RS56535B1 - Jedinjenja 4-supstituisanog-3-fenilsulfanilmetil-biciklo[3.1.0]heksana kao mglur 2/3 antagonisti - Google Patents

Jedinjenja 4-supstituisanog-3-fenilsulfanilmetil-biciklo[3.1.0]heksana kao mglur 2/3 antagonisti

Info

Publication number
RS56535B1
RS56535B1 RS20171082A RSP20171082A RS56535B1 RS 56535 B1 RS56535 B1 RS 56535B1 RS 20171082 A RS20171082 A RS 20171082A RS P20171082 A RSP20171082 A RS P20171082A RS 56535 B1 RS56535 B1 RS 56535B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
pharmaceutically acceptable
methyl
hexane
acceptable salt
compound according
Prior art date
Application number
RS20171082A
Other languages
English (en)
Inventor
Stephon Cornell Smith
Renhua Li
Charles Howard Mitch
Tatiana Natali Vetman
Original Assignee
Lilly Co Eli
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=45099188&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS56535(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Lilly Co Eli filed Critical Lilly Co Eli
Publication of RS56535B1 publication Critical patent/RS56535B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/57—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C323/58—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups with amino groups bound to the carbon skeleton
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/095—Sulfur, selenium, or tellurium compounds, e.g. thiols
    • A61K31/10—Sulfides; Sulfoxides; Sulfones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/02—Systems containing only non-condensed rings with a three-membered ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/06—Systems containing only non-condensed rings with a five-membered ring
    • C07C2601/08—Systems containing only non-condensed rings with a five-membered ring the ring being saturated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2602/00—Systems containing two condensed rings
    • C07C2602/02—Systems containing two condensed rings the rings having only two atoms in common
    • C07C2602/14—All rings being cycloaliphatic
    • C07C2602/18—All rings being cycloaliphatic the ring system containing six carbon atoms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Opis
[0001] Glutamat je glavni ekscitatorni neurotransmiter u mozgu i uključen je u veliki broj različitih fizioloških procesa koji su posredovani preko ne manje od 11 različitih receptora od kojih svaki ima sopstvenu farmakologiju. Metabotropični glutamat receptor subtipovi 2 i 3 (poznati kao mGlu2 i mGlu3) su često grupisani zajedno kao Grupa II mGlu receptora na osnovu homologije njihovih sekvenci, udvajanja sličnog drugog prenosioca i sličnih farmakoloških karakteristika. Antagonisti mGlu2/3 receptora su ispoljili značajne farmakološke efekte na modelima životinja za depresivne poremećaje i poremećaje prekomerne pospanosti. Kao takvi, smatra se da mGlu2/3 antagonisti mogu da budu korisni u tretmanu depresivnih poremećaja kao što su major depresivni poremećaj (MDP), unipolarna depresija, distimija i/ili ciklotimija i/ili korisni u tretmanu poremećaja prekomerne pospanosti kao što su prekomerna dnevna pospanost (PDP), hipersomnija povezana sa opstruktivnom apneom u snu ili narkolepsijom, poremećaj cirkadijalnog ritma spavanja (uključujući, ali bez ograničenja na, poremećaj spavanja smenskih radnika, džet leg poremećaj, poremećaj odložene faze spavanja, sindrom rane faze spavanja i 24-časovni poremećaj spavanja), idiopatska preterana pospanost i/ili preterana pospanost povezana sa neokrepljujućim spavanjem (NOS).
[0002] US 5,916,920 opisuje pojedina jedinjenja 3-monosupstituisanog biciklo[3.1.0]heksana kao modulatore metabotropičnog glutamat receptora korisna za lečenje različitih poremećaja koristeći ih kao antidepresantna sredstva. US 7,157,594 opisuje različita 3-monosupstituisana biciklo[3.1.0]heksan jedinjenja kao antagoniste grupa II mGlu receptora za upotrebu u lečenju različitih poremećaja, uključujući depresivne simptome. US 2007/0021394 A1 opisuje različita 3-monosupstituisana biciklo[3.1.0]heksan jedinjenja ko antagoniste Grupa II mGlu receptora i njihove prolekove za upotrebu u lečenju različitih poremećaja, uključujući depresiju. US 2006/0142388 otkriva 2-amino biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilnu kiselinu kao inhibitora grupe II metabotropičnog glutamat receptora. Ovaj pronalazak obezbeđuje grupu 4-supstituisanih-3-fenilsulfanilmetil-biciklo[3.1.0]heksan jedinjenja sa jakom potencijom antagonista za mGlu2 i mGlu3 receptore. Jedinjenja iz ovog pronalaska su takođe selektivna za mGlu2 i mGlu3 receptore, posebno u odnosu na druge mGlu receptore. Pojedina jedinjenja su preko modela životinja takođe pokazala da jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da budu korisna za tretman depresivnih poremećaja (koji mogu da uključe major depresivni poremećaj (MDP), unipolarni poremećaj, distimiju i/ili cikoltimiju) i poremećaj prekomerne pospanosti (koja može da uključi prekomernu dnevnu pospanost (PDP), hipersomniju povezanu sa opstruktivnom apneom u snu ili narkolepsijom, poremećaje cirkadijalnog ritma spavanja (uključujući, ali bez ograničenja na, poremećaj spavanja izazvan smenskim radom, jet leg poremećaj, poremećaj odložene faze spavanja, poremećaj rane faze spavanja i sindrom 24-časovnog poremećaja spavanja), idiopatske preterane pospanosti i/ili prekomerne pospanosti povezane sa neokrepljujućim spavanjem (NOS)). Dejstvo slično antidepresantu i podsticanje budnog stanja sa ovim mehanizmom može da se iskoristi za predviđanje uticaja na simptome depresivnih poremećaja kao što je zamor koji se inače teško leči sa postojećim antidepresantima.
[0003] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja Formule I:
gde su R<1>i R<2>svaki nezavisno vodonik, C1-C3alkoksikarboniloksimetil, C1-C5alkilkarboniloksimetil ili C3-6cikloalkilkarboniloksimetil grupa;
R<3>je nezavisno u svakom pojavljivanju metil grupa, fluor ili hlor;
R<4>je hidroksil, amino, metilkarbonilamino ili 1,2,4-triazoliltio grupa; i
n je 1 ili 2;
ili njihova farmaceutski prihvatljiva so.
[0004] Karakteristika ovog pronalaska je da su jedinjenja Formule I u kojima su R<1>i R<2>oba vodonik (di-acid jedinjenja) terapeutski aktivna jedinjenja in vivo, dok su jedinjenja u kojima su R<1>ili R<2>ili oba različita od vodonika prolekovi svojih terapeutski aktivnih di-acid analoga. Jedinjenja u kojima su R<1>ili R<2>ili oba različiti od vodonika se hidrolizuju in vivo da se dobije terapeutski aktivni di-acid analog. Kada se prolekovi jedinjenja primene oralno, posebno diestar prolekovi, obezbeđuju poboljšanu bioraspoloživost di-acid metabolita u poređenju sa oralnom primenom di-acid jedinjenja (R<1>i R<2>su oba vodonik), ali di-acid jedinjenja imaju bolju aktivnost kada se primene intravenski, intramuskularno ili subkutano.
[0005] U narednom aspektu pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja uključuje jedinjenje Formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so u kombinaciji sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim nosačem, razblaživačem ili ekscipijentom. Osim toga, ovaj aspekt pronalaska obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju prilagođenu za tretman depresivnih poremećaja, kao što su, na primer, major depresivni poremećaj, unipolarna depresija, distimija i/ili ciklotimija, koja uključuje jedinjenje Formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so u kombinaciji sa jednim ili više njihovih farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata, nosača ili razblaživača.
[0006] Naredno otelotvorenje ovog aspekta pronalaska obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja uključuje jedinjenje u skladu sa Formulom I ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so u kombinaciji sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim nosačem, ekscipijentom ili razblaživačem i opciono drugim terapeutskim sastojcima. U još jednom otelotvorenju ovog aspekta pronalaska, farmaceutska kompozicija dalje sadrži drugo terapeutsko sredstvo koje je lek koristan u tretmanu depresivnih poremećaja, kao što je, na primer, inhibitor ponovnog preuzimanja serotonina kao što su, na primer, fluoksetin i/ili citalopram.
[0007] U još jednom otelotvorenju ovog aspekta pronalaska, data je farmaceutska kompozicija prilagođena za tretman poremećaja prekomerne pospanosti, kao što su, na primer, poremećaj dnevnog ritma spavanja (PDP), prekomerna pospanost povezana sa opstruktivnom apneom u snu ili narkolpesijom, poremećaj cirkadijalnog ritma spavanja (uključujući ali bez ograničenja na poremećaj spavanja izazvan smenskim radom, jet let poremećaj, poremećaj odložene faze spavanja, poremećaj rane faze spavanja i sindrom 24-časovnog poremećaja spavanja), idiopatska preterana pospanost i/ili prekomerna pospanost povezana sa neokrepljujućim spavanjem (NOS), koja uključuje jedinjenje Formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljvu so, u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata, nosača ili razblaživača.
[0008] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje postupak za lečenje depresivnih poremećaja, kao što su, na primer, major depresivni poremećaj (MDP), unipolarna depresija, distimija i/ili ciklotimija, kod sisara, koji uključuje primenu na sisaru kome je takav tretman potreban efektivne količine jedinjenja Formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U narednom otelotvorenju ovog aspekta pronalaska, postupak dalje uključuje primenu u istovremenoj, odvojenoj ili po redu kombinaciji, drugog terapeutskog sredstva koje je lek koristan u tretmanu depresivnih poremećaja, kao što je, na primer, inhibitor ponovnog preuzimanja serotonina, kao što su, na primer, fluksetin i/ili citalopram.
[0009] Druga otelotvorenja iz pronalaska obezbeđuju postupke za lečenje poremećaja prekomerne pospanosti koji uključuju primenu na sisaru kome je takav tretman potreban efektivne količine jedinjenja Formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U drugim otelotvorenjima ovog aspekta pronalaska prekomerna pospanost je zbog bilo kog ili više od sledećih uzoraka: poremećaj dnevnog ritma spavanja (PDP), preterana pospanost povezana sa opstruktivnom apneom u snu ili narkolepsijom, poremećaj cirkadijanskog ritma spavanja (uključujući ali bez ograničenja na, poremećaj sna zbog smenskog rada, jet leg poremećaj, poremećaj odložene faze spavanja, poremećaj rane faze spavanja i sindrom 24-časovnog poremećaja spavanja), idiopatska preterana pospanost ili prekomerna pospanost povezana sa neokrepljujućim spavanjem (NOS).
[0010] U jednom posebnom otelotvorenju ovih postupaka tretmana, sisar je čovek.
[0011] Ovaj pronalazak takođe daje jedinjenje Formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u terapiji. U okviru ovog aspekta, pronalazak daje jedinjenje Formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u tretmanu depresivnih poremećaja. U narednimi otelotvorenjima, depresivni poremećaj je bilo koji od major depresivnog poremećaja (MDP), unipolarne depresije, distimije i/ili ciklotimije. U narednom otelotvorenju ovog aspekta pronalaska, pronalazak daje jedinjenje u skladu sa Formulom I, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u istovremenoj, odvojenoj ili po redu kombinaciji sa inhibitorom ponovnog preuzimanja serotonina, kao što su, na primer, fluoksetin i/ili citalopram, u tretmanu depresivnih poremećaja.
[0012] Dalje, ovaj aspekt pronalaska uključuje jedinjenje Formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljvu so, za upotrebu u tretmanu poremećaja prekomerne pospanosti. U posebnim otelotvorenjima ovog aspekta pronalaska, prekomerna pospanost je zbog jednog ili više od sledećih uzroka: poremećaj dnevnog ritma spavanja (PDP), preterana pospanost povezana sa opstruktivnom apneom u snu ili narkolepsijom, poremećaj cirkadijanskog ritma spavanja (uključujući ali bez ograničenja na, poremećaj sna zbog smenskog rada, jet leg poremećaj, poremećaj odložene faze spavanja, poremećaj rane faze spavanja i sindrom 24-časovnog poremećaja spavanja), idiopatska preterana pospanost ili prekomerna pospanost povezana sa neokrepljujućim spavanjem (NOS).
