RS56238B1 - Stabilna tečna formulacija amg 416 (velkalcetida) - Google Patents

Description

Opis

UNAKRSNA REFERENCA NA SRODNE PRIJAVE

[0001] Ova prijava ima prioritet SAD privremene prijave br. 61/840,618, koja je podneta 28.06.2013., čiji sadržaj je obuhvaćen ovde referencom u njihovoj celini.

OBLAST PRONALASKA

[0002] Predmetni opis se odnosi na tečnu formulaciju koja sadrži peptidni agonist kalcijum senzornog receptora, naročito na takvu formulaciju koja ostaje stabilna posle čuvanja tokom dužeg perioda. Opis je takođe usmeren na postupke za pripremu i upotrebu formulacije.

OSNOVA PRONALASKA

[0003] Opisana su različita jedinjenja koja imaju aktivnost snižavanja nivoa paratiroidnog hormona. Videti međunarodnu objavu br. WO 2011/014707. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje može biti predstavljeno na sledećio način:

[0004] Glavni lanac ima 7 aminokiselina, sve u D-konfiguraciji i cisteinski ostatak bočnog lanca je u L-konfiguraciji. Amino terminus je acetilovan i karboksil-terminus je amidovan. Ovo jedinjenje ("AMG-416") ima korist za lečenje sekundarnog hiperparatireoidizma (SHPT) kod pacijenata sa hemodijalizom. Tečna formulacija koja sadrži AMG-416 može biti primenjivana na subjekta intravenski. Hidrohloridna so AMG-416 može biti predstavljena na sledeći način:

[0005] Terapeutski peptidi pružaju određeni broj izazova u vezi sa njihovom formulacijom. Peptidi uopšteno, i naročito oni koji sadrže disulfidnu vezu, tipično imaju samo umerenu ili slabu stabilnost u vodenom rastvoru. Peptidi su skloni hidrolizi amidne veze kako na visokoj tako i na niskoj pH. Disulfidne veze mogu biti nestabilne čak pod prilično blagim uslovima (blizu neutralne pH). Pored toga, peptidi koji sadrže disulfid koji nisu ciklični su naročito podložni formiranju dimera. Prema tome, terapeutski peptidi su često obezbeđeni u liofilizovanom obliku, kao suvi prah ili kolač, za kasniju rekonstituciju. Liofilizovana formulacija terapeutskog peptida ima prednost obezbeđivanja stabilnosti za duže vremenske periode, ali je manje pogodna za upotrebu jer zahteva dodavanje jednog ili više razblaživača i tu postoji potencijalni rizik od grešaka kao posledica upotrebe neodgovarajućeg tipa ili količine razblaživača, kao i rizik od kontaminacije. Pored toga, postupak liofilizacije zahteva vreme i novac.

[0006] Prema tome, postoji potreba za vodenom tečnom formulacijom koja sadrži peptidni agonist kalcijum senzornog receptora, kao što je AMG 416. Bilo bi poželjno za tečnu formulaciju da ostane stabilna tokom relevantnog vremenskog perioda pod pogodnim uslovima čuvanja i da bude pogodna za primenu intravenskim ili drugim parenteralnim putevima.

REZIME PRONALASKA

[0007] Obezbeđena je tečna formulacija koja sadrži peptidni agonist kalcijum senzornog receptora, kao što je AMG 416.

[0008] U jednom primeru izvođenja, formulacija ima pH od oko 2.0 do oko 5.0. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima pH od 2.5 do 4.5. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima pH od 2.5 do 4.0. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima pH od 3.0 do 3.5. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima pH od 3.0 do 4.0. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima pH od 2.8 do 3.8.

[0009] U sledećem primeru izvođenja, pH formulacije je održavana pomoću farmaceutski prihvatljivog pufera. Takvi puferi obuhvataju, bez ograničenja, sukcinatne pufere, acetatne pufere, citratne pufere i fosfatne pufere. U sledećem primeru izvođenja, pufer je sukcinatni pufer. pH formulacije može biti podešena prema potrebi sa kiselinom ili bazom, kao što je HCl ili NaOH.

[0010] U sledećem primeru izvođenja, peptidni agonist kalcijum senzornog receptora je prisutan u koncentraciji od 0.1 mg/mL do 20 mg/mL. U sledećem primeru izvođenja, peptid je prisutan u koncentraciji od 1 mg/mL do 15 mg/mL. U sledećem primeru izvođenja, peptid je prisutan u koncentraciji od 2.5 mg/mL do 10 mg/mL. U sledećem primeru izvođenja, peptid je prisutan u koncentraciji od oko 1 mg/mL, oko 5 mg/mL ili oko 10 mg/mL.

[0011] U sledećem primeru izvođenja, AMG 416 je prisutan u koncentraciji od oko 0.1 mg/mL do oko 20 mg/mL. U jednom primeru izvođenja, AMG 416 je prisutan u koncentraciji od oko 1 mg/mL do oko 15 mg/mL. U sledećem primeru izvođenja, AMG 416 je prisutan u koncentraciji od oko 2.5 mg/mL do oko 10 mg/mL. U sledećem primeru izvođenja, AMG 416 je prisutan u koncentraciji od oko 1 mg/mL, oko 2.5 mg/mL, oko 5 mg/mL ili oko 10 mg/mL.

[0012] U sledećem primeru izvođenja, AMG 416 je prisutan u koncentraciji od 0.1 mg/mL do 20 mg/mL. U jednom primeru izvođenja, AMG 416 je prisutan u koncentraciji od 1 mg/mL do 15 mg/mL. U sledećem primeru izvođenja, AMG 416 je prisutan u koncentraciji od 2.5 mg/mL do 10 mg/mL. U sledećem primeru izvođenja, AMG 416 je prisutan u koncentraciji od 1 mg/mL do 5 mg/mL. U sledećem primeru izvođenja, AMG 416 je prisutan u koncentraciji od 5 mg/mL do 10 mg/mL. U sledećem primeru izvođenja, AMG 416 je prisutan u koncentraciji od 0.5 do 1.5 mg/mL, 2.0 do 3.0 mg/mL, 4.5 do 5.5 mg/mL ili 9.5 do oko 10.5 mg/mL

[0013] U sledećem primeru izvođenja, formulacija dalje sadrži farmaceutski prihvatljiv modifikator toničnosti ili smešu farmaceutski prihvatljivih modifikatora toničnosti. U sledećem primeru izvođenja, modifikator toničnosti (ili smeša modifikatora toničnosti) je prisutan u koncentraciji dovoljnoj da formulacija bude približno izotonična sa telesnim tečnostima (npr., ljudskom krvi). U sledećem aspektu, modifikator toničnosti je NaCl.

[0014] U sledećem primeru izvođenja, formulacija sadrži terapeutski efikasnu količinu peptidnog agonista kalcijum senzornog receptora. U poželjnom primeru izvođenja, formulacija sadrži terapeutski efikasnu količinu AMG 416.

[0015] U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima manje od 10% razlaganja kada je čuvana na 2-8°C do 2 godine. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima manje od 10% razlaganja kada je čuvana na 2-8°C do 3 godine. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima manje od 10% razlaganja kada je čuvana na 2-8°C do 4 godine.

[0016] U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima manje od 8% razlaganja kada je čuvana na 2-8°C do 2 godine. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima manje od 8% razlaganja kada je čuvana na 2-8°C do 3 godine. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima manje od 8% razlaganja kada je čuvana na 2-8°C do 4 godine.

[0017] U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima manje od 10% razlaganja kada je čuvana na sobnoj temperaturi u trajanju od 3 meseca. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima manje od 10% razlaganja kada je čuvana na sobnoj temperaturi do 6 meseci. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima manje od 10% razlaganja kada je čuvana na sobnoj temperaturi do 1 godinu.

[0018] U sledećem primeru izvođenja, obezbeđena je formulacija koja sadrži 0.5 mg/mL do 20 mg/mL peptidnog agonista kalcijum senzornog receptora (npr., AMG 416) u vodenom rastvoru, sukcinatni pufer koji održava formulaciju na pH od oko 3.0 do oko 3.5, i dovoljnu koncentraciju natrijum hlorida da formulacija bude približno izotonična sa ljudskom krvi.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0019]

Slika 1 je serija grafikona čistoće (%) kao funkcije vremena (dani) za AMG 416 rastvore u sukcinatno puferisanom fiziloškom rastvoru (pH 4.5) na sobnoj temperaturi (s.t.). Slika 1A prikazuje stabilnost AMG 416 rastvora koji imaju koncentracije od 200, 66, 20, 6.7, 2.2 i 0.67 mg/mL AMG 416. Na Slici 1B, skala je proširena da jasnije ilustruje obrazac razlaganja na koncentracijama od 20 mg/mL i ispod.

Slika 2 je grafikon čistoće (%) kao funkcije vremena (dani) za AMG 416 rastvore u sukcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru (pH 4.5) na 40°C koji ima koncentracije u opsegu od 20, 6.7, 2.2 i 0.67 mg/mL AMG 416.

Slika 3 je serija grafikona čistoće (%) kao funkcije vremena (dani) za AMG 416 rastvore u sukcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru (pH 2, 3, 4, 5 i 6) na 40°C. Na slici 3A, koncentracija AMG 416 je 10 mg/mL i na Slici 3B koncentracija AMG 416 je 2.5 mg/mL.

Slika 4 je serija grafikona čistoće (%) na 28 dana kao funkcija pH za AMG 416 rastvore u sukcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru na 2-8°C, sobnoj temperaturi i 40°C. Na Slici 4A, koncentracija AMG 416 je 10 mg/mL i na Slici 4B koncentracija AMG 416 je 2.5 mg/mL.

Slika 5 je serija HPLC hromatograma. HPLC trag na Slici 5A je za AMG 416 rastvor (5 mg/mL, pH 2.25) čuvan 27 dana na 40°C (87.8% čistoća). Na Slici 5B, skala je proširena radi jasnije ilustracije pikova.

