RS58509B1 - Organska jedinjenja monobaktama za lečenje bakterijskih infekcija - Google Patents

Organska jedinjenja monobaktama za lečenje bakterijskih infekcija

Info

Publication number
RS58509B1
RS58509B1 RS20190406A RSP20190406A RS58509B1 RS 58509 B1 RS58509 B1 RS 58509B1 RS 20190406 A RS20190406 A RS 20190406A RS P20190406 A RSP20190406 A RS P20190406A RS 58509 B1 RS58509 B1 RS 58509B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
amino
mmol
methyl
tert
4alkyl
Prior art date
Application number
RS20190406A
Other languages
English (en)
Inventor
Virender Singh Aulakh
Anthony Casarez
Xiaodong Lin
Mika Lindvall
Glenn Mcenroe
Heinz Ernst Moser
Folkert Reck
Meiliana Tjandra
Robert Lowell Simmons
Aregahegn Yifru
Qingming Zhu
Original Assignee
Novartis Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novartis Ag filed Critical Novartis Ag
Publication of RS58509B1 publication Critical patent/RS58509B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/427—Thiazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/433—Thidiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4545—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pipamperone, anabasine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Ovaj pronalazak odnosi se na nova jedinjenja β-laktama, i njihovu pripremu i upotrebu. Posebno, ovaj pronalazak odnosi se na nova jedinjenja β-laktama gde je laktamski prsten monocikličan, i njihove upotrebe za lečenje bakterijskih infekcija, naročito onih izazvanih Gram-negativnim bakterijama.
POZADINA
[0002] Poslednjih nekoliko dekada, učestalost antimikrobne rezistencije i njena veza sa ozbiljnim infektivnim bolestima povećala se do zabrinjavajućih stopa. Rastuća prevalencija rezistencije među nozokomijalnim patogenima je naročito uznemirujuća. Preko 2 miliona nozokomijalnih infekcija koje se javljaju svake godine u Sjedinjenim Američkim Državama, 50 do 60% su izazvane antimikrobnimrezistentnim sojevima bakterija. Visok stepen rezistencije na obično korišćene antibakterijske agense povećava morbidnost, mortalitet, i troškove povezane sa nozokomijalnim infekcijama. U Sjedinjenim Američkim Državama, misli se da nozokomijalne infekcije doprinose ili izazivaju više od 77.000 smrti godišnje i troškove od približno $5 do $10 milijardi svake godine.
[0003] Značajni uzroci Gram-negativne rezistencije uključuju proširen-spektar β-laktamaza (ESBL), serin karbapenemaza (KPC) i metalo-β-laktamaza (na primer NDM-1) u Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, i Proteus mirabilis, visok nivo rezistencije treće generacije cefalosporin (AmpC) β-laktamaze među Enterobacter vrstama i Citrobacter freundii, i geni rezistencije na više lekova primećeni kod Pseudomonas, Acinetobacter, i Stenotrophomonas. Problem antibakterijske rezistencije je zbog postojanja bakterijskih sojeva otpornih na više antibakterijskih agenasa. Na primer, Klebsiella pneumonia harboprsten NDM-1 metalo-β-laktamaza nosi često dodatne serin-β-laktamaze na istom plazmidu koji nosi NDM-1.
[0004] Tako, postoji potreba za novim antibakterijskim agensima, naročito antibakterijskim jedinjenjima koji su efikasni protiv postojećih mikroba rezistentnih na lekove, ili su manje podložni razvaju nove bakterijske rezistencije. Ovaj pronalazak obezbeđuje takva jedinjenja.
SUŠTINA
[0005] Ovaj pronalazak obuhvata nova jedinjenja, farmaceutske formulacije uključujući jedinjenja, i postupke upotrebe tih jedinjenja i kompozicija za lečenje pacijenata sa bakterijskim infekcijama.
Jedinjenja su monobaktami, koji obuhvataju monocikličan beta-laktamski prsten, i koji obično deluju putem inhibiranja penicilin-vezujućih proteina (PBP), koji su uključeni u biosintezu peptidoglikana potrebnih za normalne ćelijske zidove bakterija. Neki poznati članovi ove klase uključuju aztreonam i karumonam. Ostala jedinjenja monobaktama opisana su u EP0093376A2, WO2013/110643 i WO2012/073138. Jedinjenja su primarno efikasna protiv Gram-negativnih bakterija.
[0006] Jedinjenja ovog pronalaska mogu da se koriste za lečenje infekcije izazvane od strane Enterobacteriaceae, uključujući Salmonella, E. coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus, Enterobacter, Serratia, i Citrobacter, uključujući patogene kao što su Klebsiella pneumoniae koje proizvode KPC koje su manje podložne prethodnim monobaktamima poput aztreonama, kao i ne-fermentirajućim bakterijama, uključujući Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter, Burkholderia, Moraxella i Stenotrophomonas.
[0007] Jedinjenja ovog pronalaska mogu da se koriste sama ili u kombinaciji sa ostalim antibioticima, i mogu da se koriste u kombinaciji sa jedinjenjima kao što su inhibitori beta-laktamaza koji pojačavaju aktivnost jedinjenja ovog pronalaska protiv određenih patogena ili smanjuju učestalost ili obim bakterijske rezistencije na jedinjenja ovog pronalaska protiv određenih patogena. Pogodni inhibitori beta-laktamaza za upotrebu u kombinaciji sa jedinjenjima ovog pronalaska uključuju avibaktam, tazobaktam, sulbaktam i klavulansku kiselinu.
[0008] U jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja formule (I):
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,
u kojoj:
Z je CR<4>ili N;
R<1>je H ili C1-C4alkil;
R<2>je odabran iz grupe koju čine H, C1-C4alkil, i -COOH
ili R<1>i R<2>uzeti zajedno sa ugljenikom sa kojim su vezani obrazuju prsten odabran od C3-C6cikloalkilni prsten i 4-6-članog heterocikločnog prestena koji sadrži do dva heteroatoma odabrana od N, O i S kao članova prstena;
R<3>je odabran od H, -COOH, i -L<1>-W-(CH2)0-2-X-R<5>;
R<4>je H ili halo;
svako L<1>je nezavisno ravnolančani ili razgranat C1-4alkilen;
W je neka veza, O, NH ili S;
X je fenil, ili 5-6-člani heteroarilni prsten koji sadrži 1-3 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članova prstena; gde su fenil i 5-6-člani heteroaril opciono supstituisani sa jednom ili dve grupe odabrane od C1-4alkila, hidroksi, -CN, F, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) i -N(C1-4alkil)2;
R<5>je odabran od
u kojima su R<1b>, R<2b>, i R<3b>nezavisno vodonik, hidroksi, CN, (C1-C4)alkil, (C1-C4)alkoksi, (C3-C6)cikloalkil, ili 4-, 5-, 6- ili 7 -člani heterociklil koji sadrži N, O ili S kao člana prstena, u kojoj svako (C1-C4)alkil, (C1-C4)alkoksi, (C3-C6)cikloalkil, ili 4-, 5-, 6- ili 7 -člani heterociklil koji sadrži N, O ili S kao člana prstena može da bude supstituisan sa jednim, dva ili tri supstituenta odabrana nezavisno od Y,
i u kojima R<2b>i R<3b>zajedno sa atomom azota za koji su vezani mogu opciono da obrazuju 5- do 7-člani heterociklil uključujući 0 ili 1 dalji heteroatom odabran od N, O i S, pri čemu je pomenuti heterociklil opciono supstituisan sa Y;
Y je odabran od F, CN, -NH2, Q, -L<2>-C(O)NR<10>-L<2>-Q, -L<2>-NR<10>-C(O)-L<2>-Q, -L<2>-OR<10>, -L<2>-N(R<10>)2, -L<2>-N<+>(R<11>)3, -L<2>-NR<10>-C(O)R<10>, -L<2>-NR<10>-L<2>-N(R<10>)2, -L<2->O-C(O)OR<10>, -L<2>-O-C(O)-N(R<10>)2, -L<2>-NR<10>-C(O)-N(R<10>)2, -L<2>-NR<10>-C(O)-OR<11>, -L<2>-C(=NR<10>)-N(R<10>)2,-CON(R<10>)2, -L<2>-NR<10>-C(=NR<10>)-N(R<10>)2, -L<2>-NR<10>-C(=NR<10>)-R<10>, -L<2>-C(O)N(R<10>)2, -L<2>-O-SO3R<10>;
L<2>je nezavisno u svakom pojavljivanju neka veza ili ravnolančani ili razgranat C1-4alkilen, opciono supstituisan sa NH2, OH, ili F;
Het je 4-6-člani zasićeni heterociklični prsten, gde heterocikločni presten sadrži 1 ili 2 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članova prstena i supstituisan je sa okso i opciono dalje supstituisan sa Y; R<10>i R<12>su nezavisno H ili C1-4alkil opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe odabrane od OH, NH2ili Q;
Q je odabran od -L<2>-N(R<13>)2, -L<2>-N<+>(R<14>)3, -L<2>-NR<13>-C(=NR<13>)-N(R<13>)2, -L<2>-NR<13>-CR<13>(=NR<13>), -L<2>-NR<13>-L<2>-Cy, -L<2>-NR<13>-C(=NR<13>)-NR<13>-L<2>-Cy, -L<2>-NR<13>-C(=NR<13>)-L<2>-Cy, -L<2>-Cy-L<2>-R<13>, -L<2>-Cy-L<2>-N(R<13>)2, -L<2>-NR<13>-SO2N(R<13>)2, -L<2>-SO2-N(R<13>)2, -L<2>-NR<13>-SO2-R<13>, -L<2>-NR<13>-L<2>-Ar, -L<2>-S-L<2>-Cy , -L<2>-NR<13>-(C=O)-O-R<13>,
svako Cy je nezavisno 3-6-člani cikloalkil ili 3-6-člani heterociklil koji sadrži jedan ili dva heteroatoma odabrana od N, O i S kao člana prstena i opciono fuzionisan sa 5-6-članim arilnim ili heteroarilnim prstenom, u kojoj svako Cy je opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, C1-3haloalkila, R<14>, hidroksi, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) ili -N(C1-4alkil)2;
Ar je fenil, opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, C1-3haloalkila, R<14>, hidroksi, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) ili -N(C1-4alkil)2;
R<11>je nezavisno u svakom pojavljivanju C1-4alkil;
i dva R<10>, ili dva R<11>, ili dva R<12>na istom N mogu da cikliraju da obrazuju 4-6-člani heterocikločni presten opciono supstituisan sa C1-4alkilom, C1-4alkoksi, hidroksi, ili okso;
R<13>je nezavisno u svakom pojavljivanju H ili C1-4alkil opciono supstituisan sa hidroksi, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) ili -N(C1-4alkil)2;
R<14>je nezavisno u svakom pojavljivanju C1-4alkil opciono supstituisan sa hidroksi, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) ili -N(C1-4alkil)2;
u kojoj dva R<13>ili dva R<14>na istom N mogu da cikliraju da obrazuju 4-6-člani heterocikločni presten opciono supstituisan sa C1-4alkilom, C1-4alkoksi, hidroksi, amino ili okso;
R<15>je H, halo, C1-4alkil, CN, ili -O(C1-4alkil);
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0009] U nekom drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I) za upotrebu u postupku inhibiranja bakterijskog rasta ili moduliranja virulencije neke bakterijske infekcije.
[0010] U nekom drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I) za upotrebu u postupku za lečenje subjekta koji ima infekciju gram-negativnim bakterijama, opciono u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem. U određenim primerima izvođenja, subjekt je sisar i u nekim primerima izvođenja, subjekt je čovek.
[0011] Gram-negativne bakterije mogu biti iz roda odabranog od Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Salmonella, Serratia, Pseudomonas, Acinetobacter, Bacteroides, Burkholderia, Campylobacter, Neisseria, i Stenotrophomonas. Posebno, bakterijska infekcija izazvana vrstama Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Salmonella, Serratia, Pseudomonas, ili Acinetobacter može da se leči. Određene bakterijske vrste za takvo lečenje uključuju Citrobacter freundii, Citrobacter koseri, Enterobacter cloacae, Enterobacter faecalis, Enterobacter faecium, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oksitoca, Morganella morganii, Proteus mirabilis, Salmonella species, Serratia marcescens, Pseudomonas aeruginosa, i Acinetobacter baumanii, kao i Bacteroides bivius, Bacteroides fragilis, Burkholderia cepacia, Campylobacter jejuni, Neisseria gonorrhoeae, i Stenotrophomonas maltophilia.
[0012] U nekom drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I) za upotrebu u postupku davanja neke inhibitorne količine jedinjenja formule (I) fermentirajućim ili ne-fermentirajućim Gram-negativnim bakterijama. U određenim primerima izvođenja jedinjenje formule (I) za upotrebu u postupku davanja neke inhibitorne količine jedinjenja formule (I) fermentirajućim ili ne-fermentirajućim Gram-negativnim bakterijama, a te Gram-negativne bakterije su vrste Burkholderia, Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Neisseria, Proteus, Salmonella, Serratia, Pseudomonas, i Acinetobacter. Posebne bakterijske vrste za takav postupak uključuju Citrobacter freundii, Citrobacter koseri, Enterobacter cloacae, Enterobacter faecalis, Enterobacter faecium, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oksitoca, Neisseria meningiditis i Burkholderia cepacia, Morganella morganii, Proteus mirabilis, Salmonella species, Serratia marcescens, Pseudomonas aeruginosa, i Acinetobacter baumanii, kao i Bacteroides bivius, Bacteroides fragilis, Burkholderia cepacia, Campylobacter jejuni, Neisseria gonorrhoeae, i Stenotrophomonas maltophilia.
[0013] U nekom drugom primeru izvođenja, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I) za upotrebu u postupku davanja neke inhibitorne količine jedinjenja formule (I) Gram-negativnim bakterijama, kao što su Enterobacteriaceae; u nekim primerima izvođenja Gram-negativne bakterije su odabrane iz grupe koju čine vrste Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Salmonella, Serratia, Pseudomonas, i Acinetobacter.
[0014] Drugi primer izvođenja ovog pronalaska obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata efikasnu količinu jedinjenja formule (I) kombinovanog sa farmaceutski prihvatljivim nosačem ili ekscipijensom. 'Efikasna količina' kao što se ovde koristi odnosi se na količinu dovoljnu da se smanji ozbiljnost ili simptomi neke infekcije, ili neka količina efikasna u smanjenju bakterijskog opterećenja kod pacijenta.
[0015] Obezbeđene su farmaceutske kompozicije prema ovom pronalasku koje uključuju bilo koje od jedinjenja opisanih ovde i neki farmaceutski prihvatljivi nosač. U nekim primerima izvođenja, kompozicija uključuje neki dodatni terapeutski agens ili meki inhibitor beta laktamaza.
[0016] U nekom drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kombinaciju koja obuhvata jedinjenje ovog pronalaska i neki dodatni terapeutski agens ili neki inhibitor beta laktamaza ili opciono oba.
[0017] Ovaj pronalazak obezbeđuje nova jedinjenja, jedinjenja za upotrebu u postupcima za inhibiranje preživljavanja i rasta populacije Gram-negativnih bakterija, i jedinjenja za upotrebu u novim postupcima i kompozicije za lečenje bakterijskih infekcija kod sisara, naročito kod humanih subjekata. Jedinjenja obezbeđena ovde mogu da se formulišu u farmaceutske formulacije i lekove koji su korisni u postupcima inhibicije bakterijskog rasta ili ozbiljnosti ili trajanja neke bakterijske infekcije, ili za lečenje subjekta koji ima neku bakterijsku infekciju koja je podložna inhibiciji sa jedinjenjima formule (I). Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenja za upotrebu u pripremi lekova i farmaceutskih formulacija, za upotrebu u inhibiciji bakterijskog rasta, i za upotrebu u lečenju bakterijskih infekcija kod subjekta kom je potrebno takvo lečenje, npr., subjekt inficiran Gram-negativnim bakterijama ili sa naročito visokim rizikom za takvu infekciju.
[0018] Ostali aspekti ovog pronalaska su opisani ovde.
DETALJAN OPIS
[0019] Za svrhe tumačenja ove specifikacije, primenjuju se sledeće definicije osim ukoliko je drugačije navedeno ili jasno u suprotnosti sa kontekstom. Gde god je pogodno, pojmovi korišćeni u jednini takođe će da uključuju množinu i obrnuto.
Definicije
[0020] Pojmovi korišćeni u ovoj specifikaciji imaju sledeća značenja:
Kao što se ovde koristi, pojam "subjekt" odnosi se na neku životinju. U određenim aspektima, životinja je neki sisar. Subjekt se takođe odnosi na, na primer, primate (npr., ljude), krave, ovce, koze, konje, pse, mačke, zečeve, pacove, miševe, ribe, ptice i slično. U određenim primerima izvođenja, subjekt je čovek.
[0021] Kao što se ovde koristi, pojam "inhibicija" ili "inhibiranje" odnosi se na smanjenje ili supresiju nekog datog stanja, simptoma, ili poremećaja, ili bolesti, ili značajno smanjenje aktivnosti osnovne linije biološke aktivnosti ili procesa, ili smanjenje vijabilnosti, broja ili brzine rasta neke bakterijske populacije.
[0022] Kao što se ovde koristi, pojam "lečenje" ili "tretman" bilo koje bolesti ili poremećaja odnosi se, u jednom primeru izvođenja, na poboljšanje bolesti ili poremećaja (tj., usporavanje ili zaustavljanje ili smanjenje razvoja bolesti ili najmanje jednog od njenih kliničkih simptoma). U nekom drugom primeru izvođenja "lečenje" ili "tretman" odnosi se na ublažavanje ili poboljšanje najmanje jednog fizičkog parametra uključujući one koje pacijent ne može primetiti. U još nekom drugom primeru izvođenja, "lečenje" ili "tretman" odnosi se na moduliranje bolesti ili poremećaja, ili fizički, (npr., stabilizacija primetnog simptoma), fiziološki, (npr., stabilizacija fizičkog parametra), ili oba. U još nekom drugom primeru izvođenja, "lečenje" ili "tretman" odnosi se na sprečavanje ili odlaganje pojave ili razvoja ili progresije bolesti ili poremećaja.
[0023] Kao što se ovde koristi, pojam "neki," "neka," "taj" i slični pojmovi korišćeni u kontekstu ovog pronalaska (naročito u kontekstu patentnih zahteva) su tumačiće se da pokrivaju i jedninu i množinu osim ukoliko je drugačije navedeno ovde ili jasno u suprotnosti sa kontekstom.
[0024] Svi postupci opisani ovde mogu da se izvode bilo kojim odgovarajućim redosledom osim ukoliko je drugačije navedeno ovde ili drugačije jasno u suprotnosti sa kontekstom. Upotreba bilo kog i svih primera, ili primera jezika (npr. "kao što su") obezbeđenih ovde je samo radi boljeg razumevanja ovog pronalaska i ne predstavlja ograničenje obima ovog pronalaska drugačije nego kako je to traženo patentnim zahtevima.
[0025] Izraz "antibakterijski agens" odnosi se na agense sintetizovane ili modifikovane u laboratoriji kloji imaju ili baktericidnu ili bakteriostatičku aktivnost. "Aktivni" agens u ovom kontekstu inhibiraće rast P. aeruginosa i l ili ostalih Gram-negativnih bakterija. Izraz "inhibicija rasta" označava da je smanjena brzina porasta broja populacije određene bakterije. Tako, pojam uključuje situacije u kojima bakterijska populacija raste ali smanjenom brzinom, kao i situacije gde je rast populacije zaustavljen, kao i situacije gde su brojevi bakterija u populaciji smanjeni ili je čak populacija eliminisana.
[0026] "Opciono supstituisan" znači da navedena grupa može da bude supstituisana na jednom ili više položaja bilo kojim ili bilo kojom kombinacijom radikala navedenih u nastavku. Takva supstitucija uključuje zamenu atoma vodonika nesupstituisane grupe sa drugom grupom; tako da je broj supstituenata koji mogu da se dodaju nekoj nesupstituisanoj grupi jednak broju atoma vodonika na nesupstituisanoj grupi. Osim ukoliko je drugačije naznačeno, 'opciono supstituisan' znači da do tri supstituentske grupe koje nisu vodonik mogu da se dodaju.
[0027] "Halo" ili "halogen", kao što se ovde koristi, može da bude fluor, hlor, brom ili jod.
[0028] "C1-C6alkil", ili "C1-6alkil" kao što se ovde koristi, označava ravnolančani ili razgranat alkil koji ima 1-6 atoma ugljenika. Ako je označen neki drugi broj atoma ugljenika, kao što je C8ili C3, onda će definicija biti interpretirana prema tome, kao što je "C1-C4alkil" uključivaće metil, etil, propil, izopropil, butil, izobutil, sec-butil i tert-butil.
[0029] "C1-C6alkoksi", ili "C1-6alkoksi" kao što se ovde koristi, označava ravnolančani ili razgranat alkoksi koji ima 1-6 atoma ugljenika. Ako je označen neki drugi broj atoma ugljenika, kao što je C8ili C3, onda će definicija biti interpretirana prema tome, npr., "C1-C4alkoksi" predstavljaće metoksi, etoksi, propoksi, izopropoksi, butoksi, izobutoksi, sec-butoksi i tert-butoksi.
[0030] "C1-C4-Haloalkil" ili "C1-4haloalkil" kao što se ovde koristi, označava ravnolančani ili razgranat alkil koji ima 1-4 atoma ugljenika, u kom je najmanje jedan vodonik zamenjen sa nekim halogenom. Ako je označen neki drugi broj atoma ugljenika, kao što je C6ili C3, onda će definicija biti interpretirana prema tome, tako da će "C1-C4-Haloalkil" predstavljati metil, etil, propil, izopropil, butil, izobutil, sec-butil i tertbutil koji imaju najmanje jedan vodonik supstituisan halogenom, kao što je gde je halogen fluor: CF3CF2-, (CF3)2CH-, CH3-CF2-, CF3CF2-, CF3, CF2H-, CF3CF2CHCF3ili CF3CF2CF2CF2-.
[0031] "C3-C8-cikloalkil" ili "C3-8cikloalkil" kao što se ovde koristi odnosi se na neki zasićen monociklični ugljovodonični prsten od 3 do 8 atoma ugljenika. Primeri tih grupa uključuju ciklo propil, ciklo butil, ciklo pentil i ciklo heksil. Ako je označen neki drugi broj atoma ugljenika, kao što je C3-C6, onda će definicija biti interpretirana prema tome.
[0032] "4- do 8-člani heterociklil", "5- do 6-člani heterociklil", "3- do 10-člani heterociklil", "3- do 14-člani heterociklil", "4- do 14-člani heterociklil" i "5- do 14-člani heterociklil", odnosi se, respektivno, na 4- do 8-člane, 5- do 6-člane, 3- do 10-člane, 3- do 14-člane, 4- do 14-člane i 5- do 14-člane heterociklične prstenove koji sadrže 1 do 7, 1 do 5 ili 1 do 4 heteroatoma odabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik i sumpor, koji mogu biti zasićeni, ili delimično zasićeni. "Heterociklik" može da se naizmenično koristi sa "heterociklil". Heterociklična grupa može da bude vezana za heteroatom ili atom ugljenika. Pojam "heterociklil" uključuje grupe jednog prstena, grupe fuzionisanog prstena i premošćene grupe. Primeri takvog heterociklila uključuju, ali nisu ograničeni na pirolidin, piperidin, piperazin, oksazolidin, pirolidinon, morfolin, tetrahidrofuran, tetrahidrotiofen, tetrahidrotiopiran, tetrahidropiran, 1,4-dioksan, 1,4-oksatian, 8-aza-biciklo[3.2.1]oktan, 3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan, 3-Oksa-8-aza-biciklo[3.2.1]oktan, 8-Oksa-3-aza-biciklo[3.2.1]oktan, 2-Oksa-5-aza-biciklo[2.2.1]heptan, 2,5-Diaza-biciklo[2.2.1]heptan, azetidin, etilendiokso, okstan i tiazolidin. Poželjno, heterocikslična ili heterociklil grupa je zasićena ili delimično zasićena monociklična grupa osim ukoliko je drugačije navedeno, i sadrži 5-7 atoma u prstenu sa do dva heteroatoma odabrana od N, O i S kao članova prstena. U nekim primerima izvođenja, heterociklična grupa dalje uključuje bicikslične sisteme prstenova koji sadrže 1 ili 2 heteroatoma kao što su N, O ili S kao članova prstena i koji obuhvataju dva fuzionisana 3-, 4-, 5-, ili 6-člana prstenova, kao što su 3-azabiciklo[3.1.0]heksan, 8-aza-biciklo[3.2.1]oktan, 3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan, 3-Oksa-8-azabiciklo[3.2.1]oktan, 8-Oksa-3-aza-biciklo[3.2.1]oktan, 2-Oksa-5-aza-biciklo[2.2.1]heptan, 2,5-Diazabiciklo[2.2.1]heptan.
[0033] "Heteroaril" je potpuno nezasićen (aromatičan) prsten. Pojam "heteroaril" odnosi se na 5-14 člani monocikličan- ili bicikličan- ili tricikličan-aromatični sistem prstena, koji ima 1 do 8 heteroatoma odabrana od N, O i S. Obično, heteroaril je 5-10-člani sistem prstena (npr., 5-6-člani monocikl ili 8-10-člani bicikl) ili 5-6-člani sistem prstena. Osim ukoliko je drugačije navedeno, heteroaril je poželjno izolovani 5-6-člani prsten koji sadrži do 4 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članova prstena.
Uobičajene heteroarilne grupe uključuje furan, izotiazol, tiadiazol, oksadiazol, indazol, indol, kvinolin, 2-ili 3-tienil; 2- ili 3-furil; 2- ili 3-pirolil; 1-, 2-, 4-, ili 5-imidazolil; 1, 3-, 4-, ili 5- pirazolil; 2-, 4-, ili 5-tiazolil, 3-, 4-, ili 5-izotiazolil, 2-, 4-, ili 5-oksazolil, 3-, 4-, ili 5-izoksazolil, 3- ili 5-(1,2,4-triazolil), 4- ili 5-(1,2, 3-triazolil), tetrazolil, triazin, pirimidin, 2-, 3-, ili 4-piridil, 3- ili 4-piridazinil, 3-, 4-, ili 5-pirazinil, 2-pirazinil, i 2-, 4-, ili 5-pirimidinil.
[0034] Pojam "hidroksi" ili "hidroksil" odnosi se na grupu -OH, ili kada se koristi kao deo imena grupe kao što je hidroksialkil, odnosi se na imenovanu grupu supstituisanu sa -OH. Razni primeri izvođenja ovog pronalaska su opisani ovde. Podrazumeva se da se karakteristike navedene u svakom primerm izvođenja mogu kombinovati sa ostalim navedenim karakteristikama kako bi se obezbedili dalji primeri izvođenja. Sledeći numerisani primeri izvođenja su predstavnici nekih aspekata ovog pronalaska.
1. Jedinjenje formule (I):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so,
u kojoj:
Z je CR<4>ili N;
R<1>je H ili C1-C4alkil;
R<2>je odabran iz grupe koju čine H, C1-C4alkil, i -COOH
ili R<1>i R<2>uzeti zajedno sa ugljenikom sa kojim su vezani obrazuju prsten odabran od C3-C6cikloalkilnog prstena i 4-6-članog heterocikločnog prestena koji sadrži do dva heteroatoma odabrana od N, O i S kao članova prstena;
R<3>je odabran od H, -COOH, i -L<1>-W-(CH2)0-2-X-R<5>;
R<4>je H ili halo;
svako L<1>je nezavisno ravnolančani ili razgranat C1-4alkilen;
W je neka veza, O, NH ili S;
X je fenil, ili 5-6-člani heteroarilni prsten koji sadrži 1-3 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članova prstena; gde su fenil i 5-6-člani heteroaril opciono supstituisani sa jednom ili dve grupe odabrane od C1-4alkila, hidroksi, -CN, F, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) i -N(C1-4alkil)2;
R<5>je odabran od
u kojima R<1b>, R<2b>, i R<3b>su nezavisno vodonik, hidroksi, CN, (C1-C4)alkil, (C1-C4)alkoksi, (C3-C6)cikloalkil, ili 4-, 5-, 6- ili 7 -člani heterociklil koji sadrži N, O ili S kao člana prstena, gde svako (C1-C4)alkil, (C1-C4)alkoksi, (C3-C6)cikloalkil, ili 4-, 5-, 6- ili 7 -člani heterociklil koji sadrži N, O ili S kao člana prstena može da bude supstituisan sa jednim, dva ili tri supstituenta odabrana nezavisno od Y,
i u kojima R<2b>i R<3b>zajedno sa atomom azota za koji su vezani mogu opciono da obrazuju 5- do 7-člani heterociklil uključujući 0 ili 1 dalji heteroatom odabran od N, O i S, pri čemu je pomenuti heterociklil opciono supstituisan sa Y;
Y je odabran od F, CN, -NH2, Q, -L<2>-C(O)NR<10>-L<2>-Q, -L<2>-NR<10>-C(O)-L<2>-Q, -L<2>-OR<10>, -L<2>-N(R<10>)2, -L<2>-N<+>(R<11>)3, -L<2>-NR<10>-C(O)R<10>, -L<2>-NR<10>-L<2>-N(R<10>)2, -L<2>-O-C(O)OR<10>, -L<2>-O-C(O)-N(R<10>)2, -L<2>-NR<10>-C(O)-N(R<10>)2, -L<2>-NR<10>-C(O)-OR<11>, -L<2>-C(=NR<10>)-N(R<10>)2,-CON(R<10>)2, -L<2>-NR<10>-C(=NR<10>)-N(R<10>)2, -L<2>-NR<10>-C(=NR<10>)-R<10>, -L<2>-C(O)N(R<10>)2, -L<2>-O-SO3R<10>;
L<2>je nezavisno u svakom pojavljivanju neka veza ili ravnolančani ili razgranat C1-4alkilen, opciono supstituisan sa NH2, OH, ili F;
Het je 4-6-člani zasićeni heterociklični prsten, gde heterocikločni presten sadrži 1 ili 2 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članova prstena i supstituisan je sa okso i opciono dalje supstituisan sa Y; R<10>i R<12>su nezavisno H ili C1-4alkil opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe odabrane od OH, NH2ili Q;
Q je odabran od -L<2>-N(R<13>)2, -L<2>-N<+>(R<14>)3, -L<2>-NR<13>-C(=NR<13>)-N(R<13>)2, -L<2>-NR<13>-CR<13>(=NR<13>), -L<2>-NR<13>-L<2>-Cy, -L<2>-NR<13>-C(=NR<13>)-NR<13>-L<2>-Cy, -L<2>-NR<13>-C(=NR<13>)-L<2>-Cy, -L<2>-Cy-L<2>-R<13>, -L<2>-Cy-L<2>-N(R<13>)2, -L<2>-NR<13>-SO2-N(R<13>)2, -L<2->SO2-N(R<13>)2, -L<2>-NR<13>-SO2R<13>, -L<2>-NR<13>-L<2>-Ar, -L<2>-S-L<2>-Cy , -L<2>-NR<13>-(C=O)-O-R<13>,
svako Cy je nezavisno 3-6-člani cikloalkil ili 3-6-člani heterociklil koji sadrži jedan ili dva heteroatoma odabrana od N, O i S kao člana prstena i opciono fuzionisan sa 5-6-članim arilnim ili heteroarilnim prstenom, gde je svako Cy opciono supstituisano sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, C1-3haloalkila, R<14>, hidroksi, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) ili -N(C1-4alkil)2;
Ar je fenil, opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, C1-3haloalkila, R<14>, hidroksi, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) ili -N(C1-4alkil)2;
R<11>je nezavisno u svakom pojavljivanju C1-4alkil;
i dva R<10>, ili dva R<11>, ili dva R<12>na istom N mogu da cikliraju da obrazuju 4-6-člani heterocikločni presten opciono supstituisan sa C1-4alkilom, C1-4alkoksi, hidroksi, ili okso;
R<13>je nezavisno u svakom pojavljivanju H ili C1-4alkil opciono supstituisan sa hidroksi, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) ili -N(C1-4alkil)2; opciono, kada R<13>predstavlja C1-4alkil, može da bude supstituisan sa -OR<14>, -NHR<14>, hidroksi, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) ili -N(C1-4alkil)2;
R<14>je nezavisno u svakom pojavljivanju C1-4alkil opciono supstituisan sa hidroksi, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) ili -N(C1-4alkil)2;
gde dva R<13>ili dva R<14>na istom N mogu da cikliraju da obrazuju 4-6-člani heterocikločni presten opciono supstituisan sa C1-4alkilom, C1-4alkoksi, hidroksi, amino ili okso;
R<15>je H, halo, C1-4alkil, CN, ili -O(C1-4alkil);
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0035] Podrazumeva se da je svako od jedinjenja u Tabeli B, uključujući jedinjenja Primera 1-156, neki primer izvođenja ovog pronalaska i namera je da podpada unutar obima primera izvođenja 1.
2. Jedinjenje formule (IA):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so,
u kojoj:
Z je CR<4>ili N;
R<1>je H ili C1-C4alkil;
R<2>je odabran iz grupe koju čine H, C1-C4alkil, i -COOH
ili R<1>i R<2>uzeti zajedno sa ugljenikom sa kojim su vezani obrazuju prsten odabran od C3-C6cikloalkilnog prstena i 4-6-članog heterocikločnog prestena koji sadrži do dva heteroatoma odabrana od N, O i S kao članova prstena;
R<3>je odabran od H, -COOH, i -L<1>-W-(CH2)0-2-X-R<5>;
R<4>je H ili halo;
svako L<1>je nezavisno ravnolančani ili razgranat C1-4alkilen;
W je neka veza, O, NH ili S;
X je fenil, ili 5-6-člani heteroarilni prsten koji sadrži 1-3 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članova prstena; gde su fenil i 5-6-člani heteroaril opciono supstituisani sa jednom ili dve grupe odabrane od C1-4alkila, hidroksi, -CN, F, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) i -N(C1-4alkil)2;
R<5>je odabran od
u kojima R<1b>, R<2b>, i R<3b>su nezavisno vodonik, hidroksi, CN, (C1-C4)alkil, (C1-C4)alkoksi, (C3-C6)cikloalkil, ili 4-, 5-, 6- ili 7 -člani heterociklil, gde svako (C1-C4)alkil, (C1-C4)alkoksi, (C3-C6)cikloalkil, ili 4-, 5-, 6- ili 7-člani heterociklil može da bude supstituisan sa jednim, dva ili tri supstituenta odabrana nezavisno od Y, i u kojima R<2b>i R<3b>zajedno sa atomom azota za koji su vezani mogu opciono da obrazuju 5- do 7-člani heterociklil uključujući 0 ili 1 dalji heteroatom odabran od N, O i S, pri čemu je pomenuti heterociklil opciono supstituisan sa Y;
Y je odabran od F, CN, -NH2, Q, -L<2>-C(O)NR<10>-L<2>-Q, -L<2>-NR<10>-C(O)-L<2>-Q, -L<2>-OR<10>, -L<2>-N(R<10>)2, -L<2>-N<+>(R<11>)3, -L<2>-NR<10>-C(O)R<10>, -L<2>-NR<10>-L<2>-N(R<10>)2, -L<2>-O-C(O)OR<10>, -L<2>-O-C(O)-N(R<10>)2, -L<2>-NR<10>-C(O)-N(R<10>)2, -L<2>-NR<10>-C(O)-OR<11>, -L<2>-C(=NR<10>)-N(R<10>)2,-CON(R<10>)2, -L<2>-NR<10>-C(=NR<10>)-N(R<10>)2, -L<2>-NR<10>-C(=NR<10>)-R<10>, -L<2>-C(O)N(R<10>)2, , -L<2>-O-SO3R<10>;
L<2>je nezavisno u svakom pojavljivanju neka veza ili ravnolančani ili razgranat C1-4alkilen;
Het je 4-6-člani zasićeni heterociklični prsten, gde heterocikločni presten sadrži 1 ili 2 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članova prstena i supstituisan je sa okso i opciono dalje supstituisan sa Y;
R<10>i R<12>su nezavisno H ili C1-4alkil opciono supstituisan sa Q;
Q je odabran od -L<2>-N(R<13>)2, - L<2>-N<+>(R<14>)3, -L<2>-NH-C(=NH)-NH2, -L<2>-C(=NH)-NH2,
R<11>je nezavisno u svakom pojavljivanju C1-4alkil;
i dva R<10>, ili dva R<11>, ili dva R<12>na istom N mogu da cikliraju da obrazuju 4-6-člani heterocikločni presten opciono supstituisan sa C1-4alkilom, C1-4alkoksi, hidroksi, ili okso;
R<13>je nezavisno u svakom pojavljivanju H ili C1-4alkil opciono supstituisan sa hidroksi, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) ili -N(C1-4alkil)2;
R<14>je nezavisno u svakom pojavljivanju C1-4alkil opciono supstituisan sa hidroksi, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) ili -N(C1-4alkil)2;
gde dva R<13>ili dva R<14>na istom N mogu da cikliraju da obrazuju 4-6-člani heterocikločni presten opciono supstituisan sa C1-4alkilom, C1-4alkoksi, hidroksi, amino ili okso;
R<15>je H, halo, C1-4alkil, CN, ili -O(C1-4alkil);
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0036] U određenim primerima izvođenja jedinjenja formule (I) ili (IA), grupa prikazana sa -O-CR<1>R<2>R<3>je odabrana od
3. Jedinjenje primera izvođenja 1 ili primera izvođenja 2, u kom R<1>i R<2>su svako metil i R<3>je -COOH.
4. Jedinjenje primera izvođenja 1 ili primera izvođenja 2, u kom R<1>i R<2>zajedno sa ugljenikom za koji su vezani obrazuju prsten ciklopropana i R<3>je -COOH.
5. Jedinjenje primera izvođenja 1 ili primera izvođenja 2, u kom R<1>i R<2>su oba H i R<3>je -COOH.
6. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih primera izvođenja, u kom Z je CH.
7. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvođenja 1-6, u kom Z je N.
8. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvođenja 1-7, u kom je Het zasićen prsten supstituisan sa okso i opciono dalje supstituisan sa Y.
9. Jedinjenje primera izvođenja 8, u kom je Het odabran od pirolidin-2-ona, oksazolidin-2-ona, i imidazolidin-2-ona, i je opciono supstituisan sa Y. U posebnim primerima izvođenja ovih jedinjenja, Het je odabran od:
gde isprekidana veza označava mesto vezivanja Het za ostatak formule (I) ili (IA), a (Y)0-1predstavlja opcioni supstituent Y koji može da bude vezan na bilo kom raspoloživom mestu na prstenu.
10. Jedinjenje primera izvođenja 8, u kom Het je oksazolidin-2-on i opciono je supstituisan sa -L<2>-N(R<10>)2ili L<2>-NR<10>-C(=NR<10>)-N(R<10>)2
11. Jedinjenje primera izvođenja 8, u kom Het je oksazolidin-2-on koji je supstituisan na 5-položaju sa -L<2>-N(R<10>)2ili L<2>-NR<10>-C(=NR<10>)-N(R<10>)2u R-konfiguraciji
12. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih primera izvođenja, koje ima strukturu formule (II):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
R<1>R<2>R<3>je odabrano od
kom Het je odabrano od
kom L<2>je -(CH2)1-3-.
:
18. Jedinjenje primera izvođenja 16 ili 17, u kom je Y odabrano od Q, -L<2>-OR<10>, -L<2>-N(R<10>)2, -L<2>-N(R<11>)3, -L<2>-NR<10>-C(O)R<10>, -, -L<2>-O-C(O)OR<10>, -L<2>-O-C(O)-N(R<10>)2, -L2-NR<10>-C(O)-N(R<10>)2, -L<2>-C(=NR<10>)-N(R<10>)2, -CON(R<10>)<2>, -L<2>-NR10-C(=NR<10>)-N(R<10>)2, i -L<2->NR10-C(=NR<10>)-R<10>.
[0037] Alternativno, jedinjenje primera izvođenja 16 ili 17 u kom je Y formule -L<2>-NR<10>-L<2>-N(R<10>)2, npr. Y može da bude grupa kao što je -CH2-NR<10>-(CH2)2-3-N(R<10>)2; u posebnim primerima izvođenja ovih jedinjenja, R<10>je H.
19. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvođenja 6-17, u kom R<3>je formule
zvođenja 19, u kom R<3>je
u kojoj je R<3b>odabrano od H, azetidina, pirolidina i piperidina.
21. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih primera izvođenja, koje je farmaceutski prihvatljiva so.
22. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje prema bilo kom od prethodnih primera izvođenja i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.
23. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvođenja 1-20, ili farmaceutska kompozicija primera izvođenja 22 za upotrebu u postupku lečenja infekcije gram-negativnim bakterijama.
24. Jedinjenje ili kompozicija za upotrebu primera izvođenja 23, pri čemu je bakterijska infekcija izazvana vrstama Burkholderia, Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Meningitidis, Morganella, Pseudomonas, Proteus, Salmonella, Serratia, Acinetobacter, Bacteroides, Campylobacter, Neisseria, ili Stenotrophomonas bakterija.
25. Jedinjenje ili kompozicija za upotrebu primera izvođenja 23, pri čemu je bakterijska infekcija nozokomijalna pneumonija, intraabdominalna infekcija, ili infekcija urinarnog trakta izazvana vrstama Enterobacteriaceae.
26. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvođenja 1-20 za upotrebu kao lek.
27. Jedinjenje za upotrebu primera izvođenja 26, u kojoj je lek neki antibakterijski agens.
28. Jedinjenje za upotrebu primera izvođenja 26, u kojoj je antibakterijski agens za lečenje neke infekcije gram-negativnim bakterijama izazvane vrstama Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Pseudomonas, Proteus, Salmonella, Serratia, Acinetobacter, Bacteroides, Burkholderia, Campylobacter, Neisseria, ili Stenotrophomonas.
29. Farmaceutska kombinacija, koja obuhvata jedinjenje prema bilo kom od primera izvođenja 1-20 i neki drugi terapeutski agens.
[0038] U jedinjenjima formule (I) i raznim primerima izvođenja opisanim gore, oksim je poželjno konfiguracije prikazane ovde:
[0039] U nekim slučajevima prema bilo kom od primera izvođenja opisanih gore, osim ukoliko je drugačije navedeno, jedan ali ne i oba od R<2>i R<3>predstavljaju -COOH.
[0040] Gde R<3>u bilo kom od gornjih primera izvođenja je formule -L<1>-W-(CH2)0-2-X-R<5>, X može da bude fenil. U nekim od ovih primera izvođenja, L<1>je CH2. U nekim takvim primerima izvođenja, W je O. U nekim od ovih primera izvođenja, R<5>je grupa formule
u kojoj su R<1b>, R<2b>i R<3b>kao što je opisano za primer izvođenja 1 gore. U određenom od ovih primera izvođenja, R<5>je formule
u kojoj R<1b>i R<2b>svako predstavljaju H, i R<3b>može da bude H, ili heterociklična grupa kao što je 4-piperidinil. Pogodno, u ovim primerima izvođenja R<1>je H i R<2>je H ili COOH.
[0041] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje:
● Farmaceutska kombinacija koja obuhvata (a) prvi terapeutski agens koji je je jedinjenje ovog pronalaska, npr. jedinjenje formule (I) ili bilo koje njene podformule opisane ovde, i (b) neki drugi terapeutski agens kao što je opisan gore.
● Jedinjenje formule (I) za upotrebu u postupku kao što je definisano gore, koje obuhvata kodavanje, npr. istovremeno ili uzastopno, neke terapeutski efikasne količine jedinjenja ovog pronalaska, npr. jedinjenje formule (I) ili bilo koje njene podformule koja je opisana ovde, i nekog drugog terapeutskog agensa kao što je opisan gore.
[0042] Izrazi "ko-davanje" ili "kombinovano davanje" ili slično ovde se koriste u značenju da obuhvate davanje odabranih terapeutskih agenasa jednom pacijentu, i treba da uključuju režime tretmana u kojima se agensi nunžno ne daju istim putem davanja ili u isto vreme. Fiksne kombinacije su takođe unutar obima ovog pronalaska. Davanje farmaceutske kombinacije ovog pronalaska rezultuje korisnim dejstvom, npr. sinergističko terapeutsko dejstvo, u poređenju sa monoterapijom koja primenjuje samo jedan od svojih farmaceutski aktivnih sastojaka.
[0043] Svaka komponenta kombinacije prema ovom pronalasku može da se daje odvojeno, zajedno, ili u bilo kojoj njihovoj kombinaciji.
[0044] Jedinjenje ovog pronalaska i bilo koji dodatni agens mogu da se formulišu u zasebnim doznim oblicima. Alternativno, kako bi se smanjio broj doznih oblika koji se daju pacijentu, jedinjenje ovog pronalaska i bilo koji dodatni agens mogu da se formulišu zajedno u bilo kojoj kombinaciji. Na primer, jedinjenje ovog pronalaska inhibitor može da se formuliše u jednom doznom obliku, a dodatni agens može da se formuliše zajedno u drugom doznom obliku. Bilo koji zasebni dozni oblici mogu da se daju u isto vreme ili različita vremena.
[0045] Alternativno, kompozicija ovog pronalaska obuhvata neki dodatni agens kao što je opisan ovde. Svaka komponenta može da bude prisutna u pojedinačnim kompozicijama, kombinovanim kompozicijama, ili u jednoj kompoziciji.
[0046] Jedinjenja ovog pronalaska mogu da se sintetizuju opštim sintetičkim putevima dole, čiji su specifični primeri detaljnije opisani u Primerima.
[0047] Jedinjenja ovog pronalaska i intermedijeri mogu takođe da se konvertuju jedan u drugi prema postupcima opšte poznatim prosečnim stručnjacima u tehnici.
[0048] Unutar obima ovog teksta, samo lako ukloniva grupa koja nije sastavni deo posebno željenog krajnjeg proizvoda jedinjenja ovog pronalaska je označena "zaštitna grupa", osim ukoliko je drugačije naznačeno kontekstom. Zaštita funkcionalnih grupa tim zaštitnim grupama, same zaštitne grupe, i njihove reakcije cepanja opisane su, na primer, u standardnim referentnim radovima, kao što su J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London i New York 1973, u T. W. Greene i P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", treće izdanje, Wiley, New York 1999, u "The Peptides"; Tom 3 (urednici: E. Gross i J. Meienhofer), Academic Press, London i New York 1981, u "Postupaken der organischen Chemie" (Metods of Organic Chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Tom 15/l, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, u H.-D. Jakubke i H. Jeschkeit, "Aminosauren, Peptide, Proteine" (Amino acids, Peptides, Proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Bsvako, i Basel 1982, i u Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhidrat: Monosaccharide und Derivate" (Chemistry of Carbohydrates: Monosaccharides i Derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974. Karakteristika zaštitnih grupa je da one mogu lako da se uklone (tj. bez pojave neželjenih sekundarnih reakcija) na primer solvolizom, redukcijom, fotolizom ili alternativno pod fiziološkim uslovima (npr. enzimskim cepanjem).
[0049] Soli jedinjenja ovog pronalaska koje imaju najmanje jednu grupu koja formira soli mogu da se pripreme na način poznat prosečnim stručnjacima u tehnici. Na primer, soli jedinjenja ovog pronalaska koje imaju kisele grupe mogu da se formiraju, na primer, tretiranjem jedinjenja sa jedinjenjima metala, kao što su soli alkalnih metala pogodnih organskih karboksilnih kiselina, npr. natrijumova so 2-etilheksanike kiseline, sa organskim jedinjenjima alkalnih metala ili zemnoalkalnih metala, kao što su odgovarajući hidroksidi, karbonati ili hidrogen karbonati, kao što su natrijum ili kalijum hidroksid, karbonat ili hidrogen karbonat, sa odgovarajućim jedinjenjima kalcijuma ili sa amonijakom ili nekim pogodnim organskim aminom, pri čemu se poželjno koriste stehiometrijske količine ili samo u malom višku agens za formiranje soli. Adicione soli sa kiselinom jedinjenja ovog pronalaska dobijaju se na uobičajeni način, npr. tretiranjem jedinjenja sa nekom kiselinom ili pogodnim reagensom anjonske izmene. Interne soli jedinjenja ovog pronalaska koje sadrže grupe za formiranje kiselih i baznih soli, npr. slobodna karboksi grupa i slobodna amino grupa, mogu da se obrazuju, npr. neutralizacijom soli, kao što su adicione soli sa kiselinom, do izoelektrične tačke, npr. sa slabom bazom, ili tretiranjem sa jonoizmenjivačima.
[0050] Soli mogu da se konvertuju u slobodna jedinjenja u skladu sa postupcima poznatim prosečnim stručnjacima u tehnici. Soli metala i amonijum soli mogu da se konvertuju, na primer, tretiranjem sa pogodnim kiselinama, i adicionim solima sa kiselinom, na primer, tretiranjem sa pogodnim baznim agensom.
[0051] Mešavine izomera koje se mogu dobiti prema ovom pronalasku mogu se uopšteno razdvojiti na način poznat prosečnim stručnjacima u tehnici u pojedinačne izomere; dijastereoizomeri mogu se razdvojiti, na primer, podelom između polifaznih mešavina rastvarača, rekristalizacijom i/ili hromatografskim razdvajanjem, na primer preko silika gela ili npr. tečnom hromatografijom na srednjem pritisku na reverzno-faznoj koloni, i racemati mogu da se odvoje, na primer, formiranjem soli sa reagensima za formiranje optički čistih soli i separacijom mešavine dijastereoizomera koja se tako može dobiti, na primer pomoću frakcione kristalizacije, ili hromatografijom preko optički aktivnih materijala kolone.
[0052] Intermedijari i gotovi proizvodi mogu da se obrade i/ili prečiste prema standardnim postupcima, npr. upotrebom hromatografskih postupaka, distribucionih postupaka, (re-) kristalizacije, i slično.
[0053] Sledeće se primenjuje uopštenmo na sve postupke navedene ovde gore i u nastavku.
[0054] Sve faze postupka za proizvodnju jedinjenja ovog pronalaska mogu se izvesti pod reakcionim uslovima koji su poznati prosečnim stručnjacima u tehnici, uključujući one navedene posebno, u odsustvu ili, uobičajeno, u prisustvu rastvarača ili razblaživača, uključujući, na primer, rastvarače ili razblaživače koji su inertni prema reagensima korišćenim i rastvaraju ih, u odsustvu ili prisustvu katalizatora, agenasa za kondenzovanje ili neutralizaciju, na primer jonoizmenjivači, kao što su katjonski izmenjivači, npr. u H+ obliku, zavisno od prirode reakcije i/ili reaktanata na sniženoj, normalnoj ili povišenoj temperaturi, na primer u opsegu temperatura od oko -100 °C do oko 190 °C, uključujući, na primer, od približno -80 °C do približno 150 °C, na primer na od -80 do -60 °C, na sobnoj temperaturi, na od -20 do 40 °C ili na temperaturi refluksa, pod atmosferskim pritiskom ili u zatvorenoj posudi, po potrebi pod pritiskom, i/ili u inertnoj atmosferi, na primer u atmosferi argona ili azota.
[0055] U svim fazama reakcija, mešavine izomera koje su formirane mogu da se razdvoje u pojedinačne izomere, na primer dijastereoizomere ili enantiomere, ili u bilo koje željene mešavine izomera, na primer racemati ili mešavine dijastereoizomera.
[0056] Rastvarači od kojih oni rastvarači koji su pogodni za bilo koju posebnu reakciju mogu da budu odabrani uključuju one posebno navedene ili, na primer, vodu, estre, kao što su niži alkil-niži alkanoati, na primer etil acetat, etri, kao što su alifatični etri, na primer dietil etar, ili ciklični etri, na primer tetrahidrofuran ili dioksan, tečni aromatični ugljovodonici, kao što su benzen ili toluen, alkoholi, kao što su metanol, etanol ili 1- ili 2-propanol, nitrili, kao što su acetonitril, halogenovani ugljovodonici, kao što su metilen hlorid ili hloroform, kiseli amidi, kao što su dimetilformamid ili dimetil acetamid, baze, kao što su heterociklične azotne baze, na primer piridin ili N-metilpirolidin-2-on, anhidridi karboksilnih kiselina, kao što su anhidridi nižih alkanskih kiselina, na primer anhidrid sirćetne kiseline, ciklični, linearni ili razgranati ugljovodonici, kao što su ciklo heksan, heksan ili izopentan, meticikloheksan, ili mešavine ovih rastvarača, na primer vodeni rastvori, osim ukoliko je drugačije naznačeno u opisu postupaka. Takve mešavine rastvarača mogu takođe da se koriste u obradi, na primer hromatografijom ili particionisanjem.
[0057] Jedinjenja ovog pronalaska, uključujući njihove soli, mogu takođe da se dobiju u obliku hidrata, ili njihovi kristali mogu, na primer, da ukljućuju rastvarač korišćen za kristalizaciju. Različiti kristalni oblici mogu da budu prisutni.
[0058] Svi polazni materijali, blokovi za građenje, reagensi, kiseline, baze, agensi za dehidrataciju, rastvarači i katalizatori korišćeni za sintezu jedinjenja ovog pronalaska ili su komercijalno dostupni ili se mogu proizvesti postupcima organske sinteze poznatim nekom prosečnom stručnjaku u tehnici.
[0059] Izraz "optički izomer" ili "stereoizomer" odnosi se na bilo koju od brojnih stereoizomernih konfiguracija koje mogu da postoje za dato jedinjenje ovog pronalaska i uključuje geometrijske izomere. Podrazumeva se da neki supstituent može da bude vezan za hiralni centar atoma ugljenika. Pojam "hiralni" odnosi se na molekule koji imaju svojstvo ne-preklapanja sa njihovim partnerom u ogledalu, dok se pojam "ahiralni" odnosi na molekule koji se preklapaju sa njihovim partnerom u ogledalu. Prema tome, ovaj pronalazak uključuje enantiomere, dijastereomere ili racemate jedinjenja. "Enantiomeri" su par stereoizomera koji su ne- preklapajući sa slikama iz ogledala jedan drugog.1:1 mešavina para enantiomera je "racemska" mešavina. Pojam je korišćen da označi racemsku mešavinu po potrebi. "Dijastereoizomeri" su stereoizomeri koji imaju najmanje dva asimetrična atoma, ali koji nisu slike u ogledalu jedan drugog. Apsolutna stereohemija specificirana je prema Cahn- Ingold- Prelog R-S sistemu. Kada je jedinjenje čist enantiomer, stereohemija na svakom hiralnom ugljeniku može da se specificira ili sa R ili sa S. Određena jedinjenja čija je apsolutna konfiguracija nepoznata može da se označi sa (+) ili (-) zavisno od smera (udesno ili ulevo) u kom rotiraju ravan polarizovane svetlosti na talasnoj dužini natrijum D linije. Određena jedinjenja opisana ovde obuhvataju jedan ili više asimetričnih centara ili osa i na taj način mogu da dovedu do enantiomera, dijastereomera, i ostalih stereoizomernih oblika koji mogu da se definišu, u pogledu apsolutne stereohemije, kao (R)- ili (S)-.
[0060] Zavisno od izbora polaznih materijala i procedura, jedinjenja mogu da budu u obliku jednog od mogućih izomera ili kao njihove mešavine, na primer kao optički čisti izomeri, ili kao mešavine izomera, kao što su racemati i mešavine dijastereoizomera, zavisno od broja asimetričnih atoma ugljenika. Ovaj pronalazak treba da uključuje sve takve moguće stereoizomere, uključujući racemske mešavine, mešavine dijastereomera i optički čiste oblike. Optički aktivni (R)- i (S)- izomeri mogu da se pripreme upotrebom hiralnih sintona ili hiralnih reagenasa, ili dobiju upotrebom konvencionalnih tehnika. Ako jedinjenje sadrži dvostruku vezu, supstituent može da bude E ili Z konfiguracija. Ako jedinjenje sadrži disupstituisan cikloalkil, cikloalkilni supstituent može da ima cis- ili trans-konfiguraciju. Svi tautomerni oblici su takođe namenjeni da budu uključeni.
[0061] Bilo koje dobijene mešavine izomera mogu da se razdvoje na osnovu fizikohemijskih razlika konstituenata, u čiste ili suštinski čiste geometrijske ili optičke izomere, dijastereomere, racemate, na primer, hromatografijom i/ili frakcionom kristalizacijom.
[0062] Bilo koji dobijeni racemati krajnjih proizvoda ili intermedijeri mogu da se razlože u optičke antipode poznatim postupci, npr., separacijom njihovih dijastereomernih soli, dobijenih sa optički aktivnom kiselinom ili bazom, i oslobađajući optički aktivno kiselo ili bazno jedinjenje. Posebno, bazna grupa može tako da se koristi za razbijanje jedinjenja ovog pronalaska u njihove optičke antipode, npr., frakcionom kristalizacijom soli formirane sa optički aktivnom kiselinom, npr., vinska kiselina, dibenzoil vinska kiselina, diacetil vinska kiselina, di-O,O'-p-toluoil vinska kiselina, mandelinska kiselina, jabučna kiselina ili kamfor-10-sulfonska kiselina. Racemski proizvodi takođe mogu da se razdvoje hiralnom hromatografijom, npr., tečna hromatografija (HPLC) na visokom pritisku upotrebom hiralnog adsorbenta.
[0063] Dalje, jedinjenja ovog pronalaska, uključujući njihove soli, takođe može da se dobije u obliku njihovih hidrata, ili uključuju ostale rastvarače korišćene za njihovu kristalizaciju. Jedinjenja ovog pronalaska mogu inherentno ili po dizajnu da obrazuju solvate sa farmaceutski prihvatljivim rastvaračima (uključujući vodu); zbog toga, namenjeno je da ovaj pronalazak obuhvata i solvatisane i nesolvatisane oblike. Pojam "solvat" odnosi se na molekulski kompleks jedinjenja ovog pronalaska (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) sa jednim ili više molekula rastvarača. Takvi molekuli rastvarač su oni obično korišćeni u farmaceutskoj tehnici, za koje se zna da su neškodljivi za primaoca, npr., voda, etanol, i slično. Pojam "hidrat" odnosi se na kompleks gde je molekul rastvarača voda.
[0064] Jedinjenja ovog pronalaska, uključujući njihove soli, hidrate i solvate, mogu inheretno ili po dizajnu da obrazuju polimorfe.
[0065] Kao što se ovde koriste, pojmovi "so" ili "soli" odnosi se na adicionu so kiseline ili adicionu so baze jedinjenja ovog pronalaska. "Soli" uključuju posebno "farmaceutski prihvatljive soli". Izraz "farmaceutski prihvatljive soli" odnosi se na soli koje zadržavaju biološku efikasnost i svojstva jedinjenja ovog pronalaska i, koje obično nisu biološki ili drugačije nepoželjni. U mnogim slučajevima, jedinjenja ovog pronalaska mogu da obrazuju kisele i/ili bazne soli zbog prisustva amino i/ili karboksilnih grupa ili grupa njima sličnim.
[0066] Farmaceutski prihvatljive adicione soli sa kiselinom mogu da se formiraju sa neorganskim kiselinama i organskim kiselinama, npr., acetat, aspartat, benzoat, bezilat, bromid/hidrobromid, bikarbonat/karbonat, bisulfat/sulfat, kamforsulfonat, hlorid/hidrohlorid, hlorteofilonat, citrat, etandisulfonat, fumarat, gluceptat, glukonat, glukuronat, hipurat, hidrojodid/jodid, izetionat, laktat, laktobionat, laurilsulfat, malat, maleat, malonat, mandelat, mezilat, metilsulfat, naftoat, napzilat, nikotinat, nitrat, oktadekanoat, oleat, oksalat, palmitat, pamoat, fosfat/hidrogen fosfat/dihidrogen fosfat, poligalakturonat, propionat, stearat, sukcinat, sulfosalicilat, tartrat, tozilat i trifluoroacetat soli.
[0067] Neorganske kiseline od kojih se mogu dobiti soli ukljućuju, na primer, hlorovodoničnu kiselinu, bromovodoničnu kiselinu, sumpornu kiselinu, azotnu kiselinu, fosfornu kiselinu, i slično.
[0068] Organske kiseline od kojih se mogu dobiti soli ukljućuju, na primer, sirćetnu kiselinu, propionsku kiselinu, glikolnu kiselinu, oksalnu kiselinu, maleinsku kiselinu, malonsku kiselinu, sukcinsku kiselinu, fumarnu kiselinu, vinsku kiselinu, limunsku kiselinu, benzojevu kiselinu, mandelinsku kiselinu, metansulfonsku kiselinu, etansulfonsku kiselinu, toluensulfonsku kiselinu, sulfosalicilnu kiselinu, i slično. Farmaceutski prihvatljive adicione soli sa bazom mogu da se obrazuju sa neorganskim i organskim bazama.
[0069] Neorganske baze od kojih se mogu dobiti soli ukljućuju, na primer, amonijum soli i metale iz kolone I do XII periodnog sistema. U određenim primerima izvođenja, soli se dobijaju od natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, magnezijuma, železa, srebra, cinka, i bakra; naročito pogodne soli uključuju amonijum, kalijum, natrijum, kalcijum i magnezijum soli.
[0070] Organske baze od kojih se mogu dobiti soli ukljućuju, na primer, primarne, sekundarne, i tercijarne amine, supstituisane amine uključujući supstituisane amine koji se javljaju u prirodi, ciklične amine, bazne jonoizmenjivačke smole, i slično. Određeni organski amini uključuju izopropilamin, benzatin, holinat, dietanolamin, dietilamin, lizin, meglumin, piperazin i trometamin.
[0071] Farmaceutski prihvatljive soli ovog pronalaska mogu da se sintetizuju od baznih ili kiselih grupa, konvencionalnim hemijskim postupcima. Uopšteno, takve soli mogu da se pripreme reagovanjem slobodnih baznih oblika ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze (kao što su Na, Ca, Mg, ili K hidroksid, karbonat, bikarbonat ili slično), ili reagovanjem slobodnih baznih oblika ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće količine. Te reakcije se obično izvode u vodi ili u nekom organskom rastvaraču, ili u mešavini ta dva. Uopšteno, upotreba nevodenih medijuma kao što su etar, etil acetat, etanol, izopropanol, ili acetonitril je poželjna, gde se može primeniti. Dodatne pogodne soli mogu se naći, npr., u "Remington's Pharmaceutical Sciences", 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); i u "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl i Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Nemačka, 2002).
[0072] Bilo koja formula data ovdetakođe je namenjena da predstavlja neobeležene oblike kao i izotopski obeležene oblike jedinjenja ovog pronalaska. Izotopski obeležena jedinjenja imaju strukture prikazane formulama datim ovde osim što su jedan ili više atoma zamenjeni nekim atomom koji ima odabranu atomsku masu ili maseni broj. Primeri izotopa koji mogu da se ugrade u jedinjenja ovog pronalaska uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, fluora, i hlora, kao što su<2>H,<3>H,<11>C,<13>C,<14>C,<15>N,<18>F<31>P,<32>P,<35>S,<36>Cl,<125>I respektivno. Ovaj pronalazak uključuje razna izotopski obeležen jedinjenja ovog pronalaska, na primer ona u kojima su radioaktivni izotopi, kao što su<3>H i<14>C, ili ona u kojima su ne-radioaktivni izotopi, kao što su<2>H i<13>C, prisutni. Takva izotopski obeležena jedinjenja su korisna u metaboličkim ispitivanjima (sa<14>C), kinetička ispitivanja reakcija (sa, na primer<2>H ili<3>H), tehnike detekcije ili imidžinga, kao što je pozitronska emisiona tomografija (PET) ili kompjuterska tomografija pojedinačnom fotonskom emisijom (SPECT) uključujući testove distribucije leka ili supstrata u tkiva, ili u radioaktivnom tretmanu pacijenata. Posebno,<18>F obeleženo jedinjenje ovog pronalaska može biti posebno poželjno za PET ili SPECT ispitivanja. Izotopski-obeležena jedinjenja ovog pronalaska mogu uopšteno da se pripreme konvencionalnim tehnikama poznatim prosečnim stručnjacima u tehnici ili postupcima analognim onima opisanim u pratećim primerima i pripremama upotrebom odgovarajućeg izotopski-obeleženog reagensa umesto ne-obeleženog reagensa prethodno korišćenog.