[0013] Jedno posebno otelotvorenje ovog aspekta pronalaska je upotreba na sisarima, posebno ljudima.
[0014] Naredni aspekt ovog pronalaska obezbeđuje upotrebu jedinjenja Formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u proizvodnji medikamenta za tretman depresivnih poremećaja kao što su, na primer, major depresivni poremećaj (MDP), unipolarna depresija, distimija i/ili ciklotimija. Naredno otelotvorenje ovog aspekta pronalaska obezbeđuje upotrebu jedinjenja Formule I, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i drugog terapeutskog sredstva korisnog u tretmanu depresivnih poremećaja, kao što je, na primer, inhibitor ponovnog preuzimanja serotonina, kao na primer, fluokseti i/ili citalopram, u proizvodnji medikamenta za tretman depresivnih poremećaja. Naredno otelotvorenje pronalaska obezbeđuje upotrebu jedinjenja Formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u proizvodnji medikamenta za tretman poremećaja prekomerne pospanosti. U posebnim otelotvorenjima ovog aspekta pronalaska, medikament je za tretman jednog ili više od sledećih: poremećaj dnevnog ritma spavanja (PDP), preterana pospanost povezana sa opstruktivnom apneom u snu ili narkolepsijom, poremećaj cirkadijanskog ritma spavanja (uključujući ali bez ograničenja na, poremećaj sna zbog smenskog rada, jet leg poremećaj, poremećaj odložene faze spavanja, poremećaj rane faze spavanja i sindrom 24-časovnog poremećaja spavanja), idiopatska preterana pospanost ili prekomerna pospanost povezana sa neokrepljujućim spavanjem (NOS).
[0015] Jedinjenja iz ovog pronalaska imaju bazne i kisele radikale i u skladu sa tim reaguju sa brojnim organskim i neorganskim kiselinama i bazama da formiraju farmaceutski prihvatljive soli. Farmaceutski prihvaljive soli svakog od jedinjenja iz ovog pronalaska su obuhvaćene okviirom ovog pronalaska. Kako se ovde koristi, naziv "farmaceutski prihvatljiva so" se odnosi na bilo koju so jedinjenja iz pronalaska koja je uglavnom netoksična za žive organizme. Ovakve soli su navedene u Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2-19 (1977), koji je poznat stručnjacima u tehnici.
[0016] Preferirane grupe jedinjenja iz ovog pronalaska su jedinjenja u kojima:
1) R<1>i R<2>su oba vodonik;
2) R<1>ili R<2>ili oba su različiti od vodonika;
3) R<1>i R<2>su oba različiti od vodonika;
4) R<1>i R<2>su isti i različiti su od vodonika;
5) R<1>i R<2>su svaki izopropoksikarboniloksimetil grupa;
6) n je 2;
7) R<3>je nezavisno u svakom pojavljivanju fluor ili hlor;
8) n je 2 a R<3>grupe su na položajima 3- i 4- fenila.
9) n je 2 a R<3>grupe su svaka nezavisno fluor ili hlor i nalaze se na položajima 3- i 4-fenila.
10 n je 2, obe R<3>grupe su fluor, a fluor grupe su na položajima 3- i 4- fenila;
11) n je 2, a R<3>grupe zajedno sa fenil radikalom za koji su vezane formiraju 3-hlor-4-fluorfenil grupu;
12) R<4>je hidroksilna grupa.
Jasno je da su niže data preferirana jedinjenja ona koja kombinuju prethodno dat preferirani izbor za date supstituente sa preferiranim izborom drugih supstituenata. Primeri ovakvih kombinacija uključuju, ali bez ograničenja na, sledeće preferirane grupe jedinjenja:
13) preferirana jedinjenja iz bilo kog od paragrafa 1-5 (preferirani izbori za R<1>i R<2>) pri čemu je n = 2, obe R<3>grupe su fluor, a fluor grupe su na položajima 3- i 4- fenila (paragraf 10);
14) preferirana jedinjenja iz bilo kog od paragrafa 1-5 (preferirani izbori za R<1>i R<2>) pri čemu je n = 2, a R<3>grupe zajedno sa fenil radikalom za koji su vezani formiraju 3-hlor-4-fluorfenil (paragraf 11);
15) preferirana jedinjenja iz bilo kog od paragrafa 1-5 (preferirani izbori za R<1>i R<2>) gde je R<4>hidroksilna grupa (paragraf 12);
16) preferirana jedinjenja iz bilo kog od paragrafa 13-14 gde je R<4>hidroksilna grupa (paragraf 12).
[0017] Specifična preferirana jedinjenja su ona koja su opisana u Primerima, uključujući njihove slobodne baze i njihove farmaceutski prihvatljive soli.
[0018] Određena preferirana jedinjenja su:
(1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-amino-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0] heksan-2,6-dikarboksilna kiselina ili njena farmaceutski prihvatljiva so;
(1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-Amino-3-{[(3-hlor-4-fluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0] heksan-2,6-dikarboksilna kiselina ili njena farmaceutski prihvatljiva so; bis({[(1-metiletoksi)karbonil]oksi}metil)(1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-amino-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; i
bis({[(1-metiletoksi)karbonil]oksi}metil) (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-amino-3-{[(3-hlor-4-fluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat ili njegova farmaceutski prihvatljiva so (to jest jedinjenja iz Primera 1, 2, 12, 22 i 32 i alternativno njihove farmaceutski prihvatljive soli).
[0019] Skraćenice koje su ovde korišćene su definisane kako sledi:
"BSA" označava albumin seruma govečeta.
"DCG IV" označava (2S,2’R,3’R)-2-(2’,3’-dikarboksiciklopropil)glicin.
"DMEM označava Dulbekov minimum Eagle-ove podloge.
"DMSO" označava dimetil sulfoksid.
"DPBS" označava Dulbekov pufer fosfatnih soli.
"EDTA" označava etilen diamin tetrasirćetnu kiselinu.
"GTP" označava gvanozin trifosfat.
"HBSS" označava Hankov puferovani rastvor soli.
"HEPES" označava 4-(2-hidroksietil)-1-piperazin etansulfonsku kiselinu.
"HPLC" označava visoko efikasnu tečnu hromatografiju.
"IBMX" označava 3-izobutil-1-metilksantin.
"IC50" označava koncentraciju pri kojoj se postiže 50% maksimalne inhibicije.
"i.v." označava intravenski ili intravenozno.
"i.p." označava intraperitonealno.
"L-AP-4" označava L-(+)-2-amino-4-fosfonobutirnu kiselinu.
"LC/MS" označava tečnu hromatografiju praćenu masenom spektroskopijom.
"mFST" označava test forsiranog plivanja miševa; životinjski model delovanja antidepresanta. "MS" označava masenu spektroskopiju.
"MS (ES+)" označava masenu spektroskopiju uz korišćenje elektrosprej jonizacije.
"NMR" označava nuklearnu magnetnu rezonancu.
"p.o." označava per os, preko usta.
"tBu" označava tercijerni-butil radikal.
Opšta hemija
[0020] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da se izrade u skladu sa narednim šemama sinteze postupcima koji su dobro poznati i prihvaćeni u tehnici. Odgovarajući uslovi reakcije za faze ovih šema su dobro poznati u tehnici a odgovarajuće supstitucije rastvarača i ko-reagenasa su u okviru stanja tehnike. Isto tako, stručnjak sa iskustvom u tehnici će da proceni da međuproizvodi u procesu sinteze mogu da se izoluju i/ili prečiste različitim dobro poznatim tehnikama, ukoliko je to potrebno ili poželjno, i da će često biti moguće da se različiti međuproizvodi koriste direktno u narednim fazama sinteze uz malo ili bez prečišćavanja. Osim toga, stručnjak sa iskustvom će da zna da u nekim situacijama redosled po kojima se uključuju radikali nije kritičan. Određeni redosled faza potrebnih za izradu jedinjenja iz ovog pronalaska zavisi od određenog jedinjenja koje se sintetiše, početnog jedinjenja i relativne reaktivnost supstituisanih radikala, kao i procene hemičara sa iskustvom. Svi supstituenti, ukoliko nije drugačije navedeno, su kako je prethodno definisano a svi reagensi su dobro poznati i prihvaćeni u tehnici.
[0021] Prolek jedinjenja 1 može da se izradi kako je ilustrovano u Šemi I, gde su R<1>, R<2>, R<3>, R<4>i n kako je prethodno definisano a R<1>i R<2>nisu oba vodonik.
Šema I
[0022] Jedinjenje 4 reaguje sa amino zaštitnim reagensom kao što je di-terc-butildikarbonat pod uslovima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom, da se dobije jedinjenje 3. Kada su R<1>i R<2>grupa identične u jedinjenju 2, jedinjenje 3 reaguje sa dovoljnom količinom odgovarajućeg hlormetil alkil karbonata i odgovarajućim reagensima kao što su natrijum jodid i cezijum karbonat, u pogodnom rastvaraču kao što je dimetilformamid, da se dobije potreban di-estar jedinjenja 2 sa istim R<1>i R<2>. Kada su R<1>i R<2>različiti u jedinjenju 2, kontrolisanom količinom prvo hlormetil alkil karbonata do približno jednog ekvivalenta, karboksilna kiselina na petočlanom prstenu može da se konvertuje u prvi R<2>mono estar. R<2>mono estar jedinjenje može dalje da reaguje sa jednim ekvivalentom različitog hlormetil alkil karbonata. Slobodna karboksilna kisela grupa na tročlanom prstenu može nakon toga da se konvertuje u R<1>estar da se dobije potreban di-estar sa različitim R<1>i R<2>. Za dobijanje R<2>mono estra na petočlanom prstenu jedinjenja 2, jedinjenje 3 reaguje sa približno jednim ekvivalentom odgovarajućeg hlormetil alkil karbonata i pogodnim reagensima kao što su natrijum jodid i cezijum karbonat u pogodnom rastvaraču kao što je dimetilformamid, da se dobije potreban R<2>mono estar jedinjenja 2, u kome je R<1>vodonik. Za izradu R<1>mono estra na tročlanom prstenu, karboksilna kisela grupa na petočlanom prstenu treba prvo da se zaštiti jer je veoma reaktivna pod baznim uslovima. Još preciznije, karboksilna kisela grupa na petočlanom prstenu u jedinjenju 3 može da reaguje sa alfa-hlor-4-metoksitoluenom, natrijum jodidom i natrijum bikarbonatom u pogodnom rastvaraču kao što je dimetilformamid da se dobije 4-metoksilbenzil mono estar. Slobodna kisela karboksilna grupa na tročlanom prstenu u zaštićenom 4-metoksilbenzil mono estar jedinjenju nakon toga reaguje sa odgovarajućim hlormetil alkil karbonatom da se dobije potreban R<1>estar na tročlanom prstenu. Di-estar se tretira sa odgovarajućom kiselinom kao što je triflurosirćetna kiselina da se oslobode 4-metoksilbenzil i N-terc-butoksikarbonil grupa, da se dobije potreban R<1>mono estar jedinjenja 1, u kome je R<2>vodonik. Jedinjenje 2, uključujući R<2>mono estar i di-estar sa istim ili različitim R<1>i R<2>, se nakon toga de-protektuje sa odgovarajućom kiselinom kao što je hlorovodonična kiselina, u dioksanu da se dobije potrebno jedinjenje 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
Šema II
[0023] Aktivno osnovno jedinjenje 4 u kome R<4>nije hidroksilna grupa, može da se izradi kako je ilustrovano u Šemi II.
[0024] Jedinjenje 7 reaguje sa metansulfonil hloridom i odgovarajućom bazom kao što je piridin, da se dobije mesilat jedinjenja 6. Jedinjenje 6 može da reaguje sa tiol heterociklusom kao što je 1H-1,2,4-triazol-3-tiol i odgovarajućom bazom kao što je cezijum karbonat, u rastvaraču kao što je dimetilformamid, da se dobije potrebno jedinjenje 5, u kome je R<4>potrebni tio vezani heterociklus. Jedinjenje 6 može takođe da reaguje sa natrijum azidom da se dobije azid međuproizvod, koji se nakon toga redukuje sa redukcionim reagensom kao što je 1,3-propanditiol, u pogodnom rastvaraču kao što je metanol, da se dobije jedinjenje 5 u kome je R<4>amino grupa. Nastali amin može dalje da formira amid postupcima koji su dobro poznati stručnjacima u tehnici da se dobije jedinjenje 5, u kome je R<4>potrebni amid.
