RS57946B1 - 2-amino-6-(difluorometil)- 5,5-difluoro-6-fenil-3,4,5,6-tetrahidropiridini kao bace1 inhibitori - Google Patents

2-amino-6-(difluorometil)- 5,5-difluoro-6-fenil-3,4,5,6-tetrahidropiridini kao bace1 inhibitori

Info

Publication number
RS57946B1
RS57946B1 RS20181321A RSP20181321A RS57946B1 RS 57946 B1 RS57946 B1 RS 57946B1 RS 20181321 A RS20181321 A RS 20181321A RS P20181321 A RSP20181321 A RS P20181321A RS 57946 B1 RS57946 B1 RS 57946B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
difluoromethyl
fluorophenyl
amino
difluoro
tetrahydropyridin
Prior art date
Application number
RS20181321A
Other languages
English (en)
Inventor
Karsten Juhl
Lena Tagmose
Mauro Marigo
Original Assignee
H Lundbeck As
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by H Lundbeck As filed Critical H Lundbeck As
Publication of RS57946B1 publication Critical patent/RS57946B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/444—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring heteroatom, e.g. amrinone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A61K31/497—Non-condensed pyrazines containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja deluju kao BACE1 inhibitori. Odvojeni aspekti ovog pronalaska usmereni su na farmaceutske kombinacije koje obuhvataju pomenuta jedinjenja i upotrebe jedinjenja u kečenju neurodegenerativnih ili kognitivnih poremećaja.
STANJE TEHNIKE
[0002] Demencija je klinički sindrom okarakterisan deficitima u više područja kognicije koji se ne mogu objasniti normalnim starenjem, značajan pad u funkciji, i odsustvo delirijuma. Pored toga, neuropsihijatrijski simptomi i fokusna neurološka saznanja obično su prisutni. Demencija je dalje klasifikovana na osnovu etiologije. Alchajmerova bolest (AD) je najčešći uzrok demencije, praćeno pomešanom AD i vaskularnom demencijom, demencijom sa Levijevim telima (DLB), i frontotemporalnom demencijom. β-Amiloidni depoziti i neurofibrilarna klupka smatraju se glavnim patološkim odrednicama povezanim sa AD koja je okarakterisana gupitkom pamćenja, kognicije, razmišljanja, procenjivanja, i orijntacije. Takođe kako bolest napreduje pogođene su i motorne, senzorne i jezičke sposobnosti do pojave potpunog prestanka višstrukih kognitivnih funkcija. β-Amiloidni depoziti pre svega su agregati Aβ peptida, koji je sa druge strane proizvod proteolizije amiloidnog prekursor proteina (APP) kao deo β-amiloidogenične putanje. Aβ peptid rezultuje od cepanja APP na C-kraju jednom ili više γ-sekretaza i na N-kraju β-sekretazom 1 (BACE1) koja je takođe poznata kao aspartil proteaza 2. BACE1 aktivnost je u vezi direktno sa generisanjem Aβ peptida iz APP.
[0003] Ispitivanja ukazuju da inhibicija BACE1 ometa proizvodnju Aβ peptida. Dalje, BACE1 se kolokalizuj sa svojim suptratom APP u Golgi i endocitnim odeljcima (Willem M, et al. Semin.Cell Dev. Biol, 2009, 20, 175-182). Knock-out ispitivanja na miševima pokazala su odsustvo formiranja amiloidnog peptida dok su životinje zdrave i plodne (Ohno M, et al. Neurobiol. Dis., 2007, 26, 134-145). Genetska ablacija BACE1 kod miševa sa preteranim eskprimiranjem APP pokazala je odsustvo formiranja plakova, i preojretanje kognitivnih deficita (Ohno M, et al. Neuron; 2004, 41, 27-33). BACE1 nivoi su povišeni u mozgu pacijenata sa sporadičnom AD (Hampel i Shen, Scand. J. Clin. Lab. Invest.2009, 69, 8-12).
[0004] Ova konvergentna saznanja ukazuju da inhibicija BACE1 može biti terapeutska meta za lečenje AD kao i poremećaja za koje je snižavanje Aβ depozita dobrobitna.
[0005] AstraZeneca je objavila otkriće AZD3839, potentnog BACE1 inhibitornog kliničkog kandidata za lečenje AD (Jeppsson, F., et al. J. Biol. Chem., 2012, 287, 41245-41257) Oktobra 2012. Napor koji je doveo do otkrića AZD3839 je dalje opisan kod Ginman, T., et al. J. Med. Chem., 2013, 56, 4181-4205. Ginman-ova publikacija opisuje probleme koji se prevazilaze u vezi sa otkrivanjem i identifikacijom AZD3839. Ovi problemi povezani su za slabom penetracijom krvno moždane barijere i P-glikoproteinom posredovanog efluksa jedinjenja što rezultuje u smanjenom moždanom izlaganju.
[0006] Ginman-ov dokument pretpostavlja da razlike u moždanom izlaganju mogu u velikoj meri biti usled struktura kore, i obezbeđeni su podaci o Odnosu strukture i aktivnosti koji su u in vitro karakteristikama na prijavljenom jedinjenju data u četiri tabele u skladu sa podtipovima kore. U tabeli 4, serije jedinjenja koje sadrže amidin opisana su da se smatraju interesantnim u perspektivi aktivnosti. Međutim, ti podaci sugerišu da kora koja sadrži amidin ne eksprimira povoljan profil propustljivosti krvno moždane membrane.
[0007] Istraživači iz Hoffmann-La Roche i Siena Biotech takođe prijavljuju otkriće jedinjenja koja sadrže amidin (Woltering, T. J., et al. Bioorg. Med. Chem. Lett.2013, 23, 4239-4243). Pronađeno je da ova jedinjenja (jedinjenja 17 i 18 u radu) nemaju nikakav in vivo efekat (manjak Aβ40 redukcije u mozgu kod miševa divljeg tipa).
[0008] Nasuprot učenjima Ginman, et al. i Woltering, T. J., et al., pronalazači ovog pronalaska pronašli su serije amidin jedinjenja koja mogu da prodru u mozak. Shodno tome, ovaj pronalazak odnosi se na nova jedinjenja sa BACE1 inhibitornom aktivnošću, na njihovu pripremu, na njihovu medicinsku upotrebu i na lekove koji ih čine.
SUŠTINA PRONALASKA
[0009] Predmet ovog pronalaska je da obezbedi jedinjenja koja inhibiraju BACE1. Shodno tome, ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenja formule I.
gde je Ar odabran iz grupe koju čine fenil, piridil, pirimidil, pirazinil, imidazolil, pirazolil, tiazolil, oksazolil, izoksazolil, i gde je Ar opciono supstituisan jednim ili više supstituenata odabranih od halogena, CN, C1C6alkila, C2-C6alkenila, C2-C6alkinila, C1-C6fluoroalkila ili C1-C6alkoksi; i
R1 je vodonik, halogen, C1-C3fluoroalkil ili C1-C3alkil;
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0010] U jednom primeru izvođenja ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja formule I ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u terapiji.
[0011] Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje farmaceutsku kombinaciju koja obuhvata jedinjenje formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0012] U jednom primeru izvođenja ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u proizvodnji leka za lečenje neurodegenerativnog ili kognitivnog poremećaja.
[0013] U jednom primeru izvođenja, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u postupku za lečenje neurodegenerativnog ili kognitivnog poremećaja.
[0014] U jednom primeru izvođenja ovaj pronalazak obezbeđuje postupak lečenja neurodegenerativnog ili kognitivnog poremećaja koje obuhvata davanje terapeutski efektivne količine jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli pacijentu kome je do potrebno.
[0015] Dalji primeri izvođenja ovog pronalaska obezbeđeni su odmah u nastavku:
U jednom primeru izvođenja, jedinjenje je formule Ia
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0016] U jednom primeru izvođenja, R<1>je F ili H, naročito F.
[0017] U jednom primeru izvođenja, Ar je opciono supstituisan jednim ili više F, Cl, Br, CN, C1-C3alkila, C1-C3fluoroalkila ili C1-C3alkoksi.
[0018] U jednom primeru izvođenja, Ar je opciono supstituisani fenil.
[0019] U jednom primeru izvođenja, Ar je opciono supstituisani piridil.
[0020] U jednom primeru izvođenja, Ar je opciono supstituisani pirimidil.
[0021] U jednom primeru izvođenja, Ar je opciono supstituisani pirazinil.
[0022] U jednom primeru izvođenja, Ar je opciono supstituisani imidazolil.
[0023] U jednom primeru izvođenja, Ar je opciono supstituisani pirazolil.
[0024] U jednom primeru izvođenja, Ar je opciono supstituisani tiazolil.
[0025] U jednom primeru izvođenja, Ar je opciono supstituisani oksazolil.
[0026] U jednom primeru izvođenja, Ar je opciono supstituisani izoksazolil.
[0027] U jednom primeru izvođenja, jedinjenje je odabrano iz grupe koju čine:
(S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5 -hloropikolinamid
(S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5 -fluoropikolinamid
(S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5 -metoksipirazin-2-karboksamid
(S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-2-metiloksazol-4-karboksamid
(S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-metoksipikolinamid
(S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-(difluorometil)pirazin-2-karboksamid
(S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5 -cijanopikolinamid
(S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-4-metiltiazol-2-karboksamid
(S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5 -metoksipirimidin-2-karboksamid
(S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-metoksi-3-metilpirazin-2-karboksamid
(S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-cijano-3 -metilpikolinamid
(S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-bromopikolinamid
(S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-(metoksid3)pikolinamid
(S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-(metoksid3)pirazin-2-karboksamid
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0028] Odvojeni primer izvođenja usmeren je na farmaceutsku kombinaciju koja obuhvata jedinjenje sa gornjeg spiska i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0029] Još jedan primer usmeren je na postupak lečenja neurodegenerativnog ili kognitivnog poremećaja koje obuhvata davanje terapeutski efektivne količine jedinjenja sa gornjeg spiska.
[0030] Još jedan primer usmeren je na upotrebu jedinjenja sa gornjeg spiska za pripremu leka za lečenje neurodegenerativnog ili kognitivnog poremećaja.
[0031] Jedan primer izvođenja je jedinjenje sa gornjeg spiska za upotrebu u terapiji.
[0032] Još jedan primer usmeren je na jedinjenje sa gornjeg spiska za upotrebu u lečenju neurodegenerativnog ili kognitivnog poremećaja.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0033] Ovaj pronalazak baziran je na otkriću da su jedinjenja formule I inhibitori BACE1, i da su kao takva, veoma korisna u lečenju povezanih poremećaja. Određeni aspekti ovog pronalaska detaljnije su objašnjeni u nastavku, ali taj opis nije namenjen da bude detaljan prikaz svih različitih načina na koje se ovaj pronalazak može primeniti, ili svih karakteristika koje se mogu dodati ovom pronalasku. Tako, sledeća specifikacija namenjena je da prikaže neke primere izvođenja ovog pronalaska, a ne da detaljno navede sve njegove zamene, kombinacije i varijacije.
[0034] Kako se ovde koristi, izraz "C1-C6alkil" odnosi se na ravnolančani ili razgranati zasićeni ugljovodonik sa jednim do šest atoma ugljenika inkluzivno. Primeri C1-C6alkila uključuju, ali se ne ograničavaju na, metil, etil, 1-propil, 2-propil, 1-butil, 2-butil, 2-metil-2-propil, 2-metil-1-propil, n-pentil i n-heksil. Slično, izraz "C1-C3alkil" odnosi se na ravnolančani ili razgranati zasićeni ugljovodonik sa jednim do tri atoma ugljenika inkluzivno. Primeri tavih supstituenata uključuju, ali se ne ograničavaju na, metil, etil i n-propil.
[0035] Nalik tome, izraz "C1-C6alkoksi" odnosi se na ravnolančanu ili razgranatu zasićenu alkoksi grupu sa jednim do šest atoma ugljenika inkluzivno sa otvorenom valencom na kiseoniku. Primeri C1-C6alkoksi uključuju, ali se ne ograničavaju na, metoksi, etoksi, n-butoksi, t-butoksi i n-heksiloksi.
[0036] Kako se ovde koristi, izraz "C1-C6fluoroalkil" odnosi se na ravnolančani ili razgranati zasićeni ugljovodonik sa jednim do šest atoma ugljenika inkluzivno supstituisanim jednim ili više atoma fluora. Primeri C1-C6fluoroalkila uključuju, ali se ne ograničavaju na, trifluorometil, pentafluoroetil, 1 fluoroetil, monofluorometil, difluorometil, 1,2-difluoroetil i 3,4 difluoroheksil. Slično, izraz "C1-C3fluoroalkil" odnosi se na ravnolančani ili razgranati zasićeni ugljovodonik sa jednim do tri atoma ugljenika inkluzivno supstituisanim jednim ili više atoma fluora po atomu ugljenika.
