RS56294B1 - Jedinjenja 3,4-dihidroizohinolin-2(1h)-ila - Google Patents

Description

Opis

[0001] Pronalazak daje određena jedinjenja 3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-ila, njihove farmaceutske kompozicije, postupke za upotrebu istih i postupke za pripremu istih.

[0002] Parkinsonova bolest je hronični, progresivni, neurodegenerativni poremećaj okarakterisan gubitkom dopaminergičnih neurona u mozgu. Parkinsonova bolest se manifestuje tremorom u stanju mirovanja zajedno sa drugim motornim simptomima (npr. akinezija i bradikinezija) i nemotornim simptomima (npr. kognitivnim oštećenjem, poremećajima spavanja i depresijom). Trenutna terapija za tretman Parkinsonove bolesti obuhvata prekursore dopamina kao što su levodopa i agonisti dopamina kao što je pramipeksol. Takve direktno delujuće terapije dopaminom su ograničene u efikasnosti delimično zbog kognitivnog oštećenja povezanog sa visokom dozom, rizika od konvulzija (kao što je pokazano kod glodara za određene D1 agoniste) i razvoja tolerancije. Ostaje značajna neispunjena potreba za bezbednim i efikasnim tretmanom Parkinsonove bolesti.

[0003] Alosterni modulatori su sredstva koja neznatno menjaju interakcije liganada sa njihovim receptorima modifikacijom sredine koja vezuje ligand. Primer ovog tipa modulacije je kada vezivanje modulatora za alosterno (sekundarno) mesto proizvodi konformacionu promenu u receptornom proteinu koji je prenet do ligandovog ortosternog (primarnog) vezujućeg mesta. Nadeveno je da je kvalitet alosternog efekta pozitivan ako modulator olakšava ili stimuliše ili negativan ako inhibira interakciju liganda sa ortosternim vezujućim mestom.

[0004] Jedinjenja pema predmetnom pronalasku su pozitivni alosterni modulatori (PAMs) dopaminskog 1 receptora (D1). Kao takva, jedinjenja prema predmetnom pronalasku su korisna za lečenje stanja kod kojih D1 ima ulogu kao što je Parkinsonova bolest i šizofrenija, uključujući olakšanje povezanih simptoma kao što je blago kognitivno oštećenje kod Parkinsonove bolesti kao i kognitivno oštećenje i negativni simptomi kod šizofrenije. Takođe se veruje da su jedinjenja prema predmetnom pronalasku korisna u lečenju simptoma Alchajmerove bolesti kao što je kognitivno oštećenje. Jedinjenja prema predmetnom pronalasku su takođe korisna u poboljšanju motornih simptoma kod Parkinsonove bolesti kao monoterapija. Takođe, veruje se da su jedinjenja prema predmetnom pronalasku korisna u lečenju depresije i poremećaja smanjene pažnje i hiperaktivnosti (ADHD).

[0005] Predmetni pronalazak obezbeđuje određena nova jedinjenja koja su PAMs D1 receptora i, kao takva, su korisna u lečenju poremećaja razmatranih u prethodnom tekstu. Nova jedinjenja prema predmetnom pronalasku mogu da obezbede alternativan tretman za takve poremećaje. Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje kokristalni oblik određenih novih jedinjenja.

[0006] Objava evropske patentne prijave br. EP 330360 opisuje određena jedinjenja izohinolina kao agoniste opioidnog kapa-receptora i korisne kao analgetike.

[0007] SAD patent br. 5236934 opisuje određena jedinjenja 1,2,3,4-tetrahidroizohinolina kao inhibitore receptora za angiotenzin II i korisna za lečenje poremećaja CNS-a uključujući kognitivnu disfunkciju.

[0008] Objava SAD patentne prijave br. US 2006/0287359 opisuje određena jedinjenja tetrahidroizohinolina kao antagonista receptora za estrogen i korisna u lečenju bolesti povezanih sa estrogenom uključujući kancer dojke.

[0009] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I

gde

n je 0, 1 ili 2;

R<1>je halogen;

R<2>je halogen, H, CN, C1 - C3 alkoksi ili C1 - C3 alkil; i

R<3>je H, halogen, C1 - C3 alkoksi ili C1 - C3 alkil.

[0010] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje jedinjenje formule Ia

gde

n je 0, 1 ili 2;

R<1>je halogen;

R<2>je halogen, H, CN, C1 - C3 alkoksi ili C1 - C3 alkil; i

R<3>je H, halogen, C1 - C3 alkoksi ili C1 - C3 alkil.

[0011] Predmetni pronalazak dodatno obezbeđuje jedinjenje formule I ili Ia gde

n je 0, 1 ili 2;

R<1>je halogen;

R<2>je halogen; i

R<3>je H ili C1 - C3 alkoksi.

[0012] Predmetni pronalazak dodatno obezbeđuje jedinjenje formule I ili Ia gde

n je 0, 1 ili 2;

R<1>je Cl, F ili Br;

R<2>je Cl, OCH3, H, F, CN ili CH3; i

R<3>je OCH3, H, CH2CH3, Cl, OCH(CH3)2, OCH2CH3, F, CH(CH3)2ili CH3.

[0013] Predmetni pronalazak dodatno obezbeđuje jedinjenje formule I ili Ia n je 0 ili 2;

R<1>je Cl;

R<2>je Cl ili F; i

R<3>je H ili OCH3.

[0014] Predmetni pronalazak dodatno obezbeđuje jedinjenje formule Ib

[0015] Određeno jedinjenje formule I je jedinjenje formule Ic.

[0016] Određeno jedinjenje formule I je 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanon.

[0017] Predmetni pronalazak dodatno obezbeđuje kompoziciju koja sadrži 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanon i 4-hidroksibenzoevu kiselinu.

[0018] Predmetni pronalazak dodatno obezbeđuje kompoziciju koja sadrži 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanon i 4-hidroksibenzoevu kiselinu u odnosu od oko jedan prema jedan.

[0019] Predmetni pronalazak dodatno obezbeđuje kokristalni oblik kompozicije koja sadrži 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanon i 4-hidroksibenzoevu kiselinu.

[0020] Predmetni pronalazak doatno obezbeđuje stabilan kokristalni oblik kompozicije koja sadrži 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanon i 4-hidroksibenzoevu kiselinu.

[0021] Predmetni pronalazak dodatno obezbeđuje kokristalni oblik kompozicije koja sadrži 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanon i 4-hidroksibenzoevu kiselinu okarakterisanu pomoću obrasca rentgenske difrakcije upotrebom CuKa zračenja koje ima difrakcioni pik na difrakcionom uglu 2-teta od 18.2° u kombinaciji sa jednim ili više pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 16.0°, 25.4° i 7.0°; sa tolerancijom za difrakcione uglove od 0.2 stepena.

[0022] Posebno jedinjenje formule I je 2-(2,6-dihlorofenil)-1-((1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(2-hidroksipropan-2-il)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)etan-1-on.

[0023] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje kristalni oblik 2-(2,6-dihlorofenil)-1-((1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(2-hidroksipropan-2-il)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)etan-1-ona okarakterisan obrascem rentgenske difrakcije praha upotrebom CuKa zračenja koji ima difrakcioni pik na difrakcinom uglu 2-teta od 14.27° u kombinaciji sa jednim ili više od pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 15.71°, 18.01°, 18.68°, 22.43°, i 25.08°; sa tolerancijom za difrakcionim uglove od 0.2 stepena.

[0024] Pored toga, predmetni pronalazak daje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule I, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.

[0025] Pored toga, predmetni pronalazak daje postupak za lečenje Parkinsonove bolesti koji sadrži primenu na pacijenta kod koga postoji potreba za tim efikasne količine jedinjenja formule I.

[0026] Pored toga, predmetni pronalazak daje postupak za lečenje neurokognitivnih poremećaja povezanih sa Parkinsonovom bolešću koji sadrži primenu na pacijenta kod koga postoji potreba za tim efikasne količine jedinjenja formule I.

[0027] Pored toga, predmetni pronalazak daje postupak za lečenje šizofrenije koji sadrži primenu na pacijenta kod koga postoji za tim efikasne količine jedinjenja formule I.

[0028] Pored toga, predmetni pronalazak daje postupak za lečenje Alchajmerove bolesti koji sadrži primenu na pacijenta kod koga postoji potreba za tim efikasne količine jedinjenja formule I.

[0029] Pored toga, predmetni pronalazak daje jedinjenje formule I za upotrebu u terapiji.

[0030] Pored toga, predmetni pronalazak daje jedinjenje formule I za upotrebu kao lek.

[0031] Pored toga, predmetni pronalazak daje jedinjenje formule I za upotrebu u lečenju Parkinsonove bolesti.

[0032] Pored toga, predmetni pronalazak daje jedinjenje formule I za upotrebu u lečenju šizofrenije.

[0033] Pored toga, predmetni pronalazak daje jedinjenje formule I za upotrebu u lečenju Alchajmerove bolesti.

[0034] Pored toga, predmetni pronalazak daje upotrebu jedinjenja formule I za proizvodnju leka za Parkinsonovu bolest.

[0035] Pored toga, predmetni pronalazak daje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H-il]etanon i 4-hidroksibenzoevu kiselinu i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.

[0036] Jedinjenje formule I može biti korišćeno u kombinaciji sa drugim lekovima koji su korišćeni u lečenju/prevenciji/supresiji ili poboljšanju bolesti ili stanja za koja su jedinjenja formule I korisna uključujući Parkinsonovu bolest i šizofreniju. Takav drugi lek(ovi) može biti primenjivan, putem i u količini koji su uobičajeno korišćeni za njega, istovremeno ili uzastopno sa jedinjenjem formule I. Kada je jedinjenje formule I korišćeno istovremeno sa jednim ili više drugih lekova, poželjan je farmaceutski jedinični oblik doze koji sadrži takve druge lekove pored jedinjenja formule I. Prema tome, farmaceutske kompozicije prema predmetnom pronalasku obuhvataju one koje takođe sadrže jedan ili više drugih aktivnih sastojaka, pored jedinjenja formule I. Primeri drugih aktivnih serdstava efikasnih u lečenju Parkinsonove bolesti koji mogu biti kombinovani sa jedinjenjem formule I, bilo primenjeni posebno ili u istoj farmaceutskoj kompoziciji obuhvataju, ali bez ograničenja na:

(a) prekursore dopamina kao što su levodopa; melevodopa i etilevodopa; i

(b) agoniste dopamina uključujući pramipeksol, ropinirol, apomorfin, rotigotin, bromokriptin, kabergolin i pergolid.

[0037] Razume se da jedinjenja prema predmetnom pronalasku mogu da postoje kao stereoizomeri. Primeri izvođenja predmetnog pronalaska obuhvataju sve enantiomere, diastereomere i njihove smeše. Poželjni primeri izvođenja su pretežno jedan diastereomer. Poželjniji primeri izvođenja su pretežno jedan enantiomer.

[0038] Poželjan je poseban diastereomer jedinjenja formule I predstavljen jedinjenjem formule Ia

gde isprekidana veza i klinasta veza predstavljaju diastereomer trans konfiguracije.

[0039] Određeni enantiomer jedinjenja formule I ili Ia predstavljen Primerima uključujući jedinjenje Primera 1: 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanon je poželjniji.

[0040] Kao što je ovde korišćen, termin "kokristal" označava višekomponentni kristalni čvrsti oblik koji sadrži dva jedinjenja gde je veza jedinjenja primarno preko nekovalentnih i nejonskih hemijskih interakcija kao što je vodonična veza. U farmaceutskoj oblasti, kokristal tipično sadrži prvo jedinjenje koje je aktivni farmaceutski sastojak i drugo jedinjenje koje je označeno kao jedinjenje gost ili koformer. Kokristal može biti razlikovan od kristalnog oblika soli po tome što prvo jedinjenje ostaje uglavnom nenaelektrisano ili neutralno. Kokristal može biti razlikovan od kristalnog oblika hidrata ili solvata po tome što jedinjenje gost nije isključivo voda ili rastvarač. Poželjan kokristal je onaj stabilnog oblika koji ima pogodnu tačku topljenja.

[0041] Kao što je ovde korišćena, grupa "halogen" označava hloro, fluoro, bromo ili jodo. Posebne vrednosti halogena su hloro i fluoro.

[0042] Kao što je ovde korišćena, grupa "C1 - C3 alkoksi" označava metoksi, etoksi, npropoksi i i-propoksi. Posebna vrednost C1 - C3 alkoksi je metoksi.

[0043] Kao što je ovde korišćena, grupa "C1 - C3 alkil" označava metil, etil, n-propil i ipropil. Posebna vrednost C1- C3 alkil je metil.

[0044] Kao što je ovde korišćen, termin "pacijent" označava životinju kao što je sisar i obuhvata čoveka. Čovek je poželjan pacijent.

[0045] Takođe je jasno da stručnjak iz date oblasti tehnike može da leči Parkinsonovu bolest primenom na pacijenta koji trenutno ispoljava simptome efikasne količine jedinjenja formule I. Na taj način, termini "tretman" i "lečenje" su određeni tako da označavaju sve postupke gde može biti usporavanja, prekida, zaustavljanja, kontrole ili stopiranja napredovanja postojećeg poremećaja i/ili njegovih simptoma, ali neophodno ne ukazuje na ukupnu eliminaciju svih simptoma.

[0046] Jasno je da stručnjak iz date oblasti tehnike može lečiti Parkinsonovu bolest primenom na pacijenta u riziku od budućih simptoma efikasne količine jedinjenja formule I i namera je da obuhvata profilaktički tretman istih.

[0047] Kao što je ovde korišćen, termin "efikasna količina" jedinjenja formule I označava količinu, koja je doza, koja je efikasna u lečenju poremećaja, kao što je Parkinsonova bolest opisanu ovde. Nadležni dijagnostičar, kao stručnjak iz date oblasti tehnike, može lako da odredi efikasnu količinu upotrebom konvencionalnih tehnika i posmatranjem rezultata dobijenih pod analognim uslovima. U određivanju efikasne količine ili doze jedinjenja formule I, razmatra se određeni broj faktora, uključujući, ali bez ograničenja na jedinjenje formule I koje se primenjuje; koprimenu drugih sredstava, ako su korišćena; vrstu sisara; njegovu veličinu, starost i opšte zdravstveno stanje; stepen obuhvaćenosti ili težinu poremećaja, kao što je Parkinsonova bolest; odgovor pojedinačnog pacijenta; način primene; karakteristike biodostupnosti primenjenog preparata; izabrani režim doziranja; upotreba druge istovremene medikacije; i druge relevantne okolnosti.