Jedinjenje 5 se nakon toga de-protektuje sa odgovarajućom kiselinom kao što su hlorovodonična kiselina ili sirćetna kiselina da se dobije jedinjenje 4.
Šema III
[0025] Aktivno osnovno jedinjenje 8 u kome je R<4>hidroksilna grupa i ključni međuproizvod jedinjenje 7 u kome je R<4>grupa različita od hidroksilne grupe, mogu da se izrade kako je ilustrovano u Šemi III.
[0026] Jedinjenje 12 (videti WO03/104217/A2 za detalje sinteze) reaguje sa tercbutoksibis(dimetilamino)metanom u toluenu da se dobije jedinjenje 11. Jedinjenje 11 u pogodnom rastvaraču kao što je tetrahidrofuran se tretira sa odgovarajućom bazom kao što je trietilamin i odgovarajućim redukcionim reagensom kao što je diizobutilaluminijum hidrid na sniženom temperaturi, da se dobije jedinjenje 10. Jedinjenje 10 nakon toga reaguje sa trietilaminom i odgovarajuće supstituisanim benzentiolom kao što je 3,4-difluorbenzentiol, u odgovarajućem rastvaraču kao što je toluen, da se dobije jedinjenje 9. Keto grupa jedinjenja 9 može selektivno da se redukuje do potrebnog (S) hidroksil ili (R) hidroksil jedinjenja koristeći (R)-metil oksazaborolidin ili (S)-metil oksazaborolidin, tim redom. (S) hidroksil međuproizvod se de-protektuje sa odgovarajućom kiselinom kao što je hlorovodonična kiselina u odgovarajućem rastvaraču kao što je dioksan, da se dobije potrebno osnovno aktivno jedinjenje 8 u kome je R<4>(S) hidroksilna grupa. (R) hidroksil međuproizvod 7 može da se konvertuje u potreban produkt postupkom koji je ilustrovan u Šemi II.
Izrada 1: Di-terc-butil (1S,2R,5R,6R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-(dimetilaminometilen)-4-okso-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0027]
[0028] U rastvor di-terc-butil (1S,2S,5R,6R)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-4-oksobiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata (15.15 g, 36.82 mmol, videti WO03/104217/A2 za detalje sinteze) u toluenu (90.90 mL) se doda terc-butoksibis(dimetilamino)metan (12.83 g, 73.63 mmol). Ova smeša se nakon toga zagreva 1 sat na 80°C a zatim ostavi da se ohladi na temperaturu sredine. Zapremina rastvarača se smanji na približno 35 ml. Smeša se meša uz dodavanje dietil etra i heksana da se dovede do stvaranja precipitata. Čvrste supstance se sakupe filtriranjem, isperu sa heksanima i suše na vazduhu da se dobije naslovljeno jedinjenje (16.7 g, 35.79 mmol, 97.2% prinos). MS (m/z): 467.2 (M+H).
Izrada 2: Di-terc-butil (1S,2R,5R,6R)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-metiliden-4-oksobiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0029]
[0030] U rastvor di-terc-butil (1S,2R,5R,6R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-(dimetilaminometilen)-4-oksobiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata (15.7 g, 33.8 mmol) u tetrahidrofuranu (340 ml) se doda trietilamin (6.6 mL, 47.32 mmol). Smeša se ohladi na -78 °C. Diizobutilaluminijum hidrid (1N rastvor u toluenu, 50 mL, 50 mmol) se dodaje u toku jedan sat. Smeša se meša još dva sata. Nakon toga se doda 30 mL zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida. Smeša se ostavi da se zagreje na temperaturu sredine. Smeša se prenese u levak za odvajanje i ispere sa slanim rastvorom. Organski sloj se suši preko MgSO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Ostatak se prečisti gasnom hromatografijom (0 do 50% etil acetat/heksani) da se dobije naslovljeno jedinjenje (12 g, 33.34 mmol, 83.8% prinos). MS (m/z): 422 (M-H).
Izrada 3: Di-terc-butil (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0031]
[0032] Kroz di-terc-butil (1S,2R,SR,6R)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-metiliden-4-oksobiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (1.03 g, 2.43 mmol) u dietil etru (100 mL) se 10 minuta u mehurićima propušta gas azot. Dodaju se 3,4-difluorbenzentiol (0.36 g, 2.43 mmol) i trietilamin (0.01 µL, 0.05 mmol). Smeša se zagreje na 40°C i meša 15 minuta. Smeša se nakon toga ostavi da se ohladi na temperaturu sredine, prenese u levak za odvajanje, razblaži sa heksanom (40 mL), ispere sa 2N vodenim rastvorom KOH (1 x 30 mL), suši preko magnezijum sulfata, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije di-terc-butil (1S,2R,3S,5R,6R)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-oksobiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (1.35 g, 2.37 mmol): MS (m/z): 567.8 (M-H). Ovaj materijal se prenese u 120 mL dietil etra i polako u toku 2 sata dodaje u 200 mL rastvora etra na -10°C koji sadrži R-(+)-2-metil-CBS-oksazaborolidin (981.72 mg, 3.54 mmol) i boran-metil sulfid kompleks (2M rastvor u tetrahidrofuranu, 5.02 mL, 10.04 mmol). Smeša se meša još jedan sat nakon finalnog dodavanja di-terc-butil (1S,2R,3S,SR,6R)-2-[(tercbutoksikarbonil)amino]-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-oksobiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata. U toku 30 minuta se dodaje silika gel (30g) i reaktivna smeša se postepeno zagreje na temperaturu sredine. Suspenzija se filtrira i ispere sa 300 mL dietil etra. Rastvarač se koncentruje pod sniženim pritiskom i dobija se ostatak. Ostatak se prečisti gasnom hromatografijom, eluira sa (0 do 15% etil acetat /heksani) da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.844 g, 1.48 mmol, 60.7% prinos): MS (m/z): 569.8 (M-H).
[0033] Naredna jedinjenja se u osnovi izrađuju po postupku za Izradu 3:
(nastavlja se)
Izrada 10: Di-terc-butil (1S,2R,3S,4R,5R,6R)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-{[(4-fluor-3-metil-fenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0034]
[0035] Kroz di-terc-butil (1S,2R,5R,6R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-metilen-4-oksobiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (8 g, 18.9 mmol) u dietil etru (80 mL) se 10 minuta u mehurićima propušta gas azot. Dodaju se 4-fluor-3-metil-benzentiol (2.7 g, 18.9 mmol) i trietilamin (0.26 mL, 1.89 mmol). Smeša se zagreje na 40°C i meša 15 minuta. Smeša se nakon toga ostavi da se ohladi na temperaturu sredine, prenese u levak za odvajanje i polako u toku 2 sata na -10°C doda u 200 ml rastvora etra koji sadrži S-(-)-2-metil-CBS-oksazaborolidin (1M rastvor u tetrahidrofuranu ) (5.67 mL, 5.67 mmol) i boran-metil sulfid kompleks (2M rastvor u tetrahidrofuranu , 8.5 mL, 17 mmol). Smeša se meša još jedan sat nakon poslednjeg dodavanja. Dodaje se silika gel (40g) u toku 30 minuta i reaktivna smeša se postepeno zagreje na temperaturu sredine. Suspenzija se filtrira i ispere sa 300 ml dietil etra. Rastvarač se koncentruje pod sniženim pritiskom i dobija se ostatak. Ostatak se prečisti gasnom hromatografijom, eluira sa (0 do 25% etil acetat /heksani) da se dobije naslovljeno jedinjenje (9.8 g, 17.3 mmol, 91.5% prinos). MS (m/z): 565.8 (M-H).
Izrada 11: Di-terc-butil (1S,2R,3S,4R,5R,6R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-[(4-fluor-3-metil-fenil)sulfanilmetil]-4-metilsulfoniloksi-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0036]
[0037] Di-terc-butil (1S,2R,3S,4R,5R,6R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-[(4-fluor-3-metilfenil)sulfanilmetil]-4-hidroksi-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (4.6 g, 8.10 mmol) u piridinu (60 mL) se ohladi na 0°C. U ovu smešu se doda metansulfonil hlorid (1.88 ml, 24.31 mmol). Smeša se zagreje na 40°C, meša 1 sat, ohladi na temperaturu sredine i ostavi da se meša 18 sati. Smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Ostatak se podeli između etil acetata i 1N vodenog rastvora HCl (2 x 50 mL). Organski sloj se izdvoji, suši preko magnezijum sulfata, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (5.2 g, 8.05 mmol, 99.4% prinos): MS (m/z): 643.6 (M-H).
Izrada 12: Di-terc-butil (1R,2R,3R,4S,5R,6R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-[(4-fluor-3-metil-fenil)sulfanilmetil]-4-(1H-1,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0038]
[0039] Di-terc-butil (1S,2R,3S,4R,5R,6R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-[(4-fluor-3-metilfenil)sulfanilmetil]-4-metilsulfoniloksi-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (5.3 g, 8.21 mmol) se rastvori u dimetilformamidu (100 mL). U ovu smešu se dodaju cezijum karbonat (5.40 g, 16.41 mmol), 1H-1,2,4-triazol-3-tiol (3.42 g, 32.83 mmol) i natrijum triacetoksiborhidrid (906 mg, 4.10 mmol). Smeša se meša 72 sata na 40°C. Reakcija se ohladi i neutrališe sa vodom i vodenim rastvorom NH4Cl. Smeša se prenese u levak za odvajanje i ekstrahuje sa dietil etrom, suši preko magnezijum sulfata, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Ostatak se prečisti gasnom hromatografijom (0 do 50% etil acetat/heksani) da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.88 g, 1.35 mmol, 16.5% prinos). MS (m/z): 651 (M+H).
Izrada 13: Di-terc-butil (1S,2R,3R,4S,5R,6S)-4-azido-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-[(4-fluor-3-metilfenil)sulfanilmetil]biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0040]
[0041] Di-terc-butil (1S,2R,3S,4R,5R,6R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-[(4-fluor-3-metilfenil)sulfanilmetil]4-metilsulfoniloksi-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (5.9 g, 9.14 mmol) se rastvori u dimetil sulfoksidu (30 mL). U ovu smešu se doda natrijum azid (2.5 g, 38.37 mmol). Smeša se meša 18 sati na 100°C. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Ostatak se suspenduje u dietil etru (100 ml) i filtrira. Organski sloj se prenese u levak za odvajanje i ispere sa vodom i slanim rastvorom, suši preko magnezijum sulfata, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Ostatak se prečisti gasnom hromatografijom (0 do 15% etil acetat/heksani) da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.14 g, 5.30 mmol, 58% prinos). MS (m/z): 591 (M-H).
Izrada 14: Di-terc-butil (1S,2R,3R,4S,5R,6S)-4-amino-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-[(4-fluor-3-metilfenil)sulfanilmetil]biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0042]
[0043] Di-terc-butil (1S,2R,3R,4S,5R,6S)-4-azido-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-[(4-fluor-3-metil-fenil)sulfanilmetil]biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (1.88 g, 3.17 mmol) se rastvori u metanolu (15.86 mL). U ovu smešu se dodaju trietilamin (1.77 mL, 12.7 mmol) i 1,3-propanditiol (1.28 mL, 12.69 mmol). Smeša se meša 18 sati na temperaturi sredine.
Smeša je sipa u vodu i ekstrahuje sa etil acetatom, suši preko natrijum sulfata, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Ostatak se prečisti gasnom hromatografijom (50 do 100% etil acetat/heksani) da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.2 g, 2.12 mmol, 66.76% prinos). MS (m/z): 567.2 (M+1).
