RS57256B1

RS57256B1 - Kombinovana terapija kancera jajnika

Info

Publication number: RS57256B1
Application number: RS20180602A
Authority: RS
Inventors: Edward Michael Chan; Susan Elizabeth Pratt; Louis Frank Stancato
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 2011-11-11
Filing date: 2012-10-31
Publication date: 2018-08-31
Also published as: EA201490766A1; ZA201403159B; PH12014501060A1; AU2012336154B2; MY168927A; TN2014000150A1; JP2014533270A; PT2780011T; WO2013070460A1; AU2012336154A1; EA026297B1; DK2780011T3; AP2014007631A0; CY1120315T1; LT2780011T; ES2671730T3; HUE037928T2; KR101647569B1; JP6055481B2; ME03035B

Description

Opis

[0001] Kancer jajnika je drugi najčešći kancer u ginekologiji i najsmrtnosniji u smislu apsolutnog broja. Tretman obično uključuje hemoterapiju i hirurgiju a ponekad radioterapiju.

[0002] Nažalost, lek za kancer jajnika je i dalje nedostižan i postoji potreba za drugim i različitim terapijama koje bi se pokazale kao efikasne u lečenju kancera jajnika.

[0003] Identifikovano je nekoliko grupa anti-kancerogenih lekova koji se koriste u lečenju različitih tipova kancera, uključujući kancer jajnika, a tu spadaju lekovi koji sadrže platinu i analozi pirimidina. Cisplatin (takođe poznat kao cisplatinum ili cisdiamindihlorplatinum(II)) je bio prvi član grupe anti-kancerogenih lekova koji sadrže platinu, koja danas takođe uključuje karboplatin. Ovi kompleksi platine reaguju in vivo, vezuju se za i dovode do unakrsnog vezivanja DNK, što na kraju dovodi do apoptoze (prouzrokuje smrt ćelije).

[0004] Gemcitabin hidrohlorid (ovde označen kao gemcitabin) je analog pirimidina. U savremenoj terapiji se koristi za lečenje različitih tipova kancera, uključujući kombinaciju sa karboplatinom za tretman kancera jajnika.

[0005] Mada je u literaturi zabeleženo da se režim sa gemcitabinom plus cisplatin dobro podnosi i da je aktivan kod pacijenata sa povratnim kancerom jajnika, naši istraživači su otkrili da kada se ova sredstva koriste u kombinaciji sa 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilaminom, jedinjenjem otkrivenim u US 7,582,652 koje se sada podvrgava kliničkim ispitivanjima kao mogućnost u tretmanu različitih indikacija kancera, trostruka kombinacija obezbeđuje poboljšanu efikasnost u odnosi na kombinaciju gemcitabin plus cisplatin.

5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamin

[0006] Osim toga, mada se kombinacija karboplatina i gemcitabina sada takođe koristi za tretman kancera jajnika i takođe je objavljeno u literaturi da je uočena uporediva efikasnost u tretmanu kancera jajnika između karboplatina i cisplatina (međutim manja toksičnost je uočena sa karboplatinom), savremeni istraživači su zaključili da trostruka kombinacija gemcitabina, karboplatina i 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina može da bude mnogo efikasnija nego kombinacija samo gemcitabina i karboplatina, uz potencijalnu korist od smanjene toksičnosti primenom karboplatina umesto cisplatina.

[0007] Ovaj pronalazak se odnosi na postupak za lečenje kancera jajnika kod sisara koji uključuje primenu kombinacije gemcitabina, sredstva sa platinom izabranog iz grupe koja sadrži cisplatin i karboplatin i 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U još jednom otelotvorenju, primena je istog dana. U još jednom drugom otelotvorenju, primena je u toku ciklusa tretmana od 21 dan. U još jednom drugom otelotvorenju, gemcitabin i sredstvo sa platinom se primenjuju do 2 dana nakon 5-[2-terc-butil-5-(4-fluorofenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetilpropil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina ili se primeni farmaceutski prihvatljiva so, a gemcitabin se ponovo primeni do 7 dana kasnije. U još jednom otelotvorenju, farmaceutski prihvatljiva so je dimetansulfonatna so.

[0008] Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupak za lečenje kancera jajnika kod sisara koji se podvrgavaju istovremenoj terapiji sa 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilaminom ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, uključujući primenu kombinacije gemcitabina i sredstva sa platinom izabranog iz grupe koja sadrži cisplatin i karboplatin. U narednom otelotvorenju, farmaceutski prihvatljiva so je dimetansulfonatna so.

[0009] Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupak za lečenje kancera jajnika kod sisara koji se podvrgavaju istovremenoj terapiji sa 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilaminom ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju i sredstvom sa platinom izabranog iz grupe koja sadrži cisplatin i karboplatin, uključujući primenu gemcitabina. U narednom otelotvorenju, farmaceutski prihvatljiva so je dimetansulfonatna so.

