RS57895B2 - Fc varijante antitela - Google Patents

Fc varijante antitela

Info

Publication number
RS57895B2
RS57895B2 RS20181237A RSP20181237A RS57895B2 RS 57895 B2 RS57895 B2 RS 57895B2 RS 20181237 A RS20181237 A RS 20181237A RS P20181237 A RSP20181237 A RS P20181237A RS 57895 B2 RS57895 B2 RS 57895B2
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
antibody
polypeptide
variant
region
fold
Prior art date
Application number
RS20181237A
Other languages
English (en)
Inventor
Monika Baehner
Stefan Jenewein
Manfred Kubbies
Ekkehard Moessner
Tilman Schlothauer
Original Assignee
Roche Glycart Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=45888223&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS57895(B2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Roche Glycart Ag filed Critical Roche Glycart Ag
Publication of RS57895B1 publication Critical patent/RS57895B1/sr
Publication of RS57895B2 publication Critical patent/RS57895B2/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2851—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
    • C07K16/2854—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the lectin superfamily, e.g. CD23, CD72 against selectins, e.g. CD62
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81—Packaged device or kit

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Opis
Oblast tehnike
Ovaj pronalazak se odnosi na polipeptide koji sadrže varijante Fc regiona. Određenije, ovaj pronalazak se odnosi na polipeptide koji sadrže Fc region i koji poseduju izmenjenu efektorsku funkciju kao posledicu jedne ili više supstitucija aminokiselina u Fc regionu polipeptida.
Sažetak
Ovaj pronalazak se odnosi na oblast varijanti antitela i obezbeđuje polipeptide koji sadrže Fc varijante sa smanjenom efektorskom funkcijom, kao što su smanjeno ADCC i/ili C1q vezivanje. Pronalazak je kao što je definisan u patentnim zahtevima.
Određenije, pronalazak obezbeđuje polipeptid koji sadrži Fc varijantu Fc regiona humanog IgG divljeg tipa, pri čemu navedena Fc varijanta sadrži aminokiselinsku supstituciju na poziciji Pro329 i najmanje jednu dodatnu aminokiselinsku supstituciju, pri čemu su ostaci numerisani prema EU indeksu Kabata, i pri čemu navedeni polipeptid ispoljava smanjeni afinitet za humani FcyRIIIA i/ili FcyRIIA i/ili FcyRI, u poređenju sa polipeptidom koji sadrži Fc region IgG divljeg tipa, i pri čemu je ADCC, indukovana od strane navedenog polipeptida, umanjena za najmanje 20% u odnosu na ADCC, indukovanu od strane polipeptida koji sadrže Fc region humanog IgG divljeg tipa.
U specifičnom ostvarenju, Pro329 humanog Fc regiona divljeg tipa u, prethodno opisanom, polipeptidu, supstituisan je sa glicinom, da bi se razorio prolinski sendvič, unutar kontaktne površine Fc/Fcy receptor, koja se obrazuje između prolina329 iz Fc regiona i triptofanskih ostataka Trp 87 i Trp 110 iz FcgRIII (Sondermann et al.: Nature 406, 267-273 (20. jul 2000)), sa daljim aminokiselinskim supstitucijama L234A i L235A u Fc regionu humanog IgG1.
U drugom aspektu pronalaska, obezbeđeni polipeptid ispoljava smanjeni afinitet prema najmanje jednom dodatnom receptoru iz grupe koja sadrži humane receptore FcgI, FcgIIA i C1q, u poređenju sa polipeptidom koji sadrži Fc region humanog IgG divljeg tipa. Polipeptid sadrži Fc region humanog IgG1, a polipeptid je antitelo ili Fc fuzioni protein.
Za polipeptid kako je ovde opisano, agregacija trombocita izazvana polipeptidom koji sadrži Fc varijantu može biti smanjena u poređenju sa agregacijom tormbocita izazvanom polipeptidom koji sadrži Fc region divljeg tipa ljudskog IgG. Polipeptid opisan u ovom dokumentu može pokazivati značajno smanjenu CDC aktivnost u poređenju sa CDC aktivnošću izazvanom polipeptidom koji sadrži FC region divljeg tipa ljudskog IgG.
U drugom ostvarenju pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu, kako su prethodno opisani, obezbeđeni su za korišćenje u vidu medikamenta. U specifičnom ostvarenju, polipeptid je anti-CD9 antitelo, koje je karakterisano time što polipeptid koji sadrži Fc region divljeg tipa sadrži kao varijabilni region teškog lanca SEQ ID NO:9, a kao varijabilni region lakog lanca SEQ ID NO:8.
U drugom aspektu pronalaska, polipeptidi kao što su prethodno opisani, obezbeđeni su za korišćenje u lečenju bolesti, u kojoj je od koristi da je efektorska funkcija polipeptida koji sadrži varijantu Fc, izrazito umanjena u poređenju sa efektorskom funkcijom, koju indukuje polipeptid koji sadrži Fc region humanog IgG divljeg tipa.
U drugom ostvarenju, korišćenje polipeptida, kao što su prethodno opisani, obezbeđeno je za proizvodnju leka za lečenje bolesti, pri čemu je povoljno da je efektorska funkcija polipeptida koji sadrži Fc varijantu Fc regiona humanog IgG divljeg tipa izrazito redukovana u poređenju sa efektorskom funkcijom, koju indukuje polipeptid koji sadrži Fc region humanog IgG divljeg tipa.
Takođe je prikazan postupak lečenja pojedinca koji ima bolest, pri čemu je od koristi da je efektorska funkcija polipeptida koji sadrži Fc varijantu Fc regiona humanog IgG divljeg tipa izrazito redukovana u poređenju sa efektorskom funkcijom, koju indukuje polipeptid koji sadrži Fc humanog polipeptida divljeg tipa, pri čemu postupak uključuje primenu pojedincu efektivne količine, prethodno opisanog, polipeptida.
Dalji aspekt pronalaska je korišćenje polipeptida koji sadrži Fc varijantu Fc regiona humanog IgG divljeg tipa, pri čemu navedeni polipeptid ima Pro329 Fc regiona humanog IgG, koji je supstituisan sa glicinom, pri čemu su ostaci brojčano označeni prema EU indeksu Kabata, pri čemu navedeni polipeptid ispoljava smanjeni afinitet prema humanom FcgRIIIA i FcgRIIA, za nishodnu modulaciju ADCC za najmanje 20% ADCC, koju indukuje polipeptid koji sadrži Fc region humanog IgG divljeg tipa, i/ili za nishodnu modulaciju ADCP-a.
Drugi aspekt pronalaska je korišćenje polipeptida koji sadrži Fc varijantu Fc regiona humanog IgG divljeg tipa, pri čemu navedeni polipeptid ima Pro329 Fc regiona humanog IgG, koji je supstituisan sa glicinom i pri čemu Fc varijanta sadrži najmanje dve dalje aminokiselinske supstitucije na L234A i L235A u Fc regionu humanog IgG1, pri čemu su ostaci numerisani prema EU indeksu Kabata, pri čemu navedeni polipeptid ispoljava smanjeni afinitet prema humanom FcgRIIIA i FcgRIIA, za nishodnu modulaciju ADCC za najmanje 20% ADCC, koju indukuje polipeptid koji sadrži Fc region humanog IgG divljeg tipa, i/ili za unisonu modulaciju ADCP-a.
Takođe je opisano korišćenje prethodno opisanog polipeptida, pri čemu je agregacija trombocita, koju indukuje polipeptid, koji je prethodno opisan, umanjena u poređenju sa agregacijom trombocita koju indukuje polipeptid, koji sadrži humani Fc region divljeg tipa, pri čemu je polipeptid antitelo koje aktivira trombocite.
Takođe je opisan postupak lečenja pojedinca koji ima bolest, pri čemu se navedeni pojedinac leči polipeptidom, pri čemu navedeni polipeptid ima Pro329 Fc regiona humanog IgG supstituisan sa glicinom, pri čemu su ostaci brojčano označeni prema EU indeksu Kabata, pri čemu je navedeni polipeptid karakterisan izrazito smanjenim vezivanjem FcyRIIIA i/ili FcyRIIA, u poređenju sa polipeptidom, koji sadrži Fc region humanog IgG divljeg tipa, pri čemu postupak obuhvata primenu pojedincu efektivne količine navedenog polipeptida.
Stanje
Monoklonska antitela imaju veliki terapeutski potencijal i igraju značajnu ulogu u tekućim medicinskim okvirima. Tokom poslednje dekade, značajan trend u farmaceutskoj industriji predstavljao je razvoj monoklonskih antitela (mAt) u vidu terapeutskih sredstava za lečenje brojnih bolesti, kao što su maligne bolesti, astma, artritis, multipla skleroza, itd.. Monoklonska antitela se prevashodno izrađuju kao rekombinantni proteini u kulturi ćelija sisara, podvrgnutih genetskom inženjeringu.
Fc region antitela, t.j., terminalni krajevi teških lanaca antitela koji uključuju domene CH2, CH3 i deo zglobnog regiona, je ograničene varijabilnosti, a uključen je u vršenje fizioloških uloga, koje izvodi antitelo. Efektorske funkcije, koje se mogu pripisati Fc regionu antitela, variraju prema klasi i podklasi antitela, i uključuju vezivanje antitela preko Fc regiona za specifični Fc receptor ("FcR") na ćeliji, čime se pokreću razni biološki odgovori.
Ovi receptori obično imaju ekstracelularni domen koji posreduje u vezivanju za Fc, region koji uključuje membranu, i intracelularni domen, koji može biti posrednik u nekim signalizacijskim dešavanjima unutar ćelije. Ovi receptori se ekspresuju u brojnim imunim ćelijama, koje uključuju: monocite, makrofage, neutrofile, dendritične ćelije, eozinofile,
mastocite, trombocite, B-ćelije, velike granularne limfocite, Langerhansove ćelije, ćelije prirodne ubice (ʺnatural killerʺ -NK) i T ćelije. Formiranje kompleksa Fc/FcgR povlači ove efektorske ćelije na položaje vezanog antigena, što obično dovodi do signalizacijskih dešavanja unutar ćelija i sledstvenih važnih imunih odgovora, kao što su: oslobađanje medijatora zapaljenja, aktivacija B-ćelija, endocitoza, fagocitoza i citotoksični napad. Sposobnost posredovanja u citotoksičnim i fagocitnim efektorskim funkcijama jeste potencijalni mehanizam, putem koga antitela razaraju ciljane ćelije. Ćelijski-posredovana reakcija, u kojoj ne-specifične citotoksične ćelije koje ekspresuju FcgR-e prepoznaju vezano antitelo na ciljnoj ćeliji i nakon toga izazivaju lizu ciljne ćelije, označava se kao antitelo-zavisna ćelijski-posredovana citotoksičnost (ADCC) (Ravetch, et al., Annu Rev Immunol 19 (2001) 275-290). Ćelijski-posredovana reakcija, u kojoj ne- specifične citotoksične ćelije koje ekspresuju FcyR-e prepoznaju vezano antitelo na ciljnoj ćeliji i sledstveno izazivaju fagocitozu ciljne ćelije, označava se kao antitelo-zavisna ćelijski- posredovana fagocitoza (ADCP). Pored toga, preklapajući položaj na Fc regionu molekula, takođe, kontroliše aktivaciju ćelijski-nezavisne citotoksične funkcije, posredovane komplementom, koja je, inače poznata kao komplement-zavisna citotoksičnost (CDC).
U slučaju IgG klase antitela, ADCC-om i ADCP-om se upravlja putem zaposedanja Fc regiona sa familijom receptora, koji se označavaju kao Fcg receptori (FcgR-i). Kod ljudi, ova familija proteina uključuje: FcgRI (CD64); FcgRII (CD32), uključujući izoforme FcgRIIA, FcgRIIB i FcgRIIC; i FcgRIII (CD16), uključujući izoforme FcgRIIIA i FcgRIIIB (Raghavan i Bjorkman, Annu. Rev. Cell Dev. Biol.12 (1996) 181-220; Abes, et al., Expert Reviews VOL 5(6), (2009) 735-747). FcyR-i se ekspresuju na brojnim imunim ćelijama, a obrazovanje kompleksa Fc/FcgR povlači ove ćelije na položaje vezanog antigena, što obično dovodi do signalizacije i sledstvenih imunih odgovora, kao što je: oslobađanje medijatora zapaljenja, aktivacija B-ćelija, endocitoza, fagocitoza i citotoksični napad. Pored toga, dok su FcgRI, Fc-gRIIA/c i FcgRIIIA aktivacijski receptori, koji su karakterisani posredstvom intracelularnog imunoreceptorskog aktivacijskog motiva na bazi tirozina (ITAM), FcgRIIB poseduje inhibicioni motiv (ITIM), te je, sledstveno tome inhibitorni receptor. Pored toga, u de Reys, et al., Blood, 81, (1993) 1792-1800, zaključeno je da se aktivacija i agregacija trombocita, koju indukuju monoklonska antitela, poput, primera radi, CD9, pokreće prepoznavanjem antigena, koje sledi korak zavisan od Fc domena, koji uključuje FcgRII-receptor (vidi, takođe: Taylor, et al., Blood 96 (2000) 4254-4260). Dok se FcgRI vezuje sa monomernim IgG sa visokim afinitetom, FcgRIII i FcgRII su receptori slabog afiniteta, koji ulaze u interakciju sa IgG u formi kompleksa ili agregata.
Inflamatorna kaskada komplementa je deo urođenog imunog odgovora i od ključnog je značaja za sposobnost pojedinca da se suprotstavi infekcijama. Drugi značajni Fc ligand je C1q protein komplementa. Vezivanje Fc za C1q je posrednik u procesu, koji se naziva komplementzavisna citotoksičnost (CDC). C1q može da se vezuje sa šest antitela, premda je vezivanje sa dva molekula IgG dovoljno za aktivaciju kaskade komplementa. C1q obrazuje kompleks sa Clr i Cls serin proteazama da bi se formirao kompleks C1 na putu komplementa.
U mnogim okolnostima je vezivanje i stimulacija efektorskih funkcija, posredovana Fc regionom imunoglobulina, veoma povoljno, npr., u slučaju CD20 antitela, međutim, u određenim situacijama, može biti mnogo povoljnije da se smanji ili čak da se eliminiše efektorska funkcija. Ovo je posebno činjenica u slučaju antitela koja su dizajnirana za oslobađanje leka (npr., toksina i izotopa) u ciljanu ćeliju, gde Fc/FcgR posredovane efektorske funkcije dovode zdrave imune ćelije u blizinu ubojitog punjenja, dovodeći do pražnjenja normalnog limfoidnog tkiva zajedno sa ciljnim ćelijama (Hutchins, et al., PNAS USA 92 (1995) 11980-11984; White, et al., Annu Rev Med 52 (2001) 125-145). U ovim slučajevima bi korišćenje antitela, koja u maloj meri povlače komplement ili efektorske ćelijem bilo od ogromne koristi (vidi, takođe, Wu, et al., Cell Immunol 200 (2000) 16-26; Shields, et al., J. Biol Chem 276(9) (2001) 6591-6604; US 6,194,551; US 5,885,573 i PCT publication WO 04/029207).
U ostalim slučajevima, na primer, kada je cilj blokiranje interakcije u velikoj meri ekspresovanog receptora sa njegovim srodnim ligandom, od posebne koristi bi bilo da se smanje ili eliminišu sve efektorske funkcije antitela, da bi se smanjila neželjena toksičnost. Isto tako, u slučaju kada je terapeutsko antitelo ispoljavalo slobodno vezivanje za brojna humana tkiva, bilo bi razumljivo da se ograniči ciljno delovanje efektorske funkcije na različite grupe tkiva, kako bi se ograničila toksičnost. Na kraju, ali ne kao najmanje važno, trebalo bi istaći da bi smanjeni afinitet antitela za FcgRII receptor posebno bio pogodan za antitela koja indukuju aktivaciju i agregaciju trombocita preko vezivanja za FcgRII receptor, što bi predstavljalo ozbiljan sporedni efekat takvih antitela.
Premda postoje određene podklase humanih imunoglobulina koji ne poseduju
specifične efektorske funkcije, nema poznatih imunoglobulina koji postoje u prirodi i koji su bez svih efektorskih funkcija. Alternativni pristup bi bio podvrgavanje inženjeringu ili mutacijama kritičnih ostataka u Fc regionu, koji su odgovorni za efektorsku funkciju. Za primere, pogledajte PCT publications WO 2009/100309 (Medimmune), WO 2006/076594 (Xencor), WO 1999/58572 (Univ. Cambridge), US 2006/0134709 (Macrogenics), WO 2006/047350 (Xencor), WO 2006/053301 (Xencor), US 6,737,056 (Genentech), US 5,624,821 (Scotgen Pharmaceuticals) i US 2010/0166740 (Roche).
Vezivanje IgG za aktivirajuće i inhibitorne Fcg receptore ili prvu komponentu komplementa (C1q) zavisi od ostataka koji su locirani u zglobnom regionu i CH2 domenu. Dva regiona CH2 domena su presudna za vezivanje za FcgR-e i C1q komplement, i poseduju jedinstvene sekvence. Supstitucija ostataka humanih IgG1 i IgG2 na pozicijama 233-236 i ostataka IgG4 na pozicijama 327, 330 i 331, u velikoj meri je redukovala ADCC i CDC (Armour, et al., Eur. J. Immunol.29(8) (1999) 2613-2624; Shields, et al., J. Biol. Chem.276(9) (2001) 6591-6604). Idusogie i saradnici u J. Immunol 166 (2000) 2571-2575 su mapirali vezujući položaj C1q za rituksan i pokazali su da je Pro329Ala redukovao sposobnost rituksimaba da se vezuje za C1q i aktivira komplement. Prikazano je da supstitucija Pro329 sa Ala dovodi do smanjenog vezivanja za FcgRI, FcgRII i FcgRIIIA receptore (Shields, et al., J. Biol. Chem.276(9) (2001) 6591-6604), ali je, isto tako, ova mutacija opisana kao mutacija koja ispoljava vezivanje, nalik divljem tipu, za FcgRI i FcgRII i samo veoma neznatno smanjenje vezivanja za FcgRIIIA receptor (Tabela 1 i Tabela 2 u EP 1068241, Genentech). US2008/0274105A, takođe, opisuje P329A mutaciju Fc.
Oganesyan i saradnici u Acta Cristallographica D64 (2008) 700-704, uveli su trostruku mutaciju L234F/L235E/P331S u niži zglob i C2H domen i pokazali su smanjenje aktivnosti vezivanja molekula humanog IgG1 za humani C1q receptor, FcgRI, FcgRII i FcgRIIIA.
Pored toga, postoji nezadovoljena potreba za antitelima sa izrazito smanjenom ADCC i/ili ADCP i/ili CDC. Sledstveno tome, cilj tekućeg pronalaska je bio da se identifikuju takva antitela. S iznenađenjem je otkriveno da je mutacija ostatka prolina na Pro329 u glicin dovela do neočekivano jake inhibicije FcgRIIIA i FcgRIIA receptora i snažne inhibicije ADCC i CDC. Pored toga, kombinovana mutacija Pro329 i, primera radi, L234A i L235A (LALA) dovodi do neočekivano jake inibicije C1q, FcgRI, FcgRII i FcgRIIIA. Sledstveno tome, izgleda da je glicinski ostatak neočekivano superioran u odnosu na ostale aminokiselinske supstitucije, poput, na primer, alanina, na poziciji 329 u razaranju prolinskog sendviča u kontaktnom delu Fc/Fcg receptor.
Opis slika
Slika 1
Vezujući afiniteti različitih FcgR-a prema imunoglobulina izmereni su posredstvom površinske plazmon rezonance (SPR), uz korišćenje instrumenta Biacore T100 (GE Healthcare), na 25°C.
a) afinitet vezivanja za FcgRI testiran je za varijante antitela GA101 (GA) (IgG1-P329G, IgG4-SPLE i IgG1-LALA mutacija) i za P-selektin (PS) varijante antitela (IgG1-P329G, IgG1-LALA i IgG4-SPLE), kao i za antitela divljeg tipa.
b) afinitet vezivanja za FcgRI testiran je za varijante antitela CD9 (IgG1-divljeg tipa, IgG1-P329G, IgG1-LALA, IgG4-SPLE, IgG1-P329G / LALA, IgG4-SPLE / P329G), kao i za antitela divljeg tipa.
c) afinitet vezivanja za FcgRIIA(R131) testiran je za varijante antitela CD9 (IgG1-divljeg tipa, IgG1-P329G, IgG1-LALA, IgG4-SPLE, IgG1-P329G/LALA, IgG4-SPLE / P329G), kao i za antitela divljeg tipa. Normalizovani odgovor je prikazan u funkciji koncentracije receptora.
d) afinitet vezivanja za FcyRIIB testiran je za varijante antitela CD9 (ovde pod nazivom "TA") (IgG1-divljeg tipa, IgG4-SPLE /P329G, IgG1-LALA, IgG1-LALA / P329G) i P-selektin (pSel) varijante antitela (IgG4-divljeg tipa, IgG4-SPLE), kao i za antitela divljeg tipa.
e) afinitet vezivanja za FcgPIIIA-V158 testiran je za varijante antitela CD9 (IgG1-divljeg tipa, IgG4-SPLE, IgG1-LALA, IgG4-SPLE / P329G, IgGI-P329G, IgG1-LALA / P329G), kao i za antitela divljeg tipa. Normalizovani odgovor je prikazan kao funkcija koncentracije receptora.
Slika 2
Vezivanje za C1q je testirano za P-selektin (PS) varijante antitela (IgG1 divljeg tipa, P329G, IgG4-SPLE) i varijante antitela CD20 (GA) (IgG1-divljeg tipa, P329G i IgG4-SPLE).
Slika 3
Potencijal za povlačenje imuno-efektorskih ćelija zavisi od tipa Fc varijanti. Fc varijantama je obložena ELISA ploča i dodate su humane NK92 efektorske ćelije, transfektovane sa humanim FcyRIIIA. Indukcija citolitičke aktivnosti aktiviranih NK ćelija je izmerena korišćenjem esteraza testa.
a) analizirane su varijante antitela CD20 (GA101) (divlji tip, LALA, P329G, P329G / LALA). b) analizirane su varijante antitela CD20 (GA101) (uvedene P329R ili P329G mutacije).
Sve varijante su proizvedene u verziji podvrgnutoj gliko-inženjeringu, da bi se postigao snažniji signal za bilo koju efektorsku funkciju povučenih ćelija.
Slika 4
Potencijal za regrutovanje imuno-efektorskih ćelija zavisi od tipa Fc varijanti, kako je izmereno uz pomoć klasičnog ADCC testa. Humani ćelijski niz NK92, transfektovan sa humanim FgcRIIIA, korišćen je u vidu efektorskih ćelija, a CD20 pozitivne Raji ćelije su korišćene kao ciljne ćelije. Testirane su različite varijante CD20 antitela, podvrgnutih gliko- inženjeringu (GA101 G(2) i varijante CD20 antitela, koje nisu podvrgnute gliko-inženjeringu (GA101) (uvedene P329G, P329A ili LALA mutacije).
a) CD20 antitelo koje nije podvrgnuto gliko-inženjeringu : P329G, LALA, odnosno P329G/LALA mutacije, uvedene su, redom, u antitelo.
b) CD20 antitelo koje je podvrgnuto gliko-inženjeringu: P329G, P329A, odnosno LALA mutacije, uvedene su, redom, u antitelo.
Slika 5
Test komplement zavisne citotoksičnosti (CDC). Različite Fc varijante CD20 (GA101) antitela, koje nisu podvrgnute gliko-inženjeringu i koje jesu podvrgnute gliko-inženjeringu, analizirane su na njihovu efikasnost da posreduju u CDC na SUDH-L4 ciljnim ćelijama.
a) CD20 antitelo koje nije podvrgnuto gliko-inženjeringu: P329G, LALA, odnosno P329G/LALA mutacije, uvedene su, redom, u antitelo.
b) CD20 antitelo, koje je podvrgnuto gliko-inženjeringu: P329G, P329A, odnosno LALA mutacije, uvedene su, redom, u antitelo.
Slika 6
a) Profil ugljenih hidrata Fc-udruženih glikana varijanti humanih IgG1. Procenat galaktozilacije Fc-udruženih oligosaharida hIgG1, koji sadrže LALA, P329G, P329A ili P329G / LALA mutacije razlikuje se samo minimalno od onog za antitelo divljeg tipa.
b) Relativna galaktozilacija: Četiri različita IgG-a sa uvedenim IgG1 P329G / LALA mutacijama. Upoređene su količine galaktozilacije četiri različita V-domena kada se ekspresuju u Hek293 EBNA ćelijama.
Slika 7
Agregacija trombocita, indukovana antitelima, u testu u punoj krvi. Agregacija trombocita indukovana mišjim IgG1, kako je utvrđeno za dva donora koji se razlikuju po svojim odgovorima u zavisnosti od koncentracije antitela.
a) Donor A, b) Donor B.
Detaljni opis pronalaska
Definicije
U tekućoj specifikaciji i patentnim zahtevima, numeracija ostataka u teškom lancu imunoglobulina je numeracija iz EU indeksa, kao u Kabat, et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991). Izraz "EU indeks kao u Kabatu" odnosi se na brojčano označavanje ostataka humanog IgG1 EU antitela.
"Afinitet" se odnosi na jačinu zbira svih ne-kovalentnih interakcija između pojedinačnog vezujućeg položaja molekula (npr., antitela) i njegovog vezujućeg partnera (npr., antigena ili Fc receptora). Ukoliko nije drugačije naznačeno, izraz "afinitet vezivanja", kako je ovde korišćen, odnosi se na unutrašnji afinitet vezivanja koji odražava interakciju u odnosu 1:1 između članova vezujućeg para (npr., antitelo/Fc receptor ili antitelo i antigen). Afinitet molekula X za njegovog partnera Y uopšteno se može predstaviti posredstvom konstante disocijacije (Kd). Afinitet se može utvrditi putem postupaka, poznatih u struci, uključujući postupke koji su ovde opisani. Specifična ilustrativna i primerna ostvarenja za utvrđivanje vezujućeg afiniteta opisana su u nastavku.
Antitelo "zrelog afiniteta" odnosi se na antitelo sa jednom ili više izmena u jednom ili više hipervarijabilnih regiona (HVR-i), u poređenju sa matičnim antitelom, koje ne poseduje takve izmene, kao što su izmene koje dovode do poboljšanja afiniteta antitela za antigen.
"Aminokiselinska modifikacija" se odnosi na izmenu u aminokiselinskoj sekvenci prethodno-utvrđene sekvence aminokiselina. Primeri modifikacija uključuju: supstituciju, umetanje i/ili deleciju aminokiselina. Poželjna aminokiselinska modifikacija ovde je supstitucija. "Aminokiselinska modifikacija na" specifikovanoj poziciji, npr., Fc regiona, odnosi se na supstituciju ili deleciju specifično naznačenog ostatka, ili na umetanje najmanje jednog aminokiselinskog ostatka, u susedstvu specifično naznačenog ostatka. Pod umetanjem "susednog" specifično naznačenog ostatka misli se na umetanje u okviru jednog do dva njihova ostatka. Umetanje može biti N-terminalno ili C-terminalno u odnosu na specifično naznačeni ostatak.
"Aminokiselinska supstitucija" se odnosi na zamenu najmanje jednog postojećeg aminokiselinskog ostatka u prethodno-utvrđenoj sekvenci aminokiselina sa drugim različitim "zamenskim" aminokiselinskim ostatkom. Zamenski ostatak ili ostaci mogu biti "aminokiselinski ostaci koji postoje u prirodi" (t.j., koji su kodirani genetskim kodom) i koji su odabrani iz grupe koju sačinjavaju: alanin (Ala); arginin (Arg); asparagin (Asn); asparaginska kiselina (Asp); cistein (Cys); glutamin (Gln); glutaminska kiselina (Glu); glicin (Gly); histidin (His); izoleucin (Ile): leucin (Leu); lizin (Lys); metionin (Met); fenilalanin (Phe); prolin (Pro); serin (Ser); treonin (Thr); triptofan (Trp); tirozin (Tyr) i valin (Val). Poželjno, zamenski ostatak nije cistein. Supstitucija sa jednim ili više aminokiselinskih ostataka koji ne postoje u prirodi, takođe je obuhvaćena definicijom aminokiselinske supstitucije ovde. "Aminokiselinski ostatak koji ne postoji u prirodi" odnosi se na ostatak, koji se razlikuje od prethodno navedenih aminokiselinskih ostataka koji postoje u prirodi, i koji se može kovalentno vezati sa susednim aminokiselinskim ostatkom(ostacima) u polipeptidnom lancu. Primeri aminokiselinskih ostataka koji ne postoje u prirodi uključuju: norleucin, ornitin, norvalin, homoserin i ostale analoge aminokiselinskih ostataka, kao što su oni koji su opisani u Ellman, et al., Meth. Enzym. 202 (1991) 301-336. Da bi se proizveli takvi aminokiselinski ostaci koji ne postoje u prirodi, mogu biti korišćene procedure Norena i saradnika u Science 244 (1989) 182 i Ellmana i saradnika, supra. Ukratko, ove procedure uključuju hemijskiaktivirajuću supresorsku tRNK sa aminokiselinskim ostatkom koji ne postoji u prirodi, nakon čega je sledila in vitro transkripcija i translacija RNK.
"Umetanje aminokiselina" se odnosi na uključivanje najmanje jedne aminokiseline u prethodno-utvrđenu aminokiselinsku sekvencu. Dok će umetanje aminokiselina uglavnom obuhvatati umetanje jednog ili dva aminokiselinska ostatka, u ovoj prijavi su razmotrena veća "peptidna umetanja", npr., umetanje od oko tri do oko pet ili čak do približno deset aminokiselinskih ostataka. Umetnuti ostatak(ostaci) može biti ostatak koji postoji u prirodi ili ostatak koji ne postoji u prirodi, kako je prethodno izloženo.
"Delecija aminokiselina" se odnosi na odstranjivanje najmanje jednog aminokiselinskog ostatka iz prethodno-utvrđene aminokiselinske sekvence.
Naziv "antitelo" ovde je korišćen u najširem smislu, i obuhvata razne strukture antitela, uključujući, ali bez ograničavanja na njih, monoklonska antitela, poliklonska antitela, multispecifična antitela (npr., bispecifična antitela) i fragmente antitela, sve dok oni ispoljavaju željenu aktivnost vezivanja antigena.
Naziv "varijanta antitela", kako je ovde korišćen, odnosi se na varijantu antitela divljeg tipa, koja je karakterisana time što se izmena u aminokiselinskoj sekvenci u odnosu na antitelo divljeg tipa, dešava u varijanti antitela, pri čemu je, npr., izmena uvedena putem mutacije specifičnog aminokiselinskog ostatka u antitelu divljeg tipa.
Izraz "efektorska funkcija(funkcije) antitela" ili "efektorska funkcija", kako je ovde korišćen, odnosi se na funkciju koja se pripisuje Fc efektorskom domenu(domenima) molekula IgG (npr., Fc region imunoglobulina). Takva funkcija se može, primera radi, ostvariti vezivanjem Fc efektorskog domena ili više domena za Fc receptor na imunoj ćeliji sa fagocitnom ili litičkom aktivnošću ili vezivanjem Fc efektorskog domena ili više domena za komponente sistema komplementa. Uobičajene efektorske funkcije su: ADCC, ADCP i CDC.
"Fragment antitela" se odnosi na molekul, koji se razlikuje od intaktnog antitela, i koji sadrži deo intaktnog antitela koji se vezuje sa antigenom za koji se vezuje intaktno antitelo. Primeri fragmenata antitela uključuju, ali ne ograničavajući se na njih, Fv, Fab, Fab’, Fab’-SH,<F(ab’)>2; diatela; linearna antitela; jedno-lančane molekule antitela (npr., scFv); i multispecifična antitela, obrazovana od fragmenata antitela.
"Antitelo koje se vezuje za isti epitop" kao referentno antitelo, odnosi se na antitelo koje blokira vezivanje referentnog antitela za njegov antigen u kompetitivnom testu za 50% ili više, i obrnuto, referentno antitelo blokira vezivanje antitela za njegov antigen u kompetitivnom testu za 50% ili više. Ovde je dat primer kompetitivnog testa.
"Antitelo-zavisna ćelijski-posredovana citotoksičnost" i "ADCC" odnose se na ćelijskiposredovanu reakciju u kojoj ne-specifične citotoksične ćelije koje ekspresuju FcR-e (npr., ćelije prirodne ubice (NK), neutrofili i makrofagi) prepoznaju vezano antitelo na ciljnoj ćeliji i nakon toga izazivaju lizu ciljne ćelije. Primarne ćelije za posredovanje u ADCC, NK ćelije, ekspresuju samo FcgRIII, dok monociti ekspresuju FcgRI, FcgRII i FcgRIII. Ekspresija FcR na hematopoetskim ćelijama sažeto je prikazana u Tabeli 3 na strani 464 u Ravetch i Kinet, Annu. Rev. Immunol 9 (1991) 457-492.
Nazivi "antitelo-zavisna ćelijska fagocitoza" i "ADCP" odnose se na proces posredstvom koga se ćelije, prekrivene antitelom, internalizuju, ili u celini ili delom, fagocitnim imunim ćelijama (npr., makrofagi, neutrofil i dendritične ćelije), koje se vezuju sa Fc regionom imunoglobulina.
Naziv "vezujući domen" odnosi se na region polipeptida koji se vezuje sa drugim molekulom. U slučaju FcR, vezujući domen može sadržavati deo njegovog polipeptidnog lanca (npr., njegov a lanac), koji je odgovoran za vezivanje za Fc region. Jedan koristan vezujući domen je ekstracelularni domen a lanca FcR.
Izraz "vezivanje" za Fc receptor, koji je ovde korišćen, označava vezivanje antitela za Fc receptor u, primera radi, BIAcore(R) testu (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Švedska).
U BIAcore(R) testu, Fc receptor se vezuje za površinu, a vezivanje varijante, npr., varijante antitela u koju su uvedene mutacije, meri se posredstvom rezonance površinskih plazmona (SPR). Afinitet vezivanja se definiše pomoću konstanti ka (konstanta brzine za asocijaciju antitela iz kompleksa antitelo/Fc receptor), kd (konstanta disocijacije) i KD (kd/ka). Alternativno, vezujući signal SPR senzograma može biti direktno upoređen sa signalom odgovora referentnog uzorka, u odnosu na visinu rezonantnog signala i karakteristike disocijacije.
"C1q" je polipeptid koji uključuje vezujući položaj za Fc region imunoglobulina. C1q, zajedno sa dve serin proteaze, C1r i C1s, obrazuje kompleks C1, koji je prva komponenta na putu komplement-zavisne citotoksičnosti (CDC). Humani C1q može biti nabavljen iz komercijalnih izvora, od, npr., Quidel, San Diego, Kalifornija.
"CH2 domen" Fc regiona humanog IgG (označen, takođe, kao "Cg2" domen), uglavnom se proteže od približno aminokiseline 231 do približno aminokiseline 340. CH2 domen je jedinstven po tome što nije blisko sparen sa drugim domenom. Pre bi se moglo reći da se dva N-vezana razgranata lanca ugljenih hidrata umeću između dva CH2 domena intaktnog nativnog molekula IgG. Spekuliše se da bi ugljeno-hidratni deo mogao obezbediti zamenu za domendomen sparivanje i pomoći u stabilizaciji CH2 domena (Burton, Molec. Immunol.22 (1985) 161-206).
"CH3 domen" sadrži raspon od C-terminalnih ostataka do CH2 domena u Fc regionu (t.j., od približno 341. aminokiseline do približno 447. aminokiseline molekula IgG).
Nazivi "rak" i "kancerozno" odnose se na ili opisuju fiziološko stanje kod sisara, koje je obično karakterisano neregulisanim ćelijskim rastom. Primeri malignih bolesti uključuju, ali ne ograničavajući se na njih, karcinom, limfom, blastom, sarkom i leukemiju. Određeniji primeri malignih bolesti uključuju: rak skvamoznih ćelija, sitno-ćelijski rak pluća, ne-sitno-ćelijski rak pluća, adenokarcinom pluća, skvamozni karcinom pluća, rak peritoneuma, hepatocelularni kancer, gastrointestinalni kancer, rak pankreasa, glioblastom, rak cerviksa, rak jajnika, rak jetre, rak mokraćne bešike, hepatom, rak dojke, rak debelog creva, kolorektalni kancer, karcinom endometrijuma ili uterusa, karcinom pljuvačne žlezde, rak bubrega, kancer jetre, rak prostate, rak vulve, rak štitne žlezde, hepatični karcinom i razne vrste kancera glave i vrata.
Kako su ovde korišćeni, izrazi "ćelija", "ćelijski niz" i "ćelijska kultura", upotrebljavani su kao zamena jedan drugome, a sve te oznake uključuju i proistekle ćelije potomke. Sledstveno tome, reči "transformanti" i "transformisane ćelije" uključuju primarnu subjektnu ćeliju i kulture, koje su iz nje dobijene, bez obzira na broj prenosa. Podrazumeva se, takođe, da sve proistekle ćelije potomci ne moraju biti u potpunosti identične po sadržaju DNK, zbog namernih ili nenamernih mutacija. Uključeni su potomci mutanti, koji imaju istu funkciju ili biološku aktivnost kao ispitivane, originalno transformisane ćelije. Kada se nameravaju postići drugačije karakteristike, to će biti jasno iz konteksta.
Naziv "himerično" antitelo odnosi se na antitelo u kome je deo teškog i/ili lakog lanca dobijen iz određenog izvora ili speciesa, dok je preostali deo teškog i/ili lakog lanca dobijen iz različitog izvora ili speciesa.
"Klasa" antitela se odnosi na tip konstantnog domena ili konstantnog regiona, koje poseduje teški lanac antitela. Postoji pet glavnih klasa antitela: IgA, IgD, IgE, IgG i IgM, a<nekoliko>njih može biti dalje podeljeno na podklase (izotipove), npr., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 i IgA2.Konstantni domeni teških lanaca, koji odgovaraju različitim klasama imunoglobulinaoznačavajuse sa a, d, e, g, odnosno µ.
Izraz "citotoksično sredstvo", kako je ovde korišćen, odnosi se na supstancu koja inhibira ili sprečava ćelijsku funkciju i/ili izaziva smrt ili razaranje ćelije. Citotoksična sredstva uključuju, ali bez ograničavanja na njih, radioaktivne izotope (npr., At<211>, I<131>, I<125>, Y<90>, Re<186>, Re<188>, Sm<153>, Bi<212>, P<32>, Pb<212>i radioktivne izotope Lu); hemoterapeutska sredstva ili lekove (npr., metotreksat, adriamicin, vinka alkaloide (vinkristin, vinblastin, etopozid), doksorubicin, melfalan, mitomicin C, hlorambucil, daunorubicin ili druga interkalacijska sredstva); sredstva koja su inhibitori rasta; enzime i njihove fragmente, kao što su nukleolitički enzimi; antibiotike; toksine, kao što su toksini malih molekula ili enzimski aktivni toksini bakterijskog, gljivičnog, biljnog ili životinjskog porekla, uključujući njihove fragmente i/ili varijante, i razna antiitumorska ili antikancerska sredstva, koja su izložena u nastavku.
Izraz "komplement-zavisna citotoksičnost" ili CDC odnosi se na mehanizam za indukciju ćelijske smrti, u kome Fc efektorski domen(domeni) antitela, vezanog za ciljnu ćeliju, aktivira serije enzimskih reakcija, koje kulminiraju formiranjem šupljina u membrani ciljnih ćelija. Uobičajeno, kompleksi antigen-antitelo, kao što su kompleksi na antitelom obloženim ciljnim ćelijama, vezuju i aktiviraju komponentu komplementa C1q, koja onda aktivira kaskadu komplementa, što dovodi do uništavanja ciljne ćelije. Aktivacija komplementa može, takođe, dovesti do deponovanja komponenti komplementa na površini ciljnih ćelija, čime se olakšava ADCC, vezivanjem za receptore komplementa (npr., CR3) na leukocitima.
"Poremećaj" je bilo koje stanje koje bi imalo koristi od tretmana sa polipeptidom, kao što su antitela koja sadrže Fc varijantu. Ovaj izraz uključuje hronične i akutne poremećaje ili bolesti, uključujući ona patološka stanja, koja sisara čine predisponiranim za poremećaj koji je u pitanju. U jednom ostvarenju, poremećaj je rak.
"Efektorske funkcije" se odnose na biološke aktivnosti, koje se mogu pripisati Fc regionu antitela, a koje se razlikuju prema izotipu antitela. Primeri efektorskih funkcija antitela uključuju: vezivanje C1q i komplement-zavisnu citotoksičnost (CDC); vezivanje Fc receptora; antitelo-zavisnu ćelijski-posredovanu citotoksičnost (ADCC); fagocitozu (ADCP); nishodnu regulaciju receptora na površini ćelija (npr., B-ćelijski receptor); i aktivaciju B-ćelija.
"Smanjena efektorska funkcija", kako je ovde korišćena, odnosi se na redukciju specifične efektorske funkcije, kao što je, na primer ADCC ili CDC, u poređenju sa kontrolom (na primer, polipeptidom sa Fc regionom divljeg tipa), za najmanje 20%, a "izrazito smanjena efektorska funkcija", kako je ovde korišćena, odnosi se na na redukciju specifične efektorske funkcije, kao što je, na primer ADCC ili CDC, u poređenju sa kontrolom za najmanje 50%.
"Efektivna količina" sredstva, npr., farmaceutske formulacije, odnosi se na količinu, koja je efektivna u potrebnim dozažama i tokom neophodnog vremenskog trajanja, u postizavanju željenog terapeutskog ili profilaktičkog rezultata.
Naziv "Fc region" ovde je korišćen da bi se definisao C-terminalni region teškog lanca imunoglobulina, koji sadrži barem deo konstantnog regiona. Naziv uključuje Fc regione nativne sekvence i Fc regione varijante. U jednom ostvarenju, Fc region teškog lanca humanog IgG proteže se od Cys226, ili od Pro230, do karboksil-terminusa teškog lanca. Međutim, C- terminalni lizin (Lys447) u Fc regionu može, ali ne mora biti prisutan. Ukoliko ovde nije drugačije specifično naznačeno, numerisanje aminokiselinskih ostataka u Fc regionu ili konstantnom regionu je u skladu sa EU sistemom brojčanog označavanja, koji se, takođe, označava kao EU indeks, kako je opisan u Kabat, et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5<th>Ed. Public HealthService, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991).
"Fc region varijante" sadrži aminokiselinsku sekvencu, koja se razlikuje od one u Fc regionu "nativne" sekvence ili sekvence "divljeg tipa", preko najmanje jedne "aminokiselinske modifikacije", kako je ovde definisana. Poželjno, Fc region varijante ima najmanje jednu aminokiselinsku supstituciju u poređenju sa Fc regionom nativne sekvence ili sa Fc regionom matičnog polipeptida, npr., od oko jedne do oko deset aminokiselinskih supstitucija, a poželjno od oko jedne do oko pet supstitucija aminokiselina u Fc regionu nativne sekvence ili u Fc regionu matičnog polipeptida. Fc region varijante ovde će poželjno posedovati najmanje oko 80% homologije sa Fc regionom nativne sekvence i/ili sa Fc regionom matičnog polipeptida, najpoželjnije najmanje oko 90% homologije sa njima, a još poželjnije posedovaće najmanje oko 95% homologije sa navedenim sekvencama.
Naziv "Fc-varijanta", kako je ovde korišćen, odnosi se na polipeptid koji sadrži modifikaciju u Fc domenu. Fc varijante tekućeg pronalaska se definišu u skladu sa aminokiselinskim modifikacijama koje ih sačinjavaju. Sledstveno tome, na primer, P329G je Fc varijanta sa supstitucijom prolina sa glicinom na poziciji 329 u odnosu na Fc matičnog polipeptida, pri čemu je numerisanje u skladu sa EU indeksom. Identitet aminokiseline divljeg tipa može biti ne-specifikovan, u kom slučaju se prethodno-pomenuta varijanta označava kao P329G. Za sve pozicije, koje su razmotrene u ovom pronalasku, numerisanje je u skladu sa EU indeksom. EU indeks ili EU indeks kao u Kabatu ili EU šema numerisanja odnosi se na brojčano označavanje EU antitela (Edelman, et al., Proc Natl Acad Sci USA 63 (1969) 78-85.) Modifikacija može biti: adicija, delecija ili supstitucija. Supstitucije mogu uključiti aminokiseline koje postoje u prirodi i aminokiseline koje ne postoje u prirodi. Varijante mogu sadržavati aminokiseline koje ne postoje u prirodi. Primeri obuhvataju: U.S. Pat. No. 6,586,207; WO 98/48032; WO 03/073238; US 2004/0214988 A1; WO 05/35727 A2; WO 05/74524 A2; Chin,
J.W., et al., Journal of the American Chemical Society 124 (2002) 9026-9027; Chin, J.W., i Schultz, P.G., ChemBioChem 11 (2002) 1135-1137; Chin, J.W., et al., PICAS United States of America 99 (2002) 11020-11024; i Wang, L., i Schultz, P.G., Chem. (2002) 1-10.
Naziv "polipeptid koji sadrži Fc region" odnosi se na polipeptid, kao što je antitelo ili imunoadhezin (vidi definicije u nastavku), koji sadrže Fc region.
Nazivi "Fc receptor" ili "FcR" korišćeni su da bi opisali receptor, koji se vezuje sa Fc regionom antitela. Poželjni FcR je FcR nativne humane sekvence. Pored toga, poželjni FcR je onaj koji se vezuje sa IgG antitelom (gama receptor), a uključuje receptore FcgRI, FcgRII i FcgRIII subklasa, uključujući alelske varijante i, alternativno, upletene oblike ovih receptora. FcgRII receptori uključuju FcgRIIA ("aktivacijski receptor") i FcgRIIB ("inhibirajući receptor"), koji imaju slične aminokiselinske sekvence, koje se prvenstveno razlikuju u njihovim citoplazmatskim domenima. Aktivacijski receptor FcgRIIA sadrži aktivacijski motiv imunoreceptora na bazi tirozina (ITAM) u njegovom citoplazmatskom domenu. Inhibirajući receptor FcgRIIB sadrži inhibirajući motiv imunoreceptora na bazi tirozina (ITIM) u njegovom citoplazmatskom domenu. (vidi prikaz u Daëron, M., Annu. Rev. Immunol.15 (1997) 203-234). FcR-i su prikazani u: Ravetch, i Kinet, Annu. Rev. Immunol 9 (1991) 457-492; Capel, et al.,
Immunomethods 4 (1994) 25-34; i de Haas, et al., J. Lab. Clin. Med.126 (1995) 330-41. Ostali FcR-i, uključujući i one koji će biti identifikovani u budućnosti, obuhvaćeni su, ovde, pod nazivom "FcR". Naziv, takođe, uključuje neonatalni receptor, FcRn, koji je odgovoran za prenos maternalnih IgG u fetus (Guyer, et al., J. Immunol.117 (1976) 587 i Kim, et al., J. Immunol.24 (1994) 249).
Pod "IgG Fc ligandom", kako je ovde korišćen, misli se na molekul, poželjno polipeptid, iz bilo kog organizma, koji se vezuje sa Fc regionom IgG antitela, da bi se formirao kompleks Fc/Fc ligand. Fc ligandi uključuju, ali ne ograničavajući se na njih, FcgR-e, FcgR-e, FcgR-e, FcRn, C1q, C3, manan vezujući lektin, manoza receptor, stafilokokni protein A, streptokokni protein G i virusni FcgR. Fc ligandi uključuju, takođe, homologe Fc receptora (FcRH), koji pripadaju familiji Fc receptora koja je homologna sa FcgR-ima (Davis, et al., Immunological Reviews 190 (2002) 123-136). Fc ligandi mogu uključiti ne-otkrivene molekule koji se vezuju sa Fc. Posebni IgG Fc ligandi su FcRn i Fc gama receptori. Pod "Fc ligandom", kako je ovde korišćen, misli se na molekul, poželjno polipeptid, iz bilo kog organizma koji se vezuje sa Fc regionom antitela, da bi se obrazovao kompleks Fc/Fc ligand.
Pod nazivima "Fc gama receptor", "FcgR" ili "FcgamaR", kako su ovde korišćeni, misli se na bilo kog člana familije proteina koji se vezuje sa Fc regionom IgG antitela, a kodiran je od strane FcgR gena. Kod ljudi, ova familija obuhvata, ali ne ograničavajući se na njih, FcgRI (CD64), uključujući izoforme FcgRIA, FcgRIB i FcgRIC; FcgRII (CD32), uključujući izoforme FcgRIIA (uključujući alotipove H131 i R131), FcgRIIB (uključujući FcgRIIB-1 i FcgRIIB-2) i FcgRIIc; i FcgRIII (CD16), uključujući izoforme FcgRIIIA (uključujući alotipove V158 i F158) i FcgRIIIb (uključujući alotipove FcgRIIB-NA1 i FcgRIIB-NA2) (Jefferis, et al., Immunol Lett 82 (2002) 57-65), kao i bilo koje neotkrivene humane FcgR-e ili izoforme ili alotipove FcgR. FcgR može biti iz bilo kog organizma, uključujući, ali bez ograničavanja na njih, ljude, miševe, pacove, zečeve i majmune. Mišji FcgR-i uključuju, ali ne ograničavajući se njima, FcgRI (CD64), FcgRII (CD32), FcgRIII (CD16) i FcgRIII-2 (CD16-2), kao i bilo koje ne-otkrivene mišje FcgR-e ili izoforme ili alotipove FcgR.
Pod nazivima "FcRn" ili "neonatalni Fc receptor", kako su ovde korišćeni, misli se na protein koji se vezuje sa Fc regionom IgG antitela, a kodiran je, barem delom, od strane FcRn gena. FcRn može biti iz bilo kog organizma, uključujući, ali bez ograničavanja na njih, ljude, miševe, pacove, zečeve i majmune. Kako je u struci poznato, funkcionalni FcRn protein sadrži dva polipeptida, koji se obično označavaju kao teški lanac i laki lanac. Laki lanac je beta-2-mikroglobulin, a teški lanac je kodiran od strane FcRn gena. Ukoliko ovde nije drugačije navedeno, FcRn ili FcRn protein se odnosi na kompleks teškog lanca FcRn sa beta-2-mikroglobulinom.
Pod nazivom "polipeptid divljeg tipa ili matični polipeptid", kako je ovde korišćen, misli se na ne-modifikovani polipeptid, koji je kasnije modifikovan da bi se proizvela varijanta. Polipeptid divljeg tipa može biti polipeptid koji postoji u prirodi, ili varijanta polipeptida ili verzija u prirodi postojećeg polipeptida, koja je podvrgnuta inženjeringu. Polipeptid divljeg tipa se može odnositi na sam polipeptid, na kompozicije koje sadrže matični polipeptid, ili aminokiselinsku sekvencu koja ih kodira. Sledstveno tome, pod nazivom "imunoglobulin divljeg tipa", kako je ovde korišćen, misli se na nemodifikovani imunoglobulinski polipeptid, koji se podvrgava modifikacijama, da bi se proizvela varijanta, a pod nazivom "antitelo divljeg tipa", kako je ovde korišćen, misli se na nemodifikovano antitelo, koje se podvrgava modifikacijama, da bi se proizvela varijanta antitela. Trebalo bi naglasiti da "antitelo divljeg tipa" uključuje poznata, komercijalna, rekombinantno proizvedena antitela, kako su prikazana u nastavku.
Naziv "polipeptidni fragment koji može kristalisati (Fc)" je deo molekula antitela, koji ulazi u interakciju sa efektorskim molekulima i ćelijama. On sadrži C-terminalne delove teških lanaca imunoglobulina.
Naziv "okvirni region" ili "FR" odnosi se na ostatke varijabilnih domena koji se razlikuju od ostataka hipervarijabilnih regiona (HVR). FR varijabilnog domena se uopšteno sastoji od četiri FR domena: FR1, FR2, FR3 i FR4. Sledstveno tome, sekvence HVR i FR se, uopšteno, pojavljuju u sledećem redosledu u VH (ili VL): FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)- FR4.
Nazivi "antitelo pune dužine", "intaktno antitelo" i "puno antitelo", ovde su korišćeni kao zamena jedan drugome, a u odnosu na antitelo koje ima strukturu koja je suštinski slična strukturi nativnog antitela ili koje ima teške lance koji sadrže Fc region, kao što je ovde definisan.
"Funkcionalni Fc region" poseduje "efektorsku funkciju" Fc regiona nativne sekvence. Primeri "efektorskih funkcija" uključuju: vezivanje C1q; komplement-zavisnu citotoksičnost; vezivanje za Fc receptor; antitelo-zavisnu ćelijski-posredovanu citotoksičnost (ADCC); fagocitozu; nishodnu regulaciju receptora ćelijske površine (npr., B-ćelijskog receptora; BCR), itd.. Takve efektorske funkcije uopšteno zahtevaju da Fc region bude sjedinjen sa vezujućim domenom (npr., varijabilnim domenom antitela), a mogu se proceniti, na primer, korišćenjem raznih testova, kako je ovde prikazano.
"Zglobni region" se, uopšteno, definiše kao raspon koji se proteže od Glu216 do Pro230 humanog IgG1 (Burton, Molec. Immunol.22 (1985) 161-206). Zglobni regioni ostalih izotipova IgG mogu biti izravnati sa sekvencom IgG1, postavljanjem prvih i poslednjih cisteinskih ostataka koji obrazuju S-S veze između teških lanaca na iste pozicije.
"Niži zglobni region" Fc regiona se obično definiše kao niz ostataka, od onih u neposrednoj blizini C-terminalnog dela sve do ostataka zglobnog regiona, t.j., ostaci 233 do 239 Fc regiona.
"Homologija" se definiše kao procenat ostataka u varijanti aminokiselinske sekvence koji su identični, nakon izravnavanja sekvenci i uvođenja šupljina, ukoliko je to potrebno, da bi se postigao maksimalni procenat homologije. Postupci i kompjuterski programi za poravnavanje dobro su poznati u struci. Jedan takav kompjuterski program je "Align 2", autorizovan od strane Genentech, Inc., koji je prijavljen sa korisničkom dokumentacijom u United States Copyright Office, Washington, D.C.20559, 10. decembra, 1991.
Nazivi "domaćinska ćelija", "linija domaćinskih ćelija" i "kultura ćelija domaćina" koriste se kao zamena jedni drugima i odnose se na ćelije u koje se uvodi egzogena nukleinska kiselina, uključujući proistekle ćelije potomke takvih ćelija. Domaćinske ćelije uključuju "transformante" i "transformisane ćelije", koje obuhvataju primarnu transformisanu ćeliju i ćelije potomke, koje su iz nje proistekle, bez obzira na broj prenosa. Proistekle ćelije potomci ne moraju biti u potpunosti identične sa matičnom ćelijom po sadržaju nukleinske kiseline, budući da mogu sadržavati mutacije. Ovde su uključeni i potomci mutanti, koji imaju istu funkciju ili biološku aktivnost kao ispitivane ili odabrane, originalno transformisane ćelije.
"Humano antitelo" je antitelo koje poseduje aminokiselinsku sekvencu koja odgovara sekvenci antitela, koje je proizvedeno u humanom izvoru ili humanoj ćeliji, ili je dobijeno iz izvora koji nije ljudskog porekla, a koji koristi repertoare humanih antitela ili druge sekvence koje kodiraju humano antitelo. Ova definicija humanog antitela specifično isključuje humanizovano antitelo koje sadrži ne-humane antigen-vezujuće ostatke.
"Humane efektorske ćelije" su leukociti koji ekspresuju jedan ili više FcR-a i vrše efektorske funkcije. Poželjno, ćelije ekspresuju barem FcyRIII i vrše ADCC efektorsku funkciju. Primeri humanih leukocita, koji posreduju u ADCC, uključuju: mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC), ćelije prirodne ubice (NK), monocite, citotoksične T ćelije i neutrofile; pri čemu su poželjni PBMC-i i NK ćelije. Efektorske ćelije se mogu izolovati iz njihovog nativnog izvora, npr., iz krvi ili PBMC-a, kao što je ovde opisano.
"Humanizovano" antitelo se odnosi na himerično antitelo koje sadrži aminokiselinske ostatke iz ne-humanih HVR-a i aminokiselinske ostatke iz humanih FR-a. U određenim ostvarenjima, humanizovano antitelo će sadržavati suštinski sve od najmanje jednog, a obično dva, varijabilna domena, u kojima svi ili suštinski svi od HVR-a (npr., CDR-i) odgovaraju onima iz ne-humanog antitela, a svi ili suštinski svi od FR-a odgovaraju onima iz humanog antitela. Humanizovano antitelo, opciono, može sadržavati najmanje deo konstantnog regiona antitela, koji je dobijen iz humanog antitela. "Humanizovani oblik" antitela, npr., ne-humano antitelo, odnosi se na antitelo koje se podvrgava humanizaciji.
Naziv "hipervarijabilni region" ili "HVR", kako je ovde korišćen, odnosi se na svaki od regiona varijabilnog domena antitela koji ispoljava hipervarijabilnost u sekvenci i/ili obrazuje strukturno definisane petlje ("hipervarijabilne petlje"). Uopšteno, nativna antitela sa četiri lanca sadrže šest HVR-a; tri u VH (HI, H2, H3) i tri u VL (LI, L2, L3). HVR-i uopšteno sadrže aminokiselinske ostatke iz hipervarijabilnih petlji i/ili iz "regiona koji određuju komplementarnost" (CDR-i), pri čemu su ovi poslednji regioni sa najvećom varijabilnošću sekvenci i/ili su uključeni u prepoznavanje antigena. Primeri hipervarijabilnih petlji se pojavljuju u aminokiselinskim ostacima 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2) i 96-101 (H3) (Chothia, i Lesk, J. Mol. Biol. 196 (1987) 901-917). Primeri CDR-a (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1,
CDR-H2 i CDR-H3) se pojavljuju na aminokiselinskim ostacima 24-34 iz L1, 50-56 iz L2, 89-97 iz L3, 31-35B iz H1, 50-65 iz H2 i 95-102 iz H3 (Kabat, et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)). Sa izuzetkom CDR1 u VH, CDR-i uopšteno sadrže aminokiselinske ostatke koji obrazuju hipervarijabilne petlje. CDR-i, isto tako, sadrže "ostatke koji određuju specifičnost" ili "SDR-e", koji su ostaci koji dolaze u kontakt sa antigenom. SDR-i su sadržani unutar regiona CDR-a, koji se nazivaju skraćeni-CDR-i ili a-CDR-i. Primeri a-CDR-a (a-CDR-L1, a-CDR-L2, a-CDR-L3, a-CDR-H1, a-CDR-H2 i a-CDR-H3) se pojavljuju na aminokiselinskim ostacima 31-34 iz L1, 50-55 iz L2, 89-96 iz L3, 31-35B iz H1, 50-58 iz H2 i 95-102 iz H3 (Vidi Almagro i Fransson, Front. Biosci.13 (2008) 1619-1633). Ukoliko nije drugačije naznačeno, ostaci HVR-a i drugi ostaci u varijabilnom domenu (npr., ostaci FR-a) ovde su numerisani prema Kabatu i saradnicima, supra.
"Imuni kompleks" se odnose na relativno stabilnu strukturu koja se obrazuje kada se najmanje jedan ciljni molekul i najmanje jedan heterologni polipeptid koji sadrži Fc region vezuju jedan sa drugim, formirajući kompleks veće molekulske težine. Primeri imunih kompleksa su agregati antigen-antitelo i agregati ciljni molekul-imunoadhezin. Naziv "imuni kompleks", kako je ovde korišćen, ukoliko nije navedeno drugačije, odnosi se na ex vivo kompleks (t.j., kompleks koji se razlikuje od oblika ili postavke u kojoj se može naći u prirodi). Međutim, imuni kompleks se može primeniti ispitaniku, npr., da bi se utvrdio klirens imunog kompleksa kod sisara.
"Imunokonjugat" je antitelo koje je konjugovano sa jednim ili više heterolognih molekula, uključujući, ali bez ograničavanja na njih, citotoksično sredstvo.
"Pojedinac" ili "ispitanik" je sisar. Sisari uključuju, ali bez ograničavanja na njih, pripitomljene životinje (npr., krave, ovce, mačke, psi i konji), primate (npr., ljudi i primati koji nisu ljudi, kao što su majmuni), zečeve i glodare (npr., miševi i pacovi). U određenim ostvarenjima, pojedinac ili ispitanik je čovek.
"Izolovano" antitelo je ono antitelo koje je odvojeno od komponenti njegovog prirodnog okruženja. U nekim ostvarenjima, antitelo je prečišćeno do nivo čistoće, koji je veći od 95% ili 99%, kako je utvrđeno, primera radi, elektroforetskim (npr., SDS-PAGE, izoelektrično fokusiranje (IEF), kapilarna elektroforeza) ili hromatografskim (npr., jon-izmenjivačka ili reverzno-fazna HPLC) postupcima. Za pregled postupaka procene čistoće antitela, pogledajte, npr., Flatman, et al., J. Chromatogr. B 848 (2007) 79-87.
"Izolovani" polipeptid je polipeptid koji je identifikovan, izdvojen i/ili povraćen iz komponenti njegovog prirodnog okruženja. Kontaminirajuće komponente njegovog prirodnog okruženja su materijali koji bi mogli interferirati u dijagnostičkim ili terapeutskim korišćenjima polipeptida, a mogu uključiti: enzime, hormone i proteinske ili ne-proteinske komponente rastvora. U poželjnim ostvarenjima, polipeptid će biti prečišćen (1) do čistoće veće od 95% po težini polipeptida, kako je utvrđeno posredstvom Lowry metoda, a, najpoželjnije, do čistoće veće od 99% po težini, (2) do stepena koji je dovoljan da bi se dobilo najmanje 15 ostataka N- terminalne ili interne aminokiselinske sekvence, korišćenjem ʺspinning cupʺ sekvenatora, ili (3) do homogenosti, posredstvom SDS-PAGE, pod reduktivnim ili ne-reduktivnim uslovima, uz korišćenje Coomassie blue ili, poželjno, srebrnih bojenja. Izolovani polipeptid uključuje polipeptid in situ unutar rekombinantnih ćelija, budući da ni najmanje jedna komponenta iz prirodnog okruženja polipeptida neće biti prisutna. Uobičajeno, međutim, izolovani polipeptid će se pripremati korišćenjem najmanje jednog koraka prečišćavanja.
