RS59056B1

RS59056B1 - Derivati benzimidazola kao inhibitori bromodomena

Info

Publication number: RS59056B1
Application number: RS20190986A
Authority: RS
Inventors: Rino Antonio Bit; John Alexander Brown; Philip G Humphreys; Katherine Louise Jones
Original assignee: Glaxosmithkline Ip Dev Ltd
Priority date: 2015-03-19
Filing date: 2016-03-17
Publication date: 2019-08-30
Also published as: BR112017019779B1; CY1121855T1; IL254318A0; MA41778A; US11053212B2; SG11201707356QA; DK3271349T3; KR20170129871A; SI3271349T1; PT3271349T; CA2979504A1; MX2017012023A; PH12017501620A1; EP3271349A1; CO2017009992A2; CN107635989B; ME03485B; MA46981A; CR20170430A; CA2979504C

Description

Opis

POLJE PRONALASKA

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenja, na procese za njihovu izradu, na kompozicije koje ih sadrže i na njihovu upotrebu u tretmanu različitih poremećaja, posebno inflamatornih i autoimunih bolesti, kao što su reumatoidni artritis; i kanceri.

POREKLO PRONALASKA

[0002] Genomi eukariotičnih organizama su visoko organizovani unutar nukleusa ćelije. Dugački lanci dvostruke DNK su obmotani oko oktomera histon proteina (koji najčešće uključuju dve kopije histona H2A, H2B, H3 i H4) da formiraju nukleozom. Ova bazna jedinica se nakon toga dalje komprimuje agregacijom i sklapanjem nukleozoma da se formira visoko kondenzovana struktura hromatina. Moguća su brojna različita stanja kondenzacije a čvrstina ove strukture varira u toku ćelijskog ciklusa, pri čemu je najkompaktnija u toku procesa ćelijske deobe. Struktura hromatina igra kritičnu ulogu u regulaciji transkripcije gena, do koje ne može efikasno da dođe od visoko kondenzovanog hromatina. Struktura hromatina je kontrolisana serijama post translacionih modifikacija na histon proteinima, posebno histonima H3 i H4 a najčešće u okviru histon repića koji se pružaju izvan strukture jezgra nukleozoma. Ove modifikacije uključuju acetilaciju, metilaciju, fosforilaciju, ubikvitinilaciju, SUMOilaciju. Ove epigenetičke oznake se pišu i brišu specifičnim enzimima, što stavlja oznake na specifičnim ostacima unutar histon repića, čime se formira epigenetski kod koji nakon toga ćelije interpretiraju da se omogući regulacija ekspresije gena.

[0003] Acetilacija histona je najčešće povezana sa aktivacijom transkripcije gena, tako što modifikacija relaksira interakciju DNK i histon oktomera promenom elektrostatike. Pored ove fizičke promene, specifični proteini prepoznaju i vezuju se za acetilovane lizin ostatke u sklopu histona za očitavanje epigenetskog koda. Bromodomeni su mali (~110 amino kiselina) posebni domeni u okviru proteina koji se obično, ali ne ekskluzivno, vezuju za acetilovane lizin ostatke u kontekstu histona. Postoji familija od približno 50 proteina za koje se zna da sadrže bromodomene i imaju različite funkcije unutar ćelije.

[0004] BET familija bromodomena koja sadrži proteine uključuje 4 proteina (BRD2, BRD3, BRD4 i BRDT) koji sadrže tandem bromodomena sposoban da se veže za dva acetilovana lizin ostatka u neposrednoj blizini, povećavajući specifičnost interakcije. Označavanjem od N-terminalnog završetka svakog BET proteina, tandem bromodomena se obično označava kao vezujući domen 1 (BD1) i vezujući domen 2 (BD2) (Chung i saradnici, J Med. Chem,. 2011, 54, 3827-3838).

Inhibicija vezivanja BET proteina za acetilovane lizin ostatke ima potencijal da ublaži progresiju nekoliko bolesti, uključujući, ali bez ograničenja na, kancer (Dawson M.A. i saradnici, Nature, 2011: 478(7370):529-33; Wyce, A. i saradnici, Oncotarget. 2013:

4(12):2419-29), sepse (Nicodeme E. i saradnici, Nature, 2010: 468(7327):1119-23), autoimune i inflamatorne bolesti kao što su reumatoidni artritis i multiple skleroza (Mele D.A. i saradnici, Journal Experimental Medicine, 2013: 210(11):2181-90), insuficijenciju srca (Anand P. i saradnici, Cell, 2013: 154(3):569-82) i fibrozu pluća (Tang X. i saradnici, Molecular Pharmacology, 2013: 83(1):.283-293). US2015051208 i US2014336190 otkrivaju derivate benzoimidazola kao inhibitore bromodomena.

[0005] Postoji potreba za hemijskim jedinjenjima koja inhibiraju aktivnost bromodomena, preciznije, jedinjenjima koja inhibiraju vezivanje BET proteina za acetilovane lizin ostatke i stoga bi bila korisna u tretmanu, na primer, autoimunih i inflamatornih bolesti i kancera.

KRATAK SADRŽAJ PRONALASKA

[0006] U prvom aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I) i njihove soli:

pri čemu

R1i R2su svaki nezavisno vodonik ili metil grupa pod uslovom da je najmanje jedan od R1i R2metil grupa;

R3je C1-6alkil, C1-6alkoksi, cikloalkil, heterocikloalkil ili -CHR5(CH2)aR6grupa;

R4je vezan na položaju 5 ili 6 benzimidazola i predstavljen je kao

R5je vodonik, C1-3alkil, C1-3alkoksi ili -(CH2)dOR9grupa;

R6je vodonik, C1-3alkil, C1-3alkoksi, -(CH2)eOR10, hidroksi, -NR11R12, halo, cikloalkil, heterocikloalkil, aril ili heteroaril grupa, gde navedena C1-3alkil, C1-3alkoksi, -(CH2)eOR10, cikloalkil, heterocikloalkil, aril ili heteroaril grupa može da bude opciono supstituisana sa jedan ili dva supstituenta nezavisno izabrana iz grupe koja sadrži C1-3alkil, C1-3alkoksi, halo, -CH2OH, -COOH i -COCH3grupu;

R7je vodonik, C1-6alkil, -(CH2)gcikloalkil, -(CH2)hheterocikloalkil ili -CR13R14R15grupa; R8je vodonik, C1-6alkil, cikloalkil, heterocikloalkil ili -CHR16R17pri čemu je navedena C1-

6alkil grupa opciono supstituisana sa C1-3alkoksi grupom a pri čemu je R16vodonik ili C1-

3alkil grupa i R17je cikloalkil ili heterocikloalkil grupa;

R9, R10, R11, R12, R14, R15i R18su svaki nezavisno vodonik ili C1-3alkil grupa;

R13je vodonik, hidroksi, -CH2OR18, halo, -COOH, -CONH2, 1H-imidazol-4-il, -SH, -SeH, C1-

3alkil, C1-3alkoksi, fenil ili 4-hidroksifenil grupa, pri čemu navedena C1-3alkil ili C1-3alkoksi grupa može da bude opciono supstituisana sa halo ili hidroksi, -NHC(=NH2)NH2, -NH2, -COOH, -CONH2ili -SCH3grupom;

a je 0, 1, 2 ili 3;

b je 0 ili 1;

c je 1, 2 ili 3 uz uslov da kada je b 1, c je 2 ili 3;

d i e su svaki nezavisno 1 ili 2; i

g i h su svaki nezavisno 0, 1 ili 2.

[0007] Nađeno je da jedinjenja formule (I) i njihove soli inhibiraju vezivanje bromodomen proteina; preciznije, vezivanje BET familije bromodomen proteina za, na primer, acetilovane lizin ostatke. Jedinjenja formule (I) ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, mogu prema tome da imaju upotrebu u terapiji, na primer, u tretmanu autoimunih i inflamatornih bolesti, kao što su reumatoidni artritis; i kanceri.

[0008] U daljem aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutske kompozicije koje uključuju jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

DEFINICIJE

[0009] Kako se ovde koristi, naziv "bromodomen" se odnosi na evoluciono i strukturno konzervirane module (približno dužine 110 amino kiselina) koji vezuju acetilovane lizin ostatke, kao što su oni na N-terminalnim repićima histona. Oni su protein domeni koji čine deo mnogo većeg bromodomena koji sadrži proteine (BCPi), od kojih mnogi imaju ulogu u regulaciji transkripcije gena i/ili remodeliranja hromatina. Humani genom enkodira najmanje 57 bromodomena.

[0010] Kako se ovde koristi, naziv "BET" se odnosi na bromodomen i ekstraterminalni domen familije bromodomena koji sadrži proteine koji obuhvataju BRD2, BRD3, BRD4 i BRDT.

[0011] Kako se ovde koristi, naziv "BET inhibitor" se odnosi na jedinjenje koje je sposobno da inhibira vezivanje jednog ili više BET familije bromodomena koji sadrži proteine (na primer BRD2, BRD3, BRD4 ili BRDT) za, na primer, acetilovane lizin ostatke.

[0012] Kako se ovde koristi, naziv "alkil" se odnosi na zasićeni ugljovodonični lanac, ravan ili račvast, koji ima navedeni broj atoma ugljenika. Na primer, C1-6alkil se odnosi na alkil grupu koja ima od 1 do 6 atoma ugljenika. Ukoliko nije drugačije navedeno, alkil grupe su nesupstituisane. Naziv "alkil" uključuje, ali bez ograničenja na, metil, etil, propil (n-propil i izopropil), butil (n-butil, sec-butil, izobutil i terc-butil), pentil i heksil.

[0013] Kako se ovde koristi, naziv "alkoksi" se odnosi na -O-alkil grupu pri čemu je "alkil" prethodno definisan.

[0014] Kako se ovde koristi, naziv "cikloalkil" se odnosi na zasićeni, monociklični ugljovodonični prsten koji ima 3 (ciklopropil), 4 (ciklobutil), 5 (ciklopentil), 6 (cikloheksil) ili 7 (cikloheptil) atoma ugljenika.

[0015] Kako se ovde koristi, naziv "heterocikloalkil" se odnosi na zasićeni ili nezasićeni 3 do 7 člani monociklični ili biciklični prsten, koji mora da sadrži 1 ili 2 atoma koji nisu ugljenik a koji su izabrani od azota, kiseonika i sumpora. Heterocikloalkil grupe mogu da sadrže jednu ili više C(O), S(O) ili SO2grupa. Međutim, heterocikloalkil grupe nisu aromatične.

Heterocikloalkil grupe koje sadrže više od jednog heteroatoma mogu da sadrže različite heteroatome. "5 ili 6 člani heterocikloalkil" se odnosi zasićeni ili nezasićeni 5 ili 6 člani monociklični prsten koji mora da sadrži 1 ili 2 atoma ugljenika različita od ugljenika, izabrana od azota, kiseonika i sumpora. Heterocikloalkil obuhvata, ali bez ograničenja na, pirolidin, piperidin, piperazin, oksetan, tetrahidrofuran, tetrahidro-2H-piran, morfolin, morfolin-3-on, piperidin-2-on, pirimidin-2,4(1H,3H)-dion, tiomorfolin i tiomorfolin 1,1-dioksid.

[0016] Kako se ovde koristi, naziv "aril" se odnosi na monociklični ili biciklični ugljovodonični aromatični radikal. Aril uključuje, na primer, fenil i naftil.

[0017] Kako se ovde koristi, naziv "heteroaril" se odnosi na monociklični ili biciklični aromatični radikal koji sadrži jedan ili više heteroatoma izabrana od S, N i O. Ilustrativni primeri heteroarila korisnih u ovom pronalasku uključuju, ali se ne ograničavaju samo na, furanil, tienil, pirolil, imidazolil, pirazolil, triazolil, tetrazolil, tiazolil, oksazolil, izoksazolil, oksadiazolil, tiadiazolil, izotiazolil, piridinil, piridaziil, pirazinil, pirimidinil, triazinil, benzofuranil, izobenzofuril, 2,3-dihidrobenzofuril, 1,3-benzodioksolil, dihidrobenzodioksinil, benzotienil, indolizinil, indolil, izoindolil, dihidroindolil, benzimidazolil, dihidrobenzimidazolil, benzoksazolil, dihidrobenzoksazolil, benztiazolil, benzoizotiazolil, dihidrobenzoizotiazolil, indazolil, imidazopiridinil, pirazolopiridinil, benzotriazolil, triazolopiridinil, purinil, hinolinil, tetrahidrohinolinil, izohinolinil, tetrahidroizohinolinil, hinoksalinil, cinolinil, ftalazinil, hinazolinil, 1,5-naftiridinil, 1,6-naftiridinil, 1,7-naftiridinil, 1,8-naftiridinil i pteridinil.

[0018] Kako se ovde koristi, izraz "opciono supstituisan" pokazuje da grupa može da bude nesupstituisana ili supstituisana sa jednim ili više supstituenata kako je ovde definisano. "Supstituisan" u odnosu na grupu pokazuje da je atom vodonika vezan za atom koji je član grupe zamenjen sa jednim od definisanih supstituenata.

[0019] Kako se ovde koristi, naziv "farmaceutski prihvatljive soli" se odnosi na soli koje zadržavaju željenu biološku aktivnost osnovnog jedinjenja i ispoljavaju minimalne neželjene toksikološke efekte. Ove farmaceutski prihvatljive soli mogu da se izrade in situ u toku finalne izolacije i prečišćavanja jedinjenja ili odvojenom reakcijom prečišćenog jedinjenja u svom obliku slobodne kiseline ili slobodne baze sa odgovarajućom bazom ili kiselinom, tim redom. Osim toga, farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja formule (I) mogu da se izrade u toku naknadne reakcije oblika slobodne kiseline ili baze, na primer, in situ u toku izrade farmaceutske formulacije.

[0020] Kako se ovde koristi, izraz "vezan za položaj 5 ili 6 benzimidazola" se odnosi na vezivanje navedenog supstituenta na položaj 5 ili 6 kako je označeno u niže datoj strukturi:

[0021] Kako se ovde koristi, naziv "tretman" se odnosi na profilaksu stanja, poboljšanje ili stabilizaciju navedenog stanja, smanjenje ili eliminaciju simptoma stanja, usporavanje ili eliminaciju progresije stanja i prevenciju ili odlaganje ponovne pojave stanja kod prethodno obolelog pacijenta ili subjekta. U jednom izvođenju, tretman se odnosi na poboljšanje ili stabilizaciju navedenog stanja, redukciju ili eliminaciju simptoma stanja ili usporavanje ili eliminaciju progresije stanja.

[0022] Kako se ovde koristi, naziv "terapeutski efektivna količina" se odnosi na količinu jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, koja će da dovede do željenog biološkog odgovora u životinjskom ili ljudskom organizmu.

[0023] Kako se ovde koristi, naziv "subjekt" se odnosi na životinjski ili ljudski organizam.

[0024] Jasno je da sve što se odnosi na "jedinjenje(a) iz pronalaska" označava jedinjenje formule (I) kao slobodnu bazu ili kao so, na primer farmaceutski prihvaltjivu so.

IZJAVA O PRONALASKU

[0025] U prvom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja formule (I) ili njihove soli:

pri čemu

R4je vezan na položaju 5 ili 6 benzimidazola i predstavljen je kao

R5je vodonik, C1-3alkil, C1-3alkoksi ili -(CH2)dOR9grupa;

R6je vodonik, C1-3alkil, C1-3alkoksi, -(CH2)eOR10, hidroksi, -NR11R12, halo, cikloalkil, heterocikloalkil, aril ili heteroaril grupa, pri čemu navedena C1-3alkil, C1-3alkoksi, -(CH2)eOR10, cikloalkil, heterocikloalkil, aril ili heteroaril grupa može opciono da bude supstituisana sa jedan ili dva supstituenta nezavisno izabrana iz grupe koja sadrži C1-3alkil, C1-

3alkoksi, halo, -CH2OH, -COOH i -COCH3grupe;

R7je vodonik, C1-6alkil, -(CH2)gcikloalkil, -(CH2)hheterocikloalkil ili -CR13R14R15grupa; R8je vodonik, C1-6alkil, cikloalkil, heterocikloalkil ili -CHR16R17grupa pri čemu je navedena C1-6alkil grupa opciono supstituisana sa C1-3alkoksi grupom i gde je R16vodonik ili C1-3alkil grupa a R17je cikloalkil ili heterocikloalkil grupa;

R9, R10, R11, R12, R14, R15i R18su svaki nezavisno vodonik ili C1-3alkil grupa;

R13je vodonik, hidroksi, CH2OR18, halo, -COOH, -CONH2, 1H-imidazol-4-il, -SH, -SeH, C1-

a je 0, 1, 2 ili 3;

b je 0 ili 1;

c je 1, 2 ili 3 uz uslov da kada je b 1, c je 2 ili 3;

d i e su svaki nezavisno 1 ili 2; i

g i h su svaki nezavisno 0, 1 ili 2.

[0026] U daljem aspektu ovog pronalaska, R1i R2su svaki metil grupa.

[0027] U daljem ostvarenju, R3predstavlja 5 ili 6 članu heterocikloalkil grupu ili -CHR5R6grupu gde R5predstavlja vodonik ili C1-3alkil grupu a R6predstavlja 5 ili 6 članu heterocikloalkil grupu, gde dalje navedena heterocikloalkil grupa može da bude opciono supstituisana sa C1-3alkil ili C(O)CH3grupom.

[0028] U daljem ostvarenju, R6je izabran iz grupe koja se sastoji od:

[0029] U daljem ostvarenju ovog pronalaska, R6je:

[0030] U daljem ostvarenju ovog pronalaska, R3je -CHR5R6grupa gde je R5vodonik i R6je

[0031] U daljem ostvarenju ovog pronalaska, R3je izabran iz grupe koja se sastoji od:

gde Ra predstavlja vodonik ili C1-3alkil grupu.

[0032] U daljem aspektu ovog pronalaska, R5je vodonik.

[0033] U daljem aspektu ovog pronalaska, R3je -CHR5(CH2)aR6grupa, a dalje kada je R5-(CH2)dOR9, a je 0 i R6je -(CH2)eOR10grupa.

[0034] U daljem aspektu ovog pronalaska, svaki R5i R6predstavlja -CH2OCH3grupu,

[0035] U daljem aspektu ovog pronalaska, R4je vezan na položaju 5 benzimidazola.

[0036] U daljem aspektu ovog pronalaska, b je 0.

1

[0037] U daljem aspektu ovog pronalaska, c je 1.

[0038] U daljem aspektu ovog pronalaska, R4predstavlja:

[0039] U daljem aspektu ovog pronalaska, R7je vodonik, metil, izopropil, sec-butil, izobutil, -CH2-fenil, -CH2-4-hidroksifenil, -CH2OH, -CH(CH3)OH, -CH2SH, -CH2SeH, -(CH2)2SCH3, -CH2COOH, -(CH2)2COOH, -CH2CONH2, -(CH2)2CONH2, -(CH2)4NH2, (CH2)3NHC(=NH2)NH2ili -CH2-1H-imidazol-4-il grupa.

[0040] U daljem aspektu ovog pronalaska, R7je izopropil, sec-butil ili -CH(CH3)OH grupa.

[0041] U daljem aspektu ovog pronalaska, R7je -CH(CH3)OH grupa.

[0042] U daljem aspektu ovog pronalaska, R7je (R)-1-hidroksietil grupa.

[0043] U daljem aspektu ovog pronalaska, R8je vodonik.

[0044] U daljem aspektu ovog pronalaska, R8je C1-6alkil ili cikloalkil grupa.

[0045] U daljem aspektu ovog pronalaska, R8je izopropil, izobutil ili ciklopentil grupa.

[0046] U daljem aspektu ovog pronalaska, R8je izopropil grupa.

[0047] Ovaj pronalazak obuhvata sve kombinacije prethodno pomenutih grupa supstituenata.

[0048] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (Ia):

pri čemu

R3je cikloalkil, hetercikloalkil ili -CHR5(CH2)aR6grupa;

R5je vodonik, C1-3alkil ili C1-3alkoksi grupa;

R6je cikloalkil ili heterocikloalkil grupa, pri čemu navedena cikloalkil ili heterocikloalkil grupa može da bude opciono supstituisana sa jedan ili dva supstituenta izabrana iz grupe koja sadrži C1-3alkil, C1-3alkoksi, halo, -CH2OH, -COOH i -COCH3grupu;

R7je vodonik, C1-6alkil, -(CH2)gcikloalkil, -(CH2)hheterocikloalkil ili -CR13R14R15grupa; R8je vodonik, C1-6alkil, cikloalkil ili heterocikloalkil grupa, pri čemu je navedena C1-6alkil grupa opciono supstituisana sa C1-3alkoksi grupom;

3alkil, C1-3alkoksi, fenil ili 4-hidroksifenil grupa pri čemu navedena C1-3alkil ili C1-3alkoksi grupa može da bude opciono supstituisana sa halo, hidroksi, -NHC(=NH2)NH2, -NH2, -COOH, -CONH2ili -SCH3grupom;

R14, R15i R18su svaki nezavisno vodonik ili C1-3alkil grupa; i

a, g i h su svaki nezavisno 0, 1 ili 2.

[0049] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (Ib):

pri čemu

R3je cikloalkil, hetercikloalkil ili -CHR5(CH2)aR6grupa;

R5je vodonik, C1-3alkil ili C1-3alkoksi grupa;

R13je vodonik, hidroksi, -CH2OR18, halo, -COOH, -CONH2, 1H-imidazol-4-il, -SH, -SeH, C1-3alkil, C1-3alkoksi, fenil ili 4-hidroksifenil grupa pri čemu navedena C1-3alkil ili C1-3alkoksi grupa može da bude opciono supstituisana sa halo, hidroksi, -NHC(=NH2)NH2, -NH2, -COOH, -CONH2ili -SCH3grupom;

R14, R15i R18su svaki nezavisno vodonik ili C1-3alkil grupa; i

a, g i h su svaki nezavisno 0, 1 ili 2.

