RS57509B1

RS57509B1 - Na 4-položaju supstituisan derivat pirazolopirimidina i njegova upotreba u pripremanju leka

Info

Publication number: RS57509B1
Application number: RS20180869A
Authority: RS
Inventors: Shengyong Yang; Yuquan Wei
Original assignee: Guangxi Wuzhou Pharmaceuticals Group Co Ltd
Priority date: 2012-07-27
Filing date: 2013-03-05
Publication date: 2018-10-31
Also published as: CY1120460T1; AU2013296011A1; AU2013296011B2; PL2889298T3; KR20150036783A; ES2682343T3; EP2889298A1; HRP20181172T1; WO2014015673A1; SMT201800394T1; US9828375B2; JP2015522627A; DK2889298T3; SI2889298T1; PT2889298T; JP6063566B2; EP2889298B1; HUE038634T2; CN103570723A; CA2880196A1

Description

Opis

Oblast pronalaska

[0001] Ovaj pronalazak pripada oblasti organskih sintetičkih lekova, a naročito se odnosi na derivat pirazolopirimidina i njegov postupak pripreme i upotrebe u farmaceutskom preparatu. Derivat pirazolopirimidina uglavnom ima položaj 4 supstituisan.

Opis stanja tehnike

[0002] Kinaze su široko raspostranjene u organizmima i igraju suštinsku ulogu u regulisanju ćelijskoj proliferaciji, rastu, diferencijaciji, apoptozi, starenju, itd. Abnormalne aktivnosti kinaza mogu da izazovu mnoge ozbiljne bolesti uključujući kancer, autoimune bolesti (npr. lupus eritematozus, reumatoidni artritis i psorijazu), dijabetes i zapaljenje. Prema tome, kao vrsta mete tretiranja najvažnijih bolesti, kinaze se veoma intenzivno ispitiju.

[0003] U skladu sa mapom humanih gena, identifikovano je 518 kinaza kod ljudi. Veza između kinaza i tumora i autoimunih bolesti je razjašnjena. Na primer, receptor tirozin kinaze receptora 2 vaskularnog endotelijalnog faktora rasta 2 (VEGFR2) i receptora iz trombocita izvedenog faktora rasta (PDGFR) uključeni su u regulaciju novih krvnih sudova. Ova angiogeneza igra značajnu ulogu u telesnom razvoju, zarastanju rana, regeneraciji tkiva i drugih fizioloških procesa, a takođe je značajan učesnik u patološkim procesima uključujući tumore. Svrha onkoterapije može se postići inhibiranjem angiogeneze tumornih tkiva i dalje blokiranjem dostave nutrijenata do tumora. Fms-nalik tirozin kinaza 3 (FLT3) je još jedan receptor tirozin kinaze i igra značajnu ulogu u proliferaciji i diferencijaciji hemopoetičnih matičnih ćelija. U skladu sa nedavnim molekularnim biološkim ispitivanjem, FLT3 mutacija ili visoka ekspresija javljaju se u hemopoietičnim matičnim ćelijama među oko treće kod pacijenata sa akutnom mijelogenoznom leukemijom (AML). Mnoga ispitivanja su pokazala da su AML pacijenti sa FLT3 mutacijom skloni recidivu i slabim prognozama. Trenutno, FLT3 predstavlja značajnu metu lečenja za AML, a njen inhibitor je poznat kao najperspektivniji molekularni ciljani lek za lečenje AML. Nekoliko FLT3 inhibitors kao što su SU-5416, PKC-412 i CEP-701 korišćeni su u kliničkim ispitivanjima. Međutim, najskorija ispitivanja pronašla su da klinička ispitivanja ovih jedinjenja nisu idealna, a jedan od glavnih razloga je da njihovi veliki toksični i sporedni efekti ograničavaju povećanje doze leka i dalje utiču na efikasnost. Prema tome, naročito je važno ispitati i razviti FLT3 inhibitor sa visokom efikasnošću i niskom toksičnošću za lečenje AML. Dodatno tumori su blisko povezani sa drugim kinazama kao što je humana Fms-nalik tirozin kinaza 1 (FLT1), humana Fms-nalik tirozin kinaza 4 (FLT4), BRAF serin/treonin protein kinaza (BRAF), cRAF serin/treonin protein kinaza (cRAF), receptor fibroblastnog faktora rasta (FGFR1), RET receptor tirozin kinaza (RET), SRC tirozin kinaza (SRC), EphA2 tirozin kinaza (EphA2), EphB2 tirozin kinaza (EphB2), c-KIT, CDK1 i tirozin protein kinaza (KIT).

[0004] Nedavna ispitivanja identifikovala su da je FLT3 povezan ne samo sa akutnom mijeloidnom leukemijom već i sa autoimunim bolestima koje uključuju sistemski lupus eritematozus, reumatoidni artritis, psorijazu, multiple sklerozu, zapaljensko-imunološku bolest, itd. FLT3 je veoma eksprimiran u progenitornim ćelijama dendričnih ćelija (DC), a FLT3 ligand može da indukuje DC diferencijaciju i maturaciju. Pored toga, FLT3 je takođe veoma eksprimiran u zrelim dendritskim ćelijama, šro sugeriše da FLT3 signalna putanja igra značajnu ulogu u održavanju normalne DC funkcije. DCs su vrsta ključnog učesnika u humanom imunom sistemu, a abnormalna regulacija DCs je značajan razlog koji vosi ka autoimunim bolestima. U skorijim gorinama, ispitivanja su pokazala da se FLT3 aktivacija može inhibirati radi regulisanja DC diferencijacije i sazrevanja, čime se postiže svrha tretiranja autoimunih bolesti. Prema tome, veoma aktivan FLT3 inhibitor može se koristiti za AML lečenje, a naročito je značajno za lečenje autoimunih bolesti.

[0005] WO03/099820A1 odnosi se na jedinjenja pirazolopirimidina, određenije, na anilinomsupstituisana pirazolopirimidin jedinjenja korisna za lečenje p38 kinaza-povezanih stanja.

[0006] Tradicionalno. Veoma selektivan inhibitor kinaze pojedinalne kinaze uglavnom je fokusiran na uslove ispitivanja i razvoja kinaza lekova. Međutim, za kompleksnije bolesti kao što su tumor i autoimune bolesti, više-ciljni lekovi koji ciljaju više kinaza mogu biti poželjniji u smislu efikasnosti i sprečavanju rekurencija.

Suština ovog pronalaska

[0007] Ovaj pronalazak obezbeđuje novi derivat pirazolopirimidina koji uglavnom ima položaj 4 supstituisan. Derivat pirazolopirimidina prema ovom pronalasku ima strukturnu formulu I kako sledi:

u kojoj, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

supstituisan na 3-položaju ili 4-položaju benzenovog prstena matrice; pri čemu je jedan kraj atoma N povezan sa matricom;

R1je -H, C1- C6alkil,

ili metil supstituisan supstituisanim 6 - 10-članim aromatičnim prstenom; a supstituent na supstituisanom aromatičnom prstenu je -H, halogen ili C1- C4alkil;

gde ako je L

onda je Y kiseonik ili sumpor;

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, C1- C4alkil sulfenil ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

pri čemu je broj heteroatoma u supstituisanom aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 4, heteroatom je N, O ili S; supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu je -H, C1- C6alkil, supstituisan aril, -CF3, 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal, karboksil ili C3- C6cikloalkil; a supstituent u supstituisanom arilu je -H ili halogen;

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3, morfolinil ili C1- C4fenilalkil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil;

i

n=0-4.

[0008] Izraz "metil supstituisan supstituisanim 6 - 10-članim aromatičnim prstenom" odnosi se na u okviru opisa i patentnih zahteva na supstituisan metil koji može biti supstituisan supstituisanim 6 - 10-članim aromatičnim prstenom.

[0009] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

supstituisan na 3-položaju ili 4-položaju benzenovog prstena matrice; pri čemu je jedan kraj atoma N povezan sa benzenovim prstenom matrice;

R1je -H, C1- C6alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, C1- C4alkil sulfenil ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu je -H, C1- C6alkil, aril, -CF3ili 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal; a pri čemu je broj heteroatoma u aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 4, a heteroatom je N, O ili S;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil;

i

n=0-4.

[0010] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, C1- C4alkil sulfenil ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0011] Dalje poželjno , Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0012] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

ili metil supstituisan supstituisanim fenilom; a supstituent supstituisanog fenila je -H, halogen ili C1- C4alkil;

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 3.

[0013] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

ili metil supstituisan supstituisanim fenilom; a supstituent supstituisanog fenila je -H, -F, -Cl ili -Br; R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 3.

[0014] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

ili metil supstituisan supstituisanim fenilom; a supstituent supstituisanog fenila je -H ili -Br;

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 3.

[0015] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 3.

[0016] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 3.

[0017] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H;

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 3.

[0018] Dalje poželjno , Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, -F, -Cl, -Br, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0019] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, -F, -Cl, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0020] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, -F, -Cl, metil, metoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 3.

[0021] Dalje poželjno , Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal,

supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu je -H, C1- C4alkil, aril, -CF3ili 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal; a pri čemu je broj heteroatoma u aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 3, a heteroatom je N ili O;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0022] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal,

supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu je -H, C1- C4 alkil, aril, -CF3ili kvinolil; a pri čemu je broj heteroatoma u aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 3, a heteroatom je N ili O; R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3, morfolinil ili C1- C4fenilalkil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 4.

[0023] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal,

supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu je -H, C1- C4alkil, fenil, -CF3ili kvinolil; a pri čemu je broj heteroatoma u aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 3, a heteroatom je N ili O; R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3, morfolinil ili C1- C4fenilalkil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 4.

[0024] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal,

supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu je -H, C1- C4alkil, fenil, -CF3ili kvinolil; a pri čemu je broj heteroatoma u aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 2, a heteroatom je N ili O; R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3, morfolinil ili C1- C4fenilalkil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 3.

[0025] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan pirazolil, supstituisan izoksazolil, supstituisan kvinolil, supstituisan piridil,

a supstituent je -H, C1- C4alkil, fenil, -CF3ili kvinolil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 3.

[0026] Dalje poželjno , Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu je -H, C1- C6 alkil, aril, -CF3ili 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal; a pri čemu je broj heteroatoma u aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 4, a heteroatom je N ili O;

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0027] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu je -H, C1- C6alkil, aril, -CF3ili 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal; a pri čemu je broj heteroatoma u aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 4, a heteroatom je N ili O;

R4je -H, -F, -Cl, -Br, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0028] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, -F, -Cl, -Br, C1- C4alkil, metoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0029] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, -F, -Cl, -Br, metil, izopropil, metoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 3.

[0030] Dalje poželjno , Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, fenil ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0031] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor; a L je

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, fenil ili cikloheksil; a

n=0 - 3.

[0032] Dalje poželjno , Y je kiseonik ili sumpor; a L je

supstituisan na 4-položaju benzenovog prstena matrice;

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, C1- C4alkil sulfenil ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0033] Poželjno, Y je kiseonik ili sumpor; a L je

supstituisan na 4-položaju benzenovog prstena matrice;

R1je -H ili C1- C4alkil;

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, C1- C4alkil sulfenil ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0034] Poželjno, Y je kiseonik ili sumpor; a L je

supstituisan na 4-položaju benzenovog prstena matrice;

R1je -H;

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, C1- C4alkil sulfenil ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0035] Najpoželjnije, Y je kiseonik ili sumpor; a L je

supstituisan na 4-položaju benzenovog prstena matrice;

R1je -H;

R2je -H, -F, -Cl, metil, metoksi ili -NO2;

a supstituent je -H, C1- C4alkil, fenil, -CF3ili kvinolil;

R4je -H, -F, -Cl, -Br, metil, izopropil, metoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, fenil ili cikloheksil; a

n=0 - 3.

[0036] Dalje, kada je L

derivat pirazolopirimidina ima strukturnu formulu II kako sledi:

u kojoj, Y je azot, kiseonik ili sumpor;

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 4.

[0037] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor, a R1je -H, C1- C4alkil,

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 3.

[0038] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor, a R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 3.

[0039] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor, a R1je -H, C1- C4alkil,

ili

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 3.

[0040] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor, a R1je -H,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 3.

[0041] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor, a R1je -H;

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0 - 3.

[0042] Dalje poželjno , Y je azot, kiseonik ili sumpor, a R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, -F, -Cl, -Br, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0043] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor, i R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, -F, -Cl, metil, metoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-3.

[0044] Dalje poželjno , Y je azot, kiseonik ili sumpor, a R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal,

supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu je -H, C1- C4 alkil, aril, -CF3ili kvinolil; a pri čemu je broj heteroatoma u aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 3, a heteroatom je N ili O; R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0045] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor, a R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

a supstituent je -H, C1- C4alkil, fenil, -CF3ili kvinolil;

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-3.

[0046] Dalje poželjno , Y je azot, kiseonik ili sumpor, i R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu je -H, C1- C6alkil, aril, -CF3ili 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal; a pri čemu je broj heteroatoma u aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 4, a heteroatom je N ili O; R4je -H, -F, -Cl, -Br, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil; R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a n=0-4.

[0047] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor, i R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, -F, -Cl, -Br, metil, izopropil, metoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-3.

[0048] Dalje poželjno , Y je azot, kiseonik ili sumpor, i R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, fenil ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0049] Poželjno, Y je azot, kiseonik ili sumpor, i R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, fenil ili cikloheksil; a

n=0-3.

[0050] Dalje poželjno , Y je kiseonik ili sumpor, i R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, C1- C4alkil sulfenil ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0051] Poželjno, Y je kiseonik ili sumpor, i R1je -H ili C1- C4alkil;

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, C1- C4alkil sulfenil ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0052] Poželjno, Y je kiseonik ili sumpor, i R1je -H;

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, C1- C4alkil sulfenil ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0053] Najpoželjnije, Y je kiseonik ili sumpor, i R1je -H;

R2je -H, -F, -Cl, metil, metoksi ili -NO2;

a supstituent je -H, C1- C4alkil, fenil, -CF3ili kvinolil;

R4je -H, -F, -Cl, -Br, metil, izopropil, metoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, fenil ili cikloheksil; a

n=0-3.

[0054] Dalje, kada je L

derivat pirazolopirimidina ima strukturnu formulu III kako sledi

u kojoj, R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

ili

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0055] Poželjno, R3je supstituisan 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal ili

supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu je -H, C1- C6alkil, aril, -CF3ili 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal; a pri čemu je broj heteroatoma u aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 4, a heteroatom je N ili O; a

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil.

[0056] Poželjno, R3je

supstituisan pirazolil, supstituisan izoksazolil, supstituisan kvinolil ili supstituisan piridil, a supstituent je -H, C1- C4alkil, fenil, -CF3ili kvinolil; a

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil.

[0057] Poželjno, R3je

a

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil.

[0058] Poželjno, R3je

a

R4je -H, -F, -Cl, -Br, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -CF3.

[0059] Poželjno, R3je

R4je -H, C1- C4alkil ili -CF3.

[0060] Najpoželjnije, R3je

a

R4je -H ili -CF3.

[0061] Dalje je opisano da kada je L

a jedan kraj atoma N je povezan sa matricom, derivat pirazolopirimidina ima strukturnu formulu IV kako sledi:

u kojoj, R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -CF3; a m=0-2.

[0062] Poželjno, R4je halogen ili -CF3; a m=0 ili 1.

[0063] Najpoželjnije, R4je -F, -Cl, -Br ili -CF3; a m=0 ili 1.

