RS57220B1 - Derivati naftiridina korisni kao antagonisti αlfa-v-βeta-6 integrina - Google Patents

Derivati naftiridina korisni kao antagonisti αlfa-v-βeta-6 integrina

Info

Publication number
RS57220B1
RS57220B1 RS20180537A RSP20180537A RS57220B1 RS 57220 B1 RS57220 B1 RS 57220B1 RS 20180537 A RS20180537 A RS 20180537A RS P20180537 A RSP20180537 A RS P20180537A RS 57220 B1 RS57220 B1 RS 57220B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
ethyl
compound
pyrazol
phenyl
formula
Prior art date
Application number
RS20180537A
Other languages
English (en)
Inventor
Niall Andrew Anderson
Brendan John Fallon
John Martin Pritchard
Original Assignee
Glaxosmithkline Ip Dev Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Glaxosmithkline Ip Dev Ltd filed Critical Glaxosmithkline Ip Dev Ltd
Publication of RS57220B1 publication Critical patent/RS57220B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/415—1,2-Diazoles
    • A61K31/4155—1,2-Diazoles non condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4375—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having nitrogen as a ring heteroatom, e.g. quinolizines, naphthyridines, berberine, vincamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

Opis
POLJE PRONALASKA
[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenja pirolidina koja su antagonisti αvβ6integrina, na farmaceutske kompozicije koje uključuju ova jedinjenja i na upotrebu tih jedinjenja u terapiji, posebno u tretmanu stanja u kojima je indikovan antagonist αvβ6integrina i na jedinjenja koja mogu da se koriste kao međuproizvodi za proizvodnju ovih jedinjenja.
POREKLO PRONALASKA
[0002] Superfamilija integrin proteina su heterodimerički receptori površine ćelija, sastavljeni od alfa i beta podjedinica. Registrovano je 18 alfa i 8 beta podjedinica, za koje je pokazano da formiraju 24 različitih alfa/beta heterodimera. Svaki lanac uključuje veliki ekstracelularni domen (>640 amino kiselina za beta podgrupu, >940 amino kiselina za alfa podgrupu), sa transmembranom koja obuhvata region od približno 20 amino kiselina po lancu i generalno kratki citoplazmični repić od 30-50 amino kiselina po lancu. Pokazano je da različiti integrini učestvuju u više celularnih procesa, uključujući adheziju ćelije za ekstracelularni matriks, interakcije ćelije-ćelija i deluju na ćelijsku migraciju, proliferaciju, diferencijaciju i preživljavanje (Barczyk i saradnici, Cell andi Tissue Research, 2010, 339, 269).
[0003] Integrin receptori stupaju u interakciju sa proteinima vezivanja preko kratke međupovršine vezivanja protein-protein sa ligandima a integrin familija može da bude grupisana u sub-familije koje dele slične prepoznatljive motife vezivanja u tim ligandima.
Najveća subfamilija je RGD-integrini, koji prepoznaju ligande koji sadrže RGD (Argininglicin-aspartanska kiselina) motif u okviru svoje proteinske sekvence. U ovoj subfamiliji postoji 8 integrina, to jest, αvβ1, αvβ3,αvβ5, αvβ6, αvβ8, αllbβ3, α5β1, α8β1, pri čemu nomenklatura pokazuje da αvβ1, αvβ3, αvβ5, αvβ6& αvβ8dele zajedničku V podgrupu sa divergentnom β podgrupom, a αvβ1, α5β1& α8β1dele zajedničku β1podgrupu sa divergentnom α podgrupom. Pokazano je da β1subjedinica gradi par sa 11 različitih α subjedinica, od kojih samo 3 prethodno navedene zajednički prepoznaju motif RGD peptida. (Humphries i saradnici, Journal of Cell Science, 2006, 119, 3901).
[0004] U okviru 8 RGD-vezujućih integrina postoje različiti afiniteti vezivanja i specifičnosti za različite ligande koji sadrže RGD. Ligandi uključuju proteine kao što su fibronektin, vitronektin, osteopontin i latentno povezane peptide (LAPes) transformišućeg faktora rasta β1i β3(TGFβ1i TGFβ3). Pokazano je da vezivanje TGFβ1i TGFβ3za LAPe u nekoliko sistema omogućava aktivaciju bioloških aktivnosti TGFβ1i TGFβ3i nakon toga biološke reakcije pokrenutog TGFβ (Worthington i saradnici, Trends in Biochemical Sciences, 2011, 36, 47). Specifično vezivanje RGD integrina za ove ligande zavisi od brojnih faktora, u zavisnosti od fenotipa ćelije. Raznolikost ovih liganda, povezano sa oblicima ekspresije RGD-vezujućih integrina, generiše višestruke mogućnosti za uticaj na bolesti. U takve bolesti spadaju fibrotične bolesti (Margadant i saradnici, EMBO reports, 2010, 11, 97), inflamatorni poremećaji, kancer (Desgrosellier i saradnici, Nature Reviews Cancer, 2010, 10, 9), restenoze i druge bolesti sa angiogeničnom komponentom (Weis i saradnici, Cold Spring. Harb.
Perspect. Med.2011, 1, a006478).
[0005] U literaturi je otkriven značajan broj antagonista αvintegrina (Goodman i saradnici, Trends in Pharmacological Sciences, 2012, 33, 405) uključujući antitela, male peptide i jedinjenja kao antagoniste. Kao antitelo, uključen je pan-αvantagonist Intetumumab, selektivni αvβ3antagonist Etaracizumab i selektivni αvβ6antagonist STX-100. Cilengitid je ciklični peptidni antagonist koji inhibira i αvβ3i αvβ5, a SB267268 je primer jedinjenja (Wilkinson-Berka i saradnici, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2006, 47, 1600), koje inhibira i αvβ3i αvβ5. Otkriće jedinjenja koja deluju kao antagonisti različitih kombinacija αvintegrina omogućava generisanje i stvaranje novih sredstava za indikacije specifičnih bolesti.
[0006] Fibroza pluća predstavlja završno stanje više intersticijalnih bolesti pluća, uključujući idiopatske intersticijalne pneumonije i karakteriše se prekomernim nagomilavanjem ekstracelularnog matriksa unutar intesticijuma pluća. Između idiopatskih intesticijalnih pneumonija, idiopatska plućna fibroza (IPF) predstavlja najčešće i najfatalnije stanje sa kojim je vreme preživaljavanja 3 do 5 godina nakon postavljanja dijagnoze. Fibroza u IPF je generalno progresivna, otporna na postojeću farmakološku intervenciju i neumitno dovodi do respiratorne insuficijencije zbog uništenja funkcionalnih alveolarnih jedinica. Od IPF boluje približno 500,000 ljudi u USA i Evropi. Zbog toga ovo stanje predstavlja veliku nezadovoljenu medicinsku potrebu za koje je hitno potreban novi terapeutski pristup (Datta A i saradnici, Novel therapeutic approaches for pulmonary fibrosis, British Journal of Pharmacology 2011 163: 141-172).
[0007] Postoje snažni, in vitro, imunohistohemijski podaci za eksperimentalne životinje i IPF pacijente koji potvrđuju ključnu ulogu epitelijalno-ograničenog integrina, αvβ6, u aktivaciji TGF-β1. Ekspresija ovog integrina je mala u normalnom epitelijalnom tkivu a značajno je povećana u oštećenom i upaljenom epitelu uključujući aktivirani epitel u IPF. Ciljajući na ovaj integrin se stoga smanjuje teoretska mogućnost delovanja većih homeostatskih uloga TGF-β. Pokazano je da parcijalna inhibicija αvβ6integrina blokadom antitelom sprečava plućne fibroze bez ispoljavanja inflamacije (Horan GS i saradnici, Partial inhibition of integrin αvβ6prevents pulmonary fibrosis without exacerbating inflammation. Am J Respir Crit Care Med 2008177: 56-65)
[0008] αvβ3integrin se pojavljuje u velikom broju tipova ćelija, uključujući vaskularni endotelijum gde se karakteriše kao regulator brane otpornosti. Rezultati u životinjskim modelima akutnog oštećenja pluća i sepse su pokazali značajnu ulogu ovog integrina u propustljivosti krvnih sudova dok miševi sa inaktiviranim genima pokazuju značajno povećanje propustljivosti krvnih sudova što dovodi do plućnog edema ili smrti. Osim toga, antitela sposobna za inhibiciju funkcije αvβ3dovode do dramatičnog porasta permeabilnosti monosloja u humanoj plućnoj arteriji i endotelijalnim ćelijama pupčane vene kao odgovor na višestruke faktore rasta. Ovi rezultati ukazuju na zaštitnu ulogu αvβ3u održavanju integriteta vaskularnog endotelijuma nakon stimulacije krvnog suda i pokazuju da inhibicija ove funkcije može da izazove patogeni odgovor na početku hronične bolesti (Su i saradnici, Absence of integrin αvβ3enhances vascular leak in mice by inhibiting endothelial cortical actin formation Am J Respir Crit Care Med 2012185: 58-66). Prema tome, selektivnost za αvβ6u odnosu na αvβ3može da obezbedi bezbednosne prednosti.
[0009] Cilj ovog pronalaska je da obezbedi αvβ6antagoniste.
[0010] US 2004/0092454 se odnosi na jedinjenja opisana kao korisni αvβ6inhibitori.
KRATAK SADRŽAJ PRONALASKA
[0011] U prvom aspektu ovog pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje formule (I)
gde
R1predstavlja atom vodonika, metil grupu ili etil grupu;
R2predstavlja atom vodonika ili atom fluora;
R3predstavlja atom vodonika, metil grupu ili etil grupu; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0012] Jedinjenja formule (I) i njihove soli deluju kao antagonisti αvβ6i veruje se da potencijalno mogu da se koriste za tretman ili profilaksu nekih poremećaja.
[0013] U drugom aspektu ovog pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja uključuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenata.
[0014] U trećem aspektu ovog pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u terapiji, posebno u tretmanu bolesti ili stanja za koja je indikovan antagonist αvβ6integrin receptora.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0015] U prvom aspektu pronalaska obezbeđeno je jedinjenje formule (I)
gde
R1predstavlja atom vodonika, metil grupu ili etil grupu;
R2predstavlja atom vodonika ili atom fluora;
R3predstavlja atom vodonika, metil grupu ili etil grupu; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0016] U nekim otelotvorenjima jedinjenje formule (I) ima konfiguraciju:
[0017] Jasno je da ovaj pronalazak pokriva sve kombinacije određenih i preferiranih grupa koje su ovde prethodno opisane.
[0018] U nekim otelotvorenjima, R1predstavlja metil grupu, R2predstavlja atom vodonika i R3predstavlja metil grupu.
[0019] U nekim otelotvorenjima, R1predstavlja metil grupu, R2predstavlja atom vodonika i R3predstavlja atom vodonika.
[0020] U nekim otelotvorenjima, R1predstavlja metil grupu, R2predstavlja atom fluora i R3predstavlja metil grupu.
[0021] U nekim otelotvorenjima, R1predstavlja atom vodonika, R2predstavlja atom vodonika i R3predstavlja atom vodonika.
[0022] U nekim otelotvorenjima, R1predstavlja etil grupu, R2predstavlja atom vodonika i R3predstavlja metil grupu.
[0023] U nekim otelotvorenjima, R1predstavlja etil grupu, R2predstavlja atom vodonika i R3predstavlja etil grupu.
[0024] U nekim otelotvorenjima, R1predstavlja atom vodonika, R2predstavlja atom vodonika i R3predstavlja metil grupu.
[0025] U jednom otelotvorenju jedinjenje je izabrano od:
3-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline;
3-(3-(5-Metil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline;
3-(3-(5-Etil-3-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline;
3-(3-(1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline;
3-(3-(3,5-Dietil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline;
3-(3-(4-Fluoro-3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline;
3-(3-(3-Metil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline;
ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0026] U jednom otelotvorenju jedinjenje je:
3-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatna kiselina;
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0027] Jasno je da ovaj pronalazak obuhvata jedinjenja formule (I) kao slobodnu bazu i kao njegovu farmaceutski prihvatljivu so. U jednom otelotvorenju, pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I) ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0028] Za pregled odgovarajućih soli videti Berge i saradnici, J. Pharm. Sci., 66:1-19, (1977). Odgovarajuće farmaceutski prihvatljive soli su navedene u P H Stahl and C G Wermuth, editors, Handbook of Pharmaceutical Salts; Properties, Selection and Use, Weinheim/Surich: Wiley- VCH/VHCA, 2002. Odgovarajuće farmaceutski prihvatljive soli mogu da uključe soli nastale dodatkom kiseline sa neorganskim kiselinama kao što su, na primer, hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, ortofosforna kiselina, azotna kiselina, fosforna kiselina ili sumporna kiselina ili sa organskim kiselinama kao što su, na primer, metansulfonska kiselina, etansulfonska kiselina, p-toluensulfonska kiselina, sirćetna kiselina, propionska kiselina, mlečna kiselina, limunska kiselina, mravlja kiselina, jabučna kiselina, sukcinska kiselina, salicilna kiselina, maleinska kiselina, glicerofosforna kiselina, tartaratna, benzoeva, glutaminska, aspartanska, benzensulfonska, naftalensulfonska kao što je 2-naftalensulfonska, heksanoatna kiselina ili acetilsalicilna kiselina. Uobičajeno, farmaceutski prihvatljiva so može jednostavno da se izradi koristeći po potrebi željenu kiselinu ili bazu. Nastala so može da precipitira iz rastvora i da se sakupi filtriranjem ili može da se povrati evaporacijom rastvarača.
[0029] Druge ne-farmaceutski prihvatljive soli, na primer, formati, oksalati ili trifluoroacetati, mogu da se koriste, na primer, u izolovanju jedinjenja formule (I).
[0030] Farmaceutski prihvatljiva so nastala dodatkom baze može da se formira reakcijom jedinjenja formule (I) sa odgovarajućom neorganskom ili organskom bazom, (na primer trietilaminom, etanolaminom, trietanolaminom, holinom, argininom, lizinom ili histidinom), opciono u pogodnom rastvaraču, da se dobije so nastala dodatkom baze koja se obično izoluje, na primer, kristalizacijom ili filtriranjem. Farmaceutski prihvatljive bazne soli uključuju soli amonijuma, soli alkalnih metala kao što su soli natrijuma i kalijuma, soli zemno alkalnih metala kao što su soli kalcijuma i magnezijuma i soli sa organskim bazama, uključujući soli primarnih, sekundarnih i tercijernih amina, kao što su izopropilamin, dietilamin, etanolamin, trimetilamin, dicikloheksilamin i N-metil-D-glukamin.
[0031] U jednom otelotvorenju jedinjenje formule (I) ima oblik slobodne baze, na primer, 3-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatna kiselina.
[0032] U narednom otelotvorenju, jedinjenje formule (I) je hidrohloridna so, na primer, hidrohloridna so 3-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline.
[0033] Okvirom pronalaska su obuhvaćeni svi mogući stehiometrijski i ne-stehiometrijski oblici soli jedinjenja formule (I).
[0034] Poznato je da brojna organska jedinjenja mogu da formiraju komplekse sa rastvaračima u kojima reaguju ili iz kojih precipitiraju ili kristališu. Ovi kompleksi su poznati kao "solvati". Na primer, kompleks sa vodom je poznat kao "hidrat". Rastvarači sa visokom tačkom ključanja i/ili koji su sposobni da formiraju vodonične veze kao što su voda, ksilen, N-metilpirolidinon, metanol i etanol mogu da se koriste za formiranje solvata. Postupci za identifikaciju solvata uključuju, ali se ne ograničavaju samo na, NMR i mikroanalize. Solvati jedinjenja formule (I) su obuhvaćeni okvirom pronalaska.
[0035] Jedinjenja formule (I) mogu da budu u kristalnom ili amofrnom obliku. Osim toga, neki od kristalnih oblika jedinjenja formule (I) mogu da egzistiraju kao polimorfi, koji su uključeni u okvir ovog pronalaska. Polimorfni oblici jedinjenja formule (I) mogu da se okarakterišu i diferenciraju pomoću brojnih uobičajenih analitičkih tehnika, uključujući ali bez ograničenja na, difrakciju X zraka praškastog uzorka (XRPD), infracrveni /(IR) spektar, Raman spektar, diferencijalnu skenirajuću kalorimetriju (DSC), termogravimetrijske analize, (TGA) i nuklearnu magnetnu rezonancu čvrstog stanja (SSNMR).
[0036] Razumljivo je da kristalni oblici mogu opciono da budu hidratisani ili solvatisani. Ovaj pronalazak u okviru jedinjenja formule (I) uključuje stehiometrijske hidrate kao i jedinjenja formule (I) koja sadrže promenljive količine vode. Pogodni solvati uključuju farmaceutski prihvatljive solvate kao što su hidrati. Solvati obuhvataju stehiometrijske solvate i nestehniometrijske solvate.
[0037] Ovde opisana jedinjenja sadrže dva asimetrična centra tako da mogu da se formiraju izomeri, na primer, diastereoizomeri. U skladu sa tim, ovaj pronalazak obuhvata optičke izomere jedinjenja formule (I) ili kao pojedinačne izomere izolovane tako da budu potpuno slobodni od drugih izomera (to jest čisti) ili kao smešu. Pojedinačni izomer izolovan tako da bude potpuno slobodan od drugog izomera (to jest čist) može da bude izolovan tako da je prisustvo drugog izomera manje od 10%, preciznije manje od približno 1%, na primer manje od približno 0.1%.
[0038] Stručnjaku sa iskustvom u tehnici će da bude jasno da neki diastereoizomeri mogu da budu manje aktivni od drugih i da ta aktivnost pojedinačnog diastereoizomera može da bude ispod određenog limita.
[0039] U jednom otelotvorenju, jedinjenje formule (I) je (S)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatna kiselina
[0040] U narednom otelotvorenju jedinjenje formule (I) je hidrohloridna so (S)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-18-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline.
[0041] Razdvajanje izomera može da se izvrši uobičajenim tehnikama poznatim stručnjaku sa iskustvom u tehnici, na primer, frakcionom kristalizacijom, hromatografijom ili HPLC.
[0042] Jedinjenja formule (I) mogu da egzistiraju u jednom od više tautomernih oblika.
Razumljivo je da ovaj pronalazak obuhvata sve tautomere jedinjenja formule (I) bilo kao pojedinačne tautomere ili kao njihove smeše.
[0043] Iz prethodno navedenog je jasno da su okvirom ovog pronalaska obuhvaćeni solvati, optički izomeri, tautomerni polimorfni oblici jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli.
IZRADA JEDINJENJA
[0044] Jedinjenja iz pronalaska mogu da se izrade različitim postupcima, uključujući standardne hemijske reakcije. Svaka prethodno definisana promenljiva će i dalje da ima prethodno definisano značenje ukoliko nije drugačije navedeno. Ilustrativni opšti postupci sinteze su niže dati a nakon toga su specifčna jedinjenja iz pronalaska izrađena po postupku u Primerima.
[0045] Jedinjenja strukturne formule (I) mogu da se izrade procesom koji prvo uključuje deprotekciju jedinjenja strukturne formule (II), to jest cepanje estarske grupe, a nakon toga konverziju u so:
gde su R1, R2i R3kako je prethodno definisano a
R4je C1do C6alkil grupa, na primer, terc-Bu, izo-propil, etil ili metil grupa.
[0046] Šesti aspekt pronalaska obezbeđuje jedinjenje formule (II).
[0047] U jednom otelotvorenju, jedinjenje formule (II) ima konfiguraciju:
1
[0048] Deprotekcija jedinjenja strukturne formule (II) gde je R4terc-Bu može da se izvrši kiselom hidrolizom koristeći, na primer, hlorovodoničnu, bromovodoničnu, sumpornu ili trifluorosirćetnu kiselinu, u inertnom rastvaraču kao što su DCM, 2-metil-tetrahidrofuran, tetrahidrofuran, 1,4-dioksan ili ciklopentil metil etar.
[0049] Alternativno, deprotekcija jedinjenja strukturne formule (II) gde je R4metil grupa može da se izvrši baznom hidrolizom koristeći na primer vodeni rastvor natrijum hidroksida ili kalijum hidroksida u pogodnom rastvaraču, kao što je metanol.
[0050] Nakon cepanja estarske grupe, nastali produkt može da se konvertuje u traženu so postupcima koji su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici.
[0051] U jednom otelotvorenju, konverzija slobodne baze u hidrohloridnu so se postiže tretmanom rastvora slobodne baze u acetonitrilu sa vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline, koncentracijom nastalog rastvora soli i kristalizacijom iz acetonitrila.
[0052] Jedinjenja strukturne formule (II) mogu da se dobiju katalitičkom hidrogenacijom preko katalizatora, kao što su paladijum ili rodijum na ugljeniku, jedinjenja strukturne formule (III) gde su R1, R2, R3i R4kako je prethodno definisano. Hidrogenacija može da se izvede pod atmosferskim pritiskom ili pod blago povišenim pritiskom gasa vodonika, kao što su 2 do 10 atmosfera, u pogodnom rastvaraču kao što su EtOH, MeOH ili njihova smeša.
[0053] Jedinjenja strukturne formule (III) mogu da se izrade procesom koji uključuje reakciju jedinjenja strukturne formule (IV) sa bornom kiselinom strukturne formule (V) u prisustvu pogodnog katalizatora, opciono u prisustvu asimetričnog liganda, na povišenoj temperaturi i u prisustvu baze
gde su R1, R2, R3i R4kako je prethodno definisano, a geometrija dvostruke veze može da bude (E) ili smeša (E) i (Z) izomera, preferirano čist (E) izomer.
[0054] Jedinjenja strukturne formule (V) gde su R1, R2, R3kako je prethodno dfinisano, a R5predstavlja ili vodonik ili C1do C6alkil grupu, kao što je 2, 3-dimetilbutan-2,3-diol (pinakol).
[0055] Jedinjenja strukturne formule (V) mogu da se koriste kao čista borna kiselina (R5= H) ili kao estar borne kiseline (R5 = alkil grupa), koji može in situ da se konvertuje u bornu kiselinu u prisustvu vode i baze, kao što je kalijum hidroksid.
[0056] Proces kndenzovanja jedinjenja strukturnih formula (IV) i (V) se izvodi u prisustvu pogodnog katalizatora, kao što je rodijum katalizator, preferirano hlor(1,5-ciklooktadien)rodijum(I) dimer u količini od približno 5% i u inertnom rastvaraču koji se meša sa vodom, kao što je 1,4-dioksan, u prisustvu baze kao što je kalijum hidroksid, na povišenoj temperaturi kao što je 50 do 90 °C. Proces kondenzacije se izvodi pod striktno anaerobnim uslovima, gde se reaktivna smeša prečisti sa inertnim gasom kao što je azot i izvuče pod sniženim pritiskom uz ponavljanje procesa izvlačenja i prečišćavanja sa azotom više puta, na primer, tri puta.
[0057] Ovim procesom kondenzacije se dobijaju dva diastereoizomera, u približnom odnosu 1:1, koji mogu da se razdvoje kristalizacijom, hromatografijom ili pomoću HPLC. Preferirani postupak razdvajanja je asimetrična HPLC na asimetričnom nosaču, kao što je Chiralpak kolona. Odnos formiranih diastereoizomera može znatno da se poveća do, na primer, 80:20, u prisustvu 10% aditiva, kao što su asimetrični ligandi. U ovakve aditive spadaju enantiomerno čisti fosfin ligandi, na primer (R)-(+)-2,2’-bis(difenilfosfino)-1,1’-binaftalen [(R)-BINAP], koji obezbeđuje glavni izomer biološki mnogo aktivnijeg diastereoizomera.
[0058] Nađeno je da diastereoizomerni odnos zavisi od veličine alkil grupe R4. Prema tome, kada je R4tercijerna grupa, dobija se veći odnos traženog glavnog izomera. Preferirana alkil grupa R4je terc-Bu koja produkuje diastereoizomerni odnos do 95:5. Diastereoizomerni odnos može dalje da se poveća do, na primer, više od 99:1, asimetričnom HPLC ili kristalizacijom. Najveći nivo diastereoizomernog odnosa od 90:10 je dobijen kada je alkil grupa R4metil.
[0059] Jedinjenja strukturne formule (IV) mogu da se izrade reakcijom (R)-2-(2-(pirolidin-3-il)etil)-1,8-naftiridina [jedinjenje strukturne formule (VI)] sa jedinjenjem strukturne formule (VII), u prisustvu od približno 10% odgovarajućeg paladijum katalizatora, u pogodnom inertnom rastvaraču kao što je DCM, u prisustvu tercijerne amin baze, kao što su trietilamin ili diizopropiletilamin i na temperaturi sredine. Pogodni paladijum katalizatori preferirano poseduju bidentat ligand, kao što su dve difenilfosfin grupe, na primer, 1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihlorpaladijum(II) [Pd(dppf)Cl2]. Jedinjenje strukturne formule (VI) može da se koristi kao slobodna baza ili da se in situ generiše iz soli, kao što je dihidrohloridna so, u prisustvu tercijerne amin baze.
[0060] Jedinjenje strukturne formule (VI) [(R)-2-(2-(pirolidin-3-il)etil)-1,8-naftiridin] može da se izradi ovde opisanim postupcima. Kao ilustracija, (R)-2-(2-(pirolidin-3-il)etil)-1,8-naftiridin može da se izradi postupcima opisanim u Šemi 1.
1
Šema 1
[0061] Reagensi i uslovi: (a) jod, imidazol, trifenilfosfin, DCM, 0°C; (b) 2-metil-[1,8]-naftiridin, LiN(TMS)2, THF, 0°C; (c) 4M HCl u dioksanu.
[0062] (R)-terc-butil 3-(hidroksmetil)pirolidin-1-karboksilat je komercijalno raspoloživ od dobavljača Fluorochem ili BePharm Ltd, a 2-metil-[1,8]-naftiridin je komercijalno raspoloživ, na primer, od Manchester Organics Ltd, Aldrich ili Alfa Aesar.
[0063] Jedinjenje strukturne formule (VII) može da se izradi ovde opisanim postupcima. Kao ilustracija, jedinjenje strukturne formule (VI), u kome je R4je terc-butil, a dvostruka veza ima (E) geometriju, može da se izradi postupkom opisanim u Šemi 2.
Šema 2
[0064] Reagensi i uslovi: (a) izobutilen, conc. H2SO4, dietil etar, 24 h; (b) kalijum acetat, acetonitril, 60 °C, 4 h.
[0065] (E)-4-Bromobut-2-enoatna kiselina se izrađuje u skladu sa procedurom iz literature [T. Den Hartog, D. J. Van Dijken, A. J. Minnaard, B. L. Feringa Tetrahedron: Asymmetry 2010, 21, 1574-1584].
[0066] Jedinjenje strukturne formule (VII) u kome je R4metil grupa, može da se izradi po ovde opisanim postupcima. Na primer, (E)-metil 4-acetoksibut-2-enoat može da se izradi reakcijom komercijalno raspoloživog (E) metil 4-bromobut-2-enoata sa acetatnom solju, kao što su kalijum ili natrijum acetat, u pogodnom rastvaraču, kao što je acetonitril i na povišenoj temperaturi, kao što je 45-55°C.
[0067] Jedinjenja strukturne formule (V) mogu da se izrade od jedinjenja strukturne formule (VIII), gde su R1, R2i R3kako je ovde prethodno definisano.
[0068] Jedinjenja strukturne formule (V) u kome je R5H, mogu da se izrade procesom u tri faze uključujući reakciju Jedinjenja strukturne formule (VIII) sa organolitijum reagensom, kao što je n-butillitijum, u inertnom rastvaraču, kao što su THF ili 2-metil-tetrahidrofuran, na niskoj temperaturi, kao što je između -60 i -78 °C i u inertnoj atmosferi azota ili argona, nakon toga reakcijom sa trialkil borat estrom, kao što je tri(izopropil) borat i na kraju hidrolizom.
[0069] Alternativno, Jedinjenja strukturne formule (V), gde je R5pinakol, mogu da se izrade reakcijom Jedinjenja strukturne formule (VIII) sa bis(pinakolato)diboronom (raspoloživ od dobavljača Aldrich), u prisustvu paladijum katalizatora, kao što je tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum (raspoloživ od dobavljača Aldrich) i u prisustvu fosfin liganda, kao što je 2-dicikloheksilfosfino-2’,4’,6’-triizopropilbifenil (X-PHOS) (raspoloživ od dobavljača Aldrich) i u prisustvu kalijum acetata, u inertnom rastvaraču, kao što je 1,4-dioksan, na povišenoj temperaturi, na primer 110 °C i u inertnoj atmosferi, kao što je azot. Dodavanje vode u reaktivnu smešu na završetku reakcije izaziva hidrolizu nastalog pinakolato estra i dobija se željena borna kiselina (V).
[0070] (3-(1H-Pirazol-1-il)fenil)borna kiselina, do jest jedinjenje (V), gde svaki R1, R2i R3predstavlja vodonik, je komercijalno raspoloživa, na primer od dobavljača ABCR GmbH.
[0071] Jedinjenja strukturne formule (VIII) mogu da se izrade od (3-bromofenil)hidrazina (raspoloživ od dobavljača Aldrich) ili (3-bromofenil)hidrazin hidrohlorida (raspoloživ od dobavljača Amatek ili Reddy & Reddy) i zagrevanjem sa odgovarajućim dikarbonil jedinjenjem kao što su pentan-2,4-dion, heptan-3,5-dion, 3-fluoro-pentan-2,4-dion ili maskiranim dionom, kao što je (E)-4-(postupcima koji su ovde opisani u eksperimentalnom delu.
