RS57444B1 - Pirimidin fgfr4 inhibitori - Google Patents

Pirimidin fgfr4 inhibitori

Info

Publication number
RS57444B1
RS57444B1 RS20180834A RSP20180834A RS57444B1 RS 57444 B1 RS57444 B1 RS 57444B1 RS 20180834 A RS20180834 A RS 20180834A RS P20180834 A RSP20180834 A RS P20180834A RS 57444 B1 RS57444 B1 RS 57444B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
mmol
compound
methyl
phenyl
pyrimidin
Prior art date
Application number
RS20180834A
Other languages
English (en)
Inventor
Dominic Reynolds
Ming-Hong Hao
John Wang
Sudeep Prajapati
Takashi Satoh
Anand Selvaraj
Original Assignee
Eisai R&D Man Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Eisai R&D Man Co Ltd filed Critical Eisai R&D Man Co Ltd
Publication of RS57444B1 publication Critical patent/RS57444B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A61K9/0021—Intradermal administration, e.g. through microneedle arrays or needleless injectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C53/00—Saturated compounds having only one carboxyl group bound to an acyclic carbon atom or hydrogen
    • C07C53/15—Saturated compounds having only one carboxyl group bound to an acyclic carbon atom or hydrogen containing halogen
    • C07C53/16—Halogenated acetic acids
    • C07C53/18—Halogenated acetic acids containing fluorine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/48—Two nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)