[0073] Dalje, supstitucija sa težim izotopima, naročito deuterijumom (tj.,<2>H ili D) može da priušti određene terapeutske prednosti koje proizilaze iz veće metaboličke stabilnosti, na primer povećan in vivo poluživot ili smanjeni dozni zahtevi ili poboljšanje terapeutskog indeksa. Razume se da se deuterijum u ovom kontekstu odnosi kao supstituent jedinjenja ovog pronalaska. Koncentracija takvog težeg izotopa, naročito deuterijuma, može da se definiše faktorom izotopskog obogaćivanja. Izraz "faktor izotopskog obogaćivanja" kao što se ovde koristi znači odnos između izotopskog izobilja i prirodnog izobilja naznačenog izotopa. Ako je supstituent u jedinjenju ovog pronalaska ozmačen deuterijum, to jedinjenje ima faktor izotopskog obogaćivanja za svaki označeni atom deuterijuma od najmanje 3500 (52,5% ugradnja deuterijuma u svaki označeni atom deuterijuma), najmanje 4000 (60% ugradnja deuterijuma), najmanje 4500 (67,5% ugradnja deuterijuma), najmanje 5000 (75% ugradnja deuterijuma), najmanje 5500 (82,5% ugradnja deuterijuma), najmanje 6000 (90% ugradnja deuterijuma), najmanje 6333,3 (95% ugradnja deuterijuma), najmanje 6466,7 (97% ugradnja deuterijuma), najmanje 6600 (99% ugradnja deuterijuma), ili najmanje 6633,3 (99,5% ugradnja deuterijuma).
[0074] Farmaceutski prihvatljivi solvati u skladu sa ovim pronalaskom uključuju one gde rastvarač kristalizacije može biti izotopski supstituisan, npr. D2O, d6-aceton, d6-DMSO.
[0075] Jedinjenja ovog pronalaska koja sadrže grupe koje mogu da deluju kao donori i/ili akceptori za vodonične veze mogu da formiraju kokristale sa pogodnim supstancama za obrazovanje kokristala. Ovi kokristali mogu da se pripreme od jedinjenja ovog pronalaska poznatim postupcima za obrazovanje kokristala. Takvi postupci uključuju drobljenje, zagrevanje, ko-sublimaciju, ko-topljenje, ili dovođenje u kontakt u rastvoru jedinjenja ovog pronalaska sa supstancom za obrazovanje kokristala pod uslovima kristalizacije i izolovanje tako dobijenih kokristala. Pogodne supstance za obrazovanje kokristala uključuju one opisane u WO 2004/078163. Stoga, ovaj pronalazak dalje obezbeđuje kokristale koji obuhvataju jedinjenje ovog pronalaska.
[0076] Svi postupci opisani ovde mogu da se izvedu bilo kojim pogodnim redosledom osim ukoliko je drugačije navedeno ovde ili drugačije jasno u suprotnosti sa kontekstom. Upotreba bilo kog i svih primera, ili primernog jezika (npr. "kao što je") obezbeđenih ovde samo je namenjena radi boljeg razumevanja ovog pronalaska i ne predstavlja ograničenje obima ovog pronalaska inače obuhvaćenog patentnim zahtevima.
[0077] Ovaj pronalazak obezbeđuje nova jedinjenja, farmaceutske formulacije uključujući jedinjenja, i postupke za lečenje neke infekcije Gram-negativnim bakterijama. Posebno, jedinjenja su pogodna za upotrebu za lečenje infekcija izazvanih Burkholderia, Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Meningitidis, Morganella, Pseudomonas, Proteus, Salmonella, Serratia, Acinetobacter, Bacteroides, Campylobacter, Neisseria, ili Stenotrophomonas bakterijama, uključujući vrste navedene ovde.
[0078] Supstitucija sa težim izotopima kao što je deuterijum, tj.<2>H, može da priušti određene terapeutske prednosti koje proizilaze iz veće metaboličke stabilnosti, na primer, povećan in vivo poluživo ili smanjeni dozni zahtevi, i, stoga, može da bude poželjna u nekim okolnostima. Na primer, supstitucija deuterijuma na ne-zamenljivim vezama ugljovodinika (npr., C-H) može da uspori epimerizaciju i/ili metaboličku oksidaciju in vivo.
[0079] Izotopski-obeležena jedinjenja ovog pronalaska, tj. jedinjenja formule (I), mogu uopšteno da se pripreme uobičajenim tehnikama poznatim prosečnim stručnjacima u tehnici ili postupcima analognim onima opisanim u pratećim odeljcima primeri i pripreme upotrebom odgovarajućeg izotopskiobeleženog reagensa umesto ne-obeleženog reagensa prethodno.
[0080] U još nekom drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupku lečenja subjekta sa infekcijom gram-negativnim bakterijama, pri čemu taj postupak obuhvata fazu davanja subjektu kom je to potrebno antibakterijski efikasne količine jedinjenja ovog pronalaska, npr., jedinjenje formule (I), ili njegove soli, sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.
[0081] Jedinjenja ovog pronalaska takođe su korisna u lečenju pacijenata koji boluju od ili se sumnja da imaju pneumoniju, sepsu, cističnu fibrozu, povredu, iskomplikovano dijabetesno stopalo ili komplikovane infekcije urinarnog trakta i seksualno prenosive bolesti izazvane Gram-negativnim patogenima. Jedinjenja ovog pronalaska takođe su korisna u stanjima koja su izazvana vrstama Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Salmonella, Serratia, Pseudomonas, Acinetobacter, Bacteroides, Burkholderia, Campylobacter, Neisseria, ili Stenotrophomonas. Posebno, bakterijska infekcija izazvana vrstama Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Salmonella, Serratia, Pseudomonas, ili Acinetobacter može da se leči postupcima ovde. Određene bakterijske vrste za takvo lečenje uključuju Citrobacter freundii, Citrobacter koseri, Enterobacter cloacae, Enterobacter faecalis, Enterobacter faecium, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oksitoca, Morganella morganii, Proteus mirabilis, Salmonella species, Serratia marcescens, Pseudomonas aeruginosa, i Acinetobacter baumanii, kao i Bacteroides bivius, Bacteroides fragilis, Burkholderia cepacia, Campylobacter jejuni, Neisseria gonorrhoeae, i Stenotrophomonas maltophilia.
[0082] Jedinjenje ovog pronalaska takođe može da se koristi u kombinaciji sa ostalim agensima, npr., dodatni antibiotički agens koji je ili nije formule (I), za lečenje neke bakterijske infekcije kod subjekta, ili jedinjenja koje poboljšava antibakterijsku aktivnost jedinjenja ovog pronalaska, uključujući pojačivače kao što su inhibitori beta-laktamaza (BLI). Pogodni BLI za upotrebu u kombinaciji sa jedinjenjima ovog pronalaska, uključujući jedinjenja formule (I) i njihove podvrste, uključuju avibaktam, klavulansku kiselinu, sulbaktam, tazobaktam, i ostala jedinjenja formule
u kojoj M je H ili farmaceutski prihvatljivi katjon, a R predstavlja CN,-C(O)NR<1>R<2>, ili opciono supstituisanu 5-6-člani heterockličnu ili heteroarilnu grupu. Pogodni amidi uključuju one gde R<1>je H ili C1-4alkil, a R<2>je opciono supstituisan C1-4alkil, opciono supstituisan C1-4alkoksi, opciono supstituisan C1-4alkilamino, opciono supstituisana C5-6heterociklična grupa, ili -NH-C(O)-R<3>, gde je R<3>opciono supstituisan C1-4alkil, opciono supstituisan C1-4alkoksi, opciono supstituisan C1-4alkilamino, opciono supstituisana C5-6heterociklična grupa. Svaka heterociklična ili heteroarilna grupa u ovim jedinjenjima sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članova prstena, i svaka opciono supstituisana grupa može da bude supstituisana sa 1-2 grupe odabrane od CN, halo, -OH, C1-4alkila, C1-4alkoksi, amino, C1-4alkilamino, di(C1-4alkil)amino, -COO(C1-4alkil), i 5-6-članih heterocikličnih grupa. Pogodna jedinjenja ove formule opisana su u WO2008/039420, WO2009/091856, WO2013/122888, WO2010/126820, WO2009/091856, WO2013/038330, US2013/0225554, WO2013149121, WO2013149136, WO2014141132 i WO2014/033560.
[0083] Pojam "kombinacija", znači ili fiksnu kombinaciju u jednom doznom jediničnom obliku, ili komplet ili instrukcije za kombinovano davanje gde se jedinjenje ovog pronalaska i partner kombinacije može dati nezavisno u isto vreme ili odvojeno u okviru vremenskih intervala što naročito omogućava da partneri kombinacija pokazuju kooperativno, npr., sinergističko, dejstvo, ili bilo koja njihova kombinacija.
[0084] Primer izvođenja ovog pronalaska obezbeđuje jedinjenja ovog pronalaska u farmaceutskoj kombinaciji sa nekim drugim terapeutskim agensom. U nekim primerima izvođenja, drugi terapeutski agens je neki antibakterijski agens. Neograničavajući primeri antibakterijskih agenasa za upotrebu u farmaceutskim kombinacijaama ovog pronalaska mogu da se odaberu iz sledećih grupa:
(1) Makrolidi ili ketolidi kao što su eritromicin, azitromicin, klaritromicin, i telitromicin;
(2) Beta-laktami uključujući penicilin kao što je penicilin G, penicilin V, meticilin, oksacilin, kloksacilin, dikloksacilin, nafcilin, ampicilin, amoksicilin, karbenicilin, tikarcilin, mezlocilin, piperacilin, azlocilin, temocilin, cefalosporin kao što je cepalotin, cefapirin, cefradin, cefaloridin, cefazolin, cefamandol, cefuroksim, cefaleksin, cefprozil, cefaklor, lorakarbef, cefoksitin, cefinetazol, cefotaksim, ceftizoksim, ceftriakson, cefoperazon, ceftazidim, cefiksim, cefpodoksim, ceftibuten, cefdinir, cefpirom, cefepim, i karbapenemi kao što su doripenem, imipenem, meropenem i PZ-601;
(3) Glikopeptidi kao što su vankomicin i teikoplanin;
(4) Kvinoloni kao što su nalidiksinska kiselina, oksolinska kiselina, norfloksacin, pefloksacin, enoksacin, ofloksacin, levofloksacin, ciprofloksacin, temafloksacin, lomefloksacin, fleroksacin, grepafloksacin, sparfloksacin, trovafloksacin, klinafloksacin, gatifloksacin, moksifloksacin, sitafloksacin, ganefloksacin, gemifloksacin i pazufloksacin;
(5) Antibakterijski sulfonamidi i antibakterijski sulfanilamidi, uključujući para-aminobenzojevu kiselinu, sulfadiazin, sulfizoksazol, sulfametoksazol i sulfatalidin;
(6) Aminoglikozidi kao što su streptomicin, neomicin, kanamicin, paromicin, gentamicin, tobramicin, amikacin, netilmicin, spektinomicin, sizomicin, dibekalin i izepamicin;
(7) Tetraciklini kao što su tetraciklin, hlortetraciklin, demeklociklin, minociklin, oksitetraciklin, metaciklin, doksiciklin, tigeciklin;
(8) Rifamicini kao što su rifampicin (takođe se naziva rifampin), rifapentin, rifabutin, bezoksazinorifamicin i rifaksimin;
(9) Linkozamidi kao što su linkomicin i klindamicin;
(10) Streptogramini kao što su kvinupristin i daflopristin;
(11) Oksazolidinoni kao što su linezolid ili tedizolid;
(12) Polimiksin, kolistin i kolimicin;
(13) Trimetoprim i bacitracin;
(14) Inhibitori efluks pumpe;
(15) Inhibitori beta-laktamaza, uključujući avibaktam i njihove analoge, i one opisane gore.
[0085] Drugi antibakterijski agens može da se daje u kombinaciji sa jedinjenjima ovog pronalaska u kojoj se drugi antibakterijsk agens daje pre, istovremeno, ili posle jedinjenja ili jedinjenja ovog pronalaska. Kada je poželjno istovremeno davanje jedinjenja ovog pronalaska sa drugim agensom i put davanja je isti, onda jedinjenje ovog pronalaska može da se formuliše sa drugim agensom u isti dozni oblik. Primer doznog oblika koji sadrži jedinjenje ovog pronalaska i drugi agens je intravenozno davanje. Alternativni primer je intramuskularno davanje rastvora koji obuhvata jedinjenje ovog pronalaska i drugi agens.
[0086] Jedinjenja i kompozicije opisane ovde mogu da se koriste ili daju u kombinaciji sa jednim ili više terapeutskih agenasa koji deluju kao imunomodulatori, npr., aktivator kostimulatornog molekula, ili inhibitor molekula koji inhibiraju imunski sistem, ili vakcina. Protein programirane smrti 1 (PD-1) je inhibitorni član proširene CD28/CTLA4 familije T ćelijskih regulatora (Okazaki et al. (2002) Curr Opin Immunol 14: 391779-82; Bennett et al. (2003) J. Immunol.170:711-8). PD-1 eksprimira se na aktiviranim B ćelijama, T ćelijama, i monocitima. PD-1 je inhibitorni protein imunskog sistema koji negativno reguliše TCR signale (Ishida, Y. et al. (1992) EMBO J.11:3887-3895; Blank, C. et al. (Epub 2006 Dec.29) Immunol. Immunother.56(5):739-745), i ushodno je regulisan kod hroničnih infekcija. Interakcija između PD-1 i PD-L1 može da deluje kao kontrolna tačka imunskog sistema, koja može da dovede do, npr., smanjenja u infiltrirajućim limfocitima, smanjenja proliferacije posredovane T-ćelijskim receptorom, i/ili evazije imunskog sistema kancerogenim ili inficiranim ćelijama (Dong et al. (2003) J. Mol. Med.81:281-7; Blank et al. (2005) Cancer Immunol. Immunother.54:307-314; Konishi et al. (2004) Clin. Cancer Res.10:5094-100). Supresija imunskog sistema može da se preokrene inhibiranjem lokalne interakcije PD-1 sa PD-L1 ili PD-L2; efekat je aditivan kada je interakcija PD-1 sa PD-L2 blokirana isto tako (Iwai et al. (2002) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 99:12293-7; Brown et al. (2003) J. Immunol.170:1257-66). Imunomodulacija može da se postigne vezivanjem ili za inhibitorni protein imunskog sistema (npr., PD-1) ili za vezujuće proteine koji moduliraju inhibitorni protein (npr., PD-L1, PD-L2).
[0087] U jednom primeru izvođenja, terapije kombinacija ovog pronalaska uključuju imunomodulator koji je neki inhibitor ili antagonist inhibitornog molekula molekula kontrolne tačke imunskog sistema. U nekom drugom primeru izvođenja, imunomodulator se vezuje za protein koji prirodno inhibira imunski sistem-inhibitorni molekulkontrolne tačke . Kada se koristi u kombinaciji sa antibakterijskim jedinjenjima, ovi imunomodulatori mogu da poboljšaju antimikrobni odgovor, i tako poboljšaju efikasnost u odnosu na tretman sa antibakterijskim jedinjenjem samo.
[0088] Izraz "kontrolna tačka imunskog sistema" odnosi se na grupu molekula na ćelijskoj površini CD4 i CD8 T ćelija. Ovi molekuli mogu efikasno da služe kao "kočnice" za nishodnu modulaciju ili inhibiciju adaptivnog imunog odgovora. Molekuli kontrolne tačke imunskog sistema uključuju, ali nisu ograničeni na, programirane smrti 1 (PD-1), citotoksični T-limfocitni antigen 4 (CTLA-4), B7H1, B7H4, OX-40, CD137, CD40, i LAG3, koji direktno inhibiraju imune ćelije. Imunoterapeutski agensi koji mogu da deluju kao inhibitore kontrolne tačke imunskog sistema korisni u postupcima ovog pronalaska, uključuju, ali nisu ograničeni na, inhibitore od PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 i/ili TGFR beta. Inhibicija inhibitornog molekula može da izvede inhibicijom na nivou DNK, RNK ili proteina. U nekim primerima izvođenja, inhibitorna nukleinska kiselina (npr., dsRNA, siRNA ili shRNA), može da se koristi za inhibiciju ekspresije inhibitornog molekula. U ostalim primerima izvođenja, inhibitor inhibitornog signala je polipeptid, npr., rastvorljiv ligand, ili antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, koji se vezuje za inhibitorni molekul.
[0089] Izraz "u kombinaciji sa," nema nameru da označava da terapija ili terapeutski agensi moraju da se daju u isto vreme i/ili formulišu za zajednočku dostavu, iako su ovi postupci dostave unutar obima opisanog ovde. Imunomodulator može da se daje istovremeno sa, pre, ili posle, jednog ili više jedinjenja ovog pronalaska, i opciono jedne ili više dodatnih terapija ili terapeutskih agenasa. Terapeutski agensi u kombinaciji mogu da se daju bilo kojim redosledom. Uopšteno, svaki agens će da se daje u dozi i/ili u vremenskom rasporedu određenom za taj agens. Dalje će biti jasno da terapeutski agensi korišćeni u ovoj kombinaciji mogu da se daju zajedno u jednoj kompoziciji ili da se daju odvojeno u različitim kompozicijama. Uopšteno, očekivano je da će se svaki od terapeutskim agenasa korišćenih u kombinaciji koristiti na nivoima koji ne prelaze nivoe na kojima se oni koriste pojedinačno. U nekim primerima izvođenja, nivoi korišćeni u kombinaciji biće niži od onih korišćenih pojedinačno.
[0090] U određenim primerima izvođenja, antibakterijska jedinjenja opisana ovde se daju u kombinaciji sa jednim ili više imunomodulatora koji su inhibitori za PD-1, PD-L1 i/ili PD-L2. Svaki takav inhibitor može da bude neko antitelo, njegov antigen-vezujući fragment, imunoadhezin, fuzioni protein, ili oligopeptid. Primeri tih imunomodulatora poznati su u tehnici.
[0091] U nekim primerima izvođenja, imunomodulator je neko anti-PD-1 antitelo odabrano od MDX-1106, Merck 3475 ili CT- 011.
[0092] U nekim primerima izvođenja, imunomodulator je neki imunoadhezin (npr., imunoadhezin koji obuhvata ekstracelularni ili PD-1 vezujući deo PD-LI ili PD-L2 fuzionisan sa konstantnim regionom (npr., Fc region sekvence imunoglobulina).
[0093] U nekim primerima izvođenja, imunomodulator je PD-1 inhibitor kao što je AMP-224.
[0094] U nekim primerima izvođenja, imunomodulator je PD-LI inhibitor kao što je anti-PD-LI antitelo.
[0095] U nekim primerima izvođenja, imunomodulator je anti-PD-LI vezujući antagonist odabran od YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C, ili MDX-1105. MDX-1105, takođe poznat kao BMS-936559, je anti-PD-LI antitelo opisano u WO2007/005874. Antitelo YW243.55.S70 je anti-PD-LI opisano u WO 2010/077634.
[0096] U nekim primerima izvođenja, imunomodulator je nivolumab (CAS registarski broj: 946414-94-4). Alternativna imena za nivolumab uključuju MDX-1106, MDX-1106-04, ONO-4538, ili BMS-936558.
Nivolumab je potpuno humano IgG4 monoklonalno antitelo koje specifično blokira PD-1. Nivolumab (klon 5C4) i ostala humana monoklonalna antitela koja se specifično vezuju za PD-1 su opisana u US 8,008,449, EP2161336 i WO2006/121168.
[0097] U nekim primerima izvođenja, imunomodulator je anti-PD-1 antitelo Pembrolizumab.
Pembrolizumab (takođe se naziva Lambrolizumab, MK-3475, MK03475, SCH-900475 ili KEYTRUDA®; Merck) je humanizovano IgG4 monoklonalno antitelo koje se vezuje za PD-1. Pembrolizumab i ostala humanizovana anti-PD-1 antitela opisana su u Hamid, O. et al. (2013) New England Journal of Medicine 369 (2): 134-44, US 8,354,509, WO2009/114335, i WO2013/079174.
[0098] U nekim primerima izvođenja, imunomodulator je Pidilizumab (CT-011; Cure Tech), humanizovano IgG1k monoklonalno antitelo koje se vezuje za PD1. Pidilizumab i ostala humanizovana anti-PD-1 monoklonalna antitela opisana su u WO2009/101611.
[0099] Ostala anti-PD1 antitela korisna kao imunomodulatori za upotrebu u postupcima opisanim ovde uključuju AMP 514 (Amplimmune), i anti-PD1 antitela opisana u US 8,609,089, US 2010028330, i/ili US 20120114649. U nekim primerima izvođenja, anti-PD-L1 antitelo je MSB0010718C. MSB0010718C (takođe se naziva A09-246-2; Merck Serono) je monoklonalno antitelo koje se vezuje za PD-L1.
[0100] U nekim primerima izvođenja, imunomodulator je MDPL3280A (Genentech / Roche), humano Fc optimizovano IgG1 monoklonalno antitelo koje se vezuje za PD-L1. MDPL3280A i ostala humana monoklonalna antitela za PD-L1 opisana su u U.S. Patent br.: 7,943,743 i U.S objavi br.: 20120039906. Ostali anti-PD-L1 vezujući agensi korisni kao imunomodulatori za postupke ovog pronalaska uključuju YW243.55.S70 (videti WO2010/077634), MDX-1105 (takođe se naziva BMS-936559), i anti-PD-L1 vezujuće agense opisane u WO2007/005874.
[0101] U nekim primerima izvođenja, imunomodulator je AMP-224 (B7-DCIg; Amplimmune; npr., opisan u WO2010/027827 i WO2011/066342), je PD-L2 Fc fuzioni rastvorljivi receptor koji blokira interakciju između PD1 i B7-H1.
[0102] U nekim primerima izvođenja, imunomodulator je anti-LAG-3 antitelo kao što je BMS-986016. BMS-986016 (takođe se naziva BMS986016) je monoklonalno antitelo koje se vezuje za LAG-3. BMS986016 i ostala humanizovana anti-LAG-3 antitela opisana su u US 2011/0150892, WO2010/019570, i WO2014/008218.
[0103] U određenim primerima izvođenja, terapije kombinacija opisane ovde uključuju modulator kostimulatornog molekula ili inhibitorni molekul, npr., ko-inhibitorni ligand ili receptor.
[0104] U jednom primeru izvođenja, kostimulatorni modulator, npr., agonist, kostimulatornog molekula odabran je od agonista (npr., agonističko antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, ili rastvorljiv fuzioni) OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3 ili CD83 liganda.
[0105] U nekom drugom primeru izvođenja, terapije kombinacija opisane ovde uključuju imunomodulator koji je kostimulatorni molekul, npr., agonist povezan sa pozitivnim signalom koji uključuje kostimulatorni domen od CD28, CD27, ICOS i/ili GITR.
[0106] Primeri GITR agonista uključuju, npr., GITR fuzione proteine i anti-GITR antitela (npr., dvovalentna anti-GITR antitela), kao što su, GITR fuzioni protein described u U.S. Patentu br.: 6,111,090, Evropskom Patentu br.: 090505B1, U.S Patentu br.: 8,586,023, PCT objavi br.: WO 2010/003118 i 2011/090754, ili anti-GITR antitelo opisano, npr., u U.S. Patentu br.: 7,025,962, Evropskom Patentu br.: 1947183B1, U.S. Patentu br.: 7,812,135, U.S. Patentu br.: 8,388,967, U.S. Patentu br.: 8,591,886, Evropskom Patentu br.: EP 1866339, PCT objavi br.: WO 2011/028683, PCT objavi br. :WO 2013/039954, PCT objavi br.: WO2005/007190, PCT objavi br.: WO 2007/133822, PCT objavi br.: WO2005/055808, PCT objavi br.: WO 99/40196, PCT objavi br.: WO 2001/03720, PCT objavi br.: WO99/20758, PCT objavi br.: WO2006/083289, PCT objavi br.: WO 2005/115451, U.S. Patentu br.: 7,618,632, i PCT objavi br.: WO 2011/051726.
[0107] U jednom primeru izvođenja, korišćen imunomodulator je rastvorljiv ligand (npr., CTLA-4-Ig), ili antitelo ili fragment antitelo koji se vezuje za PD-L1, PD-L2 ili CTLA4. Na primer, molekul anti-PD-1 antitela može da se daje u kombinaciji sa anti-CTLA-4 antitelom, npr., ipilimumab, na primer. Primeri anti-CTLA4 antitela uključuju Tremelimumab (IgG2 monoklonalno antitelo dostupno od Pfizer, prethodno poznat kao ticilimumab, CP-675,206); i Ipilimumab (CTLA-4 antitelo, takođe poznato kao MDX-010, CAS br.477202-00-9).
[0108] U jednom primeru izvođenja, molekul anti-PD-1 antitela se daje nakon tretmana sa jedinjenjem ovog pronalaska kao što je opisano ovde.
[0109] U nekom drugom primeru izvođenja, molekul anti-PD-1 ili PD-L1 antitela se daje u kombinaciji sa anti-LAG-3 antitelom ili njegovim antigen-vezujućim fragmentom. U nekom drugom primeru izvođenja, molekul anti-PD-1 ili PD-L1 antitela se daje u kombinaciji sa anti-TIM-3 antitelom ili njegovim antigenvezujućim fragmentom. U čak ostalim primerima izvođenja, molekul anti-PD-1 ili PD-L1 antitela se daje u kombinaciji sa anti-LAG-3 antitelom i anti-TIM-3 antitelom, ili njihovim antigen-vezujućim fragmentima. Kombinacija antitela navedenih ovde može da se daje odvojeno, npr., kao zasebna antitela, ili povezano, npr., kao molekul bispecifičnog ili trispecifičnog antitela. U jednom primeru izvođenja, bispecifično antitelo koje uključuje molekul anti-PD-1 ili PD-L1 antitela i anti-TIM-3 ili anti-LAG-3 antitelo, ili njegov antigen-vezujući fragment, se daje. U određenim primerima izvođenja, kombinacija antitela navedenih ovde koristi se za lečenje kancera, npr., kancer kao što je opisan ovde (npr., čvrsti tumor). Efikasnost gore navedenih kombinacija može da se testira u životinjskim modelima poznatim u tehnici. Na primer, životinjski modeli za testiranje sinergističkog efekta anti-PD-1 i anti-LAG-3 su opisani, npr., u Woo et al. (2012) Cancer Res.72(4):917-27).
[0110] Primeri imunomodulatora koji mogu da se koriste u terapijama kombinacija uključuju, ali nisu ograničeni na, npr., afutuzumab (dostupan od Roche®); pegfilgrastim (Neulasta®); lenalidomid (CC-5013, Revlimid®); talidomid (Thalomid®), aktimid (CC4047); i citokini, npr., IL-21 ili IRX-2 (mešavina humanih citokina uključujući interleukin 1, interleukin 2, i interferon γ, CAS 951209-71-5, dostupnih od IRX Therapeutics).
[0111] Primeri doza tih imunomodulatora koji mogu da se koriste u kombinaciji sa antibakterijskim jedinjenjima ovog pronalaska uključuju dozu molekula anti-PD-1 antitela od oko 1 do 10 mg/kg, npr., 3 mg/kg, i dozu anti-CTLA-4 antitela, npr., ipilimumab, od oko 3 mg/kg.
[0112] Primeri izvođenja antibakterijskih jedinjenja ovog pronalaska za upotrebu u kombinaciji sa imunomodulatorom u postupcima uključuju primere izvođenja u kojima su ovi postupci:
i. Postupak za lečenje bakterijske infekcije kod subjekta, koji obuhvata davanje subjektu jedinjenja formule (I) kao što je opisano ovde, i imunomodulatora.
ii. Postupak primera izvođenja i, u kom je imunomodulator aktivator kostimulatornog molekula ili inhibitor molekul kontrolne tačke imunskog sistema.
iii. Postupak bilo kog od primera izvođenja i i ii, u kom je aktivator kostimulatornog molekula agonist jednog ili više OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3 i CD83 liganda.
iv. Postupak prema bilo kom od primera izvođenja i-iii gore, u kom inhibitor molekula kontrolne tačke imunskog sistema je odabran od PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 i TGFR beta.
v. Postupak prema bilo kom od primera izvođenja i-iii, u kom je inhibitor molekula kontrolne tačke imunskog sistema odabran od inhibitora PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3 ili CTLA4, ili bilo koje njihove kombinacije.
vi. Postupak prema bilo kom od primera izvođenja i-v, u kom je inhibitor molekula kontrolne tačke imunskog sistema rastvorljiv ligand ili antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, koji se vezuje za molekul kontrolne tačke imunskog sistema.
vii. Postupak prema bilo kom od primeri izvođenja i-vi, u kom je antitelo ili njegov antigenvezujući fragment od IgG1 ili IgG4 (npr., humani IgG1 ili IgG4).
viii. Postupak prema bilo kom od primera izvođenja i-vii, u kom je antitelo ili njegov antigenvezujući fragment izmenjen, npr., mutiran, kako bi se povećao ili smanjio jedan ili više od: vezivanja Fc receptora, glikozilacije antitela, broj cisteinskih ostataka, funkcije efektorske ćelije, ili funkcije komplementa.
ix. Postupak prema bilo kom od primera izvođenja i-viii, u kom je molekul antitela molekul bispecifičnog ili multispecifičnog antitela koji ima prvu specifičnost vezivanja za PD-1 ili PD-L1 i drugu specifičnost vezivanja za TIM-3, LAG-3, ili PD-L2.
x. Postupak prema bilo kom od primera izvođenja i-ix, u kom je imunomodulator anti-PD-1 antitelo odabrano od Nivolumab, Pembrolizumab ili Pidilizumab.
xi. Postupak prema bilo kom od primera izvođenja i-x, u kom je imunomodulator anti-PD-L1 antitelo odabrano od YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C, ili MDX-1105.
xii. Postupak prema bilo kom od primera izvođenja i-x, u kom je imunomodulator molekul anti-LAG-3 antitela.
xiii. Postupak primera izvođenja xii, u kom molekul anti-LAG-3 antitelo predstavlja BMS-986016,
xiv. Postupak prema bilo kom od primera izvođenja i-x, u kom je imunomodulator molekul anti-PD-1 antitela koji se daje injekcijom (npr., subkutano ili intravenozno) u dozi od oko 1 do 30 mg/kg, npr., oko 5 do 25 mg/kg, oko 10 do 20 mg/kg, oko 1 do 5 mg/kg, ili oko 3 mg/kg., npr., jednom nedeljno na svake 2, 3, ili 4 nedelje.
xv. Postupak primera izvođenja xiv, u kom se molekul anti-PD-1 antitela daje u dozi od oko 10 do 20 mg/kg svake druge nedelje.
xvi. Postupak primera izvođenja xv, u kom se molekul anti-PD-1 antitela, npr., nivolumab, daje intravenozno u dozi od oko 1 mg/kg do 3 mg/kg, npr., oko 1 mg/kg, 2 mg/kg ili 3 mg/kg, svake dve nedelje.
xvii. Postupak primera izvođenja xv, u kom se molekul anti-PD-1 antitela, npr., nivolumab, daje intravenozno u dozi od oko 2 mg/kg u 3-nedeljnim intervalima.
[0113] Izraz "efikasna količina" jedinjenja predstavlja količinu potrebnu ili dovoljnu za lečenje ili sprečavanje neke bakterijske infekcije i/ili bolesti ili stanja opisanih ovde. U nekom primeru, efikasna količina jedinjenja je količina dovoljna za lečenje bakterijske infekcije kod subjekta. U nekom drugom primeru, efikasna količina jedinjenja je količina dovoljna za lečenje neke bakterijske infekcije, kao što je, ali bez ograničenja na, Pseudomonas aeruginosa i slično kod subjekta. Efikasna količina može da varira zavisno od takvih faktora kao veličina i masa subjekta, vrsta oboljenja, ili posebno jedinjenje ovog pronalaska. Na primer, izbor jedinjenja ovog pronalaska može da utiče na ono što čini "efikasnu količinu." Neki prosečan stručnjak u tehnici moći će da ispita faktore sadržane ovde i donese odluku u vezi efikasne količine jedinjenja ovog pronalaska bez nepotrebnog eksperimentisanja.
[0114] Režim davanja može da utiče na ono što čini efikasnu količinu. Jedinjenje ovog pronalaska može da se daje subjektu ili pre ili posle pojave neke bakterijske infekcije. Obično, jedinjenje se daje subjektu kod kog je dijagnostifikovana neka bakterijska infekcija i potreban je tretman zbog toga. Dalje, nekoliko podeljenih doza, kao i raspoređenje doze, mogu da se daju svakodnevno ili uzastopno, ili doza može da se kontinuirano unosi putem infuzije, ili može da bude bolusna injekcija. Dalje, doze jedinjenja ovog pronalaska mogu da se proporcionalno povećaju ili smanje kako je pokazano potrebama terapeutske ili profilaktičke situacije. Obično, jedinjenje ovog pronalaska davaće se tokom najmanje 5 dana, češće najmanje 7 dana ili najmanje 10 dana ili najmanje 14 dana.
[0115] Jedinjenja ovog pronalaska mogu da se koriste u lečenju stanja, poremećaja ili bolesti kao što je opisano ovde, ili za proizvodnju farmaceutskih kompozicija za upotrebu u lečenju ovih bolesti. Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja ovog pronalaska za upotrebu u lečenju ovih bolesti ili farmaceutske preparate koji sadrže jedinjenja ovog pronalaska za upotrebu u lečenju ovih bolesti.
[0116] Izraz "farmaceutska kompozicija" uključuje preparate pogodne za davanje sisarima, npr., ljudima. Kada se jedinjenja ovog pronalaska daju kao farmaceutici sisarima, npr., ljudima, mogu da se daju per se ili kao farmaceutska kompozicija koja sadrži, na primer, 0,1 do 99,5% (poželjnije, 0,5 do 90%) aktivnog sastojka u kombinaciji sa nekim farmaceutski prihvatljivim nosačem.
[0117] Izraz "farmaceutski prihvatljivi nosač" je prepoznaje se u tehnici i uključuje farmaceutski prihvatljiv materijal, kompoziciju ili vozilo, pogodan za davanje jedinjenja ovog pronalaska sisarima.
Nosači uključuju tečni ili čvrsti punioc, razblaživač, ekscipijens, rastvarač ili enkapsulirajući materijal, uključene u nošenje ili transport agensa kod subjekta od jednog organa, ili dela tela, do drugog organa, ili dela tela. Svaki nosač mora da bude "prihvatljiv" u smislu da je kompatibilan sa ostalim sastojcima formulacije i neškodljiv za pacijenta. Naki primeri materijala koji mogu da služe kao farmaceutski prihvatljivi nosači uključuju: šećere, kao što su laktoza, glukoza i saharoza; skrobove, kao što su kukuruzni skrob i krompirov skrob; celulozu, i njene derivate, kao što su natrijum karboksimetil celuloza, etil celuloza i celuloza acetat; praškasti tragakant; slad; želatin; talk; ekscipijense, kao što su kakao buter i voskovi za supozitorije; ulja, kao što su ulje kikirikija, ulje semena pamuka, suncokretovo ulje, susamovo ulje, maslinovo ulje, kukuruzno ulje i sojino ulje; glikole, kao što je propilen glikol; poliole, kao što su glicerin, sorbitol, manitol i polietilen glikol; estre, kao što su etil oleat i etil laurat; agar; puferišuće agense, kao što su magnezijum hidroksid i aluminijum hidroksid; alginsku kiselinu; vodu bez pirogena; izotonični slani rastvor; Ringerov rastvor; etil alkohol; fosfatne puferske rastvore; i ostale ne-toksične kompatibilne supstance korišćene u farmaceutskim formulacijama. U nekim primerima izvođenja, farmaceutski prihvatljivi nosač steriliše se pre kombinovanja sa jedinjenjem ovog pronalaska.
[0118] U nekim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija ovog pronalaska obuhvata jedinjenje prema bilo kom od nabrojanih primera izvođenja i najmanje jedan farmaceutski prihvatljivi nosač ili ekscipijens. U određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija ovog pronalaska obuhvata jedinjenje prema bilo kom od nabrojanih primera izvođenja i najmanje dva farmaceutski prihvatljiva nosača ili ekscipijensa.
[0119] Agensi za vlaženje, emulgatori i lubrikanti, kao što su natrijum lauril sulfat i magnezijum stearat, kao i agensi za bojenje, agensi oslobađanja, agensi za oblaganje, zaslađivač, agensi za ukus i miris, konzervansi i antioksidansi mogu takođe da budu prisutni u kompozicijama.
[0120] Primeri farmaceutski prihvatljivih antioksidanasa uključuju: antioksidanse rastvorne u vodi, kao što su askorbinska kiselina, cistein hidrohlorid, natrijum bisulfat, natrijum metabisulfit, natrijum sulfit i slično; antioksidansi rastvorni u ulju, kao što su askorbil palmitat, butilovani hidroksianizol (BHA), butilovani hidroksitoluen (BHT), lecitin, propil galat, α-tokoferol, i slično; i helatirajući agensi metala, kao što su limunska kiselina, etilendiamin tetrasirćetna kiselina (EDTA), sorbitol, vinska kiselina, fosforna kiselina, i slično.
[0121] Formulacije ovog pronalaska uključuju one pogodne za oralno, nazalno, inhalaciono, topikalno, transdermalno, bukalno, sublingvalno, rektalno, vaginalno i/ili parenteralno davanje. Obično, jedinjenja ovog pronalaska treba da se daju intravenozno, u obliku rastvora koji je često izotoničan, kao što je slani rastvor ili rastvor glukoze. Formulacije mogu konvencionalno da budu prisutne u jediničnom doznom obliku i mogu da se pripreme bilo kojim postupcima koji su dobro poznati u tehnici farmacije. Količina aktivnog sastojka koji može da se kombinuje sa materijalom nosača kako bi se smanjio jedan dozni oblik uopšteno će biti ta količina jedinjenja koja proizvodi terapeutski efekat. Uopšteno, od sto procenata, ova količina će biti u opsegu od oko 1 procenta do oko devedeset devet procenata aktivnog sastojka, poželjno od oko 5 procenata do oko 70 procenata, najpoželjnije od oko 10 procenata do oko 30 procenata.
[0122] Postupci pripreme ovih formulacija ili kompozicija uključuju fazu dovođenja u vezu jedinjenja ovog pronalaska sa nosačem i, opciono, jedan ili više dodatnih sastojaka. Uopšteno, formulacije se pripremaju ravnomernim i intimnim dovođenjem u vezu jedinjenja ovog pronalaska sa tečnim nosačima, ili fino podeljenim čvrstim nosačima, ili oba, i onda, po potrebi, oblikovanje proizvoda.
[0123] Formulacije ovog pronalaska pogodne za oralno davanje mogu biti u obliku kapsula, kaheta, pilula, tableta, lozengi (upotreba baze sa ukusom, obično saharoze i akacije ili tragakanta), praškova, granula, ili kao rastvor ili suspenzija u vodenoj ili ne-vodenoj tečnosti, ili kao tečna emulzija ulje-u-vodi ili voda-u-ulju, ili kao eliksir ili sirup, ili kao pastile (upotreba inertne baze, kao što je želatin i glicerin, ili saharoza i akacija) i/ili kao tečnosti za ispiranje usta i slično, pri čemu svaki sadrži unapred određenu količinu jedinjenja ovog pronalaska kao aktivan sastojak. Jedinjenje ovog pronalaska može takođe da se daje kao bolus, elektuarijum ili pasta.
[0124] U čvrstim doznim oblicima ovog pronalaska za oralno davanje (kapsule, tablete, pilule, dražeje, praškovi, granule i slično), aktivan sastojak umešava se sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, kao što su natrijum citrat ili dikalcijum fosfat, i/ili bilo koji od sledeećih: punioci ili dodaci hrani, kao što su skrobovi, laktoza, saharoza, glukoza, manitol, i/ili silicijumova kiselina; veziva, kao što su, na primer, karboksimetilceluloza, alginati, želatin, polivinil pirolidon, saharoza i/ili akacija; humektanti, kao što su glicerol; dezintegrišući agensi, kao što su agar-agar, kalcijum karbonat, krompirov ili tapijokin skrob, alginska kiselina, određeni silikati, i natrijum karbonat; agensi za usporavanje rastvaranja, kao što su parafin; ubrzivači apsorpcije, kao što su kvaternarna jedinjenja amonijuma; agensi za vlaženje, kao što su, na primer, cetil alkohol i glicerol monostearat; apsorbensi, kao što su kaolin i bentonit glina; lubrikanti, kao što su talk, kalcijum stearat, magnezijum stearat, čvrsti polietilen glikoli, natrijum lauril sulfat, i njihove mešavine; i agensi za bojenje. U ovom slučaju kapsula, tableta i pilula, farmaceutske kompozicije mogu takođe da obuhvataju puferišuće agense. Čvrste kompozicije sličnog tipa mogu takođe da se koriste kao punioci u želatinskim kapsulama sa mekim i tvrdim punjenjem upotrebom tih ekscipijenasa kao laktoza ili mlečni šećeri, kao i polietilen glikoli visoke molekulske mase i slično.
[0125] Tableta može da se napravi sabijanjem ili oblikovanjem, opciono sa jednim ili više dodatnih sastojaka. Sabijene tablete mogu da se pripreme upotrebom veziva (na primer, želatin ili hidroksipropilmetil celuloza), lubrikanta, inertnog razblaživača, konzervansa, dezintegranta (na primer, natrijum skrob glikolat ili umrežene natrijum karboksimetil celuloze), površinski-aktivnog ili disperzionog agensa. Oblikovane tablete mogu da se proizvode oblikovanjem, u odgovarajućoj mašini, mešavine praškastog jedinjenja navlaženog sa inertnim tečnim razblaživačem.
[0126] Tablete, i ostali čvrsti dozni oblici farmaceutskih kompozicija ovog pronalaska, kao što su dražeje, kapsule, pilule i granule, mogu opciono da se postignu ili pripreme sa omotačima i oblogama, kao što su enterični omotači i ostali omotači dobro poznati u tehnici farmaceutske formulacije. Takođe mogu da se formulišu tako da obezbeđuju sporo ili kontrolisano oslobađanje aktivnog sastojka upotrebom, na primer, hidroksipropilmetil celuloze u različitim proporcijama kako bi se obezbedio poželjan profil oslobađanja, ostale polimerne matrice, lipozomi i/ili mikrosfere. Mogu da se sterilišu, na primer, filtracijom kroz filter koji zadržava bakterije, ili uvođenjem sterilišućih agenasa u obliku sterilnih čvrstih kompozicija koje mogu da se rastvore u steriloj vodi, ili nekog drugog sterilnog injektibilnog medijuma neposredno pre upotrebe. Ove kompozicije mogu takođe opciono da sadrže agense za neprozirnost i mogu da budu kompozicije koje oslobađaju aktivan sastojak(e) samo, ili prevashodno, u određenom delu gastrointestinalnog trakta, opciono, na odloženi način. Primeri ugrađujućih kompozicija moje mogu da se koriste uključuju polimerne supstance i voskove. Aktivan sastojak može takođe da bude u mikroenkapsuliranom obliku, po potrebi, sa jednim ili više gore opisanih ekscipijenasa.
[0127] Tečni dozni oblici za oralno davanje jedinjenja ovog pronalaska uključuju farmaceutske prihvatljive emulzije, mikroemulzije, rastvore, suspenzije, sirupe i eliksire. Pored aktivnog sastojka, tečni dozni oblici mogu da sadrže inertni razblaživač koji se često koristi u tehnici, kao što su, na primer, voda ili ostali rastvarači, agensi za ratvaranje i emulgatori, kao što su etil alkohol, izopropil alkohol, etil karbonat, etil acetat, benzil alkohol, benzil benzoat, propilen glikol, 1,3-butilen glikol, ulja (posebno, ulje semena pamuka, kikirikijevo, kukuruzno, klicino, maslinovo, ricinusovo i susamovo ulje), glicerol, tetrahidrofuril alkohol, polietilen glikoli i estri masnih kiselina i sorbitana, i njihove mešavine.
[0128] Pored inertnih razblaživača, oralne kompozicije mogu takođe da uključuju adjuvanse kao što su agensi za vlaženje, emulgatori i suspendujući agensi, zaslađivač, agensi za ukus, bojenje, miris i konzerviranje.
[0129] Suspenzije, pored aktivnog jedinjenja, mogu da sadrže suspendujuće agense kao što su, na primer, etoksilirane izostearil alkohole, polioksietilen sorbitol i estre sorbitana, mikrokristalna celuloza, aluminijum metahidroksid, bentonit, agar-agar i tragakant, i njihove mešavine.
[0130] Formulacije farmaceutskih kompozicija ovog pronalaska za rektalno ili vaginalno davanje mogu da budu prisutne kao supozitorije, koje se mogu pripremiti umešavanjem jednog ili više jedinjenja ovog pronalaska sa jednim ili više pogodnih neiritirajućih ekscipijenasa ili nosača koji obuhvataju, na primer, kakao buter, polietilen glikol, vosak za supozitorije ili salicilat, i koji je čvrst na sobnoj temperaturi, ali tečan na telesnoj temperaturi i, zbog toga, će se otopiti u rektumu ili vaginalnoj šupljini i osloboditi aktivno jedinjenje.
[0131] Formulacije ovog pronalaska koje su pogodne za vaginalno davanje takođe uključuju pesare, tampone, kreme, gelove, paste, pene ili sprej formulacije koje sadrže takve nosače kao što je poznato u tehnici da su pogodni.
[0132] Dozni oblici za topikalno ili transdermalno davanje jedinjenja ovog pronalaska uključuju praškove, sprejeve, masti, paste, kreme, losione, gelove, rastvore, flastere i inhalaciona sredstva. Aktivno jedinjenje može da se umeša u sterilnim uslovima sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, i sa bilo kojim konzervansima, puferima, ili propelentima koji mogu biti potrebni.
[0133] Masti, paste, kreme i gelovi mogu da sadrže, pored aktivnog jedinjenja ovog pronalaska, ekscipijense, kao što su životinjske i biljne masti, ulja, voskovi, parafini, skrob, tragakant, derivate celuloze, polietilen glikole, silikone, bentonite, silicijumovu kiselinu, talk i cink oksid, ili njihove mešavine.
[0134] Praškovi i sprejevi mogu da sadrže, pored jedinjenja ovog pronalaska, ekscipijense kao što su laktoza, talk, silicijumova kiselina, aluminijum hidroksid, kalcijum silikati i poliamidni prah, ili mešavine ovih supstanci. Sprejevi mogu dodatno da sadrže uobičajene propelente, kao što su hlorofluorougljovodonici i isparljivi nesupstituisani ugljovodonici, kao što su butan i propan.
[0135] Transdermalni flasteri imaju dodatne prednosti da obezbeđuju kontrolisano dostavljanje jedinjenja ovog pronalaska telu. Takvi dozni oblici mogu da se proizvode rastvaranjem ili dispergovanjem jedinjenja u odgovarajućem medijumu. Poboljšivači apsorpcije mogu takođe da se koriste da povećaju fluks jedinjenja po koži. Brzina tog fluksa može da se kontroliše ili obezbeđivanjem membrane za kontrolu brzine ili dispergovanjem aktivnog jedinjenja u polimernu matricu ili gel.
[0136] Oftamološke formulacije, masti za oči, praškovi, rastvori i slično, takođe su razmatrani kao da su unutar obima ovog pronalaska.
[0137] Farmaceutske kompozicije ovog pronalaska pogodne za parenteralno davanje obuhvataju jedno ili više jedinjenja ovog pronalaska u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih sterilnih izotoničnih vodenih ili nevodenih rastvora, disperzija, suspenzija ili emulzija, ili sterilne praškove koji mogu da se rekonstituišu u sterilne injektibilne rastvore ili disperzije neposredno pre upotrebe, koji mogu da sadrže antioksidanse, pufere, bakteriostatike, rastvorne supstance koje čine formulacuju izotoničnom sa krvi nezavisnog primaoca ili suspendujuće agense ili agense za zgušnjavanje.
[0138] Primeri pogodnih vodenih i nevodenih nosača koji mogu da se koriste u farmaceutskim kompozicijama ovog pronalaska uključuju vodu, etanol, poliole (kao što su glicerol, propilen glikol, polietilen glikol, i slično), i njihove pogodne mešavine, biljna ulja, kao što je maslinovo ulje, i injektibilne organske estre, kao što je etil oleat. Odgovarajuća fluidnost može da se održava, na primer, upotrebom materijala za oblaganje, kao što je lecitin, održavanjem potrebne veličine čestica u slučaju disperzija, i upotrebom surfaktanata.
[0139] Ove kompozicije mogu takođe da sadrže adjuvanse kao što su konzervansi, agensi za vlaženje, emulgatori i dispergujući agensi. Prevencija delovanja mikroorganizama može da se osigura inkluzijom raznih antibakterijskih i antifungalnih agenasa, na primer, paraben, hlorobutanol, fenol sorbinske kiseline, i slično. Takođe može da bude poželjno da uključuje izotonične agense, kao što su šećeri, natrijum hlorid, i slično u kompozicijama. Dodatno, produžena apsorpcija injektibilnog farmaceutskog oblika može da se pokrene inkluzijom agenasa koji odlažu apsorpciju kao što su aluminijum monostearat i želatin.
[0140] U nekim slučajevima, kako bi se produžilo dejstvo leka, poželjno je da se uspori apsorpcija leka iz subkutane ili intramuskularne injekcije. Ovo može da se postigne upotrebom tečne suspenzije kristalnog ili amorfnog materijala koji ima slabu rastvorljivost u vodi. Brzina apsorpcije leka onda zavisi od njegove brzine rastvaranja koja, zauzvrat, može da zavisi od veličine kristala i kristalnog oblika. Alternativno, odložena apsorpcija parenteralno-datog oblika leka postiže se rastvaranjem ili suspendovanjem leka u uljanom vozilu.
[0141] Injektibilni depo oblici pripremaju se formiranjem mikroenkapsuliranih matrica predmetnih jedinjenja u biorazgradivim polimerima kao što je polilaktid-poliglikolid. Zavisno od odnosa leka prema polimeru, i prirode određenog korišćenog polimera, brzina oslobađanja leka može da se kontroliše. Primeri ostalih biorazgradivih polimera uključuju poli(ortoestre) i poli(anhidride). Depo injektibilne formulacije takođe se pripremaju zarobljavanjem leka u lipozomima ili mikroemulzijama koje su kompatabilne sa telesnim tkivom.
[0142] Preparati ovog pronalaska mogu da se daju oralno, parenteralno, topikalno, ili rektalno. Naravno, oni se daju putem oblika pogodnih za svaki put davanja. Na primer, daju se u obliku tableta ili kapsula, injekcijom, inhalacijom, putem očnih losiona, masti, supozitorija, itd., daju se injekcijom, infuzijom ili inhalacijom; topikalno losionom ili masti; i rektalno supozitorijama. Intravenozno davanje je poželjno.
[0143] Izrazi "parenteralno davanje" i "dati parenteralno" kao što se ovde koristi znači režimi davanja koji nisu enteralno i topikalno davanje, obično injekcijom, i uključuje, bez ograničenja, intravenoznu, intramuskularnu, intraarterijalnu, intratekalnu, intrakapsularnu, intraorbitalnu, intrakardijačnu, intradermalnu, intraperitonealnu, transtrahealnu, subkutanu, subkutikularnu, intraartikularnu, subkapsularnu, subarahnoidnu, intraspinalnu i intrasternalnu injekciju i infuziju.
[0144] Izrazi "sistemsko davanje," "dati sistemski," "periferno davanje" i "dati periferno" kao što se ovde koristi znači davanje jedinjenja, leka ili drugog materijala osim direktno u centralni nervni sistem, tako da ulazi u sistem pacijenta i, tako je podvrgnut metabolizmu i drugi slični procesi, na primer, subkutano davanje.
[0145] Ova jedinjenja mogu da se daju ljudima i ostalim životinjama za terapiju bilo kojim pogodnim putem davanja, uključujući oralno, nazalno, kao što je putem, na primer, spreja, rektalno, intravaginalno, parenteralno, intracisternalno i topikalno, kao putem praškova, masti ili kapi, uključujući bukalno i sublingvalno.
[0146] Bez obzira na odabran put davanja, jedinjenja ovog pronalaska, koja mogu da se koriste u pogodnom hidratisanom obliku, i/ili farmaceutske kompozicije ovog pronalaska, formulisane su u farmaceutski prihvatljivim doznim oblicima uobičajenim postupcima koji su poznati prosečnim stručnjacima u tehnici.
[0147] Stvarni dozni nivoi aktivnih sastojaka u farmaceutskim kompozicijama ovog pronalaska mogu da variraju tako da se dobije količina aktivnog sastojka koja je efikasna da se postigne željeni terapeutski odgovor za određenog pacijenta, kompoziciju, i režim davanja, a da nije toksičan za pacijenta.
[0148] Odabrani dozni nivo zavisiće od raznih faktora uključujući aktivnost određenog jedinjenja ovog pronalaska koje je korišćeno, ili njegovog estra, soli ili amida, puta davanja, vremena davanja, brzine izlučuvanja određenog jedinjenja koje se koristi, trajanja tretmana, ostalih lekova, jedinjenja i/ili materijala korišćenih u kombinaciji sa određenim korišćenim jedinjenjea, strosti, pola, mase, stanja, opšteg zdravlja i prethodne medicinske istorije pacijenta koji se leči, i sličnih faktora dobro poznatih u medicinskoj tehnici.
[0149] Uopšteno, pogodna svakodnevna doza jedinjenja ovog pronalaska biće ona količina jedinjenja koja je dozno efikasna za proizvodnju terapeutskog efekta. Takva efikasna doza uopšteno će zavisiti od faktora opisanih gore. Uopšteno, intravenozne i subkutane doze jedinjenja ovog pronalaska za pacijenta, kada se koriste za naznačene antibakterijske efekte, biće u opsegu od oko 5 do oko 150 mg po kilogramu telesne mase po danu, poželjnije od oko 15 do oko 115 mg po kg po danu, i još poželjnije od oko 20 do oko 85 mg po kg po dan. Efikasna količina je ona količina koja leči neku bakterijsku infekciju.
[0150] Po potrebi, efikasna svakodnevna doza aktivnog jedinjenja može da se daje kao dve, tri, četiri, pet, šest ili više pod-doza datih odvojeno u odgovarajućim intervalima tokom dana, opciono, u jediničnim doznim oblicima, ili kao kontinuirana infuzija.
[0151] Kada je moguće za jedinjenje ovog pronalaska da se daje samo, poželjno je da se jedinjenje daje kao farmaceutska kompozicija.
[0152] Jedinjenja kao što su definisana u primerima izvođenja mogu da se sintetizuju opštim sintetičkim putevima dole, čiji su specifični primeri detaljnije opisani u Primerima.
Opšte šeme sinteze
[0153] Jedan postupak za sintezu jedinjenja sa formulom (I) opisan je u Šemi A. Alkohol A-1 može da se jinvertuje u A-2 prema "Mitsunobu" protokolu, obezbeđen je heterocikl dovoljno kiseo da učestvuje u Misunobu reakciji. Sulfonilacija A-2 daje A-3, koji može da se deprotektuje sa TFA ili mravljom kiselinom da bi se dobio A-4.
[0154] Heterociklični intermedijeri A-2 mogu takođe da se dobiju kao što je prikazano na Šemi C, alkilovanjem amina kao što je C-1. Pogodni reagensi alkilovanja uključuju alkil halide ili epokside.
Alkilovanje C-1 može takođe da se izvrši reduktivnom aminacijom sa odgovarajuće funkcionalizovanim i zaštićenim aldehidom. Ciklizacija C-2 može da se izvrši upotrebom agensa za karbonilovanje kao što je CDI. Primeri grupe Y u ovim jedinjenjima uključuju kiseonik ili NR<5>, npr., NH.
[0155] Funkcionalizovani amini C-2 se alternativno dobijaju od B-1 alkilovanjem sa nekim funkcionalizovanim aminom. Laktam heterocikl može analogno da se dobije alkilovanjem C-1 sa bromovanim karboksilnim estrima, praćeno bazom katalizovanom ciklizacijom. Heterocikl može da se uvede da bi se dobio Intermedijer A-2, supstitucijom odlazeče grupe u odgovarajuće zaštićen intermedijer azetidinona. Pogodne zaštitne grupe uključuju Cbz za amin i DMB za azetidinon.
Deprotekcija Cbz grupe praćena acilovanjem sa odgovarajućim funkcionalizovanim i zaštićenim kiselinama D-6 dala je A-2, kao što je prikazano na Šemi D.
Zaštićeni intermedijeri kao što su D-1 takođe se koriste za uvođenje heterocikla pod Mitsunobu uslovima, kao što je prikazano na Šemi A. D-1 takođe je konvertovan u odgovarajuće azide, koji se koristi za "klik hemiju" radi uvođenja 1-vezanih 1,2,3 triazola prema sličnoj sekvenci kao što je prikazano na Šemi B. D-1 takođe može da se koristi da bi se dobili funkcionalizovani derivati amina koji mogu da se konvertuju u heterocikle, kao što je opisano u Šemi C.
[0156] Intermedijeri tipa A-3 mogu se takođe sastaviti redosledom koji je prikazan u Šemi E, čime se oksim grupa uvodi nakon faze spajanja.
Jedinjenja Formule (I) pripremaju se od obično dostupnih jedinjenja upotrebom ovih opštih Šema i procedura poznatih prosečnim stručnjacima u tehnici zajedno sa postupcima i primerima obezbeđenim ovde.
PRIMERI
[0157] Ovaj pronalazak dalje je ilustrovan sledećim primerima, koje ne bi trebalo tumačiti kao dalje ograničavajuće. Testovi korišćeni u Primerima su prihvaćeni. Demonstriranje efikasnosti u ovim testovima je predviđanje efikasnosti kod subjekata.
Opšti uslovi
[0158] Maseni spektri dobijeni su na LC-MS, SFC-MS, ili GC-MS sistemima upotrebom postupaka elektrosprej, hemijske i jonizacije udarom elektrona iz opsega instrumenata sledećih konfiguracija: Waters ACQUITY UPLC sistem i opremljen sa ZQ 2000 ili SQD MS sistemom gde se (M+1) odnosi na protonovani molekulski jon hemijskih vrsta, (M+) se odnosi na neprotonovani kvaternarni amonijum katjon, (M+Na) se odnosi na natrijum-inkorporirani jon i (M-1) se odnosi na deprotonovani molekulski jon hemijskih vrsta.
[0159] NMR spektri izvedeni su na Bruker AVANCE 500MHz ili Varian 400MHz NMR spektrometrima upotrebom ICON-NMR, pod TopSpin programskom kontrolom. Spektri su izmereni na 298K, osim ako je drugačije naznačeno, i dati su u odnosu na rezonancu rastvarača.
Instrumentacija
[0160] MS Postupci: Upotreba Agilent 1100 HPLC sistema sa Agilent 6110 Masenim Spektrometrom
Postupak 2m_kiseli:
Postupak 2m_kiseli_polarni:
Skraćenice:
[0161]
ACN acetonitril
aq vodeni
app očigledan
ATP adenozin 5'-trifosfat
BINAP racemski 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftil
Boc tercijarna butil karboksi
br širok
brs širok singlet
BSA goveđi serum albumin
CDI 1,1'-karbonildiimidazol
d dublet
dd dublet dubleta
DCM dihlorometan
DCE 1,2-dihloroetan
DIAD diizopropilazodikarboksilat
DIPEA diizopropiletilamin
DME 1,4-dimetoksietan
DMF N,N-dimetilformamid
DMSO dimetilsulfoksid
EDTA etilendiamin tetrasirćetna kiselina
ESI elektrosprej jonizacija
EtOAc etil acetat
g gram
h sat(i)
HATU 1-[Bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b] piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat HBTU 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-benzotriazolijumheksafluorofosfat(1-)3-oksid
HCI hlorovodonična kiselina
HOBt 1-hidroksibenzotriazol
HPLC tečna hromatografija visoke performanse
LCMS tečna hromatografija i masena spektrometrija
m multiplet
m-CPBA 3-hloroperbenzojeva kiselina
MeOH metanol
MS masena spektrometrija
mg miligram
min minuti
mL mililitar
mmol milimol
m/z odnos masa prema naelektrisanje
NMR nuklearna magnetna rezonancija
p pentet
PdCl2(dppf)-CH2Cl21,1'-Bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid dihlorometan kompleks PPh3trifenilfosfin
ppm delova na milion
PyBOP benzotriazol-1-iloksitripirolidinofosfonijum heksafluorofosfat
q kvartet
rac racemska
rt sobna temperatura
Rtretenciono vreme
s singlet
satd zasićen
t triplet
TBAF tetrabutilamonijum fluorid
TBME metil tert-butil etar
TFA trifluorosirćetna kiselina
THF tetrahidrofuran
Tris·HCl aminotris(hidroksimetil)metan hidrohlorid
Priprema intermedijera
Intermedijer A: ((2S,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-2-il)metil metansulfonat.
[0162]
[0163] Rastvoru benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (5.37 g, 13.41 mmol) i TEA (3.72 mL, 26.8 mmol) u DCM na 0 °C dodat je MsCI (1.15 mL, 14.75 mmol). Posle mešanja na 0 °C tokom 1 h, razblažen je sa vodom/DCM i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2x) i kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prenet u toluen i koncentrovan (2x), dajući naslovno jedinjenje kao prljavo-belu čvrstu supstancu. Kao takvo korišćeno je u naknadnim reakcijama. LCMS: Rt= 0.86 min, m/z = 479.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
Intermedijer B: tert-Butil ((2H-tetrazol-5-il)metil)karbamat.
[0164]
[0165] U bocu napunjenu sa (2H-tetrazol-5-il)metilaminom (1.67 g, 16.85 mmol), Boc anhidridom (3.86, 17.70 mmol) i vodom (16.85 mL) dodat je NaOH (4 N, 4.42 mL, 17.70 mmol). Dobijena suspenzija je mešana na rt tokom 12 h zatim ohlađena do 0 °C, posle čega je HCI (1N) dodata do pH = 4-5. Talog je prikupljen filtracijom i matični rastvor je ohlađen do 0 °C i ponovo zakiseljen sa HCI (1N) do pH = 4-5. Još taloga je prikupljeno i kombinovano sa prvom šaržom, pri čemu je serija isprana sa heptanom kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (2.74 g, 82%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: Rt= 0.38 min, m/z = 200.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
Intermedijer C: tert-Butil ((1H-1,2,4-triazol-3-il)metil)karbamat.
[0166]
[0167] Rastvoru 2H-[1,2,4]triazol-3-il-metilamin hidrohlorida (583 mg, 4.33 mmol) i Boc-anhidrida (993 mg, 4.55 mmol) u vodi (5.78 mL) dodat je NaOH (4N, 1.137 mL, 4.55 mmol). Posle mešanja tokom 48 h beli talog je prikupljen filtracijom. Čvrsta supstanca je suspendovana u heptanu, sonifikovana zatim filtrirana, pri čemu je filter kolač ispran heptanom. LCMS: Rt= 0.41 min, m/z = 199.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
Intermedijer D: 3-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)oksazolidin-2-on.
[0168]
[0169] Faza 1: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-(((2-hidroksietil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru ((2S,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-2-il)metil metansulfonata (6.43g, 13.4 mmol) u acetonitrilu (44.8 ml) dodat je etanolamin (8.13 ml, 134 mmol) nakon toga DIPEA (7.0 ml, 40 mmol). Rastvor je zagrejan do 80°C tokom 20 h, posle čega je ohlađen do rt, razblažen sa EtOAc, ispran vodom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (4.47 g, 75%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.60 min, m/z = 444.2 (M+1).
[0170] Faza 2: Benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)karbamat. Rastvoru benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-(((2-hidroksietil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (4.47g, 10.08 mmol) u hloroformu (50 ml) dodat je CDI (4.90 g, 30.2 mmol). Posle mešanja na rt tokom 30 min, koncentrovan je u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 0-5%), dajući naslovno jedinjenje (3.84 g, 81%) kao belu penu. LCMS: Rt= 0.76 min, m/z = 470.1 (M+1).
[0171] Faza 3: Benzil ((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)karbamat.