[0010] Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupak za lečenje kancera jajnika kod sisara koji se podvrgavaju istovremenoj terapiji sa 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilaminom ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju i gemcitabinom, uključujući primenu sredstva sa platinom izabranog iz grupe koja sadrži cisplatin i karboplatin. U narednom otelotvorenju, farmaceutski prihvatljiva so je dimetansulfonatna so

[0011] Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupak za lečenje kancera jajnika kod sisara koji se podvrgavaju istovremenoj terapiji sa gemcitabinom i sredstvom sa platinom izabranim iz grupe koja sadrži cisplatin i karboplatin, uključujući primenu 5-[2-terc-butil-5-(4-fluorofenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U narednom otelotvorenju, farmaceutski prihvatljiva so je dimetansulfonatna so

[0012] Ovaj pronalazak se takođe odnosi na 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamin, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u kombinovanoj terapiji sa gemcitabinom i sredstvom sa platinom izabranim od cisplatina i karboplatina u tretmanu kancera jajnika. U narednom otelotvorenju, primena 5-[2-terc-butil-5-(4-fluorofenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, prethodi primeni gemcitabina i sredstva sa platinom. U još jednom otelotvorenju, primena 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gemcitabina i sredstva sa platinom je u okviru 24 sata. U još jednom otelotvorenju, gemcitabin i sredstva sa platinom se primenjuju do 2 dana nakon primene 5-[2-terc-butil-5-(4-fluorofenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetilpropil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, a gemcitabin se primenjuje ponovo do 7 dana kasnije. U još jednom otelotvorenju, primena gemcitabina i sredstva sa platinom je pre primene 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U još jednom otelotvorenju, gemcitabin i sredstvo sa platinom se primenjuju istovremeno. U još jednom otelotvorenju, sredstvo sa platinom je cisplatin. U još jednom otelotvorenju, sredstvo sa platinom je karboplatin. U još jednom otelotvorenju, primena je u toku ciklusa tretmana od 21 dan. U još jednom otelotvorenju, farmaceutski prihvatljiva so je dimetansulfonatna so.

[0013] Ovaj pronalazak se takođe odnosi na upotrebu 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u proizvodnji medikamenta za tretman kancera jajnika, pri čemu se navedeni medikament primenjuje u kombinaciji sa sredstvom sa platinom i gemcitabinom. U narednom otelotvorenju, primena 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina ili njegove farmaceutski prihvatljive soli prethodi primeni gemcitabina i sredstva sa platinom. U još jednom otelotvorenju, primena 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gemcitabina i sredstva sa platinom je u okviru 24 sata. U još jednom otelotvorenju, gemcitabin i sredstva sa platinom se primenjuju do 2 dana nakon primene 5-[2-terc-butil-5-(4-fluorofenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetilpropil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli a gemcitabin se primenjuje ponovo do 7 dana kasnije. U još jednom otelotvorenju, primena gemcitabina i sredstva sa platinom je pre primene 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U još jednom otelotvorenju, gemcitabin i sredstvo sa platinom se primenjuju istovremeno. U još jednom otelotvorenju, sredstvo sa platinom je cisplatin. U još jednom otelotvorenju, sredstvo sa platinom je karboplatin. U još jednom otelotvorenju, primena je u toku ciklusa tretmana od 21 dan. U još jednom otelotvorenju, farmaceutski prihvatljiva so je dimetansulfonatna so.

[0014] 5-[2-Tert-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamin može da se izradi u skladu sa procedurama kako je opisano u US 7,582,652. Alternativno, molekula može da se izradi po procedurama koje su ovde date. Reagensi i početni materijali su lako raspoloživi za stručnjaka sa uobičajenim iskustvom ili mogu da se izrade po procedurama koje su odabrane od standardnih tehnika u organskoj i heterocikličnoj hemiji, ili tehnikama koje su analogne sintezama poznatih strukturno sličnih jedinjenja. Nazivi niže datih izrada i referentnog primera 1 su generalno dati po IUPAC nazivima oblikovanim u Symyx Isentris® verziji 3.2.

Izrada 1

6-Hlor-N-(2,2-dimetilpropil)-3-nitro-piridin-2-amin

[0015]

[0016] 2,6-Dihlor-3-nitropiridin (30 g, 152.34 mmol) se rastvori u metil terc-butil etru (300 mL) da se dobije žuti rastvor koji se nakon toga ohladi na 0-5 °C. U ovaj rastvor se doda trietilamin (20 mL, 143.49 mmol), a zatim se polako dodaje neopentilamin (16 mL, 136.40 mmol). Kada je dodavanje završeno, reaktivna smeša se meša 2 sata na 5 °C a nakon toga na sobnoj temperaturi u toku noći. Narednog dana (nakon približno 18 sati) hromatografijom na tankom sloju (20% etil acetat u heksanu) je pokazano da je reakcija završena. Reaktivna smeša se ispere sa vodom (100 mL) i slanim rastvorom (100 mL). Organski deo se suši preko MgSO4, filtrira, a nakon toga koncentruje do ostatka. Doda se izopropil alkohol (20 mL). Pojavljuju se kristali koji se sakupe filtriranjem uz ispiranje, koristeći hladan izopropil alkohol (15 mL) da se dobije naslovljeno jedinjenje (32 g, 86%).