[0048] Jedinjenje formule I može biti primenjeno pojedinačno ili u obliku farmaceutske kompozicije sa farmaceutski prihvatljivim nosačima, razblaživačima ili ekscipijensima. Takve farmaceutske kompozicije i postupci za pripremu istih su poznati u stanju tehnike (videti, npr., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, D.B. Troy, Editor, 21st Edition., Lippincott, Williams & Wilkins, 2006).

Analiza pozitivne alosterne modulacije humanog receptora D1

[0049] HEK293 ćelije koje stabilo eksprimiraju humani receptor D1 su generisane preko retrovirusne trandukcije gena upotrebom pBABE-bleo vektora i Phoenix retrovirusnog sistema. Ćelije su gajene u DMEM/F12 (Gibco) dopunjenoj sa 10% telećim serumom, 20 mM HEPES, 2 mM glutamatom i 150 µg/ml zeocina na 37°C u 5% CO2. Na približno konfluenciji 80%, ćelije su sakupljene upotrebom 0.25% tripsina/EDTA, suspendovanog u FBS plus 8% DMSO, i čuvane u tečnom azotu. Na dan analize, ćelije su odmrznute i resuspendovane u STIM puferu (Hanksov ravnotežni rastvor soli dopunjen sa 0.1% BSA, 20 mM HEPES, 200 µM IBMX i 100 µM askorbinske kiseline). Test jedinjenje je serijski razblaženo (1:3) u DMSO i zatim dodatno razblaženo 1:40 u STIM puferu koji sadrži 2X EC20koncentraciju dopamina. Koncentracija EC20dopamina je definisana kao koncentracija koja povećava ciklični AMP do 20% od maksimalne količine koja može biti indukovana dopaminom; u ovoj analizi, ECmax je 5 µM, i EC20 je generalno 12 nM. Dvadeset i pet µl ovog rastvora je mešano sa 25 µl ćelijske suspenzije (1,250 ćelija) i dispergovano u svaku komoricu 96-komornih ploča sa polovinom zapremine komorica; krajnja koncentracija DMSO je 1.25%. Ploče su inkubirane na 25°C u trajanju od 60 min. Proizvodnja cAMP je kvantitativno određivana upotrebom HTRF detekcije (Cisbio™) prema uputstvima prodavca: pufer za lizu koji sadrži anti-cAMP kriptat i D2-konjugat (svaki po 25 µl) dodati su u komorice, ploče su inkubirane još 60-90 min, i fluorescencija je detektovana upotrebom EnVision uređaja za očitavanje ploče (PerkinElmer™). Podaci su prevedeni u koncentracije cAMP upotrebom cAMP standardne krive i analizirani kao apsolutna EC50upotrebom 4-parametarske nelinearne logističke jednačine (Abase™ v5.3.1.22). Apsolutna EC50 za pozitivni alosterni modulator je izračunata kao koncentracija koja stvara polovinu maksimalne količine cAMP, na bazi prozora u opsegu od EC20dopamina, koja definiše minimalni odgovor, do odgovora ECmax, definisanog dodavanjem 5 µM dopamina.

[0050] U gore navedenoj analizi, jedinjenja ilustrovana ovde pokazuju apsolutnu EC50 manju od 300 nM na humanom D1 receptoru. Jedinjenje Primera 1 ispoljava apsolutnu EC50od 3.66 ± 0.67 nM (SEM; n=9) sa maksimalnim odgovorom od 83.8 ± 4.4 % na humanom D1 receptoru. Kokristal iz Primera 2 ispoljava apsolutnu EC50 od 1.11 ± 0.11 nM (SEM; n=2) na humanom D1 receptoru. Jedinjenje iz Primera 3 ispoljava apsolutnu EC50 od 11.75 ± 1.27 nM (SEM; n=16) sa maksimalnim odgvorom od 91.3 ± 2.4 % na humanom D1 receptoru. Ovi podaci pokazuju da su ilustrovana jedinjenja formule I pozitivni alosterni modulatori humanog D1 receptora.

[0051] Anti-Parkinsonovi efekti jedinjenja prema pronalasku mogu biti određivani upotrebom postupaka dobro poznatih u stanju tehnike kao što su životinjski modeli lokomotorne aktivnosti uključujući efekte na bazalnu (na koju je naviknut) lokomotornu aktivnost i na akineziju indukovanu rezerpinom kod „knock-in“ miševa sa humanizovanim dopaminskim 1 receptorom (D1).

Generisanje „knock-in“ miša sa humanim D1 receptorom

[0052] Transgeni miš kod koga je mišji dopaminski 1 (D1) receptor zamenjen njegovim humanim parnjakom može biti generisan pomoću standardnih tehnika. Na primer, mišji genomski fragmenti su subklonirani iz RP23 bakterijske veštačke bilbioteke hromozoma i ponovo klonirani u PGK-neo ciljni vektor. Mišji otvoreni okvir čitanja je zamenjen sa otvorenim okvirom čitanja humanog D1 receptora u egzonu 2. Selekcioni marker neo ushodno od egzona 2 je flankiran sa frt mestima za kasnije uklanjanje. Flankiranje egzona 2 sa loxP selekcionim mestima omogućava opciju za generisanje D1 „knock-out“ miševa ukrštanjem sa miševima koji eksprimiraju gen nukleaze cre.

[0053] C57BL/6 N embrionalna ćelijska linija matičnih ćelija B6-3 je gajena na mitotički inaktiviranom hranljivom sloju mišjih embionalnih fibroblasta u DMEM sa visokim sadržajem glukoze i sa 20% fetusnog telećeg seruma i 2x10<6>jedinica/l faktora inhibicije leukemije. Deset miliona embrionalnih matičnih ćelija plus 30 mikrograma linearizovane vektorske DNK su elektroporisane i podvrgnute G418 selekciji (200 mikrograma/ml). Klonovi su izolovani i analizirani pomoću Southern blotting-a.

[0054] Klon koji sadrži insert očekivane veličine je inseriran u blastociste i rezultujući miševi su genotipizirani pomoću PCR-a. Muška himera je ukrštena sa ženskom koja sadrži gen za nukleazu Flp za eliminaciju selekcionog markera. Potomstvo koje sadrži humani D1 receptor bez selekcionog markera je identifikovano pomoću PCR-a. Muški heterozigot je sparen sa ženkama C57BL/6 miševa. Muško i žensko potomstvo koje sadrži humani D1 receptor su spareni i homozigoti su identifikovani pomoću PCR-a. Ponašanje i reprodukcija homozigota je normalno, i kolonija je održavana u stanju homozigota tokom sledećih generacija.

Bazalna (na koju su naviknuti) lokomotorna aktivnost

[0055] Lokomotorna aktivnost je merena upotrebom automatskog sistema za praćenje kretanja kod miševa. Miševi „knock-in“ sa humanim D1 receptorom su postavljeni u komore i ostavljeni da se navikavaju na komore 60 min. U toku ovog vremena, oni pokazuju smanjenu lokomociju tokom vremena. Posle primene jedinjenja prema pronalasku, kretanje životinje je povećano na način zavistan od doze.

[0056] Specifičnije, kutije za lokomotornu aktivnost su postavljene u četvorougaone okvire sa infracrvenim zracima za merenje motorne aktivnosti (horizontalna i vertikalna aktivnost) označene ambulacije. Lokomotorna aktivnost je beležena između vremena 7:30 i 15:00 časova.

[0057] Miševi su po slučajnom izboru dodeljeni u grupe za tretman kao što je prikazano u Tabeli 1. Svaki miš je postavljen pojedinačno u jednu od kutija za lokomotornu aktivnost tokom navikavanja od 60 minuta. Miševi su zatim oralno dozirani i ukupan broj ambulacija je beležen na 10 minuta za svakog miša tokom perioda od 60 minuta. Kod miševa sa prethodnim tretmanom sa rezerpinom, nije uključen prethodni period navikavanja. Na taj način, neposredno posle doziranja, ukupan broj ambulacija je meren tokom 60 minuta. Podaci su prebačeni iz softvera/kompjutera u tabele za dalju analizu. Statistička analiza je izvedena upotrebom one-way ANOVA, nakon koje je usledila post-hoc analiza upotrebom Fisher-ovog LSD ili Dunnett-ovog testa.

[0058] U bazalnoj (naviknutoj) lokomotornoj analizi, jedinjenja iz Primera 1, 2, 3, 4 i 13 olakšavaju kretanje kod miševa na način responsivan na dozu (Table 1 do 5). Ovo pokazuje da su jedinjenja Primera 1, 2, 3, 4 i 13 efikasna u lokomotornoj aktivaciji životinja koje su naviknute na sredinu.

Tabela 1

Tabela 2

Tabela 3

Tabela 4

Tabela 5

Reverzija akinezije indukovane rezerpinom

[0059] Rezerpin je sredstvo koje depletira kateholamin (depletira dopamin i norepinefrin). Posle 18-24 časa, miševi tretirani rezerpinom postaju akinetički i imaju smanjene vrednosti lokomotorne aktivnosti. Akinezija indukovana rezerpinom je procenjivana merenjem efekta jedinjenja na lokomotornu aktivnost približno 18-24 časa posle jedne doze 0.15, 0.3 mg/kg ili 0.6 mg/kg rezerpina subkutano. Korišćena oprema je ista kao ona korišćena za naviknutu lokomotornu aktivnost za procenu Primera 1 u Tabelama 6 i 7. Za jedinjenje iz Primera 3 (kao što je prikazano u Tabeli 8), Ethovision 8 video sistem za praćenje je korišćen za merenje lokomotorne aktivnosti.

[0060] Mužjaci miševa „knock-in“ sa humanizovanim dopaminskim D1 receptorom su po slučajnom izboru dodeljeni u grupe za tretman. Svaki miš je pojedinačno postavljen u jednu od kutija za lokomotornu aktivnost. Ambulacije na 10 minuta za svakog miša su merene do 60 min posle doziranja. Na taj način, efekti na eksploratorno ponašanje indukovano rezerpinom su procenjivani ukupno 60 minuta. Podaci su prebačeni iz softvera/kompjutera u tabele za dalju analizu. Statistička analiza je izvedena upotrebom one-way ANOVA nakon koje je usledila post-hoc analiza upotrebom t-testa.

[0061] U gore navedenoj analizi, jedinjenje iz Primera 1 vrši reverziju efekata tretmana rezerpinom i vraća kretanje kod miševa na način responsivan na dozu kao što je mereno pomoću infracrvenih zraka (Tabele 6 i 7). Ovo pokazuje da je jedinjenje iz Primera 1 efikasno u in vivo modelu Parkinsonove bolesti.

Tabela 6

Tabela 7

[0062] U gore navedenoj analizi, jedinjenje iz Primera 3 vrši reverziju efekata tretmana rezerpinom i vraća kretanje kod miševa na način responsivan na dozu kao što je mereno pomoću video praćenja (Tabela 8). Ovo pokazuje da je jedinjenje iz Primera 3 efikasno u in vivo modelu Parkinsonove bolesti.

Tabela 8

Efekti na ekstracelularne nivoe acetilholina u prefrontalnom korteksu

[0063] Acetilholin (Ach) je ključni neurotransmiter mozga za više kognitivne funkcije. Kod Alchajmerove bolesti postoji razgradnja kortikalnih oblasti mozga od značaja za funkciju pamćenja kao što je hipokampus sa gubitkom holinergičnih neurona. Donepezil (Aricept®) je inhibitor acetilholin esteraze koji povećava nivoe acetilholina u mozgu i pokazuje klinički dokaz pojačane kognicije. Pokazano je da agonisti dopamina D1 moduliraju oslobađanje acetilholina i kognitivni učinak u životinjskim modelima. Jedinjenja koja povećavaju ekstracelularne nivoe Ach u hipokampusu slobodno pokretnih humanizovanih „knock-in“ miševa sa dopaminskim D1 receptorom (hD1KI) veruje se da su koristan tretman kognitivne disfunkcije povezane sa Alchajmerovom bolešću.

Eksperimentalni postupak

[0064] Sonde za mikrodijalizu su implantirane stereotaksično pod anestezijom sa izofluranom u ventralni hipokampus (HPC) mužjaka hD1 KI miševa (Charles River, U.K). Koordinate od bregme za implantacionu sondu su: AP -3.1; LM 2.8; DV -4.5 mm.

[0065] Sledećeg dana, životinje su povezane da se omogući da se izvrši perfuzija sondi sa veštačkim CSF (koji sadrži NaCl (141 mM), KCl (5 mM), MgCl2(0.8 mM) and CaCl2(1.5 mM)). Posle perioda ispiriranja od 90 minuta, uzorci dijalizata su sakupljani u intervalima od 20 minuta. Posle dva časa, životinji je oralno injektiran nosač (20% hidroksipropil betaciklodekstrin) ili test jedinjenje, i uzorci su sakupljani dodatna 3 časa. Svi uzorci su odmah zamrznuti na suvom ledu i čuvani na -80°C tekuće analize za opseg neurotransmitera i metabolita.

Analiza uzoraka

[0066] U svaki uzorak dijalizata (29 µL) dodato je: 20 µL pufera (1M Bis-Tris, pH10), 20 µL mešanog deuterisanog standarda i 260 µl 0.1% tež./zapr. nadzil hlorida (u acetonu). Uzorci su vorteksovani i zagrevani na 65°C u trajanju od 30 min, zatim sušeni pod N2i re-suspendivani u 40 µl 50:50 (zapr./zapr.) ACN:vode (koji sadrži 10 mM amonijum format i 0.06% mravlje kiseline). Uzorci su zatim centrifugirani na 13000 rpm u trajanju od 10 min na temperaturi sredine i 35 µl je pipetirano u 03-FIVR bočice; 10 µl je injektirano na LC-MS/MS upotrebom CTC PAL HTC-xt Autosampler.

[0067] Hromatografsko odvajanje danzilovanih uzoraka (uključujući standarde leka) je izvedeno pod gradijentom upotrebom Shimadzu LC-20AD XR binarnih pumpi i 2.6 µm Phenomenex Kinetex, XB-C18 HPLC kolone. Pokretna faza A se sastoji od acetonitrila/vode 5%:95% (zapr./zapr.), 2 mM amonijum formata i 0.06% mravlje kiseline i pokretna faza B od acetonitrila/vode 95%: 5% (zapr./zapr.), 2 mM amonijum formata i 0.06% mravlje kiseline.

