, J = 6.7 Hz, IH), 5.95 (d, J = 9.6, 1 H), 5.32 (d, J = 9.6 Hz, IH), 4.45 (dd, J = 13.0 Hz, 9.6 Hz, 2H), 4.32 (d, J = 9.7 Hz, 1 H), 4.13 (dd, J = 15.5 Hz, 8.8 Hz, IH), 3.93 (s, 3H), 2.99 - 2.84 (m, IH), 2.82 - 2.68 (m, IH), 2.62 - 2.47 (m IH), 2.16 - 2.02 (m, IH) 2.00-1.85 (m, IH) 1.84-1.69 (m, IH), 1.70 -1.15 (m, 11H), 1.52 (s, 3H), 1.50 (s, 3H), 1.20 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 1.14 - 0.77 (m, 5H) 1.09 (s, 9H), 0.11 (m, IH).
[0192]Primer 8. Dobijanje (laS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -9-etil- 14-metoksi-1 a-metil-3,6-diokso-l,la,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[18,19][l,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0193]Primer 8 je dobijen na sličan način kao Primer 7, zamenjujući kasnije eluiran 7-4 za ranije eluiranim 7-3 u Koraku 5. Primer 7 je izolovan (2.9 mg) kao bela čvrsta supstanca. Analitički HPLC RetTime: 9.09 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izračunato za C41H57F2N6O9S: 847.4; nađeno: 847.4.
[0194]Primeri 9 i 10. Dobijanje (7S,10S,1 lS,12R)-7-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-l-{[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -11 -etil-16-metoksi-5,8-diokso-3aR-(trifluorometil)-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-hexadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[ 18,19] [1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-10-karboksamid i (7S,10S,1 lS,12R)-7-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-l-{[(l-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-ll-etil-16-metoksi-5,8-diokso-3aS-(trifluorometil)-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-1OH-9,12-metanociklopenta[ 18,19] [ 1,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 9-1: U rastvor Intermedijera D8 (322 mg, 0.85 mmol) i 1-2 (316 mg, 0.78 mmol) u MeCN (3.9 mL) se doda HATU (323 mg, 0.85 mmol) a zatim DIPEA (678 uL, 3.90 mmol) na rt u atmosferi argona. Nakon 2 h, reakciona smeša se koncentrujein vacuo,i sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan gradijent) dajući amid 9-1 (476 mg, 1:1 dijastereomerna smeša) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C38H53CIF3N4O7: 769.4; nađeno: 769.5.
Korak 2. Dobijanje 9-2: U rastvor 9-1 (470 mg, 612 umol), TEA (128 uL, 918 umol), i kalijum-viniltrifluoroborata (123 mg, 918 umol) u EtOH (3.06 mL), doda se PdC12(dppf) (50 mg, 61 umol). Reakciona smeša se deoksigenuje argonom tokom 10 min i zagreje na 78 °C. Posle 1 h, reakciona smeša se ohladi do rt i koncentrujein vacuo.Sirovi proizvod je prečišćen bvhromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan gradjient) dajući vinilhinoksalin 9-2 (329 mg, 1:1 dijastereomerna smeša) kao žuto ulje. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C40H56F3N4O7: 761.4; nađeno: 761.6.
Korak 3. Dobijanje 9-3: U rastvor 9-2 (329 mg, 485 umol) u DCE (97 mL) dodat je Zhan 1B katalizator (35 mg, 49 umol, Strem) i reakciona smeša deoksigenovana argonom 10 minuta. Reakciona smeša se onda zagreje na 100 °C. Posle 30 min, reakciona smeša se ostavi da se ohladi do rt i koncentrujein vacuo.Sirovi proizvodje prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan gradijent) dajući macrocikl 9-3 (301 mg, 7:4 dijastereomerna smeša) kao svetlo-žuto ulje. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C38H52F3N4O7: 733.4; nađeno: 733.5.
Korak 4. Dobijanje 9-4: U rastvor 9-3 (300 mg, 410 umol) u etanolu (2.00 mL) doda se Pd/C (10 wt % Pd, 43 mg, 41 umol) na rt u atmosferi argona. Atmosfera reakcije je zamenjena gasovitim vodonikom, i reakciona smeša intenzivno mešana na rt. Nakon 30 min, reakciona smeša je razblažena etil-acetatom (10 mL) i proceđena preko Celita uz ispitranje etil-acetatom (3 x 5 mL). Filtrat se koncentrujein vacuodajući macrocikl 9-4 (295 mg, 7:4 dijastereomerna smeša), koja se koristi u sledećem Koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C38H54F3N407: 735.4; nađeno: 735.5.
Korak 5. Dobijanje 9-5: U rastvor 9-4 (295 mg, 401 umol) u DCM (2 mL) dodat je TMSOTf (72.6 uL, 401 mmol) na rt u atmosferi argona. Posle 1.5 h, dodatni TMSOTf (362.9 uL, 2.00 mmol) se doda. Posle 1 h, dodatni TMSOTf (362.9 uL, 2.00 mmol) se doda. Posle 2 h, reakciona smeša se polako doda u 0.25 N vodeni rastvor NaOH (ohlađen do 0 °C, 3 mL). Dobijena smeša je razblažena sa IN vodenim rastvorom HC1 (5 mL), i ekstrahovana sa DCM-om (3x5mL). Kombinovani organski ekstrakti se suše pomoću anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentruju dajući karboksilnu kiselinu 9-5 (353 mg, 7:4 dijastereomerna smeša) kao braonkastu čvrstu supstacu koja se koristi u sledećem Koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C34H45F3N4O7: 679.3; nađeno: 679.5.
Korak 6. Dobijanje Primera 9 i Primera 10: U rastvor kiseline 9-5 (150 mg, 220 umol) i Intermedijera A10 (101 mg, 330 umol) u MeCN (1.1 mL) doda se HATU (127 mg, 330 umol), zatim DIPEA (191 uL, 1.10 mmol) na rt u atmosferi argona. Posle 1 h, reakciona smeša se koncentrujein vacuo,i sirovi proizvod prečisti hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan gradjient). Frakcije koje sadže željeni proizvod se kombinuju i prečiste hromatografijom na silika gelu (0-50% aceton/heksan gradijent) pri čemu se prvo eluira
[0195]Primer 9 (40 mg) kao beli prah, a kao drugi, Primer 10 (70 mg) kao beli prah. Prvo eliurajući Primer 9: Analitički HPLC RetTime: 9.42 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C43H58F5N6O9S: 929.4; nađeno: 929.5. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 5 9.83 (s, IH), 7.92 (d,J =9.1 Hz, IH), 7.19 (dd,J=9.0, 2.6 Hz, IH), 7.13 (d,J=2.6 Hz, IH), 5.99 (br s, IH), 5.96 (td, Jh-f55.5, 7= 6.6 Hz, IH), 5.70 (d,J=10.0 Hz, IH), 4.63 (d,J=6.6 Hz, IH), 4.38 (d,J= 10.0 Hz, IH), 4.22 - 4.04 (m, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.12 - 2.89 (m, IH), 2.71 - 2.51 (m, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.15 - 1.82 (m, 4H), 1.83 - 1.34 (m, 8H), 1.36 - 0.98 (m, 12H), 1.26 (s, 9H), 0.92 - 0.79 (m, 4H). Drugi elirajući Primer 10: Analitički HPLC RetTime: 9.55 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C43H58F5N6O9S: 929.4; nađeno: 929.5. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 9.61 (s, IH), 7.91 (d,J=9.1 Hz, IH), 7.23 (dd,J=9.0, 3.0 Hz, IH), 7.18( d, J=2.7 Hz, IH), 5.98 - 5.91 (m, IH), 5.83 (td, Jh-f55.5,J=6.6 Hz, IH), 5.33 (d,J=9.8 Hz, IH), 4.72 - 4.63 (m, IH), 4.46 - 4.38 (m, 1 H), 4.32(d, J=10.0 Hz, IH), 4.25 - 4.14 (m, IH), 3.97 (s, 3H), 3.73(br d, J=7.6 Hz, IH), 3.23 - 3.07 (m, IH), 2.86 - 2.37 (m, 2H), 2.14 - 1.79 (m, 2H), 1.78 - 1.38 (m, 8H), 1.51 (s, 3H), 1.35 - 1.08 (m, 8H), 1.25 (s, 9H), 1.05 (br s, 3H), 0.93 - 0.68 (m, 6H).
[0196] Primeri11 i 12. Dobijanje (7S,10S,llS,12R)-7-terc-butil-N-[(l R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-11 -etil-16-metoksi-5,8-diokso-3aR-(trifluorometil)-l,2,3,3a,5,6,7,8,ll,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[ 18,19] [ 1,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-10-karboksamid i (7S,10S,1 lS,12R)-7-terc-butil-N-[(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-11 -etil-16-metoksi-5,8-diokso-3aS-(trifluorometil)-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-1OH-9,12- metanociklopenta[ 18,19] [ 1,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
[0197]Dobijanje Primera 11 i Primera 12: U rastvor kiseline 9-5 (150 mg, 220 umol) i Intermedijera A9 (96 mg, 330 umol) u MeCN-u (1.1 mL), doda se HATU (127 mg, 330 umol), a zatim D1PEA (191uL,1.10 mmol) na rt u atmosferi argona. Posle 1 h, reakciona smeša se koncentrujein vacuo,i sirovi proizvod prečišćava hromatografijom na silika gelu (0-50% aceton/heksan gradijent). Frakcije koje sadrže željeni proizvod se kombinuju i prečišćavaju hromatografijom na silika gelu (0-50% aceton/heksan gradjient) dajući prvo eluirajući Primer 11 (29 mg) kao beli prah, i kao drugi eluirajući Primer 12 (60.2 mg) kao beli prah. Prvo eluirajući Primer 11: Analitički HPLC RetTime: 9.44 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato C42H56F5N609S: 915.4; nađeno: 915.6. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 10.17 (br s, IH), 7.83 (d,J= 9.1 Hz, IH), 7.21 (dd,J =9.1, 2.7 Hz, IH), 7.17 - 7.07 (m, IH), 5.99 (br s, IH), 5.97 (td, Jh-f55.5,J=6.6 Hz, 1H), 5.82 (d,J=9.8 Hz, 1H), 4.55 (d,J=7.2 Hz, 1H), 4.39 (d,J=10.0 Hz, 1H), 4.20 - 4.03 (m, 2H), 3.95 (s,J=5.9 Hz, 3H), 2.97 - 2.82 (m, 2H), 2.79 - 2.49 (m, 3H), 2.24 - 1.81 (m, 8H), 1.80 - 1.11 (m, 12H), 1.10 - 0.98 (m, 4H), 1.07 (s, 9H), 0.95 - 0.81 (m, 3H). Drugi eluirajući Primer 12: Analitički HPLC RetTime: 9.48 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato C42H56F5N609S: 915.4; nađeno: 915.6. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 10.07 (s, IH), 7.93 (d,J =9.6 Hz, IH), 7.28 - 7.20 (m, IH), 7.16 (s, IH), 6.17 - 5.68 (m, 3H), 4.67 - 4.55 (m, 1 H), 4.37 - 4.23 (m, 2H), 4.17 - 4.05 (m, IH), 3.97 (s, 3H), 3.75 - 3.66 (m, IH), 3.22 - 3.04 (m, IH), 3.02 - 2.31 (m, 6H), 2.30 - 1.83 (m, 10H), 1.85 - 1.13 (m, 13H), 1.06 (s, 9H), 0.95 - 0.79 (m, 1 H).
[0198] Primer13. Dobijanje (lR,4S,4aR,8S,HS,12S,13R,25aR)-8-terc-butil-N-[(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-12-etil-17-metoksi-6,9-diokso-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-heksadekahidro-lH,llH-l,4:10,13-dimetanohinoksalino[2,3-k][l,10,3,6]benzodioksadiazaciklononadecin-ll-karboksamida. Korak 1. Dobijanje smeše dijastereomera 13-1 i 13-2: U rastvor 1-2 (354 mg, 0.87 mmol), smeše Intermedijera D9 i DIO (323 mg, 0.96 mmol) i BEP (263 mg, 0.96 mmol; TCI America), dodat je DIPEA (0.45 mL, 2.61 mmol) i reakcija se meša na 50 °C tokom 2 h. Reakcija se prekida zasićenim vodenim rastvorom NaHCCbi ekstrahuje sa EtOAc, organske faze se isperu slanim rastvorom, suše preko magnezijum-sulfata i koncentruju. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-30% EtOAc/heksan) dajući neodvojivu smešu dijastereomera 13-1 i 13-2 (338 mg). LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C39H56CIN4O7: 727.38; nađeno: 727.46. Korak 2. Dobijanje smeše dijastereomera 13-3 i 13-4: U rastvor smeše 13-1 i 13-2 (338 mg, 0.46 mmol), TEA (0.10 mL, 0.69 mmol) kalijum-viniltrifluoroborata (93 mg, 0.69 mmol) u EtOH (30 mL), doda se PdCl2(dppf) (38 mg, 0.046 mmol, Strem Chemicals). Reakcija se deoksigenuje pomoću N2tokom 10 min i zagreva na 80 °C tokom 1 h. Reakcija se prekida zasićenim vodenim rastvorom NaHC03i ekstrahuje sa EtOAc, zatim ispere slanim rastvorom, suši preko magnezijum-sulfata i koncentruje. Ostatak se prečišćava hromatografijom na silika gelu dajući neodvojivu smešu dijastereomera 13-3 i 13-4 (285 mg). LCMS-ESU- (m/z): [M+HJ+ izračunato za C41H59N4O7: 719.44; nađeno: 719.70. Koraci 3 i 4. Dobijanje 13-5: U rastvor smeše dijastereomera 13-3 i 13-4 (285 mg, 0.40 mmol) in DCE (100 mL) dodat je Zhan 1B katalizator (30 mg, 0.04 mmol, Strem) i reeakcija se deoksigenuje tokom 30 minuta pomoću N2. Reakciona smeša se zagreva na 100 °C tokom 45 min, pusti da se ohladi do rt i koncentruje.Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu dajući makrociklični olefinski proizvod (125 mg; LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C39H55N4O7: 691.41; nađeno: 691.58) koji se razmuti u EtOH (6 mL) i tretira sa Pd/C (10%, 120 mg). Atmosfera se zameni vodonikom i meša na rt tokom 1.5 h. Reakciona smeša se procedi preko Celita, ispere EtOAc, koncentruje dajući 13-5 kao ulje (125 mg) koje se koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C39H57N407: 693.42; nađeno: 693.46. Korak 5. Dobijanje 13-6: U rastvor 13-5 (50 mg, 0.072 mmol) u DCM (4 mL), doda se TFA (1 mL) i meša na rt tokom 6 h. Reakciona smeša se razblaži EtOAc, ispere sa H2O, puferskim vodenim rastvorom na pH 7, suši preko magnezijum-sulfata, i koncentruje dajući 13-6 kao ostatak koji se dalje koristi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C35H49N4O7: 637.36; nađeno: 637.40. Korak 6. Dobijanje Primera 13: U rastvor 13-6 (46 mg, 0.072 mmol), Intermedijera A9 (28 mg, 0.11 mmol), TBTU (34 mg, 0.10 mmol) i DMAP (13 mg, 0.11 mmol) u DCM (5 mL), doda se DIPEA (0.038 mL, 0.22 mmol) i reakcija meša na rt tokom 16 h. Reakcija se prekida vodom, razblaži EtOAc, ispere zasićenim vodenim rastvorom NaHC03, slanim rastvorom, suši preko magnezijum-sulfata, i koncentruje. Sirovi materjial se prečišćava reverzno-faznim HPLC-om (Gemini, 30-85% MeCN/H20 + 0.1% TFA) i liofilizuje dajući Primer 13 (14.5 mg) u obliku TFA soli. Analitički HPLC RetTime: 9.39 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C43H59F2N609S: 873.40; nađeno: 873.42. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 9.28 (s, IH), 7.82 (d, J = 9.2 Hz, IH), 7.26 (dd, J = 6.4, 2.8 Hz, IH), 7.19 (d, J = 2.8 Hz, IH), 6.04 - 5.74 (m, 2H), 5.50 (s, IH), 4.55 (d, J = 7.6 Hz, IH), 4.47 (s, 1 H), 4.26 - 4.16 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.03 - 2.95 (m, 2H), 2.78 - 2.66 (m, 2H), 2.17 (br, 2H), 2.05 (s, 3H), 1.90 - 1.85 (m, IH), 1.76 - 1.74 (m, 2H), 1.61 - 1.21 (m, 20H), 1.15 - 1.11 (m, 2H), 1.08 (s, 9H), 0.93 - 0.90 (m, 1 H).
[0199]Primer 14. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-ciklopentil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 14-1: U rastvor 1-2 (223 mg, 0.50 mmol) i Intermedijera D2 (221 mg, 0.75 mmol) u acetonitrilu (5 mL), doda se HATU (306 mg, 0.80 mmol), a zatim DIPEA (0.43 mL, 2.5 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle 19 h, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se razblaži etil-acetatom (15 mL). Dobijeni rastvor se ispere IM vodenim rastvorom HC1 (10 mL). Vodeni rastvor se ekstrahuje etil-acetatom (2 x 10 mL) i kombinovani organski slojevi isperu slanim rastvorom (15 mL), suše preko anhidrovanog magnezijum-sulfata i koncentruju. Dobijeni sirovi ostatak se prečišćava hromatografijom na silika gelu (0-100% etil-acetat/heksan gradjient) dajući 14-1 (173 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]izračunato za C36H50CIN4O7: 685.33; nađeno: 685.49.
Korak 2. Dobijanje 14-2: U rastvor 14-1 (173 mg, 0.25 mmol) u EtOH (3 mL), doda se redom, kalijum-viniltrifluoroborat (51 mg, 0.38 mmol), PdCi2(dppf) (21 mg, 0.025 mmol) i TEA (0.053 mL, 0.38 mmol) i dobijena smeša zagreje na 80 °C. Posle 1 h, doda se još kalijum-viniltrifluoroborata (17 mg, 0.12 mmol) i mešanje nastavi na 80 °C. Posle 2.5 h, doda se još kalijum-viniltrifluoroborata (8 mg, 0.06 mmol) i reakcija meša tokom dodatnih 10 minuta na 80 °C. Reakcija se ohladi do sobne temperature, razblaži etil-acetatom (20 mL), ispere slanim rastvorom (20 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje etil-acetatom (10 mL), i kombinovani organski sloj suši preko anhidrovanog magnezijum-sulfata i koncentruje dajući 14-2 koji se koristi bez prečišćavanja u sledećem Koraku. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C38H53N4O7: 677.38; nađeno: 677.50.
Korak 3. Dobijanje 14-3: U rastvor 14-2 u deoksigenovanom DCE (0.006 M), dodat je Zhan 1B katalizator (18 mg, 0.025 mmol, Strem) i reakcija deoksigenovana dodatnih 10 minuta argonom. Reakcija se zagreva na 100 °C. Poslel.5 h, doda se Zhan 1B katalizator (9 mg, 0.012 mmol) i reakcija meša tokom 30 min. Reakcija se ostavi da se ohladi do rt i koncentruje na zapreminu 4-5 mL. Direktno se prečišćava hromatografijom na silika gelu dajući 14-3 kao braon ulje. (70 mg). LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C36H49N4O7: 649.35; nađeno: 649.50.
Korak 4. Dobijanje 14-4: U rastvor 14-3 (70 mg, 0.11 mmol) u EtOH (5 mL), doda se Pd/C (10 wt % Pd, 12 mg) pod argonom. Atmosfera se zameni vodonikom i rekacija meša na rt tokom 16 h. Reakciona smeša se procedi preko Celita, ispere EtOH i koncentruje dajući 14-4 kao braon ulje koje se koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H51N4O7: 651.37; nađeno: 651.60.
Korak 5. Dobijanje 14-5: U rastvor 14-4 (70 mg, 0.11 mmol) u DCM (3 mL), doda se TMSOTf (0.103 mL, 0.53 mmol) i reakcija meša na rt tokom 1 h. Reakciona smeša se koncentruje dajući 14-5 koji se koristi u sledećem Koraku bez prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C32H43N4O7: 595.31; nađeno: 595.43.
Korak 6. Dobijanje Primera 14: U rastvor 14-5 (36.8 mg, 0.06 mmol) i Intermedijera A10 (28 mg, 0.09 mmol) u acetonitrilu (1.5 mL), dodat je HATU (38 mg, 0.1 mmol), a zatim DIPEA (0.065 mL, 0.37 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle 20 minuta, reakciona smeša se deirektno prečišćava reverzno-faznim HPLC-om (Gemini 5u C18 110A kolona, 15-100% MeCN/TrbO + 0.1% TFA) i liofilizuje dajući Primer 14 kao žutu čvrstu supstancu (24 mg) u obliku TFA soli. Analitički HPLC RetTime: 9.03 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C41H55F2N6O9S: 845.4; nađeno: 845.6. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 9.31 (s, IH), 7.80 (d, /= 9.1 Hz, IH), 7.23 (dd,J=9.1, 2.8 Hz, IH), 7.16 (d,/=2.7 Hz, IH), 6.03 - 5.66 (m, 2H), 4.53 (dd,J=13.2, 9.6 Hz, 2H), 4.18 (dd, /= 17.2, 7.1 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.68 (dt,J=6.8, 2.8 Hz, 1 H), 3.13 (quin, / = 1.7 Hz, IH), 3.02 - 2.92 (m, IH), 2.85 - 2.78 (m, IH), 2.62 - 2.55 (m, 1 H), 2.30 - 2.17 (m, IH), 2.02 (s, 2H), 1.97 - 1.86 (m, 3H), 1.86 - 1.79 (m, IH), 1.80 - 1.41 (m, 17H), 1.40 - 1.28 (m, 3H), 1.22 (t,J=7.4 Hz, 3H), 1.03 - 0.87 (m, 4H), 0.76 - 0.68 (m, IH), 0.51 - 0.44 (m, 1 H).
[0200]Primer 15. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-ciklopentil-N-[(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0201]Korak 1. Dobijanje Primera 15. U rastvor 14-5 (27 mg, 0.045 mmol) i Intermedijera A9 (20 mg, 0.067 mmol) u acetonitrilu (1.3 mL), doda se HATU (27 mg, 0.072 mmol), a zatim DIPEA (0.047 mL, 0.27 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle 20 minuta, reakciona smeša se direktno prečisti reverzno-faznim HPLC-om (Gemini 5u Cl8 110A kolona, 15-100% MeCN/H20 + 0.1% TFA) i liofilizuje dajući Primer 15 kao žutu čvrstu supstancu (18.6 mg) u obliku TFA soli. Analitički HPLC RetTime: 8.89 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C40H53F2N6O9S: 831.4; nađeno: 831.6. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 9.32 (s, IH), 7.79 (d,J=9.1 Hz, IH), 7.23 (dd, J = 9.1, 2.8 Hz, IH), 7.16( d, J=2.8 Hz, IH), 6.03 - 5.66 (m, 2H), 4.53( t, J=10.0 Hz, 2H), 4.22 - 4.14 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.67 (dt,J=6.5, 2.9 Hz, IH), 3.13 (quin, 1.6 Hz, IH), 3.04 - 2.92 (m, 3H), 2.85 - 2.77 (m, IH), 2.63 - 2.55 (m, IH), 2.26 - 2.19 (m, IH), 2.05 - 2.02 (m, 2H), 1.99 - 1.86 (m, 3H), 1.84 - 1.42 (m, 12H), 1.41 -1.25 (m, 4H), 1.22( t, J=7.2 Hz, 3H), 1.15 - 1.03 (m, 3H), 1.01 - 0.90 (m, 2H), 0.76 - 0.68 (m, IH), 0.49 - 0.45 (m, IH).
[0202]Primer 16. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-cikloheksil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 16-1: U rastvor Intermedijera D3 (190 mg, 0.60 mmol) i 1-2 (264 mg, 0.60 mmol) u DMF-u (5 mL), doda se DIPEA (0.31 mL, 1.8 mmol), a zatim COMU (257 mg, 0.60 mmol) na rt. Posle 2 h, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak razblaži etil-acetatom (15 mL). Dobijeni rastvor se ispere 10% vodenim rastvorom limunske kiseline. Vodeni rastvor se ekstrahuje etil-acetatom (2 x 10 mL) i kombinovani organski slojevi isperu slanim rastvorom (15 mL), suše preko anhidrovanog magnezijum-sulfata i koncentruju. Dobijeni sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu dajući 16-1 (260 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]+ izračunato za C37H51CIN4O7: 700.28; nađeno: 700.03.
Korak 2. Dobijanje 16-2: U rastvor 16-1 (260 mg, 0.37 mmol) u EtOH (5 mL) doda se, redom, kalijum-viniltrifluoroborat (75 mg, 0.56 mmol), PdCl2(dppf) (30 mg, 0.037 mmol) i TEA (0.079 mL, 0.56 mmol). Reakciona smeša se deoksigenuje argonom tokom 12 min i zagreva na 78 °C tokom 2 h. Reakciona smeša se onda ohladi do rt, razblaži sa etil-acetatom (20 mL), i ispere slanim rastvorom (20 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil-acetatom (10 mL) i kombinovani organski slojevi osuše preko anhidrovanog magnezijum-sulfata i koncentruju dajući sirovi proizvod. Sirovi proizvod se prečisti hromatografijom na silika gelu dajući 16-2 u obliku žutog ulja (250 mg). LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C39H54N4O7: 691.87; nađeno: 691.54.
Korak 3. Dobijanje 16-3: U rastvor 16-2 (250 mg, 0.36 mmol) u deoksigenovanom DCE (0.005 M) doda se Zhan 1B katalizator (26 mg, 0.036 mmol, Strem) i reakciona smeša deoksigenuje još 10 minuta argonom. Reakciona smeša se zagreva na 70 °C tokom 2 h. Dozvoli se reakcionoj smeši da se ohladi do rt i koncentruje. Dobijeni ostatak se direktno prečišćava hromatografijom na silika gelu dajući 16-3 kao žuto ulje (250 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C37H50N4O7: 663.82; nađeno: 663.42.
Korak 4. Dobijanje 16-4: U rastvor 16-3 (200 mg, 0.3 mmol) u EtOAc (10 mL), doda se Pd/C (10 wt % Pd, 100 mg) pod argonom. Atmosfera se zameni vodonikom, i reakcija meša na rt tokom 1.5 h. Reakciona smeša se filtrira preko Celita, ispere sa EtOH i koncentruje dajući 16-4 u obliku ulja (180 mg) koje se koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C37H52N4O7: 665.83; nađeno: 665.36.
Korak 5. Dobijanje 16-5: U rastvor 16-4 (165 mg, 0.25 mmol) u DCM-u (5 mL), doda se TFA (2 mL) i reakcija meša na rt tokom 4 h. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom. Reakciona smeša se razblaži etil-acetatom (15 mL). Dobijeni rastvor se ispere zasićenim vodenim rastvorom NaHC03i koncentruje dajući 16-5 koji se koristi u sledećem Koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C33H44N4O7: 609.73; nađeno: 609.47
Korak 6. Dobijanje Primera 16: U rastvor 16-5 (70 mg, 0.12 mmol) i Intermedijera A10 (65 mg, 0.21 mmol) u DCM-u (1 mL), doda se DIPEA (0.08 mL, 0.46 mmol) a zatim HATU (88 mg, 0.23 mmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakciona smeša se razblaži sa EtOAc i ispere vodenim rastvorom NH4CI i slanim rastvorom. Sirovi materjial je prečišćen reverzno-faznim HPLC-om (Gemini kolona, 58-98 % MeCNTrhO + 0.1% TFA) i liofilizovan dajući Primer 16 (40 mg) kao TFA so. Analitički HPLC RetTime: 9.21 min. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C42H56F2N6O9S: 859.99; nađeno: 859.60. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 9.28 (s, IH), 7.76 (d,/=9.2 Hz, IH), 7.18 (d,/ =9.2 Hz, IH), 7.10 (s, IH), 5.97 - 5.82 (m, 2H), 4.88 (m, 2H), 4.51-4.46 (m, 3H), 4.19-4.11 (m, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.70-3.29 (m, 6H), 2.97-2.52 (m, 3H), 2.06 - 1.41 (m, 20H), 1.39 - 1.17 (m, 4H), 1.09 - 0.89 (m, 4H), 0.65 (m, 1 H), 0.46 - 0.44 (m, IH).
[0203]Primer 17. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(l R,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -9-etil-18,18-difluoro-14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Koraci 1 i 2. Dobijanje 17-2: Smeša Intermedijera B4 (273 mg, 0.865 mmol), Intermedijera E3 (234 mg, 0.865 mmol), i cezijum-karbonata (310 mg, 0.952 mmol) u MeCN (2.5 mL) se zagreva na 85 °C tokom 36 časova. U alternativnom procesu, DMF se koristi kao rastvarač. Voda (10 mL) se doda i smeša ekstrahuje etil-acetatom. Organska faza se suši preko natrijum-sulfata, filtrira i koncentruje dajući 17-1, koji se dalje koristi bez daljeg prečišćavanja ili posle hromatografskog prečišćavanja. Ostatak se tretira sa 35 ekvivalenta 4N HC1 u dioksanu na rt tokom 2.5 časa. Nakon dodatka dietiletra, hidrohloridna so 17-2 precipitira. So se izdvoji vakuum filtracijom i suši pod sniženim pritiskom (375 mg). U alternativnom procesu, deprotekcija se izvodi u prisustvu MSA u tBuOAc i DCM. LCMS-ESL( m/ z) :[M+Hf izračunato za C23H30F2N3O4: 450.2; nađeno: 450.1.
Korak 3. Dobijanje 17-3: Smeša 17-2 (370 mg, 0.761 mmol), Intermedijera Dl 1 (205 mg, 0.761 mmol), HATU (347 mg, 0.914 mmol) i DIPEA (0.795 mL, 4.57 mmol) u DMF (3 mL) se meša na rt tokom noći. Smeša se razblaži sa 100 mL vode i ekstrahuje dihlormetanom. Organska faza se suši preko natrijum-sulfata, filtrira i koncentruje. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc u heksanu: 30%) dajući 17-3 (236 mg). U alternativnom procesu, 17-2 i Intermedijer Dll se pomešaju sa EDC i HOBT u prisustvu NMM u DMF dajući 17-3. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C37H51F2N4O7: 701.4; nađeno: 701.3.
Korak 4. Dobijanje 17-4: Rastvor 17-3 (236 mg, 0.34 mmol) u DCE (67 mL) se deoksigenuje argonom tokom 40 minuta. Zhan 1B katalizator (25 mg, 0.034 mmol, Strem) se doda i reakcija zagreva na 100 °C, na uljanom kupatilu, tokom for 40 minuta. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom, a ostatak prečisti hromatografijom na silika gelu (EtOAc u heksanu: 5% do 65%) dajući 17-4 (229 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M-F]<+>izračunato za C35H46FN4O7: 653.3; nađeno: 653.2.
Korak 5. Dobijanje 17-5: Rastvor 17-4 (229 mg, 0.34 mmol) u 50 mL etanola se hidrogenizuje, gasovitim vodonikom, na 1 atm, preko 220 10% wt Pd/C (wet) tokom 2.5 časa. Filtracija preko Celita i koncentrovanje pod sniženim pritiskom dalo je sirovi ostatak, 17-5 (184 mg). U jednom alternativnom procesu, 17-4 je hidrogenizovan, gasovitim vodonikom, u prisustvu Rh. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C35H49F2N4O7: 675.4; nađeno: 675.3.
Korak 6. Dobijanje 17-6: Estar 17-5 (184 mg, 0.27 mmol) u 2 mL DCM se tretira sa 1 mL TFA i meša na rt tokom 3 h. Reakciona smeša se koncentruje i onda raspodeli između vode i etil-acetata. Organska faza je isprana vodom, sušena preko anhidrovanog natrijum-sulfata, filtrirana i koncentrovana dajući 17-6 (153 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C31H41F2N4O7: 619.3; nađeno: 619.2.
Korak 7. Dobijanje Primera 17: Smeša karboksilne kiseline 17-6 (153 mg, 0.247 mmol), Intermedijera A10 (90 mg, 0.297 mmol), HATU (113 mg, 0.297 mmol), DMAP (45 mg, 0.37 mmol) i DIPEA (0.215 mL, 1.24 mmol) u DMF-u (1.5 mL) se meša na rt tokom 40 minuta. Smeša se razblaži 2N vodenim rastvorom HC1 (2 mL) i ekstrahuje dihlormetanom. Organska faza se suši preko natrijum-sulfata, filtrira i koncentruje. Sirovi proizvod se prečišćava hromatografijom na silika gelu (EtOAc u heksanu: 30% - 95%) dajući Primer 17 (95 mg). Analitički HPLC RetTime: 8.79 min. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C4oH53F4N609S: 869.3; nađeno: 869.2. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 9.948 (br s, IH), 7.99 (d,J=9. 2 Hz, IH), 7.29 (dd,J=8.8, 2.4 Hz, IH), 7.09 (d,J=2.8 Hz, IH), 6.57 (br s, IH), 5.97 (td, Jh-f= 52 Hz,J=6.8 Hz, IH), 5.92 (d,J =3.6 Hz, IH), 5.322 (d,J=9.6 Hz, IH), 4.42 (ap d,J=7.2 Hz, IH), 4.40 (ap s, IH), 4.34 (ap d,J= 10 Hz, IH), 4.08 (dd,J=12.0,3.6 Hz, IH), 3.99 - 3.94 (m, IH), 3.96 (s, 3H), 3.67 (m, IH), 2.52 (m, 2H), 2.06 (m, IH), 1.93 (m, 2H), 1.77 (m, 2H), 1.63 (m, 3H), 1.50 (s, 3H), 1.56 - 1.42 (m, 4H), 1.25 (m, 1 H), 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.09 (s, 9H), 1.10-0.93 (m, 2H), 0.85 (m, 2H), 0.69 (m, IH), 0.49 (m, 1 H).
[0204]Primer 18. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 18-1: Intermedijer BI (1.94 g, 6.44 mmol) je rastvoren u MeCN (30 mL) pod argonom. Dodaju se Intermedijer El (2.02 g, 7.4 mmol) i CS2CO3(7.5 mmol), i rezultujuća smeša meša tokom 8 h na rt. Intermedijer El (200 mg, 0.73 mmol) i CS2CO3(245 mg, 0.75 mmol) se opet dodaju, i reakciona smeša meša dodatnih 15 h. Reakciona smeša se procedi preko celita sa EtOAc i koncentruje. Dobijeni sirovi ostatak se rastvori u CH2CI2, koncentruje na 12 g silika gela i prečišćava hromatografijom na silika gelu (5% do 20% EtOAc u heksanu) dajući 18-1 u obliku bele pene (2.63 g). LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C24H33CIN3O6: 494.2; nađeno: 494.1.
Korak 2. Dobijanje 18-2: Supstituisani hinoksalin 18-1 (905 mg, 1.84 mmol) se rastvori u terc-butil acetatu (7 mL) i CH2CI2(1.75 mL). MeSOsH (600 uL, 9.2 mmol) se dodaje u kapima tokom 45 s, i dobijeni žuti rastvor meša na rt tokom 50 min. Dodatni MeSOsH (100 uL, 1.5 mmol) se dodaje u kapima, i reakcija meša dodatnih 10 min. Reakciona smeša se prenese u smešu EtOAc
(20 mL) i zasićenog vodenog rastvora NaHC03(30 mL), koja se takođe meša. Faze se razdvoje, i vodena faza ekstrahuje sa EtOAc (20 mL). Kombinovanea organska faza se sušei preko Na2S04, filtrira, i koncentruje dajući amin 18-2 kao bezbojni ostatak (680 mg). LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C19H25CIN3O4: 394.2; nađeno: 394.2.
Korak 3. Dobijanje 18-3: Amin 18-2 (680 mg, 1.73 mmol) i Intermedijer Dl (600 mg, 2.1 mmol) se rastvore u DMF-u (10 mL). Doda se DIPEA (925 uL, 5.30 mmol), a zatim HATU (880 mg, 2.3 mmol). Reakcija se meša 110 min na rt i razblaži zasićenim vodenim rastvorom NaHC03(30 mL) i EtOAc (30 mL). Faze se razdvoje i organska faza ispere poluzasićenim slanim rastvorom (2 x 40 mL), suši preko anhidrovanog Na2S04, filtrira i koncentruje do sirovog ostataka. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (10% do 20% EtOAc u heksanima) daje 18-3 u obliku bezbojnog ostatka (703 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C34H48CIN4O7: 659.3; nađeno: 659.4.
Korak 4. Dobijanje 18-4: U mešajuću heterogenu smešu 18-3 (703 mg, 1.07 mmol), PdCl2(dppf>CH2Ci2 (48 mg, 0.059 mmol) i kalijum-viniltrifluoroborata (290 mg, 2.16 mmol) u EtOH (11 mL) uvodi se argon tokom 15 min. Doda se trietilamin (320 uL, 2.3 mmol) i smeša zagreva na 75 °C tokom 70 min. Reakciona smeša se ohladi do ambijentalne temperature i razblaži sa EtOAc-om (40 mL) i poluzasićenim slanim rastvorom (30 mL). Faze se razdvoje i organska faza suši preko Na2S04, filtrira, i koncentruje. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (10% do 20% to 30% EtOAc u heksanu) daje 18-4 u obliku žutog ostatka. (490 mg). LCMS-ESL( m/ z) :
[M+H]<+>izračunato za C36H51N4O7: 651.4; nađeno: 651.3.
Korak 5. Dobijanje 18-5: U rastvor 18-4 (490 mg, 0.179 mmol) u DCE (250 mL) uvodi se argon tokom 15 min. Doda se Zhan 1B katalizator (66 mg, 0.090 mmol, Strem) u obliku rastvora u DCE (5 mL) i dobijeni rastvor meša na 85 °C pod Ar tokom 105 min. Reakciona smeša se ohladi do rt i apsorbuje na silika gelu (7.5 g). Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (10% do 30% EtOAc u heksanu) daje 18-5 kao amorfni ostatak. (290 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C34H47N4O7: 623.3; nađeno: 623.3.
Korak 6: Dobijanje 18-6: Olefin 18-5 (290 mg, 0.072 mmol) je rastvoren u EtOAc (5.5 mL) i EtOH (5.5 mL) i reakcioni sud produvan argonom. Pd/C (10 wt % Pd, 92 mg) se doda u jednoj porciji i reakcioni sud dva puta produva H2. Reakcija se meša na rt pod 1 atm H2tokom 1.5 h i filtrira preko celita i koncentruje dajući sirovi ostatak 18-6 koji se koristi bez daljeg prečišćavanja (LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C34H49N4O7: 625.4; nađeno: 625.0.
Korak 7. Dobijanje 18-7: 18-6 (0.466 mmol) je rastvoren u CH2CI2(4.3 mL) pod argonom. TMSOTf (210 uL, 1.16 mmol) se dodaje u kapima tokom 30 s. Reakcija se meša 65 min i doda se još jedna porcija TMSOTf (50 uL, 0.28 mmol). Reakcija se meša dodatnih 100 min i doda se još TMSOTf (100 uL, 0.55 mmol). Reakcija se meša dodatnih 105 min i koncentrujein vacuo.Dobijeni sirovi ostatak je rastvoren u CH2CI2(20 mL) i dodat je 0.2 M vodeni rastvor NaOH (10 mL). Smeša se meša tokom 5 min i zakiseli 1 M vodenim rastvorom HC1 (20 mL). Faze se odvoje i vodena faza ekstrahuje sa CH2CI2(2 x 20 mL). Kombinovane organske faze se suše preko MgS04, filtriraju, i koncentuju dajući 18-7 u obliku braon čvrste supstance. (273 mg). LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C30H41N4O7: 569.3; nađeno: 568.9.
Korak 8. Dobijanje Primera 18: U suspenziju kiseline 18-7 (28 mg, 0.049 mmol) i Intermedijera A10 (26.5 mg, 0.087 mmol) u MeCN (1.3 mL) se doda DIPEA (55 uL, 0.31 mmol). U dobijeni rastvor doda se HATU (30.5 mg, 0.080 mmol). Reakcija se meša na rt tokom 1 h i dodatna porcija Intermedijera A10 (3 mg, 0.01 mmol) se doda. Nakon dodatnih 15 min, reakcija se razblaži sa EtOAc (30 mL) i IM vodenim rastvorom HC1 (20 mL). Faze se razdvoje i vodena faza ekstrahuje sa EtOAc (30 mL). Kombinovana organska faza se suši preko Na2S04, filtrira, i koncentruje dajući sirovi ostatak. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (10% do 40% aceton u heksanu) daje amorfni ostatak koji se liofilizuje iz vode i MeCN dajući Primer 18 u obliku amorfne čvrste supstance. (26.4 mg). Analitički HPLC RetTime: 8.42 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C39H53F2N6O9S: 819.4 ; nađeno: 819.1. 'H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 9.68 (s, IH), 7.82 (d, /= 9.1 Hz, IH), 7.19 (dd,J=9.1, 2.8 Hz, IH), 7.08 (d, /= 2.6 Hz, IH), 6.86 (s, IH), 6.14 - 5.70 (m, IH), 5.65 (d,J=9. 9 Hz, IH), 5.56 - 5.50 (m, IH), 4.53 - 4.40 (m, 3H), 4.12(dd, J=11.9, 4.3 Hz, IH), 3.93 (s, 3H),3.81 -3.74 (m, IH), 3.06 -2.64 (m, 4H),2.10- 1.35 (m, 13H), 1.13 (d, / = 7.5 Hz, 3H), 1.09 (s, 9H), 1.04 - 0.65 (m, 6H), 0.52 - 0.41 (m, IH).