[0050] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (Ia):

pri čemu

R5je vodonik, C1-3alkil, C1-3alkoksi ili -(CH2)dOR9grupa;

R6je vodonik, C1-3alkil, C1-3alkoksi, -(CH2)eOR10, hidroksi, -NR11R12, halo, cikloalkil, heterocikloalkil, aril ili heteroaril grupa, pri čemu navedena C1-3alkil, C1-3alkoksi, -(CH2)eOR10, cikloalkil, heterocikloalkil, aril ili heteroaril grupa može da bude opciono supstituisana sa jedan ili dva supstituenta nezavisno izabrana iz grupe koja sadrži C1-3alkil, C1-

3alkoksi, halo, -CH2OH, -COOH i -COCH3grupu;

R7je C1-6alkil, -CH2OH, -CH2OCH3, -(CH2)2OCH3, -CH(CH3)OH ili -C(CH3)2OH grupa; R8je vodonik, C1-6alkil, cikloalkil ili heterocikloalkil grupa, pri čemu je navedena C1-6alkil grupa opciono supstituisana sa C1-3alkoksi grupom;

R9, R10, R11i R12su svaki nezavisno vodonik ili C1-3alkil grupa;

a je 0, 1 ili 2; i

d i e su svaki nezavisno 1 ili 2.

[0051] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (Ib):

1

pri čemu

R5je vodonik, C1-3alkil, C1-3alkoksi ili -(CH2)dOR9grupa;

3alkoksi, halo, -CH2OH, -COOH i -COCH3grupu;

R9, R10, R11i R12su svaki nezavisno vodonik ili C1-3alkil grupa;

a je 0, 1 ili 2; i

d i e su svaki nezavisno 1 ili 2.

[0052] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (Ia):

pri čemu

R3je cikloalkil, hetercikloalkil ili -CHR5(CH2)aR6grupa;

R5je vodonik ili C1-3alkil grupa;

R6je cikloalkil ili heterocikloalkil grupa, pri čemu navedena cikloalkil ili heterocikloalkil grupa može da bude opciono supstituisana sa jedan ili dva supstituenta nezavisno izabrana iz grupe koja sadrži C1-3alkil, C1-3alkoksi, halo, -CH2OH, -COOH i -COCH3grupu;

R7je C1-6alkil, -CH2OH, -CH2OCH3, -(CH2)2OCH3, -CH(CH3)OH ili -C(CH3)2OH grupa; R8je vodonik, C1-6alkil, cikloalkil ili heterocikloalkil grupa, pri čemu je navedena C1-6alkil grupa opciono supstituisana sa C1-3alkoksi grupom; i

a je 0, 1 ili 2.

[0053] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (Ib):

pri čemu

R3je cikloalkil, hetercikloalkil ili -CHR5(CH2)aR6grupa;

R5je vodonik ili C1-3alkil grupa;

a je 0, 1 ili 2.

[0054] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (Ia):

1

gde je R3izabran iz grupe koja se sastoji od:

gde je Ra vodonik ili C1-3alkil grupa;

R7je izopropil, sec-butil ili -CH(CH3)OH grupa; i

R8je izopropil, izobutil, sec-butil, terc-butil, ciklobutil, ciklopentil ili -CH2OCH3grupa.

[0055] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (Ib):

1

gde je R3izabran iz grupe koja se sastoji od:

gde je Ra vodonik ili C1-3alkil grupa;

R7je izopropil, sec-butil ili -CH(CH3)OH grupa; i

[0056] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (Ic):

1

gde je R6izabran iz grupe koja se sastoji od:

R7je izopropil, sec-butil ili -CH(CH3)OH grupa; i

R8je vodonik, C3-6alkil ili cikloalkil grupa.

[0057] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (Id):

gde je R6izabran iz grupe koja se sastoji od:

1

R7je izopropil, sec-butil ili -CH(CH3)OH grupa; i

R8je vodonik, C3-6alkil ili cikloalkil grupa.

[0058] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (Ic):

gde je R6izabran iz grupe koja se sastoji od:

R7je izopropil, sec-butil ili -CH(CH3)OH grupa; i

R8je izopropil, izobutil ili ciklopentil grupa.

[0059] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (Id):

1

gde je R6izabran iz grupe koja se sastoji od:

R7je izopropil, sec-butil ili -CH(CH3)OH grupa; i

R8je izopropil, izobutil ili ciklopentil grupa.

[0060] U daljem ostvarenju, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I) i njihove soli:

pri čemu

R4je vezan na položaju 5 ili 6 benzimidazola i predstavlja

2

R5je vodonik, C1-3alkil, C1-3alkoksi ili -(CH2)dOR9grupa;

3alkoksi, halo, -CH2OH, -COOH i -COCH3grupu;

R7je vodonik, C1-6alkil, -(CH2)gcikloalkil, -(CH2)hheterocikloalkil ili -CR13R14R15grupa; R8je C1-6alkil, cikloalkil, heterocikloalkil ili -CHR16R17grupa, pri čemu je navedena C1-6alkil grupa opciono supstituisana sa C1-3alkoksi grupom i gde je R16vodonik ili C1-3alkil grupa a R17je cikloalkil ili heterocikloalkil grupa;

R9, R10, R11, R12, R14, R15i R18su svaki nezavisno vodonik ili C1-3alkil grupa;

3alkil, C1-3alkoksi, fenil ili 4-hidroksifenil grupa, pri čemu navedena C1-3alkil ili C1-3alkoksi grupa može da bude opciono supstituisana sa halo, hidroksi, -NHC(=NH2)NH2, -NH2, -COOH, -CONH2ili -SCH3grupom;

a je 0, 1, 2 ili 3;

b je 0 ili 1;

c je 1, 2 ili 3 uz uslov da kada je b 1, c je 2 ili 3;

d i e su svaki nezavisno 1 ili 2; i

g i h su svaki nezavisno 0, 1 ili 2.

[0061] Specifični primeri jedinjenja formule (I) su:

terc-butil (2S,3R)-2-{[(1-{[(3R)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-6-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat;

terc-butil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

2-metilpropil (2S)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]oksi}etil)amino]-3-hidroksibutanoat;

2-metilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3S)-oksan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

terc-butil (2S,3R)-2-{[(1-{[(3R)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-{[(1-{[(3R)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat;

2-metilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-3-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

ciklopentil (2S)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]oksiletil)amino]propanoat;

propan-2-il (2S)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]oksi}etil)amino]-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-{[(1-{[(3R)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-6-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3R)-oksan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

ciklobutil (25,3R)-2-{[(1-{[(3R)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (25)-2-{[(1-{[(3R)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il)metil]amino}-3-metilbutanoat;

ciklopentil (2S)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]oksiletil)amino]-3-metoksipropanoat;

2,2-dimetilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3R)-oksan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

ciklobutil (2S,3R)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol- 5-il]oksiletil)amino]-3-hidroksibutanoat;

ciklopentil (2S)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]oksiletil)amino]propanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-3-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-{[(1-{[(3S)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-6-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat;

ciklobutil (2R,3S)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3R)-oksan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

(3S)-oksolan-3-il (2S,3R)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]oksi}etil)amino]-3-hidroksibutanoat;

ciklopentil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

(2S)-butan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

ciklopentil (2S)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]oksiletil)amino]-3-metoksipropanoat;

(3S)-oksolan-3-il (2S)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]oksi}etil)amino]-3-metilbutanoat;

(2S)-1-metoksipropan-2-il (2S)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]oksi}etil)amino]-3-metilbutanoat;

2-metilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3R)-oksan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

2-metilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(2S)-oksan-2-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

terc-butil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-2-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

2-metilpropil (2S,3R)-2-{[(1-{[(3S)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-6-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-2-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

2

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(2R)-oksan-2-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

2-metilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(2R)-oksan-2-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

terc-butil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(2R)-oksan-2-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol- 6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

2-metilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(2R)-oksan-2-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metillamino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat; ciklobutil (2R,3S)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3R)-oksan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

terc-butil (2S,3R)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]oksi}etil)amino]-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(1R)-1-(oksan-4-il)etil]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

terc-butil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(1R)-1-(oksan-4-il)etil]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({2-[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]etil}amino)-3-hidroksibutanoat;

2,2-dimetilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

ciklopentil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

2-metilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-2-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

2-metilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]oksi}etil)amino]-3-hidroksibutanoat;

2-hidroksi-2-metilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-2-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

2-metilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-2-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

terc-butil (2S,3R)-2-{[(1-{[(3S)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-6-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(2S)-oksan-2-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat; ciklobutil (2S,3R)-2-({[1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

terc-butil (2S,3R)-2-({[1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

ciklobutil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metoksibutan-2-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metoksibutan-2-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-{[(1-{[(3S)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat; ciklobutil (2S,3R)-2-{[(1-{[(3S)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat;

terc-butil (2S,3R)-2-{[(1-{[(3S)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S)-4-hloro-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)butanoat;

2

ciklopentil (2S)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-4-metilpentanoat;

2-metilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

(3S)-oksolan-3-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

2-metilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-{[(2R)-4-metilmorfolin-2-il]metil}-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

(3S)-oksolan-3-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

ciklobutil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3S)-piperidin-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

(3S)-oksolan-3-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-2-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

(3S)-oksolan-3-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(2R)-oksan-2-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

terc-butil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metoksibutan-2-il)-1H-1,3-benzodiazol- 5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

terc-butil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[1-(oksan-4-il)etil]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

2

terc-butil (2S,3R)-2-({2-[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]etil}amino)-3-hidroksibutanoat;

ciklopentil (2S)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(2S)-1-metoksipropan-2-il]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-metoksipropanoat;

terc-butil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3S)-piperidin-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

2-metilpropil (2S)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(2S)-1-metoksipropan-2-il]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]oksi}etil)amino]-3-metoksipropanoat; ciklopentil (2S)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksipropanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[1-(oksan-4-il)etil]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3S)-oksolan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

terc-butil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3S)-oksolan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

2-metilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(4-metilmorfolin-2-il)metil]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

2-metilpropil (2S)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]oksi}etil)amino]-3-hidroksibutanoat;

(3S)-oksolan-3-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-metoksibutanoat;

2-metilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(2S)-1-metoksipropan-2-il]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-3-hidroksi-2-({[2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3R)-oksan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)butanoat;

(3S)-oksolan-3-il (2S,3S)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(2S)-1-metoksipropan-2-il]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

2

terc-butil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(2S)-1-metoksipropan-2-il]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(2S)-1-metoksipropan-2-il]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]oksi}etil)amino]-3-hidroksibutanoat;

terc-butil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksolan-3-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

terc-butil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3R)-oksolan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3R)-oksolan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksolan-3-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat; i

propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metoksibutan-2-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat ili njihove soli.

[0062] U daljem ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje ili njegovu so, koje je izabrano iz grupe koja sadrži:

2-metilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3S)-oksan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metillamino)-3-hidroksibutanoat;

2

ciklobutil (2S,3R)-2-{[(1-{[(3R)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat;

propan-2-il (2S)-2-{[(1-{[(3R)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il)metil]amino}-3-metilbutanoat;

ciklopentil (2S)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]oksi}etil)amino]propanoat;

2

ciklobutil (2R,3S)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3R)-oksan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat; i

(3S)-oksolan-3-il (2S,3R)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]oksi}etil)amino]-3-hidroksibutanoat.

[0063] U daljem ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat, formule:

ili njegovu so.

[0064] U daljem ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je (2S,3R)-2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatna kiselina, formule:

ili njegovu so.

[0065] U daljem ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je (2S,3R)-izopropil 2-(((1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat, formule:

ili njegovu so.

[0066] U daljem ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je (2S,3R)-2-(((1-(1,3-dimetoksi-propan-2-il)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatna kiselina, formule:

ili njegovu so.

[0067] U daljem ostvarenju ovog pronalaska, jedinjenje formule (I) je u obliku slobodne baze. U jednom ostvarenju, jedinjenje formule (I) u obliku slobodne baze je bilo koje od Jedinjenja iz Primera 1 do 324.

[0068] Soli jedinjenja formule (I) uključuju farmaceutski prihvatljive soli i soli koje ne moraju da budu farmaceutski prihvatljive, ali mogu da budu korisne u izradi jedinjenja formule (I) i njihovih farmaceutski prihvatljivih soli.

[0069] U jednom ostvarenju ovog pronalaska, jedinjenje formule (I) je u obliku farmaceutski

1

prihvatljive soli. U jednom ostvarenju, jedinjenje iz bilo kog Primera 1 do 324 je u obliku farmaceutski prihvatljive soli.

[0070] Jedinjenja formule (I) mogu da sadrže kiselu ili baznu funkcionalnu grupu i, prema tome će stručnjak sa iskustvom prepoznati da mogu da se izrade farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja formule (I). Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja iz pronalaska mogu da poseduju, na primer, poboljšanu stabilnost, rastvorljivost i/ili kristalnost, što omogućava njihov razvoj kao leka.

[0071] Jedinjenja formule (I) mogu da sadrže baznu funkcionalnu grupu i mogu da budu sposobna da formiraju farmaceutski prihvatljive soli nastale dodatkom kiseline tretmanom sa odgovarajućom kiselinom (neorganskom ili organskom kiselinom). U reprezentativne farmaceutski prihvatljive soli nastale dodatkom kiseline spadaju hidrohloridne, hidrobromidne, nitratne, sulfatne, bisulfatne, sulfamatne, fosfatne, acetatne, hidroksiacetatne, fenilacetatne, propionatne, butiratne, izobutiratne, valeratne, maleatne, hidroksimaleatne, akrilatne, fumaratne, maleatne, tartaratne, citratne, salicilatne, p-aminosalicilatne, glikolatne, laktatne, heptanoatne, ftalatne, oksalatne, sukcinatne, benzoatne, o-acetoksibenzoatne, hlorobenzoatne, metilbenzoatne, dinitrobenzoatne, hidroksibenzoatne, metoksibenzoatne, naftoatne, hidroksinaftoatne, mandelatne, tanatne, formatne, stearatne, askorbatne, palmitatne, oleatne, piruvatne, pamoatne, malonatne, lauratne, glutaratne, glutamatne, estolatne, metansulfonatne (mesilatne), etansulfonatne (esilatne), 2-hidroksietansulfonatne, benzensulfonatne (besilatne), p-aminobenzensulfonatne, p-toluensulfonatne (tosilatne) i naftalen-2-sulfonatne. U drugom ostvarenju, farmaceutski prihvatljiva so je so 1,2-etandisulfonske kiseline (edisilat).

[0072] Jedinjenja formule (I) mogu da sadrže kiselu funkcionalnu grupu i pogodne farmaceutski prihvatljive soli uključuju soli tih kiselih funkcionalnih grupa. Reprezentativne soli uključuju farmaceutski prihvatljive soli metala kao što su soli natrijuma, kalijuma, litijuma, kalcijuma, magnezijuma, aluminijuma i cinka; farmaceutski prihvatljivih organskih primarnih, sekundarnih i tercijernih amina, uključujući alifatične amine, aromatične amine, alifatične diamine i hidroksialkil amine kao što su metilamin, etilamin, 2-hidroksietilamin, dietilamin, TEA, etilendiamin, etanolamin, dietanolamin i cikloheksilamin.

[0073] U jednom ostvarenju, obezbeđeno je jedinjenje koje je (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatna so 1,2-etandisulfonske kiseline, formule:

2

[0074] U jednom ostvarenju, obezbeđen je kristalni oblik čvrstog stanja (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatne soli 1,2-etandisulfonske kiseline.

[0075] U daljem ostvarenju, obezbeđen je kristalni oblik čvrstog stanja (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil- 6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatne soli 1,2-etandisulfonske kiseline koju karakteriše difrakcija X-zraka praškastog uzorka (XRPD) koji ima značajne pikove difrakcije na 2θ vrednosti pokazane u Tabeli 1.

Tabela 1: Tabela XRPD pikova za (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatnu so 1,2-etandisulfonske kiseline

(nastavlja se)

[0076] U daljem ostvarenju, obezbeđen je oblik kristalnog čvrstog stanja (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatne soli 1,2-etandisulfonske kiseline okarakterisan difrakcijom X-zraka praškastog uzorka (XRPD) sa značajnim pikovima difrakcije za 2θ vrednosti, ± 0.1° 2θ eksperimentalne greške, od 5.4, 8.8, 9.9, 11.6, 13.8, 16.9, 18.0, 16.6, 19.1, 19.4, 19.8, 20.4, 20.9, 21.3, 22.0, 22.4, 22.9, 23.4, 24.9 i 25.1 stepeni.

[0077] Za pregled odgovarajućih soli videti Berge i saradnici, J. Pharm. Sci., 66:1-19 (1977). U svom okviru pronalazak uključuje sve moguće stehiometrijske i ne-stehiometrijske oblike soli jedinjenja formule (I).

[0078] Soli mogu da se formiraju postupcima dobro poznatim u tehnici, na primer, precipitacijom iz rastvora a nakon toga filtriranjem ili uparavanjem rastvarača.

[0079] Jasno je da mnoga organska jedinjenja mogu da formiraju komplekse sa rastvaračima u kojima su tako što reaguju ili precipitiraju ili kristališu iz rastvarača. Ovi kompleksi su

4

poznati kao "solvati". Na primer, kompleks sa vodom je poznat kao "hidrat". Rastvarači sa visokim tačkama ključanja i/ili rastvarači sa velikom sklonošću da formiraju vodonične veze kao što su voda, etanol, izo-propil alkohol i N-metil pirolidinon mogu da se koriste za formiranje solvata. Postupci za identifikaciju solvata uključuju, ali bez ograničenja na, NMR i mikroanalize. Jedinjenja formule (I) ili njihove soli, mogu da egzistiraju u solvatisanom i nesolvatisanom obliku.

[0080] Neka od jedinjenja iz pronalaska mogu da egzistiraju u tautomernim oblicima. Jasno je da ovaj pronalazak obuhvata sve tautomere jedinjenja iz pronalaska ili kao pojedinačne tautomere ili kao njihove smeše.

[0081] Jedinjenja iz pronalaska mogu da budu u kristalnom ili amorfnom obliku.

Termodinamički najstabilniji kristalni oblik jedinjenja iz pronalaska je od posebnog interesa.

[0082] Kristalni oblici jedinjenja iz pronalaska mogu da se karakterišu i razlikuju primenom brojnih uobičajenih analitičkih tehnika, uključujući ali bez ograničenja na, difrakciju X-zraka praška (XRPD), infracrvenu spektroskopiju (IR), Raman spektroskopiju, diferencijalnu skenirajuću kalorimetriju (DSC), termogravimetrijske analize (TGA) i nuklearnu magnetnu rezonancu čvrstog stanja (ssNMR).

[0083] Ovj pronalazak takođe obuhvata sve pogodne izotopne varijacije jedinjenja formule (I) ili njegovih farmaceutski prihvatljivih soli. Izotopna varijacija jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli se definiše kao ona u kojoj je najmanje jedan atom zamenjen sa atomom koji ima isti atomski broj ali se atomska masa razlikuje od atomske mase koja se uobičajeno nalazi u prirodi. Primeri izotopa koji mogu da budu inkorporirani u jedinjenja iz pronalaska uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fluora i hlora kao što su<2>H,<3>H,<13>C,<14>C,<15>N,<17>O,<18>O,<18>F i<36>Cl, tim redom. Neke izotopne varijacije jedinjenja formule (I) ili njegove soli ili solvata, na primer, one u kojima je inkorporiran radioaktivni izotop kao što su<3>H ili<14>C, su korisne u studijama distribucije lekova i/ili substrata tkiva. Tricijum, to jest,<3>H i ugljenik-14, to jest,<14>C, izotopi su posebno preferirani zbog svoje lake pripreme i detektabilnosti. Osim toga, supstitucija sa izotopima kao što je deuterijum, to jest,<2>H, može da pruži neke terapeutske prednosti nastale zbog veće metaboličke stabilnosti, na primer, povećanog polu-života in vivo ili smanjenja zahtevane doze pa stoga mogu da budu preferirani u nekim situacijama. Izotopne varijacije jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli mogu generalno da se izrade uobičajenim procedurama kao što su ilustrativni postupci ili izrade opisane u niže datim Primerima, koristeći odgovarajuće izotopne varijacije odgovarajućih reagenasa.

[0084] Jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu da sadrže jedan ili više asimetričkih centara (takođe označeni kao stereocentar) i stoga mogu da egzistiraju kao pojedinačni enantiomeri, diastereomeri ili drugi stereoizomerni oblici ili kao njihove smeše. Stereocentri, kao što su asimetrični atomi ugljenika, mogu takođe da budu prisutni u supstituentu kao što je alkil grupa. Kada stereohemija prisutnog asimetričnog centra u jedinjenju formule (I) ili u bilo kojoj ovde ilustrovanoj hemijskoj strukturi nije navedena, struktura treba da obuhvati sve pojedačne stereoizomere i sve njihove smeše. Prema tome, jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli koje sadrže jedan ili više asimetričnih centara mogu da se koriste kao racematne smeše, enantiomerno obogaćene smeše ili kao enantiomerno čisti pojedinačni stereoizomeri.

[0085] Pojedinačni stereoizomeri jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, koji sadrže jedan ili više asimetričnih centara mogu da se razdvoje postupcima poznatim stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Na primer, ovakva rezolucija može da se izvede (1) formiranjem diastereoizomernih soli kompleksa ili drugih derivata; (2) selektivnom reakcijom sa stereoizomerno-specifičnim reagensom, na primer enzimatičnom oksidacijom ili redukcijom; ili (3) gas-tečnom ili tečnom hromatografijom u asimetričnom okruženju, na primer, na asimetričnoj podlozi kao što je silika gel sa vezanim asimetričnim ligandom ili u prisustvu asimetričnog rastvarača. Stručnjak sa iskustvom će da razume da kada se željeni stereoizomer konvertuje u drugi hemijski entitet jednom od prethodno opisanih procedura razdvajanja, u narednoj fazi se zahteva oslobađanje željenog oblika. Alternativno, specifični stereoizomeri mogu da se sintetišu asimetričnim sintezama upotrebom optički aktivnih reagenasa, substrata, katalizatora ili rastvarača, ili konverzijom jednog enantiomera u drugi asimetričnom transformacijom.