[0068] AB Sciex API5500 je funkcionisao u dva perioda, period 1, pozitivan TIS režim za detekciju acetilholina (Ach), i period 2 sa pozitivnim i negativnim TIS režimima.

Rukovanje podacima

[0069] Podaci su izraženi kao procenat pre-injekcionog kontrolnog perioda – dobijenog izračunavanjem srednje vrednosti od tri uzorka pre primene leka (= 100%) i izražavanjem vrednosti kao procenta ove vrednosti. Statističke analize su izvršene upotrebom RM/Fit (ANOVA sa ponovljenim merenjima), da bi se uporedili odgovori između grupa za tretman. Vrednost verovatnoće od p <0.05 smatra se statistički značajnom.

Rezultati

[0070] ACh odgovor je izračunat merenjem površine ispod krive (AUC), u odnosu na preinjekcionu kontrolnu polaznu vrednost, za svaki lek tokom perioda od dva časa posle primene leka. Podaci su zatim analizirani pomoću ANOVA (Oneway; JMP v9) nakon koga sledi post hoc t-test.

[0071] Primena jedinjenja iz Primera 4 u 30 mg/kg IP ili inhibitora acetilholin esteraze, donepezila u 1 mg/kg, IP, proizvodi statistički značajno povećanje u poređenju sa kontrolama sa nosačem u ekstracelularnim nivoima Ach (Tabela 9). Ovo pokazuje da je jedinjenje Primera 4 efikasno u in vivo modelu Alchajmerove bolesti.

Tabela 9

[0072] Jedinjenja formule I, koja obuhvataju jedinjenja formula Ia, Ib i Ic, mogu biti pripremljena pomoću postupaka poznatih u oblasti hemije ili pomoću novog postupka opisanog ovde. Postupak za pripremu jedinjenja formule I i novih intermedijera za proizvodnju jedinjenja formule I, obezbeđuje dodatne karakteristike prema pronalasku i ilustrovani su sledećim postupcima.

[0073] Uopšteno, jedinjenje formule Ia gde n je 0, 1 ili 2 može biti pripremljeno od jedinjenja formule II u kome n je 0, 1 ili 2 i Pg1 predstavlja pogodnu hidroksil zaštitnu grupu (Šema 1). Određene vrednosti Pg1 obuhvataju terc-butil(dimetil)silil i terc-butil(difenil)silil. Specifičnije, jedinjenje formule II gde Pg1 je terc-butil(dimetil)silil je reagovalo sa tetrabutilamonijum fluoridom u rastvaraču kao što je tetrahidrofuran da bi se dobilo jedinjenje formule Ia.

Šema 1

[0074] Jedinjenje formule II gde n je 2 i Pg1 je terc-butil(dimetil)silil može biti pripremljeno reakcijom jedinjenja formule III sa metil litijumom u pogodnom rastvaraču (Šema 2). Pogodni rastvarači obuhvataju tetrahidrofuran. Jedinjenje formule III gde Pg1 je tercbutil(dimetil)silil može biti pripremljeno reakcijom jedinjenja formule IV sa vodonikom u prisustvu pogodnog katalizatora od prelaznog metala kao što je 1,1’-bis(di-ipropilfosfino)fedrocen(1,5-ciklooktadien)rodijum(I) tetrafluoroborat. Reakcija je pogodno izvedena u rastvaraču kao što je metanol. Jedinjenje formule IV gde Pg1 je tercbutil(dimetil)silil može biti pripremljeno reakcijom jedinjenja formule V sa etil akrilatom u prisustvu prelaznog metala kuplujućeg katalizatora kao što je paladijum acetat, ligand kao što je tri-o-tolilfosfin i baza kao što je trietilamin. Reakcija je pogodno izvedena u rastvaraču kao što je acetonitril. Jedinjenje formule V može biti pripremljeno acilacijom jedinjenja formule VIII sa odgovarajućom R<1>, R<2>, R<3>–fenilsirćetnom kiselinom u prisustvu aktivirajućeg sredstva kao što je benzotriazol-1-il-oksitripirolidinofosfonijum heksafluorofosfat i baza kao što je trietil amin. Reakcija je pogodno izvedena u rastvaraču kao što je dimetil formamid.

Šema 2

[0075] Alternativno, jedinjenje formule II može biti pripremljeno od jedinjenja formule VI gde Pg1 je pogodna hidroksil zaštitna grupa (Šema 3). Posebne vrednosti Pg1 obuhvataju terc-butil(dimetil)silil i terc-butil(difenil)silil. Specifičnije, jedinjenje formule VI gde Pg1 je terc-butil(dimetil)silil je acilovano sa 2,6-dihlorofenilsirćetnom kiselinom u prisustvu aktivirajućeg sredstva kao što je 1,1’-karbonildiimidazol da bi se obezbedilo jedinjenje formule II. Reakcija pogodno izvedena u rastvaraču kao što je tetrahidrofuran. Jedinjenje formule VI može biti pripremljeno redukovanjem jedinjenja formule VII sa vodonikom u prisustvu katalizatora kao što je paladijum. Reakcija je pogodno izvedena u rastvaraču kao što je etanol. Jedinjenje formule VII može biti pripremljeno kuplovanjem jedinjenja formule VIII sa 2-metilbut-3-en-2-olom u prisustvu katalizatora kao što je paladijum acetat, liganda kao što je 2-dicikloheksilfosfino-2’,6’-dimetoksibifenil i baze kao što je kalijum karbonat. Reakcija je pogodno izvedena u rastvaraču kao što je dimetilformamid. Jedinjenje formule VIII može biti pripremljeno na način od više koraka od jedinjenja formule X preko intermedijernog jedinjenja formule IX kao što je poznato u oblasti hemije ili pomoću postupka opisanog u Pripremama i Primerima. Jedinjenje formule X može biti pripremljeno kao što je opisano u Priprema u Primerima.

Šema 3

[0076] Jedinjenje formule II gde n je 0 i Pg1 je terc-butil(dimetil)silil može biti pripremljeno reakcijom jedinjenja formule IIIa sa metil magnezijum bromidom u pogodnom rastvaraču (Šema 4). Jedinjenje formule IIIa može biti pripremljeno acilovanjem jedinjenja formule VIIa sa odgovarajućom R<1>, R<2>, R<3>–fenilsirćetnom kiselinom u prisustvu aktivirajućeg sredstva kao što je benzotriazol-1-il-oksitripirolidinofosfonijum heksafluorofosfat i baze kao što je trietil amin. Reakcija se pogodno izvodi u rastvaraču kao što je dimetil formamid. Jedinjenje formule VIIa može biti pripremljeno reakcijom jedinjenja formule VIII sa ugljen monoksidom i metanolom u prisustvu paladijum (0) katalizatora.

Šema 4

[0077] Jedinjenje formule II gde n je 1 i Pg1 je terc-butil(dimetil)silil može biti pripremljeno reakcijom jedinjenja formule IIIb sa metil magnezijum hloridom u pogodnom rastvaraču (Šema 5). Jedinjenje formule IIIb može biti pripremljeno acilovanjem jedinjenja formule VIIb sa odgovarajućom R<1>, R<2>, R<3>–fenilsirćetnom kiselinom u prisustvu aktivirajućeg sredstva kao tšo je benzotriazol-1-il-oksitripirolidinofosfonijum heksafluorofosfat i baze kao što je trietil amin. Reakcija je pogodno izvedena u rastvaraču kao što je dimetil formamid. Jedinjenje formule VIIb može biti pripremljeno reakcijom jedinjenja formule VIII sa acetonom u prisustvu paladijum (0) katalizatora i liganda kao što je opisano u primerima i pripremama.

Šema 5

[0078] Kao što je ovde korišćen, "DMSO" označava dimetilsulfoksid; "Tris" označava trishidroksimetilaminometan; "DTT" označava ditiotreitol; "HEC" označava hidroksietil celulozu; "DMEM" označava Dulbecco-v modifikovani Eagle-ov medijum; "MS" označava maseni spektar; i "HEPS" označava 4-(2-hidroksietil)-1-piperazinetansulfonsku kiselinu.

Priprema 1

Sinteza metil 2-bromo-D-fenilalaninat hidrohlorida.

[0079]

[0080] Rastvoriti 2-bromo-D-fenilalanin (22.4 g, 91.8 mmol) u metanolu (459 mL). Dodati acetil hlorid (65.3 mL, 917.7 mmol) na sobnoj temperaturi. Mešati 36 časova. Koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (27.2 g, 92.3 mmol). MS (m/z): 258 (M+1).

Alternativna sinteza metil 2-bromo-D-fenilalaninat hidrohlorida.

[0081] Dodati acetil hlorid (562.79 g, 7.17 mol) u metanol (10.00 L) na 0°C u odgovarajućoj posudi. Zagrevati smešu do 17.5°C i mešati. Posle 30 minuta, dodati 2-bromo-D-fenilalanin (500.00 g, 2.05 mola) i zagrevati do refluksa. Posle 4 časa, hladiti do 20°C i ukloniti rastvarač pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (589 g, 1.96 mol) kao prljavo bela čvrsta supstanca. MS (m/z): 258(M-Cl (<79>Br)), 260(M-Cl (<81>Br)).

Priprema 2

Sinteza metil 2-bromo-N-(metoksikarbonil)-D-fenilalaninata.

[0082]

[0083] Rastvoriti metil 2-bromo-D-fenilalaninat hidrohlorid (27.2 g, 92.3 mmol) u dihlorometanu (923 mL) i vodi (185 mL). Dodati natrijum bikarbonat (31.0 g, 369.4 mmol) i metil hloroformat (7.86 mL, 101.6 mmol) na sobnoj temperaturi. Mešati smešu 2.5 časa. Razblažiti vodom i ekstrahovati sa dihlorometanom. Sušiti dihlorometanske ekstrakte preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Prečišćavati ostatak pomoću hromatografije na silika gelu eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (10-75% gradijent) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (29.1 g, 92.1 mmol). MS (m/z): 316 (M+1).

Alternativna sinteza metil 2-bromo-N-(metoksikarbonil)-D-fenilalaninata.

[0084] Dodati vodu (2.94 L) i natrijum hidrogen karbonat (648.25 g, 7.64 mol) u metil 2-bromo-D-fenilalaninat hidrohlorid (580 g, 1.91 mol) u dihlorometanu (9.86 L) na 10°C u odgovarajućoj posudi. Posle 5 minuta dodati metil hloroformat (198.53 g, 2.10 mol) i mešati smešu na 20°C. Posle 3 časa dodati vodu (2.5 L) i odvojiti slojeve. Ekstrahovati vodeni sloj sa dihlorometanom, sušiti kombinovane organske ekstrakte preko natrijum sulfata i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (556 g, 1.74 mol). MS (m/z): 315.8(M+1 (<79>Br)), 317.8(M+1 (<81>Br)).

Priprema 3

Sinteza dimetil (3R)-5-bromo-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2,3-dikarboksilata.

[0085]

[0086] Mešati smešu metil 2-bromo-N-(metoksikarbonil)-D-fenilalaninata (29.1 g, 92.10 mmol) i paraformaldehida (9.13 g, 101.3 mmol) u glacijalnoj sirćetnoj kiselini (115 mL, 2.01 mol) i koncentrovanoj sumpornoj kiselini (38.4 mL, 719.9 mmol) na sobnoj temperaturi u trajanju od 7 časova. Izvršiti podelu između vode i etil acetata. Odvoji slojeve i ekstrahovati vodeni sloj sa etil acetatom. Kombinovati etil acetatne ekstrakte i sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (5-40% gradijent) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (27.6 g, 84.0 mmol). MS (m/z): 328 (M+1).

Priprema 3a

Sinteza dimetil (3R)-5-bromo-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2,3-dikarboksilata i (3R)-5-bromo-2-metoksikarbonil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-3-karboksilne kiseline.

[0087]

[0088] U sirćetnu kiselinu (4.29 L) na 10°C u odgovarajućoj posudi, dodati 2-bromo-N-(metoksikarbonil)-D-fenilalaninat (572 g, 1.81 mol) i paraformaldehid (205.86 g, 2.17 mol). Posle 10 minuta lagano dodavati koncentrovanu sumpornu kiselinu (2.63 kg, 26.83 mol) i zatim mešati na 35°C. Posle 12 časova, hladiti do 15°C i dodati vodu (7.5 L) i etil acetat (6 L). Odvojiti slojeve i re-ekstrahovati vodeni sloj sa etil acetatom (2.5 L). Sušiti kombinovane organske ekstrakte preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobila smeša jedinjenja iz naslova sa sirćetnom kiselinom (640 g, 1.69 mola). Maseni spektar (m/z): 3a: 327.95(M+1 (<79>Br)), 330.05(M+1 (<81>Br)). 3b: 314(M+1 (<79>Br)), 315.95(M+1 (<81>Br)).

Priprema 4

[0089]

Sinteza metil (3R)-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilat hidrohlorida.

[0090] Rastvoriti dimetil (3R)-5-bromo-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2,3-dikarboksilat (27.55 g, 84.0 mmol) u 5N hlorovodoničnoj kiselini (330.6 mL, 1.65 mol) i zagrevati do refluksa tri dana. Koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobila bela čvrsta supstanca. Isprati čvrstu supstancu sa dietil etrom i sušiti pod vakuumom na 40°C preko noći da bi se dobio hidrohlorid (3R)-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilne kiseline (1:1) (20.8 g, 71.1 mmol). Dodati acetil hlorid (50.6 mL, 711.0 mmol) u 0°C smešu hidrohlorida (3R)-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilne kiseline (1:1) (20.8 g, 71.1 mmol) u metanolu (474 mL). Zagrevati do sobne temperature i mešati 36 časa. Koncentrovati pod sniženim pritiskom i sušiti da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (21.9 g, 71.4 mmol). MS (m/z): 270 (M+1).

Priprema 5

Sinteza hidrohlorida (3R)-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilne kiseline.