[0064] Dalje, specifičan naziv derivata pirazolopirimidina je kako sledi:

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-(trifluorometil)fenil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-hloro-3-(trifluorometil)fenil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-bromofenil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(2,3-dimetilfenil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-metoksifenil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-(trifluorometil)fenil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-izopropilfenil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-(trifluorometoksi)fenil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(4-(trifluorometil)fenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(4-hloro-3-(trifluorometil)fenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-metilfenil)-3-(3-(trifluorometil)fenil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(2-hloro-4-(trifluorometil)fenil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-fluorofenil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-fenilurea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-morfolinfenil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-fluorofenil)urea,

(S)-1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(1-fenetil)urea,

(R)-1-(4-(H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(1-fenetil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(metilcikloheksil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-cikloheksilurea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(6-kvinolil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-piridilurea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butil-1-fenil-1H-pirazol-5-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butilizoksazol-5-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-izopropil-1-metil-pirazol-5-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(5-(trifluorometil)izoksazol-3-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-metilfenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-fluorofenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-hlorfenil)-3-(3-tert-butil-1-metilpirazol-5-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3,5-difluorofenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butil-1-metil-1H-pirazol-5-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(1-metil-3(trifluorometil) 1H-pirazol-5-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)3-fluorofenil)-3-(1-metil-3 (trifluorometil) 1H-pirazol-5-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-nitrofenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-tert-butilizoksazol-5-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-metoksifenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butil-1-(kvinolin-7-il)-1H-pirazo 1-5-il)urea, 1-(3-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-(trifluorometil)fenil)urea,

1-(3-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-hloro-3-(trifluorometil)fenil)urea,

1-(3-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-(trifluorometil)fenil)urea,

1-(3-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-feniltiourea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-trifluorometilfenil)tiourea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-sulfidril)fenil)-3-(4-trifluorometil)fenil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-sulfidril)fenil)-3-(3-(trifluorometil)fenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-sulfidril)fenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-tert-butil-1-metilpirazol-5-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-hlorfenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-fluorofenil)-3-(4-hloro-3-(trifluorometil)fenil)urea,

1-(4-(1H pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-hlorfenil)-3-(4-hloro-3-(trifluorometil)fenil)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-tert-butil-1-fenil-1H-pirazol-5-il)urea,

5-(3-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)karbamido)-3-tert-butil-1H-pirazol-1-karboksilna kiselina, 5-(3-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi) -3-fluoro-fenil)karbamido)-3-tert-butil-1H-pirazol-1-karboksilna kiselina,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-tert-butil-1-(4-fluoro-fenil) -1H-pirazol-5-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butil-1-ciklopentil-1H-pirazol-5-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-tert-butil-1-ciklopentil-1H-p irazol-5-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butil-tiazol-2-il)urea,

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-feniltiazol-2-il)urea or

1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(benzotiazol-2-il)urea.

[0065] Dalje poželjno, derivat pirazolopirimidina strukturne formule I je kako sledi: U kojoj, Y je kiseonik, L je

supstituisan na 4-položaju benzenovog prstena matrice; a R1je -H; R2je -H ili halogen;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal; pri čemu je broj heteroatoma u supstituisanom aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 4, heteroatom je N, O ili S; supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu je -H, C1- C6alkil, supstituisan fenil, -CF3, 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal, karboksil ili C3- C6cikloalkil; a supstituent u supstituisanom arilu je -H ili halogen.

[0066] Poželjno, Y je kiseonik, L je

supstituisan na 4-položaju benzenovog prstena matrice; R1je -H; a R2je -H ili halogen;

R3je supstituisan 4 - 6 -člani aromatični heterociklični radikal; pri čemu je broj heteroatoma u supstituisanom aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 2, heteroatom je N ili S; supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu je -H, C1- C6alkil, supstituisan fenil, -CF3, 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal, karboksil ili C3- C6cikloalkil; a supstituent u supstituisanom arilu je -H ili halogen.

[0067] Poželjno, Y je kiseonik, L je

R3je supstituisan pirazolil ili tiazolil; supstituent na supstituisanom pirazolilu ili tiazolilu je -H, C1- C6alkil, supstituisan fenil, -CF3, 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal, karboksil ili C3- C6cikloalkil; a supstituent u supstituisanom arilu je -H ili halogen.

[0068] Poželjno, Y je kiseonik, L je

R3je supstituisan pirazolil ili tiazolil; supstituent na supstituisanom pirazolilu ili tiazolilu je -H, C1- C4alkil, supstituisan fenil, karboksil ili C3- C6cikloalkil; a supstituent na supstituisanom fenilu je -H ili halogen.

[0069] Najpoželjnije, Y je kiseonik, L je

R3je supstituisan pirazolil ili tiazolil; a supstituent na supstituisanom pirazolilu ili tiazolilu je -H, C1- C4alkil, para-fluorofenil, karboksil ili ciklopentil.

[0070] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje postupak pripreme derivata pirazolopirimidina:

[0071] Kada je Y kiseonik ili sumpor, sintetički put jedinjenja zamule II, III i IV je kako sledi:

[0072] Kada je Y azot, sintetički put jedinjenja zamule II je kako sledi:

[0073] Kada je Y azot, kiseonik ili sumpor, sintetički put tipa 5 jedinjenja je kako sledi:

[0074] Specifični reakcioni uslovi su kako sledi:

a) reagovanje alopurinola (1) sa POCl3radi dobijanja jedinjenja (2);

u kojem, rastvarač je najmanje jedan od ksilena, toluena, acetonitril i POCl3, katalizator je najmanje jedan od DMF (N,N-dimetilformamid), piridina, N,N-dimetilanilina i N,N-dietilanilina; reakciona temperatura je 100°C - 125°C, poželjno 120°C; a reakciono vreme je 3h - 6h.

b) reagovanje jedinjenja (2) sa

u prisustvu neorganske baze radi dobijanja jedinjenja (3);

u kojem, neorganska baza je najmanje jedan od vodenih rastvora kalijum karbonata, natrijum karbonata, natrijum hidroksida i kalijum hidroksida; rastvarač može biti najmanje jedan od THF (tetrahidrofuran), acetona, DMF i dioksan; reakciona temperatura je 45°C - 60°C, poželjno 60°C; a reakciono vreme je 1h - 2h.

c) reagovanje jedinjenja (3) sa

radi dobijanja jedinjenja (4a) ili (4c);

u kojem, rastvarač je najmanje jedan od benzena, ksilenaa, THF, acetonitrila ili toluena; a reakciono vreme refluksa je 5h - 12h.

d) reagovanje jedinjenja (3) sa

radi dobijanja jedinjenja (4a);

u kojoj, rastvarač može biti najmanje jedan od dihlorometana, THF, acetona, DMF i dioksana; katalizator je najmanje jedan od 1-hidroksibenzotriazola, 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorida i N,N-Diizopropiletilamina; reakciona temperatura je 25°C - 60°C, poželjno 60°C; a reakciono vreme je 10h - 20h.

e) reagovanje jedinjenja

sa R3supstituisan amin radi dobijanja jedinjenja (6);

u kojem, rastvarač može biti najmanje jedan od THF, acetona, DMF, acetonitrila ili dioksana; a reakciono vreme refluksa je 0.5h - 3h.

f) reagovanje jedinjenja (6) sa redukujućim agesnom radi dobijanja jedinjenja (7);

u kojem, rastvarač može biti organski alkoholni rastvarač sa brojem ugljenika manjim od 6 kao što je metanol, etanol i voda; redukujući agens je najmanje jedan od praha železa, stano hlorid, natrijum hidrosulfit i vodonik; reakciono vreme je 1h - 8h; a reakciona temperatura je 25°C - 100°C, poželjno 90°C.

g) reagovanje jedinjenja (7) sa jedinjenjem (2) u prisustvu kiseline radi dobijanja jedinjenja (4b); u kojoj, kiselina je organska i neorganska kiselina kao što je hlorovodonična kiselina, sumporna kiselina, p-toluensulfonska kiselina, trifluorosirćetna kiselina i sirćetna kiselina; rastvarač je jedan od etanola, izopropanola i n-butil alkohola; reakciona temperatura je 80°C - 110°C, poželjno 100°C; a reakciono vreme je 3h - 8h.

h) reagovanje jedinjenja (3) ili jedinjenja (4a, 4b i 4c) sa halogenom supstituisanim R1u prisustvu baznog katalizatora radi dobijanja jedinjenja (5);

u kojoj, neorganska baza je najmanje jedan od kalijum karbonata, natrijum karbonata, natrijum hidroksida, kalijum hidroksida i natrijum hidrida, a organska baza je najmanje jedan od trietilamina, piridina, dietilamina i DMAP (4-dimetilaminopiridin); rastvarač je najmanje jedan od metanola, etanola, propanola, THF, acetona, DMF, dioksana, dihlorometana i etil acetata; reakciono vreme je 2h - 20h; a reakciona temperatura je 25°C - 120°C.

[0075] U kojoj, X je -Cl ili -Br, Y je azot, kiseonik ili sumpor, a Z je kiseonik ili sumpor;

R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0076] Poželjno, X je -Cl ili -Br; Y je azot, kiseonik ili sumpor, Z je kiseonik ili sumpor; a R1je -H, C1- C4alkil,

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-3.

[0077] Poželjno, X je -Cl ili -Br; Y je azot, kiseonik ili sumpor; Z je kiseonik ili sumpor; R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-3.

[0078] Poželjno, X je -Cl ili -Br; Y je azot, kiseonik ili sumpor; Z je kiseonik ili sumpor; R1je -H, metil, izopropil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je H, aril ili C3- C8cikloalkil; a n=0-3.

[0079] Dalje poželjno , X je -Cl ili -Br; Y je azot, kiseonik ili sumpor; Z je kiseonik ili sumpor; R1je -H, C1-C4alkil,

R2je -H, -F, -Cl, -Br, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0080] Poželjno, X je -Cl ili -Br; Y je azot, kiseonik ili sumpor; Z je kiseonik ili sumpor; R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, -F, -Cl, metil, metoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-3.

[0081] Dalje poželjno , X je -Cl ili -Br; Y je azot, kiseonik ili sumpor; Z je kiseonik ili sumpor; R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal,

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0082] Poželjno, X je -Cl ili -Br; Y je azot, kiseonik ili sumpor; Z je kiseonik ili sumpor; R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

a supstituent je -H, C1- C4alkil, fenil, -CF3ili kvinolil;

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-3.

[0083] Dalje poželjno , X je -Cl ili -Br; Y je azot, kiseonik ili sumpor; Z je kiseonik ili sumpor; R1je -H, C1-C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, -F, -Cl, -Br, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0084] Poželjno, X je -Cl ili -Br; Y je azot, kiseonik ili sumpor; Z je kiseonik ili sumpor; R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, -F, -Cl, -Br, metil, izopropil, metoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-3.

[0085] Dalje poželjno , X je -Cl ili -Br; Y je azot, kiseonik ili sumpor; Z je kiseonik ili sumpor; R1je -H, C1-C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, fenil ili C3- C8cikloalkil; a

n=0-4.

[0086] Poželjno, X je -Cl ili -Br; Y je azot, kiseonik ili sumpor; Z je kiseonik ili sumpor; R1je -H, C1- C4alkil,

R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2;

R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, fenil ili cikloheksil; a

n=0-3.

[0087] Najpoželjnije, X je -Cl ili -Br; Y je azot, kiseonik ili sumpor; Z je kiseonik ili sumpor; R1je -H, metil, izopropil,

ili p-bromobenzil;

R2je -H, -F, -Cl, metil, metoksi ili -NO2;

a supstituent je -H, C1- C4alkil, fenil, -CF3ili kvinolil;

R4je -H, -F, -Cl, -Br, metil, izopropil, metoksi, -CF3, -OCF3ili morfolinil;

R5je -H, fenil ili cikloheksil; a

n=0-3.

[0088] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutski prihvatljivu so derivata pirazolopirimidina.

[0089] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutski prihvatljiv hidrat derivata pirazolopirimidina.

[0090] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsku kombinaciju pripremljenu od derivata pirazolopirimidina prema ovom pronalasku i farmaceutski prihvatljivih pomoćnih komponenti. Struktura derivata pirazolopirimidina prema ovom pronalasku prikazana je kao formula I do III.

[0091] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje upotrebe derivata pirazolopirimidina i njegove soli ili hidrata u pripremanju inhibitora kinaza.

[0092] Dalje, inhibitor kinaze je lek koji inhibira najmanje jedno od humana Fms-nalik tirozin kinaza 3 (FLT3), receptor 2 vaskularnog endotelijalnog faktora rasta (VEGFR2), humana Fms-nalik tirozin kinaza 1 (FLT1), humana Fms-nalik tirozin kinaza 4 (FLT4), RET receptor tirozin kinaze (RET), cRAF serin/treonin protein kinaza (cRAF), B-RAF serin/treonin protein kinaza (B-RAF), tirozin protein kinaza KIT (c-KIT), receptor α faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGFα), receptor β faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGFβ), receptor 2fibroblastnog faktor rasta (FGFR2), receptor 1 fibroblastnog faktor rasta (FGFR1), EphA2 tirozin kinaza (EphA2), EphB2 tirozin kinaza (EphB2), SRC tirozin kinaza (SRC), ABL tirozin kinaza (ABL), kinaza anaplastičnog limfoma (ALK) i Met tirozin kinaza (Met).

[0093] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje upotrebe derivata pirazolopirimidina i njegove soli ili hidrata u pripremanju antitumornih lekova.

[0094] Dalje, tumor se odnosi na leukemiju ili čvrsti tumor.

[0095] Dalje, čvrsti tumor je najmanje jedan od plućnog karcinoma, karcinoma dojke, tirotidnog tumora, ćeludačnog karcinoma, malignog melanoma, karcinoma pankreasa, karcinoma grlića materice, glioma i kolorektalnog karcinoma, pri čemu je leukemija akutna mijeloidna leukemija ili mešana leukemija.

[0096] Eksperimenti ovog pronalaska ukazuju da derivat pirazolopirimidina pokazuje bolji inhibicioni efekat na humanu leukemiju, humani tiroidni tumor, humani karcinom želuca, humani maligni melanom, humani karcinom pankresa, humani karcinom grlića materice, humani kolorektalni karcinom, itd.

[0097] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje upotrebe derivata pirazolopirimidina i njegove soli ili hidrata u pripremanju leka za autoimune bolesti.

[0098] Dalje, autoimuna bolest je najmanje jedno od sistemskog lupusa eritematozusa, reumatoidnog artritisa, psorijaze, multiple skleroze i zapaljensko-imunološke bolesti.

[0099] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje upotrebe derivata pirazolopirimidina i njegove soli ili hidrata u pripremanju inhibitora angiogeneza tumora.

[0100] Ovaj pronalazak obezbeđuje novi derivat pirazolopirimidina koji uglavnom ima položaj 4 supstituisan i njegov jednostava, efikasan i jeftin postupak pripreme. Derivat pirazolopirimidina prema ovom pronalasku ima dobru inhibitornu aktivnost za više kinaza; ima inhibitorna efekat na višestruke čvrste tumore, leukemju i autoimune bolesti; obezbeđuje novi efektivan izbor za pripremanje inhibitora kinaza, lekova za autoimune bolesti, inhibitore angiogeneza i antitumorne lekovi; i ima dpbre iglede primenjivosti.

Kratak opis crteža

[0101]

Fig.1 prikazuje krivu inhibiranja tumora jedinjenja 4a-2 u modelu MV4-11 subkutane humane leukemije kod golih miševa.

Fig.2 prikazuje krivu inhibiranja tumora jedinjenja 4a-31 u modelu MV4-11 subkutane humane leukemije kod golih miševa.

Fig.3 prikazuje krivu inhibiranja tumora jedinjenja 4a-2 u modelu WM2664 subkutanog humanog melanoma kod golih miševa.

Fig.4 prikazuje krivu inhibiranja tumora jedinjenja 4a-6 u modelu HT29 subkutanog humanog kolorektalnog karcinoma kod golih miševa.

Fig.5 prikazuje krivu inhibiranja tumora jedinjenja 4a-6 u modelu U251 subkutanog humanog glioma kod golih miševa.

Fig.6 prikazuje inhibiciju angiogeneze jedinjenja 4a-6 i 4a-31 za FLK1 transgene zebrice pri koncentraciji od 1 µg/mL.

Fig.7 prikazuje krivu inhibiranja tumora jedinjenja 4a-58 u modelu MV4-11 subkutane humane leukemije kod golih miševa.

Fig.8 pokazuje ispitivanje aktivnosti inhibicije angiogeneze jedinjenja 4a-54 za transgene zebrice.