[0086] Pojedina jedinjenja iz pronalaska koja su ovde opisana poseduju estar alfa amino kiseline koji omogućava penetraciju jedinjenja kroz ćelijski zid. Kada se nađe unutar ćelije, estar se hidrolizuje delovanjem intracelularnih karboksiesteraza da se oslobodi osnovna kiselina. Zbog svog naelektrisanja, osnovna kiselina ima smanjenu permeabilnost i zbog toga se zadržava unutar ćelije, gde se povećava njena koncentracija što dovodi do povećanja potencije i trajanja delovanja. I pored toga što se jedinjenja iz pronalaska koja sadrže estar alfa amino kiseline konvertuju u svoju odgovarajuću karboksilnu kiselinu delovanjem intracelularnih esteraza, i estri i njihove odgovarajuće kiseline deluju kao inhibitori BET familije bromodomena koji sadrži proteine. U jednom ostvarenju, jedinjenje iz pronalaska je sposobno da inhibira vezivanje jedne ili više od četiri poznate BET familije bromodomena koji sadrži proteine (na primer BRD2, BRD3, BRD4 i BRDt) za, na primer, acetilirani lizin ostatak. U daljem ostvarenju, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, je sposobno da inhibira vezivanje BRD4 za njegov srodni acetilirani lizin ostatak. Jedinjenja iz pronalaska mogu da poseduju poboljšani profil u odnosu na poznate BET inhibitore, na primer, neka jedinjenja mogu da imaju jednu ili više od sledećih osobina:

(i) potentnu BET inhibitornu aktivnost;

(ii) selektivnost u odnosu na druge poznate bromodomene koji sadrže proteine izvan proteina BET familije;

(iii) selektivnost za određeni član BET familije u odnosu na druge članove BET familije;

(iv) selektivnost vezivanja za jedan domen (to jest BD1 u odnosu na BD2 ili vice versa) bilo kog dato člana BET familije;

(v) poboljšanu sposobnost rasprostiranja (na primer poželjan profil rastvorljivosti, farmakokinetike i farmakodinamike); ili

(vi) profil smanjenog neželjenog dejstva.

[0087] Dalje, neka jedinjenja iz pronalaska mogu da inhibiraju druge bromodomene koji sadrže proteine izvan BET familije proteina, kao što su na primer, kao što je, na primer, bromodomen u susedstvu sa cink prst domenom proteina 2A (BAZ2A).

[0088] Jedinjenja iz pronalaska sadrže R4supstituent vezan ili na položaju 5 ili 6 benzimidazol jezgra, koji predstavlja estarsku grupu alfa amino kiseline i takođe pokriva odgovarajuće karboksilne kiseline. Određena struktura estara alfa amino kiselina R4osigurava da se estar hidrolizuje u ćelijama koje sadrže karboksiesterazu hCE-1 a ne u ćelijama koje sadrže druge karboksiesteraze (kao što su hCE-2 i hCE-3) ali ne hCE-1. Ova osobina omogućava selektivno targetiranje jedinjenja iz pronalaska na ćelije u kojima se ekspresuje hCE-1, kao što su makrofagi, monociti i dendrične ćelije.

[0089] Karboksiesteraze hCE-2 i hCE-3 imaju sveprisutan oblik ekspresije, dok se hCE-1 visoko ekspresuje u jetri, plućima i koštanoj srži, ali se, što je veoma važno, nalazi samo u nekim tipovima ćelija kao što su monociti, makrofagi i dendrične ćelije.

[0090] Struktura estarske grupe alfa amino kiseline, posebno oblik supstitucije na položajima R7i R8, može da odredi brzinu hidrolize jedinjenja unutar ćelija koje sadrže hCE-1 a željena brzina hidrolize može da se razlikuje u zavisnosti od izabranog načina primene.

[0091] hCE-1 je prisutna u hepatocitima i, zbog toga su, za oralnu primenu jedinjenja, estarske grupe koje imaju manju brzinu hidrolize poželjnije da bi se osiguralo da dovoljna količina jedinjenja uđe u krvotok nakon metabolizma prvog prolaza.

[0092] U jednom ostvarenju ovog pronalaska, poželjna brzina hidrolize za oralno primenjeno jedinjenje može da se dobije ukoliko je R7cikloalkil, heterocikloalkil ili -CR13R14R15grupa, pri čemu je R13vodonik, hidroksi, -CH2OH, -CH2C1-3alkil, halo, C1-3alkil ili C1-3alkoksi grupa gde navedena C1-3alkil ili C1-3alkoksi grupa može da bude opciono supstituisana sa halo ili hidroksi grupom; a R14i R15su nezavisno vodonik ili C1-3alkil grupa, uz uslov da najmanje dva od R13, R14i R15nisu vodonik. U daljem ostvarenju, R7predstavlja izopropil, -CH(CH3)OH, sec-butil, terc-butil, terc-pentil, sec-pentil, 3-pentil ili cikloalkil grupu. Slično tome, R8može da bude -CHR16R17grupa pri čemu je R16C1-3alkil grupa a R17je C1-6alkil, cikloalkil, heterocikloalkil grupa, gde je navedena C1-6alkil grupa opciono supstituisana sa C1-

3alkoksi grupom, ili R16i R17zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju cikloalkil ili heterocikloalkil grupu. U daljem ostvarenju, R8predstavlja izopropil, sec-butil, sec-pentil, 3-pentil ili cikloalkil grupu.

[0093] U jednom ostvarenju, ovaj pronalazak takođe obuhvata svaku odgovarajuću kiselinu koja je primer kovelentnih konjugata koji uključuju estar alfa amino kiseline (to jest kovalentne konjugate Primera 1 do 324 koji uključuju estar alfa amino kiseline).

IZJAVE O UPOTREBI

[0094] Jedinjenja formule (I) ili njihove farmaceutski prihvatljive soli su BET inhibitori i prema tome mogu da budu terapeutski korisni u tretmanu različitih bolesti ili stanja povezanih sa sistemskom inflamacijom ili inflamacijom tkiva, inflamatornim odgovorom na infekciju ili hipoksiju, ćelijskom aktivacijom i proliferacijom, metabolizmom lipida, fibrozama i u prevenciji i tretmanu virusnih infekcija

[0095] BET inhibitori mogu da budu korisni u tretmanu velikog broja različitih akutnih ili hroničnih autoimunih ili inflamatornih stanja, kao što su reumatoidni artritis, osteoartritis, akutni giht, psorijaza, sistemski lupus eritematoza, plućna arterijska hipertenzija (PAH), multiple skleroza, inflamatorna bolest creva (Kronova bolest i ulcerativni kolitis), astma, hronična opstruktivna bolest disajnih puteva, pneumonitis, miokarditis, perikarditis, miozitis, ekcema, dermatitis (uključujući atopični dermatitis), alopecija, vitiligo, bulozna bolest kože, nefritis, vaskulitis, hiperholesterolemija, ateroskleroza, Alzheimer-ova bolest, depresija, Sjögren-ov sindrom, sijaloadenitis, okluzija centralne retinalne vene, okluzija račvaste retinalne vene, Irvine-Gass sindrom (nakon katarakte i nakon operacije), retinitis pigmentoza, pars planitis, birdshot retinohoroidopatija, epiretinalna membrana, cistična makularna edema, parafovealne telengiektaze, trakcionalne makulopatije, vitreomakularni trakcioni sindromi, odvojenost retine, neuroretinitis, idiopatska makularna edema, retinitis, suvo oko (keraktokonjuktivitis Sicca), vernalni keratokonjuktivitis, atopični keratokonjuktivitis, uveitis (kao što su prednji uveitis, pan uveitis, zadnji uveitis, uveitis povezan sa edemom makule), skleritis, dijabetična retinopatija, dijabetična edema makule, makularna distrofija povezana sa godinama, hepatitis, pankreatitis, primarna ciroza žuči, sklerozni holangitis, Adisonova bolest, hipofizitis, tiroiditis, dijabetes tip I, arteritis velikih ćelija, nefritis koji uključuje lupusni nefritis, vaskulitis koji zahvata organe kao što je glomerulonefritis, vaskulitis koji uključuje arteritis velikih ćelija, Wegener-ove granulomatoze, Poliarteritis nodoza, Behketova bolest, Kawasaki bolest, Takayasu-ov arteritis, gangrenozna pioderma, vaskulitis koji zahvata organe i akutno odbacivanje transplantiranih organa. Od posebnog interesa je upotreba BET inhibitora za tretman reumatoidnog artritisa.

[0096] U jednom ostvarenju, akutno ili hronično autoimuno ili inflamatorno stanje je poremećaj metabolizma lipida regulacijom APO-A1 kao što su hiperholesterolemija, ateroskleroza i Alzheimer-ova bolest.

[0097] U drugom ostvarenju, akutno ili hronično autoimuno ili inflamatorno stanje je respiratorni poremećaj kao što su astma ili hronična opstruktivna bolest pluća.

[0098] U drugom ostvarenju, akutno ili hronično autoimuno ili inflamatorno stanje je sistemski inflamatorni poremećaj kao što su reumatoidni artritis, osteoartritis, akutni giht, psorijaza, sistemski lupus eritematoza, multiple skleroza ili inflamatorna bolest creva (Kronova bolest i ulcerativni kolitis).

[0099] U drugom ostvarenju, akutno ili hronično autoimuno ili inflamatorno stanje je multiple skleroza.

[0100] U daljem ostvarenju, akutno ili hronično autoimuno ili inflamatorno stanje je dijabetes tip I.

[0101] BET inhibitori mogu da budu korisni u tretmanu bolesti ili stanja koja uključuju inflamatorne odgovore na infekcije sa bakterijama, virusima, gjivicama, parazitima ili njihovim toksinima, kao što su sepsa, akutna sepsa, sindrom sepse, septični šok, endotoksemija, sindrom sistemskog inflamatornog odgovora (SIRS), sindrom multi-organske disfunkcije, sindrom toksičnog šoka, akutno oštećenje pluća, ARDS (sindrom respiratornog distresa kod odraslih), akutna bubrežna insuficijencija, fulminatni hepatitis, opekotine, akuktni pankreatitis, post-operativni sindromi, sarkoidoze, Herxheimer reakcije, encefalitis, mijelitis, meningitis, malarija i SIRS povezan sa virusnim infekcijama kao što su influenca, herpes zoster, herpes simpleks i koronavirus. U jednom ostvarenju, bolest ili stanje koje uključuje inflamatorni odgovor na infekciju sa bakterijama, virusima, gljivicama, parazitima ili njihovim toksinima je akutna sepsa.

[0102] BET inhibitori mogu da budu korisni u tretmanu stanja povezanih sa ishemijomreperfusionim oštećenjem kao što su infarkt miokarda, cerebro-vaskularna ishemija (šlog), akutni koronarni sindromi, renalno reperfusiono oštećenje, transplantacija organa, ugranja bajpasa koronarne arterije, kardiopulmonarne bajpas procedure, plućna, renalna, hepatična, gastrointestinalna embolija ili embolija perifernih delova udova.

[0103] BET inhibitori mogu da budu korisni u tretmanu fibrotičnih stanja kao što su idiopatska pulmonarna fibroza, renalne fibroze, post-operativna striktura, formiranje keloidnih ožiljaka, skleroderma (uključujući morfeju), kardijačne fibroze i cistične fibroze.

[0104] BET inhibitori mogu da budu korisni u tretmanu virusnih infekcija kao što su infekcije i reaktivacije herpes simpleksom, hladne rane, infekcije i reaktivacije herpes zosterom, male boginje, herpes zoster, humani papiloma virus (HPV), humani imunodeficijentni virus (HIV), cervikalna neoplazija, infekcija adenovirusom, uključujući akutnu respiratornu bolest, infekcije poks virusom kao što su kravlje boginje i male boginje i virus afričke svinjske groznice. U jednom ostvarenju, virusna infekcija he HPV infekcija kože ili cervikalnog epitela. U drugom ostvarenju, virusna infekcija je latentna HIV infekcija.

[0105] BET inhibitori mogu da budu korisni u tretmanu kancera, uključujući hematološke kancere (kao što su leukemija, limfoma i multiple mijeloma), epitelijalnih kancera uključujući karcinome pluća, dojke i kolona, midline karcinoma, mezenhimalnih, hepatičnih, renalnih i neuroloških tumora.

[0106] BET inhibitori mogu da budu korisni u tretmanu jednog ili više kancera izabranih od kancera mozga (glioma), glioblastoma, Bannayan-Zonana sindroma, Cowden-ove bolesti, Lhermitte-Duclos bolesti, kancera dojke, inflamatornog kancera dojke, kancera kolorektuma, Wilm-ovog tumora, Ewing-sovog sarkoma, rabdomiosarkoma, ependimoma, meduloblastoma, kancera kolona, kancera glave i vrata, kancera bubrega, kancera pluća, kancera jetre, melanoma, karcinoma skvamoznih ćelija, kancera ovarijuma, kancera pankreasa, kancera prostate, kancera sarkoma, osteosarkoma, tumora velikih ćelija kostiju, kancera tiroidee, leukemije limfoblastičnih T-ćelija, hronične mijelogenozne leukemije,

4

hronične limfocitne leukemije, leukemije slušnih ćelija, akutne limfoblastične leukemije, akutne mijelogenozne leukemije, hronične neutrofilne leukemije, limfoblastične leukemije T-ćelija, plazmacitome, imunoblastične leukemije velikih ćelija, leukemije ćelija kore mozga, multiple mijelome, megakarioblastične leukemije, akutne megakariocitične leukemije, promijelocitične leukemije, mešovite leukemije potomaka, eritroleukemije, malignog limfoma, Hočkinsovog limfoma, non-Hočkinsovog limfoma, limfoma limfoblastičnih t-ćelija, Burkitt-ovog limfoma, folikularnog limfoma, neuroblastoma, kancera bešike, urotelijalnog kancera, kancera vulve, kancera ceriksa, kancera endometrijuma, renalnog kancera, mezotelijome, kancera ezofagusa, kancera pljuvačnih žlezda, hepatocelularnog kancera, kancera želuca, nazofarangijalnog kancera, kancera usni, kancera usta, GIST (gastrointestinalni stromalni tumor), NUT-midline karcinoma i kancera testisa.

[0107] U jednom ostvarenju, kancer je leukemija, na primer leukemija izabrana od akutne monocitne leukemije, akutne mijelogene leukemije, hronične mijelogene leukemije, hronične limfocitne leukemije i mešovite leukemije potomstva (MLL). U drugom ostvarenju, kancer je NUT-midline karcinoma. U drugom ostvarenju, kancer je multiple mijeloma. U drugom ostvarenju, kancer je kancer pluća kao što je kancer malih ćelija pluća (SCLC). U narednom ostvarenju, kancer je neuroblastoma. U drugom ostvarenju, kancer je Burkitt-ova limfoma. U drugom ostvarenju, kancer je kancer cerviksa. U drugom ostvarenju, kancer je kancer ezofagusa. U drugom ostvarenju, kancer je kancer ovarijuma. U drugom ostvarenju, kancer je kancer dojke. U drugom ostvarenju, kancer je kancer kolorektuma.

[0108] U jednom ostvarenju, bolest ili stanje za koje je indikovan BET inhibitor je izabrano od bolsti povezanih sa sindromom sistemskog inflamatornog odgovora, kao što su sepsa, opekotine, pankreatitis, velika trauma, hemoragija i ishemija. U ovom ostvarenju, BET inhibitor će da se primeni u trenutku dijagnoze da redukuje incidencu SIRS, početka šoka, sindroma disfunkcije više organa, što uključuje početak akutnog oštećenja pluća, ARDS, akutno oštećenje bubrega, jetre, srca ili gastrointestinalnog organa i smrt. U drugom ostvarenju, BET inhibitor bi se primenio pre operacije ili drugih procedura povezanih sa visokim rizikom od sepse, hemoragije, ekstenzivnog oštećenja tkiva, SIRS ili MODS (dindrom disfunkcije više organa). U posebnom ostvarenju, bolest ili stanje za koje je indikovan BET inhibitor su sepsa, sindrom sepse, septični šok i endotoksenija. i endotoksaemia. U još jednog ostvarenju, BET inhibitor je indkovan za tretman akutnog ili hroničniog pankreatitisa. U drugom ostvarenju, BET inhibitor je indikovan za tretman opekotina.

[0109] U daljem aspektu, ovaj pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u terapiji.

[0110] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat, formule:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u terapiji.

[0111] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje 1,2-etandisulfonska kiselina so (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat, formule:

za upotrebu u terapiji.

[0112] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje (2S,3R)-izopropil 2-(((1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat, formule:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u terapiji.

[0113] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje fomula (I) ili ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u tretmanu bolesti ili stanja za koje je indikovan inhibitor bromodomena, preciznije BET inhibitor, uključujući svaku i sve od prethodnih indikacija.

[0114] U daljem aspektu, ovaj pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u tretmanu autoimunih i inflamatornih bolesti i kancera.

[0115] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u tretmanu reumatoidnog artritisa.

[0116] Ovde je otkriven postupak za tretman autoimune ili inflamatorne bolesti ili kancera, koji obuhvata primenu na subjektu kome je to potrebno, terapeutski efektivne količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0117] Ovde je otkriven postupak za lečenje reumatoidnog artritisa koji obuhvata primenu na subjektu kome je to potrebno, terapeutski efektivne količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0118] Ovde je otkrivena upotreba jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji medikamenta za upotrebu u tretmanu autoimune ili inflamatorne bolesti ili kancera.

[0119] Ovde je otkrivena upotreba jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji medikamenta za upotrebu u tretmanu reumatoidnog artritisa.

FARMACEUTSKE KOMPOZICIJE/NAČIN PRIMENE/DOZE

4

[0120] Mada je moguće da se za upotrebu u terapiji jedinjenje formule (I) kao i njegove farmaceutski prihvatljive soli mogu da primene kao sirova hemikalija, uobičajeno je da je aktivni sastojak prisutan u obliku farmaceutske kompozicije.

[0121] U daljem aspektu, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata. U daljem aspektu, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent.

[0122] U daljem aspektu, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja obuhvata (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5- dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat, formule:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata.

[0123] U daljem aspektu, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja obuhvata (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatnu so 1,2-etandisulfonske kiseline, formule:

[0124] U daljem aspektu, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja obuhvata (2S,3R)-izopropil 2-(((1-(1,3- dimetoksipropan-2-il)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat, formule:

[0125] Eksciipijent(i) mora da bude farmafaceutski prihvatljiv i da bude kompatibilan sa drugim sastojcima kompozicije. U skladu sa narednim aspektom pronalaska, takođe je obezbeđen proces za izradu farmaceutske kompozicije koji uključuje mešanje jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata. Farmaceutska kompozicija može da se koristi u tretmanu bilo koje od ovde opisanih bolesti.

[0126] Kako su jedinjenja formule (I) namenjena za upotrebu u farmaceutskim kompozicijama, boće lako da se razume da je svako od njih preferirano obezbeđeno u skoro potpuno čistom obliku, na primer, u najmanaje 85% čistoće, posebno u najmanje 98% čistoće (% u težini na bazi težine).

[0127] Farmaceutske kompozicije mogu da se nalaze u jediničnim doznim oblicima koji sadrže prethodno odmerenu količinu aktivnog sastojka po jedinici doze. Preferirane jedinično dozne kompozicije su one koje sadrže dnevnu dozu ili sub-dozu ili njihovu odgovarajuću frakciju, aktivnog sastojka. Ovakva dozna jedinica može stoga da se primeni više od jedanput dnevno.

4

[0128] Farmaceutske kompozicije mogu da budu prilagođene za primenu bilo kojim odgovarajućim načinom, na primer oralno (uključujući bukalno ili sublingvalno), rektalno, inhalaciono, intranazalno, topično (uključujući bukalno, sublingvalno ili transdelmano), okularno (uključujući topično, intraokularno, subkonjuktivalno, episkleralno, sub-tenon), vaginalno ili parenteralno (uključujući subkutano, intramuskularno, intravenozno ili intradermalno). Ovakve kompozicije mogu da se izrade bilo kojim postupkom poznatim u farmaceutskoj tehnici, na primer dovođenjem u vezu aktivnog sastojka sa ekscipijentom(ima).

[0129] U jednom aspektu, farmaceutska kompozicija je namenjena za oralnu primenu.

[0130] U daljem aspektu, jedinjenje iz pronalaska može da bude formulisano tako da se omogući intracelularno oslobađanje tok jedinjenja.

[0131] Farmaceutske kompozicije namenjene za oralnu primenu mogu da budu u obliku odvojenih jedinica kao što su tablete ili kapsule; praškova ili granula; rastvora ili suspenzija u vodenim ili ne-vodenim tečnostima; jestivih pena ili krema; ili tečnih emulzija ulje-u-vodi ili tečnih emulzija voda-u-ulju.

[0132] Praškovi pogodni za inkorporiranje u tablete ili kapsule mogu da se izrade usitnjavanjem jedinjenja do odgovarajuće usitnjene veličine (na primer mikronizacijom) i mešanjem sa isto tako pripremljenim farmaceutskim eksipijentom kao što su jestivi ugljeni hidrati, na primer, skrob ili manitol. Takođe mogu da budu prisutna, na primer, sredstva za korigovanje ukusa, konzervansi, disperzanti i sredstva za bojenje.

[0133] Kapsule mogu da se izrade pripremom praškaste smeše, kako je prethodno opisano, i punjenjem u formirane želatinske omotače. Glidansi i lubrikansi, kao što su koloidni silicijum dioksid, talk, magnezijum stearat, kalcijum stearat ili čvrsti polietilen glikol mogu da se dodaju u praškastu smešu pre operacije punjenja. Sredstvo za raspadanje ili solubilizaciju, kao što su agar-agar, kalcijum karbonat ili natrijum karbonat mogu takođe da se dodaju za poboljšanje raspoloživosti medikamenta kada se kapsula proguta.