[0037] Izraz "halogen" odnosi se na fluor, hlor, brom i jod.
[0038] Izraz "C2-C6alkenil" odnosi se na razgranatu ili nerazgranatu alkenil grupu sa od dva do šest atoma ugljenika i one double bond, uključujući ali neograničavajući se na etenil, propenil, i butenil. Izraz "C2-C6alkinila" označavaće razgranatu ili nerazgranatu alkinil grupu sa od dva do šest atoma ugljenika i jednom trostrukom vezom, uključujući ali neograničavajući se na etinil, propinil i butinil.
[0039] Kako se ovde koristi, fraza "efektivna količina" kada se primeni na jedinjenje ovog pronalaska, namenjena je da označi neku količinu dovoljnu da izazove neki namenjeni biološki efekat. Fraza "terapeutski efektivna količina" kada se primeni na jedinjenje ovog pronalaska namenjena je da označi neku količinu jedinjenja koja je dovoljna da poboljša, ublaži, stabiliše, preokrene, uspori ili odloži progresiju stanja poremećaja ili bolesti, ili simptoma tog poremećaja ili bolesti. U jednom primeru izvođenja, postupak ovog pronalaska obezbeđuje davanje kombinacija jedinjenja. U tim slučajevima, "efektivna količina" je količina jedinjenja ovog pronalaska u kombinaciji dovoljna da izazove namenjeni biološki efekat.
[0040] Izraz "tretiranje" ili "lečenje" kako se ovde koristi označava poboljšanje ili preokretanje progresije ili težine bolesti ili poremećaja, ili poboljšanje ili preokretanje jednog ili više simptoma ili sporednih efekata takve bolesti ili poremećaja. "Tretiranje" ili "lečenje", kako se ovde koristi, takođe označava inhibiranje ili blokiranje, kao što je u usporavanju, zaustavljanju, zadržavanju, usporavanju ili opstrukciji, progresije sistema, uslova ili stanja bolesti ili poremećaj. U cilju ovog pronalaska, "tretiranje" ili "lečenje" dalje označava pristup za dobijanje dobrobitnih ili željenih kliničkih rzultata, gde "dobrobitni ili željeni klinički rezultati" uključuju, bez ograničavanja, poboljšavanje simptoma, umanjivanje stepena poremećaja ili bolesti, stabilizovanje (tj., ne pogoršavanje) stanja bolesti ili poremećaja, odlaganje ili usporavanja stanja bolesti ili poremećaja, poboljšanje ili ublažavanje stanja bolesti ili poremećaja, i remisija bolesti ili poremećaja, bilo delimičnog ili potpunog.
[0041] Ovaj pronalazak baziran je na otkriću da su jedinjenja formule I inhibitori BACE1, i kao takva, korisna za lečenje poremećaja čije patološke karakteristike obuhvataju β-amiloidne depozite i neurofibrilarna klupka, kao što su neurodegenerativni ili kognitivni poremećaji.
[0042] Očekuje se da su jedinjenja ovog pronalaska, kako je prethodno navedeno, korisna u lečenju Alchajmerove bolesti zbog svojih efekata na β-amiloidne depozite i neurofibrilarna klupka. To uključuje porodičnu Alchajmerovu bolest kod koje pacijenti nose mutacije na specifičnim genima koji su intimno uključeni u proizvodnju Aβ peptida. Međutim, važno je naznačiti da agregati Aβ peptida nisu ograničeni samo na porodičnu Alchajmerovu bolest, već na sličan način predstavljaju značajne patofiziološke karakteristike uobčajenije sporadične Alchajmerove bolesti [Mol Cell Neurosci, 66, 3-11, 2015].
[0043] Takođe se smatra da su jedinjenja ovog pronalaska korisna u lečenju rane faze Alchajmerove bolesti, tj. stanja bolesti u kojima su i biološke i strukturalne promene počele, ali kliničke manifestacije bolesti još uvek nisu postale očigledne ili se još uvek nisu dobro razvile. Rana faza Alchajmerove bolesti zapravo može započeti godinama pre bilo kakve kliničke manifestacije pojavljivanja bolesti. Rana faza Alchajmerove bolesti uključuje prodromalnu Alchajmerovu bolest, prekliničku Alchajmerovu bolest i blago kognitivno oštećenje. Iako blago kognitivno oštećenje ne mora biti povezano sa Alchajmerovom bolešću, često je prelazna faza do Alchajmerove bolest ili je zbog Alchajmerove bolesti. Preklinička i prodromalna Alchajmerova bolest imaju asimptomične faze, i obično se dijagnostikuju prisustvom biomarkera koji su povezani sa Alchajmerovom bolešću. U ovom kontekstu jedinjenja ovog pronalaska smatraju sekorisnim u usporavanju progresije rane faze Alchajmerove bolesti, kao što je blago kognitivno oštećenje do Alchajmerove bolesti. Jedinjenja ovog pronalaska takođe se smatraju korisnim u lečenju gubitka pamćenja, deficita pažnje i demencije povezane sa Alchajmerovom bolešću.
[0044] Druge bolesti, pored nastavljanja na Alchajmerovu bolest, okarakterisane su β-amiloidnim depozitima i neurofibrilarnim klupcima. To uključuje npr. Trisomy 21 takođe poznata kao Daunov sindrom. Pacijenti koji boluju od Daunovog sindroma imaju dodatni hromozom 21 koji hromozom sadrži gen amiloidnog prekursorskog proteina (APP). Dodatni hromozom 21 dovodi do prekomerne ekspresije APP, što dovodi do povišenih nivoa Aβ peptida, što vremenom izaziva značajno povećan rizik od razvijanja Alchajmerove bolesti primećeno kod pacijnata sa Daunovim sindromom Alzheimer’s & Dementia, 11, 700-709, 201]. Cerebralna amiloidna angiopatija je takođe okarakterisana β-amiloidnim depozitima i neurofibrilarnim klupcima u krvnim sudovima centralnog nervnog sistema [Pharmacol Reports, 67, 195-203, 2015] i očekuje se da se kao takva može tretirati jedinjenjima ovog pronalaska.
[0045] U jednom primeru izvođenja, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak lečenja bolesti odabrane od Alchajmerove bolesti (porodična ili sporadična), prekliničke Alchajmerove bolesti, prodromalne Alchajmerove bolesti, blagog kognitivnog oštećenja, Daunovog sindroma i cerebralne amiloidne angiopatije, postupak koji obuhvata davanje of terapeutski efektivne količine jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli pacijentu kome je do potrebno.
[0046] Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje postupak inhibiranja BACE1 kod pacijenta koji obuhvata davanje pacijentu kome je do potrebno terapeutski efektivne količine jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0047] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje postupak inhibiranja β-sekretaza posredovanog cepanja amiloidnog prekursorskog proteina, koji obuhvata davanje pacijentu kome je potrebno takvo tretiranje, terapeutski efektivne količine jedinjenje formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U daljim primera izvođenja, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli za pripremu leka za lečenje bolesti odabrane od Alchajmerove bolesti (porodična ili sporadična), prekliničke Alchajmerove bolesti, prodromalne Alchajmerove bolesti, blagog kognitivnog oštećenja, Daunovog sindroma ili cerebralne amiloidne angiopatije.
[0048] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje upotrebu jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli za pripremu leka za inhibiranje BACE1. Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje upotrebu jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli za pripremu leka za inhibiranje proizvodnje ili akumulacije Aβ peptida.
[0049] U jednom primeru izvođenja, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u postupku za lečenje bolesti odabrane od Alchajmerove bolesti (porodična ili sporadična), prekliničke Alchajmerove bolesti, prodromalne Alchajmerove bolesti, blagog kognitivnog oštećenja, Daunovog sindroma ili cerebralne amiloidne angiopatije.
[0050] U jednom primeru izvođenja, ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenje formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u postupku za inhibiranje BACE1 ili u postupku za inhibiranje proizvodnje ili akumulacije Aβ peptida.
[0051] U daljem primeru izvođenja, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju prilagođenu za bilo koje od pomenutih tretiranja i upotreba.
[0052] U jednom primeru izvođenja, sisar je čovek.
[0053] U jednom primeru izvođenja, pacijent je humani pacijent.
[0054] Ovaj pronalazak takođe obuhvata soli ovih jedinjenja, određenije, farmaceutski prihvatljive soli. Takv soli uključuju farmaceutski prihvatljive kisele adicione soli. Kisele adicione soli uključuju soli neorganskih kiselina kao i organskih kiselina.
[0055] Reprezentativni primeri pogodnih neorganskih kiselina uključuju hlorovodoničnu, bromovodoničnu, jodovodoničnu, fosfornu, sumpornu, sulfaminsku, azotnu kiselinu i slično.
Reprezentativni primeri pogodnih organskih kiselina uključuju mravlju, sirćetnu, trihlorosirćetnu, trifluorosirćetnu, propionsku, benzojevu, cimetnu, limunsku, fumarnu, glikolnu, itakonsku, mlečnu, metansulfonsku, maleinsku, jabučnu, malonsku, mandelinsku, oksalnu, pikrinsku, piruvinsku, salicilnu, ćilibarnu, metan sulfonsku, etansulfonsku, tartarnu, askorbinsku, pamoičnu, bizmetilen salicilnu, etandisulfonsku, glukonsku, citrakonsku, aspartičnu, stearinsku, palmitinska, EDTA, glikolnu, paminobenzojevu, glutaminsku, benzensulfonsku, p-toluensulfonsku kiselinu, teofilinsku sirćetnu kiselinu, kao i 8-haloteofiline (na primer, 8-bromoteofilin i slično). Dalji primeri farmaceutski prihvatljivih neorganskih ili organskih kiselih adicionih soli uključuju farmaceutski prihvatljive soli navedene u S. M. Berge, et al., J. Pharm. Sci., 1977, 66, 2.
[0056] Dalje, jedinjenja prema ovom pronalasku mogu da postoje u svojim nesolvatizovanim kao i u solvatizovanim oblicima sa farmaceutski prihvatljivim rastvaračima kao što su voda, etanol i slično.
1
[0057] Jedinjenja ovog pronalaska mogu imati jedan ili više asimetričnih centara, i namenjeno je su bilo koji optički izomeri (tj. enantiomeri ili diastereomeri), kao odvojeni, čisti ili delimično prečišćeni optički izomeri i bilo koja njihova mešavina uključujući racemske mešavine, tj. mešavine stereoizomera, uključeni u obim ovog pronalaska.
[0058] U ovom kontekstu podrazumeva se da kada se navode enantiomerni oblici, misli se na jedinjenje u enantiomernom višku, npr. suštinski u čistom obliku. Shodno tome, jedan primer izvođenja ovog pronalaska odnosi se na jedinjenje ovog pronalaska sa enantiomernim viškom od najmanje 60%, najmanje 70%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 96%, poželjno najmanje 98%.
[0059] Racemski oblici mogu se rastvoriti u optičke antipode poznatim postupcima, na primer, odvajanjem njihovih diastereomernih soli optički aktivnom kiselinom, i oslobađanjem optički aktivnog amin jedinjenja tretiranjem sa bazom. Razdvajanje takvih diastereomernih soli može se postići, npr. frakcionom kristalizacijom. Optički aktivne kiseline pogodne za ovu svrhu mogu da uključuju, ali se ne ograničavaju na d- ili 1- tartarnu, mandelinsku ili kamforsulfonsku kiselinu. Još jedan postupak rastvaranje racemata u optičke antipode, baziran je na hromatografiji na optički aktivnoj matrici.
Jedinjenja ovog pronalaska mogu takođe da se rastvore formiranjem i hromatografskim razdvajanjem diastereomernih derivata hiralnih derivatizujućih reagenasa, kao što su, hiralni alkilirajući ili acilirajući regensi, praćeno cepanjm hiralnog pomoćnog sredstva. Bilo koji od pomenutih postupaka može se primeniti bilo za rastvaranje optičkih antipoda jedinjenja ovog pronalaska samih po sebi ili za rastvaranje optičkih antipoda sintetičkih intermedijera, koji se zatim mogu konvertovati postupcima ovde opisanim u optički rastvorene finalne proizvode koji su jedinjenja ovog pronalaska.
[0060] Dodatni postupci za rastvaranje optičkih izomera, poznati stručnjaku iz ove oblasti, mogu se koristiti. Takvi postupci uključuju one opisane u J. Jaques, A. Collet i S. Wilen in Enantiomers, Racemates, i Resolutions, John Wiley i Sons, New York, 1981. Optički aktivna jedinjenja takođe se mogu pripremiti optički aktivnih početnih materijala.