Opis poželjnih primera izvođenja

Primer 1: Pripremanje 4-hloro-1H-pirazolopirimidina (2)

[0102] Deset mL fosfornog oksihlorida (POCl3) dodato je u 5g alopurinola (jedinjenje 1), i DMF (5mL N,N-dimetilformamid) dodat je polako ukapavanjem na 0°C, zatim, DMA (1mL N,N-dimetilanilin) dodat je polako ukapavanjem, a temperatura reakcionog sistema povećana je na 120°C tokom 5h reakcije nakon što je dobijena mešavina umešana na normalnoj temperaturi nekoliko minuta. Nakon temeljnog hlađenja proizvoda reakcije, velika količina ledene vode dodata je u ugašeni fosforni oksihlorid u višku, zatim, proizvod reakcije estrahovan je dva puta etil acetatom, a sloj etil acetata osušen je izdvajanjem radi dobijanja 3.2g čvrste materije u prinosu od 56.4%.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.12(s, 1H), 9.32(s, 1H), 7.55(s, 1H) ppm.

Primer 2: Pripremanje 4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)anilina (3a-1)

[0103] P-aminofenol (0.55g, 5.5mmol) i natrijum hidroksid (0.20g, 5.5mmol) dodati su u 10mL vode; kalijum karbonat (0.76g, 5.5mmol) dodat je nakon što je dobijena mešavina umešana tokom 30 minuta na normalnoj temperaturi; temperatura je povećana na 60°C, i tetrahidrofuran rastvor 4-hloro-1H-pirazolopirimidina (intermedijer 2) (0.94g, 6.6mmol) polako je dodat u reakcioni rastvor; nakon jednog sata, reakcija je zaustavljena; nakon što je tetrahidrofuran reakcionog sistema destilovan do suvoće, preostali sistem estrahovan je etil acetatom i vodom dva puta; sloj etil acetata osušen je anhidrovanim magnezijum sulfatom, a zatim, osušen izdvajanjem, a zatim, uveden u kolonu za prečišćavanje radi dobijanja 0.77g 4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)anilina (3a-1) u prinosu od 62.1%.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.07(s, 1H), 8.50(s, 1H), 7.67(s, 1H), 6.96(d, J=8.8 Hz, 2H), 6.64(d, J=8.8 Hz, 2H), 5.20(s, 2H) ppm. LCMS m/z: 228.1 [M H].

Primer 3: Pripremanje 4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-metilanilina (3a-2)

[0104] Intermedijer (3a-2) dobijen je od intermedijera (2) i 4-amino-3-metilfenola postupkom sinteze intermedijera (3a-1) u prinosu od 64.2%.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.04(s, 1H), 8.49(s, 1H), 7.65(s, 1H), 6.89(d, J=2.4 Hz, 1H), 6.85(d, J=8.0 Hz, 1H), 6.68(d, J=8.4 Hz, 1H), 4.94(s, 2H), 2.08(s, 3H) ppm.

Primer 4: Pripremanje 4-(1H-pirazolopirimidin-4-sulfidril)-anilina (3c-3)

[0105] Intermedijer (3c-3) dobijen je od intermedijera (2) i p-aminotiofenola postupkom sinteze intermedijera (3a-1) u prinosu od 94.2%.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.98(s, 1H), 8.61(s, 1H), 7.37(d, J=9.2 Hz, 2H), 6.72(d, J=8.0 Hz, 2H), 6.62(s, 1H), 5.86(s, 2H) ppm.

Primer 5: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-trifluorometil)fenil)uree (4a-1)

[0106] 4-(trifluorometil)anilin (1.6g, 10mmol) rastvoren je u 50mL tetrahidrofurana; ukapavanjem je polako dodat u tetrahidrofuran rastvor trifosgena (2.98, 10mmol); nekoliko minuta nakon dodavanja anilina ukapavanjem, 3mL trietilamina dodato je u reakcioni rastvor i umešavan nekoliko minuta; Nakon što je tetrahidrofuran u reakcionom rastvoru destilovan do suvoće, 4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)anilin (3a-1, 1.8g, 8mmol) dodat je kako bi se omogućila reakcija tokom 8h reakcije na 90 °C sa acetonitrilom kao rastvaračem. Acetonitril osušen je izdvajanjem, i opran vodom i acetonom radi dobijanja 2.3g proizvoda (4a-1) u prinosu od 71.0%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.15(s, 1H), 9.13(s, 1H), 8.97(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.04(s, 1H), 7.60-7.51(m, 5H), 7.32(d, J=7.2 Hz, 1H), 7.24(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.27(d, J=8.8 Hz, 2H) ppm.

Primer 6: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-hloro-3-(trifluorometil)fenil) uree (4a-2)

[0107 ] Jedinjenje (4a-2) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i 4-hloro-3-trifluorometil-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 70.1 %.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.14(s, 1H), 9.26(s, 1H), 9.02(s, 1H), 8.50(s, 1H), 8.12(s, 1H), 8.05(s, 1H),7.64(d, J=7.2 Hz, 2H), 7.56(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.25(d, J=8.4 Hz, 2H) ppm.

Primer 7: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-bromofenil)uree (4a-3)

[0108 ] Jedinjenje (4a-3) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i 4-bromo-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 70.8%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.14(s, 1H), 8.87(d, J=10.8 Hz, 2H), 8.89(s, 1H), 8.50(s, 1H), 8.04(s, 1H), 7.54(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.42(d, J=17.6 Hz, 4H), 7.24(d, J=8.8 Hz, 2H) ppm.

Primer 8: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(2,3-dimetilfenil)uree (4a-4)

[0109 ] Jedinjenje (4a-4) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i 2.3-dimetil-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 72.8%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.13(s, 1H), 9.06(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.00(s, 1H), 7.55(t, J=13.63H), 7.24(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.04(t, J=15.2 Hz, 1H), 6.91(d, J=7.2 Hz, 1H), 2.24(s, 3H), 2.12(s, 3H) ppm.

Primer 9: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-metoksifenil)uree (4a-5)

[0110 ] Jedinjenje (4a-5) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i 3-metoksi-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 71.2%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.14(s, 1H), 8.79(s, 1H), 8.73(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.03(s, 1H), 7.60(d, J=8.8 Hz 2H), 7.26-7.21(m, 4H), 6.96(d, J=8.0 Hz, 1H), 6.57(dd, J=2.0 Hz, J=6.0 Hz, 1H), 3.74(s, 3H) ppm.

Primer 10: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-trifluorometil)fenil)uree (4a-6)

[0111 ] Jedinjenje (4a-6) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i 3-trifluorometil-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 71.8%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.14(s, 1H), 9.12(s, 1H), 8.95(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.04(d, J=4.0 Hz, 2H), 7.61-7.51(m, 4H), 7.32(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.26(d, J=8.4 Hz, 2H) ppm.

Primer 11: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-izopropilfenil)uree (4a-7)

[0112 ] Jedinjenje (4a-7) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i 3-izopropil-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 70.2%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.13(s, 1H), 8.77(s, 1H), 8.66(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.01(s, 2H), 7.55(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.36(s, 1H), 7.28-7.20(m, 4H), 6.87(d, J=7.6 Hz, 1H), 2.87-2.83(m, 1H), 1.20(d, J=6.8 Hz, 6H) ppm.

Primer 12: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-trifluorometoksi)fenil) uree (4a-8)

[0113 ] Jedinjenje (4a-8) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i 3-trifluorometoksi-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 72.6%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.13(s, 1H), 9.06(s, 1H), 8.91(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.04(s, 1H), 7.61(s, 1H), 7.52(d, J=8.0 Hz, 2H),7.32(m, 1H), 7.18(d, J=7.2 Hz, 1H), 6.92(d, J=6.4 Hz, 2H), 6.82(d, J=6.4 Hz, 1H) ppm. LCMS m/z: 431.1 [M H].

Primer 13: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(4-(trifluorometil)fenil) uree (4a-9)

[0114 ] Jedinjenje (4a-9) dobijeno je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluoroanilina i 4-trifluorometil-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 70.0%.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.24 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 9.14 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.70-7.64 (m, 5H), 7.42 (t, J=8.4 Hz, 1H), 7.25 (d, J=8.4 Hz, 1H) ppm.

Primer 14: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(4-hloro-3-(trifluorometil )fenil)uree (4a-10)

[0115 ] Jedinjenje (4a-10) dobijeno je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluoroanilina i 4-hloro-3-trifluorometil-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 72.6%.

MS m/z 467.1[M H].

Primer 15: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-metilfenil)-3-(3-(trifluorometil)fenil) uree(4a-11)

[0116 ] Jedinjenje (4a-11) dobijeno je od intermedijera (3a-2) i 3-trifluorometil-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 70.6%.

MS m/z 429.1 [M Na].

Primer 16: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)uree (4a-12)

[0117 ] Jedinjenje (4a-12) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i 3,5-bis(trifluorometil)-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 73.0%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.14(s, 1H), 9.46(s, 1H), 9.13(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.16(s, 2H), 8.05(s, 1H), 7.65(s, 1H), 7.60(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.28(d, J=8.8 Hz, 2H) ppm. LCMS m/z: 483.2 [M H].

Primer 17: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(2-hloro-4-(trifluorometil)fenil) uree (4a-13)

[0118 ] Jedinjenje (4a-13) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i 2-hloro-4-trifluorometil-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 71.7%.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 14.14 (s, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.68 (d, J=7.2 Hz 1H), 7.45-7.48 (m, 4H), 6.86 (d, J=8.4 Hz, 2H) ppm.

Primer 18: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-fluorofenil)uree (4a-14)

[0119 ] Jedinjenje (4a-14) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i 3-fluoro-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 71.6%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.15(s, 1H), 8.98(s, 1H), 8.89(s, 1H), 8.52(s, 1H), 8.05(s, 1H), 7.57(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.52(d, J=12.0 Hz, 1H), 7.32(d, J=7.2 Hz, 1H), 7.27(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.15(d, J=7.6 Hz, 1H), 6.80(t, J=8.4 Hz, 1H) ppm.

Primer 19: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-feniluree (4a-15)

[0120 ] Jedinjenje (4a-15) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 69.0%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.14(s, 1H), 8.81(s, 1H), 8.73(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.03(s, 1H), 7.56(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.47(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.31-7.24(m, 4H), 6.98(t, J=7.2 Hz, 1H) ppm. LCMS m/z: 347.1 [M H].

Primer 20: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-morfolinilfenil)uree (4a-16) [0121 ] Jedinjenje (4a-16) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i 4-morfolini-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 71.8%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.16(s, 1H), 9.12(s, 1H), 8.99(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.04(s, 1H), 7.61-7.52(m, 4H), 7.31(d, J=8.0 Hz, 2H), 7.28(d, J=8.8 Hz, 2H), 3.76(br s, 4H), 3.12(br s, 4H) ppm. LCMS m/z: 432.2[M H].

Primer 21: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-fluorofenil)uree (4a-17) [0122 ] Jedinjenje (4a-17) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i 4-fluoro-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 72.8%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.12(s, 1H), 8.80(s, 1H), 8.75(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.02(s, 2H), 7.55(d, J=8.0 Hz, 2H), 7.48(t, J=8.8 Hz, 2H), 7.25(d, J=8.0 Hz, 2H), 7,13(t, J=8.0 Hz, 2H) ppm. LCMS m/z: 365.1 [M H].

Primer 22: Pripremanje (S)-1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(1-fenetil)uree (4a-18)

[0123 ] Jedinjenje (4a-18) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i (S)-2-metilbenzil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 74.6%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.12(s, 1H), 8.51(d, J=8.8 Hz 1H), 7.96(s, 1H), 7.47(d, J=8.4Hz, 1H), 7.36(s, 4H), 7.26(s, 2H), 7.18(d, J=8.4 Hz, 2H), 6.98(d, J=7.2Hz, 2H), 4.86-4.83(m, 1H), 1.41(d, J=6.4 Hz, 3H) ppm.

Primer 23: Pripremanje (R)-1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(1-fenetil)uree (4a-19)

[0124 ] Jedinjenje (4a-19) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i (R)-2-metilbenzil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 74.0%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.15(s, 1H), 8.55(s, 1H), 8.49(s, 1H), 7.95(s, 1H), 7.47(d, J=7.2 Hz, 2H), 7.36(d, J=4.0 Hz, 4H), 7.25(m, 1H), 7.18(d, J=8.8 Hz, 2H), 6.68(d, J=7.6 Hz, 1H), 4.84(m, 1H), 1.41(d, J=6.8 Hz, 3H) ppm. LCMS m/z: 375.4 [M H].

Primer 24: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(metilcikloheksil)uree (4a-20)

[0125 ] Jedinjenje (4a-20) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i cikloheksanemetil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 52.1 %.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.11(s, 1H), 8.50(s, 1H), 8.44(s, 2H), 7.94(s, 1H), 7.46(d, J=9.2 Hz, 2H), 7.17(d, J=8.8 Hz, 2H), 6.11(d, J=7.6 Hz, 1H), 3.50-3.45(m, 1H), 1.83-1.80(m, 2H), 1.68-65(m, 2H), 1.56-1.53(m, 1H), 1.36-1.28(m, 2H), 1.22-1.16(m, 3H) ppm. LCMS m/z: 353.2 [M H].

Primer 25: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-cikloheksiluree (4a-21)

[0126 ] Jedinjenje (4a-21) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i cikloheksil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 48.7%.

LCMS m/z 353.2[M H].

Primer 26: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(6-kvinolil)uree (4a-22)

[0127 ] Jedinjenje (4a-22) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i estra karbimid-6-kvinolila postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 69.2%.

MS m/z 398.1 [M H].

Primer 27: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-piridiluree (4a-23)

[0128 ] Jedinjenje (4a-23) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i estra karbimid-3-piridila postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 66.2%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.16(s, 1H), 9.44(s, 1H), 9.40(s, 1H), 8.68(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.23(s, 1H), 8.03-7.96(m, 2H), 7.57(d, J=8.0 Hz, 2H), 7.38(s, 1H), 7.25(d, J=8.8 Hz, 2H) ppm. LCMS m/z: 348.3 [M H].

Primer 28: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butil-1-fenil-1H-pirazol-5-il)uree (4a-24)

[0129 ] Jedinjenje (4a-24) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i estra 1-fenil-3-tert-butil-karbimid-5-pirazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 68.8%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.13(s, 1H), 9.16(s, 1H), 8.50(s, 1H), 8.45(s, 1H), 8.03(s, 1H), 7.55-7.50(m, 6H), 7.43(d, J=4.8 Hz 1H), 7.23(d, J=9.2 Hz, 2H), 6.40(s, 1H), 1.29(s, 9H) ppm.

Primer 29: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butilizoksazol-5-il)uree (4a-25)

[0130 ] Jedinjenje (4a-25) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i estra 3-tert-butil-izocijanat-5-izoksazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 74.8%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.14(s, 1H), 9.56(s, 1H), 8.94(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.06(s, 1H), 7.56(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.27(d, J=8.8 Hz, 2H), 6.52(s, 1H), 1.30(s, 9H) ppm.

Primer 30: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)uree (4a-26)

[0131 ] Jedinjenje (4a-26) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i estra 5-tert-butil-izocijanata-3-izoksazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 76.0%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.15(s, 1H), 9.57(s, 1H), 8.95(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.06(s, 1H), 7.56(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.27(d, J=8.8 Hz, 2H), 6.52(s, 1H), 1.30(s, 9H) ppm.

Primer 31: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-izopropil-1-metil-pirazol-5-il)uree (4a-27)

[0132 ] Jedinjenje (4a-27) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i estra 1-metil-3-izopropil-izocijanata-5-pirazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 68.0%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.12(s, 1H), 9.01(s, 1H), 8.55(s, 1H), 8.50(s, 1H), 8.02(s, 1H), 7.56(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.25(d, J=8.8 Hz, 2H), 6.02(s, 1H), 3.61(s, 3H), 2.71-2.82(m, 1H), 1.17(d, J=8.0 Hz, 6H) ppm.LCMS m/z 380.4[M H].

Primer 32: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(5-trifluorometil)izoksazol-3-il)uree (4a-28)

[0133 ] Jedinjenje (4a-28) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i estra 5-trifluorometil-izocijanata-3-izoksazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 66.2%.

LCMS m/z 406.3 [M H].

