RS58226B1 - Aril- ili heteroaril-supstituisana benzenska jedinjenja - Google Patents

Aril- ili heteroaril-supstituisana benzenska jedinjenja

Info

Publication number
RS58226B1
RS58226B1 RS20190065A RSP20190065A RS58226B1 RS 58226 B1 RS58226 B1 RS 58226B1 RS 20190065 A RS20190065 A RS 20190065A RS P20190065 A RSP20190065 A RS P20190065A RS 58226 B1 RS58226 B1 RS 58226B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
c6alkyl
optionally substituted
halo
membered heterocycloalkyl
cancer
Prior art date
Application number
RS20190065A
Other languages
English (en)
Inventor
Kevin Wayne Kuntz
Richard Chesworth
Kenneth William Duncan
Heike Keilhack
Natalie Warholic
Christine Klaus
Masashi Seki
Syuji Shirotori
Satoshi Kawano
Timothy James Nelson Wigle
Sarah Kathleen Knutson
Original Assignee
Epizyme Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=46045109&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS58226(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Epizyme Inc filed Critical Epizyme Inc
Publication of RS58226B1 publication Critical patent/RS58226B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4412—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/443—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with oxygen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4433—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with oxygen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4436—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a heterocyclic ring having sulfur as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/444—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring heteroatom, e.g. amrinone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4545—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pipamperone, anabasine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4709—Non-condensed quinolines and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/553—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having at least one nitrogen and one oxygen as ring hetero atoms, e.g. loxapine, staurosporine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/52—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton
    • C07C229/54—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/63—One oxygen atom
    • C07D213/64—One oxygen atom attached in position 2 or 6
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/81—Amides; Imides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
    • C07D309/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D309/08—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/10—Spiro-condensed systems
    • C07D491/107—Spiro-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/08—Bridged systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