Slika 6 je serija HPLC hromatograma. HPLC trag na Slici 6A je za AMG 416 rastvor (5 mg/mL, pH 3.5) čuvan 27 dana na 40°C (91.7% čistoća). Na Slici 6B, skala je proširena radi jasnije ilustracije pikova.

Slika 7 je grafikon čistoće (%) kao funkcije vremena (dani) za seriju AMG 416 rastvora (5 mg/mL) u sukcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru (pH 2.25, 2.5, 3.0 i 3.5) na 2-8°C.

Slika 8 je grafikon čistoće (%) kao funkcije vremena (dani) za seriju AMG 416 rastvora (5 mg/mL) u sunkcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru (pH 2.25, 2.5, 3.0 i 3.5) na sobnoj temperaturi.

Slika 9 je grafikon čistoće (%) kao funkcije vremena (dani) za seriju AMG 416 rastvora (5 mg/mL) u sukcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru (pH 2.25, 2.5, 3.0 i 3.5) na 40°C.

Slika 10 je serija grafikona stepena razlaganja (%) kao funkcija vremena (dani) za seriju AMG 416 rastvora (5 mg/mL) u sukcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru (pH 2.25, 2.5, 3.0 i 3.5). Vremenski tok C-terminalne deamidacije je prikazan na 2-8°C (Slika 10A), sobnoj temperaturi (Slika 10B) i na 40°C (Slika 10C). Napomena: skala y-ose je različita na svakom grafikonu.

Slika 11 je serija grafikona stepena razlaganja (%) kao funkcije vremena (dani) za seriju AMG 416 rastvora (5 mg/mL) u sukcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru (pH 2.25, 2.5, 3.0 i 3.5). Vremenski tok formiranja homodimera je prikazan na 2-8°C (Slika 11A), na sobnoj temperaturi (Slika 11B) i na 40°C (Slika 11 C). Napomena: skala y-ose sa Slike 11C je različita od one na Slikama 11A i 11B.

Slika 12 je serija grafikona čistoće (%) kao funkcija pH (2.8-3.8), koncentracije AMG 416 (4-6 mg/mL) i NaCl (0.7-1.0%) za seriju rastvora u sukcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru čuvanom na 2-8°C (Slika 12A), 25°C (Slika 12B) i 40°C (Slika 12C).

Slika 13 je serija grafikona čistoće (%) kao funkcije vremena (meseci) za seriju AMG 416 rastvora (3.4 mg/mL) u sukcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru (pH 2.5, 3.0, 3.5) čuvanom na 2-8°C (Slika 13A), 25°C (Slika 13B) i 40°C (Slika 13C).

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0020] Naslovi sekcija su ovde korišćeni samo za svrhe organizacije i ne bi ih trebalo tumačiti kao ograničavajuće za opisani predmet zaštite.

[0021] Osim ukoliko je ovde naznačeno drugačije, naučni i tehnički termini korišćeni u vezi sa predmetnom prijavom imaće značenja koja se obično razumeju od strane stručnjaka iz date oblasti tehnike. Pored toga, osim ukoliko kontekst ne nalaže drugačije, termini u jednini će obuhvati množine i termini u množini će obuhvatati jedninu.

[0022] Generalno, nomenklature korišćene u vezi sa, i tehnike, molekularne biologije i hemije proteina koje su ovde opisane su dobro poznate i uobičajeno korišćene u tehnici. Postupci i tehnike predmetne prijave su generalno izvedeni prema konvencionalnim postupcima dobro poznatim u tehnici i kao što su opisani u različitim opštim i specifičnijim referencama koje su citirane i razmatrane u predmetnoj specifikaciji osim ukoliko nije naznačeno drugačije. Videti, npr., Laszlo, Peptide-Based Drug Design: Methods and Protocols, Humana Press (2008); Benoiton, Chemistry of Peptide Synthesis, CRC Press (2005); Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992), koji su ovde obuhvaćeni referencom za bilo koju svrhu. Tehnike prečišćavanja su izvedene prema specifikacijama proizvođača, kao što se obično postiže u tehnici ili kao što je ovde opisano. Terminologija korišćena u vezi sa, i laboratorijski postupci i tehnike, analitičke hemije, sintetičke organske hemije i medicinske i farmaceutske hemije opisane ovde su one koje su dobro poznate i uobičajeno kroišćene u tehnici. Standardne tehnike mogu biti korišćene za hemijske sinteze, hemijske analize, farmaceutsku pripremu, formulaciju i primenu, i lečenje pacijenata.

[0023] Trebalo bi da se razume da ovaj opis nije ograničen na određenu metodologiju, protokole i reagense, itd., opisane ovde i kao takvi mogu da variraju. Terminologija koja je ovde korišćena je za svrhe opisivanja samo određenih primera izvođenja, i nije bila namera da ograniči opisani obim, koji je definisan samo patentnim zahtevima.

[0024] Kao što je ovde korišćen, termin "oko" u date vrednosti ili opsega označava vrednost ili opseg koji je unutar 20%, poželjno unutar 10%, i poželjnije unutar 5% date vrednosti ili opsega.

I. Opšte definicije

[0025] Prema konvenciji, kao što su ovde korišćeni "a" i "an" označavaju "jedan ili više" osim ukoliko je specifično naznačeno drugačije.

[0026] Termin "AMG 416" označava jedinjenje koje ima hemijski naziv: N-acetil-D-cisteinil-D-alanil-D-arginil-D-arginil-D-arginil-D-alanil-D-arginamid disulfid sa L-cisteinom, koje može biti predstavljeno kao:

Termini "AMG 416 hidrohlorid" ili "AMG 416 HCl" se mogu naizmenično menjati i označavaju jedinjenje koje ima hemijski naziv: N-acetil-D-cisteinil-D-alanil-D-arginil-D-arginil-D-arginil-D-alanil-D-arginamid disulfid sa L-cistein hidrohloridom, koje može biti predstavljeno kao:

[0027] Kao što su ovde korišćeni, termini "aminokiselina" i "ostatak" se naizmenično mogu menjati i, kada su korišćeni u kontekstu peptida ili polipeptida, označavaju prirodne i sintetičke aminokiseline, kao i aminokiselinske analoge, aminokiselinske mimetike i aminokiseline koje se ne javljaju u prirodi koje su hemijski slične prirodnim aminokiselinama.

[0028] Termin "lečenje" označava bilo koju indiciju uspeha u lečenju ili poboljšanju povrede, patologije ili stanja, uključujući bilo koji objektivni ili subjektivni parametar kao što su sniženje; remisija; smanjenje znakova ili simptoma ili stvaranja povrede, patologije ili stanja tolerabilnijim za pacijenta; usporavanje stope degeneracije ili opadanja; stavaranje krajnje tačke degeneracije manje iscrpljujućom; poboljšanje pacijentovog fizičkog ili mentalnog stanja. Lečenje ili poboljšanje znakova ili simptoma može biti zasnovano na objektivnim ili subjektivnim parametrima; uključujući rezultate fizičkog pregleda, na primer, lečenje SHPT smanjenjem povišenih nivoa paratiroidnog hormona (PTH).

[0029] Termini "terapeutski efikasna doza" i "terapeutski efikasna količina," kao što su ovde korišćeni, označavaju količinu koja izaziva biološki ili medicinski odgovor u sistemu tkiva, životinjskom ili ljudskom koji traži istraživač, lekar ili drugi klinički radnik, koji obuhvata ublažavanje ili poboljšanje znakova ili simptoma bolesti ili poremećaja koji se leči, na primer, količina AMG 416 koja izaziva željeno smanjenje u povišenom nivou PTH.

[0030] Termin "sobna temperatura" kao što je ovde korišćen označava temperaturu od oko 25°C. Čuvanje pod "uslovima u frižideru" kao što je ovde korišćeno označava čuvanje na temperaturi od 2-8°C.

[0031] Termin "peptid", "polipeptid" i "protein" se mogu koristiti naizmenično i označavaju polimer aminokiselina, tipično spojenih zajedno preko peptidnih ili disulfidnih veza. Ovi termini takođe se odnose na aminokiselinske polimere u kojima je jedan ili više aminokiselinskih ostataka analog ili mimetik odgovarajuće prirodne aminokiseline, kao i prirodnih aminokiselinskih polimera. Ovi termini takođe mogu da obuhvataju aminokiselinske polimere koji su modifikovani, npr., dodavanjem ugljenohidratnih ostataka da bi se formirali glikoproteini ili fosforilisani. Peptidi, polipeptidi i proteini mogu biti proizvedeni pomoću sinteze tečne faze ili čvrstofazne sinteze ili pomoću genetičkiminženjeringom dobijene ili rekombinantne ćelije.

[0032] "Varijanta" peptida ili polipeptida sadrži aminokiselinsku sekvencu u kojoj su jedan ili više aminokiselinskih ostataka inserirani u, deletirani iz i/ili supstituisani u aminokiselinsku sekvencu u odnosu na drugu polipeptidnu sekvencu. Varijante obuhvataju fuzione proteine.

[0033] "Derivat" peptida ili polipeptida je peptid ili polipeptid koji je hemijski modifikovan na određeni način različit od varijanti insercije, delecije ili supstitucije, npr., preko konjugacije za drugi hemijski deo. Takva modifikacija može da obuhvata kovalentnu adiciju grupe amino i/ili karboksi terminusima peptida ili polipeptida, npr., acetilaciju amino terminusa i/ili amidaciju karboksi terminusa peptida ili polipeptida.