[0061] Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje farmaceutsku kombinaciju koja obuhvata terapeutski efektivne količine jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i farmaceutski prihvatljiv nosač. Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsku kombinaciju koja obuhvata terapeutski efektivne količine jednog od specifičnih jedinjenja opisanih u Eksperimentalnom delu i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0062] Jedinjenja ovog pronalaska mogu e davati sama ili u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačima ili ekscipijensima, bilo u jednoj ili više doza. Farmaceutske kombinacije prema ovom pronalasku mogu se formulisati sa farmaceutski prihvatljivim nosačima ili razblaživačima kao i bilo kojim drugim poznatim adjuvansima i ekspcipijesima u skladu sa uobičajenim tehnikama kao što su one opisane u Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22th Edition, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 2013.
[0063] Farmaceutske kombinacije za oralno davanje uključuju čvrste dozne oblike kao što su kapsule, tablete, dražeje, pilule, lozenge, praškovi i granule. Gde je pogodno, kombinacije se mogu pripremiti sa premazima kao što su enterični premazi ili mogu biti formulisane da obezbede kontrolisano oslobađanje aktivnog sastojka kao što je održano ili produženo oslobađanje u skladu sa postupcima dobro poznatim u struci. Tečni dozni oblici za oralno davanje uključuju rastvore, emulzije, suspenzije, sirupe i eliksire. Farmaceutske kombinacije za parenteralno davanje uključuju sterilne vodeni i nevodene injektabilne rastvore, disperzije, suspenzije ili emulzije kao i sterilne praškove koji se rekonstituišu u sterilnim injektabilnim rastvorima ili disperzijama pre upotrebe. Drugi pogodni oblici davanja uključuju, ali se ne ograničavaju na, supozitorije, sprejeve, masti, kreme, gelove, inhalante, dermalne flastere i implante.
[0064] Tipični oralni dozni opsezi su od oko 0.01 do oko 100 mg/kg telesne mase na dan.
[0065] Jedinjenja prema ovom pronalasku generalno se upotrebljavaju kao slobodne baze ili kao njihove farmaceutski prihvatljiva so. Farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja formule I priprema se npr. na konvencionalni način tretiranjem rastvora ili suspenzije slobodne baze formule I molarnim ekvivalentom farmaceutski prihvatljive kiseline. Reprezentativni primeri pogodnih organski i neorganski kiselina prethodno su opisani.
[0066] Pogodni farmaceutski nosači uključuju inertne čvrste razblaživače ili punioce, sterilne vodene rastvore i razne organske rastvarače. Primeri čvrstih nosača uključuju laktozu, terra alba-u, saharozu, ciklodekstrin, talk, želatin, agar, pektin, akaciju, magnezijum stearat, stearinsku kiselinu i niže alkil etre celuloze. Primeri tečnih nosača uključuju, ali se ne ograničavaju na, sirupe, ulje kikirikija, maslinovo ulje, fosfolipide, masne kiseline, amine masnih kiselina, polioksietilen i vodu. Slično, nosač ili razblaživač može da uključi bilo koji materijal za održano oslobađanje koji je poznat u struci, kao što su gliceril monostearat ili gliceril distearat, sam ili umešan sa voskom. Farmaceutske kombinacije obrazovane kombinovanjem jedinjenja formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i farmaceutski prihvatljivog nosača lako se daju u raznim doznim oblicima pogodnim za opisane putanje davanja. Formulacije mogu se pogodno pripremiti u jediničnom doznom obliku postupcima poznatim u farmaciji.
[0067] Ukoliko se koristi čvrst nosač za oralno davanje, pripravak se može tabletirati, smestiti u čvrstu želatinastu kapsulu u obliku praha ili peleta ili može biti u obliku dražeje ili lozenge. Količina čvrstog nosača široko varira od oko 25 mg do oko 1 g po doznoj jedinici. Ukoliko se koristi tečni nosač, pripravak može biti u obliku sirupa, emulzije, meke želatinaste kapsule ili sterilne injektabilne tečnosti kao što su vodena ili ne-vodena tečna suspenzija ili rastvor.
EKSPERIMENTALNI DEO
[0068] Jedinjenja ovog pronalaska opšte formule I, gde su R<1>i Ar prethodno definisani i mogu se pripremiti postupcima podvučenim u sledećim reakcionim šemama 1-4 i u primerima. U opisanim postupcima, moguće je upotrebiti varijantu i modifikacije, koje su same po sebi poznate hemičaru iz ove oblasti ili su očigledne stručnjaku u ovoj oblasti. Dalje, drugi postupci za pripremanje jedinjenja ovog pronalaska biće očigledni stručnjaku iz ove oblasti u smislu sledećih reakcionih šema i primera.
[0069] Na primer, Šema 2 opisuje upotrebu selektivnih zaštitinih grupa tokom sinteze jedinjenja ovog pronalaska. Stručnjak iz ove oblasti može da odabere pogodnu zaštitnu grupu za određenu reakciju. Štaviše, može biti potrebno da se uključe strategije stavljanja i skidanja zaštite za supstituente kao što su amino, amido, keto i hidroksil grupe u postupcima sinteze opisani ispod radi sintetizovanja jedinjenja formule I. Postupci za stavljanje i skidanje zaštite takvih grupa dobro su poznati u struci, i mogu se naći u T. Green, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 1991, 2nd Edition, John Wiley & Sons, New York.
[0070] Za jedinjenja, koja mogu da postoje kao mešavina ili ekvilibrijum između dva ili više tautomera, samo jedan tautomer je predstavljen u šemama, iako on ne mora biti najstabilniji tautomer. Za jedinjenja, koja mogu da postoje u enantiomernim, stereoizomernim ili geometrijski izomernim oblicima njihova geometrijska konfikuracija je specifičnoirana; drugačije, ta struktura predstavlja mešavinu stereoizomera.
[0071] Analitički LC-MS podaci dobijeni su upotrebom sledećih postupaka.
Metoda A:
[0072] LC-MS izvedena je na Waters Aquity UPLC-MS koji se sastoji od Waters Aquity uključujući upravljač kolone, upravljač binarnog rastvarača, organizator uzoraka, PDA detektor (koji radi na 254 nM), ELS detektor, i SQ-MS opremljen sa APPI-izvorom koji radi na pozitivni jonski način.
1
[0073] LC-uslovi: Kolona je Acquity UPLC BEH C181.7µm; 2.1x150mm koja radi na 60°C sa 0.6 ml/minuta binarnog gradijenta koji se sastoji od voda 0.05 % trifluorosirćetna kiselina (A) i acetonitril 5% voda 0.03 % trifluorosirćetna kiselina (B). Gradijent: 0.00 min: 10% B; 3.00 min: 99.9% B; 3.01 min: 10% B; 3.60 min: 10% B. Ukupno vreme rada: 3.60 min.
Metoda B:
[0074] LC-MS izvedena je na Waters Acquity UPLC-MS koji se sastoji od Waters Acquity uključujući upravljač kolone, upravljač binarnog rastvarača, organizator uzoraka, PDA detektor (koji radi na 254 nm), ELS detektor, i TQ-MS opremljen sa APPI-izvorom koji radi na pozitivni jonski način.
[0075] LC-uslovi: Kolona je Acquity UPLC BEH C181.7µm; 2.1x50mm koja radi na 60°C sa 1.2 ml/minuta binarnog gradijenta koji se sastoji od voda 0.05 % trifluorosirćetna kiselina (A) i acetonitril 5% voda 0.05 % trifluorosirćetna kiselina (B). Gradijent: 0.00 min: 10% B; 1.00 min: 100% B; 1.01 min: 10% B; 1.15 min: 10% B. Ukupno vreme rada: 1.15 min.
[0076]<1>H NMR spektri beleženi su na 600 MHz na Bruker Avance AV-III-600 instrumentu ili na 400 MHz na Bruker Avance AV-III-400 instrumentu ili Varian 400 instrumentu. Vrednosti hemijskog pomeranja izražene su kao relativne ppm-vrednosti. Sledeće skraćenice koriste se za višestrukost NMR signala: s = singlet, d = dublet, t = triplet, q = kvartet, dd = dvostruki dublet, ddd = dvostruko dvostruki dublet, dt = dvostruki triplet, br = širok, i m = multiplet.
[0077] Kao primer i gde R<1>je fluor u orto položaju fenilnog prstena, jedinjenja opšte formule IV mogu se pripremiti kako je prikazano u Šemi 1.
gde R<1>je kao što je definisano pod formulom I, a R je alkil grupa kao što su metil ili etil.
Jedinjenja opšte formule IV (Šema 1) mogu se pripremiti reagovanjem jedinjenja opšte formule II sa halogen-metal izmenjivačkim reagensom kao što su butillitijum praćeno dodavanje u estar opšte formule III.
[0078] Kao primer i gde R<1>je fluor u orto položaju fenilnog prstena, jedinjenje opšte formule XVI može se pripremiti kako je prikazano u Šemi 2.
gde R<2>i R<3>su alkil grupa kao što su metil ili etil.
[0079] Jedinjenja opšte formule VII (Šema 2) može se pripremiti reagovanjem jedinjenja opšte formule IV sa sulfinamidom kao što je VI u prisustvu Lewis-ove kiseline/ agensa sušenja kao što su titanijum tetraetoksid. Tretiranje jedinjenja opšte formule VII sa jedinjenjem opšte formule VIII kao što su etil bromodifluoroacetat u prisustvu Zn praha ili u prisustvu dietil cinka i tris(trifenilfosfine)rodijum(I) hlorida daje jedinjenja opšte formule IX. Jedinjenja opšte formule X dobijaju se od jedinjenja opšte formule IX tretiranjem redukujućim agensom kao što su diizobutilaluminijum hidrid. U nekim slučajevima jedinjenje X može biti u ekvilibrijumu sa hidratnim oblikom. Tretiranje jedinjenja opšte formule X sa uslovima kao što su metil 2-(dimetoksifosforil)-acetat u prisustvu litijum hlorid i baze kao kao što su N,N-diizopropiletilamin daje jedinjenja opšte formule XI. Jedinjenja opšte formule XII dobijaju se hidrogenacijom jedinjenja opšte formule XI u prisustvu katalizatora kao što su paladijum na ugljeniku. Jedinjenja opšte formule XIII dobijaju se tretiranjem jedinjenja opšte formule XII sa kiselinom kao što su hlorovodonična kiselina u metanolu praćeno tretiranjem sa kalijum karbonatom u metanolu ili zagrevanjem u rastvaraču kao što je toluen. Jedinjenja opšte formule XIII mogu biti nitrirana upotrebom azotne kiseline da bi se dobila jedinjenja opšte formule XIV. Tretiranje jedinjenja opšte formule XIV reagensom kao što su Lawesson-ov reagens (2,4-bis(4-metoksifenil)-1,3,2,4-ditiadifosfetan-2,4-disulfid)
1
daje jedinjenja opšte formule XV. Redukcija nitro grupe jedinjenja opšte formule XV daje jedinjenja opšte formule XVI.
[0080] Jedinjenja opšte formule XIV mogu se takođe pripremiti kako je prikazano u Šemi 3. Počevši od nitro supstituisanih acetofenona opšte formule IVb, jedinjenja opšte formule XIb mogu se pripremiti kako je opisano u Šemi 2 Jedinjenja opšte formule XIIb dobijaju se hidrogenacijom jedinjenja opšte formule XIb u prisustvu katalizatora kao što su paladijum na ugljeniku. Jedinjenja opšte formule XIV mogu se pripremiti kako je opisano u Šemi 2 za pripremanje jedinjenja opšte formule XIII od jedinjenja opšte formule XII. Zaštita anilin ostatka jedinjenja opšte formule XIV daje jedinjenja opšte formule XIVb. Tretiranje jedinjenja opšte formule XIVb sa reagensom kao što sje Lawesson-ov reagens (2,4-bis(4-metoksifenil)-1,3,2,4-ditiadifosfetan-2,4-disulfid) praćeno deprotekcijom anilin ostatka daje jedinjenja opšte formule XVI.
gde je R<1>kao što je definisano pod formulom I, a R<3>je alkil grupa kao što su metil ili etil
Jedinjenja opšte formule I mogu se pripremiti kako je prikazano u Šemi 4.
gde su R<1>i Ar kao što je definisano pod formulom I.
Jedinjenja opšte formule XIX mogu se pripremiti reagovanjem jedinjenja opšte formule XVI sa hloridom karboksilne kiseline opšte formule XVII ili reagovanjem sa karboksilnom kiselinom opšte formule XVIII upotrebom procedura poznatih hemičarima iz ove oblasti. Tretiranje jedinjenja opšte formule XIX sa amonijakom daje jedinjenja opšte formule I. U nekim slučajevima, dodavanje oksidirajućeg reagensa kao što su tert-butil hidroperoksid može biti potrebno radi omogućavanja reakcije.