"Izolovana" nukleinska kiselina se odnosi na molekul nukleinske kiseline, koji je razdvajen od komponenti njegovog prirodnog okruženja. Izolovana nukleinska kiselina uključuje molekul nukleinske kiseline, koji je sadržan unutar ćelija, koje uobičajeno sadrže molekul nukleinske kiseline, dok je molekul nukleinske kiseline prisutan ekstra-hromosomski ili na položaju hromosoma, koja se razlikuje od prirodne lokacije hromosoma.
"Izolovanaʺ nukleinska kiselina koja kodira antitelo odnosi se na jedan ili više molekula nukleinske kiseline koji kodiraju teške i lake lance antitela (ili njihove fragmente), uključujući molekul(molekule) nukleinske kiseline koji se nalazi u jednom ili u zasebnim vektorima, i molekul(molekule) nukleinske kiseline, koji je je prisutan na jednoj ili više lokacija u ćeliji domaćina.
Izraz "obeleživač", kada se ovde koristi, odnosi se na detektibilno jedinjenje ili kompoziciju, koji se konjuguju, direktno ili indirektno, sa polipeptidom. Obeleživač može, sam po sebi, biti detektibilan (npr., radioizotopski obeleživači ili fluorescentni obeleživači) ili, u slučaju enzimskog obeleživača, može katalizirati hemijsku promenu jedinjenja ili kompozicije supstrata koju je moguće detektovati.
Izraz "ligand-vezujući domen", kako je ovde korišćen, odnosi se na bilo koji nativni receptor na ćelijskoj površini ili na bilo koji njihov region ili derivat, koji zadržava barem kvalitativnu sposobnost vezivanja liganda sa odgovarajućim nativnim receptorom. U specifičnom ostvarenju, receptor je iz polipeptida ćelijske površine koji poseduje ekstracelularni domen koji je homologan sa članom familije super-gena imunoglobulina. Ostali receptori, koji nisu članovi supergenske familije imunoglobulina, ali su, ipak specifično pokriveni ovom definicijom, su receptori za citokine, a, posebno receptori sa aktivnošću tirozin kinaze (receptorske tirozin kinaze), članovi superfamilija receptora hematopoetina i nervnog faktora rasta, i molekuli ćelijske adhezije, npr., (E-, L- i P-) selektini.
Naziv "monoklonsko antitelo", kako je ovde korišćen, odnosi se na antitelo, koje je dobijeno iz populacije suštinski homogenih antitela, t.j., pojedinačna antitela koja čine populaciju, su identična i/ili se vezuju za isti epitop, sa izuzetkom mogućih varijanti antitela, koje, npr., sadrže mutacije koje postoje u prirodi ili se javljaju tokom proizvodnje preparata monoklonski antitela, pri čemu su takve varijante uopšteno prisutne u manjim količinama. Za razliku od preparata poliklonskih antitela, koji obično uključuju različita antitela usmerena prema različitim determinantama (epitopima), svako monoklonsko antitelo iz preparata monoklonskih antitela usmereno je prema jednoj determinanti na antigenu. Sledstveno tome, odrednica "monoklonsko" ukazuje na karakter antitela, u smislu da je dobijeno iz suštinski homogene populacije antitela, a ne bi je trebalo tumačiti u smislu zahteva za proizvodnjom antitela bilo kojim određenim postupkom. Na primer, monoklonska antitela za korišćenje u skladu sa tekućim pronalaskom, mogu biti izrađena uz pomoć brojnih tehnika, koje uključuju, ali bez ograničavanja na njih, postupak hibridoma, postupke rekombinantne DNK, postupke izloženih faga i postupke koji koriste transgenske životinje, koji sadrže sve ili deo lokusa humanih imunoglobulina, pri čemu su takvi postupci i drugi primerni postupci za izradu monoklonskih antitela ovde opisani.
"Golo antitelo" se odnosi na antitelo koje nije konjugovano sa heterolognim delom (npr., sa citotoksičnim delom) ili radio-obeleživačem. Golo antitelo može biti prisutno u farmaceutskoj formulaciji.
"Nativna antitela" se odnose na imunoglobulinske molekule koji postoje u prirodi, sa različitim strukturama. Na primer, nativna IgG antitela su hetero-tetramerni glikoproteini od oko 150,000 daltona, koji su sastavljeni od dva identična laka lanca i dva identična teška lanca, koji su povezani disulfidnim mostom. Od N- do C-kraja, svaki teški lanac ima varijabilni region (VH), koji se takođe naziva varijabilni teški domen ili varijabilni domen teškog lanca, koji slede tri konstantna domena (CHI, CH2 i CH3). Istovetno, od N- do C-kraja, svaki laki lanac ima varijabilni region (VL), koji se, takođe, naziva, varijabilni laki domen ili varijabilni domen lakog lanca, koji sledi konstantni laki (CL) domen. Laki lanac antitela može pripadati jednom od dva tipa, koji se nazivaju kapa (k) i lambda (l), na osnovu aminokiselinske sekvence njihovog konstantnog i varijabilnog domena.
"Fc region nativne sekvence" sadrži aminokiselinsku sekvencu, koja je identična aminokiselinskoj sekvenci Fc regiona koja se nalazi u prirodi. Fc regioni humane nativne sekvence uključuju: Fc region humanog IgG1 nativne sekvence (ne-A i A alotipovi); Fc region humanog IgG2 nativne sekvence; Fc region humanog IgG3 nativne sekvence i Fc region humanog IgG4 nativne sekvence, kao i njihove varijante koje postoje u prirodi.
Nukleinska kiselina je "operativno povezana" kada je postavljena u funkcionalnu vezu sa sekvencom druge nukleinske kiseline. Na primer, DNK za pre-sekvencu ili sekretornu lider sekvencu je operativno povezana sa DNK za polipeptid, ukoliko se ekspresuje kao preprotein koji participira u sekreciji polipeptida; promoter ili pojačivač se operativno povezuje sa kodirajućom sekvencom, ukoliko ona ima uticaja na transkripciju sekvence; ili se vezujući položaj ribosoma operativno povezuje sa kodirajućom sekvencom, ukoliko je ona postavljena tako da olakšava translaciju. Uopšteno, "operativno povezan" znači da su sekvence DNK koje su povezane, u neposrednoj blizini, a, u slučaju sekretornog lidera, da su u neposrednoj blizini i u fazi čitanja. Međutim, sekvence pojačivača ne moraju biti u neposrednoj blizini. Povezivanje se vrši spajanjem na pogodnim restriktivnim položajima. Ukoliko takvi položaji ne postoje, koriste se sintetski oligonukleotidni adapteri ili linkeri, u skladu sa uobičajenom praksom.
Izraz "umetak u pakovanju" se koristi kako bi se odnosio na uputstva, koja su obično sadržana u komercijalnim pakovanjima terapeutskih proizvoda, a koja uključuju podatke koji se odnose na indikacije, korišćenje, dozažu, primenu, kombinovanu terapiju, kontraindikacije i/ili upozorenja koja se tiču korišćenja takvih terapeutskih proizvoda.
Pod nazivom "pozicija", kako je ovde korišćen, misli se na položaj u sekvenci proteina. Pozicije mogu biti redom numerisane, ili se mogu brojčano označavati prema utvrđenom formatu, na primer, prema EU indeksu za numerisanje antitela.
Nazivi "polipeptid" i "protein" koriste se kao zamena jedan drugome, da bi se odnosili na polimer od aminokiselinskih ostataka, koji sadrži prirodne aminokiselinske ostatke ili aminokiselinske ostatke koji ne postoje u prirodi, i nije ograničen na minimalnu dužinu.
Sledstveno tome, peptidi, oligopeptidi, dimeri, multimeri i slične strukture uključene su unutar okvira definicije. Definicijom su obuhvaćeni i proteini pune dužine i njihovi fragmenti. Nazivi, isto tako, uključuju post-translacijske modifikacije polipeptida, uključujući, na primer, glikozilaciju, sijalilaciju, acetilaciju i fosforilaciju.
Pored toga, "polipeptid" se, ovde, takođe, odnosi na protein koji je modifikovan, na primer pojedinačnim ili višestrukim delecijama, adicijama i supstitucijama aminokiselinskih ostataka u odnosu na nativnu sekvencu, sve dotle dok protein zadržava željenu aktivnost. Na primer, serinski ostatak može biti supstituisan da bi se eliminisao pojedinačni reaktivni cistein ili da bi se odstranilo povezivanje disulfidnim mostom ili se može izvršiti konzervativna aminokiselinska supstitucija, da bi se eliminisao položaj cepanja. Ove modifikacije mogu biti namerne, kao na primer, posredstvom mutageneze usmerene na položaj, ili mogu biti slučajne, kao, na primer, posredstvom mutacija domaćina, kojima se proizvode proteini ili greške pri amplifikaciji lančane polimeraza reakcije (PCR).
Izraz "polipeptid divljeg tipa" i "Fc region divljeg tipa (humani)", kako je ovde korišćen, odnosi se na polipeptid, odnosno Fc region, koji sadrže aminokiselinsku sekvencu, u kojoj nema jedne ili više modifikacija Fc regiona, koje su ovde izložene, budući da one nisu uvedene, i služe, primera radi, kao kontrole. Polipeptid divljeg tipa može sadržavati Fc region nativne sekvence ili Fc region sa prethodno-postojećim modifikacijama aminokiselinske sekvence (kao što su adicije, delecije i/ili supstitucije).
Naziv "farmaceutska formulacija" odnosi se na preparat koji se nalazi u obliku koji omogućuje biološku aktivnost aktivnog sastojka, sadržanog u njemu, kako bi bio efektivan, i koji ne sadrži dodatne komponente koje su neprihvatljive toksičnosti u odnosu na ispitanika, kome bi se formulacija primenjivala.
"Farmaceutski prihvatljivi nosač" se odnosi na sastojak u farmaceutskoj formulaciji, koji se razlikuje od aktivnog sastojka, i koji nije toksičan prema ispitaniku. Farmaceutski prihvatljivi nosač uključuje, ali ne ograničavajući se na njih, pufer, ekscipijens, stabilizator ili konzervans.
Polipeptid sa "izmenjenim" afinitetom vezivanja za FcR ili ADCC aktivnošću jeste polipeptid koji ima pojačanu ili smanjenu aktivnost vezivanja za FcR i/ili ADCC aktivnost u poređenju sa matičnim polipeptidom ili sa polipeptidom koji sadrži Fc region nativne sekvence. Varijanta polipeptida koja "ispoljava povećano vezivanje" za FcR, vezuje se sa najmanje jednim FcR s boljim afinitetom nego matični polipeptid. Varijanta polipeptida koja "ispoljava smanjeno vezivanje" za FcR, vezuje se sa najmanje jednim FcR sa slabijim afinitetom nego matični polipeptid. Takve varijante koje ispoljavaju smanjeno vezivanje za FcR mogu posedovati malo ili nemerljivo malo vezivanje za FcR, npr., vezivanje za FcR od 0-20% u poređenju sa Fc regionom IgG nativne sekvence, kao što je, npr., utvrđeno u tekućim Primerima.
Polipeptid koji se vezuje sa FcR sa "smanjenim afinitetom" u odnosu na matični polipeptid, je polipeptid koji se vezuje sa jednim ili više prethodno-identifikovanih FcR-a sa suštinski smanjenim afinitetom vezivanja u odnosu na matično antitelo, kada su količine varijanti polipeptida i matičnih polipeptida u testu vezivanja suštinski istovetne. Na primer, varijanta polipeptida sa smanjenim afinitetom vezivanja za FcR može ispoljavati od oko 1.15 puta do oko 100 puta, npr., od oko 1.2 puta do oko 50 puta, smanjeni afinitet vezivanja za FcR, ako se uporedi sa afinitetom vezivanja matičnog polipeptida, pri čemu se afinitet vezivanja za FcR utvrđuje, primera radi, kao što je izloženo u tekućim Primerima.
Polipeptid koji sadrži Fc varijantu koja "posreduje u antitelo-zavisnoj ćelijskiposredovanoj citotoksičnosti (ADCC), u prisustvu humanih efektorskih ćelija manje efektivno" u odnosu na matični polipeptid ili polipeptid divljeg tipa, je onaj polipeptid koji je in vitro ili in vivo suštinski manje efektivan u posredovanju u ADCC, pri čemu su količine polipeptidne varijante i matičnog antitela, koje su korišćene u testu, suštinski istovetne. Uopšteno, takve varijante će biti identifikovane korišćenjem in vitro ADCC testa, kako je ovde opisan, ali su razmotreni i drugi testovi ili postupci za utvrđivanje ADCC aktivnosti, npr., na životinjskom modelu, itd.. Poželjna varijanta je od približno 1.5 puta do približno 100 puta, npr., od oko dva puta do oko pedeset puta, manje efektivna u posredovanju u ADCC, nego matični polipeptid, npr., u, ovde opisanom, in vitro testu.
"Receptor" je polipeptid koji je u stanju da se vezuje sa najmanje jednim ligandom. Poželjni receptor je receptor ćelijske površine, koji poseduje ekstracelularni ligand-vezujući domen i, opciono, druge domene (npr., transmembranski domen, intracelularni domen i/ili membransko sidro). Receptor koji se procenjuje u, ovde opisanom, testu, može biti intaktni receptor ili njegov fragment ili derivat (npr., fuzioni protein koji sadrži vezujući domen receptora, spojen sa jednim ili više heterolognih polipeptida). Pored toga, receptor čije vezujuće karakteristike se utvrđuju, može biti prisutan u ćeliji ili može biti izolovan i njime, opciono, može biti presvučena ploča ili neka druga čvrsta faza.
Naziv "receptor-vezujući domen" koristi se da bi označio bilo koji nativni ligand za receptor, uključujući molekule ćelijske adhezije ili bilo koji region ili derivat takvog nativnog liganda, koji zadržava barem kvalitativnu sposobnost vezivanja receptora od strane odgovorajućeg nativnog liganda. Ova definicija, između ostalih, specifično uključuje vezujuće sekvence iz liganada za prethodno-razmotrene receptore.
Kako je ovde korišćen, naziv "tretman" (i njegove gramatičke varijacije, kao što su "lečiti" ili "lečenje") odnosi se na kliničku intervenciju sa namerom da se izmeni prirodni tok patološkog stanja kod pojedinca koji se podvrgava lečenju, a može se izvesti u profilaktičke svrhe ili tokom trajanja kliničkog patološkog stanja. Poželjni efekti tretmana uključuju, ali bez ograničavanja na njih, sprečavanje pojave ili recidiviranja bolesti, ublažavanje simptoma, umanjivanje bilo kakvih direktnih ili indirektnih patoloških konsekvenci bolesti, sprečavanje metastaza, smanjivanje brzine progresije bolesti, poboljšanje ili olakšavanje stanja bolesti i remisiju bolesti ili poboljšanje prognoze bolesti. U nekim ostvarenjima, antitela pronalaska se koriste za odlaganje razvoja bolesti ili usporavanje napredovanja bolesti.
Pod "varijantom proteina" ili "proteinskom varijantom" ili "varijantom", kako je ovde korišćena, podrazumeva se protein koji se razlikuje od matičnog proteina po postojanju najmanje jedne aminokiselinske modifikacije. Varijanta proteina se može odnositi na sam protein, na kompoziciju koja sadrži protein ili na aminokiselinsku sekvencu koja ga kodira. Poželjno, varijanta proteina poseduje najmanje jednu aminokiselinsku modifikaciju u poređenju sa matičnim proteinom, npr., od približno jedne do približno sedamdeset modifikacija aminokiselina, a poželjno od oko jedne do oko pet modifikacija aminokiselina u poređenju sa matičnim proteinom. Sekvenca varijante proteina ovde će, poželjno, posedovati najmanje oko 80% homologije sa sekvencom matičnog proteina, a najpoželjnije najmanje oko 90% homologije, još poželjnije najmanje oko 95% homologije. Protein varijante se može odnositi na sam protein varijante, na kompozicije koja sadrži varijantu proteina ili na sekvencu DNK koja ga kodira. Sledstveno tome, pod izrazima "varijanta antitela" ili "varijantno antitelo", kako su ovde korišćeni, podrazumeva se antitelo koje se razlikuje od matičnog antitela po postojanju najmanje jedne modifikacije aminokiseline. Pod "varijantom IgG" ili "varijantnim IgG", kako su ovde korišćeni, podrazumeva se antitelo koje se razlikuje od matičnog IgG po postojanju najmanje jedne aminokiselinske modifikacije, a pod izrazima "varijanta imunoglobulina" ili "varijantni imunoglobulin", kako su ovde korišćeni, podrazumeva se imunoglobulinska sekvenca koja se razlikuje od sekvence matičnog imunoglobulina po postojanju najmanje jedne aminokiselinske modifikacije.
Izraz "varijabilni region" ili "varijabilni domen" se odnosi na domen teškog ili lakog lanca antitela, koji je uključen u vezivanje antitela sa antigenom. Varijabilni domeni teškog lanca i lakog lanca (VH, odnosno VL) nativnog antitela uopšteno imaju slične strukture, pri čemu svaki domen sadrži četiri konzervisana regiona okvira (FR-i) i tri hipervarijabilna regiona (HVR-i).
(Vidi, npr., Kindt, et al., Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co. (2007) strana 91). Pojedinačni VH ili VL domen može biti dovoljan da bi se prenela antigen-vezujuća specifičnost. Pored toga, antitela koja se vezuju sa određenim antigenom mogu biti izolovana korišćenjem VH ili VL domena iz antitela, koja se vezujuju sa antigenom, da bi se skrinirala biblioteka komplementarnih VL, odnosno VH domena. Vidi, npr., Portolano, et al., J. Immunol.150 (1993) 880-887; Clackson, et al., Nature 352 (1991) 624-628.
Naziv "vektor", kako je ovde korišćen, odnosi se na molekul nukleinske kiseline, koji je u stanju da prenosi drugu nukleinsku kiselinu, za koju je vezan. Izraz uključuje vektor kao samoreplikujuću strukturu nukleinske kiseline, kao i vektor, koji je ugrađen u genom domaćinske ćelije, u koju se on uvodi. Određeni vektori su u stanju da usmeravaju ekspresiju nukleinskih kiselina, sa kojima se operativno povezuju. Takvi vektori se ovde označavaju kao "ekspresioni vektori."
Ova prijava se odnosi na polipeptide koji sadrže aminokiselinske modifikacije, koje moduliraju vezivanje sa Fc receptorima, posebno sa Fcg receptorima.
Detaljni opis
Pronalazak je definisan u patentnim zahtevima. Ostali aspekti opisa su informativni. Pronalazak se, ovde, odnosi na postupak za izradu polipeptida koji sadrži varijantu Fc. "Matični", "startni", "ne-varijantni" polipeptid ili polipeptid divljeg tipa izrađuje se korišćenjem tehnika, raspoloživih u struci za proizvodnju polipeptida ili antitela koji sadrže Fc region. U poželjnom ostvarenju pronalaska, matični polipeptid je antitelo, a primeri postupaka za proizvodnju antitela, opisani su detaljnije u poglavljima koja slede. Matični polipeptid, može, međutim, biti, bilo koji drugi polipeptid koji sadrži Fc region, npr., imunoadhezin. Postupci za izradu imunoadhezina ovde su elaborirani detaljnije u nastavku.
U alternativnom ostvarenju, varijanta Fc regiona (Fc varijanta) može biti proizvedena u skladu sa, ovde opisanim, postupcima, a ova Fc varijanta se može spojiti sa heterolognim polipeptidom po izboru, kao što je varijabilni domen antitela ili vezujući domen receptora ili liganda.
Polipeptid divljeg tipa sadrži Fc region. Uopšteno, Fc region polipeptida divljeg tipa uključivaće Fc region nativne sekvence ili sekvence divljeg tipa, a poželjno Fc region humane nativne sekvence (humani Fc region). Međutim, Fc region polipeptida divljeg tipa može posedovati jednu ili više već-postojećih izmena ili modifikacija aminokiselinske sekvence iz Fc regiona nativne sekvence. Na primer, aktivnost vezivanja za C1q ili Fcg od strane Fc regiona može biti ranije izmenjena (ostale vrste modifikacija Fc regiona detaljnije su opisane u nastavku). U daljem ostvarenju, Fc region matičnog polipeptida je ²konceptualan" i, budući da fizički ne postoji, stručnjak za inženjering antitela može odlučiti, u zavisnosti od aminokiselinske sekvence Fc regiona željene varijante, da proizvede polipeptid koji sadrži tu sekvencu ili DNA koja kodira aminokiselinsku sekvencu Fc regiona željene varijante.
U poželjnom ostvarenju pronalaska, međutim, raspoloživa je nukleinska kiselina koja kodira Fc region polipeptida divljeg tipa, a sekvenca ove nukleinske kiseline je izmenjena da bi se proizvela sekvenca nukleinske kiseline varijante koja kodira Fc region varijante.
DNA koja kodira aminokiselinsku sekvencu varijante polaznog polipeptida priprema se brojnim postupcima, poznatim u struci. Ovi postupci uključuju, ali bez ograničavanja na njih, izradu posredstvom mutageneze usmerene na položaj (ili mutageneze posredovane oligonukleotidom), PCR mutageneze i kasetne mutageneze ranije pripremljene DNA koja kodira polipeptid.
Mutageneza usmerena ka položaju je poželjni postupak za izradu supstitucionih varijanti. Ovaj postupak je dobro poznat u struci (vidi, npr., Carter, et al., Nucleic Acids Res.13 (1985) 4431-4443 i Kunkel, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82 (1985) 488). Ukratko, pri izvođenju mutageneze DNA usmerene ka položaju, polazna DNA se izmeni najpre putem hibridizacije oligonukleotida koji kodira željenu mutaciju sa jednim lancem takve polazne DNA. Nakon hibridizacije, DNA polimeraza se koristi za sintezu celokupnog drugog lanca, uz korišćenje hibridizirajućeg oligonukleotida kao prajmera, i koristeći jedan lanac polazne DNA kao matricu. Sledstveno tome, oligonukleotid koji kodira željenu mutaciju je ugrađen u proizvedenu DNA dvostrukog lanca.
PCR mutageneza je, takođe, pogodna za izradu varijanti aminokiselinskih sekvenci polaznog polipeptida. Vidi, Higuchi, u PCR Protocols, Academic Press (1990) pp. 177-183; i Vallette, et al., Nuc. Acids Res.17 (1989) 723-733. Ukratko, kada se male količine matrice DNA koriste kao polazni materijal u PCR-u, prajmeri koji se neznatno razlikuju po sekvenci od odgovarajućeg regiona u DNA matrici, mogu biti korišćeni za proizvodnju relativno velikih količina specifičnog fragmenta DNA, koji se razlikuje od sekvence matrice samo na pozicijama gde se prajmeri razlikuju od matrice.
Drugi postupak za izradu varijanti, kasetna mutageneza, zasniva se na tehnici, koju su opisali Wells i saradnici u Gene 34 (1985) 315-323.
Jedno ostvarenje obuhvata polipeptide koji sadrže Fc region antitela, koji uključuje adiciju, supstituciju ili deleciju najmanje jednog aminokiselinskog ostatka u Fc regionu, što dovodi do smanjenog ili ukinutog afiniteta za najmanje jedan Fc receptor. Fc region ulazi u interakciju sa brojnim receptorima ili ligandima, koji uključuju, ali bez ograničavanja na njih, Fc receptore (npr., FcgRI, FcgRIIA, FcgRIIIA), protein komplementa CIq, i druge molekule, kao što su proteini A i G. Ove interakcije su suštinske za brojne efektorske funkcije i reakcije nishodne signalizacije, koje uključuju, ali ne ograničavajući se na njih, antitelo-zavisnu ćelijski- posredovanu citotoksičnost (ADCC), antitelo-zavisnu ćelijsku fagocitozu (ADCP) i komplement- zavisnu citotoksičnost (CDC). Sledstveno tome, u određenim ostvarenjima, varijante pronalaska imaju smanjeni ili ukinuti afinitet za Fc receptor, koji je odgovoran za efektorsku funkciju, u poređenju sa polipeptidom koji poseduje istovetnu aminokiselinsku sekvencu kao polipeptid koji sadrži Fc varijantu pronalaska, ali koji ne uključuje adiciju, supstituciju ili deleciju najmanje jednog aminokiselinskog ostatka u Fc regionu (koji se, ovde, takođe, označava kao "polipeptid divljeg tipa"). U određenim ostvarenjima, polipeptid koji sadrži Fc varijantu pronalaska uključuje najmanje jednu ili više sledećih karakteristika: smanjenu ili ukinutu efektorsku (ADCC i/ili CDC i/ili ADCP) funkciju, smanjeno ili ukinuto vezivanje za Fc receptore, smanjeno ili ukinuto vezivanje za C1q ili smanjene ili odsutne toksične efekte. Određenije, ostvarenja pronalaska obezbeđuju anti-CD20 (ista kao GA101 ili GA), anti-CD9 (istovetna kao TA) i anti-selektin (pSel) antitela sa smanjenim afinitetom za Fc receptore (npr., FcgRI, FcgRII, FcgRIIIA) i/ili protein komplementa C1q.
U jednom ostvarenju, antitela sadrže Fc region, koji uključuje najmanje jednu adiciju, supstituciju ili deleciju aminokiselinskog ostatka na poziciji P329, pri čemu je sistem numerisanja konstantnog regiona sistem EU indeksa, kako je naveden u Kabat, et al., NIH Publication 91 (1991) 3242, National Technical Information Service, Springfield, VA.
U specifičnom ostvarenju, polipeptidi sadrže Fc varijantu Fc humanog polipeptida divljeg tipa, pri čemu navedena varijanta uključuje aminokiselinsku supstituciju na poziciji Pro329, pri čemu je numerisanje ostataka u Fc regionu IgG numerisanje iz EU indeksa kao u Kabatu. U jednom drugom ostvarenju, navedena varijanta sadrži najmanje jednu dodatnu aminokiselinsku supstituciju.
U jednom drugom ostvarenju, polipeptid koji sadrži Fc varijantu Fc humanog polipeptida divljeg tipa poseduje aminokiselinsku supstituciju, deleciju ili adiciju, koji razaraju ili umanjuju funkciju prolinskog sendviča u regionu i/ili kontaktnoj površini Fc polipeptida sa gama receptorom Fc.
U drugom ostvarenju, Pro329 je supstituisan sa aminokiselinom koja je ili manja ili veća od prolina. U jednom drugom ostvarenju, supstituisana aminokiselina je Gly, Ala ili Arg. U pronalasku, Pro329 iz Fc polipeptida je supstituisan sa glicinom.
U jednom drugom ostvarenju, navedeni polipeptid koji sadrži Fc varijantu ima najmanje jednu dodatnu supstituciju, adiciju ili deleciju aminokiselina. U još jednom ostvarenju, navedene varijante ispoljavaju smanjeni afinitet prema humanom Fc receptoru (FcgR) i/ili receptoru humanog komplementa, ako se uporedi sa polipeptidom koji sadrži Fc polipeptida divljeg tipa.
U drugom ostvarenju, navedeni polipeptid koji sadrži varijantu Fc, ispoljava smanjeni afinitet prema receptoru humanog Fc (FcgR) i/ili receptoru humanog komplementa, u poređenju sa polipeptidom koji sadrži humani Fc region divljeg tipa. U daljem ostvarenju, afinitet prema najmanje jednom od: FcgRI, FcgRII, FcgRIIIA je redukovan, u jednom daljem ostvarenju, afinitet prema FcgRI i FcgRIIIA je redukovan, a u jednom dodatnom ostvarenju, afinitet prema FcgRI, FcgRII i FcgRIIIA je smanjen, u jednom daljem aspektu pronalaska, afinitet prema FcyRI receptoru, FcgRIIIA receptoru i C1q je redukovan, a u jednom drugom aspektu pronalaska, smanjen je afinitet prema FcgRI, FcgRII, FcgRIIIA i C1q receptoru.
U jednom drugom ostvarenju, ADCC, koju indukuje navedeni polipeptid koji sadrži varijantu Fc, je smanjena, a u poželjnom ostvarenju, ADCC je redukovana za najmanje 20% od ADCC, koju indukuje polipeptid koji sadrži Fc polipeptida divljeg tipa. U jednom daljem aspektu pronalaska, ADCC i CDC, koji su indukovani od strane polipeptida koji sadrži Fc polipeptida divljeg tipa, smanjeni su ili odstranjeni, a u jednom drugom aspektu, polipeptid koji sadrži varijantu Fc, koja je prethodno opisana, ispoljava smanjene ADCC, CDC i ADCP, u poređenju sa polipeptidom, koji sadrži Fc polipeptida divljeg tipa.
U jednom ostvarenju, najmanje jedna dodatna aminokiselinska supstitucija u polipeptidu koji sadrži varijantu Fc, odabrana je iz grupe, koju sačinjavaju: S228P, E233P, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D ili P331S. U pronalasku su uključene L234A i L235A supstitucije.
U određenom aspektu pronalaska, polipeptid koji sadrži Fc varijantu uključuje antitelo. U jednom drugom aspektu pronalaska, polipeptid koji sadrži Fc varijantu sadrži Fc region humanog IgG1. U jednom daljem aspektu pronalaska, varijante su IgG1 antitela.
U drugom ostvarenju, polipeptidi koji sadrže varijante Pro329 Fc varijanti, sadrže dodatno najmanje jednu adiciju, supstituciju ili deleciju aminokiselinskog ostatka u Fc regionu, koje su u korelaciji sa povećanom stabilnošću antitela. U jednom daljem aspektu pronalaska, afinitet polipeptida koji sadrži Fc varijantu, koja je prethodno opisana, za Fcn receptor, je izmenjena samo blago, na primer, za ne više od 10-20% afiniteta polipeptida koji sadrži Fc polipeptida divljeg tipa.
U jednom ostvarenju, adicija, supstitucija ili delecija aminokiselinskog ostatka u polipeptidu koji sadrži varijantu Fc, je na poziciji 228 i/ili 235 Fc regiona, pri čemu je sistem brojčanog označavanja konstantnog regiona sistem EU indeksa, kako je naveden od strane Kabata i saradnika.
U specifičnom ostvarenju, serin na poziciji 228 i/ili leucin na poziciji 235 u navedenom polipeptidu koji sadrži Fc varijantu, je supstituisan drugom aminokiselinom.
U specifičnom ostvarenju, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu sadrže Fc region, koji uključuje aminokiselinsku supstituciju na poziciji 228, pri čemu je serinski ostatak supstituisan sa prolinom.
U specifičnom ostvarenju, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu sadrže Fc region, koji uključuje aminokiselinsku supstituciju na poziciji 235, pri čemu je leucinski ostatak supstituisan sa glutaminskom kiselinom.
U specifičnom ostvarenju, polipeptid koji sadrži Fc varijantu sadrži trostruku mutaciju: aminokiselinsku supstituciju na poziciji P329, S228P i L235E mutaciju (P329 / SPLE).
U jednom ostvarenju, adicija, supstitucija ili delecija aminokiselinskog ostatka je na poziciji 234 i/ili 235 Fc regiona, pri čemu je sistem numerisanja konstantnog regiona sistem EU indeksa, kako je navedeno od strane Kabata i saradnika.
Polipeptid koji sadrži Fc varijantu Fc humanog polipeptida divljeg tipa, sadrži trostruku mutaciju: aminokiselinsku supstituciju na poziciji Pro329, L234A i L235A mutaciju (P329 / LALA).
Prethodno-razmotreni polipeptidi sadrže region humanog IgG1.
Budući da je poželjno da se izmeni vezivanje za FcgR, ovde su, takođe, razmotrene varijante Fc regiona sa izmenjenim afinitetom vezivanja za neonatalni receptor (FcRn). Očekuje se da varijante Fc regiona sa poboljšanim afinitetom za FcRn imaju duže polu-živote u serumu, a takvi molekuli će imati korisne primene u postupcima lečenja sisara u kojima je poželjan dugi poluživot primenjenog polipeptida, npr., za lečenje hronične bolesti ili poremećaja. Za razliku od njih, za varijante Fc regiona sa smanjenim afinitetom vezivanja za FcRn, očekuje se da imaju kraće polu-živote, a takve molekule mogu, primera radi, biti primenjivane sisaru u slučajevima kada od koristi može biti skraćeno vreme opstanka u cirkulaciji, npr. za in vivo dijagnostičko snimanje ili u slučaju polipeptida koji imaju toksične sporedne efekte kada u cirkulaciji krvi ostaju tokom produženog vremena, itd.. Očekuje sa da je manje verovatno da varijante Fc regiona sa smanjenim afinitetom vezivanja FcRn prolaze kroz placentu, te, sledstveno tome, mogu biti korišćene u lečenju bolesti ili poremećaja kod trudnica.
Varijante Fc regiona sa izmenjenim afinitetom vezivanja za FcRn uključuju varijante koje sadrže aminokiselinsku modifikaciju u Fc regionu na bilo kojoj od jedne ili više pozicija aminokiselina: 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 386, 388, 400, 413, 415, 424, 433, 434, 435, 436, 439 ili 447. One varijante, koje ispoljavaju smanjeno vezivanje za FcRn, uopšteno će sadržavati aminokiselinsku modifikaciju u Fc regionu na bilo kojoj od jedne ili više pozicija aminokiselina: 252, 253, 254, 255, 288, 309, 386, 388, 400, 415, 433, 435, 436, 439 ili 447; a varijante sa povećanim vezivanjem za FcRn uglavnom će sadržavati modifikaciju aminokiseline u Fc regionu na bilo kojoj od jedne ili više pozicija aminokiselina: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305,
307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 ili 434.
Smanjeno vezivanje za Fc ligande
Stručnjak u ovoj oblasti će razumeti da antitela pronalaska mogu imati izmenjene (relativno izmenjene u odnosu na nemodifikovano antitelo) karakteristike vezivanja za FcyR i/ili C1q (primeri vezujućih karakteristika uključuju, ali bez ograničavanja na njih, specifičnost vezivanja, ravnotežnu konstantu disocijacije (KD), brzine disocijacije i asocijacije (koff, odnosno kon) afinitet i/ili sklonost vezivanju) i da su određene izmene više ili manje poželjne. U struci je<poznato da se ravnotežna konstanta disocijacije (K>D<) definiše kao odnos k>off</k>on<. Stručnjak u>ovojoblasti može utvrditi koji je kinetički parametar najvažniji za primenu datog antitela. Na primer, modifikacija kojom se redukuje vezivanje za jedan ili više pozitivnih regulatora (npr., FcgRIIIA) i/ili pojačano vezivanje za inhibitorni Fc receptor (npr., FcgRIIB) bila bi pogodna za smanjivanje ADCC aktivnosti. Sledstveno tome, odnos afiniteta vezivanja (npr., ravnotežne<konstante disocijacije (K>D<)) može ukazivati da li je ADCC aktivnost antitela pronalaska povećana>ilismanjena. Pored toga, modifikacija kojom se redukuje vezivanje za C1q, bila bi pogodna za smanjivanje ili eliminisanje CDC aktivnosti. Afiniteti i karakteristike vezivanja Fc regiona za njegov ligand, mogu biti utvrđeni brojnim postupcima in vitro testova (testovi na biohemijskoj ili imunološkoj bazi), poznatim u struci, za određivanje Fc-FcyR interakcija, t.j., specifičnog vezivanja Fc regiona za FcyR, uključujući, ali ne ograničavajući se na njih, ravnotežne postupke (npr., enzim-vezani imuno-apsorbent test (ELISA) ili radio-imuno test (RIA)), ili kinetičke postupke (npr., BIACORE® analiza), i druge postupke, kao što su testovi indirektnog vezivanja, kompeptitivni inhibicioni testovi, fluorescentno-rezonantni energetski transfer (FRET), gel elektroforeza i hromatografija (npr., gel filtracija). Ovi i drugi postupci mogu koristiti obeleživač na jednoj ili više komponenti koje se ispituju i/ili koristiti brojne detekcione postupke koji
uključuju, ali se njima ne ograničavaju, hromogene, fluorescentne, luminescentne ili izotopske obeleživače. Detaljni opis afiniteta i kinetika vezivanja može se naći u Paul, W.E., ed., Fundamental Immunology, 4th Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999).
U jednom aspektu pronalaska, polipeptid koji sadrži Fc varijantu humanog Fc regiona divljeg tipa, kako se zahteva, ispoljava smanjeni afinitet prema humanom Fc receptoru (FcyR) i/ili prema receptoru humanog komplementa, ako se uporedi sa polipeptidom koji sadrži Fc polipeptida divljeg tipa. U jednom aspektu, polipeptidi koji sadrže varijantu Fc pronalaska, ispoljavaju afinitete prema Fc receptoru koji su najmanje 2 puta, ili najmanje 3 puta, ili najmanje 5 puta, ili najmanje 7 puta, ili najmanje 10 puta, ili najmanje 20 puta, ili najmanje 30 puta, ili najmanje 40 puta, ili najmanje 50 puta, ili najmanje 60 puta, ili najmanje 70 puta, ili najmanje 80 puta, ili najmanje 90 puta, ili najmanje 100 puta, ili najmanje 200 puta manji od afiniteta Fc polipeptida divljeg tipa.
U jednom aspektu, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska pokazuju smanjeni afinitet vezivanja za jedan ili više Fc receptora, uključujući, ali bez ograničavanja na njih, FcgRI (CD64), uključujući izoforme FcgRIA, FcgRII i FcgRIII (CD 16, uključujući izoforme FcgRIIIA), u poređenju sa antitelom koje nije modifikovano.
U jednom aspektu, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju
smanjeni afinitet vezivanja za FcgRI (CD64), FcgRIIA i FcgRIIIA, ako se uporedi sa antitelom koje nije modifikovano.
U jednom aspektu, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska pokazuju smanjeni afinitet vezivanja za FcgRIIA i FcgRIIIA, ako se uporedi sa nemodifikovanim antitelom.
U jednom aspektu, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju smanjeni afinitet vezivanja za FcgRI (CD64) i FcgRIIIA, ako se uporedi sa antitelom koje nije modifikovano.
U jednom aspektu pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska koja
ispoljava smanjeni afinitet vezivanja za Fc receptore, takođe pokazuju smanjeni afinitet prema C1q receptoru.
U određenom aspektu, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ne uključuju istovremeno povećanje vezivanja za FcgRIIB receptor, ako se uporede sa polipeptidom divljeg tipa. U određenim aspektima pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu poseduju smanjeni afinitet prema humanom receptoru FcgIIIA, i prema najmanje jednom daljem receptoru iz grupe koju čine humani receptori FcgIIA, FcgIIIB i C1q, u poređenju sa polipeptidom koji sadrži Fc polipeptida divljeg tipa. U daljim aspektima pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu imaju smanjeni afinitet prema humanom receptoru FcgIIIA, i prema dva dalja receptora iz grupe koju čine humani receptori FcgIIA, FcgIIIB i C1q, ako se uporede sa polipeptidom koji sadrži Fc polipeptida divljeg tipa. U daljem aspektu pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu imaju redukovani afinitet prema humanom FcgRIA, FcgIIIA, FcgIIA, FcgIIIB i C1q, u poređenju sa polipeptidom koji sadrži Fc polipeptida divljeg tipa. U jednom drugom aspektu pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu, imaju smanjeni afinitet prema humanom receptoru FcgRIA, FcgIIIA, FcgIIA, FcgIIIB i C1q, ako se uporede sa polipeptidom koji sadrži Fc polipeptida divljeg tipa.
U jednom aspektu pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju smanjene afinitete prema FcgRI ili FcgRIIA, u odnosu na ne-modifikovano antitelo. U jednom aspektu pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu ispoljavaju afinitete prema FcgRI ili FcgRIIA, koji su najmanje 2 puta, ili najmanje 3 puta, ili najmanje 5 puta, ili najmanje 7 puta, ili najmanje 10 puta, ili najmanje 20 puta, ili najmanje 30 puta, ili najmanje 40 puta, ili najmanje 50 puta, ili najmanje 60 puta, ili najmanje 70 puta, ili najmanje 80 puta, ili najmanje 90 puta, ili najmanje 100 puta, ili najmanje 200 puta, manji od afiniteta polipeptida divljeg tipa. U jednom aspektu pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu ispoljavaju afinitet prema FcgRI ili FcgRIIA, koji je najmanje 90%, najmanje 80%, najmanje 70%, najmanje 60%, najmanje 50%,
najmanje 40%, najmanje 30%, najmanje 20%, najmanje 10% ili najmanje 5% manji od afiniteta polipeptida divljeg tipa.
U jednom aspektu pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju smanjeni afinitet prema FcgRIIIA, u odnosu na nemodifikovano antitelo. U jednom aspektu, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju afinitete prema FcgRIIIA, koji su najmanje 2 puta, ili najmanje 3 puta, ili najmanje 5 puta, ili najmanje 7 puta, ili najmanje 10 puta, ili najmanje 20 puta, ili najmanje 30 puta, ili najmanje 40 puta, ili najmanje 50 puta, ili najmanje 60 puta, ili najmanje 70 puta, ili najmanje 80 puta, ili najmanje 90 puta, ili najmanje 100 puta, ili najmanje 200 puta, manji od afiniteta polipeptida divljeg tipa.
U jednom aspektu pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju afinitete za FcgRIIIA, koji su najmanje 90%, najmanje 80%, najmanje 70%, najmanje 60%, najmanje 50%, najmanje 40%, najmanje 30%, najmanje 20%, najmanje 10% ili najmanje 5% manji od afiniteta polipeptida divljeg tipa.
U ovoj oblasti se podrazumeva da F1-58V alelska varijanta FcgRIIIA ima izmenjene karakteristike vezivanja za antitela. U jednom ostvarenju, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska vezuju se sa smanjenim afinitetima za FcgRIIIA receptore u odnosu na polipeptid divljeg tipa. U jednom aspektu, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju afinitete za FcgRIIIA (Fl 58V), koji su najmanje 2 puta, ili najmanje 3 puta, ili najmanje 5 puta, ili najmanje 7 puta, ili najmanje 10 puta, ili najmanje 20 puta, ili najmanje 30 puta, ili najmanje 40 puta, ili najmanje 50 puta, ili najmanje 60 puta, ili najmanje 70 puta, ili najmanje 80 puta, ili najmanje 90 puta, ili najmanje 100 puta, ili najmanje 200 puta manji od afiniteta polipeptida divljeg tipa.
U jednom aspektu pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju smanjeni afinitet za C1q receptor, u odnosu na antitelo koje nije modifikovano. U jednom aspektu, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju afinitete za C1q receptor, koji su najmanje 2 puta, ili najmanje 3 puta, ili najmanje 5 puta, ili najmanje 7 puta, ili najmanje 10 puta, ili najmanje 20 puta, ili najmanje 30 puta, ili najmanje 40 puta, ili najmanje 50 puta, ili najmanje 60 puta, ili najmanje 70 puta, ili najmanje 80 puta, ili najmanje 90 puta, ili najmanje 100 puta, ili najmanje 200 puta manji od afiniteta polipeptida divljeg tipa.
U jednom aspektu pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju afinitete za C1q, koji su najmanje 90%, najmanje 80%, najmanje 70%, najmanje 60%, najmanje 50%, najmanje 40%, najmanje 30%, najmanje 20%, najmanje 10% ili najmanje 5% manji od afiniteta polipeptida divljeg tipa.
U jednom aspektu pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska pokazuju afinitete prema humanim FcgRI, FcgRIIA, FcgRIIIA, FcgRIIIA (Fl 58V) ili C1q receptorima, koji su najmanje 90%, najmanje 80%, najmanje 70%, najmanje 60%, najmanje
50%, najmanje 40%, najmanje 30%, najmanje 20%, najmanje 10% ili najmanje 5% manji od afiniteta polipeptida divljeg tipa.
U drugom aspektu pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju afinitete za FcgRI, FcgRIIA, FcgRIIIA, odnosno FcgRIIIA (Fl 58V) i/ili C1q receptore, koji su između približno 10 nM do 100 nM, 10 nM do 1 µM, 100 nM do oko 100 µM, ili oko 100 nM do oko 10 µM, ili oko 100 nM do oko 1 µM, ili oko 1 nM do oko 100 µM, ili oko 10 nM do oko 100 µM, ili oko 1 µM do oko 100 µM, ili oko 10 µM do oko 100 µM. U određenim ostvarenjima, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju afinitete za FcgRI, FcgRIIA, FcgRIIIA, FcgRIIIA (Fl-58V) ili C1q receptore koji su veći od 100 nM, 500 nM, 1 µM, veći od 5 µM, veći od 10 µM, veći od 25 µM, veći od 50 µM ili veći od 100 µM.
U drugom aspektu pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju povećane afinitete prema FcgRIIB, ako se uporede sa afinitetima polipeptida divljeg tipa. U drugom aspektu, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju afinitete prema FcgRIIB, koji su nepromenjeni ili povećani za najmanje 2 puta, ili najmanje 3 puta, ili najmanje 5 puta, ili najmanje 7 puta, ili najmanje 10 puta, ili najmanje 20 puta, ili najmanje 30 puta, ili najmanje 40 puta, ili najmanje 50 puta, ili najmanje 60 puta, ili najmanje 70 puta, ili najmanje 80 puta, ili najmanje 90 puta, ili najmanje 100 puta, ili najmanje 200 puta u odnosu na afinitete antitela koje nije modifikovano. U drugom aspektu, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju afinitete prema FcgRIIB receptoru, koji su povećani za najmanje 5%, najmanje 10%, najmanje 20%, najmanje 30%, najmanje 40%, najmanje 50%, najmanje 60%, najmanje 70%, najmanje 80%, najmanje 90% ili najmanje 95% u odnosu na afinitete polipeptida divljeg tipa.
U drugom aspektu pronalaska, varijante pronalaska ispoljavaju afinitete prema FcgRI, FcgRIIA, FcgRIIIA ili FcgRIIIA (Fl 58V) ili C1q receptorima, koji su manji od 100 µM, manji od 50 µM, manji od 10 µM, manji od 5 µM, manji od 2.5 µM, manji od 1 µM ili manji od 100 nM ili manji od 10 nM.
Smanjena efektorska funkcija
U određenim aspektima pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu u skladu sa pronalaskom moduliraju efektorsku funkciju u poređenju sa polipeptidom koji sadrži Fc polipeptida divljeg tipa.
U jednom drugom aspektu pronalaska, ova modulacija je modulacija ADCC i/ili ADCP i/ili CDC. U daljem aspektu pronalaska, ova modulacija je nishodna modulacija ili redukcija efekta. U jednom drugom aspektu pronalaska, ova modulacija je modulacija ADCC, a u još jednom aspektu pronalaska, ova modulacija je nishodna modulacija ADCC. U jednom drugom aspektu, ova modulacija je nishodna modulacija ADCC i CDC, u jednom drugom ostvarenju, ova modulacija je nishodna modulacija samo ADCC, a u još jednom ostvarenju, ova modulacija je nishodna modulacija ADCC i CDC i/ili ADCP. U jednom drugom aspektu pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu u skladu sa pronalaskom vrše nishodnu modulaciju ili redukciju ADCC / CDC i ADCP.
U daljem aspektu pronalaska, redukcija ili nishodna modulacija ADCC ili CDC ili ADCP, koje indukuje polipeptid koji sadrži Fc varijantu, predstavlja smanjenje od 0, 2.5, 5, 10, 20, 50 ili 75% vrednosti koja se zapaža u slučaju indukcije ADCC, ili CDC, odnosno ADCP posredstvom polipeptida koji sadrži Fc region divljeg tipa.
U nekim daljim aspektima pronalaska, modulacija ADCC, indukovana posredstvom polipeptida koji sadrže Fc varijantu u skladu sa pronalaskom, predstavlja smanjene jačine, tako da je EC50 navedene Fc varijante približno >10-puta smanjena u poređenju sa polipeptidom koji sadrži Fc polipeptida divljeg tipa.
U jednom drugom aspektu, varijanta u skladu sa pronalaskom je lišena bilo kakve značajne ADCC i/ili CDC i/ili ADCP aktivnosti, u prisustvu humanih efektorskih ćelija, ako se uporedi sa polipeptidom koji sadrži Fc polipeptida divljeg tipa.
U jednom drugom aspektu pronalaska, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju smanjenje, na primer, smanjenje od najmanje 20%, ili jače smanjenje, na primer, smanjenje od najmanje 50% efektorske funkcije, što bi moglo predstavljati smanjenje ADCC (nishodna modulacija), CDC i/ili ADCP.
Smanjena ADCC aktivnost
Mogu se izvršiti in vitro i/ili in vivo testovi citotoksičnosti da bi se potvrdila redukcija/iscrpljivanje CDC i/ili ADCC aktivnosti. Na primer, testovi vezivanja za Fc receptor (FcR) mogu se izvesti da bi se obezbedilo da antitelo ne pokazuje vezivanje za FcgR (otuda, verovatno gubitak ADCC aktivnosti), ali uz zadržavanje sposobnosti vezivanja za FcRn. Primarne ćelije za moduliranje ADCC, NK ćelije, ekspresuju samo FcgRIII, dok monociti ekspresuju FcgRI, RII i RIII. Ekspresija FcR na ćelijama hematopoeze sažeto je prikazana u Tabeli 3 na strani 464 iz Ravetch i Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9 (1991) 457-492. Ne- ograničavajući primeri in vitro testova za procenu ADCC aktivnosti molekula od značaja, opisani su u U.S. Patentu Br.5,500,362 (vidi, npr., Hellstrom, I., et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 83 (1986) 7059-7063) i Hellstrom, I., et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 82 (1985) 1499-1502; US 5,821,337 (vidi Bruggemann, M., et al., J. Exp. Med.166 (1987) 1351-1361). Alternativno, mogu biti korišćeni postupci ne-radioaktivnih testova (vidi, na primer, ACTI™ ne-radioaktivni test citotoksičnosti za protočnu citometriju (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA; i CytoTox 96® ne-radioaktivni test citotoksičnosti (Promega, Madison, WI). Korisne efektorske ćelije za takve testove uključuju mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) i ćelije prirodne ubice (NK). Alternativno, ili dodatno, ADCC aktivnost molekula od značaja može se proceniti in vivo, npr., na životinjskom modelu, kao što su modeli koji su prikazani u Clynes, et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 95 (1998) 652-656. Takođe mogu biti izvršeni testovi vezivanja za C1q, da bi se potvrdilo da antitelo nije u stanju da se vezuje sa C1q, te, stoga, ne poseduje CDC aktivnost. Vidi, npr., C1q and C3c binding ELISA u WO 2006/029879 i WO 2005/100402. Da bi se izvršila procena aktivacije komplementa, može se izvesti CDC test (vidi, na primer, Gazzano-Santoro, et al., J. Immunol. Methods 202 (1996) 163; Cragg, M.S., et al., Blood 101 (2003) 1045-1052; i
Cragg, M.S., i Glennie, M.J., Blood 103 (2004) 2738-2743). Utvrđivanje vezivanje za FcRn i in vivo određivanja klirensa/polu-života, takođe, mogu biti izvedeni korišćenjem u struci poznatih, postupaka (vidi, npr., Petkova, S.B., et al., Int’l. Immunol.18(12) (2006) 1759-1769).
Zamišljeno je da su polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska karakterisani posredstvom in vitro funkcionalnih testova za određivanje jednog ili više FcyR-om posredovanih efektorskih ćelijskih funkcija. U određenim ostvarenjima, antitela pronalaska imaju slične vezujuće karakteristike i efektorske ćelijske funkcije na in vivo modelima (kao što su oni koji su ovde opisani i prikazani), poput onih u testovima na in vitro bazi. Međutim, ovaj pronalazak ne isključuje varijante pronalaska koje ne ispoljavaju željeni fenotip u testovima na in vitro bazi, ali ispoljavaju željeni fenotip in vivo. U jednom ostvarenju, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska pokazuju smanjene ADCC aktivnosti, ako se uporede sa Fc polipeptida divljeg tipa koji nije modifikovan. U drugom aspektu, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju ADCC aktivnosti koje su najmanje 2 puta, ili najmanje 3 puta, ili najmanje 5 puta, ili najmanje 10 puta, ili najmanje 50 puta, ili najmanje 100 puta manje od aktivnosti antitela koje nije modifikovano. U jednom drugom ostvarenju, antitela pronalaska pokazuju ADCC aktivnosti, koje su smanjene za najmanje 10%, ili za najmanje 20%, ili za najmanje 30%, ili za najmanje 40%, ili za najmanje 50%, ili za najmanje 60%, ili za najmanje 70%, ili za najmanje 80%, ili za najmanje 90%, ili za najmanje 100% u odnosu na antitelo koje nije modifikovano. U daljem aspektu pronalaska, redukcija ili nishodna modulacija ADCC, koja je indukovana od strane polipeptida koji sadrži Fc varijantu, jeste redukcija do 0, 2.5, 5, 10, 20, 50 ili 75% u odnosu na vrednost, koja se zapaža u slučaju indukcije ADCC, CDC, odnosno ADCP, posredstvom polipeptida koji sadrži Fc region divljeg tipa. U određenim stvarenjima, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ne poseduju detektibilnu ADCC aktivnost. U specifičnim ostvarenjima, redukcija i/ili odstranjivanje ADCC aktivnosti može se pripisati smanjenom afinitetu polipeptida koji sadrži Fc varijantu pronalaska za Fc ligande i/ili receptore. U specifičnom ostvarenju pronalaska, nishodna modulacija ADCC predstavlja smanjenje jačine, tako da je EC50 navedenog polipeptida, koji sadrži Fc varijantu, smanjena približno 10-puta ili više, ako se uporedi sa Fc polipeptida divljeg tipa.
U jednom drugom aspektu, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu u skladu sa pronalaskom, vrše modulaciju ADCC i/ili CDC i/ili ADCP. U specifičnom aspektu, varijante u skladu sa pronalascima, pokazuju smanjenu CDC i ADCC i/ili ADCP aktivnost.
Smanjena CDC aktivnost
Put aktivacije komplementa pokreće se posredstvom vezivanja prve komponente sistema komplementa (C1q) za molekul, na primer antitela, koji je vezan u kompleks sa srodnim antigenom. Da bi se procenila aktivacija komplementa, može se izvršiti CDC test, npr., poput testa, opisanog u Gazzano-Santoro, et al, J. Immunol. Methods 202 (1996) 163.
Karakteristike vezivanja različitih varijanti za C1q mogu se analizirati putem ELISA imuno-testa sendvič tipa. Koncentracija antitela na polovini maksimalnog odgovora određuje<vrednost EC>50<. Ovo očitavanje se prikazuje kao relativna razlika u odnosu na referentni>standard,izmeren na istoj ploči, zajedno sa koeficijentom varijacije uzorka i referentnog standarda.
U jednom ostvarenju, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu u skladu sa pronalaskom, ispoljavaju smanjene afinitete za C1q, u odnosu na polipeptid divljeg tipa. U drugom ostvarenju, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu u skladu sa pronalaskom, ispoljavaju afinitete za C1q receptor, koji su najmanje 2 puta, ili najmanje 3 puta, ili najmanje 5 puta, ili najmanje 7 puta, ili najmanje 10 puta, ili najmanje 20 puta, ili najmanje 30 puta, ili najmanje 40 puta, ili najmanje 50 puta, ili najmanje 60 puta, ili najmanje 70 puta, ili najmanje 80 puta, ili najmanje 90 puta, ili najmanje 100 puta, ili najmanje 200 puta, manji od afiniteta polipeptida divljeg tipa.
U drugom ostvarenju, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu u skladu sa pronalaskom pokazuju afinitete prema C1q, koji su najmanje 90%, najmanje 80%, najmanje 70%, najmanje 60%, najmanje 50%, najmanje 40%, najmanje 30%, najmanje 20%, najmanje 10% ili najmanje 5% manji od afiniteta polipeptida divljeg tipa. U drugom ostvarenju, varijante u skladu sa pronalaskom, ispoljavaju afinitete za C1q, koji su između približno 100 nM do približno 100 µM, ili oko 100 nM do oko 10 µM, ili oko 100 nM do oko 1 µM, ili oko 1 nM do oko 100 µM, ili oko 10 nM do oko 100 µM, ili oko 1 µM do približno 100 µM, ili oko 10 µM do oko 100 µM. U određenim ostvarenjima, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju afinitete za CIq koji su veći od 1 µM, veći od 5 µM, veći od 10 µM, veći od 25 µM, veći od 50 µM ili veći od 100 µM.
Polipeptid koji sadrži Fc varijantu pronalaska, kao što je ovde opisano može da ispoljava smanjene CDC aktivnosti u poređenju sa Fc polipeptida divljeg tipa. Polipeptid koji sadrži Fc varijantu pronalaska kao što je ovde opisano može da pokazuje CDC aktivnosti, koje su najmanje 2 puta, ili najmanje 3 puta, ili najmanje 5 puta, ili najmanje 10 puta, ili najmanje 50 puta, ili najmanje 100 puta manje od aktivnosti polipeptida divljeg tipa. Polipeptid koji sadrži Fc varijantu pronalaska kao što je ovde opisano može da pokazuje CDC aktivnosti, koje su smanjene za najmanje 10%, ili za najmanje 20%, ili za najmanje 30%, ili za najmanje 40%, ili za najmanje 50%, ili za najmanje 60%, ili za najmanje 70%, ili za najmanje 80%, ili za najmanje 90%, ili za najmanje 100%, ili za najmanje 200%, ili za najmanje 300%, ili za najmanje 400%, ili za najmanje 500% u odnosu
polipeptid divljeg tipa. Opciono, polipeptid koji sadrži Fc varijantu ovde opisanu može da ispoljava ne detektibilne CDC aktivnosti. U posebnim slučajevima, smanjenje i/ili odstranjivanje CDC aktivnosti može se pripisati smanjenom afinitetu polipeptida koji sadrže Fc varijantu za Fc ligande i/ili receptore.
Smanjena toksičnost povezana sa antitelom
U struci se podrazumeva da biološke terapije mogu ispoljiti štetna toksična dejstva, udružena sa kompleksnom prirodom upravljanja imunim sistemom, da bi se prepoznale i napale neželjene ćelije i/ili mete. Kada se prepoznavanje i/ili ciljanje mete za napad ne odvija na mestima gde je potreban tretman, mogu se desiti posledice, kao što su sporedna toksična dejstva. Na primer, bojenje antitela u tkivima koja nisu mete može biti pokazatelj potencijalnih toksičnih efekata.
U jednom aspektu, polipeptid koji sadrži Fc varijantu pronalaska pokazuju smanjenu obojenost tkiva koja nisu mete, u poređenju sa polipeptidom divljeg tipa. U drugom aspektu, polipeptid koji sadrži Fc varijantu pronalaska pokazuje smanjenu obojenost tkiva koja nisu mete, pri čemu je obojenost smanjena najmanje 2 puta, ili najmanje 3 puta, ili najmanje 5 puta, ili najmanje 7 puta, ili najmanje 10 puta, ili najmanje 20 puta, ili najmanje 30 puta, ili najmanje 40 puta, ili najmanje 50 puta, ili najmanje 60 puta, ili najmanje 70 puta, ili najmanje 80 puta, ili najmanje 90 puta, ili najmanje 100 puta, ili najmanje 200 puta u odnosu na obojenost kod Fc polipeptida divljeg tipa. U drugom ostvarenju, varijante pronalaska pokazuju smanjenu obojenost tkiva koja nisu mete, pri čemu je obojenost smanjena za najmanje 10%, ili za najmanje 20%, ili za najmanje 30%, ili za najmanje 40%, ili za najmanje 50%, ili za najmanje 60%, ili za najmanje 70%, ili za najmanje 80%, ili za najmanje 90%, ili za najmanje 100%, ili za najmanje 200%, ili za najmanje 300%, ili za najmanje 400% ili za najmanje 500% u odnosu na Fc polipeptida divljeg tipa.