Description

Opis
POZADINA PRONALASKA
[0001] Faktori rasta fibroblasta (FGF) su porodica od više od 20 strukturalno povezanih proteina sa različitim biološkim aktivnostima. Njihovi glavni receptori, receptori faktora rasta fibroblasta (FGFR1, FGFR2, FGFR3 i FGFR4), su porodica receptorskih tirozin kinaza koje vezuju FGF i uključeni su u procese proliferacije ćelija i diferencijacije. Deregulacija signalnih mreža FGFR je implicirana u nizu patofizioloških stanja, uključujući mnoge vrste kancera kod čoveka.
[0002] "Receptor faktora rasta fibroblasta 4" ili "FGFR4" je poznat da reguliše proliferaciju i antiapoptozu i eksprimiran je ili visoko eksprimiran u mnogim kancerima. Videti, npr. Dieci i sar. 2013, Cancer Discovery, 0F1-0F16. Istraživanja su pokazala da ekspresija FGFR4 predviđa agresivniji fenotip raka, i poništavanje ili smanjenje ekspresije FGFR4 služi za smanjenje proliferacije i promovisanje apoptoze. Videti npr., Wesche i sar. 2011, Biochem J 437:199-213.
[0003] Na primer, ekspresija ili prekomerna ekspresija FGFR4 je povezana sa agresivnošću kancera u raku stomaka (Ye i sar. 2011, Cancer, 5304-5313), raku prostate (Xu i sar. 2011, BMC Cancer, 11;84), sarkomu kao što je rabdomiosarkom (Tailor VI i sar.2009, J Clin Invest, 119(11):3395-3407), raku kože kao što je melanom (Streit i sar. 2006, British J Cancer, 94:1879-1886), raku jetre, kao što je holangiokarcinom (Sia i sar. 2013, Gastroenterology 144:829-840) i hepatocelularnom karcinomu (French i sar. 2012, PLoS ONE 7(5): e367313; Miura i sar. 2012, BMC Cancer 12:56; Chiang i sar. 2008, Cancer Res 68(16):6779-6788; Sawey i sar.2011, Cancer Cell 19:347-358), raku pankreasa kao što je pankreasna intraepitelna neoplazija i pankreasni duktalni adenokarcinom (Motoda i sar.2011, Int'l J Oncol 38:133-143), kanceru pluća, kao što je kancer pluća ne-malih ćelija (Fawdar i sar. 2013, PNAS 110(30):12426-12431), kolorektalnom karcinomu (Pelaez-Garcia i sar.2013, PLoS ONE 8(5): e63695; Barderas i sar.2012, J Proteomics 75:4647-4655), i kanceru jajnika (Zaid i sar.2013, Clin Cancer Res 19:809-820).
[0004] Klinički razvoj više inhibitora FGFR je potvrdio njihovu upotrebljivost kao antitumorskih sredstava. Dieci i sar. 2013, Cancer Discovery, 0F1-0F16. Međutim, potrebna su nova sredstva koja su naročito korisna za ciljanje FGFR, i FGFR4.
[0005] WO2014/149164 opisuje jedinjenja koja su korisna kao inhibitori MK2 kinaza. J. Med. Chem. 2011, 7066-7083 opisuje novu seriju N-aril-N''-pirimidin-4-il urea koje su selektivni inhibitori receptora tirozin kinaza receptora faktora rasta fibroblasta tirozin kinaza, uključujući jedinjenje NVP-BGJ398.
REZIME
[0006] Svrha predmetnog pronalaska je da obezbedi jedinjenje Formule I:
pri čemu:
R<3>je izabran iz grupe koja obuhvata: C1-6alkil, C1-6alkoksiC1-6alkil, NR<10>R<11>C1-6alkil, R<10>heterociklilC1-6alkil, R<10>arilC1-6alkil, i R<10>heteroarilC1-6alkil, pri čemu R<10>i R<11>su svaki nezavisno odabrani iz grupe koja obuhvata: vodonik i C1-6alkil;
E je izabran iz grupe koja obuhvata:
-NR<13>C(O)CR<14>=CHR<15>,
i
-NR<13>C(O)C≡CR<14>,
pri čemu R<13>je izabran iz grupe koja obuhvata: vodonik i metil, i R<14>i R<15>su svaki nezavisno odabrani iz grupe koja obuhvata: vodonik, metil, fluoro i hloro;
R<12>je izabran iz grupe koja obuhvata: vodonik, halo, C1-6alkil, C1-6alkoksi, hidroksiC1-6alkil, hidroksiC1-6alkoksiC1-6alkoksiC1-6alkoksi, C1-6alkoksiC1-6alkil, R<5>R<6>heterociklil, -C(O)heterociklilR<5>R<6>, R<5>R<6>heterociklilC1-6alkil, NR<5>R<6>, NR<5>R<6>C1-6alkil, -C(O)NR<5>R<6>, i NR<5>R<6>C1-6alkiloksi, pri čemu R<5>i R<6>su svaki nezavisno odabrani iz grupe koja obuhvata vodonik, C1-6alkil, hidroksiC1-6alkil, aminoC1-6alkil, -C(O)C1-6alkil i C1-6alkilsulfonil; i R<1>je fenil, pri čemu je pomenuti fenil supstituisan 2, 3, ili 4 puta sa nezavisno izabranim halo ili C1-6alkoksi,
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0007] U nekim realizacijama, R<3>je C1-6alkil.
[0008] U nekim realizacijama, R<3>je izabran iz grupe koja obuhvata: metil, metoksietil, 4-piridilmetil, 3-piridilmetil, 2-piridilmetil, benzil, N,N-dimetilaminopropil, 3-metilizoksazol-5-il-metil, i 4-metilpiperazin-1-il-propil.
[0009] U nekim realizacijama, E je -NR<13>C(O)CH=CHR<15>ili -NR<13>C(O)CF=CH2, pri čemu R<13>i R<15>su kako je gore definisano. U nekim realizacijama, E je -NHC(O)CH=CH2.
[0010] U nekim realizacijama, R<12>je izabran iz grupe koja obuhvata: vodonik, fluoro, hloro, metil, metoksi, N,N-dimetilaminoetil, piperazin-1-il, 4-etilpiperazin-1-il, 4-etilpiperazin-1-ilmetil, 1-metilpiperidin-4-il, 1-etilpiperidin-4-il, N,N-dimetilaminometil, N,N-dimetilaminopropil, piperidin-4-il, morfolino, 3,5-dimetilpiperazin-1-il, 4-(metilsulfonil)piperazin-1-il, N,N-dimetilaminoetoksi, 4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il, hidroksietoksi, metoksietoksi, hidroksimetil, metoksimetil, 2-metoksipropil, 2-hidroksipropil, 2-aminopropil,4-metilpiperazin-1-il-karbonil, 4-etilpiperazin-1-il-karbonil, 4-[2-propil]piperazin-1-il, 4-acetilpiperazin-1-il, N-metil-N-hidroksietil-amino, N,N-dimetilamido, i 4-(2-aminoetil)piperazin-1-il.
[0011] U nekim realizacijama, R<12>je izabran iz grupe koja obuhvata: vodonik, C1-6alkil, hidroksiC1-6alkil, R<5>R<6>heterociklil, R<5>R<6>heterociklilC1-6alkil, -C(O)NR<5>R<6>, NR<5>R<6>C1-6alkil, NR<5>R<6>C1-6alkiloksi, C1-6alkoksi, i C1-6alkoksiC1-6alkil, pri čemu R<5>i R<6>su svaki nezavisno odabrani iz grupe koja obuhvata: vodonik, C1-6alkil, hidroksiC1-6alkil, -C(O)C1-6alkil i C1-
6alkilsulfonil.
[0012] U nekim realizacijama, R<12>je R<5>R<6>heterociklil, pri čemu R<5>i R<6>su kako je gore definisano.
[0013] U nekim realizacijama, R<5>R<6>heterociklil je R<5>R<6>piperazinil, pri čemu R<5>i R<6>su kako je gore definisano.
[0014] U nekim realizacijama, R<12>je 4-etilpiperazin-1-il.
[0015] U nekim realizacijama, R<12>nije vodonik.
[0016] U nekim realizacijama, R<1>je 2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil.
[0017] U nekim realizacijama, jedinjenje je jedinjenje Formule I(a):
pri čemu R<3>, E, R<12>i R<1>su kako je gore definisano,
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0018] Dalja svrha pronalaska je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje ili so kao što je ovde opisano i farmaceutski prihvatljiv nosač. U nekim realizacijama, kompozicija je formulisana za oralnu ili parenteralnu primenu.
[0019] Sledeća svrha je jedinjenje ili so ili kompozicija kao što je ovde opisano za upotrebu u lečenju hepatocelularnog karcinoma. U nekim realizacijama, hepatocelularni karcinom je izmenio status FGFR4 i/ili FGF19 (npr., povećana ekspresija FGFR4 i/ili FGF19).
[0020] Predmetni opis dalje opisuje postupak za lečenje hepatocelularnog karcinoma kod subjekta kom je to potrebno, koji obuhvata: detektovanje izmenjenog statusa FGFR4 i/ili FGF19 (npr., povećana ekspresija FGFR4 i/ili FGF19) u biološkom uzorku koji sadrži ćelije navedenog hepatocelularnog karcinoma, te ako navedeni hepatocelularni karcinom ima pomenuti izmenjeni status FGFR4 i/ili FGF19, davanje jedinjenja ili preparata koji je ovde opisan navedenom subjektu u količini koja je efikasna za lečenje.
[0021] Predmetni opis dodatno opisuje upotrebu jedinjenja ili soli ili kompozicije kao što je ovde opisano u postupku lečenja hepatocelularnog karcinoma.
[0022] Predmetni opis dodatno opisuje upotrebu jedinjenja ili soli kao što je ovde opisano u pripremi leka za lečenje hepatocelularnog karcinoma.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0023]
FIG. 1 predstavlja rezultate testiranja in vivo efikasnosti modela hepatocelularnog karcinoma koristeći HUH7 ćelije. Jedinjenje 108 (25 mg/kg ili 37.5 mg/kg) ili Kontrola u vidu nosača se primenjuje putem intraperitonealne injekcije, i volumen tumora je meren dva puta nedeljno tokom 15 dana.
FIG. 2 predstavlja rezultate testiranja in vivo efikasnosti modela hepatocelularnog karcinoma koristeći HEP3B ćelije. Jedinjenje 108 (12.5 mg/kg, 25 mg/kg ili 37.5 mg/kg) ili Kontrola u vidu nosača se primenjuje putem intraperitonealne injekcije, i volumen tumora je meren dva puta nedeljno tokom 15 dana.
FIG. 3 predstavlja rezultate testiranja in vivo efikasnosti modela hepatocelularnog karcinoma koristeći JHH7 ćelije. Jedinjenje 108 (12.5 mg/kg, 25 mg/kg ili 37.5 mg/kg) ili Kontrola u vidu nosača se primenjuje putem intraperitonealne injekcije, i volumen tumora je meren dva puta nedeljno tokom 15 dana.
FIG. 4 predstavlja rezultate komparativnog testiranja in vivo efikasnosti modela hepatocelularnog karcinoma koristeći HEP3B ćelije. Jedinjenje 108 (25 mg/kg, 37.5 mg/kg ili 50 mg/kg) davano je dva puta dnevno putem intraperitonealne injekcije, ili je BGJ398 (30 mg/kg ili 60 mg/kg) davan oralno dva puta dnevno.
DETALJNI OPIS REALIZACIJA
[0024] Ovde data jedinjenja su korisna kao inhibitori FGFR4. U nekim realizacijama, jedinjenja su selektivni inhibitori FGFR4 u tome što imaju veći afinitet vezivanja i/ili inhibitorni efekat FGFR4 u poređenju sa onim od FGFR1 i/ili FGFR2 i/ili FGFR3 (npr., za 10 puta, 100 puta , ili 1000 puta veće ili više).
A. Definicije
[0025] Jedinjenja koja su korisna kao aktivni sastojci u skladu sa predmetnim pronalaskom uključuju ona opisana uopšteno iznad i ispod, i nadalje su ilustrovana sa ovde otkrivenim realizacijama, pod-varijantama, i vrstama. Kao što se ovde koristi, primenjuju se sledeće definicije, osim ako nije drugačije naznačeno.
[0026] Kao što je ovde opisano, jedinjenja iz ovog pronalaska mogu opciono biti supstituisana sa jednim ili više supstituenata, kao što su oni koji su ovde generalno ilustrovani, ili kao što je ilustrovano određenim klasama, podklasama i vrstama pronalaska. Generalno, termin "supstituisan" odnosi se na zamenu vodonika u datoj strukturi sa određenim supstituentom. Osim ako nije drugačije naznačeno, supstituisana grupa može imati supstituent na svakoj supstitutivnoj poziciji grupe, te kada više od jedne pozicije u bilo kojoj strukturi može biti zamenjeno sa više od jednog supstituenta izabranog iz određene grupe, supstituent može biti ili isti ili različit na svakoj poziciji. Kombinacije supstituenata koje su predviđene ovim pronalaskom su poželjno one koje rezultiraju stvaranjem stabilnih jedinjenja. "Stabilno", kao što se ovde koristi, odnosi se na hemijski izvodljivo jedinjenje koje se bitno ne menja kada se drži na temperaturi od 40 °C ili manje, u odsustvu vlage ili drugih hemijski reaktivnih uslova, najmanje nedelju dana.
[0027] Kao što bi razumeli stručnjaci u ovoj oblasti, kako se ovde koristi "H" je vodonik, "C" je ugljenik, "N" je azot, "S" je sumpor, i "O" je kiseonik.
[0028] "Alkil" ili "alkil grupa," kako se ovde koristi, znači ravni lanac (tj., neračvasti), ili račvasti ugljovodonični lanac koji je potpuno zasićen. U nekim realizacijama, alkil ima 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika. U određenim ostvarenjima, alkilne grupe sadrže 1-6 atoma ugljenika (C1-6alkil). U određenim ostvarenjima, alkilne grupe sadrže 1-4 atoma ugljenika (C1-4alkil). U određenim ostvarenjima, alkilne grupe sadrže 1-3 atoma ugljenika (C1-3alkil). U još nekim realizacijama, alkilne grupe sadrže 2-3 atoma ugljenika (C2-3alkil), i u nekim drugim izvođenjima alkilne grupe sadrže 1-2 atoma ugljenika (C1-2alkil).
[0029] "Alkenil" ili "alkenil grupa," kako se ovde koristi, se odnosi na ravan lanac (tj., neračvasti), ili račvasti ugljovodonični lanac koji ima jednu ili više dvostrukih veza. U nekim realizacijama, alkenil ima 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika. u određenim ostvarenjima, alkenil grupe sadrže 2-8 atoma ugljenika (C2-8alkil). u određenim ostvarenjima, alkenil grupe sadrže 2-6 atoma ugljenika (C2-6alkil). U još nekim drugim realizacijama, alkenil grupe sadrže 3-4 atoma ugljenika (C3-4alkil), i u još drugim ostvarenjima alkenil grupe sadrže 2-3 atoma ugljenika (C2-3alkil). Prema drugom aspektu, termin alkenil se odnosi na ugljovodonik sa ravnim lancima koji ima dve dvostruke veze, takođe nazvan "dien." Neograničavajući primeri alkenil grupa uključuju
-CH=CH2, -CH2CH=CH2, -CH=CHCH3, -CH2CH2CH=CH2,
-CH2CH=CHCH3, -CH=CHCH2CH3, i -CH=CHCHCH2.
[0030] "Alkinil" ili "alkinil grupa" kako se ovde koristi znači ravni lanac (tj., neračvasti), ili račvasti ugljovodonični lanac koji ima jednu ili više trostrukih veza. U nekim realizacijama, alkinil ima 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika. u određenim ostvarenjima, alkinil grupe sadrže 2-8 atoma ugljenika (C2-8alkinil). U određenim ostvarenjima, alkinil grupe sadrže 2-6 atoma ugljenika (C2-6alkinil). U još drugim realizacijama, alkinil grupe sadrže 3-4 atoma ugljenika (C3-4alkinil), i u nekim drugim realizacijama alkinil grupe sadrže 2-3 atoma ugljenika (C2-
3alkinil).
[0031] "Ar" ili "aril" označava aromatični karbociklični ostatak koji ima jedan ili više zatvorenih prstenova. Primeri uključuju, bez ograničenja, fenil, naftil, antracenil, fenantracenil, bifenil, i pirenil.
[0032] "Halo" se odnosi na hlor (CI), fluor (F), brom (Br) ili jod (I).
[0033] "Haloalkil " se odnosi na jednu ili više halo grupa koje su priključene na matični molekulski deo preko alkil grupe. Primeri obuhvataju, ali nisu ograničeni na, hlorometil, fluorometil, trifluorometil, itd.
[0034] "Heteroaril" se odnosi na cikličnu grupu koja ima jedan ili više zatvorenih prstenova, sa jednim ili više heteroatoma (kiseonik, azot ili sumpor) u najmanje jednom od prstenova, pri čemu je najmanje jedan od prstenova aromatičan i gde prsten ili prstenovi mogu nezavisno biti kondenzovani, i/ili premošćeni. Primeri uključuju, bez ograničenja, hinolinil, izohinolinil, indolil, furil, tienil, pirazolil, hinoksalinil, pirolil, indazolil, tieno[2,3-c]pirazolil, benzofuril, pirazolo[1,5-a]piridil, tiofenilpirazolil, benzotienil, benzotiazolil, tiazolil, 2-feniltiazolil, i izoksazolil.
[0035] "-OR" ili "oksi" se odnosi na R grupu priključenu na matični molekulski deo preko atoma kiseonika, pri čemu R je H, alkil, alkenil, alkinil, i slično.
[0036] "Alkoksi" se odnosi na alkil grupu, kao što je ovde definisano, vezanu za glavni ugljenikov lanac preko atoma kiseonika ("alkoksi") atoma. Reprezentativni primeri za "alkoksi" uključuju, ali nisu ograničeni na, metoksi, etoksi, propoksi, fenoksi, 2-propoksi, butoksi, terc-butoksi, pentiloksi, heksiloksi i slično.
[0037] "Hidroksi" se odnosi na -OH grupu.
[0038] "Karbonil" je grupa koja ima atom ugljenika vezan dvostrukom vezom za atom kiseonika (C=O), često se prikazuje u hemijskim formulama kao C(O).
[0039] "Acetil" je grupa -C(O)CH3.
[0040] "Amin" ili "amino" se odnosi na grupu -NH2, pri čemu nijedan, jedan ili dva vodonika mogu biti zamenjeni sa odgovarajućim supstituentom kako je ovde opisano, kao što je alkil, alkenil, alkinil, i slično.
[0041] "Amid" ili "amido" se odnosi na grupu koja ima karbonil vezan za atom azota, kao što je -C(O)NH2, pri čemu nijedan, jedan ili dva vodonika mogu biti zamenjeni sa odgovarajućim supstituentom kao je ovde opisano, kao što su alkil, alkenil , alkinil i slično.
[0042] "-SR" se odnosi na R grupu priključenu na matični molekulski deo preko atoma sumpora, pri čemu R je alkil, alkenil, alkinil, aril, cikloalkil, heterociklo, ili heteroaril. Reprezentativni primeri za "-SR" uključuju, ali nisu ograničeni na, etantiol, 3-metil-1-butanetiol, feniltiol i slično.
[0043] "Cikloalkil" kako se ovde koristi, se odnosi na zasićenu cikličnu ugljovodoničnu grupu koja sadrži od 3 do 8 atoma ugljenika ili više. Reprezentativni primeri cikloalkila uključuju, ali nisu ograničeni na, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, i ciklooktil.
[0044] "Cikloalkenil" kako se ovde koristi, se odnosi na nezasićenu cikličnu ugljovodoničnu grupu koja sadrži od 3 do 8 atoma ugljenika ili više i ima jednu ili više dvostrukih veza.
[0045] "Cikloalkinil" kako se ovde koristi, se odnosi na nezasićenu cikličnu ugljovodoničnu grupu koja sadrži od 3 do 8 atoma ugljenika ili više i ima jednu ili više trostrukih veza.
[0046] "Elektrofil" kako se ovde koristi odnosi se na grupu koja ima smanjenu gustinu elektrona, obično sadrži atom ugljenika koji je direktno vezan za elektronegativniji atom, kao što je kiseonik, azot ili halo. Primeri elektrofila obuhvataju, ali nisu ograničeni na, diazometan, trimetilsilildiazometan, alkil halide, kao što je na primer metil jodid, benzil bromide i slično, alkil triflate, kao što je na primer metil triflat i slično, alkil sulfonati, kao što je na primer etil toluensulfonat, butil metansulfonat i slično, acil halidi, kao što je na primer acetil hlorid, benzoil bromid i slično, anhidridi kiselina, kao što je na primer anhidrid sirćetne kiseline, sukcinski anhidrid, maleinski anhidrid i slično, izocijanati, kao što je na primer metil izocijanat, fenil izocijanat i slično, izotiocijanate, kao što je na primer metil izotiocijanat, fenil izotiocijanat i slično, hloroformate, kao što je na primer metil hloroformat, etil hloroformat, benzil hloroformat i slično, sulfonil halidi, kao što je na primer metansulfonil hlorid, metansulfonil fluorid, p-toluensulfonil hlorid i slično, silil halidi, kao što je na primer trimetilsilil hlorid, terc-butildimetilsilil hlorid i slično, fosforil halidi kao što je na primer dimetil hlorofosfat i slično, epoksidi kao što je na primer 2-metiloksirane, aziridini kao što je na primer 2-metilaziridin, alfa-haloketon kao što je na primer 1-hloro-2-propanon, alfa-betanezasićena karbonilna jedinjenja kao što je na primer akrolein, metil vinil keton, cinamaldehid, N,N-dimetilakrilamid i slično, i gama-halo-alfa-beta-nezasićena karbonilna jedinjenja kao što je na primer (E)-6-hloroheks-4-en-3-on, U nekim realizacijama, elektrofili su alfa-haloketoni, izotiocijanati, epoksidi, aziridini, sulfonil halidi, ili alfa-beta-nezasićeni karbonili.
[0047] U nekim realizacijama, elektrofil je Majklov akceptor. Kao što je poznato u struci, "Majklov akceptor" je alken ili alkin oblika
1
Z; pri čemu Z sadrži grupu koja privlači elektrone, uključujući, ali ne ograničavajući se na, CHO, COR, COOR, CONRR', CONROR', CN, NO2, SOR, SO2R. R može biti H, alkil, ili aril; pri čemu R' je alkil, alkenil, alkoksi ili aril. U drugoj realizaciji, azodikarboksamidi i hinoni su Majklovi akceptori. Videti, Santos, M.M.M. i Moreira, R., Mini-Reviews in Medicinal Chemistry, 7:1040-1050,2007. Primer Majklove reakcije prikazan je u sledećoj šemi:
Majklov akceptor Majklov donor
pri čemu grupe za povlačenje elektrona Z, Z' i Z" su kao što je opisano gore. U nekim realizacijama, Majklovi akceptori su alfa-beta-nezasićena karbonilna jedinjenja uključujući, ali bez ograničenja na, alfa-beta-nezasićene amide, alfa-beta-nezasićene ketone, alfa-betanezasićene estre, konjugovane alkinil karbonile i alfa-beta-nezasićene nitrile.
[0048] "Alfa-beta-nezasićeni amid" ili "nezasićeni amid" kako se ovde koristi označava amid koji sadrži alken ili alkin vezan direktno na amid karbonilnu grupu i predstavljen je sa strukturom
pri čemu R' je vodonik ili alkil.
[0049] "Heteroatom" označava O, S ili N.
[0050] "Heterocikl" ili "heterociklil" kako se ovde koristi, označava monociklični heterocikl, biciklični heterocikl, ili triciklični heterocikl koji sadrži najmanje jedan heteroatom u prstenu.
[0051] Monociklični heterocikl je 3-, 4-, 5-, 6-, 7, ili 8-člani prsten koji sadrži najmanje jedan heteroatom koji se nezavisno bira iz grupe koja obuhvata O, N, i S. U nekim realizacijama, heterocikl je 3- ili 4-člani prsten koji sadrži jedan heteroatom koji se bira iz grupe koja obuhvata O, N i S. U nekim realizacijama, heterocikl je 5-člani prsten koji sadrži nula ili jednu dvostruku vezu i jedan, dva ili tri heteroatoma izabrana iz grupe koja obuhvata O, N i S. U nekim realizacijama, heterocikl je 6-, 7-, ili 8-člani prsten koji sadrži nula, jednu ili dve dvostruke veze i jedan, dva ili tri heteroatoma koji se biraju iz grupe koja obuhvata O, N i S. Reprezentativni primeri monocikličnog heterocikla obuhvataju, ali nisu ograničeni na, azetidinil, azepanil, aziridinil, diazepanil, 1,3-dioksanil, 1,3-dioksolanil, dihidropiranil (uključujući 3,4-dihidro-2H-piran-6-il), 1,3-ditiolanil, 1,3-ditianil, imidazolinil, imidazolidinil, izotiazolinil, izotiazolidinil, izoksazolinil, izoksazolidinil, morfolinil, oksadiazolinil, oksadiazolidinil, oksazolinil, oksazolidinil, piperazinil, piperidinil, piranil, pirazolinil, pirazolidinil, pirolinil, pirolidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidropiranil (uključujući tetrahidro-2H-piran-4-il), tetrahidrotienil, tiadiazolinil, tiadiazolidinil, tiazolinil, tiazolidinil, tiomorfolinil, 1,1-dioksidotiomorfolinil (tiomorfolin sulfon), tiopiranil, i tritianil.
[0052] Biciklični heterocikli prema prikazanom pronalasku mogu biti ilustrovani sa monocikličnim heterociklom fuzionisanim na arilnu grupu, monocikličnim heterociklom fuzionisanim na monociklični cikloalkil, ili monocikličnim heterociklom fuzionisanim na monociklični cikloalkenil, ili monocikličnim heterociklom fuzionisanim na monociklični heterocikl. Reprezentativni primeri bicikličnih heterocikla obuhvataju, ali nisu ograničeni na, 3,4-dihidro-2H-piranil, 1,3-benzodioksolil, 1,3-benzoditiolil, 2,3-dihidro-1,4-benzodioksinil, 2,3-dihidro-1-benzofuranil, 2,3-dihidro-1-benzotienil, 2,3-dihidro-1H-indolil, 3,4-dihidrohinolin-2(1H)-on i 1,2,3,4-tetrahidrohinolinil.
[0053] Triciklični heterocikl je biciklični heterocikl fuzionisan na arilnu grupu, ili biciklični heterocikl fuzionisan na monociklični cikloalkil, ili biciklični heterocikl fuzionisan na monociklični cikloalkenil, ili biciklični heterocikl fuzionisan na monociklični heterocikl. Reprezentativni primeri tricikličnih heterocikla obuhvataju, ali nisu ograničeni na, 2,3,4,4a,9,9a-heksahidro-1H-karbazolil, 5a,6,7,8,9,9a-heksahidrodibenzo[b,d]furanil, i 5a,6,7,8,9,9a-heksahidrodibenzo[b, d]tienil.
[0054] U gornjim heteroarilima i heterociklima atomi azota ili sumpora mogu biti opciono oksidovani u različita oksidaciona stanja. U konkretnom primeru, grupa S(O)0-2označava redom -S-(sulfid), -S(O)- (sulfoksid), i -SO2- (sulfon). Radi praktičnosti, azoti, naročito ali ne isključivo, oni koji su definisani kao prstenasti aromatični azoti, treba da uključuju one koji odgovaraju N-oksidnim oblicima.
[0055] "Farmaceutski prihvatljiva so" kako se ovde koristi označava kisele adicione soli ili bazne adicione soli od jedinjenja u predmetnom opisu. Farmaceutski prihvatljiva so je bilo koja so koja zadržava aktivnost matičnog jedinjenja i ne daje nikakav neujednačen štetni ili neželjeni efekat na subjekta kome se primenjuje i u kontekstu u kojem se primenjuje. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju, ali nisu ograničene na, metalne komplekse i soli i neorganskih i karboksilnih kiselina. Farmaceutski prihvatljive soli takođe uključuju metalne soli kao što su kao što je soli kompleksa aluminijum, kalcijum, gvožđe, magnezijum, mangan. Pored toga, farmaceutski prihvatljive soli obuhvataju, ali nisu ograničene na, kisele soli kao što su sirćetna, asparaginska, alkilsulfonska, arilsulfonska, aksetilna, benzensulfonska, benzojeva, bikarbonska, bisumporna, bitartarna, buterna, kalcijum edetat, kamsilatna, ugljena, hlorobenzojeva, limunska, edetska, edisilna, estolna, esilična, esilna, mravlja, fumarna, gluceptička, glukonska, glutamična, glkolna, glikolilarsanilinska, heksamska, heksilresorcinska, hidrabamska, bromovodonična, hlorovodonična, jodovodonična, hidroksinaftoeva, izetionska, mlečna, laktobionska, maleinska, jabučna, malonska, bademova, metansulfonska, metilazotna, metilsumporna, sluzna, mukonska, napsilna, azotna, oksalna, pnitrometansulfonska, pamoična, pantotenska, fosforna, monohidrogen fosforna, dihidrogen fosforna, ftalna, poligalaktouronska, propionska, salicilna, stearinska, ćilibarna, sulfamska, sulfanilna, sulfonska, sumporna, taninska, vinska, teoklinska, toluensulfonska, i slično. Farmaceutski prihvatljive soli mogu biti izvedene iz amino kiselina uključujući, ali ne ograničavajući se na, cistein. Metode za proizvodnju jedinjenja u vidu soli poznate su stručnjacima iz ove oblasti (videti npr., Stahl i sar., Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, Wiley-VCH; Verlag Helvetica Chimica Acta, Zurich, 2002; Berge i sar., J. Pharm. Sci.66: 1, 1977).
[0056] Ukoliko nije drugačije navedeno, nomenklatura korištena za opisivanje hemijskih grupa ili delova kako se ovde koristi prati konvenciju gde, čitanje imena sa leva na desno, pozicija vezivanja za ostatak molekula je na desnoj strani od imena. Na primer, grupa "arilC1-6alkil" se vezuje za ostatak molekula na alkilnom kraju.
[0057] Ukoliko nije drugačije navedeno, gde je hemijska grupa opisana pomoću njene hemijske formule, uključujući grupu terminalne veze označenu sa "-," podrazumeva se da se veza čita sa leva na desno. Na primer, -C(O)C1-6alkil je vezan za ostatak molekula na karbonilnom kraju.
[0058] Ukoliko nije drugačije navedeno, ovde opisane strukture treba takođe da obuhvate sve enantiomerne, dijastereomerne i geometrijske (ili konformacione) oblike struktura; na primer, R i S konfiguracije za svaki asimetrični centar, (Z) i (E) duple veze izomera, i (Z) i (E)
1
konformacione izomere. Prema tome, jedinstveni stereohemijski izomeri kao i enantiomerne, dijastereomerne i geometrijske (ili konformacione) smeše predmetnih jedinjenja su u okviru pronalaska. Ukoliko nije drugačije navedeno, svi tautomerni oblici jedinjenja prema pronalasku su u okviru pronalaska. Osim toga, ukoliko nije drugačije navedeno, svi rotamerski oblici jedinjenja prema pronalasku su u okviru pronalaska. Osim ako nije drugačije naznačeno, ovde prikazane strukture takođe imaju za cilj uključivanje jedinjenja koja se razlikuju samo u prisustvu jednog ili više izotopski obogaćenih atoma. Na primer, jedinjenja koja imaju sadašnje strukture, osim zamene vodonika sa deuterijumom ili tritijumom, ili zamena ugljenika sa<13>C-ili<14>C-obogaćenim ugljenikom su u okviru ovog pronalaska. Takva jedinjenja su korisna, na primer, kao analitički alati ili sonde u biološkim testovima.
[0059] "Izomeri" označavaju jedinjenja koja imaju isti broj i vrstu atoma i stoga istu molekulsku težinu, ali se razlikuju u odnosu na raspored ili konfiguraciju atoma. Međutim, biće shvaćeno da neki izomeri ili racemati ili druge smeše izomera mogu imati više aktivnosti od drugih. ""Stereoizomeri" se odnose na izomere koji se razlikuju samo u rasporedu atoma u prostoru. "Dijastereoizomeri" se odnose na stereoizomere koji nisu međusobne slike u ogledalu. "Enantiomeri" se odnose na stereoizomere koji su međusobne nepreklapajuće slike u ogledalu.
[0060] U nekim realizacijama, enantiomerna jedinjenja o kojima se ovde poučava mogu biti "enantiomerno čisti" izomeri koji sadrže uglavnom pojedinačni enantiomer, na primer, veći od ili jednak 90%, 92%, 95%, 98%, ili 99%, ili jednak 100% pojedinačnog enantiomera.
[0061] U nekim realizacijama, enantiomerna jedinjenja o kojima se ovde poučava mogu biti stereomerno čista. "Stereomerno čist" kako se ovde koristi znači jedinjenje ili njegova kompozicija koja sadrži jedan stereoizomer jedinjenja i u suštini je bez drugih stereoizomera tog jedinjenja. Na primer, stereomerno čista kompozicija jedinjenja koje ima jedan hiralni centar bit će u suštini bez suprotnog enantiomera tog jedinjenja. stereomerno čista kompozicija jedinjenja koje ima dva hiralna centra biće u suštini bez dijastereomera, i u suštini bez suprotnog enantiomera, tog jedinjenja. Tipično stereomerno čisto jedinjenje sadrži više od oko 80 masenih % jednog stereoizomera jedinjenja i manje od oko 20 masenih % drugih stereoizomera jedinjenja, poželjnije više od oko 90 masenih % jednog stereoizomera jedinjenja i manje od oko 10 masenih % drugih stereoizomera jedinjenja, čak poželjnije više od oko 95 masenih % jednog stereoizomera jedinjenja i manje od oko 5 masenih % drugih stereoizomera jedinjenja, i najpoželjnije više od oko 97 masenih % jednog stereoizomera jedinjenja i manje od oko 3 masenih % drugih stereoizomera jedinjenja. Videti npr., US Patent No.7,189,715.
[0062] "R" i "S" kao termini opisuju izomere koji su deskriptori stereohemijske konfiguracije kod jednog asimetrično supstituisanog atoma ugljenika. Označavanje asimetrično supstituisanog ugljenikovog atoma kao "R" ili "S" vrši se primenom pravila prioriteta Cahn-Ingold-Prelog, koja su dobro poznata stručnjacima i opisana su u Pravilima nomenklature organske hemije međunarodne unije za čistu i primenjenu hemiju (IUPAC). Deo E, Stereohemija.
[0063] "Enantiomerni višak" (ee) enantiomera je [(molska frakcija glavnog enantiomera) minus (molska frakcija sporednog enantiomera)] x 100.
B. Jedinjenja
[0064] Kao aktivni agensi u skladu sa nekim izvođenjima ovde je dato jedinjenje sa Formulom I:
pri čemu:
R<3>je izabran iz grupe koja obuhvata: C1-6alkil, C1-6alkoksiC1-6alkil, NR<10>R<11>C1-6alkil, R<10>heterociklilC1-6alkil, R<10>arilC1-6alkil, i R<10>heteroarilC1-6alkil, pri čemu R<10>i R<11>su svaki nezavisno odabrani iz grupe koja obuhvata: vodonik i C1-6alkil;
E je izabran iz grupe koja obuhvata:
-NR<13>C(O)CR<14>=CHR<15>,
i
-NR<13>C(O)O≡CR<14>,
pri čemu R<13>je izabran iz grupe koja obuhvata: vodonik i metil, i R<14>i R<15>su svaki nezavisno odabrani iz grupe koja obuhvata: vodonik, metil, fluor i hlor;
R<12>je izabran iz grupe koja obuhvata: vodonik, halo, C1-6alkil, C1-6alkoksi, hidroksiC1-6alkil, hidroksiC1-6alkoksi,C1-6alkoksiC1-6alkoksi, C1-6alkoksiC1-6alkil, R<5>R<6>heterociklil, -
1
C(O)heterociklilR<5>R<6>, R<S>R<6>heterociklilC1-6alkil, NR<5>R<6>, NR<5>R<6>C1-6alkil, -C(O)NR<5>R<6>, i NR<5>R<6>C1-6alkiloksi, pri čemu R<5>i R<6>su svaki nezavisno odabrani iz grupe koja obuhvata vodonik, C1-6alkil, hidroksiC1-6alkil, aminoC1-6alkil, -C(O)C1-6alkil i C1-6alkilsulfonil; i R<1>je fenil, pri čemu je pomenuti fenil supstituisan 2, 3, ili 4 puta sa nezavisno izabranim halo ili C1-6alkoksi,
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0065] U nekim realizacijama, R<3>je C1-6alkil.
[0066] U nekim realizacijama, R<3>je izabran iz grupe koja obuhvata: metil, metoksietil, 4-piridilmetil, 3-piridilmetil, 2-piridilmetil, benzil, N,N-dimetilaminopropil, 3-metilizoksazol-5-il-metil, i 4-metilpiperazin-1-il-propil.
[0067] U nekim realizacijama, E je -NR<13>C(O)CH=CHR<15>ili -NR<13>C(O)CF=CH2, pri čemu R<13>i R<15>su kako je gore definisano. U nekim realizacijama, E je -NHC(O)CH=CH2.
[0068] U nekim realizacijama, R<12>je izabran iz grupe koja obuhvata: vodonik, fluoro, hloro, metil, metoksi, N,N-dimetilaminoetil, piperazin-1-il, 4-etilpiperazin-1-il, 4-etilpiperazin-1-ilmetil, 1-metilpiperidin-4-il, 1-etilpiperidin-4-il, N,N-dimetilaminometil, N,N-dimetilaminopropil, piperidin-4-il, morfolino, 3,5-dimetilpiperazin-1-il, 4-(metilsulfonil)piperazin-1-il, N,N-dimetilaminoetoksi, 4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il, hidroksietoksi, metoksietoksi, hidroksimetil, metoksimetil, 2-metoksipropil, 2-hidroksipropil, 2-aminopropil,4-metilpiperazin-1-il-karbonil, 4-etilpiperazin-1-il-karbonil, 4-[2-propil]piperazin-1-il, 4-acetilpiperazin-1-il, N-metil-N-hidroksietil-amino, N,N-dimetilamido, i 4-(2-aminoetil)piperazin-1-il.
[0069] U nekim realizacijama, R<12>je izabran iz grupe koja obuhvata: vodonik, C1-6alkil, hidroksiC1-6alkil, R<5>R<6>heterociklil, R<5>R<6>heterociklilC1-6alkil, -C(O)NR<5>R<6>, NR<5>R<6>C1-6alkil, NR<5>R<6>C1-6alkiloksi, C1-6alkoksi, i C1-6alkoksiC1-6alkil, pri čemu su R<5>i R<6>svaki nezavisno odabrani iz grupe koja obuhvata: vodonik, C1-6alkil, hidroksiC1-6alkil, -C(O)C1-6alkil i C1-
6alkilsulfonil.
1
[0070] U nekim realizacijama, R<12>je R<5>R<6>heterociklil, pri čemu R<5>i R<6>su kako je gore definisano.
[0071] U nekim realizacijama, R<5>R<6>heterociklil je R<5>R<6>piperazinil, pri čemu R<5>i R<6>su kako je gore definisano.
[0072] U nekim realizacijama, R<12>je 4-etilpiperazin-1-il.
[0073] U nekim realizacijama, R<12>nije vodonik.
[0074] U nekim realizacijama, R<1>je 2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil.
[0075] U nekim realizacijama, jedinjenje je jedinjenje formule I(a):
pri čemu R<3>, E, R<12>i R<1>su kako je gore definisano,
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
C. Farmaceutske formulacije
[0076] Aktivni agensi prema ovom pronalasku mogu se kombinovati sa farmaceutski prihvatljivim nosačem da bi se obezbedile njihove farmaceutske formulacije. Poseban izbor nosača i formulacije će zavisiti od određenog načina primene za koji je kompozicija namenjena.
[0077] "Farmaceutski prihvatljiv nosač" kako se ovde koristi odnosi se na netoksični nosač, adjuvant, ili vehikul koji ne poništava farmakološku aktivnost jedinjenja sa kojim se formuliše. Farmaceutski prihvatljivi nosači, adjuvansi ili vehikuli koji se mogu koristiti u kompozicijama iz ovog pronalaska uključuju, ali nisu ograničeni na, sorbinsku kiselinu, kalijum sorbat, delimične glicerinske smeše zasićenih biljnih masnih kiselina, vodu, soli ili elektrolite, dinatrijum hidrogenfosfat, kalijum hidrogenfosfat, natrijum hlorid, soli cinka, koloidni silicijum dioksid, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, supstance na bazi celuloze,
1
polietilen glikol, natrijum karboksimetilcelulozu, poliakrilate, voskove, polietilen glikol i lanolin.
[0078] Kompozicije prema ovom pronalasku mogu biti pogodne za parenteralnu, oralnu, inhalacionu primenu, sprej primenu, za topikalnu, rektalnu, nazalnu, bukalnu, vaginalnu ili implantiranu rezervoarsku primenu, itd. U nekim realizacijama, formulacija sadrži sastojke koji su iz prirodnih ili ne-prirodnih izvora. U nekim realizacijama, formulacija ili nosač mogu biti priređeni u sterilnom obliku. Neograničavajući primeri sterilnog nosača obuhvataju vodu bez endotoksina ili vodu bez pirogena.
[0079] Termin "parenteralno" kako se ovde koristi obuhvata subkutane, intravenozne, intramuskularne, intra-artikularne, intra-sinovijalne, intrasternalne, intratekalne, intrahepatične, intralezionalne i intrakranijalne injekcije ili infuzione tehnike. U konkretnim izvođenjima, jedinjenja se daju intravenozno, oralno, subkutano ili intramuskularnim davanjem. Sterilni injektabilni oblici kompozicija iz ovog pronalaska mogu biti vodena ili uljana suspenzija. Ove suspenzije mogu biti formulisane prema postupcima koji su poznati u stanju tehnike korišćenjem pogodnih sredstava za dispergovanje ili vlaženje i suspendujućih sredstava. Sterilni preparat za injektiranje može takođe biti sterilni injekcioni rastvor ili suspenzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču. Među prihvatljivim nosačima i rastvaračima koji se mogu koristiti su voda, Ringerov rastvor i izotonični rastvor natrijum hlorida. Pored toga, kao rastvarač ili sredstvo za suspendovanje konvencionalno se koriste sterilna, fiksirana ulja.
[0080] Za ovu svrhu, bilo koje blago fiksirano ulje može se koristiti uključujući sintetičke mono- ili digliceride. Masne kiseline i njihovi derivati glicerida su korisni za pripremu injektibilnih materija, kao što su prirodna farmaceutski prihvatljiva ulja, kao što su maslinovo ulje ili ricinusovo ulje, naročito u njihovim polioksietilovanim verzijama. Ovi rastvori ili suspenzije ulja mogu takođe sadržati dugolančani alkoholni razblaživač ili sredstvo za dispergiranje, kao što je karboksimetil celuloza ili slična sredstva za dispergiranje koja se obično koriste za formulaciju farmaceutski prihvatljivih doznih oblika uključujući emulzije i suspenzije. Ostali uobičajeno korišćeni površinski aktivni sastojci, kao što su Tweens, Spans i drugi emulgatori koji se obično koriste u proizvodnji farmaceutski prihvatljivih čvrstih, tečnih ili drugih doznih oblika, takođe mogu biti korišćeni u svrhu formulacije.
1
[0081] Za oralnu primenu, jedinjenje ili so mogu biti obezbeđeni u prihvatljivom oralnom doznom obliku, uključujući, ali ne ograničavajući se, na kapsule, tablete, vodene suspenzije ili rastvore. U slučaju tableta za oralnu upotrebu, najčešće korišćeni nosači uključuju laktozu i kukuruzni skrob. Takođe se mogu dodati sredstva za podmazivanje kao što je magnezijum stearat. Za oralnu primenu u obliku kapsule korisni razblaživači uključuju laktozu i sušeni kukuruzni skrob. Kada su potrebne vodene suspenzije za oralnu upotrebu, aktivni sastojak se može kombinovati sa emulgirajućim i suspendujućim agensima. Ako je potrebno, mogu se dodati i određeni agensi za zaslađivanje. Osim toga, mogu se takođe dodati konzervansi. Pogodni primeri farmaceutski prihvatljivih konzervansa obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, različite antibakterijske i antifungalne agense kao što su rastvarači, na primer etanol, propilen glikol, benzil alkohol, hlorobutanol, kvaternarne soli amonijuma i parabeni (kao što su metil paraben, etil paraben, propil paraben, itd.).
D. Predmeti i metode upotrebe
[0082] Aktivni agensi iz ovog pronalaska mogu se koristiti za lečenje hepatocelularnog karcinoma.
[0083] "Tretman", "tretirati" i "tretiranje" odnose na vraćanje, ublažavanje, odlaganje pojave, inhibiciju napredovanja, ili na drugi način ublažavanje bolesti ili poremećaja kao što je ovde opisano. U nekim realizacijama, tretman se može davati nakon što se razvije jedan ili više simptoma. U drugim realizacijama, lečenje se može davati u odsustvu simptoma. Na primer, tretman se može primenjivati na osetljivog pojedinca pre nastanka simptoma (npr., u svetlu istorije simptoma i/ili u svetlu genetskih ili drugih faktora osetljivosti). Tretman se takođe može nastaviti nakon što su simptomi rešeni, na primer kako bi se sprečilo ili odložilo njihovo ponavljanje.
[0084] "Pacijent" ili "subjekt" kako se ovde koristi, označava životinjski subjekt, poželjno sisara, a posebno humane subjekte (uključujući i muške i ženske subjekte, uključujući i novorođenče, maloletnike, adolescente, odrasle i stare subjekte). Subjekti za laboratorijske ili veterinarske svrhe mogu takođe uključivati i druge subjekte sisara (npr. pas, mačka, konj, krava, ovca, koza, majmun, ptica, itd.).
1
[0085] U nekim izvođenjima, tretman se primenjuje na subjekta koji boluje od hepatocelularnog karcinoma sa izmenjenim statusom FGFR4 i/ili FGF19 (faktor rasta fibroblasta 19).
[0086] U nekim realizacijama, tretman može uključiti ili može se obaviti zajedno sa analizom statusa FGFR4 i/ili FGF19 u biološkom uzorku koji sadrži ćelije pomenutog hepatocelularnog karcinoma, a ukoliko pomenuti hepatocelularni karcinom pokazuje promenu FGFR4 i/ili FGF19, tretiranje subjekta sa efikasnom količinom aktivnog agensa kao što je ovde opisano.
[0087] "Izmenjen status" kako se ovde koristi sa pozivanjem na FGFR4 i/ili FGF19 uključuje njihovu povećanu ekspresiju (npr., povećane nivoe mRNA ili povećane nivoe proteina), povećan broj kopija u genomu, i/ili povećanu aktivnost kodiranog proteina kao rezultat mutacije, itd., u poređenju sa odgovarajućim ne-kanceroznim tkivom. U nekim realizacijama, izmenjeni status FGFR4 i/ili FGF19 uključuje genske i/ili kodirane proteinske mutacije koje rezultuju povećanjem aktivnosti ili su drugačije povezane sa agresivnijim oblicima hepatocelularnog karcinoma.
[0088] "Ekspresija" FGFR4 i/ili FGF19 znači da gen koji kodira iste je transkribovan, i poželjno, preveden. Tipično, ekspresija regiona kodiranja rezultiraće proizvodnjom kodiranog polipeptida.
[0089] FGFR4 i FGF19 proteini su poznati, a njihov izmenjeni status i/ili ekspresija može se meriti korišćenjem standardnih tehnika poznatih u stanju tehnike, npr., genomskom analizom mutacija ili broja kopija aberacija kao što je amplifikacijom nukleinske kiseline, analizom sekvenciranja, i/ili tehnikama zasnovanim na hibridizaciji, analiza ekspresije RNK kao što je northern blot ili qRT-PCR, western blot ili drugim imunoblot ili imunološkim testovima, fluorescentno aktiviranim sortiranjem ćelija (FACS), itd.
[0090] Da bi se ovde opisan pronalazak mogao bolje razumeti, navedeni su sledeći primeri. Treba shvatiti da su ovi primeri dati samo u ilustrativne svrhe i da se ne mogu tumačiti kao ograničavajući.
2
PRIMERI
Opšte:
[0091] Mikrotalasno grejanje je izvršeno pomoću uređaja Biotage Emrys Liberator ili inicijator mikrotalasne. Kolonska hromatografija izvedena je pomoću uređaja Isco Rf200d. Uklanjanje rastvarača vršeno je korišćenjem rotacionog isparivača Büchi ili centrifugalnog isparivača Genevac. Preparativna LC/MS je sprovedena korišćenjem Waters auto-prečišćavaća i kolone 19 x 100mm XTerra 5 micron MS C18 pod kiselim uslovima mobilne faze. NMR spektri su snimljeni korišćenjem spektrometra Varian 400MHz.
[0092] Kada se koristi termin "inertni" da se opiše reaktor (npr., reakcioni sud, balon, stakleni reaktor, i slično) podrazumeva se da je vazduh u reaktoru zamenjen sa gasom koji je u suštinu bez vlage ili sivim, inertnim gasom (kao što je azot, argon, i slično).