Izrada 15: Di-terc-butil (1S,2R,3R,4S,5R,6S)-4-acetamido-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-[(4-fluor-3-metilfenil)sulfanilmetil]biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0044]
[0045] Di-terc-butil (1S,2R,3R,4S,5R,6S)-4-amino-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-[(4-fluor-3-metil-fenil)sulfanilmetil]biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (0.15 g, 264.67 µmol) se rastvori u dihlormetanu (10 mL). U ovu smešu se dodaju trietilamin (55.34 µL, 397.01 µmol) i acetil hlorid (28.25 µL, 397.01 µmol). Smeša se meša 10 minuta na temperaturi sredine. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Ostatak se prečisti gasnom hromatografijom (10% do 100% etil acetat/ heksani) da se dobije naslovljeno jedinjenje (100 mg, 164.27 µmol, 62.06% prinos);<1>H NMR (CD3Cl) δ 1.44 (t, 27H), 1.95 (s, 3H), 2.16 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 2.60 (dd, 1H), 2.78 (bs, 1H), 3.10 (dd, 1H), 4.59 (m, 1H), 5.50 (d, 1H), 6.92 (t, 1H), 7.06 (m, 1H), 7.11 (d, 1H).
Izrada 16: (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0] heksan-2,6-dikarboksilna kiselina
[0046]
[0047] Di-terc-butil (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (4.11 g, 7.19 mmol) se odmeri u posudu okruglog dna zapremine jedan litar sa opremljenu sa mešalicom. Doda se vodonik hlorid (4N rastvor u dioksanu, 120 mL, 480.0 mmol). Smeša se zagreva 2 sata na 70°C i nakon toga ostavi da se ohladi na temperaturu sredine. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Ostatak se rastvori u dihlormetanu (200 mL) i rastvarač ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Postupak se ponovo još dva puta da se dobije (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-amino-3-[(3,4-difluorfenil)sulfanilmetil]-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilna kiselina hidrohlorid. Ovaj materijal se prenese u tetrahidrofuran (100 mL) kao suspenzija. U ovu suspenziju se doda trietilamin (40.08 mL, 287.57 mmol). Suspenzija se meša 10 minuta i nakon toga se doda metanol (50 ml). U reakciju se doda di-t-butildikarbonat (4.71 g, 21.57 mmol) i smeša se zagreva 2 sata na 80 °C. Smeša se ostavi da se ohladi na temperaturu sredine i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Ostatak se rastvori u acetonitrilu (50 ml), prenese u levak za odvajanje i ispere sa heksanima. Acetonitril sloj se izdvoji i ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Ostatak se suspenduje u dietil etru, prenese u levak za odvajanje, ispere sa 1 N vodenim rastvorom HCl, suši preko magnezijum sulfata, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (3 g, 6.53 mmol, 90.82% prinos). MS (m/z): 457.8 (M-H).
[0048]Naredna jedinjenja se u osnovi izrađuju po postupku za Izradu 16:
Izrada 21: Bis(hlormetil)(1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-[(4-fluor-3-metil-fenil)sulfanilmetil]-4-hidroksi-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0049]
[0050] U izmešanu smešu (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-[(4-fluor-3-metil-fenil)sulfanilmetil]-4-hidroksi-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilne kiseline (2.4 g, 5.27 mmol), tetra(n-butil)amonijum bisulfata (178.90 mg, 526.89 µmola) i natrijum bikarbonata (3.54 g, 42.15 mmol) u dihlormetanu (13.2 mL) i vodi (13.2 mL) se doda hlormetil hlorsulfat (1.20 mL, 11.59 mmol). Smeša se meša 18 sati na temperaturi sredine. Reakcija se sipa u vodu i ekstrahuje sa dihlormetanom. Kombinovani organski ekstrakti se suše preko magnezijum sulfata, filtriraju i koncentruju da se dobije ostatak. Ostatak se prečisti gasnom hromatografijom (20-35% etil acetat/heksan) da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.37g, 2.48 mmol, 47% prinos). MS (m/z): 574.0 (M+Na).
[0051] Naredno jedinjenje se u osnovi izrađuje po postupku za Izradu 21:
Izrada 24: Bis({[(1-metiletoksi)karbonil]oksi}metil) (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-[(tercbutoksikarbonil)amino]3-1[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0052]
[0053] Kalijum karbonat (668.43 mg, 4.79 mmol) i natrijum jodid (75.03 mg, 500.58 µmol) se dodaju u (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-[(3,4-difluorfenil)sulfanilmetil]-4-hidroksi-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilnu kiselinu (1g, 2.18 mmol) u dimetilformamidu (13.06 mL). Smeša se meša 10 minuta na temperaturi sredine. Doda se hlormetil izopropil karbonat (1 g, 6.53 mmol). Smeša se meša 18 sati na temperaturi sredine. Doda se sirćetna kiselina (4 ml) i smeša se meša 10 minuta. Zapremina rastvarača se smanji do približno 10 ml pod sniženim pritiskom da se dobije viskozni ostatak. Ostatak se razblaži sa dietil etrom i meša 10 minuta. Rastvor se propusti kroz filter a rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Ostatak se ostavi 1 sat pod visokim vakuumom. Ostatak se prečisti gasnom hromatografijom, eluira sa (0 do 35% tetrahidrofuran /heksani) da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.88 g, 1.27 mmol, 58.5% prinos).
MS (m/z): 714.2 (M+Na).
[0054] Naredna jedinjenja se u osnovi izrađuju po postupku za Izradu 24:
(nastavlja se)
Izrada 35: Bis{[(2-metilpropanoil)oksi]metil}(1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-[(tercbutoksikarbonil)amino]-3-{[(4-fluor3-metilfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0] heksan-2,6-dikarboksilat
[0055]
[0056] Izobutirna kiselina (0.21 g, 2.42 mmol) se rastvori u dimetilformamidu (10 mL). U ovaj rastvor se doda kalijum karbonat (0.54 g, 3.87 mmol). Smeša se meša 3 sata na 50 °C i nakon toga ohladi na sobnu temperaturu. U smešu se doda bis(hlormetil) (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-[(4-fluor-3-metilfenil)sulfanilmetil]-4-hidroksi-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (535 mg, 0.97 mmol). Smeša se meša 18 sati na temperaturi sredine. Smeša se razblaži sa etil acetatom, prenese u levak za odvajanje, ispere sa slanim rastvorom, suši preko magnezijum sulfata i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Ostatak se prečisti gasnom hromatografijom (10-40% etil acetat/heksani) da se dobije naslovljeno jedinjenje (230 mg, 0.36 mmol, 37%).
MS (m/z): 678.2 (M+Na).
[0057] Naredna jedinjenja se u osnovi izrađuju po postupku za Izradu 35:
(nastavlja se)
Primer 1: (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-Amino-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0] heksan2,6-dikarboksilna kiselina hidrohlorid
[0058]
[0059] Di-terc-butil (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (0.58 g, 7.19 mmol) se odmeri u bocu sa okruglim dnom zapremine 100 mL opremljenu mehaničkom mešalicom. Doda se vodonik hlorid (4N rastvor u dioksanu, 33 mL, 132.0 mmol). Smeša se zagreva 2 sata na 70°C i nakon toga ostavi da se ohladi na temperaturu sredine. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Ostatak se rastvori u dihlormetanu (50 mL) i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Ovo se ponovi još tri puta da se dobije naslovljeno jedinjenje (567 mg, 1.43 mmol, 97% prinos). MS (m/z): 360.0 (M+1).
[0060] Naredna jedinjenja se u osnovi izrađuju po postupku iz Primera 1:
(nastavlja se)
Primer 8: (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-Amino-4-hidroksi-3-{[(4-metilfenil)sulfanil]metil}biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilna kiselina
[0061]
[0062] Di-terc-butil (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-4-hidroksi-3-(ptolilsulfanilmetil)biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (300 mg, 545.73 µmol) se stavi u mikrotalasnu kivetu. U kivetu se dodaju voda (2 mL, 110 mmol) i sirćetna kiselina (2 mL, 34.9 mmol). Smeša se zagreva 20 minuta mikrotalasima na 140°C. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (165 mg, 489.04 mmol, 89.6%). MS (m/z): 338.0 (M+H).
[0063] Naredna jedinjenja se u osnovi izrađuju po postupku iz Primera 8:
Primer 12: Bis({[(1-metiletoksi)karbonil]oksi}metil)(1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-amino-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat hidrohlorid
[0064]
[0065] Bis({[(1-metiletoksi)karbonil]oksi}metil)(1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-[(tercbutoksikarbonil)amino]-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (0.88 g, 1.27 mmol) se rastvori u vodonik hloridu (4N rastvor u dioksanu, 30 mL, 120.00 mmol) i meša 1.5 sat na temperaturi sredine. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak. Ostatak se rastvori u dihlormetanu i rastvarač ukloni pod sniženim pritiskom. Ovaj proces se ponovi 8 puta. Ostatak se ostavi u toku noći pod visokim vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.692 g, 1.10 mmol, 86.61% prinos). MS (m/z): 591.8 (M+H).
[0066] Naredna jedinjenja se u osnovi izrađuju po postupku iz Primera 12:
(nastavlja se)
(nastavlja se)
Primer 32: Bis({[(1-metiletoksi)karbonil]oksi}metil)(1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-amino-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat hidrohlorid
[0067]
FAZA 1: Di-terc-butil (1S,2R,5R,6R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-(dimetilaminometilen)-4-okso-biciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0068]
[0069] Terc-butoksibis(dimetilamino)metan (481.1ml, 2.33mol) se na sobnoj temperaturi u atmosferi azota doda u suspenziju di-terc-butil(1S,2S,5R,6R)-2-[(tercbutoksikarbonil)amino]-4-oksobiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata (600g, 1.46mol) u bezvodnom toluenu (3.6L). Smeša se zagreva 3 sata i 45minuta na 80°C, a nakon toga ohladi na sobnu temperaturu i meša u toku noći. Reaktivna zapremina se smanji pod vakuumom, razblaži sa metil terc-butil etrom (1.8L) i heksanom (1.8L) i meša 3 sata na 15°C. Nakon 3 sata, dobijena čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem, ispere sa hladnim heksanom (2x1.8L) i suši pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (620.4g, prinos 91%). HPLCMS: 98%.
FAZA 2: Di-terc-butil (1S,2R,5R,6R)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-metiliden-4-oksobiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0070]
[0071] U rastvor di-terc-butil (1S,2R,5R,6R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-(dimetilaminometilen)-4-oksobiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata (620.4g, 1.33mol) u bezvodnom tetrahidrofuranu (12L), se na sobnoj temperaturi u atmosferi azota doda trietilamin (277.3ml, 1.99 mol). Smeša se ohladi na -47°C i u kapima se u toku 2 sata dodaje diizobutilaluminijum hidrid (1M rastvor u heksanu, 2.06L, 2.06mol). Dobijena smeša se meša na -47°C. Nakon 1 sat 15 minuta, se na -47°C u kapima doda sirćetna kiselina (118ml), 2.06mol), zagreje na sobnu temperaturu i nakon toga meša u toku noći. Dodaje se 20% rastvor H3PO4u vodi sve do pH=2. organska faza se izdvoji a vodena faza ekstrahuje sa etil acetatom (2x1.7L). Kombinovane organske faze se isperu po redu sa 10% vodenim rastvorom HCl (1.5L), vodom (1.5L) i slanim rastvorom (1.5L), suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju da se dobije čvrsta supstanca. Dobijena čvrsta supstanca se triturira sa vodom (3.2L), sakupi filtriranjem i nakon toga suši da se dobije naslovljeno jedinjenje (558.2g, prinos 99%). HPLCMS: 97.4%.
FAZA 3: Di-terc-butil (1S,2R,3S,5R,6R)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-oksobiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0072]
[0073] Suspenzija di-terc-butil (1S,2R,5R,6R)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-metiliden-4-oksobiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata (350.00 g, 826.43 mmol) u toluenu (2.95 L) se tretira sa 3,4-difluorbenzentiolom (172.49 g, 1.18 mol) i trietilaminom (205.61 mL, 149.28 g, 1.48 mol) na 25°C. Smeša se meša na 80°C. Nakon dvanaest sati, reakcija se ohladi na sobnu temperaturu, isperu po redu sa 2N vodenim rastvorom NaOH (pH = 10) i 1N vodenim rastvorom HCl (pH=4), suši preko MgSO4i koncentruje pod vakuumom da se dobije ostatak. Ostatak se triturira sa heksanom (1L) i rastvarač ukloni da se dobije naslovljeno jedinjenje (664g, 100% prinos).