[0205]Primer 19. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0206]Korak 1. Dobijanje Primera 19: U suspenziju kiseline 18-7 (8.8 mg, 0.015 mmol) i Intermedijera A9 (7.4 mg, 0.025 mmol) u MeCN (0.5 mL) dodat je DIPEA (14 uL, 0.08 mmol). U dobijeni rastvor dodat je HATU (9.1 mg, 0.024 mmol). Reakcija je mešana na rt tokom 1 h i dodatna porcija Intermedijera A9 (5 mg, 0.02 mmol) i HATU (5 mg, 0.01 mmol) su dodati. 1.5 h nakon dodatka, reakcija je razblažena sa EtOAc (30 mL), 0.2 M vodenim rastvorom HC1 (10 mL), i slanim rastvorom (10 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Kombinovana organska faza je osušena preko Na2S04, procedjena, i koncentrovana dajući sirovi ostatak. Prečišćavanjem hromatografijom na silika gelu (10% do 40% aceton u heksanu) dobijen je ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN dajući Primer 19 kao belu amorfnu čvrstu supstancu (8.5 mg). Analitički HPLC RetTime: 8.69 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C38H51F2N6O9S: 805.3 ; nađeno: 805.2. 'H NMR (300 MHz, CDCb) 8 10.12 (s, IH), 7.83 (d,J =9.1 Hz, IH), 7.19 (dd, J= 9.1, 2.7 Hz, IH), 7.09(d, J=2.7 Hz, IH), 6.77 (s, 1 H), 6.25 -5.76 (m, IH), 5.57 (d,J=3.7 Hz, 1 H), 5.51 (d,J=9.9 Hz, IH), 4.49 - 4.37 (m, 3H), 4.13 (dd,J=12.2, 4.3 Hz, 1 H), 3.94 (s, 3H), 3.79 - 3.72 (m, IH), 3.01 - 2.69 (m, 4H), 2.13 - 2.06 (m, IH), 2.01 - 1.22 (m, 9H), 1.14( d, J=7.2 Hz, 3H), 1.09 (s, 9H), 1.06 - 0.82 (m, 6H), 0.76 - 0.62 (m, IH), 0.54
- 0.41 (m, IH).
[0207]Primer 20. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-etilciklopropil}-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0208]Korak 1. Dobijanje Primera 20: U suspenziju kiseline 18-7 (10 mg, 0.018 mmol) i Intermedijera A3 (6.3 mg, 0.023 mmol) u MeCN (0.5 mL) dodat je DIPEA (15 uL, 0.086 mmol). Dobijenom rastvoru dodat je HATU (9.0 mg, 0.024 mmol). Reakcija je mešana na rt tokom 2.5 h dodatna porcija Intermedijera A3 (6.5 mg, 0.024 mmol) je dodata. 45 min nakon toga, reakcija je razblažena sa EtOAc (2 mL) i 1 M vodenim rastvorom HC1 (1.5 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (4x 1.5 mL). Kombinovana organska faza je osušena preko Na2S04, procedjena, i koncentrovana dajući sirovi ostatak. Prečišćavanjem hromatografijom na silika gelu (20% do 25% do 30% aceton u heksanu) dobijen je ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN dajući Primer 20 kao belu amorfnu čvrstu supstancu. Analitički HPLC RetTime: 8.40 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C39H55N6O9S: 783.4; nađeno: 783.2. 'H NMR (300 MHz, CDCb) S 9.98 (s, IH), 7.83 (d,J=9.1 Hz, IH), 7.19 (dd,J=9.1, 2.8 Hz, IH), 7.09 (d,J =2.7 Hz, IH), 6.42 (s, IH), 5.57 (d,J=3.8 Hz, 1 H), 5.36 (d,J=9.9 Hz, IH), 4.48 - 4.34 (m, 3H), 4.11 (dd,/= 11.8, 4.1 Hz, IH), 3.94 (s, 3H), 3.79 - 3.72 (m, IH), 2.98 - 2.68 (m, 4H), 1.95 - 0.80 (m, 33H), 0.76 - 0.61 (m, IH), 0.53 - 0.41 (m, 1 H).
[0209]Primer 21. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-etil-l-{[(l-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0210]Korak 1. Dobijanje Primer 21: U suspenziju kiseline 18-7 (94.9 mg, 0.167 mmol) i Intermedijera A4 (74.5 mg, 0.263 mmol) u MeCN (2.5 mL), doda se DIPEA (180 uL, 1.0 mmol). U dobijeni rastvor se doda HATU (9.0 mg, 0.024 mmol). Reakcija se meša na rt tokom 110 min i dodatne porcije Intermedijera A4 (31 mg, 0.11 mmol) i DIPEA (50 uL, 0.29 mmol) se dodaju. Posle dodatnih 40 min, reakciona smeša se razblaži EtOAc-om (30 mL), 0.2 M vodenim rastvorom HC1 (20 mL), i slanim rastvorom (10 mL). Razdvoje se faze i vodena faza ekstrahuje sa EtOAc (20 mL). Kombinovana organska faza se suši preko Na2S04, filtrira i koncentruje dajući sirovi ostatak. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (10% do 40% aceton u heksanu) daje ostatak koji liofilizovan iz vode i MeCN kako bi se dobio Primer 21 kao bela amorfna čvrsta supstanca (102.1 mg). Analitički HPLC RetTime: 8.83 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C4oH57N609S: 797.4; nađeno: 797.5. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 9.76 (s, 1 H), 7.80 (d, /= 9.1 Hz, IH), 7.17(dd,/=9.1,2.8Hz, IH), 7.07(d,/=2.7Hz, IH),6.92 (s, IH), 5.58 - 5.42 (m, 2H), 4.48 - 4.36 (m, 3H), 4.09 (dd,J=11.8, 4.2 Hz, IH), 3.92 (s, 3H), 3.79 - 3.74 (m, IH), 2.97 - 2.66 (m, 4H), 1.80 - 0.88 (m, 33H), 0.84 - 0.77 (m, IH), 0.77 - 0.61 (m, 2H), 0.52 - 0.40 (m, IH).
[0211]Primer 22. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2S)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(2-fluoroetil)ciklopropil]-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0212]Korak 1. Dobijanje Primera 22: U suspenziju kiseline 18-7 (30.1 mg, 0.0529 mmol) i Intermedijera A5 (35 mg, 0.12 mmol) u MeCN (0.5 mL), doda se DIPEA (85 uL, 0.49 mmol). U dobijeni rastvor se doda HATU (34.5 mg, 0.0907 mmol). Reakcija se meša na rt tokom 90 min i razblaži sa EtOAc-om (30 mL), 0.2M vodenim rastvorom HC1 (20 mL), i slanim rastvorom (10 mL). Faze se razdvoje i vodena faza ekstrahuje sa EtOAc (30 mL). Kombinovane organska faza se suši preko Na2S04, filtrira, i koncentruje dajući sirovi ostatak koji je rastvoren u CH2CI2i adsorbovan na 2 g silika gela. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (15% do 55% acetona u heksanu) daje ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN dajjući Primer 22 u obliku bele amorfne čvrste supstance (35.5 mg). Analitički HPLC RetTime: 8.54 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C39H54FN6O9S: 801.4; nađeno: 801.3. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 9.95 (s, IH), 7.82 (d,J=9.1 Hz, IH), 7.19 (dd,J=9.1, 2.8 Hz, IH), 7.08 (d,/=2.7 Hz, IH), 6.68 (s, IH), 5.56 (d,J=3.9 Hz, 1 H), 5.43 (d,/=9.9 Hz, IH), 4.57 - 4.29 (m, 5H), 4.12 (dd, 7= 11.8, 4.1 Hz, IH), 3.93 (s, 3H), 3.78 - 3.71 (m, IH), 2.97 - 2.67 (m, 4H), 2.12 - 1.25 (m, 14H), 1.15 (d,J=1A Hz, 3H), 1.10 (s, 9H), 1.06 - 0.89 (m, 4H), 0.76 - 0.62 (m, IH), 0.53 - 0.42 (m, 1 H).
[0213]Primer 23. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2S)-2-(2-fluoroetil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0214]Korak 1. Dobijanje Primera 23: U suspenziju kiseline 18-7 (30.5 mg, 0.0536 mmol) i Intermedijera A6 (24.8 mg, 0.0824 mmol) u MeCN-u (0.5 mL) doda se DIPEA (60 uL, 0.34 mmol). U dobijeni rastvor se doda HATU (32.3 mg, 0.0850 mmol). Reakcija se meša na rt tokom 75 min i dodatna porcija Intermedijera A6 (9 mg, 0.03 mmol) se doda. Nakon dodatnih 75 min, reakciona smeša se razblaži sa EtOAc (30 mL), 0.2M vodenim rastvorm HC1 (20 mL), i slanim rastvorom (10 mL). Faze se razdvoje i vodena faza ekstrahuje sa EtOAc (30 mL). Kombinovana organska faza se suši preko Na2S04, filtrira, i koncentruje dajući sirovi ostatak koji je rastvoren u CH2CI2i adsorbovan na 2 g silika gela. Prečišćavanjem hromatografijom na silika gelu (15% do 55% acetona u heksanu) dobijen je ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN dajući Primer 23 u obliku bele amorfne čvrste supstance (37.1 mg). Analitički HPLC RetTime: 8.64 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C40H56FN6O9S: 815.4; nađeno: 815.6. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 5 9.63 (s, IH), 7.83( d, J=9.1 Hz, IH), 7.20 (dd,/= 9.1, 2.8 Hz, IH), 7.10(d, 7=2.7Hz, IH), 6.75 (s, IH), 5.56 (d,J=3.9 Hz, 1 H), 5.50 (d,J=10.0 Hz, IH), 4.56 - 4.34 (m, 5H), 4.13 (dd,J=11.8, 4.2 Hz, 1 H), 3.95 (s, 3H), 3.82 - 3.75 (m, IH), 2.98 - 2.70 (m, 4H), 2.07 - 2.00 (m, 1 H), 2.00 - 1.93 (m, IH), 1.88- 1.44 (m, 12H), 1.32- 1.26(m,IH), 1.17 (d, J= 7.4 Hz, 3H),1.12(d,J= 10.6 Hz, 9H), 1.07 - 0.83 (m, 4H), 0.81 - 0.65 (m, 2H), 0.52 - 0.44 (m, 1 H).
[0215]Primer 24. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2S)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(2,2-difluoroetil)ciklopropil]-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11, 12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0216]Korak 1. Dobijanje Primera 24: U suspenziju kiseline 18-7 (30.2 mg, 0.0531 mmol) i Intermedijera A7 (25.9 mg, 0.0850 mmol) u MeCN (0.5 mL) doda se DIPEA (60 uL, 0.34 mmol). U dobijeni rastvor se doda HATU (32 mg, 0.084 mmol). Reakcija se meša na rt tokom 75 min a onda se doda dodatna porcija Intermedijera A7 (3.0 mg, 0.0098 mmol). Nakon još 30 min, reakciona smeša se razblaži sa EtOAc (30 mL), 0.2M vodenim rastvorom HC1 (20 mL), i slanim rastvor (10 mL). Faze se razdvoje i vodena faza ekstrahuje sa EtOAc (30 mL). Kombinovana organska faza se suši preko Na2S04, filtrira, i koncentruje dajući sirovi ostatak koji je rastvoren u CH2CI2i adsorbovan na 2 g silika gela. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (15% do 55% acetona u heksanu) daje ostatak koji koji liofilizovan iz vode i MeCN dajeući Primer 24 u obliku bele amorfne čvrste supstance (35.5 mg). Analitički HPLC RetTime: 8.62 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C39H53F2N6O9S: 819.4; nađeno: 819.2. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 9.99 (s, IH), 7.82 (d,J=9.1 Hz, 1 H), 7.19 (dd,7= 9.1,2.8 Hz, IH), 7.08 (d,J=2.7 Hz, IH), 6.69 (s, IH), 5.99 - 5.64 (m, 1 H), 5.56 (d,J=3.9 Hz, IH), 5.40 (d,J=10.0 Hz, IH), 4.47 - 4.39 (m, 3H), 4.14 - 4.08 (m, IH), 3.93 (s, 3H), 3.78 - 3.72 (m, IH), 2.96 - 2.67 (m, 4H), 2.29 - 2.16 (m, 2H), 1.83 - 1.24 (m, 12H), 1.15 (d,J=7.4 Hz, 3H), 1.09 (s, 9H), 1.05 - 0.82 (m, 4H), 0.74 - 0.63 (m, IH), 0.53 - 0.42 (m, IH).
[0217]Primer 25. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2S)-2-(2,2-difluoroetil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0218]Korak 1. Dobijanje Primera 25: U suspenziju kiseline 18-7 (30.3 mg, 0.0532 mmol) i Intermedijera A8 (28.3 mg, 0.0887 mmol) u MeCN (0.5 mL) doda se DIPEA (60 uL, 0.34 mmol). U dobijeni rastvor se doda HATU (32.4 mg, 0.0852 mmol). Reakcija se meša na rt tokom 2.5 h i razblaži sa EtOAc-om (30 mL), 0.2 M vodenim rastvorom HC1 (20 mL), i slanim rastvorom (10 mL). Faze se razdvoje i vodena faza ekstrahuje sa EtOAc (30 mL). Kombinovana organska faza se suši preko Na2S04, filtrira, i koncentruje dajući sirovi ostatak koji je rastvoren u CH2CI2i adsorbovan na 2 g silika gela. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (15% do 55% acetona u heksanu) daje ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN dajući Primer 25 u obliku bele amorfne čvrste supstance (33.9 mg). Analitički HPLC RetTime: 8.66 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C40H55F2N6O9S: 833.4; nađeno: 833.4. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 5 9.62 (s, IH), 7.82 (d,J=9.1 Hz, IH), 7.18 (dd,J=9.1, 2.8 Hz, 1 H), 7.08 (d,J=2.7 Hz, 1 H), 6.64 (s, IH), 6.04 - 5.66 (m, 1 H), 5.54(d, J=4.0 Hz, IH), 5.47(d, J =10.0 Hz, IH), 4.50 - 4.38 (m, 3H), 4.11 (dd,J=11.8, 4.2 Hz, IH), 3.93 (s, 3H), 3.82 - 3.71 (m, IH), 2.98 - 2.68 (m, 4H), 2.27 - 2.11 (m, 2H), 1.96 - 1.41 (m, 12H), 1.32(dd, J=9.6, 5.4 Hz, IH), 1.15 (d,J=7.4 Hz, 3H), 1.10 (s, 9H), 1.05 - 0.64 (m, 6H), 0.51 - 0.42 (m, IH).
[0219]Primer 26. Dobijanje (lR,4S,4aR,8S,HS,12S,13R,25aR)-8-terc-butil-N-[(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-17-metoksi-12-metil-6,9^ 2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-heksadekahidro-lH,llH-l,4:10,13-dimetanohinoksalino[2,3-k][l,10,3,6]benzodioksadiazaciklononadecin-l 1-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 26-2: U rastvor 26-1 (311 mg, 0.710 mmol; dobijen slično kao 18-1 Primera 18 zamenjujući Intermedijer B2 za Intermedijer BI u Koraku 1) u dioksanu (1.8 mL), doda se 4M HC1 u dioksanu (1.8 mL, 7.2 mmol). Reakcija se meša tokom 15.5 h na rt i onda koncentruje pod sniženim pritiskom dajući 26-2 kao belu čvrstu amorfnu supstancu koja se koristi bez daljeg prečišćavanja u sledećem Koraku. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C16H19CIN3O4: 352.1; nađeno: 352.2.
Koraci 2 i 3. Dobijanje smeše dijastereomera 26-3 and 26-4: Amin hidrohlorid 26-2 (0.710 mmol) je rastvoren zajedno sa 1:1 smešom Intermedijera D9 i DIO (266 mg, 0.788 mmol) i DIPEA (600 (uL, 3.4 mmol) u DMF (4.5 mL). HATU (360 mg, 0.95 mmol) se doda u jednoj porciji. Reakcija se meša tokom 1.75 h na rt i razblaži zasićenim vodenim rastvorom NaHCCb(20 mL), vodom (10 mL) i EtOAc-om (30 mL). Faze se razdvoje, a organska faza se ispere dva puta smešom vode (30 mL) i slanog rastvora (5 mL). Organska faza se suši preko anhidrovanog Na2S04, filtrira i koncentruje do sirovog ostatka koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu (10% do 30% EtOAc u heksanu) dajući bezbojni ostatak. (380 mg; LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C35H48CIN4O7: 671.3; nađeno: 671.6). Heterogena smeša ovog ostatka koja se meša, PdCb(dppf),CH2Cl2(35 mg, 0.043 mmol) i and kalijum-viniltrifluoroborata (156 mg, 1.16 mmol) u EtOH (7 mL) se zasiti argonom tokom nekoliko minuta. Doda se trietilamin (170 uL, 1.2 mmol), i onda smeša zagreva na 70 °C tokom 55 min. Reakciona smeša se onda ohladi do ambijetalne temperature, razblaži sa EtOAc (40 mL), i ispere vodom (30 mL). Organski slojevi se suše preko anhidrovanog Na2S04, filtriraju i koncentruju dajući ostatak koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu (15% do 30% EtOAc u heksanu) dajući smešu dijastereomera 26-3 i 26-4 u obliku žutog ostatka (277 mg). LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C37H51N4O7: 663.4; nađeno: 663.3.
Korak 4. Dobijanje 26-5: Smeša dijastereomera 26-3 i 26-4 (277 mg, 0.419 mmol) je rastvorena u DCE (140 mL) i rastvor zasićen argonom tokom 15 min. Zhan 1B katalizator (37 mg, 0.050 mmol, Strem) se doda i dobijeni rastvor meša na 85 °C pod argonom Ar tokom 1.5 h. Reakciona smeša se onda koncentruje i prečisti hromatografijom na silika gelu (20% do 50% EtOAc u heksanu) dajući 26-5 kao amorfni ostatak. (105 mg). LCMS-ESI<+>( m/ z) :
[M+H]izračunato za C35H47N4O7: 635.3; nađeno: 635.3.
Koraci 5 i 6. Dobijanje 26-6: U rastvor 26-5 (105 mg, 0.165 mmol) ul:l EtOAc:EtOH (4 mL) se doda Pd/C (10 wt % Pd, 43 mg). Reakcioni sud se produva dva puta sa H2i meša na rt pod 1 atm H2tokom 1 h. Reakciona smeša se filtrira preko Celita i koncentruje dajući sirovi ostatak (106 mg; LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C35H49N4O7: 637.4; nađeno: 637.3). Ostatak se onda rastvori u THF (0.8 mL). MeOH (0.4 mL), voda (0.4 mL) i LiOH»H20 (67 mg, 1.6 mmol) se dodaju i smeša meša na 45 °C tokom 14.5 h. Reakcija se prekida sa IN vodenim rastvorom HC1 (1.3 mL) i onda razblaži sa CH2CI2(30 mL) i IN vodenim rastvorom HC1 (20 mL). Faze se razdvoje, i vodena faza ekstrahuje sa CH2CI2(30 mL). Kombinovana organska faza se suši preko MgS04, filtrira i koncentruje dajući 26-6 kao ostatak (93.8 mg) koji se direktno koristi u Koraku 7. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C34H47N4O7: 623.3; nađeno: 623.3.
Korak 7. Dobijanje Primera 26: U suspenziju kiseline 26-6 (93.8 mg, 0.151 mmol) i Intermedijera A9 (58 mg, 0.20 mmol) u MeCN, doda se DIPEA (120 uL, 0.69 mmol). U dobijeni rastvor se doda HATU (73.5 mg, 0.193 mmol). Reakcija se meša na rt tokom 100 min i dodatna porcija Intermedijera A9 (6 mg, 0.02 mmol) se doda. Nakon dodatnih 30 min, još Intermedijera A9 (9 mg, 0.03 mmol), HATU (9 mg, 0.02 mmol) i DIPEA (10 uL, 0.06 mmol) se dodaju. Reakcija se meša tokom još 50 min, a onda razblaži sa EtOAc (25 mL), 0.2M vodenim rastvorom HC1 (20 mL) i slanim rastvorom (10 mL). Faze se razdvoje i vodena faza se ekstrahuje sa EtOAc (25 mL). Kombinovana organska faza se suši preko Na2S04, filtrira, i koncentruje dajući sirovi ostatak. Prečišćavanjem hromatografijom na silika gelu (25% do 40% aceton u heksanu) dobijenje amorfni ostatak koji liofilizovan iz vode i MeCN dajući Primer 26 u oblike bele amorfne čvrste supstance.
(113 mg). Analitički HPLC RetTime: 9.19 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C42H57F2N609S: 859.4; nađeno: 859.2. 'H NMR (400 MHz, CDC13) 5 10.02 (s, IH), 7.80 (d,J =9.1 Hz, IH), 7.21 - 7.15 (m, 2H), 7.07 (d,J=2.7 Hz, IH), 6.13 - 5.79 (m, IH), 5.63( d, J=10.1 Hz, IH), 5.50 - 5.45 (m, IH), 4.51 (d,J= 10.1 Hz, IH), 4.44 (d,J= 7.4 Hz, IH), 4.25 (s, IH), 4.18 - 4.12 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.02 - 2.77 (m, 3H), 2.66 - 2.57 (m, IH), 2.18 - 0.90 (m, 36H).
[0220]Primer 27. Dobijanje (3aR,7S,10S,llS,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-16-metoksi-11 -metil-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-1 Oh-9,12- metanociklopenta[ 18,19] [ 1,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 27-1: Amin hidrohlorid 26-2 (217 mg, 0.504 mmol) se tretira sa BEP (207 mg, 0.756 mmol), Intermedijerom D5 (283 mg, 0.909 mmol), EtOAc (9 mL), NMP (1 mL) i DIPEA (0.44 mL, 2.5 mmol), a onda zagreje na 50 °C. Posle 1.5 h, reakciona smeša se razblaži sa EtOAc. Organski rastvor se ispere, redom, zasićenim vodenim rastvorom NaHC03i slanim rastvorom, suši preko MgS04, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (9% to 40% EtOAc/Hex) dajući amid 27-1 (235 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H52CIN4O7: 687.35; nađeno: 688.13.
Korak 2. Dobijanje 27-2: Amid 27-1 (235 mg, 0.342 mmol) se tertira kalijum-viniltrifluoroboratom (69 mg, 0.513 mmol), Pd(dppf)Cl2'DCM (28 mg, 0.0342 mmol), EtOH (3.4 mL) i TEA (0.072 mL, 0.513 mmol), a onda zagreva do refluksa. Nakon 50 min, reakciona smeša se razblaži sa EtOAc i onda ispere H2O i slanim rastvorom. Organske faze se suše preko MgS04, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečišćava hromatografijom na silika gelu (9% do 40% EtOAc/Hex) dajući vinil-hinoksalin 27-2 (219 mg). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izračunato za C38H55N4O7: 679.41; nađeno: 679.49.
Koraci 3 i 4. Dobijanje 27-3: Vinil-hinoksalin 27-2 (219 mg, 0.323 mmol) se suspenduje u DCE (65 mL) i tretira sa Zhan 1B katalizatorom (41 mg, 0.065 mmol, Strem). Suspenzija se deoksigenuje propuštanjem N2tokom 17 min, a onda zagreva do refluksa tokom 90 min. Reakciona smeša se onda cedi preko celita i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak se prečišćava hromatografijom na silika gelu (15% do 50% EtOAc/Hex) dajući žaljeni makrocikl (165 mg; LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H51N4O7: 651.38; nađeno: 651.40). Makrociklični proizvod iz Koraka 3 je rastvoren u EtOH (10 mL) i EtOAc (2 mL) i tretiran sa 10 wt % Pd/C (95 mg). Vodonik iz balona se propusti kroz suspenziju tokom 1 min i smeša meša pod H2(1 atm) tokom dodatnih 1.5 h. Reakciona smeša se procedi preko celita i koncentruje pod sniženim pritiskom dajući željeni makrocikl 27-3 koji se koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H53N4O7: 653.39; nađeno: 653.32.
Korak 5. Dobijanje 27-4: Sirovi proizvod iz Koraka 4 je rastvoren u DCM-u i tretiran TMSOT-om (0.23 mL, 1.3 mmol). Nakon mešanja na rt tokom 1 hi 15 minuta, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ponovo rastvoren u DCM-u i dodat je pipetom u levak za odvajanje koji sadrži 1 M vodeni rastvor NaOH. Smeša je protrešena tokom 1 minuta i zakišeljena 10%-nim vodenim rastvorom HC1 do pH 1~2. Vodeni sloj je ekstrahovan tri puta DCM-om i kombinovani organski slojevi osušeni preko MgS04, procedjeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu dajući karboksilnu kiselinu 27-4 (119 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izrašunato za C32H45N4O7: 597.33; nadjeno: 597.40.
Korak 6. Dobijanje Primera 27: Karboksilna kiselina 27-4 (105 mg, 0.177 mmol) i intermedijer A10 (65 mg, 0.212 mmol) su tretirani sa TBTU-om (68 mg, 0.212 mmol), DMAP-om (26 mg, 0.212 mmol), DCM-om (1.8 mL) i DIPEA-om (0.31 mL, 1.8 mmol). Reakciona smeša je mešana na rt tokom 30 min, onda je dodato još amina A10 (40 mg, 0.131 mmol) i zagrevano do refluksa. Nakon sledećih 1.25 h, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen HPLC-om da se dobije Primer 27 (80 mg) prosečne čistoće 90% kao so TFA. Analitički HPLC RetTime: 9.06 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C41H57F2N6O9S: 847.39; nadjeno: 847.69. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 9.23 (s, IH), 7.87 - 7.72 (m, IH ), 7.31
-7.14(m, 2H), 5.84 (td,J=55.6, 6.5 Hz, 1 H), 5.58 (d,/= 22.6 Hz, IH), 4.94 - 4.81 (m, IH), 4.37 (d,/= 15.8 Hz, 1 H), 4.29 - 4.10 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.01(ddd, J=15.1, 9.9, 5.3 Hz, IH), 2.84
(p,7 = 7.4 Hz,IH), 2.75 (ddd, 7 =13.3, 10.2, 6.0 Hz, 1 H), 2.03(d, 7=9.0Hz, 2H), 1.97 - 1.74 (m, 4H), 1.73 - 1.55 (m, 6H), 1.53 (s, 3H), 1.48-1.21 (m, 8H), 1.19-1.02 (m, 14H), 0.99 - 0.80 (m, 2H).
[0221]Primer 28. Dobijanje (3aR,7S,10S,llS,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometill)ciklopropil]-16-methoksi-ll-metil-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-1OH-9,12- metanociklopenta[ 18,19] [ 1,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
[0222]Korak 1. Karboksilna kiselina 27-4 (20 mg, 0.034 mmol) i Intermedijer A9 (35 mg, 0.12 mmol) su tretirani TBTU-om (22 mg, 0.067 mmol), DMAP-om (8 mg, 0.07 mmol), DCM-om (1 mL) i DIPEA-om (0.117 mL, 0.674 mmol). Reakciona smeša je mešana na rt tokom 15 h, onda je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen HPLC-om dajući Primer 28 (22 mg) prosečne čistoće 90% kao so TFA. Analitički HPLC RetTime: 8.90 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>Izračunato za C40H55F2N6O9S: 833.37; Nadjeno: 833.61. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 9.23 (s, IH), 7.79( d, J=8.8 Hz, 1 H), 7.34 - 7.10 (m, 2H), 5.86 (td, 7= 55.8, 6.5 Hz, IH), 5.61 (s, 1 H), 4.54 (t, 7= 9.7 Hz, IH), 4.36 (d, 7 = 16.5 Hz, IH), 4.28 - 4.07 (m, 2H), 3.95 (d,7=17.8 Hz, 3H), 3.08 - 2.91 (m, 2H), 2.90 - 2.79 (m, IH), 2.73 (ddd, 7= 13.3, 10.3, 6.0 Hz, IH), 2.04 (s, 2H), 1.97- 1.74 (m, 4H),1.64 (ddd, 7=18.7, 11.6, 4.0 Hz, 4H), 1.49- 1.19 (m, 11 H), 1.18-0.94 (m, 14H), 0.94 - 0.80 (m, 1 H).
[0223]Primer 29. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -14-metoksi-3,6-diokso-9-propil-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksaline-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 29-1: U rastvor Intermedijera B5 (188 mg, 0.57 mmol) i Intermedijera El (233 mg, 0.86 mmol) u MeCN (2.85 mL) dodat je cezijum karbonat (280 mg, 9.18 mmol) na rt u atmosferi argona. Posle 19 h, reakciona smeša je procedjena kroz celit i filtrat je koncentrovan pod vakumom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (gradijent 0-100%-ni etil acetat/heksan) dajući supstituisani hinoksalin 29-1 (240 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C26H37CIN3O6: 522.2; nadjeno: 522.3.
Korak 2. Dobijanje 29-2: U rastvor 29-1 (240 mg, 0.46 mmol) u dioksanu (1 mL) dodata je 4 M hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 mL, 1 mmol) i reakcija je mešana na rt. Nakon 15 h, reakciona smeša je koncentrovana pod vakumom dajući amin hidrohlorid 29-2 (200 mg) kao bež čvrstu supstancu, koja se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C21H29CIN3O4: 422.2; nadjeno: 422.2.
Korak 3. Dobijanje 29-3: U rastvor 29-2 (200 mg, 0.46 mmol) i Intermedijera Dl (170 mg, 0.51 mmol) u MeCN (2.3 mL) dodat je HATU (192 mg, 0.51 mmol) što je praćeno dodatkom DIPEA (400 uL, 2.30 mmol) na rt u atmosferi argona. Nakon 1.5 h, reakciona smeša je koncentrovana u vakumu i sirov ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (gradijent 0-100% etil acetat/heksan) dajući amid 29-3 (67 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H52CIN4O7: 687.3; nadjeno: 687.5.
Korak 4. Dobijanje 29-4: U rastvor 29-3 (67 mg, 98 umol), TEA (20 uL, 150 umol) i kalijum viniltrifluoroborata (19.7 mg, 150 umol) u EtOH (500 uL) dodat je PdC12(dppf) (8 mg, 9.8 umol). Reakciona smeša je deoksigenovana argonom tokom 10 min i zagrevana na 78 °C. Nakon 40 min, reakciona smeša je ohladjena do rt i koncentrovana u vakumu. Sirov ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (gradijent 0-100% etil acetat/heksan) dajući vinil hinoksalin 29-4 (40.2 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C38H55N4O7: 679.4; nadjeno: 679.6.
Korak 5. Dobijanje 29-5: U rastvor 29-4 (40 mg, 59 umol) u DCE-u (11.8 mL) dodat je Zhan 1B katalizator (4 mg, 6 umol, Strem) i reakciona smeša je degasifikovana argonom 10 minuta. Reakciona smeša je zatim zagrevana na 100 °C. Nakon 1 h, reakciona smeša je ohladjena do rt i koncentrovana je pod vakumom. Sirov ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (gradijent 0-100% etil acetat/heksan) dajući makrocikl 29-5 (31 mg) kao svetio žuto ulje. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H51N4O7: 651.4; nadjeno: 651.5.
Korak 6. Dobijanje 29-6: U rastvor makrocikla 29-5 (31 mg, 47 umol) u etanolu (500 uL) dodat je Pd/C (10 wt %, 5 mg, 5 umol) na rt u atmosferi argona. Reakcioni sud je evakuisan i ponovo napunjen sa 1 atm gasovitog vodonika (3 x) i reakciona smeša je energično mešana na rt. Nakon 1 h, reakciona smeša je razblažena etil acetatom (10 mL) i procedjena je kroz cilit uz ispiranje etil acetatom (3 x 5 mL). Filtrat je koncentrovan u vakumu dajući makrocikl 29-6 (31 mg), koji se koristi u sledećem koraku direktno bez daljeng prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :
[M+H]<+>izračunato za C36H53N4O7: 653.4; nadjeno: 653.5.
Korak 7. Dobijanje 29-7: U rastvor 29-6 (31 mg, 47 umol) u DCM-u (0.5 mL) dodat je TMSOT (44 uL, 0.25 mmol) na rt u atmosferi argona. Nakon 25 min, reakciona smeša je koncentrovana u vakumu i azeotropski je osušena toluenom (2x2 mL) dajući karboksilnu kiselinu 29-7 (35 mg) kao žuto ulje, koje se direktno koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C32H45N4O7: 597.3; nadjeno: 597.4.
Korak 8. Dobijanje Primera 29: U rastvor 29-7 (35 mg, 49 umol) i Intermedijera A10 (22 mg, 74 umol) u MeCN (245 uL) dodat je HATU (28 mg, 74 umol) što je praćeno dodatkom DIPEA (43 uL, 250 umol) na rt u atmosferi argona. Nakon 3 h, reakciona smeša je koncentrovana u vakumu, prečišćena preparativnim HPLC-om (Gemini 5u Cl8 IlOA kolona, 5-100% MeCN/H20, 0.1% trifluorosirćetna kiselina mofikator) i liofilizovana dajući Primer 29 (22.3 mg) kao beli prah TFA soli. Analitički Analitički HPLC RetVreme: 8.81 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C41H56F2N6O9S: 847.4; nadjeno: 847.5. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 9.83(d, 7=9.4 Hz,1 H),7.93 (d, 7=9.1 Hz, 1 H), 7.36(d,7=9.1Hz, IH), 7.21 (d,7= 11.0 Hz, 1 H), 7.14 (s, 1 H), 5.97 (td, 7h-f= 55 Hz,7=7.2 Hz, 1 H), 5.84 (br s, 1 H), 5.41 (d, 7= 9.4 Hz, 1 H), 4.66 - 4.34 (m, 3H), 4.13 (app d, 7= 11.8 Hz, 1 H), 4.08 (s, 1 H), 3.97 (s, 3H), 3.78 - 3.71 (m, 1 H), 3.09 - 2.65 (m, 5H), 2.14 - 2.04 (m, 1 H), 1.87 - 1.34 (m, 8H), 1.52 (s, 3H), 1.12 (s, 9H), 1.08 - 0.84 (m, 10H), 0.76 - 0.62 (m, 1 H), 0.50 (dd,J=12.6, 6.6 Hz, 1 H).
[0224]Primer 30. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -14-metoksi-9-(2-metilpropil)-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11, 12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 30-1: Smeša Intermedijera B6 (139 mg, 0.405 mmol), Intermedijera El (170 mg, 0.625 mmol), i cezijum karbonata (203 mg, 0.623 mmol) u 3.3 mL acetonitrila je mešana na sobnoj temperauri tokom noći u atmosferi azota. Reakciona smeša je procedjena kroz celit, isprana etil acetatom i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-30% etil acetat u heksanu) da se dobije 30-1 (170 mg) kao providan film. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C27H39CIN3O6: 536.24; nadjeno: 536.31.
Korak 2. Dobijanje 30-2: Rastvor hlorovodonika u dioksanu (4.0 M, 0.16 mL, 0.64 mmol) je dodat rastvoru 30-1 (168 mg, 0.314 mmol) u 3.3 mL dioksana na sobnoj temperaturi. Nakon trideset minuta, dodatnih 4 ekvivalenata HC1 je dodato i smeša je mešana tokom noći. Zatim je dodato dodatnih 25 ekvivalenata HC1. Nakon trideset minuta, dodato je još 19 ekvivalenata HC1. Nakon jednog sata, dodato je još 29 ekvivalenata HC1. Nakon trideset minuta, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da se dobije 30-2 (148 mg, 85% čistoće), koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C22H31CIN3O4: 436.19; nadjeno: 436.25.
Korak 3. Dobijanje 30-3: HATU (144 mg, 0.379 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.28 mL, 1.58 mmol) su dodati smeši 30-2 (148 mg, 0.315 mmol) i Intermedijera Dl (99 mg, 0.348 mmol) u 3.5 mL DMF-a pod argonom. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa etil acetatom (3 x). Kombinovani organski deo je ispran vodom i slanim rastvorom, osušen (MgSCU), procedjen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-50% etil acetata u heksanu) da se dobije 30-3 (136 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C37H54CIN4O7: 701.36; nadjeno: 701.47.
Korak 4. Dobijanje 30-4: Pd(dppl)2Cl2'CH2Cl2(35 mg, 0.043 mmol) je dodat degasifikovanoj smeši 30-3 (135 mg, 0.193 mmol), kalijum viniltrifluoroborata (41 mg, 0.306 mmol) i trietilamina (0.040 mL, 0.289 mmol) u 2.1 mL etanola na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zagrevana na 78 °C pod argonom tokom 45 minuta. Posle hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana etil acetatom (tri puta). Kombinovani organski deo je ispran vodom i slanim rastvorom, osušen (MgS04), procedjen i koncentrovan pod sniženim pritiskom da se dobije 30-4 (133 mg), koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C39H57N4O7: 693.41; nadjeno: 693.48.
Korak 5. Dobijanje 30-5: Smeša 30-4 (133 mg, 0.192 mmol) i Zhan 1B katalizatora (16 mg, 0.022 mmol, Strem) u 38 mL DCE-a je deoksigenovana pod argonom tokom 25 minutes. Smeša je onda zagrevana na 95 °C tokom 50 minuta. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-50% etil acetat u heksanu) da se dobije 30-5 (70 mg) kao svetio žuti film. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C37H53N4O7: 665.38; nadjeno: 665.50.
Korak 6. Dobijanje 30-6: Paladijum na ugljeniku (10 wt % Pd, 22 mg, 0.0208 mmol) je dodat rastvoru 30-5 (69 mg, 0.104 mmol) u 3 mL etanola. Smeša je mešana u atmosferi vodonika tokom 1 sata i onda je procedjena kroz celit i isprana etil acetatom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da se dobije 30-6 (64 mg) kao svetio žuto-braon čvrst film koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C37H55N4O7: 667.40; nadjeno: 667.43.
Korak 7. Dobijanje 30-7: TMSOT (0.050 mL, 0.274 mmol) je dodat u kapima rastvoru 30-6 (30 mg, 0.045 mmol) u 1.2 mL dihlormetana pod argonom na sobnoj temperaturi. Nakon 45 minuta, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Nastali film je razmućen u 5 mL toluena i koncentrovan je pod sniženim pritiskom. Ovaj postupak je ponovljen još jednom da se dobije 30-7 (27 mg), koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C33H47N4O7: 611.34; nadjeno: 611.41.
Korak 8. Dobijanje Primera 30: HATU (28 mg, 0.074 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.050 mL, 0.281 mmol) su dodati smeši 30-7 (27 mg, 0.045 mmol) i Intermedijera A10 (22 mg, 0.072 mmol) u 2.2 mL acetonitrila pod argonom. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa etil acetatom (3 x). Kombinovani organski deo je ispran vodom i slanim rastvorom, osušen (MgS04), procedjen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-50% etil acetat u heksanu) i reverzno faznim preparativnim HPLC-om (15-100%-ni acetonitril u vodi, sa 0.1% puferom trifluorosirćetne kiseline) tako da se dobije nakon liofilizacije so trifluorosirćetne kiseline Primera 30 (18 mg) kao svetio žuta čvrsta supstanca. Analitički HPLC RetTime: 8.96 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C42H59F2N6O9S: 861.40; nadjeno: 861.30. 'H NMR (400 MHz, CD3OD): 5 9.17 (s, IH), 7.80 (d, J = 8.8 H, IH), 7.23 (dd, J = 8.8, 2.8 Hz, IH), 7.14 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 5.81 (td, JH-f= 56 Hz, J = 7.6 Hz, 1 H); 5.77 (d, J = 3.2 Hz, 1 H), 4.55 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 4.39 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 4.16 (dd, J = 11.8, 4 Hz, 1 H), 3.91 (s, 3H), 3.79-3.71 (m, 1 H), 2.98-2.90 (m, 1 H), 2.84 (dd, J = 12.6, 4.8 Hz, 1 H), 2.79-2.72 (m, 1 H), 2.06-1.91 (m, 3H), 1.77 (m, 3H), 1.64-1.44 (m, 6H), 1.51 (s, 3H), 1.44-1.32 (m, 3H), 1.15-1.07 (m, 1 H), 1.10 (s, 9H), 1.06-0.96 (m, 3H), 1.04-1.01 (m, 6H), 0.93-0.89 (m, 2H), 0.79-0.68 (m, 1 H), 0.52-0.47 (m, 1 H).
[0225]Primer 31. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-9-ciklopropil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 31-1: Neprečišćeni uzorak Intermedijera B3 je tretiran sa IntermedijeromEl (217 mg, 0.797 mmol), MeCN (5.7 mL) i CS2CO3(371 mg, 1.14 mmol). Nakon mešanja na rt tokom 17 h, reakciona smeša je procedjena kroz celit i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (20% do 40% EtOAc/Heksan) da se dobije hinoksalin 31-1 (143 mg). LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M-Boc+2H]<+>izračunato za C18H21CIN3O4: 378.12; nadjeno: 378.59.
Korak 2. Dobijanje 31-2: Hinoksalin 31-1 (143 mg, 0.299 mmol) je rastvoren u DCM-u (10 mL) i tretiran sa HCl-om (4.0 M u dioksanu, 5 mL, 20.0 mmol). Nakon mešanja tokom 2 h na rt, reakciona smeša je koncentrovana i sirovi 31-2 korišćen bez daljeg prečišćavanja.
Korak 3. Dobijanje 31-3: Sirovi amin hidrohlorid 31-2 je tretiran sa BEP-om (115 mg, 0.419 mmol), Intermedijerom Dl (120 mg, 0.423 mmol), EtOAc-om (9 mL), NMP-om (1 mL) i DIPEA-om (0.37 mL, 2.1 mmol), onda je zagrevan do 50 °C. Nakon 1.5 h, reakciona smeša je razblažena sa Et20. Organski rastvor je sukcesivno ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHC03i slanim rastvorom, onda osušen iznad MgS04, procedjen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (15% do 30% EtOAc/Hex) dajući amid 31-3 (166 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C33H44CIN4O7: 643.29; nadjeno: 643.48.
