RS55511B1 - Sulfatne soli n-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1h-benzo[d]imidazol-2-amina, njihova priprema i upotreba - Google Patents

Description

[0001]Ovaj pronalazak odnosi se na nove sulfatne soli A/-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina i njihove farmaceutski prihvatljive solvate, njihovu pripremu, farmaceutske kompozicije koje ih sadrže i upotreba istih u tretiranju i/ili prevenciji neurodegenerativnih bolesti.

POZADINA PRONALASKA

/V-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[c/]imidazol-2-amin koji ima

strukturu Formule I

[0002]

pripada familiji derivata l,4-bis(3-aminopropil)piperazina prethodno opisani u VVO2006/051489 i koji su korisni za tretiranje i/ili prevenciju neurodegenerativnih bolesti.

[0003]Oblik slobodne baze ovog jedi nje nja predstavlja dugoročne probleme stabilnosti verovatno usled oksidacija koje se dešavaju u piperazinskom prstenu. Pored toga, oblik solobodne baze ne kristališe. U smislu farmaceutskog razvoja, kristalni oblici aktivnih sastojaka zaista su poželjni. Oni uopšteno prevazilaze probleme stabilnosti i otvaraju se postupcima kristalizacije i/ili rekristalizacije koji su pogodni za prečišćavanje na industrijskoj skali, visoka reproducibilnost od šarže do šarže, naročito u pogledu kristaliničnosti.

[0004]lako je poznato da salifikacija farmaceutski aktivnog molekula (PAM) može poboljšati njegove fizičko-hemijska svojstva, odabir odgovarajuće soli ostaje kompleksan postupak. Zaista, poboljšavanje fizičko-hemijskih svojstava ide znatno dalje od dobijanja stabilnih vrstih materijala. Ove čvrste materije moraju da obuhvataju kristalisanu fazu koja koja ima dobar kristalinitet i definisanu morfologiju. U ostalim aspektima. Oblici soli mogu da obezbede ostale benefite kao što su pobošlavanje rastvorljivosti u vodi, ali isto tako mogu biti jednako štetni zbog hidroskopičnosti, problema stabilnosti ili unutrašnje toksičnosti. Prema tome, odabir soli ne može se izvesti proizvoljno i zahteva detaljna ispitivanja na prvom mestu.

[0005]Oksalatna so N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, koja je inače prijavljena u VVO2006/051489, delimično prevazilazi prethodno navedene nedostatke koji se pojavljuju sa slobodnom bazom. Međutim, potrebno je 4 ekvivalenta oksalne kiseline kako bi se dobila oksalatna so kao stabilan prah. Shodno tome, maseni procenat farmaceutski aktivnog molekula sa oksalatnim solima snižava se čak do 54%. Shodno tome, količina leka koji se daje za za datu dozu PAM-a, značajno se povećava.

[0006]Dalje, oksalati se više ne smatraju za farmaceutski najprihvatljivije soli. Oksalatne soli su u određenim slučajevima nefrotoksične, na primer, poznato je da naftidofuril oksalat izaziva kalcijum oksalatnu kristaluriju i shodno tome i kamenje u bubregu kod starijih pacijenata. Dodatno, zbog niske rastvorljivosti kalcijum oksalata, povišena koncentracija kalcijum oksalata u telesnim tečnostima, uključujući urin (hiperoksalurija), može dovesti do taloženja kalcijum oksalata (oksaloza) u tkivu bubrega (nefrokalcinoza) ili urinarnom traktu (urolitiaza). Oksaloza može da uključi mnoge različite organe kada bubrezi ne uspeju da očiste kalcijum oksalat. Taloženja u krvnim sudovima mogu izazvati bolne kožne čireve koji se ne leče, taloženja u koštanoj srži mogu izazvati anemiju, a taloženja u srcu mogu izazvati nepravilnsoti srčanom ritma ili oslabljenu srčanu funkciju. Pacijenti koji boluju od neurodegenerativnih bolesti generalno su stari i boluju od drugih patologija za koje primaju druge lekove. Prema tome, njihovi bubrezi su već preopterećeni za izbacivanje lekova koje ovi pacijenti uzimaju, a koji su već slabije imaju osećaj žeđi te su prema tome skloni dehidrataciji. Višak kalcijum oksalata vremenom se izlučuje kod pacijenata koji imaju zdrave bubrege i koji piju dovoljno vode. Išak kalcijum oksalata je zaista pravi problem u terapiji, pogotovo kod starih. Pored toga, tretmani neurodegenerativnih bolesti često su hronični, tokom veoma dugog vremenskog perioda, ako ne i doživotni. Prijavilac je uzeo u pzir da zbog svoje potencijalne toksičnosti na bubreg i urinarni trakt, oksalatne soli bi mogle da dodaju neprikladan teret pacijentima koji su već oslabljeni svojim stanjem. Prijavilac je prema tome razmotrio oksalatne soli kao farmaceutski neprihvatljive, pogotovo kako /V-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amin zahteva 4 ekvivalenta soli kontra jona kako bi ostao stabilan. Prema tome, čak iako oksalatne soli omoguće dobijanje stabilnih čvrstih materijala, one impliciraju rizične toksične sporedne efekte.

[0007]Prema tome, još uvek postoji potreba u ovoj oblasti za stabilnim, kristalnim i nehigroskopnim solima N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina koje ne predstavljaju prethodno navedene nedostatke u smislu formniranja sili i toksičnosti.

KRATAK OPIS OVOG PRONALASKA

[0008]Ovaj pronalazak baziran je na neočekivanim otkrićima da sulfatne soli N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina obezbeđuju stabilne slobodno tečuće kristalne prahove koji nisu higroskopni i zadovoljavaju prethodno navedene zahtevane kriterijume.

[0009]Prema tome, ovaj pronalazak odnosi se na sulfatnu so N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina i njene farmaceutski prihvatljive solvate.

[0010]Sulfatne soli N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina i njihovi solvati dobijaju se kao prahovi koji imaju kristalnu fazu sa dobrim kristalinitetom i definisanom morfologijom. Štaviše, sulfatne soli ovog pronalaska posebno su pogodne za pripremanje farmaceutskih kompozicija koje ih sadrže. One su farmaceutski prihvatljive i po saznanju prijavioca, nisu povezane sa bilo kakvom unutrašnjom toksičnosti bilo koje vrste. U tom aspektu, prijavilac je sproveo nekolikoin vivohroničnih ispitivanja sa sulfatnim solima N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina gde nisu primećeni nikakve pojave neočekivane toksičnosti do danas.

[0011]Štaviše, kada se uporede sa ostalim solima, kao što su oksalatne soli, manja molekularna masa sulfatnih jona omogućava povišeni maseni odnos N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina u odnosu na ukupnu masu njegove soli. Na primer, maseni procenat PAM-a sa disulfatnim solima je 69%. Prema tome, kada se uporedi sa oksalatnom soli, količina sulfatne soli potrebne za datu dozu N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina je smanjena. Ovo za uzvrat smanjuje količinu proizvoda koji se daje pacijentu i shodno tome smanjuje proizvodne troškove farmaceutskih kompozicija koje sadrže A/-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[đ]imidazol-2-amin.

DETALJAN OPIS OVOG PRONALASKA

[0012]Jedinjenja ovog pronalaska su sulfatne soli N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina i njihovi farmaceutski prihvatljivi solvati. Određenije, sulfatne soli ovog pronalaska i njihovi solvati su oni Formule II

u kojoj x je 0.5 do 4, poželjno x je 0.5 do 3.5, poželjnije x je 0.9 do 3.

Drugim rečima, sulfatna so N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina sadrži 0.5 do 4 ekvivalenta, poželjno 0.5 do 3.5 ekvivalenta, poželjnije 0.9 do 3 ekvivalenta sulfata za jedan molekul N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina.

[0013]U jednom ostvarenju, x je 2.5 do 3.5, poželjno 2.6 do 3.2, poželjnije x je 2.8 do 3, još poželjnije x je oko 2.9 ili x predstavlja 2.9.

[0014]U sledećem ostvarenju, x je 1.5 do 2.5, poželjno x je 1.5 do 2.1, poželjnije x je 1.7 do 1.9, još poželjnije x je oko 1.8 ili x predstavlja 1.8.

[0015]U još jednom ostvarenju, x je 0.5 do 1.5, poželjno x je 0.7 do 1.3, poželjnije x je 0.9 do 1.1, još poželjnije x je oko 1 ili x predstavlja 1.

[0016]U sledećem ostvarenju, x je 1.7 do 2.3, poželjno x je 1.9 do 2.1, poželjnije x je oko 2 ili x predstavlja 2.

[0017]U određenom ostvarenju, sulfatna so Formule II je u obliku farmaceutski prihvatljivog sulfata, poželjno neki hidrat. Stoihometrija solvata je između 0.5 do 5, poželjno između 1 do 4, poželjnije između 1.5 do 2.5, još poželjnije y je 1.8 do 2.2, još poželjnije 2 ili oko 2 molekula solvata za 1 molekul sulfatne soli Formule II.

[0018]Poželjni farmaceutski prihvatljivi solvati sulfatnih soli Formule II su oni Formule III

u kojoj

x je kako je definisano gore u Formuli II, a

y je 0.5 do 5, poželjno y je 1 do 4, poželjnije y je 1.5 do 2.5, još poželjnije y je 1.8 do 2.2, još poželjnije y je oko 2 ili y je 2.