1
PRIPREMANJE INTERMEDIJERA
INTERMEDIJER: 2,2-difluoro-1-(2-fluorofenil)etan-1-on
[0081]
[0082] U rastvor 1-bromo-2-fluorobenzena (10.00 g, 57.14 mmol) u THF (200 mL) dodat je n-butillitijum (2.5 M, 24.00 mL) ukapavanjem na -78°C tokom 15 minuta pod N2. Mešavina je mešana na -78°C tokom 30 min. Etil 2,2-difluoroacetat (10.64 g, 85.71 mmol) dodat je ukapavanjem na -78°C i mešan tokom 2 sata na -78°C. TLC pokazuje da nema preostalog početnog materijala. Zasićeni vodeni NH4Cl (15mL) dodat je ukapavanjem na -78°C. Reakciona mešavina je zagrejana na 25°C, ekstraktovana etil acetatom (100 mL, tri puta). Kombinovane organske faze oprane su slanim rastvorom (30 mL), osušene preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirane i koncentrovane u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni na silika gelu (petrolej etar: etil acetat = 95:5) da bi se dobio 2,2-difluoro-1-(2-fluorofenil)etan-1-on (5.60 g, 47.8% prinos, 85% čistoća).<1>H NMR (CDCl3, 400MHz): δ 7.99-7.95 (m, 1H), 7.70 - 7.64 (m, 1H), 7.33 (t, J=7.6 Hz 2H), 7.24 (dd, J=10.8, 8.4 Hz, 1H), 6.59-6.32 (m, 1H).
INTERMEDIJER: (R)-N-(2,2-difluoro-1-(2-fluorofenil)etiliden)-2-metilpropan-2-sulfinamid
[0083]
[0084] U rastvor 2,2-difluoro-1-(2-fluorofenil)etan-1-ona (5.60 g, 32.16 mmol) i (R)-2-metilpropan-2-sulfinamida (5.07 g, 41.81 mmol) u THF (110 mL), dodat je tetraetoksititanijum (14.67 g, 64.32 mmol) u jednoj porciji na 26°C. Žuti rastvor je mešan na 80°C tokom 2.5 h. TLC (petrolej etar: etil acetat=3:1) pokazuje da nema preostalog početnog materijala. Mešavina je ohlađena na 26°C. Voda (10 mL) je dodata mešavini, a ona je filtrirana i ekstraktovana etil acetatom (60 mL, tri puta). Organski sloj opran je slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan , a zatim prečišćen hromatografijom na koloni na silika gelu (petrolej etar: etil acetat=91:9) da bi se dobio (R)-N-2,2-difluoro-1-(2-fluorofenil)etiliden)-2-metilpropan-2-sulfinamid (5.60 g, 61.6% prinos, 98.1% čistoća).
INTERMEDIJER: etil (S)-3-(((R)-tert-butilsulfinil)amino)-2,2,4,4-tetrafluoro-3-(2-fluorofenil)butanoat
1
[0086] U rastvor (R)-N-(2,2-difluoro-1-(2-fluorofenil)etiliden)-2-metilpropan-2-sulfinamida (4.60 g, 16.6 mmol), etil 2-bromo-2,2-difluoro-acetat (6.73 g, 33.18 mmol) i Rh(PPh3)3Cl (469 mg, 498 µmol) u THF (90 mL) dodat je rastvor dietil cinka (1 M u THF, 33 mL) ukapavanjem na - 78°C tokom 20 minuta pod Ar, tokom kojeg je temperatura održavana na -65°C. Reakciona mešavina je zagrejana na 0°C tokom 10 minuta i mešana na 0°C tokom 2 sat. TLC (petrolej etar/etil acetat=3:1) pokazuje da je početni materijal u potpunosti potrošen. Tamno crveni rastvor ugašen je vodom (40 mL) , a zatim filtriran. Filtrat je ekstraktovan etil acetatom (100 mL, dvaputa). Kombinovane organske faze oprane su zasićenim slanim rastvorom (30 mL), osušene preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirane i koncentrovane u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni na silika gelu (petrolej etar/etil acetat=4:1) da bi se dobio etil (S)-3-(((R)-tert-butilsulfinil)amino)-2,2,4,4-tetrafluoro-3-(2-fluorofenil)butanoat (4.26 g, 62.1% prinos).<1>H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 7.65 - 7.31 (m, 1H), 7.49 - 7.44 (m, 1H), 7.23 - 7.12 (m, 2H), 6.93 - 6.66 (m, 1H), 5.00 (s, 1H), 4.39 - 4.29 (m, 2H), 1.39 (s, 9H), 1.32 (t, J=8.0 Hz, 3H).
INTERMEDIJER: (R)-2-metil-N-((S)-1,1,3,3-tetrafluoro-2-(2-fluorofenil)-4-oksobutan-2-il)-propan-2-sulfinamid
[0087]
[0088] U rastvor etil (S)-3-(((R)-tert-butilsulfinil)amino)-2,2,4,4-tetrafluoro-3-(2-fluorofenil)-butanoata (3.20 g, 7.97 mmol) u suvom THF (35 mL) dodat je ukapavanjem rastvor DIBAL-H (diizobutilaluminijum hidrid) u toluenu (1.0 M, 16 mL, 16 mmol) na -78°C pod N2. Mešavina je mešana na -78°C tokom 2 sata. Reakcija je ugašena pažljivo metanolom (3 mL) na -78°C. Voda (20 mL) i etil acetat (200 mL) zatim su dodati i mešavina je zagrejana na 25°C. Mešavina ostarena tokom 30 minuta. Dobijena mešavina filtrirana je kroz Celitni filter. Organski sloj opran je slanim rastvorom i osušen preko Na2SO4. Organski sloj je koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod (R)-2-metil-N-((S)-1,1,3,3-tetrafluoro-2-(2-fluorofenil)-
1
4-oksobutan-2-il)propan-2-sulfinamid, koji je upotrebljen odmah u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
INTERMEDIJER: etil (S)-5-(((R)-tert-butilsulfinil)amino)-4,4,6,6-tetrafluoro-5-(2-fluorofenil)-heks-2-enoat
[0089]
[0090] U umešanu suspenziju LiCl (405 mg, 9.56 mmol) u acetonitrilu (30 mL) pod N2su dodati etil 2-dietoksifosforilacetat (2.14 g, 9.56 mmol) i DIPEA (N,N-diizopropiletilamin) (2.06 g, 15.94 mmol) na 0°C. Nakon 20 min, (R)-2-metil-N-((S)-1,1,3,3-tetrafluoro-2-(2-fluorofenil)-4-okso-butan-2-il)propan-2-sulfinamid (2.85 g, 7.97 mmol) u acetonitrilu (10 mL) dodat je ukapavanjem mešavini na 0°C i mešavina je mešana na 25°C tokom 17.5 sati. Reakciona mešavina je koncentrovana kako bi se uklonio acetonitril, voda (50 ml) je dodata i ekstraktovana etil acetatom (200 ml). Organski sloj osušen je i uparen. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (petrolejum etar: etil acetat = 5:1 do 4:1) da bi se dobio etil (S)-5-(((R)-tert-butilsulfinil)amino)-4,4,6,6-tetrafluoro-5-(2-fluorofenil)heks-2-enoat (1.77 g, 46.8% prinos).
INTERMEDIJER: etil (S)-5-(((R)-tert-butilsulfinil)amino)-4,4,6,6-tetrafluoro-5-(2-fluorofenil)-heksanoat [0091]
[0092] U rastvor etil (S)-5-(((R)-tert-butilsulfinil)amino)-4,4,6,6-tetrafluoro-5-(2-fluorofenil)heks-2-enoat (1.77 g, 4.28 mmol) u etil acetatu (100 mL) dodat je Pd/C (400 mg, 10%). Crna suspenzija je mešana na 25°C tokom 18 sati pod 45-50 psi H2. Filtrirana je i koncentrovana da bi se dobio etil (S)-5-(((R)-tertbutilsulfinil)amino)-4,4,6,6-tetrafluoro-5-(2-fluorofenil)heksanoat (1.70 g, 95.5% prinos) koji je upotrebljen u sledećoj fazi odmah bez daljeg prečišćavanja.
INTERMEDIJER: (S)-6-(difluorometil)-5,5-difluoro-6-(2-fluorofenil)piperidin-2-on
1
[0094] U rastvor etil (S)-5-(((R)-tert-butilsulfinil)amino)-4,4,6,6-tetrafluoro-5-(2-fluorofenil)-heksanoata (1.70 g, 4.09 mmol) u dihlorometanu (15 mL) dodat je HCl/MeOH (4 M, 17 mL). Bezbojan rastvor je mešan na 25°C tokom 1 sata. TLC analiza pokazuje da nema preostalog početnog materijala. Mešavina je koncentrovana, a ostatak je rastvoren u toluenu. Dobijena mešavina je koncentrovana ponovo da bi se dobilo 1.5 g bezbojnog ulja. Ovo ulje rastvoreno je u toluenu (30 mL) i mešano na 100°C tokom 18 sati. Kada je mešavina ohlađena na 25°C, koncentrovana je da bi se dobio sirovi proizvod koji je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (petrolej etar:etil acetat = 2:1) da bi se dobio (S)-6-(difluorometil)-5,5-difluoro-6-(2-fluorofenil)piperidin-2-on (880 mg, 3.15 mmol, 73% prinos).
INTERMEDIJER: (S)-6-(difluorometil)-5,5-difluoro-6-(2-fluoro-5-nitrofenil)piperidin-2-on
[0095]
[0096] (S)-6-(difluorometil)-5,5-difluoro-6-(2-fluorofenil)piperidin-2-on (880 mg, 3.15 mmol) suspendovan je u trifluorosirćetnoj kiselini (2.55 mL). Mešavina je ohlađena na 0°C i dodata je koncentrovana H2SO4(2.46 g, 24.3 mmol). Zatim, HNO3(661.61 mg, 6.30 mmol) dodat je ukapavanjem. Nakon 2 sata mešanja na 25 °C, reakciona mešavina usuta je u 100 g leda i bazifikovana do pH > 11 upotrebom 5 M NaOH (aq). Suspenzija je ekstraktovana etil acetatom (150 mL). Faze su odvojene, a vodeni sloj je ekstraktovan etil acetatom (2 x 70 mL). Kombinovane organske faze oprane su rastvorom zasićenog vodenog NH4Cl (30 mL) i vodom (30 mL), osušene preko MgSO4, filtrirane, i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio (S)-6-(difluorometil)-5,5-difluoro-6-(2-fluoro-5-nitrofenil)piperidin-2-on (1.00 g, sirov).
INTERMEDIJER: (S)-6-(difluorometil)-5,5-difluoro-6-(2-fluoro-5-nitrofenil)piperidin-2-tion
2
[0098] U rastvor (S)-6-(difluorometil)-5,5-difluoro-6-(2-fluoro-5-nitrofenil)piperidin-2-ona (1.00 g, 3.08 mmol) u toluenu (5 mL) dodat je Lawesson-ov reagens (2,4-bis(4-metoksifenil)-1,3,2,4-ditiadifosfetan-2,4-disulfid) (686 mg, 1.70 mmol). Mešavina je mešana na 100°C tokom 2 sata. TLC analiza pokazuje da nema preostalog početnog materijala. Mešavina je koncentrovana i sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (petrolej etar:etil acetat = 5:1) da bi se dobio (S)-6-(difluorometil)-5,5-difluoro-6-(2-fluoro-5-nitrofenil)piperidin-2-tion (1.00 g, 2.94 mmol, 95.4% prinos).
INTERMEDIJER: (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tion
[0099]
[0100] U suspenziju (S)-6-(difluorometil)-5,5-difluoro-6-(2-fluoro-5-nitrofenil)piperidin-2-tiona (1.00 g, 2.94 mmol) u etanolu (15 mL) i vodi (4 mL) dodat je prah železa (821 mg, 145 mmol) i NH4Cl (786 mg, 14.7 mmol, 5.0 Eq). Crna mešavina je mešana na 60°C tokom 18 sati. Nakon što reakciona mešavina ohlađena na 25 °C, sirovi proizvod je filtriran, a ostatak opran etanolom (100 mL). Kombinovani filtrati koncentrovani su, a dobijena čvrsta materija dispergovana u etil acetatu (100 mL). Mešavina je filtrirana, a filtrat opran vodom (30 mL), slanim rastvorom (20 mL) i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silicijum dioksidu (petrolej etar:etil acetat=3:1∼2:1) da bi se dobio (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tion (819 mg, 2.51 mmol, 85.3% prinos).<1>H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 10.97 (s, 1H), 7.03 - 6.90 (m, 2H), 6.64 - 6.55 (m, 2H), 5.19 (s, 2H), 3.19 - 3.15 (m, 1H), 3.03 - 2.94 (m, 1H), 2.35 - 2.24 (m, 2H).