[0093] Opšti postupci i eksperimenti za pripremu jedinjenja iz ovog pronalaska su navedeni u nastavku. U određenim slučajevima, određeno jedinjenje se opisuje pomoću primera. Međutim, podrazumeva se da su u svakom slučaju nizovi jedinjenja prema ovom pronalasku pripremljeni u skladu sa šemama i eksperimentima opisanim u nastavku.
Priprema HPLC uslova za prečišćavanje ciljanih jedinjenja
Uslovi hromatografije:
[0094]
Instrument: Waters 2767-SQD Mass trigger Prep System
Kolona : Waters Xbridge C18150mm*19mm*5µm
Detektor: VWD SQD
Protok : 15 mL/min
Vreme gradijenta:
Reprezentativna mobilna faza:
[0095]
1)
Mobilna faza: A: 0.1%TFA u vodi
Mobilna faza: B: ACN
2)
Mobilna faza: A: 0.1%NH4HCO3u vodi
Mobilna faza: B: ACN
3)
Mobilna faza: A: 0.1%NH4OAc u vodi
Mobilna faza: B: ACN
4)
Mobilna faza: A: 0.1%NH4OH u vodi
Mobilna faza: B: ACN
Definicije: Sledeće skraćenice imaju naznačeno značenje:
ACN: Acetonitril
Boc2O: Di-terc-butil dikarbonat
Brettphos: 2-(Dicikloheksilfosfino)-3,6-dimetoksi-2'4',6'-triizopropil-1,1'-bifenil tBuONa: Natrijum terc-butoksid
CH3I: Jodometan
Cs2CO3: Cezijum karbonat
DCC: N,N'-dicikloheksilkarbodiimid
DCM: Dihlorometan
DIEA: N,N-diizopropiletilamin
DIPEA: N,N-diizopropiletilamin
DMAP: 4-(Dimetilamino)piridin
DME: Dimetil etar
DMF: Dimetilformamid
DMSO: Dimetil sulfoksid
EGTA: Etilen glikol tetrasirćetna kiselina
ESI-MS: Elektrosprejska jonizacija - masena spektrometrija
EtOH: Etanol
HATU: 1-[Bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-trizolo[4,5-b]piridinijum3-oksid heksafluorofosfat
H2SO4: Sumporna kiselina
iPrOH: Izopropanol
K2CO3: Kalijum karbonat
KHMDS: Kalijum bis(trimetilsilil)amid
KOH: Kalijum hidroksid
LCMS: Tečna hromatografija - masena spektrometrija
MeOH: Metanol
MsCl: Metansulfonil hlorid
NaBH3CN: Natrijum cijanoborohidrid
NaBH(OAc)3: Natrijum triacetoksiborohidrid
NH4Cl: Amonijum hlorid
NH4HCO3: Amonijum bikarbonat
NaI: Natrijum jodid
NaNO3: Natrijum nitrat
NaOAc: Natrijum acetat
nBuOH: n-Butanol
prep-HPLC: preparativna tečna hromatografija visokih performansi
prep-TLC: preparativna tankoslojna hromatografija
TBAF: Tetrabutilamonijum fluorid
TBDMS-CL: terc-Butildimetilsilil hlorid
TBSCl: terc-Butildimetilsilil hlorid
TBSOTf: terc-Butildimetilsilil trifluorometansulfonat
TEA: Trietilamin
TESCl: Hlorotrietilsilan
TFA: trifluorosirćetna kiselina
THF: Tetrahidrofuran
Ti(O<i>Pr)4: Titanijum izopropoksid
TLC: tankoslojna hromatografija
PPTS: Piridinijum p-toluensulfonat
PE: Petroleum etar
PEG: Poli(etilen glikol)
2
PtO2: platina dioksid
EtOAc: Etil acetat
Pd/C: Paladijum (0) na ugljeniku
Pd2(dba)3: Tris(dibenzilidenaceton) dipaladijum(0)
Pd(dppf)2Cl2: [1,1'-Bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II)
Ruphos: 2-Dicikloheksilfosfino-2',6'-diizopropoksibifenil
Xantphos: 4,5-Bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilksanten
Materijali: Sledeća jedinjenja su komercijalno dostupna i/ili mogu biti pripremljena na različite načine dobro poznate stručnjaku u oblasti organske sinteze. Preciznije, otkrivena jedinjenja mogu biti pripremljena korišćenjem ovde opisanih reakcija i tehnika. U opisu sintetičkih postupaka opisanih u daljem tekstu, treba shvatiti da se svi predloženi reakcioni uslovi, uključujući izbor rastvarača, reakcionu atmosferu, temperaturu reakcije, trajanje eksperimenta i proceduru obrade, mogu izabrati da budu uslovi koji su standard za tu reakciju, osim ako nije drugačije naznačeno. Stručnjak za organsku sintezu shvata da funkcionalnost prisutna na različitim delovima molekula treba da bude kompatibilna sa predloženim reagensima i reakcijama. Supstituenti koji nisu kompatibilni sa uslovima reakcije biće očigledni stručnjacima, a prema tome su naznačene alternativne metode. Polazni materijali za primere su ili komercijalno dostupni ili se lako pripremaju standardnim metodama iz poznatih materijala.
SINTEZA I TESTIRANJE JEDINJENJA IZ PRIMERA
[0096] Jedinjenja iz Tabele 1 su pripremljena prema procedurama od 2A - 2L.
TABELA 1
2
2
2
2
2
1
2
4
Procedura 2A: Primer - 100
N-(2-{6-[3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-fenil)-akrilamid
[0098]
a. N-(3,5-Dimetoksi-fenil)-acetamid
[0099] U rastvor 3,5-dimetoksi-fenilamina (20 g, 0.131 mol) u toluenu (110 mL) dodat je anhidrid sirćetne kiseline (14 g, 0.137 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 18 časova na sobnoj temperaturi. Dodat je PE (55 mL), talog je filtriran i ispran sa PE (100 mL) da se dobije jedinjenje iz naslova (24.2 g, prinos: 95%).<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 2.16 (s, 3H), 3.77 (s, 6H), 6.23 (s, 1H), 6.75 (s, 2H), 7.20 (s, 1H).
b. N-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-acetamid
[0100] U rastvor N-(3,5-dimetoksi-fenil)-acetamida (5 g, 25.6 mmol) u ACN (75 mL) dodat je sulfuril hlorid (6.9 g, 51.2 mmol) na 0 °C pod atmosferom azota. Dobijena smeša je mešana tokom 30 minuta kod ove temperature i ugašena sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(40 mL). Talog je filtriran, ispran vodom i osušen da se dobije jedinjenje iz naslova (2.3 g, prinos: 34%).<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 2.25 (s, 3H), 3.86 (s, 6H), 6.54 (s, 1H), 6.90 (s, 1H).
c. 2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenilamin
[0101] Rastvor N-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-acetamida (3.6 g, 13.7 mmol) u EtOH (130 mL) i KOH (2M, 75 mL) je zagrevan do refluksa tokom 24 časa. Reakcija je ohlađena na 0 °C i mešana 1 čas na ovoj temperaturi. Talog je filtriran i osušen da se dobije jedinjenje iz naslova (2.3 g, prinos: 76%).<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 3.90 (s, 6H), 4.57 (bs, 2H), 6.05 (s, 1H).
d. 2,4-Dihloro-3-izocijanato-1,5-dimetoksi-benzen
[0102] Smeša 2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenilamina (500 mg, 2.25 mmol), trifozgena (335 mg, 1.12 mmol) i TEA (342 mg, 3.38 mmol) u dioksanu (15 mL) zagrevana je na 130 °C tokom 2 časa pod mikrotalasima. Reakcija je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa DCM da se dobije jedinjenje iz naslova (450 mg, prinos: 80%).<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 3.92 (s, 6H), 6.42 (s, 1H).
e. (6-Hloro-pirimidin-4-il)-metil-amin
[0103] U rastvor 4,6-dihloro-pirimidina (7.45 g, 50 mmol) u iPrOH (50 mL) dodat je rastvor metil amina u THF (2M, 30 mL, 60 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 18 časova. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa DCM:EtOAc = 6:1∼1:1 da se dobije jedinjenje iz naslova (4.4 g, prinos: 62%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 2.96 (d, 3H), 5.22-5.36 (bs, 1H), 6.35 (s, 1H), 8.35 (s, 1H); MS (ESI): 144 [M+H]<+>.
f. N-Metil-N'-(2-nitro-fenil)-pirimidin-4,6-diamin
[0104] Smeša (6-hloro-pirimidin-4-il)-metil-amina (1 g, 7 mmol), 2-nitro-fenilamina (965 mg, 7 mmol), Brettphos (279 mg, 0.35 mmol) i tBuONa (2 g, 21 mmol) u DME (50 mL) zagrevana je na 90 °C tokom 1 časa pod atmosferom azota. Reakcija je koncentrovana, i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa DCM:EtOAc = 10:1∼1:1 da se dobije jedinjenje iz naslova (600 mg, prinos: 35%) u vidu žute čvrste supstance.<1>H NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 2.94 (d, 3H), 4.99 (bs, 1H), 5.82 (s, 1H), 7.04 (t, 1H), 7.60 (t, 1H), 8.21 (d, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.75 (d, 1H), 9.91 (s, 1H); MS (ESI): 246 [M+H]<+>.
g. 3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-1-[6-(2-nitro-fenilamino)-pirimidin-4-il]-urea
[0105] U rastvor N-metil-N'-(2-nitro-fenil)-pirimidin-4,6-diamina (150 mg, 0.61 mmol) u THF (15 mL) dodat je NaH (60%, 60 mg, 1.5 mmol) na 0 °C, i smeša je mešana tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi. Rastvor 2,4-dihloro-3-izocijanato-1,5-dimetoksi-benzena (180 mg, 0.73 mmol) dodat je kap po kap na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 2 časa. Dodata je voda (2 mL) da ugasi reakciju. Smeša je koncentrovana, a ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa DCM:EtOAc = 6:1∼1:1 da se dobije jedinjenje iz naslova (54 mg, prinos: 18%) u vidu žute čvrste supstance.<1>H NMR (400 Mhz, DMSO-d6) δ 3.38 (s, 3H), 3.93 (s, 6H), 6.75 (s, 1H), 6.91 (s, 1H), 7.34 (t, 1H), 7.72 (t, 1H), 7.79 (d, 1H), 8.01 (d, 1H), 8.38 (s, 1H), 9.99 (s, 1H), 11.78 (s, 1H); MS (ESI): 493 [M+H]<+>.
4
h. 1-[6-(2-Amino-fenilamino)-pirimidin-4-il]-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metilurea
[0106] U rastvor 3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-1-[6-(2-nitro-fenilamino)-pirimidin-4-il]-uree (50 mg, 0.1 mmol) u THF (10 mL) i MeOH (10 mL) dodat je Raney-Ni (suspenzija u vodi) na sobnoj temperaturi, dobijena smeša je mešana tokom 2 časa pod atmosferom vodonika. Reakcija je filtrirana i koncentrisana da se dobije jedinjenje iz naslova (38 mg, prinos: 82%), koje je direktno korišćeno u sledećem koraku.<1>H NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 3.28 (s, 3H), 3.85 (s, 2H), 3.94 (s, 6H), 5.86 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.78-6.87 (m, 3H), 7.16-7.20 (m, 2H), 8.39 (s, 1H), 12.62 (s, 1H); MS (ESI): 463 [M+H]<+>.
i. N-(2-{6-[3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-fenil)-akrilamid
[0107] U rastvor 1-[6-(2-amino-fenilamino)-pirimidin-4-il]-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-uree (25 mg, 0.05 mmol) u THF (10 mL) dodat je rastvor akriloil hlorida u THF (20 mg/mL, 0.5 mL, 0.1 mmol) na -10 °C, i dobijena smeša je na ovoj temperaturi mešana tokom 1 časa. Dodat je MeOH (1 mL) da ugasi reakciju. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću prep-TLC da se dobije jedinjenje iz naslova (12 mg, prinos: 43%).<1>H NMR (400 Mhz, DMSO-d6) δ 3.26 (s, 3H), 3.94 (s, 6H), 5.74 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 6.37 (s, 1H), 6.47-6.54 (m, 1H), 6.90 (s, 2H), 7.20 (d, 2H), 7.56-7.58 (m, 1H), 7.66-7.68 (m, 1H), 8.38 (s, 1H), 9.99 (s, 1H), 9.70 (s, 1H), 11.99 (s, 1H); MS (ESI): 517 [M+H]<+>.
[0108] Jedinjenja 102, 103 i 105 sintetizovana su na sličan način kao jedinjenje 100.
Procedura 2B: Primer - 107
[0109]
N-(2-{6-[3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-piridin-3-ilmetil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-fenil)-akrilamid
[0110]
,
a. (6-Hloro-pirimidin-4-il)-piridin-3-ilmetil-amin
[0111] U rastvor 4,6-dihloro-pirimidin (1 g, 6.71 mmol) u dioksanu (20 mL) dodat je rastvor piridin-3-il-metilamina (745 mg, 6.9 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (680 mg, prinos: 46%). MS (ESI): 221 [M+H]<+>.
,
b. N-(2-Nitro-fenil)-N'-piridin-3-ilmetil-pirimidin-4,6-diamin
[0112] Degasirana smeša (6-hloro-pirimidin-4-il)-piridin-3-ilmetil-amina (300 mg, 1.36 mmol), 2-nitro-fenilamina (188 mg, 1.36 mmol), Pd2(dba)3(128 mg, 0.14 mmol), Xantphos (161 mg, 0.28 mmol) i Cs2CO3(913 mg, 2.8 mmol) u toluenu (10 mL) zagrevana je na 100 °C tokom 4 časa. Reakcija je koncentrovana, i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (150 mg, prinos: 34%). MS (ESI): 323 [M+H]<+>.
c. 3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-[6-(2-nitro-fenilamino)-pirimidin-4-il]-1-piridin-3-ilmetltil-urea
[0113] U rastvor N-(2-nitro-fenil)-N'-piridin-3-ilmetil-pirimidin-4,6-diamina (150 mg, 0.467 mmol) u THF (15 mL) dodat je NaH (60%, 48 mg, 1.2 mmol) na 0 °C, i smeša je mešana tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi. Rastvor 2,4-dihloro-3-izocijanato-1,5-dimetoksi-benzena (procedura 2A, koraci a-d; 180 mg, 0.73 mmol) dodat je kap po kap na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 2 časa. Dodata je voda (2 mL) da ugasi reakciju. Smeša je koncentrovana, i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (85 mg, prinos: 32%). MS (ESI): 570 [M+H]<+>.
4
d. 1-[6-(2-Amino-fenilamino)-pirimidin-4-il]-3-(2,6-dihloro-3.,5-dimetoksi-fenil)-1-piridin-3-ilmetil-urea
[0114] Smeša 3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-[6-(2-nitro-fenilamino)-pirimidin-4-il]-1-piridin-3-ilmetil-uree (85 mg, 0.149 mmol) i Fe (84 mg, 1.5 mmol) u AcOH (5 mL) zagrevana je na 50°C tokom 2 časa. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan in vacuo da se dobije sirovi produkt, koji je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (53 mg, prinos: 66%). MS (ESI): 540 [M+H]<+>.
e. N-(2-{6-[3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-piridin-3-ilmetil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-fenil)-akrilamid
[0115] U rastvor 1-[6-(2-amino-fenilamino)-pirimidin-4-il]-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-piridin-3-ilmetil-uree (53 mg, 0.1 mmol) u THF (10 mL) dodat je rastvor akriloil hlorida u THF (20 mg/mL, 0.5 mL, 0.1 mmol) na -10 °C, i smeša je mešana tokom 1 časa na ovoj temperaturi. Dodat je MeOH (1 mL) da ugasi reakciju. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću prep-TLC da se dobije jedinjenje iz naslova (9 mg, prinos: 15%).<1>H NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 3.84 (s, 6H), 5.01 (s, 2H), 5.69 (d, 1H), 5.75 (s, 1H), 6.10 (dd, 1H), 6.34 (d, 1H), 6.47 (s, 1H), 7.00 (d, 1H), 7.09-7.24 (m, 2H), 7.28 (t, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.69-7.71 (m, 2H), 8.31-8.34 (m, 2H), 8.40-8.42 (m, 1H), 12.60 (s, 1H); MS (ESI): 594 [M+H]<+>.
Procedura 2C: Primer - 108
[0116]
N-[2-{6-[3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-5-(4-etil-piperazin-1-il)-fenil]-akrilamid
[0117]
preko noći
a. terc-Butil 4-bromo-2-nitrofenilkarbamat
[0118] Smeša 4-bromo-2-nitroanilina (4 g, 18.4 mmol), (Boc)2O (4.4 g, 20.24 mmol) u THF (50 mL) zagrevana je pod refluksom preko noći. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa PE:EtOAc = 20:1 da se dobije jedinjenje iz naslova (5.4 g, prinos: 93%). MS (ESI): 317, 319 [M+H]<+>.
4
100<o>C, 4h
b. terc-Butil 4-(4-etilpiperazin-1-il)-2-nitrofenilkarbamat
[0119] Degasirana smeša terc-butil 4-bromo-2-nitrofenilkarbamata (5.4 g, 17 mmol), 1-etilpiperazina (2.91 g, 25.5 mmol), Pd2(dba)3(2.1 g, 3.4 mmol), xantphos (3.92 g, 6.8 mmol) i Cs2CO3(11.1 g, 34 mmol) u toluenu (85 mL) zagrevana je na 100 °C tokom 4 časova. Reakcija je koncentrovana, i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa MeOH: DCM = 1:50∼1:20 da se dobije jedinjenje iz naslova (3.3 g, prinos: 55%). MS (ESI): 351 [M+H]<+>.
c. 4-(4-Etilpiperazin-1-il)-2-nitroanilin
[0120] U rastvor terc-butil 4-(4-etilpiperazin-1-il)-2-nitrofenilkarbamata (3.3 g, 9.43 mmol) u DCM (50 mL) dodata je TFA (20 mL) na 0°C, dobijena smeša je mešana tokom 3 časova na sobnoj temperaturi. Posle uklanjanja svih isparljivih materija in vacuo, ostatak je ponovo rastvoren u DCM, neutralizovan sa zasićenim vodenim rastvorom K2CO3i ekstrahovan sa DCM. Kombinovani ekstrakti su koncentrovani da se dobije jedinjenje iz naslova (2.1 g, prinos: 90%), koje je direktno korišćeno u sledećem koraku.<1>H NMR (400 Mhz, DMSO-d6) δ 1.02 (t, 3H), 2.36 (q, 2H), 2.47-2.49 (m, 4H) 2.97-3.00 (m, 4H), 6.97 (d, 1H), 7.20 (s, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.34 (dd, 1H); MS (ESI): 251 [M+H]<+>.
d. N<4>-(4-(4-etilpiperazin-1-il)-2-nitrofenil)-N<6>-metilpirimidin-4,6-diamin
[0121] Degasirana smeša 4-(4-etilpiperazin-1-il)-2-nitroanilina (2.1 g, 8.4 mmol), 6-hloro-N-metilpirimidin-4-amina (Procedura 2A, korak e; 1.2 g, 8.4 mmol), Pd2(dba)3(1.54 g, 1.68 mmol), xantphos (1.94 g, 3.36 mmol) i Cs2CO3(5.48 g, 16.8 mmol) u toluenu (45 mL)
4
zagrevana je na 100 °C tokom 1 časa. Reakcija je koncentrovana, i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa MeOH: DCM = 1:40∼1:20 da se dobije jedinjenje iz naslova (870 mg, prinos: 29%). MS (ESI): 358 [M+H]<+>.
e. 3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-(6-(4-(4-etilpiperazin-1-il)-2-nitrofenilamino)pirimidin-4-il)-1-metilurea
[0122] U rastvor N4-(4-(4-etilpiperazin-1-il)-2-nitrofenil)-N6-metilpirimidin-4,6-diamin (870 mg, 2.44 mmol) u THF (15 mL) dodat je NaH (60%, 200 mg, 5 mmol) na 0°C, i smeša je mešana tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi. Rastvor 2,4-dihloro-3-izocijanato-1,5-dimetoksi-benzena (Procedura 2A, koraci a-d; 908 mg, 3.66 mmol) u THF dodat je kap po kap na 0°C. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 časa. Dodat je zasićeni vodeni rastvor NH4Cl (2 mL) da ugasi reakciju. Smeša je koncentrovana i ekstrahovana sa DCM. Kombinovani ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, i koncentrisani da se dobije sirovi produkt, koji je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (330 mg, prinos: 21%) u vidu crvenog ulja.<1>H NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 1.44 (t, 3H), 3.01 (t, 2H), 3.21 (q, 2H), 3.41-3.49 (m, 5H), 3.73-3.80 (m, 4H), 3.92 (s, 6H), 6.27 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 7.25 (d, 1H), 7.69 (s, 1H), 8.32 (d, 1H), 8.52 (s, 1H), 10.28 (br s, 1H), 12.05 (br s, 1H); MS (ESI): 605 [M+H]<+>.
f. 1-(6-(2-Amino-4-(4-etilpiperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilurea
[0123] U rastvor 3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-(6-(4-(4-etilpiperazin-1-il)-2-nitrofenilamino)pirimidin-4-il)-1-metiluree (330 mg, 0.546 mmol) u THF (20 mL) i MeOH (20
4
mL) dodat je Raney-Ni (suspenzija u vodi) na sobnoj temperaturi, dobijena smeša je mešana tokom 3 časova pod atmosferom vodonika (1 atm). Reakcija je filtrirana i koncentrisana. Ostatak je ispran dva puta sa MeOH da se dobije jedinjenje iz naslova (280 mg, čistoća: 90%), koje je direktno korišćeno u sledećem koraku. MS (ESI): 575 [M+H]<+>.
g. N-(2-(6-(3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-ilamino)-5-(4-etilpiperazin-1-il)fenil)akrilamid
[0124] U rastvor 1-(6-(2-amino-4-(4-etilpiperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metiluree (280 mg, čistoća: 90%, 0.44 mmol) u THF (30 mL) dodat je rastvor akriloil hlorida u THF (20 mg/mL, 2 mL, 0.44 mmol) na -10 °C, i dobijena smeša je na ovoj temperaturi mešana tokom 1 čas. Dodat je MeOH (1 mL) da ugasi reakciju. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću prep-HPLC i prep-TLC da se dobije jedinjenje iz naslova (20 mg, prinos: 7%).<1>H NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 1.31 (t, 3H), 2.65 (q, 2H), 2.62-2.68 (m, 4H), 3.27 (s, 3H), 3.36-3.38 (m, 4H), 3.91 (s, 6H), 5.76 (d, 1H), 5.90 (s, 1H), 6.24 (dd, 1H), 6.41 (d, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.74 (dd, 1H), 7.07 (br s, 1H), 7.23 (d, 1H), 7.72 (br s, 1H), 7.98 (br s, 1H), 8.37 (s, 1H), 12.52 (s, 1H); MS (ESI): 629 [M+H]<+>.
Primer - 110
N-(2-(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-ilamino)-fenil)-2-fluoroakrilamid
4
[0126] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2A (Primer 100), modifikovanjem koraka (i) u sledeću proceduru: u rastvor 1-[6-(2-amino-fenilamino)-pirimidin-4-il]-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-uree (130 mg, pomešano sa tetrahloro anilinom) i DCC (118 mg, 0.56 mmol) u hloroformu (100 mL) dodat rastvor je 2-fluoroakrilne kiseline (50 mg, 0.56 mmol) u hloroformu (50 mL) na 0°C, i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodata je voda (1 mL) da ugasi reakciju. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću kolone reverzne faze i prep-TLC da se dobije jedinjenje iz naslova (4 mg, prinos: 5%).<1>H NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 12.17 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.84 (d, 1H), 7.37 (d, 1H), 7.29 (t, 1H), 7.26 (t, 1H), 6.47 (s, 1H), 5.94 (s, 1H), 5.78 (dd, 1H), 5,21 (dd, 1H), 3.85 (s, 6H), 3.25 (s, 3H); MS (ESI): 535 [M+H]<+>.
Procedura 2E: Primer - 111
toluen, 100<o>C, 5h
prinos: 57%
4
N-(2-(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-ilamino)-5-(1-etilpiperidin-4-il)fenil)akrilamid
[0127]
, ,
a. terc-butil 4-(4-amin-3-nitrofenil)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat
[0128] U degasiranu smešu 4-bromo-2-nitroanilina (1 g, 4.6 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (1.42 g, 4.6 mmol), trikalijum fosfat trihidrata (3.9 g, 14.64 mmol) u dioksanu i vodi (30 mL, 8:1) dodat je Pd(dppf)2Cl2(337 mg, 0.46 mmol). Smeša je refluksovana na 110 °C tokom 3 časa. Filtracija i koncentrovanje dali su sirovi proizvod, koji je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (1.1 g, prinos: 75%). MS (ESI): 320 [M+H]<+>.
b. 1-(6-hloropirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)urea
[0129] U rastvor 6-hloro-N-metilpirimidin-4-amina (Procedura 2A, korak e; 460 mg, 3.21 mmol) u DMF (15 mL) dodat je NaH (60%, 193 mg, 4.81 mmol) na 0°C, i smeša je mešana tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi. Rastvor 2,4-dihloro-3-izocijanato- 1,5-dimetoksibenzena (Procedura H, koraci a-d; 1.03 g, 4.17 mmol) u DMF (5 mL) dodat je kap po kap na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša mešana je tokom 0.5 časa. Dodat je SEMCl (804 mg, 4.81 mmol) u DMF (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 časa. Dodat je zasićeni vodeni rastvor NH4Cl da ugasi reakciju. Smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani ekstrakti su isprani vodom i fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i filtrirani. Filtrat je uparen pod vakumom da se dobije sirovi produkt, koji je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (470 mg, prinos: 28%). MS (ESI): 521 [M+H]<+>.
c. terc-butil-(4-(6-(3-(2,6-dihloro 1-3,5 C-d 1himetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)ureido)pirimidin-4-ilamino)-3-nitrofenil)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat
[0130] Degasirana smeša 1-(6-hloropirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)uree (470 mg, 0.9 mmol), terc-butil 4-(4-amino-3-nitrofenil)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (320 mg, 1 mmol), Pd2(dba)3(92 mg, 0.1 mmol), xantphos (115 mg, 0.2 mmol) i Cs2CO3(652 mg, 2 mmol) u toluenu (10 mL) zagrevana je na 100 °C tokom 5 časova. Reakcija je koncentrovana, i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (400 mg, prinos: 57%). MS (ESI): 804 [M+H]<+>.
d. terc-butil-4-(3-amino-4-(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)ureido)pirimidin-4-ilamino)fenil)piperidin-1-karboksilat [0131] U rastvor terc-butil-4-(4-(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)ureido)pirimidin-4-ilamino)-3-nitrofenil)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (380 mg, 0.473 mmol) u MeOH (10 mL) dodat je PtO2(38 mg, 10% mas.) i jedna kap hlorobenzena na sobnoj temperaturi, dobijena smeša mešana je preko noći pod atmosferom vodonika (1 atm). Reakcija je filtrirana i koncentrisana. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (130 mg, prinos: 37%). MS (ESI): 776 [M+H]<+>.
1
e. N-(2-(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-ilamino)-5-(piperidin-4-il)fenil)akrilamid TFA so
[0132] U rastvor terc-butil-4-(3-amino-4-(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)ureido)pirimidin-4-ilamino)fenil)piperidin-1-karboksilata (130 mg, 0.168 mmol) u THF (15 mL) dodat je rastvor akriloil hlorida (10 mg/mL, 1.7 mL, 0.19 mmol) u kapima na -10 °C, i dobijena smeša je mešana na 0°C tokom 1 časa. LC-MS je pokazala da je reakcija bila potpuna. Dodat je MeOH (5 mL) da ugasi reakciju, te je reakcija koncentrovana. Ostatak u DCM (2 mL) dodat je kap po kap u smešu DCM/TFA (2/1, v/v, 3 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 časa i zatim koncentrovana pod vakuumom. Ostatak (50 mg, kvant.) je direktno korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI): 600 [M+H]<+>.
f. N-(2-(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-ilamino)-5-(1-etilpiperidin-4-il)fenil)akrilamid
[0133] U rastvor N-(2-(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-ilamino)-5-(piperidin-4-il)fenil)akrilamida TFA so (35 mg, 0.049 mmol) u EtOH (1 mL), dodat je NaOAc (4 mg, 0.05 mmol) i vodeni acetaldehid (1 mL, 0.9 mmol, 40%). Nakon što je smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 časa, dodat je NaBH3CN (12 mg, 0.18 mmol), i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi još 3 časa. Posle uklanjanja svih isparljivih materija in vacuo, ostatak je podeljen između DCM i vode. Vodeni sloj je dvaput ekstrahovan sa hloroformom. Kombinovani ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i filtrirani. Filtrat je uparen pod vakumom da se dobije sirovi produkt, koji je prečišćen pomoću prep-HPLC da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (3 mg, prinos: 10%).<1>H NMR (400
2
Mhz, MeOH-d4) δ 8.38 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.54 (d, 1H), 7.24 (dd, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.46-6.35 (m, 3H), 5.81 (d, 1H), 3.97 (s, 6H), 3.74-3.70 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.26 (q, 2H), 3.17-3.11 (m, 2H), 2.99-2.96 (m, 1H), 2.26-2.22 (m, 2H), 2.06-1.99 (m, 2H), 1.43 (t, 3H); MS (ESI): 628 [M+H]<+>.
Primer - 112
[0134]
N-(2-(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-ilamino)-5-(1-metilpiperidin-4-il)fenil)akrilamid
[0135] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u Proceduri 2E (Primer 111), zamenom formaldehida u koraku (f) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (1.5 mg, prinos: 11.6%).<1>H NMR (400 Mhz, MeOH-d4) δ 8.26 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.41 (d, 1H), 7.11 (d, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.34-6.22 (m, 3H), 5.68 (d, 1H), 3.84 (s, 6H), 3.55-3.52 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.21-3.08 (m, 2H), 2.90-2.83 (m, 4H), 2.11-2.08 (m, 2H), 1.89-1.85 (m, 2H); MS (ESI): 614 [M+H]<+>.
Procedura 2F: Primer - 113
[0136]
Prinos: 53% Prinos: 53%
N-(2-{6-[3-(2,6-dihloro-3,5-d)metoksi-fenil)-1-metil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-5-dimetilaminometil-fenil)-akrilamid
[0137]
a. 4-Fluoro-3-nitro-benzaldehid
[0138] U mešani rastvor (4-fluoro-3-nitro-fenil)-metanola (750 mg, 4.4 mmol) u DCM (40 mL) na 0°C dodat je Dess-Martinov reagens (3.0 g, 7 mmol). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 4 časa. TLC je pokazao nestanak početnog materijala. Reakcija je ugašena sa 10% vodenim rastvorom NaHCO3i vodenim rastvorom 10% Na2S2O3i DCM sloj je odvojen i ispran vodom (100 mL) i fiziološkim rastvorom (50 mL). Reakcija je koncentrovana, i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (570 mg, prinos: 75%).<1>H-NMR (400 Mhz, DMSO-d6) δ 10.09 (d, 1H), 8.36 (t, 1H), 8.06 (dd, 1H), 7.97 (m, 1H).
4
b. 4-Amino-3-nitrobenzaldehid
[0139] U rastvor 4-fluoro-3-nitro-benzaldehid (570 mg, 3.3 mmol) u THF (20 mL) dodat je NH4OH (5 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 časa. Dobijena žuta čvrsta supstanca je sakupljena i isprana vodom, osušena pod vakuumom, dajući naslovljeno jedinjenje (300 mg, prinos: 53%).<1>H-NMR (300 Mhz, DMSO-d6) δ 9.76 (s, 1H), 8.57 (d, 1H), 8.18 (br s, 2H), 7.80 (dd, 1H), 7.10 (d, 1H).
c. 4-Dimetilaminometil-2-nitro-fenilamin
[0140] U mešani rastvor dimetilamina (4.0 mL, 2 M, 8.0 mmol) u MeOH (4 mL) dodat je Ti(O<i>Pr)4(1.15 g, 4 mmol) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 15 minuta Zatim je dodat 4-amino-3-nitro-benzaldehid (160 mg, 1.0 mmol) u MeOH (2 mL) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Zatim je dodat NaBH4(78 mg, 2 mmol) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 časa. LCMS je pokazao vrh glavnog produkta. Rastvor je razblažen sa EtOAc (60 mL) i ispran sa vodom (2 x100 mL) i brine (50 mL), te osušen preko anhidrovanog Na2SO4.Rastvor je uparen do suva i sakupljeno je 130 mg sirovog produkta, koji je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 Mhz, DMSO-d6) δ 7.82 (s, 1H), 7.35 (br s, 2H), 7.31 (dd, 1H), 6.97 (d, 1H), 3.26 (s, 2H), 2.12 (s, 6H).
u ,
d. 1-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-3-[6-(4-dimetilaminometil-2-nitro-fenilamino)-pirimidin-4-il]-3-metil-1-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-urea
[0141] U mešani rastvor 1-(6-hloro-pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-3- (2-trimetilsilanil-etoksimetil)-uree (procedura L, korak b; 260 mg, 0.5 mmol) u toluenu (5 mL) dodat je 4-dimetilaminometil-2-nitro-fenilamin (100 mg, 0.5 mmol), Cs2CO3(400 mg, 1.25 mmol), Pd2(dba)3(46 mg, 0.05 mmol), xantphos (90 mg, 0.15 mmol). Rastvor je mešan preko noći na 100 °C. LCMS je pokazao vrh glavnog produkta. Rastvor je uparen sa silikagelom i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa EtOAc (w(/ 0.5% TEA):MeOH (w/0.5% TEA) = 10-10:0.5 dajući željeni proizvod (100 mg, prinos: 30%). MS (ESI): 680 [M+H]<+>.
e. [6-(2-Amino-4-dimetilaminometil-fenilamino)-pirimidin-4-il]-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-urea
[0142] U mešani rastvor 1-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-3-[6-(4-dimetilaminometil-2-nitro- fenilamino)-pirimidin-4-il]-3-metil-1-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-uree (100 mg, 0.15 mmol) u MeOH (10 mL) dodato je 4 kapi hlorobenzena i zatim PtO2(30 mg, 30% mas.). Rastvor je mešan preko noći pod atmosferom vodonika na sobnoj temperaturi. Reakcija je filtrirana i koncentrisana. Ostatak je prebačen u sledeći korak bez dodatnog prečišćavanja. MS (ESI): 650 [M+H]<+>.
f. 1-[6-(2-Amino-4-dimetilaminametil-fenilamino)-pirimidin-4-il]-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-urea
[0143] U mešani rastvor 1-[6-(2-amino-4-dimetilaminometil-fenilamino)-pirimidin-4-il]-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-uree u anhidrovanom DCM (10 mL) dodata je TFA (10 mL) na sobnoj temperaturi, Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 časa. LCMS je pokazao vrh glavnog produkta. Rastvor je uparen do suva, razblažen sa DCM (40 mL) i ispran sa 10% zasićenom Na2CO3(10 mL). DCM sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4. Koncentrovanjem pod vakuumom dobijen je sirovi produkt, koji je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni (10% MeOH/DCM sa 0.5% Et3N) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (45 mg, prinos: 58% u dva koraka). MS (ESI): 520 [M+H]<+>.
g. N-(2-{6-[3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-5-dimetilaminometil-fenil)-akrilamid
[0144] U mešani rastvor 1-[6-(2-amino-4-dimetilaminometil-fenilamino)-pirimidin-4-il]-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-uree (45 mg, 0.11 mmol) u THF (40 mL) na -10 °C dodat je akrilil hlorid (30 mg, 0.33 mmol) u THF (3 mL). Rastvor je mešan na -10 °C tokom 5 časova. LCMS je pokazao vrh glavnog produkta. Reakcija je ugašena sa MeOH (3 mL) i uparena. Ostatak je prečišćen pomoću prep-HPLC (uslovi voda/ACN u NH4HCO3) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (6 mg, prinos: 15%).<1>H-NMR (400 Mhz, MeOH-d4) δ 8.25 (s, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.16 (dd, 1H), 6.70 (s, 1H), 6.33-6.20 (m, 3H), 5.67 (dd, 1H), 3.84 (s, 6H), 3.43 (s, 2H) 3.22 (s, 3H), 2.20 (s, 6H); MS (ESI): 574 [M+H]<+>.
Primer - 114
[0145]
N-(2-(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-ilamino)fenil)propiolamid
[0146] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2C (Primer 108) (g) u sledeću proceduru: u rastvor 1-[6-(2-amino-fenilamino)-pirimidin- 4-il]-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-uree (50 mg, 0.108 mmol) i DCC (46 mg, 0.22 mmol) u hloroformu (50 mL) dodat je rastvor propiolne kiseline (16 mg, 0.22 mmol) u hloroformu (50 mL) na 0°C, i dobijena smeša je preko noći mešana na sobnoj temperaturi. Dodata je voda (1 mL) da ugasi reakciju. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću kolone reverzne faze i prep-TLC da se dobije jedinjenje iz naslova (5 mg, prinos: 9.1%).<1>H NMR (400 Mhz, DMSO-d6) δ 12.04 (s, 1H), 10.36 (s, 1H), 9.03 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.67 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.30-7.25 (m, 2H), 6.96 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 4.42 (s, 1H), 4.00 (s, 6H), 3.35 (s, 3H); MS (ESI): 515 [M+H]<+>
Primer - 116
[0147]
N-(2-{6-[3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-(2-metoksi-etil)-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-fenil)-akrilamid
[0148] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), zamenom 1-(6-hloro-pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-(2-metoksi-etil)-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-uree (priprema prikazana ispod) u koraku (d) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (40 mg, prinos: 16% u pet koraka).<1>H NMR (400 Mhz, DMSO-d6) δ 11.28 (s, 1H), 9.71 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.70-7.68 (m, 1H), 7.55-7.53 (m, 1H), 7.20-7.18 (m, 2H), 6.89 (s, 1H), 6.69 (s, 1H), 6.50 (dd, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.75 (d, 1H), 4.03 (t, 2H), 3.94 (s, 6H), 3.56 (t, 2H), 3.24 (s, 3H); MS (ESI): 437 [M+H]<+>.
Priprema 1-(6-Hloro-pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-(2-metoksietil)-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-uree:
[0149]
a. (6-Hloro-pirimidin-4-il)-(2-metoksi-etil)-amin
[0150] U rastvor 4,6-dihloro-pirimidina (2 g, 14 mmol) u iPrOH (70 mL) i DIPEA (1.94 g, 15 mmol) dodat je rastvor 2-metoksi-etilamina (1.13 g, 15 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 časa. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa DCM. Kombinovani ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, i koncentrisani da se dobije sirovi produkt, koji je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (1.95 g, prinos: 82%). MS (ESI): 188 [M+H]<+>.
b. 1-(6-Hloro-pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-(2-metoksi-etil)-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-urea
[0151] U rastvor (6-hloro-pirimidin-4-il)-(2-metoksi-etil)-amin (300 mg, 1.6 mmol) u DMF (10 mL) dodat je NaH (60%, 96 mg, 2,4 mmol) na 0°C, i smeša je mešana tokom 10 minuta na sobnoj temperaturi. Rastvor 1-izocijanato-3,5-dimetoksi-benzen (590 mg, 2.4 mmol) u DMF (5 mL) dodat je kap po kap na 0°C. Dobijena smeša je mešana 30 minuta. Dodat je SEMCl (400 mg, 2.4 mmol) u DMF (2 mL) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 časa. Zasićeni vodeni rastvor NH4Cl je dodata da ugasi reakciju. Smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani ekstrakti su isprani vodom i fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, i koncentrovani da se dobije sirovi produkt, koji je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (720 mg, prinos: 78%). MS (ESI): 565 [M+H]<+>.
Primer - 120
[0152]
N-(2-{6-[3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-(3-dimetilamino-propil)-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-fenil)-akrilamid trifluorosirćetna kiselina
[0153] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 21 (Primer 142), zamenom 2-nitroanilina i N-(3-Dimetilamino-propil)-N'-(2-nitro-fenil)-pirimidin-4,6-diamina (pripremljen dole opisanim postupkom) u koraku (c) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (11 mg, prinos: 7.5% u šest koraka).<1>H NMR (300 Mhz, DMSO-d6) δ 11.30 (s, 1H), 9.80 (s, 1H), 9.28 (m, 1H), 8.92 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.24-7.16 (m, 2H), 6.90 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 6.49 (dd, 1H), 6.25 (d, 1H), 5.76 (d, 1H), 3.95 (s, 6H), 3.91-3.88 (m, 2H), 3.11-3.05 (m, 2H), 2.74 (d, 6H), 1.97-1.92 (m, 2H); MS (ESI): 588 [M+H]<+>.
Priprema N-(3-Dimetilamino-propil)-N'-(2-nitro-fenil)-pirimidin-4,6-diamin
a. N'-(6-Hloro-pirimidin-4-il)-N,N-dimetil-propan-1,3-diamin
[0155] U rastvor 4,6-dihloro-pirimidina (1 g, 6.7 mmol) i DIPEA (1.03 g, 8 mmol) u iPrOH (20 mL) dodat je N,N-dimetil-propan-1,3-diamin (714 mg, 7 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana tokom 2 časa. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa DCM. Kombinovani ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, i koncentrisani da se dobije sirovi produkt, koji je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (1.15 g, prinos: 80%). MS (ESI): 215 [M+H]<+>.
b. N (3-Dimetilamino-propil)-N'-(2-nitro-fenil)-pirimidin-4,6-diamin
[0156] Degasirana smeša N'-(6-hloro-pirimidin-4-il)-N,N-dimetil-propan-1,3-diamina (800 mg, 3.74 mmol), nitro anilina (525 mg, 3.8 mmol), Pd2(dba)3(348 mg, 0.38 mmol), Xantphos (438 mg, 0.76 mmol) i Cs2CO3(3.05 g, 9.35 mmol) u toluenu (15 mL) zagrevana je na 100 °C tokom 4 časa. Reakcija je koncentrovana, i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije sa reverznom fazom da se dobije jedinjenje iz naslova (530 mg, prinos: 45%). MS (ESI): 317 [M+H]<+>.
Primer - 121
[0157]
N-[2-(6-{3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-[3-(4-metil-piperazin-1-il)-propil]-ureido}-pirimidin-4-ilamino)-fenil]-akrilamid
[0158] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 21 (Primer 142), zamenom 2-nitroanilina i N-[3-(4-Metil-piperazin-1-il)-propil]-N'-(2-nitro-fenil)-pirimidin-4,6-diamina (priprema prikazana ispod) u koraku (e) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (8 mg, prinos: 1.2% u šest koraka).<1>H NMR (300 Mhz, Metanol-d4) δ 8.17 (s, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.32 (d, 1H), 7.12-7.08 (m, 2H), 6.62 (s, 1H), 6.29-6.14 (m, 3H), 5.58 (d, 1H), 3.82 (t, 2H), 3.75 (s, 6H), 2.27-2.19 (m, 8H), 2.06 (s, 3H), 1.67 (t, 2H); MS (ESI): 643 [M+H]<+>.
Priprema N-[3-(4-Metil-piperazin-1-il)-propil]-N'-(2-nitro-fenil)-pirimidin-4,6-diamina
[0159]
1
a. (6-Hloro-pirimidin-4-il)-[3-(4-metil-piperazin-1-il)-propil]-amin
[0160] U rastvor 4,6-dihloro- pirimidina (1.5 g, 10 mmol) i DIPEA (1.55 g, 12 mmol) u iPrOH (50 mL) dodat je rastvor 3-(4-metil-piperazin-1-il)-propilamina (1.73 g, 11 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša mešana je na sobnoj temperaturi tokom 2 časa. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa DCM. Kombinovani ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, i koncentrisani da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (1.4 g, 51%), koje je direktno korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI): 270 [M+H]<+>.
b.N-[3-(4-Metil-piperazin-1-il)-propil]-N'-(2-nitro-fenil)-pirimidin-4,6-diamin
[0161] Degasirana smeša (6-hloro-pirimidin-4-il)-[3-(4-metil-piperazin-1-il)-propil]-amina (600 mg, 2.22 mmol), nitroanilina (317 mg, 2.3 mmol), Pd2(dba)3(210 mg, 0.23 mmol), Xantphos (265 mg, 0.46 mmol) i Cs2CO3(1.81 g, 5.55 mmol) u toluenu (15 mL) zagrevana je na 100 °C tokom 4 časa. Reakcija je koncentrovana, i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije sa reverznom fazom da se dobije jedinjenje iz naslova (400 mg, prinos: 48%). MS (ESI): 372 [M+H]<+>.
Primer - 122
N-(2-{6-[3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-5-piperidin-4-il-fenil)-akrilamid trifluorosirćetna kiselina
2
[0163] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2E (Primer 111), zamenom koraka (e) i (f) sa sledećom procedurom: u rastvor terc-butil 4-(3-amino-4-(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsilil)etoksi) metil)ureido)pirimidin-4-ilamino)fenil)piperidin-1-karboksilata (Procedura 2E, Primer 111,65 mg, 0.084 mmol) u THF (15 mL) dodat je rastvor akriloil hlorida (10 mg/mL, 0.9 mL, 0.1 mmol) kap po kap na -10 °C, i dobijena smeša mešana je na 0°C tokom 1 časa. Dodat je MeOH (5 mL) da ugasi reakciju, i reakcija je koncentrovana. Ostatak je rastvoren u DCM (2 mL) i dodat kap po kap u smešu DCM/TFA (2:1, 3 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 časa i zatim koncentrovana. Ostatak je prečišćen pomoću prep-HPLC da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (23 mg, prinos: 47%).<1>H NMR (300 Mhz, DMSO-d6) δ 11.92 (s, 1H), 9.64 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.60 (m, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.25 (m, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.52 (dd, 1H), 6.41 (s, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.74 (d, 1H), 3.96 (s, 6H), 3.49 (d, 2H), 3.28 (s, 3H), 3.02 (q, 2H), 2.85 (t, 1H), 1.96 (d, 2H), 1.78 (q, 2H); MS (ESI): 600 [M+H]<+>.
Procedura 2G: Primer - 123
[0164]
N-(2-{6-[3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-5-morfolin-4-il-fenil)-akrilamid
[0165]
preko noći
a. di-terc-Butil 4-bromo-2-nitrofenilkarbamat
[0166] Smeša 4-bromo-2-nitroanilina (10 g, 46 mmol), (Boc)2O (20.7 g, 95 mmol) u THF (250 mL) je zagrevana preko noći pod refluksom. Smeša je koncentrovana da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (19.2 g, prinos: kvant.) koje je direktno korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
b. di-terc-butil estar (4-Morfolin-4-il-2-nitro-fenil)-karbaminske kiseline
[0167] Degasirana smeša terc-butil 4-bromo-2-nitrofenilkarbamata (1 g, 2.4 mmol), morfolina (314 mg, 3.6 mmol), Pd2(dba)3(220 mg, 0.24 mmol), Xantphos (278 mg, 0.48 mmol) i Cs2CO3(1.56 g, 4.8 mmol) u toluenu (30 mL) zagrevana je na 100°C tokom 1 časa. Reakcija je koncentrovana, i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu kako bi se dobila sirova smeša jedinjenja iz naslova i mono-Boc produkt (744 mg). Smeša je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI): 324 [M-Boc+H]<+>.