[0072] Razumljivo je da u bilo kom načinu koji je prethodno opisan može da bude prednost da se zaštiti jedna ili više funkcionalnih grupa. Primeri zaštitnih grupa i načini za njihovo uklanjanje mogu da se nađu u T. W. Greene ’Protective Groups in Organic Synthesis’ (3rd edition, J. Wiley and Sons, 1999). Pogodne amin zaštitne grupe uključuju acil (na primer
1
acetil, karbamat (na primer 2’,2’,2’-trihloretokskarbonil, benziloksikarbonil ili tbutoksikarbonil) i arilalkil (na primer benzil), koje mogu da se uklone hidrolizom (na primer upotrebom kiseline kao što su hlorovodonična kiselina u dioksanu ili trifluorosirćetna kiselina u dihlormetanu) ili reduktivno (na primer hidrogenolizom benzil ili benziloksikarbonil grupe ili reduktivnim uklanjanjem 2’,2’,2’-trihloretokskarbonil grupe korišćenjem cinka u sirćetnoj kiselini), kako je odgovarajuće. U druge pogodne amin zaštitne grupe spada trifluoroacetil (-COCF3) koja može da se ukloni hidrolizom uz bazu kao katalizator.
[0073] Jasno je da u bilo kom od prethodno opisanih postupaka, precizan redosled faza sinteze kojima se različite grupe i delovi uvode u molekulu može da varira. Stručnjak sa iskustvom u primeni tehnike treba da osigura da grupe ili delovi uvedeni u jednoj fazi procesa neće negativno da utiču na naredne transformacije i reakcije i u skladu sa tim da odredi redosled faza sinteze.
[0074] Apsolutna konfiguracija jedinjenja (I) u kome R1predstavlja metil grupu, R2predstavlja atom vodonika a R3predstavlja metil grupu (Primer 1) se dobija nakon nezavisne enantioselektivne asimetrične sinteze kojom se obezbeđuje jednostavan međuproizvod poznate apsolutne konfiguracije i poređenjem spektroskopskije, optičke rotacije i analitičke asimetrične HPLC jednostavnog međuproizvoda dobijenog iz oba načina sinteze. Jednostavan međuproizvod se dobija redukcijom karboksilne kiseline grupe iz Primera 1 sa litijum aluminijum hidrodom da se dobije alkohol Međuproizvod 33 Izomer 1 (Šema 3). Drugi stereoizomer Međuproizvoda 33 (Izomer 2) se dobija iz manjeg produkta Međuproizvod 13 (Izomer 2) redukcijom sa litijum aluminijum hidridom i katalitičkom hidrogenacijom dobijenog naftiridin alkohola preko 5% Rh na ugljeniku.
1
Šema 3. Reagensi i uslovi: (a) LiAlH4, THF; (b) H2, 5% Rh/C, EtOH
[0075] Nezavisna sinteza započinje konverzijom Međuproizvoda 9 u Međuproizvod 35 upotrebom terc-butil 2-bromoacetata, paladijum diacetata, tri(o-tolil)fosfina i trikalijum fosfata (Šema 4). Terc-butil estar se ukloni sa TFA da se dobije Međuproizvod 36 koji se nakon toga esterifikuje sa metanolom da se dobije Međuproizvod 37. Nakon toga se alkiluje sa terc-butil 2-bromoacetatom da se dobije racematni Međuproizvod 38. Racemat 38 se razdvoji u svoja dva enantiomera, Izomer 1 i Izomer 2, preparativnom asimetičnom HPLC. Izomer 1 Međuproizvoda 38 ima optičku rotaciju od 81 u CHCl3, dok Izomer 2 ima optičku rotaciju od -82. Metil estar svakog enantiomera Međuproizvoda 38 se selektivno hidrolizuje pomoću litijum hidroksida i vodonik peroksida da se dobije Međuproizvod 39 Izomer 1 i Izomer 2. Izomer 1 ima optičku rotaciju od 42, dok Izomer 2 ima optičku rotaciju od -41.
Međuproizvod 35
1
Međuproizvod 38 Međuproizvod 39
Izomer 1 i Izomer 2 Izomer 1 i Izomer 2
Šema 4 Reagensi i uslovi: (a) Pd(OAc)2, P(o-tolil)3, K3PO4, THF, refluks; (b) TFA, DCM: (c) MeOH, HCl, refluks; (d) Lin(TMS)2, THF, -78°C; Preparativno asimetrično HPLC razdvajanje (f) LiOH, H2O2, THF, 0°C
[0076] Apsolutna konfiguracija svakog od enantiomera Međuproizvoda 39 se dobija nezavisnom asimetričnom sintezom koristeći Evans metodologiju. Prema tome, Međuproizvod 36 se konvertuje u Međuproizvod 40 pomoću komercijalno raspoloživog (S)-4-benziloksazolidin-2-ona (Šema 5). Međuproizvod 40 se prvo enolizuje koristeći litijum heksametildisilazid na -78°C a nakon toga alkiluje sa terc-butil 2-bromoacetatom da se dobije Međuproizvod 41 (glavni izomer) kao diastereoizomer dobijen alkilacijom enolata iz manje ometanog dela. Manja komponenta je izomer dobijen alkilacijom enolata iz više ometanog dela (Međuproizvod 42). Hidrolizom glavnog izomera (Međuproizvod 41) sa litijum hidroksidom i vodonik peroksidom se dobija očekivani (S)-enantiomer Međuproizvoda 39 koji ima optičku rotaciju od 65. Prema tome, Međuproizvod 39 Izomer 1 ima (S)-konfiguraciju.
1
Šema 5. Reagensi i uslovi: (a) pivaloil hlorid, DIPEA, THF, -78°C; (b) Lin(TMS)2, THF, -78°C; (c) LiOH, H2O2, THF, 0°C
[0077] Međuproizvod 3 se nakon toga aciluje sa (S)-enantiomerom Međuproizvod 39 (Izomer 1) u prisustvu EDC, N-hidroksbenztriazola i N-metil morfolina da se dobije Međuproizvod 43, koji se konvertuje u Međuproizvod 44 katalitičkom hidrogenacijom preko 5% Rh/C (Šema 6). Terc-butil estar iz 44 se cepa sa TFA da se dobije Međuproizvod 45, koji se redukuje prvo sa bor-THF kompleksom a nakon toga sa litijum aluminijum hidridom da se dobije Međuproizvod 46.600 MHz<1>H NMR spektar, optička rotacija i analitička asimetrična HPLC glavne komponente Međuproizvoda 46 su identični sa vrednostima dobijenim za Međuproizvod 33 Izomer 1. Prema tome, konfiguracija benzilnog asimetričnog centra Međuproizvoda 33 Izomer 1 ima (S)-konfiguraciju.
1
Šema 6. Reagensi i uslovi: (a) EDC, HOBT, NMM, DCM; (b) H2, 5% Rh/C, EtOH; (c) TFA, DCM; (d) BH3.THF; (e) LiAlH4, THF, 60°C°
NAČINI UPOTREBE
[0078] Veruje se da su jedinjenja formule (I) i njihove soli inhibitori aktivnosti integrin receptora, posebno aktivnosti αvβ6receptora i da su zbog toga potencijalno korisni u tretmanu bolesti ili stanja za koja je indikovano αvβ3jedinjenje.
[0079] Ovaj pronalazak prema tome obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u terapiji. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so može da bude za upotrebu u tretmanu bolesti ili stanja za koja je indikovan antagonist αvβ3receptora.
[0080] Prema tome, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u tretmanu bolesti ili stanja za koja je indikovan antagonist αvβ3receptora.
[0081] Takođe je obezbeđena upotreba jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u proizvodnji medikamenta za tretman bolesti ili stanja za koja je indikovan antagonist αvβ6receptora.
2
[0082] Takođe je otkriven postupak za lečenje bolesti ili stanja za koja je indikovan antagonist αvβ3receptora kod subjekata kojima je to potrebno, pri čemu uključuje primenu terapeutski efektivne količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0083] Odgovarajući subjekt kome je potreban tretman je sisar, preciznije čovek.
[0084] Kako se ovde koristi, naziv "efektivna količina" označava da količina leka ili farmaceutskog sredstva koja izaziva biološki ili medicinski odgovor tkiva, sistema životinje ili ljudi koji su vidljivi, na primer, od strane istraživača ili lekara. Osim toga, naziv "terapeutski efektivna količina" označava bilo koju količinu koja, u poređenju sa odgovarajućim subjektom koji nije primio tu količinu, dovodi do poboljšanja tretmana, ozdravljenja, prevencije ili poboljšanja bolesti, poremećaja ili smanjenja neželjenog efekta ili smanjenja brzine napredovanja bolesti ili poremećaja. Naziv u svom okviru takođe obuhvata količine efikasne da pojačaju normalnu fiziološku funkciju.
[0085] Fibrotične bolesti uključuju formiranje viška fibroznog vezivnog tkiva u organu ili tkivu u reparativnim ili reaktivnim procesima, Veruje se da su antagonisti αvβ6korisni u tretmanu različitih ovakvih bolesti ili stanja, uključujući one koji zavise od funkcije αvβ6integrina i od aktivacije transformišućeg faktora rasta beta preko alfa v integrina. Bolesti mogu da obuhvate, ali bez ograničenja na, plućne fibroze, na primer idiopatsku plućnu fibrozu, ne-specifičnu intersticijalnu pneumoniju (NSIP), uobičajenu intersticijalnu pneumoniju (UIP), Hermansky-Pudlak sindrom, progesivnu masivnu fibrozu (komplikacija pneumokonioza kod rudara), plućnu fibrozu povezanu sa bolešću vezivnog tkiva, fibrozu disajnih puteva kod astme i COPD, fibrozu povezanu sa akutni respiratornim distres sindromom (ARDS), akutnim oštećenjem pluća; fibrozu indukovanu radijacijom; porodičnu plućnu fibrozu; plućnu hipertenziju); bubrežnu fibrozu (dijabetičnu nefropatiju, IgA nefropatiju, lupusni nefritis; fokalnu segmentalnu glomerulosklerozu (FSGS), nefropatiju transplanta, autoimunu nefropatiju, nefropatiju indukovanu lekovima, nefropatiju povezanu sa hipertenzijom, nefrogeničnu sistemsku fibrozu); fibroze jetre (fibrozu indukovanu virusom (na primer hepatitis C ili B), autoimuni hepatitis, primarna ciroza žuči, bolest jetre izazvana alkoholom, bolest ne-alkoholne masne jetre, uključujući ne-alkoholni steatohepatitis (NASH), kongenitalne hepatične fibroze, primarni sklerotični holangitis, hepatitis indukovan lekovima, hepatične ciroze); fibroze kože (hipertrofični ožiljci, skleroderma, keloidi, dermatomiozitis, eozinofilni fasciliti, Dupytrens kontraktura, Ehlers-Danlos sindrom, Peyronie-ova bolest epidermoliza buloza distrofika, fibroza oralne submukoze); okularne fibroze (AMD, dijabetični makularni edem, suve oči, glaukom); kardijačne fibroze (kongestivna insuficijencija srca, endomiokardijačne fibroze, hipertrofična kardiomiopatija (HCM), dilatirana kardiomiopatija (DCM), aritmogenična desna ventrikularna kardiomiopatija (ARVC), hipertenzivna bolest srca, kardijačne sarkoidoze i drugi oblici insuficijencije srca) i druga različita fibrotična stanja (medijastinalne fibroze, mijelofibroze, retroperitonealne fibroze, Kronova bolest, neurofibromatoze, leiomiomi materice (fibroidi), hronično odbacivanje transplantiranog organa). To mogu da budu dodatne koristi za dodatni antagonizam αvβ5ili αvβ8.
[0086] Pored toga, pre-kancerogene lezije ili kanceri povezani sa αvβ3integrinima mogu takođe da se tretiraju (mogu da budu uključeni ali bez ograničenja na, kanceri endometrijuma, bazalnih ćelija, jetre, kolona, grlića, usta, pankreasa, dojke i jajnika, Kapošijev sarkom, tumori velikih ćelija i kanceri povezani sa stromom). Stanja koja mogu da imaju korist od delovanja na angiogeneze mogu takođe da imaju koristi (na primer, čvrsti tumori).
[0087] Naziv "bolest ili stanje za koje je indikovan αvβ6inhibitor ", treba da uključi bilo koje ili sva od prethodno navedenih bolesnih stanja.
[0088] U jednom otelotvorenju bolest ili stanje za koje je indikovan inhibitor αvβ6je izabrano od idiopatske plućne fibroze.
KOMPOZICIJE
[0089] Mada je moguće da se za upotrebu u terapiji, jedinjenje formule (I) kao i njegove farmaceutski prihvatljive soli primene kao sirova hemijska supstanca, uobičajeno je prisustvo aktivnog sastojka u obliku farmaceutske kompozicije.
[0090] Prema tome, ovaj pronalazak u narednom aspektu obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja uključuje jedinjenje formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača i/ili ekscipijenata. Jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli, su kako je prethodno pisano. Nosač(i), razblaživač(i) ili ekscipijent(i) moraju da budu prihvatljivi u smislu da su kompatibilni sa drugim sastojcima kompozicije i da ne utiču negativno na primaoca.
[0091] Takođe je obezbeđen proces za izradu farmaceutske kompozicije koji uključuje mešanje jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivin nosača, razblaživača ili ekscipijenata. Farmceutska kompozicija može da bude za upotrebu u tretmanu bilo kog ovde opisanog stanja.
[0092] Dalje je obezbeđena farmaceutska kompozicija za tretman bolesti ili stanja za koja je indikovan inhibitor αvβ3receptora a koja uključuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0093] Dalje je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja uključuje 0.05 do 1000mg jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i 0.1 do 2g jednog ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenata.
[0094] Kako su jedinjenja formule (I) namenjena za upotrebu u farmaceutskim kompozicijama jasno je da je preferirano da budu u skoro potpuno čistom obliku, na primer, najmanje 60% čisti, još poželjnije najmanje 75% čisti a poželjno je najmanje 85% čisti, posebno najmanje 98% čisti (% na težinsko-težinskoj osnovi).
[0095] Farmaceutske kompozicije mogu da budu u jediničnim doznim oblicima koji sadrže prethodno odmerenu količinu aktivnog sastojka po jedinici doze. Preferirane jedinične dozne kompozicije su one koje sadrže dnevnu dozu ili subdozu ili njihov odgovarajući deo, aktivnog sastojka. Ovakva jedinična doza može stoga da se primeni više od jedanput dnevno.
Preferirane jedinične dozne kompozicije su one koje sadrže dnevnu dozu ili sub-dozu (za primenu više od jedanput dnevno), kako je ovde prethodno navedeno ili njihov odgovarajući deo, aktivnog sastojka.
[0096] Farmaceutske kompozicije mogu da budu prilagođene za primenu bilo kojim odgovarajućim načinom, na primer, oralno (uključujući bukalno ili sublingvalno), rektalno, inhalacijom, intranazalno, topično (uključujući bukalno, sublingvalno ili transdelmalno), vaginalno ili parentaralno (uključujući subkutano, intramuskularno, intravenozno ili intradermalno). Ovakve kompozicije mogu da se izrade bilo kojim postupkom poznatim u farmaceutskoj tehnici, na primer dovođenjem u vezu aktivnog sastojka sa nosačem(ima) ili ekscipijentom(ima).
[0097] U jednom otelotvorenju, farmaceutska kompozicija je namenjena za nazalnu ili inhalacionu primenu.
[0098] Dozni oblici za nazalnu ili inhalacionu primenu mogu uobičajeno da budu formulisani kao aerosoli, rastvori, suspenzije, geli ili suvi praškovi.
[0099] Za kompozicije pogodne i/ili prilagođene za inhalacionu primenu, preferirano je da je jedinjenje iz pronalaska u obliku čestica smanjene veličine, a još poželjnije je da je oblik smanjene veličine dobijen ili može da se dobije mikronizacijom. Preferirana veličina čestica jedinjenja ili soli smanjene veličine (na primer mikronizirana) se definiše sa D50 vrednošću od približno 0.5 do približno 10 mikrona (na primer mereno pomoću difrakcije laserom).
2
[0100] Aerosol formulacije, na primer za inhalacionu primenu, mogu da uključe rastvor ili finu suspenziju aktivne supstance u farmaceutski prihvatljivom vodenom ili nevodenom rastvaraču. Aerosol formulacije mogu da budu prisutne u pojedinačnoj ili višedoznim količinama u sterilnom obliku u zatvorenom kontejneru, koji može da bude u obliku kartridža ili da bude ponovo punjiv za upotrebu sa atomizirajućim uređajem ili inhalerom. Alternativno, zatvoreni kontejner može da bude pojedinačni uređaj za disperziju kao što je inhaler za pojedinačnu nazalnu dozu ili aerosol dispenzer opremljen sa ventilom za odmeravanje (inhaler odmerene doze) koji se odbacuje kada je sadržaj kontejnera utrošen.
[0101] Kada dozni oblik uključuje aerosol dispenzer, on preferirano sadrži pogodan propelant pod pritiskom, kao što su komprimovani vazduh, ugljen dioksid ili organski propelant kao što je hidrofluorougljenik (HFC). U pogodne HFC propelante spadaju 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropan i 1,1,1,2-tetrafluoroetan. Aerosol dozni oblici mogu takođe da budu u obliku atomizer pumpe. Aerosol pod pritiskom može da sadrži rastvor ili suspenziju aktivnog jedinjenja. Ovo može da zahteva inkorporiranje dodatnih ekscipijenata, na primer korastvarača i/ili surfaktanata za poboljšanje karakteristika disperzije i homogenosti formulacija suspenzije. Formulacije rastvora mogu takođe da zahtevaju dodatak ko-rastvarača kao što je etanol. Takođe mogu da se inkorporiraju drugi modifikatori ekscipijenta za poboljšanje, na primer, stabilnosti i/ili ukusa i/ili karakteristika mase finih čestica (količina i/ili profil) formulacije.
[0102] Za farmaceutske kompozicije pogodne i/ili prilagođene za inhalacionu primenu, farmaceutska kompozicija može da bude kompozicija suvog praška koja može da se inhalira. Ovakva kompozicija može da uključi praškastu bazu kao što su laktoza, glukoza, trehaloza, manitol ili skrob, jedinjenje formule (I) ili njegovu so (preferirano u obliku smanjene veličine čestica, na primer u mikroniziranom obliku) i opciono modifikator osobina kao što su L-leucin ili neka druga amino kiselina i/ili soli metala stearinske kiseline kao što su magnezijum ili kalcijum stearat. Preferirano, kompozicija suvog praška pogodna za inhalaciju uključuje smešu suvog praška koju čine laktoza i jedinjenje formule (I) ili njegova so.
Laktoza je preferirano laktoza hidrat, na primer laktoza monohidrat i/ili preferirana je laktoza u stepenu za inhalaciju i/ili u stepenu finoće. Preferirano, veličina čestica laktoze se definiše kao da je 90% ili više (težinski ili zapreminski) čestica laktoze manje od 1000 mikrona (mikrometara) (na primer 10-1000 mikrona, na primer 30-1000 mikrona) u prečniku, i/ili 50% ili više čestica laktoze je manje od 500 mikrona (na primer 10-500 mikrona) u prečniku. Još poželjnije, veličina čestica laktoze se definiše da je 90% ili više čestica laktoze manje od 300 mikrona (na primer 10-300 mikrona, na primer 50-300 mikrona) u prečniku, i/ili 50% ili više čestica laktoze je manje od 100 mikrona u prečniku. Opciono, veličina čestica laktoze se definiše da je 90% ili više čestica laktoze manje od 100-200 mikrona u prečniku, i/ili 50% ili više čestica laktoze je manje od 40-70 mikrona u prečniku. Najvažnije, poželjno je da je približno 3 do približno 30% (na primer približno 10%) (težinski ili zapreminski) čestica manje od 50 mikrona ili manje od 20 mikrona u prečniku. Na primer, bez ograničenja, stepen laktoze pogodan za inhalaciju je E9334 laktoza (10% finoće) (Borculo Domo Ingredients, Hanzeplein 25, 8017 JD Zwolle, Netherlands).
[0103] Opciono, posebno za inhalacione kompozicije suvog praška, farmaceutska kompozicija za primenu inhalacijom može da bude inkorporirana u kontejnere sa više zatvorenih doza (na primer koji sadrže kompoziciju suvog praška) montiranih longitudinalno u trakama ili pojasevima unutar pogodnog uređaja za inhalaciju. Kontejner može po potrebi da se otvori guljenjem ili cepanjem a doza, na primer kompozicije suvog praška, može da se primeni inhalacijom preko uređaja kao što je DISKUS TM uređaj, proizvođača GlaxoSmithKline. DISKUS TM ihalacioni uređaj je, na primer, opisan u GB 2242134 A, a ovakav uređaj sa najmanje jednim kontejnerom za farmaceutsku kompoziciju u praškastom obliku (kontejner ili kontejneri su kontejneri sa više zatvorenih doza smeštenih longitudinalno u trakama ili pojasevima) je definisan između dva člana koja su međusobno osigurana od cepanja; uređaj uključuje: sredstvo za definisanje otvorenog stanja za navedeni kontejner ili kontejnere; sredstvo za cepanje dela sastojaka od stanja otvaranja da se otvori kontejner; i na kraju komunikaciju sa otvorenim kontejnerom preko koje korisnik može da inhalira farmaceutsku kompoziciju u praškastom obliku iz otvorenog kontejenra.
[0104] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da budu formulisana u obliku tečne formulacije za oslobađanje iz dispenzera tečnosti, na primer, dispenzera tečnosti koji ima mlaznice za raspršivanje ili otvore za raspršivanje kroz koje se odmerena doza tečne formulacije raspršuje nakon primene sile od strane korisnika na pumpni mehanizam dispenzera tečnosti.
[0105] Ovakvi dispenzeri tečnosti su generalno snabdeveni sa rezervoarom sa više odmerenih doza tečne formulacije, pri čemu doze mogu da se rasprše nakon uzastopnih pritiskanja pumpe. Mlaznice ili otvori za dispenziju mogu da budu u takvom obliku da se ubace u nozdrve korisnika za dispenziju spreja tečne formulacije u nosnu šupljinu. Dispenzer tečnosti prethodno pomenutog tipa je opisan i ilustrovan u WO-A-2005/044354, koji je u celosti ovde inkorporiran kao referenca. Dispenzer ima kućište u kome se nalazi uređaj za istiskivanje tečnosti koji ima kompresionu pumpu montiranu na kontejneru u kome se nalazi tečna
2
formulacija. Kućište ima najmanje jednu polugu sa strane koja može da se pomeri prston na unutra u odnosu na kućište da se kontejner podigne u kućištu i izazove da pumpa pritisne i ispumpa odmerenu dozu formulacije iz cevčice pumpe kroz nazalnu mlaznicu kučišta.
Posebno preferirani dispenzer tečnosti je opšti tip ilustrovan na Slikama 30-40 u WO-A-2005/044354.
[0106] Kompozicije za inhalaciju ili intranazalnu primenu mogu takođe nebulizacijom da se primene u pluća i druge regione respiratornog trakta. Ovakve kompozicije mogu da budu vodeni rastvori ili suspenzije. Rastvori za inhalaciju nebulizacijom mogu da budu formulisani sa dodatnim sredstvima kao što su kiseline ili baze, puferne soli, sredstva za podešavanje izotoničnosti, surfaktanti ili antimikrobna sredstva kao što je benzilalkonijum hlorid (BAC). Kompozicija može da bude sterilna i bez antimikrobnog konzervansa. Mogu da se sterilišu, na primer, filtracijom ili zagrevanjem u autoklavu. Mogu da budu i u obliku ne-sterilnog rastvora. Jedna jedinična doza terapeutski efektivne količine jedinjenja iz ovog pronalaska može da se obezbedi kao prethodno izmešana, prethodno odmerena formulacija, u pojedinačnom kontejneru.
[0107] U narednom otelotvorenju, farmaceutska kompozicija je namenjena za oralnu primenu.
[0108] Farmaceutske kompozcije za oralnu primenu mogu da budu prisutne kao odvojene jedinice kao što su kapsule ili tablete; praškovi ili granule; rastvori ili suspenzije u vodenim ili ne-vodenim tečnostima; jestive pene ili smeše; ili tečne emulzije tipa ulje-u-vodi ili tečne emulzije tipa voda-u-ulju.
[0109] Na primer, za oralnu primenu u obliku tablete ili kapsule, aktivna lekovita komponenta može da se kombinuje sa oralnim, ne-toksičnim farmaceutski prihvatljivim inertnim nosačem, kao što su etanol, glicerol, voda i slično. Praškovi pogodni za inkorporiranje u tablete ili kapsule mogu da se izrade usitnjavanjem jedinjenja do veličine odgovarajuće finoće (na primer, mikronizacijom) i mešanjem sa slično izrađenim farmaceutskim nosačem kao što je jestivi ugljovodonik, kao što su, na primer, skrob ili manitol. Takođe mogu da se dodaju sredstva za korigovanje ukusa, konzervansi, sredstva za disperziju i bojenje.
[0110] Kapsule mogu da se izrade pripremom praškaste smeše, kako je prethodno opisano i punjenjem u formirane želatinske obloge. Pre operacije punjenja, u praškastu smešu mogu da se dodaju glidansi i lubrikansi kao što su koloidni silicijum, talk, magnezijum stearat, kalcijum stearat ili čvrsti polietilen glikol. Takođe mogu da se dodaju sredstva za raspadanje
2
ili solubilizaciju, kao što su agaragar, kalcijum karbonat ili natrijum karbonat za poboljšanje raspoloživosti medikamenta kada se kapsula proguta.
[0111] Osim toga, kada je to poželjno ili potrebno, u smešu takođe mogu da se inkorporiraju odgovarajuća vezivna sredstva, glidansi, lubrikansi, zaslađivači, sredstva za korigovanje ukusa, sredstva za raspadanje i sredstva za bojenje. U pogodna vezivna sredstva spadaju skrob, želatin, prirodni šećeri kao što su glukoza ili beta-laktoza, kukuruzni zaslađivači, prirodne i sintetičke gume kao što su akacija, trgakanta ili natrijum alginat, karboksimetilceluloza, polietilen glikol, voskovi i slično.
[0112] U lubrikanse koji se koriste u ovim doznim oblicima spadaju natrijum oleat, natrijum stearat, magnezijum stearat, natrijum benzoat, natrijum acetat, natrijum hlorid i slično.
[0113] Sredstva za raspadanje uključuju, bez ograničenja, skrob, metil celulozu, agar, bentonit, ksantan gumu i slično. Tablete se formulišu, na primer, izradom praškaste smeše, granuliranjem ili mešenjem, dodavanjem lubrikansa i dezintegratora i presovanjem u tabelete. Praškasta smeša se izrađuje mešanjem jedinjenja, odgovarajuće usitnjenog, sa razblaživačem ili bazom kako je prethodno opisano i opciono sa vezivnim sredstvom kao što su karboksimetilceluloza, alginat, želatin ili polivinil pirolidon, sredstvom za zgušnjavanje, kao što je parafin, sredstvom za ubrzavanje resorpcije kao što je kvaternarna so i/ili sredstvom za apsorpciju kao što su bentonit, kaolin ili dikalcijum fosfat. Praškasta smeša može da se granulira vlaženjem sa vezivnim sredstvom kao što su sirup, skrobna pasta, mucilaga akacije ili rastvori celuloze ili polimerni materijali i propuštanjem kroz sito. Kao alternativa granulaciji, praškasta smeša može da se propusti kroz tablet mašinu i dobijene nesavršeno formirane pločice se usitne u granule. U granule može da se doda lubrikans da se spreči lepljenje za kalupe za formiranje tableta dodavanjem stearinske kiseline, stearatne soli, talka ili mineralnog ulja. Smeša sa lubrikansom se nakon toga komprimuje u tablete. Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu takođe da se kombinuju sa inertnim nosačem slobodnog protoka i direktno komprimuju u tablete bez prolaska kroz faze granuliranja ili mešenja. Mogu da se obezbede bistri ili neprozirni zaštitni omotači koji se sastoje od omotača zalivenog šelaka, omotača od šećera ili polimernog materijala i poliranja omotača voskom. U ove omotače mogu da se dodaju sredstva za bojenje kako bi se razdvojile različite dozne jedinice.
[0114] Oralne tečnosti kao što su rastvori, sirupi i eliksiri mogu da se izrade u jediničnom doznom obliku tako da data količina sadrži prethodno odmerenu količinu jedinjenja. Sirupi mogu da se izrade rastvaranjem jedinjenja u pogodnom zaslađenom vodenom rastvoru, dok se eliksiri izrađuju korišćenjem ne-toksičnog alkoholnog vehikuluma. Suspenzije mogu da se
2
formulišu dispergovanjem jedinenja u ne-toksičnom vehikulumu. Takođe mogu da se dodaju solubilizatori i emulgatori kao što su etokslirani izostearil alkoholi i polioksi etilen sorbitol etri, konzervansi, dodaci ukusa kao što su pepermintovo ulje ili prirodni zaslađivači ili saharin ili drugi veštački zaslađivači.
[0115] Kada je to odgovarajuće, jedinične dozne kompozicije za oralnu primenu mogu da budu mikroenkapsulirane. Formulacije mogu takođe da se izrade za odloženo ili kontinuirano oslobađanje kao što je, na primer, oblaganje ili utiskivanje čestica materijala u polimere, voskove ili slično.
[0116] Jedinjenja iz pronalaska mogu takođe da se primene u obliku sistema za oslobađanje lipozoma, kao što su male jednoslojne vezikule, velike jednoslojne vezikule i višeslojne vezikule. Lipozomi mogu da se formiraju od različitih fosfolipida kao što su holesterol, stearilamin ili fosfatidilholini.
[0117] Farmaceutske kompozicije namenjene za transdermalnu primenu mogu da budu u obliku odvojenih flastera namenjenih za zadržavanje u bliskom kontaktu sa epidermisom primaoca u toku dužeg vremenskog perioda.
[0118] Farmaceutske kompozicije namenjene za topičnu primenu mogu da budu formulisane kao masti, kreme, suspenzije, losioni, praškovi, rastvori, paste, geli, sprejovi, aerosoli ili ulja.
[0119] Za tretmane očiju ili drugih spoljašnjih tkiva, na primer usta i kože, kompozicije se preferirano nanose kao topične masti ili kreme. Kada je formulisan u obliku masti, aktivni sastojak može da se upotrebi ili sa parafinskom ili sa masnom podlogom koja se meša sa vodom. Alternativno, aktivni sastojak može da se formuliše u obliku kreme sa podlogom kreme ulje-u-vodi ili podlogom voda-u-ulju.
[0120] Farmaceutske kompozicije namenjene za topičnu primenu na očima uključuju kapi za oči, pri čemu je aktivni sastojak rastvoren ili suspendovan u pogodnom nosaču, posebno vodenom rastvaraču.