[0091]

[0092] Dodati vodu (1.3 L) i 36.5% hlorovodoničnu kiselinu (9.07 Kg, 90.81 mola) u smešu dimetil (3R)-5-bromo-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2,3-dikarboksilata i (3R)-5-bromo-2-metoksikarbonil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-3-karboksilne kiseline (Priprema 3a) (520 g, 1.27 moles) u odgovarajućoj posudi i mešati smešu na 95°C. Posle 12 časova hladiti smešu do 10°C i mešati 15 minuta. Filtriranje smeše i sušenje čvrste supstance pod vakuumom na 40°C dalo je jedinjenje iz naslova (332 g, 1.13 mola). MS (m/z): 256.1(M-Cl (<79>Br)), 258(M-Cl (<81>Br)).

Priprema 6

Sinteza 2-terc-butil-3-metil-(3R)-5-bromo-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2,3-dikarboksilata.

[0093]

[0094] Rastvoriti metil (3R)-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilat hidrohlorid (21.0 g, 68.5 mmol) u 1,4-dioksanu (685 mL). Dodati zasićeni rastvor natrijum bikarbonta (685 mL, 17.5 mol) i di-terc-butildikarbonat (29.9 g, 137.0 mmol) na sobnoj temperaturi. Mešati bifaznu smešu u trajanju od 90 min. Ekstrahovati sa etil acetatom. Sušiti etil acetat preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (5-50% gradijent) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (19.5 g, 52.7 mmol). MS (m/z): 270 (M-tBOC+1).

Priprema 7

Sinteza [(3R)-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il]metanola.

[0095]

[0096] Dodati litijum aluminijum hidrid (2 L, 2.00 mol, 1M u THF) u hidrohlorid (3R)-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-karboksilne kiseline (325.4 g, 1.11 mol) u tetrahidrofuranu (4.88 L) na -35°C u odgovarajućoj posudi, zatim zagrevati do 25°C tokom 60 minuta i mešati. Posle 3 časa, hladiti smešu do -5°C zatim dodati vodu (76 mL), 15% tež./tež. vodeni rastvor natrijum hidroksida (76 mL) i vodu (228 mL). Zagrevati smešu do 25°C, dodati anhidrovani magnezijum sulfat (750 g) i mešati. Filtrirati smešu i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobila čvrsta supstanca. Dodati dihlorometan (690 mL) u čvrstu supstancu i suspendovati u trajanju od 30 minuta pre filtracije da bi se dobila čvrsta supstanca. Sušiti čvrstu suptancu pod vakuumom na 35°C da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (148.9 g, 0.55 mol). MS (m/z): 242(M+1 (<79>Br)), 244(M+1 (<81>Br)).

Priprema 8

Sinteza terc-butil (3R)-5-bromo-3-(hidroksimetil)-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-karboksilata.

[0097]

[0098] Dodati metanol (10.1 mL, 248.5 mmol) i litijum borohidrid (99.4 mL, 198.8 mmol, 2 M u THF) u rastvor 2-terc-butil-3-metil-(3R)-5-bromo-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2,3-dikarboksilata (18.4 g, 49.7 mmol) u tetrahidrofuranu (497 mL) na sobnoj temperaturi na vodenom kupatilu. Mešati 40 min i ugasiti reakciju vodom. Ekstrahovati sa etil acetatom. Sušiti etil acetatne ekstrakte preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (5-80% gradijent). Sušiti pod visokim vakuumom preko noći da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (19.1 g, 55.8 mmol). MS (m/z): 286 (M-tBu+1).

Priprema 9

Sinteza (3R)-5-bromo-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1,2,3,4-tetrahidroizohinolina.

[0099]

[0100] Dodati trifluorosirćetnu kiselinu (75.5 mL, 998.3 mmol) u rastvor terc-butil (3R)-5-bromo-3-(hidroksimetil)-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-karboksilata (15.5 g, 45.3 mmol) u dihlorometanu (226 mL) na sobnoj temperaturi. Mešati 30 min i koncentrovanti pod sniženim pritiskom. Sušiti pod vakuumom da bi se dobila [(3R)-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il]metanol; 2,2,2-trifluorosirćetna kiselina kao vlažna čvrsta supstanca. Rastvoriti [(3R)-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il]metanol; 2,2,2-trifluorosirćetnu kiselinu u dihlorometanu (753 mL). Dodati 1H-imidazol (51.3 g, 753 mmol), N,N-Dimetil-4-piridinamin (460 mg, 3.77 mmol), i t-butildimetilhlorosilan (13.6 g, 90.4 mmol). Mešati na sobnoj temperaturi preko noći. Dodati zasićeni rastvor amonijum hlorida i esktrahovati sa dihlorometanom. Sušiti dihlorometanske ekstrakte preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Kombinovati sa sirovim proizvodom iz uglavnom iste reakcije sa 19.4 mmol terc-butil (3R)-5-bromo-3-(hidroksimetil)-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-karboksilata. Prečišćavati ostatak hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (5-40% gradijent) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (14.3 g, 40.1 mmol). MS (m/z): 356 (M+1).

Alternativna sinteza (3R)-5-bromo-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1,2,3,4-tetrahidroizohinolina.

[0101] Dodati terc-butildimetilhlorosilan (193.7 g, 1.29 mol) u smešu [(3R)-5-bromo-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il]metanola (148.9 g, 0.58 mol), 1H-imidazola (202.9 g, 2.92 mol), 4-dimetilaminopiridina (0.72 g, 5.84 mmol) i N,N-dimetilformamida (1.04 L) u dihlorometanu (2.61 L) na 20°C i mešati u odgovarajućoj posudi. Posle 3 časa, hladiti smešu do 10°C i dodati zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida (1.3 L). Ekstrahovati vodeni sloj sa dihlorometanom i isprati kombinovane organske ekstrakte fiziološkim rastvorom (2 x 2L), sušiti preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Rastvoriti ostatak u metil terc-butil etru (1.5 L) i isprati fiziološkim rastvorom (2 x 1 L). Razblažiti organsku fazu toluenom (5 L) i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Dodati toluen (2.6 L) u ostatak i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (210 g, 0.53 mol). MS (m/z). 356(M+1 (<79>Br)), 358(M+1 (<81>Br)).

Priprema 10

Sinteza (3R)-5-bromo-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-3,4 dihidroizohinolina.

[0102]

[0103] Rastvoriti (3R)-5-bromo-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin (4.2 g, 11.8 mmol) u dietil etru (118 mL). Dodati N-hlorosukcinimid (2.36 g, 17.7 mmol). Mešati 30 min na sobnoj temperaturi i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Rastvoriti ostatak u kalijum hidroksidu (42.0 mL, 30.3 mmol, 5% in MeOH) i mešati 30 min na sobnoj temperaturi. Sipati u vodu i ekstrahovati sa dihlorometanom. Sušiti dihlorometanskim ekstraktima preko natrijum sulfata, filtriati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Prečišćavati ostatak hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (5-100% gradijent) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.40 g, 9.59 mmol). MS (m/z): 354 (M+1).

Alternativna sinteza (3R)-5-bromo-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-3,4 dihidroizohinolina.

[0104] Dodati N-hlorosukcinimid (106.7 g, 0.79 mol) u rastvor (3R)-5-bromo-3-({[tercbutil(dimetil)silil]oksi}metil)-1,2,3,4-tetrahidroizohinolina (220 g, 0.52 mol) u tetrahidrofuranu (3.85 L) na 20°C u odgovarajućoj posudi i mešati. Posle 30 minuta koncentrovati smešu pod sniženim pritiskom i rastvoriti ostatke u 5% tež./tež. kalijum hidroksidu u metanolu (2.2 L, 1.69 mola) i mešati na 20°C. Posle 30 minuta, dodati smešu u vodu (3 L) i ekstrahovati tri puta sa dihlorometanom (3 x1 L). Sušiti kombinovane organske ekstrakte preko anhidrovanog magnezijum sulfata i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (210 g, 0.50 mol). MS (m/z): 354(M+1 (<79>Br)), 356(M+1(<81>Br)).

Priprema 11

Sinteza (1S,3R)-5-bromo-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolina.

[0105]

[0106] Rastvoriti (3R)-5-bromo-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-3,4 dihidroizohinolin (3.4 g, 9.59 mmol) u dietil etru (160 mL). Hladiti do -78°C na suvom ledu – acetonsko kupatilo. Ukapavanjem dodati metilmagnezijum hlorid (26.9 mL, 80.6 mmol, 3M u THF). Zagrevati reakcionu smešu lagano do sobne temperature i mešati preko noći. Lagano ugasiti sa zasićenim rastvorom amonijum hlorida. Ekstrahovati sa dihlorometanom i sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Kombinovati sa sirovim proizvodom iz značajno iste reakcije sa 1.73 mmol (3R)-5-bromo-3-({[tercbutil(dimetil)silil]oksi}metil)-3,4 dihidroizohinolina. Prečistiti kombinovane ostatke hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (5-65% gradijent) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.78 g, 10.2 mmol). MS (m/z): 370 (M+1).

[0107] Relativna konfiguracija jedinjenja (1S,3R)-5-bromo-3-({[tercbutil(dimetil)silil]oksi}metil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolina je određena pomoću NMR spektroskopije upotrebom jedno-dimenzionalnih NOE eksperimenata (1DNOESY). Selektivna ekscitacija metil grupe u 1.30 ppm daje NOE za Ha u 3.11 ppm. Ovo povećanje NOE je samo u skladu sa konfiguracijom u kojoj su metil i Ha na istoj strani prstena (trans izomer) zbog toga što su u cis izomeru metil protoni predaleko od Ha da bi se pokazao NOE. S obzirom da je poznato da je apsolutna hemija za položaj 3 R, tada je zaključeno da je apsolutna hemija na položaju 1 jednaka S.

Alternativna sinteza (1S,3R)-5-bromo-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolina.

[0108]

[0109] Dodati metilmagnezijum hlorid (0.66 L, 1.99 mol, 3M u THF) u rastvor (3R)-5-bromo-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-3,4 dihidroizohinolina (93.5 g, 0.24 mol) u dietil etru (2.8 L) na -65°C u odgovarajućoj posudi. Zatim zagrevati reakcionu smešu do 20°C tokom 2 časa i mešati. Posle 16 časova, ohladiti smešu do 0°C i ugasiti reakciju zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (2.5 L) i ekstrahovati etil acetatom (2.5 L) i filtrirati smešu. Isprati kombinovane organske ekstrakte fiziološkim rastvorom (1 L), sušiti preko anhidrovanog magnezijum sulfata i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo sirovo jedinjenje iz naslova kao ulje. Kombinovati ulje sa sirovim proizvodima iz značajno istih reakcija sa 48 mmol i 229 mmol [(3R)-5-bromo-3,4-dihidroizohinolin-3-il]metoksi-tercbutil-dimetil-silana i prečišćavati ih hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa etil acetatom u heksanima (gradijent 5-65% etil acetat) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (151 g, 0.41 mol). MS (m/z): 370.1 (M+1 (<79>Br)), 372.1(M+1 (<81>Br)).

Priprema 12

Sinteza terc-butil (1S,3R)-5-bromo-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-karboksilata.

[0110]

[0111] Dodati di-terc-butil dikarbonat (1.23 g, 5.54 mmol) u rastvor [(1S,3R)-5-bromo-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-3-il]metoksi-terc-butil-dimetil-silana (2.01 g, 5.43 mmol) u dihlorometanu (15 mL). Mešati reakcionu smešu preko noći na temperaturi sredine. Koncentrovati pod sniženim pritiskom. Rastvoriti ostatak u dihlorometanu i isprati vodom i fiziološkim rastvorom, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Prečistiti hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (0-4% gradijent) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.54 g, 5.40 mmol). MS (m/z): 370.2, 372.2 (M-BOC+1).

Priprema 13

Sinteza 1-[(1S,3R)-5-bromo-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]-2-(2,6-dihlorofenil)etanona.

[0112]

[0113] Dodati benzotriazol-1-il-oksitripirolidinofosfonijum heksafluorofosfat (7.97 g, 15.3 mmol) u smešu (1S,3R)-5-bromo-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolina (3.78 g, 10.2 mmol) i 2,6-dihlorofenilsirćetnu kiselinu (2.30 g, 11.2 mmol) u dimetilformamidu (51.0 mL). Dodati trietilamin (2.13 mL, 15.3 mmol) i mešati na sobnoj temperaturi 3 časa. Razblažiti vodom i ekstrahovati sa dihlorometanom. Sušiti dihlorometanske ekstrakte preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (5-50% gradijent) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.70 g, 8.43 mmol). MS (m/z): 556 (M+1).

Priprema 14

Sinteza etil (2E)-3-{(1S,3R)-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-2-[(2,6-dihlorofenil)acetil]-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il}prop-2-enoata.

[0114]

[0115] Barbotirati azot kroz acetonitril. Postaviti tri-o-tolilfosfin (72.3 mg, 0.23 mmol), paladijum (II) acetat (11.8 mg, 0.052 mmol) i acetonitril (0.96 mL) u mikrotalasnu posudu. Mešati 10 min. Dodati etil akrilat (0.31 mL, 2.88 mmol). Dodati 1-[(1S,3R)-5-bromo-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]-2-(2,6-dihlorofenil)etanon (0.54 g, 0.96 mmol). Dodati trietilamin (0.40 mL, 2.88 mmol) i snažno mešati. Produvavati azot preko površine reakcije. Hermetički zatvoriti posudu i zagrevati do 160°C u trajanju od 35 min u mikrotalasnoj. Ohladiti do sobne temperature i razblažiti sa etil acetatom. Filtrirati talog i isprati etil acetatom. Koncentrovati filtrat pod sniženim pritiskom da bi se dobilo braon ulje. Kombinovati sa sirovim proizvodom iz uglavnom iste reakcije sa 0.27 mmol 1-[(1S,3R)-5-bromo-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]-2-(2,6-dihlorofenil)etanona. Prečistiti kombinovane ostatke hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (gradijent, 0-10%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.54 g, 0.93 mmol). MS (m/z): 576 (M+1). Sledeće jedinjenje je pripremljeno uglavnom pomoću postupka iz Pripreme 14.

Priprema 16

Sinteza terc-butil (1 S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-5-(3-etoksi-3-okso-propil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-karboksilata.