c. 4-Morfolin-4-il-2-nitro-fenilamin
[0168] U rastvor di-terc-butil estra (4-morfolin-4-il-2-nitro-fenil)-karbaminske kiseline i mono-Boc produkta (744 mg) u DCM (20 mL) dodata je TFA (10 mL) na 0°C, dobijena smeša je mešana tokom 3 časova na sobnoj temperaturi. Posle uklanjanja svih isparljivih materija in
4
vacuo, ostatak je ponovo rastvoren u DCM, neutralisan sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, i ekstrahovan sa DCM. Kombinovani ekstrakti su koncentrovani i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (290 mg, prinos: 54% u dva koraka). MS (ESI): 251 [M+H]<+>.
d. 1-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-3-metil-3-[6-(4-morfolin-4-il-2-nitro-fenilamino)-pirimidin-4-il]-1-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-urea
[0169] Degasirana smeša 4-morfolin-4-il-2-nitro-fenilamina (290 mg, 1.3 mmol), 1-(6-hloropirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-uree (Procedura 2E , korak b; 624 mg, 1.2 mmol), Pd2(dba)3(110 mg, 0.12 mmol), Xantphos (139 mg, 0.24 mmol) i Cs2CO3(782 mg, 2.4 mmol) u toluenu (15 mL) zagrevana je na 100°C tokom 2.5 časa. Reakcija je koncentrovana, i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (440 mg, prinos: 49%) kao crvena čvrsta supstanca. MS (ESI): 708 [M+H]<+>.
e. terc-butil estar {6-[3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-3-(2-trimetilsilaniletoksimetil)-ureido]-pirimidin-4-il}-(4-morfolin-4-il-2-nitro-fenil)-karbaminske kiseline [0170] Smeša 1-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-3-metil-3-[6-(4-morfolin-4-il-2-nitrofenilamino)-pirimidin-4-il]-1-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-uree (200 mg, 0.28 mmol), (Boc)2O (93 mg, 0.42 mmol) i katalitička količina DMAP u THF (10 mL) zagrevana je pod refluksom tokom 1 časa. Smeša je koncentrovana i ostatak je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI): 808 [M+H]<+>.
f. terc-butil estar (2-Amino-4-morfolin-4-il-fenil)-{6-[3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-ureido]-pirimidin-4-il}-karbaminske kiseline [0171] U rastvor kiselina terc-butil estra {6-[3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-ureidol-pirimidin-4-il}-(4-morfolin-4-il-2-nitro-fenil)-karbaminske kiseline (sirov, pripremljen iznad) u MeOH (20 mL) dodat je Raney-Ni (suspenzija u vodi) na sobnoj temperaturi, dobijena smeša mešana je tokom 2 časa pod atmosferom vodonika (1 atm). Reakcija je filtrirana i koncentrisana. Ostatak je ispran dva puta sa MeOH da se dobije produkt iz naslova (160 mg, prinos: 70%). MS (ESI):778 [M+H]<+>.
g. terc-butil estar (2-Akriloilamino-4-morfolin-4-il-fenil)-{6-[3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-ureido]-pirimidin-4-il}-karbaminske kiseline [0172] U rastvor terc-butil estra (2-amino-4-morfolin-4-il-fenil)-{6-[3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-ureido]-pirimidin-4-il}-karbaminske kiseline (80 mg, 0.103 mmol) u DCM (5 mL) dodat je rastvor TEA (10 mg/mL, 1.2 mL, 0.12 mmol) i rastvor akriloil hlorida (10 mg/mL, 1 mL, 0.11 mmol) kap po kap na 0°C, a dobijena smeša je mešana tokom 1 časa na sobnoj temperaturi. LC-MS je pokazala da je reakcija bila potpuna. Dodata je voda (5 mL) da ugasi reakciju, a reakciona smeša je ekstrahovana sa DCM. Kombinovani ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirani. Filtrat je uparen pod vakumom da se dobije sirovi produkt, koji je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
h. N-(2-{6-{3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-fenil-ureido]--pirimidin-4-ilamino}-5-morfolin-4-il-fenil)-akrilamid
[0173] U rastvor terc-butil estra (2-akriloilamino-4-morfolin-4-il-fenil)-(6-[3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-ureido]-pirimidin-4-il)-karbaminske kiseline (sirov, pripremljen iznad) u CH2Cl2(10 mL) dodata je TFA (3 mL) na 0°C, dobijena smeša je mešana tokom 1 časa na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je koncentrovana i neutralizovana sa NH3.H2O da bi se dobilo sirovo jedinjenje, koje je prečišćeno preparativnom HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (10 mg, prinos: 16% u dva koraka).<1>H NMR (300 Mhz, DMSO-d6) δ 12.05 (s, 1H), 9.60 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.33-7.30 (m, 2H), 6.89 (s, 1H), 6.83 (d, 1H), 6.48 (dd, 1H), 6.25-6.21 (m, 2H), 5.72 (d, 1H), 3.96 (s, 6H), 3.73 (br, 4H), 3.44 (s, 3H), 3.10 (br, 4H); MS (ESI): 602 [M+H]<+>
Primer - 124
N-[2-{6-[3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-5-(3,5-dimetil-piperazin-1-il)-fenil]-akrilamid
[0175] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), zamenom 4-(3,5-dimetil-piperazin-1-il)-2-nitro-fenilamina (priprema prikazana ispod) u koraku (d) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (26 mg, prinos: 30% u tri koraka).<1>H NMR (300 Mhz, Metanol-d4) δ 8.32 (s, 1H), 7.36-7.33 (m, 2H), 6.95 (d, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.43-6.37 (m, 2H), 6.15 (s, 1H), 5.77 (d, 1H), 3.95 (s, 6H), 3.70 (d, 2H), 3.29 (s, 3H), 3.18-3.13 (m, 2H), 2.45 (t, 2H), 1.24 (d, 6H); MS (ESI): 629 [M+H]<+>.
Priprema 4-(3,5-Dimetil-piperazin-1-il)-2-nitro-fenilamina
[0176]
preko noći
a. di-terc-Butil 4-bromo-2-nitrofenilkarbamat
[0177] Smeša 4-bromo-2-nitroanilina (10 g, 46 mmol), (Boc)2O (20.7 g, 95 mmol) u THF (250 mL) je zagrevana preko noći pod refluksom. Smeša je koncentrovana da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (19.2 g, kvant) koje je korišćeno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
b. di-terc-butil estar [4-(3,5-Dimetil-piperazin-1-il)-2-nitro-fenil]-karbaminske kiseline [0178] Degasirana smeša di-terc-Butil 4-bromo-2-nitrofenilkarbamata (1 g, 2.4 mmol), 2,6-dimetil-piperazina (410 mg, 3.6 mmol), Pd2(dba)3(220 mg, 0.24 mmol), Xantphos (278 mg, 0.48 mmol) i Cs2CO3(1.56 g, 4.8 mmol) u toluenu (30 mL) zagrevana je na 100 °C tokom 1 časa. Reakcija je koncentrovana, i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da bi se dobila smeša naslovnog jedinjenja i mono-Boc produkt (600 mg). Smeša je korišćena direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI): 350 [M-Boc+H]<+>.
c. 4-(3,5-Dimetil-piperazin-1-il)-2-nitro-fenilamin
[0179] U rastvor di-terc-butil estra [4-(3,5-dimetil-piperazin-1-il)-2-nitro-fenil]-karbaminske kiseline i mono-Boc produkta (600 mg) u DCM (20 mL) dodata je TFA (10 mL) na 0°C, dobijena smeša je mešana tokom 3 časova na sobnoj temperaturi. Posle uklanjanja svih isparljivih materija in vacuo, ostatak je ponovo rastvoren u DCM, neutralisan sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, i ekstrahovan sa DCM. Kombinovani ekstrakti su koncentrovani i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (233 mg, prinos: 39% u dva koraka). MS (ESI): 251 [M+H]<+>.
Primer - 125
[0180]
N-[2-{6-[3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-5-(4-metansulfonil-piperazin-1-il)-fenil]-akrilamid
[0181] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), supstituisanjem 4-(4-metansulfonil-piperazin-1-il)-2-nitro-fenilamina (priprema prikazana ispod) u koraku (d) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (15 mg, prinos: 9.6% u pet koraka).
<1>H NMR (300 Mhz, DMSO-d6) δ 12.03 (s, 1H), 9.62 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.37-7.32 (m, 2H), 6.89-6.83 (m, 2H), 6.46 (dd, 1H), 6.26-6.21 (m, 2H), 5.72 (d, 1H), 3.93 (s, 6H), 3.34-3.16 (m, 11H), 2.93 (s, 3H); MS (ESI): 679 [M+H]<+>.
Priprema 4-(4-Metansulfonil-piperazin-1-il)-2-nitro-fenilamina
[0182]
a. di-terc-Butil 4-bromo-2-nitrofenilkarbamat
[0183] Smeša 4-bromo-2-nitroanilin (10 g, 46 mmol), (Boc)2O (20.7 g, 95 mmol) u THF (250 mL) je zagrevana preko noći pod refluksom. Smeša je koncentrovana da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (19.2 g, kvant) koje je direktno korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
, ,
b. di-terc-butil estar [4-(4-Metansulfonil-piperazin-1-il)-2-nitro-fenil]-karbaminske kiseline [0184] Degasirana smeša di-terc-butil 4-bromo-2-nitrofenilkarbamata (1 g, 2.4 mmol), 1-metansulfonil-piperazina (590 mg, 3.6 mmol), Pd2(dba)3(220 mg, 0.24 mmol), Xantphos (278 mg, 0.48 mmol) i Cs2CO3(1.56 g, 4.8 mmol) u toluenu (30 mL) zagrevana je na 100 °C tokom 1 časa. Reakcija je koncentrovana, i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da bi se dobila smeša naslovnog jedinjenja i mono-Boc produkt (755 mg). Smeša je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI): 400 [M-Boc+H]<+>.
c. 4-(4-Metansulfonil-piperazin-1-il)-2-nitro-fenilamin
[0185] U rastvor di-terc-butil estra [4-(4-metansulfonil-piperazin-1-il)-2-nitro-fenil]-karbaminske kiseline i mono-Boc produkt (755 mg) u DCM (20 mL) dodata je TFA (10 mL) na 0°C, dobijena smeša je mešana tokom 3 časova na sobnoj temperaturi. Posle uklanjanja svih isparljivih materija in vacuo, ostatak je ponovo rastvoren u DCM, neutralisan sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, i ekstrahovan sa DCM. Kombinovani ekstrakti su koncentrovani i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (290 mg, prinos: 40% u dva koraka). MS (ESI): 301 [M+H]<+>.
Primer - 126
[0186]
N-[2-{6-[3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-5-(3-dimetilamino-propil)-fenil]-akrilamid
[0187] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), supstituisanjem 4-(3-Dimetilamino-prop-1-inil)-2-nitro-fenilamina (priprema prikazana ispod) u koraku (d) i platina oksida u koraku (f) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (4 mg, prinos: 1.4% u pet koraka).<1>H-NMR (300 Mhz, DMSO-d6) δ 11.98 (s, 1H), 9.66 (d, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.52 (d, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.04 (dd, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.48 (dd, 1H), 6.34 (s, 1H), 6.24 (dd, 1H), 5.72 (dd, 1H), 3.94 (s, 6H), 3.25 (s, 3H), 2.59 (t, 2H), 2.24 (t, 2H), 2.11 (s.6H), 1.71 (m, 2H); MS (ESI) 602 [M+H]<+>.
Priprema 4-(3-Dimetilamino-prop-1-inil)- 2-nitro-fenilamin
[0188]
a. 4-(3-Dimetilamino-prop-1-inil)-2-nitro-fenilamin
[0189] U mešani rastvor 4-bromo-2-nitro-fenilamin (1.08 g, 5 mmol) i dimetil-prop-2-inilamin (1.0 g, 12 mmol) u TEA (20 mL) dodat je Pd(PPh3)2Cl2(0.7 g, 1 mmol) i CuI (360 mg, 2 mmol). Rastvor je mešan na 60 °C pod azotom tokom 3 časa. Rastvor je uparen sa silikagelom i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu dajući naslovljeno jedinjenje (1.1 g, 70% čistoća). Naslovljeno jedinjenje je uzeto direktno u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. MS (ESI) 221 [M+H]<+>.
1
Primer - 127
[0190]
N-[2-{6-[3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-5-(2-dimetilamino-etoksi)-fenil]-akrilamid
[0191] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G za jedinjenje 123, supstituisanjem 4-(2-Dimetilamino-etoksi)-2-nitro-fenilamina (priprema prikazana ispod) u koraku (d) i platina oksida u koraku (f) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (4.3 mg, prinos: 8% u pet koraka).<1>H-NMR (300 Mhz, DMSO-d6) δ 12.04 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.33(d, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.79 (dd, 1H), 6.51 (dd, 1H), 6.26∼6.20 (m, 2H), 5.73 (dd, 1H), 4.04 (t, 2H), 3.96 (s, 6H), 3.27 (s, 3H), 2.67 (t, 2H), 2.24 (s, 6H); MS (ESI) 604 [M+H]<+>.
Priprema 4-(2-Dimetilamino-etoksi)-2-nitro-fenilamina
[0192]
a. 4-(2-Dimetilamin-etoksi)-2-nitro-fenilamin
[0193] U mešani rastvor 4-amino-3-nitro-fenola (1.54 g, 10 mmol) i (2-hloro-etil)-dimetilamin vodonik hlorid (1.43 g, 10 mmol) u butanonu (40 mL) dodat je Cs2CO3(10 g, 30 mmol) i NaI (150 mg, 1 mmol). Rastvor je lagano zagrejan do 80 °C u toku jednog časa. Tada je rastvor mešan na 80 °C tokom 2 časa. Rastvor je filtriran kroz Celite® i ispran sa acetonom. Rastvor je uparen sa silikagelom i prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (1.0 g, prinos: 45%) kao braon čvrsta supstanca.<1>H-NMR (300 Mhz, DMSO-d6) δ 7.38 (d, 1H), 7.24 (s, 2H), 7.16 (dd, 2H), 6.99 (d, 1H), 3.98 (t, 2H), 2.58 (t, 2H), 2.20 (s, 6H); MS (ESI) 226 [M+H]<+>.
2
Primer - 128
[0194]
(2-{6-[3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-fenil)-amid but-2-inske kiseline
[0195] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), supstituisanjem 2-nitro-fenilamina u koraku (d), izostavljanjem koraka (e), i zamenom koraka (g) sa sledećom procedurom ispod da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (7 mg, prinos: 4.8% u pet koraka).<1>H NMR (300 Mhz, DMSO-d6) δ 11.97 (s, 1H), 10.07 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.24-7.15 (m, 2H), 6.90 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 3.93 (s, 6H), 3.29 (s, 3H), 2.22 (s, 3H); MS (ESI): 529 [M+H]<+>.
[0196] U rastvor terc-butil estra (2-amino-fenil)-{6-[3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-ureido]-pirimidin-4-il}-karbaminske kiseline (50 mg, 0.075 mmol) i DCC (42 mg, 0.2 mmol) u DCM (50 mL) dodat je rastvor but-2-inske kiseline (13 mg, 0.15 mmol) u DCM (10 mL) na 0°C, te je dobijena smeša mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodata je voda (1 mL) da ugasi reakciju. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom reverzne faze da se dobije jedinjenje iz naslova (20 mg, prinos: 34%). MS (ESI): 659 [M+H]<+>.
[0197] Jedinjenje 129 je sintetisano na sličan način kao i jedinjenje 100.
Primer - 130
N-(2-{6-[1-Benzil-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-fenil)-akrilamid
[0199] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), supstituisanjem 2-nitro-fenilamina i 1-benzil-1-(6-hloro-pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-uree (priprema prikazana ispod) u koraku (d) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (26 mg, prinos: 20% u pet koraka).<1>H NMR (300 Mhz, DMSO-d6) δ 12.27 (s, 1H), 9.68 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.33-7.19 (m, 6H), 6.92 (s, 1H), 6.45 (dd, 1H), 6.24 (d, 1H), 6.18 (s, 1H), 5.74 (d, 1H), 5.07 (s, 2H), 3.95 (s, 6H); MS (ESI): 593 [M+H]<+>.
Priprema 1-Benzil-1-(6-hloro-pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-uree
[0200]
a. Benzil-(6-hloro-pirimidin-4-il)-amin
[0201] U rastvor 4,6-dihloro-pirimidina (1.5 g, 10 mmol) u iPrOH (40 mL) i DIPEA (1.55 g, 12 mmol) dodat je rastvor benzilamina (1.28 g, 12 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša mešana je na sobnoj temperaturi tokom 2.5 časa. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa DCM. Kombinovani ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, i koncentrisani da se dobije sirovi produkt, koji je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (1.5 g, prinos: 68%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 Mhz, CDCl3) δ 8.35 (br s, 1H), 7.20-7.38 (m, 5 H), 6.35 (s, 1H), 4.52 (s, 2H); MS (ESI): 220 [M+H]<+>.
4
b. 1-Benzil-1-(6-hloro-pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-urea
[0202] U rastvor benzil-(6-hloro-pirimidin-4-il)-amina (800 mg, 3.64 mmol) u DMF (15 mL) dodat je NaH (60%, 218 mg, 5.45 mmol) na 0°C, i smeša je mešana tokom 10 minuta na sobnoj temperaturi. Rastvor 1-izocijanato-3,5-dimetoksi-benzena (Procedura 2A, koraci a-d; 1.35 g, 5.45 mmol) u DMF (2 mL) dodat je kap po kap na 0°C. Dobijena smeša mešana je na sobnoj temperaturi tokom 2 časa. Dodat je zasićeni vodeni rastvor NH4Cl (2 mL) da ugasi reakciju. Smeša je koncentrovana i ekstrahovana sa DCM. Kombinovani ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, i koncentrisani da se dobije sirovi produkt, koji je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (1.7 g, prinos: 77%). MS (ESI): 599 [M+H]<+>.
Primer -131
N-(2-{6-[3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-piridin-2-ilmetil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-fenil)-akrilamid
[0204] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), supstituisanjem 2-nitro-fenilamina i 1-(6-hloro-pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-piridin-2-ilmetil-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-uree (priprema prikazana ispod) u koraku (d) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (35 mg, prinos: 13% u pet koraka).<1>H NMR (300 Mhz, DMSO-d6) δ 12,15 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.80 (t, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.31-7.25 (m, 3H), 7.17 (t, 1H), 7.09 (t, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.45 (dd, 1H), 6.39 (s, 1H), 6.23 (d, 1H), 5.74 (d, 1H), 5.17 (s, 2H), 3.94 (s, 6H); MS (ESI): 594 [M+H]<+>.
Priprema 1-(6-Hloro-pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-piridin-2-ilmetil-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-urea
[0205]
a. (6-Hloro-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilmetil-amin
[0206] U rastvor 4,6-dihloro-pirimidina (1 g, 7 mmol) u iPrOH (40 mL) i DIPEA (1.16 g, 9 mmol) dodat je rastvor 2-piridinilmetanamina (970 mg, 9 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša mešana je na sobnoj temperaturi tokom 2.5 časa. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa DCM. Kombinovani ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrisani da se dobije sirovi proizvod, koji je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (1.2 g, prinos: 78%). MS (ESI): 221 [M+H]<+>.
b. 1-(6-Hloro-pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-piridin-2-ilmetil-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-urea
[0207] U rastvor (6-hloro-pirimidin-4-il)-piridin-2-ilmetil-amina (200 mg, 0.91 mmol) u DMF (5 mL) dodat je NaH (60%, 55 mg, 1.37 mmol) na 0°C, i smeša je mešana tokom 10 minuta na sobnoj temperaturi. Rastvor 1-izocijanato-3,5-dimetoksi-benzena (Procedura 2A, a-d; 337 mg, 1.37 mmol) u DMF (2 mL) dodat je kap po kap na 0°C. Dobijena smeša je mešana tokom 30 minuta. Dodat je SEMCI (230 mg, 1.37 mmol) u DMF (2 mL) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 časa. Dodat je zasićeni vodeni rastvor NH4Cl da ugasi reakciju. Smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani ekstrakti su isprani vodom i fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i filtrirani. Filtrat je koncentrovan da se dobije sirovi proizvod, koji je prečišćen fleš hromatografijom na silicijum dioksidu da bi se dobio proizvod iz naslova (420 mg, prinos: 78%). MS (ESI): 598 [M+H]<+>.
Primer - 132
[0208]
N-(2-{6-[3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-piridin-4-ilmetil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-fenil)-akrilamid
[0209] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), supstituisanjem 3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-[6-(2-nitro-fenilamino)-pirimidin-4-il]-1-piridin-4-ilmetil-uree u koraku (e) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (14 mg, prinos: 8.1%).<1>H NMR (300 Mhz, DMSO-d6) δ 12.03 (s, 1H), 9.68 (s, 1H), 8.92 (s, 1H), 8.49 (d, 2H), 8.39 (s, 1H), 7.67 (d, 1H), 7.27-7.17 (m, 4H), 7.10 (t, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.48 (dd, 1H), 6.24 (d, 1H), 6.15 (s, 1H), 5.74 (d, 1H), 5.09 (s, 2H), 3.94 (s, 6H); MS (ESI): 594 [M+H]<+>.
Priprema 3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-[6-(2-nitro-fenilamino)-pirimidin-4-il]-1-piridin-4-ilmetil-uree
[0210]
a. (6-Hloro-pirimidin-4-il)-piridin-4-ilmetil-amin
[0211] U rastvor 4,6-dihloro-pirimidina (1.5 g, 10.5 mmol) i DIPEA (1.62 g, 12.6 mmol) u iPrOH (40 mL) dodat je 4-piridinilmetanamin (1.2 g, 11 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša mešana je na sobnoj temperaturi tokom 2 časa. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa DCM. Kombinovani ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, i koncentrisani da se dobije sirovi produkt, koji je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (1.8 g, prinos: 80%). MS (ESI): 221 [M+H]<+>.
b. N-(2-Nitro-fenil)-N'-piridin-4-ilmetil-pirimidin-4,6-diamin
[0212] Degasirana smeša (6-hloro-pirimidin-4-il)-piridin-4-ilmetil-amina (500 mg, 2.27 mmol), 2-nitroanilina (317mg, 2.3 mmol), Pd2(dba)3(200 mg, 0.22 mmol), Xantphos (253 mg, 0.44 mmol) i Cs2CO3(1.48 g, 9.35 mmol) u toluenu (10 mL) zagrevana je na 100 °C tokom 3 časa. Reakcija je koncentrovana, i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije sa reverznom fazom što je praćeno sa fleš hromatografijom na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (330 mg, prinos: 45%). MS (ESI): 323 [M+H]<+>.
c. 3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-[6-(2-nitro-fenilamino)-pirimidin-4-il]-1-piridin-4-ilmetil-urea
[0213] U rastvor N-(2-nitro-fenil)-N'-piridin-4-ilmetil-pirimidin-4,6-diamina (330 mg, 1.02 mmol) u DMF (10 mL) dodat je NaH (60%, 56 mg, 1.4 mmol) na 0°C, i smeša je mešana tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi. Rastvor 1-izocijanato-3,5-dimetoksibenzena (Procedura 2A, koraci a-d; 345 mg, 1.4 mmol) u DMF (2 mL) dodat je kap po kap na 0°C. Dobijena smeša mešana je na sobnoj temperaturi tokom 2 časa. Dodat je zasićeni vodeni rastvor NH4Cl (2 mL) da ugasi reakciju. Smeša je koncentrovana i ekstrahovana sa DCM. Kombinovani ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, i koncentrisani da se dobije sirovi produkt, koji je prečišćen pomoću prep-TLC da se dobije jedinjenje iz naslova (190 mg, prinos: 33%). MS (ESI): 570 [M+H]<+>.
Primer - 133
[0214]
Priprema 5-(4-etil-piperazin-1-il)-2-nitro-fenilamina
[0215]
1. 5-(4-Etil-piperazin-1-il)-2-nitro-fenilamin
[0216] Smeša 1-etil-piperazina (1.2 mL, 9.6 mmol), 5-fluoro-2-nitro-fenilamina (1 g, 6.4 mmol), DIPEA (1.24 g, 9.6 mmol) u DMF (15 mL) zagrevana je na 80 °C preko noći. Reakciona smeša je sipana u ledenu vodu i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani ekstrakt je ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko anhidrovanog Na2SO4, i koncentrovan kako bi se dobio sirovi produkt, koji je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (1 g, prinos: 63%). ESI-MS: 251 [M+H]<+>.
N-[2-{6-[3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-4-(4-etil-piperazin-1-il)-fenil]-akrilamid so trifluorosirćetne kiseline
[0217] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), supstituisanjem 5-(4-etil-piperazin-1-il)-2-nitro-fenilamina u koraku (a) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (20 mg, prinos: 39%).<1>H NMR (300 Mhz, Metanol-d4) δ 8.37 (s, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.98 (d, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.43-6.38 (m, 3H), 5.78 (d, 1H), 3.96-3.88 (m, 8H), 3.68-3.64 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.33-3.08 (m, 6H), 1.40 (t, 3H); MS (ESI): 629 [M+H]<+>.
Primer - 135
[0218]
N-[2-{6-[3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-5-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-fenil]-akrilamid
[0219] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), supstituisanjem 4-(4-Etil-piperazin-1-ilmetil)-2-nitro-fenilamina (priprema prikazana ispod) u koraku (d) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (30 mg, prinos: 31% u pet koraka).<1>H NMR (300 Mhz, DMSO-d6) δ 11.97 (s, 1H), 9.71 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.12 (d, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.50 (dd, 1H), 6.39 (s, 1H), 6.25 (d, 1H), 5.73 (d, 1H), 3.93 (s, 6H), 3.48 (s, 2H), 3.32 (s, 3H), 2.50-2.25 (m, 10H), 0.98 (t, 3H); MS (ESI): 643 [M+H]<+>.
Priprema 4-(4-Etil-piperazin-1-ilmetil)-2-nitro-fenilamina
[0220]
preko noći
a. 4-(4-Etil-piperazin-1-ilmetil)-2-nitro-fenilamin.
[0221] U mešani rastvor 1-etil-piperazina (1.37 g, 12 mmol) u MeOH (30 mL) dodat je Ti(O<i>Pr)4(1.73 g, 6 mmol). Zatim je rastvor mešan na sobnoj temperaturi 15 min. Zatim je dodat 4-amino-3-nitro-benzaldehida (Procedura 2F, koraci a-b, 1.5 g, 9 mmol) u MeOH (10 mL) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi preko noći, Zatim je dodat NaBH4(380 mg, 10 mmol) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 časa. Rastvor je razblažen sa EtOAc i filtriran. Filtrat je ispran vodom i fiziološkim rastvorom, osušen preko anhidrovanog Na2SO4. Koncentrisanjem je dobijen proizvod, koji je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu da se dobije jedinjenje iz naslova (800 mg, prinos: 34%). MS (ESI): 265 [M+H]<+>Primer - 136
N-(2-{6-[3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-(3-metil-izoksazol-5-ilmetil)-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-fenil)-akrilamid
[0223] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), supstituisanjem 1-(6-Hloro-pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-(3-metilizoksazol-5-ilmetil)-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-uree (priprema prikazana ispod) u koraku (d) i gvožđa/sirćetne kiseline na 60 °C u koraku (f) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (26 mg, prinos: 12% u pet koraka).<1>H NMR (300 Mhz, DMSO-d6) δ 11.78 (s, 1H), 9.72 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.21-7.15 (m, 2H), 6.90 (s, 1H), 6.52-6.43 (m, 2H), 6.26 (d, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.74 (d, 1H), 5.16 (s, 2H), 3.93 (s, 6H), 2.18 (s, 3H); MS (ESI): 598 [M+H]<+>
Priprema 1-(6-Hloro-pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-(3-metilizoksazol-5-ilmetil)-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-uree
[0224]
a. (6-Hloro-pirimidin-4-il)-(3-metil-izoksazol-5-ilmetil)-amin
[0225] U rastvor 4,6-dihloro-pirimidina (660 mg, 4.46 mmol) u iPrOH (40 mL) i DIEA (690 mg, 5.35 mmol) dodat je rastvor C-piridin-2-il-metilamina (560 mg, 5 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša mešana je na sobnoj temperaturi tokom 2 časa. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa DCM. Kombinovani ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrisanje pod vakuumom dovelo je do sirovog produkta. Sirovi produkt je prečišćen fleš hromatografijom na silicijum dioksidu da se dobije jedinjenje iz naslova (650 mg, prinos: 65%). MS (ESI): 225 [M+H]<+>.
1
b. 1-(6-Hloro-pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-(3-metil-izoksazol-5-ilmetil)-3-(2-trimetilsilanil-etoksimetil)-urea.
[0226] U rastvor (6-hloro-pirimidin-4-il)-(3-metil-izoksazol-5-ilmetil)-amina (300 mg, 1.34 mmol) u DMF (5 mL) dodat je NaH (60%, 80 mg, 2 mmol) na 0°C, i smeša je mešana tokom 10 minuta na sobnoj temperaturi. Rastvor 1-izocijanato-3,5-dimetoksi-benzena (Procedura 2A, koraci a-d, 337 mg, 1.37 mmol) u DMF (2 mL) dodat je kap po kap na 0°C. Dobijena smeša je mešana tokom 0.5 časa. Dodat je SEMCl (230 mg, 1.37 mmol) u DMF (2 mL). Reakciona smeša mešana je na sobnoj temperaturi tokom 1 časa. Dodata je zasićena vodena NH4Cl da ugasi reakciju. Smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani ekstrakti su isprani vodom i fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirani. Filtrat je uparen pod vakumom da bi se dobio sirovi produkt, koji je prečišćen fleš hromatografijom na silicijum dioksidu da bi se dobio proizvod iz naslova (440 mg, prinos: 55%). MS (ESI): 604 [M+H]<+>
Primer - 137
N-[2-{6-[3-(2,6-Dihloro-3,5-dimetoksi-fenil)-1-metil-ureido]-pirimidin-4-ilamino}-4-(2-dimetilamino-etil)-fenil]-akrilamid TFA so
[0228] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G supstituisanjem 5-(2-dimetilamino-etil)-2-nitro-fenilamina (pripremljen prema postupku datom u nastavku) u koraku (d) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (39 mg, prinos: 29%) kao TFA so.<1>H NMR (300 Mhz, DMSO-d6) δ 11.86 (s, 1H), 9.76-9.70 (m, 2H), 9.02 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.86 (d,
2
1H), 7.51 (s, 1H), 7.12 (d, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.57-6.48 (m, 2H), 6.24 (d, 1H), 5.74 (d, 1H), 3.94 (s, 6H), 3.35-3.28 (m, 5H), 2.98-2.92 (m, 2H), 2.79 (s, 6H); MS (ESI): 588 [M+H]<+>.
Priprema 5-(2-Dimetilamino-etil)-2-nitro-fenilamin
a. [2-(3-Fluoro-4-nitro-fenil)-vinil]-dimetil-amin.
[0230] Smeša 2-fluoro-4-metil-1-nitro-benzena (3 g, 19.3 mmol), N,N-dimetilformamid dimetilacetala (10 mL) i 3 mL DMF (30 mL) zagrevana je na 125°C tokom 1 časa. Smeša je ohlađena i koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući ljubičastu čvrstu supstancu. Trituracija sa heksanima dala je čist proizvod iz naslova (2.5 g, prinos: 63%). MS (ESI): 211 [M+H]<+>.
b. [2-(3-Fluoro-4-nitro-fenil)-etil]-dimetil-amin.
[0231] U rastvor [2-(3-fluoro-4-nitro-fenil)-vinil]-dimetil-amina (1.7 g, 8 mmol) u MeOH, dodat je NaBH3CN (770 mg, 12 mmol) i jedna kap AcOH. Reakciona smeša mešana je na sobnoj temperaturi tokom 2 časa i ugašena vodom. Posle uklanjanja svih isparljivih materija in vacuo, ostatak je dvaput ekstrahovan sa 10% metanolom u DCM. Kombinovani ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata. Koncentracija pod vakuumom dala je sirovi proizvod, koji je prečišćen pomoću kolone reverzne faze da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (1.08 g, prinos: 63%). MS (ESI): 213 [M+H]<+>
c. 5-(2-Dimetilamino-etil)-2-nitro-fenilamin
[0232] U rastvor [2-(3-fluoro-4-nitro-fenil)-etil]-dimetil-amina (800 mg, 3.76 mmol) u MeOH (20 mL) dodat je amonijum hidroksid (5 mL). Reakciona smeša je zagrevana na 100°C uz mikrotalasno grejanje tokom 1.5 časa. Dobijena žuta čvrsta supstanca je sakupljena i isprana vodom, osušena pod vakuumom i kombinovana sa prethodnom serijom da bi se dobilo čisto jedinjenje iz naslova (560 mg, prinos: 55%). MS (ESI): 210 [M+H]<+>.
Procedura 2H: Primer - 139
[0233]
N-(2-((6-(3-(3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(4-etilpiperazin-1-il)fenil)akrilamid
[0234]
4
a. 1-(6-hloropirimidin-4-il)-3-(3,5-dimetoksifenil)-1-metilurea
[0235] U mešani rastvor 6-hloro-N-metilpirimidin-4-amina (1g, 6.965 mmol) u dioksanu (10 mL) dodata je DIPEA (3.6 mL, 20.895 mmol) i trifozgen (0.81g, 2.786 mmol) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena smeša je mešana tokom 1h na 70°C, i zatim je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Dobijena smeša dodata je putem kanile u rastvor 3,5-dimetoksianilina (1.2g, 8.358 mmol) i DIPEA (1.2 mL, 6.965 mmol) u dioksanu (4 mL) u atmosferi argona na 0°C. Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana je tokom 12h. Nakon završetka reakcije pomoću TLC (Heksani:EtOAc, 7:3), reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom i zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa etil acetatom (2x50 mL). Kombinovana organska faza isprana je fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrisana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni (Heksani:EtOAc, 70:30) kako bi se dobio 1-(6-hloropirimidin-4-il)-3-(3,5-dimetoksifenil)-1-metilureu (1.1 g, prinos: 50%) u vidu bele čvrste supstance.<1>HNMR (CDCl3, 300Mhz): δ 12.38 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.79 (d, 2H), 6.26 (t, 1H), 3.81 (s, 6H), 3.45 (s, 3H); MS (ESI): 323.10 [M+H]<+>.
b. 1-(6-hloropirimidin-4-il)-3-(3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat urea [0236] NaH (0.124g, 3.098 mmol) dodat je u mešani rastvor 1-(6-hloropirimidin-4-il)-3-(3,5-dimetoksifenil)-1-metiluree (0.5g, 1.549 mmol) u anhidrovanom DMF (4 mL) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena smeša je mešana tokom 15 minuta i dodat je di-terc-butil dikarbonat (0.50 mL, 2.323 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature uz mešanje tokom 16h. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom i viškom hladne vode. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa etil acetatom (3x25 ml). Kombinovana organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana, i koncentrisana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni (Heksani:EtOAc, 80:20) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0.45g, 69% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.<1>HNMR (CDCl3, 300Mhz): δ 8.72 (d, 1H), 8.78 (d, 1H), 6.43-6.37 (m, 3H), 3.77 (s, 6H), 3.49 (s, 3H), 1.40 (s, 9H); MS (ESI): 424.10 [M+2]<+>.
u ,
preko noći
c. 1-(3,5-dimetoksifenil)-3-(6-((4-(4-etilpiperazin-1-il)-2-nitrafenil)amino)pirimidin-4-il)-3-metil-1-terc-butil karbonat urea
[0237] Pd2(dba)3(0.095g, 0.104 mmol) i Xantphos (0.1202 g, 0.208 mmol) sipan je u 10 mL suvog toluena u zatvorenoj epruveti u atmosferi argona na sobnoj temperaturi. Prečišćavanje gasovitim argonom je nastavljeno tokom dodatnih 5-10 min. Zatim su dodati 1-(6-hloropirimidin-4-il)-3-(3,5-dimetoksifenil)-1-dimetil-3-terc-butil karbonat urea (0.43g, 1.042 mmol) i 4-(4-etilpiperazin-1-il)-2-nitroanilin (Procedura 2C, koraci a - c; 0.317g, 1.25 mmol) i dobijena reakciona smeša je prečišćena gasovitim argonom tokom 5 min., i zatim je dodat Cs2CO3(0.676g, 2.08 mmol). Prečišćavanje gasovitim argonom je nastavljeno tokom dodatih 5 min. pre zatvaranja reakcione epruvete. Tada je reakciona smeša zagrevana na 100°C tokom 12h. Posle završetka reakcije pomoću TLC (DCM:MeOH, 98:2), reakciona masa je podeljena između EtOAc i vode. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x25 ml) i kombinovani organski sloj je ispran vodom, fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4i uparen pod vakuumom. Sirovi ostatak je prečišćen sa hromatografijom na silikagel koloni (DCM:MeOH/97:3) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0.250g, 37% prinosa).<1>HNMR (CDCl3, 300Mhz): δ 9.30 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.17 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.14 (s, 1H), 7.08 (dd, 1H), 6.42 (d, 2H), 6.36 (t, 1H), 3.75 (s, 6H), 3.49 (s, 3H), 3.23 (t, 4H), 2.62 (t, 4H), 2.49 (q, 2H), 1.39 (s, 9H), 1.14 (t, 3H); MS (ESI): 637.4 [M+H]<+>.
d. terc-butil (6-(3-(3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4il)(4-(4-etilpiperazin-1-il)-2-nitrofenil)karbamat
[0238] NaH (0.0314g, 0.786 mmol) je dodat u mešani rastvor 1-(3,5-dimetoksifenil)-3-(6-((4-(4-etilpiperazin-1-il)-2-nitrofenil)amino)pirimidin-4-il)-3-metil-1-terc-butil karbonat uree (0.25g, 0.393 mmol) u anhidrovanom DMF (4 mL) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena smeša je mešana tokom 15 min. Tada je dodat di-terc-butil dikarbonat (0.12 mL, 0.589 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature uz mešanje tokom 18h. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom i hladnom vodom. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa etil acetatom (3x20 mL). Kombinovana organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrisana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni (DCM:MeOH, 97:3) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0.280g, 96% prinosa) kao braon čvrsta supstanca.<1>HNMR (CDCl3, 300Mhz): δ 8.44 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.14-7.03 (m, 2H), 6.48 (d, 1H), 6.44-6.21 (m, 2H), 3.75 (s, 6H), 3.49 (s, 3H), 3.49 (t, 4H), 2.62 (t, 4H), 2.49 (q, 2H), 1.38 (d, 18H), 1.14 (t, 3H); MS (ESI):737.5 [M+H]<+>.
e. terc-butil (2-amino-4-(4-etilpiperazin-1-il)fenil)(6-(3-(3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-tercbutil karbonat ureido)pirimidin-4-il)karbamat
[0239] Smeša terc-butil (6-(3-(3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonata ureido)pirimidin-4-il)(4-(4-etilpiperazin-1-il)-2-nitrofenil)karbamata (0.280g, 0.380 mmol) i Raney Nikal (0.05g) u smeši MeOH i THF (1:1) (10 mL) mešana je tokom 36h na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika (balon). Reakciona smeša je filtrirana kroz podlogu od Celita. Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0.14g, 52% prinosa). MS (ESI): 707.7 [M+H]<+>.
f. terc-butil (2-akrilamido-4-(4-etilpiperazin-1-il)fenil)(6-(3-(3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4-il)karbamat
[0240] U mešani rastvor terc-butil (2-amino-4-(4-etilpiperazin-1-il)fenil)(6-(3-(3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4-il)karbamata (0.14g, 0.183 mmol) u anhidrovanom DCM (5 mL) dodata je TEA (0.08mL, 0.594 mmol) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena smeša je mešana tokom 15 min. i polako je dodat akrilil hlorid (0.03 mL, 0.396 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša ostavljena je da se zagreje do sobne temperature uz mešanje tokom 3h. Reakciona smeša je razblažena sa DCM i vodom. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa DCM (3x20 mL). Organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana, i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni (DCM:MeOH, 97:3) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0.070g, 46% prinosa) kao braon čvrsta supstanca. MS (ESI): 761.4 [M+H]<+>.
g. N-(2-((6-(3-(3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(4-etilpiperazin-1-il)fenil)akrilamid
[0241] TFA (0.35 mL, 5 vol) se polako dodaje u mešani rastvor terc-butil (2-akrilamido-4-(4-etilpiperazin-1-il)fenil)(6-(3-(3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4-il)karbamata (0.070 g, 0.124 mmol) u suvom DCM (2 mL) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature uz mešanje tokom 24h. Napredak reakcije je promatran sa LCMS, nakon završetka reakcije, višak rastvarača je uklonjen pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen sa DCM i zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa DCM (3x10 mL). Organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrisana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni (DCM/MeOH, 97:3) da se dobije 45 mg željenog produkta uz HPLC čistoću od 80%, koji je prečišćen sa preparativnom HPLC (Uslovi: Kolona: XBRIDGE-C18 (19.0x150 mm, 5 mikrona); (Mobilna faza: A; 0.1% TFA u vodi, B; ACN) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (19 mg, 37% prinosa) u vidu beličaste čvrste supstance.<1>HNMR (CDCl3, 300Mhz): δ 12.85 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.19 (d, 1H), 6.79 (s, 2H), 6.75 (d, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.39 (d, 1H), 6.22-6.13 (m, 2H), 5.80-5.73 (m, 2H), 3.78 (s, 6H), 3.28 (t, 4H), 3.21 (s, 3H), 2.60 (t, 4H), 2.47 (q, 2H), 1.12 (t, 3H); MS (ESI): 561.60 [M+H]<+>; HPLC: 96.04%, rt: 6.40 min.
Primer - 140
N-(2-((6-(3-(2,6-dihlorofenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(4-etilpiperazin-1-il)fenil)akrilamid
[0243] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2H (Primer 139), supstituisanjem 2,6-dihloroanilina u koraku (a) i (2-(hlorometoksi)etil)trimetilsilana u koraku (b) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (18 mg, 3.2% prinosa) u vidu beličaste čvrste supstance.<1>HNMR (CDCl3, 300Mhz): δ 12.58 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.37 (d, 2H), 7.22 (d, 1H), 7.14 (t, 1H), 6.77 (dd, 1H), 6.67 (s, 1H), 6.42 (d, 1H), 6.25-6.16 (m, 1H), 5.85 (s, 1H), 5.78 (d, 1H), 3.35-3.24 (m, 7H), 2.62 (t, 4H), 2.49 (q, 2H), 1.14 (t, 3H); MS (ESI): 569.10 [M]<+>; HPLC: 96.98%, rt: 3.49 min.
Primer - 141
[0244]
N-(2-((6-(3-(2-hloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(4-etilpiperazin-1-il)fenil)akrilamid
[0245] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2H (Primer 139), supstituisanjem 2-hloro-3,5-dimetoksianilina (procedura je prikazana dole) u koraku (a) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (20 mg, 6.8 % prinosa) u vidu beličaste čvrste supstance. 1H-NMR (CDCl3, 400Mhz): δ 13.46 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.79-7.71 (m, 2H), 7.56 (s, 1H), 7.18 (d, 1H), 6.74 (dd, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.38 (d, 1H), 6.26 (d, 1H), 6.21-6.15 (m, 1H), 5.79-5.74 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 3.28 (t, 4H), 3.23 (s, 3H), 2.59 (t, 4H), 2.47 (q, 2H), 1.12 (t, 3H); MS (ESI): 595.15 [M]<+>; HPLC: 98.14%, rt: 3.49 min.
Priprema 2-hloro-3,5-dimetoksianilin
[0246]
a. N-(3,5-dimetoksifenil)acetamid
[0247] Anhidrid sirćetne kiseline (6.5 mL) se polako dodaje u mešani rastvor 3,5-dimetoksi anilina (10g, 65.359 mmol) u toluenu (50 mL) u atmosferi argona na sobnoj temperaturi i dobijena reakciona mešavina se meša tokom 15h. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je razblažena heksanom i rezultirajući talog je sakupljen filtriranjem i osušen pod vakuumom da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (12.5g, 98% prinosa) u vidu beličaste čvrste supstance.
<1>HNMR (CDCl3, 300Mhz): δ 7.38 (s, 1H), 6.75 (d, 2H), 6.23 (s, 1H), 3.76 (s, 6H), 2.15 (s, 3H); MS (ESI):196.1 [M+H]<+>.
b. N-(2-hloro-3,5-dimetoksifenil)acetamid
[0248] U mešani rastvor N-(3,5-dimetoksi-fenil)-acetamid (5g, 25.64 mmol) u sirćetnoj kiselini (17 mL) dodat je 32% vodeni rastvor hlorovodonične kiseline (14 mL), prećeno sa rastvorom natrijum hlorata (1.16g, 11 mmol) u vodi (1.5 mL) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana 30 min. na 0°C. Nakon toga reakciona smeša je sipana u ledenu vodu i napravljena je baza sa prahom K2CO3. Talog je filtriran i ispran sa vodom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni (Heksan/EtOAc, 88:12) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (1.8g, 31% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.<1>HNMR (DMSO-d6, 300Mhz): δ 9.36 (s, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.53 (d, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 2.08 (s, 3H); MS (ESI): 230.2 [M+H]<+>.
