RS57190B1

RS57190B1 - Derivat hidantoina

Info

Publication number: RS57190B1
Application number: RS20180517A
Authority: RS
Inventors: Yoshikazu Nishimura; Toru Esaki; Tatsuya Tamura
Original assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2012-12-10
Filing date: 2013-12-10
Publication date: 2018-07-31
Also published as: TWI615394B; MA38250B1; US9428505B2; EP2930176B1; AU2013358167B2; ZA201503597B; IL238277A0; WO2014092061A1; BR112015012411A2; PL2930176T3; AU2013358167A1; CL2017000069A1; PT2930176T; HK1209735A1; CA2892621C; HRP20180647T1; CA2892621A1; MA38250A1; SA515360528B1; PH12015501146B1

Description

Opis

Polje tehnike

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutske preparate koji kao aktivni sastojak uključuju derivat hidantoina koji ima veliku metaboličku stabilnost i ispoljava potentni efekat sličan PTH.

Poreklo tehnike

[0002] Paratiroidni hormon (PTH) se vezuje za PTH1 receptor (PTH1R), koji je G proteinudvojeni receptor (GPCR), za aktivaciju proteina a nakon toga dovodi do aktivacije najmanje jedne kaskade signalizacije kao što je kaskada ciklična AMP (cAMP) / protein kinaza A. PTH je poznat kao hormon koji deluje na određene ćelije u bubrezima i kostima za regulaciju homeostaza kalcijuma (Ca) i fosfora (P) (Ne-patentni dokument 1). Nivo koncentracije Ca u serumu se uglavnom održava pomoću PTH direktnim ili indirektnim delovanjem na gastrointestinalni trakt, kosti i bubrege. PTH potpomaže resorpciju Ca iz bubrežnih tubusa i na taj način zaustavlja izlučivanje Ca iz organizma u spoljnu sredinu. Takođe povećava sintezu enzima koji konvertuju vitamin D u aktivni vitamin D u bubrezima i na taj način učestvuje u omogućavanju apsorpcije Ca posredstvom aktivnog vitamina D iz gastrointestinalnog trakta. Osim toga, PTH pojačava diferencijaciju osteoklasta indirektno preko osteoblasta i potpomaže oslobađanje Ca iz kostiju. Smatra se da se ova delovanja PTH uglavnom izvode preko podizanja vrednosti cikličnog adenozin 3’,5’-monofosfata (cAMP) i/ili aktivacijom fosfolipaze C (PLC) do čega dolazi kada se PTH veže za PTH1R.

[0003] Kod ljudi, PTH preparati [PTH (1-34) i PTH (1-84)] imaju snažan osteogenični efekat i indukuju značajno povećanje mineralne gustine kostiju (BMD) i čvrstine kostiju. U savremenoj terapiji, najveći broj lekova za osteoporozu raspoloživih za ljude su inhibitori resorpcije kostiju a jedini tip osteogeničnog leka koji aktivno povećava BMD su preparati PTH. Smatra se da je PTH preparat jedan od najefikasnijih tretmana osteoporoze (Ne-patentni dokument 2); međutim, kako je to peptid, potrebno je da se primeni invazivnim postupkom. Prema tome, postoji očekivanje za produkciju farmaceutskog sredstva koje ima efekte slične PTH a koje može da se primeni neinvazivno.

[0004] Hipoparatiroidizam je metabolička bolest koja se ispoljava hipokalcemijom i hiperfosfatemijom izazvanim insuficijencijom PTH izlučenim iz paratiroidne žlezde i ima razlčite prateće simptome. Preparati aktivnog vitamina D i Ca sredstva se koriste za tretman hipoparatiroidizma, međutim, kako regulatorni mehanizam za održavanje PTH ne funkcioniše, ne postiže se značajan terapeutski efekat. Osim toga, kako formulacije aktivnog vitamina D povećavaju izlučivanje Ca urinom, dugotrajna terapija može da dovede do povećanog rizika od nefropatije. Za rešavanje ovih problema postoji stalno istraživanje za zamenu terapije koja koristi preparate PTH za ovu bolest; i činjeni su pokušaji da se sprovede više invazivnih primena po danu ili kontinurana primena pomoću pumpe kako bi se postigla dovoljna efikasnost (Ne-patentni dokument 3). Prema tome, za tretman hipoparatiroidizma, poželjno je stvaranje farmaceutskog sredsva koje deluje kao PTH a koje takođe može da se primeni ne-invazivno.

[0005] Takođe, farmaceutsko sredstvo koje ima efekte slične PTH a koje takođe može da se primeni ne-invazivno je potrebno za tretman bolesti kao što su frakture, adinamička bolest kostiju, ahondroplazija, hipohondroplazija, osteomalacija, osteoartritis, artritis, trombocitopenija, hiperfosfatemija i tumorske kalcinoze.

[0006] U ovakvim okolnostima, naši pronalazači su ranije podneli patentnu prijavu na osnovu svog otkrića da su jedinjenje predstavljeno formulom (A):

[Patentni dokument 1 može da se odnosi na W, X, Y, m, n, R1, R2, R33i R34u formuli] i njegove farmaceutski prihvatljive soli, korisni kao jedinjenja koja imaju efekte kao PTH, ili još preciznije, kao agonisti PTH1R i korisni su za prevenciju i/ili tretman osteoporoze, frakture, osteomalacije, artritisa, trombocitopenije, hipoparatiroidizma, hiperfosfatemije ili tumorske kalcinoze, ili za mobilizaciju matičnih ćelija (Patentni dokument 1).

[0007] Za produkciju farmaceutskih sredstava koja imaju visoku kliničku vrednosti i koja mogu da se primene invazivno, potrebno je da se pored njegovog direktnog delovanja na cilj, razmatra in vivo kinetika kao što su apsorpcija, distribucija, metabolizam i izlučivanje leka. Posebno za omogućavanje oralne primene, poželjno je da se ima farmaceutsko sredstvo koje poseduje efekte kao PTH kao što su velika metabolička stabilnost u odnosu na mikrozome humane jetre i velika sposobnost za produkciju cAMP posredstvom PTHIR kod ljudi.

[0008] Za obezbeđivanje farmaceutskog sredstva koje može da se primeni oralno na ljudima, generalno je potreban postupak potvrđivanja efekata oralne primene in vivo testiranjem koji uključuje korišćenje životinjskog modela. Na primer, tiroparatiroidektomizirani (TPTX) pacov je poznat kao životinjski model za hipoparatiroidizam. Kako bi se otkrilo terapeutsko sredstvo koje ima jake efekte kao PTH i veliku metaboličku stabilnost i da deluje na hipoparatiroidizam kada se primeni oralno, potrebno je da se koristi postupak za pronalaženje jedinjenja koje deluje na PTH1R pacova i koje je stabilno na metaboličke enzime pacova a nakon toga da se ispita njegovo delovanje kada se oralno primeni na TPTX modelu pacova.

[0009] U postojećoj terapiji hipoparatiroidizma, opseg terapeutskog cilja za koncentraciju serumskog Ca je podešen na malo niži nivo od donje granice normalnog opsega od 7.6 do 8.8 mg/dL (Ne-patentni dokument 4). Kako normalni opseg za koncentraciju Ca u serumu pacova ima iste vrednosti kao za ljude od 10 mg/dL ili približno, za verifikaciju terapeutskog efekta je važno da se dobije koncentracija serumskog Ca u modelu bolesti kod pacova u opsegu od ciljanog terapeutskog opsega kod ljudi (7.6-8.8 mg/dL) do donje granice hiperkalcemije kod ljudi (približno 11.2 mg/dL).

[Dokumenta prethodnog stanja tehnike]

[Patentna dokumenta]

[0010] [Patentni dokument 1] WO 2010/126030

[Ne-patentna dokumenta]

[0011]

[Ne-patentni dokument 1] Kronenberg, H.M., i saradnici, In Handbook of Experimental Pharmacology, Mundy, G.R. i Martin, T.J., (eds), pp.185-201, Springer-Verlag, Heidelberg (1993)

[Ne-patentni dokument 2] Tashjian i Gagel, J. Bone Miner. Res.21:354-365 (2006) [Ne-patentni dokument 3] Rejnmark i saradnici, Osteoporosis Int. Published Online: 27 November 2012 [Ne-patentni dokument 4] Winer KK i saradnici, J. Clin. Endocrinol. Metab. 88(9):4214-4220 (2003)

Kratak sadržaj pronalaska

[Problemi koje patent treba da reši]

[0012] Predmet ovog pronalaska je da se otkriju jedinjenja sa jakim efektima sličnim PTH, visoke metaboličke stabilnosti i da se obezbede farmaceutske kompozicije koje uključuju takva jedinjenja, da se obezbedi tretman stanja koja mogu da se tretiraju delovanjima sličnim PTH, kao što je hipoparatiroidizam.

[Načini rešvanja problema]

[0013] Pod ovakvim okolnostima, naši pronalazači su nastavili istraživanja i otkrili da novo otkriveni derivati hidantoina iz ovog pronalaska ispoljavaju jaku sposobnost produkcije cAMP u ćelijama uz ekspresiju humanog PTH1R i da imaju veliku stabilnost u mikrozomima humane jetre. Naši pronalazači su takođe otkrili da jedinjenja iz ovog pronalaska ispoljavaju veliku sposobnost produkcije cAMP u ćelijama uz ekspresiju PTH1R kod pacova i da imaju veliku stabilnost u hepatocitima pacova. Pored toga, u modelima TPTX pacova podvrgnutim oralnoj primeni, kao novost je otkriveno da doza od 30 mg/kg obnavlja koncentraciju serumskog Ca do ciljanog terapeutskog opsega od 7.6-8.8 mg/dL. Rezultati dobijeni iz ovog životinjskog modela sugerišu da su jedinjenja predstavljena formulom (1), koja ispoljavaju jak efekat na humani PTH1R i veliku stabilnost u mikrozomima humane jetre, korisni kao terapeutska sredstva za hipoparatiroidizam.

[0014] Ovaj pronalazak se odnosi na sledeće:

[1] Jedinjenje predstavljeno niže datom opštom formulom (1) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:

gde su R1 i R2 nezavisno:

1) atom vodonika;

2) atom halogena;

3) alkil grupa koja uključuje jedan ili dva ugljenika koji mogu da budu supstituisani sa jednim do pet atoma fluora; ili

4) alkoksi grupa koja uključuje jedan ili dva ugljenika koji mogu da budu supstituisani sa jednim do pet atoma fluora, pod uslovom da R1 i R2 nisu oba vodonik; ili su R1 i R2 međusobno vezani da formiraju grupu predstavljenu niže datom formulom:

(gde svaka * pokazuje položaj vezivanja sa fenil delom); i

R3 i R4 su nezavisno metil grupa koja može da bude supstituisana sa jednim do tri atoma fluora; ili

R3 i R4, zajedno sa vezanim atomom ugljenika, formiraju tri- do šest-člani karbociklični prsten (pri čemu, jedan od atoma ugljenika koji formira prsten može da bude zamenjen sa atomom kiseonika, atomom sumpora, ili metil-supstituisanim ili nesupstituisanim atomom azota).

U ovom pronalasku, jedinjenje u kome je kombinacija R1 i R2 trifluorometil grupa i atom vodonika a gde R3 i R4, zajedno sa vezanim atomom ugljenika, formiraju ciklopentil prsten, može da bude isključeno iz prethodno navedenih jedinjenja predstavljenih formulom (1).

[2] Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so [1], gde su R1 i R2 izabrani od niže datih kombinacija:

1) R1 je atom vodonika ili atom halogena a R2 je atom vodonika, trifluorometil grupa, ili trifluorometoksi grupa (pod uslovom da R1 i R2 nisu oba atomi vodonika);

2) R1 je trifluorometil grupa ili trifluorometoksi grupa a R2 je atom vodonika ili atom halogena;

3) R1 i R2 su međusobno vezani da formiraju grupu predstavljenu niže datom formulom:

(gde svaka * pokazuje položaj vezivanja sa fenil delom); i

R3 i R4 su metil grupe; ili

R3 i R4, zajedno sa vezanim atomom ugljenika, formiraju prsten izabran od niže datih:

(gde * prikazuje položaj vezivanja sa imidazolidin-2,4-dion delom).