[0121] Farmaceutske kompozicije namenjene za topičnu primenu u ustima uključuju lozenge, pastile i vodice za usta.
[0122] Farmaceutske kompozicije namenjene za rektalnu primenu mogu da budu u obliku supozitorija ili kao klistiri.
[0123] Farmaceutske kompozicije namenjene za vaginalnu primenu mogu da budu u obliku pesara, tampona, krema, gelova, pasta, pena ili sprej formulacija.
[0124] Farmaceutske kompozicije namenjene za parenteralnu primenu uključuju vodene i nevodene sterilne injekcione rastvore za subkutanu, intravensku ili intramuskularnu primenu
2
koje mogu da sadrže antioksidanse, pufere, bekteriostatike i rastvorke koji čine kompoziciju izotoničnom sa krvlju primaoca; i vodenih i ne-vodenih sterilnih suspenzija koje mogu da uključe sredstva za suspendovanje i sredstva za zgušnjavanje. Kompozicije mogu da budu u jednodoznim ili višedoznim kontejnerima, na primer zatvorenim ampulama i bočicama i mogu da se čuvaju u uslovima sušenja zamrzavanjem (liofilizirani) što zahteva samo dodavanje sterilnog tečnog nosača, na primer vode za injekcije neposredno pre upotrebe. Injekcioni rastvori i suspenzije za ekstemporalnu upotrebu mogu da se izrade od sterilnih praškova, granula i tableta.
[0125] Terapeutski efektivna količina jedinjenja iz ovog pronalaska će da zavisi od brojnih faktora uključujući, na primer, godine starosti i težinu subjekta, precizno stanje koje zahteva tretman i njegova ozbiljnost, prirodu formulacije i način primene i zavisi od odluke ordinirajućeg lekara ili veterinara. U farmaceutskoj kompoziciji, svaka dozna jedinica za oralnu ili parenteralnu primenu preferirano sadrži od 0.01 do 3000 mg, još poželjnije 0.5 do 1000 mg, jedinjenja iz pronalaska izračunato kao slobodna baza.
[0126] Svaka dozna jedinica za nazalnu ili inhalacionu primenu preferirano sadrži od 0.001 do 50 mg, još poželjnije 0.01 do 50 mg, čak još poželjnije 1 do 50mg, jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, izračunato kao slobodna baza.
[0127] Za primenu rastvora ili suspenzije za nebulizaciju, dozna jedinica obično sadrži od 1 do 15mg, na primer, od 2mg do 10mg ili od 4mg do 6mg, koja može da se primeni jedanput dnevno, dva puta dnevno ili više od dva puta dnevno. Jedinjenje iz ovog pronalaska može da bude u obliku suvog ili liofiliziranog praška za rekonstituciju u apoteci ili od strane pacijenta ili može, na primer da bude u obliku vodenog rastvora soli.
[0128] Farmaceutski prihvatljiva jedinjenja iz pronalaska mogu da se primene u dnevnoj dozi (za odraslog pacijenta) od, na primer, oralnoj ili parenteralnoj dozi od 0.01 mg do 3000 mg po danu ili 0.5 do 1000 mg po danu ili nazalnoj ili inhalacionoj dozi od 0.001 do 50 mg po danu ili 0.01 do 50 mg po danu ili 10 do 50mg, jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, izračunato kao slobodna baza. Ova količina može da se primeni u jednoj dozi dnevno ili mnogo češće u nekoliko (kao što su dve, tri, četiri, pet ili šest) sub-doza dnevno tako da je ukupna dnevna doza ista. Efektivna količina njegove soli može da se odredi kao odnos efektivne količne jedinjenja formule (I) kao takvog.
[0129] Jedinjenja iz pronalaska mogu da se koriste sama ili u kombinaciji sa drugim terapeutskim sredstvima. Kombinovane terapije u skladu sa ovim otkrićem prema tome uključuju primenu najmanje jednog jedinjenja formule (/I) ili njegove farmaceutski
2
prihvatljive soli i upotrebu najmanje jednog drugog farmaceutski aktivnog sredstva.
Preferirano, kombinovane terapije u skladu sa ovim otkrićem uključuju primenu najmanje jednog jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i najmanje jednog drugog farmaceutski aktivnog sredstva. Jedinjenje(a) iz pronalaska i drugo farmaceutski aktivno sredstvo(a) mogu da se primene zajedno u jednoj farmaceutskoj kompoziciji ili odvojeno a, kada se primenjuju odvojeno, ovo može da bude istovremeno ili po redu bilo kojim redosledom. Količne jedinjenja iz pronalaska i drugog farmaceutski aktivnog sredstva(ava) i odgovarajuće vreme primene biće tako izabrane da se postigne željeni kombinovani terapeutski efekat.
[0130] Prema tome, u narednom aspektu je obezbeđena kombinacija koja uključuje jedinjenje iz pronalaska i najmanje još jedno drugo farmaceutski aktivno sredstvo.
[0131] Prema tome, u jednom aspektu, jedinjenje i farmaceutske kompozicije u skladu sa pronalaskom mogu da se koriste u kombinaciji sa ili da uključe jedno ili više drugih terapeutskih sredstava. Razumljivo je da kada se jedinjenje iz ovog pronalaska primenjuje u kombinaciji sa jednim ili više drugih terapeutskih sredstava koja se normalno primenjuju inhalacijom, intravenski, oralno, intranazalno ili drugin putem, nastala farmaceutska kompozicija može da se primeni istim načinom. Alternatino, pojedinačne komponente kompozicije mogu da se primene različitim načinima.
[0132] Jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu da se koriste u kombinaciji sa jednim ili više drugih sredstava koja mogu da budu korisna u prevenciji ili tretmanu alergijskih bolesti, inflamatornih bolesti, autoimunih bolesti, na primer imunoterapiji antigenom, anti-histaminima, kortikosteroidima (na primer flutikazon propionat, flutikazon furoat, beklometazon dipropionat, budesonid, ciklezonid, mometazon furoat, triamcinolon, flunizolid), NSAIDi, modulatori leukotriena (na primer montelukast, zafirlukast, pranlukast) i NOS inhibitori, inhibitori triptaze, IKK2 inhibitori, p38 inhibitori, Syk inhibitori, inhibitori elastaze, antagonisti beta-2 integrina, agonisti adenozina 2a, antagonisti hemokina kao što su CCR3 antagonisti ili CCR4 antagonisti, inhibitori oslobađanja medijatora, kao što je natrijum hromoglikat, inhibitori 5-lipoksigenaze (ziflo), DP1 antagonisti, DP2 antagonisti, pI3Kdelta inhibitori, ITK inhibitori, LP (lizofosfatidin) inhibitori ili FLAP (5-lipoksigenaza aktivirajući protein) inhibitori (na primer natrijum 3-(3-(terc-butiltio)1-(4-(6-etokspiridin-3-il)benzil)-5-((5-metilpiridin-2-il)metoks)-1H-indol-2-il)-2,2-dimetilpropanoat), metotreksat i slična sredstva; terapija monoklonalnim antitelima, kao što su anti-IgE, anti-TNF, anti-IL-5, anti-IL-6, anti-IL-12, anti-IL-1 i slična sredstva; terapije receptora, na primer etanercept i slična sredstva; imunoterapije ne-specifičnim antigenima (na primer interferon ili drugi citokini/hemokini, modulatori citokin/hemokin receptora, agonisti ili antagonisti citokina, agonisti TLR i slična sredstva)), inhibitori TGFβ sinteze, na primer Pirfenidone, inhibitori tirozin kinaze usmereni na faktor rasta vaskularnog endotelijuma (VEGF), faktor rasta koji potiče od trombocita (PDGF) i faktor rasta fibroblasta (FGF) receptor kinaze, na primer Nintedanib (BIBF-1120) i Imatinib mesilat (Gleevec), antagonisti endohelin receptora, na primer Ambrisentan ili Macitentan, antioksidansi, kao što su N-acetilcistein (NAC ili Fluimucil), antibiotici širokog spektra, kao što su tetraciklini, na primer Minocycline hidrohlorid, inhibitori fosfodiesteraze 5 (PDE5), na primer sildenafil. Alternativno u kombinaciji mogu da se koriste anti αvβ6antitela, na primer monoklonalna antitela kao što su ona opisana u WO2003100033A2.
[0133] Stručnjaku sa iskustvom u tehnici je jasno, da kada je to potrebno, drugi terapeutski sastojak(ci) mogu da se koriste u obliku soli, na primer kao soli alkalnih metala ili amina ili kao soli nastale dodatkom kiseline ili kao prolekovi ili kao estri, na primer niži alkil estri ili kao solvati, na primer hidrati, da se optimizuje aktivnost i/ili stabilnost i/ili fizičke karakteristike kao što je rastvorljivost, terapeutskog sastojka. Takođe će da bude jasno, kada je to potrebno, da terapeutski sastojci mogu da se koriste u optički čistom obliku.
[0134] Pogodno je da se kombinacije koje su prethodno navedene za upotrebu nalaze u obliku farmaceutske kompozicije a ove farmaceutske kompozicije uključuju kombinaciju kako je prethodno definisano zajedno sa farmaceutski prihvatljivim razblaživačem ili nosačem predstavljenim narednim aspektom pronalaska.
[0135] Pojedinačna jedinjenja ovih kombinacija mogu da se primene ili po redu ili istovremeno u odvojenim ili kombinovanim farmaceutskim kompozicijama. Preferirano, pojedinačna jedinjenja će da se primene istovremeno u kombinovanoj farmaceutskoj kompoziciji. Stručnjak sa iskustvom u tehnici će jednostavno da ispoštuje odgovarajuće doze poznatih terapeutskih sredstava.
SKRAĆENICE
[0136] Naredna lista daje definicije nekih skraćenica koje su ovde korišćene. Jasno je da lista nije ograničena ali su značenja onih skraćenica koje nisu niže navedene lako dostupne stručnjaku sa iskustvom u tehnici.
Ac (acetil)
1
BCECF-AM (2’,7’-bis-(2-karboksietil)-5-(and-6)-karboksifluorescein AM Estar)
Bu (butil)
CHAPS (3-[(3-Holamidopropil)dimetilamonijum]-1-propansulfonat)
CV (zapremina kolone)
DCM (dihlormetan)
DMF (N,N-dimetilformamid)
DMSO (dimetilsulfoksid)
DSC (diferencijalna skenirajuća kalorimetrija)
Et (etil)
EtOH (etanol)
EtOAc (etil acetat)
h (sat/sati)
HCl (Hlorovodonična kiselina)
HEPES (4-(2-hidroksetil)-1-piperazinetansulfonska kiselina)
L (litri)
M (mol)
MDAP (usmerena masena auto-preparativna HPLC)
Me (metil)
MeOH (metanol)
min (minut/minuti)
MTBE (metil t-butil etar)
Ph (fenil)
iPr (izopropil)
(R)-BINAP(R)-(+)-2,2’-Bis(difenilfosfino)-1,1’-binaftalen
Si (Silicijum)
SPE (ekstrakcija čvrste faze)
TEA (trietilamin)
TFA (trifluorosirćetna kiselina)
THF (tetrahidrofuran)
TLC (hromatografija na tankom sloju)
XRPD (difrakcija X-zraka praška)
[0137] Sve reference za slani rastvor se odnose na zasićeni vodeni rastvor natrijum hlorida.
2
EKSPERIMENTALNI DETALJI
Analitička LCMS
[0138] Analitička LCMS se izvodi na jednom od narednih sistema A, B ili C. UV detekcija za sve sisteme je uprosečen signal talasne dužine od 220 nm do 350 nm a maseni spektar je beležen na masenom spektrometru koristeći naizmenični pregled pozitivnog i negativnog oblika elektrosprej jonizacije.
[0139] Eksperimentalni detalji LCMS sistema A-B kako su ovde navedeni su kako sledi:
Sistem A
[0140]
Kolona: 50 mm x 2.1 mm ID, 1.7 µm Acquity UPLC BEH C18kolona
Brzina protoka: 1 mL/min.
Temp.: 40°C
Rastvarači: A: 10 mM amonijum bikarbonat u vodi podešen na pH10 sa rastvorom amonijaka
B: Acetonitril
Gradijent: Vreme (min) A% B%
0 99 1
1.5 3 97
1.9 3 97
2.0 0 100
Sistem B
[0141]
Kolona: 50 mm x 2.1 mm ID, 1.7 µm Acquity UPLC BEH C18
Brzina protoka: 1 mL/min.
Temp.: 40°C
Rastvarači: A: 0.1% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u vodi
B: 0.1% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu
Gradijent: Vreme (min) A% B%
0 97 3
1.5 0 100
1.9 0 100
2.0 97 3
Sistem C
[0142]
Kolona: 50 mm x 2.1 mm ID, 1.7 µm Acquity UPLC BEH C18 kolona
Brzina protoka: 1 mL/min
Temp.: 40 °C
Rastvarači: A: 0.1% v/v rastvor mravlje kiseline u vodi
B: 0.1% v/v rastvor mravlje kiseline u acetonitrilu
Gradijent: Vreme (min) A% B%
0 97 3
1.5 0 100
1.9 0 100
2.0 97 3
Usmerena masena auto-preparativna HPLC
[0143] Sirovi produkti su prečišćeni pomoću MDAP HPLC jednim od narednih postupaka A-C. Vreme izvođenja je bilo 15 minuta ukoliko nije drugačije navedeno. UV detekcija za sve postupke je uprosečen signal talasne dužine od 210 nm do 350 nm a maseni spektar je beležen na masenom spektrometru koristeći naizmenični pregled pozitivnog i negativnog oblika elektrosprej jonizacije.
Postupak A:
4
[0144] Postupak A se izvodi na XBridge C18koloni (uobičajeno 100 mm x 30 mm i.d.5 µm prečnik pakovanja) na temperaturi sredine. Korišćeni rastvarači su:
A = 10 mM vodeni rastvor amonijum bikarbonata podešen na pH 10 sa rastvorom amonijaka.
B = acetonitril.
[0145] Korišćeni gradijent je:
Postupak B:
[0146] Postupak B se izvodi na XBridge C18koloni (uobičajeno 100 mm x 30 mm i.d.5 µm prečnik pakovanja) na temperaturi sredine. Korišćeni rastvarači su:
A = 10 mM vodeni rastvor amonijum bikarbonata podešen na pH 10 sa rastvorom amonijaka. B = acetonitril
[0147] Korišćeni gradijent je:
Postupak C:
[0148] Postupak C se izvodi na XBridge C18koloni (uobičajeno 150 mm x 30 mm i.d.5 µm prečnik pakovanja) na temperaturi sredine..
[0149] Korišćeni rastvarači su:
A = 0.1% v/v rastvor mravlje kiseline u vodi.
B = 0.1% v/v rastvor mravlje kiseline u acetonitrilu.
[0150] Korišćeni gradijent je:
[0151] UV detekcija je prosečan signal talasne dužine od 210nm do 350nm.
IZRADA MEĐUPROIZVODA
Međuproizvod 1 : (R)-terc-butil 3-(jodmetil)pirolidin-1-karboksilat
[0152] Vakuumom obložena staklena reaktivna posuda zapremine 5L (Radley’s LARA) se napuni sa DCM (2 L), nakon toga sa trifenilfosfinom (339 g, 1.29 mol) i imidazolom (88 g, 1.29 mol), a temperatura se smanji na 0 ºC. Nakon toga se u porcijama u toku 30 min dodaje jod (328 g, 1.29 mol), održavajući temperaturu reakcije između 0 - 5 °C da se kontroliše egzotermija. Tokom dodavanja, formira se gusti braon precipitat. Precipitat se ostavi 15 min da se zagreje na sobnu temperaturu i nakon toga meša na sobnoj temperaturi narednih 30 min. U porcijama se u toku 15 min dodaje rastvor (R)-terc-butil 3-(hidroksmetilpirolidin-1-karboksilata (200 g, 994 mmol) (raspoloživ od dobavljača Fluorochem ili BePharm Ltd) u DCM (200 mL), održavajući temperaturu reakcije između 24 - 30 °C. Reaktivna smeša se meša 2 h, nakon toga razblaži sa TBME (8 L) i filtrira. Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom, a ostatak (700 g) se triturira u dietiletru (2 L) u ledenom kupatilu da se dobije 333 g sirovog produkta. Deo od 27g sirovog produkta se prečisti hromatografijom na nosaču silika gela (100 g) i eluira sa gradijentom 0 - 50% etil acetat - cikloheksan u toku 30 min.
Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (16.33 g, 5%) kao žuto ulje. Preostali sirovi materijal (∼ 306 g) se prečisti hromatografijom na nosaču silika gela (1.5 kg), eluira sa gradijentom 0 - 30% etil acetatcikloheksan preko 9.5 zapremina kolona. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (233.94 g, 76%) kao bledo žuto ulje: LCMS (Sistem A) RT = 1.19 min, 100%, ES+ve m/z 312 (M+H)<+>; [α]D<20>= 23 (c 1.00 u EtOH).
Međuproizvod 2: (R)-terc-Butil 3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-karboksilat
[0153] Izmešani rastvor 2-metil-1,8-naftiridina (57.5 g, 399 mmol) (raspoloživ od dobavljača Manchester Organics) i (R)-terc-butil 3-(jodmetil)pirolidin-1-karboksilata (124.2 g, 399 mmol) (Međuproizvod 1) u THF (1 L) se ohladi na 0 °C i 20 min tretira u atmosferi azota rastvorom litijum bis(trimetilsilil)amida u THF (1M, 399 mL, 399 mmol) i reaktivna smeša se meša 3 h na 0 °C. Reakcija se neutrališe sa zasićenim rastvorom amonijum hlorida (500 mL) i vodom (500 mL) i doda se etil acetat (1 L). Slojevi se razdvoje i vodena faza se ekstrahuje sa još etil acetata (1 L). Kombinovani organski slojevi se suše (MgSO4), filtriraju i upare pod vakuumom. Preostalo braon ulje (162 g) se prečisti hromatografijom na nosaču silika gela (750 g), eluira sa gradijentom 0 - 100 % [etil acetat u (5% MeOH - 95 % etil acetat)] preko 8 zapremina kolona. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (46.65 g, 36%) kao narandžasta čvrsta supstanca: LCMS (Sistem A) RT = 0.99 min, 97%, ES+ve m/z 328 (M+H)<+>, [α]D<20>= 22 (c 1.00 u EtOH).
Međuproizvod 3: (R)-2-(2-( -3-il)etil)-1,8-naftiridin, dihidrohloridna so
[0154] Rastvor (R)-terc-butil 3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidon-1-karboksilata (104.71 g, 320 mmol) u DCM (500 mL) se na sobnoj temperaturi polako tretira sa HCl (4M rastvor u 1,4-dioksanu (200 mL, 800 mmol)). Smeša se meša u toku noći na sobnoj temperaturi, za koje vreme se u boci formira veliki čvrsti grumen. Doda se MeOH (∼ 100 mL) da se pomogne rastvaranje čvrste supstance i mešanje nastavi. LCMS pokazuje ∼ 72 % produkta i ∼ 25 % početnog materijala. Doda se nova količina 4M rastvora HCl u 1,4-dioksanu (100 mL) i mešanje nastavi 1 h. Rastvarač se upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (89.66 g, 93%) kao ljubičasto obojena čvrsta supstanca: LCMS (Sistem B) RT = 0.34 min, 100%, ES+ve m/z 228 (M+H)<+>.
Međuproizvod 4 : (E)-terc-Butil 4-bromobut-2-enoat
[0155] Izobutilen gas (363 mL, 3.82 mol) se u mehurićima na -40 °C propušta 30 min kroz izmešani rastvor (E)-4-bromobut-2-enoatne kiseline (210 g, 1.27 mmol) [T. Den Hartog, D. J. Van Dijken, A. J. Minnaard, B. L. Feringa Tetrahedron Asymmet. 2010, 21, 1574-1584] i koncentrovane H2SO4(20.35 mL, 382 mmol) u dietiletru (1 L) u čeličnom autoklavu. Smeša se zatvori u autoklav i smeša se meša 24 h na sobnoj temperaturi. Reakcija se ohladi na 0 °C nakon toga zaalkališe sa trietilaminom (250 mL) i ekstrahuje sa DCM (3 x 200 mL). Organski sloj se suši i koncentruje pod vakuumom. Ostatak se triturira u n-pentanu (200 mL) da se dobije naslovljeno jedinjenje (140 g, 50%) kao braon sirup:<1>H NMR δ (CDCl3, 400 MHz) 6.89 (dt, J= 15, 7.5 Hz, 1H), 5.95 (dt, J=15, 1 Hz, 1H), 3.99 (dd, J= 7.5,1 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H). Vodeni sloj se zakiseli sa 2M rastvorom HCl do pH 2 i ekstrahuje sa EtOAc (2 x 250 mL), kombinovani organski slojevi se isperu sa vodom (2 x 500 mL), suše preko Na2SO4, upare pod vakuumom da se dobije neizreagovani početni materijal (50 g) kao beličasta čvrsta supstanca.
Međuproizvod 5 : (E)-terc-Butil 4-acetoksibut-2-enoat
[0156] Izmešani rastvor (E)-terc-butil 4-bromobut-2-enoata (280 g, 1.27 mol) u acetonitrilu (1.2 L) se na sobnoj temperaturi tretira sa kalijum acetatom (186 g, 1.9 mol). Smeša se meša 4 h na 60 °C i reakcija se prati pomoću TLC (10% dietil etar u petrol etru, Rf= 0.4, detekcija sa UV). Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu a čvrsta supstanca se ukloni filtriranjem i ispere sa dietil etrom (600 mL). Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom, a ostatak se prečisti fleš hromatografijom na koloni silika gela uz eluiranje sa 10% dietil etra u petrol etru. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare da se dobije naslovljeno jedinjenje (148 g, 58% prinos) kao bledo žuta tečnost:<1>H NMR δ (CDCl3, 400 MHz) 6.82 (dt, J=15.5, 5 Hz, 1H), 5.94 (dt, J=15.5, 2 Hz, 1H), 4.71 (dd, J=5,2 Hz, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.49 (s, 9H).
Međuproizvod 6: 1-(3-Bromofenil)-5-metil-1H-pirazol
[0157] Rastvor (3-bromofenil)hidrazin hidrohlorida (raspoloživ od dobavljača Amatek) (300 g, 1.34 mol) u sirćetnoj kiselini (2.2 L) se tretira sa diizopropiletilaminom (234 mL, 1.34 mol), a nakon toga sa (E)-4-(dimetilamino) but-3-en-2-onom (raspoloživ od dobavljača Acros) (152 g, 1.34 mol) i reaktivna smeša se zagreva 2 h na 90 °C. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom, ostatak se sipa u zasićeni rastvor NaHCO3i ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 1 L). Organska faza se izdvoji i suši preko Na2SO4. Filtrat se upari pod vakuumom a ostatak se prečisti fleš hromatografijom na koloni silia gela (100-200 meša) koristeći 0 - 4.5% etil acetata u petrol etru. Odgovarajuće frakcije se sakupe i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije 1-(3-bromofenil)-3-metil-1H-pirazol (Međuproizvod 29) (40 g, 13%). Daljom eluacijom kolone sa 20 - 40% etil aceetata u petrol etru dobija se naslovljeno jedinjenje (205 g, 64%) kao žuta tečnost:<1>H NMR δ (CDCl3; 600 MHz) 7.67 (t, J= 1.9 Hz, 1H), 7.59 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 7.54 - 7.49 (m, 1H), 7.43 - 7.40 (m, 1H), 7.37 - 7.32 (m, 1H), 6.21 (d, J= 0.7 Hz, 1H), 2.38 (s, 3H).
Međuproizvod 7: (3-(5-Metil-1H-pirazol-1-il)-fenil)borna kiselina
[0158] Rastvor 1-(3-bromofenil)-5-metil-1H-pirazola (međuproizvod 6) (200 g, 844 mmol) u THF (2 L) se polako tretira sa triizopropil boratom (raspoloživ od dobavljača Avra) (294 mL, 1.265 mol), nakon toga ohladi na -78 °C i doda se n-BuLi (844mL, 2109 mmol) u toku 30 min na -78°C. Smeša se meša 2 h na -78 °C. Reakcija se prati pomoću TLC (mobilna faza: 30% EtOAc u petrol etru). Reaktivna smeša se sipa u 2M rastvor HCl i THF se ukloni pod sniženim pritiskom. Ostatak se zaalkališe sa 2M rastvorom NaOH i ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 700mL). Vodeni sloj se neutrališe (pH∼7) sa 2M rastvorom HCl i ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 1 L). Organski slojevi se kombinuju, suše preko anhidrovanog Na2SO4i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (120 g, 69%) kao bela čvrsta susptanca. MS ES+ve m/z 203 (M+H)<+>.
Međuproizvod 8: 1-(3-Bromofenil-3,5-dimetil)-1H-pirazol
[0159] Rastvor (3-bromofenil)hidrazin hidrohlorida (raspoloživ od dobavljača Reddy & Reddy) (45 g, 200 mmol) i pentan-2,4-diona (Aldrich) (30.2 g, 302 mmol) u DCM (225 mL) se u kapima tretira sa conc. H2SO4(1.073 mL, 20.13 mmol) i meša u atmosferi azota 16 h na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se razblaži sa DCM (500 mL) i ispere sa vodom (2 x 250 mL). Organski sloj se suši preko Na2SO4i koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (100-200 meša) uz eluiranje sa 5% etil acetata u heksanu da se dobije naslovljeno jedinjenje (30 g, 59%) kao svetlo braon tečnost:<1>H NMR δ (CDCl3, 400 MHz) 7.71 (t, J=2 Hz, 1H), 7.57 - 7.49 (m, 2H), 7.46 - 7.40 (t, J=8 Hz, 1H), 6.07 (s, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.18 (s, 3H).
Međuproizvod 9: (3-(3.5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)borna kiselina
[0160] Rastvor 1-(3-bromofenil)-3,5-dimetil-1H-pirazola (međuproizvod 8) (30 g, 119 mmol) u THF (500 mL) se tretira sa triizopropil boratom (raspoloživ od dobavljača Avra) (41.6 mL, 179 mmol), ohladi na -78 °C, tretira u kapima u toku 1 h sa 2.5 M nBuLi (119 mL, 299 mmol) u atmosferi argona i meša 2 h na -78 °C. Reaktivna smeša se neutrališe sa vodenim rastvorom HCl (2M, 150 mL), neutrališe sa 2M rastvorom NaOH i ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 300 mL). Kombinovani organski rastvori se suše preko Na2SO4i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak se triturira sa pentanom i dietil etrom (1:1) i čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem da se dobije naslovljeno jedinjenje(15 g, 57%) kao beličasta čvrsta supstanca: MS ES+ve m/z 217 (M+H)<+>.
Međuproizvod 10: 1-(3-Bromofenil)-5-etil-3-metil-1H-pirazol
[0161] Suspenzija (3-bromofenil)hidrazin hidrohlorida (raspoloživ od dobavljača Anichem) (2.0 g, 8.9 mmol) i trietilamins (1.25 mL, 8.9 mmol) u EtOH (20 mL) se kratko meša dok ne postane homogena a nakon toga se doda heks-3-in-2-on (raspoloživ od dobavljača MP Biomedicals ili Alfa Aesar) (0.887 g, 8.9 mmol) i smeša se zagreva 10 min na 50 ºC. Smeša se tretira sa koncentrovanom HCl (12M, 2.5 mL), zagreva 20 min na 100 ºC. Smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom, a ostatak se podeli između etil acetata i vodenog rastvora natrijum bikarbonata. Organski rastvor se ispere sa vodenim rastvorom NaHCO3, slanim rastvorom, suši (MgSO4) i upari pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na nosaču silika gela (330 g) uz eluiranje sa gradijentom 0 - 100% DCM - cikloheksan preko 10 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.95 g, 82%) kao narandžasto ulje:<1>H NMR δ (DMSO-d6, 400 MHz) 7.67 (t, J=2 Hz, 1H), 7.58 (dt, J=8, 2 Hz, 1H), 7.49 (m, 1H), 7.47-7.42 (m, 1H), 6.11 (s, 1H), 2.66 (q, J=7.5 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.13 (t, J=7.5 Hz, 3H).
4
Međuproizvod 11: (3-(5-Etil-3-metil-1H-pirazo)-1-il-fenilborna kiselina
[0162] Smeša 1-(3-bromofenil)-5-etil-3-metil-1H-pirazola (Međuproizvod 10) (2.795 g, 10.54 mmol) i triizopropilborata (raspoloživ od dobavljača Aldrich) (2.4 g, 12.7 mmol) se u kapima tretira na -78º C sa n-BuLi (1.6M, 13.2 mL) i temperatura održava ispod -60 ºC. Smeša se ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu u toku noći. Smeša se nakon toga neutrališe sa 2M rastvorom HCl (11 mL, do pH 7) i podeli sa etil acetatom. Organski rastvor se ispere sa slanim rastvorom i suši (MgSO4). Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom a preostalo ulje se triturira sa smešom cikloheksan-petrol etar (40-60ºdok se ne dobije čvrsta supstanca. Čvrsta susptanca se sakupi filtriranjem, ispere sa petrol etrom, nakon toga sa malo vode, suši na vazduhu, a nakon toga suši pod vakuumom na 60 °C da se dobije naslovljeno jedinjenje (623 mg, 26%) kao žuta čvrsta supstanca: MS ES+ve m/z 231 (M+H)<+>.
Međuproizvod 12: (R,E)-terc-Butil 4-(3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il) but-2-enoat
[0163] Smeša (E)-terc-butil 4-acetoksibut-2-enoata (Međuproizvod 5) (14.20 g, 70.9 mmol) i 1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihlorpaladijum(II) [Pd(dppf)Cl2] (4.72 g, 6.45 mmol) u DCM (100 mL) se meša 15 min u atmosferi azota a nakon toga se doda rastvor (R)-2-(2-(pirolidin-3-il)etil)-1,8-naftiridin dihidrohlorida (Međuproizvod 3) (17g, 57 mmol) u diizopropiletilaminu (56.3 mL, 322 mmol) i DCM (200 mL). Dobija se bistar crveni rastvor koji se meša 24 sata u atmosferi azota. Smeša se podeli između DCM i vode (3 x 170 mL). Organska faza se propusti kroz kartridž faznog separatora i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. preostalo ulje (27 g) se prenese u DCM na aminopropil kartridž (900 g) i prečisti hromatografijom na CombiFlash Companion XL koristeći gradijent od 0 do 100% etil acetat -cikloheksan preko 10 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (17.62 g, 85%) kao braon ulje, koje stajanjem očvrsne : LCMS (Sistem A) RT = 1.05 min, 100% ; ES+ve m/z 368 (M+H)<+>.
Međuproizvod 13 : terc-Butil 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)butanoat
[0164] Rastvor (3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)borne kiseline (Međuproizvod 9) (44.7 g, 207 mmol) u KOH (3.8 M, 54.4 mL, 207 mmol) se tretira sa rastvorom (R,E)-terc-butil 4-(3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin1-il)but-2-enoata (Međuproizvod 12) (40 g, 103 mmol) u 1,4-dioksanu (300 mL) i nekoliko puta degasira koristeći vakuum i azot u toku 5 min. Doda se hloro(1,5-ciklooktadien)rodijum (I) dimer (2.55 g, 5.17 mmol), a nakon toga (R)-BINAP (6.44 g, 10.3 mmol) i smeša se degasira narednih 5 min. Rastvor se zagreva 60 min na 90 °C. Nakon hlađenja, reaktivna smeša se podeli između DCM (250 mL) i vode (200 mL). Vodena faza se dalje ekstrahuje sa DCM (200 mL) i kombinovani organski rastvori se upare pod vakuumom. Preostalo ulje (95 g) se rastvori u DCM i prečisti hromatografijom na aminopropil kartridžu KPNH (900 g) uz eluiranje sa gradijentom 0-50% etil acetatcikloheksan preko 10 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije braon ulje (39 g). Analitička asimetrična HPLC na Chiralpak AD-H koloni (250 mm x 4.6 mm) uz izokratno eluiranje sa 20% EtOH (sadrži 0.2% izopropilamina) - heptan, brzina protoka = 1.0 mL/min, detekcija na 215 nm pokazuje da je ulje smeša dva diastereoizomera : Pik 1 RT = 7.87 min, 90.4 %; Pik 2 RT = 9.78 min, 9.6 %. Smeša se razdvoji asimetričnom preparativnom HPLC na Chiralpak AD koloni (50 mm x 200 mm), uz eluiranje sa 20% etanola (sadrži 0.2% izopropilamina)-heptani, brzina protoka = 50 mL/min, detekcija na 240 nm, sakupljene frakcije glavne komponente sa RT = 11-16 min.