U jednom ostvarenju, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju smanjenu toksičnost, povezanu sa antitelom, ako se ista uporedi sa polipeptidom divljeg tipa. U drugom ostvarenju, polipeptid koji sadrži Fc varijantu pronalaska ispoljava toksična dejstva koja su najmanje 2 puta, ili najmanje 3 puta, ili najmanje 5 puta, ili najmanje 7 puta, ili najmanje 10 puta, ili najmanje 20 puta, ili najmanje 30 puta, ili najmanje 40 puta, ili najmanje 50 puta, ili najmanje 60 puta, ili najmanje 70 puta, ili najmanje 80 puta, ili najmanje 90 puta, ili najmanje 100 puta ili najmanje 200 puta manja od toksičnih dejstava polipeptida divljeg tipa. U drugom aspektu, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska ispoljavaju toksična dejstva, koja su smanjena za najmanje 10%, ili za najmanje 20%, ili za najmanje 30%, ili za najmanje 40%, ili za najmanje 50%, ili za najmanje 60%, ili za najmanje 70%, ili za najmanje 80%, ili za najmanje 90%, ili za najmanje 100%, ili za najmanje 200%, ili za najmanje 300%, ili za najmanje 400%, ili za najmanje 500% u odnosu na polipeptid divljeg tipa.
Agregacija trombocita
Za polipeptide kako su ovde opisani, polipeptyd divljeg tipa može da indukuje aktivaciju trombocita i/ili agregaciju trombocita, a njegove varijante, t.j., polipeptidi koji sadrže varijante Fc, mogu da pokazuju smanjenu ili čak eliminisanu aktivaciju i/ili agregaciju trombocita. Ovi polipeptidi divljeg tipa mogu biti antitela sa ciljanim delovanjem na protein trombocita. Antitelo može da bude CD9 antitelo. U drugom ostvarenju pronalaska ovo CD9 antitelo ima mutaciju na poziciji P329G i/ili na poziciji L234A / L235A. U daljem specifičnom ostvarenju, antitelo je karakterisano sekvencom SEQ ID NO-i: 8-14.
U ovoj oblasti se podrazumeva da biološke terapije mogu ispoljavati kao štetni efekat, agregaciju trombocita. In vitro i in vivo testovi bi mogli biti korišćeni za merenje agregacije trombocita. Pretpostavlja se da in vitro test odražava in vivo stanje.
Polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska kao što je ovde opisano mogu da ispoljavaju smanjenu trombocitnu agregaciju u in vitro testu, u poređenju sa polipeptidom divljeg tipa. Polipeptidi koji sadrže varijantu Fc pronalaska, kao što je ovde opisano, mogu da ispoljavaju smanjenu agregaciju trombocita u in vitro testu, koja je najmanje 2 puta, ili najmanje 3 puta, ili najmanje 5 puta, ili najmanje 7 puta, ili najmanje 10 puta, ili najmanje 20 puta, ili najmanje 30 puta, ili najmanje 40 puta, ili najmanje 50 puta, ili najmanje 60 puta, ili najmanje 70 puta, ili najmanje 80 puta, ili najmanje 90 puta, ili najmanje 100 puta, ili najmanje 200 puta manja od iste kod polipeptida divljeg tipa. Polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska kao što je ovde opisano mogu pokazivati smanjenu agregaciju trombocita u in vitro testu, koja je smanjena za najmanje 10%, ili najmanje 20%, ili za najmanje 30%, ili za najmanje 40%, ili za najmanje 50%, ili za najmanje 60%, ili za najmanje 70%, ili za najmanje 80%, ili za najmanje 90%, ili za najmanje 100%, ili za najmanje 200%, ili za najmanje 300%, ili za najmanje 400%, ili za najmanje 500% u odnosu na polipeptid divljeg tipa.
U jednom drugom aspektu, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalazaka, kako je ovde opisano, mogu da ispoljavaju smanjenu in vivo agregaciju trombocita, u poređenju sa polipeptidom divljeg tipa. U drugom aspektu, varijante pronalaska mogu da ispoljavaju smanjenu agregaciju trombocita u in vivo testu, koja je najmanje 2 puta, ili najmanje 3 puta, ili najmanje 5 puta, ili najmanje 7 puta, ili najmanje 10 puta, ili najmanje 20 puta, ili najmanje 30 puta, ili najmanje 40 puta, ili najmanje 50 puta, ili najmanje 60 puta, ili najmanje 70 puta, ili najmanje 80 puta, ili najmanje 90 puta, ili najmanje 100 puta, ili najmanje 200 puta manja od iste kod Fc polipeptida
41
divljeg tipa. U drugom ostvarenju, polipeptidi koji sadrže Fc varijantu pronalaska mogu da ispoljavaju smanjenu agregaciju trombocita u in vivo testu, koja je smanjena za najmanje 10%, ili najmanje 20%, ili za najmanje 30%, ili za najmanje 40%, ili za najmanje 50%, ili za najmanje 60%, ili za najmanje 70%, ili za najmanje 80%, ili za najmanje 90%, ili za najmanje 100%, ili za najmanje 200%, ili za najmanje 300%, ili za najmanje 400% ili za najmanje 500%, u odnosu na polipeptid divljeg tipa.
Internalizacija antitela
Varijante pronalaska se mogu vezivati za antigene ćelijske površine, koje mogu internalizovati, što dalje antitela uvodi u ćeliju. Čim se nađu unutar ćelije, varijante se mogu osloboditi u citoplazmu, ciljano usmeriti u specifični deo, ili ponovo vratiti na ćelijsku površinu. U nekim ostvarenjima, varijante pronalaska se vezuju sa antigenom ćelijske površine, koji internalizuju. U drugim ostvarenjima, antitela pronalaska mogu biti ciljano usmerena prema specifičnim organelama ili delovima ćelije. U nekim drugim ostvarenjima, varijante pronalaska mogu biti ponovo vraćene na površinski ili periferni deo ćelije, nakon internalizacije.
U specifičnom ostvarenju, antitelo pronalaska je specifično za p-selektin, CD9, CD19, CD81, CCR5 ili CXCR5, IL17a ili IL-33.
Izrada antitela
U poželjnom ostvarenju pronalaska, polipeptid koji sadrži Fc region, koji je modifikovan u skladu sa tekućim uputstvima, je antitelo. Postupci za proizvodnju antitela su sledeći:
Selekcija antigena i izrada
Kada je polipeptid antitelo, ono je usmereno prema antigenu od značaja. Poželjno, antigen je biološki značajan polipeptid, a primena antitela sisaru koji boluje od bolesti ili poremećaja, može dovesti do povoljnog terapeutskog dejstva kod tog sisara. Međutim, razmotrena su, takođe i antitela koja su usmerena prema ne-polipeptidnim antigenima (kao što su glikolipidni antigeni povezani sa tumorom; vidi U.S. Pat. No.5,091,178).
Kada je antigen polipeptid, on može biti transmembranski molekul (npr., receptor) ili ligand, kao što je faktor rasta. Primeri antigena uključuju molekule kao što su: renin; hormon rasta, uključujući humani hormon rasta i goveđi hormon rasta; faktor oslobađanja hormona rasta; paratiroidni hormon; tiroidni stimulišući hormon; lipoproteini; alfa-1-antitripsin; A-lanac insulina; B-lanac insulina; proinsulin; folikulo-stimulišući hormon; kalcitonin; luteinizacijski hormon; glukagon; faktori koagulacije, kao što je faktor VIIIC, faktor IX, tkivni faktor (TF) i von Willebrandov faktor; anti-koagulacijski faktori, kao što je protein C; atrijski natriuretski faktor; plućni surfaktant; aktivator plazminogena, kao što je urokinaza ili humani aktivator plazminogena urokinaznog ili tkivnog tipa (t-PA); bombesin; trombin; hemopoetski faktor rasta; tumor-nekrozis faktor-alfa i -beta; enkefalinaza; RANTES hemokini (ʺregulated on activation normally T-cell expressed and secretedʺ); humani makrofagni inflamatorni protein (MIP-1-alfa); serumski albumin, kao što je humani serumski albumin; Muellerian-inhibirajuća supstanca; A- lanac relaksina; B-lanac relaksina; prorelaksin; mišji peptid udružen sa gonadotropinom; mikrobni protein, kao što je betalaktamaza; DNaza; IgE; citotoksični antigen povezan sa T- limfocitima (CTLA), kao što je CTLA-4; inhibin; aktivin; vaskularni endotelni faktor rasta (VEGF); receptori za hormone ili faktore rasta; protein A ili D; reumatoidni faktori; neurotrofni faktor, kao što je neurotrofni faktor, dobijen iz kosti (BDNF), neurotrofin-3, -4, -5 ili -6 (NT-3, NT-4, NT-5 ili NT-6), ili nervni faktor rasta, kao što je NGF-b; faktor rasta dobijen iz trombocita (PDGF); fibroblastni faktor rasta, kao što je aFGF i bFGF; epidermalni faktor rasta (EGF); transformacijski faktor rasta (TGF), kao što je TGF-alfa i TGF-beta, uključujući TGF-b1, TGF-b2, TGF-b3, TGF-b4 ili TGF-b5; insulinu sličan faktor rasta-I i -II (IGF-I i IGF-II); des(1-3)-IGF-I (moždani IGF-I), vezujući proteini insulinu-sličnog faktora rasta; CD proteini, kao što je: CD4, CD8, CD19 i CD20; eritropoetin; osteo-induktivni faktori; imunotoksini; koštani morfogenetski
protein (BMP); interferon, kao što je interferon-alfa, -beta i -gama; faktori koji stimulišu kolonije (CSF-i), npr., M-CSF, GM-CSF i G-CSF; interleukini (IL-i), npr., IL-1 do IL-10; superoksid dismutaza; površinski membranski proteini; faktor ubrzavanja truljenja; virusni antigen, kao što je, na primer, deo omotača virusa AIDS-a; transportni proteini; ʺhomingʺ receptori; adresini; regulatorni proteini; integrini, kao što su: CD11a, CD11b, CD11c, CD18, ICAM, VLA-4 i VCAM; antigen povezan sa tumorom, kao što je HER2, HER3 ili HER4 receptor; i fragmenti bilo kog od prethodno-navedenih polipeptida.
Poželjne molekulske meta za antitela obuhvaćena ovim pronalaskom uključuju: CD proteine, kao što su: CD4, CD8, CD19, CD20 i CD34; članove familije ErbB receptora, kao što je EGF receptor, HER2, HER3 ili HER4 receptor; molekule ćelijske adhezije, kao što su: LFA-1, Mac1, p150.95, VLA-4, ICAM-1, VCAM, a4/b7 integrin i av/b3 integrin, uključujući njihove a ili b subjedinice (npr., anti-CD11a, anti-CD18 ili anti-CD11b antitela); faktore rasta, kao što je VEGF; tkivni faktor (TF); alfa interferon (a-IFN); interleukin, kao što je IL-8; IgE; antigene krvnih grupa; flk2/flt3 receptor; obesitasni (OB) receptor; mpl receptor; CTLA-4; protein C, itd..
Rastvorljivi antigeni ili njihovi fragmenti, koji su opciono konjugovani sa drugim molekulima, mogu biti korišćeni kao imunogeni za proizvodnju antitela. Za transmembranske molekule, kao što su receptori, kao imunogen se mogu koristiti njihovi fragmenti (npr., ekstracelularni domen receptora). Alternativno, ćelije koje ekspresuju transmembranski molekul mogu biti korišćene kao imunogen. Takve ćelije mogu biti dobijene iz prirodnog izvora (npr., linije kancerskih ćelija) ili mogu biti ćelije koje su transformisane korišćenjem rekombinantnih tehnika, da bi se ekspresovao transmembranski molekul. Ostali antigeni i njihovi oblici, koji su od koristi za izradu antitela, biće očigledni stručnjacima u ovoj oblasti.
Poliklonska antitela
Poliklonska antitela se, poželjno, razvijaju na životinjama, posredstvom višestrukih subkutanih (sc) ili intraperitonealnih (ip) injekcija odgovarajućeg antigena i adjuvansa. Od koristi može biti da se odgovarajući antigen konjuguje sa proteinom koji je imunogen u speciesu koji se imunizuje, npr., hemocijanin iz mekušca Megathura crenulata, serumski albumin, goveđi tireoglobulin ili sojin inhibitor tripsina, uz korišćenje bifunkcionalnog ili derivatizacijskog sredstva, na primer, maleimidobenzoil sulfosukcinimid estra (konjugovanje preko cisteinskih ostataka), N-hidroksisukcinimida (preko ostataka lizina), glutaraldehida, sukcinskog anhidrida, SOCl2ili karbodiimida, pri čemu su R i R<1>različite alkil grupe.
Životinje se imunizuju protiv antigena, imunogenih konjugata ili derivata uz pomoć kombinovanja, npr., 100 µg ili 5 µg proteina ili konjugata (za zečeve, odnosno, za miševe) sa 3 zapremine Freundovog kompletnog adjuvansa i injiciranja rastvora interdermalno na više položaja. Mesec dana kasnije, životinjama su date booster doze, u količini od, na primer, 1/10 originalne količine peptida ili konjugata u Freundovom kompletnom adjuvansu, putem subkutanog injiciranja na više položaja. Sedam do 14 dana kasnije, životinjama je uzeta krv, a serum je testiran na titar antitela. Životinjama su davane booster doze dok se ne postigne prag titra antitela. Poželjno, životinjama su davane booster doze konjugata istog antigena, ali koji je konjugovan sa različitim proteinom i/ili preko različitog reagensa unakrsnog povezivanja. Konjugati se, takođe, mogu izraditi u rekombinantnoj ćelijskoj kulturi, u vidu fuzija proteina. Isto
tako, agregacijska sredstva, kao što je stipsa, pogodno se mogu koristiti za pojačavanje imunog odgovora.
Monoklonska antitela
Monoklonska antitela mogu biti izrađena korišćenjem hibridoma postupka, koji su prvi opisali Kohler i saradnici u Nature, 256 (1975) 495, ili se mogu izraditi uz pomoć rekombinantnih DNA postupaka (U.S. Pat. No.4,816,567).
U hibridoma postupku, miš ili druga pogodna životinja domaćin, kao što je hrčak ili makaki majmun, imunizuju se na način koji je ovde prethodno opisan, da bi se podstakli limfociti koji proizvode ili su u stanju da proizvode antitela, koja će se specifično vezivati sa proteinom koji se koristi za imunizaciju. Alternativno, limfociti se mogu imunizovati in vitro. Limfociti se, zatim, spajaju sa ćelijama mijeloma, uz korišćenje pogodnog sredstva za spajanja, kao što je polietilen glikol, da bi se obrazovala ćelija hibridoma (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press (1986) pp.59-103).
Tako pripremljene ćelije hibridoma zasejavaju se i uzgajaju u pogodnom medijumu za kultivaciju, koji poželjno sadrži jednu ili više supstanci koje inhibiraju rast ili preživljavanje nespojenih, matičnih ćelija mijeloma. Na primer, ukoliko su matične ćelije mijeloma bez enzima hipoksantin gvanin fosforibozil transferaze (HGPRT ili HPRT), medijum za kultivaciju za hibridome obično će sadržavati hipoksantin, aminopterin i timidin (HAT medijum), supstance koje sprečavaju rast HGPRT-deficijentnih ćelija.
Poželjne ćelije mijeloma su one ćelije koje se efikasno spajaju, koje podstiču stabilnu proizvodnju visokih nivoa antitela, posredstvom odabranih ćelija koje proizvode antitela, i koje su senzitivne na medijum, kao što je HAT medijum. Među njima, poželjne ćelijske linije mijeloma su linije mišjeg mijeloma, kao što su nizovi koji su dobijeni iz MOPC-21 i MPC-11 mišjih tumora, raspoloživih posredstvom Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, Calif., SAD, i SP-2 ili X63-Ag8-653 ćelija, dostupnih posredstvom American Type Culture Collection, Rockville, Md., SAD. Ćelijske linije humanog mijeloma i mišje-humanog heteromijeloma, takođe su opisane za proizvodnju humanih monoklonskih antitela (Kozbor, J., Immunol.133 (1984) 3001; Brodeur, et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., New York (1987) pp.51-63).
Izvršeno je ispitivanje medijuma za kultivaciju, u kome se uzgajaju ćelije hibridoma, na proizvodnju monoklonskih antitela prema antigenu. Poželjno, specifičnost vezivanja monoklonskih antitela, proizvedenih od strane ćelija hibridoma, utvrđuje se putem imunoprecipitacije ili posredstvom in vitro testa vezivanja, kao što je radio-imuno test (RIA) ili enzim-vezani imuno-apsorbent test (ELISA).
Nakon što su identifikovane ćelije hibridoma koje proizvode antitela željene specifičnosti, afiniteta i/ili aktivnosti, klonovi se mogu sub-klonirati, ograničavanjem dilucionih procedura i gajiti putem standardnih postupaka (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press (1986) pp. 59-103). Pogodni medijumi za kultivaciju za ove potrebe, uključuju, na primer, D-MEM ili RPMI-1640 medijum. Pored toga, ćelije hibridoma mogu se gajiti in vivo kao ascites tumori kod životinja.
Monoklonska antitela, koje sekretuju subklonovi, pogodno se izdvajaju iz medijuma za kultivaciju, tečnosti ascitesa ili seruma putem konvencionalnih procedura prečišćavanja imunoglobulina, kao što su, na primer, protein A-sefaroza, hidroksilapatit hromatografija, gelelektroforeza, dijaliza ili afinitetna hromatografija.
DNA, koje kodira monoklonska antitela, jednostavno se izdvaja i sekvencira korišćenjem konvencionalnih procedura (npr., korišćenjem oligonukleotidnih proba koje su u stanju da se specifično vezuju sa genima koji kodiraju teške i lake lance monoklonskih antitela). Ćelije hibridoma služe kao poželjni izvor takve DNA. Čim se izoluje, DNA može biti stavljena u ekspresione vektore, koji se, nakon toga, transfektuju u domaćinske ćelije, kao što su ćelije E. coli, majmunske COS ćelije, ćelije jajnika kineskog hrčka (CHO) ili ćelije mijeloma, koje ne proizvode imunoglobulinski protein na drugačiji način, da bi se postigla sinteza monoklonskih antitela u rekombinantnim domaćinskim ćelijama. Rekombinantna proizvodnja antitela biće detaljnije opisana u nastavku.
U daljem ostvarenju, antitela ili fragmenti antitela mogu se izolovati iz biblioteka faga antitela, proizvedenih korišćenjem tehnika, koje su opisane u McCafferty, J., et al., Nature 348 (1990) 552-554. Clackson i saradnici u Nature 352 (1991) 624-628 i Marks i saradnici u J. Mol. Biol. 222 (1991) 581-597 opisuju izolovanje mišjih, odnosno humanih antitela, korišćenjem biblioteka faga. Sledeće publikacije opisuju proizvodnju visoko-afinitetnih (raspon u nM) humanih antitela putem mešanja lanaca (Marks, et al., Bio/Technology 10 (1992) 779-783), kao i kombinatornom infekcijom i in vivo rekombinovanjem kao strategijom za konstruisanje veoma velikih biblioteka faga (Waterhouse, et al., Nuc. Acids. Res. 21 (1993) 2265-2266). Sledstveno tome, ove tehnike su održive alternative tradicionalnim hibridoma tehnikama monoklonskih antitela za izolovanje monoklonskih antitela.
DNA, takođe, može biti modifikovana, na primer, supstituisanjem kodirajuće sekvence konstantnim domenima humanih teških i lakih lanaca umesto homolognih mišjih sekvenci (U.S. Pat. No.4,816,567; Morrison, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81 (1984) 68516855) ili putem kovalentnog povezivanja sa imunoglobulinskom kodirajućom sekvencom, kompletne ili delimične kodirajuće sekvence za ne-imunoglobulinski polipeptid.
Uobičajeno, takvi ne-imunoglobulinski polipeptidi su supstituisani konstantnim domenima antitela, ili se zamenjuju varijabilnim domenima jednog antigen-kombinujućeg položaja na antitelu, da bi se kreiralo himerično dvovalentno antitelo koje sadrži jedan antigen- kombinujući položaj koji poseduje specifičnost za određeni antigen i drugi antigen-kombinujući položaj koji poseduje specifičnost za drugačiji antigen.
Afinitet antitela
U izvesnim ostvarenjima, ovde obezbeđeno antitelo ima konstantu disocijacije (Kd) od £ 1µM, £ 100 nM, £ 10 nM, £ 1 nM, £ 0.1 nM, £ 0.01 nM, ili £ 0.001 nM (npr.10<-8>M ili manja, npr., od 10<-8>M do 10<-13>M, npr., od 10<-9>M do 10<-13>M).
U jednom ostvarenju, Kd se meri pomoću testa vezivanja radio-obeleženog antigena ili Fc receptora (RIA), koji se izvodi sa Fab verzijom antitela od interesa i njegovog antigena, kako je opisano u testu koji sledi. Afinitet vezivanja Fab u rastvoru za antigen se meri uravnotežavanjem Fab sa minimalnom koncentracijom (<125>J)-obeleženog antigena u prisustvu titracionih serija neobeleženog antigena, a zatim, hvatanjem vezanog antigena sa anti-Fab antitelom kojim je obložena ploča (vidi, npr., Chen, et al., J. Mol. Biol.293 (1999) 865-881). Da se utvrde uslovi za test, MICROTITER® ploče sa višestrukim pozicijama (Thermo Scientific) oblažu se preko noći sa 5 µg/ml anti-Fab antitela hvatača (Cappel Labs) u 50 mM natrijum karbonatu (pH 9.6) i, zatim se blokiraju sa 2% (w/v) goveđim serum albuminom u PBS tokom dva do pet sati na sobnoj temperaturi (otprilike 23°C). U ploči bez adsorbensa (Nunc #269620), 100 pM ili 26 pM [<125>J]-antigena se pomeša sa serijskim razblaženjima Fab od značaja (npr., dosledno sa ispitivanjem anti-VEGF antitela, Fab-12, u: Presta, et al., Cancer Res.57 (1997) 4593-4599). Fab od značaja se zatim inkubira preko noći; međutim, inkubacija može trajati duži period (npr., oko 65 sati) da bi se osiguralo postizanje ekvilibrijuma.
Posle toga, mešavina se prenosi u ploču za hvatanje radi inkubacije na sobnoj temperaturi (npr., u toku jednog sata). Onda se uklanja rastvor i ploča ispira osam puta sa 0.1% polisorbatom 20 (TWEEN-20®) u PBS. Kada se ploča osuši, dodaje se 150 µl/poziciji scintilanta (MICROSCINT-20™; Packard), te se ploče podvrgnu brojanju u TOPCOUNT™ gama brojaču (Packard) tokom deset minuta. Koncentracije svakog Fab koje pokazuju manje od ili jednako 20% maksimalnog vezivanja se biraju za primenu u testu kompetitivnog vezivanja.
Prema drugom ostvarenju, Kd se meri pomoću testa površinske plazmon rezonance na BIACORE®-2000 ili BIACORE®-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) na 25°C sa imobilisanim antigenom ili Fc receptorom na CM5 čipovima pri -10 jedinica odgovora (RU). Ukratko, karboksimetilovan-dekstranski biosenzor čipovi (CM5, BIACORE, Inc.) se aktiviraju sa N-etil-N’-(3-dimetilaminopropil)-karbodiimid hidrohloridom (EDC) i N-hidroksisukcinimidom (NHS) prema uputstvima snabdevača. Antigen se razblaži sa 10 mM natrijum acetatom, pH 4.8, do 5 µg/ml (~0.2 µM) pre injektovanja pri brzini protoka od 5 µl/minuti kako bi se aproksimativno postiglo 10 jedinica odgovora (RU) kuplovanog proteina. Posle injektovanja antigena, injektuje se 1M etanolamin da bi se blokirale neizreagovane grupe. Za kinetička merenja, dvostruka serijska razblaženja Fab (0.78 nM do 500 nM) se injektuju u PBS sa 0.05% polisorbat 20 (TWEEN-20™)surfaktanta (PBST) na 25°C pri brzini protoka od otprilike 25 µl/min. Brzine<asocijacije (k>on<) i brzine disocijacije (k>off<) se izračunavaju primenom jednostavnog jedan-na->jedan Langmuir modelavezivanja (BIACORE® Evaluation Software version 3.2) istovremenim podešavanjem senzograma asocijacije i disocijacije. Ravnotežna konstanta disocijacije (Kd) se<računa kao odnos k>off</k>on<. Vidi, npr., Chen, et al., J. Mol. Biol. 293 (1999) 865-881. Ukoliko>brzina asocijacije prelazi10<6>M<-1>s<-1>gornjim testom površinske plazmon rezonance, onda se brzina asocijacije može odrediti pomoću tehnike gašenja fluorescencije koja meri rast ili pad intenziteta fluorescentne emisije (ekscitacija = 295 nm; emisija = 340 nm, 16 nm propuštajuća traka) na 25°C 20 nM antiantigen antitela (Fab oblik) u PBS, pH 7.2, u prisustvu rastućih koncentracija antigena što se meri na spektrometru, kao što je spektrofometar opremljen stop- protokom (Aviv Instruments) ili 8000-series SLM-AMINCO™ spektrofotometar (ThermoSpectronic) sa kivetom sa mešanjem.
U izvesnim ostvarenjima, ovde obezbeđeno antitelo je fragment antitela. Fragmenti antitela obuhvataju, ali nisu ovima ograničeni, Fab, Fab’, Fab’-SH, F(ab’)2, Fv i scFv fragmente i, druge fragmente opisane u nastavku. Za pregled nekih fragmenata antitela, vidi: Hudson, et al., Nat. Med. 9 (2003) 129-134. Za pregled scFv fragmenata, vidi, npr., Pluckthün, u: The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol.113, Rosenburg and Moore eds., (Springer- Verlag, New York), pp.269-315 (1994); vidi, isto tako, WO 93/16185; i U.S. Patent Nos. US 5,571,894 i US 5,587,458 Radi rasprave o Fab i F(ab’)2 fragmentima koji obuhvataju ostatke vezujućeg epitopa spasavajućeg receptora i koji imaju produžen in vivo polu-život, vidi U.S. Patent No. US 5,869,046.
Diatela su fragmenti antitela sa dva antigen-vezujuća položaja, koja mogu biti bivalentna ili bispecifična. vidi, na primer, EP 0404097; WO 1993/01161; Hudson, et al., Nat.
Med. 9 (2003) 129-134; i: Hollinger, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 6444-6448. Triatela i tetratela su, isto tako, opisana u: Hudson, et al., Nat. Med.9 (2003) 129-134.
Antitela sa jednim domenom su fragmenti antitela koja sadrže sav ili deo varijabilnog domena teškog lanca ili sav ili deo varijabilnog domena lakog lanca antitela. U izvesnim ostvarenjima, antitela sa jednim domenom su humana antitela sa jednim domenom (Domantis, Inc., Waltham, MA; vidi, npr., U.S. Patent No. US 6,248,516 B1).
Fragmenti antitela mogu se proizvesti različitim tehnikama, uključujući ali se neograničavajući na proteolitičku digestiju intaktnog antitela kao i proizvodnju pomoću rekombinantnih ćelija domaćina (npr. E. coli ili fag), kako je ovde opisano.
Himerična i humanizovana antitela
U izvesnim ostvarenjima, ovde obezbeđeno antitelo je himerično antitelo. Izvesna himerična antitela su opisana, npr., u: U.S. Patent No. US 4,816,567; i: Morrison, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81 (1984) 6851-6855). U jednom primeru, himerično antitelo sadrži ne- humani varijabilni region (npr., varijabilni region poreklom od miša, pacova, hamstera, zeca, ili nehumanog primata, kao što je majmun) i humani konstantan region. U sledećem primeru, himerično antitelo je antitelo sa "isključene klase" u kom je izmenjena klasa ili subklasa u odnosu na matično antitelo. Himerična antitela uključuju njihove antigen-vezujuće fragmente.
U izvesnim ostvarenjima, himerično antitelo je humanizovano antitelo. Obično, nehumano antitelo se humanizuje radi smanjenja imunogenosti kod ljudi, dok se specifičnost i afinitet matičnog ne-humanog antitela zadržava. Generalno, humanizovano antitelo sadrži jedan ili više varijabilnih domena u kojima HVRs, npr., CDRs, (ili njegovi delovi) vode poreklo iz nehumanog antitela, a FRs (ili njegovi delovi) su poreklom od sekvenci humanog antitela. Humanizovano antitelo opciono će takođe sadržavati najmanje deo humanog konstantnog regiona. U nekim ostvarenjima, izvesni FR ostaci u humanizovanom antitelu su supstituisani sa odgovarajućim ostacima iz ne-humanog antitela (npr., antitelo u kome su HVR ostaci izvedeni), npr., da bi se obnovila ili poboljšala specifičnost ili afinitet antitela.
Humanizovana antitela i postupci njihove izrade su prikazani, npr., u: Almagro, and Fransson, Front. Biosci.13 (2008) 1619-1633, i dalje su opisani, npr., u: Riechmann, et al., Nature 332 (1988) 323-329; Queen, et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 86 (1989) 10029-10033;
US Patent Nos.5,821,337, 7,527,791, 6,982,321, i 7,087,409; Kashmiri, et al., Methods 36 (2005) 25-34 (opisuje SDR (a-CDR) grafting); Padlan, Mol. Immunol.28 (1991) 489-498 (opisuje "ponovno izbijanje na površinu"); Dall’Acqua, et al., Methods 36 (2005) 43-60 (opisuje
"FR mešanje"); i: Osbourn, et al., Methods 36 (2005)61-68 and Klimka, et al., Br. J. Cancer, 83 (2000) 252-260 (opisuje pristup "vođena selekcija" FR mešanju).
Humani regioni okvira, koji se mogu koristiti za humanizaciju, uključuju ali nisu ograničeni na: regione okvira odabrane primenom "best-fit" postupka (vidi, npr., Sims, et al., J. Immunol. 151 (1993) 2296); regione okvira izvedene iz konsenzus sekvence humanih antitela naročite podgrupe varijabilnih regiona lakog ili teškog lanca (vidi, npr., Carter, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89 (1992) 4285; i: Presta, et al., J. Immunol., 151 (1993) 2623); humane zrele (somatski mutirane) regione okvira ili regione okvira humane zametne linije (vidi, npr., Almagro, and Fransson, Front. Biosci. 13 (2008) 1619-1633); i regione okvira izvedene iz skriniranja FR biblioteka (vidi, npr., Baca, et al., J. Biol. Chem.272 (1997) 10678-10684 i: Rosok, et al., J. Biol. Chem.271 (1996) 22611-22618).
Humana antitela
U izvesnim ostvarenjima, ovde obezbeđeno antitelo je humano antitelo. Humana antitela se mogu proizvesti primenom raznih, u struci poznatih, tehnika. Humana antitela su generalno opisana u: van Dijk, and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5 (2001) 368-74 i: Lonberg, Curr. Opin. Immunol.20 (2008) 450-459.
Humana antitela se mogu proizvesti primenom imunogena transgenskoj životinji koja je modifikovana da proizvodi intaktna humana antitela ili intaktna antitela sa humanim varijabilnim regionima u odgovoru na izazov antigena. Ovakve životinje obično sadrže ceo ili deo humanog imunoglobulinskog lokusa, koji zamenjuje endogeni imunoglobulinski lokus, ili koji su prisutni ekstrahromozomski ili integrisani nasumično u hromozome životinje. U takvim transgenskim miševima, endogeni imunoglobulinski lokus generalno je inaktiviran. Radi pregleda postupaka za dobijanje humanih antitela iz transgenskih životinja, vidi Lonberg, Nat. Biotech.23 (2005) 1117-1125. Vidi, isto tako, npr., U.S. Patent Nos.6,075,181 i 6,150,584 koji opisuje XENOMOUSE™ tehnologiju; U.S. Patent No.5,770,429 opisuje HUMAB® tehnologiju;
U.S. Patent No.7,041,870 opisuje K-M MOUSE® tehnologiju, i U.S. publikaciju patentne prijave br. US 2007/0061900, opisuje VELOCIMOUSE® tehnologiju). Humani varijabilni regioni iz intaktnih antitela, generisanih u ovakvim životinjama, mogu dalje da se modifikuju, npr., kombinovanjem sa različitim humanim konstantnim regionom.
Humana antitela mogu se takođe proizvesti postupcima na bazi hibridoma. Opisane su ćelijske linije humanog mijeloma i mišijeg-humanog heteromijeloma u proizvodnji humanih monoklonskih antitela. (Vidi, npr., Kozbor, J. Immunol., 133 (1984) 3001; Brodeur, et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., New York, (1987) pp. 51-63; i: Boerner, et al., J. Immunol., 147 (1991) 86.) Humana antitela generisana preko tehnologije hibridoma humanih B-ćelija su, isto tako, opisana u: Li, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103 (2006) 3557-3562. Dodatni postupci uključuju one, koji su opisani, na primer, u: U.S. Patent No. 7,189,826 (koji opisuje proizvodnju monoklonskih humanih IgM antitela iz hibridoma ćelijskih linija) i: Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4) (2006) 265-268 (opisuje humani-humani hibridome). Tehnologija humanog hibridoma (Trioma tehnologija) je, isto tako, opisana u: Vollmers, and Brandlein, Histology and Histopathology 20(3) (2005) 927-937 i: Vollmers, and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology 27(3) (2005) 185-91.
Humana antitela mogu takođe da se generišu izolacijom sekvenci varijabilnog domena Fv klona odabranog iz biblioteka izlaganja faga poreklom od čoveka. Ove sekvence varijabilnog domena se onda mogu kombinovati sa željenim humanim konstantnim domenom. Tehnike za izbor humanih antitela iz biblioteka antitela su opisane u nastavku.
Antitela izvedena iz biblioteke
Antitela pronalaska mogu da se izoluju skriniranjem kombinatornih biblioteka na antitela koja imaju željenu aktivnost ili aktivnosti. Na primer, u struci su poznati razni postupci za generisanje biblioteka izlaganja faga i skriniranje takvih biblioteka na antitela koja imaju željene karakteristike vezivanja. Takvi postupci su prikazani u, npr., Hoogenboom, H.R., et al., u: Methods in Molecular Biology 178 (2002) 1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) i dalje opisani, npr., u: McCafferty, J., et al., Nature 348 (1990) 552-554; Clackson, et al., Nature 352 (1991) 624-628; Marks, et al., J. Mol. Biol.222 (1992) 581-597; Marks, kao i u: Bradbury, Methods in Molecular Biology 248161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu, et al., J. Mol. Biol.338(2) (2004) 299-310; Lee, et al., J. Mol. Biol.340(5) (2004)
1073-1093; Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34) (2004) 12467-12472; i Lee, et al., J. Immunol. Methods 284(1-2) (2004) 119-132.
U izvesnim postupcima izlaganja faga, repertoari VH i VL gena se zasebno kloniraju pomoću lančane reakcije polimeraze (PCR) i nasumično rekombinuju u bibliotekama faga, koji se onda mogu skrinirati na antigen-vezujući fag, kako je opisano u: Winter, et al., Ann. Rev. Immunol., 12 (1994) 433-455. Fag obično izlaže fragmente antitela, bilo kao jedno-lančane Fv (scFv) fragmente, bilo kao Fab fragmente. Biblioteke iz imunizovanih izvora obezbeđuju antitela visokog afiniteta za imunogen, bez neophodnog konstruisanja hibridoma. Alternativno, može se klonirati nekritički repertoar (npr., humani) kako bi se obezbedio jedan izvor antitela za široki spektar non-self (ne-samo antigen, poreklom izvan tela, prim. prev.) i, isto tako, self (samo antigen, poreklom iz tela, prim. prev.) antigena bez bilo kakve imunizacije, kako je opisao Griffiths, et al., EMBO J, 12 (1993) 725-734. Na kraju, nekritičke biblioteke se mogu, isto tako, proizvesti sintetski, kloniranjem segmenata nerearanžiranog V-gena iz stem ćelija i primenom PCR prajmera, koji sadrže random sekvencu za kodiranje visoko varijabilnih CDR3 regiona i za ostvarivanje rearanžmana in vitro, kako je opisao Hoogenboom, and Winter, J. Mol. Biol., 227 (1992) 381-388. Patentne publikacije, koje opisuju biblioteke faga humanih antitela obuhvataju, na primer: US Patent No. 5,750,373, kao i US Patent Publication Nos. 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 i 2009/0002360.
Antitela ili fragmenti antitela, izolovana iz biblioteka humanih antitela, ovde se smatraju humanim antitelima ili fragmentima humanih antitela.
Multispecifična antitela
U izvesnim ostvarenjima, ovde obezbeđeno antitelo je multispecifično antitelo, npr. bispecifično antitelo. Multispecifična antitela su monoklonska antitela koja imaju specifičnosti vezivanja za najmanje dva različita položaja. U izvesnim ostvarenjima, jedna specifičnost vezivanja je za jedan specifičan antigen dok je druga za bilo koji drugi antigen. U izvesnim ostvarenjima, bispecifična antitela mogu da se vežu za dva različita epitopa antigena. Bispecifična antitela mogu, isto tako, biti upotrebljena radi lokalizovanja citotoksičnih agenasa u ćelijama, koje ekspresuju antigen za koji se antitelo vezuje. Bispecifična antitela mogu da se proizvedu kao antitela u punoj dužini ili u vidu fragmenata antitela.
Tehnike za proizvodnju multispecifičnih antitela obuhvataju, ali nisu ovima ograničene, rekombinantnu ko-ekspresiju dva imunoglobulinska para teški lanac-laki lanac, koja imaju različite specifičnosti (vidi: Milstein, and Cuello, Nature 305 (1983) 537, WO 93/08829, kao i: Traunecker, et al., EMBO J.10 (1991) 3655) i "knob-in-hole" (“čvor u otvoru”, prim. prev.) konstruisanje (vidi, npr., U.S. Patent No. 5,731,168). Multi-specifična antitela mogu, isto tako, biti proizvedena konstruisanjem efekata elektrostatičkog upravljanja za proizvodnju antitela Fc- heterodimernih molekula (WO 2009/089004 A1); unakrsnim povezivanjem dva ili više antitela ili fragmenata (vidi, npr., US Patent No. 4,676,980, kao i: Brennan, et al., Science, 229 (1985) 81); primenom leucinskih zipera (rajsferšlusa, prim. prev.) kako bi se proizvela bispecifična antitela (vidi, npr., Kostelny, et al., J. Immunol., 148(5) (1992) 1547-1553); primenom "diatelo"
tehnologije za proizvodnju fragmenata bispecifičnih antitela (vidi, npr., Hollinger, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90 (1993) 6444-6448); i primenom jedno-lančanih Fv (sFv) dimera (vidi, npr. Gruber, et al., J. Immunol., 152 (1994) 5368); i proizvodnjom trispecifičnih antitela kako je opisano, npr., u: Tutt, et al., J. Immunol.147 (1991) 60.
Konstruisana antitela sa tri ili više funkcionalnih antigen-vezujućih položaja, uključujući "oktopus antitela", ovde su takođe obuhvaćena (vidi, npr. US 2006/0025576 A1).
Antitelo ili fragment ovde, isto tako, obuhvata "FAb dvostrukog dejstva" ili "DAF", koji sadrže antigen-vezujući položaj kojim se vezuje specifičan antigen kao i drugi, različit antigen (vidi, US 2008/0069820, na primer).
Varijante antitela sa izmenjenim afinitetom vezivanja za antigen
U izvesnim ostvarenjima, poželjno je poboljšati afinitet vezivanja za antigen i/ili druga biološka svojstva antitela. Varijante aminokiselinske sekvence antitela mogu da se proizvedu uvođenjem odgovarajućih modifikacija u nukleotidnu sekvencu koja kodira antitelo, ili putem sinteze peptida. Ovakve modifikacije obuhvataju, na primer, delecije, i/ili insercije u i/ili supstitucije na ostacima unutar aminokiselinskih sekvenci antitela. Može se napraviti svaka kombinacija delecije, insercije i supstitucije da bi se došlo do konačne konstrukcije, čime se osigurava da konačna konstrukcija poseduje željene karakteristike, npr., vezivanje antigena.
Supstitucione, insercione i delecione varijante
U izvesnim ostvarenjima, obezbeđeni su polipeptidi koji sadrže Fc varijante, a koji dodatno imaju jednu ili više aminokiselinskih supstitucija u drugim delovima izvan Fc dela. Položaji koji su od značaja za supstitucionu mutagenezu obuhvataju HVRs i FRs. Konzervativne supstitucije su prikazane u Tabeli 1, u koloni "konzervativne supstitucije". Još važnih izmena je dato u Tabeli 1, u koloni "primeri supstitucija", kao i, kako je dalje opisano u nastavku, u odnosu na grupe aminokiselinskih bočnih lanaca. Aminokiselinske supstitucije mogu da se uvedu u antitelo od značaja i proizvodi skriniraju na željenu aktivnost, npr., zadržano/poboljšano vezivanje antigena, ili smanjenje imunogenosti.
Tabela 1:
grupisane prema zajedničkim osobinama bočnog lanca:
(1) hidrofobni: Ile, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) neutralno hidrofilni: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) kiseli: Asp, Glu;
(4) bazni: His, Lys, Arg;
(5) ostaci koji utiču na orijentaciju lanca: Gly, Pro; (6) aromatični: Trp, Tyr, Phe.
Ne-konzervativne supstitucije će zahtevati izmenu člana jedne od ovih grupa za drugu grupu.
Jedna vrsta supstitucione varijante uključuje supstituisanje jednog ili više ostataka hipervarijabilnog regiona matičnog antitela (npr. humanizovano ili humano antitelo). Generalno, dobijena(e) varijanta(e), odabrana(e) za dalje ispitivanje, imaće modifikovane (npr., poboljšanja) izvesne biološke osobine (npr., uvećan afinitet, smanjenu imunogenost) u odnosu na matično antitelo i/ili će imati suštinski zadržana izvesna biološka svojstva matičnog antitela. Supstituciona varijanta kao primer je antitelo zrelog afiniteta, koje je moglo pogodno da bude stvoreno, npr., primenom tehnika sazrevanja afiniteta na bazi izlaganja faga, kao što su one koje su ovde opisane. Ukratko, jedan ili više HVR ostataka su mutirani i varijantna antitela izložena na fagu i skrinirana na naročitu biološku aktivnost (npr. afinitet vezivanja).
Mogu se načiniti izmene (npr., supstitucije) u HVRs, npr., da bi se unapredio afinitet antitela. Takve izmene mogu da se načine u HVR "vrućim tačkama," tj., ostacima koje kodiraju kodoni koji podležu mutaciji pri visokoj frekvenciji tokom procesa somatskog sazrevanja (vidi, npr., Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207 (2008) 179-196), i/ili u SDRs (a-CDRs), sa nastalim varijantama VH ili VL koje se testiraju na afinitet vezivanja. Sazrevanje afiniteta putem konstruisanja i reselektovanja iz sekundarnih biblioteka je opisano, npr., u: Hoogenboom, et al., in Methods in Molecular Biology 178 (2002) 1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)). U izvesnim ostvarenjima sazrevanja afiniteta, uvodi se raznolikost u varijabilne gene odabrane za sazrevanje putem bilo kog od brojnih postupaka (npr., PCR sklon grešci, lančanog mešanja, ili oligonukleotid-usmerena mutageneza). Onda se kreira sekundarna biblioteka. Biblioteka se onda skrinira kako bi se identifikovala svaka varijanta antitela koja ima željeni afinitet. Drugi postupak da se uvede raznolikost uključuje HVR-usmerene pristupe, u kojima se nekoliko HVR ostataka (npr., 4-6 ostataka odjednom) randomizuje. HVR ostaci koji su uključeni u vezivanje antigena mogu biti specifično identifikovani, npr., primenom alanin skenirajuće mutageneze ili modelovanjem. CDR-H3 i CDR-L3 se posebno često ciljaju.
U izvesnim ostvarenjima, supstitucije, insercije, ili delecije se mogu javiti u okviru jednog ili više HVRs sve dotle dok takve izmene suštinski ne smanjuju mogućnost antitela da vezuje antigen. Na primer, u HVRs se mogu načiniti konzervativne izmene (npr., konzervativne supstitucije kakve su ovde obezbeđene) koje suštinski ne smanjuju afinitet vezivanja. Takve izmene mogu biti izvan HVR "vrućih tačaka" ili SDRs. U izvesnim ostvarenjima gore obezbeđenih varijanti VH i VL sekvenci, svaki HVR je ili neizmenjen, ili sadrži ne više od jedne, dve ili tri aminokiselinske supstitucije.
Koristan postupak za identifikaciju ostataka ili regiona antitela koji mogu da se ciljaju za mutagenezu se naziva "alanin skenirajuća mutageneza" kako je opisao Cunningham, and Wells, Science 244 (1989) 1081-1085. U ovom postupku, ostatak ili grupa ciljanih ostataka (npr., ostataci sa nabojem, kao što su: arg, asp, his, lys i glu) se identifikuju i zamenjuju neutralnim ili amino kiselinama sa negativnim nabojem (npr., alanin ili polialanin) kako bi se odredilo da li je narušena interakcija antitela sa antigenom. Može se uneti još supstitucija na aminokiselinskim lokacijama koje ispoljavaju funkcionalnu osetljivost na inicijelne supstitucije. Alternativno, ili dodatno, kristalna struktura antigen-antitelo kompleksa za identifikovanje tačaka kontakta između antitela i antigena. Ovi kontaktni ostaci i ostaci u susedstvu mogu da se ciljaju ili eliminišu kao kandidati za supstituciju. Varijante mogu da se skriniraju kako bi se odredilo da li one imaju željena svojstva.
Insercije aminokiselinske sekvence uključuju amino- i/ili karboksil-terminalne fuzije, koje se u dužini kreću od jednog ostatka do polipeptida koji sadrži stotine ili više ostataka, kao i insercije jednog ili više aminokiselinskog ostatka unutar sekvence. Primeri terminalnih insercija obuhvataju antitelo sa N-terminalnim metionil ostatkom. Druge insercione varijante molekula antitela obuhvataju fuzionisanje N- ili C-terminusa antitela sa enzimom (npr. za ADEPT) ili polipeptidom koji povećava polu-život antitela u serumu.
Glikozilacione varijante
U izvesnim ostvarenjima, vrše se izmene ovde obezbeđenog antitela da bi se povećao ili smanjio stepen do kog je antitelo glikozilovano. Dodavanje ili brisanje položaja glikozilacije na antitelu se konvencionalno može postići izmenom aminokiselinske sekvence tako da se jedan ili više položaja glikozilacije stvara ili uklanja.
Kada antitelo sadrži Fc region, ugljeni hidrat koji je za njega vezan može biti izmenjen. Nativna antitela koje proizvode ćelije sisara obično sadrže razgranat, biantenski oligosaharid koji je generalno vezan N-povezivanjem za Asn297 u CH2 domenu Fc regiona. Vidi, npr., Wright, et al., TIBTECH 15 (1997) 26-32. Oligosaharid može uključiti razne ugljene hidrate, npr., manozu, N-acetil glukozamin (GlcNAc), galaktozu, kao i sijalinsku kiselinu, kao i fukozu vezanu za GlcNAc u "stem" biantenske oligosaharidne strukture. U nekim ostvarenjima, mogu se ostvariti modifikacije oligosaharida u antitelu pronalaska sa ciljem kreiranja varijanti antitela sa izvesnim unapređenim svojstvima.
Polipeptidi koji obuhvataju Fc varijante dalje su obezbeđeni sa sijalizovanim oligosaharidima, npr., u kojima se obezbeđuje različita sijalizacija Fc jezgra oligosaharida vezanog za Fc region antitela. Ovi polipeptidi mogu imati povećanu sijalizaciju i/ili smanjenu ADCC funkciju. Primere ovih varijanti antitela opisao je npr. Kaneko, et al., Science 313 (2006) 670-673.
Varijante cistein konstruisanih antitela
U izvesnim ostvarenjima, može biti poželjno kreirati cistein konstruisana antitela, npr., "thioMAbs," u kojima je jedan ili više ostataka antitela supstituisan sa cisteinskim ostatkom(cima). U posebnim ostvarenjima, supstituisani ostaci se javljaju na pristupačnim položajima antitela. Supstituisanjem ovih ostataka sa cisteinom, reaktivne tiol grupe se na taj način pozicioniraju na pristupačnim položajima antitela i mogu da se koriste za konjugovanje antitela sa drugim delovima, kao što su delovi leka ili delovi linker-lek, da bi se kreirao imunokonjugat, kako je ovde dalje u nastavku opisano. U izvesnim ostvarenjima, bilo koji ili više sledećih ostataka mogu da budu supstituisani sa cisteinom: V205 (Kabat numerisanje) u lakom lancu; A118 (EU numerisanje) u teškom lancu; i S400 (EU numerisanje) u teškom lancu Fc regiona. Cistein konstruisana antitela mogu da se stvore kako je opisano, npr., u: U.S. Patent No.7,521,541.
Derivati antitela
U izvesnim ostvarenjima, ovde obezbeđeno antitelo može dalje da se modifikuje da sadrži dodatne neproteinske delove, koji su u struci poznati i lako se mogu nabaviti. Delovi pogodni za izvođenje derivata antitela uključuju, ali nisu ovima ograničeni, polimere rastvorljive u vodi. Ne-ograničavajući primeri polimera rastvorljivih u vodi uključuju, ali nisu ovima ograničeni, polietilen glikol (PEG), kopolimere etilen glikol/propilen glikola, karboksimetilcelulozu, dekstran, polivinil alkohol, polivinil pirolidon, poli-1,3-dioksolan, poli-1,3,6- trioksan, etilen/maleinski anhidrid kopolimer, poliaminokiseline (bilo homopolimere ili random kopolimere), kao i dekstran ili poli(nvinil pirolidon)polietilen glikol, propropilen glikol homopolimere, prolipropilen oksid/etilen oksid kopolimere, polioksietilovane poliole (npr., glicerol), polivinil alkohol, kao i njihove smeše. Polietilen glikol propionaldehid može imati prednosti u proizvodnji zahvaljujući svojoj stabilnosti u vodi. Polimer može biti bilo koje molekulske težine, a može biti razgranat ili nerazgranat. Broj polimera vezanih za antitelo može varirati i, ukoliko je vezano više od jednog polimera, oni mogu biti isti ili različiti molekuli. Generalno, broj i/ili vrsta polimera koja se koristi za derivatizaciju može da se odredi na osnovu
razmatranja koja obuhvataju, ali bez ograničavanja, posebna svojstva ili funkcije antitela koje treba unaprediti, bez obzira da li će se derivat antitela koristiti u terapiji pod definisanim uslovima, itd.
U drugom ostvarenju, obezbeđeni su konjugati antitela i neproteinskih delova koji mogu da se selektivno zagrevaju izlaganjem radijaciji. U jednom ostvarenju, neproteinski deo je ugljenična nanotuba (Kam, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102 (2005) 11600-11605). Zračenje može biti bilo koje talasne dužine i, obuhvata, ali nije ovim ograničeno, talasne dužine koje ne oštećuju uobičajene ćelije, ali koje greju neproteinski deo do temperature na kojoj se ubijaju ćelije proksimalne delu antitelo-neprotein.
Rekombinantni postupci i kompozicije
Antitela se mogu proizvesti primenom rekombinantnih postupaka i kompozicija, npr., kako je opisano u: U.S. Patent No. 4,816,567. U jednom ostvarenju, obezbeđena je izolovana nukleinska kiselina, koja kodira ovde opisanu varijantu antitela. Ova nukleinska kiselina može da kodira aminokiselinsku sekvencu koja sadrži VL i/ili aminokiselinsku sekvencu koja sadrži VH antitela (npr., lake i/ili teške lance antitela). U sledećem ostvarenju, obezbeđen je jedan ili više vektora (npr., ekspresionih vektora) koji sadrže ovu nukleinsku kiselinu. U sledećem ostvarenju, obezbeđena je ćelija domaćina koja sadrži tu nukleinsku kiselinu. U jednom takvom ostvarenju, ćelija domaćina sadrži (npr., transformisana je sa): (1) vektor koji sadrži nukleinsku kiselinu koja kodira aminokiselinsku sekvencu koja sadrži VL antitela i aminokiselinsku sekvencu koja sadrži VH antitela, ili (2) prvi vektor koji sadrži nukleinsku kiselinu koja kodira aminokiselinsku sekvencu koja sadrži VL antitela i drugi vektor koji sadrži nukleinsku kiselinu koja kodira aminokiselinsku sekvencu koja sadrži VH antitela. U jednom ostvarenju, ćelija domaćina je eukariotska, npr. ćelija ovarijuma kineskog hamstera (CHO) ili limfoidna ćelija (npr., Y0, NS0, Sp20 ćelija). U jednom ostvarenju, obezbeđen je postupak proizvodnje varijante antitela, pri čemu postupak obuhvata uzgajanje ćelije domaćina koja sadrži nukleinsku kiselinu koja kodira antitelo, kako je prethodno dato, u uslovima pogodnim za ekspresiju antitela i, eventualno povraćaj antitela iz ćelije domaćina (medijuma kulture ćelija domaćina).
Za rekombinantnu produkciju varijante antitela, nukleinska kiselina koja kodira antitelo, npr., kako je gore opisano, izoluje se i insertuje u jedan ili više vektora radi daljeg kloniranja i/ili ekspresije u ćeliji domaćina. Ova nukleinska kiselina se lako može izolovati i sekvencirati primenom konvencionalnih procedura (npr., primenom oligonukleotidnih proba koje mogu specifično da se vežu za gene koji kodiraju teške i lake lance antitela).
Pogodne ćelije domaćini za kloniranje ili ekspresiju antitelo-kodirajućih vektora uključuju ovde opisane ćelije prokariota ili eukariota. Na primer, antitela se mogu proizvesti u bakteriji, posebno kada nije neophodna glikozilacija i Fc efektorna funkcija. Za ekspresiju fragmenata antitela i polipeptida u bakteriji, vidi, npr., U.S. Patent brojevi 5,648,237, 5,789,199 i 5,840,523. (Vidi, takođe, Charlton, Methods in Molecular Biology 248 (2003) 245-254 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), gde je opisana ekspresija fragmenata antitela u E. coli.) Nakon ekspresije, antitelo može biti izolovano paste bakterijskih ćelija u rastvorljivoj frakciji i može se dalje prečistiti.
Osim prokariota, pogodni su i eukariotski mikrobi, kao što su filamentozne gljivice ili kvasci, za kloniranje ili ekspresiju domaćina za antitelo-kodirajuće vektore, uključujući gljivice i sojeve kvasca čiji su putevi glikozilacije "humanizovani," dovodeći do proizvodnje antitela sa delimičnim ili potpunim humanim profilom glikozilacije. Vidi: Gerngross, Nat. Biotech.22 (2004) 1409-1414, kao i: Li, et al., Nat. Biotech.24 (2006) 210-215.
Pogodne ćelije domaćini za ekspresiju glikozilovanih antitela su, takođe, poreklom multicelularni organizmi (invertebrate i vertebrate). Primeri ćelija invertebrata uključuju ćelije biljaka i insekata. Brojni bakulovirusni sojevi su identifikovani da mogu da se koriste zajedno sa ćelijama insekata, naročito za transfekciju Spodoptera frugiperda ćelija.
Kao domaćini, mogu se takođe koristiti kulture biljnih ćelija. Vidi, npr., US Patente brojevi 5,959,177, 6,040,498, 6,420,548, 7,125,978 i 6,417,429 (koji opisuju PLANTIBODIES™ tehnologiju za proizvodnju antitela u transgenskim biljkama).
Kao domaćini, isto tako, mogu se koristiti ćelije vertebrata. Na primer, ćelijske linije sisara koje su prilagođene da rastu u suspenziji mogu biti od koristi. Drugi primeri korisnih ćelijskih linija sisara su CV1 linija bubrega majmuna transformisana sa SV40 (COS-7); bubrežna linija humanog embriona (293 ili bubrežne ćelije (BHK); sertoli ćelije miša (TM4 ćelije kako su opisane, npr., u: Mather, Biol. Reprod.23 (1980) 243-251); ćelije bubrega majmauna (CV1); ćelije bubrega afričkog zelenog majmuna (VERO-76); ćelije karcinoma humanog cerviksa (HELA); bubrežne ćelije psa (MDCK; ćelije jetre bafalo pacova (BRL 3A); ćelije humanih pluća (W138); ćelije humane jetre (Hep G2); mišiji mlečni tumor (MMT 060562); TRI ćelije, kako su opisane, npr., u: Mather, et al., Annals N.Y. Acad. Sci.383 (1982) 44-68; MRC 5 ćelije; i FS4 ćelije. Druge korisne ćelijske linije domaćina sisara obuhvataju ćelije ovarijuma kineskog hamstera (CHO), uključujući DHFR- CHO ćelije (Urlaub, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77 (1980) 4216); i ćelijske linije mijeloma, kao Y0, NS0 i Sp2/0. Radi pregleda izvesnih ćelijskih linija sisara domaćina pogodnih za produkciju antitela, vidi, npr., Yazaki, and Wu, Methods in Molecular Biology 248 (2003) 255-268 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ).
Testovi
Antitela, koja su ovde obezbeđena, mogu da se identifikuju, skriniraju na, ili opišu svojim fizičkim/hemijskim svojstvima i/ili biološkim aktivnostima pomoću brojnih testova poznatih u struci.
Testovi vezivanja i drugi testovi
U jednom aspektu, antitelo pronalaska je testirano na svoju aktivnost vezivanja za antigen, npr., poznatim postupcima, kao što je ELISA, Western blot, itd.
U kompetitivnom testu, primera radi, imobilisani antigen se inkubira u rastvoru koji sadrži prvo obeleženo antitelo koje vezuje antigen (npr.,) i drugo neobeleženo antitelo, koje se testira na mogućnost da se takmiči sa prvim antitelom za vezivanje za antigen. Drugo antitelo može biti prisutno u hibridoma supernatantu. Kao kontrola, imobilisani antigen se inkubira u rastvoru koji sadrži prvo obeleženo antitelo ali ne i drugo neobeleženo antitelo. Posle inkubacije u uslovima koji omogućavaju prvog antitela za antigen, uklanja se višak nevezanog antitela i, izmeri se količina obeleživača povezana sa imobilisanim antigenom. Ukoliko je količina obeleživača povezanog sa imobilisanim antigenom suštinski smanjena u ispitivanom uzorku u odnosu na kontrolni uzorak, onda to ukazuje na to da se drugo antitelo takmiči sa prvim antitelom za vezivanje za antigen (vidi: Harlow, and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
Imunokonjugati
Pronalazak, isto tako, obezbeđuje imunokonjugate koji sadrže antitelo koje je ovde konjugovano sa jednim ili više citotoksičnih agenasa, kao što su hemoterapeutski agensi ili lekovi, sredstva koja inhibiraju rast, toksini (npr., proteinski toksini, enzimski aktivni toksini bakterijskog, gljivičnog, biljnog ili životinjskog porekla, ili njihovi fragmenti), ili radioaktivni izotopi.
U jednom ostvarenju, imunokonjugat je antitelo-lek konjugat (ADC) u kom je antitelo konjugovano sa jednim ili više lekova, uključujući ali bez ograničavanja: maijtansinoid (vidi U.S.
Patent Nos.5,208,020, 5,416,064 i European Patent EP0425235 B1); auristatin kao delovi monometilauristatin leka DE i DF (MMAE i MMAF) (vidi U.S. Patent Nos.5,635,483 i 5,780,588, i 7,498,298); dolastatin; kaiheamicin ili njegov derivat (vidi U.S. Patent Nos.5,712,374, 5,714,586, 5,739,116, 5,767,285, 5,770,701, 5,770,710, 5,773,001 i 5,877,296; Hinman, et al., Cancer Res. 53 (1993) 3336-3342; and Lode, et al., Cancer Res. 58 (1998) 2925-2928); antraciklin kao daunomicin ili doksorubicin (vidi: Kratz, et al., Current Med. Chem.13 (2006) 477-523; Jeffrey, et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16 (2006) 358-362; Torgov, et al., Bioconj. Chem. 16 (2005) 717-721; Nagy, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97 (2000) 829-834; Dubowchik, et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12 (2002) 1529-1532; King, et al., J. Med. Chem.
45 (2002) 4336-4343; kao i U.S. Patent No. 6,630,579); metotreksat; vindesin; taksan kao: docetaksel, paklitaksel, larotaksel, tesetaksel i ortataksel; trihotecen; i CC1065.
U drugom ostvarenju, imunokonjugat sadrži antitelo, kako je ovde opisano, konjugovano za enzimski aktivan toksin ili njegov fragment, uključujući, ali se neograničavajući na: difterija A lanac, nevezujuće aktivne fragmente difterija toksina, eksotoksin A lanac (od Pseudomonas aeruginosa), ricin A lanac, abrin A lanac, modekcin A lanac, alfa-sarcin, Aleurites fordii proteine, diantin proteine, Phytolaca americana proteine (PAPI, PAPII i PAP-S), momordica charantia inhibitor, kurcin (iz jatropha curcas, prim prev.), krotin, sapaonaria officinalis inhibitor, gelonin, mitogelin, restriktocin, fenomicin, enomicin i trikoteceni.
U drugom ostvarenju, imunokonjugat sadrži antitelo, kako je ovde opisano, konjugovano za radioaktivni atom kako se formira radiokonjugat. Za proizvodnju radiokonjugata, dostupni su raznovrsni radioaktivni izotopi. Primeri obuhvataju: At<211>, J<131>, J<125>, Y<90>, Re<186>, Re<188>,Sm<153>, Bi<212>, P<32>, Pb<212>i radioaktivne izotope Lu. Kada se za detekciju koristi radiokonjugat, on može imati radioaktivni atom za scintigrafska ispitivanja, na primer tc99m ili 1123, ili spin obeleživač za imidžing nuklearne magnetne rezonance (NMR) (takođe poznat kao imidžing magnetne rezonance, mri), kao što su: jod-123 opet, jod-131, indijum-111, fluor-19, ugljenik-13, azot-15, kiseonik-17, gadolinijum, mangan ili gvožđe.