c. 2-hloro-3,5-dimetoksianilin
[0249] Kalijum hidroksid (2.19g, 39.18 mmol) je dodat u rastvor N-(2-hloro-3,5-dimetoksifenil)acetamida (1.8g, 7.837 mmol) u EtOH (100 mL) i vodi (10 mL) i reakciona smeša je zagrevana do refluksa tokom 12h. Višak EtOH je uklonjen pod sniženim pritiskom kako bi se dobio ostatak. Ostatak je zatim podeljen između vode i dietil etra. Organski sloj je odvojen, osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (1.2g, 82% prinosa) u vidu bele čvrste supstance.<1>HNMR (CDCl3, 300Mhz): δ 5.97 (s, 2H), 4.08 (brs, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.75 (s, 3H); MS (ESI):188.1 [M+H]<+>.
1
Procedura 21: Primer - 142
[0250]
N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(2-metoksietoksi)fenil)akrilamid
[0251]
a. 4-(2-metoksietoksi)-2-nitroanilin
[0252] Kalijum karbonat (3.58g, 0.025mol) suv i u prahu dodat je u rastvor 4-amino-3-nitrofenola (2g, 0.012mol) u DMF (20 mL) na 0°C pod atmosferom azota. U ovo je kap po kap dodat, 1-bromo-2-metoksietan (1.34 mL, 0.014mol) i dobijena reakciona smeša je refluksovana preko noći. Zatim je reakciona smeša filtrirana kroz Celit. Filtrat je koncentrovan i razblažen
2
sa etil acetatom i vodom. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa etil acetatom (3x30 mL). Organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrisana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni da se dobije jedinjenje iz naslova (0.6g, prinos: 24%) a kao čvrsta supstanca. MS (ESI): 213.15 [M+H]<+>.
ouen,<o>
b. N<4>-(4-(2-metoksietoksi)-2-nitrofenil)-N<6>-metilpirimidin-4,6-diamin
[0253] 4-(2-metoksietoksi)-2-nitroanilin (0.6g, 2.830mmol) i 6-hloro-N-metilpirimidin-4-amin (0.404 g, 2.830 mmol) prebačeni su u 10 mL suvog toluena u zatvorenu epruvetu u atmosferi argona na sobnoj temperaturi. Prečišćavanjem sa gasovitim argonom nastavljeno je tokom još 5-10 min. Zatim su dodati Cs2CO3(2.3 g, 7.075 mmol, 2.5eq) i Xantphos (0.490g, 0.849 mmol) i dobijena reakciona smeša je prečišćena gasovitim argonom tokom 5 min, što je praćeno dodavanjem Pd2(dba)3(0.518 g, 0.566 mmol). Prečišćavanje gasovitim argonom nastavljeno je tokom dodatnih 5 min pre zatvaranje reakcione epruvete. Tada je reakciona smeša zagrevana na 100°C tokom 7h. Posle završetka reakcije pomoću TLC (DCM:MeOH, 98:2), reakciona masa je filtrirana kroz celit i filtrat je uparen pod vakumom da bi se dobilo sirovi ostatak. Sirovi ostatak je prečišćen sa hromatografijom na silikagel koloni da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0.93g, prinos: 70%); MS (ESI): 320.3 [M+H]<+>.
c. 3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-(6-((4-(2-metoksietoksi)-2-nitrofenil)amino) pirimidin-4-il)-1-metilurea
[0254] U mešani rastvor 2,6-dihloro-3,5-dimetoksianilina (500 mg, 2.252 mmol) u dioksanu (10 mL) dodat je 20% fozgen u toluenu (4.4 mL, 9.0mmol) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena smeša je mešana tokom 6h na 90°C, i zatim je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Rastvarači su uklonjeni i ostatak je rastvoren u toluenu (10 mL). U ovo je dodat N4-(4-(2-metoksietoksi)-2-nitrofenil)-N6-metilpirimidin-4,6-diamin (0,718 g, 8.358 mmol, 1.0 eq). Dobijena reakciona smeša je zatim refluksovana tokom 6h. Posle završetka reakcije pomoću TLC (Heksani:EtOAc, 7:3), reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, koncentrisana pod vakuumom da bi se dobila sirova reakciona smeša. Čvrsta supstanca koja se istaložila dodavanjem etil acetata u sirovu reakcionu smešu je filtrirana, isprana sa etrom i pentanom da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0.285, prinos: 32%) u vidu bele čvrste supstance. MS (ESI): 567.0 [M+H]<+>.
d. terc-butil (6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4-il)(4-(2-metoksietoksi)-2-nitrofenil)karbamat
[0255] DMAP(0.025g, 0.2 mmol), i di-terc-butil dikarbonat (0.438g, 2.009 mmol) su dodati u mešani rastvor 3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-(6-((4-(2-metoksietoksi)-2-nitrofenil)amino) pirimidin-4-il)-1-metiluree (0.285g, 0.502 mmol) u anhidrovanom THF (10 mL) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena smeša je refluksovana tokom 3-4h. Posle završetka reakcije pomoću TLC (Heksani:EtOAc, 1:1), reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, koncentrisana pod vakuumom da bi se dobio sirovi ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0.35g, prinos: 88%) u vidu beličaste čvrste supstance. MS (ESI): 767.1 [M+H]<+>.
e. terc-butil (2-amino-4-(2-metoksietoksi)fenil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4-il)karbamat
[0256] Raney nikal (0.05g) dodat je u rastvor terc-butil (6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4-il)(4-(2-metoksietoksi)-2-
4
nitrofenil)karbamata (0.350g, 0.456mmol) u smeši THF i MeOH (10 mL) i dobijena reakciona smeša je mešana tokom 14h na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika (balon). Reakciona smeša je filtrirana kroz podlogu od Celita. Filtrat je koncentrovan da bi se dobio sirovi ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni (MeOH:DCM, 5:95) da se dobije jedinjenje iz naslova (0.26g, prinos: 77%) kao čvrsta supstanca. MS (ESI): 737.2 [M+H]<+>.
f. terc-butil (2-akrilamido-4-(2-metoksietoksi)fenil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4-il)karbamat
[0257] U mešani rastvor terc-butil (2-amino-4-(2-metoksietoksi)fenil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4-il)karbamata (0.26g, 0.352 mmol) u anhidrovanom DCM (6 mL) dodata je TEA (0.09mL, 0.704 mmol) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena smeša je mešana tokom 15 min. i lagano je dodat akriloil hlorid (0.04 mL, 0.528 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature uz mešanje tokom 2h. Reakciona smeša je razblažena sa DCM i vodom. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa DCM (3x30 mL). Organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana, i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0.200g, prinos: 72%) kao čvrsta supstanca. MS (ESI): 791.2 [M+H]<+>.
g. N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(2-metoksietoksi)fenil)akrilamid
[0258] TFA (0.38 mL, 5.05mmol) je polako dodavana u mešani rastvor terc-butil (2-akrilamido-4-(2-metoksietoksi)fenil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-tercbutil karbonat ureido)pirimidin-4-il)karbamata (0.2g, 0.252 mmol) u suvom DCM (2 mL) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature uz mešanje tokom 12h. Napredak reakcije je promatran sa LCMS. Nakon završetka reakcije, višak rastvarača je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirova čvrsta supstanca je isprana etrom da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (86 mg, prinos: 58%) u vidu bele čvrste supstance.<1>HNMR (DMSO-d6, 400Mhz): δ12.01 (s, 1H), 9.60 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.33 (s, 1H); 7.42 (s, 1H), 7.34 (d, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.79 (d, 1H), 6.51 (dd, 1H), 6.23 (d, 2H), 5.72(d, 1H), 4.08 (m,2H), 3.93 (s, 6H), 3.66 (m, 2H), 3.31(s,3H), 3.23(s,3H). MS (ESI): 591.3 [M+H]<+>; HPLC: 96.04%, rt: 3.72 min.
Primer: 144
N-(2-((6-(3-(2-hloro-6-fluoro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(4-etilpiperazin-1-il)fenil)akrilamid
[0260] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u Proceduri 21 (Primer 142), supstituisanjem N<4>-(4-(4-etilpiperazin-1-il)-2-nitrofenil)-N<6>-metilpirimidin-4,6-diamina (Procedura 2C, Primer 108, Koraci a - d) i 2-hloro-6-fluoro-3,5-dimetoksianilina (postupak prikazan dole) u koraku (c) dajući traženo pretposlednje jedinjenje (0.46 mg, prinos: 2.6 % u pet koraka) u vidu beličaste čvrste supstance. MS (ESI): 813.1 [M+H]<+>. Slobodni amin (46 mg, 0.075mmol) rastvoren je u smeši etil acetata: DCM: MeOH i tretiran sa fosfornom kiselinom (7 mg, 0.075 mmol). Nakon mešanja u trajanju od 1h, čvrsta supstanca je filtrirana i isprana sa etrom i pentanom da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (34.7 mg, prinos: 65%) u vidu beličaste čvrste supstance.<1>HNMR (DMSO-d6, 300Mhz): δ 12.15 (s, 1H), 9.60 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.29 (d, 2H), 6.9 (d, 2H), 6.81 (dd, 1H), 6.51-6.45 (m, 1H), 6.25-6.20 (m, 2H), 5.72 (d, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 3.23 (t, 4H), 3.14 (t, 4H), 2.54-2.50 (m, 5H), 1.05 (t, 3H); MS (ESI): 613.2 (M-H3PO4]<+>; HPLC: 98.6%, rt: 6.13 min.
Priprema 2-hloro-6-fluoro-3,5-dimetoksianilin
a. metil 2-fluoro-3,5-dimetoksibenzoat
[0262] Suspenzija Selectfluor (48.9 g, 0.15mol) u acetonitrilu (1.1L) je dodata u rastvor metil-3,5-dimetoksi benzoata (20 g, 0.10mol) u acetonitrilu na 0°C pod atmosferom azota. Dobijena reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana preko noći. Reakciona smeša se koncentriše pod vakuumom, razblažuje sa zasićenim rastvorom natrijum karbonata i etil acetata. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa etil acetatom (3x200mL). Organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni (gradijent heksan/etar 30:1 do 4:1) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (4g, prinos: 16.9%).
b. metil 2-hloro-6-fluoro-3,5-dimetoksibenzoat
[0263] SO2Cl2(2.20 g, 0.016 mol) dodat je kap po kap u rastvor metil-2-fluoro-3,5-dimetoksi benzoata (3.5 g, 0.016 mol) u acetonitrilu (40 mL) na 0°C pod atmosferom azota. Dobijena reakciona smeša je lagano zagrejana na sobnu temperaturu i mešana tokom 1h. Reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, i ekstrahovana sa etil acetatom (3x30 mL). Organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni koristeći eluent (gradijent heksan/etar (20:1) do heksan/etar (5:1) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (2.7g, prinos: 67%) kao čvrsta supstanca.
c. 2-hloro-6-fluoro-3,5-dimetboksibenzoeva kiselina
[0264] Suspenzija metil 2-hloro-6-fluoro-3,5-dimetoksibenzoata (2.7 g, 0.010 mol) i natrijum hidroksida (1.088 g, 0.0272) u anhidrovanom etanolu (30 mL) refluksovana je tokom 24h.
Dobijena reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i koncentrisana pod vakuumom da bi se dobilo sirovi ostatak. Sirovi ostatak je rastvoren u vodi i ekstrahovan sa etrom (3 x 30 mL). Vodeni sloj je zakiseljen sa konc. HCl i čvrsta supstanca je filtrirana, oprana hladnom vodom i osušena pod vakuumom da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (1.8 g, prinos: 71%) kao čvrsta supstanca.
d. 2-hloro-6-fluoro-3,5-dimetoksianilin
[0265] Suspenzija 2-hloro-6-fluoro-3,5-dimetoksibenzoeve kiseline (1.8 g, 0.0077 mol) i trietil amina (0.934 g, 0.0092 mol) u terc-BuOH (50 mL) mešana je 5 minuta. U dobijenu reakcionu smešu dodaje se difenil fosforil azid (2.53 g, 0.0092 mol) i zagreva do 82°C i drži se na ovoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zatim koncentrovana u vakuumu da bi se dobio sirovi ostatak. Sirovi ostatak je rastvoren u dihlormetanu (20 mL) i ohlađen na 0°C. U reakcionu smešu je dodata TFA (4 mL) i dobijena reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 2h. Rastvarači su uklonjeni pod vakuumom i sirovi ostatak je razblažen etil acetatom i zasićenim rastvorom natrijum karbonata. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa etil acetatom (3x30 mL). Organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni korišćenjem eluenta (gradijent heksan do heksan-etar (65:35)) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0.95g, prinos: 60%) kao čvrsta supstanca. MS (ESI): 205.7 [M+H]<+>.
Procedura 2J - Primer 145
[0266]
N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido) pirimidin-4-il)amino)-5-(hidroksimetil)fenil)akrilamid
[0267]
a. 1-(6-hloropirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat urea
[0268] DMAP (0.080g, 0.655 mmol) i di-terc-butil dikarbonat (2.9mL, 12.6 mmol) dodati su u mešani rastvor 1-(6-hloropirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metiluree (Procedura 2E, korak b; 2.6g, 6.632 mmol) u anhidrovanom THF (20 mL) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena smeša je zatim refluksovana tokom 2h. Posle završetka reakcije pomoću TLC (EtOAc:Heksan 3:7), reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, koncentrisana pod vakuumom da bi se dobio sirovi ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (2.5g, prinos: 69.4%) kao čvrsta supstanca.<1>H-NMR (CDCl3, 300Mhz): δ 8.73 (d, 1H), 7.95 (d, 1H), 6.61 (s, 1H), 3.95 (s, 6H), 3.63 (s, 3H), 1.35 (s, 9H).
b. metil 4-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4-il)amino)-3-nitrobenzoat
[0269] Metil 4-amino-3-nitrobenzoat (0.956g, 0.004mol) i 1-(6-hloropirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat urea (2g, 0.004mol) su stavljeni u 10 mL suvog toluena u zatvorenoj epruveti na sobnoj temperaturi i ispirana je sa gasovitim argonom tokom 5-10 min. Zatim su dodati Cs2CO3(3.25 g, 0.01 mol) i Xantphos (0.46 g, 0.0008 mol) i dobijena reakciona smeša je prečišćena gasovitim argonom 5 min, a zatim je dodato Pd2(dba)3(0.36g, 0,0004 mol). Prečišćavanje sa gasovitim argonom nastavljeno je još 5 min pre zaptivanja reakcione epruvete. Tada je reakciona smeša zagrevana na 100 °C tokom 12h. Posle završetka reakcije pomoću TLC, reakciona masa je filtrirana kroz celit i filtrat je uparen pod vakuumom da bi se dobilo sirovi ostatak. Sirovi ostatak je prečišćen sa hromatografijom na silikagel koloni da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (2.10 g, prinos: 79%);<1>H-NMR (CDCl3, 300Mhz): δ 10.3 (s, 1H), 9.00-8.95 (m, 2H), 8.75 (s, 1H), 8.22 (dd, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.61 (s, 1H), 3.95 (s, 6H), 3.94 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 1.39 (s, 9H).
c. metil 4-((terc-butoksikarbonil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksipirenil)-1-metil-3-tercbutil ureido)pirimidin-4-il)amino)-3-nitrobenzoat
[0270] DMAP (0.039g, 0.322 mmol) i di-terc-butil dikarbonat (1.48mL, 6.45mmol) dodati su u mešani rastvor metil 4-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4-il)amino)-3-nitrobenzoata (2.1g, 3.22 mmol) u anhidrovanom THF (5 ml) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena smeša je refluksovana tokom 12h. Posle završetka reakcije
1
pomoću TLC (EtOAc:Heksan 40:60), reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, koncentrisana pod vakuumom da bi se dobio sirovi ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (2.1g, prinos: 87%) kao čvrsta supstanca. MS (ESI): 751.0 [M]<+>.
d. terc-butil (6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4-il)(4-(hidroksimetil)-2-nitrofenil)karbamat
[0271] Litijum borohidrid (0.049g, 2.26mmol) je dodat u rastvor metil 4-((tercbutoksikarbonil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil-1-metil-3-terc-butil ureido)pirimidin-4-il)amino)-3-nitrobenzoata (1.7g, 2.26 mmol) u anhidrovanom THF (18mL) u atmosferi argona na 0°C. dobijena reakciona smešu je tada ostavljena da se zagreje do sobne temperature tokom 2.5h. Reakciona smeša je zatim ugašena sa ledenom vodom i razblažena sa etilacetatom. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa etil acetatom (3x20 mL). Organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrisana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0.480g, prinos: 29%) kao čvrsta supstanca. MS (ESI): 723.2 [M]<+>.
e. terc-butil (4-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-2-nitrofenil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4-il)karbamat
[0272] Imidazol (0.071g, 1.051mmol) i TBDMS-Cl (0.118g, 0.787 mmol) dodati su u mešani rastvor terc-butil (6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4-il)(4-(hidroksimetil)-2-nitrofenil)karbamata (0.380 g, 0.525 mmol) u anhidrovanom dihlorometan (5 ml) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena reakciona smeša je mešana tokom 4h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zatim razređena sa DCM i vodom. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa DCM (3x10 mL). Organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrisana pod vakuumom.
1 1
Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0,330g, prinos: 75%) kao čvrsta supstanca. MS (ESI): 837.4 [M]<+>.
f. terc-butil (2-amino-4-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)fenil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4-il)karbamat
[0273] Raney-Ni (0.06g) je dodat u rastvor terc-butil (4-(((terc-butildimetilsilil) oksi)metil)-2-nitrofenil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4-il)karbamata (0.3g, 0.358 mmol) u MeOH (5 ml) i dobijena reakciona smeša je mešana tokom 12h na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika (balon). Reakciona smeša je filtrirana kroz podlogu od Celita. Filtrat je koncentrovan da bi se dobio sirovi ostatak koji je zatim prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0.180g, prinos: 64%) kao čvrsta supstanca. MS (ESI): 807.2 [M]<+>.
g. terc-butil (2-akrilamido-4-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)fenil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4-il)karbamat
[0274] U mešani rastvor terc-butil (2-amino-4-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)fenil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-terc-butil karbonat ureido)pirimidin-4-il)karbamata (0.180 g, 0.223 mmol) u anhidrovanom DCM (5 mL) dodata je TEA (0.08 mL, 0.557 mmol) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena smeša je mešana tokom 15 min. i lagano je dodat akriloil hlorid (0.03 mL, 0.334 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature uz mešanje tokom 4h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni, kako bi se dobilo traženo jedinjenje iz naslova (0.130 g, prinos: 68%) kao čvrsta supstanca. MS (ESI): 861.3 [M]<+>.
1 2
h. N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(hidroksimetil)fenil)akrilamid
[0275] TFA (1.0 mL) je polako dodata u mešani rastvor terc-butil (2-akrilamido-4-(((tertbutildimetilsilil)oksi)metil)fenil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-tercbutil karbonat ureido)pirimidin-4-il)karbamata (0.130 g, 0.150 mmol) u suvom DCM (3 mL) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature uz mešanje tokom 13h. Napredak reakcije je promatran sa LCMS, nakon završetka reakcije, višak rastvarača je uklonjen pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen sa DCM i zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa DCM (3x10 mL). Organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrisana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni kako bi se dobilo 95 mg željenog produkta uz HPLC čistoću od 84%, koji je zatim prečišćen preparativnom HPLC (Uslovi: Kolona: X bridge C18 (19 mm x 150 mm, 5 µm); (Mobilna faza: A; 0.01% TFA u vodi, B; ACN) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (16 mg, prinos: 16%) u vidu bele čvrste supstance. 1H-NMR (DMSO-d6, 400Mhz): δ 12.08 (s, 1H), 9.70 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.53-7.46 (q, 1H), 6.32 (s, 1H), 6.25 (d, 1H), 5.74 (d, 1H), 5.42 (s, 1H), 5.35 (s, 1H), 4.49 (s, 2H), 3.94 (s, 6H), 3.25 (s, 3H); MS (ESI): 547.0 [M+H]<+>; HPLC: 97.4%, rt: 3.83 min.
Primer 147
[0276]
N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido) pirimidin-4-il)amino)-5-(metoksimetil)fenil)akrilamid
1
[0277] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u Proceduri 21 (Primer 142), supstituisanjem N<4>-(4-(metoksimetil)-2-nitrofenil)-N<6>-metilpirimidin-4,6-diamina (procedura je prikazana dole) u koraku (c) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (5.0 mg, prinos: 1.8%) u vidu beličaste čvrste supstance. 1H-NMR (CDCl3, 400Mhz): δ 12.30 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.52 (d, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.30 (d, 1H), 6.54 (s, 1H), 6.46 (d, 1H), 6.26 (dd, 1H), 6.07 (s, 1H), 5.83 (d, 1H), 5.18 (s, 2H), 3.93 (s, 6H), 3.82 (s, 3H), 3.34 (s, 3H); MS (ESI): 561.1 [M+H]<+>; HPLC: 95.76%, rt: 4.36 min.
Pripremanje N<4>-(4-(metoksimetil)-2-nitrofenil)-N<6>-metilpirimidin-4,6-diamina
[0278]
a. metil 4-amino-3-nitrobenzoat
[0279] Tionil hlorid (19.4 g, 164.85 mmol) je dodat u rastvor 4-amino-3-nitrobenzoeve kiseline (20 g, 109.89 mmol) u metanolu (200 mL) na 0°C. Dobijena smeša je zatim refluksovana tokom 12h. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Žuti talog je filtriran i osušen dajući naslovljeno jedinjenje (22 g, prinos: 100%) kao čvrstu supstancu, 1H-NMR (CDCl3, 300Mhz): δ 8.85 (d, 1H), 7.99 (dd, 1H), 6.83 (d, 1H), 6.40 (s, 2H), 3.90 (s, 3H),
b. metil 4-((6-(metilamino)pirimidin-4-il)amino)-3-nitrobenzoat
[0280] 6-hloro-N-metilpirimidin-4-amin, 3 (3 g, 20.97 mmol) i metil 4-amino-3-nitrobenzoat (3.9 g, 20.97 mmol) prebačeni su u toluen (5 ml) u zatvorenu epruvetu u atmosferi argona na sobnoj temperaturi. Gasoviti argon je propuštan tokom 5-10 min. Zatim su dodati Cs2CO3(17.0 g, 52.4 mmol) i Xantphos (3.6g, 6.29mmol) i dobijena reakciona smeša je prečišćena gasovitim argonom 5 min, zatim je dodat Pd2(dba)3(3.8 g, 4.19 mmol). Prečišćavanje sa gasovitim argonom nastavljeno je još 5 min pre zaptivanja reakcione epruvete.. Tada je reakciona smeša zagrevana na 110°C tokom 16h. Posle završetka reakcije pomoću TLC, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, filtrirana kroz sloj celita i filtrat je uparen pod vakumom da bi se dobilo sirovi ostatak. Sirovi ostatak je prečišćen sa hromatografijom na silikagel koloni da
1 4
bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (3.2 g, prinos: 51%) kao čvrsta supstanca; MS (ESI): 304.2 [M+H]<+>.
c. metil 4-((terc-butoksikarbonil)(6-((terc-butoksikarbonil)(metil)amino)pirimidin-4-il)amino)-3-nitrobenzoat
[0281] DMAP (0.497 g, 4.078 mmol) i di-terc-butil dikarbonat (8.89 g, 40.78 mmol) dodati su u mešani rastvor intermedijera-4 (3.1 g, 10.197mmol) u anhidrovanom THF (35 mL) u atmosferi argona na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je refluksovana tokom 2-3h. Posle završetka reakcije pomoću TLC, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, koncentrisana pod vakuumom da bi se dobio sirovi ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (1.9 g, prinos: 37%) kao čvrsta supstanca. MS (ESI): 504.0 [M+H]<+>.
d. terc-butil (6-((terc-butoksikarbonil)(4-(hidroksimetil)-2-nitrofenil)amino)pirimidin-4-il)(metil)karbamat
[0282] Litijum borohidrid (0.157g, 7.14 mmol) je dodat u rastvor metil 4-((tercbutoksikarbonil)(6-((terc-butoksikarbonil)(metil)amino)pirimidin-4-il)amino)-3-nitrobenzoata (1.8 g, 3.57 mmol) u THF (20 mL) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena smeša je tada ostavljena da se zagreje do sobne temperature i uz mešanje tokom 12h. Reakciona smeša je zatim ugašena ledenom vodom i razblažena sa etil acetatom. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa etil acetatom (3x40 mL). Organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana da bi se dobilo sirovi ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni kako bi se dobilo željeni intermedijer-6 (1.2 g, 75%) kao čvrstu supstancu. MS (ESI): 476.1 [M+H]<+>.
1
e. terc-butil (6-((terc-butoksikarbonil)(4-(metoksimetil)-2-nitrofenil)amino)pirimidin-4-il)(metil)karbamat
[0283] U rastvor terc-butil (6-((terc-butoksikarbonil)(4-(hidroksimetil)-2-nitrofenil)amino) pirimidin-4-il)(metil)karbamata (1.5 g, 3.488 mmol) u acetonu (20 mL) u atmosferi argona na 0°C, dodat je kalijum karbonat (0.48 g, 6.97 mmol) praćeno sa dodavanjem dimetil sulfata (0.87 g, 6.97 mmol). Dobijena reakciona smeša je zatim refluksovana tokom 24h i a zatim je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Reakciona smeša je koncentrisana pod vakuumom da bi se dobio sirovi ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0.3g, prinos: 19%) kao čvrsta supstanca. MS (ESI): 490.55 [M+H]<+>.
f. N<4>-(4-(metoksimetil)-2-nitrofenil)-N<6>-metilpirimidin-4,6-diamin
[0284] TFA (5 mL) je polako dodana u mešani rastvor terc-butil (6-((terc-butoksikarbonil)(4-(metoksimetil)-2-nitrofenil)amino)pirimidin-4-il)(metil)karbamata (0.85g) u suvom DCM (10 mL) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature uz mešanje tokom 1h. Nakon završetka reakcije, višak rastvarača je uklonjen pod sniženim pritiskom i ispran sa etrom da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0.7 g sirovo) kao čvrsta supstanca. MS (ESI): 290.2 [M+H]<+>.
1
Procedura 2K - Primer 148
[0285]
N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(4-metilpiperazin-1-karbonil)fenil)akrilamid
[0286]
a. 4-((terc-butoksikarbonil)(6-(3-(terc-butoksikarbonil)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-3-nitrobenzoeva kiselina
[0287] Litijum hidroksid (0.08 g, 2.99 mmol) je dodat u rastvor metil 4-((tercbutoksikarbonil)(6-(3-(terc-butoksikarbonil)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-3-nitrobenzoata (1.5 g, 1.997 mmol) (Procedura 2J, Korak c) u smeši THF (10 mL) i vode (2 mL) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je ostavljena da se
1
zagreje do sobne temperature uz mešanje tokom 5h. Posle završetka reakcije pomoću TLC (EtOAc:Heksan 3:7), reakciona mešavina je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo sirovi ostatak. Sirovi ostatak je rastvoren u vodi i ekstrahovana sa etar (3X30 mL). Vodeni sloj je zakiseljen sa 10% rastvorom limunske kiseline i precipitovani čvrsti ostatak je profiltriran, ispran hladnom vodom i osušen in vacuo da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (1.3 g, prinos: 93%) kao svetlo braon čvrsta supstanca. MS (ESI): 737.2 [M+H]<+>.
b. terc-butil (2-nitro-4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)fenil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-3-terc-butoksikarbonil-1-metilureido)pirimidin-4-il)karbamat
[0288] DIPEA (0.3 mL, 1.62 mmol), HATU (0.515 g, 1.355 mmol) i N-metil piperazin, 6 (0,09 mL, 0.813 mmol) su dodati u rastvor 4-((terc-butoksikarbonil)(6-(3-(terc-butoksikarbonil)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-3-nitrobenzoeve kiseline (0.4 g, 0.542 mmol) u DMF (5 ml) na 0°C u atmosferi argona. Dobijena reakciona smešu je tada ostavljena da se zagreje do sobne temperature uz mešanje tokom 18 h. Posle završetka reakcije pomoću TLC (MeOH:DCM 1:19), u reakcionu smešu je dodata voda. Precipitirana sirova čvrsta supstanca je filtrirana, osušena i prečišćena hromatografijom na silikagel koloni da se dobije jedinjenje iz naslova (0.27 g, prinos: 61%) kao čvrsta supstanca. MS (ESI): 819.1 [M+H]<+>.
c. terc-butil (2-amino-4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)fenil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-3-terc-butoksikarbonil-1-metilureido)pirimidin-4-il)karbamat
[0289] Raney nikal (0.06 g) je dodat u rastvor terc-butil (2-nitro-4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)fenil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-3-terc-butoksikarbonil-1-metilureido)pirimidin-4-il)karbamata (0.27 g, 0.329 mmol) u smeši MeOH (4 mL) i THF (4
1
mL) i dobijena reakciona smeša je mešana tokom 20h na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika. Reakciona smeša je filtrirana kroz sloj Celita. Filtrat je koncentrovan, dajući sirovo jedinjenje iz naslova (0.22 g, prinos: 84%) kao čvrsta supstanca. MS (ESI): 789.4 [M+H]<+>.
d. terc-butil (2-akrilamido-4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)fenil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-3-terc-butoksikarbonil-1-metilureido)pirimidin-4-il)karbamat
[0290] U mešani rastvor terc-butil (2-amino-4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)fenil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-3-terc-butoksikarbonil-1-metilureido)pirimidin-4-il)karbamata (0,22 g, 0.278 mmol) u anhidrovanom DCM (5 mL) dodata je TEA (0.08 mL, 0.557 mmol) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena smeša je mešana tokom 15 minuta i lagano je dodat akriloil hlorid (0.037 g, 0.417 mmol) na 0°C. Dobijena reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature uz mešanje tokom 2h. Reakciona smeša je ugašena zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i razblažena sa DCM. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa DCM (3x20 mL). Organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana da bi se dobilo sirovi ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0.060 g, prinos: 25%) kao čvrsta supstanca. MS (ESI): 843.3 [M+H]<+>.
e. N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(4-metilpiperazin-1-karbonil)fenil)akrilamid
[0291] TFA (0.2 mL) je lagano je dodata u mešani rastvor terc-butil (2-akrilamido-4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)fenil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-3-terc-butilkarbonil-1-metilureido)pirimidin-4-il)karbamata (0.060 g, 0.0711 mmol) u suvom DCM (2 mL) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne
1
temperature uz mešanje tokom 18h. Napredak reakcije je promatran sa LCMS, nakon završetka reakcije, višak rastvarača je uklonjen pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen sa DCM i ugašen sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa DCM (3x10 mL). Organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrisana pod vakuumom da bi se dobilo sirovi ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni da bi se dobilo 70 mg željenog produkta uz HPLC čistoću od 35% koji je zatim prečišćen preparativnom HPLC (Uslovi: Kolona: Gemini NX C18 (21.2 mm x 150 mm veličine čestica 5 µm); (Mobilna faza: A; 0.1% Amonijum bikarbonat u vodi, B; ACN) da bi se dobilo željeno jedinjenje. Jedinjenje je zatim razblaženo sa dihlorometanom i vodom. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa DCM (3x10 mL). Organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrisana pod vakuumom da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0.005 g, prinos: 11%) u vidu bele čvrste supstance. 1H-NMR (CD3OD, 400Mhz): δ 8.41 (s, 1H), 7.79-7.76 (m, 2H), 7.36 (dd, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.47-6.42 (m, 3H), 5.82 (d, 1H), 3.96 (s, 6H), 3.81-3.55 (m, 8H), 2.54 (s, 3H), 2.37 (s, 3H),; MS (ESI): 643.1 [M+H]<+>; HPLC: 97.26%, rt: 6.19 min.
Primer 149
[0292]
3-akrilamido-4-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-N,N-dimetilbenzamid
[0293] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u Proceduri 2K (Primer 148), supstituisanjem dimetilamina u koraku (b) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (12.0 mg, prinos: 6.1%) u vidu beličaste čvrste supstance. 1H-NMR (CD3OD, 400Mhz): δ 8.38 (s, 1H), 7.78- 7.72 (m, 2H), 7.34 (dd, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.46-6.38 (m, 3H), 5.80 (dd, 1H), 3.94 (s, 6H), 3.36 (s, 3H), 3.10 (s, 6H); MS (ESI): 587.9 [M+H]<+>; HPLC: 99.04%, rt: 3.98 min.
Primer 150
[0294]
11
N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(4-etilpiperazin-1-karbonil)fenil)akrilamid
[0295] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u Proceduri 2K (Primer 148), supstituisanjem 1-etilpiperazina u koraku (b) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (10.0 mg, prinos: 9.7%) u vidu beličaste čvrste supstance. 1H-NMR (CD3OD, 400Mhz): δ 8.41 (s, 1H), 7.76-7.79 (m, 2H), 7.36 (d, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.38-6.47 (m, 3H), 5.82 (d, 1H), 3.96 (s, 6H), 3.72-3.82 (m, 2H), 3.53-3.65 (m, 3H), 3.39 (s, 4H), 2.49-2.54 (m, 6H), 1.15 (t, 3H) ; MS (ESI): 657.0 [M+H]+; HPLC: 95.98%, rt: 6.25 min.
Primer 151
N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(4-izopropilpiperazin-1-il)fenil)akrilamid fosforne kiseline
[0297] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u Proceduri 2J (Primer 145), supstituisanjem 4-(4-izopropilpiperazin-1-il)-2-nitroanilina (procedura je prikazana dole) u koraku (b) i izostavljanjem koraka (d) i (e) da bi se dobila slobodna baza naslovnog jedinjenja (0.1 g, ukupni prinos: 9.7%) u vidu beličaste čvrste supstance. MS (ESI): 643.1 [M+H]<+>.
85% H3PO4polako se dodaje u rastvor N-(2-((6-(3 -(2,6-dihloro-3 ,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(4-izopropilpiperazin-1-il)fenil)akrilamida (0.1 g) u 95% THF-MeOH (5 ml). Dobivena reakciona smeša je zatim ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi tokom 30 min., rastvarač je uparen i trituriran sa dietil etrom, osušen pod vakuumom da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (0.16 g) kao beličasta čvrsta supstanca.
<1>HNMR(DMSO-d6, 400Mhz): δ 12.08 (s, 1H), 9.62 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.30 (d, 2H), 6.89 (d, 1H), 6.81 (d, 1H), 6.46-6.49 (m, 1H), 6.21-6.25 (m, 2H), 5.72 (d, 1H), 3.93 (s, 6H), 3.35-3.41 (m, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.12-3.17 (m, 4H), 2.67-2.70 (m, 4H), 1.05-1.11 (m, 6H); MS (ESI): 643.3 (M 1); HPLC: 95.41%, rt: 6.48min.
Priprema 4-(4-izopropilpiperazin-1-il)-2-nitroanilin
[0298]
a. terc-butil 4-izopropilpiperazin-1-karboksilat
[0299] Boc piperaizin, 1 (10 g, 53.76 mmol) i aceton (4 mL) prebačeni su u smešu suvog DCM (100 mL) i sirćetne kiseline (3.2 mL). Mešani su na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Dodat je Na(OAc)3BH (17g, 80.2mmol) i mešanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi tokom 12h. Reakciona smeša je razblažena sa vodom, ekstrahovana sa etil acetatom (3x25 ml). Organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrisan pod vakuumom da bi se dobilo sirovo naslovljeno jedinjenje (13 g, sirovo). MS (ESI): 229.2 [M+H]<+>.
b. 1-izopropilpiperazin
[0300] TFA (15 mL) je polako dodata u mešani rastvor terc-butil 4-izopropilpiperazin-1-karboksilata (13 g sirov) u suvom DCM (20 mL) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature uz mešanje tokom 18hr. Reakciona masa se koncentriše pod vakuumom i ostatak triturira sa n-heksanom i dietil etrom. Suši se pod vakuumom da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (7 g, prinos: 97%). MS (ESI): 129.1 [M+H]<+>.
c. terc-butil (4-(4-izopropilpiperazin-1-il)-2-nitrofenil)karbamat
[0301] 1-izopropilpiperazin (1.29 g, 5.66 mmol) i terc-butil (4-bromo-2-nitrofenil)karbamat (1.5 g, 4.71 mmol) prebačeni su u smešu suvog toluena (15 mL) i dioksana (2 mL) u zatvorenoj epruveti u atmosferi argona na sobnoj temperaturi. Gasoviti argon je propuštan tokom 5-10 min. Tada su dodati Cs2CO3(3.06 g, 9.43 mmol) i Xantphos (0.54 g, 0.94 mmol) i dobijena reakciona smeša je prečišćena gasovitim argonom tokom 5min., te je zatim dodat Pd2(dba)3(0.43 g, 0.47 mmol). Prečišćavanje gasovitim argonom je nastavljeno tokom dodatih 5 minuta pre zaptivanja reakcione epruvete. Tada je reakciona smeša zagrevana na 100°C tokom 12hr. Posle završetka reakcije pomoću TLC, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, filtrirana kroz sloj celita i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni (DCM:MeOH/97:3) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (1.2 g, prinos: 70.5%). MS (ESI): 365.5 [M+H]<+>.
d. 4-(4-izopropilpiperazin-1-il)-2-nitroanilin
[0302] TFA (3 mL) je polako dodata u mešani rastvor terc-butil (4-(4-izopropilpiperazin-1-il)-2-nitrofenil)karbamata (1.2 g, 3.29 mmol) u suvom DCM (5 mL) u atmosferi argona na 0°C. Dobijena reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature uz mešanje tokom 12 hr. Napredak reakcije je promatran sa LCMS, nakon završetka reakcije, višak rastvarača je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi ostatak. Sirovi ostatak je više puta ispran sa etrom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1 g, prinos: 80.6%) kao crvena čvrsta supstanca. MS (ESI): 265.1 [M+H]<+>.
Primer - 154
[0303]
11
Priprema N-(5-(4-acetilpiperazin-1-il)-2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)fenil)akrilamida
[0304] N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(piperazin-1-il)fenil)akrilamid (Procedura 2L, Primer 157) (8.6 mg, 0.014 mmol) i DIEA (7.5 µl, 0.043 mmol) mešani su u DCM (1.0 ml) na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Dodat je rastvor acetil hlorida (1.0 µl, 0.016 mmol) u DCM (11 µl) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 časa. Rastvarač je uparen i dobijeni materijal je rastvoren u 400 µl DMSO. Rastvor DMSO je razblažen sa 1.0 ml MeOH i prečišćen pomoću prep-HPLC (uslovi voda/ACN u mravljoj kiselini) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (1.4 mg, prinos: 15%).
<1>H-NMR (400 Mhz, MeOH-d4δ 2.16 (s, 3 H) 3.65 - 3.80 (m, 4 H) 3.94 (s, 6 H) 5.76 (dd, 1 H) 6.15 (s, 1 H) 6.28 - 6.49 (m, 2 H) 6.78 - 6.82 (m, 1 H) 6.95 (dd, 2.89 Hz, 1 H) 7.28 - 7.38 (m, 2 H) 8.31 (d, 1 H) 8.58 (br. s., 1 H); ESI-MS: 643 [M+H]<+>.
Primer - 155 i 156
[0305]
Priprema N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(1-metoksietil)fenil)akrilamida i N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(1-hidroksietil)fenil)
[0306] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), supstituisanjem 4-(1-metoksietil)-2-nitroanilina (procedura je prikazana dole) u koraku (d) da bi se dobila naslovljena jedinjenja posle prečišćavanja pomoću fleš hromatografijom na silikagelu eluiranjem sa 90% do 100% EtOAc/Heksan. Nepolarna frakcija je bila N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(1-metoksietil)fenil)akrilamid (16 mg, prinos: 6% u pet koraka)<1>H-NMR (400 Mhz, MeOH-d4) δ 1.46 (d, 3 H) 3.29 (s, 3 H) 3.96 (s, 6 H) 4.12 (d, 1 H) 4.40 (q, 1 H) 5.78 - 5.82 (m, 1 H) 6.33 -6.50 (m, 3 H) 6.82 (s, 1 H) 7.27 (dd, 1 H) 7.55 - 7.64 (m, 2 H) 8.37 (d, 1 H); ESI-MS: 575 [M+H]<+>. Polarna frakcija bila je N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(1-hidroksietil)fenil) akrilamid (22 mg, prinos: 8% u pet koraka).<1>H-NMR (400 Mhz, MeOH-d4) δ 1.53 (d, 3 H) 4.00 (s, 6 H) 5.83 (dd, 1 H) 6.29 - 6.56 (m, 3 H) 6.86 (s, 1 H) 7.38 (dd, 1 H) 7.57 (d, 1 H) 7.69 (s, 1 H) 8.40 (d, 1 H); ESI-MS: 661 [M+H]<+>.
Priprema 4-(1-metoksietil)-2-nitroanilina
prinos: 87%
a. 1-(4-fluoro-3-nitrofenil)etanol
[0308] 1-(4-fluoro-3-nitrofenil)etanon (1.0 g, 5.46 mmol) je rastvoren u MeOH (15.0 ml) i mešan u ledenom kupatilu. NaBH4(0.62 g, 16.0 mmol) je dodat u porcijama. Po završetku dodavanja, reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta. Reakciona smeša je sipana u EtOAc i fiziološki rastvor. Organski sloj je odvojen, osušen preko MgSO4i uparen. Dobijeni materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa 20% do 70% EtOAc/Heksan da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (881 mg, prinos: 87%). %).
<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 1.53 (d,4 H) 4.99 (dd, 1 H) 7.22 - 7.33 (m, 1 H) 7.66 (ddd, 1 H) 8.09 (dd, 1 H)
b. 1-fluoro-4-(1-metoksietil)-2-nitrobenzen
[0309] 1-(4-fluoro-3-nitrofenil)etanol (870 mg, 4.7 mmol) rastvoren je u MeOH (10 ml) i pažljivo je dodata koncentrovana sumporna kiselina (2.5 ml, 47 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 150 °C mikrotalasima (Biotage Initiator) tokom 5 minuta. Posle hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je sipana u EtOAc/vodu. Organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen preko MgSO4i uparen. Dobijeni materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa 0% do 50% EtOAc/Heksan da bi se dobilo
11
naslovljeno jedinjenje (664 mg, prinos: 71%).<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 1.45 (d, 3 H) 3.27 (s, 3 H) 4.36 (q, 1 H) 7.28 - 7.32 (m, 1 H) 7.56 - 7.63 (m, 1 H) 7.98 - 8.04 (m, 1 H)
c. 4-(1-metoksietil)-2-nitroanilin
[0310] 1-fluoro-4-(1-metoksietil)-2-nitrobenzen (664 mg, 3.33 mmol) je mešan u THF (10 ml). Dodat je NH4OH (0.39 ml, 10.0 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 časa. Dodato je još 780 ul NH4OH i reakciona smeša je grejana na 120 °C tokom 10 minuta korišćenjem mikrotalasa (Biotage Initiator) i zatim na 140 °C tokom 50 minuta. Posle hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je sipana u EtOAc/vodu. Organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušena preko MgSO4i uparen. Dobijeni materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa 0% do 50% EtOAc/Heksan da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (290 mg, prinos: 44%).<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 1.42 (d, 3 H) 3.22 (s, 3 H) 4.24 (q, 1 H) 6.05 (br. s., 2 H) 6.83 (d, 1 H) 7.38 (dd, 2.01 Hz, 1 H) 8.04 (d, 1 H)
11
Procedura 2L: Primer - 157
[0311]
Priprema N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(piperazin-1-il)fenil)akrilamid
[0312]
a. 2-(4-bromo-2-nitrofenil)izoindolin-1,3-dion