Kombinovane frakcije se upare pod sniženim pritiskom da se dobije glavni izomer naslovljenog jedinjenja (izomer 1) (25.1 g, 45%) kao braon ulje: LCMS (Sistem A) RT= 1.25 min, ES+ve m/z 540 (M+H)<+>; Analitička asimetrična HPLC na Chiralpak AD-H koloni RT = 7.87 min, >99.5%;<1>H NMR δ (CDCl3; 600 MHz) 9.07 (dd, J= 4.2, 2.0 Hz, 1H), 8.15 (dd, J= 8.0, 1.9 Hz, 1H), 8.08 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.43 (dd, J= 8.0, 4.3 Hz, 1H), 7.37 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.37 - 7.33 (m, 1H), 7.27 (d, J= 1.1 Hz, 1H), 7.27 - 7.25 (m, 1H), 7.21 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 5.98 (s, 1H), 3.31 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 3.10-2.95 (m, 2H), 2.85 (dd, J= 15.4, 5.7 Hz, 1H), 2.84 - 2.79 (m, 1H), 2.78 - 2.71(m, 1H), 2.75 - 2.67 (m, 1H), 2.55 - 2.47 (m, 1H), 2.48 - 2.41 (m, 1H), 2.43 - 2.35 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.26 - 2.18 (m, 1H), 2.23 - 2.13 (m, 1H), 2.02 - 1.95 (m, 1H), 1.98 - 1.91 (m, 2H), 1.50 - 1.42 (m, 1H), 1.30 (s, 9H). Frakcije koje sadrže glavnu komponentu (RT= 19-25 min) se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje izomer 2 (2.03g, 4%) kao braon ulje: LCMS (Sistem A) RT= 1.25 min, ES+ve m/z 540 (M+H)<+>; Analitička asimetrična HPLC na Chiralpak AD-H koloni RT=9.78 min, >99.5%.
Međuproizvod 14: terc-Butil 3-(3-(3.5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil-4-((R)-3-(2-(5.6.7.8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il) etil)pirolidin-1-il) butanoat
[0165] Rastvor terc-butil 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)butanoata (izomer 1) (Međuproizvod 13) (8.0 g, 14.8 mmol) u etanolu (200 mL) se na sobnoj temperaturi u toku noći brzo meša preko 10% Pd/C (1.58 g) u atmosferi gasa vodonika. Katalizator se ukloni filtriranjem kroz celite i ispere sa etanolom. Kombinovani filtrati i ispirci se upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (7.19 g, 89%) kao braon ulje. LCMS (Sistem A) RT = 1.44 min, ES+ve m/z 544 (M+H)<+>.
Međuproizvod 15: terc-Butil 4-((R)-3-(2-(1.8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(5-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)butanoat
[0166] Rastvor (3-(5-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)borne kiselina (Međuproizvod 7) (12.53 g, 55.8 mmol) u vodenom rastvoru KOH (3.8M, 14.69 mL, 55.8 mmol) se tretira sa rastvorom (R,E)-terc-butil 4-(3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)but-2-enoata (Međuproizvod 12) (11.4 g, 27.9 mmol) u 1,4-dioksanu (196 mL) i rastvor se nekoliko puta degasira koristeći vakuum i azot u toku 5 min. U smešu se dodaju hlor(1,5-ciklooktadien)rodijum(I) dimer (0.688 g, 1.396 mmol) i (R)-BINAP (1.738 g, 2.79 mmol) i rastvor se degasira narednih 5 min. Reaktivna smeša se zagreva 60 min na 90 ºC. Nakon hlađenja, reaktivna smeša se upari pod vakuumom i ostatak se podeli između DCM i vode. Vodena faza se dalje ekstrahuje sa DCM i kombinovani organski rastvori se upare pod vakuumom. Preostalo ulje (21.53 g) se rastvori u DCM i prečisti hromatografijom na aminopropil nosaču (375 g) na CombiFlash Companion XL uz eluiranje sa gradijentom od 0 do 100% etil acetat - cikloheksan preko 12 zapremina kolona. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije braon ulje (13.56 g). Analitička asimetrična HPLC na Chiralpak OD-H koloni (250 mm x 4.6 mm) uz izokratično eluiranje sa 20% EtOH - heptan, brzina protoka = 1.0 mL/min, detekcija na 215 nm pokazuje da je ulje smeša dva diastereoizomera : Pik 1 RT = 15.1 min, 8.2 %; Pik 2 RT = 22.6 min, 91.8 %. Smeša se razdvoji asimetričnom preparativnom HPLC na Chiralpak AD koloni (50 mm x 200 mm), uz eluiranje sa 30% etanol - heptani, brzina protoka 50 mL/min, detekcija na 215 nm, uz sakupljanje frakcija glavne komponente sa RT = 37 - 50 min. Kombinovane frakcije se upare pod sniženim pritiskom a ostatak se dalje prečisti na
4
aminopropil kartridžu (375 g) uz eluiranje sa gradijentom 0 - 100% etil acetat - cikloheksan preko 12 zapremina kolona. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije izomer 1 naslovljenog jedinjenja (9.06 g, 62%) kao braon ulje : LCMS (Sistem A) RT=1.20 min, 97%, ES+ve m/z 526 (M+H)<+>. Druge odgovarajuće frakcije se upare pod sniženim pritiskom da se dobije manji izomer (izomer 2) naslovljenog jedinjenja (1.83 g, 12%) : LCMS (Sistem A) RT= 1.21 min, ES+ve m/z 526 (M+H)<+>.
Međuproizvod 16: terc-Butil 3-(3-(5-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoat
[0167] Rastvor terc-butil 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(5-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)butanoata (izomer 1) (Međuproizvod 15) (9.06 g, 17.2 mmol) u etanolu (250 mL) se hidrogenizuje 48 h preko 10% Pd/C (1.834 g) na sobnoj temperaturi. Katalizator se ukloni filtriranjem kroz Celite i ispere sa etanolom. Kombinovani filtrati i ispirci se upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (7.68 g, 84%) kao žuto ulje: LCMS (Sistem A) RT = 1.40 min, 95%, ES+ve m/z 530 (M+H)<+>.
Međuproizvod 17: terc-Butil 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(5-etil-3-metil-1H-pirazol-1-il) fenil) butanoat
[0168] Smeša (R,E)-terc-butil 4-(3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)but-2-enoata (Međuproizvod 12) (360 mg, 0.980 mmol), (3-(5-etil-3-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)borne kiseline (Međuproizvod 10) (676 mg, 2.94 mmol), aq. KOH (3.8M, 0.516 mL, 1.96 mmol), hlor(1,5-ciklooktadien)rodijum(I) dimera (48.3 mg, 0.098 mmol), (R)-BINAP (122 mg, 0.196 mmol) u 1,4-dioksanu (15 mL) se zagreva 3 h na 95 ºC. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i podeli između DCM (25 mL) i vode (25 mL). Vodeni sloj se razdvoji i ekstrahuje sa još DCM (25 mL) a kombinovani organski rastvori se koncentruju pod vakuumom. Ostatak se rastvori u DCM i prečisti hromatografijom na nosaču silika gela (50 g) uz eluiranje sa 0 - 25% MeOH - DCM. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (158 mg, 29%) kao narandžasto ulje : LCMS (Sistem A) RT = 1.31 min, 81%, ES+ve m/z 554 (M+H)<+>; Analitika asimetrične HPLC Chiralpak AD (250 mm x 4.6 mm) 15% EtOH - heptan, izokratično, brzina protoka 1 mL/min, detekcija na 215 nm. RT = 10.5 min, 92.6% (glavni izomer) i 14.8 min, 7.4% (manji izomer);<1>H NMR δ (CDCl3; 600 MHz) 9.10 (dd, J= 4.2, 2.0 Hz, 1H), 8.17 (dd, J=8.1, 2.2 Hz, 1H), 8.11 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.46 (dd, J= 8.1, 4.4 Hz, 1H), 7.41 - 7.34 (m, 2H), 7.31 - 7.21 (m, 3H), 6.03 (s, 1H), 3.74 (q, J= 7.0Hz, 1H), 3.33 (br. S., 1H), 3.11 - 2.97 (m, 2H), 2.91 -2.70 (m, 4H), 2.63 (q, J= 7.7 Hz, 2H), 2.56 - 2.38 (m, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.27 - 2.14 (m, 2H), 2.06 - 1.92 (m, 3H), 1.51 - 1.45 (m, 1H), 1.36 - 1.31 (m, 9H), 1.19 (t, J= 7.5 Hz, 3H).
Međuproizvod 18: terc-Butil 3-(3-(5-etil-3-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoat
[0169] terc-Butil 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(5-etil-3-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)butanoat (Međuproizvod 17) (158 mg, 0.285 mmol) se hidrogenizuje 18h preko 10% Pd/C (30 mg) u etanolu (10 mL). Katalizator se ukloni filtriranjem kroz celite (10 g) i ispere sa etanolom. Kombinovani filtrati i ispirci se upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (130 mg, 82%) kao narandžasto ulje: LCMS (Sistem A) RT = 1.49 min, ES+ve m/z 558 (M+H)<+>.
Međuproizvod 19 : terc-Butil 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(1H-pirazol-1-il)fenil)butanoat
[0170] Smeša (R,E)-terc-butil 4-(3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)but-2-enoata (Međuproizvod 12) (333 mg, 0.906 mmol), (3-(1H-pirazol-1-il)fenil)borne kiseline (raspoloživ od dobavljača ABCR GmbH) (511 mg, 2.72 mmol), aq. KOH (3.8M, 0.477 mL, 1.81 mmol), hlor(1,5-ciklooktadien)rodijum(I) dimera (44.7 mg, 0.091 mmol), (R)-BINAP (113 mg, 0.196 mmol) u 1,4-dioksanu (15 mL) se zagreva 3 h na 95 ºC. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i podeli između DCM (25 mL) i vode (25 mL). Vodeni sloj se razdvoji i ekstrahuje sa još DCM (25 mL), a kombinovani organski rastvori se koncentruju pod vakuumom. Ostatak se rastvori u DCM i prečisti hromatografijom na nosaču silika gela (50 g), uz eluiranje sa 0 - 25% MeOH - DCM. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (128 mg, 28%) kao narandžasto ulje : LCMS (System A): RT = 1.22 min, ES+ve m/z 512 (M+H)<+>; Analitika asimetrične HPLC Chiralpak AD (250 mm x 4.6 mm), uz izokratično eluiranje sa 30% EtOH - heptan koji sadrži 0.1% izopropilamina, brzina protoka 1 mL/min, detekcija na 235 nm : RT = 7.05 min, 95% (glavni izomer) i 12.2 min, 5% (manji izomer).
4
Međuproizvod 20: terc-Butil 3-(3-(1H-pirazol-1-il) fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoat
[0171] terc-Butil 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(1H-pirazol-1-il)fenil)butanoat (Međuproizvod 19) (128 mg, 0.25 mmol) se hidrogenizuje 18h preko 10% Pd/C (53 mg) u etanolu (10 mL). Katalizator se ukloni filtriranjem kroz celite (10 g) i ispere sa etanolom. Kombinovani filtrati i ispirci se upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (100 mg, 78%) kao narandžasto ulje: LCMS (Sistem A) RT = 1.45 min, ES+ve m/z 516 (M+H)<+>.
Međuproizvod 21: 1-(3-Bromofenil)-3.5-dietil-1H-pirazol
[0172] Heptan-3,5-dion (raspoloživ od dobavljača Aldrich) (3.60 g, 28.1 mmol), (3-bromofenil)hidrazin (raspoloživ od dobavljačaAnichem Inc) (3.50 g, 18.7 mmol) se rastvore u DCM (20 mL). Doda se koncentrovana H2SO4(18M, 0.100 mL, 1.8 mmol) i reakcija meša 18 h na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i podeli između DCM (25 mL) i vode (25 mL), vodena faza se izdvoji i ekstrahuje sa još DCM (25 mL).
Kombinovane organske faze se koncentruju pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.64 g, 70%): LCMS (Sistem A): RT = 1.31 min, ES+ve m/z 279/281 (M+H)<+>.
Međuproizvod 22: (3-(3,5-Dietil-1H-pirazol-1-il)fenil)borna kiselina
[0173] Smeša 1-(3-bromofenil)-3,5-dietil-1H-pirazola (Međuproizvod 21) (3.637 g, 13.03 mmol), 2-dicikloheksilfosfino-2’,4’,6’-triizopropilbifenila (X-PHOS) (raspoloživ od dobavljača Aldrich) (298 mg, 0.625 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijuma (raspoloživ od dobavljača Aldrich) (179 mg, 0.195 mmol), kalijum acetata (3.20 g, 32.6 mmol) i bis(pinakolato)diborona (raspoloživ od dobavljača Aldrich) (3.64 g, 14.3 mmol) u 1,4-dioksanu (75 mL) se zagreva 4 h na 110 °C. U reaktivnu smešu se dodaju voda i etil acetat i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se dalje ekstrahuje dva puta sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti se propuste kroz hidrofobni frit i filtrat upari pod vakuumom. Ostatak se rastvori u acetonitrilu i prečisti reverzno faznom hromatografijom (100 g), eluira sa gradijentom 25 -85% acetonitril - voda koja sadrži 0.1% mravlje kiseline preko 10 zapremina kolone.
4
Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.055 g, 33%): LCMS (Sistem A) RT = 0.86 min, ES+ve m/z 245 (M+H)<+>.
Međuproizvod 23: terc-Butil 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(3.5-dietil-1H-pirazol-1-il)fenil)butanoat
[0174] Smeša (R,E)-terc-butil 4-(3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)but-2-enoata (Međuproizvod 12) (210 mg, 0.571 mmol), (3-(3,5-dietil-1H-pirazol-1-il)fenil)borne kiseline (Međuproizvod 22) (283 mg, 1.16 mmol), aq. KOH (3.8M, 0.3 mL, 1.14 mmol), hlor(1,5-ciklooktadien)rodijum(I) dimera (14.1 mg, 0.03 mmol), (R)-BINAP (35.6 mg, 0.06 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) se zagreva 4 h na 95 °C. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i podeli između EtOAc (100 mL) i vode (100 mL). Vodeni sloj se razdvoji i ekstrahuje sa još EtOAc (100 mL), a kombinovani organski rastvori se koncentruju pod vakuumom. Ostatak se prečisti hromatografijom na aminopropil SPE kartridžu (50 g), uz eluiranje sa 0 - 100% EtOAc - cikloheksan u toku 1 h. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (130 mg, 40%) kao narandžasto ulje : LCMS (Sistem C): RT = 0.97 min, ES+ve m/z 568 (M+H)<+>; Analitika asimetrične HPLC Chiralpak AD (250 mm x 4.6 mm), uz izokratno eluiranje sa 10% EtOH - heptan koji sadrži 0.1% izopropilamina, brzina protoka 1 mL/min, detekcija na 215 nm: RT = 10.5 min, 86% (glavni izomer) i 13.7 min, 13% (manji izomer). Diastereoizomeri se razdvoje preparativnom asimetričnom HPLC na Chiralpak AD (250 mm x 30 mm) uz izokratno eluiranje sa 10% EtOH - heptan koji sadrži 0.2% izopropilamina, brzina protoka 30 mL/min, detekcija na 215 nm. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije glavni izomer naslovljenog jedinjenja (izomer 1) (53 mg, 41%) : LCMS (Sistem C) RT = 0.95 min, ES+ve m/z 568 (M+H)<+>;<1>H NMR δ (COCl3; 400 MHz) 9.08 (dd, J= 4, 2 Hz, 1H), 8.15 (dd, J= 8, 2 Hz, 1H), 8.09 (d, J= 8 Hz, 1H), 7.44 (dd, J= 8, 4 Hz, 1H), 7.38 (d, J= 8 Hz, 1H), 7.37 - 7.34 (m, 1H), 7.27 - 7.24 (m, 2H), 7.22 (br. d, J= 8 Hz, 1H), 6.05 (s, 1H), 3.37 - 3.25 (br, 1H), 3.09 - 2.97 (m, 2H), 2.86 (dd, J=15, 5.5 Hz, 1H), 2.83 - 2.79 (m, 1H), 2.78 - 2.71 (m, 1H), 2.70 (q, J= 7 Hz, 2H), 2.75 - 2.67 (m, 1H), 2.62 (q, J= 7 Hz, 2H), 2.55 - 2.35 (m, 3H), 2.30 - 2.13 (m, 2H), 2.05 - 1.92 (m, 2H), 1.72 - 1.58 (m, 1H), 1.50 - 1.42 (m, 1H), 1.31 (s, 9H), 1.29 (t, J= 7 Hz, 3H), 1.19 (t, J= 7 Hz, 3H). Uparavanjem drugih odgovarajućih frakcija dobija se manji diastereoizomer naslovljenog jedinjenja (izomer 2) (5 mg, 4%) : LCMS (Sistem C) RT = 0.96 min, ES+ve m/z 568 (M+H)<+>.
4
Međuproizvod 24: terc-Butil 3-(3-(3.5-dietil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoat
[0175] terc-Butil 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(3,5-dietil-1H-pirazol-1-il)fenil)butanoat (izomer 1) (Međuproizvod 23) (144 mg, 0.25 mmol) se hidrogenizuje 18h preko 10% Pd/C (27 mg) u etanolu (10 mL). Katalizator se ukloni filtriranjem kroz celite (10 g) i ispere sa etanolom. Kombinovani filtrati i ispirci se upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (116 mg, 80%) kao narandžasto ulje: LCMS (Sistem A) RT = 1.61 min, ES+ve m/z 572 (M+H)<+>.
Međuproizvod 25: 1-(3-Bromofenil)-4-fluoro-3,5-dimetil-1H-pirazol
[0176] 3-Fluoropentan-2,4-dion (raspoloživ od dobavljača Fluorochem) (2.84 g, 24.1 mmol) i (3-bromofenil)hidrazin (raspoloživ od dobavljača Anichem Inc) (3.0 g, 16 mmol) se rastvore u DCM (20 mL). Doda se koncentrovana H2SO4(0.171 mL, 3.21 mmol) i reakcija meša 18 h na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i podeli između DCM (25 mL) i vode (25 mL), vodena faza se izdvoji i ekstrahuje sa još DCM (25 mL).
Kombinovane organske faze se nakon toga koncentruju pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.61 g, 60%):
LCMS (Sistem A) RT = 1.22 min, ES+ve m/z 269/271 (M+H)<+>.
Međuproizvod 26: (3-(4-Fluoro-3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil) borna kiselina
[0177] Smeša 1-(3-bromofenil)-4-fluoro-3,5-dimetil-1H-pirazola (Međuproizvod 25) (2.61 g, 9.70 mmol), 2-dicikloheksilfosfino-2’,4’,6’-triizopropilbifenila (X-PHOS) (raspoloživ od dobavljača Aldrich) (222 mg, 0.466 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijuma (raspoloživ od dobavljača Aldrich) (133 mg, 0.146 mmol), kalijum acetata (2.38 g, 24.3 mmol) i bis(pinakolato)diborona (raspoloživ od dobavljača Aldrich) (2.71 g, 10.67 mmol) u 1,4-dioksanu (75 mL) se zagreva 4h na 110 °C. U reaktivnu smešu se dodaju voda i etil acetat i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se dalje ekstrahuje sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti se propuste kroz hidrofobni frit i filtrat upari pod vakuumom. Ostatak se rastvori u acetonitrilu i prečisti reverzno faznom hromatografijom (100 g kartridž) koristeći gradijent 25 - 85 %
4
acetonitril - voda koja sadrži 0.1% mravlje kiseline preko 10 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (400 mg, 18%): LCMS (Sistem A) RT = 0.77 min, ES+ve m/z 235 (M+H)<+>.
Međuproizvod 27: terc-Butil 4-((R)-3-(2-(1.8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(4-fluoro-3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)butanoat
[0178] Rastvor (3-(4-fluoro-3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)borne kiseline (Međuproizvod 26) (382 mg, 1.63 mmol), ciklooktadien rodijum(l) hlorid dimera (121 mg, 0.245 mmol), vodenog rastvora KOH (3.8M, 0.430 mL, 1.63 mmol) u 1,4-dioksanu (6 mL) se meša 5 min na temperaturi sredine u atmosferi azota a nakon toga se doda (R,E)-terc-butil 4-(3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)but-2-enoatciklooktadien (Međuproizvod 12) (300 mg, 0.82 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 1 h na 95 °C, a nakon toga podeli između vode (20 mL) i EtOAc (20 mL). Organski sloj se koncentruje pod sniženim pritiskom, rastvori u MeOH (5 mL) i prenese na 10 g aminopropil SPE kartridž, koji je prethodno pripremljen sa MeOH (1 zapremina kolone). Kolona se ispere sa MeOH (3 zapremina kolone) i frakcije se koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak (385 mg) se prečisti reverzno faznom hromatografijom na C18 (30 g) kartridžu, uz eluiranje sa 50 - 80% acetonitril (sadrži 0.1% amonijaka) u 10 mM vodenom rastvoru amonijum bikarbonata. Odgovarajuće frakcije se koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao smeša diastereoizomera (70 mg, 15%): LCMS (Sistem A) RT = 1.34 min, ES+ve m/z 558 (M+H)<+>.
Međuproizvod 28: terc-Butil 3-(3-(4-fluoro-3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il) fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoat
[0179] terc-Butil 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(4-fluoro-3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)butanoat (Međuproizvod 27) (70 mg, 0.063 mmol) se hidrogenizuje 4 h preko 10% Pd/C (13.4 mg) u etanolu (4 mL). Katalizator se ukloni filtriranjem kroz celite i ispere sa etil acetatom. Kombinovani filtrati i ispirci se koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (70 mg, 35%) kao žuto ulje: LCMS (Sistem A) RT = 1.50 min, ES+ve m/z 562 (M+H)<+>.
Međuproizvod 29: 1-(3-Bromofenil)-3-metil-1H-pirazol
4
[0180] Rastvor but-3-in-2-ona (1.75 mL, 22.4 mmol), (3-bromofenil)hidrazin, hidrohlorida (5.0 g, 22.4 mmol) u MeOH (20 mL) se tretira sa conc. HCl (0.680 mL, 22.4 mmol) i reakcija se 2 min zagreva mikrotalasima u zatvorenoj posudi na 120 °C. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i podeli između DCM (25 mL) i vode (25 mL), vodeni sloj se izdvoji i ekstrahuje sa još DCM (25 mL). Kombinovani organski rastvori se koncentruju i prečiste hromatografijom na SPE nosaču silika gela (100 g) uz eluiranje sa gradijentom 0 -100% DCM - cikloheksan. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.39 g, 45%): LCMS (Sistem A) RT = 1.15 min, ES+ve m/z 237/239 (M+H)<+>;<1>H NMR δ (CDCl3; 600 MHz) 7.85 (t, J=2.0 Hz, 1H), 7.75 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.54 (ddd, J=8.2, 2.1, 0.9 Hz, 1H), 7.35 - 7.31 (m, 1H), 7.26 - 7.21 (m, 1H), 6.23 (d, J=2.4 Hz, 1H), 2.35 (s, 3H) i njegov regioizomer 1-(3-bromofenil)-5-metil-1H-pirazol (Međuproizvod 6) (1.7 g, 32%): LCMS (Sistem A) RT = 1.05 min, ES+ve m/z 237/239 (M+H)<+>.
Međuproizvod 30: (3-(3-Metil-1H-pirazol-1-il)-fenil)borna kiselina
[0181] Izrađuje se po postupku koji je sličan opisanom za izradu Međuproizvoda 26, počevši od Međuproizvoda 29 (2.39 g, 10.1 mmol) da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.23 g, 100%): LCMS (Sistem A) RT = 0.60 min, ES+ve m/z 203 (M+H)<+>.
Međuproizvod 31: terc-Butil 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(3-metil-1H-pirazol-1-il)fenil) butanoat
[0182] Izrađuje se po postupku koji je sličan opisanom za izradu Međuproizvoda 27, počevši od Međuproizvoda 12 (336 mg, 0.914 mmol) i Međuproizvoda 30 (554 mg, 2.74 mmol) da se dobije naslovljeno jedinjenje (212 mg, 44%): LCMS (Sistem A) RT = 1.26 min, ES+ve m/z 526 (M+H)<+>; Analitika asimetrične HPLC Chiralcel OD (250 mm x 4.6 mm), uz izokratno eluiranje sa 40% EtOH - heptan, brzina protoka 1 mL/min, detekcija na 215 nm : RT = 10.1 min, 16.7% (manji izomer) i 14.1 min, 83.3% (glavni izomer).
Međuproizvod 32: terc-Butil 3-(3-(3-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il) etil) pirolidin-1-il)butanoat
[0183] Rastvor terc-butil 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil) pirolidin-1-il)-3-(3-(3-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)butanoata (Međuproizvod 31) (212 mg, 0.403 mmol) u EtOH (10 mL) se hidrogenizuje 18 h preko Pd/C (42.9 mg). Katalizator se sakupi filtriranjem kroz celite i ispere sa EtOH. Kombinovani filtrati i ispirci se koncentruju pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (171 mg, 80%) kao narandžasto ulje: LCMS (Sistem A): RT= 1.46 min, ES+ve m/z 530 (M+H)<+>.
IZRADA PRIMERA
Primer 1: 3-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil) pirolidin-1-il)butanoatna kiselina
[0184]
[0185] Rastvor terc-butil 3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoata (Međuproizvod 14) (100 mg, 0.184 mmol) u 2-metilTHF (0.5 mL) se tretira sa conc. HCl (12M, 0.077 mL, 0.92 mmol) i meša 2 h na 40 °C. Rastvarač se upari pod vakuumom a preostalo ulje se rastvori u etanolu (2 mL) i nanese na SCX-2 kartridž jonskih izmenjivača (5 g), uz eluiranje sa etanolom (2 zapremine kolone) a nakon toga sa 2M rastvorom amonijaka u MeOH (2 zapremine kolone).
Amonijačne frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (79 mg, 88%) kao beličasta čvrsta supstanca: LCMS (Sistem A) RT= 0.86 min, 100%, ES+ve m/z 488 (M+H)<+>;<1>H NMR δ (CDCl3; 600 MHz): 7.42 - 7.37 (m, 1H), 7.31 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.29 (d, J=0.9 Hz, 1H), 7.23 (d, J=7.7Hz, 1H), 7.21 (d, J=7.3 Hz, 1H), 6.31 (d, J=7.3 Hz, 1H), 5.99 (s, 1H), 3.55 (br. s., 1H), 3.60-3.52 (m, 1H), 3.45 (t, J= 5.4 Hz, 2H), 3.27 (t, J=10.6 Hz, 1H), 3.09 (br. s., 1H), 2.93 - 2.86 (m, 1H), 2.82 (d, J=10.1 Hz, 1H), 2.86 - 2.75 (m, 2H), 2.72
1
(t, J=6.2 Hz, 1H), 2.74 - 2.67 (m, 2H), 2.75 (d, J=9.0 Hz, 1H), 2.61 - 2.50 (m, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.33-2.26 (m, 1H), 2.24 - 2.11 (m, 1H), 1.94 - 1.86 (m, 2H), 1.94 - 1.84 (m, 1H), 1.78 - 1.66 (m, 1H), 1.65-1.51 (m, 1H).
[0186] Primer 1 je identifikovan po ovde opisanom postupku kao (S)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((11)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatna kiselina.
Primer 2: 3-(3-(5-Metil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1.8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatna kiselina
[0187]
[0188] Rastvor terc-butil 3-(3-(5-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoata (Međuproizvod 16) (2.80 g, 5.29 mmol) u 2-metilTHF (15 mL) se tretira sa conc. HCl (12M, 3.96 mL, 47.6 mmol) i meša 2 h na 40 °C. Rastvarač se upari pod vakuumom a ostatak (3.8 g) se rastvori u etanolu (2 mL) i prečisti hromatografijom jonskih izmenjivača na SCX-2 kartridžu (70 g), uz eluiranje sa etanolom (1 zapremina kolone) a nakon toga sa 2M rastvorom amonijaka u MeOH (1 zapremina kolone). Amonijačne frakcije se upare pod vakuumom a ostatak se rastvori u DCM i dalje prečisti na aminopropil kartridžu (100 g) i eluira sa gradijentom 0 - 25% MeOH - DCM u toku 30 min.
2
Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.01 g, 80%) kao bela pena: LCMS (Sistem A) RT= 0.83 min, 100%, ES+ve m/z 474 (M+H)<+>;<1>H NMR δ (DMSO-d6; 600 MHz) 7.55 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.47 - 7.41 (m, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.34 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.30 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.02 (d, J=7.0 Hz, 1H), 6.32 -6.22 (m, 3H), 3.35 - 3.26 (m, 2H), 3.26 - 3.20 (m, 2H), 2.92 - 2.75 (m, 3H), 2.73 - 2.65 (m, 1H), 2.63 - 2.52 (m, 4H), 2.47 (dd, J=15.8, 7.3 Hz, 1H), 2.41 (t, J=7.7 Hz, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.28 (dd, J=9.0, 7.5 Hz, 1H), 2.10 - 1.96 (m, 1H), 1.94 - 1.85 (m, 1H), 1.79 - 1.71 (m, 2H), 1.68 - 1.54 (m, 2H), 1.34 (dd, J=12.3, 7.9 Hz, 1H).
Primer 3: 3-(3-(5-Etil-3-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5.6.7.8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil) pirolidin-1-il)butanoatna kiselina
[0189]
[0190] terc-Butil 3-(3-(5-etil-3-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoat (Međuproizvod 18) (130 mg, 0.233 mmol) se rastvori u 1,4-dioksanu (5 mL), doda se conc. HCl (37%, 0.038 mL, 0.466 mmol) i reaktivna smeša se meša 18 h na sobnoj temperaturi. Smeša se koncentruje pod vakuumom i uzorak se rastvori u DMSO (1 mL) i prečisti usmerenom masenom auto-preparativnom HPLC (Postupak B) na Xbridge koloni koristeći smešu acetonitril-voda sa amonijum karbonatnim puferom. Rastvarač se ukloni u struji azota u Radley’s aparatu za odmuljavanje da se dobije naslovljeno jedinjenje (20 mg, 17%): LCMS (Sistem A) RT = 0.90 min, 95%, ES+ve m/z 502 (M+H)<+>;<1>H NMR δ (CD3OD; 400 MHz) 7.48 (t, J=8Hz, 1H),7.39 - 7.32 (m, 2H), 7.30 (br d, J=8 Hz, 1H), 7.14 (d, J=7.5 Hz, 1H), 6.38 (d, J=7.5 Hz, 1H), 6.10 (s, 1H), 3.62 - 3.45 (m, 2H), 3.39 - 3.32 (m, 4H), 3.25 (dd, J= 12, 3 Hz, 1H), 3.08 (br. t, J=9 Hz, 1H), 2.86 (dd, J=16, 10 Hz, 1H), 2.71 - 2.53 (m, 7H), 2.38 - 2.26 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.24 - 2.16 (m, 1H), 1.90 -1.63 (m, 5H), 1.16 (t, J=7.5 Hz, 3H).
Primer 4 : 3-(3-(1H-Pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5.6.7.8-tetrahidro-1-,8-naftiridin-2-il)etil) pirolidin-1-il)butanoatna kiselina
[0191]
[0192] terc-Butil 3-(3-(1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoat (Međuproizvod 20) (100 mg, 0.19 mmol) se rastvori u 1,4-dioksanu (5 mL), doda se conc. HCl (37%, 0.032 mL, 0.39 mmol) i reaktivna smeša se meša 18 h na sobnoj temperaturi. Smeša se koncentruje pod vakuumom a uzorak se rastvori u smeši DMSO - MeOH (1:1; 1 mL) i prečisti usmerenom masenom auto-preparativnom HPLC (Postupak A) na Xbridge koloni koristeći smešu acetonitril-voda sa amonijum karbonatnim puferom. Rastvarač se ukloni u struji azota u Radley’s aparatu za odmuljavanje da se dobije naslovljeno jedinjenje (10 mg, 11%): LCMS (Sistem A) RT = 0.82 min, 98.6%, ES+ve m/z 460 (M+H)<+>;<1>H NMR δ (CD3OD; 400 MHz) 8.23 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.72 (br. d, J=2 Hz, 1H), 7.68 (m, 1H), 7.63 (br. d, J=8 Hz, 1H), 7.46 (t, J=8 Hz, 1H), 7.25 (br. d, J=7.5 Hz, 1H), 7.15 (d, J=7.5 Hz, 1H), 6.52 (m, 1H), 6.38 (d, J=7.5 Hz, 1H), 3.64 - 3.45 (m, 2H), 3.39 - 3.32 (m, 4H), 3.26 (zamračen sa CHD2OD, 1H), 3.15 - 3.06 (m, 1H), 2.88 (dd, J=16.5, 10 Hz, 1H), 2.71 - 2.61 (m, 3H), 2.56 (t, J=8 Hz, 2H), 2.40 - 2.28 (m, 1H), 2.26 -2.16 (m, 1H), 1.90 - 1.61 (m, 5H).
Primer 5 : 3-(3-(3,5-Dietil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5.6.7.8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il) etil)pirolidin-1-il)butanoatna kiselina
[0193]
4