Pripremljen analogno primeru 4, faza 2 u kojoj se koristi benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)karbamat (3.84 g, 8.18 mmol), K2S2O8(3.10 g, 11.5 mmol) i K2HPO4(1.852 g, 10.6 mmol) u ACN:vodi (2:1, 136 mL) uz zagrevanje tokom 40 min na 90 °C. Još K2S2O8(663 g, 2.45 mmol) i K2HPO4(370 mg, 2.13 mmol) je dodato i zagrevan je još 3 h. Još K2S2O8(332 mg, 1.23 mmol) i K2HPO4(185 mg, 1.06 mmol) je dodato, i zagrevan je dodatna 2 h, posle čega je koncentrovan u vakuumu, pri čemu se uklanja najveći deo ACN. Mešavina je razblažena sa slanim rastvorom/EtOAc i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x) i kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-100% zatim MeOH-DCM, 10%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (1.61 g, 62%) kao bež pena. LCMS: Rt= 0.51 min, m/z = 320.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0172] Faza 4: 3-((((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)oksazolidin-2-on. Pripremljen analogno primeru 4, faza 3 u kojoj se koriste benzil ((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)karbamat (96 mg, 0.30 mmol) i Pd/C 10% Degussa tip 101 (10%, 64 mg) u EtOH:MeOH (4:1, 1.5 mL) tokom 1 h. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.11 min, m/z = 186.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
Intermedijer E: tert-Butil (4-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoacetil)tiazol-2-il)karbamat.
[0173]
[0174] Gustoj suspenziji 2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksosirćetne kiseline (2.72 g, 9.99 mmol) i HATU (3.80, 10.0 mmol) u DCM:DMF (3:1, 33.3 mL) na 0 °C dodat je DIPEA (2.91 mL, 16.7 mmol). Rastvor (3S,4R)-4-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-aminoazetidin-2-ona (1.39 g, 8.33 mmol) u DCM:DMF (1:1, 32 mL) je dodat praćeno ispiranjem sa DMF (3 mL). Posle mešanja tokom 48 h taman rastvor je razblažen sa EtOAc (150 mL)/slanim rastvorom (140 mL) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x) i kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (70 mL). Ispirak sloja slanim rastvorom je re-ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i konc. u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 010%), dajući naslovno jedinjenje (2.38 g, 68%) kao crvenu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.59 min, m/z = 422.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.85 (s, 1H), 9.70 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 5.28 (ddd, J = 9.3, 5.2, 1.5 Hz, 1H), 4.45 (dd, J = 14.2, 5.3 Hz, 1H), 4.36 (dd, J = 14.1, 7.6 Hz, 1H), 4.18 (dt, J = 7.6, 5.3 Hz, 1H), 1.47 (s, 9H).
Intermedijer F: (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-(2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoacetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina.
[0175]
[0176] Rastvoru tert-Butil (4-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoacetil)tiazol-2-il)karbamata (200 mg, 0.475 mmol) u DMF (4.75 mL) na 0 °C dodat je SO3•DMF (367 mg, 2.40 mmol). Posle 16 h mešanja, koncentrovan je u vakuumu i prečišćen sa HP21 smolom (ACN-voda, 0-50%), dajući naslovno jedinjenje (110 mg, 46%) kao bledo žutu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.54 min, m/z = 501.9 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.87 (s, 1H), 9.75 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 5.25 (dd, J = 9.1, 5.4 Hz, 1H), 4.75 (dd, J = 14.3, 4.9 Hz, 1H), 4.61 (dd, J = 14.4, 7.6 Hz, 1H), 4.43 (dt, J = 7.6, 5.2 Hz, 1H), 1.49 (s, 9H).
Intermedijer G: Benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat
[0177]
[0178] Faza 1: (R,E)-1-(2,4-dimetoksifeni)-N-((2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il)metilen)metanamin.
Pripremljen prema proceduri opisanoj od strane Hubschwerlen, C. i Schmid, G. Helv. Chim. Acta 1983, 66, 2206-2209 sa dodatkom MgSO4. Suspenziji (S)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-karbaldehid (Carbosynth LLC, 346 g, 43% u DCM, 1.143 mol) i MgSO4(278 g) u DCM (1.5 L) na 0 °C dodat je 2,4-dimetoksibenzilamin (193 g, 1.154 mol) tokom 20 min. Posle mešanja na rt tokom 2 h filtriran je, pri čemu je filter kolač ispran sa DCM (2 x 250 mL). Matični rastvor korišćen je direktno u fazi 2.
[0179] Faza 2: 2-((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzi))-2-((R)-2,2-dimeti)-1,3-dioksolan-4-il)-4-oksoazetidin-3-il)izoindolin-1,3-dion. Pripremljen prema proceduri opisanoj od strane Hubschwerlen, C. i Schmid, G. Helv. Chim. Acta 1983, 66, 2206-2209. Nakon dodavanja TEA (322 mL, 2.31 mol) sirovom matičnom rastvoru iz faze 1, ohlađen je do 0 °C, posle čega je dodat rastvor 2-(1,3-dioksoizoindolin-2-il)acetil hlorida (284.3 g, 1.272 mol) u DCM (1 L) tokom perioda od 30 min. Mešavina je ostavljena da se ugreje do rt i mešana dodatnih 16 h, posle čega je isprana vodom (2 x 1 L), zasićenim NaHCO3(aq, 1 L), slanim rastvorom (1 L), osušena preko Na2SO4i koncentrovana u vakuumu, dajući sirovo naslovno jedinjenje (631 g, pretpostavljena količina) kao bledo žutu čvrstu supstancu.<1>H NMR prečišćenog uzorka (EtOAc-Heptan, 40-60%) bio je identičan sa podacima objavljenim u literaturi.
[0180] Faza 3: (3S,4S)-3-amino-1-(2,4-dimetoksibenzi)-4-((R)-2,2-dimeti)-1,3-dioksolan-4-il)azetidin-2-on. Rastvoru sirovog 2-((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((R)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il)-4-oksoazetidin-3-il)izoindolin-1,3-diona (631 g, 1.143 mol, pretpostavljena kvantitativna konverzija iz faze 2) u EtOH (8.2 L) dodat je hidrazin hidrat (235 mL, 50-60%, ∼4 mol) tokom 20 min. Dobijena mešavina je zagrevana do refluksa tokom 3 h, ohlađena do rt, filtrirana, isprana sa EtOH i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je suspendovan u EtOAc (4 L), filtriran i ispran vodom (2 x 1 L).
[0181] Faza 4: Benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzi)-2-((R)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Sirovom organskom rastvoru iz faze 3 (EtOAc, 4 L) ohlađenom do 0 °C dodat je zasićen NaHCO3(aq, 2.05 L) nakon čega benzil hloroformat (205 mL, 1.43 mol), kap po kap tokom 1 h. Posle mešanja na rt tokom 2 h, slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom, slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je tretiran sa MeOH (2 L), filtriran i ispran sa MeOH (2 x 200 mL) kako bi se dobilo čisto naslovno jedinjenje (155 g) kao bela čvrsta supstanca. Matični rastvor je ohlađen do-20 °C tokom 12 h i dobijeni talog je prikupljen filtracijom, dajući dodatno naslovno jedinjenje (90 g) za kombinovani 45% prinos preko 4 faze. LCMS: m/z = 471.1 (M+1) .
[0182] Faza 5: Benzil ((2S,3S)-2-((R)-1,2-dihidroksietil-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((R)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (267 g, 0.567 mol) u THF (3 L) dodat je rastvor TsOH•H2O (43.6 g, 0.229 mol) u vodi (0.75 L). Dvostruki sloj je zagrevan do 70 °C tokom 16 h zatim ohlađen do rt, neutralizovan do pH = 7 sa zasićenim NaHCO3(aq) i koncentrovan u vakuumu. Dobijena mešavina je filtrirana, isprana vodom i osušena kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (240 g, 98%) kao bledo žuta čvrsta supstanca. LCMS: m/z = 431.1 (M+1).
[0183] Faza 6: Benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzi))-2-formil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru benzil ((2S,3S)-2-((R)-1,2-dihidroksietil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (240 g, 0.557 mol) u EtOAc (4.5 L) dodat je rastvoru natrijum perjodata (132 g, 0.617 mol) u vodi (1.125 L) i dvostruki sloj je zagrejan do 50 °C tokom 2 h, posle čega je ohlađen do rt i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (500 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani vodom, slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (218 g, 98%) kao bledo žuta čvrsta supstanca. LCMS: m/z = 399.0 (M+1).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.32 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 8.19 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.39-7.23 (m, 5H), 7.16 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.53 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.47 (dd, J = 8.3, 2.4 Hz, 1H), 5.00-4.96 (m, 2H), 4.90 (dd, J = 8.5, 5.8 Hz, 1H), 4.38 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 4.29 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 4.05 (dd, J = 5.9, 3.3 Hz, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.70 (s, 3H).
[0184] Faza 7: Benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat.
Rastvoru benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-formil-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (218 g, 0.546 mol) u mešavini DCM:MeOH (4:1, 2.25 L) na 0 °C dodat je natrijum borohidrid (41.3 g, 1.09 mol), u porcijama. Dobijena mešavina je mešana na 0 °C tokom 2 h, posle čega je ugašena sa hladnom vodom (1 L) tokom 30 min i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (3 x 200 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani vodom, slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (208 g, 95%) kao prljavo-bela čvrsta supstanca. LCMS: m/z = 401.2 (M+1);<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.37-7.29 (m, 5H), 7.21-7.18 (m, 1H), 6.46-6.49 (m, 2H), 5.82 (bd, J = 9.6 Hz, 1H), 5.18-5.08 (m, 3H), 4.45 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 4.28 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.76-3.72 (m, 1H), 3.63-3.52 (m, 2H), 1.87 (dd, J = 9.6, 4.0 Hz, 1H).
Intermedijer H: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2S,3S)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat
[0186] Faza 1: Benzil ((2S,3S)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Pripremljen prema Mastalerz et al. J. Med. Chem.1988, 31, 1190. Rastvoru intermedijera G (208 g, 0.529 mol) u ACN (4 L) dodat je kalijum persulfat (243 g, 0.899 mol) nakon čega rastvor dikalijum fosfata (147.4 g, 0.846 mol) u vodi (2 L). Dobijena mešavina je zagrejana do 90 °C tokom 4 h zatim je ohlađena do rt i koncentrovana u vakuumu, pri čemu je uklonjen najveći deo ACN. Mešavina je ekstrahovana sa EtOAc (1 L, 2 x 200 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani vodom, slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heksani, 50-100%), dajući naslovno jedinjenje (86g, 65%) kao beli čvrsti supstanci. Analitički podaci bili su identični sa onima objavljenim u literaturi.
[0187] Faza 2: (2S,3S)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-amonijum acetat. Rastvoru benzil ((2S,3S)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (25 g, 100 mmol) u MeOH (350 mL) dodat je Pd na C (10% vlage, 2.5 g) nakon čega AcOH (11.4 mL, 200 mmol). Mešavina je evakuisana i ponovo napunjena sa H2(3x), pri čemu je doveden krajnji pritisak na 50 psi. Mešana je na rt tokom 2 h, zatim ispuštena, filtrirana preko celita i koncentrovana u vakuumu, dajući sirovo naslovno jedinjenje (22 g) kao svetlo smeđe ulje, koje je korišćeno direktno u fazi 3.
[0188] Faza 3: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarboni))amino)tiazol)-4-i))-2-(((2S,3S)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvoru (Z)-tert-butil 2-(((2-(benzo[d]tiazol-2-iltio)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)-tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (85 g, 116.4 mmol) u DMF (200 mL) na 0 °C dodat je rastvor (2S,3S)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-amonijum acetata (22 g, 100 mmol, pretpostavljena količina iz faze 2) u DMF (100 mL) nakon čega DIPEA (52.2 mL, 300 mmol). Mešavina je ostavljena da se ugreje do rt i mešana je dodatnih 16 h, posle čega je koncentrovana u vakuumu i prečišćena hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heksani, 25-100%), dajući sirovo naslovno jedinjenje (44 g, 83%) kao bledo žutu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 526.1 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, CDCl3):δ 8.94 (s, 1H), 8.02 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 5.43 (dd, J = 7.4, 4.7 Hz, 1H), 4.25 (m, 1H), 4.02 (dd, J = 8.6, 4.3 Hz, 1H), 3.86 (m, 2H), 1.56 (s, 3H), 1.55 (s, 3H), 1.52 (s, 9H), 1.44 (9H, s).
Intermedijer I: (Z)-tert-Butil 2-(((2-(benzo[d]tiazol-2-iltio)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat
[0189] Suspenziji (Z)-2-(((1-(fert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (50 g, 116.4 mmol) i 2,2'-dibenzotiazolil disulfida (54.2 g, 163 mmol) u DCM (1 L) dodat je trifenilfosfin (44.3 g, 168.8 mmol) nakon čekga je dovan TEA (22.7 mL, 163 mmol) kap po kap. Posle mešanja tokom 16 h, mešavina je koncentrovana i korišćena direktno u pripremi intermedijera H. LCMS: m/z = 579.0 (M+1).
Intermedijer J: tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(azidometil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat
[0190]
[0191] Faza 1: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2S,3S)-2-(jodometil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvoru intermedijera H (44.0 g, 83.4 mmol), trifenilfosfina (43.7 g, 166.8 mmol) i imidazola (11.4 g, 166.8 mmol) u DCM dodat je jod (42.3 g, 166.8 mmol) u porcijama tokom 5 min. Posle mešanja na rt tokom 16 h razblažen je sa DCM (300 mL), ispran sa zasićenim Na2S2O3(aq, 200 mL), vodom, slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom (EtOAc-Heksani, 25-75%), dajući naslovno jedinjenje (33 g, 62%) kao žutu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 638.0 (M-1).<1>H NMR podaci bili su identični onim opisanim u WO2012073138(A1).
[0192] Faza 2: tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(azidometil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvoru tert-butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2S,3S)-2-(jodometil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (24.0 g, 37.6 mmol) u THF (200 mL) na 0 °C dodat je TEA (10.5 mL, 75.2 mmol) nakon čega tetrabutilamonijum azid (13.9 g, 48.9 mmol). Mešavina je ostavljena da se ugreje do rt i mešana je dodatnih 16 h, posle čega je sipana u ledenu vodu (200 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu, dajući naslovno jedinjenje (17.0 g, 82%) kao bledo žutu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 551.0 (M-1).<1>H NMR podaci su bili identični sa onim opisanim u WO2012073138(A1).
Intermedijer K: (2R,3S)-2-(azidometil)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1 - oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina
[0193]
[0194] Rastvoru intermedijera J (500 mg, 0.905 mmol) u DMF (8 mL) dodat je SO3·DMF (1.38 g, 9.05 mmol). Posle mešanja na rt tokom 4h, razblažen je sa EtOAc (50 mL) i ispran vodom, nakon čega slanim rastvorom do pH = 7. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (500 mg, 87%) kao bledo žutu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 629.85 (M-1) ;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.85 (s, 1H), 9.10 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.63 (s, 1H), 7.27 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.37-5.13 (m, 1H), 3.83 - 3.54 (m, 2H), 1.46 - 1.41 (m, 4H), 1.43 - 1.35 (m, 7H).
Intermedijer L: tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(aminometil)-4-oksoazetidin-3-i))amino)-1-(2-((tertbutoksikarboni))amino)tiazo)-4-i))-2-oksoeti)iden)amino)oksi)-2-metilpropanoat
[0195]
[0196] Rastvoru intermedijera J (17.0 g, 30.8 mmol) u EtOH (300 mL) dodat je Pd na C (10%, vlage, 2.0 g) pod azotom. Mešavina je evakuisana i ponovo napunjena sa H2(3x), pri čemu je doveden krajnji pritisak na 50 psi. Mešana je na rt tokom 2 h, zatim ispuštena, filtrirana preko celita i koncentrovana u vakuumu, dajući sirovo naslovno jedinjenje (15.5 g, 96%) kao bledo žutu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 527.1 (M-1).<1>H NMR podaci su bili identični sa onim opisanim u WO2012073138(A1).
Intermedijer M: tert-Butil 4-(but-3-in-1-il)piperazin-1-karboksilat
[0197]
[0198] Rastvoru 1-Boc-piperazina (0.5 g, 2.68 mmol) u acetonitrilu (2.5 mL) dodat je K2CO3(0.55 g, 4.02 mmol) nakon čega 4-bromo-1-butin (0.39 g, 2.95 mmol). Mešavina je zagrejana na 60 °C tokom 6 h, ostavljena da dođe na sobnu temperaturu, razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 15 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom, slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (0.55 g, 86%); LCMS: m/z = 239.10 (M+1).
Postupak 2minLowp.
Intermedijer N: N,N,N-Trimetil-2-okso-2-(prop-2-in-1-ilamino)etanaminijum bromid
[0199]
[0200] Faza 1: 2-Bromo-N-(prop-2-in-1-il)acetamid Rastvoru bromoacetil bromida (2.1 g, 10.34 mmol) i trietilamina (1.5 mL, 10.34 mmol) u DCM (20 mL) ohlađenom do 0 °C, dodat je rastvor propargilamina (0.57 g, 10.34 mmol) u DCM (10 mL) kap po kap tokom perioda od 5 min, tokom čega je održavano mešanje. Mešavina je mešana na 0 °C tokom 2 h, posle čega su čvrste čestice filtrirane i filtrat je koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom (60-120 okca silika, 50% EtOAc: Heksan), dajući naslovno jedinjenje (1.3 g, 72%) kao prljavo-belu čvrstu supstancu; LCMS: m/z = 176.2 (M+1) ;<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6.68 (brs, 1H), 4.09 (dd, J = 5.4, 2.6 Hz, 2H), 3.90 (s, 2H), 2.28 (t, J = 2.6 Hz, 1H).
[0201] Faza 2: N,N,N-Trimetil-2-okso-2-(prop-2-in-1-ilamino)etanaminijum bromid. Rastvoru 2-bromo-N-(prop-2-in-1-il)acetamida (0.6 g, 3.4 mmol) u acetonitrilu (5 mL) dodat je trimetilamin (30% u MeOH, 5 mL). Mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h i koncentrovana u vakuumu. Dobijeni ostatak je pretvoren u prah sa etrom, dajući naslovno jedinjenje (780 mg, 97%); LCMS: m/z = 155.1 (M+1) ;<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.17 (s, 2H), 3.95 (dd, J = 5.4, 2.6 Hz, 2H), 3.23 (s, 9H), 2.09 (s, 1H).
Intermedijer O: 2-(4-metilpiperazin-1-il)-N-(prop-2-in-1-il)acetamid
[0202]
[0203] Rastvoru 2-bromo-N-(prop-2-in-1-il)acetamida (0.7 g, 3.98 mmol) u DCM (10 mL) dodat je N-metil piperazin (0.66 mL, 5.96 mmol) kap po kap. Reakciona mešavina mešana je na rt tokom 16 h, razblažena sa DCM i isprana vodom i slanim rastvorom. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je pretvoren u prah sa etar-pentanom, dajući naslovno jedinjenje (0.38 g, 49%); LCMS: m/z = 196.15 (M+1);<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.06 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 3.86 (dd, J = 5.9, 2.5 Hz, 2H), 3.07 (t, J = 2.5 Hz, 1H), 2.91 (s, 2H), 2.47-2.25 (m, 8H), 2.15 (s, 3H).
Intermedijer P: 4-Etinil-1-metilpiridin-1-ijum trifluorometansulfonat
[0204]
[0205] Pripremljen prema Rubinsztajn et al. Tetrahedron Lett.1992, 33, 14, 1821-1824. Suspenziji 4-etinilpiridin hidrohlorida (500 mg, 3.58 mmol) u DCM (50 mL) na 0 °C lagano je dodat NaHCO3rastvor (aq, satd, 10 mL). Posle mešanja tokom 5 min, slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, koncentrovani u vakuumu i podvrgnuti visokom vakuumu tokom 10 min. Sirovi ostatak je rastvoren u DCM (10 mL), ohlađen do 0 °C i metil triflat (450 µL, 3.94 mmol) je dodavan kap po kap. Posle mešanja tokom 30 min na 0 °C, etar je dodat i talog je prikupljen i osušen, dajući naslovno jedinjenje (870 mg, 91%) kao svetlo smeđu čvrstu supstancu. Analitički podaci bili su identični vrednostima objavljenim u literaturi.
Intermedijer Q: 4-Etinil-1,3-dimetilpiridin-1-ijum trifluorometansulfonat
[0207] Faza 1: 3-Metil-4-((trimetilsilil)etinil)piridin. Rastvoru 4-bromo-3-metil piridin hidrohlorida (5.0 g, 24.0 mmol) u THF (degaziran, 80 mL) dodat je bakar jodid (450 mg, 2.40 mmol) i trietilamin (20.0 mL, 143.9 mmol). Nakon degaziranja tokom 15 min, paladijum tetrakis trifenilfosfin (830 mg, 0.72 mmol) i trimetilsililacetilen (6.10 mL, 43.16 mmol) su dodati. Mešavina je zagrejana na 50 °C tokom 16 h zatim ohlađena do rt i filtrirana. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heksani, 10%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (3.95 g, 87%) kao bistro ali tamno ulje.
[0208] Faza 2: 4-Etinil-3-metilpiridin. Pripremljen prema postupku opisanom u WO2013/028590. Rastvoru 4-etinil-3-metilpiridina (3.79 g, 20 mmol) u THF (50 mL) dodat je TBAF (1M u THF, 40 mL, 40 mmol). Posle mešanja na rt tokom 1 h, rastvor je koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heksani, 20-40%) dajući naslovno jedinjenje (1.70 g, 72%) kao prljavo-belu čvrstu supstancu.
[0209] Faza 3: 4-Etinil-1,3-dimetilpiridin-1-ijum trifluorometansulfonat
Pripremljen prema Rubinsztajn et al. Tetrahedron Lett.1992, 33, 14, 1821-1824. Rastvoru 4-etinil-3-metilpiridina (420 mg, 3.58 mmol) u DCM (10 mL) na 0 °C dodat je metil triflat (450 µL, 3.94 mmol), kap po kap. Posle mešanja tokom 30 min na 0 °C, etar je dodat i talog je prikupljen i osušen, dajući naslovno jedinjenje (863 mg, 86%) kao svetlo smeđu čvrstu supstancu.
Intermedijer R: tert-Butil ((2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)karbamat
[0210]
[0211] Rastvoru N-Boc-propargil amina (1.60 g, 10.3 mmol) u mešavini DMF:MeOH (4:1, 10 mL) dodat je trimetilsililazid (2.0 mL, 15.2 mmol) i Cul (95 mg, 0.50 mmol). Dobijena mešavina je zagrejana do 100 °C tokom 16 h, posle čega je koncentrovana u vakuumu i prečišćena hromatografijom na silika gelu, dajući naslovno jedinjenje (2.0 g, 99%) kao svetlo žuto ulje; LCMS: m/z = 196.9 (M-1) .
Intermedijer S:
[0213] Faza 1: Benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-(jodometil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru intermedijera G (10 g, 25 mmol), trifenilfosfina (19.6 g, 75 mmol) i imidazola (5.1 g, 75 mmol) u DCM (150 mL) na 0 °C dodat je jod (19 g, 75 mmol) u porcijama tokom 10 min. Posle mešanja na rt tokom 4 h, ispran je sa zasićenim Na2S2O3(aq) rastvorom, vodom, slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je suspendovan u EtOAc (150 mL) i mešan tokom 16 h, posle čega je filtriran, zatim ispran sa acetonom i MeOH, dajući naslovno jedinjenje (9.8 g, 77%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 510.8 (M+1).
[0214] Faza 2: Benzil ((2R,3S)-2-(azidometil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-(jodometil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (5.00 g, 9.80 mmol) u THF (100 mL) na 0 °C dodat je TEA (2.73 g, 19.6 mmol) nakon čega rastvor tetrabutilamonijum azida (3.62 g, 12.7 mmol) u THF. Posle mešanja na rt tokom 16 h, filtriran je i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 2%), dajući naslovno jedinjenje (3.4 g, 81%) kao belu čvrstu supstancu.
[0215] Faza 3: Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-(azidometil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (3.00 g, 7.06 mmol) u DCM (6 mL) dodat je DMSO: voda: tert-butanol (1:1:1,6 mL) tert-butil but-3-in-1-ilkarbamat (2.19 g, 14.1 mmol), CuSO4(56 mg, 0.35 mmol) i natrijum L-askorbat (2.01 mg, 10.6 mmol). Posle mešanja na rt tokom 3 h mešavina je delimično koncentrovana i voda je dodata, posle čega su čvrste čestice prikupljene filtracijom. Filter kolač je suspendovan u DCM, filtriran i filtrat je koncentrovan, dajući naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao bledo žutu čvrstu supstancu.
[0216] Faza 4: Rastvoru proizvoda iz faze 3 (7.06 mmol) u ACN (50 mL) dodat je kalijum persulfat (3.82 g, 14.1 mmol) nakon čega rastvor dikalijum fosfata (3.08 g, 17.7 mmol) u vodi (25 mL). Dobijena mešavina je zagrejana do 90 °C tokom 4 h, zatim ohlađena do rt, filtrirana i koncentrovana u vakuumu, pri čemu je uklonjen najveći deo ACN. Filtrat je ekstrahovan sa EtOAc i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je ispran heksanima i acetonom, dajući naslovno jedinjenje (1.72 g, 57% tokom 2-faze) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 431.1 (M+1).
Intermedijer T
[0218] Faza 1: Opšta procedura za Mitsunobu reakciju je praćena. Rastvoru intermedijera G (5.00 g, 12.5 mmol), tert-butil ((2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)karbamata (2.97 mg, 15.0 mmol), trifenilfosfina (3.93 mg, 15.0 mmol) i DIAD (3.0 mL, 15 mmol) u THF (100 mL). Prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 2-5%), dajući naslovno jedinjenje (12.6 g, kontaminiran sa trifenilfosfin oksidom) kao belu penu.
[0219] Faza 2: Rastvoru proizvoda iz faze 1 (12.5 mmol) u ACN (150 mL) dodat je rastvor kalijum persulfata (6.76 g, 25.0 mmol) i dikalijum fosfata (5.44 g, 31.2 mmol) u vodi (75 mL). Dobijena mešavina je zagrejana do 90 °C tokom 4 h zatim ohlađena do rt, razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je koncentrovan u vakuumu i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu, dajući naslovno jedinjenje (2.23 g, 41% tokom 2-faze) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 428.9 (M-1).
Intermedijer U:
[0221] Faza 1: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((1,3-dioksoizoindo)in-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Opšta procedura za Mitsunobu reakciju je praćena upotrebom intermedijera G (5.00 g, 12.5 mmol), ftalimida (1.83 g, 12.5 mmol), trifenilfosfina (3.93 g, 15.0 mmol), DIAD (3.03 g, 15.0 mmol) i THF (150 mL). Posle mešanja tokom 16 h, formiran talog je filtriran, dajući naslovno jedinjenje (5.67 g, 85%) kao bela čvrsta supstanca.
[0222] Faza 2: Benzil ((2R,3S)-2-(aminometil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (4.40 g, 8.31 mmol) u DCM:MeOH (5:1, 60 mL) dodat je hidrazin hidrat (1.50 g, 25.0 mmol). Posle mešanja tokom 16 h talog je isfiltriran i filtrat je koncentrovan, dajući naslovno jedinjenje (kvantitativno) kao bela čvrsta supstanca.
[0223] Faza 3: Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-(aminometil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (8.31 mmol) u DCM:MeOH (13:1, 43 mL) dodat je (R)-tert-butil (oksiran-2-ilmetil)karbamat. Posle mešanja tokom 16 h, koncentrovan je u vakuumu i prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 2-10%), dajući naslovno jedinjenje (2.2 g, 46%) kao belu penu.
[0224] Faza 4: Rastvoru proizvoda iz faze 3 (2.20 g, 3.85 mmol) u DCM (100 mL) na 0 °C dodat je CDI (1.12 g, 6.92 mmol). Posle mešanja na 15 °C tokom 2 h, rastvor je koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 1-5%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (2.10 g, 91%) kao bela pena.
[0225] Faza 5: Rastvoru proizvoda iz faze 4 (2.10 g, 3.51 mmol) u ACN (40 mL) dodat je rastvor kalijum persulfata (1.89 g, 7.02 mmol) i dikalijum fosfata (1.52 g, 8.75 mmol) u vodi (20 mL). Dobijena mešavina je zagrejana do 90 °C tokom 4 h zatim ohlađena do rt i filtrirana. Filtrat je koncentrovan, ekstrahovan sa EtOAc i organski sloj je koncentrovan. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 2-5%), dajući naslovno jedinjenje (660 mg, 42%) kao bledo žutu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 449.09 (M+1).
Intermedijer V:
[0226]
[0227] Faza 1: (1H-1,2,3-triazol-4-il)metanol. Rastvoru propargil alkohola (11.2 g, 200 mmol) u DMF (160 mL) i MeOH (40 mL) dodat je Cul (1.9 g, 10 mmol) i trimetilsilil azid (34.6 g, 300 mmol). Nakon zagrevanja do 100°C tokom 16 h, reakciona mešavina je ohlađena do rt i filtrirana kroz celit. Filtrat je koncentrovan u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina). Sirovo jedinjenje je korišćeno kao takvo u sledećoj fazi.
[0228] Faza 2: 4-(((tert-butildimetilsilil)oksi)metil)-1H-1,2,3-triazol. Rastvoru (1H-1,2,3-triazol-4-il)metanola (30 g, 200 mmol) u DCM (160 mL) dodat je imidazol (20.4 g, 300 mmol) nakon čega TBDMS-Cl (33.3 g, 220 mmol) kao čvrsta supstanca u porcijama. Posle mešanja na rt tokom 16 h, reakciona mešavina je filtrirana kroz celit, i filtrat je koncentrovan u vakuumu. Ostatak je rastvoren u EtOAc (500 mL) i ispran vodom, slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4, i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-heksani, 5-30%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (30.2 g, 71%) kao bledo žuta čvrsta supstanca.
[0229] Faza 3: Benzil ((2R,3S)-2-((4-(((tert-butildimetilsilil)oksi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (0.94 g, 2.34 mmol), 4-(((tert-butildimetilsilil)oksi)metil)-1H-1,2,3-triazola (0.5 g, 2.34 mmol), i PPh3(0.74 g, 2.81 mmol) u THF (20 mL) na 0°C dodat je DIAD (0.57 g, 2.81 mmol) lagano. Posle mešanja na rt tokom 16 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-heksani, 20-30%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (1.25 g, 89%) kao bledo žuta čvrsta supstanca. LCMS: m/z = 594.3 (M-1).
[0230] Faza 4: Benzil ((2R,3S)-2-((4-(((tert-butildimetilsilil)oksi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-((4-(((tert-butildimetilsilil)oksi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (1.25 g, 2.1 mmol) u CH3CN (20 mL) dodat je K2S2O8(0.73 g, 2.7 mmol) nakon čega rastvor K2HPO4(0.84 g, 4.8 mmol) u vodi (10 mL). Posle mešanja na 90°C tokom 1 h, još K2S2O8(0.23 g, 0.84 mmol) je dodato. Posle zagrevanja na 90°C dodatna 2 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu. Ostatak je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom, slanim rastvorom, osušeni sa Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 1-3%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (0.44 g, 47%) kao bledo žuta čvrsta supstanca. LCMS: m/z = 446.2 (M+1).
[0231] Faza 5: Benzil ((2R,3S)-2-((4-(hidroksimetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-((4-(((tertbutildimetilsilil)oksi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (10.8 g, 24.4 mmol) u THF (100 mL) dodat je TBAF (1 M u THF, 26.6 mL, 26.6 mmol) lagano tokom perioda od 15 min. Posle mešanja na rt tokom 1.5 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 1-5%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (6.8 g, 85%) kao bledo žuta čvrsta supstanca. LCMS: m/z = 330.0 (M+1).
[0232] Faza 6: (3S,4R)-3-amino-4-((4-(hidroksimetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)azetidin-2-on. Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-((4-(hidroksimetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (1.54 g, 4.65 mmol) u EtOH (50 mL) i EtOH (25 mL) dodat je Pd/C (10%, 0.51 g, 4.65 mmol). Posle mešanja na rt tokom 4h, reakciona mešavina je filtrirana kroz podlogu celita, i filtrat je koncentrovan u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina). Sirovo jedinjenje je korišćeno kao takvo u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.12 min, m/z = 198.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
Intermedijer W: 3-(amoniometil)-1-metilpiridin-1-ijum hlorid
[0233]
[0234] Faza 1: N-(piridin-3-ilmetil)acetamid
Pripremljen prema Plater et al. Org. Biomol. Chem.2009, 7, 1633. Rastvoru piridin-3-ilmetanamina (9.42 ml, 92 mmol) u vodi (103 ml) na 10°C dodat je kiseli anhidrid (10.47 ml, 111 mmol), mešan je brzinom gde unutrašnja temperatura nije prešla 25°C. Tokom dodatnih 18 h mešanja, rastvor je koncentrovan u vakuumu zatim ko-uparavan sa toluenom (3x) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (14.22 g, kvantitativno) kao bistro ulje. LCMS: Rt=0.12 min, m/z = 151.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.49 (d, J = 2.4 Hz, 2H) 7.65 (dd, J = 7.8, 1.6 Hz, 1H) 7.30-7.24- (m, 1 H) 6.59-6.49 (m, 1 H) 4.43 (d, J = 6.0 Hz, 2H) 2.02 (s, 3H).
[0235] Faza 2: 3-(acetamidometil)-1-metilpiridin-1-ijum jodid
Rastvoru N-(piridin-3-ilmetil)acetamida (13.89 g, 92 mmol) u DCM na 0°C dodat je metil jodid (8.10 mL, 129 mmol). Rashladno kupatilo uklonjeno je nakon 10 min i rastvor je mešan na rt tokom 19 h, posle čega je koncentrovan u vakuumu i korišćen kao sirov u fazi 3. LCMS: Rt= 0.18 min, m/z = 164.9 (M+) Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.91-8.87 (m, 2H) 8.58 (brs, 1H)8.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H)8.09 (t, J = 7.0 Hz, 1H) 4.43 (d, J = 5.9 Hz, 2H) 4.35 (s, 3H) 1.92 (s, 3H)
[0236] Faza 3: 3-(amoniometil)-1-metilpiridin-1-ijum hlorid
Suspenzija 3-(acetamidometil)-1-metilpiridin-1-ijum jodida (26.9 g, 92 mmol) u HCl (6N, 307 mL, 1.84 mol) je zagrejana do 100 °C tokom 3h. Rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom (temp. kupatila 80°C). Dobijeno crveno ulje očvrsnulo je preko noći i pretvoreno je u prah sa MeOH i filtrirano kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (8.76 g, 49%) kao prljavo-bela čvrsta supstanca. Filtrat je koncentrovan do crvenog ulja, koje je nakon stajanja tokom 4 dana, formiralo čvrstu supstancu koja je prikupljena i isprana sa hladnim MeOH, dajući drugi rod (6.5 g, 36%). LCMS: Rt= 0.11 min, m/z = 123.0 (M+) Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.18 (s,1H) 9.03 (d, J = 6.0 Hz, 1H)8.66 (d, J = 8.1 Hz, 1H) 8.45 (br s, 3H) 8.24 (t, J = 7.0 Hz, 1H) 4.38 (s, 3H) 4.30 (s, 2H).
[0237] Intermedijeri opisani gore, i slična jedinjenja proizvedena istim postupcima, mogu da se koriste za pripremu jedinjenja formule (I) po Šemama sinteze obezbeđenim ovde. Sledeći primeri prikazuju sintezu odabranih jedinjenja formule (I) i obezbeđuju postupke koji mogu da se usvoje za sintezu ostalih jedinjenja formule (I).
Primer 1.2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksopirolidin-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0238] Faza 1: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksopirolidin-1-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvor Intermedijera L (100 mg, 0.190 mmol), metil-4-bromobutirata (25 µL, 0.194 mmol) i TEA (27 µL, 0.194 mmol) u DMF (1.3 mL) je zagrejan do 70 °C tokom 16 h uz mešanje, posle čega je toplota podignuta na 90 °C. Posle 6 h dodatnog zagrevanja razblažen je sa HCI (1N) i EtOAc. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x) i kombinovani organski slojevi su isprani sa LiCI rastvorom (5% aq), slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 50-100% zatim MeOH-EtOAc, 0-7%), dajući naslovno jedinjenje (21 mg, 18%) kao penu. LCMS: Rt= 0.88 min, m/z = 595.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0239] Faza 2: (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2-oksopirolidin-1-il)metil)azetidin-1-sulfonska kiselina. tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksopirolidin-1-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (43 mg, 0.072 mmol) u DMF (725 µL) je tretiran sa SO3·DMF (111 mg, 0.725 mmol). Rastvor je mešan na rt tokom 30 min, zatim je razblažen sa EtOAc i sipan u LiCI rastvor (5% aq). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x) i kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu, dajući sirovo naslovno jedinjenje (55 mg) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt = 0.77 min, m/z = 675.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli. Korišćen je u fazi 3 bez daljeg prečišćavanja.
[0240] Faza 3: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksopirolidin-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0241] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2-oksopirolidin-1-il)metil)azetidin-1-sulfonske kiseline (55 mg, 0.072 mmol), DCM (720 µL) i TFA (333 µL, 4.32 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (6 mg, 16%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.35 min, m/z = 519.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.17 (s, 1H), 5.46 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 4.71-4.64 (m, 1H), 3.92 (dd, J = 14.7, 8.7 Hz, 1H), 3.71-3.55 (m, 2H), 3.49 (dd, J = 14.7, 4.1 Hz, 1H), 2.42 (td, J = 8.0, 4.8 Hz, 2H), 2.08 (p, J = 7.6 Hz, 2H), 1.55 (s, 3H), 1.54 (s, 3H).
Primer 2: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0242] Faza 1: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarboni))amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((2-((tertbutildimetilsilil)oksi)etil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvor Intermedijera L (500 mg, 0.949 mmol) i (2-bromoetoksi)(tert-butil)dimetilsilana (204 µl, 0.949 mmol) u ACN (3.2 mL) je zagrevan na 80°C u mikrotalasnoj pećnici tokom 30 min, zatim držan na rt tokom 12 h. Ponovo je zagrejan do 100°C tokom 45 min u mikrotalasnoj pećnici, zatim držan na rt tokom 12 h, posle čega je razblažen sa EtOAc i ispran sa natrijum karbonatom (2 M, aq), osušen preko natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-100% zatim MeOH-DCM, 10%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (111 mg, 17%). LCMS: Rt= 1.03 min, m/z = 685.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.17 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.30 (br s, 1H) 5.57-5.50 (m, 1H) 4.09-4.01 (m, 1H) 3.77-3.61 (m, 3H) 3.09 (dd, J = 12.6, 3.7 Hz, 1H) 2.87-2.71 (m, 3H) 1.56 (s, 6H) 1.53 (s, 9H) 1.44 (s, 9H) 0.86 (s, 9H) 0.03 (s, 3H), 0.03 (s, 3H).
[0243] Faza 2: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((2-hidroksietil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Pripremljen prema Seki et al. Synlett 1995, 609-611. Rastvoru tert-butil 2-(((Z)-(1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((2-((tert-butildimetilsilil)oksi)etil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (111 mg, 0.162 mmol) u DMF:NMP (2.7:1, 1.62 mL) dodat je amonijum fluorid hidrofluorid (37.0 mg, 0.648 mmol). Posle mešanja tokom 65 h, rastvor je razblažen sa vodom i ekstrahovan sa EtOAc. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo sirovo naslovno jedinjenje (92 mg, 99%). Sirovi materijal korišćen je direktno u fazi 3. LCMS: Rt= 0.76 min, m/z 571.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0244] Faza 3: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarboni))amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Pripremljen prema PCT Int. Appl.2011061760. Rastvor tert-butil 2-(((Z)-(1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((2-hidroksietil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (92 mg, 0.161 mmol) u hloroformu (806 µl) je tretiran sa CDI (131 mg, 0.806 mmol) Posle mešanja na rt tokom 3h razblažen je sa EtOAc, ispran vodom, slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 0-10%), dajući naslovno jedinjenje (91 mg, 95%) kao narandžasto ulje. LCMS: Rt= 0.86 min, m/z = 597.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0245] Faza 4: (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvor tert-butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2metilpropanoata (91 mg, 0.153 mmol) u DMF (Zapremina: 763 µl) je tretiran sa SO3·DMF (234 mg, 1.525 mmol). Posle mešanja na rt tokom 1 h razblažen je sa EtOAc, ispran slanim rastvorom (3 x), osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (100 mg, 97%) kao narandžastu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.78 min, m/z = 677.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0246] Faza 5: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0247] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-1-sulfonske kiseline (100 mg, 0.148 mmol), DCM (1.5 mL) i TFA (569 µl, 7.39 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (10 mg, 12%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.32 min, m/z = 521.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.33 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 5.22 (dd, J = 8.8, 5.7 Hz, 1H), 4.23-4.11 (m, 3H), 3.75-3.62 (m, 2H pretpostavljeno; nejasno zbog vode), 3.60-3.51 (m, 1H pretpostavljeno; nejasno zbog vode), 3.34 (dd, J = 14.6, 5.5 Hz, 1H), 1.44 (s, 3H), 1.40 (s, 3H).
Primer 3: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksoimidazolidin-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0248] Faza 1: tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)etil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvor Intermedijera L (650 mg, 1.234 mmol) i (9H-fluoren-9-il)metil (2-oksoetil)karbamata (365 mg, 1.234 mmol) u DCE (12.3 ml) je tretiran sa natrijum triacetoksiborohidridom (1.377 g, 6.17 mmol). Posle mešanja na rt tokom 18 h je ugašen sa zasićenim NaHCO3(aq) i ekstrahovan sa EtOAc. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 0-10%), dajući naslovno jedinjenje (435 mg, 45%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 1.00 min, m/z = 792.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.11 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.89 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.67 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.41 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.32 (td, J = 7.4,1.2 Hz, 2H), 7.27 (s, 1H), 7.19 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 5.20 (dd, J = 9.1, 5.0 Hz, 1H), 4.30 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 4.24-4.17 (m, 1H), 3.76 (ddd, J = 8.8, 5.3, 3.7 Hz, 1H), 3.11-2.97 (m, 2H), 2.76 (dd, J = 12.5, 3.7 Hz, 1H), 2.63-2.52 (m, 3H), 1.45 (s, 9H), 1.42 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.38 (s, 9H).
[0249] Faza 2: tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-aminoetil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvor tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)etil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (435 mg, 0.549 mmol) u DMF (2.75 mL) je tretiran piperidinom (1.1 mL, 11 mmol). Posle mešanja na rt tokom 1 h razblažen je sa toluenom i koncentrovan (3x). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (238 mg, 64%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.68 min, m/z = 570.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.12 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 5.17 (dd, J = 8.3, 4.9 Hz, 1H), 3.76 (dt, J = 8.7,4.7 Hz, 1H), 2.81-2.51 (m, 6H), 1.44 (s, 9H), 1.41 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.38 (s, 9H).
[0250] Faza 3: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksoimidazolidin-1-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvoru tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-aminoetil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (100 mg, 0.151 mmol) u hloroformu (756 µl) dodat je CDI (98 mg, 0.604 mmol) nakon čega TEA (105 µl, 0.756 mmol). Posle mešanja na rt tokom 1 h razblažen je sa EtOAc, ispran vodom, slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (73 mg, 81%) kao bela čvrsta supstanca. Korišćen je kao sirov u fazi 4. LCMS: Rt= 0.70 min, m/z = 596.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0251] Faza 4: (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2-oksoimidazolidin-1-il)metil)azetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvor tert-butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksoimidazolidin-1-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (73 mg, 0.123 mmol) u DMF (613 µl) je tretiran sa SO3·DMF (94 mg, 0.613 mmol). Posle mešanja na rt tokom 2 h, razblažen je sa EtOAc, ispran slanim rastvorom (3x), osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (99 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: Rt= 0.74 min, m/z = 676.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0252] Faza 5: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksoimidazolidin-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0253] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2-oksoimidazolidin-1-il)metil)azetidin-1-sulfonske kiseline (99 mg, 0.147 mmol), DCM (1.47 mL) i TFA (566 µl, 7.35 mmol). Sirovi ostatak prečišćen je reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (4.8 mg) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 520.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.25 (dd, J = 9.0, 5.0 Hz, 1H), 6.83 (s, 1H), 5.21 (dd, J = 9.0, 5.8 Hz, 1H), 4.06-4.00 (m, 1H), 3.65 (dd, J = 14.5, 4.7 Hz, 1H), 3.33-3.30 (m, 1H pretpostavljeno; nejasno zbog vode), 3.25 (dd, J = 14.5, 6.9 Hz, 2H pretpostavljeno; nejasno zbog vode), 3.17 (ddd, J=16.7, 8.6, 6.7 Hz, 2H), 1.43 (s, 3H), 1.42 (s, 3H).
Referentni primer 4: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(aminometil)-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0254] Faza 1: Posuda od 75 mL pod pritiskom napunjena je sa Intermedijerom A (1.50 g, 3.13 mmol), intermedijerom B (1.108g, 4.70 mmol), K2CO3(1.733 g, 12.54 mmol), Nal (564 mg, 3.76 mmol) i DMF (10 mL) zatim zagrejan do 70°C uz mešanje. Nakon 3 h, još intermedijera B (1.108g, 4.70 mmol), K2CO3(1.733 g, 12.54 mmol) i Nal (394 mg, 2.63 mmol) je dodato i zagrevanje je nastavljeno. Nakon 8 h njegovog potpunog zagrevanja, ohlađen je do rt, razblažen sa EtOAc/slanim rastvorom i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x) i kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3x), osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je kombinovan sa drugim uzorkom identične skale i procedure i prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM, 0-30%), dajući 2H-tetrazol izomer (2.15 g, 60%) i 1H-tetrazol izomer (443 mg, 12%) kao bele čvrste supstance. A-LCMS: Rt= 0.97 min, m/z = 582.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli; B-LCMS: Rt= 0.93 min, m/z = 582.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0255] Faza 2: Pripremljen prema Mastalerz et al. J. Med. Chem.1988, 31, 1190. Rastvoru 2H-tetrazol izomera (2.15 g, 3.70 mmol) iz faze 1 u ACN:vodi (2:1, 61.5 mL) dodat je K2S2O8(1.40 g, 5.18 mmol) nakon čega K2HPO4(837 mg, 4.81 mmol). Dobijena mešavina je zagrejana do 90°C tokom 1.5 h, posle čega je dodato još K2S2O8(300 mg, 1.11 mmol) i K2HPO4(167 mg, 0.961 mmol). Nakon 3.5 h dodatnog zagrevanja na 90 °C, razblažen je sa ACN i koncentrovan u vakuumu, pri čemu je uklonjen najveći deo ACN. Mešavina je razblažena sa vodom/EtOAc i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (5x), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM, 50%), kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (785 mg, 49%). LCMS: Rt= 0.77 min, m/z = 432.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, ACN-d3) δ 7.49-7.30 (m, 5H), 6.76 (br s, 1H), 6.55-6.41 (m, 1H), 5.85 (br s, 1H), 5.03-5.21 (m, 3H), 4.88-4.71 (m, 2H), 4.52-4.43 (m, 3H), 4.39-4.24 (m, 1H), 1.50-1.35 (m, 9H).
[0256] Faza 3: tert-Butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-tetrazol-5-il)metil)karbamat. Pripremljen prema proceduri opisanoj u Malmström et al. Bioorg. Med. Chem. Lett.
2012, 22, 5293. Rastvor jedinjenja iz faze 2 (785 mg, 1.819 mmol) u EtOAc:MeOH (5:1, 65 mL) je evakuisan i ispunjen argonom (2x) nakon čega je dodat Pd na C (10%, 581 mg). Sistem je evakuisan i ispunjen sa H2(3x). Nakon 21 h mešanja, mešavina je filtrirana preko celita, isprana sa MeOH, koncentrovana u vakuumu, stavljena na toluen i ponovo koncentrovana (3x). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.37 min, m/z = 298.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0257] Faza 4: tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat.
[0258] Rastvoru (Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (938 mg, 2.18 mmol) u DCM:DMF (5:1, 8.5 mL) na 0 °C dodat je DIPEA (953 µL, 5.46 mmol) nakon čega HATU (830 mg, 2.18 mmol). Dobijenom rastvoru dodat je rastvor tert-butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-tetrazol-5-il)metil)karbamata (541 mg, 1.82 mmol) u DCM:DMF (5:1, 8.5 mL). Rastvor je mešan na rt tokom 1 h zatim koncentrovan u vakuumu, rastvoren u EtOAc i ispran slanim rastvorom. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc, a kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3x), osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM, 30-50%), dajući naslovno jedinjenje (897 mg, 70%) kao purpurnu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 1.01 min, m/z = 709.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0259] Faza 5: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina.
[0260] tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2metilpropanoat (200 mg, 0.282 mmol) u DMF (2 mL) je tretiran sa SO3·DMF (432 mg, 2.82 mmol).
Purpurni rastvor odmah je postao zelen. Nakon 20 min mešanja, dodato je još SO3·DMF (432 mg, 2.82 mmol). Tokom dodatnih 20 min, dodato je još SO3·DMF (432 mg, 2.82 mmol). Nakon 20 min, rastvor je razblažen sa EtOAc/slanim rastvorom i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (185 mg, 83%). LCMS: Rt= 0.91 min, m/z = 789.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0261] Faza 6: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(aminometil)-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0262] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (185 mg, 0.234 mmol), DCM (2.34 mL) i TFA (1.08 mL, 14.06 mmol) tokom 1.5 h. Sirovi ostatak prečišćen je reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (55.5 mg, 45%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.30 min, m/z = 533.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.34 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.55 (br s, 3H), 7.34 (br s, 2H), 6.73 (s, 1H), 5.37 (dd, J = 8.7,5.5 Hz, 1H), 5.19-5.13 (m, 1H), 5.01-4.94 (m, 1H), 4.62-4.57 (m, 1H), 4.43-4.37 (m, 2H), 1.38 (s, 3H) 1.34 (s, 3H).
Referentni primer 5: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5-(gvanidinometil)-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0263]
[0264] Rastvoru 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(aminometil)-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionske kiseline (20 mg, 0.038 mmol) i pirazol-1-karboksamidin hidrohlorida (11.6 mg, 0.079 mmol). u DMF (376 µL) dodat je DIPEA (26.2 µL, 0.150 mmol). Posle mešanja na rt tokom 12h, rastvor je koncentrovan u vakuumu. Toluen je dodat i ponovo je koncentrovan (3x). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (11 mg, 45%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 575.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.49-7.04 (m, 5H), 6.74 (br s, 1H), 5.26 (br s, 1H), 5.14-5.07 (m, 1H), 4.98-4.90 (m, 1H), 4.65 (br s, 2H), 4.59-4.52 (m, 1H), 1.36 (s, 3H), 1.34 (s, 3H).
Referentni primer 6: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(aminometil)-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0265] Faza 1: Pripremljen analogno primeru 4, faza 2 koja koristi odgovarajući 1H-tetrazol izomer dobijen u Fazi 1 u Primeru 4 (442 mg, 0.760 mmol), K2S2O8(288 mg, 1.064 mmol) i K2HPO4(172 mg, 0.988 mmol) u ACN:voda (2:1, 12.6 mL) na 90 °C tokom 1.5 h. Dodato je još K2S2O8(62 mg, 0.228 mmol) i K2HPO4(42 mg, 0.198 mmol) i zagrevan je dodatnih 3.5 h zatim ohlađen do rt, razblažen sa ACN i koncentrovan u vakuumu, pri čemu je uklonjen najveći deo ACN. Mešavina je razblažena sa vodom/EtOAc i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (5x) i kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM, 50%), kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (179 mg, 54%). LCMS: Rt= 0.72 min, m/z = 432.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0266] Faza 2: tert-Butil ((1-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-1H-tetrazol-5-il)metil)karbamat. Pripremljen analogno primeru 4, faza 3, upotrebom proizvoda iz Faze 1 (179 mg, 0.415 mmol) i Pd na C (10%, 132 mg) u EtOAc:MeOH (10:1, 13.8 mL) tokom 21 h. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.37 min, m/z = 298.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0267] Faza 3: tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat.
[0268] Pripremljen analogno primeru 4, faza 3 koja koristi (Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetna kiselina (214 mg, 0.498 mmol), DIPEA (953 µL, 5.46 mmol) i HATU (830 mg, 2.18 mmol) u DCM:DMF (5:1, 3.6 mL) na 0 °C nakon čega rastvor tert-butil ((1-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-1H-tetrazol-5-il)metil)karbamata (123 mg, 0.415 mmol) u DCM:DMF (4.3:1, 3.7 mL). Posle mešanja na rt tokom 1h podvrgnut je identičnoj obradi, zatim prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM), dajući naslovno jedinjenje (174 mg, 59%) kao svetlo purpurnu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 1.03 min, m/z = 709.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0269] Faza 4: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina.
[0270] Pripremljen analogno primeru 4, faza 4 koja koristi tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((tertbutoksikarbonil)amino)metil)-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (100 mg, 0.141 mmol) i SO3·DMF (216 mg, 1.41 mmol) u DMF (1.4 mL) tokom 20 min na rt. Podvrgnuti identičnoj obradi kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (100 mg, 89%). LCMS: Rt= 0.91 min, m/z = 789.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0271] Faza 5: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(aminometil)-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0272] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (100 mg, 0.126 mmol), DCM (1.26 mL) i TFA (584 µL, 7.58 mmol) tokom 1.5 h. Sirovi ostatak prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (18.7 mg, 28%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 533.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.21 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.28 (s, 2H), 6.79 (s, 1H), 5.35 (dd, J = 8.8,5.8 Hz, 1H), 4.79-4.61 (m, 2H), 4.59-4.53 (m, 1H), 4.47-4.35 (m, 2H), 1.36 (br s, 6H).
Referentni primer 7: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0273] Faza 1, Jedinjenje 1: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat.
[0274] Faza 1, Jedinjenje 2: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat.
[0275] Pripremljen analogno primeru 4, faza 1 koja koristi Intermedijer A (1.0 g, 2.1 mmol), 5-metil-2H-tetrazol (527 mg, 6.27 mmol), K2CO3(1.44 g, 10.5 mmol), Nal (470 mg, 3.13 mmol) u DMF (10 mL) na 70 °C tokom 4 h. Nije potrebno dalje dodavanje reagenasa. Posle hlađenja do rt, razblažen je sa EtOAc, ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM), dajući naslovno jedinjenje 1 (680 mg, 70%) i naslovno jedinjenje 2 (221 mg, 23%) kao čvrste supstance.1-LCMS: Rt= 0.87 min, m/z = 467.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli; 2-LCMS: Rt= 0.80 min, m/z = 467.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0276] Faza 2: Benzil ((2R,3S)-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat.
Pripremljen analogno primeru 4, faza 2 koja koristi benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((5-metil-2H-tetrazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat (202 mg, 0.433 mmol), K2S2O8(164 mg, 0.606 mmol) i K2HPO4(98 mg, 0.563 mmol) u ACN:vodi (2:1, 7.4 mL) na 90 °C tokom 1.5 h. Dodato je još K2S2O8(35 mg, 0.13 mmol) i K2HPO4(20 mg, 0.11 mmol) i zagrevan je dodatnih 30 min, zatim ohlađen do rt, onda koncentrovan u vakuumu. Mešavina je razblažena sa EtOAc, ispranaa slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4i koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 0-10%), kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (111 mg, 81%). LCMS: Rt= 0.58 min, m/z = 317.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.43-7.30 (m, 5H), 6.34 (br s, 1H), 6.01 (br s, 1H), 5.28-5.21 (m, 1H), 5.20-5.12 (m, 3H), 4.92 (dd, J = 14.3, 3.9 Hz, 1H), 4.68 (dd, J = 14.2, 7.9 Hz, 1H), 4.48-4.27 (m, 2H), 2.53 (s, 3H).
[0277] Faza 3: (3S,4R)-3-amino-4-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)azetidin-2-on. Pripremljen analogno primeru 4, faza 3 koja koristi benzil ((2R,3S)-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat (111 mg, 0.351 mmol) i Pd na C (10%, 50 mg) u EtOAc:MeOH (5:1, 7.0 mL) tokom 3 h. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.14 min, m/z = 183.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0278] Faza 4: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat.
Pripremljen analogno primeru 4, faza 3 koja koristi (Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetnu kiselinu (130 mg, 0.302 mmol), DIPEA (158 µL, 0.906 mmol) i HATU (138 mg, 0.362 mmol) u DCM:DMF (2:1, 3.0 mL) na 0 °C nakon čega rastvor (3S,4R)-3-amino-4-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)azetidin-2-ona (55 mg, 0.30 mmol) u DCM:DMF (2:1, 3.0 mL). Posle mešanja na rt tokom 1h koncentrovan je u vakuumu, rastvoren u EtOAc, ispran vodom, onda slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM), dajući naslovno jedinjenje (179 mg, 99%) kao čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.93 min, m/z = 594.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0279] Faza 5: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina.
[0280] Pripremljen analogno primeru 4, faza 4 koja koristi tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (179 mg, 0.302 mmol) i SO3·DMF (462 mg, 3.02 mmol) u DMF (3.0 mL) tokom 1 h na rt. Rastvor je razblažen sa EtOAc, ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina). LCMS: Rt= 0.80 min, m/z = 674.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0281] Faza 6: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina. Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (203 mg, 0.302 mmol), DCM (3.0 mL) i TFA (1.39 mL, 18.1 mmol) tokom 2 h. Sirovi ostatak prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (37 mg, 24%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.35 min, m/z = 518.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.03 (s, 1H), 5.37 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 5.08-4.97 (m, 1H), 4.90-4.80 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 1.32 (s, 3H), 1.31 (s, 3H).
Referentni primer 8: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0282] Faza 1: Benzil ((2R,3S)-2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat.
Pripremljen analogno primeru 4, faza 2 koja koristi benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat (221 mg, 0.474 mmol), K2S2O8(179 mg, 0.663 mmol) i K2HPO4(107 mg, 0.616 mmol) u ACN:vodi (2:1, 7.9 mL) na 90 °C tokom 1.5 h. Dodato je još K2S2O8(38.4 mg, 0.142 mmol) i K2HPO4(21.5 mg, 0.123 mmol) i zagrevan je dodatnih 30 min, zatim ohlađen do rt, onda koncentrovan u vakuumu. Mešavina je razblažena sa EtOAc, isprana slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4i koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 0-10%), kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (97 mg, 65%). LCMS: Rt= 1.00 min, m/z = 317.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0283] Faza 2: (3S,4R)-3-amino-4-((5-meti)-1H-tetrazol-1-il)metil)azetidin-2-on.
[0284] Pripremljen analogno primeru 4, faza 3 koja koristi benzil ((2R,3S)-2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat (97 mg, 0.31 mmol) i Pd na C (10%, 50 mg) u EtOH:MeOH (5:1, 3.0 mL) tokom 3h. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.11 min, m/z = 183.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0285] Faza 3: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Pripremljen analogno primeru 4, faza 3 koja koristi (Z)-2-(((1-(fert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetnu kiselinu (130 mg, 0.302 mmol), DIPEA (158 µL, 0.906 mmol) i HATU (115 mg, 0.302 mmol) u DCM:DMF (2:1, 3.0 mL) na 0 °C nakon čega rastvor (3S,4R)-3-amino-4-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)azetidin-2-ona (55 mg, 0.30 mmol) u DCM:DMF (2:1, 3.0 mL). Posle mešanja na rt tokom 1h, koncentrovan je u vakuumu, rastvoren u EtOAc, ispran vodom, onda slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM), dajući naslovno jedinjenje (133 mg, 74%) kao čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.92 min, m/z = 594.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0286] Faza 4: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Pripremljen analogno primeru 4, faza 4 koja koristi tert-butil 2-(((Z)-(1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (133 mg, 0.224 mmol) i SO3·DMF (343 mg, 2.24 mmol) u DMF (2.24 mL) tokom 1 h na rt. Rastvor je razblažen sa EtOAc, ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina). LCMS: Rt= 0.85 min, m/z = 674.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0287] Faza 5: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0288] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (151 mg, 0.224 mmol), DCM (2.24 mL) i TFA (1.04 mL, 13.45 mmol) tokom 2 h. Sirovi ostatak prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (14.4 mg, 11%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.55 min, m/z = 518.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.04 (s, 1H), 5.37 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.83-4.77 (m, 1H), 4.76-4.54 (m, 2H pretpostavljeno; nejasno zbog rastvarača), 2.48 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.33 (s, 3H).
Referentni primer 9: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0289] Faza 1: benzil ((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Bočica od 20 mL za mikrotalasnu pećnicu ispunjena je sa Intermedijerom A (250 mg, .0522 mmol), 1,2,4-triazolom (54 mg, 0.784 mmol), K2CO3(215 mg, 1.56 mmol), Nal (94 mg, 0.63 mmol) i DMF (2 mL), zatim zagrejana do 70 °C uz mešanje. Nakon 4 h, dodato je još 1,2,4-triazola (54 mg, 0.784 mmol), K2CO3(215 mg, 1.56 mmol) i Nal (94 mg, 0.63 mmol) i zagrevanje je nastavljeno. Nakon 7 h njegovog potpunog zagrevanja ohlađen je do rt, razblažen sa DCM/slanim rastvorom i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Toluen je dodat i koncentrovan je u vakuumu (kupatilo od 40 °C). Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-Heptan, 50%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (156 mg, 66%). LCMS: Rt = 0.77 min, m/z = 452.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0290] Faza 2: Benzil ((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Pripremljen analogno primeru 4, faza 2 koja koristi benzil ((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat (101 mg, 0.224 mmol), K2S2O8(85 mg, 0.313 mmol) i K2HPO4(50.7 mg, 0.291 mmol) u ACN:vodi (2:1, 61.5 mL) uz zagrevanje tokom 2 h na 90 °C. Dodato je još K2S2O8(18.1 mg, 0.067 mmol) i K2HPO4(10.1 mg, 0.058 mmol) i zagrevan je još 1.5 h. Dodato je još K2S2O8(18.1 mg, 0.067 mmol) i K2HPO4(10.1 mg, 0.058 mmol) i zagrevan je dodatnih sat vremena. Razblažen je sa ACN i koncentrovan u vakuumu, pri čemu je uklonjen najveći deo ACN. Mešavina je razblažena sa vodom/DCM, zatim je dodat EtOAc i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (5x), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 10%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (38 mg, 56%). LCMS: Rt= 0.50 min, m/z = 302.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, ACN-d3) δ 8.17 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.49-7.31 (m, 4H), 6.82-6.74 (m, 1H), 6.67 (br s, 1H), 5.18-5.01 (m, 3H), 4.49-4.42 (m, 1H), 4.37-4.30 (m, 1H), 4.21 (q, J = 5.4 Hz, 1H).
[0291] Faza 3: (3S,4R)-4-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-aminoazetidin-2-on. Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (38 mg, 0.126 mmol) u MeOH (5 mL) dodat je Pd crni (6.7 mg, 0.063 mmol) nakon čega mravlja kiselina (339 µL, 8.83 mmol). Posle 1 h mešanja, mešavina je filtrirana preko celita, isprana sa MeOH, i filtrat je koncentrovan u vakuumu. Rastvor je liofilizovan i sirovi materijal je korišćen direktno u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.14 min, m/z = 168.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0292] Faza 4: tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Gustoj suspenziji (Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (81 mg, 0.19 mmol) u DCM (800 µL) na 0 °C dodat je DIPEA (88 µL, 0.504 mmol) nakon čega HATU (72 mg, 0.190 mmol). Nekoliko kapi DMF je dodato radi homogenizacije mešavine. Dobijenom rastvoru dodat je rastvor (3S,4R)-4-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-aminoazetidin-2-ona (21 mg, 0.126 mmol) u DCM (1 mL). Posle 1.5 h mešanja, razblažen je sa vodom/DCM i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM i kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (47 mg, 65%). LCMS: Rt= 0.88 min, m/z = 579.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0293] Faza 5: (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina.