[3] Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so [1], gde su R1 i R2 izabrani od niže datih kombinacija:

1) R1 je trifluorometoksi grupa a R2 je atom fluora;

2) R1 je atom broma a R2 je atom vodonika;

3) R1 je trifluorometoksi grupa a R2 je atom fluora;

4) R1 je atom fluora a R2 je trifluorometoksi grupa;

5) R1 je trifluorometil grupa a R2 je atom vodonika;

6) R1 je atom vodonika a R2 je trifluorometoksi grupa;

7) R1 i R2 su međusobno vezani da formiraju grupu predstavljenu niže datom formulom:

(gde svaka * pokazuje položaj vezivanja sa fenil delom); i

R3 i R4 su metil grupe; ili

(gde * prikazuje položaj vezivanja sa imidazolidin-2,4-dion delom).

[4] Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so [1], gde su R3 i R4 metil grupe.

[5] Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so [1], gde R3 i R4, zajedno sa vezanim atomom ugljenika, formiraju prsten izabran od niže datih:

(gde * prikazuje položaj vezivanja sa imidazolidin-2,4-dion delom).

[6] Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so [1], gde je jedinjenje izabrano iz grupe koja sadrži:

1-(4-(2-((2-(4-fluoro-3-(trifluorometoksi)fenil)-4-okso-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion;

1-(4-(2-((2-(3-bromofenil)-4-okso-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion;

1-(4-(2-((2-(4-fluoro-3-(trifluorometil)fenil)-4-okso-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion;

1-(4-(2-((2-(4-fluoro-3-(trifluorometil)fenil)-4-okso-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion;

1-(4-(2-((2-(3-fluoro-4-(trifluorometoksi)fenil)-4-okso-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion;

1-(4-(2-((2-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioksol-5-il)-4-okso-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion;

1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion;

1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion);

1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3-diazaspiro[4.4]nonan-2,4-dion;

1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-8-metil-1,3,8-triazaspiro[4.5]dekan-2,4-dion;

5-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-2-oksa-5,7-diazaspiro[3.4]oktan-6,8-dion; iand

4-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-4,6-diazaspiro[2.4]heptan-5,7-dion.

[7] Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so [1], gde je jedinjenje 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il) sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion.

[8] Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so [1], gde je jedinjenje 1-(3,5-dimetil4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion.

[9] Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so [1], gde je jedinjenje 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3-diazaspiro[4.4]nonan-2,4-dion.

[10] Farmaceutska kompozicija, koja kao aktivni sastojak uključuje jedinjenje ili njegovu farmakološki prihvatljivu so iz bilo kog od [1] do [9].

[11] Farmaceutska kompozicija iz [10], koja je za upotrebu u oralnoj primeni.

[12] Farmaceutska kompozicija za aktivaciju intracelularnog cAMP odgovora, koja kao aktivni sastojak uključuje jedinjenje ili njegovu farmakološki prihvatljivu so iz bilo kog od [1] do [9].

[13] Sredstvo mobilizacije matičnih ćelija ili sredstvo za prevenciju ili lečenje osteoporoze, frakture, adinamičke bolesti kostiju, ahondroplazije, hipohondroplazije, osteomalacije, osteoartritisa, artritisa, trombocitopenije, hipoparatiroidizma, hiperfosfatemije ili tumoralne kalcinoze, koje kao aktivni sastojak uključuje jedinjenje ili njegovu farmakološki prihvatljivu so iz bilo kog od [1] do [9].

[14] Jedinjenje formule (I) za upotrebu u postupku za prevenciju ili tretman osteoporoze, frakture, adinamičke bolesti kostiju, ahondroplazije, hipohondroplazije, osteomalacije, osteoartritisa, artritisa, trombocitopenije, hipoparatiroidizma, hiperfosfatemije ili tumoralne kalcinoze ili mobilizaciju matičnih ćelija, pri čemu postupak uključuje primenu farmaceutski efektivne količine kompozicije koja uključuje jedinjenje ili njegovu farmakološki prihvatljivu so iz bilo kog od [1] do [9] na pacijentu kome je potrebna prevencija ili tretman bolesti ili mobilizacija matičnih ćelija.

[15] Upotreba jedinjenja ili njegove farmakološki prihvatljive soli iz bilo kog od [1] do [9] za produkciju sredstva za mobilizaciju matičnih ćelija ili sredstva za prevenciju ili lečenje osteoporoze, frakture, adinamičke bolesti kostiju, ahondroplazije, hipohondroplazije, osteomalacije, osteoartritisa, artritisa, trombocitopenije, hipoparatiroidizma, hiperfosfatemije ili tumoralne kalcinoze.

[16] Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so iz bilo kog od [1] do [9] za tretman ili prevenciju osteoporoze, frakture, adinamičke bolesti kostiju, ahondroplazije, hipohondroplazije, osteomalacije, osteoartritisa, artritisa, trombocitopenije, hipoparatiroidizma, hiperfosfatemije ili tumoralne kalcinoze, ili mobilizaciju matičnih ćelija. Takođe su opisani postupci za lečenje patoloških stanja koja mogu da se tretiraju delovanjem sličnim PTH kao što je hipoparatiroidizam, primenom jedinjenja formule (1) ili njegove soli.

[Efekti pronalaska]

[0015] Ovaj pronalazak obezeđuje derivate hidantoina sa jakim efektima sličnim PTH i visokom metaboličkom stabilnošću. Derivati hidantoina omogućavaju tretman patoloških stanja izazvanih delovanjem sličnim PTH, kao što je hipoparatiroidizam.

Kratak opis slika

[0016] Slika 1 opisuje grafik koji pokazuje prosečnu promenu nivoa koncentracije serumskog Ca za svako jedinjenje do 24 sata nakon primene, pri čemu je jedinjenje oralno primenjeno u dozi od 30 mg/kg na modelu TPTX pacova.

[Način sprovođenja pronalaska]

1

[0017] Ovaj pronalazak se odnosi na derivate hidantoina i njihovu upotrebu. Naši pronalazači su sintetisali jedinjenje predstavljeno prethodno datom formulom (1) ili njegovu farmakološki prihvatljivu so po prvi put i našli su da je jedinjenje ili njegova so jedinjenje koje ima jak efekat sličan paratoroidnom hormonu (PTH) i veliku metaboličku stabilnost.

[0018] Ovde se "alkil" odnosi na monovalentnu grupu dobijenu uklanjanjem bilo kog atoma vodonika iz alifatičnog ugljovodonika i obuhvata podgrupe struktura hidrokarbil ili hidrokarbon grupa koje ne sadrže heteroatom ili nezasićenu ugljenik-ugljenik vezu a sadrže vodonik i atome ugljenika u strukturi. Primeri alkil grupe uključuju ravne ili račvaste strukture. Alkil grupa je preferirano alkil grupa koja uključuje jedan ili dva atoma ugljenika. Alkil grupa je posebno, na primer, metil grupa ili etil grupa, a preferirano je metil grupa.

[0019] Kako se ovde koristi, naziv "alkoksi" se odnosi na oksi grupu za koju je vezana prethodno definisana "alkil" grupa i preferirano se odnosi na alkoksi grupu koja uključuje jedan ili dva atoma ugljenika. Specifični primeri uključuju metoksi i etoksi grupe a preferirani primer je metoksi grupa.

[0020] "B opciono supstituisan sa A" ovde označava da bilo koji atom(i) vodonika u B može da bude supstituisan sa bilo kojim brojem A.

[0021] U ovom pronalasku, broj supstituenata nije ograničen izuzev ako nije drugačije navedeno. Na primer, broj supstituenata može da bude 1 do 5, 1 do 4, 1 do 3, 1 do 2, ili 1.

[0022] "Atom halogena" se ovde odnosi na atom fluora, atom hlora, atom broma ili atom joda.

[0023] Ovde, simbol "*" u hemijskoj formuli se odnosi na položaj vezivanja.

[0024] Jedinjenja iz ovog pronalaska predstavljena formulom (1) imaju jak efekat sličan PTH i veliku metaboličku stabilnost.

[0025] "Efekat sličan PTH" se ovde odnosi na aktivnost generisanja intracelularnog cAMP (cAMP: ciklični adenozin monofosfat) delovanjem na PTH receptor ili delovanjem na put transdukcije signala kroz PTH receptor.

[0026] U ovom pronalasku, kada stoji "jak efekat sličan PTH" ili "efekat sličan PTH je jak" može da se potvrdi merenjem aktivnosti signalizacije cAMP ispitivanjem signalizacije cAMP, na primer, u skladu sa postupkom opisanim u J. Bone. Miner. Res. 14:11-20, 1999. Posebno, na primer, u skladu sa postupkom opisanim u Test Primeru 1, količina produkovanog cAMP u ćelijama koja dovodi do ekspresije humanog PTH1R se određuje komercijalno raspoloživim cAMP EIA kitom (na primer, Biotrack cAMP EIA sistemom, GE health care) za merenje koncentracije svakog jedinjenja na 20% aktivnosti signalizacije cAMP (EC20) ili njihove koncentracije na 50% aktivnosti signalizacije cAMP (EC50), sa aktivnošću signalizacije cAMP dobijene nakon primene 100 nM humanog PTH (1-34) definisanog kao 100%. U ovom pronalasku, za "jak efekat sličan PTH" ili "efekat sličan PTH je jak", na primer, vrednost EC20 (µM) mereno prethodno navedenim postupkom, je preferirano 5.0 ili manja, još poželjnije 3.0 ili manja a čak još poželjnije 2.0 ili manja. Za EC50, vrednost (µM) mereno prethodno navedenim postupkom, je na primer, preferirano 25.0 ili manja, još poželjnije 15.0 ili manja a čak još poželjnije 10.0 ili manja.

[0027] Kada je "visoka metabolička stabilnost" ili kada je "metabolička stabilnost je velika" to može da se potvrdi opštim postupcima merenja. Na primer, za potvrdu mogu da se koriste ćelije jetre, ćelije tankog creva, mikrozomi jetre, mikrozomi tankog creva, S9 jetre i slično. Posebno, na primer, stabilnost jedinjenja u mikrozomima jetre može da se potvrdi merenjima u skladu sa opisom u T. Kronbach i saradnici (Oxidation of midazolam and triazolam by human liver cytochrome P450IIIA4. Mol. Pharmacol, 1989, 36(1), 89-96). Još preciznije, stabilnost može da se potvrdi po postupku opisanom u Test Primeru 3. U ovom pronalasku, "visoka metabolička stabilnost" ili "metabolička stabilnost je velika" se smatra kada je vrednost klirensa (µL/min/mg) u testu metaboličke stabilnosti koristeći mikrozome humane jetre kako je opisano u prethodno navedenom Test Primeru, preferirano 60 ili manja, još poželjnije 40 ili manja, a čak još poželjnije 35 ili manja. Posebno, visoka metabolička stabilnost može da se dobije u prethodno pomenutoj formuli (1) izuzev kada je kombinacija R1 i R2 trifluorometil grupa i atom vodonika a R3 i R4, zajedno sa vezanim atomom ugljenika, formiraju ciklopentil prsten.

[0028] Jedinjenja u skladu sa ovim pronalaskom, bilo da su u slobodnim oblicima ili kao farmakološki prihvatljive soli, su uključena u ovaj pronalazak. Primeri ovih "soli" uključuju soli neorganskih kiselina, organskih kiselina, soli neorganskih baza, soli organskih baza i soli kiselih ili baznih amino kiselina.

[0029] U preferirane primere soli neorganskih kiselina spadaju hidrohloridi, hidrobromidi, sulfati, nitrati i fosfati. U preferirane primere soli organskih kiselina spadaju acetati, sukcinati, fumarati, maleati, tartarati, citrati, laktati, stearati, benzoati, metansulfonati, benzensulfonati i p-toluensulfonati.

[0030] U preferirane primere soli neorganskih baza spadaju soli alkalnih metala kao što su soli natrijuma i soli kalijuma, soli zemnoalkalnih metala kao što su soli kalcijuma i soli magnezijuma, soli aluminijuma i soli amonijuma. U preferirane primere soli organskih baza spadaju soli dietilamina, soli dietanolamina, soli meglumina i soli N,N-dibenziletilendiamina.