[0194] terc-Butil 3-(3-(3,5-dietil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoat (116 mg, 0.203 mmol) se rastvori u 1,4-dioksanu (5 mL) a nakon toga tretira sa conc. HCl (0.033 mL, 0.406 mmol) i reakcija meša 18 h na sobnoj temperaturi. Reakcija se koncentruje pod vakuumom a ostatak se rastvori u DMSO (1 mL) i prečisti usmerenom masenom auto-preparativnom HPLC (Postupak A) na Xbridge koloni koristeći smešu acetonitril - voda sa amonijum karbonatnim puferom. Rastvarač se suši u struji azota u Radleys aparatu za odmuljavanje da se dobije naslovljeno jedinjenje (27 mg, 26%): LCMS (Sistem A) RT = 0.94 min, ES+ve m/z 516 (M+H)<+>:<1>H NMR δ (CD3OD; 600 MHz) 7.49 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.37 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.34 (br. s, 1H), 7.31 (br. d, J=8.0 Hz, 1H), 7.14 (d, J=7.3 Hz, 1H), 6.38 (d, J=7.3 Hz, 1H), 6.14 (s, 1H), 3.57 (dd, J=12.5, 9.4 Hz, 1H), 3.53 - 3.47 (m, 1H), 3.39 - 3.33 (m, 3H), 3.32 - 3.29 (m, 2H), 3.25 (dd, J=12.6, 3.6 Hz, 1H), 3.10 - 3.01 (m, 1H),2.86 (dd, J=16.4, 10.4 Hz, 1H), 2.68 (t, J=6.2 Hz, 2H), 2.67-2.61 (m, 1H), 2.66 - 2.58 (m, 4H), 2.56 (t, J=7.8 Hz, 2H), 2.38-2.28 (m, 1H), 2.21 (d, J=6.8 Hz, 1H), 1.88 - 1.83 (m, 2H), 1.83 - 1.72 (m, 2H), 1.67 (dd, J=13.0, 8.4 Hz, 1H), 1.25 (t, J=7.7 Hz, 3H), 1.17 (t, J=7.6 Hz, 3H)
Primer 6: 3-(3-(4-Fluoro-3.5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin2-il)etil) pirolidin-1-il)butanoatna kiselina
[0195]
[0196] terc-Butil 3-(3-(4-fluoro-3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoat (Međuproizvod 28) (70 mg, 0.125 mmol) se rastvori u acetonitrilu (1 mL) i doda se 4M rastvor HCl u dioksanu (0.093 mL, 0.37 mmol). Reaktivna smeša se meša 2 h na temperaturi sredine. Na ovom nivou LCMS pokazuje veoma malu konverziju u produkt i doda se još 4M rastvora HCl u dioksanu (0.093 mL, 0.37 mmol) i reaktivna smeša meša narednih 8 h. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom, rastvori u smeši MeOH-DMSO (1:1; 2 mL) i prečisti pomoću MDAP (Postupak A). Odgovarajuće frakcije se kombinuju i koncentruje u struji azota u aparatu za odmuljavanje da se dobije naslovljeno jedinjenje (30 mg, 48%) kao narandžasta guma: LCMS (Sistem A) RT = 0.90 min, 98.5%, ES+ve m/z 506 (M+H)<+>;<1>H NMR δ (CD3OD; 400 MHz) 7.49 (t, J=8 Hz, 1H), 7.40 - 7.31 (m, 3H), 7.13 (t, J= 8 Hz, 1H), 6.38 (m, 1H), 3.61 - 3.46 (m, 3H), 3.44 - 3.32 (m, 4H), 3.28 -3.21 (m, 2H), 2.90 - 2.80 (m, 2H), 2.74 - 2.50 (m, 5H), 2.41 -2.28 (m, 1H), 2.25 (d, J=9 Hz, 6H), 2.22 - 2.14 (m, 1H), 1.90 - 1.66 (m, 4H).
Primer 7: 3-(3-(3-Metil-1H-Pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatna kiselina
[0197]
[0198] terc-Butil 3-(3-(3-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoat (Međuproizvod 32) (92 mg, 0.17 mmol) se rastvori u 1,4-dioksanu (5 mL) a nakon toga tretira sa conc. HCl (0.029 mL, 0.35 mmol) i reakcija meša 18 h na sobnoj temperaturi. Reakcija se koncentruje pod vakuumom a ostatak rastvori u DMSO (1 mL) i prečisti usmerenom masenom auto-preparativnom HPLC (Postupak A). Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare u struji azota gas u Radleys aparatu za odmuljavanje da se dobije naslovljeno jedinjenje (18 mg, 22%): LCMS (Sistem A) RT = 0.84 min, ES+ve m/z 474 (M+H)<+>;<1>H NMR δ (CD3OD; 400 MHz) 9.15 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.46 (t, J=1.5Hz, 1H), 8.40 (dd, J=8, 1.5 Hz, 1H), 8.16 (t, J=8Hz, 1H), 7.93 (br d, J=8 Hz, 1H), 7.81 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.11 (d, J=2 Hz, 1H), 7.09 - 7.06 (m, 1H), 7.04 (d, J=7.5 Hz, 1H), 4.11 -4.00 (m, 3H), 3.72 - 3.57 (m, 3H), 3.54 - 3.46 (m, 1H), 3.45 -3.32 (m, 4H), 3.29 - 3.16 (m, 3H), 3.15 - 3.09 (m, 1), 3.07 (s, 3H), 2.87 -2.77 (m, 1H), 2.75 - 2.65 (m, 1H), 2.58 - 2.50 (m, 2H), 2.46 - 2.35 (m, 2H), 2.19 - 2.09 (m, 1H).
Primer 8: (S)-3-(3-(3.5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil) pirolidin-1-il)butanoatna kiselina, hidrohloridna so
[0199] 3-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatna kiselina (Primer 1) (37.89 g, 78 mmol) se dalje prečisti preparativnom asimetričnom HPLC. Preparat se rastvori u etanolu (4 mL) i rastvor se razblaži sa heptanom (6 mL). Rastvor se ostavi da stoji 30 minuta i nakon toga filtrira. Filtrat se injektuje (1 g po injekciji) na Chiralpak AD kolonu (20 mikrona, 75 mm x 250 mm) uz izokratno eluiranje sa smešom 30% etanol (sadrži 0.1% izopropilamin) - 70% heptan (sadrži 0.1% izopropilamin). Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije čist Primer 1 (31.87 g) kao beličasta pena. Druge različite serije se prečiste na sličan način.
Izrada na veliko Primera 8: (S)-3-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatna kiselina, hidrohloridna so
[0200] Izrada na veliko Primera 8 je navedena u niže datoj šemi:
Međuproizvod 1 (R)-terc-butil 3-(jodmetil)pirolidin-1-karboksilat Faze 1&2.
(Alternativni postupak)
[0201] U reaktor se u atmosferi azota stavi 2-Metiltetrahidrofuran (145 kg), N,N-diizopropiletilamin (16.6 kg) i (R)-terc-butil 3-(hidroksmetil)pirolidin-1-karboksilat (16.5 kg). Masa se ohladi na 0-10°C i doda se metansulfonil hlorid (11.6 kg), a nakon toga 2-metiltetrahidrofuran (8 kg) i reakcija meša približno 5 sati. Doda se još metansulfonil hlorida (2.4 kg), a nakon toga 2-metiltetrahidrofurana (5.2 kg) i reakcija meša približno 4.5 sata. Reaktivna smeša se po redu ispere sa 10% vodenim rastvorom natrijum hidroksida (80 kg), vodom (85 kg), 1N vodenim rastvorom amonijum hlorida (101 kg), vodom (100 kg) i 25% aq. NaCl (100 kg). Organska faza se destiliše do 2-3 zapremine pod sniženim pritiskom i razblaži sa etanolom (78 kg). Smeša se destiliše do 2-3 zapremine pod sniženim pritiskom i razblaži sa etanolom (72 kg). Smeša se destiliše do 2-3 zapremine pod sniženim pritiskom i razblaži sa etanolom (77 kg). U smešu se dodaju etanol (72 kg) i kalijum jodid (70kg) i reaktivna smeša se zagreva 16 sati na 70-80°C a nakon toga ohladi na 40-50°C. Reaktivna smeša se zagreva 8 sati na 70-80°C a nakon toga ohladi na 40-50°C. Reaktivna smeša se zagreva 4 sata na 70-80°C a nakon toga ohladi na 40-50°C. Smeša se destiliše do 2-3 zapremine pod sniženim pritiskom. U koncentrat se dodaju voda (180 kg) i etil acetat (80 kg) i organski sloj se po redu ispere sa vodom (90 kg) i 25% vodenim rastvorom natrijum hlorida (98 kg). Preostala organska faza se destiliše do 1-3 zapremine pod sniženim pritiskom i razblaži sa THF (76 kg). Smeša se destiliše do 1-3 zapremine pod sniženim pritiskom i razblaži sa THF (76 kg). Smeša se destiliše do 1-3 zapremine pod sniženim pritiskom i razblaži sa THF (33 kg). Smeša se destiliše do 1-3 zapremine pod sniženim pritiskom i razblaži sa THF (34 kg). Smeša se razblaži sa THF (31 kg) da se dobije rastvor produkta koji se direktno koristi u sledećoj fazi (89.6 kg, 22.4% m/m analizom, 80% teoretski).
HPLC RT = 15.15 min, 86.1%
Kolona: 150 mm x 4.6 mm ID, 3.5 µm Agilent Zorbax SB-C8
Brzina protoka: 1.0 mL/min.
Temp.: 40°C
Detekcija na talasnoj dužini: 210 nm
Rastvarači: A: 0.1% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u vodi
B: 0.05% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu
Gradijent: Vreme (min) A% B%
0.01 95 5
15.0 5 95
18.0 5 95
18.0 95 5
Međuproizvod 2. (R)-terc-Butil 3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-karboksilat Faza 3
[0202] Izrada rastvora 1: Rastvor (R)-terc-butil 3-(jodmetil)pirolidin-1-karboksilata (Međuproizvod 1) (89.6 kg, 22.4% analizom, 20.1 kg aktivno) se destiliše pod sniženim pritiskom do 1-2 zapremine i razblaži sa THF (180 kg), doda se 2-metilnaftiridin (9.2 kg) i rastvor ohladi na 5-7°C u atmosferi azota.
[0203] Izrada rastvora 2: rastvor litijum bis(trimetilsilil)amida u THF (59.2 kg) se ohladi na 5-7°C u atmosferi azota.
[0204] Reakcija se izvodi upumpavanjem prethodno izrađenih rastvora 1 i 2 preko statičke smeše i protočnog reaktora u skladu sa niže datim uslovima čime se dobija reaktivna smeša koja je neutralisana u rastvoru vode (80 kg) i sirćetne kiseline (42 kg).
Izrada:
[0205] Smeša se tretira sa 2N rastvorom NaOH (347 kg) i ekstrahuje sa MTBE (160 kg). MTBE faza se tretira sa 1N rastvorom HCl (196 kg) na 0-10°C i organski sloj se odbaci. Kiseli vodeni sloj se dva puta ispere sa MTBE (142 kg i 146 kg) a nakon toga podesi na pH 5-6 dodavanjem 2N vodenog rastvora NaOH (80 kg). Vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (162 kg) i vodena faza podesi na pH 5-6 dodavanjem NaOH (14 kg). Vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (166 kg) i vodena faza podesi na pH 5-6 dodavanjem NaOH (10 kg). Vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (176 kg) i kombinovane EtOAc faze isperu sa vodom (210 kg) i 25% aq. rastvorom natrijum hlorida (210 kg) Organski rastvor se destiliše pod sniženim pritiskom do 2-4 zapremine i razblaži sa MTBE (80 kg). Smeša se destiliše pod sniženim pritiskom do 2-4 zapremine i razblaži sa n-heptanom (80 kg). Smeša se destiliše pod sniženim pritiskom do 2-4 zapremine i razblaži sa n-heptanom (80 kg). Smeša se destiliše pod sniženim pritiskom do 2-4 zapremine i razblaži sa MTBE (16 kg). Smeša se ohladi na 5-10°C i tretira sa n-heptanom (40 kg). Čvrsti produkt se sakupi filtriranjem (centrifuga), ispere sa nheptanom (10 kg) i suši na 50-60°C pod vakuumom da se dobije naslovljeni produkt kao čvrsta supstanca (4.3 kg).
[0206] Filtrat se tretira sa EtOAc (203 kg) i destiliše do 100-150L pod sniženim pritiskom. Smeša se razblaži sa MTBE (80 kg) i destiliše do 80L pod sniženim pritiskom. Smeša se razblaži sa n-heptanom (60 kg) i destiliše do 60L pod sniženim pritiskom. Smeša se razblaži sa n-heptanom (23 kg) i destiliše do 60L pod sniženim pritiskom. Smeša se razblaži sa MTBE (16 kg) i destiliše do 80L pod sniženim pritiskom. Smeša se razblaži sa MTBE (8 kg) i destiliše do 60-80L pod sniženim pritiskom. Smeša se razblaži sa MTBE (8 kg) i ohladi na 5-10°C u atmosferi azota. Smeša se tretira sa n-heptanom (21 kg) i meša približno 1 sat. Čvrsti produkt se sakupi filtriranjem (centrifuga), ispere sa n-heptanom (5 kg) i suši na 50-60°C pod vakuumom da se dobije drugi dobijen prinos naslovljenog produkta kao čvrsta supstanca (3.65 kg).
Ukupno 7.95kg, 36% teoretski,
HPLC 1<st>dobijen prinos RT = 9.33 min, 97.6%,
HPLC 2<nd>dobijen prinos RT = 9.27 min, 99.1%,
Kolona: 150 mm x 4.6 mm ID, 3.5 µm Agilent Zorbax SB-C8
Brzina protoka: 1.0 mL/min.
Temp.: 40°C
Detekcija na talasnoj dužini: 210 nm
Rastvarači: A: 0.05% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u vodi
B: 0.05% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu
Gradijent: Vreme (min) A% B%
0.01 80 20
15.0 5 95
18.0 5 95
18.1 80 20
Asimetrična HPLC kombinovana RT = 28.95 min, 98.8%,
Kolona: 250 mm x 4.6 mm ID, Chiralpak IC
Brzina protoka: 1.0 mL/min.
Temp.: 30°C
1
Detekcija na talasnoj dužini: 218 nm
Rastvarači: A: 0.1% v/v rastvor izobutilamina u n-heptanu
B: 0.1% v/v rastvor izobutilamina u etanolu
Gradijent: Vreme (min) A% B%
0.01 70 30
40 70 30
Međuproizvod 51. (E)-Metil 4-acetoksibut-2-enoat Faza 10
[0207] U reaktor se stave acetonitril (140 kg), kalijum acetat (10 kg), (E)-metil 4-bromobut-2-enoat (18 kg, 1wt) i acetonitril (3 kg). Smeša se meša približno 12.5 h na 45-55°C i ohladi na 20-30°C. Smeša se filtrira i filter pogača ispere sa etil acetatom (14 kg). Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom do 2-3 zapremine i razblaži sa etil acetatom (90kg). Rastvor se ispere 4 puta sa vodom (2x91 kg, 2x92 kg) i sa 11% aq. rastvorom natrijum hlorida (99 kg).
Organska faza se koncentruje pod sniženim pritiskom do 1-2 zapremine i doda se DCM (80 kg). Organska faza se koncentruje pod sniženim pritiskom do 1-2 zapremine i doda se DCM (80 kg). Organska faza se koncentruje pod sniženim pritiskom do 1-2 zapremine da se dobije rastvor naslovljenog jedinjenja u DCM (14.8 kg, 53.4% analizom, 78% teoretski).
HPLC RT = 10.37 min, 83.9%,
Kolona: 150 mm x 4.6 mm ID, 3.5 µm Agilent Zorbax SB-C8
Brzina protoka: 1.0 mL/min.
Temp.: 40°C
Detekcija na talasnoj dužini: 210 nm
Rastvarači: A: 0.05% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u vodi
B: 0.05% v/v rastvor trifluorosirćetna kiselina u acetonitrilu
Gradijent: Vreme (min) A% B%
0.01 95 5
15.0 5 95
18.0 5 95
18.1 95 5
2
Međuproizvod 47. (R,E)-Metil 4-(3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)but-2-enoat. Faze 4&5
[0208] Rastvor HCl u MeOH se izrađuje ubacivanjem HCl gasa u Metanol (40 kg) na -10 do 0°C dok se ne postigne koncentracija od 4.6mol/L. U ovaj rastvor se doda rastvor Međuproizvoda 2 (8 kg, 1mt) u MeOH (24 kg) i zagreva približno 4.5 sati na 35-45°C u atmosferi azota. Reakcija se destiliše pod sniženim pritiskom do 2-3 zapremine. Doda se MeOH (21 kg) i smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom do 2-3 zapremine. Doda se MeOH (24 kg) i smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom do 2-3 zapremine. Doda se DCM (64 kg) i smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom do 2-3 zapremine. Doda se DCM (64 kg) i smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom do 2-3 zapremine. Doda se DCM (64 kg) i smeša podesi na 10-20°C i tretira u kapima sa N,N-diizopropiletilaminom (20 kg) održavajući temperaturu <30°C da se dobije rastvor (R)-2-(2-(pirolidin-3-il)etil)-1,8-naftiridina, dihidrohloridne soli (Međuproizvod 3). U drugi reaktor se sipaju DCM (61 kg), (E)-metil 4-acetoksibut-2-enoat (Međuproizvod 51) (53% m/m rastvor u DCM, 8.8 kg, 4.7kg aktivno) i 1,1’-[bis(difenilfosfino)ferocen]paladijum (II) hlorid (2.1 kg) i preostali prostor reaktora prečisti sa azotom i meša 30 min na 20-30°C. U ovu smešu se doda rastvor dihidrohloridne soli (R)-2-(2-(pirolidin-3-il)etil)-1,8-naftiridina, (Međuproizvod 3), izrađen kao gore i smeša meša približno 22 h.na 20-30°C Reaktivna smeša se tretira sa vodom (85 kg) i filtrira kroz diatomejsku zemlju (6 kg; prethodno ovlažena sa DCM (22 kg)) ispere sa DCM (19 kg). Organska faza se ispere sa vodom (80 kg), ohladi na 5-10°C i zakiseli sa 0.5N rastvorom HCl (204 kg). Vodeni sloj se ispere sa DCM (60 kg), razblaži sa DCM (123 kg) i neutrališe sa 1N rastvorom NaOH (78 kg). Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (59 kg).
Kombinovane DCM faze se isperu sa 25% rastvorom NaCl (46 kg) i koncentruju pod sniženim pritiskom do 1-2 zapremine. Doda se toluen (34 kg) i smeša koncentruje pod sniženim pritiskom do 35-45L da se dobije rastvor naslovljenog jedinjenja (42.15 kg, 13.4% analizom, 76% teoretski prinos). Nije izvršena analiza jer je materijal nestabilan, pa se direktno koristi u sledećoj fazi.
Međuproizvod 9 (3-(3.5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil) borna kiselina. Faze 11&12
[0209]
Reaktor se napuni sa 3-bromofenilhidrazin hidrohloridom (6 kg), acetil acetonom (4031.7 g) i glacijalnom sirćetnom kiselinom (18 L) i smeša zagreva na 90-100°C i meša 3-4 h. Reaktivna smeša se koncentruje do konzistencije ulja, razblaži sa vodom (20 L), podesi na pH∼7 sa 5.5M aq. rastvorom NaOH (10 L) i ekstrahuje sa MTBE (20 L). MTBE sloj se ispere sa vodom (15 L) i slanim rastvorom (10 L) i koncentruje da se dobije ulje. U ulje se dodaju izopropil borat (B(OiPr)3) (6058.6 g) i THF (40 L) i smeša ohladi na -75 do -60°C. U kapima se na -70 do -60°C doda n-BuLi (2.5M, 12.9 L) i meša u toku noći. Reakcija se zagreje na -10 do 0°C i doda se voda (24 L) a nakon toga conc. HCl (4 L) i smeša meša 10 min i razdvoji. Vodena faza se podesi na pH 5-6 sa 1N rastvorom NaOH i ekstrahuje sa EtOAc (2x10 L). Kombinovani organski slojevi se isperu sa rastvorom NaHCO3i slanim rastvorom i koncentruju da se dobije ulje. Ovo ulje se razblaži sa heptanom (20 L) i ohladi na 0-10°C da se dobije bela čvrsta supstanca koja se izdvoji filtriranjem da se dobije naslovljeno jedinjenje (4530g, 71% teoretski).
HPLC RT = 6.53 min, 98.7%,
Kolona: 150 mm x 4.6 mm ID, 3.5 µm Agilent Zorbax Bonus RP
Brzina protoka: 1.0 mL/min.
Temp.: 40°C
Detekcija na talasnoj dužini: 220 nm
Rastvarači: A: 0.05% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u vodi
B: 0.05% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu
Gradijent: Vreme (min) A% B%
0.01 90 10
15.0 5 95
18.0 5 95
18.1 90 10
Međuproizvod 48. Metil 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)butanoat Faza 6
[0210] Reaktor se napuni sa toluenom (25 kg), (R,E)-metil 4-(3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)but-2-enoatom (Međuproizvod 47 u toluenu (42.15 kg, 13.4% analizom, 5.6 kg (1mt) aktivno), 17% m/m aq. rastvorom KOH (10 kg), (3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-
4
il)fenil)bornom kiselinom (Međuproizvod 9) (8.4 kg), hlor-(1,5-ciklooktadien)rodijum (I) dimerom (0.433 kg) i (R)-(+)-2,2’-bis(difenilfosfino)-1,1’-binaftilom (1.3 kg). Reaktor se prečisti sa azotom, zagreva na 75-85°C i meša u atmosferi azota približno 5 h. Smeša se destiliše pod sniženim pritiskom do 1-3 zapremine i ohladi na 20-30°C. Smeša se tretira sa DCM (166 kg) i vodom (57 kg), meša i vodena faza se odbaci. Organska faza se zakiseli sa 0.5N aq. rastvorom HCl (141 kg), izdvoji i vodena faza dva puta ispere sa DCM (45 i 43 kg). U vodenu fazu se doda etil acetat (57 kg) i smeša neutrališe do pH 7-8 sa 1N aq. rastvorom NaOH (56 kg). Organski sloj se sakupi a vodeni sloj se ekstrahuje dva puta sa etil acetatom (2x28 kg). Kombinovani EtOAc ekstrakti se isperu sa 25% aq. rastvorom NaCl (32 kg) i destilišu pod sniženim pritiskom do 1-2 zapremine. Smeša se razblaži sa MeOH (25 kg) i destiliše pod sniženim pritiskom do 1-2 zapremine. Ostatak se razblaži sa MeOH (29 kg) da se dobije rastvor naslovljenog jedinjenja u MeOH (∼9:1dr, 49.4 kg, 9.0% analizom, 51% teoretski prinos).
HPLC RT = 11.68 min, 90.9%,
Kolona: 150 mm x 4.6 mm ID, 3.5 µm Agilent Zorbax SB-C8
Brzina protoka: 1.0 mL/min.
Temp.: 40°C
Detekcija na talasnoj dužini: 210 nm
Rastvarači: A: 0.05% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u vodi
B: 0.05% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu
Gradijent: Vreme (min) A% B%
0.01 95 5
15.0 30 70
18.0 5 95
20.0 5 95
Asimetrična HPLC RT = 10.27 min, 90.0%,
Kolona: 250 mm x 4.6 mm ID, 5 µm CHIRALPAK AD-H
Brzina protoka: 1.0 mL/min.
Temp.: 40°C
Detekcija na talasnoj dužini: 248 nm
Rastvarači: A: 0.1% v/v rastvor dietilamina u n-heksanu
B: 0.1% v/v rastvor dietilamina u etanolu
Gradijent: Vreme (min) A% B%
0.01 80 20
40 80 20
Međuproizvod 49. Metil 3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoat. Faza 7
[0211] U hidrogenizovanu posudu se doda rastvor metil 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin1-il)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)butanoata (Međuproizvod 48) u MeOH (49.4 kg, 9.0% analizom, 4.4kg (1mt) aktivno) i Rh/C (1.1 kg) i posuda se prečisti sa azotom. Reakcija se ostavi u atmosferi vodonika (0.3MPa) i meša približno 26 h na 35-45°C. Atmosfera reakcije se zameni sa azotom i ohladi na 20-30°C. Reaktivna smeša se filtrira i čvrsti ostatak ispere sa MeOH (3x13 kg). Kombinovani filtrati se koncentruju pod sniženim pritiskom do 100-200L, filtriraju, isperu sa MeOH (20 kg) i dalje koncentruju da se dobije rastvor naslovljenog jedinjenja u metanolu (27.2 kg).
HPLC RT = 23.63 min, 85.4%,
Kolona: 150 mm x 4.6 mm ID, 2.5 µm Waters XSELECT HSS C18
Brzina protoka: 0.6 mL/min.
Temp.: 40°C
Detekcija na talasnoj dužini: 245 nm
Rastvarači: A: 0.2% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u vodi
B: 0.2% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu
Gradijent: Vreme (min) A% B%
0.0 90 10
25.0 50 50
35.0 5 95
40.0 5 95
40.1 90 10
Međuproizvod 50. 3-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatna kiselina. Faza 8
[0212] Rastvor metil 3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoata (Međuproizvod 49) u metanolu (27.2 kg, 4.4 kg (1mt) aktivno) dobijen u fazi 7 se destiliše do 1-2 zapremine pod sniženim pritiskom i razblaži sa MeOH (26 kg). U ovaj rastvor se doda silicijum tiol (0.5 kg) i pH smeše se podesi na ∼1 sa smešom HCl/MeOH (3.5M, 8 kg). Smeša se meša 10 h na 60-70°C, ohladi na 20-30°C i filtrira. Filter pogača se ispere sa metanolom (4 kg a zatim sa 2x5 kg). Filtrat se koncentruje do ∼6-8 zapremine, razblaži sa MeOH (4 kg) i doda se silicijum tiol (0.5 kg). Nakon doterivanja pH na ∼1 sa smešom HCl/MeOH (3.5M, 2 kg), rastvor se meša 10 h na 60-70°C. Smeša se ohladi na 20-30°C, filtrira i filter pogača se ispere sa metanolom (5 kg a zatim sa 2x4 kg) a filtrat se koncentruje do ∼6-8 zapremine na ≤45°C pod sniženim pritiskom. Ostatak se razblaži sa MeOH (13 kg) i dalje koncentruje do 1-2 zapremine na ≤45°C pod sniženim pritiskom. Ostatak se razblaži sa MeOH (13 kg) i doda se 2M aq. rastvor NaOH (22kg) da se dobije smeša čiji je pH>14 koja se meša 11 h na 30-40°C nakon čega se razblaži sa MeOH (4 kg) i koncentruje do 4-5 zapremine na ≤45°C pod sniženim pritiskom. pH se podesi na 8-9 sa HCl (3M aq., 6 kg) i smeša se tretira sa DCM (20 kg) a pH vodene faze podesi na pH 8-9 dodavanjem NaOH (2M aq., 5.7 kg). Vodena faza se ekstrahuje četiri puta sa DCM (2x30 kg, 31 kg, 30 kg). Kombinovana organska faza se ispere sa smešom voda (10 kg) i HCl (3M aq., 6 kg) i vodena faza ekstrahuje dva puta sa DCM (30 kg, 31 kg).
Kombinovane organske faze se koncentruju do 1-2 zapremine na ≤40°C pod sniženim pritiskom i razblaže sa DCM (10 kg) da se dobije rastvor naslovljenog jedinjenja u DCM (16.8 kg, 22.4% analizom, 87% teoretski kroz dve faze).
HPLC RT = 20.69 min, 87.8%,
Kolona: 150 mm x 4.6 mm ID, 2.5 µm Waters XSELECT HSS C18
Brzina protoka: 0.6 mL/min
Temp.: 40°C
Detekcija na talasnoj dužini: 245 nm
Rastvarači: A: 0.2% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u vodi
B: 0.2% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu
Gradijent: Vreme (min) A% B%
35.0 5 95
40.0 5 95
40.1 90 10
Asimetrično razdvajanje
[0213] Rastvor 3-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline (Međuproizvod 50) u DCM izrađen u fazi 8 se koncentruje pod sniženim pritiskom i doda se MeOH da se izradi 100 mg/mL rastvora koji se filtrira. Rastvor se nanese na superkritičnu tečnu hromatografiju (SFC) za asimetrično razdvajanje. Parametri SFC razdvajanja su sledeći:
[0214] Frakcije koje sadrže željeni izomer se koncentruju na 30º C pod sniženim pritiskom da se dobije (S)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatna kiselina (Primer 1) kao rastvor u smeši MeOH/dietilamin (12.2 kg, 22.9% analizom, 74% teoretski).
Primer 9. (S)-3-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatna kiselina, hidrohloridna so. Faza 9.
[0215] Rastvor (S)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline u metanolu (12.1 kg, 22.9% analizom, 2.8 kg (1mt) aktivno) se razblaži sa DCM (3 kg) i koncentruje do 1-3 zapremine na ≤35°C pod sniženim pritiskom. Dobijeni rastvor se razblaži sa DCM (36 kg) i dva puta ispere sa 33% vodenim rastvorom amonijum hlorida (14 kg x 2) sve dok rezidualni dietilamin ne bude <0.5%. Organska faza se razblaži sa DCM (4 kg), suši preko anhidrovanog Na2SO4(2.8 kg), filtrira i pogača ispere sa DCM (5 kg x 3). Kombinovani filtrati se koncentruju do 1-3 zapremine na ≤55°C pod sniženim pritiskom. Doda se acetonitril (6 kg) i smeša destiliše do 1-3 zapremine na ≤45°C pod sniženim pritiskom da se ukloni rezidualni metanol. Ostatak se razblaži sa acetonitrilom (20 kg), a nakon toga se doda vodeni rastvor HCl (3M, 1.9 kg). Nakon 40 min mešanja na 35°C, smeša se filtrira u posudu za kristalizaciju preko nosača filtera, uz ispiranje sa MeCN (3 kg). Rastvor se destiliše do ∼4 zapremine na ≤45°C pod sniženim pritiskom da se dobije rastvor naslovljenog jedinjenja u acetonitrilu. Dodaju se četiri porcije acetonitrila (8 kg x 2, 14 kg, 19 kg) i destiliše do 3-5 zapremina na ≤45°C pod sniženim pritiskom da se ukloni rezidualna voda. Doda se acetonitril (17 kg) da se razblaži sirovi produkt i dobijeni rastvor se meša 16 sati na 50-55°C uz zaštitu azotom. Masa se ohladi na 0-5 °C u toku 5 h i meša na 0-5°C ∼4 h u atmosferi azota. Masa se zagreje na 50-55 °C i meša ∼4 h na 50-55°C u atmosferi azota. Masa se ohladi na -10- -8 °C u toku 6 h i meša na -10- -8°C ∼23 h u atmosferi azota. Nakon što je formiranje potvrđeno sa XRPD i DSC, suspenzija se filtrira i filter pogača se ispere sa acetonitrilom (6 kg) u atmosferi azota. Vlažna čvrsta supstanca se suši 20 h na 20-35°C pod sniženim pritiskom, nakon toga se temperatura poveća na 45-55°C narednih 50 h. Nakon što se materijal proseje, suši se na 45-55°C dodatnih 20 h da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.966 kg, 66% teoretski).
Mpt: 197-202°C
<1>H NMR (DMSO-d6; 500 MHz) δ ppm 13 - 11 (br. s., 1 H), 7.43 - 7.51 (m, 2 H), 7.35 - 7.41 (m, 2 H), 7.18 (d, J=7.2 Hz, 1 H), 7.02 (br. s., 1 H), 6.35 (d, J=7.3 Hz, 1 H), 6.07 (s, 1 H), 3.54 - 3.64 (m, 1 H), 3.47 (dd, J=12.8, 7.2 Hz, 1 H), 3.25 - 3.37 (m, 4 H), 3.18 (br. s., 1 H), 3.05 - 3.13 (m, 1 H), 3.00 (dd, J=16.3, 5.6 Hz, 1 H), 2.86 (t, J=9.5 Hz, 1 H), 2.56 - 2.68 (m, 3 H), 2.41 - 2.49 (m, 2 H), 2.30 (s, 3 H), 2.14 - 2.27 (m, 1 H), 2.18 (s, 3 H), 1.98 - 2.10 (m, 1 H), 1.72 - 1.81 (m, 2H), 1.61 - 1.72 (m, 2 H), 1.56 (dq, J=12.7, 8.2 Hz, 1 H). HPLC RT = 20.56 min, 99.4%,
Kolona: 150 mm x 4.6 mm ID, 2.5 µm Waters XSELECT HSS C18
Brzina protoka: 0.6 mL/min.
Temp.: 40°C
Detekcija na talasnoj dužini: 245 nm
Rastvarači: A: 0.2% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u vodi
B: 0.2% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu
Gradijent: Vreme (min) A% B%
0 90 10
25 50 50
35 5 95
40 5 95
40.1 90 10
52 prekid
Asimetrična HPLC RT = 34.8 min, 100% a/a,
Kolona: 250 mm x 4.6 mm ID, 5 µm CHIRALPAK AS-H
Brzina protoka: 1.0 mL/min.
Temp.: 40°C
Detekcija na talasnoj dužini: 319 nm
Rastvarači: A: 0.2% v/v rastvor trietilamina u n-heptanu B: 0.2% v/v rastvor trietilamina u etanolu
Gradijent: Vreme (min) A% B%
0.01 92 8
100 prekid
ODREĐIVANJE APSOLUTNE KONFIGURACIJE PRIMERA 1
Redukcija primera 1 i njegovog diastereoizomera
Međuproizvod 33: Izomer 1.3-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butan-1-ol
[0216] Suspenzija hidrohlorida 3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline (Primer 8, koji je hidrohloridna so primera 1) (238 mg, 0.454 mmol) u THF (5 mL) se tretira na 20 ºC sa rastvorom LiAlH4u etru (1M, 1.5 mL) i smeša se meša 1.5 h u atmosferi azota. LCMS pokazuje da je reakcija završena. Reakcija se neutrališe dodvanjem 2M rastvora NaOH (0.8 mL) i etil acetata. Smeša se podeli i organski rastvor se ispere sa NaHCO3rastvorom, slanim rastvorom, suši (MgSO4) i upari pod sniženim pritiskom. Ostatak se rastvori u smeši 1:1 MeOH-DMSO (2 mL) i prečisti pomoću MDAP (Postupak A) uz sakupljanje frakcija sa RT=6.6-9.4 min. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (157 mg, 73%) kao bezbojno ulje: NMR δ (DMSO-d6, 600 MHz) δ 7.40-7.36 (m, 1H), 7.28-7.26 (m, 1H), 7.28-7.25 (m, 1H), 7.20 (d, J=7.7 Hz, 1H), 6.99 (d, J=7.3 Hz, 1H), 6.22 (d, J=7.2 Hz, 1H), 6.20 (br. s., 1H), 6.05 (s, 1H), 3.32-3.28 (m, 1H), 3.25-3.21 (m, 1H), 3.24-3.18 (m, 2H), 2.97-2.90 (m, 1H), 2.71 (t, J=8.2 Hz, 1H), 2.64 (dd, J=11.8, 7.8 Hz, 1H), 2.59 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 2.57-2.53 (m, 1H), 2.54-2.50 (m, 1H), 2.39-2.34 (m, 2H), 2.37-2.32 (m, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.07-2.01 (m, 1H), 1.94 (dd, J=13.1, 7.4 Hz, 1H), 1.97-1.88 (m, 1H), 1.87-1.79 (m, 1H), 1.74 (dt, J=11.5, 6.0 Hz, 2H), 1.67-1.59 (m, 1H), 1.60-1.53 (m, 2H), 1.31-1.24 (m, 1H); [α]D<20>= 17 (c=1.56 u CHCl3).