Konjugati antitela i citotoksičnog agensa se mogu napraviti primenom raznovrsnih sredstava kuplovanja bifunkcionalnih proteina, kao što su: N-sukcinimidil-3-(2-piridilditio) propionat (SPDP), sukcinimidil-4-(N-maleimidometil) cikloheksan-1-karboksilat (SMCC), iminotiolan (IT), bifunkcionalni derivati imidoestara (kao što je dimetil adipimidat HCl), aktivni estri (kao disukcinimidil suberat), aldehidi (kao glutaraldehid), bis-azido jedinjenja (kao bis (pazidobenzoil) heksandiamin), bis-diazonijum derivati (kao bis-(p-diazonijumbenzoil)-etilendiamin), diizocijanati (kao toluen 2,6-diizocijanat) i bis-aktivna fluor jedinjenja (kao 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzen). Na primer, ricinski imunotoksin se može pripremiti kao što je opisano u: Vitetta, et al., Science 238 (1987) 1098. Ugljenik-14-obeleženi 1-izotiocijanatobenzil- 3-metildietilen triaminpentasirćetna kiselina (MX-DTPA) je primer helirajućeg sredstva za konjugovanje radionukleotida za antitelo. Vidi WO 94/11026. Linker može biti "linker koji se može otcepiti", koji olakšava oslobađanje citotoksičnog leka u ćeliji. Na primer, može se koristiti: linker labilan u kiseloj sredini, peptidaza-senzitivan linker, fotolabilan linker, dimetil linker ili linker koji sadrži disulfid (Chari, et al., Cancer Res.52 (1992) 127-131; U.S. Patent No.5,208,020).
Imunuokonjugati ili ADCs se ovde intenzivno razmatraju, ali nisu ograničeni tim konjugatima koji su proizvedeni unakrsnim-linker reagensima, uključujući, ali bez ograničavanja na, BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SIAB, sulfo-SMCC i sulfo-SMPB i, SVSB (sukcinimidil-(4-vinilsulfon)benzoat), koji su komercijalno dostupni (npr., od Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.A).
Postupci i kompozicije za dijagnostikovanje i detekciju
U izvesnim ostvarenjima, svaka ovde obezbeđena varijanta antitela je korisna za detektovanje prisustva antigena koje se vezuje za to antitelo u biološkom uzorku. Izraz "detektovanje", kako je ovde korišćen, obuhvata kvantitativnu ili kvalitativnu detekciju. U izvesnim ostvarenjima, biološki uzorak uključuje ćeliju ili tkivo.
U jednom ostvarenju, obezbeđena je varijanta antitela za primenu u postupku dijagnostikovanja ili detektovanja. U sledećem aspektu, obezbeđen je postupak detektovanja prisustva antigena za koje se vezuje navedena varijanta antitela u biološkom uzorku. U izvesnim ostvarenjima, postupak obuhvata dovođenje u kontakt biološkog uzorka sa antitelom, kako je ovde opisano, u uslovima koji omogućavaju vezivanje antitela za antigen i, detektovanje da li se formirao kompleks između antitela i antigena. Ovaj postupak može biti in vitro ili in vivo postupak. U jednom ostvarenju, varijanta antitela se primenjuje odabranim subjektima poželjnim za terapiju sa antitelom, npr. gde je antigen za koji se pomenuto antitelo vezuje biomarker za izbor pacijenata.
Poremećaji, kao primer, koji se mogu dijagnostikovati primenom antitela pronalaska obuhvataju kancer, kardiovaskularne bolesti, neuronske poremećaje i dijabetes.
U izvesnim ostvarenjima, obezbeđene su obeležene varijante antitela. Obeleživači obuhvataju, ali nisu ovima ograničeni, obeleživače ili delove koji se direktno detektuju (kao fluorescentni, hromofori, elektron-gustina, hemiluminescentni i radioaktivni obeleživači), kao i delovi, kao što su enzimi ili ligandi, koji se detektuju indirektno, npr., preko enzimske reakcije ili molekulske interakcije. Primeri obeleživača obuhvataju, ali se ovima ne ograničavaju,<radioizotope 32>P,<14>C,<125>J,<3>H i<131>J, fluorofore, kao što su helati retke zemlje ili fluorescein i njegovi derivati, rodamin i njegovi derivati, danzil, umbeliferon, luceriferaze, npr., luciferaza
svica i bakterijska luciferaza (U.S. Patent No. 4,737,456), luciferin, 2,3-dihidroftalazindioni, peroksidaza rena (HRP), alkalna fosfataza, b-galaktozidaza, glukoamilaza, lizozim, saharidne oksidaze, npr., glukoza oksidaza, galaktoza oksidaza i glukoza-6-fosfat dehidrogenaza, heterociklične oksidaze, kao urikaza i ksantin oksidaza, kuplovane sa enzimom koji koristi hidrogen peroksid za oksidaciju bojenog prekursora kao što je HRP, laktoperoksidaza, ili mikroperoksidaza, biotin/avidin, spin obeleživači, bakteriofagni obeleživači, stabilni slobodni radikali i slično.
Farmaceutske formulacije
Farmaceutske formulacije varijante antitela, kako je ovde opisana, su pripremljene mešanjem takvog antitela, koje je željenog stepena čistoće, sa jednim ili više opcionih farmaceutski prihvatljivih nosača (Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)), u formi liofilizovanih formulacija ili vodenih rastvora. Farmaceutski prihvatljivi nosači generalno nisu toksični za primaoca u dozama i primenjenim koncentracijama, a obuhvataju, ali nisu ovima ograničeni: pufere, kao što su fosfatni, citratni i drugih organskih kiselina; antioksidanse, uključujući askorbinsku kiselinu i metionin; konzervanse (kao: oktadecildimetilbenzil amonijum hlorid; heksametonijum hlorid; benzalkonijum hlorid; benzetonijum hlorid; fenol, butil ili benzil alkohol; alkil parabeni, kao što su metil ili propil paraben; katehol; rezorcinol; cikloheksanol; 3-pentanol; i m-krezol); polipeptide niske molekulske težine (manje od oko 10 ostataka); proteine, kao serum albumin, želatin, ili imunoglobulini; hidrofilne polimere, kao polivinilpirolidon; aminokiseline kao što je glicin, glutamin, asparagin, histidin, arginin, ili lizin; monosaharide, disaharide i druge ugljene hidrate, uključujući glukozu, manozu, ili dekstrini; helirajuća sredstva kao što je EDTA; šećere, kao što su saharoza, manitol, trehaloza ili sorbitol; suprotne jone koji formiraju soli, kao što je natrijum; metalne komplekse (npr. Znproteinski kompleksi); i/ili ne-jonske surfaktante, kao što je polietilen glikol (PEG). Farmaceutski prihvatljivi nosači kao primeri ovde dalje obuhvataju sredstva za dispergovanje instersticijalnog leka, kao što su rastvorljivi glikoproteini hijaluronidaze neutralnog dejstva (sHASEGP), na primer, humani rastvorljivi PH-20 glikoproteini hijaluronidaze, kao rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.). Izvesni sHASEGPs i postupci primene kao primeri, uključujući rHuPH20, opisani su u: US Patentnoj publikaciji broj 2005/0260186 i 2006/0104968. U jednom aspektu, sHASEGP se kombinuje sa jednom ili više dodatnih glikozaminoglikanaza, kao što su hondroitinaze.
Primeri formulacija liofilizovanog antitela su opisani u: US Patent No. 6,267,958. Vodene formulacije antitela obuhvataju one, opisane u: US Patent No. 6,171,586 i WO 2006/044908, ove poslednje formulacije uključuju histidin-acetatni pufer.
Ovdašnje formulacije, isto tako, mogu sadržavati više od jednog aktivnog sastojka ako je neophodno za naročitu indikaciju koja se leči, poželjno sa komplementarnim aktivnostima koje neće neželjeno uticati jedna na drugu. Takvi aktivni sastojci su prikladno prisutni u kombinaciji u količinama koje su efektivne nameni.
Aktivni sastojci mogu biti zarobljeni u mikrokapsulama koje su proizvedene, na primer, tehnikama koacervacije ili interfejsnom polimerizacijom, na primer, hidroksimetil- celulozne ili želatin-mikrokapsule odnosno, poli-(metilmetacilat) mikrokapsule, u koloidnim sistemima oslobađanja leka (na primer, lipozomi, albumin mikrosfere, mikroemulzije, nano- čestice i nanokapsule) ili u makroemulzijama. Ove tehnike su izložene u: Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980).
Mogu se pripremiti i preparati sa produženim oslobađanjem. Pogodni primeri preparata sa produženim oslobađanjem uključuju semipermeabilne matrikse čvrstih hidrofobnih polimera, koji sadrže antitelo, pri čemu su matriksi u vidu oblikovanih artikala, npr. filmova, ili mikrokapsula.
Formulacije koje će se koristiti za in vivo primenjivanje su generalno sterilne. Sterilnost se može jednostavno postići, npr., filtriranjem kroz sterilne filtracione membrane.
Terapeutski postupci i kompozicije
Svi ovde obezbeđeni polipeptidi mogu da se primene u terapeutskim postupcima. U specifičnom aspektu, polipeptid prema pronalasku se primenjuje u lečenju bolesti. U specifičnijem aspektu, bolest je takva, da je poželjno da je efektorna funkcija varijante snažno, najmanje za 50%, smanjena u poređenju sa polipeptidom koji imaobuhvata divlji tip Fc polipeptida.
U specifičnom aspektu, polipeptid prema pronalasku se koristi u proizvodnji leka za lečenje bolesti, pri čemu je poželjno da je efektorna funkcija polipeptida snažno smanjena u poređenju sa divljim tipom Fc polipeptida. U sledećem specifičnom aspektu, polipeptid prema pronalasku se koristi za proizvodnju leka za lečenje bolesti, pri čemu je poželjno da je efektorna funkcija polipeptida smanjena u poređenju sa divljim tipom Fc polipeptida, za najmanje 20%.
Isto tako, izložen je postupak za lečenje pojedinca koji je bolestan, pri čemu je poželjno da je efektorna funkcija varijante snažno smanjena u poređenju sa divljim tipom Fc polipeptida, a postupak obuhvata primenjivanje pojedincu efektivne količine polipeptida prema pronalasku.
Snažno smanjenje efektorne funkcije je smanjenje efektorne funkcije za najmanje 50% efektorne funkcije koju indukuje divlji tip polipeptida.
Ove bolesti su, na primer, sve bolesti gde ciljna ćelija ne bi trebalo da bude razorena putem, na primer, ADCC, ADCP ili CDC. Sem toga, ovo je tačno za ona antitela koja su označena da oslobađaju lek (npr., toksini i izotopi) u ciljnoj ćeliji, pri čemu Fc/FcyR posredovane efektorne funkcije dovode zdrave imune ćelije u blizinu smrtonosnog tereta, što dovodi do trošenja normalnog limfoidnog tkiva, zajedno sa ciljnim ćelijama (Hutchins, et al, PNAS USA 92 (1995) 11980-11984; White, et al, Annu Rev Med 52 (2001) 125-145). U ovim slučajevima, primena antitela koja slabo regrutuju komplement ili efektorne ćelije bi bila od ogromnog benefita (vidi, na primer, Wu, et al., Cell Immunol 200 (2000) 16-26; Shields, et al., J. Biol Chem 276(9) (2001) 6591-6604; US 6,194,551; US 5,885,573 i PCT publikaciju WO 04/029207).
U drugim slučajevima, na primer, gde je predmet blokada interakcije divlje ekspresovanog receptora sa njegovim srodnim ligandom, korisno bi bilo smanjiti ili eliminisati svu efektornu funkciju antitela kako bi se smanjila neželjena toksičnost. Isto tako, u slučaju kada terapeutsko antitelo ispoljava slobodno vezivanje kroz brojna humana tkiva, bilo bi razumno ograničiti ciljanje efektorne funkcije na različit set tkiva da bi se ograničila toksičnost.
Takođe, za antitela agoniste bi bilo od velike pomoći ukoliko bi ova antitela ispoljavala smanjenu efektornu funkciju.
Stanja koja se mogu lečiti polipeptidnom varijantom su brojna i obuhvataju kancer (npr. gde se antitelo vezuje za HER2 receptor, angiopoetinski receptor ili faktor rasta vaskularnog endotela (VEGF)); alergijska stanja, kao što je astma (sa anti-IgE antitelom); i LFA- 1-posredovane poremećaje (npr. gde je polipeptidna varijanta anti-LFA-1 ili anti-ICAM-1 antitelo), neurološke i metaboličke poremećaje.
Gde se antitelo vezuje za HER2 receptor, poremećaj je pre svega kancer koji ekspresuje HER2, npr. benigni ili maligni tumor kog karakteriše prekomerna ekspresija HER2 receptora. Ovakvi kanceri obuhvataju, ali nisu ograničeni na ove, kancer dojke, kancer skvamoznih ćelija, mikrocelularni kancer pluća, ne-mikrocelularni kancer pluća, gastrointestinalni kancer, kancer pankreasa, glioblastom, cervikalni kancer, kancer ovarijuma, kancer bešike, hepatom, kancer kolona, kolorektalni kancer, karcinom endometrijuma, karcinom pljuvačnih žlezda, kancer bubrega, kancer jetre, kancer prostate, vulvalni kancer, kancer tiroideje, karcinom jetre i različite vrste kancera glave i vrata.
Polipeptid ili varijanta antitela se primenjuju svakim pogodnim načinom, uključujući parenteralan, subkutani, intraperitonealan, intrapulmonalan, kao i intranazalan, a, ukoliko se želi lokalni imunosupresivni tretman, intraleziono primenjivanje. Parenteralne infuzije obuhvataju: intramuskularno, intravensko, intraarterijalno, intraperitonealno, ili subkutano primenjivanje. Sem toga, varijanta antitela se pogodno primenjuje pulsnom infuzijom, posebno sa opadajućim dozama polipeptidne varijante. Poželjno se doza daje injekcijama, najpoželjnije intravenskim ili subkutanim injekcijama, u zavisnosti delom od toga da li je primenjivanje kratko ili hronično.
Za prevenciju ili lečenje bolesti, koja će doza polipeptida ili varijante antitela biti odgovarajuća, zavisiće od vrste bolesti koja će se lečiti, težine i toka bolesti, od toga da li se polipeptidna varijanta primenjuje preventivno ili u svrhu terapije, od prethodnih terapija, kliničke istorije pacijenta i odgovora na polipeptidnu varijantu, kao i od odluka ordinirajućeg lekara. Polipeptidna varijanta se pogodno primenjuje pacijentu jednom ili tokom serije tretmana.
U zavisnosti od vrste i težine bolesti, otprilike 1 µg/kg do 15 mg/kg (npr., 0.1-20 mg/kg) polipeptida ili vaijante antitela može biti početna izabrana doza koja će se primeniti pacijentu, bilo, na primer, putem jednog ili više odvojenih davanja, ili putem kontinuirane infuzije. Jedna uobičajena dnevna doza može se kretati od otprilike 1 µg/kg do 100 mg/kg ili više, zavisno od gore pomenutih faktora. Za ponovljena primenjivanja tokom nekoliko dana ili duže, u zavisnosti od stanja, tretman bi generalno bio neprekidan dok se ne javi željena supresija simptoma bolesti. Ipak, od koristi mogu biti i drugačiji režimi doziranja. Progres ove terapije se lako prati konvencionalnim tehnikama i testovima.
U izvesnim ostvarenjima, pronalazak obezbeđuje varijantu antitela ili polipeptid za primenu u postupku lečenja pojedinca koji ima kancer, a koji obuhvata primenjivanje pojedincu efektivne količine varijante antitela. U jednom takvom ostvarenju, postupak dalje obuhvata primenjivanje pojedincu efektivne količine najmanje jednog dodatnog terapeutskog agensa, npr., kakav je opisan u nastavku. U sledećim ostvarenjima, pronalazak obezbeđuje varijantu antitela za primenu u inhibisanju angiogeneze, inhibisanju ćelijske proliferacije ili za trošenje B- ćelija kod pojedinca što podrazumeva primenjivanje pojedincu efektivne količine varijante antitela kako bi se inhibisala angiogeneza, inhibisala ćelijska proliferacija ili potrošile B-ćelije kod "pojedinca" prema ma kojem od gornjih ostvarenja, poželjno čoveka.
U sledećem aspektu, pronalazak pruža primenu varijante antitela ili polipeptida u proizvodnji ili izradi leka. U jednom ostvarenju, lek se primenjuje za lečenje kancera ili inflamatornih bolesti. U sledećem ostvarenju, lek služi za primenu u postupku lečenja kancera, dijabetesa, neuronskih poremećaja ili inflamacija, a postupak obuhvata primenjivanje pojedincu koji ima kancer, dijabetes, neuronski poremećaj ili inflamaciju, efektivne količine leka. U jednom takvom ostvarenju, postupak dalje obuhvata primenjivanje pojedincu efektivne količine najmanje jednog dodatnog terapeutskog agensa, npr., kakav je opisan u nastavku. U sledećem ostvarenju, lek služi za inhibisanje angiogeneze, inhibisanje ćelijske proliferacije ili za trošenje B-ćelija.
U sledećem ostvarenju, lek je za primenjivanje u postupku inhibiranja angiogeneze, inhibiranja proliferacije ćelija ili potrošnje B-ćelija kod pojedinca, koji obuhvata primenjivanje pojedincu efektivne količine leka radi inhibisanja angiogeneze, inhibisanja ćelijske proliferacije ili potrošnje B-ćelija . "Pojedinac", prema bilo kom od gornjih ostvarenja, može biti čovek.
U sledećem aspektu, pronalazak obezbeđuje farmaceutske formulacije koje sadrže ma koju od ovde obezbeđenih varijanti antitela, npr., za primenu u bilo kom od gornjih terapeutskih postupaka. U jednom ostvarenju, farmaceutska formulacija sadrži bilo koju od ovde obezbeđenih varijanti antitela i farmaceutski prihvatljiv nosač. U drugom ostvarenju, farmaceutska formulacija sadrži bilo koju od ovde obezbeđenih varijanti antitela i najmanje jedan dodatni terapeutski agens, npr., kakav je opisan u nastavku.
Antitela pronalaska mogu da se koriste bilo sama, bilo u kombinaciji sa drugim agensima u terapiji. Recimo, antitelo pronalaska može da se primeni zajedno sa najmanje jednim dodatnim terapeutskim agensom.
Ove kombinovane terapije, prethodno navedene, obuhvataju zajedničko primenjivanje (gde su dva ili više terapeutskih agenasa sadržani u istoj ili su u zasebnim formulacijama), kao i zasebno primenjivanje, a u tom slučaju se primenjivanje antitela pronalaska izvodi pre, istovremeno, i/ili posle, primenjivanja dodatnog terapeutskog agensa i/ili adjuvansa. Antitela pronalaska, isto tako, mogu da se primenjuju u kombinaciji sa radijacionom terapijom.
Antitelo pronalaska (i bilo koji dodatni terapeutski agens) može da se primeni svakim prikladnim putem, uključujući: parenteralan, intrapulmonalni, kao i intranazalni, a, ukoliko se želi za lokalni tretman, intralezionim primenjivanjem. Parenteralne infuzije uključuju: intramuskularno, intravensko, intraarterijalno, intraperitonealno, ili subkutano primenjivanje. Doziranje se može izvesti bilo kojim pogodnim putem, npr. injekciono, kao intravenskim ili subkutanim injekcijama, delom u zavisnosti od toga da li je primenjivanje kratko ili hronično. Ovde se razmatraju razne šeme doziranja, uključujući ali se ovima ne ograničavajući, pojedinačno ili višestruka primenjivanja u toku različitih vremenskih tačaka, bolus primene, kao i pulsnu infuziju.
Antitela pronalaska bila bi formulisana, dozirana i primenjivana na način koji je konzistentan sa dobrom medicinskom praksom. U ovom kontekstu, faktori koji se uzimaju u razmatranje obuhvataju: posebnosti bolesti koja se leči, posebnosti sisara koji se leči, kliničko stanje pojedinačnog pacijenta, uzrok bolesti, mesto oslobađanja agensa, postupak primenjivanja, šemu primenjivanja, kao i druge faktore koji su poznati medicinskim praktikantima. Antitelo ne mora biti, ali se eventualno formuliše sa jednim ili više agenasa, koji se trenutno koriste za prevenciju ili lečenje poremećaja o kom je reč. Efektivna količina takvih drugih agenasa zavisi od količine antitela prisutnog u formulaciji, vrste poremećaja ili tretmana, kao i drugih faktora koji su prethodno razmatrani. Oni se generalno primenjuju u istim dozama i istim načinima primenjivanja kako je ovde opisano, ili otprilike od 1 do 99% doza koje su ovde izložene, ili u svakoj dozi i na svaki način koji je empirijski/klinički određen da je odgovarajući.
Radi prevencije ili lečenja bolesti, doza antitela pronalaska koja će biti odgovarajuća (kada se koristi samo ili u kombinaciji sa jednim ili više drugih dodatnih terapeutskih agenasa) zavisiće od: vrste bolesti koju treba lečiti, vrste antitela, težine i toka bolesti, od toga da li se antitelo primenjuje preventivno ili u svrhu terapije, od prethodnih terapija, kliničke istorije pacijenta i odgovora na antitelo, kao i od odluka ordinirajućeg lekara. Antitelo se pogodno primenjuje pacijentu jednom ili tokom serije tretmana. U zavisnosti od vrste i težine bolesti, otprilike 1 µg/kg do 15 mg/kg (npr.0.1mg/kg-10mg/kg) antitela može biti početna izabrana doza koja će se primeniti pacijentu, bilo, na primer, putem jednog ili više odvojenih davanja, ili putem kontinuirane infuzije. Jedna uobičajena dnevna doza može se kretati od otprilike 1 µg/kg do 100 mg/kg ili više, zavisno od gore pomenutih faktora. Za ponovljena primenjivanja tokom nekoliko dana ili duže, u zavisnosti od stanja, tretman bi generalno bio neprekidan dok se ne javi željena supresija simptoma bolesti. Doziranje antitela bi, primera radi, bilo u opsegu od oko 0.05 mg/kg do oko 10 mg/kg. Tako, pacijentu se može dati jedna ili više doza od otprilike 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg ili 10 mg/kg (ili bilo koja njihova kombinacija). Ove doze se mogu primenjivati naizmenično, npr. svake nedelje ili svake tri nedelje (npr. tako da pacijent primi od otprilike dve do otprilike dvadeset, ili npr. oko šest doza antitela). Mogu se primeniti inicijalno doze sa većim sadržajem, koje prati jedna ili više nižih doza. Ipak, od koristi mogu biti i drugačiji režimi doziranja. Progres ove terapije se lako prati konvencionalnim tehnikama i testovima.
Razume se da svaka od gornjih formulacija ili terapeutskih postupaka mogu da se izvedu primenom imunokonjugata pronalaska umesto ili zajedno sa antitelom koje je u skladu sa pronalaskom.
Proizvodni artikli
U drugom aspektu, obezbeđen je proizvodni artikl, koji sadrži materijale korisne za tretman, prevenciju i/ili dijagnozu prethodno opisanih poremećaja. Proizvodni artikl se sastoji od kontejnera i signature ili inserta u pakovanju koje je na ili uz kontejner. Pogodni kontejneri obuhvataju, na primer, boce, bočice, špriceve, kese sa IV rastvorom, itd. Kontejneri mogu biti napravljeni od različitih materijala, kao što su staklo ili plastika. Kontejner sadrži kompoziciju koja je sama ili kombinovana sa drugom kompozicijom efektivnom za, prevenciju i/ili dijagnostikovanje stanja i, može imati sterilan prilazni otvor (na primer, kontejner može biti kesica za intravenski rastvor ili bočica koja ima zatvarač koji je probodiv iglom hipodermijske injekcije). Najmanje jedan aktivan agens u kompoziciji je antitelo pronalaska. Signatura ili inserti iz pakovanja ukazuju na to da se kompozicija koristi za lečenje izabranog stanja. Sem toga, proizvodni artikl može sadržati (a) prvi kontejner sa kompozicijom koja se u njemu nalazi, pri čemu kompozicija sadrži antitelo pronalaska; i (b) drugi kontejner sa kompozicijom koja se u njemu nalazi, pri čemu kompozicija sadrži još citotoksično ili sredstvo koje je na drugi način terapeutsko. Proizvodni artikl u ovom ostvarenju može dalje sadržavati insert za pakovanje na kom se ukazuje na to da se kompozicije mogu koristiti za lečenje nekog posebnog stanja. Alternativno, ili dodatno, proizvodni artikl može dalje sadržavati drugi (ili treći) kontejner koji sadrži farmaceutski prihvatljiv pufer, kao što je bakteriostatska voda za injekcije (BWFI), slani rastvor puferovan fosfatom, Ringerov rastvor i rastvor dekstroze. Dalje mogu biti obuhvaćeni materijali koji su poželjni sa komercijalnog aspekta i aspekta korisnika, uključujući druge pufere, diluente, filtere, igle i špriceve.
Podrazumeva se da svaki od prethodno navedenih proizvodnih artikala može uključiti imunokonjugat pronalaska umesto ili dodatno sa varijantom antitela.
Ne-terapeutske primene polipeptida
Varijanta antitela pronalaska može da se koristi kao sredstvo za afinitetno prečišćavanje. U ovom procesu, varijanta antitela se imobiliše na čvrstoj fazi, kao što je Sephadex smola ili filter papir, primenom dobro poznatih postupaka. Imobilisana polipeptidna varijanta se dovede u kontakt sa uzorkom koji sadrži antigen kog treba prečistiti i, nakon toga se nosač ispira sa pogodnim rastvaračem koji će ukloniti suštinski sav materijal iz uzorka osim antigena kog treba prečistiti, koji je vezan za imobilisanu varijantu antitela. Konačno, nosač se ispira sa drugim pogodnim rastvaračem, kao što je glicinski pufer, pH 5.0, koji će otpustiti antigen sa polipeptidne varijante.
Varijanta antitela može, isto tako, da se koristi u dijagnostičkim testovima, npr., za detekciju ekspresije antigena od značaja u specifičnim ćelijama, tkivima, ili serumu.
Za dijagnostičke primene, varijanta antitela obično će biti obeležena sa detektabilnim delom. Dostupni su brojni obeleživači koji se generalno mogu grupisati u sledeće kategorije:
(a) radioizotopi, kao što su<35>S,<14>C,<125>J,<3>H i<131>J. Polipeptidna varijanta može biti obeležena sa radioizotopom primenom tehnika opisanih, na primer, u: Coligen, et al., Current Protocols in Immunology, Volumes 1 and 2, Ed. Wiley-Interscience, New York, N.Y., Pubs. (1991) i radioaktivnost može da se izmeri korišćenjem scintilacionog brojača.
(b) Fluorescentni obeleživači, kao što su helati elemenata retke zemlje (europium helati) ili fluorescein i njegovi derivati, rodamin i njegovi derivati, danzil, lisamin, fikoeritrin i teksas crveno su dostupni. Fluorescentni obeleživači mogu biti konjugovani sa polipeptidnom varijantom primenom tehnika opisanih, na primer, u: Current Protocols in Immunology, supra. Fluorescencija se može odrediti korišćenjem fluorimetra.
(c) Dostupni su različiti enzim-supstrat obeleživači i U.S. Pat. No. 4,275,149 omogućava pregled nekih od njih. Enzim generalno katalizuje hemijsku izmenu hromogenog supstrata, koja se može meriti primenom raznih tehnika. Na primer, enzim može katalizovati promenu boje supstrata, koja se može izmeriti spektrofotometrijski. Alternativno, enzim može promeniti fluorescenciju ili hemiluminescenciju supstrata. Prethodno su opisane tehnike za kvantitativno određivanje promene fluorescencije. Hemiluminescentni supstrat postaje elektronski ekscitiran hemijskom reakcijom i može zatim emitovati svetlost, koja se onda može izmeriti (korišćenjem hemiluminometra, na primer) ili energiju predati fluorescentnom akceptoru. Primeri enzimatskih obeleživača uključuju: luciferaze (npr., luciferazu svica i bakterijsku luciferazu; U.S. Pat. No.4,737,456), luciferin, 2,3-dihidroftalazindione, malat dehidrogenazu, ureazu, peroksidazu kao što je peroksidaza rena (HRPO), alkalnu fosfatazu, b-galaktozidazu, glukoamilazu, lizozim, saharidne oksidaze (npr., glukoza oksidaza, galaktoza oksidaza i glukoza-6-fosfat dehidrogenaza), heterociklične oksidaze (kao što su urikaza i ksantin oksidaza), laktoperoksidaza, mikroperoksidaza i slične. Tehnike kojima se enzimi konjuguju za antitela su opisani u: O’Sullivan, et al., Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, in Methods in Enzym. (ed J. Langone & H. Van Vunakis), Academic press, New York, 73:147-166 (1981).
Primeri enzim-supstrat kombinacija uključuju, na primer:
(i) peroksidazu rena (HRPO) sa hidrogen peroksidazom kao supstratom, pri čemu hidrogen peroksidaza oksiduje bojeni prekursor (npr., ortofenilen diamin (OPD) ili 3,3’,5,5’-tetrametil benzidin hidrohlorid (TMB));
(ii) alkalnu fosfatazu (AP) sa para-nitrofenil fosfatom kao hromogenim supstratom; i
(iii) b-D-galaktozidazu (b-D-Gal) sa hromogenim supstratom (npr., p-nitrofenil-b-D-galaktozidaza) ili fluorogenim supstratom 4-metilumbeliferil-b-D-galaktozidaza.
Stručnim licima su na raspolaganju brojne druge kombinacije enzim-supstrat. Za generalni pregled istih, vidi U.S. Pat.brojevi 4,275,149 i 4,318,980.
Ponekad, obeleživač se indirektno konjuguje sa polipeptidnom varijantom. Vešt praktičar zna za razne tehnike kojima će se ovo postići. Na primer, polipeptidna varijanta može biti konjugovana sa biotinom i svaka od tri gore pomenute široke kategorije obeleživača može biti konjugovana sa avidinom, ili vice versa. Biotin se selektivno vezuje za avidin i tako, obeleživač može biti konjugovan sa polipeptidnom varijantom na ovaj indirektan način. Alternativno, da bi se ostvarilo indirektno konjugovanje obeleživača sa polipeptidnom varijantom, polipeptidna varijanta se konjuguje sa malim haptenom (npr., digoksinom) i jedna od različitih vrsta gore pomenutih obeleživača se konjuguje sa anti-hapten polipeptidnom varijantom (npr., anti-digoksinskim antitelom). Tako se može postići indirektna konjugacija obeleživača sa polipeptidnom varijantom.
U drugom ostvarenju pronalaska, varijanta antitela ne mora biti obeležena, a njeno prisustvo se može otkriti primenom obeleženog antitela, koje se vezuje za polipeptidnu varijantu.
Varijanta antitela ovog pronalaska može se primeniti u bilo kom poznatom test postupku, kao što su testovi kompetitivnog vezivanja,direktni i indirektni sandvič testovi i imunoprecipitacioni testovi. Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, (1987) pp.
147-158, CRC Press, Inc..
Varijanta antitela, isto tako, može da se koristi za in vivo dijagnostičke testove. Generalno, polipeptidna varijanta je obeležena sa radionuklidom (kao što je:<111>In,<99>Tc,<14>C,<131>J,<125>J,<3>H,<32>P ili<35>S) tako da se antigen ili ćelija koja ga ekspresuje može lokalizovati primenom imunoscintigrafije. Iako je ovaj pronalazak u izvesnim detaljima opisan na ilustrativan način i kroz primere radi jasnijeg razumevanja, opise i primere ne treba tumačiti kao ograničavanje okvira pronalaska.
Opis liste sekvenci:
SEQ ID NO:1
Humani kappa laki lanac
SEQ ID NO:2
Humani lambda laki lanac
SEQ ID NO:3
Humani IgG1 (alotip bele rase)
SEQ ID NO:4
Humani IgG1 (alotip afroamerikanaca)
SEQ ID NO:5
Humani IgG1 LALA-mutant (alotip bele rase)
SEQ ID NO:6
Humani IgG4
SEQ ID NO:7
Humani IgG4 SPLE-mutant, koji predstavlja primer humanih sekvenci za kappa laki lanac, lambda laki lanac, IgG1 i IgG4 koji bi mogli služiti kao baza za stvaranje varijanti prema pronalasku. U sekvenci Id brojevi 3-5, sekvenci humanih IgG1 alotipova, P329 region prema Kabat EU indeksu je lociran na položaju 212, dok navedeni P329 region u sekvenci Id brojevi 6 i 7 može da se nađe u položaju 209.
SEQ ID NO:8
Kappa laki lanac mAb 40A746.2.3
SEQ ID NO:9
Teški lanac divljeg tipa IgG1 u mAb 40A746.2.3
SEQ ID NO:10
Teški lanac IgG1 P329G u mAb 40A746.2.3
SEQ ID NO: 11
Teški lanac IgG1 LALA / P329G u mAb 40A746.2.3
SEQ ID NO: 12
Teški lanac IgG4 SPLE u mAb 40A746.2.3
SEQ ID NO: 13
Teški lanac IgG4 SPLE / P329G u mAb 40A746.2.3
SEQ ID NO: 14
Teški lanac IgG1 LALA u mAb 40A746.2.3
Primeri
Sledećih sedam primera su primeri postupaka i kompozicija pronalaska kako su zahtevani, uporedo sa komparativnim izlaganjem. Shvata se da razna druga ostvarenja mogu da se praktikuju, datim opštim opisom, koji je prethodno obezbeđen.
Iako je ovaj pronalazak u izvesnim detaljima opisan na ilustrativan način radi jasnijeg razumevanja, opise i primere ne treba tumačiti kao ograničavanje okvira pronalaska.
Primer 1
Antitela
Za eksperimente koji su opisani u nastavku, korišćena su antitela protiv CD9 (vidi SEQ IDs 8-14), P-selektin (sekvence opisane u: WO 2005/100402) i CD20 (sinonim: GA101, sekvence opisane u: EP 1692182).
Sve ovde opisane varijante, npr. P329G, P329A, P329R SPLE, LALA, P329G/LALA, P329G/SPLE varijante selektina, CD9, CD20 (GA101) i CD20 (GA101)-glikokonstruisanog vezujućeg antitela (numerisanje prema EU nomenklaturi) generisane su primenom mutageneze na bazi PCR. IgG molekuli su ekspresovani u HEK-EBNA ili HEK293 (CD9 Fc varijante) sistemu i, prečišćene korišćenjem proteina A i hromatografije isključivanja prema veličini.
Primer 2
Određivanje afiniteta vezivanja različitih Fcg receptora za imunoglobuline
Afiniteti vezivanja različitih FcyR-a za imunoglobulinine izmereni su posredstvom površinske rezonance plazmona (SPR), uz korišćenje instrumenta Biacore T100 (GE Healthcare), na 25°C.
BIAcore® sistem je, za ispitivanje interakcija molekula, dobro utemeljen sistem. On omogućuje kontinuirano praćenje vezivanja ligand/analit u realnom vremenu i na taj način omogućuje određivanje konstanti brzine asocijacije (ka), konstanti brzine disocijacije (kd) i<ravnotežnih konstanti (K>D<). Izmene u refraktivnom indeksu ukazuju na promene mase na>površini,koje su posledica interakcije između imobilisanog liganda i analita, injiciranog u rastvor. Ukoliko se molekuli vezuju za imobilisane ligande na površini, masa se povećava, a u slučaju disocijacije, masa se smanjuje.
U slučaju interakcije u odnosu 1:1, u rezultatima se ne mogu videti razlike ukoliko se vezujući molekul injicira preko površine ili ukoliko se imobiliše na površini. Sledstveno tome, korišćene se različite postavke (sa Fcgreceptorom kao ligandom, odnosno kao analitom), u zavisnosti od rastvorljivosti i raspoloživosti liganda ili odgovarajućeg analita.
Za FcyRI, 10000 rezonantnih jedinica (RU) sistema prihvatanja, koji prepoznaje polihistidinsku sekvencu (pentaHis monoklonsko antitelo, Qiagen Hilden, kataloški broj 34660), imobilisano je korišćenjem amin-kuplujućeg kita, nabavljenog posredstvom GE Healthcare i CM5 čipa, pri pH 4.5. FcyRI je vezan pri koncentraciji od 5 µg/ml, pri pulsu od 60 sekundi i brzini protoka od 5 µl/min. Različite koncentracije antitela koje se kreću u rasponu 0 do 100 nM, propuštane su brzinom protoka od 30 µl/min, kroz protočne ćelije, pri 298 K, tokom 120 sekundi, da bi se snimila faza asocijacije. Faza disocijacije je praćena sve do isteka 240 sekundi, a pokrenuta je prebacivanjem iz rastvora uzorka u radni pufer. Površina je regenerisana putem 2- minutnog ispiranja sa rastvorom glicina sa pH 2, pri brzini protoka od 30 µl/min. Za sve eksperimente je odabran HBS-P+ pufer, nabavljen posredstvom GE Healthcare (10 mM HEPES, pH 7.4, 150 mM NaCl, 0.05% (v/v) surfaktant P20). Razlike u refraktivnom indeksu mase korigovane su oduzimanjem odgovora koji je dobijen sa površine bez vezanog FcyRI. Takođe su oduzete injekcije slepog rastvora (= dvostruka referenca).
Ravnotežna konstanta disocijacije (KD), koja se definiše kao odnos ka/kd, utvrđenajeanaliziranjem kriva senzograma, koje su dobijene sa nekoliko različitih koncentracija, uz korišćenje softverskog paketa BIAevaluation. Podešavanje podataka je usklađeno sa pogodnim modelom vezivanja.
Za FcyRIIA i FcyRIIIAV158, 10000 rezonantnih jedinica (RU) monoklonskog antitela koje se ispituje, imobilisano je na CM5 čipu, korišćenjem amin-kuplujućeg čipa, nabavljenog posredstvom GE (pH 4.5, pri koncentraciji od 10 µg/ml).
Različite koncentracije FcyRIIA i IIIA, koje se kreću u rasponu od 0 do 12800 nM, propuštane su sa brzinom protoka od 5 µl/min, kroz protočnu ćeliju, pri 298 K, tokom 120 sekundi, da bi se snimila faza asocijacije. Faza disocijacije je praćena sve do isteka 240 sekundi, a pokrenuta je prebacivanjem iz rastvora uzorka u radni pufer. Površina je regenerisana putem 0,5-minutnog ispiranja sa rastvorom 3 mM NaOH/1M NaCl, pri brzini protoka od 30 µl/min. Za sve eksperimente je odabran HBS-P+ pufer, nabavljen posredstvom GE Healthcare (10 mM HEPES, pH 7.4, 150 mM NaCl, 0.05% (v/v) surfaktant P20).
Razlike u refraktivnom indeksu mase korigovane su oduzimanjem odgovora koji je dobijen sa površine bez vezanog antitela. Takođe su oduzete injekcije slepog rastvora (= dvostruka referenca).
Ravnotežna konstanta disocijacije (KD) je utvrđena analiziranjem kriva senzograma, koje su dobijene sa nekoliko različitih koncentracija, uz korišćenje softverskog paketa BIAevaluation. Podešavanje podataka je praćeno usklađivanjem sa pogodnim modelom vezivanja, uz korišćenje tzv. ²steady state² iscrtavanja krive.
Za FcyRIIB, 10000 rezonantnih jedinica (RU) sistema prihvatanja, koji prepoznaje polihistidinsku sekvencu (pentaHis monoklonsko antitelo, Qiagen Hilden, kataloški broj 34660), imobilisano je korišćenjem amin-kuplujućeg kita, nabavljenog posredstvom GE Healthcare i CM5 čipa, pri pH 4.5. FcyRIIB je vezan pri koncentraciji od 5 µg/ml, pri pulsu od 120 sekundi i brzini protoka od 5 µl/min. Različita antitela su propuštana u koncentraciji od 1340 nM, brzinom protoka od 5 µl/min, kroz protočne ćelije, pri 298 K, tokom 60 sekundi, da bi se snimila faza asocijacije. Faza disocijacije je praćena sve do isteka 120 sekundi, a pokrenuta je prebacivanjem iz rastvora uzorka u radni pufer. Površina je regenerisana putem 0,5-minutnog ispiranja sa rastvorom glicina pri pH 2.5, pri brzini protoka od 30 ml/min. Za sve eksperimente je odabran HBS-P+ pufer, nabavljen posredstvom GE Healthcare (10 mM HEPES, pH 7.4, 150 mM NaCl, 0.05% (v/v) surfaktant P20).
Razlike u refraktivnom indeksu mase korigovane su oduzimanjem odgovora koji je dobijen sa površine bez vezanog FcyRIIB. Takođe su oduzete injekcije slepog rastvora (= dvostruka referenca).
Zbog veoma slabog unutrašnjeg afiniteta FcyRIIB za IgG1 divljeg tipa, afinitet nije kalkulisan pre nego što je utvrđeno kvalitativno vezivanje.
U tabelama koje slede sažeto su prikazani efekti uvođenja mutacije u Fc deo na vezivanje sa FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB, i FcgRIIIAV1-58 (A), kao i efekat na ADCC (izmerena bez (BLT) i sa ciljnim ćelijama (ADCC)) i na vezivanje sa C1q binding (B).
Tabela 2A:
Tabela 2B:
Detaljnije, dobijeni su sledeći rezultati:
Afinitet za FcyRI receptor
P329G, P329A, SPLE i LALA mutacije uvedene su u Fc polipeptid u P-selektinu, CD20 i CD9 antitelu i, izmeren je afinitet vezivanja za FcyRI na Biacore sistemu. Dok se antitelo sa P329G mutacijom još uvek vezuje za FcgR1 (Slika 1a i 1b), uvođenje trostrukih mutacija P329G / LALA i P329G / SPLE, rezultira antitelima za koje se vezivanje ne može detektovati (Slika 1b). LALA ili SPLE mutacije smanjuju vezivanje za receptor više od samog P329G ali manje nego u kombinaciji sa P329G (Slika 1a i 1b). Tako, kombinacija P329G sa ili LALA ili SPLE mutacijama je mnogo efektivnija od P329G mutacije ili samih dvostrukih mutacija LALA ili SPLE. Vrednost kd za CD20 IgG1 divlji tip antitela je bila 4.6 nM a za P329G mutant istog antitela 5.7 nM, ali za trostruki mutant P329G/LALA nije se mogla odrediti vrednost kd zahvaljujući praktično nedetektabilnom vezivanju antitela za FcyRI receptor. Testirano je samo antitelo, tj. bilo CD9 bilo CD20 ili P-selektin i, imalo je minorni efekat na afinitete vezivanja.
Afinitet za FcyRIIA receptor
P329G, SPLE i LALA mutacije, uvedene su u Fc polipeptid CD9 antitela i, izmeren je afinitet vezivanja za FcyRIIA-R131 receptor na Biacore sistemu. Nivo vezivanja je normalizovan tako da je uhvaćeno mAb predstavljalo 100 RU. Tako da nije očekivano više od otprilike 20 RUis za stehiometriju 1:1. Slika 1c prikazuje da je vezivanje za FcyRIIA receptor snažno smanjeno uvođenjem LALA, SPLE/P329G, P329G i LALA/P329G mutacije u Fc varijantu. Suprotno vezivanju za FcyRl receptor, uvođenje same P329G mutacije može veoma snažno da blokira vezivanje za receptor, manje ili više u sličnom stepenu kao i trostruka mutacija P329G / LALA (Slika 1c).
Afinitet za FcgRIIB receptor
SPLE, LALA, SPLE/P329G i LALA/P329G mutacije, uvedene su u Fc polipeptid CD9 i P-selektin antitela i, izmeren je afinitet vezivanja za FcgRIIB receptor na Biacore sistemu. Slika Id prikazuje da je vezivanje za FcyRIIB receptor snažno sniženo sa LALA i trostrukim mutantima P329G/LALA , P329G / SPLE
Afinitet za FcyRIIIA receptor
P329G,LALA, SPLE, P329G / LALA i SPLE / P329G mutacije, uvedene su u Fc polipeptid CD9 i, izmeren je afinitet vezivanja za FcgRIIIA-V158 receptor na Biacore sistemu. P329G mutacija i trostruka mutacija P329G / LALA smanjuju vezivanje za FcyRIIIA receptor najsnažnije, do praktično nedetektabilnih nivoa. P329G/SPLE, isto tako, dovodi do snažnog snižavanja afiniteta vezivanja, mutacije SPLE odnosno LALA, samo neznatno smanjuju afinitet vezivanja za FcyRIIIA receptor (Slika 1e).
Primer 3
C1Q ELISA
Svojstva vezivanja različitih polipeptida koji sadrže Fc varijante za C1q su analizirana imunotestom tipa sendvič ELISA. Svaka varijanta je kuplovana sa hidrofobnom Maxisorp pločom sa 96 pozicija u 8 koncentaracija između 10 µg/ml i 0 µg/ml. Ovo kuplovanje simulira komplekse antitela, što je preduslov za visok afinitet vezivanja C1q molekula. Posle ispiranja, uzorci se inkubiraju da bi se omogućilo C1q vezivanje. Posle sledećeg ispiranja, vezani C1q molekul se detektuje pomoću poliklonskog zečijeg anti-hClq antitela. Nakon sledećeg koraka ispiranja, dodaje se enzim obeležen anti-zečijim-Fcy specifičnim antitelom. Imunološka reakcija se načini vidljivom dodavanjem supstrata koji se pomoću enzima prevodi u bojeni proizvod. Rezultirajuća apsorbanca, fotometrijski izmerena, je proporcionalna količini vezanog C1q za<antitelo koje se istražuje. Izračunavaju se EC>50<vrednosti interakcije varijanta-C1q. Jedinice>apsorpcije, kojenastaju iz bojene rekacije, postave se prema koncentracijama antitela.<Koncentracija antitela pri polovini maksimalnog odgovora određuje EC>50<vrednost. Ovo>očitavanje se prikazuje kaorelativna razlika prema referentnom standardu merenom na istoj ploči zajedno sa koeficijentom varijacije uzorka i reference.
P329G mutacija, uvedena u P-selektin ili CD20 antitelo snažno smanjuje vezivanje<za>C1q, slično SPLE mutaciji (Slika 2). Tabela 3 zbirno prikazuje izračunate EC50vrednosti za vezivanje barijanti za C1q receptor. C1q pripada proteinima aktivacije komplementa i ima glavnu ulogu u aktivaciji klasičnog puta komplementa, koja dovodi do formiranja kompleksa membranskog napada. C1q je takođe upleten u druge imunološke procese, kao što je uvećavanje fagocitoze, klirens apoptotskih ćelija ili neutralizacija virusa. Tako, može se očekivati da mutanti ovde prikažu smanjenje vezivanja za C1q, npr. P329G i SPLE, kao i što takođe trostruke mutacije, koje obuhvataju prethodno pomenute pojedinačne mutacije, snažno umanjuju prethodno pomenute funkcije C1q.
Tabela 3:
Primer 4
ADCC bez ciljnih ćelija, BLT test
Antitela koja treba testirati (CD20 (GA101) i CD9) se oblože u PBS preko noći na 4°C u prikladnim pločama ravnog dna sa 96 pozicija. Posle ispsiranja ploče sa PBS, zaostali vezujući položaji se blokiraju sa PBS/1 % BSA rastvorom u toku 1 h na RT. U međuvremenu, efektorne ćelije (NK-92 ćelijska linija transfektovana da ekspresuje nizak ili visok afinitet za humani FcyRIII) se sakupe i, zaseje se 200000 živih ćelija/poziciji u 100 µl/poziciji AIM V medijuma, nakon uklanjanja blokirajućeg pufera. Korišćeno je 100 µl/poziciji saponin pufera (0.5
% saponina 1 % BSA u PBS) za određivanje maksimalnog oslobađanja esteraze pomoću efektornih ćelija. Ove ćelije su inkubirane u toku 3 h na 37°C, 5 % CO2 u inkubatoru. Posle 3 h, 20 µl/poziciji supernatanta se pomeša sa 180 µl/poziciji BLT supstrata (0.2 mM BLT 0.11 mM DTNB u 0.1 M Tris-HCL, pH 8.0) i inkubira u toku 30 min na 37°C pre čitanja ploče na 405 nm u čitaču mikroploča. Procenat oslobađanja esteraze je određen podešavanjem maksimalnog oslobađanja (saponin-tretirane ćelije) na 100 % i nestimulisanih ćelija (bez ab obloge) na 0 % oslobađanja.
Divlji tip CD20 antitela (GA101 tež (1)) ispoljava snažnu indukciju citolitičke aktivnosti. LALA varijanta prikazuje značajnu redukciju oslobađanja esteraze, dok P329G i P329G / LALA varijanta ne ispoljavaju ADCC aktivnost (Slika 3a). Slika 3b prikazuje da ne samo promena G na položaju P329 dovodi do primetno snižene citolitičke aktivnosti, već isto tako, izmena P329 u R329 (CD20 antitelo). Tako čini se da arginin uništava funkciju prolin sendviča u antitelu, slično glicinu. Snažno redukovana ADCC, koja je ovde zapažena za P329G mutant, najverovatnije rezultira iz snažne redukcije vezivanja za FcyRIIA i FcyRIIIA receptor (vidi Sliku 1c i Sliku 1e).
Primer 5
ADCC sa ciljnim ćelijama
Humane mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) su korišćene kao efektorne ćelije i pripremljene su upotrebom Histopaque-1077 (Sigma Diagnostics Inc., St. Louis, MO63178 USA) uz striktno praćenje uputstava proizvođača. Ukratko, venska krv se od volontera uzima u heparinizirane špriceve. Krv se razblaži 1:0.75-1.3 sa PBS (koji ne sadrži Ca<++>ili Mg<++>) i postavi na Histopaque-1077. Gradijent je centrifugiran na 400 x g tokom 30 min na sobnoj temperaturi (RT) bez pauza. Interfaza, koja sadrži PBMC, je sakupljena i isprana sa PBS (50 ml po ćelijama iz dva gradijenta) i sakupljena centrifugiranjem na 300 x g u toku 10 minuta na RT. Nakon resuspenzije taloga sa PBS, PBMC su izbrojane i isprane drugi put uz centrifugiranje na 200 x g tokom 10 minuta na RT. Ćelije su onda resusupendovane u odgovarajućem medijumu za predstojeće procedure. Odnos efektor - meta, korišćen u ADCC testu je bio 25:1 i 10:1 za PBMC i NK ćelije. Efektorne ćelije su pripremljene u AIM-V medijumu u odgovarajućoj koncentraciji sa ciljem da se doda 50 ml po poziciji u pločama zaobljenog dna sa 96 pozicija. Ciljne ćelije su bile ćelije humanog B limfoma (npr., Raji ćelije) uzgajane u DMEM koji sadrži 10% FCS. Ciljne ćelije su isprane u PBS, izbrojane i resuspendovane u AIM- V pri 0.3 miliona po ml u cilju dodavanja 30’000 ćelija u 100 ml po mikropoziciji. Antitela su razblažena u AIM-V, dodata u 50 ml ciljnim ćelijama pre postavljanja u ploču i, ostavljena da se vežu za mete tokom 10 minuta na RT. Zatim se dodaju efektorne ćelije i ploča se inkubira u toku 4 sata na 37°C u vlažnoj atmosferi koja sadrži 5% CO2. Ubijanje ciljnih ćelija ispitano merenjem oslobađanja laktat dehidrogenaze (LDH) iz oštećenih ćelija, korišćenjem Cytotoxicity Detection kit (Roche Diagnostics, Rotkreuz, Switzerland). Posle inkubacije od 4 sata, ploče su centrifugirane na 800 x g.100 ml supernatanta iz svake pozicije je preneto u novu ploču transparentnog ravnog dna sa 96 pozicija. 100 mlbojenog puferovanog supstrata iz kita se<doda u svaku poziciju. Vrednosti V>max<bojene reakcije se određuju na ELISA čitaču na 490 nm>najmanje 10 min primenom SOFTmax PRO software-a (Molecular Devices, Sunnyvale, CA94089, USA). Spontano oslobađanje LDH je mereno iz pozicija koje sadrže samociljne i efektorne ćelijeali ne i antitela. Maksimalno oslobađanje je izmereno iz pozicija koje sadrže samo ciljne ćelije i 1% Triton X-100. Procenat specifičnogantitelo-posredovanog ubijanja jeizračunato na sledeći način: ((x-SR)/(MR - SR)*100, gde je x srednja vrednost Vmaxpri specifičnoj koncentraciji antitela, SR je srednja vrednost Vmaxspontanog oslobađanja, a MR je srednja vrednost Vmaxmaksimalnog oslobađanja.
Mogućnost regrutovanja imunih-efektornih ćelija zavisi od tipa Fc varijante kada se meri klasičnim ADCC testom. Ovde, humana NK92 ćelijska linija transfektovana sa humanim FcgRIIIA je korišćena kao efektor i, CD20 pozitivne Raji su korišćene kao ciljne ćelije. Kako se može videti na Slici 4a, ADCC je snažno smanjena kod GA101 (CD20) Fc varijanti gde glicin zamenjuje prolin (P329G) i takođe, do sličnog stepena, kod dvostrukoh mutanta P329G / LALA. Suprotno, smanjivanje ADCC je bilo manje snažno sa LALA mutacijom. U cilju boljeg razgraničavanja između različitih varijanti, varijante su, isto tako, proizvedene u glikokonstruisanoj verziji da bi se uvećao potencijal ADCC. Može se zapaziti da matični molekul (GA101 (CD20)) pokazuje snažnu ADCC kako se ekspresuje. LALA verzija je značajno narušena u svom ADCC potencijalu. P329G mutant veoma snažno smanjuje ADCC; mnogo više nego P329A varijanta GA101 (CD20) antitela (Slika 4b).
Primer 6
Aktivnost komplementa
Izbrojane su ciljne ćelije, isprane sa PBS, resuspendovane u AIM-V (Invitrogen) pri 1 milion ćelija po ml. U ploče ravnog dna sa 96 pozicija se stavi 50 ml ćelija po reakcionom mestu. Pripreme se razblaženja antitela u AIM-V i doda se po 50 ml ćelijama. Antitela se ostavljaju da se vezuju za ćelije 10 minuta na sobnoj temperaturi. Humani serum komplement (Quidel) je sveže otopljen, razblažen 3-puta sa AIM-V i dodat po 50 ml u pozicije. Zečiji komplement (Cedarlane Laboratories) je pripremljen prema opisu proizvođača, razblažen 3-puta sa AIM-V i dodat po 50 ml u pozicije. Kao kontrola, izvori komplementa su tokom 30 min grejani na 56°C pre dodavanja testu. Test ploče su inkubirane 2h na 37°C. Ubijanje ćelija je određeno merenjem oslobađanja LDH. Ukratko, ploče su centrifugirane pri 300 x g u toku 3 min.50 ml supernatanta po poziciji je preneseno u novu ploču sa 96 pozicija i dodato je po 50 ml test reagensa iz Cytotoxicity Kit (Roche). Kinetičkim merenjem na ELISA čitaču se određuje Vmax, koja odgovara koncentraciji LDH u supernatantu. Maksimalno oslobađanje je određeno inkubiranjem ćelija u prisustvu 1% Triton X-100.
Analizirane su različite Fc varijante u posredovanju CDC na SUDH-L4 ciljnim ćelijama. Ne-glikokonstruisani GA101 molekul je ispoljio jasnu indukciju CDC. LALA varijanta ispoljava aktivnost samo pri najvišoj koncentraciji, dok P329G i P329G/LALA varijante ne ispoljavaju CDC aktivnost (Slika 5a). Sem toga, LALA varijanta, kao i P329G i P329A varijante glikokonstruisanog GA101 molekula ne pokazuju CDC aktivnost (Slika 5b).
Primer 7
Ugljenohidratni profil humanog IgG1
Ugljenohidratni profili humanih IgG1 antitela, koja sadrže mutacije unutar Fc, namenjene ukidanju vezivanja za Fcg□ receptore, analizirani su na MALDI/TOF-MS u pozitivnom jonskom modu (neutralni oligosaharidi).
Humane (h) IgG1 varijante se tretiraju sa sijalidazom (QA-Bio) prema uputstvima proizvođača kako bi se uklonila terminalna sijalinska kiselina. Neutralni oligosaharidi u hIgG1 se zatim oslobađaju pomoću digestije sa PNGase F (QA-Bio) kako je prethodno opisano (Ferrara, C. et al., Biotech. Bioeng. 93 (2006) 851-861). Ugljenohidratni profili su analizirani masenom spektrometrijom (Autoflex, Bruker Daltonics GmbH) u pozitivnom jonskom modu kako je prethodno opisano (Ferrara, C. et al., Biotech. Bioeng.93 (2006) 851-861).
Ugljenohidratni profil neutralnih Fc-udruženih glikana humanog IgG1 se karakteriše sa tri glavna m/z pika, što se može pripisati fukozilovanom kompleksu oligosaharida bez (G0), sa jednim (G1) ili dva (G2) terminalna galaktozidna ostatka.
Ugljenohidratni profili hIgG1, koji sadrže mutacije unutar Fc, namenjene ukidanju vezivanja za Fc receptore, analizirani su i upoređeni sa onima dobijenim za divlji tip antitela. IgG varijante, koje sadrže jednu od mutacija unutar Fc (P329G, LALA, P329A, P329G/LALA) pokazuju slične ugljenohidratne profile sa divljim tipom antitela, sa Fc-udruženim glikanima koji su fukozilovani kompleks oligosaharida (podaci nisu prikazani). Mutacija unutar Fc može uticati na nivo terminalne galaktozilacije i terminalne sijalilacije, što se zapaža kod zamenjivanja amino kiselina na položajima 241, 243, 263, 265, ili 301 sa alaninom (Lund, J. et al., J. Immunol.157 (1996) 4963-4969).
Slika 6a pokazuje relativan procenat galaktozilacije za različite hIgG1 Fc-varijante, koje su ovde opisane. Mogu se zapaziti neznatne varijacije kada se antitela ekspresuju u različitim domaćinima, ali bez mogućnosti zapažanja značajnih razlika u terminalnoj galaktozilaciji.
Slika 6b indikuje varijabilnost sadržaja galaktozilacije za divlji tip i IgG1-P329G / LALA za 4 različita antitela, pri čemu su upoređena četiri različita V-domena na količinu njihove galaktozilacije kada se ekspresuju u Hek293 EBNA ćelijama.
Primer 8
Test agregacije trombocita indukovane antitelom u punoj krvi.
Analiza agregacije u punoj krvi korišćenjem Multiplate instrumenta od Dynabyte. Prvo, uzme se 20 ml krvi od normalnih humanih donora i prenese u hiruidin epruvete (Dynabyte Medical, # MP0601). U testu je korišćen minićelijski impedanca uređaj za ubacivanje (Dynabead #MP0021) u Multiplate instrument. Onda, 175 µl 0.9 % NaCl se doda u minićeliju. U minićeliju se doda antitelo kako se dobija konačna test koncentracija. Zatim, dodaje se 175 µl humane krvi i inkubira se u toku 3 min na 37°C. Automatski se startuje analiza impedancom još dodatnih 6 min na 37°C. Podaci su analizirani određivanjem površine-ispod-krive kao merom agregacije trombocita.
Pokazalo se da CD9 antitelo indukuje aktivaciju trombocita i agregaciju trombocita (Worthington, et al., Br. J. Hematol.74(2) (1990) 216-222). Prethodno je pokazano da agregacija trombocita koju indukuju antitela koja se vezuju za trombocite uključuje vezivanje za FcyRIIA (de Reys, et al., Blood 81 (1993) 1792-1800). Kako je prethodno pokazano, mutacije LALA, P329G, P329G/LALA i P329G/SPLE uvedene u CD9 antitelo snažno smanjuju vezivanje CD9 antitela za FcyRIIA receptor (Slika 1c).
Aktivacija (mereno efluksom Ca, podaci nisu prikazani) kao i agregacija trombocita indukovane CD9 antitelom se eliminišu uvođenjem P329G i LALA trostruke mutacije u antitelo, tako da je vezivanje FcyRIIA značajno smanjeno u poređenju sa divljim tipom antitela (vidi Sliku 7a i 7b). Mišiji IgG1 indukuje agregaciju trombocita pri niskim koncentracijama antitela (0.1-1 µ/ml). Pri višim koncentracijama, prekomerna stimulacija trombocita dovodi do utišavanja agregacionog odgovora (3-30 µg/ml). Zapažena je donorska varijabilnost sa chim-hu-IgG4-SPLE. Na Slici 6a podaci za chim-hu-IgG4-SPLE odgovor pri višim koncentracijama antitela i na Slici 6b su prikazani podaci za chim-hu-IgG4-SPLE ne-odgovor. Ni jedan od uzoraka krvi nije pokazao agregacioni odgovor sa varijantama antitela chimhu-IgGl-LALA, chim-hu-IgG-WT-P329G, chim-hu-IgGl-LALA-P329G, chim-hu-IgG4-SPLE-P329G, chim-hu-IgG4-SPLE-N297Q.
Kontrole: spontana agregacija u netretiranom uzorku krvi (background); ADP-indukovana (ADP) i trombin analog-indukovana (TRAP6) agregacija trombocita. Izotipske kontrole: mišiji IgG1 (mišiji izotip) i humani IgG4-SPLE (hu-IgG4-SPLE izotip).
Jedna moguća interpretacija ovih podataka je da je pad vezivanja CD9 antitela sa trostrukim mutacijama za FcyRIIA receptor razlog smanjivanja agregacije trombocita zapaženog sa ovom vrstom mutantnih antitela. U principu, tako bi mogla biti moguća prevencija agregacije trombocita, kao toksični neželjeni efekat tretmana antitelom, uvođenjem gore pomenutih mutacija, koje mogu da smanje vezivanje za FcyRIIA receptor, u Fc delu antitela.
LISTA SEKVENCI
<110> Roche G ycart AG <120> Fc var jante ant te a <130> 27397 WO <150> EP11160251 <151> 2011-03-29 <160> 14
<170> Patentna verz ja 3.5 <210> 1
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo Sap ens <400> 1
<210> 2
<211> 105
<212> PRT
<213> Homo sap ens <400> 2
<211> 330
<212> PRT
<213> Homo sap ens
<400> 3
<211> 330
<212> PRT
<213> Homo sap ens
<400> 4
<211> 330
<212> PRT
<213> Homo sap ens
<400> 5
<211> 327
<212> PRT
<213> Homo sap ens
<400> 6
<211> 327
<212> PRT
<213> Homo sap ens
<400> 7
<211> 214
<212> PRT
<213> Veštačka Sekvenca
<220>
<223> LC_1_1-PEP
<400> 8
<211> 449
<212> PRT
<213> Veštačka Sekvenca
<220>
<223> 8201_HC_IGG1-PEP
<400> 9
<211> 449
<212> PRT
<213> Veštačka Sekvenca
<220>
<223> 8206_HC_IGG1-P329G-PEP
<400> 10
<211> 449
<212> PRT
<213> Veštačka Sekvenca
<220>
<223> 8207_HC_IGG1-LALA-P329G-PEP
<400> 11
<211> 446
<212> PRT
<213> Veštačka Sekvenca <220>
<223> 8202_HC_IGG4-SPLE-PEP <400> 12
<211> 446
<212> PRT
<213> Veštačka Sekvenca
<220>
<223> 8208_HC_IGG4-SPLE-P329G-PEP
<400> 13
<211> 449
<212> PRT
<213> Veštačka Sekvenca
<220>
<223> 8205_HC_IGG1_LALA-PEP <400> 14