[0294] tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (44 mg, 0.076 mmol) u DMF (760 µL) je tretiran sa SO3·DMF (116 mg, 0.760 mmol). Posle 1 h mešanja, rastvor je razblažen sa EtOAc/slanim rastvorom i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: Rt = 0.81 min, m/z = 659.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0295] Faza 6: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0296] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (50.1 mg, 0.076 mmol), DCM (760 µL) i TFA (351 µl, 4.56 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (14.8 mg, 34%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 503.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.39 (d, J = 8.83 Hz, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 6.74 (s, 1H), 5.28 (dd, J = 8.8, 5.4 Hz, 1H), 4.74-4.64 (m, 1H), 4.58 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 4.32 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 1.37 (s, 3H) 1.41 (s, 3H).
Referentni primer 10: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(aminometil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0297] Faza 1: ((2S,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-2-il)metil metansulfonat (3.10 g, 6.48 mmol), tert-butil ((1H-1,2,4-triazol-3-il)metil)karbamat (1.926 g, 9.72 mmol), K2CO3(1.35 g, 9.72 mmol) i Nal (1.165 g, 7.78 mmol) su suspendovani u DMF (20 mL) i zagrejani do 70 °C uz mešanje. Posle 3 h, dodato je još tert-butil ((1H-1,2,4-triazol-3-il)metil)karbamata (1.926 g, 9.72 mmol), K2CO3(1.35 g, 9.72 mmol) i Nal (777 mg, 8.10 mmol) i zagrevana je dodatna 4 h, posle čega je razblažena sa EtOAc/voda i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x), a kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3x), osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-Heptan, 0-70%) kako bi se dobio 3-supstituisan izomer (1.16 g, 31%) zajedno sa 5-supstituisanim izomerom (375 mg, 10%). A-LCMS: Rt= 0.87 min, m/z = 581.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli; B-LCMS: Rt= 0.94 min, m/z = 581.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli; B-<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.86 (s, 1H), 7.44-7.31 (m, 4H), 7.29 (s, 3H), 6.90 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.49-6.37 (m, 2H), 5.25-5.04 (m, 3H), 4.54-4.43 (m, 2H), 4.43-4.22 (m, 3H), 4.13 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 3.90-3.71 (m, 7H), 1.36-1.51 (m, 9H).
[0298] Faza 2: Pripremljen analogno primeru 4, faza 2 koja koristi 3-supstituisan izomer iz faze 1 (1.16 g, 2.00 mmol), K2S2O8(756 mg, 2.80 mmol) i K2HPO4(452 mg, 2.60 mmol) u ACN:vodi (2:1, 33.3 mL) uz zagrevanje tokom 1.5 h na 90 °C. Dodato je još K2S2O8(162 mg, 0.599 mmol) i K2HPO4(90 mg, 0.52 mmol) i zagrevan je još 3.5 h, posle čega je koncentrovan u vakuumu, pri čemu je uklonjen najveći deo ACN. Mešavina je razblažena sa vodom/EtOAc i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (5x) i kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM, 0-100%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (416 mg, 48%). LCMS: Rt= 0.71 min, m/z = 431.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, ACN-d3) δ 8.08 (s, 1H), 7.49-7.25 (m, 5H), 6.82-6.60 (m, 2H), 5.81-5.62 (m, 1H), 5.21-5.03 (m, 3H), 4.48-4.07 (m, 6H), 1.46-1.33 (m, 9H).
[0299] Faza 3: tert-butil ((1-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,4-triazol-3-il)metil)karbamat. Pripremljen prema proceduri opisanoj u Malmström et al. Bioorg. Med. Chem. Lett.
2012, 22, 5293. Rastvor proizvoda iz Faze 2 (416 mg, 0.966 mmol) u EtOAc:MeOH (5:1, 32.2 mL) je evakuisan i ispunjen argonom (2x) nakon čega je dodat Pd na C (10%, 103 mg). Sistem je evakuisan i ispunjen sa H2(3x). Posle 21 h mešanja, dodat je MeOH (282 µL). Tokom dodatnih 4 h mešanja, mešavina je filtrirana preko celita, isprana sa MeOH, koncentrovana u vakuumu, stavljena na toluen i ponovo koncentrovana (3x). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.33 min, m/z = 297.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0300] Faza 4: tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat.
[0301] Gustoj suspenziji (Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (47 mg, 0.109 mmol) u DCM:DMF (12:1, 6.5 mL) na 0 °C dodat je DIPEA (505 µL, 2.89 mmol) nakon čega HATU (440 mg, 1.16 mmol). Dobijenom rastvoru dodat je rastvor tert-butil ((1-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,4-triazol-3-il)metil)karbamata (286 mg, 0.964 mmol) u DCM:DMF (14:1, 7.5 mL). Posle 1 h mešanja, razblažena je sa vodom/EtOAc i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc, a kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3x), osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM, 70%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (428 mg, 63%). LCMS: Rt= 0.99 min, m/z = 708.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0302] Faza 5: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((3-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(((tertbutoksikarbonil)amino)metil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (200 mg, 0.283 mmol) u DMF (2.0 mL) je tretiran sa SO3·DMF (433 mg, 2.83 mmol). Posle 20 min mešanja, rastvor je razblažen sa EtOAc/slanim rastvorom i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x) i kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: Rt= 0.91 min, m/z = 788.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0303] Faza 6: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(aminometil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0304] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((3-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (223 mg, 0.283 mmol), DCM (2.89 mL) i TFA (1.31 ml, 16.98 mmol). Sirovi ostatak prečišćen je reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (99 mg, 65%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 532.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.45 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.39 (br s, 3H), 7.32 (s, 2H), 6.74 (s, 1H), 5.23 (dd, J = 8.5, 5.7 Hz, 1H), 4.76-4.65 (m, 1H), 4.62-4.55 (m, 1H), 4.32-4.27 (m, 1H), 4.16-4.08 (m, 2H), 1.36 (s, 3H) 1.43 (s, 3H).
Referentni primer 11: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((3-(gvanidinometil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0305]
[0306] Rastvoru 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(aminometil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionske kiseline (25 mg, 0.047 mmol) i pirazol-1-karboksamidin hidrohlorida (10.9 mg, 0.099 mmol) u DMF (470 µL) dodat je DIPEA (33 µL, 0.188 mmol). Posle mešanja na rt tokom 12h, rastvor je koncentrovan u vakuumu. Toluen j dodat i ponovo je koncentrovan (3x). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (16 mg, 52%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 574.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.45 (br s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.86 (br s, 1H), 7.31 (br s, 3H), 6.74 (br s, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.22 (br s, 1H), 4.69-4.59 (m, 1H), 4.60-4.50 (m, 1H), 4.45-4.36 (m, 2H), 4.34-4.26 (m, 1H), 1.35 (s, 3H) 1.41 (s, 3H).
Referentni primer 12: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(aminometil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0307] Faza 1: Pripremljen analogno primeru 4, faza 2 koja koristi 5-supstituisan izomer iz faze 1 u Primeru 10 (361 mg, 0.622 mmol), K2S2O8(235 mg, 0.870 mmol) i K2HPO4(115 mg, 0.808 mmol) u ACN:vodi (2:1, 10.4 mL) uz zagrevanje tokom 1.5 h na 90 °C. Dodato je još K2S2O8(50 mg, 0.187 mmol) i K2HPO4(23 mg, 0.162 mmol) i zagrevan je još 3.5 h, posle čega je koncentrovan u vakuumu, pri čemu je uklonjen najveći deo ACN. Mešavina je razblažena sa vodom/EtOAc i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (5x), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM, 0-100%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (155 mg, 58%). LCMS: Rt= 0.71 min, m/z = 431.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0308] Faza 2: tert-Butil ((1-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,4-triazol-5-il)metil)karbamat. Pripremljen prema Primeru 7, faza 3. Rastvor proizvoda iz Faze 1 (134 mg, 0.311 mmol) u EtOAc:MeOH (5:1, 10.4 mL) je evakuisan i ispunjen argonom (2x) nakon čega je dodat Pd na C (10%, 33 mg). Sistem je evakuisan i ispunjen sa H2(3x). Posle 21 h mešanja, dodat je MeOH (282 µL). Tokom dodatnih 4 h mešanja, mešavina je filtrirana preko celita, isprana sa MeOH, koncentrovana u vakuumu, stavljena na toluen i ponovo koncentrovana (3x). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.38 min, m/z = 297.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0309] Faza 3: tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat.
[0310] Gustoj suspenziji (Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (160 mg, 0.373 mmol) u DCM:DMF (30:1, 3.1 mL) na 0 °C dodat je DIPEA (163 µL, 0.933 mmol) nakon čega HATU (142 mg, 0.373 mmol). Dobijenom rastvoru dodat je rastvor tert-butil ((1-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,4-triazol-5-il)metil)karbamata (92 mg, 0.311 mmol) u DCM:DMF (30:1, 3.1 mL). Posle 1 h mešanje, koncentrovan je u vakuumu i prenet u EtOAc/slani rastvor. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (3x), osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM, 70%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (128 mg, 58%). LCMS: Rt= 0.97 min, m/z = 708.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0311] Faza 4: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((tertbutoksikarbonil)amino)metil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (128 mg, 0.181 mmol) u DMF (1.3 mL) je tretiran sa SO3·DMF (277 mg, 1.81 mmol). Posle 20 min mešanja, rastvor je razblažen sa EtOAc/slanim rastvorom i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: Rt = 0.90 min, m/z = 788.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0312] Faza 5: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(aminometil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0313] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (143 mg, 0.181 mmol), DCM (1.81 mL) i TFA (837 µl, 10.9 mmol). Sirovi ostatak prečišćen je reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (60 mg, 62%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.28 min, m/z = 532.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.23 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 8.40 (br s, 3H), 8.06 (s, 1H), 7.59-7.27 (m, 2H), 6.84 (s, 1H), 5.37 (dd, J = 9.0, 5.5 Hz, 1H), 4.61-4.51 (m, 1H), 4.49-4.34 (m, 3H), 4.25 (dd, J = 15.3, 5.8 Hz, 1H), 1.37 (s, 6H).
Referentni primer 13: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5-(gvanidinometil)-1H-1,2,4-triazol-1 -il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0314]
[0315] Rastvoru 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(aminometil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionske kiseline (25 mg, 0.047 mmol) i pirazol-1-karboksamidin hidrohlorida (10.9 mg, 0.099 mmol) u DMF (470 µL) dodat je DIPEA (33 µL, 0.188 mmol). Posle mešanja na rt tokom 12 h, rastvor je koncentrovan u vakuumu. Toluen je dodat i ponovo je koncentrovan (3x). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (13 mg, 42%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.29 min, m/z = 574.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.96-7.78 (m, 1H), 7.41-6.96 (m, 5H), 6.80-6.71 (m, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.42-5.32 (m, 1H), 4.75-4.63 (m, 1H), 4.62-4.42 (m, 1H), 4.39-4.28 (m, 1H), 1.38 (s, 3H) 1.34 (s, 3H).
Primer 14: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksopiperidin-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0316] Faza 1: Benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-okso-4-((2-oksopiridin-1(2H)-il)metil)azetidin-3-il)karbamat. ((2S,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-2-il)metil metansulfonat (860 mg, 1.80 mmol), piridin-2(1H)-on (855 mg, 8.99 mmol), K2CO3(1.74 g, 12.6 mmol) i Nal (746 mg, 4.49 mmol) su suspendovani u DMF (6.9 mL) i zagrejani do 80 °C uz mešanje. Posle 4 h, ohlađena je do rt, razblažena sa EtOAc i isprana slanim rastvorom. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM) da bi se dobilo naslovno jedinjenje (304 mg, 35%).LCMS: Rt= 0.79 min, m/z = 478.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.39-7.28 (m, 6H), 7.07 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 6.93-6.85 (m, 1H), 6.55 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.40 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.35 (dd, J = 8.2, 2.4 Hz, 1H), 6.10-6.02 (m, 1H), 5.87 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.93 (br s, 1H), 4.63 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 4.27-4.10 (m, 1H), 3.97 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 3.88 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.76 (s, 3H).
[0317] Faza 2: Benzil ((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksopiridin-1(2H)-il)metil)azetidin-3-il)karbamat.
Pripremljen analogno primeru 4, faza 2 koja koristi Benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-okso-4-((2-oksopiridin-1(2H)-il)metil)azetidin-3-il)karbamat (361 mg, 0.622 mmol), K2S2O8(225 mg, 0.833 mmol) i K2HPO4(135 mg, 0.773 mmol) u ACN:vodi (2:1, 9.9 mL) uz zagrevanje tokom 1.5 h na 90 °C. Dodato je još K2S2O8(45 mg, 0.17 mmol) i K2HPO4(26.9 mg, 0.155 mmol) i zagrevan je još 30 min, posle čega je koncentrovan, rerastvoren u EtOAc, ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4, i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 0-10%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (157 mg, 81%). LCMS: Rt= 0.56 min, m/z = 328.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0318] Faza 3, Jedinjenje 1: 1-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)piridin-2(1H)-on.
[0319] Faza 3, Jedinjenje 2: 1-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)piperidin-2-on. Pripremljen prema primeru 7, faza 3. Rastvor benzil ((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksopiridin-1(2H)-il)metil)azetidin-3-il)karbamata (157 mg, 0.480 mmol) u EtOH:MeOH (5:1, 4.8 mL) je evakuisan i ispunjen argonom (2x) nakon čega je dodat Pd na C (10%, 33 mg). Sistem je evakuisan i ispunjen sa H2(3x). Posle 3 h mešanja, mešavina je filtrirana preko celita, isprana sa MeOH i koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi.
[0320] Faza 4, Jedinjenje 1: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksopiridin-1(2H)-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat.
[0321] Faza 4, Jedinjenje 2: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarboni))amino)tiazo)-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksopiperidin-1-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat.
[0322] Gustoj suspenziji (Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (60 mg, 0.14 mmol) u DCM:DMF (1:1, 1.4 mL) na 0 °C dodat je DIPEA (73 µL, 0.42 mmol) nakon čega HATU (63.7 mg, 0.168 mmol). Dobijenom rastvoru, posle 20 min, dodata je mešavina rastvora 1-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)piridin-2(1H)-ona i 1-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)piperidin-2-ona (90 mg, -0.46 mmol) u DCM (200 µL). Posle 1 h mešanja, koncentrovan u vakuumu i prenet u EtOAc, ispran vodom, slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM) da bi se dobili naslovno jedinjenje 1 (54 mg) i naslovno jedinjenje 2 (30 mg).1-LCMS: Rt= 0.88 min, m/z = 605.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli; 2-LCMS: Rt= 0.90 min, m/z = 609.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0323] Faza 5: (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2-oksopiperidin-1-il)metil)azetidin-1-sulfonska kiselina. tert-butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksopiperidin-1-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (30 mg, 0.049 mmol) u DMF (493 µL) je tretiran sa SO3•DMF (151 mg, 0.986 mmol). Posle 1 h mešanja, rastvor je razblažen sa EtOAc, ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: Rt = 0.78 min, m/z = 689.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0324] Faza 6: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazo)-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksopiperidin-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0325] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2-oksopiperidin-1-il)metil)azetidin-1-sulfonske kiseline (34 mg, 0.049 mmol), DCM (494 µL) i TFA (228 µl, 2.96 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (5.2 mg, 17%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.63 min, m/z = 533.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.02 (s, 1H), 5.27 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.59-4.48 (m, 1H), 3.61 (d, J = 4.7 Hz, 2H), 3.48-3.37 (m, 1H), 3.32 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 2.34-2.13 (m, 2H), 1.78-1.57 (m, 4H), 1.39 (br s, 6H).
Referentni primer 15: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazo)-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksopiridin-1(2H)-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0327] Faza 1: (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2-oksopiridin-1(2H)-il)metil)azetidin-1-sulfonska kiselina. tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksopiridin-1 (2H)-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (54 mg, 0.089 mmol) u DMF (893 µL) je tretiran sa SO3•DMF (205 mg, 1.34 mmol). Posle 1 h mešanja, rastvor je razblažen sa EtOAc, ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: Rt = 0.76 min, m/z = 685.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0328] Faza 2: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksopiridin-1(2H)-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina. Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2-oksopiridin-1(2H)-il)metil)azetidin-1-sulfonske kiseline (61 mg, 0.089 mmol), DCM (891 µL) i TFA (412 µl, 5.35 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (9.6 mg, 19%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.57 min, m/z = 529.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.59 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.56-7.48 (m, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.50 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.39 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 5.30 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 4.47 (dd, J = 14.5, 2.7 Hz, 1H), 4.07 (dd, J = 14.5, 8.6 Hz, 1H), 1.37 (s, 3H), 1.36 (s, 3H).
Referentni primer 16: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(5-amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0329] Faza 1: (3S,4R)-4-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-aminoazetidin-2-on. Pripremljen analogno primeru 4, faza 3 koja koristi benzil ((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat (250 mg, 0.830 mmol) i Pd na C (10%, 125 mg) u EtOH:MeOH (4:1, 8.3 mL) tokom 3 h. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.13 min, m/z = 168.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0330] Faza 2: tert-butil2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(5-((tert-butoksikarbonil)amino)-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Gustoj suspenziji (Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(5-((tertbutoksikarbonil)amino)-1,2,4-tiadiazol-3-il)sirćetne kiseline (129 mg, 0.299 mmol) u DCM:DMF (1:1, 3 mL) na 0 °C dodat je DIPEA (157 µL, 0.897 mmol) nakon čega HATU (136 mg, 0.359 mmol). Dobijenom rastvoru, posle 20 min, dodat je rastvor (3S,4R)-4-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-aminoazetidin-2-ona (50 mg, 0.299 mmol) u DCM. Posle 2 h mešanja, koncentrovan je u vakuumu i prenet u EtOAc, ispran vodom, slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (100 mg, 58%). LCMS: Rt= 0.82 min, m/z = 580.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0331] Faza 3: (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(5-((tert-butoksikarbonil)amino)-1,2,4-tiadiazol-3-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(5-((tert-butoksikarbonil)amino)-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (100 mg, 0.173 mmol) u DMF (1.7 mL) je tretiran sa SO3•DMF (396 mg, 2.59 mmol). Posle 1 h mešanja, rastvor je razblažen sa EtOAc, ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: Rt = 0.74 min, m/z = 660.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0332] Faza 4: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(5-amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0333] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(5-((tertbutoksikarbonil)amino)-1,2,4-tiadiazol-3-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (114 mg, 0.173 mmol), DCM (1.7 mL) i TFA (800 µl, 10.4 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (46 mg, 46%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.42 min, m/z = 504.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.42 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.21 (br s, 2H), 8.10 (s, 1H), 5.22 (dd, J = 8.6, 5.5 Hz, 1H), 4.67-4.58 (m, 1H), 4.56-4.47 (m, 1H), 4.28 (q, J = 5.5 Hz, 1H), 1.39 (s, 3H), 1.34 (s, 3H).
Referentni primer 17: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)sirćetna kiselina.
[0334] Faza 1: tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)acetat. Rastvoru (Z)-2-((2-(tertbutoksi)-2-oksoetoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (108 mg, 0.269 mmol) u DCM (2.7 mL) na 0 °C dodat je DIPEA (141 µL, 0.808 mmol) nakon čega HATU (113 mg, 0.296 mmol). Dobijenom rastvoru, posle 20 min, dodat je rastvor (3S,4R)-4-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-aminoazetidin-2-ona (50 mg, 0.299 mmol) u DCM. Posle 1 h mešanja, razblažen je sa EtOAc, ispran vodom, slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (106 mg, 72%). LCMS: Rt= 0.78 min, m/z = 551.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0335] Faza 2: (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-((Z)-2-((2-(tert-butoksi)-2-oksoetoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)acetat (100 mg, 0.182 mmol) u DMF (1.8 mL) je tretiran sa SO3•DMF (278 mg, 1.82 mmol). Posle 1 h mešanja, rastvor je razblažen sa EtOAc, ispran ledeno hladnom vodom, slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i konc. u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt = 0.71 min, m/z = 631.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0336] Faza 3: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)sirćetna kiselina.
[0337] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-((Z)-2-((2-(tert-butoksi)-2-oksoetoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (97 mg, 0.154 mmol), DCM (1.54 mL) i TFA (711 µl, 9.23 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (22.7 mg, 22%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.28 min, m/z = 475.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.50 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 5.25 (dd, J = 9.0, 5.9 Hz, 1H), 4.69-4.49 (m, 4H), 4.36 (dt, J = 7.4, 4.9 Hz, 1H).
Referentni primer 18: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0338] Faza 1: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvoru (Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (pripremljene prema Yamawaki et al. Bioorg. Med. Chem. Lett.2007, 15, 6716-6732) (150 mg, 0.279 mmol) u DCM:DMF (1:1, 2.8 mL) na 0 °C dodat je DIPEA (146 µL, 0.837 mmol) nakon čega HATU (127 mg, 0.335 mmol). Dobijenom rastvoru, posle 20 min, dodat je rastvor (3S,4R)-4-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-aminoazetidin-2-ona (51 mg, 0.31 mmol) u DCM. Posle 1 h mešanja, razblažen je sa EtOAc, ispran vodom, slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (147 mg, 77%). LCMS: Rt= 0.98 min, m/z = 687.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0339] Faza 2: (2R,3S)-2-(1H-1,2,4-triazol-1-il)metil-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat (147 mg, 0.214 mmol) u DMF (2.14 mL) je tretiran sa SO3•DMF (328 mg, 2.14 mmol). Posle 1 h mešanja, rastvor je razblažen sa EtOAc, ispran sa ledeno hladnom vodom, slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i konc. u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: Rt = 0.89 min, m/z = 767.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0340] Faza 3: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0341] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (164 mg, 0.214 mmol), DCM (2.14 mL) i TFA (989 µl, 12.8 mmol). Sirovi ostatak prečišćen je reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (50 mg, 41%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.29 min, m/z = 501.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.31 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 5.26 (dd, J = 9.0, 5.5 Hz, 1H), 4.67 (dd, J = 14.5, 4.3 Hz, 1H), 4.49-4.39 (m, 1H), 4.33 (ddd, J = 7.4, 5.5, 4.3 Hz, 1H), 1.34-1.27 (m, 4H).
Referentni primer 19: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0342] Faza 1: tert-Butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)karbamat. Pripremljen analogno primeru 4, faza 3 koja koristi Intermedijer T (1.20 g, 2.79 mmol) i Pd na C (10%, 830 mg) u EtOAc:MeOH (5:1, 24 mL) tokom 19 h. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.41 min, m/z = 297.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0343] Faza 2: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvoru (Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (pripremljene prema Yamawaki et al. Bioorg. Med. Chem. Lett.2007, 15, 6716-6732) (1.50 g, 2.79 mmol) u DCM (15 mL) na 0 °C dodat je DIPEA (1.22 mL, 6.98 mmol) i HATU (1.11 g, 2.93 mmol). Posle zagrevanja do rt, rastvor tert-butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)karbamata (827 mg, 2.79 mmol) u DCM:DMF (1.7:1, 12.7 mL). Posle 1 h mešanja, razblažen je sa DCM i ispran vodom, slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-90%), kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (1.92 g, 84%) kao purpurno ulje. LCMS: Rt= 1.08 min, m/z = 816.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0344] Faza 3: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((tertbutoksikarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat (1.92 g, 2.35 mmol) u DMF (20 mL) je tretiran sa SO3•DMF (3.60 g, 23.5 mmol). Posle 30 min mešanja, rastvor je razblažen sa EtOAc/vodom i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc, a kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i konc. u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (1.98 g, 94%) kao purpurnu penu. LCMS: Rt = 0.99 min, m/z = 896.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0345] Faza 4: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-ciklopropankarboksilna kiselina.
[0346] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (1.98 g, 2.21 mmol), DCM (18.4 mL) i TFA (10.2 mL, 133 mmol). Polovina sirovog ostatka prečišćena je reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (300 mg, ca 50%) kao prljavobeli prah. LCMS: Rt= 0.29 min, m/z = 530.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.69 (s, 1H), 7.04 (br s, 1H), 5.43 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.93-4.78 (m, 2H), 4.74-4.67 (m, 1H), 4.22-4.12 (m, 2H), 1.36-1.20 (m, 2H), 1.20-1.00 (m, 2H).
Referentni primer 20: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(gvanidinometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-ciklopropankarboksilna kiselina.
[0347]
[0348] Rastvoru 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-ciklopropankarboksilne kiseline (582 mg, 1.10 mmol) u DMF (12 mL) na 0 °C dodat je pirazol-1-karboksamidin hidrohlorid (322 mg, 2.20 mmol) i DIPEA (1.54 mL, 8.80 mmol). Posle 16 h mešanja na rt, rastvor je razblažen sa toluenom (60 mL), što je dovelo do odvajanja gustog ulja. Gornji sloj je dekantovan i zaostalo ulje je prečišćeno reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (240 mg, 37%) kao prljavo-beli prah. LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 572.2 (M+H) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.59 (s, 1H), 6.99 (br s, 1H), 5.43 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.91-4.75 (m, 2H pretpostavljeno; nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 4.70 (dd, J = 8.2, 6.3 Hz, 1H), 4.41-4.34 (m, 2H), 1.20 (br s, 2H), 1.05 (br s, 2H). E-izomer je takođe dobijen. LCMS: Rt= 0.33 min, m/z = 572.2 (M+H) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.58 (s, 1H), 7.46 (br. s., 1H), 5.45 (br. s., 1H), 4.84 (s, 3H), 4.37 (s, 2H), 1.33-1.08 (m, 4H)..
Primer 21: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)sirćetna kiselina.
[0349] Faza 1: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)acetat. Rastvoru (Z)-2-((2-(tert-butoksi)-2-oksoetoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (100 mg, 0.249 mmol), Intermedijer D (51 mg, 0.27 mmol) i HATU (123 mg, 0.324 mmol) u DMF (1.25 mL) dodat je DIPEA (131 µL, 0.747 mmol). Posle 4 h mešanja, razblažen je sa EtOAc, ispran vodom, slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-10% MeOH-DCM) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (118 mg, 83%). LCMS: Rt= 0.81 min, m/z = 569.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0350] Faza 2: (3S,4R)-3-((Z)-2-((2-(tert-butoksi)-2-oksoetoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-1-sulfonska kiselina. tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)acetat (118 mg, 0.208 mmol) u DMF (2.14 mL) je tretiran sa SO3•DMF (159 mg, 1.04 mmol). Posle 30 min mešanja, rastvor je razblažen sa EtOAc, ispran sa ledeno hladnim slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i konc. u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: Rt = 0.72 min, m/z = 649.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0351] Faza 3: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)sirćetna kiselina.
[0352] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (3S,4R)-3-((Z)-2-((2-(tert-butoksi)-2-oksoetoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-1-sulfonske kiseline (135 mg, 0.208 mmol), DCM (1.04 mL) i TFA (801 µl, 10.4 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (25 mg, 23%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.25 min, m/z = 493.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.41 (d, J = 9.1 Hz, 1H) 6.86 (s, 1H) 5.24 (dd, J = 9.0, 5.8 Hz, 1H) 4.62 (s, 2H) 4.20-4.11 (m, 3H) 3.72-3.63 (m, 2H) 3.40-3.31 (m, 2H pretpostavljeno; nejasno zbog vode).
Primer 22: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0353] Faza 1: Benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat.
Rastvoru (Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (854 mg, 1.59 mmol), Intermedijera D (324 mg, 1.75 mmol) i HATU (785 mg, 2.07 mmol) u DMF (7.9 mL) dodat je DIPEA (832 µL, 4.77 mmol). Posle 1 h mešanja, sipan je u vodi i ekstrahovan sa EtOAc. Slani rastvor je dodat vodenom sloju, i dalje je ekstrahovan sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-10% MeOH-DCM) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (1.09 g, 97%) kao bež pena. LCMS: Rt= 0.97 min, m/z = 705.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0354] Faza 2: (3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-1-sulfonska kiselina. Benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat (1.00 g, 1.42 mmol) u DMF (7.0 mL) na 0 °C je tretiran sa SO3•DMF (448 mg, 2.84 mmol). Posle 2 h mešanja na rt, rastvor je sipan u ledeno hladni slani rastvor i ekstrahovan sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i konc. u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt = 0.90 min, m/z = 785.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0355] Faza 3: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0356] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-1-sulfonske kiseline (1.10 g, 1.40 mmol), DCM (7.0 mL) i TFA (5.39 mL, 70.0 mmol). Dodatni TFA (3.24 mL, 42.0 mmol) dodat je posle 1 h na rt i rastvor je razblažen sa DCM i koncentrovan u vakuumu tokom dodatnih 30 min. Sirovi ostatak prečišćen je reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (178 mg, 23%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.30 min, m/z = 518.9 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.27 (d, J = 9.0 Hz, 1H) 6.92 (s, 1H) 5.23 (dd, J = 9.1, 5.7 Hz, 1H) 4.12-4.23 (m, 3H) 3.72-3.62 (m, 2H pretpostavljeno; nejasno zbog vode) 3.61-3.52 (m, 1H pretpostavljeno; nejasno zbog vode) 3.26 (dd, J = 14.5, 5.9 Hz, 1H) 1.36 (s, 4H).<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.23 (s, 1H), 5.48 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 4.71-4.65 (m, 1H), 4.44 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 3.89-3.73 (m, 3H), 3.54 (dd, J = 14.9, 4.9 Hz, 1H), 1.65-1.56 (m, 2H), 1.56-1.46 (m, 2H).
Referentni primer 23: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-metil-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina
[0357] Faza 1: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((((R)-2-hidroksipropil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat.
Rastvor Intermedijera L (500 mg, 0.949 mmol) i (R)-propilen oksida (996 µl, 14.2 mmol) u DCM (1.9 ml) je mešan na rt tokom 16 h, posle čega se javio talog. Dodato je još (R)-propilen oksida (332 µl, 4.75 mmol). Tokom dodatnih 3 h, dodat je više (R)-propilen oksida (500 µl, 7.14 mmol). Posle naredna 24 h mešanja, koncentrovan je u vakuumu i sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (185 mg, 33%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.82 min, m/z = 585.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0358] Faza 2: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarboni))amino)tiazo)-4-i))-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-metil-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvoru tert-butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((((R)-2-hidroksipropil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (185 mg, 0.316 mmol) u hloroformu (3.16 mL) dodat je CDI (257 mg, 1.58 mmol). Posle mešanja na rt tokom 20 min, rastvor je razblažen sa EtOAc/vodom i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc, a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM, 0-100%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (81 mg, 42%). LCMS: Rt= 0.92 min, m/z = 611.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0359] Faza 3: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-(((R)-5-metil-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-metil-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (81 mg, 0.133 mmol) u DMF (1.33 mL) je tretiran sa SO3•DMF (203 mg, 1.33 mmol). Posle 20 min mešanja na rt, rastvor je razblažen sa EtOAc/slanim rastvorom i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao čvrstu supstancu. LCMS: Rt = 0.84 min, m/z = 691.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0360] Faza 4: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-metil-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina
[0361] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-(((R)-5-metil-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (92 mg, 0.133 mmol), DCM (1.33 mL) i TFA (615 µL, 7.98 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (18.6 mg, 23%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.39 min, m/z = 535.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.29 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 5.22 (dd, J = 8.8, 5.7 Hz, 1H), 4.55 (dt, J = 13.5, 6.5 Hz, 1H), 4.15 (q, J = 6.0 Hz, 1H), 3.72-3.63 (m, 2H), 3.34-3.27 (m, 2H), 1.46 (s, 3H), 1.42 (s, 3H), 1.28 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
Primer 24: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(gvanidinometil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0362]
[0363] Rastvoru 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(aminometil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionske kiseline (30.1 mg, 0.055 mmol) i Pirazol-1-karboksamidin hidrohlorida (16.1 mg, 0.110 mmol) u DMF (548 µl) dodat je DIPEA (38.3 µl, 0.219 mmol). Posle 5 h mešanja na rt, rastvor je koncentrovan u vakuumu i prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (17.5 mg, 49%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.30 min, m/z = 592.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 6.97 (s, 1H), 5.31 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 4.74 (dtd, J = 9.3, 5.9, 3.2 Hz, 1H), 4.55 (ddd, J = 9.2, 5.9, 3.1 Hz, 1H), 3.86 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 3.66 (dd, J = 15.0, 9.5 Hz, 1H), 3.53 (dd, J = 15.5, 3.2 Hz, 1H), 3.47-3.34 (m, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.37 (s, 3H).
Primer 25: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(aminometil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-ciklopropankarboksilna kiselina.
[0364] Faza 1: tert-Butil (((R)-3-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2-oksooksazolidin-5-il)metil)karbamat. Pripremljen analogno primeru 4, faza 3 koja koristi Intermedijer U (1.16 g, 2.28 mmol) i Pd na C (10%, 246 mg) u EtOH:MeOH (5:1, 3 mL) tokom 19 h. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi.
[0365] Faza 2: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)-tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvoru (Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (1.29 g, 2.28 mmol) i HATU (909 mg, 2.39 mmol) u DMF:DCM (3:1, 9.0 mL) na 0 °C dodat je DIPEA (1.0 mL, 5.72 mmol). Posle 15 min mešanja na 0 °C tert-butil (((R)-3-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2-oksooksazolidin-5-il)metil)karbamat (715 mg, 2.28 mmol) je dodat kao rastvor u DMF:DCM (1:1, 9 mL) nakon čega ispran DMF (1.5 mL). Posle 1.2 h na rt, razblažen je sa EtOAc i ispran sa LiCl (5% aq). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x), a kombinovani organski slojevi su isprani sa LiCl (5% aq), NaHCO3(aq satd), slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 5-90%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (1.357 g, 72%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: Rt= 1.04 min, m/z = 834.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0366] Faza 3: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-(((R)-5-(((tert-butoksikarbonil)amino)-metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)-tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat (1.357 g, 1.627 mmol) u DMF (8.1 mL) na 0 °C je tretiran sa SO3•DMF (748 mg, 4.88 mmol). Posle 2 h mešanja na rt, rastvor je razblažen sa EtOAc/LiCl (5% aq) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x), a kombinovani organski slojevi su isprani sa LiCl (5% aq), slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao čvrstu supstancu. LCMS: Rt = 0.96 min, m/z = 914.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0367] Faza 4: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(aminometil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-ciklopropankarboksilna kiselina.
[0368] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-(((R)-5-(((tert-butoksikarbonil)amino)-metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (725 mg, 0.794 mmol), DCM (8.0 mL) i TFA (3.7 mL, 48.0 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (231 mg, 52%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.41 min, m/z = 548.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.18 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.00 (t, J = 5.8 Hz, 3H), 6.83 (s, 1H), 5.22 (dd, J = 8.8, 5.9 Hz, 1H), 4.68 (tdd, J = 9.0, 5.8, 3.4 Hz, 1H), 4.24 (ddd, J = 9.3, 5.9, 3.6 Hz, 1H), 3.75 (t, J = 8.8 Hz, 1H pretpostavljeno; nejasno zbog vode), 3.61 (dd, J = 8.7, 5.8 Hz, 1H pretpostavljeno; nejasno zbog vode), 3.41 (dd, J = 14.7, 9.0 Hz, 1H), 3.30 (dd, J = 14.7, 3.7 Hz, 1H), 3.25-3.05 (m, 2H), 1.40-1.27 (m, 4H).1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.18 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.02-4.93 (m, 1H), 4.70 (ddd, J = 9.2, 5.8, 3.7 Hz, 1H), 4.04 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 3.78 (dd, J = 15.0, 9.0 Hz, 1H), 3.60-3.56 (m, 1H), 3.54 (dd, J = 11.3, 3.6 Hz, 1H), 3.40 (s, 1H), 3.38 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 1.57-1.49 (m, 2H), 1.49-1.40 (m, 2H).
Primer 26: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(gvanidinometil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-ciklopropankarboksilna kiselina.
[0369]
[0370] Rastvoru 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(aminometil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropan-karboksilne kiseline (0.795 mmol) i Pirazol-1-karboksamidin hidrohlorida (234.8 mg, 1.602 mmol) u DMF (7.0 mL) dodat je DIPEA (1.20 mL, 8.06 mmol). Posle 19 h mešanja na rt, rastvor je konc. u vakuumu i prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (177 mg, 37%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.47 min, m/z = 590.1 (M+H) Postupak 2m_kiseli_polarni; ;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.15 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.62 (br s, 1H), 7.24 (s, 3H), 6.81 (s, 1H), 5.23 (dd, J = 8.9, 5.9 Hz, 1H), 4.60-4.51 (m, 1H), 4.23 (ddd, J = 9.0, 5.8, 3.7 Hz, 1H), 3.70 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 3.52 (dd, J = 8.8, 5.4 Hz, 1H), 3.49-3.44 (m, 1H), 3.43-3.34 (m, 3H), 1.38-1.24 (m, 4H).
Referentni primer 27: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0371] Faza 1: tert-Butil ((1-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)karbamat. Suspenziji paladijuma na ugljeniku (823 mg, 0.774 mmol) u EtOAc/MeOH (5:1, 16.8 mL) dodat je Intermedijer S (1.11 g, 2.58 mmol) u jednoj porciji. Sistem je evakuisan i ispunjen sa H2(3x). Posle mešanja tokom 19 h, mešavina je razblažena sa EtOAc, filtrirana kroz celit, isprana sa MeOH-EtOAc (20%, 100 mL x 3) i koncentrovana u vakuumu, dajući sirovo naslovno jedinjenje (730 mg) kao prljavobeli prah. LCMS: Rt= 0.37 min, m/z = 297.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0372] Faza 2: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Gustoj suspenziji (Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (1.32 g, 2.46 mmol) u DCM (12 mL) na 0 °C dodat je DIPEA (1.08 mL, 6.16 mmol) nakon čega HATU (0.984 g, 2.59 mmol). Reakciona mešavina je zagrejana do sobne temperature i tert-butil ((1-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)karbamat (0.73 g, 2.5 mmol) dodat je kao rastvor u DCM:DMF(1.7:1, 9.6 mL). Posle mešanja tokom 1.3 h, primećena je promena boje od žute do tamno purpurne, posle čega je razblažena sa DCM, isprana vodom, slanim rastvorom, osušena preko natrijum sulfata i koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-90%), dajući naslovno jedinjenje (1.62 g, 81%) kao purpurnu penu.
LCMS: Rt= 1.05 min, m/z = 816.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0373] Faza 3: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (1.58 g, 1.94 mmol) u DMF (15 mL) dodat je SO3•DMF kompleks (2.97 g, 19.4 mmol). Posle 45 min mešanja, razblažen je sa EtOAc (120 mL), slanim rastvorom (80 mL), vodom (40 mL) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 20 mL), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao purpurna pena. LCMS: Rt= 0.96 min, m/z = 896.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0374] Faza 4: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-ciklopropankarboksilna kiselina.
Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (1.74 g, 1.94 mmol), DCM (19.4 mL) i TFA (8.95 mL, 116 mmol). Posle 3 h na rt, ohlađen je do 0 °C i dodato je još TFA (200 µL, 2.6 mmol), posle čega je ostavljen da se ugreje do rt. Posle narednih 1 h na rt, ohlađen je do 0 °C i dodato je još TFA (200 µL, 2.6 mmol), pri čemu je ponovo ostavljen da se ugreje do rt. Tokom dodatnih 1 h na rt, razblažen je sa DCM i koncentrovan u vakuumu. Polovina sirovog ostatka je prečišćena reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (140 mg, ca 23%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.27 min, m/z = 530.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.07 (s, 1H), 7.08-6.99 (m, 1H) 5.42-5.31 (m, 1H), 4.88-4.74 (m, 2H pretpostavljeno; delimično nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 4.74-4.68 (m, 1H), 4.20 (s, 2H), 1.36-1.23 (m, 2H),1.23-1.07 (m, 2H).
Referentni primer 28: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(gvanidinometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-ciklopropankarboksilna kiselina.
[0375]
[0376] Rastvoru 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2 oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropan-karboksilne kiseline (559 mg, 1.06 mmol) i Pirazol-1-karboksamidin hidrohlorida (310 mg, 2.12 mmol) u DMF (12 mL) dodat je DIPEA (1.48 mL, 8.45 mmol). Posle 16 h mešanja na rt, rastvor je razblažen sa toluenom (20 mL), što je dovelo do odvajanja gustog ulja. Gornji sloj je dekantovan i zaostalo ulje je prečišćeno reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (240 mg, 39%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.28 min, m/z = 572.0 (M+H) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.09 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 5.52 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.97 (dd, J = 14.1, 5.5 Hz, 1H), 4.91 (q, J = 5.5 Hz, 1H), 4.84-4.76 (m, 1H pretpostavljeno; delimično nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 4.55 (s, 2H), 1.49-1.36 (m, 2H), 1.34-1.23 (m, 2H).. E-izomer je takođe dobijen. LCMS: Rt= 0.32 min, m/z = 572.0 (M+H) Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.37 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.13 (s, 2H), 6.50 (s, 1H), 5.18 (dd, J = 9.6, 5.3 Hz, 1H), 4.97 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 4.76-4.58 (m, 1H), 4.52 (dd, J = 16.11, 7.70 Hz, 1H), 4.26-4.05 (m, 2H), 1.86-2.08 (m, 1 H), 1.34-1.07 (m, 6 H).
Referentni primer 29: (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)propionska kiselina.
[0377] Faza 1: (R)-tert-Butil 2-hloropropanoat. Pripremljen prema Wright et al. Tetrahedron Lett.1997, 38, 7345. Staklena bomba od 500 mL napunjena je sa magnezijum sulfatom (4.21 g, 35.0 mmol) i DCM (43.8 mL). Ovoj suspenziji dodat je sumporna kiselina (486 µL, 8.75 mmol), kap po kap uz energično mešanje. Posle 15 min mešanja, (R)-2-hloropropionska kiselina (950 mg, 8.75 mmol) je dodata, a nakon nje tert-butanol (4.20 ml, 43.8 mmol). Bomba je zaptivena i mešana na rt tokom 19 h, posle čega je natrijum bikarbonat (aq satd, 100 mL) pažljivo dodata, u kojem trenutku su sve čvrste materije rastvorene. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu (kupatilo na 20 °C, 50 mBar) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (1.36 g, 94%) kao svetlo ružičasto ulje.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 4.29 (q, J = 6.9 Hz, 1H) 1.65 (d, J = 6.9 Hz, 3H) 1.49 (s, 9H).
[0378] Faza 2: (S)-tert-butil 2-((1,3-dioksoizoindolin-2-il)oksi)propanoat. Pripremljen prema Yamawaki et al. Bioorg. Med. Chem.2007, 15, 6716. Gustoj suspenziji N-hidroksiftalimida (517 mg, 3.17 mmol) i kalijum karbonata (657 mg, 4.76 mmol) u DMF (4.5 mL) dodat je (R)-tert-butil 2-hloropropanoat (522 mg, 3.17 mmol). Dodatni DMF (4.5 mL) je dodat posle čegaje gusta suspenzija postala viskozna. Posle mešanja tokom 5 d, razblažena je sa EtOAc i sipana u LiCl rastvor (5% aq, 90 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x), a kombinovani organski slojevi su isprani sa LiCl (5% aq), slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i konc. u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-50%), dajući naslovno jedinjenje (348 mg, 38%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.89 min, m/z = 314.0 (M+23) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.87-7.81 (m, 2H), 7.75 (dd, J = 5.5, 3.1 Hz, 2H), 4.79 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 1.61 (s, 3H), 1.46 (s, 9H).
[0379] Faza 3: (S)-tert-butil 2-(aminooksi)propanoat. Rastvoru (S)-tert-butil 2-((1,3-dioksoizoindolin-2-il)oksi)propanoata (73.3 mg, 0.252 mmol) u DCM (Zapremina: 500 µL) na 0 °C dodat je metil hidrazin (13.5 µL, 0.252 mmol). Posle mešanja tokom 3 h na 0 °C, čvrste čestice su isfiltrirane i filtrat je koncentrovan u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao bistro ulje.
[0380] Faza 4: (S)-tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-propanoat.
Rastvoru Intermedijera E (62.2 mg, 0.148 mmol) u MeOH (1 mL) na 0 °C dodat je rastvor (S)-tert-butil 2-(aminooksi)propanoata (24 mg, 0.15 mmol) u DCM (300 µL). Posle mešanja tokom 6 d, sirćetna kiselina (8.5 µl, 0.15 mmol) je dodata. Posle 4 d, dodato je još sirćetne kiseline (8.5 µl, 0.15 mmol). Tokom dodatnih 24 h, delimično je koncentrovan u vakuumu, zatim razblažen sa EtOAc/vodom. Slojevi su razdvojeni i organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i konc. u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 0-10%), dajući naslovno jedinjenje (20.2 mg, 24%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.81 min, m/z = 565.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0381] Faza 5: (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-((Z)-2-((S)-1-(tert-butoksi)-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru (S)-tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)propanoata (20.2 mg, 0.036 mmol) u DMF (400 µl) dodat je SO3•DMF (54.8 mg, 0.358 mmol). Posle 2.5 h mešanja, razblažen je sa EtOAc/LiCl (5% aq) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x), a kombinovani organski slojevi su isprani sa LiCl (5% aq), slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i konc. u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.74 min, m/z = 645.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0382] Faza 6: (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)propionska kiselina.
Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-((Z)-2-((((S)-1-(tert-butoksi)-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (23 mg, 0.036 mmol), DCM (357 µL) i TFA (165 µL, 2.14 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (7.9 mg, 36%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.40 min, m/z = 489.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.69 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 5.54 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.96-4.67 (m, 4H pretpostavljeno; delimično nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 1.44 (d, J = 7.0 Hz, 3H).
Referentni primer 30: (R)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)propionska kiselina.
[0383] Faza 1: (S)-tert-Butil 2-hloropropanoat. Pripremljen prema Wright et al. Tetrahedron Lett.1997, 38, 7345. Staklena bomba od 500 mL je ispunjena magnezijum sulfatom (21.7 g, 181 mmol) i DCM (182 mL). Ovoj suspenziji dodata je sumporna kiselina (2.5 mL, 45 mmol), kap po kap uz energično mešanje. Posle 15 min mešanja, (S)-2-hloropropionska kiselina (5.0 g, 45 mmol) je dodata nakon čega tert-butanol (21.6 ml, 226 mmol). Bomba je zaptivena i mešana na rt tokom 19 h, posle čega je ohlađena do 0 °C i pažljivo je dodat natrijum bikarbonat (aq satd, 350 mL), u kojem trenutku su sve čvrste materije rastvorene. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu (kupatilo na 20 °C, 50 mBar) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (7.64 g, 96%) kao svetlo žuto ulje (93% čistoća).<1>H NMR podaci su bili identičan prethodno pripremljenom enantiomeru.
[0384] Faza 2: (R)-tert-butil 2-((1,3-dioksoizoindolin-2-il)oksi)propanoat. Gustoj suspenziji N-hidroksiftalimida (3.71 g, 22.1 mmol) i kalijum karbonata (4.58 g, 33.1 mmol) u DMF (55 mL) dodat je (S)-tert-butil 2-hloropropanoat (4.30 g, 24.3 mmol). Posle 72 h mešanja, gusta suspenzija je zagrevana do 40 °C dodatnih 16 h, u kom trenutku je razblažena sa EtOAc/LiCl (5% aq) i slojevi su razdvojeni.
Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x) i kombinovani organski slojevi su isprani sa LiCl (5% aq), slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (5.45 g, 85%) kao prljavo-bela čvrsta supstanca. LCMS: Rt= 0.88 min, m/z = 313.9 (M+23) Postupak 2m_kiseli.
[0385] Faza 3: (R)-tert-butil 2-(aminooksi)propanoat. Rastvoru (R)-tert-butil 2-((1,3-dioksoizoindolin-2-il)oksi)propanoata (69.6 mg, 0.239 mmol) u DCM (478 µL) na 0 °C dodat je metil hidrazin (12.8 µl, 0.239 mmol). Posle mešanja tokom 3 h na 0 °C, čvrste čestice su isfiltrirane i filtrat je koncentrovan u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao bistro ulje.
[0386] Faza 4: (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-((Z)-2-((((R)-1-(tert-butoksi)-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru Intermedijera F (110 mg, 0.219 mmol) u MeOH (2 mL) na 0 °C dodat je rastvor (R)-tert-butil 2-(aminooksi)propanoata (38.5 mg, 0.239 mmol) u DCM:MeOH (2:1, 600 µL) nakon čega se ispere DCM (400 µL). Posle mešanja tokom 16 h, delimično je koncentrovan u vakuumu, zatim razblažen sa EtOAc/vodom i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i konc. u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.74 min, m/z = 645.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0387] Faza 5: (R)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)propionska kiselina.
[0388] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-((Z)-2-((((R)-1-(tert-butoksi)-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina (141 mg, 0.219 mmol), DCM (2.19 mL) i TFA (1.0 mL, 13 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (35.5 mg, 29%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.42 min, m/z = 489.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.58 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 5.41 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.81-4.52 (m, 4H pretpostavljeno; delimično nejasno zbog pika rastvarača), 1.29 (d, J = 7.0 Hz, 3H).
Referentni primer 31: (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-3-(4-(N-(piperidin-4-il)karbamimidoil)-fenoksi)propionska kiselina.
[0389] Faza 1: tert-Butil 4-(4-((S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-3-(benzhidriloksi)-3-oksopropoksi)benzimidamido)piperidin-1-karboksilat. Rastvoru (S,Z)-2-(((1-(benzhidriloksi)-3-(4-(N-(1-(tert-butoksikarbonil)piperidin-4-il)karbamimidoil)fenoksi)-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (pripremljena prema WO2013110643, 72 mg, 0.085 mmol), (3S,4R)-4-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-aminoazetidin-2-ona (15.7 mg, 0.094 mmol) i HATU (42.2 mg, 0.111 mmol) u DMF (854 µL) dodat je DIPEA (44.8 µl, 0.256 mmol). Posle mešanja na tokom 3 h razblažen je sa EtOAc, ispran vodom, NaHCO3(aq satd), slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (82 mg, 87%) kao maslinasti film. LCMS: Rt= 0.97 min, m/z = 992.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0390] Faza 2: (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-((Z)-2-((((S)-1-(benzhidriloksi)-3-(4-(N-(1-(tertbutoksikarbonil)piperidin-4-il)karbamimidoil)fenoksi)-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. tert-Butil 4-(4-((S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-3-(benzhidriloksi)-3-oksopropoksi)benzimidamido)piperidin-1-karboksilat (99 mg, 0.10 mmol) u DMF (500 µL) je tretiran sa SO3•DMF (45.9 mg, 0.299 mmol). Posle mešanja tokom 40 min, dodato je još SO3•DMF (45.9 mg, 0.299 mmol). Posle 1.3 h, dodat je još SO3•DMF (45.9 mg, 0.299 mmol). Posle mešanja dodatnih 30 min, rastvor je sipan u ledeno hladan slani rastvor i ekstrahovan sa EtOAc. Slojevi su razdvojeni i organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao prljavo-belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.97 min, m/z = 1073.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0391] Faza 3: (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-3-(4-(N-(piperidin-4-il)karbamimidoil)-fenoksi)propionska kiselina.
[0392] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-((Z)-2-((((S)-1-(benzhidriloksi)-3-(4-(N-(1-(tert-butoksikarbonil)piperidin-4-il)karbamimidoil)fenoksi)-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (0.085 mmol), DCM (850 µL) i TFA (327 µL, 4.25 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (12 mg, 17%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.41 min, m/z = 706.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.55 (d, J = 7.4 Hz, 1H) 9.40 (br s, 1H) 9.01 (br s, 1H) 8.53-8.71 (m, 1H) 8.41 (s, 1H) 7.92 (s, 1H) 7.67 (d, J = 9.0 Hz, 2H) 7.21 (br s, 2H) 7.03 (d, J = 7.8 Hz, 1H) 6.76 (s, 1H) 5.17-5.24 (m, 1H) 4.94 (d, J = 3.9 Hz, 1H) 4.46-4.53 (m, 2H) 4.37-4.45 (m, 1H) 4.25-4.32 (m, 1H) 3.88 (br s, 1H) 3.39 (br s, 4H) 2.92 (t, J = 11.5 Hz, 2H) 2.05-2.14 (m, 2H) 1.79 (d, J = 11.0 Hz, 2H).
Referentni primer 32: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklobutankarboksilna kiselina.
[0394] LCMS: Rt= 0.58 min, m/z = 515.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.75 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 5.56 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.95-4.85 (m, 2H), 4.86-4.82 (m, 1H pretpostavljeno; delimično nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 4.78-4.70 (m, 1H pretpostavljeno; delimično nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 2.61-2.46 (m, 2H), 2.38-2.27 (m, 2H), 2.00-1.89 (m, 2H).
Referentni primer 33: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(cijanometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0395]
[0396] LCMS: Rt= 0.57 min, m/z = 542.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.19 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 5.43-5.23 (m, 1H), 4.93-4.84 (m, 1H), 4.76-4.67 (m, 1H), 4.47 (ddd, J = 8.71, 5.4, 3.5 Hz, 1H), 4.07 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 1.35 (s, 6H).
Referentni primer 34: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-amino-1H-pirazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0397]
[0398] LCMS: Rt= 0.50 min, m/z = 517.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.54 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.00 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.40 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 4.69 (q, J = 5.5 Hz, 1H), 4.43 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 1.31 (d, J = 1.8 Hz, 6H).
Referentni primer 35: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-amino-1H-pirazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0399]
[0400] LCMS: Rt= 0.39 min, m/z = 517.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.86 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 6.90 (s, 1H), 5.35 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 4.72-4.67 (m, 1H), 4.54-4.49 (m, 2H), 1.28 (s, 3H), 1.27 (s, 3H).
Referentni primer 36: (2R,3S)-3-((Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2-karboksipropan-2-il)oksi)imino)acetamido)-2-((4-((1-metilpirolidin-1-ijum-1-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonat.
[0401]
[0402] LCMS: Rt= 0.55 min, m/z = 600.3 (M+) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.50 (s, 1H), 9.34 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.27 (s, 2H), 6.72 (s, 1H), 5.33 (dd, J = 8.6, 5.6 Hz, 1H), 4.82 (dd, J = 15.1, 9.2 Hz, 1H), 4.69-4.53 (m, 4H), 3.60-3.50 (m, 2H), 3.46-3.33 (m, 2H), 2.95 (s, 3H), 2.14-2.00 (m, 4H), 1.35 (s, 3H), 1.29 (s, 3H).
Referentni primer 37: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((karbamoiloksi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0403]
[0404] LCMS: Rt= 0.53 min, m/z = 576.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.23 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.59 (br s, 2H), 5.31 (dd, J = 9.2, 5.4 Hz, 1H), 4.94 (s, 2H), 4.91 (dd, J = 14.3, 3.2 Hz, 1H), 4.72 (dd, J = 14.2, 9.0 Hz, 1H), 4.42 (ddd, J = 8.8, 5.5, 3.1 Hz, 1H), 1.38 (s, 3H), 1.37 (s, 3H).
Referentni primer 38: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-1-sulfo-4-((4-((sulfooksi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0405]
[0406] LCMS: Rt= 0.43 min, m/z = 612.9 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.71 (s, 1H), 6.96-7.11 (m, 1H), 5.40 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.93-4.65 (m 3H pretpostavljeno; delimično nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 1.34 (s, 6H).
Referentni primer 39: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((2-amino-4,5-dihidro-1H-imidazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0407]
[0408] LCMS: Rt= 0.30 min, m/z = 520.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.63 (br s, 1H) 9.12 (d, J = 8.6 Hz, 1H) 7.74 (d, J = 15.3 Hz, 3H) 7.31-7.49 (m, 2H) 6.77 (s, 1H) 5.22 (dd, J = 8.5, 5.8 Hz, 1H) 4.24 (dt, J = 7.1, 5.3 Hz, 1H) 3.76-3.85 (m, 1H) 3.59-3.73 (m, 2H) 3.43-3.55 (m, 3H) 1.43 (s, 3H) 1.41, (s, 3H).
Referentni primer 40: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((E)-2-(cijanoimino)imidazolidin-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0410] LCMS: Rt= 0.33 min, m/z = 544.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.29 (d, J = 9.1 Hz, 1H) 7.74 (br s, 1H) 6.85 (s, 1H) 5.20 (dd, J = 8.8, 5.7 Hz, 1H) 4.10-4.17 (m, 1H) 3.72-3.81 (m, 1H) 3.62 (dd, J = 14.7, 6.8 Hz, 1H) 3.48-3.56 (m, 1H) 3.31-3.42 (m, 3H) 1.43 (s, 3H) 1.41, (s, 3H).
Referentni primer 41: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(2-aminoetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina
[0412] Faza 1: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Mešavini Intermedijera K (100 mg, 0.158 mmol) i tert-butil but-3-in-1-ilkarbamat (54 mg, 0.32 mmol) u DMSO: vodi: tert-butanol (1: 1: 1, 3 mL) dodat je CuSO4(13 mg, 0.079 mmol) i natrijum L-askorbat (32 mg, 0.16 mmol). Posle prekonoćnog mešanja, mešavina je razblažena sa EtOAc i vodom. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom, slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je ispran sa dietil etrom/pentanom, dajući naslovno jedinjenje (80 mg, 63%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 799.8 (M-1).
[0413] Faza 2: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(2-aminoetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina. Rastvoru (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (110 mg, 0.137 mmol) u DCM (1.4 mL) na 0 °C dodat je TFA: DCM (1:1, 4.2 mL) nakon čega trietilsilan (65 µL, 0.411 mmol). Reakciona mešavina je mešana na 0 °C tokom 30 min i lagano zagrejana do sobne temperature. Polse 2 h na rt, koncentrovana je u vakuumu i pretvorena u prah sa MTBE:Heptanom (1:2) posle čega se javila čvrsta supstanca. Sirova čvrsta supstanca je prečišćena reverzno faznom preparativnom HPLC (C18 kolona, sistem rastvarača acetonitril: voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (5 mg, 7%); LCMS: m/z = 543.9 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 8.06 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 5.44 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 4.66 (q, J = 6.0 Hz, 1H), 4.95-4.83 (m, 2H pretpostavljeno; nejasno zbog vode), 3.29-3.24 (m, 2H), 3.07 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.54 (s, 3H), 1.52 (s, 3H).
Referentni primer 42: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((4-(2-(piperazin-1-il)etil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina
[0414] Faza 1: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(2-(4-(tert-butoksikarbonil)piperazin-1-il)etil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru Intermedijera K (90 mg, 0.142 mmol) i tert-butil 4-(but-3-in-1-il)piperazin-1-karboksilata (34 mg, 0.14 mmol) u mešavini DMSO:voda:tert-butanol (1:1:1, 2.16 mL) dodat je CuSO4(2.5 mg, 0.016 mmol) i natrijum L-askorbat (5 mg, 0.15 mmol). Posle prekonoćnog mešanja, mešavina je razblažena sa EtOAc i vodom. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom, slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je ispran sa dietil etrom/pentanom, dajući naslovno jedinjenje (120 mg, sirovi); LCMS: m/z = 871.4 (M+1).
[0415] Faza 2: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((4-(2-(piperazin-1-il)etil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina
[0416] Rastvoru (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(2-(4-(tert-butoksikarbonil)piperazin-1-il)etil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (120 mg, 0.138 mmol) u DCM (1.4 mL) na 0 °C dodat je TFA: DCM (1:1, 4.2 mL) nakon čega trietilsilan (65 µL, 0.411 mmol). Reakciona mešavina je mešana na 0 °C tokom 30 min i lagano zagrejana do sobne temperature. posle 2 h na rt, koncentrovana je u vakuumu i pretvorena u prah sa MTBE: Heptanom (1:2), posle čega se javila čvrsta supstanca. Sirova čvrsta supstanca je prečišćena reverzno faznom preparativnom HPLC (C18 kolona, sistem rastvarača acetonitril: voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (9.3 mg, 11%); LCMS: m/z = 612.8 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.67 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.30 (s, 2H), 6.66 (s, 1H), 5.27 (dd, J = 8.8, 5.5 Hz, 1H), 4.82 (dd, J = 14.7, 4.0 Hz, 1H), 4.68 (dd, J = 14.7, 6.6 Hz, 1H), 4.24 (td, J = 5.9, 4.2 Hz, 1H), 3.10 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 2.76 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 2.64-2.54 (m, 6H), 1.37 (s, 3H), 1.30 (s, 3H).
Referentni primer 43: (3S,4R)-3-((Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2-karboksipropan-2-il)oksi)imino)acetamido)-2-okso-4-((4-((2-(trimetilamonio)acetamido)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)azetidin-1-sulfonat.
[0417] Faza 1: 2-(((1-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-okso-1-sulfoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)amino)-N,N,N-trimeti)-2-oksoetanamonijum bromid. Rastvoru Intermedijera K (100 mg, 0.158 mmol) i N,N,N-trimetil-2-okso-2-(prop-2-in-1-ilamino)etanamonijum bromida (50 mg, 0.212 mmol) u mešavini DMSO: voda: tert-butanol (1:1:1, 3 mL) dodat je CuSO4(2.5 mg, 0.016 mmol) i natrijum L-askorbat (5 mg, 0.15 mmol). Mešavina je mešana preko noći i ugašena sa ledeno hladnom vodom, posle čega su dobijen čvrste čestice isfiltrirane i osušene u vakuumu da bi se dobilo sirovo naslovno jedinjenje (50 mg, 40%); LCMS: m/z = 784.85 (M-1).
[0418] Faza 2: (3S,4R)-3-((Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2-karboksipropan-2-il)oksi)imino)acetamido)-2-okso-4-((4-((2-(trimetilamonio)acetamido)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)azetidin-1-sulfonat.
[0419] Gustoj suspenziji 2-(((1-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-okso-1-sulfoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)amino)-N,N,N-trimetil-2-oksoetanaminijum bromida (50 mg, 0.0635 mmol) u DCM (640 µL) na 0 °C dodat je TFA: DCM (1:1, 1.92 mL) nakon čega trietilsilan (31 µL, 0.19 mmol).
Reakciona mešavina je mešana na 0 °C tokom 30 min i lagano zagrejana do sobne temperature. Posle 2 h na rt, koncentrovana je u vakuumu i pretvorena u prah sa MTBE:Heptanom (1:2), posle čega se javila čvrsta supstanca. Sirova čvrsta supstanca je prečišćena reverzno faznom preparativnom HPLC (C18 kolona, sistem rastvarača acetonitril: voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (11 mg, 27%). LCMS: m/z = 630.9 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 9.06 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.32 (s, 2H), 6.71 (s, 1H), 5.28 (dd, J = 8.6, 5.5 Hz, 1H), 4.89-4.64 (m, 2H), 4.38 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 4.22 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 4.08 (s, 2H), 3.22 (s, 9H), 1.33 (s,3H), 1.26 (s, 3H).
Referentni primer 44: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0420] Faza 1: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru Intermedijera K (100 mg, 0.158 mmol) u mešavini DMSO: voda: tert-butanol (1:1:1, 1.5 mL) na 0 °C dodat je N-Boc-propargil amin (50 mg, 0.321 mmol), CuSO4(13 mg, 0.079 mmol) i natrijum L-askorbat (48 mg, 0.237 mmol). Dobijena mešavina je postepeno dovedena na rt i mešana tokom 3 h. Zatim je razblažena sa EtOAc i slanim rastvorom i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x) i kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, zatim koncentrovani u vakuumu da bi se dobilo sirovo naslovno jedinjenje (120 mg, 96%); LCMS: m/z = 787.95 (M+1).
[0421] Faza 2: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0422] Gustoj suspenziji (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-1 H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (120 mg, 0.15 mmol) U DCM (1.5 mL) na 0 °C dodat je TFA: DCM (1:1, 4.5 mL) nakon čega trietilsilan (72 µL, 0.45 mmol). Reakciona mešavina je mešana na 0 °C tokom 30 min i lagano zagrejana do sobne temperature. Posle 2 h na rt, koncentrovana je u vakuumu i pretvorena u prah sa MTBE: Heptanom (1:2), posle čega se javila čvrsta supstanca. Sirova čvrsta supstanca je prečišćena reverzno faznom preparativnom HPLC (C18 kolona, sistem rastvarača acetonitril: voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (11.3 mg, 14%). LCMS: m/z = 528.9 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.47 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.30 (s, 2H), 6.75 (s, 1H), 5.27 (dd, J = 8.6, 5.6 Hz, 1H), 4.82 (qd, J = 14.9, 5.0 Hz, 2H), 4.23 (q, J = 5.1 Hz, 1H), 4.09 (s,2H), 1.37 (s, 3H), 1.32 (s, 3H).