Izrada 2

5-Hlor-3-(2,2-dimetilpropil)imidazo[4,5-b]piridin-2-amin hidrobromid

[0017]

[0018] (6-Hlor-N-(2,2-dimetilpropil)-3-nitro-piridin-2-amin (24.4 g, 0.10 mol) sa toluenom (300 mL) se sipa u autoklav zapremine 1 L.

[0019] U posudi se 5% Pt/C (1.5 g) izmeša sa vodom (12 mL) i 50% hipofosfornom kiselinom (0.25 mL) uz 10 minuta mešanja. Pripremljeni Pt/C katalizator se prenese u autoklav. Reaktivna smeša se zagreje na 75 °C pod pritiskom vodonika od 50 psi. Nakon 3 sata, GC analize pokazuju da je prisutno manje od 1% početnog materijala. Reakcija se zaustavlja i ohladi na sobnu temperaturu. Reaktivna smeša se filtrira kroz ploču CELITE® i filter pogača ispere sa metanolom. Filtrat koji sadrži produkt, 6-hlor-N2-(2,2-dimetilpropil)piridin-2,3-diamin, se koncentruje pod vakuumom do zapremine od približno 100 mL i direktno koristi u ciklizaciji bez daljeg prečišćavanja.

[0020] Gore navedeni rastvor se razblaži sa metanolom (150 mL) i ohladi u ledenom kupatilu. U jednoj porciji se doda cijanogen bromid (11 g, 0.105 mol). Reakcija se ostavi da se zagreje na temperaturu sredine uz mešanje kako se ledeno kupatilo zagreva. Reakcija je završena nakon približno 5 do 10 sati.

[0021] Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom do približno 4 zapremine (da se sakupi približno 6 zapremina destilata) pod vakuumom. Doda se metil terc-butil etar (6 zapremina, 180 mL). Smeša se ohladi u ledenom kupatilu i meša 1 sat. Materijal se filtrira da se dobije naslovljeno jedinjenje (22.0 g, 76%) kao beličasta čvrsta supstanca.

Izrada 3

3-(2,2-Dimetilpropil)-5-[(E)-2-(4-fluorofenil)vinil]imidazo[4,5-b]piridin-2-amin

[0022]

[0023] Bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfin)dihlorpaladijum(II) (CAS No: 887919-35-9) (100.4 mg, 141.8 mmol) se prenese u bocu kruškastog oblika i čvrsta supstanca dehidrogenizuje sa 5 ciklusa vakuum/azot. Doda se 1-Butanol (55 mL) a nakon toga se sadržaj boce deoksigenizuje sa 3 ciklusa vakuum (30 sekundi svaki)/azot a zatim sa još 2 ciklusa vakuum (60 sekundi svaki)/azot, uz mešanje. Nije dobije potpuni rastvor, već gusta smeša.

[0024] U bocu okruglog dna sa 3 grla opremljenu sa Claisen adapterom, mehaničkom mešalicom, termoelementom, refluksnim kondenzatorom i gumenim zatvaračem se doda 5-hlor-3-(2,2-dimetilpropil)imidazo[4,5-b]piridin-2-amin hidrobromid (22.65 g, 70.9 mmol), a nakon toga slobodni prostor deoksigenizuje sa blagim ispiranjem azotom u toku 15 minuta. U paperjastu belu čvrstu supstancu se dodaju 1-butanol (46 mL), diizopropiletilamin (34.48 g, 46.5 mL, 266.8 mmol) i 4-fluorostiren (11.66 g; 11.4 mL, 95.5 mmol), svaki pomoću šprica. Nakon deoksigenacije ove smeše prečišćavanjem sa azotom u toku 40 minuta, špricem se doda smeša katalizator/butanol. Kroz žitku masu se 10 minuta propušta azot, a nakon toga se slobodan prostor iznad ispira 5 minuta sa azotom. Reakcija se ostavi da se meša na 118-120° C u toku noći. Nakon 18 sati, smeša se ohladi uz mešanje. Precipitacija ili kristalizacija se dešava između 45 °C i 70 °C. Počevši na temperaturi od 41 °C, u toku 10 minuta se u kapima dodaje dejonizovana voda (100 mL) da se dobije žitka masa. Nakon mešanja i hlađenja na 26 °C, boca se stavi u ledeno kupatilo da se sadržaj ohladi. Nakon 1 sat, u kupatilo se doda etanol i još leda i temperatura se snizi na -2 °C. Smeša se ostavi 1 sat na -2 do -5 °C, nakon toga filtrira kroz polipropilensku ploču (dobro filtriranje), ispere sa dejonizovanom vodom (4 zapremine), a zatim sa heptanom (3 zapremine). Materijal se osuši izvlačenjem vahduza vakuumom u toku 10 minuta i dalje suši u vakuumskoj pećnici na 40 °C da se dobije naslovljeno jedinjenje kao beličasta čvrsta supstanca (20.25 g, 88%).<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 7.51 (m, 2H); 7.41 (d, 1H); 7.32 (d, 1H); 7.19 (m, 3H); 7.08 (d, 1H); 6.79 (s, 2H); 3.89 (s, 2H); 1.00 (s, 9H).