Claims (6)

Patentni zahtevi
1. Antitelo ili Fc fuzionisani protein, koji sadrže Fc varijantu divljeg-tipa Fc regiona humanog IgG1, pri čemu Fc varijanta divljeg-tipa Fc regiona humanog IgG1 sadrži aminokiselinske supstitucije P329G, L234A i L235A, a pri čemu su ostaci numerisani prema Kabatovom indeksu EU.
2. Antitelo ili Fc fuzionisani protein, prema zahtevu 1, pri čemu divlji-tip regiona humanog IgG1 indukuje ADCC i, pri čemu je ADCC, koju indukuje antitelo ili Fc fuzionisani protein koji sadrže Fc varijantu IgG1, smanjena na 0-20% ADCC, koju indukuje antitelo ili Fc fuzionisani protein koji sadrže divlji-tip Fc regiona humanog IgG1.
3. Antitelo ili Fc fuzionisani protein, prema zahtevima 1 ili 2, pri čemu antitelo ili Fc fuzionisani protein koji sadrže Fc varijantu ispoljavaju snižen ili istopljen afinitet za Fc receptor odgovoran za efektornu funkciju u poređenju sa antitelom ili Fc fuzionisanim proteinom koji sadrže divljitip Fc regiona humanog IgG1.
4. Antitelo prema ma kom od zahteva 1-3, pri čemu je antitelo anti-CD9 antitelo, koje je naznačeno time što je divlji-tip Fc regiona sadržan u vidu varijabilnog regiona teškog lanca SEQ ID NO:9 i u vidu varijabilnog regiona lakog lanca SEQ ID NO:8.
5. Antitelo ili Fc fuzionisani protein, prema ma kom od zahteva 1-4, za primenu kao lek.
6. Antitelo ili Fc fuzionisani protein, prema ma kom od zahteva 1-4, za primenu u postupku za lečenje bolesti kod pojedinca gde je povoljno da je efektorna funkcija antitela ili Fc fuzionisanog proteina značajno smanjena u poređenju sa efektornom funkcijom koju indukuje antitelo ili Fc fuzionisani protein koji sadrže divlji-tip Fc regiona humanog IgG, postupak obuvata primenjivanje antitela ili Fc fuzionisanog proteina prema ma kom od zahteva 1-4 pojedincu.
RS20181237A 2011-03-29 2012-03-27 Fc varijante antitela RS57895B2 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP11160251 2011-03-29
EP12710732.4A EP2691417B2 (en) 2011-03-29 2012-03-27 Antibody fc variants
PCT/EP2012/055393 WO2012130831A1 (en) 2011-03-29 2012-03-27 Antibody fc variants