[0019]Poželjna jedinjenja Formule III su ona u kojima, x je 0.5 do 1.5, poželjno 0.8 do 1.2, poželjnije x je 0. 9 do 1.1, još poželjnije x je oko 1 ili x predstavlja 1.

[0020]Naročito poželjna poželjna jedinjenja ovog pronalaska su jedinjenja Formule III u kojima x je oko 1, a y je oko 2, ili x predstavlja 1, a y je 2.

[0021]Prijavilac je pokazao da su sulfatna so N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina i njeni farmaceutski prihvatljivi solvati prihvatljivi za prečišćavanje metabolizma amiloidnog prekursorskog proteina (APP) u četiri ključne tačke: 1) povećavanju karboksi-terminalnih fragmenata APP (APP-CTF) koji svi zajednički poseduju poslednjih 50 amino-kiselina APP, a naročito one koje imaju potencijalne fiziološke aktivnosti, kao što su a-stubovi (APP-CTF alpha) i y-stubovi (APP-CTF gama ili AICD za APP intra celularni domen), 2) povećavanju lučenja sAPP a koji predstavlja neuroprotektivne/neurotropične karakteristike,

3) smanjivanju proizvodnje neurotoksičnih nus-proizvoda APP,tj.3-amiloidnih (Ap) peptida, naročito

u njihovom x-42 obliku,

4) nemodifikovanju APP ekspresije i bez neurotoksičnosti.

[0022]Sulfatne soli ovog pronalaska i njihovi solvati zaista su korisni u usmeravanju APP metabolizma ka ne-amiloidnim putanjama u frontalnom korteksu i hipokampusu.

[0023]Prijavilac je takođe pokazao da su sulfatna so N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina i njeni farmaceutski prihvatljivi solvati korisni u preinačavanju patološke Tau proteinske fosforilacije ublažavajući oksidativne stresne procese. Tau proteini interaktuju sa tubulinom radi stabilizovanja mikrotubula i promovisanja tubulinskog sklopa u mikrotubulama, pri čemu se stabilnost mikrotubula kontroliše izoformama i fosforilacijom. Tau patologije obuhvataju mehanizme koji vode do nepravilnih modifikacija Tau proteina povezanih sa mikrotubulama, progresivne agregacije i akumulacije u fibrilarnom materijalu unutar degenerišućih neurona koji formiraju takozvane neurofibrilarne naslage (NFT).

[0024]Dodatno, i nasuprot drugim solima, njihove fizičko-hemijske karakteristike posebno su korisne u pogledu formulsanja leka ili u pogledu bezbednosti, rastvorljivosti, stabilnosti, kristalnosti, morfologijom i toksičnosti.

[0025]Prema tome, sulfatne soli ovog pronalaska su korisne kao lek, naročito za tretiranje ili preveniranje neurodegenerativnih bolesti i svih bolesti u kojima je primećena disfunkcija APP metabolizma, uključujući, ali neograničavajući se na Alchajmerovu bolest, amiloidne angiopatije, demencije sa Levi telima (DLB) i Daunov sindrom.

[0026]Prema tome, sulfatne soli ovog pronalaska korisne su kao lek, naročito za tretiranje ili preveniranje neurodegenerativnih bolesti i svih bolesti u kojima je primećena disfunkcija fosforilacije Tau proteina, uključujući, ali neograničavajući se na tautopatije kao što su frontotemporalna demencija sa Parkinsonizmom povezanim sa hromozomom 17.

[0027]Dakle, ovaj pronalazak takođe se odnosi na sulfatnu so N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina ili njen farmaceutski prihvatljiv solvat kako je ovde definisan za upotrebu u tretiranju i/ili preveniranju bolesti odabrane od neurodegenerativnih bolesti koje uključuju Alchajmerovu bolest, demenciju sa Levi telima (DLB), amiotrofičnu lateralnu sklerozu (ALS) sa frontotemporalnom demencijom, inkluzionu miopatiju tela sa Padžetovom bolesti kostiju i/ili frontotemporalnom demencijom (IBMPFD), frontotemporalnu lobarnu degeneraciju, sinukleinopatije, Hantingtonovu bolest i Parkinsonovu bolest, amiloidopatije koje uključuju amiloidne angiopatije, tautopatije koje uključuju frontotemporalnu demenciju sa Parkinsonizmom povezanim sa hromozomom 17, neuromuskularne bolesti sa proteinskim inkluzijama, kao i razvojne bolesti koje uključuju Daunov sindrom. Poželjno, bolest je izabrana od Alchajmerove bolesti, amiotrofične lateralne skleroze (ALS) sa frontotemporalnom demencijom, inkluzione miopatije tela sa Padžetovom bolesti kostiju i/ili frontotemporalnom demencijom (IBMPFD), frontotemporalne lobarne degeneracije, sinukleinopatija, Hantingtonove bolesti, amiloidopatija uključujući amiloidne angiopatije, tautopatije uključujući frontotemporalnu demenciju sa Parkinsonizmom povezanim sa hromozomom 17. Poželjnije, bolest je izabrana od Alchajmerove bolesti, sinukleinopatija, amiloidopatija uključujući amiloidne angiopatije, i tautopatije uključujući frontotemporalnu demenciju sa Parkinsonizmom povezanim sa hromozomom 17. Još poželjnije, bolest je izabrana od Alchajmerove bolesti i tautopatije uključujući frontotemporalnu demenciju sa Parkinsonizmom povezanim sa hromozomom 17.

[0028]Drugim rečima, ovaj opis takođe obezbeđuje postupak za tretiranje i/ili preveniranje bolesti odabrane od neurodegenerativnih bolesti, amiloidopatija, tautopatija i razvojnih bolesti, određenije one navedene iznad kao i njihova ostvarenja, koji obuhvata davanje pacijentu kome je to potrebno, farmaceutski efikasne količine sulfatne soli N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina ili njenog farmaceutski prihvatljivog solvata kako su prethodno opisani. U određenom ostvarenju, bolest je izabrana od Alchajmerove bolesti i tautopatija.

[0029]U jednom posebnom ostvarenju, pronalazak se takođe odnosi na sulfatnu so N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina ili njen farmaceutski prihvatljiv solvat kako su prethodno definisani za upotrebu u odlaganju kod pacijenta početka bolesti odabrane od neurodegenerativnih bolesti koje uključuju Alchajmerovu bolest, demenciju sa Levi telima (DLB), amiotrofičnu lateralnu sklerozu (ALS) sa frontotemporalnom demencijom, inkluzionu miopatiju tela sa Padžetovom bolesti kostiju i/ili frontotemporalnom demencijom (IBMPFD), frontotemporalnu lobarnu degeneraciju, sinukleinopatiju, Hantingtonovu bolest i Parkinsonovu bolest, amiloidopatije koje uključuju amiloidne angiopatije, tautopatije koje uključuju frontotemporalnu demenciju sa Parkinsonizmom povezanim sa hromozomom 17, neuromuskularnu bolest sa proteinskim inkluzijama, kao i razvojne bolesti koje uključuju Daunov sindrom. Poželjno, bolest je izabrana od Alchajmerove bolesti, amiotrofične lateralne skleroze (ALS) sa frontotemporalnom demencijom, inkluzionu miopatiju tela sa Padžetovom bolesti kostiju i/ili frontotemporalnom demencijom (IBMPFD), frontotemporalnu lobarnu degeneraciju, sinukleinopatije, Hantingtonovu bolest, amiloidopatije koje uključuju amiloidne angiopatije, tautopatije koje uključuju frontotemporalnu demenciju sa Parkinsonizmom povezanim sa hromozomom 17. Poželjnije, bolest je izabrana od Alchajmerove bolesti, sinukleinopatija, amiloidopatija koje uključuju amiloidne angiopatije, i tautopatija koje uključuju frontotemporalnu demenciju sa Parkinsonizmom povezanim sa hromozomom 17. Još poželjnije, bolesti su odabrane od Alchajmerove bolesti i tautopatija koje uključuju frontotemporalnu demenciju sa Parkinsonizmom povezanim sa hromozomom 17.

[0030]Drugim rečima, opis obezbeđuje postupak za odlaganje kod pacijenta početka bolesti odabrane od neurodegenerativnih bolesti, amiloidopatija, tautopatija i razvojnih bolesti, određenije prethodno navedenih kao i njihovih ostvarenja, koji obuhvata davanje pacijentu kome je to potrebno, farmaceutski efektivne količine sulfatne soli ovog pronalaska ili njenog farmaceutski prihvatljivog solvata. U određenom ostvarenju, bolest je izabrana od Alchajmerove bolesti i tautopatija.

[0031]U skladu sa daljom karakteristikom ovog opisa, obezbeđen je postupak za modulisanje APP metabolizma, kod pacijenta, poželjno toplokrvne životinje, a još poželjnije čoveka, kome potreban takav tretman, koji obuhvata davanje pomenutom pacijentu efektivne količine sulfatne soli N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina ovog pronalaska, ili njenog farmaceutski prihvatljivog solvata.

[0032]U skladu sa još daljom karakteristikom ovog opisa obezbeđen je postupak za preinačavanje patološke fosforilacije Tau proteina ublažavajući oksidativne stresne procese kod pacijenta, poželjno toplokrvne životinje, a još poželjnije čoveka, kome potreban takav tretman, koji obuhvata davanje pomenutom pacijentu efektivne količine sulfatne soli N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina ovog pronalaska ili njenog farmaceutski prihvatljivog solvata.