FAZA 4: Di-terc-butil (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0074]
[0075] 1N rastvor (R)-metil oksazaborolidinq u toluenu (228.21mL) i boran-metil sulfid kompleksa (86.68g, 101.98 mL, 1.14 mol) u anhidrovanom metil t-butil etru (4.56 L) se ohladi na -40°C. U ovaj rastvor se u toku 2 sata preko levka za dodavanje dodaje di-terc-butil (1S,2R,3S,5R,6R)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-oksobiciklo[3.1.0]heksan2,6-dikarboksilat (650.00g, 1.14 mol) u metil t-butil etru (3.42 L) nakon čega se reakcija zagreje na 0°C. Nakon 1 sat, doda se metanol (461.80 mL, 11.41 mol) i unutrašnja temperatura zadržava na ispod 15°C. Reakcija se ispere sa 2N vodenim rastvorom NaOH (2L), suši preko MgSO4i koncentruje pod vakuumom da se dobije ostatak. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu (8:1 do 1:1 heksan/etil acetat) da se dobije naslovljeno jedinjenje (580g, 89% prinos).
FAZA 5: (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-Amino-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilna kiselina
[0076]
[0077] Voda (1.10L) i 12.18M rastvor vodonik hlorida u vodi (789.88mL, 9.62 mol) se dodaju u rastvor di-terc-butil (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilata (550.00 g, 962.07 mmol) u 1,4-dioksanu (192.41mL). Dobijena žitka masa se meša na 100°C. Nakon 12 sata, reakcija se ohladi na25°C, meša 12 sati i nakon toga zaalkališe sa NaOH (50% mt/mt) do pH = 2.65. Dobijena smeša se meša 30 minuta na 10°C nakon čega se precipitat sakupi filtriranjem, ispere sa vodom (1 L) i metil terc-butil etrom (1 L) i suši 2 sata na 25°C a nakon toga u pećnici na 60°C sve do konstantne težine da se dobije naslovljeno jedinjenje (300g, 87% prinos). MS (m/z): 360 (M+1).
Faza 6: (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilna kiselina
[0078]
[0079] Trietilamin (407.27mL, 2.92 mol) i [2-(terc-butoksikarboniloksiimino)-2-fenilacetonitril] (308.39g, 1.25 mol) se na 25°C dodaju u suspenziju (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-amino-3-[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilne kiseline (300.00 g, 834.84 mmol) u 1,4-dioksanu (500.9mL) i vodi (500.9mL). Smeša se zagreje na 50°C. Nakon 12 sata, reakcija se ohladi na 25°C, razblaži sa vodom (2.5 L) i ispere sa metil terc-butil etrom (6 x 1 L). Vodena faza se zaalkališe sa 1N vodenim rastvorom HCl do pH = 2 i ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 2 L). Kombinovani ekstrakti etil acetata se isperu sa slanim rastvorom, suše preko MgSO4i koncentruju pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (250g, 65% prinos). MS (m/z): 360 (M+-Boc).
FAZA 7: Bis({[(1-metiletoksi)karbonil]oksi}metil)(1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-[(tercbutoksikarbonil)amino]-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat
[0080]
[0081] Rastvor (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilne kiseline (150.00 g, 326.46 mmol) u dimetilformamidu (3.38 L) se po redu tretira sa kalijum karbonatom (1 180.48g, 1.31mo), hlormetil izopropil karbonatom (149.43g, 979.39 mmol) i natrijum jodidom (9.79g, 65.29 mmol) i smeša se meša u atmosferi azota na 25°C. Nakon 12 sati, u smešu se doda voda (1.5 L), čvrste supstance se izdvoje filtriranjem i filtrat se ekstrahuje sa metil terc-butil etrom (3 x 1.5 L). Kombinovani organski ekstrakti se isperu po redu sa vodom, slanim rastvorom, suše preko MgSO4i koncentruju pod vakuumom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu (2:1 to 1:1 heksan/ etil acetat) da se dobije naslovljeno jedinjenje (225g, 70% prinos). MS (m/z): 592 (M+-Boc).
FAZA 8: Bis({[(1-metiletoksi)karbonil]oksi}metil)(1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-amino-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat hidrohlorid
[0082]
[0083] Bis({[(1-metiletoksi)karbonil]oksi}metil)(1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-[(tercbutoksikarbonil)amino]-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat (124.9g, 180.57 mmol) se tretira sa 4N rastvorom vodonik hlorida u 1,4-dioksanu (1.12L, 4.50 mol) na 25°C. Nakon 90 minuta, rastvarač se ukloni pod vakuumom i ostatak se u toku 30 minuta prevede u žitku masu u metil terc-butil etru (1 L). Dobijeni precipitat se sakupi filtriranjem, ispere sa metil terc-butil etrom (500 mL) i suši 16 sati u pećnici na 45°C. Dobijena so se rastvori u dihlormetanu i vodi a nakon toga neutrališe sa trietilaminom. Organska faza se izdvoji, suši preko MgSO4i koncentruje pod vakuumom da se dobije ostatak. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu (3:1 do 1:1 heksan/ etil acetat), da se dobije slobodna baza koja se tretira sa 4N rastvorom HCl u 1,4-dioksanu (950 mL) na 25°C. Nakon 15 minuta, rastvarač se upari pod vakuumom i ostatak se prevede u žitku masu u metil terc-butil etru (1 L) i heksanu (250 mL). Dobijena čvrsta supstanca se filtrira, ispere sa metil terc-butil etrom (500 mL) i suši pod vakuumom na 45°C do konstantne težine da se dobije naslovljeno jedinjenje (98.5g, 87% prinos). MS (m/z): 592 (M+1).
[0084] Podaci iz literature (Witkin, Jeffrey M. i Eiler, William J.A. (2006), Antagonism of Metabotropic Glutamate Group II Receptors in the Potential Treatment of Neurological and Neuropsychiatric Dizorders. Drug Development Research vol 67, pg.757-769; i Yasuhara, Akito and Chaki, Shigeyuki, (2010) Metabotropic Glutamate Receptors: Potential Drug Targets for Psychiatric Dizorders, The Open Medicinal Chemistry Journal, vol.4, pg. 20-36.) i podaci dobijeni u ne-kliničkim ispitivanjima na životinjama podržavaju ulogu mGlu2/3 antagonista u tretmanu depresivnih poremećaja i poremećaja prekomerne pospanosti.
Preciznije, nađeno je da su antagonisti mGlu 2/3 receptora efikasni kod depresivnih poremećaja u modelima glodara i izazivaju budnost praćenjem EEG pacova bez nesrazmerne ili klinički relevantne hiperaktivnosti ili nesrazmerne kompenzatorne prekomerne pospanosti. Povećana budnost se manifestuje u povećanju pažnje, poboljšanju kognitivne performanse i mogućeg smanjenja zamora. Kako prethodno opisani poremećaji predstavljaju uobičajena komorbidna klinička stanja, antagonist mGlu2/3 receptora može da bude posebno efikasan kod populacije specifičnih pacijenata, kao što su pacijenti sa major depresivnim poremećajem, u tretmanu refraktorne depresije, unipolarne depresije, distimije i/ili ciklotimije ili bilo kog poremećaja prekomerne pospanosti. Poremećaji prekomerne pospanosti mogu da uključe, ali bez ograničenja na, poremećaj dnevnog ritma spavanja (PDP), preteranu pospanost povezanu sa opstruktivnom apneom u snu ili narkolepsijom, poremećaj cirkadijalnog ritma spavanja (uključujući, ali bez ograničenja na, poremećaj spavanja izazvan smenskim radom, jet leg poremećaj, poremećaj odložene faze spavanja, poremećaj rane faze spavanja i sindrom 24-časovnog poremećaja spavanja), idiopatske prekomerne pospanosti i prekomerne pospanosti povezane sa neokrepljujućim spavanjem (NOS)
[0085] Za dalji prikaz karakteristika jedinjenja iz ovog pronalaska, reprezentativna jedinjenja mogu da se podvrgnu narednim in vitro i in vivo ispitivanjima:
Ispitivanja CAMP antagonista mGlu2 i mGlu3 receptora
[0086] Aktivnost antagonista se ispituje u rekombinantnim AV12 ćelijama u kojima se stabilno ekspresuju humani mGlu2 ili mGlu3 receptori i transporter glutamat EAAT1 (transporter 1 ekscitatorne amino kiseline) pacova. Ćelijske linije se održavaju uzgajanjem u DMEM sa visokim sadržajem glukoze i piridoksin hidrohlorida obogaćenim sa 5 % dijaliziranog seruma fetusa govečeta (FBS), 1 mM natrijum piruvijata, 1 mM HEPES i 1 mM L-glutamina; geneticin i higromicin B se koriste kao selektivni antibiotici. Navedene kulture se uzgajaju na 37°C u atmosferi koja sadrži 6.5% CO2i dvonedeljnoj pasaži. Ćelije se sakupe pomoću 0.25% tripsina, suspenduju u zamrznutom medijumu (FBS sa 10% DMSO) po 10<7>ćelija/ml i alikvote se čuvaju u tečnom azotu. Dvadeset četiri sata pre ispitivanja, ćelije se prenesu u gustini od 8,000-10,000 ćelija po otvoru u tretiranu kulturu tkiva, u ploče sa 96 otvora od kojih je polovina crna (Costar 3875) u 50 µl DMEM sa visokim sadržajem glukoze i piridoksin hidrohlorida obogaćenim sa 5 % dijaliziranog FBS, 1 mM natrijum piruvijata, 1 mM HEPES, 100 µg/ml ampicillina i 250 µM (mGlu2) ili 125 µM (mGlu3) L-glutamina.
[0087] Poništaj inhibicije forskolin-stimulisane cAMP produkcije sa test jedinjenjem se meri pomoću homogene vremenski razložene fluorescentne tehnologije (HTRF; Cisbio cat # 62AM4PEB). Medijum se ukloni a ćelije se inkubiraju 30 minuta sa 100 µl pufera za stimulaciju, na 37°C. (STIM pufer sadrži 500 ml HBSS, 1000 ml DPBS, 0.034 % BSA, 1.67 mM HEPES i 500 µM IBMX (Sigma I5879).) Jedinjenja se testiraju u 10-tačaka koncentracije na krivoj odgovora korišćenjem 3X serijsko razblaženje a zatim daljim razblaženjem od 40 puta u STIM puferu. DCG IV (Tocris 0975) služi kao referentni agonist. Finalna reaktivna smeša sadrži 1 µM (za mGlu2) ili 3 µM (za mGlu3) forskolina (Sigma F6886), DCG IV pri svom EC90i do 25 µM test jedinjenja. Ćelije se inkubiraju 20 minuta na 37°C. Za merenje nivoa cAMP, cAMP-d2 konjugat i anti cAMP-kriptat konjugat u puferu za lizu se inkubiraju sa tretiranim ćelijama 1 sat (mGlu2) ili 1.5 sat (mGlu3) na sobnoj temperaturi. HTRF signal se detektuje pomoću EnVision čitača ploča (Perkin-Elmer) da se izračuna odnos fluorescencije na 665 do 620 nM. Neobrađeni podaci se konvertuju u cAMP količinu (pmol/otvor) pomoću cAMP standardne krive izrađene za svaki eksperiment.
Relativne IC50vrednosti se izračunavaju od najvećeg ka manjem opsegu koncentracija na krivoj odgovora pomoću logističkog programa dobijanja krivih od četiri parametra (ActivityBase v5.3.1.22).