Izrada 4

1-[2-Amino-3-(2,2-dimetilpropil)imidazo[4,5-b]piridin-5-il]-2-(4-fluorofenil)etan-1,2-dion [0025]

[0026] 3-(2,2-Dimetilpropil)-5-[(E)-2-(4-fluorofenil)vinil]imidazo[4,5-b]piridin-2-amin (100.0 g, 308.26 mmol) se izmeša sa dimetil sulfoksidom (200 mL) u boci okruglog dna sa 3 grla zapremine 2 L, opremljenoj sa refluksnim kondenzatorom, termoelementom, i mehaničkom mešalicom. Nakon 10 minuta mešanja, u toku 4 minuta se dodaje 48% vodonik bromid (28.69 g, 170.20 mmol) da se dobije siva žitka masa. uočeva se egzotermna reakcija od 22 °C do 33 °C. U reaktivnu smešu se doda sirćetna kiselina (9.28 g, 154.53 mmol).

Nakon 1.8 sati mešanja, doda se nova količina 48% vodonik bromid (31.75 g, 188.35 mmol). Reaktivna smeša se zagreje i postaje gusta. Doda se sirćetna kiselina(400 mL, 6.98 mol). Kada temperatura dostigne 91°C, dodaju se dimetil sulfoksid (50 mL) i 40% rastvor H2SO4(100 mL). Temperatura se poveća na 100 °C. Nakon 3 sata, doda se još 40% rastvora H2SO4(300 mL) i postavi se Dean-Stark povratni kondenzator da se uklone rastvarači niske tačke ključanja kao što je dimetil sulfid. Nakon mešanja narednih 17 sati na 100 °C, u reakciju se doda još 40% rastvora H2SO4(80 mL). Reakcija se meša 1 sat a nakon toga se doda dejonizovana voda (300 mL). Reakcija se meša 3 sata a nakon toga se temperatura poveća na 103 °C a zatim se doda još dejonizovane vode (200 mL). Nakon još 2.5 sata mešanja doda se nova porcija dejonizovane vode (200 mL). Mešanje i zagrevanje se nastavi još 1.5 sat kada se zagrevanje prekine (ukupno 28 sati od vremena prvog dodavanja 40% rastvora H2SO4).

Reaktivna smeša se ostavi da kristališe, uz hlađenje na temperaturu sredine u toku noći.

Produkt se filtrira, ispere sa dejonizovanom vodom (2 x 200 mL), a nakon toga suši u vakuumskoj pećnici na 50 °C.

[0027] Čvrsti materijal (u obliku soli) se tretira sa 1 M rastvorom natrijum hidroksida (550 mL) uz mešanje u toku 18 sati. Žitka masa se filtrira, ispere sa dejonizovanom vodom (500 mL) i suši u vakuumskoj pećnici na 50 °C da se dobije naslovljeno jedinjenje (83.7 g, 77%).

<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 7.95 (d, 1H); 7.87 (m, 2H); 7.60 (d, 1H); 7.58 (s, 2H); 7.39 (t, 2H); 3.60 (s, 2H); 0.61 (s, 9H).

Izrada 4A (alternativni postupak)

1-[2-Amino-3-(2,2-dimetilpropil)imidazo[4,5-b]piridin-5-il]-2-(4-fluorofenil)etan-1,2-dion

[0028] 3-(2,2-Dimetilpropil)-5-[(E)-2-(4-fluorofenil)vinil]imidazo[4,5-b]piridin-2-amin (1.00 g, 2.93 mmol) se suspenduje u 1,4-dioksanu (4 mL) i 50% rastvoru sumporne kiseline (1 mL) u boci okruglog dna sa 3 grla opremljenoj sa termoelementom i refluksnim kondenzatorom. Smeša postaje bistar rastvor i zagreje se na temperaturu refluksa (90-93 °C interna i 115 °C temperatura uljanog kupatila). Po redu se dodaju vodonik bromid (400 mL, 3.56 mmol) i dimetil sulfoksid (2.50 mL, 35.20 mmol). Reaktivna smeša se zagreje na temperaturu refluksa pomoću uljanog kupatila i uvede se gas azot brzinom od približno jedan mehur/sekundi. Nakon 1 sat, doda se druga porcija 50% rastvora sumporne kiseline (3 mL, 21.4 mmol). Nakon 5 sati, doda se treća porcija 50% rastvora sumporne kiseline (4 mL, 31 mmol) i reakcija se održava pod refluksom u toku noći. HPLC pokazuje da je produkt > 93%. Uljano kupatilo se ukloni i reakcija se ostavi da se ohladi na približno 70 °C kada se doda voda (5 mL). Nakon hlađenja na sobnu temperaturu (približno 30 minuta) smeša se filtrira i pogača se ispere sa vodom (10 mL) da se dobije vodonik sulfatna so produkta (1.33 g).

