RS56122B1 - Inhibitori cdc7 - Google Patents

Description

Opis

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja izoindolinona ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, koja inhibiraju CDC7 i mogu biti korisna za lečenje kancera.

[0002] CDC7 je serin/treonin kinaza koja ima ključnu ulogu u započinjanju replikacije DNK i regulaciji kontrolne tačke S faze ćelijskog ciklusa. Ushodna regulacija CDC7 je zabeležena u brojnim tumorskim ćelijskim linijama. Takođe, inhibicija CDC7 u takvim ćelijskim linijama je rezultovala u zaustavljanju ćelijskog ciklusa. Prema tome, inhibicija CDC7 može biti korisna za terapiju kancera.

[0003] Inhibitori CDC7 su poznati u stanju tehnike. Jedinjenja izoindolinona su takođe poznata u stanju tehnike. WO 2005/100351 je otkrio određena jedinjenja izoindolinona kao jedinjenja reaktivna sa nikotinskim acetilholinskim receptorom.

[0004] Ostaje potreba za obezbeđivanjem alternativnih inhibitora CDC7 za lečenje kancera. Prema tome, predmetni pronalazak daje inhibitore CDC7 koji mogu biti korisni za lečenje kancera.

[0005] Predmetni pronalazak daje jedinjenje koje je 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0006] Predmetni pronalazak daje jedinjenje koje je 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 2, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0007] Predmetni pronalazak daje jedinjenje koje je 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0008] Kao naročiti primer izvođenja, predmetni pronalazak daje jedinjenje koje je 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on. Kao drugi naročiti primer izvođenja, predmetni pronalazak daje jedinjenje koje je 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 2. Kao dodatni naročiti primer izvođenja, predmetni pronalazak daje jedinjenje koje je 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 1.

[0009] Predmetni pronalazak daje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens. Predmetni pronalazak daje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens. Predmetni pronalazak takođe daje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 2, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens. Predmetni pronalazak dodatno daje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 2, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens. Predmetni pronalazak takođe daje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 1, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens. Predmetni pronalazak dodatno daje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 1, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.

[0010] Predmetni pronalazak daje postupak za lečenje kancera koji sadrži primenu na pacijenta kod koga postoji potreba za tim efikasne količine 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Predmetni pronalazak daje postupak za lečenje kancera koji sadrži primenu na pacijenta kod koga postoji potreba za tim efikasne količine 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona. Predmetni pronalazak takođe daje postupak za lečenje kancera koji sadrži primenu na pacijenta kod koga postoji potreba za tim efikasne količine 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona, izomera 2, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Predmetni pronalazak dodatno daje postupak za lečenje kancera koji sadrži primenu na pacijenta kod koga postoji potreba za tim efikasne količine 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona, izomera 2. Predmetni pronalazak takođe daje postupak za lečenje kancera koji sadrži primenu na pacijenta kod koga postoji potreba za tim efikasne količine 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona, izomera 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Predmetni pronalazak dodatno daje postupak za lečenje kancera koji sadrži primenu na pacijenta kod koga postoji potreba za tim efikasne količine 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona, izomera 1.

[0011] Predmetni pronalazak daje 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u terapiji. Predmetni pronalazak daje 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju kancera. Predmetni pronalazak daje farmaceutsku kompoziciju za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu farmaceutska kompozicija sadrži 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0012] Predmetni pronalazak daje 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on za upotrebu u terapiji. Predmetni pronalazak daje 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on za upotrebu u lečenju kancera. Predmetni pronalazak daje farmaceutsku kompoziciju za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu farmaceutska kompozicija sadrži 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on.

[0013] Predmetni pronalazak daje 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 2, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u terapiji. Predmetni pronalazak daje 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 2, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju kancera. Predmetni pronalazak daje farmaceutsku kompoziciju za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu farmaceutska kompozicija sadrži 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 2, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0014] Predmetni pronalazak daje 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 2 za upotrebu u terapiji. Predmetni pronalazak daje 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 2 za upotrebu u lečenju kancera. Predmetni pronalazak daje farmaceutsku kompoziciju za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu farmaceutska kompozicija sadrži 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 2.

[0015] Predmetni pronalazak daje 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 1, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u terapiji. Predmetni pronalazak daje 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 1, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju kancera. Predmetni pronalazak daje farmaceutsku kompoziciju za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu farmaceutska kompozicija sadrži 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 1, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0016] Predmetni pronalazak daje 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 1 za upotrebu u terapiji. Predmetni pronalazak daje 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 1 za upotrebu u lečenju kancera. Predmetni pronalazak daje farmaceutsku kompoziciju za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu farmaceutska kompozicija sadrži 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 1.

[0017] Predmetni pronalazak daje upotrebu 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji leka za lečenje kancera. Predmetni pronalazak takođe daje upotrebu 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona u proizvodnji leka za lečenje kancera.

[0018] Predmetni pronalazak daje upotrebu 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona, izomera 2, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji leka za lečenje kancera. Predmetni pronalazak takođe daje upotrebu 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona, izomera 2 u proizvodnji leka za lečenje kancera.

[0019] Predmetni pronalazak daje upotrebu 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona, izomera 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji leka za lečenje kancera. Predmetni pronalazak takođe daje upotrebu 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona, izomera 1 u proizvodnji leka za lečenje kancera.

[0020] Predmetni pronalazak daje 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 2, hidrat u kristalnom obliku. Predmetni pronalazak takođe daje 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 2, hidrat u kristalnom obliku okarakterisan obrascem rentgenske difrakcije praha koji ima karakteristične pikove, u 20 ± 0.2, koji se javlja na 22.27 i jedan ili više od 13.46, 16.54, 16.66, 18.10 i 23.13.

[0021] Predmetni pronalazak daje jedinjenje koje je 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 2, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje je alternativno identifikovano kao (3R)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0022] Predmetni pronalazak daje jedinjenje koje je 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koja je alternativno identifikovana kao (3S)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0023] Kao naročiti primer izvođenja, predmetni pronalazak daje jedinjenje koje je (3R)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on. Kao dodatni naročiti primer izvođenja, predmetni pronalazak daje jedinjenje koje je (3S)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on.

[0024] Predmetni pronalazak takođe daje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži (3R)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens. Predmetni pronalazak dodatno daje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži (3R)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens. Predmetni pronalazak takođe daje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži (3S)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens. Predmetni pronalazak dodatno daje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži (3S)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.

[0025] Predmetni pronalazak daje (3R)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u terapiji. Predmetni pronalazak daje (3R)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju kancera. Predmetni pronalazak daje farmaceutsku kompoziciju za uporebu u lečenju kancera, pri čemu farmaceutska kompozicija sadrži (3R)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0026] Predmetni pronalazak daje (3R)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on za upotrebu u terapiji. Predmetni pronalazak daje (3R)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on za upotrebu u lečenju kancera. Predmetni pronalazak daje farmaceutsku kompoziciju za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu farmaceutska kompozicija sadrži (3R)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on.

[0027] Predmetni pronalazak daje (3S)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u terapiji. Predmetni pronalazak daje (3S)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju kancera. Predmetni pronalazak daje farmaceutsku kompoziciju za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu farmaceutska kompozicija sadrži (3S)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0028] Predmetni pronalazak daje (3S)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on za upotrebu u terapiji. Predmetni pronalazak daje (3S)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on za upotrebu u lečenju kancera. Predmetni pronalazak daje farmaceutsku kompoziciju za upotrebu u lečenju kancera, pri čemu farmaceutska kompozicija sadrži (3S)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on.