[0116]

[0117] Dodati 10% paladijum na uglju (0.09 g) u 100 ml Parr bocu. Prečistiti sa azotom. Dodati etanol (5 mL) da bi se ovlažio katalizator. Dodati terc-butil (1S,3R)-3-[[tercbutil(dimetil)silil]oksimetil]-5-[(E)-3-etoksi-3-okso-prop-1-enil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-karboksilat (330 mg, 0.67 mmol) kao rastvor u etanolu (15 mL). Hermetički zatvoriti bocu i prečistiti azotom. Prečistiti posudu vodonikom i postaviti pod pritisak do 414 kPa vodonika. Mućkati na sobnoj temperaturi u trajanju od 1.5 časa. Ventilirati i otvoriti posudu. Filtrirati reakcionu smešu. Koncentrovati filtrat pod sniženim pritiskom. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (0-10% gradijent) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojno ulje (252 mg, 0.51 mmol). MS (m/z): 392.2 (M-BOC+1).

Priprema 17

Sinteza etil 3-{(1S,3R)-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-2-[(2,6-dihlorofenil)acetil]-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il}propanoata.

[0118]

[0119] U suvu kutiju u 85 ml Parr autoklavu sa šipkom za mešanje i staklenom oblogom, dodati 1,1’-bis(di-i-propilfosfino)ferocen(1,5-ciklooktadien)rodijum(I) tetrafluoroborat (7 mg, 0.010 mmol). Dodati etil (2E)-3-{(1S,3R)-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-2-[(2,6-dihlorofenil)acetil]-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il}prop-2-enoat (133 mg, 0.23 mmol) kao rastvor u anhidrovanom metanolu (5 mL). Hermetički zatvoriti autoklav i ukloniti iz suve kutije. Prečišćavati posudu vodonikom i postaviti pod pritisak do 690 kPa vodonika. Mešati na sobnoj temperaturi preko noći. Ventilirati i otvoriti posudu. Koncentrovati reakcionu smešu pod sniženim pritiskom. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa 25% metil t-butil etrom: heksanima da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bistro bezbojno ulje (121 mg, 0.21 mmol). MS (m/z): 578 (M+1).

Priprema 18

Sinteza (1S,3R)-5-bromo-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin hidrohlorida.

[0120]

[0121] Dodati hlorovodonik (267.24 g, 1.02 mol, 4M u 1,4-dioksanu) u (1S,3R)-5-bromo-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin (419 g, 1.02 mol) u izopropil acetat (4.19 L) na 10°C i mešati 15 minuta u odgovarajućoj posudi. Filtrirati smešu i isprati filter kolač sa izopropil acetatom (2.5 L), sušiti na filteru u trajanju od 30 minuta, zatim pod vakuumom u peći na 40°C u trajanju od 16 časova da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (380 g, 0.89 mol). MS (m/z): 370(M-Cl (<79>Br)), 372(M-Cl (<81>Br)).

Priprema 19

Sinteza (E)-4-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il]-2-metil-but-3-en-2-ola.

[0122]

[0123] Dodati (1S,3R)-5-bromo-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin hidrohlorid (310 g, 723.83 mmol) i 2-metilbut-3-en-2-ol (508.95 g, 5.79 mol) u N,N-dimetilformamid (1.08 L) u odgovarajućoj posudi i degazirati barbotiranjem azota kroz rastvor u trajanju od 10 minutas. Dodati kalijum karbonat (315.12 g, 2.28 mol), 2-dicikloheksilfosfino-2’,6’-dimetoksibifenil (15.32 g, 36.19 mmol) i paladijum (II) acetat (8.29 g, 36.19 mmol) i degazirati barbotiranjem azota kroz smešu u trajanju od 15 minuta, zatim zagrevati do 125°C. Posle 16 časova, hladiti smešu do 20°C i razblažiti etil acetatom (1.5L) i vodom (2.5 L). Isprati etil acetatni sloj fiziološkim rastvorom (2.5 L), zatim sušiti preko natrijum sulfata i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Prečistiti ostatak pomoću „flash“ hromatografije, eluiranjem sa 0-50% etil acetata u izoheksanima da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (193 g, 459.1 mmol). MS (m/z): 376(M+1).

Priprema 20

Sinteza 4-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il]-2-metilbutan-2-ola.

[0124]

[0125] Dodati rastvor (E)-4-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il]-2-metil-but-3-en-2-ola (68 g, 168.83 mmol) u etanolu (816 mL) u posudu za hidrogenizaciju pod pritiskom i dodati 5% paladijum na aktivnom uglju (35.83 g, 16.84 mmol). Prečistiti posudu vodoničnim gasom, postaviti pod pritisak od 470 kPa vodoničnog gasa i mešati na 25°C. Posle 16 časova, ventilirati posudu i filtrirati reakcionu smešu kroz dijatomejsku zemlju. Isprati dijatomejsku zemlju etil acetatom i koncentrovati filtrat pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ulje. Rastvoriti ulje u etil acetatu (1 L) i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (64 g, 161 mmol). MS (m/z): 378.2 (M+1).

Priprema 21

Sinteza 1-[(1S,3R)-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]-2-(2,6-dihlorofenil)etanona.

[0126]

[0127] Rastvoriti 4-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il]-2-metil-butan-2-ol (0.21 g, 0.36 mmol) u THF (2.0 mL). Hladiti na suvom ledu – acetonskom kupatilu. Lagano dodati metil litijum (0.67 mL, 1.07 mmol, 1.6 M u dietil etru) i mešati na suvom ledu –acetonskom kupatilu u trajanju od 4 časa. Dodati zasićeni rastvor amonijum hlorida (2 mL). Ukloniti suvi led-acetonsko kupatilo i omogućiti smeši da se zagreje do sobne temperature. Ekstrahovati sa etil acetatom. Kombinovati etil acetatne ekstrakte; isprati fiziološkim rastvorom, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo bistro bezbojno ulje. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (gradijent, 0-30%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bistro, bezbojno ulje (0.16 g, 0.29 mmol). MS (m/z): 564 (M+1).

Alternativna sinteza 1-[(1S,3R)-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]-2-(2,6-dihlorofenil)etanona.

[0128] Dodati 1,1’-karbonildiimidazol (112.9 g, 682.36 mmol) u smešu 2,6-dihlorofenilsirćetne kiseline (173.09 g, 818.83 mmol) u tetrahidrofuranu (1.63 L) u odgovarajućoj posudi i mešati na 25°C. Posle 1 časa dodati rastvor 4-[(1S,3R)-3-[[tercbutil(dimetil)silil]oksimetil]-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il]-2-metil-butan-2-ola (217 g, 545.89 mmol) u tetrahidrofuranu (1.63 L) u smešu, zagrevati smešu do 45°C i mešati. Posle 24 časa, hladiti smešu do 20°C, ukloniti 2 L tetrahidrofurana koncentrovanjem pod sniženim pritiskom i razblažiti ostatke sa etil acetatom (2.5 L). Isprati etil acetatni rastvor zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (1.5 L), 1M vodenim rastvorom natrijum hidroksida (1 L), vodom (1 L) i fiziološkim rastvorom (1.5 L). Sušiti organske materije preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (376 g, 532.70 mmol). MS (m/z): 564.2(M+1 (<35>Cl)), 566.2 (M+1 (<37>Cl)).

Sledeće jedinjenje je pripremljeno uglavnom pomoću postupak iz Pripreme 21.

Primer 1

Sinteza 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanona.

[0129]

[0130] Rastvoriti 1-[(1S,3R)-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]-2-(2,6-dihlorofenil)etanon (0.16 g, 0.28 mmol) u THF (2.8 mL). Dodati tetrabutilamonijum fluorid (0.30 mL, 0.30 mmol, 1M u THF). Mešati 40 min. Dodati zasićeni rastvor amonijum hlorida i ekstrahovati sa etil acetatom. Kombinovati etil acetatne ekstrakte; isprati vodom i fiziološkim rastvorom, sušiti preko natrijum sulfata, filtirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa etil acetatom:heksanima (gradijent, 0-60%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela pena (0.12 g, 0.26 mmol). MS (m/z): 450 (M+1).

Alternativna sinteza 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanona.

[0131] Dodati tetra-n-butilamonijum fluorid (651.71 mL, 651.71 mmol, 1M u THF) u rastvor 1-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]-2-(2,6-dihlorofenil)etanon (400 g, 566.71 mmol) u tetrahidrofuranu (4 L) na 5°C u odgovarajućoj posudi. Zagrevati smešu do 20°C i mešati. Posle 3 časa, ukloniti 3 L tetrahidrofurana koncentrovanjem pod sniženim pritiskom i razblažiti ostatke etil acetatom (2.5 L). Isprati organske materije zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (2 L), vodom (2 L) i fiziološkim rastvorom (2 x 2 L). Sušiti etil acetatni rastvor preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncedntrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ulje. Rastvoriti ovo ulje u 2-propanolu (2.5 L) i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo ulje. Prečistiti pomoću hiralne SFC upotrebom AS-H kolone (50 x 250mm, veličine čestica 5 mikrona) eluiranjem sa 80 % superkritičnog ugljen dioksida i 20% od 0.2% rastvora dietilmetilamina u izopropil alkoholu na 280 g/min. da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (182.8 g, 389.62 mmol). MS (m/z): 450.2(M+1 (<35>Cl)), 452.2 (M+1 (<37>Cl)). Optička rotacija: [α]<20>D-39.4° (c = 0.95, MeOH).

Primer 2

Kokristalizacija 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanona i 4-hidroksibenzoeve kiseline.

[0132]

[0133] Jedinjenja 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanona (402.56 mg) i 4-hidroksibenzoeve kiseline (144.7 mg) su postavljena u 40 mL bočicu zajedno sa šipkom za mešanje. Bočica je popunjena do ivice vodom (39 mL). Uzorak je mešan na 1200 rpm na 50°C (postavka sa magnetnom mešalicom uz zagrevanje). Silikonsko ulje je nakapano oko osnove bočice da bi se osigurao dobar termalni prenos sa vrelom pločom. Dobijena je gusta bela suspenzija sa komadima prljavo bele čvrste supstance. Posle jednog časa suspendovanja, termometar umetnut kroz septum bočice je očitavao 40.5°C, i uzorak je preveden u homogenu suspenziju svetlo bele čvrste supstance. Posle prekonoćnog suspendovanja, uzorak je homogena suspenzija flokulentne bele čvrste supstance. Termometar očitava 43.1°C. Polarizovana svetlosna mikroskopija pokazuje puno dvostruko prelamanje svetlosti. Svetla bela čvrsta supstanca je izolovana vakuumskom filtracijom i sušena na mestu pod strujom vazduha u trajanju u 10 minuta. Uzorak je postavljen u 75°C vakuumsku peć na dva časa da bi se dobila kompozicja iz naslova kao bela kristalna čvrsta supstanca (484 mg, 94.9% prinos). Početak tačke topljenja = 160.0°C (diferencijalna skenirajuća kalorimetrija).

Rentgenska difrakcija praha

[0134] Obrasci rentgenske difrakcije (XRD) kristalnih čvrstih supstanci su dobijeni na Bruker D4 Endeavor rentgenskom difraktometru praha, opremljenim sa izvorom CuKa λ = 1.54060 A) i Vantec detektorom, koji funkcioniše na 35 kV i 50 mA. Uzorak je skeniran između 4 i 40° u 2θ, sa veličinom koraka od 0.009° u 2θ i stopom skeniranja od 0.5 sekundi/koraku, i sa 0.6 mm divergencijom, 5.28 fiksiranim anti-rasejavajućim razmakom i 9.5 mm prorezima detektora. Suvi prah je pakovan na kvarcnom držaču uzorka i glatka površina je dobijena upotrebom staklene pločice. Obrasci difrakcije kristalnog oblika su sakupljeni na temperaturi sredine i relativnoj vlažnosti sredine. Dobro je poznato u kristalografskoj tehnici da, za bilo koji dati kristalni oblik, relativni intenziteti difrakcionih pikova mogu da variraju zahvaljujući poželjnoj orijentaciji koja rezultuje iz faktora kao što je morfologija kristala ili izgled kristala. Tamo gde su prisutni efekti poželjne orijentacije, intenziteti pikova su promenjeni, ali su karakteristični položaji pikova polimorfa nepromenjeni. Pored toga, takođe je dobro poznato u kristalografskoj tehnici da za svaki dati oblik kristala ugaoni položaji pika mogu malo da variraju. Na primer, položaji pikova mogu da se pomere zbog varijacije u temperaturi ili vlažnosti na kojoj se uzorak analizira, premeštanja uzorka ili prisustva ili odsustva internog standarda. U predstavljenom slučaju, varijabilnost položaja pikova od 0.2 u 2θ uzeće u obzir ove potencijalne varijacije bez ometanja nedvosmislene identifikacije naznačenog kristalnog oblika. Potvrda kristalnog oblika može biti napravljena na bazi bilo koje jedinstvene kombinacije posebnih pikova (u jedinicama ° 2θ), tipično istaknutiji pikovi. (United States Pharmacopeia #35, National Formulary #30, Chapter <941>, pages 427-432, 2012). Obrasci difrakcije kristalnog oblika, sakupljeni na temperaturi sredine i relativnoj vlažnosti sredine, su podešeni na osnovu NBS standardnog referentnog materijala 675 (mica) sa pikovima na 8.853 i 26.774 stepeni 2-teta.

[0135] Pripremljeni uzorak kokristala iz Primera 2 je okarakterisan rentgenskim difrakcionim obrascem upotrebom CuKa zračenja kao da ima difrakcione pikove (2-teta vrednosti) kao što su opisani u Tabeli 3 u daljem tekstu, i naročito ima pikove na 18.2 u kombinaciji sa jednim ili više pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 16.0, 25.4 i 7.0; sa tolerancijom za difrakcione uglove od 0.2 stepeni.

Tabela 3

Alternativna priprema kokristala 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanona i 4-hidroksibenzoeve kiseline.

[0136] U 20 mL bočicu dodat je 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanon (2.00 g, 1.00 ekviv.; 4.44 mmola). Aceton (4 mL) je dodat uz mešanje na sobnoj temperaturi. Formiran je bistar rastvor.

4-Hidroksibenzoeva kiselina (0.756 g; 1.23 ekviv.; 5.47 mmola) je dodata uz mešanje na sobnoj temperaturi. Prvo je formirana neznatna suspenzija, a zatim gusta suspenzija. Smeša je zagrevana na vreloj ploči do 60°C. Aceton u alikvotama od 1 mL je dodavan sve dok nije zabeležena suspenzija koja se dobro meša na 60°C. Ukupan aceton koji je dodat je 9.00 mL (122.43 mmola, 7.11 g). Temperatura je održavana na ∼60°C nekoliko časova. Smeša je hlađena do sobne temperature i postavljena u frižider da bi se poboljšalo dobijanje. Dobijena čvrsta supstanca je sakupljena vakuumskom filtracijom, isprana sa 2 mL acetona i sušena u vakuumskoj peći preko noći na 40°C da bi se dobila kompozicija iz naslova kao bela kristalna čvrsta supstanca. HPLC analiza pokazuje da je molarni odnos 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanona prema 4-hidroksibenzoevoj kiselini u kokristalu jedan prema jedan.