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RS57895B1 RS57895B1 (sr) 2019-01-31
RS57895B2 true RS57895B2 (sr) 2025-02-28

Family

ID=45888223

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20181237A RS57895B2 (sr) 2011-03-29 2012-03-27 Fc varijante antitela

Country Status (26)

Country Link
US (5) US8969526B2 (sr)
EP (2) EP3590965A1 (sr)
JP (1) JP5926791B2 (sr)
KR (2) KR101614195B1 (sr)
CN (2) CN105949313B (sr)
AR (1) AR085741A1 (sr)
AU (1) AU2012234335B2 (sr)
BR (1) BR112013024574B1 (sr)
CA (1) CA2828289C (sr)
DK (1) DK2691417T4 (sr)
ES (1) ES2692268T5 (sr)
FI (1) FI2691417T4 (sr)
HR (1) HRP20181690T4 (sr)
HU (1) HUE041335T2 (sr)
IL (1) IL228002B (sr)
LT (1) LT2691417T (sr)
MX (2) MX354359B (sr)
MY (1) MY163539A (sr)
PL (1) PL2691417T5 (sr)
PT (1) PT2691417T (sr)
RS (1) RS57895B2 (sr)
RU (1) RU2607014C2 (sr)
SG (2) SG10201602394QA (sr)
SI (1) SI2691417T2 (sr)
TR (1) TR201815420T4 (sr)
WO (1) WO2012130831A1 (sr)