[0033]Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje obuhvataju sulfatnu so N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina ili njen farmaceutski prihvatljiv solvat kako su ovde opisani i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač, ekscipijens i/ili adjuvans. U jednom ostvarenju, pronalazak takođe pokriva farmaceutske kompozicije koje sadrže, pored sulfatne soli N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina ili njenog farmaceutski prihvatljivog solvata kao aktivnog sastojka, dodatne terapeutske agense i/ili aktivne sastojke.

[0034]U skladu sa jednim ostvarenjem, sulfatne soli N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina ovog pronalaska, kao i njihovi farmaceutski prihvatljivi solvati mogu se davati kao deo kombinovane terapije. Prema tome, unutar obima ovog pronalaska uključena su ostvarenja koja obuhvataju kodavanje kompozicija i lekova koji sadrže, pored sulfatne soli ovog pronalaska ili njenog farmaceutski prihvatljivog solvata kao aktivnog sastojka, dodatne terapeutske agense i/ili aktivne sastojke. Takvi višestruki režimi davanja leka, koji se često nazivaju "kombinovana terapija", mogu se koristiti u tretiranju i/ili prevenciji bilo koje bolesti ili stanja posredovanih ili povezanih sa modulacijom APP metabolizma. Upotreba takvih kombinacija terapeutskih agenasa naročito je značajno u odnosu na tretiranje gore navedenih neurodegenerativnih bolesti within kod pacijenta kome je takav tretman potreban ili kod pojedinca koji je pod rizikom da postane takav pacijent.

[0035]Pored potrebe za terapeutskom efikasnosti, koja može zahtevati upotrebu aktivnoh agenasa pored sulfatnih soli N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina ili njihovih farmaceutski prihvatljivih solvata, mogu postojati dodatni razlozi koji se zalažu ili veoma preporučuju upotrebu kombinacija lekova koji uključuju aktivne sastojke koji predstavljaju dodatnu terapiju,tj.,koji upotpunjavaju i dopunjavaju funkciju koju izvode sulfatne soli N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina ovog pronalaska ili njihovi farmaceutski prihvatljivi solvati. Pogodni dopunski terapeutski agensi koji se koriste u svrhe dopunske terapije uključuju lekove koji, umesto da direktno tretiraju i/ili preveniraju bolest ili stanje posredovano ili povezano sa APP metabolizmom, tretiraju bolesti ili stanja što direktno rezultira iz ili indirektno prati osnovu ili podleže bolesti ili stanju sa modulisanim APP metabolizmom.

[0036]U skladu sa daljom karakteristikom ovog pronalaska, sulfatna so N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, njen farmaceutski prihvatljiv solvat mogu se koristiti u kombinovanoj terapiji sa drugim lekovima koji se koriste za tretiranje Alchajmerove bolesti. Određenije, jedinjenje Formule II, kao i njen farmaceutski prihvatljiv solvat, mogu se koristiti kao pomoćna terapija u kombinaciji sa inhibitorima acetilholinesteraze, uključujući, ali neograničavajući se na donepezil (CAS Br. 120014-06-4) i njegove soli i solvate, galantamin (CAS Br. 357-70-0) i njegove soli i solvate, rivastigmin (CAS Br. 123441-03-2) i njegove soli i solvate, takrin (CAS Br. 321-64-2) i njegove soli i solvate, ili u kombinaciji sa NMDAglutamat receptor antagonistima, uključujući, ali neograničavajući se na memantin (CAS Br. 19982-08-2) i njegove soli i solvate, ili u kombinaciji sa dvostrukim inhibitorom acetilholinesteraze i NMDA glutamat receptor antagonistom, uključujući, ali neograničavajući se na huperzin A (CAS Br.102518-79-6) i njegove soli i solvate, ili u kombinaciji sa glukagon-nalik peptid 1 (GLP-1) agonistima, uključujući, ali neograničavajući se na liraglutid (CAS Br. 204656-20-2) i njegove soli i solvate, eksenatid (CAS Br. 141732-76-5) i njegove soli i solvate, ili u kombinaciji sa retinoidima, uključujući, ali neograničavajući se na acitretin (CAS Br. 55079-83-9) i njegove soli i solvate, ili u kombinaciji sa blokatorima kalcijumskog kanala (CCB), uključujući, ali neograničavajući se na nilvadipin (CAS Br. 75530-68-6) i njegove soli i solvate, nitrendipin (CAS Br. 39562-70-4) i njegove soli i solvate, nimodipin (CAS Br.66085-59-4) i njegove soli i solvate ili u kombinaciji sa blokatorima angiotenzin receptora, uključujući, ali neograničavajući se na valsartan (CAS Br. 137862-53-4) i njegove soli i solvate, ili u kombinaciji sa tetraciklinskim antibioticima, uključujući, ali neograničavajući se na minociklin (CAS Br. 10118-90-8) i njegove soli i solvate.

[0037]Prema tome, postupci tretiranja ovog opisa i farmaceutske kompozicije ovog pronalaska mogu uposliti sulfatnu so N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina ili njen farmaceutski prihvatljiv solvat u monoterapiji. Međutim. Pomenuti postupci i kompozicije takođe se primeniti u višestrukoj terapiji u kojoj se jedna ili više sulfatnih soli N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina ili njihovih farmaceutski prihvatljivih solvata daju zajedno u kombinaciji sa jednim ili više terapeutskih agenasa.

[0038]U prethodno opisanom ostvarenju, kombinacije sulfatnih soli N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina ili njihovih farmaceutski prihvatljivog solvata i drugih teraputski aktivnih agenasa mogu se davati, u pogledu doznig oblika, bilo odvojeno ili u konjukciji jedni sa drugima, i u pogledu vremena njihovog davanja, bilo serijski ili simultano. Na taj način, davanje jednog komponentnog agensa može biti pre, u isto cvreme ili nakon davanja drugog komponentnog agensa(asa).

[0039]Uopšteno, za farmaceutsku primenu, sulfatne soli N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina ili njihovi farmaceutski prihvatljivi solvati mogu se formulisati kao farmaceutska kompozicija koja obuhvata najmanje jednu sulfatnu so ovog pronalaska ili njen farmaceutski prihvatljiv solvat i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač, ekscipijens i/ili adjuvans, i opciono jedan ili više dodatnih terapeutskih agenasa i/ili aktivnih sastojaka.

[0040]Pomoću neograničavajućih primera, farmaceutska kompozicija može biti u doznom obliku prikladan za oralno davanje, za parenteralno davanje (kao što je intravenoznom, intramuskularnom ili subkutanom injekcijom ili intravenskom infuzijom), za topikalno davanje (uključujući očno), za davanje inhalacijom, flasterima, implantima, supozitorijama, itd. Ovakvi pogodni oblici davanja- koji mogu biti čvrsti, polu-čvrsti ili tečni, u zavisnosti od načina davanja- kao i postupci i nosači, razblaživači i ekscipijensi za upotrebu u njihovim pripremama, poznati su stručnjacima; pozvati se na poslednje izdanje Remington's Pharmaceutical Sciences. Farmaceutske kompozicije mogu se formulisati u čvrstom obliku i ponovo rastvoriti ili suspendovati pre upotrebe.

[0041]Neki od poželjnih, ali neograničavajućih primera doznih oblika uključuju tablete, pilule, praškove, lozenge, kesice, vrećice, eliksire, suspenzije, emulzije, rastvore, sirupe, aerosole, masti, kreme, losione, meke i čvrste želatinaste kapsule, supozitorije, kapi, sterilne injektabilne rastvore i sterilne upakovane praškove (koji se obično rekonstruišu pre upotrebe) za davanje kao bolus i/ili za kontinualno davanje, koje se mogu formulisati sa nosačima, ekscipijesima, i razblaživačima pogodnimperseza ovekve formulacije, kao što je laktoza, dekstroza, sukroza, sorbitol, manitol, škrobovi, akacija guma, kalcijum fosfat, alginati, tragakant, želatin, kalcijum silikat, mikrocristalna celuloza, polivinilpirolidon, polietilen glikol, celuloza, (sterilna) voda, metilceluloza, metil-i propilhidroksibenzoati, talk, magnezijum stearat, jestiva ulja, biljna ulja i mineralna ulja ili njihove pogodne mešavine. Farmaceutske kompozicije opciono mogu da sadrže druge supstance koje se uobičajeno koriste u farmaceutskim formulacijama, kao što su agensi za podmazivanje, agensi za vlaženje, agensi za emulzifiranje i suspendovanje, agensi za dispergovanje, agensi za dezintergraciju, agensi za stabilizaciju, izotonični agensi, agensi za punjenje, punioci, prezervativi, zaslađivači, arome, mirisi, boje, antibakterijski agensi i/ili antigljivični agensi kao što su parabeni, hlorobutanol, fenol, sorbinska kiselina, agensi za ispuštanje, regulatori protoka, agensi za oslobađanje, itd. Kompozicije se takođe mogu formulisati tako da obezbede brzo, odloženo ili produženo oslobađanje aktivnog jedinjenja(a) koje je u njima sadržano.

[0042]Farmaceutske kompozicije ovog pronalaska poželjno su u jediničnom doznom obliku, i mogu biti prikladno upakovane, na primer u kutiju, blister, fiolu, bočicu, kesicu, ili bilo koje drugo odgovarajuće jedno-dozno ili više-dozno pakovanje ili kontejner (koji može biti odgovarajuće obeležen); opciono sa jednim ili više lifleta koji sadrže informacije o proizvodu i/ili instrukcijama ua upotrebu. Uopšteno, takve jedinične doze sadrže između 0.05 i 1000 mg, a obično između 1 i 500 mg, najmanje jednog jedinjenja ovog pronalaska, npr. oko 10, 25, 50,100, 200, 300 ili 400 mg po jediničnoj dozi.