Korak 4. Dobijanje 31-4: Amid 31-3 (166 mg, 0.258 mmol) je tretiran kalijum viniltrifluoroboratom (52 mg, 0.387 mmol), Pd(dppf)Cl2'DCM-om (21 mg, 0.0258 mmol), EtOH (2.6 mL) i TEA-om (0.054 mL), onda je zagrevan do refluksa. Nakon 50 min, reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i isprana vodom i slanim rastvorom. Organski deo je osušen iznad MgS04, procedjen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (15% do 40% EtOAc/Hex) dajući vinil hinoksalin 31-4 (145 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C35H47N4O7: 635.34; nadjeno: 635.58.
Koraci 5 i 6. Dobijanje 31-5: Vinil hinoksalin 31-4 (145 mg, 0.228 mmol) je suspendovan u DCE-u (46 mL) i tretiran sa Zhan 1B katalizatorom (33 mg, 0.0456 mmol, Strem). Suspenzija je deoksigenovana mehurićima N2tokom 22 min, onda je zagrevana do refluksa tokom 50 min. Reakciona smeša je procedjena kroz Celit i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (25% do 35% EtOAc/Hex) dajući željeni makrocikl (54 mg; LCMS-ESL( m/ z) :[M +H]<+>izračunato za C33H43N4O7: 607.31; nadjeno: 607.67). Makrociklični proizvod iz Koraka 5 je rastvoren u EtOH (10 mL) i tretiran sa 10% Pd/C (45 mg). Vodonik iz balona je produvan kroz suspenziju tokom 1 min i hidrogenacija (1 atm) je nastavljena dodatnih 1.5 h. Reakciona smeša je procedjena kroz celit i koncentrovana pod sniženim pritiskom dajući željeni makrocikl 31-5 koji se koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C33H45N4O7: 609.33; nadjeno: 609.95.
Korak 7. Dobijanje 31-6: Sirovi proizvod 31-5 je rastvoren u THF-u i tretiran sa LiOH (1.0 M u H2O, 5 mL, 5 mmol). Nakon mešanja na rt tokom 3 dana, reakciona smeša je zagrevana uz refluks tokom 20 h. Smeša je sipana u H2O i zakišeljena 10%-nom HC1 do pH~l-2. Vodeni sloj je ekstrahovan tri puta DCM-om. Kombinovani organski deo je osušen iznad MgS04, procedjen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi material je prečišćen hromatografijom na silika gelu (80% do 100% EtOAc/Hex) dajući karboksilnu kiselinu 31-6 (24 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M +H]<+>izračunato za C32H43N4O7: 595.31; nadjeno: 595.12.
Korak 8. Dobijanje Primera 31: Karboksilna kiselina 31-6 (24 mg, 0.040 mmol) i Intermedijer A10 (25 mg, 0.081 mmol) su tretirani sa TBTU-om (23 mg, 0.081 mmol), DMAP-om (10 mg, 0.081 mmol), DCM-om (2 mL) i DIPEA-om (0.070 mL, 0.40 mmol). Reakciona smeša je mešana na rt tokom 15 h onda je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen HPLC-om dajući Primer 31 (13 mg, 34%) u približno 90% čistoće u obliku TFA soli. Analitički HPLC RetTime: 8.92 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C41H55F2N6O9S: 845.37; nadjeno: 845.67. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 9.13 (s, 1 H), 7.79 (d, 7 = 9.1 Hz, 1 H), 7.23 (dd,/= 9.1, 2.7 Hz, 1 H), 7.13( d, J =2.7 Hz, 1 H), 6.05 - 5.65 (m, 2H), 4.55( d, J=7.0 Hz, 1 H), 4.47 (d,J=11.7 Hz, 2H), 4.27 (dd,J=12.0, 3.7 Hz, 1 H), 3.94 (s, 3H), 3.78 (dd,J=6.8, 2.8 Hz, 1 H), 2.99 - 2.86 (m, 1 H), 2.80 (td,J=13.2, 4.1 Hz, 1 H), 1.98 (d,J=28.8 Hz, 2H), 1.92 - 1.67 (m, 4H), 1.65 - 1.41 (m, 10H), 1.33(d, J=27.7 Hz, 3H), 1.20 - 1.06 (m, 9H), 1.04 - 0.84 (m, 6H), 0.82 - 0.62 (m, 3H), 0.61 - 0.41 (m, 2H), 0.06 (dd,J=9.2, 4.9 Hz, 1 H).
[0226]Primer 32. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-9-benzil-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 32-1: U rastvor Intermedijera B7 (390 mg, 1.00 mmol) i Intermedijera El (272 mg, 1.00 mmol) u MeCN (5 mL) dodat je cezijum karbonat (390 mg, 1.00 mmol) na rt u atmosferi argona. Nakon 24 h, reakciona smeša je razblažena etil acetatom (50 mL). Nastala smeša je isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL), osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovanain vacuo.Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (gradijent 0-100% etil acetat/heksan) dajući hinoksalin 32-1 (550 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C30H37CIN3O6: 570.2; nadjeno: 570.2.
Korak 2. Dobijanje 32-2: U rastvor 32-1 (549 mg, 0.96 mmol) u dioksanu (2 mL) dodata je 4 M HC1 u dioksanu (2 mL, 1 mmol) i reakcija je mešana na rt. Nakon 24 h, reakciona smeša je koncentrovanain vacuodajući amin hidrohlorid 32-2 (461 mg) kao bež čvrstu supstancu, koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C25H29CIN3O4: 470.2; nadjeno: 470.2.
Korak 3. Dobijanje 32-3: U rastvor 32-2 (461 mg, 0.96 mmol) i Intermedijera Dl (369 mg, 1.10 mmol) u MeCN (5 mL) dodat je HATU (418 mg, 1.10 mmol) praćen dodatkom DIPEA (869 uL, 5.00 mmol) na rt u atmosferi argona. Nakon 24 h, reakciona smeša je koncentrovanain vacuoi sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (gradijent 0-100% etil acetat/heksan) dajući 32-3 (202.6 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato C40H52CIN4O7: 735.3; nadjeno: 735.4.
Korak 4. Dobijanje 32-4: U rastvor 32-3 (202 mg, 276 umol), TEA (56 uL, 414 umol) i kalijum viniltrifluoroborata (56 mg, 414 umol) u EtOH (2.76 mL) dodat je PdCb(dppf) (22.5 mg, 27.6 umol). Reakciona smeša je degasifikovana argonom tokom 10 min i onda zagrevana na 78 °C. Nakon 1 h, reakciona smeša je ohladjena do sobne temperature i koncentrovanain vacuo.Sirovi ostatak je prečešćen hromatografijom na silika gelu (gradijent 0-100% etil acetat/heksan) dajući 32-4 (163 mg) kao žuto ulje. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C42H55N4O7: 727.4; nadjeno: 727.5.
Korak 5. Dobijanje 32-5: U rastvor 32-4 (163 mg, 220 umol) u DCE-u (44 mL) dodat je Zhan 1B katalizator (16 mg, 22 umol, Strem) i reakciona smeša je degasifikovana argonom tokom 10 minuta. Reakciona smeša je onda zagrevana na 100 °C. Nakon 45 min, reakciona smeša je ohladjena do rt i koncentrovanain vacuo.Sirovi ostatak je prečešćen hromatografijom na silika (gradijent 0-100% etil acetate/heksan) dajući 32-5 (125 mg) kao svetio žuto ulje. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C40H51N4O7: 699.4; nadjeno: 699.4.
Korak 6. Dobijanje 32-6: U rastvor makrocikla 32-5 (124 mg, 178 umol) u etanolu (890 uL) dodat je Pd/C (10 wt % Pd, 19 mg, 18 umol) na rt u atmosferi argona. Reakcioni sud je evakuisan i ponovo napunjen gasom vodonika (3 x) i reakciona smeša je energično mešana na rt pod 1 atm H2. Nakon 2.5 h, reakciona smeša je razblažena etil acetatom (5 mL) i procedjena je kroz celit uz ispiranje etil acetatom (3x5 mL). Filtrat je koncentrovan u vakumu dajući 32-6 (139 mg), koji je korišćen direktno u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavananja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C40H53N4O7: 701.4; nadjeno: 701.5.
Koraci 7 i 8. Dobijanje Primera 32: U rastvor 32-6 (124 mg, 178 umol) u DCM-u (3 mL) dodat je TFA (2 mL) na rt u atmosferi argona. Nakon 3 h, reakciona smeša je koncentrovana u vakumu i azeotropski osušena iz toluena (2><2 mL) dajući željenu karboksilnu kiselinu kao žuto ulje, koje se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. (126 mg; LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H45N4O7: 645.3; nadjeno: 645.4). U rastvor ove karboksilne kiseline (120 mg, 178 umol) i Intermedijera A10 (119 mg, 392 umol) u MeCN (1 mL) dodat je HATU (151 mg, 3 92 umol) praćen dodatkom DIPEA (155 uL, 890 umol) na rt u atmosferi argona. Nakon 30 min, reakciona smeša je koncentrovanain vacuoi sirovi ostatak je prečešćen hromatografijom na silika gelu (gradijent 0-100% etil acetat/heksan). Frakcije koje sadrže željeni proizvod kombinovane su i ponovo prečišćene preparativnim HPLC-om (Gemini 5u Cl8 110A kolona, 5-100% MeCN/H20, 0.1% trifluorosirćetna kiselina modifikator) i liofilizovane dajući so TFA Primera 32 (23 mg) kao beli prah. Analitički HPLC RetTime: 8.81 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C45H57F2N6O9S: 895.4; nadjeno: 895.6. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 9.24 (s, 1 H), 7.73 (d,J=9.1 Hz, 1 H), 7.47 - 7.27 (m, 4H), 7.21 - 7.12 (m, 1 H), 6.65( d, J= 2.9 Hz, IH), 5.83 (td, Jh-f= 55 Hz,J=7.2 Hz, 1 H), 5.77 (br s, 1 H), 4.63 (d,J=6.9 Hz, 2H), 4.50 - 4.28 (m, 3H), 3.93 (s, 2H), 3.79 - 3.71 (m, 1 H), 3.11 - 2.99 (m, 1 H), 2.97 - 2.85 (m, 1 H), 2.82 - 2.61 (m, 3H), 1.92 (br s, 2H), 1.82 - 1.70 (m, 2H), 1.63 - 1.44 (m, 4H), 1.52 (s, 3H), 1.15 (s, 9H), 1.04 (br s, 2H), 1.02 - 0.96 (m, 2H), 0.95 - 0.88 (m, 4H), 0.78 - 0.66 (m, 1 H), 0.56 - 0.46 (m, 1 H).
[0227]Primer 33. Dobijanje (laS,2aR,6S,9S,10S,HR,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(lS,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-15-metoksi-10-metil-4,7-diokso-1 a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro- lH,9H-8,11 - metanociklopropa[4',5']ciklopenta[r,2':l 8,19][l,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[l 1,12-b]hinoksalin-9-karboksamida. Koraci 1 i 2. Dobijanje diastereomerne smeše 33-1 i 33-2: Hinoksalin 18-2 (220 mg, 0.56 mmol) je rastvoren sa 1:1 diastereomerne Intermedijerne smeše D12 i D13 (208 mg, 0.643 mmol) u MeCN (5 mL). DIPEA (280 uL, 1.6 mmol) i HATU (360 mg, 0.95 mmol) su dodati, i reakcija je mešana 1.25 h na rt. Reakcija je razblažena sa EtOAc (30 mL), zasićenim vodenim rastvorom NaHC03(15 mL), H2O (10 mL), i slanim rastvorom (10 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Organska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2S04, procedjena i koncentrovana do sirovog ostatka koji je rastvoren u CH2CI2i adsorbovan na silika gel (5 g). Prečešćeno je hromatografijom na silika gelu (10% do 30% EtOAc u heksanu) dajući belu penu (352 mg; LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C37H52CIN4O7: 699.4; nadjeno: 699.1). Heterogena smeša ovog ostatka je mešana, PdCl2(dppf),CH2Cl2(30.7 mg, 0.0376 mmol) i kalijum viniltrifluoroborat (135 mg, 1.01 mmol) u EtOH (5 mL) je izložena argonu tokom nekoliko minuta. Trietilamin (160 uL, 1.1 mmol) je dodat i smeša je zagrevana na 75 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je ohladjena do sobne temperature i razblažena sa EtOAc (30 mL), H2O (15 mL) i slanim rastvorom (15 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Organska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2S04, procedjena i koncentrovana dajući sirovi ostatak koji je rastvoren u CH2CI2i adsorbovan na silika gel (3 g). Prečešćavanjem hromatografijom na silika gelu (10% do 40% EtOAc u heksanu) dobijena je neodvojiva smeša 33-1 i 33-2 kao žuti ostatak (258 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C39H55N4O7: 691.4; nadjeno: 691.7. Korak 3: Dobijanje 33-3: Diastereomerna smeša 33-1 i 33-2 (258 mg, 0.373 mmol) je rastvorena u DCE-u (125 mL) i rastvor zasićem argonom tokom 10 min. Zhan 1B katalizator (41 mg, 0.056 mmol, Strem) je dodat rastvoru u DCE-u (3.3 mL) i nastali rastvor je mešan na 85 °C u Ar tokom 105 min. Reakciona smeša je koncentrovana na 5 g silika gela i prečešćena je hromatografijom na silika gelu (0% do 25% EtOAc u heksanu) dajući makrocikl 33-3 kao amorfni ostatak (81.9 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C37H51N4O7: 663.4; nadjeno: 663.3. Koraci 4 i 5: Dobijanje 33-4: U rastvor 33-3 (81.9 mg, 0.124 mmol) u 1:1 EtOAc:EtOH (4 mL) dodat je Pd/C (10 wt % Pd, 19 mg). Reakcioni sud je dva puta očišćen sa H2i mešanje na rt pod 1 atm H2tokom 2.5 h. Reakciona smeša je procedjena kroz celit i koncentrovana dajući sirovi ostatak. Ovaj ostatak je rastvoren u CH2CI2(1.2 mL) i dodat je TMSOT-u (90 uL, 0.50 mmol). Smeša je mešana na rt tokom 4.5 h. Reakcija je koncentrovanain vacuoi rastvorena u CH2CI2(5 mL). Dodat je 0.2 M vodeni rastvor NaOH (5 mL) i dvofazna smeša je mešana na rt tokom 5 min. Smeša je zakišeljena 1 M vodenim rastvorom HC1 (20 mL) i razblažena sa CH2CI2(20 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa CH2CI2(2 x 20 mL). Kombinovana organska faza je osušena iznad MgS04, procedjena i koncentrovana dajući 33-4 kao sirovi ostatak (76.1 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C33H45N4O7: 609.3; nadjeno: 608.9. Korak 6: Dobijanje Primera 33: Suspenziji kiseline 33-4 (43 mg, 0.072 mmol) i Intermedijera A9 (40.9 mg, 0.14 mmol) u MeCN (800 uL) dodat je DIPEA (100 uL, 0.57 mmol). HATU (37 mg, 0.097 mmol) je dodat nastalom rastvoru, i reakcija je mešana na rt tokom 15 h. Reakcija je zatim razblažena sa EtOAc (20 mL), 0.2 M vodenim rastvorom HC1 (10 mL) i slanim rastvorom (10 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (20 mL). Kombinovana organska faza je osušena iznad Na2S04, procedjena, i koncentrovana dajući sirovi ostatak. Ovaj ostatak je rastvoren u CH2CI2i koncentrovan na 2 g silika gela. Prečišćen je hromatografijom na silika gelu (15% do 55% aceton u heksanu) dajući amorfni ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN dajući Primer 33 kao čvrstu amorfnu supstancu bele boje (29.6 mg). Analitički HPLC RetTime: 9.07 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C4H55F2N6O9S: 845.4; nadjeno: 845.2. 'H NMR (400 MHz, CDCI3) 5 10.21 (s, 1 H), 7.82 (d,J=9.1 Hz, 1 H), 7.19( dd, J =9.1, 2.7 Hz, 1 H), 7.09 (d, /= 2.7 Hz, 1 H), 6.79 (s, 1 H), 6.21 - 5.76 (m, 1 H), 5.65 (d,J =3.9 Hz, 1 H), 5.29( d, J =9.7 Hz, 1 H), 4.99 (d,J =7.5 Hz, 1 H), 4.47 - 4.29 (m, 4H), 4.16 - 4.09 (m, 1 H), 3.93 (s, 3H), 2.99 - 2.85 (m, 2H), 2.80 - 2.64 (m, 2H), 2.24 - 2.16 (m, 1 H), 2.13 - 2.05 (m, 1 H), 2.01 - 0.95 (m, 29H), 0.56 - 0.45 (m, 1 H), 0.45 - 0.35 (m, 1 H).
[0228]Primer 34. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-etilciklopropil} -9-etil-l 8,18-difiuoro- 14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11, 12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0229]Primer 34 je dobijen na sličan način kao Primer 17, zamenom Intermedijera A3 sa Intermedijerom A10 u Koraku 7. Primer 34 je izolovan (5.7 mg) sa oko 95% čistoće. Analitički HPLC RetTime: 8.81 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C40H55F2N6O9S: 833.4; nadjeno: 833.25. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 5 10.027 (br s, 1 H), 7.98 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.29 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1 H), 7.09 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 6.32 (br s, 1 H), 5.92 (d, J = 3.6 Hz, 1 H), 5.30 (d, J = 10.0 Hz, 1 H), 4.42 - 4.33 (m, 3H), 4.08 (dd, J = 11.6, 4.0 Hz, 1 H), 3.96 (s, 3H), 3.65 (m, 1 H), 2.93 (m, 1 H), 2.51 (m, 2H), 2.02 (m, 1 H), 1.86 - 1.40 (m, 11 H) 1.34 - 1.14 (m, 7H), 1.09 (s, 9H), 1.10 - 0.82 (m, 6H), 0.72 (m, 1 H), 0.48 (m, 1 H).
[0230]Primer 35. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2S)-2-(2,2-difluoroetil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11, 12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0231]Primer 35 je dobijen na sličan način kao Primer 17, zamenom Intermedijera A8 sa Intermedijerom A10 u Koraku 7. Primer 35 je izolovan (12.8 mg) sa oko 90% čistoće. Analitički HPLC RetTime: 8.78 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C41H55F4N6O9S: 883.4; nadjeno: 883.2.<*>H NMR (400 MHz, CDCb) 8 9.69 (br s, 1 H), 7.98 (d, J = 9.2 Hz, 1 H), 7.29 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1 H), 7.09 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 6.53 (br s, 1 H), 5.91 (d, J = 4.0 Hz, 1 H), 5.84 (tt, Jh-f= 56 Hz, J = 3.6 Hz, 1 H), 5.33 (d, J = 6.4 Hz, 1 H), 4.43 (m, 2H), 4.34 (ap d, J = 9.6 Hz, 1 H), 4.08 (dd, J = 11.6, 4.0 Hz, 1 H), 3.96 (s, 3H), 3.99 - 3.94 (m, 1 H), 3.68 (m, 1 H), 2.58 - 2.52 (m, 3H), 2.20 (m, 2H), 1.82 - 1.58 (m, 7H) 1.54 - 1.40 (m, 5H), 1.36 - 1.18 (m, 6H), 1.09 (s, 9H), 1.10 - 1.00 (m, 1 H), 0.85 (m, 2H), 0.69 (m, IH), 0.49 (m, 1 H).
[0232]Primer 36. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,21aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1 a,3,4,5,6,9,10,17b, 18,18a, 19,20,21,21 a-tetradekahidro-1 H,8H-7,10-metanodiciklopropa[ 13,14:18,19] [1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 36-1: U rastvor trimetilsulfoksonijum jodida (72 mg, 0.32 mmol) u DMSO/THF-u (1:1, 2 mL) dodat je natrijum hidrid (60%, 12 mg, 0.32 mmol) i mešanje na rt tokom 2 h. Makrocikl 1-5 (103 mg, 0.16 mmol) je dodat u kapima u THF-u (3 mL). Smeša je zagrevana na 65 °C i mešana 16 h. Nakon hladjenja do rt, smeša je razblažena sa EtOAc/H20, ekstrahovana sa EtOAc, osušena iznad anhidrovanog MgS04, i koncentrovanain vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-25% EtOAc/heksan) dajući 36-1 (27 mg) kao ostatak. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H51N4O7: 651.38; nadjeno: 651.52.
Korak 2. Dobijanje 36-2: U rastvor 36-1 (26 mg, 0.04 mmol) u DCM-u (1 mL) dodat je TMSOTf (0.036 mL, 0.2 mmol) i mešan na rt tokom 2 h. Ovaj rastvor se doda pipetom u rastvor 1 N NaOH (2 mL) uz mešanje. Nakon 10 min, smeša se razblaži sa DCM-om i zakiseli sa 1 N vodenim rastvorom HC1 do pH 3. Nakon ekstrakcije vodenog sloja DCM-om, kombinovani organski sloj se osuši iznad anhidrovanog MgS04i koncentrujein vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-10% EtOAc/MeOH) dajući 36-2 (24 mg) kao ostatak koji se koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C32H43N4O7: 595.31; nadjeno: 595.43.
Korak 3. Dobijanje Primera 36: U rastvor 36-2 (24 mg, 0.041 mmol), Intermedijera A10 (16 mg, 0.053 mmol), TBTU-a (19 mg, 0.06 mmol) i DMAP-a (8 mg, 0.06 mmol) u DCM-u (2 mL) dodat je DIPEA (0.021 mL, 0.12 mmol) i reakcija je mešana na rt tokom 16 h. Dodati su ponovo Intermedijer A10 (16 mg, 0.053 mmol), TBTU (19 mg, 0.06 mmol), DMAP (8 mg, 0.06 mmol), i DIPEA (0.021 mL, 0.12 mmol) i reakcija je mešana na rt tokom 4 h. Reakcija je kvenčovana vodom, razblažena sa EtOAc, isprana zasićenim vodenim rastvorom NaHC03, slanim rastvorom, osušena iznad anhidrovanog MgS04, i koncentrovanain vacuo.Sirovi materija je prečišćen reverzno faznim HPLC-om (Gemini, 45-85% MeCN/THhO + 0.1% TFA) i liofilizovan dajući Primer 36 (3 mg) kao so TFA. Analitički HPLC RetTime: 9.06 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C41H55F2N6O9S: 845.37; nadjeno: 845.43. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 9.31 (s, 1 H), 7.72 (d, J = 10 Hz, 1 H), 7.20 - 7.17 (m, 2H), 5.60 - 5.82 (m, 2H), 5.51 (s, 1 H), 4.72 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 4.43 (d, J = 11.6 Hz, 1 H), 4.31 (s, 1 H), 4.26 - 4.22 (dd, J = 11.6, 4 Hz , 1 H), 3.94 (s, 3H), 3.78 (m, 1 H),2.60 (m, 1 H), 2.27 (m, 1 H), 2.04 (s, 3H), 1.68 (m, 3H), 1.59 (m, 2H), 1.54-1.15 (m, 11 H), 1.09 (s, 9H), 0.95 - 0.86 (m, 8H), 0.47 (m, 1 H).
[0233] Primer37. Dobijanje (lR,4S,4aR,8S,llS,12S,13R,25aR)-8-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -12-etil-17-metoksi-6,9-diokso-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-heksadekahidro-lH,HH-l,4:10,13-dimetanohinoksalino[2,3-k][l,10,3,6]benzodioksadiazaciklononadecin-ll-karboksamida.
[0234]Korak 1. Dobijanje Primera 37: U rastvor 13-6 (76 mg, 0.12 mmol), Intermedijera A10 (44 mg, 0.14 mmol), HATU-a (55 mg, 0.14 mmol) i DMAP-a (21 mg, 0.18 mmol) u DMF-u (2 mL) dodat je DIPEA (0.11 mL, 0.6 mmol) i reakcija je mešana na rt tokom 16 h. Dodati su ponovo Intermedijer A10 (44 mg, 0.14 mmol), HATU (55 mg, 0.14 mmol), DMAP (21 mg, 0.18 mmol), što je praćeno dodatkom DIPEA (0.11 mL, 0.6 mmol) i reakcija je mešana na 40 °C tokom 50 h. Reakcija je kvenčovana vodom, razblažena sa EtOAc, isprana zasićenim vodenim rastvorom NaHC03, slanim rastvorom, osušena iznad anhidrovanog MgS04i koncentrovanain vacuo.Sirovi materijal je prečišćen reverzno faznim HPLC-om (Gemini, 45-85% MeCN/tbO + 0.1% TFA) i liofilizovan dajući Primer 37 (30 mg) kao so TFA. Analitički HPLC RetTime: 9.44 min. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C44H61F2N6O9S: 887.42; nadjeno: 887.50. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 9.24 (s, 1 H), 7.76 (d, J = 9.2 Hz, 1 H), 7.20 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1 H), 7.12 (m, 1 H), 5.95 -5.66 (m, 2H), 5.43 (s, 1 H), 4.51 (d,J = 7.6Hz, 1 H),4.41 (s, 1 H), 4.20 - 4.10 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 2.94 - 2.88 (m, 1 H), 2.73 - 2.63 (m, 2H), 2.11 (br, 2H), 2.02 - 0.83 (m, 41 H).
[0235]Primer 38. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-l-{[(l-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-14-metoksi-9-metil-5-(l-metilciklopentil)-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 38-1: Amin 18-2 (192 mg, 0.487 mmol) je tretiran sa BEP-om (246 mg, 0.898 mmol), Intermedijerom D14 (278 mg, 0.898 mmol), EtOAc (9 mL), NMP-om (1 mL) i DIPEA-om (0.42 mL, 2.4 mmol), a onda je zagrevan do 50 °C. Nakon 1 h, reakciona smeša je razblažena sa EtOAc. Organski rastvor je sukcesivno ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHC03i slanim rastvorom, onda je osušen iznad MgS04, procedjen i koncentrovanin vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (15% do 35% EtOAc/Heksan) da se dobije amid 38-1 (264 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C36H50CIN4O7: 685.34; nadjeno: 685.82.
Korak 2. Dobijanje 38-2: Amid 38-1 (264 mg, 0.385 mmol) je tretiran kalijum viniltrifluoroboratom (82 mg, 0.615 mmol), Pd(dppf)Cl2'DCM (33 mg, 0.041 mmol), EtOH (4.0 mL) i TEA-om (0.086 mL, 0.62 mmol), a onda je zagrevan do refluksa. Nakon 55 min, reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i isprana vodom i slanim rastvorom. Organski deo je osušen iznad anhidrovanog MgS04, procedjen i koncentrovanin vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (15% do 30% EtOAc/Heksan) dajući vinil hinoksalin 38-2 (168 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C38H53N4O7: 677.39; nadjeno: 677.38.
Koraci 3 i 4. Dobijanje 38-3: Vinil hinoksalin 38-2 (225 mg, 0.332 mmol) je suspendovan u DCE-u (66 mL) i tretiran Zhan 1 B katalizatorom (42 mg, 0.067 mmol, Strem). Suspenzija je dagasifikovana propuštanjem mehurića N2tokom 28 min, onda je zagrevana uz refluks tokom 90 min. Reakciona smeša je zatim procedjena kroz celit i koncentrovana jein vacuo.Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (15% do 30% EtOAc/Heksan) dajući željeni makrocikl (168 mg; LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C36H49N4O7: 649.36; nadjeno: 649.33). Makrocikl je rastvoren u EtOH (25 mL) i EtOAc (5 mL) i tretiran sa Pd/C (10 wt% Pd, 95 mg). Vodonik iz balona je produvan 1 min kroz suspenziju i reakcija je mešana u atmosferi H2dodatnih 1.5 h. Po završetku reakciona smeša je procedjena kroz celit i koncentrovanain vacuodajući željeni makrocikl 38-3 koji se dalje koristi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS-ESI<+>( m/ z) :
[M+H]izračunato za C36H51N4O7: 651.38; nadjeno: 651.42.
Korak 5. Dobijanje 38-4: Neprečišćeni 38-3 iz prethodnog Koraka je rastvoren u DCM-u (10 mL) i tretiran TMSOTf-om (0.23 mL, 1.3 mmol). Nakon mešanja 1 h 15 min na rt, reakciona smeša je koncentrovanain vacuo.Ostatak se rastvori u DCM-u i pipetira u 1 M vodeni rastvor NaOH. Smeša se protrese 1 min, onda zakiseli 10%-nim vodenim rastvoriom HC1 do pH~1-2. Vodeni sloj se ekstrahuje tri puta DCM-om i kombinovani organski slojevi se osuše iznad anhidrovanog MgS04, procede i koncentrujuin vacuo.Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0% do 20% MeOH/EtOAc) dajući karboksilnu kiselinu 38-4 (131 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C32H43N407: 595.31; nadjeno: 595.29.
Korak 6. Dobijanje Primera 38: Karboksilna kiselina 38-4 (131 mg, 0.220 mmol) i Intermedijer A10 (81 mg, 0.264 mmol) su tretirani TBTU-om (85 mg, 0.264 mmol), DMAP-om (32 mg, 0.264 mmol), DCM-om (2.6 mL) i DIPEA-om (0.38 mL, 2.2 mmol). Reakciona smeša je mešana 14 h na rt, onda je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen HPLC-om dajući Primer 38 (74 mg) sa oko 90% čistoće kao so TFA. Analitički HPLC RetTime: 8.93 min. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C4iH55F2N606S: 845.37; nadjeno: 845.57. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 9.12 (s, 1 H), 7.77 (d,J=9. 2 Hz, 1 H), 7.20 (dd,J=9.0 Hz, 2.7 Hz, 1 H), 7.16 (d,/=2.8 Hz, 1 H), 5.81 (td,/ = 55.9, 6.6 Hz, 1 H), 5.59 (d,/=3.5 Hz, 1 H), 4.52 (d,/ =6.8 Hz, 1 H), 4.50 (s, 1 H), 4.40( d, J=l2. 0Hz,lH),4.18(dd,/=11.9Hz,3.9Hz, 1 H), 3.93 (s, 3H), 3.74 (m, 1 H), 2.97-2.90 (m, 1 H), 2.85-2.75 (m, 2H), 2.01 (m, 2H), 1.85-1.41 (m, 21 H), 1.12
(s, 3H), 1.08 (d,J=7.4 Hz, 3H), 0.96 (m, 2H), 0.91 (t,J=4.3 Hz, 2H), 0.70 (m, IH), 0.48 (m, 1
H).
[0236]Primer 39. Dobijanje (3aR,7S,10S,llS,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -11 -etil-16-metoksi-3 a metil-5,8-diokso-l,2,3,3a,5,6,7,8,ll,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[ 18,19] [ 1,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 39-1: Hinoksalin etar 1-1 (588.7 mg, 1.159 mmol) je rastvoren u TFA (5 mL). Rastvor je mešan 3 h na na sobnoj temperaturi. TFA je uklonjenin vacuodajući so TFA 39-1 (631.2 mg) kao bezbojni prah. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C16H19CIN3O4: 352.1; nadjeno: 352.1.
Korak 2. Dobijanje 39-2: TFA so 39-1 (631.2 mg, 1.159 mmol) je rastvorena u CH2Cl2/MeOH (3 mL/3 mL). Rastvoru je dodat TMSCHN2rastvor (2 M heksan, 3 mL, 5.177 mmol) na rt. Rastvor je mešan tokom 30 min da nastane suspenzija koja se cedi kroz porozni stakleni levak da se odvoji čvrsti deo. Filtrat je koncentrovanin vacuodajući ostatak koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu (100% etil acetat) da bi se dobio metil ester 39-2 (213.0 mg) kao bezbojni kristal. LCMS-ESf"( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C17H21CIN3O4: 366.1; nadjeno: 366.1.
Korak 3. Dobijanje 39-3: Intermedijer D7 (191.2 mg, 0.587 mmol) i metil estar 39-2 (414.1 mg, 1.132 mmol) su tretirani HATU-om (860.0 mg, 2.264 mmol) i DIPEA-om (0.59 mL, 3.396 mmol) u DMF-u (8 mL) na rt tokom 4 h. Reakcija je kvenčovana vodom (50 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (50 mL tri puta). Kombinovani organski deo je ispran slanim rastvorom (50 mL) i osušen iznad Na2S04. Nakon uklanjanja agensa za sušenje filtracijom, rastvarač je uklonjenin vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (20% etil acetat u heksanu) da bi se dobio željeni amid 39-3 (573.9 mg) kao bezbojno ulje. LCMS-ESL( m/ z) :[M+Na]<+>izračunato za C33H49ClN4Na07: 695.3; nadjeno: 695.3.
Korak 4. Dobijanje 39-4: Amid 39-3 (573.9 mg, 0.8524 mmol), kalijum trifluorovinilborat (171.3 mg, 1.279 mmol) i PdCl2dppf»CH2Cl2(62.4 mg, 0.085 mmol) su tretirani sa Et3N (0.18 mL, 1.279 mmol) u EtOH (8 mL) u atmosferi azota i pažljivo je sve refluktovano tokom 30 min. Reakcija je razblažena sa PhMe (30 mL) i rastvarač je uklonjenin vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (20% etil acetate u heksanu) da bi se dobio željeni vinil hinoksalin 39-4 (542.0 mg, 0.8152 mmol) kao narandžasta pena. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C37H52N4Na07: 687.4; nadjeno: 687.3.
Korak 5. Dobijanje 39-5: Vinil hinoksalin 39-4 (542.0 mg, 0.8152 mmol) je tretiran Zhan 1 b katalizatorom (59.8 mg, 0.08 mmol, Strem) i DCE-om (41 mL). Smeša je zagrevana lh na 80°C. Dodatni Zhan 1 b katalizator (59.8 mg, 0.08 mmol, Strem) je dodat i smeša je zagrevana na 80 °C još 30 min. Rastvarač je uklonjenin vacuoi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (20% etil acetat u heksanu) dajući makrocikl 39-5 (401.0 mg, 0.6297 mmol) kao narandžasto ulje. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C35H49N4O7: 637.4; nadjeno: 637.3.
Korak 6. Dobijanje 39-6: Makrocikl 39-5 (401.0 mg, 0.6297 mmol) je prenet u 1,4-dioksan (15 mL) i tretiran sa Pd/C (10% wt Pd, 200.0 mg) i MgO (200.0 mg) mešanjem u atmosferi vodonika. Smeša je zatim mešana lh na rt. Reakciona smeša je procedjena kroz celit (5 g) korišćenjem EtOAc (80 mL). Rastvarač je uklonjenin vacuodajući makrocikl 39-6 (425.3 mg) kao svetio narandžasto ulje. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C35H51N4O7: 639.4; nadjeno: 639.3.
Korak 7. Dobijanje 39-7: Makrocikl 39-6 (74.8 mg, 0.110 mmol) je tretiran 2 M vodenim rastvorom LiOH (1.6 mL, 3.15 mmol) u MeOH/THF (4 mL /4 mL) 8 h na rt, 2 h na 50 °C i onda još 3 h na 60 °C. Smeša je ohladjena na 0 °C korišćenjem leđnog vodenog kupatila. Smeši je dodat slani rastvor (30 mL). Sve je ekstrahovano sa CH2CI2(30 mL tri puta). Organski sloj je ispran slanim rastvorom (30 mL) i osušen iznad anhidrovanog Na2S04. Nakon uklanjanja agensa za sušenje filtracijom, rastvarač je uklonjenin vacuodajući karboksilnui kiselinu 39-7 (370.6 mg, 0.5932 mmol) kao bezbojno ulje. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C34H49N4O7: 625.4; nadjeno: 625.3.
Korak 8. Dobijanje Primera 39: Karboksilna kiselina 39-7 (100.0 mg, 0.1601 mmol) i Intermedijer A10 (73.2 mg, 0.2401 mmol) su tretirani HATU-om (91.3 mg, 0.2401 mmol) i DIPEA-om (0.14 mL, 0.8005 mmol) u DMF-u (3 mL) 5 h na rt. Reakcija je kvenčovana vodom (30 mL) i ekstrahovana EtOAc (30 mL tri puta). Organski sloj je ispran slanim rastvorom (30 mL) i osušen iznad anhidrovanog Na2S04. Nakon uklanjanja agensa za sušenje filtracijom, rastvarač je uklonjenin vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (25 do 100% etil acetat u heksanu). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su koncentrovanein vacuoi ostatak je dalje prečišćen super kritičnom tečnom hromatografijom na koloni (DAICEL Chiralpak IC 10x250 mm, 18.9 mL/min, 35% MeOH, 15 atm, 40 °C) dajući Primer 39 (80.5 mg, 0.0920 mmol, 57%) kao bezbojni prah. Analitički HPLC RetTime: 9.35 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C43H61F2N6O9S: 875.4; nadjeno: 875.4. 'H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7.81 (d,J=9.6 Hz, 1 H), 7.27 (s, 1 H), 7.24 (d,/=9.6 Hz, 1 H), 6.68 (d,J=9.6 Hz, 1 H), 5.74-6.30 (m, 3H), 4.73 (d,/ =7.2 Hz, 1 H), 4.73 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 4.40-4.60 (m, 1 H), 4.22 (d,J=9. 6 Hz, 1 H), 3.95 (s, 3H), 3.61 (q,J=7.2 Hz, 2H), 3.16-3.30 (m, 1 H), 2.50-2.77 (m, 2H), 2.20-0.60 (m, 21 H), 1.35 (s, 3H) 1.12 (t,/ =7.2 Hz, 3H), 1.18 (s, 3H), 1.02 (s, 9H).
[0237] Primer40. Dobijanje (3aR,7S,10S,llS,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(l R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-11 -etil-16-metoksi-3a-metil-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-1OH-9,12- metanociklopenta[ 18,19] [ 1,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
[0238]Primer 40 je dobijen na sličan način kao Primer 39, zamenom Intermedijera A9 sa Intermedijerom A10 u Koraku 8. Primer 40 je izolovan (70.9 mg) sa oko 92% čistoće. Analitički HPLC RetTime: 9.24 min. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]izračunato za C42H59F2N609S: 861.4; nadjeno: 861.4. 'H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7.80 (d,J=9. 6 Hz, 1 H), 7.25 (s, 1 H), 7.23 (d,J= 9. 6 Hz, 1 H), 6.70 (d,J=9. 6 Hz, 1 H), 5.60-6.10 (m, 3H), 4.69 (d,J=7.2 Hz, 1 H), 4.39 (dd,J= 12.0, 6.0 Hz, 1 H), 4.2 (d, J = 9.6 Hz, 1 H), 4.03-4.10 (m, 1 H), 3.94 (s, 3H), 3.12-3.28 (m, 1 H), 2.89-3.05 (m, 1 H), 2.50-2.76 (m, 2H), 2.30-0.80 (m, 19H), 1.36 (s, 3H) 1.25 (t,J=7.2 Hz, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.04 (s, 9H).
[0239] Primer41. Dobijanje (3aR,7S,10S,llS,12R,24aR)-7-terc-butil-N-[(lR,2S)-2-(2,2-difluoroetil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-11 -etil-16-metoksi-3a metil-5,8-diokso-l,2,3,3a,5,6,7,8,ll,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-10H-9,12-metanociklopenta[ 18,19] [ 1,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
[0240]Primer 41 je dobijen na sličan način kao Primer 39, zamenom Intermedijera A8 sa Intermedijerom A10 u Koraku 8. Primer 41 je izolovan (4.3 mg) sa oko 92% čistoće. Analitički HPLC RetTime: 9.36 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C42H59F2N609S: 889.4; nadjeno: 889.5. 'H NMR (300 MHz, CD3COCD3) 5 7.83 (d,J= 7.83 Hz, 1 H), 7.19-7.30 (m, 1 H), 5.74-6.30 (m, 3H), 4.70 (d,J=7.2 Hz, 1 H), 4.19 (dd,J=12.0, 6.0 Hz, 1 H), 4.24 (d,J=9.6 Hz, 1 H), 4.12( d, J=12.0, 9.6 Hz, 1 H), 3.96 (s, 3H), 3.10-3.26 (m, 1 H), 2.56-2.80 (m, 2H), 2.30-0.80 (m, 25H), 1.54 (s, 3H), 1.42 (s, 3H), 1.12 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.06 (s, 9H).
[0241]Primer 42 i Primer 43. Dobijanje (laS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-1 a-etil-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida i (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-l-{[(l-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-la-etil-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 43-1: U rastvor mešavine Intermedijera D15 (281 mg, 0.81 mmol) i Intermedijera 18-2 (290 mg, 0.74 mmol) u MeCN (3.7 mL) dodat je HATU (308 mg, 0.81 mmol) što je praćeno dodatkom DIPEA (640 uL, 3.68 mmol) na rt u atmosferi argona. Nakon 17 h, reakciona smeša je koncentrovanain vacuo,i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-100% etil acetat/heksan) dajući 43-1 (121 mg, 1:1 diastereomerna smeša) kao bezbojno ulje. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C36H52CIN4O7: 687.3; nadjeno: 687.5.
Korak 2. Dobijanje 43-2: U rastvor diastereomerne smeše 43-1 (121 mg, 176 umol), TEA (38 uL, 264 umol) i kalijum viniltrifluoroborata (35.4 mg, 264 umol) u EtOH (0.88 mL) dodat je PdCb(dppf) (14.4 mg, 17.6 umol). Reakciona smeša je degasifikovana argonom tokom 10 min i zagrevana do 78 °C. Nakon 25 min, reakciona smeša je ohladjena do rt i koncentrovanain vacuo.Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-100% etil acetat/heksan) dajući 43-2 (105 mg, 1:1 diastereomerna smeša) kao žuto ulje. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]izračunato za C38H55N4O7: 679.4; nadjeno: 679.5.
Korak 3. Dobijanje 43-3: U rastvor diastereomerne smeše 43-2 (105 mg, 155 umol) u DCE-u (31 mL) dodat je Zhan 1B katalizator (11.3 mg, 15.5 umol, Strem) i reakciona smeša je degasifikovana 10 minuta argonom. Reakciona smeša je onda zagrejanana 100 °C. Nakon 15 min, reakciona smeša je ohladjena do rt i koncentrovanain vacuo.Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-100% etil acetat/heksan) dajući 43-3 (52.3 mg, 1:1 diastereomerna smeša) kao svetio žuto ulje. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H51N4O7: 651.4; nadjeno: 651.5.