INTERMEDIJER: metil-d3-5-(metoksi-d3)pirazin-2-karboksilat
[0101]
[0102] Natrijum (0.094 g, 4.10 mmol) je dodat u malim porcijama metanolu-d4(2.94 ml) i reakciona mešavina je mešana dok sav natrijum nije ureagovan. Rastvor je dodat u još jedan rastvor metil-5-hloropirazin-2-karboksilata (0.6 g, 3.48 mmol) u metanol-d4(0.98 ml). Reakciona mešavina je mešana tokom 1.5 sata na sobnoj temperaturi. Reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu. Dodato je 2 ml vode. Mešavina je ekstraktovana etil acetatom. Organska faza oprana je slanim rastvorom, osušena preko MgSO4i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio metil-d3-5-(metoksi-d3)pirazin-2-karboksilat.
INTERMEDIJER: metil 5-(metoksi-d3)pikolinat
[0103]
[0104] Metil 5-hidroksipikolinat (2.88 g, 18.8 mmol) je rastvoren u dimetilformamidu (108 ml) pod argonom. Kalijum karbonat (7.20 g, 52.1 mmol) dodat je, a narandžasta suspenzija je mešana tokom 45 minuta na sobnoj temperaturi. Jodometan-d3(1.41 ml, 22.6 mmol) je dodat. Reakciona mešavina je mešana tokom 2 sata. Vodaa je dodata. Mešavina je ekstraktovana etil acetatom. Organska faza oprana je slanim rastvorom, osušena preko MgSO4i koncentrovana u vakuumu i prečišćena hromatografijom na koloni na silika gelu (heptan: etil acetat) da bi se dobio metil 5-(metoksi-d3)pikolinat.
PRIPREMANJE JEDINJENJA OVOG PRONALASKA
Primer 1 (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-hloropikolinamid (jedinjenje 1)
[0105]
[0106] 5-hloropikolinska kiselina (19 mg, 0.12 mmol) i HATU (1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat) (67.4 mg, 0.177 mmol) je rastvoren DMF (1 mL). Reakciona mešavina je mešana tokom 5 minuta. Zatim (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tion (25mg, 0.081 mmol) i DIPEA (N,N-di-izopropil etilamin) (52 mg, 0.07 ml, 0.4 mmol) su dodati. Reakciona mešavina je mešana tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Zasićena vodena NH4Cl dodata je i mešavina je ekstraktovana etil acetatom. Kombinovane organske faze oprane su slanim rastvorom, osušene preko MgSO4, filtrirane, i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Amonijak u metanolu (7M, 2mL) dodat je i reakciona mešavina je mešana na 55°C u zatvorenoj bočici preko noći. Reakciona mešavina je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silicijum dioksidu (heptane:etil acetat). Proizvod je rastvoren u etil acetatu i opran 5 puta zasićenom vodenom NaHCO3/voda kako bi se uklonili nuproizvodi tiouree. Kombinovane organske faze oprane su slanim rastvorom, osušene preko MgSO4, filtrirane, i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-hloropikolinamid.<1>H NMR (DMSO-d6, 600MHz): δ 10.78 (s, 1H), 8.79 (dt, J = 2.4, 1.1 Hz, 1H), 8.20 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz,
1H), 8.16 (dd, J = 8.4, 0.7 Hz, 1H), 7.96 - 7.90 (m, 1H), 7.88 (dd, J = 6.8, 2.7 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 11.6, 8.8 Hz, 1H), 6.74 (t, J = 55.2 Hz, 1H), 6.38 (s, 2H), 2.51 (dt, J = 3.7, 1.8 Hz, 2H), 2.19 - 1.98 (m, 2H).
LC-MS (m/z) 433 (MH<+>); tR= 0.53 minuta (Metoda A)
Primer 2 (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-fluoropikolinamid (jedinjenje 2)
[0107]
[0108] Pripremljen kao u primeru 1 od (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tiona i 5-fluoropikolinske kiseline.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.72 (s, 1H), 8.74 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.24 (dd, J = 8.7, 4.6 Hz, 1H), 7.99 (td, J = 8.7, 2.8 Hz, 1H), 7.95 -7.91 (m, 1H), 7.88 (dd, J = 6.8, 2.7 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 11.6, 8.8 Hz, 1H), 6.74 (t, J = 55.2 Hz, 1H), 6.38 (s, 2H), 2.56 - 2.50 (m, 2H), 2.22 - 1.98 (m, 2H).
LC-MS (m/z) 417.1 (MH<+>); tR= 0.49 minuta (Metoda A)
Primer 3 (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-metoksipirazin-2-karboksamid (jedinjenje 3)
2
[0110] Pripremljen kao u primeru 1 od (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tiona i 5-metoksipirazin-2-karboksilne kiseline.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.61 (s, 1H), 8.89 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.42 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.90 (m, 2H), 7.20 (dd, J = 11.6, 8.9 Hz, 1H), 6.86 - 6.62 (m, 1H), 6.37 (s, 2H), 4.02 (s, 3H), 2.56 - 2.50 (m, 2H), 2.19 -1.96 (m, 2H).
LC-MS (m/z) 430.1 (MH<+>); tR= 0.48 minuta (Metoda A)
Primer 4 (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-2-metiloksazol-4-karboksamid (jedinjenje 4)
[0111]
[0112] Pripremljen kao u primeru 1 od (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tiona i 2-metiloksazol-4-karboksilne kiseline.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.25 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 7.82 (m, 2H), 7.16 (dd, J = 11.6, 8.7 Hz, 1H), 6.73 (t, J = 55.2 Hz, 1H), 6.36 (s, 2H), 3.01 (s, 1H), 2.59 - 2.41 (m, 5H), 2.19 - 1.96 (m, 2H).
LC-MS (m/z) 403 (MH<+>); tR= 0.42 minuta (Metoda A)
Primer 5 (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-metoksipikolinamid (jedinjenje 5)
[0114] Pripremljen kao u primeru 1 od (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tiona i 5-metoksipikolinska kiselina.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.55 (s, 1H), 8.40 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.94 - 7.90 (m, 1H), 7.84 (dd, J = 6.7, 2.7 Hz, 1H), 7.62 (dd, J = 8.7, 2.9 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 11.6, 8.8 Hz, 1H), 6.85 - 6.61 (m, 1H), 6.36 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 2.55 - 2.47 (m, 2H), 2.17 - 2.00 (m, 2H).
LC-MS (m/z) 429.1 (MH<+>); tR= 0.5 minuta (Metoda A)
Primer 6 (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-(difluorometil)pirazin-2-karboksamid (jedinjenje 6)
[0115]
[0116] Pripremljen kao u primeru 1 od (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tiona i 5-difluorometil)pirazin-2-karboksilne kiseline.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO) δ 11.02 (s, 1H), 9.40 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 9.10 (s, 1H), 7.96 - 7.91 (m, 2H), 7.38 -7.17 (m, 2H), 6.75 (t, J = 55.1 Hz, 1H), 6.38 (s, 2H), 2.56 - 2.50 (m, 2H), 2.20 - 1.98 (m, 2H).
LC-MS (m/z) 450.1 (MH<+>); tR= 0.48 minuta (Metoda A)
Primer 7 (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-cijanopikolinamid (jedinjenje 7)
2
[0118] Pripremljen kao u primeru 1 od (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tiona i 5-cijanopikolinske kiseline.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.94 (s, 1H), 9.21 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.59 (dd, J = 8.2, 1.9 Hz, 1H), 8.29 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.96 - 7.88 (m, 2H), 7.22 (dd, J = 11.5, 8.8 Hz, 1H), 6.74 (t, J = 55.0 Hz, 1H), 6.37 (s, 2H), 2.57 - 2.48 (m, 2H), 2.07 (m, 2H).
LC-MS (m/z) 424.5 (MH<+>); tR= 0.45 minuta (Metoda B)
Primer 8 (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-4-metiltiazol-2-karboksamid (jedinjenje 8)
[0119]
[0120] Pripremljen kao u primeru 1 od (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tiona i 4-metiltiazol-2-karboksilne kiseline.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.84 (s, 1H), 7.90 (dd, J = 6.7,2.5 Hz, 1H), 7.88 - 7.83 (m, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.19 (dd, J = 11.5, 8.9 Hz, 1H), 6.74 (t, J = 55.1 Hz, 1H), 6.38 (s, 2H), 2.59 - 2.46 (m, 5H), 2.18 - 1.95 (m, 2H).
LC-MS (m/z) 419.4 (MH<+>); tR= 0.47 minuta (Metoda B)
Primer 9 (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-metoksipirimidin-2-karboksamid (jedinjenje 9)
2
[0122] Pripremljen kao u primeru 1 od (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tiona i 5-metoksipirimidin-2-karboksilne kiseline.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.73 (s, 1H), 8.73 (s, 2H), 7.95 - 7.91 (m, 1H), 7.82 (dd, J = 6.7, 2.5 Hz, 1H), 7.22 - 7.18 (m, 1H), 6.74 (t, J = 55.2 Hz, 1H), 6.37 (s, 2H), 4.03 (s, 3H), 2.58 - 2.50 (m, 2H), 2.18 - 1.99 (m, 2H).
LC-MS (m/z) 430.5 (MH<+>); tR= 0.39 minuta (Metoda B)
Primer 10 (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-metoksi-3-metilpirazin-2-karboksamid (jedinjenje 10)
[0123]
[0124] Pripremljen kao u primeru 1 od (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tiona i 5-metoksi-3-metilpirazin-2-karboksilne kiseline.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.52 (s, 1H), 8.24 (d, J = 0.6 Hz, 1H), 7.91 (ddd, J = 8.8, 4.1, 2.8 Hz, 1H), 7.74 (dd, J = 6.8, 2.7 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 11.7, 8.8 Hz, 1H), 6.85 - 6.62 (m, 1H), 6.38 (s, 2H), 3.99 (s, 3H), 2.76 (d, J = 0.5 Hz, 3H), 2.55 - 2.49 (m, 2H), 2.18 - 1.99 (m, 2H).
LC-MS (m/z) 444.5 (MH<+>); tR= 0.52 minuta (Metoda B)
Primer 11 (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-cijano-3-metilpikolinamid (jedinjenje 11)
[0125]
2
[0126] Pripremljen kao u primeru 1 od (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tiona i 5-cijano-3-metilpikolinske kiseline.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.80 (s, J = 27.6 Hz, 1H), 8.99 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.99 - 7.87 (m, 1H), 7.82 - 7.69 (m, 1H), 7.36 - 7.13 (m, 1H), 6.73 (t, J = 55.0 Hz, 1H), 6.36 (s, 2H), 2.56 - 2.47 (m, 2H), 2.21 - 1.97 (m, 2H).
LC-MS (m/z) 438.1 (MH<+>); tR= 0.49 minuta (Metoda B)
Primer 12 (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-bromopikolinamid (jedinjenje 12)
[0127]
[0128] Pripremljen kao u primeru 1 od (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tiona i 5-bromopikolinske kiseline.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.78 (s, 1H), 8.87 (dd, J = 2.3, 0.7 Hz, 1H), 8.33 (dd, J = 8.4, 2.3 Hz, 1H), 8.09 (dd, J = 8.4, 0.6 Hz, 1H), 7.94 (ddd, J = 8.8, 4.1, 2.8 Hz, 1H), 7.89 (dd, J = 6.8, 2.7 Hz, 1H), 7.21 (dd, J = 11.6, 8.8 Hz, 1H), 6.88 - 6.62 (m, 1H), 6.39 (s, 2H), 2.60 - 2.49 (m, 2H), 2.19 - 1.96 (m, 2H).
LC-MS (m/z) 479.1 (MH<+>); tR= 0.53 minuta (Metoda B)
Primer 13 (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-(metoksi-d3)pikolinamid (jedinjenje 13)
[0129]
[0130] (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tion (25 mg, 0.081 mmol) je rastvoren u dihlorometanu (1 mL) pod atmosferom argona. Trimetilaluminijum (52 µl, 0.105 mmol, 2 molar, toluen) dodat je polako, zatim je dodat metil-(metoksi-d3)pikolinat (18 mg, 0.11 mmol) u 0.5mL dihlorometana. Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Reakciona
2
mešavina je sipana na ohlađenu 4N HCl (aq). Mešavina je ekstraktovana etil acetatom. Organski faza oprana je slanim rastvorom, osušena preko magnezijum sulfata i koncentrovana u vakuumu.7M amonijak u metanolu (4mL) dodat je i reakciona mešavina je mešana u zatvorenoj bočici na 50°C preko noći. Reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu i prečišćena fleš hromatografijom na silika gelu (heptan/etil acetat) praćeno prečišćavanjem preparativnom HPLC do dobijanja naslovljenog jedinjenja kao so triflurosirćetne kiseline.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO) δ 11.13 (s, 1H), 10.75 (s, 1H), 9.98 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.40 (dd, J = 2.9, 0.5 Hz, 1H), 8.21 (ddd, J = 8.9, 4.1, 2.6 Hz, 1H), 8.15 (dd, J = 8.7, 0.5 Hz, 1H), 8.09 (dd, J = 6.8, 2.6 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 8.7, 2.9 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 11.9,9.0 Hz, 1H), 7.20 (t, J = 53.0 Hz, 1H), 3.17-3.01 (m, 2H), 2.48 - 2.38 (m, 2H).