[0043]Obično, u zavisnosti od stanja koje se sprečava ili tretira i načina davanja, aktivno jedinjenje ovog pronalaska obično se daje između 0.01 do 100 mg po kilogramu, češće između 0.1 i 50 mg, kao što je između 1 i 25 mg, na primer oko 0.5,1, 5,10,15, 20 ili 25 mg, po kilogramu telesne težine pacijenta na dan, koje se može dati kao jedna dnevna doza, podeljena na jednu ili više dnevnih doza, ili esencijalno kontinulano, npr. primenom kapajuće infuzije.

[0044]Svo pominjanje na jedinjenja Formule II uključuju pominjanje solvata, određenije jedinjenja Formule III, i njihovih više-komponentnih kompleksa i tečnih kristala.

[0045]Jedinjenja opisana u ovoj prijavi imenovana su primenom ChemDrau/<9>Ultra version 12.0 (CambridgeSoft, Cambridge, MA, USA).

[0046]A/-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-l/-/-benzo[d]imidazol-2-amin može se dobiti kako je opisano u VVO2006/051489. Sulfatne soli i njihovi solvati mogu se pripremiti u skladu sa poznatim tehnikama u ovoj oblasti kao što su one koje uključuju taloženje, kristalizaciju, rekristalizaciju, liofilizaciju, fazni transfer ili jono izmenjivačke smole.

DEFINICIJE

[0047]Izraz "solvat" ovde se koristi da opiše jedinjenje u ovom ovom pronalasku koje sadrži stohiometrijske ili pod-stohiometrijske količine jednog ili više molekula farmaceutski prihvatljivog rastvarača kao što je etanol. Izraz "hidrat" odnosi se na to kada je pomenuti rastvarač voda. Molekuli farmaceutski prihvatljivog rastvarača mogu biti kokristalizovani sa jedinjenjem ovog pronalaska, i/ili prisutni u kristalnim i/ili amorfnim fazama njihovih čvrstih oblika, i/ili u njima apsorbovan.

[0048]Izraz "Alchajmerova bolest" kako se ovde koristi, označava sve vrste Alchajmerove bolesti, uključujući, ali neograničavajući se na sporadične i familijarne vrste.

[0049]Izraz "inkluziona miopatija tela sa Padžetovom bolesti kostiju i/ili frontotemporalnom demencijom (IBMPFD)" kako se ovde koristi, je vrsta miopatije, određenije nasleđenog odraslog početka multisistemske bolesti koja pogađa mišiće, kosti i centralni nervni sistem. Pacijenti sa ovim stanjem mogu pokazivati razne manifestacije, uključujući inkluzionu telesnu miopatiju, Padžetovu bolest kostiju, frontotemporalnu demenciju i/ili amiotrofičnu lateralnu sklerozu (Lou Gehrig-ova bolest).

[0050]Izraz "demencija sa Levi telima (DLB)" kako se ovde koristi, takođe je poznata kao demecija Levi tela, koja razlikuje bolest Levi tela, kortikalnu bolest Levi tela i senilnu demenciju Levi tipa, je vrsta demencije blisko povezana sa Alchajmerovom i Parkinsonovom boliesti. Okarakterisana je prisustvom Levi tela, ugrušcima alfa-sinukleinskog i ubikvuitinskog proteina u neuronima, koji se mogu detektovati upost mortemmoždanoj histologiji.

[0051]Izraz "sinukleinopatije" kako se ovde koristi označava bolest centralnog nervnog sistema okarakterisana alfa sinuklein-pozitivnim taloženjem u neuronima.

[0052]Izraz "amiloidne angiopatije" kako se ovde koristi označava bolesti povezane sa amiloidnim taloženjima koja se formiraju na zidovima krvnih sudova centralnog nervnog sistema.

[0053]Izraz "tautopatije" kako se ovde koristi označava neurodegenerativne bolesti povezane sa patološkom agregacijom tau proteina u ljudskom mozgu.

[0054]Izraz "razvojne bolesti" kako se ovde koristi označava bilo koje stanje koje se javlja u nekom stadijumu dečijeg razvoja i odlaže ili sprečava razvoj jedne ili više fizioloških funkcija kao što su veštine govora. Razvojne bolesti uključuju fiziološke i psihičke bolesti. Neograničavajući primeri razvojnih bolesti su poremećaj autizam spektrum (ASD), Daunov sindrom, poremećaj nedostatka pažnje (ADD) i hiperaktivni poremećaj nedostatka pažnje (ADHD).

[0055]Izraz "pacijent" odnosi se na toplokrvnu životinju, poželjnije čoveka, koji/koja treba da primi, ili prima medicinsku negu ili je/će biti predmet medicinske procedure.

[0056]Izraz "čovek" odnosi se na subjekta oba pola i bilo kod stadijuma razvoja( i. e.novorođenče, odojče, maloletnik, adolescent, odrasla osoba).

[0057]Izrazi "tretirati", "tretiranje" i "tretman, kako se ovde koriste, namenjeni su da uključe ublažavanje, oslabljivanje ili poništavanje stanja ili bolesti i/ili njenih pratećih simptoma.

[0058]Izrazi "prevenirati", "preveniranje" i "prevencija", kako se ovde koriste, odnose se na postupak odlaganja ili sprečavanja početka stanja ili bolesti i/ili njenih pratećih simptoma, sprečavajući da pacijent stekne stanje ili bolest, ili snižavajući rizik pacijenta od sticanja stanja ili bolesti.

[0059]Izraz "terapeutski efektivna količina" (ili jednostavnije "efektivna količina") kako se ovde koristi označava količinu aktivnog agensa ili aktivnog sastojka (npr. N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amin) koji je dovoljan da postigne željeni terapeutski ili profilaktički efekat kod pacijenta kojem/kojoj se daje.

[0060]Izraz "davanje", ili njena varijanta ("primenjivanje"), označava obezbeđivanje aktivnog agensa ili aktivnog sastojka (npr. A/-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amin), samog ili kao deo farmaceutski prihvatljive kompozicije, pacijentu kod kojeg/koje stanje, simptomi, ili bolest treba da se tretira ili prevenira.

[0061]Pod "farmaceutski prihvatljivi" podrazumeva se da su sastojci farmaceutske kompozicije međusobno kompatibilni a ne štetni za pacijenta koji ih prima.

[0062]Izraz "farmaceutsko vozilo" kako se ovde koristi označava nosač, ili inertnu podlogu koja se koristi kao rastvarač ili razblaživač u kojoj se farmaceutski aktivni agens formuliše i/ili daje. Neograničavajući primeri farmaceutskih vozila uključuju kreme, gelove, losione, rastvore, i lipozome.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0063] FIG.1 prikazuje DSC spektar tartaratne soli (1 ekv.)N-( 3-( 4-( 3-( diizobutilamino) propil) piperazin- l-il) propil)- lH- benzo[ d] imidazol- 2- amina.FIG.2 prikazuje DSC spektar fumaratne soli (1 ekv.)N-( 3-( 4-( 3-( diizobutilamino) propil) piperazin- l-il) propil)- lH- benzo[ d] imidazol- 2- amina.FIG.3 prikazuje DSC spektar oksalatne soli (2 ekv.)N-( 3-( 4-( 3-( diizobutilamino) propil) piperazin- l-il) propil)- lH- benzo[ d] imidazol- 2- amina.FIG.4 prikazuje DSC spektar oksalatne soli (3 ekv.) N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina.FIG.5 prikazuje DSC spektar oksalatne soli (4 ekv.) N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina.FIG.6 prikazuje DSC spektar sulfatne soli (1 ekv.) N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina.FIG. 7prikazuje DSC spektar sulfatne soli (2 ekv.) N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina.FIG.8 prikazuje XRPD difraktogram N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, 4ekv. oksalatne soli.FIG. 9prikazuje XRPD difraktogram N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, 2.9 ekv. sulfatne soli primera 1.FIG. 10prikazuje XRPD difraktogram N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, 1.8ekv. sulfatne soli primera 2 (grafikon višeg intenziteta) koji se preklapa sa onim od N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, 2.9 ekv. sulfatne soli primera 1 (grafikon nižeg inteziteta).FIG. 11prikazuje XRPD difraktogram N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, lekv. sulfatne soli primera 3.FIG. 12prikazuje XRPD difraktogram N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, lekv. sulfatne soli primera 3 (donji grafikon) koji se preklapa sa onim od N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina (slobodna baza)

(gornji grafikon).

FIG. 13-aprikazuje fotografije kristala N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina 4 ekv. oksalatne soli, kako se može uočiti optičkim mikroskopom, sa uvećanjem od x325, pod emitovanim svetlom.FIG. 13-bprikazuje fotografije kristala N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina 4 ekv. oksalatne soli, kako se može uočiti optičkim mikroskopom, sa uvećanjem od x325, pod unakrsnom polarizovanim svetlom.FIG. 14prikazuje XRPD difraktogram N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, 2ekv. sulfatne soli primera 4.FIG. 15prikazuje XRPD difraktogram N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, 2ekv. sulfatne soli primera 4 (donji grafikon) koji se preklapa sa onim od N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina (slobodna baza)

(gornji grafikon).