Opis
OSNOV PRONALASKA
[0001] U eukariotskim ćelijama DNK se pakuje sa histonima da bi formirala hromatin. Promene u uređenoj strukturi hromatina mogu dovesti do promena transkripcije odgovarajućih gena. Kontrola promena strukture hromatina (a time i transkripcije) posredovana je kovalentnim modifikacijama histona, prvenstveno njihovih N-terminalnih krajeva. Ove modifikacije se često označavaju kao epigenetičke jer mogu da dovedu do naslednih promena ekspresije gena, ali ne utiču na samu sekvencu DNK. Kovalentne modifikacije (na primer, metilacija, acetilacija, fosforilacija, i ubikvitinacija) bočnih lanaca amino-kiselina enzimski su posredovane. Selektivnu adiciju metil grupa na specifičnim aminokiselinskim mestima histona kontroliše jedinstvena porodica enzima poznatih kao histon-metiltransferaze (HMT).
[0002] Usklađena kolekcija biohemjskih sistema koja je u osnovi regulacije transkripcije mora biti strogo kontrolisana kako bi se rast i diferenciranje ćelija odvijali optimalno. Bolesna stanja nastaju kao rezultat narušavanja ove kontrole usled aberantne ekspresije i/ili aktivnosti enzima odgovornih za modifikaciju DNK i histona. U slučaju humanih kancera, na primer, sve je veći broj dokaza koji ukazuju na to da deregulisana epigenetička enzimska aktivnost doprinosi nekontrolisanoj proliferaciji ćelija udruženoj sa kancerom kao i sa drugim fenotipovima povezanim sa kancerom, kao što su povećana ćelijska migracija i invazija. Pored kancera, rastući je broj dokaza o ulozi epigenetičkih enzima u brojnim drugim oboljenjima kod ljudi, uključujući metaboličke bolesti (kao što je dijabetes), zapaljenske bolesti (kao što je Crohnova bolest), neurodegenerativne bolesti (kao što je Alzheimerova bolest) i kardiovaskularne bolesti. Prema tome, selektivno modulisanje aberantnog delovanja epigenetičkih enzima može biti korisno za lečenje različitih bolesti.
[0003] Poznato je da su proteini polikomb grupe (PcG) i tritoraks grupe (trxG) deo ćelijskog memorijskog sistema. Vidi, npr., Francis et al. (2001) Nat Rev Mol Cell Biol 2:409-21 i Simon et al. (2002) Curr Opin Genet Dev 12:210-8. Uopšteno, PcG proteini su represori transkripcije, koji održavaju "isključeno stanje", a trxG proteini su aktivatori transkripcije, koji održavaju "uključeno stanje". Zbog toga što članovi PcG i trxG proteina sadrže unutrašnju histon-metiltransferaznu (HMTaznu) aktivnost, PcG i trxG proteini mogu učestvovati u ćelijskoj memoriji, preko metilacije sržnih histona. Vidi, npr., Beisel et al.
(2002) Nature 419:857-62; Cao et al. (2002) Science 298:1039-43; Czermin et al. (2002) Cell 111:185-96; Kuzmichev et al. (2002) Genes Dev 16:2893-905; Milne et al. (2002) Mol Cell 10:1107-17; Muller et al. (2002) Cell 111:197-208; i Nakamura et al. (2002) Mol Cell 10:1119-28.
[0004] Biohemijske i genetičke studije obezbedile su dokaz da PcG proteini Drosophila funkcionišu u najmanje dva zasebna proteinska kompleksa, polikomb represivni kompleks 1 (PRC1) i ESC-E(Z) kompleks (poznat i kao polikomb represivni kompleks 2 PRC2)). Otte et al. (2003) Curr Opin Genet Dev 13:448-54. Studije na Drosophila pokazale su da ESC-E(Z)/EED-EZH2 (tj., PRC2) kompleksi imaju unutrašnju histon-metiltransferaznu aktivnost. Iako se sastavi kompleksa koje su izolovale različite grupe, blago razlikuju, oni obično sadrže EED, EZH2, SUZ12, i RbAp48 ili njihove homologe iz Drosophila. Međutim, rekonstituisani kompleks koji sadrži samo EED, EZH2, i SUZ12 zadržava histon-metiltransferaznu aktivnost za lizin 27 histona H3. US Patent 7,563,589.
[0005] Od različitih proteina koji čine PRC2 komplekse, EZH2 (enhancer of zeste homolog 2) predstavlja katalitičku podjedinicu. Katalitičko mesto EZH2 prisutno je unutar SET domena, visoko konzerviranog sekvencionog motiva (nazvanog po Su(var)3-9, enhancer of zeste, trithorax) koji se nalazi u nekoliko proteina pridruženih hromatinu, uključujući članove tritoraks grupe i polikomb grupe. SET domen je karakteristika svih poznatih histon-lizinmetiltransferaza izuzev H3-K79 metiltransferaze DOT1.
[0006] Pokazano je da pored utišavanja Hox gena, PRC2-posredovana metilacija histona H3-K27 učestvuje u X-inaktivaciji. Plath et al. (2003) Science 300:131-5; Silva et al. (2003) Dev Cell 4:481-95. Regrutovanje PRC2 kompleksa na Xi i zatim trimetilacija na histonu H3-K27 dešava se tokom početnog stadijuma X-inaktivacije i zavisi od Xist RNK. Pored toga, nađeno je da EZH2 i njemu pridružena histon-H3-K27- metiltransferazna aktivnost diferencijalno markiraju pluripotentne epiblastne ćelije i diferencirani trofektoderm, i konzistentno sa ulogom EZH2 u održavanju obrazaca epigenetičkog modifikovanja pluripotentnih epiblastnih ćelija, Cre-posredovana delecija EZH2 rezultuje gubitkom histon-H3-K27 metilacije u ćelijama. Erhardt et al. (2003) Development 130:4235-48). Pored toga, studije na ćelijskim linijama kancera prostate i dojke otkrile su jaku korelaciju između nivoa EZH2 i SUZ12 i invazivnosti ovih kancera, ukazujući na to da disfunkcija PRC2 kompleksa može doprinositi kanceru. Bracken et al. (2003) EMBO J 22:5323-35; Kirmizis et al. (2003) Mol Kancer Ther 2:113-21; Kleer et al. (2003) Proc Natl Acad Sci USA 100:11606-11; Varamballi et al. (2002) Nature 419:624-9.
[0007] Nedavno je saopšteno da su somatske mutacije tirozina 641 (Y641C, Y641F, Y641N, Y641S i Y641H, ponekad označene i kao Y646C, Y646F, Y646N, Y646S i Y646H, respektivno) EZH2 udružene sa folikularnim limfomom (FL) i podtipom difuznog B-krupnoćelijskog limfoma poreklom iz germinativnog centra (germinal center B cell-like (GCB) subtype of diffuse large B-cell limphoma (DLBCL). Morin et al. (2010) Nat Genet 42:181-5. U svim slučajevima nađeno je da je pojava mutantnog EZH2 gena bila heterozigotna, a ekspresija alela divljeg tipa i mutantnih alela detektovana je u mutantnim uzorcim profilisanim sekvenciranjem transkriptoma. Pokazano je takođe da sve mutantne forme EZH2 mogu da se inkorporišu u multiproteinski PRC2 kompleks, ali da tako nastali kompleksi nemaju sposobnost da katališu metilaciju H3-K27-ekvivalentne rezidue peptidnog supstrata. Prema tome, zaključeno je da sa bolešću udružene promene na Tir641 EZH2 za rezultat imaju gubitak funkcije vezane za EZH2-katalisanu metilaciju H3-K27.
KRATAK OPIS PRONALASKA
[0008] U jednom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na aril- ili heteroaril-supstituisano benzensko jedinjenje Formule (I) dole ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju ili prevenciji poremećaja proliferacije ćelija hematološkog sistema.
U ovoj formuli,
X1je N ili CR11;
X2je N ili CR13;
Z je NR7R8, OR7, S(O)nR7, ili CR7R8R14, gde je n 0, 1, ili 2;
svaki od R1, R5, R9, i R10, nezavisno, je H ili C1-C6alkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, COOH, C(O)O-C1-C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril;
svaki od R2, R3, i R4, nezavisno, je -Q1-T1, gde je Q1veza ili C1-C3alkil linker opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksil ili C1-C6alkoksi, i T1je H, halo, hidroksil, COOH, cijano, ili RS1, gde je RS1C1-C3alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C1-C6alkoksil, C(O)O-C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, amino, mono- C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5-ili 6-člani heteroaril, i RS1je opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, okso, COOH, C(O)O- C1-C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6- člani heteroaril;
R6je C6-C10aril ili 5- ili 6-člani heteroaril, od kojih je svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2, gde je Q2veza ili C1-C3alkil linker opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksil ili C1-C6alkoksi, i T2je H, halo, cijano, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A- , -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra, -S(O)2NRaRb, ili RS2, gde je svaki od Ra, Rb, i Rc, nezavisno H ili R -S3, A je farmaceutski prihvatljivi anjon, svaki od RS2i RS3, nezavisno, je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, ili Rai Rb, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 12-člani heterocikloalkil prsten koji ima 0 ili 1 dodatni heteroatom, i svaki od RS2, RS3, i 4 do 12-članog heterocikloalkil prstena formiranog od Rai Rb, je opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3, gde je Q3veza ili C1-C3alkil linker svaki opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksil ili C1-C6alkoksi, i T3je odabran iz grupe koja sadrži halo, cijano, C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6-člani heteroaril, ORd, COORd, -S(O)2Rd, -NRdRe, i -C(O)NRdRe, svaki od Rdi Renezavisno je H ili C1-C6alkil, ili -Q3-T3je okso; ili svaka dva susedna -Q2-T2, zajedno sa atomima za koje su prikačeni formiraju 5- ili 6-člani prsten koji opciono sadrži 1-4 heteroatoma odabrana između N, O i S i opciono je supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, COOH, C(O)O-C1-C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril;
R7je -Q4-T4, gde je Q4veza, C1-C4alkil linker, ili C2-C4alkenil linker, svaki linker je opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksil ili C1-C6alkoksi, i T4je H, halo, cijano, NRfRg, -ORf, -C(O)Rf, -C(O)ORf, -C(O)NRfRg, -C(O)NRfORg, NRfC(O)Rg, -S(O)2Rf, ili RS4, gde je svaki od Rfi Rg, nezavisno H ili RS5, svaki od RS4i RS5, nezavisno je C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, i svaki od RS4i RS5je opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5, gde je Q5veza, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2, ili C1-C3alkil linker, Rkje H ili C1-C6alkil, i T5je H, halo, C1-C6alkil, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono- C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6-člani heteroaril, ili S(O)qRqgde je q 0, 1, ili 2 i Rqje C1- C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, i T5je opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, C1-C6alkil, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril osim kada je T5H, halo, hidroksil, ili cijano; ili -Q5-T5je okso; svaki od R8, R11, R12, i R13, nezavisno, je H, halo, hidroksil, COOH, cijano, RS6, ORS6, ili COORS6, gde je RS6C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C8cikloalkil, 4 do 12-člani heterocikloalkil, amino, mono- C1-C6alkilamino, ili di- C1-C6alkilamino, i RS6je opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, COOH, C(O)O-C1- C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, i di-C1-C6alkilamino; ili R7i R8, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 11-člani heterocikloalkil prsten sa 0 do 2 dodatna heteroatoma, ili R7i R8, zajedno sa C atomom za koji su prikačeni, formiraju C3-C8cikloalkil ili 4 do 11-člani heterocikloalkil prsten sa 1 do 3 heteroatoma, i svaki od 4 do 11-članih heterocikloalkil prstenova ili C3-C8cikloalkila formiranih od R7i R8opciono je supstituisan jednim ili većim brojem -Q6-T6, gde je Q6veza, C(O), C(O)NRm, NRmC(O), S(O)2, ili C1-C3alkil linker, Rmje H ili C1-C6alkil, i T6je H, halo, C1- C6alkil, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono- C1-C6alkilamino, di-C1- C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6- člani heteroaril, ili S(O)pRpgde je p 0, 1, ili 2 i Rpje C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, i T6je opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, C1-C6alkil, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril osim kada je T6H, halo, hidroksil, ili cijano; ili -Q6-T6je okso; i
R14je odsutan, H, ili C1-C6alkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, COOH, C(O)O-C1- C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6- člani heteroaril.
[0009] Jedna podgrupa jedinjenja Formule (I) uključuje jedinjenja Formule (Ia):
[0010] Druga podgrupa jedinjenja Formule (I) uključuje jedinjenja Formule (Ib), (Ic), ili (Id):
[0011] Još jedna podgrupa jedinjenja formule (I) uključuje jedinjenja Formule (Ie), (Ig), (II), ili (IIa):
[0012] Jedinjenja Formule (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (Ig), (II) ili (IIa) mogu uključivati jednu ii više od sledećih odlika:
X1je CR11i X2je CR13.
X1je CR11i X2je N.
X1je N i X2je CR13.
X1je N i X2je N.
Z je NR7R8.
Z je CR7R8R14.
Z je OR7.
Z je S(O)nR7, gde je n 0, 1, ili 2.
R6je nesupstituisani C6-C10aril ili nesupstituisani 5- ili 6-člani heteroaril.
R6je C6-C10aril supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2ili 5- ili 6-člani heteroaril supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2.
R6je fenil supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2.
R6je 5- ili 6-člani heteroaril koji sadrži 1-3 dodatna heteroatoma odabrana između N, O, i S i opciono je supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2.
R6je hinolinil, tetrazolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, izotiazolil, furil, ili tienil, od kojih je svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2.
T2je C1-C6alkil, C6-C10aril, halo, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A- ,-C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra, ili -S(O)2NRaRb. T2je -NRaRb, gde je svaki od Rai Rb, nezavisno H ili C1-C6alkil, ili Rai Rb, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 7-člani heterocikloalkil prsten sa 0 ili 1 dodatnim heteroatomom, C1-C6alkil i 4 do 12-člani (npr., 4 do 7-člani) heterocikloalkil prsten opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3- T3. Q2je C1-C3alkil linker opciono supstituisan sa halo ili hidroksil.
Q2je veza ili metil ili etil linker i T2je H, halo, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A- , ili -S(O)2NRaRb.
R7nije H.
R7je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil ili 4 do 12-člani (npr., 4 do 7-člani) heterocikloalkil, svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
R7je 4 do 7-člani heterocikloalkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem - Q5-T5.
R7je piperidinil, tetrahidropiran, ciklopentil, ili cikloheksil, svaki opciono supstituisan jednim -Q5-T5.
T5je H, halo, C1-C6alkil, C1-C6alkoksil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, ili 4 do 12-člani (npr., 4 do 7-člani) heterocikloalkil.
Q5je veza i T5je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, ili 4 do 12-člani (npr., 4 do 7-člani) heterocikloalkil.
Q5je CO, S(O)2, ili NHC(O); i T5je C1-C6alkil, C1-C6alkoksil, C3-C8cikloalkil, ili 4 do 12-člani (npr., 4 do 7-člani) heterocikloalkil.
Q5je C1-C3alkil linker i T5je H ili C6-C10aril.
Q5je C1-C3alkil linker i T5je C3-C8cikloalkil, 4 do 7-člani heterocikloalkil, ili S(O)qRq.
R11je H.
R7je ciklopentil ili cikloheksil, svaki opciono supstituisan jednim -Q5-T5.
Q5je NHC(O) i T5je C1-C6alkil ili C1-C6alkoksi.
R7je izopropil.
Svaki od R2i R4, nezavisno je H ili C1-C6alkil opciono supstituisan sa amino, mono-C1-C6alkilamino, di- C1-C6alkilamino, ili C6-C10aril.
Svaki od R2i R4je metil.
R1je H.
R12je H, metil, etil, etenil, ili halo.
R12je metil.
R12je etil.
R12je etenil.
R8je H, metil, ili etil.
R8je metil.
R8je etil.
R8je 4 do 7-heterocikloalkil, npr., tetrahidropiran.
Z je NR7R8ili CR7R8R14gde R7i R8, zajedno sa atomom za koji su prikačeni formiraju prsten odabran iz grupe koja sadrži piperidinil, morfolinil, piperazinil, i cikloheksenil, svaki opciono supstituisan jednim -Q6-T6.
R13je H ili metil.
R13je H.
R3je H.
A- je Br ili Cl- .
[0013] Predmetna objava obezbeđuje i farmaceutske smeše koje sadrže jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača i jedno ili više jedinjenja koja se biraju između Formula objavljenih u ovom tekstu.
[0014] Sledeći aspekt pronalaska uključuje terapijski efikasnu količinu jednog ili više jedinjenja odabranih između Formula objavljenih u ovom tekstu, za upotrebu u metodu lečenja ili prevencije kancera.
[0015] Ukoliko nije drugačije navedeno, svaki opis metoda lečenja uključuje upotrebu jedinjenja za obezbeđivanje lečenja ili profilakse, kako je opisano u specifikaciji, kao i upotrebu jedinjenja za pripremanje medikamenta za lečenje ili prevenciju takvog stanja. Lečenje podrazumeva lečenje ljudi ili životinja, uključujući glodare i druge modele bolesti.
[0016] Na primer, metod uključuje korak primene, kod subjekta koji ima kancer sa aberantnom H3-K27 metilacijom, efikasne količine jednog ili više jedinjenja neke od formula objavljenih u ovom tekstu, pri čemu jedinjenje ili jedinjenja inhibiraju histonmetiltransferaznu aktivnost EZH2, čime leče kancer. Primeri aberantne metilacije H3-K27 mogu uključivati globalni porast i/ili izmenjenu distribuciju H3-K27 di ili tri-metilacije unutar hromatina kancerskih ćelija.
[0017] Na primer, kancer se bira iz grupe koja sadrži kancere u kojima se preterano eksprimiraju EZH2 ili druge PRC2 podjedinice, sadrže mutacije sa gubitkom funkcije u H3-K27 demetilazama kao UTX, ili se preterano eksprimiraju pomoćni proteini kao PHF19/PCL3 sposobni da povećaju ili pogrešno lokalizuju EZH2 aktivnost (vidi reference u Sneeringer et al. Proc Natl Acad Sci USA 107(49):20980-5, 2010).
[0018] Na primer, metod uključuje korak davanja, subjektu koji ima kancer koji preterano eksprimira EZH2, terapijski efikasne količine jednog ili više jedinjenja neke od Formula objavljenih u ovom tekstu, pri čemu jedinjenje ili jedinjenja inhibiraju histonmetiltransferaznu aktivnost EZH2, čime leče kancer.
[0019] Na primer, metod uključuje korak davanja, subjektu koji ima kancer sa mutacijom i gubljenjem funkcije H3-K27 demetilaze UTX, terapijski efikasne količine jednog ili više
1
jedinjenja neke od Formula objavljenih u ovom tekstu, pri čemu jedinjenje ili jedinjenja inhibiraju histon-metiltransferaznu aktivnost EZH2, čime leče kancer.
[0020] Na primer, metod uključuje korak davanja, subjektu koji ima kancer sa preteranom ekspresijom pomoćne komponente ili komponenti PRC2, kao PHF19/PCL3, terapijski efikasne količine jednog ili više jedinjenja neke od Formula objavljenih u ovom tekstu, pri čemu jedinjenje ili jedinjenja inhibiraju histon-metiltransferaznu aktivnost EZH2, čime leče kancer.
[0021] U još jednom aspektu, jedinjenja ovog pronalaska koriste se u metodu modulisanja aktivnosti divljeg tipa EZH2, katalitičke podjedinice PRC2 kompleksa, koja katališe monodo tri-metilaciju lizina 27 na histonu H3 (H3-K27). Na primer, jedinjenja mogu da se koriste u metodu inhibiranja aktivnosti EZH2 u ćeliji. Ovaj metod može da se izvede in vitro ili in vivo.
[0022] U još jednom aspektu, jedinjenja mogu da se koriste u metodu inhibiranja konverzije H3-K27 u trimetilisani H3-K27 kod subjekta. Metod uključuje primenu, kod subjekta, terapijski efikasne količine jednog ili više jedinjenja neke od Formula objavljenih u ovom tekstu za inhibiranje histon-metiltransferazne aktivnosti EZH2, čime se kod subjekta inhibira konverzija H3-K27 u trimetilisani H3-K27.
[0023] Na primer, metod uključuje korak davanja, subjektu koji ima kancer koji eksprimira Y641 mutant EZH2, terapijski efikasne količine jednog ili više jedinjenja neke od Formula objavljenih u ovom tekstu, pri čemu jedinjenje ili jedinjenja inhibiraju histonmetiltransferaznu aktivnost EZH2, čime se leči kancer.
[0024] Na primer, kancer se bira iz grupe koja sadrži folikularni limfom i difuzni B krupnoćelijski limfom (DLBCL) podtip poreklom iz germinativnog centra (GCB). Na primer, kancer je limfom, leukemija ili melanom. Poželjno, limfom je ne-Hodgkinov limfom, folikularni limfom ili difuzni B krupnoćelijski limfom. Alternativno, leukemija je hronična mijelogena leukemija (CML), akutna mijeloidna leukemija, akutna limfocitna leukemija ili leukemija mešovitih linija.
[0025] Prekancerozno stanje je mijelodisplastični sindrom (MDS, ranije poznat kao preleukemija).
[0026] Na primer, kancer je hematološki kancer.
[0027] Na primer, metod uključuje korak davanja, subjektu koji ima kancer koji eksprimira Y641 mutant EZH2, terapijski efikasne količine jednog ili više jedinjenja neke od Formula objavljenih u ovom tekstu, pri čemu jedinjenje ili jedinjenja selektivno inhibiraju histonmetiltransferaznu aktivnost Y641 mutanta EZH2, čime se leči kancer
[0028] Na primer, metod uključuje još i korake izvođenja testa za detektovanje Y641 mutanta EZH2 u uzorku koji sadrži kancerske ćelije subjekta koji ima kancer.
[0029] U još jednom aspektu, jedinjenja mogu da se koriste u metodu modulisanja aktivnosti divljeg tipa i mutantne histon-metiltransferaze EZH2, katalitičke podjedinice PRC2 kompleksa, koja katališe mono do trimetilaciju lizina 27 na histonu H3 (H3-K27). Na primer, predmetni pronalazak se odnosi na metod inhibiranja aktivnosti određenih mutantnih formi EZH2 u ćeliji. Mutantne forme EZH2 uključuju supstituciju tirozina 641 641 (Y641, takođe Tir641) divljeg tipa EZH2 drugom amino-kiselinom. Metod uključuje dovođenje u kontakt ćelije sa efikasnom količinom jednog ili više jedinjenja bilo koje od Formula objavljenih u ovom tekstu. Ovaj metod može da se izvede in vitro ili in vivo.
[0030] U još jednom aspektu, jedinjenja mogu da se koriste u metodu inibiranja konverzije H3-K27 u trimetilisani H3-K27, kod subjekta. Metod uključuje davanje subjektu koji eksprimira Y641 mutant EZH2 terapijski efikasne količine jednog ili više jedinjenja bilo kojeod Formula objavljenih u ovom tekstu za inhibiranje histon-metiltransferazne aktivnosti EZH2, čime se kod subjekta inhibira konverzija H3-K27 u trimetilisani H3-K27. Na primer, inhibirana histon-metiltransferazna aktivnost je ona od I641 mutanta EZH2. Na primer, jedinjenje ovog pronalaska selektivno inhibira histon-metiltransferaznu aktivnost Y641 mutanta EZH2. Na primer, Y641 mutant EZH2 se bira iz grupe koja sadrži Y641C, Y641F, Y641H, Y641N, i Y641S.
[0031] Metod inhibiranja kod subjekta, konverzije H3-K27 u trimetilisani H3-K27 može uključivati i izvođenje testa za detektovanje Y641 mutanta EZH2 u uzorku dobijenom od subjekta pre primene, kod subjekta koji eksprimira Y641 mutant EZH2, terapijski efikasne količine jednog ili više jedinjenja bilo koje od Formula objavljenih u ovom tekstu. Na primer, obavljanje testa za detektovanje Y641 mutanta EZH2 uključuje resekvenciranje celog genoma ili resekvenciranje ciljnog regiona kojim se detektuje nukleinska kiselina koja kodira Y641 mutant EZH2. Na primer, obavljanje testa za detektovanje Y641 mutanta EZH2 uključuje dovođenje u kontakt uzorka sa antitelom koje se specifično vezuje za polipeptid ili njegov fragment karakterističan za Y641 mutanta EZH2. Na primer, obavljanje testa za detektovanje Y641 mutanta EZH2 uključuje dovođenje u kontakt uzorka pod visoko stringentnim uslovima sa nukleinskokiselinskom probom koja se hibridizuje sa nukleinskom kiselinom kodirajućom za polipeptid ili njegov fragment karakterističan za Y641 mutant EZH2.
[0032] Pored toga, jedinjenja mogu da se koriste u metodu identifikovanja inhibitora Y641 mutanta EZH2. Metod uključuje korake kombinovanja izolovanog Y641 mutanta EZH2 sa histonskim supstratom, donorom metil grupe i testnim jedinjenjem, pri čemu histonski supstrat uključuje formu H3-K27 odabranu iz grupe koja sadrži nemetilisani H3-K27, monometilisani H3-K27, dimetilisani H3-K27, i bilo koju kombinaciju istog; i obavljanje testa za detektovanje metilacije H3-K27 (npr., formiranje trimetilisanog H3-K27) u histonskom supstratu, čime se testno jedinjenje identifikuje kao inhibitor Y641 mutanta EZH2, kada je metilacija H3-K27 (npr., formiranje trimetilisanog H3-K27) u prisustvu testnog jedinjenja manja od metilacije H3-K27 (npr., formiranje trimetilisanog H3-K27) u odsustvu testnog jedinjenja.
[0033] U jednom primeru izvođenja, obavljanje testa za detektovanje metilacije H3-K27 u histonskom supstratu uključuje merenje inkorporacije obeleženih metil grupa.
[0034] U jednom primeru izvođenja, obeležene metil grupe su izotopom obeležene metil grupe.
[0035] U jednom primeru izvođenja, obavljanje testa za detektovanje metilacije H3-K27 u histonskom supstratu uključuje dovođenje u kontakt histonskog supstrata sa antitelom koje se specifično vezuje za trimetilisani H3-K27.
[0036] Isto tako, jedinjenja mogu da se upotrebe u metodu identifikovanja selektivnog inhibitora Y641 mutanta EZH2. Metod uključuje korake kombinovanja izolovanog Y641 mutanta EZH2 sa histonskim supstratom, donorom metil grupe, i testnim jedinjenjem, pri čemu histonski supstrat uključuje formu H3-K27 odabranu iz grupe koja sadrži monometilisani H3-K27, dimetilisani H3-K27, i kombinaciju monometilisanog H3-K27 i dimetilisanog H3-K27, čime se formira testna mešavina; kombinovanje izolovanog divljeg tipa EZH2 sa histonskim supstratom, donorom metil grupe, i testnim jedinjenjem, pri čemu histonski supstrat uključuje formu H3-K27 odabranu iz grupe koja sadrži monometilisani H3-K27, dimetilisani H3-K27, i kombinaciju monometilisanog H3-K27 i dimetilisanog H3-K27, čime se formira kontrolna mešavina; obavljanje testa za detektovanje trimetilacije histonskog supstrata u svakoj od testnih mešavina; izračunavanje odnosa (a) trimetilacije Y641 mutantom EZH2 sa testnim jedinjenjem (M+) prema (b) trimetilaciji Y641 mutantom EZH2 bez testnog jedinjenja (M-); izračunavanje odnosa (c) trimetilacije divljim tipom EZH2 i testnim jedinjenjem (WT+) prema (d) trimetilaciji divljim tipom EZH2 bez testnog jedinjenja (WT-); upoređivanje odnosa (a)/(b) sa odnosom (c)/(d); i identifikovanje testnog jedinjenja kao selektivnog inhibitora Y641 mutanta EZH2 kada je odnos (a)/(b) manji od odnosa (c)/(d).
[0037] Predmetna objava uključuje i metod identifikovanja subjekta kao kandidata za lečenje pomoću jednog ili više jedinjenja pronalaska. Metod uključuje korake izvođenja testa za detektovanje Y641 mutanta EZH2 u uzorku dobijenom od subjekta; i identifikovanje subjekta koji eksprimira Y641 mutant EZH2 kao kandidata za lečenje pomoću jednog ili više jedinjenja pronalaska, pri čemu jedinjenje ili jedinjenja inhibiraju histon-metiltransferaznu aktivnost EZH2.
1
[0038] Jedinjenja mogu da se koriste i u metodu inhibiranja konverzije H3-K27 u trimetilisani H3-K27. Metod uključuje korake dovođenja u kontakt Y641 mutanta EZH2 sa histonskim supstratom koji uključuje H3-K27 i efikasnom količinom jedinjenja predmetnog pronalaska, pri čemu jedinjenje inhibira histon-metiltransferaznu aktivnost EZH2, čime inhibira konverziju H3-K27 u trimetilisani H3-K27.
[0039] Pored toga, jedinjenja ili metodi opisani u ovom tekstu mogu da se koriste za istraživanje (npr., studiju epigenetičkih enzima) i u druge neterapijske svrhe.
[0040] Ukoliko nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni termini upotrebljeni u ovom tekstu imaju značenja koja lako razume prosečno obučeni stručnjak u oblasti kojoj pronalazak pripada. Iako se u primeni ili testiranju predmetnog pronalaska mogu koristiti metodi i materijali slični ili ekvivalentni onima koji su opisani u ovom tekstu, pogodni metodi i materijali opisani su u nastavku ovog teksta. U slučaju konflikta, predmetna specifikacija, uključujući definicije, biće kontrola. Pored toga, materijali, metodi i primeri služe samo kao ilustracija i ne predstavljaju ograničenje pronalaska.
[0041] Druge odlike i prednosti pronalaska biće jasne na osnovu detaljnog opisa i zahteva, koji slede.
KRATAK OPIS SLIKA
[0042]
Slika 1 (A) predstavlja idealizovani dijagram zastupljenosti ćelija (tj., broja ćelija) u funkciji vremena, koji pokazuje eksponencijalnu proliferaciju tokom log-faze rasta ćelija.
Slika 1 (B) predstavlja idealizovani grafikon ln(brojnost ćelija) u funkciji vremena za podatke sa table (A).
Slika 2 predstavlja dijagram koji pokazuje bifazne krive rasta ćelija u prisustvu antiproliferativnog jedinjenja kod kojeg postoji period odlaganje pre nego što se ispolji uticaj tog jedinjenja na rast ćelija. Jedinjenje počinje da utiče na rast ćelija u vremenskoj tački označenoj kao "početak uticaja". Puni krugovi predstavljaju idealizovane podatke za kontrolni uzorak koji je primao prenosnik (ili rastvarač), i koji nije tretiran jedinjenjem. Drugi simboli predstavljaju krive bifaznog rasta za ćelije tretirane različitim koncentracijama jedinjenja (tj., leka).
Slika 3 predstavlja dijagram kpu funkciji koncentracije jedinjenja za (A) citostatsko i (B) citotoksično jedinjenje, koji ilustruje grafičko određivanje LCC za citotoksično sredstvo. Primećuje se da za citostatsko jedinjenje (tabla A), vrednost kpnikada ne pada ispod nule.
Slika 4 predstavlja dijagram koji prikazuje globalnu H3K27me3 metilaciju u WSU-DLCL2 tumorima iz miševa tretiranih Jedinjenjem 87 tokom 7 dana.
Slika 5 predstavlja dijagram koji prikazuje globalnu H3K27me3 metilaciju u WSU-DLCL2 tumorima iz miševa tretiranih Jedinjenjem 141 tokom 7 dana.
Slika 6 predstavlja dijagram koji prikazuje rast tumora kod miševa koji nose ksenograft WSU-DLCL2. tokom tretmana u trajanju od 28 dana prenosnikom ili Jedinjenjem 141.
Slika 7 predstavlja dijagram koji prikazuje rast tumora kod miševa koji nose ksenograft WSU-DLCL2, tretiranih Jedinjenjem 44.
Slika 8 predstavlja dijagram koji prikazuje globalnu H3K27me3 metilaciju u WSU-DLCL2 tumorima kod miševa tretiranih Jedinjenjem 44 tokom 28 i 7 dana. Slika 9 predstavlja dijagram koji prikazuje rast tumora kod miševa koji nose ksenograft WSU-DLCL2, uz tretman Jedinjenjem 44, pri različitim režimima doziranja.
Slika 10 predstavlja dijagram koji prikazuje globalnu H3K27me3 metilaciju u WSU-DLCL2 tumorima kod miševa tretiranih Jedinjenjem 44, pri različitim režimima doziranja, tokom 28 dana.
Slika 11 predstavlja dijagram koji prikazuje efekat Jedinjenja 44 na telesnu težinu miševa. Podaci su prikazani kao srednja vrednost ± SD (n=9). Doze koje su dovele do smrti nisu unete.
Slika 12 predstavlja dijagram koji prikazuje antitumorske efekte oralno primenjenog Jedinjenja 44 na ksenograft difuznog B krupnoćelijskog limfoma KARPAS-422 kod miševa. Podaci su prikazani kao srednja vrednost ± SD (n=9). * P < 0.05 prema kontroli sa prenosnikom na dan 29 (ANOVA za ponovljena merenja, praćeno testom višestrukog poređenja po Dunnettovom tipu). Doze koje su dovele do smrti nisu unete.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0043] Predmetni pronalazak obezbeđuje nova aril- ili heteroaril-supstituisana benzenova jedinjenja za upotrebu u lečenju ili prevenciji poremećaja proliferacije ćelija hematološkog sistema.
1
1. Aril- ili heteroaril-supstituisana benzenska jedinjenja
[0044] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja Formule (I):
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli za upotrebu u lečenju ili prevenciji poremećaja ćelijske proliferacije hematološkog sistema. U ovoj formuli:
X1je N ili CR11;
X2je N ili CR13;
Z je NR7R8, OR7, S(O)nR7, ili CR7R8R14, gde je n 0, 1, ili 2;
svaki od R1, R5, R9, i R10, nezavisno, je H ili C1-C6alkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, COOH, C(O)O-C1-C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril;
svaki od R2, R3, i R4, nezavisno, je -Q1-T1, gde je Q1veza ili C1-C3alkil linker opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksil ili C1-C6alkoksi, i T1je H, halo, hidroksil, COOH, cijano, ili RS1, gde je RS1C1-C3alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C1-C6alkoksil, C(O)O-C1-C6alkil, C3-C8ckloalkil, C6-C10aril, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, i RS1je opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, okso, COOH, C(O)O- C1-C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6- člani heteroaril;
R6je C6-C10aril ili 5- ili 6-člani heteroaril, od kojih je svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2, gde je Q2veza ili C1-C3alkil linker opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksil ili C1-C6alkoksi, i T2je H, halo, cijano, -
1
ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A- , -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra, -S(O)2NRaRb, ili RS2, gde je svaki od Ra, Rb, i Rc, nezavisno H ili RS3, A- je farmaceutski prihvatljivi anjon, svaki od RS2i RS3, nezavisno, je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, ili Rai Rb, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 12-člani heterocikloalkil prsten koji ima 0 ili 1 dodatni heteroatom, i svaki od RS2, RS3, i 4 do 12-članog heterocikloalkil prstena formiranog od Rai Rb, je opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3, gde je Q3veza ili C1-C3alkil linker svaki opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksil ili C1-C6alkoksi, i T3je odabran iz grupe koja sadrži halo, cijano, C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6-člani heteroaril, ORd, COORd, -S(O)2Rd, -NRdRe, i -C(O)NRdRe, svaki od Rdi Renezavisno je H ili C1-C6alkil, ili -Q3-T3je okso; ili svaka dva susedna -Q2-T2, zajedno sa atomima za koje su prikačeni formiraju 5- ili 6-člani prsten koji opciono sadrži 1-4 heteroatoma odabrana između N, O i S i opciono supstituisana jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, COOH, C(O)O-C1-C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril;
R7je -Q4-T4, gde je Q4veza, C1-C4alkil linker, ili C2-C4alkenil linker, svaki linker je opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksil ili C1-C6alkoksi, i T4je H, halo, cijano, NRfRg, -ORf, -C(O)Rf, -C(O)ORf, -C(O)NRfRg, -C(O)NRfORg, -NRfC(O)Rg, -S(O)2Rf, ili RS4, gde je svaki od Rfi Rg, nezavisno H ili RS5, svaki od RS4i RS5, nezavisno je C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, i svaki od RS4i RS5je opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5, gde je Q5veza, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2, ili C1-C3alkil linker, Rkje H ili C1-C6alkil, i T5je H, halo, C1-C6alkil, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono- C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6-člani heteroaril, ili S(O)qRqgde je q 0, 1, ili 2 i Rqje C1- C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, i T5je opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, C1-C6alkil, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril osim kada je T5H, halo, hidroksil, ili cijano; ili -Q5-T5je okso;
1
svaki od R8, R11, R12, i R13, nezavisno, je H, halo, hidroksil, COOH, cijano, RS6, ORS6, ili COORS6, gde je RS6C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C8cikloalkil, 4 do 12-člani heterocikloalkil, amino, mono-C1-C6alkilamino, ili di- C1-C6alkilamino, i RS6je opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, COOH, C(O)O-C1- C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, i di-C1-C6alkilamino; ili R7i R8, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 11-člani heterocikloalkil prsten sa 0 do 2 dodatna heteroatoma, ili R7i R8, zajedno sa C atomom za koji su prikačeni, formiraju C3-C8cikloalkil ili 4 do 11-člani heterocikloalkil prsten sa 1 do 3 heteroatoma, i svaki od 4 do 11-članih heterocikloalkil prstenova ili C3-C8cikloalkila formiranih od R7i R8je opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q6-T6, gde je Q6veza, C(O), C(O)NRm, NRmC(O), S(O)2, ili C1-C3alkil linker, Rmje H ili C1-C6alkil, i T6je H, halo, C1- C6alkil, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono- C1-C6alkilamino, di-C1- C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6- člani heteroaril, ili S(O)pRpgde je p 0, 1, ili 2 i Rpje C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, i T6je opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, C1-C6alkil, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril osim kada je T6H, halo, hidroksil, ili cijano; ili -Q6-T6je okso; i
R14je odsutan, H, ili C1-C6alkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, COOH, C(O)O-C1- C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6- člani heteroaril.
[0045] Na primer, X1je CR11, i X2je CR13.
[0046] Na primer, X1je CR11i X2je N.
[0047] Na primer, X1je N i X2je CR13.
[0048] Na primer, X1je N i X2je N.
[0049] Na primer, Z je NR7R8.
[0050] Na primer, Z je CR7R8R14.
[0051] Na primer, Z je OR7.
[0052] Na primer, Z je S(O)nR7, gde je n 0, 1, ili 2.
[0053] Na primer, Z je SR7.
[0054] Na primer, R6je nesupstituisani C6-C10aril ili nesupstituisani 5- ili 6-člani heteroaril.
1
[0055] Na primer, R6je C6-C10aril supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2ili 5- ili 6-člani heteroaril supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2.
[0056] Na primer, R6je nesupstituisani fenil.
[0057] Na primer, R6je fenil supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2.
[0058] Na primer, R6je 5 do 6-člani heteroaril koji sadrži 1-3 dodatna heteroatoma odabrana između N, O, i S i opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2.
[0059] Na primer, R6je piridinil, pirazolil, pirimidinil, hinolinil, tetrazolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, izotiazolil, furil, ili tienil, od kojih je svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2.
[0060] Na primer, Q2je veza.
[0061] Na primer, Q2je nesupstituisani C1-C3alkil linker.
[0062] Na primer, T2je C1-C6alkil ili C6-C10aril, svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3.
[0063] Na primer, T2je nesupstituisani ili supstituisani linearnolančani C1-C6ili granati C3-C6alkil, uključujući ali ne ograničavajući se na metil, etil, n-propil, i-propil, n-butil, s-butil, tbutil, n-pentil, s-pentil i n-heksil.
[0064] Na primer, T2je fenil.
[0065] Na primer, T2je halo (npr., fluor, hlor, brom, i jod).
[0066] Na primer, T2je 4 do 7-člani heterocikloalkil (npr., azetidinil, oksetanil, tietanil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil, tetrahidrofuranil, piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, tetrahidro-2H-piranil, 3,6-dihidro-2H-piranil, tetrahidro-2H-tiopiran, morfolinil, 1,4-diazepanil, 1,4-oksazepanil, 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptanil, 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptanil, 2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptanil, 2,6-diazaspiro[3.3]heptanil, i slično) opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3.
[0067] Na primer, T2je -ORa, -NR
aRb, -(NRaRbRc) A- , -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra, ili -S(O)2NRaRb.
[0068] Na primer, T2je -NRaRbili -C(O)NRaRb, gde je svaki od Rai Rb, nezavisno H ili C1-C6alkil, ili Rai Rb, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 7-člani heterocikloalkil prsten sa 0 ili 1 dodatnim heteroatomom, C1-C6alkil i 4 do 7-člani heterocikloalkil prsten su opciono supstituisani jednim ili većim brojem -Q3-T3.
[0069] Na primer, Q2je C1-C3alkil linker opciono supstituisan sa halo ili hidroksil.
[0070] Na primer, Q2je veza ili metil linker i T2je H, halo, -ORa, -NR
aRb, -(NRaRbRc) A- , ili -S(O)2NRaRb.
1
[0071] Na primer, svaki od Ra, Rb, i Rc, nezavisno je H ili C1-C6alkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3.
[0072] Na primer, jedan od Ra, Rb, i Rcje H.
[0073] Na primer, Rai Rb, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 7-člani heterocikloalkil prsten sa 0 ili 1 dodatnim heteroatomom na N atomu (npr., azetidinil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil, piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, morfolinil, 1,4-diazepanil, 1,4-oksazepanil, 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptanil, 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptanil, 2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptanil, 2,6-diazaspiro[3.3]heptanil, i slično) i prsten je opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3.
[0074] Na primer, -Q3-T3je okso.
[0075] Na primer, T2je 4 do 7-člani heterocikloalkil ili C3-C8cikloalkil i jedan ili više -Q3-T3su okso.
[0076] Na primer, Q3 je veza ili nesupstituisani ili supstituisani C1-C3alkil linker.
[0077] Na primer, T3je H, halo, 4 do 7-člani heterocikloalkil, C1-C3alkil, ORd, COORd, -S(O)2Rd, ili -NRdRe.
[0078] Na primer, jedan od Rdi Reje H.
[0079] Na primer, R7nije H.
[0080] Na primer, R7je -C(O)Rf.
[0081] Na primer, R7je -C(O)Rf, gde je RfC3-C8cikloalkil.
[0082] Na primer, R7je C6-C10aril supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0083] Na primer, R7je fenil opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0084] Na primer, R7je C1-C6alkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0085] Na primer, R7je C3-C8cikloalkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0086] Na primer, R7je 4 do 7-člani heterocikloalkil (npr., azetidinil, oksetanil, tietanil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil, tetrahidrofuranil, piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, tetrahidro-2H-piranil, 3,6-dihidro-2H-piranil, tetrahidro-2H-tiopiran, i morfolinil, i slično) opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0087] Na primer, R7je 5 do 6-člani heterocikloalkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0088] Na primer, R7je izopropil.
[0089] Na primer, R7je pirolidinil, piperidinil, tetrahidropiran, ciklopentil, cikloheksil, ili cikloheptil, svaki opciono supstituisan jednim -Q5-T5.
[0090] Na primer, R7je ciklopentil ili cikloheksil, svaki opciono supstituisan jednim -Q5-T5.
2
[0091] Na primer, R7je pirolidinil, piperidinil, tetrahidropiran, tetrahidro-2H-tiopiranil, ciklopentil, cikloheksil, ili cikloheptil, svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0092] Na primer, R7je ciklopentil, cikloheksil ili tetrahidro-2H-tiopiranil, svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0093] Na primer, jedan ili više -Q5-T5su okso.
[0094] Na primer, R7je 1-oksid-tetrahidro-2H-tiopiranil ili 1,1-dioksid-tetrahidro-2H-tiopiranil.
[0095] Na primer, Q5je veza i T5je amino, mono-C1-C6alkilamino, ili di-C1-C6alkilamino.
[0096] Na primer, Q5je NHC(O) i T5je C1-C6alkil ili C1-C6alkoksi.
[0097] Na primer, -Q5-T5je okso.
[0098] Na primer, T4je 4 do 7-člani heterocikloalkil ili C3-C8cikloalkil i jedan ili više -Q5-T5su okso.
[0099] Na primer, T5je H, halo, C1-C6alkil, C1-C6alkoksil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, ili 4 do 7-člani heterocikloalkil.
[0100] Na primer, Q5je veza i T5je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, ili 4 do 7-člani heterocikloalkil.
[0101] Na primer, Q5je CO, S(O)2, ili NHC(O); i T5je C1-C6alkil, C1-C6alkoksil, C3-C8cikloalkil, ili 4 do 7-člani heterocikloalkil.
[0102] Na primer, T5je C1-C6alkil ili C1-C6alkoksil, svaki opciono supstituisan sa halo, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, ili C3-C8cikloalkil.
[0103] Na primer, Q5je C1-C3alkil linker i T5je H ili C6-C10aril.
[0104] Na primer, Q5je C1-C3alkil linker i T5je C3-C8cikloalkil, 4 do 7-člani heterocikloalkil, ili S(O)qRq.
[0105] Na primer, R11je H.
[0106] Na primer, svaki od R2i R4, nezavisno, je H ili C1-C6alkil opciono supstituisan sa amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, ili C6-C10aril.
[0107] Na primer, svaki od R2i R4, nezavisno je C1-C3alkil opciono supstituisan sa C1-C6alkoksil.
[0108] Na primer, svaki od R2i R4je metil.
[0109] Na primer, R1je H.
[0110] Na primer, R12je H, metil, etil, etenil, ili halo.
[0111] Na primer, R12je metil.
[0112] Na primer, R12je etil.
[0113] Na primer, R12je etenil.
[0114] Na primer, R8je H, metil, etil, ili etenil.
[0115] Na primer, R8je metil.
[0116] Na primer, R8je etil.
[0117] Na primer, R8je 4 do 7-člani heterocikloalkil (npr., azetidinil, oksetanil, tietanil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil, tetrahidrofuranil, piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, tetrahidro-2H-piranil, 3,6-dihidro-2H-piranil, tetrahidro-2H-tiopiran, morfolinil, 1,4-diazepanil, 1,4-oksazepanil, 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptanil, 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptanil, 2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptanil, 2,6-diazaspiro[3.3]heptanil, i slično).
[0118] Na primer, R8je tetrahidropiran.
[0119] Na primer, R8je tetrahidropiran i R7je -Q4-T4, gde je Q4veza ili C1-C4alkil linker i T4je H, C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil ili 4 do 7-člani heterocikloalkil.
[0120] Na primer, Z je NR7R8ili CR7R8R14gde R7i R8, zajedno sa atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 11-člani heterocikloalkil prsten sa 1 do 3 heteroatoma (npr., azetidinil, oksetanil, tietanil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil, tetrahidrofuranil, piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, tetrahidro-2H-piranil, 3,6-dihidro-2H-piranil, tetrahidro-2H-tiopiran, i morfolinil, 1,4-dioksa-8-azaspiro[4.5]dekanil, i slično) ili C3-C8cikloalkil, svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q6-T6.
[0121] Na primer, prsten koji formiraju R7i R8je odabran iz grupe koja sadrži azetidinil, pirolidinil, piperidinil, morfolinil, piperazinil, 1,4-dioksa-8-azaspiro[4.5]dekanil, i ckkloheksenil, svaki opciono supstituisan jednim -Q6-T6.
[0122] Na primer, -Q6-T6je okso.
[0123] Na primer, T6je H, halo, C1-C6alkil, C1-C6alkoksil, C3-C8ciloalkil, C6-C10aril, ili 4 do 7-člani heterocikloalkil.
[0124] Na primer, Q6je veza i T6je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, ili 4 do 7-člani heterocikloalkil.
[0125] Na primer, Q6je CO, S(O)2, ili NHC(O); i T6je C1-C6alkil, C1-C6alkoksil, C3-C8cikloalkil, ili 4 do 7-člani heterocikloalkil.
[0126] Na primer, T6je C1-C6alkil ili C1-C6alkoksil, svaki opciono supstituisan sa halo, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, ili C3-C8cikloalkil.
[0127] Na primer, Q6je C1-C3alkil linker i T6je H ili C6-C10aril.
[0128] Na primer, Q6je C1-C3alkil linker i T6je C3-C8cikloalkil, 4 do 7-člani heterocikloalkil, ili S(O)pRp.
[0129] Na primer, svaki od Rpi Rq, nezavisno, je C1-C6alkil.
[0130] Na primer, R13je H ili metil.
[0131] Na primer, R13je H.
[0132] Na primer, R3je H.
[0133] Na primer, A- je Br- ili Cl- .
[0134] Na primer, svaki od R5, R9, i R10je H.
[0135] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja Formule (Ia)
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli za upotrebu u lečenju ili prevenciji poremećaja proliferacije ćelija hematološkog sistema, gde:
X1je N ili CR11;
X2je N ili CR13;
Z je NR7R8, OR7, S(O)nR7, ili CR7R8R14, gde je n 0, 1, ili 2;
svaki od R1i R5, nezavisno, je H ili C1-C6alkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, COOH, C(O)O-C1-C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1- C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril;
svaki od R2, R3, i R4, nezavisno, je -Q1-T1, gde je Q1veza ili C1-C3alkil linker opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksil ili C1-C6alkoksi, i T1je H, halo, hidroksil, COOH, cijano, ili RS1, gde je RS1C1-C3alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C1-C6alkoksil, C(O)O-C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, i RS1je opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata
2
odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, okso, COOH, C(O)O- C1-C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6- člani heteroaril;
R6je C6-C10aril ili 5- ili 6-člani heteroaril, od kojih je svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2, gde je Q2veza ili C1-C3alkil linker opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksil ili C1-C6alkoksi, i T2je H, halo, cijano, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A- , -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra, -S(O)2NRaRb, ili RS2, gde je svaki od Ra, Rb, i Rc, nezavisno H ili RS3, A- je farmaceutski prihvatljivi anjon, svaki od RS2i RS3, nezavisno, je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, ili Rai Rb, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 12-člani heterocikloalkil prsten sa 0 ili 1 dodatnim heteroatomom, i svaki od RS2, RS3, i 4 do 12-članog heterocikloalkil prstena koji formiraju Rai Rb, je opciono supstituisan jednim ili većim brojem - Q3-T3, gde je Q3veza ili C1-C3alkil linker svaki opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksil ili C1-C6alkoksi, i T3je odabran iz grupe koja sadrži halo, cijano, C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6- člani heteroaril, ORd, COORd, -S(O)2Rd, -NRdRe, i -C(O)NRdRe, svaki od Rdi Renezavisno je H ili C1-C6alkil, ili -Q3-T3je okso; ili svaka dva susedna -Q2-T2, zajedno sa atomima za koje su prikačeni formiraju 5- ili 6-člani prsten koji opciono sadrži 1-4 heteroatoma odabrana između N, O i S i opciono je supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, COOH, C(O)O-C1-C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril;
R7je -Q4-T4, gde je Q4veza, C1-C4alkil linker, ili C2-C4alkenil linker, svaki linker je opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksil ili C1-C6alkoksi, i T4je H, halo, cijano, NRfRg, -ORf, -C(O)Rf, -C(O)ORf, -C(O)NRfRg, -C(O)NRfORg, -NRtC(O)Rg, -S(O)2Rf, ili RS4, gde je svaki od Rfi Rg, nezavisno H ili RS5, svaki od RS4i RS5, nezavisno je C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, i svaki od RS4i RS5je opciono supstituisan jednim ili veći brojem -Q5-T5, gde je Q5veza, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2, ili C1-C3alkil linker, Rkje H ili C1-C6alkil, i T5je H, halo, C1-C6alkil, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono- C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6-člani heteroaril, ili S(O)qRqgde je q 0, 1, ili 2 i Rqje C1- C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, i T5je opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, C1-C6alkil, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril osim kada je T5H, halo, hidroksil, ili cijano; ili -Q5-T5je okso; svaki od R8, R11, R12, i R13, nezavisno, je H, halo, hidroksil, COOH, cijano, RS6, ORS6, ili COORS6, gde je RS6C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C8cikloalkil, 4 do 12-člani heterocikloalkil, amino, mono-C1-C6alkilamino, ili di- C1-C6alkilamino, i RS6je opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, COOH, C(O)O-C1- C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, i di-C1-C6alkilamino; ili R7i R8, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 11-člani heterocikloalkil prsten sa 0 do 2 dodatna heteroatoma, ili R7i R8, zajedno sa C atomom za koji su prikačeni, formiraju C3-C8cikloalkil ili 4 do 11-člani heterocikloalkil prsten sa 1 do 3 heteroatoma, i svaki od 4 do 11-članih heterocikloalkil prstenova ili C3-C8cikloalkila koje formiraju R7i R8je opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q6-T6, gde je Q6veza, C(O), C(O)NRm, NRmC(O), S(O)2, ili C1-C3alkil linker, Rmje H ili C1-C6alkil, i T6je H, halo, C1- C6alkil, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1- C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6-člani heteroaril, ili S(O)pRpgde je p 0, 1, ili 2 i Rpje C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 7-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, i T6je opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, C1-C6alkil, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril osim kada je T6H, halo, hidroksil, ili cijano; ili -Q6-T6je okso; i
R14je odsutan, H, ili C1-C6alkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, COOH, C(O)O-C1- C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6- člani heteroaril.
[0136] Na primer, X2je CR13.
[0137] Na primer, X2je N.
[0138] Na primer, Z je NR7R8.
[0139] Na primer, Z je CR7R8R14.
[0140] Na primer, Z je OR7.
2
[0141] Na primer, Z je S(O)nR7, gde je n 0, 1, ili 2.
[0142] Na primer, Z je SR7.
[0143] Na primer, R6je nesupstituisani C6-C10aril ili nesupstituisani 5- ili 6-člani heteroaril.
[0144] Na primer, R6je C6-C10aril supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2ili 5- ili 6-člani heteroaril supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2.
[0145] Na primer, R6je nesupstituisani fenil.
[0146] Na primer, R6je fenil supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2.
[0147] Na primer, R6je 5 do 6-člani heteroaril koji sadrži 1-3 dodatna heteroatoma odabrana između N, O, i S i opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2.
[0148] Na primer, R6je piridinil, pirazolil, pirimidinil, hinolinil, tetrazolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, izotiazolil, furil, ili tienil, od kojih je svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2.
[0149] Na primer, Q2je veza.
[0150] Na primer, Q2je nesupstituisani C1-C3alkil linker.
[0151] Na primer, T2je C1-C6alkil ili C6-C10aril, svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3.
[0152] Na primer, T2je nesupstituisani supstituisani linearni C1-C6ili granati C3-C6alkil, uključujući ali ne ograničavajući se na metil, etil, n-propil, i-propil, n-butil, s-butil, t-butil, npentil, s-pentil i n-heksil.
[0153] Na primer, T2je fenil.
[0154] Na primer, T2je halo (npr., fluor, hlor, brom, i jod).
[0155] Na primer, T2je 4 do 7-člani heterocikloalkil (npr., azetidinil, oksetanil, tietanil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil, tetrahidrofuranil, piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, tetrahidro-2H-piranil, 3,6-dihidro-2H-piranil, tetrahidro-2H-tiopiran, morfolinil, 1,4-diazepanil, 1,4-oksazepanil, 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptanil, 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptanil, 2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptanil, 2,6-diazaspiro[3.3]heptanil, i slično) opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3.
[0156] Na primer, T2je -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A- ,-C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra, ili -S(O)2NRaRb.
[0157] Na primer, T2je -NRaRbili -C(O)NRaRb, gde je svaki od Rai Rb, nezavisno H ili C1-C6alkil, ili Rai Rb, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 7-člani heterocikloalkil prsten sa 0 ili 1 dodatnim heteroatomom, C1-C6alkil i 4 do 7-člani heterocikloalkil prsten su opciono supstituisani jednim ili većim brojem -Q3-T3.
[0158] Na primer, Q2je C1-C3alkil linker opciono supstituisan sa halo ili hidroksil.
2
[0159] Na primer, Q2je veza ili metil linker i T2je H, halo, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A- ili -S(O)2NRaRb.
[0160] Na primer, svaki od Ra, Rb, i Rc, nezavisno je H ili C1-C6alkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3.
[0161] Na primer, jedan od Ra, Rb, i Rcje H.
[0162] Na primer, Rai Rb, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 7-člani heterocikloalkil prsten sa 0 ili 1 dodatnim heteroatomom na N atomu (npr., azetidinil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil, piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, morfolinil, 1,4-diazepanil, 1,4-oksazepanil, 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptanil, 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptanil, 2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptanil, 2,6-diazaspiro[3.3]heptanil, i slično) i prsten je opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3.
[0163] Na primer, -Q3-T3je okso.
[0164] Na primer, T2je 4 do 7-člani heterocikloalkil ili C3-C8cikloalkil i jedan ili više -Q3-T3su okso.
[0165] Na primer, Q3je veza ili nesupstituisani ili supstituisani C1-C3alkil linker.
[0166] Na primer, T3je H, halo, 4 do 7-člani heterocikloalkil, C1-C3alkil, ORd, COORd,-S(O)2Rd, ili -NRdRe.
[0167] Na primer, jedan od Rdi Reje H.
[0168] Na primer, R7nije H.
[0169] Na primer, R7je -C(O)Rf.
[0170] Na primer, R7je -C(O)Rf, gde je RfC3-C8cikloalkil.
[0171] Na primer, R7je C6-C10aril supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0172] Na primer, R7je fenil opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0173] Na primer, R7je C1-C6alkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0174] Na primer, R7je C3-C8cikloalkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0175] Na primer, R7je 4 do 7-člani heterocikloalkil (npr., azetidinil, oksetanil, tietanil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil, tetrahidrofuranil, piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, tetrahidro-2H-piranil, 3,6-dihidro-2H-piranil, tetrahidro-2H-tiopiran, i morfolinil, i slično) opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0176] Na primer, R7je 5 do 6-člani heterocikloalkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0177] Na primer, R7je izopropil.
2
[0178] Na primer, R7je pirolidinil, piperidinil, tetrahidropiran, ciklopentil, cikloheksil, ili cikloheptil, svaki opciono supstituisan jednim -Q5-T5.
[0179] Na primer, R7je ciklopentil ili cikloheksil, svaki opciono supstituisan jednim -Q5-T5.
[0180] Na primer, R7je pirolidinil, piperidinil, tetrahidropiran, tetrahidro-2H-tiopiranil, ciklopentil, cikloheksil, ili cikloheptil, svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0181] Na primer, R7je ciklopentil, cikloheksil ili tetrahidro-2H-tiopiranil, svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0182] Na primer, jedan ili više -Q5-T5su okso.
[0183] Na primer, R7je 1-oksid-tetrahidro-2H-tiopiranil ili 1,1-dioksid-tetrahidro-2H-tiopiranil.
[0184] Na primer, Q5je veza i T5je amino, mono-C1-C6alkilamino, ili di-C1-C6alkilamino.
[0185] Na primer, Q5je NHC(O) i T5je C1-C6alkil ili C1-C6alkoksi.
[0186] Na primer, -Q5-T5je okso.
[0187] Na primer, T4je 4 do 7-člani heterocikloalkil ili C3-C8cikloalkil i jedan ili više -Q5-T5su okso.
[0188] Na primer, T5je H, halo, C1-C6alkil, C1-C6alkoksil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, ili 4 do 7-člani heterocikloalkil.
[0189] Na primer, Q5je veza i T5je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, ili 4 do 7-člani heterocikloalkil.
[0190] Na primer, Q5je CO, S(O)2, ili NHC(O); i T5je C1-C6alkil, C1-C6alkoksil, C3-C8cikloalkil, ili 4 do 7-člani heterocikloalkil.
[0191] Na primer, T5je C1-C6alkil ili C1-C6alkoksil, svaki opciono supstituisan sa halo, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, ili C3-C8cikloalkil.
[0192] Na primer, Q5je C1-C3alkil linker i T5je H ili C6-C10aril.
[0193] Na primer, Q5je C1-C3alkil linker i T5je C3-C8cikloalkil, 4 do 7-člani heterocikloalkil, ili S(O)qRq.
[0194] Na primer, R11je H.
[0195] Na primer, svaki od R2i R4, nezavisno, je H ili C1-C6alkil opciono supstituisan sa amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, ili C6-C10aril.
[0196] Na primer, svaki od R2i R4, nezavisno je C1-C3alkil opciono supstituisan sa C1-C6alkoksil.
[0197] Na primer, svaki od R2i R4je metil.
[0198] Na primer, R1je H.
2
[0199] Na primer, R5je H.
[0200] Na primer, R12je H, metil, etil, etenil, ili halo.
[0201] Na primer, R12je metil.
[0202] Na primer, R12je etil.
[0203] Na primer, R12je etenil.
[0204] Na primer, R8je H, metil, etil, ili etenil.
[0205] Na primer, R8je metil.
[0206] Na primer, R8je etil.
[0207] Na primer, R8je 4 do 7-člani heterocikloalkil (npr., azetidinil, oksetanil, tietanil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil, tetrahidrofuranil, piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, tetrahidro-2H-piranil, 3,6-dihidro-2H-piranil, tetrahidro-2H-tiopiran, morfolinil, 1,4-diazepanil, 1,4-oksazepanil, 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptanil, 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptanil, 2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptanil, 2,6-diazaspiro[3.3]heptanil, i slično).
[0208] Na primer, R8je tetrahidropiran.
[0209] Na primer, R8je tetrahidropiran i R7je -Q4-T4, gde je Q4veza ili C1-C4alkil linker i T4je H, C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil ili 4 do 7-člani heterocikloalkil.
[0210] Na primer, Z je NR7R8ili CR7R8R14gde R7i R8, zajedno sa atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 11-člani heterocikloalkil prsten sa 1 do 3 heteroatoma (npr., azetidinil, oksetanil, tietanil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil, tetrahidrofuranil, piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, tetrahidro-2H-piranil, 3,6-dihidro-2H-piranil, tetrahidro-2H-tiopiran, i morfolinil, 1,4-dioksa-8-azaspiro[4.5]dekanil, i slično) ili C3-C8cikloalkil, svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q6-T6.
[0211] Na primer, prsten koji formiraju R7i R8je odabran iz grupe koja sadrži azetidinil, pirolidinil, piperidinil, morfolinil, piperazinil, 1,4-dioksa-8-azaspiro[4.5]dekanil, i cikloheksenil, svaki opciono supstituisan jednim -Q6-T6.
[0212] Na primer, -Q6-T6je okso.
[0213] Na primer, T6je H, halo, C1-C6alkil, C1-C6alkoksil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, ili 4 do 7-člani heterocikloalkil.
[0214] Na primer, Q6je veza i T6je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, ili 4 do 7-člani heterocikloalkil.
[0215] Na primer, Q6je CO, S(O)2, ili NHC(O); i T6je C1-C6alkil, C1-C6alkoksil, C3-C8cikloalkil, ili 4 do 7-člani heterocikloalkil.
2
[0216] Na primer, T6je C1-C6alkil ili C1-C6alkoksil, svaki opciono supstituisan sa halo, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, ili C3-C8cikloalkil.
[0217] Na primer, Q6je C1-C3alkil linker i T6je H ili C6-C10aril.
[0218] Na primer, Q6je C1-C3alkil linker i T6je C3-C8cikloalkil, 4 do 7-člani heterocikloalkil, ili S(O)pRp.
[0219] Na primer, svaki od Rpi Rq, nezavisno, je C1-C6alkil.
[0220] Na primer, R13je H ili metil.
[0221] Na primer, R13je H.
[0222] Na primer, R3je H.
[0223] Na primer, A- je Br- ili Cl- .
[0224] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja Formule (Ib), (Ic), ili (Id):
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili estre, pri čemu su Z, X2, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R11, i R12definisani u ovom tekstu.
[0225] Još jedna podgrupa jedinjenja formule (I) uključuje jedinjenja Formule (Ie), ili (Ig):
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili estre, pri čemu su Z, X2, R2, R3, R4, R6, i R12definisani u ovom tekstu.
[0226] Na primer, R2, R4i R12su svaki nezavisno C1-6alkil.
[0227] Na primer, R6je C6-C10aril ili 5- ili 6-člani heteroaril, od kojih je svaki opciono nezavisno supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2, gde je Q2veza ili C1-C3alkil linker, i T2je H, halo, cijano, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A- , -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -S(O)2Ra, ili RS2, gde je svaki od Rai Rb, nezavisno H ili RS3, svaki od RS2i RS3, nezavisno, je C1-C6alkil, ili Rai Rb, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 7-člani heterocikloalkil prsten sa 0 ili 1 dodatnim heteroatomom, i svaki od RS2, RS3, i 4 do 7-članog heterocikloalkil prstena koji formiraju Rai Rb, je opciono, nezavisno supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3, gde je Q3veza ili C1-C3alkil linker i T3je odabran iz grupe koja sadrži halo, C1-C6alkil, 4 do 7-člani heterocikloalkil, ORd, -S(O)2Rd, i -NRdRe, svaki od Rdi Renezavisno je H ili C1-C6alkil, ili -Q3-T3je okso; ili bilo koja dva susedna -Q2-T2, zajedno sa atomoma za koje su prikačeni formiraju 5- ili 6-člani prsten koji opciono sadrži 1-4 heteroatoma odabrana između N, O i S.
[0228] Sledeća podgrupa jedinjenja Formule (I) uključuje jedinjenja Formule (II):
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli,
gde
Q2je veza ili metil linker;
T2je H, halo, -OR -a, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A , ili -S(O)2NRaRb; i
R7je piperidinil, tetrahidropiran, ciklopentil, ili cikloheksil, svaki opciono supstituisan jednim -Q5-T5;
R8je etil; i
Ra, Rb, i Rcsu definisani u ovom tekstu.
1
[0229] Na primer, Q2je veza
[0230] Na primer, Q2je metil linker
[0231] Na primer, T2je -NRaRbili -(NRaRbRc)+A- .
[0232] Još jedna podgrupa jedinjenja Formule (I) uključuje jedinjenja Formule (IIa):
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili estre, pri čemu su R7, R8, Ra, Rb, i Rcdefinisani u ovom tekstu.
[0233] Jedinjenja Formule (II) ili (IIa) mogu uključivati jednu ili više od sledećih odlika: Na primer, svaki od Rai Rb, nezavisno je H ili C1-C6alkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3.
[0234] Na primer, jedan od Rai Rbje H.
[0235] Na primer, Rai Rb, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 7-člani heterocikloalkil prsten sa 0 ili 1 dodatnim heteroatomom na N atomu (npr., azetidinil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil, piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, morfolinil, 1,4-diazepanil, 1,4-oksazepanil, 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptanil, 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptanil, i slično) i prsten je opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3.
[0236] Na primer, Rai Rb, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju azetidinil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil, tetrahidrofuranil, piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, ili morfolinil, i prsten je opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3.
[0237] Na primer, jedan ili više -Q3-T3su okso.
[0238] Na primer, Q3je veza ili nesupstituisani ili supstituisani C1-C3alkil linker.
[0239] Na primer, T3je H, halo, 4 do 7-člani heterocikloalkil, C1-C3alkil, ORd, COORd,-S(O)2Rd, ili -NRdRe.
2
[0240] Na primer, jedan od Rdi Reje H.
[0241] Na primer, R7je C3-C8cikloalkil ili 4 do 7-člani heterocikloalkil, svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0242] Na primer, R7je piperidinil, tetrahidropiran, tetrahidro-2H-tiopiranil, ciklopentil, cikloheksil, pirolidinil, ili cikloheptil, svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0243] Na primer, R7je ciklopentil cikloheksil ili tetrahidro-2H-tiopiranil, svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
[0244] Na primer, Q5je NHC(O) i T5je C1-C6alkil ili C1-C6alkoksi.
[0245] Na primer, jedan ili više -Q5-T5su okso.
[0246] Na primer, R7je 1-oksid-tetrahidro-2H-tiopiranil ili 1,1-dioksid-tetrahidro-2H-tiopiranil.
[0247] Na primer, Q5je veza i T5je amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino.
[0248] Na primer, Q5je CO, S(O)2, ili NHC(O); i T5je C1-C6alkil, C1-C6alkoksil, C3-C8cikloalkil, ili 4 do 7-člani heterocikloalkil.
[0249] Na primer, R8je H ili C1-C6alkil koji je opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, COOH, C(O)O-C1-C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, i di-C1-C6alkilamino.
[0250] Na primer, R8je H, metil, ili etil.
[0251] Još jedna podgrupa jedinjenja Formule (I) uključuje jedinjenja Formule (III) :
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli,
gde
R3je vodonik, C1-C3alkil ili halo;
R4je C1-C3alkil,
R7je C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil ili 4 do 7-člani heterocikloalkil, opciono supstituisan jednim ili većim brojem Rs
R8je C1-C6alkil;
Rhje -Qh-Th, gde je Qhveza, C1-C3alkil linker ili N(RN); Thje ORh1ili -NRh1Rh2, gde su Rh1i Rh2nezavisno vodonik ili C1-C6alkil, ili jedan od Rh1i Rh2je metil i drugi je 6-člani N-sadržavajući heterocikloalkil opciono supstituisan jednim ili dva metila, ili zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, Rh1i Rh2formiraju 4 do 7-člani heterocikloalkil prsten sa 0 ili 1 dodatnim heteroatomom odabranim između kiseonika i azota, gde je pomenuti heterocikloalkil prsten opciono supstituisan jednim ili većim brojem Ri;
Rije C1-C3alkil, -NRN1RN2ili a C3-C8cikloalkil ili 5 ili 6 člani heterocikl od kojih je svaki cikloalkil ili heterocikl nezavisno opciono supstituisan sa Rj;
RNje vodonik, C1-C6alkil ili C3-C8cikloalkil;
Rjje C1-C3alkil, -NRN1RN2, ili -NC(O)RN;
RN1i RN2su svaki nezavisno vodonik, C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, 5 ili 6-člani heterocikl, od kojih je svaki cikloalkil ili heterocikl nezavisno opciono supstituisan sa Rj.
[0252] Na primer, R3je vodonik.
[0253] Na primer, R3je halogen, kao, na primer, fluoro ili hloro. Na primer, R3je fluoro.
[0254] Na primer R4je metil, etil, propil, ili izopropil. Na primer, R4je metil. Na primer, R4je izopropil.
[0255] Na primer, R7je 4 do 7-člani heterocikloalkil (npr., azetidinil, oksetanil, tietanil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil, tetrahidrofuranil, piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, tetrahidro-2H-piranil, 3,6-dihidro-2H-piranil, tetrahidro-2H-tiopiran, i morfolinil, i slično).
[0256] Na primer, R7je 5 ili 6 člani cikloalkil ili heterocikloalkil.
[0257] Na primer, R7je 6-člani cikloalkil ili heterocikloalkil.
[0258] U nekim primerima izvođenja, R7je piperidinil, tetrahidropiranil, ciklopentil, ili cikloheksil.
[0259] U nekim primerima izvođenja, Rjje metil. U nekim primerima izvođenja, Rjje NH2.
[0260] Na primer, R8je C1, C2ili C3alkil. Na primer, R8je metil. Na primer, R8je etil.
[0261] U nekim primerima izvođenja, Qhje veza. U drugim, Qhje metilen.
[0262] U nekim primerima izvođenja, Thje N(CH3)2.
4
[0263] U nekim primerima izvođenja, jedan od Rh1i Rh2je metil i drugi je 6-člani N-sadržavajući heterocikloalkil opciono supstituisan sa jednim ili dva metila. Na primer, 6-člani N-sadržavajući heterocikloalkil ne sadrži dodatne heteroatome u prstenu. Na primer, 6-člani N-sadržavajući heterocikloalkil nije dodatno supstituisan, osim jednom ili dvema metil grupama.
[0264] U nekim primerima izvođenja, Rh1i Rh2, zajedno sa N za koji su prikačeni formiraju 6 člani prsten. Na primer, Thje odabran između piperidina, morfolina, piperazina, i N-metil piperazina.
[0265] Na primer, Thje morfolin.
[0266] U nekim primerima izvođenja, Rije metil ili N(CH3)2. U nekim primerima izvođenja, Rije C3-C8cikloalkil ili 5 ili 6-člani heterocikl. Na primer, Rije 6-člani cikloalkil ili heterocikl, supstituisan sa nula ili jednim Rj.
[0267] U nekim primerima izvođenja, RNje H ili metil.
[0268] U određenim jedinjenjima Formule (III), jedinjenjima formule IIIa, R3je vodonik, R4je CH3i Qhje metilen.
[0269] U određenim jedinjenjima Formule III, jedinjenjima formule IIIb, R3je fluoro, R4je izopropil i Qhje veza.
[0270] U određenim jedinjenjima Formule III, jedinjenjima formule IIIc, R3je vodonik, R4je propil ili izopropil i Qhje metilen.
[0271] U određenim jedinjenjima Formule III, jedinjenjima formule IIId, R3je vodonik, R4je propil ili izopropil i Qhje veza.
[0272] U određenim jedinjenjima Formule III, jedinjenjima formule (IIIe),
gde
R3je H ili F
R4je metil, i-propil, ili n-propil,
Rhje
gde je RiH, metil, ili
[0273] Reprezentativna jedinjenja predmetnog pronalaska uključuju jedinjenja navedena u Tabeli 1. U donjoj tabeli svako pojavljivanje
treba razumeti kao
4
4
4
4
4
4
4
1
2
4
1
2
4
1
[0274] Kako se koristi u ovom tekstu, "alkil", "C1, C2, C3, C4, C5ili C6alkil" ili "C1-C6alkil" treba da obuhvati C1, C2, C3, C4, C5ili C6linearnolančane (linearne) zasićene alifatične ugljovodonične grupe i C3, C4, C5ili C6granate zasićene alifatične ugljovodonične grupe. Na primer, C1-C6alkil treba da uključi C1, C2, C3, C4, C5i C6alkil grupe. Primeri alkila uključuju komponente koje imaju od jednog do šest ugljenikovih atoma, kao što su, bez ograničavanja, metil, etil, n-propil, i-propil, n-butil, s-butil, t-butil, n-pentil, s-pentil ili n-heksil.
[0275] U određenim primerima izvođenja, linearni ili granati alkil ima šest ili manje ugljenikovih atoma (npr., C1-C6za linearni lanac, C3-C6za granati lanac), i u drugom primeru izvođenja, alkil sa linearnim lancem ili granatim lancem ima četiri ili manje ugljenikovih atoma.
[0276] Kako se koristi u ovom tekstu, izraz "cikloalkil" odnosi se na zasićeni ili nezasićeni nearomatični ugljovodonični mono- ili multi-prstenasti (npr., fuzionisani, premošćeni ili spiro prstenovi) sistem koji sadrži 3 do 30 ugljenikovih atoma (npr., C3-C10). Primeri cikloalkila uključuju, ali se ne ograničavaju na ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil, ciklopentenil, cikloheksenil, cikloheptenil, i adamantil. Izraz "heterocikloalkil" odnosi se na zasićeni ili nezasićeni nearomatični 3-8-člani monociklični, 7-12-člani biciklični (fuzionisani, premošćeni ili spiro prstenovi), ili 11-14-člani triciklični prstenasti sistem (fuzionisani, premošćeni ili spiro prstenovi) sa jednim ili više heteroatoma (kao što su O, N, S, ili Se), ukoliko nije drugačije naznačeno. Primeri heterocikloalkil grupa
2
uključuju, ali se ne ograničavaju na piperidinil, piperazinil, pirolidinil, dioksanil, tetrahidrofuranil, izoindolinil, indolinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil, tetrahidrofuranil, oksiranil, azetidinil, oksetanil, tietanil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, tetrahidropiranil, dihidropiranil, piranil, morfolinil, 1,4-diazepanil, 1,4-oksazepanil, 2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptanil, 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptanil, 2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptanil, 2,6-diazaspiro[3.3]heptanil, 1,4-dioksa-8-azaspiro[4.5]dekanil i slično.
[0277] Izraz "opciono supstituisani alkil" odnosi se na nesupstituisani alkil ili alkil koji ima naznačene supstituente koji zamenjuju jedan ili više vodonikovih atoma na jednom ili više ugljenika ugljovodonične osovine. Takvi supstituenti mogu uključiti, na primer, alkil, alkenil, alkinil, halogen, hidroksil, alkilkarboniloksi, arilkarboniloksi, alkoksikarboniloksi, ariloksikarboniloksi, karboksilat, alkilkarbonil, arilkarbonil, alkoksikarbonil, aminokarbonil, alkilaminokarbonil, dialkilaminokarbonil, alkiltiokarbonil, alkoksil, fosfat, fosfonato, fosfinato, amino (uključujući alkilamino, dialkilamino, arilamino, diarilamino i alkilarilamino), acilamino (uključujući alkilkarbonilamino, arilkarbonilamino, karbamoil i ureido), amidino, imino, sulfhidril, alkiltio, ariltio, tiokarboksilat, sulfate, alkilsulfinil, sulfonato, sulfamoil, sulfonamido, nitro, trifluorometil, cijano, azido, heterociklil, alkilaril, ili aromatičnu ili heteroaromatičnu komponentu.
[0278] "Arilalkil" ili "aralkil" komponenta je alkil supstituisan arilom (npr., fenilmetil (benzil)). "Alkilaril" komponenta je aril supstituisan alkilom (npr., metilfenil).
[0279] Kako se koristi u ovom tekstu, "alkil linker" treba da uključi C1, C2, C3, C4, C5ili C6linearnolančane (linearne) zasićene dvovalentne alifatične ugljovodonične grupe i C3, C4, C5ili C6granate zasićene alifatične ugljovodonične grupe. Na primer, C1-C6alkil linker treba da uključi C1, C2,C3, C4, C5i C6alkil linkerske grupe. Primeri alkil linkera uključuju komponente koje imaju od jednog do šest ugljenikovih atoma, kao što su, bez ograničavanja, metil (-CH2-), etil (-CH2CH2-), n-propil (-CH2CH2CH2-), i-propil (-CHCH3CH2-), n-butil (-CH2CH2CH2CH2-), s-butil (-CHCH3CH2CH2-), i-butil (-C(CH3)2CH2-), n-pentil (-CH2CH2CH2CH2CH2-), s-pentil (-CHCH3CH2CH2CH2-) ili n-heksil (-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-).
[0280] "Alkenil" uključuje nezasićene alifatične grupe koje su po dužini i mogućoj supstituciji analogne gore opisanim alkilima, ali koje sadrže najmanje jednu dvostruku vezu. Na primer, izraz "alkenil" uključuje linearnolančane alkenil grupe (npr., etenil, propenil, butenil, pentenil, heksenil, heptenil, oktenil, nonenil, decenil), i granate alkenil grupe. U određenim primerima izvođenja, linearnolančana ili granata alkenil grupa ima šest ili manje ugljenikovih atoma u svojoj osovini (npr., C2-C6za linearni lanac, C3-C6za granati lanac).
Izraz "C2-C6" uključuje alkenil grupe koje sadrže dva do šest ugljenikovih atoma. Izraz "C3-C6" uključuje alkenil grupe koje sadrže tri do šest ugljenikovih atoma.
[0281] Izraz "opciono supstituisani alkenil" odnosi se na nesupstituisani alkenil ili alkenil koji ima naznačene supstituente koji zamenjuju jedan ili više vodonikovih atoma na jednom ili više ugljenikovih atoma ugljovodonične osovine. Takvi supstituenti mogu uključivati, na primer, alkil, alkenil, alkinil, halogen, hidroksil, alkilkarboniloksi, arilkarboniloksi, alkoksikarboniloksi, ariloksikarboniloksi, karboksilat, alkilkarbonil, arilkarbonil, alkoksikarbonil, aminokarbonil, alkilaminokarbonil, dialkilaminokarbonil, alkiltiokarbonil, alkoksil, fosfat, fosfonato, fosfinato, amino (uključujući alkilamino, dialkilamino, arilamino, diarilamino i alkilarilamino), acilamino (uključujući alkilkarbonilamino, arilkarbonilamino, karbamoil i ureido), amidino, imino, sulfhidril, alkiltio, ariltio, tiokarboksilat, sulfate, alkilsulfinil, sulfonato, sulfamoil, sulfonamido, nitro, trifluorometil, cijano, heterociklil, alkilaril, ili aromatičnu ili heteroaromatičnu komponentu.
[0282] "Alkinil" uključuje nezasićene alifatične grupe koje su po dužini i mogućoj supstituciji analogne gore opisanim alkilima, ali koje sadrže najmanje jednu trostruku vezu. Na primer, "alkinil" uključuje linearnolančane alkinil grupe (npr., etinil, propinil, butinil, pentinil, heksinil, heptinil, oktinil, noninil, decinil), i granate alkinil grupe. U određenim primerima izvođenja, linearnolančana ili granata alkinil grupa ima šest ili manje ugljenikovih atoma u svojoj osovini (npr., C2-C6za linearni lanac, C3-C6za granati lanac). Izraz "C2-C6" uključuje alkinil grupe koje sadrže dva do šest ugljenikovih atoma. Izraz "C3-C6" uključuje alkinil grupe koje sadrže tri do šest ugljenikovih atoma.
[0283] ] Izraz "opciono supstituisani alkinil" odnosi se na nesupstituisani alkinil ili alkinil koji ima naznačene supstituente koji zamenjuju jedan ili više vodonikovih atoma na jednom ili više ugljenikovih atoma ugljovodonične osovine. Takvi supstituenti mogu uključivati, na primer, alkil, alkenil, alkinil, halogen, hidroksil, alkilkarboniloksi, arilkarboniloksi, alkoksikarboniloksi, ariloksikarboniloksi, karboksilat, alkilkarbonil, arilkarbonil, alkoksikarbonil, aminokarbonil, alkilaminokarbonil, dialkilaminokarbonil, alkiltiokarbonil, alkoksil, fosfat, fosfonato, fosfinato, amino (uključujući alkilamino, dialkilamino, arilamino, diarilamino i alkilarilamino), acilamino (uključujući alkilkarbonilamino, arilkarbonilamino, karbamoil i ureido), amidino, imino, sulfhidril, alkiltio, ariltio, tiokarboksilat, sulfate, alkilsulfinil, sulfonato, sulfamoil, sulfonamido, nitro, trifluorometil, cijano, azido, heterociklil, alkilaril, ili aromatičnu ili heteroaromatičnu komponentu.
[0284] Druge opciono supstituisane komponente (kao što su opciono supstituisani cikloalkil, heterocikloalkil, aril, ili heteroaril) uključuju nesupstituisane komponente i komponente koje imaju jedan ili više naznačenih supstituenata. Na primer, supstituisani heterocikloalkil
4
uključuje one koji su supstituisani jednom ili većim brojem alkil grupa, na primer 2,2,6,6-tetrametil-piperidinil i 2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-tetrahidropiridinil.
[0285] "Aril" uključuje grupe sa aromatičnošću, uključujući "konjugovane" ili multiciklične sisteme sa najmanje jednim aromatičnim prstenom i koji ne sadrže nijedan heteroatom u prstenastoj strukturi. Primeri uključuju fenil, benzil, 1,2,3,4-tetrahidronaftalenil, itd.
[0286] "Heteroaril" grupe su aril grupe, kako je gore definisano, osim što imaju jedan do četiri heteroatoma u prstenastoj strukturi, i mogu se označiti i kao "aril heterocikli" ili "heteroaromatici". Kako se koristi u ovom tekstu, izraz "heteroaril" treba da uključi stabilni 5-, 6-, ili 7-člani monociklični ili 7-, 8-, 9-, 10-, 11- ili 12-člani biciklični aromatični heterociklični prsten koji se sastoji od ugljenikovih atoma i jednog ili više heteroatoma, npr., 1 ili 1-2 ili 1-3 ili 1-4 ili 1-5 ili 1-6 heteroatoma, ili npr., 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 heteroatoma, nezavisno odabranih iz grupe koja sadrži azot, kiseonik i sumpor. Atom azota može biti supstituisan ili nesupstituisan (tj., N ili NR gde je R H ili drugi supstituent, kako je definisano). Heteroatomi azota i sumpora mogu opciono biti oksidisani (tj., N→O i S(O)p, gde je p = 1 ili 2). Treba napomenuti da ukupan broj S i O atoma u aromatičnom heterociklu nije veći od 1.
[0287] Primeri heteroaril grupa uključuju pirol, furan, tiofen, tiazol, izotiazol, imidazol, triazol, tetrazol, pirazol, oksazol, izoksazol, piridin, pirazin, piridazin, pirimidin, i slično.
[0288] Pored toga, izrazi "aril" i "heteroaril" uključuju multiciklične aril i heteroaril grupe, npr., triciklike, biciklike, npr., naftalen, benzoksazol, benzodioksazol, benzotiazol, benzoimidazol, benzotiofen, metilendioksifenil, hinolin, izohinolin, naftridin, indol, benzofuran, purin, benzofuran, deazapurin, indolizin.
[0289] U slučaju multicikličnih aromatičnih prstenova, potrebno je da samo jedan od prstenova bude aromatičan (npr., 2,3-dihidroindol), mada mogu i svi prstenovi biti aromatični (npr., hinolin). Drugi prsten može biti i fuzionisan ili premošćen.
[0290] Cikloalkil, heterocikloalkil, aril, ili heteroaril prsten može biti supstituisan na jednoj ili više pozicija u prstenu (npr., prsten-formirajući ugljenik ili heteroatom kao N) supstituentima kako je opisano gore, na primer, alkil, alkenil, alkinil, halogen, hidroksil, alkoksi, alkilkarboniloksi, arilkarboniloksi, alkoksikarboniloksi, ariloksikarboniloksi, karboksilat, alkilkarbonil, alkilaminokarbonil, aralkilaminokarbonil, alkenilaminokarbonil, alkilkarbonil, arilkarbonil, aralkilkarbonil, alkenilkarbonil, alkoksikarbonil, aminokarbonil, alkiltiokarbonil, fosfat, fosfonato, fosfinato, amino (uključujući alkilamino, dialkilamino, arilamino, diarilamino i alkilarilamino), acilamino (uključujući alkilkarbonilamino, arilkarbonilamino, karbamoil i ureido), amidino, imino, sulfhidril, alkiltio, ariltio, tiokarboksilat, sulfate, alkilsulfinil, sulfonato, sulfamoil, sulfonamido, nitro, trifluorometil, cijano, azido, heterociklil, alkilaril, ili aromatična ili heteroaromatična komponenta. Aril i heteroaril grupe mogu biti i fuzionisane ili premošćene sa alicikličnim ili heterocikličnim prstenovima, koji nisu aromatični tako da formiraju multiciklični siste (npr., tetralin, metilendioksifenil).
[0291] Kako se koristi u ovom tekstu, "karbocikl" ili "karbociklični prsten" treba da uključi svaki stabilni monociklični, biciklični ili triciklični prsten koji ima nazačeni broj ugljenika, od kojih svaki može biti zasićen, nezasićen ili aromatičan. Karbocikl uključuje cikloalkil i aril. Na primer, C3-C14karbocikl treba da uključi monociklični, biciklični ili triciklični prsten koji ima 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ili 14 ugljenikovih atoma. Primeri karbocikla uključuju, ali se ne ograničavaju na ciklopropil, ciklobutil, ciklobutenil, ciklopentil, ciklopentenil, cikloheksil, cikloheptenil, cikloheptil, cikloheptenil, adamantil, ciklooktil, ciklooktenil, ciklooktadienil, fluorenil, fenil, naftil, indanil, adamantil i tetrahidronaftil. Premošćeni prstenovi su takođe uključeni u definiciju karbocikla, uključujući, na primer, [3.3.0]biciklooktan, [4.3.0]biciklononan, [4.4.0]biciklodekan i [2.2.2]biciklooktan. Premošćeni prsten sreće se kada jedan ili više ugljenikovih atoma povezuju dva nesusedna ugljenikova atoma. U jednom primeru izvođenja, prstenovi mosta su jedan ili dva ugljenikova atoma. Primećeno je da most uvek konvertuje monociklični prsten u triciklični prsten. Kada je prsten premošćen, supstituenti navedeni za prsten mogu biti prisutni i u mostu. Fuzionisani (npr., naftil, tetrahidronaftil) i spiro prstenovi takođe su uključeni.
[0292] Kako se koristi u ovom tekstu, "heterocikl" ili "heterociklična grupa" uključuje svaku prstenastu strukturu (zasićenu nezasićenu ili aromatičnu) koja sadrži najmanje jedan heteroatom u prstenu (npr., N, O ili S). Heterocikl uključuje heterocikloalkil i heteroaril. Primeri heterocikla uključuju, ali se ne ograničavaju na morfolin, pirolidin, tetrahidrotiofen, piperidin, piperazin, oksetan, piran, tetrahidropiran, azetidin, i tetrahidrofuran.
[0293] Primeri heterocikličnih grupa uključuju, ali se ne ograničavaju na akridinil, azocinil, benzimidazolil, benzofuranil, benzotiofuranil, benzotiofenil, benzoksazolil, benzoksazolinil, benztiazolil, benztriazolil, benztetrazolil, benzizoksazolil, benzizotiazolil, benzimidazolinil, karbazolil, 4aH-karbazolil, karbolinil, hromanil, hromenil, cinolinil, dekahidrohinolinil, 2H,6H-1,5,2-ditiazinil, dihidrofuro[2,3-b]tetrahidrofuran, furanil, furazanil, imidazolidinil, imidazolinil, imidazolil, 1H-indazolil, indolenil, indolinil, indolizinil, indolil, 3H-indolil, izatinoil, izobenzofuranil, izohromanil, izoindazolil, izoindolinil, izoindolil, izohinolinil, izotiazolil, izoksazolil, metilendioksifenil, morfolinil, naftiridinil, oktahidroizohinolinil, oksadiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,2,5-oksadiazolil, 1,3,4-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazol5(4H)-on, oksazolidinil, oksazolil, oksindolil, pirimidinil, fenantridinil, fenantrolinil, fenazinil, fenotiazinil, fenoksatinil, fenoksazinil, ftalazinil, piperazinil, piperidinil, piperidonil, 4-piperidonil, piperonil, pteridinil, purinil, piranil, pirazinil, pirazolidinil, pirazolinil, pirazolil, piridazinil, piridooksazol, piridoimidazol, piridotiazol, piridinil, piridil, pirimidinil, pirolidinil, pirolinil, 2H-pirolil, pirolil, hinazolinil, hinolinil, 4H-hinolizinil, hinoksalinil, hinuklidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidroizohinolinil, tetrahidrohinolinil, tetrazolil, 6H-1,2,5-tiadiazinil, 1,2,3-tiadiazolil, 1,2,4-tiadiazolil, 1,2,5-tiadiazolil, 1,3,4-tiadiazolil, tiantrenil, tiazolil, tienil, tienotiazolil, tienooksazolil, tienoimidazolil, tiofenil, triazinil, 1,2,3-triazolil, 1,2,4-triazolil, 1,2,5-triazolil, 1,3,4- triazolil i ksantenil.
[0294] Izraz "supstituisani", kako se koristi u ovom tekstu, znači da se jedan ili više vodonikovih atoma na naznačenom atomu zamenjuju izborom iz naznačenih grupa, uz uslov da se ne prevaziđe normalna valenca atoma, i da supstitucija rezultuje stabilnim jedinjenjem. Kada je supstituent okso ili keto (tj., =O), onda su na atomu zamenjena 2 vodonikova atoma. Keto supstituenti nisu prisutni na aromatičnim komponentama. Dvostruke veze prstena, kako se koristi u ovom tekstu, su dvostruke veze koje se formiraju između dva susedna atoma prstena (npr., C=C, C=N ili N=N). "Stabilno jedinjenje" i "stabilna struktura" označavaju jedinjenje koje je dovoljno robusno da preživi izolaciju do korisnog stepena čistoće iz reakcione mešavine, i formuliše se u efikasno terapijsko sredstvo.
[0295] Kada je prikazano da se veza sa supstituentom ukršta sa vezom koja povezuje dva atoma u prstenu, onda takav supstituent može biti povezan sa bilo kojim atomom u prstenu. Kada je supstituent naveden bez ukazivanja na atom preko kojeg je takav supstituent povezan sa ostatkom jedinjenja date formule, onda takav supstituent može biti povezan preko bilo kojeg atoma u toj formuli. Kombinacije supstituenata i/ili varijabli su dozvoljene, ali samo ako takve kombinacije za rezultat imaju stabilna jedinjenja.
[0296] Kada se neka varijabla (npr., R1) javlja više od jednom u nekom konstituentu ili formuli jedinjenja, njena definicija za jedno pojavljivanje je nezavisna od definicije za bilo koje drugo pojavljivanje. Tako, na primer, ako je pokazano da je grupa supstituisana sa 0-2 R1komponente, onda grupa opciono može biti supstituisana sa do dve R1komponente i R1se pri svakom pojavljivanju bira nezavisno iz definicije za R1. Isto tako, kombinacije supstituenata i/ili varijabli su dozvoljene, ali samo ako takve kombinacije za rezultat imaju stabilna jedinjenja.
[0297] Izraz "hidroksi" ili "hidroksil" uključuje grupe sa -OH ili -O-.
[0298] Kako se koristi u ovom tekstu, "halo" ili "halogen" odnosi se na fluoro, hloro, bromo i jodo. Izraz "perhalogenisani" uopšteno se odnosi na komponentu u kojoj su svi vodonikovi atomi zamenjeni atomima halogena. Izraz "haloalkil" ili "haloalkoksil" označavaju alkil ili alkoksil supstituisan jednim ili većim brojem atoma halogena.
[0299] Izraz "karbonil" uključuje jedinjenja i komponente koji sadrže ugljenik spojen dvostrukom vezom sa atomom kiseonika. Primeri komponenti koje sadrže karbonil uključuju, ali se ne ograničavaju na aldehide, ketone, karboksilne kiseline, amide, estre, anhidride, itd.
[0300] Izraz "karboksil" odnosi se na -COOH ili njen C1-C6alkil estar.
[0301] "Acil" uključuje komponente koje sadrže acil radikal (R-C(O)-) ili karbonil grupu. "Supstituisani acil" uključuje acil grupe u kojima su jedan ili više vodonikovih atoma zamenjeni, na primer, alkil grupama, alkinil grupama, halogenom, hidroksil, alkilkarboniloksi, arilkarboniloksi, alkoksikarboniloksi, ariloksikarboniloksi, karboksilat, alkilkarbonil, arilkarbonil, alkoksikarbonil, aminokarbonil, alkilaminokarbonil, dialkilaminokarbonil, alkiltiokarbonil, alkoksil, fosfat, fosfonato, fosfinato, amino (uključujući alkilamino, dialkilamino, arilamino, diarilamino i alkilarilamino), acilamino (uključujući alkilkarbonilamino, arilkarbonilamino, karbamoil i ureido), amidino, imino, sulfhidril, alkiltio, ariltio, tiokarboksilat, sulfatnom, alkilsulfinil, sulfonato, sulfamoil, sulfonamido, nitro, trifluorometil, cijano, azido, heterociklil, alkilaril, ili aromatičnom ili heteroaromatičnom komponentom.
[0302] "Aroil" uključuje komponente sa aril ili heteroaromatičnom komponentom vezanom za karbonil grupu. Primeri aroil grupa uključuju fenilkarboksi, nafttil karboksi, itd.
[0303] "Alkoksialkil", "alkilaminoalkil" i "tioalkoksialkil" uključuju alkil grupe, kako je gore opisano, gde atomi kiseonika, azota ili sumpora zamenjuju jedan ili više ugljenikovih atoma ugljovodonične osovine.
[0304] Izraz "alkoksi" ili "alkoksil" uključuje supstituisane i nesupstituisane alkil, alkenil i alkinil grupe kovalentno povezane sa atomom kiseonika. Primeri alkoksi grupa ili alkoksil radikala uključuju, ali se ne ograničavaju na metoksi, etoksi, izopropiloksi, propoksi, butoksi i pentoksi grupe. Primeri supstituisanih alkoksi grupa uključuju halogenisane alkoksi grupe. Alkoksi grupe mogu biti supstituisane grupama kao što su alkenil, alkinil, halogen, hidroksil, alkilkarboniloksi, arilkarboniloksi, alkoksikarboniloksi, ariloksikarboniloksi, karboksilat, alkilkarbonil, arilkarbonil, alkoksikarbonil, aminokarbonil, alkilaminokarbonil, dialkilaminokarbonil, alkiltiokarbonil, alkoksil, fosfat, fosfonato, fosfinato, amino (uključujući alkilamino, dialkilamino, arilamino, diarilamino, i alkilarilamino), acilamino (uključujući alkilkarbonilamino, arilkarbonilamino, karbamoil i ureido), amidino, imino, sulfhidril, alkiltio, ariltio, tiokarboksilat, sulfate, alkilsulfinil, sulfonato, sulfamoil, sulfonamido, nitro, trifluorometil, cijano, azido, heterociklil, alkilaril, ili aromatične ili heteroaromatične komponente. Primeri halogen supstituisanih alkoksi grupa uključuju, ali se ne ograničavaju na fluorometoksi, difluorometoksi, trifluorometoksi, hlorometoksi, dihlorometoksi i trihlorometoksi.
[0305] Izraz "etar" ili "alkoksi" uključuje jedinjenja ili komponente koji sadrže kiseonik povezan sa dva ugljenikova atoma ili heteroatoma. Na primer, izraz uključuje "alkoksialkil" što se odnosi na alkil, alkenil, ili alkinil grupu kovalentno povezanu sa kiseonikovim atomom koji je kovalentn povezan sa alkil grupom.
[0306] Izraz "estar" uključuje jedinjenja ili komponente koji sadrže ugljenik ili heteroatom povezan sa atomom kiseonika koji je povezan sa ugljenikom karbonil grupe. Izraz "estar" uključuje alkoksikarboksi grupe kao metoksikarbonil, etoksikarbonil, propoksikarbonil, butoksikarbonil, pentoksikarbonil, itd.
[0307] Izraz "tioalkil" uključuje jedinjenja ili komponente koji sadrže alkil grupu povezanu sa atomom sumpora. Tioalkil grupe mogu biti supstituisane grupama kao što su alkil, alkenil, alkinil, halogen, hidroksil, alkilkarboniloksi, arilkarboniloksi, alkoksikarboniloksi, ariloksikarboniloksi, karboksilat, karboksilna kiselina, alkilkarbonil, arilkarbonil, alkoksikarbonil, aminokarbonil, alkilaminokarbonil, dialkilaminokarbonil, alkiltiokarbonil, alkoksil, amino (uključujući alkilamino, dialkilamino, arilamino, diarilamino i alkilarilamino), acilamino (uključujući alkilkarbonilamino, arilkarbonilamino, karbamoil i ureido), amidino, imino, sulfhidril, alkiltio, ariltio, tiokarboksilat, sulfate, alkilsulfinil, sulfonato, sulfamoil, sulfonamido, nitro, trifluorometil, cijano, azido, heterociklil, alkilaril, ili aromatične ili heteroaromatične komponente.
[0308] Izraz "tiokarbonil" ili "tiokarboksi" uključuje jedinjenja i komponente koji sadrže ugljenik spojen dvostrukom vezom sa atomom sumpora.
[0309] Izraz "tioetar" uključuje komponente koje sadrže atom sumpora spojen za dva ugljenikova atoma ili heteroatoma. Primeri tioetara uključuju, ali se ne ograničavaju na alktioalkile, alktioalkenile, i alktioalkinile. Izraz "alktioalkili" uključuje komponente sa alkil, alkenil, ili alkinil grupom spojenom sa atomom sumpora koji je povezan sa alkil grupom. Slično, izraz "alktioalkenili" odnosi se na komponente u kojima je alkil, alkenil ili alkinil grupa povezana sa atomom sumpora koji je kovalentno povezan sa alkenil grupom; i alktioalkinili" odnosi se na komponente u kojima je alkil, alkenil ili alkinil grupa povezana sa atomom sumpora koji je kovalentno povezan sa alkinil grupom.
[0310] Kako se koristi u ovom tekstu, "amin" ili "amino" odnosi se na nesupstituisanu ili supstituisanu - NH2. "Alkilamino" uključuje grupe jedinjenja u kojima je azot iz -NH2vezan sa najmanje jednom alkil grupom. Primeri alkilamino grupa uključuju benzilamino, metilamino, etilamino, fenetilamino, itd. "Dialkilamino" uključuju grupe u kojima je azot iz -NH2vezan sa najmanje dve dodatne alkil grupe. Primeri dialkilamino grupa uključuju, ali se ne ograničavaju na dimetilamino i dietilamino. "Arilamino" i "diarilamino" uključuju grupe u kojima je azot povezan sa najmanje jednom ili dve aril grupe, respektivno. "Aminoaril" i "aminoariloksi" odnosi se na aril i ariloksi supstituisan sa amino. "Alkilarilamino", "alkilaminoaril" ili "arilaminoalkil" odnosi se na amino grupu koja je povezana sa najmanje jednom alkil grupom i najmanje jednom aril grupom. "Alkaminoalkil" odnosi se na alkil, alkenil, ili alkinil grupu povezanu sa atomom azota koji je takođe povezan sa alkil grupom. "Acilamino" uključuje grupe u kojima je azot vezan za acil grupu. Primeri acilamino uključuju, ali se ne ograničavaju na alkilkarbonilamino, arilkarbonilamino, karbamoil i ureido grupe.
[0311] Izraz "amid" ili "aminokarboksi" uključuje jedinjenja ili komponente koje sadrže atom azota povezan sa ugljenikom karbonil ili tiokarbonil grupe. Izraz uključuje "alkaminokarboksi" grupe koje uključuju alkil, alkenil ili alkinil grupe povezane sa amino grupom koja je pvezana sa ugljenikom karbonil ili tiokarbonil grupe. Uključuje i "arilaminokarboksi" grupe koje uključuju aril ili heteroaril komponente povezane sa amino grupom koja je povezana sa ugljenikom karbonil ili tiokarbonil grupe. Izrazi "alkilaminokarboksi", "alkenilaminokarboksi", "alkinilaminokarboksi" i "arilaminokarboksi" uključuju komponente u kojima su alkil, alkenil, alkinil i aril komponente, respektivno, povezane sa atomom azota koji je dalje povezan sa ugljenikom karbonilne grupe. Amidi mogu biti supstituisani supstituentima kao što su alkil sa linearnim lancem, granati alkil, cikloalkil, aril, heteroaril ili heterocikl. Supstituenti na amidnim grupama mogu biti dodatno supstituisani.
[0312] Jedinjenja predmetnog pronalaska koja sadrže azote mogu da se konvertuju u N-okside tretmanom oksidišućim sredstvom (npr., 3-hloroperoksibenzoeva kiselina, (mCPBA) i/ili vodonik peroksidi) da se dobiju druga jedinjenja predmetnog pronalaska. Dakle, smatra se da sva prikazana i zahtevana azot-sadržavajuća jedinjenja, kada je to dopušteno valencom i strukturom, uključuju i jedinjenje kako je pokazano, i njegov N-oksidni derivat (koji može da se označi kao N→O ili N<+>-O-). Pored toga, u drugim slučajevma, azoti u jedinjenjima predmetnog pronalaska mogu da se konvertuju u N-hidroksi ili N-alkoksi jedinjenja. Na primer, N-hidroksi jedinjenja mogu da se pripreme oksidacijom matičnog amina oksidišućim sredstvom kao što je m-CPBA. Isto tako, smatra se da sva prikazana i zahtevana azotsadržavajuća jedinjenja, kada je to dopušteno valencom i strukturom, obuhvataju i jedinjenje kako je pokazano, i njegove N-hidroksi (tj., N-OH) i N-alkoksi (tj., NOR, gde je R supstituisani ili nesupstituisani C1-C6alkil, C1-C6alkenil, C1-C6alkinil, 3-14-člani karbocikl ili 3-14-člani heterocikl) derivate.
[0313] U ovoj specifikaciji, strukturna formula jedinjenja u nekim slučajevima predstavlja određeni izomer radi pogodnosti, ali predmetni pronalazak uključuje sve izomere, kao što su geometrijski izomeri, optički izomeri bazirani na asimetričnom ugljeniku, stereoizomeri, tautomeri i slično, pri čemu se podrazumeva da ne mogu svi izomeri imati isti nivo aktivnosti. Pored toga, kod jedinjenja predstavljenih formulom može biti prisutan kristalni polimorfizam. Napominje se da su sve kristalne forme, mešavine kristalnih formi, ili njihovi anhidridi ili hidrati uključeni u okvir ovog pronalaska. Pored toga, u okvir ovog pronalaska uključen je takozvani metabolit koji se proizvodi degradacijom predmetnog jedinjenja in vivo.
[0314] "Izomerizam" označava jedinjenja koja imaju identične molekulske formule, ali se razlikuju po redosledu vezivanja svojih atoma ili aranžmanu atoma u prostoru. Izomeri koji se razlikuju po aranžmanu atoma u prostoru označavaju se kao "stereoizomeri". Stereoizomeri koji nisu jedan drugome slika u ogledalu označavaju se kao "dijastereoizomeri" i stereoizomeri koji jedan drugome nisu preklapajuće slike u ogledalu označavaju se kao "enantiomeri" ili, ponekad, optički izomeri. Mešavina koja sadrži jednake količine pojedinačnih enantiomernih formi suprotne hiralnosti označava se kao "racemska mešavina".
[0315] Ugljenikov atom povezan sa četiri neidentična supstituenta označava se kao "hiralni centar."
[0316] "Hiralni izomer" označava jedinjenje sa najmanje jednim hiralnim centrom. Jedinjenja sa više od jednog hiralnog centra mogu postojati ili kao pojedinačni dijastereomeri ili kao mešavina dijastereomera, označena kao "dijastereomerna mešavina". Kada je prisutan jedan hiralni centar, stereoizomer može da se karakteriše apsolutnom konfiguracijom (R ili S) tog hiralnog centra. Apsolutna konfiguracija odnosi se na aranžman u prostoru supstituenata prikačenih za hiralni centar. Supstituenti prikačeni za hiralni centar o kojem je reč rangiraju se prema Cahnovom Sequence Rule, Ingold i Prelog. (Cahn et al., Angew. Chem. Inter. Edit.
1966, 5, 385; errata 511; Cahn et al., Angew. Chem. 1966, 78, 413; Cahn and Ingold, J. Chem. Soc. 1951 (London), 612; Cahn et al., Experientia 1956, 12, 81; Cahn, J. Chem. Educ.
1964, 41, 116).
[0317] "Geometrijski izomer" označava dijastereoizomere koji svoje postojanje duguju ometenoj rotaciji oko dvostrukih veza ili cikloalkil linkeru (npr., 1,3-ciklobutil). Nazivi ovih konfiguracija razlikuju se po prefiksima cis i trans, ili Z i E, koji označavaju da su grupe na istoj ili suprotnim stranama dvostruke veze u molekulu prema Cahn-Ingold-Prelogovim pravilima.
[0318] Treba razumeti da jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da se opišu kao različiti hiralni izomeri ili geometrijski izomeri. Treba takođe razumeti da kada jedinjenja imaju hiralnu izomernu ili geometrijsku izomernu formu, sve izomerne forme su uključene u okvir predmetnog pronalaska, i imenovanje jedinjenja ne isključuje nijednu izomernu formu, pri čemu se podrazumeva da sve izomerne forme ne mogu imati isti nivo aktivnosti.
1
[0319] Pored toga, strukture i druga jedinjenja o kojima je reč u ovom pronalasku uključuju sve njihove atropijske izomere, pri čemu se podrazumeva da ne mogu svi atropijski izomeri imati isti nivo aktivnosti. "Atropijski izomeri" predstavljaju tip stereoizomera u kojima su atomi dva izomera različito aranžirani u prostoru. Atropijski izomeri svoje postojanje duguju ograničenoj rotaciji prouzrokovanoj ometenom rotacijom velikih grupa oko centralne veze. Takvi atropijski izomeri tipično postoje u vidu mešavine, međutim, kao rezultat nedavnih dostignuća u hromatografskim tehnikama, u odabranim slučajevima moguće je izvršiti razdvajanje mešavina dva atropijska izomera.
[0320] "Tautomer" je jedan od dva ili više strukturnih izomera koji postoje u ravnoteži i koji se lako konvertuju iz jedne izomerne forme u drugu. Ova konverzija rezultuje formalnom migracijom vodonikovog atoma udruženom sa zamenom susednih konjugovanih dvostrukih veza. Tautomeri postoje kao mešavina tautomernog seta u rastvoru. U rastvorima u kojima je moguća tautomerizacija, hemijska ravnoteža tautomera će biti dostignuta. Tačan odnos tautomera zavisi od nekoliko faktora, uključujući temperaturu, rastvarač i pH. Koncept tautomera koji su interkonvertibilni putem tautomerizacije naziva se tautomerizam.
[0321] Od različitih mogućoh tipova tautomerizma, dva se često zapažaju. U keto-enolnom tautomerizmu dolazi do istovremenog pomeranja elektrona i atoma vodonika. Tautomerizam prsten-lanac nastaje kao rezultat aldehidne grupe (-CHO) u molekulu šećernog lanca koja reaguje sa jednom od hidroksi grupa (-OH) u istom molekulu dajući mu cikličnu (prstenastu) formu, kao što je slučaj kod glukoze.
[0322] Česti tautomerni parovi su: keton-enol, amid-nitril, laktam-laktim, amid-imidična kiselina-tautomerizam u heterocikličnim prstenovima (npr., u nukleobazama kao što su guanin, timin i citozin), imin-enamin i enamin-enamin. Primer keto-enol ravnoteže je između piridin-2(1H)-ona i odgovarajućih piridin-2-ola, kako je pokazano dole.
[0323] Treba razumeti da jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da se opišu kao različiti tautomeri. Treba razumeti da su, kada jedinjenja imaju tautomerne forme, sve tautomerne forme obuhvaćene okvirom predmetnog pronalaska, i imenovanje jedinjenja ne isključuje nijednu tautomernu formu. Podrazumeva se da određeni tautomeri mogu imati viši nivo aktivnosti od drugih.
2
[0324] Izraz "kristalni polimorfi", "polimorfi" ili "kristalne forme" označava kistalne strukture u kojima jedinjenje (ili njegova so ili solvat) mogu da se kristališu u različite kristalne aranžmane, koji svi imaju isti elementarni sastav. Različite kristalne forme obično imaju različite obrasce difrakcije X-zraka, osobine infracrvenog spektra, tačke topljenja, gustinu, tvrdoću, kristalni oblik, optičke i električne osobine, stabilnost i rastvorljivost. Rastvarač za rekristalizaciju, stopa kristalizacije, temperatura skladištenja i drugi faktori mogu dovesti do toga da jedna kristalna forma dominira. Kristalni polimorfi jedinjenja mogu se pripremiti kristalizacijom pod različitim uslovima.
[0325] Jedinjenja bilo koje od Formula objavljenih u ovom tekstu uključuju sama jedinjenja, kao i njihove soli, njihove estre, i njihove solvate, ako je to primenljivo. So, na primer, može da se formira između anjona i pozitivno naelektrisane grupe (npr., amino) na aril- ili heteroaril-supstituisanom benzenovom jedinjenju. Pogodni anjoni uključuju hlorid, bromid, jodid, sulfat, bisulfat, sulfamat, nitrat, fosfat, citrat, metansulfonat, trifluoroacetat, glutamat, glukuronat, glutarat, malat, maleat, sukcinat, fumarat, tartrat, tozilat, salicilat, laktat, naftalensulfonat, i acetat (npr., trifluoroacetat). Izraz "farmaceutski prihvatljivi anjon" odnosi se na anjon pogodan za formiranje farmaceutski prihvatljive soli. Slično tome, so može da se formira i između katjona i negativno naelektrisane grupe (npr., karboksilat) na aril- ili heteroaril-supstituisanom benzenovom jedinjenju. Pogodni katjoni uključuju natrijumov jon, kalijumov jon, magnezijumov jon, kalcijumov jon, i amonijum katjon kao što je tetrametilamonijum jon. Aril- ili heteroaril-supstituisana benzenova jedinjenja uključuju i one soli koje sadrže kvatrnarne atome azota. Primeri prolekova uključuju estre i druge farmaceutski prihvatljive derivate, koji posle primene kod subjekta mogu dati aktivna aril- ili heteroaril-supstituisana benzenova jedinjenja.
[0326] Pored toga, jedinjenja predmetnog pronalaska, na primer soli jedinjenja, mogu postojati u hidratisanoj ili nehidratisanoj (anhidrovanoj) formi ili kao solvati sa drugim molekulima rastvarača. Neograničavajući primeri hidrata uključuju monohidrate, dihidrate, itd. Neograničavajući primeri solvata uključuju etanolne solvate, acetonske solvate, itd.
[0327] "Solvat" označava adicione forme rastvarača, koje sadrže stehiometrijsku ili nestehiometrijsku količinu rastvarača. Neka jedinjenja imaju tendenciju da zadrže fiksirani molarni odnos molekula rastvarača u kristalnom čvrstom stanju, tako formirajući solvat. Ako je rastvarač voda formirani solvat je hidrat; i ako je rastvarač alkohol, formirani solvat je alkoholat. Hidrati se formiraju kombinacijom jednog ili više molekula vode sa jednim molekulom supstance pri čemu voda zadržava svoje molekulsko stanje kao H2O.
[0328] Kako se koristi u ovom tekstu, izraz "analog" odnosi se na hemijsko jedinjenje koje je strukturno slično drugom, ali se blago razlikuje po sastavu (na primer po zameni jednog atoma atomom različitog elementa ili po prisustvu određene funkcionalne grupe, ili zameni jedne funkcionalne grupe drugom funkcionalnom grupom). Dakle, analog je jedinjenje koje je slično ili uporedivo sa referentnim jedinjenjem po funkciji ili izgledu, ali ne i po strukturi ili poreklu.
[0329] Kako je definisano u ovom tekstu, izraz "derivat" odnosi se na jedinjenja koja imaju zajedničku osnovnu strukturu, a supstituisana su različitim grupama kako je opisano u ovom tekstu. Na primer, sva jedinjenja predstavljena Formulom (I) su aril- ili heteroarilsupstituisana benzenska jedinjenja, i imaju Formulu (I) kao zajedničku osnovu.
[0330] Izraz "bioizoster" odnosi se na jedinjenje koje je rezultat zamene atoma ili grupe atoma drugim, u širem smislu sličnim atomom ili grupom atoma. Cilj bioizosterične zamene je kreiranje novog jedinjenja sa osobinama sličnim osobinama matičnog jedinjenja. Bioizosterična zamena može biti fizikohemijski bazirana ili topološki bazirana. Primeri karboksilnokiselinskih bioizostera uključuju, ali se ne ograničavaju na acil sulfonimide, tetrazole, sulfonate i fosfonate. Vidi, npr., Patani and LaVoie, Chem. Rev. 96, 3147-3176, 1996.
[0331] Predmetni pronalazak treba da uključi sve izotope atoma koji se sreću u predmetnim jedinjenjima. Izotopi uključuju one atome koji imaju isti atomski broj, ali različite masene brojeve. Opšti primeri, bez ograničavanja, izotopa vodonika uključuju tricijum i deuterijum, a izotopi ugljenika uključuju C-13 i C-14.
2. Sinteza aril- ili heteroaril-supstituisanih benzenskih jedinjenja
[0332] Predmetna objava obezbeđuje metode sinteze jedinjenja bilo koje od Formula objavljenih u ovom tekstu. Predmetna objava obezbeđuje i detaljne metode sinteze različitih objavljenih jedinjenja predmetnog pronalaska prema sledećim šemama kako je pokazano u Primerima.
[0333] U opisu, kada se opisuje da smeše imaju, uključuju ili sadrže specifične komponente, smatra se da se smeše suštinski sastoje ili sadrže navedene komponente. Slično tome, kada se opisuje da metodi ili procesi imaju, uključuju ili sadrže specifične procesne korake, procesi se takođe suštinski sastoje ili sadrže navedene procesne korake. Pored toga, treba razumeti da je redosled koraka ili redosled obavljanja određenih radnji bez značaja dokle god pronalazak ostaje primenljiv. Pored toga, dva ili više koraka ili radnje mogu da se izvode istovremeno.
[0334] Sintetski procesi pronalaska mogu tolerisati široku različitost funkcionalnih grupa, tako da se mogu koristiti različiti supstituisani polazni materijali. Na kraju ili pri kraju ukupnog procesa, obično se dobija željeno finalno jedinjenje, iako u određenim slučajevima
4
može biti poželjno dalje konvertovanje jedinjenja u njegovu farmaceutski prihvatljivu so, estar, ili prolek.
[0335] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da se pripreme na različite načine korišćenjem komercijalno dostupnih polaznih materijala, jedinjenja poznatih u literaturi, ili iz lako pripremljenih intermedijara, korišćenjem standardnih sintetskih metoda i postupaka poznatih stručnjaku u oblasti, ili koji će stručnjaku biti očigledni u svetlu uputstava datih u ovom tekstu. Standardni sintetski metodi i procedure pripreme organskih molekula i transformacije funkcionalnih grupa i manipulacije mogu se naći u relevantnoj naučnoj literaturi ili standardnim udžbenicima u oblasti. Bez ograničavanja na jedan ili nekoliko izvora, klasični tekstovi kao što su Smith, M. B., March, J., March’s Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5th edition, John Wiley & Sons: New York, 2001; Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons: New York, 1999; R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); i L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995), korisni su i priznati referentni udžbenici organske sinteze poznati stručnjacima u oblasti. Sledeći opisi sintetskih metoda dizajnirani su radi ilustracije, a ne da bi ograničili opšte postupke pripreme jedinjenja predmetnog pronalaska.
[0336] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu uobičajeno da se pripreme različitim metodima koji su poznati stručnjacima u oblasti. Jedinjenja ovog pronalaska sa bilo kojom Formulom objavljenom u ovom tekstu mogu se pripremiti prema postupcima ilustrovanim na Šemama 1-10 kasnije u ovom tekstu, od komercijalno dostupnih polaznih materijala koji se mogu pripremiti korišćenjem postupaka iz literature. Z i R grupe (kao R2, R3, R4, R6, R7, R8, i R12) na Šemama 1-10 su kako je definisano u nekoj od Formula objavljenih u ovom tekstu, ukoliko nije drugačije navedeno.
[0337] Prosečno obučen stručnjak u oblasti zapaziće da se tokom niza reakcija i sintetskih šema opisanih u ovom tekstu, redosled određenih koraka može promeniti, na primer uvođenje i uklanjanje protektivnih grupa.
[0338] Prosečno obučen stručnjak u oblasti prepoznaće da određene grupe mogu zahtevati da se upotrebom protektivnih grupa zaštite od uslova reakcije. Protektivne grupe mogu da se koriste i za razlikovanje sličnih funkcionalnih grupa u molekulima. Spisak protektivnih grupa i načini njihovog uvođenja i uklanjanja mogu se naći u Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons: New York, 1999.
[0339] Poželjne protektivne grupe uključuju, ali se ne ograničavaju na:
Za hidroksilnu komponentu: TBS, benzil, THP, Ac
Za karboksilne kiseline: benzil estar, metil estar, etil estar, alil estar
Za amine: Cbz, BOC, DMB
Za diole: Ac (x2) TBS (x2), ili kada se uzmu zajedno acetonidi
Za tiole: Ac
Za benzimidazole: SEM, benzil, PMB, DMB
Za aldehide: di-alkil acetali kao dimetoksi acetal ili dietil acetil.
[0340] U reakcionim šemama opisanim u ovom tekstu, mogu se proizvesti multipli stereoizomeri. Kada nije naveden određeni stereoizomer, podrazumevaju se svi mogući stereoizomeri koji mogu da se proizvedu reakcijom. Osoba prosečno obučena u oblasti prepoznaće da reakcije mogu da se optimizuju da bi se preferentno dobio jedan izomer, ili mogu da se osmisle nove šeme da bi se proizveo jedan izomer. Ako se proizvedu mešavine, mogu se koristiti tehnike kao što su preparativna tankoslojna hromatografija, preparativna HPLC, preparativna hiralna HPLC, ili preparativna SFC, da bi se izomeri razdvojili.
[0341] Sledeće skraćenice koriste se u specifikaciji i definisane su u nastavku ovog teksta:
AA amonijum acetat
ACN acetonitril
Ac acetil
AcOH sirćetna kiselina
atm atmosfera
aq. vodeni
BID ili b.i.d. bis in die (dva puta dnevno)
tBuOK kalijum t-butoksid
Bn benzil
BOC tert-butoksi karbonil
BOP (benzotriazol-1-iloksi)tris(dimetilamino)-fosfonijumheksafluorofosfat
Cbz benziloksi karbonil
CDCl3deuterisani hloroform
CH2Cl2dihlorometan
COMU (1-cijano-2-etoksi-2-oksoetilidenaminooksi)dimetil-aminomorfolino-karbenijum heksafluorofosfat
d dani
DBU 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en
DCE 1,2 dihloroetan
DCM dihlorometan
DEAD dietil azodikarboksilat
DIAD diizopropil azodikarboksilat
DiBAL-H diizobutil aluminijum hidrid
DIPEA N,N-diizopropiletilamin (Hunigova baza)
DMA dimetilacetamid
DMAP N,N dimetil-4-aminopiridin
DMB 2,4 dimetoksi benzil
DMF N,N dimetilformamid
DMSO dimetil sulfoksid
DPPA difenilfosfonski azid
EA ili EtOAc etil acetat
EDC ili EDCI N-(3-dimetilaminopropil)-N’-etilkarbodiimid
Et2O dietil etar
ELS evaporativno rasipanje svetlosti
ESI- elektrosprej negativni modalitet
ESI+ elektrosprej pozitivni modalitet
Et3N ili TEA trietilamin
EtOH etanol
FA mravlja kiselina
FC ili FCC fleš hromatografija
h sati
H2O voda
HATU O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum heksafluorofosfat
HOAT 1-hidroksi-7-azabenzotriazol
HOBt 1-hidroksibenzotriazol
HO-Su N-hidroksisukcinimid
HCl hidrogen hlorid ili hlorovodonična kiselina
HPLC tečna hromatografija visokih performansi
K2CO3kalijum karbonat
KHMDs kalijum heksametildisilazid
LC/MS ili LC-MS tečna hromatografija-masena spektrometrija
LDA litijum diizopropilamid
LiHMDs litijum heksametildisilazid
LG odlazeća grupa
M molarni
m/z odnos masa/naelektrisanje
m-CPBA meta-hloroperbenzoeva kiselina
MeCN acetonitril
MeOD d4-metanol
MeI metil jodid
MS3Å 3Å molekularna sita
MgSO4magnezijum sulfat
min minuti
Ms mezil
MsCl mezil hlorid
MsO mezilat
MS maseni spektar
MWI mikrotalasno ozračivanje
Na2CO3natrijum karbonat
Na2SO4natrijum sulfat
NaHCO3natrijum bikarbonat
NaHMDs natrijum heksametildisilazid
NaOH natrijum hidroksid
NaHCO3natrijum bikarbonat
Na2SO4natrijum sulfat
NIS N-jodosukcinimid
NMR nuklearna magnetna rezonanca
o/n ili O/N preko noći
Pd/C paladijum na ugljeniku
Pd(dppf)Cl2.DCM [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen] dihloropaladijum(II), kompleks sa dihlorometanom
PPAA 1-propanfosfonska kiselina ciklični anhidrid
Pd(OH)2paladijum dihidroksid
PE petrol etar
PG protektivna grupa
PMB para metoksibenzil
p.o. per os (oralna primena)
ppm delova na milion
prep HPLC preparativna tečna hromatografija visokih performansi prep TLC preparativna tankoslojna hromatografija
p-TsOH para-toluensulfonska kiselina
PyBOP (benzotriazol-1-iloksi)tripirolidinofosfonijum heksafluorofosfat QD ili q.d. quaque die (jednom dnevno)
RBF flakon sa okruglim dnom
RP-HPLC reverzno-fazna tečna hromatografija visokih performansi Rt ili RT sobna temperatura
SEM (trimetilsilil)etoksimetil
SEMCl (trimetilsilil)etoksimetil hlorid
SFC superkritična hromatografija
SGC hromatografija na silika gelu
STAB N natrijum triacetoksi borohidrid
TBAF tetra-n-butilamonijum fluorid
TBME tert-butil metil etar
TEA trietilamin
TFA trifluorosirćetna kiselina
TfO triflat
THF tetrahidrofuran
THP tetrahidropiran
TID ili t.i.d ter in die (tri puta na dan)
TLC tankoslojna hromatografija
TMSCl trimetilsilil hlorid
Ts tozil
TsOH tozinska kiselina
UV ultravioletno
[0342] Šema 1 prikazuje sintezu modifikovanih aril analoga prema opštem putu koji koristi dobro poznate hemijske reakcije. Supstituisane nitrobenzoeve kiseline, od kojih su mnoge komercijalno dostupne ili se mogu napraviti nitracijom odgovarajućih supstituisanih benzoevih kiselina ili drugim hemijskim reakcijama poznatim stručnjacima u oblasti, mogu se konvertovati u svoje metil estre tretmanom metiljodidom u polarnom rastvaraču kao što je DMF u prisustvu odgovarajuće baze kao što je natrijum karbonat na odgovarajućoj temperaturi kao što je 60 °C (Korak 1). Nitro grupa može da se redukuje u amin korišćenjem odgovarajućeg redukujućeg sredstva kao što je gvožđe u prisustvu kiseline kao što je amonijum hlorid u protičkom rastvaraču kao što je etanol na odgovarajućoj temperaturi kao što je 80 °C (Korak 2). Uvođenje R7može da se obavi korišćenjem reduktivne aminacije sa odgovarajućim ketonom ili aldehidom u prisustvu odgovarajućeg redukujućeg sredstva kao što je natrijum cijanoborohidrid i katalitičke kiseline kao što je sirćetna kiselina u odgovarajućem rastvaraču kao što je metanol. Različite R8grupe mogu da se uvedu alkilacijom korišćenjem R8-LG, gde je LG odlazeća grupa kao što je jod, u prisustvu blage baze kao što je cezijum karbonat u odgovarajućem polarnom rastvaraču kao što je acetonitril na odgovarajućoj temperaturi kao što je 80 °C (Korak 4). Alternativno, R8grupe mogu da se uvedu reduktivnom aminacijom sa R8-ketonom ili R8-aldehidom u prisustvu odgovarajućeg redukujućeg sredstva kao što je natrijum cijanoborohidrid i katalitičke kiseline kao što je sirćetna kiselina u odgovarajućem rastvaraču kao što je metanol. Estarska komponenta može da se konvertuje u amid korišćenjem standardnog protokola u dva koraka. Estar može da se hidrolizuje u odgovarajuću kiselinu korišćenjem pogodne baze kao što je natrijum hidroksid u polarnom rastvaraču kao što je etanol (Korak 5). Kiselina bi se tada izložila standardnoj amidnoj kuplujućoj reakciji posle čega se odgovarajući amin dodaje zajedno sa odgovarjućim amid-kuplujućim reagensom kao što je PYBOP u pogodnom rastvaraču kao što je DMSO da se dobije željeni amid (Korak 6).
[0343] Zavisno od prirode R6supstituenta, dalja hemijska modifikacija može da se obavi da bi se R6supstituent konvertovao u alternativni R6supstituent. Reprezentativni uzorci takvih modifikacija mogu uključivati hidrogenizaciju, uklanjanje protektivne grupe praćeno dodatnim amid-kuplujućim reakcijama, paladijumom katalisanim kuplujućim reakcijama, reakcijama reduktivne aminacije ili reakcijama alkilacije. Na primer, kako je prikazano na Šemi 2, ako je R6bromid, alternativni R6supstituenti mogu da se uvedu korišćenjem standardnih protokola baziranih na prelaznim metalima, koji se oslanjaju na odlazeću grupu kao što je bromid, kao spojnu tačku. Bromid će se kombinovati sa odgovarajućim derivatom boronskog estra, u prisustvu blage baze i paladijumskog katalizatora u polarnom rastvaraču kao što je dioksan/voda, na povišenoj temperaturi, da se dobije željeni novi R6supstituent (tj. Suzukijeva reakcija). Na primer, kako je prikazano na Šemi 3, ako se Suzukijeva reakcija izvodi sa derivatom boronskog estra koji nosi formil grupu može da se izvede dalja modifikacija reakcijom reduktivne aminacije sa primarnim i sekundarnim aminima (npr. morfolin, dimetilamin) da bi se uvele aminske grupe.
Šema 3
[0344] U zavisnosti od prirode R7supstituenta, dodatna hemijska modifikacija posle Koraka 6 Šeme 1 može da se obavi da bi se konvertovao R7supstituent u alternativni R7supstituent. Na primer, protektovana amino grupa sadržana u R7može da se izloži reakciji deprotektovanja (npr. odsecanje Boc grupe) da se dobiju slobodne amino grupe. Takve slobodne amino grupe
1
mogu da se izlože reakcijama reduktivne aminacije ili reakcijama alkilacije da se dobiju supstituisani amini.
[0345] Šema 4 prikazuje opštu sintezu 2,6-disupstituisanih izonikotinamidnih jedinjenja. Suzukijeva reakcija u Koraku 1 aril boronskokiselinskog jedinjenja sa metil 2,6-dihloroizonikotinatnim polaznim materijalom može se koristiti za uvođenje aril grupe koja može biti supstituisana funkcionalnom grupom X pogodnom za dalju transformaciju. Takve X grupe uključuju formil ili hidroksimetil koji lako mogu da se transformišu u Koraku 2 u različite grupe Y. Takve Y grupe uključuju aminometil, monoalkilaminometil i dialkilaminometil grupe. Poslednja može da se pripremi reduktivnom aminacijom u slučaju kada je X formil ili konvertovanjem X = hidroksimetil u bromometil, što je praćeno alkilacijom sa aminom. Estarska hidroliza u sledećem koraku daje kiseli intermedijar koji može da se kupluje sa odgovarajućim 3-(aminometil)-piridin-2(1H)-onima dajući pretposlednji 2-hloro-6-aril-izonikotin amidni intermedijar. Suzukijeva reakcija ili reakcija aminacije zatim daje jedinjenja supstituisana Z grupom na 2-poziciji. U slučaju aminacione reakcije primeri Z mogu biti monoalkilamino ili dialkilamino. U slučaju Suzukijeve reakcije Z može biti aril, dihidroaril ili tetrahidroaril kao što je cikloheksenil.
Šema 4
[0346] Šema 5 prikazuje opštu sintezu 6-aril-3-metil-pikolinamida koji imaju monoalkilamino ili dialkilamino grupe na 4-poziciji. Polazeći od oksidacije metil 3-bromo-6-hloropikolinata u N-oksid praćene hlorinacijom fosfornim oksihloridom dobija se metil 3-bromo-4,6-dihloropikolinat. 4-hloro grupa može selektivno da se supstituiše različitim mono i dialkil aminima koji mogu da sadrže funkcionalne ili protektovane funkcionalne grupe koje u kasnijoj fazi mogu biti demaskirane. Paladijumom katalisana metilacija tetrametilkalajem, praćena hidrolizom estra i amidnim kuplovanjem sa odgovarajućim 3-(aminometil)-piridin-
2
2(1H)-onima daje pretposlednje 2-hloro piridin intermedijare. Suzukijeva kuplujuća reakcija ovih intermedijara sa aril boronskim kiselinama rezultuje zamenom 2-hloro grupe aril grupom. Tako, ovo daje 6-aril-3-metil-pikolinamide sa monoalkilamino ili dialkilamino grupama na 4-poziciji. Aril grupa koja može biti supstituisana funkcionalnom grupom X koja ostaje u finalnom proizvodu ili se konvertuje u drugu grupu deprotektovanjem ili reakcijom konverzije funkcionalne grupe npr. reduktivnom aminacijom.
Šema 5
[0347] Opšte sinteze 3-(aminometil)-piridin-2(1H)-onskih intermedijara za amidnu kuplujuću reakciju sa Šeme 1 opisane su na Šemi 6 dole. U jednom metodu, diketon može da se kondenzuje sa 2-cijanoacetamidom u prisustvu odgovarajućeg reagensa kao što je piperidin acetat u polarnom rastvaraču kao što je etanol da se dobije cijanopiridon (Korak 9). U drugom metodu, kada je R3H, odgovarajuće supstituisani alkinil keton može da se kondenzuje sa 2-cijanoacetamidom u prisustvu odgovarajućeg reagensa kao što je piperidin acetat u polarnom rastvaraču kao što je etanol da se dobije cijanopiridon (Korak 11). Cijano grupa može da se redukuje pod odgovarjućim uslovima kao što je hidrogenizacija u prisustvu katalitičkog Raneyjevog nikla u polarnom rastvaraču kao što je amonijum u metanolu da se dobije amin (Korak 10).
[0348] Dodatno, u zavisnosti od prirode R2, R3, ili R4grupe, druge hemijske modifikacije mogu da se obave da bi se svaka od njih nezavisno konvertovala u alternativni supstituent. Reprezentativni primer takvih modifikacija može uključivati hidrogenizaciju, uklanjanje protektivne grupe praćeno dodatnim amidnim kuplujućim reakcijama, paladijumom katalisanim kuplujućim reakcijama, reakcijama reduktivne aminacije, i reakcijama alkilacije. Šema 4 prikazuje varijantu opšteg puta sinteze sa Šeme 1, baziranu na 2-supstituisanim (supstituent je R12grupa) metil 3-amino-5-bromo-benzoatnim polaznim materijalima. Ovi polazni materijali mogu da se pripreme od 2-supstituisanih 3-nitro-benzoevih kiselina koje su komercijalno dostupne ili mogu da se pripreme nitracijom 2-supstituisanih benzoevih kiselina. Tako, brominacija 2-supstituisanih 3-nitro-benzoevih kiselina pogodnim reagensom kao što je 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindion daje odgovarajuće 2-supstituisane 3-nitro-5-bromobenzoeve kiseline. Različiti metodi esterifikacije i zatim redukcije nitro grupe mogu redom da se primene da bi se od 2-supstituisanih 3-nitro-5-bromo-benzoevih kiselina pripremili 2-supstituisani metil 3-amino-5-bromo-benzoatni polazni materijali.
4
[0349] Kako je prikazano na Šemi 7, R7grupa može da se uvede iz 2-supstituisanih metil 3-amino-5-bromo-benzoata u Koraku 1 korišćenjem reduktivne aminacije sa odgovarajućim R7-ketonom ili R7-aldehidom u prisustvu odgovarajućeg redukujućeg sredstva kao što je natrijum cijanoborohidrid i katalitičke kiseline kao što je sirćetna kiselina u odgovarajućem rastvaraču kao što je metanol. Slično, R8grupe mogu da se uvedu u Koraku 2 reduktivnom aminacijom sa R8-ketonom ili R8-aldehidom u prisustvu odgovarajućeg redukujućeg sredstva kao što je natrijum cijanoborohidrid i katalitičke kiseline kao što je sirćetna kiselina u odgovarajućem rastvaraču kao što je metanol. Alternativno, različite R8grupe mogu da se uvedu alkilacijom korišćenjem R8-LG, gde je LG odlazeća grupa kao što je jod, u prisustvu blage baze kao što je cezijum karbonat u odgovarajućem polarnom rastvaraču kao što je acetonitril na odgovarajućoj temperaturi kao što je 80 °C. U Koraku 3, aril grupe koje odgovaraju R6mogu da se uvedu Suzukijevom reakcijom intermedijarnog bromida sa odgovarajućom aril boronskom kiselinom ili derivatom estra npr, X-Ar-B(OH)2, u prisustvu blage baze i paladijumskog katalizatora u polarnom rastvaraču kao što je dioksan/voda, na povišenoj temperaturi. X grupa u X-Ar-B(OH)2može da bude potpuno uređeni supstituent na aril prstenu ili može biti funkcionalna grupa koja može da se konvertuje u drugu grupu modifikacijom funkcionalne grupe. Reprezentativni uzorak takvih modifikacija može uključivati hidrogenizaciju, uklanjanje protektivne grupe praćeno dodatnim amid kuplujućim reakcijama, paladijumom katalisanim kuplujućim reakcijama, reakcijama reduktivne aminacije ili reakcijama alkilacije. Na primer, ako se Suzukijeva reakcija izvodi sa derivatom boronske kiseline koji nosi formil grupu, može se izvesti dodatna modifikacija reakcijom reduktivne aminacije sa primarnim i sekundarnim aminima (npr. morfolin, dimetilamin) da bi se uvele aminske grupe. U Koraku 4 estarska komponenta može da se hidrolizuje u odgovarajuću kiselinu korišćenjem odgovarajuće baze kao što je natrijum hidroksid u polarnom rastvaraču kao što je etanol. U Koraku 5, kiselina može da se izloži standardnoj amid kuplujućoj reakciji posle koje se odgovarajući amin dodaje zajedno sa pogodnim amid kuplujućim reagensom kao što je PYBOP u pogodnom rastvaraču kao što je DMSO da se dobije željeni amid. U zavisnosti od prirode R7supstituenta, druge hemijske modifikacije posle Koraka 5 Šeme 4 mogu da se obave da bi se konvertovao R7supstituent u alternativni R7supstituent. Na primer, protektovana amino grupa sadržana u R7može da se izloži reakciji deprotektovanja (npr. odsecanje Boc grupe) da se dobiju slobodne amino grupe. Takve slobodne amino grupe mogu da se izlože reakcijama reduktivne aminacije ili reakcijama alkilacije da se dobiju supstituisani amini.
[0350] Šema 8 dole prikazuje opštu sintezu 2-monoalkilamino i 2-dialkilmino-3-supstituisanih-6-arilizonikotinamida, gde 3-supstituent odgovara R12i 6-aril grupa odgovara R6, Formula I. U Koraku 13-supstituent može da se uvede metodom opisanim u Epsztain J. et al. Tetrahedron, 1991, v. 47, 1697-16708, metalacijom 2-hloro-izonikotinanilida sa nbutillitijumom, praćenom zadržavanjem sa alkiljodidom kao što je metiljodid ili aldehidom ili drugom elektrofilnom grupom.
[0351] U slučajevima kada zadržavaući reagens daje supstituenta sa funkcionalnom grupom, ta grupa može bit maskirana ili konvertovana u drugu funkcionalnu grupu kompatibilnu sa narednim hemijskim koracima. U Koraku 2 može se sprovesti anilid amidna hidroliza pod standardnim kiselinskim uslovima, što je praćeno sintezom metil estra pod standardnim uslovima na primer kako je pokazano sa metil jodidom i bazom što daje odgovarajuće metil 2-hloro-3-supstituisane izonikotinate. U Koraku 4 alkilamino grupa može da se uvede Buchwaldovom kuplujućom reakcijom R7NH2monoalkilamina sa metil 2-hloro-3-supstituisanim izonikotinatima. Ova reakcija je po hemijskoj literaturi dobra prethodnica za različite 2-hloropiridinske sisteme. U opcionom Koraku 5 za dialkilamino jedinjenja R8grupe mogu da se uvedu reduktivnom aminacijom sa R8-ketonom ili R8-aldehidom u prisustvu odgovarajućeg redukujućeg sredstva kao što je natrijum cijanoborohidrid i katalitičke kiseline kao što je sirćetna kiselina u odgovarajućem rastvaraču kao što je metanol. Alternativno, različite R8grupe mogu da se uvedu alkilacijom korišćenjem R8-LG, gde je LG odlazeća grupa kao što je jod, u prisustvu blage baze kao što je cezijum karbonat u odgovarajućem polarnom rastvaraču kao što je acetonitril na odgovarajućoj temperaturi kao što je 80 °C. U Koraku 6, oksidacija u N-oksid praćena hlorinacijom fosfornim oksihloridom daje metil 6-hloro-2-mono ili dialkilamino-3-supstituisane izonikotinate. U Koraku 7 estarska komponenta može da se hidrolizuje u odgovarajuću kiselinu korišćenjem pogodne baze kao što je natrijum hidroksid u polarnom rastvaraču kao što je etanol. U Koraku 8, kiselina može da se izloži standardnoj amid kuplujućoj reakciji posle čega se odgovarajući amin ili supstituisani 3-(aminometil)-piridin-2(1H)-on dodaje zajedno sa pogodnim amid kuplujućim sredstvom kao što je PYBOP u pogodnom rastvaraču kao što je DMSO da se dobije željeni amid. U Koraku 9, aril grupe koje odgovaraju R6mogu se uvesti Suzukijevom reakcijom intermedijarnog bromida sa odgovarajućom aril boronskom kiselinom ili estarskim derivatom, npr, X-Ar-B(OH)2, u prisustvu blage baze i paladijumskog katalizatora u polarnom rastvaraču kao što je dioksan/voda, na povišenoj temperaturi. X grupa u X-Ar-B(OH)2može biti u potpunosti uređeni supstituent na aril prstenu ili može biti funkcionalna grupa koja se može konvertovati u drugu grupu modifikacijom funkcionalne grupe. Reprezentativni uzorak takvih modifikacija može uključivati hidrogenizaciju, uklanjanje protektivne grupe praćeno dodatnim amid kuplujućim reakcijama, paladijumom katalisanim kuplujućim reakcijama, reakcijama reduktivne aminacije ili reakcijama alkilacije. Na primer ako se Suzukijeva reakcija izvodi sa derivatom boronske kiseline koji nosi formil grupu dodatna modifikacija reakcijom reduktivne aminacije sa primarnim i sekundarnim aminima (npr. morfolin, dimetilamin) može da se izvede da bi se uvele aminske grupe. U zavisnosti od prirode R7supstituenta, drugi koraci hemijske modifikacije mogu da se obave da se konvertuje R7supstituent u alternativni R7supstituent. Na primer protektovana amino grupa sadržana u R7može da se izloži reakciji deprotektovanja (npr. odsecanje Boc grupe) da se dobiju slobodne amino grupe. Takve slobodne amino grupe mogu da se izlože reakcijama reduktivne aminacije ili reakcijama alkilacije da se dobiju supstituisani amini.
[0352] Šema 9 opisuje sintezu modifikovanih aril analoga koja prati opšti put koji koristi dobro uspostavljenu hemiju. Polazeći od supstituisane benzoeve kiseline kao što je 5-hloro-2-metilbenzoeva kiselina, nitracija korišćenjem standardnih uslova kao što je tretman konc. H2SO4i konc. HNO3može dati nitro analog. Esterifikacija kiseline može se postići korišćenjem alkilirajućeg sredstva kao što je metil jodid u prisustvu baze kao što je natrijum karbonat u polarnom rastvaraču kao što je DMF. Nitro grupa može da se redukuje korišćenjem uslova kao što su gvožđe i amonijum hlorid u protičkom rastvaraču kao što je etanol uz zagrevanje do temperature kao što je 80 °C. Dobijeni anilin može da se konvertuje u bromid korišćenjem Sandmeyerove reakcije kao što je tretman sa CuBr2i t-butil nitritom u rastvaraču kao što je acetonitril. Paladijumom katalisano kuplovanje tiola bromidom može da se obavi korišćenjem izvora paladijuma kao što je Pd(OAc)2uz ligand kao što je ksantfos u prisustvu baze kao što je N,N-diizopropil etilamin u rastvaraču kao što je 1,4-dioksan opciono zagrejan na temperaturu kao što je 100 °C. Estar može da se hidrolizuje vodenom bazom kao što je NaOH u vodi. Dobijena kiselina može da se kupluje sa 3-(amino metil)-4, 6-dimetilpiridin-2(1H)-onom korišćenjem standardnih aminokiselinskih kuplujućih uslova kao što je PyBOP u DMSO. Rezultujući tioetar može da se oksidiše u odgovarajući sulfoksid ili sulfon korišćenjem pogodnih ekvivalenata oksidanata kao što je m-CPBA u rastvaraču kao što je DCM. Aril supstituenti mogu da se inkorporišu korišćenjem paladijumjumskog kuplovanja kao što je Suzukijeva reakcija, opisana gore.
[0353] Šema 10 opisuje sintezu modifikovanih aril analoga, koja prati opšti put koji koristi jasno uspostavljenu hemiju. Polazeći od supstituisanog anilina kao što je metil 3-amino-5-hloro-2-metilbenzoat, anilin može da se konvertuje u fenol korišćenjem Sandmeyerove reakcije kao što je tretman vodenim NaNO2rastvorom u vodenoj kiselini kao što je 50% H2SO4. Fenol može da se alkiliše korišćenjem alkilirajućeg sredstva kao što je tetrahidro-2H-piran-4-il 4-metilbenzensulfonat u prisustvu odgovarajuće baze kao što je cezijum karbonat u polarnom rastvaraču kao što je DMF uz opciono zagrevanje do temperature kao što je 80 °C. Estar može da se hidrolizuje vodenom bazom kao što je NaOH u vodi. Dobijena kiselina može da se kupluje sa 3-(amino metil)-4, 6-dimetilpiridin-2(1H)-onom korišćenjem standardnih aminokiselinskih kuplujućih uslova kao što je PyBOP u DMSO. Aril supstituenti mogu da se inkorporišu korišćenjem paladijumskog kuplovanja kao što je Suzukijeva reakcija, opisana gore.
3. Upotreba u metodima lečenja
[0354] Jedinjenja predmetnog pronalaska inhibiraju histon-metiltransferaznu aktivnost EZH2 ili njegovog mutanta i prema tome, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja za upotrebu u metodima lečenja stanja i bolesti na čiji tok može uticati modulisanje metilacionog statusa histona ili drugih proteina, gde je pomenuti metilacioni status bar delom posredovan aktivnošću EZH2. Modulacija metilacionog statusa histona može dalje uticati na nivo ekspresije ciljnih gena aktiviranih metilacijom i/ili ciljnih gena suprimiranih metilacijom. Metod uključuje primenu, kod subjekta kojem je takvo lečenje potrebno, terapijski efikasne količine jedinjenja predmetnog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, polimorfa, solvata ili stereoizomera.
[0355] Poremećaj u kojem EZH2-posredovana metilacija proteina ima ulogu može biti kancer ili prekancerozno stanje. Predmetna objava obezbeđuje i upotrebu jedinjenja predemetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, polimorfa, solvata ili stereoizomera u lečenju kancera ili prekancera na čiji tok se može uticati modulacijom EZH2-posredovane metilacije proteina, ili za pripremanje medikamenata korisnih za lečenje takvog kancera ili prekancera. Primeri kancera koji se mogu lečiti uključuju limfome, uključujući ne-Hodgkinov limfom, folikularni limfom (FL) i dufuzni B krupnoćelijski limfom (DLBCL); melanom; i leukemiju, uključujući CML. Primeri prekanceroznih stanja uključuju mijelodisplastični sindrom (MDS; ranije poznat kao preleukemija).
[0356] Predmetna objava obezbeđuje i metode zaštite od poremećaja u kojima EZH2-posredovana metilacija proteina ima ulogu kod subjekta kojem je to potrebno, primenom terapijski efikasne količine jedinjenja predmetnog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, polimorfa ili solvata, kod subjekta kojem je takvo lečenje potrebno. Poremećaj može biti kancer, npr., kancer u kojem EZH2-posredovana metilacija proteina ima ulogu. Predmetna objava obezbeđuje i upotrebu jedinjenja predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, estra, proleka, metabolita, polimorfa, solvata ili stereoizomera za pripremanje medikamenta korisnog za prevenciju poremećaja proliferacije ćelija udruženog bar delom sa EZH2-posredovanom metilacijom proteina.
[0357] Jedinjenja ovog pronalaska mogu da se koriste za modulisanje metilacije proteina (npr., histona), npr., za modulisanje histon-metiltransferazne ili histon-demetilazne enzimske aktivnosti. Bar neka od jedinjenja pronalska mogu da se koriste in vivo ili in vitro za modulisanje metilacije proteina. Saopšteno je da je metilacija histona uključena u aberantnu ekspresiju određenih gena u kancerima, kao i u utišavanje neuronskih gena u neneuronskim ćelijama. Bar neka od jedinjenja opisanih u ovom tekstu pogodna su kao kandidati za lečenje ovih bolesti, tj., za smanjenje metilacije ili ponovno uspostavljanje metilacije na nivou koji je približan onom u normalnim ćelijama.
[0358] Jedinjenja koja su modulatori metilacije mogu da se koriste za modulisanje ćelijske proliferacije. Na primer, u nekim slučajevima preterana proliferacija može da se smanji sredstvima koja smanjuju metilaciju, dok nedovoljna proliferacija može da se stimuliše sredstvima koja povećavaju metilaciju. Prema tome, različite bolesti mogu da se leče
1
jedinjenjima pronalaska uključujući hiperproliferativne bolesti, kao što su benigni rast ćelija i maligni rast ćelija.
[0359] Kako se koristi u ovom tekstu, "subjekt kojem je to potrebno" je subjekt koji ima poremećaj u kojem EZH2-posredovana metilacija proteina ima ulogu, ili subjekt kod kojeg je povećan rizik za razvijanje takvog poremećaja, u odnosu na opštu populaciju. Subjekt kojem je to potrebno može imati prekancerozno stanje. Poželjno, subjekt kojem je to potrebno ima kancer. "Subjekt" uključuje sisara. Sisar može biti npr., čovek ili drugi odgovarajući sisar, na primer primat, miš, pacov, pas, mačka, krava, konj, koza, kamila, ovca ili svinja. Subjekt može biti i ptica ili živina. U jednom primeru izvođenja sisar je čovek.