[0029] Predmetni pronalazak daje upotrebu (3R)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji leka za lečenje kancera. Predmetni pronalazak takođe daje upotrebu (3R)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona u proizvodnji leka za lečenje kancera.

[0030] Predmetni pronalazak daje upotrebu (3S)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji leka za lečenje kancera. Predmetni pronalazak takođe daje upotrebu (3S)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona u proizvodnji leka za lečenje kancera.

[0031] Predmetni pronalazak daje (3R)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, hidrat u kristalnom obliku. Predmetni pronalazak takođe daje (3R)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, hidrat u kristalnom obliku okarakterisan obrascem rentgenske difrakcije praha koji ima karakteristične pikove, u 2θ ± 0.2, koji se javljaju na 22.27 i jedan ili više od 13.46, 16.54, 16.66, 18.10 i 23.13.

[0032] Pored toga, predmetni pronalazak daje poželjne primere izvođenja postupaka i upotreba kao što su ovde opisani, u kojima je kancer izabran iz grupe koja se sastoji od kancera dojke, trostruko negativnog kancera dojke, kancera jajnika, kancera pluća, kolorektalnog kancera, hematološkog kancera i leukemije.

[0033] Kao što su korišćeni u prethodnom tekstu, i u opisu pronalaska, sledeći termini, osim ukoliko nisu drugačije naznačeni, biće shvaćeni da imaju sledeća značenja:

"Farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens" je medijum generalno prihvaćen u stanju tehnike za primenu biološki aktivnih sredstava na sisare, npr., ljude.

[0034] "Farmaceutski prihvatljive soli" označavaju relativno netoksične, neorganske i organske soli jedinjenja prema predmetnom pronalasku.

[0035] "Efikasna količina" označava količinu jedinjenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, prema predmetnom pronalasku ili farmaceutske kompozicije koja sadrži jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, prema predmetnom pronalasku koje će izazvati biološki ili medicinski odgovor ili željeni terapeutski efekat na tkivu, sistemu, životinji, sisaru ili čoveku koji je tražen od strane istraživača, veterinara, medicinskog lekara ili drugog kliničkog radnika.

[0036] Termini "tretman," "lečenje," "lečiti," i slično, su određeni tako da obuhvataju usporavanje ili reverziju napredovanja poremećaja. Ovi termini takođe obuhvataju olakšavanje, poboljšanje, slabljenje, eliminaciju ili redukciju jednog ili više simptoma poremećaja ili stanja, čak ako poremećaj ili stanje nije stvarno eliminisano i čak ako napredovanje poremećaja ili stanja nije samo po sebi usporeno ili nije izvršena njegova reverzija.

[0037] Jedinjenja prema predmetnom pronalasku su sposobna za reakciju, na primer, sa više neorganskih i organskih kiselina da bi se formirale farmaceutski prihvatljive soli. Takve farmaceutski prihvatljive soli i zajednička metodologija za njihovu pripremu su dobro poznati u stanju tehnike. Videti, npr., P. Stahl, et al., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2002); S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 66, No. 1, January 1977.

[0038] Jedinjenja prema predmetnom pronalasku su poželjno formulisana kao farmaceutske kompozicije upotrebom farmaceutski prihvatljivog nosača, razblaživača ili ekscipijensa i primenom različitim putevima. Poželjno, takve kompozicije su za oralnu primenu. Takve farmaceutske kompozicije i postupci za njihovu pripremu su dobro poznati u stanju tehnike. Videti, npr., Remington: The Science and Practice of Pharmacy (A. Gennaro, et al., eds., 21st ed., Mack Publishing Co., 2005).

[0039] Stvarno primenjena količina jedinjenja prema predmetnom pronalasku biće određena od strane lekara pod relevantnim uslovima, uključujući stanje koje se leči, izabrani put primene, primenjeno stvarno jedinjenje ili jedinjenja prema predmetnom pronalasku, starost, težinu, i odgovor individualnog pacijenta, i težinu simptoma pacijenta. Doze na dan normalno spadaju unutar opsega od oko 1 do oko 1000 mg. U nekim slučajevima, nivoi doze ispod donje granice navedenog opsega mogu biti više nego adekvatni, dok u drugim slučajevima mogu biti korišćene veće doze. Nivoi doze mogu biti određeni od strane stručnjaka iz date oblasti tehnike.

[0040] Jedinjenja prema predmetnom pronalasku, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, mogu biti pripremljeni pomoću različitih postupaka poznatih u stanju tehnike, kao i onih opisanih u Pripremama i Primerima u daljem tekstu. Specifični sintetički koraci za svaki od opisanih puteva mogu biti kombinovani na različite načine za pripremu jedinjenja prema pronalasku ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli.

[0041] Reagensi i početni materijali su generalno lako dostupni stručnjaku iz date oblasti tehnike. Drugi mogu biti pripremljeni pomoću standardnih tehnika organske i heterociklične hemije, tehnika koje su poznate stručnjaku iz date oblasti tehnike, i postupaka opisanih u Primerima koji slede uključujući bilo koje nove postupke. Sledeće Pripreme i Primeri dodatno ilustruju pronalazak. Jedinjenja koja su ovde ilustrovana su označena i numerisana upotrebom Symyx Draw Version 3.2, Symyx Draw Version 4.0, ili IUPACNAME ACDLABS.

[0042] Pojedinačni izomeri, enantiomeri ili dijastereomeri mogu biti razdvojeni ili razloženi od strane stručnjaka iz date oblasti tehnike na bilo kojoj pogodnoj tački u sintezi jedinjenja pomoću postupaka kao što su tehnike selektivne kristalizacije ili hiralna hromatografija (Videti, npr., Enantiomers, Racemates, and Resolutions (J. Jacques, et al., John Wiley and Sons, Inc., 1981)). Oznaka "izomer 1" označava jedinjenje koje se prvo eluira iz hiralne hromatografije. Oznaka "izomer 2" označava jedinjenje koje se drugo eluira iz hiralne hromatografije.

[0043] Kao što su ovde korišćeni, sledeći termini imaju naznačena značenja: "ADP" označava adenozin difosfat; "ATP" označava adenozin trifosfat; "Balb/c’ označava albino; "BCA" označava bicinhoninsku kiselinu; "DMSO" označava dimetil sulfoksid; "DTT" označava ditiotreitol; "EDTA" označava etilendiamintetrasirćetnu kiselinu; "ee" označava enantiomerni višak; "Ex" označava primer; "FBS" označava fetusni teleći serum; "FP" označava fluorescentnu polarizaciju; "GAPDH " označava gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenazu; "HEC" označava hidroksi etil celulozu; "HEPES" označava 4-(2-hidroksietil)-1-piperazinetansulfonsku kiselinu; "hr" označava čas ili časove; "IC50" označava koncentraciju sredstva koja proizvodi 50% maksimalnog inhibitornog odgovora mogućeg za to sredstvo; "IVTI" označava in vivo ciljnu inhibiciju; "MCM2 označava protein održavanja minihromozoma; "min" označava minut ili minute; "PBS" označava fosfatno puferisani fiziološki rastvor; "P.O." označava oralnu primenu; "Prep" označava preparat; "PVDF" označava polividin difluorid; "RPMI" označava Roswell Park Memorial Institute; "RNaza" označava ribonukleazu; "RuPhos" označava 2-dicikloheksilfosfino-2’,6’-diizopropoksibifenil; "Rt" označava vreme zadržavanja; "SDS-Page" označava natrijum dodecil sulfat poliakrilamid gel elektroforezu; "SCX" označava snažnu katjonsku razmenu; "SFC" označava superkritičnu fluidnu hromatografiju; i "THF" označava tetrahidrofuran.