HPLC analize

[0137]

kolona: Agilent ZORBAX Bonus-RP, Rapid Resolution, 4.6x75mm, 3.5µ

Temperatura kolone: 30°C

Zapremina injekcije: 2 µL

Detekcije: UV

2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanon (Primer 1) @ 219nm 4-hidroksibenzoeva kiselina @ 256nm

[0138]

Stopa protoka: 1.5 mL/min.

Pokretna faza:

A) 0.1% TFA u vodi

B) 0.1% TFA u acetonitrilu

Tabela gradijenata

Relativni odnos

Druga alternativna priprema kokristala 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanona i 4-hidroksibenzoeve kiseline.

[0139] Jedinjenja 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanon (45.06 g, 0.1 mol) i 4-hidroksibenzoeva kiselina (14.5 g, 1.05 mol ekv.) su suspendovana na 23°C u 53:47 izopropil alkoholu:heptanu (236 mL, 4 zapremine) i zagrevana do 65°C. Dobijeni rastvor je zasejan sa kokristalima 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanona i 4-hidroksibenzoeve kiseline (553 mg, 1.0 tež. % punjenja semena) i mešan an 65°C u trajanju od 30 minuta. Heptan (943 mL, 16 zapremine<3>) je dodat na 65°C tokom 4.6 časa. Suspenzija je mešana na 65°C dodatnih 30 minuta, hlađena do 23°C tokom 2 časa, mešana preko noći na 23°C, i vakuumski filtrirana. Čvrsti proizvod je ispran sa 10:90 izopropil alkohola:heptana (2 x 50 mL) i heptanom (50 mL) zatim sušen u vakuumskoj peći na 40°C u trajanju od 2 časa da bi se proizvela kompozicija iz naslova kao beli kristalni proizvod (51.3 g, 86.3 tež. % prinos). Početak tačke topljenja = 162.2°C (diferencijalna skenirajuća kalorimetrija).

Priprema 23

Sinteza 4-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il]-2-metil-butan-2-ol hidrohlorida.

[0140]

[0141] Rastvoriti terc-butil (1 S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-5-(3-hidroksi-3-metil-butil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-karboksilat (161 mg, 0.34 mmol) u etil acetatu (962 µL). Hladiti na ledenom kupatilu. Dodati hlorovodonik (843 µL, 3.37 mmol, 4M u dioksanu) i mešati na ledenom kupatilu u trajanju od 4 časa. Koncentrovati pod sniženim pritiskom. Rastvoriti u etanolu i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (100 mg, 0.34 mmol). MS (m/z): 264.2 (M+1). Sledeće jedinjenje je pripremljeno uglavnom pomoću postupka iz Pripreme 3.

Priprema 25

Sinteza 1-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2-hloro-5-metoksifenil)etanona.

[0142]

[0143] Rastvoriti 4-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il]-2-metil-butan-2-ol (0.36 g, 0.95 mol u dihlorometanu (9.5 mL). Dodati diizopropiletilamin (499 µL, 2.86 mmol). Dodati 2-(2-hloro-5-metoksi-fenil)sirćetnu kiselinu (229.5 mg, 1.14 mmol). Dodati O-(7-aza-1H-benzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (561 mg, 1.40 mmol) i mešati na temperaturi sredine preko noći. Razblažiti reakcionu smešu dihlorometanom i isprati vodom i fiziološkim rastvorom, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo braon ulje. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa acetonom: heksanima (gradijent, 0-20%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao neprozirno ulje (0.46 g, 0.82 mmol). MS (m/z): 560.2 (M+1).

Sledeća jedinjenja su pripremljena uglavnom pomoću postupka iz Pripreme 25.

Priprema 28

Sinteza 1-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-1-metil-5-vinil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2,6-dihlorofenil)etan-1-ona.

[0144]

[0145] Rastvoriti 1-[(1S,3R)-5-bromo-3-({[terc-butil(dimetil)silil]oksi}metil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]-2-(2,6-dihlorofenil)etanon (300 mg, 0.54 mmol) i dibutil estar vinilborne kiseline (0.24 mL, 1.08 mmol) u 1,4-dioksanu (5.4 mL). Dodati vodeni rastvor Na2CO3(2.7 mL, 2M u vodi). Degazirati sa azotom 10 min. Dodati bis(trifenilfosfin)paladijum (II) hlorid (76 mg, 0.11 mmol). Zagrevati do 80°C. Mešati 2 časa. Dodati vodu i ekstrahovati sa etil acetatom tri puta. Kombinovati etil acetatne ekstrakte, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (gradijent, 5-80%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela pena (220 mg, 0.44 mmol). MS (m/z): 504 (M+1).

Priprema 29

Sinteza 1-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-5-(1-hidroksietil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2,6-dihlorofenil)etan-1-ona (smeša diastereomera) i 1-((1 S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-5-(2-hidroksietil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2,6-dihlorofenil)etan-1-ona.

[0146]

[0147] Rastvoriti 1-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-1-metil-5-vinil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2,6-dihlorofenil)etan-1-on (477 mg, 0.95 mmol) u THF (9.5 mL). Hladiti do 0°C. Dodati BH3(1.9 mL, 1.89 mmol, 1M u THF). Mešati 4 časa na sobnoj temperaturi. Hladiti do 0°C. Dodati NaOH (3.8 mL, 3 M u vodi) i H2O2(0.58 mL, 30% tež./tež.% u vodi). Mešati preko noći na sobnoj temperaturi. Dodati etil acetat, isprati zasićenim rastvorom NaHCO3 i fiziološkim rastvorom, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (gradijent, 5-60%) da bi se dobio 1-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-5-(1-hidroksietil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2,6-dihlorofenil)etan-1-on (smeša diastereomera) kao bela pena (92 mg, 0.19 mmol). MS (m/z): 522 (M+1); i 1-((1S,3R)-3-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)-5-(2-hidroksietil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2,6-dihlorofenil)etan-1-on kao bela pena (254 mg, 0.49 mmol). MS (m/z): 522 (M+1).

Priprema 30

Sinteza 1-((1S,3R)-5-acetil-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2,6-dihlorofenil)etan-1-ona.

[0148]

[0149] Rastvoriti 1-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-5-(1-hidroksietil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2,6-dihlorofenil)etan-1-on (92 mg, 176 µmol, smeša dva diastereomera) u CH2Cl2(1.8 mL). Dodati NaHCO3(92 mg, 1.1mmol) i 3,3,3-triacetoksi-3-jodoftalid (90 mg, 211 µmol) na sobnoj temperaturi. Mešati 40 min. Dodati zasićeni rastvor NaHCO3 i zasićeni rastvor Na2S2O3, ekstrahovati etil acetatom tri puta. Kombinovati etil acetatne ekstrakte, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (gradijent, 5-60%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela pena (0.068 g, 130 mmol). MS (m/z): 522 (M+1).

Sledeća jedinjenja su pripremljena uglavnom pomoću postupka iz Pripreme 30.

Priprema 33

Sinteza 2-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-2-(2-(2,6-dihlorofenil)acetil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)acetaldehida.

[0150]

[0151] Rastvoriti 1-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-5-(2-hidroksietil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2,6-dihlorofenil)etan-1-on (160 mg, 0.31 mmol) u CH2Cl2 (3.1 mL). Dodati NaHCO3(160 mg, 1.90 mmol) i 3,3,3-triacetoksi-3-jodoftalid (156 mg, 0.37 mmol) na sobnoj temperaturi. Mešati 40 min. Dodati zasićeni rastvor NaHCO3 i zasićeni rastvor Na2S2O3, ekstrahovati sa etil acetatom tri puta. Kombinovati etil acetatne ekstrakte, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (gradijent, 5-60%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela pena (140 mg, 0.27 mmol). MS (m/z): 520.2 (M+1).

Priprema 34

Sinteza 1-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-5-(2-hidroksipropil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2,6-dihlorofenil)etan-1-ona (smeša dva diastereomera).

[0152]

[0153] Rastvoriti 2-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-2-(2-(2,6-dihlorofenil)acetil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)acetaldehid (138 mg, 0.27 mmol) u THF (2.7 mL). Hladiti do 0°C, dodati MeMgCl (0.097 mL, 0.29 mmol, 3M u Et2O). Mešati 30 min na 0°C. Dodati vodu i ekstrahovati sa etil acetatom tri puta. Kombinovati etil acetatne ekstrakte, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (gradijent, 2-60%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela pena (122 mg, 0.23 mmol). MS (m/z): 536.2 (M+1).

Sledeće jedinjenje je pripremljeno uglavnom pomoću postupka iz Pripreme 34.

Priprema 36

Sinteza 1-((1S,3R)-5-bromo-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2-hloro-6-fluorofenil)etan-1-ona.

[0154]

[0155] Rastvoriti (1S,3R)-5-bromo-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin (1.85 g, 4.99 mmol) i 2-hloro-6-fluorofenilsirćetnu kiselinu (1.04 g, 5.49 mmol) u dihlorometanu (50 mL). Dodati O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (2.85 g, 7.49 mmol) i diizopropiletilamin (1.3 mL, 7.49 mmol) na sobnoj temperaturi. Mešati 3 časa. Dodati vodu i ekstrahovati sa dihlorometanom tri puta. Kombinovati dihlorometanske ekstrakte, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Prečistiti ostatak hromatografijom na siliak gelu, eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (gradijent, 5-60%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela pena (2.2 g, 4.07 mmol). MS (m/z): 540.2 (M+1).

Priprema 37

Sinteza 1-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-1-metil-5-vinil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2-hloro-6-fluorofenil)etan-1-ona.

[0156]

[0157] Rastvoriti 1-((1S,3R)-5-bromo-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2-hloro-6-fluorofenil)etan-1-on (1.8 g, 3.33 mmol) i dibutil estar vinilborne kiseline (1.5 mL, 6.65 mmol) u 1,4-dioksanu (22 mL). Dodati vodeni rastvor Na2CO3 (11 mL, 2M u vodi). Degazirati sa azotom 10 min. Dodati bis(trifenilfosfin)paladijum (II) hlorid (467 mg, 0.67 mmol). Zagrevati do 80°C. Mešati 2 časa. Dodati vodu i ekstrahovati sa etil acetatom tri puta. Kombinovati etil acetatne ekstrakte, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod snjženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (gradijent, 5-40%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela pena (1.54 g, 3.15 mmol). MS (m/z): 488.2 (M+1).

Priprema 38

Sinteza 1-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-5-(2-hidroksietil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2-hloro-6-fluorofenil)etan-1-ona.

[0158]

[0159] Rastvoriti 1-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-1-metil-5-vinil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2-hloro-6-fluorofenil)etan-1-on (1.54 g, 3.15 mmol) u THF (31 mL). Hladiti do 0°C. Dodati BH3 (6.3 mL, 6.3 mmol, 1M u THF). Mešati 4 časa na sobnoj temperaturi. Hladiti do 0°C. Dodati NaOH (12.6 mL, 3 M u vodi) i H2O2(1.92 mL, 30% tež./tež.% u vodi). Mešati preko noći na sobnoj temperaturi. Dodati etil acetat, isprani zasićeni rastvor NaHCO3 i fiziološki rastvor, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (gradijent, 5-60%) da bi se dobio 1-(1S,3R)-3-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)-5-(2-hidroksietil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2-hloro-6-fluorofenil)etan-1-on kao bela pena (1.08 g, 2.13 mmol). MS (m/z): 506.2 (M+1).

Priprema 39

Sinteza 2-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-2-(2-(2-hloro-6-fluorofenil)acetil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)acetaldehid.

[0160]

[0161] Rastvoriti 1-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-5-(2-hidroksietil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2-hloro-6-fluorofenil)etan-1-on (1.08 g, 2.13 mmol) u CH2Cl2(21 mL). Dodati NaHCO3(1.08 g, 12.9 mmol) i 3,3,3-triacetoksi-3-jodoftalid (1.09 g, 2.56 mmol) na sobnoj temperaturi. Mešati 40 min. Dodati zasićeni rastvor NaHCO3 i zasićeni rastvor Na2S2O3, ekstrahovati sa etil acetatom tri puta. Kombinovati etil acetatne ekstrakte, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (gradijent, 5-60%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela pena (0.87 g, 1.73 mmol).

Priprema 40

Sinteza 1-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)propan-2-ona.

[0162]

[0163] Mešati (1S,3R)-5-bromo-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-l-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin hidrohlorid (2.5 g, 6.14 mmol), aceton (30 mL), kalijum fosfat, tribazni, N-hidrat (3.99 g, 18.4 mmol), CataCXium A (di(1-adamantil)-n-butilfosfin, 220 mg, 0.61 mmol) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum (0) (290 mg, 0.31 mmol). Mešati 2 dana na 70°C. Hladiti do 0°C. Dodati vodu i ekstrahovati sa etil acetatom tri puta. Kombinovati etil acetatne ekstrakte, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncetrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (gradijent, 10-100%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela pena (1.3 g, 3.74 mmol). MS (m/z): 348 (M+1).

Priprema 41

Sinteza 1-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-2-(2-(6-hloro-2-fluoro-3-metoksifenil)acetil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)propan-2-ona.

[0164]

[0165] Rastvoriti 1-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)propan-2-on (1.3 g, 3.74 mmol) u dihlorometanu (37 mL). Dodati diizopropiletilamin (2.0 mL, 11.22 mmol), 2-(6-hloro-2-fluoro-3-metoksifenil)sirćetnu kiselinu (1.06 g, 4.86 mmol), O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (1.91 g, 4.86 mmol) i na sobnoj temperaturi. Mešati 16 časova. Isprati zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (gradijent, 5-50%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela pena (1.6 g, 2.69 mmol). MS (m/z): 548.6 (M+1).

Priprema 42

Sinteza 1-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-5-(2-hidroksipropan-2-il)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2,6-dihlorofenil)etan-1-ona.