Primer 33: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-metilfenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)uree (4a-29)

[0134 ] Jedinjenje (4a-29) dobijeno je od intermedijera (3a-2) i estra 5-tert-butil-izocijanata-3-izoksazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 68.4%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.14 (s, 1H), 9.95(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.42(s, 1H), 8.05 (s,1H), 7.91(d, J=8.8 Hz, 1H), 7.20(d, J=2.4 Hz, 1H), 7.13(dd, J=2.8 Hz, J=6.0 Hz, 1H), 6.47(s, 1H), 2.28(s, 1H), 1.30(s, 9H) ppm.

Primer 34: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-fluorofenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)uree (4a-30)

[0135 ] Jedinjenje (4a-30) dobijeno je od intermedijera (3a-3) i estra 5-tert-butil-izocijanata-3-izoksazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 71.4%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.18 (s, 1H), 9.87(s, 1H), 8.86(s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.18(d, J=11.6 Hz, 2H), 7.44(d, J=10.4 Hz, 1H), 7.17(d, J=8.4 Hz, 1H), 6.51(s, 1H) 1.30(s, 9H) ppm.

Primer 35: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)uree (4a-31)

[0136 ] Jedinjenje (4a-31) dobijeno je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-3-fluoroanilina i estra 5-tert-butil-izocijanata-3-izoksazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 75.4%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.27 (s, 1H), 9.63(s, 1H), 9.13(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.29(s, 1H), 7.67(d, J=10.4 Hz, 1H), 7.41(t, J=8.8 Hz, 1H), 7.23(d, J=8.8 Hz, 1H), 6.50(s, 1H) 1.30(s, 9H) ppm.

Primer 36: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-hlorfenil)-3-(3-tert-butil-1-metilpirazo l-5-il)uree (4a-32)

[0137 ] Jedinjenje (4a-32) dobijeno je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-3-hloroanilina i estra 3-tert-butil-1-metil-izocijanata-5-pirazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 71.4%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.23 (s, 1H), 9.30(s, 1H), 8.71(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.24(s, 1H), 7.89(d, J=1.6 Hz, 1H), 7.44-7.38(m, 2H), 6.07(s, 1H), 3.62(s, 3H), 1.22(s, 9H) ppm.

LCMS m/z 408.2[M H].

Primer 37: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3,5-difluorofenil)-3-(5-tertbutilizoksazol-3-il)uree (4a-33)

[0138 ] Jedinjenje (4a-33) dobijeno je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-3,5-difluoroanilina i estra 5-tert-butil-izocijanata-3-izoksazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 68.9%.

LCMS m/z 429.4[M H].

Primer 38: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butil-1-metil-1H-pirazol-5-il)uree (4a-34)

[0139 ] Jedinjenje (4a-34) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i estra 3-tert-butil-1-metil-izocijanata-5-pirazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 72.1%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.13 (s, 1H), 9.19(s, 1H), 9.03(br s, 1H), 8.54(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.03(s, 1H), 7.56(d, J=8.0 Hz, 2H), 7.25(d, J=8.0 Hz, 2H), 6.06(s, 1H), 3.62(s, 3H), 1.22(s, 9H) ppm.

Primer 39: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(1-metil-3-(trifluorometil)1H-pir azol-5-il)uree (4a-35)

[0140 ] Jedinjenje (4a-35) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i estra 3-trifluorometil-1-metilizocijanata-5-pirazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 70.1%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.15 (s, 1H), 9.19(s, 1H), 9.13(br s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.06(s, 1H), 7.57(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.27(d, J=8.8 Hz, 2H), 6.63(s, 1H), 3.79(s, 3H) ppm.

Primer 40: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)3-fluorofenil)-3-(1-metil-3-(trifluorometil )1H-pirazol-5-il)uree (4a-36)

[0141 ] Jedinjenje (4a-36) dobijeno je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-3-hloroanilina i estra 3-trifluorometil-1-metil-izocijanata-5-pirazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 72.4%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.23 (s, 1H), 9.41(s, 1H), 9.13(br s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.33(s, 1H), 7.69(d, J=12.8 Hz, 1H), 7.41(t, J=8.8 Hz, 1H), 7.28(d, J=8.8 Hz, 1H), 6.64(s, 1H), 3.79(s, 3H) ppm.

Primer 41: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-nitrofenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)uree (4a-37)

[0142 ] Jedinjenje (4a-37) dobijeno je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-2-fluoro-anilina i estra 5-tert-butil-izocijanata-3-izoksazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 24.4%. LCMS m/z 439.4[M H].

Primer 42: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-tert-butilizoksazol-5-il)uree (4a-38)

[0143 ] Jedinjenje (4a-38) dobijeno je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-3-fluoro-anilina i estra 5-tert-butil-izocijanata-3-izoksazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 69.1%. LCMS m/z 412.2[M H].

Primer 43: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-metoksifenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il) uree (4a-39)

[0144 ] Jedinjenje (4a-39) dobijeno je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-2-metoksianilina i estra 3-tert-butil-izocijanat-5-izoksazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 69.1 %.

LCMS m/z 424.2[M H].

Primer 44: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butil-1-(kvinolin-7-il)-1H-pirazol-5-il)uree (4a-40)

[0145 ] Jedinjenje (4a-40) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i estra 3-tert-butil-1-(kvinolin-7-il)-izocijanata-5-pirazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 69.1%.

MS m/z 520.2[M H].

Primer 45: Pripremanje 1-(3-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-trifluorometil)fenil)uree (4a-41)

[0146 ] Jedinjenje (4a-41) dobijeno je od intermedijera 3-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-anilina i 3-trifluorometil-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 79.2%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.18(s, 1H), 9.20 (s, 1H), 9.05(s, 1H), 8.54(s, 1H), 8.11(s, 1H), 7.6-7.59(m, 5H), 7.43(t, J=7.6 Hz, 1H), 7.34(d, J=8.0 Hz, 2H), 6.97(d, J=7.2 Hz, 2H) ppm.

Primer 46: Pripremanje 1-(3-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-hloro-3-(trifluorometil)fenil) uree (4a-42)

[0147 ] Jedinjenje (4a-42) dobijeno je od intermedijera 3-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-anilina i 4-trifluorometil-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 80.1%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.19(s, 1H), 9.22(s, 1H), 9.09(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.08(s, 1H), 7.60-7.56(m, 3H), 7.42(t, J=8.0 Hz, 1H), 7.32(d, J=8.0 Hz, 1H), 6.96(d, J=7.6 Hz, 1H) ppm.

Primer 47: Pripremanje 1-(3-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-trifluorometil)fenil)uree (4a-43)

[0148 ] Jedinjenje (4a-43) dobijeno je od intermedijera 3-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-anilina i 4-trifluorometil-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 78.2%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.16(s, 1H), 9.17 (s, 1H), 9.03(s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.10(s, 1H), 7.66-7.57(m, 5H), 7.42(t, J=8.0 Hz, 1H), 7.33(d, J=8.8 Hz, 1H), 6.97(d, J=7.2 Hz, 1H) ppm.

Primer 48: Pripremanje 1-(3-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)uree (4a-44)

[0149 ] Jedinjenje (4a-44) dobijeno je od intermedijera 3-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-anilina i estra 5-tert-butil-izocijanata-3-izoksazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 81.6%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.17(s, 1H), 9.58(s, 1H), 8.01(s, 1H), 8.52(s, 1H), 8.10(s, 1H), 7.58(s, 1H), 7.42(t, J=8.4 Hz, 1H), 6.99(d, J=7.6 Hz, 1H), 6.48(s, 1H), 1.28(s, 9H) ppm.

Primer 49: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-tert-butil-1-metilpirazol-5-il)uree (4a-45)

[0150 ] Jedinjenje (4a-45) dobijen je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-3-fluoroanilina i estra 3-tert-butil-1-metil-izocijanata-5-pirazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 70.4%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.24 (s, 1H), 9.21(s, 1H), 8.61(s, 1H), 8.52(s, 1H), 8.31(s, 1H), 7.69(d, J=1.2 Hz, 1H), 7.41-7.37(m, 1H), 7.26-7.22(m, 1H), 6.07(s, 1H), 3.62(s, 3H), 1.22(s, 9H) ppm.

Primer 50: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-hlorfenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)uree (4a-46)

[0151 ] Jedinjenje (4a-46) dobijen je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-3-hloroanilina i estra 5-tert-butil-izocijanata-3-izoksazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 78.4%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.25 (s, 1H), 9.68(s, 1H), 9.10(s, 1H), 8.52(s, 1H), 8.26(s, 1H), 7.89(d, J=4.0 Hz, 1H), 7.49-7.41(m, 2H), 6.53(s, 1H) 1.30(s, 9H) ppm.

Neinventivni Primer 51: Pripremanje N-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-4-brombenzamida (4a-47)

[0152] 4-bromobenzojeva kiselina (265mg, 1.32mmol), 1-hidroksibenzotriazol (HOBT, 178.8mg, 1.32mmol), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etil karbodiimid hidrohlorid (EDCI, 254.6mg, 1.32mmol) i N,N-diizopropiletilamin (DIEA, 0.33mL, 2.0mmol) dodati su u 25mL tetrahidrofurana i umešavani na normalnoj temperaturi tokom 30-minutne reakcije, jedinjenje (3a-1) (300mg, 1.32mmol) dodato je rado povišavanje temperature do 60°C u cilju reagovanja preko noći. Nakon reakcije i hlađenja, 5mL ledene vode dodato je radi odvajanja velike količine čvrstih materija, a te čvrste materije podvrgnute su ekstrahovanju i oprane radi dobijanja 390mg jedinjenje (4a-47) u prinosu od 72.1%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.18(s, 1H), 10.49(s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.11(br s, 1H), 7.95(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.88(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.79(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.34(d, J=9.2 Hz, 2H) ppm.

Neinventivni Primer 52: Pripremanje N-(3-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-4-brombenzamida (4a-48)

[0153 ] Jedinjenje (4a-48) dobijeno je od intermedijera 3-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-anilina i 4-bromobenzojeve kiseline postupkom sinteze jedinjenja (4a-47) u prinosu od 76.6%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.19(s, 1H), 10.51(s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.16(s, 1H), 7.91(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.83(s, 1H), 7.76(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.71(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.49(t, J=8.0 Hz, 1H), 7.09(dd, J=1.6 Hz, 6.4 Hz, 1H) ppm. LCMS m/z: 410.0 [M H].

Neinventivni Primer 53: Pripremanje N-(3-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-4-fluorobenzamida (4a-49)

[0154 ] Jedinjenje (4a-49) dobijeno je od intermedijera 3-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-anilina i 3-fluorobenzojeve kiseline postupkom sinteze jedinjenja (4a-47) u prinosu od 76.0%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.18(s, 1H), 10.50(s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.15(s, 1H), 7.84-7.70(m, 4H), 7.62(d, J=6.0Hz, 1H), 7.59(t, J=4.0Hz, 1H), 7.57-7.46(m, 1H), 7.09(d, J=2.0Hz, 1H) ppm. LCMS m/z: 350.1 [M H].

Neinventivni Primer 54: Pripremanje N-(3-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-4-(trifluorometil)benzamida (4a-50)

[0155 ] Jedinjenje (4a-50) dobijeno je od intermedijera 3-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-anilina i 4-(trifluorometil)benzojeve kiseline postupkom sinteze jedinjenja (4a-47) u prinosu od 71.2%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.18(s, 1H), 10.66(s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.15(d, J=8.4 Hz, 3H), 7.93(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.84(s, 1H), 7.72(d, J=8.8 Hz, 1H), 7.50(t, J=8.0 Hz, 1H), 7.12(dd, J=2.0 Hz, J=6.4 Hz, 1H) ppm. LCMS m/z: 400.3 [M H].

Neinventivni Primer 55: Pripremanje N-(3-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-2-(4-hlorofenil)acetamida (4a-51)

[0156 ] Jedinjenje (4a-51) dobijeno je od intermedijera 3-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-anilina i 4-hlorofenilsirćetne kiseline postupkom sinteze jedinjenja (4a-47) u prinosu od 67.8%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.17(s, 1H), 10.47(s, 1H), 8.50(s, 1H), 8.12(s, 1H), 7.68-7.34(m, 8H), 7.00(d, J=1.2Hz, 1H), 3.67(s, 1H) ppm.LCMS m/z: 380.1 [M H].

Primer 56: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-feniltiouree (4a-52)

[0157 ] Jedinjenje (4a-52) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 82.0%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.13(s, 1H), 8.80(s, 1H), 8.72(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.03(s, 2H), 7.56(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.47 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.31-7.24(m, 4H), 6.98(t, J=8.0 Hz, 1H) ppm..LCMS m/z: 365.1 [M H].

Primer 57: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-trifluorometilfenil)tiouree (4a-53)

[0158 ] Jedinjenje (4a-53) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i 3-trifluorometil-fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 79.8%.

LCMS m/z 431.02[M H].

Primer 58: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-fluorofenil)-3-(4-hloro-3-(trifluorometil )fenil)uree (4a-54)

[0159 ] Jedinjenje (4a-54) dobijeno je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-2-fluoroanilin i 4-hloro-3-trifluorometil fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 66%.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.19(s, 1H), 9.55(s, 1H), 8.74(s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.21(s, 1H), 8.13(d, J=2.4 Hz, 2H), 7.64(s, 2H), 7.43(d, J=11.6Hz, 1H), 7.17(d, J=8.8 Hz, 1H).LCMS m/z 467.1 [M H].

Primer 59: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-2-hlorofenil)-3-(4-hloro-3-(trifluor ometil)fenil)uree (4a-55)

[0160 ] Jedinjenje (4a-55) dobijeno je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-2-hloroanilina i 4-hloro-3-trifluorometil fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 68%.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.20(s, 1H), 9.56(s, 1H), 8.70(s, 1H), 8.54(s, 1H), 8.21(s, 1H), 8.13(d, J=4.8 Hz, 2H), 7.68(s, 2H), 7.43(d, J=11.6Hz, 1H), 7.15(d, J=8.8 Hz, 1H).LCMS m/z 483.0[M H].

Primer 60: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-tert-butil-1-fenil-1H-p irazol-5-il)uree (4a-56)

[0161 ] Jedinjenje (4a-56) dobijeno je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-3-fluoroanilina i estra 1-fenil-3-tert-butil-izocijanata-5-pirazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 86%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.23(s, 1H), 9.33(s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.50(s, 1H), 8.30(s, 1H), 7.66(d, J=2.4 Hz, 1H), 7.55(d, J=4.4 Hz 4H), 7.43-7.39(m, 2H), 7.21(d, J=2.4 Hz, 1H), 6.40(s, 1H), 1.29(s, 9H) ppm.LCMS m/z 487.1[M H].

Primer 61: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-fluorofenil)-3-(3-tert-butil-1-fen il-1H-pirazol-5-il)uree (4a-57)

[0162 ] Jedinjenje (4a-57) dobijeno je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-3-hloroanilina i estra 1-fenil-3-tert-butil-izocijanata-5-pirazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 87%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.22(s, 1H), 9.31(s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.50(s, 1H), 8.23(s, 1H), 7.85(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.55(d, J=4.4 Hz 4H), 7.43-7.39(m, 2H), 7.34(d, J=2.0 Hz, 1H), 6.40(s, 1H), 1.29(s, 9H) ppm.

<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6): δ 170.3, 162.2, 160.8, 156.8, 154.8, 151.7, 142.1, 138.6, 136.8, 131.7, 129.3, 127.2, 126.0, 124.5, 124.2, 119.2, 118.1, 101.0, 96.1, 32.0, 30.1ppm.LCMS m/z 503.1 [M H].

Primer 62: Pripremanje 5-(3-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)karbamido)-3-tert-butil-1H-pirazol-1-karboksilne kiseline) (4a-58)

[0163 ] Jedinjenje (4a-58) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i estra 1-Boc-3-tert-butil-izocijanata-5-pirazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 86%.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.12 (s, 1H), 11.99(s, 1H), 9.31(s, 1H), 8.93(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.02(s, 1H), 7.54(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.24(d, J=8.4 Hz, 2H), 6.00(s, 1H), 1.26(s, 9H) ppm.LCMS m/z 435.1 [M - H].