Priprema 1

Metil 5-bromo-2-jodobenzoat

[0044]

[0045] Dodati 5-bromo-2-jodobenzojevu kiselinu (1998 g, 6.11 mol) u delovima u 20°C rastvor sumporne kiseline (100 mL) u metanolu (13 L). Zagrevati suspenziju do refluksa 24 časa, zatim hladiti do 20°C i ukloniti rastvarač pod sniženim pritiskom. Sipati ostatak u 1:1 smešu metil-terc-butil etra i ledenu vodu (20 L) i razdvojiti faze. Ekstrahovati vodenu fazu sa metil-terc-butil etrom (1.5 L), spojiti organske faze i isprati vodenim 0.2M NaOH (5 L), isprati zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i isparavati pod sniženim pritiskom. Rastvoriti sirovi proizvod u 40-45°C petroletru (10 L), filtrirati kroz čep od dijatomejske zemlje i isparavati pod sniženim pritiskom. Rastvoriti ostatak u petrol etru (5 L) i hladiti do -50 °C, filtrirati prvi prinos čvrstih supstanci, isprati čvrstu supstancu ledeno hladnim petroletrom. Isparavati ishodnu tečnost, ponovo rastvoriti čvrstu supstancu u petrol etru (1 L), hladiti do -50°C, i filtrirati drugi prinos. Spojiti prvi i drugi prinos i sušiti na otvorenom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (1880 g, 90%).

Priprema 2

Metil 5-bromo-2-etilbenzoat

[0046]

[0047] Dodavati dietil cink (3050 mL, 3.05 mol, 1 M heksan) tokom 3 časa u 5°C rastvor metil 5-bromo-2-jodobenzoata (1876 g, 5.50 mol) i (1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen)paladijum(II) hlorida (40 g, 0.05 mol). Zagrevati smešu do 60-65°C tokom 2 časa i mešati dodatna 2 časa, zatim hladiti do 10-15°C i sipati u ledeno hladan vodeni rastvor 1 M HCl (10 L). Razdvojiti faze, ekstrahovati vodeni sloj sa metil-terc-butil etrom (2 x 10 L), spojiti organske faze, isprati zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i isparavati pod sniženim pritiskom. Rastvoriti u etil acetatu (400 mL) i dodati petrol etar (8 L), zatim ostaviti da odstoji na 15-20°C u trajanju od 16 časova i filtrirati kroz čep od silika gela, isprati etil acetatom/ petrol etrom (1:20, 8 L) i isparavati filtrat pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao svetlo žuto ulje (1306 g, 96%). ES/MS m/e: (<79>Br/<81>Br) 243/245 (M+H).

Priprema 3

Metil 5-bromo-2-(1-bromoetil)benzoat

[0048]

[0049] Dodati N-bromosukcinimid (1090 g, 6.12 mol) i 2,2’-azo-bis-izobutironitril (11.4 g, 0.069 mol) u 20°C rastvor metil 5-bromo-2-etilbenzoata (1296 g, 5.33 mol) u ugljen tetrahloridu (7 L). Zagrevati do refluksa u trajanju od 4 časa, hladiti do 20-30°C i isprati vodom (10 L), ekstrahovati vodenu fazu sa dihlorometanom (5 L), spojiti organske slojeve i isprati vodom (10 L), Na2SO3 (5 L) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Sušiti natrijum sulfatom, filtrirati i isparavati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao svetlo žuta čvrsta supstanca (1791 g, 104% sirova). ES/MS m/z: 241 (M-HBr).

Priprema 4

6-Bromo-2-[(1R)-1-(4-metoksifenil)etil]-3-metil-izoindolin-1-on

[0050]

[0051] Dodati čvrsti metil 5-bromo-2-(1-bromoetil)benzoat (1724 g, 5.35 mol) u rastvor komercijalno dostupnog (R)-1-(4-metoksifenil)etanamina (BePharm, WZG111219-071; 974 g, 6.44 mol) i trietilamina (1710 mL, 12.26 mol) u metanolu (12 L). Zagrevati smešu u trajanju od 10 časova na 67°C zatim isparavati do sušenja pod sniženim pritiskom. Podeliti ostatak sa etil acetatom (5 L) i vodenim 1 N HCl (10 L), razdvojiti faze, isprati organsku fazu ponovo vodenim 1 N HCl (5 L), zasićenim natrijum bikarbonatom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, zatim sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i isparavati pod sniženim pritiskom. Rastvoriti tamno crveno ulje u metil-terc-butil etru (750 mL) i dodati petrol etar (3 L) uz snažno mešanje. Filtrirati čvrste supstance, isprati metil-terc-butil etrom/petrol etrom (1:8), petrol etrom, sušiti na otvorenom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao prljavo bela čvrsta supstanca (1014 g, 52%). ES/MS m/z: 360 (M+H).

Priprema 5

2-[(1R)-1-(4-Metoksifenil)etil]-3-metil-6-(1-tetrahidropiran-2-ilpirazol-4-il)izoindolin-1-on [0052]

[0053] Spojiti 6-bromo-2-[(1R)-1-(4-metoksifenil)etil]-3-metil-izoindolin-1-on(64 g, 177 mmol), 1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol (67g, 295 mmol), kalijum karbonat (70 g, 506 mmol), (1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen)paladijum(II) hlorid (9 g, 11 mmol), dioksan (800 mL) i vodu (212 mL) pod azotom i zagrevati do 70-75°C u trajanju od 16 časova. Dodati 1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol (15 g, 54 mmol) i zagrevati do 80-85°C u trajanju od 2 časa. Koncentrovati pod sniženim pritiskom do 200 mL, dodati etil acetat (500 mL) i vodu (500 mL), mešati u trajanju od 30 minuta, i filtrirati čvrste supstance. Spojiti čvrste supstance i organski sloj i isparavati pod sniženim pritiskom. Rastvoriti ostatak u dihlorometanu i filtrirati kroz čep od silika gela. Isprati čep od silika gela dihlorometanom/etil acetatom (1:0) i zatim (2:1) i isparavati do sušenja pod sniženim pritiskom. Suspendovati čvrstu supstancu u 2:1 smešu petrol etra/etil acetata (600 mL) u trajanju od 30 minuta na 25-30°C i filtrirati da bi se sakupila čvrsta supstanca da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao prljavo bela čvrsta supstanca (68 g, 89%). ES/MS m/z: 432 (M+H).

Priprema 6

3-(6-hloro-5-fluoro-pirimidin-4-il)-2-[(1R)-1-(4-metoksifenil)etil]-3-metil-6-(1-tetrahidropyran-2-ilpirazol-4-il)izoindolin-1-on

[0054]

[0055] Dodavati natrijum bis(trimetilsilil)amid (210 mL, 210 mmol, 1 M THF) ukapavanjem tokom 60 minuta u ledeno hladnu suspenziju 2-[(1R)-1-(4-metoksifenil)etil]-3-metil-6-(1-tetrahidropiran-2-ilpirazol-4-il)izoindolin-1-ona (62 g, 144 mmol) i 4,6-dihloro-5-fluoropirimidina (31 g, 186 mmol) u tetrahidrofuranu (620 mL). Mešati rastvor 60 minuta na 0°C i zatim razblažiti smešu sa etil acetatom (1 L) i vodom (1 L). Isprati organsku fazu zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i isparavati pod sniženim pritiskom. Rastvoriti ostatak u 1:1 petrol etru/etil acetatu, filtrirati kroz čep od silka gela, i isparavati da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta pena (83 g, 103%). ES/MS m/z: 562 (M+H).