[0166]

[0167] Rastvoriti 1-((1S,3R)-5-acetil-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)-2-(2,6-dihlorofenil)etan-1-on (68 mg, 130 µmol) u THF (1.3 mL). Hladiti do 0°C, dodati MeMgCl (87 µL, 261 µmol, 3M u Et2O). Mešati 30 min na 0°C i 30 min na sobnoj temperaturi. Dodati MeMgCl (87 µL, 261 µmol, 3M u Et2O) na sobnoj temperaturi. Mešati 60 min. Dodati vodu i ekstrahovati etil acetatom tri puta. Kombinovati etil acetatne ekstrakte, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela pena (0.054 g, 100 µmol). MS (m/z): 536.2 (M+1).

Sledeća jedinjenja su pripremljena uglavnom pomoću postupka iz Priprema 42.

Primer 3

Sinteza 2-(2,6-dihlorofenil)-1-((1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(2-hidroksipropan-2-il)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)etan-1-ona.

[0169] Rastvoriti 1-((1S,3R)-3-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-5-(2-hidroksipropan-2-il)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1 H)-il)-2-(2,6-dihlorofenil)etan-1-on (0.054 g, 100 µmol) u THF (1.0 mL). Dodati tetrabutilamonijum fluorid (0.11 mL, 110 µmol, 1M u THF). Mešati 30 min. Dodati zasićeni rastvor amonijum hlorida i ekstrahovati sa etil acetatom tri puta. Kombinovati etil acetatne ekstrakte, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (gradijent, 10-100%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela pena (0.03 g, 71 µmol). MS (m/z): 422 (M+1).

Primer 3a

Priprema kristalnog 2-(2,6-dihlorofenil)-1-((1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(2-hidroksipropan-2-il)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)etan-1-ona.

[0170] Rastvoriti 1.932 g 2-(2,6-dihlorofenil)-1-((1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(2-hidroksipropan-2-il)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)etan-1-ona u koncentraciji od 128mg/mL u ciklopentil metil etru uz mešanje na 80°C/1000 rpm. Rastvor počinje da taloži belu čvrstu supstancu koja je zatim hlađena do temperature sredine posle krakog perioda suspendovanja. Čvrsta supstanca je izolovana vakuumskom filtracijom i sušena pod azotom kratko pre nastavljanja u 65°C vakuumskoj peći u trajanju od 2 časa. 1.606 g jedinjenja iz naslova je dobijeno sa prinosom od 86.8%.

Rentgenska difrakcija praha

[0171] Obrasci rentgenske difrakcije praha kristalnih čvrstih supstanci su dobijeni na Bruker D4 Endeavor rentgenskom difraktometru praha, opremljenom sa CuKa izvorom (λ = 1.54060 Å) i Vantec detektorom, koji funkcioniše na 35 kV i 50 mA. Uzorak je skeniran između 4 i 40° u 2θ, sa veličinom koraka od 0.0087° u 2θ i stopom skeniranja od 0.5 sekundi/koraku, i sa 0.6 mm divergencijom, 5.28 mm fiksiranim anti-rasejavajućim razmakom i 9.5 mm prorezima detektora. Suvi prah je pakovan na kvarcnom držaču uzoraka i glatka površina je dobijena upotrebom staklene pločice. U kristalografiji je dobro poznato da, za svaki dati kristalni oblik, relativni intenziteti difrakcionih pikova mogu da variraju kao posledica poželjne orijentacije koja rezultuje iz faktora kao što su morfoligija i izgled kristala. Tamo gde su prisutni efekti poželjne orijentacije, intenziteti pikova su promenjeni, ali karakteristični položaji pikova polimorfa su nepromenjeni. Videti, npr. The U. S. Pharmacopeia 35 – National Formulary 30 Chapter <941> Characterization of crystalline and partially crystalline solids by X-ray powder diffraction (XRPD) Official December 1, 2012-May 1, 2013. Pored toga, takođe je dobro poznato u kristalografskoj tehnici da za svaki dati oblik kristala ugaoni položaji pika mogu neznantno da variraju. Na primer, položaji pikova mogu da se pomere kao posledica varijacije u temperaturi ili vlažnosti na kojoj se uzorak analizira, pomeranja uzorka ili prisustva ili odsustva internog standarda. U predstavljenom slučaju, varijabilnost položaja pika od ± 0.2 u 2θ uzeće u obzir ove potencijalne varijacije bez ometanja nedvosmislene identifikacije naznačenog oblika kristala. Potvrda kristalnog oblika se može napraviti na bazi bilo koje jedinstvene kombinacije posebnih pikova (u jedinicama ° 2θ), tipično istaknutiji pikovi. Difrakcioni obrasci kristalnog oblika, sakupljeni na temperaturi sredine i relativnoj vlažnosti sredine, su podešeni na bazi NIST 675 standardnih pikova na 8.85 i 26.77 stepeni 2-teta.

[0172] Pripremljeni uzorak kristalnog jedinjenja iz Primera 3a je okarakterisan pomoću XRD obrasca upotrebom CuKa zračenja kao da ima difrakcione pikove (2-teta vrednosti) kao što su opisani u Tabeli 10 u daljem tekstu. Specifično obrazac sadrži pik na 14.3 u kombinaciji sa jednim ili više od pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 15.7, 18.0, 18.7, 22.4 i 25.1 sa tolerancijom za difrakcione uglove od 0.2 stepeni.

Tabela 10. Pikovi rentgenske difrakcije praha Primera 3a

[0173] Sledeća jedinjenja su pripremljena uglavnom pomoću postupka iz Primera 3.

Primer 4a

Priprema kokristalnog 2-(2,6-dihlorofenil)-1-((1S,3R)-5-(2-hidroksi-2-metilpropil)-3-(hidroksimetil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)etan-1-ona i 4-hidroksibenzoeve kiseline.

[0174] Postaviti 2-(2,6-dihlorofenil)-1-((1S,3R)-5-(2-hidroksi-2-metilpropil)-3-(hidroksimetil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)etan-1-on (98.33 mg) i 4-hidroksibenzoevu kiselinu (35.40 mg) u 20 mL bočici opremljenoj sa šipkom za mešanje. Bočica je napunjena do ivice vodom (∼20 mL) i ssuspendovana na 45°C (postavka sa magnetnom mešalicom uz zagrevanje) preko noći. Uzorak je suspendovan dodatno tokom 48 časova na 60°C bez formiranih kristala. Dodat je aceton (1 mL) i uzorak je suspendovan preko noći na 40°C/1000 rpm. Materijal izgleda kristalan. Dobijena bela čvrsta supstanca je izolovana vakuumskom filtracijom i sušena na mestu pod vakuumom i strujom vazduha u trajanju od 10 minuta.

Rentgenska difrakcija praha

[0175] Obrasci rentgenske difrakcije praha kristalnih čvrstih supstanci su dobijeni na Bruker D4 Endeavor rentgenskom difraktometru praha, opremljenom sa CuKa izvorom (λ = 1.54060 Å) i Vantec detektorom, koji funkcioniše na 35 kV i 50 mA. Uzorak je skeniran između 4 i 40° u 2θ, sa veličinom koraka od 0.009° u 2θ i stopom skeniranja od 0.5 sekundi/koraku, i sa 0.6 mm divergencijom, 5.28 mm fiksiranim anti-rasejavajućim razmakom i 9.5 mm prorezima detektora. Suvi prah je pakovan na kvarcnom držaču uzoraka i glatka površina je dobijena upotrebom staklene pločice. Difrakcioni obrasci kristalnog oblika su sakupljeni na temperaturi i relativnoj vlažnosti sredine. U kristalografiji je dobro poznato da, za svaki dati kristalni oblik, relativni intenziteti difrakcionih pikova mogu da variraju kao posledica poželjne orijentacije koja rezultuje iz faktora kao što su morfoligija i izgled kristala. Tamo gde su prisutni efekti poželjne orijentacije, intenziteti pikova su promenjeni, ali karakteristični položaji pikova polimorfa su nepromenjeni. Pored toga, takođe je dobro poznato u kristalografskoj tehnici da za svaki dati oblik kristala ugaoni položaji pika mogu neznantno da variraju. Na primer, položaji pikova mogu da se pomere kao posledica varijacije u temperaturi ili vlažnosti na kojoj se uzorak analizira, pomeranja uzorka ili prisustva ili odsustva internog standarda. U predstavljenom slučaju, varijabilnost položaja pika od ± 0.2 u 2θ uzeće u obzir ove potencijalne varijacije bez ometanja nedvosmislene identifikacije naznačenog oblika kristala. Potvrda kristalnog oblika se može napraviti na bazi bilo koje jedinstvene kombinacije posebnih pikova (u jedinicama ° 2θ), tipično istaknutiji pikovi. (United States Pharmacopeia #35, National Formulary #30, Chapter <941>, pages 427-432, 2012). Difrakcioni obrasci kristalnog oblika, sakupljeni na temperaturi sredine i relativnoj vlažnosti sredine, su podešeni na bazi NIST 675 standardnih pikova na 8.85 i 26.77 stepeni 2-teta.

[0176] Pripremljeni uzorak kokristala Primera 4a je okarakterisan pomoću obrasca rentgenske difrakcije upotrebom CuKa zračenja kao da ima difrakcione pikove (2-teta vrednosti) kao što su opisani u Tabeli 11 u daljem tekstu, i naročito ima pikove na 7.0 u kombinaciji sa jednim ili više pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 18.8, 16.1 i 19.3; sa tolerancijom za difrakcione uglove od 0.2 stepena.

Tabela 11: Pikovi rentgenske difrakcije praha Primera 4a

Primer 7

Sinteza 2-(2-hloro-6-metoksi-fenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metil-butil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanona.

[0177]

[0178] Rastvoriti 1-[(1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-(2-hloro-6-metoksifenil)etanon (0.58 g, 1.04 mmol) u THF (5.3 mL). Dodati sirćetnu kiselinu (16 mL, 279 mmol) i vodu (5.3 mL). Mešati na 50°C u trajanju od 1.5 časa. Koncentrovati pod sniženim pritiskom. Rastvoriti ostatak u etil acetatu i isprati zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, vodom i fiziološkim rastvorom. Sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Prečistiti ostatak hromatografijom an silika gelu, eluiranjem sa acetonom: heksanima (gradijent, 0-30%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela pena (0.34 g, 0.76 mmol). MS (m/z): 446.0 (M+1).

Sledeće jedinjenje je pripremljeno uglavnom pomoću postupka iz Primera 8.

Primer 10

Sinteza 2-(2-hlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanona.

[0179]

[0180] Rastvoriti 2-(2-hlorofenil)sirćetnu kiselinu (96.8 mg, 0.56 mmol) i O-(7-aza-1H-benzotriazol-1-il)-N, N, N’, N’-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (200 mg, 0.52 mmol) u dihlorometanu (2 mL). Dodati diizopropiletilamin (183 µL, 1.05 mmol). Mešati na temperaturi sredine u trajanu od 20 min. Dodati ovu reakcionu smešu u rastvor 4-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il]-2-metil-butan-2-ola (92 mg, 0.35 mol) u dihlorometanu (0.4 mL). Isprati dihlorometanom (1 mL) i mešati na temperaturi sredine u trajanju od 3.5 časa. Razblažiti reakcionu smešu vodom i mešati. Ekstrahovati sa dihlorometanom i sušiti ekstrakte preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (gradijent, 0-60%) da bi se dobio ostatak. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa 10% (2N amonijak u metanolu):dihlorometanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela pena (78 mg, 0.19 mmol). MS (m/z): 416.2 (M+1).

Sledeće jedinjenje je pripremljeno uglavnom pomoću postupka iz Primera 10.

Primer 12

Sinteza 3-hloro-2-[2-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metil-butil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]-2-okso-etil]benzonitrila.

[0181]

[0182] U bočici suspendovati 2-(2-hloro-6-cijano-fenil)sirćetnu kiselinu (75.4 mg, 0.37 mmol) u acetonitrilu (0.3 mL). Dodati trietilamin (114 µL, 0.82 mmol) i mešati dok se čvrste supstance ne rastvore. Dodati O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum tetrafluoroborat (165 mg, 0.51 mmol) i mešati na temperaturi sredine u trajanju od 10 min. U posebnoj bočici suspendovati 4-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il]-2-metil-butan-2-ol hidrohlorid (102 mg, 0.34 mol) u acetonitrilu (0.3 mL). Dodati trietilamin (227 µL, 1.63 mmol) i istaložiti oblike. Mešati 10 min na temperaturi sredine. Prebaciti reakcionu smešu 2-(2-hloro-6-cijano-fenil)sirćetne kiseline, acetonitrila, trietilamina i O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum tetrafluoroborata iz bočice u bočicu koja sadrži reakcionu smešu 4-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il]-2-metil-butan-2-ol hidrohlorida, acetonitrila i trietilamina. Isprati acetonitrilom (0.9 mL) i mešati homogenu reakcionu smešu na temperaturi sredine preko noći. Razblažiti reakcion smešu vodom i ekstrahovati sa etil acetatom. Isprati etil acetatne ekstrakte vodom, zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i fiziološkim rastvorom. Sušiti ekstrakte preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika, eluiranjem sa etil acetatom: heksanima (0-60% gradijent) da bi se dobio ostatak. Prečistiti pomoću reverzno fazne hromatografije na C18 modifikovanoj siliki da bi se proizvelo jedinjenje iz naslova kao zeleno ulje (34 mg, 0.08 mmol): (m/z): 441.2 (M+1).

Priprema 46

Sinteza 2-(2-hloro-6-metil-fenil)sirćetne kiseline.

[0183]

[0184] U 100 mL bočicu sa zatvaračem na zavrtanj dodati 2-(2-hloro-6-metil-fenil)acetonitril (8.0g, 48.30 mmol) i 3N vodeni rastvor natrijum hidroksida (80 mL, 240.00 mmol). Zagrevati smešu na 110°C u trajanju od 18 časova. Ohladiti smešu do 10°C i zaskiseliti do pH 1 sa koncentrovanom hlorovodoničnom kiselinom (15mL)). Ekstrahovati smešu sa etil acetatom. Odvojiti i sušiti organsku fazu preko natrijum sulfata. Filtrirati i koncentrovati do sušenja. Kristalizovati iz dietil etra da bi se proizvelo jedinjenje iz naslova kao prljavo bela čvrsta supstanca (7.20 g, 39.00 mmol): MS (m/z): 184.8 (M+1).