Korak 4. Dobijanje 43-4: U rastvor diastereomerne smeše 43-3 (52 mg, 80 umol) u etanolu (0.4 mL) dodat je Pd/C (10 wt % Pd, 9 mg, 8 umol) na rt u atmsferi argona. Atmosferaje zamenjena vodonikom i reakciona smeša je energično mešana na rt. Nakon 45 min, reakciona smeša je razblažena etil acetatom (1 mL) i procedjena kroz celit uz ispiranje etil acetom (3><1 mL). Filtrat je koncentrovanin vacuodajući 43-4 (49 mg, 1:1 diastereomerna smeša), koja je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H52N4O7: 653.4; nadjeno: 653.6.
Korak 5. Dobijanje 43-5: U rastvor diastereomerne smeše 43-4 (49 mg, 67 umol) u DCM-u (0.5 mL) dodat je TMSOTf (60 uL, 0.34 mmol) na rt u atmosferi argona. Nakon 3 h, reakciona smeša je dodata polako u 0.25 N vodeni rastvor NaOH (prethodno ohladjen na 0 °C, 1 mL). Nastala smeša je razblažena 1 N vodenim rastvorom HC1 (5 mL), i ekstarahovana je DCM-om (3 x 5 mL). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani su dajući 43-5 (71 mg, 1:1 diastereomerna smeša) kao čvrstu supstancu boje kože, koja se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C32H45N4O7: 597.3; nadjeno: 597.5.
Korak 6. Dobijanje Primera 42 i 43: U rastvor diastereomerne smeše 43-5 (71 mg,~67 umol) i Intermedijera A10 (54 mg, 178 umol) u MeCN (1.00 mL) dodat je HATU (69 mg, 178 umol) praćen dodatkom DIPEA (155 uL, 0.89 mmol) na rt u atmosferi argona. Nakon 1 h, reakciona smeša je koncentrovanain vacuo,i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-100% etil acetat/heksan). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i ponovo prečišćene preparativnim HPLC-om (Gemini 5u Cl8 IlOA kolona, 50-100% MeCN/H20, 0.1% trifluorosirćetna kiselina modifikator) i liofilizovane su dajući Primer 42 (10 mg) i Primer 43 (10 mg) kao bež prahove. Primer 42: Analitički HPLC RetTime: 9.04 min. [M+H]<+>izračunato za C41H57F2N6O9S: 847.4; nadjeno: 847.6. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 6 8.98 (s, 1 H), 7.73 (d,J =8.4 Hz, 2H), 7.20 - 7.13 (m, 2H), 5.70 (td,J=55.8, 6.4 Hz, 1 H), 5.65 (d,/=3.7 Hz, 1 H), 5.44 (br s, 1 H), 4.55 - 4.42 (m, 1 H), 4.20 - 4.03 (m, 1 H), 3.87 (s, 3H), 3.17 - 3.08 (m, 1 H), 2.85 - 2.72 (m, 1 H), 2.71 - 2.59 (m, 1 H), 2.18 - 2.06 (m, 1 H), 2.03 - 1.83 (m, 4H), 1.80 - 1.53 (m, 5H), 1.50 (br s, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.40-1.31 (m, 1 H), 1.33 - 1.09 (m, 5H), 1.06 (s, 9H), 1.05 - 0.95 (m, 6H), 0.92 - 0.73 (m, 3H). Primer 43: Analitički HPLC RetTime: 9.17 min. [M+H]<+>izračunatoC4iH57F2N609S: 847.4; nadjeno: 847.6. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 9.03 (s, 1 H), 7.68 (d,J=9.5 Hz, 1 H), 7.14 - 7.09 (m, 2H), 5.68 (td, JH-f= 55.5, 6.7 Hz, 1 H), 5.59 (d,J=3.7 Hz, 1 H),4.45 (d, .7=6.8 Hz, 1H), 4.29 ( d, J =12.1 Hz, IH), 4.12 (s, 1H), 4.08 (dd, J= 12.1, 4.3Hz, 1 H), 3.82 (s, 3H), 2.90 - 2.79 (m, 1 H), 2.79 - 2.70 (m, 1 H), 2.66 - 2.56 (m, 1 H), 2.43 - 2.31 (m, 1 H), 1.95 - 1.85 (m, 2H), 1.75 - 1.62 (m, 1 H), 1.61 - 1.42 (m, 5H), 1.44 (br s, 3H) 1.40 (s, 3H), 1.34 - 1.02 (m, 8H), 1.00 (s, 9H), 0.99 - 0.89 (m, 5H), 0.85 - 0.74 (m, 3H).
[0242]Primer 44. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -14-metoksi-1 a,9-dimetil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 44-1: HATU (544 mg, 1.43 mmol, Oakvvood) i DIPEA (0.83 mL, 4.76 mmol) su dodati smeši 18-2 (429 mg, 1.09 mmol) i Intermedijera D6 (395 mg, 1.33 mmol) u 12 mL acetonitrila u argonu. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-30% etil acetat u heksanu) da se dobije 44-1 (545 mg; 1:1 diastereomerna smeša) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]izračunato za C35H50CIN4O7: 673.33; nadjeno: 673.47.
Korak 2. Dobijanje 44-2: Pd(dppi)Ci2'CH2Ci2(74 mg, 0.091 mmol, Strem) je dodat deoksigenovanoj smeši 44-1 (542 mg, 0.805 mmol), kalijum viniltrifluoroborata (168 mg, 1.25 mmol), i trietilamina (0.170 mL, 1.21 mmol) u 9 mL EtOH na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zagrevana na 78 °C pod argonom tokom 75 minuta. Nakon hladjenja do rt, 6 mL toluena je dodato i reakcionoa smeša je koncentrovanain vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-35% etil acetat u heksanu) da se dobije 44-2 (438 mg; 1:1 diastereomerna smeša) kao žuti film. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C37H53N4O7: 665.38; nadjeno: 665.55.
Korak 3. Dobijanje 44-3 i 44-4: Diastereomerna smeša 44-2 (437 mg, 0.658 mmol) i Zhan 1B katalizator (81 mg, 0.072 mmol, Strem) u 131 mL DCE-a je deoksigenovana pod argonom tokom 25 minuta. Smeša je onda zagrevana na 95 °C tokom 50 minuta. Dodatnih 7 mg Zhan 1B katalizatora je dodato reakcionoj smeši i reakcionoa smeša je zagrevana na 95 °C tokom 10 minuta. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša je koncentrovanain vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-40% etil acetat u heksanu) da se dobiju pojedinačni diastereomeri 44-3 (143 mg, ranije eluirajuća komponenta) kao svetio žuti film i 44-4 (118 mg, kasnije eluirajuća komponenta) kao svetio žuta čvrsta supstanca. Ranije eluirajuća 44-3: LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]izračunato za C35H49N4O7: 637.35; nadjeno: 637.45. Kasnije eluirajuća 44-4: LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C35H49N4O7: 637.35; nadjeno: 637.59.
Korak 4. Dobijanje 44-5: Paladijum na ugljeniku (10 wt % Pd, 48 mg, 0.045 mmol) je dodat rastvoru 44-3 (143 mg, 0.225 mmol) u 6 mL etanola. Atmosfera je zamenjena vodonikom i reakcija je mešana tokom 90 minuta. Reakciona smeša je procedjena kroz celit i isprana je etil acetatom. Filtrat je koncentrovanin vacuoda se dobije 44-5 (130 mg) kao braon čvrst film, koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C35H51N4O7: 639.37; nadjeno: 639.53.
Korak 5. Dobijanje 44-6: TMSOTf (0.53 mL, 2.91 mmol) je dodat u kapima rastvoru 44-5 (130 mg, 1.27 mmol) u 3.8 mL dihlormetana pod argonom na sobnoj temperaturi. Nakon jednog sata, dodatnih 0.22 mL TMSOTf-a je dodato. Nakon narednih sat vremena, dodato je 0.20 mL TMSOTf-a, a nakon sledećih 40 minuta, dodato je još 0.25 mL TMSOTf-a. Nakon jednog sata, reakciona smeša je razmućena u 10 mL dihlormetana i kvenčovana je dodatkom 20 mL 1 N vodenog rastvora HC1 uz mešanje. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan dihlormetanom (3 x 30 mL). Kombinovani organski deo je ispran slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2S04, procedjen, i koncentrovanin vacuoda se dobije 44-6 (113 mg) kao bež čvrsta supstanca, koja se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C31H43N4O7: 583.31; nadjeno: 583.45.
Korak 6. Dobijanje Primera 44: HATU (53 mg, 0.139 mmol) i DIPEA (0.080 mL, 0.459 mmol) su dodati smeši 44-6 (51 mg, 0.088 mmol) i Intermedijera A10 (49 mg, 0.161 mmol) u 1.5 mL of MeCN pod argonom. Nakon mešanja tokom noći, dodatnih 13 mg Intermedijera A10 je dodato. Nakon jednog sata, reakciona smeša je razmućena u 15 mL etil acetata i sipana u 20 mL 1 N vodenog rastvora HC1. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa etil acetatom. Kombinovani organski deo je ispran vodom i slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2S04, pocedjen, i koncentrovanin vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-40% etil acetat u heksanu) da se dobije Primer 44 (41 mg) kao bež čvrsta supstanca. Analitički HPLC RetTime: 8.86 min. LCMS-ESL(m/z):[M+H]izračunato za C40H55F2N6O9S: 833.36; nadjeno: 833.51. 'H NMR (400 MHz, CD3OD): 7.79 (d, J = 10 Hz, 1 H), 7.28-7.21 (m, 2H), 6.77 (d, J = 8.4 Hz, 1 H), 5.81 (td, Jh-f= 56 Hz, J = 6.4 Hz, 1 H), 5.73-5.70 (m, 1 H), 4.56 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 4.40 (d, J = 11.6 Hz, 1 H), 4.26-4.16 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.05-2.91 (m, 1 H), 2.90-2.82 (m, 1 H), 2.77-2.68 (m, 1 H), 2.06-1.94 (m, 2H), 1.88-1.74 (m, 1 H), 1.72-1.58 (m, 3H), 1.58-1.44 (m, 4H), 1.53 (s, 3H), 1.51 (s, 3H), 1.43-1.36 (m, 1 H), 1.12-1.02 (m, 2H), 1.09 (s, 9H), 1.07 (d, J = 4 Hz, 3H), 1.00-0.94 (m, 2H), 0.92-0.84 (m, 3H), 0.16-0.11 (m, 1 H).
[0243]Primer 45. Dobijanje (laS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -14-metoksi-1 a,9-dimetil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11, 12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0244]Primer 45 je dobijen na sličan način kao kao Primer 44, zamenom kasnije eluirajućeg 44-4 sa ranije eluirajućim 44-3 u Koraku 4. Primer 45 je izolovan (23 mg) kao bež čvrsta supstanca. Analitički HPLC RetTime: 8.92 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C40H55F2N6O9S: 833.36; nadjeno: 833.54. 'H NMR (400 MHz, CD3OD): 7.79 (d, J = 9.2 Hz, 1 H), 7.25-7.19 (m, 2H), 6.55 (d, J = 5.2 Hz, 1 H), 5.78 (td, Jh-f= 61 Hz, J = 6Hz, 1 H), 5.52-5.48 (m, 1 H), 4.58 (d, J = 6.4 Hz, 1 H), 4.52 (d, J= 12 Hz, 1 H), 4.17-4.10 (m, 1 H), 4.04 (d, J = 6.4 Hz, 1 H), 3.93 (s, 3H), 3.22-3.14 (m, 1 H), 2.88-2.80 (m, 1 H), 2.78-2.66 (m, 1 H), 2.08-1.90 (m, 2H), 1.76-1.64 (m, 1 H), 1.63-1.50 (m, 7H), 1.51 (s, 3H), 1.47-1.36 (m, 2H), 1.46 (s, 3H), 1.18-1.06 (m, 1 H), 1.12 (s, 9H), 1.07 (m, 3H), 1.00-0.80 (m, 4H), 0.10-0.04 (m, 1 H).
[0245]Primeri 46 i 47. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-18,18-difluoro-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida i (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(dilfuorometil)-l-{[(l-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-18-fluoro-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 46-1: Smeša Intermedijera BI (627 mg, 2.08 mmol), Intermedijera E3 (548 mg, 1.91 mmol) i cezijum karbonata (744 mg, 2.28 mmol) u 7 mL DMF-a je mešana na 85 °C pod argonom tokom 36 sati. Reakciona smeša je ohladjena do sobne temperature i sipana u 30 mL vode i vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom (3 x 30 mL). Kombinovani organski deo je ispran vodom i slanim rastvorom, osušen je iznad anhidrovanog Na2S04, pocedjen i koncentrovanin vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-30% etil acetat u heksanu) da se dobije 46-1 (891 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-ESI<+>( m/ z) :
[M+H]<+>izračunato za C27H36F2N3O6: 536.25; nadjeno: 536.35.
Korak 2. Dobijanje 46-2: Hinoksalin etar 46-1 (478 mg, 0.893 mmol) je rastvoren u 4.2 mL terc-butil acetata i 1.1 mL dihlormetana na sobnoj temperaturi. MeSCbH (0.30 mL, 4.67 mmol) je dodat u kapima i reakciona smeša je mešana na rt tokom 2 h. Reakciona smeša je preneta u smešu EtOAc (20 mL) i zasićenog rastvora NaHC03(30 mL) koji se meša. Faze su odvojene, i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 20 mL). Kombinovani organski deo je osušen iznad anhidrovanog Na2S04, pocedjen, i koncentrovanin vacuoda se dobije amin 46-2 kao žuti čvrsti film (346 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C22H28F2N3O4: 436.20; nadjeno: 436.29.
Korak 3. Dobijanje 46-3: HATU (396 mg, 1.04 mmol, Oakvvood) i DIPEA (0.57 mL, 3.29 mmol) su dodati smeši 46-2 (345 mg, 0.793 mmol) i Intermedijera Dll (260 mg, 0.965 mmol) u 9 mL acetonitrila pod argonom. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-40% etil acetat u heksanu) da se dobije 46-3 (545 mg) kao providan čvrst film. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H49F2N4O7: 687.35; nadjeno: 687.57.
Korak 4. Dobijanje 46-4: Smeša 46-3 (480 mg, 0.699 mmol) i Zhan 1B katalizatora (61 mg, 0.083 mmol, Strem) u 140 mL DCE-a je deoksigenovana argonom tokom 18 minuta. Smeša je onda zagrevana na 95 °C tokom 70 minuta. Dodatnih 20 mg Zhan 1B katalizatora je dodato i smeša je mešana na 95 °C tokom jednog sata. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša je koncentrovanain vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-35% etil acetat u heksanu) da se dobije neodvojiva smeša 46-4 (glavna), i oko 15% 47-1 (sporedna; 233 mg ukupno) kao bež čvrsta supstanca. Glavna komponenta 46-4: LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]izračunato za C34H45F2N4O7: 665.38; nadjeno: 665.50. Sporedna komponenta 47-1: LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C34H44FN4O7: 639.31; nadjeno: 639.49.
Korak 5. Dobijanje smeše 46-5 i 47-2: Paladijum na ugljeniku (10 wt % Pd, 70 mg, 0.066 mmol) je dodat rastvoru smeše 46-4 i 47-1 (232 mg, 0.353 mmol) iz prethodnog Koraka u 9 mL etanola. Atmosfera je zamenjena vodonikom i mešana 7 h. Reakcija je procedjena kroz celit, isprana etanolom. Filtrat je koncentrovanin vacuoda se dobije smeša 46-5 (glavna) i 47-2 (sporedna; 216 mg ukupno) kao bež čvrsta supstanaca, koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Glavna komponenta 46-5: LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C34H47F2N4O7: 661.33; nadjeno: 661.52. Sporedna komponenta 47-2:LCMS-ESL ( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C34H48FN4O7: 643.34; nadjeno: 643.57.
Korak 6. Dobijanje smeše 46-6 i 47-3: TMSOTf (0.35 mL, 1.90 mmol) je dodat u kapima rastvoru smeše 46-5 i 47-2 (215 mg, 0.326 mmol) iz prethodnog Koraka u 6.5 mL dihlormetana pod argonom na rt. Nakon 1 h, dodatnih 0.18 mL TMSOTf-a je dodato. Nakon narednih sat vremena, 0.30 mL TMSOTf-a je dodato. Nakon 2 h, 0.18 mL TMSOTf-a je dodato. Nakon 1 h, dodatnih 0.18 mL TMSOTf-a je dodato. Nakon 45 minuta, reakciona smeša je razmućena u 25 mL dihlorometana i kvenčovana dodatkom 30 mL 1 N vodenog rastvora HC1 uz mešanje. Vodeni sloj je ekstrahovan dihlormetanom (3 x 40 mL). Kombinovani organski deo je ispran slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2S04, pocedjen, i koncentrovanin vacuoda se dobije neodvojiva smeša 46-6 (glavna) i 47-3 (sporedna; 187 mg ukupno), koja se koristi u sedećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Glavna komponenta 46-6: LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C30H39F2N4O7: 605.27; nadjeno: 605.44. Sporedna komponenta 47-3:LCMS-ESL ( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C30H39FN4O7: 587.28; nadjeno: 587.38.
Korak 7. Dobijanje Primera 46 i Primera 47: HATU (160 mg, 0.421 mmol, Oakvvood) i DIPEA (0.25 mL, 1.44 mmol) su dodati smeši 46-6 i 47-3 (150 mg, 0.248 mmol) iz prethodnog koraka i Intermedijera A10 (150 mg, 0.496 mmol) u 6.5 mL acetonitrila pod argonom. Nakon mešanja tokom noći, reakciona smeša je razmućena u 30 mL etil acetate i sipana u 30 mL 1 N vodenog rastvora HC1. Vodeni sloj je ekstrahovan tri puta etil acetatom. Kombinovani organski deo je ispran sa vodom i slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2S04, pocedjen, i koncentrovanin vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-50% etil acetat u heksanu) i preparativno reverzno faznim HPLC-om (50-100% acetonitril u vodi, sa 0.1% puferom trifluorosirćetne kiseline) da se dobije so trifluorosirćetne kiseline Primera 46 (107 mg) kao svetio žuta čvrsta supstanca i so trifluorosirćetne kiseline 1:1 smeše diastereomera Primera 47 (12 mg) kao žuta čvrsta supstanca. Primer 46: Analitički HPLC RetTime: 8.60 min. LCMS-ES1<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C39H51F4N6O9S: 855.33; nadjeno: 855.63. 'H NMR (400 MHz, CD3OD): 8 9.23 (s, 1 H), 7.94 (d, J = 9.2 Hz, 1 H), 7.31 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1 H), 7.28 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 5.78 (td, Jh-f= 66 Hz, J = 6.8 Hz, 1 H), 5.68-5.66 (m, 1 H), 4.57 (d, J = 6.4 Hz, 1 H), 4.41 (d, J = 12 Hz, 1 H), 4.35 (s, 1 H), 4.22-4.16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1 H), 3.97 (s, 3H), 3.72-3.66 (m, 1 H), 2.86-2.76 (m, 1 H), 2.64-2.48 (m, 1 H), 2.11-1.94 (m, 3H), 1.86-1.74 (m, 3H), 1.73-1.62 (m, 1 H), 1.58-1.54 (m, 2H), 1.50 (s, 3H), 1.49-1.44 (m, 1 H), 1.42-1.38 (m, 1 H), 1.11-1.04 (m, 4H), 1.09 (s, 9H), 1.02-0.94 (m, 2H), 0.93-0.86 (m, 2H), 0.78-0.66 (m, 1 H), 0.54-0.46 (m, 1 H). Primer 47 (1:1 smeša diastereomera): Analitički HPLC RetTime: 8.45 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C39H52F3N6O9S: 837.34; nadjeno: 837.63. 'H NMR (400 MHz, CD3OD): 8 9.13 (s, 1 H), 7.89 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.27 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1 H), 7.24 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 5.99-5.43 (m, 1 H), 5.79 (td, Jh-f= 55 Hz, J = 6.8 Hz, 1 H), 5.53-5.50 (m, 1 H), 4.57-4.44 (m, 2H), 4.11 (s, 1 H), 4.35 (s, 1 H), 4.22-4.13 (dd, J = 12.4, 4 Hz, 1 H), 3.95 (s, 3H), 3.83-3.79 (m, 1 H), 2.94-2.80 (m, 2H), 2.28-2.14 (m, 1 H), 2.06-1.96 (m, 2H), 1.88-1.69 (m, 4H), 1.58-1.54 (m, 2H), 1.51 (s, 3H), 1.44-1.36 (m, 1 H), 1.32-1.26 (m, 1 H), 1.14-1.04 (m, 4H), 1.10 (s, 9H), 1.02-0.86 (m, 4H), 0.74-0.64 (m, 1 H), 0.58-0.48 (m, 1 H).
[0246]Primer 48. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(lR,2S)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-etenilciklopropil}-14-metoksi-9-metil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida. Korak 1: Dobijanje Primera 48: Smeši kiseline 18-7 (9.7 mg, 0.017 mmol) i Intermedijera Al (13 mg, 0.049 mmol) u MeCN (0.4 mL) je dodat DIPEA (40 uL, 0.23 mmol). Nastalom rastvoru dodat je HATU (12.5 mg, 0.033 mmol). Reakcija je mešana na rt tokom 1 h i razblažena je sa EtOAc (2 mL), 0.2 M vodenim rastvorom HC1 (1 mL), i slanim rastvorom (1 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3x2 mL). Kombinovana organska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2SO/t, procedjena, i koncentrovana da se dobije sirovi ostatak koji je rastvoren u CH2CI2i adsorbovan na 1 g silika gela. Prečišćavanjem hromatografijom na silika gelu (10% do 50% acetona u heksanu) dobija se ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN da bi se dobio Primer 48 kao bela amorfna čvrsta supstanca (8.4 mg). Analitički HPLC RetTime: 8.52 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C39H53N609S: 781.4; nadjeno: 781.2. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 5 9.91 (s, 1 H), 7.83 (d,J=9.1 Hz, 1 H), 7.19 (dd,J=9.1, 2.7 Hz, 1 H), 7.10 (d, / = 2.7 Hz, 1 H), 6.73 (s, 1 H), 5.86 - 5.72 (m, 1 H), 5.57 (d,J=3.8 Hz, 1 H), 5.48 (d,J=9.9 Hz, 1 H), 5.27 - 5.15 (m, 1 H), 5.15 - 5.07 (m, 1 H), 4.48 - 4.35 (m, 3H), 4.12 (dd,J=11.8, 4.1 Hz, 1 H), 3.94 (s, 3H), 3.81 - 3.71 (m, 1 H), 2.98 - 2.75 (m, 4H), 2.16 - 2.09 (m, 1 H), 1.94 (dd, /= 8.2, 5.8 Hz, 1 H), 1.87 - 1.24 (m, 9H), 1.17 (d, /= 7.4 Hz, 3H), 1.09 (s, 9H), 1.04 - 0.91 (m, 5H), 0.75 - 0.65 (m, 1 H), 0.52 - 0.42 (m,J=6.0 Hz, 1 H).
[0247] Primer49. Dobijanje (laS,2aR,6S,9S,10S,l lR,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-15-metoksi-10-metil-4,7-diokso-1 a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1 H,9H-8,11 - metanociklopropa[4',5']ciklopenta[ 1 ',2': 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
[0248]Korak 1: Dobijanje Primera 49: U suspenziju kiseline 33-4 (30 mg, 0.049 mmol) i Intermedijera A10 (31 mg, 0.10 mmol) u MeCN (700 uL) dodat je DIPEA (70 uL, 0.40 mmol). HATU (32 mg, 0.084 mmol) je onda dodat nastalom rastvoru, i reakcija je mešana na rt tokom 1.5 h. Dodatna porcija Intermedijera A10 (6 mg, 0.02 mmol) je dodata. Reakcija je mešana dodatnih 30 min i onda je razblažena sa EtOAc (30 mL), 0.2 M vodenim rastvorom HC1 (15 mL) i slanim rastvorom (15 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (30 mL). Kombinovana organska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2S04, procedjena, i koncentrovana da se dobije sirovi ostatak. Ostatak je rastvoren u CH2CI2i adsorbovan na 2 g silika gela. Prečišćavanjem hromatografijom na silika gelu (10% do 50% aceton u heksanu) dobija se amorfni ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN da bi se dobio Primer 49 kao bela amorfna čvrsta supstanca (30.5 mg). Analitički HPLC RetTime: 9.15 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C42H57F2N6O9S: 859.4; nadjeno: 859.2. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 9.86 (s, 1 H), 7.82 (d,/= 9.1 Hz, 1 H), 7.45 (s, 1 H), 7.18 (dd,J=9.1, 2.7 Hz, 1 H), 7.08 (d,J=2.7 Hz, 1 H), 6.14 - 5.71 (m, 1 H), 5.61 (d,J=3.7 Hz, 1 H), 5.28 (d,J=9.8 Hz, 1 H), 5.00 (d,J=7.4 Hz, 1 H), 4.49 (d,J= 7.0 Hz, 1 H), 4.42 - 4.31 (m, 2H), 4.12 (dd,J=11.6, 4.0 Hz, 1 H), 3.93 (s, 3H), 3.00 - 2.63 (m, 4H), 2.25 - 2.16 (m, 1 H), 2.09 - 1.90 (m, 4H), 1.81 - 0.95 (m, 26H), 0.92 - 0.75 (m, 3H), 0.57 - 0.45 (m, 1 H), 0.44 - 0.36 (m, 1 H).
[0249]Primer 50. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-9-(cijanometil)-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] - 14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0250]Primer 50 je dobijen na sličan način kao Primer 1, zamenom Intermedijera B8 sa Intermedijerom B4 u Koraku 1. Primer 50 je prečišćen reverzno faznim HPLC-om (Gemini kolona, 58-98 % ACN/H2O + 0.1% TFA) i liofilizovan dajući čvrstu supstancu (5 mg) kao so TFA. Analitički HPLC RetTime: 8.29 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C40H51F2N7O9S: 844.94; nadjeno: 844.58. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) S 9.71 (s, 1 H), 7.79 (d,J=8.8 Hz, 1 H), 7.22 (m, 2H), 6.25 (m, 1 H), 6.08 - 5.80 (m, 1 H), 4.39 (m, 1 H), 4.29 (m, 2H), 4.13 (m, 1 H), 3.92 (s, 3H), 3.65 (m, 1 H), 3.06 - 2.83 (m, 4H), 2.55 (m, 1 H), 2.14 - 1.47 (m, 17H), 1.03(s, 9H), 0.92 (m, 4H), 0.65 (m, 1 H), 0.45 - 0.43 (m, 1 H).
[0251] Primer51. Dobijanje (3aR,7S,10S,l lS,12R,24aR)-7-terc-butil-N-{(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-etilciklopropil}-ll-etil-16-metoksi-3a-metil-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-1OH-9,12- metanociklopenta[ 18,19] [ 1,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
[0252]Primer 51 je dobijen na sličan način kao Primer 39, zamenom Intermedijera A3 sa Intermedijerom A10 u Koraku 8. Primer 51 je izolovan (12.3 mg) sa oko 96.5% čistoće. Analitički HPLC RetTime: 9.38 min. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]izračunato za C43H63N6O9S: 839.4; nadjeno: 839.5. 'H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 7.60 (d, /= 8.4 Hz, 1 H), 6.98-7.08 (m, 2H), 6.53 (d,J =9.6 Hz, 1 H), 5.57-5.83 (m, 2H), 4.52 (d,J=8.4 Hz, 2H), 4.24 (dd, /= 10.8, 6.0 Hz, 1 H), 4.02 (d,J=9.6 Hz, 1 H), 3.82 (dd,J=10.8, 2.4 Hz, 1 H), 3.73 (s, 3H), 2.93-3.10 (m, 1 H), 2.80-2.90 (m, 2H), 2.30-2.58 (m, 2H), 0.60-2.10 (m, 32H), 0.84 (s, 9H).
[0253]Primer 52. Dobijanje (3aR,7S,10S,llS,12R,24aR)-7-terc-butil-ll-etil-N-[(lR,2S)-2-(2-fluoroetil)-1-{[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-16-metoksi-3a-metil-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-1OH-9,12-metanociklopenta[ 18,19] [ 1,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
[0254]Primer 52 je dobijen na sličan način kao Primer 39, zamenom Intermedijera A6 sa Intermedijerom A10 u Koraku 8. Primer 52 je izolovan (12.3 mg) sa oko 96.5% čistoće. Analitički HPLC RetTime: 8.60 min. Analitički HPLC RetTime: 9.31 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C44H64FN6O9S: 871.4; nadjeno: 871.5. 'H NMR (300 MHz, CD3OD) 8 7.81 (d,J=8.4 Hz, 1 H), 7.20-7.30 (m, 2H), 6.73 (d,J=9.6 Hz, 1 H), 5.75-6.02 (m, 2H), 4.74 (d,J =8.4 Hz, 2H), 4.54 (t,J =6.0 Hz, 2H), 4.36-4.49 (m, 1 H), 4.23 (d,J =9.6 Hz, 1 H), 4.04 (dd,J =12.0, 2.4 Hz, 1 H), 3.75 (s, 3H), 3.28-3.16 (m, 1 H), 2.50-2.70 (m, 2H), 2.30-0.80 (m, 35H), 1.04 (s, 9H).
[0255]Primer 53. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-buti1-N-[(l R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0256]Primer 53 je dobijen na sličan način kao Primer 17 zamenom Intermedijera E4 sa Intermedijerom E3 u Koraku 1 i Intermedijera A9 sa Intermedijerom A10 u Koraku 7. Primer 53 je izolovan (8.8 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C38H48F4N6O8S: 825.32; nadjeno: 825.75. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 10.13 (s, 1 H), 8.15( d, J =8.2 Hz, 1 H), 7.91 - 7.74 (m, 2H), 7.69 (t,J=7.6 Hz, 1 H), 6.92 (s, 1 H), 5.47 (d,J=9.6 Hz, 1 H), 4.48 (t,J= 10.3 Hz, 2H), 4.36 (d,J= 9.4 Hz, 1 H), 4.12 (dd,J=12.1, 3.6 Hz, 1 H), 3.70 - 3.59 (m, 1 H), 3.08 - 2.75 (m, 1 H), 2.58 - 2.38 (m, 1 H), 2.14 (t,J=6.8 Hz, 1 H), 1.95 - 1.67 (m, 4H), 1.47 (tt,J=13.9, 7.1 Hz, 4H), 1.35 (s, 2H), 1.20( t, J=7.3 Hz, 3H), 1.15 - 0.64 (m, 19H), 0.51 (q, J = 6.4Hz, 1 H).
[0257]Primer 54. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-etilciklopropil}-9-etil-18,18-difluoro-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11, 12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0258]Primer 54 je dobijen na sličan način kao Primer 53 zamenom Intermedijera A9 sa Intermedijerom A3. Primer 54 je izolovan (10.0 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C39H52F2N6O8S: 803.35; nadjeno: 803.79. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 5 9.88 (s, 1 H), 8.12 (d,J=8.2 Hz, 1 H), 7.88 - 7.69 (m, 2H), 7.66 (t,J=7.6 Hz, 1 H), 6.68 (s, 1 H), 5.95 (d,J=3.4 Hz, 1 H), 5.46 (d,J= 9.4 Hz, 1 H), 4.45 (dd,J=13.8, 9.7 Hz, 2H), 4.09 (dd,J =12.0, 3.6 Hz, 2H), 3.71 - 3.57 (m, 1 H), 2.53 (dd,J=21.4, 14.6 Hz, 1 H), 1.85 - 1.39 (m, 10H), 1.38 - 0.96 (m, 20H), 1.01 (dd,J= 17.2, 9.5Hz, 3H), 1.04 - 0.78 (m, 6H), 0.70 (s, 1 H), 0.49 (dd,
J= 12.7, 6.3 Hz, 1 H).
[0259]Primer 55. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -9-etil-3,6-diokso-14-(2,2,2-trilfuoroetoksi)-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0260]Intermedijer 55-1 je dobijen sledeći Korake od 1 do 6 Primera 1, zamenom Intermedijera E2 sa Intermedijerom El u Koraku 1. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C34H49N4O7: 625.36; nadjeno: 625.25.
Korak 1. Dobijanje 55-2. Hinoksalinol 55-1 (24 mg, 0.038 mmol) je suspendovan u DMF-u (2 mL) i tretiran sa CS2CO3(63 mg, 0.19 mmol) i 2,2,2-trifluoroetil trifluorometansulfonatom (0.055 mL, 0.38 mmol). Reakciona smeša je mešana na RT tokom 5 h, onda je razblažena EtOAc. Organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom, osušen je iznad MgS04, procedjen i koncentrovan pod sniženim pritiskom dajući 55-2, koji je prenet dalje bez naknadnog prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H50F3N4O7: 707.36; nadjeno: 707.38.
Korak 2. Dobijanje 55-3. Trifluoroetil etar 55-2 (0.038 mmol teorijski) je tretiran DCM-om (4 mL) i TMSOTf-om (0.14 mL, 0.77 mmol) na RT. Nakon 1 h, reakcija je kvenčovana dodatkom M NaOH (2 mL). Nakon energičnog mešanja od 5 min, smeša je sipana u levak za odvajanje uz dodatak 10% HC1 (20 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan 3x DCM-om. Kombinovani organski sloj je osušen iznad MgS04, procedjen i koncentrovan pod sniženim pritiskom dajući 55-3, koji je prenet dalje bez naknadnog prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C32H42F3N4O7: 651.30; nadjeno: 651.18.
Korak 3. Dobijanje Primera 55. Karboksilna kiselina 55-3 (0.038 mmol teorijski) je tretirana intermedijerom A10 (23 mg, 0.077 mmol), TBTU-om (25 mg, 0.077 mmol), DMAP-om (9 mg, 0.077 mmol), DCM-om (1 mL) i DIPEA-om (0.134 mL, 0.768 mmol). Reakciona smeša je mešana na RT tokom 20 h, onda je koncentrovana pod sniženim pritiskom i prečišćena reverzno faznim HPLC-om dajući Primer 55 kao so TFA (7 mg, 18% preko 3 Koraka). LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C41H54F5N6O9S: 901.36; nadjeno: 902.08. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 9.18 (s, 1 H), 7.86 (d,J=9.1 Hz, 1 H), 7.32 (dd,/=9.1, 2.8 Hz, 1 H), 7.25 (d,J=2.7 Hz, 1 H), 6.02 - 5.63 (m, 2H), 4.76 - 4.62 (m, 2H), 4.56 (d,J=7.1 Hz, 1 H), 4.39 (t,J= 6.0 Hz, 2H), 4.15 (dt,J=17.2, 8.6 Hz, 1 H), 3.74 (dd,J=6.7, 2.8 Hz, 1 H), 3.05 - 2.89 (m, 1 H), 2.82 (td,J=13.2, 4.2 Hz, 1 H), 2.65 - 2.50 (m, 1 H), 2.02 (d,J=10.4 Hz, 2H), 1.78 (dt,J=23.5, 10.7 Hz, 3H), 1.68 - 1.26 (m, 14H), 1.22 (t,J= 7.3 Hz, 3H), 1.10 (s, 9H), 0.97 (d,J =2.5 Hz, 2H), 0.95 - 0.84 (m, 2H), 0.71 (s, 1 H), 0.51 (t,J =9.8 Hz, 1 H).
[0261]Primer 56. Dobijanje (3aR,7S,10S,llS,12R,24aR)-7-terc-butil-ll-etil-N-[(lR,2R)-2-etil-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-16-metoksi-3a-metil-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-1OH-9,12- metanociklopenta[ 18,19] [ 1,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida.
[0262]Primer 56 je dobijen na sličan način kao Primer 39, zamenom Intermedijera A9 sa Intermedijerom A3 u Koraku 8. Primer 56 je izolovan (8.8 mg, 0.0103 mmol, 53.7%). Analitički HPLC RetTime: 9.56 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C44H65N6O9S: 853.45; nadjeno: 853.5. 'H NMR (300 MHz, CD3OD) 5 7.81(d, J=9.6 Hz, 1 H), 7.20-7.30 (m, 2H), 6.73 (d,J=9.6 Hz, 1 H), 5.76-6.01 (m, 2H), 4.75 (d,J=8.4 Hz, 1 H), 4.46 (dd,J=12.0, 6.0 Hz, 1 H), 4.23 (d,J= 9.6 Hz, 1 H), 4.00-4.08 (m, 1 H), 3.95 (s, 3H), 2.50-2.78 (m, 3H), 0.80-2.30 (m, 30H), 1.54 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.05 (s, 9H).
[0263]Primer 57. Dobijanje (laS,2aR,6S,9S,10S,HR,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(lR,2S)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(2,2-difluoroetil)ciklopropil]-15-metoksi-10-metil-4,7-diokso-1 a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro- lH,9H-8,11 - metanociklopropa[4',5']ciclopenta[ 1 ',2': 18,19] [1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
[0264]Korak 1. Dobijanje Primera 57. U smešu kiseline 33-4 (14.9 mg, 0.0245 mmol) i amin hidrohlorida A-7 (16.3 mg, 0.0535 mmol) u MeCN (500 uL) dodat je DIPEA (40 uL, 0.23 mmol). HATU (15.5 mg, 0.0408 mmol) je onda dodat nastalom rastvoru, i reakcija je mešana na rt tokom 17 h. Reakcija je onda razblažena sa EtOAc (2 mL), 0.2 M vodenim rastvorom HC1 (1.5 mL) i slanim rastvorom (1.5 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (4 x 1.5 mL). Kombinovana organska faza je osušena iznad Na2S04, procedjena i koncentrovana da se dobije sirovi ostatak. Ostatak je rastvoren u CH2CI2i koncentrovan je na 1.5 g silika gela. Prečišćavanjem hromatografijom na silika gelu (10% do 40% aceton u heksanu) dobij a se amorfni ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN da bi se dobio Primer 57. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H57F2N6O9S: 859.4; nadjeno: 859.0. 'H NMR (300 MHz, CDCb) 8 10.00 (s, IH), 7.82 (d,J=9.1 Hz, IH), 7.19 (dd,J=9.1, 2.7 Hz, 1 H), 7.09 (d,J=2.6 Hz, IH), 6.75 (s, 1 H), 6.07 - 5.57 (m, 2H), 5.26 (d,J=9.8 Hz, 1 H), 5.01 (d,J=1A Hz, IH), 4.50 - 4.29 (m, 3H), 4.12 (dd,J=11.7, 3.9 Hz, IH), 3.93 (s, 3H), 3.00 - 2.62 (m, 4H), 2.34 - 0.96 (m, 33H), 0.95 - 0.78 (m, IH), 0.51 (dd,J=13.0, 7.9 Hz, IH), 0.39 (d,J=4.2 Hz, 1 H).
[0265] Primer58. Dobijanje (laS,2aR,6S,9S,10S,l lR,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(lR,2S)-2-(2,2-difluoroetil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-15-metoksi-10-metil-4,7-diokso-1 a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro- lH,9H-8,11 - metanociklopropa[4',5']ciklopenta[ 1 ',2': 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
[0266]Korak 1. Dobijanje Primera 58. U suspenziju kiseline 33-4 (14.5 mg, 0.0238 mmol) i amin hidrohlorida A-8 (16.0 mg, 0.0502 mmol) u MeCN (500 uL) dodat je DIPEA (40 uL, 0.23 mmol). HATU (15.5 mg, 0.0408 mmol) je dodat nastalom rastvoru, i reakcija je mešana na rt tokom 17 h. Reakcija je onda razblažena sa EtOAc (2 mL), 0.2 M vodenim rastvorom HC1 (1.5 mL) i slanim rastvorom (1.5 mL). Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (4 x 1.5 mL). Kombinovana organska faza je osušena iznad Na2S04, procedjena i koncentrovana da se dobije sirovi ostatak. Ostatak je rastvoren u CH2CI2i koncentrovan je na 1.5 g silika gela. Prečišćavanjem hromatografijom na silika gelu (10% do 40% aceton u heksanu) dobij a se amorfni ostatak koji je liofilizovan iz vode i MeCN da bi se dobio Primer 58. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C43H59F2N609S: 873.4; nadjeno: 873.3. 'H NMR (300 MHz, CDCb) 5 9.72 (s, IH), 7.82 (d, / = 9.1Hz, IH), 7.19(dd,J=9.1, 2.7 Hz, 1 H), 7.09(d, 7=2.7Hz, IH), 6.82 (s, IH), 6.12-5.54 (m, 2H),5.25 (d,/=9.8Hz, IH), 5.01(d, 7=7.2 Hz,IH), 4.50-4.30 (m, 3H), 4.13(dd, J= 11.7, 4.2Hz, IH), 3.93 (s, 3H), 3.03 - 2.65 (m, 4H), 2.34 - 0.97 (m, 33H), 0.94 - 0.76 (m, 3H), 0.60 - 0.45 (m, 1 H), 0.45 - 0.34 (m, IH).
[0267]Primer 59. Dobijanje (laS,2aR,6S,9S,10S,HR,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil] -2-(difluorometil)ciklopropil] -10-etil-19,19-difluoro-15-metoksi-4,7-diokso-1 a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro- lH,9H-8,11 - metanociklopropa[4',5']ciklopenta[ 1 ',2': 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 59-1. Rastvor Intermedijera D16 (0.50 g, 1.6 mmol) u DMF-u (7 mL) je tretiran sa COMU-om (0.80 g, 1.9 mmol), DIPEA-om (1.2 mL, 6.7 mmol) i Intermedijerom 17-2 (0.65 g, 1.3 mmol) i mešanje tokom noći na rt. Reakcija je kvenčovana 1 M rastvorom limunske kiseline (5 mL) i ekstrahovana je sa EA. Kombinovani organski deo je ispran slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog MgSCMi koncentrovanin vacuo.Ostatakje prečišćen hromatografijom na silika gelu (15-100% EA/heksan) dajući 59-1. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C4oH55F2N407: 741.88; nadjeno: 741.51.