FIG. 16prikazuje DVS krivu sušenja na 25°C N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, 1 ekv. sulfatne soli primera 3.FIG. 17prikazuje dijagrame DVS izotermne sorpcije/desorpcije na 25°C N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina,lekv. sulfatne soli primera 3.FIG.18prikazuje dijagrame DVS izotermne sorpcije/desorpcije na 25°C dehidrisanog oblika N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina,lekv. sulfatne soli primera 3.FIG. 19-a do 19-dprikazuju rezultate dobijene za N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[đ]imidazol-2-amin, 1.8 ekv. sulfatne soli uinMitroispitivanju APP metabolizma. U svim crtežima, rezultati su obezbeđeni za kontrolku (beli stub) i sulfatnu so ovog pronalaska pri četiri koncetracije (crni stubovi). FIG. 19-a prikazuje AICD nivoe, FIG. 19-b CTFa nivoe, FIG. 19-c ABi.42nivoe i

FIG. 19-d sAPPa nivoe.

FIG. 20prikazuje CTFa nivoe izmerene u frontalnom korteksu miševa tretiranih različitim dozama N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, 1.8 ekv. sulfatne soli( in vivoispitivanje APP metabolizma; 24 h akutno tretiranje). Rezultati su obezbeđeni za vozilo (beli stub) i sulfatnu so ovog pronalaska u pet doza (tamno sivi stubovi).FIG. 21prikazuje CTFa nivoe izmerene u frontalnom korteksu miševa tretiranih različitim dozama N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, 2 ekv. sulfatne soli ili oksalatne soli iz VVO2006/051489( in vivoIspitivanje APP metabolizma; mišje 24 h akutno tretiranje). Rezultati su obezbeđeni za vozilo (beli stub), oksalatnu so (svetio sivi stubovi) i sulfatnu so ovog pronalaska (tamno sivi stubovi) pri 6 mg/kg.FIG. 22-ai22-bprikazuju rezultate dobijene za N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amin, 1.8 ekv. sulfatne soli uin vivoIspitivanju APP metabolizma (1-mesečno hronično ispitivanje pacova). U svim crtežima, rezultati su obezbeđeni za vozilo (beli stub) i sulfatnu so ovog pronalaska pri dve koncentracije (tamno sivi stubovi). FIG. 22-a prikazuje CTF nivoe u frontalnom korteksu, a FIG. 22-b CTFB nivoe u hipokampusu.FIG. 23-a, 23-bi23-cprikazuju rezultate dobijene za N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amin, 1.8 ekv. sulfatne soli uin vivoIspitivanju APP metabolizma (3-mesečno hronično ispitivanje miševa). U svim crtežima, rezultati su obezbeđeni za vozilo (beli stub) i sulfatnu so ovog pronalaska pri tri koncentracije (tamno sivi stubovi). FIG. 23-a prikazuje AT100 nivoe,

FIG. 23-b AT8 nivoe, a FIG. 23-c LPO nivoe.

HEMIJSKI PRIMERI

[0064]Sledeće skraćenice upotrebljene su kroz ovu prijavu: °C: stepeni Celzijusa, DIPE: di-/zo-propil etar, DSC: diferencijalna skenirajuća kalorimetrija, DVS: dinamična sorpcija/desorpcija vodenom parom, 6: NMR hemijska pomeranja expressed in ppm, eq: ekvivalent(i), Et: etil, g: gram(i), h: sat(i), HPLC: tečna hromatografija visokih performansi, IPA: izopropanol, IR: infracrveno, L: litar(i), LCMS: HPLC kuplovana sa masenim spektrometrom, M: mol/L, mM: mmol/L, u.M: u.mol/L, Me: metil, mg: milligram(i), min: minut(i), mL: millilitar(i), mol: mol(i), mmol: millimol(i), u.mol : mikromol(i), MS: Masena Spektrometrija, NMR: nuklearna magnetna rezonanca, ppm: deo na milion, RH: relativna vlažnost vazduha, rm: reakciona mešavina, rpm: obrtaj(i) po minutu, rt: vreme zadržavanja, RT: sobna temperatura( oko15-25 °C), RV: reakcioni sud, THF: tetrahidrofuran, XRPD: X-zračna difrakcija praha, W: Vat(i).

[0065]Sve prijavljene temperature izražene su u stepenima Celzijusa (°C); sve reakcije izvedene su na sobnoj temperaturi (RT) ukoliko nije drugačije naznačeno.

[0066]Eksperimentalna postavka ili procedure prečišćavanja koje su korišćene u ovom pronalasku, a kada nisu detaljno opisane, podrazumeva se da su poznate onima koji su upućeni u ovu oblast i opisane su u takvim standradnim referentnim uputsvima za upotrebu kao što su : i) Gordon, A. J.; Ford, R. A. "The Chemist's Companion - A Handbook of Practical Data, Techniques, and References", Wiley: New York, 1972; ii) Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistrv, Pearson Prentice Hali: London, 1989.

HPLC analiza.

Postupak A:

[0067]HPLC spektri obično su obezbeđeni na Waters Alliance 2695 sistemu HPLC. Ovaj instrument uključuje neki uređaj za automatsko uzorkovanje, neku kvaternarnu pumpu, i neki detektor ultraljubičastih višetalasnih dužina. Upotrebljene hromatografske kolone bile su Waters X-Terra RP18 5u.m, 4,6x250 mm.

[0068]Eluent koji se uobičajeno korišćen je mešavina rastvora A (0.1% TFA u H2O) i rastvora B (0.1 % TFA u MeOH).

[0069]Gradijent pri brzini protoka od 1 mL po minutu primenjen je kako sledi: gradijent je održavan u početnim uslovima 5 % rastvora B tokom 0 min, linerano je povećavan do 40 % rastvora B u 50 min, održavan na 40 % tokom 5 min, vraćen u početne uslove u 1 min i održavan tokom 5 min.

Postupak B:

[0070]U jednoj varijanti, HPLC analize izvedene su u skladu sa parametrima opisanim u Tabeli 1 ispod.

NMR analiza

[0071]<*>H (300 MHz) spektri zabeleženi su na Bruker Advance DRX 300 MHz instrumentu. Hemijska pomeranja izražena su u delovima po milionu, (ppm, 6 jedinice). Konstante kuplovanja izražene su u Hercima (Hz). Skraćenice za primećena umnožavanja u NMR spektrima su kako slede: s (singlet), d (dublet), t (triplet), q (kvadruplet), m (multiplet), br (širok).

DSC spektri. TA Instrument, DSC Q10.

[0072]DSC spektri zabeleženi su na TA DSC Q10 instrumentu unutar temperaturnog opsega od -10°C do 300°C ili 400°C i sa 10°C povećanja.

Optička mikroskopija.

[0073]Opservacija optičkom mikroskopijom izvedena je na LEICA DMIRB mikroskopu opremljenim sa digitalnom kamerom i motorizovanom postoljem. Nekoliko granula praha dispergovano je na staklenu pločicu sa mineralnim uljem. Fotografije su zabeležene primenom platforme za analizu slika od Microvision Instruments, i pod emitovanim svetlom i polarizovanim svetlom.

X-zračna difrakcija praha

[0074]Analiza X-zračne difrakcije praha (XRPD) izvedena je na Bruker - AXS D8 Advance difraktometru, primenom bakarne anti-katjode, mono-kristalnog silikonskog držača uzoraka i detektora osetljivog na pozicioniranje. Uslovi rada instrumenta za X-zračnu akviziciju obrasca opisani su u Tabeli 2.

[0075]Uzorak praha dispergovan je na silikonski držač uzoraka na način da se zaobiđe poželjno postavljanje (nanasumično postavljeni kristali) i da se osigura planarnost površine uzorka.

Dinamička sorpcija parom

[0076]Analiza dinamičke sorpcije parom (DVS) sa vodom izvedena je u DVS-Intrinzičkom inkubatoru od SMS Ltd, opremljen DVS-Intrinzičkim kontrolnim softverom 1.0.

[0077]Uzorak od oko 5 do 10 mg, smešten na aluminijumski pločasti držač, podvrgnut je analizi punog ciklusa (sorpcija praćena desorpcijom) pod uslovima opisanim u Tabeli 3.

[0078]Uzorci su prethodnosušeni pod strujom suvog filtriranog vazduha dok nije dobijena stabilna masa. Relativna vlažnost je zatim povećana 5% uvećanjima. U svakom fazi, uzorku je dopušteno da se uveća dok nije dostignut ekvilibrijum (dm/dt kriterijum), a zatim je relativna vlažnost dalje povećavana. Relativna vlažnost pojačavana je do 95%. Nakon ekvilibrijumizacije u ovog fazi, započeta je desorpcija na isti postepen način, pri čemu je masa uzorka ostavljena da se stabilizuje nakon svake faze postepenog snižavanja vlažnosti.

[0079]Rastvarači i reagensi su kupljeni i korišćeni kako je naznačeno od komercijalnih dobavljača ukoliko nije drugačije naznačeno.

Primer 1:sinteza N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-

amina, 2.9 ekv. sulfatne soli

[0080]Razblaženi rastvor sumporne kiseline u DIPE prepremljen je dodavanjem 4 mL (0,0751mol) koncentrovane sumporne kiseline u 28 mL (0,197mol) DIPE.