Priprema 7

3-(5-Fluoropirimidin-4-il)-2-[(1R)-1-(4-metoksifenil)etil]-3-metil-6-(1-tetrahidropiran-2-ilpirazol-4-il)izoindolin-1-on

[0056]

[0057] Dodati trietilamin (40 mL, 287 mmol) i 20% paladijum hidroksid na uglju (14 g) u rastvor 3-(6-hloro-5-fluoro-pirimidin-4-il)-2-[(1R)-1-(4-metoksifenil)etil]-3-metil-6-(1-tetrahidropiran-2-ilpirazol-4-il)izoindolin-1-ona (80 g, 142 mmol) u etil acetatu (2.1 L) i hidrogenizovati sa vodoničnim gasom (30 psi) na 20-25°C u trajanju od 16 časova. Ponoviti reakcione uslove sa 5 grama 3-(6-hloro-5-fluoro-pirimidin-4-il)-2-[(1R)-1-(4-metoksifenil)etil]-3-metil-6-(1-tetrahidropiran-2-ilpirazol-4-il)izoindolin-1-ona. Spojiti obe reakcije i filtrirati kroz dijatomejsku zemlju i isparavati da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta pena (77 g, 102%). ES/MS m/z: 528 (M+H).

Priprema 8

6-Bromo-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-2-[(1R)-1-(4-metoksifenil)etil]-3-metil-izoindolin-1-on

[0058]

[0059] Rastvoriti 6-bromo-2-[(1R)-1-(4-metoksifenil)etil]-3-metil-izoindolin-1-on (2.814 mmol, 1.014 g) u tetrahidrofuranu (28 mL). Dodati 4-hloro-5-fluoro-pirimidin (5.628 mmol, 518 µL) i hladiti do 0°C. Dodavati kalijum heksametildisilazid (4.502 mmol, 9 mL, 0.5 M u toluenu) tokom 7 minuta i mešati 1 čas, zatim zagrevati do temperature sredine i mešati 90 minuta. Sipati u metil-terc-butil etar i vodeni 1 M HCl, dodati vodu i razdvojiti slojeve. Isprati vodenim 1 N HCl, filtrirati, isprati zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, sušiti preko magnezijum sulfata, filtrirati kroz čep od 2 cm od silika gela i isparavati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ulje. Prečišćavati na silika gelu sa 20-40% etil acetatom/heksanom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao pena (547 mg, 43%). ES/MS m/z: 456 (M+H).

Primer 1

3-(5-Fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on

[0060]

[0061] Rastvoriti 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-2-[(1R)-1-(4-metoksifenil)etil]-3-metil-6-(1-tetrahidropiran-2-ilpirazol-4-il)izoindolin-1-on (65 g, 123 mmol) u trifluorosirćetnoj kiselini (600 mL) i zagrevati do 75-80°C u trajanju od 16 časova. Isparavati pod sniženim pritiskom i razblažiti etil acetatom (500 mL) i vodom (500 mL). Podesiti pH vodenog sloja do 8-9 sa vodenim 6 N NaOH, ekstrahovati vodeni sloj sa etil acetatom (3 x 500 mL), spojiti organske slojeve, isprati zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, sušiti natrijum sulfatom, filtrirati, i isparavati pod sniženim pritiskom. Izvršiti hromatografiju sirovog proizvoda na silika gelu sa 50-100% etil acetatom/petrol etrom. Spojiti frakcije proizvoda i isparavati pod sniženim pritiskom da bi se dobila žuta pena (33 g, 87% sirov). Ponoviti reakcione uslove sa 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-2-[(1R)-1-(4-metoksifenil)etil]-3-metil-6-(1-tetrahidropiran-2-ilpirazol-4-il)izoindolin-1-onom i spojiti proizvode (10 g, 18.9 mmol). Rastvoriti spojene proizvode u metanolu i mešati sa SiliaBond® Thiol (Silia MetS® Thiol) na 15-20°C u trajanju od 20 časova, filtrirati i isparavati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova sa 77% ee (38 g, 87%).

Primer 2

3-(5-Fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 2

[0062]

[0063] Razdvojiti glavni enantiomer (izomer 2) 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona (38 g, 123 mmol) od manjeg enantiomera (izomer 1) 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-ona pomoću preparativne hiralne HPLC superkritične fluidne hromatografije (SFC) (kolona: Chiralpak OJ-H(5 µ), 30 x 250 cm; eluent: 15% izopropanol u CO2, protok 120 g/min an UV 214 nm). Drugi eluirajući izomer (izomer 2) je jedinjenje iz naslova (17 g, 45%, >98% ee). Hiralna analiza (kolona: Chiralpak OJ-H (5 µm) 4.6 x 250 mm, eluent: 20% izopropanol u CO2, protok: 3 mL.min na UV 214 nm, Rt= 5.78 minuta. ES/MS m/z: 310 (M+H).

Primer 3

3-(5-Fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on

[0064]

[0065] Spojiti RuPhos paladijum(II) fenetilamin hlorid (60 µmol, 43 mg), dioksan (0.5 mL) i kalijum terc-butoksid (1 M tetrahidrofuran, 60 µmol, 60 µL) pod azotom, ultrazvučno obrađivati smešu u trajanju od 0.5 minuta. Dodati Ruphos smešu katalizatora u reakcionu posudu pod azotom koja sadrži 6-bromo-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-2-[(1R)-1-(4metoksifenil)etil]-3-metil-izoindolin-1-on (544 mg, 1.192 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazol-1-karboksilat (1.79 mmol, 526 mg), 1,4-dioksan (6 mL), natrijum karbonat (3.6 mmol, 2.4 mL 1.5 M vodeni) i zagrevati u mikrotalasnoj na 150°C u trajanju od 30 minuta. Razblažiti smešu etil acetatom, isprati vodenim 1.5 M natrijum karbonatom, isprati zasićenim vodenim natrijum hloridom, sušiti preko magnezijum sulfata, filtrirati kroz dijatomejsku zemlju, i isparavati do svetlo žutog ostatka. Rastvoriti ostatak u anizolu (1 mL) i trifluorosirćetnoj kiselini (7 mL) i zagrevati do 80°C u trajanju od 4 časa, zatim zagrevati do 70°C u trajanju od 18 časova. Isparavati smešu pod sniženim pritiskom, rastvoriti u metanolu, sipati na 10 g SCX kolonu, isprati metanolom (100 mL), eluirati sa 2 M amonijakom u metanolu i isparavati. Prečišćavati na 40 g silika gelu sa gradijentom od 1-8% metanola/dihlorometana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela pena (279 mg, 76%). ES/MS m/z: 310 (M+H).

Primer 4

3-(5-Fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 2, hidrat [0066]

[0067] Suspendovati 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, izomer 2 (9.6 g, 0.03 mol) u 2% acetonu u vodi (50 mL) i mešati smešu na 50°C u trajanju od 1.5 časa. Dodati aceton (1 mL) i zagrevati smešu do 65°C u trajanju od 1 časa pre sporog hlađenja do sobne temperature tokom 12 časova. Filtrirati čvrste supstance i isprati sa četiri zapremine vode. Sušiti čvrstu supstancu pod vakuumom na 50°C u trajanju od 6 časova da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (8.6g, 90%).