[0034] Termin "aminokiselina" obuhvata njeno normalno značenje u tehnici. Dvadeset prirodnih aminokiselina i njihove skraćenice prate konvencionalnu upotrebu. Videti, Immunology-A Synthesis, 2nd Edition, (E. S. Golub and D. R. Green, eds.), Sinauer Associates: Sunderland, Mass. (1991), koji je obuhvaćen ovde referencom za bilo koju svrhu. Stereoizomeri (npr., D-aminokiseline) 19 konvencionalnih aminokiselina (osim glicina), neprirodne aminokiseline kao što su [alfa]-, [alfa]-disupstituisane aminokiseline, N-alkil aminokiseline i druge nekonvencionalne aminokiseline mogu takođe biti pogodne komponente za polipeptide i uključene su u izraz "aminokiselina." Primeri nekonvencionalnih aminokiselina obuhvataju: homocistein, ornitin, 4-hidroksiprolin, [gama]-karboksiglutamat, [epsilon]-N,N,N-trimetil lizin, [epsilon]-N-acetil lizin, O-fosfoserin, N-acetilserin, N-formilmetionin, 3-metilhistidin, 5-hidroksi lizin, [sigma]-N-metilarginin i druge slične aminokiseline i imino kiseline (npr., 4-hidroksiprolin). U obeležavanju polipeptida koje je ovde korišćeno, amino terminus je sa leve strane i karboksil-terminus je sa desne strane, u skladu sa standardnom upotrebom i konvencijom.

[0035] "Subjekat" ili "pacijent" kao što je ovde korišćen može biti bilo koji sisar. U tipičnom primeru izvođenja, subjekat ili pacijent je čovek.

[0036] "Pufer" kao što je ovde korišćen označava kompoziciju, pri čemu kompozicija sadrži slabu kiselinu i njenu konjugovanu bazu (obično kao konjugovana bazna so), slabu bazu i njenu konjugovanu kiselinu, ili njihove smeše. Stručnjaci iz date oblasti tehnike bi lako prepoznali različite pufere koji bi se mogli koristiti u formulacijama korišćenim u pronalasku. Tipični puferi obuhvataju, ali bez ograničenja na farmaceutski prihvatljive slabe kiseline, slabe baze ili njihove smeše. Primeri farmaceutski prihvatljivih pufera obuhvataju acetat (npr., natrijum acetat), sukcinat (npr., natrijum sukcinat).

[0037] Izraz "slaba kiselina" je hemijska kiselina koja potpuno ne jonizuje u vodenom rastvoru; to jest, ako je kiselina predstavljena opštom formulom HA, tada u vodenom rastvoru se formira A, ali još uvek ostaje značajna količina nedisocirane HA. Konstatna dosocijacije kiseline (Ka) slabe kiseline varira između 1.8x10<-16>i 55.5.

[0038] Izraz "slaba baza" je hemijska baza koja se ne jonizuje potpuno u vodenom rastvoru; to jest, ako je baza predstavljena opštom formulom B, tada se u vodenom rastvoru formira BH+, ali još uvek ostaje značajna količina neprotonovane B. Konstanta disocijacije kiseline (Ka) rezultirajuće konjugovane slabe kiseline BH+ varira između 1.8x10<-16>i 55.5.

[0039] Izraz "konjugovana kiselina" je kiseli član, HX+, dela dva jedinjenja (HX+, X) koja se transformišu jedno u drugo preko dobijanja ili gubitka protona.

[0040] Izraz "konjugovana baza" je bazni član, X-, para od dva jedinjenja (HX, X-) koja se transformišu jedno u drugo preko dobijanja ili gubitka protona.

[0041] Izraz "konjugovana bazna so" je jonska so koja sadrži konjugovanu bazu, X-, i pozitivno naelektrisani protiv-jon.

[0042] Izraz "puferski sistem" označava smešu koja sadrži najmanje dva pufera.

[0043] Termin "q.s." označava dodavanje količine koja je dovoljna da se postigne željena funkcija, npr., da se rastvor dovede do željene zapremine (tj., 100%).

[0044] Izraz "modifikator toničnosti" označava farmaceutski prihvatljivu inertnu supstancu koja može biti dodata u formulaciju da bi se podesila toničnost formulacije. Modifikatori toničnosti pogodni za ovaj pronalazak obuhvataju, ali bez ograničenja na, natrijum hlorid, kalijum hlorid, manitol ili glicerin i drugi farmaceutski prihvatljiv modifikator toničnosti.

II. Primeri izvođenja

[0045] Predmetni opis se odnosi na tečne formulacije koje sadrže peptidni agonist kalcijum senzornog receptora, pri čemu formulacija ima pH od oko 2.0 do oko 5.0. U poželjnom primeru izvođenja, predmetni opis se odnosi na tečnu formulaciju koja sadrži AMG 416, pri čemu formulacija ima pH od oko 2.0 do oko 5.0. AMG 416 i njena priprema su opisani u međunarodnoj patentnoj objavi br. WO 2011/014707. Na primer, AMG 416 može biti sastavljen pomoću čvrstofazne sinteze od odgovarajućih Fmoc-zaštićenih D-aminokiselina. Posle cepanja sa smole, materijal može biti tretiran sa Boc-L-Cys(NPyS)-OH tako da se formira disulfidna veza. Boc grupa može zatim biti uklonjena sa trifluorosirćetnom kiselinom (TFA) i rezultirajući proizvod prečišćen pomoću reverzno-fazne tečne hromatografije pod visokim pritiskom (HPLC) i izolovan kao oblik TFA soli pomoću liofilizacije. TFA so može biti prevedena u farmaceutski prihvatljivu so izvođenjem kasnijeg postupka izmene soli. Takvi postupci su dobro poznati u tehnici i obuhvataju, npr., jono-izmenjivačke tehnike, izborno nakon kojih sledi prečišćavanje rezultirajućeg proizvoda (na primer pomoću reverzno-fazne tečne hromatografije ili reverzne osmoze).

[0046] Formulacije koje su ovde opisane primarno sa terapeutskim peptidom, AMG 416, kao aktivnim sastojkom. Međutim, kao što će stručnjaku iz date oblasti tehnike biti jasno, predmetni opis takođe se odnosi na varijante i derivate AMG 416.

[0047] Na primer, u jednom primeru izvođenja, opisane formulacije takođe mogu biti korišćene sa: N-acetil-D-cisteinil-D-alanil-D-arginil-D-arginil-D-arginil-D-alanil-D-arginamid disulfidom sa D-cisteinom. U sledećem primeru izvođenja, opisana formulacija takođe može biti korišćena sa N-acetil-D-cisteinil-D-alanil-D-arginil-D-arginil-D-arginil-D-alanil-D-arginamid disulfidom sa N-acetil-D-cisteinom. U sledećem primeru izvođenja, opisane formulacije takođe mogu biti korišćene sa: N-acetil-D-cisteinil-D-alanil-D-arginil-D-arginil-D-arginil-D-alanil-D-arginamid disulfidom sa N-acetil-L-cisteinom.

[0048] U sledećem primeru izvođenja, opisane formulacije takođe mogu biti korišćene sa: N-acetil-L-cisteinil-L-alanil-L-arginil-L-arginil-L-arginil-L-alanil-L-arginamid disulfidom sa D-cisteinom. U sledećem primeru izvođenja, opisane formulacije takođe mogu biti korišćene sa: N-acetil-L-cisteinil-L-alanil-L-arginil-L-arginil-L-arginil-L-alanil-L-arginamid disulfidom sa L-cisteinom. U sledećem primeru izvođenja, opisane formulacije takođe mogu biti korišćene sa: N-acetil-L-cisteinil-L-alanil-L-arginil-L-arginil-L-arginil-L-alanil-L-arginamid disulfidom sa N-acetil-D-cisteinom. U sledećem primeru izvođenja, opisane formulacije takođe mogu biti korišćene sa: N-acetil-L-cisteinil-L-alanil-L-arginil-L-arginil-L-arginil-L-alanil-L-arginamid disulfidom sa N-acetil-L-cisteinom.

[0049] U sledećem primeru izvođenja, opisane formulacije takođe mogu biti korišćene sa: N-acetil-D-cisteinil-D-arginil-D-arginil-D-alanil-D-arginil-D-alanil-D-arginamid disulfidom sa D-cisteinom. U sledećem primeru izvođenja, opisane formulacije takođe mogu biti korišćene sa: N-acetil-D-cisteinil-D-arginil-D-arginil-D-alanil-D-arginil-D-alanil-D-arginamid disulfidom sa L-cisteinom. U sledećem primeru izvođenja, opisane formulacije takođe mogu biti korišćene sa: N-acetil-D-cisteinil-D-arginil-D-arginil-D-alanil-D-arginil-D-alanil-D-arginamid disulfidom sa N-acetil-D-cisteinom. U sledećem primeru izvođenja, opisane formulacije takođe mogu biti korišćene sa: N-acetil-D-cisteinil-D-arginil-D-arginil-D-alanil-D-arginil-D-alanil-D-arginamid disulfidom sa N-acetil-L-cisteinom.

[0050] U sledećem primeru izvođenja, opisane formulacije takođe mogu biti korišćene sa: N-acetil-L-cisteinil-L-arginil-L-arginil-L-alanil-L-arginil-L-alanil-L-arginamid disulfidom sa D-cisteinom. U sledećem primeru izvođenja, opisane formulacije takođe mogu biti korišćene sa: N-acetil-L-cisteinil-L-arginil-L-arginil-L-alanil-L-arginil-L-alanil-L-arginamid disulfidom sa L-cisteinom. U sledećem primeru izvođenja, opisane formulacije takođe mogu biti korišćene sa: N-acetil-L-cisteinil-L-arginil-L-arginil-L-alanil-L-arginil-L-alanil-L-arginamid disulfidom sa N-acetil-D-cisteinom. U sledećem primeru izvođenja, opisane formulacije takođe mogu biti korišćene sa: N-acetil-L-cisteinil-L-arginil-L-arginil-L-alanil-L-arginil-L-alanil-L-arginamid disulfidom sa N-acetil-L-cisteinom.

[0051] U sledećem primeru izvođenja, opisane formulacije takođe mogu biti korišćene sa jednim ili više jedinjenja datih u Tabeli 1, Tabeli 2, Tabeli 3, Tabeli 4, Tabeli 5, Tabeli 6, Tabeli 7, Tabeli 8, Tabeli 9 i/ili Tabeli 10 međunarodne patentne objave br. WO 2011/014707. U sledećem primeru izvođenja, opisane formulacije mogu takođe biti korišćene sa jednim ili više jedinjenja opisanih u međunarodnoj patentnoj objavi br. WO 2011/014707.