FLIPR i cAMP analize za selektivnost mGlu receptora
[0088] Relativni antagonistični potencijal jedinjenja iz pronalaska za druge humane mGlu receptore može da se ispita ili analizom cAMP ili fluorometrjskim ispitivanjem odgovora kalcijuma (videti na primer Fell i saradnici, JPET (in press)). Ukratko, pojedinačne AV12 ćelijske linije koje sadrže transporter EAAT1 glutamata pacova i u kojima se stabilno ekspresuju humani mGlu1, 2, 3, 4, 5, 6, & 8 receptori se koriste u ovoj studiji. mGlu1 i 5 receptori su Gq-udvojeni, tako da prirodno signaliziraju kroz fosfolipazu C, stvarajući kalcijum fluks odgovor koji može da se koristi za merenje aktivacije receptora pomoću Fluorometric Imaging Plate Reader (FLIPR, Molecular Devices). Ćelijske linije u kojima se ekspresuju mGlu2, 3, 4 i 8 receptori se dizajniraju za ekspresiju Gα15 subjedinice tako da ovi Gi-udvojeni receptori generišu kalcijum fluks odgovor sličan sa ćelijskim linijama u kojima se ekspresuju mGlu1 i 5 receptor. mGlu6 receptor se testira u cAMP formatu po metodama analognim sa onima koje su prethodno razvijene za mGlu2 i mGlu3. Ove ćelijske linije se održavaju na način koji je prethodno opisan izuzev što količine L-glutamina i izabranih sredstava (geneticin, higromicin B, zeocin i blasticidin) mogu da variraju u zavisnosti od ćelijske linije. Ove kulture se dvonedeljno pasažiraju.
[0089] Nivoi intracelularnog kalcijuma se prate pomoću FLIPR pre i nakon dodavanja test jedinjenja i Fluo-3 AM (Invitrogen) ili Calcium 4 (Molecular Devices) boje, u zavisnosti od ćelijske linije. Ćelije se ostave 24 sata pre ispitivanja u različitoj koncentraciji glutamina i različitoj gustini ćelija po otvoru, u zavisnosti od ćelijske linije. Medijum se ukloni a ćelije se inkubiraju sa 8 µM boje (50 µl po otvoru) u toku 90 ili 120 minuta (u zavisnosti od ćelijske linije) na 25°C. Jedno dodavanje FLIPR analiza koja generiše krivu odgovora sa 11-tačaka koncentracije za glutamat agonist se izvrši pre svakog eksperimenta da se potvrdi odgovarajuća osetljivost ćelija. Rezultati se analiziraju pomoću GraphPad Prism v4.03 da se izračuna koncentracija glutamata potrebna da indukuju EC90(analiza antagonista) i EC10(analiza potencijatora) odgovori.
[0090] Jedinjenja su testirana na svaki mGlu receptor u dve dodatne FLIPR analize koristeći profil odgovora sa 10 tačaka koncentracije počevši od finalne koncentracije od 25 µM za analizu agonista i 12.5 µM za analize potencijatora i antagonista. Prvo dodavanje detektuje aktivnost bilo kog agonista a drugo dodavanje sadrži 100 µl izabranih koncentracija (u zavisnosti od ćelijske linije) glutamata u puferu za analizu koji generiše EC10ili EC90glutamat odgovor. Efekti agonista se kvantifikuju kao procenat stimulacije indukovane samim jedinjenjem u odnosu na maksimalni glutamat odgovor. Efekti antagonista se kvantifikuju izračunavanjem procenta inhibicije EC90glutamat odgovora izazvane jedinjenjem. Efekti potencijatora se kvantifikuju kao procenat rasta u prisustvu EC10odgovora glutamata u odnosu na ECmaxodgovora. Sve vrednosti se izračunavaju u odnosu na IC50ili EC50vrednosti koristeći program izrade logističke krive sa četiri parametra (ActivityBase v5.3.1.22).
[0091] Aktivnost antagonista u mGlu6 ćelijama se meri koristeći cAMP u postupku analognom sa postupkom prethodno opisanim za aktivnost mGlu2 i mGlu3, izuzev što je referentni agonist L-AP4 (Tocris). Za merenje aktivnosti mGlu6 agonista, izračunava se vrednost za koju jedinjenje inhibira produkciju cAMP stimulisanu forskolilnom. Relativne IC50i EC50vrednosti se izračunavaju od najveće iz krive odgovora dobijene od većih ka manjim vrednostima koncentracije, koristeći program izrade logističke krive sa četiri parametra (ActivityBase v5.3.1.22).
[0092] Jedinjenja iz primera u kojima su R<1>i R<2>oba vodonik su u osnovi testirana kako je prethodno opsiano i nađeno je da imaju visoku potenciju antagonista za mGlu2 i mGlu3 receptore. Za jedinjenja iz primera u kojima su R<1>i R<2>oba vodonik je takođe nađeno da su selektivni antagonisti mGlu2 i mGlu3 receptora u odnosu na druge subtipove mGlu receptora. Za IC50vrednosti za mGlu2 i mGlu3 receptore jedinjenja iz primera u kojima su R<1>i R<2>oba vodonik je nađeno da su manje od 70 nM i 140 nM, tim redom, dok je nađeno da su IC50vrednosti za druge testirane mGlu receptore značajno veće. Jedinjenja iz primera 1 i 2 su u osnovi testirana kako je prethodno opisano i nađeno je da imaju profile aktivnosti kako je pokazano u Tabeli 1.
Tabela 1. Vrednosti selektivnost
[0093] Osim toga, neka jedinjenja iz ovog pronalaska pokazuju nedostatak značajne aktivnosti na druge fiziološki važne receptore kao što su, ali bez ograničenja na, hERG kanal, receptori serotonina (posebno 5-HT2Ai 5-HT2B), receptori muskarina (posebno M2) i iGluR receptori (posebno iGluR5). Jedinjenje iz primera 1 je testirano preko poznatih metoda analiza i nađeno je da nema vidnu aktivnost na ove receptore.
[0094] Prema tome, očekuje se da fiziološki relevantne doze jedinjenja iz pronalaska obezbede značajnu inhibiciju mGlu2 i mGlu3 receptora in vivo, ali nema značajne interakcije sa drugim mGlu receptorima ili drugim fiziološki relevantnim receptorima, i prema tome se očekuje da se obezbedi potrebna farmakologija uz izbegavanje neželjenih efekata povezanih sa delovanjem van cilja.
Test forsiranog plivanja kod miševa (mFST)
[0095] mFST je ustanovljena in vivo analiza za delovanje antidepresanta (Li i saradnici J Pharmacol Exp Ther. 319(1):254-9, 2006.). Miševi tretirani sa poznatim klinički efikasnim antidepresantima (selektivni inhibitori ponovnog preuzimanja serotonina i/ili triciklični antidepresanti) ostaju kraće vreme nepomični nakon stavljanja u tank sa vodom, ponašanje koje je povezano sa osećanjem beznadežnosti. mFST je koorišćen za procenu potencijalne aktivnosti novih mGlu2/3 antagonista kao antidepresanata, kako je u osnovi opisano u prethodno objavljenim postupcima (videti, na primer, Li i saradnici J Pharmacol Exp Ther. 319(1):254-9, 2006.). Ukratko, korišćeni su mužjaci NIH-Swiss miševa (Harlan Sprague-Dawley, Indianapolis, IN) težine između 25-30 g. Životinje smeštene u grupi se premeste iz vivarijuma u oblast za testiranje u svojim sopstvenim kavezima i ostave da se prilagode na novu sredinu najmanje 1 sat pre testiranja. Jedinjenja u kojima su R<1>i R<2>oba vodonik se rastvore u vodi uz minimalno dodavanje NaOH zbog rastvorljivosti i primene i.p. Jedinjenja u kojima R<1>i/ili R<2>nisu vodonik su izrađena na dan upotrebe u 2.0-2.5% N-metil-pirolidinonu a nakon toga suspendovana u 1% HEC, 0.25% Tween 80 i 0.05% Dow antipenećem sredstvu i primenjena oralno. Miševi se stave u cilindar (promer: 10 cm; visina: 25 cm) ispunjen do visine od 6 cm sa vodom (22-25°C) u toku 6 min. Računa se trajanje nepomičnosti u toku poslednja 4 minuta od ukupno 6 minuta trajanja testa. Miševi se registruju kao nepokretni kada plutaju bez kretanja ili čine samo one pokrete koji su neophodni da održavaju glavu iznad vode.
[0096] Reprezentativna jedinjenja su u osnovi testirana kako je prethodno opisano i nađeno je da značajno smanjuju vreme nepokretnosti kod miševa divljeg soja. Jedinjenja iz primera u kojima su R<1>i R<2>oba vodonik su u osnovi ispitivana kako je prethodno opisano i nađeno je da imaju ED60vrednosti manje od 30 mg/kg i.p., sa maksimalnim smanjenjem vremena nepokretnosti od najmanje 25%. Jedinjenja iz Primera 1, 2, 12/32 i 22 su u osnovi ispitana kako je prethodno opisano i nađeno je da imaju aktivnosti kako je pokazano u Tabeli 2. Stoga se od jedinjenja iz ovog pronalaska očekuje da imaju delovanje antidepresanta in vivo.
Tabela 2. Test forsiranog plivanja miševa (mFST)
[0097] U drugim eksperimentima su ispitivani miševi sa uklonjenim receptorom (mGlu2 genetski modifikovani miševi); ovi miševi su posebno odgajani kao heterozigot x heterozigot soj i koriste se kao pripadnici istog legla za upoređivanje -/- i /+ miševa (Taconic Farms). Nađeno je da jedinjenja iz Primera 1 i 2 (10mg/kg, i.p., 30 min pre) značajno smanjuju vreme nepomičnosti kod mGlu2+/+ miševa, ali ne kod mGlu2-/- miševa. Isto tako, nađeno je da jedinjenja iz primera 12/32 (30 mg/kg, po, 120 min pre) smanjuju vreme nepomičnosti kod mGlu2+/+ miševa, ali ne kod mGlu2-/- miševa. Ovi rezultati dalje pokazuju da mGlu2 receptor doprinosi da jedinjenja iz pronalaska imaju efekat sličan antidepresantima.
[0098] Jedinjenja iz pronalaska mogu takođe da budu testirana u kombinaciji sa drugim jedinjenjima korisnim za tretman depresivnih poremećaja, kao što su, na primer, SSRI-i, zbog njihove sposobnosti da pojačaju efekte slične antidepresantu u odnosu na samo jedinjenje. Jedinjenje iz primera 12 (10 mg/kg p.o.) je testirano samo u testu forsiranog plivanja miševa i u kombinaciji ili sa fluoksetinom (10 mg/kg, i.p.) ili citalopramom (1 mg/kg, i.p.) i nađeno je da značajno povećava efekat sličan antidepresantu u odnosu na samo jedinjenje, kako je pokazano u niže datoj Tabeli 3. Osim toga, ispitivanje vrednosti u mozgu i plazmi aktivnog di-acid radikala jedinjenja iz Primera 12 (to jest istog jedinjenja kao što je slobodna baza u primeru 1) i vrednosti fluoksetina i citaloprama u plazmi pokazuje da nema povećanja u tim vrednostima, što potvrđuje rezultate da povećanje aktivnosti slično antidepresantu nije samo zbog porasta prisustva jedinjenja u centralnom nervnom sistemu.
Tabela 3. mFST sa SSRI
[0099] Budnost i praćenje ponašanja kod pacova: reprezentativna jedinjenja iz ovog pronalaska su testirana na pacovima da se utvrdi njihova sposobnost da povećaju vreme u budnom stanju bez neželjenih efekata kao što su inhibicija REM spavanja, poremećaj motorike budnosti (disproporcija hiper- ili hipolokomocija), i/ili povratak prekomerne pospanosti. Životinje su kontinuirano praćene elektro-encefalogramima (EEG), elektromiogramima (EMG) i kretanjem za merenje kumulativnog vremena u budnom stanju, povratne prekomerne pospanosti i intenzitet lokomotorne aktivnosti u toku budnog stanja. Metode za ovakve studije su poznate u tehnici (videti, na primer metode opisane u Edgar DM, Seidel WF. Modafinil induces wakefulness without intensifying motor activity ili subsequent rebound preterana pospanost in the rat. J Pharmacology & Experimental Therapeutics 1997; 283: 757-769; van Gelder RN, Edgar DM, Dement WC. Real-time automated sleep scoring: validation of microcomputer-based system for miševa. Sleep 1991, 14: 48-55; i Gross BA, Walsh CM, Turakhia AA, Booth V, Mashour GA, Poe GR. Open-source logic-based automated sleep scoring software using electrophysio logical recordings in rats. J vNeurosci Methods. 2009; 184(1):10-8.).