Rentgenska difrakcija praha

[0068] XRD obrasci kristalnih čvrstih supstanci su dobijeni na Bruker D4 Endeavor rentgenskom difraktometru praha, opremljenom sa CuKa izvorom (λ = 1.54060 A) i Vantec detektorom, koji funkcioniše na 35 kV i 50 mA. Uzorak je skeniran između 4 i 40° u 2θ, sa veličinom koraka od 0.0087° u 2θ i stopom skeniranja od 0.5 sekundi/koraku, i sa 0.6 mm divergencijom, 5.28 mm fiksiranim prorezima protiv rasejanja i 9.5 mm prorezima detektora. Suvi prah je pakovan na kvarcnom držaču uzorka i glatka površina je dobijena upotrebom staklene pločice. U stanju tehnike kristalografije je dobro poznato da za svaki dati kristalni oblik, relativni intenziteti difrakcionih pikova mogu da variraju zahvaljujući poželjnoj orijentaciji koja je rezultat faktora kao što su morfologija kristala i izgled kristala. Tamo gde su prisutni efekti poželjne orijentacije, intenziteti pika su promenjeni, ali karakteristični položaji pika polimorfa su nepromenjeni. Pored toga, takođe je dobro poznato u kristalografskoj tehnici da za svaki dati oblik kristala ugaoni položaji pika mogu neznatno da variraju. Na primer, položaji pika mogu da se pomere zahvaljujući varijaciji u temperaturi i vlažnosti na kojoj je uzorak analiziran, premeštanju uzorka ili prisustvu ili odsustvu internog standarda. U predmetnom slučaju, varijabilnost položaja pika od ± 0.2 u 2θ uzeće u obzir obe potencijalne varijacije bez ometanja nedvosmislene identifikacije naznačenog oblika kristala. Potvrda kristalnog oblika može biti napravljena na bazi bilo koje jedinstvene kombinacije razlikujućih pikova (u jedinicama °2θ), tipično više istaknutih pikova. Obrasci difrakcije kristalnog oblika, sakupljeni na temperaturi sredine i relativnoj vlažnosti, podešeni su na bazi NIST 675 standardnih pikova na 8.85 i 26.77 stepeni 2-teta.

[0069] Pripremljeni uzorak Primera 4 je okarakterisan pomoću XRD obrasca upotrebom CuKa zračenja tako da ima pikove difrakcije (2-teta vrednosti) kao što su opisani u Tabeli 1 u daljem tekstu. Specifično obrazac sadrži pik na 22.27 u kombinaciji sa jednim ili više od pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 13.46, 16.54, 16.66, 18.10 i 23.13 sa tolerancijom za difrakcione uglove od 0.2 stepena.

Tabela 1

Primer 5

(3R)-3-(5-Fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, dihidrohlorid, acetonitril solvat

[0070]

[0071] Dodati 0.25 M HCl (1 mL) u 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on (Primer 3, 0.084 mg, 0.27 mmol) i ultrazvučno obraditi uzrak. Sav matrijal je rastvorljiv. Isparavati smešu do sušenja, rezultujući u uljanom ostatku. Dodati acetonitril (2 mL) i rastvor postaje žut i kristali počinju da se formiraju. Pojedinačni kristali su izolovani za rentgensku difrakciju jednog kristala. Uzorak je određen da je acetonitril solvat dihidrohloridne soli. Atomi hlora obezbeđuju dovoljno anomalno rasejavanje da bi se omogućilo određivanje apsolutne stereohemije molekula pomoću rentgenske difrakcije jednog kristala.

[0072] Providan, bezbojan uzorak sličan prizmi C18H17Cl2FN6O, približnih dimenzija 0.180 mm x 0.200 mm x 0.220 mm, je korišćen za rentgensku kristalografsku analizu. Sakupljeno je ukupno 3318 okvira. Ukupno vreme izlaganja je 1.84 časova. Okviri su integrisani sa Bruker SAINT softverskim paketom upotrebom algoritma sa uskim okvirom. Integracija podataka upotrebom ortorombične jedinične ćelije proizvela ukupno 13411 refleksija maksimalnog θ ugla od 66.30° (0.84 A rezolucija), od kojih su 3304 nezavisne (prosečna redundancija 4.059, punoća = 97.8%, Rint = 7.25%, Rsig = 6.30%) i 2885 (87.32%) bile veće od 2σ(F<2>). Krajnje ćelijske konstante od a = 8.0583(2) A, b = 36.3803(9) A, c = 6.96840(10) A, zapremina = 2042.88(8) A3, su zasnovane na prečišćavanju XYZ-centroida 6295 refleksija iznad 20 σ(I) sa 11.24° < 2θ < 132.0°. Podaci su ispravljeni za efekte apsorpcije upotrebom „multi-scan“ postupka (SADABS). Odnos minimalne prema maksimalnoj vidljivoj transmisiji je 0.761. Izračunati minimalni i maksimalni koeficijenti transmisije (na bazi veličine kristala) su 0.5466 i 0.6033.

[0073] Struktura je rešena i prečišćena upotrebom Bruker SHELXTL™ Software Package, upotrebom prostorne grupe P 2121 2, sa Z = 4 za jedinicu formule, C18H17Cl2FN6O. Krajnja razrada je izvedena pomoću metode najmanjih kvadrata sa anizotropnom punom matricom na F<2>sa 255 promenljivih konvergiranim na R1 = 4.27%, za zabeležene podatke i wR2 = 10.80% za sve podatke. Kriterijumi saglasnosti su 1.066. Najveći pik u finalnoj razlici za sintezu elektronske gustine je 0.295 e-/ Å<3>i najveći otvor je -0.204 e-/ Å<3>sa RMS devijacijom od 0.056 e-/Å<3>. Na osnovu krajnjeg modela, izračunata gustina je 1.376 g/cm<3>i F(000), 872 e-. Apsolutni strukturni parametar je korigovan do 0.0(0), što ukazuje na to da je apsolutna struktura molekula u skladu sa jedinjenjem iz naslova. Molekul rastvarača acetonitrila je donekle poremećen i shodno tome je korigovan izotropno, dok su (3R)-3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on i joni hlorida korigovani anizotropno. Ovaj rezultat za Primer 5 uspostavlja apsolutnu stereohemiju molekula kao R enantiomera, na taj način takođe uspostvljajući stereohemiju Primera 3, iz koga je izveden Primer 5.

[0074] Dodatno, Primeri 2 i 3 su podvrgnuti analizi preko hiralne HPLC superkritične fluidne hromatografije (SFC) upotrebom istih uslova u cilju određivanja enantiomera prisutnog za svaki Primer. (Kolona: Chiralcel OJ-H 4.6 mm X 150 mm, 20% izopropanol u CO2, 5 mL/min, UV 225 nm). Za Primer 2 i Primer 3, izomer 1 se eluira na 1.53’ i izomer 2 se eluira na 1.81-1.84’. U ovoj analizi, Primer 2 ima 100% ee i Primer 3 ima 96.4% ee. Ovi rezultati pokazuju da je enantiomer prisutan za oba Primer 2 i Primer 3 – izomer 2. S obzirom na to da je apsolutna stereohemija za Primer 3 - R enantiomer, kao što je obezbeđen gore, i Primeri 2 i 3 su oba identifikovani kao pomoću hiralne HPLC SFC kao izomer 2, apsolutna stereohemija za Primer 2 je, prema tome, takođe R enantiomer. Pored toga, s obzirom na to da je Primer 2 korišćen za pripremu Primera 4, apsolutna stereohemija za Primer 4 je R enantiomer.