Primer 63: Pripremanje 5-(3-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluoro-fenil)karbamido)-3-tert-butil-1 H-pirazol-1-karboksilne kiseline) (4a-59)

[0164 ] Jedinjenje (4a-59) dobijen je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-3-fluoroanilina i estra 1-Boc-3-tert-butil-izocijanata-5-pirazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 84%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.12 (s, 1H), 11.99(s, 1H), 9.31(s, 1H), 8.93(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.02(s, 1H), 7.65(dd, J=2.4 Hz, J=10.8 Hz, 1H), 7.40(t, J=8.8 Hz, 1H), 7.22(d, J=8.8 Hz, 1H), 6.00(s, 1H), 1.26(s, 9H) ppm.LCMS m/z 453.1 [M - H].

Primer 64: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-tert-butil-1-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-5-il)uree (4a-60)

[0165 ] Jedinjenje (yll728) dobijeno je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-3-fluoroanilina i estra 1-(4-fluorofenil)-3-tert-butil-izocijanata-5-pirazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 79%.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.23(s, 1H), 9.29(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.49(s, 1H), 8.30(s, 1H), 7.65-7.56(m, 3H), 7.38(t, J=8.8 Hz, 3H), 7.18(d, J=8.8 Hz, 1H), 6.38(s, 1H), 1.29(s, 9H) ppm.LCMS m/z 505.2[M H].

Primer 65: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butil-1-ciklopentil-1H-pirazol-5-il)uree (4a-61)

[0166 ] Jedinjenje (4a-61) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i estra 1-ciklopentil-3-tert-butilizocijanata-5-pirazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 92%.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.15 (s, 1H), 9.38(s, 1H), 8.79(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.03(s, 1H), 7.56(d, J=8.0 Hz, 2H), 7.24(d, J=8.0 Hz, 2H), 6.05(s, 1H), 4.63-4.55(m, 1H), 1.99-1.92(m, 4H), 1.84-1.81(m, 2H), 1.60-1.56(m, 2H), 1.22(s, 9H) ppm.LCMS m/z 461.2[M H].

Primer 66: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-tert-butil-1-ciklopentil-1 H-pirazol-5-il)uree (4a-62)

[0167 ] Jedinjenje (4a-62) dobijeno je od intermedijera 4-(pirazolopirimidin-4-fenoksil)-3-fluoroanilina i estra 1-ciklopentil-3-tert-butil-izocijanata-5-pirazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 94%.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.23(s, 1H), 9.17(s, 1H), 8.52(s, 1H), 8.49(s, 1H), 8.30(s, 1H), 7.68(dd, J=2.4 Hz, J=10.8 Hz, 1H), 7.40(t, J=8.8 Hz, 1H), 7.24(d, J=8.8 Hz, 1H), 6.05(s, 1H), 4.55-4.48(m, 1H), 1.98-1.89(m, 4H), 1.88-1.80(m, 2H), 1.62-1.56(m, 2H), 1.22(s, 9H) ppm.

<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6): δ 162.1, 158.4, 156.7, 154.8, 152.3, 152.1, 138.9, 135.8, 132.9, 131.7, 124.2, 114.4, 106.4, 100.9, 94.7, 57.00, 31.8, 30.3, 23.9ppm.LCMS m/z 479.2[M H].

Primer 67: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butil-tiazol-2-il)uree (4a-63)

[0168 ] Jedinjenje (4a-63) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i estra 4-tert-butil-2-izocijanat tiazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 76%.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.06(s, 1H), 10.60(s, 1H), 8.99(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.07(s, 1H), 7.57(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.28(d, J=8.8 Hz, 2H), 6.65(s, 1H), 1.26(s, 9H) ppm.LCMS m/z 410.1[M+H].

Primer 68: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-feniltiazol-2-il)uree (4a-64)

[0169 ] Jedinjenje (4a-64) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i estra 4-fenil-2-izocijanat tiazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 71%.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.14(s, 1H), 10.76(s, 1H), 9.06(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.06(s, 1H), 7.90(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.60(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.56(s, 1H), 7.43(t, J=8.0 Hz, 2H), 7.34-7.29(m, 3H) ppm.LCMS m/z 430.1[M H].

Primer 69: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(benzotiazol-2-il)uree (4a-65) [0170 ] Jedinjenje (4a-65) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i estra 2-fenil izocijanat benzotiazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 69%.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.14 (s, 1H), 10.85(s, 1H), 9.33(s, 1H), 8.52(s, 1H), 8.07(s, 1H), 7.91(d, J=7.2 Hz, 1H), 7.64(d, J=8.4 Hz, 3H), 7.40(t, J=7.6 Hz, 1H), 7.30(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.25(t, J=8.0 Hz, 1H) ppm.LCMS m/z 404.1[M H].

Primer 70: Pripremanje 1-(3-(1H-pirazolopirimidin-4-amido)fenil)-3-(3-hloro-4-(fluorofenil)uree (4b-1)

[0171] Nakon što je 60mL n-butil alkohola dodato u 1-(3-aminofenil)-3-(3-hloro-4-(fluorofenil)ureu (1.4g), katalitička količina hlorovodoničnih kiselina dodata je i umešavana na normalnoj temperaturi tokom 20 minuta; dodato je 780mg 4-hloro-1H-pirazolopirimidina (intermedijer 2); temperatura je povećana na 100°C tokom reagovanja od 2.5 sata, nakon kojeg su rastvarači osušeni izdvajanjem; nakon dodavanja kalijum karbonata radi pravilnog podešavanja pH vrednosti, etil acetat je primenjen za ekstrahovanje dva puta; nakon sušenja sloja etil acetata i njegovog izdvajanja i umešavanja, proizvod reakcije je uveden u kolonu za prečišćavanje dihlorometanom i metanolom u odnosu od 24:1, čime se dobija 1.71g čvrste materije u prinosu od 86.6%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 13.65(s, 1H), 10.02(s, 1H), 8.88(d, J=11.2Hz,1H), 8.40(s, 1H), 8.31(s, 2H), 8.03(m, 6H), 7.83(t, J=6.4Hz, 1H), 7.57(d, J=7.6Hz, 1H), 7.37-7.27(m, 3H), 7.19(d, J=7.6Hz, 1H) ppm.

Primer 71: Pripremanje (R)-1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-amido)fenil)-3-(1-fenetil)uree (4b-2)

[0172 ] Jedinjenje (4b-2) dobijeno je od intermedijera (2) i (R)-1-(4-amido-fenil)-3-(1-fenetil)uree postupkom sinteze jedinjenja (4b-1) u prinosu od 87.9%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 13.56(s, 1H), 9.86(s, 1H), 8.41(s, 1H), 8.32(s, 1H), 8.01(s, 1H), 7.61(s, 2H), 7.40-7.34(m, 6H), 7.26-7.23(m, 1H), 6.62(d, J=8.0Hz, 1H), 4.84-4.81(m, 1H), 1.39(d, J=6.8 Hz, 3H) ppm.

Primer 72: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-amido)-3-(3-metoksifenil)uree (4b-3)

[0173 ] Jedinjenje (4b-3) dobijeno je od intermedijera (2) i 1-(4-amido-fenil)-3-(3-metoksifenil)uree postupkom sinteze jedinjenja (4b-1) u prinosu od 87.6%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 13.59(s, 1H), 9.93(s, 1H), 8.69(d, J=5.6Hz, 2H), 8.35(s, 1H), 8.15(s, 1H), 7.71(d, J=8.0Hz, 2H), 7.47(d, J=8.8Hz, 2H), 7.21-7.16(m, 2H), 6.93(d, J=8.0Hz, 1H), 6.56-6.53(m, 1H), 3.74(s, 3H) ppm.

Primer 73: Pripremanje (S)-1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-amido)fenil)-3-(1-fenetil)uree (4b-4)

[0174 ] Jedinjenje (4b-4) dobijen je od intermedijera (2) i (S)-1-(4-amido-fenil)-3-(1-fenetil)uree postupkom sinteze jedinjenja (4b-1) u prinosu od 85.6%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 13.55(s, 1H), 9.85(s, 1H), 8.40(s, 1H), 8.32(s, 1H), 8.01(s, 1H), 7.61(s, 2H), 7.40-7.34(m, 6H), 7.26-7.22(m, 1H), 6.61(d, J=8.0Hz, 1H), 4.84-4.81(m, 1H), 1.39(d, J=6.8 Hz, 3H) ppm.

Primer 74: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-amido)fenil)-3-(4-hloro-3-(trifluorometil)fenil)uree (4b-5)

[0175 ] Jedinjenje (4b-5) dobijeno je od intermedijera (2) i 1-(4-amido-fenil)-3-(4-hloro-3-trifluorometilfenil)uree postupkom sinteze jedinjenja (4b-1) u prinosu od 88.6%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 13.60(s, 1H), 9.95(s, 1H), 9.17 (s, 1H) H), 8.86(s, 1H), 8.36(s, 1H), 8.15(b, 1H), 8.14(s, 1H), 7.75(d, J=8.4Hz, 2H), 7.67-7.61(m,2H), 7.49(d, J=8.8Hz, 2H) ppm.

Primer 75: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-amido)fenil)-3-(4-metoksifenil)uree (4b-6)

[0176 ] Jedinjenje (4b-6) dobijeno je od intermedijera (2) i 1-(4-amido-fenil)-3-(4-metoksifenil)uree postupkom sinteze jedinjenja (4b-1) u prinosu od 88.0%.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.57 (s, 1H), 9.90 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.15 (b, 1H), 7.68 (s, 2H), 7.45 (d, J=8.0Hz, 2H), 7.35 (d, J=8.0Hz, 2H), 6.86 (d, J=8.4Hz, 2H), 3.71 (s, 3H) ppm.

Primer 76: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-amido)fenil)-3-(2,4,6-trimetilfenil)uree (4b-7) [0177 ] Jedinjenje (4b-7) dobijeno je od intermedijera (2) i 1-(4-amido-fenil)-3-(2,4,6-trimetilfenil)uree postupkom sinteze jedinjenja (4b-1) u prinosu od 87.2%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 13.62(s, 1H), 10.14(s, 1H), 8.86(s, 1H), 8.37(s, 2H), 8.34(s, 1H), 8.11(b, 1H), 7.67-7.62(m, 3H), 7.46(d, J=8.0Hz, 2H), 6.89(s, 2H), 2.23(s, 3H), 2.18(s, 6H) ppm.

Primer 77: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-amido)fenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)uree (4b-8)

[0178 ] Jedinjenje (4b-8) dobijeno je od intermedijera N<1>-(pirazolopirimidin-4-il)fenil-1,4-diamina i estra 3-tert-butil-izocijanat-5-izoksazola postupkom sinteze jedinjenja (4b-1) u prinosu od 52.7%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 13.57 (s, 1H), 10.04(s, 1H), 9.74(s, 1H), 8.42(s, 1H), 8.24(s, 1H), 8.14(s, 1H), 7.32(d, J=6.8 Hz, 2H), 7.12(t, J=7.6 Hz, 1H), 6.45(s, 1H), 1.26(s, 9H) ppm.

Primer 78: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-sulfidril)fenil)-3-(4-trifluorometil)fenil)uree (4c-1)

[0179 ] Jedinjenje (4c-1) dobijeno je od intermedijera (3c-1) i p-trifluorometil fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 46.6%.

LCMS m/z 431.0[M H].

Primer 79: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-sulfidril)fenil)-3-(3-trifluorometil)fenil)uree (4c-2)

[0180 ] Jedinjenje (4c-2) dobijeno je od intermedijera (3c-1) i 2-(trifluorometil)fenil izocijanata postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 42.3%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 14.09(s, 1H), 9.22(s, 2H), 8.64(s, 1H), 8.04(s, 2H), 7.62-7.54(m, 4H), 7.36(d, J=7.2 Hz, 1H), 7.27(d, J=8.4 Hz, 2H) ppm.

LCMS m/z 431.0[M H].

Primer 80: Pripremanje 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-sulfidril)fenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)uree (4c-3)

[0181 ] Jedinjenje (4c-3) dobijeno je od intermedijera (3c-1) i estra 5-tert-butil-izocijanata-3-izoksazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 42.6%.

LCMS m/z 410.2[M H].

Primer 81: Pripremanje 1-(4-(1 metil-1H-pirazolopirimidin-4-fenoksil)fenil)-3-(4-(trifluorometil)fenil)uree(5 a-1)

[0182] Do 70mg kalijum hidroksida (1.21mmol) dodato je u DMF (20mL) rastvor 500mg (1.21mmol) jedinjenja (4a-1), umešavano na normalnoj temperaturi tokom 30 minuta, a zatim, dodat je metil jodid (0.07mL, 1.21mmol) i umešavan preko noći na normalnoj temperaturi; nakon reakcije, voda i etil acetat upotrebljeni su za ekstrahovanje 3 puta, a sloj etil acetata osušen je izdvajanjem i uveden u kolonu za prečišćavanje radi dobijanja 320mg proizvoda u prinosu od 71.4%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.17(s, 1H), 8.96(s, 1H), 8.55(s, 1H), 8.07(s, 2H), 7.70-7.64(m, 4H), 7.57(d, 1H), 7.67-7.62(m, J=8.4Hz, 2H), 7.26(d, J=8.8Hz, 2H) 4.05(s, 3H) ppm.

Primer 82: Pripremanje 1-(4-(1-metil-1H-pirazolopirimidin-4-fenoksil)fenil)-3-(3-metoksifenil)uree (5a-2)

[0183 ] Jedinjenje (5a-2) dobijeno je iz jedinjenja (4a-5) i metil jodida postupkom sinteze jedinjenja (5a-1) u prinosu od 78.6%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 8.82(s, 1H), 8.75(s, 1H), 8.55(s, 1H), 8.05(s, 1H), 7.55(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.26-7.17(m, 4H), 6.95(d, J=8.4 Hz, 1H), 6.57(d, J=8.4 Hz, 1H) ppm..

LCMS m/z: 391.4 [M H].

Primer 83: Pripremanje 1-(5-tert-butilizoksazol-3-il)-3-(4-(1-metil-1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)uree(5a-3)

[0184 ] Jedinjenje (5a-3) dobijeno je od jedinjenja (4a-26) i metil jodida postupkom sinteze jedinjenja (5a-1) u prinosu od 76.0%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.57(s, 1H), 8.95(s, 1H), 8.55(s, 1H), 8.08(s, 1H), 7.56(d, J=9.2 Hz, 2H), 7.27(d, J=8.8 Hz, 2H), 6.52(s, 1H), 4.05(s, 3H), 1.30(s, 9H) ppm.

Primer 84: Pripremanje 1-(5-tert-butilizoksazol-3-il)-3-(4-(1-izopropil-1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil )uree (5a-4)

[0185 ] Jedinjenje (5a-4) dobijeno je od jedinjenja (4a-26) i 2-bromopropana postupkom sinteze jedinjenja (5a-1) u prinosu od 69.0%.

LCMS m/z:436.2 [M H].

Primer 85: Pripremanje 1-(5-tert-butilizoksazol-3-il)-3-(4-(1-(2-morfolinetil)-1H-pirazolopirimidin-4-feno ksi)fenil)uree (5a-5)

[0186] Kalijum hidroksid (70mg, 1.21mmol) dodat je u DMF (20mL) rastvor 275mg (1.21mmol) jedinjenja (3a-1) i umešavan na normalnoj temperaturi tokom 30 minuta, a zatim, dodat je 4-(2-hloroetil)morfoline hidrohlorid (224mg, 1.21mmol) radi reagovanja tokom 6 sati na 80°C, zatim, reakcioni rastvor estrahovan je velikom količinom vode i etil acetata; nakon reakcije, reakcioni rastvor estrahovan je vodom i etil acetatima 3 puta, a sloj etil acetata osušen je izdvajanjem i uveden u kolonu za prečišćavanje radi dobijanja 280mg 4-(1-(2-morfolinetil)-pirazolopirimidin-4-fenoksi) anilina u prinosu od 68.1%.

[0187 ] Jedinjenje (5a-5) dobijeno je od intermedijera 4-(1-(2-(morfolinetil)-pirazolopirimidin-4-fenoksil)anilina i estra 3-tert-butil-izocijanat-5-izoksazola postupkom sinteze jedinjenja (4a-1) u prinosu od 72.1 %.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.60(s, 1H), 9.06(s, 1H), 8.54(s, 1H), 8.11(s, 1H), 7.56(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.27(d, J=8.4 Hz, 2H), 6.52(s, 1H), 4.56(br s, 1H), 3.46(s, 4H), 2.80(s, 2H), 2.43(s, 4H), 1.30(s, 9H) ppm.