[0134] osim toga, kada je poželjno ili potrebno, u smešu mogu takođe da se inkorporiraju pogodna vezivna sredstva, glidansi, lubrikansi, zaslađivači, korigenski ukusa, sredstva za raspadanje i sredstva za bojenje. U pogodna vezivna sredstva spadaju skrob, želatin, prirodni šećeri kao što su glukoza ili beta laktoza, kukuruzni zaslađivači, prirodne i sintetičke gume kao što su akacija, tragakanta ili natrijum alginat, karboksimetilceluloza, polietilen glikol, voskovi i slično. U lubrikanse korišćene u ovim doznim oblicima spadaju natrijum oleat, natrijum stearat, magnezijum stearat, natrijum benzoat, natrijum acetat, natrijum hlorid i slično. U sredstva za raspadanje spadaju skrob, metil celuloza, agar, bentonit, ksantan guma i

4

slično. Tablete su formulisane, na primer, izradom smeše praškova, granuliranjem i mešanjem, dodavanjem lubrikansa i sredstva za raspadanje i presovanjem u tablete. Smeša praškova se izrađuje mešanjem odgovarajuće usitnjenog jedinjenja sa razblaživačem ili bazom kako je prethodno opisano, i opciono, sa vezivnim sredstvom kao što su karboksimetilceluloza, alginat, želatin ili polivinil pirolidon, retardant rastvor kao što je parafin, sredstvom za ubrzavanje resorpcije kao što je kvaternarna so i/ili sredstvom za apsorpciju što su bentonit, kaolin ili dikalcijum fosfat. Smeša praškova može da se granulira vlaženjem sa vezivnim sredstvom kao što su sirup, skrobna pasta, akacija mucilaga ili rastvori celuloznih ili polimernih materijala i propuštanjem kroz sito. Kao alternativa granuliranju, smeša praškova može da se propusti kroz tablet mašinu i dobijaju se nepravilno formirane pločice koje se polome u granule. Granule mogu da se pospu lubrikansom zbog sprečavanja lepljenja za kapule u kojima se formiraju tablete dodavanjem stearinske kiseline, stearatne soli, talka ili mineralnog ulja. Lubrikovana smeša se nakon toga komprimuje u tablete.

Jjedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu takođe da se kombinuju sa slobodno protočnim inertnim ekscipijentom i direktno komprimuju u tablete bez prolaska kroz faze granuliranja i mešanja. Mogu da se obezbede providni ili neprovidni zaštitni omotači koji se sastoje od zaštitnog omotača od šelaka, omotača od šećera ili polimernog materijala i poliranog omotača od voska. U ove omotače mogu da se dodaju boje da se napravi razlika između doznih jedinica.

[0135] Oralnet tečnosti kao što su rastvori, sirupi i eliksiri mogu da se izrade u obliku jediničnih doza tako da data količina sadrži prethodno odmerenu količinu jedinjenja. Sirupi mogu da se izrade rastvaranjem jedinjenja u pogodnom aromatizovanom vodenom rastvoru, dok se eliksiri izrađuju upotrebom ne-toksičnog alkoholnog vehikuluma. Suspenzije mogu da se formulišu dispergovanjem jedinjenja u ne-toksičnom vehikulumu. Takođe mogu da se dodaju solubilizatori i emulgatori kao što su etoksilirani izostearil alkoholi i polioksi etilen sorbitol etri, konzervansi, aromatični dodaci kao što je pepermint ulje ili prirodni zaslađivači ili saharin ili drugi veštački zaslađivači. Kompozicije za oralnu primenu mogu da se formulišu tako da obezbede profil modifikovanog oslobađanja kao što je kontinuirano ili neko drugo kontrolisano oslobađanje terapeutski aktivnog sredstva.

[0136] Kada je to odgovarajuće, jedinične dozne kompozicije za oralnu primenu mogu da budu mikroenkapsulirane. Kompozicija može da bude izrađena za odloženo ili kontinuirano oslobađanje, na primer, oblaganjem ili umetanjem čestica materijala u polimere, vosak ili slično.

4

[0137] Farmaceutske kompozicije za nazalnu ili inhalacionu primenu mogu uobičajeno da se formulišu kao aerosoli, rastvori, suspenzije, geli ili suvi praškovi.

[0138] Za farmaceutske kompozicije pogodne za i/ili prilagođene za inhalacionu primenu, preferirano je da je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u obliku smanjene veličine čestica što se dobija, na primer mikronizacijom. Poželjna veličina čestica jedinjenja ili soli smanjene veličine (mikronizirane) se definiše preko D50 vrednosti od približno 0.5 do približno 10 mikrona (na primer mereno pomoću laserske difrakcije Farmaceutske kompozicije mogu) Farmaceutske kompozicije mogu.

[0139] Za farmaceutske kompozicije pogodne za i/ili prilagođene za inhalacionu primenu, farmaceutska kompozicija može da bude kompozicija suvog praška ili aerosol formulacija, koja uključuje rastvor ili finu suspenziju aktivne supstance u farmaceutski prihvatljivom vodenom ili nevodenom rastvaraču. Kompozicije suvog praška mogu da uključe praškastu bazu kao što su laktoza, glukoza, trehaloza, manitol ili skrob, jedinjenja formule (I) ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so (preferirano u obliku čestica male veličine, na primer u mikroniziranom obliku) i opciono modifikator karakteristika kao što su L-leucin ili neka druga amino kiselina i/ili metalna so stearinske kiseline kao što su magnezijum ili kalcijum stearat. Preferirano, kompozicija suvog praška za inhalaciju uključuje praškastu mešavinu laktoze, na primer laktoze monohidrat i jedinjenja formule (I) ili njegove soli.

[0140] U jednom ostvarenju, kompozicija suvog praška pogodna za inhalacionu primenu može da bude inkorporirana u zatvorenu ambalažu sa višestrukim dozama koja se daje uz pakovanje(a) medikamenta smeštenih unutar odgovarajućeg uređaja za inhalaciju. Ambalaža može da se cepa, guli ili na neki drugi način otvori i pojedinačne doze kompozicije suvog praška primene inhalacijom preko piska inhalacionog uređaja, kako je poznato u tehnici. Pakovanje medikamenta može da bude u brojnim različitim oblicima, na primer u obliku diska ili izdužene trake. Reprezentativni uređaji za inhalaciju na tržištu su DISKHALER™ inhaler uređaj, DISKUS™ uređaj za inhalaciju i ELLIPTA™ uređaj za inhalaciju, proizvođača GlaxoSmithKline. DISKUS™ inhalacioni uređaj je, na primer, opisan u GB 2242134A a ELLIPTA™ inhalacioni uređaj je, na primer, opisan u WO 03/061743 A1 WO 2007/012871 A1 i/ili WO2007/068896.

[0141] Farmaceutske kompozicije namenjene za parenteralnu primenu uključuju vodene i nevodene sterilne injekcione rastvore koji mogu da sadrže antioksidanse, pufere, bakteriostatike i rastvorke koji zadržavaju kompoziciju izotoničnom sa krvlju prima°Ca; i vodene i nevodene sterilne suspenzije koje mogu da uključe sredstva za suspendovanje i

4

sredstva za zgušnjavanje. Kompozicije mogu da se nalaze u jediničnoj ili višestruko doznoj ambalaži, na primer zatvorenim ampulama i bočicama i mogu da se čuvaju u suvozamrznutom (liofiliziranom) stanju koje zahteva samo dodavanje sterilnog tečnog nosača, na primer, vode za injekcije neposredno pre upotrebe. Ekstemporalni injekcioni rastvori i suspenzije mogu da se izrade od sterilnih praškova, granula i tableta.

[0142] Farmaceutske kompozicije namenjene za topičnu primenu mogu da se formulišu kao masti, kreme, suspenzije, emulzije, losioni, praškovi, rastvori, paste, geli, pene, sprejovi, aerosoli ili ulja. Ovakve farmaceutske kompozcije mogu da uključe uobičajene aditive u koje spadaju, ali bez ograničenja na, konzervansi, rastvarači za pomoć pri penetraciji leka, korastvarač, emolijenti, propelanti, sredstva za modifikaciju viskoziteta (sredstva za geliranje), surfaktanti i nosači. U jednom ostvarenju, obezbeđena je farmaceutska kompozicija namenjena za topičnu primenu koja uključuje između 0.01 - 10% ili između 0.01 - 1% jedinjenje formula (I) - (XVI) ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, u odnosu na težinu kompozicije.

[0143] Za tretman očiju ili drugih spoljašnjih tkiva, na primer usta ili kože, kompozicije se preferirano nanose kao topične masti, kreme, gelovi, sprejovi ili pene. Kada je formulisan u masti, aktivni sastojak može da se koristi ili sa parafinskom ili sa masnom podlogom koja se meša sa vodom. Alternativno, aktivni sastojak može da bude formulisan u kremu sa krem podlogom ulje-u-vodi ili podlogom voda-u-ulju. Farmaceutske kompozicije namenjene za topičnu primenu na očima uključuju kapi za oči u kojima je aktivni sastojak rastvoren ili suspendovan u odgovarajućem nosaču, posebno vodenom rastvaraču.

[0144] Terapeutski efektivna količina jedinjenje formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli će da zavisi od brojnih faktora, uključujući na primer, starost i težinu subjekta, precizno stanje koje zahteva tretman i njegova ozbiljnost, priroda formulacije i način primene i odluka u potpunosti zavisi od nadležnog lekara ili veterinara. U farmaceutskoj kompoziciji, svaka dozna jedinica za oralnu primenu preferirano sadrži od 0.01 do 1000 mg, još poželjnije od 0.5 do 100 mg, jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, izračunato prema slobodnoj bazi.

[0145] Jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu da se upotrebe sama ili u kombinaciji sa drugim terapeutskim sredstvima. Kombinovane terapije u skladu sa ovim pronalaskom, prema tome uključuju primenu najmanje jednog jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i upotrebu najmanje jednog drugog terapeutski aktivnog sredstva. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i drugo

4

terapeutski aktivno sredstvo(a) može da se primene zajedno u jednoj farmaceutskoj kompoziciji ili odvojeno, a kada se primenuju odvojeno, to može da bude istovremeno ili jedno za drugim bilo kojim redosledom.

[0146] U daljem aspektu, obezbeđen je produkt kombinacije koji uključuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so zajedno sa jednom ili više terapeutski aktivnih sredstava, i opciono jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata.

[0147] Stručnjaku sa iskustvom u tehnici će biti jasno da kada je to odgovarajuće, drugi terapeutski sastojak(ci) može da se koristi u obliku soli, na primer soli alkalnog metala ili amina, ili kao soli nastale dodatkom kiseline ili kao solvati, na primer hidrati, da se optimizuju aktivnost i/ili stabilnost i/ili fizičke karakteristike, kao što je rastvorljivost terapeutskog sastojka. Takođe će da bude jasno, kada je to odgovarajuće, da terapeutski sastojci mogu da se koriste u optički čistom obliku.

[0148] Kombinacije koje se odnose na prethodno, mogu za upotrebu uobičajeno da budu u obliku farmaceutske kompozicije i takve farmaceutske kompozicije uključuju kombinaciju kako je prethodno definisano, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijentom.

OPŠTI NAČINI SINTEZE

[0149] Jedinjenja formule (I) i njihove soli mogu da se izrade ovde opisanom metodologijom, što čini naredne aspekte ovog pronalaska.

[0150] U skladu sa tim, ovde je obezbeđen proces za izradu jedinjenja formule (I), koji uključuje alkilaciju jedinjenja formule (II):

gde su R2, R3i R4kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I). Na primer, jedinjenje formule (II) može da se rastvori u rastvaraču kao što je N,N-dimetilformamid, nakon toga tretira sa pogodnom bazom u prisustvu alkil halida i zagreva na odgovarajućoj temperaturi odgovarajući vremenski period, da se dobiju, nakon prečišćavanja, jedinjenja formule (I) gde su R1, R2, R3i R4kako je prethodno definisano za jedinjenje formule (I).

[0151] Ovde je obezbeđen proces za izradu jedinjenja formule (I), koji uključuje ciklizaciju jedinjenja formule (III):

gde su R3i R4kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I). Na primer, jedinjenje formule (III) može da se rastvori u smeši rastvarača kao što je etanol / voda, nakon toga tretira sa pogodnim aldehidom formule (IV) u prisustvu natrijum ditionita i zagreva na pogodnoj temperaturi odgovarajući vremenski period, da se, nakon prečišćavanja, dobiju jedinjenja formule (I). Prethodno pomenuti aldehidi imaju opštu formulu (IV), pri čemu su R1i R2kako je prethodno definisano za jedinjenje formule (I).

[0152] Ovde je obezbeđen proces za izradu jedinjenja formule (III), koji uključuje nukleofilnu funkcionalizaciju jedinjenja formule (V):

gde je R4kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I). Na primer, jedinjenje formule (V) treba da se rastvori u rastvaraču kao što je tetrahidrofuran a nakon toga tretira sa pogodnim aminom koji sadrži R3kako je prethodno definisano za jedinjenje formule (I), u prisustvu pogodne baze kao što je trietilamin. Smeša se nakon toga zagreva na pogodnoj

1

temperaturi odgovarajući vremenski period, da se nakon prečišćavanja, dobiju jedinjenja formule (III).

[0153] Ovde je obezbeđen proces za izradu jedinjenja formule (V), koji uključuje reduktivnu aminaciju jedinjenja formule (VI):

pri čemu se (VI) rastvori u pogodnom rastvaraču kao što je dihlormetan u koji su dodati odgovarajuće funkcionalizovani amin i aditiv kao što je sirćetna kiselina. Smeša se meša na odgovarajućoj temperaturi određeni vremenski period pre dodavanja redukcionog sredstva kao što je natrijum triacetoksiborhidrid. Smeša se meša odgovarajući vremenski period da se, nakon prečišćavanja, dobiju jedinjenja formule (V) gde je R4kako je prethodno definisano za jedinjenje formule (I).

[0154] Ovde je obezbeđen proces za izradu jedinjenja formule (VII), koji uključuje funkcionalizaciju jedinjenja formule (VIII):

pri čemu se jedinjenje formule (VIII) rastvori u rastvaraču kao što je dioksan a nakon toga tretira sa pogodnim aminom koji sadrži R3kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I) u prisustvu pogodne baze kao što je trietilamin. Smeša se nakon toga zagreva na pogodnoj temperaturi odgovarajući vremenski period da se, nakon prečišćavanja, dobiju jedinjenja formule (VII). Nastala jedinjenja opšte formule (VII) nakon toga reaguju sa aldehidima formule (IV) u prisustvu natrijum ditionita u odgovarajućoj smeši rastvarača kao što je etanol / voda na pogodnoj temperaturi odgovarajući vremenski period da se, nakon prečišćavanja, dobiju Jedinjenja formule (IX).

2

Dobijena jedinjenja stručnjak sa iskustvom u tehnici može nakon toga dalje da razradi po redu procedurama alkilacije, oksidacije i reduktivne aminacije da se dobiju dalje funkcionalizovane molekule koje odgovaraju opštoj formuli (I), pri čemu su R1, R2, R3i R4kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I).

[0155] Ovde je obezbeđen proces za izradu jedinjenja formule (I), koji uključuje funkcionalizaciju jedinjenja formule (X):

pri čemu su R1, R2i R3kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I). Na primer, jedinjenje formule (X) se rastvori u smeši rastvarača koja sadrži acetonitril i vodu, nakon toga tretira sa pogodnom bazom u prisustvu trimetilsulfonijum jodida i zagreva na pogodoj temperaturi odgovarajući vremenski period da se nakon izrade dobiju funkcionalizovani međuproizvodi jedinjenja. Ova jedinjenja mogu nakon toga da se dalje razrađuju, na primer, rastvaranjem u pogodnom rastvaraču, kao što je tetrahidrofuran i dodavanjem Lewisove kiseline kao što je bor trifluorid dietil eterat. Nakon mešanja na odgovarajućoj temperaturi određeni vremenski period, dodavanjem funkcionalizovanjog amina, baze i redukcionog sredstva kao što je natrijum triacetoksiborhidrid dobijaju se, nakon odgovarajućeg vremena reakcije, izrade i prečišćavanja, jedinjenja opšte formule (I), gde su R1, R2, R3i R4kako je prethodno definisano za jedinjenje formule (I).

[0156] Ovde je obezbeđen proces za izradu jedinjenja formule (X), koji uključuje funkcionalizaciju jedinjenja formule (XI):

pri čemu su R1, R2i R3kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I). Na primer, jedinjenje formule (XI) se rastvori u rastvaraču kao što je dihlormetan i tretira sa odgovarajućim oksidantom odgovarajući vremenski period da se, nakon prečišćavanja, dobiju jedinjenja formule (X).

[0157] Ovde je obezbeđen proces za izradu jedinjenja formule (XII), koji uključuje funkcionalizaciju jedinjenja formule (XIII):

pri čemu se jedinjenje formule (XIII) rastvori u rastvaraču kao što je tetrahidrofuran, nakon toga tretira sa pogodnim aminom koji sadrži R3kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I) u prisustvu pogodne baze kao što je trietilamin. Smeša se nakon toga zagreva na odgovarajućoj temperaturi odgovarajući vremenski period da se, nakon prečišćavanja, dobiju jedinjenja formule (XII). Nastala jedinjenja opšte formule (XII) mogu nakon toga da reaguju sa aldehidima formule (IV) u prisustvu natrijum ditionita u smeši pogodnih rastvarača kao što su etanol / voda, na pogodnoj tempearaturi odgovarajući vremenski period, da se nakon prečišćavanja, dobiju jedinjenja formule (XI), gde su R1, R2i R3kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I).

[0158] Pored ovoga, ovde je obezbeđen proces za izradu jedinjenja formule (I), koji uključuje funkcionalizaciju jedinjenja formule (X), gde su R1, R2i R3kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I). Na primer, jedinjenje formule (X) može da se rastvori u rastvaraču kao što je dihlormetan a nakon toga tretira sa odgovarajuće funkcionalizovanim aminom u prisustvu aditiva kao što je trietilamin. Nakon odgovarajućeg vremena reakcije, nastali međuproizvod se redukuje nakon dodavanja redukcionog sredstva kao što je natrijum triacetoksiborhidrid, odgovarajući vremenski period i na odgovarajućoj temperaturi, nakon čega se po redu izradom i prečišćavanjem smeše dobijaju jedinjenja opšte formule (I) gde su R1, R2, R3i R4kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I).

4

[0159] Pored toga, obezbeđen je proces za izradu jedinjenja formule (I), gde su R1, R2, R3i R4kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I) a R4sadrži funkcionalizovanu karboksilnu kiselinu. Na primer, jedinjenje opšte formule (I) može da se rastvori u smeši rastvarača kao što je tetrahidrofuran / metanol / voda, nakon toga tretira sa bazom kao što je litijum hidroksid odgovarajući vremenski period da se, nakon prečišćavanja, dobije jedinjenje opšte formule (I) gde su R1, R2, R3i R4kako je ovde prethodno definisano za jedinjenje formule (I).

[0160] Jedinjenja IV, VI, VIII i XIII su raspoloživa na tržištu od, na primer, proizvođača Sigma Aldrich.

PRIMERI

[0161] Naredni primeri služe da ilustruju njihovu izradu ali ih ne treba razmatrati kao limitirajuće za okvir pronalaska na bilo koji način.

[0162] U izradama Međuproizvoda i Primera, korišćenje izraza “izrađen od: Međuproizvoda X” ili “izrađeno od Primera Y” pokazuju gde može da se nađe primer izrade za korišćena jedinjenja (na primer Međuproizvod X ili Primer Y), pre nego da se obavezno koristi egzaktna izraza.

Skraćenice

[0163]

Ac Acetil

Bn Benzil

B°C terc-Butiloksikarbonil

dba Dibenzilidenaceton

DCM Dihlorometan

DIPEA N,N-diizopropiletilamin

DMAP 4-Dimetilaminopiridin

DMF N,N-dimetilformamid

DMSO Dimetilsulfoksid

EDC N-(3-Dimetilaminopropil)-N-etilkarbodiimid

ee Enantiomerni višak

Et Etil

EtOAc Etil acetat

EtOH Etanol

H ili h Sat(i)

HATU O-(7-Azabenzotriazol-1-il)-N,N,N,N-tetrametiluronijum heksafluorofosfat HOBt Hidroksibenzotriazol

HPLC Visoko efikasna tečna hromatografija

IC50Polovina maksimalne inhibitorne koncentracije

IPA izopropil alkohol

LCMS Tečna hromatografija – masena spektrometrija

MDAP Maseno usmerena auto preparativna HPLC

Me Metil

MPER Reagens za ekstrakciju proteina sisara

MS Masena spektrometrija

nBuLi n-Butillitijum

NMP N-Metil-2-pirolidon

NMR Nuklearna magnetna rezonanca

Pd/C Paladijum na ugljeniku

Pd(PPh3)4Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0)

Ph Fenil

ppm Delovi po milion

pTSA para-Toluen sulfonska kiselina

rt Sobna temperatura

SCX Sulfonska kiselina, izmena jakih katjona

SPE Čvrsta faza ekstrakcije

tBu Tercijerni butil

TFA Trifluorosirćetna kiselina

tRETVreme zadržavanja

THF Tetrahidrofuran

UV Ultraljubičasto

Eksperimentalni detalji

NMR

[0164]<1>H NMR spektri se beleže ili u CDCl3ili DMSO-d6ili na Bruker DPX 400 ili Bruker Avance DRX, Varian Unity 400 spektrometru ili JEOL Delta koji svi rade na 400 MHz. Korišćeni unutrašnji standard je ili tetrametilsilan ili rezidualni protonski rastvarač na 7.25 ppm za CDCl3ili 2.50 ppm za DMSO-d6.

LCMS

Sistem A

[0165] Kolona: 50mm x 2.1mm ID, 1.7µm Acquity UPLC BEH C18

Brzina protoka: 1mL/min.