Međuproizvod 34. 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil) butan-1-ol
[0217] Rastvor terc-butil 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)butanoata (Međuproizvod 13, izomer 2) (155 mg, 0.287 mmol) u 2-Me-THF (3 mL) se ohladi na ledu na 5ºC a nakon toga pažljivo tretira sa rastvorom litijum aluminijum hidrida u THF (1M, 1.5 mL). Smeša se meša 2 h u atmosferi azota, LCMS pokazuje da je reakcija završena. Reakcija se neutrališe dodvanjem 2M rastvora NaOH (0.3 mL) i smeša se meša 0.5 h. Dodaju se etil acetat i čvrsti natrijum sulfat i smeša se meša 5 min, filtrira, čvrsta supstanca ispere sa etil acetatom i upari pod sniženim pritiskom. Ostatak se rastvori u smeši DMSO-MeOH (1:1, 2 mL) i prečisti pomoću MDAP (Postupak A) uz sakupljanja frakcija sa RT=5.09 min. Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom, ostatak se
1
rastvori u MeOH i ponovo upari pod sniženim pritiskom da se dobiju dve onečišćene frakcije. Dve frakcije se kombinuju (31 mg) i ponovo prečiste pomoću MDAP u toku 25 min (visoki pH) uz sakupljanja frakcija sa RT=6.41 min, m/z 470, upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (16.4 mg, 12%) kao bezbojno ulje: LCMS (Postupak A) RT=0.94 min, 91%, ES+ve m/z 470 (M+H)<+>; [α]D<20>= - 14 (c=1.64 u CHCl3).
Međuproizvod 33 Izomer 2.3-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butan-1-ol
[0218] Rastvor 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)butan-1-ola (Međuproizvod 34) (8 mg, 0.02 mmol) u etanolu (5 mL) se hidrogenizuje preko 5% Rh/C vlažnog katalizatora (5 mg) u toku 2.5 dana. Reaktivna smeša se filtrira kroz celite i katalizator se ispere sa etanolom. Filtrat i ispirci se upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (7 mg, 87%) kao bezbojno ulje: NMR δ (DMSO-d6, 600 MHz): 7.37 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.28 (m, 1H), 7.24 - 7.27 (m, 1H), 7.20 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 6.99(d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.21 (d, J=1.2 Hz, 1H), 6.19 (br. s., 1H), 6.04 (s, 1H), 4.61 (br. s., 1H), 3.27 - 3.30 (m, 1H), 3.21 -3.23 (m, 2H), 3.19 - 3.25 (m, 1H), 2.90 - 2.98 (m, 1H), 2.68 (t, J=8.1 Hz, 1H), 2.57 - 2.61 (m, 2H), 2.56 - 2.61 (m, 2H),2.51 - 2.56 (m, 1H), 2.35 - 2.41 (m, 1H), 2.32 - 2.39 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.03 (dd, J=8.5, 7.1 Hz, 1H), 1.88 - 1.99 (m, 2H), 1.78 - 1.87 (m, 1H), 1.73 (quin, J=5.9 Hz, 2H), 1.60-1.66 (m, 1H), 1.51 - 1.58 (m, 2H), 1.24 - 1.30 (m, 1H); [α]D<20>= -19 (c=0.689 u CHCl3).
Proizvodnja Međuproizvoda 39 Izomer 1 i Izomer 2
Međuproizvod 35. terc-Butil 2-(3-(3.5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)acetat
[0219]
2
[0220] Smeša (3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)borne kiseline (Međuproizvod 9) (10.8 g, 50 mmol), terc-butil 2-bromoacetata (14.6 g, 75 mmol), tri-o-tolilfosfina (1.5 g, 4.93 mmol), Pd(OAc)2(700 mg, 3.12 mmol), praškastog trikalijum fosfata (42.5 g, 200 mmol) i tetrahidrofurana (100 mL) se degasira u ciklusima azot/vakuum i zagreva 16h pod refluksom. LCMS analiza pokazuje ∼ 70% konverzije. Doda se još paladijum acetata (300 mg) i tercbutil 2-bromoacetata (3 g) i smeša se refluksuje 6 h. LCMS pokazuje da nema početnog materijala i prisustvo produkta. Smeša se podeli između vode (200 mL) i EtOAc (2 x 200 mL) i suši (MgSO4). Organska faza se upari a ostatak se prečisti hromatografijom na nosaču silika gela (330 g) uz eluiranje sa 0-40% etil acetat-cikloheksan (15 zapremina kolone) da se dobije naslovljeno jedinjenje (10.4 g, 72%) kao žuto ulje: LCMS (Postupak C) RT=1.18 min, ES+ve m/z 287 (M+H)<+>.
Međuproizvod 36. 2-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)acetat
[0221]
[0222] Rastvor terc-butil 2-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)acetata (Međuproizvod 35) (10 g, 28 mmol) u dihlormetanu (10 mL) se polako tretira sa TFA (20 mL, 260 mmol) i meša 2 h na sobnoj temperaturi. LCMS analiza pokazuje da je reakcija završena. Rastvor se upari pod sniženim pritiskom a ostatak se rastvori u 2N rastvoru NaOH (100 mL) i ispere sa dietil etrom (2 x 100 mL). Vodena faza se zakiseli sa 2N rastvorom HCl i ohlađena suspenzija se ekstrahuje sa EtOAc (2 x 150 mL). Organski rastvor se suši (MgSO4) i upari. Ostatak (∼7 g) se triturira sa dietil etrom (40 mL) i sakupi filtriranjem da se dobije naslovljeno jedinjenje(5.2 g, 81%) kao bež čvrsta supstanca: LCMS (Postupak C) RT=0.76 min, 100%, ES+ve m/z 231 (M+H)<+>; NMR δ (CDCl3, 400 MHz) 7.51 - 7.44 (1H, m), 7.41 - 7.30 (3H, m), 6.08 (1H, s), 3.70 (2H, s), 2.29 (3H, s), 2.26 (3H, s).
Međuproizvod 37. Metil 2-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)acetat
[0223]
[0224] Rastvor 2-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)sirćetne kiseline (Međuproizvod 36) (460 mg, 2 mmol) se rastvori u MeOH (70 mL) i tretira sa rastvorom vodonik hlorida in ciklopentilmetiletru (3M, 10 mL) i smeša se zagreva 2 h pod refluksom. Smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom, a ostatak se podeli između etil acetata i natrijum bikarbonata.
Organska faza se ispere sa slanim rastvorom, suši preko MgSO4i upari pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na nosaču silika gela (20 g) uz eluiranje sa gradijentom 0-25 % etil acetat-cikloheksan u toku 20 min. Odgovarajuće frakcije koje sadrže glavnu componentu se kombinuju i upare da se dobije naslovljeno jedinjenje (251 mg, 51%) kao bezbojno ulje: NMR δ (CDCl3) 7.43-7.37 (2H, m), 7.33 (1H, br d, J 8 Hz), 7.29-7.24 (1H, m zamračen sa CHCl3), 5.99 (1H, s), 3.70 (3H, s), 3.68 (2H, s), 2.31 (3H, s) i 2.30 (3H, s).
Međuproizvod 38. 4-terc-Butil 1-metil 2-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)sukcinat
[0225]
[0226] Rastvor litijum heksametildisilazida u THF (1M, 1.85 mL) se ohladi na -78 ºC i tretira sa rastvorom metil 2-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)acetata (Međuproizvod 37) (453 mg, 1.85 mmol) u THF (2 mL). Nakon 5 min reaktivna smeša se tretira sa terc-butil 2-bromoacetata (0.82 mL, 5.6 mmol) u THF (2 mL) i nakon 30 min na -78 ºC smeša se ostavi
4
da se zagreje na sobnu temperaturu. Smeša se meša 2.5 h a nakon toga neutrališe sa vodenim rastvorom HCl (0.2 M, 10 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom. Organski rastvor se ispere sa vodenim rastvorom NaHCO3, 0.2M rastvorom HCl, slanim rastvorom, suši (MgSO4) i upari pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na nosaču sa 50 g silika gela uz eluiranje sa 0-25% EtOAc-cikloheksan. Frakcije koje sadrže glavni pik se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije bezbojno ulje (780 mg), koje se dalje prečisti hromatografijom na nosaču sa 70 g silika gela uz eluiranje sa 0-50% TBME-cikloheksan da se dobije naslovljeno jedinjenje (479 mg, 72%) kao bezbojno ulje: NMR δ (CDCl3) 7.43-7.33 (3H, m), 7.29-7.25 (1H, m), 6.00 (1H, s), 4.09 (1H, dd, J 10.0, 5.5 Hz), 3.69 (3H, s), 3.13 (1H, dd, J 16.7, 10.0 Hz), 2.64 (1H, dd, J 16.7, 5.5 Hz), 2.30 (6H, s), 1.42 (9H, s). Dva enantiomera ovog jedinjenja se razdvoje preparativnom asimetričnom HPLC na Chiralcel OD-H Koloni (30 mm x 250 mm) uz eluiranje sa 5% IPA-heksan, brzina protoka = 20 mL/min da se dobije Izomer 1 (267 mg) kao bezbojno ulje: [α]D<22>+ 81 (c=1.028 u CHCl3); Analitička asimetrična HPLC na Chiralcel OJ-H Koloni (4.6 mm id x 250 mm) RT=7.75 min, 99.3% (sadrži drugi enantiomer, RT=9.35 min, 0.7%) i Izomer 2 (230 mg) kao bezbojno ulje: [α]D<22>- 82 (c=1.016 u CHCl3); Analitička asimetrična HPLC RT=9.35 min, 98.6% (sadrži drugi enantiomer, RT=7.75 min, 1.4%).
Međuproizvod 39 Izomer 1.4-(terc-Butoksi)-2-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-oksobutanoatna kiselina
[0227]
[0228] Rastvor 4-terc-butil 1-metil 2-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)sukcinata Izomer 1 (Međuproizvod 38, Izomer 1) (257 mg, 0.72 mmol) se rastvori u THF (2 mL) i ohladi na 0 ºC (hlađenje ledom) a zatim se dodaju 30% vodonik peroksid (0.366 mL, 3.6 mmol) i 1M rastvor LiOH u vodi (1M, 2.15 mL). Nakon stajanja u frižideru u toku noći, reaktivna smeša se tretira sa vodenim rastvorom natrijum metabisulfita (1M, 3 mL) a nakon toga zakiseli do pH 1 sa 2M rastvorom HCl. Reaktivna smeša se tri puta ekstrahuje sa etil acetatom i organski rastvor se suši preko MgSO4. Rastvor se upari pod sniženim pritiskom i preostala bela pena se prečisti pomoću MDAP (Postupak C). Odgovarajuće frakcije se upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (140 mg, 57%) kao bezbojno ulje:<1>H NMR δ (400 MHz; CDCl3) 7.38-7.32 (2H, m), 7.30-7.24 (2H, m), 5.98 (1H, s), 4.05 (1H, dd, J 9.5, 6 Hz), 3.09 (1H, dd, J 16.5, 9.5 Hz), 2.63 (1H, dd, J 16.5, 6 Hz), 2.31 (3H, s), 2.24 (3H, s), 1.38 (9H, s).
[α]D<20>+ 42 (c=1.037 u CHCl3).
Međuproizvod 39 Izomer 2.4-(terc-Butoksi)-2-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il) fenil-4-oksobutanoatna kiselina
[0229]
[0230] Rastvor 4-terc-butil 1-metil 2-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)sukcinata Izomer 2 (Međuproizvod 38, Izomer 2) (220 mg, 0.61 mmol) se rastvori u 2-Me-THF (5 mL) i ohladi na 0 ºC (hlađenje ledom) a zatim se dodaju 30% vodonik peroksid (0.313 mL, 3.1 mmol) i 0.2M rastvor LiOH u vodi (0.2M, 9.21 mL, 1.84 mmol). LCMS pokazuje da je reakcija završena nakon 6 dana. Reaktivna smeša se tretira sa rastvorom natrijum tiosulfata (1M, 3 mL) i rastvorom natrijum bikarbonata (0.5M, 8 mL) i smeša (pH 8) se meša 10 min, a nakon toga zakiseli do pH 1 sa 6M rastvorom HCl. Reaktivna smeša se ekstrahuje tri puta sa etil acetatom i organski rastvor se suši preko MgSO4. Uparavanjem pod sniženim pritiskom dobija se bela čvrsta supstanca koja se prečisti pomoću MDAP (Postupak C). Uparavanjem odgovarajućih frakcija pod sniženim pritiskom dobija se naslovljeno jedinjenje (105 mg, 50%) kao bezbojno ulje:<1>H NMR δ (400 MHz; CDCl3) 7.38-7.32 (2H, m), 7.30-7.22 (2H, m), 5.99 (1H, s), 4.05 (1H, dd, J 9.5, 6 Hz), 3.09 (1H, dd, J 16.5, 9.5 Hz), 2.63 (1H, dd, J 16.5, 6 Hz), 2.31 (3H, s), 2.24 (3H, s), 1.38 (9H, s). [α]D<20>41 (c=1.482 u CHCl3).
Određivanje apsolutne konfiguracije Međuproizvoda 39 Izomer 1 kao (S) (Evans-ov postupak)
Međuproizvod 40. (S)-(+)-4-benzil-3-(2-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)acetil)oksazolidin-2-on
[0231]
[0232] 2-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)sirćetna kiselina (Međuproizvod 36) (2.3 g, 9.99 mmol) se rastvori u THF (70 mL) i tretira sa DIPEA (2.268 mL, 12.99 mmol). U izmešani rastvor se pipetom doda pivaloil hlorid (1.229 mL, 9.99 mmol) u atmosferi azota. Smeša se meša 45 min na 0ºC, a nakon toga ponovo ohladi na -78º C čime se dobija bela žitka masa.
[0233] U međuvremenu se u posebnoj boci rastvori (S)-4-benziloksazolidin-2-on (3.19 g, 17.98 mmol) u THF (50 mL) i ohladi na -78º C uz mešanje. U ovaj rastvor se doda n-BuLi 1.6M rastvor u heksanima (11.24 mL, 17.98 mmol) i smeša se meša 0.5 h na -78º C. U izmešani anhidrid se kanilom doda metalizirani oksazolidinon. Dobijena žitka masa se meša 1 h na -78ºC a nakon toga ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu u toku vikenda.
[0234] Reaktivna smeša se neutrališe sa zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (40 mL), razblaži sa vodom (10 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom. Organska faza se ispere sa slanim rastvorom, suši (MgSO4), filtrira i koncentruje pod vakuumom. Preostalo ulje se rastvori u DCM i prečisti hromatografijom na nosaču sa100g silika gela uz eluiranje sa gradijentom 0-50% etil acetat u cikloheksanu u toku 40 min. Frakcije koje sadrži glavnu komponentu se kombinuju i koncentruju pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.1 g, 54%) kao bezbojno ulje:<1>H NMR δ (600 MHz, DMSO-d6) 7.48-7.44 (m, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.41-7.38 (m, 1H), 7.29 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.28-7.25(m, 2H), 7.25-7.21 (m, 1H), 7.17-7.13 (m, 2H), 6.07 (s, 1H), 4.69 (tt, J=7.8, 3.0 Hz, 1H), 4.36 (t, J= 8.5 Hz, 1H), 4.36-4.32 (m, 1H), 4.26-4.20 (m, 1H), 4.23-4.18 (m, 1H), 3.03-2.97 (m, 1H), 2.95-2.90 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.18 (s, 3H); [α]D<20>= 49 (c 1.64 u CHCl3).
Međuproizvod 41 (S)-terc-Butil 4-((S)-4-benzil-2-oksooksazolidin-3-il)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-oksobutanoat i Međuproizvod 42. (R)-terc-butil 4-((S)-4-benzil-2-oksooksazolidin-3-il)-3-(3-(3,5-dimetil1H-pirazol-1-il)fenil)-4-oksobutanoat
[0235]
[0236] Rastvor litijum heksametildisilazida u THF (1M, 5.7 mL) se na -78ºC doda u rastvor (S)-4-benzil-3-(2-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)acetil)oksazolidin-2-ona (Međuproizvod 40) (2.0 g, 5.14 mmol) u THF (10 mL) i smeša se meša 60 min na -78ºC a zatim se doda terc-butil 2-bromoacetat (2.3 mL, 15 mmol). Smeša se meša 3 h na -78ºC a nakon toga ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu i meša 2 dana nakon čega se neutrališe dodvanjem zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida. Smeša se podeli sa etil acetatom, organska faza se izdvoji, ispere sa slanim rastvorom (dva puta), suši preko MgSO4i upari pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na na nosaču silika gela (100 g) uz eluiranje sa 0-50% etil acetat-cikloheksan u toku 1 h da se dobije produkt (1.2 g, 46%) kao žuto ulje koje je smeša dva diastereoizomera:
LCMS (Postupak C) RT=1.32 min, 11%, ES+ve m/z 504 i RT = 1.36 min, 53%, ES+ve m/z 504 (M+H)<+>. Deo diastereoizomerne smeše očekivanog produkta (200 mg) se dalje prečisti pomoću MDAP (Postupak C) sakupljanjem glavne frakcije uz RT = 9.56 min da se dobije (S)-terc-butil 4-((S)-4-benzil-2-oksooksazolidin-3-il)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-oksobutanoat (Međuproizvod 41) (69 mg) kao bezbojno ulje: LCMS (Postupak C) RT = 1.36 min, ES+ve m/z 504 (M H)<+>;<1>H NMR δ (400 MHz, CDCl3) 7.47 (1H, br s), 7.43-7.28 (8H, m), 6.00 (1H, s), 5.56 (1H, dd, J 11, 4Hz), 4.67-4.59 (1H, m), 4.15-4.06 (2H, m), 3.42-3.30 (2H, m), 2.83 (1H, dd, J 13, 10 Hz), 2.67 (1H, dd, J 17, 4 Hz), 2.32 (3H, s), 2.30 (3H, s), 1.46 (9H, s); [α]D<20>= 102 (c=1.20 u CHCl3). Manja frakcija iz MDAP prečišćavanja uz RT=9.2 min se upari u struji azota u jedinici za izduvavanje da se dobije (R)-terc-butil 4-((S)-4-benzil-2- oksooksazolidin-3-il)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-oksobutanoat (Međuproizvod 42) (7 mg): LCMS (Postupak C) RT = 1.32 min, ES+ve m/z 504 (M+H)<+>;<1>H NMR δ (400 MHz, CDCl3) 7.51 (1H, br s), 7.46-7.38 (3H, m), 7.21-7.15 (3H, m), 6.99-6.94 (2H, m), 5.97 (1H, s), 5.46 (1H, dd, J 11, 4 Hz), 4.81-4.73 (1H, m), 4.24 (1H, t, J 8.5 Hz), 4.10 (1H, dd, J 9, 3 Hz), 3.33 (1H, dd, J 17, 11 Hz), 3.08 (1H, dd, J 13.5, 3 Hz), 2.66-2.59 (2H, m), 2.29 (3H, s), 2.28 (3H, s), 1.43 (9H, s); [α]D<20>= - 37 (c=0.71 u CHCl3).
Međuproizvod 39 Izomer 1 (S)-(+)-4-(terc-Butoksi)-2-(3-(3.5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-oksobutanoatna kiselina
[0237]
[0238] Rastvor (S)-terc-butil 4-((S)-4-benzil-2-oksooksazolidin-3-il)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-oksobutanoata (Međuproizvod 41) (69 mg, 0.14 mmol) u THF (1 mL) se tretira sa 30% vodonik peroksidom (8.8 M, 0.078 mL, 0.68 mmol) na 4ºC, a nakon toga sa vodenim rastvorom litijum hidroksida (1M, 0.411 mL) i smeša se meša 2 h u ledenom kupatilu. Reaktivna smeša se ostavi u frižideru u toku noći a nakon toga neutrališe dodvanjem vodenog rastvora natrijum metabisulfita, a nakon 10 min se doda 2M rastvor HCl. Nakon 2 h smeša se ekstrahuje sa etil acetatom i vodeni sloj se ekstrahuje sa još EtOAc. Kombinovani organski rastvori se isperu sa slanim rastvorom, suše (MgSO4) i upare pod sniženim pritiskom. Ostatak se rastvori u DMSO (1 mL) i prečisti pomoću MDAP (Postupak C) uz sakupljanje pika na RT= 8.3-9.9 min, m/z 345. Odgovarajuće frakcije se upare u struji azota u izduvnoj jedinici da se dobije naslovljeno jedinjenje (22 mg, 47%) kao bezbojno ulje:<1>H NMR δ (CDCl3) 7.36-7.31 (2H, m), 7.28-7.23 (2H, m), 5.96 (1H, s), 4.04 (1H, dd, J 9.5, 6 Hz), 3.08 (1H, dd, J 16.5, 9.5 Hz), 2.62 (1H, dd, J 16.5, 6 Hz), 2.29 (3H, s), 2.23 (3H, s), 1.37 (9H, s); [α]D<20>= 65 (c=2.08 u CHCl3).
Sinteza Međuproizvoda 46 i Međuproizvoda 33 Izomer 1 i pokazivanje da su oni isti izomer
Međuproizvod 43. (S)-(+)-terc-Butil 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-oksobutanoat
[0239]
[0240) Rastvor 4-terc-butil 1-metil 2-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)sukcinata (Međuproizvod 39 Izomer 1) (107 mg, 0.31 mmol) u DCM (1 mL) se tretira sa N-[3-(dimetilamino)propil]-N-etilkarbodiimid hidrohloridom (77 mg, 0.40 mmol) i N-hidroksbenztriazol hidratom (62 mg, 0.40 mmol). Reaktivna smeša se meša 10 min a nakon toga se dodaju rastvor (R)-2-(2-(pirolidin-3-il)etil)-1,8-naftiridina (Međuproizvod 3) (100 mg, 0.44 mmol) u DCM (3 mL) i N-Me-morfolin (0.102 mL, 0.93 mmol). Smeša se meša 2 h na sobnoj temperaturi. Smeša se razblaži sa vodom i faze se razdvoje u fritu za razdvajanje faza a organska faza se upari pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti pomoću MDAP (Postupak C) uz sakupljanje frakcija sa m/z 554. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (160 mg, 93%) kao bezbojno ulje: LCMS (Postupak C) RT= 0.99 min, 98.5%, ES+ve m/z 554 (M H)<+>; [α]D<20>= 41 (c=1.720 u CHCl3); Analitička asimetrična HPLC Chiralcel OD-H (4.6 mm x 250 mm) uz eluiranje sa 10% EtOH-heptan sadrži 0.1% izopropilamina uz detekciju na 235 nm, brzinu protoka=1 mL/min, RT=30.4 min, 77.3% i RT=37.6 min, 22.7%.
Međuproizvod 44. (S)-terc-Butil 3-(3-(3.5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-okso-4-((R)-3-(2-(5.6.7.8-tetrahidro-1.8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il) butanoat
[0241]
[0242] Rastvor (S)-terc-butil 4-((R)-3-(2-(1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-oksobutanoata (Međuproizvod 43) (107 mg, 0.19 mmol) u etanolu (20 mL) se hidrogenizuje 4 dana preko 5% Rh/C (28 mg). Doda se još katalizatora (5 mg) i smeša hidrogenizuje još jedan dan. Katalizator se ukloni filtriranjem kroz celite i ispere sa etanolom. Kombinovani filtrati i ispirci se koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (101 mg, 94%): LCMS (Postupak C) RT=0.86 min, 98%, ES+ve m/z 558 (M+H)<+>.
Međuproizvod 45. (S)-(+)-3-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-okso-4-((R)-3-(2-(5.6.7.8-tetrahidro-1.8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatna kiselina
[0243]
[0244] Rastvor (S)-terc-butil 3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-okso-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoata (Međuproizvod 44) (101 mg, 0.18 mmol) u CHCl3(5 mL) se tretira 2 h sa TFA (3 mL) na sobnoj temperaturi.
Reaktivna smeša se upari pod sniženim pritiskom a ostatak se rastvori u DCM i ponovo upari tri puta pod sniženim pritiskom. Ostatak (200 mg) se rastvori u acetonitrilu i propusti kroz SCX-2 kartridž (10 g) koji je prethodno pripremljen sa MeCN. Jedinjenje se ispere sa MeCN i eluira sa 2M rastvorom amonijaka u MeOH. Amonijačne frakcije se upare pod sniženim
1
pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (80 mg, 88%) kao bela pena: LCMS (Postupak A) RT = 0.82 min, 90%, ES+ve m/z 502 (M H)<+>; [α]D<20>= 34 (c= 0.88 u CHCl3).
Međuproizvod 46. (S)-(+)-3-(3-(3.5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butan-1-ol
[0245]
[0246) Rastvor (S)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-okso-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline (Međuproizvod 45) (65 mg, 0.13 mmol) u THF (1 mL) se na sobnoj temperaturi tretira sa rastvorom bor-THF u THF (1M, 2 mL) u atmosferi azota. Smeša se meša na temperaturi sredine u toku noći. Ujutru se doda AcOH (0.5 mL) da se neutrališe višak bora, a nakon toga se doda 2M rastvor NaOH (1 mL) da se razbiju kompleksi bora. Smeša se razblaži sa etrom i dva puta ispere sa 2M rastvorom NaOH, a nakon toga slanim rastvorom, suši (MgSO4) i upari pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt (100 mg) se rastvori u THF (1mL) i na 20ºC tretira sa rastvorom LiAlH4u etru (1M, 1.5 mL) u atmosferi azota. Smeša se ostavi 30 min na 20º a nakon toga se zagreva 2 h na 50ºC. Doda se još LiAlH4rastvora (1M, 0.7 mL) i smeša se zagreva 45 min na 60ºC. LCMS (Postupak A) RT = 1.12 min, 58%, m/z 474 (M+H)<+>za produkt i RT = 1.23 min, 27%, m/z 488 (M+H)<+>za amid. Temperatura se poveća na 80ºC još 1 h, međutim, čini se da je reakcija prekinuta. Reaktivna smeša se neutrališe dodvanjem 2M rastvora NaOH (1 mL) i etra. Bela čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem, ispere sa etrom i etil acetatom. Filtrat i ispirci se upare pod sniženim pritiskom. Ostatak (58 mg) se prečisti pomoću MDAP (Postupak A) da se dobije naslovljeno jedinjenje (30 mg, 49%) kao žuta guma: LCMS (Postupak A) RT = 1.10 min, 93%, ES+ve m/z 474 (M H)+; [α]D<20>= 7.0 (c= 0.859 u CHCl3);<1>H NMR (DMSO-d6,600 MHz) δ 7.40-7.36 (m, 1H), 7.28-7.26 (m, 1H), 7.28-7.25 (m, 1H), 7.20 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 6.99 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.22(d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.20 (br. s., 1H), 6.05 (s, 1H), 3.32-3.28 (m, 1H), 3.25-3.21 (m, 1H), 3.24-3.18 (m, 2H), 2.97-2.90
2
(m,1H), 2.71 (t, J= 8.2 Hz, 1H), 2.64 (dd, J= 11.8, 7.8 Hz, 1H), 2.59 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 2.57-2.53 (m, 1H), 2.54-2.50 (m, 1H),2.39-2.34 (m, 2H), 2.37-2.32 (m, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.07-2.01 (m, 1H), 1.94 (dd, J= 13.1, 7.4 Hz, 1H), 1.97-1.88 (m, 1H), 1.87-1.79 (m, 1H), 1.74 (dt, J= 11.5, 6.0 Hz, 2H), 1.67-1.59 (m, 1H), 1.60-1.53 (m, 2H), 1.31-1.24 (m, 1H).<1>H NMR spektar okazuje smešu od ~3:1 bliskih signala, u skladu sa smešom diastereoizomera naslovljenog jedinjenja. Glavna komponenta odgovara Međuproizvodu 33 Izomer 1, a manja komponenta odgovara Međuproizvodu 33 Izomer 2. Analitika asimetrične HPLC (4.6 x 250 mm Chiralpak1 AD) uz eluiranje sa 10% EtOH-heptan sadrži 0.1% izopropilamin, brzina protoka= 1 mL/min, injektovanje 15 µL, detekcija na 235 nm RT=22.5 min, 78.9% i RT=26.9 min, 21.1%.
RASTVORLJIVOST
[0247] Hemiluminiscentna azotna detekcija (CLND) kinetičke rastvorljivosti je merena u skladu sa N. Bhattachar i saradnici, J. Pharm. Biomed. Anal.2006, 41, 152-157 i nađeno je da je: za Primer 1, 504 µM; za Primer 2, 249 µM; za Primer 3, 276 µM; za Primer 4, 388 µM; za Primer 5, 470 µM; za Primer 6, 437 µM; za Primer 7, 349 mM µM.
BIOLOŠKA ISPITIVANJA
[0248] Ispitivanja adhezije: Korišćeni reagensi i postupci su kako je opisano u [Ludbrook i saradnici, Biochem. J.2003, 369,311), sa pratećim tačkama razjašnjenja. Korišćene su sledeće ćelijske linije sa lingandima u zagradama: K562-α5β1(Fibronectin), K562-0vβ3(LAP-b1), K562-αvβ5(Vitronectin), K562-0vβ6(LAP-b1), K562-αvβ8(LAP-b1). Dvovalentni katjon korišćen za omogućavanje adhezije je 2 mM MgCl2. Adhezija je kvantifikovana obeležavanjem ćelija sa fluorescentnom bojom BCECFAM (Life Technologies), gde su ćelijske suspenzije u količini od 6x106 ćelija/mL inkubirane sa 0.66mL/mL 30 mM BCECF-AM 10 minuta na 37°C, a nakon toga prenete u ploče za ispitivanje. Na završetku ispitivanja, ćelije koje su vezane su lizirane koristeći 50 µM/otvor 0.5% Triton X-100 u H2O za oslobađanje fluorescencije. Intenzitet fluorescencije je detektovan pomoću Envision® čitača ploča (Perkin Elmer). Za aktivnost antagonista u ispitivanju, rezultati su naneti na logaritamsku jednačinu od četiri parametra da se odredi IC50.
[0249] Ispitivanje vezivanja humanog rastvorljivog αvβ6proteina za RGD koji sadrži peptid fluorescentnom polarizacijom: ekstracelularni domeni αvi β6se zajedno pojavljuju iz pFastBac dualne konstrukcije koristeći bakulovirus sistem ekspresije. Ekspresovani protein sadrži amino kiselinu 31-987 od αvpraćeno Tev mestom cepanja, Fos epitop repić i 6His repić, amino kiseline 21-707 od β6praćeno položajem Prescission proteaze, Jun epitop repić i FLAG repić. Protein je izlučen u medijum za ekspresiju; prečišćen diafiltracijom a nakon toga je dalje prečišćen koristeći His repić praćeno FLAG repićem a nakon toga hromatografijom za FLAG tag a nakon toga hromatografiom razdvajanja po veličini. Ovaj dobijeni materijal je više od 95% čistoće. Fluorescentni vezujući peptid na bazi LAPβ3je hemijski sintetizovan i ima sekvencu AcGRRGDLGRLK(Cy3B)-NH2. Korišćen je pufer za analizu od 25 mM HEPES pH7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CHAPS i 400 mM MgCl2. U crne ploče sa 384 otvora male zapremine se doda po 0.1 mL/otvor test jedinjenja u 100% DMSO, a nakon toga 3 mL/otvor 10 nM αvβ6proteina. Ploče se inkubiraju 15 minuta na sobnoj temperaturi a nakon toga se doda 3 mL/otvor 4 nM peptida koji sadrži fluorescentni RGD. Ploče se inkubiraju 60 minuta na sobnoj temperaturi, a fluorescentna polarizacija se detektuje pomoću Envision® čitača ploča (Perkin Elmer) sa ekscitacijom na 531 nm i emisijom merenom na 590 nm. Za aktivne antagoniste u ispitivanju, rezultati su naneti na logaritamsku jednačinu od četiri parametra da se odredi IC50.
[0250] Afinitet (plC50) za humani αvβ6protein u ispitivanju fluorescentne polarizacije za Primer 1 je bio 8.1, dok je njihov afinitet u ispitivanju adhezije ćelija bio za: αvβ6plC50= 8.4; αvβ3plC50= 6; αvβ5plC50= 6.9; αvβ8plC50= 7.7.
[0251] Afinitet (plC50) za humani αvβ6protein u ispitivanju fluorescentne polarizacije za Primer 2 je bio 7.8, dok je njihov afinitet u ispitivanju adhezije ćelija bio za: αvβ6plC50= 8.4; αvβ3plC50= 6; αvβ5plC50= 6.8; αvβ8plC50= 7.7.
[0252] Afinitet (plC50) za humani αvβ6protein u ispitivanju fluorescentne polarizacije za Primer 3 je bio 8.2, dok je njihov afinitet u ispitivanju adhezije ćelija bio za: αvβ6plC50= 8.2; αvβ3plC50= 6; αvβ5plC50= 6.9; αvβ8plC50= 7.7.
[0253] Afinitet (plC50) za humani αvβ6protein u ispitivanju fluorescentne polarizacije za Primer 4 je bio 8.2, dok je njihov afinitet u ispitivanju adhezije ćelija bio za: αvβ6plC50= 8.6; αvβ3plC50= 6.9; αvβ5plC50= 7.5; αvβ8plC50= 7.8.
[0254] Afinitet (plC50) za humani αvβ6protein u ispitivanju fluorescentne polarizacije za Primer 5 je bio 7.8, dok je njihov afinitet u ispitivanju adhezije ćelija bio za: αvβ6plC50= 8.1; αvβ3plC50= 6.1; αvβ5plC50= 6.6; αvβ8plC50= 7.4.
4
[0255] Afinitet (plC50) za humani αvβ6protein u ispitivanju fluorescentne polarizacije za Primer 6 je bio 7.7, dok je njihov afinitet u ispitivanju adhezije ćelija bio za: αvβ6plC50= 8.1; αvβ3plC50= 5.8; αvβ5plC50= 6.6; αvβ8plC50= 7.3.
[0256] Afinitet (plC50) za humani αvβ6protein u ispitivanju fluorescentne polarizacije za Primer 7 je bio 7.8, dok je njihov afinitet u ispitivanju adhezije ćelija bio za: αvβ6plC50= 8.4; αvβ3plC50= 6.7; αvβ5plC50= 7.4; αvβ8plC50= 7.3.