Primer 86: Pripremanje 1-(5-tert-butilizoksazol-3-il)-3-(4-(1-(3-dimetilaminopropil)-1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)uree (5a-6)

[0188 ] Jedinjenje (5a-6) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i 3-hloro-N,N-dimetilpropil-1-amina postupkom sinteze jedinjenja (5a-5) u prinosu od 49.1 %.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.77(s, 1H), 9.59(s, 1H), 8.57(s, 1H), 8.11(s, 1H), 7.58(d, J=9.2 Hz, 2H), 7.26(d, J=8.8 Hz, 2H), 6.52(s, 1H), 4.52(t, J=6.4 Hz, 2H), 2.98(t, J=7.6 Hz, 2H), 2.64(s, 6H), 2.24(t, J=7.6 Hz, 2H), 1.30(s, 9H) ppm.

Primer 87: Pripremanje 1-(5-tert-butil-1H-pirazol-3-il)-3-(4-(1-izopropil-1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)uree (5a-7)

[0189 ] Jedinjenje (5a-7) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i 3-bromopropana i 5-tert-butil-3-aminopirazola postupkom sinteze jedinjenja (5a-5) u prinosu od 54.2%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 12.00(s, 1H), 9.31(br s, 1H), 8.95(s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.03(s, 1H), 7.55(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.24(d, J=8.8 Hz, 2H), 6.00(s, 1H), 5.17-5.11(m, 1H), 1.50(d, J=6.0 Hz 6H), 1.26(s, 9H) ppm. LCMS m/z:435.2 [M H].

Primer 88: Pripremanje 1-(5-tert-butilizoksazol-3-il)-3-(4-(1-(2-morfolinetil)-1H-pirazolopirimidin-4-feno ksi)fenil)uree (5a-8)

[0190 ] Jedinjenje (5a-8) dobijeno je od intermedijera (3a-1) i 4-(2-hloroetil)morfolin hidrohlorida i 5-tert-butil-3-aminopirazola postupkom sinteze jedinjenja (5a-5) u prinosu od 51.0%.

<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 11.99(s, 1H), 9.30(br s, 1H), 8.94(s, 1H), 8.54(s, 1H), 8.07(s, 1H), 7.50(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.25(d, J=8.8 Hz, 2H), 6.00(s, 1H), 4.56(t, J=6.4 Hz 2H), 3.46(s, 4H), 2.80(t, J=6.0 Hz 2H), 2.42(s, 4H), 1.26(s, 9H) ppm.

Primer 89: Pripremanje 1-(4-(1-(4-bromofenil)-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(5-tertbutilizoksazol-3-il)uree (5a-9)

[0191 ] Jedinjenje (5a-9) dobijeno je od jedinjenja (4a-26) i 4-bromobenzil bromida postupkom sinteze jedinjenja (5a-1) u prinosu od 86.7%.

LCMS m/z: 562.2[M H].

Primer 90: Ispitivanje aktivnosti inhibiranja kinaza derivata pirazolopirimidina prema ovom pronalasku

[0192] Svrha ovog eksperimenta bila je da se ispita inhibitorna aktivnost jedinjenja ovog pronalaska za in vitro kinazu postupkom izotopnog obeležavanja (obeležena je γ fosfatna grupa na ATP). U ovom eksperimentu, ispitana je in vitro aktivnost inhibicije kinaza kao što su FLT3, VEGFR2, FLT1, FLT4, RET, c-RAF, B-RAF, c-KIT, PDGFα, PDGFβ, FGFR2, FGFR1, EphA2, EphB2, SRC, ABL, ALK i Met respektivno.

Staurosporin bio je referentni molekul (ili koji je označen kao pozitivna kontrola). Inhibiranje aktivnosti kinaze test jedinjenja izraženo je polu-inhibitornom koncentracijom (IC50) ili brzine inhibiranja aktivnosti kinaza test jedinjenja pri koncentraciji od 10µM. IC50vrednost mogla bi se dobiti izračunavanjem brzine inhibiranja aktivnosti kinaza test jedinjenja pri različitim koncentracijama.

1) Eksperimentalni materijali:

[0193] 20mM 3-(N-morfolinil)propanesulfonska kiselina (MOPS); 1mM etilendiamintetrasirćetna kiselina (EDTA), 0.01% Brij 35 (Brij-35), 5% glicerol, 0.1% merkaptoetanol, 1mg/mL goveđi serum albumin (BSA), 10mM manganov dihloridni rastvor (MnCl2), 0.1mg/mL glutaminska kiselina/tirozin (4:1) polipeptid (poli(Glu, Tyr)4:1), 50µM EAIYAAPFAKKK (supstrat iz FLT3), 0.33 mg/mL mijelin bazni protein (supstrat iz VEGFR2), 250 µM KKKSPGEYVNIEFG (supstrat iz FLT1(h)), 500µM GGEEEEYFELVKKKK (supstrat iz FLT4(h)), 250µM KKKSPGEYVNIEFG (supstrat iz RET), 0.66mg/mL mijelin bazni protein (supstrat iz C-RAF), 250 µM GGMEDIYFEFMGGKKK (supstrat iz c-Kit), 250µM GGMEDIYFEFMGGKKK (supstrat iz PDGFα), 250µM KKKSPGEYVNIEFG (supstrat iz FGFR1), 500 mM GGEEEEYFELVKKKK (supstrat iz SRC), 50 µM EAIYAAPFAKKK (supstrat iz ABL), 250µM KKKSPGEYVNIEFG (supstrat iz ALK), 250µM KKKSPGEYVNIEFG (supstrat iz Met(h)), 10mM magnezijum acetat i γ-<33>P-ATP rastvor, stopirajući pufer (3% fosfatni pufer), pufer za pranje (75mM fosfatni rastvor), metanol, Filtermat A membrana, FLT3, VEGFR2, FLT3, VEGFR2, FLT1, FLT4, RET, c-RAF, B-RAF, c-KIT, PDGFRα, PDGFRβ, FGFR2, FGFR1, EphA2, EphB2, SRC, ABL, ALK, Met i druge kinaze, i test jedinjenja.

2) Eksperimentalni postupak:

[0194] Puferi (8mM MOPS sa pH vrednosti od 7.0, 0.2mM EDTA i 10mM MnCl2), (5-10mU) kinaza za testiranje (FLT3, VEGFR2, FLT1, FLT4, RET, c-RAF, B-RAF, c-KIT, PDGFRα, PDGFRβ, FGFR2, FGFR1, EphA2, EphB2, SRC, ABL, ALK i Met), supstrati kinaza za testiranje (odnosi se na eksperimentalne materijale), 10mM magnezijum acetat i γ-<33>P-ATP rastvor, i test jedinjenja pri različitim koncentracijama dodati su u reakcionu epruvetu tim redosledom. Reakcija započinje dodavanjem MgATP (koncentracija ATP bila je Km vrednost odgovarajuće kinaze, tj. koncentracija FLT3 bila je 200µM, ona od VEGFR2 bila je 90µM, ona od FLT1 bila je 200µM, ona od FLT4 bila je 200µM, ona od RET bila je 70µM, ona od c-RAF bila je 45µM, ona od B-RAF bila je 200µM, ona od c-KIT bila je 200µM, ona od PDGFRα bila je 120µM, ona od PDGFRβ bila je 200µM, ona od FGFR2 bila je 90µM, ona od FGFR1 bila je 200µM, ona od EphA2 bila je 155µM, ona od EphB2 bila je 10µM, ona od SRC bila je 45µM, ona od ABL bila je 45µM, ona od ALK bila je 200µM i ona od Met bila je 45µM), a reakcija je inkubisana na sobnoj temperaturi tokom 40 minuta. Reakcija je na kraju prekinuta sa 5µL 3% fosfatnim puferom, a 10µL reakcionog rastvora titrirano je na Filtermat A membranu; rastvor je opran 3 puta sa 75mM fosfatnim rastvorom svaku put u trajanju od 5 minuta, a zatim, opran jednom metanolom. Konačno, Filtermat A membrana je osušena, i izvedeno je scintilaciono brojanje na membrane, pri čemu scintilaciono brojanje utiče na stepen fosforilacije supstrata, tako da inhibicija aktivnosti kinaze može biti okarakterisana.

3) Eksperimentalni rezultati:

[0195] Inhibitorna aktivnost jedinjenja u ovom pronalasku za kinaze (FLT3, VEGFR2, FLT1, FLT4, RET, c-RAF, B-RAF, c-KIT, PDGFRα, PDGFRβ, FGFR2, FGFR1, EphA2, EphB2, SRC, ABL, ALK i Met) ispitana je eksperimentalnim postupkom.

[0196] IC50vrednosti (vrednost inhibitorne aktivnosti) test jedinjenja (4a-2, 4a-6, 4a-25 i 4a-31) za nekoliko kinaza prikazane su u Tabeli 1.

[0197] IC50vrednosti (vrednost inhibitorne aktivnosti) nekoliko test jedinjenja za kinaze (FLT3 i VEGFR2) prikazane su u Tabeli 2.

[0198] Brzine inhibiranja aktivnosti (%) nekoliko test jedinjenja za kinaze (FLT3, VEGFR2, c-KIT, PDGFRα, FGFR2, FGFR1, EphA2, EphB2, ABL, ALK i Met) pri koncentraciji od 10µM prikazane su u Tabeli 3. ("--" u svakoj tabeli da ispitivanje nije izvedeno.)

Tabela 1 Inhibitorna aktivnost test jedinjenja za nekoliko kinaza

Tabela 2 Inhibitorna aktivnost test jedinjenja za FLT3 i VEGFR2

Tabela 3 Brzina inhibiranja test jedinjenja za više kinaza pri koncentraciji od 10µM

[0199] Eksperimentalni rezultati pokazuju da test jedinjenja imaju snažnu inhibitornu aktivnost za FLT3 i VEGFR2, a neka test jedinjenja takođe imaju dobru inhibitornu aktivnost za kinaze (FLT1, FLT4, RET, c-RAF, B-RAF, c-KIT, PDGFRα, PDGFRβ, FGFR2, FGFR1, EphA2, EphB2, SRC, ABL, ALK i Met).

Primer 91: eksperiment na in vitro proliferaciji humane tumorne ćelije inhibicije za derivat pirazolopirimidina prema ovom pronalasku

[0200] Svrha ovog eksperimenta bila je da se ispita inhibiciona aktivnost test jedinjenja ovog pronalaska na in vitro proliferaciju humane tumorne ćelije metil tiazolil tetrazolium (MTT) colorimetrijom.

1) Eksperimentalni materijali:

[0201] Glavni reagensi: RPMI-1640, fetalni goveđi serum, pankreatin, itd. nabavljeni su od Gibco BRL Company (Invitrogen Corporation, USA) i IMDM podloga koja je nabavljena od American type culture collection (ATCC). Metil tiazolil tetrazolium (MTT) i dimetil sulfoksid (DMSO) proizvodi su Sigma Company (USA). Derivati pirazolopirimidina pripremljeni su od strane pronalazača. Tokom in vitro eksperimenta, 100% DMSO pripremljen je 10mM rastvoru za čuvanje, a taj rastvor je odložen u frižider na -20°C tokom dalje upotrebe, i razblažen do potrebne koncentracije sa kompletnim rastvorom za rast pre upotrebe.

[0202] Ćelijska linija i uzgajanje: ćelijska linija MV4-11 humane leukemije, Jurkat, K562, humana tirofima ćelijska linija TT, ćelijska linija MKN-45 humanog kancera želuca, ćelijske linije A375 i A875 humanog malignog melanoma, ćelijska linija panc-1 humanog karcinoma pankreasa, ćelijska linija HELA humanog karcinoma grlića materice, ćelijska linija HCT116 humanog kolorektalnog karcinoma, itd. nabavljeni su od American type culture collection, a ova laboratorija je i čuvala pomenute ćelijske linije. Sve ćelijske linije leukemije (osim MV4-11), ćelijske linije karcinoma želuca i tirofimne ćelijske linije uzgajane su u RPMI-1640 kompletnoj podlozi koja sadrži 10% fetalni goveđi serum, 100U/mL penicillina i 100µg/mL streptomicina na 37°C u 5% CO2. Preostale ćelijske linije uzgajane su u DMEM kompletnoj podlozi koja sadrži 10% fetalni goveđi serum (koji sadrži 20% MV4-11 ćeliju), 100U/mL penicillina i 100µg/mL streptomicina na 37°C u 5% CO2.

2) Eksperimentalni postupak:

[0203] Ćelijska suspenzija sa koncentracijom ćelija od 1 - 2×10<4>/mL podešena je kopletnom ćelijskom podlogom i inokulisana u ploču sa 96 bazenčića, pri čemu je svaki bazenčić ispunjen sa 200µl ćelijske suspenzije koja je uzgajana preko noći. Narednog dana, supernatant je usisan i odbačen (supernatant je usisan nakon centrifugiranja suspenzionih ćelija), a zatim, ćelije su tretirane test jedinjenjima pri gradijentnim koncentracijama respektivno. U međuvremenu, postavljene su negativna kontrolna grupa bez leka i kontrolna grupa rastvarača jednake zapremine, a DMSO koncentracija iznosila je 0.1%. Svakoj doznoj grupi dodeljeno je tri bazenčića i uzgajane su na 37°C u 5% CO2Nakon 72 sata, 20µl 5mg/mL MTT reagens dodat je u svaki bazenčić, i uzgajan još dodatnih 2 do 4 sata, nakon čega je odbačen supernatant; 150µL DMSO dodato je u svaki bazenčić again, protresano i mešano ujednačeno tokom 15 minuta; vrednosti apsorbance (A) (proporcionalne količini živih ćelija) određene su sa čitačem mikroploča (λ=570nm) i uprosečene. Relativna brzina inhibiranja ćelijske proliferacije = (kontrolna grupa A570 - eksperimentalna grupa A570)/kontrolna grupa A 570×100%. Eksperiment je ponovljen 3 puta najmanje. Eksperimentalni podaci su izraženi kao srednje vrednosti, statistički podaci testirani su sa t, a P<0.05 znači da razlika ima statistički značaj. Efekti inhibicije ćelijske proliferacije svih jedinjenja kako sledi, izraženi su kao IC50ili brzina inhibiranja.

3) Eksperimentalni rezultati:

[0204] Aktivnosti inhibiranja proliferacije za ćelijske linije humane leukemije (MV4-11, Jurkat i K562), humanu tirofima ćelijsku liniju (TT), ćelijsku liniju humanog kancera želuca (MKN-45), ćelijske linije humanog malignog melanoma (A375 i A875), ćelijsku liniju humanog karcinoma pankreasa (panc-1), ćelijsku liniju humanog karcinoma grlića materice (HELA), ćelijsku liniju humanog kolorektalnog karcinoma (HCT116), itd. ispitane su ovim postupkom.

[0205] Aktivnosti inhibiranja proliferacije (IC50) test jedinjenja za različite ćelijske linije prikazane su u Tabeli 4.

Tabela 4 Aktivnosti inhibiranja proliferacije (IC50: µM) test jedinjenja za različite ćelijske linije

[0206] Rezultati pokazuju da test jedinjenja imaju veopma snažnu inhibitornu aktivnost za mutant ćelijsku liniju MV4-11 od FLT3-ITD, nekoliko test jedinjenja imaju dobru inhibitornu aktivnost za RET mutant ćelijsku liniju TT, a nekoliko test jedinjenja takođe imaju inhibitornu aktivnost za druge tumorske ćelijske linije koje uključuju MKN45 i A375, itd.

Primer 92: In vivo anti-leukemija tumor eksperiment za jedinjenja 4a-2

[0207] Svrha ovog eksperimenta bila je da se ispita in vivo anti-tumor efekat jedinjenja ovog pronalaska. U ovom eksperimentu, model subkutane humane tumorske leukemije na NOD-SCID miševima upotrebljeni su za ispitivanje in vivo anti-tumor aktivnosti jedinjenja 4a-2. Korišćena ćelijska linija bila je ćelijska linija MV4-11 humane leukemije. Lek (Sorafenib) koji se koristi u anti-leukemija kliničkom ispitivanju korišćen je kao pozitivna kontrola.