Temp: 40°C

UV opseg detekcije: 210 do 350nm

Maseni spektar: beležen na masenom spektrometru upotrebom alternativnog skeniranja pozitivnog i negativnog oblika elektrosprej jonizacije

Rastvarači:

A: 0.1% v/v mravlja kiselina u vodi

B: 0.1% v/v mravlja kiselina u acetonitrilu

Gradijent:

Vreme (min.) A% B%

0 97 3

1.5 0 100

1.9 0 100

2.0 97 3

Sistem B

[0166] Kolona: 50mm x 2.1mm ID, 1.7µm Acquity UPLC BEH C18

Brzina protoka: 1mL/min.

Temp: 40°C

UV opseg detekcije: 210 do 350nm

Rastvarači:

A: 10mM amonijum bikarbonat u vodi podešen na pH10 sa rastvorom amonijaka B: acetonitril

Gradijent:

Vreme (min.) A% B%

0 99 1

1.5 3 97

1.9 3 97

2.0 0 100

Sistem C

[0167] Kolona: 50mm x 2.1mm ID, 1.7µm Acquity UPLC CSH C18

Brzina protoka: 1mL/min.

Temp: 40°C

UV opseg detekcije: 210 do 350nm

Korišćeni su sledeći rastvarači:

A = 0.1% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u vodi.

B = 0.1% v/v rastvor trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu.

Gradijent:

Vreme (min.) A% B%

0 95 5

1.5 5 95

1.9 5 95

2.0 95 5

Sistem D

[0168] Kolona: 50mm x 2.1mm ID, 1.7µm Acquity UPLC CSH C18

Brzina protoka: 1mL/min.

Temp: 40°C

UV opseg detekcije: 210 do 350nm

Korišćeni su sledeći rastvarači:

A = 10mM amonijum bikarbonat u vodi podešen na pH10 sa rastvorom amonijaka. B = Acetonitril.

Gradijent:

Vreme (min.) A% B%

0 97 3

1.5 5 95

1.9 5 95

2.0 97 3

Sistem E

[0169] Kolona: XBridge BEH C18(50mmx4.6mm, 2.5µm)

Brzina protoka: 1.3mL/min.

Temp: 35°C

Rastvarači:

A: 5mM amonijum bikarbonat u vodi (pH 10)

B: Acetonitril

Gradijent:

Vreme (min.) A% B%

0 95 5

0.5 95 5

1 85 15

3.3 2 98

6.0 2 98

6.1 95 5

6.5 95 5

Sistem F

[0170] Kolona: Acquity BEH C18(50mmx2.1mm, 1.7µm) Brzina protoka: 0.6mL/min.

Temp: 35°C

Rastvarači:

A: 0.1% mravlja kiselina u vodi

B: 0.1% mravlja kiselina u acetonitrilu

Gradijent:

Vreme (min.) A% B%

0 97 3

0.4 97 3

3.2 2 98

3.8 2 98

4.2 97 3

4.5 97 3

Sistem G

[0171] Kolona: Acquity BEH C18(50mmx2.1mm, 1.7µm) Brzina protoka: 0.45mL/min.

Temp: 35°C

Rastvarači:

A: 0.05% mravlja kiselina u acetonitrilu

B: 0.05% mravlja kiselina u vodi

Gradijent:

Vreme (min.) A% B%

0 3 97

0.4 3 97

7.5 98 2

9.5 98 2

9.6 3 97

10 3 97

Sistem H

[0172] Kolona: XBridge BEH C18(50mmx4.6mm, 2.5µm) Brzina protoka: 1.3mL/min.

Temp: 35°C

Rastvarači:

A: 5mM amonijum bikarbonat u vodi (pH 10) B: Acetonitril

Gradijent:

1

Vreme (min.) A% B%

0 95 5

0.5 95 5

1 85 15

6.0 2 98

9.0 2 98

9.5 95 5

10 95 5

Sistem I

[0173] Kolona: 50mm x 2.1mm ID, 1.7µm Acquity UPLC CSH C18

Brzina protoka: 1mL/min.

Temp: 40°C

UV opseg detekcije: 210 do 350nm

Rastvarači:

A: 0.1% v/v mravlja kiselina u vodi

B: 0.1% v/v mravlja kiselina u acetonitrilu

Gradijent:

Vreme (min.) A% B%

0 97 3

1.5 5 95

1.9 5 95

2.0 97 3

Sistem J

2

[0174] Kolona: 50mm x 2.1mm ID, 1.7µm Acquity UPLC CSH C18

Brzina protoka: 1mL/min.

Temp: 40°C

UV opseg detekcije: 210 do 350nm

Rastvarači:

Gradijent:

Vreme (min.) A% B%

0 97 3

0.05 97 3

1.5 5 95

1.9 5 95

2.0 97 3

Maseno usmerena autopreparativna HPLC (MDAP)

[0175] Maseno usmerena autopreparativna HPLC se sprovodi pod niže datim uslovima. UV detekcija je prosečan signal talasnih dužina od 210nm do 350nm a maseni spektri su beleženi na masenom spektrometru korišćenjem alternativnog pozitivnog i negativnog načina elektrosprej jonizacije.

Postupak A

[0176] Postupak A se izvodi na Sunfire C18koloni (obično 150mm x 30mm i.d.5µm promer pakovanja) na temperaturi sredine.

Korišćeni su sledeći rastvarači:

A = 0.1% v/v rastvor mravlje kiseline u vodi

B = 0.1% v/v rastvor mravlje kiseline u acetonitrilu.

Postupak B

[0177] Postupak B se izvodi na XBridge C18koloni (obično 100mm x 30mm i.d.5µm promer pakovanja) na temperaturi sredine. Korišćeni su sledeći rastvarači:

A = 10 mM vodeni rastvor amonijum bikarbonata podešen na pH 10 sa rastvorom amonijaka.

B = acetonitril.

Izrada međuproizvoda

Međuproizvod 1: 5-Metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid

[0178] 5-Bromo-3-metilpiridin-2(1H)-on (komercijalno raspoloživ od, na primer, Sigma Aldrich) (1.5 g, 7.98 mmol) se doda u bocu koja je prečišćena sa azotom. Doda se anhidrovani THF (75 mL) i rastvor se meša 20 min u atmosferi azota, u kupatilu suvi led/aceton. U smešu se u kapima doda 1.6 M rastvor n-butillitijuma u heksanima (14.96 mL, 23.93 mmol) i reaktivna smeša se meša 3 sata u atmosferi azota u kupatilu suvi led/aceton. U kapima se doda anhidroavni DMF (14.83 mL, 191 mmol) i reaktivna smeša se meša 1 sat u atmosferi azota u kupatilu suvi led/aceton. Smeša se neutrališe pomoću zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (30 mL) i ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu. Dobijena suspenzija se podeli između EtOAc (100 mL) i vode (100 mL) i slojevi se razdvoje. Organski sloj se ispere sa slanim rastvorom (50 mL), suši i upari pod sniženim pritiskom da se dobije bledo žuta čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se triturira sa dietil etrom i čvrsti filtrat se sakupi kao naslovljeno jedinjenje (serija 1, 210.8 mg). Vodeni slojevi iz prethodnih ekstrakcija se kombinuju i ponovo ekstrahuju sa DCM (4 x 75 mL i 4 x 100 mL).

Kombinovani organski slojevi se suše i upare pod sniženim pritiskom da se dobije bledo žuta tečnost. Tečni ostatak se azeotropira sa toluenom (2 x 30 mL) i rastvarači se uklone pod sniženim pritiskom da se dobije žuta čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se triturira sa dietil etrom i čvrsti filtrat se sakupi kao naslovljeno jedinjenje (serija 2, 452.4 mg). Ukupan prinos

4

iz reakcije je 61%. Serija 1: LCMS (Sistem A): tRET= 0.41 min, MH<+>= 138. Serija 2: LCMS (Sistem A): tRET= 0.41 min, MH<+>= 138.

Međuproizvod 2: 1.5-Dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid

[0179] Smeša 5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehida (za primer izrade videti Međuproizvod 1, 5 g, 36.5 mmol) i kalijum karbonata (10.08 g, 72.9 mmol) u DMF (50 mL) se ohladi u kupatilu led/voda i u kapima se doda metil jodid (5.70 mL, 91 mmol). Reaktivna smeša se meša 15 min u atmosferi azota i nakon toga ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu i meša narednih 2.5 sati. Čvrsta supstanca se ukloni filtriranjem i dobijeni rastvor upari pod sniženim pritiskom. Ostatak se podeli između EtOAc (2 x 150 mL) i 1:1 smeše voda:zasićeni slani rastvor (150 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u DCM i prečisti hromatografijom na koloni silika gela (100 g kolona) uz gradijent 0 - 50 % EtOAc u cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (4.4 g, 80% prinos) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.46 min, MH<+>= 152.

Međuproizvod 3: (S)-ciklopentil 2-amino-4-metilpentanoat 4-metilbenzensulfonat

[0180] Boca okruglog dna se napuni sa (S)-2-amino-4-metilpentanoatnom kiselinom (5 g, 38.1 mmol), cikloheksanom (100 mL), p-toluensulfonskom kiselinom monohidrat (9.43 g, 49.6 mmol) i ciklopentanolom (35 mL, 386 mmol). Dean - Stark kondenzator se stavi i smeša zagreva na 130°C da se izvrši kompletno rastvaranje. Smeša se meša na ovoj temperaturi preko vikenda a zatim ostavi da stoji 7 dana na sobnoj temperaturi. Precipitirana čvrsta supstanca se izdvoji filtriranjem i ispere po redu sa cikloheksanom i etil acetatom. Čvrsta supstanca se suši pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (5.56g) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ 7.62-7.79 (m, 2H), 7.25 (d, J=7.83 Hz, 2H), 5.15-5.42 (m, 1H), 3.97 (t, J=6.97 Hz, 1H), 2.39 (s, 3H), 1.42-2.10 (m, 11H), 1.02 (d, J=7.09 Hz, 6H).

Međuproizvod 4: (2S)-tetrahidrofuran-3-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoat 181] Smeša (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoatne kiseline (2.5 g, 11.51 mmol), diizopropiletil-amina (2.97 g, 4.02 mL, 23.01 mmol), 1-hidroksibenzotriazol hidrata (2.12g, 13.84 mmol), EDC (2.65 g, 13.81 mmol) i tetrahidrofuran-3-ola (10.14 g, 9.33 mL, 115 mmol) u DMF (20 mL) se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (50 mL) i zasićenog rastvora NaHCO3(50 mL). Organska faza se ispere sa 1M rastvorom hlorovodonične kiseline (50 mL), vodom (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL). Organska faza se suši i upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.19 g) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 5.34 (d, J=1.71 Hz, 1H), 4.93-5.09 (m, 1H), 4.16-4.26 (m, 1H), 3.72-3.97 (m, 4H), 2.07-2.23 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 0.82-1.02 (m, 6H).

Međuproizvod 5: (2S)-tetrahidrofuran-3-il 2-amino-3-metilbutanoat hidrohlorid

[0182] Rastvor (25)-tetrahidrofuran-3-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoata (za izradu videti Međuproizvod 4, 3.1 g, 10.79 mmol) u dioksanu (5 mL) se tretira sa 4M rastvorom vodonik hlorida u dioksanu (10 mL, 40 mmol). Reaktivna smeša se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Rastvarač se upari i ostatak azeotropira sa toluenom (x3) da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.81 g), kao svetlo braon ulje. Sirovi produkt se koristi u narednim reakcijama bez prečišćavanja.

Međuproizvod 6: (2S,3R)-2-hidroksi-2-metilpropil 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksibutanoat

[0183] U mikrotalasnoj posudi se doda 2,2-dimetiloksiran (2.058 mL, 23.17 mmol) u smeši (2S,3R)-2-((terc- butoksikarbonil)amino)-3-hidroksibutanoatne kiseline (1.016 g, 4.63 mmol) i natrijum bikarbonata (2.038 g, 24.26 mmol). Dobijena smeša se zagreva mikrotalasnim zračenjem 30 min na 120 °C. Smeša se filtrira filteru vezanim sa eluentom, koristeći EtOAc kao eluent. Isparljive komponente se uklone pod sniženim pritiskom da se dobije 1.75g bistrog ulja kao sirovi produkt. Sirovi produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (50g Silica kolona), eluira sa 0-100% EtOAc u cikloheksanu kao gradijentu sa 10 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i isparljive komponente se uklone pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.8g) kao bistro ulje. Produkt se koristi u sirovom stanju u narednoj fazi bez naknadnog prečišćavanja.

Međuproizvod 7: (2S,3R)-2-hidroksi-2-metilpropil 2-amino-3-hidroksibutanoat

[0184] 4.0M rastvor HCl u dioksanu (1 mL, 32.9 mmol) se doda u (2S,3R)-2-hidroksi-2-metilpropil 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksibutanoat (za izradu videti Međuproizvod 6, 85 mg, 0.292 mmol) i dobijena smeša se meša 2.5 sata na r.t.. Isparljive komponente se uklone pod sniženim pritiskom i ulje se triturira sa Et2O da se dobije naslovljeno jedinjenje (55.8mg). Međuproizvod se koristi u sirovom stanju u sledećoj fazi bez prečišćavanja.

Međuproizvod 8: (2S,3R)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metoksibutanoat

[0185] (2S,3R)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metoksibutanoatna kiselina (5000 mg, 21.44 mmol), EDC (4931 mg, 25.7 mmol), DMAP (262 mg, 2.144 mmol) i HOBt (3939 mg, 25.7 mmol) se rastvore u DIPEA (7.49 mL, 42.9 mmol) i DMF (25 mL). Rastvor se meša 30 minuta a zatim se doda (5)-tetrahidrofuran-3-ol (17.39 mL, 215 mmol). Reaktivna smeša se meša u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (150 mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (150 mL). Organske frakcije se izdvoje i vodeni sloj se ponovo dva puta ekstrahuje sa etil acetatom (2x150 mL). Organske frakcije se kombinuju, propuste kroz hidrofobni frit i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijeno ulje se rastvori u DCM (3 mL) i rastvor se podeli u dva dela koji se ponovo nanesu na kolonu silika gela (100 g kolone). Produkt se eluira sa gradijentom 20-70% etil acetat u cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i suše u vakuumskoj pećnici da se dobije naslovljeno jedinjenje (2156 mg).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 5.84-5.99 (m, 1H), 5.25-5.33 (m, 1H), 4.11 (dd, J=4.04, 8.59 Hz, 1H), 3.72-3.89 (m, 4H), 3.68 (s, 1H), 3.26 (s, 3H), 2.12-2.26 (m, 1H), 1.86-2.00 (m, 1H), 1.38-1.46 (m, 9H), 1.11-1.16 (m, 3H).

Međuproizvod 9: (2S,3R)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-amino-3-metoksibutanoat hidrohlorid

[0186] (2S,3R)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metoksibutanoat (za izradu videti Međuproizvod 8, 5910 mg, 17.53 mmol) se rastvori u HCl (5M u IPA) (35.1 mL, 176 mmol) i reaktivna smeša se meša u toku noći. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i dobijeno ulje se stavi u vakuumsku pečnicu u toku noći da se dobije naslovljeno jedinjenje (3890 mg, 93% prinos) kao narandžasta kristalna čvrsta supstanca koja se koristi u narednoj fazi bez naknadnog prečišćavanja.

Međuproizvod 10: (2S,3R)-Neopentil 2-amino-3-hidroksibutanoat 4-metilbenzensulfonat

[0187] U suspenziju (2S,3R)-2-amino-3-hidroksibutanoatne kiseline (2.27 g, 19.06 mmol) i monohidrata 4-metilbenzensulfonske kiseline (4.71 g, 24.77 mmol) u cikloheksanu (100 mL) se doda 2,2-dimetilpropan-1-ol (13.44 g, 152 mmol). Na posudu sa reaktivnom smešom se stavi Dean-Stark kondenzator i smeša zagreva na 130 °C u toku noći. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu formira se bela žitka masa koja se upari pod sniženim pritiskom da se ukloni rastvarač. Bela čvrsta supstanca se rastvori u minimalnoj količini vruće EtOAc i bistar rastvor se ostavi da se ohladi i nakon toga stavi u kupatilo sa vodom i ledom. Ne dolazi do kristalizacije. Rastvor se upari pod sniženim pritiskom i suši u vakuumskoj pećnici u toku četiri noći. Dobijena čvrsta supstanca se kristališe iz EtOAc i ostavi da se ohladi, nakon čega se formira bela čvrsta supstanca. Dobijena bela čvrsta supstanca se ukloni filtriranjem, ispere sa malo hladnog EtOAc i suši u vakuumskoj pećnici da se dobije naslovljeno jedinjenje (6.0 g) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (d6-DMSO, 293 K): δ 0.94 (s, 9 H) 1.22 (d, J = 6.3 Hz, 3 H) 2.29 (s, 3 H) 3.84 (d, J = 10.4 Hz, 1 H) 3.92 (d, J = 10.6 Hz, 1 H) 3.99 (d, J = 3.8 Hz, 1 H) 4.13 - 4.20 (m, 1 H) 5.61 (d, J = 4.3 Hz, 1 H) 7.11 (m, J = 7.8 Hz, 2 H) 7.48 (m, J = 8.1 Hz, 2 H) 8.22 (br.s., 3 H).

Međuproizvod 11: (2S,3R)-izobutil 2-amino-3-hidroksibutanoat 4-metilbenzensulfonat

[0188] U suspenziju (2S,3R)-2-amino-3-hidroksibutanoatne kiseline (2.5 g, 20.99 mmol) i monohidrata 4-metilbenzensulfonske kiseline (5.19 g, 27.3 mmol) u cikloheksanu (100 mL) se doda 2-metilpropan-1-ol (15.50 mL, 168 mmol). Na posudu sa reaktivnom smešom se stavi Dean-Stark kondenzator i smeša zagreva na 130 °C u toku noći. Reaktivna smeša se ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom. Dobijena bezbojna tečnost se suši tri noćiu vakuumskoj pećnici. Inicijalno, rekristalizacija je pokušana korišćenjem EtOAc, ali je uzorak ostajao u rastvoru i zbog toga je rastvarač uzklonjen pod sniženim pritiskom. Trituracija sa dietil etrom se izvodi dva puta, a dobijena bela čvrsta supstanca se ukloni filtriranjem i suši u vakuumskoj pećnici da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.2 g,) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (d6-DMSO, 293 K): δ 0.92 (d, J = 6.6 Hz, 6 H) 1.21 (d, J = 6.6 Hz, 3 H) 1.82 - 1.99 (m, 1 H) 2.29 (s, 3 H) 3.92 - 4.00 (m, 3 H) 4.11 - 4.17 (m, 1 H) 7.11 (d, J = 7.8 Hz, 2 H) 7.48 (d, J = 8.1 Hz, 2 H) 8.23 (br.s., 3 H).

Međuproizvod 12: (S)-izopropil 2-amino-3-metilbutanoat 4-metilbenzensulfonat

[0189] (S)-2-amino-3-metilbutanoatna kiselina (2.5 g, 21.34 mmol), p-toluensulfonska kiselina (5.28 g, 27.7 mmol) i propan-2-ol (15 mL, 196 mmol) se rastvore u cikloheksanu (100 mL) i zagrevaju 22 h na 130°C. Rastvor se ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu kada bela čvrsta supstanca precipitira. Ova smeša se filtrira pod vakuumom i čvrsta supstanca ispere nekoliko puta sa heksanom. Čvrsta supstanca se nakon toga prenese u vakuumsku pećnicu na 40°C i zagreva 3h. Ova čvrsta supstanca se nakon toga doda u cikloheksan (100mL) zajedno sa p-toluensulfonskom kiselinom (1.76g, 9.2mmol) i propan-2-olom (3.94g, 5.3mmol). Smeša se nakon toga zagreva 20h na 130°C. Smeša se ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu i filtrira pod gravitacijom. Bela čvrsta supstanca se nakon toga stavi u vakuumsku pećnicu 24h na 40°C da se dobije naslovljeno jedinjenje (5.98 g).<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ 7.65-7.78 (m, 2H), 7.25 (d, J=7.83 Hz, 2H), 5.10-5.19 (m, 1H), 3.87 (d, J=4.40 Hz, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.23-2.33 (m, 1H), 1.34 (d, J=6.11 Hz, 6H), 1.09 (dd, J=3.55, 6.97 Hz, 6H).

Međuproizvod 13: (S)-ciklopentil 2-aminobutanoat 4-metilbenzensulfonat

[0190] (S)-2-Aminobutanoatna kiselina (3.0 g, 29.1 mmol), ciklopentanol (20.5 g, 238 mmol) i monohidrat 4-metilbenzensulfonske kiseline (7.19 g, 37.8 mmol) se dodaju u cikloheksan (100 mL) i reaktivna smeša se zagreje na 125 °C, nakon čega dolazi do kompletnog rastvaranja. Smeša se nakon toga zagreva 24 sata na ovoj temperaturi. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, isparljive komponente se uklone iz žitke mase pod sniženim pritiskom da se dobije bela čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se kristališe iz minimalne kolčine toplog EtOAc. Dobijeni kristali se filtriraju i isperu sa malo hladnog EtOAc da se dobije naslovljeno jedinjenje (6.30 g, 18.35 mmol, 63% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (d6-DMSO, 293 K): δ 0.92 (t, J = 7.5 Hz, 3 H) 1.52 - 1.73 (m, 6 H) 1.73 - 1.95 (m, 4 H) 2.29 (s, 3 H) 3.90 - 4.01 (m, 1 H) 5.18 - 5.22 (m, 1 H) 7.11 (d, J = 7.8 Hz, 2 H) 7.48 (d, J = 8.1 Hz, 1 H) 8.26 (br.s., 3 H).