[0031] U preferirane primere soli kiselih amino kiselina spadaju aspartati i glutamati. U preferirane primere soli baznih amino kiselina spadaju soli arginina, soli lizina i soli ornitina.

[0032] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da apsorbuju vlagu, imaju adsorbovanu vodu ili formiraju hidrate kada se ostave na vazduhu. Ovi hidrati su takođe uključeni u soli ovog pronalaska.

[0033] Osim toga, jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da apsorbuju neke druge rastvarače da formiraju solvate. Ovakve soli su takođe obuhvaćene ovim pronalaskom kao soli jedinjenja formule (1).

[0034] Isto tako, strukturna formula jedinjenja može da predstavlja određeni izomer u smislu praktičnosti. Međutim, jedinjenja iz ovog pronalaska obuhvataju sve izomere kao što su geometrijski izomeri, optički izomeri na bazi asimetričnih ugljenika, stereoizomeri i tautomeri, kao i smeše ovih izomera koje se javljaju zbog struktura jedinjenja bez ograničenja na opisane formule u smislu praktičnosti i mogu da budu ili jedan od izomera ili njihova smeša. Prema tome, jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da imaju asimetrični atom ugljenika u molekuli i mogu da budu prisutna kao optički aktivni oblici ili racemati, ali ovaj pronalazak nije ograničen ni na jedan od njih i obuhvata oba.

[0035] Ovaj pronalazak uključuje sve izotope jedinjenja predstavljenih formulom (1). U izotopima jedinjenja iz ovog pronalaska, najmanje jedan atom je zamenjen sa atomom koji ima isti atomski broj (broj protona) ali ima različit maseni broj (zbir broja protona i broja neutrona). Primeri izotopa prisutnih u jedinjenjima iz ovog pronalaska uključuju atom vodonika, atom ugljenika, atom azota, atom kiseonika, atom fosfora, atom sumpora, atom fluora i atom hlora, uključujući<2>H,<3>H,<13>C,<14>C,<15>N,<17>O,<18>O,<31>P,<32>P,<35>S,<18>F i<36>Cl, tim redom. Posebno, radioizotopi koji se raspadaju emisijom radioaktivnosti kao što su<3>H i<14>C su korisni u testovima distribucije u tkivima organizma za lekove ili jedinjenja. Stabilni izotopi se ne raspadaju, skoro su jednaki u količini i ne emituju radioaktivnost i zbog toga mogu bezbedno da se koriste. Izotopi jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da se konvertuju u skladu sa uobiajenim postupcima supstitucijom reagensa koji sadrži odgovarajući izotop sa reagensom korišćenim za sinteze.

[0036] Jedinjenja u skladu sa ovim pronalaskom mogu da ispolje kristalni polimorfizam, ali nisu posebno ograničena na bilo koji od njih, več mogu da budu u bilo kom od ovih kristalnih oblika ili da egzistiraju kao smeša dva ili više kristalnih oblika.

[0037] Jedinjenja predstavljena gore datom formulom (1) u skladu sa ovim pronalaskom su preferirano kako sledi.

1

[0038] U formuli, R1 i R2 su izabrani od niže datih kombinacija:

1) R1 je atom vodonika ili atom halogena a R2 je atom vodonika, trifluorometil grupa ili trifluorometoksi grupa (pod uslovom da R1 i R2 nisu oba atomi vodonika);

(pri čemu, svaka * pokazuje položaj vezivanja sa fenil delom); i

R3 i R4 su metil grupe; ili

(gde * prikazuje položaj vezivanja sa imidazolidin-2,4-dion delom).

[0039] Još poželjnija jedinjenja predstavljena gore datom formulom (1) u skladu sa ovim pronalaskom su kako sledi.

[0040] U formuli, R1 i R2 su izabrani od niže datih kombinacija:

1) R1 je trifluorometoksi grupa a R2 je atom fluora;

2) R1 je atom broma a R2 je atom vodonika;

3) R1 je trifluorometoksi grupa a R2 je atom fluora;

4) R1 je atom fluora a R2 je trifluorometoksi grupa;

5) R1 je trifluorometil grupa a R2 je atom vodonika;

6) R1 je atom vodonika a R2 je trifluorometoksi grupa;

(gde svaka * pokazuje položaj vezivanja sa fenil delom); i

R3 i R4 su metil grupe; ili

(gde * prikazuje položaj vezivanja sa imidazolidin-2,4-dion delom).

Dalje preferirana jedinjenja predstavljena gore datom formulom (1) u skladu sa ovim pronalaskom su izabrana iz grupe koja sadrži sledeća jedinjenja ili njihovu farmakološki prihvatljivu so.

Jedinjenje 1:

1-(4-(2-((2-(4-fluoro-3-(trifluorometoksi)fenil)-4-okso-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion;

Jedinjenje 2:

1-(4-(2-((2-(3-bromofenil)-4-okso-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5dimetilimidazolidin-2,4-dion;

Jedinjenje 3:

Jedinjenje 4:

1-(4-(2-((2-(3-fluoro-4-(trifluorometoksi)fenil)-4-okso-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion;

Jedinjenje 5:

1-(4-(2-((2-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioksol-5-il)-4-okso-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion;

Jedinjenje 6:

1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il) sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion;

Jedinjenje 7:

1

Jedinjenje 8:

Jedinjenje 9:

Jedinjenje 10:

5-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-2-oksa-5,7-diazaspiro[3.4]oktan-6,8-dion; i

Jedinjenje 11:

[0041] Od prethodno navedenih jedinjenja 1 do 11, najpoželjnija su jedinjenja 6, 7 i 8.

[0042] Ova jedinjenja predstavljena gore datom formulom (1) ili njihove farmakološki prihvatljive soli u skladu sa ovim pronalaskom su korisna kao jedinjenja koja imaju efekat sličan PTH, preferirano kao agonisti PTH1R i korisna su za prevenciju i/ili tretman osteoporoze, frakture, adinamične bolesti kostiju, ahondronplazije, hipohondroplazije, osteomalacije, osteoartritisa, artritisa, trombocitopenije, hipoparatiroidizma, hiperfosfatemije, tumoralne kalcinoze ili slično ili za mobilizaciju matičnih ćelija.

[0043] Jedinjenja ili njihove soli u skladu sa ovim pronalaskom mogu da se formulišu uobičajenim postupcima u tablete, praškove, fine granule, granule, obložene tablete, kapsule, sirupe, troheje, preparate za inhalaciju, supozitorije, injekcije, masti, oftalmičke masti, oftalmičke preparate, preparate za nos, preparate za uši, kataplazme, losione i slično.

Uobičajeni ekscipijenti, vezivna sredstva, lubrikansi, sredstva za bojenje, korektivi i, ukoliko je potrebno, stabilizatori, emulgatori, pojačivači apsorpcije, surfaktanti, podešivači pH, konzervansi, antioksidansi i slično mogu da se koriste u formulaciji i izmešaju se sastojcima koji se uobičajeno koriste kao sirovi materijal za farmaceutske preparate i formulišu se uobičajenim postupcima.

[0044] Na primer, oralni preparati se proizvode dodavanjem, u jedinjenje ili njegovu farmakološki prihvatljivu so u skladu sa ovim pronalaskom, ekscipijenta i, ukoliko je potrebno, vezivnog sredstva, sredstva za raspadanje, lubrikansa, sredstva za bojenje, korektiva

1

i slično, a nakon toga se uobičajenim postupkom formulišu u prašak, fine granule, granule, tablete, obložene tablete, kapsule i slično.

[0045] Primeri ovih sastojaka uključuju životinjska i biljna ulja kao što su sojino ulje, loj govečeta i sintetički gliceridi; ugljovodonike kao što su tečni parafin, skvalan i čvrsti parafin; estarska ulja kao što su oktildodecil miristat i izopropil miristat; više alkohole kao što su cetostearil alkohol i behenil alkohol; silikonske smole; silikonsko ulje; surfaktante kao što su polioksietilen estar masnih kiselina, sorbitan estar masnih kiselina, glicerol estar masnih kiselina, polioksietilen sorbitan estar masnih kiselina, polioksietilen hidrogenizovano ricinusovo ulje i polioksietilen-polioksipropilen blok kopolimer; polimere rastvorljive u vodi kao što su hidroksietilceluloza, poliakrilne kiseline, karboksivinil polimer, polietilen glikol, polivinilpirolidon i metilceluloza; niže alkohole kao što su etanol i izopropanol; polihidrične alkohole kao što su glicerol, propilen glikol, dipropilen glikol i sorbitol; šećere kao što su glukoza i saharoza; neorganske praškove kao što su silicijum anhidrid, magnezijum aluminijum silikat i aluminijum silikat; i prečišćenu vodu.

[0046] U primere ekscipijenata spadaju laktoza, kukuruzni skrob, šećer u prahu, glukoza, manitol, sorbitol, mikrokristalna celuloza i silicijum dioksid.

[0047] U primere vezivnih sredstava spadaju polivinil alkohol, polivinil etar, metilceluloza, etilceluloza, akacija, tragakanta, želatin, šelak, hidroksipropilmetilceluloza, hidroksipropilceluloza, polivinilpirolidon, polipropilen glikol-polioksietilen blok polimer i meglumin.

[0048] U primere sredstava za raspadanje spadaju skrob, agar, želatin prah, mikrokristalna celuloza, kalcijum karbonat, natrijum bikarbonat, kalcijum citrat, dekstrin, pektin i karboksimetilceluloza kalcijum.

[0049] U primere lubrikansa spadaju magnezijum stearat, talk, polietilen glikol, silicijum i hidrogenizovano biljno ulje.

[0050] Korišćena sredstva za bojenje su sredstva odobrena kao aditivi za farmaceutske preparate. Kao korektivi se koriste kakao prah, pepermint kamfor, empazam, ulje mente, borneola, mlevena kora cimeta i slično.

[0051] Naravno, ove tablete i granule mogu da budu obložene šećerom ili nekim drugim odgovarajućim omotačem, ukoliko je to potrebno. Tečni preparati kao što su sirupi i injektabilni preparati se proizvode dodavanjem sredstva za podešavanje pH, solubilizatora, sredstva za podešavanje toničnosti i slično i kada je potrebno, sredstva za solubilizaciju

1

stabilizatora i slično u jedinjenje ili njegovu farmakološki prihvatljivu so u skladu sa ovim pronalaskom i formulisanjem uobičajenim postupkom.

[0052] Postupak za proizvodnju preparata za spoljašnju upotrebu nije ograničen i ti preparati mogu da se proizvedu uobičajenim postupcima. Preciznije, različiti sirovi materijali koji se uobičajeno koriste za farmaceutske preparate, kvazi lekove, kozmetičke preparate i slično, mogu da se koriste kao osnovni materijali za formulaciju. Specifični primeri korišćenih baznih materijala uključuju sirove materijale kao što su životinjska i biljna ulja, mineralna ulja, estarska ulja, voskovi, viši alkoholi, masne kiseline, silikonsko ulje, surfaktanti, fosfolipidi, alkoholi, polihidratni alkoholi, polimeri rastvorljivi u vodi, minerali gline i prečišćena voda. Osim toga, ukoliko je potrebno, mogu da se dodaju podešivači pH, antioksidansi, helatna sredstva, konzervansi i fungicidi, sredstva za bojenje, korigensi ukusa i slično. Bazni materijali za preparate za spoljašnju upotrebu u skladu sa ovim pronalaskom nisu ograničeni na ove materijale.

[0053] Sastojci kao što su sastojci koji imaju efekat indukcije diferencijacije, promoteri krvotoka, baktericidi, anti-inflamatorna sredstva, aktivatori ćelija, vitamini, amino kiseline, humektansi i keratolitička sredstva, mogu takođe da se izmešaju ukoliko je potrebno.

Prethodno pomenuti bazni materijali se dodaju u količini koja odgovara obično korišćenoj koncentraciji za proizvodnju preparata za spoljašnju upotrebu.