Families Citing this family (634)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US20170166655A1 (en) * 2004-03-26 2017-06-15 Xencor, Inc. Novel immunoglobulin variants
AU2005304624B2 (en) 2004-11-12 2010-10-07 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US12492253B1 (en) 2008-02-25 2025-12-09 Xencor, Inc. Anti-human C5 antibodies
WO2011028952A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
AU2011283694B2 (en) 2010-07-29 2017-04-13 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points
SG192673A1 (en) 2011-02-10 2013-09-30 Roche Glycart Ag Mutant interleukin-2 polypeptides
ES2692268T5 (en) 2011-03-29 2025-02-26 Roche Glycart Ag Antibody fc variants
JP6152090B2 (ja) 2011-04-21 2017-06-21 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ コロラド，ア ボディー コーポレイトＴＨＥ ＲＥＧＥＮＴＳ ＯＦ ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＣＯＬＯＲＡＤＯ，ａ ｂｏｄｙ ｃｏｒｐｏｒａｔｅ 視神経脊髄炎を処置するための組成物および方法
EA201892619A1 (ru) 2011-04-29 2019-04-30 Роше Гликарт Аг Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2
KR102231139B1 (ko) 2011-06-28 2021-03-24 인히브릭스, 인크. 세르핀 융합 폴리펩타이드 및 이의 이용 방법
US10400029B2 (en) 2011-06-28 2019-09-03 Inhibrx, Lp Serpin fusion polypeptides and methods of use thereof
WO2013026839A1 (en) 2011-08-23 2013-02-28 Roche Glycart Ag Bispecific antibodies specific for t-cell activating antigens and a tumor antigen and methods of use
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
US12466897B2 (en) 2011-10-10 2025-11-11 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
MX360352B (es) * 2012-02-15 2018-10-30 Hoffmann La Roche Cromatografia de afinidad basada en receptores fc.
SG11201408538PA (en) * 2012-07-13 2015-02-27 Roche Glycart Ag Bispecific anti-vegf/anti-ang-2 antibodies and their use in the treatment of ocular vascular diseases
KR20150037959A (ko) * 2012-08-02 2015-04-08 에프. 호프만-라 로슈 아게 단량체 및 다량체 분자의 제조 방법 및 이의 용도
MY175687A (en) * 2012-08-07 2020-07-06 Roche Glycart Ag Composition comprising two antibodies engineered to have reduced and increased effector function
PE20150645A1 (es) 2012-08-08 2015-05-11 Roche Glycart Ag Proteinas de fusion de interleuquina 10 y usos de las mismas
US20140044675A1 (en) 2012-08-10 2014-02-13 Roche Glycart Ag Interleukin-2 fusion proteins and uses thereof
RU2015117393A (ru) 2012-10-08 2016-12-10 Роше Гликарт Аг Лишенные fc антитела, содержащие два Fab-фрагмента, и способы их применения
KR102211837B1 (ko) 2013-01-14 2021-02-03 젠코어 인코포레이티드 신규한 이형이량체 단백질
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
WO2014113510A1 (en) 2013-01-15 2014-07-24 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
TWI635098B (zh) 2013-02-01 2018-09-11 再生元醫藥公司 含嵌合恆定區之抗體
EP2762496A1 (en) 2013-02-05 2014-08-06 EngMab AG Method for the selection of antibodies against BCMA
EP2762497A1 (en) 2013-02-05 2014-08-06 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA
WO2014122143A1 (en) 2013-02-05 2014-08-14 Engmab Ag Method for the selection of antibodies against bcma
NZ710695A (en) * 2013-02-06 2020-05-29 Inhibrx Inc Non-platelet depleting and non-red blood cell depleting cd47 antibodies and methods of use thereof
EP2961770A1 (en) 2013-02-26 2016-01-06 Roche Glycart AG Bispecific t cell activating antigen binding molecules
LT2961771T (lt) * 2013-02-26 2020-03-10 Roche Glycart Ag Bispecifinės t ląstelę aktyvinančios antigeną surišančios molekulės, specifinės cd3 ir cea antigenams
EP2961773B1 (en) * 2013-02-26 2019-03-20 Roche Glycart AG Bispecific t cell activating antigen binding molecules
CN105188733B (zh) 2013-03-13 2020-05-08 建新公司 包含pdgf和vegf结合部分的融合蛋白及其使用方法
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10519242B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
EP2970486B1 (en) 2013-03-15 2018-05-16 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
MX367668B (es) 2013-03-15 2019-08-30 Dana Farber Cancer Inst Inc Anticuerpos neutralizadores de flavivirus y métodos de uso de los mismos.
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
UA118028C2 (uk) 2013-04-03 2018-11-12 Рош Глікарт Аг Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування
UA118029C2 (uk) 2013-04-29 2018-11-12 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Модифіковане антитіло, що зв'язується з людським fcrn, й способи його застосування
WO2014177459A2 (en) 2013-04-29 2014-11-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-receptor binding modified asymmetric antibodies and methods of use
EP3594240B1 (en) 2013-05-20 2023-12-06 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
KR102332303B1 (ko) 2013-05-31 2021-11-26 자임워크스 인코포레이티드 감소되거나 침묵화된 효과기 기능을 갖는 이종다량체
AR097584A1 (es) 2013-09-12 2016-03-23 Hoffmann La Roche Terapia de combinación de anticuerpos contra el csf-1r humano y anticuerpos contra el pd-l1 humano
CN112552401B (zh) 2013-09-13 2023-08-25 广州百济神州生物制药有限公司 抗pd1抗体及其作为治疗剂与诊断剂的用途
JP2016538283A (ja) 2013-11-13 2016-12-08 ザイムワークス，インコーポレイテッド Ｅｇｆｒ及び／またはｈｅｒ２を標的にする一価抗原結合性構築物及びその使用
AU2014357292B2 (en) 2013-11-27 2020-06-25 Zymeworks Bc Inc. Bispecific antigen-binding constructs targeting HER2
KR20160089390A (ko) * 2013-12-10 2016-07-27 에프. 호프만-라 로슈 아게 다중-하부단위 구조에 대한 약학적 활성 개체의 표적화 전달을 위한 다중-하부단위 구조의 하부단위의 결합 도메인의 용도
IL263466B2 (en) 2013-12-17 2023-10-01 Genentech Inc Anti-CD3 antibodies and methods of using them
RU2711322C1 (ru) 2013-12-20 2020-01-16 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Улучшенные способы получения рекомбинантного полипептида
CA2932547C (en) 2014-01-06 2023-05-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Monovalent blood brain barrier shuttle modules
MX380658B (es) 2014-01-15 2025-03-11 Hoffmann La Roche Variantes de region fc con union mejorada de la proteina a.
PT3102595T (pt) * 2014-02-06 2019-01-11 Hoffmann La Roche Proteínas de fusão de interleucina-2 e suas utilizações
WO2015117930A1 (en) * 2014-02-06 2015-08-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Interleukine 10 immunoconjugates
TWI701042B (zh) 2014-03-19 2020-08-11 美商再生元醫藥公司 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物
EP3699195A3 (en) 2014-03-28 2020-11-04 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind to cd38 and cd3
CN106604742B (zh) 2014-07-03 2019-01-11 百济神州有限公司 抗pd-l1抗体及其作为治疗剂及诊断剂的用途
BR112017001385B1 (pt) 2014-07-22 2023-12-05 Cb Therapeutics, Inc. Anticorpo isolado ou fragmento do mesmo que liga a pd-1, uso deste, composição, polinucleotídeo isolado e vetor de expressão
EP2982692A1 (en) 2014-08-04 2016-02-10 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA
EP3177643B1 (en) 2014-08-04 2019-05-08 F.Hoffmann-La Roche Ag Bispecific t cell activating antigen binding molecules
KR102476226B1 (ko) 2014-08-05 2022-12-12 아폴로믹스 인코포레이티드 항-pd-l1 항체
LT3191135T (lt) 2014-09-12 2020-11-25 Genentech, Inc. Anti-her2 antikūnai ir imunokonjugatai
SG11201701128YA (en) 2014-09-12 2017-03-30 Genentech Inc Cysteine engineered antibodies and conjugates
MA40579A (fr) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech Inc Anticorps anti-cll-1 et immunoconjugués
MX2017003472A (es) 2014-09-17 2017-10-31 Genentech Inc Inmunoconjugados que comprenden anticuerpos anti-her2.
BR112017005631A2 (pt) * 2014-09-19 2018-06-26 City Of Hope células t com receptor de antígeno coestimulador quimérico direcionadas à il13ra2
US9938522B2 (en) 2014-09-25 2018-04-10 Genewiz, Inc. High throughput sequencing of end regions of long linear DNAs
CA2961950A1 (en) 2014-09-28 2016-03-31 The Regents Of The University Of California Modulation of stimulatory and non-stimulatory myeloid cells
EP3204415B1 (en) 2014-10-09 2020-06-17 EngMab Sàrl Bispecific antibodies against cd3epsilon and ror1
NZ769391A (en) * 2014-10-27 2024-12-20 Sanofi Aatd Inc Serpin fusion polypeptides and methods of use thereof
US20160130324A1 (en) * 2014-10-31 2016-05-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc. C1 Inhibitor Fusion Proteins and Uses Thereof
MX2017005156A (es) * 2014-11-05 2017-08-08 Hoffmann La Roche Metodo para determinacion de anticuerpos de anti-farmaco contra anticuerpo de farmaco humano o humanizado de funcion efectora suprimida.
DK3215528T3 (da) 2014-11-06 2019-10-07 Hoffmann La Roche Fc-regionvarianter med modificeret FcRn-binding og anvendelsesfremgangsmåder
EP3224275B1 (en) 2014-11-14 2020-03-04 F.Hoffmann-La Roche Ag Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer
KR102614189B1 (ko) 2014-11-17 2023-12-18 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. Cd3xcd20 이특이적 항체를 이용한 종양의 치료 방법
US10508151B2 (en) 2014-11-19 2019-12-17 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
WO2016081640A1 (en) 2014-11-19 2016-05-26 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor / anti-bace1 multispecific antibodies and methods of use
EP4141032B1 (en) 2014-11-20 2024-05-29 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of t cell activating bispecific antigen binding molecules and pd-1 axis binding antagonists
EP3023437A1 (en) 2014-11-20 2016-05-25 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA
DK3221357T3 (da) 2014-11-20 2020-08-10 Hoffmann La Roche Fælles letkæder og fremgangsmåder til anvendelse
PT3221356T (pt) 2014-11-20 2020-10-29 Hoffmann La Roche Moléculas de ligação ao antigénio biespecíficas ativadoras das células t contra folr1 e cd3
PE20171324A1 (es) 2014-11-26 2017-09-11 Xencor Inc Anticuerpos heterodimericos que se unen a cd3 y a antigenos tumorales
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
EP3223907A2 (en) 2014-11-26 2017-10-04 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cd38
WO2016082044A1 (en) 2014-11-27 2016-06-02 Zymeworks Inc. Methods of using bispecific antigen-binding constructs targeting her2
EP3029068A1 (en) 2014-12-03 2016-06-08 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA for use in the treatment of diseases
WO2016097865A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 Regenesance B.V. Antibodies that bind human c6 and uses thereof
WO2016105450A2 (en) 2014-12-22 2016-06-30 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
MA41459A (fr) 2015-02-03 2017-12-12 Als Therapy Development Inst Anticorps anti-cd40l et méthodes pour traiter des maladies ou des troubles liés aux cd40l
US10227411B2 (en) 2015-03-05 2019-03-12 Xencor, Inc. Modulation of T cells with bispecific antibodies and FC fusions
WO2016148653A1 (en) 2015-03-17 2016-09-22 Agency For Science, Technology And Research A serotype cross-reactive, dengue neutralizing antibody and uses thereof
WO2016161010A2 (en) 2015-03-30 2016-10-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Heavy chain constant regions with reduced binding to fc gamma receptors
EP3973980A1 (en) 2015-03-31 2022-03-30 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules comprising a trimeric tnf family ligand
KR20180002653A (ko) 2015-04-07 2018-01-08 제넨테크, 인크. 효능작용 활성을 갖는 항원 결합 복합체 및 사용 방법
SG11201708804WA (en) 2015-05-07 2017-11-29 Agenus Inc Anti-ox40 antibodies and methods of use thereof
HK1248577A1 (zh) 2015-05-11 2018-10-19 F. Hoffmann-La Roche Ag 治疗狼疮性肾炎的组合物和方法
DK3310814T5 (da) 2015-06-16 2024-10-07 Hoffmann La Roche Humaniserede og affinitetsmodnede antistoffer mod FcRH5 og fremgangsmåder til anvendelse
US10501545B2 (en) 2015-06-16 2019-12-10 Genentech, Inc. Anti-CLL-1 antibodies and methods of use
EP3916018A1 (en) 2015-06-16 2021-12-01 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
CN107787331B (zh) 2015-06-17 2022-01-11 豪夫迈·罗氏有限公司 抗her2抗体和使用方法
CN107531788B (zh) 2015-06-24 2022-06-21 豪夫迈·罗氏有限公司 对her2和血脑屏障受体特异性的三特异性抗体及使用方法
HUE057952T2 (hu) 2015-06-24 2022-06-28 Hoffmann La Roche Anti-transzferrin receptor antitestek testreszabott affinitással
JP7114460B2 (ja) * 2015-06-26 2022-08-08 サノフィ・バイオテクノロジー モノクローナル抗ＩＬ－１ＲＡｃＰ抗体
CN107922500A (zh) 2015-06-29 2018-04-17 洛克菲勒大学 具有增强的激动剂活性的抗cd40抗体
SI3331910T1 (sl) 2015-08-03 2020-07-31 Engmab Sarl Monoklonska protitelesa proti humani antigen dozorevanja limfocitov B (BCMA)
AU2016304794B2 (en) 2015-08-07 2021-07-15 ALX Oncology Inc. Constructs having a SIRP-alpha domain or variant thereof
AU2016325630B2 (en) 2015-09-23 2022-11-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Optimized anti-CD3 bispecific antibodies and uses thereof
PE20181046A1 (es) 2015-09-25 2018-07-03 Genentech Inc Anticuerpos anti-tigit y metodos de uso
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
JP2018533930A (ja) 2015-10-02 2018-11-22 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 二重特異性ｔ細胞活性化抗原結合分子
JP2018536389A (ja) 2015-10-02 2018-12-13 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト メソテリンとｃｄ３に結合する二重特異性細胞活性化抗原結合分子
WO2017055385A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-cd3xgd2 bispecific t cell activating antigen binding molecules
AU2016330807B2 (en) 2015-10-02 2023-08-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-human CD19 antibodies with high affinity
PE20180484A1 (es) 2015-10-02 2018-03-07 Hoffmann La Roche Moleculas biespecificas de union a antigeno activadoras de celulas t
US10526413B2 (en) 2015-10-02 2020-01-07 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific antibodies specific for OX40
WO2017055314A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific anti-cd19xcd3 t cell activating antigen binding molecules
WO2017055404A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies specific for pd1 and tim3
TWI873952B (zh) 2015-10-02 2025-02-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 雙特異性抗‐人類cd20/人類轉鐵蛋白受體抗體及使用方法
CR20180243A (es) 2015-10-02 2018-07-31 Genentech Inc Conjugados de anticuerpo-fármaco de pirrolobenzodiazepina y métodos de uso
WO2017055395A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-cd3xrob04 bispecific t cell activating antigen binding molecules
WO2017055392A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-cd3xcd44v6 bispecific t cell activating antigen binding molecules
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
WO2017055393A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-cd3xtim-3 bispecific t cell activating antigen binding molecules
ES2895034T3 (es) * 2015-10-02 2022-02-17 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-PD1 y procedimientos de uso
AU2016334623A1 (en) 2015-10-07 2018-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies with tetravalency for a costimulatory TNF receptor
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
EP3365025B1 (en) 2015-10-20 2020-07-15 Genentech, Inc. Calicheamicin-antibody-drug conjugates and methods of use
US10407510B2 (en) 2015-10-30 2019-09-10 Genentech, Inc. Anti-factor D antibodies and conjugates
US10273281B2 (en) 2015-11-02 2019-04-30 Five Prime Therapeutics, Inc. CD80 extracellular domain polypeptides and their use in cancer treatment
EP3165536A1 (en) 2015-11-09 2017-05-10 Ludwig-Maximilians-Universität München Trispecific molecule combining specific tumor targeting and local immune checkpoint inhibition
CN108883173B (zh) 2015-12-02 2022-09-06 阿吉纳斯公司 抗体和其使用方法
CA3007030A1 (en) 2015-12-07 2017-06-15 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and psma
IL313608A (en) 2015-12-09 2024-08-01 Hoffmann La Roche Antibody against CD20 type II to reduce the formation of antibodies against drugs
EP3178848A1 (en) 2015-12-09 2017-06-14 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies
WO2017097706A1 (en) * 2015-12-09 2017-06-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Direct affinity measurement of human igg1 binding multimeric antigens
CN106939047B (zh) * 2016-01-04 2021-08-31 江苏怀瑜药业有限公司 一种pd-l1抗体及其制备方法
JP7036729B2 (ja) 2016-01-08 2022-03-15 クリング・バイオセラピューティックス・べー・フェー 治療用抗ｃｄ９抗体
KR20180097615A (ko) 2016-01-08 2018-08-31 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pd-1 축 결합 길항물질 및 항-cea/항-cd3 이중특이성 항체를 사용하는 cea-양성 암의 치료 방법
EP3423491A1 (en) * 2016-03-01 2019-01-09 H. Hoffnabb-La Roche Ag Obinutuzumab variants having altered cell death induction
SG11201807400TA (en) * 2016-03-04 2018-09-27 Shire Human Genetic Therapies Recombinant follistatin-fc fusion proteins and use in treating duchenne muscular dystrophy
JP7015244B2 (ja) 2016-03-22 2022-02-02 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト プロテアーゼ活性化ｔ細胞二重特異性分子
WO2017162587A1 (en) 2016-03-22 2017-09-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Protease-activated t cell bispecific molecules
EP3231813A1 (en) 2016-03-29 2017-10-18 F. Hoffmann-La Roche AG Trimeric costimulatory tnf family ligand-containing antigen binding molecules
JP2019513371A (ja) 2016-04-01 2019-05-30 アビディティー バイオサイエンシーズ エルエルシー 核酸ポリペプチド組成物とその使用
EP3445788B1 (en) 2016-04-22 2022-01-19 Alligator Bioscience AB Novel bispecific polypeptides against cd137
EP3241845A1 (en) 2016-05-06 2017-11-08 MAB Discovery GmbH Humanized anti-il-1r3 antibodies
WO2017194442A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer and a tenascin binding moiety
EP3243836A1 (en) 2016-05-11 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG C-terminally fused tnf family ligand trimer-containing antigen binding molecules
JP7089483B2 (ja) 2016-05-11 2022-06-22 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 修飾された抗テネイシン抗体及び使用方法
EP3243832A1 (en) 2016-05-13 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer and pd1 binding moiety
CN118436801A (zh) 2016-05-20 2024-08-06 豪夫迈·罗氏有限公司 Protac抗体缀合物及其使用方法
CN109478421B (zh) 2016-05-25 2024-07-09 豪夫迈·罗氏有限公司 剂量方案设计相关的材料与方法
EP3465221B1 (en) 2016-05-27 2020-07-22 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bioanalytical method for the characterization of site-specific antibody-drug conjugates
EP3252078A1 (en) 2016-06-02 2017-12-06 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
WO2018220099A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
WO2017214024A1 (en) 2016-06-06 2017-12-14 Genentech, Inc. Silvestrol antibody-drug conjugates and methods of use
JP7012668B2 (ja) 2016-06-12 2022-02-14 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト ジヒドロピリミジニルベンズアゼピンジカルボキサミド化合物
JP7010854B2 (ja) 2016-06-14 2022-01-26 ゼンコア インコーポレイテッド 二重特異性チェックポイント阻害剤抗体
SG11201811184UA (en) 2016-06-20 2019-01-30 F Star Beta Ltd Lag -3 binding members
CN109715663B (zh) 2016-06-28 2022-11-25 Xencor股份有限公司 结合生长抑素受体2的异源二聚抗体
GB201611530D0 (en) 2016-07-01 2016-08-17 Alligator Bioscience Ab Novel polypeptides
US10864203B2 (en) 2016-07-05 2020-12-15 Beigene, Ltd. Combination of a PD-1 antagonist and a RAF inhibitor for treating cancer
RU2656181C1 (ru) * 2016-07-13 2018-05-31 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Анти-pd-1-антитела, способ их получения и способ применения
HRP20260151T1 (hr) 2016-08-02 2026-03-27 Visterra, Inc. Modificirani polipeptidi i njihova uporaba
WO2018027204A1 (en) 2016-08-05 2018-02-08 Genentech, Inc. Multivalent and multiepitopic anitibodies having agonistic activity and methods of use
US10696722B2 (en) 2016-08-10 2020-06-30 Ajou University Industry-Academic Cooperation Foundation Heterodimeric Fc-fused cytokine and pharmaceutical composition comprising the same
CN109689111B (zh) 2016-08-11 2024-04-05 基因泰克公司 吡咯并苯并二氮杂䓬前药及其抗体缀合物
WO2018033135A1 (en) 2016-08-19 2018-02-22 Beigene, Ltd. Use of a combination comprising a btk inhibitor for treating cancers
CN109790220A (zh) 2016-08-25 2019-05-21 豪夫迈·罗氏有限公司 与巨噬细胞激活剂组合的抗csf-1r抗体的间歇给药
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
US10882918B2 (en) 2016-09-30 2021-01-05 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific T cell activating antigen binding molecules
JP7050770B2 (ja) 2016-10-05 2022-04-08 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗体薬物コンジュゲートの調製方法
MY203000A (en) 2016-10-14 2024-06-01 Xencor Inc Il15/il15r� heterodimeric fc-fusion proteins
US20190276549A1 (en) 2016-11-01 2019-09-12 Genmab B.V. Polypeptide variants and uses thereof
JP7267914B2 (ja) 2016-11-02 2023-05-02 エンクマフ エスアーエールエル Ｂｃｍａ及びｃｄ３に対する二重特異性抗体、及び多発性骨髄腫を治療するために併用して使用される免疫療法薬
MA46770A (fr) 2016-11-09 2019-09-18 Agenus Inc Anticorps anti-ox40, anticorps anti-gitr, et leurs procédés d'utilisation
JP7784795B2 (ja) 2016-11-15 2025-12-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３二重特異性抗体による処置のための投与
TW201829463A (zh) * 2016-11-18 2018-08-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗hla-g抗體及其用途
CN110300599B (zh) 2016-12-07 2024-07-02 艾吉纳斯公司 抗体和其使用方法
EP3551663A1 (en) 2016-12-12 2019-10-16 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of treating cancer using anti-pd-l1 antibodies and antiandrogens
AU2017380981B2 (en) 2016-12-19 2025-01-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with targeted 4-1BB (CD137) agonists
KR102692708B1 (ko) 2016-12-20 2024-08-07 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-cd20/항-cd3 이중특이성 항체 및 4-1bb(cd137) 작용물질의 병용 요법
CN110072553B (zh) 2016-12-22 2023-09-15 豪夫迈·罗氏有限公司 在抗pd-l1/pd1治疗失败之后抗csf-1r抗体与抗pd-l1抗体组合对肿瘤的治疗
WO2018127473A1 (en) 2017-01-03 2018-07-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecules comprising anti-4-1bb clone 20h4.9
MX2019008199A (es) 2017-01-06 2019-11-25 Avidity Biosciences Llc Composiciones de acido nucleico polipeptido y metodos de induccion de la omision de exon.
US11993645B2 (en) 2017-01-11 2024-05-28 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Compositions comprising R-Spondin (RSPO) surrogate molecules
TWI832600B (zh) 2017-01-20 2024-02-11 美商健臻公司 骨靶向抗體
TWI787230B (zh) 2017-01-20 2022-12-21 法商賽諾菲公司 抗ＴＧＦ-β抗體及其用途
US11555038B2 (en) 2017-01-25 2023-01-17 Beigene, Ltd. Crystalline forms of (S)-7-(1-(but-2-ynoyl)piperidin-4-yl)-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide, preparation, and uses thereof
WO2018140821A1 (en) 2017-01-26 2018-08-02 Surrozen, Inc. Tissue-specific wnt signal enhancing molecules and uses thereof
ES3010117T3 (en) 2017-03-27 2025-04-01 Hoffmann La Roche Improved antigen binding receptors
KR20190133017A (ko) 2017-03-27 2019-11-29 에프. 호프만-라 로슈 아게 개선된 항원 결합 수용체 구성
CN110573528B (zh) 2017-03-29 2023-06-09 豪夫迈·罗氏有限公司 针对共刺激性tnf受体的双特异性抗原结合分子
WO2018178074A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Trimeric antigen binding molecules specific for a costimulatory tnf receptor
EP3601346A1 (en) 2017-03-29 2020-02-05 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
MX2019011769A (es) 2017-04-03 2019-11-07 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a steap-1.
JP7148539B2 (ja) 2017-04-03 2022-10-05 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 免疫抱合体
MY201482A (en) 2017-04-03 2024-02-26 Hoffmann La Roche Immunoconjugates of an anti-pd-1 antibody with a mutant il-2 or with il-15
JP6997209B2 (ja) 2017-04-04 2022-02-04 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｃｄ４０およびｆａｐに特異的に結合することができる新規な二重特異性抗原結合分子
EP4516809A3 (en) 2017-04-05 2025-09-03 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific antibodies specifically binding to pd1 and lag3
KR102294136B1 (ko) * 2017-04-05 2021-08-26 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-lag3 항체
TWI788340B (zh) 2017-04-07 2023-01-01 美商必治妥美雅史谷比公司 抗icos促效劑抗體及其用途
CN110505883A (zh) 2017-04-13 2019-11-26 豪夫迈·罗氏有限公司 供治疗癌症的方法中使用的白介素-2免疫缀合物,cd40激动剂,和任选地pd-1轴结合拮抗剂
KR20200005540A (ko) 2017-04-14 2020-01-15 제넨테크, 인크. 암의 진단 및 치료 방법
CA3059938A1 (en) 2017-04-14 2018-10-18 Kodiak Sciences Inc. Complement factor d antagonist antibodies and conjugates thereof
KR20190139216A (ko) 2017-04-28 2019-12-17 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. Cd80 세포외 도메인 폴리펩티드를 이용한 치료 방법
EP3401332A1 (en) 2017-05-08 2018-11-14 MAB Discovery GmbH Anti-il-1r3 antibodies for use in inflammatory conditions
KR102840867B1 (ko) 2017-05-24 2025-07-30 에이엘에스 테라피 디벨럽먼트 인스티튜트 치료용 항-cd40 리간드 항체
US11597764B2 (en) 2017-06-15 2023-03-07 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-L1-CAM antibodies and uses thereof
US11299540B2 (en) 2017-06-18 2022-04-12 Kindred Biosciences, Inc. IL17A antibodies and antagonists for veterinary use
EA201992502A1 (ru) 2017-06-20 2020-04-22 Эмджен Инк. Способ лечения или уменьшения интенсивности метаболических нарушений с применением белков, связывающих рецептор гастроингибиторного пептида (gipr), в комбинации с агонистами glp-1
EP3645569A4 (en) 2017-06-26 2021-03-24 BeiGene, Ltd. IMMUNOTHERAPY FOR LIVER CELL CARCINOMA
WO2019006472A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Xencor, Inc. TARGETED HETETRODIMERIC FUSION PROTEINS CONTAINING IL-15 / IL-15RA AND ANTIGEN-BINDING DOMAINS
EP3655439A1 (en) 2017-07-20 2020-05-27 Aptevo Research and Development LLC Antigen binding proteins binding to 5t4 and 4-1bb and related compositions and methods
GB201711809D0 (en) 2017-07-21 2017-09-06 Governors Of The Univ Of Alberta Antisense oligonucleotide
MX2020000903A (es) * 2017-08-11 2020-07-22 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd8 y usos de los mismos.
US12297272B2 (en) 2017-08-15 2025-05-13 Eianco US inc. IgG Fc variants for veterinary use
US11306144B2 (en) 2017-08-25 2022-04-19 Five Prime Therapeutics, Inc. B7-H4 antibodies and methods of use thereof
MX2020002241A (es) 2017-08-28 2020-09-03 Angiex Inc Anticuerpos anti-tm4sf y métodos de uso de los mismos.
US20190100587A1 (en) * 2017-10-02 2019-04-04 Covagen Ag IgG1 Fc MUTANTS WITH ABLATED EFFECTOR FUNCTIONS
EP3694885A1 (en) 2017-10-14 2020-08-19 CytomX Therapeutics, Inc. Antibodies, activatable antibodies, bispecific antibodies, and bispecific activatable antibodies and methods of use thereof
WO2019084060A1 (en) 2017-10-24 2019-05-02 Silverback Therapeutics, Inc. CONJUGATES AND METHODS OF USE FOR THE SELECTIVE DELIVERY OF IMMUNOMODULATORY AGENTS
BR112020007630A2 (pt) 2017-11-01 2020-11-17 F. Hoffmann-La Roche Ag anticorpo biespecífico ox40, produto farmacêutico, composição farmacêutica e anticorpos biespecíficos anti-fap/ anti-ox40
JP2021500902A (ja) 2017-11-01 2021-01-14 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 新規ｔｎｆファミリーリガンド三量体含有抗原結合分子
MY205342A (en) 2017-11-01 2024-10-16 Hoffmann La Roche Bispecific 2+1 contorsbodies
JP2021502100A (ja) 2017-11-08 2021-01-28 ゼンコア インコーポレイテッド 新規抗ｐｄ−１配列を用いた二重特異性および単一特異性抗体
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
CN111712518B (zh) 2017-11-17 2025-03-25 默沙东有限责任公司 对免疫球蛋白样转录物3(ilt3)具有特异性的抗体及其用途
WO2019108795A1 (en) 2017-11-29 2019-06-06 Beigene Switzerland Gmbh Treatment of indolent or aggressive b-cell lymphomas using a combination comprising btk inhibitors
AU2018378812B2 (en) 2017-12-06 2025-05-22 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating muscle atrophy and myotonic dystrophy
IL275426B2 (en) 2017-12-19 2025-03-01 Xencor Inc Engineered il-2 fc fusion proteins
MX2020006119A (es) 2017-12-21 2020-08-24 Hoffmann La Roche Anticuerpos de union a hla-a2/wt1.
CN111247429B (zh) * 2017-12-21 2025-03-28 豪夫迈·罗氏有限公司 用于新颖抗原结合模块的特异性测试的通用报告细胞测定法
EP3502140A1 (en) 2017-12-21 2019-06-26 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of tumor targeted icos agonists with t-cell bispecific molecules
EP3731864A1 (en) 2017-12-29 2020-11-04 F. Hoffmann-La Roche SA Anti-vegf antibodies and methods of use
CN108218998A (zh) * 2017-12-31 2018-06-29 武汉班科生物技术股份有限公司 一种突变型人源IgG的Fc片段及其制备方法与应用
EP3740505A1 (en) 2018-01-16 2020-11-25 Lakepharma Inc. Bispecific antibody that binds cd3 and another target
MA51666A (fr) 2018-01-24 2020-12-02 Genmab Bv Variants polypeptidiques et leurs utilisations
EP3746470A1 (en) 2018-01-31 2020-12-09 F. Hoffmann-La Roche AG Stabilized immunoglobulin domains
WO2019149716A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies comprising an antigen-binding site binding to lag3
IL325995A (en) 2018-02-08 2026-03-01 Genentech Inc Bispecific antigen binding molecules and methods of use
TWI829667B (zh) 2018-02-09 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合gprc5d之抗體
BR112020016986A2 (pt) 2018-02-21 2021-03-02 Five Prime Therapeutics, Inc. formulações de anticorpo contra b7-h4
CA3091161A1 (en) 2018-02-21 2019-08-29 Five Prime Therapeutics, Inc. B7-h4 antibody dosing regimens
CN111836831A (zh) 2018-02-26 2020-10-27 豪夫迈·罗氏有限公司 用于抗tigit拮抗剂抗体和抗pd-l1拮抗剂抗体治疗的给药
KR20200144094A (ko) 2018-03-02 2020-12-28 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. B7-h4 항체 및 이의 사용 방법
IL277049B2 (en) 2018-03-13 2024-02-01 Zymeworks Bc Inc Conjugates of biparatopic anti-HER2 antibody and drug and methods of use
EP3765489B1 (en) 2018-03-13 2024-10-16 F. Hoffmann-La Roche AG Therapeutic combination of 4-1bb agonists with anti-cd20 antibodies
TWI841551B (zh) 2018-03-13 2024-05-11 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 使用靶向4-1bb (cd137)之促效劑的組合療法
CN110305217B (zh) 2018-03-27 2022-03-29 广州爱思迈生物医药科技有限公司 双特异性抗体及其应用
JP2021519073A (ja) 2018-03-29 2021-08-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド 哺乳動物細胞におけるラクトジェニック活性の制御
WO2019195278A1 (en) 2018-04-02 2019-10-10 Silverback Therapeutics, Inc. Alk5 inhibitors, conjugates, and uses thereof
CA3096052A1 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
SG11202007961QA (en) 2018-04-13 2020-09-29 Hoffmann La Roche Her2-targeting antigen binding molecules comprising 4-1bbl
AR115052A1 (es) 2018-04-18 2020-11-25 Hoffmann La Roche Anticuerpos multiespecíficos y utilización de los mismos
SG11202010163QA (en) 2018-04-18 2020-11-27 Xencor Inc Pd-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and pd-1 antigen binding domains and uses thereof
EP3781598A1 (en) 2018-04-18 2021-02-24 Xencor, Inc. Tim-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and tim-3 antigen binding domains
MX2020011552A (es) 2018-05-03 2020-11-24 Genmab Bv Combinaciones de variantes de anticuerpos y usos de las mismas.
MX2020012679A (es) 2018-05-25 2021-02-09 Silverback Therapeutics Inc Compuestos de amino-pirazincarboxamida, conjugados, y usos de los mismos.
CN120795120A (zh) 2018-06-05 2025-10-17 伦敦大学国王学院 向胃肠系统递送酬载的btnl3/8导引构建体
TW202016144A (zh) 2018-06-21 2020-05-01 日商第一三共股份有限公司 包括cd3抗原結合片段之組成物及其用途
WO2020007817A1 (en) 2018-07-04 2020-01-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel bispecific agonistic 4-1bb antigen binding molecules
CA3104868A1 (en) 2018-07-09 2020-01-16 Surrozen, Inc. Tissue-specific wnt signal enhancing molecules and uses thereof
GB201811404D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd Anti-CD137 Antibodies
GB201811415D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd Anti-Mesothelin Anti bodies
ES3044118T3 (en) 2018-07-12 2025-11-26 Invox Pharma Ltd Antibody molecules that bind cd137 and ox40
GB201811403D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd Antibody molecules
GB201811450D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Delta Ltd Mesothelin and CD137 binding molecules
GB201811410D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd OX40 Binding molecules
GB201811408D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd CD137 Binding Molecules
PT3820569T (pt) 2018-07-12 2025-01-14 Invox Pharma Ltd Moléculas de anticorpo que se ligam a pd-l1 e cd137
CA3110513A1 (en) 2018-08-31 2020-03-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Dosing strategy that mitigates cytokine release syndrome for cd3/c20 bispecific antibodies
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
MX2021002764A (es) 2018-09-12 2021-05-12 Silverback Therapeutics Inc Composiciones para el tratamiento de enfermedades con conjugados inmunoestimuladores.
AU2019337654A1 (en) 2018-09-12 2021-04-08 Silverback Therapeutics, Inc. Substituted benzazepine compounds, conjugates, and uses thereof
BR112021004553A2 (pt) 2018-09-17 2021-06-08 Abcuro, Inc. anticorpos anti-klrg1
JP2022508529A (ja) * 2018-09-29 2022-01-19 上海博槿生物科技有限公司 二重標的抗原結合分子
WO2020070041A1 (en) 2018-10-01 2020-04-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecules comprising anti-fap clone 212
CN112654641A (zh) 2018-10-01 2021-04-13 豪夫迈·罗氏有限公司 具有与cd40的三价结合的双特异性抗原结合分子
AU2019355971B2 (en) 2018-10-03 2025-05-08 Xencor, Inc. IL-12 heterodimeric Fc-fusion proteins
KR20210076025A (ko) 2018-10-15 2021-06-23 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. 암 병용 요법
SG11202104136YA (en) 2018-10-23 2021-05-28 Dragonfly Therapeutics Inc Heterodimeric fc-fused proteins
MY195550A (en) 2018-10-29 2023-01-31 Hoffmann La Roche Antibody Formulation
WO2020089437A1 (en) 2018-10-31 2020-05-07 Engmab Sàrl Combination therapy
JP7410143B2 (ja) * 2018-11-01 2024-01-09 山▲東▼新▲時▼代▲薬▼▲業▼有限公司 二重特異性抗体及びその用途
WO2020102251A1 (en) * 2018-11-14 2020-05-22 Jn Biosciences Llc Multimeric hybrid fc proteins for replacement of ivig
EP4198057A1 (en) 2018-12-05 2023-06-21 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic methods and compositions for cancer immunotherapy
WO2020115115A1 (en) 2018-12-05 2020-06-11 Morphosys Ag Multispecific antigen-binding molecules
JP2022513198A (ja) 2018-12-10 2022-02-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｆｃ含有タンパク質への部位特異的コンジュゲーションのための光架橋性ペプチド
CN113677703A (zh) 2018-12-17 2021-11-19 鳄鱼生物科学公司 多肽
EP3898679A2 (en) 2018-12-17 2021-10-27 Alligator Bioscience AB Polypeptides
AR117453A1 (es) 2018-12-20 2021-08-04 Genentech Inc Fc de anticuerpos modificados y métodos para utilizarlas
CR20210330A (es) 2018-12-21 2021-07-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS QUE SE UNEN A CD3 (Divisional 2021-0325)
WO2020127628A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Tumor-targeted superagonistic cd28 antigen binding molecules
EP3898671A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 F. Hoffmann-La Roche AG Antibody that binds to vegf and il-1beta and methods of use
UA128001C2 (uk) 2018-12-21 2024-03-06 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Націлені на пухлину агоністичні cd28-антигензв'язувальні молекули
CN120904316A (zh) * 2018-12-27 2025-11-07 伊兰科美国公司 兽用IgG Fc变体
WO2020154424A1 (en) * 2019-01-22 2020-07-30 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Antigen-presenting neutrophil-derived dendritic cells and methods of use thereof
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
US12589132B2 (en) 2019-02-22 2026-03-31 Five Prime Therapeutics, Inc. CD80 extracellular domain Fc fusion proteins for treating PD-L1 negative tumors
WO2020176748A1 (en) 2019-02-27 2020-09-03 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-cd20 or anti-cd38 antibodies
MX2021010254A (es) 2019-02-27 2021-09-21 Angiex Inc Conjugados de anticuerpo-farmaco que comprenden anticuerpos anti-tm4sf1 y metodos de uso de los mismos.
CA3132185A1 (en) 2019-03-01 2020-09-10 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind enpp3 and cd3
CA3131104A1 (en) 2019-03-06 2020-09-10 Silverback Therapeutics, Inc. Cyclic amino-pyrazinecarboxamide compounds and uses thereof
WO2020185722A2 (en) 2019-03-13 2020-09-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-cancer combination therapies comprising ctla-4 and pd-1 blocking agents
EP3938403A1 (en) 2019-03-14 2022-01-19 F. Hoffmann-La Roche AG Treatment of cancer with her2xcd3 bispecific antibodies in combination with anti-her2 mab
JP7617012B2 (ja) 2019-03-14 2025-01-17 モルフォシス・アーゲー Ｃ５ａＲを標的とする抗体
JP7301155B2 (ja) 2019-04-12 2023-06-30 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト リポカリンムテインを含む二重特異性抗原結合分子
BR112021020867A2 (pt) 2019-04-19 2022-01-04 Genentech Inc Anticorpos, ácido nucleico, vetor, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, usos do anticorpo, método de tratamento de um indivíduo com câncer e método para reduzir a depuração
WO2020219820A1 (en) 2019-04-25 2020-10-29 Avidity Biosciences, Inc. Nucleic acid compositions and methods of multi-exon skipping
CN114126648A (zh) 2019-05-31 2022-03-01 Alx肿瘤生物技术公司 用SIRPα Fc融合体组合免疫检查点抑制剂治疗癌症的方法
US20220298230A1 (en) * 2019-06-11 2022-09-22 The Rockefeller University Antibodies and methods for treatment of viral infections
KR20220035908A (ko) 2019-06-19 2022-03-22 실버백 테라퓨틱스, 인크. 항-메소텔린 항체 및 이의 면역접합체
KR20220025848A (ko) 2019-06-26 2022-03-03 에프. 호프만-라 로슈 아게 Cea 및 4-1bbl에 결합하는 항체의 융합
WO2020260326A1 (en) 2019-06-27 2020-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel icos antibodies and tumor-targeted antigen binding molecules comprising them
RS66218B1 (sr) * 2019-07-01 2024-12-31 Tonix Pharma Ltd Anti-cd154 antitela i njihove upotrebe
JP2022538139A (ja) 2019-07-02 2022-08-31 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 変異体インターロイキン－２及び抗ｃｄ８抗体を含む免疫複合体
US20220267469A1 (en) * 2019-07-12 2022-08-25 Lipum Ab Novel bssl antibodies
AR119382A1 (es) 2019-07-12 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos de pre-direccionamiento y métodos de uso
AR119393A1 (es) 2019-07-15 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a nkg2d
US20210139477A1 (en) 2019-07-16 2021-05-13 Silverback Therapeutics, Inc. Alk5 inhibitors, conjugates, and uses thereof
CA3248329A1 (en) 2019-07-31 2025-11-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to gprc5d
CN114174338A (zh) 2019-07-31 2022-03-11 豪夫迈·罗氏有限公司 与gprc5d结合的抗体
CN114667134A (zh) 2019-08-15 2022-06-24 希沃尔拜克治疗公司 苯并氮杂䓬缀合物的制剂及其用途
CN114340675A (zh) 2019-09-12 2022-04-12 豪夫迈·罗氏有限公司 治疗狼疮性肾炎的组合物和方法
PH12022550646A1 (en) 2019-09-18 2023-04-03 Genentech Inc Anti-klk7 antibodies, anti-klk5 antibodies, multispecific anti-klk5/klk7 antibodies, and methods of use
JP2022548978A (ja) 2019-09-27 2022-11-22 ジェネンテック， インコーポレイテッド 薬抗ｔｉｇｉｔ及び抗ｐｄ－ｌ１アンタゴニスト抗体を用いた処置のための投薬
CA3151322A1 (en) 2019-10-01 2021-04-08 Silverback Therapeutics, Inc. Combination therapy with immune stimulatory conjugates
EP4017542A1 (en) 2019-10-04 2022-06-29 Tae Life Sciences Antibody compositions comprising fc mutations and site-specific conjugation properties
WO2021072203A1 (en) 2019-10-09 2021-04-15 Silverback Therapeutics, Inc. Tgfbetar1 inhibitor-asgr antibody conjugates and uses thereof
CA3157509A1 (en) 2019-10-10 2021-04-15 Kodiak Sciences Inc. Methods of treating an eye disorder
JP2023500701A (ja) 2019-11-06 2023-01-10 ジェンマブ ビー．ブイ． 抗体変種の組み合わせおよびその使用
KR20220092580A (ko) 2019-11-06 2022-07-01 제넨테크, 인크. 혈액암의 치료를 위한 진단과 치료 방법
WO2021102332A1 (en) 2019-11-22 2021-05-27 Silverback Therapeutics, Inc. Tgfbetar2 inhibitor-lrrc15 antibody conjugates and uses thereof
CN121243368A (zh) 2019-11-27 2026-01-02 Alx肿瘤生物技术公司 用于治疗癌症的组合疗法
WO2021119505A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Genentech, Inc. Anti-ly6g6d antibodies and methods of use
KR20220100963A (ko) 2019-12-18 2022-07-18 에프. 호프만-라 로슈 아게 Hla-a2/mage-a4에 결합하는 항체
CN114846024A (zh) 2019-12-20 2022-08-02 豪夫迈·罗氏有限公司 Il-37融合蛋白及其用途
CN114929734A (zh) 2020-01-09 2022-08-19 豪夫迈·罗氏有限公司 新型含有4-1bbl三聚体的抗原结合分子
TWI869528B (zh) 2020-01-13 2025-01-11 美商威特拉公司 C5ar1抗體分子及其用途
WO2022050954A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
WO2021194481A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
WO2021165417A1 (en) 2020-02-19 2021-08-26 Adivo Gmbh Modified fc regions
AU2021232158A1 (en) 2020-03-06 2022-09-29 Ona Therapeutics, S.L. Anti-CD36 antibodies and their use to treat cancer
JP2023516080A (ja) 2020-03-06 2023-04-17 ジーオー セラピューティクス，インコーポレイテッド 抗グリコｃｄ４４抗体およびその使用
WO2021188390A1 (en) 2020-03-19 2021-09-23 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
JP2023518841A (ja) 2020-03-26 2023-05-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド 宿主細胞タンパク質が減少した修飾哺乳動物細胞
JP7626753B2 (ja) * 2020-03-26 2025-02-04 デンカ株式会社 Ｆｃ領域の一部を欠損した抗体を含む試薬
HRP20240182T1 (hr) 2020-03-26 2024-04-26 Vanderbilt University Ljudska monoklonska protutijela za teški akutni respiratorni sindrom koronavirusa 2 (sars-cov-2)
CN115397850A (zh) 2020-03-30 2022-11-25 豪夫迈·罗氏有限公司 与vegf和pdgf-b结合的抗体及其使用方法
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
AU2021256936A1 (en) 2020-04-15 2022-07-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Immunoconjugates
MX2022013112A (es) 2020-04-22 2023-01-16 Dragonfly Therapeutics Inc Fórmulacion, regimen de dosificación y proceso de manufactura de proteínas heterodiméricas fusionadas con fc.
JP2023527690A (ja) 2020-05-11 2023-06-30 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 改変ｐｂｍｃと免疫抱合体との併用療法
WO2021231976A1 (en) 2020-05-14 2021-11-18 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (psma) and cd3
EP4149964A2 (en) 2020-05-15 2023-03-22 Apogenix AG Multi-specific immune modulators
TW202208423A (zh) 2020-05-17 2022-03-01 英商阿斯特捷利康英國股份有限公司 Ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２抗體及其選擇和使用方法
WO2021236658A1 (en) 2020-05-19 2021-11-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Binding molecules for the treatment of cancer
GB2595299B (en) 2020-05-21 2022-08-03 Mabsolve Ltd Modified immunoglobulin FC regions
KR20230015365A (ko) * 2020-05-22 2023-01-31 포르미콘 아게 Ace2 융합 단백질 및 이의 용도
PE20240080A1 (es) 2020-06-08 2024-01-16 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-hbv y metodos de uso
KR20230024368A (ko) 2020-06-18 2023-02-20 제넨테크, 인크. 항-tigit 항체 및 pd-1 축 결합 길항제를 사용한 치료
WO2021255146A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3 and cea
PE20230470A1 (es) 2020-06-19 2023-03-14 Hoffmann La Roche Moleculas de union al dominio fc de activacion inmunitaria
PH12022553489A1 (en) 2020-06-19 2024-04-22 Hoffmann La Roche Antibodies binding to cd3 and folr1
WO2021255155A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3 and cd19
PE20230835A1 (es) 2020-06-19 2023-05-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3
KR20230025667A (ko) 2020-06-19 2023-02-22 에프. 호프만-라 로슈 아게 프로테아제 활성화된 t 세포 이중특이성 항체
AU2021295549A1 (en) 2020-06-23 2022-11-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic CD28 antigen binding molecules targeting Her2
CA3184747A1 (en) 2020-06-24 2021-12-30 Genentech, Inc. Apoptosis resistant cell lines
CN115916830A (zh) 2020-06-25 2023-04-04 豪夫迈·罗氏有限公司 抗cd3/抗cd28双特异性抗原结合分子
KR20230152783A (ko) 2020-07-07 2023-11-03 칸큐어 엘엘씨 Mic 항체 및 결합제 및 이의 사용 방법
CR20230076A (es) 2020-07-10 2023-03-13 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a células cancerosas y dirigen radionucleótidos a dichas células
PH12023550112A1 (en) 2020-07-17 2024-06-24 Genentech Inc Anti-notch2 antibodies and methods of use
WO2022020353A2 (en) * 2020-07-20 2022-01-27 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods and compositions for treatment and prevention of coronavirus infection
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
EP4188543A1 (en) 2020-07-31 2023-06-07 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Antigen binding protein
JP2023536602A (ja) 2020-08-03 2023-08-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド リンパ腫のための診断及び治療方法
WO2022029051A1 (en) 2020-08-03 2022-02-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Improved antigen binding receptors
US20220041694A1 (en) 2020-08-10 2022-02-10 Astrazeneca Uk Limited Sars-cov-2 antibodies for treatment and prevention of covid-19
CA3192204A1 (en) 2020-08-19 2022-02-24 Xencor, Inc. Anti-cd28 and/or anti-b7h3 compositions
CA3192344A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Genentech, Inc. Crispr/cas9 multiplex knockout of host cell proteins
CA3191859A1 (en) 2020-09-01 2022-03-10 Merck Patent Gmbh Nkp30 binders
EP4208201A1 (en) 2020-09-04 2023-07-12 F. Hoffmann-La Roche AG Antibody that binds to vegf-a and ang2 and methods of use
CN116406291A (zh) 2020-10-05 2023-07-07 基因泰克公司 用抗fcrh5/抗cd3双特异性抗体进行治疗的给药
CN116568810A (zh) 2020-10-07 2023-08-08 国立大学法人千叶大学 新型抗糖链抗体及其用途
EP4229192A1 (en) 2020-10-14 2023-08-23 Denali Therapeutics Inc. Fusion proteins comprising sulfoglucosamine sulfohydrolase enzymes and methods thereof
AR123855A1 (es) 2020-10-20 2023-01-18 Genentech Inc Anticuerpos anti-mertk conjugados con peg y métodos de uso
JP2023547447A (ja) 2020-10-28 2023-11-10 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 改良型抗原結合受容体
KR20230093483A (ko) 2020-10-29 2023-06-27 포르미콘 아게 Ace2 융합 단백질 및 이의 용도
AU2021374594B2 (en) 2020-11-04 2026-03-05 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and anti-cd79b antibody drug conjugates
TWI874719B (zh) 2020-11-04 2025-03-01 美商建南德克公司 用抗cd20/抗cd3雙特異性抗體進行治療之給藥
JP7716473B2 (ja) 2020-11-04 2025-07-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３二重特異性抗体の皮下投薬
CN117916261A (zh) 2020-11-16 2024-04-19 豪夫迈·罗氏有限公司 与靶向fap的cd40激动剂的组合疗法
JP2023549854A (ja) 2020-11-16 2023-11-29 スロゼン オペレーティング， インコーポレイテッド 肝臓特異的Ｗｎｔシグナル増強分子およびその使用
MX2023007133A (es) 2020-12-17 2023-06-27 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-hla-g y uso de estos.
JP2024503826A (ja) 2021-01-06 2024-01-29 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｐｄ１－ｌａｇ３二重特異性抗体及びｃｄ２０ ｔ細胞二重特異性抗体を用いる併用療法
WO2022148853A1 (en) 2021-01-11 2022-07-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Immunoconjugates
JP2024504931A (ja) 2021-01-12 2024-02-02 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト がん細胞に結合し、放射性核種を前記細胞に標的化するスプリット抗体
CA3173944A1 (en) 2021-01-13 2022-07-21 Visterra, Inc. Humanized complement 5a receptor 1 antibodies and methods of use thereof
CA3204291A1 (en) 2021-01-13 2022-07-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy
EP4286406A4 (en) 2021-01-29 2025-07-23 Illimis Therapeutics Inc FUSION MOLECULE WITH NON-INFLAMMATORY PHAGOCYTOSIS-INDUCING ACTIVITY
GB2603166A (en) 2021-01-29 2022-08-03 Thelper As Therapeutic and Diagnostic Agents and Uses Thereof
EP4288455A1 (en) 2021-02-03 2023-12-13 Mozart Therapeutics, Inc. Binding agents and methods of using the same
WO2022169872A1 (en) 2021-02-03 2022-08-11 Genentech, Inc. Multispecific binding protein degrader platform and methods of use
CN112980851A (zh) * 2021-03-03 2021-06-18 上海奥浦迈生物科技股份有限公司 高效检测融合蛋白/抗体Fc段不能介导ADCC和CDC活性的方法
AU2022230745A1 (en) 2021-03-03 2023-08-17 Formycon Ag Formulations of ace2 fc fusion proteins
EP4301782A1 (en) 2021-03-05 2024-01-10 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-cd44 antibodies and their uses
US11739144B2 (en) 2021-03-09 2023-08-29 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and CLDN6
WO2022189377A1 (en) 2021-03-09 2022-09-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of pd-1-targeted il-2 variant immunoconjugates and fap/4-1bb binding molecules
EP4304724A1 (en) 2021-03-09 2024-01-17 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of pd-1-targeted il-2 variant immunoconjugate and anti-tyrp1/anti-cd3 bispecific antibodies
EP4305065A1 (en) 2021-03-10 2024-01-17 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and gpc3
WO2022192647A1 (en) 2021-03-12 2022-09-15 Genentech, Inc. Anti-klk7 antibodies, anti-klk5 antibodies, multispecific anti-klk5/klk7 antibodies, and methods of use
AU2022238526A1 (en) 2021-03-15 2023-09-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Compositions and methods of treating lupus nephritis
WO2022197877A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents
EP4314032A1 (en) 2021-03-30 2024-02-07 F. Hoffmann-La Roche AG Protease-activated polypeptides
TW202304994A (zh) 2021-04-02 2023-02-01 美商泰尼歐生物公司 促效性抗ｉｌ－２ｒ抗體及使用方法
US20240209080A1 (en) 2021-04-10 2024-06-27 Profoundbio Us Co. Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
US20240218046A1 (en) * 2021-04-14 2024-07-04 Anjarium Biosciences Ag Fc-derived polypeptides
EP4326855A1 (en) 2021-04-19 2024-02-28 Genentech, Inc. Modified mammalian cells
CA3216459A1 (en) 2021-04-23 2022-10-27 Profoundbio Us Co. Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same
TW202244059A (zh) 2021-04-30 2022-11-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３雙特異性抗體進行治療之給藥
CA3213632A1 (en) 2021-04-30 2022-11-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for combination treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and anti-cd79b antibody drug conjugate
CN117295760A (zh) 2021-05-07 2023-12-26 信达生物制药(苏州)有限公司 与Fc受体结合改变的Fc突变体
JP2024520902A (ja) 2021-05-13 2024-05-27 エーエルエックス オンコロジー インコーポレイテッド がんを治療するための併用療法
EP4337330A1 (en) 2021-05-14 2024-03-20 Genentech, Inc. Methods for treatment of cd20-positive proliferative disorder with mosunetuzumab and polatuzumab vedotin
WO2022243261A1 (en) 2021-05-19 2022-11-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic cd40 antigen binding molecules targeting cea
CN117396599A (zh) 2021-05-21 2024-01-12 基因泰克公司 用于生产目的重组产物的经修饰的细胞
AR126009A1 (es) * 2021-06-02 2023-08-30 Hoffmann La Roche Moléculas agonistas de unión al antígeno cd28 que se dirigen a epcam
WO2022265331A1 (ko) * 2021-06-14 2022-12-22 고려대학교 산학협력단 제어된 면역 작용 기작과 증가된 혈중 반감기를 갖는 fc변이체들
US20240279321A1 (en) 2021-06-18 2024-08-22 Therini Bio, Inc. ANTIBODIES WHICH BIND HUMAN FIBRIN OR FIBRINOGEN yC DOMAIN AND METHODS OF USE
WO2023279092A2 (en) 2021-07-02 2023-01-05 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating cancer
TW202320857A (zh) 2021-07-06 2023-06-01 美商普方生物製藥美國公司 連接子、藥物連接子及其結合物及其使用方法
EP4370545A1 (en) 2021-07-12 2024-05-22 Genentech, Inc. Structures for reducing antibody-lipase binding
US12240910B2 (en) 2021-07-14 2025-03-04 Genentech, Inc. Anti-C-C motif chemokine receptor 8 (CCR8) antibodies and methods of use
EP4373859A1 (en) 2021-07-22 2024-05-29 F. Hoffmann-La Roche AG Heterodimeric fc domain antibodies
AU2022317820A1 (en) 2021-07-28 2023-12-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating cancer
KR20240042476A (ko) 2021-07-30 2024-04-02 오엔에이 테라퓨틱스 에스.엘. 항-cd36 항체 및 암을 치료하기 위한 이의 용도
CN117794953A (zh) 2021-08-03 2024-03-29 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗体及使用方法
US20250101126A1 (en) 2021-08-05 2025-03-27 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-muc4 antibodies and their uses
CN118354789A (zh) 2021-09-03 2024-07-16 Go医疗股份有限公司 抗糖-cMET抗体及其用途
EP4396232A1 (en) 2021-09-03 2024-07-10 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-lamp1 antibodies and their uses
WO2023053282A1 (ja) 2021-09-29 2023-04-06 中外製薬株式会社 がんの治療に用いるための細胞傷害誘導治療剤
WO2023056403A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Genentech, Inc. Methods for treatment of hematologic cancers using anti-tigit antibodies, anti-cd38 antibodies, and pd-1 axis binding antagonists
WO2023056069A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Angiex, Inc. Degrader-antibody conjugates and methods of using same
IL312005A (en) 2021-10-14 2024-06-01 Hoffmann La Roche New interleukin-7 immunoconjugates
CN118139648A (zh) 2021-10-14 2024-06-04 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗癌症的替代的PD1-IL7v免疫缀合物
MX2024004550A (es) 2021-10-14 2024-04-29 Teneobio Inc Proteinas de union a la mesotelina y usos de las mismas.
WO2023076876A1 (en) 2021-10-26 2023-05-04 Mozart Therapeutics, Inc. Modulation of immune responses to viral vectors
KR20240114794A (ko) 2021-11-05 2024-07-24 엘리게이터 바이오사이언스 에이비 신규 펩티드
TW202342095A (zh) 2021-11-05 2023-11-01 英商阿斯特捷利康英國股份有限公司 用於治療和預防ｃｏｖｉｄ—１９之組成物
TW202337494A (zh) 2021-11-16 2023-10-01 美商建南德克公司 用莫蘇妥珠單抗治療全身性紅斑狼瘡（ｓｌｅ）之方法及組成物
WO2023088876A1 (en) 2021-11-16 2023-05-25 Apogenix Ag Multi-specific immune modulators
EP4437112A1 (en) 2021-11-24 2024-10-02 Formycon AG Improved ace2 fusion proteins
WO2023094571A1 (en) 2021-11-25 2023-06-01 Formycon Ag Stabilization of ace2 fusion proteins
IL312652A (en) 2021-11-25 2024-07-01 Hoffmann La Roche Enhanced receptors for antigen binding
EP4437006A1 (en) 2021-11-26 2024-10-02 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of anti-tyrp1/anti-cd3 bispecific antibodies and tyrp1-specific antibodies
AR127887A1 (es) 2021-12-10 2024-03-06 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3 y plap
WO2023114829A1 (en) 2021-12-15 2023-06-22 Genentech, Inc. Stabilized il-18 polypeptides and uses thereof
KR20240122840A (ko) 2021-12-17 2024-08-13 비이브 헬쓰케어 컴퍼니 Hiv 감염에 대한 조합 요법 및 그의 용도
CR20240246A (es) 2021-12-20 2024-07-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos agonistas anti-ltbr y anticuerpos biespecificos que los comprenden
US20250084169A1 (en) 2022-01-12 2025-03-13 Biomolecular Holdings Llc Nk/monocyte engagers
US20230322958A1 (en) 2022-01-19 2023-10-12 Genentech, Inc. Anti-Notch2 Antibodies and Conjugates and Methods of Use
US12584107B2 (en) 2022-01-20 2026-03-24 3T Biosciences, Inc. T cell receptor (TCR) compositions and methods for optimizing antigen reactive T-cells
GB202201137D0 (en) 2022-01-28 2022-03-16 Thelper As Therapeutic and diagnostic agents and uses thereof
WO2023151661A1 (zh) 2022-02-11 2023-08-17 江苏恒瑞医药股份有限公司 免疫缀合物及其用途
TW202342510A (zh) 2022-02-18 2023-11-01 英商Ｒｑ生物科技有限公司 抗體
US20230303719A1 (en) 2022-03-03 2023-09-28 Yale University Humanized 3e10 antibodies, variants, and antigen binding fragments thereof
MX2024011468A (es) 2022-03-23 2024-09-25 Hoffmann La Roche Tratamiento conjunto de un anticuerpo biespecifico anti-cd20/anti-cd3 y quimioterapia.
CN119095881A (zh) 2022-03-25 2024-12-06 豪夫迈·罗氏有限公司 经改善的嵌合受体
JP2025511000A (ja) 2022-03-28 2025-04-15 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト インターフェロンガンマバリアントおよびこれを含む抗原結合分子
AR128876A1 (es) 2022-03-28 2024-06-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecíficos de linfocitos t activables con proteasa folr1 mejorados
IL315770A (en) 2022-04-01 2024-11-01 Genentech Inc Dosage for treatment with bispecific anti-FCRH5/anti-CD3 antibodies
US12071621B2 (en) 2022-04-05 2024-08-27 Avidity Biosciences, Inc. Anti-transferrin receptor antibody-PMO conjugates for inducing DMD exon 44 skipping
WO2023201299A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Genentech, Inc. Pharmaceutical compositions of therapeutic proteins and methods of use
WO2023198727A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical compositions of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and methods of use
WO2023212304A1 (en) 2022-04-29 2023-11-02 23Andme, Inc. Antigen binding proteins
US20250289871A1 (en) 2022-04-29 2025-09-18 Astrazeneca Uk Limited Sars-cov-2 antibodies and methods of using the same
AR129268A1 (es) 2022-05-11 2024-08-07 Hoffmann La Roche Anticuerpo que se une a vegf-a e il6 y métodos de uso
JP2025517650A (ja) 2022-05-11 2025-06-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ＦｃＲＨ５／抗ＣＤ３二重特異性抗体による処置のための投与
KR20250022049A (ko) 2022-06-07 2025-02-14 제넨테크, 인크. 항-pd-l1 길항제 및 항-tigit 길항제 항체를 포함하는, 폐암 치료의 효율을 결정하는 방법
EP4536290A1 (en) 2022-06-08 2025-04-16 Angiex, Inc. Anti-tm4sf1 antibody-drug conjugates comprising cleavable linkers and methods of using same
AU2023305619A1 (en) 2022-07-13 2025-01-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
KR20250040020A (ko) 2022-07-19 2025-03-21 제넨테크, 인크. 항-fcrh5/항-cd3 이중특이성 항체로 치료하기 위한 투약법
CN120239705A (zh) 2022-07-21 2025-07-01 萤火虫生物股份有限公司 糖皮质激素受体激动剂和其缀合物
TW202417504A (zh) 2022-07-22 2024-05-01 美商建南德克公司 抗ｓｔｅａｐ１抗原結合分子及其用途
US20240132624A1 (en) 2022-07-27 2024-04-25 Ablynx N.V. Polypeptides binding to a specific epitope of the neonatal fc receptor
US20260035478A1 (en) 2022-07-27 2026-02-05 Teneobio, Inc. Mesothelin binding proteins and uses thereof
EP4565604A2 (en) 2022-08-01 2025-06-11 Flagship Pioneering Innovations VII, LLC Immunomodulatory proteins and related methods
WO2024030956A2 (en) 2022-08-03 2024-02-08 Mozart Therapeutics, Inc. Cd39-specific binding agents and methods of using the same
EP4582457A1 (en) 2022-08-30 2025-07-09 Mirabiologics Inc. Artificial protein and pharmaceutical composition
AR130550A1 (es) 2022-09-21 2024-12-18 Sanofi Biotechnology Anticuerpo anti-il-1r3 humanizado y métodos de uso
EP4594353A1 (en) 2022-09-28 2025-08-06 F. Hoffmann-La Roche AG Improved protease-activatable t cell bispecific antibodies
JP2025534285A (ja) 2022-09-29 2025-10-15 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト プロテアーゼ活性化ポリペプチド
EP4598958A1 (en) 2022-10-05 2025-08-13 Amgen Inc. Combination therapies comprising t-cell redirecting therapies and agonistic anti-il-2r antibodies or fragments thereof
US20240228620A1 (en) 2022-10-06 2024-07-11 Bicara Therapeutics Inc. Multispecific proteins and related methods
WO2024077239A1 (en) 2022-10-07 2024-04-11 Genentech, Inc. Methods of treating cancer with anti-c-c motif chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies
TW202423970A (zh) 2022-10-10 2024-06-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 Ｇｐｒｃ５ｄ ｔｃｂ及ｃｄ３８抗體之組合療法
TW202423969A (zh) 2022-10-10 2024-06-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 Ｇｐｒｃ５ｄ ｔｃｂ及蛋白酶體抑制劑之組合療法
TW202430211A (zh) 2022-10-10 2024-08-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 Ｇｐｒｃ５ｄ ｔｃｂ及ｉｍｉｄ之組合療法
JP2025534759A (ja) * 2022-10-18 2025-10-17 クロスポイント セラピューティクス インコーポレイテッド ヒト抗体ｆｃドメイン変異体及びその用途
AR130792A1 (es) 2022-10-20 2025-01-22 Glaxosmithkline Intellectual Property No 3 Ltd Proteínas de unión a antígeno
JP2026502768A (ja) 2022-10-25 2026-01-27 アブレクシス， エルエルシー 抗ｃｄ３抗体
KR20250093336A (ko) 2022-10-25 2025-06-24 제넨테크, 인크. 다발성 골수종에 대한 치료 및 진단 방법
EP4612178A1 (en) 2022-11-03 2025-09-10 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy with anti-cd19/anti-cd28 bispecific antibody
EP4615872A1 (en) 2022-11-08 2025-09-17 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating childhood onset idiopathic nephrotic syndrome
WO2024100170A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to hla-a*02/foxp3
WO2024107731A2 (en) 2022-11-14 2024-05-23 Ablexis, Llc Anti-pd-l1 antibodies
EP4619428A1 (en) 2022-11-15 2025-09-24 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules
WO2024114676A1 (zh) 2022-11-29 2024-06-06 江苏恒瑞医药股份有限公司 Cldn18.2/4-1bb结合蛋白及其医药用途
CN116143932B (zh) * 2022-12-07 2025-02-11 南开大学 一种针对IgE的抗体或其抗原结合片段以及Fc变体
EP4588936A1 (en) 2022-12-08 2025-07-23 Changchun Bcht Biotechnology Co. Antibodies specifically binding to rsv
EP4386084A1 (en) 2022-12-14 2024-06-19 Formycon AG Improved ace2 fusion proteins
WO2024127277A1 (en) 2022-12-16 2024-06-20 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Method of treating pain with an anti-ccl17 antibody
EP4431525A1 (en) 2023-03-16 2024-09-18 Anaveon AG Il-2 fusion protein
JP2026501338A (ja) 2022-12-22 2026-01-14 アナヴェオン アーゲー 抗ｐｄ－１抗体抗原結合ドメイン及び免疫抱合体
EP4491631A1 (en) 2023-07-13 2025-01-15 Anaveon AG Anti-pd-1 antibody binding domain and immunoconjugate
JP2026503077A (ja) 2023-01-09 2026-01-27 オデッセイ セラピューティクス，インコーポレイテッド 抗ｔｎｆｒ２抗原結合タンパク質及びその使用
JP2026510546A (ja) 2023-01-18 2026-04-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド 多重特異性抗体およびその使用
CR20250288A (es) 2023-01-20 2025-08-29 Hoffmann La Roche POLIPÉPTIDOS DE DOMINIO Fc -VARIANTE DE IL2 RECOMBINANTES Y POLITERAPIA CON POLIPÉPTIDOS DE UNIÓN AL ANTÍGENO ANCLADOS A LA MEMBRANA
CN120569410A (zh) 2023-01-25 2025-08-29 豪夫迈·罗氏有限公司 与csf1r和cd3结合的抗体
WO2024160736A1 (en) 2023-01-30 2024-08-08 Isar Bioscience Gmbh Human anti-trem2 antibody for treating neurodegenerative disorders
CN120813375A (zh) 2023-01-30 2025-10-17 凯玛布有限公司 抗体
TW202436339A (zh) 2023-01-31 2024-09-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 治療選自非小細胞肺癌或三陰性乳癌的癌症之用途
WO2024163009A1 (en) 2023-01-31 2024-08-08 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating urothelial bladder cancer
WO2024165454A1 (en) 2023-02-06 2024-08-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy and uses thereof
WO2024167885A1 (en) 2023-02-06 2024-08-15 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Immunomodulatory compositions and related methods
TW202448960A (zh) 2023-02-07 2024-12-16 美商Ｇｏ治療公司 包括抗醣MUC4抗體及MIC蛋白α1-α2結構域之抗體融合蛋白及其用途
CN121002056A (zh) 2023-02-08 2025-11-21 免疫标记治疗股份公司 β2微球蛋白、HLA重链多肽、和CD47–SIRPα抑制剂的融合蛋白
AU2024221322A1 (en) 2023-02-17 2025-07-03 Apogee Therapeutics, Inc. Antibodies that bind interleukin 4 receptor alpha and methods of use
TW202448926A (zh) 2023-02-17 2024-12-16 比利時商艾伯霖克斯公司 結合新生兒fc受體之多肽
AU2024226156A1 (en) 2023-02-21 2025-08-28 Teneobio, Inc. C-kit binding proteins, chimeric antigen receptors, and uses thereof
JP2026510318A (ja) 2023-03-06 2026-04-02 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ／抗ＣＤ３抗体と腫瘍標的化４－１ＢＢアゴニストの併用療法
JP2026509243A (ja) 2023-03-10 2026-03-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド プロテアーゼとの融合およびその使用
WO2024188965A1 (en) 2023-03-13 2024-09-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy employing a pd1-lag3 bispecific antibody and an hla-g t cell bispecific antibody
TW202444757A (zh) 2023-03-14 2024-11-16 美商奧迪希治療公司 抗cd25抗原結合蛋白及其用途
CN120936626A (zh) 2023-03-31 2025-11-11 基因泰克公司 抗αvβ8整合素抗体及使用方法
EP4688841A1 (en) 2023-04-03 2026-02-11 F. Hoffmann-La Roche AG All-in-one agonistic antibodies
EP4688840A1 (en) 2023-04-03 2026-02-11 F. Hoffmann-La Roche AG Agonistic split antibodies
US20250002588A1 (en) 2023-04-07 2025-01-02 Diagonal Therapeutics Inc. Bispecific agonistic antibodies to activin a receptor like type 1 (alk1)
WO2024213533A1 (en) 2023-04-13 2024-10-17 Alligator Bioscience Ab Combination therapies
KR20260012304A (ko) 2023-04-17 2026-01-26 피크 바이오, 인크. 항체 및 항체-약물 접합체 및 사용 방법 및 합성 공정 및 중간체
AU2024270495A1 (en) 2023-05-05 2025-10-09 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
EP4709752A1 (en) 2023-05-08 2026-03-18 F. Hoffmann-La Roche AG Targeted interferon alpha fusion proteins and methods of use
AU2024273454A1 (en) 2023-05-16 2025-11-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Pd-1-regulated il-2 immunocytokine and uses thereof
EP4713364A1 (en) 2023-05-17 2026-03-25 Odyssey Therapeutics, Inc. Modified single-domain antibodies
WO2024236163A1 (en) 2023-05-17 2024-11-21 Morphosys Ag T cell receptor beta constant region 2 (trbc2) antibodies
WO2024243423A1 (en) 2023-05-24 2024-11-28 Mozart Therapeutics, Inc. Cd8-specific binding proteins and methods of using the same
WO2024246083A1 (en) 2023-06-01 2024-12-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies targeting bcma and cd28
TW202502811A (zh) 2023-06-01 2025-01-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 與ｂｃｍａ特異性結合之免疫刺激性抗原結合分子
KR20260026086A (ko) 2023-06-21 2026-02-25 에프. 호프만-라 로슈 아게 Fap 표적화 림포톡신 베타 수용체 작용제를 이용한 조합 요법
EP4731255A1 (en) 2023-06-22 2026-04-29 Genentech, Inc. Treatment of multiple myeloma
EP4731668A1 (en) 2023-06-22 2026-04-29 Genentech, Inc. Antibodies and uses thereof
WO2024263904A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 Genentech, Inc. Methods for treatment of liver cancer
WO2024263195A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 Genentech, Inc. Methods for treatment of liver cancer
KR20260032566A (ko) 2023-06-29 2026-03-09 오디세이 테라퓨틱스, 인코포레이티드 항-trailr2 항원-결합 단백질 및 그의 용도
AU2024299328A1 (en) 2023-07-21 2026-01-22 Marrow Therapeutics, Inc. Hematopoietic cell targeting conjugates and related methods
AU2024300993A1 (en) 2023-07-26 2026-01-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3
KR20260051042A (ko) 2023-08-09 2026-04-15 에프. 호프만-라 로슈 아게 단일 및 다중특이성 항-trem2 항체, 그 방법 및 용도
WO2025032069A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Mono and multispecific anti-trem2 antibodies, methods and uses thereof
TW202508641A (zh) 2023-08-16 2025-03-01 大陸商上海邁晉生物醫藥科技有限公司 一種包含免疫綴合物的醫藥組成物及其用途
WO2025040567A1 (en) 2023-08-18 2025-02-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Protease activatable fc domain binding molecules
AR133909A1 (es) 2023-09-25 2025-11-12 Hoffmann La Roche ANTICUERPO QUE SE UNE A C3bBb
AU2024351114A1 (en) 2023-09-26 2026-02-12 Genmab A/S Dosage of antibody drug conjugate rinatabart sesutecan
AR133955A1 (es) 2023-09-26 2025-11-19 Profoundbio Us Co Agentes de unión a ptk7, conjugados de éstos y métodos de uso de los mismos
TW202530265A (zh) 2023-10-13 2025-08-01 美商奧迪希治療公司 抗cdh17抗原結合蛋白及其用途
WO2025087681A1 (en) 2023-10-26 2025-05-01 Morphosys Ag Bispecific antibodies against cd3 and cd20
WO2025099120A1 (en) 2023-11-09 2025-05-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies with conditional activity
WO2025106474A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for treating cancer with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
TW202535955A (zh) 2023-11-27 2025-09-16 丹麥商珍美寶股份有限公司 用於ｐｔｋ７檢測之抗體及方法
WO2025125118A1 (en) 2023-12-11 2025-06-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Protease activatable fc domain binding molecules
TW202544037A (zh) 2023-12-11 2025-11-16 英商葛蘭素史密斯克藍智慧財產發展有限公司 抗原結合蛋白
WO2025125386A1 (en) 2023-12-14 2025-06-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies that bind to folr1 and methods of use
WO2025125545A1 (en) * 2023-12-15 2025-06-19 Sanofi Effectorless igg1 fc variants
WO2025137523A2 (en) 2023-12-20 2025-06-26 Apogee Therapeutics, Inc. Pharmaceutical formulations of antibodies that bind interleukin 13
WO2025137410A1 (en) 2023-12-20 2025-06-26 Apogee Therapeutics, Inc. Pharmaceutical compositions of anti-il-13 antibodies with and without c-terminal lysine
WO2025132503A1 (en) 2023-12-20 2025-06-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to ceacam5
WO2025133290A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Temper Bio Protein for immune regulation
WO2025134068A1 (en) 2023-12-22 2025-06-26 Ac Immune Sa Antibody drug conjugates targeting proteinopathies, and uses thereof
WO2025133042A2 (en) 2023-12-22 2025-06-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Activatable fusion proteins and methods of use
WO2025149661A1 (en) 2024-01-10 2025-07-17 Genmab A/S Slitrk6 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2025149633A1 (en) 2024-01-12 2025-07-17 Laigo Bio B.V. Bispecific antigen binding proteins
TW202545974A (zh) 2024-01-26 2025-12-01 美商旗艦先鋒創新有限責任（Ｖｉｉ）公司 免疫受體抑制蛋白及相關方法
WO2025158412A1 (en) 2024-01-26 2025-07-31 Biohaven Therapeutics Ltd. BIFUNCTIONAL DEGRADERS OF IgG4 IMMUNOGLOBULINS
WO2025181697A1 (en) 2024-02-26 2025-09-04 Biohaven Therapeutics Ltd. Bifunctional degraders of anti-pla2r antibody
WO2025083294A2 (en) * 2024-02-29 2025-04-24 Ageronix SA Aat-fc fusion protein
US20250381289A1 (en) 2024-02-29 2025-12-18 Genmab A/S Egfr and c-met bispecific binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2025181189A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3
WO2025202147A1 (en) 2024-03-27 2025-10-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Interleukin-7 immunoconjugates
WO2025210538A1 (en) 2024-04-02 2025-10-09 Biohaven Therapeutics Ltd. Bifunctional degraders
TW202602940A (zh) 2024-04-09 2026-01-16 美商安進公司 激動性抗ｉｌ－２ｒｂｇ重鏈抗體
WO2025217240A1 (en) 2024-04-10 2025-10-16 Odyssey Therapeutics, Inc. Anti-tnfr2 antigen-binding proteins and uses thereof
WO2025215060A1 (en) 2024-04-11 2025-10-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies that specifically bind modified oligonucleotides
WO2025222129A2 (en) 2024-04-19 2025-10-23 Mozart Therapeutics, Inc. Engineered cytokines and targeted cytokine delivery
WO2025226808A1 (en) 2024-04-24 2025-10-30 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating lupus nephritis
US20250353881A1 (en) 2024-05-16 2025-11-20 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Immunoreceptor inhibitory proteins and related methods
WO2025245111A1 (en) 2024-05-22 2025-11-27 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Immunoreceptor targeting proteins and related methods
US12606639B2 (en) 2024-05-23 2026-04-21 GlaxoSmith Kline Intellectual Property Development Limited Antigen binding proteins
WO2025255353A1 (en) 2024-06-06 2025-12-11 Apogee Therapeutics, Inc. Dosage and administration of an anti-ox40l antibody
WO2025255435A2 (en) 2024-06-07 2025-12-11 Odyssey Therapeutics, Inc. Antigen-binding proteins against serum albumin and uses thereof
WO2025255496A1 (en) * 2024-06-07 2025-12-11 Nuvig Therapeutics, Inc. Modified fc polypeptides
WO2025255558A2 (en) 2024-06-07 2025-12-11 Odyssey Therapeutics, Inc. Anti-thymic stromal lymphopoietin (tslp) antigen-binding proteins and uses thereof
WO2025264972A1 (en) 2024-06-21 2025-12-26 Apogee Therapeutics, Inc. Antibodies that bind il-4r alpha and antibodies that bind
US20260008843A1 (en) 2024-06-21 2026-01-08 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Multispecific antigen binding proteins
WO2025264960A1 (en) 2024-06-21 2025-12-26 Apogee Therapeutics, Inc. Antibodies that bind il-13 and antibodies that bind ox40l
WO2026006809A1 (en) 2024-06-27 2026-01-02 Odyssey Therapeutics, Inc. Multispecific molecules binding tnfr2 and cd25 and uses thereof
WO2026006708A2 (en) 2024-06-27 2026-01-02 Odyssey Therapeutics, Inc. Anti-cd25 antigen-binding proteins and uses thereof
WO2026006689A2 (en) 2024-06-28 2026-01-02 Firefly Bio, Inc. Bcl-xl degrader antibody conjugates and uses thereof
WO2026014615A1 (ko) * 2024-07-10 2026-01-15 고려대학교 산학협력단 작용기 기능이 제거된 신규 당화 fc 변이체
WO2026019692A2 (en) 2024-07-15 2026-01-22 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Immunomodulatory fusion proteins and related methods
WO2026030464A1 (en) 2024-07-30 2026-02-05 Genentech, Inc. Dosage regimen for reducing cytokine release syndrome (crs) with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies in multiple myeloma therapy
WO2026028159A1 (en) 2024-07-31 2026-02-05 Biohaven Therapeutics Ltd. Bifunctional degraders for the treatment of graves' disease
WO2026035986A1 (en) 2024-08-07 2026-02-12 Bighat Biosciences, Inc. Humanized anti-cdh17 antibodies and use of the same
WO2026039779A1 (en) 2024-08-15 2026-02-19 Yale University Humanized 3e10 antibodies and antigen binding fragments optimized for rad51 binding
WO2026041568A1 (en) 2024-08-20 2026-02-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3 and dotam
WO2026052652A1 (en) 2024-09-03 2026-03-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Cytokine receptor agonist
WO2026052654A1 (en) 2024-09-03 2026-03-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Cytokine receptor agonist
WO2026072685A1 (en) 2024-09-25 2026-04-02 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating lupus nephritis
WO2026073840A1 (en) 2024-10-01 2026-04-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies that bind to cd3 and uses therefor
WO2026080829A1 (en) 2024-10-10 2026-04-16 Apogee Therapeutics, Inc. Methods of administering antibodies that bind interleukin 13
WO2026078029A1 (en) 2024-10-10 2026-04-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Splitted interleukin-2 prodrugs and uses thereof
WO2026082710A1 (en) 2024-10-16 2026-04-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Small molecule-inducible recombinant receptors
WO2026085417A2 (en) 2024-10-18 2026-04-23 Apogee Therapeutics, Inc. Antibodies that bind interleukin 4 receptor alpha in combination with hyaluronidase or a variant thereof
WO2026085419A2 (en) 2024-10-18 2026-04-23 Apogee Therapeutics, Inc. Antibodies that bind il-13 in combination with hyaluronidase or a variant thereof
WO2026085415A1 (en) 2024-10-18 2026-04-23 Apogee Therapeutics, Inc. Antibodies that bind il-13 and antibodies that bind tslp in combination with hyaluronidase or a variant thereof
WO2026085414A1 (en) 2024-10-18 2026-04-23 Apogee Therapeutics, Inc. Antibodies that bind tslp and antibodies that bind interleukin 4 receptor alpha in combination with hyaluronidase or a variant thereof