[0191] Naredni Međuproizvodi su izrađeni na sličan način kao Međuproizvod 13 koristeći odgovarajuće komercijalno raspoložive amino kiselinu i alkohol kao početne materijale:

(nastavlja se)

Međuproizvod 24: (S)-ciklopentil 2-amino-3-metilbutanoat 4-metilbenzensulfonat

[0192] (S)-2-Amino-3-metilbutanoatna kiselina (800 mg, 6.83 mmol), ciklopentanol (5.07 ml, 55.9 mmol) i monohidrat 4-metilbenzensulfonske kiseline (1.689 g, 8.88 mmol) se suspenduju u cikloheksanu (15 mL) i reaktivna smeša se zagreva na 95 °C uz postavljen Dean-Stark kondenzator. Postiže se potpuno rastvaranje i reaktivna smeša se zagreva na 95 °C u toku noći. U Dean-Stark aparatu nije bilo sakupljene vode. Temperatura reaktivne smeše se poveća na 110 °C i reaktivna smeša se zagreva na 110 °C u toku noći. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu da se dobije bela žitka masa. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije bela čvrsta supstanca. Ovaj sirovi materijal se rastvori u minimalnoj zapremini toplog EtOAc i rastvor se ostavi da se ohladi. Dobijena bela čvrsta supstanca se filtrira, ispere sa malom količinom EtOAc i suši da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.89 g, 5.28 mmol, 77% prinos) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (d6-DMSO, 293 K): δ 0.94 (d, J = 7.1 Hz, 3 H) 0.96 (d, J = 7.1 Hz, 3 H) 1.54 - 1.76 (m, 6 H) 1.81 - 1.95 (m, 2 H) 2.05 - 2.20 (m, 1 H) 2.29 (s, 3 H) 3.85 - 3.90 (m, 1 H) 5.20 - 5.24 (m, 1 H) 7.11 (d, J= 7.8 Hz, 2 H) 7.47 (d, J= 8.1 Hz, 2 H) 8.23 (br.s., 3 H).

Međuproizvod 25: (2S,3R)-izobutil 2-amino-3-hidroksibutanoat 4-metilbenzensulfonat

[0193] U suspenziju (2S,3R)-2-amino-3-hidroksibutanoatne kiseline (2.5 g, 20.99 mmol) i monohidrata 4-metilbenzensulfonske kiseline (5.19 g, 27.3 mmol) u cikloheksanu (100 mL) se doda 2-metilpropan-1-ol (15.50 ml, 168 mmol). Na posudu sa reaktivnom smešom se stavi Dean-Stark kondenzator i smeša zagreva na 130 °C u toku noći. Reaktivna smeša se ostavi da

1

se ohladi na sobnu temperaturu i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom. Dobijena bezbojna tečnost se suši tri noći u vakuumskoj pećnici. Inicijalno, rekristalizacija je pokušana koristeći EtOAc, ali uzorak ostaje u rastvoru i stoga se rastvarač ukloni pod sniženim pritiskom. Trituracija u dietil etru je ponovo bila neuspešna, tako da se uzorak (sa još uvek prisutnim etrom) drži u toku noći na vazduhu, sa pasterovom pipetom i spatulom ostavljenim u gumi da se pokuša indukcija kristalizacijom. Mala količina čvrste supstance se formira oko spatule i pipete, pa se ponovo pokuša trituracija u dietil etru i ovog puta je uspešna. Dobijena bela čvrsta supstanca se ukloni filtriranjem i suši u vakuumskoj pećnici da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.2 g, 6.33 mmol, 30% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (d6-DMSO, 293 K): δ 0.92 (d, J = 6.6 Hz, 6 H) 1.21 (d, J = 6.6 Hz, 3 H) 1.82 - 1.99 (m, 1 H) 2.29 (s, 3 H) 3.92 - 4.00 (m, 3 H) 4.11 - 4.17 (m, 1 H) 7.11 (d, J = 7.8 Hz, 2 H) 7.48 (d, J = 8.1 Hz, 2 H) 8.23 (br.s., 3 H).

Međuproizvod 26: ciklopentil 1-aminociklobutankarboksilat 4-metilbenzensulfonat

[0194] 1-Aminociklobutankarboksilna kiselina (1.66 g, 14.42 mmol), monohidrat 4-metilbenzensulfonske kiseline (3.57 g, 18.74 mmol) i ciklopentanol (10.16 g, 118 mmol) se dodaju u cikloheksan (100 mL) i reaktivna smeša se zagreva na 130 °C. Smeša se potpuno rastvori i reaktivna smeša se zagreva 3 dana na ovoj temperaturi. Rastvarač se upari jer kondenzator nije bio dobro namešten. Dobijena bledo braon čvrsta supstanca se ponovo kristališe iz EtOAc, filtrira, ispere i suši da se dobije so p-toluensulfonske kiseline početnog materijala amino kiseline. Ovaj obnovljeni početni materijal (3.7726 g, 13.13 mmol), ciklopentanol (10.16 g, 118 mmol) i monohidrat 4-metilbenzensulfonske kiseline (0.823 g, 4.33 mmol) se dodaju u cikloheksan (100 mL) i reaktivna smeša se zagreva 5 dana na 130 °C. Dobijena suspenzija se upari pod sniženim pritiskom i suši u vakuumskoj pećnici. Čvrsta supstanca se kristališe iz toplog EtOAc, filtrira, ispere i suši da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.31 g, 9.31 mmol, 65% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (d6-DMSO, 293 K): δ 1.55 - 1.65 (m, 2 H) 1.65 - 1.77 (m, 4 H) 1.81 - 1.93 (m, 2 H) 1.97 - 2.05 (m, 2 H) 2.29 (s, 3 H) 2.30 - 2.39 (m, 2 H) 2.39 - 2.49 (m, 2 H) 5.21 - 5.25 (m, 1 H) 7.12 (d, J = 8.3 Hz, 2 H) 7.48 (d, J = 8.1 Hz, 2 H) 8.50 (br.s., 3 H).

Međuproizvod 27: (2S,3S)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-3-hidroksibutanoatna kiselina

2

[0195] U izmešani rastvor (2S,3S)-2-amino-3-hidroksibutanoatne kiseline (1 g, 8.39 mmol) i kalijum karbonata (2.90 g, 20.99 mmol) u vodi (18 mL) se na 0 °C doda benzil karbonohloridat (1.438 mL, 10.07 mmol). Reaktivna smeša se meša 21 h na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se ispere sa Et2O i vodenom zakišeljenom do pH 0 dodavanjem 2M vodenog rastvora HCl. Dobijeni mlečno beli rastvor se ekstrahuje 3 puta sa EtOAc, koncentruje pod vakuumom da se dobije bezbojno ulje. U ulje se doda toluen i koncentruje pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.80g) kao bezbojno ulje. LCMS (Sistem A): tRET= 0.68 min, MH<+>= 254.

Međuproizvod 28: (2S,3S)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-(((benziloksi)karbonil)amino)-3-hidroksibutanoat

[0196] U izmešani rastvor (2S,3S)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-3-hidroksibutanoatne kiseline (za izradu videti Međuproizvod 27, 0.920 g, 3.45 mmol) u DMF (5 mL) se dodaju (S)-tetrahidrofuran-3-ol (2.343 mL, 34.5 mmol), EDC (0.794 g, 4.14 mmol), DIPEA (1.205 mL, 6.90 mmol), DMAP (0.417 g, 3.42 mmol) i 1-hidroksibenzotriazol hidrat (0.634 g, 4.14 mmol). Dobijeni rastvor se meša u toku noći i reaktivna smeša se podeli između EtOAc i zasićenog vodenog rastvora NaHCO3. Organska faza se ispere sa 2M rastvorom HCl, propusti kroz hidrofobni frit i koncentruje pod vakuumom da se dobije bezbojno ulje. Ulje se rastvori u DCM i prečisti hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa smešom cikloheksan:EtOAc (15 - 75%). Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje. Ukupan prinos iz reakcije je 46%. LCMS (Sistem A): tRET= 0.79 min, MH<+>= 324.

Međuproizvod 29: (2S,3S)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorid

[0197] U vakuum degasiranu crnu suspenziju (2S,3S)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-(((benziloksi)karbonil)amino)-3-hidroksibutanoata (za izradu videti Međuproizvod 280.508 g, 1.571 mmol) se doda 10% Pd/C (0.167 g, 0.157 mmol) u etanolu (20 mL) u atmosferi vodonika. Reaktivna smeša se meša 5h 30min, propusti kroz celite kertridž, koncentruje pod vakuumom i suši u struji azota da se dobije braon ulje. U braon ulje se dodaju Et2O (2 mL) i 1M rastvor HCl u Et2O (1.46 mL), koncentruju u struji azota i suše pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao braon čvrsta supstanca. Jedinjenje se koristi sa ovom čistoćom.

Međuproizvod 30: (S)-(S)-Tetrahidrofuran-3-il 2-amino-4-metilpentanoat

[0198] P-toluensulfonska kiselina monohidrat (7.73 g, 40.6 mmol) se doda u izmešanu suspenziju L-leucina (4.1 g, 31.3 mmol) i (S)-(+)-3-hidroksitetrahidrofurana (10 mL, 147 mmol) u cikloheksanu (105 mL). Dobijena suspenzija se zagreva 2 dana na 110 °C sa Dean-Stark aparaturom i ohladi na sobnu temperaturu uz mešanje. Dobijena čvrsta supstanca se prevede u žitku masu sa dodatnom količinom cikloheksana (100 mL), filtrira i suši pod vakuumom do braon čvrste supstance (18 g). Čvrsta supstanca se prevede u žitku masu u toluenu (100 mL) i zagreva na 60 °C. Dobijeni rastvor se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira i kombinovani filtrati iz toluena i ispirci cikloheksana se kombinuju sa filtriranom čvrstom supstancom. Dobijena suspenzija se ispere (3 x zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata, 1 x slani rastvor), suši preko MgSO4i upari pod vakuumom do braon ulja. Ulje se prenese u SPE (silika, 100 g) i eluira sa 0-5% (2 M rastvor amonijaka u metanolu) u DCM. Bistar produkt koji sadrži frakcije se upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.58 g) kao svetlo braon ulje. LCMS (Sistem C): tRET= 0.49 min, MH<+>= 202

Međuproizvod 31: (2S,3R)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat 4-metilbenzensulfonat

[0199] U suspenziju (2S,3R)-2-amino-3-hidroksibutanoatne kiseline (komercijalno raspoložive od, na primer, Sigma Aldrich) (10 g, 84 mmol) u cikloheksanu (100 mL), se na sobnoj temperaturi dodaju 2-propanol (51.7 mL, 672 mmol) i 4-metilbenzensulfonska kiselina hidrat (20.76 g, 109 mmol). Stavi se Dean-Stark aparatura i reaktivna smeša se meša 4 dana na 105 °C. Reaktivna smeša se upari pod vakuumom da se dobije bezbojno ulje (53 g). Ulje se rekristališe iz EtOAc (20 mL) da se dobije bela čvrsta supstanca (49 g). Čvrsta supstanca se suši u vakuumskoj pećnici u toku noći da se dobije naslovljeno jedinjenje (31.9 g) kao voskasta bela čvrsta supstanca. Međuproizvod je ~85% čist, koristi se na ovom nivou čistoće u narednim reakcijama.<1>H NMR (d6-DMSO): δ 1.20 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 1.25 (dd, J = 3.2, 6.4 Hz, 6 H), 2.29 (s, 3 H), 3.82 - 3.92 (m, 1 H), 4.05 - 4.16 (m, 2 H), 5.02 (m, 1 H), 7.11 (d, J = 7.9 Hz, 2 H), 7.42 - 7.51 (m, 2 H), 8.20 (br. s., 3 H).

4

Međuproizvod 31a: (2S,3R)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorid

[0200] So (2S,3R)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat 4-metilbenzensulfonske kiseline (za primer izrade videti Međuproizvod 31) (90g) se rastvori u vodi (200 mL) i zaalkališe sa zasićenim rastvorom natrijum karbonata (200 mL), a nakon toga ekstrahuje sa dihlormetanom (5 x 200 mL) i organski sloj suši i upari pod vakuumom da se dobije bledo žuto ulje. Produkt se rastvori u dihlorometanu i doda se 4.0M rastvor vodonik hlorida u dioksanu (100 mL), a nakon toga se smeša meša 1 sat, zatim upari pod vakuumom i suši u vakuumskoj pećnici u toku noći da se dobije (2S,3R)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorid (33.5 g, 169 mmol) kao bezbojna kristalna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.44 (br s, 3H), 5.65 (d, J = 10 Hz, 1H), 4.95-5.04 (m, 1H), 4.04 - 4.13 (m, 1H), 3.80 (d, J = 10 Hz, 1H), 1.18-1.29 (m, 9H).

Međuproizvod 32: (2S,3R)-ciklobutil 2-amino-3-hidroksibutanoat 4-metilbenzensulfonat

[0201] (2S,3R)-2-amino-3-hidroksibutanoatna kiselina (15 g, 126 mmol), ciklobutanol (72.6 g, 1007 mmol) i p-toluensulfonska kiselina monohidrat (31.1 g, 164 mmol) se kombinuju u cikloheksanu (480 mL) i zagrevaju četiri noći na 140 °C uz priključenu Dean-Stark aparaturu. Ukupno se ukloni 8.4 mL vode. Reakcija se koncentruje pod vakuumom. Ostatak se triturira 2 sata sa Et2O (115 mL). Dobijena čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem i ispere sa Et2O (~ 50 mL) a nakon toga suši u vakuumskoj pećnici da se dobije naslovljeno jedinjenje (40.0064 g, 110 mmol) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (d6-DMSO): δ 1.20 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 1.54 -1.71 (m, 1 H), 1.71 - 1.88 (m, 1 H), 1.98 - 2.16 (m, 2 H), 2.23 - 2.38 (m, 5 H), 3.92 (d, J = 3.9 Hz, 1 H), 4.06 - 4.21 (m, 1 H), 4.98 - 5.06 (m, 1 H), 5.63 (d, J = 4.4 Hz, 1 H), 7.11 (d, J = 7.8 Hz, 2 H), 7.41 - 7.52 (m, 2 H), 8.21 (br. s., 2 H).

Međuproizvod 33: (2S,3R)-(S)-sec-Butil 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksibutanoat

[0202] U rastvor (2S,3R)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksibutanoatne kiseline (2.95 g, 13.46 mmol) u DMF (10 mL) se dodaju HOBT (2.473 g, 16.15 mmol), EDC (3.10 g, 16.15 mmol), DMAP (0.164 g, 1.346 mmol) i DIPEA (4.70 mL, 26.9 mmol). Reaktivna smeša se meša 4 noći na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak podeli između EtOAc (2 x 150 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (150 mL). Organski slojevi se kombinuju, isperu sa 2 M vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (150 mL) i slanim rastvorom (150 mL), suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u DCM i prečisti sa SPE (silika, 100 g) uz gradijent 0-100 % EtOAc u cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.0 g, 7.26 mmol) kao bezbojna guma. LCMS (Sistem B): tRET= 1.01 min, MH<+>= 276

Međuproizvod 34: (2S,3R)-(S)-sec-(Butil 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorid

[0203] U rastvor (2S,3R)-(S)-sec-butil 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksibutanoata (za primer izrade videti Međuproizvod 33, 2.0 g, 7.26 mmol) u 1,4-dioksanu (16 mL) se doda 4 M rastvor hlorovodonične kiseline u 1,4-dioksanu (4.41 mL, 145 mmol) i reaktivna smeša meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna smeša se upari pod sniženim pritiskom. Materijal se rastvori u 1,4-dioksanu (4 mL) i doda se 4 M rastvor hlorovodonične kiseline u 1,4-dioksanu (4.41 mL, 145 mmol). Reaktivna smeša se meša 3 noći na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se upari pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.5 g, 7.09 mmol) kao svetlo braon guma.<1>H NMR (d6-DMSO): 0.89 (t, J = 7.5 Hz, 3 H), 1.22 (s, 3H), 1.23 (s, 3 H), 1.53 - 1.65 (m, 2 H), 3.87 (d, J = 3.8 Hz, 1 H), 4.10 - 4.17 (m, 1 H), 4.81 -4.91 (m, 1 H), 5.50 - 5.73 (br.s., 1 H), 8.36 (br.s., 3 H).

Međuproizvod 35: (2S)-tetrahidrofuran-3-il 2-aminobutanoat hidrohlorid

[0204] Rastvor (2S)-tetrahidrofuran-3-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoata (za izradu videti Međuproizvod 36, 3.0 g, 10.98 mmol) u dioksanu (5 mL) se tretira sa 4M rastvorom vodonik hlorida u dioksanu (10 mL, 40 mmol). Reaktivna smeša se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Rastvarač se upari i ostatak azeotropira sa toluenom (x3) da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.87 g, 8.92 mmol, 81 % prinos), kao bezbojna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.55 (br s, 3H), 5.32-5.38 (m, 1H), 3.92-3.96 (m, 1H), 3.70-3.84 (m, 4H). 2.13-2.24 (m, 2H), 1.88-2.00 (m, 1H), 1.78-1.87 (m, 1H), 0.92 (t, J= 12.0 Hz, 3H).

Međuproizvod 36: (2S)-tetrahidrofuran-3-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoat

[0205] Smeša (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoatne kiseline (2.5 g, 12.3 mmol), diizopropiletilamina (3.18 g, 4.3 mL, 24.6 mmol), 1-hidroksibenzotriazol hidrata (2.26g, 14.76 mmol), EDC (2.83 g, 14.76 mmol) i tetrahidrofuran-3-ola (10.84 g, 9.97 mL, 123 mmol) u DMF (20 mL) se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (50 mL) i zasićenog rastvora NaHCO3(50 mL). Organska faza se ispere sa 1M rastvorom hlorovodonične kiseline (50 mL), vodom (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL). Organska faza se suši i upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.07 g, 11.23 mmol, 91 % prinos), kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 5.30-5.34 (m, 1H), 5.00-5.04 (m, 1H), 4.16-4.22 (m,1H), 3.92-3.94 (m, 1H), 2.12-2.22 (m, 1H).1.93-2.03 (m, 1H), 1.78-1.84 (m, 1H), 1.60-1.69 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 0.92 (t, J = 12.0 Hz, 3H).

Međuproizvod 37: (2S)-1-metoksipropan-2-il 2-aminobutanoat hidrohlorid

[0206] Rastvor (2S)-1-metoksipropan-2-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoata (za izradu videti Međuproizvod 38, 2.98 g, 10.82 mmol) u dioksanu (5 mL) se tretira sa 4M rastvorom vodonik hlorida u dioksanu (10 mL, 40 mmol). Reaktivna smeša se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Rastvarač se upari i ostatak azeotropira sa toluenom (x3) da se dobije (2S)-1-metoksipropan-2-il 2-aminobutanoat hidrohlorid (2.13 g, 10.06 mmol, 93 % prinos) kao svetlo braon ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.64 (br s, 3H), 5.04-5.13 (m, 1H), 3.89-3.93 (m, 1H), 3.56 (s, 3H), 3.25 (d, J = 10.0 Hz, 2H) 1.79-1.90 (m, 2H),1.18 (dd, J = 12 Hz, 4 Hz, 3H), 0.93 (dt, J = 10.0 Hz, 4 Hz, 3H).

Međuproizvod 38: (2S)-1-metoksipropan-2-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoat

[0207] Smeša (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoatne kiseline (2.5 g, 12.3 mmol), diizopropiletilamina (3.18 g, 4.3 mL, 24.6 mmol), 1-hidroksibenzotriazol hidrata (HOBt) (2.26g, 14.76 mmol), EDC (2.83 g, 14.76 mmol) i 1-metoksi-2-propanola (11.09 g, 12.02 mL, 123 mmol) u DMF (20 mL) se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (50 mL) i zasićenog rastvora NaHCO3(50 mL). Organska faza se ispere sa 1M rastvorom hlorovodonične kiseline (50 mL), vodom (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL). Organska faza se suši i upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.98 g, 10.82 mmol, 88 % prinos), kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.05-5.15 (m, 2H), 4.20-4.30 (m, 1H), 3.37-3.48 (m,2H), 3.34 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 1.80-1.90 (m, 1H).1.64-1.72 (m, 1H), 1.78-1.84 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.22-1.27 (m, 3H), 0.89-0.96 (m, 3H).

Međuproizvod 39: (2S,3R)-(S)-Tetrahidrofuran-3-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksibutanoat

[0208] U rastvor (2S,3R)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksibutanoatne kiseline (5 g, 22.8 mmol) u N,N-dimetilformamidu (22.5 mL) se dodaju diizopropiletilamin (7.97 mL, 45.6 mmol), 1-hidroksibenzotriazol hidrat (4.19 g, 27.4 mmol), EDC (5.25 g, 27.4 mmol), DMAP (0.28 g, 2.26 mmol) i (S)-tetrahidrofuran-3-ol (18.3 mL, 228 mmol). Reaktivna smeša se meša 72 h na RT. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (200 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (200 mL). Organska faza se izdvoji i ispere sa 2M vodenim rastvorom HCl (160 mL), vodom (160 mL) i slanim rastvorom (160 mL). Organska faza se suši i upari da se dobije sirovi produkt kao bistro ulje. Ulje se rastvori u dihlormetanu (2 mL) i prenese na 2 x 100 g SNAP kolonu silika gela. Sirovi materijal na silika gelu se prečisti pomoću Biotage SP4 uz gradijent 10 - 50 % etil acetat u cikloheksanu preko 24 CV. Frakcije koje sadrže čist produkt se sakupe i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i dalje suši pod visokim vakuumom u toku noći da se dobije (2S,3R)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksibutanoat (2.81 g, 9.42 mmol, 41 % prinos) kao providna guma.<1>H NMR δ (500 MHz, CDCl3) ppm: 5.38 (1H, t, J=5.4 Hz), 5.29 (1H, d, J=7.7 Hz), 4.36 - 4.27 (1H, m), 4.23 (1H, d, J=8.5 Hz), 3.98 - 3.81 (4H, m), 2.25 - 2.13 (1H, m), 2.10 - 2.01 (1H, m), 1.64 (1H, br. s), 1.46 (9H, s), 1.26 (3H, d, J=6.6 Hz).