1) Eksperimentalni materijali:

[0208] IMDM, fetalni goveđi serum, pankreatin, itd. nabavljeni su od Gibco BRL company (Invitrogen Corporation, USA); IMDM podloga nabavljena je od American type culture collection (ATCC); ćelijska linija MV4-11 humane leukemije nabavljen je od American type culture collection; NOD-SCID miševi nabavljeni su od Beijing HFK Bioscience Co., Ltd.; a sorafenib je nabavljen od Nanjing Dirise Chemical Co., Ltd.

2) Eksperimentalni postupak:

[0209] Korišćeni su NOD-SCID miševi stari od 6 do 8 nedelja, i MV4-11 ćelije inokulisane su subkutano na zadnjim rebrima miševa pri koncentraciji od 1×10<7>/0.1mL/miš; nakon što su tumori narasli do 400 -500mm<3>(za oko 20 dana), miševi (n=6) su grupisani i podvrgnuti oralnom intragastričnom davanju. Eksperimentalno grupisanje: kontrolna grupa rastvarača leka (12.5% kastor ulje 12.5% etanol 75% voda)

Jedinjenje 4a-2: 1mg/kg q.d.;

Jedinjenje 4a-2: 3mg/kg q.d.;

Jedinjenje 4a-2: 10mg/kg q.d.;

Pozitivna kontrola sorafenib: 3mg/kg q.d.;

Svaka grupa leka rastvorena je u 12.5% kastor ulja 12.5% etanola 75% vode.

Ciljevi opservacije: Masa miševa i dugi i kratki prečnici tumora mereni su svaka 3 dana, a zapremina tumora (dužina×širina<2>×0.52) izračunata je kako bi se posmatrale dijareja, grčevi, osip, značajan gubitak mase i ostale reakcije.

3) Eksperimentalni rezultati:

[0210] Krive rasta tumora različitih grupa izmereni u eksperimentima prikazani su na Fig.1.

[0211] Eksperimentalni rezultati pokazuju da test jedinjenje (4a-2) ima očigledan in vivo inhibicioni efekat na rast ćelijske linije MV4-11 mutant humane leukemije od FLT3-ITD, očigledno može da inhibira rast tumora ili potpuno ukloni tumor pri dnevnoj dozi od 3mg/kg ili iznad, i pokazuje superiorniji inhibicioni efekat u odnosu na pozitivnu kontrolu (sorafenib). Gubitak mase, osip, dijareja i ostali neželjeni efekti nisu primećeni kod miševa tokom davanja, što ukazuje da test jedinjenje (4a-2) ima veoma malu toksičnost unutar doznog opsega davanja u dozi datoj tokom ispitivanja.

Primer 93: In vivo anti-leukemija tumor eksperiment za jedinjenja 4a-31

[0212] Svrha ovog eksperimenta bila je da se ispita in vivo anti-tumor efekat jedinjenja ovog pronalaska. U ovom eksperimentu, model subkutane humane tumorne leukemije na NOD-SCID miševina primenjen na mišu upotrebljen je radi ispitivanja in vivo anti-tumor aktivnost jedinjenja 4a-31.

Upotrebljena ćelijska linija bila je ćelijska linija MV4-11 humane leukemije. Lek (Sorafenib) koji se koristi u anti-leukemija kliničkom ispitivanju korišćen je kao pozitivna kontrola.

1) Eksperimentalni materijali:

[0213] IMDM, fetalni goveđi serum, pankreatin, itd. nabavljeni su od Gibco BRL company (Invitrogen Corporation, USA); IMDM podloga nabavljena je od American type culture collection (ATCC); ćelijska linija MV4-11 humane leukemije nabavljena je od American type culture collection; NOD-SCID miševi nabavljeni su od Beijing HFK Bioscience Co., Ltd.

2) Eksperimentalni postupak

[0214] Upotrebljeni su NOD-SCID miševi stari od 6 do 8 nedelja, a MV4-11 ćelije inokulisane su subkutano na zadnjim rebrima miševa pri koncentraciji od 1×10<7>/0.1mL/miš; nakon što su tumori narasli do 400 - 500mm<3>(za oko 20 dana), miševi (n=6) su grupisani i podvrgnuti oralnom intragastričnom davanju.

Eksperimentalno grupisanje: kontrolna grupa rastvarača leka (12.5% kastor ulje 12.5% etanol 75% voda)

Jedinjenje 4a-31: 1mg/kg q.d.;

Jedinjenje 4a-31: 3mg/kg q.d.;

Jedinjenje 4a-31: 10mg/kg q.d.;

Pozitivna kontrola (sorafenib): 3mg/kg q.d.;

Svaka grupa leka rastvorena je u 12.5% kastor ulja 12.5% etanola 75% vode.

3) Eksperimentalni rezultati

[0215] Krive rasta tumora različitih grupa izmereni u ovom eksperimentu prikazani su na Fig.2.

[0216] Eksperimentalni rezultati pokazuju da test jedinjenje 4a-31 ima očigledan in vivo inhibicioni efekat na rast ćelijske linije MV4-11 mutant humane leukemije od FLT3-ITD, očigledno može da inhibira rast tumora pri dnevnoj dozi od 1mg/kg i potpuno ukloni tumor pri dnevnoj dozi od 3mg/kg ili iznad, i pokazuje superiorniji inhibicioni efekat u odnosu na pozitivnu kontrolu (sorafenib). Gubitak mase, osip, dijareja i ostali neželjeni efekti nisu primećeni kod miševa tokom davanja, što ukazuje da test jedinjenje 4a-31 ima veoma malu toksičnost unutar doznog opsega davanja u dozi datoj tokom ispitivanja.

Primer 94: In vivo anti-melanom eksperiment za jedinjenje 4a-2

[0217] Svrha ovog eksperimenta bila je da se ispita in vivo anti-tumor efekat jedinjenja ovog pronalaska. U ovom eksperimentu, model subkutanog malignog melanom kod golih miševa upotrebljen je da se ispita in vivo anti-tumor aktivnost jedinjenja 4a-2 ovog pronalaska. Upotrebljena ćelijska linija bila je ćelijska linija WM2664 humanog malignog melanoma. Lek (sorafenib) koji se koristi u antimalenom kliničkom ispitivanju korišćen je kao pozitivna kontrola.

1) Eksperimentalni materijali:

[0218] DMEM, fetalni goveđi serum, pankreatin, itd. nabavljeni su od Gibco BRL Company (Invitrogen Corporation, USA); ćelijska linija WM2664 humanog malignog melanoma nabavljena je od American type culture collection (ATCC); BALB/C goli miševi nabavljeni su od Beijing HFK Bioscience Co., Ltd.; a kastor ulje (C5135-500G) proizvod je Sigma Company.

2) Eksperimentalni postupak:

[0219] BALB/C goli miševi stari od 6 do 8 nedelja upotrebljeni su, a WM2664 ćelije inokulisane su subkutano na zadnjim rebrima miševa pri koncentraciji od 5×106/0.1mL/miš; nakon što su tumori narasli do 200 - 300mm<3>(za oko 15 dana), miševi (n=6) su grupisani i podvrgnuti oralnom intragastričnom davanju.

Grupa pozitivne kontrole (sorafenib): 50mg/kg q.d.;

Jedinjenje 4a-2: 12.5mg/kg q.d.;

Jedinjenje 4a-2: 25mg/kg q.d.;

Svaka grupa leka rastvorena je u 12.5% kastor ulja 12.5% etanola 75% vode.

3) Eksperimentalni rezultati:

[0220] Krive rasta tumora različitih grupa izmereni u ovom eksperimentu prikazani su na Fig.3.

[0221] Eksperimentalni rezultati pokazuju da test jedinjenje 4a-2 ima očigledan in vivo inhibicioni efekat na rast mutant ćelijsku liniju WM2664 humanog malignog melanoma od BRAF<V600D>, očigledno može da inhibira rast tumora pri dozi od 25mg/kg/d, i efektivnije je od sorafeniba pri dnevnoj dozi od 50mg/kg. Gubitak mase, osip, dijareja i ostali sporedne reakcije nisu primećene kod golih miševa tokom davanja, što ukazuje da test jedinjenje 4a-2 ima veoma malu toksičnost unutar doznog opsega davanja u dozi datoj tokom ispitivanja.

Primer 95: In vivo anti-tumor eksperiment za jedinjenje 4a-6

[0222] Svrha ovog eksperimenta bila je da se ispita in vivo anti-tumor efekat jedinjenja ovog pronalaska. U ovom eksperimentu, model kolorektalnog karcinoma i model humanog glioma subkutano inokulisani na golim miševima respektivno su korišćeni za ispitivanje in vivo anti-tumor aktivnosti jedinjenja (4a-6) ovog pronalaska. Korišćene ćelijske linije bile su ćelijska linija HT29 humanog kolorektalnog karcinoma i ćelijska linija U251 humanog glioma.

1) Eksperimentalni materijali:

[0223] DMEM, fetalni goveđi serum, pankreatin, itd. nabavljeni su od Gibco BRL Company (Invitrogen Corporation, USA); DMEM podloga nabavljena je od American type culture collection (ATCC); ćelijska linija HT29 humanog kolorektalnog karcinoma i ćelijska linija U251 BALB/C human glioma nabavljene su od American type culture collection; BALB/C goli miševi nabavljeni su od Institute of Zoology, Chinese Academy of Science; a kremofer (C5135-500G) nabavljen je od Sigma Company.

2) Eksperimentalni postupak:

[0224] BALB/C goli miševi stari od 6 do 8 nedelja upotrebljeni su, i u modelu ćelija humanog kolorektalnog karcinoma, HT29 ćelije inokulisane su subkutano na zadnjim rebrima miševa pri koncentraciji od 1×10<7>/0.1mL/miš; nakon što su tumori narasli do 150 - 200mm<3>(za oko 10 dana), miševi (n=6) su grupisani i podvrgnuti oralnom intragastričnom davanju. Za model humanog glioma, U251 ćelije inokulisane su subkutano na zadnjim rebrima miševa pri koncentraciji od 5×10<6>/0.1mL/miš; nakon što su tumori narasli do 150 - 200mm<3>(za oko 14 dana), miševi (n=6) su grupisani i podvrgnuti oralnom intragastričnom davanju.

Jedinjenje 4a-6: 15 mg/kg q.d.;

Jedinjenje 4a-6: 30 mg/kg q.d.;

Jedinjenje 4a-6: 60 mg/kg q.d.;

Pozitivna kontrola (sorafenib) group: 30 mg/kg q.d.;

Svaka grupa leka rastvorena je u 12.5% kastor ulja 12.5% etanola 75% vode.

3) Eksperimentalni rezultati:

[0225] Krive rasta tumora različitih grupa modela HT29 humanog kolorektalnog karcinoma izmereni u ovom eksperimentu prikazane su na Fig.4, a krive rasta tumora različitih grupa modela U251 humanog glioma izmereni u ovom eksperimentu prikazani su na Fig.5.

[0226] Eksperimentalni rezultati pokazuju da test jedinjenje 4a-6 ima očigledan in vivo inhibicioni efekat na rast tumora u oba modela, a očigledno može da inhibira rast tumora pri dnevnoj dozi od 30mg/kg ili iznad. Gubitak mase, osip, dijareja i ostali sporedne reakcije nisu primećene kod golih miševa tokom davanja, što ukazuje da test jedinjenje 4a-6 ima veoma malu toksičnost unutar doznog opsega davanja u dozi datoj tokom ispitivanja.

Eksperiment 96 Ispitivanje inhibicione aktivnosti angiogeneze jedinjenja 4a-6 i 4a-31 za transgene zebrice

[0227] Svrha ovog eksperimenta bila je da se ispita in vivo inhibiciona aktivnost na formiranje novih krvnih sudova test jedinjenja ovog pronalaska praćenjem inhibicionog test jedinjenja ovog pronalaska na interkluzivnim krvnim sudovima transgenih zebrica (FLK1-GFP) pri različitim koncentracijama.

Inhibiciona aktivnost na formiranje novih krvnih sudova test jedinjenja izražena je stepenom inhibicije test jedinjenja na interkluzivnim krvnim sudovima zebrice pri koncentraciji od 10ug/mL, 3ug/mL i 1ug/mL.

1) Eksperimentalni materijali:

[0228]

Transgene zebrice (FLK1-GFP): uzgajane u ovoj laboratoriji

Esperimentalni reagensi: dimetil sulfoksid (DMSO), test jedinjenja

Glavni eksperimentalni uređaj: fluorescentni mikroskop, stereomikroskop, CCD kamera, itd.

2) Eksperimentalni postupak:

[0229] Pribavljanje embriona zebrica: Zebrice korišćene od strane ove laboratorije bile su fluorescentne transgene zebrice (FLK1: GFP). Pogledati Westrafield postupak za uzgoj i uzgajanje zebrica. Dan pre dobijanja jajašaca, mužijaci i ženke zebrice uparene su u odnosu od 1:1. Drugog dana, mužijaci i ženke zebrice prirodno su se uparili i položili jajašca na temperaturi od oko 28 °C pod dovoljnim osvetljenjem. Sakupljeno je dovoljno embriona zebrica, oprano, smešteno u podlogu za uzgajanje embriona, i smešteni u 28 °C inkubator radi uzgajanja. Preživljavanje embriona identifikovano je morfološkim i filogenetskim standardima, a mrtvi embrioni bili su beli i izvađeni na vreme kako bi se sprečilo pogoršanje kvaliteta vode.

[0230] Lečenje: Deset sati nakon oplodnje embriona zebrica (korišćen je mikroskop kako bi se pratio proces u kojem embrioni zebrica prelaze u period pupljenja), zdravi embrioni odabrani su nasumično radi grupisanja, u svaki bazenčić ploče sa 24 bazenčića dodato je 10 embriona zebrica, sva podloga za uzgajanje je uklonjena usisavanjem, i dodati su rastvori jedinjenja pri različitim koncentracijama;

Koncentracije svakog jedinjenja podešene su na 10ug/mL, 3ug/mL i 1ug/mL respektivno. Postavljena je prazna kontrola bez dodavanja bilo kog jedinjenja, i smešteni u 28 °C inkubator radi uzgajanja.

[0231] Zapaženi rezultati: Trideset i jedan sat nakon oplodnje embriona zebrica, jajašca su izvađena, a izlegle zebrice su sastrugane; a zatim, izlegle zebrice smeštene su na pločicu, 1‰ rastvor trikaina dodat je kako bi se narkotizovalo telo ribica, a 1.5% metilceluloza upotrebljena je za fiksiranje tela ribica; međusegmenti sudovi (ISV)su zapaženi, izbrojani i fotografisani pod fluorescentnim mikroskopom.

3) Eksperimentalni rezultati:

[0232] Fig.6 prikazuje angiogeneznu inhibiciju jedinjenja 4a-6 i 4a-31 za FLK1 transgene zebrice pri koncentraciji od 1µg/mL. Rezultati pokazuju da jedinjenja 4a-6 i 4a-31, u poređenju sa kontrolnom grupom, mogu da veoma dobro inhibiraju angiogenezu kod zebrica. Eksperimentalni rezultati pokazuju da većina jedinjenja pripremljenih u primerima ovog pronalaska imaju veoma dobru inhibitornu aktivnost za nove krvne sudove FLK1 transgenih zebrica, što ukazuje na to da ova jedinjenja imaju veoma dobru inhibitornu aktivnost za VEGFR2.

Primer 97: In vivo anti-leukemija tumor eksperiment za jedinjenja 4a-58

[0233] Svrha ovog eksperimenta bila je da se ispita in vivo anti-tumor efekat jedinjenja ovog pronalaska. U ovom eksperimentu, model humane leukemije čvrstog tumora na NOD-SCID miševima upotrebljen je da se ispita in vivo anti-tumor aktivnost jedinjenja 4a-58. Upotrebljena ćelijska linija bila je ćelijska linija MV4-11 humane akutne mijeloidne leukemije, sa anti-leukemija lekom Quizartinib (AC220) kao pozitivna kontrola.