[0360] Kako se koristi u ovom tekstu, izraz "poremećaj proliferacije ćelija" odnosi se na stanje u kojem neregulisani ili nenormalni rast ćelija, ili oba, mogu dovesti do razvoja neželjenog stanja ili bolesti, koje može ali ne mora biti kancerozno. Primeri poremećaja ćelijske proliferacije koji se mogu lečiti jedinjenjima pronalaska obuhvataju različita stanja u kojima je deregulisana ćelijska deoba. Primeri proliferativnih ćelijskih poremećaja uključuju, ali se ne ograničavaju na neoplazme, benigne tumore, maligne tumore, prekancerozna stanja, in situ tumore, inkapsulirane tumore, metastatske tumore, tečne tumore, solidne tumore, imunološke tumore, hematološke tumore, kancere, karcinome, leukemije, limfome, sarkome, i brzo deleće ćelije. Izraz "brzo deleća ćelija" kako se koristi u ovom tekstu definiše se kao bilo koja ćelija koja se deli stopom koja prevazilazi ili je veća od očekivane ili zapažene među susednim ili jukstapozicioniranim ćelijama u istom tkivu. Poremećaj ćelijske proliferacije uključuje prekancer ili prekancerozno stanje. Poremećaj ćelijske proliferacije uključuje kancer. Metodi i upotrebe dati u ovom tekstu mogu da se koriste za lečenje ili olakšavanje simptoma kancera ili za identifikovanje za to pogodnih kandidata. Izraz "kancer" uključuje solidne tumore, kao i hematološke tumore i/ili malignitete. "Prekancerska ćelija" ili "prekancerozna ćelija" je ćelija koja ispoljava poremećaj ćelijske proliferacije koji je prekancer ili prekancerozno stanje. "Kancerska ćelija " ili "kancerozna ćelija" je ćelija koja ispoljava poremećaj ćelijske proliferacije koji je kancer. Za identifikovanje kancerskih ćelija ili prekanceroznih ćelija može se koristiti svaki reproducibilni način merenja. Kancerske ćelije ili prekancerozne ćelije mogu da se identifikuju histološkom tipizacijom ili gradiranjem uzoraka tkiva (npr., uzorka biopsije). Kancerske ćelije ili prekancerozne ćelije mogu da se identifikuju upotrebom odgovarajućih molekularnih markera.
[0361] Primeri nekanceroznih stanja ili poremećaja koji se mogu lečiti korišćenjem jednog ili više jedinjenja predmetnog pronalaska uključuju, ali se ne ograničavaju na reumatoidni artritis; inflamaciju; autoimunsku bolest; limforoliferativna stanja; akromegaliju; reumatoidni spondilitis; osteoartritis; giht, druga artritična stanja; sepsu; septički šok; endotoksični šok;
1 1
gram-negativnu sepsu; sindrom toksičkog šoka; astmu; sindrom respiratornog distresa kod adulta; hroničnu opstruktivnu bolest pluća; hroničnu upalu pluća; zapaljensku bolet creva; Crohnovu bolest; psorijazu; ekcem; ulcerativni kolitis; pankreasnu fibrozu; hepatičnu fibrozu; akutnu i hroničnu bolest bubrega; sindrom iritabilnog kolona; gorušicu; restenozu; cerebralnu malariju; moždani udar i ishemičnu povredu; neuralnu traumu; Alzheimerovu bolest; Huntingtonovu bolest; Parkinsonovu bolest; akutni i hronični bol; alergijski rinitis; alergijski konjunktivitis; hroničnu srčanu slabost; akutni koronarni sindrom; kaheksiju; malariju lepru; leišmanijazu; Lymeovu bolest; Reiterov sindrom; akutni sinovitis; mišićnu degeneraciju, burzitis; tendonitis; tenosinovitis; sindrom hernijacije, rupture, ili prolapsa intervertebralnog diska; osteopetrozu; trombozu; restenozu; silikozu; plućnu sarkozu; bolesti resorpcije koštanog tkiva, kao što je osteoporoza; reakciju kalema protiv domaćina; multiplu sklerozu; lupus; fibromijalgiju; AIDS i druge virusne bolesti kao što su herpes zoster, herpes simpleks I ili II, virus influence i citomegalovirus; i dijabetes melitus.
[0362] Primeri kancera koji se mogu lečiti korišćenjem jednog ili više jedinjenja predmetnog pronalaska uključuju, ali se ne ograničavaju na adrenokortikalni karcinom, kancere povezane sa AIDS, limfom povezan sa AIDS, analni kancer, anorektalni kancer, kancer analnog kanala, kancer apendiksa, dečji cerebelarni astrocitom, dečji cerebralni astrocitom, karcinom bazalnih ćelija, kancer kože (nemelanom), kancer žučnih kanala i žučne kese, kancer ekstrahepatičnog žučnog kanala, kancer intrahepatičnog žučnog kanala, kancer bešike, kancer mokraćne bešike, kancer kostiju i zglobova, osteosarkom i maligni fibrozni histiocitom, kancer mozga, tumor mozga, gliom moždanog stabla, cerebelarni astrocitom, cerebralni astrocitom/maligni gliom, ependimom, meduloblastom, supratentorijalne primitivne neuroektodermalne tumore, gliom vidnih puteva i hipotalamusa, kancer dojke, bronhijalne adenome/karcinoide, karcinoidni tumor, gastrointestinalni kancer, kancer nervnog sistema, limfom nervnog sistema, kancer centralnog nervnog sistema, limfom centralnog nervnog sistema, cervikalni kancer, kancere kod dece, hroničnu limfocitnu leukemiju, hroničnu mijelogenu leukemiju, hronične mijeloproliferativne poremećaje, kancer kolona, kolorektalni kancer, limfom T-ćelija kože, limfoidnu neoplazmu, mikozis fungoides, Seziaryjev sindrom, kancer endometrijuma, kancer ezofagusa, tumor ekstrakranijalnih germinativnih ćelija, tumor ekstragonadalnih germinativnih ćelija, kancer ekstrahepatičnog žučnog kanala, kancer oka, intraokularni melanom, retinoblastom, kancer žučne kese, gastrični (želudačni) kancer, gastrointestinalni karcinoidni tumor, gastrointestinalni stromalni tumor (GIST), tumor germinativnih ćelija, tumor germinativnih ćelija ovarijuma, gestacioni trofoblastni tumor gliom, kancer glave i vrata, hepatocelularni (jetrin) kancer, Hodgkinov limfom, hipofaringealni kancer, intraokularni melanom, okularni kancer, tumore ćelija ostrvaca (endokrini pankreas),
1 2
Kaposijev sarkoma, kancer bubrega, renalni kancer, kancer bubrega, kancer larinksa, akutnu limfoblastnu leukemiju, akutnu mijeloidnu leukemiju, hroničnu limfocitnu leukemiju, hroničnu mijelogenu leukemiju, leukemiju vlasastih ćelija, kancer usana i usne duplje, kancer jetre, kancer pluća, nesitnoćelijski kancer pluća, sitnoćelijski kancer pluća, limfom povezan sa AIDS, ne-Hodgkinov limfom, primarni limfom centralnog nervnog sistema, Waldenstramovu makroglobulinemiju, meduloblastom, melanom, intraokularni (očni) melanom, karcinom Merkelovih ćelija, maligni mezoteliom, mezoteliom, metastatski skvamozni kancer vrata, kancer usta, kancer jezika, sindrom multiple endokrine neoplazije, mikozis fungoides, mijelodisplastične sindrome, mijelodisplastične/mijeloproliferativne bolesti, hroničnu mijelogenu leukemiju, akutnu mijeloidnu leukemiju, multipli mijelom, hronične mijeloproliferativne poremećaje, nazofaringealni kancer, neuroblastom, oralni kancer, kancer usne duplje, orofaringealni kancer, kancer ovarijuma, kancer epitela ovarijuma, tumor ovarijuma sa niskim malignim potencijalom, kancer pankreasa, kancer ćelija pankreasnih ostrvaca, kancer paranazalnog sinusa i nosne šupljine, paratiroidni kancer, kancer penisa, kancer farinksa, feohromocitom, pineoblastom i supratentorijalne primitivne neuroektodermalne tumore, tumor hipofize, neoplazme plazma ćelija/multipli mijelom, pleuropulmonalni blastom, kancer prostate, rektalni kancer, kancer prelaznih ćelija bubrežne karlice i uretera, retinoblastom, rabdomiosarkom, kancer pljuvačne žlezde, tumore iz porodice Ewingovog sarkoma, Kaposijev sarkom, sarkom mekog tkiva, kancer uterusa, sarkom uterusa, kancer kože (nemelanom), kancer kože (melanom), karcinom Merkelovih ćelija kože, kancer tankog creva, sarkom mekog tkiva, karcinom skvamoznih ćelija, želudačni (gastrični) kancer, supratentorijalne primitivne neuroektodermalne tumore, kancer testisa, kancer grla, timom, timom i timusni karcinom, kancer štitne žlezde, kancer prelaznih ćelija bubrežne karlice i uretera i drugih urinarnih organa, gestacioni trofoblastni tumor, kancer uretre, kancer endometrijuma uterusa, sarkom uterusa, kancer tela uterusa, kancer vagine, kancer vulve, i Wilmov tumor.
[0363] "Proliferativni poremećaj ćelija hematološkog sistema" je ćelijski proliferativni poremećaj koji obuhvata ćelije hematološkog sistema. Proliferativni poremećaj ćelija hematološkog sistema može uključivati limfom, leukemiju, mijeloidne neoplazme, neoplazme mastocita, mijelodisplaziju, benignu monoklonsku gamopatiju, limfomatoidnu granulomatozu, limfoidnu papulozu, policitemija vera, hroničnu mijelocitnu leukemiju, agnogenijsku mijeloidnu metaplaziju, i esencijalnu trombocitemiju. Proliferativni poremećaj ćelija hematološkog sistema može uključiti hiperplaziju, displaziju, i metaplaziju ćelija hematološkog sistema. U jednom aspektu, smeše predmetnog pronalaska mogu se koristiti za lečenje kancera odabranih iz grupe koja sadrži hematološki kancer predmetnog pronalaska ili
1
proliferativni poremećaj ćelija hematološkog sistema predmetnog pronalaska, ili se mogu koristiti za identifikovanje za to pogodnih kandidata. Hematološki kancer predmetnog pronalaska može uključiti multipli mijelom, limfom (uključujući Hodgkinov limfom, ne-Hodgkinov limfom, limfome kod dece, i limfome limfocitnog i kožnog porekla), leukemiju (uključujući leukemiju kod dece, leukemiju vlasastih ćelija, akutnu limfocitnu leukemiju, akutnu mijelocitnu leukemiju, hroničnu limfocitnu leukemiju, hroničnu mijelocitnu leukemiju, hroničnu mijelogenu leukemiju, i leukemiju mastocita), mijeloidne neoplazme i neoplazme mastocita.
[0364] "Ćelijski proliferativni poremećaj pluća" je ćelijski proliferativni poremećaj koji obuhvata ćelije pluća. Ćelijski proliferativni poremećaji pluća mogu uključivati sve forme ćelijskih proliferativnih poremećaja koji zahvataju ćelije pluća. Ćelijski proliferativni poremećaji pluća mogu uključivati kancer pluća, prekancer ili prekancerozno stanje pluća, benigni rast ili lezije pluća, i maligni rast ili lezije pluća, i metastatske lezije u tkivima i organima različitim od pluća. U jednom aspektu, smeše predmetnog pronalaska mogu da se koriste za lečenje kancera pluća ili ćelijskog proliferativnog poremećaja pluća, ili mogu da se koriste za identifikovanje za to pogodnih kandidata. Kancer pluća može uključiti sve forme kancera pluća. Kancer pluća može uključivati maligne plućne neoplazme, karcinom in situ, tipične karcinoidne tumore i atipične karcinoidne tumore. Kancer pluća može uključivati sitnoćelijski kancer pluća (SCLC), nesitnoćelijski kancer pluća (NSCLC), karcinom skvamoznih ćelija, adenokarcinom, sitnoćelijski karcinom, krupnoćelijski karcinom, karcinom adenoskvamoznih ćelija, i mezoteliom. Kancer pluća može uključiti "ožiljačni karcinom", bronhoalveolarni karcinom, karcinom džinovskih ćelija, karcinom vretenastih ćelija, i krupnoćelijski neuroendokrini karcinom. Kancer pluća može uključiti plućne neoplazme koje su histološki i ultrastrukturno heterogene (npr., mešoviti tipovi ćelija).
[0365] Ćelijski proliferativni poremećaji pluća mogu uključiti sve forme ćelijskih proliferativnih poremećaja koji zahvataju ćelije pluća. Ćelijski proliferativni poremećaji pluća mogu uključiti kancer pluća, prekancerozna stanja pluća. Ćelijski proliferativni poremećaji pluća mogu uključiti hiperplaziju, metaplaziju i displaziju pluća. Ćelijski proliferativni poremećaji pluća mogu uključiti azbestom indukovanu hiperplaziju, skvamoznu metaplaziju, i benignu reaktivnu metaplaziju mezotela. Ćelijski proliferativni poremećaji pluća mogu uključiti zamenu cilindričnog epitela višeslojnim pločastim epitelom, i displaziju mukoze. Osobe izložene udisanju štetnih sredinskih agenasa kao što su dim cigarete i azbest mogu biti pod povećanim rizikom za razvijanje ćelijskih proliferativnih poremećaja pluća. Ranija oboljenja pluća koja neku osobu mogu učiniti sklonom ka razvijanju ćelijskih proliferativnih poremećaje mogu uključiti hroničnu intersticijalnu bolest pluća, nekrotizujuću bolest pluća,
1 4
sklerodermu, reumatoidnu bolest, sarkoidozu, intersticijalni pneumonitis, tuberkulozu, ponavljane pneumonije, idiopatsku plućnu fibrozu, granulomatozu, azbestozu, fibrozirajući alveolitis, i Hodgkinovu bolest.
[0366] "Ćelijski proliferativni poremećaj kolona" je ćelijski proliferativni poremećaj koji obuhvata ćelije kolona. Poželjno, ćelijski proliferativni poremećaj kolona je kancer kolona. U jednom aspektu, smeše predmetne objave mogu da se koriste za lečenje kancera kolona ili ćelijskog proliferativnog poremećaja kolona, ili da se koriste za identifikovanje za to pogodnih kandidata. Kancer kolona može uključiti sve forme kancera kolona. Kancer kolona može uključiti sporadične i hereditarne kancere kolona. Kancer kolona može uključiti maligne neoplazme kolona, karcinom in situ, tipične karcinoidne tumore i atipične karcinoidne tumore. Kancer kolona može uključiti adenokarcinom, karcinom skvamoznih ćelija, karcinom adenoskvamoznih ćelija. Kancer kolona može biti udružen sa hereditarnim sindromom odabranim iz grupe koja sadrži hereditarni nepolipozni kolorektalni kancer, familjarnu adenomatoznu polipozu, Gardnerov sindrom, Peutz-Jegherov sindrom, Turcotov sindrom i juvenilnu polipozu. Kancer kolona može biti prouzrokovan hereditarnim sindromom odabranim iz grupe koja sadrži hereditarni nepolipozni kolorektalni kancer, familjarnu adenomatoznu polipozu, Gardnerov sindrom, Peutz-Jegherov sindrom, Turcotov sindrom i juvenilnu polipozu.
[0367] Ćelijski proliferativni poremećaji kolona mogu uključivati sve forme ćelijskih proliferativnih poremećaja koji zahvataju ćelije kolona. Ćelijski proliferativni poremećaji kolona mogu uključivati kancer kolona, prekancerozna stanja kolona, adenomatozne polipe kolona i metahrone lezije kolona. Ćelijski proliferativni poremećaj kolona može uključivati adenom. Ćelijski proliferativni poremećaji kolona mogu da se karakterišu hiperplazijom, metaplazijom i displazijom kolona. Ranija oboljenja kolona koja osobe mogu učiniti sklonim ka razvijanju ćelijskih proliferativni poremećaja kolona mogu uključiti raniji kancer kolona. Trenutne bolesti koje osobe mogu učiniti sklonim ka razvijanju ćelijskih proliferativnih poremećaja kolona mogu uključiti Crohnovu bolest i ulcerativni kolitis. Ćelijski proliferativni poremećaji kolona može biti udružen sa mutacijom u genu odabranom iz grupe koja se sastoji od p53, ras, FAP i DCC. Osoba može imati poećan rizik da razvije ćelijski proliferativni poremećaji kolona zbog prisustva mutacije u genu odabranom iz grupe koja se sastoji od p53, ras, FAP i DCC.
[0368] "Ćelijski proliferativni poremećaj pankreasa" je ćelijski proliferativni poremećaj koji obuhvata ćelije pankreasa. Ćelijski proliferativni poremećaji pankreasa mogu uključivati sve forme ćelijskih proliferativnih poremećaja koji zahvataju ćelije pankreasa. Ćelijski proliferativni poremećaji pankreasa mogu uključivati kancer pankreasa, prekancer ili
1
prekancerozno stanje pankreasa, hiperplaziju pankreasa i displaziju pankreasa, benigni rast ili lezije pankreasa i maligni rast ili lezije pankreasa, i metastatske lezije u telesnim tkivima i organima različitim od pankreasa. Kancer pankreasa uključuje sve forme kancera pankreasa. Kancer pankreasa može uključiti duktusni adenokarcinom, adenoskvamozni karcinom, pleomorfni karcinom džinovskih ćelija, mucinozni adenokarcinom, karcinom džinovskih ćelija sličnih osteoklastima, mucinozni cistadenokarcinom, acinusni karcinom, neklasifikovani krupnoćelijski karcinom, sitnoćelijski karcinom, pankreatoblastom, papilarnu neoplazmu, mucinozni cistadenom, papilarnu cističnu neoplazmu i serozni cistadenom. Pankreasni kancer može uključiti i pankreasne neoplazme koje su histološki i ultrastrukturno heterogene (npr., mešoviti tipovi ćelija).
[0369] "Ćelijski proliferativni poremećaj prostate" je ćelijski proliferativni poremećaj koji obuhvata ćelije prostate. Ćelijski proliferativni poremećaji prostate mogu uključivati sve forme ćelijskih proliferativnih poremećaja koji zahvataju ćelije prostate. Ćelijski proliferativni poremećaji prostate mogu uključivati kancer prostate, prekancer ili prekancerozno stanje prostate, benigni rast ili lezije prostate, i maligni rast ili lezije prostate, i metastatske lezije u tkivima i organima tela različitim od prostate. Ćelijski proliferativni poremećaji prostate mogu uključivati hiperplaziju, metaplaziju i displaziju prostate.
[0370] "Ćelijski proliferativni poremećaj kože" je ćelijski proliferativni poremećaj koji obuhvata ćelije kože. Ćelijski proliferativni poremećaji kože mogu uključivati sve forme ćelijskih proliferativnih poremećaja koji zahvataju ćelije kože. Ćelijski proliferativni poremećaji kože mogu uključivati prekancer ili prekancerozno stanje kože, benigni rast ili lezije kože, melanom, maligni melanom i drugi maligni rast ili lezije kože, i metastatske lezije u tkivima i organima tela različitim od kože. Ćelijski proliferativni poremećaji kože mogu uključivati hiperplaziju, metaplaziju i displaziju kože.
[0371] "Ćelijski proliferativni poremećaj ovarijuma" je ćelijski proliferativni poremećaj koji obuhvata ćelije ovarijuma. Ćelijski proliferativni poremećaji ovarijuma mogu uključivati sve forme ćelijskih proliferativnih poremećaja koji zahvataju ćelije ovarijuma. Ćelijski proliferativni poremećaji ovarijuma mogu uključivati prekancer ili prekancerozno stanje ovarijuma, benigni rast ili lezije ovarijuma, kancer ovarijuma, maligni rast ili lezije ovarijuma, i metastatske lezije u tkivima i organima tela različitim od ovarijuma. Ćelijski proliferativni poremećaji ovarijuma mogu uključivati hiperplaziju, metaplaziju i displaziju ćelija ovarijuma.
[0372] "Ćelijski proliferativni poremećaj dojke" je ćelijski proliferativni poremećaj koji obuhvata ćelije dojke. Ćelijski proliferativni poremećaji dojke mogu uključivati sve forme ćelijskih proliferativnih poremećaja koji zahvataju ćelije dojke. Ćelijski proliferativni
1
poremećaji dojke mogu uključivati kancer dojke, prekancer ili prekancerozno stanje dojke, benigni rast ili lezije dojke, i maligni rast ili lezije dojke, i metastatske lezije u tkivima i organima tela različitim od dojke. Ćelijski proliferativni poremećaji dojke mogu uključivati hiperplaziju, metaplaziju i displaziju dojke
[0373] Ćelijski proliferativni poremećaj dojke može biti prekancerozno stanje dojke. Smeše predmetnog pronalaska mogu da se koriste za lečenje prekanceroznog stanja dojke. Prekancerozno stanje dojke može uključivati atipičnu hiperplaziju dojke, duktusni karcinom in situ (DCIS), intraduktusni karcinom, lobularni karcinom in situ (LCIS), lobularnu neoplaziju, i stadijum 0 ili gradus 0 rasta ili lezije dojke (npr., stadijum 0 ili gradus 0 kancera dojke ili karcinom in situ). Prekancerozno stanje dojke može da se oceni prema TNM klasifikacionoj šemi koju je prihvatio American Joint Committee on Cancer (AJCC), po kojoj se primarni tumor (T) označava kao stadijum T0 ili Tis; i gde se regionalni limfni čvorovi (N) označavaju kao stadijum N0; i gde se udaljene metastaze (M) označavaju kao stadijum M0.
[0374] Ćelijski proliferativni poremećaj dojke može biti kancer dojke. U jednom aspektu, smeše predmetnog pronalaska mogu da se koriste za lečenje kancera dojke ili da se koriste za identifikovanje kandidata pogodnih za to. Kancer dojke može uključivati sve forme kancera dojke. Kancer dojke može uključivati primarne epitelne kancere dojke. Kancer dojke može uključivati kancere u kojima je dojka zahvaćena drugim tumorima kao što su na primer limfom, sarkom ili melanom. Kancer dojke može uključivati karcinom dojke, duktusni karcinom dojke, lobularni karcinom dojke, nediferencirani karcinom dojke, cistosarkom filodes dojke, angiosarkom dojke, i primarni limfom dojke. Kancer dojke može uključivati stadijum I, II, IIIA, IIIB, IIIC i IV kancera dojke. Duktusni karcinom dojke može uključivati invazivni karcinom, invazivni karcinom in situ sa preovlađujućom intraduktusnom komponentom, inflamatorni kancer dojke, i duktusni karcinom dojke sa histološkim tipom odabranim iz grupe koja sadrži komedo tip, mucinozni (koloidni), medularni, medularni sa limfocitnim infiltratom, papilarni, scirozni, i tubularni tip. Lobularni karcinom dojke može uključivati invazivni lobularni karcinom sa preovlađujućom in situ komponentom, invazivni lobularni karcinom, i infiltrirajući lobularni karcinom. Kancer dojke može uključivati Pagetovu bolest, Pagetovu bolest sa intraduktusnim karcinomom, i Pagetovu bolest sa invazivnim duktusnim karcinomom. Kancer dojke može uključivati neoplazme dojke koje su histološki i ultrastrukturno heterogene (npr., mešoviti tipovi ćelija).
[0375] Jedinjenje predmetnog pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prolek, metabolit, polimorf, ili solvat, može da se koristi za lečenje kancera dojke, ili za identifikovanje za to pogodnih kandidata. Kancer dojke koji se leči može uključivati porodični kancer dojke. Kancer dojke koji se leči može uključivati sporadični kancer dojke.
1
Kancer dojke koji se leči može nastati kod muškog subjekta. Kancer dojke koji se leči može nastati kod premenopauzalnog ženskog subjekta ili postmenopauzalnog ženskog subjekta. Kancer dojke koji se leči može nastati kod subjekta koji ima 30 ili više godina starosti, ili subjekta koji je star manje od 30 godina. Kancer dojke koji se leči može nastati kod subjekta koji ima 50 ili više godina starosti, ili subjekta koji je star manje od 50 godina. Kancer dojke koji se leči može nastati kod subjekta koji ima 70 ili više godina starosti, ili subjekta koji je star manje od 70 godina.
[0376] Kancer dojke koji se leči može da se tipizira da bi se utvrdila porodična ili spontana mutacija u BRCA1, BRCA2, ili p53. Kancer dojke koji se leči može da se tipizira kao onaj koji ima amplifikaciju HER2/neu gena, kada preterano eksprimira HER2/neu, ili kao onaj koji ima niski, srednji ili visoki nivo HER2/neu ekspresije. Kancer dojke koji se leči može da se tipizira prema markeru odabranom iz grupe koja sadrži estrogenski receptor (ER), progesteronski receptor (PR), humani epidermski faktor rasta receptor-2, Ki-67, CA15-3, CA 27-29, i c-Met. Kancer dojke koji se leči može da se tipizira kao ER-nepoznat, ER-bogat ili ER-siromašan. Kancer dojke koji se leči može da se tipizira kao ER-negativan ili ER-pozitivan. ER-tipizacija kancera dojke može da se izvede na bilo koji reproducibilan način. ER-tipizacija može da se izvede kako je navedeno u Onkologie 27: 175-179 (2004). Kancer dojke koji se leči može da se tipizira kao PR-nepoznat, PR-bogat ili PR-siromašan. Kancer dojke koji se leči može da se tipizira kao PR-negativan ili PR-pozitivan. Kancer dojke koji se leči može da se tipizira kao receptor-pozitivan ili receptor-negativan. Kancer dojke koji se leči može da se tipizira kao onaj koji je udružen sa visokim nivoima CA 15-3, ili CA 27-29, ili oba, u krvi.
[0377] Kancer dojke koji se leči može uključivati lokalizovani tumor dojke. Kancer dojke koji se leči može uključivati tumor dojke udružen sa negativnom biopsijom sentinel limfnog čvora (SLN, limfni čvor-stražar). Kancer dojke koji se leči može uključivati tumor dojke udružen sa pozitivnom biopsijom sentinel limfnog čvora (SLN). Kancer dojke koji se leči može uključivati tumor dojke koji je udružen sa jednim ili više pozitivnih aksilarnih limfnih čvorova, pri čemu se aksilarni limfni čvorovi gradiraju nekim od postojećih metoda. Kancer dojke koji se leči može uključivati tumor dojke koji je tipiziran kao onaj koji ima nodalno negativan status (npr., čvor-negativan) ili onaj koji ima nodalno pozitivan status (npr., čvorpozitivan). Kancer dojke koji se leči može uključivati tumor dojke koji je metastazirao na druga mesta u telu. Kancer dojke koji se leči može biti klasifikovan kao onaj koji je metastazirao na lokaciju odabranu iz grupe koja sadrži kost, pluća, jetru ili mozak. Kancer dojke koji se leči može biti klasifikovan prema karakteristikama odabranim iz grupe koja sadrži metastatski, lokalizovani, regionalni, lokalno-regionalni, lokalno uznapredovali,
1
udaljeni, multicentrični, bilateralni, ipsilateralni, kontralateralni, novodijagnostikovani, rekurentni i inoperabilni.
[0378] Jedinjenje predmetne objave ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, estar, prolek, metabolit, polimorf, solvat, može da se koristi za lečenje ili prevenciju ćelijskog proliferativnog poremećaja dojke, ili za lečenje ili prevenciju kancera dojke, kod subjekta koji ima povećan rizik za razvoj kancera dojke u odnosu na ukupnu populaciju, ili se koristi za identifikovanje za to pogodnih kandidata. Subjekt sa povećanim rizikom za razvoj kancera dojke u odnosu na ukupnu populaciju je ženski subjekt sa porodičnom istorijom ili ličnom istorijom kancera dojke. Subjekt sa povećanim rizikom za razvoj kancera dojke u odnosu na ukupnu populaciju je ženski subjekt sa naslednom ili spontanom mutacijom u BRCA1 ili BRCA2, ili oba. Subjekt sa povećanim rizikom za razvoj kancera dojke u odnosu na ukupnu populaciju je ženski subjekt sa porodičnom istorijom kancera dojke i naslednom ili spontanom mutacijom u BRCA1 ili BRCA2, ili oba. Subjekt sa povećanim rizikom za razvoj kancera dojke u odnosu na ukupnu populaciju je ženski subjekt star preko 30 godina, star preko 40 godina, star preko 50 godina, star preko 60 godina, star preko 60 godina, star preko 70 godina, star preko 80 godina, ili star preko 90 godina. Subjekt sa povećanim rizikom za razvoj kancera dojke u odnosu na ukupnu populaciju je subjekt sa atipičnom hiperplazijom dojke, duktusnim karcinomom in situ (DCIS), intraduktusnim karcinomom, lobularnim karcinomom in situ (LCIS), lobularnom neoplazijom ili stadijumom 0 rasta ili lezije dojke (npr., stadijum 0 ili gradus 0 kancera dojke, ili karcinom in situ).
[0379] Kancer dojke koji se leči može da se histološki gradira prema Scarff-Bloom-Richardsonovom sistemu, gde se tumoru dojke dodeljuje mitotički skor od 1, 2, ili 3; skor nukleusnog pleomorfizma od 1, 2, ili 3; skor formiranja tubula od 1, 2, ili 3; i ukupni Scarff-Bloom-Richardsonov skor koji iznosi između 3 i 9. Kanceru dojke koji se leči može da se pripiše gradus tumora prema International Consensus Panel on the Treatment of Breast Cancer, odabran iz grupe koja sadrži gradus 1, gradus 1-2, gradus 2, gradus 2-3, ili gradus 3.
[0380] Kancer koji se leči može da se gradira prema American Joint Committee on Cancer (AJCC) TNM klasifikacionom sistemu, gde se tumor (T) određuje kao stadijum TX, T1, T1mic, T1a, T1b, T1c, T2, T3,T4, T4a, T4b, T4c, ili T4d; i gde se regionalni limfni čvorovi (N) određuju kao stadijum NX, N0, N1, N2, N2a, N2b, N3, N3a, N3b, ili N3c; i gde se udaljene metastaze (M) mogu odrediti kao stadijum MX, M0, ili M1. Kancer koji se leči može da se gradira prema American Joint Committee on Cancer (AJCC) klasifikaciji kao Stadijum I, Stadijum IIA, Stadijum IIB, Stadijum IIIA, Stadijum IIIB, Stadijum IIIC, ili Stadijum IV. Kanceru koji se leči može da se odredi gradus prema AJCC klasifikaciji kao Gradus GX (npr., gradus ne može da se proceni), Gradus 1, Gradus 2, Gradus 3 ili Gradus 4. Kancer koji se leči
1
može da se gradira prema AJCC patološkoj klasifikaciji (pN) kao pNX, pN0, PN0 (I-), PN0 (I+), PN0 (mol-), PN0 (mol+), PN1, PN1(mi), PN1a, PN1b, PN1c, pN2, pN2a, pN2b, pN3, pN3a, pN3b, ili pN3c.
[0381] Kancer koji se leči može uključivati tumor za koji je određeno da ima prečnik jednak ili manji od oko 2 centimetra. Kancer koji se leči može uključivati tumor za koji je određeno da ima prečnik od oko 2 do oko 5 centimetara. Kancer koji se leči može uključivati tumor za koji je određeno da ima prečnik jednak ili veći od oko 3 centimetra. Kancer koji se leči može uključivati tumor za koji je određeno da ima prečnik veći od 5 centimetara. Kancer koji se leči može da se klasifikuje po mikroskopskom izgledu kao dobro diferenciran, umereno diferenciran, slabo diferenciran ili nediferenciran. Kancer koji se leči može da se klasifikuje po mikroskopskom izgledu u odnosu na broj mitoza (npr., zastupljenost ćelijskih deoba) ili nukleusni pleomorfizam (npr., promene u ćelijama). Kancer koji se leči može da se klasifikuje po mikroskopskom izgledu kao udružen sa područjima nekroze (npr., područja umirućih ili degenrisanih ćelija). Kancer koji se leči može da se klasifikuje po tome što ima abnormalan kariotip, abnormalan broj hromozoma, ili po tome što ima jedan ili više hromozoma koji izgledaju nenormalno. Kancer koji se leči može da se klasifikuje kao aneuploidan, triploidan, tetraploidan, ili kao onaj koji ima izmenjenu ploidiju. Kancer koji se leči može da se klasifikuje po tome što ima hromozomsku translokaciju, ili deleciju ili duplikaciju celog hromozoma ili region delecije, duplikacije ili amplifikacije dela hromozoma.
[0382] Kancer koji se leči može da se procenjuje DNK citometrijom, protočnom citometrijom ili citometrijom slike. Kancer koji se leči može da se tipizira kao da ima 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, ili 90% ćelija u sintetskom stadijumu ćelijske deobe (npr., u S fazi ćelijske deobe). Kancer koji se leči može da se tipizira kao onaj koji ima nisku frakciju S faze ili visoku frakciju S faze.
[0383] Kako se koristi u ovom tekstu, "normalna ćelija" je ćelija koja ne može da se klasifikuje kao deo "ćelijskog proliferativnog poremećaja". Normalna ćelija nema neregulisan ili nenormalan rast, ili oba, koji mogu dovesti do razvoja neželjenog stanja ili oboljenja. Poželjno, u normalnoj ćeliji normalno funkcionišu mehanizmi kontrole ćelijskog ciklusa.
[0384] Kako se koristi u ovom tekstu, "kontakt sa ćelijom" odnosi se na stanje u kojem su jedinjenje ili druga smeša od interesa u direktnom kontaktu sa ćelijom ili su joj dovoljno blizu da u njoj indukuju željeni biološki efekat.
[0385] Kako se koristi u ovom tekstu, "kandidatsko jedinjenje" odnosi se na jedinjenje predmetne objave ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, estar, prolek, metabolit, polimorf ili solvat, koje je ili će biti testirano u jednom ili većem broju in vitro ili in vivo bioloških testova, da bi se odredila verovatnoća da to jedinjenje izazove željeni biološki ili medicinski
11
odgovor u ćeliji, tkivu, sistemu, životinji ili čoveku, koji očekuje istraživač ili kliničar. Kandidatsko jedinjenje je jedinjenje predmetne objave, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, estar, prolek, metabolit, polimorf ili solvat. Biološki ili medicinski odgovor može biti lečenje kancera. Biološki ili medicinski odgovor može biti lečenje ili prevencija ćelijskog proliferativnog poremećaja. Biološki odgovor ili efekat može uključivati i promenu ćelijske proliferacije ili rasta, do koje dolazi in vitro ili u životinjskom modelu, kao i druge biološke promene koje se mogu zapaziti in vitro. In vitro ili in vivo biološki testovi mogu uključivati, ali se ne ograničavaju na testove enzimske aktivnosti, testove pomeranja elektroforetske mobilnosti, testove sa reporter-genom, in vitro testove ćelijske vijabilnosti, i testove opisane u ovom tekstu.
[0386] Kako se koristi u ovom tekstu, "monoterapija" se odnosi na primenu jednog aktivnog ili terapijskog jedinjenja kod subjekta kojem je to potrebno. Poželjno, monoterapija će uključivati primenu terapijski efikasne količine aktivnog jedinjenja. Na primer, to je monoterapija kancera jednim od jedinjenja predmetnog pronalaska, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, prolekom, metabolitom, analogom ili derivatom, primenjena kod subjekta kojem je potrebno lečenje kancera. Monoterapija je suprotna kombinacionoj terapiji, u kojoj se primenjuje kombinacija više aktivnih jedinjenja, pri čemu je, poželjno, svaka komponenta u kombinaciji prisutna u terapijski efikasnoj količini. Monoterapija jedinjenjem predmetnog pronalaska ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, prolekom, metabolitom, polimorfom ili solvatom, može biti efikasnija od kombinovane terapije u indukovanju željenog biološkog efekta.
[0387] Kako se koristi u ovom tekstu, "tretiranje/lečenje" ili "tretirati/lečiti" opisuje upravljanje i brigu o pacijentu sa ciljem borbe protiv bolesti, stanja ili poremećaja i uključuje primenu jedinjenja predmetnog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, proleka, metabolita, polimorfa ili solvata, za ublažavanje simptoma ili komplikacija bolesti, stanja ili poremećaja, ili za eliminisanje bolesti, stanja ili poremećaja. Izraz "tretirati/lečiti" može uključivati i tretman ćelija in vitro ili tretman animalnog modela.
[0388] Jedinjenje predmetnog pronalaska, ili njegova farmaceutski prihvatljive so, prolek, metabolit, polimorf ili solvat mogu da se koriste za prevenciju relevantne bolesti, stanja ili poremećaja, ili da se koriste za identifikovanje za tu svrhu odgovarajućih kandidata. Kako se koristi u ovom tekstu, "prevencija" ili "prevenirati" opisuje smanjenje ili eliminisanje pojave simptoma ili komplikacija takve bolesti, stanja ili poremećaja.
[0389] Kako se koristi u ovom tekstu, izraz "olakšati" opisuje proces kojim se smanjuju jačina znakova ili simptoma bolesti. Što je važno, znak ili simptom može da se olakša, a da ne bude eliminisan. Primena farmaceutskih smeša pronalaska može dovesti do eliminacije znakova ili simptoma, međutim eliminacija nije obavezna. Očekuje se da efikasne doze smanje jačinu znaka ili simptoma. Na primer, znak ili simptom poremećaja kao što je kancer, koji se može naći na više lokacija, ublažen je ako je jačina kancera smanjena na bar jednoj od većeg broja lokacija.
[0390] Kako se koristi u ovom tekstu, izraz "jačina" opisuje potencijal kancera da se transformiše od prekanceroznog ili benignog stanja u maligno stanje. Alternativno, ili dodatno, jačina opisuje stadijum kancera, na primer, prema TNM sistemu (koji su prihvatile International Union Against Cancer (UICC) i American Joint Committee on Cancer (AJCC)) ili prema drugim u struci poznatim metodima. Stadijum kancera odnosi se na meru ili jačinu kancera, na osnovu faktora kao što su lokacija prmarnog tumora, veličina tumora, broj tumora, i zahvaćenost limfnih čvorova (širenje kancera u limfne čvorove). Alternativno ili dodatno, jačina opisuje stadijum tumora po metodima poznatim u struci (vidi, National Cancer Institute, www.cancer.gov). Gradiranje tumora je sistem koji se koristi za klasifikaciju kancerskh ćelija u odnosu na to koliko nenormalno izgledaju pod mikroskopom i kolikom brzinom će tumor verovatno rasti i širiti se. Prilikom određivanja stadijuma tumora razmatraju se mnogi faktori, uključujući strukturu i obrazac rasta ćelija. Specifični faktori koji se koriste za određivanje stadijuma tumora variraju za svaki tip kancera. Jačina opisuje i histološki stadijum, nazvan i diferencijacija, što se odnosi na to u kojoj meri tumorske ćelije liče na normalne ćelije u istom tipu tkiva (vidi, National Cancer Institute, www.cancer.gov). Pored toga, jačina opisuje nukleusni stadijum, što se odnosi na oblik i veličinu nukleusa u tumorskim ćelijama i procenat tumorskih ćelija koje se dele (vidi, National Cancer Institute, www.cancer.gov).
[0391] Jačina može da opiše i stepen u kojem tumor sekretuje faktore rasta, razgrađuje vanćelijski matriks, postaje vaskularizovan, gubi adheziju sa jukstapozicioniranim tkivima, ili metastazira. Pored toga, jačina može da opiše broj lokacija na koje je primarni tumor metastazirao. Konačno, jačina može uključivati težinu lečenja tumora različitih tipova i lokalizacija. Na primer, za najjače tumore smatraju se inoperabilni tumori, kanceri koji imaju lakši pristup većem broju telesnih sistema (hematološki i imunološki tumori), kao i oni koji su najotporniji na tradicionalne načine lečenja. U ovim situacijama, produžavanje preživljavanja subjekta i/ili smanjenje bola, smanjenje zastupljenosti kancerskih ćelija ili ograničavanje ćelija na jedan sistem, i poboljšanje stadijuma kancera/gradusa tumora/histološkog gradusa/nukleusnog gradusa, smatraju se za ublažavanje znakova ili simptoma kancera.
[0392] Kako se koristi u ovom tekstu, izraz "simptom" definiše se kao indikacija bolesti, bolesnog stanja, povrede, ili toga da nešto nije u redu u telu. Simptome oseća ili primećuje individua kod koje se javljaju, ali oni mogu biti teško primetni za druge. Drugi se definišu kao osobe koje nisu profesionalno obučeni medicinski radnici.
[0393] Kako se koristi u ovom tekstu, izraz "znak" se takođe definiše kao indikacija da nešto nije u redu u telu. Međutim, znaci se definišu kao pojave koje može primetiti doktor, sestra, ili drugi profesionalno obučeni medicinski radnik.
[0394] Kancer je grupa oboljenja koja mogu izazvati gotovo svaki znak ili simptom. Znaci i simptomi zavisiće od mesta kancera, veličine kancera i njegovog uticaja na obližnje organe ili strukture. Ako se kancer širi (metastazira) onda se simptomi mogu pojaviti u različitim delovima tela.
[0395] Kako kancer raste, on počinje da potiskuje okolne organe, krvne sudove i nerve. Ovaj pritisak izaziva neke znakove i simptome kancera. Ako je kancer u kritičnom području, kao što su neki delovi mozga, čak i najmanji tumor može dovesti do ranih simptoma.
[0396] Međutim ponekad kancer počinje na mestima na kojima ne izaziva nikakve simptome dok prilično ne naraste. Kancer pankreasa na primer, obično ne naraste toliko da može da se primeti preko spoljašnjosti tela. Neki kanceri pankreasa ne izazivaju simptome dok ne počnu da rastu oko obližnjih nerava (što dovodi do bola u leđima). Drugi rastu oko žučnog kanala, gde blokiraju protok žuči i dovode do žute obojenosti kože poznate kao žutica. U trenutku kada kancer pankreasa izazove ove znakove ili simptome, obično je već dostigao uznapredovali stadijum.
[0397] Kancer može da izazove i siimptome kao što su groznica, umor ili gubitak težine. Do ovoga može doći zato što kancerske ćelije koriste veliki deo energetskih izvora ili oslobađaju supstance koje menjaju telesni metabolizam. Kancer može i da izazove imunski sistem da reaguje na načine koji će dovesti do ovih simptoma.
[0398] Ponekad kancerske ćelije oslobađaju u krvotok supstance koje dovode do simptoma za koje se obično ne misli da potiču od kancera. Na primer, neki kanceri pankreasa mogu oslobađati supstance koje dovode do nastanka krvnih ugrušaka u venama nogu. Neki kanceri pluća proizvode supstance slične hormonima, koje utiču na nivo kalcijuma u krvi, što utiče na nerve i mišiće i dovodi do slabosti i vrtoglavice.
[0399] Kancer ispoljava nekoliko opštih znakova i simptoma koji se sreću u prisustvu različitih podtipova kancerskih ćelija. Većina ljudi sa kancerom će u nekom periodu bolesti izgubiti na težini. Neobjašnjivi (nenamerni) gubitak težine od 10 funti ili više može biti prvi znak kancera, posebno kancera pankreasa, želuca, jednjaka ili pluća.
[0400] Groznica je veoma česta kod kancera, ali se češće sreće kod uznapredovale bolesti. Gotovo svi pacijenti sa kancerom imaće groznicu u nekom trenutku, posebno ako kancer ili
11
njegovo lečenje utiču na imunski sistem i otežavaju borbu tela protiv infekcije. Ređe, groznica može biti rani znak kancera kao što je leukemija ili limfom.
[0401] Umor može biti važan simptom progresije kancera. Do ovoga može doći i rano, u kancerima kao što je leukemija, ili ako kancer dovodi do gubitka krvi, kao što je to slučaj sa nekim kancerima kolona ili želuca.
[0402] Bol može biti rani simptom kod nekih kancera kao što su kancer kosti ili kancer testisa. Ipak, bol je najčešće simptom uznapredovale bolesti.
[0403] Zajedno sa kancerima kože (vidi kasniji paragraf), neki unutrašnji kanceri mogu da izazovu uočljive znakove na koži. Ove promene uključuju to da koža izgleda tamnija (hiperpigmentacija), žuta (žutica), ili crvena (eritem); da svrbi; ili da dlaka preterano raste.
[0404] Alternativno ili dodatno, podtipovi kancera ispoljavaju specifične znakove ili simptome. Promene u uobičajenom pražnjenju creva ili funkciji mokraćne bešike mogu ukazivati na kancer. Dugotrajna konstipacija, diareja, ili promene u veličini stolice mogu biti znaci kancera kolona. Bol tokom uriniranja, krv u urinu ili promene u funkciji mokraćne bešike (na primer češće ili ređe uriniranje) mogu biti povezani sa kancerom mokraćne bešike ili prostate.
[0405] Promene stanja kože ili pojava novog stanja kože mogu ukazivati na kancer. Kanceri kože mogu krvariti ili izgledati kao ranice koje ne zarastaju. Dugotrajna ranica u ustima može biti oralni kancer, naročito kod pacijenata koji puše, žvaću duvan ili često piju alkohol. Ranice na penisu ili vagini mogu biti znaci infekcije ili ranog kancera.
[0406] Neuobičajeno krvarenje ili pražnjenje mogu ukazivati na kancer. Neuobičajeno krvarenje može da se dešava i kod ranih i kod uznapredovalih kancera. Krv u sputumu (flegma) može biti znak kancera pluća. Krv u stolici (ili tamna ili crna stolica) može biti znak kancera kolona ili rektuma. Kancer cerviksa ili endometrijuma (koji oblaže uterus) mogu dovesti do vaginalnog krvarenja. Krv u urinu može biti znak kancera mokraćne bešike ili bubrega. Krvavi iscedak iz bradavice može biti znak kancera dojke.
[0407] Zadebljanje ili grudvica u dojci ili drugim delovima tela može ukazivati na prisustvo kancera. Mnogi kanceri mogu da se osete kroz kožu, uglavnom u grudima, testisu, limfnim čvorovima (žlezdama) i mekim tkivima tela. Grudvica ili zadebljanje može biti rani ili kasni znak kancera. Svaka grudvica ili zadebljanje može ukazivati na kancer, naročito ako je formacija nova ili raste.
[0408] Loše varenje ili problemi prilikom gutanja mogu ukazivati na kancer. Iako ovi simptomi obično imaju druge uzroke, loše varenje ili problemi prilikom gutanja mogu biti znaci kancera jednjaka, želuca ili farinksa (grla).
[0409] Novije promene bradavice ili mladeža mogu uakzivati na kancer. Svaka bradavica, mladež, ili pega koji menjaju boju, veličinu ili oblik, ili gube svoju jasnu granicu ukazuju na potencijalni razvoj kancera. Na primer kožna lezija može biti melanom.
[0410] Dugotrajni kašalj ili promuklost mogu ukazivati na kancer. Kašalj koji ne prestaje može biti znak kancera pluća. Promuklost može biti znak kancera larinksa (zvučna kutija) ili štitne žlezde.
[0411] Iako su gore navedeni znakovi i simptomi oni koji se češće sreću kod kancera, postoje i mnogi drugi koji su manje česti i nisu ovde navedeni.
[0412] Lečenje kancera može rezultovati smanjenjem veličine tumora. Smanjenje veličine tumora može da se označi i kao "regresija tumora". Poželjno, posle lečenja, veličina tumora će se smanjiti za 5% ili više u odnosu na njegovu veličinu pre lečenja; poželjnije, veličina tumora se smanjuje za 10% ili više; poželjnije, smanjuje se za 20% ili više; poželjnije, smanjuje se za 30% ili više; poželjnije, smanjuje se za 40% ili više; još poželjnije, smanjuje se za 50% ili više; i najpoželjnije, smanjuje se za više od 75% ili više. Veličina tumora može da se meri bilo kojim reproducibilnim načinom merenja. Veličina tumora može da se meri kao dijametar tumora.
[0413] Lečenje kancera može rezultovati smanjenjem zapremine tumora. Poželjno, posle lečenja, zapremina tumora će se smanjiti za 5% ili više u odnosu na njegovu veličinu pre lečenja; poželjnije, zapremina tumora se smanjuje za 10% ili više; poželjnije, smanjuje se za 20% ili više; poželjnije, smanjuje se za 30% ili više; poželjnije, smanjuje se za 40% ili više; još poželjnije, smanjuje se za 50% ili više; i najpoželjnije, smanjuje se za više od 75% ili više. Zapremina tumora može da se meri bilo kojim reproducibilnim načinom merenja.
[0414] Lečenje kancera može rezultovati smanjenjem broja tumora. Poželjno, posle lečenja, broj tumora će se smanjiti za 5% ili više u odnosu na broj pre lečenja; poželjnije, broj tumora se smanjuje za 10% ili više; poželjnije, smanjuje se za 20% ili više; poželjnije, smanjuje se za 30% ili više; poželjnije, smanjuje se za 40% ili više; još poželjnije, smanjuje se za 50% ili više; i najpoželjnije, smanjuje se za više od 75%. Broj tumora može da se meri bilo kojim reproducibilnim načinom merenja. Broj tumora može da se meri brojanjem tumora vidljivih golim okom ili pri specifičnom uveličanju. Poželjno, specifično uveličanje iznosi 2x, 3x, 4x, 5x, 10x, ili 50x.
[0415] Lečenje kancera može rezultovati smanjenjem broja metastatskih lezija u drugim tkivima i organima udaljenim od mesta primarnog tumora. Poželjno, posle lečenja, broj metastatskih lezija će se smanjiti za 5% ili više u odnosu na broj pre lečenja; poželjnije, broj metastatskih lezija se smanjuje za 10% ili više; poželjnije, smanjuje se za 20% ili više; poželjnije, smanjuje se za 30% ili više; poželjnije, smanjuje se za 40% ili više; još poželjnije,
11
smanjuje se za 50% ili više; i najpoželjnije, smanjuje se za više od 75%. Broj metastatskih lezija može da se meri bilo kojim reproducibilnim načinom merenja. Broj metastatskih lezija može da se meri brojanjem metastatskih lezija vidljivih golim okom ili pri specifičnom uveličanju. Poželjno, specifično uveličanje iznosi 2x, 3x, 4x, 5x, 10x, ili 50x.
[0416] Lečenje kancera može rezultovati porastom prosečnog vremena preživljavanja populacije lečenih subjekata u poređenju sa populacijom koja prima samo nosač. Poželjno, prosečno vreme preživljavanja će se povećati za više od 30 dana; poželjnije za više od 60 dana; poželjnije za više od 90 dana; i najpoželjnije za više od 120 dana. Porast prosečnog vremena preživljavanja populacije može da se meri bilo kojim reproducibilnim načinom. Porast prosečnog vremena preživljavanja populacije može da se meri, na primer, izračunavanjem, za populaciju, prosečne dužine preživljavanja posle inicijacije lečenja aktivnim jedinjenjem. Porast prosečnog vremena preživljavanja populacije može da se meri i, na primer, izračunavanjem, za populaciju, prosečne dužine preživljavanja posle završetka prvog kruga lečenja aktivnim jedinjenjem.
[0417] Lečenje kancera može rezultovati porastom prosečnog vremena preživljavanja populacije lečenih subjekata u poređenju sa populacijom nelečenih subjekata. Poželjno, prosečno vreme preživljavanja će se povećati za više od 30 dana; poželjnije za više od 60 dana; poželjnije za više od 90 dana; i najpoželjnije za više od 120 dana. Porast prosečnog vremena preživljavanja populacije može da se meri bilo kojim reproducibilnim načinom. Porast prosečnog vremena preživljavanja populacije može da se meri, na primer, izračunavanjem, za populaciju, prosečne dužine preživljavanja posle inicijacije lečenja aktivnim jedinjenjem. Porast prosečnog vremena preživljavanja populacije može da se meri i, na primer, izračunavanjem, za populaciju, prosečne dužine preživljavanja posle završetka prvog kruga lečenja aktivnim jedinjenjem.
[0418] Lečenje kancera može rezultovati porastom prosečnog vremena preživljavanja populacije lečenih subjekata u poređenju sa populacijom koja je primala monoterapiju lekom koji nije jedinjenje predmetnog pronalaska, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prolek, metabolit, analog ili derivat. Poželjno, prosečno vreme preživljavanja će se povećati za više od 30 dana; poželjnije za više od 60 dana; poželjnije za više od 90 dana; i najpoželjnije za više od 120 dana. Porast prosečnog vremena preživljavanja populacije može da se meri bilo kojim reproducibilnim načinom. Porast prosečnog vremena preživljavanja populacije može da se meri, na primer, izračunavanjem, za populaciju, prosečne dužine preživljavanja posle inicijacije lečenja aktivnim jedinjenjem. Porast prosečnog vremena preživljavanja populacije može da se meri i, na primer, izračunavanjem, za populaciju, prosečne dužine preživljavanja posle završetka prvog kruga lečenja aktivnim jedinjenjem.
11
[0419] Lečenje kancera može rezultovati smanjenjem stope mortaliteta populacije lečenih subjekata u poređenju sa populacijom koja prima samo nosač. Lečenje kancera može rezultovati smanjenjem stope mortaliteta populacije lečenih subjekata u poređenju sa netretiranom populacijom. Lečenje kancera može rezultovati smanjenjem stope mortaliteta populacije lečenih subjekata u poređenju sa populacijom koja je primala monoterapiju lekom koji nije jedinjenje predmetnog pronalaska, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prolek, metabolit, analog ili derivat. Poželjno, stopa mortaliteta će se smanjiti za više od 2%; poželjnije, za više od 5%; poželjnije, za više od 10%; i najpoželjnije, za više od 25%. Smanjenje stope mortaliteta populacije lečenih subjekata može da se meri bilo kojim reproducibilnim načinom. Smanjenje stope mortaliteta populacije može da se meri, na primer, izračunavanjem, za populaciju, prosečnog broja smrtnih slučajeva vezanih za bolest u jedinici vremena, posle inicijacije lečenja aktivnim jedinjenjem. Smanjenje stope mortaliteta populacije može da se meri i, na primer, izračunavanjem, za populaciju, prosečnog broja smrtnih slučajeva vezanih za bolest u jedinici vremena, posle završetka prvog kruga lečenja aktivnim jedinjenjem.
[0420] Lečenje kancera može rezultovati smanjenjem stope rasta tumora. Poželjno, posle lečenja, stopa rasta tumora će se smanjiti za najmanje 5% u odnosu na onu pre lečenja; poželjnije, stopa rasta tumora će se smanjiti za najmanje 10%; poželjnije, smanjuje se za najmanje 20%; poželjnije, smanjuje se za najmanje 30%; poželjnije, smanjuje se za najmanje 40%; poželjnije, smanjuje se za najmanje 50%; još poželjnije, smanjuje se za najmanje 50%; i najpoželjnije smanjuje se za najmanje 75%. Stopa rasta tumora može da se meri bilo kojim reproducibilnim načinom merenja. Stopa rasta tumora može da se meri promenom dijametra tumora u jedinici vremena.
[0421] Lečenje kancera može rezultovati smanjenjem ponovnog rasta tumora. Poželjno, posle lečenja, ponovni rast tumora biće manji od 5%; poželjnije, ponovni rast tumora biće manji od 10%; poželjnije, manji od 20%; poželjnije, manji od 30%; poželjnije, manji od 40%; poželjnije, manji od 50%; još poželjnije, manji od 50%; i najpoželjnije, manji od 75%. Ponovni rast tumora može da se meri bilo kojim reproducibilnim načinom merenja. Ponovni rast tumora se meri, na primer, merenjem porasta dijametra tumora posle prethodnog smanjenja tumora usled lečenja. Na smanjenje ponovnog rasta tumora ukazuje nemogućnost tumora da se ponovo pojavi posle okončanja lečenja.
[0422] Lečenje ili prevencija poremećaja ćelijske proliferacije može rezultovati smanjenjem stope ćelijske proliferacije. Poželjno, posle lečenja, stopa ćelijske proliferacije smanjiće se za najmanje 5%; poželjnije, za najmanje 10%; poželjnije, za najmanje 20%; poželjnije, za najmanje 30%; poželjnije, za najmanje 40%; poželjnije, za najmanje 50%; još poželjnije, za
11
najmanje 50%; i najpoželjnije, za najmanje 75%. Stopa ćelijske proliferacije može da se meri bilo kojim reproducibilnim načinom merenja. Stopa ćelijske proliferacije meri se, na primer, određivanjem broja ćelija u deobi u tkivnom uzorku u jedinici vremena.
[0423] Lečenje ili prevencija poremećaja ćelijske proliferacije može rezultovati smanjenjem učešća proliferišućih ćelija. Poželjno, posle lečenja, učešće proliferišućih ćelija smanjiće se za najmanje 5%; poželjnije, za najmanje 10%; poželjnije, za najmanje 20%; poželjnije, za najmanje 30%; poželjnije, za najmanje 40%; poželjnije, za najmanje 50%; još poželjnije, za najmanje 50%; i najpoželjnije, za najmanje 75%. Učešće proliferišućih ćelija može da se meri bilo kojim reproducibilnim načinom merenja. Poželjno, učešće proliferišućih ćelija određuje se, na primer, kvantifikovanjem broja ćelija u deobi u odnosu na broj ćelija koje nisu u deobi, u uzorku tkiva. Učešće proliferišućih ćelija može biti ekvivalentno mitotičkom indeksu.
[0424] Lečenje ili prevencija poremećaja ćelijske proliferacije može rezultovati smanjenjem veličine područja ili zone ćelijske proliferacije. Poželjno, posle lečenja, veličine područja ili zone ćelijske proliferacije smanjiće se za najmanje 5% u odnosu na veličinu pre lečenja; poželjnije, smanjiće se za najmanje 10%; poželjnije, za najmanje 20%; poželjnije, za najmanje 30%; poželjnije, za najmanje 40%; poželjnije, za najmanje 50%; još poželjnije, za najmanje 50%; i najpoželjnije, za najmanje 75%. Veličina područja ili zone ćelijske proliferacije može da se meri bilo kojim reproducibilnim načinom merenja. Veličina područja ili zone ćelijske proliferacije može da se meri kao dijametar ili širina područja ili zone ćelijske proliferacije
[0425] Lečenje ili prevencija poremećaja ćelijske proliferacije može rezultovati smanjenjem broja ili proporcije ćelija koje imaju nenormalan izgled ili morfologiju. Poželjno, posle lečenja, broj ćelija koje imaju nenormalnu morfologiju smanjiće se za najmanje 5% u odnosu na veličinu pre lečenja; poželjnije, smanjiće se za najmanje 10%; poželjnije, za najmanje 20%; poželjnije, za najmanje 30%; poželjnije, za najmanje 40%; poželjnije, za najmanje 50%; još poželjnije, za najmanje 50%; i najpoželjnije, za najmanje 75%. Nenormalni izgled ćelija ili morfologija mogu se meriti bilo kojim reproducibilnim načinom merenja. Nenormalna ćelijska morfologija može da se određuje mikroskopijom, npr., korišćenjem inverznog mikroskopa za kulturu tkiva. Nenormalna ćelijska morfologija može da se manifestuje nukleusnim pleomorfizmom.
[0426] Kako se koristi u ovom tekstu, izraz "selektivno" označava tendenciju pojavljivanja nečega sa većom učestalošću u jednoj populaciji nego u drugoj populaciji. Uporedive populacije mogu biti populacije ćelija. Jedinjenje predmetnog pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prolek, metabolit, polimorf ili solvat, mogu selektivno delovati na kancersku ili prekanceroznu ćeliju, ali ne i na normalnu ćeliju. Jedinjenje predmetnog
11
pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prolek, metabolit, polimorf ili solvat, mogu delovati selektivno u modulaciji jednog molekulskog cilja (npr., ciljne proteinmetiltransferaze) ali ne modulišu bitno drugi molekulski cilj (npr., protein-metil transferazu koja nije ciljna). Pronalazak obezbeđuje i metod selektivne inhibicije aktivnosti enzima, kao što je protein-metiltransferaza. Poželjno, događaj se dešava selektivno u populaciji A u odnosu na populaciju B ako se dešava više nego dva puta češće u populaciji A u poređenju sa populacijom B. Događaj se dešava selektivno ako se javlja više od pet puta češće u populaciji A. Događaj se dešava selektivno ako se javlja više od deset puta češće u populaciji A; poželjnije, više od pedeset puta; još poželjnije, više od 100 puta; i najpoželjnije, više od 1000 puta češće u populaciji A poređenju sa populacijom B. Na primer, reći će se da se ćelijska smrt javlja selektivno u kancerskim ćelijama ako se javlja više nego dva puta češće u kancerskim ćelijama nego u normalnim ćelijama.
[0427] Jedinjenje predmetnog pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prolek, metabolit, polimorf ili solvat, mogu da modulišu aktivnost molekulskog cilja (npr., ciljne protein-metiltransferaze). Modulacija se odnosi na stimulaciju ili inhibiciju aktivnosti molekulskog cilja. Poželjno, jedinjenje predmetnog pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prolek, metabolit, polimorf ili solvat, moduliše aktivnost molekulskog cilja ako stimuliše ili inhibira aktivnost molekulskog cilja najmanje dvostruko u odnosu na aktivnost molekulskog cilja pod istim uslovima, ali u odsustvu pomenutog jedinjenja. Poželjnije, jedinjenje predmetnog pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prolek, metabolit, polimorf ili solvat, moduliše aktivnost molekulskog cilja ako stimuliše ili inhibira aktivnost molekulskog cilja najmanje 5-struko, najmanje 10-struko, najmanje 20-struko, najmanje 50-struko, najmanje 100-struko u odnosu na aktivnost molekulskog cilja pod istim uslovima, ali u odsustvu pomenutog jedinjenja. Aktivnost molekulskog cilja može da se meri bilo kojim reproducibilnim načinom. Aktivnost molekulskog cilja može da se meri in vitro ili in vivo. Na primer, aktivnost molekulskog cilja može da se meri in vitro testom enzimske aktivnosti ili testom vezivanja DNK, ili aktivnost molekulskog cilja može da se meri in vivo testiranjem ekspresije reporter-gena.
[0428] Jedinjenje predmetnog pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prolek, metabolit, polimorf ili solvat, ne moduliše bitno aktivnost molekulskog cilja ako dodavanje jedinjenja ne stimuliše ili ne inhibira aktivnost molekulskog cilja za više od 10% u odnosu na aktivnost molekulskog cilja pod istim uslovima, ali u odsustvu pomenutog jedinjenja.
[0429] Kako se koristi u ovom tekstu, izraz "izozim selektivno" označava preferencijalnu inhibiciju ili stimulaciju jedne izoforme enzima u poređenju sa drugom izoformom enzima (npr., preferencijalna inhibicija ili stimulacija protein-metiltransferaznog izoenzima alfa u
11
poređenju sa protein-metiltransferaznim izoenzimom beta). Poželjno, jedinjenje predmetnog pronalaska, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prolek, metabolit, polimorf ili solvat, pokazuje najmanje četvorostruku razliku, poželjno desetostruku razliku, poželjnije pedesetostruku razliku, u dozi potrebnoj za postizanje biološkog efekta. Poželjno, jedinjenje predmetnog pronalaska, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prolek, metabolit, polimorf ili solvat, prikazuje ovu razliku u okviru raspona inhibicije i primer razlike se izražava pri IC50, tj., pri 50% inhibicije za molekulski cilj od interesa.
[0430] Primena jedinjenja predmetnog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, proleka, metabolita, polimorfa ili solvata, na ćeliji ili kod subjekta kojem je to potrebno može rezultovati modulacijom (tj., stimulacijom ili inhibicijom) aktivnosti protein-metiltransferaze od interesa.
[0431] Predmetna objava obezbeđuje metode procene biološke aktivnosti jedinjenja predmetnog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, proleka, metabolita, polimorfa ili solvata ili metode identifikovanja testnog jedinjenja kao inhibitora Y641 mutanta EZH2. U jednom primeru izvođenja metod uključuje kombinovanje izolovanog Y641 mutanta EZH2 sa histonskim supstratom, donorom metil grupe (kao što je S-adenozilmetionin (SAM)), i testnog jedinjenja, pri čemu histonski supstrat uključuje formu H3-K27 odabranu iz grupe koja sadrži nemetilisani H3-K27, monometilisani H3-K27, dimetilisani H3-K27, i bilo koju njihovu kombinaciju; i izvođenje testa za detektovanje metilacije H3-K27 u histonskom supstratu, čime se testno jedinjenje identifikuje kao inhibitor Y641 mutanta EZH2 ako je metilacija H3-K27 u prisustvu testnog jedinjenja manja od metilacije H3-K27 u odsustvu testnog jedinjenja. Test detektovanja metilacije H3-K27 može da se bira tako da se meri stopa metilacije, obim metilacije ili i stopa i obim metilacije.
[0432] Y641 mutant EZH2 izolovan je kao PRC2 kompleks ili njegov funkcionalni ekvivalent. Kako se koristi u ovom tekstu, izraz "izolovan" znači suštinski odvojen od drugih komponenti sa kojima se kompleks može naći u prirodnim uslovima. Jedinjenje može da se izoluje, a da nije neophodno njegovo prečišćavanje. U jednom primeru izvođenja, mutant EZH2 izoluje se kao kompleks Y641 mutanta EZH2 zajedno sa EED i SUZ12. U drugom primeru izvođenja, mutant EZH2 izoluje se kao kompleks Y641 mutanta EZH2 zajedno sa EED, SUZ12, i RbAp48. Pod pogodnim uslovima, PRC2 kompleks ili njegov funkcionalni ekvivalent ispoljavaju histon-metiltransferaznu aktivnost za H3-K27. U jednom primeru izvođenja, kompleks je sačinjen od rekombinantno eksprimiranih komponentnih polipetida, npr., EZH2, EED, SUZ12, sa ili bez RbAp48.
[0433] Izolovani Y641 mutant EZH2 kombinuje se sa histonskim supstratom. Histonski supstrat uključuje svaki pogodni izvor histonskih polipeptida ili njihovih fragmenata koji
12
mogu služiti kao supstrat za EZH2. U jednom primeru izvođenja, histonski supstrat uključuje histone izolovane iz subjekta. Histoni mogu biti izolovani iz ćelija subjekta korišćenjem bilo kojeg pogodnog metoda; takvi metodi dobro su poznati stručnjaku u oblasti i nije potrebno dodatno ih ovde opisivati. Vidi, na primer, Fang et al. (2004) Methods Enzymol 377:213-26. U skladu sa Primerima, kasnije u ovom tekstu, u jednom primeru izvođenja histonski supstrat se obezbeđuje u vidu nukleozoma. U skladu sa Primerima, kasnije u ovom tekstu, u jednom primeru izvođenja histonski supstrat se obezbeđuje u vidu nukleozoma iz ptičjih (pilećih) eritrocita.
[0434] Tako obezbeđeni histonski supstrat može uključivati mešavinu histona sa različitim modifikacija, uključujući različita stanja metilacije H3-K27, što se procenjuje Western blotovanjem sa antitelima specifičnim za stanja metilacije H3-K27. U jednom primeru izvođenja, histonski supstrat može da se obezbedi u vidu prečišćenog histona H3 pune dužine. Tako prečišćeni histon H3 pune dužine može da se obezbedi u vidu preparata homogenog u odnosu na stanje H3-K27 metilacije ili u vidu mešavine različitih stanja metilacije H3-K27. Preparat izolovanog histona H3, homogen u pogledu stanja metilacije H3-K27, može delom da se pripremi propuštanjem preko imunoafinitetne kolone napunjene pogodnim antitelima specifičnim za stanje metilacije H3-K27 ili imunoprecipitacijom uz korišćenje magnetnih perlica obloženih pogodnim antitelima specifičnim za stanje metilacije H3-K27. Alternativno ili dodatno, metilaciono stanje H3-K27 može da se karakteriše izvođenjem testa. Na primer, polazni materijal, histonski supstrat, može da se okarakteriše da sadrži 50 procenata nemetilisanog H3-K27, 40 procenata monometilisanog H3-K27, 10 procenata dimetilisanog H3-K27, i 0 procenata trimetilisanog H3-K27.
[0435] U jednom primeru izvođenja, histonski supstrat uključuje peptidnu biblioteku ili pogodan peptid koji sadrži jednu ili više aminokiselinskih sekvenci srodnih sa histonom H3, uključujući, posebno, sekvencu koja obuhvata H3-K27. Na primer, u jednom primeru izvođenja, histonski supstrat je peptidni fragment koji odgovara aminokiselinskim reziduama 21-44 histona H3. Peptidna biblioteka ili peptid mogu se pripremiti peptidnom sintezom prema tehnikama poznatim u struci i opciono modifikovanim za inkorporaciju svakog željenog stepena metilacije lizina koji odgovara H3-K27. Kako je opisano u donjim Primerima, ovi peptidi takođe mogu da se modifikuju tako da sadrže obeleživač, na primer biotin, koristan za obavljanje kasnije opisanih testova. U jednom primeru izvođenja, obeleživač se dodaje na amino (N)-terminus peptida. U jednom primeru izvođenja, obeleživač se dodaje na karboksi (C)-terminus peptida.
[0436] Detekcija metilacije H3-K27 može da se izvrši korišćenjem bilo kojeg pogodnog metoda. U jednom primeru izvođenja, izvor donora metil grupe uključuje metil grupe koje su obeležene detektabilnim obeleživačem. Detektabilni obeleživač je u jednom primeru izvođenja izotopski obeleživač, npr., tricijum. Drugi tipovi obeleživača mogu uključivati, na primer, fluorescentne obeleživače.
[0437] Detekcija formiranja trimetilisanog H3-K27 može da se izvrši korišćenjem bilo kojeg pogodnog metoda. Na primer, detekcija formiranja trimetilisanog H3-K27 može da se izvrši korišćenjem testa za detektovanje inkorporacije obeleženih metil grupa, kako je gore opisano, opciono u kombinaciji sa hromatografskim ili drugim metodom za separaciju obeleženih proizvoda po veličini, npr., elektroforezom na poliakrilamidnom gelu (PAGE), kapilarnom elektroforezom (CE), ili tečnom hromatografijom pod visokim pritiskom (HPLC). Alternativno ili dodatno, detekcija formiranja trimetilisanog H3-K27 može da se izvrši korišćenjem antitela specifičnih za trimetilisani H3-K27.
[0438] Detekcija konverzije monometilisanog H3-K27 u dimetilisani H3-K27 može da se izvrši korišćenjem bilo kojeg pogodnog metoda. U jednom primeru izvođenja, konverzija se meri korišćenjem antitela specifičnih za monometilisani H3-K27 i dimetilisani H3-K27. Na primer, početne količine ili koncentracije monometilisanog H3-K27 i dimetilisanog H3-K27 mogu da se odrede korišćenjem odgovarajućih antitela specifičnih za monometilisani H3-K27 i dimetilisani H3-K27. Posle kombinovanja enzima, supstrata, donora metil grupe i testnog jedinjenja, rezultujuća količina ili koncentracija monometilisanog H3-K27 i dimetilisanog H3-K27 može da se odredi korišćenjem odgovarajućih antitela specifičnih za monometilisani H3-K27 i dimetilisani H3-K27. Početne i rezultujuće količine ili koncentracije monometilisanog H3-K27 i dimetilisanog H3-K27 zatim mogu da se uporede. Alternativno ili dodatno, početne i rezultujuće količine ili koncentracije monometilisanog H3-K27 i dimetilisanog H3-K27 zatim mogu da se uporede sa odgovarajućim količinama ili koncentracijama iz negativne kontrole. Negativna kontrolna reakcija, u koju nije uključeno testno sredstvo, može da se izvodi paralelno ili u vidu istorijske kontrole. Rezultati takve kontrolne reakcije mogu opciono da se oduzmu od odgovarajućih rezultata eksperimentalne reakcije, pre ili zajedno sa gore pomenutim upoređivanjem.
[0439] Zbog toga što dimetilisana forma H3-K27 može dalje da se metiliše u istom testu, može izgledati da smanjenje količine ili koncentracije monometilisanog H3-K27 ne odgovara direktno porastu dimetilisanog H3-K27. U tom slučaju, može se pretpostaviti, međutim, da smanjenje količine ili koncentracije monometilisanog H3-K27 predstavlja, po sebi, odraz konverzije monometilisanog H3-K27 u dimetilisani H3-K27.
[0440] Detekcija konverzije dimetilisanog H3-K27 u trimetilisani H3-K27 može da se izvrši korišćenjem bilo kojeg pogodnog metoda. U jednom primeru izvođenja, konverzija se meri korišćenjem antitela specifičnih za dimetilisani H3-K27 i trimetilisani H3-K27. Na primer, početne količine ili koncentracije dimetilisanog H3-K27 i trimetilisanog H3-K27 mogu da se odrede korišćenjem odgovarajućih antitela koja su specifična za dimetilisani H3-K27 i trimetilisani H3-K27. Posle kombinovanja enzima, supstrata, i testnog jedinjenja, rezultujuće količine ili koncentracije dimetilisanog H3-K27 i trimetilisanog H3-K27 mogu da se odrede korišćenjem odgovarajućih antitela koja su specifična za dimetilisani H3-K27 i trimetilisani H3-K27. Početne i rezultujuće količine ili koncentracije dimetilisanog H3-K27 i trimetilisanog H3-K27 zatim mogu da se uporede. Alternativno ili dodatno, početne i rezultujuće količine ili koncentracije dimetilisanog H3-K27 i trimetilisanog H3-K27 zatim mogu da se uporede sa odgovarajućim količinama ili koncentracijama iz negativne kontrole. Negativna kontrolna reakcija, u koju nije uključeno testno sredstvo, može da se izvodi paralelno ili u vidu istorijske kontrole. Rezultati takve kontrolne reakcije mogu opciono da se oduzmu od odgovarajućih rezultata eksperimentalne reakcije, pre ili zajedno sa gore pomenutim upoređivanjem.
[0441] Testno jedinjenje se identifikuje kao inhbitor Y641 mutanta EZH2 kada je metilacija H3-K27 u prisustvu testnog jedinjenja manja od metilacije H3-K27 bez testnog jedinjenja. U jednom primeru izvođenja, testno jedinjenje se identifikuje kao inhbitor Y641 mutanta EZH2 kada je formiranje trimetilisanog H3-K27 u prisustvu testnog jedinjenja manje od formiranja trimetilisanog H3-K27 u odsustvu testnog jedinjenja.
[0442] Predmetna objava obezbeđuje i metode identifikovanja selektivnog inhibitora Y641 mutanta EZH2. U jednom primeru izvođenja metod uključuje kombinovanje izolovanog Y641 mutanta EZH2 sa histonskim supstratom, donorom metil grupe (npr., SAM), i testnim jedinjenjem, pri čemu histonski supstrat uključuje formu H3-K27 odabranu iz grupe koja sadrži monometilisani H3-K27, dimetilisani H3-K27, i kombinaciju monometilisanog H3-K27 i dimetilisanog H3-K27, čime se formira testna mešavina; kombinovanje izolovanog divljeg tipa EZH2 sa histonskim supstratom, donorom metil grupe (npr., SAM), i testnim jedinjenjem, pri čemu histonski supstrat uključuje formu H3-K27 odabranu iz grupe koja sadrži monometilisani H3-K27, dimetilisani H3-K27, i kombinaciju monometilisanog H3-K27 i dimetilisanog H3-K27, čime se formira kontrolna mešavina; izvođenje testa za detektovanje trimetilacije histonskog supstrata u testnoj mešavini i kontrolnoj mešavini; izračunavanje odnosa (a) trimetilacije sa Y641 mutantom EZH2 i testnim jedinjenjem (M+) prema (b) trimetilaciji sa Y641 mutantom EZH2 bez testnog jedinjenja (M-); izračunavanje odnosa (c) trimetilacije sa divljim tipom EZH2 i testnim jedinjenjem (WT+) prema (d) trimetilaciji sa divljim tipom EZH2 bez testnog jedinjenja (WT-); upoređivanje odnosa (a)/(b) sa odnosom (c)/(d); i identifikovanje testnog jedinjenja kao selektivnog inhibitora Y641 mutanta EZH2 kada je odnos (a)/(b) manji od odnosa (c)/(d). U jednom primeru izvođenja
12
metod uključuje još i uzimanje u obzir negativne kontrole bez testnog jedinjenja za jednu ili obe testne mešavine i kontrolnu mešavinu.
[0443] U nekim testovima, koriste se imunološki reagensi, npr., antitela i antigeni. U nekim testovima, za merenja enzimske aktivnosti može da se koristi fluorescencija. Kako se koristi u ovom tekstu, "fluorescencija" označava proces kojim molekul emituje foton kao rezultat apsorbovanja ulaznog fotona više energije. Specifični metodi procene biološke aktivnosti objavljenih jedinjenja opisani su u primerima.
[0444] Primena jedinjenja predmetnog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, proleka, metabolita, polimorfa ili solvata, kod ćelije ili subjekta kojem je to potrebno, može rezultovati modulacijom (tj., stimulacijom ili inhibicijom) aktivnosti unutarćelijskog cilja (npr., supstrata). Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu modulisati nekoliko unutarćelijskih ciljeva, uključujući, ali ne ograničavajući se na protein-metiltransferazu.
[0445] Aktiviranje se odnosi na dovođenje smeše od interesa (npr., proteina ili nukleinske kiseline) u stanje pogodno za obavljanje željene biološke funkcije. Smeša od interesa, koja može da se aktivira, ima i neaktivno stanje. Aktivirana smeša od interesa može imati inhibitornu ili stimulatornu biološku funkciju, ili obe.
[0446] Elevacija se odnosi na porast željene biološke aktivnosti smeše od interesa (npr., proteina ili nukleinske kiseline). Do elevacije može doći porastom koncentracije smeše od interesa.
[0447] Kako se koristi u ovom tekstu, "put tačke provere ćelijskog ciklusa" odnosi se na biohemijski put koji je uključen u modulaciju tačke provere ćelijskog ciklusa. Put tačke provere ćelijskog ciklusa može imati stimulatorne ili inhibitorne efekte, ili oba, na jednu ili više funkcija koje uključuju tačku provere ćelijskog ciklusa. Put tačke provere ćelijskog ciklusa sastoji se od najmanje dve smeše od interesa, poželjno proteina, koje, obe, doprinose modulaciji tačke provere ćelijskog ciklusa. Put tačke provere ćelijskog ciklusa može da se aktivira preko aktivacije jednog ili više članova puta tačke provere ćelijskog ciklusa. Poželjno, put tačke provere ćelijskog ciklusa je biohemijski signalni put.
[0448] Kako se koristi u ovom tekstu, "regulator tačke provere ćelijskog ciklusa" odnosi se na smešu od interesa koja može da funkcioniše, bar delimično, u modulaciji tačke provere ćelijskog ciklusa. Regulator tačke provere ćelijskog ciklusa može imati stimulatorne ili inhibitorne efekte, ili oba, na jednu ili više funkcija koje uključuju tačku provere ćelijskog ciklusa. Regulator tačke provere ćelijskog ciklusa može ali ne mora biti protein.
[0449] Lečenje kancera ili poremećaja ćelijske proliferacije može rezultovati ćelijskom smrću, i poželjno, ćelijska smrt će za rezultat imati smanjenje od najmanje 10% broja ćelija u populaciji. Poželjnije, ćelijska smrt znači smanjenje od najmanje 20%; poželjnije, smanjenje od najmanje 30%; poželjnije, smanjenje od najmanje 40%; poželjnije, smanjenje od najmanje 50%; najpoželjnije, smanjenje od najmanje 75%. Broj ćelija u populaciji može da se meri bilo kojim reproducibilnim načinom. Broj ćelija u populaciji može da se meri sortiranjem fluorescencijom aktiviranih ćelija (FACS), imunofluorescentnom mikroskopijom i svetlosnom mikroskopijom. Metodi merenja ćelijske smrti pokazani su u Li et al., Proc Natl Acad Sci U S A.100(5): 2674-8, 2003. U aspektu, ćelijska smrt se dešava apoptozom.
[0450] Poželjno, efikasna količina jedinjenja predmetnog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, proleka, metabolita, polimorfa ili solvata, neće biti značajno citotoksična za normalne ćelije. Terapijski efikasna količina jedinjenja nije značajno citotoksična za normalne ćelije onda kada primena jedinjenja u terapijski efikasnoj količini ne indukuje ćelijsku smrt više od 10% normalnih ćelija. Terapijski efikasna količina jedinjenja ne utiče značajno na vijabilnost normalnih ćelija onda kada primena jedinjenja u terapijski efikasnoj količini ne indukuje ćelijsku smrt više od 10% normalnih ćelija. U aspektu, ćelijska smrt se dešava apoptozom.
[0451] Dovođenje u kontakt ćelije sa jedinjenjem predmetnog pronalaska, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, prolekom, metabolitom, polimorfom ili solvatom, može indukovati ili aktivirati ćelijsku smrt selektivno u kancerskim ćelijama. Dovođenje u kontakt ćelije sa jedinjenjem predmetnog pronalaska, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, prolekom, metabolitom, polimorfom ili solvatom, može indukovati ćelijsku smrt selektivno u jednoj ili više ćelija zahvaćenih ćelijskim proliferativnim poremećajem. Poželjno, primena kod subjekta kojem je to potrebno, jedinjenja predmetnog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, proleka, metabolita, polimorfa ili solvata indukovaće ćelijsku smrt selektivno u jednoj ili više ćelija zahvaćenih ćelijskim prolifeativnim poremećajem.
[0452] Jedan aspekt predmetng pronalaska odnosi se na metod lečenja ili prevencije kancera (npr., na čiji tok može da se utiče modulacijom EZH2-posredovane metilacije proteina) primenom jedinjenja predmetnog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, proleka, metabolita, polimorfa ili solvata, kod subjekta kojem je to potrebno, pri čemu primena jedinjenja predmetnog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, proleka, metabolita, polimorfa ili solvata rezultuje jednim ili većim brojem od sledećeg: prevencija proliferacije kancerskih ćelija akumulacijom ćelija u jednoj ili više faza ćelijskog ciklusa (npr. G1, G1/S, G2/M), ili indukcija ćelijske senescencije, ili pokretanje diferencijacije tumorskih ćelija; pokretanje ćelijske smrti u kancerskim ćelijama putem citotoksičnosti, nekroze ili apoptoze, bez bitnog porasta ćelijske smrti u normalnim ćelijama, antitumorska aktivnost kod životinja sa terapijskim indeksom od najmanje 2. Kako se ovde koristi, izraz "terapijski indeks" je maksimalna tolerisana doza podeljena efikasnom dozom. Predmetni pronalazak se
12
odnosi i na metod koji se koristi za identifikovanje pogodnih kandidata za lečenje ili prevenciju kancera.
[0453] Za detaljne opise poznatih tehnika o kojima se govori u ovom tekstu ili za ekvivalentne tehnike, stručnjak u oblasti može se uputiti na opšte referentne tekstove. Ovi tekstovi uključuju Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Inc. (2005); Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (3rd edition), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2000); Coligan et al., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, N.Y.; Enna et al., Current Protocols in Pharmacology, John Wiley & Sons, N.Y.; Fingl et al., The Pharmacological Basis of Therapeutics (1975), Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 18th edition (1990). Ovi tekstovi mogu, naravno, biti referentni i za spravljanje ili korišćenje aspekta pronalaska.
[0454] Kako se koristi u ovom tekstu, "kombinaciona terapija" ili "koterapija" uključuje primenu jedinjenja predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, proleka, metabolita, polimorfa ili solvata i najmanje jednog drugog sredstva kao dela specifičnog režima lečenja čija svrha je obezbeđivanje korisnog efekta na osnovu kodejstva ovih terapijskih sredstava. Korisni efekat kombinacije može uključivati, ali se ne ograničava na farmakokinetičko ili farmakodinamičko kodejstvo koje je rezultat kombinacije terapijskih sredstava. Primena ovih terapijskih sredstava u kombinaciji tipično se odvija tokom definisanog vremenskog perioda (obično minuta, sata, dana ili nedelja zavisno od odabrane kombinacije). "Kombinaciona terapija" može, ali obično ne obuhvata primenu dva ili više ovih terapijskih sredstava kao dela zasebnih monoterapijskih režima koji slučajno i arbitrarno rezultuju kombinacijama opisanim u ovom predmetnom pronalasku.
[0455] "Kombinaciona terapija" obuhvata primenu ovih terapijskih sredstava na sekvencijalan način, pri čemu se svako terapijsko sredstvo primenjuje u različito vreme, kao i primenu ovih terapijskih sredstava, ili najmanje dva terapijska sredstva, suštinski istovremeno. Suštinski istovremena primena može da se obavi, na primer, primenom kod subjekta jedne kapsule koja ima fiksirani odnos svakog od terapijskih sredstava, ili u više kapsula zasebnih za svako terapijsko sredstvo. Sekvencijalna ili suštinski istovremena primena svakog terapijskog sredstva može da se obavi odgovarajućim putem, uključujući, ali ne ograničavajući se na oralne puteve, intravenske puteve, intramuskularne puteve i direktnu apsorpciju preko mukozne membrane tkiva. Terapijska sredstva mogu da se primene istim putem ili različitim putevima. Na primer, prvo terapijsko sredstvo odabrane kombinacije može da se primeni intravenskom injekcijom dok drugo terapijsko sredstvo kombinacije može da se primeni oralno. Alternativno, na primer, sva terapijska sredstva mogu da se primene oralno ili sva
12
terapijska sredstva mogu da se primene intravenskom injekcijom. Redosled primene terapijskih sredstava nije strogo kritičan.
[0456] "Kombinaciona terapija" obuhvata i primenu terapijskih sredstava kao je gore opisano u dodatnoj kombinaciji sa drugim biološki aktivnim sastojcima i terapijama koje ne uključuju lekove (npr., lečenje operacijom ili zračenjem). Kada kombinaciona terapija dodatno uključuje lečenje koje ne obuhvata primenu lekova, lečenje koje ne obuhvata primenu lekova može da se sprovede u bilo koje pogodno vreme, dokle god se postiže koristan efekat zajedničkog dejstva kombinacije terapijskog sredstva i lečenja koje ne obuhvata primenu lekova. Na primer, u pogodnim slučajevima, koristan efekat se postiže kada se lečenje koje ne obuhvata primenu lekova udalji od primene terapijskih sredstava, moguće za dane ili čak nedelje.
[0457] Jedinjenje predmetnog pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prolek, metabolit, analog ili derivat, mogu se primeniti u kombinaciji sa drugim hemioterapijskim sredstvom. Drugo hemioterapijsko sredstvo (označeno i kao antineoplastično sredstvo ili antiproliferativno sredstvo) može biti alkilirajuće sredstvo; antibiotik; antimetabolit; detoksikujuće sredstvo; interferon; poliklonsko ili monoklonsko antitelo; EGFR inhibitor; HER2 inhibitor; inhibitor histon-deacetilaze; hormon; inhibitor mitoze; MTOR inhibitor; inhibitor multikinaze; inhibitor serin/treonin kinaze; inhibitori tirozin kinaze; VEGF/VEGFR inhibitor; taksan ili derivat taksana, inhibitor aromataze, antraciklin, lek koji cilja mikrotubule, lek otrovan za topoizomerazu, inhibitor molekulskog cilja ili enzima (npr., kinaze ili protein-metiltransferaze), lek koji je citidinski analog ili neki hemioterapeutik, antineoplastično ili antiproliferativno sredstvo navedeno u www.cancer.org/docroot/cdg/cdg_0.asp.
[0458] Primeri alkilirajućih sredstava uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: ciklofosfamid (Cytoxan; Neosar); hlorambucil (Leukeran); melfalan (Alkeran); karmustin (BiCNU); busulfan (Busulfex); lomustin (CeeNU); dakarbazin (DTICDome); oksaliplatin (Eloxatin); karmustin (Gliadel); ifosfamid (Ifex); mehloretamin (Mustargen); busulfan (Myleran); karboplatin (Paraplatin); cisplatin (CDDP; Platinol); temozolomid (Temodar); tiotepa (Thioplex); bendamustin (Treanda); ili streptozocin (Zanosar).
[0459] Primeri antibiotika uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: doksorubicin (Adriamycin); lipozomski doksorubicin (Doxil); mitoksantron (Novantrone); bleomicin (Blenoxane); daunorubicin (Cerubidine); lipozomski daunorubicin (DaunoXome); daktinomicin (Cosmegen); epirubicin (Ellence); idarubicin (Idamycin); plikamicin (Mithracin); mitomicin (Mutamycin); pentostatin (Nipent); ili valrubicin (Valstar).
12
[0460] Primeri antimetabolita uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: fluorouracil (Adrucil); kapecitabin (Xeloda); hidroksiurea (Hydrea); merkaptopurin (Purinethol); pemetreksed (Alimta); fludarabin (Fludara); nelarabin (Arranon); kladribin (Cladribine Novaplus); klofarabin (Clolar); citarabin (Cytosar-U); decitabin (Dacogen); lipozomski citarabin (DepoCyt); hidroksiurea (Droxia); pralatreksat (Folotyn); floksuridin (FUDR); gemcitabin (Gemzar); kladribin (Leustatin); fludarabin (Oforta); metotreksat (MTX; Rheumatrex); metotreksat (Trexall); tioguanin (Tabloid); TS-1 ili citarabin (Tarabine PFS).
[0461] Primeri detoksikujućih sredstava uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: amifostin (Ethyol) ili mesna (Mesnex).
[0462] Primeri interferona uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: interferon alfa-2b (Intron A) ili interferon alfa-2a (Roferon-A).
[0463] Primeri poliklonskih ili monoklonskih antitela uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: trastuzumab (Herceptin); ofatumumab (Arzerra); bevacizumab (Avastin); rituksimab (Rituxan); cetuksimab (Erbitux); panitumumab (Vectibix); tositumomab/jod131 tositumomab (Bexxar); alemtuzumab (Campath); ibritumomab (Zevalin; In-111; Y-90 Zevalin); gemtuzumab (Mylotarg); ekulizumab (Soliris) ili denozumab.
[0464] Primeri EGFR inhibitora uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: gefitinib (Iressa); lapatinib (Tykerb); cetuksimab (Erbitux); erlotinib (Tarceva); panitumumab (Vectibix); PKI-166; kanertinib (CI-1033); matuzumab (Emd7200) ili EKB-569.
[0465] Primeri HER2 inhibitora uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: trastuzumab (Herceptin); lapatinib (Tykerb) ili AC-480.
[0466] Inhibitori histon-deacitilaze uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: vorinostat (Zolinza).
[0467] Primeri hormona uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: tamoksifen (Soltamox; Nolvadex); raloksifen (Evista); megestrol (Megace); leuprolid (Lupron; Lupron Depot; Eligard; Viadur); fulvestrant (Faslodex); letrozol (Femara); triptorelin (Trelstar LA; Trelstar Depot); eksemestan (Aromasin); goserelin (Zoladex); bikalutamid (Casodex); anastrozol (Arimidex); fluoksimesteron (Androxy; Halotestin); medroksiprogesteron (Provera; Depo-Provera); estramustin (Emcyt); flutamid (Eulexin); toremifen (Fareston); degareliks (Firmagon); nilutamid (Nilandron); abareliks (Plenaxis); ili testolakton (Teslac).
[0468] Primeri inhibitora mitoze uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: paklitaksel (Taxol; Onxol; Abraxane); docetaksel (Taxotere); vinkristin (Oncovin; Vincasar PFS); vinblastin (Velban); etopozid (Toposar; Etopophos; VePesid); tenipozid (Vumon); iksabepilon (Ixempra); nokodazol; epotilon; vinorelbin (Navelbine); kamptotecin (CPT); irinotekan (Camptosar); topotekan (Hycamtin); amsakrin ili lamelarin D (LAM-D).
12
[0469] Primeri MTOR inhibitora uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: everolimus (Afinitor) ili temsirolimus (Torisel); rapamun, ridaforolimus; ili AP23573.
[0470] Primeri multikinaznih inhibitora uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: sorafenib (Nexavar); sunitinib (Sutent); BIBW 2992; E7080; Zd6474; PKC-412; motesanib; ili AP24534.
[0471] Primeri inhibitora serin/treonin kinaze uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: ruboksistaurin; eril/easudil hidrohlorid; flavopiridol; seliciklib (CYC202; Roscovitrine); SNS-032 (BMS-387032); Pkc412; briostatin; KAI-9803;SF1126; VX-680; Azd1152; Arry-142886 (AZD-6244); SCIO-469; GW681323; CC-401; CEP-1347 ili PD 332991.
[0472] Primeri inhibitora tirozin kinaze uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: erlotinib (Tarceva); gefitinib (Iressa); imatinib (Gleevec); sorafenib (Nexavar); sunitinib (Sutent); trastuzumab (Herceptin); bevacizumab (Avastin); rituksimab (Rituxan); lapatinib (Tykerb); cetuksimab (Erbitux); panitumumab (Vectibix); everolimus (Afinitor); alemtuzumab (Campath); gemtuzumab (Mylotarg); temsirolimus (Torisel); pazopanib (Votrient); dasatinib (Sprycel); nilotinib (Tasigna); vatalanib (Ptk787; ZK222584); CEP-701; SU5614; MLN518; XL999; VX-322; Azd0530; BMS-354825; SKI-606 CP-690; AG-490; WHI-P154; WHI-P131; AC-220; ili AMG888.
[0473] Primeri VEGF/VEGFR inhibitora uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: bevacizumab (Avastin); sorafenib (Nexavar); sunitinib (Sutent); ranibizumab; pegaptanib; ili vandetinib.
[0474] Primeri lekova koji ciljaju mikrotubule uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: paklitaksel, docetaksel, vinkristin, vinblastin, nokodazol, epotiloni i navelbin.
[0475] Primeri lekova koji su otrovi za topoizomerazu uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: tenipozid, etopozid, adriamicin, kamptotecin, daunorubicin, daktinomicin, mitoksantron, amsakrin, epirubicin i idarubicin.
[0476] Primeri taksana ili taksanskih derivata uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: paklitaksel i docetaksol.
[0477] Primeri opštih hemioterapijskih, antineoplastičnih, antiproliferativnih sredstava uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: altretamin (Hexalen); izotretinoin (Accutane; Amnesteem; Claravis; Sotret); tretinoin (Vesanoid); azacitidin (Vidaza); bortezomib (Velcade) asparaginaza (Elspar); levamisol (Ergamisol); mitotan (Lysodren); prokarbazin (Matulane); pegaspargaza (Oncaspar); denileukin diftitoks (Ontak); porfimer (Photofrin); aldesleukin (Proleukin); lenalidomid (Revlimid); beksaroten (Targretin); talidomid (Thalomid); temsirolimus (Torisel); arsen trioksid (Trisenox); verteporfin (Visudyne);
12
mimozin (Leucenol); (1M tegafur - 0.4 M 5-hloro-2,4-dihidroksipirimidin - 1M kalijum oksonat) ili lovastatin.
[0478] U sledećem aspektu, drugo hemioterapijsko sredstvo može biti citokin kao G-CSF (faktor stimulacije kolonija granulocita). U sledećem aspektu, jedinjenje predmetnog pronalaska, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, analog ili derivat, mogu se primeniti u kombinaciji sa radioterapijom. Radijaciona terapija može da se primeni i u kombinaciji sa jedinjenjem predmetnog pronalaska i drugim hemioterapijskim sredstvom opisanim u ovom tekstu, kao deo terapije korišćenjem više sredstava. U još jednom aspektu, jedinjenje predmetnog pronalaska, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, analog ili derivat, mogu se primeniti u kombinaciji sa standardnim hemioterapijskim kombinacijama kao što su, bez ograničavanja, CMF (ciklofosfamid, metotreksat i 5-fluorouracil), CAF (ciklofosfamid, adriamicin i 5-fluorouracil), AC (adriamicin i ciklofosfamid), FEC (5-fluorouracil, epirubicin, i ciklofosfamid), ACT ili ATC (adriamicin, ciklofosfamid, i paklitaksel), rituksimab, kseloda (kapecitabin), cisplatin (CDDP), karboplatin, TS-1 (tegafur, gimestat i otastat kalijum u molarnom odnosu 1:0.4:1), kamptotecin-11 (CPT-11, irinotekan ili Camptosar™), CHOP (ciklofosfamid, hidroksidaunorubicin, onkovin, i prednizon ili prednizolon), R-CHOP (rituksimab, ciklofosfamid, hidroksidaunorubicin, onkovin, prednizon ili prednizolon), ili CMFP (ciklofosfamid, metotreksat, 5-fluorouracil i prednizon).
[0479] U poželjnim primerima izvođenja, jedinjenje predmetnog pronalaska, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, polimorf ili solvat, mogu se primeniti sa inhibitorom enzima kao što je receptorska ili nereceptorska kinaza. Receptorske ili nereceptorske kinaze su, na primer, tirozin kinaze ili serin/treonin kinaze. Kinazni inhibitori opisani u ovom tekstu su mali molekuli, polinukleinske kiseline, polipeptidi, ili antitela.
[0480] Primeri kinaznih inhibitora uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: bevacizumab (cilja VEGF), BIBW 2992 (cilja EGFR i Erb2), cetuksimab/erbituks (cilja Erb1), imatinib/gleevik (cilja Bcr-Abl), trastuzumab (cilja Erb2), gefitinib/iressa (cilja EGFR), ranibizumab (cilja VEGF), pegaptanib (cilja VEGF), erlotinib/tarceva (cilja Erb1), nilotinib (cilja Bcr-Abl), lapatinib (cilja Erb1 i Erb2/Her2), GW-572016/lapatinib ditozilat (cilja HER2/Erb2), panitumumab/vektibiks (cilja EGFR), vandetinib (cilja RET/VEGFR), E7080 (ima više ciljeva uključujući RET i VEGFR), herceptin (cilja HER2/Erb2), PKI-166 (cilja EGFR), kanertinib/CI-1033 (cilja EGFR), sunitinib/SU-11464/sutent (cilja EGFR i FLT3), matuzumab/Emd7200 (cilja EGFR), EKB-569 (cilja EGFR), Zd6474 (cilja EGFR i VEGFR), PKC-412 (cilja VEGR i FLT3), vatalanib/Ptk787/ZK222584 (cilja VEGR), CEP-701 (cilja FLT3), SU5614 (cilja FLT3), MLN518 (cilja FLT3), XL999 (cilja FLT3), VX-322 (cilja FLT3), Azd0530 (cilja SRC), BMS-354825 (cilja SRC), SKI-606 (cilja SRC), CP-690 (cilja
1
JAK), AG-490 (cilja JAK), WHI-P154 (cilja JAK), WHI-P131 (cilja JAK), sorafenib/neksavar (cilja RAF kinazu, VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-β, KIT, FLT-3, i RET), dasatinib/spricel (BCR/ABL i Src), AC-220 (cilja Flt3), AC-480 (cilja sve HER proteine, "panHER"), motesanib difosfat (cilja VEGF1-3, PDGFR, i c-kit), denosumab (cilja RANKL, inhibira SRC), AMG888 (cilja HER3), i AP24534 (ima više ciljeva uključujući Flt3).
[0481] Primeri serin/treonin kinaznih inhibitora uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: rapamune (cilja mTOR/FRAP1), deforolimus (cilja mTOR), certikan/everolimus (cilja mTOR/FRAP1), AP23573 (cilja mTOR/FRAP1), eril/fasudil hidrohlorid (cilja RHO), flavopiridol (cilja CDK), seliciklib/CYC202/roskovitrin (cilja CDK), SNS-032/BMS-387032 (cilja CDK), ruboksistaurin (cilja PKC), Pkc412 (cilja PKC), briostatin (cilja PKC), KAI-9803 (cilja PKC), SF1126 (cilja PI3K), VX-680 (cilja Aurora kinazu), Azd1152 (cilja Aurora kinazu), Arry-142886/AZD-6244 (cilja MAP/MEK), SCIO-469 (cilja MAP/MEK), GW681323 (cilja MAP/MEK), CC-401 (cilja JNK), CEP-1347 (cilja JNK), i PD 332991 (cilja CDK).
[0482] Poremećaji u kojima ulogu ima EZH2-posredovana metilacija proteina mogu biti neurološka oboljenja. Jedinjenja predmetnog pronalaska se, prema tome, mogu koristiti i za lečenje ili izučavanje neuroloških oboljenja kao što su epilepsija, šizofrenija, bipolarni poremećaj ili drugi pshološki i/ili psihijatrijski poremećaji, neuropatije, atrofija skeletnih mišića, i neurodegenerativne bolesti, npr., neka neurodegenerativna bolest. Primeri neurodegenerativnih bolesti uključuju sledeće: Alzheimerova, amiotrofična lateralna skleroza (ALS), i Parkinsonova bolest. Druga klasa neurodegenerativnih bolesti uključuje bolesti koje su bar delom prouzrokovane agregacijom poliglutamina. Bolesti ove klase uključuju sledeće: Huntingtonova bolest, spinolbulbarna mišićna atrofija (SBMA ili Kennedyijeva bolest) dentatorubropalidoluizijanska atrofija (DRPLA), spinocerebelarna ataksija 1 (SCA1), spinocerebelarna ataksija 2 (SCA2), Machado-Josephova bolest (MJD; SCA3), spinocerebelarna ataksija 6 (SCA6), spinocerebelarna ataksija 7 (SCA7), i spinocerebelarna ataksija 12 (SCA12).
[0483] Bilo koja druga bolest u kojoj ulogu ima epigenetička metilacija posredovana EZH2, može se lečiti ili prevenirati korišćenjem jedinjenja i metoda opisanih u ovom tekstu, ili te bolesti i njihovo moguće lečenje mogu da se izučavaju jedinjenjima opisanim u ovom tekstu.
4. Farmaceutske smeše
1 1
[0484] Predmetna objava obezbeđuje i farmaceutske smeše koje sadrže jedinjenje bilo koje od Formula objavljenih u ovom tekstu, u kombinaciji sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim ekscipijentom ili nosačem.
[0485] "Farmaceutska smeša" je formulacija koja sadrži jedinjenja predmetnog pronalaska u formi pogodnoj za primenu kod subjekta. U jednom primeru izvođenja, farmaceutska smeša je u masi ili u jediničnoj doznoj formi. Jedinična dozna forma je bilo koja vrsta forme, uključujući, na primer, kapsulu, IV kesicu, tabletu, pojedinačnu pumpu na aerosolnom inhalatoru ili fiolu. Količina aktivnog sastojka (npr., formulacija objavljenog jedinjenja ili njegove soli, hidrata, solvata ili izomera) u jediničnoj dozi smeše je efikasna količina i varira u skladu sa određenim tretmanom o kojem je reč. Stručnjak u oblasti će prepoznati da je ponekad neophodno napraviti rutinske varijacije u doziranju u zavisnosti od starosti i stanja pacijenta. Doza će zavisiti i od puta primene. U vidu se imaju različiti putevi uključujući oralni, pulmonalni, rektalni, parenteralni, transdermalni, potkožni, intravenski, intramuskularni, intraperitonealni, inhalacioni, bukalni, sublingvalni, intrapleuralni, intratekalni, intranazalni, i slično. Dozne forme za površinsku ili transdermalnu primenu jedinjenja ovog pronalaska uključuju praškove, sprejove, masti, paste, kremove, losione, gelove, rastvore, flastere i inhalante. U jednom primeru izvođenja, aktivno jedinjenje se meša pod sterilnim uslovima sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, i nekim od prezervansa, pufera, ili propelanata koji su potrebni.
[0486] Kako se koristi u ovom tekstu, fraza "farmaceutski prihvatljiv" odnosi se na ona jedinjenja, anjone, katjone, materijale, smeše, nosače i/ili dozne forme koji su u okvirima opšte medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima čoveka i životinja bez izazivanja preterane toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora, ili drugih problema ili komplikacija, u srazmeri sa razumnim odnosom korist/rizik.
[0487] "Farmaceutski prihvatljivi ekscipijent" označava ekscipijent koji je koristan za pripremanje farmaceutske smeše, koji je uopšteno bezbedan, netoksičan i nije biološki niti na drugi način nepoželjan, i uključuje ekscipijent koji je prihvatljiv za veterinarsku upotrebu kao i za farmaceutsku upotrebu kod ljudi. "Farmaceutski prihvatljivi ekscipijent" kako se koristi u opisu i zahtevima uključuje jedan i više od jednog takvog ekscipijenta.
[0488] Farmaceutska smeša formulisana je tako da bude kompatibilna sa putem primene kojem je namenjena. Primeri puteva primene uključuju parenteralni, npr., intravenski, intradermalni, potkožni, oralni (npr., inhalacija), transdermalni (površinski), i transmukozni put primene. Rastvori ili suspenzije koji se koriste za parenteralnu, intradermalnu, ili potkožnu primenu mogu uključivati sledeće komponente: sterilni razblaživač kao što je voda za injekcije, slani rastvor, neisparljiva ulja, polietilen glikole, glicerin, propilen glikol ili
1 2
druge sintetske rastvarače; antibakterijska sredstva kao što su benzil alkohol ili metil parabeni; antioksidante kao što su askorbinska kiselina ili natrijum bisulfit; helirajuća sredstva kao što je etilendiamintetrasirćetna kiselina; pufere kao što su acetati, citrati ili fosfati, i sredstva za podešavanje toničnosti kao što su natriju hlorid ili dekstroza. pH može da se podesi kiselinama ili bazama, kao što su hlorovodonična kiselina ili natrijum hidroksid. Parenteralni preparati mogu biti zatvoreni u ampule, jednokratne špriceve ili višedozne fiole od stakla ili plastike.
[0489] Jedinjenje ili farmaceutska smeša objave može da se primeni kod subjekta na mnogo poznatih načina koji se danas koriste za hemioterapijsko lečenje. Na primer, za lečenje kancera, jedinjenje pronalaska može da se injektira direktno u tumore, da se injektira u krvotok ili telesne duplje ili da se uzima oralno ili nanosi preko kože, flasterima. Odabrana doza biće dovoljna za uspostavljanje efikasnog lečenja, ali ne toliko visoka da dovede do neprihvatljivih sporednih efekata. Stadijum stanja bolesti (npr., kancer, prekancer, i slično) i zdravlje pacijenta trebalo bi detaljno pratiti tokom lečenja i tokom razumnog perioda posle lečenja.
[0490] Izraz "terapijski efikasna količina", kako se koristi u ovom tekstu, odnosi se na količinu farmaceutskog sredstva za lečenje, ublažavanje ili prevenciju identifikovane bolesti ili stanja, ili za ispoljavanje detektabilnog terapijskog ili inhibitornog efekta. Efekat može da se detektuje bilo kojim testnim metodom poznatim u struci. Precizna efikasna količina za subjekta zavisiće od subjektove telesne težine, veličine i zdravlja; prirode i obima stanja; i terapeutika ili kombinacije terapeutika odabranih za primenu. Terapijski efikasne količine za datu situaciju mogu se odrediti rutinskom eksperimentacijom koja je u okvirima obučenosti i procene kliničara. U poželjnom aspektu, bolest ili stanje koje se leči je kancer. U sledećem aspektu, bolest ili stanje koje se leči je ćelijski proliferativni poremećaj.
[0491] Za svako jedinjenje, terapijski efikasna količina može na početku da se proceni u testovima na kulturi ćelija, npr., neoplastičnih ćelija ili u animalnim modelima, obično pacovima, miševima, zečevima, psima ili svinjama. Animalni model može da se koristi i za određivanje pogodnog opsega koncentracije i puta primene. Takva informacija može zatim da se koristi da bi se odredile korisne doze i putevi primene kod ljudi. Terapijska/profilaktička efikasnost i toksičnost mogu da se odrede standardnim farmaceutskim postupcima u ćelijskim kulturama ili eksperimentalnim životinjama, npr., ED50(doza koja je terapijski efikasna u 50% populacije) i LD50(doza koja je letalna za 50% populacije). Dozni odnos između toksičnih i terapijskih efekata je terapijski indeks, i on može da se izrazi kao odnos, LD50/ED50. Poželjne su farmaceutske smeše koje ispoljavaju velike terapijske indekse.
1
Doziranje može varirati u ovom opsegu zavisno od upotrebljene dozne forme, osetljivosti pacijenta, i puta primene.
[0492] Doziranje i primena podešavaju se tako da obezbede dovoljne nivoe aktivnog sredstva/sredstava ili da održe željeni efekat. Faktori koji se uzimaju u obzir uključuju jačinu bolesti, opšte stanje zdravlja subjekta, starost, težinu i pol subjekta, način ishrane, vreme i frekvenciju primene, kombinacije lekova, reakciju osetljivosti, i toleranciju/odgovor na terapiju. Farmaceutske smeše dugog dejstva mogu da se primenjuju svaka 3 do 4 dana, svake nedelje, ili jednom svake dve nedelje zavisno od poluživota i stope klirensa određene formulacije.
[0493] Farmaceutske smeše koje sadrže aktivna jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da se izrade na način koji je opšte poznat, npr., postupcima konvencionalnog mešanja, razblaživanja, granulacije, pravljenja dražeja, levigacije, emulgovanja, inkapsulisanja, zarobljavanja ili liofilizovanja. Farmaceutske smeše mogu da se formulišu na konvencionalan način korišćenjem jednog ili više farmaceutski prihvatljivih nosača koji sadrže ekscipijente i/ili pomoćna sredstva koja olakšavaju procesovanje aktivnih jedinjenja u preparatima koji mogu da se koriste farmaceutski. Naravno, odgovarajuća formulacija zavisi od odabranog puta primene.
[0494] Farmaceutske smeše pogodne za upotrebu injektiranjem uključuju sterilne vodene rastvore (kada su rastvorljive u vodi) ili disperzije i sterilne praškove za trenutnu pripremu sterilnih injektabilnih rastvora ili disperzija. Za intravensku primenu, pogodni nosači uključuju fiziološki slani rastvor, bakteriostatsku vodu, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, N.J.) ili fosfatom puferisani slani rastvor (PBS). U svim slučajevima, smeša mora biti sterilna i treba da bude fluidna toliko da se lako ušpricava. Mora biti stabilna pod uslovima izrade i skladištenja i mora biti zaštićena od kontaminirajućeg dejstva mikroorganizama kao što su bakterije i gljivice. Nosač može biti rastvarački ili disperzioni medijum koji sadrži, na primer, vodu, etanol, poliol (na primer, glicerol, propilen glikol, i tečni polietilen glikol, i slično), i njihove pogodne mešavine. Dobra fluidnost može da se održi, na primer. upotrebom omotača kao što je lecitin, održavanjem željene veličine čestica u slučaju disperzije i upotrebom surfaktanata. Prevencija delovanja mikroorganizama može se postići različitim antibakterijskim i antigljivičnim sredstvim, na primer, parabenima, hlorobutanolom, fenolom, askorbinskom kiselinom, timerozalom i slično. U mnogim slučajevima, poželjno je u smešu uključiti izotonična sredstva, na primer, šečere, polialkohole kao što su manitol i sorbitol, i natrijum hlorid. Produžena apsorpcija injektabilnih smeša može da se postigne uključivanjem u smešu sredstva koje će odložiti apsorpciju, na primer, aluminijum monostearata i želatina.
1 4
[0495] Sterilni injektabilni rastvori mogu da se pripreme inkorporisanjem aktivnog jedinjenja u željenoj količini u odgovarajući rastvarač, sa jednim ili kombinacijom sastojaka navedenih gore, po potrebi, što je praćeno sterilizujućom filtracijom. Uopšteno, disperzije se pripremaju inkorporisanjem aktivnog jedinjenja u sterilni prenosnik koji sadrži bazni disperzioni medijum i druge potrebne sastojke od gore navedenih. U slučaju sterilnih praškova za pripremanje sterilnih injektabilnih rastvora, metodi pripreme su sušenje u vakuumu i sušenje zamrzavanjem čime se dobija praškasti aktivni sastojak i bilo koji dodatni željeni sastojak, iz njegovog prethodno sterilno filtriranog rastvora.
[0496] Oralne smeše obično uključuju inertni razblaživač ili jestivi farmaceutski prihvatljivi nosač. One mogu biti zatvorene u želatinske kapsule ili komprimovane u tablete. Za oralnu terapijsku primenu, aktivno jedinjenje može da se inkorporiše sa ekscipijentom i koristi u vidu tableta, troheja, ili kapsula. Oralne smeše mogu da se pripreme i korišćenjem fluidnog nosača za upotrebu u vidu vodice za ispiranje usta, pri čemu se jedinjenje u tečnom nosaču primenjuje oralno i progrgoće i ispljune ili proguta. Farmaceutski kompatibilna vezujuća sredstva i/ili adjuvansni materijali mogu biti uključeni kao deo smeše. Tablete, pilule, kapsule, troheje i slično mogu sadržati bilo koji od sledećih sastojaka ili jedinjenja slične prirode: povezivač kao što su mikrokristalna celuloza, tragantova guma ili želatin; ekscipijent kao što su skrob ili laktoza, dezintegrišuće sredstvo kao što je alginska kiselina, Primogel, ili kukuruzni skrob; lubrikant kao što su magnezijum stearat ili Sterotes; glidans kao što je koloidni silicijum dioksid; zaslađivač kao što su saharoza ili saharin; ili sredstvo za poboljšanje ukusa kao što su pepermint, metil salicilat ili ukus pomorandže.
[0497] Za primenu inhalacijom, jedinjenja se dostavljaju u vidu aerosolnog spreja iz kontejnera pod pritiskom ili dispenzera koji sadrži pogodni propelant, npr., gas kao ugljen dioksid, ili pomoću nebulizera.
[0498] Sistemska primena može biti i transmukoznim ili transdermalnim načinom. Za transmukoznu ili transdermalnu primenu, u formulaciji se koriste penetranti pogodni za barijeru koja treba da se prođe. Takvi penetranti su opšte poznati u struci i uključuju, na primer, za transmukoznu primenu, deterdžente, žučne soli, i derivate fuzidinske kiseline. Transmukozna primena može da se obavi upotrebom nazalnog spreja ili supozitorija. Za transdermalnu primenu, aktivna jedinjenja se formulišu u masti, meleme, gelove ili kremove, kako je opšte poznato u struci.
[0499] Aktivna jedinjenja mogu da se pripreme sa farmaceutski prihvatljivim nosačima koji će zaštititi jedinjenje od brze eliminacije iz tela, na primer u vidu formulacija sa kontrolisanim oslobađanjem, uključujući implante i mikroinkapsulirane dostavne sisteme. Mogu se koristiti biodegradabilni, biokompatibilni polimeri kao što su etilen vinil acetat, polianhidridi,
1
poliglikolna kiselina, kolagen, poliortoestri, i polilaktična kiselina. Metodi pripreme takvih formulacija biće jasni stručnjaku u oblasti. Materijali mogu da se nabave i komercijalno od Alza Corporation i Nova Pharmaceuticals, Inc. Lipozomske suspenzije (uključujući lipozome koji monoklonskim antitelima na virusne antigene ciljaju inficirane ćelije) takođe mogu da se koriste kao farmaceutski prihvatljivi nosači. Mogu se pripremiti prema metodima poznatim stručnjacima u oblasti, na primer kako je opisano u U.S. pat. br.4,522,811.
[0500] Posebno je poželjno formulisati oralne ili parenteralne smeše u doznu jediničnu formu zbog lakše primene i uniformnosti doziranja. Jedinična dozna forma kako se ovde koristi označava fizički zasebne jedinice pripremljene kao jedinične doze za subjekta koji se leči; svaka jedinica sadrži prethodno određenu količinu aktivnog jedinjenja za koju je izračunato da proizvodi željeni terapijski efekat, zajedno sa potrebnim farmaceutskim nosačem. Specifikacija jedinične dozne forme diktirana je i direktno zavisna od jedinstvenih karakteristika aktivnog jedinjenja i određenog terapijskog efekta koji treba da se postigne.
[0501] U terapijskim primenama, doze farmaceutskih smeša upotrebljenih u skladu sa pronalaskom variraju zavisno od sredstva, starosti, težine i kliničkog stanja pacijenta primaoca, i iskustva i procene kliničara ili praktičara koji primenjuje terapiju, pored ostalih faktora koji utiču na izbor doze. Obično, doza će biti dovoljna da za rezultat ima usporavanje i poželjno regresiju rasta tumora i takođe poželjno dovede do potpune regresije kancera. Doza može biti u opsegu od oko 0.01 mg/kg na dan do oko 5000 mg/kg na dan. U poželjnim aspektima, doza može biti u opsegu od oko 1 mg/kg na dan do oko 1000 mg/kg na dan. U aspektu, doza će biti u opsegu od oko 0.1 mg/dan do oko 50 g/dan; oko 0.1 mg/dan do oko 25 g/dan; oko 0.1 mg/dan do oko 10 g/dan; oko 0.1 mg do oko 3 g/dan; ili oko 0.1 mg do oko 1 g/dan, u jednoj, podeljenoj ili kontinuiranoj dozi (koja se može podesiti prema pacijentovoj težini u kg, površini tela u m<2>, i starosti u godinama). Efikasna količina farmaceutskog sredstva je ona koja obezbeđuje poboljšanje koje objektivno može da se identifikuje od strane kliničara ili drugog kvalifikovanog posmatrača. Na primer, regresija tumora kod pacijenta može da se meri u odnosu na dijametar tumora. Smanjenje dijametra tumora ukazuje na regresiju. Na regresiju ukazuje i izostanak ponovne pojave tumora posle završetka lečenja. Kako se ovde koristi, izraz "dozno efikasan način" odnosi se na količinu aktivnog jedinjenja za proizvođenje željenog biološkog efekta kod subjekta ili na ćeliji.
[0502] Farmaceutska smeša se može nalaziti u kontejneru, pakovanju, ili dispenzeru, zajedno sa uputstvom za upotrebu.
[0503] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da dodatno formiraju soli. Sve ove forme su takođe obuhvaćene okvirom zahtevanog pronalaska.
1
[0504] Kako se koristi u ovom tekstu, "farmaceutski prihvatljive soli" odnosi se na derivate jedinjenja predmetnog pronalaska gde je matično jedinjenje modifikovano pravljenjem njegove kisele ili bazne soli. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli uključuju, ali se ne ograničavaju na soli mineralnih ili organskih kiselina baznih rezidua kao što su amini, alkalne ili organske soli kiselih rezidua kao što su karboksilne kiseline, i slično. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju konvencionalne netoksične soli ili kvaternarne amonijum soli matičnog jedinjenja formirane na primer, od netoksičnih neorganskih ili organskih kiselina. Na primer, takve konvencionalne netoksične soli uključuju, ali se ne ograničavaju na one koje su izvedene iz neorganskih i organskih kiselina odabranih između sledećih: 2-acetoksibenzoeva, 2-hidroksietan sulfonska, sirćetna, askorbinska, benzen sulfonska, benzoeva, bikarbonska, karbonska, limunska, edetinska, etanska disulfonska, 1,2-etan sulfonska, fumarna, glukoheptonska, glukonska, glutaminska, glikolna, glikoliarsanilna, heksilrezorcinska, hidrabamična, bromovodonična, hlorovodonična, jodovodonična, hidroksimaleinska, hidroksinaftoinska, izetionska, mlečna, laktobionska, lauril sulfonska, maleinska, malična, mandelična, metan sulfonska, napsilična, azotna, oksalna, pamoinska, pantotenska, fenilsirćetna, fosforna, poligalakturonska, propionska, salicilna, stearinska, subsirćetna, sukcinična, sulfaminska, sulfanilna, sumporna, taninska, tartaratna, toluen sulfonska, i česte amino-kiseline, npr., glicin, alanin, fenilalanin, arginin, itd.
[0505] Drugi primeri farmaceutski prihvatljivih soli uključuju heksansku kiselinu, ciklopentan propionsku kiselinu, piruvičnu kiselinu, malonsku kiselinu, 3-(4-hidroksibenzoil)benzoevu kiselinu, cinaminsku kiselinu, 4-hlorobenzensulfonsku kiselinu, 2-naftalensulfonsku kiselinu, 4-toluensulfonsku kiselinu, kamforsulfonsku kiselinu, 4-metilbiciklo-[2.2.2]-okt-2-en-1-karboksilnu kiselinu, 3-fenilpropionsku kiselinu, trimetilsirćetnu kiselinu, terciajrnu butilsirćetnu kiselinu, mukonsku kiselinu, i slično. Predmetni pronalazak obuhvata i soli koje se formiraju kada je kiselinski proton prisutan u matičnom jedinjenju zameni jonom metala, npr., jonom alkalnog metala, jonom zemnoalkalnog metala ili jonom aluminijuma; ili koordinira sa organskom bazom kao što su etanolamin, dietanolamin, trietanolamin, trometamin, N-metilglukamin, i slično. U formi soli, podrazumeva se da odnos jedinjenja prema katjonu ili anjonu soli može biti 1:1, ili bilo koji drugi odnos različit od 1:1, npr., 3:1,2:1, 1:2, ili 1:3.
[0506] Treba razumeti da sva pozivanja na farmaceutski prihvatljive soli uključuju adicione forme sa rastvaračem (solvate) ili kristalne forme (polimorfe), kako je ovde definisano, iste soli.
[0507] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da se pripreme i kao estri, na primer, farmaceutski prihvatljivi estri. Na primer, karboksilnokiselinska funkcionalna grupa u
1
jedinjenju može da se konvertuje u svoj odgovarajući estar, npr., metil, etil ili drugi estar. Isto tako, alkoholna grupa u jedinjenju može da se konvertuje u svoj odgovarajući estar, npr., acetat, propionat ili drugi estar.
[0508] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da se pripreme i kao prolekovi, na primer, farmaceutski prihvatljivi prolekovi. Izrazi "pro-lek" i "prolek" koriste se naizmenično u ovom tekstu i označavaju svako jedinjenje koje oslobađa aktivni matični lek in vivo. Pošto je poznato da prolekovi pojačavaju brojne željene kvalitete farmaceutskih sredstava (npr., rastvorljivost, bioraspoloživost, izradu, itd.), jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da se dostave u vidu proleka. "Prolek" uključuje svaki kovalentno povezani nosač koji oslobađa aktivni matični lek predmetnog pronalaska in vivo kada se taj prolek primeni kod subjekta. Prolekovi u predmetnom pronalasku pripremaju se modifikovanjem funkcionalnih grupa prisutnih u jedinjenju na takav način da se modifikacije odsecaju ili rutinskom manipulacijom ili in vivo, do matičnog jedinjenja. Prolekovi uključuju jedinjenja predmetnog pronalaska u kojima je hidroksi, amino, sulfhidril, karboksi ili karbonil grupa vezana za bilo koju grupu koja može da se odseče in vivo da se formira slobodna hidroksil, slobodna amino, slobodna sulfhidril, slobodna karboksi ili slobodna karbonil grupa, respektivno.
[0509] Primeri prolekova uključuju, ali se ne ograničavaju na estre (npr., acetatne, dialkilaminoacetatne, formatne, fosfatne, sulfatne i benzoatne derivate) i karbamate (npr N,N-dimetilaminokarbonil) hidroksi finkcionalnih grupa, estre (npr., etil estre, morfolinoetanol estre) karboksilnih funkcionalnih grupa, N-acil derivate (npr., N-acetil) N-Mannichove baze, Schiffove baze i enaminone amino funkcionalnih grupa, oksime, acetale, ketale i enol estre ketonskih i aldehidnih funkcionalnih grupa u jedinjenjima pronalska i slično, vidi Bundegaard, H., Design of Prodrugs, p1-92, Elesevier, New York-Oxford (1985).
[0510] Jedinjenja ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, estri ili prolekovi, primenjuju se oralno, nazalno, transdermalno, pulmonalno, inhalaciono, bukalno, sublingvalno, intraperintonealno, potkožno, intramuskularno, intravenski, rektalno, intrapleuralno, intratekalno i parenteralno. U jednom primeru izvođenja, jedinjenje se primenjuje oralno. Stručnjak u oblasti prepoznaće prednosti određenih puteva primene.
[0511] Dozni režim u kojem se koriste jedinjenja bira se prema različitim faktorima uključujući tip, vrstu, starost, težinu, pol, i medicinsko stanje pacijenta; jačinu stanja koje se leči; put primene; funkciju bubrega i jetre pacijenta; i određeno upotrebljeno jedinjenje ili njegovu so. Prosečno obučeni lekar ili veterinar lako će odrediti i prepisati efikasnu količinu leka potrebnu za prevenciju, suprotstavljanje, ili zaustavljanje progresije stanja.
[0512] Tehnike formulisanja i primene objavljenih jedinjenja pronalaska mogu se naći u Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, Mack Publishing Co.,
1
Easton, PA (1995). U primeru izvođenja, jedinjenja opisana u ovom tekstu, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, koriste se u farmaceutskim preparatima u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem ili razblaživačem. Pogodni farmaceutski prihvatljivi nosači uključuju inertne čvrste potporne supstance ili razblaživače i sterilne organske ili vodene rastvore. Jedinjenja će u takvim farmaceutskim smešama biti prisutna u količini dovoljnoj da obezbede željenu doznu količinu u ovde opisanom opsegu.
[0513] Svi procenti i odnosi upotrebljeni ovde, ako nije drugačije navedeno, izraženi su po težini. Druge osobine i prednosti predmetnog pronalaska uočljive su na osnovu različitih primera. Dati primeri ilustruju različite komponente i metodologiju korisnu u primeni predmetnog pronalaska. Primeri ne ograničavaju zahtevani pronalazak. Na osnovu predmetne objave obučeni stručnjak može da identifikuje i koristi druge komponente i metodologiju korisnu za izvođenje predmetnog pronalaska.
[0514] U sintetskim šemama opisanim u ovom tekstu, jedinjenja mogu biti prikazana u jednoj određenoj konfiguraciji, zbog pojednostavljenja. Takve određene konfiguracije ne treba razumeti kao ograničenja pronalaska na jedan ili drugi izomer, tautomer, regioizomer ili stereoizomer, ni isključivanje mešavine izomera, tautomera, regioizomera ili stereoizomera; međutim, podrazumeva se da dati izomer, tautomer, regioizomer ili stereoizomer može imati viši nivo aktivnosti nego neki drugi izomer, tautomer, regioizomer ili stereoizomer.
[0515] Dizajnirana jedinjenja, odabrana i/ili optimizovana metodima opisanim ranije u ovom tekstu, kada se proizvedu, mogu da se okarakterišu korišćenjem različitih testova poznati stručnjacima u oblasti, da bi se odredilo da li ta jedinjenja imaju biološku aktivnost. Na primer, molekuli mogu da se okarakterišu konvencionalnim testovima, uključujući, ali ne ograničavajući se na testove koji su opisani u nastavku ovog teksta, da bi se odredilo da li imaju pretpostavljenu aktivnost, vezujuću aktivnost i/ili vezujuću specifičnost.
[0516] Pored toga, visokopropusni skrining može da se koristi za ubrzanje analize takvim testovima. Kao rezultat moguće je izvršiti brzi skrining molekula opisanih u ovom tekstu u pogledu aktivnosti, korišćenjem tehnika poznatih u struci. Opšte metodologije za izvođenje visokopropusnog skrininga opisane su, na primer, u Devlin (1998) High Throughput Screening, Marcel Dekker; i U.S. Patent br.5,763,263. Visokopropusni testovi mogu koristiti jednu ili više različitih testnih tehnika uključujući, ali ne ograničavaući se na dole opisane.
[0517] Pronalazak je opisan ovim tekstom. Stručnjak u oblasti će prepoznati da pronalazak može da se primeni u različitim primerima izvođenja i da su gornji opis i naredni primeri dati radi ilustracije, a ne da bi predstavljali ograničenje patentnih zahteva koji slede.
5. Primeri
1
Opšti eksperimentalni postupci
NMR
[0518] 1H-NMR spektri dobijaju se korišćenjem CDCl3ako nije drugačije navedeno i beleže se na 400 ili 500 MHz korišćenjem Varian ili Oxford instruments magnet (500 MHz) instrumenata. Navedeni multipliciteti su s = singlet, d = dublet, t = triplet, q = kv, quint = kvintet, sxt = sekstet, m = multiplet, dd =dublet dubleta, dt = dublet tripleta; br označava široki signal.
LCMS i HPLC
[0519] Shimadzu LC-Q, Shimadzu LCMS-2010EV ili Waters Acquity Ultra Performance LC. HPLC: Proizvodi se analiziraju pomoću Shimadzu SPD-20A sa 150 x 4.5 mm YMC ODS-M80 kolonom ili 150 x 4.6 mm YMC-Pack Pro C18 kolonom pri 1.0 ml/min.
[0520] Mobilna faza je MeCN:H2O=3:2 (sadrži 0.3% SDS i 0.05% H3PO4), 0.05% TFA u vodi, 0.05% TFA u acetonitrilu (gradijent inicijalno 20%, zatim 0.05%TFA/MeCN do konc. do 95% za 3 min. zadržavanje 0.5 min. na 3.51 do 4.50 min zatim 0.05%TFA/MeCN konc.
20%).
[0521] Alternativno LCMS, 2 različita metoda se koriste; jedan koji se najviše koristi je visoki pH (METCR1600) i drugi je za standardnija jedinjenja (METCR1416).
[0522] 0.1% mravlja kiselina u vodi - mobilna faza "A" 0.1% mravlja kiselina u acetonitrilu -mobilna faza "B" koristi Waters Atlantis dC18, 2.1 mm x 100 mm, 3 μm kolonu, uz stopu protoka = 0.6 ml/min, temperatura kolone = 40 °C; vreme (min) %B 0.00 min 5% B.5.0 min 100% B, 5.4 min 100% B i .42 min 5%B
[0523] 3.5-minutni metod odnosi se na Atlantis dC18, 2.1 mm x 50 mm, 3 μm kolonu, stopa protoka 1 ml/min na 40 ºC. Mobilna faza A mravlja kiselina (aq.) 0.1% mobilna faza B mravlja kiselina (MeCN) 0.1%, injektiranje 3 μL, gradijent 0 min (5% organsko), 2.5 min (100% organsko), 2.7 min (100% organsko), 2.71 min (5% organsko), 3.5 min (5% organsko)
[0524] 7.0-minutni metod odnosi se na Atlantis dC18, 2.1 mm x 100 mm, 3 μm kolonu, stopa protoka 0.6 ml/min na 40C. Mobilna faza A mravlja kiselina (aq.) 0.1% mobilna faza B mravlja kiselina (MeCN) 0.1%, injektiranje 3 μL, gradijent 0 min (5% organsko), 5 min (100% organsko), 5.4 min (100% organsko), 5.42 min (5% organsko), 7 min (5% organsko)
14
[0525] I 3.5- i 7-minutni metod izvode se na MS18 Shimadzu LCMS-2010EV ili MS19 Shimadzu LCMS-2010EV sistemu koji koristi LC-20AB pumpe i SPD-M20A PDA detektore.
[0526] Proizvodi se prečišćavaju pomoću HPLC/MS, korišćenjem Waters AutoPurification System sa 3100 masenim detektorom.
[0527] HPLC analize mogu da se izvode i na Shimdazu LC-2010 CHT korišćenjem YMC ODS-A, C18, (150x4.6x 5μm) kolone na ambijentalnoj temperaturi uz stopu protoka 1.4 ml/min. Koristi se injekciona zapremina od 10 μl i detekcija se vrši putem UV/PDA. Mobilna faza A je 0.05% TFA u vodi i mobilna faza B je 0.05% TFA u acetonitrilu sa programom za gradijent inicijalno 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, pri 9.51 do 12 min B. konc. 0.5%. Razblaživač je mobilna faza
[0528] Drugo
[0529] Automatizovana fleš hromatografija na koloni izvodi se na Biotage Izolera version 4.
10 g SNAP punjenje radi pri 12 ml/min ili 25g SNAP punjenje radi pri 25 ml/min i detektovanje je na 254 nm i 280 nm.
[0530] Odabrane redukcije nitrila mogu da se izvode na ThalesNano H-Cube® prema uslovima opisanim u eksperimentalnom postupku.
Primer 1: Sinteza Jedinjenja 1: 5-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0531]
Korak 1: 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoeva kiselina
[0532]
[0533] U mešani rastvor 2-metil-3-nitrobenzoeve kiseline (50 g, 276.2 mmol) u konc. H2SO4(200 mL), doda se u porcijama 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindion (43.4 g, 151.8 mmol) na sobnoj temperaturi i reakciona masa se meša na sobnoj temperaturi 5 h. Po završetku, reakciona masa se sipa na ledeno hladnu vodu, čvrsti precipitat se filtrira, dobijena rezidua se ispere vodom i suši pod vakuumom dajući željeno jedinjenje (71.7 g, 100%).
Korak 2: Sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata
[0534]
[0535] U mešani rastvor 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoeve kiseline (287 g, 1103 mmol) u DMF (150 mL), dodaju se natrijum karbonat (468 g, 4415 mmol) i metil jodid (626.63 g, 4415 mmol). Dobijena reakciona masa se zagreva na 60 °C, 8 h. Po završetku, čvrsti precipitat se filtrira, rezidua se ispere dietil etrom (5 puta). Kombinovani organski slojevi se suše, koncentruju pod sniženim pritiskom dajući željeno sirovo jedinjenje (302 g, 99%).
Korak 3: metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoat
[0536]
[0537] U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata (150 g, 544 mmol) u etanolu (750 mL), dodaju se amonijum hlorid (150 g, 2777 mmol) rastvoren u vodi (750 mL) i gvožđe u prahu (93.3 g, 1636 mmol), uz mešanje. Dobijena reakciona masa se zagreva na 80 °C, 7 h.
Po završetku, reakciona masa se filtrira kroz celit uz ispiranje vodom i etil acetatom, filtrat se ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani organski slojevi se suše, koncentruju pod sniženim pritiskom dajući željeno jedinjenje.
Korak 4: metil 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-2-metilbenzoat
[0538]
[0539] U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (0.3 g, 1.33 mmol) i ciklopentanona (0.56 g, 6.6 mmol) u metanolu (3 mL), doda se sirćetna kiselina (0.159 g, 2.6 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 3 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (0.208 g, 3.3 mmol) i reakcija se meša preko noći. Po završetku, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom dajući željeno jedinjenje.
Korak 5: metil 5-bromo-3-(ciklopentil(metil)amino)-2-metilbenzoat
[0540]
[0541] U mešani rastvor sirovog metil 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-2-metilbenzoata (0.7 g, 2.25 mmol) u acetonitrilu (15 mL), dodaju se cezijum karbonat (1.47 g, 4.50 mmol) i metil jodid (1.6 g, 11.26 mmol); dobijena reakciona masa se zagreva na 80 °C 7 h. Po završetku, reakciona masa se ohladi na sobnu temperaturu i filtrira, rezidua se ispere etil acetatom i filtrat se koncentruje i zatim prečisti hromatografijom na koloni da se dobije željeno jedinjenje (0.6 g, 82%).
14
Korak 6: 5-bromo-3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid
[0542]
[0543] Vodeni NaOH (0.11 g, 2.75 mmol) doda se u rastvor metil 5-bromo-3-(ciklopentil(metil)amino)-2-metilbenzoata (0.6 g, 1.8 mmol) u MeOH (1.5 mL) i meša na 60 °C 1 h. Posle završetka reakcije, etanol se ukloni pod sniženim pritiskom i izvede se acidifikacija korišćenjem razblažene HCl do pH 6 i do pH 4 korišćenjem limunske kiseline. Ekstrakcija se obavi etil acetatom. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju da se dobije odgovarajuća kiselina (0.5 g, 87%).
[0544] Kiselina (0.5 g, 1.60 mmol) se zatim rastvori u DMSO (3 mL) i doda se 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (0.49 g, 3.22 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PYBOP (1.25 g, 2.41 mmol) i mešanje se nastavlja preko noći. Po završetku reakcije, reakciona masa se sipa na led da se dobije čvrsta supstanca, ovo se filtrira i ispere acetonitrilom, praćeno etrom da se dobije željeno jedinjenje (0.315 g, 44%).
Korak 7: Sinteza 5-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0545]
[0546] Rastvor 5-bromo-3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 ekv.), (4-formilfenil)boronske kiseline (1.2 ekv.) i Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) u 1,4-dioksanu (4 mL) prečisti se argonom 10 min. Zatim se doda 2 M rastvor Na2CO3(3.6 ekv.) i prečisti se argonom 10 min. Reakciona mešavina se meša na 100 °C 2 h. Posle završetka reakcije, doda se voda i ekstrakcija se obavi korišćenjem DCM. Kombinovani organski slojevi se isperu vodom, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim prritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni, preko silika gela (60-120 veličina okaca) da se dobije željeno jedinjenje (0.1 g, 44%).
Korak 8: Sinteza 5-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropuridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino) metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0547]
[0548] U mešani rastvor 5-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida (0.1 g, 0.212 mmol) i N,N-dimetilamina (0.047 g, 1.06 mmol) u metanolu (3 mL), doda se sirćetna kiselina (0.1 g, 0.21 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 3 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (0.033 g, 0.53 mmol) i reakcija se meša preko noći. Po završetku, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i rezidua se prečisti hromatografijom na koloni, preko silika gela dajući željeno jedinjenje (0.04 g, 37%). LCMS: 501.39 (M 1)<+>; HPLC: 90.78% (@ 254 nm) (Rt;4.171; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μm; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.17 (t, 1H), 7.57 (d, 2H, J=8 Hz), 7.33-7.37 (m, 3H), 7.17 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.27 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.52 (t, 1H, J=7.2 Hz),
14
3.04 (s, 2H), 2.54 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.15 (s, 6H), 2.09 (s, 3H), 1.70-1.72 (m, 2H), 1.61 (m, 2H), 1.43-1.50 (m, 4H).
Primer 2: Sinteza Jedinjenja 2: 5-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0549]
[0550] Rastvor 5-bromo-3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 ekv.), (4-(morfolinometil)fenil)boronske kiseline (1.2 ekv.) i Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) u 1,4-dioksanu (4 mL) prečisti se argonom 10 min. Zatim se doda 2 M rastvor Na2CO3(3.6 ekv.) i prečisti se argonom ponovo 10 min. Reakciona mešavina se meša na 100 °C 2 h. Posle završetka reakcije, doda se voda i ekstrakcija se obavlja korišćenjem DCM. Kombinovani organski slojevi se isperu vodom, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi maaterijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela (veličina sita 60-120) da se dobije željeno jedinjenje (0.02g, 16%). LCMS: 543.22 (M 1)<+>; HPLC: 99.53% (@ 254 nm) (Rt;4.181; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μm; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.17 (t, 1H, J=4.4 Hz), 7.98 (s, 1H), 7.73 (d, 1H, J=7.6 Hz), 7.57 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.37 (s, 2H), 7.17 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.27 (d, 2H, J=4.8 Hz), 3.44-3.57 (m, 7H), 2.54 (s, 3H), 2.32-2.36 (m, 4H), 2.23 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.69-1.72 (m, 2H), 1.61 (m, 2H), 1.43-1.50 (m, 4H).
Primer 3: Sinteza 5-(ciklopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino) metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
14
Korak 1: Sinteza 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
[0552] Vodeni NaOH (0.1 g, 2.5 mmol) doda se u rastvor metil 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-2-metilbenzoata (0.39 g, 1.25 mmol) u MeOH (5 mL) i meša na 60 °C 1 h. Etanol se ukloni pod sniženim pritiskom, i rastvor acidifikuje korišćenjem razblažene HCl do pH 6 i limunske kiseline do pH 4. Proizvod se ekstrahuje etil acetatom i kombinovani organski slojevi se koncentruju da se dobije željena kiselina (0.26 g, 0.82 mmol). Kiselina se rastvori u DMSO (3 mL) i u rastvor se doda 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (0.25 g, 1.68 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PYBOP (0.65 g, 1.26 mmol) i mešanje se nastavlja preko noći. Reakciona mešavina se prelije preko leda da se dobije čvrsta supstanca i ova čvrsta susptanca se sakupi filtracijom i ispere acetonitrilom, što je praćeno etrom da se dobije 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid (0.178 g, 50%).
Korak 2: Sinteza 5-(ciklopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0553] Rastvor 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 ekv.), (4-formilfenil)boronske kiseline (1.2 ekv.) i Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) u 1,4-dioksanu (4 mL) prečisti se argonom 10 min. Zatim se doda 2 M rastvor Na2CO3(3.6 ekv.) i prečisti se argonom ponovo 10 min. Reakciona mešavina se meša na 100 °C 2 h. Posle hlađenja do sobne temperature, doda se voda u mešavinu i proizvod se ekstrahuje korišćenjem DCM. Kombinovani organski slojevi se isperu vodom, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi
14
materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela (veličina sita 60-120) da se dobije 5-(ciklopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid.
Korak 3: 5-(ciklopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0554] U mešani rastvor 5-(ciklopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida (0.11 g, 0.24 mmol) i N,N-dimetilamina (0.044 g, 1.2 mmol) u metanolu (3 mL) doda se sirćetna kiselina (0.014 g, 0.24 mmol) i rastvor se meša na sobnoj temperaturi 3 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (0.030 g, 0.48 mmol) i rastvor se meša preko noći. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i rezidua prečisti hromatografijom na koloni, preko silika gela da se dobije željeni 5-(ciklopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
LCMS: 486.21 (M 1)+; HPLC: 99.84% (@ 254 nm) (Rt;4.799; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μm; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.44 (s,1H), 8.02-8.03 (m,1H), 7.62 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.44 (s, 2H), 6.80 (s, 1H), 6.73 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.65 (d, 1H, J=6.4 Hz), 4.27 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.89 (d, 2H, J= 5.2 Hz), 2.49 (7H spojena u piku rastvarača), 1.98-2.19 (m, 11H), 1.55-1.70 (m, 6H).
Primer 4: Sinteza 5-(ciklopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0555]
14
[0556] Rastvor 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 ekv.), (4-(morfolinometil)fenil)boronske kiseline (1.2 ekv.) i Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) u 1,4-dioksanu (4 mL) ) prečisti se argonom 10 min. Zatim se doda 2 M rastvor Na2CO3(3.6 ekv.) i prečisti se argonom ponovo 10 min. Reakciona mešavina se meša na 100 °C 2 h. Posle završetka reakcije, doda se voda i obavi se ekstrakcija korišćenjem DCM. Kombinovani organski slojevi se isperu vodom, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela (veličina sita 60-120) da se dobije 5-(ciklopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid koji se dalje prečišćava korišćenjem preparativne HPLC dajući TFA so.
LCMS: 529.30 (M 1)+; HPLC: 99.46% (@ 254 nm) (Rt;4.782; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μm; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi / B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 ºC; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 9.90 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.72 (d, 2H, J=8 Hz), 7.55 (d, 2H, J=8 Hz), 6.83 (s, 1H), 6.76 (s, 1H), 5.86 (s, 1H),4.37 (s, 2H), 4.27 (d, 2H, J=4 Hz), 3.89-3.98 (m, 3H), 3.28-3.31 (m, 2H), 3.14 (s, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.98-1.99 (m, 2H), 1.70 (s, 2H), 1.55 (s, 4H).
Primer 5: Sinteza 2-(ciklobeks-1-en-1-il)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(4-((dimetilamino) metil)fenil)izonikotinamida
[0557]
Korak 1: Sinteza metil 2-hloro-6-(4-(hidroksimetil)fenil)izonikotinata
14
[0558] Rastvor metil 2,6-dihloroizonikotinata (1 g, 4.85 mmol), boronske kiseline (0.73 g, 4.8 mmol) i PdCl2(PPh3)2(0.15 g, 0.218 mmol) u THF (20 mL) oslobađa se gasa, 15 min. Zatim se doda Cs2CO3i reakciona masa se ponovo prečišćava 10 min. Reakcija se zagreva na 70 °C 2 h. Po završetku, reakciona masa se koncentruje i prečisti hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije metil 2-hloro-6-(4-(hidroksimetil)fenil)izonikotinat (0.45 g, 33%).
Korak 2: Sinteza metil 2-(4-(bromometil)fenil)-6-hloroizonikotinata
[0559] U rastvor metil 2-hloro-6-(4-(hidroksimetil)fenil)izonikotinata (0.67 g, 2.418 mmol) u DCM (10 mL), dodaju se trifenil fosfin (1 g, 3.86 mmol) i ugljen tetrabromid (1.63 g, 3.87 mmol) na 0 °C i reakciona masa se meša preko noći na rt. Po završetku, reakciona masa se koncentruje i prečisti hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije metil 2-(4-(bromometil)fenil)-6-hloroizonikotinat (0.53 g, 64%).
Korak 3: Sinteza metil 2-hloro-6-(4-((dimetilamino)metil)fenil)izonikotinata
[0560] U rastvor metil 2-(4-(bromometil)fenil)-6-hloroizonikotinata (0.533 g, 1.56 mmol) u THF, doda se dimetilamin (7.8 mL, 2M rastvor u THF) i reakciona masa se meša preko noći na rt. Po završetku, reakciona masa se koncentruje i dobijeni sirovi proizvod se prečisti hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije čisti metil 2-hloro-6-(4-((dimetilamino)metil)fenil)izonikotinat (0.48 g, 99%).
Korak 4: Sinteza 2-hloro-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(4-((dimetilamino)metil)fenil) izonikotinamida
[0561] U rastvor metil 2-hloro-6-(4-((dimetilamino)metil)fenil)izonikotinata (0.48 g, 1.578 mmol) u etanolu (5 mL), doda se NaOH (0.094 g, 2.368 mmol), rastvoren u vodi (1 mL), i reakciona masa se zagreva na 60 °C 1 h. Po završetku, rastvarač evaporiše pod sniženim pritiskom. Rezidua se ispere etrom i acidifikuje pomoću IN HCl do pH 8 i zatim limunskom kiselinom do pH 5-6. Vodeni sloj se ekstrahuje korišćenjem 20% MeOH/DCM i kombinovani organski slojevi se koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije kiselina (0.47 g, sirova) koja se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. U rastvor ove kiseline (0.47 g, 1.64 mmol) u DMSO (4 mL), doda se PyBOP (1.26 g, 2.43 mmol) i reakcija se meša na rt 15 min. Zatim se doda 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (0.49 g, 3.28 mmol) i reakcija se meša preko noći. Po završetku, doda se voda i vodeni sloj se ekstrahuje korišćenjem 20%
1
MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se koncentruju i rezidua se prečisti hromatografijom na silika gel koloni da se dobije 2-hloro-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(4-((dimetilamino)metil)fenil)izonikotinamid (0.3 g, 43.6%)
Korak 5: Sinteza 2-(cikloheks-1-en-1-il)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(4-((dimetilamino) metil)fenil)izonikotinamida
[0562] U mešani rastvor 2-hloro-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(4-((dimetilamino) metil)fenil)izonikotinamida (0.11 g, 0.25 mmol), boronske kiseline (0.059 g, 0.27 mmol) u mešavini dioksan/voda (3 mL+1.5 mL), Na2CO3(0.098 g, 3.6 mmol) se doda i i reakciona masa se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.028 g, 0.025 mmol) i prečisti argonom ponovo 10 min. Reakciona masa se zagreva na 100 °C 3 h. Po završetku, reakciona masa se filtrira kroz celit i celitno ležište se ispere etil acetatom. Kombinovani filtrati se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava na koloni preko silika gela da se dobije 2-(cikloheks-1-en-1-il)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(4-((dimetilamino) metil)fenil)izonikotinamid.
Analitički podaci: LCMS: 471.30 (M 1)<+>; HPLC: 95.64% (@ 254 nm) (Rt;5.661; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSOd6, 400 MHz) δ 11.52 (s, 1H), 8.79 (t, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.10 (d, 2H, J= 7.60 Hz), 7.81 (s, 1H), 7.41 (d, 2H, J= 7.60 Hz), 6.90 (bs, 1H), 5.88 (s, 1H), 4.34 (d, 2H, J=4.8 Hz), 3.44 (s, 2H), 2.56 (bs, 2H), 2.26 (bs, 2H), 2.18 (s, 3H), 2.17 (s, 6H), 2.12 (s, 3H), 1.80-1.72 (m, 2H), 1.68-1.60 (m, 2H).
Primer 6: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-((dimetilamino)metil)fenil)-6-(piperidin-1-il)izonikotinamida
[0563]
1 1
Korak 1: Sinteza metil 2-hloro-6-(piperidin-1-il)izonikotinata
[0564] Rastvor metil 2,6-dihloroizonikotinata (1 g, 4.85 mmol), piperidina (0.61 g, 7.28 mmol), K2CO3(1.38 g, 9.7 mmol) u acetonitrilu (20 mL) zagreva se na 90 °C 20 h. Posle završetka reakcije, reakciona masa se filtrira, filtrat koncentruje i prečisti na koloni da se dobije čisti metil 2-hloro-6-(piperidin-1-il)izonikotinat (1.23 g, 90%).
Korak 2: Sinteza 2-hloro-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(piperidin-1-il)izonikotinamida
[0565] U rastvor metil 2-hloro-6-(piperidin-1-il)izonikotinata (1.1 g, 4.33 mmol) u etanolu (10 mL), doda se NaOH (0.207 g, 5.196 mmol), rastvoren u vodi (2 mL) i reakciona masa se zagreva na 60 °C 1 h. Po završetku, rastvarač evaporiše pod sniženim pritiskom. Rezidua se ispere etrom i acidifikuje korišćenjem IN HCl do pH 8 i zatim limunske kiseline do pH 5-6. Dobijena čvrsta supstanca se filtrira, ispere vodom i na kraju suši pod sniženim pritiskom da se dobije kiselina (0.92 g, 89%) koja se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. U rastvor ove kiseline (0.9 g, 3.75 mmol) u DMSO (10 mL), doda se PyBOP (3.9 g, 7.5 mmol) i reakcija se meša na rt 15 min. Zatim se doda 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (1.5 g, 10 mmol) i reakcija se meša preko noći. Po završetku, doda se voda i čvrsta supstanca koja precipitira se filtrira, ispere vodom i suši da se dobije 2-hloro-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(piperidin-1-il)izonikotinamid (1 g, 74%).