[0054] Način primene jedinjenja ili njihovih soli ili hidrata jedinjenja ili soli u skladu sa ovim pronalaskom nije posebno ograničen i mogu da se primene oralno ili parenteralno postupcima koji se obično koriste. Na primer, mogu da budu formulisani u preparate kao što su tablete, praškovi, granule, kapsule, sirupi, troheje, preparati za inhalaciju, supozitorije, injekcije, masti, oftalmičke masti, oftalmički preparati, preparati za nos, preparati za uši, kataplzame i losioni i da se kao takvi primene.

[0055] Jedinjenja iz ovog pronalaska su posebno pogodna za formulisanje u oralna sredstva jer pokazuju odličnu aktivnost signalizacije cAMP i imaju metaboličku stabilnost.

[0056] Doza leka u skladu sa ovim pronalaskom može na odgovarajući način da se izabere u zavisnosti od ozbiljnosti simptoma, godina starosti, pola, telesne težine, načina primene, vrste soli, specifičnog tipa bolesti i slično.

[0057] Mada doza značajno varira u skladu sa tipom bolesti i ozbiljnosti simptoma kod pacijenta, starost pacijenta, razlike u polu i razlika u osetljivosti na lek između pacijenata i slično, doza je obično približno 0.03 do 1000 mg, preferirano 0.1 do 500 mg a još poželjnije 0.1 do 100 mg dnevno za odrasle i primenjuje se podeljena u jednu do nekoliko doza dnevno.

1

[0058] U proizvodnji jedinjenja iz ovog pronalaska predstavljenih prethodno datom formulom (1), sirovi materijal jedinjenja i različiti reagensi mogu da formiraju soli, hidrate ili solvate, sve promenljivo u zavisnosti od početnog materijala, korišćenog rastvarača i slično i nisu posebno ograničeni sve dok ne inhibiraju reakciju.

[0059] Koji rastvarač se koristi takođe varira u skladu sa početnim materijalom, reagensom i slično i očigledno nije posebno ograničen sve dok ne inhibira reakciju i dok rastvara početni materijal do određenog stepena.

[0060] Različiti izomeri (na primer, geometrijski izomeri, optički izomeri na bazi asimetričnih atoma ugljenika, rotameri, stereoizomeri i tautomeri) mogu da se prečiste i izoluju uobičajenim načinima razdvajanja, na primer, rekristalizacijom, postupcima diastereomerne soli, postupcima enzimatične rezolucije i različitim postupcima hromatografije (na primer, hromatografijom na tankom sloju, hromatografijom na koloni, visoko efikasnom tečnom hromatografijom i gasnom hromatografijom).

[0061] Jedinjenja u skladu sa ovim pronalaskom dobijena kao slobodni oblici mogu da se konvertuju u soli koje mogu da se formiraju sa jedinjenjima ili u hidrate jedinjenja u skladu sa uobičajenim postupcima. Jedinjenja u skladu sa ovim pronalaskom dobijena kao soli ili hidrati jedinjenja, mogu takođe da se konvertuju u slobodne oblike jedinjenja u skladu sa uobičajenim postupcima.

[0062] Jedinjenja u skladu sa ovim pronalaskom mogu da se izoluju i prečiste primenom uobičajenih hemijskih operacija kao što su ekstrakcija, koncentracija, evaporacija, kristalizacija, filtracija, rekristalizacija i različiti postupci hromatografije.

Opšti postupci sinteze

[0063] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da se sintetišu različitim postupcima od kojih će neki da budu opisani u skladu sa narednim šemama. Šeme su ilustrativne i ovaj pronalazak nije ograničen samo hemijskim reakcijama i uslovima koji su eksplicitno navedeni. Mada su neki supstituenti u narednim šemama isključeni zbog jasnoće, ovakvo isključivanje nema za cilj da ograniči otkriće u šemama. Reprezentativna jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da se sintetišu korišćenjem odgovarajućih proizvoda poznatih jedinjenja i reagenasa. R1, R2, R3i R4u formulama u narednim opštim postupcima sinteze su kako je definisano za R1, R2, R3i R4u jedinjenjima predstavljenim prethodno datom formulom (1) (jedinjenja predstavljena formulom (1) u narednim opštim postupcima sinteze).

1

[0064] Jedinjenja iz ovog pronalaska (Formula 1) mogu da se sintetišu postupcima izrade (Postupci A i B) koji su niže pokazani.

Šema 1 (Postupak A)

[0065] Šema 1 pokazuje postupak za dobijanje derivata hidantoina (Formula 1) amidacijom derivata karboksilne kiseline (1) i derivata amino-amida (2) da se dobije amido-amid derivat (3) a nakon toga konstrukcijom spiroimidazolon prstena postupkom intramolekularne ciklizacije.

[0066] Faza 1 je postupak amidacije derivata karboksilne kiseline (1) i derivata amino-amida (2). U primere reagensa za udvajanje spadaju N,N’-dicikloheksilkarbodiimid (DCC), 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid hidrohlorid (EDC), O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU) i 4-(4,6-dimetoksi-1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolinijum hlorid n-hidrat (DMT-MM). U primere baze spadaju trietilamin ili N,N-diizopropiletilamin. Ukoliko je potrebno, 4-(dimetilamino)piridin (DMAP) može da se koristi kao katalizator. U primere odgovarajućeg rastvarača spadaju dihlormetan ili N,N-dimetilformamid. U primere odgovarajućeg rastvarača reakcije kada se koristi DMT-MM, spadaju metanol, etanol i acetonitril. Temperatura reakcije je 0°C do sobne temperature, na primer a vreme reakcije je 0.5 do 24 sata. Dobijeni amino-amid derivat (3) se izoluje uobičajenom tehnikom, i ukoliko je potrebno, može da se prečisti kristalizacijom ili hromatografijom.

[0067] Faza 2 je postupak za ciklizaciju amido-amid derivata (3) u prisustvu odgovarajuće baze kao što su vodeni rastvor natrijum hidroksida ili kalijum t-butoksid u pogodnom rastvaraču kao što su etanol, terc-butanol ili dimetilsulfoksid. Temperatura reakcije je, na primer, od sobne temperature do uslova refluksovanja u toku jedan do 24 sata. Dobijeni

2

derivat hidantoina (Formula 1) se izoluje uobičajenim tehnikama i kada je to potrebno, može da se prečisti kristalizacijom ili hromatografijom.

[0068] Amino-amid derivat (2) pokazan u Šemi 1 može da se sintetiše od derivata piperidina (4). Postupak sinteze za amino-amid derivat (2) je pokazan u Šemi 2.

Šema 2

[0069] Faza 3 je Strecker-ova sinteza konvertovanaja derivata piperidinona (4) u amino-nitril derivat (5). Posebno, ovo je postupak reakcije piperidinona (4) sa natrijum cijanidom ili kalijum cijanidom i amonijum hloridom ili amonijum acetatom u odgovarajućem rastvaraču kao što su metanol, etanol ili tetrahidrofuran, u prisustvu/odsustvu vode. Temperatura reakcije je, na primer, sobna temperatura do 80°C, a vreme reakcije je 2 do 72 sata. Dobijeni derivat amino-nitrila (5) se izoluje uobičajenim tehnikama i, ukoliko je potrebno, može da se prečisti kristalizacijom ili hromatografijom.

[0070] Faza 4 je postupak konverzije nitril grupe u amido grupu pod uslovima bazne hidrolize u prisustvu vodonik peroksida. Ova reakcija može da se izvede, na primer, u skladu sa Chemistry-A European Journal (2002), 8(2), 439-450.

[0071] Faza 5 je postupak hidrogenacije olefin Jedinjenja (6) u inertnom rastvaraču kao što su metanol, etanol, trifluoroetanol, dimetilformamid ili dimetilacetamid, u prisustvu katalizatora kao što su paladijum ugljenik ili paladijum hidroksid ugljenik, tim redom, u atmosferi H2. Temperatura reakcije je sobna temperatura do 80°C a reakcija može da se izvede pod pritiskom. Dobijeni amino-amid derivat (2) se izoluje uobičajenom tehnikom i, ukoliko je potrebno, može da se prečisti kristalizacijom ili hromatografijom.

[0072] Derivat piperidinona (4) pokazan u Šemi 2 može da se sintetiše od poznatog ketil derivata vinilsulfonila (7) i derivata hidantoin-arilbromida (8). Postupak sinteze za derivat piperidina (4) je pokazan u Šemi 3.

Šema 3

[0073] Faza 6 je postupak za sintezu ketal-arilvinilsulfonil derivata (9) udvajanjem ketal vinilsulfonil derivata (7) i hidantoin-arilbromid derivata (8) u atmosferi N2u prisustvu paladijum katalizatora kao što su tris(dibenzilidenaceton)paladijum(0) ili bis(dibenzilidenaceton)paladijum i dodavanjem fosfin liganda kao što je tri-terc-butilfosfin tetrafluoroborna kiselina i odgovarajuće baze kao što je metildicikloheksilamin, u pogodnom rastvaraču kao što je N-metil-2-piperidon (NMP). Temperatura reakcije je između 90°C i temperature refluksa. Dobijeni ketal-arilvinilsulfonil derivat (9) se izoluje uobičajenim tehnikama i kada je to potrebno, može da se prečisti kristalizacijom ili hromatografijom.

[0074] Faza 7 je postupak za konverziju ketala iz ketal-arilvinilsulfonil derivata (9) u keton, u pogodnom rastvaraču kao što je vodeni rastvor tetrahidrofurana, u prisustvu kiseline kao što je hlorovodonična kiselina. Temperatura reakcije je, na primer, tačka ključanja rastvarača a vreme reakcije je približno 1 do 24 sata. Dobijeni piperidin derivat (4) se izoluje uobičajenim tehnikama i kada je to potrebno, može da se prečisti kristalizacijom ili hromatografijom.

[0075] Hidantoin-arilbromid derivat (8) pokazan u Šemi 3 može da se sintetiše od 4-bromo-3,5-dimetilanilina (10) i derivata bromoacetatne kiseline (11) ili od 2-bromo-5-jod-1,3-dimetilbenzena (13) i derivata amino kiseline (14). Postupak sinteze za hidantoin-aril bromid derivat (8) je pokazan u Šemi 4.

Šema 4

[0076] Faza 8 je postupak za alkilaciju 4-bromo-3,5-dimetilanilina (10) sa derivatom bromoacetatne kiseline (11), u prisustvu odgovarajuće baze kao što je diizopropiletilamin i u pogodnom rastvaraču kao što je N-metil-2-piperidon (NMP). Temperatura reakcije je, na primer, sobna temperatura do 100°C i vreme reakcije je 1 do 24 sata. Dobijeni derivat arilbromid-amino kiseline (12) se izoluje uobičajenim tehnikama i kada je to potrebno, može da se prečisti kristalizacijom ili hromatografijom.

[0077] Faza 9 je postupak za sintezu derivata arilbromid-amino kiseline (12), udvajanjem 2-bromo-5-jod-1,3-dimetilbenzena (13) i derivata amino kiseline (14) u prisustvu metal katalizatora kao što je bakar jodid (I). Reakcija može da se izvede u prisustvu odgovarajuće baze kao što je diazabicikloundecen (DBU) i u pogodnom rastvaraču kao što je N,N-dimetilacetamid (DMA), na temperaturi reakcije od približno 80°C do 120°C. Dobijeni derivat arilbromid-amino kiseline (12) se izoluje uobičajenim tehnikama i kada je to potrebno, može da se prečisti kristalizacijom ili hromatografijom.

[0078] Faza 10 je postupak za sintezu hidantoin-arilbromid derivata (8) reakcijom derivata arilbromidamino kiseline (12) sa natrijum cijanatom pod kiselim uslovima. Rastvarač je, na primer, smeša rastvarača kao što je sirćetna kiselina - dihlormetan; temperatura reakcije je sobna temperatura do 60°C; i vreme reakcije je 1 do 24 sata. Dobijeni hidantoin-arilbromid derivat (8) može da se izoluje uobičajenim tehnikama i kada je to potrebno, može da se prečisti kristalizacijom ili hromatografijom.

[0079] Hhidantoin-arilbromid derivat (8) pokazan u Šemi 3 može takođe da se sintetiše od 4-bromo-3,5-dimetilanilina (10) i derivata ketona (15). Postupak sinteze za hidantoin-arilbromid derivat (8) je pokazan u Šemi 5.