[0029] Ova so se doda u 1 N rastvor natrijum hidroksida (50 mL) i meša 30 minuta na sobnoj temperaturi da se dobije svetlo žuta suspenzija. Smeša se filtrira, svetlo žuta čvrsta supstanca ispere sa vodom (3 x 10 mL) a nakon toga suši na 55 °C pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.91 g, 88%).

Referentni Primer 1

5-[2-terc-butil-5-(4-fluorofenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetilpropil)imidazo[4,5-b]piridin-2-amin dimetansulfonat ili 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetilpropil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamin dimetansulfonat

[0030]

[0031] 1-[2-Amino-3-(2,2-dimetilpropil)imidazo[4,5-b]piridin-5-il]-2-(4-fluorofenil)etan-1,2-dion (354 g, 1 mol) se izmeša sa etanolom (2.8 L), amonijum acetatom (550.0 g, 7.1 mol) i trimetil acetaldehidom (110 g, 1.3 mol). Reakcija se zagreje na približno 70 °C (temperatura reakcije se održava ispod refluksovanja da pomogne sprečavanju sublimacije NH4OAc) dok se pomoću HPLC ili LC-MS ne konstatuje nestanak diona. Nakon završetka reakcije (obično u toku noći), smeša se koncentruje pod vakuumom. Dodaju se etil acetat (5.3 L) i voda (3.5 L), a zatim 1 N rastvor NaOH (1.4 L). Smeša se meša 20-30 minuta na sobnoj temperaturi. Faze se razdvoje a vodena faza ekstrahuje sa etil acetatom (2.8 L). Kombinovani delovi etil acetata se dva puta isperu sa 10 zapremina rastvora soli. Rastvor etil acetata upari do približno 1.2 L (približno 3 zapremine). Doda se etanol (2.8 L) i smeša zagreje na približno 65 °C. U kapima se brzo dodaje metansulfonska kiselina (240.0 g, 2.5 mol) u etil acetatu (600 mL). Smeša se 3 sata održava na približno 65 °C. Izvor toplote se ukloni i reakcija se ohladi na sobnu temperaturu uz mešanje u toku još 2 sata. Čvrsti produkt se sakupi filtriranjem, ispere sa etil acetatom (500 mL) i suši u vakuumskoj pećnici na približno 45 °C da se dobije naslovljeno jedinjenje (490 g, 80%). ES/MS m/z 421.5 (M+1).<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8.99 (s, 2H), 7.90 (d, 1H, J = 9.0 Hz); 7.86 (d, 1H, J = 9.0 Hz); 7.60 (dd, 2H, J = 9.0 Hz), 7.34 (dd, 2H, J = 9.0 Hz); 3.68 (s, 2H); 2.35 (s, 6H); 1.51 (s, 9H); 0.71 (s, 9H).

[0032] Naredni Primeri ilustruju poboljšanje efikasnosti trostruke kombinovane primene jedinjenja, 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-

1

imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina (dimetansulfonatna so (Jedinjenje A)), gemcitabina i sredstva sa platinom, u odnosu na dvostruku kombinaciji gemcitabina i sredstva sa platinom u studijama na ksenograft miševima sa kancerom humanog jajnika. Podrazumeva se da su Primeri dati samo kao ilustracija a ne kao ograničavajući i da stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici može da izvrši brojne modifikacije.

Primer 1

In vivo trostruka kombinacija Jedinjenja A, gemcitabina i cisplatina

[0033] Cilj ove studije je da se uporedi tretman dvostrukom kombinacijom gemcitabina i cisplatina i tretman trostrukom kombinacijom (uključujući Jedinjenje A) u ksenograft modelu miševa kancera humanog jajnika da se odredi koji je efikasniji.

[0034] Humani tumor ksenograft miševa se generiše od rane pasaže sledećih ćelijskih linija kancera jajnika: A-2780 (National Cancer Institute), SK-OV-3x.luc (SK-OV-3 ćelijska linija modifikovana za ekspresiju luciferaze (#1, medijum za ekspresiju), Indiana University). A-2780 ćelije kancera jajnika su odgajane u RPMI 1640 sa L-glutaminom, 25 mM HEPES (Invitrogen 22400-089) obogaćenim sa 1mM piruvijatom i 10% sertifikovanim serumom fetusa govečeta (Gibco 16000, FBS). SK-OV-3x.luc ćelije (ćelije kancera jajnika) su uzgajane u McCoy-ovom 5A medijumu sa L-glutaminom (Invitrogen 16600-082) obogaćenim sa neesencijalnim amino kiselinama, 1 mM piruvijata i 10% FBS.