Korak 3: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-formilfenil)-6-(piperidin-1-il)izonikotinamida
[0566] U mešani rastvor 2-hloro-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(piperidin-1-il)izonikotinamida (0.6 g, 1.6 mmol), boronske kiseline (0.263 g, 1.76 mmol) u
1 2
mešavini dioksan/voda (15 mL+5 mL), doda se Na2CO3(0.61 g, 5.76 mmol) i reakciona masa se prečisti 15 min argonom. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.184 g, 0.16 mmol) i prečisti argonom ponovo 10 min. Reakciona masa se zagreva na 100 °C 3 h. Po završetku, reakciona masa se filtrira kroz celit i celitno ležište se ispere etil acetatom. Kombinovani filtrati se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečisti na koloni preko silika gela da se dobije N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-formilfenil)-6-(piperidin-1-il)izoniko-tinamid (0.5 g, 71%).
Korak 4: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-((dimetilamino)metil)fenil)-6-(piperidin-1-il)izonikotinamida
[0567] U rastvor N-((4,6-dimetil-2-oksoo-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-formilfenil)-6-(piperidin-1-il)izonikotinamida (0.2 g, 0.45 mmol) u metanolu (12 mL), dodaju se dimetil amin (2.6 mL, 4.5 mmol, 2M rastvor u THF) i sirćetna kiselina (0.02 g, 0.45 mmol) i reakciona masa se meša na rt 90 min. Zatim se reakciona masa ohladi na 0 °C i doda se natrijum cijanoborohidrid (0.056 g, 0.9 mmol). Reakcija se meša na 0 °C 2 h i zatim se meša na rt preko noći. Po završetku, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom, rezidua se tretira vodom i ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani etil acetatni slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečisti hromatografijom na koloni preko silika gela dajući N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-((dimetilamino)metil)fenil)-6-(piperidin-1-il)izonikotinamid u vidu svetlozelene čvrste supstance (0.173 g, 79%).
Analitički podaci: LCMS: 474.30 (M 1)<+>; HPLC: 99.15% (@ 254 nm) (Rt;5.257; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSOd6, 400 MHz) δ 11.50 (s, 1H), 8.61 (t, 1H, J=4.4 Hz), 8.03 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.52 (s, 1H), 7.40 (d, 2H, J= 8.4 Hz), 7.13 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.32 (d, 2H, J=4 Hz), 3.63 (bs, 6H), 2.26 (bs, 6H), 2.18 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.59 (bs, 6H).
Primer 7: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-((dimetilamino)metil)fenil)-6-(izopropilamino)izonikotinamida
[0568]
1
Korak 1: Sinteza metil 2-hloro-6-(izopropilamino)izonikotinata
[0569] Rastvor metil 2,6-dihloroizonikotinata (1 g, 4.85 mmol), izopropil amina (0.286 g, 4.85 mmol), Cs2CO3(2.06 g, 6.3 mmol) u toluenu (30 mL) prečisti se argonom 10 min. Zatim se dodaju Pd(OAc)2(0.108 g, 0.485 mmol) i BYNAP (0.3 g, 0.485 mmol) i ponovo se uvede argon 15 min. Reakciona masa se meša na 80 °C 6 h. Po završetku, reakciona masa se filtrira i rezidua se dobro ispere etil acetatom. Kombinovani filtrati se koncetruju i prečiste na koloni preko silika gela da se dobije čisti metil 2-hloro-6-(izopropilamino)izonikotinat (0.3 g, 27.27%).
Korak 2: Sinteza 2-hloro-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(izopropilamino)izonikotinamida
[0570] U rastvor metil 2-hloro-6-(izopropilamino)izonikotinata (0.393 g, 1.7 mmol) u etanolu (4 mL), dodaju se NaOH (0.082 g, 2.06 mmol) i voda (0.8 mL) i reakciona masa se zagreva na 60 °C 1 h. Po završetku, rastvarač evaporiše pod sniženim pritiskom. Rezidua se ispere etrom i acidifikuje korišćenjem 1N HCl do pH 8 i zatim limunskom kiselinom do pH 5-6. Dobijena čvrsta supstanca se filtrira, ispere vodom i na kraju suši pod sniženim pritiskom da se dobije kiselina (0.36 g, 97%) koja se koristi u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. U rastvor ove kiseline (0.36 g, 1.68 mmol) u DMSO (1.5 mL), doda se PyBOP (1.3 g, 2.5 mmol) i reakcija se meša na rt 15 min. Zatim se doda 3-(aminometil)- 4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (0.383 g, 2.5 mmol) i reakcija se meša preko noći. Po završetku, doda se voda i vodeni sloj se ekstrahuje pomoću 10%MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se isperu vodom, suše preko natrijum sulfata i koncentruju da se dobije sirovi 2-hloro-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(izopropilamino)izonikotinamid (0.58 g, 100%) koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
1 4
Korak 3: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-formilfenil)-6-(izopropilamino)izonikotinamida
[0571] U mešani rastvor 2-hloro-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-6-(izopropilamino)izonikotinamida (0.58 g, 1.67 mmol), boronske kiseline (0.277 g, 1.84 mmol) u mešavini dioksan/voda (7 mL+3 mL), doda se Na2CO3(0.64 g, 6.037 mmol) i reakciona masa se prečisti 15 min argonom. Zatim, doda se Pd(PPh3)4(0.194 g, 0.168 mmol) i ponovo se uvodi argon 10 min. Reakciona masa se zagreva na 100 °C 3 h. Po završetku, reakciona masa se filtrira kroz celit i celitno ležište se ispere etil acetatom. Kombinovani filtrati se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečisti na koloni preko silika gela da se dobije N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-formilfenil)-6-(izopropilamino)izonikotinamid (0.6 g, 85.7%).
Korak 4: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-((dimetilamino)metil)fenil)-6-(izopropilamino)izonikotinamida
[0572] U rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-formilfenil)-6-(izopropilamino) izonikotinamida (0.6 g, 1.44 mmol) u metanolu (6 mL), dodaju se dimetil amin (7.1 mL, 14.33 mmol, 2M rastvor u THF) i sirćetna kiselina (0.086 g, 1.44 mmol) i reakciona masa se meša na rt 1 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (0.18 g, 2.8 mmol) i reakcija se meša na rt 2 h. Po završetku, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom, rezidua se tretira vodom i ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani etil acetatni slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečisti prep. HPLC da se dobije ciljni molekul sinteze N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-(4-((dimetilamino)metil)fenil)-6-(izopro-pilamino)izonikotinamid u vidu svetložute čvrste supstance.
Analitički podaci: LCMS: 448.25 (M 1)<+>; HPLC: 96.22% (@ 254 nm) (Rt;4.170, metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 8.01 (d, 2H, J=8 Hz), 7.67 (d, 2H, J=8 Hz), 7.39 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.14 (s, 1H), 4.50 (s, 2H), 4.40 (s, 2H), 4.17-4.11 (m, 1H), 2.89 (s, 6H), 2.38 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.33 (d, 6H, J=6H).
1
Primer 8: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0573]
Korak 1: Sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il) amino) benzoata
[0574] U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (2.5 g, 10.2 mmol) i dihidro-2H-piran-4(3H)-ona (1.3 g, 13.3 mmol) u metanolu (20 mL), doda se sirćetna kiselina (0.61 g, 10.2 mmol) i rastvor se meša na sobnoj temperaturi 18 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (1.2 g, 20.48 mmol) na 0 °C i mešanje se nastavi preko noći na sobnoj temperaturi. Zatim se rastvarač ukloni pod sniženim pritiskom i sirovi materijal se prečisti hromatografijom na koloni da se dobije metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il) amino) benzoat (2.2 g, 66%).
Korak 2: Sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-(metil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino) benzoata
[0575] U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il) amino) benzoata (1.0 g, 3.15 mmol) u acetonitrilu (15 mL), dodaju se cezijum karbonat (1.97 g, 6.10 mmol) i metil jodid (2.15 g, 15.27 mmol); dobijeni rastvor se zagreva na 80 °C 20 h. Rastvor se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira i rezidua se ispere etil acetatom. Zatim se filtrat koncentruje i proizvod se prečisti hromatografijom na koloni da se dobije metil 5-bromo-2-metil-3-(metil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino) benzoat (0.82 g, 80%).
Korak 3: Sinteza 5-bromo-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1, 2-dihidropiridin-3-il) metil)-2-metil-3-(metil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino) benzamida
[0576] Vodeni NaOH (0.19 g, 4.89 mmol) doda se u rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-(metil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino) benzoata (0.82 g, 2.4 mmol) u MeOH (20 mL) i meša na 60
1
°C 1 h. Etanol se ukloni pod sniženim pritiskom i rastvor se acidifikuje korišćenjem razblažene HCl do pH 6 i limunske kiseline do pH 4. Proizvod se ekstrahuje etil acetatom i kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju dajući odgovarajuću kiselinu (0.70 g). Kiselina se zatim rastvori u DMSO (3 mL) i doda joj se 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (0.74 g, 4.89 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min, zatim se doda PYBOP (1.9 g, 3.6 mmol) i mešanje se nastavi preko noći. Rastvor se sipa preko leda da se dobije čvrsta supstanca koja se filtrira i ispere acetonitrilom što je praćeno prečišćavanjem hromatografijom na koloni da se dobije 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil (tetrahi-dro-2H-piran-4-il) amino) benzamid (0.6 g, 54%).
Korak 4: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0577] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-2-metil-3-(metil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino) benzamida (1 ekv.) i 4-(2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H pirazol-1-il)etil)morfolina (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i ponovo uvede argon 10 min. Rastvor se zagreva na 100 °C 4 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečisti hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije željeni N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)benzamid (0.045 g, 36.9%).
LCMS: 563.00(M 1)+; HPLC% 99.26(@ 254 nm) (Rt;3.774; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.06 (t, 1H, J=4.8 Hz), 7.82 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.27 (d, 2H, J=4.8 Hz), 4.21 (t, 2H, J=6.4 Hz), 3.85 (d, 2H, J=11.2 Hz), 3.54 (t, 4H), 3.23-3.26 (m, 2H), 2.99 (m, 1H), 2.72 (t, 2H, J=6.4 Hz), 2.60 (s, 3H), 2.40 (bs, 4H), 2.20 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.58-1.59 (m, 4H).
1
Primer 9: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0578]
[0579] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1, 2-dihidropiridin-3-il) metil)-2-metil-3-(metil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino) benzamida (1 ekv.) i 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i ponovo se uvede argon 10 min. Rastvor se zagreva na 100 °C 4 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečisti hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije željeni N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamid 0.02 g, 20%). LCMS: 464.30(M 1)+; HPLC% 97.80(@ 254 nm) (Rt;4.286; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi / B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.06 (t, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.27 (d, 2H, J=4.8 Hz), 3.83-3.86(m, 5H), 3.23-3.29 (m, 2H), 2.99 (m, 1H), 2.59 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.58 (m, 4H).
Primer 10: Sinteza 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0580]
1
Jedinjenje 10
Korak 1: Sinteza metil 5-bromo-3-(cikloheksilamino)-2-metilbenzoata
[0581] U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (5.0 g, 20.6 mmol) i cikloheksanona (4.03 g, 41.2 mmol) u metanolu (50 mL), doda se sirćetna kiselina (0.247 g, 20.6 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 3 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (1.55 g, 24.6 mmol) i reakcija se meša preko noći. Po okončanju, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i sirovi materijal se prečisti hromatografijom na koloni da se dobije metil 5-bromo-3-(cikloheksilamino)-2-metilbenzoat (2.75 g, 41%).
Korak 2: Sinteza metil 5-bromo-3-(cikloheksil (metil) amino)-2-metilbenzoata
[0582] U mešani rastvor metil 5-bromo-3-(cikloheksilamino)-2-metilbenzoata (2.75 g, 8.45 mmol) u acetonitrilu (25 mL), dodaju se cezijum karbonat (5.45 g, 16.9 mmol) i metil jodid (6 g, 42.3 mmol); dobijeni rastvor se zagreva na 80 °C 20 h. Po završetku, rastvor se ohladi na sobnu temperaturu i filtrira, i rezidua se ispere etil acetatom. Filtrat se koncentruje i zatim prečisti hromatografijom na koloni da se dobije metil 5-bromo-3-(cikloheksil (metil) amino)-2-metilbenzoat (2.5 g, 87%).
Korak 3: Sinteza 5-bromo-3-(cikloheksil (metil) amino)-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-2-metilbenzamida
[0583] Vodeni NaOH (0.55 g, 14.7 mmol) doda se u rastvor metil 5-bromo-3-(cikloheksil (metil) amino)-2-metilbenzoata (2.5 g, 7.35 mmol) u MeOH (15 mL) i meša na 60 °C 1 h. Posle završetka reakcije, etanol se ukloni pod sniženim pritiskom i izvrši se acidifikacija korišćenjem razblažene HCl do pH 6 i limunske kiseline do pH 4. Proizvod se ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju da se dobije odgovarajuća kiselina (2.5 g, 87%). Kiselina se zatim rastvori u DMSO (20 mL) i doda joj se 3-(amino
1
metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (2.34 g, 15.1 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PYBOP (5.85 g, 11.05 mmol) i mešanje se nastavlja preko noći. Zatim se reakcija sipa preko leda da se dobije čvrsta supstanca koja se sakuplja filtracijom i ispere acetonitrilom. Prečišćavanje na silicijumskoj koloni daje 5-bromo-3-(cikloheksil (metil) amino)-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1, 2-dihidropiridin-3-il) metil)-2-metilbenzamid (1.5 g, 44.19%).
Korak 4: Sinteza 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0584] U mešani rastvor 5-bromo-3-(cikloheksil (metil) amino)-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i ponovo se uvede argon 10 min. Reakcija se zagreva na 100 °C 4 h. Posle hlađenja, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod. Prečišćavanje hromatografijom na koloni, preko silika gela daje jedinjenje iz naslova (0.02 g, 20%).
LCMS: 462.40(M 1)+; HPLC% 88.48(@ 254 nm) (Rt;4.683; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.06 (t, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.26 (d, 2H, J=4 Hz), 3.83 (s, 3H), 2.71 (t, 1H), 2.60 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.69 (m, 4H), 1.53-1.55 (m, 1H), 1.39-1.41 (m, 2H), 1.06-1.19 (m, 3H).
Primer 11: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-5-(metil(piperidin-4-il)amino)-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil] -3-karboksamida
[0585]
1
Korak 1: Sinteza tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)amino) piperidin-1-karboksilata
[0586] U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (5.0 g, 20.6 mmol) i tertbutil 4-oksopiperidin-1-karboksilata (8.2 g, 41.1 mmol) u metanolu (50 mL), doda se sirćetna kiselina (1.2 g, 20.6 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 8 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (1.55 g, 24.6 mmol) na 0 °C i reakcija se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom i proizvod se prečišćava hromatografijom na koloni na silika gelu da se dobije tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)amino)piperidin-1-karboksilat (5.0 g, 57%).
Korak 2: Sinteza tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)-2-metilfenil(metil)amino)piperidin-1-karboksilata
[0587] U mešani rastvor tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)amino) piperidin-1-karboksilata (3.0 g, 7.06 mmol) u acetonitrilu (25 mL), dodaju se cezijum karbonat (4.57 g, 14.1 mmol) i metil jodid (5.0 g, 35.2 mmol). Reakcija se zagreva do 80 °C 20 h. Zatim se reakcija ohladi na sobnu temperaturu i filtrira, ispere etil acetatom. Filtrat se koncentruje i proizvod se prečisti hromatografijom na koloni na silika gelu da se dobije tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)-2-metilfenil (metil) amino) piperidin-1-karboksilat (2.5 g, 81%).
Korak 3: Sinteza tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-1-karboksilata
[0588] Vodeni NaOH (0.37 g, 9.38 mmol) doda se u rastvor tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)-2-metilfenil(metil)amino)piperidin-1-karboksilata (2.0 g, 4.69 mmol) u MeOH (20 mL) i meša na 60 °C 1 h. Posle završetka reakcije, etanol se ukloni pod sniženim pritiskom i rastvor se acidifikuje korišćenjem razblažene HCl do pH 6 i limunske kiseline do
1 1
pH 4. Proizvod se ekstrahuje korišćenjem etil acetata. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju dajući odgovarajuću kiselinu (1.7 g, 90%). Kiselina se zatim rastvori u DMSO (10 mL) i doda joj se 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (1.42 g, 9.38 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PYBOP (3.66 g, 7.04 mmol) i mešanje se nastavlja preko noći. Posle završetka, reakciona masa se sipa preko leda da se dobije čvrsta supstanca, ovo se filtrira i ispere acetonitrilom posle čega sledi prečišćavanje hromatografijom na koloni da se dobije tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4, 6-dimetil-2-okso-1, 2-dihidropiridin-3-il) metil) karbamoil)-2-metilfenil) (metil) amino) piperidin-1-karboksilat (1.3 g, 50%).
Korak 4: Sinteza tert-butil 4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino)piper-idin-1-karboksilata
[0589] U mešani rastvor tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-1-karboksilata (1 ekv.) i 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzil)morfolina (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i argon se ponovo uvodi 10 min. Reakcija se zagreva na 100 °C 5 h. Posle hlađenja, reakciona mešavina se razblaži vodom, i proizvod se ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije tert-butil 4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino)piperidin-1-karboksilat
Korak 5: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-5-(metil(piperidin-4-il)amino)-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0590] Mešani rastvor tert-butil 4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino)piper-idin-1-karboksilata (1 mmol) u DCM (5 mL) ohladi se na 0 °C i TFA (2 mL) mu se doda. Reakcija se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Po završetku, rastvor se koncentruje do suvog. Rezidua se prečisti ispiranjima rastvaračem da se dobije jedinjenje iz naslova (0.07 g, 86%).
1 2
LCMS: 558.45 (M 1)+; HPLC% 98.81(@ 254 nm) (Rt;4.009; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 10.1 (bs, 1H), 8.51 (d, 1H), 8.16 (t, 2H), 7.77 (d, 2H, J=8 Hz), 7.57 (d, 2H, J=8 Hz), 7.42 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.33 (bs, 2H), 4.29 (d, 2H, J=19.2 HZ), 3.96 (m, 2H), 3.25 (m, 4H), 3.15 (m, 4H), 2.89-2.91 (m, 2H), 2.64 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.81 (m, 4H).
Primer 12: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-5-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0591]
[0592] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-2-metil-3-(metil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino) benzamida (1 ekv.) i 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzil) morfolina (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i argon se ponovo uvede 10 min. Rastvor se zagreva na 100 °C 4 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.065 g, 55%). LCMS: 559.35 (M 1)+; HPLC% 99.26(@ 254 nm) (Rt;3.983; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent:5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.15 (t, 1H), 7.58 (d, 2H, J=8 Hz), 7.36 (d, 3H, J=8.4 Hz), 7.18 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.8 Hz), 3.84 (d, 2H, J=11.2 Hz), 3.57 (m, 3H),
1
3.48 (m, 3H), 3.24 (m, 2H), 3.40 (m, 1H), 2.63 (s, 3H), 2.36 (m, 4H), 2.23 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.60 (m, 4H).
Primer 13: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-5-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0593]
[0594] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-2-metil-3-(metil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino) benzamida (1 ekv.) i N,N-dimetil-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)metanamina (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i argon se ponovo uvede 10 min. Rastvor se zagreva na 100 °C 4 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.01 g, 9%). LCMS: 517.30 (M 1)+; HPLC% 98.12(@ 254 nm) (Rt;3.972; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.16 (t, 1H), 7.58 (d, 2H, J=8 Hz), 7.34-7.36 (m, 2H), 7.18 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4 Hz), 3.84 (d, 2H, J=10.8 Hz), 3.42 (s, 2H), 3.02 (m, 2H), 2.66 (m, 1H), 2.63 (s, 3H), 2.50 (3H spojena u piku rastvarača), 2.23 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.60 (m, 4H).
Primer 14: Sinteza 5-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
1 4
[0596] U mešani rastvor 5-bromo-3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i (4-(morfolinometil) fenil)boronske kiseline (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i argon se ponovo uvede 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.070 g, prinos 29%). LCMS: 557.40 (M 1)+; HPLC% 98.83(@ 254 nm) (Rt; 4.303; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.15 (t, 1H, J=4 Hz), 7.56 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.36 (d, 2H, J=8 Hz), 7.28 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.57 (m, 4H), 3.48 (s, 2H), 2.74 (t, 1H), 2.64 (s, 3H), 2.36 (m, 4H), 2.20 (s, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.69-1.71 (m, 3H), 1.53-1.56 (m, 2H), 1.41-1.44 (m, 2H), 1.10-1.23 (m, 3H).
Primer 15: Sinteza 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0597]
1
[0598] U mešani rastvor 5-bromo-3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i (1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)boronske kiseline (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i argon se ponovo uvede 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.06 g, prinos 25%). LCMS: 561.35 (M 1)+; HPLC% 96.87(@ 254 nm) (Rt;4.209; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.44 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.06 (t, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.8 Hz), 4.21 (t, 2H, J=6 Hz), 3.54 (m, 4H), 2.72 (t, 2H, J=6.8 Hz), 2.61 (s, 3H), 2.40 (m, 4H), 2.20 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.70 (m, 4H), 1.53-1.56 (m, 3H), 1.10-1.23 (m, 4H).
Primer 16: Sinteza 5-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0599]
1
[0600] U mešani rastvor 5-bromo-3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i (4-((dimetilamino) metil)fenil)boronske kiseline (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i argon se ponovo uvede 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.065 g, prinos 29%). LCMS: 515.40 (M 1)+; HPLC% 96.73(@ 254 nm) (Rt;4.362; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.16 (t, 1H), 7.64 (d, 2H, J=6.8 Hz), 7.45 (d, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 2.75 (t, 1H), 2.65 (s, 3H), 2.32-2.42 (m, 6H), 2.20 (s, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.69 (m, 4H), 1.53-1.56 (m, 1H), 1.42-1.45 (m, 2H), 1.10-1.23 (m, 4H). [1H spojen u piku rastvarača].
Primer 17: Sinteza 3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[0601]
1
Korak 1: Sinteza 3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida.
[0602] U mešani rastvor 5-bromo-3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0.5 g, 1.12 mmol) i (6-formilpiridin-3-il)boronske kiseline (0.39 g, 1.68 mmol) u mešavini dioksan/voda (15 mL+3 mL), doda se Na2CO3(0.42 g, 4.09 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.130 g, 0.112 mmol.) i argon se ponovo uvede 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.35 g, prinos 66%).
Korak 2: Sinteza 3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[0603] U mešani rastvor jedinjenja 3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i morfolina (5 ekv.) u metanolu (10 mL), doda se sirćetna kiselina (2 ekv.) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 18 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekv.) na 0 °C i reakcija se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i sirovi materijal se prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije jedinjenje, i sirovi materijal koji se prečišćava preparativnom HPLC dajući jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli, (0.022 g, 22%). LCMS: 544.35 (M 1)+; HPLC% 98.42(@ 254 nm) (Rt;4.143; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR
1
(DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.17 (t, 1H), 8.01 (d, 1H, J=7.6) 7.50 (d, 1H, J=7.6 Hz), 7.42 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H), 3.59-3.61 (m, 8H), 3.35-3.37 (m, 2H), 2.66 (s, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.72 (m, 2H), 1.61 (m, 2H), 1.48 (m, 4H).
Primer 18: Sinteza 3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0604]
[0605] Rastvor 5-bromo-3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 ekv.), (1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)boronske kiseline (1.2 ekv.) i Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) u 1, 4-dioksanu (4 mL) prečisti se argonom 10 min. Zatim se doda rastvor 2M Na2CO3(3.6 ekv.) i mešavina se ponovo prečisti 10 min. Reakciona mešavina se meša na 100 °C 2 h. Po završetku reakcije, doda se voda i ekstrakcija se obavi korišćenjem DCM. Kombinovani organski slojevi se isperu vodom, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni, preko silika gela (veličina sita 60-120) da se dobije jedinjenje iz naslova (0.08 g, 66%). LCMS: 547.35 (M 1)+; HPLC% 97.60(@ 254 nm) (Rt;4.071; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.44 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.05 (t, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.26 (d, 2H, J=4 Hz), 4.20 (d, 2H, J=6.4 Hz), 3.49-3.53 (m, 6H), 2.72 (t, 2H), 2.40 (bs, 6H), 2.20 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.61-1.70 (m, 4H), 1.42-1.50 (m, 4H).
1
Primer 19: Sinteza 3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0606]
[0607] Rastvor 5-bromo-3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 ekv.), (1-metil-1H-pirazol-4-il)boronske kiseline (1.2 ekv.) i Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) u 1, 4-dioksanu (4 mL) prečisti se argonom 10 min. Zatim se doda rastvor 2M Na2CO3(3.6 ekv.) i mešavina se ponovo prečisti 10 min. Reakciona mešavina se meša na 100 °C 2 h. Po završetku reakcije, doda se voda i ekstrakcija se obavi korišćenjem DCM. Kombinovani organski slojevi se isperu vodom, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni, preko silika gela (veličina sita 60-120) da se dobije jedinjenje iz naslova (0.07 g, 70%) LCMS: 448.25 (M 1)+; HPLC% 98.34(@ 254 nm) (Rt;4.578; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.44 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.05 (t, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.26 (d, 2H, J=3.2 Hz), 3.83 (s, 3H), 3.49 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.69 (m, 2H), 1.60 (m, 2H), 1.42-1.49 (m, 4H). [3H spojena u piku rastvarača].
Primer 20: Sinteza 5-(((1s,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0608]
1
Korak 1: Sinteza 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoeve kiseline
[0609] U mešani rastvor 2-metil-3-nitrobenzoeve kiseline (50 g, 276.2 mmol) u konc. H2SO4(200 mL) dodaje se 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindion (43.4 g, 151.8 mmol) u porcijama na sobnoj temperaturi i reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 5 h. Po završetku, reakciona mešavina se sipa u ledeno hladnu vodu, rezultujući precipitat se filtrira, rezidua se ispere vodom i suši pod vakuumom da se dobije 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoeva kiselina (71.7 g, 99.9%) koja se direktno koristi u sledećem koraku.
Korak 2: Sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata
[0610] U mešani rastvor 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoeve kiseline (287 g, 1103 mmol) u DMF (150 mL) dodaju se natrijum karbonat (468 g, 4415 mmol) i metil jodid (626.63 g, 4415 mmol). Dobijena reakciona mešavina se zagreva na 60 °C 8 h. Po završetku, precipitirana čvrsta supstanca se sakupi filtracijom, rezidua se ispere dietil etrom (5 puta). Kombinovani organski slojevi se suše, koncentruju pod sniženim pritiskom dajući metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoat (302 g, 99%) koji se direktno koristi u sledećem koraku.
Korak 3: Sinteza metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata
[0611] U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata (150 g, 544 mmol) u etanolu (750 mL) dodaju se amonijum hlorid (150 g, 2777 mmol) rastvoren u vodi (750 mL) i gvožđe u prahu (93.3 g, 1636 mmol) uz mešanje. Dobijena reakciona mešavina se zagreva na 80 °C 7 h. Po završetku, reakciona mešavina se filtrira kroz celit; rezidua se ispere vodom i etil acetatom, filtrat se ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani organski slojevi se suše, koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoat koji se direktno koristi u sledećem koraku.
1 1
Korak 4: Sinteza metil 5-bromo-3-((4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-amino)-2-metilbenzoata
[0612] U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (5 g, 20.57 mmol) i tertbutil (4-oksocikloheksil) karbamata (5.6 g, 26.7 mmol) u metanolu (50 mL) doda se sirćetna kiselina (1.2 g, 20.57 mmol) i reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 8 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (1.6 g, 26.74 mmol) na 0 °C i reakcija se meša preko noći. Po završetku, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i sirovi materijal se prečisti hromatografijom na koloni, dva puta ispere korišćenjem etil acetata:heksana da se dobije metil 5-bromo-3-((4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-amino)-2-metilbenzoat i to 4 g (44%) nepolarnog izomera (cis izomer, kontaminiran polaznim materijalom) i 3 g (33%) čistog polarnog izomera (trans izomer).
Korak 5: Sinteza metil 5-bromo-3-((1s,4s)-(4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(metil)-amino)-2-metilbenzoata
[0613] U mešani rastvor cis izomera metil 5-bromo-3-((4-((tert-butoksikarbonil) amino) cikloheksil) amino)-2-metilbenzoata (4 g, 9.09 mmol) u acetonitrilu (50 mL) dodaju se cezijum karbonat (5.9 g, 18.18 mmol) i metil jodid (6.45 g, 45.45 mmol). Rezultujuća reakciona mešavina se zagreva na 80 °C 7 h. Po završetku, reakciona mešavina se ohladi do sobne temperature i filtrira, rezidua se ispere etil acetatom i filtrat se koncentruje, zatim prečisti hromatografijom na koloni dajući 4.0 g (44%) manje polarnog cis-izomera, metil 5-bromo-3-(((1s,4s)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-amino)-2-metilbenzoata) i 3.0 g (33%) polarnijeg trans-izomera, metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-amino)-2-metilbenzoata.
Korak 6: Sinteza tert-butil (1s,4s)-(4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-karbamoil)-2-metilfenil)-(metil)-amino)-cikloheksil) karbamata
[0614] Vodeni NaOH (0.23 g, 5.72 mmol) doda se u rastvor metil 5-bromo-3-(((1s,4s)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(metil)-amino)-2-metilbenzoata (1.3 g, 2.86 mmol) u MeOH (20 mL) i meša na 60 °C 1 h. Po završetku reakcije, etanol se ukloni pod sniženim pritiskom i izvrši se acidifikacija korišćenjem razblažene HCl do pH 6 i limunske
1 2
kiseline za podešavanje na pH 4. Ekstrakcija se obavlja korišćenjem etil acetata. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju dajući sirovu kiselinu (1.13 g, 90.1%).
[0615] Kiselina (1.13 g, 2.57 mmol) se rastvori u DMSO (10 mL) i doda se 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (0.87 g, 5.72 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PYBOP (2.23 g, 4.28 mmol) i mešanje se nastavlja preko noći. Posle završetka reakcije, reakciona mešavina se sipa preko leda da se dobije čvrsta supstanca, ovo se filtrira i ispere acetonitrilom, što je praćeno prečišćavanjem hromatografijom na koloni da se dobije tert-butil (1s,4s)-(4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-karbamoil)-2-metilfenil)-(metil)-amino)-cikloheksil)karbamat (0.8 g, 48.7%).
Korak 7: Sinteza 3-(((1s,4s)-4-aminocikloheksil)-(metil)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida
[0616] U mešani rastvor tert-butil (4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-karbamoil)-2-metilfenil)-(metil)-amino)-cikloheksil)-karbamata (0.8 g, 1.39 mmol) u DCM (25 mL) na 0 °C doda se TFA (5 mL). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Posle završetka, reakciona mešavina se koncentruje do suvog. Rezidua se bazifikuje vodenim natrijum bikarbonatom do pH 8 i vodeni sloj se ekstrahuje pomoću 20% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju da se dobije 3-(((1s,4s)-4-aminocikloheksil)-(metil)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamid (600 mg, 90.9%).
Korak 8: Sinteza 3-((1s,4s)-(4-acetamidocikloheksil)-(metil)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida
[0617] U mešani rastvor 3-((4-aminocikloheksil)-(metil)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida (0.275, 0.580 mmol) u DMF (5 mL), dodaju se EDCI.HCl (0.168 g, 0.870 mmol), HOBt (0.078 g, 0.58 mmol) i sirćetna kiselina (0.07 g, 1.16 mmol), reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 18 h. Po završetku, doda se voda i organske supstance se ekstrahuju pomoću 10% MeOH/ DCM. Kombinovani organski slojevi se suše, koncentruju dajući sirovi materijal koji se zatim prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije 3-(((1s,4s)-4-acetamidocikloheksil)-(metil)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamid (0.25 g, 83.6%).
1
Korak 9: Sinteza 5-(((1s,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0618] U mešani rastvor 3-((4-acetamidocikloheksil)-(metil)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) benzil) morfolina (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL) doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i ponovo se uvede argon 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.06 g, 50.8%). LCMS: 614.40 (M 1)+; HPLC% 99.44(@ 254 nm) (Rt;3.948; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.17 (t, 1H), 7.76 (d, 1H, J=7.2 Hz), 7.55 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.36 (d, 3H, J=8 Hz), 7.16 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.71 (bs, 1H), 3.57 (m, 4H), 3.47 (s, 2H), 2.98 (m, 1H), 2.59 (s, 3H), 2.36 (m, 4H), 2.26 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.74-1.81 (m, 5H), 1.49-1.56 (m, 3H), 1.40-1.48 (m, 3H).
[0619] Primer 21: 5-(((1r,4r)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid priprema se na analogan način kao primer 20, od trans-izomera, metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-amino)-2-metilbenzoatnog intermedijara opisanog u Primeru 20.
1 4
[0620] Analitički podaci 1258-Trans: LCMS: 614.40 (M 1)<+>; HPLC% 99.64(@ 254 nm) (Rt;3.917; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.16 (t, 1H), 7.76 (d, 1H, J=7.6 Hz), 7.57 (d, 2H, J=7.2 Hz), 7.36 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.29 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H), 3.57 (bs, 5H), 3.48 (m, 2H), 2.71 (m, 1H), 2.64 (s, 3H), 2.36 (m, 4H), 2.20 (s, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.68-1.81 (m, 7H), 1.51-1.53 (m, 2H), 1.10-1.13 (m, 2H).
Primer 22: Sinteza 3-(((1s,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0621]
[0622] U mešani rastvor 3-(((1s,4s)-4-acetamidocikloheksil)-(metil)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL) doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i ponovo se uvede argon 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela dajući jedinjenje iz naslova (0.02 g, 20%). LCMS: 519.40 (M 1)<+>; HPLC% 96.24(@ 254 nm) (Rt;4.247; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.44 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.07 (t, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.75 (d, 1H, J=7.2 Hz), 7.27 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.27 (d, 2H,
1
J=4.8 Hz), 3.83 (s, 3H), 3.69 (bs, 1H), 2.96 (m, 1H), 2.56 (s, 3H), 2.20 (s, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.81 (s, 3H), 1.74-1.76 (m, 2H), 1.54 (m, 2H), 1.36-1.46 (m 4H).
Primer 23 Sinteza 3-(((1r,4r)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0623]
[0624] Priprema se na analogan način kao primer 22 (0.06 g, 40%).
LCMS: 519.30 (M 1)+; HPLC% 98.21(@ 254 nm) (Rt;4.155; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.07 (t, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.66 (d, 1H, J=7.2 Hz), 7.23 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.26 (d, 2H, J=2.8 Hz), 3.83 (s, 3H), 3.44 (m, 1H), 2.66-2.69 (m, 1H), 2.61 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.78-1.80 (m, 2H), 1.74 (s, 3H), 1.67-1.70 (m, 2H), 1.48-1.51 (m 2H), 1.10-1.13 (m, 2H).
Primer 24: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(piperidin-4-il)amino)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[0625]
1
Korak 1: Sinteza tert-butil 4-((3-(((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil) karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil) (metil) amino) piperidin-1-karboksilata
[0626] Tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil) karbamoil)-2-metilfenil) (metil) amino) piperidin-1-karboksilat (0.5 g, 0.892 mmol), (6-formilpiridin-3-il)boronska kiselina (0.31 g, 1.33 mmol) i Pd(PPh3)4(0.103 g, 0.082 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) prečiste se argonom 10 min. Zatim se doda 2M Na2CO3rastvor (0.34 g, 3.21 mmol) i ponovo se uvede argon 10 min. Reakciona mešavina se meša na 100 °C 2 h. Posle završetka reakcije, doda se voda i obavi se ekstrakcija korišćenjem 5% MeOH u DCM. Kombinovani organski slojevi se isperu vodom, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi matrijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela (veličina sita 60-120) da se dobije tert-butil 4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-1-karboksilat (0.40 g, 87.9%).
Korak 2: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(piperidin-4-il)amino)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[0627] U mešani rastvor tert-butil 4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-1-karboksilata (1 ekv.) i morfolina (5 ekv.) u metanolu (5 mL za 0.3 mmol), doda se sirćetna kiselina (1 ekv.) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 4 h. Zatim se doda redukujuće sredstvo NaBH3CN (1 ekv.) i reakcija se meša preko noći. Po završetku, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i rezidua se prečisti hromatografijom na koloni, preko silika gela da se dobije željeni tert-butil 4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)fenil)(metil)amino) piperidin-1-karboksilat. Ovo jedinjenje se zatim rastvori u DCM (5 mL) i ohladi na 0 °C. Doda mu se
1
TFA (2 mL). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Po završetku, reakcija se koncentruje do suvog. Rezidua se prečisti ispiranjem rastvaračem da se dobije jedinjenje iz naslova (0.1 g, 65.78%). LCMS: 559.35 (M 1)+; HPLC: 95.60% (@ 254 nm) (Rt;3.906; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.67 (m, 1H), 8.22 (d, 2H, J=8 Hz), 8.17 (t, 1H), 7.61 (d, 1H, J=8 Hz), 7.48 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.52 (s, 2H), 4.29 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.84 (bs, 4H), 3.26 (bs, 6H), 3.16 (t, 1H), 2.89-2.91 (m, 2H), 2.64 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.81 (bs, 4H).
Primer 25: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(piperidin-4-il)amino)-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0628]
[0629] U mešani rastvor tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil) karbamoil)-2-metilfenil) (metil) amino) piperidin-1-karboksilata (1 ekv.) i 4-(2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)etil)morfolina (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i argon se ponovo uvede 10 min. Reakcija se zagreva na 100 °C 5 h. Posle hlađenja, reakciona mešavina se razblaži vodom, i proizvod se ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije tert-butil 4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino) piperidin-1-karboksilat. Mešani rastvorovog jedinjenja (1 mmol) u DCM (5 mL) ohladi se na 0 °C i doda se TFA (2 mL). Reakcija se meša na sobnoj
1
temperaturi 1 h. Po završetku, rastvor se koncentruje do suvog. Rezidua se prečisti ispiranjem rastvaračem da se dobije jedinjenje iz naslova (0.06 g, 89%). LCMS: 562.40 (M 1)<+>; HPLC: 99.01% (@ 254 nm) (Rt;3.838; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.23 (m, 1H), 8.05 (t, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.53 (t, 2H), 4.27 (d, 2H, J=3.6 Hz), 3.25 (m, 4H), 3.10-3.16 (m, 4H), 2.87 (m, 2H),2.60 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.79 (bs, 4H). [5 H spojena u piku rastvarača]
Primer 26: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(piperidin-4-il)amino)-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0630]
[0631] U mešani rastvor tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil) karbamoil)-2-metilfenil) (metil) amino) piperidin-1-karboksilata (1 ekv.) i 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i argon se ponovo uvede 10 min. Reakcija se zagreva na 100 °C 5 h. Posle hlađenja, reakciona mešavina se razblaži vodom i proizvod se ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije tert-butil 4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)piperidin-1-karboksilat. Mešani rastvor ovog jedinjenja (1 mmol) u DCM (5 mL) ohladi se na 0 °C i doda mu seTFA (2 mL). Reakcija se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Po završetku, rastvor se koncentruje do suvog. Rezidua se prečisti ispiranjem rastvaračem da se dobije jedinjenje iz
1
naslova (0.07 g, 87%). LCMS: 463.30 (M 1)+; HPLC: 98.02% (@ 254 nm) (Rt;4.145; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.47 (bs, 1H), 8.12 (s, 2H), 8.05 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.28 (m, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.24-3.27 (m, 2H), 3.11 (bs, 1H), 2.87-2.89 (m, 2H), 2.59 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.77-1.80 (m, 4H).
Primer 27: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-5-(metil(piperidin-4-il)amino)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0632]
[0633] U mešani rastvor tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil) karbamoil)-2-metilfenil) (metil) amino) piperidin-1-karboksilata (1 ekv.) i N,N-dimetil-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)metanamina (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i argon se ponovo uvede 10 min. Reakcija se zagreva na 100 °C 5 h. Posle hlađenja, reakciona mešavina se razblaži vodom i proizvod se ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije tert-butil 4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino) piperidin-1-karboksilat. Mešani rastvor ovog jedinjenja (1 mmol) u DCM (5 mL) ohladi se na 0 °C i doda mu seTFA (2 mL). Reakcija se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Po završetku, rastvor se koncentruje do suvog. Rezidua se prečisti ispiranjem rastvaračem da se dobije jedinjenje iz naslova (0.06 g, 90%). LCMS: 516.35 (M
1
1)+; HPLC: 98.28% (@ 254 nm) (Rt;3.930; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 9.82 (bs, 1H), 8.51 (bs, 1H), 8.17 (s, 2H), 7.77 (d, 2H, J=7.2 Hz), 7.55(d, 2H, J=7.6 Hz), 7.43 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.30 (m, 4H), 3.25 (4H merged in rastvarač peak), 2.88-2.91 (m, 1H), 2.75 (s, 6H), 2.64 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.81 (m, 4H).
Primer 28: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[0634]
Korak 1: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metil-3-(metil (tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamid
[0635] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-2-metil-3-(metil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino) benzamida (0.4 g, 0.86 mmol) i (6-formilpiridin-3-il)boronske kiseline (0.3 g, 1.29 mmol) u mešavini dioksan/voda (10 mL+2 mL), doda se Na2CO3(0.32 g, 3.09 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.092 g, 0.086 mmol.) i argon se ponovo uvede 10 min. Reakcija se zagreva na 100 °C 6 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i proizvod se ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metil-3-(metil (tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamid (0.28 g, 66%).
1 1
Korak 2: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetrahi-dro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamid
[0636] U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (1 ekv.) i morfolina (5 ekv.) u metanolu (10 mL), doda se sirćetna kiselina (2 ekv.) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 18 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekv.) na 0 °C i reakcija se meša na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i sirovi materijal se prečisti hromatografijom na koloni da se dobije jedinjenje iz naslova (0.08 g, 70%). LCMS: 560.30 (M 1)+; HPLC: 99.22% (@ 254 nm) (Rt;3.944; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.17 (t, 1H), 8.02 (d, 1H, J=7.6 Hz), 7.50 (d, 1H, J=8 Hz), 7.41 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.8 Hz), 3.85 (d, 2H, J=11.2 Hz), 3.61 (s, 3H), 3.59-3.60 (m, 3H), 3.24-3.29 (m, 2H), 3.02-3.05 (m, 1H), 2.64 (s, 3H), 2.42 (bs, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.61 (bs, 4H).
Primer 29: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(hidroksimetil)piridin-3-il)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida
[0637]
[0638] U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (1 ekv.) i dimetilamina (5 ekv.) u metanolu (10 mL), doda se sirćetna kiselina (2 ekv.) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 18 h. Natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekv.) se doda na 0 °C i reakcija se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač se ukloni pod
1 2
sniženim pritiskom i sirovi materijal se prečisti hromatografijom na koloni da se dobije jedinjenje iz naslova. LCMS: 491.25 (M 1)+; HPLC: 99.58% (@ 254 nm) (Rt;3.984; metod: kolona YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.19 (t, 1H), 8.05 (d, 1H, J=8.4 Hz), 7.52 (d, 1H, J=8.4 Hz), 7.41 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 5.44 (t, 1H, J=5.6 Hz), 4.59 (d, 2H, J=5.6 Hz), 4.28 (d, 2H, J=4 Hz), 3.85 (d, 2H, J=10.4 Hz), 3.32 (2H merged in rastvarač peak), 3.03 (m, 1H), 2.64 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.61 (bs, 4H).
Primer 30: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino) benzamida
[0639]
[0640] U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metil-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (1 ekv.) i dimetilamina (5 ekv.) u metanolu (10 mL), doda se sirćetna kiselina (2 ekv.) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 18 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekv.) na 0 °C i reakcija se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i sirovi materijal se prečisti hromatografijom na koloni da se dobije jedinjenje iz naslova (0.03 g, 26%). LCMS: 518.25 (M 1)+; HPLC: 89.16% (@ 254 nm) (Rt;3.982; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.18 (t, 1H), 8.08 (d, 1H, J=8 Hz), 7.52 (d, 1H, J=8 Hz), 7.43 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.8 Hz), 3.83-3.86 (m, 4H), 3.32 (2H merged in rastvarač peak), 3.03 (m, 1H), 2.64 (s, 3H), 2.50 (3H
1
spojena u piku rastvarača), 2.40 (bs, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.60 (bs, 4H).
Primer 31: Sinteza 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[0641]
Korak 1: Sinteza 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida
[0642] U mešani rastvor bromo jedinjenja 5-bromo-3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid (0.6 g, 1.30 mmol) i (6-formilpiridin-3-il)boronske kiseline (0.450 g, 1.95 mmol) u mešavini dioksan/voda (8 mL+2 mL), doda se Na2CO3(0.498 g, 4.5 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min.
Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.15 g, 0.129 mmol.) i mešavina se ponovo prečisti 10 min. Reakciona masa se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamid (0.525 g, 83%).
Korak 2: Sinteza 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[0643] U mešani rastvor jedinjenja 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamid (1 ekv.) i morfolina (5
1 4
ekv.) u metanolu (10 mL), doda se sirćetna kiselina (2 ekv.) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 8 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekv.) na 0 °C i reakcija se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i sirovi materijal se prečisti hromatografijom na koloni da se dobije 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil) -2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamid (0.089 g, prinos 53%). LCMS: 558.35 (M 1)+; HPLC: 96.52% (@ 254 nm) (Rt;4.375; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.18 (t, 1H), 8.01 (d, 1H, J=6.8 Hz), 7.49 (d, 1H, J=8 Hz), 7.33 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=3.6 Hz), 3.59-3.61 (m, 6H), 2.75 (m, 1H), 2.65 (s, 3H), 2.43 (bs, 4H), 2.21 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.70 (bs, 4H), 1.53-1.56 (m, 1H), 1.42-1.44 (m, 1H), 1.09-1.23 (m, 4H).
Primer 32: Sinteza 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilbenzamida
[0644]
[0645] U mešani rastvor jedinjenja 3-(cikloheksil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i dimetilamina (5 ekv.) u metanolu (10 mL), doda se sirćetna kiselina (2 ekv.) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 8 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekv.) na 0 °C i reakcija se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i sirovi materijal se prečisti hromatografijom na koloni da se dobije jedinjenje iz naslova (0.017 g, prinos 11%). LCMS: 516.35 (M 1)+; HPLC: 90.32% (@ 254 nm) (Rt;4.203; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B;
1
0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.18 (t, 1H), 8.05 (d, 1H, J=6 Hz), 7.50 (d, 1H, J=8.4 Hz), 7.34 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.8 Hz), 3.75 (bs, 2H), 2.75 (m, 1H), 2.65 (s, 3H), 2.34 (bs, 6H), 2.22 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.69-1.71 (m, 4H), 1.54-1.56 (m, 2H), 1.42-1.45 (m, 2H), 1.08-1.23 (m, 2H).
Primer 35: Sinteza 3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilbenzamida
[0646]
[0647] U mešani rastvor 3-(ciklopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i dimetilamina (5 ekv.) u metanolu (10 mL), doda se sirćetna kiselina (2 ekv.) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 18 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekv.) na 0 °C i reakcija se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i sirovi materijal se prečisti hromatografijom na koloni da se dobije jedinjenje, i sirovi materijal koji se prečisti preparativnom HPLC dajući jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.12 g, 57%). LCMS: 502.30 (M 1)+; HPLC: 99.07% (@ 254 nm) (Rt;4.059; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.50 (s, 1H), 10.04 (bs, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.22 (m, 2H), 7.57-7.61 (m, 1H), 7.35 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.49 (s, 2H), 4.28 (d, 2H, J=2 Hz), 3.65 (bs, 1H), 2.83 (s, 6H), 2.65 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.73 (bs, 2H), 1.63 (bs, 2H), 1.50 (m, 4H).
1
Primer 36: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-5-(metil(piperidin-4-il)amino)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0648]
Korak 1: Sinteza metil 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-2-metilbenzoata
[0649] U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (5 g, 20.57 mmol) i ciklopentanona (8.64 g, 102.8 mmol) u metanolu (30 mL), dodas e sirćetna kiselina (2.46 g, 41.1 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 3 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (3.23 g, 51.4 mmol) i reakcija se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i sirovi materijal se prečisti hromatografijom na koloni da se dobije metil 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-2-metilbenzoat (4 g, 78.2%).
Korak 2: Sinteza metil 5-bromo-3-(ciklopentil (etil) amino)-2-metilbenzoata
[0650] U mešani rastvor 5-bromo-3-(ciklopentilamino)-2-metilbenzoata (2 g, 6.43 mmol) u DMF (15 mL), dodaju se cezijum karbonat (4.18 g, 12.8 mmol) i etil jodid (5.01 g, 32.15 mmol); dobijena reakciona mešavina se zagreva na 80 °C 18 h. Po završetku, reakciona mešavina se ohladi na sobnu temperaturu i filtrira, rezidua se ispere etil acetatom i filtrat se koncentruje da se dobije željeno sirovo jedinjenje, koje se prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije metil 5-bromo-3-(ciklopentil(etil)amino)-2-metilbenzoat (0.7 g, 32.1%).
Korak 3: Sinteza 5-bromo-3-(ciklopentil (etil) amino)-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-2-metilbenzamida
[0651] Vodeni NaOH (0.126 g, 3.09 mmol) doda se u rastvor metil 5-bromo-3-(ciklopentil (etil) amino)-2-metilbenzoata (0.7 g, 2.06 mmol) u etanolu (5 mL) i meša na 60 °C 1 h. Posle
1
završetka reakcije, etanol se ukloni pod sniženim pritiskom i vodeni sloj se acidifikuje korišćenjem razblažene HCl do pH 6 i liminske kiseline do pH 4. Proizvod se ekstrahuje korišćenjem etil acetata. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju dajući sirovu kiselinu (0.5 g, 75%). Kiselina (0.5 g, 1.53 mmol) se zatim rastvori u DMSO (5 mL) i doda joj se 3-(amino metil)-4, 6-dimetilpiridin-2(1H)-on (0.467 g, 3.07 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PYBOP (1.19 g, 2.30 mmol) i mešanje se nastavi preko noći. Posle završetka reakcije, reakciona mešavina se sipa preko leda, ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju, zatim se proizvod prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije 5-bromo-3-(ciklopentil (etil) amino)-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-2-metilbenzamid (0.3 g, 42%).
Korak 4: Sinteza 5-(ciklopentil (etil) amino)-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0652] U mešani rastvor 5-bromo-3-(ciklopentil (etil) amino)-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-2-metilbenzamida (0.3 g, 0.653 mmol) i (4-(morfolinometil) fenil) boronske kiseline (0.216 g, 0.98 mmol) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(0.249 g, 2.35 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.075 g, 0.065 mmol) i argon se ponovo uvede 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 3 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.15 g, 41%). LCMS: 557.35 (M 1)+; HPLC: 99.13% (@ 254 nm) (Rt;4.128; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.44 (s, 1H), 8.17 (t, 1H), 7.57 (d, 2H, J=8 Hz), 7.41 (s, 1H), 7.37 (d, 2H, J=8 Hz), 7.20 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.8 Hz), 3.56-3.57 (m, 4H), 3.48 (s, 3H), 3.00-3.02 (m, 2H), 2.36 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.69-1.70 (m, 2H), 1.60 (m, 2H), 1.47-1.48 (m, 4H), 0.81 (t, 3H, J=6.4 Hz).
Primer 37: Sinteza 3-(((1r,4r)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)benzamida
1
[0654] U mešani rastvor 3-(((1r,4r)-4-acetamidocikloheksil)-(metil)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i 4-(2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)etil)morfolina (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL) doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i argon se ponovo uvede 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.050 g, 28%). LCMS: 618.35 (M 1)+; HPLC: 95.34% (@ 254 nm) (Rt;3.760; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.09 (t, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.67 (d, 1H, J=7.2 Hz), 7.23 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.26 (d, 2H, J=3.2 Hz), 4.21 (t, 2H, J=6 Hz), 3.44-3.53 (m, 5H), 2.72 (t, 3H, J=5.6 Hz),2.61 (s, 3H), 2.40 (m, 4H), 2.20 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.67-1.88 (m, 7H), 1.46-1.55 (m, 2H), 1.07-1.15 (m, 2H).
Primer 38: Sinteza 3-(((1s,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0655]
1
[0656] Priprema se na način analogan jedinjenju 37 (0.020 g, 11%). LCMS: 618.35 (M 1)<+>; HPLC: 99.00% (@ 254 nm) (Rt;3.732; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.09 (t, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.77 (d, 1H, J=7.2 Hz), 7.28 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.45 (bs, 1H), 4.27 (d, 2H, J=4 Hz), 4.22 (s, 2H), 3.70 (bs, 1H), 3.54 (m, 4H), 2.97 (m, 1H), 2.67-2.72 (m, 2H), 2.56 (s, 3H), 2.42 (m, 3H), 2.20 (s, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.74-1.81 (m, 5H), 1.55 (m, 2H), 1.39-1.41 (m, 4H).
Primer 39: Sinteza 5-(((1r,4r)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0657]
[0658] U mešani rastvor 3-(((1r,4r)-4-acetamidocikloheksil)-(metil)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i N,N-dimetil-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)metanamina (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL) doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i argon se ponovo uvede 10 min. Reakciona mešavina se
1
zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.05 g, 30%). LCMS: 572.35 (M 1)+; HPLC: 96.88% (@ 254 nm) (Rt;3.900; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.18 (t, 1H), 7.67 (d, 1H, J=6.8 Hz), 7.57 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.34 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.30 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.27 (d, 2H, J=3.6 Hz), 3.39 (m, 3H), 2.72 (m, 1H), 2.64 (s, 3H), 2.20(s, 6H), 2.15 (s, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.78-1.81 (m, 2H), 1.74 (s, 3H), 1.68 (m, 2H), 1.51-1.56 (m, 2H), 1.08-1.23 (m, 2H).
Primer 40: Sinteza 5-(((1s,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0659]
[0660] Priprema se na način analogan Primeru 39 (0.06 g, 36%). LCMS: 572.35 (M 1)<+>; HPLC: 94.79% (@ 254 nm) (Rt;3.936; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (s, 1H), 8.19 (t, 1H), 7.78 (d, 1H, J=7.2 Hz), 7.56 (d, 2H, J=8 Hz), 7.33-7.35 (m, 3H), 7.17 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=3.6 Hz), 3.70 (bs, 1H), 3.37-3.40 (m, 2H), 2.98 (m, 1H), 2.59 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.20 (m, 3H), 2.15 (s, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.81 (s, 3H), 1.74 (m, 2H), 1.55 (m, 2H), 1.40-1.48 (m, 4H).
1 1
Primer 41: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metil-3-(metil(piperidin-4-il)amino)benzamida
[0661]
[0662] U mešani rastvor tert-butil 4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-1-karboksilata (1 ekv.) i morfolina (5 ekv.) u metanolu (5 mL za 0.3 mmol), doda se sirćetna kiselina (1 ekv.) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 4 h. Zatim se doda redukujuće sredstvo NaBH3CN (1 ekv.) i reakcija se meša preko noći. Po završetku, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i rezidua se prečisti hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije željeni tert-butil 4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilfenil)(metil) amino) piperidin-1-karboksilat. Ovo jedinjenje se zatim rastvori u DCM (5 mL) i ohladi na 0 °C. Doda se TFA (2 mL). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Po završetku, reakcija se koncentruje do suvog. Rezidua se prečisti ispiranjem rastvaračem da se dobije jedinjenje iz naslova (0.06 g, 40%). LCMS: 517.25 (M 1)+; HPLC: 99.07% (@ 254 nm) (Rt;3.913; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.48 (s, 1H), 10.08 (bs, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.57 (bs, 1H), 8.23 (d, 2H, J=7.6 Hz), 8.18 (s, 1H), 7.60 (d, 1H, J=8 Hz), 7.50 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.49 (d, 2H), 4.30 (s, 2H), 3.25 (d, 2H), 3.16 (s, 1H), 2.89 (m, 2H), 2.83 (s, 6H), 2.64 (s, 3H), 2.26 (s, 3H),2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.81 (bs, 4H).
Primer 42: Sinteza 5-(((1s,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
1 2
Korak 1: Sinteza metil 5-bromo-3-(((1s,4s)-4-((tert-butoksikarbonil)amino) cikloheksil)(metil)-amino)-2-metilbenzoata
[0664] U mešani rastvor manje polarnog cis izomera, metil 5-bromo-3-(((1s,4s)-4-((tertbutoksikarbonil)amino)cikloheksil) amino)-2-metilbenzoata (4 g, 9.09 mmol), u acetonitrilu (50 mL), dodaju se cezijum karbonat (5.9 g, 18.18 mmol) i metil jodid (6.45 g, 45.45 mmol). Dobijena reakciona mešavina se zagreva na 80 °C 7 h. Reakciona mešavina se ohladi na sobnu temperaturu i filtrira, a sakupljene čvrste supstance se isperu etil acetatom. Filtrat se koncentruje da se dobije željeni proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni dajući metil 5-bromo-3-(((1s,4s)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)(metil)-amino)-2-metilbenzoat (1.4 g, 34.14%).
Korak 2: Sinteza tert-butil ((1s,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata
[0665] Vodeni NaOH (0.23 g, 5.72 mmol) doda se u rastvor metil 5-bromo-3-(((1s,4s)-4-((tert-butoksikarbonil) amino)cikloheksil)(metil)-amino)-2-metilbenzoata (1.3 g, 2.86 mmol) u MeOH (20 mL) i meša na 60 °C 1 h. Etanol se ukloni pod sniženim pritiskom i mešavina se acidifikuje do pH razblaženom HCl i do pH 4 limunskom kiselinom. Mešavina se ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju dajući odgovarajuću kiselinu (1.13 g, 90.1%).
[0666] Kiselina (1.13 g, 2.57 mmol) se zatim rastvori u DMSO (10 mL) i doda joj se 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (0.87 g, 5.72 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PyBOP (2.23 g, 4.28 mmol). Mešanje se nastavlja preko noći. Reakciona mešavina se sipa preko ledene vode. Dobijeni precipitat se filtrira, ispere acetonitrilom i prečisti hromatografijom na koloni da se dobije tert-butil
1
((1s,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil) karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamat (0.8 g, 48.7%).
Korak 3: Sinteza tert-butil ((1s,4s)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-karbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino)-cikloheksil)karbamat
[0667] U mešani rastvor tert-butil ((1s,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil) karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)-karbamata (1 ekv.) i 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzil)morfolina (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.). Rastvor se zatim prečisti argonom 15 min. Doda se Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i argon se ponovo uvede 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije tert-butil ((1s,4s)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-karbamoil)-4-metil-4’-(morfo-linometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino)-cikloheksil)karbamat (0.08 g, 45.71%).
Korak 4: Sinteza 5-(((1s,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0668] Mešani rastvor tert-butil ((1s,4s)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-karbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il) (metil)amino)-cikloheksil)karbamata (0.08 g) u DCM (5 mL) ohladi se na 0 °C i doda se TFA (2 mL). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Reakcija se koncentruje do suvog dajući jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.06 g, 88.2%). LCMS: 572.40 (M 1)<+>; HPLC: 95.39% (@ 254 nm) (Rt;3.719; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 10.05 (bs, 1H), 8.19 (t, 1H), 7.74-7.78 (m, 4H), 7.56 (d, 2H, J=6.8 Hz), 7.46 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.38 (bs, 2H), 4.29 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.95 (m, 2H), 3.60-3.63 (m, 2H), 3.27-3.30 (m, 2H), 3.13-3.19 (m, 4H), 2.54 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.86 (m, 2H), 1.59-1.64 (m, 4H), 1.49-1.51 (m, 2H).
1 4
Primer 43: Sinteza 5-(((1r,4r)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0669]
Korak 1: Sinteza 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoeve kiseline
[0670] U mešani rastvor 2-metil-3-nitrobenzoeve kiseline (50 g, 276.2 mmol) u konc. H2SO4(200 mL), dodaje se 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindion (43.4 g, 151.8 mmol) u porcijama na sobnoj temperaturi i reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 5 h. Reakciona mešavina se sipa u ledeno hladnu vodu; čvrsta supstanca koja precipitira se filtrira, ispere vodom i suši pod vakuumom dajući željeno jedinjenje, 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoevu kiselinu (71.7 g, 99.9%) koja se kao takva koristi u sledećim reakcijama.
Korak 2: Sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata
[0671] U mešani rastvor 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoeve kiseline (287 g, 1103 mmol) u DMF (150 mL), dodaju se natrijum karbonat (468 g, 4415 mmol) i metil jodid (626.63 g, 4415 mmol). Reakciona mešavina se zatim zagreva na 60 °C 8 h. Čvrsti precipitata se filtrira i ispere dietil etrom (5 puta). Kombinovani organski filtrati se suše, koncentruju pod sniženim pritiskom dajući željeno jedinjenje, metil 5-bromo-2-metil- 3-nitrobenzoat (302 g, 99%), koje se kao takvo koristi u sledećim reakcijama.
Korak 3: Sinteza metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata
[0672] U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata (150 g, 544 mmol) u etanolu (750 mL), dodaju se amonijum hlorid (150 g, 2777 mmol) rastvoren u vodi (750 mL) i gvožđe u prahu (93.3 g, 1636 mmol), uz mešanje. Dobijena reakciona mešavina se zagreva na 80 °C 7
1
h. Reakciona mešavina se filtrira kroz celit i sakupljena čvrsta supstanca se ispere vodom i etil acetatom. Filtrat se ekstrahuje etil acetatom i ekstrakt se suši, koncentruje pod sniženim pritiskom, dajući željeno jedinjenje, metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoat, koje se kao takvo koristi u sledećim reakcijama.
Korak 4: Sinteza metil 5-bromo-3-((4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)amino)-2-metil-benzoata
[0673] U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (5.0 g, 20.6 mmol) i tertbutil (4-oksocikloheksil) karbamata (5.6 g, 26.7 mmol) u metanolu (50 mL), doda se sirćetna kiselina (1.2 g, 20.57 mmol) i reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 8 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (1.6 g, 26.74 mmol) na 0 °C i reakcija se meša preko noći. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i sirovi materijal se prečisti hromatografijom na koloni (dva puta) uz eluiranje etil acetatom/heksanom da se dobije 4 g (44%) manje polarnog cis izomera, metil 5-bromo-3-(((1s,4s)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata (kontaminiranog sa nešto polaznog materijala) i 3 g (33%) polarnijeg čistog trans izomera, metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino) cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata.
Korak 5: Sinteza metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tertbutoksikarbonil)amino)cikloheksil)(metil)-amino)-2-metilbenzoata
[0674] U mešani rastvor polarnijeg trans izomera, metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tertbutoksikarbonil)amino) cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata (3 g, 6.81 mmol) u acetonitrilu (40 mL), dodaju se cezijum karbonat (4.4 g, 13.62 mmol) i metil jodid (4.83 g, 34.05 mmol). Dobijena reakciona mešavina se zagreva na 80 °C 7 h. Reakciona mešavina se ohladi na sobnu temperaturu i filtrira i čvrsta supstanca se ispere etil acetatom. Filtrat se koncentruje da se dobije željeno sirovo jedinjenje koje se prečišćava hromatografijom na koloni dajući metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)(metil)amino)-2-metilbenzoat (1.3 g, 43.33%).
Korak 6: Sinteza tert-butil ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata
1
[0675] Vodeni NaOH (0.23 g, 5.72 mmol) doda se u rastvor metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil) amino)cikloheksil)(metil)amino)-2-metilbenzoata (1.3 g, 2.86 mmol) u MeOH (20 mL) i meša na 60 °C 1 h. Po završetku reakcije, metanol se ukloni pod sniženim pritiskom i rezidua se acidifikuje do pH 6 razblaženom HCl i do pH 4 limunskom kiselinom. Acidifikovana mešavina se ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani organski ekstrakti se suše i koncentruju dajući odgovarajuću kiselinu (1 g, 83%).
[0676] Gornja kiselina (1 g, 2.27 mmol) se rastvori u DMSO (5 mL) i doda se 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (0.65 g, 4.54 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PyBOP (1.7 g, 3.4 mmol). Mešanje se nastavlja preko noći. Reakciona mešavina se sipa u ledenu vodu. Dobijeni precipitat se filtrira, ispere acetonitrilom i prečišćava hrmatografijom na koloni da se dobije jedinjenje
tert-butil((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil) karbamoil)-2-metilfenil)(metil) amino)-cikloheksil)karbamat (0.7 g, 53.8%).
Korak 7: Sinteza tert-butil ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-karbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino)-cikloheksil)karbamata
[0677] U mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamata (1 ekv.) i 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzil)morfolina (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i reakcioni flakon se ponovo prečisti 10 min argonom. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski ekstrakti se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije tert-butil ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino)ciklo-heksil)karbamat (0.07 g, 40%).
Korak 8: Sinteza 5-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0678] Mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)
1
(metil)amino)cikloheksil)karbamata (0.07 g) u DCM (5 mL) ohladi se na 0 °C i doda se TFA (2 mL). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona mešavina se koncentruje do suvog dajući jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.05 g, 84.74%). LCMS: 572.60 (M 1)+; HPLC: 88.92% (@ 254 nm) (Rt;3.546; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 10.05 (bs, 1H), 8.16 (t, 1H), 7.74-7.76 (m, 4H), 7.56 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.34 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.38 (bs, 2H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.95 (m, 2H), 3.63 (m, 2H), 3.27 (m, 1H), 3.12 (m, 2H), 2.97 (m, 2H), 2.74 (t, 1H), 2.66 (s, 3H), 2.20 (s, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.93-1.95 (m, 2H), 1.74-1.77 (m, 2H), 1.54-1.57 (m, 2H), 1.28-1.31 (m, 2H).
Primer 44: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0679]
Korak 1: Sinteza 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoeve kiseline
[0680]
[0681] U mešani rastvor 2-metil-3-nitrobenzoeve kiseline (100 g, 552 mmol) u konc. H2SO4(400 mL), doda se u porcijama 1,3-dibromo- 5,5-dimetil-2,4-imidazolidindion (88 g, 308 mmol) na sobnoj temperaturi i reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 5 h. Reakciona mešavina se sipa na ledeno hladnu vodu i precipitirana čvrsta supstanca se
1
isfiltrira, ispere vodom i suši pod vakuumom da se dobije željeno jedinjenje u vidu čvrste supstance (140 g, 98%). Izolovano jedinjenje se direktno prenosi u sledeći korak.<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.31 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 2.43 (s, 3H).
Korak 2: Sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata
[0682]
[0683] U mešani rastvor 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoeve kiseline (285 g, 1105 mmol) u DMF (2.8 L) na sobnoj temperaturi doda se natrijum karbonat (468 g, 4415 mmol), što je praćeno dodavanjem metil jodida (626.6 g, 4415 mmol). Dobijena reakciona mešavina se zagreva na 60 °C 8 h. Posle završetka (prati se pomoću TLC), reakciona mešavina se filtrira (da se ukloni natrijum karbonat) i ispere etil acetatom (1 L X 3). Kombinovani filtrat se ispere vodom (3 L X 5) i vodena faza ponovo ekstrahuje etil acetatom (1 L X 3). Kombinovani organski slojevi se suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu čvrste supstance (290 g, prinos 97%). Izolovano jedinjenje se direktno prenosi u sledeći korak.<1>H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.17 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.59 (s, 3H).
Korak 3: Sinteza metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata
[0684]
[0685] U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata (290 g, 1058 mmol) u etanolu (1.5 L) doda se vodeni amonijum hlorid (283 g, 5290 mmol rastvoreno u 1.5 L vode). Dobijena mešavina se meša na 80°C i doda joj se prah gvožđa (472 g, 8451 mmol) u porcijama. Dobijena mešavina se zagreva na 80 °C 12 h. Po završetku, što se određuje
1
pomoću TLC, reakciona mešavina se filtrira preko celite<®>i celitno ležište se ispere metanolom (5 L), što je praćeno ispiranjem korišćenjem 30% MeOH u DCM (5 L). Kombinovani filtrat se koncentruje u vakuumu, dobijena rezidua se razblaži vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (2 L) i ekstrahuje etil acetatom (5 L X 3). Kombinovani organski slojevi se suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju u koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu čvrste supstance (220 g, 85%). Jedinjenje se direktno prenosi u sledeći korak.<1>H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.37 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.80 (bs, 2H), 2.31 (s, 3H).
Korak 4: Sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il) amino) benzoata
[0686]
[0687] U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (15 g, 61.5 mmol) i dihidro-2H-piran-4(3)-ona (9.2 g, 92 mmol) u dihloroetanu (300 mL) doda se sirćetna kiselina (22 g, 369 mmol) i reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 minuta, zatim se reakciona mešavina ohladi na 0 °C i doda se natrijum triacetoksiborohidrid (39 g, 184 mmol). Reakciona mešavina se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku reakcije, što se određuje pomoću TLC, vodeni rastvor natrijum bikarbonata se doda u reakcionu mešavinu dok se ne dobije pH 7-8. Organska faza se izdvoji i vodena faza se ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani organski slojevi se suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filttriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje se prečišćava hromatografijom na koloni (100-200 veličina sita silika gela) uz eluiranje korišćenjem etil acetata:heksana da se dobije željeno jedinjenje u vidu čvrste supstance (14 g, 69%).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.01 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 5.00 (d, 1H, J=7.6 Hz), 3.84-3.87 (m, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.54-3.56 (m, 1H), 3.43 (t, 2H, J=12 Hz), 2.14 (s, 3H), 1.81-1.84 (m, 2H), 1.47-1.55 (m, 2H).
Korak 5: Sinteza metil 5-bromo-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzoata
[0688]
2
[0689] U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il) amino) benzoata (14 g, 42.7 mmol) u dihloroetanu (150 mL) dodaju se acetaldehid (3.75 g, 85.2 mmol) i sirćetna kiselina (15.3 g, 256 mmol). Dobijena reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 minuta. Mešavina se ohladi na 0 °C i doda se natrijum triacetoksiborohidrid (27 g, 128 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 3 sata. Po završetku reakcije, što se određuje pomoću TLC, vodeni rastvor natrijum bikarbonata se doda u reakcionu mešavinu dok se ne dobije pH 7-8, organska faza se izdvoji i vodena faza se ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani organski slojevi se suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje se prečišćava hromatografijom na koloni (100-200 veličina sita silika gela), uz eluiranje korišćenjem etil acetata:heksana da se dobije željeno jedinjenje u vidu viskozne tečnosti (14 g, 93%).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.62 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 3.80 (bs, 5H), 3.31 (t, 2H), 2.97-3.05 (m, 2H), 2.87-2.96 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 1.52-1.61 (m, 2H), 1.37-1.50 (m, 2H), 0.87 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Korak 6: Sinteza 5-bromo-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzamida
[0690]
[0691] U mešani rastvor 5-bromo-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzoata (14 g, 39.4 mmol) u etanolu (100 mL) doda se vodeni NaOH (2.36 g, 59.2 mmol u 25 mL vode) i dobijena mešavina se meša na 60 °C 1 h. Po završetku reakcije, što se određuje pomoću TLC, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i dobijena rezidua se acidifikuje
2 1
pomoću 1N HCl do pH 7 i zatim se dodaje vodeni rastvor limunske kiseline dok se ne dobije pH 5-6. Vodeni sloj se ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH u DCM (200 mL X 3), kombinovani organski slojevi se suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom dajući odgovarajuću kiselinu (14 g, 100%).
[0692] Gornja kiselina (14 g, 40.9 mmol) se zatim rastvori u DMSO (70 mL) i doda joj se 3-(amino metil)-4, 6-dimetilpiridin-2(1H)-on (12.4 g, 81.9 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 minuta, zatim se doda PYBOP (31.9 g, 61.4 mmol) i mešanje se nastavi preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku reakcije, što se određuje pomoću TLC, reakciona mešavina se sipa u ledeno hladnu vodu (700 mL), meša 30 minuta i čvrsti precipitat se sakupi filtracijom, ispere vodom (500 mL) i suši na vazduhu. Dobijena čvrsta supstanca se meša sa acetonitrilom (75 mL X 2), filtrira i suši na vazduhu. Dobijena čvrsta supstanca se ponovo meša sa 5% MeOH u DCM (100 mL), filtrira i potpuno suši u vakuumu da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu čvrste supstance (14 g, 74%).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (s, 1H), 8.23 (t, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.23 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81 (d, 2H, J=10.4 Hz), 3.20-3.26 (m, 2H), 3.00-3.07 (m, 1H), 2.91-2.96 (m, 2H), 2.18 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.58-1.60 (m, 2H), 1.45-1.50 (m, 2H), 0.78 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Korak 7: Sinteza N-((4, 6-dimetil-2-okso-1, 2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0693]
[0694] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1, 2-dihidropiridin-3-il) metil)-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzamida (14 g, 29.5 mmol) u mešavini dioksan/voda (70 mL/14 mL) doda se 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) benzil) morfolin (13.4 g, 44.2 mmol), što je praćeno dodavanjem Na2CO3(11.2 g, 106.1 mmol). Rastvor se prečisti argonom 15 minuta i zatim se doda Pd(PPh3)4(3.40 g, 2.94 mmol) i rastvor se ponovo prečisti argonom još 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku (što se prati pomoću TLC), reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko
2 2
anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje se prečisti hromatografijom na koloni (100-200 veličina sita silika gela) eluira korišćenjem metanola:DCM do jedinjenja iz naslova u vidu čvrste supstance (12 g, 71%).
Analitički podaci: LCMS: 573.35 (M 1)<+>; HPLC: 99.5% (@ 254 nm) (Rt;3.999; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.19 (t, 1H), 7.57 (d, 2H, J=7.2 Hz), 7.36-7.39 (m, 3H), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=2.8 Hz), 3.82 (d, 2H, J=9.6 Hz), 3.57 (bs, 4H), 3.48 (s, 2H), 3.24 (t, 2H, J=10.8Hz), 3.07-3.09 (m, 2H), 3.01 (m, 1H), 2.36 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.51-1.53 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.4 Hz).
Korak 8: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid trihidro-hlorida
[0695]
[0696] N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid (12 g, 21.0 mmol) rastvori se u metanolnoj HCl (200 mL) i meša na sobnoj temperaturi 3 h. Posle tri sata mešanja, reakciona mešavina se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca meša se sa etrom (100 mL X 2) da se dobije željena so u vidu čvrste supstance (11 g, 77%). Analitički podaci za tri-HCl so: LCMS: 573.40 (M 1)<+>; HPLC: 99.1% (@ 254 nm) (Rt;3.961; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (D2O 400 MHz) δ 7.92 (bs, 1H,) 7.80 (s, 1H), 7.77 (d, 2H, J=8 Hz), 7.63 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 6.30 (s, 1H), 4.48 (s, 2H), 4.42 (s, 2H), 4.09-4.11 (m, 4H), 3.95-3.97 (m, 2H), 3.77 (t, 3H, J=10.4 Hz), 3.44-3.47 (m, 3H), 3.24-3.32 (m, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.01 (m, 2H), 1.76 (m, 2H), 1.04 (t, 3H, J=6.8 Hz).
2
Primer 45: Sinteza 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0697]
Korak 1: Sinteza tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)cikloheksil) karbamata
[0698] U mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamata (1 ekv.) i 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 minuta. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i reakcioni flakon se ponovo prečisti argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski ekstrakti se suše preko Na2SO4, i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)cikloheksil) karbamat (0.07 g, 46.6%)
Korak 2: Sinteza 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0699] Mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil) amino)cikloheksil) karbamata (0.07 g) u DCM (5 mL) ohladi se na 0 °C i doda se TFA (2 mL). Reakciona
2 4
mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Reakcija se koncentruje do suvog dajući jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.07 g, 98.59%). LCMS: 477.35 (M 1)+; HPLC: 99.16% (@ 254 nm) (Rt;3.796; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.08 (t, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.74 (m, 3H), 7.28 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.26 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.84 (s, 3H), 2.96 (bs, 1H), 2.73 (bs, 1H), 2.63 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.92-1.95 (m, 2H), 1.74-1.77 (m, 2H), 1.48-1.57 (m, 2H), 1.23-1.32 (m, 2H).
Primer 46: Sinteza 3-(((1s,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0700]
Korak 1: Sinteza tert-butil ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)cikloheksil) karbamata
[0701] U mešani rastvor tert-butil ((1s,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)-karbamata (1 ekv.) i 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.). Rastvor se zatim prečisti argonom 15 min. Doda se Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i reakciona mešavina se ponovo prečisti argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4, i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije tert-butil ((1s,4s)-4-
2
((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)cikloheksil) karbamat (0.05 g, 33.3%).
Korak 2: Sinteza 3-(((1s,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0702] Mešani rastvor tert-butil ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil) amino)cikloheksil) karbamata (0.05 g) in DCM (5 mL) ohladi se na 0 °C i doda se TFA (2 mL). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Reakcija se koncentruje do suvog dajući jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.03 g, 73.1%). LCMS: 477.30 (M 1)+; HPLC: 98.76% (@ 254 nm) (Rt;3.862; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.08-8.12 (m, 2H), 7.76-7.81 (m, 4H), 7.33 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.27 (d, 2H, J=4 Hz), 3.83 (s, 3H), 3.16 (m, 2H), 2.50 (3H merged in rastvarač peak), 2.22 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.84 (m, 2H), 1.57-1.63 (m, 4H), 1.47-1.50 (m, 2H).
Primer 47: Sinteza 5-(((1s,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0703]
Korak 1: Sinteza tert-butil ((1s,4s)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino) cikloheksil)karbamata
2
[0704] U mešani rastvor tert-butil ((1s,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)-karbamata (1 ekv.) i N,N-dimetil-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil) metanamina (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.). Rastvor se zatim prečisti argonom 15 min. Doda se Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i reakciona mešavina se ponovo prečisti argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4, i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije tert-butil ((1s,4s)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino) cikloheksil)karbamat (0.100 g, 61%).
Korak 2: Sinteza 5-(((1s,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0705] Mešani rastvor tert-butil ((1s,4s)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino)cikloheksil)karbamata (0.10 g) u DCM (5 mL) ohladi se na 0 °C i doda se TFA (2 mL). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona mešavina se koncentruje do suvog dajući jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.05 g, 59.5%). LCMS: 530.35 (M 1)+; HPLC: 97.13% (@ 254 nm) (Rt;3.672; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.44 (s, 1H), 9.47 (bs,1H), 8.17 (t, 1H), 7.74-7.76 (m, 4H), 7.55 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.44 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.30 (m, 4H), 3.12 (m, 2H), 2.74 (s, 6H), 2.54 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.84 (bs, 2H), 1.59-1.63 (m, 4H), 1.48 (m, 2H).
Primer 48: Sinteza 3-(((1s,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il) benzamida
[0706]
2
Korak 1: Sinteza tert-butil ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata
[0707] U mešani rastvor tert-butil ((1s,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)-karbamata (1 ekv.) i 4-(2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)etil)morfolina (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.). Rastvor se zatim prečisti argonom 15 min. Doda se Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i reakciona mešavina se ponovo prečisti argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4, i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino) cikloheksil)karbamat (0.120 g, 75.4%).
Korak 2: Sinteza 3-(((1s,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0708] Mešani rastvor tert-butil ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata (0.10 g) u DCM (5 mL) ohladi se na 0 °C i doda se TFA (2 mL). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona mešavina se koncentruje do suvog da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.06 g, 58.82%). LCMS: 576.40 (M 1)+; HPLC: 96.89% (@ 254 nm) (Rt;3.481; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400
2
MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.08 (t, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.74-7.79 (m, 3H), 7.34 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.51 (bs, 2H), 4.27 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.16 (m, 6H), 2.50 (3H merged in rastvarač peak), 2.23 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.84 (bs, 2H), 1.57-1.63 (m, 4H), 1.47-1.49 (m, 2H). [3 H spojena u piku rastvarača].
Primer 49: Sinteza 3-(((1s,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[0709]
Korak 1: Sinteza tert-butil ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)-amino)cikloheksil) karbamata
[0710] U rastvor koji se meše tert-butil ((1s,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil) karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamata (0.5 g, 8.71 mmol) i (6-formilpiridin-3-il) boronske kiseline (0.264 g, 1.13 mmol) u mešavini dioksan/voda (10 mL+2 mL), doda se Na2CO3(0.333 g, 2.8 mmol). Rastvor se zatim prečisti argonom 15 min. Doda se Pd(PPh3)4(0.1 g, 0.086 mmol) i rastvor se ponovo prečisti argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4, i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije tert butil ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino) cikloheksil) karbamat (0.3 g, 57.3%).
Korak 2: Sinteza tert-butil ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)fenil)(metil)amino) cikloheksil)karbamata
2
[0711] U rastvor koji se meše tert-butil ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino) cikloheksil)karbamata (1 ekv.) i morfolina (5 ekv.) u metanolu (10 mL), doda se sirćetna kiselina (2 ekv.). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 18 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekv.) na 0 °C i reakciona mešavina se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i sirovi proizvod se prečisti hromatografijom na koloni da se dobije tert-butil ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)fenil)(metil)amino) cikloheksil)karbamat
Korak 3: Sinteza 3-(((1s,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[0712] Mešani rastvor tert-butil ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)fenil) (metil)amino)cikloheksil)karbamata u DCM (5 mL) ohladi se na 0 °C i doda se TFA (2 mL). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona mešavina se koncentruje do suvog i proizvod se prečisti ispiranjem rastvaračem da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.1 g, 94.33%). LCMS: 573.45 (M 1)+; HPLC: 98.94% (@ 254 nm) (Rt;3.618; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (s, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.19-8.21 (m, 2H), 7.80 (s, 3H), 7.60 (d, 1H, J=8 Hz), 7.49 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.52 (bs, 2H), 4.29 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.83 (bs, 4H), 3.27 (m, 4H), 3.14-3.21 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.87 (bs, 2H), 1.59-1.64 (m, 4H), 1.49-1.51 (m, 2H).
Primer 50: Sinteza 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[0713]
21
Korak 1: Sinteza tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamata
[0714] U mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil) karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)-karbamata (0.4 g, 0.696 mmol) i (6-formilpiridin-3-il)boronske kiseline (0.21 g, 0.906 mmol) u mešavini dioksan/voda (8 mL+2 mL), doda se Na2CO3(0.332 g, 3.13 mmol). Reakcioni rastvor se zatim prečisti argonom 15 min. Doda se Pd(PPh3)4(0.080 g, 0.069 mmol) i rastvor se ponovo prečisti argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil) karbamat (0.28 g, 66.98%).
Korak 2: Sinteza tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)fenil)(metil)-amino)cikloheksil)karbamata
[0715] U mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamata (1 ekv.) i morfolina (5 ekv.) u metanolu (10 mL), doda se sirćetna kiselina (2 ekv.). Reakcija se meša na sobnoj temperaturi 18 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekv.) na 0 °C i reakcija se meša na sobnoj temperaturi.preko noći Rastvarač se ukloni na sniženom pritisku i sirovi materijal se prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)fenil)(metil)-amino)ciklo-heksil)karbamat
Korak 3: Sinteza 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[0716] Mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-karbamoil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)fenil)(metil)-amino)cikloheksil)karbamata u DCM (5 mL) ohladi se na 0 °C i doda se TFA (2 mL). Reakciona masa se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona mešavina se koncentruje do suvog i čvrsti proizvod se prečisti ispiranjem rastvaračem da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.07 g, 82.3%). LCMS: 573.40 (M 1)+; HPLC: 91.56% (@ 254 nm) (Rt;3.591; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.19-8.22 (m, 2H), 7.78 (bs, 3H), 7.61 (d, 1H, J=8 Hz), 7.40 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.52 (bs, 2H), 4.28 (d, 2H, J=3.2 Hz), 3.84 (bs, 4H), 3.27 (bs, 4H), 2.97 (bs, 1H), 2.75 (m, 1H), 2.66 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.93 (m, 2H), 1.74-1.76 (m, 2H), 1.54-1.57 (m, 2H), 1.28-1.31 (m, 2H).
Primer 51: Sinteza 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0717]
Korak 1: Sinteza tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata
[0718] U mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamata (1 ekv.) i 4-(2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)etil)morfolina (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i reakcioni flakon se ponovo prečisti 10 min argonom. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela dajući tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamat (0.08 g, 45.45%)
Korak 2: Sinteza 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0719] Mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(1-(2-morfolinoetil)-1H-pirazol-4-il)fenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata (0.08 g) u DCM (5 mL) ohladi se na 0 °C i doda mu se TFA (2 mL). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Reakcija se koncentruje do suvog da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.07 g, 86.41%). LCMS: 576.45 (M 1)+; HPLC: 98.26% (@ 254 nm) (Rt;3.413; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.08 (t, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.75 (m, 3H), 7.28 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.53 (t, 2H), 4.27 (d, 2H, J=3.6 Hz), 2.97-3.16 (m, 4H), 2.67-2.71 (m, 1H), 2.62 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.92-1.94 (m, 2H), 1.72 (m, 2H), 1.52-1.55 (m, 2H), 1.23-1.29 (m, 2H).
Primer 52: Sinteza 3-(((1s,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilbenzamida
[0720]
21
Korak 1: Sinteza tert-butil ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-karbamoil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamata
[0721] U mešani rastvor tert-butil ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)-(metil) amino)cikloheksil)karbamata (1 ekv.) i dimetilamina (5 ekv.) u metanolu (10 mL), doda se sirćetna kiselina (2 ekv.). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 18 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekv.) na 0 °C i reakcija se meša na sobnoj temperaturi. preko noći. Rastvarač se ukloni na sniženom pritisku i sirovi proizvod se prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije tert-butil ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-karbamoil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamat
Korak 2: Sinteza 3-(((1s,4s)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilbenzamida
[0722] Mešani rastvor tert-butil ((1s,4s)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata u DCM (5 mL) ohladi se na 0 °C i doda se TFA (2 mL). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Reakcija se koncentruje do suvog i proizvod se prečisti ispiranjem rastvaračem do jedinjenja iz naslova u vidu TFA soli (0.07 g, 93.3%). LCMS: 531.25 (M 1)+; HPLC: 97.59% (@ 254 nm) (Rt;3.680; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 10.01 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.20 (d, 2H, J=5.2 Hz), 7.80 (bs, 3H), 7.59 (d, 1H, J=8 Hz), 7.51 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.48 (bs, 2H), 4.29 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.21 (m, 1H), 3.14-3.16 (m, 1H), 2.83 (s, 6H), 2.55 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.86 (bs, 2H), 1.59-1.64 (m, 4H), 1.49-1.51 (m, 2H).
Primer 53: Sinteza 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilbenzamida
[0723]
Jedinjenje 53
Korak 1: Sinteza tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino) cikloheksil)karbamata
[0724] U mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamata (1 ekv.) i dimetilamina (5 ekv.) u metanolu (10 mL), doda se sirćetna kiselina (2 ekv.). Reakcija se meša na sobnoj temperaturi 18 h. Zatim se doda natrijum cijanoborohidrid (2.5 ekv.) na 0 °C i reakcija se meša na sobnoj temperaturi. preko noći. Rastvarač se ukloni na sniženom pritisku i sirovi materijal se prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije tertbutil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino) cikloheksil)karbamat.
Korak 2: Sinteza 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilbenzamida
[0725] Mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metilfenil)(metil)amino)cikloheksil)karbamata u DCM (5 mL) ohladi se na 0 °C i doda mu se TFA (2 mL). Reakciona masa se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona mešavina se koncentruje do suvog i čvrsti proizvod se prečisti ispiranjem rastvaračem do jedinjenja iz
21
naslova u vidu TFA soli (0.05 g, 66.6%). LCMS: 531.30 (M 1)+; HPLC: 97.59% (@ 254 nm) (Rt;3.564; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 10.01 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.20 (bs, 2H), 7.78 (bs, 2H), 7.59 (d, 1H, J=6 Hz),7.41 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.48 (bs, 2H), 4.29 (m, 2H), 2.97 (bs, 2H), 2.83 (s, 6H), 2.66 (s, 3H), 2.21 (s, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.93 (m, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.55-1.57 (m, 2H), 1.28-1.31 (m, 2H).
Primer 54: Sinteza 3-(((1r,4r)-4-acetamidocikloheksil)(metill)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benz-amida
[0726]
Jedinjenje 54 priprema se metodom sličnim onome koji je opisan u Primeru 57.
[0727] Analitički podaci: LCMS: 615.55 (M 1)<+>; HPLC: 98.75% (@ 254 nm) (Rt;3.854; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.18 (t, 1H), 8.02 (d, 1H, J=8 Hz), 7.67 (d, 1H, J=7.2 Hz), 7.49 (d, 1H, J=8 Hz), 7.35 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.59-3.61 (m, 4H), 3.47-3.55 (m, 2H), 2.76 (t, 2H, J=4 Hz), 2.65 (s, 3H), 2.42 (bs, 4H), 2.21 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.78-1.90 (m, 2H), 1.68-1.74 (m, 5H), 1.48-1.57 (m, 2H), 1.03-1.23 (m, 2H).
Primer 55: Sinteza 3-(((1s,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-2-metil-benzamida
[0728]
21
Korak 1: Sinteza 3-(((1s,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-kso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida
[0729] 3-(((1s,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamidu (0.65 g, 1.25 mmol) i (6-formilpiridin-3-il)boronskoj kiselini (0.38 g, 1.63 mmol) u mešavini dioksan/voda (10 mL+2 mL) doda se Na2CO3(0.48 g, 4.53 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.14 g, 0.12 mmol.) i ponovo se uvede argon 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije cis-izomer 3-((4-acetamidocikloheksil)-(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (0.35 g, 51.16%).
[0730] Korak 2: Sinteza U mešani rastvor 3-(((1s,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i dimetilamina (5 ekv.) u 5 mL, za 0.3 mmol, MeOH doda se sirćetna kiselina (2 ekv.) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi. Zatim se doda NaBH3CN (1.5 ekv.) i reakcija se meša preko noći. Po završetku, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i rezidua se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela, ili kako je specifikovano, dajući jedinjenje iz naslova (0.006 g, 3.2%). LCMS: 573.40 (M 1)<+>; HPLC: 95.52% (@ 254 nm) (Rt;3.899; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.20 (t, 1H), 8.14 (d, 1H, J=7.6 Hz), 7.78 (d, 1H, J=7.2 Hz), 7.55 (d, 1H, J=8 Hz), 7.44 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=3.2 Hz), 4.26 (bs, 1H), 3.71 (bs, 1H), 3.01 (bs, 1H), 2.61-2.66 (m, 8H),
21
2.28 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.81 (m, 5H), 1.56 (m, 2H), 1.40-1.46 (m, 2H), 1.23 (m, 2H). [2H spojena u piku rastvarača].
Primer 56: Sinteza 3-(((1s,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(hidroksimetil)piridin-3-il)-2-metilbenzamida
[0731]
[0732] Jedinjenje 56 priprema se istom reakcijom kao jedinjenje 55. LCMS: 546.40 (M 1)+; HPLC: 99.40% (@ 254 nm) (Rt;3.845; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.20 (t, 1H), 8.04 (d, 1H, J=8 Hz), 7.77 (d, 1H, J=7.2 Hz), 7.52 (d, 1H, J=7.6 Hz), 7.40 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 5.45 (t, 1H, J=5.2 Hz), 4.59 (d, 2H, J=5.6 Hz), 4.27 (d, 2H, J=4 Hz), 3.71 (bs, 1H), 3.00 (bs, 1H), 2.60 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.81 (m, 5H), 1.56 (m, 2H), 1.40-1.48 (m, 4H).
Primer 57: Sinteza 3-(((1s,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[0733]
21
[0734] U mešani rastvor 3-(((1s,4s)-4-acetamidocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i morfolina (5 ekv.) u 5 mL, za 0.3 mmol, MeOH doda se sirćetna kiselina (2 ekv.) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi. Zatim se doda NaBH3CN (1.5 ekv.) i reakcija se meša preko noći. Po završetku, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i rezidua se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela, ili kako je specifikovano, dajući jedinjenje iz naslova (0.08 g, 43%). LCMS: 615.40 (M 1)+; HPLC: 99.64% (@ 254 nm) (Rt;3.900; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.19 (t, 1H), 8.01 (d, 1H, J=7.6 Hz), 7.77 (d, 1H, J=7.2 Hz), 7.50 (d, 1H, J=8 Hz), 7.40 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.71 (bs, 1H), 3.59-3.61 (m, 4H), 3.50 (t, 1H, J=4.4 Hz), 3.00 (bs, 1H), 2.68 (t, 1H, J=4.4 Hz), 2.60 (s, 3H), 2.42 (bs, 4H), 2.27 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.81 (m, 5H), 1.56 (m, 2H), 1.40-1.45 (m, 2H), 1.16-1.29 (m, 2H).
Primer 59: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-5-(propil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0735]
Korak 1: Sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata
[0736] U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (15 g, 61.5 mmol) i dihidro-2H-piran-4(3)-ona (9.2 g, 92 mmol) u dihloroetanu (300 mL) doda se sirćetna kiselina (22 g, 369 mmol) i reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 minuta, posle čega se rekaciona mešavina ohladi na 0 °C i doda se natrijum triacetoksiborohidrid (39 g, 183.96
21
mmol). Reakciona mešavina se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Zatim se u reakcionu mešavinu doda vodeni natrijum bikarbonat koji podešava pH na 7-8. Organska faza se izdvoji i vodena faza se ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani ekstrakti se suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečisti hromatografijom na koloni (100-200 veličina sita silika gela) eluira etil acetatom:heksanom da se dobije metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino) benzoat kao beličasta čvrsta supstanca (14 g, 69%).
Korak 2: Sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-(propil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata
[0737] U mešani rastvor 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (1 g, 3.04 mmol) i propionaldehida (0.354 g, 6.09 mmol) u dihloroetanu (10 mL), doda se sirćetna kiselina (1.12 g, 18.2 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 10 minuta. Zatim se doda natrijum triacetoksiborohidrid (1.94 g, 9.14 mmol) na 0 °C i reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 2 h. Rastvarač se zatim ukloni pod sniženim pritiskom i rezidui se doda voda. Mešavina se ekstrahuje koiršćenjma DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentuju pod sniženim pritiskom dajući sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije metil 5-bromo-2-metil-3-(propil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoat (0.96 g, 85.7%).
Korak 3: Sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(propil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida
[0738] Vodeni NaOH (0.156 g, 3.8 mmol) doda se u rastvor 5-bromo-2-metil-3-(propil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (0.96 g, 2.59 mmol) u etanolu (5 mL). Reakciona mešavina se meša na 60 °C 1 h. Etanol se zatim ukloni pod sniženim pritiskom i rezidua se acidifikuje do pH 6 razblaženom HCl i do pH 4 limunskom kiselinom. Mešavina se ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani ekstrakti se suše, filtriraju i koncentruju dajući odgovarajuću kiselinu (0.8 g, 86.67%).
[0739] Gornja kiselina (0.8 g, 2.24 mmol) se rastvori u DMSO (5 mL) i doda se 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (0.683 g, 4.49 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PyBOP (1.75 g, 3.36 mmol) i mešanje se nastavlja preko noći. Reakciona mešavina se sipa u ledenu vodu i ekstrahuje korišećenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše, filtriraju i koncentruju da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava ispiranjem rastvaračem da se dobije 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-
22
okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(propil(tetrahi-dro-2H-piran-4-il)amino)benzamid (0.9 g, 81.8%).
Korak 4: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-5-(propil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0740] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(propil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (0.2 g, 0.412 mmol) i 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzil)morfolina (0.148 g, 0.488 mmol) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(0.108 g, 1.01 mmol) i reakciona mešavina se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.048 g, 0.042 mmol) i reakciona mešavina se ponovo prečisti argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 2 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.20 g, 83.68%). LCMS:587.40 (M 1)+; HPLC: 98.68% (@ 254 nm) (Rt;4.257; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.19 (t, 1H, J=4.8 Hz), 7.56 (d, 2H, J=8 Hz), 7.38 (t, 3H, J=8 Hz), 7.19 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.82-3.85 (m, 2H), 3.57 (m, 4H), 3.48 (s, 2H), 3.23 (t, 2H, J=10.8 Hz), 2.94-3.02 (m, 3H), 2.36 (bs, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.56-1.65 (m, 4H), 1.20-1.25 (m, 2H), 0.76 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 60: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(izobutil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0741]
Korak 1: Sinteza metil 5-bromo-3-(izobutil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata
[0742] U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (1 g, 3.04 mmol) i izobutiraldehida (1.09 g, 15.24 mmol) u metanolu (15 mL), doda se sirćetna kiselina (0.456 g, 7.6 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 8 h. Natrijum cijanoborohidrid (0.522 g, 7.56 mmol) se zatim doda na 0 °C i reakciona mešavina se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i sirovi proizvod se prečisti hromatografijom na koloni da se dobije metil 5-bromo-3-(izobutil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoat (0.52 g, 54.33%).
Korak 2: Sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(izobutil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
[0743] Vodeni NaOH (0.104 g, 2.61 mmol) doda se u rastvor metil 5-bromo-3-(izobutil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata (0.5 g, 1.30 mmol) u etanolu (15 mL) i meša na 60 °C 1 h. Etanol se zatim ukloni na sniženom pritisku i izvrši se acidifikacija do pH 6 razblaženom HCl i do pH 4 limunskom kiselinom. Mešavina se ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani ekstrakti se suše i koncentruju dajući odgovarajuću kiselinu (0.375 g, 76.9%).
[0744] Gornja kiselina (0.350 g, 9.45 mmol) se zatim rastvori u DMSO (5 mL) i doda se 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (0.283 g, 18.9 mmol). Reakciona mšavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre nego što joj se doda PyBOP (0.737 g, 14.17 mmol). Reakciona mešavina se meša preko noći. Reakciona mešavina se sipa u ledenu vodu i dobijeni precipitat se sakupi i prečisti ispiranjem rastvaračem da se dobije 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(izobutil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamid (0.2 g, 42.01%).
Korak 3: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(izobutil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0745] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(izobutil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0.14 g, 0.277 mmol) i 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-diokaaborolan-2-il)benzil)morfolina (0.100 g, 0.333 mmol) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(0.108 g, 1.01 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.032 g, 0.027 mmol) i reakciona mešavina se ponovo prečisti argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 2 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava preparativnom HPLC dajući jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.039 g, 23.49%). LCMS:601.30 (M 1)+; HPLC: 99.88% (@ 254 nm) (Rt;5.225; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 9.83 (bs, 1H), 8.20 (t, 1H), 7.73 (d, 2H, J=8 Hz), 7.56 (d, 2H, J=8 Hz), 7.43 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.39 (bs, 2H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.95-3.98 (m, 2H), 3.85-3.87 (m, 2H), 3.62 (t, 2H, J=11.2 Hz), 3.15-3.31 (m, 9H), 2.84 (m, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.62 (bs, 2H), 1.37-1.40 (m, 2H), 0.80 (d, 6H, J=6 Hz).
Primer 61: Sinteza 5-((ciklopropilmetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0746]
22
Korak 1: Sinteza metil 5-bromo-3-((ciklopropilmetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata
[0747] U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (1 g, 3.04 mmol) i ciklopropankarbaldehida (1.06 g, 15.24 mmol) u metanolu (15 mL), doda se sirćetna kiselina (0.456 g, 7.6 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 8 h. Natrijum cijanoborohidrid (0.488 g, 7.62 mmol) se zatim doda na 0 °C i reakciona mešavina se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i sirovi proizvod se prečisti hromatografijom na koloni da se dobije metil 5-bromo-3-((ciklopropilmetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoat (0.275 g, 23.70%).
Korak 2: Sinteza 5-bromo-3-((ciklopropilmetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
[0748] Vodeni NaOH (0.056 g, 1.45 mmol) doda se u rastvor metil 5-bromo-3-((ciklopropilmetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata (0.275 g, 0.943 mmol) u etanolu (5 mL) i meša na 60 °C 1 h. Etanol se zatim ukloni pod sniženim pritiskom i izvrši se acidifikacija do pH 6 razblaženom HCl i do pH 4 limunskom kiselinom. Mešavina se ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani ekstrakti se suše i koncentruju dajući odgovarajuću kiselinu (0.25 g, 93.28%).
[0749] Gornja kiselina (0.250 g, 0.68 mmol) se rastvori u DMSO (3 mL) i doda se 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (0.155 g, 1.02 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PyBOP (0.708 g, 1.36 mmol). Reakciona mešavina se meša preko noći. Reakciona mešavina se sipa u ledenu vodu i dobijeni precipitat se sakupi i prečisti ispiranjem rastvaračem dajući 5-bromo-3-((ciklopropilmetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-piridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid (0.25 g, 73.31%).
Korak 3: Sinteza 5-((ciklopropilmetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0750] U mešani rastvor 5-bromo-3-((ciklopropilmetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0.25 g, 0.499 mmol) i 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzil)morfolina (0.181 g, 0.598 mmol) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(0.19 g, 1.79 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.057 g, 0.049 mmol) i reakciona mešavina se ponovo prečisti argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 2 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava preparativnom HPLC da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.085 g, 28.52%). LCMS:599.35 (M 1)+; HPLC: 99.21% (@ 254 nm) (Rt;4.191; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.51 (s, 1H), 9.83 (bs, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.77 (d, 2H, J=6.4 Hz), 7.53-7.58 (m, 3H), 7.28 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.39 (bs, 2H), 4.29 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.95-3.98 (m, 2H), 3.59-3.65 (m, 2H), 3.31-3.21 (m, 5H), 3.05-3.16 (m, 3H), 2.93 (m, 2H), 2.32 (m, 4H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.65 (bs, 2H), 1.50 (m, 2H), 0.66 (bs, 1H), 0.28 (d, 2H, J=7.2 Hz).
Primer 62: Sinteza 5-(butil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0751]
[0752] Jedinjenje 62 priprema se metodom koji je sličan onome opisanom u Primeru 61.
[0753] Analitički podaci za TFA so: LCMS: 601.35 (M 1)<+>; HPLC: 99.41% (@ 254 nm) (Rt;4.482; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (s, 1H), 9.89 (bs, 1H), 8.22 (t, 1H), 7.75 (d, 2H, J=8 Hz), 7.57 (d, 2H, J=8 Hz), 7.44 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.39 (bs, 2H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.95-3.98 (m, 3H), 3.83-3.86 (m, 4H), 3.21-3.30 (m, 4H), 3.08-3.11 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.62 (m, 4H), 1.20 (m, 4H), 0.79 (t, 3H, J=6.4 Hz).
22
Primer 63: Sinteza 5-((ciklobutilmetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0754]
[0755] Jedinjenje 63 priprema se metodom koji je sličan onome opisanom u Primeru 61. Analitički podaci: LCMS: 613.35 (M 1)<+>; HPLC: 99.25% (@ 254 nm) (Rt;4.586; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.18 (t, 1H), 7.56 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.41 (s, 1H), 7.37 (d, 2H, J=8 Hz), 7.20 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.45 (m, 2H), 4.28 (d, 2H, J=4 Hz), 3.83-3.85 (m, 2H), 3.57 (m, 3H), 3.48 (s, 2H), 3.19-3.22 (m, 2H), 3.08 (bs, 2H), 2.86 (m, 1H), 2.36 (m, 4H), 2.20 (s, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.70-1.78 (m, 4H), 1.56-1.63 (m, 6H).
Primer 64: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metil-5-(6-(morfolinometil) piridin-3-il) benzamida
[0756]
22
Korak 1: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida
[0757] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzamida (1 g, 2.15 mmol) i (6-formilpiridin-3-il) boronske kiseline (0.539 g, 2.31 mmol) u mešavini dioksan/voda (15 mL+3 mL), doda se Na2CO3(0.82 g, 7.74 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.288 g, 0.25 mmol) i argon se ponovo uvede 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 80 °C 2 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije željeno jedinjenje (0.60 g, 57%).
Korak 2: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metil-5-(6-(morfolinometil) piridin-3-il) benzamida
[0758] U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (0.2 g, mmol) u dihloroetanu (3 mL) dodaju se morfolin (5 ekv.) u 5 mL MeOH i sirćetna kiselina (2 ekv.) i mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 minuta Zatim se doda NaBH3CN (1.5 ekv.) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 16 sati. Po završetku (praćeno pomoću TLC), u reakcionu mešavinu se dodaje vodeni natrijum bikarbonat do pH 7-8, organska faza se odvoji i vodena faza se ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani organski slojevi se suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje se prečisti hromatografijom na koloni (100-200 veličina sita silika gela) eluira etil acetatom:heksanom da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu beličaste čvrste supstance. LCMS: 574.25 (M 1)+; HPLC: 97.17% (@ 254 nm) (Rt;3.906; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mmx 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.20 (t, 1H), 8.01 (d, 1H, J=7.2 Hz), 7.50 (d, 1H, J=7.6 Hz), 7.46 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=3.6 Hz), 3.81-3.83 (m, 2H), 3.59-3.61 (m, 6H), 3.22-3.30 (m, 2H), 3.08-3.10 (m, 2H), 3.03 (m, 1H), 2.43 (s, 4H), 2.25 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.65-1.67 (m, 2H), 1.51-1.53 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.4 Hz).
22
Primer 65: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0759]
Korak 1: Sinteza metil 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata
[0760] U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (14 g, 42.68 mmol) i acetaldehida (3.75 g, 85.36 mmol) u dihloroetanu (150 mL), doda se sirćetna kiselina (15.36 g, 256.08 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 20 minuta. Zatim se doda natrijum triacetoksiborohidrid (27.01 g, 128.04 mmol) na 0 °C i reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 2 h. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i voda se doda rezidui. Mešavina se ekstrahuje korišćenjem DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije metil 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoat (14 g, 93.33%).
Korak 2: Sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
[0761] Vodeni NaOH (2.36 g, 59.15 mmol) doda se u rastvor metil 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata (14 g, 39.43 mmol) u etanolu (100 mL) i meša na 60 °C 1 h. Etanol se zatim ukloni pod sniženim pritiskom i izvrši se acidifikacija do pH 6 razblaženom HCl i do pH 4 limunskom kiselinom. Mešavina se ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani ekstrakti se suše i koncentruju dajući odgovarajuću kiselinu (13.9 g, 100%).
[0762] Gornja kiselina (10 g, 29.23 mmol) se rastvori u DMSO (25 mL) i dodaju se 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (8.8 g, 58 mmol) i trietilamin (5.6 g, 58.4 mmol).
22
Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PyBOP (22 g, 43.8 mmol). Reakciona mešavina se meša preko noći. Reakciona mešavina se sipa u ledenu vodu i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše i koncentruju da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava ispiranjem rastvaračem da se dobije 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamid (14 g, 73.68%).
Korak 3: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0763] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0.2 g, 0.42 mmol) i (4-((dimetilamino)metil)fenil)boronske kiseline (0.15 g, 0.505 mmol) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(0.16 g, 1.51 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.048 g, 0.042 mmol) i reakciona mešavina se ponovo prečisti argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 2 h. Reakciona mešavina se zatim razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.120 g, 53.8%). LCMS:531.30 (M 1)+; HPLC: 94.88% (@ 254 nm) (Rt;3.949; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.19 (t, 1H, J=4.4 Hz), 7.61 (d, 2H, J=8 Hz), 7.39-7.41 (m, 3H), 7.23 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.8 Hz), 3.62-3.84 (m, 4H), 3.22-3.38 (m, 2H), 3.02-3.06 (m, 3H), 2.30 (bs, 6H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.51-1.53 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 66: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-((4-metilpiperazin-1-il)metil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0764]
22
[0765] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0.2 g, 0.42 mmol) i (4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)boronske kiseline (0.159 g, 0.505 mmol) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(0.16 g, 1.51 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.048 g, 0.042 mmol) i reakciona mešavina se ponovo prečisti argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 2 h. Reakciona mešavina se zatim razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava preparativnom HPLC dajući jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.110 g, 44.7%). LCMS:586.40 (M 1)+; HPLC: 96.03% (@ 254 nm) (Rt;3.803; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.23 (t, 1H), 7.69 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.47 (t, 3H, J=8 Hz), 7.29 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.28 (d, 4H, J=4 Hz), 3.93 (s, 3H), 3.83-3.86 (m, 2H), 3.43 (m, 2H), 3.16-3.27 (m, 8H), 2.81 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.66 (m, 2H), 1.57 (m, 2H), 0.84 (t, 3H, J=6 Hz).
Primer 67: Sinteza 4’-((1R, 4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-ilmetil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida (0.1g, 28%);
[0766]
2
Korak 1: Sinteza metil 5-bromo-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzoata
[0767] U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il) amino) benzoata (14 g, 43 mmol) i acetaldehida (3.75 g, 85.4 mmol) u dihloroetanu (150 mL), doda se sirćetna kiselina (15.36 g, 256 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi 20 minuta, doda se natrijum triacetoksiborohidrid (27.0 g, 128 mmol) na 0 °C. Mešavina se meša na sobnoj temperaturi 2 h i gasi vodenim natrijum bikarbonatom. Organska faza se izdvoji i vodena faza se ekstrahuje dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom dajući sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije metil 5-bromo-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzoat (14 g, 93%).
Korak 2: Sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzamida
[0768] U mešani rastvor metil 5-bromo-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzoata (14 g, 39 mmol) u etanolu (100 mL) doda se vodeni NaOH (2.36 g, 59.1 mmol). Posle mešanja na 60 °C 1 h, etanol se ukloni pod sniženim pritiskom i izvrši se acidifikacija do pH 4 korišćenjem razblažene HCl, a zatim puferskim rastvorom limunske kiseline. Mešavina se ekstrahuje etil acetatom i kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju da se dobije odgovarajuća kiselina (13.9 g).
[0769] U mešani rastvor gornje kiseline (10 g, 29 mmol), 3-(amino metil)-4, 6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (8.8 g, 58 mmol) i trietilamina (5.6 g, 58 mmol) u DMSO (25 mL) doda se PYBOP (22 g, 44 mmol) na 0 °C. Posle mešanja preko noći na sobnoj temperaturi, mešavina se sipa preko leda i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/CH2Cl2. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirova supstanca. Triturisanje sirovog materijala rastvaračem daje 5-bromo-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-3-(etil (tetrahidro-2H-piran- 4-il) amino)-2-metilbenzamid (14 g, 73%).
2 1
Korak 3: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0770] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzamida (5.0 g, 10 mmol) i (4-formilfenil) boronske kiseline (2.35 g, 15.8 mmol) u mešavini dioksan/voda (30 mL/10 mL), doda se Na2CO3(4.01 g, 37.9 mmol). Rastvor se prečisti argonom 15 min, doda se Pd(PPh3)4(1.21 g, 1.05 mmol) i reakciona mešavina zagreva na 100 °C 2 h. Mešavina se ostavi da se ohladi do sobne temperature, razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/CH2Cl2. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid (3.5 g, 66%).
Postupci reduktivne aminacije koji slede koriste se za sintezu Jedinjenja 67 do 105
[0771] U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida (1.0 mmol) i potrebnog amina (3.0 mmol) u dihloroetanu (10 mL), doda se sirćetna kiselina (6.0 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi 20 minuta, doda se natrijum triacetoksiborohidrid (0.63 g, 3.0 mmol) na 0 °C. Mešavina se meša na sobnoj temperaturi 2 h. i reakcija gasi vodenim natrijum bikarbonatom. Organska faza se izdvoji i vodena faza se ekstrahuje dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom dajući sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela ili uz korišćenje RP-HPLC da se dobije proizvod u vidu slobodne baze ili u vidu trifluoroacetatne soli.
Analitički podaci za 4’-((1R, 4R)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-ilmetil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid: LCMS: 585.25 (M 1)<+>; HPLC: 99.65% (@ 254 nm) (Rt;4.019; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.19 (t, 1H), 7.55 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.39-
2 2
7.41 (m, 3H), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.35 (s, 2H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.93 (d, 2H, J=7.2 Hz), 3.82 (d, 2H, J=9.6 Hz), 3.72 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.44-3.53 (m, 3H), 3.22-3.27 (m, 1H), 3.01-3.09 (m, 2H), 2.73 (d, 1H, J=9.2 Hz), 2.23 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.79-1.82 (m, 1H), 1.51-1.67 (m, 5H), 0.82 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 68: 4’-((1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-ilmetil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid (0.15 g, 43%);
[0772]
[0773] Analitički podaci: LCMS: 585.35 (M 1)+; HPLC: 98.99% (@ 254 nm) (Rt;3.95; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (bs, 1H,), 8.18(s, 1H,), 7.56-7.54 (m, 2H), 7.41-7.39 (m, 3H), 7.21 (s, 1H), 5.87(s, 1H), 4.34 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4Hz),3.93 (d, 1H, J=7.6 Hz), 3.83-3.81(m, 2H), 3.74-3.72 (m, 2H), 3.52(d, 1H, J=6.8 Hz.), 3.44(s, 1H,), 3.28-3.22(m,2H), 3.09-3.08(m, 3H), 2.73 (d,1H J=10Hz), 2.41 (d,1H J=10Hz), 2.24(s,3H), 2.20(s,3H), 2.10(s,3H), 1.79(m, 1H), 1.67-1.51 (m,5H).0.83 (t,3H J=6.8Hz).
Primer 69: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(pirolodin-1-ilmetil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid (0.19 g)
[0774]
2
[0775] Analitički podaci: LCMS:557.25 (M 1)<+>; HPLC: 97.70% (@ 254 nm) (Rt;4.075; metod: kolona: YMC ODS-A150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.19 (t, 1H, J=4.4 Hz), 7.55 (d, 2H, J=8 Hz), 7.38 (d, 2H, J=6.4 Hz), 7.35 (s, 1H),7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.58 (s, 2H), 3.22-3.27 (m, 2H), 3.06-3.09 (m, 2H), 2.99-3.04 (m, 1H), 2.43 (bs, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.69 (m, 6H), 1.51-1.56 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 70: (S)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4’-(3-hidroksipirolodin-1-ilmetil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid, TFA so (0.15 g, 44%)
[0776]
[0777] Analitički podaci: LCMS: 573.40 (M 1)<+>; HPLC: 97.97% (@ 254 nm) (Rt;3.965; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (s, 1H), 10.03-10.30 (m, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.75 (d, 2H, J=7.2
2 4
Hz), 7.60 (d, 2H, J=8 Hz), 7.52 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.45-4.46 (m, 2H), 4.39-4.40 (m, 2H), 4.29 (d, 2H, J=5.2 Hz), 3.83-3.86 (m, 2H), 3.43-3.55 (m, 2H), 3.01-3.36 (m, 6H), 2.32-2.37 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.67 (m, 2H), 1.58 (m,2H), 0.84 (t, 3H, J=6.4 Hz).
Primer 71: (R)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-(3-hidrokspirolodin-1-ilmetil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid, (0.125 g, 55%)
[0778]
[0779] Analitički podaci: LCMS: 573.40 (M 1)<+>; HPLC: 96.12% (@ 254 nm) (Rt;3.921; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.18 (t, 1H), 7.56 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.39 (s, 1H), 7.36 (d, 2H, J=8 Hz), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.68 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4 Hz), 4.19 (bs, 1H), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.56-3.59 (m, 2H), 3.22-3.25 (m, 2H), 3.08-3.09 (m, 2H), 3.01 (m, 1H), 2.57-2.67 (m, 2H), 2.32 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.97-2.00 (m, 1H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.51-1.53 (m, 3H), 0.83 (t, 3H, J=6.4 Hz).
Primer 72: (S)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-(3-fluoropirolodin-1-ilmetil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid (0.05 g)
[0780]
2
[0781] Analitički podaci: LCMS: 575.35 (M 1)<+>; HPLC: 98.44% (@ 254 nm) (Rt;4.081; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.18 (t, 1H), 7.56 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.39 (s, 1H), 7.34 (d, 2H, J=8 Hz), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 5.09-5.25 (m, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4 Hz), 3.81-3.86 (m, 2H), 3.65 (s, 2H), 3.53-3.55 (m, 2H), 3.17-3.25
(m, 2H), 3.07-3.16 (m, 7H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.51-1.53 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 73: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(piperazin-1-ilmetil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid, TFA so (0.18 g, 50%)
[0782]
[0783] Analitički podaci: LCMS:572.10 (M 1)<+>; HPLC: 96.61% (@ 254 nm) (Rt;3.736; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.81 (bs, 2H), 8.20 (s, 1H), 7.66 (d, 2H, J=7.2 Hz),
2
7.47 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.42 (m, 1H), 7.25 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4 Hz), 3.82-3.85 (m, 4H), 3.11-3.27 (m, 9H), 2.88 (m, 4H), 2.25 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.65 (m, 2H), 1.53-1.55 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6 Hz).
Primer 74: (R)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4’-(3-fluoropirolodin-1-ilmetil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid, (0.07 g, 31%);
[0784]
[0785] Analitički podaci: LCMS: 575.35 (M 1)<+>; HPLC: 97.53% (@ 254 nm) (Rt;4.079; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.18 (t, 1H), 7.57 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.38 (d, 2H, J=4.4 Hz), 7.36 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 5.12-5.26 (m, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.63 (s, 2H), 3.22-3.25 (m, 2H), 3.08-3.09
(m, 2H), 3.02 (m, 1H), 2.73-2.83 (m, 2H), 2.32 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.89 (m, 1H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.51-1.53 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=7.2 Hz).
Primer 75: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(piperidin-1-ilmetil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid, (0.1 g, 88%);
[0786]
2
[0787] Analitički podaci: LCMS:571.25 (M 1)<+>; HPLC: 98.25% (@ 254 nm) (Rt;4.147; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.19 (t, 1H, J=5.2 Hz), 7.55 (d, 2H, J=8 Hz), 7.39 (s, 1H), 7.34 (d, 2H, J=8 Hz), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.82-3.83 (m, 2H), 3.43 (s, 2H), 3.24 (t, 2H, J=11.2 Hz), 3.06-3.09 (m, 2H), 2.99-3.01 (m, 1H), 2.32 (bs, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.47-1.56 (m, 6H), 1.38-1.39 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=7.2 Hz).
Primer 76: (S)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-((3-hidroksipiperidin-1-il)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid (0.25 g, 71.4%);
[0788]
[0789] Analitički podaci: LCMS: 587.40 (M 1)<+>; HPLC: 97.63% (@ 254 nm) (Rt;3.997; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.18 (t, 1H, J-4.8 Hz), 7.56 (d, 2H, J=8 Hz), 7.39 (s,
2
1H), 7.34 (d, 2H, J=8 Hz), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.55 (d, 1H, J=4.8 Hz), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.51-3.54 (m, 2H), 3.43-3.45 (m, 1H), 3.06-3.09 (m, 3H), 2.99-3.01 (m, 2H), 2.79 (d, 1H, J=6.8 Hz), 2.65 (d, 1H, J=10.8 Hz), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.78-1.88 (m, 2H), 1.58-1.71 (m, 2H), 1.39-1.51 (m, 4H), 1.04-1.10 (m, 1H), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 77: (R)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4’-((3-hidroksipiperidin-1-il)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid (0.11 g, 48.6%);
[0790]
[0791] Analitički podaci: LCMS: 587.45 (M 1)<+>; HPLC: 98.65% (@ 254 nm) (Rt;3.976; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.44 (s, 1H), 8.18 (t, 1H), 7.56 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.39 (s, 1H), 7.35 (d, 2H, J=8 Hz), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.40-3.54 (m, 3H), 3.22-3.25 (m, 2H), 3.08-3.09 (m, 2H),
3.02 (m, 1H), 2.78-2.80 (m, 2H), 2.66 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.80-1.86 (m, 3H), 1.53-1.67 (m, 3H), 1.40-1.51 (m, 3H), 1.04-1.06 (m, 1H), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 78: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-((4-hidroksipiperidin-1-il)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid (0.2 g, 57%);
[0792]
2
[0793] Analitički podaci: LCMS: 587.20 (M 1)<+>; HPLC: 99.89% (@ 254 nm) (Rt;1.456; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.19 (t, 1H, J=4.4 Hz), 7.56 (d, 2H, J=8 Hz), 7.39 (s, 1H), 7.34 (d, 2H, J=8 Hz), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.53 (d, 1H, J=3.6 Hz), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 3.22-3.27 (m, 2H), 3.07-3.09 (m, 2H), 3.01-3.06 (m, 1H), 2.66 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.00-2.04 (m, 2H), 1.64-1.67 (m, 4H), 1.51-1.53 (m, 2H), 1.36-1.39 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=7.2 Hz).
Primer 79: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4’-((3-fluoropiperidin-1-il)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid (0.2 g, 56%);
[0794]
[0795] Analitički podaci: LCMS: 589.35 (M 1)<+>; HPLC: 96.06% (@ 254 nm) (Rt;4.092; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.;
24
gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.18 (t, 1H), 7.57 (d, 2H, J=7.2 Hz), 7.40 (s, 1H), 7.35 (d, 2H, J=7.2 Hz), 7.22 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.56-4.68 (m, 1H), 4.28 (d, 2H), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.22-3.28 (m, 3H), 3.08-3.09 (m, 2H),
3.02 (m, 1H), 2.65-2.72 (m, 1H), 2.39 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.78-1.81 (m, 2H), 1.64-1.68 (m,2H), 1.50-1.53 (m, 4H), 0.83 (t, 3H).
Primer 80: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-((4-fluoropiperidin-1-il)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid (0.09 g, 25%);
[0796]
[0797] Analitički podaci: LCMS: 589.30 (M 1)<+>; HPLC: 95.46% (@ 254 nm) (Rt;4.156; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.18 (t, 1H), 7.56 (d, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.37 (d, 2H), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.62-4.74 (m, 1H), 4.28 (d, 2H, J=3.2 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.49 (s, 2H), 3.22-3.25 (m, 3H), 3.08-3.09 (m, 3H), 3.02 (m, 1H), 2.32 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.82-1.85 (m, 2H), 1.64-1.67 (m, 4H), 1.51-1.53 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.4 Hz).
Primer 81: 4’-((4,4-difluoropiperidin-1-il)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid (0.1 g, 27%);
[0798]
[0799] Analitički podaci: LCMS: 607.35 (M 1)<+>; HPLC: 95.48% (@ 254 nm) (Rt;4.237;metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.19 (t, 1H), 7.58 (d, 2H, J=8 Hz), 7.38 (d, 2H, J=3.6 Hz), 7.36 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.56 (s, 2H), 3.22-3.27 (m, 2H), 3.08-3.09 (m, 2H), 2.99-3.01 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.90-1.99 (m, 4H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.48-1.56 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.4 Hz). [4 H spojena u piku rastvarača].
Primer 82: 4’-(azetidin-1-ilmetil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0800]
[0801] Analitički podaci: LCMS: 543.40 (M 1)<+>; HPLC: 96.50% (@ 254 nm) (Rt;4.010; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.19 (t, 1H, J=4.4 Hz), 7.54 (d, 2H, J=8 Hz), 7.38 (s, 1H), 7.32 (d, 2H, J=8 Hz), 7.20 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.22-3.27 (m, 2H), 2.98-3.11 (m, 7H), 2.23 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.94-2.01 (m, 2H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.51-1.56 (m, 2H), 0.82 (t, 3H, J=7.2 Hz).
Primer 83: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-((3-hidroksiazetidin-1-il)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0802]