[0313] 4-bromo-1-fluoro-2-nitrobenzen (2.0 g, 9.1 mmol) i kalijum 1,3-dioksoizoindolin-2-id (2.0 g, 10.9 mmol) su stavljeni u mikrotalasnu bočicu zapremine (0.5-2 ml) i dodat je NMP (12.0 ml). Reakciona smeša zagrevana je na 200 °C pomoću mikrotalasnog grejanja (Biotage,
11
Initiator) tokom 1min. Posle hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je dodata kap po kap u mešanu vodu što je rezultiralo formiranjem taloga. Čvrsta supstanca je sakupljena, isprana sa vodom i osušena pod strujom azota da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (2.89 g, prinos: 92%).<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 7.26 (s, 2 H) 7.43 (d, 2H) 7.81 - 7.87 (m, 3H) 7.91 (dd, ,2H) 7.95 - 8.05 (m, 3H) 8.33 (d, 1H)
b. terc-butil 4-(4-(1,3-dioksoizoindolin-2-il)-3-nitrofenil)piperazin-1-karboksilat [0314] 2-(4-bromo-2-nitrofenil)izoindolin-1,3-dion (500 mg, 1.4 mmol), terc-butil piperazin-1-karboksilat (402 mg, 2.2 mmol), Pd2(dba)3(66.0 mg, .07 mmol), Xantphos (83 mg, .144 mmol) i Cs2CO3(939 mg, 2.9 mmol) postavljeni su u reakcionu bočicu (reakciona bočica za mikrotalasnu zapremine 10-20ml) i prečišćeni sa azotom. Dodat je toluen (5.0 ml) i azot u mehurićima je propuštan tokom 10min. Reakciona smeša zagrevana je na 100 °C tokom 5 časova. Zagrevanje je zaustavljeno i smeša je ohlađena na sobnu temperaturu. Reakciona smeša je filtrirana kroz sloj celita i filtrat je uparen. Preostali materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa 20% do 70% EtOAc/Heksan da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (275 mg, prinos: 42%).<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 1.51 (s, 6H) 3.28 - 3.39 (m, 2H) 3.57 - 3.70 (m, 2H) 7.20 - 7.24 (m, 1H) 7.35 (d, 1H) 7.66 (d, 1H) 7.75 - 7.87 (m, 1H) 7.96 (dd, 1H)
c. terc-butil 4-(4-amino-3-nitrofenil)piperazin-1-karboksilat
[0315] U suspenziju terc-butil 4-(4-(1,3-dioksoizoindolin-2-il)-3-nitrofenil)piperazin-1-karboksilata (275.4 mg, 0.6 mmol) u THF (5.0 ml) dodato je 1.0M hidrazina u THF (1.8 ml, 1.8 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša mešana je na sobnoj temperaturi tokom 2 časa. Reakciona smeša je sipana u EtOAc/vodu i organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen preko MgSO4i uparen. Dobijeno ulje je prečišćeno pomoću fleš
11
hromatografije na silikagelu eluiranjem sa 20% do 70% EtOAc/Heksan da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (182 mg, 93 % prinos).<1>H-NMR (400 Mhz, DMSO-d6) δ 1.42 (s, 9 H) 2.89 - 2.99 (m, 4 H) 3.44 (d, 4 H) 6.98 (d, 1 H) 7.22 (s, 2H) 7.26 - 7.38 (m, 2 H)
d. terc-butil 4-(4-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)ureido)pirimidin-4-il)amino)-3-nitrofenil)piperazin-1-karboksilat [0316] 1-(6-hloropirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)urea (175 mg, 0.34 mmol), terc-butil 4-(4-amino-3-nitrofenil)piperazin-1-karboksilat (90 mg, 0.28 mmol), Pd2(dba)3(13 mg, 0.014 mmol), Brettphos (13 mg, 0.028 mmol) i natrijum terc-butoksid (54 mg, 0.56 mmol) su prebačeni u reakcionu bočicu (2 do 5 ml) i prečišćeni sa azotom. Dodan je toluen (1.0 ml) i azot u mehurićima je propuštan tokom 5min zatim je reakciona smeša preko noći zagrevana na 100 °C. Grejanje je zaustavljeno i smeša je ohlađena do sobne temperature. Reakciona smeša je filtrirana kroz sloj Celita®. Filtrat je uparen, a dobijeni materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa 20% do 70% EtOAc/Heksan da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (102.4 mg, prinos: 45%).<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 0.01 (s, 9 H) 0.85 - 0.98 (m, 2 H) 1.50 (s, 9 H) 3.03 (s, 3 H) 3.17 (br. s., 4 H) 3.56- 3.66 (m, 4 H) 3.75 -3.97 (m, 8 H) 5.22 (s, 2 H) 6.50 (s, 1 H) 6.95 (s, 1 H) 7.65 (s, 1 H) 8.46 (s, 1 H)
e. terc-butil 4-(4-((terc-butoksikarbonil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)ureido)pirimidin-4-il)amino)-3-nitrofenil)piperazin-1-karboksilat
11
[0317] terc-butil 4-(4-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)ureido)pirimidin-4-il)amino)-3-nitrofenil)piperazin-1-karboksilat (162 mg, 0.2 mmol), di-terc-butil dikarbonat (53 mg, 0.24 mmol) i DMAP (4.9 mg, 0.04 mmol) su mešani u THF (2.0 ml) na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota tokom 1 časa. Reakciona smeša je sipana u EtOAc i vodu. Organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen preko MgSO4i uparen. Dobijeni materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa 10% do 70% EtOAc/Heksan da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (148 mg, prinos: 82%).<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 0.01 (s, 9 H) 0.80 - 1.04 (m, 2 H) 1.4 (s, 9 H) 1.49 (s, 9 H) 3.12 (s, 3 H) 3.19 - 3.36 (m, 4 H) 3.50 - 3.70 (m, 4 H) 3.83 - 3.92 (m, 9 H) 3.96 (d, 1H) 5.14 (d, 1 H) 5.42 (d, 1 H) 6.46 (s, 1 H) 7.05 - 7.19 (m, 2 H) 7.58 (d, 1 H) 8.03 (s, 1 H) 8.29 (s, 1 H)
f. terc-butil 4-(3-amino-4-((terc-butoksikarbonil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)ureido)pirimidin-4-il)amino)fenil)piperazin-1-karboksilat
[0318] terc-butil 4-(4-((terc-butoksikarbonil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)ureido)pirimidin-4-il)amino)-3-nitrofenil)piperazin-1-karboksilat (149 mg, 0.164 mmol) mešan je u THF (1.5 ml) i MeOH (1.5 ml). Dodato je pet kapi suspenzije Raney nikla u vodi. Rastvor je mešan pod atmosferom vodonika na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je filtrirana kroz podlogu Celite®, a filtrat je koncentrovan da se dobije sirovo jedinjenje iz naslova koje je uzeto u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. ESI-MS: 877 [M+H]<+>.
12
g. terc-butil 4-(3-akrilamido-4-((terc-butoksikarbonil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsi/il)etoksi)metil)ureido)pirimidin-4-il)amino)fenil)piperazin-1-karboksilat
[0319] Sirovi terc-butil 4-(3-amino-4-((terc-butoksikarbonil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)ureido)pirimidin-4-il)amino)fenil)piperazin-1-karboksilat (95 mg, 0.11 mmol) je rastvoren u THF (1.5 ml) i mešan u ledenom kupatilu u atmosferi azota. Dodati su DIEA (57 µl, 0.30 mmol) i zatim akriloil hlorid (13 µl, 0.16 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 časa. Reakciona smeša je sipana u EtOAc i fiziološki rastvor. Organski sloj je odvojen, osušen preko MgSO4i uparen. Dobijeni materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa 30% do 100% EtOAc/Heksan da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (47 mg, prinos: 47%).<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 0.02 (s, 9 H) 0.79 - 1.04 (m, 2 H) 1.36 (s,9 H) 1.49 (s, 9 H) 3.08 (s, 4 H) 3.05 (s, 3 H) 3.25 (br. s., 4 H) 3.64 (br. s., 4 H) 3.86 (s, 6 H) 5.27 (s, 1 H) 5.67 - 5.79 (m, 1 H) 6.15 - 6.56 (m, 2 H) 6.48 (s, 1 H) 7.03 - 7.14 (m, 1 H) 7.87 - 8.09 (m, 2 H) 8.19 - 8.29 (br. s., 1 H) 8.44 (s, 1 H).
h. N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(piperazin-1-il)fenil)akrilamid
[0320] terc-butil 4-(3-akrilamido-4-((terc-butoksikarbonil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)ureido)pirimidin-4-il)amino)fenil)piperazin-1-karboksilat (59 mg, 0.06 mmol) mešan je u DCM (2.0 ml). Dodata je TFA (97 µl, 1.3 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 časova.
Reakciona smeša je uparena. Preostali ostatak je rastvoren u DCM i ispran sa zasićenim NaHCO3, osušen preko MgSO4i uparen. Dobijeni materijal je rastvoren u THF (2.0 ml) i dodat je NH4OH (74 µl, 1.9 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 minuta. Reakciona smeša je uparena da se dobije jedinjenje iz naslova (34 mg, prinos: 90%) koje je prevedeno u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.<1>H-NMR (400 Mhz, DMSO-d6) δ 2.62 (br. s., 4 H) 3.08 - 3.27 (m, 7 H) 3.77 - 4.03 (m, 6 H) 5.72 (d, 1 H) 6.11 6.34 (m, 2 H) 6.40 - 6.62 (m, 1 H) 6.70 - 6.98 (m, 2 H) 7.22 - 7.37 (m, 2 H) 8.32 (s, 1 H) 8.70 (s, 1 H) 9.58 (br. s., 1 H) 12.06 (s, 1 H); ESI-MS: 601 [M+H]<+>.
Primer - 158
N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-((2-hidroksietil)(metil)amino)fenil)akrilamid
[0322] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2L (Primer 157), supstituisanjem 2-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-metiletanamina, Pd(dba)2i Ruphos u koraku (b), i Pd(dba)2, Brettphos i natrijum terc-butoksid u koraku (d) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (64 mg, prinos: 16% u sedam koraka)<1>H-NMR (400 Mhz, MeOH-d4) δ 3.04 (s, 3 H) 3.26 (s, 3 H) 3.51 (s, 2 H) 3.69 - 3.81 (m, 2 H) 3.94 (s, 6 H) 5.71 - 5.78 (m, 1 H) 6.03 - 6.10 (m, 1 H) 6.26 - 6.45 (m, 2 H) 6.72 (d, 1 H) 6.79 (s, 1 H) 7.04 - 7.10 (m, 1 H) 7.23 (d, 1 H) 8.28 (d, 1 H); ESI-MS: 590 [M+H].
Priprema 2-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-metiletanamina
a. 2-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-metiletanamin
[0324] 2-(metilamino)etanol (1.0 g, 13.3 mmol) je mešan u DCM (25.0 ml) u atmosferi azota. Dodata je DIEA (3.23 ml, 18.6 mmol) praćeno sa terc-butilhlorodimetilsilanom (2.0 g, 13.3 mmol) i reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je sipana u etar/vodu. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etrom tri puta. Kombinovani organski sloj je osušen preko MgSO4i uparen, a preostali materijal je osušen pod visokim vakuumom da se dobije jedinjenje iz naslova (1.4 g, prinos: 56%).<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 0.08 (s, 6 H) 0.91 (s, 9 H) 1.93 (br. s., 1 H) 2.48 (s, 3 H) 2.71 (t, 2 H) 3.75 (t, 2 H).
Primer - 160
N-(5-(1-aminoetil)-2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)fenil)akrilamid TFA so
[0326] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123) supstituisanjem terc-butil (1-(4-amino-3-nitrofenil)etil)karbamata, Pd(dba)2, Brettphos i natrijum terc-butoksid u koraku (d) da bi se dobila slobodna baza koja je pretvorena u so TFA. Slobodna baza je rastvorena u DCM i 1 dodat je jedan ekvivalent TFA. Smeša je uparena i trituracija sa etrom dala je naslovno jedinjenje (65 mg, prinos: 23% u pet koraka).<1>H-NMR (400 Mhz, MeOH-d4) δ 1.67 (d, 3 H) 3.33 - 3.37 (s, 3 H) 3.92 - 3.97 (s, 6 H) 4.49 (m, 1 H) 5.75 - 5.83 (m, 1 H) 6.30 - 6.50 (m, 3 H) 6.81 (s, 1 H) 7.36 (dd,, 1 H) 7.69 (d, 1 H) 7.82 (d, 1 H) 8.36 - 8.43 (m, 1 H); ESI-MS: 560 [M+H].
Priprema terc-butil (1-(4-amino-3-nitrofenil)etil)karbamata
[0327]
a. 1-(4-fluoro-3-nitrofenil)etanamin
[0328] HNO3koji se dimi (0.48 ml, 10.8 mmol) pažljivo je dodat u ledenom kupatilu ohlađenu koncentrovanu H2SO4(3.6 ml, 68.2 mmol). U smešu je kap po kap dodat 1-(4-fluorofenil)etanamin (1.0 g, 7.2 mmol). Reakciona smeša je mešana uz hlađenje tokom 50 minuta. Reakciona smeša je sipana u led i načinjena baznom sa 3M rastvorom NaOH (24 ml, 72.00 mmol) do oko pH 8.0. Alkalni rastvor je dvaput ekstrahovan sa DCM. Kombinovani
12
organski sloj je osušen preko Na2SO4i uparen da se dobije jedinjenje iz naslova (1.3 g, prinos: 96%).<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 1.41 (d, 6 H) 4.25 (q, 1 H) 7.21 - 7.26 (m, 1 H) 7.67 (ddd, 1 H) 8.10 (dd, 1 H)
b. terc-butil (1-(4-fluoro-3-nitrofenil)etil)karbamat
[0329] U suspenziju 1-(4-fluoro-3-nitrofenil)etanamina (1.3 g, 6.9 mmol) u THF (10.0 ml) dodata je DIEA (2.4 ml, 13.8 mmol), te zatim di-terc-butil dikarbonat (1.9 ml, 8.3 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota tokom 2 časa. Reakciona smeša je sipana u EtOAc/vodu i organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko MgSO4i uparen. Dobijeni materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa 10% do 70% EtOAc/Heksan da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (1.5 g, prinos: 75%).<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 1.37 - 1.50 (m, 12 H) 4.81 (br. s., 2H) 7.23 -7.26 (m, 1 H) 7.59 (ddd, 1 H) 8.01 (dd, 1 H).
c. terc-butil (1-(4-amino-3-nitrofenil)etil)karbamat
[0330] Terc-butil (1-(4-fluoro-3-nitrofenil)etil)karbamat (500 mg, 1.75 mmol) je mešan u THF (2 ml). Dodat je NH4OH (0.978 ml, 7.0 mmol) i reakciona smeša je zagrevana na 150 °C tokom 30 minuta korišćenjem mikrotalasa (Biotage Initiator). Dodat je NH4OH (0.600 ml) i zatim je smeša zagrevana na 180 °C. Posle hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je sipana u EtOAc/vodu. Organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen preko MgSO4i uparen. Dobijeni materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa 0% do 50% EtOAc/Heksan da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (376 mg, prinos: 76%)<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 1.43 - 1.48 (m, 12 H) 4.71 (br. s., 2 H) 6.79 (d, 1 H) 7.34 (dd, 1 H) 8.05 (d, 1 H).
Primer - 161
[0331]
Priprema N-(5-(4-(2-aminoetil)piperazin-1-il)-2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)fenil)akrilamid 2 TFA soli
[0332]
a. terc-butil (2-(4-(3-akrilamido-4-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)fenil)piperazin-1-il)etil)karbamat
[0333] U rastvor N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(piperazin-1-il)fenil)akrilamid 2,2,2-trifluoroacetata (Procedura 2L, Primer 157) (30 mg, 0.042 mmol) u THF (1.0 ml) i MeOH (1.0 ml) dodat je terc-butil (2-oksoetil)karbamat (13 mg, 0.08 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta. Dodat je natrijum cijanoborohidrid (7.0 mg, 0.12 mmol) i reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač je uparen i dodat je zasićeni rastvor NaHCO3. Smeša je ekstrahovana tri puta sa DCM. Kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4i uparen. Preostali materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa 0% do 15% MeOH u DCM da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (17 mg, prinos: 54%) ESI-MS: 744 [M+H]<+>.
12
N-(5-(4-(2-aminoetil)piperazin-1-il)-2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)fenil)akrilamid 2 TFA so
[0334] Terc-butil (2-akrilamido-4-(4-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)piperazin-1-il)fenil)(6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)ureido) pirimidin-4-il)karbamat (17 mg, 0.017 mmol) mešan je u DCM (1.0 ml). Dodata je TFA (200 µl, 2.6 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 časa. Rastvarač je uparen i preostali materijal je triturisan sa etrom. Dobijena čvrsta supstanca je sakupljena, isprana etrom i osušena pod strujom azota da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (15 mg, prinos: 96%).<1>H-NMR (400 Mhz, MeOH-d4) δ 2.90 (br. s., 6 H) 3.15 - 3.22 (m, 2 H) 3.33 - 3.41 (m, 4 H) 3.94 (s, 6 H) 5.74 - 5.79 (m, 1 H) 6.17 (s, 1 H) 6.32 - 6.44 (m, 2 H) 6.81 (s, 1 H) 6.92 - 6.98 (m, 1 H) 7.35 (d, 2 H) 8.32 (d, 1 H); ESI-MS: 644 [M+H]<+>.
Primer - 162
N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-3-fluorofenil)akrilamid 2,2,2-trifluoroacetat
[0336] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), supstituisanjem 2-fluoro-6-nitroanilina, Pd(dba)2, Brettphos i natrijum terc-butoksida u koraku (d) da se dobije slobodna baza, koja je pretvorena u so TFA. Slobodna baza je rastvorena u DCM i dodat je jedan ekvivalent TFA. Smeša je uparena i trituracija sa etrom dala je naslovno jedinjenje (47 mg, prinos: 22% u četiri koraka).<1>H-NMR (400 Mhz, McOH-d4) δ 3.30 (s, 3 H) 3.93 (s, 6 H) 5.72 - 5.78 (m, 2 H) 6.21 - 6.29 (m, 1 H) 6.23 (d, 1 H) 6.27 (d, 1 H) 6.32 - 6.40
12
(m, 1 H) 6.56 (dd, 1 H) 6.90 (s, 1 H) 7.10 (t, 1 H) 7.25 - 7.37 (m, 1 H) 7.76 (d, 1 H) 8.32 (s, 1 H) 8.89 (s, 1 H) 9.66 (s, 1 H) 11.96 (s, 1 H); ESI-MS: 535 [M+H]<+>
Primer - 163
N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(2-(dimetilamino)etil)fenil)akrilamid 2,2,2-trifluoroacetat
[0338] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), supstituisanjem terc-butil 4-amino-3-nitrofenetilkarbamata (procedura je prikazana dole), Pd(dba)2i Brettphos-a u koraku (d) da se dobije sirova so TFA slobodnog terminalnog amina, koja je korišćena kao takva u sledećem dodatnom koraku: U rastvor N-(5-(2-aminoetil)-2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-3-(hidroksimetil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)fenil)akrilamid 2,2,2-trifluoroacetata (9.2 mg, 0.014 mmol) u THF (1.0 ml) i MeOH (1.0 ml) dodat je formaldehid (5.1 µl, 0.068 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta. Dodat je natrijum cijanoborohidrid (3.4 mg, 0.055 mmol) i reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač je uparen i dodat je zasićeni rastvor NaHCO3. Smeša je ekstrahovana tri puta sa DCM. Kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4i uparen. Preostali materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa 10% do 70% MeOH u DCM da bi se dobila slobodna baza. U rastvor slobodne baze DCM, dodata je TFA (11 µl, 0.014 mmol). Rastvarač je uparen i osušen pod visokim vakuumom da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (6.3 mg, prinos: 66%).<1>H-NMR (400 Mhz, MeOH-d4) δ 2.97 (s, 6 H) 3.10 (dd, 2 H) 3.34 (s, 3 H) 3.45 (dd, 2 H) 3.94 (s, 6 H) 4.63 - 4.63 (m, 1 H) 5.76 - 5.81 (m, 1 H) 6.31 - 6.48 (m, 3 H) 6.81 (s, 1 H) 7.25 (dd, 1 H) 7.55 (d, 1 H) 7.62 - 7.72 (m, 1 H) 8.35 (s, 1 H) ; ESI-MS: 588 [M+H].
12
Priprema terc-butil 4-amino-3-nitrofenetilkarbamata
[0339]
a. terc-butil 4-fluoro-3-nitrofenetilkarbamat
[0340] 2-(4-fluorofenil)etanamin (1.0 g, 7.2 mmol) rastvoren je u koncentrovanoj H2SO4(4.0 ml, 75 mmol) i ohlađen u ledenom kupatilu. HNO3(0.48 ml, 10.8 mmol) koji se dimi je pažljivo dodat kap po kap u smešu. Reakciona smeša je mešana uz hlađenjem tokom 45 minuta i sipana u led. Smeša je učinjena baznom sa 3M rastvorom NaOH (60 ml, 180 mmol) i alkalni rastvor je tri puta ekstrahovan sa DCM. Kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4i uparen da se dobije sirovi amin. Sirovi materijal je rastvoren u THF (15.0 ml). Dodati su di-terc-butil dikarbonat (1.7 g, 7.9 mmol) i DIEA (2.5 ml, 14.4 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 časova. Reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen preko MgSO4i uparen. Dobijeni materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa 0% do 20% EtOAc/Heksan da se dobije jedinjenje iz naslova (569 mg, prinos: 28%).<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 1.44 (s, 9 H) 2.88 (t, 2 H) 3.40 (d, 2 H) 7.24 (t, 1 H) 7.42 - 7.54 (m, 1 H) 7.89 (dd, 1 H).
b. terc-butil 4-amino-3-nitrofenetilkarbamat
[0341] Terc-butil 4-fluoro-3-nitrofenetilkarbamat (569 mg, 2.00 mmol) je mešan u THF (2.64 ml). Dodat je NH4OH (2.50 ml, 17.97 mmol) i reakciona smeša je zagrevana na 150 °C tokom 30 minuta korišćenjem mikrotalasa (Biotage Initiator). Dodat je NH4OH (0.600 ml) i zatim je zagrevan na 180 °C. Posle hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je sipana u EtOAc/vodu. Organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen preko MgSO4i uparen. Dobijeni materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa 0% do 30% EtOAc/Heksan da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (257 mg, prinos: 46%)<1>H-NMR
12
(400 Mhz, CDCl3) δ 1.44 (s, 9 H) 2.73 (t, J=7.03 Hz, 2 H) 3.34 (m, 2 H) 4.46 - 4.62 (m, 1 H) 6.78 (d, J=8.53 Hz, 1 H) 7.24 (dd, J=8.53, 1.76 Hz, 1 H) 7.94 (d, J=1.76 Hz, 1 H).
Primer - 164
N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(2-(dimetilamino)etil)fenil)akrilamid 2,2,2-trifluoroacetat
[0343] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2L (Primer 157), supstituisanjem 2-nitro-4-(2-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)etoksi)anilina (priprema prikazana ispod) i natrijum terc-butoksida u koraku (d) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (7 mg, prinos: 2.7% u četiri koraka).<1>H-NMR (400 Mhz, MeOH-d4) δ 3.28 (s, 3 H) 3.88 -3.97 (m, 8 H) 4.06 - 4.14 (m, 2 H) 5.76 (dd, 1 H) 6.12 (s, 1 H) 6.32 - 6.46 (m, 2 H) 6.79 (s, 1 H) 6.91 (dd, 1 H) 7.34 - 7.41 (m, 2 H) 8.31 (d, 1 H); ESI-MS: 577 [M+H]<+>.
Priprema 2-nitro-4-(2-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)etoksi)anilina
a. 2-nitro-4-(2-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)etoksi)anilin
[0345] 4-amino-3-nitrofenol (2.0 g, 12.977 mmol) je rastvoren u DMF (20 ml) i dodat je kalijum karbonat (3.59 g, 25.953 mmol). U smešu je dodat 2-(2-bromoetoksi)tetrahidro-2H-piran (2.55 ml, 16.87 mmol) i reakciona smeša je mešana na 50 °C tokom 6 časova, te zatim 3 dana na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je sipana u EtOAc/fiziološki rastvor. Vodeni sloj je dva puta ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom tri puta, osušen preko MgSO4i uparen. Dobijeni materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silikagelu eluiranjem sa 5% do 40% EtOAc/Heksan da se dobije jedinjenje
12
iz naslova (1.4 g, prinos: 38%).<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 1.51 - 1.68 (m, 4 H) 1.71 - 1.89 (m, 2 H) 3.46 - 3.61 (m, 1 H) 3.72 - 3.99 (m, 2 H) 4.03 - 4.24 (m, 3 H) 4.64 - 4.79 (m, 1 H) 6.78 (d, 1 H) 7.09 - 7.17 (m, 1 H) 7.60 (d, 1 H).
Primer - 165
[0346]
N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-3-metilfenil)akrilamid
[0347] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), supstituisanjem 2-metil-6-nitroanilina, Pd(dba)2, Brettphos i natrijum terc-butoksida u koraku (d) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (3.0 mg, prinos: 6% u pet koraka).<1>H-NMR (400 Mhz, MeOH-d4) δ 3.52 (m, 3 H) 3.95 (m, 6 H) 5.69 (dd, 1 H) 6.21 (dd, 1 H) 6.46 (dd, 1 H) 6.64 (d, 1 H) 6.73 (d, 1 H) 6.82 (s, 1 H) 7.11 (t, 1 H) 8.06 (d, 1 H) 8.55 (d, 1 H) ; ESI-MS: 531 [M+H]<+>
Primer - 166
N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-3-metoksifenil)akrilamid
[0349] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), supstituisanjem 2-metoksi-6-nitroanilina, Pd(dba)2, Brettphos i natrijum terc-butoksida u koraku (d) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (33.0 mg, prinos: 6.1% u pet koraka).<1>H-
1
NMR (400 Mhz, MeOH-d4) δ 3.76 (s, 3 H) 3.93 (s, 6 H) 5.70 (dd, 1 H) 6.23 (d, 1 H) 6.52 (d, 1 H) 6.88 - 6.95 (m, 2 H) 7.27 (t, 1 H) 7.44 - 7.56 (m, 1 H) 8.28 (s, 1 H) 8.57 (br. s., 1 H) 9.40 -9.57 (m, 1 H) 12.15 (s, 1 H) ; ESI-MS: 547 [M+H]<+>
Primer - 167
[0350]
N-(3-hloro-2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)fenil)akrilamid
[0351] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), supstituisanjem 2-hloro-6-nitroanilina, Pd(dba)2, Brettphos i natrijum terc-butoksida u koraku (d) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (11.0 mg, prinos: 5% u pet koraka).<1>H-NMR (400 Mhz, MeOH-d4) δ 3.29 (s, 3 H) 3.94 (s, 6 H) 5.71 - 5.75 (m, 1 H) 6.23 (dd, 1 H) 6.56 (dd, 1 H) 6.90 (s, 1 H) 7.31 - 7.39 (m, 2 H) 7.94 (d, 1 H) 8.30 (s, 1 H) 9.01 (s, 1 H) 9.51 - 9.70 (m, 1 H) 12.04 (s, 1 H) ; ESI-MS: 551 [M+H]<+>.
Primer - 168
[0352]
Priprema N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)fenil)akrilamida TFA so
1 1
[0353] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u Primeru 161, supstituisanjem 2-((terc-butildimetilsilil)oksi)acetaldehida u koraku (a) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (13 mg, prinos: 42% u dva koraka)<1>H-NMR (400 Mhz, MeOH-d4) δ 3.14 - 3.20 (m 2 H) 3.35 - 3.37 (m, 2H) 3.73 - 3.76 (m, 2 H) 3.84 - 3.96 (m, 10 H) 5.75 - 5.79 (m, 1 H) 6.24 (s, 1 H) 6.37 - 6.47 (m, 2 H) 6.81 (s, 1 H) 6.99 (dd, 1 H) 7.37 - 7.46 (m, 2 H) 8.34 - 8.36 (m, 1 H) ; ESI-MS: 645 [M+H]<+>.
Primer - 170
(E)-3-hloro-N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)fenil)akrilamid
[0355] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u Proceduri 2A (Primer 100), modifikovanjem koraka (i) u sledeću proceduru: u rastvor 1-(6-((2-aminofenil)amino) pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metiluree (10 mg, 0.022 mmol), trietilamina (10.9 mg, 0.11 mmol), i (E)-3-hloroakrilne kiseline (2.76 mg, 0.026 mmol) u DCM (0.4 ml, 6.22 mmol), ohlađen na 0 °C, dodat je 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid (0.023 ml, 0.039 mmol, 50% rastvor u EtOAc). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4h i koncentrovana. Preostali ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silikagelu, kako bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (7.2 mg, prinos: 61%).<1>H NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 3.30 (s, 3 H) 3.90 (s, 6 H) 6.02 (s, 1 H) 6.36 (d, J=12.92 Hz, 1 H) 6.49 (s, 1 H) 7.21 - 7.33 (m, 2 H) 7.36 - 7.50 (m, 2 H) 7.75 (d, J=6.53 Hz, 1 H) 7.93 (br. s., 1 H) 8.41 (s, 1 H) 12.50 (s, 1 H); MS (ESI): 551.0 [M+H]<+>
Primer - 171
[0356]
1 2
(Z)-3-hloro-N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)fenil)akrilamid
[0357] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u Proceduri 2A (Primer 100), modifikovanjem koraka (i) u sledeću proceduru: u rastvor 1-(6-((2-aminofenil)amino)pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metiluree (20 mg, 0.043 mmol), trietilamina (21.8 mg, 0.22 mmol), i (Z)-3-hloroakrilne kiseline (5,5 mg, 0.052 mmol) u DCM (0.86 ml, 13.3 mmol), ohlađen na 0 °C dodat je 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid (49 mg, 0.78 mmol, 50% rastvor u EtOAc). Dobijena smeša mešana je na sobnoj temperaturi tokom 2 h i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silikagel koloni da se dobije jedinjenje iz naslova (15 mg, prinos: 63%).
<1>H NMR (400 Mhz, CDC13) δ X; MS (ESI): 551.0 [M+H]<+>.
Primer - 172
(Z)-N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)fenil)but-2-enamid
[0359] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u Proceduri 2A (Primer 100), modifikovanjem koraka (i) u sledeću proceduru: u rastvor 1-(6-((2-aminofenil)amino)pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metiluree (20 mg, 0.043 mmol), trietilamina (21.8 mg, 0.22 mmol), i (Z)-but-2-enoične kiseline (4.5 mg, 0.052 mmol) u DCM (0.86 ml, 13.3 mmol) dodat je rastvor 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksida (49.4 mg, 0.78 mmol, 50% rastvor EtOAc) na 0°C, i dobijena
1
smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2h. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću kolone silikagela da se dobije jedinjenje iz naslova (8.5 mg, prinos: 37%).
1H NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 2.20 (dd, J=7.28, 1.76 Hz, 3 H) 3.30 (s, 3 H) 3.92 (s, 6 H) 5.85 (dd, J=11.42, 1.76 Hz, 1 H) 5.99 (s, 1 H) 6.29 (dd, J=11.36, 7.34 Hz, 1 H) 6.52 (s, 1 H) 7.23 -7.34 (m, 2 H) 7.46 (d, J=7.40 Hz, 1 H) 7.55 (br. s., 1 H) 7.78 (d, J=7.53 Hz, 1 H) 8.40 (d, J=0.88 Hz, 1 H) 12.50 (s, 1 H); MS (ESI): 531.3 [M+H]<+>.
Primer -175
(S,Z)-N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)fenil)-4-hidroksipent-2-enamid
[0361] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), supstituisanjem 2-nitroanilina u koraku (d) i metakriloil hlorida u koraku (g) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (13 mg, prinos: 72%). 1H NMR (400 Mhz, CDCl3) 2.03 (br. s., 3 H) 3.31 (s, 3 H) 3.92 (s, 6 H) 5.49 (s, 1 H) 5.81 (s, 1 H) 6.00 (s, 1 H) 6.53 (s, 1 H) 7.29 (m, 3 H) 7.44 (d, J=7.91 Hz, 1 H) 7.83 (d, J=7.53 Hz, 1 H) 7.92 (s, 1 H) 8.41 (s, 1 H) 12.34 (s, 1 H). MS (ESI): 531.1 [M+H]<+>.
Primer - 181
(Z)-3-hloro-N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-5-(4-etilpiperazin-1-il)fenil)akrilamid
1 4
[0363] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u Proceduri 2C (Primer 108), modifikovanjem koraka (g) u sledeću proceduru: u rastvor 1-(6-((2-amino-4-(4-etilpiperazin-1-il)fenil)amino)pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metiluree (11 mg, 0.019 mmol), trietilamina (9.67 mg, 0.096 mmol), i (Z)-3-hloroakrilne kiseline (2.43 mg, 0.023 mmol) u DCM (0.4 ml, 6.21 mmol) dodat je rastvor 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksida (21.9 mg, 0.034 mmol) na 0°C, i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću silikagel kolone da se dobije jedinjenje iz naslova (7.5 mg, prinos: 59%).<1>H NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 1.29 (t, J=8.0 Hz, 3 H) 2.90 (br. s., 4 H) 3.27 (s, 3 H) 3.45 (t, J=4.64 Hz, 4 H) 3.91 (s, 6 H) 5.90 (s, 1 H) 6.32 (d, J=8.41 Hz, 1 H) 6.52 (s, 1 H) 6.59 (d, J=8.41 Hz, 1 H) 6.73 (dd, J=8.78, 2.76 Hz, 1 H) 7.09 (br. s., 1H) 7.24 (s, 2 H) 7.83 (br. s., 1 H) 8.36 (s, 1 H) 8.69 (br. s., 1 H) 12.52 (s, 1 H); MS (ESI): 663.1 [M+H]<+>.
Primer - 185
N-(2-((6-(3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metilureido)pirimidin-4-il)amino)-6-fluorofenil)akrilamid
[0365] Jedinjenje je sintetizovano pomoću pristupa navedenog u proceduri 2G (Primer 123), supstituisanjem 3-fluoro-2-nitroanilin u koraku (d), izostavljanjem koraka (e), i modifikovanjem koraka (g) u sledeću proceduru: u rastvor 1-(6-((2-amino-3-metilfenil)amino)pirimidin-4-il)-3-(2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil)-1-metil-3-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)uree (31 mg, 0.051 mmol), diizopropil etilamina (13.1 mg, 0.103 mmol), i akrilne kiseline (39.9 mg, 0.055 mmol) u DCM (1 ml, 15.54 mmol) dodat je rastvor 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksida (48.1 mg, 0.076 mmol, 50% rastvor EtOAc) na 0°C, i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2h. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću silikagel kolone da se dobije SEM zaštićeno jedinjenje iz naslova (24 mg, prinos: 71% u tri koraka). Posle finalnog koraka (g), izolovano je jedinjenje iz naslova (12 mg, prinos: 62%).<1>H-NMR (400 Mhz, CDCl3) δ 3.40 (s, 3 H) 3.93
1
(m, 6 H) 5.91 (d, 1 H) 6.20 (s, 1 H) 6.30 - 6.45 (m, 1 H) 6.50 - 6.58 (m, 2 H) 7.01 (t, 1 H) 7.28 - 7.35 (m, 1 H) 7.42 - 7.63 (m, 2 H) 8.41 (s, 1 H) 12.43 (br. s., 1 H); ESI-MS: 535 [M+H]<+>.
Testovi biološke aktivnosti
[0366] Ispitivanje vezivanja za FGFR4. Prečišćeni rekombinantni FGFR4 je prethodno inkubiran sa 10 µM jedinjenja preko noći na 4 °C, ili tokom 1 časa na sobnoj temperaturi. Nakon pre-inkubacije, uzorci proteina su odvojeni pomoću SDS-PAGE i gelovi su obojeni sa SimplyBlue™ SafeStain (Life Technologies, Grand Island, New York). FGFR pojasevi su isečeni i svareni koristeći komplet In-Gel Tryptic Digestion (Thermo Scientific, Waltham, Massachusetts). Svareni uzorci su korišćeni na uređaju Thermo Scientific Q Exactive™ LCMS korišćenjem separacije reverzne faze i tandemske masne spektrometrije za identifikaciju modifikovanih peptida.
[0367] Alternativno, posle pre-inkubacije FGFR4 je koncentrovan i feri su izmenjeni na koloni OPTI-TRAP za koncentrovanje proteina i desalinizaciju C4 (Optimize Technologies). Protein je eluiran u acetonitrilu koji sadrži 0.1% mravlje kiseline i vodi se sa direktnim ubrizgavanjem na uređaju Thermo Scientific Q Exactive™ LCMS radi identifikacije modifikovanog, neoštećenog FGFR4.
[0368] Rezultati dati u daljem tekstu u Tabeli Table 2 potvrđuju formaciju kovalentnog adukta testiranih jedinjenja sa peptidima sa vezom očekivane mase adukta peptid-ligand sa posmatranom masom.
TABELA 2
[0369] IC50 Profilisanje aktivnosti inhibicije kinaze. Jedinjenja su profilisana za aktivnost inhibicije FGFR u Reaction Biology Corporation (Malvern, Pennsilvania) sa njihovim testom
1
Kinase HotSpot<SM>. Videti, Anastassiadis i sar., 2011, Sveobuhvatni test katalitičke aktivnosti kinaze otkriva karakteristike selektivnosti inhibitora kinaze. Nat Biotechnol 29, 1039-1045.
[0370] Rekombinantni FGFR1 (2.5 nM), FGFR2 (1 nM), FGFR3 (5 nM), ili FGFR4 (12 nM) (Invitrogen™) pripremljen je kao mešavina sa supstratom KKKSPGEYVNIEFG (SEQ ID NO:1) (20 µM, FGFR1 supstrat); i Poli [E,Y] 4:1 (0.2 mg/ml, FGFR2,3,4 supstrat)] u kinaznom reakcionom puferu (20 mM HEPES-HCl, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 2 mM MnCl2, 1 mM EGTA, 0.02% Brij35, 0.1 mM Na3VO4, 0.02 mg/ml BSA, 2 mM DTT, i 1% DMSO). Jedinjenje je dodato u smešu enzima/supstrata pomoću akustične tehnologije (Labcyte® Echo 550, Sunnyvale, California) (videti, Olechno i sar., 2006, Improving IC50 results with acoustic droplet ejection. JALA 11,240-246) i prethodno inkubirani tokom 0, 15, ili 60 minuta na sobnoj temperaturi. Posle pre-inkubacije jedinjenja, smeša ATP (Sigma-Aldrich®) i<33>P-γ-ATP (PerkinElmer) dodata je u konačnoj koncentraciji od 10 µM da se iniciraju reakcije kinaza. Reakcije su inkubirane tokom 120 minuta na sobnoj temperaturi i zatim su nanesene na Whatman™ P81 filterski papir za jonsku razmenu. Nevezani fosfat je uklonjen sa obimnim pranjem filtera u 0.75% fosfornoj kiselini. Videti, Anastassiadis i sar., 2011, Comprehensive assay of kinase catalytic activity reveals features of kinase inhibitor selectivity. Nat Biotechnol 29, 1039-1045.
[0371] Rezultati za FGFR4 i FGFR1 su prikazani pored pojedinačnih jedinjenja iz Tabele 1 gore. Jedinjenja su pokazala selektivnu inhibiciju FGFR4, sa višim IC50za FGFR1.
[0372] Bez želje da se vežemo za teoriju, aktivnost IC50u odnosu na FGFR1 je generalno predstavnik aktivnosti u pogledu FGFR1, FGFR2, i FGFR3. Videti takođe, Dieci i sar., 2013, Fibroblast Growth Factor Receptor Inhibitors as a Cancer Treatment: From a Biologic Rationale to Medical Perspectives. Cancer Discovery, F1-F16.
[0373] Radi potvrde, neka od jedinjenja su takođe testirana na inhibiciju FGFR2 i FGFR3. Ovi rezultati prikazani dole u Tabeli 3 su konzistentni sa IC50aktivnošću FGFR1 koja je generalno reprezentativna za aktivnost FGFR1, FGFR2, i FGFR3, i dodatno pokazuje selektivnost ovih FGFR4 inhibitora.
TABELA 3
1
[0374] In vivo efikasnost u modelima tumora. Jedinjenje 108 je testirano na njegovu sposobnost da inhibira rast tumora kod golih miševa koji imaju tumorske ksenograftove iz tri različite humane hepatocelularne tumorske ćelijske linije karcinoma. Ove ćelijske linije su reprezentativne za kancere koji imaju izmenjeni status FGFR4 i/ili FGF19. Videti Sawey i sar., Cancer Cell 19(3): 347-358 (2011).
[0375] Životinje: Goli miševi, uzrasta 6-8 nedelja, a koje su otprilike težile 19-25 g, kupljene su od kompanije Taconic (Taconic, Hudson, New York). Svi eksperimenti na životinjama su obavljeni u skladu sa protokolima odobrenim od strane Institucionalnog komiteta za zaštitu i korišćenje životinja.
[0376] Tumorski ksenografti i tretman: 7.5 x 10<6>HUH7 ćelije (HSRRB kat. br. JCRB0403), 5 x 10<6>Hep3B (ATCC kat. br. HB8064), ili 2.5 x 10<6>JHH7 ćelije (HSRRB kat. br. JCRB1031), svake u ukupnoj zapremini od 100 µl, 1:1 Matrigel (Corning Inc, Corning, NY), injektirane su subkutano (s.c.) u desni lateralni bok. Kada su tumori dosegli 150-200 mm<3>, miševi su randomizovani u grupe za tretman od 5-10 životinja. Doziranje je vršeno dva puta dnevno intraperitonealnim injekcijom u naznačenim dozama tokom 15 dana koristeći jedinjenje 108, formulisano u vehikulu od 5% DMSO (Alfa Aesar, Ward Hill, MA), 10% PEG300 (Sigma, St. Louis, MO), 8% TWEEN® 80 (Sigma, St. Louis, MO), 77% USP fiziološkog rastvora u željenoj koncentraciji. Zapremine tumora su sakupljene dva puta nedeljno koristeći formulu zapremina = (dužina*širina<2>)/2. Telesna masa je takođe izmerena dva puta nedeljno. Sve životinje su posmatrane i negovane u skladu sa Vodičem za zaštitu i korišćenje laboratorijskih životinja, 8th izdanje (National Academies Press, Washington D.C.).
[0377] Statističke metode: Statistička poređenja su napravljena na kraju eksperimenta korišćenjem ANOVA ponovljenih merenja sa Bonferroni post-testom za poređenje tretiranih grupa, koristeći GraphPad Prism 5. Sledeći kriterijumi su korišćeni za određivanje progresivne bolesti, stabilne bolesti, parcijalne regresije i potpune regresije. Progresivna bolest se definiše
1
kao tri uzastopna merenja koja se povećavaju od najboljeg odgovora ili >120% inicijalne zapremine tumora. Stabilna bolest je tri uzastopna merenja koja su <120% i >50% inicijalne zapremine tumora, dok se tri uzastopna merenja koja su <50% inicijalne zapremine tumora kvalificiraju kao parcijalna regresija. Kompletna regresija je tri uzastopna merenja < 30 mm<3>. Za upoređivanje odgovora između tretiranih grupa korišćen je test hi-kvadrata (Microsoft Excel).
[0378] Rezultati od životinja koji nose tumore iz HUH7, HEP3B, i JHH7 ćelija kancera su prikazani na Slikama 1-3, redom, i a takođe su data u Tabeli 4.
TABELA 4 - Inhibicija rasta tumora u FGF19 amplifikovanim HCC ksenograftima
1
[0379] Ovi podaci pokazuju da je jedinjenje 108 efikasno u svim modelima. Između tri modela, HEP3B je najosetljiviji, JHH7 je najmanje osetljiv i HUH7 pokazuje srednju osetljivost na jedinjenje 108. Iako se odgovor na dozu može videti na Slici. 3 za JHH7, postojala je progresivna bolest u svim nivoima testiranih doza.
[0380] Uporedne studije jedinjenja 108 sa BGJ398. Uporedne studije su rađene sa jedinjenjem 108 i poznatim inhibitorom FGFR, BJG398.
[0381] Protokol testa biohemijske kinaze za dobijanje IC50: Rekombinantni FGFR1 (2.5 nM), ili FGFR4 (12 nM) pripremljen je kao smeša sa supstratom KKKSPGEYVNIEFG (SEQ ID NO:1) (20 µM, FGFR1 supstrat); Poli [E,Y] 4:1 (0.2 mg/ml, FGFR2,3,4 supstrat)] u puferu za reakciju sa kinazom (20 mM HEPES-HCl, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 2 mM MnCl2, 1 mM EGTA, 0.02% Brij35, 0.1 mM Na3VO4, 0.02 mg/ml BSA, 2 mM DTT, i 1% DMSO). Jedinjenje je dodato u smešu enzima/supstrata koristeći akustičnu tehnologiju i prethodno inkubiranu 0, 15, ili 60 minuta na sobnoj temperaturi. Posle prethodne inkubacije jedinjenja,<33>P-γ-ATP je dodat u konačnoj koncentraciji od 10 µM da se iniciraju reakcije kinaze. Reakcije su inkubirane 120 minuta na sobnoj temperaturi. Fosforilovanje supstrata je posmatrano analizom filtera, kao gore. Rezultati su dati u Tabeli 5. Rezultati pokazuju da je jedinjenje 108 potentniji inhibitor FGFR4, dok je BGJ398 potentniji FGFR1 inhibitor.
TABELA 5 - Poredbena ispitivanja Jedinjenja 108 i BGJ398 sa biohemijskom analizom kinaze
[0382] Protokol testa vijabilnosti ćelija za dobijanje GI50: ćelijske linije su gajene na 37°C, 5% CO2i 95% vlažnosti. Medij za kultivisanje je kupljen od GIBCO®, USA. Za ispitivanje vijabilnosti, 2000 ćelija/bunaru je zasejano u 96 ploča, koje su inkubirane 24h pre tretmana sa jedinjenjem. Nakon dodavanja jedinjenja, ploče su inkubirane tokom 72h na 37°C sa 5% CO2, i zatim izmerene pomoću CTG testa (CellTiter-Glo® Luminescentni test vijabilnosti ćelije, Kat. br.: G7572, Promega). Rezultati su prikazani u Tabeli 6. Tabela pokazuje da je jedinjenje 108 potentnije od BGJ398 u Hep3B ćelijama, FGF19 amplifikovane linije. Potencija za HUH7
14
i JHH7, druge dve FGF19 amplifikovane linije, se može uporediti između jedinjenja 108 i BGJ398. HepG2 (ATCC kat. br. HB-8065), SNU398 (ATCC kat. br. CRL-2233) i SNU449 (ATCC kat. br. CRL-2234) su FGF19 ne-amplifikovane ćelijske linije koje su korišćene kao kontrola.
[0383] GI50je koncentracija testiranog leka gde 100 × (T - T0)/(C - T0) = 50. Videti npr., Monks i sar., Feasibility of a High-Flux Anticancer Drug Screen Using a Diverse Panel of Cultured Human Tumor Cell Lines, J Natl Cancer Inst (1991) 83(11):757-766; Boyd i sar., Data Display and Analysis Strategies for the NCI Disease-oriented In Vitro Antitumor Drug Screen, in CYTOTOKSIC ANTICANCER DRUGS: MODELS AND CONCEPTS FOR DRUG DISCOVERY AND DEVELOPMENT, Valeriote i sar., eds. (1990), pp.11-34. Luminiscencija testiranog bunarića posle perioda izlaganja testiranom leku od 72h period je T, luminescencija u vremenu nula je T0, i kontrolna luminescencija je C. GI50meri inhibitornu snagu rasta testnog agensa.
TABELA 6 - Poredbena ispitivanja Jedinjenja 108 i BGJ398 u testovima vijabilnosti ćelija
[0384] Poređenje in vivo efikasnosti: u ovim eksperimentima korišćeni su goli miševi kao gore. 5.0 x 10<6>Hep3B ćelija u ukupnoj zapremini od 100 µl, 1:1 Matrigel (Coming Inc, Coming, New York), su ubrizgani subkutano u desni bok. Kada su tumori dosegli 150-200 mm<3>miševi su randomizovani u grupe za tretman od 5-10 životinja. Tretman je tada započeo upotrebom Jedinjenja 108, formulisanog u vehiklu od 5% DMSO (Alfa Aesar, Ward Hill, MA), 10% PEG300 (Sigma, St. Louis, MO), 8% TWEEN® 80 (Sigma, St. Louis, MO), 77% USP fiziološkog rastvora u željenoj koncentraciji. BGJ398, formulisan kao suspenzija u 0.5% metilceluloze (Sigma)/0.2% TWEEN® 80, suspendovan je u željenoj koncentraciji. Oba leka su dozirana tokom 18 dana, izuzev jedne grupe za tretman (videti dole). Zapremine tumora su sakupljene dva puta nedeljno koristeći formulu Zapremina = (dužina*širina)/2. Telesna težina je takođe sakupljena dva puta nedeljno. Sve životinje su posmatrane i negovane u skladu sa Vodičem za zaštitu i korišćenje laboratorijskih životinja, 8th izdanje (National Academies Press, Washington D.C.). Rezultati ove komparativne in vivo studije prikazani su na Slici 4.
[0385] Podaci pokazuju da je jedinjenje 108 efikasnije nego BGJ398 u podnošljivim dozama. Iako je BGJ398 kod 60 mg/kg pokazao efikasnost uporedivu sa jedinjenjem 108, doziranje ovog BGJ398 kod 60 mg/kg grupi moralo biti prekinuto na dan 11 zbog lošeg zdravlja životinja. Ova razlika u toksičnosti nije posledica načina primene, jer grupa životinja koja je oralno dozirana sa BGJ398 sa 30 mg/kg nije pokazala loše zdravlje.
LISTA SEKVENCI [0386]
14