Korak 2. Dobijanje 59-2. Rastvor 59-1 (0.51 g, 0.69 mmol) u DCE-u (140 mL) je zasićen argonom tokom 30 min pre dodatka Zhan 1B katalizatora (0.051 g, 0.07 mmol). Reakcija je zagrevana na 85 °C tokom 45 min, i sledeća porcija Zhan 1B katalizatora je dodata. Nakon narednih 30 min, reakcija je ohladjena do rt, koncentrovanain vacuoi prečišćena hromatografijom na silika gelu (5-100% EA/heksan) da se dobije 59-2. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C38H51F2N4O7: 713.83; nadjeno: 713.54.
Korak 3. Dobijanje 59-3. Rastvor 59-2 je stavljen u EtOH (8 mL). Dodat je Pd/C (0.072 g, 10% w/w) i atmosfera je zamenjena vodonikom. Nakon 1 h, dodat je katalizator. Nakon 4 h, EA i dodatni katalizator su dodati. 3 h nakon toga reakcija je procedjena, koncentrovanain vacuo,i ostatak je razmućen u EtOH (8 mL) i tretiran sa 0.5 g Pd/C (10% w/w) i atmosfera je zamenjena vodonikom. Reakcija je mešana tokom noći, a potom je, kao što je prethodno opisano dobijen 59-3 koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C38H53F2N407: 715.85; nadjeno: 715.52.
Korak 4. Dobijanje 59-4. Rastvor 59-3 (0.40 g, 0.56 mmol) u DCM-u (1.5 mL) tretiranje sa 2.5 mL TFA na rt. Nakon 1.5 h, reakcija je koncentrovanain vacuo.Ostatak je razmućen u EA, ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHC03, slanim rastvorom i osušen iznad anhidrovanog MgS04. Koncentrovanjemin vacuodobija se 59-4 koji je korišćen dalje bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C34H45F2N4O7: 659.74; nadjeno: 659.56.
Korak 5. Dobijanje Primera 59: Rastvor 59-4 (0.20 g, 0.30 mmol) u DMF-u (2 mL) je zatim tretiran sa HATU-om (0.21 g, 0.55 mmol), DIPEA-om (0.27 mL, 1.5 mmol), DMAP-om (0.056 g, 0.46 mmol), i Intermedijerom A9 (0.13 g, 0.46 mmol) i mešan 5 h na rt. Reakciona smeša je prečišćena preparativnim HPLC-om da se dobije so TFA Primera 59. Analitički HPLC RetTime: 9.20 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]izračunato za C42H55F4N6O9S: 895.98; nadjeno: 895.60. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 9.31 (s, 1 H); 7.94 (d, J = 9.2 Hz, 1 H); 7.32 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1 H); 7.21 (d, J = 2.4 Hz, 1 H); 5.98 (br s, 1 H); 5.85 (td, Jh-f= 55.2 Hz, J = 6 Hz, 1 H); 4.94 (d, J = 7.6 Hz, 1 H); 4.58 (d, J = 7.2 Hz, 1 H); 4.35 (d, J = 7.2 Hz, 1 H); 4.33 (br s, 1 H); 4.18 (dd, J = 12, 3.6 Hz, 1 H); 3.97 (br s, 3H); 2.98 (m, 1 H); 2.64-2.41 (m, 2H); 2.22 (m, 1 H); 2.15-1.92 (m, 4H); 1.84-1.22 (m, 14H); 1.18 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 1.14-0.98 (m, 2H); 1.08 (s, 9H); 0.60-0.48 (m, 2H).
[0268]Primer 60. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-18,18-difluoro-14-metoksi-3,6-diokso-9-propil-l,la,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida. Korak 1. Dobijanje 60-1: U rastvor Intermedijera B5 (160 mg, 0.590 mmol) i Intermedijera E3 (194 mg, 0.590 mmol) u MeCN (2.95 mL) dodat je cezijum karbonat (192 mg, 0.590 mmol) na rt u atmosferi argona. Nakon 24 h, reakciona smeša je procedjena kroz celit i filtrat je koncentrovanin vacuo.Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (gradijent 0-100% etil acetat/heksan) dajući supstituisani hinoksalin 60-1. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C29H40F2N3O6: 564.28; nadjeno: 564.44. Korak 2. Dobijanje 60-2: U rastvor 60-1 (193 mg, 0.343 mmol) u terc-butil acetatu (1.36 mL) dodat je rastvor metansulfonske kiseline (111 uL, 1.72 mmol) u dihlormetanu (0.34 mL) i reakcija je mešana na rt. Nakon 2 h, reakciona smeša je razblažena zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (20 mL) i nastala smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 x 20 mL). Kombinovani organski deo je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovanin vacuoda se dobije amin hidrohlorid 60-2, koji se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izračunato za C24H32F2N3O4: 464.23; nadjeno: 464.35. Korak 3. Dobijanje 60-3: U rastvor 60-2 (133 mg, 0.289 mmol) i Intermedijera Dll (133 mg, 0.412 mmol) u MeCN (1.7 mL) dodat je HATU (157 mg, 0.412 mmol) što je praćeno dodatkom DIPEA (298 uL, 1.72 mmol) na rt u atmosferi argona. Nakon 1 h, reakciona smeša je koncentrovanain vacuo,i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (gradijent 0-100% etil acetat/heksan) dajući amid 60-3. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C38H53F2N4O7: 715.38; nadjeno: 715.55. Korak 4. Dobijanje 60-4: U rastvor 60-3 (188 mg, 264 umol) u DCE-u (52.8 mL) dodat je Zhan 1 B katalizator (19.4 mg, 26.4 umol) i reakciona smeša je degasifikovana 10 minuta argonom. Reakciona smeša je onda zagrevana na 100 °C. Nakon 1 h, reakciona smeša je ohladjena do rt i koncentrovanain vacuo.Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (gradijent 0-100% etil acetat/heksan) dajući makrocikl 60-4. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C36H49F2N4O7: 687.35; nadjeno: 687.54. Korak 5. Dobijanje 60-5: U rastvor makrocikla 60-4 (119 mg, 173 umol) u etanolu (1.0 mL) dodat je Pd/C (10 wt %, 18.4 mg, 17.3 umol) na rt u atmosferi argona. Reakcioni sud je evakuisan i ponovo napunjen 1 atm gasovitog vodonika (3 x) i reakciona smeša je energično mešana na rt. Nakon 1 h, reakciona smeša je procedjena kroz celit uz ispiranje etil acetatom (3 x 2 mL). Filtrat je koncntrovanin vacuoto dajući makrocikl 60-5, koji se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C36H51F2N4O7: 689.36; nadjeno: 689.56. Korak 6. Dobijanje 60-6: U rastvor 60-5 (150 mg, 218 umol) u DCM-u (1.1 mL) dodat je TMSOTf (197 uL, 1.09 mmol) na rt u atmosferi argona. Nakon 2 h, reakciona smeša je prebačena u rastvor 0.5 N NaOH (5 mL) prethodno ohladjenog na 0 °C. Nastala smeša je zakišeljena rastvorom 1 N HC1 do pH = 2 i ekstrahovana je dihlorometanom (3 x 5 mL). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovaniin vacuodajući karboksilnu kiselinu 60-6, koja se koristi direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C32H43F2N4O7: 633.30; nadjeno: 633.49. Korak 7. Dobijanje Primera 60: U rastvor 60-6 (100 mg, 158 umol) i Intermedijera A9 (69.0 mg, 237 umol) u MeCN (790 uL) dodat je HATU (91.5 mg, 237 umol) što je praćeno dodatkom DIPEA (137 uL, 790 umol) na rt u atmosferi argona. Nakon 3 h, reakciona smeša je koncentrovanain vacuo,prečišćena preparativnim HPLC-om (Gemini 5u Cl8 IlOA kolona, 5-100% MeCN/H20, 0.1% trifluoroirćetna kiselina modifikator) i liofilizovana da se dobije Primer 60 kao so TFA. Analitički HPLC RetTime: 8.89 min. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izračunatoC4oH53F4N609S: 869.35; nadjeno: 859.66. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 9.29 (br s, 1 H), 7.94 (d,/=9.2 Hz, 1 H), 7.31 (d,/=9.2 Hz, 1 H), 7.19 (br s, 1 H), 5.87 (br s, 1 H), 5.84 (td, Jh-f= 55.8 Hz, J = 5.4 Hz, 1 H), 4.56 (d, J = 6.9 Hz, 1 H), 4.40 (d, J = 12.6 Hz, 1 H), 4.36
(s, 1 H), 4.17 (dd, J = 11.9, 3.4 Hz, 1 H), 3.96 (br s, 4H), 3.68 (br s, 1 H), 3.01 - 2.91 (m, 1 H), 2.71 - 2.61 (m, 1 H), 2.61 - 2.43 (m, 1 H), 2.02 (br s, 4H), 1.88 - 1.59 (m, 4H), 1.59 - 1.35 (m, 4H), 1.33 - 1.20 (m, 3H), 1.09 (s, 9H), 1.04 - 0.95 (appt, J=7.0 Hz, 5H), 0.79 - 0.65 (m, 1 H), 0.49 (d,J=6.5 Hz, 1 H).
[0269] Primer61. Dobijanje (laS,2aR,6S,9S,10S,l lR,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -10-etil-19,19-difluoro-15-metoksi-4,7-diokso-1 a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro- 1H,9H-8,11 -metanociklopropa[4',5']ciklopenta[ 1 ',2': 18,19] [ 1,10,3,6] dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
[0270]Primer 61 je dobijen na sličan način kao Primer 59 zamenom Intermedijera A10 sa Intermedijerom A9 u Koraku 5. So TFA Primera 61 je izolovana. Analitički HPLC RetTime: 9.28 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C43H57F4N6O9S: 909.38; nadjeno: 909.59. 'HNMR (400 MHz, CD3OD) 5 9.28 (s, 1 H); 7.95 (d, J = 9.2 Hz, 1 H); 7.33 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1 H); 7.23 (d, J = 2.4 Hz, 1 H); 6.0 (br s, 1 H); 5.83 (br s, 1 H); 5.83 (td, Jh-f= 55 Hz, J = 6 Hz, 1 H); 4.94 (d, J = 7.6 Hz, 1 H); 4.61 (d, J = 7.6 Hz, 1 H); 4.34 (d, J = 7.6 Hz, 1 H); 4.32 (br s, 1 H); 4.18 (m, 1 H); 3.97 (s, 3H); 2.63-2.47 (m, 2H); 2.28-2.17 (m, 1 H); 2.12-1.96 (m, 4H); 1.83-1.26 (m, 14H); 1.53 (s, 3H); 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 1.08 (s, 9H); 0.94-0.88 (m, 2H); 0.62-0.48 (m, 2H).
[0271] Primer62. Dobijanje (laS,2aR,6S,9S,10S,l lR,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil] -2-(difluorometil)ciklopropil] -19,19-difluoro-15-metoksi-10-metil-4,7-diokso-l a,2,2a,4,5,6,7,l 0,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-l H,9H-8,11 - metanociklopropa[4',5']ciklopenta[ 1 ',2': 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida. Korak 1. Dobijanje Primera 62-1: HATU (214 mg, 0.563 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.30 mL, 1.72 mmol) su dodati smeši 46-2 (186 mg, 0.428 mmol) i Intermedijera D16 (157 mg, 0.508 mmol) u 10 mL acetonitrila pod argonom. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-30% etil acetat u heksanu) dajući Intermedijer 62-1. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C39H53F2N407: 727.38; nadjeno: 727.51. Korak 2. Dobijanje 62-2: Smeša 62-1 (275 mg, 0.378 mmol) i Zhan 1 B katalizator (34 mg, 0.046 mmol, Strem) u 75 mL DCE je deoksigenovana argonom tokom 17 minuta. Smeša je zatim zagrevana uz refluks tokom 80 minuta. Dodatnih 8 mg Zhan 1B katalizatora je dodato i smeša je mešana uz refluks dvadeset minuta. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša je koncentrovanain vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-25% etil acetat u heksanu) dajući Intermedijer 62-2. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izračunato za C37H49F2N4O7: 699.35; nadjeno: 669.50. Korak 3. Dobijanje smeše 62-3: Paladijum na ugljeniku (10 wt % Pd, 60 mg, 0.057 mmol) je dodat rastvoru 62-2 (207 mg, 0.297 mmol) u 7 mL etanola. Atmosfera je zamenjena vodonikom i smeša je mešana tokom noći. Reakcija je procedjena kroz celit, uz ispiranje etanolom. Filtrat je koncentrovanin vacuodajući intermedijer 62-3, koji se koristi u narednom koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C37H51F2N4O7: 701.36; nadjeno: 701.65. Korak 4. Dobijanje 62-4: TFA (1.6 mL, 20.9 mmol) je polako dodat u rastvor 62-3 (202 mg, 0.289 mmol) u 4.5 mL dihlrometana. Nakon 3.5 h, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom skoro do suva. Ostatak je razmućen u 30 mL etil acetata, ispran sa 20 mL vode, 20 mL zasićenog rastvora NaHC03(aq>, i odvojeni vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (3 x 20 mL). Kombinovani organski deo je ispran sa 30 mL slanog rastvora, osušen iznad anhidrovanog MgS04, procedjen, i koncentrovanin vacuodajući intermedijer 62-4, koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C33H43F2N4O7: 645.30; nadjeno: 645.53. Korak 5. Dobijanje Primera 62: HATU (113 mg, 0.297 mmol, Oakvvood) i DIPEA (0.17 mL, 0.978 mmol) su dodati smeši 62-4 (120 mg, 0.186 mmol) i Intermedijera A9 (110 mg, 0.379 mmol) u 6 mL acetonitrila pod argonom. Nakon mešanja tokom noći, reakciona smeša je razmućena u 30 mL etil acetate i isprana sa 20 mL 1 N vodenog rastvora HC1. Vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa etil acetatom. Kombinovani organski deo je ispran sa 50%-nim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2SO, procedjen, i koncentrovanin vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-50% etil acetat u heksanu) i reverzno faznim HPCL-om (50-100% acetonitril u vodi, sa 0.1% sa puferom trifluorosirćetne kiseline) dajući so trifluorosirćetne kiseline Primera 62. Analitički HPLC RetTime: 9.03 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C41H53F4N6O9S: 881.35; nadjeno: 881.57. 'H NMR (400 MHz, CD3OD): 5 9.27 (s, 1 H), 7.94 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.33 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1 H), 7.27 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 5.84 (td, Jh-f= 56 Hz, J = 6.8 Hz, 1 H), 5.75 (d, J = 3.6 Hz, 1 H), 4.94 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 4.55 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 4.35 (d, J = 12 Hz, 1 H), 4.32 (s, 1 H), 4.22-4.16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1 H), 3.97 (s, 3H), 3.01-2.94 (m, 1 H), 2.81-2.72 (m, 1 H), 2.66-2.40 (m, 1 H), 2.36-2.28 (m, 1 H), 2.10-1.94 (m, 4H), 1.82-1.72 (m, 2H), 1.70-1.22 (m, 10H), 1.14-1.02 (m, 7H), 1.10 (s, 9H), 0.61-0.49 (m, 2H).
[0272]Primer 63. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-14-metoksi-1 a-metil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11, 12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 63-1: Amin hidrohlorid 17-2 (500 mg, 1.03 mmol) je kombinovan sa intermedijernom smešom D17 (378.5 mg, 1.34 mmol), DIPEA (1.8 mL, 10.3 mmol) i DMF (3 mL). Reakcionoj smeši je dodat HATU (587.1 mg, 1.55 mmol) i mešana je na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Reakciona smeša je zatim razblažena vodom (20 mL) i 1N HC1 (10.5 mL) i razmućena je u metilen hloridu (20 mL). Organski deo je odvojen a vodeni sloj ekstrahovan tri puta metilen hloridom (10 mL). Kombinovani organski deo je ispran slanim rastvorom, osušen iznad MgS04, procedjen, i koncentrovanin vacuo.Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu dajući 63-1 kao 1:1 diastereomernu smešu. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izračunato za C38H53F2N4O7: 715.4; nadjeno: 715.4.
Korak 2. Dobijanje 63-2 i 63-3: Diastereomerna smeša 63-1 (496 mg, 0.695 mmol) i Zhan 1B katalizator (53.8 mg, 0.0695 mmol, Strem) su rastvoreni u 140 mL anhidrovanog DCE i izloženi N2tokom 30 minuta. Smeša je onda zagrevana na 100 °C tokom 90 minuta, i dodatna porcija Zhan 1 B katalizatora je dodata (54 mg, 0.695 mmol, Strem). Reakcija je zatim ohladjena do sobne temperature i koncentrovanain vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-40% etil acetat u heksanu) dajući pojedinačne diastereomere 63-2 (ranije eluirajuću frakciju) i 63-3 (kasnje eluirajuću frakciju). Ranije eluirajuća frakcija: LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C36H49F2N4O7: 687.4; nadjeno: 687.2. Kasnije eluirajuća frakcija: LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izračunato za C36H49F2N4O7: 687.4; nadjeno: 687.3.
Korak 3. Dobijanje 63-4: Paladijum na ugljeniku (10% w/w, 155 mg) je dodat rastvoru 63-2 (155 mg, 0.226 mmol) u etanolu (3 mL). Smeša je mešana u atmosferi vodonika tokom 1 h i onda je procedjena kroz celit, i isprana etil acetatom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da se dobije 63-4, koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izračunato za C36H51F2N4O7: 689.4; nadjeno: 689.3.
Korak 6. Dobijanje 63-5: Intermedijer 63-4 (153.5 mg, 0.222 mmol) je rastvoren u smeši 1:1 TFA:DCM (6 mL) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovanain vacuodajući 63-5, koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C32H44N4O7: 633.3; nadjeno: 633.2.
Korak 7. Dobijanje Primera 63: HATU (99.2 mg, 0.261 mmol) i DIPEA (271 uL, 2.1 mmol) su dodati smeši 63-5 (140.5 mg, 0.222 mmol) i A10 (100 mg, 0.316 mmol) u 1 mL DMF-a. Nakon mešanja tokom noći na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je sipana u vodu, zakišeljena 1 N vodenim rastvorom HC1 do pH 1, i ekstrahovana tri puta sa metilen hloridom (15 mL). Kombinovani organski deo je ispran vodom, slanim rastvorom, osušen iznad MgS04, procedjen, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativno reverzno faznim HPLC-om (5-100% acetonitril u vodi, sa 0.1% puferom trifluorosirćetne kiseline) dajući Primer 63. Analitički HPLC RetTime: 8.951 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C41H55F4N6O9S: 883.4; nadjeno: 883.2. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 7.96 (d,J=9.2 Hz, 1 H), 7.33 (dd,J=9.2, 2.8 Hz, 1 H), 7.23 (d,J=2. 1 Hz, IH), 6.03 (d,J=3.9 Hz, 1 H), 5.80 (td,J =55.8, 6.7 Hz, 1 H), 4.61 (d,J=6.9 Hz, IH), 4.46 (d,J=12.2 Hz, IH), 4.26 - 4.14 (m, 2H), 4.01 - 3.91 (m, 3H), 2.65 - 2.47 (m, 2H), 2.11-1.85 (m, 5H), 1.84-1.61 (m, 3H), 1.61-1.46 (m, 10H), 1.46 - 1.32 (m, 3H), 1.33 - 1.17 (m, 4H), 1.09 (d,J=15.9 Hz, 10H), 1.04 - 0.95 (m, 1 H), 0.94 - 0.84 (m, 2H), 0.21 - 0.12 (m, 1 H).
[0273]Primer64. Dobijanje (laS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -9-etil-18,18-difluoro-14-metoksi-1 a-metil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11, 12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0274]Primer 64 je dobijen na sličan način kao Primer 63, zamenom kasnije eluirajućeg 63-3 sa ranije eluirajućim 63-2 u Koraku 3. Primer 64 je onda izolovan. Analitički HPLC RetTime: 8.535 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C41H57F2N6O9S: 883.4; nadjeno: 883.3. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 7.97 (d,J=8.9 Hz, 1 H), 7.45 - 7.16 (m, 2H), 5.97 - 5.52 (m, 2H), 4.74 (d,J=7.6 Hz, 1 H), 4.50 - 4.16 (m, 1 H), 4.06 - 3.86 (m, 5H), 2.77 - 2.57 (m, IH), 2.51 - 2.18 (m, 2H), 2.16 - 1.86 (m, 5H), 1.75 - 1.32 (m, 16H), 1.33 - 1.03 (m, 14H), 1.02 - 0.76 (m, 2H), 0.42 - - 0.09 (m, 1 H).
[0275]Primer 65. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-18,18-difluoro-14-metoksi-3,6-diokso-9-propil-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0276]Korak 1. Dobijanje Primera 65: U rastvor 60-6 (52 mg, 82 umol) i Intermedijera A10 (37.5 mg, 123 umol) u MeCN (411 uL) dodat je HATU (47.5 mg, 123 umol) što je praćeno dodatkom DIPEA (73 uL, 411 umol) na rt u atmosferi argona. Nakon 20 h, reakciona smeša je koncentrovanain vacuo,prečišćena preparativnim HPLC-om (Gemini 5u C18 110A kolona, 5-100% MeCN/HiO, 0.1% trifluorosirćetna kiselina modifikator) i liofilizovana dajući Primer 65 kao so TFA. Analitički HPLC RetTime: 8.99 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C41H55F4N6O9S: 883.36; nadjeno: 883.60. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 9.26 (s, 1 H), 7.95 (d,J=9.1 Hz, 1 H), 7.33 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1 H), 7.22 (d,J=2.8 Hz, 1 H), 5.89 (d,J=3.2 Hz, 1 H), 5.81 (td, Jh-f= 55.5 Hz, J = 6.5 Hz, 1 H), 4.59 (d, /= 7.0 Hz, 1 H), 4.40 (d, J = 12.5 Hz, 1 H), 4.36 (s, 1 H), 4.17 (dd, J = 12.2, 3.8 Hz, 1 H), 3.97 (s, 3H), 3.73 - 3.66 (m, 1 H), 2.73 - 2.64 (m, 1 H), 2.63 - 2.45 (m, 1 H), 2.01 (br s, 3H), 1.85 - 1.62 (m, 4H), 1.62 - 1.53 (m, 3H), 1.51 (s, 3H), 1.48 - 1.22 (m, 5H), 1.08 (s, 9H), 1.01 (app t, /= 7.3 Hz, 4H), 0.94 - 0.87 (m, 2H), 0.80 - 0.69 (m, 1 H), 0.50 (d,J=7.1 Hz, 1
H).
[0277]Primer 66. Dobijanje (4aR,8S,llS,12S,13R,25aR)-8-terc-butil-N-[(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-12-etil-17-metoksi-6,9-diokso-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-heksadekahidro-lH,llH-10,13-metanohinoksalino[2,3-k] [1,10,3,6]benzodioksadiazaciklononadecin-11 -karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 66-1 i 66-2. U rastvor Intermedijera 70-3 (283 mg, 0.42 mmol) u CH2CI2(5 mL) dodat je TMSOTf (380 uL, 2.1 mmol). Nakon mešanja 2 h, reakciona smeša je sipana u 1 N NaOH (12 mL) koji se meša. Smeša je preneta u levak za odvajanje, zakišeljena sa 1 N HC1 do pH 3, ekstrahovana sa CH2Cl2, osušena iznad magnezijum sulfata, i koncentrovana. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-10% MeOH/EtOAc) dajući smešu 66-1 i 66-2. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C34H47N4O7: 623.34; nadjeno: 623.66.
Korak 2. Dobijanje 66-3 i 66-4. U rastvor 66-1 i 66-2 (58 mg, 0.09 mmol), intermedijera A9 (32 mg, 0.11 mmol), TBTU-a (42 mg, 0.13 mmol) i DMAP-a (16 mg, 0.14 mmol) u DMF-u (3 mL) dodat je DIPEA (47 uL, 0.27 mmol) i reakcija je mešana na rt tokom 23 h. Reakcija je onda kvenčovana vodom, razblažena EtOAc, isprana zasićenim rstvorom NaHC03, slanim rastvorom, osušena iznad magnezijum sulfata, i koncentrovana. Sirovi material je prečišćen reverzno faznim HPLC-om (Gemini, 30-85% ACN/H2O + 0.1% TFA) i liofilizovan dajući so TFA smeše Intermedijera 66-3 i 66-4. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H57F2N6O9S: 859.39; nadjeno: 859.65.
Korak 3. Dobijanje Primera 66: 66-3 i 66-4 (5 mg, 0.005 mmol) su razmućeni u EtOH (2 mL) i tretirani sa Pd/C (10%, 5 mg). Atmosfera je zamenjena vodonikom i sve je mešano na rt tokom 2.5 h. Reakcija je procedjena kroz celit, isprana sa EtOAc i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-10% MeOH/EtOAc) i liofilizovan da se dobije prekursor jedinjenje. Analitički HPLC RetTime: 9.15 min.LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H59F2N6O9S: 862.01; nadjeno: 862.37. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 7.94 - 7.73 (m, 1 H), 7.25 (m, 1 H), 6.87 (d,J=9.8 Hz, 1 H), 6.05 (m, 2H), 4.83 - 4.74 (m, 1 H), 4.70 (d,J= 7.6 Hz, 1 H), 4.52 - 4.28 (m, 2H), 4.16 (m, 2H), 4.05 - 3.86 (m, 4H), 3.86 - 3.45 (m, 4H), 3.22 - 3.00 (m, 1 H), 2.89 (s, 1 H), 2.77 - 2.55 (m, 1 H), 2.25 (t,J=7.3 Hz, 1 H), 2.09 - 0.81 (m, 35H).
[0278]Primer 67. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2S)-2-(2,2-difluoroetil)-!-{[(!-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11, 12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0279]Primer 67 je dobijen na sličan način kao Primer 1 zamenom Intermedijera A8 sa Intermedijerom A10 u Koraku 8. So TFA Primera 67 je izolovana. Analitički HPLC RetTime: 8.85min.LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C^H^NeC^S: 847.99; nadjeno: 847.64. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 9.00 (s, 1 H); 7.79 (d, J = 9.2 Hz, 1 H); 7.23 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1 H); 7.15 (d, J = 2.4 Hz, 1 H); 5.89 (tt, Jh-f= 54 Hz, J = 4.4 Hz, 1 H); 5.89 (br s, 1 H); 4.61 (d, J = 7.2 Hz, 1 H); 4.39 (br s, 1 H); 4.37 (d, J = 9.2 Hz, 1 H); 4.16 (dd, J = 9.2 Hz, 7.2 Hz, 1 H); 3.92 (s, 3H); 3.78-3.72 (m, 1 H); 3.10-2.88 (m, 1 H); 2.86-2.74 (td, J = 12, 4.4 Hz, 1 H); 2.62-2.53 (m, 1 H); 2.18-2.04 (m, 1 H); 1.88-1.46 (m, 14H); 1.53 (s, 3H); 1.28-1.20 (m, 4H); 1.10 (s, 9H); 1.02-0.96 (m, 2H); 0.96-0.86 (m, 2H); 0.78-0.67 (m, IH); 0.54-0.47 (m, IH).
[0280]Primer 68. Dobijanje (4aR,8S,llS,12S,13R,25aS)-8-terc-butil-N-[(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil] -2-(difluorometil)ciklopropil] -21,21 -difluoro-17-metoksi-12-metil-6,9-diokso-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-heksadekahidro-lH,HH-10,13-metanohinoksalino[2,3-k] [1,10,3,6]benzodioksadiazaciklononadecin-11 -karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 68-1 i 68-2 (smeša): TMSOTf (0.6 mL, 3.3 mmol) je dodat u rastvor intermedijera 62-3 (424 mg, 0.606 mmol) u 7 mL dihlormetana na sobnoj temperaturi. Nakon 1 h, dodatnih 0.2 mL TMSOTf-a je dodato. Nakon tri sata, reakciona smeša je koncentrovana dajući smešu 68-1 i 68-2 izomera, koja je korišćena u narednom koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izračunato za C33H43F2N4O7: 645.30; nadjeno: 645.49.
Korak 2. Dobijanje 68-3 168-4 (smeša): HATU (209 mg, 0.550 mmol, Oakvvood) i DIPEA (0.25 mL, 1.43 mmol) su dodati smeši 68-1 i 68-2 iz prethodnog koraka (176 mg, 0.273 mmol) i Intermedijera A9 (161 mg, 0.555 mmol) u 4 mL acetonitrila i 2 mL DMF-a pod argonom. Nakon jednog sata, dodatnih 100 mg Intermedijera A9 je dodato. Nakon dva sata, reakciona smeša je razmućena u 30 mL etil acetata i isprana je sa 20 mL 1 N vodenog rastvora HC1. Vodeni sloj je ekstrahovan tri puta etil acetatom. Kombinovani organski deo je ispran sa 50% slanim rastvorom, osušen iznad Na2S04, procedjen, i koncentrovanin vacuo.Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-50% etil acetat u heksanu) i preparativnim reverzno faznim HPLC-om (50-100% acetonitril u vodi, sa 0.1% puferom trifluorosirćetne kiseline) dajući soli trifluorosirćetne kiseline kao smešu 68-3 i 68-4. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>izračunato za C41H53F4N6O9S: 881.35; nadjeno: 881.50.
Korak 3. Dobijanje Primera 68: Paladijum na ugljeniku (10 wt % Pd, 2 mg, 0.0019 mmol) je dodat u rastvor smeše 68-3 i 68-4 iz prethodnog koraka (4.5 mg, 0.0045 mmol) u 1 mL etanola. Atmosfera je zamenjena vodonikom i smeša je mešana dva sata. Reakcija je procedjena kroz celit, uz ispiranje etanolom. Filtrat je koncentrovanin vacuodajući Primer 68. Analitički HPLC RetTime: 8.81 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C41H55F4N6O9S: 883.36; nadjeno: 883.64. 'H NMR (400 MHz, CD3OD): 8 7.94 (d, J = 10.4 Hz, 1 H), 7.34-7.30 (m, 2H), 6.13 (td, Jh-f= 57 Hz, J = 6.8 Hz, 1 H), 5.88-5.84 (m, 1 H), 4.62 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 4.38-4.30 (m, 2H), 4.20-4.05 (m, 2H), 3.98 (s, 3H), 2.87-2.76 (m, 2H), 2.34-2.16 (m, 2H), 1.92-1.54 (m, 6H), 1.46-1.36 (m, 3H), 1.34-1.12 (m, 8H), 1.20 (d, J = 7.6 Hz, 3H), 1.08-0.96 (m, 4H), 1.04 (s, 9H), 0.93-0.78 (m, 4H).
[0281]Primer 69. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -14-etoksi-9-etil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 69-2. Hinoksalinol 55-1 (54 mg, 0.086 mmol) je suspendovan u ACN-u (2 mL) i tretiran sa CS2CO3(84 mg, 0.259 mmol) i bromoetanom (0.032 mL, 0.432 mmol). Reakciona smeša je mešana na RT tokom 16 h. Reakcija je procedjena i sirovi materijal je prečišćen flash hromatografijom na koloni dajući 69-2. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C36H52N4O7: 652.38; nadjeno: 653.41.
Korak 2. Dobijanje 69-3. Intermedijer 69-2 (0.086 mmol teorijski) je tretiran DCM-om (10 mL) i TMSOTf-om (1.0 mL) na RT. Nakon 1 h, reakcija je kompletno završena što je utvđeno LCMS-om. Reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom dajući 69-3, koji se koristi dalje bez prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C32H44N4O7: 596.32; nadjeno: 597.38.
Korak 3. Dobijanje Primera 69. Karboksilna kiselina 69-3 (0.0.086 mmol teorijski) je tretirana intermedijerom A10 (40 mg, 0.130 mmol), TBTU-om (47 mg, 0.147 mmol), DMAP-om (18 mg, 0.147 mmol), DCM-om (3 mL) i DIPEA-om (0.075 mL, 0.432 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 20 h, onda je koncentrovana pod sniženim pritiskom i prečišćena reverzno faznim HPLC-om dajući Primer 69 kao so TFA. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C41H56F2N6O9S: 846.38; nadjeno: 847.75.
[0282] Primer70. Dobijanje (laS,2aR,6S,9S,10S,l lR,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-10-etil-15-metoksi-4,^ a,2,2a ,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1 H,9H-8,11 - metanociklopropa[4',5']ciklopenta[ 1 ',2': 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazacildononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 70-1: U rastvor 1-2 (575 mg, 1.41 mmol), D12 (410 mg, 1.26 mmol) i HATU (696 mg, 1.80 mmol) u DMF-u (12 mL) dodat je DIPEA (1.0 mL, 5.64 mmol) i reakcija je mešana na rt. Nakon 2 h mešanja, dodatni HATU (350 mg, 0.92 mmol) i DIPEA (0.5 mL, 2.8 mmol) su dodati reakciji, i smeša je mešana tokom 14 h. Reakcija je kvenčovana zasićenim rastvorom NaHCCbi ekstrahovana sa EtOAc, isprana zatim slanim rastvorom, osušena iznad magnezijum sulfata i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu
(10-30% EtOAc/heksan) dajući intermedijer 70-1. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]izračunato za C38H54CIN4O7: 713.37; nadjeno: 713.95.
Korak 2. Dobijanje 70-2: U rastvor 70-1 (542 mg, 0.76 mmol), TEA (0.16 mL, 1.14 mmol) i kalijum viniltrifluoroborat (153 mg, 1.14 mmol) u EtOH (10 mL) dodat je PdC12(dppf) (62 mg, 0.08 mmol). Reakcija je degasifikovana sa N2tokom 10 min i zagrevana na 80 °C tokom 1 h. Reakcija je kvenčovana zasićenim rastvorom NaHC03i ekstrahovana sa EtOAc, isprana zatim slanim rastvorom, osušena iznad magnezijum sulfata i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-20% Ac/heksan) dajući intermedijer 70-2. LCMS-ESL (m/z):
[M+H]<+>izračunato za C40H57N4O7: 705.42; nadjeno: 705.05.
Koraci 3 i 4. Dobijanje 70-3: U rastvor 70-2 (470 mg, 0.66 mmol) u DCE-u (100 mL) dodat je Zhan 1B katalizator (49 mg, 0.07 mmol) i reakcija je degasifikovana 30 minuta sa azotom. Reakcija je zagrevana na 100 °C tokom 1 h, ohladjena do sobne temperature i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu dajući proizvod (358 mg; LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C38H53N4O7: 677.39; nadjeno: 677.52) koji je razmućen u EtOH (6 mL) i EtOAc (2 mL) i tretiran sa Pd/C (10%, 350 mg). Atmosfera je zamenjena vodonikom i mešana na rt tokom 1.5 h. Reakcija je procedjena kroz celit, isprana sa EtOAc i koncentrovana (358 mg intermedijera 70-3) koji se naknadno koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z):
[M+H]<+>izračunato za C38H55N4O7: 679.41; nadjeno: 679.44.
Korak 5. Dobijanje 70-4: U rastvor 70-3 (100 mg, 0.15 mmol) u DCM-u (1 mL) dodat je TFA (1 mL) i mešan je 2 h na rt. Reakcija je razblažena sa EtOAc, isprana vodom, načinjena baznijom do pH 7 zasićenim rastvorom NaHC03, osušena iznad magnezijum sulfata, i koncentrovana dajući ostatak intermedijera 70-4 koji se koristi kasnije bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C34H47N4O7: 623.34; nadjeno: 623.44 .
Korak 6. Dobijanje Primera 70: U rastvor 70-4 (94 mg, 0.15 mmol), intermedijera A9 (65 mg, 0.22 mmol), TBTU (87 mg, 0.27 mmol) i DMAP (27 mg, 0.22 mmol) u DCM-u (3 mL) dodat je DIPEA (0.13 mL, 0.75 mmol) i reakcija je mešana na rt tokom 2 h. Reakcija je kvenčovana vodom, razblažena sa EtOAc, isprana zasićenim rastvorom NaHC03, slanim rastvorom, osušena iznad magnezijum sulfata i koncentrovana. Sirovi material je prečišćen reverzno-faznim HPLC-om (Gemini, 30-85% ACN/H2O + 0.1% TFA) i liofilizovan dajući Primer 70 (23 mg) kao so TFA.
Analitičkia HPLC RetTime: 9.32 min.LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C42H57F2N609S: 859.39; nadjeno: 859.54. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 9.31 (s, 1 H), 7.83 (d,J=9.1 Hz, 1 H), 7.26 (dd,J=9.1, 2.8 Hz, 1 H), 7.20 (d, /= 2.7 Hz, 1 H), 6.09 - 5.68 (m, 2H), 5.51 (s, 1 H), 5.07 - 4.97 (m, 1 H), 4.70 - 4.55 (m, 1 H), 4.42 - 4.29 (m, 2H), 4.22 (dd,J=12.0, 4.1 Hz, IH), 3.96 (s, 2H), 3.75 (t,J=6.7 Hz, 2H), 3.02 (m, 2H), 2.93 - 2.67 (m, IH), 2.56 (m, 1 H), 2.13 - 1.04 (m, 30H), 1.00 (d, /= 6.6 Hz, IH), 0.90 (m, 3H), 0.65 - 0.46 (m, 2H).
[0283]Primer 71. Dobijanje (4aR,8S,llS,12S,13R,25aR)-8-terc-butil-N-[(lR,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-17-metoksi-12-metil-6,9-diokso-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-heksadekahidro-lH,llH^ dimetanohinoksalino[2,3-k][l,10,3,6]benzodioks i
Korak 1: U rastvor amina 18-2 (315 mg, 0.80 mmol), DIPEA (350 uL, 2.0 mmol) i smeše 1:1 kiselina D19 (270 mg, 0.80 mmol) u MeCN (8 mL) dodat je HATU (400 mg, 1.05 mmol). Nastali rastvor je mešan 2.5 h na r.t, i tada ispran sa EtOAc (50 mL) i 0.2 N vodenim rastvorom HC1 (30 mL). Faze su odvojene, i organska faza je osušena iznad MgS04, procedjena, i koncentrovana dajući sirovi ostatak. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (10% do 30% EtOAc u heksanu) daje 474 mg bezbojnog ulja koje se direktno koristi u sledećem Koraku.
Korak 2: Suspenzija proizvoda iz Koraka 1 (474 mg, ca. 0.65 mmol), PdCl2(dppf),CH2Cl2(40 mg, 0.049 mmol) i kalijum viniltrifluoroborat (189 mg, 1.41 mmol) u EtOH (8 mL) je zasićena argonom nekoliko minuta i dodat je Et3N (200 uL, 1.4 mmol). Nastala smeša je zagrejana pod argonom na 75 °C na uljanom kupatilu. Nakon 2.25 h mešanja, reakciona smeša je ohladjena do r.t. i razblažena sa EtOAc (35 mL) i polu-zasićenim slanim rastvorom (20 mL). Faze su odvojene, i organska faza je osušena iznad Na2S04, procedjena, i koncentrovana dajući sirovi ostatak. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu daje žuto ulje koje se koristi direktno u sledećem Koraku.
Korak 3: Rastvor proizvoda iz Koraka 3 (395 mg, 0.56 mmol) u 1,2-DCE-u (180 mL) je zasićen argonom 10 min. Zhan 1B metatezis katalizator (61 mg, 0.083 mmol) je dodat kao rastvor u DCE-u (4 mL), i nastali rasvor je zagrevan na 85 °C. Nakon mešanja 1.75 h, reakciona smeša je ohladjena do sobne temperature, koncentrovana na silika gelu (5 g), i prečišćena hromatografijom na silika gelu (10 do 15 do 25% EtOAc u heksanu) dajući 116 mg brzo-eluirajućeg proizvoda i 84 mg sporo-eluirajućeg proizvoda.
Koraci 4-5 (brzo-eluirajući diastereomer): Brzo-eluirajući proizvod iz Koraka 3 je rastvorenu 1:1 EtOAc:EtOH (4 mL). Pd/C (10 wt. %Pd, 45 mg) je dodat, i reakcioni sud je očišćen dva puta sa 1 atm th. Reakciona smeša je mešana 2.5 h pod 1 atm H2i onda je procedjena kroz celit sa EtOAc dajući sirovi ostatak. Ovaj ostatak je rastvoren u CH2CI2(1 mL) i tertian je sa TFA (2 mL). Nakon 2 h mešanja, reakciona smeša je koncentrovanain vacuoi raspodeljena izmedju EtOAc (15 mL) i 15% zasićenog vodenog rastvora NaHC03(10 mL). Faze su odvojene, i organska faza je isprana slanim rastvorom (10 mL), osušena iznad Na2S04, i procedjena dajući 71-1. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C34H47N4O7: 623.3; nadjeno: 623.2.
Koraci 4-5 (sporo-eluirajući diastereomer): Sporo- eluirajući proizvod iz Koraka 3 je rastvoren u EtOAc (1 mL) i EtOH (7 mL). Pd/C (10 wt. % Pd, 85 mg) je dodat, i reakcioni sud je produvan dva puta sa 1 atm H2. Reakciona smeša je mešana 3 h pod 1 atm H2i zatim procedjena je kroz celit sa EtOAc dajući sirovi ostatak. Ovaj ostatak je rastvoren u CH2CI2(1 mL) i tretiranje sa TFA (2 mL). Nakon 2 h mešanja, reakciona smeša je koncentrovanain vacuoi raspodeljena izmedju EtOAc (15 mL) i 15% zasićenog vodenog rastvora NaHC03 (10 mL). Faze su odvojene, i organska faza je isprana slanim rastvorom (10 mL), osušena iznad Na2S04, i procedjena dajući 71-2. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C34H47N4O7: 623.3; nadjeno: 623.2.