2

Šema 5

[0080] Faza 11 je Strecker-ova sinteza kojom se derivat ketona (15) prevodi u derivat arilamino-nitrila (16). Još preciznije, to je postupak u kome reaguje derivat ketona (15) sa 4-bromo-3,5-dimetilanilinom (10) i trimetilsilil cijanidom u pogodnom rastvaraču kao što je sirćetna kiselina. Temperatura reakcije može da bude sobna temperatura i vreme reakcije je jedan do tri sata ili približno. Dobijeni derivat arilamino-nitrila (16) se izoluje uobičajenim tehnikama i kada je to potrebno, može da se prečisti kristalizacijom ili hromatografijom.

[0081] Faza 12 je postupak za reakciju derivata aril amino-nitrila (16) sa 2,2,2-trihloracetilizocijanatom u pogodnom rastvaraču kao što je dihlormetan a nakon toga dolazi do sinteze derivata iminohidantoina (17) dodavanjem reagenasa kao što su metanol, voda i trietilamin i ostavljanjem da reaguju uz zagrevanje. Dobijeni derivat iminohidantoina (17) se izoluje uobičajenim tehnikama i kada je to potrebno, može da se prečisti kristalizacijom ili hromatografijom.

[0082] Faza 13 je postupak za konverziju derivata iminohidantoina (17) u hidantoinarilbromid derivat (8) pod kiselim uslovima. Na primer, sinteza može da se izvede u rastvaraču sirćetna kiselina-voda uz zagrevanje na približno 65°C u toku jedan do šest sati ili približno. Dobijeni derivat hidantoin-arilbromida (8) se izoluje uobičajenim tehnikama i kada je to potrebno, može da se prečisti kristalizacijom ili hromatografijom.

[0083] Šema 6 je postupak za Heck-ovu reakciju derivata vinilsulfonamida (18) i hidantoinarilbromid derivata (8) u prisustvu metal katalizatora, a nakon toga hidrogenacijom olefin jedinjenja (19), da se dobije derivat hidantoina (Formula 1).

Šema 6 (Postupak B)

[0084] Derivat hidantoina (Formula 1) može da se sintetiše izvođenjem reakcije iz Faze 14 u skladu sa postupkom iz Faze 6 i reakcijom iz Faze 15 u skladu sa postupkom iz Faze 5.

Dobijeni derivat hidantoina (Formula 1) se izoluje uobičajenim tehnikama i kada je to potrebno, može da se prečisti kristalizacijom ili hromatografijom.

[0085] Derivat vinilsulfonamida (18) korišćen u Fazi 14 može da se sintetiše u skladu sa Šemama 2, 3 i 12 iz WO2010/126030(A1).

[0086] Sva prethodna dokumenta stanja tehnike citirana u ovoj specifikaciji su ovde inkorporirana kao reference.

[Primeri]

[0087] Sadržaj ovog pronalaska će da bude mnogo detaljnije opisan narednim primerima i test primerima; međutim, ovaj pronalazak nije ograničen na sadržaj primera i test primera. Svi početni materijali i reagensi su nabavljeni od komercijalnih dobavljača ili su sintetizovani po poznatim postupcima.<1>H-NMR spektar je meren na Mercury300 (proizvođača Varian), ECP-400 (proizvođača JEOL) ili 400-MR (proizvođača Varian) sa ili bez Me4Si kao unutrašnjeg standarda (s = singlet, d = dablet, t = triplet, brs = široki singlet, m = multiplet). Merenje masene spektrometrije je izvršeno na masenom spektrometru, ZQ2000 (proizvođača Waters), SQD (proizvođača Waters) ili 2020 (proizvođača Shimazu).

Primer 1

2

1-(4-(2-((2-(4-fluoro-3-(trifluorometoksi)fenil)-4-okso-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion (Jedinjenje 1)

Reakcija (1-1)

[0088]

[0089] U rastvor 4-bromo-3,5-dimetilanilina (3.47 g, 17.4 mmol) i diizopropiletilamina (5.3 mL, 30.4 mmol) u DMI (13 mL) se na sobnoj temperaturi doda 2-bromoizobuterna kiselina (3.86 g, 23.1 mmol). Smeša se meša jedan sat na 100°C. Nakon toga se dodaju 2-bromoizobutirat (496 mg, 2.97 mmol) i diizopropiletilamin (0.8 mL, 4.59 mmol) i smeša se meša jedan sat na 100°C.

[0090] U reaktivnu smešu se na sobnoj temperaturi dodaju metanol (52 mL) i 5 N vodeni rastvor natrijum hidroksida (52 mL, 260 mmol) a nakon toga se ova smeša meša 1.5 sat na 75°C. Reaktivna smeša se ohladi, nakon toga se doda voda i pH podesi na 5 koristeći 1 N vodeni rastvor kalijum hidrogen sulfata i zatim ekstrahuje koristeći etil acetat. Organski sloj se ispere sa vodom, nakon toga suši preko anhidrovanog magnezijum sulfata i koncentruje da se dobije 2-((4-bromo-3,5-dimetilfenil)amino)-2-metil propanoatna kiselina kao sirovi produkt (5.79 g).

[0091] MS(ESI) m/z = 286, 288 (M+H)+

(Reakcija 1-2)

[0092]

2

[0093] U smešu 2-((4-bromo-3,5-dimetilfenil)amino)-2-metil propanoatne kiseline (5.79 g jedinjenja dobijenog u Reakciji 1-1) u dihlormetanu (62 mL) i sirćetnoj kiselini (62 mL), se na sobnoj temperaturi doda natrijum cijanat (5.03 g, 59.8 mmol). Smeša se meša tri sata na sobnoj temperaturi. Doda se zasićeni rastvor natrijum hidrogen karbonata (400 mL) da se pH podesi na 7-8 koristeći 5 N vodeni rastvor natrijum hidroksida i ova smeša se ekstrahuje sa etil acetatom. Organski sloj se suši preko anhidrovanog magnezijum sulfata a nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca se po redu ispere sa smešom etil acetat-heksan a nakon toga sa smešom dihlormetan-heksan da se dobije 1-(4-bromo-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion (3.80 g, 66%).

[0094] MS(ESI) m/z = 311, 313 (M+H)+

(Reakcija 1-3)

[0095]

[0096] Smeša 8-(vinilsulfonil)-1,4-dioksa-8-azaspiro[4.5]dekana (431 mg, 1.85 mmol), 1-(4-bromo-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-diona (575 mg, 1.85 mmol), tris(dibenzilidenaceton)paladijuma(0) (508 mg, 0.55 mmol), tri-terc-butilfosfin tetrafluoroborne kiseline (165 mg, 0.55 mmol) i metildicikloheksilamina (2.1 mL, 9.25 mmol) u N-metil-2-pirolidonu (18.5 mL) se meša dva sata u atmosferi azota na 110°C.

Reaktivna smeša se ohladi, neutrališe sa vodom a nakon toga ekstrahuje sa etil acetatom. Organski sloj se ispere sa vodom i slanim rastvorom, suši preko anhidrovanog magnezijum sulfata a nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni amino-silika gela (dihlormetan - metanol) da se dobije

(E)-1-(4-(2-(1,4-dioksa-8-azaspiro[4.5]dekan-8-ilsulfonil)vinil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion (584 mg, 68%).

[0097] MS(ESI) m/z = 464 (M+H)+

2

(Reakcija 1-4)

[0098]

[0099] U rastvor (E)-1-(4-(2-(1,4-dioksa-8-azaspiro[4.5]dekan-8-ilsulfonil)vinil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-di-ona (1.2 g, 2.58 mmol) u tetrahidrofuranu (26 mL) se u kapima u toku deset minuta dodaje 2 N vodeni rastvor hlorovodonične kiseline (26 mL, 52 mmol). Smeša se meša dva sata na 60°C. Reaktivna smeša se ohladi, nakon toga se pH podesi na 7 koristeći 2 N vodeni rastvor natrijum hidroksida i ova smeša se ekstrahuje sa etil acetatom. Organski sloj se ispere sa slanim rastvorom, suši preko anhidrovanog magnezijum sulfata a nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (dihlormetanetil acetat) da se dobije (E)-1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oksopiperidin-1-il)sulfonil)vinil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion (998 mg, 92%).

MS(ESI) m/z = 420 (M+H)+

(Reakcija 1-5)

[0100]

[0101] U rastvor (E)-1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oksopiperidin-1-il)sulfonil)vinil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-diona (994 mg, 2.37 mmol) u metanolu (24 mL) se na sobnoj temperaturi dodaju kalijum cijanid (188 mg, 2.84 mmol) i amonijum acetat (237 mg, 3.08 mmol). Smeša se meša tri sata na 60-70°C. Reaktivna smeša se ohladi, koncentruje pod sniženim pritiskom a nakon toga razblaži sa etil acetatom. Organski sloj se ispere sa vodom i slanim rastvorom, suši preko anhidrovanog magnezijum sulfata a nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (dihlormetan -

2

etil acetat) da se dobije (E)-4-amino-1-((4-(5,5-dimetil-2,4-dioksoimidazolidin-1-il)-2,6-dimetilstiril)sulfonil)piperidin-4-karbonitril (681 mg, 68%).

[0102]<1>H-NMR (300MHz, DMSO-d6) δ: 1.3 (6H, s), 1.7 (2H, m), 2.0 (2H, m), 2.3 (6H, s), 2.7 (2H, s), 2.9 (2H, m), 3.4 (2H, m), 6.9 (1H, d, J = 15.9 Hz), 7.1 (2H, s), 7.4 (1H, d, J = 15.9 Hz), 11.2 (1H, brs)

(Reakcija 1-6)

[0103]

[0104] U rastvor (E)-4-amino-1-((4-(5,5-dimetil-2,4-dioksoimidazolidin-1-il)-2,6-dimetilstiril)sulfonil)piperidin-4-karbonitrila (675 mg, 1.50 mmol) u metanolu (7.5 mL) i dimetilsulfoksidu (0.195 mL) se na sobnoj temperaturi doda 2 N vodeni rastvor natrijum hidroksida (1.6 ml, 1.6 mmol) a nakon toga se polako, u kapima, dodaje 30% vodeni rastvor vodonik peroksida (0.2 mL, 1.95 mmol). Smeša se meša jedan sat na sobnoj temperaturi. U reaktivnu smešu se dodaju etil acetat, heksan i zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida. Čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem, ispere i suši da se dobije (E)-4-amino-1-((4-(5,5-dimetil-2,4-dioksoimidazolidin-1-il)-2,6-dimetilstiril)sulfonil)piperidin-4-karboksamid (498 mg, 72%).

[0105] MS(ESI) m/z = 464 (M+H)+

(Reakcija 1-7)

[0106]

[0107] Smeša (E)-4-amino-1-((4-(5,5-dimetil-2,4-dioksoimidazolidin-1-il)-2,6-dimetilstiril)sulfonil)piperidin-4-karboksamida (1.3 g, 2.8 mmol) i paladijum hidroksida na ugljeniku (20% Pd) (ovlažena sa približno 50% vode) (1.3 g) u metanolu (21 mL) i

2

dimetilformamidu (7 mL) se meša četiri sata u atmosferi vodonika na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se filtrira i ispere a nakon toga se filtrat koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije 4-amino-1-((4-(5,5-dimetil-2,4-dioksoimidazolidin-1-il)-2,6-dimetilfenetil)sulfonil)piperidin-4-karboksamid (998mg, 77%).

MS(ESI) m/z = 466 (M+H)+

(Reakcija 1-8)

[0108]

[0109] U rastvor 4-amino-1-((4-(5,5-dimetil-2,4-dioksoimidazolidin-1-il)-2,6-dimetilfenetil)sulfonil)piperidin-4-karboksamida (120 mg, 0.258 mmol), 4-fluoro-3-(trifluorometoksi)benzoeve kiseline (69 mg, 0.309 mmol) i diizopropiletilamina (0.09 ml, 0.516 mmol) u dimetilformamidu (2.5 mL) se doda O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronijumheksafluorofosfat (HATU) (118 mg, 0.309 mmol). Smeša se meša 1.5 sat na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se neutrališe sa vodom a nakon toga ekstrahuje sa dihlormetanom. Organski sloj se ispere sa slanim rastvorom, ispere sa anhidrovanim natrijum sulfatom a nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije 1-((4-(5,5-dimetil-2,4-dioksoimidazolidin-1-il)-2,6-dimetilfenetil)sulfonil)-4-(4-fluoro-3-(trifluorometoksi)benzamid)piperidin-4-karboksamid (150 mg, 67%).