[0803] Analitički podaci: LCMS: 559.80 (M 1)<+>; HPLC: 96.10% (@ 254 nm) (Rt;3.917; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz)δ 11.45 (s, 1H), 8.18 (t, 1H), 7.54 (d, 2H, J=8 Hz), 7.38 (s, 1H), 7.31 (d, 2H, J=4.4 Hz), 7.20 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 5.28 (d, 1H, J=6.4 Hz), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 4.17-4.19 (m, 1H), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.56 (s, 2H), 3.48 (t, 2H, J=6.4 Hz), 3.22-3.27 (m, 2H), 3.06-3.09 (m, 2H), 3.01 (m, 1H), 2.75 (t, 2H, J=6.8 Hz), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.51-1.53 (m, 2H), 0.82 (t, 3H, J=7.2 Hz).
Primer 84: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-((3-fluoroazetidin-1-il)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0804]
24
[0805] Analitički podaci: LCMS: 561.25 (M 1)<+>; HPLC: 97.99% (@ 254 nm) (Rt;4.021; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz)δ 11.45 (s, 1H), 8.18 (t, 1H), 7.57 (d, 2H, J=7.2 Hz), 7.37-7.40 (m, 3H), 7.22 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 5.27 (m, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.63 (s, 2H), 3.22-3.27 (m, 2H), 3.08-3.09 (m, 2H), 3.01 (m, 1H), 2.77 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.65-1.67 (m, 2H), 1.51-1.53 (m, 2H), 1.04-1.06 (m, 1H), 0.83 (t, 3H, J=7.2 Hz) [2H spojena u piku rastvarača].
Primer 86: 4’-((1,4-diazepan-1-il)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0806]
[0807] Analitički podaci: LCMS: 585.37 (M 1)<+>; HPLC: 87.74% (@ 254 nm) (Rt;3.715; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz)δ 11.47 (s, 1H), 8.18 (t, 1H), 7.57 (d, 2H, J=6.8 Hz), 7.39 (m, 3H), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.29 (d, 2H), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.66 (s, 2H), 3.08-3.09 (m, 3H), 3.02 (bs, 4H), 2.96 (m, 3H), 2.64-2.66 (m, 4H), 2.24 (s, 3H),
2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.78 (m, 2H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.51-1.53 (m, 2H), 0.83 (t, 3H).
Primer 87: N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-((4-metil-1,4-diazepan-1-il)metil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0808]
[0809] Analitički podaci: LCMS: 600.30 (M 1)<+>; HPLC: 99.46% (@ 254 nm) (Rt;3.713; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.44 (s, 1H), 8.17 (t, 1H), 7.56 (d, 2H, J=8 Hz), 7.38 (d, 2H, J=5.6 Hz), 7.36 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=5.2 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.61 (s, 2H), 3.09-3.28 (m, 3H), 3.06-3.09 (m, 2H), 3.02 (m, 1H), 2.59-2.65 (m, 5H), 2.56 (t, 2H, J=6 Hz), 2.24 (s, 6H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.72 (m, 4H), 1.51-1.53 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.4 Hz).
Primer 88: 4’-((1,4-oksazepan-4-il)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0810]
[0811] Analitički podaci: LCMS: 587.40 (M 1)<+>; HPLC: 96.85% (@ 254 nm) (Rt;4.055; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.18 (t, 1H, J=4.8 Hz), 7.56 (d, 2H, J=8 Hz), 7.37-7.39 (m, 3H), 7.21 (s, 1H), 5.5 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.69 (t, 3H, J=6
24
Hz), 3.64 (s, 1H), 3.59-3.61 (m, 2H), 3.22-3.27 (m, 2H), 2.99-3.09 (m, 3H), 2.59-2.64 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.77-1.83 (m, 2H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.48-1.56 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=7.2 Hz).
Primer 89: 4’-(aminometil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0812]
[0813] Analitički podaci: LCMS: 503.40 (M 1)<+>; HPLC: 79.83% (@ 254 nm) (Rt;3.846; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.19 (t, 1H), 7.63 (d, 2H, J=8.4 Hz), 7.47 (d, 2H, J=8 Hz), 7.39 (s, 1H), 7.23 (s,1H), 5.86 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.92 (s, 2H), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.22-3.32 (m, 2H), 3.08-3.10 (m, 2H), 3.01 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.65-1.67 (m, 2H), 1.51-1.56 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 90: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-((metilamino)metil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0814]
24
[0815] Analitički podaci: LCMS: 517.30 (M 1)<+>; HPLC: 98.05% (@ 254 nm) (Rt;3.886; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.51 (s, 1H), 8.19 (t, 1H, J=4.4 Hz), 7.55 (d, 2H, J=8 Hz), 7.38 (d, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.66 (s, 2H), 3.11-3.25 (m, 3H), 3.04-3.09 (m, 2H), 2.99-3.01 (m, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.65-1.67 (m, 2H), 1.48-1.56 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 91: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-((etilamino)metil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0816]
[0817] Analitički podaci: LCMS: 531.35 (M 1)<+>; HPLC: 98.28% (@ 254 nm) (Rt;3.977; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.18 (t, 1H, J=4.8 Hz), 7.55 (d, 2H, J=8 Hz), 7.39 (s,
24
1H), 7.37 (d, 2H, J=2 Hz), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=6 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.71 (s, 2H), 3.22-3.28 (m, 2H), 3.01-3.11 (m, 3H), 2.52-2.55 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.65-1.67 (m, 2H), 1.50-1.53 (m, 2H), 1.03 (t, 3H, J=7.2 Hz), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 92: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-((izopropilamino)metil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid, TFA so
[0818]
[0819] Analitički podaci za TFA so: LCMS: 545.40 (M 1)<+>; HPLC: 94.74% (@ 254 nm) (Rt;4.081; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (s, 1H), 8.66 (bs, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.74 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.57 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.43 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 4.19 (t, 2H), 3.82-3.85 (m, 2H), 3.25 (t, 2H, J=10.8 Hz), 3.09-3.22 (m, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.65 (m, 2H), 1.53-1.55 (m, 3H), 1.28 (d, 6H, J=6.4 Hz),0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 93: 4’-((ciklopropilmetil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0820]
24
[0821] Analitički podaci: LCMS: 557.35 (M 1)<+>; HPLC: 96.44% (@ 254 nm) (Rt;4.182; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.19 (t, 1H), 7.55 (d, 2H, J=7.2 Hz), 7.37-7.39 (m, 3H), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.73 (s, 2H), 3.22-3.24 (m, 3H), 3.06-3.09 (m, 2H), 3.01 (m, 1H), 2.36 (d, 2H, J=6.8 Hz), 2.23 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.51-1.56 (m, 2H), 0.81-.084 (m, 4H), 0.38-0.39 (m, 2H), 0.07-0.08 (m, 2H).
Primer 94: 4’-((dietil)amino)metil)-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0822]
[0823] Analitički podaci: LCMS: 559.20 (M 1); HPLC: 98.33% (@ 254 nm) (Rt;4.126; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.;
24
gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (s, 1H), 8.19 (t, 1H, J=5.2 Hz), 7.55 (d, 2H, J=8 Hz), 7.38 (d, 2H, J=5.2 Hz), 7.36 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.83 (m, 2H), 3.54 (s, 2H), 3.22-3.37 (m, 2H), 3.06-3.11 (m, 2H),
2.99-3.01 (m, 1H), 2.43-2.47 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.48-1.56 (m, 2H), 0.98 (t, 6H, J=7.2 Hz), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 95: (R)-4’-(((2,3-dihidroksipropil)amino)metil)-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0824]
[0825] Analitički podaci: LCMS: 599.35 (M 1)<+>; HPLC: 93.58% (@ 254 nm) (Rt;3.808; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.18 (t, 1H, J=4.8 Hz), 7.56 (d, 2H, J=8 Hz), 7.37-7.39 (m, 3H), 7.16 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.51-4.56 (m, 2H), 4.28 (d, 2H, J=4.8 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.73 (s, 2H), 3.55 (m, 1H), 3.11-3.25 (m, 3H), 3.01-3.09 (m, 3H), 2.56-2.61 (m, 1H), 2.41-2.46 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.65-1.67 (m, 2H),1.48-1.56 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 96: (S)-4’-(((2,3-dihidroksipropil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0826]
2
[0827] Analitički podaci: LCMS: 577.25 (M 1)<+>; HPLC: 96.96% (@ 254 nm) (Rt;3.812; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.19 (t, 1H, J=4.8 Hz), 7.55 (d, 2H, J=8 Hz), 7.37-7.39 (m, 3H), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.55 (m, 3H), 4.28 (d, 2H, J=4.8 Hz), 3.81-3.83 (m, 2H), 3.72 (s, 2H), 3.55 (bs, 1H), 3.22-3.28 (m, 3H), 3.01-3.11 (m, 3H), 2.57-2.60 (m, 1H), 2.41-2.45 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.51-1.56 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=7.2 Hz).
Primer 97: 4’-(((ciklopropilmetil)(metil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0828]
[0829] Analitički podaci: LCMS: 571.40 (M 1)<+>; HPLC: 99.80% (@ 254 nm) (Rt;4.243; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.18 (t, 1H, J=4.8 Hz), 7.57 (d, 2H, J=8 Hz), 7.40 (s,
2 1
1H), 7.37 (d, 2H, J=8 Hz), 7.22 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.83 (m, 2H), 3.53 (s, 2H), 3.11-3.25 (m, 2H), 2.99-3.09 (m, 3H), 2.25-2.32 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.65-1.67 (m, 2H), 1.48-1.56 (m, 2H), 0.88 (m, 1H), 0.83 (t, 3H, J=7.2 Hz), 0.46-0.47 (m, 2H), 0.081 (m, 2H).
Primer 98: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(((2-hidroksietil)amino)metil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0830]
[0831] Analitički podaci: LCMS:547.35 (M 1)<+>; HPLC: 96.46% (@ 254 nm) (Rt;3.862; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.44 (s, 1H), 8.19 (t, 1H, J=4.4 Hz), 7.55 (d, 2H, J=8 Hz), 7.38 (d, 2H, J=4.4 Hz), 7.37 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.47 (bs, 2H), 4.28 (d, 2H, J=3.6 Hz), 3.81-3.83 (m, 2H), 3.72 (s, 2H), 3.46 (m, 2H), 3.22-3.27 (m, 2H), 3.07-3.09 (m, 2H), 3.01-3.06 (m, 1H), 2.55-2.57 (m, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.51-1.53 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 99: N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-4’-(((3-hidroksipropil)amino)metil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0832]
2 2
[0833] Analitički podaci: LCMS: 561.30 (M 1)<+>; HPLC: 96.82% (@ 254 nm) (Rt;3.911; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (s, 1H), 8.19 (t, 1H), 7.55 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.39 (d, 2H), 7.37 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.46 (bs, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.83 (m, 2H), 3.69 (s, 2H), 3.45 (t, 2H, J=6.4 Hz), 3.22-3.27 (m, 2H),
3.07-3.09 (m, 2H), 3.01-3.06 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.51-1.61 (m, 4H), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz) [1 H spojen u piku rastvarača].
Primer 100: 4’-((bis(2-hidroksietil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid, TFA so
[0834]
[0835] Analitički podaci za TFA so: LCMS: 591.25 (M 1)<+>; HPLC: 99.00% (@ 254 nm) (Rt;3.860; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);
2
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (s, 1H), 9.38 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.77 (d, 2H, J=3.2 Hz), 7.65 (s, 2H), 7.63 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.29 (d, 2H, J=4.8 Hz), 3.78-3.90 (m, 6H), 3.18-3.28 (m, 9H), 2.27 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.58-1.67 (m, 4H), 0.85 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 101: 4’-(((2-aminoetil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0836]
[0837] Analitički podaci: LCMS: 546.35 (M 1)<+>; HPLC: 93.12% (@ 254 nm) (Rt;3.721; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (s, 1H), 9.19 (bs, 1H), 8.20 (t, 1H), 7.99 (bs, 2H), 7.74 (d, 2H, J=8 Hz), 7.57 (d, 2H, J=8 Hz), 7.42 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.26-4.29 (m, 3H), 3.82-3.84 (m, 2H), 3.11-3.27 (m, 8H), 3.03 (s, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.55 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6Hz).
Primer 102: 4’-(((3-aminopropil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid, TFA so
[0838]
2 4
[0839] Analitički podaci TFA salt: LCMS: 560.20 (M 1)<+>; HPLC: 98.90% (@ 254 nm) (Rt;3.611; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.48 (s, 1H), 8.93 (bs, 2H), 8.20 (t, 1H), 7.79 (bs, 2H), 7.73 (d, 2H, J=8 Hz), 7.55 (d, 2H, J=8 Hz), 7.43 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 4.19 (m, 2H), 3.81-3.85 (m, 2H), 3.25 (t, 2H, J=11.2 Hz), 3.11-3.16 (m, 3H), 3.01 (m, 3H), 2.87-2.88 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.89-1.92 (m, 2H), 1.65-1.68 (m, 2H), 1.53-1.55 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 103: 4’-(((2,2-difluoroetil)amino)metil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0840]
[0841] Analitički podaci: LCMS: 567.30 (M 1)<+>; HPLC: 92.86% (@ 254 nm) (Rt;3.984; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.19 (t, 1H), 7.57 (d, 2H, J=7.2 Hz), 7.38-7.40 (m,
2
3H), 7.21 (s, 1H), 6.01 (t, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.77 (s, 2H), 3.22-3.28 (m, 2H), 3.06-3.09 (m, 2H), 3.01 (m, 1H),
2.84 (t, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.65-1.67 (m, 2H), 1.51-1.53 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 104: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(((2,2,2-trifluoroetil)amino)metil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0842]
[0843] Analitički podaci: LCMS: 585.25 (M 1)<+>; HPLC: 99.52% (@ 254 nm) (Rt;4.175; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.19 (t, 1H), 7.58 (d, 2H, J=8 Hz), 7.39-7.40 (m, 3H), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.80-3.83 (m, 4H), 2.93-3.27 (m, 8H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.67 (m, 2H),
1.51-1.53 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 105: 4’-(2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptan-6-ilmetil)-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-5-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0844]
2
[0845] Analitički podaci: LCMS: 585.40 (M 1)<+>; HPLC: 99.67% (@ 254 nm) (Rt;3.99; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (bs, 1H,) , 8.18(s, 1H,), 7.55-7.54 (m, 2H), 7.38 (s, 1H), 7.31-7.29 (m, 2H), 7.20(s, 1H), 5.85(s, 1H), 4.60 (s, 3H), 4.28 (d, 2H, J=4.8Hz), 3.83-3.81 (m, 2H), 3.53 (s, 2H,), 3.83-3.81(m, 2H), 3.32 (2 protona spojena u piku rastvarača), 3.24-3.22 (m, 4H), 3.09-3.01(m, 3H,), 2.24(s,3H), 2.20(s,3H), 2.10(s,3H), 1.67-1.64(m, 2H), 1.53-1.51(m, 2H), 0.83 (t,3H J=6.4Hz).
Primer 108: Sinteza 5-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0846]
Korak 1: Sinteza tert-butil ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino) cikloheksil)karbamata
2
[0847] U mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)-cikloheksil)karbamata (1 ekv.) i N,N-dimetil-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil) metanamina (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(3.6 ekv.) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.) i reakcioni flakon se ponovo prečisti argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski ekstrakti se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije tert-butil ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino) cikloheksil)karbamat (0.08 g, 48.78%)
Korak 2: Sinteza 5-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0848] Mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4’-((dimetilamino)metil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-il)(metil)amino)cikloheksil)karbamata (0.08 g) u DCM (5 mL) ohladi se na 0 °C i doda se TFA (2 mL). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona mešavina se koncentruje do suvog dajući jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.06 g, 89.55%). LCMS: 530.35 (M 1)+; HPLC: 89.74% (@ 254 nm) (Rt;3.557; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 9.74 (bs, 1H), 8.17 (t, 1H), 7.74-7.76 (m, 4H), 7.55 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.36 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.28-4.31 (m, 4H), 2.97 (bs, 1H), 2.74 (d, 6H, J=4.4 Hz), 2.66 (s, 3H), 2.20 (d, 6H, J=2 Hz), 2.10 (s, 3H), 1.92-1.95 (m, 2H), 1.74-1.77 (m, 2H), 1.52-1.57 (m, 2H), 1.28-1.30 (m, 2H) [1H spojen u piku rastvarača].
Primer 109: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamida
[0849]
2
[0850] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0.2 g, 0.42 mmol) i (1-metil-1H-pirazol-4-il)boronske kiseline (0.105 g, 0.505 mmol) u mešavini dioksan/voda (5 mL+1 mL), doda se Na2CO3(0.16 g, 1.51 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.048 g, 0.042 mmol) i reakciona mešavina se ponovo prečisti argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 2 h. Reakciona mešavina se zatim razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na koloni dajući jedinjenje iz naslova (0.100 g, 50%). LCMS:478.20 (M 1)+; HPLC: 95.82% (@ 254 nm) (Rt;4.322; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.10 (t, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.27 (d, 2H, J=4.8 Hz), 3.81-3.83 (m, 5H), 3.21-3.26 (m, 2H), 2.98-3.08 (m, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.63-1.66 (m, 2H), 1.48-1.52 (m, 2H), 0.86 (t, 3H, J=7.2 Hz).
Primer 110: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-benzamida
[0851]
2
Korak 1: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida
[0852] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (1 g, 2.15 mmol) i (6-formilpiridin-3-il) boronske kiseline (0.539 g, 2.31 mmol) u mešavini dioksan/voda (15 mL+3 mL), doda se Na2CO3(0.82 g, 7.74 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.288 g, 0.25 mmol) i argon se ponovo uvodi 10 min. Reakciona masa se zagreva na 80 °C 2 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela dajući željeno jedinjenje (0.60 g, 57%).
Korak 2: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-((dimetilamino)metil)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
[0853] U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida (0.102 g, 0.203 mmol) i dimetilamina (0.044 g, 2M 0.507 mL, 1.01 mmol) u dihloroetanu (3 mL), doda se sirćetna kiselina (0.073 g, 1.021 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 20 minuta. Zatim se doda natrijum triacetoksiborohidrid (0.129 g, 0.609 mmol) na 0 °C i reakcija se meša 4 h na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač se ukloni na sniženom pritisku i doda se voda, ekstrakcija se obavlja korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentrišu pod sniženim pritiskom dajući sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije jedinjenje iz naslova (0.08 g, 75%). LCMS: 532.30 (M 1)+; HPLC: 97.53% (@ 254 nm) (Rt;3.878; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u
2
acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.75 (d, 1H, J=1.2 Hz), 8.20 (t, 1H, J=4.8 Hz), 8.02 (d, 1H,J=6.4 Hz), 7.49 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.8 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.56 (s, 2H), 3.22-3.24 (m, 2H), 3.02-3.12 (m, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.21 (s, 6H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.65-1.67 (m, 2H), 1.50-1.56 (m, 2H), 0.82 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 111: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-((4-metilpiperazin-1-il)metil)piridin-3-il)benzamida
[0854]
Korak 1a: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metilbenzamida
[0855]
[0856] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (1 g, 2.15 mmol) i (6-formilpiridin-3-il) boronske kiseline (0.539 g, 2.31 mmol) u mešavini dioksan/voda (15 mL+3 mL), doda se
2 1
Na2CO3(0.82 g, 7.74 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.288 g, 0.25 mmol) i argon se ponovo uvodi 10 min. Reakciona masa se zagreva na 80 °C 2 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela dajući željeno jedinjenje (0.60 g, 57%).
Korak 1b: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-(hidroksimetil)piridin-3-il)-2-metilbenzamid
[0857]
[0858] Kada se gornja reakcija ponovi na skali od 1.5 g, izoluje se N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-(hidroksimetil) piridin-3-il)-2-metilbenzamid (0.350 g, 22%).
Korak 2: Sinteza 5-(6-(bromometil) piridin-3-il)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzamida
[0859]
[0860] U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-(hidroksimetil)piridin-3-il)-2-metilbenzamida (0.35 g, 0.694 mmol) u DCM (5 mL), doda se trifenil fosfin (0.361 g, 1.38 mmol) i meša se na sobnoj temperaturi 10 min. Na kraju se doda CBr4(0.318 g, 1.38 mmol) u porcijama i
2 2
dobijeni rastvor se meša na sobnoj temperaturi 18 h. Po završetku, u reakcionu masu se doda voda i ekstrakcija se obavi korišćenjem DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata, koncentruju pod sniženim pritiskom dajući sirovi materijal koji se zatim prečišćava na koloni dajući željeno jedinjenje (0.35 g, 89%).
Korak 3: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-((4-metilpiperazin-1-il)metil)piridin-3-il)benzamida
[0861] U mešani rastvor 5-(6-(bromometil) piridin-3-il)-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0.175 g, 0.309 mmol) rastvorenog u THF (2 mL), doda se 1-metilpiperazin (0.309 g, 1.54 mmol) na sobnoj temperaturi i meša na istoj temperaturi 18 h. Po završetku, voda se doda u reakcionu masu i ekstrakcija se obavi korišćenjem DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom dajući sirovi materijal koji se zatim prečišćava preparativnom HPLC dajući jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.028 g, 15%). LCMS: 587.40 (M 1)+; HPLC: 98.05% (@ 254 nm) (Rt;3.831; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.21 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.59 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.35 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.29 (d, 2H, J=4 Hz), 3.96-4.04 (m, 2H), 3.83-3.86 (m, 2H), 3.16-3.43 (m, 13H), 2.81 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.67 (m, 2H), 1.56 (m, 2H), 0.84 (t, 3H, J=6.4 Hz).
Primer 112: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4,4’-dimetil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0862]
2
[0863] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4, 6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (200 mg, 0.42 mmol) i p-tolil boronske kiseline (86 mg, 0.63 mmol) u dioksanu (3 mL), doda se vodeni rastvor 2M Na2CO3(0.75 mL, 1.51 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(48 mg, 0.04 mmol) i argon se ponovo uvodi 10 min. Reakciona masa se zagreva na 100 °C 2 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM (3 puta). Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom, praćeno prečišćavanjem hromatografijom na koloni daje jedinjenje iz naslova (150 mg, 73%). LCMS: 488.20 (M 1)+; HPLC: 99.33% (@ 254 nm) (Rt;5.393; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.19 (t, 1H), 7.51 (d, 2H, J=8 Hz), 7.37 (s, 1H), 7.25 (d, 2H, J=8 Hz), 7.19 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.81-3.83 (m, 2H), 3.22-3.27(m, 2H), 3.07-3.09 (m, 2H), 3.01 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.51-1.55 (m, 2H), 0.82 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 113: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-(hidroksimetil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0864]
[0865] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (200 mg, 0.42 mmol) i 4-(hidroksimetil)fenilboronske kiseline (96 mg, 0.63 mmol) u dioksanu (2.5 mL), doda se vodeni rastvor 2M Na2CO3(0.75 mL, 1.51 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(48 mg, 0.04 mmol) i argon se ponovo uvodi 15 min. Reakciona masa se
2 4
zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM (3 puta). Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom, praćeno prečišćavanjem hromatografijom na koloni daje jedinjenje iz naslova (130 mg, 62%). LCMS: 504.15 (M 1)+; HPLC: 98.86% (@ 254 nm) (Rt;4.240; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.19 (t,1H), 7.57 (d, 2H, J=7.2 Hz), 7.39 (s, 1H), 7.37 (d, 2H), 7.21 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 5.20 (t, 1H, J=5.2 Hz), 4.52 (d, 2H, J=5.6 Hz), 4.28 (d, 2H, J=3.6 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.22-3.32 (m, 2H), 3.08-3.09 (m, 2H), 3.01 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.65-1.67 (m, 2H), 1.51-1.53 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.4 Hz).
Primer 114: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-3’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0866]
Korak 1: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-3’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0867] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (400 mg, 0.84 mmol) i (3-formilfenil)boronske kiseline (189 mg, 1.26 mmol) u dioksanu (2 mL), doda se vodeni rastvor 2M Na2CO3(1.5 mL, 3.03 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(97 mg, 0.08 mmol) i argon se ponovo uvodi 15 min. Reakciona masa se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM (3 puta). Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata.
2
Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom, praćeno prečišćavanjem hromatografijom na koloni daje jedinjenje iz naslova (270 mg, 64%).
Korak 2: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-3’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0868] U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-3’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida (270 mg, 0.53 mmol) i morfolina (94 mg, 1.07 mmol) u dihloroetanu (5 mL), doda se sirćetna kiselina (194 mg, 3.23 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 30 minuta. Zatim se u reakcionu mešavinu doda natrijum triacetoksiborohidrid (343 mg, 1.61 mmol) na 0 °C, ostavi se da dostigne sobnu temperaturi i mešanje se nastavi preko noći. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži dihlorometanome, ispere vodom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i suši peko natriju sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom, praćeno prečišćavanjem hromatografijom na koloni, daje jedinjenje iz naslova (200 mg, 65%). LCMS: 573.25 (M 1)+; HPLC: 90.21% (@ 254 nm) (Rt;4.048; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.20 (t, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.49 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.39 (d, 1H, J=5.6 Hz), 7.29 (d, 1H, J=7.2 Hz), 7.20 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.82-3.84 (m, 2H), 3.56 (m, 4H), 3.52 (s, 2H), 3.22-3.30 (m, 2H), 3.08-3.10 (m, 2H), 3.01 (m, 1H), 2.37 (s, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.65-1.67 (m, 2H), 1.51-1.54 (m,2H), 0.83 (t, 3H, J=6.4 Hz).
Primer 115: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-((3-(morfolinometil)azetidin-1-il)metil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid
[0869]
2
[0870] Jedinjenje 115 priprema se metodom koji je sličan onome opisanom u Primeru 67.
Analitički podaci: LCMS: 642.45 (M 1)<+>; HPLC: 93.13% (@ 254 nm) (Rt;3.803; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H),8.18 (t, 1H), 7.54 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.38 (s, 1H), 7.31 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.20 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4 Hz), 3.81-3.83 (m, 2H), 3.52-3.53 (m, 6H), 3.22-3.24 (m, 2H), 3.07-3.09 (m, 2H), 3.01 (m, 1H), 2.79 (s, 2H), 2.56-2.58 (m,2H), 2.29 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.51-1.53 (m, 2H), 0.82 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 116: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-5-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0871]
Korak 1: Sinteza metil 4-metil-4’-(morfolinometil)-5-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-[1,1’-bifenil]-3-karboksilata
[0872] U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (600 mg, 1.83 mmol) i 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzil]morfolina (833 mg, 2.75 mmol) u dioksanu (9 mL), doda se vodeni rastvor 2M Na2CO3(3.30 mL, 6.60 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(211 mg, 0.18 mmol) i argon se ponovo uvodi 15 min. Reakciona masa se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM (3 puta). Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom, praćeno prečišćavanjem hromatografijom na koloni daje jedinjenje iz naslova (500 mg, 77%).
2
Korak 2: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-5-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0873] Vodeni NaOH (73m g, 1.76 mmol) doda se u mešani rastvor metil 4-metil-4’-(morfolinometil)-5-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-[1,1’-bifenil]-3-karboksilata (500 mg, 1.17 mmol) u etanolu (10 mL) i mešanje se nastavi na 60 °C 1 h. Po završetku, etanol se ukloni pod sniženim pritiskom i izvrši se acidifikacija razblaženom HCl do pH 6. Vodeni sloj se ekstrahuje etil acetatom (5 puta) i kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom daje odgovarajuću kiselinu (350 mg, 72.4%).
[0874] U ledeno hladni rastvor koji se meša gornje kiseline (200 mg, 0.48 mmol) u DMF (10 mL) dodaju se EDCI (139 mg, 0.73 mmol) i trietilamin (0.17 mL, 1.21 mmol). Zatim se posle 15 minuta mešanja na 0 °C, dodaju HOBT (78 mg, 0.58 mmol) pa zatim 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (148 mg, 0.97 mmol). Reakciona mešavina se ostavi da dostigne sobnu temperaturi i mešanje se nastavi preko noći. Po završetku, reakciona masa se sipa preko leda, ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM (5 puta). Kombinovani organski slojevi se isperu vodom i suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom praćeno ispiranjem rastvaračem daje jedinjenje iz naslova (50 mg, 19%). LCMS: 545.15 (M 1)+; HPLC: 95.86% (@ 254 nm) (Rt;4.382; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.03 (m, 1H), 7.71 (bs, 1H), 7.54 (d, 1H, J=7.6 Hz), 7.34 (d, 2H, J=7.6 Hz), 6.85 (s, 1H), 6.70 (s, 1H), 5.83 (d, 2H, J=7.6 Hz), 4.58 (d, 1H, J=7.6 Hz), 4.26 (d, 2H, J=4 Hz), 4.04 (d, 2 H, J=4.8 Hz),3.85-3.88 (m, 2H), 3.62 (m, 1H), 3.57 (t, 2H), 3.41-3.47 (m, 3H), 2.32-2.36 (m, 4H), 2.19 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.88-1.91 (m, 2H), 1.50-1.52 (m, 2H).
Primer 117: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etilamino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0875]
2
Korak 1: Sinteza metil 5-bromo-3-(etilamino)-2-metilbenzoata
[0876] U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (1.0 g, 4.09 mmol) i acetaldehida (180 mg, 4.09 mmol) u dihloroetanu (10 mL), doda se sirćetna kiselina (1.47 g, 24.58 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 30 minuta. Zatim se doda natrijum triacetoksiborohidrid (2.6 g, 12.29 mmol) na 0 °C, ostavi se da dostigne sobnu temperaturu i mešanje se nastavi 2 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži dihlorometanom, ispere vodom zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i suši preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom praćeno prečišćavanjem hromatografijom na koloni daje željeno jedinjenje (600 mg, 55%).
Korak 2: Sinteza metil 5-(etilamino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksilata
[0877] U mešani rastvor metil 5-bromo-3-(etilamino)-2-metilbenzoata (600 mg, 2.2 mmol) i 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzilmorfolina (1.0 g, 3.3 mmol) u dioksanu (5 mL), doda se vodeni rastvor 2M Na2CO3(33.96 mL, 7.93 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(255 mg, 0.22 mmol) i argon se ponovo uvodi 15 min. Reakciona masa se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM (3 puta). Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom, praćeno prečišćavanjem hromatografijom na koloni daje jedinjenje (800 mg, 98%).
Korak 3: Sinteza 5-(etilamino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksilne kiseline
[0878] Vodeni NaOH (130 mg, 3.25 mmol) doda se u mešani rastvor jedinjenja 6 (800 mg, 2.17 mmol) u etanolu (10 mL) i mešanje se nastavi na 60 °C 1 h. Po završetku, etanol se
2
ukloni pod sniženim pritiskom i izvrši se acidifikacija korišćenjem razblažene HCl do pH∼6. Vodeni sloj se ekstrahuje etil acetatom (5 puta) i kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom, daje željeno jedinjenje (700 mg, 91%). LCMS: 355.05 (M 1)+; HPLC: 89.74% (@ 254 nm) (Rt;3.854; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 8.24 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.84 (d, 2H, J=8 Hz), 7.71 (d, 2H, J=8.4 Hz), 4.45 (s, 2H), 4.06 (d, 2H, J=11.2 Hz), 3.79 (t, 2H, J=12 Hz), 3.53 (q, 2H, J=7.2 Hz), 3.40-3.43 (m, 2H), 3.22-3.31 (m, 2H), 2.66 (s, 3H), 1.45 (t, 3H, J=7.2 Hz).
Korak 4: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etilamino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0879] 5-(etilamino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksilna kiselina (300 mg, 0.84 mmol) se rastvori u DMSO (2 mL) i doda se 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (257 mg, 1.69 mmol). Posle 15 minuta mešanja na sobnoj temperaturi u reakcionu mešavinu se doda PyBOP (660 mg, 1.26 mmol) i mešanje se nastavi preko noći. Posle završetka, reakciona masa se sipa preko leda i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM (5 puta). Kombinovani organski slojevi se ispiraju vodom i suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom praćeno ispiranjem rastvaračem daje jedinjenje iz naslova (100 mg, 24%). LCMS: 489.20 (M 1)+; HPLC: 96.41% (@ 254 nm) (Rt;4.060; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 9.90 (s, 1H), 8.06 (t, 1H), 7.73 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.55 (d, 2H, J=7.2 Hz), 6.80 (d, 2H, J=7.6 Hz), 5.86 (s, 1H), 4.38 (s, 2H), 4.27 (d, 2H, J=4 Hz), 3.95 (m, 2H), 3.62-3.65 (m, 2H), 3.28-3.31 (m, 2H), 3.20-3.24 (m, 2H), 3.14-3.19 (m, 2H), 2.20 (s, 3H),2.10 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.21 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 118: Sinteza 5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-(hidroksimetil)-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0880]
2
Korak 1: Sinteza tert-butildimetil(prop-2-in-1-iloksi)silana
[0881] U ledeno hladni mešani rastvor prop-2-in-1-ola (10.0 g, 178.3 mmol) i imidazola (18.2 mg, 267.5 mmol) u dihloroetanu (500 mL), doda se TBDMSC1 (40.24 g, 267.5 mmol) i mešanje se nastavi na 0 °C 1.5 h. Po završetku, u rekacionu mešavinu se doda zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida i izvrši se ekstrakcija etil acetatom (3 times). Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom praćeno ispiranjem rastvaračem daje željeno jedinjenje (20 g, 67%).
Korak 2: Sinteza 5-((tert-butildimetilsilil)oksi)pent-3-in-2-ona
[0882] U mešani rastvor tert-butildimetil(prop-2-in-1-iloksi)silana (20.0 g, 116.9 mmol) u THF (400 mL) na -78 °C doda se n-BuLi (90 mL, 140.0 mmol) i reakciona mešavina se ostavi da dostigne sobnu temperaturu za 2 h. Zatim se reakciona mešavina ohladi na -78 °C i doda se borontrifluorid eterat (18 mL, 140.0 mmol). Posle10 minuta mešanja doda se sirćetni anhidrid (15 mL, 153.0 mmol) i reakciona mešavina se ostavi da dostigne sobnu temperaturu za 2.5 h. Reakcija se gasi vodenim 1N NaOH rastvorom i ekstrahuje etil acetatom (3 puta). Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom praćeno ispiranjem rastvaračem daje C (13 g, 52%).
Korak 3: Sinteza 4-(((tert-butildimetilsilil)oksi)metil)-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-karbonitrila
[0883] U mešani rastvor jedinjenja 5-((tert-butildimetilsilil)oksi)pent-3-in-2-ona (13.0 g, 61.0 mmol) i cijanoacetamida (6.2 g, 73.2 mmol) u mešavini etanola i vode (9:1) (270 mL) na sobnoj temperaturi doda se piperidinacetat (katalitički) i reakciona mešavina se zagreva na refluksu 5 h. Posle uklanjanja rastvarača doda se voda i čvrsti proizvod se filtrira. Čvrsti
2 1
proizvod posle ispiranja vodom praćenog etrom i heksanom daje željeno jedinjenje (5.5 g, 32%).
Korak 4: Sinteza 3-(aminometil)-4-(((tert-butildimetilsilil)oksi)metil)-6-metilpiridin-2(1H)-ona
[0884] U mešani rastvor 4-(((tert-butildimetilsilil)oksi)metil)-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-karbonitrila (5.5 g, 19.7 mmol) u metanolu (100 mL) i amonijaku (30 mL) doda se Raneyjev nikl (kvantitativno) i reakciona mešavina se meša u prisustvu vodonika pod pritiskom u balonu 14 h. Po završetku, reakciona mešavina se filtrira kroz celit i ispere metanolom. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom daje željeno jedinjenje (3.5 g, 63%).
Korak 5: Sinteza 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-(hidroksimetil)-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
[0885] Vodeni NaOH (70 mg, 1.7 mmol) doda se u mešani rastvor metil 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata (400 mg, 1.1 mmol) u etanolu (60 mL) i mešanje se nastavi na 60 °C 1 h. Po završetku, etanol se ukloni pod sniženim pritiskom i izvrši se acidifikacija korišćenjem razblažene HCl do pH ∼6. Vodeni sloj se ekstrahuje etil acetatom (5 puta) i kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom daje odgovarajuću kiselinu (320 mg, 83.55%).
[0886] Gornja kiselina (400 mg, 1.1 mmol) se zatim rastvori u DMSO (4 mL) i doda joj se 3-(aminometil)-4-(((tert-butildimetilsilil)oksi)metil)-6-metilpiridin-2(1H)-on (525 mg, 1.7 mmol). Posle 15 minuta mešanja na sobnoj temperaturi u reakcionu mešavinu se doda PyBOP (900 mg, 1.6 mmol) i mešanje se nastavi preko noći. Po završetku, reakciona masa se sipa preko leda, ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM (5 puta). Kombinovani organski slojevi se isperu vodom i suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom praćeno ispiranjem rastvaračem daje željeno jedinjenje (230 mg, 40%).
Korak 6: Sinteza 5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-(hidroksimetil)-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0887] U mešani rastvor 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-(hidroksimetil)-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (250 mg, 0.5
2 2
mmol) i 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzil]morfolina (230 mg, 7.6 mmol) u dioksanu (5 mL), doda se vodeni rastvor 2M Na2CO3(0.9 mL, 1.8 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(57 mg, 0.05 mmol) i argon se ponovo uvodi 15 min. Reakciona masa se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM (3 puta). Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom, praćeno prečišćavanjem hromatografijom na koloni daje jedinjenje iz naslova (60 mg, 25%). LCMS: 589.35 (M 1)+; HPLC: 95.58% (@ 254 nm) (Rt;3.524; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.54 (s, 1H), 8.22 (t, 1H), 7.57 (d, 2H, J=7.6 Hz), 7.38 (d, 2H, J=5.6 Hz), 7.36 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.16 (s, 1H), 5.28 (m, 1H), 4.52 (d, 2H, J=4.8 Hz), 4.25 (d, 2H, J=3.6 Hz), 3.81-3.83 (m, 2H), 3.57 (m, 4H), 3.48 (s, 2H), 3.01-3.09 (m, 3H), 2.36 (m, 4H), 2.23 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.64-1.67 (m, 2H), 1.51-1.53 (m, 2H), 1.23 (m, 2H), 0.82 (t, 3H, J=6.4 Hz).
Primer 119: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-5-(N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamido)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0888]
Korak 1: Sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-(N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamido) benzoata
[0889] Rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (520 mg, 1.58 mmol) zagreva se na 70 °C u 3 ml sirćetnog anhidrida, 6 h. Reakciona mešavina se ohladi do sobne temperature i reakcija se gasi sat. NaHCO3i ekstarhuje etil acetatom. Organski sloj se suši preko Na2SO4, koncentruje i prečišćava silika gel (100-200) hromatografijom na koloni da se dobije ciljno jedinjenje (400 mg, 68%).
2
Korak 2: Sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamido)benzamida
[0890] Mešavina metil 5-bromo-2-metil-3-(N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamido) benzoata (400 mg, 1.08 mmol) i NaOH (47 mg, 1.13 mmol) u 5 ml etanol:voda (2:1) zagreva se na 70 °C 2 h. Reakciona mešavina se koncentruje do suvog i sirovi materijal se rastvori u vodi, pH se podesi na 5 do 6 sporim dodavanjem HCl i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH u DCM. Organski sloj se suši preko Na2SO4, koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije 400 mg kiseline.
[0891] Mešavina sirove kiseline (400 mg, 1.23 mmol), 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (370 mg, 2.46 mmol), PyBOP (960 mg, 1.85 mmol) i trietil amina (0.17ml, 1.23) meša se u 2 ml DMSO na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona mešavina se razblaži vodom i jedinjenje se ekstrahuje u 10% MeOH u DCM, suši preko Na2SO4, koncentruje i sirova supstanca se prečisti silika gel (100-200) hromatografijom na koloni da se dobije 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamido)benzamid (95 mg, 17.3%).
Korak 3: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-5-(N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamido)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0892] Rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamido)benzamida (50 mg, 0.10 mmol), (4-(morfolinometil)fenil)boronske kiseline (41 mg, 0.13 mmol), natrijum karbonata (27 mg, 0.25 mmol) u 3 ml dioksana oslobađa se gasa pomoću argona 20 min, u mešavinu se doda Pd(PPh3) (12 mg, 0.0012 mmol) i zagreva na 100 °C preko noći. Reakcija se ohladi na sobnu temperaturu i razblaži vodom, pre nego što se ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH u DCM, organski slojevi se suše preko Na2SO4, koncentruju i dobijeni sirovi proizvod se prečisti silika gel (100-200) hromatografijom da se dobije jedinjenje iz naslova (26 mg, 23%). LCMS: 609.35 (M 23)+; HPLC: 97.81% (@ 254 nm) (Rt;4.407; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.48 (bs, 1H), 8.41 (t, 1H), 7.67-7.69 (m, 2H), 7.39-7.56 (m, 4H), 5.87 (s, 1H), 4.54-4.57 (m, 1H), 4.30-4.31 (d, 2H, J = 4 Hz), 3.77-3.85 (m, 2H), 3.50-3.58 (m, 6H), 2.37 (m, 4H), 2.22 (s, 3H),
2 4
2.16 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.88-1.91 (m, 1H), 1.51-1.65(m, 6H), 2 protona spojena u piku rastvarača.
Primer 120: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-3’-fluoro-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0893]
Korak 1: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-3’-fluoro-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0894] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (300 mg, 0.63 mmol) i (3-fluoro-4-formilfenil)boronske kiseline (160 mg, 0.94 mmol) u dioksanu (6 mL), doda se vodeni rastvor 2M Na2CO3(1.15 mL, 2.3 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(72 mg, 0.06 mmol) i argon se ponovo uvodi 15 min. Reakciona masa se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM (3 puta. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom praćeno hromatografskim prečišćavanjem na koloni daje jedinjenje iz naslova (288 mg, 88%).
Korak 2: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-3’-fluoro-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil] -3-karboksamida
[0895] U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-3’-fluoro-4’-formil-4-metil-[1,1’-ifenil]-3-karboksamida (285 mg, 0.55 mmol) i morfolina (149 mg, 1.64 mmol) u dihloroetanu (5 mL), doda se sirćetna kiselina (0.2 mL, 3.29 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturI 30 minuta.
2
Zatim se u reakcionu mešavinu doda natrijum triacetoksiborohidrid (349 mg, 1.64 mmol) na 0 °C, ostavi se da dostigne sobnu temperaturu i mešanje se nastavi preko noći. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži dihlorometanom, ispere vodom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i suši preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom praćeno hromatografijom na koloni i prep. HPLC prečišćavanjem daje jedinjenje iz naslova (70 mg, 20%). LCMS: 591.45 (M 1)+; HPLC: 98.96% (@ 254 nm) (Rt;4.034; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.5 (bs, 1H), 10.1 (bs, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.66-7.73 (m, 3H), 7.54 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 5.88 (s, 1H), 4.44 (s, 2H), 4.30 (m, 5H), 3.96 (m, 2H), 3.66-3.86 (m, 6H), 3.17-3.34 (m, 4H), 2.27 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.11(s, 3H), 1.57-1.67 (m, 4H), 0.84 (t, 3H, J = 6 Hz).
Primer 121: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2’-fluoro-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0896]
Korak 1: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2’-fluoro-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0897] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (300 mg, 0.62 mmol) i (2-fluoro-4-formilfenil)boronske kiseline (158 mg, 0.94 mmol) u dioksanu (3 mL), doda se vodeni rastvor 2M Na2CO3(1.13 mL, 2.26 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(72 mg, 0.06 mmol) i argon se ponovo uvede 15 min. Reakciona masa se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem
2
10% MeOH/DCM (3 puta). Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom praćeno hromatografskim prečišćavanjem na koloni daje željeno jedinjenje (300 mg, 91%).
Korak 2: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2’-fluoro-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0898] U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2’-fluoro-4’-formil-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida (300 mg, 0.57 mmol) i morfolina (100 mg, 1.15 mmol) u dihloroetanu (4 mL), doda se sirćetna kiselina (207 mg, 3.46 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturI 30 minuta. Zatim se u reakcionu mešavinu doda natrijum triacetoksiborohidrid (367 mg, 1.73 mmol) na 0 °C, ostavi se da dostigne sobnu temperaturu i mešanje se nastavi preko noći. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži dihlorometanom, ispere vodom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i suši preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom praćeno prečišćavanjem hromatografijom na koloni daje jedinjenje iz naslova (300 mg, 87.97%).
LCMS: 591.30 (M 1)+; HPLC: 96.03% (@ 254 nm) (Rt;4.077; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (bs, 1H), 8.17 (t, 1H), 7.47 (t, 1H, J = 8Hz), 7.30 (s, 1H), 7.21-7.23 (m, 2H), 7.10 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J = 4.4Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.50-3.59 (m, 6H), 3.22-3.25 (m, 2H), 3.00-3.06 (m, 3H), 2.38 (m, 4H), 2.25(s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.51-1.66 (m, 4H), 0.83 (t, 3H, J = 6.8 Hz).
Primer 122: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2’,4-dimetil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0899]
2
Korak 1: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)- 4’-formil-2’,4-dimetil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0900] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (400 mg, 0.84 mmol) i 3-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzaldehida (310 mg, 1.26 mmol) u dioksanu (2 mL), doda se vodeni rastvor 2M Na2CO3(1.5 mL, 3.03 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(97mg, 0.08 mmol) i argon se ponovo uvede 15 min. Reakciona masa se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM (3 puta). Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom praćeno hromatografskim prečišćavanjem na koloni daje željeno jedinjenje (300 mg, 69.28%).
Korak 2: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2’,4-dimetil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil] -3-karboksamida
[0901] U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-formil-2’,4-dimetil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida (410 mg, 0.79 mmol) i morfolina (210 mg, 2.38 mmol) u dihloroetanu (10 mL), doda se sirćetna kiselina (280 mg, 4.77 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturI 30 minuta. Zatim se u reakcionu mešavinu doda natrijum triacetoksiborohidrid (580 mg, 2.71 mmol) na 0 °C, ostavi se da dostigne sobnu temperaturu i mešanje se nastavi preko noći. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži dihlorometanom, ispere vodom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i suši preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom praćeno prečišćavanjem hromatografijom na koloni daje jedinjenje iz naslova (125 mg, 26.76%).
2
LCMS: 587.55 (M 1)+; HPLC: 97.23% (@ 254 nm) (Rt;4.065; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (bs, 1H), 9.91 (bs, 1H), 8.17 (bs, 1H), 7.32-7.42 (m, 3H), 7.15 (bs, 1H), 6.92 (bs, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.27-4.35 (m, 4H),3.86 (m, 2H), 3.64-3.67 (m, 3H), 3.12-3.32 (m, 10H), 2.33 (bs, 6H), 2.19(s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.55-1.64 (m, 4H), 0.84 (t, 3H, J = 6 Hz), 2 protona spojena u piku rastvarača.
Primer 123: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolin-4-karbonil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0902]
[0903] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (300 mg, 0.63 mmol) i morfolino(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan- 2-il)fenil)metanona (260 mg, 0.82 mmol) u dioksanu (10 mL), doda se vodeni rastvor 2M Na2CO3(1.13 mL, 2.27 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(72 mg, 0.06 mmol) i argon se ponovo uvede 15 min. Reakciona masa se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM (3 puta). Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom praćeno hromatografskim prečišćavanjem na koloni daje jedinjenje iz naslova (250 mg, 68%). LCMS: 587.35 (M 1)+; HPLC: 93.85% (@ 254 nm) (Rt;4.535; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (bs, 1H), 8.21 (t, 1H), 7.69-7.71 (m, 2H), 7.45-7.49 (m, 3H), 7.26 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.29 (d,
2
2H, J = 4Hz), 3.82-3.84 (m, 2H), 3.48-3.60 (m, 8H), 3.23-3.25 (m, 2H), 3.09-3.11 (m, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.52-1.68 (m, 4H), 0.83 (t, 3H, J = 6.8 Hz).
Primer 124: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0904]
[0905] U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(piperidin-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida (0.2 g, 0.35 mmol) u DCM (8 mL) dodaju se trietil amin (0.106 g, 1.04 mmol) i mezil hlorid (0.08 g, 0.69 mmol) na 0 °C. Dobijena reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 2 h. Po završetku, u reakcionu mešavinu se doda voda i izvrši se ekstrahovanje korišćenjem 10%MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom dajući sirovi materijal koji se zatim rastvori u metanolu (10 mL) i doda se NaOH (0.021 g, 0.52 mmol). Ova mešavina se meša na sobnoj temperature 15 h. Po završetku, obavi se ekstrakcija korišćenjem 20% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju i sirovi materijal se prečisti ispiranjem rastvaračem dajući jedinjenje iz naslova (0.1 g, 45.45%).
LCMS: 650.85 (M 1)+; HPLC: 95.37% (@ 254 nm) (Rt;4.258; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (bs, 1H), 8.18 (t, 1H), 7.57-7.59 (m, 3H), 7.37-7.39 (m, 2H), 7.22 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.29 (d, 2H, J = 4.4Hz), 3.58 (m, 4H), 3.48-3.52 (m, 4H), 3.09-3.11 (m, 2H), 2.94 (m, 1H), 2.82 (s, 3H), 2.67-2.72 (m, 2H), 2.36 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.21
(s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.81-1.83 (m, 2H), 1.59-1.61 (m, 2H), 0.84 (t, 3H, J = 6 Hz).
2
Primer 125: Sinteza 5-((1-acetilpiperidin-4-il)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0906]
[0907] U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(piperidin-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida (0.25 g, 0.44 mmol) i sirćetne kiseline (0.052 g, 0.86 mmol) u DMF (3 mL), dodaju se EDCI (0.123 g, 0.64 mmol) i HOBt (0.087 g, 0.64 mmol), praćeno dodavanjem trietilamina (0.108g, 1.06 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Posle završetka reakcije, doda joj se voda i izvrši se ekstrakcija korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se ispiraju vodom, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom dajući sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije jedinjenje iz naslova (0.1 g, 37.31%).
LCMS: 614.75 (M 1)+; HPLC: 97.57% (@ 254 nm) (Rt;4.140; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (bs, 1H), 8.19 (t, 1H), 7.57 (d, 2H, J = 7.2 Hz), 7.37-7.39 (m, 3H), 7.22 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.29 (d, 2H, J = 4.4Hz), 3.78 (m, 1H), 3.49-3.58 (m, 6H), 2.99-3.08 (m, 4H), 2.36 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.74 (m, 2H), 1.31-1.52 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J = 6.8 Hz), 2 protona spojena u piku rastvarača.
Primer 126: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(piperidin-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0908]
2 1
Korak 1: Sinteza tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)-2-metilfenil)amino)piperidin-1-karboksilata
[0909] U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (4.5 g, 18.44 mmol) i tertbutil 4-oksopiperidin-1-karboksilata (11.01 g, 55.33 mmol) u dihloroetanu (50 mL), doda se sirćetna kiselina (6.64 g, 110.6 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturI 10 minuta. Zatim se u reakcionu mešavinu doda natrijum triacetoksiborohidrid (11.72 g, 55.28 mmol) na 0 °C, i reakcija se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i sirovi materijal se prečisti hromatografijom na koloni dajući željeno jedinjenje (5.2 g, 66.24%).
Korak 2: Sinteza tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)-2-metilfenil)(etil)-amino)-piperidin-1-karboksilata
[0910] U mešani rastvor tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)-2-metilfenil)amino)piperidin-1-karboksilata (5g, 11.70 mmol) i acetaldehida (1.58 g, 35.12 mmol) u dihloroetanu (60 mL), doda se sirćetna kiselina (4.24 g, 70.66 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 10 min. Zatim se doda natrijum triacetoksiborohidrid (7.44 g, 35.09 mmol) na 0 °C i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 2 h. Po završetku, reakcija se prekida vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, organska faza se izdvoji i ekstrahuje dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom dajući sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije željeni proizvod (5 g, 93.45%).
Korak 3: Sinteza tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)piperidin-1-karboksilata
2 2
[0911] Vodeni rastvor NaOH (0.7 g, 17.50 mmol) doda se u rastvor tert-butil 4-((5-bromo-3-(metoksikarbonil)-2-metilfenil)amino)piperidin-1-karboksilata (5 g, 10.94 mmol) u etanolu (50 mL) i meša na 60 °C 1 h. Posle završetka reakcije, etanol se ukloni pod sniženim pritiskom i izvrši se acidifikacija korišćenjem razblažene HCl do pH 6 uz doterivanje na pH 4 korišćenjem limunske kiseline. Ekstrakcija se vrši korišćenjem etil acetata. Kombinovani organski slojevi se suše i koncetruju dajući odgovarajuću kiselinu (4.8 g, 99.17%).
[0912] Gore pomenuta kiselina (4.8 g, 10.90 mmol) se zatim rastvori u DMSO (20 mL) i doda joj se 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (3.32 g, 21.81 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PYBOP (8.50 g, 16.35 mmol) i mešanje se nastavlja preko noći. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-fenil)(etil)amino)piperidin-1-karboksilat (4.4 g, 70.96%).
Korak 4: Sinteza tert-butil 4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(etil)amino)piperidin-1-karboksilata
[0913] U mešani rastvor tert-butil 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-fenil)(etil)amino)piperidin-1-karboksilata (2 g, 3.47mmol) i 4-(morfolinometil)-fenil)boronske kiseline (1.58 g, 5.21 mmol) u mešavini dioksan/voda, doda se Na2CO3(1.32 g, 12.45 mmol) i rastvor se prečisti argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.4 g, 0.35 mmol) i prečišćavanje argonom se ponovi 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 90 °C 3.5 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni, preko silika gela dajući željeno jedinjenje (1.6 g, 68.66%).
Korak 5: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(piperidin-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0914] tert-butil 4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)(etil)amino)piperidin-1-karboksilat (1.3 g, 0.1.93
2
mmol) rastvori se u DCM (20 mL), u to se doda TFA (10 mL) na 0 °C i meša se na rt 2 h. Po završetku reakcije, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom, reakcija se prekida vodenim natrijum bikarbonatom i ekstrahuje korišćenjem 10%MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal; koji se zatim prečišćava ispiranjem acetonitrilom dajući jedinjenje iz naslova (0.9 g, 81.81%).
LCMS: 572.35 (M 1)+; HPLC: 96.59% (@ 254 nm) (Rt;3.964; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.19 (t, 1H), 7.57 (d, 2H, J = 8 Hz), 7.38 (m, 3H), 7.21 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.29 (d, 2H, J = 4Hz), 3.48-3.57 (m, 8H), 2.98-3.10 (m, 4H), 2.88 (m, 1H), 2.36 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.70-1.73 (m, 2H), 1.48-1.51 (m, 2H), 0.84 (t, 3H, J = 6.8 Hz).
Primer 127: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(1-pivaloilpiperidin-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0915]
[0916] N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(piperidin-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamid (0.2 g, 0.34 mmol) se rastvori u DMSO (2 mL) i pivalinskoj kiselini (0.107 g, 1.04 mmol) i zatim se doda trietil amin (0.106 g, 1.04 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre nego što joj se doda PYBOP (0.27 g, 0.52 mmol) i mešanje se nastavi preko noći. Posle završetka rakcije, reakciona mešavina se sipa na led, ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše, koncentruju da bi se dobio sirovi materijal; koji se zatim prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije jedinjenje iz naslova (0.14 g, 60.86%).
2 4
LCMS: 656.65 (M 1)+; HPLC: 97.51% (@ 254 nm) (Rt;4.555; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (bs, 1H), 8.18 (t, 1H), 7.57 (d, 2H, J = 7.2), 7.37-7.40 (m, 3H), 7.21 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.21-4.29 (m, 4H), 3.49-3.58(m, 6H), 3.06-3.08 (m, 3H), 2.73-2.79 (m, 2H), 2.37 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.75-1.78 (m, 2H), 1.38-1.41 (m, 2H), 1.17 (s, 9H), 0.83 (t, 3H, J = 7.2 Hz).
Primer 128: Sinteza 5-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0917]
Korak 1: Sinteza metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tertbutoksikarbonil)amino)cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata
[0918] U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (5 g, 20.57 mmol) i tertbutil (4-oksocikloheksil) karbamata (5.6 g, 26.74 mmol) u dihloroetanu (50 mL), doda se sirćetna kiselina (7.4 g, 123.33 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 10 min. Zatim se doda natrijum triacetoksiborohidrid (13 g, 61.72 mmol) na 0 °C i reakcija se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, reakcija se gasi vodenim natrijum bikarbonatom, organska faza se izdvoji i vodena faza se ekstrahuje dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom dajući sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije jedinjenje iz naslova (3.5 g, 38.88%).
Korak 2: Sinteza metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metilbenzoata
2
[0919] U mešani rastvor metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tertbutoksikarbonil)amino)cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata (1.4 g, 3.18 mmol) i acetaldehida (0.419 g, 9.52 mmol) u dihloroetanu (20 mL), doda se sirćetna kiselina (1.14 g, 19.0 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 10 min. Zatim se doda natrijum triacetoksiborohidrid (2 g, 9.43 mmol) na 0 °C i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 2 h. Po završetku, reakcija se gasi vodenim natrijum bikarbonatom, organska faza se izdvoji i vodena faza se ekstrahuje dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom dajući sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije jedinjenje iz naslova (1.25 g, 84.45%).
Korak 3: Sinteza tert-butil ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)cikloheksil)karbamata
[0920] Vodeni NaOH (0.16 g, 4.0 mmol) doda se u rastvor metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tertbutoksikarbonil)-amino)cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metilbenzoata (1.25 g, 2.67 mmol) u etanolu (10 mL) i meša na 60 °C 1 h. Po završetku reakcije, etanol se uklanja pod sniženim pritiskom i vrši se acidifikacija razblaženom HCl do pH 6 i podešavanjem pH na 4 limunskom kiselinom. Ekstrakcija se obavlja korišćenjem etil acetata. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju dajući odgovarajuću kiselinu (1.1g, 90%).
[0921] Gore pomenuta kiselina (1.1g, 2.42 mmol) se zatim rastvori u DMSO (10 mL) i doda joj se 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (0.736 g, 4.84 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PYBOP (1.88 g, 3.61 mmol) i mešanje se nastavlja preko noći. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni, preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.75 g, 53.57%).
Korak 4: Sinteza tert-butil ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)-metil)-karbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)-(etil)-amino)-cikloheksil)-karbamata
[0922] U mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)cikloheksil) karbamata (0.7g,
2
1.19 mmol) i (4-(morfolinometil)fenil)-boronske kiseline (0.489 g, 1.78 mmol) u mešavini dioksan/voda, doda se Na2CO3(0.454 g, 4.28 mmol) i rastvor se prečišćava argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.137 g, 0.119 mmol) i ponovo se vrši prečišćavanje argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 90 °C 3.5 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni, preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.55 g, 67.48%).
Korak 5: Sinteza 5-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil] -3-karboksamida
[0923] tert-butil ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)-metil)-karbamoil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-il)-(etil)-amino)-cikloheksil)-karbamat (0.55g, 0.80 mmol) rastvori se u DCM (10 mL), u to se doda TFA (3 mL) na 0 °C i meša se na sobnoj temperaturi preko noći. Po završetku reakcije, rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom, i reakcija se prekida vodenim natrijum bikarbonatom i ekstrahuje dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se zatim prečišćava ispiranjem acetonitrilom dajući jedinjenje iz naslova (0.42 g, 89.36%).
LCMS: 586.45 (M 1)+; HPLC: 98.38% (@ 254 nm) (Rt;3.667; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.18 (t, 1H), 7.56 (d, 2H, J = 7.6), 7.35-7.38 (m, 3H), 7.18 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.29 (d, 2H, J = 3.2Hz), 3.58 (m, 4H), 3.49 (m, 2H), 3.09-3.10 (m, 2H), 2.63-2.66 (m, 2H), 2.37 (m, 4H), 2.21 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.75-1.78 (m, 4H), 1.40-1.43 (m, 2H), 1.05-1.08(m, 2H), 0.83 (t, 3H, J = 6.4 Hz).
Primer 129: Sinteza 5-(((1r,4r)-4-acetamidocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0924]
2
[0925] U mešani rastvor 5-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida (0.25 g, 0.42 mmol) i sirćetne kiseline (0.151 g, 0.85 mmol) u DMF (3 mL), dodaju se EDCI (0.123 g, 0.64 mmol) i HOBt (0.057 g, 0.42 mmol), pa zatim trietilamin (0.064g, 0.63 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Po završetku reakcije, doda se voda i ekstrakcija se izvede korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se isperu vodom, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni dajući jedinjenje iz naslova (0.11 g, 41.04%).
LCMS: 628.35 (M 1)+; HPLC: 98.79% (@ 254 nm) (Rt;3.902; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (bs, 1H), 8.18 (t, 1H), 7.56-7.66 (m, 3H), 7.36-7.38 (m, 3H), 7.18 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.29 (d, 2H, J = 4Hz), 3.99 (m, 1H), 3.48-3.58 (m, 6H), 3.10-3.11 (m, 2H), 2.67 (m, 1H), 2.37 (m, 4H), 2.22 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.74-1.79 (m, 6H), 1.43-1.46 (m, 2H), 1.08-1.11 (m, 2H), 0.81-0.94 (t, 4H).
Primer 130: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-fluoro-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0926]
2
Korak 1: 6-fluoro-2-metil-3-nitrobenzoeva kiselina
[0927] Rastvor 2-fluoro-6-metilbenzoeve kiseline (2 g, 12.98 mmol) u koncentrovanoj H2SO4(15.77 ml, 295.85 mmol) ohladi se na -5 °C u vodenom kupatilu aceton/led, na vazduhu. U kapima se u reakcionu mešavinu doda mešavina koncentrovane azotne kiseline (1.08 ml, 16.87 mmol) i koncentrovane H2SO4(1 ml, 18.76 mmol) na -5 do 0 °C, 15 minuta. Bledožuta reakciona mešavina se meša na -5 do 0 °C 30 minuta pre nego što se sipa na led (100 g). Dobijeni precipitat se filtrira i rastvori u EtOAc (50 ml) i organska faza se ispere dejonizovanom vodom (25 ml), praćeno zasićenim slanim rastvorom (25 ml). Organska faza se suši preko MgSO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom dajući 2 g (77%) 6-fluoro-2-metil-3-nitrobenzoeve kiseline u vidu bele čvrste supstance. LC-MS 99%, 1.31min (3 minuta LC-MS metod), m/z=198.0, 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 8.04 (dd, J = 9.1, 5.0 Hz, 1H), 7.16 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 2.63 (s, 3H).
Korak 2: Sinteza 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-nitrobenzoeve kiseline
[0928] U rastvor 6-fluoro-2-metil-3-nitrobenzoev kiseline (100 mg, 0.5 mmol) u koncentrovanoj H2SO4(0.5 ml, 9.38 mmol) doda se 1,3-dibromo-5,5-dimetilimidazolidin-2,4-dion (79 mg, 0.28 mmol) na sobnoj temperaturi i pod azotom. Reakciona mešavina se meša 6 sati tokom čega se formira precipitat. Reakciona mešavina se polako dodaje u dejonizovanu vodu (3 ml) i dobijeni precipitat se filtrira. Čvrsti materijal se ispere dejonizovanom vodom (2 ml) i suši na vazduhu 2 sata dajući 123 mg (88%) 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-nitrobenzoeve kiseline u vidu bledožute čvrste supstance. LC-MS 94%, 1.61 min (3-minutni LC-MS metod), m/z=275.9/277.9 (ES-), 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 8.25 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 2.58 (s, 3H).
2
Korak 3: Sinteza metil 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-nitrobenzoata
[0929] U rastvor 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-nitrobenzoeve kiseline (2.41 g, 8.67 mmol) u N,N-dimetilformamidu (25 ml) na sobnoj temperaturi i pod azotom doda se K2CO3(2.4 g, 17.34 mmol) što je praćeno jodometanom (0.7 ml, 11.27 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 2 sata pre nego što se razblaži dejonizovanom vodom (100 ml) i ekstrahuje pomoću EtOAc (3 x 50 ml). Kombinovane organske faze se isperu zasićenim NaHCO3(aq) (50 ml) i zatim suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Rezidua se prečisti dva puta pomoću FCC (50 g silike, Isolute punjenje, gradijent eluenata; 98:2 heptan:EtOAc do 9:1 heptan:EtOAc) da se dobije 2.43 g (89%) metil 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-nitrobenzoata u vidu bele supstance. LC-MS 99%, 2.18min (3-minutni LC-MS metod), m/z=bez jonizacija, 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 8.22 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H), 2.48 (s, 3H).
Korak 4: Sinteza metil 3-amino-5-bromo-6-fluoro-2-metilbenzoata
[0930] U rastvor metil 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-nitrobenzoata (2.43 g, 8.32 mmol) u etanolu (80 ml) na sobnoj temperaturi doda se amonijum hlorid (4.37 g, 83.2 mmol) što je praćeno dejonizovanom vodom (40 ml). Mešavina se zagreva na 70 °C na vazduhu pre nego što se doda gvožđe (2.79 g, 49.92 mmol). Reakcija dobija mrku boju tokom 2.5 sata mešanja na 70 °C. Ova mešavina se stavi da se ohladi na sobnu temperaturu i filtrira se kroz kieselgel. Jastuče filtera se ispere pomoću MeOH (80 ml) i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Rezidua se rastvori u zasićenom NaHCO3(aq) (50 ml) i EtOAc (150 ml). Faze se izdvoje i organska faza se ispere zasićenim NaHCO3(aq) (50 ml) pre nego što se osuši preko MgSO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Rezidua se prečisti pomoću FCC (50 g silike, Isolute punjenje, gradijent eluenata; 95:5 heptan:EtOAc do 7:3 heptan:EtOAc) da se dobije 2.23 g (95%, korigovani prinos: 77%) metil 3-amino-5-bromo-6-fluoro-2-metilbenzoata u vidu žutog ulja. Materijal se koristi u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. LC-MS 81%, 1.87 min (3-minutni LC-MS metod), m/z=261.9/263.9,<1>H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 6.89 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.60 (s, 2H), 2.08 (s, 3H).
Korak 5: Sinteza metil 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-[(oksan-4-il)amino]benzoata
2
[0931] U rastvor metil 3-amino-5-bromo-6-fluoro-2-metilbenzoata (2.23 g, 8.08 mmol) u 1,2-dihloroetanu (32 ml) na sobnoj temperaturi i pod azotom doda se oksan-4-on (1.49 ml, 16.17 mmol) pa zatim sirćetna kiselina (2.78 ml, 48.5 mmol). Ovaj rastvor se meša 5 minuta pre nego što mu se doda natrijum triacetoksiborohidrid (5.14 g, 24.25 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja u trajanju od 5.5 sati LCMS ne pokazuje prisustvo neodreagovalog polaznog materijala. Doda se dejonizovana voda (32 ml) i mešavina se neutrališe čvrstim NaHCO3. Faze se odvoje i vodeni sloj se ekstrahuje pomoću EtOAc (2 x 32 ml). Kombinovani organski slojevi se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Rezidua se prečisti pomoću FCC (50 g silike, Isolute punjenje, gradijent eluenata; 95:5 heptan:EtOAc do 6:4 heptan:EtOAc) da se dobije 2.3 g (82%) metil 3-bromo-2-fluoro-6-metil- 5-[(oksan-4-il)amino]benzoata u vidu beličaste čvrste supstance. LC-MS 99%, 2.13 min (3-minutni LC-MS metod), m/z=245.9/247.9, 1H NMR (500 MHz, hloroformd) δ ppm 6.78 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 4.01 (dt, J = 11.9, 3.4 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.53 (td, J = 11.7, 2.1 Hz, 2H), 3.49 - 3.42 (m, 1H), 3.34 (s, 1H), 2.04 (s, 5H), 1.48 (qd, J = 11.0, 4.2 Hz, 2H).
Korak 6: Sinteza metil 3-bromo-5-[etil(oksan-4-il)amino]-2-fluoro-6-metilbenzoata
[0932] U rastvor metil 3-bromo-2-fluoro-6-metil-5-[(oksan-4-il)amino]benzoata (500 mg, 1.44 mmol) u 1,2-dihloroetanu (15 ml) na sobnoj temperaturi i pod azotom doda se acetaldehid (0.81 ml, 14.44 mmol), što je praćeno dodavanjem sirćetne kiseline (0.5 ml, 8.67 mmol). Ovaj rastvor se meša 5 minuta pre nego što mu se doda natrijum triacetoksiborohidrid (3.06 g, 14.44 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle 2 sata mešanja doda se dejonizovana voda (20 ml) i mešavina se neutrališe čvrstim NaHCO3. Faze se odvoje i vodeni sloj se ekstrahuje pomoću EtOAc (2 x 20 ml). Kombinovani organski ekstrakti se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Rezidua se prečisti pomoću FCC (10 g silike, Isolute punjenje, gradijent eluenata; 95:5 heptan:EtOAc do 85:15 heptan:EtOAc) da se dobije 519 mg (96%) metil 3-bromo-5-[etil(oksan-4-il)amino]-2-fluoro-6-metilbenzoata u vidu bledožutog ulja koje tokom stajanja očvrsne. LC-MS 94%, 2.45 min (3-minutni LC-MS metod), m/z=373.9/375.9, 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 7.33 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 3.95 (s, 5H), 3.32 (td, J = 11.7, 2.1 Hz, 2H), 3.00 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.88 (tt, J = 10.9, 4.0 Hz, 1H), 2.25 (s, 3H), 1.73 - 1.54 (m, 4H), 0.85 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
Korak 7: Sinteza 3-bromo-5-[etil(oksan-4-il)amino]-2-fluoro-6-metilbenzoeve kiseline
2 1
[0933] U rastvor metil 3-bromo-5-[etil(oksan-4-il)amino]-2-fluoro-6-metilbenzoata (519 mg, 1.39 mmol) u tetrahidrofuranu (13 ml) i MeOH (4 ml) doda se 4M NaOH (13.87 ml). Reakciona mešavina se meša na 50 °C na vazduhu, 72 sata. Reakciona mešavina se acidifikuje do pH 2-3 pomoću 6 M HCl i ekstrahuje pomoću DCM (5 x 15 ml). Kombinovani organski ekstrakti se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom dajući 526 mg (95%) 3-bromo-5-[etil(oksan-4-il)amino]-2-fluoro-6-metilbenzoeve kiseline u vidu bež pene. LC-MS 88%, 1.77 min (3-minutni LC-MS metod), m/z=359.9/361.9,<1>H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 7.43 - 7.31 (m, 1H), 4.00 (d, J =11.3 Hz, 2H), 3.41 - 3.29 (m, 2H), 3.16 - 2.91 (m, 3H), 2.40 (s, 3H), 1.84 - 1.59 (m, 4H), 0.99 - 0.82 (m, 3H).
Korak 8: Sinteza 3-bromo-N-[(4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-5-[etil(oksan-4-il)amino]-2-fluoro-6-metilbenzamida
[0934] U rastvor 3-bromo-5-[etil(oksan-4-il)amino]-2-fluoro-6-metilbenzoeve kiseline (200 mg, 0.56 mmol) u N,N dimetilformamidu (2 ml) na sobnoj temperaturi i pod azotom doda se PyBOP (346.72 mg, 0.67 mmol), pa zatim N-etil-N-(propan-2-il)propan-2-amin (145 ml, 0.83 mmol) i 3-(aminometil)-4,6-dimetil-1,2-dihidropiridin-2-on (89%, 104 mg, 0.61 mmol). Posle 1 sata mešanja na sobnoj temperaturi LCMS više ne registruje prisustvo polaznog materijala. EtOAc (20 ml) se doda u reakcionu mešavinu i ovo se zatim ispere dejonzovanom vodom (5 ml), a zatim zasićenim NaHCO3(aq) (3 x 5 ml). Organska faza se suši preko MgSO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Rezidua se prečisti pomoću FCC (5 g silike, Isolute punjenje, gradijent eluenata; 100% DCM do 97:3 DCM:MeOH) da se dobije 112 mg (41%) 3-bromo-N-[(4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-5-[etil(oksan-4-il)amino]-2-fluoro-6-metilbenzamida u vidu bledožute čvrste supstance. LC-MS 97%, 1.85 min (3-minutni LC-MS metod), m/z=494.0/496.0, 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 11.66 (s, 1H), 7.23 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 5.95 (s, 1H), 4.65 - 4.43 (m, 2H), 3.93 (d, J = 11.0 Hz, 2H), 3.38 - 3.22 (m, 2H), 2.97 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.91 - 2.79 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.24 - 2.11 (m, 6H), 1.72 - 1.53 (m, 4H), 0.83 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
Korak 9: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-fluoro-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0935] U rastvor 3-bromo-N-[(4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-5-[etil(oksan-4-il)amino]-2-fluoro-6-metilbenzamida (112 mg, 0.23 mmol) u 1,4-dioksanu (2 ml) i vodi (1 ml) doda se 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzil]morfolin (103 mg, 0.34
2 2
mmol) što je praćeno Na2CO3(84.04 mg, 0.79 mmol). Rastvor se prečišćava azotom 5 minuta, pre dodavanja paladijum-trifenilfosfina (1:4) (26 mg, 0.02 mmol). Žuta mešavina se zatim prečišćavai azotom 5 minuta pre zagrevanja na 100 °C. Posle 4 sata LCMS pokazuje da nema prisutnog neodragovalog polaznog materijala. Potamnela reakciona mešavina se razblaži dejonizovanom vodom (5 ml) i ekstrahuje 10% MeOH u DCM (5 x 5 ml). Kombinovani organski ekstrakti se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Rezidua se prečišćava pomoću FCC (5 g silike, Isolute punjenje, gradijent eluenata; 99:1 DCM:MeOH do 95:5 DCM:MeOH) da se dobije 69 mg (52%) jedinjenja iz naslova u vidu beličaste čvrste supstance. LCMS 97%, 2.70 min (7-minutni LC-MS metod), m/z=591.2, 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 12.10 (br s, 1H), 7.53 - 7.30 (m, 4H), 7.13 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.07 (br s, 1H), 5.88 (s, 1H), 4.55 (br s, 2H), 3.93 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 3.73 - 3.69 (m, 4H), 3.52 (s, 2H), 3.30 (t, J = 10.8 Hz, 2H), 3.02 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 2.92 (ddd, J = 14.6, 10.7, 3.7 Hz, 1H), 2.46 (s, 4H), 2.35 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 1.79 -1.43 (m, 4H), 0.86 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
Primer 131: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-((3-oksomorfolino)metil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0936]
Korak 1: Sinteza 4’-(bromometil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0937] U ledeno hladni mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4’-(hidroksimetil)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida (450 mg, 0.89 mmol) u DCM (10 mL) dodaju se trifenil fosfin (469 mg, 1.78 mmol) i ugljen tetrabromid (741 mg, 2.25 mmol). Reakciona mešavina se ostavi da dostigne sobnu temperaturu i mešanje se nastavi 16 h. Po okončanju, uklanjanje rastvarača pod
2
sniženim pritiskom, praćeno prečišćavanjem hromatografijom na koloni daje jedinjenje 8 (300 mg, 59%).
Korak 2: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4’-((3-oksomorfolino)metil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0938] U ledeno hladni mešani rastvor 4’-(bromometil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida (250 mg, 0.44 mmol) i morfolin-3-ona (67 mg, 0.66 mmol) u DMF (30mL) doda se natrijum hidrid (27 mg, 0.66 mmol). Posle 10 minuta, ukloni se led i mešanje se nastavi tokom 16 h na sobnoj temperaturi. Po završetku, doda se voda i izvrši se ekstrahovanje pomoću DCM (3 puta). Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastavarača pod sniženim pritiskom, praćeno prečišćavanjem hromatografijom na koloni i prep. HPLC daje jedinjenje iz naslova (75 mg, 29%). LCMS: 587.35 (M 1)+; HPLC: 98.69% (@ 254 nm) (Rt;4.604; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.50 (bs,1H), 8.25 (m,1H),7.65 (m,2H), 7.37-7.35 (m, 3H), 5.87 (s, 1H), 4.59 (m, 2H), 4.29 (d, 2H), 4.12 (s, 2H), 3.82 (m, 4H), 3.28 (m, 4H), 3.17-3.09 (m, 2H), 2.32-2.28 (m, 4H), 2.22 (s, 3H), 2.11 (s, 3H),1.57 (m, 4H), 0.86 (t, 3H).
Primer 132: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-4-metil-4’-(morfolinometil)-[1,1’-bifenil]-3-karboksamida
[0939]
Korak 1: Sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino) benzoata
2 4
[0940] U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (2.5 g, 10.24 mmol) i dihidro-2H-tiopiran-4(3H)-ona (1.42 g, 12.29 mmol) u dihloroetanu (50 mL), doda se sirćetna kiselina (3.6 ml, 61.47 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 10 min. Reakciona mešavina se ohladi na 0 °C i doda se natrijum triacetoksiborohidrid (6.5 g, 30.73 mmol) i meša se na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona mešavina se neutrališe zas. NaHCO3i jedinjenje se ekstrahuje u DCM, suši preko Na2SO4i koncentruje pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sirovog materijala hromatografijom na koloni daje metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino) benzoat (2.5 g, 71.0%).
Korak 2: Sinteza metil 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-2-metilbenzoata
[0941] U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino) benzoata (2.5 g, 5.83 mmol) i acetaldehida (513 mg, 11.66 mmol) u dihloroetanu (50 mL), doda se sirćetna kiselina (2.0 ml, 34.9 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 20 minuta. Reakciona mešavina se ohladi na 0 °C i doda se natrijum triacetoksiborohidrid (3.7 g, 17.49 mmol) i meša se na sobnoj temperaturi preko noći. Mešavina se neutrališe pomoću zas. NaHCO3i jedinjenje se ekstrahuje u DCM, suši preko Na2SO4i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal se prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije metil 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran- 4-il)amino)-2-metilbenzoat (2.0 g, 74.0%).
Korak 3: Sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
[0942] Mešavina metil 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-2-metilbenzoata (2.0 g, 5.39 mol) i NaOH (0.323 g, 8.08 mol) u 3 ml mešavine etanol:voda (2:1) zagreva se na 70 °C 2 h. Reakciona mešavina se koncentruje do suvog i sirovi materijal se raspodeli između vode i DCM, organski sloj se suši preko Na2SO4i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije 1.8 g kiseline.
[0943] Mešavina sirove kiseline (1.8 g, 5.04 mmol), 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (1.53 mg, 10.08 mmol) i PyBOP (3.9 g, 7.56 mmol) meša se u 3 ml DMSO na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona mešavina se razblaži vodom, i jedinjenje se ekstrahuje pomoću DCM. Organski sloj se suši preko Na2SO4, koncentruje pod sniženim pritiskom i prečišćava hromatografijom na koloni (eluiranje uz korišćenje 4% MeOH u DCM) na silika gelu (veličina sita 100-200) da se dobije 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-2-metilbenzamid (1.5 g, 60.7%).
2
Korak 4: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[0944] Rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (800 mg, 1.629 mmol), 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzil)morfolina (740 mg, 2.443 mmol), natrijum karbonata (621 mg, 5.86 mmol) u 20 ml dioksana oslobodi se gasa pomoću argona tokom 20 min, zatim se u mešavinu doda Pd(PPh3) (188 mg, 0.16 mmol), i mešavina se greje na 100 °C preko noći. Reakcija se ohladi na sobnu temperaturu i razblaži vodom, jedinjenje se ekstrahuje pomoću 10% MeOH u DCM, suši preko Na2SO4, koncentruje, i sirovi materijal se prečišćava hromatografijom na silika gelu (veličina sita: 100-200) da se dobije jedinjenje iz naslova (700 mg, 73.0%).
LCMS: 589.25 (M+1)+; HPLC: 96.75% (@ 254 nm) (Rt;4.869; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (D2O, 400 MHz) δ 7.78-7.89 (m, 4H), 7.64-7.66 (m, 2H), 6.33 (s, 1H), 4.52 (s, 2H), 4.45 (s, 2H), 4.13 (d, J = 13.2 Hz, 2H), 3.77-3.89 (m, 5H), 3.49 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.30-3.33 (m, 2H), 2.73-2.82 (m, 5H), 2.44, 2.38, 2.30 (3s, 9H), 1.89 (m, 2H), 1.06 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
Primer 133: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(1-oksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[0945]
[0946] U ohlađeni rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida (200 mg, 0.34 mmol) u 2 ml DCM doda se m-CPBA (70 mg, 0.41 mmol) na 0
2
°C, i mešavina se meša na sobnoj temperaturi 2 h (tok reakcije se prati pomoću TLC). Reakcija se gasi zas. NaHCO3, jedinjenje se ekstrahuje korišćenjem DCM, suši preko Na2SO4, koncentruje pod sniženim pritiskom i prečišćava pomoću hromatografije na koloni, preko silika gela (100-200) da se dobije jedinjenje iz naslova (60 mg, 29.3%).
LCMS: 605.25(M 1)+; HPLC: 44.06% & 54.42% (@ 254 nm) (Rt;4.092&4.448; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s,1H), 8.18 (t,1H), 7.59-7.57 (m,2H), 7.39-7.37 (m, 3H), 7.23-7.21 (m,1H), 5.86 (s, 1H), 4.29 (d, 2H,J=4 Hz),3.58 (m,3H), 3.48(m, 3H), 3.18-2.86 (m,5H), 2.67-2.59 (m,4H), 2.37-2.33 (m,4H), 2.25 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H),1.77 (m, 2H), 0.85 (t,3H).
Primer 134: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-3',4-dimetil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid
[0947]
[0948] Jedinjenje 134 priprema se metodom koji je sličan opisanom u Primeru 131.
Analitički podaci: LCMS: 587.4 (M 1)<+>; HPLC: 98.76% (@ 254 nm) (Rt;4.11; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (bs, 1H), 8.17 (bs, 1H), 7.41-7.20 (m, 5H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, J = 4 Hz, 2H), 3.82 (d, J = 10 Hz, 2H), 3.55 (m, 4H), 3.44 (bs, 2H), 3.27-3.22 (m, 2H), 3.09-3.01 (m, 3H), 2.39 (m, 7H), 2.23 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.67-1.51 (m, 4H), 0.83 (t, J = 6.8 Hz, 3H).
2
Primer 135: 4-((3'-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5'-(etil(1-oksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-4'-metil-[1,1'-bifenil]-4-il)metil)morfolin-4-oksid
[0949]
[0950] Tokom gore opisanog prečišćavanja pomoću prep. HPLC izolovan je i 4-((3'-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-5'-(etil(1-oksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-4'-metil-[1,1'-bifenil]-4-il)metil)morfolin-4-oksid.
LCMS: 621.40 (M 1)+; HPLC: 98.69% (@ 254 nm) (Rt;4.157; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12.18 (s, 1H), 11.45 (s, 1H), 8.20 (t, 1H), 7.79 (d, 2H, J=6.8 Hz), 7.62 (d, 2H, J=6.8 Hz), 7.45 (s, 1H), 7.27 (s, 2H), 5.86 (s, 1H), 4.89 (s, 2H), 4.30 (d, 2H, J=4 Hz), 4.00-3.80 (m, 7H), 3.19 (m, 2H), 3.00-2.85 (m, 4H), 2.70-2.60 (m, 2H), 2.30 (bs, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.75 (m, 2H), 0.87 (t, 3H, J=6 Hz).
Primer 136: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-((1,1-dioksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)(etil)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[0951]
2
[0952] U ohlađeni rastvor jedinjenja N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid (200 mg, 0.34 mmol) u 2 ml DCM doda se m-CPBA (117 mg, 0.68 mmol) na 0 °C, i mešavina se meša na sobnoj temperaturi 2 h (tok reakcije se prati pomoću TLC). Reakcija se gasi zasićenim NaHCO3i ekstrahuje pomoću DCM, suši preko Na2SO4i koncentruje pod sniženim pritiskom. Posle hromatografije na koloni, jedinjenje iz naslova se dobija u vidu TFA soli, posle dodatnog prečišćavanja pomoću prep. HPLC (80 mg, 38.1%). LCMS: 621.45 (M 1)+; HPLC: 99.93% (@ 254 nm) (Rt;4.522; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12.22 (s, 1H), 11.45 (s, 1H), 8.20 (t, 1H), 7.78 (d, 2H, J=8 Hz), 7.61 (d, 2H, J=8 Hz), 7.43 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.89 (s, 2H), 4.29 (d, 2H, J=4.4 Hz), 4.00-3.80 (m, 7H), 3.32 (m, 2H), 3.04 (m, 4H), 2.65-2.55 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.17 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.78 (m, 2H), 0.83 (t, 3H, J=6.4&7.2 Hz).
Primer 137: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4,4'-dimetil-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[0953]
[0954] U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4,4'-dimetil-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida (200 mg, 0.35 mmol) u dihlorometanu na sobnoj temperaturi doda se m-CPBA (60 mg, 0.35 mmol), i mešanje se nastavlja preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, reakcija se gasi dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata, i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM (3 puta). Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom praćeno ispiranjem rastvaračem daje jedinjenje iz naslova (120 mg, 58%). LCMS: 589.35 (M)+; HPLC: 95.56% (@ 254 nm) (Rt; 4.143;
2
metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.5 (bs, 1H), 8.22 (t, 1H), 7.66-7.60 (m, 4H), 7.42 (s, 1H), 7.21 (s, 1H,), 5.85 (s, 1H), 4.34-4.28 (m, 4H,), 4.12-4.07 (m, 2H), 3.83-3.81 (m, 2H), 3.62-3.60 (m, 2H), 3.42-3.39 (m, 2H), 3.33-3.22 (m, 2H), 3.16-3.08 (m, 3H), 2.65-2.62 (m, 2H), 2.25-2.10 (m, 9H), 1.67-1.51 (m,
4H), 0.83(t,3H, J=6.8Hz).
Primer 138: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-5-((tetrahidro-2H-piran-4-il)(2,2,2-trifluoroetil)amino)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[0955]
Korak 1: Sinteza 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoeve kiseline
[0956] Rastvor 5-bromo-2-metilbenzoeve kiseline (5.0 g, 23 mmol) u koncentrovanoj H2SO4(27 ml, 512 mmol) ohladi se na 5 °C u kupatilu koje sadrži mešavinu aceton/led. Mešavina koncentrovane azotne kiseline (1.9 ml, 30 mmol) i koncentrovane H2SO4(2.8 ml, 52 mmol) dodaje se u kapima u reakcionu mešavinu na -5° do 0 °C tokom 15 min. Žuta reakciona mešavina se meša na -5° do 0 °C, 2 h, pri čemu se formira žuti precipitat. Reakciona mešavina se sipa preko leda (150 g), i precipitat se zatim sakupi filtracijom. Precipitat se suši na vazduhu da se dobije jedinjenje iz naslova (5.5 g, 52%) u vidu bledožute čvrste supstance. LC-MS 57%, 1.82 min (3.5-minutni LC-MS metod), bez jonizacije; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.29 (s, 1 H) 8.13 (d, J=1.58 Hz, 1 H) 2.43 (s, 3 H).
Korak 2: Sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata
[0957] U rastvor 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoeve kiseline (5.5 g, 21 mmol) u DMF (42 ml) pod azotom doda se Na2CO3(3.4 g, 32 mmol), a zatim i jodometan (2.0 ml, 32 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 2 h. Mešavina se razblaži dejonizovanom vodom (150 ml) i ekstrahuje korišćenjem EtOAc (4 x 50 ml). Kombinovane organske faze se ispiraju zasićenim NaHCO3(aq) (2 x 50 ml), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju vakuumu da se dobije jedinjenje iz naslova (6.3 g, 61%) u vidu žutog ulja. LC-MS 57%, 2.20 min (3.5-minutni LCMS metod), bez jonizacije; 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 7.38 (d, J=2.05 Hz, 1 H) 7.23 (d, J=2.05 Hz, 1 H) 3.20 (s, 3 H) 1.82 (s, 3 H).
Korak 3: Sinteza metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata
[0958] U rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata (6.3 g, 21 mmol) u metanolu (150 ml) doda se amonijum hlorid (11.0 g, 209 mmol), što je praćeno dodavanjem dejonizovane vode (75 ml). Mešavina se zagreva na 70 °C pre dodavanja gvožđa (7.0 g, 125 mmol). Reakciona mešavina se meša na 70 °C 2 h, pre nego što se ostavi da dostigne sobnu temperaturu i filtrira se kroz kieselgel. Jastuče filtera se ispere korišćenjem MeOH (150 ml), i filtrat se koncentruje u vakuumu. Rezidua se rastvori u zasićenom NaHCO3(aq) (50 ml) i EtOAc (150 ml). Faze se odvoje, i organska faza se ispira zasićenim NaHCO3(aq) (3 x 50 ml), suši preko MgSO4, filtrira i koncentruje u vakuumu. Rezidua se prečišćava fleš hromatografijom na koloni (50 g silike, Isolute punjenje, 5-20% EtOAc:heptani) da se dobije jedinjenje iz naslova (3.0 g, 51%) u vidu gustog bledožutog ulja. LC-MS 87%, 1.89 min (3.5-minutni LC-MS metod), m/z = 243.9, 244.9, 245.9, 246.9; 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 7.34 (d, J=1.89 Hz, 1 H) 6.95 (d, J=1.89 Hz, 1 H) 3.88 (s, 3 H) 3.80 (br. s., 2 H) 2.29 (s, 3 H).
Korak 4: Sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-[(oksan-4-il)amino]benzoata
[0959] U rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (3.0 g, 12 mmol) u 1,2-dihloroetanu (48 ml) pod azotom doda se oksan-4-on (2.3 ml, 25 mmol), i zatim sirćetna kiselina (4.2 ml, 74 mmol). Reakciona mešavina se meša 5 min pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida (7.8 g, 37 mmol). Posle 64 h mešanja dodaje se dejonizovana voda (100 ml), i mešavina se neutrališe čvrstim NaHCO3. Faze se odvoje, i vodeni sloj se ekstrahuje pomoću EtOAc (4 x 50 ml). Kombinovani organski ekstrakti se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju u vakuumu. Rezidua se prečišćava fleš-hromatografijom na koloni (50 g silike, Isolute punjenje,
1
10-30% EtOAc:heptani) da se dobije jedinjenje iz naslova (3.5 g 85%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS 99.8%, 2.18 min (3.5-minutni LC-MS metod), m/z= 327.9, 328.9, 329.9, 330.9; 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 7.24 (d, J=1.73 Hz, 1 H) 6.85 (d, J=1.58 Hz, 1 H) 4.03 (dt, J=11.82, 3.31 Hz, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 3.66 (br.s., 1 H) 3.56 (td, J=11.55, 1.97 Hz, 2 H) 3.47 - 3.55 (m, 1 H) 2.24 (s, 3 H) 2.06 (d, J=13.56 Hz, 2 H) 1.47 - 1.60 (m, 2 H).
Korak 5: Sinteza metil 5-bromo-2-metil-3-[(oksan-4-il)(2,2,2-trifluoroetil)amino]benzoata
[0960] U 100 mL-ski dvogrli flakon sa okruglim dnom, koji sadrži metil 5-bromo-2-metil-3-[(oksan-4-il)amino]benzoat (500 mg, 1.5 mmol) i TFA (15 ml), dodaje se natrijum tetrahidroborat (1.0 g, 26 mmol), u porcijama, tokom 5 min. Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 2 h, zatim zagreva na 50 °C 3 h i tretira dodatnim alikvotom NaBH4(300 mg) tokom 25 min. Reakciona mešavina se zatim zagreva na 60 °C 2 h i ostavi se da se meša na sobnoj temperaturi 17 h. Reakciona mešavina se tretira korišćenjem TFA (5 ml) i NaBH4(200 mg) i zagreva na 60 °C 3.5 h. Dodaje se još jedan alikvot NaBH4(200 mg) tokom 15 min, zajedno sa TFA (5 ml), i zagrevanje se nastavlja još 3 h, pre nego što se mešavina ostavi da stoji na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona mešavina se sipa na led (75 ml) i meša dok se led ne istopi. Reakciona mešavina se bazifikuje dodavanjem 6M NaOH (aq) (40 ml), i pH se podesi na vrednost 7 pomoću 1M HCl (aq) (40 ml). Dobijena bela suspenzija sakupi se filtracijom, čvrsta supstanca se ispere vodom (20 ml) i suši u vakuumu na 40 °C, 3 h da se dobije jedinjenje iz naslova (577 mg, 91%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS 98.2%, 2.42 min (3.5-minutni LC-MS metod), m/z = 409.90, 410.9, 411.90, 412.9;
1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 7.80 (d, J=1.73 Hz, 1 H) 7.41 (d, J=1.73 Hz, 1 H) 4.01 (dd, J=11.51, 4.10 Hz, 2 H) 3.91 (s, 3 H) 3.64 (d,J=5.20 Hz, 2 H) 3.32 (t, J=11.82 Hz, 2 H) 2.99 (tt, J=11.43, 3.63 Hz, 1 H) 2.48 (s, 3 H) 1.80 (dd, J=12.53, 1.50 Hz, 2 H) 1.54 - 1.62 (m, 2 H).
Korak 6: Sinteza 5-bromo-2-metil-3-[(oksan-4-il)(2,2,2-trifluoroetil)amino]benzoeva kiselina
[0961] U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-[(oksan-4-il)(2,2,2-trifluoroetil)amino]benzoata (572 mg, 1.4 mmol) u mešavini THF (14 ml) i MeOH (2.1 ml), doda se 4M NaOH (aq) (13.9 ml). Reakciona mešavina se meša na 50 °C 5.5 h, a zatim na sobnoj temperaturi 17 h. THF se ukloni koncentrovanjem u vakuumu, a vodena rezidua se acidifikuje do pH 4 pomoću 6M HCl (aq) (9.5 ml). Dobijena suspenzija se ostavi da stoji na sobnoj temperaturi 20 min pre nego što se čvrsta supstanca sakupi filtracijom. Kolač čvrste
2
supstance ispira se vodom (20 ml) i suši pod visokim vakuumom 2 h da se dobije jedinjenje iz naslova (507 mg, 90%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS 98%, 2.04 min (3.5-minutni LC-MS metod), m/z = 395.9, 396.9, 397.9, 398.9; 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 7.97 (d, J=1.73 Hz, 1 H) 7.48 (d, J=1.73 Hz, 1 H) 4.02 (dd, J=11.35, 3.94 Hz, 2 H) 3.65 (br. s, 2 H) 3.33 (t, J=11.59 Hz, 2 H) 3.00 (tt, J=11.49, 3.80 Hz, 1 H) 2.55 (s, 3 H) 1.82 (d, J=11.98 Hz, 2 H) 1.55 - 1.69 (m, 2 H). OH nije vidljivo.
Korak 7: Sinteza 5-bromo-N-[(4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-metil-3-[(oksan-4-il)(2,2,2-trifluoroetil)amino]benzamida
[0962] Mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-[(oksan-4-il)(2,2,2-trifluoroetil)amino]benzoata (250 mg, 0.63 mmol) u suvom DMF (3.0 ml) na 0 °C u balonu azota tretira se korišćenjem HATU (288 mg, 0.76 mmol) i DIPEA (220 µl, 1.3 mmol), u kapima. Dobijeni rastvor se meša 5 min, i zatim tretira 3-(aminometil)-4,6-dimetil-1,2-dihidropiridin-2-onom (89%, 119 mg, 0.69 mmol). Dobijena suspenzija se meša na 0 °C 20 min, a zatim na sobnoj temperaturi 16.5 h. Reakciona mešavina se tretira 3-(aminometil)-4,6-dimetil-1,2-dihidropiridin-2-onom (30 mg). Mešanje se nastavlja još 23 h, i zatim se reakciona mešavina raspodeli između vode (30 ml) i CH2Cl2(20 ml). Slojevi se odvoje, i vodena faza ekstrahuje pomoću CH2Cl2(3 x 20 ml). Kombinovane organske supstance se ispiraju zasićenim rastvorom NaHCO3(aq) (50 ml), vodom (60 ml), zasićenim slanim rastvorom (2 x 40 ml), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju u vakuumu. Sirova rezidua se prečišćava fleš hromatografijom na koloni (10 g SNAP punjenje, Isolera, 0-10% MeOH/CH2Cl2) i trituriše etrom (10 ml) uz sonifikaciju. Dobijeni precipitat se sakupi filtracijom i suši u vakuumu da se dobije jedinjenje iz naslova (249 mg, 74%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS 100%, 4.08 min (7-minutni LC-MS metod), m/z = 530.0, 531.0, 532.0, 533.0; 1H NMR (500 MHz, aceton) δ 10.67 (s, 1H), 7.55 (d, J = 1.8 Hz, 2H), 7.27 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 5.90 (s, 1H), 4.40 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.90 (dd, J = 11.2, 4.6 Hz, 4H), 3.28 (t, J = 11.6 Hz,2H), 3.07 - 2.97 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.76 (dd, J = 12.3, 1.6 Hz, 2H), 1.61 (qd, J = 12.0, 4.5 Hz, 2H).
Korak 8: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-5-((tetrahidro-2H-piran-4-il)(2,2,2-trifluoroetil)amino)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[0963] U 100 mL-skom dvogrlom flakonu sa okruglim dnom, 5-bromo-N-[(4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-metil-3-[(oksan-4-il)(2,2,2-trifluoroetil)amino] benzamid (200 mg, 0.38 mmol), 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzil]morfolin (126 mg, 0.41 mmol) u 1,4-dioksanu (3.0 ml) tretiraju se rastvorom koji sadrži Na2CO3(140 mg, 1.3 mmol) u vodi (1.0 ml). Gasoviti azot se propušta kroz mešavinu pomoću duge igle, tokom 5 min, pre dodavanja paladijum-trifenilfosfana (1:4) (44 mg, 0.04 mmol). Gasoviti azot se propušta kroz žutu suspenziju tokom dodatnih 5 min pre zagrevanja reakcione mešavine na 100 °C 5.5 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom (10 ml) i 10% MeOH u CH2Cl2(10 ml). Slojevi se odvoje, i vodena faza ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH u CH2Cl2(3 x 15 ml). Kombinovani organski ekstrakti se ispiraju zasićenim slanim rastvorom (40 ml), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju u vakuumu. Sirova rezidua se prečišćava hromatografijom na koloni (10g SNAP punjenje, Isolera, 0-4% MeOH:CH2Cl2) da se dobije jedinjenje iz naslova (193 mg, 82%) u vidu beličastog praha. LC-MS 100%, 3.34 min (7-minutni LC-MS metod), m/z = 627.5;<1>H NMR (500 MHz, aceton) δ 10.76 (s, 1H), 7.65 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.57 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 5.91 (s, 1H),4.44 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.97 (s, 2H), 3.90 (dd, J = 11.4, 4.1 Hz, 2H), 3.61 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.50 (s, 2H), 3.29 (t, J = 11.5 Hz, 2H), 3.06 (tt, J = 11.4, 3.8 Hz, 1H), 2.39 (d, J = 5.0 Hz, 7H), 2.34 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.82 (dd, J = 12.3, 1.7 Hz, 2H), 1.70 - 1.56 (m, 2H).
Primer 139: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-etil-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[0964]
Korak 1: Sinteza metil 5-hloro-2-[2-(trimetilsilil)etinil]benzoata
4
[0965] U rastvor metil 2-bromo-5-hlorobenzoata (14.8 g, 59 mmol) u TEA (124 ml, 889.82 mmol) dodaju se bakar(I) jodid (338 mg, 1.78 mmol) i trifenilfosfin (778 mg, 2.97 mmol) na sobnoj temperaturi i pod azotom. Kroz mešavinu se propušta gasoviti azot 10 min pre dodavanja etinil(trimetil)silana (12.45 ml, 89 mmol) i Pd(OAc)2(266 mg, 1.19 mmol). Reakciona mešavina se meša na 50 °C 20 h, pre nego što se koncentruje pod sniženim pritiskom. Rezidua se rastvori u dejonizovanoj vodi (50 ml) i EtOAc (50 ml) i filtrira kroz celit. Filterski kolač se ispere pomoću EtOAc (50 ml) pre razdvajanja faza, a vodeni sloj se ekstrahuje pomoću EtOAc (2 x 50 ml). Kombinovani organski ekstrakti se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Rezidua se prečisti pomoću FCC (10 g silike, Isolute punjenje, gradijent eluenata; 99:1 heptan:EtOAc do 85:15 heptan:EtOAc) da se dobije 16.2 g (102.4%) metil 5-hloro-2-[2-(trimetilsilil)etinil]benzoata u vidu narandžastog ulja koje tokom stajanja postaje čvrsto. Uzorak je sadržao heptan. LC-MS 91%, 2.57 min (3-minutni LC-MS metod), m/z=267.4/268.9, 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 7.89 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.41 (dd, J = 8.3, 2.3 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 0.27 (s, 9H).
Korak 2: Sinteza metil 5-hloro-2-etinilbenzoata
[0966] U rastvor metil 5-hloro-2-[2-(trimetilsilil)etinil]benzoata (10 g, 37.5 mmol) u metanolu (150 ml) doda se K2CO3(10.36 g, 75 mmol) na sobnoj temperature i na vazduhu. Reakciona mešavina se meša 1 h pre koncentrovanja pod sniženim pritiskom. Rezidua se rastvori u dejonizovanoj vodi (50 ml) i EtOAc (50 ml). Faze se odvoje, i vodeni sloj se ekstrahuje pomoću EtOAc (2 x 50 ml). Kombinovani organski ekstrakti se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Rezidua se prečisti korišćenjem FCC (50 g silike, Isolute punjenje, gradijent eluenata; 95:5 heptan:EtOAc do 9:1 heptan:EtOAc) da se dobije 5.75 g (55.2%) metil 5-hloro-2-etinilbenzoata u vidu narandžastog ulja koje tokom stajanja postaje čvrsto. Ovaj materijal je sadržao 30% etil estra koji je pogodan za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja. LC-MS 38%, 1.98 min (3-minutni LC-MS metod), m/z=195.0/196.9,<1>H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 7.93 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.45 (dd, J = 8.3, 2.3 Hz,1H), 3.94 (s, 3H), 3.43 (s, 1H).
Korak 3: Sinteza metil 5-hloro-2-etilbenzoata
[0967] U rastvor metil 5-hloro-2-etinilbenzoata (5.34 g, 27.44 mmol) u etil acetatu (135 ml) doda se Pd/C (10%) (50% vode, 2.92 g, 1.37 mmol). Reakciona mešavina se meša u atmosferi vodonika na sobnoj temperaturi, 3 h. LCMS pokazuje da je reakcija završena, i mešavina se filtrira kroz celit. Filterski kolač se ispira pomoću EtOAc (50 ml), a filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije 5.12 g (93.9%) metil 5-hloro-2-etilbenzoata u vidu mrkog ulja koje je pogodno za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja.
LC-MS 56%, 2.21 min (3-minutni LC-MS metod), m/z=198.9/200.9, 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 7.84 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 8.3, 2.3 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 2.94 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.21 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
Korak 4: Sinteza metil 5-hloro-2-etil-3-nitrobenzoata
[0968] Rastvor metil 5-hloro-2-etilbenzoata (5.12 g, 25.77 mmol) u koncentrovanoj H2SO4(31 ml, 587 mmol) ohladi se do -5 °C u kupatilu koje sadrži mešavinu aceton/led, na vazduhu. U reakcionu mešavinu se u kapima dodaje mešavina koncentrovane azotne kiseline (2.15 ml, 33.51 mmol) i koncentrovane H2SO4(2 ml, 37.52 mmol) na -5 ° do 0 °C, 15 min. Bledožuta reakciona mešavina se meša na -5° do 0 °C 1 h pre izlivanja na led (500 ml), i zatim se ekstrahuje pomoću EtOAc (3 x 100 ml). Kombinovane organske faze se ispiraju dejonizovanom vodom (100 ml), i zatim zasićnim slanim rastvorom (100 ml). Organska faza se suši preko MgSO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. LCMS i NMR pokazuju ∼30% hidrolize estara. Sirovi materijal se rastvori u metanolu (30 ml) i ohladi do 0 °C u atmosferi azota pri čemu se polako dodaje SOCl2(2.25 ml, 30.93 mmol). Reakciona mešavina se zatim zagreva do refluksa 6 h pre nego što se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije 6.18 g (98.4%) metil 5-hloro-2-etil-3-nitrobenzoata u vidu narandžastog ulja. Proizvod sadrži mešavinu 3-nitro:6-nitro izomera (1:1) zajedno sa nešto etil estra, pa je pogodna za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja.
Korak 5: Sinteza metil 3-amino-5-hloro-2-etilbenzoata
[0969] U rastvor metil 5-hloro-2-etil-3-nitrobenzoata (6.18 g, 25.36 mmol) u metanolu (250 ml) na sobnoj temperaturi doda se amonijum hlorid (13.31 g, 253.65 mmol), i zatim dejonizovana voda (125 ml). Mešavina se na vazduhu zagreva na 70 °C pre dodavanja gvožđa (8.5 g, 152.19 mmol). Reakcija potamni tokom 2.5 h mešanja na 70 °C. Ova mešavina se ostavi da se ohladi do sobne temperature pa se filtrira kroz kieselgel. Jastuče filtera se ispere pomoću MeOH (250 ml), i filtrat koncentruje pod sniženim pritiskom. Rezidua se rastvori u zasićenom NaHCO3(aq) (50 ml) i EtOAc (150 ml). Faze se odvoje, i organska faza se ispira zasićenim NaHCO3(aq) (2 x 50 ml) pre sušenja preko MgSO4, filtriranja i koncentrovanja pod sniženim pritiskom. Rezidua se prečišćava uz pomoć FCC (50 g silike, Isolute punjenje, gradijent eluenata; 95:5 heptan:EtOAc do 75:25 heptan:EtOAc) da se dobije 2.42 g (22%, korigovani prinos: 7%) metil 3-amino-5-hloro-2-etilbenzoata u vidu žutog ulja. Proizvod sadrži ∼25% etil estra, a moguće i ∼15% 4-nitro proizvoda. Materijal se koristi u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. LC-MS 31%, 2.00 min (3-minutni LC-MS metod), m/z=295.0, 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 7.17 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.86 - 3.81 (m, 2H), 2.74 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.20 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
Korak 6: Sinteza metil 5-hloro-2-etil-3-[(oksan-4-il)amino]benzoata
[0970] U rastvor metil 3-amino-5-hloro-2-etilbenzoata (1.5 g, 7.02 mmol) u 1,2-dihloroetanu (28 ml) na sobnoj temperaturi i pod azotom doda se oksan-4-on (1.3 ml, 14.04 mmol), a zatim sirćetna kiselina (2.41 ml, 42.12 mmol). Ovaj rastvor se meša 5 min pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida (4.46 g, 21.06 mmol), na sobnoj temperaturi. Posle 20 h mešanja dodaje se dejonizovana voda (28 ml) i mešavina se neutrališe čvrstim NaHCO3. Faze se odvoje, a vodeni sloj se ekstrahuje pomoću EtOAc (2 x 28 ml). Kombinovani organski ekstrakti se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Rezidua se prečišćava pomoću FCC (50 g silike, Isolute punjenje, gradijent eluenata; 95:5 heptan:EtOAc do 8:2 heptan:EtOAc) da se dobije 1.76 g (84%, korigovani prinos: 50%) metil 5-hloro-2-etil-3-[(oksan-4-il)amino]benzoata u vidu bele čvrste supstance. Proizvod sadrži ∼25% etil estera. Materijal se koristi u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. LC-MS 60%, 2.27 min (3-minutni LC-MS metod), m/z=298.0/300.0, 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 7.07 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.71 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 4.01 (dt, J = 11.8, 3.4 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.82 -3.76 (m, 1H), 3.64 - 3.47 (m, 3H), 2.79 - 2.63 (m,2H), 2.06 (d, J = 13.2 Hz, 2H), 1.55 - 1.46 (m, 2H), 1.18 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
Korak 7: Sinteza 5-hloro-2-etil-3-[etil(oksan-4-il)amino]benzoeve kiseline
[0971] U rastvor metil 5-hloro-2-etil-3-[(oksan-4-il)amino]benzoata (350 mg, 1.18 mmol) u DCE (10 ml) na sobnoj temperaturi i pod azotom doda se acetaldehid (0.66 ml, 11.75 mmol), a zatim i sirćetna kiselina (0.4 ml, 7.05 mmol). Ovaj rastvor se meša 5 min pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida (2.49 g, 11.75 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle 23 h mešanja dodaje se još acetaldehida (0.66 ml, 11.75 mmol), a zatim i natrijum triacetoksiborohidrida (2.49 g, 11.75 mmol). Posle još 3 h mešanja dodaje se dejonizovana voda (15 ml), i mešavina se neutrališe čvrstim NaHCO3. Faze se odvoje, i vodeni sloj ekstrahuje pomoću EtOAc (2 x 15 ml). Kombinovani organski ekstrakti se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Rezidua se prečišćava pomoću FCC (10 g silike, Isolute punjenje, gradijent eluenata; 99:1 heptan:EtOAc do 85:15 heptan:EtOAc) da se dobije jedinjenje iz naslova (317 mg) u vidu mešavine metil i etil estara (2:1), koja se koristi u sledećoj fazi.
[0972] U mešavinu estara dodaju se THF (10 ml) i 4M NaOH (9.7 ml, 38.9 mmol), i reakcija se meša na 50 °C 27 h, posle čega se u reakcionu mešavinu dodaje MeOH (5 ml), i mešavina se meša još 21 h na 50 °C. Reakciona mešavina se acidifikuje do pH 2-3 pomoću 6M HCl i ekstrahuje korišćenjem DCM (5 x 10 ml). Kombinovani organski ekstrakti se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu narandžastih kristala (289 mg, 79% kroz dva koraka). LC-MS 100%, 2.09 min (LC-MS metod od 3.5 min), m/z= 312.0/314.0, 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ 7.73 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 3.99 (d, J = 11.0 Hz, 2H), 3.38 - 3.29 (m, 2H), 3.20 - 3.03 (m, 4H), 3.02 - 2.91 (m, 1H), 1.78 -1.61 (m, 4H), 1.13 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.91 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
Korak 8: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-etil-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-(morfolinometil)-[1,1-bifenil]-3-karboksamida
[0973] U rastvor 5-hloro-2-etil-3-[etil(oksan-4-il)amino]benzoeve kiseline (191 mg, 0.61 mmol) u DMF (3 ml) na 0 °C doda se HATU (280 mg, 0.74 mmol), zatim i DIPEA (213 µl, 1.26 mmol) i 3-(aminometil)-4,6-dimetil-1,2-dihidropiridin-2-on (89%, 115 mg, 0.67 mmol). Reakcija se meša na sobnoj temperaturi 3 h, posle čega se sipa u dejonizovanu vodu (50 ml), i dobijena čvrsta supstanca se filtrira i ispira vodom. Vodena faza se ispira pomoću DCM (3 x 50 ml), kombinovane organske supstance se ispiraju zasićenim slanim rastvorom (30 ml), suše na MgSO4, filtriraju i evaporišu da se dobije ulje. Čvrsti materijal i ulje se kombinuju i prečišćavaju pomoću kolone od 10 g za izolovanje, uz eluiranje sa 0% do 3% MeOH u DCM, zatim evaporišu i ponovo prečišćavaju pomoću kolone od 10 g za izolovanje, uz eluiranje sa 0% do 3% MeOH u EtOAc da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu beličaste čvrste supstance (234 mg, 79%). LC-MS 92%, 1.78 min (3.5-minutni LCMS metod), m/z= 446.2/448. U mešani rastvor 5-hloro-N-[(4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-etil-3-[etil(oksan-4-il)amino]benzamida (117 mg, 0.26 mmol) u degaziranoj mešavini diglima (4 ml) i MeOH (2 ml), u koju je uveden gasoviti azot, dodaju se 2'-(dicikloheksilfosfanil)-N,N-dimetilbifenil-2-amin (21 mg, 0.05 mmol), paladijum diacetat (5.89 mg, 0.03 mmol), cezijum fluorid (120 mg, 0.79 mmol) i 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2il)benzil]morfolin (119 mg, 0.39 mmol). Uvođenje gasovitog azota nastavlja se tokom 10 min, a zatim se reakcija zagreva na 70 °C 16 h posle čega se dodaje još 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzil]morfolina (119 mg, 0.39 mmol), i grejanje se nastavlja 6 h. Reakcija se zatim ohladi do sobne temperature i filtrira kroz keiselguhr, kolač se ispira pomoću MeOH. Doda se destilovana voda (20 ml), filtrat se ekstrahuje pomoću EtOAc (3 x 50 ml), i kombinovane organske supstance se ispiraju zasićenim slanim rastvorom (2 x 50 ml), suše na MgSO4, filtriraju i isparavaju. Dobijena rezidua se prečisti kolonom za izolovanje od 25 g, uz eluciju u gradijentu od 0% do 10% MeOH u DCM, da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu bledožute čvrste supstance (32 mg, 21%). LC-MS 99%, 2.72 min (7-minutni LC-MS metod), m/z= 294.3 (M+H/2), 1H NMR (500 MHz, aceton-d6) δ 10.80 (s, 1H), 7.60 - 7.54 (m, 3H), 7.51 (s, 1H), 7.39 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 5.92 (s, 1H), 4.45 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.88 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 3.66 - 3.56 (m, 4H),3.51 (s, 2H), 3.29 (t, J = 11.2 Hz, 2H), 3.17 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.09 (t, J = 11.2 Hz, 1H), 2.98 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 2.41 (s, 4H), 2.36 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.76 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 1.65 - 1.56 (m, 2H), 1.08 (t, J = 7.4Hz, 3H), 0.91 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
Primer 140: Sinteza 3'-cijano-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[0974]
Korak 1: Sinteza 5-bromo-2-(morfolinometil)benzonitrila
[0975] U mešani rastvor 5-bromo-2-formilbenzonitrila (200 mg, 0.95 mmol) i morfolina (248 mg, 2.85 mmol) u dihloroetanu (10 mL) dodaje se sirćetna kiselina (342 mg, 5.7 mmol), i reakcija se meša na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Zatim se u reakcionu mešavinu dodaje natrijum triacetoksiborohidrid (604 mg, 2.85 mmol) na 0 °C, mešavina se ostavi da dostigne sobnu temperaturu, i mešanje se nastavlja preko noći. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži dihlorometanom, ispere vodom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i suši preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom, praćeno prečišćavanjem uz pomoć hromatografije na koloni, daje željeno jedinjenje (150 mg, 56%).
Korak 2: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzamida
[0976] Mešana mešavina 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (1.0 g, 2.1 mmol), bipinakolato diborona (2.67 g, 10.5 mmol) i kalijum acetata (610 mg, 6.31 mmol) u dioksanu (10 mL), prečisti se argonom 15 min. Zatim se dodaje kompleks 1,1'-bi(difenilfosfino)ferocenpaladijum(II)dihlorid dihlorometana (85 mg, 0.10 mmol), i mešavina se ponovo prečišćava argonom 15 min. Reakciona masa se zagreva na 80 °C 7 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM (3 puta). Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom praćeno prečišćavanjem hromatografijom na koloni daje željeno jedinjenje (250 mg, 27%).
Korak 3: Sinteza 3'-cijano-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[0977] U mešani rastvor 5-bromo-2-(morfolinometil)benzonitrila (190 mg, 0.68 mmol) i N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzamida (200 mg, 0.45 mmol) u dioksanu (6 mL) doda se 2M vodeni rastvor Na2CO3(0.81 mL, 1.63 mmol), i rastvor se prečišćava argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(52 mg, 0.04 mmol), i rastvor se ponovo prečišćava argonom 15 min. Reakciona masa se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM (3 puta). Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata. Uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom praćeno prečišćavanjem hromatografijom na koloni daje jedinjenje iz naslova (16 mg, 6%). LCMS: 598.20 (M 1)+; HPLC: 89.15% (@ 254 nm) (Rt;4.039; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.;
1
gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (bs, 1H), 8.20 (t, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.94 (d, 1H, J = 6.8 Hz), 7.63 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.51 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.29 (m, 2H), 3.84-3.82 (m, 2H), 3.66-3.58 (m, 6H), 3.32 (m, 5H), 3.11-3.03 (m, 4H), 2.25 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.65-1.51 (m, 4H), 0.82 (t, 3H, J = 6 Hz).
Primer 141: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid
[0978]
Korak 1: 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoeva kiselina
[0979] U mešani rastvor 2-metil-3-nitrobenzoeve kiseline (100 g, 552.48 mmol) u konc. H2SO4(400 mL) dodaje se 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidindion (87.98 g, 307.70 mmol), u partijama, na sobnoj temperaturi. Reakciona mešavina se zatim meša na sobnoj temperaturi 5 h. Reakciona mešavina se izlije u ledenu vodu, precipitirana čvrsta materija se sakupi filtracijom, ispere vodom i suši u vakuumu da se dobije željena 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoeva kiselina u vidu beličaste čvrste supstane (140 g, prinos: 97.90%).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.31 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 2.43 (s, 3H).
Korak 2: metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoat
[0980] U mešani rastvor 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoeve kiseline (285 g, 1104.65 mmol) u DMF (2.8 L) doda se natrijum karbonat (468 g, 4415.09 mmol) pa zatim metil jodid (626.63 g, 4415 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena reakciona mešavina se meša na 60 °C 8 h. Reakciona mešavina se zatim filtrira da bi se odvojio suspendovani čvrsti materijal koji se dobro ispere etil acetatom (3 x 1 L). Kombinovani filtrati se dobro isperu vodom (5 x 3 L), i
11
vodena faza se ekstrahuje etil acetatom (3 x 1 L). Kombinovani organski ekstrakti se suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoat u vidu beličaste čvrste supstance (290 g, prinos: 97%). 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.17 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.59 (s, 3H).
Korak 3: metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoat
[0981] U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoata (290 g, 1058.39 mmol) u etanolu (1.5 L) doda se vodeni amonijum hlorid (283 g, 5290 mmol rastvorena u 1.5 L vode). Nastala mešavina se meša i zagreva na 80 °C, što je praćeno dodavanjem gvožđa u prahu (472 g, 8451 mmol), u partijama na 80 °C. Dobijena reakciona mešavina se zagreva na 80 °C 12 h. Zatim se još vruća reakciona mešavina filtrira kroz Celit<®>, i Celit<®>ležište se dobro ispere metanolom (5 L), i zatim 30% MeOH u DCM (5 L). Kombinovani filtrati se koncentruju u vakuumu, i dobijena rezidua se razblaži vodenim bikarbonatom (2 L) i ekstrahuje etil acetatom (3 x 5 L). Kombinovani organski slojevi se suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoat u vidu mrke čvrste supstance (220 g, prinos: 89.41%).
[0982] Deo proizvoda (5 g) se rastvori u vrućem etanolu (20 mL), nerastvorljiva rezidua se ukloni filtriranjem, i matična tečnost se koncentruje da se dobije metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoat (3.5 g, prinos: 70%) u vidu svetlomrke čvrste supstance čija je HPLC čistoća 93.81%. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.37 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.80 (bs, 2H), 2.31 (s, 3H).
Korak 4: metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)amino)-2-metilbenzoat
[0983] U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (5 g, 20.5 mmol) i tertbutil(4-oksocikloheksil)karbamata (5.69 g, 26.7 mmol) u dihloroetanu (50 mL) doda se sirćetna kiselina (7.4 g, 123 mmol), i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 10 min. Zatim se doda natrijum triacetoksiborohidrid (13.1 g, 61.7 mmol) na 0 °C, i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 16 h. Reakcija se gasi vodenim natrijum bikarbonatom, organska faza se odvoji, a vodena faza se ekstrahuje dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi se suše preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentruju u vakuumu. Sirovi proizvod se prečišćava hromatografijom na koloni od silika gela (veličina sita: 100-200) uz eluiranje 10% etil acetatom u heksanu da se dobije 3.5 g polarnijeg (trans) izomera, metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-
12
((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata, u vidu čvrste supstance (38.46%). 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.21 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.41 (bs, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.60 (m, 1H), 3.45 (m, 1H), 3.20 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 2.15 (bs, 2H), 2.05 (bs, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.30 (m, 4H).
Korak 5: metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)-(etil)amino)-2-metilbenzoat
[0984] U mešani rastvor metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)-cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzoata (55 g, 0.124 mol) i acetaldehida (11 g, 0.25 mol) u dihloroetanu (550 mL) doda se sirćetna kiselina (44.64 g, 0.744 mol), i reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 10 min. Zatim se doda natrijum triacetoksiborohidrid (79 g, 0.372 mol) na 0 °C, i reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 16 h. Reakcija se gasi vodenim natrijum bikarbonatom, organska faza se odvoji, a vodena faza ekstrahuje dihlorometanom. Kombinovani ekstrakti se suše preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentruju u vakuumu. Sirovo jedinjenje se prečišćava hromatografijom na koloni od silika gela (veličina sita: 100-200) uz eluiranje 10% etil acetatom u heksanu da se dobije 44 g metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)-(etil)amino)-2-metilbenzoata (75.2%) u vidu čvrste supstance.<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.55 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 6.65 (d, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.15 (bs, 1H), 3.05 (q, 2H), 2.60 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 1.75 (m, 4H), 1.40 (m, 2H), 1.35 (s, 9H), 1.10 (m, 2H), 0.80 (t, 3H).
Korak 6: tert-butil ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)cikloheksil)karbamat
[0985] Vodeni NaOH (3.5 g, 0.08 mol u 10 mL H2O) doda se u rastvor metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)-(etil)amino)-2-metilbenzoata (25 g, 0.053 mol) u EtOH (100 mL), i meša na 60 °C 1 h. Etanol se tada ukloni pod sniženim pritiskom, i mešavina se acidifikuje do pH 8 razblaženom HCl, a do pH 6 limunskom kiselinom. Mešavina se ekstrahuje 10% metanolom u DCM (3 x 200 mL). Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju dajući odgovarajuću kiselinu (24.2 g, 99.0%).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.13 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 6.68 (d, 1H), 3.14 (bs, 1 H), 3.03 (q, 2H), 2.56 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.80-1.65 (m, 4H), 1.40 (m, 2H), 1.35 (s, 9H), 1.10 (m, 2H), 0.77 (t, 3H).
1
[0986] Kiselina (24 g, 0.053 mol) se rastvori u DMSO (100 mL), i dodaju se 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (16 g, 0.106 mol) i trietilamin (5.3 g, 0.053 mol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PyBop (41 g, 0.079 mmol), i mešanje se zatim nastavlja preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona mešavina se sipa u ledenu vodu (1 L). Dobijeni precipitat se sakupi filtracijom, dobro ispere vodom (2 x 1 L) i suši. Dobijeni proizvod se dodatno prečišćava ispiranjem acetonitrilom (3 x 200 mL) i DCM (100 mL) da se dobije tert-butil ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(etil) amino)cikloheksil)-karbamat (24 g, 77%). 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (s, 1H), 8.24 (t, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.67 (d, 1H); 5.85 (s, 1H), 4.24 (d, 2H), 3.13 (bs, 1H), 3.01 (q, 2H), 2.53 (m, 1H), 2.18 (s, 3H), 2.10 (s, 6H), 1.80-1.65 (m, 4H), 1.40 (m, 2H), 1.35 (s, 9H), 1.10 (m, 2H), 0.77 (t, 3H).
Korak 7: tert-butil ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil) karbamoil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-il)(etil)amino)cikloheksil) karbamat
[0987] U mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)cikloheksil)-karbamata (24 g, 0.041 mol) i 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzil)morfolina (18 g, 0.061 mol) u mešavini dioksan/voda (160 mL 40 mL) doda se Na2CO3(15 g, 0.15 mol), i rastvor se prečišćava argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(4.7 g, 0.041 mol), i reakciona mešavina se ponovo prečišćava argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 4 h. Reakciona mešavina se zatim razblaži pomoću 10% MeOH/DCM (500 mL) i filtrira. Filtrat se koncentruje, razblaži vodom (500 mL) i ekstrahuje pomoću 10% MeOH u DCM (3 x 500 mL). Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečišćava hromatografijom na silika gel koloni (veličina sita: 100-200) uz eluiranje 7% MeOH u DCM da se dobije tert-butil ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-il)(etil)amino) cikloheksil)karbamat (20 g, 71.43%). 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.20 (t, 1H), 7.56 (d, 2H), 7.36 (m, 3H), 7.17 (s, 1H), 6.66 (d, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.28 (d, 2H), 3.57 (bs, 4H), 3.48 (s, 2H), 3.20-3.05 (m, 3H), 2.62 (m, 1H), 2.36 (bs, 4H), 2.20 (s, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.75 (m, 4H), 1.42 (m, 2H), 1.35 (s, 9H), 1.10 (m, 2H), 0.82 (t, 3H).
Korak 8: 5-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid
14
[0988] U mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-il)(etil)amino) cikloheksil)karbamata (20 g, 0.03 mol) u DCM (200 mL) na 0 °C doda se TFA (75 mL), i reakcija se meša 2 h na sobnoj temperaturi. Reakciona mešavina se zatim koncentruje do suvog, i rezidua se bazifikuje do pH 8 zasićenim vodenim rastvorom bikarbonata (300 mL). Mešavina se ekstrahuje 20% metanolom u DCM (4 x 200 m). Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4, i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom da se dobije 5-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid (15.5 g, 91%) koji se kao takav koristi u sledećoj reakciji.<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.18 (bs, 1H), 7.57 (d, 2H), 7.38 (m, 3H), 7.20 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.29 (d, 2H), 3.57 (bs, 4H), 3.48 (s, 2H), 3.31 (bs, 2H), 3.10 (m, 2H), 2.91 (m, 1H), 2.67 (m, 1H), 2.36 (bs, 4H), 2.21 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.90 (m, 2H), 1.83 (m, 2H), 1.45 (m, 2H), 1.23 (m, 2H), 0.83 (t, 3H).
Korak 9: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid
[0989] U mešani rastvor 5-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida (14 g, 0.023 mol) u dihlorometanu (150 mL) doda se vodeni 35% rastvor formaldehida (2.4 g, 0.080 mol) na 0 °C. Posle 20 min mešanja doda se Na(OAc)3BH (12.2 g, 0.057 mol), a mešanje se nastavlja još 2 h na 0 °C. Zatim se doda voda (100 mL) u reakcionu mešavinu, i mešavina se ekstrahuje 20% metanolom u DCM (3 x 200 mL). Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4, i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečisti hromatografijom na koloni od aluminijum oksida uz eluiranje pomoću 6-7% MeOH u DCM da se dobije jedinjenje iz naslova (10 g, 63.6%). LCMS: 614.65 (M 1)+; HPLC: 98.88% (@ 210-370 nm) (Rt;3.724; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (s, 1H), 8.17 (t, 1H), 7.56 (d, 2H, J=8 Hz), 7.36 (m, 3H), 7.17 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.29 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.57 (bs, 4H), 3.48 (s, 2H), 3.09 (q, 2H), 2.66 (m, 1H), 2.36 (bs, 4H), 2.21 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.11 (s, 9H), 1.79 (m, 4H), 1.36 (m, 2H), 1.11 (m, 2H), 0.82 (t, 3H, J=6.4&6.8 Hz).
1
Primer 142: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-((2-metoksietil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[0990]
Korak 1: Sinteza metil 5-bromo-3-((2-metoksietil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata
[0991] U mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoata (400 mg, 1.22 mmol) i 2-metoksiacetaldehida (1.3 mg, 17.56 mmol) u 7 ml dihloroetana doda se sirćetna kiselina (0.42 mL, 7.33 mmol), i mešavina se meša na sobnoj temperaturi 20 min. Reakciona mešavina se ohladi do 0 °C pa se doda natrijum triacetoksiborohidrid (777 mg, 3.66 mmol), i mešavina se meša na sobnoj temperaturi 2 h. Reakciona mešavina se zatim neutrališe zas. NaHCO3i ekstrahuje pomoću DCM, i organski sloj se suši preko Na2SO4i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije 260 mg sirovog proizvoda.
Korak 2: Sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-((2-metoksietil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
[0992] Mešavina metil 5-bromo-3-((2-metoksietil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata (260 mg, 0.67 mmol) i NaOH (40 mg, 1.01 mmol) u 5 ml mešavine etanol:voda (2:1) greje se na 70 °C 2 h. Reakciona mešavina se koncentruje do suvog, sirovi proizvod se rastvori u vodi, pH se podesi na 5-6 sporim dodavanjem HCl, i jedinjenje se ekstrahuje u 10% MeOH u DCM. Organski sloj se suši preko Na2SO4i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije 230 mg kiseline.
[0993] Mešavina sirove kiseline (230 mg, 0.62 mmol), 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (188 mg, 1.24 mmol), PyBOP (483 mg, 0.93 mmol) i trietil amina (0.17 ml, 1.238)
1
meša se u 3 ml DMSO na rt preko noći. Reakciona mešavina se razblaži vodom, i jedinjenje se ekstrahuje u 10% MeOH u DCM, suši preko Na2SO4i koncentruje, i sirovi materijal se prečisti hromatografijom na koloni od silika gela (100-200) da se dobije 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-((2-metoksietil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamid (110 mg, 35%).
Korak 3: Sinteza N-((4,6-dimetil 2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-((2-metoksietil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[0994] Rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-((2-metoksietil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (110 mg, 0.21 mmol), (4-(morfolinometil)fenil)boronske kiseline (99 mg, 0.33 mmol), natrijum karbonata (83 mg, 0.78 mmol) u 4 ml dioksana oslobodi se gasa pomoću argona tokom 20 min, zatim se u mešavinu dodaje Pd(PPh3) (25 mg, 0.02 mmol), i mešavina se zagreva na 100 °C preko noći. Reakcija se ohladi do sobne temperature i razblaži vodom, jedinjenje se ekstrahuje u 10% MeOH u DCM, suši preko Na2SO4i koncentruje i sirovi proizvod se prečišćava hromatografijom na silika gelu (100-200) da se dobije jedinjenje iz naslova (50 mg, 38%). LCMS: 603.45 (M 1)+; HPLC: 99.60% (@ 254 nm) (Rt;4.492; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (bs, 1H), 8.20 (t, 1H), 7.58 (d, 2H, J = 7.2Hz), 7.47 (s, 1H), 7.37 (d, 2H, J = 7.2Hz), 7.23 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.29 (d, 2H, J = 3.6 Hz), 3.82-3.85 (m, 2H), 3.49-3.58 (m, 6H), 3.15-3.3.23 (m, 9H), 2.98 (m, 1H), 2.36 (m, 4H), 2.23 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.51-1.68 (m, 4H).
Primer 143: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil-d5(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid
[0995]
1
Korak 1: Sinteza metil 5-bromo-3-(etil-d5(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata
[0996] U mešani rastvor jedinjenja metil 5-bromo-2-metil-3-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)benzoat (1g, 3.05 mmol) i natrijum triacetoksiborodeuterida (0.2 g, 4.76 mmol) u dihloroetanu (15 mL) doda se sirćetna kiselina (1.65 g, 27.5 mmol), i reakcija se meša na 5-10 °C 2 h. Tada se doda acetaldehid-d4(0.264 g, 6.00 mmol) na 0 °C, i reakcija se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Po završetku, reakcija se gasi vodenim natrijum bikarbonatom, organska faza se odvoji, i vodena faza ekstrahuje dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije željeni proizvod (1 g, 91%).
Koraci 2 i 3: Sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etild5(tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzamida
[0997] Vodeni NaOH (0.166 g, 4.15 mmol) doda se u rastvor jedinjenja metil 5-bromo-3-(etil-d5(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoat (1 g, 2.77 mmol) u etanolu (10 mL), i mešavina se meša na 60 °C 1 h. Po završetku reakcije, etanol se ukloni pod sniženim pritiskom, i mešavina se acidifikuje razblaženom HCl do pH 6, a pH 4 se postiže limunskom kiselinom. Ekstrakcija se obavlja etil acetatom. Kombinovani organski slojevi se koncentruju sušenjem čime se dobija odgovarajuća kiselina (0.7 g, 2.01 mmol, 73%), koja se zatim rastvori u DMSO (7 mL), posle čega joj se doda 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (0.611 g, 4.01 mmol). Reakciona mešavna se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PYBOP (1.56 g, 3.01 mmol), i mešanje se nastavlja preko noći. Po završetku konverzije, reakciona masa se izliva na led, ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju da bi se dobio sirovi materijal koji se zatim prečišćava ispiranjem rastvaračem da se dobije željeni proizvod (0.6 g, 62%).
1
Korak 4: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil-d5(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-formil-4-metil-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[0998] U mešani rastvor jedinjenja 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil-d5(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamid (0.3 g, 0.62 mmol) i (4-(morfolinometil)fenil)boronske kiseline (0.283 g, 0.93 mmol) u mešavini dioksan/voda doda se Na2CO3(0.24 g, 2.26 mmol), i rastvor se prečišćava argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.072 g, 0.062 mmol), i mešavina se ponovo prečišćava 10 min. Reakciona masa se zagreva na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, i rastvarač se uklanja pod snižnim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni, preko silika gela da se dobije željeno jedinjenje iz naslova (0.22 g, 61%). Analitički podaci za N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etild5(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-formil-4-metil-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid: LCMS: 578.35 (M 1)+; HPLC: 98.50% (@ 254 nm) (Rt;4.176; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (bs, 1H), 8.19 (t, 1H), 7.57 (d, 2H, J = 7.6), 7.36-7.39 (m, 3H), 7.21 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.29 (d, 2H, J = 3.2 Hz), 3.81-3.84 (m, 2H), 3.48-3.57 (m, 6H), 3.22-3.25 (m, 2H), 3.02 (m, 1H), 2.36 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.51-1.67 (m, 4H).
Primer 144: Sinteza 5-((2,2-difluoroetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[0999]
1
Korak 1: Sinteza metil 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetil)(oksan-4-il)amino]-2-metilbenzoata
[1000] U dvogrlom 100 mL-skom flakonu sa okruglim dnom, mešani rastvor metil 5-bromo-2-metil-3-[(oksan-4-il)amino]benzoata (500 mg, 1.5 mmol) u difluorosirćetnoj kiselini (15 ml), tretira se natrijum tetrahidroboratom (1000 mg, 26 mmol), u porcijama, 12 min (PAŽNJA!). Reakciona mešavina se zagreje do 50 °C i meša 4 h. Reakciona mešavina se ostavi da dostigne sobnu temperaturu, i zatim se sipa na led (130 ml) i pušta da odstoji 5 min. Mešavina se bazifikuje dodavanjem 6M NaOH (aq) (35 ml), i pH se podešava do 7 pomoću 1M HCl (aq) (20 ml). Dobijena suspenzija se ostavlja da odstoji dok se rastvor ne izbistri, i dobijena čvrsta supstanca se sakupi filtracijom i suši u vakuumu na 40 °C da se dobije jedinjenje iz naslova (572 mg, 96%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS 100%, 2.32 min (3.5-minutni LC-MS metod), m/z = 391.9, 392.9, 393.9, 394.9; 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 7.79 (d, J=1.89 Hz, 1 H) 7.44 (d, J=1.89 Hz, 1 H) 5.44 - 5.71 (m, 1 H) 4.00 (dd, J=11.51, 4.10 Hz, 2 H) 3.91 (s, 3 H) 3.41 (td, J=13.99, 4.18 Hz, 2 H) 3.32 (t, J=11.27 Hz, 2H) 2.97 (tt, J=11.37, 3.84 Hz, 1 H) 2.47 (s, 3 H) 1.72 - 1.81 (m, 2 H) 1.59 - 1.67 (m, 2 H).
Korak 2: Sinteza 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetil)(oksan-4-il)amino]-2-metilbenzoeve kiseline
[1001] U mešani rastvor metil 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetil)(oksan-4-il)amino]-2-metilbenzoata (571 mg, 1.5 mmol) u mešavini THF (14.6 ml) i MeOH (2.2 ml) doda se 4M NaOH (14.6 ml). Reakciona mešavina se meša na 50 °C 7 h. Zagrevanje se prekida, i reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 16.5 h. THF se uklanja u vakuumu, i vodena rezidua se acidifikuje do pH 4 dodavanjem 6M HCl (aq) (10 ml) uz hlađenje ledom. Dobijena čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem i ispira vodom (20 ml), suši u vakuumu na 30-40 °C 3 h da se dobije jedinjenje iz naslova (526 mg, 96%) u formi svetlobež čvrste supstance. LC-MS 100%, 1.98 min (3.5-minutni LC-MS metod), m/z = 377.9, 378.9, 379.9, 380.9; 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 7.91 (d, J=1.58 Hz, 1 H) 7.49 (d, J=1.58 Hz, 1 H) 5.43 - 5.75 (m, 1 H) 4.01 (dd, J=11.43, 3.55 Hz, 2 H) 3.42 (td, J=13.95, 3.78 Hz, 2 H) 3.32 (t, J=11.35 Hz, 2 H) 2.98 (tt, J=11.37, 3.53 Hz, 1 H) 2.52 (s, 3 H) 1.77 (d, J=10.88 Hz, 2 H) 1.56 - 1.69 (m, 2 H). OH se ne vidi.
Korak 3: Sinteza 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetil)(oksan-4-il)amino]-N-[(4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-metilbenzamida
2
[1002] Mešani rastvor 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetil)(oksan-4-il)amino]-2-metilbenzoeve kiseline (250 mg, 0.66 mmol) u suvom DMF (3.0 ml) na 0 °C u balonu od azota tretira se korišćenjem HATU (327 mg, 0.86 mmol) i DIPEA (230 µl, 1.3 mmol), u kapima. Dobijeni rastvor se meša 5 min, i zatim tretira 3-(aminometil)-4,6-dimetil-1,2-dihidropiridin-2-onom (89%, 136 mg, 0.79 mmol). Dobijena suspenzija se meša na 0 °C 20 min, a zatim se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Posle 18 h dodaje se 3-(aminometil)-4,6-dimetil-1,2-dihidropiridin-2-on (25 mg), i mešanje se nastavlja tokom još 25 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom (30 ml) i CH2Cl2(30 ml). Slojevi se odvoje, i vodena faza ekstrahuje pomoću CH2Cl2(3 x 15 ml). Kombinovane organske faze se ispiraju zasićenim rastvorom NaHCO3(aq) (45 ml), vodom (2 x 50 ml), zasićenim slanim rastvorom (2 x 50 ml) i suše (MgSO4), filtriraju i koncentruju u vakuumu. Rezidua se prečisti hromatografijom na koloni (lOg SNAP SNAP-punjenje, Isolera, 0-3% MeOH:CH2Cl2), i zatim trituriše etrom. Dobijena čvrsta supstanca se sakupi filtracijom i suši u vakuumu na 40 °C da se dobije jedinjenje iz naslova (259 mg, 77%) u vidu beličaste čvrste supstance. LC-MS 100%, 4.04 min (7-minutni LC-MS metod), m/z = 512.0, 513.0, 514.0, 515.0;<1>H NMR (500 MHz, aceton) δ 10.71 (s, 1H), 7.57 -7.49 (m, 2H), 7.25 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 5.91 (s, 1H), 5.76 (tt, J = 56.2, 4.3 Hz, 1H), 4.40 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.88 (dd, J = 11.3, 4.2 Hz, 2H), 3.52 (td, J = 14.6, 4.2 Hz, 2H), 3.33 - 3.23 (m, 2H), 3.02 (tt, J = 11.6, 3.9 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.73 (dd, J = 12.4, 1.9 Hz, 2H), 1.59 (qd, J = 12.2, 4.5 Hz, 2H).