Acumen® Imaging Assay za detekciju fosforilisanog MCM2 u H1299 ćelijama

[0075] Acumen® eX3 je korišćen za određivanje efekta jedinjenja na formiranje endogenog fosoforilisanog MCM2 na Serine53 (pMCM2-S53). Fosforilacija MCM2 pomoću CDC7 je određena upotrebom specifičnog anti-pMCM2-S53 antitela i kvantitativno određena sa fluorescentno obeleženim sekundarnim antitelima pomoću Acumen® eX3 za praćenje aktivnosti CDC7 u ćelijama. Poznato je da je fosforilacija MCM2 na serinu 53 u korelaciji sa inhibicijom CDC7.

[0076] H1299 ćelije (ATCC #CRL-5803) su održavane u RPMI-1640 (Hyclone SH30809.01) medijumu za rast dopunjenom sa 10% FBS. Ćelije su sakupljene upotrebom standardnih postupaka ćelijske kulture i zatim brojane upotrebom Vi-Cell XR Cell Viability Analyzer (Beckman Counter). 3000-6000 H1299 ćelija u 100 µL medijuma za rast je postavljeno u svaku komoricu Biocoat Poly-D-Lysine 96-komorne crne/providne ploče sa ravnim dnom BioCoat™ Multiwell (Becton Dickinson) ploča za ćelijsku kulturu 356640 i inkubirano preko noći na 37°C, 5% CO2.

[0077] Ćelije su tretirane test jedinjenjem (50 µL/komorici) razblaženim u medijumu koji sadrži 0.6% DMSO i inkubirane u trajanju od 4 časa na 37°C. U svaku komoricu je dodat 7.4% formaldehid (150 µL) razblažen sa PBS iz stoka 37% formaldehida i ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi u trajanju od 30 minuta. Formaldehid je uklonjen i dodat je hladni metanol (100 µL). Ploče su inkubirane 20 minuta na 4°C da bi se ćelije permeabilizovale. Ploče su isprane 3 x sa 100 µL/komorici PBS. Ploče su inkubirane sa 50 µL/komorici 1:1000 razblaženog anti pMCM2-S53 antitela (generisano upotrebom NP_004517.2 (videti PubMed Sequence Database), konjugacija za hemocijanin prilepka upotrebom aktivacije maleimida, preko standardnog 90-dnevnog protoka imunizacije zeca za proizvodnju zečjeg poliklonskog antitela (Thermo Scientific Pierce Antibodies, Thermo Fisher Scientific)) u PBS dopunjenom sa 2% BSA preko noći na 4°C. Ploče su isprane sa PBS (4 x 100 µL/komorici) i inkubirane u 100 µL/komorici 1:1000 razblaženog kozjeg anti-zečjeg IgG Alexa Fluor 488 sekundarnog antitela (Invitrogen CA11304s) u PBS u trajanju od 1 časa na sobnoj temperaturi. Ploče su isprane sa PBS (4 x 100 µL/komorici). PBS (50 µL/komorici) koji sadrži RNazu (50 µg/ml) i propidijum jodid (15 µM) su dodati i ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi u trajanju od 30 minuta. Ploče su hermetički zapečaćene sa crnom masom i očitavane na Acumen® eX3 (TTP LABTECH) upotrebom optičkog filtera 500-530 nanometra i 575-640 nanometra za Alexa Fluor 488 i propidijum jodid, respektivno. Broj pMCM2-S53 pozitivnih ćelija je normalizovan do ukupnih ćelija za svaku komoricu i izračunavan kao procenat inhibicije u odnosu na kontrolne ploče. Procenat inhibicije iz podataka o koncentraciji jedinjenja od deset tačaka za četvrotoparametarsku logističku jednačinu je generisan da bi se izvela vrednost IC50.

[0078] Jedinjenja unutar obima pronalaska su testirana u ovoj analizi značajno kao što je opisano u prethodnom tekstu. Jedinjenje iz Primera 2 je određeno tako da ima IC50od 0.261 µM ± 0.004 (n=2). Jedinjenje iz Primera 3 je određeno tako da ima IC50od 0.29 µM. Jedinjenje iz Primera 4 je određeno tako da ima IC50 od 0.29 µM ± 0.0813 (n=2). Ovi rezultati pokazuju da Primeri 2, 3 i 4 inhibiraju pMCM2-S53 u H1299 ćeijskoj analizi i na taj način su inhibitori CDC7.

CDC7/DBF4 in vitro analiza enzima

[0079] Transcreener™ Kinase ADP-FP analiza je korišćena za određivanje vrednosti IC50 jedinjenja protiv CDC7/DBF4 kinaze. Analiza ADP-FP kinaze procenjuje aktivnost CDC7/DBF4 u prisustvu inhibitora jedinjenja merenjem koncetracije ADP formirane u reakciji kinaze. Reakcija kinaze je izvedena upotrebom 25 mikrolitarske reakcione zapremine u 96-komornoj ploči za analizu. Za ADP-FP analizu, reagensi su dodati da bi se dobili krajnji reakcioni uslovi od HEPES (25 mM) pH 7.5, 0.03 % Triton® X-100, magnezijum hlorid (10 mM), DTT (1 mM), MCM2 (400 nM) (aminokiselina 1-209, fiziološki supstrat CDC7/DBF4), spermin (4 mM), CDC7/DBF4 (2,640 ng/mL) (rekombinantni humani CDC7/DBF4 eksprimirani u ćelijama insekata), 4% dimetil sulfoksid i serijska razblaženja jedinjenja (razblažena 1:3 od 20,000 nM do 1 nM). Enzim i supstrat su dodati jedinjenju posle ATP do 5 µM da bi se započela reakcija. Ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi u trajanju od 60 minuta.

[0080] Za ADP-FP format dodati 25 mikrolitara detekcionog reagensa za gašenje koji sadrži HEPES (52 mM) pH 7.5, EDTA (20 mM), natrijum hlorid (0.4 M), polioksietilenglikol dodecil etar (0.02%) (BRIJ-35™), anti-ADP antitelo (10 µg/mL) i ADP (4 nM) Transcreener® ADP Alexa fluor® 633 trejser za gašenje reakcije. Ploče su inkubirane 1 čas, i zatim očitavane u Wallac EnVision™ 2104 Multilabel Reader (PerkinElmer) u Fluorescence Polarization režimu upotrebom polarizacionih filtera od Ex620nm i Em688nm talasne dužine. Sirovi podaci o milipolarizaciji (mP) su prevedeni u mikromolarni ADP upotrebom pripremljene ADP/ATP standardne krive koja počinje na 5 uM ADP 1:1 serijskom razblaženju u reakcionom puferu do 0.0025 µM ADP. IC50vrednost za svako jedinjenje je izvedeno upotrebom podataka o procentu inhibicije izračunatih iz µM ADP podataka reakcije u odnosu na kontrolne ploče (DMSO naspram 100 mM EDTA inhibiranih kontrola enzima). Procenat inhibicije i podaci o koncentraciji jedinjenja u deset tačaka su često aproksimirani na četvoro-parametarsku logističku jednačinu.

[0081] Jedinjenja unutar obima pronalaska su testirana u ovoj analizi značajno kao što je opisano u prethodnom tekstu. Jedinjenje iz Primera 2 je određeno tako da ima IC50od 3.7 nM. Jedinjenje iz Primera 3 je određeno tako da ima IC50od 4.5 nM. Jedinjenje iz Primera 4 je određeno tako da ima IC50 od 3.3 nM ± 0. 634 (n=2). Rezultati pokazuju da Primeri 2, 3 i 4 inhibiraju proizvodnju ADP u in vitro analizi enzima i na taj način su inhibitori CDC7.