[0052] U nekim primerima izvođenja, formulacija sadrži terapeutski efikasnu količinu aktivnog sastojka (npr., AMG 416). Terapeutski efikasna količina aktivnog sastojka u bilo kom datom primeru izvođenja formulacije predmetnog opisa zavisiće od zapremine formulacije koja će se primeniti na datog subjekta, kao i starosti i telesne težine subjekta, i prirode bolesti ili poremećaja koji se leči. U zavisnosti od oblika doze, u nekim slučajevima terapeutski efikasna količina može biti obezbeđena pacijentu u jednoj primeni, dok u drugim slučajevima može biti potreban veći broj primena.

[0053] Tečna formulacija predmetnog opisa je farmaceutska kompozicija pogodna za intravensku, intraarterijsku, intramuskularnu i subkutanu primenu. U poželjnom primeru izvođenja, tečna formulacija je pogodna za primenu preko intravenskog ili drugih parenteralnih puteva. Poželjno, tečna formulacija je sterilni, vodeni rastvor. Tipično, rastvarač je injektabilna voda ili smeša vode i jednog ili više rastvarača koji se mešaju sa vodom, kao što su propilen glikol, polietilen glikol i etanol. Poželjna je upotreba sterilne, dejonizovane vode kao rastvarača. Drugi rastvarači koji su pogodni i konvencionalni za farmaceutske preparate mogu, međutim, biti korišćeni.

[0054] Formulacija tipično sadrži oko 0.1 mg/mL do oko 100 mg/mL aktivnog sastojka (npr., AMG 416), oko 0.1 mg/mL do oko 20 mg/mL aktivnog sastojka, oko 0.5 mg/mL do oko 15 mg/mL aktivnog sastojka, oko 1 mg/mL do oko 10 mg/mL aktivnog sastojka, ili oko 2 mg/mL do oko 5 mg/mL aktivnog sastojka. U nekim primerima izvođenja, formulacija sadrži oko 1 mg/mL aktivnog sastojka, oko 2 mg/mL aktivnog sastojka, oko 2.5 mg/mL aktivnog sastojka, oko 5 mg/mL aktivnog sastojka, oko 10 mg/mL aktivnog sastojka ili oko 20 mg/mL aktivnog sastojka. U sledećem primeru izvođenja, formulacija sadrži 0.1 mg/mL do 100 mg/mL aktivnog sastojka, 0.1 mg/mL do 20 mg/mL aktivnog sastojka, 0.5 mg/mL do 15 mg/mL aktivnog sastojka, ili 1 mg/mL do 10 mg/mL aktivnog sastojka, ili 2 mg/mL do 5 mg/mL aktivnog sastojka. U poželjnom primeru izvođenja, formulacija sadrži 1 mg/mL do 10 mg/mL aktivnog sastojka. U sledećem poželjnom primeru izvođenja, formulacija sadrži 2 mg/mL do 5 mg/mL aktivnog sastojka.

[0055] Formulacija tipično ima pH od oko 2.0 do oko 5.0, pH od oko 2.5 do oko 4.5, pH od oko 2.5 do oko 4.0, pH od oko 3.0 do oko 3.5 ili pH od oko 3.0 do oko 3.6. U nekim primerima izvođenja, formulacija ima pH od oko 2, pH od oko 2.5, pH od oko 3.0, pH od oko 3.3, pH od oko 3.5 ili pH od oko 4.0. U nekim primerima izvođenja, formulacija ima pH od 2.0 do 5.0, pH od 2.5 do 4.5, pH od 2.5 do oko 4.0, pH od 3.0 do 3.5 ili pH od 3.0 do 3.6.

[0056] Kao što je opisano potpunije u primerima, stabilnost AMG 416 zavisi od pH rastvora. Pronalazači ovog pronalaska su našli da su dva glavna proizvoda razlaganja rezultat C-terminalne deamidacije i formiranja homodimera. Pored toga, pronalazači ovog pronalaska su našli da je vremenski tok razlaganja preko ovih puteva funkcija pH. Videti Primer 6. Na niskoj pH, razlaganje pomoću C-terminalne deamidacije dominira (videti Sliku 10) dok na višim pH, razlaganje pomoću formiranja homodimera dominira (videti Sliku 11). Na taj način, formiranje dva glavna proizvoda razlaganja ima suprotnu vezu između pH i stepena razlaganja. Ovi suprotni trendovi su u osnovi ukupnih rezultata vezanih za stabilnost u opsegu pH vrednosti i podržavaju identifikaciju od oko pH 3.0 do 3.5 kao pH maksimalne stabilnosti AMG 416 rastvora.

[0057] Tipično, formulacija sadrži fiziološki prihvatljivo puferujuće sredstvo koje održava pH formulacije u željenom opsegu. U jednom primeru izvođenja, pufer zadržava pH od oko 2.0 do oko 5.0, pH od oko 2.5 do oko 4.5, pH od oko 2.5 do oko 4.0, pH od oko 3.0 do oko 3.5 ili pH od oko 3.0 do oko 3.6. U nekim primerima izvođenja, pufer zadržava pH od oko 2, pH od oko 2.5, pH od oko 3.0, pH od oko 3.3, pH od oko 3.5 ili pH od oko 4.0. U nekim primerima izvođenja, pufer zadržava pH od 2.0 do 5.0, pH od 2.5 do 4.5, pH od 2.5 do oko 4.0, pH od 3.0 do 3.5 ili pH od 3.0 do 3.6.

[0058] Bilo koji pufer koji je sposoban da održava pH formulacije na bilo kojoj pH ili unutar bilo kog opsega pH datog u prethodnom tekstu je pogodan za upotrebu u formulacijama predmetnog opisa, uz uslov da ne reaguje sa drugim komponentama formulacije, izaziva formiranje vidljivog talog ili na drugi način izaziva da aktivni sastojak postane hemijski destabilizovan. Pufer korišćen u predmetnoj formulaciji tipično sasdrži komponentu izabranu iz grupe koja se sastoji od sukcinata, citrata, malata, edentata, histidina, acetata, adipata, akonitata, askorbata, benzoata, karbonata, bikarbonata, maleata, glutamata, laktata, fosfata i tartarata, ili smeše ovih pufera. U poželjnom primeru izvođenja, pufer sadrži sukcinat, npr., natrijum sukcinat.

[0059] Koncentracija pufera je izabrana tako da je obezbeđena stabilizacija pH kao i dovoljan kapacitet puferovanja. U jednom primeru izvođenja, pufer je prisutan u formulaciji u koncentraciji od oko 0.5 do oko 100 mmol/L, od oko 0.75 do oko 50 mmol/L, od oko 1 do oko 20 mmol/L, ili od oko 10 do oko 20 mmol/L. U drugim primerima izvođenja, pufer je prisutan u oko 5 mmol/L, na oko 10 mmol/L, na oko 15 mmol/L ili oko 20 mmol/L. U drugim primerima izvođenja, pufer je prisutan u formulaciji u koncentraciji od 0.5 do 100 mmol/L, od 0.75 do 50 mmol/L, od 1 do 20 mmol/L, ili od 10 do 20 mmol/L. U poželjnom primeru izvođenja, pufer je prisutan na oko 10 mmol/L. U sledećem poželjnom primeru izvođenja, pufer je sukcinat prisutan na oko 10 mmol/L.

[0060] Sa tačke gledišta kompatibilnosti tečne formulacije sa intravenskom primenom, bilo bi poželjno za pH tečne formulacije da bude što bliže što je moguće fiziološkoj pH. Tečne formulacije koje imaju pH koja je daleko od fiziološke pH ili koje su snažno puferisane mogu da izazovu bol ili nelagodnost prilikom primene. Kao što je razmatrano, tečne formulacije AMG 416 na fiziološkoj pH ili višoj bi ostale stabilne tokom dužeg vremenskog perioda. Prema tome, u poželjnom primeru izvođenja, tečna formulacija predmetnog opisa je slabo puferisana tako da se injektirana količina brzo neutrališe fiziološkim tečnostima tela subjekta. Iznenađujuće je da je dobra stabilnost i dobra kontrola pH održavana sa niskom koncentracijom pufera. U poželjnom primeru izvođenja, HCl so AMG 416 je korišćena u pripremi tečne formulacije za minimizaciju kapaciteta pufera. Kako je HCl jaka kiselina, ona ne deluje kao pufer. Ovo obezbeđuje prednost u odnosu na upotrebu slabije kiseline, kao što je sirćetna kiselina. Upotreba acetatne soli AMG 416, na primer, bi sama po sebi obezbedila izvesni kapacitet puferisanja i omogućava manju fleksibilnost za podešavanje puferujućeg kapaciteta formulacije i može imati za rezultat formulaciju koja je otpornija na neutralizaciju unutar tela i prema tome je slabije tolerisana. Kako je AMG 416 polikatjonski peptid, efekat bi bio povećan u poređenju sa većinom peptida koji imaju neutralniji karakter.

[0061] Generalno je poželjno da je formulacija koja se primenjuje intravenskim ili drugim parenteralnim putem izotonična sa telesnim tečnostima. U nekim primerima izvođenja, formulacija predmetnog opisa sadrži fiziološki prihvatljiv modifikator toničnosti. Modifikator toničnosti koristan u predmetnom opisu može da obuhvata natrijum hlorid, manitol, saharozu, dekstrozu, sorbitol, kalijum hlorid ili njihove smeše. U poželjnom primeru izvođenja, sredstvo za podešavanje toničnosti je natrijum hlorid.

[0062] Kada je sredstvo za podešavanje toničnosti prisutno, ono je poželjno prisutno u količini dovoljnoj da se pripremi tečna formulacija približno izotonična sa telesnim tečnostima (tj., oko 270 do oko 300 mOsm/L) i pogodna za parenteralnu injekciju u sisara, kao što je humani subjekat, u dermalna, subkutana ili intramuskularna tkiva ili IV. Izotoničnost može biti merena pomoću, na primer, upotrebe osmometra tipa pritiska pare ili zamrzavanja sa ledom. U zavisnosti do koncentracija drugih komponenti u fromulaciji, natrijum hlorid je prisutan u formulaciji u koncentraciji od oko 7.0 do oko 10 mg/mL, oko 7.5 do oko 9.5 mg/mL, ili oko 8.0 do oko 9.0 mg/mL. U jednom primeru izvođenja, natrijum hlorid je prisutan u formulaciji u koncentraciji od oko 8.5 mg/mL. U drugim primerima izvođenja, natrijum hlorid je prisutan u formulaciji u koncentraciji od 7.0 do 10 mg/mL, 7.5 do 9.5 mg/mL ili 8.0 do 9.0 mg/mL.