Claims (8)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje prema Formuli I:
    naznačeno time što: R<3>je izabran iz grupe koja obuhvata: C1-6alkil, C1-6alkoksiC1-6alkil, NR<10>R<11>C1-6alkil, R<10>heterociklilC1-6alkil, R<10>arilC1-6alkil, i R<10>heteroarilC1-6alkil, pri čemu R<10>i R<11>su svaki nezavisno odabrani iz grupe koja obuhvata: vodonik i C1-6alkil; E je izabran iz grupe koja obuhvata: -NR<13>C(O)CR<14>=CHR<15>, i -NR<13>C(O)C≡CR<14>, pri čemu R<13>je izabran iz grupe koja obuhvata: vodonik i metil, i R<14>i R<15>su svaki nezavisno odabrani iz grupe koja obuhvata: vodonik, metil, fluoro i hloro; R<12>je izabran iz grupe koja obuhvata: vodonik, halo, C1-6alkil, C1-6alkoksi, hidroksiC1- 6alkil, hidroksiC1-6alkoksi, C1-6alkoksiC1-6alkoksi, C1-6alkoksiC1-6alkil, R<5>R<6>heterociklil, -C(O)heterociklilR<5>R<6>, R<5>R<6>heterociklilC1-6alkil, NR<5>R<6>, NR<5>R<6>C1- 6alkil, -C(O)NR<5>R<6>, i NR<5>R<6>C1-6alkoksi, pri čemu R<5>i R<6>su svaki nezavisno odabrani iz grupe koja obuhvata vodonik, C1-6alkil, hidroksiC1-6alkil, aminoC1-6alkil, -C(O)C1- 6alkil i C1-6alkilsulfonil; i R<1>je fenil, pri čemu pomenuti fenil je supstituisan 2, 3, ili 4 puta sa nezavisno izabranim halo ili C1-6alkoksi, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  2. 2. Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time što R<3>je izabran iz grupe koja obuhvata: metil, metoksietil, 4-piridilmetil, 3-piridilmetil, 2-piridilmetil, benzil, N,N-dimetilaminopropil, 3-metilizoksazol-5-il-metil, i 4-metilpiperazin-1-il-propil, ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so.
  3. 3. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-2, naznačeno time što E je -NHC(O)CH=CH2, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  4. 4. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, naznačeno time što R<12>je izabran iz grupe koja obuhvata: vodonik, fluoro, hloro, metil, metoksi, N,N-dimetilaminoetil, piperazin-1-il, 4-etilpiperazin-1-il, 4-etilpiperazin-1-il-metil, 1-metilpiperidin-4-il, 1-etilpiperidin-4-il, N,N-dimetilaminometil, N,N-dimetilaminopropil, piperidin-4-il, morfolino, 3,5-dimetilpiperazin-1-il, 4-(metilsulfonil)piperazin-1-il, N,N-dimetilaminoetoksi, 4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il, hidroksietoksi, metoksietoksi, hidroksimetil, metoksimetil, 2-metoksipropil, 2-hidroksipropil, 2-aminopropil,4-metilpiperazin-1-il-karbonil, 4-etilpiperazin-1-il-karbonil, 4-[2-propil]piperazin-1-il, 4-acetilpiperazin-1-il, N-metil-N-hidroksietil-amino, N,N-dimetilamido, i 4-(2-aminoetil)piperazin-1-il, ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so.
  5. 5. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, naznačeno time što R<12>je R<5>R<6>heterociklil, pri čemu R<5>i R<6>su kako je gore definisano, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  6. 6. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, naznačeno time što R<12>je 4-etilpiperazin-1-il, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  7. 7. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6, naznačeno time što R<1>je 2,6-dihloro-3,5-dimetoksifenil, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  8. 8. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-7, naznačeno time što navedeno jedinjenje je jedinjenje sa Formulom I(a):
    pri čemu R<3>, E, R<12>i R<1>su kako je gore definisano, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 14 9. Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time što je navedeno jedinjenje izabrano iz grupe koja obuhvata:
    14
    ��
    ��
    �
    ili njihova farmaceutski prihvatljiva so. 10. Jedinjenje prema zahtevu 1 naznačeno time što je:
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 11. Jedinjenje prema zahtevu 1 naznačeno time što je:
    1 1 12. Farmaceutska kompozicija naznačena time što sadrži jedinjenje ili so prema bilo kom od zahteva 1-11 i farmaceutski prihvatljiv nosač. 13. Jedinjenje ili so prema bilo kom od zahteva 1-11 ili farmaceutska kompozicija prema zahtevu 12, naznačena time što je za upotrebu u lečenju hepatocelularnog karcinoma. 14. Jedinjenje ili so ili kompozicija za upotrebu prema zahtevu 13, naznačena time što navedeni hepatocelularni karcinom ima promenjen status FGF19. 15. Jedinjenje ili so ili kompozicija za upotrebu prema zahtevu 14, naznačena time što promenjen status FGF19 obuhvata povećanu ekspresiju FGF19. 16. Jedinjenje ili so ili kompozicija za upotrebu prema zahtevu 13, naznačena time što navedeni hepatocelularni karcinom ima promenjen status FGFR4. 17. Jedinjenje ili so ili kompozicija za upotrebu prema zahtevu 16, naznačena time što navedeni hepatocelularni karcinom ima povećanu ekspresiju FGFR4. 18. Jedinjenje ili so prema bilo kom od zahteva 1-11 ili farmaceutska kompozicija prema zahtevu 12, naznačena time što je za upotrebu u lečenju holangiokarcinoma. 19. Jedinjenje ili so ili kompozicija za upotrebu prema zahtevu 18, naznačena time što je navedeni holangiokarcinom povezan sa ekspresijom FGFR4. 20. Jedinjenje ili so ili kompozicija za upotrebu prema zahtevu 19, naznačena time što je navedeni holangiokarcinom povezan sa prekomernom ekspresijom FGFR4. 21. Jedinjenje ili so prema bilo kom od zahteva 1-11 naznačeno time što je za upotrebu kao lek. 1 2
RS20180834A 2013-10-18 2014-10-16 Pirimidin fgfr4 inhibitori RS57444B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361892881P 2013-10-18 2013-10-18
EP14790956.8A EP3057943B1 (en) 2013-10-18 2014-10-16 Pyrimidine fgfr4 inhibitors
PCT/US2014/060857 WO2015057938A1 (en) 2013-10-18 2014-10-16 Pyrimidine fgfr4 inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS57444B1 true RS57444B1 (sr) 2018-09-28