[0110] MS(ESI) m/z = 672 (M+H)+

(Reakcija 1-9)

[0111]

[0112] U izmešani rastvor 1-((4-(5,5-dimetil-2,4-dioksoimidazolidin-1-il)-2,6-dimetilfenetil)sulfonil)-4-(4-fluoro-3-( trifluorometoksi)benzamid)piperidin-4-karboksamida (150 mg, 0.223 mmol) u terc-butanolu (2.5 mL) i etanolu (2.5 mL) se na 0°C doda kalijum terc-butoksid (75 mg, 0.670 mmol). Smeša se meša u atmosferi azota 1.5 sat na 50°C.

Reaktivna smeša se ohladi, razblaži sa vodom, neutrališe sa zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida a nakon toga ekstrahuje sa dihlormetanom. Organski sloj se ispere sa vodom i slanim rastvorom, suši preko anhidrovanog natrijum sulfata a nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (dihlormetan - metanol) da se dobije1-(4-(2-((2-(4-fluoro-3-(trifluorometoksi)fenil)-4-okso-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion (118 mg, 81%).

[0113] MS(ESI) m/z = 654 (M+H)+.<1>H-NMR (400MHz, CD3OD) δ: 1.40 (6H, s), 1.71-1.80 (2H, m), 2.00-2.08 (2H, m), 2.43 (6H, s), 3.22 (4H, s), 3.47-3.57 (2H, m), 3.80-3.88 (2H, m), 7.01 (2H, s), 7.50-7.57 (1H, m), 7.97-8.04 (1H, m), 8.05-8.12 (1H, m)

[0114] Naredna jedinjenja iz Primera se sintetišu po postupcima sličnim onima iz Reakcija 1-8 i 1-9 u Primeru 1, koristeći odgovarajuće karboksilne kiseline početnih materijala, reagense i rastvarače.

(Jedinjenje 2-5)

[0115]

Tabela 1

1

(nastavlja se)

Primer 2

2 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il) sulfonil)etil)fenil)5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion (Jedinjenje 6)

(Reakcija 2-1)

[0116]

[0117] Smeša 2-(3-(trifluorometil)fenil)-8-(vinilsulfonil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-4-ona (150 mg, 0.387mmol) sintetisana u skladu sa postupkom opisanim u Šemama 2, 3 i 12 u WO2010/126030(A1), 1-(4-bromo-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-diona (169 mg, 0.542 mmol), bis(dibenzilidenaceton) paladijuma (45 mg, 0.077 mmol), tri-tercbutilfosfin tetrafluoroborne kiseline (22 mg, 0.077 mmol) i metildicikloheksilamina (0.123 mL, 0.581 mmol) u N-metil-2-pirolidonu (0.97 mL) se meša jedan sat na 100°C u atmosferi azota. Reaktivna smeša se ohladi, neutrališe sa vodom a nakon toga ekstrahuje sa etil acetatom. Organski sloj se ispere sa vodom i slanim rastvorom, suši preko anhidrovanog natrijum sulfata a nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (etil acetat - heksan) da se dobije

(E)-1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)vinil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion (197 mg, 82%). MS(ESI) m/z = 618 (M+H)+

(Reakcija 2-2)

[0118]

[0119] Smeša (E)-1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)vinil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-diona (195 mg, 0.316 mmol) i paladijum hidroksida / ugljenik (20% Pd) (ovlažena sa približno 50% vode) (195 mg, 0.139 mmol) u 2,2,2-trifluoroetanolu (6 mL) se meša 14 sati na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika. Smeša se filtrira i filtrat koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (etil acetat - heksan) da se dobije 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il) sulfonil)etil)fenil)5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion (121 mg, 62%).

MS(ESI) m/z = 620 (M+H)+.<1>H-NMR (400MHz, CD3OD) δ: 1.40 (6H, s), 1.72-1.81 (2H, m), 2.00-2.10 (2H, m), 2.44 (6H, s), 3.22 (4H, s), 3.50-3.58 (2H, m), 3.80-3.88 (2H, m), 7.01 (2H, s), 7.72-7.79 (1H, m), 7.88-7.94 (1H, m), 8.16-8.23 (1H, m), 8.31 (1H, s)

Primer 3

1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion (Jedinjenje 7)

(Reakcija 3)

[0120]

[0121] Sa upotrebom odgovarajućih početnih materijala i rastvarača, 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion (Jedinjenje 7) se sintetiše postupcima sličnim onima opisanim u Primeru 2.

4

MS(ESI) m/z = 636 (M+H)+.<1>H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 1.47 (6H, s), 1.70-1.78 (2H, m), 2.10-2.19 (2H, m), 2.40 (6H, s), 3.00-3.07 (2H, m), 3.19-3.25 (2H, m), 3.45-3.53 (2H, m), 3.81-3.88 (2H, m), 6.94 (2H, s), 7.35 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.73 (1H, brs), 7.93 (2H, d, J = 8.0 Hz), 9.37 (1H, brs)

Primer 4

1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3-diazaspiro[4.4]nonan-2,4-dion (Jedinjenje 8)

(Reakcija 4-1)

[0122]

[0123] U smešu ciklopentanona (42 mg, 0.500 mmol) i 4-bromo-3,5-dimetilanilina (100 mg, 0.500 mmol) u sirćetnoj kiselini (0.5 mL) se na sobnoj temperaturi doda trimetilsilil cijanid (0.063 ml, 0.500 mmol). Smeša se meša 1.5 sat na sobnoj temperaturi u atmosferi azota. Reaktivna smeša se neutrališe sa 28% vodenim rastvorom amonijaka (1 mL), razblaži sa vodom i ekstrahuje sa dihlormetanom. Organski sloj se ispere sa vodom i slanim rastvorom, suši preko anhidrovanog natrijum sulfata a nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije 1-((4-bromo-3,5-dimetilfenil)amino)ciklopentankarbonitril kao sirovi produkt (152 mg).

<1>H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 1.83-1.92 (4H, m), 2.07-2.15 (2H, m), 2.33-2.42 (2H, m), 2.37 (6H, m), 3.71 (1H, brs), 6.56 (2H, s)

(Reakcija 4-2)

[0124]

[0125] U rastvor 1-((4-bromo-3,5-dimetilfenil)amino)ciklopentankarbonitrila (145 mg, 0.495 mmol) u dihlormetanu (5 mL) se na sobnoj temperaturi doda 2,2,2-trihloracetilizocijanat (0.070 mL, 0.593 mmol). Smeša se meša jedan sat na sobnoj temperaturi u atmosferi azota.

[0126] Dodaju se trietilamin (0.103 mL, 0.742 mmol), voda (0.045 mL) i metanol (0.10 mL) i smeša se refluksuje 1.5 sat u atmosferi azota. Reaktivna smeša se ohladi, a nakon toga razblaži sa vodom, pH se podesi na 5 koristeći 1 N vodeni rastvor hlorovodonične kiseline a nakon toga ekstrahuje sa dihlormetanom. Organski sloj se ispere sa vodom i slanim rastvorom, suši preko anhidrovanog natrijum sulfata a nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije1-(4-bromo-3,5-dimetilfenil)-4-imino-1,3-diazaspiro[4.4]nonan-2-on kao sirovi produkt. MS(ESI) m/z = 336, 338 (M+H)+

(Reakcija 4-3)

[0127]

[0128] Smeša 1-(4-bromo-3,5-dimetilfenil)-4-imino-1,3-diazaspiro[4.4]nonan-2-ona (sirovi produkt dobijen u prethodnoj reakciji) u sirćetnoj kiselini (1.0 mL) i vodi (0.25 mL) se meša 1.5 sat na 65°C u atmosferi azota. Nakon daljeg dodavanja sirćetne kiseline (1.0 mL) i vode (0.25 mL), smeša se meša 17 sati na 65°C u atmosferi azota. Reaktivna smeša se ohladi, a nakon toga razblaži sa vodom i pH podesi na 8 koristeći zasićeni vodeni rastvor natrijum hidrogen karbonata i ekstrahuje sa etil acetatom. Organski sloj se ispere sa vodom i slanim rastvorom, suši preko anhidrovanog natrijum sulfata a nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (etil acetat - heksan) da se dobije 1-(4-bromo-3,5-dimetilfenil)-1,3-diazaspiro[4.4]nonan-2,4-dion (121 mg). MS(ESI) m/z = 337, 339 (M+H)+

(Reakcija 4-4)

[0129]

[0130] Uz upotrebu odgovarajućih početnih materijala i rastvarača, 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3-diazaspiro[4.4]nonan-2,4-dion (Jedinjenje 8) se dobija po postupcima sličnim onima opisanim u Primeru 2.

MS(ESI) m/z = 662 (M+H)+.<1>H-NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 1.36-1 (2H, m), 1.60-1.70 (4H. m), 1.82-1.91 (2H, m),1.91-2.06 (4H, m), 2.38 (6H, s), 3.01-3.09 (2H, m), 3.22-3.30 (2H, m), 3.30-3.42 (2H, m), 3.70-3.77 (2H, m), 7.03 (2H, s), 7.57 (2H, d, J = 8.4 Hz), 8.14 (2H, d, J = 8.4 Hz)

Primer 5

1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-8-metil-1,3,8-triazaspiro[4.5]dekan-2,4-dion (Jedinjenje 9)

(Reakcija 5-1)

[0131]

[0132] Uz upotrebu terc-butil estra 4-oksopiperidin-1-karboksilne kiseline kao početnog materijala i upotrebom odgovarajućeg rastvarča, terc-butil estar 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)2,4-diokso-1,3,8-triazaspiro[4.5]dekan-8-karboksilne kiseline se dobija po postupcima sličnim onima opisanim u Primeru 4. MS(ESI) m/z = 777 (M+H)+.

(Reakcija 5-2)

[0133]

[0134] U izmešani rastvor terc-butil estra 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)2,4-diokso-1,3,8-triazaspiro[4.5]dekan-8-karboksilne kiseline (11.7 mg, 0.015 mmol) u dihlormetanu (0.13 mL) se na sobnoj temperaturi doda trifluorosirćetna kiselina (0.05 mL, 0.673 mmol). Smeša se ostavi u struji azota i meša jedan sat na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]dekan-2,4-dion 2 so trifluorosirćetne kiseline (13.6 mg). MS(ESI) m/z = 677 (M+H)+.

(Reakcija 5-3)

[0135]

[0136] U smešu 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]dekan-2,4-dion 2 soli trifluorosirćetne kiseline (21.1 mg, 0.022 mmol) i mravlje kiseline (0.033 mL) se doda 37% vodeni rastvor formaldehida (0.055 mL). Smeša se ostavi u struji azota i meša tri sata uz zagrevanje na 80°C. Reaktivna smeša se koncentruje i dobijeni ostatak razblaži sa etil acetatom. Organski sloj se ispere sa razblaženim vodenim rastvorom natrijum hidroksida, suši preko anhidrovanog magnezijum sulfata a nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se podvrgne prečišćavanju hromatografijom na koloni (dihlormetan -metanol) da se dobije 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil-8-metil-1,3,8-triazaspiro[4.5]dekan-2,4-dion (4.5 mg, 30%).