[0063] Formulacije predmetnog opisa mogu da obuhvataju druge konvencionalne farmaceutske nosače, ekscipijense ili adjuvanse. Na primer, formulacije prema predmetnom pronalasku mogu da obuhvataju stabilizujuća sredstva (npr., EDTA i/ili natrijum tiosulfat) ili konzervanse (npr., benzil alkohol). Pored toga, formulacije predmetnog opisa mogu da uključuju dodatna medicinska i/ili farmaceutska sredstva. Na primer, u postupcima za lečenje SHPT kod pacijenata sa hemodijalizom sa CKD-MBD, AMG 416 može biti ko-primenjivan sa jednim ili više aktivnih sredstava u renalnoj osteodistrofiji, kao što je terapija vitaminom D (npr., parikalcitolom) koja je ustanovljeni tretman za SHPT.

[0064] U jednom primeru izvođenja, formulacija ima manje od 5% razlaganja kada je čuvana na oko 2-8°C tokom 1 godine. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima manje od 5% razlaganja kada je čuvana na sobnoj temperaturi tokom 1 godine. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima manje od 10% razlaganja kada je čuvana na oko 2-8°C tokom 1 godine. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima manje od 10% razlaganja kada je čuvana na sobnoj temperaturi tokom 1 godine. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima manje od 5% razlaganja kada je čuvana na oko 2-8°C tokom 2 godine. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima manje od 5% razlaganja kada je čuvana na sobnoj temperaturi tokom 2 godine. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima manje od 10% razlaganja kada je čuvana na oko 2-8°C tokom 2 godine. U sledećem primeru izvođenja, formulacija ima manje od 10% razlaganja kada je čuvana na sobnoj temperaturi tokom 2 godine.

[0065] U jednom primeru izvođenja, obezbeđena je tečna formulacija koja sadrži 0.1 mg/mL do 20 mg/mL terapeutskog peptida, pufer koji održava formulaciju na pH od 2.0 do 5.0, i dovoljnu koncentraciju natrijum hlorida za formulaciju koja će biti približno izotonična. U sledećem primeru izvođenja, obezneđena je tečna formulacija koja sadrži 1 mg/mL do 15 mg/mL terapeutskog peptida, pufer koji održava formulaciju na pH od 2.5 do 4.5, i dovoljnu koncentraciju natrijum hlorida da bi formulacija bila približno izotonična. U sledećem primeru izvođenja, obezbeđena je tečna formulacija koja sadrži 2.5 mg/mL do 10 mg/mL terapeutskog peptida, pufer koji održava formulaciju na pH od 2.5 do 4.0, i dovoljnu koncentraciju natrijum hlorida da bi formulacija bila približno izotonična. U sledećem primeru izvođenja, obezbeđena je tečna formulacija koja sadrži 2.5 mg/mL do 5 mg/mL terapeutskog peptida, pufer koji održava formulaciju na pH od 2.5 do 3.5 i dovoljnu koncentraciju natrijum hlorida da bi formulacija bila približno izotonična. U sledećem primeru izvođenja, obezbeđena je formulacija koja sadrži 2 mg/mL do 20 mg/mL terapeutskog peptida u vodenom rastvoru, sukcinatni pufer koji održava formulaciju na pH od oko 3.0 do 3.5 i dovoljnu koncentraciju natrijum hlorida da bi formlacija bila približno izotonična.

[0066] U jednom primeru izvođenja, obezbeđena je tečna formulacija koja sadrži 0.1 mg/mL do 20 mg/mL AMG 416, pufer koji održava formulaciju na pH od 2.0 do 5.0 i dovoljnu koncentraciju natrijum hlorida da bi formulacija bila približno izotonična. U sledećem primeru izvođenja, obezbeđena je tečna formulacija koja sadrži 1 mg/mL do 15 mg/mL AMG 416, pufer koji održava formulaciju na pH od 2.5 do 4.5, i dovoljnu koncentraciju natrijum hlorida da bi formulacija bila približno izotonična. U sledećem primeru izvođenja, obezbeđena je tečna formulacija koja sadrži 2.5 mg/mL do 10 mg/mL AMG 416, pufer koji održava formulaciju na pH od 2.5 do 4.0, i dovoljnu koncentraciju natrijum hlorida da bi formulacija bila približno izotonična. U sledećem primeru izvođenja, obezbeđena je tečna formulacija koja sadrži 2.5 mg/mL do 5 mg/mL AMG 416, pufer koji održava formulaciju na pH od 2.5 do 3.5 i dovoljnu koncentraciju natrijum hlorida da bi formulacija bila približno izotonična. U sledećem primeru izvođenja, obezbeđena je formulacija koja sadrži 2 mg/mL do 20 mg/mL AMG 416 u vodenom rastvoru, sukcinatni pufer koji održava formulaciju na pH od oko 3.0 do 3.5, i dovoljnu koncentraciju natrijum hlorida da bi formulacija približno bila izotonična.

[0067] U poželjnom primeru izvođenja, formulacije predmetnog pronalaska su pripremljene postavljanjem količine pufera izračunate da stvara željenu pH u pogodnu posudu i njenim rastvaranjem sa vodom za injekciju (WFI), dodavanjem količine materijala (npr., hidrohloridne soli AMG 416) dovoljne da se postigne željena koncentracija aktivnog sastojka (npr., AMG 416), dodavanjem količine modifikatora toničnosti (ili smeše modifikatora toničnosti) izračunate da čini rezultujuću formulaciju izotoničnom sa telesnim tečnostima, i dodavanjem količine WFI neophodne da se ukupna zapremina dovede do željene koncentracije. Pošto su sastojci pomešani, pH je podešena do oko 3.0 do oko 3.5, i komponente su ponovo mešane.

[0068] Ako je podešavanje potrebno u cilju postizanja željenog opsega pH, pH vrednost može biti podešena pomoću pogodnih rastvora; sa kiselim rastvorima ako je redukcija pH vrednosti naznačena i sa alkalnim rastvorom ako je naznačeno povećanje pH. Neograničavajući primeri pogodnih kiselih rastvora su, npr., hlorovodonična kiselina, fosforna kiselina, limunska kiselina i natrijum ili kalijum hidrogen fosfat. Neograničavajući primeri pogodnih alkalnih rastvora su hidroksidi alkalnih i zemnoalkalnih metala, karbonati alkalnih metala, acetati alkalnih metala, citrati alkalnih metala i hidrogen fosfati dialkalnog metala, npr., natrijum hiroksid, natrijum acetat, natrijum karbonat, natrijum citrat, dinatrijum ili dikalijum hidrogen fosfat ili amonijak.

[0069] Postupak se tipično izvodi na temperaturi od oko 2-8°C do oko 50°C, i na atmosferskom pritisku. Dobijena formulacija može zatim biti prebačena u kontejnere za jediničnu dozu ili za više doza (kao što su boce, vijalice, ampule ili prethodno napunjeni špricevi) za čuvanje pre upotrebe.

[0070] Formulacije mogu biti pripremljene i primenjene kao što je opisano u prethodnom tekstu. Alternativno, formulacije mogu biti primenjivane posle rastvaranja, dispergovanja, itd. formulacije (pripremljene kao što je opisano u prethodnom tekstu) u nosaču, kao što je, na primer, tečnost za infuziju ili u krvi/tečnosti vraćena pacijentu u toku hemodijalize (npr., u toku ispiranja).

[0071] Priprema tečnih formulacija prema predmetnom opisu je poznata, ili biće očigledna, stručnjacima iz date oblasti tehnike, na primer, videti Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, 17th edition, 1985.

PRIMERI

[0072] Sledeći primeri, uključujući izvedene eksperimente i postignute rezultate, su obezbeđeni samo za ilustrativne svrhe i ne bi ih trebalo tumačiti kao ograničavajuće za obim priloženih patentnih zahteva.

PRIMER 1

Rastvorljivost AMG 416 u sukcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru

[0073] U ovoj studiji, ispitivana je rastvorljivost AMG 416 u sukcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru. AMG 416 HCl (103 mg praha, 80 mg peptida) je rastvoren u 200 μL natrijum sukcinatno puferisanog fiziološkog rastvora (25 mM sukcinat, 0.9% fiziološki rastvor, pH 4.5). Posle kratkog vorteksovanja, dobijen je bistar rastvor sa nominalnom koncentracijom od 400 mg/mL. Kako širenje zapremine rastvora nije određeno, rastvorljivost AMG 416 može biti konzervativno naznačena kao najmanje 200 mg/mL. Iako maksimalna rastvorljivost nije određena u ovom eksperimentu, AMG 416 je rastvorljiv u pH 4.5 sukcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru do koncentracija od najmanje 200 mg/mL.

PRIMER 2

Studija stabilnosti zavisne od koncentracije

[0074] U ovoj studiji, ispitivana je stabilnost AMG 416 u opsegu koncentracija u sukcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru (pH 4.5). Rastvor od 200 mg/mL AMG 416 iz Primera 1, u prethodnom tekstu, je razblažen dodatno sa 200 μL sukcinatno puferisanog fiziološkog rastvora (pH 4.5) do nominalne koncentracije od 200 mg/mL, koja je serijski razblažena sa sukcinatno puferisanim fiziološkim rastvorom (pH 4.5) do 66, 20, 6.7, 2.2 i 0.67 mg/mL. Uzorci su održavani na sobnoj temperaturi (tj., oko 25°C) i alikvote su analizirane pomoću HPLC u intervalima do 29 dana. Druga serija AMG 416 uzoraka koji pokrivaju opseg koncentracija od 20 do 0.67 mg/mL je inkubirana na 40°C i analizirana na isti način.