LC-MS (m/z) 432 (MH<+>); tR= 0.49 minuta (Metoda A)
Primer 14 (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-(metoksi-d3)pirazin-2-karboksamid (jedinjenje 14)
[0131]
[0132] Pripremljen kao u primeru 13 od (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tiona i metil 5-(metoksi-d3)pikolinata.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.61 (s, 1H), 8.89 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.42 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.91 - 7.86 (m, 2H), 7.19 (dd, J = 11.5, 8.9 Hz, 1H), 6.84 - 6.61 (m, 1H), 6.36 (s, 2H), 2.53 - 2.49 (m, 2H), 2.16 - 1.96 (m, 2H).
LC-MS (m/z) 433.1 (MH<+>); tR= 0.49 minuta (Metoda A)
Stereohemija
[0133] Kristali su dobijeni rekristalizacijom (S)-5-bromo-N-(3-(2-(difluorometil)-3,3-difluoro-6-thioksopiperidin-2-il)-4-fluorofenil)pikolinamida od mešavine heptana i etil acetata. Struktura (S)-5-bromo-N-(3-(2-(difluorometil)-3,3-difluoro-6-thioksopiperidin-2-il)-4-fluorofenil)pikolinamida je razjašnjena X-zračnom kristalografijom pomenutih kristala. Struktura pokazuje apolutnu i relativnu konfiguraciju (S)-5-bromo-N-(3-(2-(difluorometil)-3,3-difluoro-6-thioksopiperidin-2-il)-4-fluorofenil)pikolinamida. (S)-5-bromo-N-(3-(2-(difluorometil)-3,3-difluoro-6-thioksopiperidin-2-il)-4-fluorofenil)pikolinamid je pripremljen kako je opisano u primeru 1 počevši od (S)-6-(5-amino-2-
2
fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tion i 5-bromopikolinske kiseline.
[0134] Apsolutne konfiguracije primernih jedinjenja ovog pronalaska tako se mogu racionalizovati. (S)-5-bromo-N-(3-(2-(difluorometil)-3,3-difluoro-6-thioksopiperidin-2-il)-4-fluorofenil)pikolinamid je pripremljen od (S)-6-(5-amino-2-fluorofenil)-6-(difluorometil)-5,5-difluoropiperidin-2-tiona koji je početni materijal za sva primerna jedinjenja ovog pronalaska.
Farmakološko ispitivanje
BACE1 ogled vezivanja
[0135] Ogled vezivanja izveden je kao SPA-baziran ogled upotrebom biotinilisovanog oblika humanog BACE1 rekombinantno eksprimiran i naknadno prečišćen iz Freestile HEK293 ćelije. Ogled vezivanja izvodi se u 50 mM natrijum acetatnom puferu, pH 4.5 koji sadrži 50 mM NaCl i 0.03% Tween-20 u belim sa providnim dnom 384 pločama (Corning #3653).10 nM (finalna koncentracija) radioligand ([<3>H]-N-((1S,2R)-1-benzil-3-ciklopropilamino-2-hidroksi-propil)-5-(metansulfonil-metil-amino)-N-((R)-1-fenil-etil)-izofthalamid) (TRQ11569 kupljen od GE Healthcare) umešan je sa test jedinjenjem pri datoj koncentraciji, 6 nM (finalna koncentracija) humanog BACE1 i 25 µg Streptavidin premazane PVT jezgro SPA perlice (RPNQ0007, GE Healthcare Life Sciences) u kupnoj zapremini od 40 µl. Nekoliko koncentracija svakog test jedinjenja testirano je u ogledu radi određivanja IC50. Ploče su inkubisane tokom jednog sata na sobnoj temperaturi i izbrojane u Wallac Trilux brojaču. Ukupno i ne-specifično vezivanje određeni su upotrebom pufera i 1 µM (finalna koncentracija) visoko afinitetnog BACE1 referentnog inhibitora (S)-6-[3-hloro-5-(5-prop-1-inil-piridin-3-il)-tiofen-2-il]-2-imino-3,6-dimetiltetrahidro-pirimidin-4-ona, respektivno. Za svako test jedinjenje, IC50vrednost (koncentracija koja posreduje 50% inhibicije specifičnog vezivanja radioliganda) određena je iz koncentracija-odgovor krive i potrebljena za izračunavanje Kiiz jednačine Ki= IC50/(1+L/Kd), gde L i Kdsu finalna koncentracija radioliganda potrebljenog u ogledu i konstanta disocijacije radioliganda, respektivno. Kdradioliganda je određena iz eksperimenata zasićenog vezivanja.
Tabela 1: afinitet vezivanja odabranih jedinjenja
BACE1 ogled efikasnosti
[0136] Ogled efikasnosti izveden je kao FRET-baziran ogled upotrebom komercijalno dostupnog BACE1 kompleta (Life Technologies, P2985).2 µl test jedinjenje pri 10 (finalna koncentracija) i 15 µl BACE1 enzim iz kompleta (finalna koncentracija 3 nM) predinkubisani su tokom 15 minuta at sobnoj temperaturi pre dodavanje 15 µl supstrata iz kompleta (250 nM finalna koncentracija) i inkubisani tokom dodatnih 90 minuta na sobnoj temperaturi. Ogledna ploča je naknadno isčitana Pherastar (Ex540/Em590). Enzimske aktivnosti primećene u prisustvu test jedinjenja normalizovane su do enzimske aktivnosti u prisustvu pufera i 10 (finalna koncentracija) visoko afinitetnog BACE1 referentnog inhibitora (S)-6-[3-Hloro-5-(5-prop-1-inil-piridin-3-il)-tiofen-2-il]-2-imino-3,6-dimetil-tetrahidropirimidin-4-ona, respektivno. Efikasnost test jedinjenja procenjena je pri 10 (finalna koncentracija) i definisana kao procenat inhibicije enzimske aktivnosti upotrebom jednačine %inhibicija = 100% -normalizovana enzimska aktivnost u procentima.
Tabela 2: BACE1 aktivnost odabranih jedinjenja
1
Određivanje Aβ nivoa u mogu i plazmi pacova nakon BACE1 inhibicije. Životinje.
[0137] Sva briga i eksperimentalne procedure na pacovima odobrene su od strane Lundbeck veterinasrkog osoblja, u skladu zakonom Danske. Pacovi su držani u ograđenom prostoru sa 12/12-h ciklusom svetla/tame i ad libitum pristupu hrani i vodi.
Tretiranje naivnih pacova.
[0138] Mladi odrasli mužijaci Sprague Dawley pacova približno 250g težine kupljeni iz Charles River i primili su 0-30 mg/kg nosača (10% HP betaCD 1M MeSO4, pH 2.5) ili test jedinjenja (rastvoreno u nosaču) samo putem oralne gavaže (p.o). Jedinjenja su dozirana u zapremini od 5ml/kg. Kohorte od 5-10 životinja utvrđene su za svaki uslov tretiranja.
[0139] Životinje koje su podvrgnute tretiranju detaljno su praćene od strane veterinarskog osoblja zbog bilo kakvog znaka toksičnosti. Parametri praćenja uključivali su telesne mase, fizički izgled, promene u izgledu krzna, javljanje neprovociranog ponašanja, i zatupljenog ili preterano ispoljenih odgovora na spoljašnje stimuluse.
Sakupljanje tkiva.
[0140] Na T =180 minuta nakon inicijalnog doziranja, životinje su iznenađene i obezglavljene giljotinom. Krv sa mesta obezglavljivanja uzorkovana je u EDTA premazanim epruvetama nakon obezglavljivanja životinje. Krv je centrifugirana na 2200G na 4°C tokom 15 minuta, a plazma je sakupljena i zamrznuta na -80°C. Krv je alikvotirana za Aβ ELISA i DMPK analizu. Odmah nakon žrtvovanja, mozak je ekstraktovan i
2
podeljen na 2 polovine. Desne polovine mozgova su trenutno zamrznute na suvom ledu i odložene na -80°C. Leve polovine mozgova su disecirane; sa prednjim mozgom uzetim za Aβ ELISA, a ostatak upotrebljen za DMPK analizu. Ovi uzorci takođe su trenutno zamrznuti na suvom ledu i odloženi na -80°C do upotrebe za analizu.
Obrada tkiva.
[0141] Korteks uzorci odmrznuti su blago na mokrom ledu pre homogenizovanja sa malom zapreminom dispergujućeg instrumenta (T10 osnovni ULTRA-TURRAX®) koji je podešen na brzinu 5 tokom približno 5-7 sek. Tkivo je obrađeno u 10-ostrukoj zapremini mase, na primer 100mg tkiva homogenizovano u 1000µL Homogenizacionog pufera. Homogenizacioni pufer: 50ml Milli Q voda 50nM NaCl 0.2% Dietilamin (DEA) 1 tableta potpunog koktela proteaza inhibitora 1nM 4-(2-aminoetil) benzensulfonil fluorid hidrohlorid nepovratna serin proteaza inhibitor (AEBSF).
[0142] Nakon homogenizacije 450 µL alikvota uzoraka sakupljeno je u 1.5ml Eppendorf epruveti i smešteno na mokar led, 0.5% NP-40 (50ul) dodat je u sve uzorke, a zatim su inkubisani na ledu tokom 30 min. Po sonifikaciji svih uzoraka upotrebom Ultrasoničnog homogenizatora sa 20 kHz homogenim zvukom (SONOPLUS HD2070, Bandelin Electronic) 10 pulsiranje podešeno je na 12-13 % snage radi ekstraktovanja svih Aβ vrsta. Uzorci su zatim centrifugirani (Ole Dich 157 MPRF Micro centrifuga) na 20000G tokom 20 minuta na 4°C. Nakon centrifugiranja 285µl supernatanta je pipetirano u 600µL mikrocevaste epruvet i neutralizovan je sa 15µL 1M Tris-HCL pufera.
ELISA protokol.
[0143] WAKO 294-62501 Human/Pacovski Abeta amiloid (40) kopmplet upotrebljen je za vse ELISA analize.30 µL plazma uzoraka ili 30 µL korteks supernatanata generisani kako je prethodno opisano, smešteni su u 600 µL mikrocevaste epruvete na mokar led. U to, 30 µL 8M Uree (AppliChem A1049, 9025) dodato je radi generisanja 2-strukog razblaženja. Supernatatnti plazme i korteksa su inkubisani na ledu tokom 30 min. Standardni redovi pripremljeni su standardnim peptidnim zalihama obezbeđenim u kompletu i standardnog razblaživača koji sadrži 1.6M Ureu (200 µL 8M Urea 800 µL standardnog razblaživača) i 0.8M Ureu (400µL 8M Urea 3600µL Standardnog razblaživača). Serijska 2-struka razblaženja Aβ40 od 100 pmol/ml do 0 pmol/L pripremljena su za ogled.
[0144] Nakon inkubisanja sa ureom, svi uzorci dalj su razblaženi dodavanjem 5 puta standardog razblaživača iz kompleta. Ovo je izvedeno dodavanjem 240 µL Standardnog Razblaživača do 60 µL uzorak/urea mešavine, koja je zatim dobro umešana.100 µL svakog razblaženog uzorka je pipetirano u određene bazenčiće ELISA pliče u duplikatima. Ploča je zatim prekrivena i inkubisana preko noći na 4°C.
Sledeći dan, ELISA komplet ostavljen je na sobnoj temperaturi pre upotrebe. Inkubisana ploča oprana je 5 puta sa 20x rastvorom za pranje rastvoren u Milli Q vodi.100 µL HRP-konjugata naneto je u svaki bazenčić, a ploča je prekrivena i inkubisana na 4°C tokom 1 h. Pranje je ponovo ponovljeno 5 puta.100 µL 3,3',5,5'-Tetrametilbenzidin (TMB) rastvor je i nanet u svaki bazenčić, a ploča je prekrivena i inkubisana u tami na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta.100 µL STOP-rastvor zatim je nanet u svaki bazenčić, a ploča je isčitana na 450 nm talasne dužine u spektrofotometru (Labsystems Multiscan Ascent) u roku od 30 min od dodavanja STOP-rastvora u bazenčiće.