Korak 4: Sinteza 5-((2,2-difluoroetil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[1003] U dvogrlom flakonu sa okruglim dnom, 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetil)(oksan-4-il)amino]-N-[(4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil]-2-metilbenzamid (200 mg, 0.39 mmol) i 4-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzil]morfolin (130 mg, 0.43 mmol) u dioksanu (3.0 ml) tretiraju se rastvorom Na2CO3(145 mg, 1.4 mmol) u vodi (1.0 ml). Mešavina se kratko sonifikuje, i gasoviti azot se propušta kroz dobijenu suspenziju pomoću duge igle, 5 min. Suspenzija se tada tretira paladijum-trifenilfosfanom (1:4) (45 mg, 0.04 mmol), a gasoviti azot se ponovo propušta kroz dobjenu suspenziju još 5 min. Reakciona mešavina se zatim greje do 100 °C 8 h i meša na sobnoj temperaturi 16 h. Reakciona mešavina se tretira vodom (20 ml) i 10% MeOH/CH2Cl2(15 ml). Slojevi se odvoje, i vodeni sloj se ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/CH2Cl2(3 x 15 ml). Kombinovane organske supstance se ispiraju zasićenim slanim rastvorom (55 ml), suše (MgSO4), filtriraju i koncentruju u vakuumu. Sirova rezidua se prečišćava hromatografijom na koloni (lOg SNAP-
21
punjenje 10 g, Isolera, 0-5% MeOH/CH2Cl2) i tretira etrom (10 ml), posle čega se krato sonifikuje, zagreva u vodenom kupatilu i hladi na ledu. Dobijena bela čvrsta supstanca sakuplja se filtracijom i ispira etrom (5 ml). Čvrsta supstanca se suši u vakuumu na 40 °C 35 h da se dobije jedinjenje iz naslova (159 mg, 67%) u vidu beličaste čvrste suspsatnce. LC-MS 100%, 3.09 min (7-minutni LC-MS metod), m/z = 609.15;<1>H NMR (500 MHz, aceton) δ 10.72 (s, 1H), 7.63 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.54 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 5.91 (s, 1H), 5.76 (ttt, J = 56.4, 30.4, 4.4 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.89 (dd, J = 11.4, 3.9 Hz, 2H), 3.65 - 3.55 (m, 6H), 3.50 (s, 2H), 3.29 (t, J = 11.3 Hz, 2H), 3.07 (tt, J = 11.5, 3.6 Hz, 1H), 2.40(s, 4H), 2.37 (s, 3H), 2.34 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.82 - 1.75 (m, 2H), 1.61 (qd, J = 11.9, 4.1 Hz, 2H).
Primer 145: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1s,4s)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamid
[1004]
Korak 1: Sinteza 3-(((1s,4s)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
[1005] U ohlađeni rastvor jedinjenja tert-butil ((1s,4s)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)cikloheksil) karbamat (1.0 g, 1.60 mmol) u 10 ml DCM doda se 2 ml TFA, u kapima, i reakciona mešavina se meša na rt 2 h. Reakciona masa se koncentruje do suvog pod sniženim pritiskom, i dobijeni sirovi proizvod se rastvori u 10% MeOH u DCM i ispira zas. NaHCO3, vodom i zasićnim slanim rastvorom. Organska faza se suši preko Na2SO4i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije sirovo željeno jedinjenje (650 mg, 81%).
22
Korak 2: Sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1s,4s)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida
[1006] U mešani rastvor sirovog jedinjenja 3-(((1s,4s)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid (650 mg, 1.32 mmol) i formaldehida (0.5 ml 38% rastvora, 13.26 mmol) u 10 ml metanola doda se natrijum cijanoborohidrid (82 mg, 1.32 mmol) na 0 °C, i mešavina se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona mešavina se raspodeli između vode i 10% MeOH u DCM, organski sloj se suši preko Na2SO4i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirova supstanca se prečisti na koloni od aluminijum oksida da se dobije željeni proizvod, jedinjenje (450 mg, 65%).
Korak 3: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1s,4s)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzamida
[1007] Rastvor jedinjenja 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1s,4s)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamid (150 mg, 0.29 mmol), (1-metil-1H-pirazol-4-il)boronske kiseline (72 mg, 0.34 mmol), natrijum karbonata (110 mg, 1.06 mmol) u 10 ml dioksana oslobađa se gasa pomoću argona, 20 min, posle čega se doda Pd(PPh3) (33 mg, 0.03 mmol), i mešavina se zagreva na 100 °C preko noći. Reakcija se ohladi do sobne temperature i razblaži vodom, jedinjenje se ekstrahuje u 10% MeOH u DCM, suši preko Na2SO4i koncentruje, i sirovi materijal se prečišćava hromatografijom na silika gelu (100-200) da se dobije jedinjenje iz naslova (40 mg, 26%).
Analitički podaci: LCMS: 519.40 (M 1)<+>; HPLC: 95.98% (@ 254 nm) (Rt;3.987; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45(bs, 1H), 8.12-8.09 (m, 2H), 7.80 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.10 (s,1H), 5.86 (s,1H), 4.27 (d, 2H, J=4.8 Hz), 3.84 (s, 3H), 3.07-305 (m, 2H), 2.67-2.63 (m, 2H), 2.21 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.12-2.11 (s, 3H+3H+3H), 1.79-1.75 (m, 4H), 1.36-1.11 (m, 4H), 0.80 (t, 3H, J=6.0 Hz).
Primer 146: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1s,4s)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-4'-((4-metil-1,4-diazepan-1-il)metil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid
2
Korak 1: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1s,4s)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4'-formil-4-metil-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[1009] Rastvor jedinjenja 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1s,4s)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamid (380 mg, 0.73 mmol), (4-formilfenil)boronske kiseline (165 mg, 1.10 mmol), natrijum karbonata (280 mg, 2.6 mmol) u 5 ml dioksana oslobodi se gasa pomoću argona tokom 20 min, doda se Pd(PPh3) (84 mg, 0.07 mmol), i mešavina se zagreva na 100 °C 5 h. Reakcija se ohladi do sobne temperature i razblaži vodom, jedinjenje se ekstrahuje u 10% MeOH u DCM, suši preko Na2SO4i koncentruje, i sirovi materijal se prečišćava hromatografijom na silika gelu (100-200) da se dobije željeno jedinjenje (250 mg, 63%).
Korak 2: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1s,4s)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-4'-((4-metil-1,4-diazepan-1-il)metil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[1010] U mešani rastvor jedinjenja N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1s,4s)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4'-formil-4-metil-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid (90 mg, 0.16 mmol) i 1-metil-1,4-diazepana (0.56 g, 0.49 mmol) u 2 ml metanola doda se sirćetna kiselina (0.03 mL, 0.49 mmol), i mešavina se meša na sobnoj temperaturi 20 min. Reakciona mešavina se ohladi do 0 °C i doda se natrijum cijanoborohidrid (25 mg, 0.41 mmol), i sve se meša na sobnoj temperaturi 4 h. Reakciona mešavina se neutrališe zas. NaHCO3, i jedinjenje se ekstrahuje u DCM, suši preko Na2SO4, koncentruje pod sniženim pritiskom i prečišćava pomoću prep. HPLC da se dobije jedinjenje iz naslova (26 mg, 25%).
24
Analitički podaci za TFA so: LCMS: 641.50 (M+1)<+>; HPLC: 97.72% (@ 254 nm) (Rt;3.783; metod: kolona: YMC ODS A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (bs, 1H), 9.54 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.74 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.57 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.42 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.29 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 3.83 (m, 4H), 3.25 (m, 3H), 3.17-3.12 (m, 4H), 2.84 (s, 3H), 2.69, 2.68 (2s, 6H), 2.24 (s, 3H), 2.21(s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.10-1.89 (m, 6H), 1.46-1.44 (m, 4H), 0.84 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
Primer 147: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid
[1011]
Korak 1: metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)-(etil)amino)-2-metilbenzoat
[1012] U mešani rastvor metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)-cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata (10 g, 22.72 mmol) i acetaldehida (2.99 g, 67.95 mmol) u dihloroetanu (100 mL) doda se sirćetna kiselina (8.18 g, 136.33 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 20 min. Zatim se doda natrijum triacetoksiborohidrid (14.45 g, 68.16 mmol) na 0 °C, i reakciona mešavina se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač se odstrani pod sniženim pritiskom, rezidua se rastvori u vodi i ekstrahuje pomoću 5% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti su suše i koncentruju da se dobije metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)-(etil)amino)-2-metilbenzoat, koji se kao takav koristi u sledećoj reakciji (9 g, 84.66%).
2
Korak 2: tert-butil ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)amino)cikloheksil)karbamat
[1013] Vodeni NaOH (1.15 g, 28.84 mmol) doda se u rastvor metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)-(etil)amino)-2-metilbenzoata (9 g, 19.23 mmol) u etanolu (10 mL), i mešavina se meša na 60 °C 1 h. Etanol se ukloni pod sniženim pritiskom, i mešavina se acidifikuje do pH 6 razblažnom HCl, zatim do pH 4 limunskom kiselinom. Mešavina se ekstrahuje acetatom. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju da se dobije odgovarajuća kiselina (8.6 g, 98.50%).
[1014] Gore pomenuta kiselina (8.6 g, 18.90 mmol) rastvori se u DMSO (7 mL) i doda se 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (5.74 g, 37.80 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PyBOP (14.70 g, 28.35 mmol). Reakciona mešavina se meša preko noći. Reakciona mešavina se sipa u ledenu vodu i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše i koncentruju da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava ispiranjem rastvaračem da se dobije tert-butil ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)amino)cikloheksil)karbamat (10.2 g, 91.89%).
Korak 3: 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid
[1015] tert-butil ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metilfenil)amino)cikloheksil)karbamat (3 g, 5.10 mmol) se rastvori u DCM (20 mL), i zatim se doda TFA (5 mL). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom, i zatim se doda zasićeni rastvor NaHCO3. Mešavina se ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM, i kombinovani ekstrakti se ispiraju vodom i zasićenim slanim rastvorom, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid (2.2 g, 87.50%).
Korak 4: 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamid
2
[1016] 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamid (2.2 g, 4.50 mmol) rastvori se u DCM (25 mL) i ohladi do 0 °C, zatim se doda formalin (0.49 g, 16.26 mmol). Reakciona mešavina se meša na istoj temperaturi 20 min. Zatim se doda natrijum triacetoksiborohidrid (2.39 g, 11.22 mmol), i reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom, a u reziduu se doda voda. Mešavina se ekstrahuje uz pomoć 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše i koncentruju pod sniženim pritiskom dajući 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamid (2.3 g, 98.71%) koji se kao takav koristi u sledećim reakcijama.
Korak 5: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid
[1017] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i fenilboronske kiseline (1.5 ekv.) u mešavini dioksan/voda doda se Na2CO3(3.6 ekv.), i rastvor se prečišćava argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.), i reakciona mešavina se ponovo prečišćava argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 2 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4, i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na silika gelu da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.07 g, 23.92%). LCMS: 515.45 (M 1)+; HPLC: 92.45% (@ 254 nm) (Rt;4.672; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.48 (bs, 1H), 9.41 (bs, 1H), 8.23 (bs, 1H), 7.63 (d, 2H, J=4.8Hz), 7.50-7.20 (m, 5H), 5.86 (s, 1H), 4.29 (d, 2H), 3.12 (m, 3H), 2.68 (s, 6H), 2.25 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.95 (m, 4H), 1.44 (m, 4H), 0.84 (t, 3H).
Primer 148: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4,4'-dimetil-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid
[1018]
2
Korak 1: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4,4'-dimetil-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid
[1019] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i p-tolilboronske kiseline (1.5 ekv.) u mešavini dioksan/voda doda se Na2CO3(3.6 ekv.), i rastvor se prečišćava argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.), i reakciona mešavina se ponovo prečišćava argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 2 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4, i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na silika gelu da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.15 g, 51.30%). LCMS: 529.40 (M 1)+; HPLC: 93.61% (@ 254 nm) (Rt;4.761; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (bs, 1H), 9.40 (bs, 1H), 8.21 (bs, 1H), 7.53 (d, 2H, J=6.8Hz), 7.38 (bs, 1H), 7.26 (d, 2H, J=7.6Hz), 5.86 (s, 1H), 4.29 (d, 2H, J=4Hz), 3.15 (m, 2H), 2.69 (s, 3H), 2.68 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.95 (m, 4H), 1.44 (m, 4H), 0.84 (t, 3H).
Primer 149: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-4'-(trifluorometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid
[1020]
2
Korak 1: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-4'-(trifluorometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid
[1021] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i (4-(trifluorometil)fenil)boronske kiseline (1.5 ekv.) u mešavini dioksan/voda doda se Na2CO3(3.6 ekv.), i rastvor se prečišćava argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.), i reakciona mešavina se ponovo čisti argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 2 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4, i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na silika gelu da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.08 g, 23.52%). LCMS: 583.45 (M 1)+; HPLC: 94.04% (@ 254 nm) (Rt;5.168; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.48 (s, 1H), 9.41 (bs, 1H), 8.27 (bs, 1H), 7.88 (d, 2H, J=8Hz), 7.81 (d, 2H, J=8Hz), 7.51 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.30 (d, 2H, J=4.4Hz), 3.16 (m, 3H), 2.85 (m, 1H), 2.69 (s, 3H), 2.68 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.94 (m, 4H), 1.45 (m, 4H), 0.85 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 150: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-4'-(metilsulfonil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid
[1022]
2
Korak 1: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-4'-(metilsulfonil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid
[1023] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i (4-(metilsulfonil)fenil)boronske kiseline (1.5 ekv.) u mešavini dioksan/voda doda se Na2CO3(3.6 ekv.), i rastvor se prečišćava argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.), i reakciona mešavina se ponovo očisiti argonom 10 min. Reakciona mešavina se greje na 100 °C 2 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4, i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na silika gelu da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.12 g, 34.68%). LCMS: 593.45 (M 1)+; HPLC: 98.74% (@ 254 nm) (Rt;4.194; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.48 (bs, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.99 (d, 2H, J=8.4Hz), 7.93 (d, 2H, J=8.4Hz), 7.51 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.30 (d, 2H, J=4.4Hz), 3.24 (s, 3H), 3.30 (m, 3H), 2.80 (m, 1H), 2.69 (s, 3H), 2.68 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.93 (m, 4H), 1.45 (m, 4H), 0.84 (t, 3H, J=6.8Hz).
Primer 151: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(pirimidin-5-il)benzamid
[1024]
Korak 1: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(pirimidin-5-il)benzamid
[1025] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i pirimidin-5-ilboronske kiseline (1.5 ekv.) u mešavini dioksan/voda doda se Na2CO3(3.6 ekv.), i rastvor se prečišćava argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.), i reakciona mešavina se ponovo prečišćava argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 2 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4, i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na silika gelu da se dobije TFA so N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(pirimidin-5-il)benzamida (0.12 g, 39.33%). LCMS: 517.60 (M 1)+; HPLC: 99.55% (@ 210 nm-370 nm) (Rt;3.996; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (bs, 1H), 9.43(bs, 1H), 9.18 (s, 1H), 9.14 (s, 2H), 8.22 (s, 1H), 7.59(s, 1H), 7.41 (s, 1H), 5.87 (s, 1H),4.30 (d, 2H), 3.14 (m, 3H), 2.69 (s, 3H+3H), 2.27 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.11-2.07 (m, 4H), 1.95 (m, 4H), 1.44 (m, 4H), 0.84 (t, 3H).
Primer 152: Sinteza TFA soli N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-5-(furan-2-il)-2-metilbenzamida
[1026]
1
Korak 1: sinteza metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata
[1027]
[1028] U mešani rastvor metil 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoata (5.0 g, 2.0 mmol) i 4-N-Boc-aminocikloheksanona (5.69 g, 2.67 mmol) u dihloroetanu (50 mL) doda se sirćetna kiselina (7.4 g, 12 mmol). Zatim se doda natrijum triacetoksiborohidrid (13.1 g, 6.17 mmol) na 0 °C, i mešavina se meša na sobnoj temperaturi 16 h. Reakciona mešavina se gasi vodenim natrijum bikarbonatom, organska faza se odvaja, i vodena faza se ekstrahuje dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi se suše preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentruju u vakuumu. Sirovo jedinjenje se prečišćava hromatografijom na koloni, preko silika gela (veličina sita: 100-200) uz eluiranje 10% etil acetatom u heksanu da se dobije 3.5 g polarnijeg trans-izomera 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata (38%) u vidu beličaste čvrste supstance.<1>H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.21 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 4.41 (bs, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.41-3.64 (m, 2H), 2.11-2.21 (m, 6H), 1.42 (s, 9H), 1.22-1.36 (m, 5H),
Korak 2: Sinteza metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)(etil)-amino)-2-metilbenzoata
[1029]
2
[1030] U mešani rastvor 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata (55 g, 0.12 mol) i acetaldehida (11 g, 0.25 mol) u dihloroetanu (550 mL) doda se sirćetna kiselina (44.6 g, 0.74 mol). Doda se natrijum triacetoksiborohidrid (79 g, 0.37 mol) na 0 °C, i mešavina se meša na sobnoj temperaturi 16 h. Doda se vodeni natrijum bikarbonat, organska faza se odvoji, i vodena faza se ekstrahuje dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi se suše preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentruju u vakuumu. Sirovo jedinjenje se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (35 g, 59%) u vidu beličaste čvrste supstance.
Korak 3: sinteza tert-butil ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)-metil)karbamoil)-2-metilfenil(etil)amino)cikloheksil)karbamata
[1031]
[1032] U mešani rastvor metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)(etil)-amino)-2-metilbenzoata (25 g, 0.053 mol) u EtOH (100 mL) doda se vodeni NaOH (3.5 g, 0.08 mol u 10 mL H2O). Posle mešanja na 60 °C u trajanju od 1 h, mešavina se acidifikuje do pH 4 i ekstrahuje pomoću 10% metanola u DCM. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju da se dobije 24.2 g odgovarajuće kiseline. U mešani rastvor pomenute kiseline (24 g, 0.053 mol), 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (16 g, 0.11 mol) i trietil amina (5.3 g, 0.053 mmol) u DMSO (50 mL) doda se PyBop (41 g, 0.079 mol). Posle mešanja preko noći na sobnoj temperaturi, mešavina se sipa u ledenu vodu i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal se ispira vodom (2 x 1 L), zatim acetonitrilom (3 x 150 mL) da se dobije jedinjenje iz naslova (24 g, 77%).
Korak 4: sinteza 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
[1033]
[1034] U mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)-metil)karbamoil)-2-metilfenil(etil)amino)-cikloheksil)karbamata (6.0 g, 10 mol) u DCM (30 mL) doda se TFA (10 mL) na 0 °C. Reakciona mešavina se meša 2 h na sobnoj temperaturi i koncentruje do suvog. Rezidua se neutrališe dodavanjem zasićenog rastvora bikarbonata (40 mL), što je praćeno ekstrahovanjem 20% metanolom u DCM (4 x 100 mL). Kombinovane organske faze se suše preko Na2SO4, i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom da se dobije 5.0 g jedinjenja iz naslova koje se koristi bez dodatnog prečišćavanja.
Korak 4: sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r, 4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida
[1035]
[1036] U mešani rastvor 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (5.0 g, 10 mmol) u
4
dihlorometanu (50 mL) doda se aq 35% rastvor formaldehida (2.9 g, 36 mmol) na 0 °C. Doda se Na(OAc)3BH (5.43 g, 25.6 mmol), i mešavina se meša 2 h na 0 °C. Doda se voda (100 mL), posle čega sledi ekstrahovanje 20% metanolom u DCM (3 x 200 mL). Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom. Rezidua se prečisti hromatografijom na koloni, preko baznog aluminijum oksida uz eluiranje pomoću 6-7% MeOH u DCM da se dobije jedinjenje iz naslova (4.5 g, 94%).
Opšti postupak za Suzukijevu reakciju za sintezu Jedinjenja 152-156, 158-162, 165, i 167.
[1037] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i datih estara boronska kiselina/pinakol (1.2 ekv.) u mešavini dioksan/voda (4:1) doda se Na2CO3(3.6 ekv.). Rastvor se prečišćava argonom 15 min. Doda se Pd(PPh3)4(0.1 ekv.). Mešana reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 2-4 h pod argonom. Posle hlađenja do sobne temperature, mešavina se razblaži korišćenjem 10% MeOH/DCM i filtrira. Filtrat se koncentruje, razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH u DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvodi se prečišćavaju hromatografijom na koloni preko silika gela (veličina sita: 100-200) ili preparativnom HPLC da se dobiju proizvodi u vidu slobodnih baza odnosno TFA soli. Analitički podaci za N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-5-(furan-2-il)-2-metilbenzamid (0.08 g, 27%); LCMS: 505.55 (M 1)+; HPLC: 97.76% (@ 210 nm-370 nm) (Rt; 4.192; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (bs, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.17 (s,1H), 7.71 ( s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.93(s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.29 (d, 2H), 3.08-3.06 (m, 3H), 2.67 (m, 1H), 2.21 (s, 3H+3H+3H), 2.18-2.11 (s, 3H+3H), 1.80 (m, 4H), 1.37-1.19 (m, 4H), 0.81 (t, 3H).
Primer 153: TFA so N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(hinolin-8-il)-benzamida (0.09 g, 27%);
[1038]
[1039] Analitički podaci za TFA so: LCMS: 566.70 (M 1)<+>; HPLC: 93.94% (@ 210 nm-370 nm) (Rt;4.352; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/ B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 μL, temp. kol: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.43(bs, 1H), 9.34 (bs, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.45 (d, 1H,J=7.6 Hz), 8.16 (t, 1H), 8.00 (d, 1H, J=7.2Hz), 7.80-7.79 (m, 1H), 7.70-7.69 (m, 1H), 7.59-7.57 (m, 1H), 7.49 (m, 1H), 7.29 (s,1H), 5.85(s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=3.6 Hz), 3.16-3.11 (m, 3H), 2.70-2.69 (m, 1H+3H+3H), 2.30(s, 3H), 2.19(s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.99 (m, 4H), 1.45 (m,4H), 0.93 (t, 3H).
Primer 154: TFA so 5-(2-aminopirimidin-5-il)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino-2-metilbenzamida (0.14 g, 45%)
[1040]
Analitički podaci za TFA so: LCMS: 532.65(M 1)<+>; HPLC: 98.49% (@ 210 nm-370 nm) (Rt; 3.692; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.48 (bs, 1H), 9.45 (bs, 1 H), 8.17(s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J=4.4 Hz), 3.12(m, 3H), 2.69 (s, 3H+3H), 2.23 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.96 (m, 4H), 1.43 (m, 4H), 0.83 (t, 3H).
Primer 155: TFA so N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(piridin-4-il)-benzamida (0.17 g, 56%)
[1042]
Analitički podaci za TFA so: LCMS: 516.60 (M 1)<+>; HPLC: 92.58% (@ 210 nm-370 nm) (Rt; 3.775; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (bs, 1H), 9.74 (bs, 1H), 8.85 (d, 2H, J=5.2 Hz), 8.30 (t, 1H), 8.24 (d, 2H, J=4.8 Hz), 7.71 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 5.88 (s, 1H), 4.31(d,2H,J=4.4Hz), 3.16 (m,3H), 2.79 (m, 1H), 2.69(s, 3H+3H), 2.28 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.98-1.90 (m, 4H), 1.47-1.45 (m,4H), 0.84 (t,3H).
Primer 156: TFA so N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(tiofen-3-il)-benzamida (0.07 g, 56%)
[1044]
[1045] Analitički podaci za TFA so: LCMS: 521.55(M 1)<+>; HPLC: 98.64% (@ 210 nm-370 nm) (Rt;4.366; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (bs,1H), 9.45 (bs, 1H), 8.18 (s,1H), 7.87 (s,1H), 7.63 (s,1H), 7.54(m, 2H), 7.32(s, 1H), 5.87(s, 1H), 4.29(d, 2H), 3.13 (m, 3H), 2.69 (m, 6H+1H), 2.22 (s, 3H+3H), 2.11 (s,3H), 1.96 (m, 4H) 1.44 (m,4H), 0.84 (t,3H).
Primer 158: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(6-metilpiridin-3-il)benzamid
[1046]
[1047] Analitički podaci: LCMS: 530.55 (M 1)<+>; HPLC: 96.45% (@ 210 nm-370 nm) (Rt; 4.192; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (bs, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.95-7.90 (d, 1H, J=8.0Hz), 7.39 (s, 1H), 7.35-7.30 (d, 1H, J=7.6Hz), 7.22 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.29 (d, 2H), 3.05-3.15 (m, 2H), 2.60-2.70 (m, 1 H), Tri protona su spojena sa pikom rastvarača, 2.25-2.35 (m, 6H+1H), 2.0-2.25 (3H+3H+3H), 1.70-1.90 (m, 4H), 1.30-1.20 (m, 2H), 1.0-1.20 (m, 2H), 0.75-0.85 (t, 3H)
Primer 159: TFA so N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-5-(3,5-dimetilizoksazol-4-il)-2-metilbenzamida (0.13 g, 50%)
[1048]
[1049] Analitički podaci za TFA so: LCMS: 534.60 (M 1)<+>; HPLC: 96.65% (@ 210 nm-370 nm) (Rt; 4.352; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (bs, 1H), 9.42 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.25-4.30 (d, 2H), 3.0-3.20 (m, 3H), 2.65-2.75 (m, 3H+3H), Tri protona spojena sa pikom rastvarača, 2.39 (s, 3H), 2.05-2.25 (m, 3H+3H+3H+1H), 1.90-2.0 (m, 2H), 1.80-1.90 (m, 2H), 1.35-1.50 (m, 4H), 0.80-0.90 (t, 3H).
Primer 160: TFA so 5-(1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (0.06 g, 58%)
[1050]
[1051] Analitički podaci za TFA so: LCMS: 533.80 (M 1)<+>; HPLC: 90.76% (@ 254 nm) (Rt; 5.583; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (bs, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 5.85(s, 1H), 4.20-4.30 (d, 2H), 3.76 (s, 2H), 3.0-3.20 (m, 2H), 2.60-2.75 (m, 3H+3H), 2.33 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.80-2.0 (m, 4H), 1.35-1.50 (m, 4H), 0.80-0.90 (t, 3H).
Primer 161: TFA so N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-3)-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-5-(1-metilpirazol-3-il)-2-metilbenzamida (0.1 g, 33%)
[1052]
[1053] Analitički podaci za TFA so: LCMS: 519.45 (M 1)<+>; HPLC: 96.61% (@ 254 nm) (Rt; 6.026; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (bs, 1H), 9.46 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.38 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.20-4.25 (d, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.0-3.15 (m, 3H), 2.60-2.80 (m, 1H+3H+3H), 2.24 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.80-2.0 (m, 2H+2H), 1.40-1.50 (m, 4H), 0.80-0.90 (t, 3H).
Primer 162: TFA so N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-5-(piridin-3-il)-2-metilbenzamida (0.1 g, 33%)
[1054]
4
[1055] Analitički podaci za TFA so: LCMS: 516.50 (M 1)<+>; HPLC: 89.96% (@ 254 nm) (Rt; 6.026; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (bs, 1H), 9.35 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.22 (m, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.25-4.35 (d, 2H), 3.05-3.15 (m, 3H), 2.6-2.80 (m, 1H+3H+3H), 2.25 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.90-2.0 (m, 2H+2H), 1.40-1.50 (m, 4H), 0.80-0.90 (t, 3H).
Primer 163: N N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-4'-(2H-tetrazol-5-il)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid
[1056]
41
[1057] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i 5-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-2H-tetrazola (1.5 ekv.) u mešavini dioksan/voda doda se Na2CO3(3.6 ekv.), i rastvor se prečišćava argonom 15 min. Doda se Pd(PPh3)4(0.1 ekv.), i reakciona mešavina se ponovo prečišćava argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 2 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4, i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na silika gelu, i zatim prep. HPLC da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.125 g, 35.50%). LCMS: 583.40 (M 1)+; HPLC: 90.26% (@ 210-370nm) (Rt;4.130; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 μ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (bs, 1H), 9.32 (bs, 1H), 8.23-8.11 (m, 3H), 7.90 (d, 2H, J=7.2Hz), 7.50 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 5.87 (s, 1H,), 4.30(d, 2H, J=4.4Hz), 3.59 (s, 1H), 3.13 (m, 3H), 2.69-2.68 (m,6H), 2.26-2.10 (m, 9H), 1.94 (m, 4H), 1.44 (m, 4H) 0.85(m, 3H).
Primer 164: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(2-metilpirimidin-5-il)benzamid
[1058]
[1059] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i 2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirimidina (1.5 ekv.) u mešavini dioksan/voda doda se Na2CO3(3.6 ekv.), i rastvor se prečišćava argonom 15 min. Zatim se doda Pd (PPh3)4(0.1 ekv.), i reakciona mešavina se ponovo prečišćava argonom 10 min. Reakciona mešavina se greje na 100 °C 2 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10%
42
MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4, i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na silika gelu, i zatim prep. HPLC da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.08 g, 25.97%). LCMS: 531.65 (M 1)+; HPLC: 99.61% (@ 210-370 nm) (Rt; 3.981; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (bs, 1H),9.46 (bs, 1H), 9.00 (m,2H), 8.20 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 5.86(s, 1H),4.29(m, 2H), 3.125-3.127(m,3H),2.69-2.50(m, 10H),2.25-2.10(m, 9H), 1.94 (m, 4H), 1.43(m, 4H), 0.83(m, 3H).
Primer 165: TFA so 5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino-2-metilbenzamida (0.18 g, 69%)
[1060]
[1061] Analitički podaci za TFA so: LCMS: 533.80 (M 1)<+>; HPLC: 87.18% (@ 210-370 nm) (Rt; 3.946; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (D2O-d6, 400 MHz) δ 7.93 (s, 1H), 7.62-7.57 (m, 2H), 6.31(s, 1H), 4.492-4.494 (m, 2H), 3.92-3.80 (m, 6H), 3.33(m, 1H), 2.82 (m, 6H), 2.39-2.28 (m, 16H), 1.66 (m, 4H), 1.04(m, 3H).
Primer 166: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(tiazol-4-il)benzamid
[1062]
4
[1063] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (1 ekv.) i 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)tiazola (1.5 ekv.) u mešavini dioksan/voda doda se Na2CO3(3.6 ekv.), i rastvor se prečišćava argonom 15 min. Zatim se doda Pd(PPh3)4(0.1 ekv.), i reakciona mešavina se ponovo prečišćava argonom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 2 h. Reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje 10% MeOH/DCM. Kombinovani ekstrakti se suše preko Na2SO4, i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi proizvod koji se prečišćava hromatografijom na silika gelu, i zatim uz pomoć prep. HPLC da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.07 g, 28.40%). LCMS: 522.50 (M 1)+; HPLC: 99.22% (@ 210-370 nm) (Rt; 4.114; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.48 (bs, 1H), 9.36 (bs, 1H), 9.18 (s, 1H), 8.19 (bs, 2H), 7.79 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.30 (d, 2H, J = 4.4 Hz), 3.11 (m, 3H), 2.73-2.68 (m, 7H), 2.22 (s, 6H), 2.11 (s, 3H), 1.95 (m, 4H), 1.44 (m, 4H), 0.83 (t, 3H).
Primer 167: TFA so N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(tiofen-2-il)-benzamida (0.05 g, 50%).
[1064]
44
[1065] Analitički podaci: LCMS: 521.55 (M 1)<+>; HPLC: 88.13% (@ 210-370 nm) (Rt; 4.412; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (bs, 1H), 9.32 (bs, 1H), 8.22 (t, 1H), 7.53-7.38 (m, 3H), 7.20-7.13 (m, 2H), 5.87 (s, 1H), 4.28 (d, 2H, J = 3.6 Hz), 3.10 (m, 3H), 2.69-2.68 (m, 7H), 2.21 (s, 6H), 2.11 (s, 3H), 1.95-1.90 (m, 4H), 1.44 (m, 4H), 0.83 (t, 3H).
Primer 168: Sinteza TFA soli N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(tiazol-2-il)-benzamida
[1066]
Korak 1: sinteza metil 3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(tiazol-2-il)benzoata
[1067] U mešani rastvor metil 3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoata (0.5 g, 1.2 mmol) i 2-bromotiazola (0.22 g, 1.38 mmol) u mešavini dioksan/voda doda se Cs2CO3(0.94 g, 2.88 mmol) na sobnoj temperaturi. Rastvor se prečišćava tokom 15 min, i doda se PdCl2(PPh3)2(0.08 g, 0.11 mmol). Mešavina se zagreva na 100 °C 3 h pod argonom, razredi vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.36 g, 71%).
Korak 2: sinteza tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(tiazol-2-il)-fenil)-(etil)-amino)-cikloheksil)-karbamata
4
[1068] U mešani rastvor metil 3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(tiazol-2-il)benzoata (0.36 g, 0.76 mmol) u etanolu (5 mL) doda se vodeni NaOH (0.064 g, 1.60 mmol) na sobnoj temperaturi. Mešavina se zagreva na 60 °C 1 h, i koncentruje pod sniženim pritiskom. Koncentrat se acidifikuje do pH 4 i ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju da se dobije 0.26 g sirove kiseline. U mešani rastvor pomenute sirove kiselina (0.26 g, približno 0.56 mmol) i 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0.17 g, 1.13 mmol) u DMSO (3 mL) doda se PYBOP (0.44 g, 0.85 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja preko noći, mešavina se sipa u led i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se ispiraju vodom, suše i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije jedinjenje iz naslova (0.15 g) koje se direktno koristi u sledećem koraku.
Korak 3: sinteza 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(tiazol-2-il)benzamida
[1069] U mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(tiazol-2-il)-fenil)-(etil)-amino)-cikloheksil)-karbamata (0.15 g, 0.25 mmol) u dihlorometanu (3 mL) doda se TFA (1 mL). Mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h i koncentruje pod sniženim pritiskom, i u koncentrat se doda NaHCO3. Posle ekstrahovanja pomoću 10% MeOH/DCM, kombinovani organski slojevi se ispiraju vodom i zasićenim slanim rastvorom, suše preko anhidrovanog Na2SO4i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije 0.11 g jedinjenja iz naslova koje se direktno koristi.
Korak 4: Sinteza TFA soli N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(tiazol-2-il)-benzamida
[1070] U mešani rastvor 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(tiazol-2-il)benzamida (0.1 g, 0.20 mmol) u metanolu (3 mL) doda se formalin (0.06 g, 2.0 mmol) na 0 °C. Doda se natrijum cijanoborohidrid (0.025 g, 0.59 mmol), i mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona mešavina se gasi vodom i ekstrahuje korišćenjem 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi su suše i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije čvrsta supstanca koja se prečišćava preparativnom HPLC da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.06 g, 56%).
Analitički podaci za TFA so: LCMS: 522.60 (M 1)<+>; HPLC: 92.00% (@ 210-370 nm) (Rt; 4.255; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u
4
vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (bs, 1H), 9.39 (bs, 1H), 8.30 (t, 1H), 7.90 (d, 1H, J = 3.2 Hz), 7.78 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.71 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 5.88 (s, 1H ), 4.30 (d, 2H, J = 4 Hz), 3.11 (m, 3H), 2.77-2.68 (m, 7H), 2.24 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.96-1.89 (m, 4H), 1.45 (m, 4H), 0.84 (t, 3H, J = 6.4 Hz).
Primer 169: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2-il)-benzamida
[1071]
4
Korak 1: sinteza metil 3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2-il)benzoata
[1072] U mešani rastvor metil 3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoata (0.5 g, 1.15 mmol) i 2-bromo-1-metil-1H-imidazola (0.22 g, 1.38 mmol) u mešavini dioksan/voda doda se Cs2CO3(0.94 g, 2.88 mmol) pod argonom. Doda se PdCl2(PPh3)2(0.08 g, 0.11 mmol), i mešavina se zagreva na 100 °C 4 h pod argonom. Doda se voda, i mešavina se ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi su suše preko Na2SO4, i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije metil 3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2-il)benzoat (0.22 g, 40%).
Korak 2: sinteza tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2-il)-fenil)-(etil)-amino)cikloheksil)karbamata
[1073] U mešani rastvor metil 3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2-il)benzoata (0.22 g, 0.47 mmol) u etanolu (3 mL) doda se vodeni NaOH (0.028 g, 0.70 mmol). Posle 1 h mešanja na 60 °C, mešavina se koncentruje pod sniženim pritiskom, acidifikuje do pH 4 i ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju da se dobije 0.16 g sirove kiseline. U mešani rastvor sirove kiselina (0.16 g, 0.35 mmol) i 3-(amino metil)-4, 6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0.11 g, 0.70 mmol) u DMSO (3 mL) doda se PYBOP (0.27 g, 0.53 mmol). Posle mešanja preko noći, mešavina se sipa u ledenu vodu i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se isperu vodom, suše i koncentruju pod sniženim pritiskom da
4
se dobije 0.12 g tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2-il)-fenil)-(etil)-amino)cikloheksil)karbamata koji se koristi direktno, bez dodatnog prečišćavanja.
Sinteza 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2-il)benzamida
[1074] U mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2-il)-fenil)-(etil)-amino)cikloheksil)karbamata (0.12 g, 0.20 mmol) u DCM (3 mL) doda se TFA (1 mL). Posle 1 h mešanja na sobnoj temperaturi mešavina se koncentruje pod sniženim pritiskom. U reziduu se doda zasićeni rastvor NaHCO3posle čega sledi ekstrakcija pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se ispiraju vodom i zasićenim slanim rastvorom, suše i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije 0.1 g 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2-il)benzamida koji se koristi direktno, bez dodatnog prečišćavanja.
Sinteza TFA soli N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2-il)benzamida
[1075] U mešani rastvor 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-2-il)benzamida (0.1 g, 0.20 mmol) u metanolu (3 mL) doda se formalin (0.06 g, 2.0 mmol) na 0 °C. Doda se natrijum cijanoborohidrid (0.025 g, 0.59 mmol), i mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Doda se voda, posle čega sledi ekstrahovanje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi su suše i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije čvrsta supstanca koja se prečišćava preparativnom HPLC da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.03 g, 28%). Analitički podaci za TFA so: LCMS: 519.65 (M 1)<+>; HPLC: 96.10% (@ 254 nm) (Rt; 3.976; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (bs, 1H), 9.60 (bs, 1H), 8.24 (bs, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 5.87 (s, 1H ), 4.30 (bs, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.10 (m, 3H), 2.69 (bs, 7H), 2.28 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.96-1.88 (m, 4H), 1.46 (m, 4H), 0.84 (bs, 3H).
4
Primer 170: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)benzamid
[1076]
[1077] Jedinjenje 170 priprema se metodom koji je sličan opisanom u Primeru 183 kasnije u ovom tekstu.
Analitički podaci: LCMS: 614.75 (M 1)<+>; HPLC: 98.17% (@ 210-370 nm) (Rt; 3.598; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (bs, 1H), 10.10 (bs, 1H), 9.68 (bs, 1H), 8.21 (m, 2H), 7.47 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 7.05 (d, 1H, J = 4.8 Hz), 5.87 (s, 1H), 4.54-4.51 (m, 2H), 4.30 (d, 2H, J = 4 Hz), 3.53 (m, 2H), 3.13 (m, 7H), 2.86 (s, 3H), 2.76-2.68 (m, 7H), 2.24 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.97-1.90 (m, 4H), 1.43 (m, 4H), 0.83 (t, 3H, J = 6.4 Hz).
Primer 171: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)benzamid
[1078]
[1079] Jedinjenje 171 priprema se metodom koji je sličan opisanom u Primeru 183 kasnije u ovom tekstu.
Analitički podaci: LCMS: 573.75 (M 1)<+>; HPLC: 95.92% (@ 210-370 nm) (Rt; 3.891; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (bs, 1H), 8.19 (t, 1 H), 8.14 (d, 1H, J = 4.8 Hz), 7.44 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.88 (d, 1H, J = 4.8 Hz), 5.86 (s, 1H), 4.29 (d, 2H, J = 4.4 Hz), 3.84-3.81 (m, 2H), 3.54 (m, 4H), 3.28-3.22 (m, 2H), 3.10-3.02 (m, 3H), 2.42 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.66-1.50 (m, 4H), 0.82 (t, 3H, J = 6.4 Hz).
Primer 172: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(6-(piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamid
[1080]
1
[1081] Jedinjenje 172 priprema se metodom koji je sličan opisanom u Primeru 183 kasnije u ovom tekstu.
Analitički podaci: LCMS: 600.75 (M 1)<+>; HPLC: 99.58% (@ 210-370 nm) (Rt; 3.460; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (bs, 1H), 9.59 (bs, 1H), 8.92 (bs, 2H), 8.47 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.92 (d, 1H, J=7.6 Hz), 7.39 (bs, 1H), 7.21 (bs, 1H), 7.01 (d, 1H, J=8.8 Hz), 5.87 (s, 1H), 4.29 (d, 2H, J=5.2 Hz), 3.75 (q, 4H, J=5.2 Hz), 3.22 (m, 4H), 3.12 (m, 3H), 2.75 (m, 1H), 2.69 (s, 3H), 2.68 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.97 (m, 4H), 1.44 (m, 4H), 0.83 (t, 3H, J=6.8 Hz).
Primer 173: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-(piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamid
[1082]
[1083] Jedinjenje 173 priprema se metodom koji je sličan opisanom u Primeru 183 kasnije u ovom tekstu.
Analitički podaci: LCMS: 559.55 (M 1)<+>; HPLC: 98.43% (@ 210-370 nm) (Rt; 3.731; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (bs, 1 H), 8.86 (s, 2H), 8.48 (bs, 1H), 8.21 (bs, 1H), 7.94 (bs, 1H), 7.45 (bs, 1H), 7.25 (bs, 1H), 7.02 (d, 1H, J=8.4 Hz), 5.87 (s, 1H), 4.29 (d, 2H, J=3.6 Hz), 3.83 (m, 3H), 3.76 (bs, 4H), 3.30-3.15 (m, 7H), 3.10 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.75-1.50 (m, 4H), 0.84 (t, 3H).
2
Primer 174: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(pirazin-2-il)-benzamida
[1084]
Korak 1: sinteza metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)(etil)-amino)-2-metilbenzoata
[1085] U mešani rastvor 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)amino)-2-metilbenzoata (10 g, 23 mmol) i acetaldehida (2.99 g, 68 mmol) u dihloroetanu (100 mL) doda se sirćetna kiselina (8.18 g, 136 mmol), i reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 20 min. Doda se natrijum triacetoksiborohidrid (14.45 g, 68 mmol) na 0 °C, i mešavina se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom, doda se voda, i zatim se izvrši ekstrahovanje pomoću 5% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju da se dobije 9 g jedinjenja iz naslova koje se koristi bez dodatnog prečišćavanja.
Korak 2: sinteza metil 3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoata
[1086] U mešani rastvor metil 5-bromo-3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)(etil)-amino)-2-metilbenzoata (2.0 g, 4.3 mmol) i bi-pinakolatodiborona (5.42 g, 21 mmol) u dioksanu doda se kalijum acetat (1.25 g, 12.82 mmol) pod argonom. Doda se PdCl2(dppf)DCM (0.35 g, 0.42 mmol), i mešavina se zagreva na 80 °C 3 h pod argonom. Zatim se doda voda, posle čega sledi ekstrahovanje etil acetatom. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (1.3 g, 70%).
Korak 3: sinteza metil 3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(pirazin-2-il)benzoata
[1087] U mešani rastvor metil 3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoata (0.50 g, 1.15 mmol) i 2-bromopirazina (0.24 g, 1.49 mmol) u mešavini dioksan/voda doda se Cs2CO3(0.94 g, 2.89 mmol) pod argonom. Doda se PdCl2(PPh3)2(0.08 g, 0.11 mmol), i mešavina se zagreva na 100 °C 3 h pod argonom. Doda se voda posle čega sledi ekstrahovanje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.29 g, 53%).
Korak 4: sinteza tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)-metil)karbamoil)-2-metil-5-(pirazin-2-il)-fenil)-(etil)-amino)-cikloheksil)-karbamata
[1088] U mešani rastvor metil 3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(pirazin-2-il)benzoata (0.29 g, 0.62 mmol) u etanolu (3 mL) doda se vodeni NaOH (0.037 g, 0.93 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle 1 h mešanja na 60 °C, mešavina se koncentruje pod sniženim pritiskom, acidifikuje do pH 4 i ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju da se dobije 0.24 g sirove kiseline. U mešani rastvor pomenute sirove kiseline (0.24 g, 0.52 mmol) i 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0.16 g, 1.05 mmol) u DMSO (3 mL) doda se PYBOP (0.41 g, 0.79 mmol). Posle mešanja preko noći, mešavina se sipa u ledenu vodu i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se isperu vodom, suše i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije 0.3 g jedinjenja iz naslova koje se koristi direktno, bez dodatnog prečišćavanja.
Korak 5: sinteza 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(pirazin-2-il)benzamida
4
[1089] U mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)-metil)karbamoil)-2-metil-5-(pirazin-2-il)-fenil)-(etil)-amino)-cikloheksil)-karbamata (0.3 g, 0.51 mmol) u DCM (3 mL) doda se TFA (1 mL). Posle 1 h mešanja na sobnoj temperaturi mešavina se koncentruje pod sniženim pritiskom. Doda se zasićeni rastvor NaHCO3posle čega sledi ekstrahovanje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se ispiraju vodom i zasićenim slanim rastvorom, suše i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije 0.24 g jedinjenja iz naslova koje se koristi direktno, bez dodatnog prečišćavanja.
Korak 6: Sinteza TFA soli N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(pirazin-2-il)benzamida
[1090] U mešani rastvor 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(pirazin-2-il)benzamida (0.24 g, 0.51 mmol) u metanolu (3 mL) doda se formalin (0.15 g, 5.1 mmol) na 0 °C. Doda se natrijum cijanoborohidrid (0.06 g, 1.0 mmol), i mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Doda se voda posle čega sledi ekstrahovanje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca se prečišćava preparativnom HPLC da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.12 g, 47%).
Analitički podaci za TFA so: LCMS: 517.50 (M 1)<+>; HPLC: 99.49% (@ 210-370 nm) (Ri; 4.072; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (bs, 1H), 9.45 (bs, 1H), 9.26 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.23 (t, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 5.88 (s, 1H), 4.31 (d, 2H, J = 4 Hz), 3.13 (m, 3H), 2.78 (m, 1H), 2.69 (d, 6H, J = 4.8 Hz), 2.28 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 1.96-1.92 (m, 4H), 1.45 (m, 3H), 0.84 (t, 3H, J = 6.4 Hz).
Primer 175: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)-benzamida
[1091]
Korak 1: sinteza metil 3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)benzoata
[1092] U mešani rastvor metil 3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoata
(0.40 g, 0.92 mmol) i 2-bromo-5-metilpirazina (0.21 g, 1.19 mmol) u mešavini dioksan/voda doda se Cs2CO3(0.75 g, 2.30 mmol) pod argonom. Doda se PdCl2(PPh3)2(0.064 g, 0.092 mmol), i mešavina se greje na 100 °C 3 h pod argonom. Doda se voda, posle čega sledi ekstrahovanje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.3 g, 56%).
Korak 2: sinteza tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)-fenil)-(etil)-amino)-cikloheksil)karbamata
[1093] U rastvor metil 3-(((1r,4r)-4-((tert-butoksikarbonil)-amino)-cikloheksil)-(etil)-amino)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)benzoata (0.29 g, 0.49 mmol) u etanolu (3 mL) doda se vodeni NaOH (0.029 g, 0.75 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja na 60 °C tokom 1 h, mešavina se koncentruje pod sniženim pritiskom, acidifikuje do pH 4 i ekstrahuje etil acetatom. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju da se dobije 0.25 g sirove kiseline. U mešani rastvor pomenute sirove kiseline (0.25 g, 0.44 mmol) i 3-(amino metil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0.13 g, 0.88 mmol) u DMSO (3 mL) doda se PYBOP (0.34 g, 0.66 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle toga mešanje se nastavlja preko noći, i mešavina se sipa na led i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se ispiraju vodom, suše i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije 0.2 g jedinjenja iz naslova koje se koristi direktno, bez dodatnog prečišćavanja.
Korak 3: sinteza 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)benzamida
[1094] U mešani rastvor tert-butil ((1r,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)-fenil)-(etil)-amino)-cikloheksil)karbamata (0.2 g, 0.33 mmol) u DCM (3 mL) doda se TFA (1 mL). Posle 1 h mešanja na sobnoj temperaturi, mešavina se koncentruje pod sniženim pritiskom. Doda se zasićeni rastvor NaHCO3, posle čega sledi ekstrahovanje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se ispiraju vodom i zasićenim slanim rastvorom, suše i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije 0.15 g jedinjenja iz naslova koje se koristi direktno, bez dodatnog prečišćavanja
Korak 4: Sinteza TFA soli N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)-benzamida
[1095] U mešani rastvor 3-(((1r,4r)-4-aminocikloheksil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(5-metilpirazin-2-il)benzamida (0.15 g, 0.29 mmol) u metanolu (3 mL) doda se formalin (0.089 g, 2.98 mmol) na 0 °C. Doda se natrijum cijanoborohidrid (0.037 g, 0.59 mmol), i mešavina se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Doda se voda, posle čega sledi ekstrahovanje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca se dodatno prečišćava preparativnom HPLC koja daje jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.12 g, 75%). Analitički podaci za TFA so: LCMS: 531.50 (M 1)<+>; HPLC: 88.93% (@ 210-370 nm) (Ri; 4.130; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.49 (bs, 1H), 9.54 (bs, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.23 (t, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.30 (bs, 2H), 3.12 (m, 3H), 2.77-2.69 (m, 7H), 2.53 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.95-1.91 (m, 4H), 1.44 (m, 4H), 0.83 (t, 3H).
Primer 176: Sinteza 5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
Korak 1: Sinteza 6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-karbonitrila
[1097] U mešani rastvor t-BuOK (1 g, 8.9 mmol) u DMSO (15 mL) na rt dodaju se jedinjenje cijanoacetamid (0.824 g, 9.8 mmol) i (E)-hept-3-en-2-on (1 g, 8.91 mmol). Reakciona mešavina se meša 30 min na rt. Doda se još t-BuOK (3 g, 26.7 mmol), i reakciona mešavina se meša na rt u prisustvu vazduha. Po završetku, mešavina se razblaži pomoću H2O i uz sporo dodavanje 4N HCl. Precipitirana čvrsta suspatanca se filtrira, ispira vodom i suši. Sirovi proizvod se trituriše etrom da se dobije jedinjenje iz naslova (0.5 g, 33%).
Korak 2: Sinteza 3-(aminometil)-6-metil-4-propilpiridin-2(1H)-ona
[1098] U rastvor 6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-karbonitrila (1.3 g, 7.38 mmol) u metanolu i aq rastvoru amonijaka (50 mL, 9:1) doda se katalitička količina Raneyevog nikla. Reakciona masa se meša na sobnoj temperaturi pod vodonikom (balon pod pritiskom), 5 h. Po završetku reakcije, mešavina se filtrira kroz celitno ležište, i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije jedinjenje iz naslova (1.2 g, 92%).
Korak 3: Sinteza 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1, 2-dihidropiridin-3-il) metil)-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzamida
[1099] Vodeni NaOH (2.36 g, 59.15 mmol) doda se u rastvor metil 5-bromo-3-(etil (tetrahidro-2H-piran-4-il) amino)-2-metilbenzoata (14 g, 39.43 mmol) u etanolu (100 mL), i mešavina se meša na 60 °C 1 h. Po završetku reakcije, etanol se ukloni pod sniženim pritiskom, i mešavina se acidifikuje razblaženom HCl do pH 6, i limunskom kiselinom do pH 4. Ekstrakcija se obavlja etil acetatom. Kombinovani organski slojevi se koncentruju sušenjem koje daje odgovarajuću kiselinu (13.9 g, 99%).
[1100] Pomenuta kiselina (0.6 g, 1.75 mmol) se zatim rastvori u DMSO (5 mL) i dodaju se 3-(aminometil)-6-metil-4-propilpiridin-2(1H)-on (0.64 g, 3 mmol) i trietil amin (0.49 g, 5.26 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PyBOP (1.36 g, 2.63 mmol), i mešanje se nastavlj preko noći. Po završetku reakcije, reakciona mešavina se sipa u led, ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše, koncentruju da se dobije sirovi materijal koji se zatim prečišćava ispiranjem rastvaračem da se dobije 5 g jedinjenja iz naslova (0.75 g, 84.7%).
Korak 4: Sinteza 5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[1101] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0.3 g, 0.59 mmol) i pinakol estra 4-((morfolino)metil)fenilboronske kiseline (0.22 g, 0.71 mmol) u mešavini dioksan/voda (5 mL 1 mL) doda se Na2CO3(0.23 g, 2.14 mmol), i rastvor se prečišćava argonom 15 min. Doda se Pd(PPh3)4(0.068 g, 0.059 mmol), i ponovo se uvodi argon tokom 10 min. Reakciona masa se greje na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.25 g, 70%). LCMS: 601.55 (M 1)+; HPLC: 97.21% (@ 210-370 nm) (Rt; 4.380; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (bs, 1H), 8.16 (bs, 1H), 7.57 (d, 2H, J= 7.6 Hz), 7.38 (t, 3H, J= 6.8 Hz), 7.21 (s, 1H), 5.89 (s, 1H), 4.30 (m, 2H), 3.84-3.82 (m, 2H), 3.57 (bs, 3H), 3.48 (s, 3H), 3.28-3.22 (m, 2H), 3.09-3.02 (m, 3H), 2.36 (bs, 4H), 2.25 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.67-1.54 (m, 6H), 0.93 (t, 3H, J= 7 Hz), 0.84 (t, 3H).2H su spojena sa pikom rastvarača.
Primer 177: Sinteza N-((5-bromo-4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[1102]
Korak 1: Sinteza metil 5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksilata
[1103] U mešani rastvor metil 5-bromo-3-(etil-(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoata (1 g, 2.82 mmol) i pinakol estra 4-((morfolino)metil)fenilboronske kiseline (1.03 g, 3.38 mmol) u mešavini dioksan/voda (10 mL 2 mL) doda se Na2CO3(1.08 g, 10.14 mmol), i rastvor se prečišćava argonom 15 min. Doda se Pd(PPh3)4(0.325 g, 0.28 mmol), i argon se ponovo uvodi tokom 10 min. Reakciona masa se greje na 100 °C 2 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, a rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni, preko silika gela da se dobije jedinjenje iz naslova (0.75 g, 59%).
Korak 2: Sinteza 5-bromo-4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-karbonitrila
[1104] U mešanu suspenziju 4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-karbonitrila (5 g, 33.78 mmol) u AcOH (25 mL) u kapima se dodaje brom (2.5 mL) na rt. Dobijeni rastvor se meša 1 h. Rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca se rekristališe u vrućem EtOH i H2O da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu bele čvrste supstance (5.5 g, 72%).
Korak 3: Sinteza 3-(aminometil)-5-bromo-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona
[1105] U mešani rastvor 5-bromo-4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-karbonitrila (1 g, 4.44 mmol) i NiCl2.6H2O (0.21 g, 0.89 mmol) u metanolu na 0 °C dodaje se NaBH4(0.68 g, 17.78 mmol), u partijama. Reakciona mešavina se zatim meša rt preko noći. Po završetku, mešavina se acidifikuje pomoću 3N HCl i meša na rt tokom 3 h. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom. Rezidua se ispere dietil etrom i bazifikuje pomoću aq NH4OH. Jedinjenje se ekstrahuje u 10% MeOH u DCM i suši preko anhidrovanog Na2SO4da se dobije jedinjenje iz naslova (0.96 g, 94%) koje se koristi kao takvo u reakciji kuplovanja.
Korak 4: Sinteza N-((5-bromo-4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[1106] Vodeni NaOH (0.06 g, 1.66 mmol) doda se u rastvor jedinjenja 7 (0.5 g, 1.11 mmol) u mešavini EtOH:H2O (4:1) (10 mL), i dobijena mešavina se meša na 60 °C 1 h. Po završetku reakcije, etanol su ukloni pod sniženim pritiskom, i reakcija se acidifikuje razređenom HCl do pH 6, i limunskom kiselinom do pH 4. Ekstrakcija se izvodi pomoću 10% MeOH u DCM. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju dajući odgovarajuću kiselinu (0.35 g, 72%).
[1107] Gore pomenuta kiselina (0.266 g, 0.61 mmol) se zatim rastvori u DMSO (2.5 mL) i dodaju se 3-(aminometil)-5-bromo-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-on (0.42 g, 1.83 mmol) i trietil amin (0.095 g, 0.91 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PYBOP (0.63 g, 1.22 mmol), i mešanje se nastavlja preko noći. Po završetku reakcije, reakciona masa se sipa u led, ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše, koncentruju da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava ispiranjem rastvaračem da se dobije jedinjenje iz naslova (0.035 g, 7.6%).
LCMS: 653.65 (M 1)+ , HPLC: 89.23% (@ 210-370 nm) (Rt; 4.421; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.88 (bs, 1H), 8.30 (bs, 1H), 7.76 (m, 2H), 7.57 (d, 2H, J= 7.6 Hz), 7.44 (bs, 1H), 7.27 (bs, 1H), 4.39 (m, 4H), 3.99-3.96 (m, 5H), 3.84 (d, 2H, J= 8.4 Hz), 3.65-3.62 (m, 2H), 3.28-3.23 (m, 4H), 3.12 (m, 4H), 2.35 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 1.65-1.55 (m,4H), 0.84 (t, 3H).
Primer 178: 4-hloro-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid
[1108]
1
[1109] Jedinjenje178 priprema se metodom koji je sličan opisanom u Primeru 177.
Analitički podaci: LCMS: 593.60 (M 1)<+>; HPLC: 95.50% (@ 210-370 nm) (Rt; 4.566; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s,1H), 8.34 (m, 1 H), 7.61-7.24 (m, 6H), 5.86 (s, 1H), 4.29 (m, 2H), 3.86-3.84 (m, 2H), 3.57-3.49 (m, 6H), 3.25-3.16 (m, 5H), 2.36 (m, 4H), 2.21 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.68-1.58 (m, 4H), 0.86 (t, 3H).
Primer 179: Sinteza 5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[1110]
Korak 1: Sinteza 5-fluoro-4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-karbonitrila
[1111] U mešani rastvor 2-cijanoacetamida (689 mg, 8.2 mmol) u anhidrovanom EtOH (7.0 ml) na 75 °C doda se 3-fluoropentan-2,4-dion (880 mg, 7.5 mmol), a zatim i piperidin (96 µl,
2
0.97 mmol). Reakciona mešavina se meša na ovoj temperaturi 3 h, i zatim se reakciona mešavina ostavi da dostigne sobnu temperaturu pre nego što se stavi da odstoji u frižideru 4 dana. Bež čvrsta supstanca sakupi se filtracijom i ispira hladnim EtOH (4 x 0.4 ml) dok filtrat ne postane bistar. Dobijena bež čvrsta supstanca suši se u vakuumu na 40 °C 5 h da se dobije jedinjenje iz naslova (733 mg, 58%) u vidu bež čvrste supstance. LC-MS 97%, 1.18 min (LC-MS metod od 3.5 min); m/z = 166.9, 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 13.67 (br. s., 1H) 2.46 (d, J=2.05 Hz, 3 H) 2.45 (d, J=2.84 Hz, 3 H).
Korak 2: Sinteza 3-(aminometil)-5-fluoro-4,6-dimetil-1,2-dihidropiridin-2-on
[1112] Rastvor 0.05M 5-fluoro-4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-karbonitrila (731 mg, 4.4 mmol) u 1.75M NH3/MeOH (87 ml) propušta se kroz H-Cube na 80 °C i 50 bara pri stopi protoka od 1 ml/min. Dobijeni rastvor se koncentruje u vakuumu. Dobijena čvrsta supstanca se podeli u 2 serije, a 350 mg sirovog proizvoda se prečisti uz pomoć hromatografije na koloni (SNAP punjenje od 25 g, Isolera, 0-25% MeOH (sadrži 10% NH4OH):CH2Cl2) da se dobije jedinjenje iz naslova (307 mg, 20%) u vidu beličaste čvrste supstance, kao mešavina proizvod:početni materijal (1:1). LC-MS (ELS) 100%, 0.23 min (3.5-minutni LC-MS metod), m/z = 170.9, 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ ppm 3.79 (s, 2 H) 2.31 (d, J=2.84 Hz, 3 H) 2.25 (d, J=2.05 Hz, 3 H).
Korak 3: Sinteza 5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamida
[1113] Mešani rastvor 3-[etil(oksan-4-il)amino]-2-metil-5-[4-(morfolin-4-ilmetil)fenil]benzoeve kiseline (100 mg, 0.22 mmol) u anhidrovanom DMF (4.0 ml) na 0 °C u balonu azota tretira se korišćenjem HATU (99 mg, 0.26 mmol) i DIPEA (75 µl, 0.43 mmol), u vidu kapi. Dobijeni rastvor se meša 10 min, a zatim se tretira 3-(aminometil)-5-fluoro-4,6-dimetil-1,2-dihidropiridin-2-onom (50%, 81 mg, 0.24 mmol). Dobijena suspenzija se meša na 0 °C 30 min, i zatim na sobnoj temperaturi 18 h. Reakciona mešavina se raspodeli između vode (20 ml) i CH2Cl2(15 ml). Slojevi se odvoje, i vodena faza ekstrahuje pomoću CH2Cl2(3 x 15 ml). Kombinovani organski materijali se isperu zasićenim rastvorom NaHCO3(aq) (40 ml), vodom (2 x 25 ml), zasićenim slanim rastvorom (20 ml), i zatim suše (MgSO4), filtriraju i koncentruju u vakuumu. Sirova rezidua se prečisti fleš hromatografijom na koloni (IOg SNAP-punjenje, Isolera, 0-6% MeOH/CH2Cl2), i rastvori u mešavini EtOAc (40 ml) i CH2Cl2(10 ml), zatim ispere vodom (6 x 30 ml), zasićenim slanim rastvorom (2 x 30 ml), posle čega se suši (MgSO4), filtrira i koncentruje u vakuumu. Čvrsta supstanca se dobro osuši u vakuumu na 40 °C tokom 40 h da se dobije 5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-4-metil-4'-(morfolinometil)-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid (93 mg, 73%) u vidu praškaste bele čvrste supstance. LC-MS 100%, 2.76 min (LC-MS metod od 7 min), m/z = 591.2; 1H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ 11.79 (s, 1H), 7.44 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 3H), 7.08 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.95 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 3.76 - 3.66 (m, 4H), 3.51 (s, 2H), 3.31 (td, J = 11.3, 2.7 Hz, 2H), 3.10 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.00 (tt, J = 9.6, 4.6 Hz, 1H), 2.45 (s, 4H), 2.43 (d, J = 1.8 Hz, 3H), 2.34 (s, 3H), 2.13 (d, J = 2.7 Hz, 3H), 1.74 - 1.62 (m, 4H), 0.89 (t, J= 7.0 Hz, 3H). Smatra se da se signal jednog protona podudara sa pikom rastvarača.
Primer 180: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-2-metil-5-(1-metil-1H-imidazol-4-il)benzamid
[1114]
[1115] Jedinjenje 180 priprema se metodom koji je sličan opisanom u Primeru 169.
Analitički podaci: LCMS: 519.55 (M 1)<+>; HPLC: 89.93% (@ 210-370 nm) (Rt; 3.676; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.50 (bs, 1H), 9.77 (bs, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.20-8.17 (m, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.30 (d, 2H, J=5.2 Hz), 3.87 (s, 3H), 3.11 (m, 3H), 2.68-2.67 (m, 6H), 2.72-2.64 (m,1H), 2.22 (s, 6H), 2.11 (s, 3H), 1.99-1.87 (m, 4H), 1.48-1.40 (m, 4H), 0.81 (t, 3H, J=6.8 Hz).
4
Primer 181: 4'-(azetidin-1-karbonil)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-4-metil-[1,1'-bifenil]-3-karboksamid
[1116]
[1117] Analitički podaci: LCMS: 598.60 (M 1)<+>; HPLC: 94.88% (@ 210-370 nm) (Rt; 3.823; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.44 (bs, 1H), 9.56 (bs, 1H), 8.21 (m, 1H), 8.05-7.96 (m, 4H), 7.54 (bs, 1H), 7.38 (bs, 1H), 5.87 (s, 1 H), 4.82-4.81 (m, 2H), 4.31 (d, 2H, J= 4.8 Hz), 3.69 (t, 2H, J= 5.6 Hz), 3.17-3.14 (m, 3H), 2.77 (bs, 1 H), 2.69-2.68 (m, 6H), 2.26 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.97-1.91 (m, 4H), 1.46-1.44 (m, 4H), 0.85 (t, 3H, J=6.8 Hz).2H spojena sa pikom rastvarača.
Primer 182: N3-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(((1r,4r)-4-(dimetilamino)cikloheksil)(etil)amino)-N4'-(3-hidroksipropil)-4-metil-[1,1'-bifenil]-3,4'-dikarboksamid
[1118]
[1119] Analitički podaci: LCMS: 617.70 (M 1)<+>; HPLC: 93.27% (@ 210-370 nm) (Rt; 4.009; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B tokom 8 min, zadržavanje tokom 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (bs, 1H), 9.47 (bs, 1H), 8.48 (m, 1H), 8.23 (bs, 1H), 7.93-7.73 (m, 4H), 7.47 (bs, 1H), 7.31 (bs, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.31-4.30 (m, 2H), 3.47 (t, 2H, J= 6 Hz), 3.34-3.33 (m, 2H), 3.13 (bs, 3H), 2.69-2.68 (m, 6H), 2.26 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.96 (m, 4H), 1.69 (t, 2H, J= 6.6 Hz), 1.45 (m, 4H), 0.85 (t, 3H). 1H spojen sa pikom rastvarača.
Primer 183: 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)benzamid
[1120]
[1121] Analitički podaci: LCMS: 601.65(M 1)<+>; HPLC: [99.85% (@ 210 nm-370 nm) (Rt; 4.256; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.48 (bs, 1H), 9.84 (bs, 1H), 8.47 (bs, 1H), 8.17 (bs, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.41 (m, 2H), 7.04 (d, 1H, J= 8 Hz), 5.89 (s, 1H), 4.44 (d, 2H, J= 12Hz), 4.30 (s, 2H), 3.84 (bs, 2H), 3.52 (d, 2H, J= 9Hz), 3.12-3.24 (m, 8Hz), 2.85 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.54-1.65 (m, 6H), 0.84-0.94 (m, 6H).3 protona spojena sa pikom rastvarača.
Primer 184: Sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamida
[1123] Rastvor 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)benzamida (0.7 g, 1.38 mmol), odgovarajućeg boronat estra (0.601 g, 2.08 mmol) i tetrakisa (0.160 g, 0.138 mmol) u dioksanu (10 mL) prečišćava se argonom 10 min. Doda se aq Na2CO3(0.529 g, 4.99 mmol, 2 mL), i mešavina se ponovo oslobađa gasa tokom 10 min. Reakciona mešavina se greje na 100 °C 16 h. Po završetku, mešavina se koncentruje da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava na koloni dajući jedinjenje iz naslova (0.50 g, 61.5%). Analitički podaci: LCMS: 587.55 (M 1)<+>; HPLC: 97.87% (@ 210-370 nm) (Rt; 4.217; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (bs, 1H), 8.38 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 8.14 (t, 1H, J = 4.4 Hz), 7.78 (dd, 1H, J = 2.4, 9.2 Hz), 7.35 (d, 1H, J = 1.2 Hz), 7.15 (d, 1H, J = 1.2 Hz), 6.85 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 5.88 (s, 1H), 4.29 (d, 2H, J = 4.8 Hz), 3.82 (d, 2H, J = 10 Hz), 3.43 (t, 4H, J = 5.2 Hz), 3.24 (t, 2H, J = 11.2 Hz), 3.10-2.98 (m, 3H), 2.78 (t, 4H, J = 4.8 Hz), 2.22 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.67-1.47 (m, 6H), 0.93 (t, 3H, J = 7.2 Hz), 0.81 (t, 3H, J = 6.8 Hz).
Primer 185: Sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamida
[1124]
[1125] Rastvor 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0.5 g, 0.99 mmol), 1-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)piperazina (0.43 g, 1.48 mmol), i tetrakisa (0.114 g, 0.09 mmol) u dioksanu (7 mL) prečišćava se argonom 10 min. Doda se aq Na2CO3(0.377 g, 3.5 mmol, 2 mL), i mešavina se ponovo oslobađa gasa tokom 10 min. Reakciona mešavina se greje na 100 °C 16 h. Po završetku, mešavina se koncentruje da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava na koloni dajući jedinjenje iz naslova (0.35 g, 60.13%).
Analitički podaci: LCMS: 586.36(M 1)<+>; HPLC: 97.03% (@ 210-370 nm) (Rt; 4.10; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (bs, 1H), 8.37 (bs, 1H), 8.17 (bs, 1H), 7.78 (d, 1H, J=7.6Hz), 7.35 (s,1H), 7.15 (s, 1H), 6.85 (d, 1H, J=8.8Hz), 5.99 (s, 1H), 4.34 (d, 2H, J=4Hz), 3.83-3.81 (m, 2H), 3.42(bs, 4H), 3.27-3.21 (m, 3H), 3.02-3.01 (m, 3H), 2.77 (bs, 4H), 2.22 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 1.67-1.49 (m, 4H), 1.13 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 0.81 (t, 3H, J=6.4Hz).
Primer 186: Sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)benzamida
[1126]
Korak 1: Sinteza 4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-karbonitrila
[1127] U mešani rastvor 2-cijanoacetamida (4.1 g, 49 mmol) i t-BuOK (4.9 g, 44.6 mmol) u DMSO na 0 °C doda se 5-metilheks-3-en-2-on (5 g, 44.6 mmol), i mešavina se meša 30 min. Doda se još t-BuOK (15 g, 133.9 mmol) u reakcionu mešavinu i nastavi se mešanje na sobnoj temperaturi tokom još jednog sata. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom (50 mL) i polako acidifikuje pomoću 4N HCl. Precipitat se filtrira i ispira vodom i suši da se dobije jedinjenje B (2.2 g, 28.2%).
Korak 2: Sinteza 3-(aminometil)-4-izopropil-6-metilpiridin-2(1H)-ona
[1128] U rastvor cijano jedinjenja B (2.2 g, 12.5 mmol) u metanolu i aq rastvoru amonijaka (10 mL, 4:1) doda se katalitička količina Raneyevog nikla. Reakciona masa se meša na sobnoj temperaturi pod vodonikom (balon pod pritiskom) 4 h. Po završetku reakcije, mešavina se filtrira kroz celitno ležište i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije jedinjenje iz naslova (2 g, 91%).
Korak 3: sinteza 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
[1129] 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoeva kiselina (2.0 g, 0.0058 mol) se rastvori u DMSO (20 mL) i dodaju se 3-(aminometil)-4-izopropil-6-metilpiridin-2(1H)-on (2.1 g, 11.7 mmol) i trietil amin (0.585 g, 5.8 mmol). Reakciona mešavina se meša na sobnoj temperaturi 15 min pre dodavanja PyBOP (4.5 g, 8.7 mmol) i mešanje nastavlja preko noći. Po završetku reakcije, reakciona mešavina se sipa u led, ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše i koncentruju da se dobije sirovi materijal koji se zatim prečišćava ispiranjem rastvaračem dajući jedinjenje iz naslova (2.0 g, 68.9%).
Korak 4: Sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)benzamida
[1130] Rastvor 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0.3 g, 0.99 mmol), odgovarajućeg pinakol estera boronske kiseline (0.216 g, 0.715 mmol) i tetrakisa (0.068 g, 0.0596 mmol) u dioksanu (10 mL) prečišćava se argonom 10 min. Ovome se doda aq Na2CO3(0.227 g, 2.14 mmol, 2 mL), i mešavina se ponovo oslobađa gasa tokom 10 min. Reakciona mešavina se greje na 100 °C 16 h. Po završetku, mešavina se koncentruje da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava pomoću prep. HPLC dajući jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.12 g, 33.6%).
Analitički podaci za TFA so: MS: 601.55 (M 1)<+>. HPLC: 96.78% (@ 210-370 nm) (Rt; 4.197; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.49 (bs, 1H), 9.94 (bs, 1H), 8.493 (d, 1H,6 Hz), 7.957 (bs, 1H), 7.65-7.258(m, 3H), 7.056 (d, 1H, 8.4 Hz), 6.014 (s, 1H), 4.46 (d, 2H,12.8 Hz), 4.349 (d, 2H,4.8 Hz), 3.849 (d, 2H,7.2Hz), 3.530 (d, 2H,10.8 Hz), 3.28-3.075 (m, 10H), 2.85 (s, 3H), 2.26 (bs, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.64 (bs, 2H), 1.56 (bs, 2H), 1.14 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 0.845 (t, 3H,7.6 Hz).
Primer 187: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-(4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamida
[1131]
[1132] U mešani rastvor N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-(piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamida (0.1 g, 0.179 mmol) i 1-metilpiperidin-4-ona (0.04 g, 0.358 mmol) u dihloroetanu (2 mL) doda se sirćetna kiselina (0.07 mL, 1.07 mmol), i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 15 min. Zatim se doda natrijum triacetoksiborohidrid (0.113 g, 0.53 mmol) na 0 °C, i reakcija se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Po završetku, reakcija se gasi vodenim natrijum bikarbonatom, organska faza se odvoji, a vodena faza se ekstrahuje dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava uz pomoć prep. HPLC dajući jedinjenje iz naslova u vidu TFA soli (0.08 g, 22.72%).
Analitički podaci za TFA so: ESMS: 656.41 (M 1)<+>; HPLC: [97.76% (@ 210 nm-370 nm) (Rt; 3.667; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.49 (bs, 1H), 10.33 (bs, 1H), 9.86 (bs, 1H), 8.49 (bs, 1H), 8.20 (bs, 1H), 7.96 (bs, 1H), 7.24-7.39 (m, 2H), 7.07 (d, 1H, J=9Hz), 5.87 (s, 1H), 4.47 (bs, 2H), 4.28 (d, 2H, J=4Hz), 3.84 (s, 2H), 3.60 (d, 5H, J= 11Hz), 3.16-3.28 (m, 7H), 2.99 (bs, 2H), 2.79 (s, 3H), 2.11-2.25 (m, 11H), 1.87-1.90 (m, 2H), 1.56-1.64 (m, 3H), 0.85 (s, 3H).
Primer 188: Sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamida
[1133]
1
[1134] U mešani rastvor 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamida (0.3 g, 0.51 mmol) i 1-metilpiperidin-4-ona (0.086 g, 0.76 mmol) u dihloroetanu (5 mL) doda se sirćetna kiselina (0.18 g, 3.06 mmol), i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 20 min. Tada se doda natrijum triacetoksiborohidrid (0.33 g, 1.55 mmol) na 0 °C, i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 2 h. Po završetku, reakcija se gasi vodenim natrijum bikarbonatom, organski faza se odvoji, a vodena faza ekstrahuje dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava uz pomoć prep. HPLC dajući jedinjenje iz naslova (0.12 g, 34.38%).
Analitički podaci: LCMS: 683.45 (M 1)<+>; HPLC: 98.65% (@ 210-370 nm) (Rt; 4.04; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.47 (bs, 1H), 10.24 (bs, 1H), 9.79 (bs, 1H), 8.46 (bs, 1 H), 8.19(bs, 1H), 7.92 (bs, 1H), 7.38 (bs, 1H), 7.19 (bs, 1H), 7.06 (d, 1H, J=9.2 Hz), 6.0 (s, 1 H), 4.47 (bs, 2H), 4.34 (d, 2H, J=7.6Hz), 3.83(d, 2H J=8.8Hz), 3.6 (d, 4H, J=12Hz), 3.43 (m, 1H), 3.27-3.16(m, 8H), 2.99-2.97 (m, 3H), 2.79 (s, 3H), 2.37-2.33 (m,3H), 2.24(bs, 3H), 2.13 (s, 3H), 1.90-1.82 (m, 2H), 1.64-1.53 (m, 4H), 1.13 (s, 3H), 1.12(s, 3H), 0.83 (t, 3H, J=6.8Hz)
Primer 189: Sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso -4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamida
[1135]
2
[1136] U mešani rastvor 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamida (0.45 g, 0.76 mmol) i 1-metilpiperidin-4-ona (0.173 g, 1.53 mmol) u dihloroetanu (10 mL) doda se sirćetna kiselina (0.276 g, 4.6 mmol), i reakcija se meša na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Tada se doda natrijum triacetoksiborohidrid (0.488 g, 2.3 mmol) na 0 °C, i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 2 h. Po završetku, reakcija se gasi vodenim natrijum bikarbonatom, organska faza se odvoji, i vodena faza ekstrahuje dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava hromatografijom na koloni dajući jedinjenje iz naslova (0.215 g, 41%).
Analitički podaci: LCMS: 684.45(M 1)<+>; HPLC: 93.41% (@ 210 nm-370 nm) (Rt; 4.140; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46(bs, 1H), 8.38(s, 1H, ), 8.13(bs, 1H), 7.78(d, 1H, J= 9Hz), 7.35(s, 1H), 7.15(s, 1H), 6.8(d, 1H, J= 9), 5.88(s, 1H), 4.28(d, 2H, J= 4Hz), 3.82(d, 2H, 10Hz), 3.49(s, 4H), 3.24(t, 2H, J= 11Hz), 3.0-3.08(m, 3H), 2.78(d, 2H, J= 10Hz), 2.56(s, 4H), 2.22(s, 3H), 2.13(s, 1H), 2.11 (s, 1H), 1.57-1.86(m, 6H), 1.46-1.55(m, 6H), 0.91 (t, 3H, J= 8Hz), 0.81 (t, 3H, J= 6Hz).
Primer 190: Sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[1137]
Korak 1: Sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida:
[1138] Rastvor 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0.4 g, 0.793 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pikolinaldehida (0.28 g, 1.19 mmol) i tetrakisa (0.091 g, 0.079 mmol) u dioksanu (5 mL) prečišćava se argonom 10 min. Tada se doda aq Na2CO3(0.301 g, 2.83 mmol), i mešavina se ponovo oslobađa gasa tokom 10 min. Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C 16 h. Po završetku, mešavina se koncentruje da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava na koloni dajući jedinjenje iz naslova (0.28 g, 66.50%).
Korak 2: Sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[1139] U mešani rastvor 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0.28 g, 0.528 mmol) i morfolina (0.07 g, 0.79 mmol) u dihloroetanu (3 mL) doda se sirćetna kiselina (0.19 g, 3.16 mmol), i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 20 min. Tada se doda natrijum triacetoksiborohidrid (0.33 g, 1.55 mmol) na 0 °C, i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 2 h. Po završetku, reakcija se gasi vodenim natrijum bikarbonatom, organska faza se odvoji, a vodena faza ekstrahuje dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava uz pomoć prep. HPLC dajući jedinjenje iz naslova (0.12 g, 38.70%).
Analitički podaci za TFA so: LCMS: 601.36 (M 1)<+>; HPLC: 95.48% (@ 210-370 nm) (Rt; 4.28; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H
4
NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.45 (bs, 1H), 10.45 (bs, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.23-8.21 (m, 2H), 7.62-7.52(m, 2H), 7.34 (bs, 1H), 6.01 (s,1H), 4.55 (s, 2H), 4.35 (d, 2H,J=5.2Hz), 3.84 (bs, 6H), 3.29-3.13 (m, 8H), 2.27 (s, 3H), 2.13(s, 3H), 1.66-1.56(m,4H), 1.13(s,3H), 1.12 (s, 3H), 0.83 (t, 3H, J= 6.8).2H protona spojena sa pikovima rastvarača.
Primer 191: Sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[1140]
Korak 1: Sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)benzamida
[1141] Rastvor 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)benzamida (0.5 g, 0.99 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pikolinaldehida (0.346 g, 1.48 mmol), i tetrakisa (0.114 g, 0.99 mmol) u dioksanu (10 mL) prečišćava se argonom 10 min. Tada se doda aq Na2CO3(0.378 g, 3.56 mmol, 1.8 mL), i mešavina se ponovo oslobađa gasa 10 min. Reakciona mešavina se greje na 100 °C 16 h. Po završetku, mešavina se koncentruje da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava na koloni dajući jedinjenje iz naslova (0.40 g, 76.0%).
Korak 2: Sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[1142] U mešani rastvor 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-formilpiridin-3-il)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)benzamida (0.315 g, 0.59 mmol) u EDC (8 mL) na 0 °C doda se morfolin (0.1 g, 1.18 mmol), i mešavina se meša rt 10 min. Tada se doda NaBH(OAc)3(0.377 g, 1.78 mmol), i mešavna se meša 16 h. Po završetku, reakcija se gasi vodom. Tada se doda MeOH (8 mL), i slojevi se odvoje i ekstrahuju pomoću 10% MeOH u DCM, posle čega se prečišćavaju hromatografijom na koloni da se dobije jedinjenje iz naslova (0.2 g, 56%).
Analitički podaci: LCMS: 602.60(M 1)<+>; HPLC: 98.12% (@ 210 nm-370 nm) (Rt; 4.374; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.48(s, 1H), 8.75(s, 1H), 8.19(t, 1H, J=4Hz), 7.99-8.02(m, 1H), 7.49(t, 2H, J= 8Hz), 7.26(s, 1H), 5.88(s, 1H), 4.29(d, 2H, J= 4Hz), 3.82(d, 2H, J= 10Hz), 3.59-3.61(m, 6H), 3.24(t, 2H, J= 12Hz), 2.99-3.10(m, 3H), 2.42(s, 4H), 2.25(s, 3H), 2.11(s, 3H), 1.48-1.67(m, 6H), 0.926(t, 3H, J= 8Hz), 0.824(t, 3H, J= 7Hz).
Primer 192: N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-,(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamid
[1143]
Korak 1: Sinteza tert-butil (1-(5-(3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil) karbamoil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metilfenil)piridin-2-il)piperidin-4-il)karbamata (9):
[1144] U mešani rastvor 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0.35 g, 0.736 mmol) i odgovarajućeg pinakol estra boronske kiseline (0.35 g, 0.88 mmol) u dioksanu (5 mL) doda se Na2CO3(0.28 g, 2.65 mmol), i rastvor se prečišćava argonom 15 min. Tada se doda tetrakis (0.085 g, 0.073 mmol), i prečišćavanje argonom se ponavlja tokom 10 min. Reakciona masa se greje na 100 °C 4 h. Po završetku, reakciona mešavina se razblaži vodom i ekstrahuje pomoću 10% MeOH/DCM. Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom, i mešavina prečišćava hromatografijom na koloni da se dobije jedinjenje iz naslova (0.39 g, 79%)
Korak 2: Sinteza 5-(6-(4-aminopiperidin-1-il)piridin-3-il)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (10):
[1145] U mešani rastvor tert-butil (1-(5-(3-(((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil) karbamoil)-5-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metilfenil)piridin-2-il)piperidin-4-il)karbamata (0.39 g, 0.058 mmol) u DCM (4 mL) na 0 °C doda se TFA (2 mL), i reakcija se meša 1 h na sobnoj temperaturi. Po završetku, reakcija se koncentruje do suvog. Rezidua se bazifikuje vodenim zas. rastvorom bikarbonata (30 mL) do pH 8, i vodeni sloj se ekstrahuje 20% metanolom u DCM (4 x 50 mL). Kombinovane organske faze se suše preko Na2SO4, i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom da se dobije jedinjenje iz naslova (0.3 g, 90.63%) koje se koristi kao takvo u sledećoj reakciji.
Korak 3: Sinteza N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-5-(6-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
[1146] U mešani rastvor 5-(6-(4-aminopiperidin-1-il)piridin-3-il)-N-((4,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0.3 g, 0.524 mmol) u DCM (3 mL) na 0 °C doda se 37-41% vod. rastvor formalina (0.277 g, 1.31 mmol), i mešavina se meša na rt 10 min. Tada se doda NaBH(OAc)3(0.277 g, 1.31 mmol), i mešavina se meša 2 h. Po završetku, reakcija se gasi vodom. Doda se MeOH (10 mL), slojevi se odvoje i ekstrahuju pomoću 10% MeOH u DCM, i zatim prečiste na koloni da se dobije jedinjenje iz naslova (0.12 g, 38%).
Analitički podaci: LCMS: 602.00 (M 1)<+>; HPLC: 97.22% (@ 210-370 nm) (Rt; 3.757; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (bs, 1 H), 8.38 (s, 1H), 8.15 (t, 1H), 7.78 (d, 1H, J=8.4Hz), 7.35 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.90 (d, 1H, J=8.8Hz), 5.85 (s, 1H), 4.35 (d, 2H, J=13.2Hz), 4.28 (d, 2H, J=4Hz), 3.82 (d, 2H, J=10Hz), 3.30-3.20 (m, 2H), 3.10-3.00 (m, 3H), 2.90-2.80 (m, 2H), 2.28 (s, 6H), 2.22 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.90-1.80 (m, 3H), 1.70-1.60 (m, 2H), 1.60-1.50 (m, 2H), 1.40-1.30 (m, 2H), 0.82 (t, 3H, J=6.4Hz).
Primer 193: Sinteza 5-(6-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
[1147]
Sinteza tert-butil (1-(5-(3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metilfenil)piridin-2-il)piperidin-4-il)karbamata
[1148] Rastvor 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0.35 g, 0.69 mmol), tert-butil (1-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)piperidin-4-il)karbamata (0.33 g, 0.83 mmol), i tetrakisa (0.079 g, 0.069 mmol) u dioksanu (5 mL) prečišćava se argonom 10 min. Tada se doda aq Na2CO3(0.263 g, 2.48 mmol, 2 mL), i mešavina se ponovo oslobađa gasa tokom 10 min. Reakciona mešavina se greje na 100 °C 16 h. Po završetku, mešavina se koncentruje da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava na koloni dajući jedinjenje iz naslova (0.31 g, 63%).
Sinteza 5-(6-(4-aminopiperidin-1-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
[1149] tert-butil (1-(5-(3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metilfenil)piridin-2-il)piperidin-4-il)karbamat (0.31 g, 0.44 mmol) se rastvori u DCM (5 mL), u to se doda TFA (1 mL) i meša na rt 2 h. Po završetku reakcije, rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom i doda se zasićeni rastvor NaHCO3. Ekstrakcija se vrši pomoću 10% MeOH/DCM; kombinovani organski slojevi se ispiraju vodom i zasićenim slanim rastvorom i suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije jedinjenje iz naslova (0.26 g, 98.11%).
Sinteza 5-(6-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3-il)-3-(etil-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida
[1150] U mešani rastvor 5-(6-(4-aminopiperidin-1-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0.26 g, 0.43 mmol) u DCM (4 mL) doda se formalin (0.045 g, 1.51 mmol), i reakcija se meša na 0 °C 10 min. Tada se doda natrijum triacetoksiborohidrid (0.23 g. 1.08 mmol) na 0 °C, i reakcija se meša 1 h. Po završetku doda se voda u reakciona masu, i izvrši se ekstrahovanje primenom DCM. Kombinovani organski slojevi se ispiraju rastvorom bikarbonata, suše preko natrijum sulfata i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal koji se zatim prečišćava ispiranjem rastvaračem da se dobije jedinjenje iz naslova (0.17 g, 62%). Analitički podaci: LCMS: 629.70 (M+1)<+>; HPLC: 97.74% (@ 210-370 nm) (Rt; 4.176; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 10.33 (bs, 1H), 8.39 (d, 1H), 8.16 (t, 1H), 7.81 (d, 1H, J=6.8Hz), 7.35 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.97 (d, 1H, J=9.2Hz), 5.99 (s, 1H), 4.50 (d, 2H, J=12.8Hz), 4.34 (d, 2H, J=4.4Hz), 3.82 (d, 2H, J=9.6Hz), 3.39 (m, 1H), 3.24 (m, 3H), 3.10-3.00 (m, 3H), 2.90-2.80 (m, 2H), 2.69 (s, 6H), 2.22 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.10-2.05 (m, 2H), 1.70-1.60 (m, 2H), 1.60-1.45 (m, 4H), 1.13 (d, 6H, J=6.4Hz), 0.82 (t, 3H, J=6.8Hz).
Primer 194: Sinteza 5-(6-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)benzamida
[1151]
Sinteza tert-butil (1-(5-(3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-5-(((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)fenil) piridin-2-il)piperidin-4-il)karbamata
[1152] Rastvor 5-bromo-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)benzamida (0.5 g, 0.99 mmol), odgovarajućeg pinakol estra boronske kiseline (0.6 g, 1.48 mmol), i tetrakisa (0.114 g, 0.99 mmol) u dioksanu (7 mL) prečišćava se argonom 10 min. Tada se doda aq Na2CO3(0.377 g, 3.5 mmol, 2 mL), i ponavlja se oslobađanje od gasa tokom 10 min. Reakciona mešavina se greje na 100 °C 16 h. Po završetku, mešavina se koncentruje da se dobije sirovi materijal koji se prečišćava na koloni dajući jedinjenje iz naslova (0.40 g, 57.47%).
Sinteza 5-(6-(4-aminopiperidin-1-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)benzamida
[1153] U mešani rastvor tert-butil (1-(5-(3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-4-metil-5-(((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)fenil)piridin-2-il)piperidin-4-il)karbamata (0.4 g, 0.00051 mol) u DCM (10 mL) na 0 °C doda se TFA (10 mL), i reakcija se meša 2 h na sobnoj temperaturi. Po završetku, reakcija se koncentruje do suvog. Rezidua se zatim bazifikuje vodenim zas. rastvorom bikarbonata (80 mL) do pH 8, i vodeni sloj se ekstrahuje 20% metanolom u DCM (4 x 60 mL). Kombinovane organske faze se suše preko Na2SO4, i rastvarač se uklanja pod sniženim pritiskom da se dobije jedinjenje iz naslova (0.315 g, 92.1%) koje se kao takvo koristi u sledećoj reakciji.
Sinteza 5-(6-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro -2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)benzamida
[1154] U mešani rastvor 5-(6-(4-aminopiperidin-1-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-okso-4-propil-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)benzamida (0.315 g, 0.52 mmol) u DCM (8 mL) na 0 °C doda se 37-41% aq rastvor formalina (0.078 g, 2.6 mmol), i mešavina se meša na rt 10 min. Tada se doda NaBH(OAc)3(0.275 g, 1.3 mmol), i mešavina se meša 2 h. Po završetku, reakcija se gasi vodom. Doda se MeOH (8 mL), slojevi se odvoje i ekstrahuju pomoću 10% MeOH u DCM, a rekristalizovanje iz etra, acetonitrila i pentana daje jedinjenje iz naslova (0.27 g, 82%).
Analitički podaci: LCMS: 630.00 (M+1)<+>; HPLC: 98.21% (@ 210-370 nm) (Rt; 4.155; metod: kolona: YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm x 5 µ; mobilna faza: A; 0.05% TFA u vodi/B; 0.05% TFA u acetonitrilu; inj. zapr.: 10 µL, temp. kol.: 30 °C; stopa protoka: 1.4 mL/min.; gradijent: 5% B do 95% B za 8 min, zadržavanje 1.5 min, 9.51-12 min 5% B);<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.46 (s, 1H), 8.37 (d, 1H, J=1.6Hz), 8.13 (t, 1H, J=4.4Hz), 7.76 (dd, 1H, J=2.4&9.2Hz), 7.35 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.89 (d, 1H, J=8.8Hz), 5.88 (s, 1H), 4.25-4.35 (m, 4H), 3.82 (d, 2H, J=10Hz), 3.24 (m, 2H), 3.10-3.00 (m, 3H), 2.90-2.80 (m, 2H), 2.35 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 2.18 (s, 6H), 2.11 (s, 3H), 1.80 (m, 2H), 1.70-1.60 (m, 2H), 1.60-1.45 (m, 4H), 1.40-1.30 (m, 2H), 0.93 (t, 3H, J=7.2Hz), 0.81 (t, 3H, J=6.8Hz).
Primer 195: Sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamida
[1155]
Korak 1: Sinteza 5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-karbonitrila
[1156] U mešani rastvor 6-metil-2-okso-4-(propan-2-il)-1,2-dihidropiridin-3-karbonitrila (225 mg, 1.277 mmol) u MeCN (6 mL) doda se selektfluor (620 mg, 1.75 mmol). Reakciona mešavina se meša na 50 °C 3 h. Posle hlađenja do 23 °C, reakciona mešavina se koncentruje u
1
vakuumu. Rezidua se prečisti hromatografijom na koloni (50% do 100% EtOAc-heptan) da se dobije jedinjenje iz naslova (90 mg, 36%).1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.39 (m, 1 H), 2.44 (d, J = 3.1 Hz, 3 H), 1.41 (dd, J = 7.0, 3.1 Hz, 6 H); LCMS E-S (M+H) = 195.2.
Korak 2: Sinteza 3-(aminometil)-5-fluoro-4-izopropil-6-metilpiridin-2(1H)-ona
[1157] 5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-karbonitril (100 mg, 0.515 mmol) u 100 mL-skom flakonu rastvori se u mešavini MeOH (6 mL) i 2 mL NH3aq(2 mL, 25%). Redukcija se izvede uz pomoć aparata H-Cube sa Raneyvim niklom, koji se koristi kao katalizator, na sobnoj temperaturi tokom 3-4 h. Po završetku reakcije (što se prati pomoću TLC), reakcija se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije jedinjenje iz naslova u vidu sive čvrste supstance (90 mg, 90%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 4.04 (s, 2 H), 3.22 (m, 1 H), 2.24 (d, J = 3.4 Hz, 3 H), 1.32 (dd, J = 7.0, 1.8 Hz, 6 H); LCMS E-S (M+H) = 199.2.
Korak 3: tert-butil 4-(5-(3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(metoksikarbonil)-4-metilfenil)piridin-2-il)piperazin-1-karboksilat
[1158] Jedinjenje se priprema prema opštem postupku Suzukijeve kuplujuće reakcije.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.42 (dd, J = 2.4 Hz, 1H), 7.70-7.74 (m, 2H), 7.41 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.97 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.58 (s, 8H), 3.34 (m, 2H), 3.11 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.02 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 1.64-1.76 (m, 4H), 1.50 (s, 9H), 0.91 (t, J = 7.0 Hz, 3H). MS (ES) (M+H) = 539.5.
Korak 4: Sinteza tert-butil 4-(5-(3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(((5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metilfenil)piridin-2-il)piperazin-1-karboksilata
[1159] Hidroliza tert-butil 4-(5-(3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(metoksikarbonil)-4-metilfenil)piridin-2-il)piperazin-1-karboksilata prema metodima sličnim ranije opisanim u primerima daje odgovarajuću sirovu karboksilnu kiselinu, 5-(6-(4-(tertbutoksikarbonil)piperazin-1-il)piridin-3-il)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoevu kiselinu. Ova kiselina je zatim kupluje sa 3-(aminometil)-5-fluoro-4-izopropil-6-metilpiridin-2(1H)-onom prema metodima sličnim ranije opisanim.
2
Posle prečišćavanja reverzno-faznom HPLC (ACN-H2O sadrži 0.1% mravlju kiselinu) dobija se jedinjenje iz naslova. 1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.33 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 2.6, 8.8 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.54 (s, 2H), 3.92 (m, 2H), 3.46-3.56 (m, 9H), 3.34 (m, 2H), 3.07-3.18 (m, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.24 (d, J = 3.2 Hz, 3H), 1.74-1.77 (m, 2H), 1.62-1.69 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.37 (dd, J = 1.6, 6.8 Hz, 6H), 0.90 (t, J = 6.8 Hz, 3H); MS (ES) (M+H) 705.7.
Korak 5: Sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamid formata
[1160] U rastvor tert-butil 4-(5-(3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(((5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)karbamoil)-4-metilfenil)piridin-2-il)piperazin-1-karboksilata (450 mg, 0.639 mmol) u etanolu (4.3 mL) na sobnoj temperaturi doda se 4M HCl u dioksanu (2 mL, 8.00 mmol). Posle 2 h, LC/MS ukazuje na prisustvo proizvoda i preostalog početnog materijala. Doda se još 4M HCl u 1,4-dioksanu (1.5 ml, 6.00 mmol), i posle 4 h LC/MS pokazuje da je reakcija završena. Reakciona mešavina se koncentruje do suvog, azeotropiše toluen-metanolom da se dobije sirova hlorovodonična so (454 mg, 111%). Uzorak od 125 mg pomenute sirove hlorovodonične soli prečisti se reverzno-faznom HPLC/MS (ACN-H2O, 0.1% mravlja kiselina) da se dobije 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamid format (65 mg) u vidu bezbojnog staklastog filma. 1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.35-8.40 (m, 2H), 7.86 (dd, J=2.4, 8.8 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.54 (s, 2H), 3.92 (m, 2H), 3.84 (m, 4H), 3.54 (m, 1H), 3.30-3.38 (m, 6H), 3.07-3.18 (m, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.24 (d, J = 2.8 Hz, 3H), 1.73-1.76 (m, 2H), 1.62-1.68 (m, 2H), 1.37 (d, J= 6.8 Hz, 6H), 0.89 (t, J = 6.8 Hz, 3H); MS (ES)(M+H) 605.6.
Primer 196: Sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)benzamida
[1161]
[1162] U rastvor 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(piperazin-1-il)piridin-3-il)benzamid hidrohlorida (160 mg, 0.25 mmol) u metanolu (2 mL) na 0 °C doda se 35% rastvor formaldehida u vodi (0.196 mL, 2.495 mmol). Posle mešanja tokom 20 min doda se natrijum cijanoborohidrid (31.4 mg, 0.499 mmol). Posle 1.5 h na 0 °C, reakcija se gasi vodom (3 mL), uklanja se hladno kupatilo, i mešavina se meša 10 min. Tada se dodaju DCM (10 mL) i zasićeni aq NaHCO3(1 mL). Organski sloj se izdvoji, vodeni sloj se ekstrahuje pomoću DCM (2 x 15 mL), i kombinovani organski ekstrakti se suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju. Proizvod se prečišćava reverzno-faznom HPLC/MS (ACN-H2O, 0.5% mravlja kiselina) kako bi se dobio 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)benzamid format (31 mg, 0.047 mmol, prinos: 19%) u vidu bezbojnog staklastog filma. 1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.42 (br. s, 1H), 8.38 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.85 (dd, J= 2.8, 8.8 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.54 (s, 2H), 3.91 (m, 2H), 3.82 (br. s, 4H), 3.54 (m, 1H), 3.31-3.38 (m, 2H), 3.05-3.21 (m, 7H), 2.81 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.24 (d, J = 2.8 Hz, 3H), 1.73-1.76 (m, 2H), 1.58-1.68 (m, 2H), 1.37 (dd, J = 1.6, 6.8 Hz, 6H), 0.89 (t, J = 6.8 Hz, 3H); MS (ES) (M+H) 619.7.
Primer 197: Sinteza 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamida
[1163]
4
Korak 1: Metil 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzoat
[1164] Jedinjenje 197 priprema se prema opštem postupku Suzukijeve kuplujuće reakcije.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.77 (dd, J= 0.9, 2.4 Hz, 1H), 7.84 (dd, J = 2.4, 7.9 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 3.98 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.75-3.78 (m, 4H), 3.72 (s, 2H), 3.34 (m, 2H), 3.13 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.03 (m, 1H), 2.56 (m, 7H), 1.64-1.76 (m, 4H), 0.92 (t, J = 7.1 Hz, 3H). MS (ES) (M+H) = 454.5.
Korak 2: 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4-izopropil-6-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzamid format
[1165] Hidroliza metil 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metil-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzoata prema metodima sličnim ranije opisanim, daje odgovarajuću karboksilnu kiselinu, 3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-5-(6-(morfolinometil)piridin-3-il)benzoevu kiselina. Ova kiselina se zatim kupluje sa 3-(aminometil)-5-fluoro-4-izopropil-6-metilpiridin-2(1H)-on prema ranije opisanom metodu. Posle prečišćavanja reverzno-faznom HPLC (ACN-H2O sadrži 0.1% mravlju kiselinu) dobija se jedinjenje iz naslova. 1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.77 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.25 (br. s, 1H), 8.07 (dd, J = 2.3, 8.2 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.52 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 1.8 Hz, 1 H), 4.54, (s, 2H), 3.97 (s, 2H), 3.91 (m, 2H), 3.78 (m, 4H), 3.55 (m, 1H), 3.35 (m, 2H), 3.08-3.20 (m, 3H), 2.81 (m, 4H), 2.36 (s, 3H), 2.24 (d, J = 2.9 Hz, 3H), 1.60-1.77 (m, 4H), 1.37 (dd, J = 1.5, 7.0 Hz, 6H), 0.90 (t, J = 6.9 Hz, 3H). MS (ES) (M+H) 620.6.
Primer 198: Protokoli biotestova i opšti metodi Protokol za testove sa PRC2 enzimima divljeg-tipa i mutantima
[1166] Opšti materijali. S-adenozilmetionin (SAM), S-adenozilhomocistein (SAH), bicin, KCl, Tween20, dimetilsulfoksid (DMSO) i želatin iz goveđe kože (BSG), maksimalne moguće čistoće, nabavljaju se od Sigma-Aldrich. Ditiotreitol (DTT) se nabavlja od EMD.<3>H-SAM, sa specifičnom aktivnošću od 80 Ci/mmol, nabavlja se od American Radiolabeled Chemicals. Streptavidinske ploče za ispiranje (flashplates) sa 384 bunarčića nabavljaju se od PerkinElmer.
[1167] Supstrati. Peptidi reprezentativni za humane histonske H3 rezidue 21-44, koji sadrže nemodifikovani lizin 27 (H3K27me0) ili dimetilisani lizin 27 (H3K27me2), sintetišu se tako da sadrže C-terminalni G(K-biotin) linker-afinitetni markerski motiv i C-terminalnu amidnu kapu, i nabavljaju se od 21st Century Biochemicals. Ovi peptidi se prečišćavaju tečnom hromatografijom visokih performansi (HPLC) do čistoće od preko 95%, koja je potvrđena tečnom hromatografijom-masenom spektrometrijom (LC-MS). Sekvence su navedene ispod.
H3K27me0: ATKAARKSAPATGGVKKPHRYRPGGK(biotin)-amid (SEQ ID NO: 1)
H3K27me2: ATKAARK(me2)SAPATGGVKKPHRYRPGGK(biotin)-amid (SEQ ID NO: 2)
[1168] Oligonukleozomi iz kokošijih eritrocita prečiste se iz kokošije krvi primenom poznatih postupaka.
[1169] Rekombinantni PRC2 kompleksi. Humani PRC2 kompleksi prečišćavaju se kao 4-komponentni enzimski kompleksi koji se koeksprimiraju u ćelijama Spodoptera frugiperda (sf9) korišćenjem bakulovirusnog ekspresionog sistema. Eksprimirane podjedinice su bile EZH2 divlji-tip (NM_004456) ili EZH2 Y641F, N, H, S ili C mutanti izvedeni iz konstrukta EZH2 divlji-tip, EED (NM_003797), Suz12 (NM_015355) i RbAp48 (NM_005610). EED podjedinica sadrži N-terminalni FLAG marker koji se koristi sa ciljem da se prečisti celi 4-komponentni kompleks iz lizata sf9 ćelija. Čistoća kompleksa je iznosila 95% ili više, što je određeno pomoću analize SDS-PAGE i Agilent Bioanalyzer. Stok koncentracije enzima (uopšteno, 0.3-1.0 mg/mL) određene su uz pomoć Bradfordovog testa u odnosu na standard, odnosno goveđi serum albumin (BSA).
[1170] Opšti postpak za PRC2 enzimske testove na peptidnim supstratima. Testovi se izvode u puferu koji se sastoji od 20 mM bicina (pH=7.6), 0.5 mM DTT, 0.005% BSG i 0.002% Tween20, a priprema se neposredno na dan upotrebe. Jedinjenja u 100% DMSO (1 µL) nanose se na polipropilenske ploče sa V-dnom i 384 bunarčića (Greiner) uz pomoć Platemate 2 x 3 koji je opremljen glavom sa 384 pipetirajućih kanala (Thermo). DMSO (1 µL) se dodaje u kolone 11, 12, 23, 24, redovi A-H kao kontrola sa maksimalnim signalom, a SAH, koji je poznati proizvod i inhibitor PRC2 (1 µL), dodaje se u kolone 11,12, 23, 24, redovi I-P kao kontrola sa minimalnim signalom. Koktel (40 µL) koji sadrži PRC2 enzim divljeg-tipa i H3K27me0 peptid ili bilo koji od Y641 mutiranih enzima i H3K27me2 peptid dodaju se u Multidrop Combi (Thermo). Jedinjenja se ostave da se inkubiraju sa PRC230 min na 25 °C, a zatim se dodaje koktel (10 µL) koji sadrži mešavinu neradioaktivnih i<3>H-SAM kako bi se reakcija podstakla (finalna zapremina = 51 µL). U svim slučajevima, finalne koncentracije su kako sledi: divlji-tip ili mutirani PRC2 enzim bio je 4 nM, SAH u kolonama sa minimalnim signalom bio je 1 mM, a DMSO koncentracija je bila 1%. Finalne koncentracije ostalih komponenata su navedene u Tabeli 2, u nastavku ovog teksta. Testovi se prekidaju dodavanjem neradioaktivnog SAM (10 µL) do finalne koncentracije od 600 µM, koji razređuje<3>H-SAM do nivoa kada se više ne detektuje njegova ugradnja u peptidni supstrat. 50 µL-ske reakcije na polipropilenskoj ploči sa 384 bunarčića prenesu se na ploče za ispiranje sa 384 bunarčića, a biotinilosani peptidi se ostave da se vežu na streptavidinsku površinu tokom najmanje 1 h pre ispiranja tri puta pomoću 0.1% Tween20 u aparatu za ispiranje ploča Biotek ELx405. Ploče su zatim očitavaju u čitaču ploča PerkinElmer TopCount kako bi se izmerila količina<3>H-obeleženog peptida vezanog za površinu ploča, što se meri kao dezintegracija po min (dpm), ili se alternativno označava kao udar po min (cpm).
Tabela 2: Finalne koncentracije komponenata za svaku varijaciju testa na bazi EZH2 identiteta (divlji tip ili Y641 mutirani EZH2)
[1171] Opšti postupak testa sa PRC2 enzimom divljeg-tipa na supstratu od oligonukleozoma. Ovaj test se izvodi u puferu koji sadrži 20 mM bicina (pH=7.6), 0.5 mM DTT, 0.005% BSG, 100 mM KCl i 0.002% Tween20, a koji je pripremljen na dan upotrebe. Jedinjenja u 100% DMSO (1 µL) se nanose na ploče od polipropilena sa 384 bunarčića (Greiner) uz pomoć Platemate 2 x 3 koji je opremljen glavom sa 384 pipetirajućih kanala (Thermo). DMSO (1 µL) se dodaje u kolone 11, 12, 23, 24, u redove A-H kao kontrola sa maksimalnim signalom, a SAH, koji je poznati proizvod i inhibitor PRC2 (1 µL), dodaje se u kolone 11, 12, 23, 24, redovi I-P kao kontrola za minimalni signal. Koktel (40 µL) koji sadrži PRC2 enzim divljeg tipa iz oligonukleozoma iz kokošijih eritrocita dodaje se uz pomoć Multidrop Combi (Thermo). Jedinjenja se ostave da se inkubiraju sa PRC2 tokom 30 min na 25 °C, a tada se dodaje koktel (10 µL) koji sadrži mešavinu neradioaktivnog i<3>H-SAM sa ciljem inicijacije reakcije (finalna zapremina = 51 µL). Finalne koncentracije su bile kako sledi: PRC2 enzim divljeg tipa je bio 4 nM, neradioaktivni SAM je bio 430 nM, 3H-SAM je bio 120 nM, olignonukleozom iz kokošijih eritrocita je bio 120 nM, SAH u kolonama sa minimalnim signalom je bio 1 mM, a koncentracija DMSO je bila 1%. Test se prekida dodavanjem neradioaktivnog SAM (10 µL) do finalne koncentracije od 600 µM, koji razređuje<3>H-SAM do nivoa kada se više ne detektuje njegova ugradnja u olignonukleozom iz kokošijih eritrocita.50 µL-ske reakcije na ploči od polipropilena sa 384 bunarčića prenesu se na ploču za ispiranje sa 384-bunarčića, a nukleozomi iz kokošijih eritrocita se imobilišu na površinu ploče, koja se tada ispira tri puta korišćenjem 0.1% Tween20 u aparatu za ispiranje ploča Biotek ELx405. Ploče se zatim očitavaju u aparatu PerkinElmer TopCount sa ciljem da se izmeri količina<3>H-obeleženih oligonukleozoma iz kokošijih eritrocita na površini ploča za ispiranje, što se meri kao dezintegracija po min (dpm), ili se alternativno, označava kao udar po min (cpm).
Izračunavanje % inhibicije
[1172]
[1173] Pri čemu je dpm = dezintegracija po min, cmpd = signal u testnom bunarčiću, a min i maks su odgovarajuće kontrole sa minimalnim i maksimalnim signalom.
Četvoroparametarsko podešavanje IC50
[1175] Pri čemu je obično dozvoljeno da vrh i dno variraju, ali mogu da se fiksiraju na 100 ili 0 uz pomoć 3-parametarskog podešavanja. Uobičajeno se dozvoljava da Hill-ov koeficijent varira, ali može da se fiksira na 1 uz pomoć 3-parametarskog podešavanja. Y predstavlja % inhibicije, a X je koncentracija jedinjenja.
[1176] IC50vrednosti za testove sa PRC2 enzimom na peptidnim supstratima (na primer, EZH2 divlji tip i Y641F) prikazane su u Tabeli 3, dole.
Test WSU-DLCL2 metilacije
[1177] Ćelijska suspenzija WSU-DLCL2 nabavlja se od DSMZ (German Collection of Microorganisms and Cell Cultures, Braunschweig, Nemačka). Medijum RPMI/Glutamaks, penicilin-streptomicin, goveđi fetalni serum inaktivisan toplotom, i D-PBS nabavljaju se od Life Technologies, Grand Island, NY, SAD. Pufer za ekstrakciju i pufer za neutralisanje (5x) nabavljaju se od Active Motif, Carlsbad, CA, SAD. Zečje antitelo na histon H3 nabavlja se od Abcam, Cambridge, MA, SAD. Zečje antitelo protiv H3K27me3 i HRP-konjugovani antizečji-IgG nabavljaju se od Cell Signaling Technology, Danvers, MA, SAD. TMB "super osetljivi" supstrat nabavlja se od BioFX Laboratories, Owings Mills, MD, SAD. Goveđi serum albumin koji ne sadrži IgG nabavlja se od Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA, SAD. PBS sa Tween (10x PBST) nabavlja se od KPL, Gaithersburg, MD, SAD. Sumporna kiselina se nabavlja kod Ricca Chemical, Arlington, TX, SAD. Ploče za Immulon ELISA nabavljaju se od Thermo, Rochester, NY, SAD. Ploče sa V-dnom za ćelijsku kulturu nabavljaju se od Corning Inc., Corning, NY, SAD. Ploče sa V-dnom od polipropilena nabavljaju se od Greiner Bio-One, Monroe, NC, SAD.
[1178] Ćelijska suspenzija WSU-DLCL2 održava se u medijumu za rast (RPMI 1640 obogaćenom 10% v/v fetalnim goveđim serumom, koji je inaktivisan toplotom, i sadrži 100 jedinica/mL penicilin-streptomicina) i kultiviše na 37 °C u atmosferi sa 5% CO2.U uslovima ovoga testa, ćelije se inkubiraju u testnom medijumu (RPMI 1640 koji je obogaćen 20% v/v fetalnim goveđim serumom, inaktivisanim toplotom, i sadrži 100 jedinica/mL penicilinstreptomicina) na 37 °C u atmosferi sa 5% CO2na šejkeru za ploče.
[1179] WSU-DLCL2 ćelije se zaseju u testni medijum u koncentraciji od 50000 ćelija po mL na pločama za kulturu ćelija sa V-dnom i 96 bunarčića, sa 200 µL suspenzije u svakom bunarčiću. Jedinjenje (1 µL) iz ploča sa 96 bunarčića dodaje se direktno na ploče sa V-dnom. Ploče se inkubiraju na šejkeru za mikrotitarske ploče na 37 °C uz 5% CO2tokom 96 h. Posle četiri dana inkubacije, ploče se centrifugiraju na 241 x g tokom pet min, i medijum se pažljivo aspirira iz svakog bunarčića ploče sa ćelijama, bez narušavanja konzistencije ćelijskog peleta. Pelet se ponovo suspenduje u 200 µL DPBS, i ploče se ponovo centrifugiraju na 241 x g tokom pet min. Supernatant se aspirira pa se na svaku ploču dodje hladan (4 °C) pufer za ekstrakciju (100 µL). Ploče se inkubiraju na 4 °C u orbitalnom šejkeru tokom dva sataa. Ploče se centrifugiraju na 3427 x g tokom 10 min. Supernatant (80 µL po bunarčiću) se prenese u svoj odgovarajući bunarčić na ploči od polipropilena sa D-dnom i 96 bunarčića. U polipropilensku ploču sa V-dnom, koja sadrži supernatant, dodaje se pufer za neutralizovanje (5x; 20 µL po bunarčiću). Polipropilenske ploče sa V-dnom, koje sadrže sirovi histonski preparat (CHP), inkubiraju se u orbitalnom šejkeru tokom pet minuta. Sirovi histonski preparati se dodaju u svaki odgovarajući bunarčić (2 µL po bunarčiću) u dvostrukim ELISA pločama sa 96 bunarčića, koje sadrže 100 µL pufera za oblaganje (IX PBS BSA 0.05% w/v). Ploče se zatvore i inkubiraju preko noći na 4 °C. Sledećeg dana, ploče se isperu tri puta sa 300 µL IN PBST (po bunarčiću). Bunarčići se blokiraju dva sata korišćenjem 300 µL ELISA razređivača po bunarčiću (PBS (1x) BSA (2% w/v) i Tween20 (0.05% v/v)). Ploče se ispiraju tri puta korišćenjem IX PBST. Za detekciju histona H3, dodaje se 100 µL po bunarčiću antitela protiv histona-H3 (Abcam, ab1791) razblaženog 1:10000 u ELISA razblaživaču. Za detektovanje H3K27 trimetilacije, dodaje se 100 µL (po bunarčiću) antitela protiv H3K27me3 koje je razblaženo 1:2000 u ELISA razblaživaču. Ploče se inkubiraju 90 min na sobnoj temperaturi. Ploče se ispiraju tri puta korišćenjem 300 µL 1X PBST po bunarčiću. Za detektovanje histona H3, po bunarčiću se doda 100 µL HRP-konjugovanog anti-zečjeg IgG antitela razblaženog 1:6000 u ELISA razblaživaču. Za detektovanje H3K27me3, po bunarčiću se doda 100 µL HRP-konjugovanog anti-zečjeg IgG antitela razblaženog 1:4000 u ELISA razblaživaču. Ploče se inkubiraju na sobnoj temperaturi 90 min. Ploče se ispiraju četiri puta korišćenjem IX PBST (300 µL po bunarčiću). U svaki bunarčić doda se 100 µL supstrata TMB. Ploče sa histonom H3 inkubiraju se pet minuta na sobnoj temperaturi. Ploče sa H3K27me3 inkubiraju se 10 min na sobnoj temperaturi. Reakcija se zaustavlja IN sumpornom kiselinom (100 µL po bunarčiću). Apsorbanca svake ploče očitava se na 450 nm.
[1180] Prvo, opseg za svaki bunarčić određuje se pomoću:
[1181] Svaka ploča sadrži osam kontrolnih bunarčića za tretman samo sa DMSO (minimalna inhibicija) kao i osam kontrolnih bunarčića za maksimalnu inhibiciju (pozadinski bunarčići).
[1182] Izračunava se prosek opsega vrednosti za svaki tip kontrole i koristi za određivanje procenta inhibicije u svakom testnom bunarčiću na ploči. Testno jedinjenje se serijski razblaži tri puta u DMSO kako bi se dobilo ukupno deset koncentracija, počevši od 25 µM. Određuje se procenat inhibicije, a IC50krive se konstruišu pomoću rezultata iz dva bunarčića za svaku koncentraciju jedinjenja. IC50vrednosti za ovaj test prikazane su u Tabeli 3 dole.
Analiza ćelijske proliferacije
[1183] Ćelijska suspenzija WSU-DLCL2 se nabavlja od DSMZ (German Collection of Microorganisms and Cell Cultures, Braunschweig, Nemačka). Medijum RPMI/Glutamaks, penicilin-streptomicin, fetalni goveđi serum inaktivisan toplotom nabavljaju se od Life Technologies, Grand Island, NY, SAD. Polipropilenske ploče sa V-dnom i 384 bunarčića nabavljaju se kod Greiner Bio-One, Monroe, NC, SAD. Velike neprozirne ploče za ćelijsku kulturu sa 384 bunarčića nabavljaju se od Perkin Elmer, Waltham, MA, SAD. Cell-Titer Glo<®>se nabavlja od Promega Corporation, Madison, WI, SAD. Čitač ploča SpectraMax M5 se nabavlja od Molecular Devices LLC, Sunnyvale, CA, SAD.
[1184] Ćelijska suspenzija WSU-DLCL2 se održava u medijumu za rast (RPMI 1640 koji je obogaćen sa 10% v/v fetalnog goveđeg seruma, koji je inaktivisan toplotom) uz kultivisanje na 37 °C u atmosferi sa 5% CO2. U uslovima ovoga testa, ćelije se inkubiraju u testnom medijumu (RPMI 1640 obogaćen 20% v/v fetalnim goveđim serumom inaktivisanim toplotom, koji je sadržao 100 jedinica/mL penicilin-streptomicina) na 37 °C uz 5% CO2.
[1185] Za procenu efekta jedinjenja na proliferaciju ćelijske linije WSU-DLCL2, ćelije koje se umnožavaju eksponencijalno zaseju se na bele neprozirne ploče sa 384 bunarčića pri gustini od 1250 ćelija/ml u finalnoj zapremini od 50 µl testnog medijuma. Ploča sa jedinjenjem priprema se uz pomoć devet trostrukih serijskih razblaženja u triplikatu, u DMSO, počevši od 10 mM (finalna vršna koncentracija jedinjenja u ovom testu je bila 20 µM, a koncentracija DMSO je bila 0.2%). Alikvot od 100 nL jedinjenja sa stok-ploče doda se u odgovarajući bunarčić na ploči sa ćelijama. Kontrola sa potpunom (100%) inhibicijom se sastoji od ćelija tretiranih staurosporinom (finalna koncentracija 200 nM), a kontrola bez inhibicije (0%) se sastoji od ćelija koje su bile tretirane korišćenjem samo DMSO. Posle
1
dodavanja jedinjenja, testne ploče se inkubiraju 6 dana na 37 °C uz 5% CO2i relativnu vlažnost >90% tokom 6 dana. Vijabilnost ćelija se meri kvantifikovanjem ATP prisutnog u ćelijskim kulturama uz dodavanje 35 µl Cell Titer Glo® reagensa na ćelijske ploče. Luminiscencija se očitava na aparatu SpectraMax M5. Koncentracija pri kojoj dolazi do inhibicije vijabilnosti ćelija za 50% određuje se pomoću 4-parametarskog podešavanja kriva sa normalizovanim doznim odgovorom. IC50vrednosti za ovaj test takođe su predstavljene u Tabeli 3 dole.
Tabela 3
2
4
Primer 199: Određivanje najniže citotoksične koncentracija (LCC)
[1186] Poznato je da se ćelijska deoba odvija deobom ćelija koja za rezultat ima udvostručivanje broja ćelija posle deobe, u odnosu na broj ćelija pre deobe. Pod stalnim uslovima sredine (na primer, pH, jonska snaga, temperatura, gustoća ćelija, sadržaj proteina i faktora rasta u medijumu i slično) ćelije će proliferisati uzastopnim udvostručivanjem (tj., deobom) u skladu sa sledećom jednačinom, pod uslovom da imaju dovoljno nutrijenata i drugih potrebnih faktora.
gde je Ntbroj ćelija u vremenskoj tački (t) posle otpočinjanja perioda posmatranja, N0je broj ćelija na početku perioda posmatranja, t je vreme od otpočinjanja perioda posmatranja, a tDje vremenski interval potreban da se broj ćelija udvostruči, koji je takođe poznat kao vreme udvostručavanja. Jednačina A.1 može da se konvertuje u pogodniju formu eksponencijalne jednačine sa bazom e, uz korišćenje jednakisti 0.693 = ln(2).
[1187] Konstanta stope ćelijske proliferacije (kp) je obrnuto proporcionalna vremenu udvostručavanja, kako sledi.
.
[1188] Kombinovanje jednačina A.2 i A.3 daje,
[1189] Prema tome, u skladu sa jednačinom A.4, očekuje se da se broj ćelija povećava eksponencijalno tokom vremena (Slika 1 A) tokom ranog perioda ćelijskog rasta koji je poznat kao log-faza rasta. Eksponencijalne jednačine poput jednačine A.4 mogu da se linearizuju logaritmovanjem obeju strana.
[1190] Tako, dijagram ln(Nt) u funkciji vremena očekivano daje rastuću ravnu liniju sa nagibom koji je jednak kpi y-presekom koji je jednak ln(N0), kao šta je ilustrovano na Slici 1B.
[1191] Promene sredinskih uslova mogu da dovedu do promene stope ćelijske proliferacije, koja može da se kvantifikuje kao promena konstante stope proliferacije kp. Među uslovima koji mogu da dovedu do promene stope proliferacije je i uvođenje u sistem nekog antiproliferativnog jedinjenja na početku perioda posmatranja (tj., kod tačke t=0). Kada neko antiproliferativno jedinjenje ima neposredan uticaj na ćelijsku proliferaciju, očekivano je da će dijagam ln(Nt) u funkciji vremena i dalje biti linearan za sve koncentracije jedinjenja uz opadajuće vrednosti kpza rastuće koncentracije jedinjenja.
[1192] U zavisnosti od mehanističke osnove antiproliferativnog delovanja, neka jedinjenja ne moraju neposredno uticati na stopu proliferacije. Umesto toga, moguć je i period latencije pre nego što se uticaj jedinjenja primeti. U takvim slučajevima, dijagram ln(Nt) u funkciji vremena može da bude bifazan, a vremenska tačka pri kojoj uticaj jedinjenja započinje može da se identifikuje kao tačka preloma između faza (Slika 2). Bez obzira na to da li je uticaj jedinjenja na proliferaciju neposredan ili započinje posle perioda latencije, konstanta stope proliferacije za svaku koncentraciju jedinjenja se definiše pomoću nagiba krive ln(Nt) u odnosu na vreme od tačke pri kojoj uticaj jedinjenja započinje prema kraju perioda posmatranja u eksperimentu.
[1193] Jedinjenje koje se daje rastućim ćelijama može da utiče na posmatranu proliferaciju na jedan od dva opšta načina: inhibiranjem naredne deobe ćelije (citostaski) ili ubijanjem ćelije (citotoksično). Ako je jedinjenje citostatsko, povećanje koncentracije jedinjenja smanjuje vrednost kpdo prestanka ćelijske deobe. Kod te tačke, stopa ćelijske deobe, a prema tome i vrednost kp, iznosiće nula. Ako je, sa druge strane, jedinjenje citotoksično, tada će se vrednost kpsastojati od konstanti za dve stope: konstante stope za nastavljenu ćelijsku deobu u prisustvu jedinjenja (kg) i konstante stope za ubijanje ćelija pomenutim jedinjenjem (kd). Ukupna konstanta stope za proliferaciju kod fiksne koncentracije jedinjenja će tako biti razlika između apsolutne vrednosti suprotnih konstanti stope.
[1194] Kod koncentracija jedinjenja kod kojih stopa ćelijskog rasta prevazilazi stopu ubijanja ćelija, kpće imati pozitivnu vrednost (tj., kp>0). Kod koncentracija jedinjenja kod kojih je stopa ćelijskog rasta manja od stope za ubijanje ćelija, kpće imati negativnu vrednost (tj., kp<0), a broj ćelija će se smanjivati tokom vremena, što ukazuje na jaku citotoksičnost. Kada se kgtačno podudara sa kd, tada će ukupna konstanta stope proliferacije, kp, imati vrednost nula. Tako možemo da definišemo najnižu citotoksičnu koncentraciju (LCC) kao koncentraciju jedinjenja koja daje vrednost kpjednaku nuli, jer će bilo koja koncentracija koja je veća od toga dovesti do jasno vidljive citotoksičnosti. Nota bene: kod koncentracija ispod LCC, verovatno nastupa proces ubijanja ćelija, ali sa stopom koja je manja od proliferacije rezidulanih ćelija. Ovde navedeni tretman nema za nameru da definiše biološke detalje delovanja jedinjenja. Umesto toga, cilj je jedino da se definiše praktični parametar uz pomoć kojeg može da se objektivno kvantifikuje koncentracija jedinjenja pri kojoj stopa ubijanja ćelija nadvladava novi ćelijski rast. Zaista, LCC predstavlja prelomnu tačku ili kritičnu koncentraciju iznad koje se primećuje prava citotoksičnost, a ne citotoksičnu koncentraciju per se. U tom pogledu, LCC može da se posmatra kao i druga fizička metrika za prelomnu tačku, poput kritične micelarne koncentracije (CMC) koja se koristi za određivanje koncentracije lipida, deterdženta ili drugih surfaktanata, iznad koje se svi molekuli ugrađuju u micelarne strukture.
[1195] Tradicionalno, uticaj antiproliferativnih jedinjenja na ćelijski rast se uobičajeno kvantifikuje uz pomoć IC50vrednosti koja se definiše kao koncentracija jedinjenja koja smanjuje stopu ćelijske proliferacije za pola od one kada se ne primenjuje pomenuto jedinjenje (tj., kada se koristi kontrola koja sadrži samo prenosnik ili rastvarač; Slika 2). IC50, međutim, ne dozvoljava istraživaču da razlikuje citostatska od citotoksičnih jedinjenja. Nasuprot tome, LCC omogućava jednostavno razlikovanje pomenutih svojstava jedinjenja, a dodatno kvantifikuje i koncentraciju kod koje je javlja tranzicija prema jakom citotoksičnom ponašanju.
[1196] Ako se vreme posmatranja ograniči na prozor između početka uticaja (koji je definisan iznad i na Slici 2) i kraja eksperimenta, tada će podaci generalno odgovarati linearnoj jednačini kada su prikazani preko ln(Nt) u funkciji vremena (vidi gore). Iz tog tipa podešavanja, vrednost kpmože da se odredi za svaku koncentraciju testnog jedinjenja. Ponovno prikazivanje vrednosti kpu funkciji koncentracije jedinjenja ([I]) dovešće do krive u formi opadajuće izoterme, sa maksimalnom vrednošću kod [I] = 0 za kmaks(definisano uz pomoć kontrole sa prenosnikom ili rastvaračem) i minimalnom vrednošćui kod minimalne koncentracije jedinjenja kmin(Slika 3).
gde je Imidkoncentracija jedinjenja koja daje vrednost kpkoja se nalazi između vrednosti kmaksi kmin(primetiti da vrednost Imidnije ista kao IC50, osim u slučaju potpuno i samo citostatskog jedinjenja). Tako, uklapanje podešenih podataka u jednačinu A.7 obezbeđuje procenu kmaks, kmini Imid. Ako je jedinjenje citostatsko (kao što je gore definisano), vrednost kminne može da
4
bude manja od nule. Kod citotoksičnih jedinjenja, kminće biti manja od nule, a apsolutna vrednost kminće direktno odražavati efikasnost jedinjenja da ubija ćelije.
[1197] Podešene vrednosti izvedene iz jednačine A.7, mogu takođe da se koriste za određivanje vrednosti LCC. Po definiciji, kada je [I] = LCC, kp= 0. Tako, u ovim uslovima jednačina A.7 postaje.
[1198] Algebarsko preuređivanje jednačine A.8 daje jednačinu za LCC.
[1199] Ova analiza je jednostavna za implementaciju uz pomoć programa za nelinearno podešavanje krive i može da se primeni tokom ćelijskih testova koji ispituju delovanje jedinjenja tokom otkrivanja i razvoja leka. Na taj način, LCC može da obezbedi vrednu metriku za procenu SAR (odnos struktura-aktivnost) testnog jedinjenja.
[1200] Tabela 4, dole, prikazuje LCC i IC50podatke za neka jedinjenja pronalaska na ćelijama WSU-DLCL2.
Tabela 4
4 1
Primer 200: In vivo testovi
Miševi
[1201] Ženke miševa soja Fox Chase SCID<®>(CB17/Icr-Prkdcsid/IcrIcoCrl, Charles River Laboratories) ili atimusnih nude miševa (Crl:NU(Ncr)-Foxn1nu, Charles River Laboratories) bile su stare 8 nedelja, a raspon telesne težine (BW) je varirao od 16.0-21.1 g tokom D1 studije. Životinje su dobijale vodu ad libitum (reverzna osmoza: 1 ppm Cl) uz režim ishrane NIH 31 Lab Diet® (modifikovano i ozračeno), koji je obuhvatao 18.0% sirovih proteina, 5.0% sirove masti, i 5.0% sirovih vlakana. Miševi su bili smešteni na ozračenoj Enrich-o'cobs<™>"šuški" u statičkim mikroizolatorima uz ciklus svetla od 12 h, na 20-22 °C (68-72° F) uz vlažnost od 40-60%. Svi postupci su uvažavali preporuke Guide for Care and Use of Laboratory Animals koji se tiču ograničavanja kretanja, smeštaja, hirurških procedura, regulacije hrane i tečnosti i veterinarske nege.
Kultura tumorskih ćelija
[1202] Ćelijske linije humanog limfoma su nabavljene iz različitih izvora (ATCC, DSMZ), na primer, WSU-DLCL2 su nabavljene od DSMZ. Ćelijske linije se održavaju kao suspenzije u medijumu RPMI-1640 koji sadrži 100 jedinica/mL natrijumove soli penicilina G, 100 g/mL streptomicina, i 25 g/mL gentamicina. Medijum je obogaćen 10% fetalnim goveđim serumom i 2 mM glutaminom. Ćelije se kultivišu u bocama za kulturu tkiva u vlažnom inkubatoru na 37 °C, u atmosferi sa 5% CO2i 95% vazduha.
In Vivo implantacija tumora
[1203] Ćelijske linije humanog limfoma, na primer ćelije WSU-DLCL2, se sakupe tokom srednje log-faze rasta, pa se resuspenduju u PBS sa 50% Matrigel™ (BD Biosciences). Svaki miš je primio 1x10<7>ćelija (0.2 mL ćelijske suspenzije) subkutano u desni bok. Tumori se
4 2
mere nonijusom u dve dimenzije sa ciljem praćenja njihovog rasta do dostizanja željene srednje zapremine u rasponu od 80 do120 mm<3>. Veličina tumora, u mm<3>, određuje se na osnovu:
gde je w = širina, a l = dužina tumora u mm. Težina tumora može da se proceni na osnvu pretpostavke da 1 mg odgovara 1 mm3 zapremine tumora. Posle 10-30 dana, miševi sa tumorima zapremine 108-126 mm3 su sortirani u grupe za tretman u kojima je srednja zapremina tumora bila 117-119 mm3.
Testni artikli
[1204] Testna jedinjenja su uskladištena na sobnoj temperaturi zaštićena od svetla. Tokom svakog dana tretmana, pripremaju se sveže formulacije jedinjenja (na primer, formulacija tri-HCl soli Jedinjenja 44 ili tri-HCl soli Jedinjenja 87), suspendovanjem praha u 0.5% natrijum karboksimetilcelulozi (NaCMC) i 0.1% Tween® 80 u dejonizovanoj vodi. Jedinjenje 141 (slobodna baza) se rastvara u sterilnom slanom rastvoru, a pH se podešava do 4.5 svežom HCl, svakog dana. Prenosnici, 0.5% NaCMC i 0.1% Tween® 80 u dejonizovanoj vodi ili sterilnom slanom rastvoru sa pH 4.5, koriste se za tretman kontrolnih grupa primenom istog režima tretmana. Formulacije se čuvaju u mraku na 4 °C, pre primene. Ako nije drugačije rečeno, jedinjenja navedena i testirana u ovom eksperiment bila su u formi svojih specifičnih soli pomenutih u ovom paragrafu.
Plan tretmana
[1205] Miševi se tretirju dozama jedinjenja u rasponu od 12.5-600 mg/kg uz korišećenje rasporede TID (tri puta na dan, svakih 8 h), BID (2 puta na dan, svakih 12 h) ili QD (jednom dnevno), tokom više dana, oralnom gavažom (Jedinjenje 44 ili 87) ili intraperitonealnim injektiranjem (Jedinjenje 141). Svaka doza se dostavlja u zapremini od 0.2 mL za miša od 20 g (10 mL/kg), što se podešava prema poslednjoj izmerenoj težini svake pojedinačne životinje. Maksimalna dužina tretmana je bila 28 dana.
Analiza srednje zapremine tumora (MTV) i inhibicije tumorskog rasta (TGI)
4
[1206] Efikasnost tretmana se određuje poslednjeg dana tretmana. MTV(n), srednja zapremina tumora za više životinja, n, koja se određuje tokom poslednjeg dana, određuje se za svaku grupu. Procenat inhibicije rasta tumora (%TGI) može da se definiše na nekoliko načina. Prvo, razlika između MTV(n) odgovarajuće kontrolne grupe i MTV(n) grupe koja je tretirana lekom izražava se kao procenat MTV(n) kontrolne grupe:
[1207] Drugi način za izračunavanje %TGI uzima u obzir promenu veličine tumora od dana 1 do dana n, pri čemu n predstavlja poslednji dan tretmana.
Toksičnost
[1208] Težina životinja se meri dnevno tokom Dana 1-5, a zatim dva puta nedeljno do kraja studije. Miševi se često ispituju kako bi se utvrdili vidljivi znaci bilo kakvih neželjenih efekata tretmana, i njihovo prisustvo se dokumentuje. Prihvatljiva toksičnost maksimalne tolerisane doze (MTD) definiše se kao srednji gubitak telesne težine za grupu koji iznosi manje od 20% tokom testiranja, uz mortalitet povezan sa tretmanom (TR) manji od 10%. Smrt se klasifikuje kao da je TR ako može da se pripiše neželjenom dejstvu samog tretmana, što se može proceniti na osnovu kliničkih znakova i/ili autopsije, ili usled nepoznatih razloga tokom perioda doziranja. Smrt se klasifikuje kao nepovezana sa tretmanom (NTR) ukoliko je bilo dokaza da smrt nije uzrokovana sporednim efektima tretmana. NTR smrti tokom doznog intervala se tipično kategorišu kao NTRa (usled nesreće ili ljudske greške) ili NTRm (usled širenja tumora invazijom i/ili metastazom koji su potvrđeni autopsijom). Oralno tretirane životinje koje umiru usled nepoznatih uzroka tokom perioda doziranja klasifikuju se kao
4 4
NTRu kada nije moguća TR klasifikacija, a autopsija koja bi trebalo da otkloni mogućnost greške pri doziranju, ne može da se izvrši.
Uzorkovanje
[1209] Tokom dana 7 ili 28 studije, miševi se uzorkuju na ranije utvrđen način sa ciljem da se utvrdi ciljana inhibicija tumora. Tumori se sakupljaju od specifikovanih miševa u uslovima bez RNAze i dele se na pola. Tumorsko tkivo iz svake životinje se brzo zamrzava N2i sprašuje pomoću tučka avana.
Statističke i grafičke analize
[1210] Sve statističke i grafičke analize obavljaju se pomoću Prism 3.03 (GraphPad) za Windows. Da bi se testirala statistička značajnost između kontrolne i tretiranih grupa tokom celog trajanja tretmana primenjuju se uzastopni ANOVA testovi praćeni Dunnettovih testom ili dvostrukim ANOVA testom. Rezultati nisu značajni (ns) ako je P>0.05, značajni su (označeno sa "*") ako je 0.01<P<0.05, veoma su značajni ("**") ako je 0.001<P<0.01, i izuzetno su značajni ("***") ako je P<0.001.
Ekstrahovanje histona
[1211] Za izolaciju histona, 60-90 mg tumorskog tkiva se homogenizuje u 1.5 ml pufera za ekstrakciju nukleusa (10 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 25 mM KCl, 1% Triton X-100, 8.6% saharoza, uz Rocheovu tabletu sa inhibitorom proteaze 1836145) i inkubiraju na ledu 5 min. Nukleusi se sakupljaju centrifugiranjem na 600 g tokom 5 min na 4 °C i ispiraju se jednom u PBS. Supernatant se uklanja, a histoni ekstrahuju jedan sat, uz vorteksovanje svakih 15 min u prisustvu 0.4N hladne sumporne kiseline. Ekstrakti se centrifugiraju na 10 000 g 10 min na 4 °C i prenose u epruvetu za mikrocentrifugiranje koja sadrži 10x zapreminu ledeno hladnog acetona. Histoni se precipitiraju na -20 °C tokom 2 h-preko noći, sakupljaju u pelet centrifugiranjem na 10000 g 10 min, i resuspenduju u vodi.
ELISA
[1212] Histoni se pripremaju u ekvivalentnim koncentracijama u puferu za oblaganje (PBS 0.05% BSA) što daje 0.5 ng/µl uzorka, a 100 µl uzorka ili standarda se dodaje u duplikatu na
4
ELISA ploče sa 296 bunarčića (Thermo Labsistems, Immulon 4HBX #3885). Ploče se zatvore i inkubiraju preko noći na 4 °C. Sledećeg dana, ploče se isperu 3x sa 300 µl/bunarčiću PBST (PBS 0.05% Tween 20; 10x PBST, KPL #51-14-02) uz pomoć aparata za ispiranje pločica Bio Tek. Ploče se blokiraju pomoću 300 µl/bunarčiću razblaživača (PBS 2% BSA 0.05% Tween 20), inkubiraju na RT 2 h, i ispiraju 3x korišćenjem PBST. Sva antitela se razblaže u razblaživaču. Na svaku ploču doda se 100 µl/bunarčiću anti-H3K27me3 antitela (CST #9733, 50% stok u glicerolu, 1:1000) ili anti-total H3 antitela (Abcam ab1791, 50% glicerol, 1:10000). Ploče se inkubiraju 90 min na RT pa se ispiraju 3x pomoću PBST. Doda se 100 µl/bunarčiću anti-Rb-IgG-HRP antitela u razblaženju 1:2000 (Cell Signaling Technology, 7074) na H3K27Me3 ploču i istog antitela u razblaženju 1:6000 na H3 ploču, i ploče se inkubiraju 90 min na RT. Ploče se ispiraju 4x korišćenjem PBST. Za detektovanje se doda 100 µl/bunarčiću TMB supstrata (BioFx Laboratories, #TMBS), i ploče se inkubiraju u tami na RT 5 min. Reakcija se zaustavlja uz pomoć 100 µl/bunarčiću IN H2SO4. Apsorbanca na 450 nm očitava se na aparatu za očitavanje ploča SpectaMax M5.
Rezultati:
7-dnevna PD studija sa Jedinjenjem 87
[1213] Da bi se ispitalo da li Jedinjenje 87 može da moduliše marker H3K27me3 histona u tumorima in vivo, miševi koji nose WSU-DLCL2 tumor (ksenokalem) tretiraju se Jedinjenjem 87 primenom tretmana BID (200 mg/kg) ili QD (400 mg/kg) ili samo uz pomoć prenosnika (BID raspored) tokom 7 dana. Svaka grupa se sastojala od 4 životinje. Životinje se žrtvuju 3 h posle poslednje doze, a tumor se čuva u smrznutom stanju kao šta je gore opisano. Posle izolacije histona, uzorci se nanose na pločice iz ELISA testa uz korišćenje antitela usmerenih na trimetilovano stanja histona H3K27 (H3K27me3) ili na ukupni histon H3. Na osnovu ovih podataka izračunava se odnos globalno metilovanog u odnosu na ukupni H3K27. Slika 4 pokazuje srednje odnose globalne metilacije za sve grupe, koji su izmereni primenom ELISA i ukazuje na ciljanu inhibiciju u rasponu od pribl. 62.5% (400 mg/kg QD x 7) i 37.5% (200 mg/kg BID x 7), u poređenju sa prenosnikom.
28-dnevna studija efikasnosti sa Jedinjenjem 141 na WSU-DLCL2 modelu sa ksenokalemom
4
[1214] Da bi se testiralo da li Jedinjenje 141 može in vivo da podstakne inhibiciju tumorskog rasta, miševi koji nose WSU-DLCL2 ksenokalem tretiraju se Jedinjenjem 141 u dozama od 12.5, 25 ili 50 mg/kg, QD tokom 28 dana, intraperitonealnim injektiranjem. Zapremina tumora i telesna težina određuju se dva puta nedeljno. Jedinjenje 141 se dobro toleriše pri svim dozama uz minimalni gubitak telesne težine. Paralelni kohort miševa (n=4 po grupi) tretira se istim dozama tokom 7 dana, a miševi se žrtvuju 7. dana, 3 h posle poslednje doze sa ciljem uzimanja uzoraka tumora i procene ciljane inhibicije. Slika 5 pokazuje rezultate ELISA merenja globalne metilacije H3K27me3 koja je normalizovana u odnosu na ukupni H3. Primećuje se dozno-zavisna ciljana inhibicija u rasponu od 39% do 67%, u poređenju sa prenosnikom.
[1215] Slika 6 prikazuje rast tumora tokom 28 dana tretmana kod grupa tretiranih prenosnikom ili Jedinjenjem 141.
[1216] Efekt primene korišćenog prenosnika, unetog intraperitonealnim putem, može da se primeti jer je tumorski rast bio sporiji u grupi sa prenosnikom u odnosu na netretiranu grupu. Samo je grupa sa najvišom dozom Jedinjenja 141 (50 mg/kg QD x 28) pokazala inhibiciju tumorskog rasta u odnosu na grupu sa prenosnikom (33% izračunato od dana 1, 43% izračunato od dana 7). Rast tumora nije bio statistički značajan u poređenju sa prenosnikom, kada se koristi ANOVA test za ponavljana merenja, praćena Dunnettovim testom, ali terminalna veličina tumora je bila značajno manja kod grupe tretirane primenom 50 mg/kg (DQ), u poređenju sa grupom koja je tretirana samo prenosnikom (dvostruka ANOVA, Bonferronijev test, p<0.0001).
Studija efikasnosti sa rastućim dozama Jedinjenja 44 na modelu sa WSU-DLCL2 ksenokalemom
[1217] Sa ciljem da se testira da li jedinjenje 44 može da indukuje antitumorski efekat in vivo, miševi sa WSU-DLCL2 ksenokalemom tretiraju se Jedinjenjem 44 u dozama od 37.5, 75 ili 150 mg/kg, primenom TID režima, tokom 28 dana. Svaka grupa se sastojala od po 12 miševa za potrebe ispitivanja efikasnosti (jedan deo eksperimenta). Paralelni kohort je doziran tokom 7 dana istim dozama, po istom režimu, da bi se procenila ciljana inhibicija posle 7 dana (n=6 po grupi). Slika 7 prikazuje rast tumora tokom tretmana od 28 dana kod grupa tretiranih prenosnikom i jedinjenjem 44. Može da se primeti jasna dozno zavisna inhibicija rasta tumora. Samo se grupa tretirana najvećom dozom statistički razlikuje od grupe tretirane prenosnikom kako je pokazanoo korišćenjem ANOVA testa za ponavljana merenja i
4
Dunnettovog testa. Inhibicija rasta tumora u grupi sa najvećom dozom je bila 58% (od dana 1) ili 73% (od dana 7) u odnosu na grupu sa prenosnikom.
[1218] Histoni se izoluju iz tumora sakupljenih posle 7 dana doziranja (paralelni PD kohort) i na kraju studije tokom dana 28 kod kohorta za ispitivanje efikasnosti (3 h posle poslednje doze za oba kohorta). Slika 8 prikazuje da se metilni obeleživač H3K27me3 moduliše tretmanom na dozno-zavisan način i da postoji statistički značajno bolja ciljana inhibicija tokom dana 28 u odnosu na dan 7 kod grupe tretirane najvišom dozom (150 mg/kg; TID).
Studija efikasnosti sa Jedinjenjem 44 pri različitim rasporedima doziranja
[1219] Sa ciljem da se proceni da li će Jedinjenje 44 dovesti do inhibicije rasta tumora primenom drugačijih rasporeda doziranja (različiti od TID), studija efikasnosti na modelu sa WSU-DLCL2 ksenokalemom izvodi se tako da se međusobno upoređuju dozni rasporedi TID, BID i QD. Svaka grupa se sastojala od 12 životinja, i miševi su tretirani 28 dana. Slika 9 prikazuje rast tumora tokom tretmana od 28 dana kod grupa tretiranih prenosnikom i Jedinjenjem 44. Inhibicija rasta tumora može da se postigne pri svim dozama i svim rasporedima (Tabela 5 dole: sažetak inhibicija rasta tumora koje su indukovane različitim rasporedima doziranja Jedinjenja 44 u modelima sa WSU-DLXC2 ksenokalemima). Iako su samo rasporedi TID (150 mg/kg) i BID (225 mg/kg) pokazivali statistički značajnu razliku u odnosu na prenosnik (ANOVA za ponavljana merenja i Dunnettov test), sve terminalne veličine tumora iz grupa tretiranih Jedinjenjem 44 bile su statistički različite od grupe sa prenosnikom (dvostruka ANOVA i Bonferronijev test; p<0.0001).
Tabela 5
[1220] Na dan 28, miševi se žrtvuju, a tumori izoluju 3 h posle poslednje doze, da bi se procenila ciljana inhibicija. Slika 10 prikazuje da tretman Jedinjenjem 44 ostvaruje slične nivoe ciljane inhibicije, pri svim dozama i rasporedima doziranja.
4
Example 201: Antikancerski efekat Jedinjenja 44, na mišjem modelu sa ksenokalemom KARPAS-422 humanog difuznog B-krupnoćelijskog limfoma
[1221] Jedinjenje 44 (u vidu HCl soli) ispituje se u pogledu posedovanja antikancerske aktivnosti, u mišjem modelu sa KARPAS-422 ksenokalemom, pri čemu je kalem bio humani difuzni B-krupnoćelijski limfom. Ukoliko nije drugačije navedeno, Jedinjenje 44 testirano u ovom eksperimentu bilo je u formi svoje tri-HCl soli. 45 ženki miševa soja CAnN.Cg-Foxnlnu/CrlCrlj (Charles River Laboratories, Japan) koje su nosile KARPAS-422 tumore, čija je srednja zapremina tumora (TV) dostigla približno 150 mm<3>, odabrano je na osnovu TV, i zatim nasumično raspoređeno u pet grupa. Oralna primena Jedinjenja 44 (80.5, 161, 322, i 644 mg/kg) ili prenosnika započela je tokom dana 1. Jedinjenje 44 je davano jednom dnevno na dan 1 i dan 29, a dva puta dnevno tokom perioda od dana 2 do dana 28. Primenjivana zapremina (0.1 mL/10 g telesne težine) izračunata je na osnovu telesne težine pre primene. TV i telesna težina određivani su dva puta nedeljno. Dizajn eksperimenta prikazan je u Tabeli 6.
Tabela 6. Šema doziranja
[1222] TV izračunava se merenjem nonijusom, uz primenu formule za određivanje zapremine izduženog elipsoida (LxW<2>)/2 pri su čemu L i W mere za odgovarajuću ortogonalnu dužinu i širinu (mm).
[1223] Podaci se izražavaju kao srednja vrednost ± standardna devijacija (SD). Razlike u TV između grupa koje su tretirane prenosnikom ili Jedinjenjem analiziraju se uz pomoć analize varijanse ponavljanih merenja (ANOVA) koja je praćena Dunnettovim testom. Vrednost P<0.05 (dvostrano) se smatra statistički značajnom. Statističke analize su sprovedene uz pomoć programa Prism 5, verzija 5.04 (GraphPad Software, Inc., CA, SAD).
4
[1224] Tokom perioda tretmana, doza od 644 mg/kg je dovela do smrti dva od devet miševa. Za maksimalnu tolerisanu dozu određena je doza od 322 mg/kg, pri kojoj nije primećen mortalitet ili gubitak telesne težine tokom studije (Slika 11 i Tabela 7).
[1225] Jedinjenje 44 je pokazalo značajne antitumorske efekte protiv humanog difuznog B-krupnoćelijskog limfoma (KARPAS-422 ksenokalem) pri svim dozama, na dan 29, na doznozavisan način (Slika 12). Efekat inhibicije rasta tumora primećen je pri dozi od 80.5 mg/kg. Regresija tumora primećena je pri dozama od 161 i 322 mg/kg.
Tabela 7. Efekat Jedinjenja 44 na mortalitet miševa
EKVIVALENTI
[1226] Pronalazak može da bude izveden i kroz druge specifične forme bez značajnog odstupanja od njegovih osnovnih karakteristika. Prethodne primere izvođenja, prema tome, treba smatrati ilustrativnim, a ne ograničavajućim faktorima pronalaska opisanog u ovom tekstu. Okvir pronalaska je, prema tome, naznačen priloženim patentnim zahtevima, a ne samo prethodnim opisom, i sve promene do kojih dolazi unutar smisla i opsega patentnih zahteva obuhvaćene su njima.
LISTA SEKVENCI
[1227]
<110> EPIZYME, INC.
<120> ARIL- ILI HETEROARIL-SUPSTITUISANA BENZENSKA JEDINJENJA
<130> 41478-507001WO
41