[0075] Čistoća na vremenskoj tački 29-dana za uzorke na sobnoj temperaturi i 40°C je prikazana u Tabelama 1 i 2, respektivno. Rezultati obezbeđuju profil stabilnosti AMG 416 kao funkciju koncentracije i temperature.

Tabela 1

Tabela 2

[0076] Vremenski tok razlaganja AMG 416 kao funkcija koncentracije na sobnoj temperaturi je prikazan na Slici 1A. Na Slici 1B, skala je proširena da bi jasnije ilustrovala obrazac razlaganja na koncentracijama leka od 20 mg/mL i ispod. Vremenski tok razlaganja AMG 416 kao funkcija koncentracije na 40°C je prikazan na Slici 2. Podaci prikazuju da je stabilnost rastvaranja AMG 416 povezana sa koncentracijom u ispitivanom opsegu od 0.67 mg/mL do 200 mg/mL. Podaci takođe jasno pokazuju da je stabilnost rastvora AMG 416 povezana za temperaturom inkubacije.

[0077] Tabela 3 prikazuje predviđanja stepena razlaganja za rastvore različitih koncentracija AMG 416 na sobnoj temperaturi, na bazi stepena razlaganja na 29 dana, čuvanja na sobnoj temperaturi u pH 4.5 SBS. Podaci za čuvanje na sobnoj temperaturi 29-dana iz Tabele 1 su ekstrapolirani do naznačenog vremenskog perioda pretpostavljajući linearnu kinetiku razlaganja. Podaci o sobnoj temperaturi su ekstrapolirani do 5°C. Pretpostavljena je razlika od 20°C, ekvivalentna 4-struko nižoj stopi razlaganja. Ekstrapolacije su izvedene upotrebom jednostavne primene Arrhenius-ove jednačine, gde povećanje od 10°C u temperaturi obezbeđuje 2-struko povećanje u stopi reakcije, pretpostavljajući isti reakcioni mehanizam i da je aktivaciona energija za svaku relevantnu reakciju oko 50 kJ/mol.

[0078] Osenčene vrednosti označavaju uslove koncentracije/čuvanja koji su imali manje od 10% razlaganja, što može biti poželjno za tečnu formulaciju.

Tabela 3

Predviđanje stabilnosti za rastvore AMG 416

[0079] Poređenje podataka prikazanih u Tabelama 1 i 2 omogućava procenu povećanja temperature kao sredstva za predviđanje dugotrajne stabilnosti rastvora AMG 416. Podaci od 0.67 do 20 mg/mL su predstavljeni u Tabeli 4, u daljem tekstu, i prikazuju ubrzanje razlaganja na 40°C, što je izrazito više nego što je predviđeno pomoću Arrhenius-ove jednačine (sa pretpostavkama opisanim, u prethodnom tekstu). Ovo sugeriše da će podaci o ubrzanoj stabilnosti predvideti veći stepen razlaganja nego što će biti zabeleženi na stvarnoj temperaturi čuvanja.

Tabela 4

PRIMER 3

Stabilnost tečnih formulacija AMG 416 u opsegu pH

[0080] U ovoj studiji, stabilnost tečnih formulacija AMG 416, na koncentraciji od 10 mg/mL, je određena u opsegu pH u sukcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru. AMG 416 HCl (257 mg powder) je rastvoren u 20 ml pH 4.5 sukcinatno puferisanog fiziološkog rastvora da bi se dobilo 10.0 mg/ml koncentracije peptida (podešena za sadržaj peptida u prahu). Rastvor je ravnomerno podeljen u pet 4 mL porcija koje su podešene do pH 2, 3, 4, 5 i 6, respektivno, sa NaOH i HCl prema potrebi. Tri 1 mL rastvora su podeljena u alikvote iz svake porcije i inkubirana na 2-8°C, na sobnoj temperaturi (oko 25°C) i na 40°C, respektivno. Preostali 1 mL rastvora u svakoj alikvoti je razblažen sa pH 4.5 sukcinatno puferisanim fiziološkim rastvorom do 4 mL od 2.5 mg/mL koncentracije peptida, pH je podešen, i inkubiran na isti način. Uzorci su uzimani prema rasporedu i razblaženi sa dejonizovanom vodom do 1.0 mg/mL za HPLC analizu.

[0081] Čistoća na vremenskoj tački od 28 dana za sve testirane uzorke data je u Tabeli 5 (napomena: početna vrednost čistoće bila je 99.3% za ovu studiju). Rezultati daju profil stabilnosti kao funkciju pH, temperature i koncentracije.

Tabela 5

[0082] Vremenski tok razlaganja AMG 416 kao funkcija pH je prikazan na Slici 3. U oba rastvora, 10 mg/mL (Slika 3A) i 2.5 mg/mL (Slika 3B), najmanje razlaganje je zabeleženo na pH 3. U oba rastvora, razlaganje na pH 6 teče najbrže sa čistoćom koja dostiže 50% do 29 dana. HPLC analiza je pokazala glavni proizvod razlaganja na pH 2 koji se razlikuje od proizvoda razlaganja na pH većoj od 3. Na nižoj pH, razlaganje je pretežno preko deamidacije putem hidrolize i na višoj pH, razlaganje je pretežno formiranje homodimera.

[0083] Profil stabilnosti kao funkcija pH na 28. danu je prikazan na Slici 4. Može se ponovo videti u oba rastvora, 10 mg/mL (Slika 4A) i 2.5 mg/mL (Slika 4B) da je u ovoj grupi eksperimenata, pH najmanjeg razlaganja približno 3.0. Pored toga, smanjenja u čistoći su povezana sa temperaturom na svim nivoima pH, sa najmanjim razlaganjem zabeleženim u uzorcima inkubiranim na 2-8°C, i najvećim razlaganjem zabeleženim u uzorcima inkubiranim na 40°C.

[0084] Na bazi stepena razlaganja na 28 dana, predviđanja stepena razlaganja su izračunavana kao što je opisano, u prethodnom tekstu. Previđanja za 10 mg/mL rastvor su data u Tabeli 6 i predviđanja za 2.5 mg/mL su data u Tabeli 7. Osenčene vrednosti prikazuju uslove koji pokazuju manje od 10% razlaganja, i koji mogu biti poželjni za tečnu formulaciju. Uslovi gde uzorak na 28 dana pokazuje malo veću čistoću od početnih podataka prikazani su kao 0.0% za sve projekcije.

[0085] Ove ekstrapolacije sugerišu manje od 10% razlaganja posle 2 godine na sobnoj temperaturi za 2.5 ili 10 mg/mL rastvore na pH 3. Uopšteno, podaci za višu temperaturu predviđaju veće razlaganje na 2 godine od podataka za nižu temperaturu. Na taj način, za studije 10 mg/mL (Tabela 6), dok je pH 3 predviđen da je manje od 10% razlaganja iz svih podataka o temperaturi, podaci za 2-8°C predviđaju niži stepen razlaganja od viših temperatura, i ustvari na 2-8°C, podaci za pH 4 takođe podržavaju manje od 10% razlaganja. Slično tome, na 2.5 mg/mL, pH opseg od 2-4 je predviđen da ima manje od 10% razlaganja tokom 2 godine na sobnoj temperaturi kada je ekstrapoliran iz podataka za 2-8°C.

Tabela 6

Predviđanja stabilnosti za AMG 41610 mg/mL rastvore na bazi stepena razlaganja na 28 dana

Tabela 7

[0086] Tabela 8 prikazuje efekat ubrzanja temperature za ove podatke na sličan način kao u Tabeli 4, u prethodnom tekstu. Ovo ponovo ukazuje na to da povišenje temperature ima tendenciju da obezbedi veće ubrzanje razlaganja nego što je očekivano ekstrapolacijom na bazi jednostavne primene Arrhenius-ovih principa.

Tabela 8

[0087] Na svakoj pH vrednosti, podaci o razlaganju za svaku od tri temperature su upoređivani sa podacima za druge dve temperature da bi se izračunalo zabeleženo ubrzanje. Predviđeno ubrzanje je preko jednostavnne primene Arrhenius-ovih principa kao što je opisano u prethodnom tekstu. Kao što je opisano, u daljem tekstu, HPLC analiza pokazuje da je pretežni mehanizam razlaganja na pH manjoj od oko 3 različit od onoga koji je zabeležen na pH većoj od oko 3.

PRIMER 4

Efekat ekscipijenasa za podešavanje toničnosti na stabilnost

[0088] U ovoj studiji, određivani su efekti različitih farmaceutskih ekscipijenasa na stabilnost AMG 416 u tečnoj formulaciji. Pripremljen je 10 mg/mL rastvor AMG 416 i stok rastvori manitola, glicina, arginina, NaCl i Na2SO4 u 2x izotoničnim koncentracijama. pH AMG 416 rastvora i pet rastvora ekscipijensa i dejonizovane vode posebno su podešeni do pH 3.5 upotrebom HCl/NaOH. 500 μL alikvote svakog od šest rastvora su dodati u staklene vijalice i 500 μL AMG 416 rastvora je dodato u iste vijalice i dobro mešano. Ovo je izvedeno u tri ponavljanja da bi se obezbedilo osamnaest vijalica uzoraka, od kojih svaka sadrži 5 mg/mL AMG 416 i izotoničnu koncentraciju ekscipijensa (ili dejonizovane vode). Ovo je ponovljeno sa grupom rastvora podešenih do pH 4.5, obezbeđujući dodatnih osamnaest vijalica sa uzorkom. Uzorci su inkubirani i uklonjeni za HPLC analizu na relevantnim vremenskim tačkama.

[0089] Podaci o stabilnosti na vremenskoj tački od 56-dana su prikazani u Tabeli 9. Opseg ponašanja vezanog za stabilnost je zabeležen kao funkcija ekscipijensa. Pod većinom testiranih uslova, NaCl formulacije su pokazale najmanju količinu razlaganja. Izuzeci su za 2-8°C podatke na pH 3.5 i 4.5. Varijabilniji su zabeleženi za druge ekscipijense, iako izgleda da je arginin štetan u uzorcima na 40°C i u pH 4.5 uzorku na sobnoj temperaturi (oko 25°C), i izgleda da je natrijum sulfat štetan u uzorcima na pH 4.5 na sobnoj temperaturi i na 40°C.