Referentni primer 45: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(gvanidinometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0424] Faza 1: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((2,3-bis(tertbutoksikarbonil)gvanidino)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina. Rastvoru trifluoroacetata 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(amoniometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionske kiseline (150 mg, 0.122 mmol) u DCM (10 mL) dodat je DIPEA (100 µL, 0.610 mmol) nakon čega N,N-di-Boc-1H-pirazol-1-karboksamidin (42 mg, 0.134 mmol). Rastvor je mešan na RT preko noći, posle čega je koncentrovan u vakuumu, voda je dodata i liofilizovan je tokom 72 h da bi se dobilo sirovo naslovno jedinjenje (210 mg, pretpostavljena količina conversion). LCMS: m/z = 772.1 (M-1).
[0425] Faza 2: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(gvanidinometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0426] Opšta procedura za kiselinom posredovanu deprotekciju. Rastvoru 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((2,3-bis(tert-butoksikarbonil)gvanidino)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionske kiseline (0.15 mmol, pretpostavljena količina conversion) u DCM (1.5 mL) na 0 °C dodat je TFA (689 µL, 9 mmol). Hladno kupatilo je uklonjeno posle 10 min. Posle 4 h na rt, razblažen je sa DCM (1.5 mL) i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (X-Bridge, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; acetonitril-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 1 mL/min) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (2.7 mg, 3%). LCMS: m/z = 572.0 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.91 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 5.31 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.54 (s, 1H), 4.35 (s, 2H), 3.50-3.35 (m, 2H), 1.19 (s, 3H), 1.18 (s, 3H).
Referentni primer 46: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((2-(4-metilpiperazin-1-il)acetamido)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0427] Faza 1: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((2-(4-metilpiperazin-1-il)acetamido)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru Intermedijera K (100 mg, 0.158 mmol) u mešavini DMSO: voda: tert-butanol (1:1:1, 1 mL) na 0 °C dodat je 2-(4-metilpiperazin-1-il)-N-(prop-2-in-1-il)acetamid (47 mg, 0.24 mmol), CuSO4(13 mg, 0.079 mmol) i natrijum L-askorbat (48 mg, 0.237 mmol). Dobijena mešavina je postepeno dovedena na sobnu temperaturu i mešana tokom 3 h. Zatim je razblažena sa EtOAc i slanim rastvorom i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x), a kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, zatim koncentrovani u vakuumu da bi se dobilo sirovo naslovno jedinjenje (110 mg, 84%); LCMS: m/z = 829.1 (M+1).
[0428] Faza 2: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((2-(4-metilpiperazin-1-il)acetamido)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0429] Gustoj suspenziji (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((2-(4-metilpiperazin-1-il)acetamido)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (120 mg, 0.13 mmol) u DCM (1.3 mL) na 0 °C dodat je TFA: DCM (1:1, 3.9 mL) nakon čega trietilsilan (62 µL, 0.39 mmol). Reakciona mešavina je mešana na 0 °C tokom 30 min i lagano zagrejana do sobne temperature. Posle 2 h na rt, koncentrovana je u vakuumu i pretvorena u prah sa MTBE: Heptanom (1:2), posle čega se javila čvrsta supstanca. Sirova čvrsta supstanca je prečišćena reverzno faznom preparativnom HPLC (C18 kolona, sistem rastvarača ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (9 mg). LCMS: m/z = 669.75 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.33 (s, 2H), 6.71 (s, 1H), 5.29 (dd, J = 8.7, 5.6 Hz, 1H), 4.88-4.60 (m, 2H), 4.34 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 4.24 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 3.20-2.87 (m, 8H), 2.77 (s, 3H), 1.34 (s, 3H), 1.30 (s, 3H).
Referentni primer 47: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(hidroksimetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0430] Faza 1: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(hidroksimetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru Intermedijera K (126 mg, 0.20 mmol) u mešavini DMSO: voda: tert-butanol (1:1:1, 1.5 mL) na 0 °C dodat je propargil alkohol (24 µL, 0.40 mmol), CuSO4(16 mg, 0.10 mmol) i natrijum L-askorbat (59 mg, 0.30 mmol). Dobijena mešavina je postepeno dovedena na rt i mešana tokom 3 h. Zatim je zamrznuta i liofilizovana. Sirovi ostatak je prečišćen sa HP21 smolom (ACN-voda, 10-100%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje kao svetlo smeđa čvrsta supstanca (100 mg, 73%); LCMS: m/z = 687.1 (M-1).
[0431] Faza 2: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(hidroksimetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0432] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(hidroksimetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (100 mg, 0.145 mmol), DCM (4 mL) i TFA (1 mL, 13 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (T3, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; acetonitril-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 1 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (22 mg, 29%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 530.9 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.50 (br s, 1H), 9.36 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.50 (br s, 2H), 6.70 (s, 1H), 5.28 (dd, J = 8.8, 5.2, Hz, 1H), 4.86 (dd, J = 14.4, 4.0 Hz, 1H), 4.69 (dd, J = 14.8, 7.2 Hz, 1H), 4.48 (s, 2H), 4.27-4.21 (m, 1H), 1.35 (s, 3H), 1.34 (s, 3H).
Referentni primer 48: (2R,3S)-3-((Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2-karboksipropan-2-il)oksi)imino)acetamido)-2-((4-(1-metilpiridin-1-ijum-4-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonat.
[0433] Faza 1: 4-(1-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)-1-metilpiridin-1-ijum trifluorometansulfonat. Rastvoru Intermedijera K (85 mg, 0.134 mmol) u mešavini DMSO: voda: tert-butanol (1:1:1, 1.0 mL) na 0 °C dodat je 4-etinil-1-metilpiridin-1-ijum trifluorometansulfonat (72 µL, 0.27 mmol), CuSO4(11 mg, 0.067 mmol) i natrijum L-askorbat (40 mg, 0.201 mmol). Dobijena mešavina je postepeno dovedena na rt i mešana tokom 3 h posle čega je razblažena sa vodom (5 mL). Dobijeni talog je ispran vodom (2 mL) i osušen pomoću N2toka, dajući naslovno jedinjenje (80 mg) kao mešavinu sa njegovim N-sulfonilovanim azetidinon analogom kao svetlo smeđu čvrstu supstancu; LCMS: m/z = 748.1 (M-1).
[0434] Faza 2: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(1-metilpiridin-1-ijum-4-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonat.4-(1-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)-1-metilpiridin-1-ijum trifluorometansulfonat (70 mg, 0.10 mmol) u DMF (1 mL) je tretiran sa SO3•DMF (80 mg, 0.52 mmol). Reakciona mešavina je mešana na rt tokom 16 h, zatim je koncentrovana u vakuumu i prečišćena sa HP21 smolom (ACN-voda, 10-100%), dajući naslovno jedinjenje (24 mg, 31%) kao bež čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 748.1 (M-1).
[0435] Faza 3: (2R,3S)-3-((Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2-karboksipropan-2-il)oksi)imino)acetamido)-2-((4-(1-metilpiridin-1-ijum-4-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonat.
[0436] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(1-metilpiridin-1-ijum-4-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonata (24 mg, 0.032 mmol), DCM (1.2 mL) i TFA (0.3 mL, 3.9 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XBridge, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 1 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (7.9 mg, 41%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 592.0 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 8.76 (s, 1H), 8.62 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 8.19 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 6.76 (s, 1H), 5.42 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.98-4.81 (m, 2H; delimično nejasno zbog pika rezidualnog rastvarača), 4.66-4.54 (m, 1H pretpostavljeno: nejasno zbog pika rezidualnog rastvarača), 4.22 (s, 3H), 1.30 (s, 3H), 1.27 (s, 3H).
Referentni primer 49: (2R,3S)-3-((Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2-karboksipropan-2-il)oksi)imino)acetamido)-2-((4-(1,3-dimetilpiridin-1-ijum-4-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonat.
[0437] Faza 1: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(1,3-dimetilpiridin-1-ijum-4-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonat. Rastvoru intermedijera K (120 mg, 0.19 mmol) u mešavini DMSO: voda: tert-butanol (1:1:1, 1.5 mL) na 0 °C dodat je 4-etinil-1,3-dimetilpiridin-1-ijum trifluorometansulfonat (107 mg, 0.38 mmol), CuSO4(15 mg, 0.095 mmol) i natrijum L-askorbat (56 mg, 0.285 mmol). Dobijena mešavina je postepeno dovedena na rt i mešana tokom 3 h, posle čega je razblažena sa vodom (10 mL). Dobijeni talog je ispran vodom (5 mL) i osušen. Sirovi ostatak je prečišćen sa HP21 smolom (ACN-voda, 10-100%), dajući naslovno jedinjenje (80 mg, 55%) kao svetlo smeđu čvrstu supstancu; LCMS: m/z = 762.2 (M-1).
[0438] Faza 2: (2R,3S)-3-((Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2-karboksipropan-2-il)oksi)imino)acetamido)-2-((4-(1,3-dimetilpiridin-1-ijum-4-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonat.
[0439] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(1,3-dimetilpiridin-1-ijum-4-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonata (24 mg, 0.032 mmol), DCM (1.2 mL) i TFA (0.3 mL, 3.9 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (T3, 30 x 150 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 1 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (12 mg, 62%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 606.1 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 8.65 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.49 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.74 (br s, 1H), 5.47 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.97-4.88 (m, 3H), 4.21 (s, 3H), 2.46 (s, 3H), 1.30 (s, 3H), 1.28 (s, 3H).
Referentni primer 50: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0440] Faza 1: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazo)-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((4-(trimetilsilil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvoru Intermedijera J (120 mg, 0.19 mmol) u mešavini DMSO:voda: tert-butanol (1:1:1, 2.0 mL) na 0 °C dodat je trimetilsililacetilen (100 µL, 0.724 mmol), CuSO4(29 mg, 0.181 mmol) i natrijum L-askorbat (108 mg, 0.543 mmol). Dobijena mešavina je postepeno dovedena na rt i mešana tokom 4 h, posle čega je razblažena sa slanim rastvorom (5 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 10 mL).
Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 7%), dajući naslovno jedinjenje (170 mg, 72%) kao svetlo smeđu čvrstu supstancu; LCMS: m/z = 651.2 (M+1).
[0441] Faza 2: tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Pripremljen prema postupak opisanom u WO2013/028590. Rastvoru tert-butil 2-(((Z)-(1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((4-(trimetilsilil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (140 mg, 0.261 mmol) u THF (4 mL) dodat je TBAF (1M u THF, 860 µL, 0.86 mmol). Posle mešanja na rt tokom 16 h, dodatni TBAF (1M u THF, 1.0 mL, 1.0 mmol) je dodat. Posle mešanja dodatnih 48 h, rastvor je koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 7%) dajući naslovno jedinjenje (84 mg, 68%) kao prljavo-belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 579.2 (M+1).
[0442] Faza 3: (2R,3S)-2-((1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (84 mg, 0.145 mmol) u DMF (2 mL) je tretiran sa SO3•DMF (222 mg, 1.45 mmol). Reakciona mešavina je mešana na rt tokom 16 h, zatim je razblažena sa EtOAc (50 mL) i vodom. Slojevi su razdvojeni i organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu, dajući sirovo naslovno jedinjenje kao bledo žutu čvrstu supstancu (84 mg, 88%). LCMS: m/z = 657.1 (M-1) .
[0443] Faza 4: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0444] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-2-((1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (80 mg, 0.121 mmol), DCM (4 mL) i TFA (1 mL, 13 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (T3, 30 x 150 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 1 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (12 mg, 20%) kao belau čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 500.9 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.95 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 5.38 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.88-4.80 (m, 1H), 4.78-4.70 (m, 2H pretpostavljeno; nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 1.34 (s, 6H).
Referentni primer 51: 1-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2-karboksipropan-2-il)oksi)imino)acetamido)-4-okso-1-sulfoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina.
[0445] Faza 1: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(tert-butoksikarbonil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru Intermedijera K (157 mg, 0.248 mmol) u mešavini DMSO: voda: tert-butanol (1:1:1, 2.0 mL) na 0 °C dodat je tert-butil propiolat (68 µL, 0.496 mmol), CuSO4(20 mg, 0.124 mmol) i natrijum L-askorbat (198 mg, 0.372 mmol). Dobijena mešavina je postepeno dovedena na sobnu temperaturu i mešana tokom 3 h, posle čega je razblažena sa vodom (20 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, koncentrovani u vakuumu, rastvoreni u vodi i liofilizovani, dajući naslovno jedinjenje (180 mg, 96%) kao bledo žutu čvrstu supstancu; LCMS: m/z = 759.3 (M+1).
[0446] Faza 2: 1-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2-karboksipropan-2-il)oksi)imino)acetamido)-4-okso-1-sulfoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilna kiselina.
[0447] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(tert-butoksikarbonil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (180 mg, 0.237 mmol), DCM (8 mL) i TFA (2 mL, 26 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (T3, 30 x 150 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 1 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (35 mg, 27%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 544.9 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 8.43 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 5.38 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.92-4.71 (m, 3H; delimično nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 1.33 (s, 6H).
Referentni primer 52: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0448] Faza 1: tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat.
[0449] Opšta procedura za Mitsunobu reakciju. Rastvoru Intermedijera H (300 mg, 0.569 mmol), tertbutil ((2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)karbamata (135 mg, 0.682 mmol) i trifenilfosfina (178 mg, 0.682 mmol) u THF (10 mL) na 0 °C dodat je DIAD (145 mg, 0.682 mmol), kap po kap. Posle mešanja na rt tokom 16 h, rastvor je koncentrovan i prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 2-5%), dajući naslovno jedinjenje (300 mg, 75%) kao žutu penu. LCMS: m/z = 706.2 (M+1).
[0450] Faza 2: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((tertbutoksikarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (220 mg, 0.311 mmol) u DMF (5 mL) je tretiran sa SO3•DMF (476 mg, 3.11 mmol). Rastvor je mešan na rt tokom 48 h, zatim je koncentrovan u vakuumu i prečišćen sa HP21 smolom (ACN-voda, 10-50%), dajući naslovno jedinjenje (82 mg, 33%). LCMS: m/z = 786.2 (M-1).
[0451] Faza 3: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0452] (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina (82 mg, 0.104 mmol) je mešan sa mravljom kiselinom (2.0 mL) na rt tokom 5 h, čime su se uklonile obe Boc grupe. Posle koncentrovanja u vakuumu, materijal je rastvoren u DCM (1.5 mL), ohlađen do 0 °C i tretiran sa TFA (0.5 mL, 6.5 mmol) tokom 1 h, posle čega je koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (T3, 30 x 150 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 1 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (17.2 mg, 31%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 529.9 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.67 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 5.39 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.86-4.74 (m, 3H pretpostavljeno; nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 4.16 (s, 2H), 1.25 (s, 3H), 1.23 (3H, s).
Referentni primer 53: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(gvanidinometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0453]
[0454] Rastvoru 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionske kiseline (60 mg, 0.089 mmol) i pirazol-1-karboksamid hidrohlorida (16 mg, 0.11 mmol) u DMF (3 mL) dodat je DIPEA (45 µL, 0.27 mmol). Posle mešanja tokom 16 h, rastvor je koncentrovan i ispran etrom. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XBridge, 30 x 150 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 1 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (7.5 mg, 15%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 571.9 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.55 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 5.38 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.82-4.76 (m, 1H pretpostavljeno; nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 4.76-4.72 (m, 2H pretpostavljeno; nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 4.32 (s, 2H), 1.15 (s, 3H), 1.14 (s, 3H).
Referentni primer 54: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0455] Faza 1: tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Opšta procedura za Mitsunobu reakciju je praćena upotrebom Intermedijera H (300 mg, 0.569 mmol), 1,2,3-triazola (47 mg, 0.682 mmol), trifenilfosfina (178 mg, 0.682 mmol), DIAD (145 mg, 0.682 mmol) i THF (10 mL). Prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 2-5%), dajući naslovno jedinjenje (320 mg, 97%) kao žutu penu. LCMS: m/z = 579.2 (M+1).
[0456] Faza 2: (2R,3S)-2-((2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (320 mg, 0.553 mmol) u DMF (5 mL) je tretiran sa SO3•DMF (846 mg, 5.53 mmol). Rastvor je mešan na rt tokom 24 h, zatim je koncentrovan u vakuumu i prečišćen sa HP21 smolom (ACN-voda, 10-50%), dajući naslovno jedinjenje (70 mg, 19%). LCMS: m/z = 657.1 (M-1).
[0457] Faza 3: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0458] (2R,3S)-2-((2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina (70 mg, 0.11 mmol) je mešan sa mravljom kiselinom (2.0 mL) na rt tokom 4 h, zatim je koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XBridge, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 1 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (8.1 mg, 15%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 500.9 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.60 (s, 2H), 6.94 (s, 1H), 5.39 (d, J = 5.2 Hz, 1H),), 4.83-4.78 (m, 2H), 4.78-4.68 (m, 1H pretpostavljeno; nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 1.26 (s, 3H), 1.25 (s, 3H).
Referentni primer 55: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0459] Faza 1: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarboni))amino)tiazo)-4-i))-2-(((2R,3S)-2-((4-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat.
Opšta procedura za Mitsunobu reakciju je praćena upotrebom Intermedijera H (300 mg, 0.569 mmol), 4-metil-1,2,3-triazola (83 mg, 0.683 mmol), trifenilfosfina (179 mg, 0.683 mmol), DIAD (138 mg, 0.648 mmol) i THF (8 mL). Prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 2-4%), dajući naslovno jedinjenje (160 mg, 47%) kao žutu penu. LCMS: m/z = 591 (M-1).
[0460] Faza 2: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (160 mg, 0.270 mmol) u DMF (5 mL) je tretiran sa SO3•DMF (413 mg, 2.70 mmol). Rastvor je mešan na rt tokom 16 h, zatim je koncentrovan u vakuumu i prečišćen sa HP21 smolom (ACN-voda, 10-50%), dajući naslovno jedinjenje (77 mg, 43%). LCMS: m/z = 671.1 (M-1).
[0461] Faza 3: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0462] (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina (67 mg, 0.10 mmol) je mešan sa mravljom kiselinom (1.5 mL) na rt tokom 3.5 h, zatim je koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XBridge, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 1 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (13.7 mg, 27%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 514.9 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.39 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.38 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.80-4.60 (m, 3H pretpostavljeno; nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 2.10 (s, 3H), 1.26 (s, 3H), 1.25 (s, 3H).
Referentni primer 56: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4H-1,2,4-triazol-4-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0463] Faza 1: tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4H-1,2,4-triazol-4-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvor hidrazida mravlje kiseline (27.4 mg, 0.456 mmol) i trietil ortoformata (67.6 mg, 0.456 mmol) u MeOH (5 mL) je zagrevan do refluksa tokom 4 h. Posle hlađenja do 40 °C, Intermedijer L (120 mg, 0.228 mmol) je dodat i mešavina je zagrevana do refluksa tokom dodatnih 20 h. Posle hlađenja do rt, rastvarač je uparavan u vakuumu i dobijeni ostatak je rastvoren u EtOAc, ispran vodom, slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-10% MeOH-EtOAc), dajući naslovno jedinjenje (95 mg, 72%) kao penu. LCMS: m/z = 529.1 (M+1).
[0464] Faza 2: (2R,3S)-2-((4H-1,2,4-triazol-4-il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-meti1-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4H-1,2,4-triazol-4-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (95 mg, 0.16 mmol) u DMF (2 mL) je tretiran sa SO3•DMF (251 mg, 1.64 mmol). Rastvor je mešan na rt tokom 24 h posle čega je dodato još SO3•DMF (502 mg, 3.28 mmol) i rastvor je mešan dodatnih 72 h. Razblažen je sa vodom i ekstrahovan sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (2x), osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (77 mg) kao čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 657.1 (M-1).
[0465] Faza 3: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4H-1,2,4-triazol-4-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0466] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-2-((4H-1,2,4-triazol-4-il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (77 mg, 0.117 mmol), DCM (3 mL) i TFA (1 mL, 13.0 mmol) tokom 2 h. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XBridge, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 1 mL/min),, dajući naslovno jedinjenje (5.6 mg, 10%) kao beli prah. LCMS: m/z = 500.8 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 8.52 (s, 2H), 6.90 (s, 1H), 5.30 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.56 (m, 2H), 4.42 (q, 1H), 1.30 (s, 6H).
Primer 57: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(aminometil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0467] Faza 1: tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((((S)-3-((tert-butoksikarbonil)amino)-2-hidroksipropil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat.
[0468] Rastvor Intermedijera L (250 mg, 0.475 mmol) i (R)-tert-butil (oksiran-2-ilmetil)karbamata (410 mg, 2.38 mmol) u DCM (3 ml) je mešan na rt tokom 16 h zatim je koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 4-10%), dajući naslovno jedinjenje (250 mg, 75%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 698.1 (M-1).
[0469] Faza 2: tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvoru tert-butil 2-(((Z)-(1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((((R)-2-hidroksipropil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (250 mg, 0.357 mmol) u DCM (10 mL) na 0 °C dodat je CDI (104 mg, 0.643 mmol). Posle mešanja na 15 °C tokom 2 h rastvor je koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 3-5%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (155 mg, 60%). LCMS: m/z = 724.0 (M-1).
[0470] Faza 3: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-(((R)-5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (155 mg, 0.213 mmol) u DMF (1 mL) je tretiran sa SO3•DMF (130 mg, 0.854 mmol). Rastvor je mešan na rt tokom 2 h, posle čega je koncentrovan u vakuumu i prečišćen sa HP21 smolom (ACN-voda, 10-50%), dajući naslovno dajući naslovno jedinjenje (160 mg, 93%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 804.0 (M-1).
[0471] Faza 4: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(aminometil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0472] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-(((R)-5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (160 mg, 0.199 mmol), DCM (1.5 mL) i TFA (500 µL, 6.49 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (85.8 mg, 78%) kao beli prah. LCMS: m/z = 548.0 (M+1);<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 6.93 (s, 1H), 5.23 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.76-4.69 (m, 1H), 4.54-4.49 (m, 1H), 3.84 (t, J = 9.6 Hz, 1H), 3.56 (dd, J=14.8, 9.6 Hz, 1H), 3.41-3.34 (m, 2H), 3.21-3.11(m, 2H), 1.34(s, 3H), 1.32 (s, 3H).
Primer 58: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(aminometil)-2-oksooksazolidin-3-ii)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0473] Faza 1: tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((((R)-3-((tert-butoksikarbonil)amino)-2-hidroksipropil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvor Intermedijera L (400 mg, 0.760 mmol) i (S)-tertbutil (oksiran-2-ilmetil)karbamata (658 mg, 3.80 mmol) u DCM (4 ml) je mešan na rt tokom 16 h, zatim je koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 4-10%), dajući naslovno jedinjenje (390 mg, 73%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 700.1 (M+1).
[0474] Faza 2: tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvoru tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((((R)-3-((tertbutoksikarbonil)amino)-2-hidroksipropil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (390 mg, 0.557 mmol) u DCM (20 mL) na 0 °C dodat je CDI (162 mg, 1.00 mmol). Posle mešanja na 15 °C tokom 2 h rastvor je koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 3-5%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (168 mg, 41%). LCMS: m/z = 726.1 (M+1).
[0475] Faza 3: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-(((S)-5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. tert-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (168 mg, 0.231 mmol) u DMF (1 mL) je tretiran sa SO3•DMF (142 mg, 0.926 mmol). Rastvor je mešan na rt tokom 2 h, posle čega je koncentrovan u vakuumu i prečišćen sa HP21 smolom (ACN-voda, 10-50%), dajući naslovno jedinjenje (155 mg, 83%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 804.0 (M-1).
[0476] Faza 4: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(aminometil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0477] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-(((S)-5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (155 mg, 0.192 mmol), DCM (1.5 mL) i TFA (500 µL, 6.49 mmol). Polovina sirovog ostatka je prečišćena reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (21.8 mg, ca 82%) kao beli prah. LCMS: m/z = 547.8 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 6.96 (s, 1H), 5.27 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.80-4.78 (m, 1H), 4.52-4.47 (m, 1H), 3.75-3.66 (m, 2H), 3.49-3.45 (m, 1H), 3.32-3.16 (m, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.35 (s, 3H).
Primer 59: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(gvanidinometil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0479] Rastvoru 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(aminometil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionske kiseline (0.096 mmol) i Pirazol-1-karboksamidin hidrohlorida (21 mg, 0.144 mmol) u DMF (3 mL) dodat je DIPEA (100 µL, 0.576 mmol). Posle 16 h mešanja na rt, rastvor je koncentrovan u vakuumu i ispran etrom. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (29 mg, 51%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS m/z = 589.8 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 6.93 (s, 1H), 5.26 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.65-4.55 (m, 1H), 4.52-4.45 (m, 1H), 3.69-3.61 (m, 2H), 3.44-3.30 (m, 4H), 1.34 (s, 3H), 1.32 (s, 3H).
Referentni primer 60: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0480] Faza 1, Jedinjenje A: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((3-metil-1H-1,2,4-triazol-1 -il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat.
[0481] Faza 1, Jedinjenje B: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((5-metil-1H-1,2,4-triazol-1 -il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat.
[0482] ((2S,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-2-il)metil metansulfonat (3.74 g, 8.0 mmol), 3-metil-1H-1,2,4-triazol (2.00 g, 24.0 mmol), K2CO3(6.64 g, 48.0 mmol) i Nal (2.88 g, 17.2 mmol) su suspendovani u DMF (16 mL) i zagrejani do 70 °C uz mešanje. Posle 24 h, mešavina je koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 2%) da bi se dobilo naslovno jedinjenja (1.64 g, 44% kombinovano) kao prljavo-bela čvrsta supstanca (nerazdvojiva mešavina). LCMS: m/z = 466.2 (M+1).
[0483] Faza 2, Jedinjenje A: Benzil ((2R,3S)-2-((3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat.
[0484] Faza 2, Jedinjenje B: Benzil ((2R,3S)-2-((5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat.
[0485] Pripremljen prema Mastalerz et al. J. Med. Chem.1988, 31, 1190. Rastvoru jedinjenja A/B, faza 1 (1.60 g, 3.44 mmol) u ACN:vodi (2:1, 45 mL) dodat je K2S2O8(1.86 g, 6.88 mmol) nakon čega K2HPO4(1.50 g, 8.60 mmol). Dobijena mešavina je zagrejana do 90 °C tokom 4 h, posle čega je ohlađens do rt, zatim je razblažena sa EtOAc i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 x), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 10%), da bi se dobila naslovna jedinjenja (mešavina, 670 mg, 62%) kao bela čvrsta supstanca. Mešavina je dalje prečišćena hiralnom HPLC (Chiralcel-OJ, 2 x 25 cm, EtOH-Heksani, 18%), dajući jedinjenje A (250 mg) i jedinjenje B (240 mg).
[0486] Faza 3: (3S,4R)-3-amino-4-((3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)azetidin-2-on.
[0487] Gusta suspenzija benzil ((2R,3S)-2-((3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (250 mg, 0.79 mmol) i Pd na C (10%, 100 mg) u MeOH (20 mL) je evakuisana i ispunjena sa H2(3x), pri čemu je doveden krajnji pritisak na 35 psi. Posle 2 h mešanja, mešavina je filtrirana preko celita, isprana sa MeOH i filtrat je koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi.
[0488] Faza 4: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarboni))amino)tiazo)-4-i))-2-(((2R,3S)-2-((3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvoru (Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (310 mg, 0.72 mmol), (3S,4R)-3-amino-4-((3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)azetidin-2-ona (130 mg, 0.72 mmol) i EDCI (150 mg, 0.79 mmol) u DMF (5 mL) na 0 °C dodat je piridin (64 µL, 0.79 mmol). Posle mešanja na rt tokom 24 h, dodato je još (Z)-2-(((1-(tertbutoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (310 mg, 0.72 mmol) i EDCI (150 mg, 0.79 mmol), zajedno sa HOBt (110 mg, 0.79 mmol) i DIPEA (250 µL, 1.44 mmol). Tokom dodatnih 16 h mešanja, koncentrovan je u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 5%), dajući naslovno jedinjenje (230 mg, 54%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 593.0 (M+1).
[0489] Faza 5: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (230 mg, 0.388 mmol) u DMF (4 mL) je tretiran sa SO3•DMF (594 mg, 3.88 mmol). Posle 24 h mešanja, rastvor je koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen sa HP21 smolom (ACN-voda, 5-50%), dajući naslovno jedinjenje (100 mg, 38%) kao bledo žutu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 673.1 (M+1).
Faza 6: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazo)-4-i))-2-(((2R,3S)-2-((3-meti)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0490]
[0491] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (100 mg, 0.149 mmol), DCM (4.0 mL) i TFA (1.0 mL, 13.0 mmol) tokom 3 h. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (50 mg, 65%) kao beli prah. LCMS: m/z = 514.7 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.72 (br s, 1H), 6.78 (s, 1H), 5.25 (dd, J = 8.8, 5.6 Hz, 1H), 4.61 (dd, J = 14.4, 5.2 Hz, 1H), 4.47 (dd, J = 14.4, 6.0 Hz, 1H), 4.33 (dd, J = 6.0, 5.2 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 1.42 (s, 3H), 1.38 (s, 3H).
Referentni primer 61: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0492] Faza 1: (3S,4R)-3-amino-4-((5-meti)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)azetidin-2-on.
[0493] Gusta suspenzija benzil ((2R,3S)-2-((5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (240 mg, 0.76 mmol) i Pd na C (10%, 100 mg) u MeOH (20 mL) je evakuisana i ispunjena sa H2(3x), pri čemu je doveden krajnji pritisak na 35 psi. Posle 2 h mešanja, mešavina je filtrirana preko celita, isprana sa MeOH i filtrat je koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi.
[0494] Faza 2: tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvoru (Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (310 mg, 0.72 mmol), (3S,4R)-3-amino-4-((5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)azetidin-2-ona (130 mg, 0.72 mmol) i EDCI (150 mg, 0.79 mmol) u DMF (5 mL) na 0 °C dodat je piridin (64 µL, 0.79 mmol). Posle mešanja na rt tokom 24 h, koncentrovan je u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 10%), dajući naslovno jedinjenje (190 mg, 45%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 593.0 (M+1).
[0495] Faza 3: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. tert-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (180 mg, 0.304 mmol) u DMF (4 mL) je tretiran sa SO3•DMF (466 mg, 3.04 mmol). Posle 24 h mešanja, rastvor je koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen sa HP21 smolom (ACN-voda, 0-50%), dajući naslovno jedinjenje (80 mg, 39%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: m/z = 671.0 (M+1).
[0496] Faza 4: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazo)-4-i))-2-(((2R,3S)-2-((5-meti)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0497] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (80 mg, 0.119 mmol), DCM (4.0 mL) i TFA (1.0 mL, 13.0 mmol) tokom 3 h. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (15 mg, 24%) kao beli prah. LCMS: m/z = 514.8 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.86 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 5.36-5.28 (m, 1H), 4.78-4.66 (m, 1H pretpostavljeno; nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 4.54-4.44 (m, 1H), 4.42-4.30 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 1.25 (s, 6H).
Referentni primer 62: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(formimidamidometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0499] Rastvoru 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionske kiseline (100 mg, 0.159 mmol) i etilformamidat hidrohlorida (17.4 mg, 0.159 mmol) u DMF (1 mL) dodat je DIPEA (41 mg, 0.32 mmol). Posle 2 h mešanja, dodato je još etilformamidat hidrohlorida (9.0 mg, 0.082 mmol) i DIPEA (20 mg, 0.16 mmol). Tokom dodatnih 4 h, rastvor je koncentrovan i ispran etrom. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (15.5 mg, 18%) kao mešavinu tautomera amidina. LCMS: m/z = 556.8 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.73 (s, 0.4H), 7.65 (s, 0.6H), 7.57 (m, 1H), 6.83 (s, 1H), 5.37 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.80-4.61(m, 3H pretpostavljeno; nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača) 4.48 (s, 0.4H), 4.45 (s, 0.6H), 1.17 (s, 3H), 1.15 (s, 3H).
Primer 63: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-ii)-2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(hidroksimetil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0500] Faza 1: Tert-butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((S)-9-hidroksi-2,2-dimetil-5,7-dioksa-11-aza-2-siladodekan-12-il)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvoru tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(aminometil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (500 mg, 0.95 mmol) u DCM (5 mL) dodat je (S)-trimetil(2-((oksiran-2-ilmetoksi)metoksi)etil)silan (485 mg, 2.38 mmol). Posle mešanja na rt tokom 12 h, dodato je sledećih 2.5 ekvivalenta (S)-trimetil(2-((oksiran-2-ilmetoksi)metoksi)etil)silana. Posle mešanja na rt dodatnih 12 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 2-10%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (155 mg, 22%). LCMS: m/z = 731.4 (M+1).
[0501] Faza 2: Tert-butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-(((S)-2-okso-5-(((2-(trimetilsilil)etoksi)metoksi)metil)oksazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvoru tert-butil 2-(((Z)-(1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((S)-9-hidroksi-2,2-dimetil-5,7-dioksa-11-aza-2-siladodekan-12-il)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (155 mg, 0.21 mmol) u DCM (10 mL) na 0 °C dodat je CDI (62 mg, 0.38 mmol). Posle mešanja na <15 °C tokom 2 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 3-5%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (130 mg, 81%). LCMS: m/z = 755.3 (M-1).
[0502] Faza 3: (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-(((S)-2-okso-5-(((2-(trimetilsilil)etoksi)metoksi)metil)oksazolidin-3-il)metil)azetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru tertbutil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-(((S)-2-okso-5-(((2-(trimetilsilil)etoksi)metoksi)metil)oksazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (130 mg, 0.17 mmol) u DMF (1 mL) dodat je SO3•DMF (105 mg, 0.69 mmol). Posle mešanja na rt tokom 2 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu. Sirova mešavina je prečišćena HP21 smolom (ACN-voda, 10-50%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (140 mg, 97%). LCMS: m/z = 705.42 (M-SEM).
[0503] Faza 4: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(hidroksimetil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0504] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-(((S)-2-okso-5-(((2-(trimetilsilil)etoksi)metoksi)metil)oksazolidin-3-il)metil)azetidin-1-sulfonske kiseline (140 mg, 0.17 mmol), DCM (2 mL) i TFA (1 mL) tokom 3 h. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (28 mg, 30%) LCMS: m/z = 549.0 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.00 (s, 1H), 5.23 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.80-4.70 (m, 1H), 4.45-4.40 (m, 1H), 4.10-3.95 (m, 2H), 3.77 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 3.49 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 3.39 (m, 1H), 1.39 (s, 3H), 1.38 (s, 3H).
Primer 64: (S)-2-(((Z)-(1-(2-aminotiazo)-4-i))-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-3-(4-(N-(piperidin-4-il)karbamimidoil)fenoksi)propionska kiselina.
[0505] Faza 1: tert-Butil (4-(2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)amino)acetil)tiazol-2-il)karbamat. Pripremljen analogno intermedijeru E, upotrebom intermedijera D (0.776 g, 4.19 mmol), 2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksosirćetne kiseline (1.141 g, 4.19 mmol), HATU (3.071 g, 8.08 mmol) u DMF (20 mL) nakon čega DIPEA (3.66 mL, 20.95 mmol). LCMS: Rt= 0.60 min, m/z = 440.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0506] Faza 2: (3S,4R)-3-(2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoacetamido)-2-okso-4-((2-oksooksazo)idin-3-il)metil)azetidin-1-su)fonske kiseline.
[0507] Pripremljen analogno intermedijeru F, upotrebom tert-butil (4-(2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)amino)acetil)tiazol-2-il)karbamata (500 mg, 1.138 mmol), SO3•DMF (523 mg, 3.41 mmol) u DMF (5.7 mL). LC/MS: Rt = 0.54 min; m/z = 520.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0508] Faza 3: (3S,4R)-3-((Z)-2-((((S)-1-(benzhidriloksi)-3-(4-(N-(1-(tert-butoksikarbonil)piperidin-4-il)karbamimidoil)fenoksi)-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru (3S,4R)-3-(2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoacetamido)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-1-sulfonske kiseline (170 mg, 0.328 mmol) u CHCl3(2 mL, odnos: 1) i EtOH (6 mL, odnos: 3) dodat je (S)-tert-butil 4-(4-(2-(aminooksi)-3-(benzhidriloksi)-3-oksopropoksi)benzimidamido)piperidin-1-karboksilat (pripremljen prema WO2013110643, 193 mg, 0.328 mmol). Posle mešanja tokom 2 h, dodat je AcOH (19 µL, 0.328 mmol). Posle 12 h, dodato je još rastvora (3S,4R)-3-(2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoacetamido)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-1-sulfonske kiseline (170 mg, 0.328 mmol) u 3:1 CHCl3:EtOH. Posle mešanja tokom 45 h, koncentrovan je u vakuumu, i sirovi ostatak je prečišćen sa HP21 smolom (10-100% ACN-voda), dajući naslovno jedinjenje (117 mg, 33%) kao prljavo-belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt = 0.96 min, m/z = 1091.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0509] Faza 4: (S)-2-(((Z)-(1-(2-aminotiazo)-4-i))-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksooksazolidin-3-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-3-(4-(N-(piperidin-4-il)karbamimidoil)fenoksi)propionska kiselina.
[0510] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (3S,4R)-3-((Z)-2-((((S)-1-(benzhidriloksi)-3-(4-(N-(1-(tert-butoksikarbonil)piperidin-4-il)karbamimidoil)fenoksi)-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2oksooksazolidin-3-il)metil)azetidin-1-sulfonske kiseline (117 mg, 0.107 mmol), DCM (5.3 mL) i TFA (0.413 mL, 5.37 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 µM, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (23 mg, 28%) kao beli prah. LC/MS: Rt= 0.42 min, m/z = 724.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.53 (d, J = 7.57 Hz, 1 H), 9.43-9.36 (m, 2H), 9.01 (br s, 1 H), 8.53-8.36 (m, 2H), 7.72 (d, J = 8.5 Hz, 3H), 7.26 (br s, 2H), 7.15 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.82 (s, 1H), 5.19 (dd, J = 8.7, 5.8 Hz, 1H), 5.02 (t, J = 3.8 Hz, 1H), 4.51-4.42 (m, 2H), 4.12-3.96 (m, 3H), 3.90-3.81 (m, 1H), 3.73 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.69-3.62 (m, 1H), 3.58-3.53 (m, 1H), 3.20-3.16 (m, 1H), 2.98-2.85 (m, 1H) 2.13-2.04 (m, 1H), 1.85-1.72 (m, 1H).
Referentni primer 65: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazo)-4-i))-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((4-((sulfamoilamino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0511]
[0512] Pripremljen analogno primeru 53, upotrebom TFA soli 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionske kiseline, sirovo jedinjenje (200 mg, 0.318 mmol), tert-butil hlorosulfonilkarbamata (68 mg, 0.318 mmol), DIPEA (113 mL, 0.636 mmol) i DMF (1 mL). LCMS: m/z = 609.1 (M-1).<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.65 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 5.40 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.85-4.83 (m, 1H), 4.76-4.74 (m, 2H), 4.13 (s, 2H), 1.26 (s, 3H), 1.25 (s, 3H).
Priprema tert-butil hlorosulfonilkarbamata: Rastvoru tert-butanola (3.2 g, 36.9 mmol) u benzenu (13 mL) dodat je sumporizocijanatidoil hlorid (3.5 mL, 36.6 mmol). Posle mešanja na rt tokom 2 h, reakciona mešavina je ugašena sa heksanom. Mešavina je ohlađena u kupatilo sa ledom, što je rezultovalo belim čvrstim talogom. Čvrsta supstanca je filtrirana, isprana heksanom, osušena i korišćena u sledećoj fazi neposredno (3.2 g, 41%).
Referentni primer 66: (S)-3-(4-(N-(2-aminoetil)karbamimidoil)fenoksi)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)propionska kiselina.
[0514] Pripremljen analogno primeru 31, upotrebom tert-butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)karbamata i (S,Z)-2-(((1-(benzhidriloksi)-3-(4-(N-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)etil)karbamimidoil)fenoksi)-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (pripremljena prema WO2013110643). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 µM, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min). LCMS: Rt= 0.25 min, m/z = 695.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.48 (s, 3H), 8.99 (s, 1H), 8.21 (s, 4H), 7.89 (s, 4H), 7.82-7.77 (m, 2H), 7.71 (s, 1H), 7.22 (dd, J = 10.5, 8.2 Hz, 4H), 6.72 (s, 1H), 5.33 (dd, J = 9.3, 5.5 Hz, 1H), 4.99 (dd, J = 5.7, 3.3 Hz, 1H), 4.90 (ddd, J = 12.8, 8.0, 3.9 Hz, 1H), 4.78-4.68 (m, 2H), 4.51-4.36 (m, 3H), 4.08 (s, 3H), 3.13 (s, 2H).
Referentni primer 67: (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-3-(4-(N-(2-aminoetil)karbamimidoil)fenoksi)propionska kiselina.
[0515]
[0516] Pripremljen analogno primeru 66, upotrebom (3S,4R)-4-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-aminoazetidin-2-ona. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 µM, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min). LCMS: Rt= 0.25 min, m/z = 666.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
Referentni primer 68: (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazo)-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-3-(4-(N-(azetidin-3-il)karbamimidoil)fenoksi)propionska kiselina.
[0518] Pripremljen analogno primeru 64 , upotrebom intermedijer F i (S)-tert-butil 3-(4-(2-(aminooksi)-3-(benzhidriloksi)-3-oksopropoksi)benzimidamido)azetidin-1-karboksilata (pripremljen prema WO2013110643). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 µM, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min). LCMS: Rt= 0.35 min, m/z = 678.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 13.68-13.03 (m, 1 H), 10.02 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 9.57-9.51 (m, 2 H), 9.05 (br s, 1 H), 8.91-8.76 (m, 2 H), 8.39 (s, 1 H), 7.91 (s, 1 H), 7.69 (d, J = 8.5 Hz, 2 H), 7.30 (br s, 2 H), 6.92 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 6.80 (s, 1H), 5.12-5.04 (m, 2H), 4.74-4.66 (m, 1H), 4.54 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.49-4.35 (m, 3H), 4.31-4.16 (m, 5 H).
Referentni primer 69: jedinjenje 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-aminopropil)amino)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina sa mravljom kiselinom (1:1).
[0519]
[0520] Pripremljen analogno primeru 28, upotrebom 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilne kiseline (20 mg, 0.038 mmol), tert-butil (3 bromopropil)karbamat (60 mg, 0.252 mmol), DIPEA (0.1 mL, 0.572 mmol), i DMF (0.5 mL). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (Xselect CSH, 19 x 100 mm, 5 µM, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min). LCMS: Rt= 0.29 min, m/z = 587.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (500 MHz, D2O) δ 8.31 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.32 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.86-4.78 (m, 2H), 4.73-4.66 (m, 1H pretpostavljeno; nejasan zbog rezidualnog pika rastvarača), 4.29 (s, 2H), 3.04-3.01 (m, 2H), 2.97-2.92 (m, 2H), 1.96 (p, J = 7.9 Hz, 2H), 1.22-1.11 (m, 2H), 1.10-0.96 (m, 2H).
Primer 70: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(2-aminoetil)-2-oksoimidazolidin-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0521] Faza 1: Tert-butil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarboni))amino)tiazo)-4-i))-2-(((2R,3S)-2-(11,11-dimetil-9-okso-10-oksa-2,5,8-triazadodecil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvoru tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-aminoetil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (100 mg, 0.176 mmol) u DCE (1.8 mL) dodat je tert-butil (2-oksoetil)karbamat (27.9 mg, 0.176 mmol). Posle mešanja tokom 2 h, dodat je natrijum triacetoksiborohidrid (112 mg, 0.527 mmol). Posle 12 h, reakciona mešavina je ugašena sa zasićenim NaHCO3(aq) i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Korišćen je kao sirov u fazi 2.
[0522] Faza 2: Tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-2-oksoimidazolidin-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Pripremljen analogno primeru 3 faza 3, upotrebom tertbutil 2-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(11,11-dimetil-9-okso-10-oksa-2,5,8-triazadodecil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (135 mg, 0.189 mmol), CDI (46.1 mg, 0.284 mmol), TEA (132 µl, 0.947 mmol) i hloroforma (1.9 mL). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LC/MS: Rt= 1.02 min, m/z = 739.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0523] Faza 3: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((3-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-2-oksoimidazolidin-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Pripremljen analogno primeru 3, faza 4, upotrebom tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-2-oksoimidazolidin-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (60 mg, 0.081 mmol), SO3•DMF (124 mg, 0.812 mmol), DMF (812 µl). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LC/MS: Rt= 0.94 min, m/z = 819.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0524] Faza 4: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(2-aminoetil)-2-oksoimidazolidin-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0525] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1 -oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((3-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-2-oksoimidazolidin-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (42 mg, 0.051 mmol), TFA (237 µl, 3.08 mmol) u DCM (500 µL). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 µM, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (1.2 mg, 4%). LC/MS: Rt= 0.35 min, m/z = 563.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ<1>H NMR 6.99 (s, 1 H), 5.32 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 4.56-4.50 (m, 1 H), 3.70 (dd, J = 15.1, 9.6 Hz, 1 H), 3.59-3.49 (m, 1 H), 3.463.30 (m, 4 H), 3.29-3.20 (m, 2 H), 3.08-3.02 (m, 2 H), 1.40 (s, 3 H), 1.38 (s, 3 H).
Referentni primer 71: (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-3-(4-(N-((S)-pirolidin-3-il)karbamimidoil)fenoksi)propionska kiselina.
[0526]
[0527] Pripremljen analogno primeru 64 , upotrebom intermedijera F i (R)-tert-butil 3-(4-((S)-2-(aminooksi)-3-(benzhidriloksi)-3-oksopropoksi)benzimidamido)pirolidin-1-karboksilata (pripremljen prema WO2013110643). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 µM, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min). LCMS: Rt= 0.39 min, m/z = 692.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.52 (d, J = 7.6 Hz, 3 H), 9.11 (br s, 1 H), 8.92-8.78 (m, 2 H), 8.40 (s, 1 H), 7.92 (s, 1 H), 7.67 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.30 (br s, 2 H), 6.90 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 6.80 (s, 1 H), 5.11-5.04 (m, 2 H), 4.58-4.51 (m, 1 H), 4.48-4.35 (m, 4 H), 4.25-4.20 (m, 1 H), 3.53-3.44 (m, 1 H), 2.35-2.25 (m, 1 H), 2.20-2.11 (m, 1 H).
Primer 72: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(hidroksimetil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0528] Faza 1: Tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((((R)-3-(benziloksi)-2-hidroksipropi))amino)meti))-4-oksoazetidin-3-i))amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Pripremljen analogno primeru 63 faza 1, upotrebom tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2(aminometil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (200 mg, 0.38 mmol), (R)-2-((benziloksi)metil)oksiran (623 mg, 3.8 mmol), DCM (2 mL). Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 4-10%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (126 mg, 48%). LCMS: m/z = 691.3 (M+1).
[0529] Faza 2: Tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-((benziloksi)metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Pripremljen analogno primeru 63 faza 2, upotrebom tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((((R)-3-(benziloksi)-2-hidroksipropil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (126 mg, 0.182 mmol), CDI (53 mg, 0.33 mmol), DCM (5 mL). Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 3-5%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (76 mg, 58%). LCMS: m/z = 715.3 (M-1).
[0530] Faza 3: Tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-((benziloksi)metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (2R,3S)-2-(((R)-5-((benzi)oksi)meti))-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(tertbutoksi)-2-meti)-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonat. Pripremljen analogno primeru 63 faza 3, upotrebom tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-((benziloksi)metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (76 mg, 0.11 mmol), SO3•DMF (65 mg, 0.42 mmol), DMF (1 mL). Sirovi ostatak je prečišćen HP21 smolom (CH3CN-voda, 10-50%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (80 mg, 95%). LCMS: m/z = 797.3 (M+1).
[0531] Faza 4: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(hidroksimeti))-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0532] Rastvoru tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-((benziloksi)metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat (2R,3S)-2-(((R)-5-((benziloksi)metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(tertbutoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonata (80 mg, 0.1 mmol) u DCM (10 mL) dodat je BCl3(1 M u DCM, 0.6 mL). Posle mešanja na rt tokom 15 min, reakciona mešavina je ugašena sa EtOH i koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (1.1 mg, 2%). LCMS: m/z = 549.0 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 6.96 (s, 1H), 5.29 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.48 (m, 2H), 3.73-3.35 (m, 6H), 1.36 (s, 3H), 1.35 (s, 3H).
Referentni primer 73: (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-3-(4-(N-((R)-pirolidin-3-il)karbamimidoil)fenoksi)propionska kiselina.
[0533]
[0534] Pripremljen analogno primeru 64, upotrebom intermedijera F i (S)-tert-butil 3-(4-((S)-2-(aminooksi)-3-(benzhidriloksi)-3-oksopropoksi)benzimidamido)pirolidin-1-karboksilata (pripremljen prema WO2013110643). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 µM, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min). LCMS: Rt= 0.39 min, m/z = 692.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.52 (d, J = 7.6 Hz, 3 H), 9.11 (br s, 1 H), 8.92-8.78 (m, 2 H), 8.40 (s, 1 H), 7.92 (s, 1 H) 7.67 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.30 (br s, 2 H), 6.90 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 6.80 (s, 1 H), 5.11-5.04 (m, 2 H), 4.51-4.58 (m, 1 H), 4.48-4.35 (m, 4 H), 4.25-4.19 (m, 1 H), 3.53-3.44 (m, 1 H), 2.35-2.26 (m, 1 H), 2.29-2.11 (m, 1 H).
Referentni primer 74: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((3-karbamoil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0535]
[0536] Pripremljen analogno primeru 4, upotrebom tert-butil (1-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,4-triazol-3-karbonil)karbamata. LCMS: m/z = 544.0 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 8.41 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.36-5.32 (m, 1H), 4.75-4.50 (m, 3H, delimično nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 1.23 (s, 6H).
Referentni primer 75: (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(5-amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-3-(4-(N-(piperidin-4-il)karbamimidoil)fenoksi)propionska kiselina.
[0537]
[0538] Pripremljen analogno primeru 31, upotrebom 2-(5-((tert-butoksikarbonil)amino)-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-oksosirćetne kiseline. LCMS: Rt= 0.305 min, m/z = 707.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, D2O): δ 8.02 (s, 1 H), 7.66 (s, 1 H), 7.43 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 6.77 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 5.24 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 5.10-5.06 (m, 1 H), 4.44-4.29 (m, 4 H), 4.01-3.88 (m, 1 H), 3.49 (d, J = 13.6 Hz, 2 H), 3.21-2.99 (m, 2 H), 2.33-2.23 (m, 2H), 1.92-1.80 (m, 2H).
Primer 76: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-3-amino-2-oksopirolidin-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0539]
[0540] Pripremljen analogno primeru 1, upotrebom (S)-metil 4-bromo-2-((tertbutoksikarbonil)amino)butanoata. LCMS: m/z = 532.0 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 6.99 (s, 1H), 5.31 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.70-4.58 (m, 1H), 4.02 (t, J = 9.6, 9.2 Hz, 1H), 3.85 (dd, J = 9.6, 9.2 Hz, 1H), 3.59 (m, 1H), 3.47 (m, 1H), 3.34 (dd, J = 14.8, 2.4 Hz, 1H), 2.48 (m, 1H), 2.01 (m, 1H), 1.39 (s, 3H), 1.37 (s, 3H).
Referentni primer 77: (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-3-(4-(N-((1r,3S)-3-aminociklobutil)karbamimidoil)fenoksi)propionska kiselina.
[0542] Pripremljen analogno primeru 31, upotrebom (S)-benzhidril 2-(aminooksi)-3-(4-(N-((1r,3S)-3-((tert-butoksikarbonil)amino)ciklobutil)karbamimidoil)fenoksi)propanoata LCMS: Rt= 0.39 min, m/z = 692.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.83-9.76 (m, 1H), 9.51 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 9.33 (br s, 1H), 8.71 (br s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.05-7.97 (m, 3H), 7.91 (s, 1H), 7.66 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.30 (br s, 2H), 6.89 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 6.80 (s, 1H), 5.13-5.04 (m, 2H), 4.55-4.49 (m, 1H), 4.47-4.33 (m, 3H), 4.24-4.16 (m, 2H), 3.97-3.86 (m,1H), 2.69-2.52 (m, 4H).
Referentni primer 78: (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-3-(4-(N-(3-aminopropil)karbamimidoil)fenoksi)propionska kiselina.
[0543]
[0544] Pripremljen analogno primeru 67, upotrebom (S)-benzhidril 2-(aminooksi)-3-(4-(N-(3-((tertbutoksikarbonil)amino)propil)karbamimidoil)fenoksi)propanoata (pripremljen prema WO2013110643). LCMS: Rt= 0.38 min, m/z = 680.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.59-9.47 (m, 2H), 9.34 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.79-7.67 (m, 3H), 7.66-7.62 (m, 2H), 7.29 (s, 2H), 6.94-6.88 (m, 2H), 6.80 (s, 1H), 5.10 (dd, J = 8.1, 5.5 Hz, 1H), 5.06 (dd, J = 5.0, 2.7 Hz, 1H), 4.56-4.48 (m, 1H), 4.48-4.35 (m, 3H), 4.26-4.19 (m, 1H), 2.90 (dd, J = 8.9, 5.5 Hz, 3H), 1.96-1.83 (m, 2H).
Referentni primer 79: (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-3-((6-(N-(piperidin-4-il)karbamimidoil)piridin-3-il)oksi)propionska kiselina.
[0546] Pripremljen analogno primeru 68, upotrebom intermedijera F i (R)-tert-butil 4-(5-(2-(aminooksi)-3-(benzhidriloksi)-3-oksopropoksi)pikolinimidamido)piperidin-1-karboksilata (pripremljen prema WO2013110643). LCMS: Rt= 0.29 min, m/z = 707.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.71 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 9.58 (br s, 1 H), 9.24 (br s, 1 H), 8.45-8.40 (m, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.27-8.21 (m, 1H), 8.12 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 7.84 (s, 1 H), 7.65-7.59 (m, 1H), 7.24 (br s, 2 H), 6.77 (s, 1 H), 6.50 (s, 1 H), 5.18-5.11 (m, 1H), 5.09-5.03 (m, 1H), 4.64-4.58 (m, 1H), 4.55-4.49 (m, 1H), 4.48-4.42 (m, 1H), 4.23 (q, J = 5.5 Hz, 1H), 3.96-3.85 (m, 1H), 3.45-3.40 (m, 2H), 2.94-2.83 (m, 2H), 2.10-2.02 (m, 2H), 1.92-1.81 (m, 2H).
Primer 80: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((S)-3-gvanidino-2-oksopirolidin-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0548] Pripremljen analogno primeru 20 upotrebom 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-3-amino-2-oksopirolidin-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionske kiseline i 1H-pirazol-1-karboksimidamid HCl. LCMS: m/z = 576.2 (M+1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 6.95 (s, 1H), 5.31 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.72-4.57 (m, 1H), 4.27 (t, J = 9.6 i 9.2 Hz, 1H), 3.85 (dd, J = 9.6 Hz, 1H), 3.59 (t, J = 9.2, 8.8 Hz, 1H), 3.49 (q, 1H), 3.34 (dd, 1H), 2.46 (m, 1H), 1.88 (m, 1H), 1.35 (s, 3H), 1.33 (s, 3H).
Referentni primer 81: (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-3-(4-(N-((1R,5S,6s)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-6-il)karbamimidoil)fenoksi)propionska kiselina.
[0550] Pripremljen analogno primeru 31, upotrebom (1R,5S,6s)-tert-butil 6-(4-((R)-2-(aminooksi)-3-(benzhidriloksi)-3-oksopropoksi)benzimidamido)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilat hidrata. LCMS: Rt= 0.42 min, m/z = 704.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.70 (br s, 1H), 9.56-9.45 (m, 2H), 9.14-8.96 (m, 2H), 8.54 (br s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.63 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.28 (br s, 2H), 6.88 (d, J = 9.6 Hz, 2H), 6.78 (s, 1H), 5.10-5.02 (m, 2H), 4.54-4.48 (m, 1H), 4.45-4.35 (m, 3H), 4.23-4.17 (m, 1H), 3.61-3.54 (m, 4H), 2.73-2.68 (m, 1H), 2.25 (br s, 2H).
Referentni primer 82: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(aminometil)izoksazol-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0551] Faza 1: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((E)-2-metoksivinil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Suspenziji (metoksimetil)trifenilfosfonijum hlorida (10.34 g, 30.2 mmol) u THF (100 mL) na -78 °C dodat je KHMDS (u toluenu) (66.3 ml, 33.1 mmol) lagano. Posle mešanja tokom 30 min, the above prepared rastvor ilida dodat je rastvoru benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-formil-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (3 g, 7.53 mmol) u THF (38 ml) na -78 °C. Posle 3 h, reakciona mešavina je ugašena sa zasićenim NaHCO3(aq, 60 mL), i mešana je preko noći. Mešavina je razblažena sa EtOAc, i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x), i kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni sa Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-60%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (1.6 g, 49%) zajedno sa transizomerom (0.8 g, 25%). LCMS: Rt= 0.91 min, m/z = 427.0 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
[0552] Faza 2: Benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoksibenzi))-2-okso-4-(2-oksoetil)azetidin-3-il)karbamat. Rastvoru benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((E)-2-metoksivinil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (1.58 g, 3.70 mmol) u dioksanu (37 ml) dodat je HCl (7.4 ml, 7.4 mmol) i zagrejan do 50 °C tokom 4 h. Posle hlađenja do rt, reakciona mešavina je ugašena sa zasićenim NaHCO3(aq) i ekstrahovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni sa Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-80%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (0.89 g, 58%). LCMS: Rt= 0.86 min, m/z = 413.0 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
[0553] Faza 3: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((E)-2-(hidroksiimino)etil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru hidroksilamin hidrohlorida (160 mg, 2.25 mmol) i natrijum bikarbonata (2.4 mL, 2.23 mmol) u vodi (6 mL) dodat je rastvor benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-okso-4-(2-oksoetil)azetidin-3-il)karbamata (886 mg, 2.15 mmol) u EtOH (200 µL) nakon čega je ispran sa EtOH (200 µL). Posle mešanja tokom 20 h, reakciona mešavina je delimično koncentrovana u vakuumu i podeljena između DCM i slanog rastvora. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.76 min, m/z = 428.1 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
[0554] Faza 4: Rastvoru benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((E)-2-(hidroksiimino)etil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (403 mg, 0.94 mmol) i N-Boc-propargilamina (156 mg, 0.97 mmol) u DCM (12 mL) na 0 °C dodat je natrijum hipohlorit (5%, 2.6 mL, 1.89 mmol) kap po kap. Posle mešanja tokom 18 h, reakciona mešavina je razblažena sa DCM i vodom. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2x).
Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-80%), dajući naslovno jedinjenje (127 mg, 23%). LCMS: Rt= 0.96 min, m/z = 581.2 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
[0555] Faza 5: Rastvoru intermedijera iz faze 4 (279 mg, 0.48 mmol) u acetonitrilu (4.6 mL, odnos: 2) i vodi (2.3 mL, odnos: 1) dodat je kalijum peroksidisulfat (169 mg, 0.62 mmol), i kalijum fosfat, dvobazni (192 mg, 1.1 mmol) i zagrejan do 90 °C. Posle 3h, dodato je još kalijum peroksidisulfata (81 mg, 0.3 mmol) i zagrejan je do 90 °C. Posle 2 h dodatnog zagrevanja, reakciona mešavina je ugašena sa NaHCO3i ekstrahovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-80%), dajući naslovno jedinjenje (71 mg, 34%). LCMS: Rt= 0.77 min, m/z = 431.0 (M+1).
Postupak 2m_kiseli.
[0556] Faza 6: Tert-butil ((Z)-4-amino-5-((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)-2-oksopent-3-en-1-il)karbamat. Rastvoru intermedijera iz faze 5 (84 mg, 0.20 mmol) u EtOH (1.9 mL, odnos: 2) i MeOH (0.93 mL, odnos: 1) dodat je Pd-C (22 mg, 20 µmol) i pročišćen sa N2. Boca je snabdevena sa H2balonom, evakuisana i ispunjena sa H2(3x). Posle 1.5 h, reakciona mešavina je filtrirana kroz celit uz MeOH ispiranje (3x). Filtrat je koncentrovan u vakuumu i podvrgnut azeotropiji sa toluenom. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.39 min, m/z = 229.1 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
[0557] Faza 7: Tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((Z)-2-amino-5-((tert-butoksikarbonil)amino)-4-oksopent-2-en-1-il)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat.
[0558] Pripremljen analogno primeru 4 faza 4, upotrebom (Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (100 mg, 0.23 mmol), HATU (89 mg, 0.23 mmol), DIPEA (68 µl, 0.39 mmol), tert-butil ((Z)-4-amino-5-((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)-2-oksopent-3-en-1-il)karbamata (58 mg, 0.19 mmol) i DCM:DMF (3:1, 2 mL).79 mg. LCMS: Rt= 0.98 min, m/z = 710.4 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
[0559] Faza 8: Tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)izoksazol-3-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat. Rastvoru tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((Z)-2-amino-5-((tert-butoksikarbonil)amino)-4-oksopent-2-en-1-il)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (77 mg, 0.108 mmol)) u etanolu (0.4 mL) dodat je hidroksilamin hidrohlorid (19 mg, 0.27 mmol) i kalijum karbonat (18 mg, 0.13 mmol) i zagrejan do 60 °C. Posle 6 h, reakciona mešavina je delimično koncentrovana u vakuumu i podeljena između EtOAc i vode. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom (EtOAc-Heptan, 5-90%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (13 mg, 17%). LCMS: Rt= 1.04 min, m/z = 708.3 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
[0560] Faza 9: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)izoksazol-3-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina.
[0561] Pripremljen analogno primeru 4 faza 5, upotrebom tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((tertbutoksikarbonil)amino)metil)izoksazol-3-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (13 mg, 18 µmol), SO3•DMF (16.8 mg, 0.11 mmol), DMF (200 µl). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.94 min, m/z = 788.4 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
[0562] Faza 10: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(aminometil)izoksazol-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0563] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4il)acetamido)-2-((5-(((tert butoksikarbonil)amino)metil)izoksazol-3-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (10.9 mg, 14 µmol), TFA (70 µl, 0.91 mmol), i DCM (0.2 mL). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (Xselect CSH, 19 x 100 mm, 5 µM, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (1.7 mg, 17%). LCMS: Rt= 0.48 min, m/z = 532.1 (M+1). Postupak 2m_kiseli_polarni.<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 6.85 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 5.38 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.26 (s, 2H), 3.22 (dd, J = 16.2, 7.1 Hz, 2H), 3.10 (dd, J = 16.2, 6.0 Hz, 1H), 1.33 (s, 3H), 1.29 (s, 3H).
Referentni primer 83: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((benzil(metil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0564]
[0565] Pripremljen analogno primeru 52, upotrebom N-((2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-N-metil-1-fenilmetanamina. LCMS: m/z = 634.1 (M-1).<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.79 (s, 1H), 7.40-7.31 (m, 5H), 6.89 (s, 1H), 5.43 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.96-4.89 (m, 1H), 4.87-4.83 (m, 2H), 4.70-4.60 (m, 2H, delimično preklopljen D2O signalom), 4.36 (s, 2H), 2.64 (s, 3H), 1.28 (s, 3H), 1.27 (s, 3H).
Referentni primer 84: (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-3-(4-(N-(piperidin-4-il)karbamimidoil)fenoksi)propionska kiselina.
[0566]
[0567] Pripremljen analogno primeru 31, upotrebom tert-butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)karbamata. LCMS: Rt= 0.44 min, m/z = 735.3 (M+1). Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.63-9.48 (m, 1H), 9.45-9.33 (m, 2H), 9.02 (s, 1H), 8.56 (brs,1H), 8.44 (br s, 1H), 8.22 (s, 3H), 7.74-7.67 (m, 3H), 7.26 (br s, 2H), 7.19 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.72 (s, 1H), 5.38-5.30 (m, 1H), 5.01-4.96 (m, 1H), 4.93-4.86 (m, 1H), 4.77-4.68 (m, 1H), 4.49-4.35 (m, 3H), 4.08 (br s, 2H), 3.85 (br s, 2H), 2.96-2.84 (m, 2H), 2.13-2.03 (m, 2H), 1.83-1.70 (m, 2H).