[0081]U suspenziju N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina (16,1 g, 0,03756 mol) u DIPE(280 mL), ukapavanjem je dodato 32 mL prethodno opisanog razblaženog rastvora sumporne kiseline. Primećeno je blago snižavanje temperature od oko 10°C. Reakciona mešavina umešavana je na RT, i postaje bistra posle jednog sata. Dobijeni beli rastvor je filtriran i suspendovan. Dobijeni beli prah je zatim osušen pod vakuumom na 50°C tokom 48 sati.

Analitički podaci

HPLC (postupak A): rt: 20,24 min;

[0082]Elementarna analiza: izračunata: %C=48.06; %H=7.74; N=13.45; %S=10.26; %0=20.48

eksperimentalna: %C=41.43; %H=6.95; %N=11.60%; %S=12.34; %0=26.53.

Primer 2:sinteza N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-

amina, 1.8 ekv. sulfatne soli

[0083]Nazivno jedinjenje prepremljeno je u skladu sa sličnim postupkom kao onaj opisan u primeru 1.

Analitički podaci

HPLC (postupak A): rt: 29,207 min;

[0084]NMR (D20): 6 (ppm): 7,2 (m, 4H, 2CH); 3,7 (b, 8H, 4CH2); 3,4-3,1 (m, 8H, 4CH2); 2,9 (m 4H, 2CH2); 2,3-1,9 (m, 6H, 2CjH+2CjH2); 0,85(d, 12H, 4CH3).

[0085]Elementarna analiza: izračunata: %C=48.06; %H=7.74; N=13.45; %S=10.26; %0=20.48

eksperimentalna: %C=49.55; %H=7.89; N=13.87; %S=8.95; %0=19.29.

Primer 3:sinteza N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-

amina, 1 ekv. sulfatne soli

[0086]3 mL etanola dodato je u 99.6 mg sinteze N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, a gotovo kompletno rastvaranje postignuto je nakon zagrevanja na 70°C. Ekvimolarna količina 0.5 M vodenog rastvora sumporne kiseline je dodata (465 ul) i zabeleženo je potpuno rastvaranje. Rastvor je osušen u vakuumu na 70°C kako bi se dobio čvrst ostatak. Čvrsta materija resuspendovana je u IPA/EtOH na 70°C kako bi se dobila suspenzija finih čestica; zapremina rastvarača je zatim delimično smanjena pod vakuumom. Suspenzija je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Supernatant je uklonjen, a prah je osušen pod vakuumom tokom 2 h na 70°C, kako bi se dobilo naslovno jedinjenje u prinosu od 89%.

[0087]HPLC analize (postupak B): procenat N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina (slobodna baza) u nazivnom jedinjenju, određen spoljnom standardizacijom, ponađeno je da iznosi 83.4%. Ovaj rezultat konzistentan je sa teorijski izračunatim procentom: 81.4%.

Primer 4:sinteza N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-

amina, 2 ekv. sulfatne soli

[0088]3 mL etanola dodato je u 101.7 mg sinteze N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, a gotovo kompletno rastvaranje postignuto je nakon zagrevanja na 70°C. Dvo-molarna količina 0.5 M vodenog rastvora sumporne kiseline je dodata (950 u±) i zabeleženo je potpuno rastvaranje. Rastvor je osušen u vakuumu na 70°C kako bi se dobio prozračan film u kojem je progresivno došlo od kristalizacije očekivane soli. Čvrsta materija je zatim resuspendovana u 3 mL metanola kako bi dala bistru suspenziju koja umešavana na 60°C tokom 15 minuta. 10 mL IPA dodato je kako bi se završila kristalizacija soli, a dobijena suspenzija umešavana je na 80°C tokom 30 minuta. Suspenzija je ostavljena da se ohladi na sobnoj temperaturi i ostavljena preko noći na pod-ambijentalnoj temperaturi. Supernatant je uklonjen iz bočice, a prah je sušen pod vakuumom tokom 2.5 sata na 70°C kako bi se dobilo naslovno jedinjenje u prinosu od 71%.

[0089]HPLC analize (postupak B): procenat N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina (slobodna baza) u nazivnom jedinjenju, određen spoljnom standardizacijom, ponađeno je da iznosi 65.8%. Ovaj rezultat konzistentan je sa teorijski izračunatim procentom: 68.6%.

[0090]je preimećena bilo kakva dugoročna nestabilnost usled oksidacije, određenije oksidacije na piperazinskom prstenu, kod sulfatnih soli u čvrstom stanju.

Primer 5:Fizičko-hemijska analiza različitih soli

[0091]Hlorovodonične, bromovodonične, acetatne, tartaratne, fumaratne, malatne, oksalatne i sulfatne soli N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina pripremljene su u skladu sa postupcima sličnim onim opisanim u prethodnim primerima ili standardnim postupcima za dobijanje soli dobro poznatim u ovoj oblasti. Rezultati dobijanja ovih solui prijavljene su u Tabeli 4.

[0092]Direktno je pronađeno da je hloridna so veoma higroskopna, dok acetatne soli nisu dobijene u čvrstom obliku, lako su tartaratne i fumaratne soli dobijene kao čvrste materije, DSC analiza je pokazala da nisu kristalizovane (videti FIG. 1 i 2). Takav nedostatak može da rezultira u varijacijama od šarže do šarže u smislu čvrstih oblika. Šarža do šarže reproducibilnost predstavlja važan kriterijum u sintezi jedinjenja lekova, naročito kada različiti čvrsti oblici mogu da imaju različita farnakokinetička i farmakodinamička svojstva. Prema tome, tartaratne i fumaratne soli nisu zadovoljavajuće.

[0093]Malatna so je dobijena u obliku praha; međutim, ona nosi asimetričan ugljenik. Hiralni centri znatno komplikuju klinički razvoj, budući da svaki stereoizomer treba da bude jednako okarakterisan kao i aktivan stereoizomer.

[0094]Što se tiče oksalatnih soli, 4 ekv. Oksalatnih kontra-jona potrebno je da bi se dobili odgovarajući kristalni prahovi. DSC grafikoni oksalatnih soli (2 ekv., 3 ekv. i 4 ekv.) prikazani su respektivno na FIG. 3, 4 i 5. Kako je pokazano DSC spektrima, tetraoksalatna so nosi najbolje oblikovan i definisan endoterm. Potreba za imanjem 4 ekvivalenta oksalatne soli predstavlja upozorenje, nudući da se maseni procenat aktivnog molekula snižava čak i do 54%. Prema tome, količina leka koji treba da se daje za datu dozu PAM značajno je povećana kao i rizik od nefrotoksičnosti povezane sa oksalatima.

[0095]Obe sulfatne soli talože se kao čvrste materije. Pronađeno je da su stabilne nakon što su ostavljene na otvorenom vazduhu. Nasuprot hloridnoj soli, nije primećen bilo kakav higroskopični problem. DSC analiza (videti FIG. 6 i 7) otkrila je dobro definisane endoterme koji su konzinstentni sa čvrstim materijama koje obuhvataju kristalnu fazu.

Primer 6:XRPD analiza oksalatne i sulfatne soli

[0096]XRPD difraktogram N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, 4 ekv. oksalatne soli prikazan je na FIG. 8. U analiziranom ugaonom prozoru, primećeno je nekoliko difrakcionih zraka niskog inteziteta. XPRD profil otkriva prisustvo visoko difuzione pozadine. Takav XPRD profil okarakterisan je prahom koji ima kristalnu fazu sa malo ili slabo kristaliniteta (veliki zraci) sa prisustvom amorfne faze (veoma difuziona pozadina).

[0097]X-zračni difrakcioni profil za sulfatnu so primera 1 (videti FIG. 9) pokazuje nekoliko dobro definisanih i oštrih difrakcionih pikova između 5 i 25° u 2-teta skali, što ukazuje da čvrst oblik pomenute sulfatne soli obuhvata veoma dobru kristalnu fazu. Difraktogram takođe prikazuje pozadinski halo (između 10 i 30°) koji se interpretira kao da dolazi iz amorfne materije prisutne u čvrstoj materiji. Upoređivanje profila sa sulfatnom soli primera 2 otkriva dosta preklapanja između nekoliko detektovanih difrakcionih pikova (videti FIG. 10).

[0098]XPRD difraktogram sulfatne soli primera 3 (videti FIG. 11) potvrđuje dobar kristalinitet ove soli sa brojim, dobro i odlično definisanim difrakcionim pikovima između 4 i 30° 29, prijavljuje različiti difrakcioni profil od sinteze N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina (slobodne baze). XPRD profile ove soli upoređen je sa jednom od slobodnih baza, pri čemu su oba profila koja se preklapaju u istom hromatografu (FIG. 12) konzistentna sa različitim kristalnim oblicima između sulfatne soli i slobodne baze. Ovi rezukltati su konzistentni sa zapažanjima optičkom mikroskopijom. Zaista, visoko dvostruko prelamanje i dobro definisana štapna morfologija čestica kada su zapaženi pod emitovanim svetlom (FIG. 13a) i unakrsno polarizovanim svetlom (FIG. 13b) ukazuju na sulfatnu so dobrog kristaliniteta.

[0099]XPRD difraktogram sulfatne soli primera 4 (videti FIG. 14) potvrđuje dobar kristalinitet ove soli sa brojnim difrakcionim pikovima između 4 i 30° 29, a prijavljuje različit difrakcione profil od sinteze N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina (slobodne baze). XPRD profil ove soli upoređen je sa onim od slobodne baze. Pri čemu su oba profila koja se preklapaju u istom hromatografu (FIG. 15) konzistentna sa različitim kristalnim oblicima između sulfatne soli i slobodne baze.