[0145] Koncentracija Aβ u uzorcima određena je na osnovu standardne krive generisane iz standarda koji sadrže poznate koncentracije sintetičkog Aβ40. Stručnjaka iz ove oblasti će ceniti da ekstrakcije dietilamina (DEA) i uree oslobađaju rastvorljiv Aβ, i nerastvorljiv Aβ respektivno. Kako je ELISA komplet potvrđen i široko u upotrebi, prihvaćen je dokle god su uslovi tretiranja i ogledni uslovi isti za svako ispitano jedinjenje, ogled bi trebalo da da konzistentne robustne podatke za ispitana jedinjenja sa minimalnim neslaganjima.
Analiza podataka
[0146] Kako bi se odredila koncentracija Aβ40 u uzorcima, umetnute vrednosti uzoraka uvedenih u ploče pomnožene su sa 20 da bi se izračunala razblaženja koja su izvedena kada su dodate zapremine DEA, uree i neutralizacionog rastvora. Vrednosti su izračunate kao procenta promene u Aβ40 u poređenju sa životinjama koje su tretirane samo nosačem.
Bioanaliza uzoraka mozga i plazme
[0147] TC je određen u homogenatima plazme i mozga upotrebom UltraPerformance LC® (UPLC®) hromatografije praćeno tandemskom-MS (MS/MS) detekcijom.
Uređaj:
[0148] Tecan Genesis RSP 200; Biomek NXP, Beckman Coulter; Sigma 4K15 centrifuga; Acquity UPLC, Waters; Sciex API4000 TQ, Applied Biosystems; MS softver: Analyst verzija 1.4.1
Hemikalije
[0149] Acetonitril, HPLC-čistoće, Fluka, Br.34967N; Metanol, HPLC-čistoće, Sigma-Aldrich, Lot 9003S; Mravlja kiselina, HPLC-čistoće, Riedel-de Haën, Lot 51660; Prečišćena voda, Millipore Synergy UV
Pripremanje uzoraka
4
[0150] Homogenat mozga pripremljen je homogenizovanjem mozga 1:4 (v/v) sa vodom:2-propanol:DMSO (50:30:20 v/v/v) praćeno centrifugiranjem i sakupljanjem supernatanta. Kalibracioni standardi i QC uzorci pripremljeni upotrebom Hamilton robota.150 µL ISTD u acetonitrilu (1 ng/mL ISTD) dodato je u 25 µL kalibracionih standarda, QC uzorci i test uzorci (homogenati plazme i mozga) upotrebom Biomek robota. Nakon centrifugiranja (6200 g, 4 °C, 20 min) 100 µL supernatanta svakog uzorka transferovano je u novu ploču i umešano sa 100 µL vode sa 0.1 % mravljom kiselinom upotrebom Biomek robota (method file InVivo transfer). Nakon brzog centrifugiranja (6200 g, 4 °C, 5 min) uzorci su smešteni u auto-uzorkator.
UPLC-MS/MS analiza
[0151] MS/MS detekcija izvedena je sa Applied Biosystems Sciex API 4000 instrumentom u režimu pozitivno-jonske elektrosprej jonizacije. TC i ISTD detektovani su kao roditelj > ćerka masa pream naelektrisanje odnos (m/z). Azot je upotrebljen za nebulizatorske i kolizione gasove. Oblast pika linerano odgovara koncentracijama plazme i mozga analita u opsegu od 1.00 - 1000 ng/mL plazme i 5.00 - 5000 ng/g mozga (uređeno za razblaženja). Ukoliko je koncentracije leka u uzorku plazme/mozga iznad 1000 ng/mL ili 5000 ng/g, uzorak je pogodno razblažen u praznim homogenatima plazme/mozga pre analiziranja.
Hromatografski sistem
Analitičke kolone:
[0152] Waters Acquity UPLC HSS C18 SB (pH 2-8) 1.8 µm, 2.1x30mm.
Mobilna faza A: 0.1 % vod. mravlja kiselina ili 0.1 % vod. amonijum hidroksid
Mobilna faza B: Acetonitril sa 0.1 % vod. mravlju kiselina ili 0.1 % vod. amonijum hidroksid.
Slabo pranje: Metanol
Snažno pranje: Acetonitril/Izopropanol/mravlja kiselina (50/50/2 v/v/v)
Protok: 0.6 mL/min
Trajanje: 3 min.
Za odbacivanje: 0-0.5 min
Temperatura: 40°C
[0153] Jedinjenja 3 i 5 data su u dozi od 10 mg/kg p.o. i mozak i plazma uzorci sakupljeni su na 3 sata nakon doziranja, a sledeća izlaganja merena su kako je opisano gore.
Tabela 3: Rezultati za jedinjenje 3
[0154] Kako je prikazano u tabelama 3 i 4, jedinjenja ovog pronalaska mogu da penetriraju kroz krvno moždanu barijeru i pokazuju efikasnost u CNS.
MDCK-MDR1 ogled
[0155] Propusnost test jedinjenja procenjenja je na MDCK-MDR1 ćelijama koje su uzgajane do that were cultured do konfluentnosti (4-6 dana) u ploči sa 96 transbazenčića. Test jedinjenja su razblažena sa transportnim puferom (HBSS 1% BSA) do koncentracije od 0.5 i nanete na apikalnu ili bazolateralnu stranu ćelijskog monosloja. Propusnost test jedinjenja u A prema B pravcu ili B orema A pravcu određena je u triplikatu putem 60-minutnog inkubacionog vremena na 37°C i 5% CO2 sa relativnom vlagom od 95%. Test jedinjenja su kvantifikovana LC-MS/MS analizom baziranom na odnosu područja pikova analit/IS u bazenčičima transploče kako primaoca, tako i donora.
[0156] Očigledan koeficijent propusnosti Papp (cm/s) izračunat je upotrebom jednačine:
[0157] U kojoj dCr/dt je kumulativna koncentracija jedinjenja u komori primaoca u funckiji vremena (µM/s); Vr je zapremina rastvora u komori primaoca (0.05 mL na apikalnoj strani; 0.25 mL na bazolateralnoj strani); A je oblast površine za transport, tj.0.0804 cm<2>za oblast monosloja; C0 je inicijalna koncentracija u komori donora (µM).
[0158] Jedinjenja su klasifikovani Pgp supstrati kada je odnos efluksa (Papp BA / Papp AB) iznosi ≥ 2.
Tabela 5: BACE1 aktivnost odabranih jedinjenja
[0159] Kako je prikazano u tabelama 5, većina primernih jedinjenja ovog pronalaska ima MDCK-MDR1 odnose efluksa ispod 2, te su prema tome verovatno sposobna da prođu krvno moždanu barijeru (E Kerns, L Di, Drug-like Properties: Concepts, Structure Design and Methods (2008) Elsevier).

Claims (13)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule I
    u kojoj je Ar odabran iz grupe koju čine fenil, piridil, pirimidil, pirazinil, imidazolil, pirazolil, tiazolil, oksazolil, izoksazolil, i gde je Ar opciono supstituisani jednim ili više supstituenata odabran od halogena, CN, C1-C6alkila, C2-C6alkenila, C2-C6alkinila, C1-C6fluoroalkila ili C1-C6alkoksi; i R<1>je vodonik, halogen, C1-C3fluoroalkil ili C1-C3alkil; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  2. 2. Jedinjenje prema zahtevu 1, gde je do jedinjenje formule Ia
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  3. 3. Jedinjenje prema zahtevu 1 ili 2, gde R<1>je F ili H.
  4. 4. Jedinjenje prema zahtevu 1 ili 2, gde je Ar opciono supstituisan jednim ili više F, Cl, Br, CN, C1-C3alkila, C1-C3fluoroalkila ili C1-C3alkoksi.
  5. 5. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-4, gde je Ar opciono supstituisani piridil.
  6. 6. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-4, gde je Ar opciono supstituisani pirimidil.
  7. 7. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-4, gde je Ar opciono supstituisani pirazinil.
  8. 8. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-4, gde je Ar opciono supstituisani oksazolil.
  9. 9. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-4, gde je Ar opciono supstituisani tiazolil.
  10. 10. Jedinjenje prema zahtevu 1, gde je do jedinjenje odabrano iz grupe koju čine: (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-hloropikolinamid, (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-fluoropikolinamid, (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-metoksipirazin-2-karboksamid, (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-2-metiloksazol-4-karboksamid, (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-metoksipikolinamid, (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-(difluorometil)pirazin-2-karboksamid, (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-cijanopikolinamid, (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-4-metiltiazol-2-karboksamid, (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-metoksipirimidin-2-karboksamid, (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-metoksi-3-metilpirazin-2-karboksamid, (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-cijano-3-metilpikolinamid, (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-bromopikolinamid, (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-(metoksid3)pikolinamid i (S)-N-(3-(6-amino-2-(difluorometil)-3,3-difluoro-2,3,4,5-tetrahidropiridin-2-il)-4-fluorofenil)-5-(metoksid3)pirazin-2-karboksamid; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  11. 11. Farmaceutska kombinacija koja obuhvata jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-10 i farmaceutski prihvatljiv nosač.
  12. 12. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-10 za upotrebu u terapiji.
  13. 13. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-10 za upotrebu u lečenju bolesti odabrane od Alchajmerove bolesti (porodična ili sporadična), prekliničke Alchajmerove bolesti, prodromalne Alchajmerove bolesti, blagog kognitivnog oštećenja, Daunovog sindroma i cerebralne amiloidne angiopatije. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 4
RS20181321A 2014-11-10 2015-11-09 2-amino-6-(difluorometil)- 5,5-difluoro-6-fenil-3,4,5,6-tetrahidropiridini kao bace1 inhibitori RS57946B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DKPA201400648 2014-11-10
DKPA201500447 2015-08-07
EP15805109.4A EP3218365B1 (en) 2014-11-10 2015-11-09 2-amino-6-(difluoromethyl)- 5,5-difluoro-6-phenyl-3,4,5,6-tetrahydropyridines as bace1 inhibitors
PCT/EP2015/076015 WO2016075063A1 (en) 2014-11-10 2015-11-09 2-amino-6-(difluoromethyl)- 5,5-difluoro-6-phenyl-3,4,5,6-tetrahydropyridines as bace1 inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS57946B1 true RS57946B1 (sr) 2019-01-31

Family

ID=54783558

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20181321A RS57946B1 (sr) 2014-11-10 2015-11-09 2-amino-6-(difluorometil)- 5,5-difluoro-6-fenil-3,4,5,6-tetrahidropiridini kao bace1 inhibitori

Country Status (44)

Country Link
US (3) US9346797B1 (sr)
EP (2) EP3461483A1 (sr)
JP (1) JP6629320B2 (sr)
KR (1) KR20170081184A (sr)
CN (1) CN107074836B (sr)
AU (1) AU2015345258B2 (sr)
BR (1) BR112017009583A2 (sr)
CA (1) CA2965563A1 (sr)
CL (1) CL2017001112A1 (sr)
CO (1) CO2017004465A2 (sr)
CR (1) CR20170186A (sr)
CY (1) CY1120846T1 (sr)
DK (1) DK3218365T3 (sr)
DO (1) DOP2017000117A (sr)
EA (1) EA032339B1 (sr)
EC (1) ECSP17028459A (sr)
ES (1) ES2694860T3 (sr)
GE (2) GEAP201814485A (sr)
GT (1) GT201700099A (sr)
HR (1) HRP20181698T1 (sr)
HU (1) HUE040304T2 (sr)
IL (1) IL252089B (sr)
JO (1) JO3458B1 (sr)
LT (1) LT3218365T (sr)
MA (1) MA40955B1 (sr)
ME (1) ME03723B (sr)
MX (1) MX2017006049A (sr)
NI (1) NI201700055A (sr)
PE (1) PE20170946A1 (sr)
PH (1) PH12017500841B1 (sr)
PL (1) PL3218365T3 (sr)
PT (1) PT3218365T (sr)
RS (1) RS57946B1 (sr)
RU (1) RU2017116196A (sr)
SG (1) SG11201703547XA (sr)
SI (1) SI3218365T1 (sr)
SM (1) SMT201800570T1 (sr)
SV (1) SV2017005435A (sr)
TN (1) TN2017000144A1 (sr)
TR (1) TR201816427T4 (sr)
TW (1) TWI690318B (sr)
UA (1) UA119576C2 (sr)
WO (1) WO2016075063A1 (sr)
ZA (1) ZA201702797B (sr)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CR20170187A (es) 2014-11-10 2018-02-01 H Lundbeck As 2-Amino-3,5-difluoro-6-metil-6-fenil-3,4,5,6-tetrahidropiridinas en calidad de inhibidores de BACE1 para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer
JO3458B1 (ar) 2014-11-10 2020-07-05 H Lundbeck As 2- أمينو-6- (دايفلوروميثيل) – 5، 5- ديفلورو-6-فينيل-3،4، 5، 6-تيتراهيدروبيريدين كمثبطات bace1
MA40941A (fr) 2014-11-10 2017-09-19 H Lundbeck As 2-amino-5,5-difluoro-6-(fluorométhyl)-6-phényl-3,4,5,6-tétrahydropyridines comme inhibiteurs de bace1
JO3627B1 (ar) 2015-04-30 2020-08-27 H Lundbeck As إيميدازو بيرازينونات على هيئة مثبطات pde1
TW201717948A (zh) 2015-08-10 2017-06-01 Ｈ 朗德貝克公司 包括給予２－胺基－３，５，５－三氟－３，４，５，６－四氫吡啶的聯合治療
AU2016305275A1 (en) * 2015-08-12 2018-02-08 H. Lundbeck A/S 2-amino-3-fluoro-3-(fluoromethyl)-6-methyl-6-phenyl-3,4,5,6-tetrahydropyridins as bace1 inhibitors
US10034861B2 (en) 2016-07-04 2018-07-31 H. Lundbeck A/S 1H-pyrazolo[4,3-b]pyridines as PDE1 inhibitors
JOP20190081A1 (ar) * 2016-10-13 2019-04-11 Novartis Ag مشتق أوكسازين للاستخدام في علاج أو الوقاية من اعتلال وعائي دماغي نشواني
MX2019004859A (es) 2016-10-28 2019-06-20 H Lundbeck As Tratamientos de combinacion que comprenden la administracion de imidazopirazinonas.