1) Eksperimentalni materijali:

[0234] IMDM, fetalni goveđi serum, pankreatin, itd. nabavljeni su od Gibco BRL company (Invitrogen Corporation, USA); IMDM podloga nabavljena je od American type culture collection (ATCC); ćelijska linija MV4-11 humane leukemije nabavljena je od American type culture collection; a NOD-SCID miševi nabavljeni su od Beijing HFK Bioscience Co., Ltd.

2) Eksperimentalni postupak

[0235] Upotrebljeni su NOD-SCID miševi stari od 6 do 8 nedelja, a MV4-11 ćelije inokulisane su subkutano na zadnjim rebrima miševa pri koncentraciji od 1×10<7>/0.1mL/miš; nakon što su tumori narasli više od 2000mm<3>, miševi (n=3) su grupisani i podvrgnuti oralnom intragastričnom davanju.

Eksperimentalno grupisanje: jedinjenje 4a-58: 3mg/kg q.d.;

Jedinjenje 4a-58: 10mg/kg q.d.;

Pozitivna kontrola AC220: 3mg/kg q.d.;

Pozitivna kontrola AC220: 10mg/kg q.d.;

Svaka grupa leka rastvorena je u 12.5% kastor ulja 12.5% etanola 75% vode.

3) Eksperimentalni rezultati

[0236] Krive rasta tumora različitih grupa izmereni u ovom eksperimentu prikazani su na Fig.7.

[0237] Eksperimentalni rezultati pokazuju da test jedinjenje 4a-58 test ima očigledan in vivo inhibicioni efekat na rast ćelijska linija MV4-11 mutantne humane akutne mijeloidne leukemije za FLT3-ITD; čak i kada je zapremina tumora bila veoma velika, jedinjenje je moglo potpuno da inhibira rast tumora pri dnevnoj dozi od 3mg/kg ili iznad. Gubitak mase, osip, dijareja i ostali neželjeni efekti nisu primećeni kod miševa tokom davanja, što ukazuje da test jedinjenje 4a-58 ima veoma malu toksičnost unutar doznog opsega davanja u dozi datoj tokom ispitivanja.

Primer 98 Ispitivanje inhibicione aktivnosti angiogeneze jedinjenja 4a-54 za transgene zebrice.

[0238] Svrha ovog eksperimenta bila je da se ispita inhibitorna aktivnost jedinjenja ovog pronalaska na novi in vivo krvni sud praćenjem inhibicije jedinjenja ovog pronalaska na međusegmentne sudove transgenih zebrica FLK1-GFP pri jednoj koncentraciji. Inhibitorna aktivnost jedinjenja 4a-54 za nove krvne sudoves izražena je stepenom inhibicije jedinjenja za međusegmentne sudove zebrica.

1) Eksperimentalni materijali:

[0239]

Transgene zebrice (FLK1-GFP): uzgajane u ovoj laboratoriji

Esperimentalni reagensi: dimetil sulfoksid (DMSO), test jedinjenje

2) Eksperimentalni postupak:

[0240] Pribavljanje embriona zebrica: Zebrice korišćene od strane ove laboratorije bile su fluorescentne transgene zebrice (FLK1: GFP). Pogledati Westrafield postupak za uzgoj i uzgajanje zebrica. Dan pre dobijanja jajašaca, mužijaci i ženke zebrice uparene su u odnosu od 1:1. Drugog dana, mužijaci i ženke zebrice prirodno su se uparili i položili jajašca na temperaturi od oko 28 °C pod dovoljnim osvetljenjem. Sakupljeno je dovoljno embriona zebrica, oprano, smešteno u podlogu za uzgajanje embriona, i smešteni u 28 °C inkubator radi uzgajanja. Preživljavanje embriona identifikovano je morfološkim i filogenetskim standardima, a mrtvi embrioni bili su beli i izvađeni na vreme kako bi se sprečilo pogoršanje kvaliteta vode.

[0241] Lečenje: Deset sati nakon oplodnje embriona zebrica (korišćen je mikroskop kako bi se pratio proces u kojem embrioni zebrica prelaze u period pupljenja), zdravi embrioni odabrani su nasumično radi grupisanja, u svaki bazenčić ploče sa 24 bazenčića dodato je 6 embrioba zebrica, sva podloga za uzgajanje je uklonjena usisavanjem, i dodati su rastvori jedinjenja pri različitim koncentracijama; postavljena je prazna kontrola bez dodavanja bilo kog jedinjenja, i zatim, prazna kontrola smeštena je u 28 °C inkubator radi uzgajanja.

[0242] Zapaženi rezultati: Trideset i jedan sat nakon oplodnje embriona zebrica, jajašca su izvađena, a izlegle zebrice su sastrugane, i zatim, izlegle zebrice smeštene su na pločicu, 1‰ rastvor trikaina dodat je kako bi se narkotizovalo telo ribica, a 1.5% metilceluloza upotrebljena je za fiksiranje tela ribica; primećeni su međusegmenti sudovi (ISV), izbrojani i fotografisani pod fluorescentnim mikroskopom.

3) Eksperimentalni rezultati:

[0243] Fig.6 prikazuje angiogeneznu inhibiciju jedinjenja 4a-54 za FLK1 transgene zebrice pri koncentraciji od 5µm. Jedinjenje 4a-54 pri koncentraciji od 5µm, u poređenju sa praznom kontrolnom grupom, moglo je potpuno da inhibira angiogenezu zebrica.

[0244] Eksperimentalni rezultati pokazuju da jedinjenje pripremljeno u primeru ovog pronalaska ima veoma dobru inhibitornu aktivnost za nove krvne sudove FLK1 transgenih zebrica.

[0245] Strukturne formule specifičnih jedinjenja uključenih u primerima ovog pronalaska su kako slede, u kojima su jedinjenja 4a-47 - 4a-51 neinventivna:

Claims

Patentni zahtevi 1. Derivat pirazolopirimidina strukturne formule I:

u kojoj, Y je azot, kiseonik ili sumpor; L je

supstituisan na 3-položaju ili 4-položaju benzenovog prstena matrice; pri čemu je jedan kraj atoma N povezan sa matricom; R1je -H, C1- C6alkil,

ili metil supstituisan supstituisanim 6 - 10-članim aromatičnim prstenom; a supstituent supstituisanog aromatičnog prstena je - H, halogen ili C1- C4alkil; u kojoj ako je L

onda je Y kiseonik ili sumpor; R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, C1- C4alkil sulfenil ili -NO2; R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal, ili pri čemu je broj heteroatoma u supstituisanom aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 4, heteroatom je N, O ili S; supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu je -H, C1- C6alkil, supstituisan aril, -CF3, 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal, karboksil ili C3- C6cikloalkil; a supstituent u supstituisanom arilu je -H ili halogen; R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3, morfolinil ili C1- C4fenilalkil; R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a n=0-4.
2. Derivat pirazolopirimidina prema zahtevu 1, n a z n a č e n t i m e, š t o je Y azot, kiseonik ili sumpor; L je

supstituisan na 3-položaju ili 4-položaju benzenovog prstena matrice; pri čemu je jedan kraj atoma N povezan sa matricom; R1je -H, C1- C6alkil,

ili metil supstituisan supstituisanim 6 - 10-članim aromatičnim prstenom; a supstituent supstituisanog aromatičnog prstena je - H, halogen ili C1- C4alkil; R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, C1- C4alkil sulfenil ili -NO2; R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal, ili pri čemu je supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu -H, C1- C6alkil, aril, -CF3ili 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal; a pri čemu je broj heteroatoma u aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 4, a heteroatom je N, O ili S; R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3, morfolinil ili C1- C4fenilalkil; R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a n=0-4.
3. Derivat pirazolopirimidina prema zahtevu 1 ili 2, n a z n a č e n t i m e, š t o je Y azot, kiseonik ili sumpor; L je

supstituisan na 3-položaju ili 4-položaju benzenovog prstena matrice; pri čemu je jedan kraj atoma N povezan sa matricom; R1je -H, C1- C4alkil,

ili metil supstituisan supstituisanim 6 - 10-članim aromatičnim prstenom; a supstituent supstituisanog aromatičnog prstena je -H, halogen ili C1- C4alkil; R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, C1- C4alkil sulfenil ili -NO2; R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal, ili pri čemu je supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu -H, C1- C6alkil, aril, -CF3ili 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal; a pri čemu je broj heteroatoma u aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 4, a heteroatom je N, O ili S; R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3, morfolinil ili C1- C4fenilalkil; R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a n=0-4.
4. Derivat pirazolopirimidina prema bilo kom od prethodnih zahteva, n a z n a č e n t i m e, š t o je Y azot, kiseonik ili sumpor; L je

supstituisan na 3-položaju ili 4-položaju benzenovog prstena matrice; pri čemu je jedan kraj atoma N povezan sa matricom; R1je -H, C1- C4alkil,

ili metil supstituisan supstituisanim 6 - 10-članim aromatičnim prstenom; a supstituent supstituisanog aromatičnog prstena je -H, halogen ili C1- C4alkil; R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2; R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

ili pri čemu je supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu -H, C1- C6alkil, aril, -CF3ili 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal; a pri čemu je broj heteroatoma u aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 4, a heteroatom je N, O ili S; R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3, morfolinil ili C1- C4fenilalkil; R5je H, aril ili C3- C8cikloalkil; a n=0-4.
5. Derivat pirazolopirimidina prema bilo kom od prethodnih zahteva, n a z n a č e n t i m e, š t o je Y azot, kiseonik ili sumpor; L je

supstituisan na 3-položaju ili 4-položaju benzenovog prstena matrice; pri čemu je jedan kraj atoma N povezan sa matricom; R1je -H, C1- C4alkil,

ili metil supstituisan supstituisanim fenilom; a supstituent supstituisanog fenila je -H, halogen ili C1- C4alkil; R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2; R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

ili pri čemu je supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu -H, C1- C6alkil, aril, -CF3ili 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal; a pri čemu je broj heteroatoma u aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 4, a heteroatom je N, O ili S; R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3, morfolinil ili C1- C4fenilalkil; R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a n=0-3.
6. Derivat pirazolopirimidina prema bilo kom od prethodnih zahteva, n a z n a č e n t i m e, š t o je Y azot, kiseonik ili sumpor; L je

supstituisan na 3-položaju ili 4-položaju benzenovog prstena matrice; pri čemu je jedan kraj atoma N povezan sa matricom; R1je -H, C1- C4alkil,

ili metil supstituisan supstituisanim fenilom; a supstituent supstituisanog fenila je -H, -F, -Cl ili -Br; R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2; R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

ili pri čemu je supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu -H, C1- C6alkil, aril, -CF3ili 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal; a pri čemu je broj heteroatoma u aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 4, a heteroatom je N, O ili S; R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3, morfolinil ili C1- C4fenilalkil; R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a n=0-3.
7. Derivat pirazolopirimidina prema bilo kom od prethodnih zahteva, n a z n a č e n t i m e, š t o je Y azot, kiseonik ili sumpor; L je

supstituisan na 3-položaju ili 4-položaju benzenovog prstena matrice; pri čemu je jedan kraj atoma N povezan sa matricom; R1je -H, C1- C4alkil,

ili metil supstituisan supstituisanim fenilom; a supstituent supstituisanog fenila je -H ili -Br; R2je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi ili -NO2; R3je supstituisan 4 - 12 -člani aromatični heterociklični radikal,

ili

pri čemu je supstituent u supstituisanom heteroaromatičnom prstenu -H, C1- C6alkil, aril, -CF3ili 5 - 10-člani aromatični heterociklični radikal; a pri čemu je broj heteroatoma u aromatičnom heterocikličnom radikalu 1 do 4, a heteroatom je N, O ili S; R4je -H, halogen, C1- C4alkil, C1- C4alkoksi, -CF3, -OCF3, morfolinil ili C1- C4fenilalkil; R5je -H, aril ili C3- C8cikloalkil; a n=0-3.
8. Derivat pirazolopirimidina prema zahtevu 1, n a z n a č e n t i m e, što se naziva 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-(trifluorometil)fenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-hloro-3-(trifluorometil)fenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-bromofenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(2,3-dimetilfenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-metoksifenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-(trifluorometil)fenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-izopropilfenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-(trifluorometoksi)fenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(4-(trifluorometil)fenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(4-hloro-3-(trifluorometil)fenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-metilfenil)-3-(3-(trifluorometil)fenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(2-hloro-4-(trifluorometil)fenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-fluorofenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-fenilurea , 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-morfolinfenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-fluorofenil)urea, (S)-1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(1-fenetil)urea, (R)-1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(1-fenetil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(metilcikloheksil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-cikloheksilurea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(6-kvinolil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-piridilurea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butil-1-fenil-1H-pirazol-5-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butilizoksazol-5-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-izopropil-1-metil-pirazol-5-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(5-(trifluorometil)izoksazol-3-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-metilfenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-fluorofenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-hlorfenil)-3-(3-tert-butil-1-metilpirazol-5-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3,5-difluorofenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butil-1-metil-1H-pirazol-5-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(1-metil-3(trifluorometil)1H-pirazol-5-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)3-fluorofenil)-3-(1-metil-3(trifluorometil)1H-pirazol-5-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-nitrofenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-tert-butilizoksazol-5-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2metoksifenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butil-1-(kvinolin-7-il)-1H-pirazol-5-il)urea, 1-(3-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-(trifluorometil)fenil)urea, 1-(3-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-hloro-3-(trifluorometil)fenil)urea, 1-(3-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-(trifluorometil)fenil)urea, 1-(3-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-feniltiourea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-trifluorometilfenil)tiourea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-sulfidril)fenil)-3-(4-trifluorometil)fenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-sulfidril)fenil)-3-(3-(trifluorometil)fenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-sulfidril)fenil)-3-(5-tertbutilizoksazol-3-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-tert-butil-1-metilpirazol-5-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-hlorfenil)-3-(5-tert-butilizoksazol-3-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-fluorofenil)-3-(4-hloro-3-(trifluorometil)fenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-2-hlorfenil)-3-(4-hloro-3-(trifluorometil)fenil)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-tert-butil-1-fenil-1H-pirazol-5-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-tert-butil-1-fenil-1H-pirazol-5-il)urea, 5-(3-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)karbamido)-3-tert-butil-1H-pirazol-1-karboksilna kiselina, 5-(3-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi) -3-fluoro-fenil)karbamido)-3-tert-butil-1H-pirazol-1-karboksilna kiselina, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-tert-butil-1-(4-fluoro-fenil)-1H-pirazol-5-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butil-1-ciklopentil-1H-pirazol-5-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)-3-fluorofenil)-3-(3-tert-butil-1-ciklopentil-1H-pirazol-5-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(3-tert-butil-tiazol-2-il)urea, 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(4-feniltiazol-2-il)urea ili 1-(4-(1H-pirazolopirimidin-4-fenoksi)fenil)-3-(benzotiazol-2-il)urea.
9. Farmaceutski prihvatljiva so derivata pirazolopirimidina prema bilo kom od prethodnih zahteva.
10. Farmaceutski prihvatljiv hidrat derivata pirazolopirimidina prema bilo kom od prethodnih zahteva.
11. Farmaceutska kombinacija koja obuhvata derivat pirazolopirimidina prema bilo kom od prethodnih zahteva, so prema zahtevu 9 ili hidrat prema zahtevu 10 i farmaceutski prihvatljive pomoćne komponente.
12. Derivat pirazolopirimidina prema bilo kom od prethodnih zahteva, so prema zahtevu 9 ili hidrat prema zahtevu 10 za upotrebu kao inhibitori kinaza.
13. Derivat pirazolopirimidina prema bilo kom od prethodnih zahteva, so prema zahtevu 9 ili hidrat prema zahtevu 10 za upotrebu kao antitumorni lekovi.
14. Derivat pirazolopirimidina prema bilo kom od prethodnih zahteva, so prema zahtevu 9 ili hidrat prema zahtevu 10 za upotrebu u lečenju autoimunih bolesti.
15. Derivat pirazolopirimidina prema bilo kom od prethodnih zahteva, so prema zahtevu 9 ili hidrat prema zahtevu 10 za upotrebu kao inhibitori angiogeneza.