Korak 6: Dobijanje Primera 71: Suspenziji kiseline 71-1 (49 mg, 0.079 mmol) i amin hidrohlorida A9 (41 mg, 0.14 mmol) u MeCN (1 mL) dodat je DIPEA (100 uL, 0.57 mmol). Nastalom rastvoru dodat je HATU (45 mg, 0.12 mmol) i reakcija je mešana na rt tokom 14.5 h. Reakcija je onda razblažena sa EtOAc (20 mL), 0.2 M vodenim rastvorom HC1 (10 mL) i slanim rastvorom (10 mL). Faze su odvojene, i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (20 mL). Kombinovana organska faza je osušena iznad Na2S04, procedjena, i koncentrovana dajući sirovi ostatak. Ovaj ostatak je rastvoren u CH2CI2i koncentrovan na 2 g silika gela. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (4% do 45% acetona u heksanu) daje amorfni ostatak koji se liofilizuje iz vode i MeCN dajući Primer 71. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H57F2N6O9S: 859.4; nadjeno: 859.1. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 10.13 (s, 1 H), 7.81 (d,J =9.1 Hz, 1 H), 7.63 (s, IH), 7.19 (dd, 7= 9.1, 2.8 Hz, 1 H), 7.09 (d,J=2.7 Hz, 1 H), 5.97 (td,J =55.5, 6.9 Hz, IH), 5.59 - 5.45 (m, 2H), 4.96 (dd,J=14.4, 6.2 Hz, 1 H), 4.51 (d,J=7.2 Hz, IH), 4.42 (d,J=9.8 Hz, 1 H), 4.13 (dt,J=12.0, 7.7 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 2.99 - 2.63 (m, 4H), 2.40 - 2.23 (m, 2H), 2.15 - 0.83 (m, 34H).
[0284] Primer72. Dobijanje (4aS,8S,llS,12S,13R,25aS)-8-terc-butil-N-[(l R,2R)-1-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-17-metoksi-12-metil-6,9-diokso-2,3,4,4a,6,7,8,9,12,13,21,22,23,24,25,25a-heksadekahidro-lH,llH-l,3:10,13-dimetanohinoksalino[2,3-k][l,10,3,6]benzodioksadiazaciklononadecin-ll-karboksamida.
[0285] Korak 1: Dobijanje Primera 72: Suspenziji kiseline 71-2 (49 mg, 0.079 mmol) i amin hidrohlorida A9 (38 mg, 0.13 mmol) u MeCN-u (1 mL) dodat je DIPEA (100 uL, 0.57 mmol). Nastalom rastvoru dodat je HATU (41 mg, 0.11 mmol), i reakcija je mešana na rt tokom 14.5 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc (20 mL), 0.2 M vodenim rastvorom HC1 (10 mL) i slanim rastvorom (10 mL). Faze su odvojene, i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (20 mL). Kombinovana organska faza je osušena iznad Na2S04, procedjena, i koncentrovana dajući sirovi ostatak. Ovaj ostatak je rastvoren u CH2CI2i koncentrovan na 2 g silika gela. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (4% do 45% acetona u heksanu) daje amorfni ostatak koji se liofilizuje iz vode i MeCN dajući Primer 72. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C42H57F2N609S: 859.4; nadjeno: 859.0. 'HNMR (400 MHz, CDCb) 8 9.72 (s, 1 H), 9.36 (s, 1 H), 7.86(d, J=9.1 Hz, IH), 7.28(d, J=2.7 Hz, 1 H), 7.25 - 7.17 (m, 2H), 5.98 - 5.88 (m, 1 H), 5.69 (td,J=55.4, 6.9 Hz, 1 H), 4.81 - 4.69 (m, IH), 4.68 - 4.56 (m, 2H), 4.33 (d,J= 10.1Hz, IH), 3.99 (s, 3H), 3.35 (dd,J =9.7, 7.0 Hz, 1 H), 3.24 - 3.13 (m, IH), 2.97 - 2.87 (m, IH), 2.87 - 2.72 (m, 2H), 2.57 - 2.45 (m, 1 H), 2.38 - 2.28 (m, IH), 2.17 - 0.71 (m, 34H).
[0286] Primer 73. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-9-etil-14-metoksi-N-[(lR,2R)-2-metil-1 - {[(1 -metilciklo<p>ro<p>il)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0287]Primer 73 je dobijen na sličan način kao Primer 1 zamenom Intermedijera Ali sa Intermedijerom A10 u Koraku 8. So TFA Primera 73 je izolovana. Analitički HPLC RetTime: 8.72 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C40H57N6O9S: 797.98; nadjeno: 797.54. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 8.84 (s, 1 H); 7.79 (d, J = 9.2 Hz, 1 H); 7.22 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1 H); 7.13 (d, J = 2.4 Hz, 1 H); 5.87 (d, J = 3.2 Hz, 1 H); 4.57 (d, J = 7.2 Hz, 1 H); 4.39 (br s, 1 H); 4.37 (br d, J = 10 Hz, IH); 4.15 (dd, J = 12, 4 Hz, IH); 3.92 (s, 3H); 3.74 (m, IH); 3.10-2.88 (m, 1 H);2.80 (td, J =12.4, 4 Hz, 1 H); 2.58 (m, 1 H); 1.89-1.66 (m, 3H); 1.66-1.38 (m, 11H); 1.52 (s, 3H); 1.23 (t, J =7.2 Hz, 3H); 1.16 (d, J = 6 Hz, 3H); 1.10 (s, 9H); 1.02-0.84 (m, 4H); 0.78-0.66 (m, 1 H); 0.55-0.20 (m, 1 H).
[0288]Primer 74. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -fluorociklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0289]Primer 74 je dobijen na sličan način kao Primer 1 zamenom Intermedijera A12 sa Intermedijerom A10 u Koraku 8. So TFA Primera 74 je izolovana. Analitički HPLC RetTime: 8.81 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C39H52F3N6O9S: 837.35; nadjeno: 837.54. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 9.26 (s, 1 H); 7.79 (d, J = 9.2 Hz, 1 H); 7.22 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1 H); 7.14 (d, J = 2.4 Hz, 1 H); 5.89 (d, J = 3.6 Hz, 1 H); 5.82 (td, Jh-f= 56 Hz, J = 6.4 Hz, 1 H); 4.56, (d, J = 7.2 Hz, 1 H); 4.39 (s, 1 H); 4.38 (d, J = 12 Hz, 1 H); 4.16 (dd, J = 12, 7.2 Hz, 1 H); 3.92 (s, 3H); 3.78-3.72 (m, 1 H); 3.10-2.89 (m, 1 H); 2.80 (td, J = 12, 4 Hz, 1 H); 2.63-2.54 (m, 1 H); 2.02 (m, 2H); 1.95-1.66 (m, 3H); 1.66-1.36 (m, 9H); 1.22 (t, J =7.2 Hz, 3H); 1.14-1.04 (m, 2H); 1.09 (s, 9H); 1.04-0.92 (m, 2H); 0.78-0.68 (m, IH); 0.57-0.46 (m, IH).
[0290]Primer 75. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-l-{[(l-hlorociklopropil)sulfonil]karbamo 1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0291]Primer 75 je dobijen na sličan način kao Primer 1 zamenom Intermedijera A13 sa Intermedijerom A10 u Koraku 8. So TFA Primera 75 je izolovana. Analitički HPLC RetTime: 8.89 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C39H52CIF2N6O9S: 853.32; nadjeno: 853.94.
'H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 9.24 (s, 1 H); 7.79 (d, J = 9.2 Hz, 1 H); 7.22 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1 H); 7.13 (d, J = 2.4 Hz, 1 H); 5.88 (d, J = 3.2 Hz, 1 H); 5.84 (td, Jh-f= 55.6 Hz, J = 6.8 Hz, 1 H); 4.57 (d, J = 7.2 Hz, lH);4.39(brs, lH);4.38(d,J=12Hz, lH);4.16(dd,J=12,7.2Hz, 1 H); 3.92 (s, 3H); 3.77-3.73 (m, 1 H); 3.00-2.88 (m ,1 H); 2.86-2.75 (m, 1 H); 2.64-2.54 (m, 1 H); 2.10-1.90 (m, 4H); 1.90-1.37 (m, 12H); 1.23 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 1.10 (s, 9H); 1.02-0.96 (m, 2H); 0.78-0.64 (m, 1 H); 0.56-0.45 (m, 1 H).
[0292]Primer 76. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-18,18-difluoro-14-metoksi-1 a,9-dimetil-3,6-diokso-1 ,a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 76-1: HATU (502 mg, 1.32 mmol, Oakvvood) i DIPEA (0.70 mL, 4.02 mmol) su dodati smeši 46-2 (434 mg, 0.998 mmol) i Intermedijera Dl 7 (350 mg, 1.24 mmol) u 16 mL acetonitrila pod argonom. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i nastali ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-25% etil acetat u heksanu) dajući 76-1. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C37H51F2N4O7: 701.36; nadjeno: 701.57.
Korak 2. Dobijanje 76-2 i 76-3: Diastereomerna smeša 76-1 (550 mg, 0.786 mmol) i Zhan 1B katalizatora (69 mg, 0.094 mmol, Strem) u 157 mL DCE je deoksigenovana pod argonom tokom 25 minuta. Smeša je zagrevana uz refluks tokom 90 minuta. Dodatnih 35 mg Zhan 1B katalizatora je dodato i reakciona smeša je zagrevana uz refluks 45 minuta. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša je koncentrovanain vacuo.Nastali ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-35% etil acetat u heksanu) dajući pojedinačne stereomere 76-2
(ranije eluirajuća komponenta) kao beli čvrst film i 76-3 (kasnije eluirajuća komponenta) kao braon čvrst film. Ranije eluirajuća 76-2: LCMS-ESf" (m/z): [M+H]<+>izračunato za C35H47F2N4O7: 673.33; nadjeno: 673.45. Kasnije eluirajuća 76-3: LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]izračunato za C35H47F2N4O7: 673.33; nadjeno: 673.47.
Korak 3. Dobijanje 76-4: Paladijum na ugljeniku (10 wt % Pd, 51 mg, 0.048 mmol) je dodat rastvoru 76-2 (175 mg, 0.260 mmol) u 9 mL etanola. Atmosfera je zamenjena vodonikom i reakcija je mešana preko noći. Reakciona smeša je procedjena kroz celit i isprana etanolom. Filtrat je koncentrovanin vacuodajući 76-4, koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C35H49F2N4O7: 675.35; nadjeno: 675.53.
Korak 4. Dobijanje 76-5: TFA (1.2 mL, 15.6 mmol) je polako dodat rastvoru 76-4 (155 mg, 0.230 mmol) u 3.4 mL dihlormetana. Nakon 4 sata, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom skoro do suva. Nastali ostatak je razmućen u 25 mL etil acetata, ispran sa 15 mL vode, 15 mL zasićenog rastvora NaHCCb(aq), i razdvojen je. Vodeni slojevi su ekstrahovani sa etil acetatom (3 x 20 mL). Kombinovani organski deo je ispran sa 30 mL slanog rastvora, osušen iznad anhidrovanog MgSCM, procedjen, i koncentrovanin vacuodajući 76-5, koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C31H41F2N4O7: 619.29; nadjeno: 619.44.
Korak 5. Dobijanje Primera 76: HATU (160 mg, 0.421 mmol) i DIPEA (0.20 mL, 1.15 mmol) su dodati smeši 76-5 (140 mg, 0.226 mmol) i Intermedijera A10 (139 mg, 0.457 mmol) u 7.5 mL MeCN pod argonom. Nakon mešanja tokom noći, reakciona smeša je razmućena u 30 mL etil acetata i isprana sa 20 mL 1 N vodenog rastvora HC1. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom tri puta. Kombinovani organski deo je ispran slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog MgSCM, procedjen, i koncentrovanin vacuo.Nastali ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-45% etil acetat u heksanima) i preparativnim reverzno-faznim HPLC-om (50-100% acetonitril u vodi, sa 0.1% puferom trifluoroasirćetne kiseline) dajući so trifluorosirćetne kiseline Primera 76. Analitički HPLC RetTime: 8.80 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C40H53F4N6O9S: 869.35; nadjeno: 869.59. 'H NMR (400 MHz, CD3OD): 9.19 (s, 1 H), 7.94 (d, J = 9.2 Hz, 1 H), 7.32 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1 H), 7.27 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 5.78 (td, Jh-f= 56 Hz, J = 7.2 Hz, 1 H), 5.76-5.74 (m, 1 H), 4.56 (d, J = 6.4 Hz, 1 H), 4.48 (d, J = 12 Hz, 1 H), 4.27-4.19 (m, 1 H), 4.22 (s, 1 H), 3.97 (s, 3H), 2.76-2.70 (m, 1 H), 2.62-2.43 (m, 1 H), 2.14-1.94 (m, 3H), 1.90-1.80 (m, 1 H), 1.80-1.62 (m, 3H), 1.56-1.52 (m, 2H), 1.51 (s, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.41-1.36 (m, 1 H), 1.27-1.18 (m, 1 H), 1.11 (s, 9H), 1.09-1.04 (m, 5H), 1.03-0.94 (m, 2H), 0.87-0.81 (m, 3H), 0.17-0.12 (m, 1 H).
[0293]Primer77. Dobijanje (laS,5S,8S,9S,10R,22aS)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-18,18-difluoro- 14-metoksi-1 a,9-dimetil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11, 12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0294]Primer 77 je pripremljen na sličan način kao Primer 76, zamenom kasnije eluirajućeg 76-3 sa ranije eluirajućim 76-2 u Koraku 3. Primer 76 je onda izolovan. Analitički HPLC RetTime: 8.46 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C40H53F4N6O9S: 869.35; nadjeno: 869.53. 'H NMR (400 MHz, CD3OD): 7.95 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.32 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.28 (s, 1 H), 6.58-6.54 (m, 1 H), 5.75 (td, Jh-f= 55 Hz, J = 6.8 Hz, 1 H), 5.54-5.50 (m, 1 H), 4.65 (d, J = 6.8 Hz, 1 H), 4.46 (d, J = 12.8 Hz, 1 H), 4.26-4.18 (m, 1 H), 3.97 (s, 3H), 2.92-2.71 (m, 1 H), 2.50-1.94 (m, 6H), 1.68-1.57 (m, 2H), 1.56-1.52 (m, 2H), 1.51 (s, 3H), 1,50-1.47 (m, 1 H), 1.46-1.38 (m, 3H), 1.44 (s, 3H), 1.27-1.18 (m, 2H), 1.17-1.01 (m, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.94-0.82 (m, 4H), 0.17-0.12 (m,
IH).
[0295]Primer 78. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,19E,22aR)-5-terc-butil-14-cijano-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-3,6-diokso-l,la,3,4,5,6,9,10,17,17a,18,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Koraci 1-4. Intermedijer 78-4 je pripremljen na sličan način kao Intermedijer 17-4, korišćenjem E6 umesto E3.
Korak 5: U rastvor 78-4 (90 mg, 0.135 mmol) u EtOH (0.7 mL) dodat je NaBH4(21 mg, 0.54 mmol). Reakciona smeša je mešana 1 h na rt. Nakon tog vremena reakciona smeša je procedjena kroz celit i koncentrovana je dajući intermedijer 78-5, koji se kasnije koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C35H45F2N506: 669.76; nadjeno: 669.73.
Koraci 6 i 7: Dobijanje Primera 78: U rastvor 78-5 (35 mg, 0.31 mmol) u DCM-u (0.4 mL), dodat je TFA (0.2 mL) i smeša je mešana 3 h na 20 °C tokom 3 h. Rastvarač je uklonjenin vacuoa ostatak se kasnije koristi bez daljeg prečišćavanja. U suspenziju u kojoj se nalazi ostatak (33 mg, 0.05 mmol) i Intermedijer A10 (27 mg, 0.1 mmol) u DCM-u (0.3 mL) dodat je TBTU (26 mg, 0.08 mmol) i DIPEA (35 uL, 0.2 mmol) na rt. Nakon 1 h, rastvor je direktno prečišćen reverzno-faznim HPLC-om (Gemini 5u C18 110A kolona, 50-100% ACN/H20 + 0.1% TFA) i liofilizovan dajući so TFA Primera 78. Analitički HPLC RetTime: 7.994 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C40H49F4N7O8S: 863.92; nadjeno: 864.20.. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 9.35 (s, IH), 7.29 (d,l H), 7.18 (dd,l H), 6.64 (d, 1 H), 6.01-5.82 (m, 2H), 5.41 (m, 2H), 4.57 - 4.07 (m, 5H), 3.52 (m, 1 H), 2.55-2.28 (m, 2H), 2.06 - 1.98 (m, 2H), 1.85 (m, 1 H), 1.69 - 1.37 (m, 9H), 1.33 (m, 2H), 1.06-0.87 (m, 16H), 0.70 (m, 2H)., 0.49 (m, 1 H).
[0296] Primer79. Dobijanje (laS,2aR,6S,9S,10S,l lR,23aR,23bS)-6-terc-butil-15-hloro-N-[(l R,2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-(difluorometil)ciklopropil]-10-metil-4,7-diokso-l a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro- lH,9H-8,11 - metanociklopropa[4',5']ciklopenta[ 1 ',2': 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 79-1. Sulfonil hinoksalin E5 (920 mg, 3.32 mmol) je suspendovan u MeCN (17 mL), i onda tretiran intermedijerom BI (1.00 g, 3.32 mmol) i CS2CO3. Nakon 17 h, reakciona smeša je procedjena kroz celit i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (10% do 30% EtOAc/Heksan) dajući etar 79-1. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M-Boc+2H]<+>izračunato za C18H22CI2N3O3: 398.10; nadjeno: 398.12.
Korak 2. Dobijanje 79-2.terc-Butilkarbamat 79-1 (513 mg, 1.03 mmol) je rastvoren u DCM-u (10 mL) i tretiran HCl-om (4.0 mL u dioksanu, 5 mL, 20 mmol). Reakciona smeša je mešana 1.5 h na RT, onda je koncentrovana pod sniženim pritiskom dajući amin hidrohlorid 79-2, koji je posle korišćen bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C18H22CI2N3O3: 398.10; nadjeno: 398.16.
Korak 3. Dobijanje 79-3. Amin hidrohlorid 79-2 (1.03 mmol teorijski) i intermedijer D12 (336 mg, 1.04 mmol) su kombinovani i tretirani sa BEP-om (285 mg, 1.04 mmol), EtOAc-om (9 mL), NMP-om (1 mL) i DIPEA-om (0.90 mL, 5.2 mmol). Reakciona smeša je mešana na 50 °C tokom 3 h, zatim je ohladjena do sobne temperature. Nakon narednih 15 h, reakciona smeša je razblažena sa EtOAc. Organski deo je ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHC03i slanim rastvorom, onda osušen iznad MgS04, procedjen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (10% do 25% EtOAc/Heksan) dajući amid 79-3. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C36H49CI2N4O6: 703.30; nadjeno: 703.91.
Korak 4. Dobijanje 79-4. Hloro hinoksalin 79-3 (541 mg, 0.769 mmol) je tretiran kalijum viniltrifluoroboratom (154 mg, 1.15 mmol), Pd(dppf)Ci2dihlorometan aduktom (63 mg, 0.077 mmol), EtOH (8 mL) i trietilaminom (0.16 mL, 1.15 mmol). Smeša je uz mešanje i refluks zagrevana 1 h, onda je ohladjena do sobne temperature i razblažena sa EtOAc. Organski deo je ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHC03i slanim rastvorom, onda osušen iznad MgS04, procedjen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (10% do 30% EtOAc/Heksan) dajući vinil hinoksalin 79-4. LCMS-ESL (m/z):
[M+H]<+>izračunato za C38H52CIN4O6: 695.36; nadjeno: 695.10.
Korak 5. Dobijanje 79-5. Vinil hinoksalin 79-4 (390 mg, 0.561 mmol) je tretiran sa DCE-om (112 mL) i Zhan-B katalizatorom (38 mg, 0.0561 mmol). Smeša koja se mešaje degasifikovana mehurićima N2tokom 25 min, onda je zagrevana uz refluks pod Ar atmosferom. Nakon 1.5 h, smeša je ohladjena do sobne temperature i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (10% do 30% EtOAc/Heksan) dajući makrocikl 79-5. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C36H48C1N406: 667.33; nadjeno: 667.86.
Korak 6. Dobijanje 79-6. Makrocikl 79-5 (198 mg, 0.297 mmol) je tretiran sa EtOAc (100 mL) i 5% Rh/glinica (100 mg). H2 je mehurićima proveden kroz rastvor 1 minut i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperature u atmosferi H2. Nakon 45 min, još 5% Rh/glinica(200 mg) je dodato. Ponovo je H2mehurićima proveden kroz rastvor 1 min i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u atmosferi H2. Nakon sledećih 1 h, reakciona smeša je procedjena kroz celit i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Materijal (79-6) je korišćen dalje bez prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C36H5oClN406: 669.34; nadjeno: 669.63.
Korak 7. Dobijanje 79-7. Makrocikl 79-6 (0.297 mmol teorijski) je tretiran DCM-om (10 mL) i TFA-om (10 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 14 h, onda je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je rastvoren u EtOAc i organski rastvor je ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHC03i 1 M limunske kiseline. Slani rastvor je dodat nakon ispiranja limunskom kiselinom radi razbijanja nastale emulzije. Organski sloj je osušen iznad MgS04, procedjen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (100% EtOAc) dajući onečišćen 79-7 koji se koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C32H42CIN4O6: 613.28; nadjeno: 613.22.
Korak 8. Dobijanje Primera 79. Karboksilna kiselina 79-7 (0.264 mmol teorijski) tretirana je intermedijerom A9 (156 mg, 0.537 mmol), TBTU-om (170 mg, 0.528 mmol), DMAP-om (65 mg, 0.528 mmol), DCM-om (2 mL) i DIPEA-om (0.23 mL, 1.3 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 19 h a onda je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno-faznim HPLC-om dajući Primer 79 kao so TFA. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C40H52CIF2N6O8S: 849.32; nadjeno: 849.16. 'H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 9.17 (s, 1 H), 7.86 (t,J=8.1 Hz, 1 H), 7.77 (t, /= 3.5 Hz, 1 H), 7.55 (dd,J=8.8, 2.3 Hz, 1 H), 5.84 (td,J =55.7, 6.7 Hz, 1 H), 5.62 (d,J= 3.5 Hz, 1 H), 4.98 (t,J =10.6 Hz, 1 H), 4.53 (t,J =9.3 Hz, 1 H), 4.42 - 4.26 (m, 2H), 4.19 (dd,J=12.0, 3.9 Hz, 1 H), 3.34 (d, /= 7.6 Hz, 1 H), 2.99 (tt, /= 8.2, 4.8 Hz, 2H), 2.78 (ddt, /= 21.6, 14.2, 5.7 Hz, 2H), 2.28 - 2.12 (m, 1 H), 2.08 - 1.16 (m, 19H), 1.16 - 0.96 (m, 17H), 0.58 (dd, /= 8.3, 4.1 Hz, IH), 0.55 - 0.44 (m, 1 H).
[0297] Primer 80. Dobijanje (3aR,7S,10S,llS,12R)-l-acetil-7-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-16-metoksi-11 -metil-5,8-diokso-1,2,3,3a,5,6,7,8,11,12,20,21,22,23,24,24a-heksadekahidro-1 Oh-9,12-metanopirolo[2',3': 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-10-karboksamida. Korak 1. Dobijanje 80-1: Amin 18-2 (195 mg, 0.495 mmol) i Intermedijer Dl8 (192.8 mg, 0.544 mmol) su rastvoreni u DMF-u (10 mL). DIPEA (430 uL, 2.48 mmol) je dodat [to je praćeno dodatkom HATU (207 mg, 0.544 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon 1.5 h, reakciona smeša je koncentrovanain vacuoi sirovi ostatak je direktno prečišćen hromatografijom na silika gelu (gradijent 0-100% etil acetat/heksan) dajući 80-1 (poželjno je favorizovanje odnosa diastereomera 2:1). LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C37H53CLN5O8: 730.3; nadjeno: 730.48. Korak 2. Dobijanje 80-2: Heterogena smeša 80-1 (314 mg, 0.431 mmol), PdCl2(dppf>CH2Ci2 (35.2 mg, 0.043 mmol) i kalijum viniltrifluoroborat (86.6 mg, 0.646 mmol) u EtOH (2.2 mL) koja se meša je zasićena argonom tokom 15 min. Trietilamin (320 uL, 2.3 mmol) je dodat i smeša je zagrevana na 80 °C. Nakon 40 min, reakciona smeša je ohladjena do sobne temperature i razblaženaje sa toluenom (5 mL). Nastala smeša je kocentrovana i sirovi ostatak je direktno prečišćen hromatogrfijom na silika gelu (gradijent 0-100% etil acetat/heksan) dajući 80-2 (poželjno je favorizovanje odnosa diastereomera 2:1). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]izračunato za C39H56N5O8: 722.4; nadjeno: 722.54. Korak 3. Dobijanje 80-3: 80-2 (228 mg, 0.320 mmol) je rastvoren u DCE-u (64 mL) i rastvor je zasićen argonom tokom 15 min. Zhan 1B katalizator (23 mg, 0.032 mmol) je dodat i nastali rastvor je mešan na 100 °C pod argonom. Nakon 45 min, reakciona smeša je ohladjena do rt, koncentrovana jein vacuoi direktno je prečišćena hromatogrfijom na silika gelu (gradijent 0-100% etil acetat/heksan) dajući 80-3 (poželjno je favorizovanje odnosa diastereomera 5:2). LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C37H52N5O8: 694.37; nadjeno: 694.53. Korak 4: Dobijanje 80-4: Olefin 80-3 (164 mg, 0.237 mmol) je rastvoren u etanolu (1.19 mL) i reakcioni sud je zasićen argonom. Pd/C (10 wt % Pd, 25 mg) je dodat u jednoj porciji i reakcioni sud očišćen tri puta sa H2. Reakcija je mešana na rt pod 1 atm H2tokom 2 h i razblažena je etil acetatom (10 mL). Nastala smeša je procedjena kroz celit i koncentrovana je da se dobije sirovi ostatak 80-4 (poželjno je favorizovanje odnosa diastereomera 5:2) koji se koristi bez daljeg prečišćavanja (LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C37H54N5O8: 696.39; nadjeno: 696.56. Korak 5. Dobijanje 80-5: U rastvor 80-4 (164 mg, 240 umol) u DCM-u (1.2 mL) je dodat TFA (0.45 mL) na rt. Nakon 7 h, reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom (50 mL) i tako nastala smeša je ekstrahovana sa 1 N vodenim rastvorom natrijum hidroksida (40 mL). Vodeni sloj je lagano zakišeljen koncentrovanom hlorovodoničnom kiselinom do pH=3, i ekstrahovan je sa etil acetatom (2 x 50 mL). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani suin vacuo.Ostatak je azeotropski osušen toluenom (3x5 mL) dajući 80-5 (poželjno je favorizovanje odnosa diastereomera 5:2) koji se koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C33H46N5O8: 640.33; nadjeno: 640.48. Korak 6. Dobijanje Primera 80: U rastvor 80-5 (140 mg, 219 umol) i Intermedijera A10 (133 mg, 438 umol) u MeCN (1.1 mL) dodat je HATU (169 mg, 438 umol) što je praćeno dodatkom DIPEA (190 uL, 1.09 mmol) na rt u atmosferi argona. Nakon 15 h, reakciona smeša je koncentrovanain vacuo,i prečišćena preparativnim HPLC-om (Gemini 5u Cl8 110A kolona, 5-100% MeCN/H20, 0.1% trifluorosirćetna kiselina modifikator) i liofilizovana dajući Primer 80 (poželjno je favorizovanje odnosa diastereomera 5:2) kao svetio žutu so TFA. Analitički HPLC RetTime: 7.91 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C42H58F2N7O10S: 890.39; nadjeno: 890.64. 'H NMR (400 MHz, CD3OD, Dijastereomer manje prisutan je označen sa<*>) 5 9.18 (s, 1 H), 9.14 (s, IH<*>), 7.78 (br d,J =9.0 Hz, IH, IH<*>), 7.21 (br d,J= 9.0 Hz, IH, IH<*>), 7.18 (br s, IH, IH<*>), 5.80 (br td, Jh-f= 55.8 Hz, J = 6.8 Hz, IH, IH<*>), 5.64 (br s, IH, IH<*>), 5.23 (d,J=4.7 Hz, IH<*>), 5.15 (d,J=4.7 Hz, 1 H), 4.56 (d,J=6.7 Hz, IH, IH<*>), 4.46 (d,J=12.1 Hz, IH<*>), 4.41 (d,J= 12.0 Hz, 1 H), 4.30 - 4.22 (m, IH, IH<*>), 4.22 - 4.07 (m, IH, IH<*>), 4.02 - 3.79 (m, IH, IH<*>) 3.92 (br s, 3H, 3H<*>), 3.73 - 3.52 (m, 2H, 2H<*>), 3.05 - 2.68 (m, 3H, 3H<*>), 2.40 - 2.21 (m, IH, IH<*>), 2.13 - 1.94 (m, 4H, 4H<*>), 1.83 (s, 2H, 2H<*>), 1.75 - 1.20 (m, 12H, 12H<*>), 1.12 (s, 9H<*>),1.1 0 (s, 9H), 1.06 (br d,J=7.3 Hz, 3H, 3H<*>), 0.92 - 0.85 (m, 4H, 4H<*>).
[0298] Primer81. Dobijanje (laS,2aR,6S,9S,10S,l lR,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difiuorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-19,19-difluoro-15-metoksi-10-metil-4,7-diokso-1 a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1 H,9H-8,11- metanociklopropa[4',5']ciklopenta[ 1 ',2': 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
[0299]Primer 81 je pripremljen na sličan način kao Primer 62, zamenom Intermedijera A10 sa Intermedijerom A9 u Koraku 5. Primer 81 je izolovan. Analitički HPLC RetTime: 9.36 min. LCMS-ESL (m/z): [M+H]izračunato za C42H55F4N6O9S: 895.36; nadjeno: 895.59. 'HNMR (400 MHz, CD3OD): 8 9.23 (s, 1 H), 7.93 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.31 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1 H), 7.26 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 5.80 (td, Jh-f= 56 Hz, J = 6.8 Hz, 1 H), 5.73 (d, J = 3.2 Hz, 1 H), 4.94 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 4.56 (d, J = 6.8 Hz, 1 H), 4.36 (d, J = 6.8 Hz, 1 H), 4.32 (s, 1 H), 4.22-4.16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1 H), 3.97 (s, 3H), 2.79-2.71 (m, 1 H), 2.61-2.52 (m, 1 H), 2.26-2.16 (m, 1 H), 2.08-1.92 (m, 4H), 1.82-1.64 (m, 3H), 1.60-1.54 (m, 3H), 1.53-1.46 (m, 1 H), 1.52 (s, 3H), 1.44-1.26 (m, 5H), 1.08 (s, 9H), 1.07-0.98 (m, 4H), 0.94-0.84 (m, 3H), 0.60-0.48 (m, 2H).
[0300] Primer 82. Dobijanje (laS,2aR,6S,9S,10S,HR,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-19,19-difluoro-10-metil-4,7-diokso-1 a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro- lH,9H-8,11 - metanociklopropa[4',5']ciklopenta[ 1 ',2': 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
[0301]Intermedijer 82-1 je pripremljen na sličan način kao i intermedijer 46-2, zamenom intermedijera E3 sa E4 u Koraku 1. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]izračunato za C26H34F2N3O5: 506.25; nadjeno: 506.59.
[0302]Primer 82 je pripremljen na sličan način kao Primer 62, zamenom Intermedijera 82-1 sa Intermedijerom 46-2 u Koraku 1. Primer 82 je izolovan. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C4iH52F4N608S: 864.35; nadjeno: 865.43. 'H NMR (400 MHz, cdcl3) 5 9.82 (s, 1 H), 7.89 - 7.72 (m, 2H), 7.67 (t,/=7.6 Hz, 1 H), 6.93 (s, 1 H), 6.12 - 5.65 (m, 2H), 5.34 (d,J=8.6 Hz, 1 H), 4.90(d, .7=7.4 Hz,1 H), 4.45(t,/=9.3Hz, 2H), 4.27(d, .7=7.9Hz,1 H), 4.13 (dd, J=11.9, 3.9 Hz, 1 H), 2.77 - 2.64 (m, 2H), 2.27 - 2.12 (m, 1 H), 2.13 - 1.86 (m, 4H), 1.82 - 1.19 (m, 15H), 1.18 - 0.98 (m, 13H), 0.89 - 0.77 (m, 2H), 0.53 (dd,J=13.3, 8.1 Hz, 1 H), 0.43 (d,J=4.2 Hz, 1 H).
[03031Primer 83. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(l R,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-3,6-diokso-14-(trifluorometoksi)-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 83-1: HATU (3.06 g, 8.05 mmol) je polako dodat u rastvor 3,3-difluoro-2-okso-4-pentenske kiseline (1.03 g, 6.86 mmol) u 10 mL DMF-a. Onda je dodata smeša 4-(trifluorometoksi)benzen-1,2-diamina (1.29 g, 6.71 mmol) i DIPEA (1.4 mL, 8.05 mmol) u 12 mL DMF-a. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je sipana u 175 mL vode i ekstrahovana sa etil acetatom (4 x 100 mL). Kombinovani organski deo je ispran sa 50%-nim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2S04, procedjen, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Nastala čvrsta supstanca je prečišćena hromatografijom na silika gel koloni (0-25% etil acetat u heksanu) dajući intermedijer 83-1, kasnije eluirajućeg proizvoda. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C12H8F5N2O2: 307.04; nadjeno: 307.29.
Korak 2. Dobijanje 83-2: Rastvor 83-1 (924 mg, 3.01 mmol) u 2 mL DMF-a je tretiran sa POCb (0.56 mL, 6.04 mmol) i zagrevan 2.5 h na 80 °C. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša je razblažena sa 25 mL EtOAc i dodata polako u 20 mL vode uz energično mešanje. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom. Kombinovani organski deo je zatim ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom dajući intermedijer 83-2. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C12H7CIF5N2O: 324.01; nadjeno: 324.13.
Korak 3. Dobijanje 83-3: CS2CO3(606 mg, 1.86 mmol) je dodat u smešu intermedijera 83-2 (460 mg, 1.54 mmol) i intermedijera B4 (564 mg, 1.79 mmol) u 12 mL DMF-a na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zagrevana na 85 °C tokom noći. Nakon hladjenja do sobne temperature, smeša je sipana u 50 mL vode i ekstrahovana je sa etil acetatom (4 x 40 mL). Kombinovani organski deo je ispran sa 90 mL 50%-nog slanog rastvora, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Nastala čvrsta supstanca je prečišćena hromatografijom na silika gel koloni (0-30% etil acetat u heksanu) dajući 83-3. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C28H35F5N3O6: 604.24; nadjeno: 604.20.
Korak 4. Dobijanje 83-4: Hinoksalin etar 83-3 (290 mg, 0.647 mmol) je rastvoren u 4.1 mL terc-butil acetata i 1.1 mL dihlormetana na sobnoj temperaturi. MeS03H (0.25 mL, 3.88 mmol) je dodat u kapima i reakciona smeša je mešana 2 h na rt. Reakciona smeša je preneta u smešu EtOAc (20 mL) i zasićenog vodenog rastvora NaHC03(30 mL) koja se meša. Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 20 mL). Kombinovana organska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2S04, procedjena, i koncentrovanain vacuodajući amin 83-4. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C23H27F5N3O4: 504.18; nadjeno: 504.31.
Korak 5. Dobijanje 83-5: HATU (260 mg, 0.684 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.40 mL, 2.30 mmol) su dodati u smešu 83-4 (258 mg, 0.512 mmol) i Intermedijera Dl 1 (177 mg, 0.657 mmol) u 7 mL acetonitrila pod argonom. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i nastali ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-20% etil acetat u heksanu) dajući 83-5. LCMS-ESL (m/z): [M+H]<+>izračunato za C37H48F5N4O7: 755.34; nadjeno: 755.49.
Korak 6. Dobijanje 83-6: Smeša 83-5 (215 mg, 0.285 mmol) i Zhan 1 B katalizatora (29 mg, 0.040 mmol, Strem) u 60 mL DCE-a je deoksigenovana argonom tokom 15 minuta. Smeša je zagrevana uz refluks tokom 90 minuta. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša je koncentrovanain vacuo.Nastali ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-40% etil acetat u heksanu) dajući 83-6. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C35H44F5N4O7: 727.31; nadjeno: 727.43.
Korak 7. Dobijanje 83-7: Paladijum na ugljeniku (10 wt % Pd, 40 mg, 0.038 mmol) je dodat rastvoru 83-6 (129 mg, 0.178 mmol) u 9 mL etanola. Atmosfera je zamenjena vodonikom i reakcija je mešana preko noći. Reakciona smeša je procedjena kroz celit i isprana je etanolom. Filtrat je koncentrovanin vacuodajući ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (0-30% etil acetat u heksanu) dajući 83-7. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C35H46F5N4O7: 729.32; nadjeno: 729.45.
Korak 8. Dobijanje 83-8: TFA (0.62 mL, 8.09 mmol) je polako dodat u rastvor 83-7 (79 mg, 0.109 mmol) u 1.8 mL dihlormetana. Nakon 4 sata, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom skoro do suva. Nastali ostatak je razmućen u 10 mL etil acetata, ispran je sa 8 mL vode, 8 mL zasićenog rastvora NaHCCh(aq), i odvojen je. Vodeni slojevi su ekstrahovani sa etil acetom (3 x 10 mL). Kombinovani organski deo je ispran sa 10 mL slanog rastvora, osušen iznad anhidrovanog Na2SC>4, procedjen, i koncentrovanin vacuodajući 83-8, koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C31H38F5N4O7: 673.26; nadjeno: 673.10.
Korak 9. Dobijanje Primer 83: HATU (84 mg, 0.221 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.095 mL, 0.547 mmol) su dodati u smešu 83-8 (72 mg, 0.107 mmol) i Intermedijera A10 (66 mg, 0.217 mmol) u 4 mL acetonitrila pod argonom. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je razmućena u 20 mL etil acetata i isprana sa 10 mL 1 N vodenog rastvora HC1. Vodeni sloj je ekstrahovan tri puta etil acetatom. Kombinovani organski delovi su isprani sa 50%-nim slanim rastvorom, osušeni iznad anhidrovanog NaiSCU, procedjeni, i koncentrovaniin vacuo.Nastali ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-50% etil acetat u heksanu) i preparativno reverzno-faznim HPLC-om (50-100% acetonitril u vodi, sa 0.1% puferom trifluorosirćetne kiseline) dajući so trifluorosirćetne kiseline Primera 83. Analitički HPLC RetTime: 9.12 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C40H50F7N6O9S: 923.32; nadjeno: 923.10. 'H NMR (400 MHz, CD3OD): 8 9.26 (s, IH), 8.01-7.91 (m, 2H), 7.78-7.63 (m, 1 H), 5.95 (d, J = 3.6 Hz, 1 H), 5.83 (td, Jh-f= 61 Hz, J = 6.0 Hz, 1 H), 4.59 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 4.42 (d, J = 12.4 Hz, 1 H), 4.35 (s, 1 H), 4.22-4.11 (m, 1 H), 3.72-3.66 (m, 1 H), 2.71-2.49 (m, 2H), 2.18-1.94 (m, 3H), 1.90-1.75 (m, 3H), 1.74-1.62 (m, 2H), 1.60-1.48 (m, 3H), 1.51 (s, 3H), 1.50-1.24 (m, 4H), 1.22-1.18 (m, 2H), 1.08 (s, 9H), 1.07-0.84 (m, 5H), 0.81-0.64 (m, 1 H), 0.54-0.44 (m, 1 H).
[0304]Primer 84. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,19E,22aR)-5-terc-butil-14-cijano-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1-{[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,21,22,22a-dodekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1: Dobijanje Primera 84. Sirovi Primer 78 (8.7 mg, 0.01 mmol) je ponovo rastvoren u ACN-u (0.3 mL) i tretiran sa DDQ (3.4 mg, 0.015 mmol). Nakon 10 minuta, rastvor je direktno prečišćen reverzno-faznim HPLC-om (Gemini 5u C18 110A kolona, 50-100% ACN/H2O + 0.1% TFA) i lofilizovan dajući so TFA Primera 84. Analitički HPLC RetTime: 8.385 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C40H47F4N7O8S: 861.90; nadjeno: 862.89. 'H NMR (400 MHz, CD30D) >H NMR (400 MHz, CD30D) 5 9.21 (s, 1 H), 8.25 (d,l H), 8.20 (d,l H), .7.91 (dd, 1 H),6.32 (m, 2H), 5.97-5.61 (m, 2H), 4.82 (m, 1 H), 4.58 - 4.13 (m, 4H), 3.71-3.49 (m, 3H), 2.61 (m, 2H), 2.23 (m, 1 H), 2.00 - 1.80 (m, 3H), 1.56 - 1.20 (m, 10H), 1.20 (m, 3H), 1.07 (m, 8H), 0.98-0.82 (m, 3H)., 0.55 (m, 1 H).
[0305]Primer 85. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-14-(difluorometoksi)-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-l-{[(l-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0306]Primer 85 je pripremljen slično kao Primer 83, korišćenjem intermedijera E7 umesto 83-2 u Koraku 3. Analitički HPLC RetTime: 8.725 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C40H50F6N6O9S: 904.92; nadjeno: 905.16. 'H NMR (400 MHz, CD30D) 8 9.23 (s, 1 H), 7.88 (d,l H), 7.76 (d,l H), .7.62 (dd, 1 H), 7.03 (dd, 1 H), 5.94-5.65 (m, 3H), 4.57 - 4.14 (m, 4H), 3.66
(m, 1 H), 2.57 (m, 2H), 2.01 - 1.97 (m, 3H), 1.82 - 1.77 (m, 3H), 1.64 (m, 1 H), 1.57 - 1.33 (m, 10H), 1.20 (m, 3H), 1.06-0.87 (m, 12H), 0.87 (m, 2H)., 0.48 (m, 1 H).