RU2019109039A (ru) 2016-10-28 2020-11-30 Х. Лундбекк А/С Комбинированные средства для лечения, предусматривающего введение имидазопиразинонов, предназначенные для лечения психических и/или когнитивных расстройств
TW201829394A (zh) 2016-12-21 2018-08-16 丹麥商Ｈ 朗德貝克公司 作為ｂａｃｅ１抑制劑之６-胺基-５-氟-５-（氟甲基）-２，３，４，５-四氫吡啶-２-基-苯基-５-（甲氧基-ｄ）-吡-２-甲醯胺及其氟化衍生物
MX2020006174A (es) 2017-12-14 2022-09-27 H Lundbeck As Tratamientos de combinación que comprenden la administración de 1h-pirazol[4,3-b]piridinas.
AR113926A1 (es) 2017-12-14 2020-07-01 H Lundbeck As Derivados de 1h-pirazolo[4,3-b]piridinas
WO2019121840A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 H. Lundbeck A/S Pyrazolo[3,4-b]pyridines and imidazo[1,5-b]pyridazines as pde1 inhibitors

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR0210391A (pt) 2001-06-12 2004-06-15 Elan Pharm Inc Composto, métodos de tratar um paciente que tenha ou de prevenir um paciente de contrair uma doença ou condição e de preparar um composto, e, uso de um composto
GB0124928D0 (en) 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
EP2258687B1 (en) 2002-02-12 2012-12-26 Glaxosmithkline LLC Nicotinamide derivates useful as P38 inhibitors
AR077277A1 (es) 2009-07-09 2011-08-17 Lilly Co Eli Compuestos de biciclo (1,3)tiazin-2-amina formulacion farmaceutica que lo comprende y su uso para la manufactura de un medicamento util para el tratamiento de la enfermedad de alzheimer
KR101730937B1 (ko) * 2010-06-09 2017-04-27 얀센 파마슈티카 엔.브이. 베타-세크레타아제(ｂａｃｅ) 저해제로 유용한 5,6-디하이드로-2ｈ-[1,4]옥사진-3-일-아민 유도체
CN103429589A (zh) 2011-01-12 2013-12-04 诺瓦提斯公司 噁嗪衍生物及其在治疗神经障碍中的用途
PT2663561E (pt) 2011-01-13 2016-06-07 Novartis Ag Derivados heterocíclicos novos e sua utilização no tratamento de distúrbios neurológicos
US8754075B2 (en) * 2011-04-11 2014-06-17 Hoffmann-La Roche Inc. 1,3-oxazines as BACE1 and/or BACE2 inhibitors
TW201247635A (en) 2011-04-26 2012-12-01 Shionogi & Co Oxazine derivatives and a pharmaceutical composition for inhibiting BAC1 containing them
BR112013031098A2 (pt) * 2011-06-07 2016-12-06 Hoffmann La Roche halogeno-alquil-1,3 oxazinas como inibidores de bace1 e/ou bace2
UY34278A (es) 2011-08-25 2013-04-05 Novartis Ag Derivados novedosos de oxazina y su uso en el tratamiento de enfermedades
US8338413B1 (en) 2012-03-07 2012-12-25 Novartis Ag Oxazine derivatives and their use in the treatment of neurological disorders
BR112014023384A8 (pt) 2012-03-20 2018-01-16 R Artis Dean inibidores de bace espirocíclicos de di-hidro-tiazina e di-hidro-oxazina, e composições e usos dos mesmos.
WO2014056816A1 (en) 2012-10-10 2014-04-17 F. Hoffmann-La Roche Ag COMBINATION OF AN Aβ ANTIBODY AND A BACE INHIBITOR
EP2912035A4 (en) 2012-10-24 2016-06-15 Shionogi & Co DERIVATIVES OF DIHYDROOXAZINE OR OXAZEPINE HAVING BACE1 INHIBITING ACTIVITY
CA2902212C (en) 2013-03-01 2020-10-13 Amgen Inc. Perfluorinated 5,6-dihydro-4h-1,3-oxazin-2-amine compounds as beta-secretase inhibitors and methods of use
JO3318B1 (ar) 2013-06-18 2019-03-13 Lilly Co Eli مثبطات bace
CN106029639B (zh) 2014-02-19 2019-01-08 H.隆德贝克有限公司 治疗阿尔茨海默病的bace1抑制剂的2-氨基-3，5，5-三氟-3，4，5，6-四氢吡啶
TW201623295A (zh) 2014-04-11 2016-07-01 塩野義製藥股份有限公司 具有ｂａｃｅ１抑制活性之二氫噻及二氫衍生物
CR20170187A (es) 2014-11-10 2018-02-01 H Lundbeck As 2-Amino-3,5-difluoro-6-metil-6-fenil-3,4,5,6-tetrahidropiridinas en calidad de inhibidores de BACE1 para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer
JO3458B1 (ar) 2014-11-10 2020-07-05 H Lundbeck As 2- أمينو-6- (دايفلوروميثيل) – 5، 5- ديفلورو-6-فينيل-3،4، 5، 6-تيتراهيدروبيريدين كمثبطات bace1
MA40941A (fr) 2014-11-10 2017-09-19 H Lundbeck As 2-amino-5,5-difluoro-6-(fluorométhyl)-6-phényl-3,4,5,6-tétrahydropyridines comme inhibiteurs de bace1
TW201717948A (zh) 2015-08-10 2017-06-01 Ｈ 朗德貝克公司 包括給予２－胺基－３，５，５－三氟－３，４，５，６－四氫吡啶的聯合治療
AU2016305275A1 (en) 2015-08-12 2018-02-08 H. Lundbeck A/S 2-amino-3-fluoro-3-(fluoromethyl)-6-methyl-6-phenyl-3,4,5,6-tetrahydropyridins as bace1 inhibitors
TW201829394A (zh) 2016-12-21 2018-08-16 丹麥商Ｈ 朗德貝克公司 作為ｂａｃｅ１抑制劑之６-胺基-５-氟-５-（氟甲基）-２，３，４，５-四氫吡啶-２-基-苯基-５-（甲氧基-ｄ）-吡-２-甲醯胺及其氟化衍生物

Also Published As

Publication number Publication date
JP2017533245A (ja) 2017-11-09
TR201816427T4 (tr) 2018-11-21
EA201790818A1 (ru) 2017-09-29
BR112017009583A2 (pt) 2017-12-26
PH12017500841A1 (en) 2017-10-30
US20170319564A1 (en) 2017-11-09
MA40955A (fr) 2017-09-20
CY1120846T1 (el) 2020-05-29
US20190000823A1 (en) 2019-01-03
PH12017500841B1 (en) 2017-10-30
RU2017116196A3 (sr) 2019-05-14
UA119576C2 (uk) 2019-07-10
MA40955B1 (fr) 2018-11-30
SV2017005435A (es) 2017-07-19
HRP20181698T1 (hr) 2018-12-28
JO3458B1 (ar) 2020-07-05
NI201700055A (es) 2017-09-22
CO2017004465A2 (es) 2017-07-19
MX2017006049A (es) 2017-06-19
ZA201702797B (en) 2019-05-29
EP3218365A1 (en) 2017-09-20
EP3461483A1 (en) 2019-04-03
GEP20196949B (en) 2019-02-25
ECSP17028459A (es) 2017-08-31
AU2015345258B2 (en) 2020-05-21
TWI690318B (zh) 2020-04-11
US10045974B2 (en) 2018-08-14
LT3218365T (lt) 2018-12-10
CA2965563A1 (en) 2016-05-19
CL2017001112A1 (es) 2017-12-01
WO2016075063A1 (en) 2016-05-19
IL252089A0 (en) 2017-07-31
TN2017000144A1 (en) 2018-10-19
KR20170081184A (ko) 2017-07-11
HUE040304T2 (hu) 2019-02-28
GT201700099A (es) 2019-07-29
JP6629320B2 (ja) 2020-01-15
GEAP201814485A (en) 2018-08-27
IL252089B (en) 2020-03-31
SG11201703547XA (en) 2017-05-30
CR20170186A (es) 2017-07-27
DOP2017000117A (es) 2017-07-31
RU2017116196A (ru) 2018-12-14
EA032339B1 (ru) 2019-05-31
AU2015345258A1 (en) 2017-05-04
PL3218365T3 (pl) 2019-02-28
PT3218365T (pt) 2018-11-22
ME03723B (me) 2021-04-20
PE20170946A1 (es) 2017-07-13
US20160130267A1 (en) 2016-05-12
ES2694860T3 (es) 2018-12-27
CN107074836A (zh) 2017-08-18
CN107074836B (zh) 2020-03-27
SI3218365T1 (sl) 2018-12-31
SMT201800570T1 (it) 2019-01-11
US9346797B1 (en) 2016-05-24
US10603310B2 (en) 2020-03-31
TW201628616A (zh) 2016-08-16
EP3218365B1 (en) 2018-10-10
DK3218365T3 (en) 2018-11-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RS57946B1 (sr) 2-amino-6-(difluorometil)- 5,5-difluoro-6-fenil-3,4,5,6-tetrahidropiridini kao bace1 inhibitori
US10059669B2 (en) 2-amino-3,5-difluoro-3,6-dimethyl-6-phenyl-3,4,5,6-tetrahydropyridines as BACE1 inhibitors for treating alzheimer&#39;s disease
US9353084B2 (en) 2-amino 3,5,5-trifluoro-3,4,5,6-tetrahydropyridines as BACE1 inhibitors for treatment of Alzheimer&#39;s disease
US10058540B2 (en) 2-amino-5,5-difluoro-6-(fluoromethyl)-6-phenyl-3,4,5,6-tetrahydropyridines as BACE1 inhibitors
CA2993630A1 (en) 2-amino-3-fluoro-3-(fluoromethyl)-6-methyl-6-phenyl-3,4,5,6-tetrahydropyridines as bace1 inhibitors
HK40006946A (en) Solid dosage forms of 2-amino-6-(difluoromethyl)-5,5-difluoro-6-phenyl-3,4,5,6-tetrahydropyridine bace1 inhibitors
OA18265A (en) 2-amino-6-(difluoromethyl)-5,5-difluoro-6phenyl-3,4,5,6-tetrahydropyridines as bacel inhibitors.
HK1242321A1 (en) 2-amino-6-(difluoromethyl)-5,5-difluoro-6-phenyl-3,4,5,6-tetrahydropyridines as bace1 inhibitors
HK1242321B (en) 2-amino-6-(difluoromethyl)-5,5-difluoro-6-phenyl-3,4,5,6-tetrahydropyridines as bace1 inhibitors
OA18264A (en) 2-amino-3,5-difluoro-3,6-dimethyl-6-phenyl3,4,5,6-tetrahydropyridines as bacel inhibitors for treating Alzheimer&#39;s disease.
HK1242320B (en) 2-amino-3,5-difluoro-3,6-dimethyl-6-phenyl-3,4,5,6-tetrahydropyridines as bace1 inhibitors for treating alzheimer’s disease
HK1242320A1 (en) 2-amino-3,5-difluoro-3,6-dimethyl-6-phenyl-3,4,5,6-tetrahydropyridines as bace1 inhibitors for treating alzheimer’s disease