Claims (23)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I)
    naznačeno time što R1predstavlja atom vodonika, metil grupu ili etil grupu; R2predstavlja atom vodonika ili atom fluora; R3predstavlja atom vodonika, metil grupu ili etil grupu; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  2. 2. Jedinjenje formule (I) u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što R1predstavlja metil grupu, R2predstavlja atom vodonika i R3predstavlja metil grupu; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  3. 3. Jedinjenje formule (I) u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što R1predstavlja etil grupu, R2predstavlja atom vodonika i R3predstavlja etil grupu; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  4. 4. Jedinjenje formule (I) u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što R1predstavlja atom vodonika, R2predstavlja atom vodonika i R3predstavlja metil grupu; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  5. 5. Jedinjenje formule (I) u skladu sa patentnim zahtevom 1.
  6. 6. Jedinjenje formule (I) u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 5, naznačeno time što ima konfiguraciju:
  7. 7. Jedinjenje formule (I) u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je iziabrano od: 3-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline; 3-(3-(5-Metil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline; 3-(3-(5-Etil-3-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline; 3-(3-(1H-Pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline; 3-(3-(3,5-Dietil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin1-il)butanoatne kiseline; 3-(3-(4-Fluoro-3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline; 3-(3-(3-Metil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline; ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
  8. 8. Jedinjenje formule (I) u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to: 3-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatna kiselina:
  9. 9. Jedinjenje formule (I) u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to (S)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatna kiselina
  10. 10. Jedinjenje formule (I) u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to hidrohloridna so 3-(3-(3,5-Dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline.
  11. 11. Jedinjenje formule (I) u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to hidrohloridna so (S)-3-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-1-il)fenil)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etil)pirolidin-1-il)butanoatne kiseline.
  12. 12. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 11, naznačeno time što je za upotrebu u terapiji.
  13. 13. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 11, naznačeno time što je za upotrebu u tretmanu bolesti ili stanja za koja je indikovan antagonist αvβ6receptora.
  14. 14. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 11, naznačeno time što je za upotrebu u tretmanu fibrotične bolesti.
  15. 15. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 14, naznačeno time što je fibrotična bolest plućna fibroza.
  16. 16. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 11, naznačeno time što je za upotrebu u tretmanu idiopatske plućne fibroze.
  17. 17. Farmaceutska kompozicija, naznačena time što uključuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 11 i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenata.
  18. 18. Kombinacija, naznačena time što uključuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 11 i najmanje jedno drugo farmaceutski aktivno sredstvo.
  19. 19. Kombinacija u skladu sa patentnim zahtevom 18, naznačena time što je za upotrebu u terapiji.
  20. 20. Kombinacija u skladu sa patentnim zahtevom 18 ili kombinacija za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 19, naznačena time što je inhibitor TGFβ sinteze, na primer, pirfenidon, drugo farmaceutski aktivno sredstvo.
  21. 21. Kombinacija u skladu sa patentnim zahtevom 18 ili kombinacija za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 19, naznačena time što je nintedanib (BIBF1120) drugo farmaceutski aktivno sredstvo.
  22. 22. Kombinacija u skladu sa patentnim zahtevom 18 ili kombinacija za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 19, naznačena time što je anti αvβ6antitelo drugo farmaceutski aktivno sredstvo.
  23. 23. Jedinjenje formule (II)
    naznačeno time što R1predstavlja atom vodonika, metil grupu ili etil grupu; R2predstavlja atom vodonika ili atom fluora; R3predstavlja atom vodonika, metil grupu ili etil grupu; i R4je C1do C6alkil grupa; ili njegova so. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20180537A 2013-03-28 2014-03-26 Derivati naftiridina korisni kao antagonisti αlfa-v-βeta-6 integrina RS57220B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1305668.4A GB201305668D0 (en) 2013-03-28 2013-03-28 Avs6 Integrin Antagonists
PCT/EP2014/056013 WO2014154725A1 (en) 2013-03-28 2014-03-26 Naphthyridine derivatives useful as alpha-v-beta-6 integrin antagonists
EP14712666.8A EP2989100B1 (en) 2013-03-28 2014-03-26 Naphthyridine derivatives useful as alpha-v-beta-6 integrin antagonists