Tabela 9

[0090] Tabela 10 ekstrapolira podatke za čuvanje od 2 godine na sobnoj temperaturi, i sličan trend je zabeležen kao što je razmatrano, u prethodnom tekstu, po tome što viša temperatura čuvanja generalno predviđa brže razlaganje nego što je očekivano preko jednostavne primene Arrhenius-ovih principa.

Tabela 10

Predviđeni stepen razlaganja (%) za 5 mg/mL AMG 416 rastvore posle 2 godine čuvanja na sobnoj temperaturi

[0091] Podaci pokazuju da natrijum hlorid može biti pogodan modifikator toničnosti za formulacije AMG 416 rastvora.

PRIMER 5

Stabilnost rastvora u različitim puferima

[0092] U ovoj studiji, stabilnost tečnih formulacija AMG 416 je procenjivana u četiri različita pufera tokom 9 dana. Puferisani fiziološki rastvori su pripremljeni u koncentraciji od 25 mM, pH 4.5, za četiri različita anjonska pufera u obliku natrijumove soli: acetat, citrat, laktat i sukcinat. AMG 416 HCl (prah) je rastvoren u svakom puferisanom rastvoru da bi se obezbedio 2.5 mg/mL rastvor i pH je podešena do 4.5 sa HCl/NaOH. Rastvori su razblaženi dodatno sa pH 4.5 puferom do 1.0 mg/mL i 0.25 mg/mL. Svaki od dobijenih rastvora je podeljen u dve staklene HPLC vijalice, jednu čuvanu na 2-8°C i jednu na sobnoj temperaturi (oko 25°C). HPLC analiza je izvedena na 0, 4 i 9 dana za određivanje potencije i čistoće.

[0093] Čistoća AMG 416 u većini uzoraka na svim vremenskim tačkama bila je 100%, sa izuzetkom nekoliko malih pikova za citratni uzorak na 9 dana koji mogu biti pripisani osnovnoj varijaciji. U svim testiranim puferima, AMG 416 je pokazao dobru stabilnost u toku studije od 9 dana.

PRIMER 6

Stabilnost u puferisanim rastvorima na pH 2.25, 2.53.0 i 3.5

[0094] U ovoj studiji, ispitivana je stabilnost tečne formualcije AMG 416 pod uslovima niske pH. Sukcinatom puferisani fiziološki rastvor (10 mM, pH 3.5) je pripremljen rastvaranjem 59 mg ćilibarne kiseline u 45 ml laboratorijski obrađene (dejonizovane) vode i podešavanjem pH do 3.5 upotrebom 1N HCl i 1N NaOH prema potrebi, i količine do 50 ml. Na isti način, pripremljen je 10 mM, pH 3.5 natrijum laktat (56 mg/50 mL) puferski rastvor.

[0095] AMG 416 HCl (128 mg prah) je rastvoren u 20 mL sukcinatnog pufera da bi se dobilo 5 mg/mL AMG 416 rastvora koji je podeljen u dve iste 10 mL porcije. NaCl (90 mg) je dodat u jednu porciju i manitol (500 mg) je dodat u drugu. Svaka porcija od 10 mL je podeljena u dve iste porcije od 5 mL i pH je podešena do 2.25 i 3.5, respektivno, sa 1N HCl i 1N NaOH. Na isti način, četiri rastvora od 5 mL su pripremljena upotrebom laktatnog pufera. 1.0 mL svakog od (osam) rezultirajućih rastvora je dodato u 3 vijalice za uzorak seruma. Pored toga, preostali pH 2.25, sukcinatno puferisani AMG 416 rastvor koji sadrži NaCl je podešen do pH 2.5 i 0.5 mL alikvote su dodate u 3 vijalice sa uzorkom seruma i preostali pH 3.5 sukcinatno puferisani rastvor sa NaCl je podešen do pH 3.0 i 0.5 mL alikvote su dodate u 3 vijalice sa uzorkom seruma. Videti Tabelu 11.

[0096] Na svakoj vremenskoj tački (0, 2, 8, 12 i 24 nedelje) svih 30 uzoraka su uzeti iz skladišta, ekvilibrisani do sobne temperature (oko 25°C), i 100 μL alikvota je razblažena do 0.5 mg/mL sa vodom za RP-HPLC analizu. Preostali uzorci su ponovo hermetički zatvoreni i vraćeni u njihove odgovarajuće uslove čuvanja.

Tabela 11

[0097] Reprezentativni HPLC podaci za studiju su prikazani na Slikama 5 i 6. HPLC trag prikazan na Slici 5 je pH 2.25 uzorak čuvan 67 dana na 40°C (5 mg/mL, 87.8% čistoća). Slika 5B prikazuje različitu skalu da bi se videle nečistoće. Slika 6 ilustruje efekat rastuće pH do 3.5 za inače ekvivalentnu formulaciju (pH 3.5, 40°C, 5 mg/mL, 67 dana, 91.7% čistoća). Slika 6B prikazuje različitu skalu da bi se videle nečistoće. Kao u prethodnoj studiji, izrazita razlika je zabeležena u profilu proizvoda razlaganja kako se pH menja.

[0098] AMG 416 čistoća kao funkcija vremena je predstavljena u Tabeli 12 (10 mM koncentracija pufera: L = laktat; S =sukcinat. Modifikator toničnosti: N = 0.9% NaCl; M = 5% manitol). Napomena: korišćena serija je sadržala 3.4% dimera na vremenu 0. Vremenska tačka za dan 14 za uzorak 26 je izostavljena zbog greške u pripremi uzorka.

[0099] Izabrani trendovi podataka su predstavljeni u grafičkom obliku na Slikama 7-9.

Tabela 12

[0100] Slika 7 obezbeđuje stabilnost rastvora AMG 416 (5 mg/mL) u sukcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru kao funkciju pH pod uslovima u frižideru (2-8°C). Slika 8 obezbeđuje stabilnost rastvora AMG 416 (5 mg/mL) u sukcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru kao funkciju pH posle čuvanja na sobnoj temperaturi. Slika 9, obezbeđuje stabilnost rastvora AMG 416 (5 mg/mL) u sukcinantno puferisanom fiziološkom rastvoru kao funkciju pH posle čuvanja na 40°C.

[0101] Profil proizvoda razlaganja na najkasnijoj vremenskoj tački je predstavljen u Tabeli 13, i vremenski tok pojave dva glavna proizvoda razlaganja (C-terminalna deamidacija i formiranje homodimera) je prikazano u Tabelama 14 i 15. Slike 10 i 11 predstavljaju vremenski tok razlaganja na ove pojedinačne proizvode (C-terminalna deamidacija i formiranje homodimera, respektivno) kao funkcija pH za izabrane formulacije (one formulacije za koje je dostupna kompletna grupa pH uslova, tj., one koje sadrže NaCl i sukcinat, ali ne laktat ili manitol).

[0102] Slika 10 prikazuje jasnu zavisnost od pH za deamidaciju, sa značajno većim razlaganjem preko ovog puta na pH 2.25 nego na višim pH, i direktnu vezu između između pH i količine deamidacije. Nasuprot tome, formiranje homodimera predstavljeno na Slici 11 pokazuje suprotnu vezu između pH i stepena razlaganja. Ovi suprotni trendovi su u osnovi ukupnih podataka o stabilnosti predstavljenih na Slikama 7-9, i maksimalna stabilnost za AMG 416 rastvore u ovoj grupi eksperimenata je zabeležena na pH od 3.0 ± 0.5.

[0103] Korelacija između stabilnosti i sastava ekscipijensa je manje jasna. Što se tiče izbora pufera (sukcinat naspram laktata), pregled podataka u Tabelama 12-14 ne pokazuje jasan obrazac preferencije za bilo koji pufer u odnosu na bilo koji od glavnih proizvoda razlaganja na pH 2.25 ili 3.5. Svi uzorci sa sukcinatnim puferom su pokazali nižu čistoću na vremenu 0 od odgovarajućih laktatno-puferisanih uzoraka, zbog veće integracije homodimernog pika. Razlog za ovo je nejasan, ali može da ukaže na promenu u relativnoj apsorbanci za ishodnu supstancu i dimer kao funkcije pufera. Međutim, kao što je navedeno u prethodnom tekstu, kasnija inkubacija obezbeđuje uglavnom identičnu stopu razlaganja u prisustvu bilo kog pufera. Što se tiče izbora modifikatora toničnosti (NaCl ili manitol), natrijum hlorid izgleda da pojačava stopu deamidacije na pH 2.25 (videti Tabelu 13, uzorci 9-12 na 25°C i naročito uzorci 17-20 na 40°C). Međutim, NaCl izgleda da suprimira (u poređenju sa manitolom) razlaganje do homodimera na pH 3.5 (Tabela 14, uzorci 13-16 na 25°C i naročito uzorci 21-24 na 40°C).

Tabela 13

10 mM koncentracija pufera: L = laktat; S = sukcinat. Modifikator toničnosti: N = 0.9% NaCl; M = 5% manitol). Vrednost za dimer % reflektuje povećanje u proizvodu razlaganja posle oduzimanja početne vrednosti.

Tabela 14

10 mM koncentracija pufera: L = laktat; S = sukcinat. Modifikator toničnosti: N = 0.9%

NaCl; M = 5% manitol).

[0104] Maksimalna stabilnost za AMG 416 rastvore u ovoj grupi eksperimenata zabeležena je na pH od 3.0 ± 0.5. Stopa ukupnog razlaganja na pH 2.5 i 3.5 je slična, ali profil proizvoda razlaganja je različit. Stabilnost na pH 2.25 je manja kao posledica većeg stepena zabeležene deamidacije. Dok neki efekat ekscipijensa može biti zabeležen na profilu stabilnosti, podaci ne ukazuju na ukupnu preferenciju među ispitivanim sistemima eskcipijensa, kada su formulisani na pH 3.0.