[0307] Primer86. Dobijanje (laS,2aR,6S,9S,10S,l lR,23aR,23bS)-6-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-15-fluoro-10-metil-4,7-diokso-1 a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1 H,9H-8,11 - metanociklopropa[4',5'] ciklopenta[ l',2':18,19][l,l 0,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 86-1: U rastvor E8 (1.5 g, 5.75 mmol) i BI (1.9 g, 6.34 mmol) u MeCN (50 mL) dodat je CS2CO3(3.09 g, 9.49 mmol). Nakon mešanja na rt tokom 60 h, reakciona smeša je procedjena kroz celit i koncentrovana je. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (5-35% EtOAc/heksan) dajući proizvod 86-1. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C23H30CIFN3O5- Boe: 482.13; nadjeno: 382.04.
Korak 2. Dobijanje 86-2: U rastvor 86-1 (747 mg, 1.55 mmol) u CH2CI2(5 mL) dodat je HC1 (5 mL, 4 M u dioksanu) i mešanje 3 h. Reakciona smeša je koncentrovana dajući ostatak koji se zatim koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C18H23C12FN3O3- HC1: 382.13; nadjeno: 382.08.
Korak 3. Dobijanje 86-3: U rastvor 86-2 (397 mg, 0.95 mmol), D12 (308 mg, 0.95 mmol) i BEP-a (312 mg, 1.14 mmol) u EtOAc (9 mL) i NMP-u (1 mL) dodat je DIPEA (0.7 mL, 3.8 mmol) i reakcija je mešana na 50 °C preko noći. Reakcija je kvenčovana zasićenim rastvorom NaHC03i ekstrahovana je sa EtOAc, isprana zatim slanim rastvorom, osušena iznad magnezijum sulfata i koncentrovana. Sirovi proizvod je prešišćen silika gelom dajući 86-3. LCMS-ESL( m/ z) :
[M+H]<+>izračunato za C36H49CIFN4O6: 687.33; nadjeno: 687.44.
Korak 4. Dobijanje 86-4: U rastvor 86-3 (266 mg, 0.39 mmol), TEA (0.08 mL, 0.58 mmol) i kalijum viniltrifluoroborata (78 mg, 0.58 mmol) u EtOH (8 mL) dodat je PdCl2(dppf) (32 mg, 0.04 mmol). Reakcija je degasifikovna sa N2tokom 10 minuta i zagrevana je na 75 °C tokom 1 h. Reakcija je kvenčovana zasićenim rastvorom NaHC03i ekstrahovana je EtOAc, isprana zatim slanim rastvorom, osušena iznad magnezijum sulfata i koncentrovana. Sirovi proizvod je prešišćen hromatografijom na silika gelu (0-25% EtOAc/heksan) dajući 86-4. LCMS-ESL( m/ z) :
[M+H]<+>izračunato za C38H52FN4O6: 679.39; nadjeno: 679.52.
Koraci 5 i 6. Dobijanje 86-5: U rastvor 86-4 (262 mg, 0.38 mmol) u DCE-u (50 mL) dodat je Zhan 1 B katalizator (28 mg, 0.04 mmol) i reakcija je degasifikovana sa N2 tokom 25 minuta. Reakcija je zagrevana na 100 °C tokom 1 h, ohladjena do rt i koncentrovana. Sirovi proizvod je prešišćen hromatografijom na silika gelu (0-30% EtOAc/heksan) dajući proizvod olefin (182 mg; LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H48FN4O6: 651.36; nadjeno: 651.38) koji je razmućen u EtOH (5 mL) i EtOAc (1 mL) i tretiran Pd/C (10%, 55 mg). Atmosfera je zamenjena vodonikom i mešana na rt tokom 1.25 h. Reakcija je procedjena kroz celit, isprana sa EtOAc i koncentrovana dajući 86-5 koji se zatim koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H50FN4O6: 653.37; nadjeno: 653.46.
Korak 7. Dobijanje 86-6: U rastvor 86-5 (182 mg, 0.28 mmol) u DCM-u (3 mL) dodat je TFA (3 mL) i mešan je na rt tokom 18 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc, isprana vodom, načinjena baznom zasićenim rastvorom NaHC03do pH 7, isprana 1 M rastvorom limunske kiseline, osušena iznad magnezijum sulfata, i koncentrovana dajući ostatak 86-6 koji se zatim koristi bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato. C32H42FN4O6: 597.31; nadjeno: 597.15.
Korak 8. Dobijanje Primer 86: U rastvor 86-6 (24 mg, 0.04 mmol), intermedijera A10 (18 mg, 0.06 mmol), TBTU-a (23 mg, 0.07 mmol) i DMAP-a (7 mg, 0.06 mmol) u DMF-u (3 mL) dodat je DIPEA (35 uL, 0.20 mmol) i reakcija je mešana na rt tokom 3 h. Dodatni intermedijer A10 (18 mg, 0.06 mmol), TBTU (23 mg, 0.07 mmol), DMAP (7 mg, 0.06 mmol), i DIPEA (35 uL, 0.20 mmol) su dodati i reakcija je mešana 16 h na rt. Sirovi materijal je prečišćen reverzno-faznim HPLC-om (Gemini, 30-85% ACN/H2O + 0.1% TFA) i liofilizovan dajući Primer 86 kao so TFA. Analitički HPLC RetTime: 9.25 min.LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C4iH54F3N608S: 847.37; nadjeno: 847.18.<>>HNMR (400 MHz, CD3OD) 5 9.18 (s, IH), 8.13 - 7.84 (m, 2H), 7.59 - 7.21 (m, 2H), 6.07 - 5.58 (m, 2H), 5.00 (d,J=7.4 Hz, 1 H), 4.57 (d,/=7.0 Hz, 1 H), 4.45 - 4.27 (m, 2H), 4.20 (dd, J = 12.0, 4.0 Hz, 1 H), 3.11 - 2.94 (m, 3H), 2.92 - 2.70 (m, 4H), 2.32 - 2.14 (m, 1 H), 2.10 - 1.94 (m, 2H), 1.86 (m, 1 H), 1.77( d, J=14.5 Hz, 1 H), 1.74-1.21 (m, 15H), 1.21 - 1.01 (m, 10H), 1.00 - 0.84 (m, 2H), 0.60 (m, IH), 0.53 (m, 1 H).
[0308]Primer 87. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-14-cijano-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[l 8,19][1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[l 1,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0309]Koraci 1 i 2. Dobijanje Primera 87. U rastvor Primera 84 (100 mg, 0.11 mmol) u EtOAc (3 mL) dodat je Pd/C (10 wt % Pd, 30 mg). Reakcioni sud je očišćen dva puta vodonikom i mešano je sve na rt pod 1 atm H2tokom 6h. Nakon tog vremena je reakciona smeša procedjena kroz celit i koncentrovana. Reakcijom se redukuje hinoksalinski prsten. Sirovi material je ponovo rastvoren u ACN-u (5 mL) i tretiran je DDQ-om (34 mg, 0.15 mmol). Nakon 1 h, rastvor je direktno prečišćen reverzno faznim HPLC-om (Gemini 5u C18 110A kolona, 50-100% ACN/H2O + 0.1% TFA) i liofilizovan dajući so TFA Primera 87. Analitički HPLC RetTime: 8.463 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C40H49F4N7O8S: 863.92; nadjeno: 864.18. 'HNMR (400 MHz, CD30D) 8 9.24 (s, 1 H), 8.27 (d,l H), 8.20 (d,l H), .7.91 (dd, 1 H), 5.93-5.82 (m, 3H), 4.88 (m, 1 H), 4.58 - 4.13 (m, 5H), 3.71-3.49 (m, 3H), 2.59 (m, 2H), 2.03 - 1.96 (m, 3H), 1.82 - 1.77 (m, 3H), 1.65 - 1.35 (m, 11 H), 1.20 (m, 3H), 1.06-0.87 (m, 8H), 0.71 (m, 2H)., 0.48 (m, 1 H).
[0310]Primer 88. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-14-hloro-N-[(l R,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-18,18-difiuoro-9-metil-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 88-1: HATU (4.56 g, 12 mmol) je dodat polako u rastvor 3,3-difluoro-2-oksopent-4-enske kiseline (1.52 g, 10.1 mmol) u 14 mL DMF-a. Smeša 4-hlorobenzen-l,2-diamina (1.43 g, 10 mmol) i DIPEA (2.1 mL, 12 mmol) u 20 mL DMF-a je onda dodata. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je sipana u 30 mL 1 N vodenog rastvora HC1 i ekstrahovana etil acetatom (5 x 40 mL). Kombinovani organski deo je osušen iznad anhidrovanog Na2S04, procedjen, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Nastala čvrsta supstanca je prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0-45% etil acetat u heksanu) dajući intermedijer 88-1 kao kasnije eluirajući proizvod. 'H NMR (400 MHz, CDCb): 5 12.1 (s, 1 H), 7.99 (m, 1 H), 7.61-7.58 (m, 1 H), 7.33-7.31 (m, 1 H), 6.61-6.48 (m, 1 H), 5.96 -5.90 (m, 1 H), 5.67-5.63 (m, 1 H).
Korak 2. Dobijanje 88-2: Rastvor intermedijera 88-1 (648 mg, 2.53 mmol) u 2 mL DMF-a je tretian sa POCb (0.49 mL, 5.26 mmol) i zagrevan na 80 °C tokom 3 sata. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša je razblažena sa 20 mL EtOAc i dodata je polako u 15 mL vode uz energično mešanje. Slojevi su odvojeni a vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom. Kombinovani organski deo je zatim ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan je pod sniženim pritiskom dajući intermedijer 88-2. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 8.184 (d, J = 1.6Hz, 1 H), 8.01 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.82 (dd, J = 9.4, 2 Hz, 1 H), 6.56-6.43 (m, 1 H), 5.88 (m, 1 H), 5.70 (d, J = 10.8 Hz, 1 H).
Korak 3. Dobijanje 88-3: CS2CO3(660 mg, 2.03 mmol) je dodat u smešu intermedijera 88-2 (425 mg, 1.54 mmol) i intermedijera BI (570 mg, 1.89 mmol) u 9 mL DMF-a na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zagrevana na 85 °C preko noći. Nakon hladjenja do sobne temperature, smeša je sipana u 40 mL vode i ekstrahovana sa etil acetatom (4 x 30 mL). Kombinovani organski deo je ispran sa 75 mL 50%-nog slanog rastvora, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Nastala čvrsta supstanca je prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (0-20% etil acetat u heksaanu) dajući 88-3. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C26H33CIF2N3O5: 540.20; nadjeno: 540.12.
Korak 4. Dobijanje 88-4: Hinoksalin etar 88-3 (458 mg, 0.848 mmol) je rastvoren u 4.2 mL terc-butil acetata i 1.2 mL dihlormetana na sobnoj temperaturi. MeS03H (0.30 mL, 4.67 mmol) je dodat u kapima i reakciona smeša je mešana na rt tokom 2 h. Reakciona smeša je prebačena u smešu EtOAc (20 mL) i zasićenog vodenog rastvora NaHC03(30 mL) koja se meša. Faze su odvojene a vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 20 mL). Kombinovana organska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2S04, procedjena, i koncentrovanain vacuodajući amin 88-4 kao žuti film LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C21H25CIF2N3O3: 440.15; nadjeno: 440.29.
Korak 5. Dobijanje 88-5: HATU (360 mg, 0.947 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.51 mL, 2.91 mmol) su dodati u smešu 88-4 (320 mg, 0.727 mmol) i Intermedijera Dl 1 (237 mg, 0.880 mmol) u 10 mL acetonitrila pod argonom. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-20% etil acetat u heksanu) dajući 88-5. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C35H46CIF2N4O6: 691.30; nadjeno: 691.50.
Korak 6. Dobijanje of 88-6: Smeša 88-5 (390 mg, 0.564 mmol) i Zhan 1B katalizatora (55 mg, 0.075 mmol, Strem) u 100 mL DCE-a je deoksigenovana argonom tokom 15 minuta. Smeša je onda zagrevana uz refluks tokom 110 minuta. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša je koncentrovanain vacuo.Nastali ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-25% etil acetat u heksanu) dajući 88-6. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C33H42CIF2N4O6: 663.27; nadjeno: 663.33.
Korak 7. Dobijanje smeše 88-7: Rodijum na glinici (5 wt % Rh, 31 mg, 0.015 mmol) je dodat rastvoru 88-6 (90 mg, 0.136 mmol) u 9 mL etanola. Atmosfera je zamenjena vodonikom i smeša je mešana preko noći. Reakcija je procedjena kroz celit, isprana etanolom. LC/MS analiza ukazuje daje oko 60% početnih supstanci ostalo neizreagovano. Ostatak u rastvoru u 8 mL etanola je ponovo podvrgnut uslovima hidrogenizacije korišćenjem 25 mg Rodijuma na glinici (5 masenih % Rh) preko noći. Reakcija je procedjena kroz celit, isprana etanolom. Filtrat je koncentrovanin vacuodajući ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (0-30% etil acetat u heksanu) dajući 88-7. LCMS-ESL( m/ z) :[M+Hf izračunato za C33H44CIF2N4O6: 665.28; nadjeno: 665.48.
Korak 8. Dobijanje 88-8: TFA (0.45 mL, 5.86 mmol) je polako dodat u rastvor 88-7 (52 mg, 0.078 mmol) u 2 mL dihlormetana. Nakon 3 sata, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom skoro do suva. Nastali ostatak je razmućen u 10 mL etil acetata, ispran sa 8 mL vode, 8 mL zasićenog rastvora NaHC03(aq), i odvojen je. Vodeni slojevi su ekstrahovani etil acetatom (3 x 10 mL). Kombinovani organski deo je ispran sa 10 mL slanog rastvora, osušen iznad anhidrovanog MgS04, procedjen, i koncentrovanin vacuodajući 88-8, koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C29H36CIF2N4O6: 609.22; nadjeno: 609.42.
Korak 9. Dobijanje Primera 88: HATU (58 mg, 0.153 mmol, Oakwood) i DIPEA (0.065 mL, 0.374 mmol) su dodati u smešu 88-8 (45 mg, 0.074 mmol) i Intermedijera A10 (49 mg, 0.161 mmol) u 2.5 mL acetonitrile pod argonom. Nakon mešanja preko noći, reakciona smeša je razmućena u 15 mL etil acetata i isprana je sa 10 mL 1 N vodenog rastvora HC1. Vodeni slojevi su ekstrahovani tri puta sa etil acetatom. Kombinovani organski deo je ispran sa 50%-nim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2S04, procedjen, i koncentrovanin vacuo.Nastali ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-50% etil acetat u heksanu) i preparativnim reverzno faznim HPLC-om (50-100% acetonitril u vodi, sa 0.1% puferom trifluorosirćetne kiseline) dajući so trifluorosirćetne kiseline Primera 88. Analitički HPLC RetTime: 8.92 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za CssHtsCh^NeOgS: 859.28; nadjeno: 859.42. 'HNMR (400 MHz, CD3OD): 8 9.23 (s, 1 H), 8.10 (s, 1 H), 7.90 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.81 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 5.81 (td, Jh-f= 56 Hz, J = 6.0 Hz, 1 H), 5.69-5.66 (m, 1 H), 4.56 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 4.43 (d, J = 12 Hz, 1 H), 4.34 (s, 1 H), 4.22-4.16 (dd, J = 12, 4 Hz, 1 H), 3.71-3.66 (m, 1 H), 2.83-2.76 (m, 1 H), 2.61-2.48 (m, 1 H), 2.11-1.94 (m, 4H), 1.88-1.72 (m, 4H), 1.71-1.62 (m, 1 H), 1.58-1.54 (m, 2H), 1.51 (s, 3H), 1.50-1.36 (m, 2H), 1.09 (s, 9H), 1.08-1.01 (m, 3H), 1.01-0.94 (m, 2H), 0.93-0.86 (m, 2H), 0.80-0.68 (m, 1 H), 0.52-0.46 (m, 1 H).
[0311]Primer 89. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,19E,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-9-etil-18,18-difluoro-14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,21,22,22a-dodekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11, 12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
Korak 1. Dobijanje 89-1: 17-4 (95 mg, 0.14 mmol) u 0.4 mL DCM je tretiran sa 0.4 mL TFA i mešan na rt tokom 2 h. Reakciona smeša je razblažena sa 5 mL DCM-a i onda je tretirana vodom i zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata do pH 6.5. Slojevi su odvojeni i organske faze su isprane vodom još jednom, onda su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, procedjeni i koncentrovani dajući 89-1. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C31H39F2N4O7: 617.3; nadjeno: 616.7.
Korak 2. Dobijanje Primera 89: Smeša 89-1 iz Koraka 1 (41 mg, 0.066 mmol), Intermedijera A10 (24 mg, 0.079 mmol), HATU (30 mg, 0.079 mmol), i DIPEA (0.057 mL, 0.33 mmol) u DMF-u (0.4 mL) je mešana na rt preko noći. Smeša je razblažena sa 2 N HC1 (1 mL) i ekstrahovana je dihlormetanom. Organske faze su osušene iznad natrijum sulfata, procedjene i koncentrovane. Smeša sirovog proizvoda je prečišćena preparativno reverzno faznim HPLC-om (10-99% acetonitril u vodi, sa 0.1% puferom trifluorosirćetne kiseline) dajući Primer 89. Analitički HPLC RetTime: 8.65 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C40HMF4N6O9S: 867.3; nadjeno: 866.9. 'HNMR (400 MHz, CDCI3) 5 9.890 (s, 1 H), 7.98 (d,J=9.2 Hz, 1 H), 7.28 (dd,J=8.8, 2.4 Hz, 1 H), 7.06 (d, /= 2.8 Hz, 1 H), 6.75 (br s, 1 H), 6.30 - 5.93 (m, 2H), 5.92 (td, Jh-f= 52 Hz, /= 6.8 Hz, 1 H), 5.47 (d,J =10 Hz, IH), 4.53 (d, / = 12 Hz, 1 H), 4.48 (d,J=10.4 Hz, IH), 4.42 (d, /= 6.8 Hz, 1 H), 4.07 (dd, /= 11.6, 3.2 Hz, 1 H), 3.98 - 3.94 (m, 1 H), 3.95 (s, 3H), 3.57 (m, 1 H), 2.60 - 2.48 (m, 2H), 2.20 (m, 1 H), 2.06 (m, 1 H), 1.90 (m, 1 H), 1.80 (m, 1 H), 1.63 (m, 2H), 1.50 (s, 3H), 1.56 - 1.36 (m, 2H), 1.26 (m, 1 H), 1.19 (t, /= 7.2 Hz, 3H), 1.09 (s, 9H), 1.03-0.93 (m, 2H), 0.85 (m, 2H), 0.76 (m, 1 H), 0.53 (m, 1 H).
[0312]Primer 90. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(lR,2R)-2-(difiuorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil] -9-etil-18-fluoro-14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11, 12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0313]Daljim prečišćavanjem u sintezi jedinjenja 17 preparativno reverzno faznim HPLC-om (60-88% acetonitrile u vodi, sa 0.1% puferom trifluorosirćetne kiseline) izolovan je Primer 93 kao manji sporedni proizvod. Analitički HPLC RetTime: 8.64 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C^H^NeC^S: 851.4; nadjeno: 851.4. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 5 9.93 (br s, 1 H), 7.88 (d,J=9.1 Hz, 1 H), 7.22 (d,J=2.4 Hz, 1 H), 7.06 (d,J=2.4 Hz, 1 H), 6.55 (s, 1 H), 5.91 (td, Jh-f= 136 Hz,J=8 Hz, 1 H), 5.81 (td,Ju-r= 52 Hz,J=8 Hz, 1 H), 5.30 (d,J =9.7 Hz, 1 H), 4.44 (d,J=12.0 Hz, 1 H), 4.38 (d,J=6.7 Hz, 1 H), 4.32 (d,J=9.8 Hz, 1 H), 4.07 (m, 1 H), 3.93 (s, 3H), 3.72 (m, 1 H), 2.59 (m, 1 H), 2.35 (m, 1 H), 2.06 (m, 4H), 1.88 (m, 1 H), 1.78 (m, 1 H), 1.71 - 1.52 (m, 4H), 1.48 (s, 3H), 1.48 - 1.41 (m, 2H), 1.23 (m, 2H) 1.21 (t, /= 8.0 Hz, 3H), 1.08 (s, 9H), 1.05 - 0.90 (m, 2H), 0.84 (m, 2H), 0.66 (m, 1 H), 0.48 (m, 1 H).
[0314]Primer 91. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(lR,2S)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil]-2-etenilciklopropil-9-etil-14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0315]Primer 91 je pripremljen na sličan način kao Primer 1 zamenom Intermedijera Al sa Intermedijerom A10 u Koraku 8. So TFA Primera 91 je izolovana. Analitički HPLC RetTime: 8.72 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C4oH55N609S: 795.96; nadjeno: 795.94. 'H NMR (400 MHz, CD30D) 5 9.03 (s, 1 H); 7.80 (d, J =9.2 Hz, 1 H); 7.24 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1 H); 7.16 (d, J = 2.4 Hz, 1 H); 5.90 (d, J = 3.6 Hz, 1 H); 5.68 (m, 1 H); 5.25 (d, J = 17.2 Hz, 1.6 Hz, 1 H);5.10(d, J= 11.2, 1.6 Hz, 1 H); 4.57 (d, J = 6.8Hz, 1 H); 4.39 (brs, 1 H); 4.37 (d,.T = 9.2 Hz, 1 H); 4.16 (dd, J =12.8, 4.4 Hz, 1 H); 3.93 (s, 3H); 3.77-3.72 (m, 1 H); 3.02-2.88 (m, 1 H): 2.86-2.75 (m, 1 H); 2.64-2.54 (m, 1 H); 2.18 (q, J = 8.8 Hz, 1 H): 1.90-1.66 (m, 4H); 1.66-1.40 (m, 6H); 1.38-1.32 (m, 1 H); 1.30-1.20 (m, 5H); 1.10 (s, 9H); 1.14-1.02 (m, 2H); 0.77-0.68 (m, 1 H); 0.54-0.45 (m, IH).
[0316]Primer 92. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-{(lR,2S)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil] -2-etenilciklopropil} -9-etil-18,18-difluoro-14-metoksi-3,6-diokso- 1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro -8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0317]Primer 92 je pripremljen na sličan način kao Primer 17, zamenom Intermedijera Al sa Intermedijerom A10 u Koraku 7. Primer 92 je izolovan. Analitički HPLC RetTime: 8.75 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C40H53F2N6O9S: 831.36; nadjeno: 831.25, 'H NMR (400 MHz, Chloroform-d) 5 9.98 (s, 1 H), 7.96 (d,/ =9.2 Hz, 1 H), 7.40 - 7.19 (m, 1 H), 7.08 (s, 1 H), 6.56 (s, 1 H), 5.91 (d,/=3.8 Hz, 1 H), 5.86 - 5.64 (m, 1 H), 5.34 (d, / = 9.7 Hz, 1 H), 5.21 (d,J =17.2 Hz, 1 H), 5.10 (d,J=10.3 Hz, lH),4.53-4.26(m,2H),4.15-4.02(m, 1 H), 3.95 (s, 3H), 3.73 - 3.57 (m, 1 H), 2.97 - 2.81 (m, 1 H), 2.64 - 2.37 (m, 2H), 2.21 - 2.06 (m, 1 H), 2.06 - 1.88 (m, 2H), 1.88 - 1.55 (m, 4H), 1.55-1.12 (m, 10H), 1.07 (s, 9H), 1.02 - 0.78 (m, 5H), 0.78 - 0.61 (m, 1 H), 0.47(q, J=7.3, 6.2Hz, 1 H).
[0318]Primer 93. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-9-etil-N-[(2R)-2-etil-l-{[(l-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-18,18-difluoro-14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10- metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0319]Primer 93 je pripremljen na sličan način kao Primer 17, zamenom Intermedijera A4 sa Intermedijerom A10 u Koraku 7. Primer 93 je izolovan. Analitički HPLC RetTime: 8.03 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C41H57F2N6O9S: 847.39; nadjeno: 846.99. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 5 7.95 (d,J=8.9 Hz, 1 H), 7.27 (m, 1 H), 7.08 (s, 1 H), 6.65 (s, 1 H), 5.91 (s, 1 H), 5.41 (d,J=9.0 Hz, 1 H), 4.82 (m, 2H), 4.47 (d,J=6.2 Hz, 1 H), 4.35 (dd,J=35.7, 10.7 Hz, 2H), 4.07 (m, 1 H), 3.94 (s, 3H), 3.63 (m, 1 H), 2.50 (m, 2H), 1.95 (m, 2H), 1.94 (m, 2H), 1.78 (m, 3H), 1.64 (m, 4H), 1.48 (m, 6H), 1.19 (m, 4H), 1.07 (s, 9H), 1.05 - 0.88 (m, 4H), 0.88 - 0.75 (m, 1 H), 0.67 (m, 1 H), 0.47 (m, 1 H).
[0320]Primer 94. Dobijanje (laR,5S,8S,9S,10R,22aR)-5-terc-butil-N-[(2R)-l-[(ciklopropilsulfonil)karbamoil] -2-(difluorometil)ciklopropil] -9-etil-18,18-difluoro-14-metoksi-3,6-diokso-1,1 a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradekahidro-8H-7,10-metanociklopropa[ 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-8-karboksamida.
[0321]Primer 94 je pripremljen na sličan način kao Primer 17, zamenom Intermedijera A9 sa Intermedijerom A10 u Koraku 7. Primer 94 je izolovan. Analitički HPLC RetTime: 8.71 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C39H51F4N6O9S: 855.34; nadjeno: 855.26. 'H NMR (400 MHz, CDCb) S 10.22 (s, 1 H), 8.02( d, J=9.2 Hz, 1 H), 7.33 (d,J=12Hz, 1 H), 7.12 (s, 1 H), 5.95 (td,Jhf=52 Hz,J=8 Hz, 1 H), 5.50 (d,J=9.7 Hz, 1 H), 4.53 (d,J=6.4 Hz, 1 H), 4.46 (dd,J=26.4, 10.7 Hz, 2H), 4.13(d, J= 11.5Hz, 1 H), 4.00 (s, 3H), 3.68 (m, 1 H), 2.91 (m, 1 H), 2.57
(m, 3H), 2.13 (m, 2H), 1.94 (m, 2H), 1.73 (m, 3H), 1.50 (m, 3H), 1.33 (m, 3H), 1.22( t, J=7.2 Hz, 3H), 1.13 (s, 9H), 1.00 - 0.95 (m, 4H), 0.95 - 0.85 (m, 1 H), 0.69 (m, 1 H), 0.51 (m, 1 H).
[0322]Primer 95. Dobijanje (laS,2aR,6S,9S,10S,HR,23aR,23bS)-6-terc-butil-15-cijano-N-[(1 R,2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-19,19-difluoro-10-metil-4,7-diokso-1 a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1H,9H-8,11- metanociklopropa[4',5']ciklopenta[ 1 ',2': 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida.
[0323]Intermedijer 95-1 je pripremljen na sličan način kao Intermedijer 46-2, zamenom E6 sa Intermedijerom E3 u Koraku 1. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C27H33F2N4O5: 531.24; nadjeno: 531.2.
[0324]Primer 95 je pripremljen na sličan način kao Primer 62, zamenom Intermedijera 95-1 sa Intermedijerom 46-2 u Koraku 1 i zamenom Intermedijera A10 sa Intermedijerom A9 u Koraku 5. Primer 95 je izolovan. Analitički HPLC RetTime: 8.86 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C42H52F4N7O8S: 890.35; nadjeno: 889.94. 'H NMR (400 MHz, CDCb) 8 9.34 (s, 1 H), 7.80 (m, 2H), 7.42 (d,J =8.6 Hz, 1 H), 6.85 (s, 1 H), 6.69 (s, 1 H), 5.38 (m, 1 H), 5.29 (m, 3H), 5.02 (d,J= 8.8 Hz, 1 H), 4.46 (d,J=7.4 Hz, 1 H), 4.10 - 3.97 (m, 2H), 3.84 (d,J=7.9 Hz, 1 H), 3.74 (d,J= 8.6 Hz, 1 H), 2.42 - 2.29 (m, 1 H), 2.10 (s, 1 H), 1.87 - 1.72 (m, 1 H), 1.69 - 1.48 (m, 4H), 1.38 (d,J=14.8 Hz, 2H), 1.30 - 1.08 (m, 4H), 0.99 (s, 5H), 0.89 (m, 3H), 0.69 (s, 10H), 0.64 (m, 1 H), 0.43 (s, 1 H), 0.11 (m, 1 H), 0.01 (m, 1 H).
[0325]Primer 96. Dobijanje (laS,2aR,6S,9S,10S,HR,21E,24aR,24bS)-6-terc-butil-15-hloro-N-[(lR,2R)-2-(difluorometil)-l-{[(l-metilciklopropil)sulfonil]karbamoil}ciklopropil]-10-metil-4,7,18-triokso-1 a,2,2a,4,5,6,7,10,11,20,23,24,24a,24b-tetradekahidro-1 H,9H, 18H-8,11 - metanociklopropa[4',5']ciklopenta[ 1 ',2': 18,19] [ 1,10,3,6,12]dioksatriazaciklononadecino[ 11,12-b]hinazolin-9-karboksamida.
[0326]Primer 96 je pripremljen na sličan način kao 89, zamenom intermedijera 96-1 sa intermedijerom 17-4 u Koraku 1. Intermedijer 96-1 je pripremljen na sličan način kao intermedijer 17-4 u Primeru 17, zamenom E9 sa E3 i BI sa B4 u Koraku 1, i zamenom intermedijera D16 sa intermedijerom Dll u Koraku 3. Primer 96 je izolovan. Analitički HPLC RetTime: 9.18 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C41H52CIF2N6O9S: 877.32; nadjeno: 877.61. 'H NMR (400 MHz, Chloroform-d) 8 9.76 (s, 1 H), 8.03 (d,J=8.6 Hz, 1 H), 7.39 (m, 1 H), 7.27 (m, 1 H), 6.80 (s, 1 H), 5.92 (m, 1 H), 5.87 - 5.73 (m, 1 H), 5.68 (m, 1 H), 5.64 - 5.51 (m, 1 H), 5.21 (m, 1 H), 4.93 (m, 2H), 4.52 - 4.32 (m, 3H), 4.15 - 3.94 (m, 2H), 2.86 - 2.71 (m, IH), 2.26 (m, 1 H), 2.15 (m, 2H), 2.10 - 2.02 (m, 1 H), 2.02 - 1.84 (m, 2H), 1.77 (m, 2H), 1.61 (s, 3H), 1.50 (m, 4H), 1.42 - 1.17 (m, 6H), 1.17 - 0.92 (m, 10H), 0.92 - 0.78 (m, 2H), 0.51 - 0.37 (m, IH).
[0327]Primer 97. Dobijanje (laS,2aR,6S,9S,10S,HR,23aR,23bS)-6-terc-butil-15-cijano-N-[(2R)-2-(difluorometil)-1 - {[(1 -metilciklopropil)sulfonil]karbamoil} ciklopropil]-10-metil-4,7-diokso-1 a,2,2a,4,5,6,7,10,11,19,20,21,22,23,23a,23b-heksadekahidro-1 H,9H-8,11 - metanociklopropa[4',5']ciklopenta[ 1 ',2': 18,19] [ 1,10,3,6]dioksadiazaciklononadecino[ 11,12-b]hinoksalin-9-karboksamida. [03281Intermedijer 97-1 je pripremljen na sličan način kao intermedijer 79-5, zamenom E2 sa E5 u Koraku 1. LCMS-ESI<+>( m/ z) :[M+H]izračunato za C43H55N4O7: 739.41; nadjeno: 739.31.
Korak 1. Dobijanje 97-2. Makrociklični olefin 97-1 (0.84 g, 1.14 mmol) je rastvoren u 114 mL etanola i 114 mL etil acetata. Nakon degasifikacije argonom, 0.84 g 5% Pd/C Degussa-tipa je dodat i smeša je hidrogenizovana 4 sata na 1 atm. Cedjenjem kroz celit, koncentrovanjem, i hromatografijom na silika gelu (40% - 60% etil acetat u heksanu gradijent) dobij a se intermedijer 97-2. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C36H51N4O7: 651.38; nadjeno: 651.32.
Korak2. Dobijanje 97-3. Rastvor makrocikličnog fenola97-2 (0.47 g, 0.73 mmol) ohladjen na ledu i trietilamin (0.81 ml, 5.81 mmol) u 3 mL DCM-a je tretiran u kapima 1 M rastvorom anhidrida trifluorometansulfonske kiseline, u metilen hloridu (0.18 ml, 1.09 mmol). Nakon mešanja tokom 2 sata, reakcija je kvenčovana vodom i ekstrahovana sa etil acetatom. Organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom, osušen iznad Na2S04, procedjen i koncentrovan. Hromatografija na silika gelu korišćenjem gradijenta 5% - 50% etil acetat u heksanu dala je 97-3 kao prvi elucioni pik (55 mg). LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C37H50F3N4O9S: 783.33; nadjeno: 782.96.
Korak 3. Dobijanje 97-4. Degasifikovana je smeša makrocikla triflata 97-3 (408 mg, 0.52 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma (30.11 mg, 0.03 mmol), cink cijanida, 98% (61.21 mg, 0.52 mmol) u 2.6 mL DMF-a tokom 10 minuta. Reakcija je zagrevana na 80 °C tokom 1 sata. Dodatnih 60 mg tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma i 120 mg cink cijanida je dodato i zagrevanje je nastavljeno još 30 minuta. Reakcija je kvenčovana zasićenim rastvorom amonijum hlorida i ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je odvojena, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata, procedjena i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu korišćenjem gradijenta 5% -70% etil acetata u heksanu da se dobije intermedijer 97-4. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]<+>izračunato za C37H50N5O6: 660.38; nadjeno: 660.10.
Korak 4. Dobijanje 97-5. Rastvor 97-4 (290 mg, 0.44 mmol) u 1 mL DCM-a je tretian sa 0.5 mL TFA i mešan preko noći. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organska faza je odvojena, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata, procedjena i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu korišćenjem gradijenta 10% -70% etil acetata u heksanu da se dobije intermedijer 97-5 (216 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS-ESL( m/ z) :
[M+H]<+>izračunato za C33H42N5O6: 604.31; nadjeno: 604.00.
Korak 5. Dobijanje Primera 97. Smeša 97-5 (50 mg, 0.08 mmol), HATU (37.79 mg, 0.1 mmol), u 0.3 mL DMF-a je mešana 5 min,onda su dodati A10 (50 mg, 0.08 mmol) i DIPEA (0.06 ml, 0.33 mmol). Nakon 45 min na rt, reakcija je bila nepotpuna (LCMS). Dodato je još 20 mg A10 i mešano je 2 sata. Dodato je zatim 2 mL 1 N HC1, i smeša je ekstrahovana sa DCM. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu korišćenjem gradijenta 30% - 65% etil acetata u heksanu. Kombinovani frakcijski proizvod sadrži deo ostatka DMF-a. Dodata je voda, koja je generisala taloženje (14 mg). Filtrat je ekstrahovan sa etil acetatom, i ekstrakti su kombinovani sa talogom. Nastali rastvor je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, procedjen, koncentrovan i osušen pod sniženim pritiskom dajući Primer 97. Analitički HPLC RetTime: 9.06 min. LCMS-ESL( m/ z) :[M+H]izračunato za C42H54F2N7O8S: 854.98; nadjeno: 853.88. 'HNMR (400 MHz, CDCI3) 8 9.77 (br s, 1 H), 8.05 (m, 1 H), 7.93 (m, 1 H), 7.62 (m, 1 H), 7.20 (m, 1 H), 7.08 (m, 1 H), 6 - 5.65 (m, 1 H), 5.56 (m, 1 H), 5.17 (m, 1 H), 4.90 (m, 1 H), 4.38 (m, 2H), 4.22 (m, 1 H), 4.06 (m, 1 H), 3.57 (m, 1 H), 2.88 (m, 1 H), 2.70 (m, 5H), 2.28 - 2.08 (m, 1 H), 2.04 - 1.30 (m, 12H), 1.29 - 1.09 (m, 9H), 1.08 - 0.96 (m, 4H), 0.85 - 0.67 (m, 3H), 0.43 (m, 1 H), 0.34 (m, IH), 0.19-0.03 (m, 1 H).
[0329]Sledeća jedinjenja mogu biti pripremljena sintetičkim metodama ovog pronalaska ili pomoću opšte poznatih metoda u oblasti:
i gde su E i G definisani kao gore.
Biološka aktivnost
Ekspresija i prečišćavanje Genotipa la, 2a i 3 NS3 Proteaza.Generisanje NS3 Proteaznih ekspresionih plazmida
[0330] Sekvenca koja kodira genotip 1 b (sa jednim lancem) HCV NS3 proteaznog domena je amplifikovana PCR-om iz plazmida koji kodira I3891uc-ubi-neo/NS3-3VET replikon (Reblikon, Mainz, Nemačka). 5'-PCR prajmer je dizajniran za kodiranje N-terminalnog K3heksahistidinskog taga i ubacivanje in-frame rekombinantnog Tobacco Etch virus (rTEV) proteaznog mesta cepanja u NS3 kodirajuću sekvencu. Nastali DNK fragment je kloniran u pET28 protein ekspresioni vektor (Invitrogen, Carlsbad, CA) dajući p28-N6H-Tev-NS3(181)lb.
[0331] Kodirajuće sekvence za genotip 3 HCV proteaza domena je amplifikovana RT-PCR-om, korišćenjem kita Titan One Tube RT-PCR (Roche, Indianapolis, IN) i RNK je ekstrahovana iz HCV pozitivnog humanog seruma (BBI Diagnostics, MA) korišćenjem kita QIAmp UltraSens Virus (Qiagen, Valencia, CA). 5' PCR prajmeri su dizajnirani za kodiranje N-terminalnog heksahistidinskog taga i ubacivanje in-frame rTEV proteaznih mesta cepanja u NS3 Proteaza kodirajuću sekvencu. Dobijeni DNK fragmenti su klonirani u pET28 dajući respektivno ekspresione vektore p28-N6H-Tev-NS3(181)la i p28-N6H-Tev-NS3(181)3
NS3 proteaza protein ekspresija
[0332] Bakterije BL21AI (Invitrogen, Carlsbad, CA) su transformisane genotipom lb ili 3 NS3 ekspresionim vektorima i korišćene za inokulaciju u fermentacionom sudu od 20 L (Sartorius BBI Svstem Inc., Bethlehem, PA), koji sadrži 18 L svežeg 2YT medijuma obogaćenog sa 50 upg/mL kanamicina. Kada gustina ćelija postigne ODćoo od 1, temperatura kultura je smanjena sa 37 °C na 28 °C i momentalno je inicirana indukcija dodavanjem 30 uM ZnS04, 14 mM L-arabinoze i 1 mM Izopropil P- D -tiogalaktozida (IPTG) finalne koncentracije. Ćelije su nakon inkubacije sakupljene centrifugiranjem 4 sata i skladištene su kao zamrznuti taloži na -80 °C pre prečišćavanja NS3 proteina.
Prečišćavanje NS3 Proteaza
Prečišćavanje GenotipalbNS3 Proteaze
[0333] Taloži ćelija su odmrznuti i resuspendovani do 10 mL/g ćelija u puferu za lizu ćelija koji sadrži 50 mM tris-a pH 7.6, 300 mM NaCl, 0.1% 3-[(3-holamidopropil)dimetilamonijum]-l-propansulfonata (CHAPS), 5% glicerola, i 2 mM p-merkaptoetanola. Ćelijske suspenzije su sonifikovane, procedjene kroz gazu, i propuštene tri puta kroz sistem za homogenizaciju (microfluidizer) na 18,000 funti/in<2>. Dobijeni lizati su centrifugirani na 15500 rpm tokom 45 minuta i supernatanti su stavljeni na HisTrap HP kolonu (GE Lifesciences) prethodno ekvilibrisanu sa pet zapremina Ni pufera A (50 mM tris pH 7.6, 300 mM NaCl, 0.1% CHAPS, 5% glicerola, 2 mM (3-mercaptoetanola, 50 mM imidazol-HCl-a). Proteini su eluirani sa gradijentom od 0-100% Ni pufera A plus 500 mM imidazol-HCl-a i sakupljene su frakcije i spojene. Bazen HisTrap je razblažen sa 1:10 SP-A puferom (50 mM tris pH 7.0, 10% glicerol, 2 mM ditiotreitol (DTT)) i stavljene su na kolonu HiTrap SP-HP (GE Lifesciences) ekvilibrisanu SP-A puferom. NS3 proteaza je eluirana sa gradijentom od 0-100% SP-B pufera (SP-A pufer plus 1 M NaCl). Uzorci su alikvotirani iz Bazena u kojima su koncentrovane SP frakcije koje sadrže NS3, trenutno zamrznuti u tečnom azotu i čuvani na -80° C.