[0035] Harlan atimični bezdlaki miševi (6-7 nedelja stari) su smešteni uz neograničen pristup hrani i vodi i aklimatizovani jednu nedelju pre subkutane implantacije ksenografta u desnu zadnju slabinu sa određenim brojem ćelija. A-2780 ili SK-OV-3x.luc implanti sadrže 0.1 mL ćelija (2 ili 5 x 106 ćelija, tim redom) u medijumu bez seruma sa 0.1 mL MATRIGEL® (BD Biosciences) do konačne zapremine od 0.2 mL. Tumori se ostave da se razviju do zapremine od 120-150 mm<3>a nakon toga se po principu slučajnog uzorka podele u grupe za tretman da se dostigne konzistentna prosečna veličina tumora za sve grupe. Svaku grupu za tretman u SK-OV-3x.luc studiji čini 12 životinja; svaku grupu za A-2780 studiju čini 20 životinja.

[0036] Jedinjenje A se nedeljeno priprema u smeši hidroksietilceluloza (HEC) 1% / TWEEN® 800.25% / antipeneće sredstvo 0.05% (HEC/TWEEN®) i čuva na 4 °C. Doza od 30 mg/kg Jedinjenja A za SK-OV-3x.luc tretiranu grupu (ili 10 mg/kg za A-2780 tretiranu grupu), ili njihov vehikulum, se primenjuje oralno gastričnom gavažom 3 puta dnevno (TID) u zapremini od 0.2 mL u toku 3 nedelje. Protokol tretmana obuhvata početni tretman sa Jedinjenjem A a nakon dva dana uvođenja tretmana sa gemcitabinom i cisplatinom.

[0037] Cisplatin i gemcitabin se razblaže u PBS, pripreme i primene nedeljno u obliku intraperitonealnih injekcija u količini od 0.2 mL. Primenjuje se konstantna zapremina kako je ilustrovano u Tabeli 1.

Tabela 1

[0038] Jedanput nedeljno (QW) tretmani gemcitabinom i cisplatinom su dati na početku trećeg dana 0.5 i 1 sat, tim redom, nakon 7. doze (što odgovara tek više od dva puta dana doziranja Jedinjenja A) Jedinjenja A ili vehikuluma svake nedelje. Najveće doze gemcitabina i cisplatina su izabrane na osnovu efikasnosti kao pojedinačnog sredstva a fiksni odnosi njihovih razblaženja su dozirani u kombinaciji (primena po redu kao odvojenih jedinjenja): 100 mg/kg gemcitabina 4 mg/kg cisplatina (100+4); 50 mg/kg gemcitabina 2 mg/kg cisplatina (50+2); ili 25 mg/kg gemcitabina 1 mg/kg cisplatina (25+1). SK-OV-3x.luc i A-2780 grupama za tretman je primenjena trostruka kombinovana terapija u skladu sa sledećim režimom doziranja. Odgovarajući vehikulumi su korišćeni kada nije indikovan tretman. 1. HEC/TWEEN®, 0.2 mL, oralno, TIDx21 / PBS , 0.2 mL+0.2 mL, IP, QWx3

2. Jedinjenje A, 10 (ili 30) mg/kg, oralno, TIDx21 / PBS, 0.2+0.2 mL, IP, QWx3

3. HEC/TWEEN®, 0.2 mL, oralno, TIDx21 / gemcitabin+cisplatin (25+1) mg/kg, IP, QWx3 4. HEC/TWEEN®, 0.2 mL, oralno, TIDx21 / gemcitabin+cisplatin (50+2) mg/kg, IP, QWx3 5. HEC/TWEEN®, 0.2 mL, oralno, TIDx21 / gemcitabin+cisplatin (100+4) mg/kg, IP, QWx3

6. Jedinjenje A, 10 (ili 30) mg/kg, oralno, TIDx21 / gemcitabin+cisplatin, 25+1 mg/kg, IP, QWx3

7. Jedinjenje A, 10 (ili 30) mg/kg, oralno, TIDx21 / gemcitabin+cisplatin, 50+2 mg/kg, IP, QWx3

8. Jedinjenje A, 30 mg/kg, oralno, TIDx21 / gemcitabin+cisplatin, 100+4 mg/kg, IP, QWx3* *SK-OV-3x.luc samo za studiju.

[0039] Zapremina tumora i telesna težina su beleženi i analizirani dva puta nedeljno pomoću dobijenih vrednosti i sredstava za analizu. Zapremina tumora (mm<3>) je procenjena po formuli: v = l x w<2>x 0.536 gde je l = veći izmereni prečnik a w = manji perpendikularni prečnik.