In vitro antiproliferativna analiza

[0082] In vitro anti-proliferativna aktivnost Primera 2 je određena pomoću analiza brojanja ćelija naspram panela od 114 ćelijskih linija kancera kolorektalnog porekla, poreklom od dojke, pluća i krvi (leukemija) dobijenih iz ATCC, HSRRB, RIKEN ili ECACC. Ćelije su kultivisane i održavane u medijumu prema uputstvima proizvođača. Vreme udvostručavanja ćelija svake ćelijske linije je određeno i sve ćelijske linije su bez zagađenja mikoplazmom. Ćelije su kultivisane preko noći u 96-komornim pločama pre dodavanja jedinjenja za analize anti-proliferativne aktivnosti. Optimalna gustina zasejavanja ćelija je pažljivo procenjivana za svaku ćelijsku liniju zasejavanjem ćelijske kulture sa 4 različite gustine ćelija u 100 µL medijuma i uzimajući u obzir njihovo vreme udvostručavanja i veličine ćelija. Gustina zasejavanja koja je dala oko 90% konfluencu na kraju dva vremena udvostručavanja je zatim izabrana za testiranje jedinjenja. Staurosporin je korišćen sa 1:3 razblaženjem kao referenca. Primer 2 je pripremljen kao 4 mM DMSO stok i razblažen u medijumu za kulturu u odnosu 1:2 ratio.50 µL medijuma koji sadrži jedinjenje je dodato u svaku komoricu prekonoćne 96-komorne kulture da bi se proizvele željene krajnje koncentracije od 20, 10, 5, 2.5, 1.25, 0.625, 0.312, 0.156, 0.078 µM i DMSO kontrola. Svaka koncentracija tretmana ima dvostruke komorice. Ćelije su dalje kultivisane za dva vremena udvostručenja u prisustvu jedinjenja. Na kraju vremena tretmana, ćelije su prvo ispitivane pod mikroskopom za morfološke promene, kao što su ćelijska smrt ili vidljivo povećanje veličine ćelija. Ćelije u svakoj duploj komorici su posebno sakupljane. Prilepljene ćelije su sakupljene prvo tripsinizacijom. Sakupljene ćelije su resuspendovane u medijumu za rast i brojane su upotrebom ćelijskog brojača.

[0083] Jedinjenje unutar obima pronalaska je testirano u ovoj analizi suštinski kao što je opisano u prethodnom tekstu. Kao što je dato u Tabeli 2 u daljem tekstu, jedinjenje iz Primera 2 pokazuje značajnu anti-proliferativnu aktivnost protiv većine od 114 ćelijskih linija kancera testiranih u farmakološki relevantnim koncentracijama (<8 µM). Pored toga, oko 10% ćelijskih linija kancera pokazuju naročitu osetljivost na jedinjenje, kao što je pokazano preko masivne ćelijske smrti koja se javlja za ove ćelije kancera unutar 2 dvostruka vremenska perioda tretmana. Većina ovih naročito osetljivih ćelijskih linija kancera su poreklom od kolorektalnog kancera i leukemije. Osetljivost je dalje potvrđena in vivo u modelima ksenotransplanta tumora, kao što su Colo-205 i SW620 (videti detalje u daljem tekstu). Ovi podaci pokazuju da Primer 2 ima široku antiproliferativnu aktivnost in vitro u testiranim ćelijskim linijama.

Tabela 2: Široka in vitro antikancerska aktivnost jedinjenja iz Primera 2

CDC7 in vivo ciljna inhibicija (IVTI) na MCM2-S40/41 fosforilaciju (pMCM2-S40/41) sa Colo-205 modelom ksenotransplanta tumora

[0084] Ćelije humanog kolorektalnog kancera colo-205 (ATCC#CCL-222) su održavane u RPMI 1640 medijumu koji sadrži 10% FBS. Ćelije u Log fazi rasta su sakupljene, isprane i resuspendovane u 1:1 smešu medijuma bez seruma i Matrigel™ (Becton Dickinson). One su injektirane subkutano u 5 x 10<6>ćelija/životinji/mestu u bok zadnjeg uda kao modeli subkutanog ksenotransplanta tumora u balb/c (nu/nu) ženkama miševa (6-8 nedelja sa telesnom težinom od 20 do 25 grama/mišu). Životinje su randomizovane na srednjoj zapremini tumora od 150 do 250 mm<3>, (v = 1 x w x 0.536 gde je 1= veće od izmerenog prečnika i w = manje od vertikalnog prečnika). Jedinjenje je primenjeno preko P.O. u standardnoj formulaciji od 1% HEC tež./zapr., P80 0.25% zapr./zapr., sredstva protiv penušanja 1510-US 0.05% zapr./zapr. Tumori su sakupljeni 4 časa posle doziranja i prekinuti homogenizcijom u puferu za lizu (Invitrogen) koji sadrži inhibtor proteaze (Roche) i inhibtor fosfataze (Roche ili Sigma). Koncentracija proteina iz lizata tumora je određena pomoću BCA analize (Thermo Scientific) i 5 do 10 µg proteina je odvojeno pomoću standardne SDS-PAGE (BioRad Criterion™ gel) ili (Invitrogen ePage™ gel). Proteini su zatim prebačeni u PVDF ili nitroceluloznu membranu i ispitivani sa antitelima protiv pMCM2-S40/41 (Betil Laboratories #A300-788A) ili GAPDH (Fitzgerald 10R-G109A ili Abcam ab9485) prema protokolu proizvođača i standardnom protokolu western blot-a. Nivoi pMCM2-S40/41 su određeni i kvantitativno određivani pomoću Licor ili FUJI imidžera i normalizovani do ukupnog nivoa GAPDH. Procenat inhibicije promene intenziteta pMCM2-S40/41 trake je izračunavan upotrebom srednje vrednosti intenziteta nosačem tretiranih kontrolnih tumora normalizovanih prema GAPDH kao maksimalni signal. Sledeća formula je korišćena za izračunavanje procenta inhibicije signala u grupama tretiranog tumora: Procenat inhibicije = (normalizovani podaci – normalizovani maks.) / (nula- normalizovani maks.)* 100. TED70 vrednost se odnosi na tačnu dozu jedinjenja neophodnu za inhibiciju u proseku 70% CDC7/DBF4-posredovane fosforilacije pMCM2 normalizovane prema GAPDH (% ciljne inhibicije) u in vivo ekspermentu ksenotransplanta 4 časa posle oralne doze. TEC70 se odnosi na tačnu koncentraciju u plazmi jedinjenja neophodnu da inhibira u proseku 70% CDC7/DBF4-posredovane fosforilacije pMCM2 normalizovanih prema GAPDH (% ciljne inhibicije) u in vivo eksperimentu ksenotransplanta 4 časa posle oralne doze.

[0085] Jedinjenje unutar obima pronalaska je testirano u ovoj analizi suštinski kao što je opisano u prethodnom tekstu. TED70je generisan iz grafikona doze i % inhibicije pMCM2 i za Primer 3 je 2.6 mg/kg. TEC70 je generisan upotrebom doze, % inhibicije pMCM2 i koncentracije u plazmi na inhibiciji od 70%. TEC70 za Primer 3 je 1.8 µM. Ovi podaci pokazuju da jedinjenje unutar obima predmetnog pronalaska inhibira CDC7/DBF4-posredovanu fosforilaciju pMCM2 u in vivo eksprimentu ksentransplanta miša 4 časa posle oralne doze kod miševa.