MS(ESI) m/z = 691 (M+H)+.<1>H-NMR (400MHz, CD3OD) δ: 1.76-1.84 (2H, m), 1.92-2.02 (2H, m), 2.02-2.12 (4H, m), 2.38 (3H, s), 2.46 (6H, s), 2.81-2.88 (2H, m), 2.92-3.02 (2H, m), 3.23 (4H, s), 3.51-3.60 (2H, m), 3.72-3.80 (2H, m), 7.01 (2H, s), 7.48 (2H, d, J = 8.0 Hz), 8.10 (2H, d, J = 8.0 Hz)

Primer 6

5-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)2-oksa-5,7-diazaspiro[3.4]oktan-6,8-dion (Jedinjenje 10)

(Reakcija 6)

[0137]

[0138] Uz upotrebu oksetan-3-ona kao početnog materijala i upotrebom odgovarajućeg rastvarača, 5-(3,5-dimetil4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-2-oksa-5,7-diazaspiro[3.4]oktan-6,8-dion se dobija po postupcima sličnim onima opisanim u Primeru 4.

MS(ESI) m/z = 650 (M+H)+.<1>H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 1.69-1.77 (2H, m), 2.12-2.22 (2H, m), 2.45 (6H, s), 3.03-3.11 (2H, m), 3.22-3.29 (2H, m), 3.46-3.53 (2H, m), 3.84-3.91 (2H, m), 4.86 (2H, d, J = 7.2 Hz), 5.03 (2H, d, J = 7.2 Hz), 7.07 (2H, s), 7.35 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.98 (2H, d, J = 8.4 Hz), 8.56 (1H, s), 10.34 (1H, s)

4

Primer 7

4-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-4,6-diazaspiro[2.4]heptan-5,7-dion (Jedinjenje 11)

(Reakcija 7-1)

[0139]

[0140] Smeša 2-bromo-5-jod-1,3-dimetilbenzena (300 mg, 0.965 mmol),

1-aminociklopropan karboksilne kiseline (195 mg, 1.93 mmol), bakar jodida (I) (37 mg, 0.194 mmol) i diazabicikloundecena (0.50 mL, 3.35 mmol) u dimetilacetamidu (2.6 mL) se meša tri sata na 120°C u atmosferi azota. Reaktivna smeša se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (Wakosil C18, acetonitril - voda (0.1% mravlja kiselina)) da se dobije 1-((4-bromo-3,5-dimetilfenil)amino)ciklopropan karboksilne kiseline (219 mg, 80%). MS(ESI) m/z = 284, 286 (M+H)+.

(Reakcija 7-2)

[0141]

[0142] U smešu 1-((4-bromo-3,5-dimetilfenil)amino)ciklopropan karboksilne kiseline (198 mg, 0.697 mmol) u sirćetnoj kiselini (3 mL) i dihlormetanu (1.5 mL), se na sobnoj temperaturi doda kalijum cijanat (424 mg, 5.23 mmol). Smeša se meša jedan sat na sobnoj temperaturi a nakon toga meša dva sata na 60°C. Doda se zasićeni vodeni rastvor natrijum hidrogen karbonata da se pH podesi na 8 i ova smeša se ekstrahuje sa etil acetatom. Organski sloj se ispere sa vodom i slanim rastvorom, suši preko anhidrovanog natrijum sulfata a nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (etil acetat - heksan) da se dobije 4-(4-bromo-3,5-dimetilfenil)-4,6-diazaspiro[2.4]heptan-5,7-dion (49 mg, 23%).

[0143]MS(ESI) m/z = 309, 311 (M+H)+.

(Reakcija 7-3)

[0144]

[0145] Sa upotrebom odgovarajućih početnih materijala i rastvarača, 4-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)4,6-diazaspiro[2.4]heptan-5,7-dion (Jedinjenje 11) se sintetiše postupcima sličnim onima opisanim u Primeru 2.

MS(ESI) m/z = 634 (M+H)+.<1>H-NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 0.99-1.03 (2H, m), 1.19-1.27 (4H, m), 1.58-1.64 (2H, m),1.81-1.90 (2H, m), 2.35 (6H, s), 2.99-3.04 (2H, m), 3.22-3.29 (2H, m), 3.67-3.73 (2H, m), 6.95 (2H, s), 7.56 (2H, d, J =8.4 Hz), 8.12 (2H, d, J = 8.4 Hz)

Primer 8

1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il) sulfonil)etil)fenil)1,3-diazaspiro[4.4]nonan-2,4-dion (Jedinjenje 12)

(Reakcija 8)

[0147] Sa upotrebom odgovarajućih početnih materijala i rastvarača, 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il) sulfonil)etil)fenil)-1,3-diazaspiro[4.4]nonan-2,4-dion se sintetiše postupcima sličnim onima opisanim u Primeru 2. MS(ESI) m/z = 646 (M+H)+.<1>H-NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 1.40-1.48 (2H, m), 1.62-1.71 (4H, m), 1.88-1.97 (2H, m),1.97-2.08 (4H, m), 2.41 (6H, s), 3.03-3.10 (2H, m), 2.29-3.34 (2H, m), 3.38-3.47 (2H, m), 3.72-3.79 (2H, m), 7.06 (2H,s), 7.84 (1H, dd, J = 7.6, 7.6 Hz), 8.02 (1H, d, J = 7.6 Hz), 8.33 (1H, d, J = 7.6 Hz), 8.38 (1H, s)

Test Primeri

[0148] Za jedinjenja iz ovog pronalaska, rezultati testa na aktivnost za produkciju cAMP preko humanog PTH1R, aktivnost za produkciju cAMP preko PTH1R pacova, metaboličku stabilnost koristeći mikrozoma humane jetre, metaboličku stabilnost korišćenjem hepatocita pacova i kalcemičnog delovanja u TPTX modelima pacova su pokazani u Test Primerima 1 do 5, tim redom. Jedinjenja opisana u WO2010/126030A1, koja su pokazana u Tabele 2, su korišćena kao komparativna jedinjenja.

4

Tabela 2

Test Primer 1: Merenje in vitro aktivnosti jedinjenja na signal cAMP preko humanog PTH1R (Peptidi)

[0149] Humani PTH(1-34) i kalcitonin su nabavljeni od Peptide Institute, Inc. (Osaka, Japan), rastvoreni u 10 mM sirćetnoj kiselini do 1 mM i čuvani zamrznuti na -80°C.

(Ćelijska kultura)

[0150] Ćelije su uzgajane u Dulbecco-vom modifikovanom Eagle medijumu (DMEM) obogaćenom sa 10% seruma fetusa govečeta (Hyclone), 100 jedinica/ml penicilina G i 100 µg/ml streptomicin sulfata (Invitrogen Corp) na 37°C u vlažnoj atmosferi koja sadrži 5% CO2.

[0151] Analiza transdukcije cAMP signala korišćenjem LLC-PK1 ćelija u kojima se ne pojavljuje PTH1R i HKRK-B7 ćelija, to jest, LLC-PK1 ćelija u kojima se prekomerno pojavljuje humani PTH1R u količini od 9.5 x 10<5>receptora/ćelija (Takasu i saradnici, J. Bone. Miner. Res.14:11-20, 1999). (stimulacija cAMP)

[0152] HKRK-B7 ili LLC-PK1 ćelije se zaseju u ploče sa 96 udubljenja u količini od 1 x 10<5>ćelije/udubljenje i inkubiraju u toku noći. Narednog dana se doda 50 µl cAMP pufera za analizu (DMEM, 2 mM IBMX, 0.2 mg/ml albumina seruma govečeta, 35 mM HepesNaOH, pH 7.4) koji sadrži PTH (1-34) ili svako od jedinjenja i ploče se stave u inkubator na 37°C. Ćelije se inkubiraju 20 minuta. Nakon uklanjanja medijuma, ćelije se jedanput isperu sa 100 µl cAMP pufera za analizu. Ploče se prenesu na usitnjen suvi led da se ćelije zamrznu a nakon toga uklone sa suvog leda. Ćelije se liziraju sa 40 µl 50 mM HCl i ponovo zamrznu na suvom ledu. Količina produkovanog intracelularnog cAMP se meri koristeći komercijalno raspoloživ cAMP EIA kit (Biotrack cAMP EIA system, GE health care).

(Izračunavanje 20% efektivne koncentracije (EC20) i 50% efektivne koncentracije (EC50) u merenjima in vitro sposobnosti indukcije cAMP)

[0153] Analize se izvode koristeći promenljivi gradijent jednačine za dobijanje krive S oblika odnosa doza-odgovor. Aktivnost cAMP signalizacije na humani PTH (1-34) pri 100 nM se definiše kao 100% a koncentracija pri kojoj svako jedinjenje pokazuje 20% ili 50% aktivnosti signalizacije cAMP se izračunava kao EC20 ili EC50.

[0154] Rezultati dobijeni sa HKRK-B7 ćelijama su pokazani u Tabeli 3.

[0155] Stepen cAMP odgovora u LLC-PK1 ćelijama je niži od stepena u HKRK-B7 ćelijama.

4

Tabela 3

Test Primer 2: Merenje in vitro aktivnosti jedinjenja na signalizaciju cAMP preko PTH1R pacova.

[0156] Umesto HKRK-B7 ćelija, uzete su LLC-PK46_RATO_PTH1R ćelije u kojima se prekomerno pojavljuje PTH1R pacova, koje su nabavljene od Chugai Pharmaceutical, za merenja na sličan način kao u Test Primeru 1.

[0157] Rezultati dobijeni korišćenjem LLC-PK46_RATO PTH1R ćelija su pokazani u Tabeli 4.

[0158] EC20 vrednosti in vitro aktivnosti signalizacije cAMP na PTH1 receptor pacova imaju dobru korelaciju sa rezultatima sa humanim PTH1R. Dobra korelacija između pacova i ljudi je takođe uočena za EC50 vrednosti.

4

Tabela 4

Test Primer 3: Ispsitivanje metaboličke stabilnosti korišćenjem mikrozoma humane jetre

[0159] U 0.1 M fosfatnom puferu (pH7.4), mikrozomi humane jetre se inkubiraju sa jedinjenjem ili komparativnim primerom u koegzistenciji sa NADPH na 37°C u navedenom vremenskom periodu. Koncentracija osnovnog jedinjenja u svakom vremenu reakcije se meri pomoću LC/MS/MS a inherentni klirens (µL/min/mg proteina) se izračunava iz nagiba krive dobijene iz odnosa vreme reakcije prema brzina zadržavanja.

[0160]

Koncentracija jedinjenja: 1 µM

Microzom: 0.5 mg/mL

NADPH: 1 mM

Vreme reakcije: 0, 5, 15 i 30 minuta

[0161] Rezultati su pokazani u Tabeli 5. Jedinjenja 1 do 11 pokazuju veliku metaboličku stabilnost u odnosu na mikrozome humane jetre u poređenju sa komparativnim Primerima 1 do 6.

4

Tabela 5

Test Primer 4: Ispitivanje metaboličke stabilnosti korišćenjem hepatocita pacova

[0162] Ćelije jetre se pripreme iz jetre pacova (SD, ženke) postupkom perfuzije kolagenaze. Doda se jedinjenje iz Primera ili Komparativnog Primera i ovo se inkubira na 37°C u navedenom vremenskom periodu, a nakon toga se doda rastvor za zaustavljanje reakcije. Koncentracija osnovnog jedinjenja u svakom vremenu reakcije se meri pomoću LC/MS/MS a inherentni klirens (µL/10<6>ćelije/min) se izračunava iz nagiba krive dobijene iz odnosa vreme reakcije prema brzina zadržavanja.

[0163]

Koncentracija ćelija: 1 x 10<6>ćelija/mL

Koncentracija jedinjenja: 1 µM

Medijum: Williams-ov medijum E

Vreme reakcije: 0, 15, 30, 60, 120 i 240 minuta

Rastvor za zaustavljanje reakcije: acetonitril / 2-propanol (4/6, v/v)

4

[0164] Rezultati su pokazani u Tabeli 6. Metabolička stabilnost na hepatocite pacova za Jedinjenja 2, 4, 5, 7, 8, 9, 10 i 11 je povećana u poređenju sa Komparativnim Primerima 1, 2, 3, 5 i 6.

Tabela 6

Test Primer 5: Kalcemičko delovanje u modelu TPTX pacova

[0165] Ženke Crl:CD(SD) pacova stare četiri nedelje su nabavljene od Charles River Japan (Atsugi Breeding Center) i nedelju dana su prilagođavane standardnim laboratorijskim uslovima od 20-26°C i sa 35-75% vlažnosti. Pacovima je davana voda za piće, a standardna hrana za glodare (CE-2) (CLEA Japan, Inc.) koja sadrži 1.1% kalcijuma, 1.0% fosforne kiseline i 250 IU/100 g vitamina D3 im je bila dostupna po želji.