Antitumorna aktivnost se izračunava kao procenat smanjenja zapremine tretiranog (T) tumora u odnosu na zapreminu netretiranog kontrolnog (C) tumora [1-(T/C)] x 100. Vrednosti zapremine tumora se prevedu u log skalu da se izjednači varijanca u odnosu na vreme i tretirane grupe. Rezultati log zapremina su ispitivani sa analizom varijaci od dva puta ponovljenih merenja u odnosu na vreme i tretman korišćenjem MIXED procedure u SAS softveru (verzija 8.2). Model korelacije za ponovljena merenja je prostorni model. Tretirane grupe su poređene sa kontrolnom grupom u svakoj vremenskoj tački. MIXED procedura je takođe odvojeno korišćena za svaku tretiranu grupu za izračunavanje prilagođene srednje vrednosti i standardne greške u svakoj tački vremena. Obe analize su posledice autokorelacije za svaku životinju i nedostatka vrednosti do koga dolazi kada su životinje sa velikim tumorima ranije uklonjene iz studije. Prilagođena srednja vrednost i standardna greška se nanose za svaku tretiranu grupu u odnosu na vreme. Po dogovoru, p-vrednosti ≤ 0.05 pokazuju značajne razlike u rastu tumora. Maksimalni procenat merenja gubitka težine i finalne zapremine tumora su predstavljeni sa rezultantom statističkog poređenja inhibicije rasta tumora između pojedinačnog i kombinovanih tretmana.

[0040] Finalna prosečna zapremina tumora SK-OV-3x.luc tretiranih ksenografta za 3 nedelje samo sa Jedinjenjem A, ili sa kombinacijama manjih doza gemcitabina i cisplatina (25+1, 50+2) primenjenih po rasporedu jedanput nedeljno, nije značajno različita od kontrole sa vehikulumom (Tabela 2). Najveći rezultat inhibicije rasta tumora u odnosu na kontrolu vehikulumom je dobijen sa kombinacijom gemcitabin cisplatin (100+4). Ko-tretman svake od gemcitabin cisplatin tretirane životinje sa Jedinjenjem A dovodi do povećanja inhibicije rasta tumora. Kombinacije od 25+1, 50+2 i 100+4 sa Jedinjenjem A postižu ili prevazilaze anti-tumorni odgovor za kombinaciju 100+4.

1

[0041] Tretman trostrukom kombinacijom svake od 25+1 i 50+2 gemcitabin cisplatin tretirane životinje sa Jedinjenjem A dovodi do poboljšanja inhibicije rasta tumora u odnosu na dvostruku kombinaciju gemcitabin cisplatin, kako je pokazano u Tabeli 2. Posebno, kombinacije 25+1, 50+2 i 100+4 sa Jedinjenjem A značajno prevazilaze anti-tumorni odgovor u odnosu na odgovarajuću dvostruku kombinaciju 25+1, 50+2 i 100+4.

Tabela 2: inhibicija rasta SK-OV-3x.luc tumora kombinovanim tretmanom sa gemcitabinom, cisplatinom i Jedinjenjem A

[0042] U drugom modelu, A2780 modelu tumora jajnika, tretman trostrukom kombinacijom svake gentamicin cisplatin tretirane životinje sa Jedinjenjem A dovodi do poboljšanja inhibicije rasta tumora u odnosu na dvostruku kombinaciju gemcitabin cisplatin, kako je pokazano u Tabeli 3. Posebno, kombinacije 25+1 i 50+2 sa Jedinjenjem A značajno prevazilaze anti-tumorni odgovor na 25+1 i 50+2 dvostruku kombinaciju.

Tabela 3: inhibicija rasta A-2780 tumora tretmanom sa kombinacijom gemcitabin, cisplatin i Jedinjenje A

Primer 2

In vivo terapija trostrukom kombinacijom sa Jedinjenjem A, gemcitabinom i karboplatinom

[0043] Karboplatin (25 mg/kg - 100 mg/kg) može da bude zamenjen sa cisplatinom u osnovi kako je opisano u Primeru 1.

[0044] Jedinjenja opisana u ovom pronalasku su preferirano formulisana kao farmaceutske kompozicije koje se primenjuju različitim načinima. Najpoželjnije, ove kompozicije su za oralnu, intravensku ili intraperitonealnu primenu. Ovakve farmaceutske kompozicije i procesi za njihovu izradu su dobro poznati u tehnici. Videti, na primer, REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (D. Troy, i saradnici, eds., 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005).

[0045] Jedinjenja iz ovog pronalaska su generalno efikasna u širokom opsegu doza. Količina primenjenog 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina je normalno u opsegu od približno 100-420 mg svakih 12 sati

1

u toku 10 dana, mnogo poželjnije 100-300 mg svakih 12 sati u toku 10 dana ili najpoželjnije 200 mg svakih 12 sati u toku 10 dana ili alternativno 300 mg svakih 12 sati u toku 10 dana. Prihvaćeno je da se 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamin primenjuje najmanje dva dana pre početka režima gemcitabin i cisplatin ili gemcitabin i karboplatin.