Međuproizvod 40: (2S,3R)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-amino-3-hidroksibutanoat, hidrohlorid

[0209] U rastvor (2S,3R)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksibutanoata (za izradu videti Međuproizvod 39, 570 mg, 1.97 mmol) u 1,4-dioksanu (5.5 mL) se na sobnoj temperaturi doda hlorovodonična kiselina (4 M rastvor u dioksanu) (1.97 mL, 7.88 mmol). Reaktivna smeša se meša 16 h na sobnoj temperaturi. Reakcija (prati se pomoću TLC) pokazuje konverziju, ali nije završena. Doda se nova porcija hlorovodonične kiseline (4 M rastvor u dioksanu) (1.97 mL, 7.88 mmol) i meša 6 h. Hlorovodonična kiselina (4 M rastvor u dioksanu) (1.97 mL, 7.88 mmol) se ponovo doda, meša 2 h i ostavi da stoji u toku noći. Rastvarač se ukloni pod vakuumom i produkt dalje suši u vakuumskoj pećnici da se dobije (2S,3R)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-amino-3-hidroksibutanoat, hidrohlorid (470 mg, 1.979 mmol, 100 % prinos) kao žuta guma.<1>H NMR δ (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 8.46 (3H, br. s.), 5.66 (1H, br. s.), 5.35 (1H, td, J=4.2, 2.3 Hz), 4.17 - 4.08 (1H, m), 3.89 (1H, d, J=3.8 Hz), 3.85 - 3.69 (4H, m), 2.24 - 2.13 (1H, m), 2.00 - 1.91 (1H, m), 1.22 (3H, d, J=6.6 Hz).

Međuproizvod 41: (2S)-1-metoksipropan-2-il 2-amino-3-metilbutanoat hidrohlorid

[0210] Rastvor (2S)-1-metoksipropan-2-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoata (za izradu videti Međuproizvod 42, 3.13 g, 10.82 mmol) u dioksanu (5 mL) se tretira sa 4M rastvorom vodonik hlorida u dioksanu (10 mL, 40 mmol). Reaktivna smeša se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Rastvarač se upari i ostatak azeotropira sa toluenom (x3) da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.84 g, 8.15 mmol, 75 % prinos) kao svetlo braon ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.64 (br s, 3H), 5.05-5.15 (m, 1H), 3.78-3.81 (m, 1H), 3.33-3.43 (m, 2H), 3.23-3.25 (m, 3H), 2.15-2.24 (m, 1H), 1.19 (dd, J = 12 Hz, 4 Hz, 3H), 0.98-1.02 (m, 3H), 0.94 (dd, J = 10.0 Hz, 3 Hz, 3H).

Međuproizvod 42: ((2S)-1-metoksipropan-2-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoat

[0211] Smeša (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoatne kiseline (2.5 g, 11.51 mmol), diizopropiletilamina (2.97 g, 4.02 mL, 23.01 mmol), 1-hidroksibenzotriazol hidrata (2.12g, 13.84 mmol), EDC (2.65 g, 13.81 mmol) i 1-metoksipropan-2-ola (10.37 g, 11.25 mL, 115 mmol) u DMF (20 mL) se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (50 mL) i zasićenog rastvora NaHCO3(50 mL). Organska faza se ispere sa 1M rastvorom hlorovodonične kiseline (50 mL), vodom (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL). Organska faza se suši i upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.13 g, 10.82 mmol, 94 % prinos), kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.00-5.15 (m, 2H), 4.16-4.22 (m, 1H), 3.34-3.47 (m, 2H), 3.30-3.33 (m, 3H), 1.41 (s, 9H), 1.21 (d, J = 12 Hz, 3H), 0.94 (d, J = 12 Hz, 3H), 0.84-0.88 (m, 3H).

Međuproizvod 43: (2S)-1-metoksipropan-2-il 2-amino-3,3-dimetilbutanoat hidrohlorid

[0212] 4M rastvor vodonik hlorida u dioksanu (10 mL, 40 mmol) se doda u (2S)-1-metoksipropan-2-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanoat (za izradu videti Međuproizvod 44, 2.6 g, 8.63 mmol). Reaktivna smeša se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Rastvarač se upari i ostatak azeotropira sa toluenom (x3) da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.83 g, 7.63 mmol, 89 % prinos) kao bledo žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.55 (br s, 3H), 5.05-5.16 (m, 1H), 3.32-3.45 (m, 3H), 3.23-3.25 (m, 3H), 1.19 (m, 3H), 1.02 (s, 9H).

Međuproizvod 44: (2S)-1-metoksipropan-2-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3.3-dimetilbutanoat

[0213] Smeša (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanoatne kiseline (2.5 g, 10.8 mmol), diizopropiletilamina (2.79 g, 3.78 mL, 21.6 mmol), 1-hidroksibenzotriazol hidrata (1.99g, 12.97 mmol), EDC (2.49 g, 12.97 mmol) i 1-metoksipropan-2-ola (9.74 g, 10.57 mL, 108 mmol) u DMF (20 mL) se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (50 mL) i zasićenog rastvora NaHCO3(50 mL). Organska faza se ispere sa 1M rastvorom hlorovodonične kiseline (50 mL), vodom (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL). Organska faza se suši i upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.65 g, 8.73 mmol, 81 % prinos) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.08-5.18 (m, 2H), 4.04-4.11 (m, 1H), 3.32-3.48 (m, 5H), 1.43 (s, 9H), 1.23 (d, J = 12 Hz, 3H), 0.97 (s, 9H).

Međuproizvod 45: (2S)-tetrahidrofuran-3-il 2-amino-3,3-dimetilbutanoat hidrohlorid

[0214] 4M rastvor vodonik hlorida u dioksanu (10 mL, 40 mmol) se doda u (25)-tetrahidrofuran-3-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanoat (za izradu videti Međuproizvod 46, 2.6 g, 8.63 mmol). Reaktivna smeša se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Rastvarač se upari i ostatak azeotropira sa toluenom (x3) da se dobije naslovljeno jedinjenje ((1.78 g, 7.49 mmol, 87 % prinos) kao bezbojna higroskopna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.58 (br s, 3H), 5.33-5.37 (m, 1H), 3.65-3.84 (m, 5H), 2.12-2.22 (m, 1H), 1.94-2.03 (m, 1H), 1.01 (s, 9H).

Međuproizvod 46: (2S)-tetrahidrofuran-3-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanoat

[0215] Smeša (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanoatne kiseline (2.5 g, 10.8 mmol), diizopropiletilamina (2.79 g, 3.78 mL, 21.6 mmol), 1-hidroksibenzotriazol hidrata (1.99g, 12.97 mmol), EDC (2.49 g, 12.97 mmol) i tetrahidrofuran-3-ola (9.52 g, 8.76 mL, 123 mmol) u DMF (20 mL) se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (50 mL) i zasićenog rastvora NaHCO3(50 mL). Organska faza se ispere sa 1M rastvorom hlorovodonične kiseline (50 mL), vodom (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL). Organska faza se suši i upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.7 g, 8.96 mmol, 83 % prinos) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.30-5.35 (m, 1H), 5.05-5.12 (m, 1H), 3.79-4.09 (m, 4H), 1.97-2.22 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 0.97 (s, 9H).

Međuproizvod 47: (2S)-tetrahidrofuran-3-il 2-amino-3-hidroksi-3-metilbutanoat hidrohlorid

[0216] Rastvor (2S)-tetrahidrofuran-3-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksi-3-metilbutanoata (za izradu videti Međuproizvod 48, 320 mg, 1.05 mmol) u dioksanu (2 mL) se tretira sa 4M rastvorom vodonik hlorida u dioksanu (2 mL, 8 mmol). Reaktivna smeša se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Rastvarač se upari. Ostatak se triturira sa dietil etrom, formira se guma. Supernatant se izdvoji dekantovanjem i preostali rastvarač upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (250 mg, 1.043 mmol, 99 % prinos) kao bezbojna pena.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.41 (br s, 3H), 5.49-5.56 (m, 1H), 5.32-5.38 (m,1H), 3.70-3.85 (m, 5H), 2.11-2.23 (m, 1H), 1.93-2.02 (m, 1H), 1.29-1.34 (m, 3H), 1.16-1.19 (m, 3H).

Međuproizvod 48: (2S)-tetrahidrofuran-3-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksi-3-metilbutanoat

[0217] Rastvor (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksi-3-metilbutanoatne kiseline (250 mg, 1.072 mmol) u tetrahidrofuranu (5 mL) se tretira sa trifenilfosfinom (309 mg, 1.18 mmol) i diizopropil azodikarboksilatom (238 mg, 229 µL, 1.18 mmol). Smeša se meša 5 minuta na sobnoj temperaturi a nakon toga se doda tetrahidrofuran-3-ol (472 mg, 434 mL, 5.36 mmol). Reaktivna smeša se meša 18 sati na sobnoj temperaturi. Rastvarač se upari. Ostatak se rastvori u etil acetatu (15 mL). Rastvor se ispere sa vodom (2x10 mL) i slanim rastvorom (10 mL). Organska faza se suši i upari. Ostatak se prečisti hromatografijom [40% etil acetat/heksan] da se dobije naslovljeno jedinjenje (142 mg, 0.468 mmol, 43.7 % prinos)

1

kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.33-5.44 (m, 2H), 4.14-4.20 (m, 1H), 3.83-3.97 (m, 4H), 2.13-2.25 (m, 1H), 2.00-2.12 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.26-1.29 (m, 6H).

Međuproizvod 49: (S)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-amino-3-metilbutanoat hidrohlorid

[0218] Rastvor (S)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoata (za izradu videti Međuproizvod 50, 2.73 g, 9.50 mmol) u etil acetatu (5 mL) se tretira sa 4M rastvorom vodonik hlorida u dioksanu (5 mL). Reaktivna smeša se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Rastvarač se upari. Trituracijom sa dietil etrom se ne dobija čvrsta supstanca. Rastvarač se upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.98 g, 8.85 mmol, 93 % prinos) kao bezbojno ulje. Uzorak stajanjem nekoliko dana na sobnoj temperaturi očvršćava.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.69 (br s, 3H), 5.32-5.37 (m, 1H), 3.70-3.84 (m, 5H), 2.12-2.24 (m, 2H), 1.93-2.02 (m, 1H), 0.99 (t, J = 12 Hz, 3H), 0.94 (t, J = 12 Hz, 3H).

Međuproizvod 50: (S)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoat

[0219] Smeša (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoatne kiseline (2.5 g, 11.51 mmol), diizopropiletilamina (2.97 g, 4.02 mL, 23.01 mmol), 1-hidroksibenzotriazol hidrata (HOBt) (2.12g, 13.84 mmol), EDC (2.65 g, 13.81 mmol) i (S)-tetrahidrofuran-3-ola (5.07 g, 3.91 mL, 57.5 mmol) u DMF (20 mL) se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (50 mL) i zasićenog rastvora NaHCO3(50 mL). Organska faza se ispere sa 1M rastvorom hlorovodonične kiseline (50 mL), vodom (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL). Organska faza se suši i upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.73 g, 9.50 mmol, 83 % prinos), kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.30-5.35 (m, 1H), 4.90-5.04 (m,1H), 4.16-4.20 (m, 1H), 3.75-3.93 (m, 4H), 2.08-2.22 (m, 2H), 1.98-2.07 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 0.95 (t, J = 12 Hz, 3H), 0.88 (t, J = 12 Hz, 3H).

Međuproizvod 51: (S)-ciklopentil 2-amino-3-hidroksi-3-metilbutanoat hidrohlorid

[0220] Rastvor (S)-ciklopentil 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksi-3-metil butanoata (za izradu videti Međuproizvod 52, 330 mg, 1.09 mmol) u etil acetatu (2 mL) se tretira sa 4M rastvorom HCl u dioksanu (2 mL). Reaktivna smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku

2

noći. Rastvarač se upari. Pokušajem trituracije sa heksanom/dietil etar se ne dobija čist produkt. Jedinjenje se rastvori u metanolu i prenese na SCX kolonu. Kolona se ispere sa metanolom, nakon toga eluira sa 2M rastvorom amonijaka u metanolu. NH3/metanol frakcije se upare. Ostatak se rastvori u dietil etru (5 mL) i rastvor se tretira sa 1M rastvorom vodonik hlorida u dietil etru (0.5 mL). Rastvarač se upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (258 mg, 1.085 mmol, 99 % prinos) kao higroskopna bezbojna guma.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.33 (br s, 3H), 5.50-5.54 (m, 1H), 5.17-5.23 (m, 1H), 3.68-3.77 (m, 1H), 3.30-3.37 (m, 1H), 1.78-1.89 (m, 2H), 1.53-1.74 (m, 5H), 1.17 (s, 6H).

Međuproizvod 52: (S)-ciklopentil 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksi-3-metilbutanoat

[0221] Rastvor (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksi-3-metilbutanoatne kiseline (500 mg, 2.14 mmol) u tetrahidrofuranu (5 mL) se tretira sa trifenilfosfinom (618 mg, 2.36 mmol) i diizopropilazodikarboksilatom (477 mg, 458 µL, 2.36 mmol). Reaktivna smeša se meša 10 minuta na sobnoj temperaturi a nakon toga se doda ciklopentanol (923 mg, 973 µL, 10.72 mmol). Reaktivna smeša se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Rastvarač se upari. Ostatak se rastvori u etil acetatu (10 mL). Rastvor se ispere sa zasićenim rastvorom NaHCO3(10 mL), 1M rastvorom hlorovodonične kiseline (10 mL), vodom (10 mL) i slanim rastvorom (10 mL). Organska faza se suši i upari. Ostatak se prečisti hromatografijom [30% etil acetat/heksan] da se dobije naslovljeno jedinjenje (330 mg, 1.095 mmol, 51.1 % prinos) kao bezbojna gumasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 6.48 (br s, 1H), 5.20-5.43 (m,1H), 4.93-5.01 (m, 1H), 4.05-4.36 (m, 1H), 1.50-1.88 (m, 6H), 1.45 (s, 6H), 1.23-1.27 (m, 9H).

Međuproizvod 53: (2S)-1-metoksipropan-2-il 2-amino-3-hidroksi-3-metilbutanoat hidrohlorid

[0222] Rastvor (2S)-1-metoksipropan-2-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksi-3-metilbutanoata (za izradu videti Međuproizvod 54, 480 mg, 1.57 mmol) u etil acetatu (2 mL) se tretira sa 4M rastvorom HCl u dioksanu (2 mL). Reaktivna smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Rastvarač se upari. Jedinjenje se rastvori u metanolu i prenese na SCX kolonu. Kolona se ispere sa metanolom, nakon toga eluira sa 2M rastvorom amonijaka u metanolu. NH3/metanol frakcije se upare. Ostatak se rastvori u dietil etru (5 mL) i rastvor se tretira sa 1M rastvorom vodonik hlorida u dietil etru (0.5 mL). Rastvarač se upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (315 mg, 1.303 mmol, 83 % prinos) kao higroskopna bezbojna guma.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.27 (br s, 3H), 5.48-5.54 (m, 1H), 5.06-5.16 (m, 1H), 3.74-3.82 (m, 1H), 3.38-3.47 (m, 1H), 3.27 i 3.25 (2 x s, 3H. OMe) 1.36 i 1.32 (2 x s, 3H), 1.20 (d, J = 8 Hz, 3H), 1.17 i 1.14 (2 x s, 3H).

Međuproizvod 54: (2S)-1-metoksipropan-2-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksi-3-metilbutanoat

[0223] Rastvor (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-hidroksi-3-metilbutanoatne kiseline (500 mg, 2.14 mmol) u tetrahidrofuranu (5 mL) se tretira sa trifenilfosfinom (618 mg, 2.36 mmol) i diizopropilazodikarboksilatom (477 mg, 458 µL, 2.36 mmol). Reaktivna smeša se meša 10 minuta na sobnoj temperaturi a nakon toga se doda 1-metoksipropan-2-ol (966 mg, 1.05 mL, 10.72 mmol). Reaktivna smeša se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Rastvarač se upari. Ostatak se rastvori u etil acetatu (10 mL). Rastvor se ispere sa zasićenim rastvorom NaHCO3(10 mL), 1M rastvorom hlorovodonične kiseline (10 mL), vodom (10 mL) i slanim rastvorom (10 mL). Organska faza se suši i upari. Ostatak se prečisti hromatografijom [40% etil acetat/heksan]. U produkt se doda heksan (10 mL) i meša 30 minuta. Čvrsta supstanca se izdvoji filtriranjem, ispere sa heksanom i suši da se dobije naslovljeno jedinjenje (487 mg, 1.595 mmol, 74.4 % prinos), kao bezbojna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.16-5.43 (m,1H), 4.10-4.30 (m, 1H), 2.38-2.50 (m, 2H), 3.35 i 3.37 (2 x s, 3H), 1.60 (s, 3H), 1.45 (s, 3H), 1.25-1.29 (m, 12H).

Međuproizvod 55: (S)-ciklopentil 2-amino-2-ciklopropilacetat

[0224] 20 v/v piperidina u DMF (1 mL) se doda u rastvor (S)-ciklopentil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-ciklopropilacetata (za izradu videti Međuproizvod 56, 240 mg, 0.59 mmol) u DMF (1 mL). Reaktivna smeša se meša 18 sati na sobnoj temperaturi.

Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (15 mL) i vode (15 mL). Organska faza se izdvoji, ispere sa vodom (2x10 mL), suši i upari. Ostatak se rastvori u metanolu i prenese u SCX kolonu. Kolona se ispere sa metanolom (3CV) i nakon toga eluira sa 2M rastvorom amonijaka u metanolu (5CV). Frakcija amonijak/MeOH se upari. Ostatak se rastvori u dihlormetanu (2 mL). Doda se 1.0M rastvor vodonik hlorida u dietil etru (1 mL). Rastvarač se upari i ostatak triturira sa dietil etrom da se dobije čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se

4

rastvori u etil acetatu (20 mL) i rastvor ispere sa zasićenim rastvorom NaHCO3i slanim rastvorom. Organska faza se suši i upari. Ostatak se prečisti hromatografijom [0-4% metanol/dihlorometan] da se dobije naslovljeno jedinjenje (43 mg, 0.235 mmol, 39.6 % prinos) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.18-5.25 (m, 1H), 2.78-2.82 (m, 1H), 1.80-1.93 (m, 2H), 1.56-1.78 (m, 6H), 0.93-1.03 (m, 1H), 0.41-0.58 (m, 2H), 0.27-0.34 (m, 1H).

Međuproizvod 56: (S)-ciklopentil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-ciklopropilacetat

[0225] Dicikloheksilkarbodiimid (147 mg, 0.711 mmol) se doda u izmešani rastvor (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-2-ciklopropilsirćetne kiseline (200 mg, 0.593 mmol) u ciklopentanolu (2 mL, veliki višak). Reaktivna smeša se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (20 mL) i vode (20 mL). Organska faza se izdvoji, ispere sa vodom i slanim rastvorom. Suši se i upari. Ostatak se prečisti hromatografijom [10-30% etil acetat/heksan] da se dobije naslovljeno jedinjenje (246 mg, 0.607 mmol, 102 % prinos) kao bezbojna čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 1.42 min; MH<+>406.

Međuproizvod 57: (S)-ciklopentil 2-amino-3-ciklopropilpropanoat

[0226] 20 v/v piperidina u DMF (1 mL) se doda u (S)-ciklopentil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-ciklopropilpropanoat (za izradu videti Međuproizvod 58, 270 mg, 0.59 mmol). Reaktivna smeša se meša 18 sati na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (15 mL) i zasićenog rastvora NaHCO3(15 mL). Organska faza se izdvoji, ispere sa vodom (2x10 mL) i slanim rastvorom (10 mL). Organska faza se suši i upari. Ostatak se prečisti hromatografijom [0-4% metanol/dihlorometan] da se dobije naslovljeno jedinjenje (48 mg, 0.243 mmol, 37.8 % prinos) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.11-5.18 (m, 1H), 3.42-3.46 (m, 1H), 3.24-3.28 (m, 1H), 1.76-1.86 (m, 1H), 1.45-1.77 (m, 8H), 0.65-0.75 (m, 1H), 0.38-0.46 (m, 2H), 0.04-0.08 (m, 2H).

Međuproizvod 58: (S)-ciklopentil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-ciklopropilpropanoat

[0227] Ciklopentanol (2 mL, veliki višak) se doda u (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-ciklo-propilpropanoatnu kiselinu (250 mg, 0.711 mmol). Smeša se meša i tretira sa N-etoksikarbonil-2-etoksi-1,2-dihidrohinolinom (EEDQ) (211 mg, 0.854 mmol). Reaktivna smeša se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (10 mL) i zasićenog rastvora NaHCO3(10 mL). Organska faza se izdvoji, ispere sa vodom i slanim rastvorom. Suši se i upari. Ostatak se prečisti hromatografijom [10-30% etil acetat/heksan] da se dobije naslovljeno jedinjenje (270 mg, 0.644 mmol, 90 % prinos).

LCMS (Sistem A): tRET= 1.45 min; MH<+>420.

Međuproizvod 59: (R)-ciklopentil 2-amino-3-ciklopropilpropanoat

[0228] 20 v/v piperidina u DMF (1 mL) se doda u (R)-ciklopentil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-ciklopropilpropanoat (za izradu videti Međuproizvod 60, 258 mg, 0.615 mmol). Reaktivna smeša se meša 18 sati na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (15 mL) i zasićenog rastvora NaHCO3(15 mL). Organska faza se izdvoji, ispere sa vodom (2x10 mL) i slanim rastvorom (10 mL). Organska faza se suši i upari. Ostatak se prečisti hromatografijom [0-4% metanol/dihlorometan] da se dobije naslovljeno jedinjenje (59 mg, 0.299 mmol, 48.6 % prinos) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.11-5.18 (m, 1H), 3.42-3.46 (m, 1H), 3.24-3.28 (m, 1H), 1.76-1.86 (m, 1H), 1.45-1.77 (m, 8H), 0.65-0.75 (m, 1H), 0.38-0.46 (m, 2H), 0.04-0.08 (m, 2H).