Referentni primer 85: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((azetidin-3-ilmetil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0568] Faza 1: Benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(hidroksimetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvoru (Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (218 mg, 0.39 mmol) u DCM (5 mL) i DMF (1 ml) na 0 °C dodat je DIPEA (0.11 mL, 0.61 mmol), HATU (170 mg, 0.446 mmol), i (3S,4R)-3-amino-4-((4-(hidroksimetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)azetidin-2-on (80 mg, 0.41 mmol). Posle mešanja na 0 °C tokom 1 h, reakciona mešavina je razblažena sa DCM, isprana vodom, slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4i koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 0-5%), dajući naslovno jedinjenje (250 mg, 86%). LCMS: Rt = 0.98 min, m/z = 717.3 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
[0569] Faza 2: Benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(hidroksimetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (440 mg, 0.614 mmol) u THF (4 mL) dodat je MnO2(1.2 g, 13.51 mmol). Posle mešanja na rt tokom 20 h, reakciona mešavina je filtriran kroz podlogu celita uz THF ispiranje (20 mL). Filtrat je koncentrovan, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 0-5%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (300 mg, 68%). LCMS: Rt= 1.04 min, m/z = 715.3 (M+H). Postupak 2m_kiseli.
[0570] Faza 3: Tert-butil 3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)amino)metil)azetidin-1-karboksilat. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (150 mg, 0.21 mmol) u DCE (4 ml) na 0 °C dodat je tert-butil 3-(aminometil)azetidin-1-karboksilat (78 mg, 0.420 mmol), natrijum triacetoksiborohidrid (66.7 mg, 0.315 mmol), i DMF (0.4 mL). Posle mešanja na rt tokom 3 h, reakciona mešavina je ugašena sa zasićenim NaHCO3(aq) i razblažena sa 10% EtOH/DCM (40 mL). Organski sloj je odvojen, osušen sa Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.55 min, m/z = 885.5 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
[0571] Faza 4: Tert-butil 3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)(tert-butoksikarbonil)amino)metil)azetidin-1-karboksilat. Rastvoru tert-butil 3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)amino)metil)azetidin-1-karboksilata (186 mg, 0.21 mmol) i zasićenog NaHCO3(aq, 4 ml, 0.210 mmol) u DCM (4 mL) dodat je Boc2O (137 mg, 0.630 mmol). Posle mešanja na rt tokom 12 h, slojevi reakcione mešavine su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Hept, 50-80%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (120 mg, 58%). LCMS: Rt= 1.24 min, m/z = 985.7 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
[0572] Faza 5: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)((1-(tertbutoksikarbonil)azetidin-3-il)metil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Pripremljen analogno primeru 19 faza 3, upotrebom tert-butil 3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)(tertbutoksikarbonil)amino)metil)azetidin-1-karboksilata (120 mg, 0.122 mmol), SO3•DMF (192 mg, 1.22 mmol), i DMF (1.2 mL). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 1.12 min, m/z = 1065.7 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
[0573] Faza 6: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((azetidin-3-ilmetil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0574] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)((1-(tert-butoksikarbonil)azetidin-3-il)metil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (130 mg, 0.122 mmol), TFA (0.56 mL, 7.32 mmol), i DCM (1.5 mL).6.3 mg. LCMS: Rt= 0.47 min, m/z = 599.3 (M+1). Postupak 2m_kiseli_polarni.<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.82 (s, 1 H), 7.10 (s, 1 H), 5.61 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 5.01 (q, J = 5.6 Hz, 1 H), 4.95-4.85 (m, 2 H), 4.36 (s, 2 H), 4.26-4.15 (m, 2 H) 4.11-3.97 (m, 2 H), 3.46-3.30 (m, 3 H), 1.26 (s, 2 H), 1.20 - 1.05 (m, 2 H).
Primer 86: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-3-amino-2-oksopirolidin-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0575]
[0576] Pripremljen analogno primeru 76, upotrebom (R)-metil 4-bromo-2-((tertbutoksikarbonil)amino)butanoata. LCMS: m/z = 532.0 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 6.96 (s, 1H), 5.28 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.53 (m, 1H), 3.96 (t, J = 10.0 i 9.2 Hz, 1H), 3.85 (dd, J = 10.4 i 10.0 Hz, 1H), 3.58 (m, 1H), 3.44 (m, 1H), 3.31 (dd, 1H), 2.47 (m, 1H), 1.96 (m, 1H), 1.34 (s, 3H), 1.34 (s, 3H).
Referentni primer 87: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazol-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0577] Faza 1: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((2,5-dioksoimidazolidin-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Opšta procedura za Mitsunobu reakciju je praćena upotrebom intermedijera G (10.0 g, 25 mmol), imidazolidin-2,4-diona (2.5 g, 25 mmol), trifenilfosfina (7.9 g, 30 mmol), DIAD (6.1 g, 30 mmol) i THF (200 mL). Dobijeni talog (8.3 g, 69%) koji je blago kontaminiran sa trifenilfosfin oksidom, je prikupljen filtracijom. LCMS: m/z = 481.0 (M-1).
[0578] Faza 2: tert-Butil 3-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2,4-dioksoimidazolidin-1-karboksilat. Rastvoru benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((2,5-dioksoimidazolidin-1-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (4.60 g, 9.54 mmol) i di-tert-butildikarbonata (2.30 g, 10.5 mmol) u DCM (55 mL) dodat je DMAP (0.150 g, 1.33 mmol). Posle 3 h na rt, voda je dodata, posle čega su slojevi razdvojeni. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu, dajući naslovno jedinjenje (4.20 g, 75%).
[0579] Faza 3: tert-Butil 3-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2,4-dioksoimidazolidin-1-karboksilat. Pripremljen analogno primeru 4, faza 2 upotrebom tert-butil 3-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2,4-dioksoimidazolidin-1-karboksilata (900 mg, 1.70 mmol) K2S2O8(280 mg, 2.89 mmol), i K2HPO4(680 mg, 2.91 mmol) u ACN:vodi (2:1, 30 mL) uz zagrevanje na 90 °C tokom 4 h. Posle hlađenja do rt, mešavina je filtrirana i filtrat je koncentrovan u vakuumu, pri čemu je uklonjen najveći deo ACN. Mešavina je razblažena sa vodom/EtOAc i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc, a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 2-6%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (170 mg, 23%). LCMS: m/z = 431.0 (M-1).
[0580] Faza 4: tert-Butil 3-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-4-hidroksi-2-oksoimidazolidin-1-karboksilat. Rastvoru tert-butil 3-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2,4-dioksoimidazolidin-1-karboksilata (170 mg, 0.390 mmol) u EtOH (10 mL) na 0 °C dodat je natrijum borohidrid (30 mg, 0.78 mmol). Posle 3 h na 0 °C, mešavina je ugašena sa zasićenim NH4Cl (aq) i delimično koncentrovana u vakuumu. Dvostruki sloj je ekstrahovan sa DCM i organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Dobijeni ostatak je korišćen kao takav u fazi 5. LCMS: m/z = 457.1 (M+Na).
[0581] Faza 5: tert-Butil 3-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazol-1-karboksilat. Rastvoru tert-butil 3-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-4-hidroksi-2-oksoimidazolidin-1-karboksilata (160 mg, 0.368 mmol) u DCM (5 mL) na 0 °C dodat je metansulfonil hlorid (31 µL, 0.41 mmol) nakon čega TEA (0.15 mL, 1.1 mmol). Posle mešanja tokom 1 h na 0 °C, rastvor je koncentrovan u vakuumu i prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 2-5%), dajući naslovno jedinjenje (100 mg, 65%). LCMS: m/z = 415.1 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.02 (s, 1H), 7.41-7.27 (m, 5H), 7.06 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.15 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.21-5.09 (m, 3H), 4.30 (dd, J = 14.4, 9.6 Hz, 1H), 4.01-3.94 (m, 1H), 3.49 (dd, J = 14.8, 3.2 Hz, 1H), 1.46 (s, 9H).
[0582] Faza 6: tert-Butil 3-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazol-1-karboksilat. Mešavina tert-Butil 3-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazol-1-karboksilata (490 mg, 1.18 mmol) i Paladijuma na ugljeniku (10mas.%, 140 mg) u MeOH (60 mL) je evakuisana i ispunjena sa H2(3x), pri čemu je krajnji pritisak doveden do 30 psi. Posle 2 h mešanja, mešavina je filtrirana kroz celit i koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 6%), dajući naslovno jedinjenje (50 mg, 25%).
[0583] Faza 7: tert-Butil 3-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazol-1-karboksilat. Pripremljen analogno primeru 4 faza 4, upotrebom (Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (117 mg, 0.276 mmol), HATU (105 mg, 0.276 mmol), DIPEA (36 mg, 0.28 mmol), tert-butil 3-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazol-1-karboksilata (65 mg, 0.23 mmol) i DMF (5 mL). Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 3%), dajući naslovno jedinjenje (140 mg, 88%). LCMS: m/z = 694.0 (M+1).
[0584] Faza 8: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-Butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((3-(tert-butoksikarbonil)-2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazol-1-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru tert-butil 3-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazol-1-karboksilata (140 mg, 0.202 mmol) u DMF (1.0 mL) dodat je SO3•DMF (185 mg, 1.21 mmol). Posle 4 h na rt, rastvor je koncentrovan u vakuumu i prečišćen HP21 smolom (ACN-voda, 10-50%), dajući naslovno jedinjenje (90 mg, 58%). LCMS: m/z = 772.3 (M-1).
[0585] Faza 9: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazol-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina. Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom tert-butil 3-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazol-1-karboksilata (pripremljen od tert-butil 3-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2,4-dioksoimidazolidin-1-karboksilata) (90 mg, 1.16 mmol), TFA (0.5 mL, 6.4 mmol) i DCM (1.5 mL). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (15.6 mg, 60%) kao prljavo-bela čvrsta supstanca. LCMS: m/z = 516.0 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 6.98 (s, 1H), 6.41 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.30 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.54-4.52 (m, 1H), 4.00-3.95 (m, 1H), 3.84-3.79 (m, 1H), 1.35 (s, 3H), 1.34 (s, 3H).
Primer 88: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-3-gvanidino-2-oksopirolidin-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0587] Pripremljen analogno primeru 20, upotrebom 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-3-amino-2-oksopirolidin-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina i 1H-pirazol-1-karboksimidamid HCl. LCMS: m/z = 574.1 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 6.93 (s, 1H), 5.28 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.53 (m, 1H), 4.24 (t, J = 9.6 i 9.2 Hz, 1H), 3.85 (dd, J = 9.2 i 9.2 Hz, 1H), 3.51 (m, 1H), 3.40 (t, J = 9.2 i 8.8 Hz, 1H), 3.32 (dd, 1H), 3.34 (dd, 1H), 2.43 (m, 1H), 1.87 (m, 1H), 1.36 (s, 3H), 1.32 (s, 3H).
Referentni primer 89: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((4-(((R)-pirolidin-3-ilamino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0588]
[0589] Pripremljen analogno primeru 85, upotrebom (R)-tert-butil 3-aminopirolidin-1-karboksilata. LCMS: Rt= 0.46 min, m/z = 599.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.86 (s, 1 H), 7.16 (s, 1 H), 5.60 (d, J = 5.5 Hz, 1 H), 4.99 (s, 1 H), 4.90 (d, J = 3.9 Hz, 2 H), 4.46 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 4.20-4.14 (m, 1 H), 3.82 (dd, J = 13.1, 8.0 Hz, 1 H), 3.65-3.38 (m, 2 H), 2.67 - 2.57 (m, 1 H), 2.31-2.20 (m, 1 H), 1.34 (t, J = 4.3 Hz, 3 H), 1.25-1.19 (m, 2 H).
Referentni primer 90: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-aminopropil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0590] Faza 1: Benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(hidroksimetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvoru (Z)-2-((1
((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (2.5 g, 4.43 mmol) u DCM (78 mL) i DMF (15 ml) na 0 °C dodat je DIPEA (1.2 ml, 7.00 mmol), HATU (1.9 g, 5.13 mmol), i (3S,4R)-3-amino-4-((4-(hidroksimetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)azetidin-2-on (0.92 g, 4.67 mmol). Posle mešanja na 0 °C tokom 1 h, reakciona mešavina je razblažena sa DCM, isprana vodom, slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4i koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 0-5%), dajući naslovno jedinjenje (2.5 g, 75%). LCMS: Rt= 0.98 min, m/z = 717.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0591] Faza 2: Benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(hidroksimetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (1.8 g, 2.57 mmol) u THF (21 ml) dodat je MnO2(4.9 g, 56.5 mmol). Posle mešanja na rt tokom 20 h, reakciona mešavina je filtrirana kroz podlogu celita uz THF ispiranje (250 mL). Filtrat je koncentrovan, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 0-5%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (1.4 g, 76%). LCMS: Rt= 1.04 min, m/z = 715.3 (M+H). Postupak 2m_kiseli.
[0592] Faza 3: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-((tertbutoksikarbonil)amino)propil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat.
Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (370 mg, 0.52mmol) u DCE (4 mL) na 0 °C dodat je tert-butil (3-aminopropil)karbamat (180 mg, 1.04 mmol) i natrijum triacetoksihidroborat (165 mg, 0.78 mmol) sekvencijalno. Posle mešanja na rt tokom 16 h, reakciona mešavina je razblažena sa DCM, isprana sa zasićenim NaHCO3(aq), slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu da bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.99 min, m/z = 873.2 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
[0593] Faza 4: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)(3-((tertbutoksikarbonil)amino)propil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat.
Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (0.45 g, 0.52 mmol) u DMF (6 mL) na 0 °C dodat je Bocanhidrid (0.24 mL, 1.04 mmol). Posle mešanja na rt tokom 18 h, dodat je DIPEA (0.18 mL, 1.04 mmol).
Posle mešanja tokom 36 h, reakciona mešavina je sipana u vodu i ekstrahovana sa DCM. Kombinovani organski slojevi su isprani sa 5% LiCl, slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-60%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (0.40 g, 80%). LCMS: Rt= 1.26 min, m/z = 973.3 (M+H). Postupak 2m_kiseli.
[0594] Faza 5: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)(3-((tertbutoksikarbonil)amino)propil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)(3-((tertbutoksikarbonil)amino)propil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (0.40 g, 0.41 mmol) u DMF (5 mL) na 0 °C dodat je SO3•DMF (0.63 g, 4.12 mmol). Posle mešanja na rt tokom 1 h, reakciona mešavina je razblažena sa EtOAc, isprana sa 5%LiC (aq), slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu da bi se dobilo naslovno jedinjenje (0.42 g, 97%). LCMS: Rt= 1.10 min, m/z = 1053.6 (M+H). Postupak 2m_kiseli.
[0595] Faza 6: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-aminopropil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0596] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)(3-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (0.5 g, 0.48 mmol), DCM (2.5 mL), i TFA (1 mL, 13 mmol) tokom 1.5 h. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min) dajući naslovno jedinjenje (123 mg, 42%). LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 587.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.39 (br s, 1 H), 7.76 (s, 1 H), 7.22 (s, 2 H), 6.73 (s, 1 H), 5.33 (dd, J = 9.0, 5.5 Hz, 1 H), 4.84 (dd, J = 14.3, 4.5 Hz, 1 H), 4.73-4.61 (m, 1 H), 4.61-4.48 (m, 1 H), 4.27-4.14 (m, 2 H), 3.02-2,89 (m, 3 H), 2.85 (t, J = 7.4 Hz, 3 H), 1.85 (p, J = 7.5 Hz, 3H) 1.32-1.04 (m, 6 H);<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.90 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 5.67 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 5.12-5.04 (m, 1H), 5.04-4.88 (m, 2H), 4.45 (s, 2H), 3.30-3.22 (m, 2H), 3.16 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.24-2.08 (m, 2H), 1.37-1.26 (m, 2H), 1.26-1.08 (m, 2H).
Referentni primer 91: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((4-(((S)-pirolidin-3-ilamino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0597]
[0598] Pripremljen analogno primeru 90, upotrebom (S)-tert-butil 3-aminopirolidin-1-karboksilata i benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata u fazi 3. LCMS: Rt= 0.3 min, m/z = 599.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.18 (d, J = 9.0 Hz, 1 H), 9.04-8.59 (m, 2 H), 7.79 (s, 1 H), 7.24 (br s, 2 H), 6.72 (s, 1 H), 5.35 (dd, J = 9.0, 5.5 Hz, 1 H), 4.93-4.81 (m, 1 H), 4.68-4.60 (m, 1 H), 4.55 (s, 1 H), 4.24 (br s, 2 H), 3.95-3.79 (m, 1 H), 2.27-2.11 (m, 1 H), 2.04-1.90 (m, 1 H), 1.38-1.06 (m, 4 H).
Referentni primer 92: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(aminometil)azetidin-1-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0599]
[0600] Pripremljen analogno primeru 90, upotrebom tert-butil (azetidin-3-ilmetil)karbamata i benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata u fazi 3. LCMS: Rt= 0.46 min, m/z = 599.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.84 (s, 1 H) 7.11 (s, 1 H) 5.56 (d, J = 5.5 Hz, 1 H) 5.00 (m, 1 H) 4.89 (m, 2 H) 4.52 (s, 2 H) 4.35 (m, 2 H) 4.23-4.03 (m, 2 H) 3.38 - 3.21 (m, 3 H) 1.31 (m, 2 H) 1.18 (m, 2 H).
Referentni primer 93: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((((1r,3R)-3-aminociklobutil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0601]
[0602] Pripremljen analogno primeru 90, upotrebom tert-butil ((1r,3r)-3-aminociklobutil)karbamata i benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata u fazi 3. LCMS: Rt= 0.46 min, m/z = 599.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.82 (s, 1 H), 7.09 (s, 1 H), 5.58 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 5.04-4.84 (m, 3 H), 4.31 (s, 2 H), 4.14-4.00 (m, 2 H), 2.81-2.60 (m, 4 H) 1.26 (s, 2 H), 1.19-1.06 (m, 2 H).
Referentni primer 94: (((Z)-(1-(5-amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-aminopropil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0603]
[0604] Pripremljen analogno primeru 90, upotrebom (Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(5-((tert-butoksikarbonil)amino)-1,2,4-tiadiazol-3-il)sirćetne kiseline. LCMS: Rt= 0.29 min, m/z = 588.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.53-9.29 (m, 1 H), 8.15 (s, 2 H), 7.75 (s, 1 H) 5.40-5.28 (m, 1 H), 4.82-4.69 (m, 1 H), 4.63 (s, 2 H), 4.21 (d, J = 5.1 Hz, 2 H), 3.00-2.91 (m, 2 H), 2.85 (s, 2 H), 1.91-1.74 (m, 2 H), 1.37-1.04 (m, 4 H).
Referentni primer 95: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((2,4-dioksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0605]
[0606] Pripremljen analogno primeru 54, upotrebom benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2S,3S)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata i oksazolidin-2,4-diona. LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 533.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.23 (s, 1 H), 5.42 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 4.86-4.83 (m, 3 H), 4.07 (dd, J = 14.5, 9.8 Hz, 1 H), 3.72 (dd, J = 14.5, 3.9 Hz, 1 H), 1.58-1.52 (m, 2 H), 1.51-1.45 (m, 2 H).
Referentni primer 96: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((3-aminopropil)amino)metil)-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0607]
[0608] Pripremljeno analogno procedurama opisanim u primerima 54 i 90, upotrebom benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2S,3S)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata i 5-(((tert-butildimetilsilil)oksi)metil)-2H-tetrazola. LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 588.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.41 (br s, 1 H), 7.78 (s, 1 H), 7.24 (s, 1 H), 6.75 (s, 1 H), 5.38-5.32 (m, 1H), 4.86 (dd, J = 14.3, 4.5 Hz, 1 H), 4.72-4.63 (m, 1H), 4.61-4.55 (m, 1H), 4.28-4.16 (m, 1H), 3.01-2.94 (m, 1H), 2.87 (t, J = 7.4 Hz, 1 H), 1.92-1.82 (m, 1H), 1.33-1.18 (m, 2 H), 1.18-1.08 (m, 1 H).
Primer 97: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(((2-aminoetil)amino)metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0610] Pripremljen analogno primeru 26, upotrebom tert-butil (2-bromoetil)karbamata. LCMS: Rt= 0.380 min, m/z = 591.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 6.93 (s, 1H), 5.28 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 3.85 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 3.68 (dd, J = 15.0, 8.1 Hz, 1H), 3.46-3.36 (m, 2H), 3.25-3.01 (m, 5H), 2.60 (s, 1H), 1.30-1.21 (m, 2H),1.18-1.09 (m, 2H).
Referentni primer 98: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-metil-5-okso-4,5-dihidro-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0611]
[0612] Pripremljen analogno primeru 31, upotrebom 1-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-4-metil-1H-1,2,4-triazol-5(4H)-ona i (Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline. LCMS: m/z = 531.0 (M-1);<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.67 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 5.36 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.70 - 4.60 (m, 1H, delimično nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 4.14 (dd, J = 15.2 i 7.6 Hz, 1H), 3.96 (dd, J = 15.2 i 4.8 Hz, 1H), 3.14 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.35 (s, 3H).
Referentni primer 99: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((dimetilamino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0614] Pripremljen analogno primeru 54, upotrebom N,N-dimetil-1-(2H-1,2,3-triazol-4-il)metanamina. LCMS: m/z = 560.2 (M+1);<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.80 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 5.43 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.94-4.88 (m, 1H), 4.85-4.80 (m, 2H), 4.32 (s, 2H), 2.75 (s, 6H), 1.28 (s, 6H).
Referentni primer 100: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((metilamino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0615]
[0616] Pripremljen analogno primeru 54, upotrebom tert-butil ((2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)(metil)karbamata. LCMS: m/z = 544.1 [M-H]-;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.73 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 5.42 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.92-4.86 (m, 1H), 4.82-4.78 (m, 2H), 4.22 (s, 2H), 2.60 (s, 3H), 1.30 (s, 6H).
Referentni primer 101: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1-(2-aminoetil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0618] Faza 1: Benzil ((2R,3S)-2-(3,3-dibromoalil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)(4-metoksibenzil)karbamat. Rastvoru PPh3(302.4 mg, 1.15 mmol) u DCM (1 mL) na 0 °C dodat je CBr4(192 mg, 0.58 mmol). Posle 10 min, rastvor benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-okso-4-(2-oksoetil)azetidin-3-il)(4-metoksibenzil)karbamata (152.7 mg, 0.29 mmol) u DCM (800 µL) dodat je kap po kap nakon čega je isprano sa DCM (800 µL). Posle 20 min, reakciona mešavina je razblažena sa DCM i vodom, i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0-40% EtOAc-Hept) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (162 mg, 82%). LCMS: Rt= 1.2 min, m/z = 689.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
Priprema benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-okso-4-(2-oksoetil)azetidin-3-il)(4-metoksibenzil)karbamata: Rastvoru benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((E)-2-metoksivinil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (primer 82, faza 1, 1.44 g, 3.38 mmol) u DMF (33.8 ml) na -10 °C (slano ledeno kupatilo) dodat je natrijum hidrid (60%, 162 mg, 4.05 mmol). Posle mešanja tokom 30 min, dodat je p-metoksibenzilhlorid (506, µL, 3.71 mmol). Posle zagrevanja do 0 °C i mešanja tokom dodatnih 30 min, ugašena je sa NH4Cl (aq, satd), zatim razblažena sa EtOAc i LiCl (5% aq). Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi isprani su sa LiCl (5% aq), slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i konc. u vakuumu. Sirovi materijal je podvrgnut uslovima opisanim u primeru 82, faza 2, zatim prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Hept, 0-70%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (684 mg, 38%). LCMS: Rt= 0.97 min, m/z = 533.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0619] Faza 2: Benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-okso-4-(prop-2-in-1-il)azetidin-3-il)(4-metoksibenzil)karbamat. tert-Butillitijum (0.291 mL, 0.494 mmol) dodat je rastvoru benzil ((2R,3S)-2-(3,3-dibromoalil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)(4-metoksibenzil)karbamata (162 mg, 0.235 mmol) u THF (Zapremina: 3.4 mL) na -78 °C. Posle 15 min, reakciona mešavina je ugašena sa NH4Cl, i razblažena sa vodom i EtOAc. Slojevi su razdvojeni, i organski sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x).
Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Hept, 0-40%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (98 mg, 79%). LCMS: Rt= 1.08 min, m/z = 529.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0620] Faza 3: Benzil ((2R,3S)-2-((1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)(4-metoksibenzil)karbamat. Rastvoru benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-okso-4-(prop-2-in-1-il)azetidin-3-il)(4-metoksibenzil)karbamata (95.6 mg, 0.18 mmol) u mešavini DMSO (1.2 mL), tert-butanola (1.2 mL) i vode (1.2 mL), dodat je bakar(II) sulfat pentahidrat (4.5 mg, 0.018 mmol), natrijum L-askorbat (35.8 mg, 0.18 mmol) i N-Boc-2-azidoetilamin (76 mg, 0.39 mmol). Posle mešanja tokom 12 h, dodato je još bakar(II) sulfat pentahidrata (10.6 mg, 0.23 ekvivalenta), natrijum L-askorbata (37.4 mg, 1.04 ekvivalenta) i N-Boc-2-azidoetilamin (82.1 mg, 2.44 ekvivalenta). Posle mešanja tokom 4 dana ukupno, reakciona mešavina je razblažena sa EtOAc i vodom. Slojevi su razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani sa LiCl (5% aq), slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovanii u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Hep, 0-40%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (57.2 mg, 44%). LCMS: Rt= 1.06 min, m/z = 715.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0621] Faza 4: Benzil ((2R,3S)-2-((1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)(4-metoksibenzil)karbamat. Pripremljen analogno primeru 82 faza 5, upotrebom benzil ((2R,3S)-2-((1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)(4-metoksibenzil)karbamata (57.2 mg, 0.080 mmol), CH3CN (762 µl), vode (381 µl), kalijum peroksidisulfata (31 mg, 0.12 mmol), i kalijum fosfata, dvobazni (19 mg, 0.109 mmol).20.2 mg. LCMS: Rt= 0.89 min, m/z = 565.3 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
[0622] Faza 5: Tert-butil (2-(4-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)etil)karbamat. Gustoj suspenziji benzil ((2R,3S)-2-((1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)(4-metoksibenzil)karbamata (20.2 mg, 0.036 mmol) u MeOH (0.68 mL) dodat je Pd crni (19 mg, 0.018 mmol) i mravlja kiselina (31 µl, 0.711 mmol). Posle mešanja na rt tokom 3 h, dodato je još Pd crnog (9.7 mg). Posle mešanja na rt tokom dodatnih 5.5 h, reakciona mešavina je filtrirana kroz celulozu sa MeOH eluentom, i filtrat je koncentrovan u vakuumu. Korišćen je u fazi 6 bez daljeg prečišćavanja. LCMS: Rt= 0.396 min, m/z = 311.1 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
[0623] Faza 6: Tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoat.
[0624] Pripremljen analogno primeru 82 faza 7, upotrebom (Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (18.55 mg, 0.043 mmol), HATU (17.7 mg, 0.047 mmol), DCM:DMF (1:3, 800 µl), DIPEA (18.86 µl, 0.108 mmol), tertbutil (2-(4-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)etil)karbamata (11.17 mg, 0.036 mmol).6.5 mg. LCMS: Rt= 0.971 min, m/z = 722.4 (M+1). Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 7.82 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 5.34 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.43 (t, J = 5.9 Hz, 3H), 4.19 (dt, J = 9.3, 4.5 Hz, 1H), 4.09 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 3.54-3.45 (m, 3H), 3.13 (ddd, J = 15.0, 11.8, 6.0 Hz, 2H), 2.93 (dd, J = 15.2, 9.6 Hz, 1H), 2.01 (s, 2H), 1.53 (d, J = 1.4 Hz, 14H), 1.49 (s, 7H), 1.46 (d, J = 1.7 Hz, 15H), 1.38 (s, 14H), 1.23 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
[0625] Faza 7: (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Pripremljena analogno primeru 82 faza 9, upotrebom tert-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropanoata (6.5 mg, 9.00 µmol), DMF (200 µl), SO3•DMF (5.8 mg, 0.037 mmol). Korišćen je u fazi 8 bez daljeg prečišćavanja. LCMS: Rt= 0.911 min, m/z = 802.1 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
[0626] Faza 8: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1-(2-aminoetil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina. Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju, upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(tert-butoksi)-2-metil-1-oksopropan-2-il)oksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (7.22 mg, 9.00 µmol), DCM (200 µl) i TFA (50 µl, 649 µmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; AcN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min) dajući naslovno jedinjenje (1.2 mg, 24%). LCMS: Rt= 0.487 min, m/z = 546.2 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
Referentni primer 102: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((2-aminoetil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0627]
[0628] Pripremljen analogno primeru 90, upotrebom tert-butil (2-aminoetil)karbamata i benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata u fazi 3. LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 573.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.24 (d, J = 9.0 Hz, 1.0 H), 7.75 (s, 1 H), 7.22 (s, 2 H), 6.71 (s, 1 H), 5.42-5.28 (m, 1 H), 4.86 (dd, J = 14.3, 4.1 Hz, 1 H), 4.72-4.59 (m, 1 H), 4.53 (ddd, J = 7.4, 5.5, 4.3 Hz, 1 H), 4.24-4.09 (m, 2 H), 3.10-2.97 (m, 5 H), 1.34-1.19 (m, 3 H), 1.19-1.06 (m, 1H).
Referentni primer 103: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((azetidin-3-ilamino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0629]
[0630] Pripremljen analogno primeru 90, upotrebom tert-butil 3-aminoazetidin-1-karboksilata i benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata u fazi 3. LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 585.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, D2O) δ 7.84 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 5.60 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.04-4.87 (m, 3H), 4.52-4.36 (m, 5H), 4.35 (s, 1H), 1.35-1.29 (m, 2H), 1.24-1.14 (m, 2H).
Primer 104: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(formimidamidometil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0631]
[0632] Pripremljen analogno primeru 26, upotrebom etil formamidat-HCI. LCMS: Rt= 0.29 min, m/z = 575.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
Referentni primer 105: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((3-cijano-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0633]
[0634] Pripremljen analogno primeru 54, upotrebom 1H-1,2,4-triazol-3-karbonitrila. LCMS: m/z = 526.0 [M-H];<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.57 (s, 1H), 6.90 (s, 1H), 5.34 (br s, 1H), 5.20-4.77 (m, 3H), 1.31 (s, 6H).
Referentni primer 106: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-aminoazetidin-1-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0635]
[0636] Pripremljen analogno primeru 90, upotrebom tert-butil (2-oksoetil)karbamata i benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata u fazi 3, osim gde je dodatna obrada u fazi sulfonilacije. Sirovi proizvod sulfonilacije je tretiran sa piridinom u MeOH na 40 °C tokom 1h kako bi se uklonio proizvod prekomerne sulfonilacije na azetidinu. LCMS: Rt= 0.30 min, m/z = 585.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, D2O) δ 7.76 (s, 1 H), 7.03 (s, 1 H), 5.50 (d, J = 5.5 Hz, 1 H), 4.97-4.89 (m, 1 H), 4.89-4.77 (m, 2 H), 4.56-4.48 (m, 3 H), 4.46-4.35 (m, 3 H), 1.29-1.18 (m, 2 H), 1.15-1.08 (m, 2 H).
Referentni primer 107: (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-3-(4-karbamimidoilfenoksi)propionska kiselina.
[0637]
[0638] Pripremljen analogno primeru 68, using (R)-benzhidril 2-(aminooksi)-3-(4-(N-(tertbutoksikarbonil)karbamimidoil)fenoksi)propanoat (pripremljen prema WO2013110643). LCMS: Rt= 0.30 min, m/z = 623.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.14 (s, 2 H), 8.68 (br s, 2 H), 8.37 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.77-7.70 (m, 2 H), 7.28 (br s, 2 H), 6.95 (br s, 1H), 6.79 (s, 1 H), 6.55 (br s, 1 H), 5.19-5.11 (m, 1H), 5.07-4.98 (m, 1H), 4.54-4.39 (m, 3H), 4.28-4.22 (m, 1H).
Primer 108: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksoimidazolidin-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0639] Faza 1: Benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2S,3S)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat.
Rastvoru (Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (6.66 g, 12.38 mmol) na 0 °C u DCM (61.9 ml, odnos: 1) i DMF (61.9 ml, odnos: 1) dodati su DIPEA (6.49 ml, 37.2 mmol) i HATU (5.65 g, 14.86 mmol). Posle 20 min, dodat je (3S,4S)-3-amino-4-(hidroksimetil)azetidin-2-on (1.44 g, 12.38 mmol). Posle mešanja tokom 2 h na rt, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu i razblažena sa EtOAc. Organski sloj je ispran vodom, slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Aceton-DCM) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (4.4 g, 56%). LCMS: Rt= 0.97 min, m/z = 636.1 (M+1), Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 11.80 (br s, 1H), 9.08 (d, J = 9.0 Hz, 1 H), 8.41 (s, 1 H), 7.48-7.32 (m, 5 H), 7.32-7.15 (m, 6 H), 6.84 (s, 1 H), 5.20 (ddd, J = 9.2, 5.1, 0.9 Hz, 1 H), 4.77 (t, J = 5.3 Hz, 1 H), 3.76-3.70 (m, 1H), 3.62-3.48 (m, 1 H), 3.47-3.33 (m, 1 H), 1.56-1.33 (m, 13 H).
[0640] Faza 2: Benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2S,3S)-2-(((metilsulfonil)oksi)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2S,3S)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (1 g, 1.57 mmol) na 0 °C u THF (15.7 ml) dodat je TEA (0.66 ml, 4.7 mmol) i MsCl (25 µl, 0.32 mmol). Posle 2 h, reakciona mešavina je razblažena sa EtOAc, isprana slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina). LCMS: Rt= 0.99 min, m/z = 714.1 (M+1), Postupak 2m_kiseli.
[0641] Faza 3: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(azidometil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2S,3S)-2-(((metilsulfonil)oksi)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (1.3 g, 1.82 mmol) u DMF (20 ml) dodat je NaI (0.82 g, 5.5 mmol) i natrijum azid (0.83 g, 12.8 mmol). Posle mešanja na 60 °C tokom 6 h, reakciona mešavina je ugašena sa ledeno hladnom vodom i ekstrahovana sa EtOAc.
Kombinovani organski slojevi su isprani vodom, slanim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, koncentrovanog u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-heptan) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (689 mg, 57%). LCMS: Rt= 1.02 min, m/z = 661.1 (M+1), Postupak 2m_kiseli.
[0642] Faza 4: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(aminometil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(azidometil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (689 mg, 1.04 mmol) u THF (10 mL) i MeOH (1.3 mL) dodat je Ph3P (301 mg, 1.15 mmol). Posle 12 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 0-100%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (369 mg, 56%). LCMS: Rt= 0.88 min, m/z = 635.1 (M+1), Postupak 2m_kiseli.
[0643] Faza 5: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-((((9H-fluoren-9-i))metoksi)karbonil)amino)etil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(aminometil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (199 mg, 0.29 mmol) u DCE (2.9 mL) dodat je (9H-fluoren-9-il)metil (2-oksoetil)karbamat (84 mg, 0.30 mmol) i natrijum triacetoksiborohidrid (181 mg, 0.86 mmol). Posle 12 h, reakciona mešavina je ugašena sa zasićenim NaHCO3(aq), razblažena sa EtOAc, i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc, i kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 0-100%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (150 mg, 58%). LCMS: Rt= 1.10 min, m/z = 900.0 (M+1), Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 9.16 (d, J = 9.0 Hz, 1 H), 8.35 (s, 1H), 7.87 (d, J = 7.4 Hz, 2 H), 7.66 (d, J = 7.4 Hz, 2 H), 7.45-7.18 (m, 16 H), 6.83 (s, 1H), 5.24-5.17 (m, 1H), 4.28 (d, J = 6.7 Hz, 2 H), 4.19 (d, J = 6.3 Hz, 1 H), 3.79-3.67 (m, 1 H), 3.03-2.95 (m, 2H), 2.73-2.63 (m, 1H), 1.54-1.37 (m, 13H).
[0644] Faza 6: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-aminoetil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat.
Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)etil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (150 mg, 0.167 mmol) u DCM (1.7 mL) dodat je piperidin (16.50 µl, 0.167 mmol). Posle 2 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu i liofilizovana u mešavini CH3CN/vode kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina). LCMS: Rt= 0.93 min, m/z = 678.5 (M+1), Postupak 2m_kiseli.
[0645] Faza 7: Benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksoimidazolidin-1-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat.
Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-aminoetil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (90 mg, 0.133 mmol) u hloroformu (2.7 mL) dodat je CDI (43.1 mg, 0.266 mmol) i TEA (111 µl, 0.797 mmol). Posle 12 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 0-100%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (46 mg, 49%). LCMS: Rt= 0.95 min, m/z = 704.0 (M+1), Postupak 2m_kiseli.
[0646] Faza 8: (3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2-oksoimidazolidin-1-il)metil)azetidin-1-sulfonska kiselina, (3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((3-okso-1,2,4-triazinan-1-il)metil)azetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksoimidazolidin-1-il)metil)azetidin-3
il)amino)etiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (46 mg, 65 µmol) u DMF (654 µl) dodat je SO3•DMF (100 mg, 0.654 mmol). Posle mešanja na rt tokom 2 h, reakciona mešavina je razblažena sa EtOAc, isprana slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (50 mg, 98%). LCMS: Rt= 0.84 min, m/z = 784.0 (M+1), Postupak 2m_kiseli. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi.
[0647] Faza 9: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksoimidazolidin-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0648] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((2-oksoimidazolidin-1-il)metil)azetidin-1-sulfonske kiseline, (3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((3-okso-1,2,4-triazinan-1-il)metil)azetidin-1-sulfonske kiseline (48 mg, 61 µmol), DCM (0.61 mL), i TFA (0.28 mL, 3.7 mmol) tokom 4 h. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; AcN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min) dajući naslovno jedinjenje (3.6 mg, 10%). LCMS: Rt= 0.45 min, m/z = 518.1 (M+1), Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, D2O): δ 7.01 (s, 1 H), 5.32 (d, J = 5.5 Hz, 1 H), 4.53-4.39 (m, 1 H), 3.61 (dd, J = 14.8, 6.9 Hz, 1 H), 3.56- 3.41 (m, 2 H), 3.35-3.21 (m, 3 H), 1.46-1.19 (m, 4 H).
Referentni primer 109: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4,5-bis(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0649] Faza 1: Rastvoru di-tert-butiliminodikarbonata (1.02 g, 4.60 mmol) u DMF (14 mL) na 0 °C dodat je natrijum hidrid (0.19 g, 4.83 mmol). Uklonjeno je hladno kupatilo, i dodato je još DMF (20 mL). Posle mešanja tokom 15 min, 1,4-dihlorobut-2-in (0.91 ml, 9.20 mmol) je brzo dodat. Posle mešanja na rt tokom 12 h, reakciona mešavina je sipana u hladan rastvor LiCl (5% aq.). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x), a kombinovani organski slojevi su isprani sa LiCl (5% aq.), slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-10%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (467 mg, 33%). LCMS: Rt= 1.07 min, m/z = 326.0 (M+Na), Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.13 (t, J = 1.9 Hz, 2 H) 4.40 (t, J=1.9 Hz, 2 H), 1.57-1.51 (m, 18H).
[0650] Faza 2: Pripremljen prema proceduri opisanoj u Sharpless, K. B. Synthesis.2005, 9, 1514.
Rastvoru intermedijera iz faze 1 (466 mg, 1.53 mmol) u 1,4-dioksanu (5.8 mL) i vodi (1.9 mL) dodat je natrijum azid (401 mg, 6.17 mmol) nakon čega amonijum hlorid (167.8 mg, 3.14 mmol). Nakon zagrevanja do 75 °C tokom 11 h, reakciona mešavina je sipana u levak za odvajanje, i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Hep, 0-40%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (224 mg, 41%). LCMS: Rt= 0.90 min, m/z = 354.1 (M+1), Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.87 (s, 2H), 4.56 (s, 2H), 1.50 (s, 18H).
[0651] Faza 3: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(azidometil)-5-((bis(tertbutoksikarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Gustoj suspenziji benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2S,3S)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (202 mg, 0.32 mmol), intermedijera iz faze 2 (136 mg, 0.38 mmol) i trifenilfosfina (100 mg, 0.38 mmol) u THF (4 mL) na 0 °C dodat je DIAD (0.079 mL, 0.38 mmol) kap po kap. Posle mešanja na rt tokom 12 h, reakciona mešavina je razblažena sa DCM i koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Hep, 0-70%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje. LCMS: Rt= 1.27 min, m/z = 971.5 (M+1), Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.38 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.45 -7.38 (m, 5H), 7.32 - 7.20 (m, 7H), 6.84 (s, 1H), 5.41 (dd, J = 9.0, 5.2 Hz, 1H), 4.78 (d, J = 1.5 Hz, 2H), 4.51 (d, J = 1.2 Hz, 2H), 4.48 - 4.42 (m, 2H), 4.37 - 4.30 (m, 1H), 1.42 (d, J = 39.1 Hz, 31H).
[0652] Faza 4: (2R,3S)-2-((4-(azidometil)-5-((bis(tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(azidometil)-5-((bis(tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (103 mg, 0.11 mol) u DMF (530 µl) na 0 °C dodat je SO3•DMF (33.5 mg, 0.21 mmol). Posle mešanja na rt tokom 3 h, reakciona mešavina je razblažena sa EtOAc, isprana sa LiCl (5% aq.), slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina). LCMS: Rt= 1.16 min, m/z = 1051.6 (M+1), Postupak 2m_kiseli. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi.
[0653] Faza 5: (2R,3S)-2-((4-(aminometil)-5-((bis(tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru (2R,3S)-2((4-(azidometil)-5-((bis(tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (111 mg, 0.11 mmol) u EtOAc (1.1 mL) i EtOH (0.22 mL) pod N2dodat je Pd-C (22 mg, 0.021 mmol). Sistem je evakuisan i ispunjen sa H2(3x). Posle mešanja na rt tokom 4 h, reakciona mešavina je filtrirana kroz celit uz ispiranje sa EtOAc i EtOH. Filtrat je koncentrovan u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 1.06 min, m/z = 1025.7 (M+1), Postupak 2m_kiseli.
[0654] Faza 6: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4,5-bis(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0655] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-2-((4-(aminometil)-5-((bis(tert-butoksikarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (109 mg, 0.11 µmol), DCM (1.1 mL), i TFA (0.49 mL, 6.36 mmol) tokom 2 h. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min) dajući naslovno jedinjenje (12 mg, 19%). LCMS: Rt= 0.46 min, m/z = 559.2 (M+1), Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.16 (s, 1H), 5.61 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.07-4.88 (m, 3H), 4.34 (s, 4H), 1.39-1.13 (m, 4H).
Referentni primer 110: 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-3-(4-karbamimidoilfenoksi)propionska kiselina.
[0656]
[0657] Pripremljen analogno primeru 107, upotrebom tert-butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)karbamata. LCMS: Rt= 0.29 min, m/z = 652.1 (M+1), Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.53 (d, J = 8.9 Hz, 2 H), 7.43 (s, 1 H), 7.03 (s, 1 H), 6.82 (d, J = 8.9 Hz, 2 H), 5.35-5.28 (m, 1 H), 4.97-4.91 (m, 1 H), 4.77-4.70(m, 1 H), 4.61-4.55 (m, 2 H), 4.38-4.29(m, 1H), 4.27-4.19(m, 1H), 4.00(s, 2H).
Primer 111: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-((3-(2-aminoetil)ureido)metil)-2-oksooksazolidin-3-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0658]
[0659] Pripremljen analogno primeru 26, upotrebom tert-butil (2-(1H-imidazol-1-karboksamido)etil)karbamat. LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 634.3 (M+1), Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.18 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.68 (br s, 2 H), 7.28 (br s, 2 H), 6.82 (s, 1H), 6.41 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 6.31-6.20 (m, 1H), 5.23 (dd, J = 8.9, 5.83 Hz, 1H), 4.52-4.44 (m, 1H), 4.24-4.12(m, 1H), 3.69-3.58(m, 1H), 2.90-2.75(m, 2H), 1.38-1.27 (m, 4H).
Referentni primer 112: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((4-((piperidin-4-ilamino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0660]
[0661] Pripremljeno analogno sa 90, upotrebom tert-butil 4-aminopiperidin-1-karboksilata i benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata u fazi 3. LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 613.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.73 (s, 1 H), 7.00 (s, 1 H), 5.49 (d, J = 5.6 Hz, 1 H), 4.90 (q, J = 5.5 Hz, 1 H), 4.85-4.74 (m, 2 H), 4.33 (s, 2 H), 3.53-3.37 (m, 2 H), 3.09-2.88 (m, 2 H), 2.29 (t, J = 12.5 Hz, 2 H), 1.87-1.66 (m, 2 H), 1.25-1.12 (m, 2 H), 1.11-0.95 (m, 2 H).
Primer 113: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((2-oksoazetidin-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0662]
[0663] Pripremljen analogno primeru 1, upotrebom 3-bromopropionske kiseline. LCMS: m/z = 503.0 [M-H];<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 6.95 (s, 1H), 5.27 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.52-4.43 (m, 1H), 3.66-3.60 (m, 1H), 3.36-3.31 (m, 2H), 3.28 (m, 1H), 2.76 (t, J = 3.6 Hz, 2H), 1.36 (s, 3H), 1.35 (s, 3H).
Referentni primer 114: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-gvanidinopropil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0664]
[0665] Pripremljen analogno primeru 90, upotrebom N-(3-aminopropil)-N'-tert-butoksikarbonil gvanidina i benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata u fazi 3. LCMS: Rt= 0.55 min, m/z = 629.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.80 (s, 1 H), 7.05 (s, 1 H), 5.68-5.57 (m, 1 H), 5.05-4.90 (m, 2 H), 4.84-4.79 (m, 1 H), 4.34 (s, 2 H), 3.29-3.21 (m, 2 H), 3.19-3.08 (m, 2 H), 2.02-1.91 (m, 2 H), 1.29-0.94 (m, 4 H).
Referentni primer 115: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-aminopropil)(metil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0666]
[0667] Pripremljen analogno primeru 90, upotrebom tert-butil (3-(metilamino)propil)karbamata i benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata u fazi 3.. LCMS: Rt= 0.53 min, m/z = 601.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.91 (s, 1 H), 7.06 (s, 1 H), 5.55 (d, 1 H, J = 6.1 Hz), 5.06-4.88 (m, 3 H), 4.49 (s, 2 H), 3.26-3.15 (m, 2H), 3.06 (t, 2 H, J = 7.5 Hz), 2.89 (s, 3 H), 2.20-2.07 (m, 2H), 1.30-1.07 (m, 4H).
Referentni primer 116: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-(metilamino)propil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0668]
[0669] Pripremljen analogno primeru 90, upotrebom tert-butil (3-aminopropil)(metil)karbamata i benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata u fazi 3. LCMS: Rt= 0.48 min, m/z = 601.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.82 (s, 1 H), 7.09 (s, 1 H), 5.66-5.53 (m, 1 H), 5.03-4.87 (m, 3 H), 4.37 (s, 2 H), 3.21-3.05 (m, 4 H), 2.68 (s, 3H), 2.17-2.02 (m, 2 H), 1.30-1.04 (m, 4 H).
Referentni primer 117: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((2-(metilamino)etil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0670]
[0671] Pripremljen analogno primeru 90, upotrebom tert-butil (2-aminoetil)(metil)karbamata i benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata u fazi 3. LCMS: Rt= 0.44 min, m/z = 587.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.82 (s, 1 H), 7.09 (s, 1 H), 5.58 (d, J = 5.5 Hz, 1 H), 5.02-4.82 (m, 3 H), 4.42 (s, 2 H), 3.55-3.40 (m, 4H), 2.75 (s, 3 H), 1.30-1.04 (m, 4 H).
Referentni primer 118: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((4-aminobutil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0672]
[0673] Pripremljen analogno primeru 90, upotrebom tert-butil (4-aminobutil)karbamata i benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata u fazi 3. LCMS: Rt= 0.32 min, m/z = 601.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.71 (s, 1 H), 6.99 (s, 1 H), 5.48 (d, J = 5.6 Hz, 1 H), 4.95-4.69 (m, 3 H), 4.24 (s, 2 H), 3.00 (t, J = 7.3 Hz, 2 H), 2.87 (t, J = 7.1 Hz, 2 H), 1.77-1.51 (m, 4 H), 1.23-1.12 (m, 2 H), 1.12-0.90 (m, 2 H).
Referentni primer 119: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-aminopropil)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0674] Faza 1: ert-Butil (3-(3-benzoiltioureido)propil)karbamat. Pripremljen prema proceduri opisanoj od strane Jubian at al. Angew.Chem, 1995, 107, 1343 i Rasmussen et al. Synthesis, 1988, 456. Rastvoru benzoil izotiocijanata (0.93 g, 5.70 mmol) u acetonu (10 mL) dodat je tert-butil (3-aminopropil)karbamat (0.95 g, 5.45 mmol). Posle zagrevanja na 60 °C tokom 2.5 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-heptan, 0-40%), dajući naslovno jedinjenje (0.83 g, 43%). LCMS: Rt= 0.93 min, m/z = 338.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0675] Faza 2: Tert-butil (3-tioureidopropil)karbamat. Rastvoru tert-butil (3-(3-benzoiltioureido)propil)karbamata (0.83 g, 2.45 mmol) u MeOH (15 mL) dodat je vodeni rastvor natrijum hidroksida (1.96 mL, 2.45 mmol). Posle mešanja na rt tokom 2 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu i podvrgnuta azeotropiji sa toluenom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 9% sa 1% NH4OH), dajući naslovno jedinjenje (0.83 g, 43%). LCMS: Rt= 0.47 min, m/z = 234.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0676] Faza 3: Tert-butil (3-((imino(metiltio)metil)amino)propil)karbamat. Rastvoru tert-butil (3-tioureidopropil)karbamata (0.29 g, 1.28 mmol) u MeOH (8 mL) dodat je jodometan (80 µL, 1.29 mmol). Posle mešanja na rt tokom 18 h, dodat je bikarbonat na polimernom nosaču (0.5 g, 3.5mmol NaCO3/g resin) reakcionoj mešavini. Posle 30 min, reakciona mešavina je filtrirana, i filtrat je koncentrovan u vakuumu da bi se dobio željeni proizvod zajedno sa N-metilovanim proizvodom, tert-butil (3-(3-metiltioureido)propil)karbamat (0.28 g, 87%, 2:1 odnos). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.44 min i 0.49 min, m/z = 248.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0677] Faza 4: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(3-imino-11,11-dimetil-9-okso-10-oksa-2,4,8-triazadodecil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina. Rastvoru tert-butil (3-((imino(metiltio)metil)amino)propil)karbamata (32.1 mg, 87 µmol) u dioksanu (1 mL, odnos: 2) na rt dodata je trietilamin (30 µL, 0.22 mmol), 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina (primer 19, 23 mg, 43 µmol), i DMF (0.5 mL, odnos: 1). Posle zagrevanja do 60 °C tokom 17 h, reakciona mešavina je razblažena sa EtOAc i vodom. Vodeni sloj je odvojen, koncentrovan u vakuumu, podvrgnut azeotropiji sa toluenom, i osušen u visokom vakuumu da bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina). LCMS: Rt= 0.51 min, m/z = 729.6 (M+1), Postupak 2m_kiseli.
[0678] Faza 5: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-aminopropil)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0679] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(3-imino-11,11-dimetil-9-okso-10-oksa-2,4,8-triazadodecil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilne kiseline (37 mg, 15 µmol), DCM (0.8 mL), i TFA (0.2 mL, 2.60 mmol) tokom 1.5 h. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min) dajući naslovno jedinjenje (5.2 mg, 20%). LCMS: Rt= 0.39 min, m/z = 629.2 (M+1), Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.77 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 5.63 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 5.06-4.99 (m, 1H), 4.98-4.89 (m, 2H), 4.57 (s, 2H), 3.39-3.34 (m, 2H), 3.14-3.06 (m, 2H), 2.01 (p, J = 7.2 Hz, 2H), 1.39-1.29 (m, 2H), 1.26-1.15 (m, 2H).
Referentni primer 120: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-aminopropil)gvanidino)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0680]
[0681] Pripremljen analogno primeru 119, upotrebom tert-butil (3-((imino(metiltio)metil)amino)propil)karbamata. LCMS: Rt= 0.30 min, m/z = 629.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (500 MHz, D2O) δ 7.97 (s, 1 H), 7.05 (s, 1 H), 5.42 (d, J = 5.4 Hz, 1 H), 4.87-4.78 (m, 1 H), 4.45 (s, 1 H), 3.24 (t, J = 6.9 Hz, 1 H), 2.98-2.93 (m, 1 H), 2.64 (s, 1 H), 1.87 (dt, J = 14.9, 7.18 Hz, 3 H), 1.33-1.25 (m, 3 H), 1.21-1.10 (m, 4 H).
Referentni primer 121: 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazo)-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((2,5-dioksopirolidin-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)-2-metilpropionska kiselina.
[0682]
[0683] Pripremljen analogno primeru 54, upotrebom pirolidin-2,5-diona. LCMS: Rt= 0.55 min, m/z = 533.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6:D2O (1:1)): δ 6.94 (s, 1 H), 5.18 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 4.53-4.43 (m, 1 H), 3.96-3.86 (m, 1H), 3.36-3.25 (m, 1 H) 2.53 (s, 4 H), 1.40 (s, 3 H) 1.37 (s, 3 H).
Primer 122: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2-oksoimidazolidin-1-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina
[0684]
[0685] Pripremljen analogno primeru 108, upotrebom benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((((S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-((tert butoksikarbonil)amino)propil)amino)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata. Dijastereomer A: 3.1 mg. LCMS: Rt= 0.65 min, m/z = 547.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.12 (s, 1H), 5.39 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.60-4.56 (m, 1H), 3.84 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 3.59-3.53 (m, 1H), 3.48-3.41 (m, 2H), 3.21-3.09 (m, 3H), 1.46 (br s, 3H), 1.36 (br s, 3H).
Dijastereomer B: 2.9 mg, LCMS: Rt= 0.65 min, m/z = 547.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.12 (s, 1H), 5.42 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.61-4.54 (m, 1H), 4.16-4.08 (m, 1H), 3.82-3.72 (m, 2H), 3.55-3.49 (m, 1H), 3.27-3.15 (m, 3H), 1.47 (br s, 3H), 1.37 (br s, 3H).
Referentni primer 123: 3-(((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-((1-karboksiciklopropoksi)imino)acetamido)-4-okso-1-sulfoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)amino)-N,N,N-trimetilpropan-1-aminijum.
[0686]
[0687] Pripremljen analogno primeru 90, upotrebom N<1>,N<1>,N<1>-trimetilpropan-1,3-diaminijum 2,2,2-trifluoroacetata.. LCMS: Rt= 0.51 min, m/z = 629.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.81 (s, 1 H), 7.09 (s, 1 H), 5.70-5.63 (m, 1 H), 5.03-4.93 (m, 3 H), 4.83-4.82 (m, 1 H), 4.37 (s, 2 H), 3.44-3.37 (m, 2 H), 3.22-3.16 (m, 2 H), 3.07 (s, 9 H), 2.26-2.17 (m, 2 H), 1.29-1.10 (m, 4 H).
Referentni primer 124: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-aminobutanamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0688] Faza 1: Benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((metilsulfonil)oksi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(hidroksimetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (178 mg, 0.25 mmol) i DIPEA (65 µL, 0.37 mmol) u DCM (2.5 mL) na 0 °C dodat je MsCl (25 µL, 0.32 mmol). Posle 1 h na 0 °C, reakciona mešavina je razblažena sa DCM (10 mL), isprana sa 0.2 N HCl i zasićena NaHCO3(aq). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, koncentrovan u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (190 mg, 96%). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 1.05 min, m/z = 795.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0689] Faza 2: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)meti))-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvoru aq. NH4OH (2 mL, 28-30mas.%) u EtOH (2 mL, odnos:1) i THF (2 mL, odnos:1) dodat je rastvor benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((metilsulfonil)oksi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (190 mg, 0.24 mmol) u THF (1 mL) na -5 °C kap po kap. Posle mešanja na -5 °C tokom 1 h i rt tokom 12 h, reakciona mešavina je razblažena sa 40 mL DCM i isprana sa 10 mL aq. zasićenog NaHCO3(aq), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 5-10%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (120 mg, 49%). LCMS: Rt= 0.87 min, m/z = 716.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0690] Faza 3: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-((tert-butoksikarbonil)amino)butanamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarboni))amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvoru 4-((tert-butoksikarbonil)amino)butanske kiseline (30.7 mg, 0.15 mmol) u DCM (2 mL) na 0 °C dodat je DIPEA (35 µL, 0.20 mmol) i HATU (65 mg, 0.17 mmol). Posle 10 min, dodat je benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat (90 mg, 0.10 mmol). Posle mešanja na 0 °C tokom 1 h, reakciona mešavina je razblažena sa DCM (40 mL), isprana sa 2M aq. Na2CO3(20 mL), slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 5-10%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (42 mg, 46%). LCMS: Rt= 1.07 min, m/z = 901.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0691] Faza 4: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((4-((tertbutoksikarbonil)amino)butanamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-((tertbutoksikarbonil)amino)butanamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (42 mg, 47 µmol) u DMF (0.47 mL) dodat je SO3•DMF (74 mg, 0.47 mmol). Posle mešanja na rt tokom 5 h, posle 10 eq SO3•DMF dodat je i mešan na rt tokom 2 h. Reakciona mešavina je razblažena sa EtOAc (60 mL) i slanim rastvorom (40 mL), i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (40 mL).
Kombinovani organski slojevi su osušeni sa Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (45.3 mg, 99%). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.96 min, m/z = 981.6 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0692] Faza 5: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-aminobutanamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2
oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0693] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((4-((tert-butoksikarbonil)amino)butanamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (47 mg, 48 µmol), DCM (0.5 mL), i TFA (0.2 mL, 2.87 mmol) tokom 2 h. Reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu, i ostatak je podeljen između DCM i ledene vode. Vodeni sloj je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; AcN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min) dajući naslovno jedinjenje LCMS: Rt= 0.53 min, m/z = 615.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.63 (s, 1 H), 7.05 (s, 1 H), 5.58-5.49 (m, 1 H), 4.96-4.83 (m, 3 H), 4.41 (br s, 2 H), 3.06-2.90 (m, 2 H), 2.44-2.28 (m, 2 H), 1.98-1.83 (m, 2 H), 1.38-1.04 (m, 4 H).
Referentni primer 125: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-((1r,3R)-3-aminociklobutil)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0694]
[0695] Pripremljen analogno primeru 119, upotrebom tert-butil ((1r,3r)-3-((imino(metiltio)metil)amino)ciklobutil)karbamata. LCMS: Rt= 0.33 min, m/z = 641.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.72 (s, 1 H), 7.10 (s, 1 H), 5.58 (d, J = 5.5 Hz, 1 H), 5.01-4.95 (m, 1H), 4.89-4.85 (m, 2H), 4.53 (s, 2 H), 4.25-4.17 (m, 1H), 4.05-3.95 (m, 1H), 2.69-2.59 (m, 2H), 2.58-2.48 (m, 2H), 1.34-1.27 (m, 2H), 1.19-1.12 (m, 2H).
Referentni primer 126: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(azetidin-3-ilmetil)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0696] Faza 1: Tert-butil 3-((3-((2-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-1,2-bis(tert-butoksikarbonil)gvanidino)metil)azetidin-1-karboksilat.
[0697] Pripremu benzil ((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat 2,2,2-trifluoroacetata. Rastvoru NH-Boc [benzil ((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat] (368 mg, 0.86 mmol) u DCM (4 mL) dodat je TFA (1.05 mL, 13.68 mmol). Posle mešanja na rt tokom 1 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu da bi se dobilo naslovno jedinjenje kao TFA so (pretpostavljena količina). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.43 min, m/z = 331.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0698] Priprema tert-butil 3-((N,N'-bis(tert-butoksikarbonil)-1H-pirazol-1-karboksimidamido)metil)azetidin-1-karboksilata. Rastvoru Bis-Boc-pirazolkarboksamidina (2.49 g, 8.01 mmol), N-Boc-3-hidroksimetilazetidina (1.50 g, 8.01 mmol) i trifenilfosfina (2.10 g, 8.01 mmol) u THF (80 mL) na 0 °C dodat je DIAD (1.62 g, 8.01 mmol) kap po kap. Posle mešanja na rt tokom 12 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu, i ostatak je rastvoren u 10% EtOAc/heptanu kako bi se pretvorio u prah trifenilfosfin oksid. Filtrat je koncentrovan u vakuumu i hromatografisan kolonskom hromatografijom na silika gelu (EtOAc-heptan, 0-35%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (1.6 g, 41%). LCMS: Rt= 1.12 min, m/z = 480.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0699] Priprema tert-butil 3-((3-((2-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-1,2-bis(tert-butoksikarbonil)gvanidino)metil)azetidin-1-karboksilata. Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat2,2,2-trifluoroacetata (340 mg, 0.77 mmol) u dioksanu (6 mL) dodat je DIPEA (0.147 mL, 0.842 mmol) i rastvor tert-butil 3-((N,N'-bis(tert-butoksikarbonil)-1H-pirazol-1-karboksimidamido)metil)azetidin-1-karboksilata (367 mg, 0.765 mmol) u dioksanu (1 mL). Nakon zagrevanja do 60 °C tokom 12 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu i prečišćena hromatografijom na silika gelu (EtOAc-heptan, 0-95%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (390 mg, 69%). LCMS: Rt= 0.94 min, m/z = 742.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0700] Faza 2: Tert-butil 3-((3-((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-1,2-bis(tert-butoksikarbonil)gvanidino)metil)azetidin-1-karboksilat. Rastvoru tert-butil 3-((3-((2-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-1,2-bis(tert-butoksikarbonil)gvanidino)metil)azetidin-1-karboksilata (390 mg, 0.526 mmol) u EtOH (10 mL) i MeOH (10.00 mL) dodat je Pd/C (5%, 112 mg, 53 µmol) i vodonični balon posle evakuacije i ispunjen sa H2. Posle 1 h, reakciona mešavina je filtrirana preko podloge celita, i filtrat je koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo naslovno jedinjenje (302 mg, 95%). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.74 min, m/z = 608.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0701] Faza 3: Tert-butil 3-((3-((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-1,2-bis(tert-butoksikarbonil)gvanidino)metil)azetidin-1-karboksilat. Rastvoru tert-butil 3-((3-((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-1,2-bis(tertbutoksikarbonil)gvanidino)metil)azetidin-1-karboksilata (309 mg, 0.51 mmol) i (Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (273 mg, 0.51 mmol) u DMF (6 mL, odnos: 1) i DCM (6 mL, odnos: 1) dodat je HATU (232 mg, 0.61 mmol) nakon čega DIPEA (0.22 mL, 1.27 mmol). Posle mešanja na rt tokom 12 h, EtOAc je dodat u reakcionu mešavinu i ispran vodom, slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-heptan, 0-95%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (330 mg, 58%). LCMS: Rt= 1.15 min, m/z = 1127.8 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0702] Faza 4: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((2,3-bis(tert-butoksikarbonil)-3-((1-(tertbutoksikarbonil)azetidin-3-il)metil)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru tert-butil 3-((3-((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-1,2-bis(tert-butoksikarbonil)gvanidino)metil)azetidin-1-karboksilata (330 mg, 0.29 mmol) u DMF (2 mL) na 0 °C dodat je rastvor SO3•DMF (359 mg, 2.34 mmol) u DMF (1 mL). Posle mešanja na rt tokom 5 h, reakciona mešavina je razblažena sa EtOAc i isprana slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (300 mg, 85%). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 1.25 min, m/z = 1208.7 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0703] Faza 5: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazo)-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(azetidin-3-ilmetil)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0704] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2((4-((2,3-bis(tert-butoksikarbonil)-3-((1-(tert-butoksikarbonil)azetidin-3-il)metil)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (300 mg, 0.248 mmol), DCM (3 mL) i TFA (1.90 mL, 24.85 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; AcN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 24 mL/min) dajući naslovno jedinjenje (19 mg, 12%). LCMS: Rt= 0.32 min, m/z = 641.3 (M+1), Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.26 (br s, 1 H), 8.79 (br s, 3 H), 7.78-7.54 (m, 3H), 7.14 (s, 2 H), 6.84 (s, 1 H), 5.06 (br s, 1 H), 4.88 (dd, J = 14.1, 3.94 Hz, 1 H), 4.70-4.59 (m, 1H), 4.54-4.46 (m, 1H), 4.35 (d, J = 3.8 Hz, 2 H), 4.00-3.89 (m, 2H), 3.76-3.65 (m, 2H), 3.08-2.94 (m, 1H), 1.30-1.09 (m, 4H).