Studije su izvedene na sledeći način:
Priprema životinja. Odraslim mužjacima Wistar pacova (približno 270-300 g u vreme operacije) su hirurški ugrađeni uređaji za stalno beleženje EEG, EMG, telesne temperature i kretanje na sledeći način: pacovima je hirurški ugrađen kranijalni implant koji se sastoji od četiri vijka od nerđajućeg čelika za EEG beleženje (dva frontalno [3.9 mm ispred bregme i ±2.0 mm mediolateralno] i dva ocipitalno [6.4 mm iza bregme, ±5.5 mm mediolateralno]) i sa dve žice od nerđajućeg čelika obložene teflonom za beleženje EMG (pozicionirane ispod potiljačnog trapezoidnog mišića). Svi provodnici su zalemljeni za minijaturni konektor (Microtech, Boothwyn, PA) pre operacije. Konstrukcija implanta je fiksirana za lobanju kombinacijom vijaka od nerđajućeg čelika za beleženje EEG, cijanoakrilata nanetog između konektora implanta i lobanje i dentalnog akrila. Telesna temperatura i lokomotorna aktivnost su praćene preko minijaturnog transmitera (Minimitter PDT4000G, Philips Respironics, Bend, OR) koji je hirurški smešten u abdomen. Životinje se ostave najmanje 3 nedelje da se oporave.
Sredina za beleženje. Svaki pacov je pojedinačno smešten u mikroizolatorni kavez modifikovan sa ubačenim stubom sa filterom od polikarbonata na vrhu da se obezbedi više vertikalnog prostora za glavu. Fleksibilni kabl koji minimalno ograničava pokrete je jednim krajem vezan komutator smešten na vrhu kaveza a drugim krajem za kranijalni implant životinje. Svaki kavez je smešten u odvojene komore sa ventiliranim odeljcima od nerđajućeg čelika u kojima se beleži stanje spavanja i budnosti. Hrana i voda su raspoložive ad libitum a temperatura sredine se održava na približno 23±1°C.24-časnovni ciklus svetlo-tama (ST 12:12) je održavan u toku studije pomoću fluorescentnog svetla. Prosečna relativna vlažnost je približno 50%. Životinje nisu uznemiravane najmanje 30 sati pre i nakon svakog tretmana.
Izvođenje studije i doziranje. Jedinjenja u kojima su R<1>i R<2>oba vodonik se rastvore u vodi sa minimalnom količinom NaOH koji se dodaje zbog rastvorljivosti i primenjena su i.p. u zapremini od 1.0 mL po kg telesne težine. Jedinjenja u kojima R<1>i/ili R<2>nisu vodonik su primenjena p.o. u zapremini od 2 mL po kg telesne težine u jednom od dva alternativna vehikuluma: i) 2.5% N-metil-2-pirolidinon u hidroksietil celulozi; ili ii) 10% akacija sa 0.05% Dow Corning® Antifoam u vodi. Vehikulum ili vrednosti doze jednog od jedinjenja se primenjuju pseudo-randomno tako da ni jedan pacov ne prima isti tretman dva puta i ni jedan pacov ne prima više od 8 tretmana u bilo kojoj studiji. Svaki pacov se uzme iz svog kaveza u trajanju od približno minut da se izmeri i tretira. Najmanje 6 dana je period "čišćenja" pre i nakon svakog tretmana.
Prikupljanje rezultata. Razlikovanje spavanja i budnog stanja može da bude automatizovano (na primer, Van Gelder i saradnici 1991; Edgar i saradnici 1997, Winrow i saradnici, 2010; Gross i saradnici, 2009). EEG je pojačan i filtriran (X10,000, propusni opseg 1-30 Hz), EMG je pojačan i integrisan (propusni opseg 10-100 Hz, RMS integracija) i ne-specifična lokomotorna aktivnost (LMA) se prati istovremeno. Stanja pobuđenosti su klasifikovana u periodima od 10 sekundi kao ne-REM spavanje, REM spavanje, budnost ili teta-dominantna budnost. Lokomotorna aktivnost (LMA) se beleži kao broj po minutu i detektuje se komercijalno raspoloživim telemetrijskim prijemnicima (ER<4>000, Minimitter, Bend, OR).
Statistička analiza. Starost i telesne težine su sumirani kao prosečna vrednost, minimum i maksimum u odnosu na tretirane grupe. Sve životinje koje su imale najmanje jedan rezultat su uključene u zbir rezultata (na primer, uključen je odgovarajući rezultat tretirane životinje za koju su rezulati telemetrije upotrebljivi ali rezultati EEG nisu). Period posmatranja nakon tretmana je podeljen na 2 intervala nakon doziranja (prvih 7 sati i prvih 19 sati) pri čemu se vreme doziranja definiše kao početak u sat = 0. Rezultati su sumirani za svaki period računanjem ili prosečno po satu ili kumulativnom vrednošću za svaki period. Svaki rezultat u svakom periodu se analizira analizama kovarijanse uzimajući kao faktore tretiranu grupu i rezultat tretmana a odgovarajući interval pre tretmana, 24 sata ranije, kao kovarijante. Načini podešavanja i promene nastale od vrste vehikuluma i njihove odgovarajuće standardne greške su sumirani za svaku tretiranu grupu. Podešene Dunnett-ove višestruko uporedive P-vrednosti su pokazane za svaki rezultat u svakom periodu. Nisu svi rezultati analizirani u svim periodima, kako je pokazano u Tabeli 1, što na taj način utiče na stopu greške eksperimenta tip I. Zbog toga nisu vršena dalja podešavanja za višestruka testiranja.
Određivanje efikasnosti. Prag efikasnosti doze je procenjen kao najniža doza za koju kumulativno vreme budnosti prelazi 50 minuta u odnosu na kontrolne grupe sa vehikulumom u toku prvih 7 sati nakon tretmana. Preciznije određivanje može da se izvrši sprovođenjem naknadnih studija sa mnogo manjim rasponom doza u odnosu na efikasnu dozu.
Određivanje neželjenih efekata. Posebno su procenjena dva potencijalno neželjena efekta: prevazilaženje preterane pospanosti i intenzivirana motorna aktivnost (Edgar DM, Seidel WF, 1997).
(i) Prevazilaženje preterane pospanosti može da se meri kao smanjenje novoa budnog stanja u toku perioda od 8-19 sati nakon tretmana sa efikasnom dozom. Biološki značajno smanjenje se definiše kao više od 50 procenata kumulativnog porasta u toku prvih 7 sati. Prema tome, ukoliko se budno stanje poveća za 100 minuta u toku prvih 7 sati, tada se smanjenje u kumulativnom budnom stanju od 50 minuta ili više, u odnosu na grupu tretiranu vehikulumom, u toku perioda od 8-19 sati nakon tretmana, može smatrati biološki značajnim. Grupa prosečnih promena, pokazana u Tabeli 2, pokazuje nedostatak prevazilaženja preterane pospanosti.
(ii) Povećana motorna aktivnost se definiše kao prosečno povećanje u odnosu na kontrolne grupe sa vehikulumom koje prevazilazi 5 LMA brojanja po minutu EEG definisane pospanosti sa početnom efikasnom dozom i za koje je efekat povezan sa dozom. Grupa prosečnog rasta u Tabeli 2 je cela bila ispod 5 brojanja budnog stanja po minuti i nije zavisila od doze.
[0100] Jedinjenja iz primera su u osnovi testirana kako je opisano i nađeno je da dovode do budnog stanja bez značajnog prevazilaženja hipersomnije ili intenziviranja motorne aktivnosti. Jedinjenja iz primera u kojima su R<1>i R<2>oba vodonik (primenjena i.p.) su u osnovi testirana kako je opisano i nađeno je da su efikasna u dozama od 10 mg/kg ili manjim.
Jedinjenje iz primera 12 je u osnovi testirano kako je opisano i nađeno je da ima profil kumulativnog vremena budnosti i intenzitet lokomotorne aktivnosti kako je pokazano u Tabeli 4.
Tabela 4.
[0101] Pored toga, u tri odvojena eksperimenta, ispitivani su miševi kojima su odstranjeni pojedinačni mGlu2(-/-), pojedinačni mGlu3(-/-) ili dvostruki mGlu2(-/-) mGlu3(-/-) receptor. Ovi miševi su odgajani kao heterozigot x heterozigot soj i koriste se kao pripadnici istog legla za upoređivanje -/- i /+ miševa (Taconic Farms). Nađeno je da jedinjenje iz Primera 1 (10mg/kg, i.p.) značajno povećava budno stanje kod divljih oblika miševa, pojedinačnog genetički izmenjenog tipa mGlu3(-/-) miševa i pojedinačnog genetički izmenjenog mGlu2(-/-) miševa, mada u manjoj meri. Nasuprot tome, nađeno je da jedinjenje iz Primera 1 ne povećava značajno budnost kod dvostruko genetički izmenjenih mGlu2(-/-) mGlu3(-/-) miševa. Ovi nalazi pokazuju da i mGlu2 i mGlu3 receptori doprinose efektu jedinjenja iz pronalaska u održavanju budnog stanja.
[0102] Mada je moguće da se jedinjenja korišćena u postupcima iz ovog pronalaska primene direktno bez bilo kakve formulacije, jedinjenja se uobičajeno primenjuju u obliku farmaceutske kompozicije koja uključuje najmanje jedno jedinjenje Formule I, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kao aktivni sastojak i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač i/ili ekscipijent. Ove kompozicije mogu da se primene različitim načinima kao što su oralno, sublingvalno, nazalno, subkutano, intravenozno i intramuskularno. Ovakve farmaceutske kompozicije i procesi za njihovu izradu su dobro poznati u tehnici. Videti, na primer, Remington: The Science i Practice of Pharmacy (University of the Sciences in Philadelphia, ed., 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins Co., 2005). Jedinjenja Formule I gde R<1>ili R<2>ili oba nisu vodonik, se preferirano primenjuju oralno kako bi se poboljšala bioraspoloživost, dok su jedinjenja Formule I u kojima su R<1>i R<2>oba vodonik preferirana za i.v., i.p. ili intramuskularnu primenu.
[0103] Kompozicije su preferirano formulisane u pojedinačnom doznom obliku, gde svaka doza sadrži od približno 1 do približno 600 mg, mnogo češće od približno 30 do približno 300 mg, kao što je, na primer, između približno 50 i približno 250 mg aktivnog sastojka. Naziv "jedinični dozni oblik" se odnosi na fizički odvojene jedinice pogodne za pojedinačno doziranje na ljudima i drugim sisarima, a svaka jedinica sadrži prethodno određenu količinu aktivnog materijala izračunatog da dovede do potrebnog terapeutskog efekta, zajedno sa najmanje jednim pogodnim farmaceutski prihvatljivim nosačem, razblaživačem i/ili ekscipijentom.
[0104] Jedinjenja Formule I su generalno efikasna u širokom opsegu doze. Na primer, dnevne doze su normalno u rasponu od približno 0.01 do približno 10 mg/kg, mnogo češće od približno 0.3 do 5.0 mg/kg i kao primer, između 0.5 i 3.0 mg/kg telesne težine. U nekim slučajevima, vrednosti doze ispod niže granice prethodno navedenog opsega mogu da budu više nego adekvatne, dok u drugim slučajevima mogu da se primene čak i veće doze bez izazivanja bilo kakvog ozbiljnog neželjenog dejstva, pa stoga prethodno dati opseg doza ne treba da ograniči okvir ovog pronalaska na bilo koji način. Razumljivo je da će količinu jedinjenja koje se primenjuje odrediti lekar, uzimajući u obzir relevantne okolnosti, uključujući stanje koje se tretira, izbor načina primene, određeno jedinjenje ili jedinjenja koja se primenjuju, starost, težinu i odgovor pojedinačnog pacijenta i ozbiljnost simptoma pacijenta.