[0166] TPTX je izveden na pacovima starim pet nedelja. Neki od pojedinaca su podvrgnuti prividnoj operaciji (Sham). Pojedinci čija je koncentracija Ca u serumu bila manja od 8

4

mg/dL četiri dana nakon operacije su izabrani za upotrebu kao TPTX pacovi. Petog dana nakon operacije, pacovi su podeljeni u osam TPTX grupa i jednu Sham grupu (n=5, u svakoj grupi) na osnovu njihove telesne težine i koncentracije Ca u serumu izmerene četvrtog dana nakon operacije. Čist rastvarač je oralno primenjen na Sham grupi i TPTX-vehikulum grupi u zapremini od 10 mL/kg. Svaki test primerak je pojedinačno oralno primenjen na svaku TPTX test primernu grupu rastvaranjem test jedinjenja u rastvaraču u dozi od 30 mg/10 mL/kg. Sastav rastvarača je 10% dimetilsulfoksida (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), 10% Cremophor EL (Sigma-Aldrich Japan LLC), 20% hidroksipropil-β-ciklodekstrin (Nihon Shokuhin Kako Co., Ltd.), glicin (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.); i pH je podešen na 10. Neposredno pre primene svakog uzorka, izvrši se sakupljanje prethodne krvi i sakupljanje krvi se vrši na 2, 6, 10 i 24 sata nakon primene zbog merenja koncentracije Ca u serumu. Svako uzimanje krvi se vrši iz jugularne vene uz inhalacionu anesteziju izofluranom.

[0167] Merenje Ca u serumu: Serum dobijen centrifugiranjem sakupljene krvi se meri na automatskom analajzeru TBA-120FR (Toshiba Medical Systems Corporation).

[0168] Za statističke analize životinjskih studija, rezultati su pokazani kao ± standardna greška (SE). Statističke analize su izvedene neuparenim testom SAS Preclinical Package (Ver.5.00.010720, SAS Institute Japan, Tokyo, Japan). Ap-vrednost <0.05 se smatra kao statistički značajna. Statistički značaj svake grupe test jedinjenja u poređenju sa TPTX-vehikulum grupom, grupom komparativnog primera 1 i grupom komparativnog primera 2 je pokazan kao #, * i ∫ tim redom.

[0169] Prethodna vrednost za koncentraciju Ca u serumu je bila 9.9 mg/dL za Sham grupu i 5.3-6.2 mg/dL za svaku od TPTX grupa. Koncetracije Ca u serumu za svako jedinjenje do 24 sata nakon primene su pokazane na Slici 1 kao prosečna promenjena količina u odnosu na prethodnu vrednost. Osim toga, za sva jedinjenja, koncentracija Ca u serumu je dostigla maksimum šest sati nakon primene ili deset sati nakon primene za svako jedinjenje.

[0170] Jedinjenja 6, 7 i 8, koja imaju najveću metaboličku stabilnost hepatocita pacova pokazuju veliku pozitivnu promenu u odnosu na prethodnu vrednost a njihova oralna primena ispoljava jake efekte na kalcemičko delovanje. Sa druge strane, Jedinjenje 1 i komparativni primeri 1 i 2 koji imaju malu metaboličku stabilnost hepatocita pacova pokazuju manju pozitivnu promenu od prethodne vrednosti u poređenju sa Jedinjenjima 6, 7 i 8. Posebno, Jedinjenja 7 i 8 su statistički značajnija u poređenju sa komparativnim primerima 1 i 2.

[0171] Pored toga, Jedinjenja 6, 7 i 8 koja imaju veliku metaboličku stabilnost hepatocita pacova pokazuju pojedinačne maksimalne vrednosti od 7.8 do 8.5 mg/dL u šest ili deset sati nakon primene i postižu ciljani terapeutski opseg koncentracije Ca u serumu od 7.6 do 8.8 mg/dL kod pacijenata sa hipoparatiroidizmom. Sa druge strane, ovaj ciljani terapeutski opseg ne može da se dostigne u bilo koje vreme merenja za Jedinjenje 1 i komparativne primere 1 i 2 koji imaju malu metaboličku stabilnost hepatocita pacova.

[0172] Iz rezultata prethodno navedenog testa, naađeno je da Jedinjenja 6, 7 i 8, koja imaju jaku aktivnost signalizacije cAMP u ćelijama izazivajući ekspresiju PTH1R pacova i veliku stabilnost prema metaboličkom raspadanju hepatocita pacova pokazuju jake efekte na kalcemičko delovanje na pacovima kada se primene oralno. Ova jedinjenja takođe imaju aktivnost signalizacije cAMP u ćelijama izazivajući ekspresiju humanog PTH1R i veliku metaboličku stabilnost u odnosu na mikrozome humane jetre u poređenju sa komparativnim Jedinjenjima; i od njih se očekuje da imaju velike terapeutske efekte kada se primene oralno na pacijentima sa hipoparatiroidizmom. Osim toga, za jedinjenja predstavljena Formulom (1) koja imaju aktivnost signalizacije cAMP u ćelijama izazivajući ekspresiju humanog PTH1R i koja pokazuju metaboličku stabilnost u odnosu na mikrozome humane jetre u istom stepenu kao Jedinjenja 6, 7 i 8, se takođe očekuje da imaju terapeutske efekte kod pacijenata sa hipoparatiroidizmom.

Primenljivost u industriji

[0173] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja imaju jak efekat sličan PTH i veliku metaboličku stabilnost. Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje lek za prevenciju i/ili tretman osteoporoze, frakture, adinamičke bolesti kostiju, ahondroplazije, hipohondroplazije, osteomalacije, osteoartritisa, artritisa, trombocitopenije, hipoparatiroidizma, hiperfosfatemije, tumoralne kalcinoze ili slično ili za mobilizaciju matičnih ćelija.

1

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje predstavljeno niže datom opštom formulom (1) ili njegova farmakološki prihvatljiva so:

naznačeno time što su R1 i R2 nezavisno: 1) atom vodonika; 2) atom halogena; 3) alkil grupa koja uključuje jedan ili dva ugljenika koji mogu da budu supstituisani sa jednim do pet atoma fluora; ili 4) alkoksi grupa koja uključuje jedan ili dva ugljenika koji mogu da budu supstituisani sa jednim do pet atoma fluora, pod uslovom da R1 i R2 nisu oba vodonik; ili su R1 i R2 su međusobno vezani da formiraju grupu predstavljenu niže datom formulom:

(gde svaka * pokazuje položaj vezivanja sa fenil delom); i R3 i R4 su nezavisno metil grupa koja može da bude supstituisana sa jednim do tri atoma fluora; ili R3 i R4, zajedno sa vezanim atomom ugljenika, formiraju tri- do šest-člani karbociklični prsten (pri čemu, jedan od atoma ugljenika koji formira prsten može da bude zamenjen sa atomom kiseonika, atomom sumpora, ili metil-supstituisanim ili nesupstituisanim atomom azota).
2. Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što su R1 i R2 izabrani od niže datih kombinacija: 1) R1 je atom vodonika ili atom halogena a R2 je atom vodonika, trifluorometil grupa, ili trifluorometoksi grupa (pod uslovom da R1 i R2 nisu oba atomi vodonika); 2 2) R1 je trifluorometil grupa ili trifluorometoksi grupa a R2 je atom vodonika ili atom halogena; 3) R1 i R2 su međusobno vezani da formiraju grupu predstavljenu niže datom formulom:

(gde svaka * pokazuje položaj vezivanja sa fenil delom); i R3 i R4 su metil grupe; ili R3 i R4, zajedno sa vezanim atomom ugljenika, formiraju prsten izabran od niže datih:

(gde * prikazuje položaj vezivanja sa imidazolidin-2,4-dion delom).
3. Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što su R1 i R2 izabrani od niže datih kombinacija: 1) R1 je trifluorometoksi grupa a R2 je atom fluora; 2) R1 je atom broma a R2 je atom vodonika; 3) R1 je trifluorometoksi grupa a R2 je atom fluora; 4) R1 je atom fluora a R2 je trifluorometoksi grupa; 5) R1 je trifluorometil grupa a R2 je atom vodonika; 6) R1 je atom vodonika a R2 je trifluorometoksi grupa; 7) R1 i R2 su međusobno vezani da formiraju grupu predstavljenu niže datom formulom:

(gde svaka * pokazuje položaj vezivanja sa fenil delom); i R3 i R4 su metil grupe; ili R3 i R4, zajedno sa vezanim atomom ugljenika, formiraju prsten izabran od niže datih:

(gde * prikazuje položaj vezivanja sa imidazolidin-2,4-dion delom).
4. Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što su R3 i R4 metil grupe.
5. Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što R3 i R4, zajedno sa vezanim atomom ugljenika, formiraju prsten izabran od niže datih:

(gde * prikazuje položaj vezivanja sa imidazolidin-2,4-dion delom).
6. Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je jedinjenje izabrano iz grupe koja sadrži: 1-(4-(2-((2-(4-fluoro-3-(trifluorometoksi)fenil)-4-okso-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion; 1-(4-(2-((2-(3-bromofenil)-4-okso-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion; 1-(4-(2-((2-(4-fluoro-3-(trifluorometil)fenil)-4-okso-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion; 4 1-(4-(2-((2-(3-fluoro-4-(trifluorometoksi)fenil)-4-okso-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion; 1-(4-(2-((2-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioksol-5-il)-4-okso-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion; 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion; 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion; 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3-diazaspiro[4.4]nonan-2,4-dion; 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-8-metil-1,3,8-triazaspiro[4.5]dekan-2,4-dion; 5-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-2-oksa-5,7-diazaspiro[3.4]oktan-6,8-dion; iand 4-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-4,6-diazaspiro[2.4]heptan-5,7-dion.
7. Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je jedinjenje 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en -8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion.
8. Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što su jedinjenje 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion.
9. Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je jedinjenje 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-okso-2-(4-(trifluorometoksi)fenil)-1,3,8-triazaspiro[4.5]deka-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3-diazaspiro[4.4]nonan-2,4-dion.
10. Farmaceutska kompozicija, naznačena time što kao aktivni sastojak uključuje jedinjenje ili njegovu farmakološki prihvatljivu so iz bilo kog od patentnih zahteva 1 do 9.
11. Farmaceutska kompozicija u skladu sa patentnim zahtevom 10, naznačena time što je za upotrebu u oralnoj primeni.
12. Farmaceutska kompozicija za aktivaciju intracelularnog cAMP odgovora, naznačena time što kao aktivni sastojak uključuje jedinjenje ili njegovu farmakološki prihvatljivu so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 9.
13. Sredstvo za mobilizaciju matičnih ćelija, ili sredstvo za prevenciju ili lečenje osteoporoze, frakture, adinamičke bolesti kostiju, ahondroplazije, hipohondroplazije, osteomalacije, osteoartritisa, artritisa, trombocitopenije, hipoparatiroidizma, hiperfosfatemije ili tumoralne kalcinoze, naznačeno time što kao aktivni sastojak uključuje jedinjenje ili njegovu farmakološki prihvatljivu so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 9.
14. Jedinjenje ili njegova farmakološki prihvatljiva so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 9, naznačeno time što je za upotrebu u prevenciji ili tretmanu osteoporoze, frakture, adinamičke bolesti kostiju, ahondroplazije, hipohondroplazije, osteomalacije, osteoartritisa, artritisa, trombocitopenije, hipoparatiroidizma, hiperfosfatemije ili tumoralne kalcinoze ili za mobilizaciju matičnih ćelija.
15. Upotreba jedinjenja ili njegove farmakološki prihvatljive soli u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 9, naznačeno time što je za produkciju sredstva za mobilizaciju matičnih ćelija ili sredstva za prevenciju ili lečenje osteoporoze, frakture, adinamičke bolesti kostiju, ahondroplazije, hipohondroplazije, osteomalacije, osteoartritisa, artritisa, trombocitopenije, hipoparatiroidizma, hiperfosfatemije ili tumoralne kalcinoze.