Prečišćavanje Genotipa 3 NS3 Proteaze
[0334] Bakterijski taloži sakupljeni od ekspresije genotipa 3 HCV NS3 proteaze su homognizovani u puferu za lizu (25 mM tris, pH 7.5 pufer koji sadrži 150 mM NaCl i 1 mM fenilmetansulfonil fluorid (PMSF)) i propušteni kroz sistem za homogenizaciju (microfluidizer) na 18,000 funti/in<2>. Homogenizovani ćelijski lizati su centrifugirani na 30,000 x g tokom 30 minuta na 4° C. Dobijeni Pl taloži su isprani sa puferom za ispiranje I (25 mM tris, pH 7.5 sadrži 1% CHAPS) što je praćeno centrifugiranjem na 10,000 x g tokom 30 minuta na 4° C. Dobijeni P2 taloži su isprani sa puferom za ispiranje II (250 mM CAPS pufer, pH 10.8, koji sadrži 2M NaCl I 2m uree) što je praćeno centrifugiranjem na 30,000 x g tokom minuta na 4° C. Dobijeni P3 taloži resuspendovani su u puferu za rastvaranje (Solubilization Buffer) (20 ml 25 mM tris, pH 7.5, koji sadrži 150 mM NaCl i 8 M uree) i inkubirani na 4° C tokom jednog sata. Rastvoreni proteini su prošli kroz filter od 0.45 mikrona. Koncentracije proteina su merene i rastvori su prilagodjeni do 40 mM DTT, inkubirani 30 minuta na 4° C i onda brzo razblaženi u Refolding puferu (25 mM tris, pH 8.5, 0.8 M Gvanidin-HCl, 0.4 M L-Arginin, 10 mM ZnSO/0uz mešanje. Rastvori proteina su inkubirani preko noći na 4° C kako bi se ponovo uvili. Uvijene proteaze su centrifugirane na 30,000 x g tokom 10 minuta da se uklone zaostali taloži. Finalna koncentracija proteina je zatim merena i NS3 proteaze su alikvotirane, naglo zamrznute u tečnom azotu i čuvane na -80° C.
Odredjivanje Ki za Genotipelbi 3a NS3 Proteaze
[0335] Prečišćeni domen NS3 proteaze (amino kiseline 1-181) genotipa virusa 1 b i 3a su generisani kao gore. Interno kvenčovan fluorogenični depsipeptidni supstrat Ac-DED(Edans)-EEAbuy[COO]ASK(Dabcyl)-NH2 i sintetički peptid koji sadrži ostatke hidrofobnog jezgraNS4A proteinskog kofaktora (KKGSVVLVGRIILSGRKK; NS4A peptid) su dobijeni od Anaspec, Inc.
(San Jose, CA). Ostale hemikalije i bioreagensi su bili čisti i kupljeni od standardnih dobavljača.
[0336] Reakcije su izvedene na sobnoj temperaturi u puferu koji se sastoji od 50 mM HEPES-a, 40% glicerola, 0.05% Triton X-100, 10 mM DTT-a, i 10% DMSO-a. Finalni rastvori testa sadrže 50 pM NS3 genotip 1 b proteazu ili 200 pM genotip 3a proteazu, 20 uM NS4A peptid, i 4 uM supstrata (genotip lb) ili 2 uM supstrata (genotip 3a). Koncentracije inhibitora variraju od 100 nM do 5 pM u tri razblaženja, a kontrole su uključene bez inhibitora.
[0337] Razblaženja jedinjenja su uradjena u DMSO-u do 20 x konačne koncentracije. Reakcione smeše su pripremljene na sterilnim pločama za uzgajanje ćelija sa 96- bazena. Rastvor enzima i NS4A peptida u puferu (25 uL zapremine oba reagensa do 4 x konačne koncentracije) je pomešan sa 45 uL pufera ovog testa i 5 uL ili inhibitora ili DMSO-a i preinkubiran je na sobnoj temperaturi tokom 1 sat. Reakcija je započeta dodatkom 25 uL rastvora supstrata od 4 x finalne koncentracije. Ploče su promešane energično 5-10 sekundi i reakcija je ostavljena da teče narednih 90 minuta. Fluoroscencija je merena svakih 30 sekundi izmedju 90-tog i 120-tog minuta reakcionog vremena korišćenjem Tečan InfiniTe Ml000 ili PerkinElmer Envision multimod čitača ploča sa talasnom dužinom eksitacije od 340 nm i talasnom dužinom emisije od 490 nm.
[0338] Brzine su izračunate iz toka krive u stanju ravnoteže u roku od 90-120 minuta nakon dodatka supstrata. Da bi se odredila ^i, brzine su unete kao funkcija koncentracije inhibitora, a podaci su bili u skladu sa jednačinom 1 (Morrison, J. F., Biochimica et Biophvsica Acta 1969, 185, 269-286) da se izračuna K;app korišćenjem GraphPad Prism 5. Aktivna frakcija enzima je izračunata titracijom aktivnog mesta sa poznatim potentnim inhibitorima. ?i je izračunata iz Kiapp/( l + [[S]//Cm]). RezutatiKiza repezentativna jedinjenja za genotip lb i 3a (Ki 1B i Ki 3A, respektivno) su prikazani u Tabli 1.
Odredjivanje anti- HCV aktivnosti bazirane na ćelijama:
[0339]Antivirusni potencijal (EC50) je odredjen kako u ćelijskim linijama sa stabilnim subgenomskim HCV replikonom tako i u ćelijams sa prolazno transficiranim HCV replikonom. Termin polovina maksimalno efikasne koncentracije (EC50) se odnosi na koncentraciju leka koja indukuje odgovor na pola puta izmedju osnovne linije i maksimuma nakon vremena ekspozicije navedene u nastavku.
[0340]Stabilni podgenomski HCV replikoni za genotip 1 a, 1 b, 2a, 3a, i 4a uspostavljeni su u Huh-7-vodjenim ćelijama kako je objasnio Lohmann et al (Lohmann V, Korner F, Koch J, et al Replication of subgenomic hepatitis C virus RNAs in a hepatoma cell line.Science 1999; 285:119-3). Svaka stabilna ćelijska linija sadrži bicistronski HCV replikon koji kodira reporter gen humanizovane Renilla luciferaze (hRLuc) fuzionisan za selektivni neomicin otporni gen, što je praćeno EMCV IRES i NS3-NS5B kodirajućim regionom HCV. Selekcija za ćelije koje konstitutivno eksprimiraju HCV replicon je postignuta u prisustvu selektivnog antibiotika, neomicina (G418). Aktivnost luciferaze je merena kao marker za nivoe unutarćelijske HCV replikacije.
[0341]Genotip 1 a stabilni replikon je izveden iz H77 HCV soja i sadrži adaptivne mutacije P1496L i S2204I. Genotip 1 b stabilni replikon je izveden iz Conl HCV soja i sadrži adaptivne mutacije E1202G, T1280I, i K1846T. Genotip 2 a stabilni replikon je izveden iz JFH-1 HCV soja i ne zahteva adaptivne mutacije. Genotip 3 a stabilni replikon je izveden iz S52 HCV soja i sadrži adaptivne mutacije P1121 L, A1198T i S22101 (ekvivalent S2204I u genotipu 1). Genotip 4 a stabilni replikon je izveden iz ED43 HCV soja i sadrži adaptivne mutacije Q1691R i S2204I. Sve replikon ćelijske linije su propagirane u Huh-7-vodjenim ćelijama i čuvane su u Dulbecco's modified Eagle's Medium (DMEM) dopunjenim sa 10% fetalnim govedjim serumom (FBS) i 0.5 mg/mLG418.
[0342]Formirani su prolazno-transficirani HCV replikoni za genotip 1 a, 1 b, 3a i rezistentne vrste D168A NS3/4a proteaznog inhibitora u genotipu 1 b ili R155K u genotipu la. Prolazno-transficirani replikoni su takodje biscistronski podgenomski replikoni ali ne sadrže neomicin selektivni marker prisutan u stabilnim replikonima. Ovi replikoni kodiraju polio virus IRES praćen hRLuc reporter genom, EMCV IRES-om i konačno NS3-NS5B kodirajući HCV regoion. Genotip 1 a (H77) i 1 b (Conl) divlji tip replikoni su izvedeni iz istog soja i sadrže iste adaptivne mutacije koje su date gore. Genotip 3a prolaznog replikona je izveden iz S52 HCV soja kao gore, ali sadrži nešto drugačike adaptivne mutacije P1112L, K1615E i S2210I. Konkretno, sekundama adaptivna mutacija A1198T (A166T) u proteaza domenu stabilnog genotipa 3a replikona je zamenjena sa K1615E (K583E) u NS3 helikazi, bez efekta na efikasnost replikacije. Uklanjanje A166T lociranog u proteaza domenu minimizira uticaj ove vrste inhibitora koji ciljaju proteazni domen i predstavlja proteazni domen koji je bliži divljem tipu za genotip 3a. Rezistentni replikoni koji kodiraju mutacije NS3/4 proteaznog inhibitora su uvedeni u 1 b ili 1 a divlji tip NS3 gen sa ciljano direktnom mutagenezom. In vitro transkribovane RNk iz svih prolaznih replikona su transfekovane u naive Huh-7-vodjene ćelijske linije elektroporacijom. Luciferaze aktivnost je merena kao marker intraželijskog nivoa HCV replikacije.
[0343]Za izvodjenje EC50testova, ćelije iz svakog HCV replikona su sipane u ploče sa 384-bazena. Jedinjenja su rastvorena u DMSO-u pri koncentraciji 10 mM i razblažene u DMSO-u korišćenjem instrumenta za automatsko pipetiranje. Tri puta serijski razblažena jedinjenja su dodata direktno ćelijama korišćenjem automatizovanog instrumenta. DMSO je korišćen kao negativna (rastvarač; bez inhibitora) kontrola i kombinacija tri HCV inhibitora uključujući proteazni inhibitor; NS5A inhibitor i nukleozid inhibitor su korišćeni u koncentracijama > 100 x EC50kao pozitivne kontrole (100% inhibicija). Sedamdeset dva sata kasnije, ćelije su lizirane iaktivnost Renillaluciferaze je kvantifikovana po preporuci proizvodjača (Promega-Madison, WI). Ne-linearna regresija je izvedena za izračunavanje EC50vrednosti.
Rezultati su predstavljeni u Tabelama 1 i 2:
[0344J
[0345]Podaci u Tabelama 1 i 2 predstavljaju prošek tokom vremena za svaki test za svako jedinjenje. Za odredjena jedinjenja, sprovedeno je više testova tokom trajanja projekta. Prema tome, podaci iskazani u Tabelama 1 i 2 sadrže podatke prijavljene u prioritetnom dokumentu, kao i podatke dobijene u medjuvremenu.
Farmaceutske kompozicije
[0346]Sledeće ilustruje reprezentativne forme farmaceutskih doza, koje sadrže jedinjenje Formula I, II, III, ili IV (kao što je bilo koji od IVa-IVh) ('Jedinjenje X'), za terapijsku ili profilaktičku upotrebu kod ljudi.
[0347]Navedene formulacije se mogu dobiti konvencionalnim postupcima dobro poznatim u farmaceutskoj struci.
[0348] Upotreba termina "jedan" i "jedno" i "taj" i sličnih referenci u kontekstu ovog pronalaska (a naročito u kontekstu sledećih patentnih zahteva) moraju se tumačiti da pokriju i jedninu i množinu, osim ako nije drugačije označeno u tekstu ili je na drugi način jasno kontradiktorno u datom kontekstu. Sve metode ovde opisane mogu se izvesti u bilo kom pogodnom redosledu osim ako nije drugačije naglašeno u tekstu ili je na drugi način jasno kontradiktorno u datom kontekstu.
[03491 Upotreba individualnih numeričkih vrednosti je navedena aproksimativno kao da su vrednostima prethodile reči "oko" ili "približno". Slično tome, numeričke vrednosti u različitim opsezima navedene u ovoj aplikaciji, osim ako nije izričito navedeno drugačije, se iskazuju kao aproksimacija kao da su minimalnim ili maksimalnim vrednostima u okviru navedenih raspona prethodile reči "oko" ili "približno". Na ovaj način, varijacije iznad i ispod navedenih opsega mogu se koristiti za postizanje suštinski istih rezultata kao vrednosti unutar opsega. Kako se ovde koristi, termini "oko" i "približno" kada se odnose na numeričke vrednosti imaju svoja jasna i uobičajena značenja prosečnom poznavaocu oblasti koja je najbliža materiji koja se ovde stavlja na uvid javnosti ili oblasti koja je relevantna za opseg ili element o kome se radi. Količina proširenja strogo numeričkih granica zavisi od mnogo faktora. Na primer, neki od faktora koji se mogu razmatrati obuhvataju kritičnost elemenata i/ili efekata koji će data količina varijacije imati na izvođenje materije u patentnim zahtevima, kao i druga razmatranja koja su poznata poznavaocima ove oblasti. Kako se ovde koisti, upotrebom različitog broja značajnih cifara za različite numeričke vrednosti ne treba da limitira kako će primena reči "oko" ili "približno" služiti da proširi odredjenu numeričku vrednost ili opseg. Stoga, uopšteno, "oko" i "približno" proširuju numeričku vrednost. Isto tako, stavljanje na uvid javnosti opsega je dato kao kontinuirani opseg uključujući svaku vrednost izmedju minimalnih i maksimalnih vrednosti plus proširenje opsega koje je omogućeno primenom termina "oko" i "približno". Stoga, ponavljanjem opsega vredosti ovde treba samo da služi kraći metod za individualno upućivanje na svaku pojedinačnu vrednost koja je u okviru opsega, osim ukoliko drugačije nije naznačeno, i svaka pojedinačna vrednost je inkorporirana u specifikaciju kao daje bila ovde individualno ponovljena.

Claims (1)

1. Jedinjenje formule IVa: ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
2. Jedinj enj e prema patentnom zahtevu 1, koj e j e j edinj enj e formule IVb: ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
3. Jedinj enj e prema patentnom zahtevu 1, koj e j e j edinj enj e formule IVb:
4. Jedinjenje formule IVc: ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 4, koje je jedinjenje formule IVd: ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 4, koje je jedinjenje formule IVd: Jedinjenje formule IVe: ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 7, koje je jedinjenje formule IVf: ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 7, koje je jedinjenje formule IVf: Jedinjenje formule IVg: ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 10, koje je jedinjenje formule IVh: ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
12. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 10, koje je jedinjenje formule IVh:
13. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje iz bilo kog od patentnih zahteva 1-12, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.
14. Jedinjenje iz bilo kog od patentnih zahteva 1 do 12, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za primenu u medicinskoj terapiji.
15. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 13 za primenu u lečenju infekcije virusom hepatitisa C.
16. Jedinjenje iz bilo kog patentnog zahteva 1 do 12 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za primenu u profilaktičkom ili terapijskom lečenju infekcije virusom hepatitisa C.
RS20161182A 2012-07-03 2013-07-02 Inhibitori hepatitis c virusa RS55494B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261667806P 2012-07-03 2012-07-03
US201361798524P 2013-03-15 2013-03-15
EP13739324.5A EP2870160B1 (en) 2012-07-03 2013-07-02 Inhibitors of hepatitis c virus
PCT/US2013/049119 WO2014008285A1 (en) 2012-07-03 2013-07-02 Inhibitors of hepatitis c virus

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS55494B1 true RS55494B1 (sr) 2017-04-28

Family

ID=48803614

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20161182A RS55494B1 (sr) 2012-07-03 2013-07-02 Inhibitori hepatitis c virusa
RS20190303A RS58409B1 (sr) 2012-07-03 2013-07-02 Inhibitori virusa hepatitisa c

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190303A RS58409B1 (sr) 2012-07-03 2013-07-02 Inhibitori virusa hepatitisa c

Country Status (40)

Country Link
US (7) US9296782B2 (sr)
EP (4) EP3159345B1 (sr)
JP (4) JP6025977B2 (sr)
KR (3) KR102040023B1 (sr)
CN (2) CN104540832B (sr)
AP (1) AP3903A (sr)
AR (1) AR091661A1 (sr)
AU (6) AU2013286729B2 (sr)
BR (2) BR112014033080B1 (sr)
CA (1) CA2877005C (sr)
CL (1) CL2014003634A1 (sr)
CO (1) CO7160104A2 (sr)
CR (1) CR20150045A (sr)
CY (2) CY1118379T1 (sr)
DK (2) DK2870160T3 (sr)
EA (2) EA033961B1 (sr)
EC (1) ECSP15002066A (sr)
ES (3) ES2605383T3 (sr)
HR (2) HRP20161379T1 (sr)
HU (2) HUE032404T2 (sr)
IL (4) IL236500B (sr)
IN (1) IN2014MN02598A (sr)
LT (2) LT3159345T (sr)
MD (2) MD20180040A2 (sr)
ME (2) ME03362B (sr)
MX (2) MX360597B (sr)
MY (1) MY173342A (sr)
NZ (2) NZ739248A (sr)
PE (1) PE20150204A1 (sr)
PH (3) PH12014502862B1 (sr)
PL (2) PL2870160T3 (sr)
PT (2) PT2870160T (sr)
RS (2) RS55494B1 (sr)
SG (3) SG11201408739VA (sr)
SI (2) SI3159345T1 (sr)
SM (3) SMT201900167T1 (sr)
TW (1) TWI602822B (sr)
UA (1) UA119315C2 (sr)
UY (1) UY34888A (sr)
WO (1) WO2014008285A1 (sr)

Families Citing this family (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI568722B (zh) 2012-06-15 2017-02-01 葛蘭馬克製藥公司 作爲ｍＰＧＥＳ－１抑制劑之三唑酮化合物
UA119315C2 (uk) 2012-07-03 2019-06-10 Гіліад Фармассет Елелсі Інгібітори вірусу гепатиту с
EA025560B1 (ru) 2012-10-19 2017-01-30 Бристол-Майерс Сквибб Компани Ингибиторы вируса гепатита с
WO2014071007A1 (en) 2012-11-02 2014-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
WO2014070964A1 (en) 2012-11-02 2014-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US9643999B2 (en) 2012-11-02 2017-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP2914614B1 (en) 2012-11-05 2017-08-16 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
PT2950786T (pt) 2013-01-31 2020-03-03 Gilead Pharmasset Llc Formulação de combinação de dois compostos antivirais
WO2014137869A1 (en) 2013-03-07 2014-09-12 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US9617310B2 (en) * 2013-03-15 2017-04-11 Gilead Sciences, Inc. Inhibitors of hepatitis C virus
EA201690473A1 (ru) 2013-08-27 2017-03-31 ГАЙЛИД ФАРМАССЕТ ЭлЭлСи Комбинированный состав двух противовирусных соединений
WO2015100144A1 (en) * 2013-12-23 2015-07-02 Gilead Sciences, Inc. Crystalline forms of a macrocyclic hcv ns3 inhibiting tripeptide
PT3087085T (pt) * 2013-12-23 2019-06-04 Gilead Sciences Inc Síntese de um tripéptido macrocíclico inibidor de ns3 de hcv
US10059969B1 (en) 2014-10-03 2018-08-28 Abbvie Inc. Process for the preparation of (S)-2-amino-non-8-enoic acid
DK3236972T3 (en) 2014-12-26 2021-10-04 Univ Emory Antivirale N4-hydroxycytidin-derivativer
CN107250097B (zh) * 2015-02-16 2020-08-07 中央硝子株式会社 含氟α-酮羧酸酯类的实用制造方法
WO2017184670A2 (en) 2016-04-22 2017-10-26 Gilead Sciences, Inc. Methods for treating zika virus infections
CN109641874A (zh) 2016-05-10 2019-04-16 C4医药公司 用于靶蛋白降解的c3-碳连接的戊二酰亚胺降解决定子体
EP4491236A3 (en) 2016-05-10 2025-04-02 C4 Therapeutics, Inc. Heterocyclic degronimers for target protein degradation
EP3454862B1 (en) 2016-05-10 2024-09-11 C4 Therapeutics, Inc. Spirocyclic degronimers for target protein degradation
CN109790143A (zh) 2016-05-10 2019-05-21 C4医药公司 用于靶蛋白降解的胺连接的c3-戊二酰亚胺降解决定子体
CN109414508A (zh) 2016-05-27 2019-03-01 吉利德科学公司 使用ns5a、ns5b或ns3抑制剂治疗乙型肝炎病毒感染的方法
JOP20170127A1 (ar) 2016-06-02 2017-12-02 Gilead Pharmasset Llc صيغة مشتركة مكونة من ثلاث مركبات مضادة للفيروسات
US10961236B2 (en) 2016-09-22 2021-03-30 Astrazeneca Ab (S)-2-(1-cyclopropylethyl)-5-(4-methyl-2-((6-(2-oxopyrrolidin-1-yl)pyridin-2-yl)amino) thiazol-5-yl)-7-(methylsulfonyl)isoindolin-1-one as a phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor
EP3577100A4 (en) * 2017-02-01 2021-03-10 Abbvie Inc. ENZYMATIC PROCESS FOR THE PRODUCTION OF (±) -2- (DIFLUOROMETHYL) -1- (ALCOXYCARBONYL) -CYCLOPROPANECARBONIC ACID AND (±) -2- (VINYL) -1- (ALCOXYCARBONYLURE) -CYCLOPROPANEC
EP4717317A2 (en) 2017-06-20 2026-04-01 C4 Therapeutics, Inc. N/o-linked degrons and degronimers for protein degradation
JP6804790B1 (ja) 2017-12-07 2020-12-23 エモリー ユニバーシティー Ｎ４−ヒドロキシシチジンおよび誘導体ならびにそれらに関連する抗ウイルス用途
CN111018795B (zh) * 2019-12-25 2023-03-28 上海彩迩文生化科技有限公司 一种碱性条件下合成喹喔啉-3-酮的方法
US20230218644A1 (en) 2020-04-16 2023-07-13 Som Innovation Biotech, S.A. Compounds for use in the treatment of viral infections by respiratory syndrome-related coronavirus
US12083099B2 (en) 2020-10-28 2024-09-10 Accencio LLC Methods of treating symptoms of coronavirus infection with viral protease inhibitors
EP4382529A1 (en) 2022-12-07 2024-06-12 Bayer Consumer Care AG A process for preparing pure (3s)-pyrrolidin-3-ol and pure (3s)-pyrrolidin-3-ol hydrochloride

Family Cites Families (111)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU3659102A (en) 2000-12-12 2002-06-24 Schering Corp Diaryl peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatits c virus
JP5039268B2 (ja) 2001-10-26 2012-10-03 アベンティス・ファーマスーティカルズ・インコーポレイテツド ベンゾイミダゾールおよび類縁体および蛋白キナーゼ阻害剤としてのその使用
US6867185B2 (en) 2001-12-20 2005-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
DE60324552D1 (en) 2002-05-20 2008-12-18 Bristol Myers Squibb Co Substituierte cycloalkyl p1' hepatitis c virus inhibitoren
ATE481106T1 (de) 2002-05-20 2010-10-15 Bristol Myers Squibb Co Heterocyclische sulfonamid-hepatitis-c-virus- hemmer
ES2361011T3 (es) 2002-05-20 2011-06-13 Bristol-Myers Squibb Company Inhibidores del virus de la hepatitis c.
MY140680A (en) 2002-05-20 2010-01-15 Bristol Myers Squibb Co Hepatitis c virus inhibitors
ES2320771T3 (es) 2003-04-16 2009-05-28 Bristol-Myers Squibb Company Inhibidores peptidicos de isoquinolina macrociclicos del virus de la hepatitis c.
CN1788006A (zh) 2003-04-18 2006-06-14 安南塔制药公司 喹喔啉基大环丙型肝炎丝氨酸蛋白酶抑制剂
US7176208B2 (en) 2003-04-18 2007-02-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
AU2004240704B9 (en) 2003-05-21 2009-10-22 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor compounds
US7135462B2 (en) 2003-11-20 2006-11-14 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
RS51974B (sr) 2004-07-16 2012-02-29 Gilead Sciences Inc. Antivirusna jedinjenja
WO2007001406A2 (en) 2004-10-05 2007-01-04 Chiron Corporation Aryl-containing macrocyclic compounds
CA2606195C (en) 2005-05-02 2015-03-31 Merck And Co., Inc. Hcv ns3 protease inhibitors
AR057456A1 (es) * 2005-07-20 2007-12-05 Merck & Co Inc Inhibidores de la proteasa ns3 del vhc
AU2006276246B2 (en) 2005-07-25 2012-09-27 Intermune, Inc. Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis C virus replication
PE20070211A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
NZ565269A (en) * 2005-08-01 2010-03-26 Merck & Co Inc Macrocyclic peptides as HCV NS3 protease inhibitors
CN101233148A (zh) * 2005-08-01 2008-07-30 默克公司 作为hcv ns3蛋白酶抑制剂的大环肽
ES2356776T3 (es) 2005-10-11 2011-04-13 Intermune, Inc. Compuestos y métodos para inhibir la replicación del virus de la hepatitis.
US7772183B2 (en) 2005-10-12 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
GB0609492D0 (en) 2006-05-15 2006-06-21 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
GB0612423D0 (en) 2006-06-23 2006-08-02 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
RU2008152171A (ru) 2006-07-05 2010-08-10 Интермьюн, Инк. (Us) Новые ингибиторы вирусной репликации гепатита с
AU2007309488B2 (en) 2006-10-24 2012-10-11 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
CA2667146C (en) 2006-10-24 2016-01-19 Merck & Co., Inc. Hcv ns3 protease inhibitors
AU2007309546A1 (en) 2006-10-24 2008-05-02 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. HCV NS3 protease inhibitors
US8377874B2 (en) 2006-10-27 2013-02-19 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
BRPI0718161A2 (pt) 2006-10-27 2013-11-26 Merck & Co Inc Composto, composição farmacêutica, e, uso do composto.
US7888464B2 (en) 2006-11-16 2011-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US20080287449A1 (en) 2007-04-26 2008-11-20 Deqiang Niu Aza-tripeptide hepatitis c serine protease inhibitors
SG174809A1 (en) 2007-05-03 2011-10-28 Intermune Inc Macrocyclic compounds useful as inhibitors of hepatitis c virus
JP2010526834A (ja) 2007-05-10 2010-08-05 インターミューン・インコーポレーテッド Ｃ型肝炎ウイルス複製の新規ペプチド阻害剤
US20090005387A1 (en) 2007-06-26 2009-01-01 Deqiang Niu Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis c virus serine protease inhibitors
NZ582096A (en) 2007-06-29 2012-05-25 Gilead Sciences Inc Antiviral compounds that inhibit hepatitis c virus (hcv)
AP2009005073A0 (en) 2007-06-29 2009-12-31 Gilead Sciences Inc Antiviral compounds
AU2008277377B2 (en) 2007-07-19 2013-08-01 Msd Italia S.R.L. Macrocyclic compounds as antiviral agents
WO2009014730A1 (en) 2007-07-26 2009-01-29 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic serine protease inhibitors
WO2009042668A2 (en) 2007-09-24 2009-04-02 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Urea-containing peptides as inhibitors of viral replication
US8106059B2 (en) 2007-10-24 2012-01-31 Virobay, Inc. Substituted pyrazines that inhibit protease cathepsin S and HCV replication
US20090111757A1 (en) 2007-10-25 2009-04-30 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
CL2008003384A1 (es) 2007-11-14 2009-12-11 Enanta Pharm Inc Compuestos derivados de quinoxalina macrocíclica, inhibidores de serina proteasa; composicion farmaceutica que los comprende; y su uso en el tratamiento de la hepatitis c.
WO2009070689A1 (en) 2007-11-29 2009-06-04 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic, c5-substituted proline derivatives as inhibitors of the hepatitis c virus ns3 protease
WO2009070692A1 (en) 2007-11-29 2009-06-04 Enanta Pharmaceuticals, Inc. C5-substituted, proline-derived, macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors
EP2222161A4 (en) 2007-12-05 2011-09-28 Enanta Pharm Inc QUINOXALINYL DERIVATIVES
WO2009079353A1 (en) 2007-12-14 2009-06-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Triazole-containing macrocyclic hcv serine protease inhibitors
RU2515318C2 (ru) 2007-12-21 2014-05-10 Авила Терапьютикс, Инк. Ингибиторы протеазы вируса гепатита с и их применение
US8309685B2 (en) 2007-12-21 2012-11-13 Celgene Avilomics Research, Inc. HCV protease inhibitors and uses thereof
US8293705B2 (en) 2007-12-21 2012-10-23 Avila Therapeutics, Inc. HCV protease inhibitors and uses thereof
US8202996B2 (en) 2007-12-21 2012-06-19 Bristol-Myers Squibb Company Crystalline forms of N-(tert-butoxycarbonyl)-3-methyl-L-valyl-(4R)-4-((7-chloro-4-methoxy-1-isoquinolinyl)oxy)-N- ((1R,2S)-1-((cyclopropylsulfonyl)carbamoyl)-2-vinylcyclopropyl)-L-prolinamide
JP2011510927A (ja) 2008-01-24 2011-04-07 エナンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｈｃｖセリンプロテアーゼ阻害剤としての二フッ素化トリペプチド
ES2437147T3 (es) 2008-02-04 2014-01-09 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Inhibidores de serina proteasa macrocíclicos
CA2714604A1 (en) 2008-02-25 2009-09-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Macrocyclic hcv ns3 protease inhibitors
US8431733B2 (en) 2008-03-12 2013-04-30 Virobay, Inc. Process for the preparation of (3S)-3-amino-N-cyclopropyl-2-hydroxyalkanamide derivatives
CN102015652A (zh) 2008-03-20 2011-04-13 益安药业 作为丙型肝炎病毒抑制剂的氟化大环化合物
WO2009142842A2 (en) 2008-04-15 2009-11-26 Intermune, Inc. Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication
US8163921B2 (en) 2008-04-16 2012-04-24 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2009134624A1 (en) 2008-04-28 2009-11-05 Merck & Co., Inc. Hcv ns3 protease inhibitors
US8211891B2 (en) 2008-04-30 2012-07-03 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Difluoromethyl-containing macrocyclic compounds as hepatitis C virus inhibitors
EA019327B1 (ru) 2008-07-22 2014-02-28 Мерк Шарп Энд Домэ Корп. Макроциклическое хиноксалиновое соединение в качестве ингибитора протеазы вгс ns3
KR101647520B1 (ko) 2008-08-07 2016-08-10 에프. 호프만-라 로슈 아게 거대환식 화합물의 제조 방법
CA2734744A1 (en) 2008-08-20 2010-02-25 Michael Eissenstat Hcv protease inhibitors
UY32099A (es) 2008-09-11 2010-04-30 Enanta Pharm Inc Inhibidores macrocíclicos de serina proteasas de hepatitis c
WO2010033466A1 (en) 2008-09-16 2010-03-25 Phenomix Corporation Macrocyclic inhibitors of hepatitis c protease
PL2331538T3 (pl) 2008-09-16 2014-09-30 Boehringer Ingelheim Int Krystaliczne postacie 2-tiazolylo-4chinolinyl-oksy-pochodnej, silnego inhibitora HCV
US8044087B2 (en) 2008-09-29 2011-10-25 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8563505B2 (en) 2008-09-29 2013-10-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US20100080770A1 (en) 2008-09-29 2010-04-01 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
KR20110075019A (ko) 2008-10-15 2011-07-05 인터뮨, 인크. 치료용 항바이러스성 펩티드
WO2010048468A1 (en) 2008-10-23 2010-04-29 Concert Pharmaceuticals, Inc. Deuterated macrocyclic inhibitors of viral ns3 protease
AU2009316472B2 (en) 2008-11-20 2015-07-09 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Cyclic carboxamide compounds and analogues thereof as of Hepatitis C virus
CN102223875A (zh) 2008-11-21 2011-10-19 贝林格尔.英格海姆国际有限公司 口服给药的强效hcv抑制剂的药物组合物
US20100272674A1 (en) 2008-12-04 2010-10-28 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
NZ592705A (en) 2008-12-10 2013-02-22 Achillion Pharmaceuticals Inc 4-amino-4-oxobutanoyl peptide cyclic analogues, inhibitors of viral replication
US8283310B2 (en) 2008-12-15 2012-10-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
KR20110114582A (ko) 2008-12-19 2011-10-19 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Ｈｃｖ ｎｓ３ 프로테아제 억제제
JP5687631B2 (ja) 2008-12-23 2015-03-18 ジヤンセン・フアーマシユーチカルズ・インコーポレーテツドＪａｎｓｓｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． Ｈｃｖのマクロ環状プロテアーゼ阻害剤を製造するための方法および中間体
US8936781B2 (en) 2009-05-13 2015-01-20 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic compounds as hepatitis C virus inhibitors
WO2010135748A1 (en) 2009-05-22 2010-11-25 Sequoia Pharmaceuticals Inc. Bimacrocyclic hcv ns3 protease inhibitors
US8828930B2 (en) 2009-07-30 2014-09-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Hepatitis C virus NS3 protease inhibitors
MY156175A (en) 2009-07-31 2016-01-15 Cadila Healthcare Ltd Substituted benzamide derivatives as glucokinase (gk) activators
EP2470189A4 (en) 2009-08-27 2013-01-23 Merck Sharp & Dohme METHOD FOR PRODUCING PROTEASE INHIBITORS OF HEPATITIS C VIRUS
CN102741270B (zh) 2009-09-28 2015-07-22 英特穆恩公司 C型肝炎病毒复制的环肽抑制剂
US20110082182A1 (en) 2009-10-01 2011-04-07 Intermune, Inc. Therapeutic antiviral peptides
US9193740B2 (en) 2009-10-19 2015-11-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bismacrocyclic compounds as hepatitis C virus inhibitors
CN104771364B (zh) 2010-03-10 2018-05-25 艾伯维巴哈马有限公司 固体组合物
US8530497B2 (en) 2010-03-11 2013-09-10 Boehringer Ingelheim International Gmbh Crystalline salts of a potent HCV inhibitor
JP2013528217A (ja) 2010-06-07 2013-07-08 アッヴィ・インコーポレイテッド 大環状ｃ型肝炎セリンプロテアーゼ阻害薬
WO2012019299A1 (en) 2010-08-11 2012-02-16 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor compounds
US20120094897A1 (en) 2010-09-15 2012-04-19 Intermune, Inc. Novel inhibitors of hepatitis c virus replication
US20130178413A1 (en) 2010-09-21 2013-07-11 John A. McCauley Hcv ns3 protease inhibitors
SG188618A1 (en) * 2010-09-21 2013-04-30 Enanta Pharm Inc Macrocyclic proline derived hcv serine protease inhibitors
US20120095211A1 (en) 2010-09-22 2012-04-19 Intermune, Inc. Substituted proline inhibitors of hepatitis c virus replication
WO2012047764A1 (en) 2010-10-04 2012-04-12 Intermune, Inc. Therapeutic antiviral peptides
WO2012054874A1 (en) 2010-10-22 2012-04-26 Intermune, Inc. Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication
WO2012061248A2 (en) 2010-11-01 2012-05-10 Rfs Pharma, Llc Novel specific hcv ns3 protease inhibitors
JP6034802B2 (ja) 2010-12-14 2016-11-30 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションＭｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ． 大環状ラクタムの調製のための方法および中間体
KR20140003521A (ko) 2010-12-30 2014-01-09 이난타 파마슈티칼스, 인코포레이티드 페난트리딘 매크로사이클릭 ｃ형 간염 세린 프로테아제 억제제
EP2658859A4 (en) 2010-12-30 2014-07-30 Enanta Pharm Inc MACROCYCLIC HEPATITIS C SERIN PROTEASE INHIBITORS
US8957203B2 (en) 2011-05-05 2015-02-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2012166459A1 (en) 2011-05-27 2012-12-06 Bristol-Myers Squibb Company Tripeptides incorporating deuterium as inhibitors of hepatitis c virus
US8691757B2 (en) 2011-06-15 2014-04-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CA2857705A1 (en) 2011-06-16 2012-12-20 AB Pharma Ltd. Macrocyclic heterocyclic compounds for inhibiting hepatitis c virus and preparation and use thereof
US8912141B2 (en) 2011-06-23 2014-12-16 Panmed Ltd. Treatment of hepatitis C virus
EP2744331A4 (en) 2011-08-19 2015-01-21 Merck Sharp & Dohme METHOD AND INTERMEDIATE PRODUCTS FOR THE MANUFACTURE OF MACROLACTAMEN
US20140328799A1 (en) 2011-10-31 2014-11-06 Steven S. Carroll Compositions useful for the treatment of viral diseases
EP2780026B1 (en) 2011-11-15 2019-10-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Hcv ns3 protease inhibitors
AU2013208024A1 (en) 2012-01-12 2014-07-10 Boehringer Ingelheim International Gmbh Stabilized pharmaceutical formulations of a potent HCV inhibitor
UA119315C2 (uk) 2012-07-03 2019-06-10 Гіліад Фармассет Елелсі Інгібітори вірусу гепатиту с
US9617310B2 (en) 2013-03-15 2017-04-11 Gilead Sciences, Inc. Inhibitors of hepatitis C virus

Also Published As

Publication number Publication date
NZ703064A (en) 2016-12-23
SG10201702950TA (en) 2017-06-29
ME02547B (me) 2017-02-20
AU2017203984B2 (en) 2019-06-06
HUE042345T2 (hu) 2019-06-28
JP2015523365A (ja) 2015-08-13
AU2017203984A1 (en) 2017-07-06
EA201790661A2 (ru) 2017-08-31
SG11201408739VA (en) 2015-01-29
KR20190124346A (ko) 2019-11-04
AU2013286729B2 (en) 2015-11-12
CA2877005A1 (en) 2014-01-09
SI3159345T1 (sl) 2019-03-29
US20140017198A1 (en) 2014-01-16
CR20150045A (es) 2015-05-13
EA033961B1 (ru) 2019-12-13
ES2716138T3 (es) 2019-06-10
ME03362B (me) 2019-10-20
IN2014MN02598A (sr) 2015-07-24
BR112014033080A2 (pt) 2017-06-27
US20170290827A1 (en) 2017-10-12
US20190008858A1 (en) 2019-01-10
AU2021204238A1 (en) 2021-07-22
AU2013286729A1 (en) 2015-01-22
AU2019222909A1 (en) 2019-09-19
CO7160104A2 (es) 2015-01-15
EA201492214A1 (ru) 2015-10-30
EA027390B1 (ru) 2017-07-31
WO2014008285A1 (en) 2014-01-09
MX2018013668A (es) 2019-01-28
KR102040023B1 (ko) 2019-11-05
BR122021012378B1 (pt) 2022-05-10
IL252446A0 (en) 2017-07-31
ES2827300T3 (es) 2021-05-20
DK2870160T3 (en) 2017-01-23
AP2014008166A0 (en) 2014-12-31
AU2016200670A1 (en) 2016-02-25
AP3903A (en) 2016-11-17
ECSP15002066A (es) 2015-11-30
US20150175655A1 (en) 2015-06-25
KR20160040743A (ko) 2016-04-14
AU2019222909B2 (en) 2021-03-25
CA2877005C (en) 2016-12-13
EP2870160B1 (en) 2016-09-28
US9296782B2 (en) 2016-03-29
DK3159345T3 (en) 2019-03-25
CN104540832B (zh) 2016-08-24
EA201790661A3 (ru) 2017-10-31
US20160130300A1 (en) 2016-05-12
UY34888A (es) 2014-01-31
MD20180040A2 (ro) 2018-11-30
EP3492464A1 (en) 2019-06-05
HRP20161379T1 (hr) 2016-12-02
AR091661A1 (es) 2015-02-18
JP2016041743A (ja) 2016-03-31
IL261581A (en) 2018-10-31
IL269662A (en) 2019-11-28
PH12014502862A1 (en) 2015-02-23
AU2016200201A1 (en) 2016-02-04
KR20150034698A (ko) 2015-04-03
SMT201900167T1 (it) 2019-05-10
US10335409B2 (en) 2019-07-02
MD4602B1 (ro) 2018-11-30
PT2870160T (pt) 2016-12-12
PT3159345T (pt) 2019-04-15
PL2870160T3 (pl) 2017-05-31
EP3825312A1 (en) 2021-05-26
EP3492464B1 (en) 2020-08-19
SI2870160T1 (sl) 2016-11-30
TWI602822B (zh) 2017-10-21
HK1210151A1 (en) 2016-04-15
CY1121418T1 (el) 2020-05-29
PH12020550552A1 (en) 2021-07-26
IL236500B (en) 2018-02-28
US9655944B2 (en) 2017-05-23
MD20140136A2 (ro) 2015-05-31
PL3159345T3 (pl) 2019-09-30
EP2870160A1 (en) 2015-05-13
PH12014502862B1 (en) 2015-02-23
LT2870160T (lt) 2016-12-12
UA119315C2 (uk) 2019-06-10
HRP20190578T1 (hr) 2019-05-17
BR112014033080B1 (pt) 2022-03-29
PH12016502040A1 (en) 2019-02-27
MX360597B (es) 2018-11-09
IL236500A0 (en) 2015-02-26
HUE032404T2 (en) 2017-09-28
KR101610575B1 (ko) 2016-04-07
CN106117309B (zh) 2019-08-30
NZ739248A (en) 2019-05-31
CN106117309A (zh) 2016-11-16
JP6025977B2 (ja) 2016-11-16
MX2014015846A (es) 2015-08-14
ES2605383T3 (es) 2017-03-14
US20160361375A1 (en) 2016-12-15
US20190365748A1 (en) 2019-12-05
US10603318B2 (en) 2020-03-31
TW201414740A (zh) 2014-04-16
MY173342A (en) 2020-01-17
JP2018154651A (ja) 2018-10-04
CN104540832A (zh) 2015-04-22
EP3159345A1 (en) 2017-04-26
HK1209416A1 (en) 2016-04-01
CY1118379T1 (el) 2017-06-28
IL261581B (en) 2019-10-31
CL2014003634A1 (es) 2015-11-06
SG10201912269YA (en) 2020-02-27
RS58409B1 (sr) 2019-04-30
EP3159345B1 (en) 2019-01-09
JP2020143107A (ja) 2020-09-10
SMT201600470T1 (it) 2017-03-08
PE20150204A1 (es) 2015-02-12
LT3159345T (lt) 2019-03-12
SMT201600470B (it) 2017-03-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2870160B1 (en) Inhibitors of hepatitis c virus
EP2970335B1 (en) Macrocyclic and bicyclic inhibitors of hepatitis c virus
HK1210151B (en) Inhibitors of hepatitis c virus
HK1236517B (en) Inhibitors of hepatitis c virus
HK1236517A (en) Inhibitors of hepatitis c virus
HK1236517A1 (en) Inhibitors of hepatitis c virus
HK1231100B (zh) 丙型肝炎病毒的抑制剂