Claims (16)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje koje ima formulu
    naznačeno time što su R<1>i R<2>svaki nezavisno vodonik, C1-C3alkoksikarboniloksimetil, C1-C5alkilkarboniloksimetil ili C3-6cikloalkilkarboniloksimetil grupa; R<3>je nezavisno u svakom pojavljivanju metil grupa, fluor ili hlor; R<4>je hidroksil, amino, metilkarbonilamino ili 1,2,4-triazoliltio grupa; i n je 1 ili 2; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  2. 2. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što su R<1>i R<2>svaki vodonik, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  3. 3. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što su R<1>i R<2>isti i nisu vodonik, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  4. 4. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 3, naznačeno time što su R<1>i R<2>svaki izopropiloksikarboniloksimetil grupa.
  5. 5. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 4, naznačeno time što je n = 2 a R<3>grupe su na položajima 3- i 4- fenila.
  6. 6. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 5, naznačeno time što je R<3>nezavisno u svakom pojavljivanju hlor ili fluor.
  7. 7. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-amino-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilna kiselina ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  8. 8. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to bis({[(1-metiletoksi)karbonil]oksi}metil) (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2amino-3-{[(3,4-difluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  9. 9. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2-amino-3-{[(3-hlor-4-fluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0] heksan-2,6-dikarboksilna kiselina ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  10. 10. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to bis({[(1-metiletoksi)karbonil]oksi}metil) (1S,2R,3S,4S,5R,6R)-2amino-3-{[(3-hlor-4-fluorfenil)sulfanil]metil}-4-hidroksibiciklo[3.1.0]heksan-2,6-dikarboksilat ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  11. 11. Farmaceutska kompozicija, naznačena time što uključuje jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 10, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u kombinaciji sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim nosačem, ekscipijentom ili razblaživačem.
  12. 12. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 10, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je za upotrebu u terapiji.
  13. 13. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 10, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je za upotrebu u tretmanu depresivnih poremećaja.
  14. 14. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 10, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je za upotrebu u tretmanu poremećaja prekomerne pospanosti.
  15. 15. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 10, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je za upotrebu u istovremenoj, odvojenoj ili po redu kombinaciji sa inhibitorom ponovnog preuzimanja serotonina u tretmanu depresivnih poremećaja.
  16. 16. Farmaceutska kompozicija u skladu sa patentnim zahtevom 11, naznačena time što kompozicija dodatno uključuje inhibitor ponovnog preuzimanja serotonina.
RS20171082A 2010-11-18 2011-11-15 Jedinjenja 4-supstituisanog-3-fenilsulfanilmetil-biciklo[3.1.0]heksana kao mglur 2/3 antagonisti RS56535B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US41512110P 2010-11-18 2010-11-18
PCT/US2011/060730 WO2012068067A1 (en) 2010-11-18 2011-11-15 4-substituted-3-phenylsulfanylmethyl-bicyclo[3.1.0]hexane compounds as mglur 2/3 antagonists
EP11791692.4A EP2640697B1 (en) 2010-11-18 2011-11-15 4-substituted-3-phenylsulfanylmethyl-bicyclo[3.1.0]hexane compounds as mglur 2/3 antagonists

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS56535B1 true RS56535B1 (sr) 2018-02-28

Family

ID=45099188

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20171082A RS56535B1 (sr) 2010-11-18 2011-11-15 Jedinjenja 4-supstituisanog-3-fenilsulfanilmetil-biciklo[3.1.0]heksana kao mglur 2/3 antagonisti

Country Status (37)

Country Link
US (1) US8629169B2 (sr)
EP (1) EP2640697B1 (sr)
JP (1) JP5877847B2 (sr)
KR (2) KR20150140876A (sr)
CN (1) CN103228625B (sr)
AR (1) AR083845A1 (sr)
AU (1) AU2011329076B2 (sr)
BR (1) BR112013012118A2 (sr)
CA (1) CA2818116C (sr)
CL (1) CL2013001345A1 (sr)
CO (1) CO6761385A2 (sr)
CR (1) CR20130178A (sr)
DK (1) DK2640697T3 (sr)
DO (1) DOP2013000099A (sr)
EA (1) EA021724B1 (sr)
EC (1) ECSP13012629A (sr)
ES (1) ES2650139T3 (sr)
GT (1) GT201300126A (sr)
HR (1) HRP20171649T1 (sr)
HU (1) HUE037457T2 (sr)
IL (1) IL225843A (sr)
LT (1) LT2640697T (sr)
MA (1) MA34663B1 (sr)
MX (1) MX339973B (sr)
NO (1) NO2640697T3 (sr)
NZ (1) NZ609816A (sr)
PE (1) PE20140997A1 (sr)
PH (1) PH12013500991A1 (sr)
PL (1) PL2640697T3 (sr)
PT (1) PT2640697T (sr)
RS (1) RS56535B1 (sr)
SG (1) SG189959A1 (sr)
SI (1) SI2640697T1 (sr)
TW (1) TWI520935B (sr)
UA (1) UA110039C2 (sr)
WO (1) WO2012068067A1 (sr)
ZA (1) ZA201302918B (sr)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR079343A1 (es) * 2009-12-21 2012-01-18 Lilly Co Eli Compuesto de acido 2-amino-4-(4h-1,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxilico, composicion farmaceutica que lo comprende y su uso para preparar un medicamento util para tratar un trastorno psiquiatrico
EP3000814A1 (en) 2014-09-26 2016-03-30 Domain Therapeutics Substituted pyrazoloquinazolinones and pyrroloquinazolinones as allosteric modulators of group II metabotropic glutamate receptors
CN109071418B (zh) 2016-04-18 2022-03-18 大正制药株式会社 氨基酸衍生物的前药
JP2020506895A (ja) 2017-01-17 2020-03-05 ボード オブ レジェンツ, ザ ユニバーシティ オブ テキサス システムBoard Of Regents, The University Of Texas System インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼおよび／またはトリプトファンジオキシゲナーゼの阻害剤として有用な化合物
US11046649B2 (en) 2018-07-17 2021-06-29 Board Of Regents, The University Of Texas System Compounds useful as inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and/or tryptophan dioxygenase

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0669928B2 (ja) 1987-10-06 1994-09-07 宇部興産株式会社 光重合性歯科材料
JP2589812B2 (ja) 1989-07-05 1997-03-12 松下電器産業株式会社 スチームアイロン
ZA969485B (en) 1995-11-16 1998-05-12 Lilly Co Eli Excitatory amino acid receptor antagonists.
BR9611521A (pt) * 1995-11-16 1999-06-29 Lilly Co Eli Antagonistas de receptor de aminoácido excitador
ZA983930B (en) * 1997-05-14 1999-11-08 Lilly Co Eli Excitatory amino acid receptor modulators.
BR9908850A (pt) * 1998-03-17 2000-11-21 Pfizer Prod Inc Biciclo [2.2.1]|heptanos e compostos relacionados
GB9815542D0 (en) 1998-07-17 1998-09-16 Lilly Co Eli Bicyclohexane derivatives
CH694053A5 (de) 1998-09-03 2004-06-30 Hoffmann La Roche Verfahren zur Herstellung von 2-Amino-bicyclo[3.1.0]hexan-2,6-dicarbonsäure-Derivaten.
WO2002068380A1 (en) * 2001-02-22 2002-09-06 Eli Lilly And Company Synthetic excitatory amino acids
PT1459765E (pt) 2001-12-27 2008-10-03 Taisho Pharmaceutical Co Ltd Derivados de 6-fluorobiciclo [3.1.0] hexano
US7371872B2 (en) 2002-06-11 2008-05-13 Eli Lilly And Company Prodrugs of excitatory amino acids
PL1637517T3 (pl) 2003-06-26 2011-04-29 Taisho Pharmaceutical Co Ltd Pochodne estrowe kwasu 2-aminobicyklo[3.1.0]heksano-2,6-dikarboksylowego
WO2005000790A1 (ja) * 2003-06-26 2005-01-06 Taisho Pharmaceutical Co., Ltd. ２－アミノビシクロ[３．１．０]ヘキサン－２，６－ジカルボン酸誘導体
JP2007063129A (ja) 2003-06-26 2007-03-15 Taisho Pharmaceut Co Ltd ２−アミノ−３−アルコキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン誘導体
AR079343A1 (es) * 2009-12-21 2012-01-18 Lilly Co Eli Compuesto de acido 2-amino-4-(4h-1,2,4-triazol-3-ilsulfanil)biciclo[3.1.0]hexano-2,6-dicarboxilico, composicion farmaceutica que lo comprende y su uso para preparar un medicamento util para tratar un trastorno psiquiatrico

Also Published As

Publication number Publication date
LT2640697T (lt) 2018-01-10
CO6761385A2 (es) 2013-09-30
IL225843A (en) 2015-05-31
EA021724B1 (ru) 2015-08-31
MA34663B1 (fr) 2013-11-02
US20120129902A1 (en) 2012-05-24
CL2013001345A1 (es) 2013-11-15
DOP2013000099A (es) 2013-08-15
CA2818116A1 (en) 2012-05-24
SG189959A1 (en) 2013-06-28
ES2650139T3 (es) 2018-01-17
WO2012068067A1 (en) 2012-05-24
KR20150140876A (ko) 2015-12-16
PE20140997A1 (es) 2014-08-25
JP5877847B2 (ja) 2016-03-08
GT201300126A (es) 2014-02-27
NO2640697T3 (sr) 2018-02-17
PH12013500991A1 (en) 2015-02-11
PL2640697T3 (pl) 2018-02-28
IL225843A0 (en) 2013-06-27
JP2014505664A (ja) 2014-03-06
PT2640697T (pt) 2017-12-11
ECSP13012629A (es) 2013-07-31
HRP20171649T1 (hr) 2017-12-15
MX2013005622A (es) 2013-07-05
US8629169B2 (en) 2014-01-14
TWI520935B (zh) 2016-02-11
ZA201302918B (en) 2014-10-29
EP2640697B1 (en) 2017-09-20
HUE037457T2 (hu) 2018-08-28
MX339973B (es) 2016-06-20
CR20130178A (es) 2013-07-09
SI2640697T1 (sl) 2017-11-30
AR083845A1 (es) 2013-03-27
AU2011329076B2 (en) 2015-03-12
EP2640697A1 (en) 2013-09-25
EA201390498A1 (ru) 2013-07-30
CA2818116C (en) 2016-04-05
BR112013012118A2 (pt) 2016-09-27
DK2640697T3 (en) 2017-10-23
CN103228625A (zh) 2013-07-31
CN103228625B (zh) 2014-12-03
KR20130101094A (ko) 2013-09-12
NZ609816A (en) 2014-12-24
AU2011329076A1 (en) 2013-05-02
TW201307271A (zh) 2013-02-16
UA110039C2 (xx) 2015-11-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6580598B2 (ja) Ｃｘｃｒ２阻害剤としての１−（シクロペント−２−エン−１−イル）−３−（２−ヒドロキシ−３−（アリールスルホニル）フェニル）尿素誘導体
UA125523C2 (uk) Інгібітори magl
RS56535B1 (sr) Jedinjenja 4-supstituisanog-3-fenilsulfanilmetil-biciklo[3.1.0]heksana kao mglur 2/3 antagonisti
WO2007017093A1 (en) Substituted 2-benzyloxy-benzoic acid amide derivatives
KR20140051355A (ko) 이중 활성 H1 역 효능제/5-HT2A 길항제로서의 (티에노[2,3-b][1,5]벤족사제핀-4-일)피페라진-1-일 화합물
US9056844B2 (en) 4-substituted-3-benzyloxy-bicyclo[3.1.0]hexane compounds as mGluR 2/3 antagonists
KR101582429B1 (ko) 이중 활성 H1 역 효능제/5-HT2A 길항제로서의 (티에노[2,3-b][1,5]벤족사제핀-4-일)피페라진-1-일 화합물
EP1836177A2 (en) Vitamin d receptor modulators
TWI603950B (zh) 截短側耳素衍生物及其用途
JP5755821B2 (ja) Ｍｇｌｕ２／３アゴニスト