[0100]Kao rezultat, Primeri 5 i 6 jasno pokazuju da su sulfatne soli superiornije u odnosu na bilo koju drugu kiselu so i u odnosu na oksalatne soli naročito. Sulfatne soli ne nose tešku higroskopičnost kao hloridne soli. Za razliku od bromidnih soli, one kristalizuju kako bi se dobili praškasti materijali. Njihov kristalinitet je zaista znatno superiorniji od tartaratnih i fumaratnih soli. Kao i sulfatne soli, oksalatna so sa specifičnom 4 ekv. Stohiometrijom obezbeđuje čvrste materije koje obuhvataju kristalnu i amorfnu fazu. Međutim, XRPD profili i optička mikroskopija pod emitovanim i polarizovanim svetima otkriva da je kristalna baza sulfatnih soli bolje definisana u smislu morfologije i kristaliniteta u odnosu na one kod oksalatnih soli. Štaviše, sulfatne soli popravljaju nedostatke N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina (slobodne baze),tj.mogu se izolovati u čvrstom obliku koji imaju kristalizovanu fazu sa dobrim kristalinitetom i koji nemaju očigledne stabilizacione nedostatke. Dalje, one proširuju mogućnosti formiranja ovog PAM zahvaljujući veoma velikoj rastvorljivosti u vodi. 4 ekv. oksalatne soli ne popravljaju u potpunosti nedostatke slobodne baze u smislu kristaliniteta i morfologije i u svakom slučaju su inferiornije u odnosu na sulfatne soli u ovim aspektima. Stručnjak će čak smatrati da 4 ekv. oksalatne soli pogoršavaju ukupna svojstva slobodne baze PAM budući da ona sadrži velike količine oksalatnih kontra-jona koji mogu da indukuju tešku nefrotoksičnost.

Primer 7:DVS profil N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-

amina, 1 ekv. sulfatne soli

[0101]DVS analiza izvedena je u skladu sa prethodno opisanim postupkom.

[0102]Rezultati su prikazani u FIG. 16 i 17 koji prikazuju DVS krivu sušenja kao i DVS izotermne dijagrame (tragovi sropcije/desorpcije vodenom parom) nakon preliminarnog sušenja sulfatne soli primera 3. U FIG. 17, gornja kriva odgovara desorpcionoj fazi, a donja kriva sorpcionoj fazi.

[0103]Nakon sušenja na 25°C/0% RH, uzorak je izgubio 0.18% svoje mase.

[0104]Nakon sorpcije, tri intervala relativne vlažnosti koji odgovaraju različitim brzinama sorpcije vode i ponašanjima primećeni su u masenoj varijaciji uzorka: • od 0 do 80% RH: kontinualna i spora brzina sorpcije vode; preuzimanje vode na 25°C/60% RH i 25°C/80% RH iznosilo je respektivno 0.7% i 1.5% u odnosu na masu uzorka koja je dobijena nakon inicijalnog sušenja na 0% RH; • od 80 do 90% RH: brza i skora konstantna brzina sorpcije vode; preuzimanje vode na 25°C/90% RH iznosilo je 9.7% u odnosu na masu uzorka koja je dobijena nakon inicijalnog sušenja na 0% RH; • sorpcija vode je zatim povećana, a preuzimanje vodene pare na 25°C/95% RH bilo je 19.4% u odnosu na masu uzorka koja je dobijena nakon inicijalnog sušenja na 0% RH.

[0105]Nakon desorpcije, primećena su tri intervala relativne vlažnosti koji odgovaraju različitim brzinama sorpcije vode i ponašanjima: • od 95 do 90% RH: rapidno smanjenje bzune preostale vode sa 10% preostalog na 25°C/75% RH u odnosu na masu uzorka koja je dobijena nakon inicijalnog sušenja na 0% RH; • od 75 do 10% RH: uzorak je zadržao "adsorbovanu" vodu sa jakom i skoro konstantnom histerezom (čak do 6.7% na 25°C/75% RH); • od 10 do 0% RH: uzorak je izgubio deo svoje vode; preostala količina vode iznosila je 4.6% na 25°C/0% RH, u odnosu na masu uzorka koja je dobijena nakon inicijalnog sušenja na 0% RH; u ovoj fazi masa uzorka je stabilizovana i prema tome u ekvilibrijumu sa okrženjem oko nje.

[0106]Na osnovu uobičajeno upotrebljenih kriterijuma( tj.jedinjenje se naziva higroskopnim ukoliko je prisutno više od 2mas.% preuzimanja vode na 25°C/60% RH), sulfatna so primera 3 nije higroskopna na 25°C/60% RH, samo sa ukupnim masenim preuzimanjem u ovoj fazi.

[0107]Uzomajući u obzir rapidno preuzimanje vode na 80% RH, kao i jaku histerezu (6 do 6.7% water koja ostaje od 80 do 10% RH nakon desorpcije), sulfatna so primera 3, originalno dobijena u svom ne-solvatiranom obliku, konvertovana je u di-hidratisani oblik na visokoj RH. Teoretsko preuzimanje vode za di-hidratisani oblik N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, 1 ekv. sulfatne soli primera 3 je 6.8% i u liniji sa eksperimentalno određenih 6.7%.

[0108]Na kraju prethodno opisanog prvog DVS ciklusa, isti uzorak je podvrgnut drugom DVS ciklusu sa drugomsorpcionom fazom i drugom desorpcionom fazom. Rezultati su prikazani u FIG. 18. Obe druge i sorpciona i desorpciona faza bile su identične krivoj prve desorpcione faze dobijena tokom prvog DVS ciklusa. Zaista, kao što se može primetiti na FIG. 18, desorpciona faza i sorpciona faza međusobno se preklapaju. Di-hidratisani oblik N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina, 1 ekv. sulfatne soli primera 3, koji je dobijen iznad 80% RH na 25°C tokom prvog ciklusa, bio je prema tome stabilan i nehigroskopan.

BIOLOŠKI PRIMERI

In vitroispitivanje APP metabolizma

[0109]Ovo ispitivanje izvedeno je primenom SH-5Y5Y ćelija (ćelijska linija ljudskog neuroblastoma koja preterano eksprimira divlji tip ljudskog APP) koje su tretirane tokom 24 h sulfatnom soli primera 2. Ovaj test izveden je na četiri različite koncentracije jedinjenja od 0.3,1, 3 i 10U.M. Kvantifikacija različitih metabolita postignuta je western-blot analizom. CTFa, CTF3 i AICD analizirani su primenom anti-aktina ((1-19) (SC-1616 Santa Cruz Biotechnologv; 1:1000 od 200 u.g/ml zalihe) kao unutrašnje kontrole i anti-C term APP antitelo (1:250000 u puferu za pranje). Koncentracije proteina određene su kompletom BCA za ispitivanje proteina (Thermo Scientific). Uzorci (20 u.g ukupnog proteina) odvojeni su primenom 16% SDS-PAGE u skladu sa molekularnom masom svakog proteina, i preneti na nitrocelulozne membrane.

[0110]Rezultati su prikazani na FIG. 19-a, 19-b, 19-c i 19-d. Oni pokazuju dozno zavine povišene nivoe AICD, CTFa i sAPPa i snižen nivo ABi.42.

[0111]Sulfatna so primera 2, prema tome, indukuje značajno povećanje APP metabolizma neamiloidogeničnom putanjom konkominantnoj sa redukcijom u formiranju štetnih metabolita uključenih u formaciju amiloidnih plakova. Ovi rezultati su svi utoliko pre izvanredni budući da je ABi 42 jedan od najštetnijih nusproizvoda APP metabolizma u odnosu na formiranje amiloidnih plakova. Dalje, peptid sAPPa ne indukuje formiranje amiloidnog plaka i pre se smatra da ima dobrobitne neuroprotektivne efekte.

[0112]Dodatno, primećeno je da nije pronađena nikakva citotoksičnost za ovu sulfatnu so, a CC50na SH-5Y5Y ćelijskoj liniji pronađeno je više od 30U.M. CC50 je definisan kao koncentracija na kojoj 50% smeštenih ćelija ostaje živo.

In vivoIspitivanje APP metabolizma

[0113]In vivoexperimenti izvedeni su na 4-meseca starim C57B16 ženkama miševa ili 2-meseca starim Sprague Dawley pacovima.

[0114]Akutno tretiranje: 24 h p. o.

[0115]C57B16 ženke miševa tretirane super os(sondom) nosilom ili jedinjenjem (primer 2) pri 0.25,

0.5,1, 3 i 6 mg/kg mg/kg (n=6 po grupi) tokom 24h. Proizvod je adminsitriran jednokratnom sondom za hranjenje pacova ECIMED Ref# V0104030 (4 mm x 30 mm). Životinje su žrtvovane nakon 24h, a mozak je odmah uklonjen radi diseciranja. Nivoi CTFa u frontalnom korteksu (FC) i/ili hipokampusu (HIP) izmereni su prethodno opisanom western-blot analizom. Ukratko, tkiva su homogenizovana sa 200u± pufera za liziju (10 mL Laemmli pufera za pred-liziju i 1 tableta koktela inhibitora proteaze Complete Mini (Roche)) u posudi. Nakon sonikacije (5 min), homogenati su centrifugirani na 1600 o/min tokom 5 min na 4°C. Supernatanti su alikvotirani i sukladišteni na -80°C pre vvestern blot analize.