Claims (15)

  1. PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje, naznačeno time, što ima Formulu (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju ili prevenciji ćelijskih proliferativnih poremećaja hematološkog sistema:
    gde X1je N ili CR11; X2je N ili CR13; Z je NR7R8, OR7, S(O)nR7, ili CR7R8R14, pri čemu je n 0, 1, ili 2; svaki od R1, R5, R9, i R10, je nezavisno H ili C1-C6alkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, COOH, C(O)O-C1-C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril; svaki od R2, R3, i R4, je nezavisno -Q1-T1, pri čemu je Q1veza ili C1-C3alkil linker opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksil ili C1-C6alkoksi, i T1je H, halo, hidroksil, COOH, cijano, ili RS1, gde je RS1C1-C3alkil, C2- C6alkenil, C2- C6alkinil, C1-C6alkoksil, C(O)O-C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, i RS1je opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, okso, COOH, C(O)O-C1-C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril; R6je C6-C10aril ili 5- ili 6-člani heteroaril, od kojih je svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2, pri čemu je Q2veza ili C1-C3alkil linker opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksil ili C1-C6alkoksi, i T2je H, halo, cijano, -ORa,-NR aRb, -(NRaRbRc) A- ,C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa,-S(O)2Ra, -S(O)2NRaRb, ili RS2, gde je svaki od Ra, Rb, i Rc, nezavisno H ili RS3, A- je farmaceutski prihvatljivi anjon, svaki od RS2i RS3, je nezavisno C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, ili Rai Rb, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 12-člani heterocikloalkil prsten koji ima 0 ili 1 dodatni heteroatom, i svaki od RS2, RS3, i 4 do 12-članog heterocikloalkil prstena koji formiraju Rai Rb, je opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3, pri čemu je Q3veza ili C1-C3alkil linker, svaki opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksil ili C1-C6alkoksi, i T3se bira iz grupe koja sadrži halo, cijano, C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6-člani heteroaril, ORd, COORd, -S(O)2Rd, -NRdRe, i -C(O)NRdRe, svaki od Rdi Reje nezavisno H ili C1-C6alkil, ili -Q3-T3je okso; ili svaki od dva susedna -Q2-T2, zajedno sa atomima za koje su prikačeni formiraju 5- ili 6-člani prsten koji opciono sadrži 1-4 heteroatoma odabrana između N, O i S i opciono je supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, COOH, C(O)OC1-C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril; R7je -Q4-T4, gde je Q4veza, C1-C4alkil linker, ili C2-C4alkenil linker, svaki linker je opciono supstituisan sa halo, cijano, hidroksil ili C1-C6alkoksi, i T4je H, halo, cijano, NRfRg, -ORf, -C(O)Rf, -C(O)ORf, -C(O)NRfRg, -C(O)NRfORg, -NRfC(O)Rg, -S(O)2Rf, ili RS4, gde je svaki od Rfi Rg, nezavisno H ili RS5, svaki od RS4i RS5, je nezavisno C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, i svaki od RS4i RS5je nezavisno supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5, pri čemu je Q5veza, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2, ili C1-C3alkil linker, Rkje H ili C1-C6alkil, i T5je H, halo, C1-C6alkil, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6- C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6-člani heteroaril, ili S(O)qRqgde je q 0, 1, ili 2 i Rqje C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, i T5je opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, C1-C6alkil, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril izuzev kada je T5H, halo, hidroksil, ili cijano; ili - Q5-T5je okso; svaki od R8, R11, R12, i R13, je nezavisno H, halo, hidroksil, COOH, cijano, RS6, ORS6, ili COORS6, gde je RS6C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C8cikloalkil, 4 do 12-člani heterocikloalkil, amino, mono-C1-C6alkilamino, ili di-C1-C6alkilamino, i RS6je opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, COOH, C(O)O-C1-C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, i di-C1-C6alkilamino; ili R7i R8, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 11-člani heterocikloalkil prsten koji ima 0 do 2 dodatna heteroatoma, ili R7i Rs, zajedno sa C atomom za koji su prikačeni, formiraju C3-C8cikloalkil ili 4 do 11-člani heterocikloalkil prsten koji ima 1 do 3 heteroatoma, i svaki od 4 do 11-članih heterocikloalkil prstenova ili C3-C8cikloalkila koje formiraju R7i R8je opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q6-T6, pri čemu je Q6veza, C(O), C(O)NRm, NRmC(O), S(O)2, ili C1-C3alkil linker, Rmje H ili C1-C6alkil, i T6je H, halo, C1-C6alkil, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, 5- ili 6-člani heteroaril, ili S(O)pRpgde je p 0, 1, ili 2 i Rpje C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili 5- ili 6-člani heteroaril, i T6je opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, C1-C6alkil, hidroksil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12-člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril osim kada je T6H, halo, hidroksil, ili cijano; ili -Q6-T6je okso; i R14je odsutan, H, ili C1-C6alkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata odabranih iz grupe koja sadrži halo, hidroksil, COOH, C(O)O-C1-C6alkil, cijano, C1-C6alkoksil, amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, 4 do 12- člani heterocikloalkil, i 5- ili 6-člani heteroaril.
  2. 2. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što je R6fenil supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2; ili R6je 5- ili 6-člani heteroaril koji sadrži 1-3 dodatna heteroatoma odabrana između N, O, i S i opciono je supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2, poželjno 5- ili 6-člani heteroaril je piridinil, pirazolil, pirimidinil, hinolinil, tetrazolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, izotiazolil, furil, ili tienil, od kojih je svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2.
  3. 3. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-2, naznačeno time, što je T2-NRaRbili-C(O)NRaRb, gde je svaki od Rai Rb, nezavisno H ili C1-C6alkil, ili Rai Rb, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 12- člani heterocikloalkil prsten koji ima 0 ili 1 jedan dodatni heteroatom, C1-C6alkil i 4 do 12-člani heterocikloalkil prsten opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3, i Q2je C1-C3alkil linker opciono supstituisan sa halo ili hidroksil. 41
  4. 4. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-3, naznačeno time, što je R7C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil ili 4 do 12-člani heterocikloalkil, svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5; ili R7je 4 do 12-člani heterocikloalkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5, poželjno R7je piperidinil, tetrahidropiran, tetrahidro-2H-tiopiranil, ciklopentil, ili cikloheksil, svaki opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q5-T5.
  5. 5. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-4, naznačeno time, što su (i) jedan ili više -Q5-T5okso; ili (ii) T5je H, halo, C1-C6alkil, C1-C6alkoksil, C3-C8cikloalkil, C6-C10aril, ili 4 do 12-člani heterocikloalkil; ili (iii) kada je Q5veza, T5je amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, C1-C6alkil, C3-C8cikloalkil, ili 4 do 12-člani heterocikloalkil; ili (iv) kada je Q5CO, S(O)2, ili NHC(O), T5je C1-C6alkil, C1-C6alkoksil, C3-C8cikloalkil, ili 4 do 12-člani heterocikloalkil; ili (v) kada je Q5C1-C3alkil linker, T5je H, C6-C10aril, C3-C8cikloalkil, 4 do 12-člani heterocikloalkil, ili S(O)qRq.
  6. 6. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-5, naznačeno time, što je svaki od R1i R11H.
  7. 7. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-6, naznačeno time, što je svaki od R2i R4, nezavisno H ili C1-C6alkil opciono supstituisan sa amino, mono-C1-C6alkilamino, di-C1-C6alkilamino, ili C6-C10aril, poželjno svaki od R2i R4je metil.
  8. 8. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-7, naznačeno time, što je R12H, metil, etil, etenil, ili halo, R8je H, metil, ili etil, i R13je H ili metil.
  9. 9. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što jedinjenje ima Formulu (Ie):
    poželjno jedinjenje ima Formulu (Ig):
    gde su R2, R4i R12svaki, nezavisno C1-6alkil.
  10. 10. Jedinjenje za upotrebu prema patentnim zahtevima 1 i 9, naznačeno time, što je R6C6-C10aril ili 5- ili 6-člani heteroaril, od kojih je svaki opciono, nezavisno supstituisan jednim ili većim brojem -Q2-T2, gde je Q2veza ili C1-C3alkil linker, i T2je H, halo, cijano, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A- , -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -S(O)2Ra, ili Rs2, gde je svaki od Rai Rb, nezavisno H ili Rs3, svaki od Rs2i Rs3, je nezavisno C1-C6alkil, ili Rai Rb, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 7-člani heterocikloalkil prsten koji ima 0 ili 1 dodatni heteroatom, i svaki od Rs2, Rs3, i 4 do 7-članog heterocikloalkil prstena koji formiraju Rai Rb, je opciono nezavisno supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3, gde je Q3veza ili C1-C3alkil linker i T3je odabran iz grupe koja sadrži halo, C1-C6alkil, 4 do 7-člani heterocikloalkil, ORd, -S(O)2Rd, i -NRdRe, svaki od Rdi Reje nezavisno H ili C1-C6alkil, ili -Q3-T3je okso; ili bilo koja dva susedna -Q2-T2, zajedno sa atomima za koje su prikačeni formiraju 5- ili 6-člani prsten koji opciono sadrži 1-4 heteroatoma koji se biraju između N, O i S.
  11. 11. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 i 9, naznačeno time, što jedinjenje ima Formulu (II): 41
    gde je Q2veza ili metil linker, T2je H, halo, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A- , ili -S(O)2NRaRb, R7je piperidinil, tetrahidropiran, ciklopentil, ili cikloheksil, svaki opciono supstituisan jednim -Q5-T5i R8je etil, poželjno jedinjenje ima Formulu (IIa):
  12. 12. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1, 9, i 11, naznačeno time, što je (i) svaki od Rai Rb, nezavisno H ili C1-C6alkil opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3, (ii) jedan od Rai Rbje H, ili (iii) Rai Rb, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju 4 do 7-člani heterocikloalkil prsten koji ima 0 ili 1 dodatni heteroatom pored N atoma i prsten je opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3, poželjno Rai Rb, zajedno sa N atomom za koji su prikačeni, formiraju azetidinil, pirolidinil, imidazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, triazolidinil, tetrahidrofuranil, piperidinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperazinil, ili morfolinil, i prsten je opciono supstituisan jednim ili većim brojem -Q3-T3, i poželjnije Rai Rb, zajedno sa N atomom za koji su spojeni, formiraju morfolinil.
  13. 13. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što je jedinjenje 41
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  14. 14. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-13, naznačeno time, što se ćelijski proliferativni poremećaj hematološkog sistema karakteriše hiperplazijom, displazijom ili metaplazijom ćelija hematološkog sistema.
  15. 15. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-14, naznačeno time, što se ćelijski proliferativni poremećaj hematološkog sistema bira između: (a) hematološkog kancera; (b) multiplog mijelom; (c) limfoma; (d) ne-Hodgkinovog limfoma; (e) leukemije; (f) akutne limfocitne leukemije, akutne mijelocitne leukemije, hronične limfocitne leukemije, hronične mijelocitne leukemije, hronične mijelogene leukemije ili leukemije mastocita. 41
RS20190065A 2011-04-13 2012-04-13 Aril- ili heteroaril-supstituisana benzenska jedinjenja RS58226B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161474821P 2011-04-13 2011-04-13
US201161499595P 2011-06-21 2011-06-21
EP16172386.1A EP3150580B1 (en) 2011-04-13 2012-04-13 Aryl- or heteroaryl-substituted benzene compounds