Family

ID=51842899

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20180834A RS57444B1 (sr) 2013-10-18 2014-10-16 Pirimidin fgfr4 inhibitori

Country Status (33)

Country Link
US (4) US9434697B2 (sr)
EP (2) EP3057943B1 (sr)
JP (2) JP6139788B2 (sr)
KR (1) KR101826015B1 (sr)
CN (2) CN105899490B (sr)
AR (1) AR098048A1 (sr)
AU (2) AU2014337291B9 (sr)
BR (1) BR112016008110B1 (sr)
CA (1) CA2924206C (sr)
CL (1) CL2016000918A1 (sr)
CY (1) CY1121129T1 (sr)
DK (1) DK3057943T3 (sr)
ES (1) ES2679521T3 (sr)
HR (1) HRP20181129T1 (sr)
HU (1) HUE039268T2 (sr)
IL (1) IL244373B (sr)
JO (1) JO3515B1 (sr)
LT (1) LT3057943T (sr)
MX (1) MX378288B (sr)
MY (1) MY184733A (sr)
NZ (1) NZ717559A (sr)
PE (1) PE20160679A1 (sr)
PH (1) PH12016500676B1 (sr)
PL (1) PL3057943T3 (sr)
PT (1) PT3057943T (sr)
RS (1) RS57444B1 (sr)
RU (1) RU2715708C2 (sr)
SG (1) SG11201602069WA (sr)
SI (1) SI3057943T1 (sr)
SM (1) SMT201800379T1 (sr)
TW (1) TWI597268B (sr)
UA (1) UA116920C2 (sr)
WO (2) WO2015057938A1 (sr)

Families Citing this family (73)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8754114B2 (en) 2010-12-22 2014-06-17 Incyte Corporation Substituted imidazopyridazines and benzimidazoles as inhibitors of FGFR3
ES2704744T3 (es) 2012-06-13 2019-03-19 Incyte Holdings Corp Compuestos tricíclicos sustituidos como inhibidores de FGFR
SMT202100451T1 (it) 2012-07-11 2021-09-14 Blueprint Medicines Corp Inibitori del recettore di crescita dei fibroblasti
US9388185B2 (en) 2012-08-10 2016-07-12 Incyte Holdings Corporation Substituted pyrrolo[2,3-b]pyrazines as FGFR inhibitors
TWI647220B (zh) 2013-03-15 2019-01-11 美商西建卡爾有限責任公司 雜芳基化合物及其用途
MY181020A (en) 2013-03-15 2020-12-16 Sanofi Sa Heteroaryl compounds and uses thereof
EA035095B1 (ru) 2013-04-19 2020-04-27 Инсайт Холдингс Корпорейшн Бициклические гетероциклы в качестве ингибиторов fgfr
MX378288B (es) 2013-10-18 2025-03-10 Eisai R&D Man Co Ltd Inhibidores de pirimidina del fgfr4.
CA2928042C (en) 2013-10-25 2022-05-10 Blueprint Medicines Corporation Inhibitors of the fibroblast growth factor receptor
CN105683188B (zh) 2013-10-25 2018-02-09 诺华股份有限公司 作为fgfr4抑制剂的稠环二环吡啶基衍生物
WO2015108992A1 (en) 2014-01-15 2015-07-23 Blueprint Medicines Corporation Heterobicyclic compounds and their use as fgfr4 receptor inhibitors
MA38393B1 (fr) 2014-03-13 2018-11-30 Sanofi Sa Composés hétéroaryle et utilisations associées
JP6585167B2 (ja) 2014-10-03 2019-10-02 ノバルティス アーゲー Ｆｇｆｒ４阻害剤としての縮環二環式ピリジル誘導体の使用
US10851105B2 (en) 2014-10-22 2020-12-01 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as FGFR4 inhibitors
MX373169B (es) 2015-02-20 2020-04-24 Incyte Holdings Corp Heterociclos bicíclicos como inhibidores de receptores del factor de crecimiento fibroblástico (fgfr).
MA41551A (fr) 2015-02-20 2017-12-26 Incyte Corp Hétérocycles bicycliques utilisés en tant qu'inhibiteurs de fgfr4
WO2016134294A1 (en) 2015-02-20 2016-08-25 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr4 inhibitors
US9802917B2 (en) 2015-03-25 2017-10-31 Novartis Ag Particles of N-(5-cyano-4-((2-methoxyethyl)amino)pyridin-2-yl)-7-formyl-6-((4-methyl-2-oxopiperazin-1-yl)methyl)-3,4-dihydro-1,8-naphthyridine-1(2H)-carboxamide
WO2016164703A1 (en) * 2015-04-09 2016-10-13 Eisai R & D Management Co., Ltd. Fgfr4 inhibitors
SG10201810057UA (en) * 2015-04-14 2018-12-28 Eisai R&D Man Co Ltd Crystalline fgfr4 inhibitor compound and uses thereof
US10550112B2 (en) 2015-07-20 2020-02-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Pyrimidines as EGFR inhibitors and methods of treating disorders
BR112018001053A2 (pt) 2015-07-20 2018-09-11 Univ Taipei Medical compostos, composição farmacêutica e método para inibir, prevenir ou tratar um câncer em um indivíduo
CN105418441A (zh) * 2015-12-22 2016-03-23 中国工程物理研究院化工材料研究所 2,3-二氯-4-羟基苯胺的制备方法
US10934311B2 (en) 2016-01-08 2021-03-02 Hangzhou Innogate Pharma Co., Ltd. Heterocyclic compound used as FGFR inhibitor
EP3454898B1 (en) * 2016-05-10 2021-11-10 Eisai R&D Management Co., Ltd. Drug combinations for reducing cell viability and/or cell proliferation
JP6667014B2 (ja) * 2016-05-20 2020-03-18 浙江海正薬業股▲ふん▼有限公司Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｈｉｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＣＯ．，ＬＴＤ． ピリミジン誘導体、その調製方法および医療での使用
CN107400092B (zh) * 2016-05-20 2021-08-24 浙江海正药业股份有限公司 嘧啶类衍生物及其制备方法和其在医药上的用途
CN105884760B (zh) * 2016-06-13 2019-01-04 厦门市蔚嘉化学科技有限公司 一种可比司他中间体的制备方法
CN109803684B (zh) * 2016-08-23 2022-08-23 卫材 R&D 管理有限公司 用于治疗肝细胞癌的组合疗法
WO2018049233A1 (en) 2016-09-08 2018-03-15 Nicolas Stransky Inhibitors of the fibroblast growth factor receptor in combination with cyclin-dependent kinase inhibitors
WO2018055503A1 (en) 2016-09-20 2018-03-29 Novartis Ag Combination comprising a pd-1 antagonist and an fgfr4 inhibitor
SG11201903911UA (en) 2016-11-02 2019-05-30 Novartis Ag Combinations of fgfr4 inhibitors and bile acid sequestrants
NZ754218A (en) * 2016-11-17 2021-07-30 Guangdong Zhongsheng Pharmaceutical Co Ltd Fgfr4 inhibitor and preparation method and use thereof
KR101812266B1 (ko) 2016-11-25 2017-12-27 한국과학기술연구원 4-((2-아크릴아미도페닐)아미노)티에노[3,2-d]피리미딘-7-카복스아미드 유도체 및 그의 약학적 활용
CN108239069B (zh) * 2016-12-26 2021-01-05 南京药捷安康生物科技有限公司 一种用于成纤维细胞生长因子受体的抑制剂及其用途
CN108503593B (zh) * 2017-02-28 2021-04-27 暨南大学 2-氨基嘧啶类化合物及其应用
AR111960A1 (es) 2017-05-26 2019-09-04 Incyte Corp Formas cristalinas de un inhibidor de fgfr y procesos para su preparación
JP6941900B2 (ja) * 2017-08-04 2021-09-29 アビスコ セラピューティクス カンパニー リミテッド Ｆｇｆｒ４阻害活性が示されるアルデヒド基ピリジン誘導体、その製造方法および応用
CN109422760B (zh) * 2017-09-01 2022-05-27 南京圣和药物研发有限公司 Fgfr4抑制剂及其应用
WO2019047826A1 (zh) 2017-09-05 2019-03-14 博奥阿迪斯生物科技公司 芳香类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
MA51570A (fr) 2018-01-10 2020-11-18 Eisai R&D Man Co Ltd Polythérapies pour le traitement du carcinome hépatocellulaire
MA52493A (fr) 2018-05-04 2021-03-10 Incyte Corp Sels d'un inhibiteur de fgfr
CR20200590A (es) 2018-05-04 2021-04-26 Incyte Corp Formas sólidas de un inhibidor de fgfr y procesos para prepararlas
CN112313207B (zh) * 2018-06-22 2023-02-14 北京赛特明强医药科技有限公司 一种氰基取代吡啶及氰基取代嘧啶类化合物、制备方法及其应用
WO2020177067A1 (en) 2019-03-05 2020-09-10 Bioardis Llc Aromatic derivatives, preparation methods, and medical uses thereof
WO2020185532A1 (en) 2019-03-08 2020-09-17 Incyte Corporation Methods of treating cancer with an fgfr inhibitor
EP3966207B1 (en) 2019-05-10 2023-11-01 Deciphera Pharmaceuticals, LLC Phenylaminopyrimidine amide autophagy inhibitors and methods of use thereof
MX2021013662A (es) 2019-05-10 2022-03-11 Deciphera Pharmaceuticals Llc Inhibidores de la autofagia de heteroarilaminopirimidina amida y metodos de uso de estos.
IL325201A (en) 2019-06-17 2026-02-01 Deciphera Pharmaceuticals Llc Aminopyrimidine amide autophagy inhibitors and methods of using them
WO2021007269A1 (en) 2019-07-09 2021-01-14 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
CN112341344B (zh) * 2019-08-09 2021-10-26 上海喀露蓝科技有限公司 一种激酶抑制剂中间体的制备方法
WO2021067374A1 (en) 2019-10-01 2021-04-08 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
TWI891666B (zh) 2019-10-14 2025-08-01 美商英塞特公司 作為ｆｇｆｒ抑制劑之雙環雜環
WO2021076728A1 (en) 2019-10-16 2021-04-22 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
BR112022010664A2 (pt) 2019-12-04 2022-08-16 Incyte Corp Derivados de um inibidor de fgfr
EP4069696A1 (en) 2019-12-04 2022-10-12 Incyte Corporation Tricyclic heterocycles as fgfr inhibitors
EP4083021B1 (en) * 2019-12-23 2025-07-02 Beijing Scitech-MQ Pharmaceuticals Limited Cyano-substituted pyridine and cyano-substituted pyrimidine compound and preparation method therefor and application thereof
WO2021146424A1 (en) 2020-01-15 2021-07-22 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
US20230172867A1 (en) 2020-05-15 2023-06-08 Eisai R&D Management Co., Ltd. A method for treating cancer with an oral dosage form of an fgfr4 inhibitor
JP2023533903A (ja) * 2020-05-15 2023-08-07 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 Ｆｇｆｒ４阻害剤の経口製剤によるがんの治療方法
CN113943251B (zh) * 2020-07-16 2026-04-17 正大天晴药业集团股份有限公司 双环庚烯基氨基取代的氮杂芳环类化合物及其医药用途
EP4226945A4 (en) 2020-10-05 2024-10-23 Chiome Bioscience, Inc MEDICINES FOR THE TREATMENT OF CANCER
CN114621106A (zh) * 2020-12-11 2022-06-14 重庆医药工业研究院有限责任公司 一种酪氨酸激酶药物中间体的制备方法
TW202304459A (zh) 2021-04-12 2023-02-01 美商英塞特公司 包含ｆｇｆｒ抑制劑及ｎｅｃｔｉｎ－４靶向劑之組合療法
EP4352059A1 (en) 2021-06-09 2024-04-17 Incyte Corporation Tricyclic heterocycles as fgfr inhibitors
WO2022261159A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Incyte Corporation Tricyclic heterocycles as fgfr inhibitors
CN115490670A (zh) * 2021-06-17 2022-12-20 浙江海正药业股份有限公司 Fgfr4选择性抑制剂的盐及其制备方法和用途
CN115504965A (zh) 2021-06-23 2022-12-23 浙江海正药业股份有限公司 嘧啶类衍生物的晶型及其制备方法
CN114276266B (zh) * 2021-12-30 2024-10-11 兰州康鹏威耳化工有限公司 一种4-氨基-2-氟苯甲酰胺的制备方法
CN114560815A (zh) * 2022-03-04 2022-05-31 北京工业大学 (2-((5-氯-取代苯基氨基嘧啶-2-基)氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯类衍生物
CN116947825B (zh) * 2022-04-14 2025-11-28 浙江海正药业股份有限公司 Fgfr4选择性抑制剂化合物的晶型及其制备方法和用途
CN114835640B (zh) * 2022-05-24 2024-02-13 中国药科大学 成纤维细胞生长因子受体抑制剂、制备方法及应用
EP4509142A1 (en) 2023-08-16 2025-02-19 Ona Therapeutics S.L. Fgfr4 as target in cancer treatment

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2054867T3 (es) * 1987-09-28 1994-08-16 Ciba Geigy Ag Plaguicidas y pesticidas.
AU763839B2 (en) 1998-05-26 2003-07-31 Warner-Lambert Company Bicyclic pyrimidines and bicyclic 3,4-dihydropyrimidines as inhibitors of cellular proliferation
GB0103926D0 (en) 2001-02-17 2001-04-04 Astrazeneca Ab Chemical compounds
WO2004037212A2 (en) 2002-10-24 2004-05-06 Sepracor, Inc. Compositions comprising zopiclone derivatives and methods of making and using the same
MXPA06001098A (es) 2003-07-29 2006-04-24 Irm Llc Compuestos y composiciones utiles como inhibidores de proteina cinasa.
GB0512324D0 (en) * 2005-06-16 2005-07-27 Novartis Ag Organic compounds
WO2006038112A1 (en) 2004-10-01 2006-04-13 Warner-Lambert Company Llc Use of kinase inhibitors to promote neochondrogenesis
BRPI0620408B8 (pt) * 2005-12-21 2021-05-25 Novartis Ag derivados de pirimidinil aril uréia sendo inibidores de fgf, seus usos, e preparação farmacêutica
EP1918376A1 (en) 2006-11-03 2008-05-07 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. FGFR4 promotes cancer cell resistance in response to chemotherapeutic drugs
US8846704B2 (en) * 2007-01-31 2014-09-30 YM Biosciences Austraila Pty Ltd Thiopyrimidine-based compounds and uses thereof
US20090062320A1 (en) 2007-08-28 2009-03-05 Vito Guagnano Method of Treating Disorders Mediated by the Fibroblast Growth Factor Receptor
TWI546290B (zh) 2008-06-27 2016-08-21 賽基艾維洛米斯研究股份有限公司 雜芳基化合物及其用途
AR079257A1 (es) * 2009-12-07 2012-01-04 Novartis Ag Formas cristalinas de 3-(2,6-dicloro-3-5-dimetoxi-fenil)-1-{6-[4-(4-etil-piperazin-1-il)-fenil-amino]-pirimidin-4-il}-1-metil-urea y sales de las mismas
US9180127B2 (en) 2009-12-29 2015-11-10 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Type II Raf kinase inhibitors
BR112012016992A2 (pt) 2010-01-14 2019-09-24 Univ Yale "funcionalidade que se liga a uma interface de contato assimétrico de um recpetor de tirosina quinase (rtk), hibridoma, composição farmacêutica, uso de uma quantidade efixaz da funcionalidade, método para identificar uma funcionalidade que se liga a uma interface de contato assimétrico de um receptor de tirosina quinase (rtk), e, molécula pequena".
WO2011153553A2 (en) 2010-06-04 2011-12-08 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for kinase inhibition
US20140051662A1 (en) 2011-04-08 2014-02-20 Ab Science Treatment of multiple myeloma with masitinib
CN102816162B (zh) 2011-06-10 2016-04-27 中国科学院广州生物医药与健康研究院 嘧啶并嘧啶酮类化合物及其药用组合物和应用
US20130183294A1 (en) 2012-01-18 2013-07-18 Genentech, Inc. Methods of using fgf19 modulators
EA026953B1 (ru) 2012-02-28 2017-06-30 Астеллас Фарма Инк. Азотсодержащее ароматическое гетероциклическое соединение
SMT202100451T1 (it) * 2012-07-11 2021-09-14 Blueprint Medicines Corp Inibitori del recettore di crescita dei fibroblasti
JP2016518316A (ja) * 2013-03-15 2016-06-23 セルジーン アビロミクス リサーチ， インコーポレイテッド Ｍｋ２阻害剤およびそれらの使用
EP3019491A4 (en) 2013-07-09 2016-12-21 Dana Farber Cancer Inst Inc KINASEHEMMER FOR THE TREATMENT OF DISEASES
AR097455A1 (es) 2013-08-28 2016-03-16 Astellas Pharma Inc Composición farmacéutica que contiene compuesto de pirimidina como un ingrediente activo
MX378288B (es) 2013-10-18 2025-03-10 Eisai R&D Man Co Ltd Inhibidores de pirimidina del fgfr4.
CA2928042C (en) 2013-10-25 2022-05-10 Blueprint Medicines Corporation Inhibitors of the fibroblast growth factor receptor
WO2015108992A1 (en) 2014-01-15 2015-07-23 Blueprint Medicines Corporation Heterobicyclic compounds and their use as fgfr4 receptor inhibitors
MA38393B1 (fr) * 2014-03-13 2018-11-30 Sanofi Sa Composés hétéroaryle et utilisations associées
CN113234072B (zh) 2016-05-20 2022-11-04 江苏豪森药业集团有限公司 Fgfr4抑制剂、其制备方法和应用
JP6667014B2 (ja) 2016-05-20 2020-03-18 浙江海正薬業股▲ふん▼有限公司Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｈｉｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＣＯ．，ＬＴＤ． ピリミジン誘導体、その調製方法および医療での使用

Also Published As

Publication number Publication date
US20200206222A1 (en) 2020-07-02
CA2924206C (en) 2022-10-25
EP3057943A1 (en) 2016-08-24
PH12016500676B1 (en) 2022-07-20
CN110354128A (zh) 2019-10-22
AU2014337291B2 (en) 2018-12-13
JP2016535000A (ja) 2016-11-10
SMT201800379T1 (it) 2018-09-13
TWI597268B (zh) 2017-09-01
ES2679521T3 (es) 2018-08-28
MX2016004933A (es) 2016-12-20
CN105899490A (zh) 2016-08-24
IL244373A0 (en) 2016-04-21
US20160130237A1 (en) 2016-05-12
BR112016008110B1 (pt) 2019-07-02
US9730931B2 (en) 2017-08-15
AU2014337291A1 (en) 2016-03-17
US20170007601A1 (en) 2017-01-12
EP3421457B1 (en) 2021-10-06
CA2924206A1 (en) 2015-04-23
CY1121129T1 (el) 2019-12-11
JP6139788B2 (ja) 2017-05-31
JP2017160233A (ja) 2017-09-14
IL244373B (en) 2018-10-31
SI3057943T1 (en) 2018-08-31
AU2014337291B9 (en) 2020-05-07
AU2018271284A1 (en) 2018-12-20
LT3057943T (lt) 2018-11-12
PL3057943T3 (pl) 2018-09-28
EP3057943B1 (en) 2018-04-25
UA116920C2 (uk) 2018-05-25
TW201605802A (zh) 2016-02-16
US10912774B2 (en) 2021-02-09
US10537571B2 (en) 2020-01-21
WO2015057938A1 (en) 2015-04-23
AR098048A1 (es) 2016-04-27
US9434697B2 (en) 2016-09-06
CN105899490B (zh) 2019-07-23
PE20160679A1 (es) 2016-08-04
DK3057943T3 (en) 2018-07-30
KR101826015B1 (ko) 2018-02-06
RU2715708C2 (ru) 2020-03-03
HRP20181129T1 (hr) 2018-09-21
HUE039268T2 (hu) 2018-12-28
PT3057943T (pt) 2018-07-24
PH12016500676A1 (en) 2016-05-30
NZ717559A (en) 2021-07-30
HK1223091A1 (en) 2017-07-21
CL2016000918A1 (es) 2016-11-11
RU2016118981A (ru) 2017-11-23
JO3515B1 (ar) 2020-07-05
SG11201602069WA (en) 2016-04-28
MX378288B (es) 2025-03-10
EP3421457A1 (en) 2019-01-02
WO2015057963A1 (en) 2015-04-23
RU2016118981A3 (sr) 2018-06-25
US20170360785A1 (en) 2017-12-21
MY184733A (en) 2021-04-20
KR20160072113A (ko) 2016-06-22
AU2018271284B2 (en) 2020-05-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10912774B2 (en) Pyrimidine FGFR4 inhibitors
ES2330045T3 (es) 2,4-diamino-pirimidinas como inhibidores de aurora.
US9611223B2 (en) 3-aryl-5-substituted-isoquinolin-1-one compounds and their therapeutic use
JP2023036991A (ja) Ｅｈｍｔ２阻害剤としてのアミン置換複素環化合物、その塩、及びそれらの合成方法
Gadekar et al. Design, synthesis and biological evaluation of 2, 3-dihydroimidazo [2, 1-b] thiazoles as dual EGFR and IGF1R inhibitors
CA3043288A1 (en) 3-amino-1,5-dihydro-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-ones as cyclin dependent kinase inhibitors
US20180057465A1 (en) Inhibitors of Necroptosis
EP3307726B1 (en) 2-oxo-1,2-dihydropyridine-3-carboxamide compounds and their use as inhibitors of pdk1
HK1223091B (en) Pyrimidine fgfr4 inhibitors