[0116]Dozno zavisni rezultati prikazani su na FIG. 20. Jedinjenje primera 2 poboljšava APP metabolizam neamiloidogeničnom putanjom u frontalnom korteksu kako je prikazano povećavajućim koncentracijama CTFa. Frontalni korteks je generalno prvi region mozga koji je pogođen formiranjem amiloidnih plakova kod bolesti povezanih sa nepravilnim APP metabolizmom.

[0117]Jedinjenje primera 2 takođe je upoređeno sa oksalatnom soli iz WO2006/051489 u istom ogledu (6 mg/kg dose). Rezultati prikazani na FIG. 21 ukazuju na superiornu efikasnost sulfatnih soli u poređenju sa oksalatnom soli.

Hronični tretman: 1- mesečni

[0118]Pacovima je administrirano tokom jednog meseca 1 ili 10 mg/kg/dan jedinjenja primera 2 rastvoreno u pijaćoj vodi. Zadivljujuće visoka rastvorljivost ove sulfatne soli omogućila je lako formulisanje i njeno davanje životinjama. Životinje su žrtvovane nakon jednog meseca a nivoiCTFa i CTFB u frontalnom korteksu (FC) i/ili hipokampusu (HIP) izmereni su prethodno opisanom western-blot analizom. Dozno zavisni rezultati prikazani su na FIG. 22-a i 22-b. Sulfatna so primera 2 poboljšava APP metabolizam neamiloidogeničnom putanjom u frontalnom korteksu kako je prikazano povećavajućim koncentracijama CTFa (FIG. 22-a). Sulfatna so primera 2 ublažava APP metabolizam amiloidogeničnom putanjom u hipokampusu kako je prikazano smanjivanjem koncentracija CTFB (FIG. 22-b). Frontalni korteks je generalno prvi region mozga koji je pogođen formiranjem amiloidnih plakova kod bolesti povezanih sa nepravilnim APP metabolizmom dok je hipokampus, koji je znatn više uključen u procesima pamćenja i prepoznavanja, oštećen kasnije ali ozbiljnije. Prema tome, sulfatna so primera 2 ima veoma pozitivan efekat na APP metabolizam i u frontalnom korteksu i u hipokampusu i stoga može biti interesantna u tretiranju neurodegenerativnih bolesti, određenije i za rane i uznapredovale stadijume bolesti povezanih sa nepravilnim APP metabolizmom.

Hronični tretman: 3- mesečni

[0119]Neuropatološki poremećaji takođe su okarakterisani abnormalnom fosforilacijom Tau proteina (AT100). Hiperfosforilacija tau proteina (na specifičnim mestima) može da rezultira kao intraćelijsko nagomilavanje neurofibrilarnih čvorova (NFT), uključenih u patogenezu Alchajmerove bolesti i ostalih tautopatija. Jedna osa ispitivanja prema tome bila je ispitivanje efekta sulfatne soli primera 2 na ovu abnormalnu fosforilacija. Paralelno, takav efekat takođe je praćen u odnosu na nepatološku fosforilaciju Tau proteina (AT8) koji bi trebalo da ostane nepogođen. Još jedna osa ovog ispitivanja prema tome odnosi se na uticaj sulfatne soli primera 2 na oksidativni stres (OS). Prema tome, određivani su nivoi lipidne peroksidacije, dobro poznatog markera za procenu oksidativnog stresa. Zaista, oksidativni stres (OS), generisanjem toksičnih reaktivnih vrsta kiseonika (ROS) i oksidativnim oštećenjem (oksidacija vitalnih ćelijskih komponenti kao što su lipidi, proteini i DNK), smatra se da je uključen u patogenezu neurodegenerativnih poremećaja. Neuronski ćelijski OS odgovor posebno je ispitivan na njegovu učestvovanje u neurodegenerativnim procesima. OS rezultira iz neravnoteže između ROS generisanja i antioksidativnih odbrana, koje vode ka nagomilavanju oksidativnih oštećenja, i konačno do ćelijske smrti. Oksidativno oštećenje takođe je povezano sa patološkim gubitkom neurona kod Parkinsonove bolesti (PD) i Hantingtonove bolesti (HD).

[0120]4-meseca stare C57B16 ženke miševa administirane su sa 0.5,1 ili 3 mg/kg jedinjenja primera 2 rastvoreno u vodi za piće. Pre svega, svi miševi su izmereni i smešteni u pojedinačne kaveze kako bi imali približno iste srednje vrednosti težine ± SD po kavezu. Svaka koncentracija proizvoda prepremljena je u sterilnim bočicama i održavana na RT i zaštićene od svetla. Pijaće boce punjene su svake nedelje i merene. Potražena zapremina izračunata je merenjem svake boce nakon svake nedelje, a preostala zapremina je odbačena.

[0121]Merenja AT100 fosforilacionih nivoa izvedena su na tkivima mozga western blot analizom (prethodno oisana) primenom specifičnog anti AT100 antitela (Anti-humano PHF-Tau monoklonalno antitelo, MN1020, ThermoScientific/Pierce).

[0122]Merenja AT8 fosforilacionih nivoa izvedena su na tkivima mozga western blot analizom (prethodno oisana) primenom specifičnog anti AT8 antitela (nti-humano PHF-Tau monoklonalno antitelo, MN1060, ThermoScientific/Pierce).

[0123]Merenja LPO nivoa: nivo peroksidacije lipida u hipokampusu određen je kao kumen hidroperoksid (CHP) ekvivalenti i izražen je kao CHP ekvivalenti po mokroj masi tkiva i kao procenat podataka kontrolne grupe praćeno modifikovanimFOX ogledom.

[0124]Rezultati su prikazani na FIG. 23-a, 23-b i 23-c. Sulfatna so ovog pronalaska smanjuje patološku fosforilaciju Tau proteina (FIG. 23-a) dok ne utiče na normalnu fosforilaciju Tau proteina (FIG. 23-b). Dodatno, ova sulfatna so indukuje značajno smanjenje LPO nivoa te je prema tome sposobna da delimično ublaži prošeće oksidativnog stresa (FIG. 23-c).

[0125]Imajući u vidu prethodne eksperimentalne rezultate, sulfatne soli ovog pronalaska su korisne u orijentisanju APP metabolizma ka neamiloidogeničnim putanjama u frontalnom korteksu and hipokampusu. One dalje menjaju patološku fosforilaciju Tau proteina ublažavajući procese oksidativnog stresa.

Claims (12)

1. Sulfatna so N-(3-(4-(3-(diizobutilamino)propil)piperazin-l-il)propil)-lH-benzo[d]imidazol-2-amina i njeni farmaceutski prihvatljivi solvati.

2. Sulfatna so prema zahtevu 1, sa formulom II u kojoj je x 0,5 do 4, i njeni farmaceutski prihvatljivi solvati.

3. Sulfatna so prema zahtevu 2 i njeni farmaceutski prihvatljivi solvati, naznačena t im e, štoje x 1,5 do 2,5.

4. Sulfatna so prema zahtevu 2 i njeni farmaceutski prihvatljivi solvati, naznačena t im e, štoje x 0,5 do 1,5.

5. Sulfatna so prema zahtevu 2 i njeni farmaceutski prihvatljivi solvati,naznačena time, štoje x 2,5 do 3,5.

6. Sulfatna so prema zahtevu 2, sa formulom III u kojoj x je kako je definisano u zahtevu 2, a y je 0,5 do 5.

7. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata sulfatnu so prema bilo kom od zahteva 1 do 6, ili njen farmaceutski prihvatljiv solvat, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač, ekscipijens i/ili adjuvans.

8. Sulfatna so prema bilo kom od zahteva 1 do 6, ili njen farmaceutski prihvatljiv solvat, za upotrebu kao lek.

9. Sulfatna so prema bilo kom od zahteva 1 do 6, ili njen farmaceutski prihvatljiv solvat, za upotrebu u tretiranju i/ili preveniranju bolesti odabrane od neurodegenerativnih bolesti, amiloidopatija, tautopatija i razvojnih bolesti.

10. Sulfatna so za upotrebu prema zahtevu 9, gde je bolest izabrana od Alchajmerove bolesti, demencije sa Levi telima (DLB), amiotrofične lateralne skleroze (ALS) sa frontotemporalnom demencijom, inkluzione miopatije tela sa Padžetovom bolesti kostiju i/ili frontotemporalnom demencijom (IBMPFD), frontotemporalne lobarne degeneracije, sinukleinopatija, Hantingtonove bolesti, Parkinsonove bolesti, amiloidnih angiopatija, frontotemporalne demencije sa Parkinsonizmom povezanim sa hromozomom 17 i Daunovog sindroma.

11. Sulfatna so prema bilo kom od zahteva 1 do 6, ili njen farmaceutski prihvatljiv solvat, za upotrebu u odlaganju kod pacijenta početka bolesti odabrane od neurodegenerativnih bolesti, amiloidopatija, tautopatija i razvojnih bolesti.

12. Sulfatna so za upotrebu prema zahtevu 11, u kojoj je bolest izabrana od Alchajmerove bolesti, demencije sa Levi telima (DLB), amiotrofične lateralne skleroze (ALS) sa frontotemporalnom demencijom, inkluzione miopatije tela sa Padžetovom bolesti kostiju i/ili frontotemporalnom demencijom (IBMPFD), frontotemporalne lobarne degeneracije, sinukleinopatija, Hantingtonove bolesti, Parkinsonove bolesti, amiloidnih angiopatija, frontotemporalne demencije sa Parkinsonizmom povezanim sa hromozomom 17 i Daunovog sindroma.