Tabela 15

(10 mM koncentracija pufera: L = laktat; S = sukcinat. Modifikator toničnosti: N = 0.9% NaCl; M = 5% manitol). Napomena: razlaganje je izraženo kao povećanje u sadržaju dimera (ne ukupni dimer) jer je API korišćen za eksperiment sadržao znatnu količinu dimera.

[0105] Maksimalna stabilnost za AMG 416 rastvore u ovoj grupi eksperimenata zabeležena je na pH od 3.0 ± 0.5. Analiza rastvora formulisanih na pH 2.5 ili 3.5 pokazala je različite profile razlaganja, pri čemu je C-terminalna hidroliza amida dala najveći proizvod razlaganja na niskoj pH, dok je formiranje homodimera najveće na višim pH. Za tečne formulacije na pH 3.0 predviđeno je ukupno razlaganje od 2-4% tokom 2 godine pod uslovima u frižideru.

PRIMER 7

Studija stabilnosti

[0106] U ovoj studiji, ispitivana je stabilnost tečne formulacije AMG 416 pod različitim uslovima proizvodnje i analitičkim uslovima. Pripremljeno je četrnaest grupa formulacija za testiranje, od kojih svaka ima različitu kombinaciju pH (2.7, 3.3 ili 3.9), koncentracije peptida (4, 5 ili 6 mg/mL) i koncentraciju soli (0.7, 0.85 ili 1.0%). Osmolaritet svake formulacije je održavan istim (sukcinat 10 mM). Videti Tabelu 16.

Tabela 16

Uzorci (2.1 mL) svake od grupa za testiranje formulacije su sipani u 3mL tip 1B staklene vijalice (Schott, Germany) i hermetički su zatvoreni (gumeni zapušač). Grupe vijalica su čuvane u uspravnom položaju tri meseca na temperaturama od 4°C, 25°C ili 40°C. Promene u pH, osmolarnosti, procentu AMG 416, i proizvodima razlaganja su procenjivani tokom tri meseca.

[0107] Površina odgovora zavisna od vremena definisana sa tri faktora (pH, % peptida i % NaCl) je procenjivana aproksimacijom statističkog modela koji opisuje takvu površinu sa podacima za svaki HPLC odgovor i na svakoj temperaturi (JMP® statistički softver, SAS). Monte Carlo simulacija je korišćena za generisanje raspodela predviđenih HPLC odgovora na zadatoj tački (pH = 3.3, peptid = 5% i NaCl = 8.5%) kao funkcija slučajne varijacije faktora oko zadate tačke i slučajnog šuma.

[0108] Nije zabeležena značajna promena u pH i osmolarnosti sa vremenom. Na 4°C i 25°C, čistoća je ostala 92% ili više, deamidacija je bila 4% ili manje i formiranje homodimera je bilo 4% ili manje tokom cele dužine studije. Na 40°C, čistoća, deamidacija i formiranje homodimera je zabeleženo počevši od meseca 1. Međutim, deamidacija i formiranje homodimera su smanjeni kako je pH opseg sužen oko 3.3, što ukazuje na to da pH ima značajan uticaj na formiranje ovih proizvoda razlaganja.

[0109] Na osnovu ovih podataka, moguće je obezbediti predviđanje profila čistoće u opsegu od pH od 2.8 do 3.8. Kao što je prikazano na Slici 12, čistoća na svakoj temperaturi je snažno zavisna od pH, i manje zavisna od koncentracije peptida i NaCl unutar testiranog opsega. Pod uslovima u frižideru, efekat pH je manje značajan na vrednostima iznad pH 3.3, ali na sobnoj temperaturi (oko 25°C), više pH vrednosti su povezane sa bržim razlaganjem. Formulacije za terapeutsku upotrebu mogu biti podvrgnute dugotrajnom čuvanju pod uslovima u frižideru. Pored toga, trebalo bi razmotriti potencijalno izlaganje formulacije višim temperaturama u toku proizvodnje, pakovanja, etiketiranja i kliničke upotrebe. Na taj način, u ovoj grupi eksperimenata, zabeleženo je da bi pH vrednost u testiranom opsegu od 2.8 do 3.8 (3.3 ± 0.5) bila pogodna za AMG 416 formulacije.

PRIMER 8

Dugotrajna stabilnost tečnih formulacija AMG 416 u opsegu pH

[0110] U ovoj studiji, dugotrajna stabilnost tečne formulacije AMG 416, u koncentraciji od 3.4 mg/mL, određivana je u opsegu pH u sukcinatno puferisanom fiziološkom rastvoru. USP prečišćena voda (1200 mL) je sipana u staklenu čašu. Natrijum sukcinat (4.05 g) i natrijum hlorid (13.5 g) su dodati i mešani da bi se rastvorili. pH je podešena do 2.5 sa 1N NaOH i/ili 1N HCl prema potrebi. AMG 416 HCl (5.5 g težina praha) je dodat, mešan da bi se rastvorio i dopunjen do 1500 mL sa prečišćenom vodom da bi se dobio 3.4 mg/mL rastvor (AMG 416). Rastvor je podeljen u tri porcije i pH za svaku porciju je podešena do 2.5, 3.0 i 3.5, respektivno. Svaki rastvor je filtriran posebno kroz 0.22 mikronski PVDF filter i sipan po 2 mL u 5-cc vijalice. Pošto su zatvorene čepovima, hermetički zatvorene i etiketirane, vijalice su postavljene u naznačene komore za merenje stabilnosti na 5°C ± 3, 25°C ± 2 i 40°C ± 2. Uzorci su uzimani prema režimu i razblaženi sa dejonizovanom vodom do 1.0 mg/mL za HPLC analizu. Čistoća tokom meseci 0, 1, 2, 3, 5, 12 i 24 je data u Tabeli 17 (napomena: početna vrednost čistoće bila je 99.2% za ovu studiju). Rezultati obezbeđuju dugotrajni profil stabilnosti tečne formulacije od 3.4 mg/mL AMG 416 kao funkciju pH i temperature.

Tabela 17

[0111] Vremenski tok čistoće tečne formulacije AMG 416 na svakom nivou pH je prikazan na Slici 13. Na svim temperaturama, najveća čistoća je zabeležena na pH 3.5, dok je najveće razlaganje zabeleženo na pH 2.5. Pored toga, na svim temperaturama, čistoća na pH 3.0 i 3.5 bila je značajno veća od čistoće na pH 2.5. Na taj način, na primer, za uzorke u frižideru, čistoća na 24 meseca bila je 98.3 i 97.7 za rastvore na pH 3.5 i 3.0, respektivno, ali samo 94.8 za rastvor na pH 2.5. Pored toga, smanjenje u čistoći je zabeleženo da je povezano sa temperaturom na svim nivoima pH, sa najmanjim zabeleženim razlaganjem u uzorcima inkubiranim na 2-8°C i najveće razlaganje je zabeleženo u uzorcima inkubiranim na 40°C. Glavni proizvod razlaganja zabeležen na pH 2.5 je deamidovani proizvod i na pH 3.5 zabeležen je homodimer.

[0112] Ovi podaci potvrđuju da su opisane formulacije sposobne da održavaju adekvatnu stabilnost AMG 416 tokom najmanje dve godine roka trajanja pod uslovima u frižideru. Zabeleženo razlaganje je linearno u svim slučajevima i podržava zaključke na bazi ekstrapolacije podataka iz ranijih eksperimenata. Iz ovh podataka, optimalna pH leži između 3.0 i 3.5 na bazi ravnoteže između različitih puteva razlaganja.

[0113] Sve publikacije, patenti i patentne prijave citirani u ovoj specifikaciji su ovde obuhvaćeni referencom kao da je svaka pojedinačna publikacija ili patentna prijava specifično i pojedinačno naznačena kao obuhvaćena referencom. Iako je gore navedeni pronalazak opisan donekle detaljno preko ilustracije i primera za svrhe boljeg razumevanja, stručnjacima iz date oblasti tehnke biće jasno u svetlu navoda ovog pronalaska da određene promene i modifikacije mogu biti napravljene bez udaljavanja od smisla i obima priloženih patentnih zahteva.

Claims (15)

Patentni zahtevi

1. Farmaceutska formulacija koja sadrži AMG 416 u vodenom rastvoru, naznačena time što formulacija ima pH od 2.0 do 5.0.

2. Formulacija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što formulacija ima pH od 2.5 do 4.5.

3. Formulacija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što formulacija ima pH od 2.5 do 4.0.

4. Formulacija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što formulacija ima pH od 3.0 do 3.5.

5. Formulacija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što je pH održavana pomoću farmaceutski prihvatljivog pufera.

6. Formulacija prema patentnom zahtevu 5, naznačena time što pufer je sukcinat.

7. Formulacija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što AMG 416 je prisutan u formulaciji u koncentraciji od 0.1 mg/mL do 20 mg/mL

8. Formulacija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što je AMG 416 prisutan u formulaciji u koncentraciji od 1 mg/mL do 15 mg/mL.

9. Formulacija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što je AMG 416 prisutan u formulaciji u koncentraciji od 2.5 mg/mL do 10 mg/mL.

10. Formulacija prema patentnom zahtevu 1, koja dalje sadrži farmaceutski prihvatljiv modifikator toničnosti.

11. Formulacija prema patentnom zahtevu 10, naznačena time što je modifikator toničnosti prisutan u formulaciji u koncentraciji koja je dovoljna da formulacija bude približno izotonična.

12. Formulacija prema patentnom zahtevu 10, naznačena time što regulator toničnosti je NaCl.

13. Formulacija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što formulacija ima manje od 10% razlaganja kada je čuvana na 2-8°C tokom 2 godine.

14. Formulacija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što formulacija ima manje od 10% razlaganja kada je čuvana na sobnoj temperaturi tokom 2 godine.

15. Formulacija koja sadrži 2 mg/mL do 20 mg/mL AMG 416 u vodenom rastvoru, sukcinatni pufer koji održava formulaciju na pH od oko 3.0 do 3.5, i dovoljnu koncentraciju natrijum hlorida da bi formulacija bila približno izotonična.