Antitumorska efikasnost u modelu ksenotransplanta miša humanog kolorektalnog karcinoma SW620

[0086] In vivo antikancerska aktivnost Primera 4 je studirana u ćelijskoj liniji humanog kolorektalnog adenokarcinoma SW620 u modelu mišjeg ksenotransplanta miša koji je predviđen kao osetljiv na bazi in vitro podataka proliferativne analize brojanja ćelija opisanog u prethodnom tekstu. SW620 ćelijska linija je dobijena iz American Type Culture Collection (ATCC) i kultivisana je u Leibovitz’s L-15 medijumu sa 10 % fetusnim telećim serumom prema ATCC uputstvima. SW620 ćelijska suspenzija (5.0 x 10<6>/0.2 mL) je injektirana subkutano u desni bok svake ženke atimusnih Balb/c golih miševa. Miševi (5∼6 nedelja starosti pri dolasku) su dobijeni iz Shanghai Sippr-bk Laboratory Animals Ltd. Posle prijema i tokom studije, životinje su smeštene po 5 životinja u kavezu u kaveze odgovarajuće veličine sa čvrstim dnom sa prostirkom. Životinje su aklimatizovane 7 dana pre implantacije SW620 ćelija. Životinje su hranjene sa Shanghai Laboratory Animal Center sertifikovanom ishranom za glodare sa 23 % proteina ad libitum i autoklavirana voda sa česme je obezbeđena ad libitum. Soba životinja je održavana na 12-časovnom ciklusu svetlosti/mraka. Kada zapremina tumora dostigne u proseku 154.9 mm<3>(9 dana posle implantacije tumora), životinje koje nose tumor su po slučajnom izboru grupisane u 9 grupa (8 životinja/grupi) sa sličnom srednjom zapreminom tumora i telesnom težinom. Prosečna telesna težina miševa sa tumorom je 17.3 g. Jedinjenje je formulisano u HEC 1% tež./zapr., P800.25% zapr./zapr., i sredstvo za penušanje 1520-US 0.025% zapr./zapr. u dejonizovanoj vodi pomoću ultrazvučnog sondiranja u trajanju od 15 minuta na ledu i formulacija jedinjenja je pripremana jednom dnevno za doziranje životinje. Formulisano jedinjenje je primenjeno u dozama od 10.4, 20.8 i 31.2 mg/kg (koje sadrže 10, 20 i 30 mg/kg aktivnog farmaceutskog sastojka API, respektivno) dva puta na dan (BID) putem oralne gavaže (0.1 mL/20 g) u trajanju od 2 nedelje. Doziranje od dva puta na dan je izvedeno sa razmakom od oko 8 časova (približno 9 časova ujutru i 5 časova popodne svakog dana). Nosač je takoše davan dva puta na dan kao kontrolna grana studije. Zapremina tumora i telesna težina su mereni 3 puta nedeljno na slepi način. Zapremina tumora je određena pomoću merenja nonijusa (mm) i upotrebom formule za elipsoidnu sferu: zapremina tumora (mm<3>) = dužina x širina<2>/ 2, gde se dužina i širina odnose na veću i manju vertikalnu dimenziju sakupljene pri svakom merenju. Ponašanje životinja i zdravlje životinja su praćeni dva puta na dan u toku perioda doziranja. Studija je završena na dan 28 posle početka tretmana.

[0087] Statistička analiza podataka o zapremini tumora počinje sa transformacijom podataka prema log skali da bi se izjednačila varijansa u grupama prema vremenu i tretmanu. Podaci o log zapremini su analizirani sa dvostrukim ponovljenim mernim analizama varijanse prema vremenu u tretmanu upotrebom MIXED postupaka u SAS softveru (verzija 9.3). Model korelacije za ponovljene mere je Spatial Power. Tretirane grupe su upoređivane sa kontrolnom grupom u svakoj vremenskoj tački. MIXED postupak je takođe korišćen posebno za svaku grupu tretmana za izračunavanje podešenih srednjih vrednosti i standardnih grešaka na svakoj vremenskoj tački. Obe analize su odgovorne za autokorelaciju unutar svake životinje i gubitak podataka koji se javlja kada su životinje sa velikim tumorima rano uklonjene iz studije. Podešene srednje vrednosti i standardne greške su prikazane na grafikonu za svaku grupu tretmana naspram vremena. Analiza koja poredi tretirane grupe sa kontrolnim grupama u svakoj vremenskoj tački koristi log 10 zapremine tumora i proizvodi p-vrednosti. Za statističku značajnost prikazanih p-vrednosti, "***" =P<0.001.

[0088] Ako je T > T0, koristi se izračunavanje Delta T/C, %. Ako je T < T0 koristi se regresiono izračunavanje, %:

Jednačine:

[0089]

T = Krajnja zapremina tumora u tretiranoj grupi

T0 = Ishodna zapremina tumora u tretiranoj grupi (pretpostavlja se da je ista kao C0)

C = Krajnja zapremina tumora u kontrolnoj grupi

C0 = Ishodna zapremina tumora u kontrolnoj grupi (pretpostavlja se da je ista kao T0)

Regresija, % = 100 * (T-T0)/T0

Tabela 3: Antitumorska aktivnost zavisna od doze u modelu ksenotransplanta tumora SW620 miša

[0090] Jedinjenje unutar obima pronalaska je testirano u ovoj analizi suštinski kao što je opisano u prethodnom tekstu. Kao što je dato u Tabeli 3 u prethodnom tekstu, jedinjenje Primera 4 pokazuje in vivo aktivnost protiv kancera na SW620 ksenograft tumorima na način zavistan od doze kada je davano dva puta dnevno kontinuirano tokom 2 nedelje. Rezultati za sve testirane doze su značajno manji nego za nosač. Ova aktivnost je u skladu sa in vitro aktivnošću zabeleženom sa ćelijskom linijom kancera SW620. Na maksimalnoj tolerisanoj dozi od 31.2 mg/kg, jedinjenje izaziva značajnu regresiju tumora, kao što je pokazano preko negativne vrednosti. Takođe, nije zabeležen značajan rast tumora 2 nedelje posle prestanka doziranja. Ovi podaci pokazuju da Primer 4 obezbeđuje antitumorsku aktivnost zavisnu od doze u modelu ksenotransplanta tumora SW620 miša.

Claims (13)

Patentni zahtevi

1. Jedinjenje koje je 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat.

2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on.

3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje je 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, enantiomer R, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 3, koje je 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, enantiomer R.

5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje je 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, enantiomer S, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 5, koje je 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on, enantiomer S.

7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je 3-(5-fluoropirimidin-4-il)-3-metil-6-(1H-pirazol-4-il)izoindolin-1-on ili njegov hidrat.

8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 7 koje je hidrat u kristalnom obliku naznačen obrascem rentgenske difrakcije praha koji ima karakteristične pikove, u 2θ ± 0.2, koji se javljaju na 22.27 i jedan ili više od 13.46, 16.54, 16.66, 18.10 i 23.13.

9. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje ili so prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.

10. Jedinjenje ili so prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8 za upotrebu u terapiji.

11. Jedinjenje ili so prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8 za upotrebu u lečenju kancera.

12. Jedinjenje ili so za upotrebu prema patentnom zahtevu 11, naznačeno time što kancer je izabran iz grupe koja se sastoji od kancera dojke, trostrukog negatvnog kancera dojke, kancera jajnika, kancera pluća, kolorektalnog kancera, hematološkog kancera i leukemije.

13. Jedinjenje ili so za upotrebu prema patentnom zahtevu 12, naznačeno time što kancer je kolorektalni kancer.

Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5