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS57220B1 true RS57220B1 (sr) 2018-07-31

Family

ID=48444909

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20180537A RS57220B1 (sr) 2013-03-28 2014-03-26 Derivati naftiridina korisni kao antagonisti αlfa-v-βeta-6 integrina

Country Status (38)

Country Link
US (2) US10023568B2 (sr)
EP (2) EP2989100B1 (sr)
JP (1) JP6095847B2 (sr)
KR (2) KR101775085B1 (sr)
CN (1) CN105189499B (sr)
AR (1) AR095768A1 (sr)
AU (1) AU2014243068C1 (sr)
BR (1) BR112015024530A8 (sr)
CA (1) CA2903358A1 (sr)
CL (1) CL2015002860A1 (sr)
CR (1) CR20150509A (sr)
CY (1) CY1120188T1 (sr)
DK (1) DK2989100T3 (sr)
DO (1) DOP2015000251A (sr)
EA (1) EA027305B1 (sr)
ES (1) ES2665597T3 (sr)
GB (1) GB201305668D0 (sr)
HR (1) HRP20180528T1 (sr)
HU (1) HUE036750T2 (sr)
IL (1) IL241184A0 (sr)
LT (1) LT2989100T (sr)
MA (1) MA38540B1 (sr)
ME (1) ME02987B (sr)
MX (1) MX363288B (sr)
NO (1) NO2989100T3 (sr)
NZ (1) NZ629025A (sr)
PE (1) PE20151606A1 (sr)
PH (1) PH12015502232B1 (sr)
PL (1) PL2989100T3 (sr)
PT (1) PT2989100T (sr)
RS (1) RS57220B1 (sr)
SG (1) SG11201506813QA (sr)
SI (1) SI2989100T1 (sr)
SM (1) SMT201800247T1 (sr)
TW (1) TWI632143B (sr)
UA (1) UA114952C2 (sr)
UY (1) UY35505A (sr)
WO (1) WO2014154725A1 (sr)

Families Citing this family (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SI3050878T1 (sl) 2013-09-24 2022-01-31 Fujifilm Corporation Nova dušik-vsebujoča spojina ali njena sol ali kovinski kompleks le-te
GB201417094D0 (en) * 2014-09-26 2014-11-12 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Novel compounds
GB201417011D0 (en) * 2014-09-26 2014-11-12 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Novel compounds
GB201417002D0 (en) * 2014-09-26 2014-11-12 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Novel compound
GB201417018D0 (en) * 2014-09-26 2014-11-12 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Novel compounds
KR20170123315A (ko) 2015-03-11 2017-11-07 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드 Tslp 결합 단백질
GB201615588D0 (en) 2016-09-14 2016-10-26 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd TSLP Binding Proteins
GB201604589D0 (en) * 2016-03-18 2016-05-04 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Chemical compound
GB201604681D0 (en) 2016-03-21 2016-05-04 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Chemical Compounds
GB201604680D0 (en) 2016-03-21 2016-05-04 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Chemical Compounds
BR112019009245A2 (pt) 2016-11-08 2019-07-16 Bristol-Myers Squibb Company azol amidas e aminas como inibidores de alfav integrina
ES2984394T3 (es) 2016-11-08 2024-10-29 Bristol Myers Squibb Co Compuestos mono y espirocíclicos que contienen ciclobutano y azetidina como inhibidores de la integrina alfa v
WO2018089357A1 (en) 2016-11-08 2018-05-17 Bristol-Myers Squibb Company INDAZOLE DERIVATIVES AS αV INTEGRIN ANTAGONISTS
HRP20210228T1 (hr) * 2016-11-08 2021-03-19 Bristol-Myers Squibb Company Amidi pirola kao inhibitori alfa v integrina
AU2017359023B2 (en) 2016-11-08 2021-12-09 Bristol-Myers Squibb Company 3-substituted propionic acids as alpha v integrin inhibitors
US10696672B2 (en) 2016-12-23 2020-06-30 Pliant Therapeutics, Inc. Amino acid compounds and methods of use
MX394210B (es) 2017-02-28 2025-03-04 Morphic Therapeutic Inc INHIBIDORES DE INTEGRINA AVß6.
MA52117A (fr) 2017-02-28 2022-04-06 Morphic Therapeutic Inc Inhibiteurs de l'intégrine (alpha-v) (bêta-6)
KR102700471B1 (ko) 2017-11-07 2024-08-28 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 알파 v 인테그린 억제제로서의 피롤로피라진 유도체
FI3761980T3 (fi) 2018-03-07 2024-02-21 Pliant Therapeutics Inc Aminohappoyhdisteitä ja käyttömenetelmiä
TWI841573B (zh) * 2018-06-27 2024-05-11 美商普萊恩醫療公司 具有未分支連接子之胺基酸化合物及使用方法
WO2020047208A1 (en) 2018-08-29 2020-03-05 Morphic Therapeutic, Inc. Inhibitors of (alpha-v)(beta-6) integrin
WO2020047239A1 (en) 2018-08-29 2020-03-05 Morphic Therapeutic, Inc. INHIBITING αV β6 INTEGRIN
WO2020047207A1 (en) * 2018-08-29 2020-03-05 Morphic Therapeutics, Inc. Inhibitors of (alpha-v)(beta-6) integrin
SI3844162T1 (sl) 2018-08-29 2025-06-30 Morphic Therapeutic, Inc. Zaviralci integrina alfa v beta6
GB202010626D0 (en) 2020-07-10 2020-08-26 Univ Nottingham Compound
WO2022183360A1 (en) * 2021-03-02 2022-09-09 Tsao Yeou Ping Short synthetic peptide and their uses for treating dry eye disease
EP4605008A1 (en) * 2022-12-14 2025-08-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Alpha-v beta-6 integrin ligands for extrahepatic delivery
IL321740A (en) * 2022-12-27 2025-08-01 Pliant Therapeutics Inc Alpha-V-beta-8 integrin inhibitors and their uses
WO2025259747A2 (en) 2024-06-12 2025-12-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Dystrophy myotonic protein kinase (dmpk) irna compositions and methods of use thereof
WO2025259743A1 (en) 2024-06-12 2025-12-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Dual conjugate compounds for extrahepatic delivery

Family Cites Families (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9004781D0 (en) 1990-03-02 1990-04-25 Glaxo Group Ltd Device
KR20010033248A (ko) 1997-12-17 2001-04-25 폴락 돈나 엘. 인테그린 수용체 길항제
CA2315370A1 (en) 1997-12-17 1999-06-24 Merck & Co., Inc. Integrin receptor antagonists
CN1589145A (zh) 1999-06-02 2005-03-02 麦克公司 αv整联蛋白受体拮抗剂
WO2000078317A1 (en) 1999-06-23 2000-12-28 Merck & Co., Inc. Integrin receptor antagonists
EP1229910A4 (en) 1999-10-04 2003-10-01 Merck & Co Inc integrin
PL355011A1 (en) * 1999-11-08 2004-03-22 Merck & Co, Inc. Process and intermediates for the preparation of imidazolidinone alpha v integrin antagonists
US7119098B2 (en) 2000-06-15 2006-10-10 Pharmacia Corporation Heteroarylakanoic acids as intergrin receptor antagonists
AU7793501A (en) 2000-07-26 2002-02-05 Merck & Co Inc Alpha v integrin receptor antagonists
WO2002022616A2 (en) 2000-09-14 2002-03-21 Merck & Co., Inc. Alpha v integrin receptor antagonists
CA2432504A1 (en) 2001-01-03 2002-07-11 Merck & Co., Inc. Methods and compositions for treating periodontal disease
DE10112771A1 (de) 2001-03-16 2002-09-26 Merck Patent Gmbh Inhibitoren des Integrins alpha¶v¶beta¶6¶
AR037517A1 (es) 2001-11-05 2004-11-17 Novartis Ag Derivados de naftiridinas, un proceso para su preparacion, composicion farmaceutica y el uso de los mismos para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria
NZ535425A (en) 2002-03-13 2008-05-30 Biogen Idec Inc Anti-alphavbeta6 antibodies
US20040224986A1 (en) 2002-08-16 2004-11-11 Bart De Corte Piperidinyl targeting compounds that selectively bind integrins
EP1592421A1 (en) 2002-12-20 2005-11-09 Pharmacia Corporation Heteroarylalkanoic acids as integrin receptor antagonists
US6932865B2 (en) 2003-04-11 2005-08-23 Lockheed Martin Corporation System and method of making single-crystal structures through free-form fabrication techniques
CN1901958B (zh) 2003-11-03 2011-03-09 葛兰素集团有限公司 流体分配装置
EP2139882B1 (en) 2007-03-23 2013-12-25 Amgen Inc. 3- substituted quinoline or quinoxaline derivatives and their use as phosphatidylinositol 3-kinase (pi3k) inhibitors
US8563566B2 (en) 2007-08-01 2013-10-22 Valeant Pharmaceuticals International Naphthyridine derivatives as potassium channel modulators
EP2211615A4 (en) 2007-10-22 2010-10-13 Glaxosmithkline Llc PYRIDOSULFONAMIDE DERIVATIVES AS PI3 KINASE INHIBITORS
WO2011111880A1 (ko) 2010-03-08 2011-09-15 주식회사 메디젠텍 세포핵에서 세포질로의 ｇｓｋ３의 이동을 억제하는 화합물을 함유하는 세포핵에서 세포질로의 gsk3 이동에 의해 발생되는 질환의 치료 또는 예방용 약학적 조성물
WO2015048819A1 (en) 2013-09-30 2015-04-02 The Regents Of The University Of California Anti-alphavbeta1 integrin compounds and methods
GB201417011D0 (en) 2014-09-26 2014-11-12 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Novel compounds
GB201417002D0 (en) 2014-09-26 2014-11-12 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Novel compound
GB201417094D0 (en) 2014-09-26 2014-11-12 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Novel compounds
GB201417018D0 (en) 2014-09-26 2014-11-12 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Novel compounds
US9790222B2 (en) 2015-02-19 2017-10-17 Scifluor Life Sciences, Inc. Fluorinated tetrahydronaphthyridinyl nonanoic acid derivatives and uses thereof
WO2016145258A1 (en) 2015-03-10 2016-09-15 The Regents Of The University Of California Anti-alphavbeta1 integrin inhibitors and methods of use
GB201604589D0 (en) 2016-03-18 2016-05-04 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Chemical compound
GB201604680D0 (en) 2016-03-21 2016-05-04 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Chemical Compounds
GB201604681D0 (en) 2016-03-21 2016-05-04 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Chemical Compounds

Also Published As

Publication number Publication date
NO2989100T3 (sr) 2018-07-28
SI2989100T1 (en) 2018-06-29
PT2989100T (pt) 2018-05-18
US20160280705A1 (en) 2016-09-29
MA38540A1 (fr) 2017-02-28
AR095768A1 (es) 2015-11-11
UA114952C2 (uk) 2017-08-28
SG11201506813QA (en) 2015-10-29
CL2015002860A1 (es) 2016-03-28
US10450312B2 (en) 2019-10-22
EP2989100A1 (en) 2016-03-02
PH12015502232A1 (en) 2016-02-01
WO2014154725A1 (en) 2014-10-02
MX2015013742A (es) 2016-02-29
HK1214262A1 (en) 2016-07-22
NZ629025A (en) 2017-05-26
DOP2015000251A (es) 2016-02-29
PH12015502232B1 (en) 2018-09-26
CR20150509A (es) 2016-03-04
EA201591503A1 (ru) 2016-04-29
HUE036750T2 (hu) 2018-07-30
LT2989100T (lt) 2018-05-25
US20180291022A1 (en) 2018-10-11
CN105189499A (zh) 2015-12-23
MA38540B1 (fr) 2017-10-31
TW201533042A (zh) 2015-09-01
TWI632143B (zh) 2018-08-11
PL2989100T3 (pl) 2018-07-31
JP6095847B2 (ja) 2017-03-15
ES2665597T3 (es) 2018-04-26
GB201305668D0 (en) 2013-05-15
AU2014243068A1 (en) 2015-10-08
BR112015024530A2 (pt) 2017-07-18
BR112015024530A8 (pt) 2019-12-10
ME02987B (me) 2018-10-20
AU2014243068C1 (en) 2017-05-25
PE20151606A1 (es) 2015-11-24
US10023568B2 (en) 2018-07-17
CY1120188T1 (el) 2018-12-12
CN105189499B (zh) 2016-09-28
MX363288B (es) 2019-03-19
EP3360876A1 (en) 2018-08-15
EA027305B1 (ru) 2017-07-31
IL241184A0 (en) 2015-11-30
KR20170103033A (ko) 2017-09-12
KR20150135790A (ko) 2015-12-03
HRP20180528T1 (hr) 2018-05-04
KR102042141B1 (ko) 2019-11-07
EP2989100B1 (en) 2018-02-28
AU2014243068B2 (en) 2017-01-05
DK2989100T3 (en) 2018-04-23
SMT201800247T1 (it) 2018-07-17
KR101775085B1 (ko) 2017-09-05
JP2016515557A (ja) 2016-05-30
UY35505A (es) 2014-10-31
CA2903358A1 (en) 2014-10-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RS57220B1 (sr) Derivati naftiridina korisni kao antagonisti αlfa-v-βeta-6 integrina
US10513517B2 (en) Naphthyridine derivatives as alpha V beta 6 integrin antagonists for the treatment of E.G. fibrotic diseases
US10004724B2 (en) Compounds alpha v beta 6 integrin antagonists
HK1217484A1 (zh) 取代的5-(3，5-二甲基异恶唑-4-基)二氢吲哚-2-酮类衍生物
HK1214262B (en) Naphthyridine derivatives useful as alpha-v-beta-6 integrin antagonists