[0046] U skladu sa doznim režimom odobrenim od FDA, kombinovana primena gemcitabina i karboplatina bi trebalo da bude intravenski u dozi od 1000 mg/m<2>u toku 30 minuta u dane 1 i 8 u svakom ciklusu tretmana od 21 dan. Karboplatin AUC 4 bi trebalo da se primeni intravenski na dan 1 nakon primene gemcitabina. Pacijenti treba da se prate pre svake doze sa potpunim pregledom krvi, uključujući diferencijalnu formulu. Pacijenti bi trebalo da imaju apsolutni broj granulocita ≥1500 x 10<6>/L a broj trombocita ≥100,000 x 10<6>/L pre svakog ciklusa.

Modifikacija doze

[0047] Podešavanje doze gemcitabina zbog hematološke toksičnosti u okviru ciklusa tretmana se zasniva na broju granulocita i trombocita dobijenih na dan 8 terapije. Ukoliko je uočena supresija koštane srži, doza gemcitabina treba da bude modifikovana u skladu sa uputstvom u Tabeli 4.

Tabela 4: Uputstvo za redukciju doze 8. dana za gemcitabin u kombinaciji sa karboplatinom

[0048] Generalno, za ozbiljnu (stepen 3 ili 4) ne-hematološku toksičnost, izuzev mučnina/povraćanje, terapija sa gemcitabinom treba da se zadrži ili smanji za 50% u zavisnosti od procene ordinirajućeg lekara. Za podešavanje doze karboplatina, videti uputstvo za upotrebi koje je dao proizvođač.

1

[0049] Podešena doza za gemcitabin u kombinaciji sa karboplatinom za naredne cikluse se zasniva na uočenoj toksičnosti. Doza gemcitabina u narednim ciklusima treba da se redukuje na 800 mg/m<2>u dane 1 i 8 u slučaju bilo koje od narednih hematoloških toksičnosti:

• apsolutni broj granulocita < 500 x 10<6>/L u toku više od 5 dana

• apsolutni broj granulocita < 100 x 10<6>/L u toku više od 3 dana febrilne neutropenije

• trombociti < 25,000 x 10<6>/L

• ciklus odložen više od jedne nedelje zbog toksičnosti

[0050] Ukoliko se prethodno navedene toksičnosti ponove nakon početne redukcije doze, za naredni ciklus, gemcitabin treba da se daje samo na dan 1 u količini od 800 mg/m<2>.

[0051] Veruje se da cisplatin može da se primeni na isti način kao karboplatin.

[0052] U nekim slučajevima, vrednosti doze ispod donjeg limita prethodno navedenog opsega mogu da budu više nego adekvatne, dok u drugim slučajevima čak i veće doze mogu da se primene bez izazivanja bilo kog neželjenog sporednog efekta i zbog toga prethodno dat opseg doza nema za cilj da ograniči okvir ovog pronalaska na bilo koji način. Jasno je da količinu jedinjenja koja se primenjuje određuje lekar u svetlu relevantnih okolnosti, uključujući stanje koje se tretira, odabrani način primene, određeno jedinjenje ili jedinjenja koja se primenjuju, godine starosti, težinu i odgovor pojedinačnog pacijenta i ozbiljnost simptoma kod pacijenta.

1

Claims

Patentni zahtevi

1. 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamin, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačen time što je za upotrebu u kombinovanoj terapiji sa gemcitabinom i sredstvom sa platinom izabranog od cisplatina i karboplatina u tretmanu kancera jajnika.

2. 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamin, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačen time što primena 5-[2-terc-butil5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli prethodi primeni gemcitabina i sredstva sa platinom.

3. 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamin, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili 2, naznačen time što se gemcitabin i sredstvo sa platinom primenjuju do 2 dana nakon primene 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, a gemcitabin se ponovo primenjuje do 7 dana kasnije.

4. 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamin, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačen time što primena gemcitabina i sredstva sa platinom prethodi primeni 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetilpropil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamina, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

5. 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamin, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevima 1-2, naznačen time što se gemcitabin i sredstvo sa platinom primenjuju istovremeno.

6. 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamin, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-5, naznačen time što je sredstvo sa platinom cisplatin.

7. 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamin, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-5, naznačen time što je sredstvo sa platinom karboplatin.

8. 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamin, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-7, naznačen time što ciklus tretmana traje 21 dan.

9. 5-[2-terc-butil-5-(4-fluoro-fenil)-1H-imidazol-4-il]-3-(2,2-dimetil-propil)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilamin, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-8, naznačen time što je farmaceutski prihvatljiva so dimetansulfonatna so.

Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5

1