Priprema 47

Sinteza terc-butil 2-(2-hloro-5-izopropil-fenil)acetata.

[0185]

[0186] Dodati bis(dibenzilidenaceton)paladijum (49.2 mg, 85.6 µmol) u posudu sa okruglim dnom i hermetički zatvoriti sa septumom. Isprati azotom. Dodati tri-terc-butilfosfin (85.6 µL, 85.6 µmol, 1M u toluenu) i litijum bis(trimetilsilil)amid (12.8 mL, 11.56 mmol, 0.9M u metilcikloheksanima) peko šprica. Dodati 2-bromo-1-hloro-4-izopropil-benzen (1.0 g, 4.28 mmol) i t-butil acetat (865.2 µL, 6.42 mmol) preko šprica. Dodati toluen (10.7 mL) preko šprica i reakciona smeša postaje vrela na dodir. Postaviti na vodeno kupatilo na temperaturu sredine i mešati 3 časa. Čuvati reakcionu smešu u zamrzivaču tokom vikenda. Zagrevati reakcionu smešu do temperature sredine. Razblažiti reakcionu smešu sa dietil etrom i dodati zasićeni rastvor amonijum hlorida. Odvojiti slojeve i isprati dietil etarski sloj sa zasićenim rastvorom natrijum hlorida. Sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa acetonom: heksanima (0-2% gradijent) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.04 g). Prečistiti ponovo hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa dihlorometanom: heksanima (0-20% gradijent) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (490 mg, 1.82 mmol). MS (m/z): 213.0 (M-tBu+1).

Sledeće jedinjenje je pripremljeno uglavnom pomoću postupka iz Pripreme 47.

Priprema 49

Sinteza 2-(2-hloro-5-izopropil-fenil)sirćetne kiseline.

[0187]

[0188] Rastvoriti terc-butil 2-(2-hloro-5-izopropil-fenil)acetat (483 mg, 1.80 mmol) u dihlorometanu (5.1 mL). Lagano dodati trifluorosirćetnu kiselinu (1.09 mL, 14.4 mmol) i mešati reakcionu smešu 3 časa na temperaturi sredine. Koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (380 mg, 1.79 mmol). MS (m/z): 229.8 (M+18). Sledeće jedinjenje je pripremljeno uglavnom pomoću postupka iz Pripreme 49.

Priprema 51

Sinteza izopropil 2-(3-izopropoksifenil)acetata.

[0189]

[0190] Rastvoriti 2-(3-hidroksifenil)sirćetnu kiselinu (5.04 g, 32.8 mmol) u dimetilformamidu (49.9 mL). Dodati kalijum karbonat (15.1 g, 108.2 mmol) i 2-jodopropan (15.1 mL, 150.8 mmol). Zagrevati reakcionu smešu do 80°C u trajanju od 6 časova. Mešati na temperaturi sredine u trajanju od 64 časa. Zagrevati reakcionu smešu do 95°C u trajanju od 6 časova.

[0191] Dodati dodatni kalijum karbonat (9.2 g, 65.6 mmol) i 2-jodopropan (15.1 mL, 150.8 mmol) i zagrevati reakcionu smešu do 90°C preko noći. Podići temperaturu reakcione smeše do 150°C i zagrevati preko noći. Hladiti do temperature sredine i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Razblažiti ostatak vodom i etil acetatom. Odvojiti slojeve i ekstrahovati vodeni sloj sa etil acetatom. Kombinovati etil acetatne ekstrakte i isprati vodom i fiziološkim rastvorom, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa acetonom: heksanima (0-20% gradijent) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.79 g, 20.27 mmol). MS (m/z): 237.0 (M+H), 254.0 (M+18).

Sledeće jedinjenje je pripremljeno uglavnom pomoću postupka iz Pripreme 51.

Priprema 53

Sinteza 2-(3-izopropoksifenil)sirćetne kiseline.

[0192]

[0193] Rastvoriti izopropil 2-(3-izopropoksifenil)acetat (4.2 g, 17.8 mmol) u tetrahidrofuranu (35.6 mL). Dodati vodu (35.6 mL) i litijum hidroksid (6.05 g, 248.8 mmol). Zagrevati reakcionu smešu do 66°C preko noći. Koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se uklonio tetrahidrofuran. Razblažiti reakcionu smešu vodom i isprati dietil etrom. Zakiseliti vodeni sloj sa 5N HC1 do pH 1. Ekstrahovati vodeni sloj dietil etrom. Isprati dietil etarski ekstrakt vodom i fiziološkim rastvorom, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.37 g, 17.35 mmol). MS (m/z): 195.0 (M+1), 212.0 (M+18).

Sledeće jedinjenje je pripremljeno uglavnom pomoću postupka iz Pripreme 53.

Priprema 55

Sinteza 2-(2-hloro-5-izopropoksi-fenil)sirćetne kiseline.

[0194]

[0195] Rastvoriti 2-(3-izopropoksifenil)sirćetnu kiselinu (3.24 g, 16.6 mmol) u dimetilformamidu (11.1 mL). Hladiti na ledenom kupatilu i dodati rastvor N-hlorosukcinimida (2.44 g, 18.3 mmol) u dimetilformamidu (12.2 mL). Mešati preko noći omogućavajući da reakcija dostigne temperaturu sredine. Razblažiti reakcionu smešu dietil etrom. Isprati vodom. Ekstrahovati ostatak od ispiranja vodom sa dietil etrom. Kombinovati dietil etarske ekstrakte i ispirati vodom i fiziološkim rastvorom, sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Prečistiti ostatak hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa acetonom: heksanima (0-25% gradijent) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.08 g, 13.47 mmol). MS (m/z): 245.8 (M+18).

Sledeće jedinjenje je pripremljeno uglavnom pomoću postupka iz Pripreme 55.

Priprema 57

Sinteza metil 2-(2-hloro-6-cijano-fenil)sirćetne kiseline.

[0196]

[0197] Dodati 2M rastvor litijum diizopropilamida u tetrahidrofuranu (62.6 mL, 461.8 mmol) u tetrahidrofuranu (1 L) na -78°C. Lagano dodati 1,3-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2(1H)-pirimidinon (19.94 mL, 164.91 mmol), a zatim je ukapavanjem dodavan 3-hloro-2-metilbenzonitril (20 g, 131.93 mmol). Održavati smešu na -78°C uz mešanje u trajanju od 5 min. Prečistiti reakcionu posudu sa ugljen dioksidom (1 L; 25.65 mola) za 15 min. Dodati vodu (100 mL) i mešati 2 časa. Dodati 10M vodeni rastvor natrijum hidroksida da bi se povećala pH vodene faze do >12. Odvojiti vodeni sloj i isprati dietil etrom. Zakiseliti vodeni sloj koncentrovanom hlorovodoničnom kiselinom do pH-1 i ekstrahovati sa etil acetatom. Odvojiti organsku fazu i sušiti preko natrijum sulfata. Filtrirati i koncentrovati do sušenja da bi se proizvelo jedinjenje iz naslova kao prljavo bela čvrsta supstanca (16.0 g; 81.80 mmol). MS (m/z): 195.9 (M+1).

Priprema 58

Sinteza metil (1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-karboksilata.

[0198]

[0199] U staklenoj posudi pod pritiskom, koja sadrži magnetnu šipku za mešanje, suspendovati (1S,3R)-5-bromo-3-((terc-butildimetilsililoksi)metil)-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin (30 g, 81.0 mmol), paladijum acetat (1.8 g, 8.1 mmol), bis-(1,3-difenilfosfino)propan (6.7 g, 16.2 mmol) i natrijum karbonat (34.3 g, 324.0 mmol) u smeši dimetil sulfoksida (360 mL) i metanola (180 mL). Napuniti posudu ugljen monoksidom (410 kPa) i zagrevati do 100°C uz mešanje. Održavati temperaturu na 100°C u trajanju od 19 časova. Omogućiti da se smeša hladi do temperature sredine. Filtrirati rezultujuću suspenziju i razblažiti filtrat sa metil terc-butil etrom (1000 mL). Isprati rastvor fiziološkim rastvorom (3 x 500 mL). Sušiti preko natrijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom da bi se proizvelo jedinjenje iz naslova kao tamno narandžasto ulje (26.7 g, 76.4 mmol): MS (m/z): 350.0 (M+1).

Priprema 59

Sinteza metil (1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-2-[2-(6-hloro-2-fluoro-3-metoksifenil)acetil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-5-karboksilata.

[0200]

[0201] Dodati trietilamin (0.36 mL, 2.57 mmol) u mešani rastvor metil (1S,3R)-3-[[tercbutil(dimetil)silil]oksimetil]-1-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-karboksilata (500 mg, 1.29 mmol), (benzotriazol-1-iloksi)tripirolidinofosfonijum heksafluorofosfata (1.02 g, 1.93 mmol) i 2-(6-hloro-2-fluoro-3-metoksifenil)sirćetne kiseline (356 mg, 1.54 mmol) u dimetilformamidu (6.4 mL). Mešati na sobnoj temperaturi 16 časova. Dodati zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida (60 mL). Ekstrahovati sa etil acetatom (3 x 50 mL). Isprati kombinovane organske slojeve fiziološkim rastvorom. Sušiti preko magnezijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Prečistiti pomoću „flash“ hromatografije da bi se proizvelo jedinjenje iz naslova kao amorfno žuto ulje (703 mg, 1.15 mmol): MS (m/z): 550.0 (M+1).

Sledeća jedinjenja su pripremljena uglavnom pomoću postupka iz Pripreme 59.

Primer 13

Sinteza 2-(6-hloro-2-fluoro-3-metoksi-fenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(1-hidroksi-1-metil-etil)-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-2-il]etanona.

[0202]

[0203] Dodati 0.6M rastvor lantan (III) hlorid bis(litijum hlorid) kompleksa u tetrahidrofuranu (1.92 mL, 1.15 mmol) u mešani rastvor metil (1S,3R)-3-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-2-[2-(6-hloro-2-fluoro-3-metoksifenil)acetil]-1-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-5-karboksilata (703 mg, 1.15 mmol) u tetrahidrofuranu (5 mL). Mešati na sobnoj temperaturi 40 minuta. Ukapavanjem dodati 3M rastvor metil magnezijum bromida u dietil etru (3.50 ekviv.; 4.03 mmol; 1.34 mL; 1.39 g). Mešati reakcionu smešu 1.5 čas. Ugasiti fiziološkim rastvorom (25 mL). Pošto je prestalo oslobađanje gasa, ekstrahovati etil acetatom (3 x 25mL). Isprati kombinovane organske slojeve fiziološkim rastvorom. Sušiti preko magnezijum sulfata, filtrirati i koncentrovati pod sniženim pritiskom. Ponovo rastvoriti ostatak u tetrahidrofuranu (10 mL) i dodati tetrabutilamonijum fluorid, trihidrat (492 mg, 1.73 mmola). Mešati 2 časa na sobnoj temperaturi. Koncentrovati pod sniženim pritiskom. Isprati ostatak kroz kratak čep „flash“ silike (15 g) sa etil acetatom (50 mL). Koncentrovati pod sniženim pritiskom. Prečistiti pomoću reverzno fazne hromatografije na C18 modifikovanoj siliki da bi se proizvelo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (349 mg, 0.76 mmol): (m/z): 436.0 (M+1).

Sledeća jedinjenja su pripremljena uglavnom pomoću postupka iz Primera 13.

Claims (16)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule

   u kome n je 0, 1 ili 2; R<1>je halogen; R<2>je halogen, H, CN, C1 - C3 alkoksi ili C1 - C3 alkil; i R<3>je H, halogen, C1 - C3 alkoksi ili C1 - C3 alkil.
2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 formule

   u kome n je 0, 1 ili 2; R<1>je halogen; R<2>je halogen, H, CN, C1 - C3 alkoksi ili C1 - C3 alkil; i R<3>je H, halogen, C1 - C3 alkoksi ili C1 - C3 alkil.
3. 3. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 ili 2 u kome n je 0, 1 ili 2; R<1>je halogen; R<2>je halogen; i R<3>je vodonik ili C1 - C3 alkoksi.
4. 4. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 ili 2 u kome n je 0, 1 ili 2; R<1>je Cl, F ili Br; R<2>je Cl, OCH3, H, F, CN ili CH3; i R<3>je OCH3, H, CH2CH3, Cl, OCH(CH3)2, OCH2CH3, F, CH(CH3)2ili CH3.
5. 5. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1, 2 ili 3 u kome n je 0 ili 2; R<1>je Cl; R<2>je Cl ili F; i R<3>je H ili OCH3.
6. 6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanon.
7. 7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je 2-(2,6-dihlorofenil)-1-((1S,3R)-5-(2-hidroksi-2-metilpropil)-3-(hidroksimetil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)etan-1-on.
8. 8. Kompozicija koja sadrži 2-(2,6-dihlorofenil)-1-[(1S,3R)-3-(hidroksimetil)-5-(3-hidroksi-3-metilbutil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il]etanon i 4-hidroksibenzoevu kiselinu.
9. 9. Kokristalni oblik kompozicije prema patentnom zahtevu 8.
10. 10. Kokristalni oblik kompozicije prema patentnom zahtevu 9 naznačen obrascem rentgenske difrakcije praha upotrebom CuKa zračenja koji ima difrakcioni pik na difrakcionom uglu 2-theta od 18.2° u kombinaciji sa jednim ili više od pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 16.0°, 25.4° i 7.0°; sa tolerancijom za difrakcione uglove od 0.2 stepena.
11. 11. Kokristalni oblik 2-(2,6-dihlorofenil)-1-((1S,3R)-5-(2-hidroksi-2-metilpropil)-3-(hidroksimetil)-1-metil-3,4-dihidroizohinolin-2(1H)-il)etan-1-ona i 4-hidroksibenzoeve kiseline.
12. 12. Kokristalni oblik prema patentnom zahtevu 11 naznačen obrascem rentgenske difrakcije praha upotrebom CuKa zračenje koje ima difrakcioni pik na difrakcionom uglu 2-teta od 7.0° u kombinaciji sa jednim ili više od pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 18.8°, 16.1° i 19.3°; sa tolerancijom za difrakcione uglove od 0.2 stepena.
13. 13. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.
14. 14. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7 za upotrebu u terapiji.
15. 15. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7 za upotrebu u lečenju Parkinsonove bolesti.
16. 16. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7 za upotrebu u lečenju šizofrenije.