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS58226B1 true RS58226B1 (sr) 2019-03-29

Family

ID=46045109

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190065A RS58226B1 (sr) 2011-04-13 2012-04-13 Aril- ili heteroaril-supstituisana benzenska jedinjenja
RS20211082A RS62279B1 (sr) 2011-04-13 2012-04-13 Aril- ili heteroaril-supstituisana benzenova jedinjenja
RS20160706A RS55113B1 (sr) 2011-04-13 2012-04-13 Aril-ili heteroaril-supstituisana benzenska jedinjenja

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20211082A RS62279B1 (sr) 2011-04-13 2012-04-13 Aril- ili heteroaril-supstituisana benzenova jedinjenja
RS20160706A RS55113B1 (sr) 2011-04-13 2012-04-13 Aril-ili heteroaril-supstituisana benzenska jedinjenja

Country Status (35)

Country Link
US (15) US8410088B2 (sr)
EP (5) EP3486234B1 (sr)
JP (6) JP5933686B2 (sr)
KR (8) KR102154946B1 (sr)
CN (2) CN104080769B (sr)
AR (1) AR086008A1 (sr)
AU (1) AU2012242595B2 (sr)
BR (2) BR122020006541B1 (sr)
CA (2) CA2832843C (sr)
CL (1) CL2013002898A1 (sr)
CY (3) CY1117986T1 (sr)
DK (4) DK3943485T3 (sr)
ES (4) ES2973868T3 (sr)
FI (1) FI3943485T3 (sr)
HR (3) HRP20211297T8 (sr)
HU (4) HUE056552T2 (sr)
IL (5) IL278373B2 (sr)
JO (2) JO3363B1 (sr)
LT (4) LT3943485T (sr)
ME (1) ME02500B (sr)
MX (3) MX343685B (sr)
MY (1) MY166171A (sr)
NZ (3) NZ717119A (sr)
PE (1) PE20140863A1 (sr)
PH (2) PH12013502118A1 (sr)
PL (4) PL3943485T3 (sr)
PT (4) PT3943485T (sr)
RS (3) RS58226B1 (sr)
RU (1) RU2632193C2 (sr)
SG (1) SG194447A1 (sr)
SI (4) SI3486234T1 (sr)
SM (3) SMT202100503T1 (sr)
TW (1) TWI529162B (sr)
WO (1) WO2012142504A1 (sr)
ZA (1) ZA201307539B (sr)

Families Citing this family (118)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130102477A1 (en) 2010-06-23 2013-04-25 Ryan D. Morin Biomarkers for non-hodgkin lymphomas and uses thereof
AU2011298987B2 (en) 2010-09-10 2017-09-28 Epizyme, Inc. Inhibitors of human EZH2, and methods of use thereof
US9175331B2 (en) * 2010-09-10 2015-11-03 Epizyme, Inc. Inhibitors of human EZH2, and methods of use thereof
TW201733984A (zh) * 2011-04-13 2017-10-01 雅酶股份有限公司 經取代之苯化合物
JO3363B1 (ar) * 2011-04-13 2019-03-13 Epizyme Inc مركبات بنزين مستبدلة بأريل أو أريل غير متجانس
BR112014007603A2 (pt) * 2011-09-30 2017-06-13 Glaxosmithkline Llc métodos de tratamento do câncer
WO2013075084A1 (en) 2011-11-18 2013-05-23 Constellation Pharmaceuticals Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
CA2862289C (en) 2012-02-10 2019-11-26 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
HUE042271T2 (hu) * 2012-03-12 2019-06-28 Epizyme Inc Emberi EZH2 inhibitorai és azok alkalmazási eljárásai
DK3628670T3 (da) 2012-04-13 2022-12-05 Epizyme Inc Saltform til ezh2-hæmning
KR102117982B1 (ko) * 2012-04-13 2020-06-03 에피자임, 인코포레이티드 암 치료용 병용 요법
US9562041B2 (en) 2012-05-16 2017-02-07 Glaxosmithkline Llc Enhancer of zeste homolog 2 inhibitors
US20150239842A1 (en) * 2012-09-28 2015-08-27 Pfizer Inc. Benzamide and heterobenzamide compounds
CN105102432B (zh) * 2012-10-15 2019-01-04 Epizyme股份有限公司 经取代的苯化合物
KR102021642B1 (ko) * 2012-10-15 2019-09-16 에피자임, 인코포레이티드 암을 치료하는 방법
JP2016503009A (ja) * 2012-12-13 2016-02-01 グラクソスミスクライン・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ ＬＬＣ Ｚｅｓｔｅホモログ２エンハンサー阻害剤
EP2934531A4 (en) * 2012-12-19 2016-06-15 Glaxosmithkline Llc COMBINATION
CA2894216A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Epizyme, Inc. 1,4-pyridone compounds
AU2013361079B2 (en) 2012-12-21 2018-07-26 Epizyme, Inc. 1,4-pyridone bicyclic heteroaryl compounds
UA111305C2 (uk) 2012-12-21 2016-04-11 Пфайзер Інк. Конденсовані лактами арилу та гетероарилу
ME02730B (me) * 2013-02-11 2017-10-20 Constellation Pharmaceuticals Inc Modulatori enzima koji modifikuju metil, njihove kompozicije i upotreba
US20160039767A1 (en) 2013-03-14 2016-02-11 Epizyme, Inc. Pyrazole derivatives as prmt1 inhibitors and uses thereof
US9447079B2 (en) 2013-03-14 2016-09-20 Epizyme, Inc. PRMT1 inhibitors and uses thereof
EP2970136A1 (en) 2013-03-14 2016-01-20 Epizyme, Inc. Arginine methyl transferase inhibtors and uses thereof
KR20150127216A (ko) 2013-03-14 2015-11-16 제넨테크, 인크. 암의 치료 및 암 약물 내성의 예방 방법
JP2016514164A (ja) 2013-03-14 2016-05-19 エピザイム，インコーポレイティド アルギニンメチルトランスフェラーゼ阻害剤としてのピラゾール誘導体およびその使用
US9394258B2 (en) 2013-03-14 2016-07-19 Epizyme, Inc. Arginine methyltransferase inhibitors and uses thereof
US9023883B2 (en) 2013-03-14 2015-05-05 Epizyme, Inc. PRMT1 inhibitors and uses thereof
WO2014153226A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Epizyme, Inc. Arginine methyltransferase inhibitors and uses thereof
EP2970131B1 (en) 2013-03-14 2017-11-15 Epizyme, Inc. Arginine methyltransferase inhibitors and uses thereof
EP2970181B1 (en) 2013-03-14 2017-06-07 Epizyme, Inc. Arginine methyltransferase inhibitors and uses thereof
US9120757B2 (en) 2013-03-14 2015-09-01 Epizyme, Inc. Arginine methyltransferase inhibitors and uses thereof
WO2014151142A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
AU2014254392B2 (en) 2013-03-15 2018-05-24 Epizyme, Inc. Substituted benzene compounds
US9243001B2 (en) 2013-03-15 2016-01-26 Epizyme, Inc. Substituted benzene compounds
US9505745B2 (en) 2013-04-30 2016-11-29 Glaxosmithkline Intellectual Property (No. 2) Limited Enhancer of zeste homolog 2 inhibitors
CN105452246A (zh) * 2013-06-06 2016-03-30 葛兰素史密斯克莱知识产权（第2号）有限公司 Zeste增强子同源物2的抑制剂
EP3019494B1 (en) * 2013-07-10 2017-06-21 Glaxosmithkline Intellectual Property (No. 2) Limited Enhancer of zeste homolog 2 inhibitors
US10150764B2 (en) 2013-07-19 2018-12-11 Epizyme, Inc. Substituted benzene compounds
US9624205B2 (en) 2013-07-19 2017-04-18 Epizyme, Inc. Substituted 6,5-fused bicyclic heteroaryl compounds
WO2015023915A1 (en) 2013-08-15 2015-02-19 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Indole derivatives as modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
EP3057962B1 (en) * 2013-10-16 2023-10-18 Epizyme, Inc. Hydrochloride salt form for ezh2 inhibition
US9738630B2 (en) 2013-11-19 2017-08-22 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of lysine methyl transferase
US9822103B2 (en) 2013-11-22 2017-11-21 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of lysine methyl transferase
EP3076977B1 (en) 2013-12-06 2021-03-03 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
CN105037360B (zh) * 2014-04-28 2016-08-17 四川大学 吡啶酮衍生物及其制备方法和用途
BR112016029492A2 (pt) 2014-06-17 2017-10-17 Eisai R&D Man Co Ltd método para tratamento de linfoma não hodgkin
AP2016009605A0 (en) 2014-06-17 2016-12-31 Pfizer Substituted dihydroisoquinolinone compounds
EP3160940A4 (en) 2014-06-25 2018-05-02 Epizyme, Inc. Substituted benzene and 6,5-fused bicyclic heteroaryl compounds
ES2739697T3 (es) 2014-08-21 2020-02-03 Boehringer Ingelheim Int Nuevos compuestos y derivados de espiro[3H-indol-3,2-pirrolidin]-2(1H)-ona como inhibidores de MDM2-p53
MX383635B (es) 2014-10-16 2025-03-14 Epizyme Inc Método para tratar el cáncer.
CN107148419A (zh) * 2014-10-28 2017-09-08 葛兰素史密斯克莱知识产权（第2 号）有限公司 Zeste增强子同源物2抑制剂
WO2016073956A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Ezh2 inhibitors and uses thereof
SG11201703806XA (en) 2014-11-17 2017-06-29 Epizyme Inc Method for treating cancer
TW201636344A (zh) 2014-12-05 2016-10-16 美國禮來大藥廠 Ｅｚｈ２抑制劑
EA201792304A1 (ru) * 2015-04-20 2018-03-30 Эпизайм, Инк. Комбинированная терапия для лечения рака
AU2016275051A1 (en) 2015-06-10 2017-12-07 Epizyme, Inc. EZH2 inhibitors for treating lymphoma
UY36758A (es) * 2015-06-30 2016-12-30 Glaxosmithkline Ip No 2 Ltd Inhibidores del potenciador del homólogo zeste 2
CN108025191A (zh) 2015-08-24 2018-05-11 Epizyme股份有限公司 治疗癌症的方法
TW201718598A (zh) 2015-08-27 2017-06-01 美國禮來大藥廠 Ｅｚｈ２抑制劑
US10577350B2 (en) 2015-08-28 2020-03-03 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Crystalline forms of (R)-N-((4-methoxy-6-methyl-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-2-methyl-1-(1-(1-(2,2,2-trifluoroethyl)piperidin-4-yl)ethyl)-1H-indole-3-carboxamide
WO2017062495A2 (en) 2015-10-06 2017-04-13 Epizyme, Inc. Method of treating medulloblastoma with an ezh2 inhibitor
HRP20210960T1 (hr) 2015-10-09 2021-09-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh Spojevi i derivati spiro[3h-indol-3,2’-pirolidin]-2(1h)-ona kao inhibitori mdm2-p53
US20190070188A1 (en) * 2015-11-06 2019-03-07 Epizyme, Inc. Pediatric dosing for treatment of cancer with an ezh2 inhibitor
WO2017084494A1 (zh) 2015-11-19 2017-05-26 江苏恒瑞医药股份有限公司 苯并呋喃类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
CN105440023A (zh) * 2015-12-10 2016-03-30 江苏理工学院 Epz-6438的合成方法
US12084472B2 (en) 2015-12-18 2024-09-10 Ardelyx, Inc. Substituted 4-phenyl pyridine compounds as non-systemic TGR5 agonists
TWI773657B (zh) 2015-12-18 2022-08-11 美商亞德利克斯公司 作爲非全身ｔｇｒ５促效劑之經取代之4-苯基吡啶化合物
WO2017132518A1 (en) 2016-01-29 2017-08-03 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
ES3057783T3 (en) 2016-03-15 2026-03-04 Oryzon Genomics Sa Combinations of lsd1 inhibitors for use in the treatment of neoplastic diseases
WO2017174023A1 (zh) * 2016-04-08 2017-10-12 南京明德新药研发股份有限公司 作为ezh2抑制剂的联苯化合物
EP3445365A4 (en) * 2016-04-22 2019-10-16 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. EZH2 INHIBITORS AND USES THEREOF
WO2017192290A1 (en) 2016-05-04 2017-11-09 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Methods of treating cancers overexpressing carm1 with ezh2 inhibitors and platinum-based antineoplastic drugs
MX2018013519A (es) 2016-05-05 2019-03-14 Glaxosmithkline Ip No 2 Ltd Inhibidores del potenciador del homologo zeste 2.
US11786533B2 (en) 2016-06-01 2023-10-17 Epizyme, Inc. Use of EZH2 inhibitors for treating cancer
US11147819B2 (en) 2016-06-17 2021-10-19 Epizyme, Inc. EZH2 inhibitors for treating cancer
EP3529242A1 (en) 2016-10-19 2019-08-28 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of inhibitors of ezh2
EP3548032A2 (en) 2016-12-02 2019-10-09 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
US11191741B2 (en) * 2016-12-24 2021-12-07 Arvinas Operations, Inc. Compounds and methods for the targeted degradation of enhancer of zeste homolog 2 polypeptide
CN108314677B (zh) 2017-01-17 2020-06-30 安徽中科拓苒药物科学研究有限公司 一种ezh2抑制剂及其用途
AU2018210099A1 (en) 2017-01-19 2019-08-15 Daiichi Sankyo Company, Limited Pharmaceutical composition used for treatment of HTLV-1-associated myelopathy
WO2018137639A1 (zh) * 2017-01-25 2018-08-02 恩瑞生物医药科技（上海）有限公司 一种组蛋白甲基转移酶ezh2抑制剂、其制备方法及其医药用途
US10266542B2 (en) 2017-03-15 2019-04-23 Mirati Therapeutics, Inc. EZH2 inhibitors
US11642346B2 (en) 2017-03-31 2023-05-09 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
WO2018195450A1 (en) * 2017-04-21 2018-10-25 Epizyme, Inc. Combination therapies with ehmt2 inhibitors
MY198008A (en) 2017-05-18 2023-07-25 Jiangsu Hengrui Medicine Co Crystal of benzofuran derivative free base and preparation method
WO2018223030A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 Epizyme, Inc. Use of ezh2 inhibitors for treating cancer
WO2018231973A1 (en) 2017-06-13 2018-12-20 Epizyme, Inc. Inhibitors of ezh2 and methods of use thereof
CA3074720A1 (en) * 2017-09-05 2019-03-14 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
BR112020008325A2 (pt) 2017-11-14 2020-10-20 Pfizer Inc. terapias de combinação com o inibidor de ezh2
NZ766447A (en) 2018-01-31 2021-12-24 Mirati Therapeutics Inc Prc2 inhibitors
CN108640842B (zh) * 2018-04-04 2021-06-04 大连九信精细化工有限公司 一种2-溴-5-氟硝基苯的合成方法
SG11202009438UA (en) 2018-04-18 2020-11-27 Constellation Pharmaceuticals Inc Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
AU2019281969B2 (en) * 2018-06-07 2024-03-07 Merck Sharp & Dohme Llc Processes for the preparation of sugammadex
JP2021531340A (ja) 2018-07-09 2021-11-18 フォンダシヨン、アジール、デ、アブグルスFondation Asile Des Aveugles 眼障害を治療するためのｐｒｃ２サブユニットの阻害
CN111683936B (zh) * 2018-07-27 2021-08-20 苏州信诺维医药科技股份有限公司 多取代苯环化合物、制备方法及其用途
KR102689665B1 (ko) 2019-02-19 2024-07-31 한미약품 주식회사 신규한 헤테로트리시클릭 유도체 화합물 및 이의 용도
WO2020192650A1 (zh) * 2019-03-25 2020-10-01 上海华汇拓医药科技有限公司 酰胺类化合物制备方法及其在医药领域的应用
JP7624404B2 (ja) 2019-04-22 2025-01-30 ミラティ セラピューティクス，インク． Ｐｒｃ２阻害剤としてのナフチリジン誘導体
US12465648B2 (en) 2019-05-06 2025-11-11 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Heterobifunctional compounds as degraders of HPK1
AU2020288563A1 (en) 2019-06-05 2022-01-06 Mirati Therapeutics, Inc. Imidazo(1,2-c)pyrimidine derivatives as PRC2 inhibitors for treating cancer
PH12022550188A1 (en) 2019-07-24 2022-11-21 Constellation Pharmaceuticals Inc Crystalline forms of 7-chloro-2-(4-(3-methoxyazetidin-1-yl)cyclohexyl)-2,4-dimethyl-n-((6-methyl-4-(methylthio)-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)benzo[d][1,3]dioxole-5-carboxamide
CN114555112A (zh) 2019-08-22 2022-05-27 朱诺治疗学股份有限公司 T细胞疗法和zeste增强子同源物2(ezh2)抑制剂的组合疗法及相关方法
CN115551842B (zh) * 2020-06-08 2024-04-23 南京明德新药研发有限公司 联苯类化合物
JP7387907B2 (ja) 2020-08-13 2023-11-28 ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド 新規なジオキソロイソキノリノン誘導体化合物及びその用途｛ｎｏｖｅｌ ｄｉｏｘｏｌｏｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎｏｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｎｄ ｕｓｅ ｔｈｅｒｅｏｆ｝
CN116348459B (zh) 2020-10-13 2025-11-25 苏州信诺维医药科技股份有限公司 多取代苯环化合物马来酸盐的晶型、其制备方法及其应用
CN114907299B (zh) * 2021-02-08 2024-06-25 上海医药工业研究院 他泽司他关键中间体的盐型、其制备方法及其中间体
CN114907300B (zh) * 2021-02-08 2024-05-28 上海医药工业研究院 他泽司他关键中间体的制备方法及其中间体
CN113292489B (zh) * 2021-06-16 2022-08-30 泓博智源(开原)药业有限公司 二氯代二烷基烟腈的制备方法
CN113527275A (zh) * 2021-07-20 2021-10-22 成都师范学院 一种sklb1039化合物及其制备方法和应用
CN113582863B (zh) * 2021-08-19 2023-05-26 沈阳农业大学 一种氨乙基联苯类化合物及其制备方法和用途
KR20230081459A (ko) 2021-11-30 2023-06-07 엘젠테라퓨틱스 주식회사 헤테로사이클릭이 치환된 신규한 3-페닐피리딘과 4-페닐피리딘 유도체 및 이의 용도
WO2023111810A1 (en) 2021-12-14 2023-06-22 Pfizer Inc. Combination therapies and uses for treating cancer
WO2023209591A1 (en) 2022-04-27 2023-11-02 Daiichi Sankyo Company, Limited Combination of antibody-drug conjugate with ezh1 and/or ezh2 inhibitor
AU2023292893A1 (en) 2022-06-13 2025-01-02 Treeline Biosciences, Inc. Quinolone bcl6 bifunctional degraders
JP2025525324A (ja) 2022-06-13 2025-08-05 ツリーライン バイオサイエンシズ インコーポレイテッド １，８－ナフチリジン－２－オンヘテロ二官能性ｂｃｌ６分解剤
CN115197202B (zh) * 2022-07-15 2024-01-26 四川大学 一种ezh2共价抑制剂及其制备方法和应用
CN116655612A (zh) * 2023-05-09 2023-08-29 王亚男 一种ezh2抑制剂的合成方法及应用

Family Cites Families (106)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
JPH0733729A (ja) 1993-07-26 1995-02-03 Kirin Brewery Co Ltd Ｎ−シアノ−ｎ′−置換−アリールカルボキシイミダミド化合物の製造法
NZ277556A (en) 1993-12-27 1997-06-24 Eisai Co Ltd N-phenyl(alkyl)- and n-pyridyl(alkyl)anthranilic acid derivatives; intermediates
DE19516776A1 (de) 1995-05-10 1996-11-14 Boehringer Ingelheim Int Chromatin-Regulatorgene
US5741819A (en) 1995-06-07 1998-04-21 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc. Arylsulfonylaminobenzene derivatives and the use thereof as factor Xa inhibitors
US5763263A (en) 1995-11-27 1998-06-09 Dehlinger; Peter J. Method and apparatus for producing position addressable combinatorial libraries
JP3906935B2 (ja) 1995-12-18 2007-04-18 杏林製薬株式会社 Ｎ−置換ジオキソチアゾリジルベンズアミド誘導体及びその製造法
WO2000018725A1 (en) 1998-09-30 2000-04-06 The Procter & Gamble Company 2-substituted ketoamides
UA71587C2 (uk) 1998-11-10 2004-12-15 Шерінг Акцієнгезелльшафт Аміди антранілової кислоти та їхнє застосування як лікарських засобів
US6710058B2 (en) 2000-11-06 2004-03-23 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Monocyclic or bicyclic carbocycles and heterocycles as factor Xa inhibitors
KR100828982B1 (ko) 2000-12-28 2008-05-14 시오노기세이야쿠가부시키가이샤 칸나비노이드 2형 수용체 친화 작용을 갖는 피리돈 유도체
EP1363702A4 (en) * 2001-01-30 2007-08-22 Cytopia Pty Ltd PROCESS FOR INHIBITING KINASES
US7700293B2 (en) 2001-08-02 2010-04-20 The Regents Of The University Of Michigan Expression profile of prostate cancer
AU2002351412B2 (en) * 2001-12-21 2010-05-20 Exelixis Patent Company Llc Modulators of LXR
EP2130820A1 (en) 2002-02-19 2009-12-09 Shionogi & Co., Ltd. Antipruritics
TW200306155A (en) 2002-03-19 2003-11-16 Du Pont Benzamides and advantageous compositions thereof for use as fungicides
AU2003292556B2 (en) 2002-12-27 2009-09-10 Sucampo Ag Derivatives of prostaglandins for treating abdominal discomfort
RS53118B (sr) * 2003-02-26 2014-06-30 Sugen Inc. Aminoheteroaril jedinjenja kao inhibitori protein kinaze
WO2005014599A1 (en) * 2003-06-04 2005-02-17 Cellular Genomics, Inc. Imidazo[1,2-a]pyrazin-8-ylamines and method of inhibition of bruton’s tyrosine kinase by such compounds
US7442685B2 (en) 2003-06-13 2008-10-28 The University Of North Carolina At Chapel Hill DOT1 histone methyltransferases as a target for identifying therapeutic agents for leukemia
EP1633740B1 (en) 2003-06-19 2011-11-09 GlaxoSmithKline LLC 5-(acylamino)indazole derivatives as kinase inhibitors
DK1663978T3 (da) 2003-07-23 2008-04-07 Bayer Pharmaceuticals Corp Fluorsubstitueret omega-carboxyaryl-diphenylurinstof til behandling og forebyggelse af sygdomme og lidelser
EP1663194B1 (en) 2003-08-26 2010-03-31 Merck HDAC Research, LLC Use of SAHA for treating mesothelioma
US20050059682A1 (en) 2003-09-12 2005-03-17 Supergen, Inc., A Delaware Corporation Compositions and methods for treatment of cancer
AU2005229522A1 (en) 2004-03-11 2005-10-13 Actelion Pharmaceuticals Ltd. Indol-1-yl-acetic acid derivatives
CN1286973C (zh) 2004-04-12 2006-11-29 上海第二医科大学附属瑞金医院 一种组蛋白甲基转移酶及其制备方法
DE602005017781D1 (de) 2004-06-01 2009-12-31 Univ North Carolina Rekonstituierter histon-methyltransferase-komplex und verfahren zur identifizierung von modulatoren dafür
JO2787B1 (en) 2005-04-27 2014-03-15 امجين إنك, Alternative amide derivatives and methods of use
US7923219B2 (en) 2005-06-02 2011-04-12 The University Of North Carolina At Chapel Hill Ubiquitin E3 ligase
FR2889526B1 (fr) 2005-08-04 2012-02-17 Aventis Pharma Sa 7-aza-indazoles substitues, compositions les contenant, procede de fabrication et utilisation
KR101347102B1 (ko) 2005-10-19 2014-01-03 그뤼넨탈 게엠베하 신규한 바닐로이드 수용체 리간드 및 약제를 제조하기 위한이의 용도
EP1951672B1 (en) 2005-10-21 2011-05-25 Merck Sharp & Dohme Corp. Potassium channel inhibitors
WO2007053480A2 (en) 2005-10-28 2007-05-10 The University Of North Carolina At Chapel Hill Protein demethylases comprising a jmjc domain
EP1960551A2 (en) 2005-12-01 2008-08-27 Medical Prognosis Institute Methods and devices for identifying biomarkers of treatment response and use thereof to predict treatment efficacy
AU2006325746A1 (en) 2005-12-14 2007-06-21 Bristol-Myers Squibb Company Six-membered heterocycles useful as serine protease inhibitors
WO2007087015A1 (en) 2006-01-20 2007-08-02 The University Of North Carolina At Chapel Hill Diagnostic and therapeutic targets for leukemia
MX2008014616A (es) 2006-05-15 2008-11-28 Irm Llc Compuestos y composiciones de tereftalamato, y su uso como inhibidores de integrasa de vih.
EP2040711A2 (en) 2006-05-18 2009-04-01 Amphora Discovery Corporation 2-oxo-1,2-dihydroquinoline derivatives, compositions, and uses thereof as antiproliferative agents
EP2086318A4 (en) 2006-10-10 2009-12-23 Burnham Inst Medical Research NEUROPROTEKTIVE COMPOSITIONS AND METHOD
US8314087B2 (en) 2007-02-16 2012-11-20 Amgen Inc. Nitrogen-containing heterocyclyl ketones and methods of use
US8338437B2 (en) 2007-02-28 2012-12-25 Methylgene Inc. Amines as small molecule inhibitors
WO2008109534A1 (en) * 2007-03-02 2008-09-12 Mdrna, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting ezh2 gene expression and uses thereof
WO2008113006A1 (en) 2007-03-14 2008-09-18 Xenon Pharmaceuticals Inc. Methods of using quinolinone compounds in treating sodium channel-mediated diseases or conditions
DE102007017884A1 (de) 2007-04-13 2008-10-16 Grünethal GmbH Neue Vanilloid-Rezeptor Liganden und ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln
WO2009006577A2 (en) * 2007-07-03 2009-01-08 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for inhibiting ezh2
CA2690619A1 (en) 2007-07-16 2009-01-22 Abbott Laboratories Indazoles, benzisoxazoles and benzisothiazoles as inhibitors of protein kinases
JP2011502148A (ja) * 2007-10-31 2011-01-20 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション 疼痛の治療用としてのｐ２ｘ３受容体アンタゴニスト
AU2008337286B2 (en) 2007-12-19 2014-08-07 Cancer Research Technology Limited Pyrido[2,3-b]pyrazine-8-substituted compounds and their use
US8558000B2 (en) 2008-01-23 2013-10-15 Bristol-Myers Squibb Company 4-pyridinone compounds and their use for cancer
WO2009124137A2 (en) 2008-04-01 2009-10-08 Mount Sinai School Of Medicine Of New York University Method of suppressing gene transcription through histone lysine methylation
US20100113415A1 (en) * 2008-05-29 2010-05-06 Rajapakse Hemaka A Epha4 rtk inhibitors for treatment of neurological and neurodegenerative disorders and cancer
UY31982A (es) * 2008-07-16 2010-02-26 Boehringer Ingelheim Int Derivados de 1,2-dihidropiridin-3-carboxamidas n-sustituidas
AU2009279616A1 (en) 2008-08-08 2010-02-11 New York Blood Center Small molecule inhibitors of retroviral assembly and maturation
FR2934995B1 (fr) 2008-08-14 2010-08-27 Sanofi Aventis Composes d'azetidines polysubstitues, leur preparation et leur application en therapeutique
UY32275A (es) * 2009-03-24 2010-06-30 Sanofi Aventis DERIVADOS DE AZACARBOLINAS 9H-PIRROLO[2,3-b:5,4-c'] DIPIRIDINA, SU PREPARACION Y SU UTILIZACIÓN TERAPÉUTICA.
EP2411007A4 (en) 2009-03-27 2012-12-05 Uab Research Foundation MODULATION OF IRES-MEDIATED TRANSLATION
WO2011011366A2 (en) 2009-07-20 2011-01-27 Constellation Pharmaceuticals Agents for stimulating activity of methyl modifying enzymes and methods of use thereof
WO2011082044A1 (en) 2009-12-30 2011-07-07 Avon Products, Inc. Topical lightening composition and uses thereof
US8536179B2 (en) * 2010-05-07 2013-09-17 Glaxosmithkline Llc Indoles
ES2528269T3 (es) * 2010-05-07 2015-02-06 Glaxosmithkline Llc Azaindazoles
WO2011140325A1 (en) * 2010-05-07 2011-11-10 Glaxosmithkline Llc Indazoles
US20130102477A1 (en) 2010-06-23 2013-04-25 Ryan D. Morin Biomarkers for non-hodgkin lymphomas and uses thereof
AU2011298987B2 (en) 2010-09-10 2017-09-28 Epizyme, Inc. Inhibitors of human EZH2, and methods of use thereof
US9175331B2 (en) 2010-09-10 2015-11-03 Epizyme, Inc. Inhibitors of human EZH2, and methods of use thereof
WO2012068589A2 (en) 2010-11-19 2012-05-24 Constellation Pharmaceuticals Modulators of methyl modifying enzymes, compositions and uses thereof
US8765792B2 (en) 2010-12-01 2014-07-01 Glaxosmithkline Llc Indoles
AU2011336272A1 (en) 2010-12-03 2013-06-20 Epizyme, Inc. 7-deazapurine modulators of histone methyltransferase, and methods of use thereof
EP3323820B1 (en) 2011-02-28 2023-05-10 Epizyme, Inc. Substituted 6,5-fused bicyclic heteroaryl compounds
TW201733984A (zh) 2011-04-13 2017-10-01 雅酶股份有限公司 經取代之苯化合物
JO3363B1 (ar) 2011-04-13 2019-03-13 Epizyme Inc مركبات بنزين مستبدلة بأريل أو أريل غير متجانس
BR112014007603A2 (pt) 2011-09-30 2017-06-13 Glaxosmithkline Llc métodos de tratamento do câncer
HUE042271T2 (hu) 2012-03-12 2019-06-28 Epizyme Inc Emberi EZH2 inhibitorai és azok alkalmazási eljárásai
KR102117982B1 (ko) 2012-04-13 2020-06-03 에피자임, 인코포레이티드 암 치료용 병용 요법
DK3628670T3 (da) 2012-04-13 2022-12-05 Epizyme Inc Saltform til ezh2-hæmning
US9562041B2 (en) 2012-05-16 2017-02-07 Glaxosmithkline Llc Enhancer of zeste homolog 2 inhibitors
CN105102432B (zh) 2012-10-15 2019-01-04 Epizyme股份有限公司 经取代的苯化合物
KR102021642B1 (ko) 2012-10-15 2019-09-16 에피자임, 인코포레이티드 암을 치료하는 방법
AU2013361079B2 (en) 2012-12-21 2018-07-26 Epizyme, Inc. 1,4-pyridone bicyclic heteroaryl compounds
US9045477B2 (en) 2013-03-15 2015-06-02 Epizyme, Inc. Substituted 6,5-fused bicyclic heteroaryl compounds
US9243001B2 (en) 2013-03-15 2016-01-26 Epizyme, Inc. Substituted benzene compounds
US9776996B2 (en) 2013-03-15 2017-10-03 Epizyme, Inc. Substituted 6,5-fused bicyclic heteroaryl compounds
US10150764B2 (en) 2013-07-19 2018-12-11 Epizyme, Inc. Substituted benzene compounds
US9624205B2 (en) 2013-07-19 2017-04-18 Epizyme, Inc. Substituted 6,5-fused bicyclic heteroaryl compounds
EP3057962B1 (en) 2013-10-16 2023-10-18 Epizyme, Inc. Hydrochloride salt form for ezh2 inhibition
EP3076977B1 (en) 2013-12-06 2021-03-03 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
BR112016029492A2 (pt) 2014-06-17 2017-10-17 Eisai R&D Man Co Ltd método para tratamento de linfoma não hodgkin
MX383635B (es) 2014-10-16 2025-03-14 Epizyme Inc Método para tratar el cáncer.
SG11201703806XA (en) 2014-11-17 2017-06-29 Epizyme Inc Method for treating cancer
EA201792304A1 (ru) 2015-04-20 2018-03-30 Эпизайм, Инк. Комбинированная терапия для лечения рака
AU2016275051A1 (en) 2015-06-10 2017-12-07 Epizyme, Inc. EZH2 inhibitors for treating lymphoma
CN108025191A (zh) 2015-08-24 2018-05-11 Epizyme股份有限公司 治疗癌症的方法
MX2018003663A (es) 2015-09-25 2018-08-14 Epizyme Inc Metodo de tratamiento de tumor rabdoide maligno del ovario (mrto) /cancer microcitico del ovario del tipo hipercalcemico (sccoht) con un inhibidor de ezh2.
JP2019500623A (ja) 2015-11-05 2019-01-10 エピザイム，インコーポレイティド ヒストンｈ３メチル化ステータスをモニターするためのフローサイトメトリー
CN108697716A (zh) 2015-12-07 2018-10-23 Epizyme股份有限公司 Ezh2抑制剂及其使用方法
WO2017132518A1 (en) 2016-01-29 2017-08-03 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
WO2017139404A1 (en) 2016-02-08 2017-08-17 Epizyme, Inc. Methods of treating cancer
US11786533B2 (en) 2016-06-01 2023-10-17 Epizyme, Inc. Use of EZH2 inhibitors for treating cancer
US11147819B2 (en) 2016-06-17 2021-10-19 Epizyme, Inc. EZH2 inhibitors for treating cancer
EP3548032A2 (en) 2016-12-02 2019-10-09 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
AU2018217139A1 (en) 2017-02-02 2019-08-22 Epizyme, Inc. Cancer treatment modalities
US11642346B2 (en) 2017-03-31 2023-05-09 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
WO2018223030A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 Epizyme, Inc. Use of ezh2 inhibitors for treating cancer
WO2018231973A1 (en) 2017-06-13 2018-12-20 Epizyme, Inc. Inhibitors of ezh2 and methods of use thereof
CA3074720A1 (en) 2017-09-05 2019-03-14 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
CA3162315A1 (en) 2019-12-20 2021-06-24 Marinus Jacobus Verwijs Crystalline hydrobromide salt of a ezh2 inhibitor, its preparation and pharmaceutical composition useful for the treatment of cancer
US20230201213A1 (en) 2020-05-28 2023-06-29 Epizyme, Inc. Use of ezh2 inhibitors for treating cancer

Also Published As

Publication number Publication date
PE20140863A1 (es) 2014-07-19
LT3486234T (lt) 2021-09-10
EP4360712A2 (en) 2024-05-01
RU2017132054A (ru) 2019-02-06
SG194447A1 (en) 2013-12-30
US10420775B2 (en) 2019-09-24
IL249273A0 (en) 2017-01-31
JP2019014732A (ja) 2019-01-31
NZ804540A (en) 2025-05-02
LT3150580T (lt) 2019-02-11
PH12013502118A1 (en) 2014-01-13
CY1117986T1 (el) 2017-05-17
IL324294A (en) 2025-12-01
JP2021042243A (ja) 2021-03-18
SMT201900050T1 (it) 2019-02-28
PH12016502132A1 (en) 2017-05-22
MX2020012695A (es) 2021-04-12
IL228745A (en) 2016-12-29
ES2886099T3 (es) 2021-12-16
US20140288041A1 (en) 2014-09-25
LT2697199T (lt) 2016-09-26
DK3943485T3 (da) 2024-01-22
DK2697199T3 (en) 2016-09-12
KR20190121386A (ko) 2019-10-25
RU2013150345A (ru) 2015-05-20
HRP20211297T8 (hr) 2022-02-18
PL2697199T3 (pl) 2016-12-30
KR102032303B1 (ko) 2019-10-15
WO2012142504A1 (en) 2012-10-18
US10155002B2 (en) 2018-12-18
AU2012242595B2 (en) 2014-05-15
NZ734744A (en) 2019-03-29
US12161645B2 (en) 2024-12-10
IL228745A0 (en) 2013-12-31
CY1124617T1 (el) 2022-07-22
BR112013026324A8 (pt) 2018-01-30
US20150353494A1 (en) 2015-12-10
ES2706951T3 (es) 2019-04-01
US12168015B2 (en) 2024-12-17
US9522152B2 (en) 2016-12-20
KR20180120275A (ko) 2018-11-05
ZA201307539B (en) 2014-06-25
EP3150580A1 (en) 2017-04-05
CL2013002898A1 (es) 2014-08-22
EP2697199B1 (en) 2016-06-08
SI2697199T1 (sl) 2016-10-28
US11052093B2 (en) 2021-07-06
IL278373B1 (en) 2025-12-01
RU2017132054A3 (sr) 2021-05-14
PT3486234T (pt) 2021-09-07
US9549931B2 (en) 2017-01-24
PT3150580T (pt) 2019-01-28
KR101955871B1 (ko) 2019-03-08
EP3486234B1 (en) 2021-06-02
US20240245697A1 (en) 2024-07-25
TW201302704A (zh) 2013-01-16
HUE042788T2 (hu) 2019-07-29
BR112013026324B1 (pt) 2020-12-08
CA2832843C (en) 2020-09-29
PL3150580T3 (pl) 2019-04-30
KR20140029442A (ko) 2014-03-10
KR102154946B1 (ko) 2020-09-10
KR20210118968A (ko) 2021-10-01
MX384521B (es) 2025-03-14
PT2697199T (pt) 2016-09-05
AR086008A1 (es) 2013-11-13
NZ616298A (en) 2016-03-31
SMT201600308B (it) 2016-11-10
KR20190025055A (ko) 2019-03-08
US20160022693A1 (en) 2016-01-28
US9855275B2 (en) 2018-01-02
US20240245698A1 (en) 2024-07-25
CY1121120T1 (el) 2019-12-11
ES2973868T3 (es) 2024-06-24
EP3943485B1 (en) 2023-12-27
CA3086473A1 (en) 2012-10-18
EP3486234A1 (en) 2019-05-22
SI3150580T1 (sl) 2019-03-29
AU2012242595A1 (en) 2013-05-02
US20200155562A1 (en) 2020-05-21
CN104080769A (zh) 2014-10-01
US12168016B2 (en) 2024-12-17
CN104080769B (zh) 2017-06-20
BR122020006541B1 (pt) 2022-05-10
KR20230134128A (ko) 2023-09-20
CN107311921A (zh) 2017-11-03
PL3943485T3 (pl) 2024-05-20
HRP20190074T1 (hr) 2019-03-08
MX343685B (es) 2016-11-17
JOP20180104B1 (ar) 2019-10-20
US20130123234A1 (en) 2013-05-16
US9090562B2 (en) 2015-07-28
EP4360712A3 (en) 2024-07-31
US20250170138A1 (en) 2025-05-29
ES2589555T3 (es) 2016-11-15
EP2697199A1 (en) 2014-02-19
HRP20211297T1 (hr) 2021-12-10
US20170252349A1 (en) 2017-09-07
HRP20161115T1 (hr) 2016-11-18
JP2018104450A (ja) 2018-07-05
JP2016147886A (ja) 2016-08-18
RS55113B1 (sr) 2016-12-30
PT3943485T (pt) 2024-03-06
IL249273B (en) 2019-05-30
US8410088B2 (en) 2013-04-02
CN107311921B (zh) 2021-02-12
NZ717119A (en) 2017-10-27
KR20250126865A (ko) 2025-08-25
KR101914321B1 (ko) 2018-11-02
JP6778226B2 (ja) 2020-10-28
IL278373B2 (en) 2026-04-01
JOP20180104A1 (ar) 2019-01-30
JP5933686B2 (ja) 2016-06-15
CA2832843A1 (en) 2012-10-18
IL278373A (sr) 2020-12-31
US20240277723A1 (en) 2024-08-22
MX2013011921A (es) 2014-03-27
EP3150580B1 (en) 2018-10-17
SI3943485T1 (sl) 2024-04-30
PL3486234T3 (pl) 2021-11-29
FI3943485T3 (fi) 2024-01-29
SI3486234T1 (sl) 2021-12-31
RS62279B1 (sr) 2021-09-30
MY166171A (en) 2018-06-07
IL266418A (en) 2019-06-30
JP2014516931A (ja) 2014-07-17
TWI529162B (zh) 2016-04-11
US20210379076A1 (en) 2021-12-09
JO3363B1 (ar) 2019-03-13
DK3150580T3 (en) 2019-02-04
DK3486234T3 (da) 2021-08-16
KR102308488B1 (ko) 2021-10-06
US20180318309A1 (en) 2018-11-08
US20170119780A1 (en) 2017-05-04
ME02500B (me) 2017-02-20
US20190192526A1 (en) 2019-06-27
US20120264734A1 (en) 2012-10-18
HUE028837T2 (en) 2017-01-30
KR20200105543A (ko) 2020-09-07
EP3943485A1 (en) 2022-01-26
BR112013026324A2 (pt) 2016-10-11
PH12016502132B1 (en) 2024-01-05
SMT202100503T1 (it) 2021-11-12
RU2632193C2 (ru) 2017-10-03
HUE056552T2 (hu) 2022-02-28
US8765732B2 (en) 2014-07-01
HUE066461T2 (hu) 2024-08-28
KR102566864B1 (ko) 2023-08-11
LT3943485T (lt) 2024-02-12
JP2023011933A (ja) 2023-01-24
HK1193804A1 (zh) 2014-10-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12161645B2 (en) Aryl-or heteroaryl-substituted benzene compounds
HK40068083B (en) Aryl- or heteroaryl-substituted benzene compounds
HK40103254A (en) Aryl- or heteroaryl-substituted benzene compounds
HK40068083A (en) Aryl- or heteroaryl-substituted benzene compounds
HK40009077B (en) Aryl- or heteroaryl-substituted benzene compounds
HK40009077A (en) Aryl- or heteroaryl-substituted benzene compounds
HK1230589A1 (en) Aryl- or heteroaryl-substituted benzene compounds
HK1230589B (en) Aryl- or heteroaryl-substituted benzene compounds
HK1230589A (en) Aryl-or heteroaryl-substituted benzene compounds
HK1193804B (en) Aryl-or heteroaryl-substituted benzene compounds