Family Cites Families (218)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4318980A (en) 1978-04-10 1982-03-09 Miles Laboratories, Inc. Heterogenous specific binding assay employing a cycling reactant as label
US4490473A (en) 1983-03-28 1984-12-25 Panab Labeled antibodies and methods
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4752601A (en) 1983-08-12 1988-06-21 Immunetech Pharmaceuticals Method of blocking immune complex binding to immunoglobulin FC receptors
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5091178A (en) 1986-02-21 1992-02-25 Oncogen Tumor therapy with biologically active anti-tumor antibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5985599A (en) 1986-05-29 1999-11-16 The Austin Research Institute FC receptor for immunoglobulin
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US5204244A (en) 1987-10-27 1993-04-20 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
JP3040121B2 (ja) 1988-01-12 2000-05-08 ジェネンテク，インコーポレイテッド 増殖因子レセプターの機能を阻害することにより腫瘍細胞を処置する方法
US5576184A (en) 1988-09-06 1996-11-19 Xoma Corporation Production of chimeric mouse-human antibodies with specificity to human tumor antigens
EP0368684B2 (en) 1988-11-11 2004-09-29 Medical Research Council Cloning immunoglobulin variable domain sequences.
US5047335A (en) 1988-12-21 1991-09-10 The Regents Of The University Of Calif. Process for controlling intracellular glycosylation of proteins
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
GB8916400D0 (en) 1989-07-18 1989-09-06 Dynal As Modified igg3
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5364930A (en) 1990-10-16 1994-11-15 Northwestern University Synthetic C1q peptide fragments
US5419904A (en) 1990-11-05 1995-05-30 The Regents Of The University Of California Human B-lymphoblastoid cell line secreting anti-ganglioside antibody
CA2095633C (en) 1990-12-03 2003-02-04 Lisa J. Garrard Enrichment method for variant proteins with altered binding properties
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
US5278299A (en) 1991-03-18 1994-01-11 Scripps Clinic And Research Foundation Method and composition for synthesizing sialylated glycosyl compounds
US6582959B2 (en) 1991-03-29 2003-06-24 Genentech, Inc. Antibodies to vascular endothelial cell growth factor
US20030206899A1 (en) 1991-03-29 2003-11-06 Genentech, Inc. Vascular endothelial cell growth factor antagonists
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
US6136310A (en) 1991-07-25 2000-10-24 Idec Pharmaceuticals Corporation Recombinant anti-CD4 antibodies for human therapy
US7018809B1 (en) 1991-09-19 2006-03-28 Genentech, Inc. Expression of functional antibody fragments
FI941572A7 (fi) 1991-10-07 1994-05-27 Oncologix Inc Anti-erbB-2-monoklonaalisten vasta-aineiden yhdistelmä ja käyttömenete lmä
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
WO1993010260A1 (en) 1991-11-21 1993-05-27 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Controlling degradation of glycoprotein oligosaccharides by extracellular glycosisases
CA2372813A1 (en) 1992-02-06 1993-08-19 L.L. Houston Biosynthetic binding protein for cancer marker
GB9206422D0 (en) 1992-03-24 1992-05-06 Bolt Sarah L Antibody preparation
CA2118508A1 (en) 1992-04-24 1993-11-11 Elizabeth S. Ward Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
CA2124592A1 (en) 1992-09-28 1994-04-14 Karel Grohmann Fermentation of cellulose and hemicellulose in corn fiber and distillers dried grains with solubles to ethanol
AU687727B2 (en) 1992-10-28 1998-03-05 Genentech Inc. Vascular endothelial cell growth factor antagonists
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
DK0752248T3 (da) 1992-11-13 2000-11-13 Idec Pharma Corp Terapeutisk anvendelse af kimæriske og radioaktivt mærkede antistoffer mod humant B-lymfocytbegrænset differentieringsantig
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US6491916B1 (en) 1994-06-01 2002-12-10 Tolerance Therapeutics, Inc. Methods and materials for modulation of the immunosuppresive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US5885573A (en) 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US6180377B1 (en) 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
AU691811B2 (en) 1993-06-16 1998-05-28 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
US5595721A (en) 1993-09-16 1997-01-21 Coulter Pharmaceutical, Inc. Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5747035A (en) 1995-04-14 1998-05-05 Genentech, Inc. Polypeptides with increased half-life for use in treating disorders involving the LFA-1 receptor
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US5730977A (en) 1995-08-21 1998-03-24 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. Anti-VEGF human monoclonal antibody
ES2233974T3 (es) 1995-09-11 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Anticuerpo contra la cadena alfa del receptor de la interleucina 5 humana.
US6750334B1 (en) 1996-02-02 2004-06-15 Repligen Corporation CTLA4-immunoglobulin fusion proteins having modified effector functions and uses therefor
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
JP4046354B2 (ja) 1996-03-18 2008-02-13 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム 増大した半減期を有する免疫グロブリン様ドメイン
WO1997043316A1 (en) 1996-05-10 1997-11-20 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Physiologically active molecules with extended half-lives and methods of using same
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
PT971959E (pt) 1997-04-07 2006-05-31 Genentech Inc Anticorpos humanizados e metodos para formar anticorpos humanizados
KR100816621B1 (ko) 1997-04-07 2008-03-24 제넨테크, 인크. 항-ｖｅｇｆ 항체
US20020032315A1 (en) 1997-08-06 2002-03-14 Manuel Baca Anti-vegf antibodies
WO1998048032A2 (en) 1997-04-21 1998-10-29 Donlar Corporation POLY-(α-L-ASPARTIC ACID), POLY-(α-L-GLUTAMIC ACID) AND COPOLYMERS OF L-ASP AND L-GLU, METHOD FOR THEIR PRODUCTION AND THEIR USE
DE19721700C1 (de) 1997-05-23 1998-11-19 Deutsches Krebsforsch Mutierter OKT3-Antikörper
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
US20040191256A1 (en) 1997-06-24 2004-09-30 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
ES2244066T3 (es) 1997-06-24 2005-12-01 Genentech, Inc. Procedimiento y composiciones de glicoproteinas galactosiladas.
US6172213B1 (en) 1997-07-02 2001-01-09 Genentech, Inc. Anti-IgE antibodies and method of improving polypeptides
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
AU759779B2 (en) 1997-10-31 2003-05-01 Genentech Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
DK1034298T3 (da) 1997-12-05 2012-01-30 Scripps Research Inst Humanisering af murint antistof
HUP0100813A3 (en) 1998-02-25 2003-08-28 Lexigen Pharmaceuticals Corp L Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
US6242195B1 (en) 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
DK1071700T3 (da) 1998-04-20 2010-06-07 Glycart Biotechnology Ag Glykosylerings-modifikation af antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellulær cytotoksicitet
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
EP1105427A2 (en) 1998-08-17 2001-06-13 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
PL209392B1 (pl) 1999-01-15 2011-08-31 Genentech Inc Przeciwciało, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciała
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6676927B1 (en) 1999-01-20 2004-01-13 The Rockefeller University Animal model and methods for its use in the selection of cytotoxic antibodies
CA2704600C (en) 1999-04-09 2016-10-25 Kyowa Kirin Co., Ltd. A method for producing antibodies with increased adcc activity
US6703020B1 (en) 1999-04-28 2004-03-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Antibody conjugate methods for selectively inhibiting VEGF
ES2248127T3 (es) 1999-10-04 2006-03-16 Medicago Inc. Metodo para regular la transcripcion de genes foraneos en presencia de nigtrogeno.
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
EP1240319A1 (en) 1999-12-15 2002-09-18 Genentech, Inc. Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
AU767394C (en) 1999-12-29 2005-04-21 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use
HUP0204475A2 (en) 2000-02-11 2003-04-28 Merck Patent Gmbh Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
ATE402192T1 (de) 2000-03-03 2008-08-15 Kyowa Hakko Kogyo Kk Anti-ccr4 antikörper und fragmente davon
US7449443B2 (en) 2000-03-23 2008-11-11 California Institute Of Technology Method for stabilization of proteins using non-natural amino acids
JP2003531588A (ja) 2000-04-11 2003-10-28 ジェネンテック・インコーポレーテッド 多価抗体とその用途
JP2003531149A (ja) 2000-04-13 2003-10-21 ザ・ロツクフエラー・ユニバーシテイ 抗体由来の免疫応答の増強
US6586207B2 (en) 2000-05-26 2003-07-01 California Institute Of Technology Overexpression of aminoacyl-tRNA synthetases for efficient production of engineered proteins containing amino acid analogues
US20060024304A1 (en) 2000-06-28 2006-02-02 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a Man5GlcNAc2 glycoform
US20060034830A1 (en) 2000-06-28 2006-02-16 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a GalGlcNAcMan5GLcNAc2 glycoform
US20060034828A1 (en) 2000-06-28 2006-02-16 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a GlcNAcMAN5GLCNAC2 glycoform
US20060029604A1 (en) 2000-06-28 2006-02-09 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a GlcNAc2Man3GlcNAc2 glycoform
US7598055B2 (en) 2000-06-28 2009-10-06 Glycofi, Inc. N-acetylglucosaminyltransferase III expression in lower eukaryotes
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
CA2953239A1 (en) 2000-10-06 2002-04-18 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Antibody composition-producing cell
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
CA2430013C (en) 2000-11-30 2011-11-22 Medarex, Inc. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
US7083784B2 (en) 2000-12-12 2006-08-01 Medimmune, Inc. Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
AU2002250293B2 (en) 2001-03-09 2007-10-11 Arnason, Barry G. Mr Polymeric immunoglobulin fusion proteins that target low-affinity FCGammaReceptors
IL157946A0 (en) 2001-04-02 2004-03-28 Genentech Inc Combination therapy
GB0118662D0 (en) 2001-07-31 2001-09-19 Univ Southampton Binding agents
CA2463879C (en) 2001-10-25 2012-12-04 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US20060034829A1 (en) 2001-12-27 2006-02-16 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a MAN3GLCNAC2 glycoform
US20060024292A1 (en) 2001-12-27 2006-02-02 Gerngross Tillman U Immunoglobulins comprising predominantly a Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2 glycoform
US20040002587A1 (en) 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
WO2003073238A2 (en) 2002-02-27 2003-09-04 California Institute Of Technology Computational method for designing enzymes for incorporation of amino acid analogs into proteins
US20040132101A1 (en) * 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US7662925B2 (en) 2002-03-01 2010-02-16 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20080152649A1 (en) 2002-03-01 2008-06-26 Xencor, Inc. Optimized igf-1r antibodies and methods of using the same
US20080206242A1 (en) 2002-03-01 2008-08-28 Xencor, Inc. Method of treatment of th2-mediated conditions using optimized anti-cd30 antibodies
US20070148171A1 (en) 2002-09-27 2007-06-28 Xencor, Inc. Optimized anti-CD30 antibodies
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
CA2481925A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Therapeutic agent for patients having human fc.gamma.riiia
CA2481658A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Method of enhancing of binding activity of antibody composition to fcy receptor iiia
CA2488441C (en) 2002-06-03 2015-01-27 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
EP1572091A4 (en) 2002-07-09 2008-03-05 Genentech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR TUMOR DIAGNOSIS AND TREATMENT
EP1553975B8 (en) 2002-09-27 2023-04-12 Xencor, Inc. Optimized fc variants and methods for their generation
US20060235208A1 (en) 2002-09-27 2006-10-19 Xencor, Inc. Fc variants with optimized properties
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
DK1562972T3 (da) 2002-10-15 2010-12-06 Facet Biotech Corp Modifikation af FcRn-bindingsaffiniteter eller serumhalveringstider for antistoffer ved mutagenese
US7365168B2 (en) 2002-10-15 2008-04-29 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
TWI335821B (en) 2002-12-16 2011-01-11 Genentech Inc Immunoglobulin variants and uses thereof
US7608260B2 (en) 2003-01-06 2009-10-27 Medimmune, Llc Stabilized immunoglobulins
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
CA2512729C (en) 2003-01-09 2014-09-16 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant fc regions and methods of using same
WO2004065416A2 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US8084582B2 (en) 2003-03-03 2011-12-27 Xencor, Inc. Optimized anti-CD20 monoclonal antibodies having Fc variants
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
UA101945C2 (uk) 2003-05-30 2013-05-27 Дженентек, Инк. Лікування злоякісного новоутворення за допомогою бевацизумабу
DK1641823T3 (da) 2003-06-12 2011-12-12 Lilly Co Eli GLP-1-analog fusionsproteiner
US7758859B2 (en) 2003-08-01 2010-07-20 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
WO2005044853A2 (en) 2003-11-01 2005-05-19 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
US20050106667A1 (en) 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
AU2004266159A1 (en) 2003-08-22 2005-03-03 Biogen Idec Ma Inc. Improved antibodies having altered effector function and methods for making the same
AU2004273791A1 (en) 2003-09-05 2005-03-31 Genentech, Inc. Antibodies with altered effector functions
WO2005035727A2 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Ambrx, Inc. Polymer derivatives
WO2005037867A1 (en) 2003-10-15 2005-04-28 Pdl Biopharma, Inc. ALTERATION OF Fc-FUSION PROTEIN SERUM HALF-LIVES BY MUTAGENESIS OF POSITIONS 250, 314 AND/OR 428 OF THE HEAVY CHAIN CONSTANT REGION OF IG
GB0324368D0 (en) 2003-10-17 2003-11-19 Univ Cambridge Tech Polypeptides including modified constant regions
US9296820B2 (en) 2003-11-05 2016-03-29 Roche Glycart Ag Polynucleotides encoding anti-CD20 antigen binding molecules with increased Fc receptor binding affinity and effector function
EP2478912B1 (en) 2003-11-06 2016-08-31 Seattle Genetics, Inc. Auristatin conjugates with anti-HER2 or anti-CD22 antibodies and their use in therapy
WO2005063815A2 (en) 2003-11-12 2005-07-14 Biogen Idec Ma Inc. Fcϝ receptor-binding polypeptide variants and methods related thereto
WO2005047327A2 (en) 2003-11-12 2005-05-26 Biogen Idec Ma Inc. NEONATAL Fc RECEPTOR (FcRn)-BINDING POLYPEPTIDE VARIANTS, DIMERIC Fc BINDING PROTEINS AND METHODS RELATED THERETO
EP1701979A2 (en) 2003-12-03 2006-09-20 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target the epidermal growth factor receptor
PT1718677E (pt) 2003-12-19 2012-07-18 Genentech Inc Fragmentos de anticorpo monovalentes úteis como agentes terapêuticos
EP1697520A2 (en) 2003-12-22 2006-09-06 Xencor, Inc. Fc polypeptides with novel fc ligand binding sites
EP1697748A4 (en) 2003-12-22 2007-07-04 Centocor Inc METHODS FOR GENERATING MULTIMEDIA MOLECULES
SI2311873T1 (sl) * 2004-01-07 2018-12-31 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. M-CSF-specifična monoklonska protitelesa in njihova uporaba
US20060018911A1 (en) 2004-01-12 2006-01-26 Dana Ault-Riche Design of therapeutics and therapeutics
AU2005206277B2 (en) 2004-01-22 2011-06-23 Merck Patent Gmbh Anti-cancer antibodies with reduced complement fixation
BRPI0507169A (pt) 2004-02-02 2007-06-26 Ambrx Inc polipeptìdeos do hormÈnio de crescimento humano modificados e seu usos
EP1740615B1 (en) 2004-03-31 2014-11-05 Genentech, Inc. Humanized anti-tgf-beta antibodies
WO2005123780A2 (en) 2004-04-09 2005-12-29 Protein Design Labs, Inc. Alteration of fcrn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
PT1737891E (pt) * 2004-04-13 2013-04-16 Hoffmann La Roche Anticorpos anti p-selectina
US20060009360A1 (en) 2004-06-25 2006-01-12 Robert Pifer New adjuvant composition
EP2471813B1 (en) * 2004-07-15 2014-12-31 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
AU2005274905B2 (en) * 2004-08-04 2010-12-23 Mentrik Biotech, Llc Variant Fc regions
AU2005285347A1 (en) 2004-08-19 2006-03-23 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US20060074225A1 (en) 2004-09-14 2006-04-06 Xencor, Inc. Monomeric immunoglobulin Fc domains
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
DK1791565T3 (en) 2004-09-23 2016-08-01 Genentech Inc Cysteingensplejsede antibodies and conjugates
WO2006036834A2 (en) 2004-09-24 2006-04-06 Amgen Inc. MODIFIED Fc MOLECULES
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
WO2006047350A2 (en) 2004-10-21 2006-05-04 Xencor, Inc. IgG IMMUNOGLOBULIN VARIANTS WITH OPTIMIZED EFFECTOR FUNCTION
AU2005335714B2 (en) 2004-11-10 2012-07-26 Macrogenics, Inc. Engineering Fc antibody regions to confer effector function
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
AU2005304624B2 (en) 2004-11-12 2010-10-07 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US20070135620A1 (en) 2004-11-12 2007-06-14 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
EP1858925A2 (en) 2005-01-12 2007-11-28 Xencor, Inc. Antibodies and fc fusion proteins with altered immunogenicity
DOP2006000029A (es) 2005-02-07 2006-08-15 Genentech Inc Antibody variants and uses thereof. (variantes de un anticuerpo y usos de las mismas)
WO2007008943A2 (en) 2005-07-08 2007-01-18 Xencor, Inc. Optimized anti-ep-cam antibodies
ES2577292T3 (es) 2005-11-07 2016-07-14 Genentech, Inc. Polipéptidos de unión con secuencias hipervariables de VH/VL diversificadas y consenso
EP1973951A2 (en) 2005-12-02 2008-10-01 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
TW200812616A (en) 2006-05-09 2008-03-16 Genentech Inc Binding polypeptides with optimized scaffolds
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
US20110077383A1 (en) * 2007-07-03 2011-03-31 Medimmune, Llc Hinge domain engineering
MX2010001637A (es) * 2007-08-17 2010-03-15 Hoffmann La Roche Mediacion de citotoxicidad de celulas que evidencian la expresion superficial de cd9.
TWI468417B (zh) 2007-11-30 2015-01-11 Genentech Inc 抗－ｖｅｇｆ抗體
HRP20150279T1 (hr) 2007-12-26 2015-05-08 Xencor, Inc. Fc inaäśice s promijenjenim vezanjem na fcrn
JP6157046B2 (ja) 2008-01-07 2017-07-05 アムジェン インコーポレイテッド 静電的ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃｓｔｅｅｒｉｎｇ）効果を用いた抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための方法
KR20160070165A (ko) 2008-02-08 2016-06-17 메디뮨 엘엘씨 Ｆｃ 리간드 친화성이 감소된 항-ＩＦＮＡＲ１ 항체
JP5913980B2 (ja) 2008-10-14 2016-05-11 ジェネンテック， インコーポレイテッド 免疫グロブリン変異体及びその用途
ES2692268T5 (en) 2011-03-29 2025-02-26 Roche Glycart Ag Antibody fc variants
EA201892619A1 (ru) 2011-04-29 2019-04-30 Роше Гликарт Аг Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2

Also Published As

Publication number Publication date
PL2691417T5 (pl) 2025-02-10
ES2692268T3 (es) 2018-12-03
AU2012234335A1 (en) 2013-09-05
NZ614658A (en) 2015-07-31
EP2691417A1 (en) 2014-02-05
IL228002A0 (en) 2013-09-30
PL2691417T3 (pl) 2019-01-31
DK2691417T4 (en) 2025-01-02
KR20130139342A (ko) 2013-12-20
HRP20181690T4 (hr) 2025-01-03
PT2691417T (pt) 2018-10-31
EP2691417B2 (en) 2024-10-30
HUE041335T2 (hu) 2019-05-28
US20150239981A1 (en) 2015-08-27
US20240018259A1 (en) 2024-01-18
RU2013145623A (ru) 2015-05-10
RU2607014C2 (ru) 2017-01-10
JP2014514287A (ja) 2014-06-19
BR112013024574B1 (pt) 2022-08-09
RS57895B1 (sr) 2019-01-31
CA2828289A1 (en) 2012-10-04
WO2012130831A1 (en) 2012-10-04
SI2691417T2 (sl) 2025-05-30
MY163539A (en) 2017-09-15
US20170137530A1 (en) 2017-05-18
CN103476795B (zh) 2016-07-06
JP5926791B2 (ja) 2016-05-25
AR085741A1 (es) 2013-10-23
HK1193109A1 (zh) 2014-09-12
EP2691417B1 (en) 2018-08-01
MX336740B (es) 2016-01-29
EP3590965A1 (en) 2020-01-08
US8969526B2 (en) 2015-03-03
HRP20181690T1 (hr) 2018-12-28
CN105949313B (zh) 2021-06-15
MX2013009981A (es) 2013-09-26
US20210139603A1 (en) 2021-05-13
FI2691417T4 (fi) 2025-01-14
DK2691417T3 (en) 2018-11-19
ES2692268T5 (en) 2025-02-26
LT2691417T (lt) 2018-10-25
KR20160044598A (ko) 2016-04-25
SI2691417T1 (sl) 2018-11-30
BR112013024574A2 (pt) 2017-09-19
CA2828289C (en) 2020-07-21
AU2012234335B2 (en) 2016-09-01
CN103476795A (zh) 2013-12-25
SG193554A1 (en) 2013-11-29
KR101614195B1 (ko) 2016-04-20
TR201815420T4 (tr) 2018-11-21
SG10201602394QA (en) 2016-05-30
US20120251531A1 (en) 2012-10-04
IL228002B (en) 2018-08-30
CN105949313A (zh) 2016-09-21
MX354359B (es) 2018-02-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240018259A1 (en) Antibody fc variants
US12252532B2 (en) Anti-myostatin antibodies and methods of use
EP3215532B1 (en) Anti-tim3 antibodies and methods of use
RU2758596C2 (ru) Антитела к вирусу денге, полипептиды, содержащие варианты fc-областей, и способы их применения
JP2022525585A (ja) 抗ｈｌａ－ｄｑ２．５抗体
KR20150023938A (ko) 항-테오필린 항체 및 이의 사용 방법
TW201245227A (en) Antibody Fc variants
HK1228426B (zh) 抗体fc变体
HK1228426A1 (en) Antibody fc variants
NZ614658B2 (en) Antibody fc variants
HK1193109B (en) Antibody fc variants