Referentni primer 127: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(aminometil)azetidin-1-karboksimidamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0705] Faza 1: Benzil ((2R,3S)-2-((4-(hidroksimetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-((4-(((tert-butildimetilsilil)oksi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (1.8 g, 4.04 mmol) u MeOH (60 mL) dodat je MeOH prethodno ispran DOWEX-50W-X4100-200 (3.60 g, 4.04 mmol) smolom. Posle mešanja na rt tokom 2 h, reakciona mešavina je filtrirana, i filtrat je koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina). LCMS: Rt= 0.52 min, m/z = 332.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0706] Faza 2: Tert-butil ((2-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)(((tert-butoksikarbonil)imino)(1H-pirazol-1-il)metil)karbamat. Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-((4-(hidroksimetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (1.33 g, 4.01 mmol) i bis-Boc-pirazolkarboksamidina (1.37 g, 4.42 mmol) u THF (50 mL) dodat je trifenilfosfin (1.16 g, 4.42 mmol) nakon čega DIAD (0.89 g, 4.42 mmol). Posle mešanja na rt tokom 12 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-heptan, 0-90%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (1.73 g, 69%). LCMS: Rt= 0.99 min, m/z = 624.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0707] Faza 3: Rastvoru tert-butil ((2-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)(((tert-butoksikarbonil)imino)(1H-pirazol-1-il)metil)karbamata (320 mg, 0.51 mmol) u CH3CN (2 mL) dodat je Boc-aminometilazetidin (105 mg, 0.56 mmol). Nakon zagrevanja do 70 °C tokom 1 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.91 min, m/z = 742.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0708] Faza 4: Tert-butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)((3-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)azetidin-1-il)((tert-butoksikarbonil)imino)metil)karbamat.
Rastvoru jedinjenja iz faze 3 (570 mg, 0.77 mmol) u EtOH (10 mL) i MeOH (10 mL) dodat je Pd/C (5%, 16.35 mg, 77 µmol) i vodonični balon posle evakuacije i ispunjen sa H2. Posle 4 h, reakciona mešavina je filtrirana preko podloge celita, i filtrat je koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo naslovno jedinjenje (302 mg, 95%). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.68 min, m/z = 608.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0709] Faza 5: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((N,N'-bis(tert-butoksikarboni))-3-(((tertbutoksikarbonil)amino)metil)azetidin-1-karboksimidamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Pripremljen analogno primeru 126 faza 3, upotrebom tert-butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)((3-(((tertbutoksikarbonil)amino)metil)azetidin-1-il)((tert-butoksikarbonil)imino)metil)karbamata (460 mg, 0.76 mmol), (Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (407 mg, 0.76 mmol), DMF (8 mL), DCM (8 mL), HATU (345 mg, 0.91 mmol) i DIPEA (0.33 µL, 1.89 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-heptan, 0-100%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (0.65 g, 76%). LCMS: Rt= 1.15 min, m/z = 1127.9 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0710] Faza 6: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((N,N'-bis(tert-butoksikarboni))-3-(((tertbutoksikarbonil)amino)metil)azetidin-1-karboksimidamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((N,N'-bis(tertbutoksikarbonil)-3-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)azetidin-1-karboksimidamido )metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (650 mg, 0.58 mmol) u DMF (3 mL) na 0 °C dodat je rastvor SO3•DMF (883 mg, 5.77 mmol) u DMF (1 mL) na 0 °C. Posle mešanja na rt tokom 12 h, reakciona mešavina je razblažena sa EtOAc i isprana slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 1.18 min, m/z = 1208.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0711] Faza 7: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(Aminometi))azetidin-1-karboksimidamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((N,N'-bis(tert-butoksikarbonil)-3-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)azetidin-1-karboksimidamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (690 mg, 0.57 mmol), DCM (3 mL) i TFA (2.1 mL, 27.4 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min) dajući naslovno jedinjenje (98 mg, 27%). LCMS: Rt= 0.32 min, m/z = 641.3 (M+1), Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.73 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.72-7.54 (m, 3H), 7.18 (s, 2H), 6.74 (s, 1H), 5.25 (dd, J = 8.9, 5.5 Hz, 1H), 4.88 (dd, J = 14.2, 4.3 Hz, 1H), 4.65 (dd, J = 14.2, 7.7 Hz, 1H), 4.53 (ddd, J = 7.6, 5.6, 4.4 Hz, 1H), 4.46-4.31 (m, 2H), 4.15 (td, J = 8.7, 5.0 Hz, 2H), 3.96-3.81 (m, 2H), 3.11 (d, J = 7.3 Hz, 2H pretpostavljeno; delimično nejasno zbog vode), 2.91 (p, J = 6.8 Hz, 1H), 1.26-1.11 (m, 2H), 1.08-0.95 (m, 2H).
Referentni primer 128: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((4-((3-(piperidin-4-il)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0712]
[0713] Pripremljen analogno primeru 119, upotrebom tert-butil 4-((imino(metiltio)metil)amino)piperidin-1-karboksilata. LCMS: Rt= 0.32 min, m/z = 655.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.73 (s, 1 H), 7.14 (s, 1 H), 5.59 (d, J = 5.6 Hz, 1 H), 5.01-4.94 (m, 1 H), 4.90-4.84 (m, 1 H), 4.80 (s, 1 H), 4.54 (s, 2 H), 3.80-3.71 (m, 1 H), 3.48 (d, J = 13.4 Hz, 2 H), 3.10 (t, J = 12.5 Hz, 2 H), 2.21 (d, J = 12.9 Hz, 2 H), 1.85-1.71 (m, 2H), 1.38-1.31 (m, 2 H), 1.24-1.16 (m, 2 H).
Referentni primer 129: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(2-aminoetil)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0715] Pripremljen analogno primeru 119, upotrebom tert-butil (2-((imino(metiltio)metil)amino)etil)karbamata. LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 615.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.63 (s, 1 H), 7.02 (s, 1 H), 5.49 (d, J = 5.6 Hz, 1 H), 4.88 (q, J = 5.6 Hz, 1 H), 4.77 (d, J = 5.6 Hz, 2 H), 4.44 (s, 2 H), 3.48 (t, J = 5.9 Hz, 2 H), 3.14 (t, J = 5.9 Hz, 2 H), 1.28-1.15 (m, 2 H), 1.12-1.00 (m, 2 H).
Referentni primer 130: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((1-(3-aminopropil)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0716] Faza 1: Benzil ((2R,3S)-2-((4-(hidroksimetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-((4-(((tertbutildimetilsilil)oksi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (500 mg, 1.12 mmol) u MeOH (15 mL) dodata je DOWEX-50W-X4100-200 (1 g, 1.12 mmol) smola. Posle mešanja na rt tokom 3 h, reakciona mešavina je filtrirana, i filtrat je koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina). LCMS: Rt= 0.51 min, m/z = 332.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0717] Faza 2: Benzil ((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-((4-(hidroksimetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (385 mg, 1.16 mmol) u THF (10 mL) dodat je mangan dioksid (2.0 g, 23 mmol). Posle mešanja na rt tokom 12 h, još 1 g MnO2je dodat i mešan je još 1 h. Reakciona mešavina je filtrirana preko celita uz MeOH ispiranje. Filtrat je koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo naslovno jedinjenje (340 mg, 89%). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.61 min, m/z = 330.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0718] Faza 3: Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (340 mg, 1.03mmol) i Boc-1,3-diaminopropana (360 mg, 2.07 mmol) u DCE (16 mL) i THF (6 mL) na 0 °C dodat je natrijum triacetoksiborohidrid (328 mg, 1.55 mmol). Posle mešanja na rt tokom 18 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu, ponovo rastvorena u DCM, isprana sa 5% natrijum bikarbonatom, slanim rastvorom, osušena preko MgSO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu da bi se dobilo naslovno jedinjenje (470 mg, 93%). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.64 min, m/z = 488.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0719] Faza 4: Rastvoru DIPEA (0.17 mL, 0.96 mmol) i proizvoda iz faze 3 (470 mg, 0.96 mmol) u dioksanu (15 mL) dodat je bis-Boc-pirazolkarboksamidin (359 mg, 1.16 mmol). Posle zagrevanja do 60 °C tokom 3 h, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu i prečišćena hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 20-100%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (130 mg, 18%). LCMS: Rt= 0.93 min, m/z = 730.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0720] Faza 5: Pripremljen analogno primeru 126 faza 2, upotrebom proizvoda iz faze 4 (130 mg, 0.178 mmol), EtOH (5 mL) i metanola (3 mL), Pd/C (5%, 37.9 mg, 18 µmol). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi (100 mg, 94%). LCMS: Rt= 0.70 min, m/z = 596.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0721] Faza 6: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((2,3-bis(tert-butoksikarbonil)-1-(3-((tertbutoksikarbonil)amino)propil)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Pripremljen analogno primeru 126 faza 3, upotrebom proizvoda iz faze 5 (100 mg, 0.168 mmol), tertbutil 3-((3-((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-1,2-bis(tertbutoksikarbonil)gvanidino)metil)azetidin-1-karboksilata (309 mg, 0.51 mmol) i (Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (90 mg, 0.17 mmol), DMF (3 mL), DCM (2 mL), HATU (83 mg, 0.22 mmol) i DIPEA (73 µL, 0.42 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-heptan, 15-90%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (110 mg, 59%) zajedno sa bis-Boc proizvodom. LCMS: Rt= 1.13 min, m/z = 1115.7 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0722] Faza 7: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((2,3-bis(tert-butoksikarbonil)-1-(3-((tertbutoksikarbonil)amino)propil)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Pripremljen analogno primeru 126 faza 4, upotrebom benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((2,3-bis(tert-butoksikarbonil)-1-(3-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (110 mg, 99 µmol), DMF (2 mL), rastvora SO3•DMF (121 mg, 0.79 mmol) u DMF (1 mL) nakon čega još 140 mg SO3•DMF. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi (pretpostavljena količina). LCMS: Rt= 1.15 min, m/z = 1195.9 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0723] Faza 8: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((1-(3-aminopropil)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2
oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0724] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((2,3-bis(tert-butoksikarbonil)-1-(3-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (118 mg, 99 µmol), DCM (2 mL) i TFA (2.0 mL, 26 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min) dajući naslovno jedinjenje (5.1 mg, 8%). LCMS: Rt= 0.28 min, m/z = 629.4 (M+1). Postupak 2m_kiseli.
Referentni primer 131: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-amino-3-metilbutil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0725]
[0726] Pripremljen analogno primeru 90, upotrebom tert-butil (4-amino-2-metilbutan-2-il)karbamata. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min). LCMS: Rt= 0.33 min, m/z = 615.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.76 (s, 1 H), 7.03 (s, 1 H), 5.52 (d, J = 5.6 Hz, 1 H), 4.97-4.90 (m, 1 H), 4.88-4.74 (m, 2 H), 4.31 (s, 2 H), 3.18-3.08 (m, 2 H), 2.04-1.94 (m, 2 H), 1.29 (s, 6 H), 1.23-1.18 (m, 2 H), 1.14-0.99 (m, 2 H).
Referentni primer 132: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((4-amino-2-metilbutan-2-il)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0728] Pripremljen analogno primeru 90, upotrebom tert-butil (3-amino-3-metilbutil)karbamata (Boc zaštita nije bila potrebna zbog ometanog amina). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min). LCMS: Rt= 0.49 min, m/z = 615.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O): δ 7.86 (s, 1 H), 7.16 (s, 1 H), 5.62 (d, J = 5.4 Hz, 1 H), 5.07-4.91 (m, 2 H), 4.88-4.79 (m, 3 H), 4.40 (s, 2 H), 3.23-3.13 (m, 2 H), 2.22-2.12 (m, 2 H), 1.49 (s, 6 H), 1.39-1.11 (m, 4H).
Referentni primer 133: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((((2-aminoetoksi)karbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0729] Faza 1: 2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil1H-imidazol-1-karboksilat. Rastvoru CDI (218 mg, 1.30 mmol) u DCM (4 mL) dodat je rastvor tert-butil (2-hidroksietil)karbamata (0.22 mL, 1.37 mmol) u DCM (1 mL). Posle mešanja na rt tokom 1 h, reakciona mešavina je korišćena direktno u DCM za sledeću fazu.
[0730] Faza 2: Benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(10,10-dimetil-3,8-diokso-4,9-dioksa-2,7-diazaundecil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (90 mg, 0.13 mmol) u DCM (2 mL) na 0 °C dodat je rastvor 2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil 1H-imidazol-1-karboksilat (0.59 ml, 0.19 mmol) u DCM (0.6 mL). Posle mešanja na rt tokom 12 h, dodato je još 3 ekvivalenta 2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil 1H-imidazol-1-karboksilata (1.18 ml, 0.38 mmol). Posle mešanja na rt dodatnih 60 h, reakciona mešavina je podeljena između DCM (40 mL) i vode (20 mL). Organski sloj je osušen sa Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 0-5%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (64 mg, 56%). LCMS: Rt= 1.09 min, m/z = 903.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0731] Faza 3: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(10,10-dimetil-3,8-diokso-4,9-dioksa-2,7diazaundecil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(10,10-dimetil-3,8-diokso-4,9-dioksa-2,7-diazaundecil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (108 mg, 0.120 mmol) u DMF (1.2 mL) dodat je SO3•DMF (189 mg, 1.20 mmol). Posle mešanja na rt tokom 5 h, reakciona mešavina je razblažena sa EtOAc (60 mL) i slanim rastvorom (20 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (20 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni sa Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu da bi se dobilo naslovno jedinjenje (68 mg, 58%). Sirovi ostatak je korišćen kao takav u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.96 min, m/z = 983.6 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0732] Faza 4: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((((2-aminoetoksi)karbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0733] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(10,10-dimetil-3,8-diokso-4,9-dioksa-2,7-diazaundecil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (68 mg, 69 µmol), DCM (0.7 mL) i TFA (0.32 mL, 4.15 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (19 mg, 44%). LCMS: Rt= 0.54 min, m/z = 617.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.67 (s, 1 H), 7.10 (s, 1 H), 5.60-5.52 (m, 1 H), 5.01-4.84 (m, 3 H), 4.43-4.37 (s, 2 H), 4.35-4.27 (m, 2 H), 3.33-3.25 (m, 2 H), 1.36-1.13 (m, 4 H).
Referentni primer 134: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((2-aminoacetamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0735] Pripremljen analogno primeru 124, upotrebom 2-((tert-butoksikarbonil)amino)sirćetne kiseline. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min). LCMS: Rt= 0.48 min, m/z = 587.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.68 (s, 1 H), 7.12 (s, 1 H), 5.57-5.53 (m, 1 H), 4.96 (m, 3 H), 4.51 (s, 2 H), 3.84 (s, 2 H), 1.35 (m, 4 H).
Referentni primer 135: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(2-aminoetil)ureido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0736]
[0737] Pripremljen analogno primeru 133, upotrebom tert-butil (2-(1H-imidazol-1-karboksamido)etil)karbamata (bez dodatne baze) u fazi 2. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min). LCMS: Rt= 0.51 min, m/z = 616.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.62 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 5.55-5.49 (m, 1H), 4.97-4.86 (m, 3H), 4.34(s, 2H), 3.44-3.35 (m, 2H), 3.12-3.03 (m, 2H), 1.36-1.10 (m, 4H).
Referentni primer 136: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-aminopropil)ureido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0739] Pripremljen analogno primeru 133, tert-butil (3-(1H-imidazol-1-karboksamido)propil)karbamat (bez dodatne baze) u fazi 2. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; AcN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min).LCMS: Rt= 0.52 min, m/z = 630.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.60 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 5.57-5.48 (m, 1 H), 4.97-4.86 (m, 3H), 4.32 (s, 2H), 3.18(m, 2H), 2.97 (m, 2H), 1.79 (m, 2 H), 1.33 (m, 4H). Referentni primer 137: (2R,3S)-3-((Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-((1-karboksiciklopropoksi)-imino)acetamido)-2-((4-((((1-metilpiridin-1-ijum-3-il)metil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonat.
[0740] Faza 1: 3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)amino)metil)-1-metilpiridin-1-ijum hlorid.
[0741] Suspenziji 3-(amoniometil)-1-metilpiridin-1-ijuma (147 mg, 0.755 mmol) u THF:EtOH (1:1, 1.26 mL) dodat je trietilamin (175 µl, 1.26 mmol) nakon čega rastvor benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((metilsulfonil)oksi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropan-karboksilata (200 mg, 0.252 mmol) u THF (500 uL), kap po kap. Posle mešanja na rt tokom 20 h, mešavina je koncentrovana u vakuumu zatim ponovo rastvorena u DMSO i prečišćena reverzno faznom preparativnom HPLC (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (50 mg, 23%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: Rt= 0.85 min, m/z = 821.3 (M+) Postupak 2m_kiseli.
[0742] Faza 2: 3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)(tert-butoksikarbonil)amin-metilpiridin-1-ijum hlorid.
[0743] Pripremljen analogno primeru 85, faza 4 upotrebom 3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)amino)metil)-1-metilpiridin-1-ijum hlorida (50 mg, 0.058 mmol), Boc-anhidrida (0.027 mL, 0.115 mmol), NaHCO3(satd aq, 1.22 mL) i DCM (1.15 mL). LCMS: Rt= 0.99 min, m/z = 921.3 (M+) Postupak 2m_kiseli.
[0744] Faza 3: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)((1-metilpiridin-1-ijum-3-il)metil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonat.
[0745] Pripremljen analogno primeru 19, faza 3 upotrebom 3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)(tert-butoksikarbonil)-amino)metil)-1-metilpiridin-1-ijum hlorida (49 mg, 0.051 mmol), SO3•DMF (78 mg, 0.51 mmol) i DMF (1 mL). LCMS: Rt= 0.99 min, m/z = 1002 (M+) Postupak 2m_kiseli.
[0746] Faza 4: (2R,3S)-3-((Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-((1-karboksiciklopropoksi)-imino)acetamido)-2-((4-((((1-metilpiridin-1-ijum-3-il)metil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonat.
[0747] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)((1-metilpiridin-1-ijum-3-il)metil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonata (53 mg, 0.053 mmol), TFA (81 µl, 1.1 mmol) i DCM (72 mL). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (13 mg, 35%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.30 min, m/z = 635.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 9.00 (s, 1H), 8.78-8.67 (m, 2H), 7.97 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.75 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 5.11 (dd, J = 14.4, 3.7 Hz, 1H), 5.06-4.99 (m, 1H), 4.70-4.46 (m, 4H), 4.38 (s, 3H), 3.77-3.62 (m, 1H), 1.35-1.26 (m, 1H), 1.20-1.10(m, 2H), 0.93-0.82 (m, 1H).
Referentni primer 138: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-aminopiperidin-1-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0748] Faza 1: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-((tert-butoksikarbonil)amino)piperidin-1-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat.
[0749] Benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((metilsulfonil)oksi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat (64 mg, 0.081 mmol) i natrijum jodid (18.1 mg, 0.121 mmol) su mešani u DMF (700 µL) tokom 14 h, posle čega su dodati cezijum karbonat (33.4 mg, 0.103 mmol) i tert-butil piperidin-4-ilkarbamat (17.7 mg, 0.089 mmol). Posle 3 h dodatnog mešanja, mešavina je razblažena sa EtOAc i LiCl (5% aq) rastvorom. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x) i kombinovani organski slojevi su isprani sa LiCl (5% aq) rastvorom, slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (1-8% MeOH-DCM), dajući naslovno jedinjenje (52.6 mg, 73%) kao prljavo-belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.98 min, m/z = 899.7 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0750] Faza 2: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((4-((tert-butoksikarbonil)amino)piperidin-1-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-((tert-butoksikarbonil)amino)piperidin-1-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (53 mg, 59 µmol) u DMF (293 µL) na 0 °C dodat je SO3•DMF (24.3 mg, 0.159 mmol). Posle mešanja tokom 2 h na rt, još SO3•DMF (24.3 mg, 81 µmol) je dodato. Posle dodatnog mešanja tokom 16h, rastvor je koncentrovan u vakuumu. Sirovi materijal korišćen je direktno u fazi 3. LCMS: Rt= 0.97 min, m/z = 979.9 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0751] Faza 3: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-aminopiperidin-1-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0752] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((4-((tert-butoksikarbonil)amino)piperidin-1-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (58 mg, 59 µmol), DCM (590 µL), anizola (13 µL, 0.12 mmol) i TFA (273 µL, 3.54 mmol).
Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (2.7 mg, 7.3%) kao prljavo-beli prah. LCMS: Rt= 0.50 min, m/z = 613.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.93 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 5.59 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 5.07-5.00 (m, 1H), 4.99-4.96 (m, 1H), 4.93-4.90 (m, 1H), 4.39 (s, 2H), 3.75-3.62 (m, 2H), 3.63-3.51 (m, 1H), 3.28-3.08 (m, 2H), 2.33 (d, J = 13.7 Hz, 2H), 2.04-1.89 (m, 2H), 1.38-1.11 (m, 4H).
Referentni primer 139: (2R,3S)-3-((Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-((1-karboksiciklopropoksi)imino)acetamido)-2-((4-(((6,7-dihidro-5H-pirazolo[1,2-a][1,2,4]triazol-4-ijum-6-il)tio)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1 - sulfonat.
[0753] Faza 1: 6-(((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)tio)-6,7-dihidro-5H-pirazolo[1,2-a][1,2,4]triazol-4-ijum hlorid.
[0754] Pripremljen analogno primeru 138, pri čemu faza 1 koristi benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((metilsulfonil)oksi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (54 mg, 0.068 mmol), natrijum jodida (17.2 mg, 0.115 mmol), cezijum karbonata (24.5 mg, 0.075 mmol), 6-merkapto-6,7-dihidro-5H-pirazolo[1,2-a][1,2,4]triazol-4-ijum hlorida (13.4 mg, 0.075 mmol) i DMF (600 µL). Gusta suspenzija je koncentrovana u vakuumu, i sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (19.7 mg, 34%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.91 min, m/z = 840.4 (M+) Postupak 2m_kiseli.
[0755] Faza 2: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidri)oksi)karbonil)cic)opropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((6,7-dihidro-5H-pirazolo[1,2-a][1,2,4]triazol-4-ijum-6-il)tio)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonat.
[0756] Pripremljen analogno primeru 138, pri čemu faza 2 koristi 6-(((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)tio)-6,7-dihidro-5H-pirazolo[1,2-a][1,2,4]triazol-4-ijum hlorid (21 mg, 0.025 mmol), DMF (250 µL), SO3•DMF (18.9 mg, 0.123 mmol) zatim dodatni SO3•DMF (22.3 mg, 0.146 mmol). Sirovi materijal korišćen je direktno u fazi 3. LCMS: Rt= 0.92 min, m/z = 921.7 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0757] Faza 3: (2R,3S)-3-((Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-((1-karboksiciklopropoksi)imino)-acetamido)-2-((4-(((6,7-dihidro-5H-pirazolo[1,2-a][1,2,4]triazol-4-ijum-6-il)tio)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4oksoazetidin-1-sulfonat.
[0758] Pripremljen analogno primeru 138, pri čemu faza 3 koristi (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((6,7-dihidro-5H-pirazolo[1,2-a][1,2,4]triazol-4-ijum-6-il)tio)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonat (23 mg, 0.025 mmol), anizol (5.5 µL, 0.050 mmol), TFA (116 µL, 1.50 mmol) i DCM (300 µL). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (1.5 mg, 8%). LCMS: Rt=0.60 min, m/z = 654.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 9.02 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 7.84 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 5.65 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.12-4.97 (m, 3H), 4.94-4.89 (m, 1H), 4.64-4.50 (m, 4H), 4.09 (s, 2H), 1.48-1.36 (m, 2H), 1.32-1.24 (m, 2H).
Referentni primer 140: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-((1s,3S)-3-aminociklobutil)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina
[0759]
[0760] Pripremljen analogno primeru 119, upotrebom tert-butil ((1S,3S)-3-((imino(metiltio)metil)amino)ciklobutil)karbamata. LCMS: Rt= 0.49 min, m/z = 641.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 7.61 (s, 1H) 7.00 (s, 1H) 5.47 (d, J = 5.6 Hz, 1H) 4.91-4.84 (m, 1H) 4.79-4.76 (m, 3H) 4.41 (s, 3H) 3.78 (t, J = 7.6 Hz, 1H) 3.51 (t, J = 8.0 Hz, 1H) 2.84-2.67 (m, 1H) 2.12 (d, J = 9.7 Hz, 1H) 1.23-1.19 (m, 2H) 1.05 (d, J = 4.5 Hz, 2H).
Referentni primer 141: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((4-((3-((S)-pirolidin-3-il)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina
[0762] Pripremljen analogno primeru 119, upotrebom (S)-tert-butil 3-((imino(metiltio)metil)amino)pirolidin-1-karboksilata. LCMS: Rt= 0.49 min, m/z = 640.8 (M+1) Postupak 2m_kiseli;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 7.62 (s, 1H) 7.00 (s, 1H) 5.49 (d, J = 5.6 Hz, 1H) 4.83 - 4.91 (m, 1H) 4.80-4.75 (m, 2H) 4.44 (s, 2H) 4.30 (t, J = 4.0 Hz, 1H) 3.60-3.18 (m, 5H) 2.38-2.24 (m, 1H) 2.04 (dq, J = 12.5, 6.5 Hz, 1H) 1.24-1.12 (m, 2H) 1.04 (br s, 2H).
Referentni primer 142: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((4-((3-(®-pirolidin-3-il)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina
[0763]
[0764] Pripremljen analogno primeru 119, usi®(R)-tert-butil 3-((imino(metiltio)metil)amino)pirolidin-1-karboksilat. LCMS: Rt= 0.29 min, m/z = 641.1 (M+1) Postupak 2m;<1>H NMR (400 MHz, D2O) 8 ppm 7.62 (s, 1H) 7.01 (s, 1H) 5.49 (d, J = 5.6 Hz, 1H) 4.87 (q, J = 5.7 Hz, 1H) 4.80-4.75 (m, 2H) 4.44 (s, 2H) 4.31 (t, J = 4.0 Hz, 1H) 3.61-3.20 (m, 4H) 2.41-2.21 (m, 1H) 2.08-2.00 (m, 1H) 1.18 (m, 2H) 1.14 (m, 2H).
Referentni primer 143: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina
[0765] Faza 1: 4-(azidometil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol Rastvoru 1-bromo-2-butina (640 µL, 7.31 mmol) u 1,4-dioksanu /vodi (3:1, 36 mL) dodat je natrijum azid (1.901 g, 29.2 mmol) nakon čega amonijum hlorid (782 mg, 14.6 mmol). Gusta suspenzija je zagrejana do 75 °C tokom 8 h. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i konc. u vakuumu da bi se dobio sirovi materijal (833 mg, 78%) koji je korišćen direktno u fazi 2. LCMS: Rt= 0.35 min, m/z = 138.9 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0766] Faza 2: tert-Butil ((5-metil-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)karbamat Gusta suspenzija 4-(azidometil)-5-metil-2H-1,2,3-triazola (803 mg, 5.81 mmol), Boc-anhidrida (1.36 mL, 5.88 mmol) i Pd-C (157 mg, 0.148 mmol) u EtOH (39 mL) je evakuisana i ponovo napunjena sa H2(3x). Reakciona mešavina je mešana pod H2tokom 1h 45 min. Dobijena crna suspenzija je filtrirana kroz celit i eluisana sa EtOAc. Filtrat je koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-60%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (878 mg, 71%). LCMS: Rt= 0.82 min, m/z = 213.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0767] Faza 3: Rastvoru benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (331 mg, 0.826 mmol), tert-butil ((5-metil-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)karbamata (235.3 mg, 1.109 mmol) i trifenilfosfina (265.6 mg, 1.013 mmol) u THF (8.3 mL) na 0 °C dodat je DIAD (0.210 mL, 1.016 mmol), kap po kap. Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 h, reakciona mešavina je koncentrovana na silika gelu. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-60%) dalo je željeno jedinjenje (360 mg, 73%). LCMS: Rt= 0.99 min, m/z = 595.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0768] Faza 4: Gusta suspenzija proizvoda iz gornje faze (faza 4) (396.8 mg, 0.667 mmol), K2S2O8(243 mg, 0.870 mmol) i K2HPO4(268.1 mg, 1.539 mmol) u ACN/vodi (2:1, 9.4 mL) je zagrejana do90 °C tokom 2 h. Dodatni K2S2O8(55.6 mg, 0.200 mmol) je dodat i zagrevanje je nastavljeno tokom dodatnih 2 h. Reakciona mešavina je delimično koncentrovana u vakuumu, zatim ugašena sa NaHCO3i ekstrahovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-90%), zatim HPLC (OBD C18, 5 µ, 30x100 mm, 30-70% ACN/H2O w/0.1% TFA pufer tokom 18 min, 60 mL/min), je dalo željeno jedinjenje (157 mg, 53%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.80 min, m/z = 445.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0769] Faza 5: tert-Butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)karbamat. U N2ispranu bocu koja sadrži proizvod iz gornje faze (93.2 mg, 0.210 mmol) i Pd-C (18 mg) dodat je etanol (1.6 mL) nakon čega metanol (0.4 mL). Gusta suspenzija je evakuisana i ispunjena sa H2(3x). Reakciona mešavina je mešana pod H2tokom 2 h. Dobijena crna suspenzija je filtrirana kroz celit, gde je eluiranje sa metanolom. Filtrat je koncentrovan u vakuumu i sirovi ostatak je korišćen kao takav u fazi 6. LCMS: Rt= 0.46 min, m/z = 311.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0770] Faza 6: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvoru (Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (120 mg, 0.213 mmol), tert-butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-5-metil-2H1,2,3-triazol-4-il)metil)karbamata (65.2 mg, 0.210 mmol) i HATU (86 mg, 0.22 mmol) u DMF (2.1 mL) na 0 °C, dodat je DIPEA (0.073 mL, 0.420 mmol). Posle mešanja tokom 16 h, reakciona mešavina je razblažena sa EtOAc i isprana sa LiCI rastvorom (5% aq). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x) i kombinovani organski slojevi su isprani sa LiCI rastvorom (5% aq), zasićenim NaHCO3(aq), slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Prečišćavanje sirovog ostatka hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-90%) je dalo naslovno jedinjenje (144 mg, 82%). LCMS: Rt= 1.12 min, m/z = 830.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0771] Faza 7: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (140 mg, 0.170 mmol) u DMF (848 µl) na 0 °C dodat je SO3•DMF (54.4 mg, 0.355 mmol). Reakciona mešavina je mešana tokom 2.5 h, posle čega je dodato još SO3•DMF (27.4 mg, 0.170 mmol). Tokom dodatnih 22 h rastvor je razblažen sa EtOAc i sipan u hladni LiCI rastvor (5%, aq). Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani sa LiCI (5% aq), slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu da bi se dobilo 163.1 mg sirovog materijala koji je korišćen u fazi 8 bez daljeg prečišćavanja. LCMS: Rt= 1.01 min, m/z = 910.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0772] Faza 8: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina
[0773] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (155 mg, 0.170 mmol), DCM (1.70 mL), anizola (37 µL, 0.34 mmol) i TFA (0.787 mL, 10.2 mmol). Sirovi materijal je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSELECT C18, 5 µ, 30x100 mm, ACN-H2O w/0.1% mravlja kiselina pufer, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (55 mg, 57%) kao prljavo-belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.49 min, m/z = 544.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni.<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.04 (s, 1H), 5.46 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.91-4.84 (m, 1H), 4.84-4.76 (m, 1H), 4.62-4.56 (m, 1H pretpostavljeno; nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 4.13 (s, 2H), 2.16 (s, 3H), 1.32-1.18 (m, 2H), 1.18-1.00 (m, 2H).
Referentni primer 144: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-aminopropil)gvanidino)metil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina
[0774] Faza 1: tert-Butil (3-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)(((tert-butoksikarbonil)imino)(1H-pirazol-1-il)metil)karbamat. U ledeno hladan rastvor tert-butil (((tert-butoksikarbonil)amino)(1H-pirazol-1-il)metilen)karbamata (500 mg, 1.611 mmol), tert-butil (3-hidroksipropil)karbamata (282 mg, 1.611 mmol) i trifenilfosfina (634 mg, 2.417 mmol) rastvoren u THF (16 mL) dodat je DIAD (470 µl, 2.417 mmol) i mešan je tokom 16 h. Reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (600 mg, 80%). LCMS: Rt= 1.02 min, m/z = 468.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0775] Faza 2: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((Z)-4-(tert-butoksikarbonil)-3-((tertbutoksikarbonil)imino)-11,11-dimetil-9-okso-10-oksa-2,4,8-triazadodecil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina. Rastvoru 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilne kiseline (33.9 mg, 0.062 mmol) i tert-butil (3-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)(((tertbutoksikarbonil)imino)(1H-pirazol-1-il)metil)karbamata (54.2 mg, 0.116 mmol) u DMF (624 µl) na 0 °C dodat je DIPEA (32.7 µl, 0.187 mmol). Posle mešanja na rt tokom 16 h, rastvor je koncentrovan u vakuumu i korišćen kao takav bez daljeg prečišćavanja. LCMS: Rt= 0.75 min, m/z = 943.7 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0776] Faza 3: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-aminopropil)gvanidino)metil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina
[0777] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((Z)-4-(tert-butoksikarbonil)-3-((tert-butoksikarbonil)imino)-11,11-dimetil-9-okso-10-oksa-2,4,8-triazadodecil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilne kiseline (58.5 mg, 0.062 mmol), DCM (621 µL), anizola (20.4 µL, 0.186 mmol) i TFA (427 µL, 4.55 mmol). Reakciona mešavina je razblažena sa ledeno-hladnom vodom (1 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ekstrahovan sa vodom (1 mL) i kombinovani vodeni slojevi su isprani sa DCM (1 mL) i zatim prečišćeni reverzno faznom preparativnom HPLC (XSELECT C18, 5 µ, 30x100 mm, 1-20% ACN/H2O w/0.1% mravlja kiselina pufer tokom 18 min, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (19 mg, 44%) kao prljavo-belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.54 min, m/z = 643.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni.<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.11 (s, 1H), 5.62 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.01-4.94 (m, 1H), 4.91-4.74 (m, 2H pretpostavljeno; nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 4.50 (br s, 2H), 3.36 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 3.11 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.01 (p, J = 7.2 Hz, 2H), 1.35-1.25 (m, 2H), 1.21-1.05 (m, 2H).
Referentni primer 145: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(1-(3-(3-aminopropil)gvanidino)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina
[0778] Faza 1: 1-(2H-1,2,3-triazol-4-il)etanol . Rastvoru but-3-in-2-ola (3.63 g, 50.2 mmol) u DMF (40 ml) i MeOH (10 ml) dodat je azidotrimetilsilan (10.22 ml, 75 mmol). Reakciona mešavina je zagrejana na 100 °C tokom 16 h. Reakcija je ohlađena i filtrirana kroz podlogu celita. Filtrat je koncentrovan do ∼25 ml i korišćen direktno u sledećoj fazi. LCMS: Rt= 0.16 min, m/z = 113.8 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni.
[0779] Faza 2: 4-(1-((tert-butildifenilsilil)oksi)etil)-1H-1,2,3-triazol. Rastvoru 1-(1H-1,2,3-triazol-4-il)etanola (50.2 mmol) i imidazola (5.13 mg, 75 mmol) u DCM (50 ml) 0 °C dodat je TBDPSCI (14.6 mL, 55.2 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi preko noći mešavina je filtrirana kroz podlogu celita i zatim je koncentrovana do suva. Dobijeni ostatak je rastvoren u EtOAc, ispran vodom, slanim rastvorom, osušen sa natrijum sulfatom i koncentrovan. Prečišćavanje sirovog ostatka hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 5-25%) dalo je naslovno jedinjenje (8.16 g, 46%) kao žuto ulje. LCMS: Rt= 1.09 min, m/z = 352.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.71 (d, J = 6.5 Hz, 2H) 7.64-7.54 (m, 3 H) 7.49-7.28 (m, 6H) 5.14 (q, J = 6.3 Hz, 1H) 1.46 (dd, J = 6.3, 3.0 Hz, 3H) 1.08 (s, 9H).
[0780] Faza 3: Benzil ((2R,3S)-2-((4-(1-((tert-butildifenilsilil)oksi)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru 4-(1-((tert-butildifenilsilil)oksi)etil)-1H-1,2,3-triazola (2.42 g, 6.88mmol),benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (2.76 g, 6.88 mmol), i PPh3(2.17 mg, 8.26 mmol) u THF (35 ml) na 0°C dodat je DIAD (1.60 ml, 8.26 mmol) kap po kap. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h, zatim koncentrovana u vakuumu. Prečišćavanje sirovog ostatka hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 30-60%) dalo je naslovno jedinjenje (4.32 g, 85%) kao čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 1.12 min, m/z = 734 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0781] Faza 4: Benzil ((2R,3S)-2-((4-(1-((tert-butildifenilsilil)oksi)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-((4-(1-((tert-butildifenilsilil)oksi)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (2.50 g, 3.41 mmol) u ACN/vodi (2:1, 45 mL) na sobnoj temperaturi dodat je K2S2O8(1.57 mg, 5.79 mmol) i K2HPO4(949 mg, 5.45 mmol). Mešavina je zagrejana do 90 °C pod azotom uz mešanje tokom 6 h. Reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu kako bi se uklonio ACN. Dobijenoj gustoj suspenziji dodat je EtOAc i voda. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Organski delovi su kombinovani, osušeni sa Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Prečišćavanje sirovog ostatka hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 30-60%) dalo je naslovno jedinjenje (1.35 g, 68%). LCMS: Rt= 1.18 min, m/z = 584.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0782] Faza 5: Benzil ((2R,3S)-2-((4-(1-hidroksietil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Mešavina ((2R,3S)-2-((4-(1-((tert-butildifenilsilil)oksi)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (1.35 g, 2.31 mmol) i TBAF (1 M u THF, 4.63 ml, 4.63 mmol) u THF (23 ml) je mešana na sobnoj temperaturi 3 h. Rastvarač je uklonjen i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (450 mg, 56%) kao bledo žuta čvrsta supstanca. LCMS: Rt= 0.53 min, m/z = 346.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0783] Faza 6: tert-Butil (1-(2-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)etil)((Z)-((tert-butoksikarbonil)imino)(1H-pirazol-1-il)metil)karbamat. Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-((4-(1-hidroksietil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (460 mg, 1.33mmol), (E)-tert-butil (((tert-butoksikarbonil)imino)(1H-pirazol-1-il)metil)karbamata (455 mg, 1.465 mmol), i trifenilfosfina (419 mg, 1.60 mmol) u THF (7 ml) na 0°C dodat je DIAD (0.311 ml, 1.598 mmol) kap po kap. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i koncentrovana do suva.
Prečišćavanje sirovog ostatka hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 30-60%) dalo je naslovno jedinjenje (190 mg, 22%) kao bledo žutu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.99 min, m/z = 638.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0784] Faza 7: Mešavina tert-butil (1-(2-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)etil)((Z)-((tert-butoksikarbonil)imino)(1H-pirazol-1-il)metil)karbamata (190 mg, 0.298 mmol) i tert-butil (3-aminopropil)karbamata (57.1 mg, 0.328 mmol) u ACN (1490 µl) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Rastvarač je zatim uklonjen u vakuumu i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 50-80%), dajući željeno jedinjenje (100 mg, 45%). LCMS: Rt= 0.91 min, m/z = 744.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0785] Faza 8: Mešavina proizvoda dobijenog iz faze 7 (100 mg, 0.134 mmol) i 10% Pd-C (30 mg, 0.134 mmol) u EtOH (2 ml) i MeOH (1 ml) je mešana pod vodonikom tokom 4 h. Paladijum je isfiltriran kroz podlogu celita i rastvarač je uklonjen kako bi se dobio sirovi materijal koji je korišćen u fazi 9 bez daljeg prečišćavanja. LCMS: Rt= 0.68 min, m/z = 610.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0786] Faza 9: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((E)-3-(tert-butoksikarboni))-4-((tertbutoksikarbonil)imino)-12,12-dimetil-10-okso-11-oksa-3,5,9-triazatridekan-2-il)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvoru (Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (76 mg, 0.13 mmol) i DIPEA (35.1 µl, 0.201 mmol) u DCM/DMF (2:1, 1.34 mL) na 0 °C dodat je HATU (61.1 mg, 0.161 mmol). Ova mešavina je mešana na 0 °C tokom 30 min. Ovome je dodat proizvod dobijen iz faze 8 (82 mg, 0.13 mmol). Reakciona mešavina je mešana na 0 °C tokom 30 min, zatim je razblažena sa EtOAc (60 ml), isprana sa zasićenim vodenim Na2CO3, slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4i koncentrovana u vakuumu. Prečišćavanje sirovog ostatka hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 40-60%) dalo je naslovno jedinjenje (150 mg, 99%) kao bledo žutu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 1.12 min, m/z = 1129.8 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0787] Faza 10: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((E)-3-(tert-butoksikarbonil)-4-((tertbutoksikarbonil)imino)-12,12-dimetil-10-okso-11-oksa-3,5,9-triazatridekan-2-il)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina Rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((E)-3-(tertbutoksikarbonil)-4-((tert-butoksikarbonil)imino)-12,12-dimetil-10-okso-11-oksa-3,5,9-triazatridekan-2-il)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (150 mg, 0.133 mmol) u DMF (1 ml) na 0 °C dodat je SO3•DMF kompleks (203 mg, 1.33 mmol). Posle mešanja na rt tokom 2.5 h, rastvor je razblažen sa EtOAc, ispran hladnim slanim rastvorom, osušen sa Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je korišćen kao takav u fazi 11. LCMS: Rt= 1.15 min, m/z = 1210.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0788] Faza 11: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(1-(3-(3-aminopropil)gvanidino)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina
[0789] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2((4-((E)-3-(tert-butoksikarbonil)-4-((tert-butoksikarbonil)imino)-12,12-dimetil-10-okso-11-oksa-3,5,9-triazatridekan-2-il)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (0.133 mmol), TFA (410 µl, 5.32 mmol) anizola (29 µL, 0.27 mmol) i DCM (1.33 mL). Reakciona mešavina je ohlađena do 0 °C i razblažena sa DCM i ledenom vodom, posle čega su slojevi razdvojeni . Vodeni sloj je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSELECT, C185um 30x100mm; ACN-voda sa 0.1% mravlja kiselina), dajući naslovno jedinjenje (34 mg, 39%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.52 min, m/z = 643.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni.<1>H NMR (400 MHz, D2O, prijavljen kao 1:1 mešavina dijastereomera) δ 7.79 (s, 1H) 7.77 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 5.64 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.61 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.05-4.73 (m, 8H pretpostavljeno; delimično nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 3.39-3.32 (m, 4H), 3.13-3.05 (m, 4H), 2.00 (p, J = 7.0 Hz, 4H), 1.64 (d, J = 3.6 Hz, 3H), 1.63 (d, J = 3.7 Hz, 3H), 1.37-1.28 (m, 4H), 1.21-1.12 (m, 4H).
Referentni primer 146: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((S)-1-((3-aminopropil)amino)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina
[0790] Faza 1: (R)-But-3-in-2-il metansulfonat. Rastvoru R-(+)-3-butin-2-ola (1000 mg, 14.27 mmol) i DIPEA (3.72 ml, 21.4 mmol) u DCM (50 ml) na 0 °C dodat je metansulfonil hlorid (1.44 mL, 18.6 mmol). Mešavina je mešana na 0 °C tokom 2 h, zatim razblažena sa DCM, isprana sa HCI (0.2 N, aq) nakon čega zasićenim NaHCO3(aq). Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (2.093 g, 99%) kao svetlo narandžasto ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.28 (m, J = 6.7, 2.1 Hz, 1H) 3.12 (s, 3H) 2.71 (d, J = 2.2 Hz, 1H) 1.66 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
[0791] Faza 2: (S)-tert-Butil (3-(but-3-in-2-ilamino)propil)karbamat. Rastvor (R)-but-3-in-2-il metansulfonata (2189 mg, 14.77 mmol) u ACN (10 ml) dodat je, kap po kap, suspenziji tert-butil (3-aminopropil)karbamata (2831 mg, 16.25 mmol) i kalijum karbonata (2446 mg, 17.72 mmol) u ACN (50 ml). Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 h, posle čega je gusta suspenzija filtrirana i filtrat je koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 0-8%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (570 mg, 17%) kao svetlo narandžasto ulje. LCMS: Rt= 0.43 min, m/z = 227.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0792] Faza 3: (S)-tert-Butil but-3-in-2-il(3-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)karbamat. Mešavina (S)-tert-butil (3-(but-3-in-2-ilamino)propil)karbamata (570 mg, 2.52 mmol), di-tert-butil dikarbonata (1.10 g, 5.04 mmol) i zasićenog NaHCO3(aq, 17 mL) u DCM (16.8 mL) je mešana na rt tokom 16 h, posle čega su dva sloja razdvojena i organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu.
Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (MeOH-DCM, 0-5%) dalo je naslovno jedinjenje (710 mg, 86%) kao viskozno ulje. LCMS: Rt= 0.99 min, m/z = 327.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0793] Faza 4: (S)-tert-butil (1-(2H-1,2,3-triazol-4-il)etil)(3-((tertbutoksikarbonil)amino)propil)karbamat. Mešavina (S)-tert-butil but-3-in-2-il(3-((tertbutoksikarbonil)amino)propil)karbamata (710 mg, 2.18 mmol), azidotrimetilsilana (452 µl, 3.26 mmol) i bakar (I) jodida (21 mg, 0.11 mmol) u DMF/MeOH (1:1, 3.4 mL) je zagrejana do 100 °C tokom 8 h. Posle hlađenja, mešavina je filtrirana kroz podlogu celita, i filtrat je koncentrovan u vakuumu i prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 30-80%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (636 mg, 79%) kao ulje. LCMS: Rt= 0.78 min, m/z = 370.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0794] Faza 5: Rastvoru (S)-tert-butil (1-(1H-1,2,3-triazol-4-il)etil)(3-((tertbutoksikarbonil)amino)propil)karbamata (636 mg, 1.72 mmol), benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (689 mg, 1.72 mmol) i trifenilfosfina (542 mg, 2.07 mmol) u THF (8.6 mL) na 0°C dodat je DIAD (402 µl, 2.07 mmol), kap po kap. Posle mešanja na rt tokom 5h mešavina je koncentrovana u vakuumu. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 30-60%) je dalo željeno jedinjenje (970 mg, 75%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 1.08 min, m/z = 752.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0795] Faza 6: Mešavina proizvoda dobijenog iz faze 5 (970 mg, 1.29 mmol), K2S2O8(611 mg, 2.19 mmol) i K2HPO4(360 mg, 2.06 mmol) u ACN/vodi (2:1, 15 mL) je zagrejana do 90 °C pod azotom tokom 4 h. Reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu kako bi se uklonio ACN. Mešavina je podeljena između EtOAc/vode i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc, a kombinovani organski delovi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 50-100%) je dalo željeno jedinjenje (443 mg, 57%). LCMS: Rt= 0.95 min, m/z = 602.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0796] Faza 7: tert-Butil ((S)-1-(2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)etil)(3-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)karbamat. Mešavina proizvoda dobijenog iz faze 6 (443 mg, 0.736 mmol) i 10% Pd/C (100 mg) u EtOH/MeOH (2:1, 15 mL) je mešana pod vodonikom tokom 4 h, posle čega je mešavina filtrirana preko celita i rastvarač je uklonjen u vakuumu da bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) koje je korišćeno direktno bez daljeg prečišćavanja. LCMS: Rt= 0.68 min, m/z = 468.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0797] Faza 8: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((S)-1-((tert-butoksikarbonil)(3-((tertbutoksikarbonil)amino)propil)amino)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat Mešavini (Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (416 mg, 0.736 mmol), tert-butil ((S)-1-(2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)etil)(3-((tert
butoksikarbonil)amino)propil)karbamata (0.736 mmol) i DIPEA (193 µl, 1.10 mmol) u DCM/DMF (5:1, 7.3 mL) na 0 °C dodat je HATU (308 mg, 0.810 mmol). Posle mešanja na 0 °C tokom 1 h razblažen je sa EtOAc, ispran vodom, slanim rastvorom, osušen preko natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 50-90%) je dalo željeno jedinjenje (700 mg, 96%) kao crvenu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 1.17 min, m/z = 987.7 (M+1) Postupak 2m_kiseli. Hiralna SFC analiza (SFC-X5, CO2/EtOH=90/10, SFC=5ml/min, AD kolona, Rt = 12.28 min) potvrdila je da je to bio jedan dijastereomer.
[0798] Faza 9: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((S)-1-((tert-butoksikarbonil)(3-((tertbutoksikarbonil)amino)propil)amino)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((S)-1-((tert-butoksikarbonil)(3-((tertbutoksikarbonil)amino)propil)amino)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilatu (700 mg, 0.709 mmol) u DMF (3.5 ml) na 0 °C dodat je SO3•DMF (760 mg, 4.96 mmol). Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, posle čega je dodato još 3 ekvivalenta SO3•DMF i mešana tokom dodatnih 2 h. Reakciona mešavina je razblažena sa EtOAc, isprana sa LiCI (5%, aq, 2x), slanim rastvorom, osušena sa Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu da bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) koje je korišćeno kao takvo bez daljeg prečišćavanja. LCMS: Rt= 1.07 min, m/z = 1067.6 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0799] Faza 10: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((S)-1-((3-aminopropil)amino)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina
[0800] Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((S)-1-((tert-butoksikarbonil)(3-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)amino)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (0.709 mmol), anizola (153 mg, 1.42 mmol), TFA (273 µl, 35.5 mmol) i DCM (7.1 mL). Reakciona mešavina je ohlađena do 0 °C i razblažena sa DCM i ledenom vodom. Posle energičnog mešanja, dva sloja su razdvojena i vodeni sloj je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSELECT, C18, 5um 30x100mm ACN-voda sa 0.1 mravljom kiselinom), dajući naslovno jedinjenje (110 mg, 25%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.50 min, m/z = 601.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.87 (s, 1H) 7.04 (s, 1H) 5.61 (d, J = 5.6 Hz, 1H) 5.04-4.97 (m, 1 H) 4.89 (d, J = 5.4 Hz, 2H) 4.69-4.62 (m, 1H) 3.13-3.00 (m, 4H) 2.04 (t, J = 4.0 Hz, 2H) 1.68 (d, J = 6.9 Hz, 3H) 1.23 (t, J = 3.9 Hz, 2H) 1.11-1.02 (m, 2H).
Referentni primer 147: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(2-(2-aminoetoksi)etil)gvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina
[0801]
[0802] Pripremljen analogno primeru 119, upotrebom tert-butil (2-(2-((imino(metiltio)metil)amino)etoksi)etil)karbamata. LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 659.0 (M+1) Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (500 MHz, D2O) δ ppm 7.61 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 5.47 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.87 (q, J = 5.6 Hz, 1H), 4.81-4.70 (m, 2H pretpostavljeno; delimično nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 4.42 (s, 2H), 3.66-3.54 (m, 4H), 3.32 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.13-3.06 (m, 2H), 1.28-0.93 (m, 4H).
Referentni primer 148: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-aminopropil)-1-metilgvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina
[0803] Faza 1: tert-Butil (3-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)(((tert-butoksikarbonil)imino)(1H-pirazol-1-il)metil)karbamat. Ledeno-hladnom rastvoru tert-butil (((tert-butoksikarbonil)amino)(1H-pirazol-1-il)metilen)karbamata (500 mg, 1.61 mmol), tert-butil (3-hidroksipropil)karbamata (282 mg, 1.611 mmol) i trifenilfosfina (634 mg, 2.42 mmol) u THF (16 mL) dodat je DIAD (470 µl, 2.42 mmol). Mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h, posle čega su isparljive supstance uklonjene u vakuumu. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-100%) dalo je naslovno jedinjenje (600 mg, 80%). LCMS: Rt= 1.02 min, m/z = 468.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0804] Faza 2: Benzil ((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Mešavina benzil ((2R,3S)-2-((4-(hidroksimetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (360 mg, 1.09 mmol) i MnO2(2.36 g, 27.2 mmol) u THF (11 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, posle čega je mešavina filtrirana kroz celit i koncentrovana. Dobijeni materijal (340 mg, 95%) je korišćen kao takav u fazi 3.
[0805] Faza 3: Benzil ((2R,3S)-2-((4-((metilamino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (340 mg, 1.03 mmol) u DCE (10 mL) dodat je MeNH2(1032 µl, 2.065 mmol). Posle mešanja tokom 1 h na rt, dodat je natrijum triacetoksiborohidrid (438 mg, 2.07 mmol) i mešavina je mešana preko noći, posle čega je ugašena sa zasićenim NaHCO3(aq) na 0 °C i ekstrahovana sa EtOAc (2x).
Organski ekstrakti su kombinovani, isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Dobijeni sirovi materijal (pretpostavljena količina) je korišćen kao takav u fazi 4.
[0806] Faza 4: Rastvor benzil ((2R,3S)-2-((4-((metilamino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (93 mg, 0.27 mmol), tert-butil (3-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)(((tertbutoksikarbonil)imino)(1H-pirazol-1-il)metil)karbamata (152 mg, 0.324 mmol), DIPEA (94 µl, 0.540 mmol) u ACN (1800 µl) je zagrejan do 90 °C preko noći. Sve isparljive supstance su uklonjene u vakuumu, a prečišćavanje sirovog ostatka hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan) dalo je željeni proizvod. LCMS: Rt= 0.94 min, m/z = 744.6 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0807] Faza 5: Mešavina proizvoda iz faze 4 (46 mg, 0.062 mmol) i Pd na C (10mas.%, 23 mg) u EtOH/MeOH (4:1, 620 µL) je mešana pod vodonikom tokom 16 h. Reakciona mešavina je filtrirana kroz podlogu celita i koncentrovana, a dobijeni materijal (pretpostavljena količina) je korišćen kao takav bez daljeg prečišćavanja.
[0808] Faza 6: Benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(4-(tert-butoksikarbonil)-3-((tertbutoksikarbonil)imino)-2,11,11-trimetil-9-okso-10-oksa-2,4,8-triazadodecil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Rastvor (Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (30.9 mg, 0.057 mmol), DIPEA (30.1 µl, 0.172 mmol) i HATU (26.2 mg, 0.069 mmol) u DCM/DMF (1:1, 574 µl) je mešan tokom 20 min, posle čega je dodat proizvod iz faze 5 (35 mg, 0.057 mmol).
Dobijena mešavina je mešana dodatnih 2 h, u kom trenutku su isparljive supstance uklonjene u vakuumu i materijal je razblažen sa EtOAc, ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan) dalo je naslovno jedinjenje. LCMS: Rt= 1.11 min, m/z = 1029.9 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0809] Faza 7: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(4-(tert-butoksikarbonil)-3-((tertbutoksikarbonil)imino)-2,11,11-trimetil-9-okso-10-oksa-2,4,8-triazadodecil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Ledeno-hladno rastvoru benzhidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2((4-(4-(tert-butoksikarbonil)-3-((tert-butoksikarbonil)imino)-2,11,11-trimetil-9-okso-10-oksa-2,4,8-triazadodecil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilata (32 mg, 0.028 mmol) u DMF (283 µl) dodat je SO3•DMF (43.4 mg, 0.283 mmol). Posle mešanja tokom 2 h, reakciona mešavina je razblažena sa EtOAc, isprana slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4i koncentrovana u vakuumu. Ovaj sirovi ostatak je korišćen u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0810] Faza 8: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-aminopropil)-1-metilgvanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina
Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(4-(tert-butoksikarbonil)-3-((tert-butoksikarbonil)imino)-2,11,11-trimetil-9-okso-10-oksa-2,4,8-triazadodecil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (27 mg, 0.022 mmol), TFA (103 µl, 1.34 mmol) i DCM (223 µl). Sirovi materijal je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSELECT C18, 5 µ, 30x100 mm, ACN/H2O w/0.1% mravlja kiselina pufer), dajući naslovno jedinjenje (1.1 mg, 7%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.32 min, m/z = 643.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (500 MHz, D2O) δ ppm 7.65 (s, 1H) 7.00 (s, 1H) 5.48 (d, J = 5.7 Hz, 1H) 4.89-4.83 (m, 1H) 4.60-4.45 (m, 2H) 3.25 (td, J = 6.9, 3.6 Hz, 2H) 2.95 (t, J = 7.7 Hz, 2H) 2.91 (s, 3H) 1.98-1.74 (m, 2H) 1.23-1.10 (m, 2H) 1.05-1.00 (m, 2H).
Referentni primer 149: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-(aminometil)azetidin-1-karbonil)oksi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0811]
[0812] Pripremljen analogno primeru 126 upotrebom (2-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil 3-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)azetidin-1-karboksilata u fazi 2. LCMS: Rt= 0.52 min, m/z = 643.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni.<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.83 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 5.61 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 5.25-5.16 (m, 2H), 5.08-4.97 (m, 2H), 4.93-4.86 (m, 1H pretpostavljeno; delimično nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 4.22 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 3.89-3.77 (m, 2H), 3.32 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 3.07-2.95 (m, 1H), 1.49-1.37 (m, 2H), 1.34-1.19 (m, 2H).
[0813] Priprema (2-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil 3-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)azetidin-1-karboksilata. Pripremljen na analogan način kao primer 4, pri čemu faza 2 koristi (2-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil 3-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)azetidin-1-karboksilat (410 mg, 0.591 mmol), K2S2O8(272 mg, 1.01 mmol) i K2HPO4(165 mg, 0.946 mmol) u ACN:vodi (2:1, 7.2 mL) uz zagrevanje tokom 5 h na 90 °C. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 30-90%), dajući naslovno jedinjenje (80 mg, 25%) kao čvrstu supstancu. LCMS: Rt= 0.78 min, m/z = 544.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0814] Priprema (2-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil 3-(((tert-butoksikarbonil)amino)metil)azetidin-1-karboksilata. Bočica za scintilaciju od 20 mL je napunjena benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((4-(hidroksimetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamatom (660 mg, 1.37 mmol, dobijen kao nusproizvod tokom pripreme intermedijera V), CDI (252 mg, 1.51 mmol) i DCM (11.4 mL). Posle mešanja tokom 2 h, tert-butil (azetidin-3-ilmetil)karbamat (383 mg, 2.06 mmol) je dodat i mešana je dodatnih 16 h.
Mešavina je koncentrovana u vakuumu i prečišćena hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 40-90%), dajući naslovno jedinjenje (410 mg, 43%) kao čvrstu supstancu. Rt= 0.94 min, m/z = 694.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
Referentni primer 150: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((S)-3-aminopirolidin-1-karboksimidamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0815]
[0816] Pripremljen analogno primeru 127 upotrebom (S)-tert-butil pirolidin-3-ilkarbamata u fazi 3. Rt= 0.25 min, m/z = 641.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.55-10.15 (m, 1H), 8.06-7.78 (m, 1H), 7.66 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.59 (br s, 2H), 7.20 (s, 2H), 6.74 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 5.23 (ddd, J = 14.6, 8.8, 5.5 Hz, 1H), 4.90 (dt, J = 13.8, 3.7 Hz, 1H), 4.71-4.60 (m, 1H), 4.59-4.35 (m, 3H), 3.90 (br s, 1H), 3.70-3.38 (m, 3H pretpostavljeno; preklapa se sa pikom vode), 2.30-2.15 (m, 1H), 2.09-1.98 (m, 1H), 1.30-1.13 (m, 2H), 1.13-0.98 (m, 2H).
Referentni primer 151: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(1-((3-aminopropil)amino)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0817]
[0818] Pripremljen analogno primeru 146 upotrebom 3-bromobut-1-ina u fazi 2. LCMS: Rt= 0.50 min, m/z = 601.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni.<1>H NMR (400 MHz, D2O, prijavljen kao 1.3:1 mešavina dijastereomera) δ 7.94 (s, 0.75H), 7.90 (s, 1H), 5.69 (d, J = 5.6 Hz, 0.75H), 5.64 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.08 (q, J = 5.5 Hz, 1.8H), 4.97 (q, J = 9.3, 7.7 Hz, 3.9H), 4.76-4.68 (m, 1.7H pretpostavljeno; delimično nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 3.24-3.02 (m, 7.5H), 2.21-2.02 (m, 3.8H), 1.76 (d, J = 7.0 Hz, 2.35H), 1.73 (d, J = 6.9 Hz, 3.1H), 1.41-1.21 (m, 4.9H), 1.20-1.08 (m, 2.5H).
Referentni primer 152: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((2-aminoetil)sulfonil)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0819] Faza 1: (2-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil metansulfonat. Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-((4-(hidroksimetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (100 mg, 0.302 mmol, dobijen tokom pripreme intermedijera V) u DCM (3.0 mL) na 0 °C dodat je TEA (84 µL, 0.60 mmol) nakon čega metansulfonil hlorid (28.2 µL, 0.362 mmol). Posle mešanja na rt tokom 2 h, rastvor je razblažen sa DCM, ispran sa zasićenim NaHCO3(aq), slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je korišćen bez dodatnog prečišćavanja. LCMS: Rt= 0.66 min, m/z = 410.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0820] Faza 2: Pripremljen analogno primeru 138, faza 1 upotrebom proizvoda iz faze 1 (525 mg, 1.28 mmol), tert-butil (2-merkaptoetil)karbamata (273 mg, 1.53 mmol), natrijum jodida (192 mg, 1.28 mmol) i cezijum karbonata (836 mg, 2.56 mmol) u DMF (12.8 mL). Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan) da bi se dobio proizvod (190 mg, 30%). LCMS: Rt= 0.80 min, m/z = 491.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0821] Faza 3: Rastvoru proizvoda (190 mg, 0.387 mmol) iz faze 2 u DCM (3.9 mL) na 0 °C dodat je m-CPBA (147 mg, 0.852 mmol). Posle mešanja tokom 1 h, podeljen je između vode/DCM. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM i kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan), dajući proizvod (148 mg, 73%). LCMS: Rt= 0.72 min, m/z = 523.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0822] Faza 4: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((2-aminoetil)sulfonil)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0823] Pripremljen analogno primeru 4, faze 3-6. LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 622.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (500 MHz, D2O) δ 7.90 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 5.59 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 5.03 (q, J = 5.6 Hz, 1H), 4.91 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.78 (s, 2H pretpostavljeno; nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača), 3.63-3.58 (m, 2H), 3.54-3.50 (m, 2H), 1.41-1.33 (m, 2H), 1.24 (t, J = 3.2 Hz, 2H).
Referentni primer 153: 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((R)-3-aminopirolidin-1-karboksimidamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0824]
[0825] Pripremljen analogno primeru 127 upotrebom (R)-tert-butil pirolidin-3-ilkarbamata u fazi 3. Rt= 0.30 min, m/z = 641.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.51-9.87 (m, 1H), 8.07-7.75 (m, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.59 (br s, 2H), 7.20 (s, 2H), 6.73 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.22 (ddd, J = 15.1, 8.8, 5.4 Hz, 1H), 4.94-4.85 (m, 1H), 4.70-4.59 (m, 1H), 4.59-4.36 (m, 3H), 3.97-3.83 (m, 1H), 3.70-3.38 (m, 3H pretpostavljeno; preklapa se sa pikom vode), 2.29-2.17 (m, 1H), 2.08-1.98 (m, 1H), 1.27-1.15 (m, 2H), 1.13-1.01 (m, 2H).
Referentni primer 154: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5,6-dihidropirolo[3,4-d][1,2,3]triazol-2(4H)-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0826] Faza 1: tert-Butil((4-hlorobut-2-in-1-il)oksi)difenilsilan. Rastvoru imidazola (691 mg, 10.2 mmol) i tert-butilhlorodifenilsilana (2.65 ml, 10.1 mmol) u DCM (15.3 mL) na 0 °C dodat je 4-hlorobut-2-in-1-ol (824 µL, 9.18 mmol). Posle 2 h mešanja na rt razblažen je sa DCM/vodom i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2x), a kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je rastvoren u dioksanu i ponovo koncentrovan (2x), zatim korišćen direktno bez daljeg prečišćavanja.
[0827] Faza 2: 5-(azidometil)-4-(((tert-butildifenilsilil)oksi)metil)-1H-1,2,3-triazol. Rastvoru tertbutil((4-hlorobut-2-in-1-il)oksi)difenilsilana (3.15 g, 9.18 mmol) u dioksanu/vodi (46 mL, 3:1) dodat je amonijum hlorid (982 mg, 18.4 mmol) nakon čega natrijum azid (2.39 g, 36.8 mmol). Dvofazni rastvor je zagrejan do 75 °C tokom 33 h, posle čega su slojevi razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom, slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-35%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (1.692 g, 47%) kao bela čvrsta supstanca. Rt= 1.11 min, m/z = 393.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.54 (s, 1H), 7.71-7.63 (m, 4H), 7.49-7.36 (m, 6H), 4.87 (s, 2H), 4.46 (s, 2H), 1.58 (s, 2H), 1.07 (s, 9H).
[0828] Faza 3: tert-butil ((4-(((tert-butildifenilsilil)oksi)metil)-1H-1,2,3-triazol-5-il)metil)karbamat. Boca je napunjena sa 5-(azidometil)-4-(((tert-butildifenilsilil)oksi)metil)-1H-1,2,3-triazola (1.044 g, 2.420 mmol), Boc-anhidrida (581 mg, 2.66 mmol) i Pd-C (5%, 200 mg). Posle ispiranja sistema sa N2, EtOH (24.2 ml) je dodat. Mešavina je zatim evakuisana i ponovo napunjena sa H2(3x). Posle energičnog mešanja tokom 17 h, sistem je pročišćen sa N2i gusta suspenzija je filtrirana preko celita i koncentrovana u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-50%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (777 mg, 69%) kao bela čvrsta supstanca. Rt= 1.12 min, m/z = 467.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.71-7.64 (m, 4H), 7.49-7.36 (m, 6H), 4.87 (s, 2H), 4.40 (br s, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.08 (s, 9H).
[0829] Faza 4: Rastvoru benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (674 mg, 1.68 mmol), tert-butil ((4-(((tert-butildifenilsilil)oksi)metil)-1H-1,2,3-triazol-5-il)metil)karbamata (777 mg, 1.67 mmol) i trifenilfosfina (525 mg, 2.00 mmol) u THF (16.7 mL) na 0 °C dodat je DIAD (414 µL, 1.10 mmol), kap po kap. Posle mešanja na rt tokom 11 h, mešavina je koncentrovana na silika gelu i prečišćena hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-50%) da bi se dobio proizvod (1.196 g, 85%) kao bela čvrsta supstanca. Rt= 1.31 min, m/z = 849.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0830] Faza 5: Benzil ((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-5-(((tert-butildifenilsilil)oksi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru proizvoda iz faze 4 (265 mg, 0.312 mmol) u DCM (3.1 mL) na 0 °C dodat je TFA (721 µL, 9.36 mmol). Posle mešanja na 0 °C tokom 3 h razblažen je sa DCE i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je ponovo rastvoren u DCM i ispran sa zasićenim NaHCO3(aq). Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (3x), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je korišćen kao takav bez daljeg prečišćavanja. Rt= 1.03 min, m/z = 749.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0831] Faza 6: Benzil ((2R,3S)-2-((4-(((tert-butildifenilsilil)oksi)metil)-5-((2-nitrofenilsulfonamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-5-(((tert-butildifenilsilil)oksi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (234 mg, 0.312 mmol) u DCM (3.1 mL) na 0 °C dodat je 2-nitrobenzen-1-sulfonil hlorid (77.2 mg, 0.338 mmol) nakon čega TEA (87 µL, 0.62 mmol). Posle 2.2 h mešanja na rt, razblažen je sa DCM i ispran sa KHSO4(2%, aq). Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (3x) i kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i konc. u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-60%), dajući naslovno jedinjenje (252 mg, 87%) kao prljavo-belu čvrstu supstancu. Rt= 1.24 min, m/z = 934.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0832] Faza 7: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((4-(hidroksimetil)-5-((2-nitrofenilsulfonamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru benzil ((2R,3S)-2-((4-(((tert-butildifenilsilil)oksi)metil)-5-((2-nitrofenilsulfonamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (252 mg, 0.270 mmol) u THF (2.8 mL) na 0 °C dodat je TBAF (1.0 M u THF, 270 µL, 0.270 mmol). Posle mešanja tokom 2.6 h, rastvor je razblažen sa EtOAc i delimično koncentrovan u vakuumu. Dodatni EtOAc je dodat zajedno sa KHSO4(2%, aq) i vodom. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-100%), dajući naslovno jedinjenje (165 mg, 88%) kao belu čvrstu supstancu. Rt= 0.83 min, m/z = 696.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0833] Faza 8: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((5-((2-nitrofenil)sulfonil)-5,6-dihidropirolo[3,4-d][1,2,3]triazol-2(4H)-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamat. Rastvoru benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((4-(hidroksimetil)-5-((2-nitrofenilsulfonamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (165 mg, 0.237 mmol), i trifenilfosfina (91.6 mg, 0.349 mmol) u THF (11.9 mL) na 0 °C dodat je DIAD (72 µL, 0.35 mmol), kap po kap. Posle 3 h, još trifenilfosfin (46.4 mg, 0.177 mmol) je dodato, posle čega je ohlađen do 0 °C, praćeno dodavanjem DIAD (37 µL, 0.18 mmol). Posle mešanja na rt tokom 2.5 h, koncentrovan je u vakuumu i prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-100%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (318 mg), koje je bilo kontaminirano sa trifenilfosfin oksidom. Rt= 0.93 min, m/z = 678.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0834] Faza 9: tert-Butil 2-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-4,6-dihidropirolo[3,4-d][1,2,3]triazol-5(2H)-karboksilat. Gustoj suspenziji benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-((5-((2-nitrofenil)sulfonil)-5,6-dihidropirolo[3,4-d][1,2,3]triazol-2(4H)-il)metil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (241 mg, ∼50%/wt, ∼0.178 mmol) i kalijum karbonata (77.4 mg, 0.560 mmol) u DMF (3.0 mL) dodat je tiofenol (23.8 µl, 0.231 mmol). Posle mešanja na rt tokom 2 h, dodat je Boc-anhidrid (78 mg, 0.36 mmol). Tokom dodatnih 2 h, gusta suspenzija je razblažena sa EtOAc i isprana sa zasićenim NaHCO3(aq). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x) i kombinovani organski slojevi su isprani sa LiCl (5% aq), slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i konc. u vakuumu. Sirovi ostatak je kombinovan sa ostacima od 2 poput trasformacije (15 mg i 20 mg skale) i prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-100%) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (85.5 mg, 81% kombinovan). Rt= 0.96 min, m/z = 593.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.21 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.40-7.27 (m, 5H), 6.92 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.40 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.04 (s, 2H), 5.00 (dd, J = 9.6, 5.1 Hz, 1H), 4.65 (dd, J = 14.0, 7.1 Hz, 1H), 4.56 (dd, J = 4.1, 6.2 Hz, 1H), 4.38-4.24 (m, 5H), 4.12 (q, J = 6.2 Hz, 1H), 3.86 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 1.46 (s, 9H).
[0835] Faza 10: tert-Butil 2-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-4,6-dihidropirolo[3,4-d][1,2,3]triazol-5(2H)-karboksilat. Suspendovan je tert-butil 2-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-4,6-dihidropirolo[3,4-d][1,2,3]triazol-5(2H)-karboksilat (85.5 mg, 0.144 mmol), kalijum peroksidisulfat (51.8 mg, 0.186 mmol) i kalijum fosfat, dvobazni (57 mg, 0.33 mmol) u ACN/vodi (2 mL, 2:1) tokom 5 min, zatim zagrejan do 90 °C tokom 1.5 h. Dodato je još kalijum peroksidisulfata (13.9 mg, 0.050 mmol) i zagrevan je dodatnih sat vremena. Dodato je još kalijum peroksidisulfata (12.1 mg, 0.043 mmol) i zagrevan je dodatnih sat vremena, posle čega je gusta suspenzija delimično koncentrovana u vakuumu, zatim podeljena između zasićenog NaHCO3(aq) i EtOAc. Posle odvajanja slojeva, vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x).
Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan, 0-100%) da bi se dobio kontaminirani proizvod (33 mg), koji je ponovo prečišćen reverzno faznom HPLC (XSELECT CSH, C18, 5 µ, 30x100 mm, ACN/H2O sa 0.1% puferom mravlje kiseline, 60 mL/min). Naslovno jedinjenje (12.1 mg, 19%) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca. Rt= 0.78 min, m/z = 433.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.40 (s, 1H), 8.17 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 7.42-7.26 (m, 5H), 5.05 (s, 2H), 5.04-4.99 (m, 1H), 4.58 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 4.40 (d, J = 4.7 Hz, 4H), 4.22 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 1.45 (s, 9H).
[0836] Faza 11: tert-Butil 2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-4,6-dihidropirolo[3,4-d][1,2,3]triazol-5(2H)-karboksilat. Suspendovan je tert-butil 2-(((2R,3S)-3-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-4,6-dihidropirolo[3,4-d][1,2,3]triazol-5(2H)-karboksilat (11.8 mg, 0.027 mmol) i Pd-C (5%, 2.3 mg) u MeOH/EtOH (740 µl, 1.7:1) pod N2, posle čega je sistem evakuisan i ispunjen sa H2(3x). Posle energičnog mešanja tokom 1.7 h, sistem je pročišćen sa N2i čvrste čestice su filtrirane kroz 0.45 µ špric filter. Filtrat je koncentrovan u vakuumu i korišćen kao takav bez daljeg prečišćavanja.
[0837] Faza 12: tert-Butil 2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)-ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)-tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-4,6-dihidropirolo[3,4-d][1,2,3]triazol-5(2H)-karboksilat. Ohlađenoj (0 °C) gustoj suspenziji (Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)-imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (15.3 mg, 0.028 mmol), tert-butil 2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-4,6-dihidropirolo[3,4-d][1,2,3]triazol-5(2H)-karboksilata (8.3 mg, 0.027 mmol) i HATU (11.4 mg, 0.029 mmol) u DMF (500 µL) dodat je DIPEA (9.5 µL, 0.054 mmol). Posle mešanja na rt tokom 16 h, razblažen je sa EtOAc i ispran sa LiCI (5%, aq). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x) i kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (18.1 mg, 81%) kao bela čvrsta supstanca. Rt= 1.08 min, m/z = 828.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0838] Faza 13: (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-(tert-butoksikarbonil)-5,6-dihidropirolo[3,4-d][1,2,3]triazol-2(4H)-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonska kiselina. Rastvoru tert-butil 2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oksoazetidin-2-il)metil)-4,6-dihidropirolo[3,4-d][1,2,3]triazol-5(2H)-karboksilata (18.1 mg, 0.022 mmol) u DMF (300 µL) na 0 °C dodat je SO3•DMF (12.3 mg, 0.078 mmol). Posle mešanja na rt tokom 2 h, rastvor je ohlađen do 0 °C i dodato je još SO3•DMF (22.2 mg, 0.141 mmol). Tokom dodatnih 4 h na rt, razblažen je sa EtOAc i ispran sa LiCI (5% aq). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x), a kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i konc. u vakuumu. Korišćen je kao takav (pretpostavljena količina) bez daljeg prečišćavanja. Rt= 0.96 min, m/z = 908.4 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
Faza 14: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5,6-dihidropirolo[3,4-d][1,2,3]triazol-2(4H)-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina. Prateći opštu proceduru za kiselinom posredovanu deprotekciju upotrebom (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)-ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-(tert-butoksikarbonil)-5,6-dihidropirolo[3,4-d][1,2,3]triazol-2(4H)-il)metil)-4-oksoazetidin-1-sulfonske kiseline (20 mg, 0.022 mmol), anizola (5 µl, 0.046 mmol), DCM (300 µL) i TFA (51 µL, 0.66 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno faznom preparativnom HPLC (XSELECT CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući naslovno jedinjenje (7.3 mg, 60%) kao beli prah. LCMS: Rt= 0.37 min, m/z = 542.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni;<1>H NMR (500 MHz, D2O) δ 7.18 (s, 1H), 5.51 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 5.01-4.92 (m, 2H), 4.87 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.61-4.35 (m, 4H), 1.42-1.32 (m, 2H), 1.32-1.23 (m, 2H).
Referentni primer 155: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((S)-1,3-diaminopropil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina
Referentni primer 156: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((R)-1,3-diaminopropil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina
[0839] Faza 1: (S)-tert-butil (1-((tert-butildifenilsilil)oksi)-4-oksobutan-2-il)karbamat Rastvoru (S)-tertbutil (1-((tert-butildifenilsilil)oksi)-4-hidroksibutan-2-il)karbamata (pripremljen prema proceduri opisanoj u WO2013124826 A1 upotrebom L-asparaginske kiseline) (15.0 g, 33.8 mmol) i DIPEA (29.5 mL, 169 mmol) u DCM (50 mL) na 0 °C dodata je gusta suspenzija DMSO (7.20 mL, 101 mmol) i sumportrioksid piridin kompleks (16.14 g, 101 mmol) u DCM (50 mL). Posle mešanja na rt tokom 1.5 h, mešavina je razblažena sa zasićenim NaHCO3(aq) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski delovi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (16.9 g, pretpostavljena količina) kao svetlo smeđe ulje. Korišćeno je kao takvo bez daljeg prečišćavanja. LCMS: Rt= 1.20 min, m/z = 442.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0840] Faza 2: (S)-tert-butil (4-(benzi)amino)-1-((tert-butildifenilsilil)oksi)butan-2-il)karbamat. (S)-tertbutil (1-((tert-butildifenilsilil)oksi)-4-oksobutan-2-il)karbamatu (14.93 g, 33.8 mmol) u DCE (100 mL) na 0 °C dodat je benzilamin (3.69 mL, 33.8 mmol) i natrijum triacetoksihidroborat (8.60 g, 40.6 mmol) sekvencijalno. Posle mešanja na rt 18 h, ugašen je dodavanjem zasićenog NaHCO3(aq, 300mL) i mešan dodatnih 30 min. Faze su odvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (8 g, 44%). LCMS: Rt= 1.08 min, m/z = 533.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0841] Faza 3: (S)-tert-butil (4-amino-1-((tert-butildifenilsilil)oksi)butan-2-il)karbamat. (S)-tert-butil (4-(benzilamino)-1-((tert-butildifenilsilil)oksi)butan-2-il)karbamatu (8.0 g, 15.0 mmol) u MeOH (100 mL) dodat je amonijum format (9.47 g, 150 mmol) i Pd(OH)2(1.054 g, 1.502 mmol). Reakciona mešavina je mešana na 70 °C tokom 1.5 h, zatim ohlađena do rt i filtrirana kroz celit, gde je eluiranje sa MeOH/EtOAc (1:2, ∼800 mL). Filtrat je koncentrovan u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (7 g) svetlo smeđeg ostatka koji je korišćen kao takav bez daljeg prečišćavanja. LCMS: Rt= 0.95 min, m/z = 443.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0842] Faza 4: (S)-di-tert-butil (4-((tert-butildifenilsilil)oksi)butan-1,3-diil)dikarbamat. (S)-tert-butil (4-amino-1-((tert-butildifenilsilil)oksi)butan-2-il)karbamatu (6.65 g, 15.02 mmol) u DCM (75 mL) dodat je zasićen NaHCO3(aq, 50 mL) i di-tert-butil dikarbonat (5.24 g, 24.03 mmol), sekvencijalno. Posle mešanja tokom 16 h, slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (6.25 g, 77%). LCMS: Rt= 1.31 min, m/z = 543.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.70-7.58 (m, 4H) 7.49-7.34 (m, 6H) 5.29-5.12 (m, 1H) 4.83-4.56 (m, 1H) 3.72 (d, J = 8.4 Hz, 2H) 3.63-3.51 (m, 1H) 3.48-3.27 (m, 1H) 3.04-2.73 (m, 1H) 1.58 (d, J = 4.9 Hz, 2H) 1.44 (s, 9H) 1.43, (s, 9H), 1.06 (s, 9H).
[0843] Faza 5: (S)-di-tert-butil (4-hidroksibutan-1,3-diil)dikarbamat. Rastvoru (S)-di-tert-butil (4-((tertbutildifenilsilil)oksi)butan-1,3-diil)dikarbamata (6.25g, 11.51 mmol) u MeOH (100 mL) dodat je natrijum hidroksid (1.38 g, 34.5 mmol) u vodi (20.0 mL). Mešavina je zagrejana do 70 °C tokom 18 h, zatim ohlađena do sobne temperature i delimično koncentrovana u vakuumu. DCM je zatim dodat i mešavina je ohlađena do 0 °C, posle čega je dodata sirćetna kiselina (2.31 mL, 40.3 mmol). Organski sloj je zatim odvojen, ispran sa zasićenim NaHCO3(aq) i slanim rastvorom. Kombinovani vodeni delovi su ekstrahovani sa DCM, a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (1.67 g, 48%). LCMS: Rt= 0.67 min, m/z = 305.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.06 (br s, 1H) 4.83 (br s, 1H) 3.82-3.64 (m, 2H) 3.61 (dd, J = 10.3, 4.9 Hz, 1H) 3.43-3.25 (m, 1H) 3.11-2.93 (m, 1H) 2.18 (br s, 1H) 1.79-1.65 (m, 1H) 1.64-1.58 (m, 1H) 1.51-1.36 (m, 18H).
[0844] Faza 6: (S)-di-tert-butil (4-oksobutan-1,3-diil)dikarbamat. Rastvoru (S)-di-tert-butil (4-oksobutan-1,3-diil)dikarbamata (1.67g, 5.49 mmol) i DIPEA (3.83 mL, 21.95 mmol) u DCM (20 mL) na 0 °C dodata je gusta suspenzija DMSO (1.061 mL, 13.72 mmol) i sumpor trioksid piridin kompleks (2.183 g, 13.72 mmol) u DCM (20 mL). Posle mešanja na rt tokom 30 min, mešavina je razblažena sa zasićenim NaHCO3(aq) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (1.47 g, 89%). LCMS: Rt= 0.70 min, m/z = 325.0 (M+Na) Postupak 2m_kiseli.
[0845] Faza 7: (S)-di-tert-butil pent-4-in-1,3-diildikarbamat. Rastvoru (S)-di-tert-butil (4-oksobutan-1,3-diil)dikarbamata (1.47g, 4.86 mmol) u MeOH (30 mL) dodat je kalijum karbonat (1.680 g, 12.15 mmol) i dimetil (1-diazo-2-oksopropil)fosfonat (1.40 mL, 7.29 mmol), sekvencijalno. Posle mešanja tokom 15 h, mešavina je razblažena sa EtOAc, isprana vodom, slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4i koncentrovana u vakuumu. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (0.943 g, 65%). LCMS: Rt= 0.81 min, m/z = 321.1 (M+Na) Postupak 2m_kiseli.
[0846] Faza 8: (S)-di-tert-butil (1-(2H-1,2,3-triazol-4-il)propan-1,3-diil)dikarbamat. Rastvoru (S)-di-tertbutil pent-4-in-1,3-diildikarbamata u DMF/MeOH (3.7 mL, 1.2:1) dodat je azidotrimetilsilan (330 µL, 2.38 mmol) i bakar jodid (15 mg, 0.079 mmol). Mešavina je zagrejana na 100 °C tokom 16 h, ohlađena do rt zatim filtrirana kroz celit. Filtrat je koncentrovan u vakuumu i sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc -Heptan) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje. LCMS: Rt= 0.68 min, m/z = 342.1 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0847] Faza 9: Rastvoru (S)-di-tert-butil (1-(2H-1,2,3-triazol-4-il)propan-1,3-diil)dikarbamata (852 mg, 2.50 mmol), benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoksibenzil)-2-(hidroksimetil)-4-oksoazetidin-3-il)karbamata (1.05 g, 2.62 mmol) i PPh3(785 mg, 2.99 mmol) u THF (13 mL) na 0°C dodat je DIAD (0.582 ml, 2.99 mmol), kap po kap. Posle mešanja na rt tokom 7 h, koncentrovan je u vakuumu i prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc -Heptan) da bi se dobio proizvod (1.24 g, 68%). LCMS: Rt= 1.01 min, m/z = 724.5 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0848] Faza 10: Proizvodu iz faze 9 (1.240 g, 1.713 mmol) u acetonitrilu (20 mL) dodat je K2S2O8(621 mg, 2.227 mmol) i rastvor K2HPO4(477 mg, 2.74 mmol) u vodi (10 mL), sekvencijalno. Posle zagrevanja na 90 °C uz energično mešanje tokom 1 h, dodato je još K2S2O8(185 mg, 0.685 mmol) zajedno sa K3PO4(363 mg, 1.71 mmol). Mešavina je zagrejana do 90 °C tokom 5 h, zatim je ohlađena do rt i razblažena sa EtOAc (120 mL). Slojevi su razdvojeni i organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan) da bi se dobio proizvod (590 mg, 60%). LCMS: Rt= 0.85 min, m/z = 574.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0849] Faza 11: Di-tert-butil ((S)-1-(2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)propan-1,3-diil)dikarbamat. Suspendovanje proizvoda iz faze 10 (590 mg, 1.03 mmol) i Pd-C (10% 200 mg) u EtOH/MeOH (21 mL, 2:1), posle čega je sistem evakuisan i ponovo napunjen sa H2(3x). Posle 4 h energičnog mešanja, mešavina je filtrirana kroz celit, isprana sa EtOH/DCM. Filtrat je koncentrovan u vakuumu, dajući naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao bledo žutu čvrstu supstancu koja je korišćena kao takva bez daljeg prečišćavanja. LCMS: Rt= 0.61 min, m/z = 440.2 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0850] Faza 12: Benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((4-((S)-2,2,12,12-tetrametil-4,10-diokso-3,11-dioksa-5,9-diazatridekan-6-il)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilat. Mešavina (Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)sirćetne kiseline (582 mg, 1.028 mmol), DIPEA (0.269 mL, 1.543 mmol) i HATU (430 mg, 1.131 mmol) u DCM/DMF (12 mL, 5:1) je mešana na 0 °C tokom 30 min. Ovoj mešavini dodat je di-tert-butil ((S)-1-(2-(((2R,3S)-3-amino-4-oksoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)propan-1,3-diil)dikarbamat (1.03 mmol). Posle mešanja tokom dodatnih 30 min na 0 °C, razblažena je sa EtOAc, isprana vodom, slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4i koncentrovana u vakuumu. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu (EtOAc-Heptan) kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (760 mg, 77%). LCMS: Rt= 1.12 min, m/z = 959.6 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0851] Faza 13: (3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((4-((S)-2,2,12,12-tetrametil-4,10-diokso-3,11-dioksa-5,9-diazatridekan-6-il)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)azetidin-1-sulfonska kiselina. Benzhidril 1-(((Z)-(1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-okso-2-(((3S,4R)-2-okso-4-((4-((S)-2,2,12,12-tetrametil-4,10-diokso-3, 11-dioksa-5,9-diazatridekan-6-il)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)azetidin-3-il)amino)etiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilatu (760 mg, 0.792 mmol) u DMF (4 mL) na 0 °C dodat je SO3•DMF (850 mg, 5.55 mmol). Posle mešanja tokom 2 h na rt, rastvor je razblažen sa EtOAc, ispran sa LiCI (5% aq), slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan u vakuumu kako bi se dobilo naslovno jedinjenje (pretpostavljena količina) kao narandžasto ulje koje je korišćeno direktno bez daljeg prečišćavanja. LCMS: Rt= 1.01 min, m/z = 1039.6 (M+1) Postupak 2m_kiseli.
[0852] Faza 14, Jedinjenje 1: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((S)-1,3-diaminopropil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2
oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0853] Faza 14, Jedinjenje 2: 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((R)-1,3-diaminopropil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-okso-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oksoetiliden)amino)oksi)ciklopropankarboksilna kiselina.
[0854] (3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((benzhidriloksi)karbonil)ciklopropoksi)imino)-2-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-okso-4-((4-((S)-2,2,12,12-tetrametil-4,10-diokso-3,11-dioksa-5,9-diazatridekan-6-il)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)azetidin-1-sulfonskoj kiselini (5.55 mmol) u mravljoj kiselini (4 mL) na 0 °C dodat je anizol (173 µL, 1.58 mmol). Rastvor je zagrejan na 40 °C tokom 2 h, posle čega je ohlađen do rt i koncentrovan u vakuumu. Dobijenom ostatku dodat je DCM (15 mL), zatim ledena voda (12 mL) i ovo je energično mešano tokom 1 h. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je direktno prečišćen reverzno faznom HPLC (XSELECT CSH, 30 x 100 mm, 5 µm, C18 kolona; ACN-voda sa 0.1% modifikatorom mravlje kiseline, 60 mL/min), dajući jedinjenje 1 (170 mg, 37%) i jedinjenje 2 (21 mg, 5%) kao bele čvrste supstance. Smatra se da jedinjenje 2 proizilazi iz blage epimerizacije stereocentra tokom faze 7.1-LCMS: Rt= 0.31 min, m/z = 573.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni.<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 7.86 (s, 1H) 7.07 (s, 1H) 5.60 (d, J = 5.6 Hz, 1H) 5.03-4.82 (m, 4H pretpostavljeno; delimično nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača) 3.12-2.85 (m, 2H) 2.54-2.34 (m, 2H) 1.28-1.08 (m, 4H).2-LCMS: Rt= 0.30 min, m/z = 573.3 (M+1) Postupak 2m_kiseli_polarni.<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 7.86 (s, 1H) 7.07 (s, 1H) 5.58 (d, J = 5.5 Hz, 1H) 5.07-4.85 (m, 4H pretpostavljeno; delimično nejasno zbog rezidualnog pika rastvarača) 3.12-2.84 (m, 2H) 2.53-2.34 (m, 2H) 1.30-1.03 (m, 4H).
Bakterijski skrining i kulture
[0855] Bakterijski izolati su kultivisani iz zaliha zamrznutih na -70°C dvema uzastopnim prekonoćnim pasažama na 35°C na vazduhu okoline na 5% krvnom agaru (Remel, Lenxa, Kans.). Kontrola kvaliteta i P.
aeruginosa ATCC 27853) je od American Type Culture Collection (ATCC; Rockville, Md.) i PAO1 je primljen od Dr. K. Poole.
[0856] Konstrukcija Escherichia coli isogenskih sojeva, Sojevi NB27273-CDY0026 (roditeljski), NB27273-CDY0033 (KPC2) i NB27273-CDY0030 (SHV12)
[0857] Soj NB27273 (BW25113 pspB::Km<r>) je dobijen od Keio kolekcije umetanja transpozona. Soj ima pspB gen zamenjen markerom rezistencije na kanamicin (BW25113 pspB::Km<r>). Ovaj soj je izlečen od transpozona u pspB preko FLP rekombinaze upotrebom objavljene metodologije. Dobijeni soj, BW25113 pspB, korišćen je kao domaćin za vektore multikopiranja koji eksprimiraju ključne β-laktamaze. Plazmidi multikopiranja koji usmeravaju konstitutivnu ekspresiju β-laktamaza ustanovljeni su kao sledeći:
Sintetički, kodon optimizovani geni koji kodiraju E. coli KPC2 i SHV12 β-laktamaze izrađeni su sa DNA2.0 (Palo Alto, CA). svaki od sintetičkih fragmenata dizajniran je da sadrži Notl i Ncol restrikciona mesta na njihovim krajevima, što omogućav ligaciju u Notl/Ncol digestivni pET28a(+) derivat za proteinsku ekspresiju. Umetci u ovim vektorima služili su kao šablon DNK za PCR amplifikaciju gena koji kodira KPC2 i SHV12, upotrebom parova prajmera E225 (tcgcCTCGAGgcgactgcgctgacgaatttgg) (SEQ ID NO:1) i E202 (aatcGAATTCttactgaccattaacgcccaagc) (SEQ ID NO:2) i E227 (tcgcCTCGAGgcgagcccgcaaccgctgga) (SEQ ID NO:3) i E204 (aatcGAATTCttaacgctgccagtgctcaatc) (SEQ ID NO:4), respektivno. Kodon optimizovane nukleotidne sekvence i relevantna informacija o prepoznavanju prajmera je prikazana dole:
SHV12
E227 TCGCCTCGAGGCGAGCCCGCAACCGCTGGA (SEQ ID NO:6)
E204 AATCGAATTCTTAACGCTGCCAGTGCTCAATC (SEQ ID NO:7)
REV. COMP. E204 GATTGAGCACTGGCAGCGTTAAGAATTCGATT (SEQ ID NO:8)
KPC2
E225 TCGCCTCGAGGCGACTGCGCTGACGAATTTGG (SEQ ID NO:10)
E202 AATCGAATTCTTACTGACCATTAACGCCCAAGC (SEQ ID NO:11)
REV. COMP. E202 GCTTGGGCGTTAATGGTCAGTAAGAATTCGATT (SEQ ID NO:12)
UNDERLINED = DNA ENCODING BL
PCR proizvodi zatim su digestovani sa Xhol i EcoRI i vezani u slično digestovan plazmid pAH63-pstS(BlaP). Plazmid pAH63-pstS(BlaP) je derivat plazmida pAH63 (J Bacteriol:183(21): 6384-6393) izrađenog kloniranjem TEM-1 (bla) promotera i regiona iz plazmida pBAD koji kodira signalni peptid (J Bacteriol. 1995 Jul.177(14):4121-30) u plazmid pAH63. Ovaj fragment je PCR amplifikovan od pBAD upotrebom para prajmera E192 (ttcaCTGCAGtgaacgttgcgaagcaacggC) (SEQ ID NO:13) i E194 (TCGAggatcctcgagagcaaaaacaggaaggcaaaatgccg) (SEQ ID NO:14), digestovanih sa Pstl i BamHI i umetnutih u slično digestovan plazmid pAH63. Prema tome, ekspresija β-laktamaza iz konstrukta na bazi pAH63-pstS(BlaP) je konstitutivna i signal sekvenca je obezbeđena da se usmere ovi proteini u periplazmu. Vektori na bazi plazmida pAH63 korišćeni su za umetanje u genom u jednoj kopiji, međutim, da bi se obezbedili viši nivoi ekspresije radi omogućavanja osetljivije detekcije osetljivosti jedinjenja na β-laktamaze, ekspresioni umetci sadržani u ovim vektorima premešteni su u replikativni vektor multikopija pBAD-Kan (J Bacteriol.1995 Jul.177(14):4121-30). Kako bi se ovo postiglo, umetci koji obuhvataju gene za β-laktamaze, sa povezanim sekvencama TEM promotera i signalnim sekvencama, su PCR amplifikovani iz njihovih odgovarajućih vektora upotrebom prajmera E269 (ccgTCTAGAcggatggcctttttgcgtttc) (SEQ ID NO:15) i E202 (aatcGAATTCttactgaccattaacgcccaagc) (SEQ ID NO:16) za KPC2 konstrukt i E204 (aatcGAATTCttaacgctgccagtgctcaatc) (SEQ ID NO:17) za SHV12 konstrukt. Ovi fragmenti zatim su digestovani sa Xbal i EcoRI, i svaki je umetnut u pBAD18-kan koji je digestovan sa istim enzimima kako bi se generisao par vektora multikopija koji eksprimiraju KPC2 i SHV12 respektivno. Ovi vektori transformisani su u BW25113 pspB kako bi se generisali sojevi NB27273-CDY0033 (koji eksprimira KPC2) i NB27273-CDY0030 (koji eksprimira SHV12). pBAD18-kan vektor takođe sadrži TEM promoter region i signalnu sekvencu, (ali nema nikakve intaktne gene za β-laktamaze) i transformisan je u BW25113 pspB upotrebom standardnih protokola kako bi se generisao kontrolni soj NB27273-CDY0026. Ekspresija β-laktamaza je potvrđena verifikovanjem smanjene osetljivosti na primerne testirane antibiotike koji su poznati supstrati za KPC2 ili SHV12.
Testiranje osetljivosti
[0858] Minimalne Inhibitorne Koncentracije (MIC) određene su postupkom mikrorazređena u bujonu u skladu sa smernicama Kliničkog i Laboratorijskog Instituta (CLSI). Ukratko, sveže prekonoćne bakterijske kulture su suspendovane u sterilnom slanom rastvoru, i podešene na 0.5 McFarland standard mutnoće. Bakterijske suspenzije su zatim razblažene u katjonski podešenom Mueller-Hinton bujonu (MHB II; BBL) da bi se dobio krajnji inokulum od približno 5x10<5>jedinica koje formiraju koloniju (CFU)/mL. Glavna ploča antibiotika je pripremljena u koncentraciji ekvivalentnoj sto-strukoj najvišoj željenoj krajnjoj koncentraciji u 100% dimetil sulfoksidu (DMSO). Glavna ploča antibiotika je zatim razblažena serijskim dvostrukim razblaženjem sa višekanalnom pipetom. Dobijene serije razblaženja jedinjenja su razblažene 1:10 sa sterilnom vodom dovodeći do 10% DMSO krajnje koncentracije. Zapremina od 10 µL serija razblaženja leka je preneza na ploče sa 96 bazenčića za testiranje. Ploče za testiranje inokulisane su sa 90 µL bakterijskih suspenzija i inkubirane na 35-37°C tokom 20 h. Ploče za testiranje očitane su upotrebom mikrotitarskog čitača ploče (Molecular Devices) na 600nm kao i vizuelni zapažanjem preko ogledala za čitanje. Najniža koncentracija jedinjenja koja je sprečila vidljivi rast zabeležena je kao MIC. Performansa testa je praćena testiranjem aztreonama protiv laboratorijskih sojeva za kontrolu kvaliteta u skladu sa smernicama CLSI.
[0859] Referentna jedinjenja: za poređenje, sledeća poznata jedinjenja monobaktama su korišćena ovde:
Referentno jedinjenje 1: Aztreonam
Referentno jedinjenje 2: Karumonam
Referentno jedinjenje 4: Aicuris WO2013110643
Tabela A: Minimalne Inhibitorne Koncentracije (MIC) protiv izogenskih sojeva E. coli, koji nose razne determinante rezistencije.
[0860] Podaci u Tabeli A prikazuju da jedinjenja ovog pronalaska imaju dobru antibakterijsku moć protiv E. coli, uključujući sojeve koji pokazuju snažnu rezistenciju na nekoliko poznatih antibiotika monobaktama i sulfaktama.
[0861] Podaci o aktivnosti za odabrana jedinjenja ovog pronalaska obezbeđena su u sledećoj tabeli. Jedinjenja su testirana na E. coli soj 25922 i E. coli koja sadrža KPC-2 (poznata karbapenemaza kod Klebsiella pneumoniae), kako bi se odredile Minimalne Inhibitorne Koncentracije (MIC), u mg/L. Treba napomenuti da su jedinjenja identifikovana kao formatne soli podvrgnuta liofilizaciji tokom izolovanja, čime se u nekim slučajevima uklanja malo mravlje kiseline, tako da sadržaj formata ovih soli može da bude manji od stehiometrijskog.
Tabela B. Aktivnost Jedinjenja u Primerima.
Istim postupcima opisanim ovde, dodatna jedinjenja mogu lako da se pripreme od poznatih polaznih materijala uz korišćenje uobičajenih veština.

Claims (15)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I):
  2. ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u kojoj: Z je CR<4>ili N; R<1>je H ili C1-C4alkil; R<2>je odabran iz grupe koju čine H, C1-C4alkil, i -COOH ili R<1>i R<2>uzeti zajedno sa ugljenikom sa kojim su vezani obrazuju prsten odabran od C3-C6cikloalkilnog prstena i 4-6-članog heterocikločnog prestena koji sadrži do dva heteroatoma odabrana od N, O i S kao članova prstena; R<3>je odabran od H, -COOH, i -L<1>-W-(CH2)0-2-X-R<5>; R<4>je H ili halo; svako L<1>je nezavisno ravnolančani ili razgranat C1-4alkilen; W je neka veza, O, NH ili S; X je fenil, ili 5-6-člani heteroarilni prsten koji sadrži 1-3 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članova prstena; gde su fenil i 5-6-člani heteroaril opciono supstituisani sa jednom ili dve grupe odabrane od C1-4alkila, hidroksi, -CN, F, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) i -N(C1-4alkil)2; R<5>je odabran od
  3. gde R<1b>, R<2b>, i R<3b>su nezavisno vodonik, hidroksi, CN, (C1-C4)alkil, (C1-C4)alkoksi, (C3-C6)cikloalkil, ili 4-, 5-, 6- ili 7 -člani heterociklil koji sadrži N, O ili S kao člana prstena, gde svaki (C1-C4)alkil, (C1-C4)alkoksi, (C3C6)cikloalkil, ili 4-, 5-, 6- ili 7 -člani heterociklil koji sadrži N, O ili S kao člana prstena može da bude supstituisan sa jednim, dva ili tri supstituenata odabrana nezavisno od Y, i gde R<2b>i R<3b>zajedno sa atomom azota za koji su vezani mogu opciono da obrazuju 5- do 7-člani heterociklil uključujući 0 ili 1 dalje heteroatome odabrane od N, O i S, pri čemu je pomenuti heterociklil opciono supstituisan sa Y; Y je odabran od F, CN, -NH2, Q, -L<2>-C(O)NR<10>-L<2>-Q, -L<2>-NR<10>-C(O)-L<2>-Q, -L<2>-OR<10>,-L<2>-N(R<10>)2, -L<2>-N<+>(R<11>)3, -L<2>-NR<10>-C(O)R<10>, -L<2>-NR<10>-L<2->N(R<10>)2, -L<2>-O-C(O)OR<10>, -L<2>-O-C(O)-N(R<10>)2, -L<2>-NR<10>-C(O)-N(R<10>)2, -L<2>-NR<10>-C(O)-OR<11>, -L<2>-C(=NR<10>)-N(R<10>)2, -CON(R<10>)2, -L<2>-NR<10>-C(=NR<10>)-N(R<10>)2, -L<2>-NR<10>-C(=NR<10>)-R<10>, -L<2>-C(O)N(R<10>)2, , -L<2>-O-SO3R<10>; L<2>je nezavisno u svakom pojavljivanju neka veza ili ravnolančani ili razgranat C1-4alkilen, opciono supstituisan sa NH2, OH, ili F; Het je 4-6-člani zasićeni heterociklični prsten, gde taj heterocikločni presten sadrži 1 ili 2 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članova prstena i supstituisan je sa okso i opciono dalje supstituisan sa Y; R<10>i R<12>su nezavisno H ili C1-4alkil opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe odabrane od OH, NH2ili Q; Q je odabran od -L<2>-N(R<13>)2, -L<2>-N<+>(R<14>)3, -L<2>-NR<13>-C(=NR<13>)-N(R<13>)2, -L<2>-NR<13>-CR<13>(=NR<13>), -L<2>-NR<13>-L<2>-Cy, -L<2>-NR<13>-C(=NR<13>)-NR<13>-L<2>-Cy, -L<2>-NR<13>-C(=NR<13>)-L<2>-Cy, -L<2>-Cy-L<2>-R<13>, -L<2>-Cy-L<2>-N(R<13>)2, -L<2>-NR<13>-SO2-N(R<13>)2, -L<2>-SO2-N(R<13>)2, -L<2>-NR<13>-SO2-R<13>, -L<2>-NR<13>-L<2->Ar, -L<2>-S-L<2>-Cy, -L<2>-NR<13>-(C=O)-O-R<13>,
  4. svako Cy je nezavisno 3-6-člani cikloalkil ili 3-6-člani heterociklil koji sadrži jedan ili dva heteroatoma odabrana od N, O i S kao člana prstena i opciono fuzionisan sa 5-6-članim arilnim ili heteroarilnim prstenom, gde je svako Cy opciono supstituisano sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, C1-3haloalkila, R<14>, hidroksi, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) ili -N(C1-4alkil)2; Ar je fenil, opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, C1-3haloalkila, R<14>, hidroksi, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) ili -N(C1-4alkil)2; R<11>je nezavisno u svakom pojavljivanju C1-4alkil; i dva R<10>, ili dva R<11>, ili dva R<12>na istom N mogu da cikliraju da obrazuju 4-6-člani heterocikločni presten opciono supstituisan sa C1-4alkil, C1-4alkoksi, hidroksi, ili okso; R<13>je nezavisno u svakom pojavljivanju H ili C1-4alkil opciono supstituisan sa hidroksi, -OR<14>, -NHR<14>, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) ili -N(C1-4alkil)2; R<14>je nezavisno u svakom pojavljivanju C1-4alkil opciono supstituisan sa hidroksi, C1-4alkoksi, -NH2, -NH(C1-4alkil) ili -N(C1-4alkil)2; u kojoj dva R<13>ili dva R<14>na istom N mogu da cikliraju da obrazuju 4-6-člani heterocikločni presten opciono supstituisan sa C1-4alkil, C1-4alkoksi, hidroksi, amino ili okso; R<15>je H, halo, C1-4alkil, CN, ili -O(C1-4alkil). 2. Jedinjenje prema zahtevu 1, u kojem R<1>i R<2>zajedno sa ugljenikom za koji su vezani obrazuju ciklopropan prsten i R<3>je -COOH. 3. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih zahteva, u kom Z je CH. 4. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-3, u kom je Het odabran od pirolidin-2-ona, oksazolidin-2-ona, i imidazolidin-2-ona, i opciono je supstituisan sa Y. 5. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih zahteva, koje ima strukturu formule (II):
  5. ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 6. Jedinjenje prema zahtevu 1, u kojem je ---O-CR<1>R<2>R<3>odabrano od
  6. i
  7. 7. Jedinjenje prema zahtevu 1 ili zahtevu 6, u kom je Het odabran od
  8. 8. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih zahteva, koje je neka farmaceutski prihvatljiva so.
  9. 9. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje je odabrano od:
    i njihovih farmaceutski prihvatljivih soli.
  10. 10. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje je
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  11. 11. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje prema bilo kom od prethodnih zahteva i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.
  12. 12. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-10, ili farmaceutska kompozicija prema zahtevu 11 za upotrebu u postupku za lečenje infekcije gram-negativnim bakterijama.
  13. 13. Jedinjenje ili farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 12, u kojoj je bakterijska infekcija nozokomijalna pneumonija, intraabdominalna infekcija, ili infekcija urinarnog trakta izazvana vrstama Enterobacteriaceae.
  14. 14. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-10 za upotrebu u lečenju.
  15. 15. Farmaceutska kombinacija, koja obuhvata jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-10 i neki drugi terapeutski agens. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20190406A 2014-03-24 2015-03-23 Organska jedinjenja monobaktama za lečenje bakterijskih infekcija RS58509B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461969735P 2014-03-24 2014-03-24
US201462088304P 2014-12-05 2014-12-05
EP15714147.4A EP3122745B1 (en) 2014-03-24 2015-03-23 Monobactam organic compounds for the treatment of bacterial infections
PCT/US2015/022011 WO2015148379A1 (en) 2014-03-24 2015-03-23 Monobactam organic compounds for the treatment of bacterial infections

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS58509B1 true RS58509B1 (sr) 2019-04-30

Family

ID=52808201

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190406A RS58509B1 (sr) 2014-03-24 2015-03-23 Organska jedinjenja monobaktama za lečenje bakterijskih infekcija

Country Status (37)

Country Link
US (4) US9174978B2 (sr)
EP (2) EP3122745B1 (sr)
JP (1) JP6153674B2 (sr)
KR (1) KR101733441B1 (sr)
CN (1) CN106164072B (sr)
AP (1) AP2016009374A0 (sr)
AU (1) AU2015236369B2 (sr)
BR (1) BR112016020333B1 (sr)
CA (1) CA2939254C (sr)
CL (1) CL2016002285A1 (sr)
CU (1) CU24441B1 (sr)
CY (1) CY1121701T1 (sr)
DK (2) DK3511328T3 (sr)
EA (1) EA030850B1 (sr)
EC (1) ECSP16073620A (sr)
ES (2) ES2862203T3 (sr)
GT (1) GT201600183A (sr)
HR (1) HRP20190501T1 (sr)
HU (1) HUE042134T2 (sr)
IL (1) IL247259B (sr)
LT (1) LT3122745T (sr)
MA (1) MA39777B1 (sr)
MX (1) MX373444B (sr)
MY (1) MY179292A (sr)
PE (1) PE20161371A1 (sr)
PH (1) PH12016501577B1 (sr)
PL (1) PL3122745T3 (sr)
PT (1) PT3122745T (sr)
RS (1) RS58509B1 (sr)
SG (1) SG11201606711UA (sr)
SI (1) SI3122745T1 (sr)
SM (1) SMT201900218T1 (sr)
SV (1) SV2016005274A (sr)
TW (1) TWI714525B (sr)
UA (1) UA121383C2 (sr)
WO (1) WO2015148379A1 (sr)
ZA (1) ZA201605565B (sr)

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL3353175T3 (pl) * 2015-09-23 2021-02-22 Novartis Ag Sole i postacie stałe antybiotyku monobaktamowego
WO2017081615A1 (en) 2015-11-09 2017-05-18 Wockhardt Limited 7-oxo -6-(sulfooxy)- 1,6-diazabicyclo [3.2.1] octane containing compounds and their use in treatment of bacterial infections
US20180339983A1 (en) 2015-12-15 2018-11-29 Merck Sharp & Dohme Corp. Biaryl monobactam compounds and methods of use thereof for the treatment of bacterial infections
CA3016341A1 (en) 2016-03-07 2017-09-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Bicyclic aryl monobactam compounds and methods of use thereof for the treatment of bacterial infections
SG11201908691PA (en) 2017-03-20 2019-10-30 Broad Inst Inc Compounds and methods for the treatment of parasitic diseases
JP7235718B2 (ja) * 2017-08-02 2023-03-08 ノバルティス アーゲー モノバクタム系抗生物質およびその中間体を製造するための化学的方法
WO2019058346A1 (en) * 2017-09-22 2019-03-28 Novartis Ag MONOBACTAM ADMINISTRATION IN ASSOCIATION WITH ANTIBIOTIC AGENT FOR THE TREATMENT OF COMPLICATED INTRA-ABDOMINAL INFECTION
KR102455390B1 (ko) * 2017-10-02 2022-10-17 아릭사 파마슈티컬스 인코포레이티드 아즈트레오남 유도체 및 이의 용도
EP3691639B1 (en) 2017-10-02 2023-11-15 Merck Sharp & Dohme LLC Chromane monobactam compounds for the treatment of bacterial infections
US20200360349A1 (en) * 2017-11-10 2020-11-19 Novartis Ag Administration of monobactam for the treatment of urinary tract infection
WO2019144969A1 (zh) 2018-01-29 2019-08-01 南京明德新药研发股份有限公司 用于治疗细菌感染的单环β-内酰胺化合物
KR102017784B1 (ko) * 2018-04-11 2019-09-03 전북대학교산학협력단 민감성 및 선택성을 개선한 캠필로박터 검출용 배지 조성물 및 이를 이용한 캠필로박터 검출방법
KR102017785B1 (ko) * 2018-05-17 2019-09-03 전북대학교산학협력단 민감성 및 선택성을 개선한 캠필로박터 선택증균용 배지 조성물 및 이를 이용한 캠필로박터 검출방법
SG11202101255UA (en) 2018-08-09 2021-03-30 Antabio Sas Diazabicyclooctanones as inhibitors of serine beta-lactamases
US11905286B2 (en) 2018-08-09 2024-02-20 Antabio Sas Diazabicyclooctanones as inhibitors of serine beta-lactamases
KR20210083285A (ko) 2018-11-13 2021-07-06 난징 산홈 팔마세우티칼 컴퍼니 리미티드 모노박탐 화합물 및 그의 사용
WO2020125670A1 (zh) * 2018-12-18 2020-06-25 南京明德新药研发有限公司 单环β-内酰胺化合物在制药中的应用
EP4046998B1 (en) * 2019-11-22 2024-02-28 Suzhou Erye Pharmaceutical Co., Ltd. Sulfonylurea ring substituted monocyclic beta-lactam antibiotics
CN111303144B (zh) * 2019-12-13 2020-11-27 苏州信诺维医药科技有限公司 一种治疗细菌感染的化合物
CN114828850B (zh) 2019-12-19 2024-08-13 深圳嘉科生物科技有限公司 化合物在制药中的应用
EP3838266A1 (en) 2019-12-20 2021-06-23 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Microfluidic production of biofunctionalized giant unilamellar vesicles for targeted intracellular cargo delivery
CN113754651B (zh) 2020-06-02 2023-04-18 中国医学科学院医药生物技术研究所 一种β-内酰胺化合物、其用途及其制备方法
WO2022011626A1 (en) * 2020-07-16 2022-01-20 Ningxia Academy Of Agriculture And Forestry Sciences Novel monobactam compounds, their preparation and use as antibacterial agents
WO2022185240A1 (en) 2021-03-04 2022-09-09 Bp Asset Vi, Inc. Formulation of a monobactam antibiotic
WO2022185241A1 (en) 2021-03-04 2022-09-09 Bp Asset Vi, Inc. Process for manufacturing a monobactam antibiotic
GEAP202416514A (en) 2021-11-18 2024-08-26 Merck Sharp & Dohme Llc Chromane amidine monobactam antibiotics
CN115304594B (zh) 2022-10-12 2023-02-14 苏州二叶制药有限公司 磺酰脲环取代的化合物的盐型及其晶型

Family Cites Families (70)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ205240A (en) 1980-02-07 1984-07-31 Squibb & Sons Inc Sulphonamide derivatives,being starting materials for producing beta-lactams
EP0048953B1 (en) 1980-09-29 1988-03-09 E.R. Squibb &amp; Sons, Inc. Beta-lactam antibiotics
US4775670A (en) 1980-09-29 1988-10-04 E. R. Squibb & Sons, Inc. 2-oxo-1-azetidinesulfonic acid salts
WO1982001873A1 (en) * 1980-12-05 1982-06-10 Takeda Chemical Industries Ltd 1-sulfo-2-oxoazetidine derivatives and process for their preparation
JPS58189176A (ja) * 1982-04-30 1983-11-04 Takeda Chem Ind Ltd １−スルホ−２−アゼチジノン誘導体およびその製造法
JPS58210061A (ja) * 1982-05-31 1983-12-07 Takeda Chem Ind Ltd １−スルホ−２−オキソアゼチジン誘導体、その製造法および用途
US4782147A (en) 1980-12-05 1988-11-01 Takeda Chemical Industries, Ltd. 1-sulfo-2-oxoazetidine derivatives and their production
CA1262128A (en) 1981-08-27 1989-10-03 Christian N. Hubschwerlen .beta.-lactams
IL67451A (en) 1981-12-25 1987-10-20 Takeda Chemical Industries Ltd 4-cyano-2-azetidinones and production thereof and process for the preparation of 4-carbamoyl-2-azetidinones using them
EP0090505B1 (en) 1982-03-03 1990-08-08 Genentech, Inc. Human antithrombin iii, dna sequences therefor, expression vehicles and cloning vectors containing such sequences and cell cultures transformed thereby, a process for expressing human antithrombin iii, and pharmaceutical compositions comprising it
AU564150B2 (en) * 1982-04-30 1987-08-06 Takeda Chemical Industries Ltd. 1-sulfo-2-azetidinone derivatives
HU189290B (en) 1982-05-31 1986-06-30 Banyu Pharmaceutical Co Ltd,Jp Process for preparing new 2-oxo-1-azetidine-sulphonic acid derivatives and pharmaceutically acceptable salts thereof, further pharmaceutical compositions containing such derivatives as active substances
EP0096297B1 (de) 1982-06-03 1988-06-15 F. HOFFMANN-LA ROCHE & CO. Aktiengesellschaft Verfahren zur Herstellung von 1-Sulfo-2-oxoazetidinderivaten
JPS6153282A (ja) 1984-08-22 1986-03-17 Banyu Pharmaceut Co Ltd 単環β−ラクタム誘導体
JPS6153283A (ja) 1984-08-24 1986-03-17 Banyu Pharmaceut Co Ltd ２−オキソ−１−アゼチジンスルホン酸誘導体
US4610824A (en) 1984-10-09 1986-09-09 E. R. Squibb & Sons, Inc. Hydrazide derivatives of monocyclic beta-lactam antibiotics
US5112968A (en) 1989-07-28 1992-05-12 E. R. Squibb & Sons, Inc. Monobactam hydrazide derivatives
ES2308787T3 (es) 1996-08-16 2008-12-01 Schering Corporation Antigenos de superficie de celular de mamiferos; reactivos relacionados.
US6111090A (en) 1996-08-16 2000-08-29 Schering Corporation Mammalian cell surface antigens; related reagents
JP2001520039A (ja) 1997-10-21 2001-10-30 ヒューマン ジノーム サイエンシーズ， インコーポレイテッド ヒト腫瘍壊死因子レセプター様タンパク質、ｔｒ１１，ｔｒ１１ｓｖ１およびｔｒ１１ｓｖ２
AU2591599A (en) 1998-02-09 1999-08-23 Genentech Inc. Novel tumor necrosis factor receptor homolog and nucleic acids encoding the same
WO2001003720A2 (en) 1999-07-12 2001-01-18 Genentech, Inc. Promotion or inhibition of angiogenesis and cardiovascularization by tumor necrosis factor ligand/receptor homologs
CN101899114A (zh) 2002-12-23 2010-12-01 惠氏公司 抗pd-1抗体及其用途
JP2007524596A (ja) 2003-02-28 2007-08-30 トランスフォーム・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 共結晶医薬組成物
US7618632B2 (en) 2003-05-23 2009-11-17 Wyeth Method of treating or ameliorating an immune cell associated pathology using GITR ligand antibodies
WO2005007190A1 (en) 2003-07-11 2005-01-27 Schering Corporation Agonists or antagonists of the clucocorticoid-induced tumour necrosis factor receptor (gitr) or its ligand for the treatment of immune disorders, infections and cancer
WO2005055808A2 (en) 2003-12-02 2005-06-23 Genzyme Corporation Compositions and methods to diagnose and treat lung cancer
GB0409799D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Isis Innovation Method of generating improved immune response
US20060002932A1 (en) 2004-06-04 2006-01-05 Duke University Methods and compositions for enhancement of immunity by in vivo depletion of immunosuppressive cell activity
PT2343320T (pt) 2005-03-25 2018-01-23 Gitr Inc Anticorpos anti-gitr e as suas utilizações
DK2439273T3 (da) 2005-05-09 2019-06-03 Ono Pharmaceutical Co Humane monoklonale antistoffer til programmeret død-1(pd-1) og fremgangsmåder til behandling af cancer ved anvendelse af anti-pd-1- antistoffer alene eller i kombination med andre immunterapeutika
PT1907424E (pt) 2005-07-01 2015-10-09 Squibb & Sons Llc Anticorpos monoclonais humanos para o ligando 1 de morte programada (pd-l1)
WO2007133822A1 (en) 2006-01-19 2007-11-22 Genzyme Corporation Gitr antibodies for the treatment of cancer
AU2007300531A1 (en) 2006-09-27 2008-04-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel inhibitors of beta-lactamase
BR122017025062B8 (pt) 2007-06-18 2021-07-27 Merck Sharp & Dohme anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo para o receptor de morte programada humano pd-1, polinucleotídeo e composição compreendendo o referido anticorpo ou fragmento
US8591886B2 (en) 2007-07-12 2013-11-26 Gitr, Inc. Combination therapies employing GITR binding molecules
ES2533826T3 (es) 2008-01-18 2015-04-15 Merck Sharp & Dohme Corp. Inhibidores de beta-lactamasa
CN101970499B (zh) 2008-02-11 2014-12-31 治疗科技公司 用于肿瘤治疗的单克隆抗体
EP2262837A4 (en) 2008-03-12 2011-04-06 Merck Sharp & Dohme PD-1 BINDING PROTEINS
NZ590667A (en) 2008-07-02 2013-01-25 Emergent Product Dev Seattle Tgf-b antagonist multi-target binding proteins
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
JP2012500855A (ja) 2008-08-25 2012-01-12 アンプリミューン、インコーポレーテッド Ｐｄ−１アンタゴニストおよび感染性疾患を処置するための方法
AU2009288730B2 (en) 2008-08-25 2013-06-20 Amplimmune, Inc. Compositions of PD-1 antagonists and methods of use
CN102149820B (zh) 2008-09-12 2014-07-23 国立大学法人三重大学 能够表达外源gitr配体的细胞
CN102203100B (zh) 2008-10-31 2014-08-27 盐野义制药株式会社 具有邻苯二酚基团的头孢菌素
EP3255060A1 (en) 2008-12-09 2017-12-13 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-pd-l1 antibodies and their use to enhance t-cell function
JP5844159B2 (ja) 2009-02-09 2016-01-13 ユニヴェルシテ デクス−マルセイユＵｎｉｖｅｒｓｉｔｅ Ｄ’Ａｉｘ−Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ Ｐｄ−１抗体およびｐｄ−ｌ１抗体ならびにその使用
US20120053350A1 (en) 2009-04-30 2012-03-01 Ian Mangion Preparation of alkyl esters of n-protected oxo-azacycloalkylcarboxylic acids
KR101790802B1 (ko) 2009-09-03 2017-10-27 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 항-ｇｉｔｒ 항체
GB0919054D0 (en) 2009-10-30 2009-12-16 Isis Innovation Treatment of obesity
WO2011061760A1 (en) 2009-11-18 2011-05-26 Cadila Healthcare Limited Novel antithrombotic agents
WO2011066342A2 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Amplimmune, Inc. Simultaneous inhibition of pd-l1/pd-l2
CA2785907A1 (en) 2009-12-29 2011-07-28 Emergent Product Development Seattle, Llc Ron binding constructs and methods of use thereof
JP2012027846A (ja) 2010-07-27 2012-02-09 Sony Corp 情報処理装置、情報表示方法及びコンピュータプログラム
DK2646436T3 (en) * 2010-11-29 2015-06-29 Pfizer monobactams
BR112014004310B8 (pt) 2011-08-25 2023-04-18 Merck Sharp & Dohme Composto de pirimidina inibidor da enzima fosfodiesterase 10, composição farmacêutica, uso de um composto
EP3052497B1 (en) 2011-09-13 2017-06-28 Wockhardt Limited Nitrogen containing compounds and their use
WO2013039954A1 (en) 2011-09-14 2013-03-21 Sanofi Anti-gitr antibodies
KR101764096B1 (ko) 2011-11-28 2017-08-02 메르크 파텐트 게엠베하 항-ｐｄ-ｌ1 항체 및 그의 용도
US8796257B2 (en) 2011-12-02 2014-08-05 Naeja Pharmaceutical Inc. Bicyclic compounds and their use as antibacterial agents and β-lactamase inhibitors
UY34585A (es) 2012-01-24 2013-09-02 Aicuris Gmbh & Co Kg Compuestos b-lactámicos sustituidos con amidina, su preparación y uso
EP2814483A2 (en) 2012-02-15 2014-12-24 Rempex Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating bacterial infections
UY34632A (es) 2012-02-24 2013-05-31 Novartis Ag Compuestos de oxazolidin- 2- ona y usos de los mismos
TW201343645A (zh) 2012-03-30 2013-11-01 Cubist Pharm Inc １，３，４－□二唑及１，３，４－噻二唑β－內醯胺酶抑制劑
KR20150003777A (ko) 2012-03-30 2015-01-09 큐비스트 파마슈티컬즈 인코포레이티드 이속사졸 β-락타마제 억제제
UY34887A (es) 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
BR112015003592B1 (pt) 2012-08-25 2020-04-14 Wockhardt Ltd derivados de 1,6-diazabiciclo[3,2,1]octan-7-ona e seu uso no tratamento de infecções bacterianas
CN103044416A (zh) 2012-12-17 2013-04-17 浙江华方药业有限责任公司 一种卡芦莫南钠的合成方法
WO2014141132A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Naeja Pharmaceutical Inc. NEW HETEROCYCLIC COMPOUNDS AND THEIR USE AS ANTIBACTERIAL AGENTS AND β-LACTAMASE INHIBITORS
WO2015103583A1 (en) 2014-01-06 2015-07-09 President And Fellows Of Harvard College Monobactams and methods of their synthesis and use

Also Published As

Publication number Publication date
EA030850B1 (ru) 2018-10-31
ES2862203T3 (es) 2021-10-07
MA39777B1 (fr) 2019-03-29
EP3122745A1 (en) 2017-02-01
US20200276169A1 (en) 2020-09-03
EA201691766A1 (ru) 2016-12-30
SMT201900218T1 (it) 2019-05-10
UA121383C2 (uk) 2020-05-25
MA39777A (fr) 2017-02-01
PH12016501577B1 (en) 2022-04-29
EP3511328B1 (en) 2021-03-03
WO2015148379A1 (en) 2015-10-01
DK3511328T3 (da) 2021-03-22
PT3122745T (pt) 2019-04-30
JP2017510580A (ja) 2017-04-13
SI3122745T1 (sl) 2019-05-31
CU24441B1 (es) 2019-09-04
HUE042134T2 (hu) 2019-06-28
TW201540712A (zh) 2015-11-01
ES2719136T3 (es) 2019-07-08
CU20160131A7 (es) 2017-02-02
CA2939254C (en) 2023-02-14
PL3122745T3 (pl) 2019-08-30
MY179292A (en) 2020-11-03
CN106164072B (zh) 2019-10-01
BR112016020333B1 (pt) 2022-08-09
EP3122745B1 (en) 2019-02-27
PH12016501577A1 (en) 2016-10-03
US20160051523A1 (en) 2016-02-25
PE20161371A1 (es) 2016-12-21
HRP20190501T1 (hr) 2019-05-03
AP2016009374A0 (en) 2016-08-31
ZA201605565B (en) 2017-09-27
AU2015236369A1 (en) 2016-09-01
KR101733441B1 (ko) 2017-05-10
CA2939254A1 (en) 2015-10-01
EP3511328A1 (en) 2019-07-17
KR20160110541A (ko) 2016-09-21
US10369138B2 (en) 2019-08-06
IL247259B (en) 2020-02-27
CL2016002285A1 (es) 2016-12-30
US20190231752A1 (en) 2019-08-01
SV2016005274A (es) 2018-06-12
ECSP16073620A (es) 2018-12-31
MX2016011822A (es) 2016-12-02
DK3122745T3 (en) 2019-04-08
US9174978B2 (en) 2015-11-03
AU2015236369B2 (en) 2017-02-16
US20150266867A1 (en) 2015-09-24
NZ723114A (en) 2020-12-18
SG11201606711UA (en) 2016-10-28
GT201600183A (es) 2018-12-18
CN106164072A (zh) 2016-11-23
IL247259A0 (en) 2016-09-29
TWI714525B (zh) 2021-01-01
CY1121701T1 (el) 2020-07-31
LT3122745T (lt) 2019-04-10
MX373444B (es) 2020-04-30
BR112016020333A2 (pt) 2017-10-24
JP6153674B2 (ja) 2017-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3122745B1 (en) Monobactam organic compounds for the treatment of bacterial infections
JP6670333B2 (ja) メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤としての３−テトラゾリル−ベンゼン−１，２−ジスルホンアミド誘導体
US10160726B2 (en) Quinolone derivatives as antibacterials
US20230126352A1 (en) Macrocyclic rip2-kinase inhibitors
EP3519419B1 (en) Beta-lactamase inhibitors
HK1230592B (en) Monobactam organic compounds for the treatment of bacterial infections
HK1230592A1 (en) Monobactam organic compounds for the treatment of bacterial infections
NZ723114B2 (en) Monobactam organic compounds for the treatment of bacterial infections
US20260125396A1 (en) Macrocyclic rip2-kinase inhibitors
NZ786969A (en) Beta-lactamase inhibitors
HK40005785B (en) Beta-lactamase inhibitors
HK40005785A (en) Beta-lactamase inhibitors