Međuproizvod 60: (R)-ciklopentil 2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-ciklopropilpropanoat

[0229] Ciklopentanol (2 mL, veliki višak) se doda u (R)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-ciklopropilpropanoatnu kiselinu (250 mg, 0.711 mmol). Smeša se meša i tretira sa N-etoksikarbonil-2-etoksi-1,2-dihidrohinolinom (EEDQ) (211 mg, 0.854 mmol). Reaktivna smeša se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (10 mL) i zasićenog rastvora NaHCO3(10 mL). Organska faza se izdvoji, ispere sa vodom i slanim rastvorom. Suši se i upari. Ostatak se prečisti hromatografijom [1030% etil acetat/heksan] da se dobije naslovljeno jedinjenje (258 mg, 0.615 mmol, 86 % prinos) kao bezbojno ulje. LCMS (Sistem A): tRET= 1.45 min; MH<+>420.

Međuproizvod 61: (S)-ciklopentil 2-aminopropanoat hidrohlorid

[0230] (S)-ciklopentil 2-((terc-butoksikarbonil)amino)propanoat (za izradu videti Međuproizvod 62, 4.145 g, 16.11 mmol) se rastvori u 1,4-dioksanu (25 mL) i nakon toga se u smešu doda 4M rastvor vodonik hlorida u dioksanu (25 mL, 100 mmol) i boca meša 18h na 25°C. Rastvarač se ukloni pod vakuumom. Produkt se suspenduje u etil acetatu i rastvarač upari (x4) dok se ne formira bela čvrsta supstanca i identifikuje kao naslovljeno jedinjenje (2.801 g, 14.46 mmol, 90 % prinos).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ ppm 5.28-5.34 (m, 1H), 4.00-4.08 (q, J = 8 Hz, 1H), 1.90-2.00 (m, 1H), 1.64-1.84 (m, 6H), 1.52 (d, J = 8Hz, 3H).

Međuproizvod 62: (S)-ciklopentil 2-((terc-butoksikarbonil)amino)propanoat

[0231] (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)propanoatna kiselina (5 g, 26.4 mmol) i ciklopentanol (24.01 mL, 264 mmol) se rastvore u toluenu (250 mL). Nakon toga se u reaktivnu smešu doda 2-(tributilfosforaniliden)acetonitril (14.46 mL, 52.9 mmol) i refluksuje 60 sati. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu. Nakon toga se u reaktivnu smešu doda 100 mL etil acetata. Nakon toga se ispere, prvo sa 250 mL zasićenog rastvora natrijum bikarbonata i drugi put sa 250 mL slanog rastvora. Organski sloj se suši preko MgSO4i rastvarač se ukloni pod vakuumom. Čvrsta supstanca se zatim rastvori u MeOH i propusti kroz 100g SCX kolonu. Kolona se ispere prvo sa metanolom i nakon toga sa NH3u MeOH. Na osnovu TLC, konstatovali smo da je traženi produkt u prvoj metanolnoj fazi. Rastvarač se ukloni da se dobije bledo žuto ulje, koje se prečisti hromatografijom [0-30% etil acetat u cikloheksanu]. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i rastvarač se ukloni da se dobije naslovljeno jedinjenje (4.145 g, 16.11 mmol, 61.0 % prinos) kao bledo žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ ppm 5.13-5.19 (m, 1H), 4.00-4.13 (m, 1H), 1.80-1.90 (m, 5H), 1.43 (s, 9H), 1.31 (d, J = 8Hz, 3H).

Međuproizvod 63: (S)-(S)-1-metoksipropan-2-il 2-amino-3-metilbutanoat hidrohlorid

[0232] (S)-(S)-1-metoksipropan-2-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoat (za izradu videti Međuproizvod 64, 1.2 g, 4.15 mmol) se rastvori u etil acetatu (2 mL) i rastvor se tretira sa 4M rastvorom vodonik hlorida u dioksanu (2 mL). Reaktivna smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Rastvarač se upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (725 mg, 3.21 mmol, 77 % prinos) kao bezbojna guma.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.80 (br s, 3H), 5.19-5.27 (m, 1H), 3.39-3.53 (m, 2H), 3.33 (s, 3H), 2.43-2.53 (m, 1H), 1.28 (d, J = 8 Hz, 3H), 1.13-1.18 (m, 6H).

Međuproizvod 64: (S)-(S)-1-metoksipropan-2-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoat

[0233] Smeša (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoatne kiseline (1.0 g, 4.60 mmol), diizopropiletilamina (1.19 g, 1.608 mL, 9.21 mmol), 1-hidroksibenzotriazol hidrata (846 mg, 5.52 mmol), EDC (1.06 g, 5.53 mmol) i (S)-1-metoksipropan-2-ola (1.037 g, 1.127 mL, 11.5 mmol) u DMF (5 mL) se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (15 mL) i zasićenog rastvora NaHCO3(15 mL). Organska faza se ispere sa 1M rastvorom hlorovodonične kiseline (15 mL), vodom (15 mL) i slanim rastvorom (15 mL). Organska faza se suši i upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.23 g, 4.25 mmol, 92 % prinos), kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.13-5.19 (m, 1H), 5.06-5.10 (m, 1H (NH?)), 4.19-4.23 (m, 1H), 3.36-3.46 (m, 2H), 3.33 (s, 3H), 2.10-2.18 (m, 1H), 1.45 (s, 9H), 1.23-1.27 (m, 3H), 0.88-1.02 (m, 6H).

Međuproizvod 65: (S)-izopropil 2-amino-3-metilbutanoat, 4-metilbenzensulfonat

[0234] (S)-2-amino-3-metilbutanoatna kiselina (2.5 g, 21.34 mmol), p-toluensulfonska kiselina (5.28 g, 27.7 mmol) i propan-2-ol (15 mL, 196 mmol) se rastvore u cikloheksanu (100 mL) i zagrevaju 22h na 130°C. Rastvor se ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu kada bela čvrsta supstanca precipitira. Ova smeša se filtrira pod vakuumom i čvrsta supstanca ispere nekoliko puta sa heksanom. Čvrsta supstanca se nakon toga stavi u vakuumsku pećnicu 3 sata na 40°C. Ova čvrsta supstanca se nakon toga doda u cikloheksan (100mL) zajedno sa ptoluensulfonskom kiselinom (1.76g, 9.2mmol) i propan-2-olom (3.94g, 65.3mmol). Smeša se nakon toga zagreva 20 sati na 130°C. Smeša se ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu i filtrira pod gravitacijom. Bela čvrsta supstanca se nakon toga stavi 24 sata u vakuumsku pećnicu na 40°C da se dobije naslovljeno jedinjenje (5.977 g, 18.09 mmol, 85 % prinos).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.24 (br s, 3H), 7.48 (d, J = 12 Hz, 2H), 7.11 (d, J = 12 Hz, 2H), 4.99-5.09 (m, 1H), 3.85-3.91 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.09-2.19 (m, 1H), 1.23-1.28 (m, 6H), 0.94-1.00 (m, 6H).

Međuproizvod 66: (S)-izobutil 2-amino-3-metoksipropanoat, hidrohlorid

[0235] 10% Paladijum na ugljeniku, 50% vodena pasta (350 mg, 20maseni %) se doda u izmešani rastvor (S)-izobutil 2-(((benziloksi)karbonil)amino)-3-metoksipropanoata (za izradu videti Međuproizvod 67, 1.75 g, 5.66 mmol) i amonijum formata (1.78 g, 28.3 mmol) u izopropanolu (50 mL). Reaktivna smeša se meša 2 sata na 90°C. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu i filtrira kroz celite. Rastvarač se upari iz filtrata. Ostatak se rastvori u etil acetatu (10 mL) i tretira sa 1M rastvorom vodonik hlorida u dietil etru (6.0 mL, 6 mmol). Rastvarač se upari i ostatak se triturira sa dietil etrom da se dobije naslovljeno jedinjenje (840 mg, 3.97 mmol, 70.1 % prinos), kao bledo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.68 (br s, 3H), 4.32 (br s, 1H), 4.01-4.06 (m, 1H), 3.88-3.94 (m, 1H), 1.92 (heptet, J = 8 Hz, 1H), 0.91 (d, J = 8 Hz, 6H).

Međuproizvod 67: (S)-izobutil 2-(((benziloksi)karbonil)amino)-3-metoksipropanoat

[0236] Smeša (S)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-3-metoksipropanoatne kiseline (1.6 g, 6.32 mmol), N-etilmorfolina (1.45 g, 1.60 mL, 12.64 mmol), N-hidroksibenzotriazol hidrata (1.16 g, 7.58 mmol), EDC (1.45 g, 7.58 mmol) i izobutanola (2.34 g, 2.92 mL, 31.6 mmol) u dihlormetanu (20 mL) se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Rastvarač se upari. Ostatak se podeli između etil acetata (25 mL) i zasićenog rastvora NaHCO3(25 mL). Organska faza se izdvoji, ispere sa 2M rastvorom hlorovodonične kiseline, vodom i slanim rastvorom.

Organska faza se suši i upari. Ostatak se azeotropira sa toluenom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.81 g, 5.85 mmol, 93 % prinos), kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.15-7.40 (m, 5H), 5.6-5.65 (m, 1H, (NH?)), 5.14 (s, 2H), 4.47-4.52 (m, 1H), 3.89-4.04 (m, 2H), 3.81-3.87 (m, 1H), 3.61-3.68 (m, 1H), 1.96 (heptet, J = 8 Hz, 1H), 0.94 (d, J = 8 Hz, 6H).

Međuproizvod 68: (S)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-3-metoksipropanoatna kiselina

Faza i).

[0237] Ref: Tetrahedron asimetrija 9 (1988)3841.

[0238] Smeša Z-Ser-OH (1.0 g, 4.18 mmol), srebro(I) oksida (4.84 g, 20.9 mmol) i jodometana (5.93 g, 2.61 mL, 41.8 mmol) u acetonitrilu (20 mL) se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna smeša se filtrira kroz celite i rastvarač se upari iz filtrata da se dobije produkt faze i) kao svetlo žuto ulje.

Faza ii).

[0239] Produkt Faze i) se rastvori u tetrahidrofuranu (5 mL) i metanolu (5 mL). Rastvor se tretira sa 1M rastvorom litijum hidroksida (10 mL). Reaktivna smeša se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Metanol i THF se upare. Ostatak se razblaži sa vodom (10 mL) i zakiseli sa 2M rastvorom hlorovodonične kiseline. Smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (3x20 mL). Kombinovani ekstrakti se suše i upare da se dobije naslovljeno jedinjenje (869 mg, 3.43 mmol, 82 % prinos), kao bezbojna guma. LCMS (Sistem A): tRET= 0.75 min; MH<+>254.

Međuproizvod 69: (S)-izopropil 2-amino-4-hlorobutanoat

[0240] Tionil hlorid (2.0 g, 1.23 mL, 16.8 mmol) se polako dodaje u izmešani rastvor L-homoserina (1.0 g, 8.4 mmol) u izopropanolu (15 mL). Reaktivna smeša se meša na 60°C u toku noći. Reaktivna smeša se ohladi i rastvarač se upari. Ostatak se triturira sa dietil etrom da se dobije smeša. Čvrsta supstanca se podeli između etil acetata (25 mL) i zasićenog rastvora NaHCO3(25 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (2x25 mL). Kombinovani organski slojevi se suše i upare da se dobije naslovljeno jedinjenje (160 mg, 0.891 mmol, 10.61 % prinos), kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.03 (heptet, J = 8 Hz, 1H), 3.63-3.77 (m, 2H), 3.55-3.59 (m, 1H), 2.14-2.23 (m, 1H) 1.84-1.95 (m, 1H), 1.25 (d, J = 8 Hz, 3H), 1.23 (d, J = 8 Hz, 3H).

Međuproizvod 70: (4-(Etilamino)-3-nitrofenil)metanol

[0241] (4-fluoro-3-nitrofenil)metanol (500 mg, 2.92 mmol), 70% etanamin u vodi (286 µl, 2.92 mmol) i DIPEA (1531 µl, 8.77 mmol) se rastvore u tetrahidrofuranu (THF) (3 mL) i reaktivna smeša se zagreva 3 sata u Biotage Initiator microwave koristeći početnu visoku apsorpciju podešenu na 120°C. Reaktivna smeša se podeli između DCM (25 mL) i zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (25 mL). Slojevi se razdvoje i vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (2x25 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Sirovi uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na koloni silika gela (50 g silika) uz gradijent 0-5 % dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu preko 10 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (4-(etilamino)-3-nitrofenil)metanol (524.3 mg, 2.67 mmol, 91 % prinos) kao narandžasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.80 min; MH<+>197.<1>H NMR δ (400 MHz, D6-DMSO): 1.22, (t, J = 7 Hz, 3H), 3.34-3.42, (m, 2H), 4.39, (d, J=5 Hz, 2H), 5.18, (t, J= 6 Hz, H), 7.03, (d, J= 9 Hz, H), 7.48, (dd, J = 6 Hz, J = 3 Hz, H), 7.98 - 8.01, (m, H), 8.02 - 8.07, (m, H).

[0242] Naredni Međuproizvodi su izrađeni na sličan način kao Međuproizvod 70 koristeći odgovarajuće komercijalno raspoložive amine:

(U tabelama, detalji korišćenog LCMS sistema, vreme zadržavanja (tRET), MH<+>, prinos reakcije i % prinosa su dati za svaki Međuproizvod).

1

n l

Međuproizvod 84: (S)-terc-butil 3-(((4(hidroksimetil)-2-nitrofenil)amino)metil)piperidin-1-karboksilat

[0243] DIPEA (7.65 mL, 43.8 mmol) se doda u izmešani rastvor 4-fluoro-3-nitrobenzil alkohola (2.50 g, 14.61 mmol) i (3S)-3-(aminometil)piperidina (4.70 g, 21.91 mmol u 2-metiltetrahidrofuranu (15 mL). Rastvor se zagreva na 80 °C u toku noći, reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu i dobijena čvrsta supstanca podeli između EtOAc i zasićenog vodenog rastvora NaHCO3. Vodeni sloj se ukloni a organski sloj ispere (1x sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, 1x sa slanim rastvorom). Organski deo se suši preko MgSO4i upari pod vakuumom da se dobije narandžasto ulje. Ostatak se rastvori u DCM i prečisti hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa smešom cikloheksan:EtOAc (10 - 66%).

Frakcije koje sadrže produkt se upare pod vakuumom do narandžastog penastog ulja. Ulje se rastvori u TBME i upari pod vakuumom do narandžastog ulja da se dobije naslovljeno jedinjenje kao narandžasto ulje (5.52 g). Ukupan prinos iz reakcije je 88%. LCMS (Sistem C): tRET= 1.27 min, MH<+>= 366.

[0244] Naredni Međuproizvodi su izrađeni na sličan način kao Međuproizvod 84 koristeći na tržištu raspoložive odgovarajuće amine:

2

n l

Međuproizvod 89: 5-(1-etil-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on

[0245] 4-(etilamino)-(3-nitrofenil)metanol (za izradu videti Međuproizvod 70, 520 mg, 2.65 mmol), 5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za izradu videti Međuproizvod 1, 363 mg, 2.65 mmol) i natrijum ditionit (1384 mg, 7.95 mmol) se dodaju u etanol (8 mL) i vodu (4 mL). Reaktivna smeša se zagreva 5 sati mikrotalasima na 100°C. Reaktivna smeša se podeli između 25% rastvoru propan-2-ola u DCM (25 mL) i zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (25 mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa 25% rastvoru propan-2-ola u DCM (3x25 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u DCM i prečisti hromatografijom na koloni silika gela (50 g silika) uz gradijent 2-12% DCM-2M rastvor amonijaka u metanolu preko 10 zapremina kolone a nakon toga zadržavanjem sa 12% DCM-2M rastvor amonijaka u metanolu za 5 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (295.1 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 060 min, MH<+>= 284.

[0246] Naredni Međuproizvodi su izrađeni na sličan način kao Međuproizvod 89, koristeći kao odgovarajuće ili 5-Metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (Međuproizvod 1) ili 1,5-Dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (Međuproizvod 2):

n l

Međuproizvod 103: (S)-terc-butil 3-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat

[0247] Natrijum hidrosulfit (7.89 g, 45.3 mmol) se doda u suspenziju (S)-terc-butil 3-(((4-(hidroksimetil)-2-nitrofenil)amino)metil)piperidin-1-karboksilata (za primer izrade videti Međuproizvod 84) (5.52g, 15.11 mmol) i 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehida (za izradu videti Međuproizvod 2, 2.97 g, 19.64 mmol) u smeši vode (20 mL) i etanola (40 mL). Dobijena suspenzija se zagreva 6 h na 80 °C, ohladi na sobnu temperaturu i ostavi da stoji 1.5 dan. Smeša se podeli između zasićenog vodenog rastvora NaHCO3(200 mL) i smeše DCM:IPA (3:1, 200 mL). Organski sloj se ukloni i vodeni sloj ekstrahuje [2x DCM:IPA (3:1, 200 mL)]. Kombinovani organski slojevi se suše preko MgSO4i upare pod vakuumom u bledo braon penu. Ostatak se rastvori u DCM, prečisti hromatografijom na silika

4

gelu uz eluiranje sa smešom EtOAc:EtOH (12.5 - 25%). Frakcije koje sadrže produkt se upare pod vakuumom u bledo braon penu i prevedu u žitku masu sa TBME i cikloheksanom.

Dobijena suspenzija se upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca. Ukupan prinos iz reakcije je 49%.

LCMS (Sistem C): tRET= 0.68 min, MH<+>= 467.

[0248] Naredni Međuproizvodi su izrađeni na sličan način kao Međuproizvod 103:

Međuproizvod 109: (R)-5-(5-(hidroksimetil)-1-(piperidin-3-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin- 2(1H)-on

[0249] 5M Rastvor HCl u IPA (40 mL, 200 mmol) se doda u (S)-terc-butil 3-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat (za izradu videti Međuproizvod 103, 1.8 g, 3.86 mmol) i suspenzija meša 4 h. Reaktivna smeša se upari pod vakuumom u braon ulje. Ostatak se rastvori u MeOH i prenese na 20 g SCX kertridž. Kertridž se eluira sa MeOH (200 mL), nakon toga sa 2M metanolnim amonijakom (100 mL). Osnovne frakcije se upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bledo žuta pena (1.389g). Ukupan prinos iz reakcije je 98%.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.61 min, MH<+>= 367.

[0250] Sledeći Međuproizvod je izrađen na sličan način kao Međuproizvod 109:

Međuproizvod 111: (S)-5-(1-((1-acetilpiperidin-3-il)metil)-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetil- piridin-2(1H)-on

[0251] Sirćetni anhidrid (0.382 mL, 4.05 mmol) se doda u suspenziju (R)-5-(5-(hidroksimetil)-1-(piperidin-3-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2 (1H)-ona (za izradu videti Međuproizvod 109, 1.35 g, 3.68 mmol) u 2-metiltetrahidrofuranu (30 mL). Dobijena suspenzija se meša 2h. Reaktivna smeša se podeli između 2-MeTHF (200 mL) i zasićenog vodenog rastvora NaHCO3(25 mL). Organski sloj se ispere (1x sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3[25 mL]), suši preko MgSO4i upari pod vakuumom do bele čvrste supstance (~ 0.3 g). Kombinovani vodeni slojevi se ekstrahuju (3 x DCM [50 mL]) i organski slojevi dodaju u ostatak iz 2-MeTHF evaporacije. Dobijeni rastvor se upari pod vakuumom u belu čvrstu supstancu. Čvrsta supstanca se rastvori u DCM i prečisti hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa smešom DCM:2M metanolni rastvor amonijaka (0-5%). Frakcije koje sadrže produkt se upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (1.353g). Ukupan prinos je 90%. LCMS (Sistem C): tRET= 0.44 min, MH<+>= 409.

Međuproizvod 112: (R)-5-(1-((1-acetilpiperidin-3-il)metil)-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetil-piridin-2(1H)-on

[0252] U izmešanu suspenziju (S)-5-(5-(hidroksimetil)-1-(piperidin-3-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on hidrohlorida (za izradu videti Međuproizvod 109, 1.49 g, 3.37 mmol) u dihlormetanu (10 mL) se doda DIPEA (3.53 mL, 20.19 mmol). U dobijeni žuti rastvor se doda acetil hlorid (0.718 mL, 10.10 mmol) i meša 1.5 h. Doda se 2M vodeni rastvor NaOH (10 mL, 20.00 mmol), reaktivna smeša energično meša 30 min i organski sloj se ukloni. Vodeni sloj se ekstrahuje 3 puta sa DCM i kombinovane organske faze propuste kroz hidrofobni frit i koncentruju pod vakuumom da se dobije braon pasta. Ostatak se rastvori u THF (10 mL) i doda se 2M vodeni rastvor NaOH (10 mL, 20.00 mmol). Reaktivna smeša se meša 30 min. Reaktivna smeša se podeli između vode i DCM i organski sloj se ukloni. Vodena faza se ekstrahuje 3 puta sa DCM. U vodeni sloj se dodaju zasićeni vodeni rastvor NaHCO3i smeša DCM:IPA (3:1) i organski sloj se ukloni. Vodeni sloj se ekstrahuje 3 puta a kombinovane organske faze se propuste kroz hidrofobni frit, koncentruju i suše pod vakuumom da se dobije žuta čvrsta supstanca. Sirova čvrsta supstanca se rastvori u DCM, prečisti hromatografijom na silika gelu, eluira sa 2M rastvorom metanolnog amonijaka:DCM (2.5 - 12.5%, 15 CV). Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao žuta čvrsta supstanca (1.01g). Ukupan prinos iz reakcije je 73%. LCMS (Sistem A): tRET= 0.47 min, MH<+>= 409.

Međuproizvod 113: 1-etil-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0253] 5-(1-etil-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 89, 290 mg, 1.024 mmol) i 45% težinski 2-jodoksibenzoeve kiseline (701 mg, 1.126 mmol) se dodaju u DCM (5 mL) i suspenzija se meša 4 dana u atmosferi azota. Reaktivna smeša se podeli između zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (30 mL) i DCM (30 mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (3x30 mL). Organski slojevi se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Slojevi se ponovo podele između zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (50 mL) i DCM (50 mL). Slojevi se razdvoje i vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (3x50 mL). Kombinovani organski slojevi se suše koristeći hidrofobni frit i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (263 mg) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.67 min, MH<+>= 282

[0254] Naredni Međuproizvodi su izrađeni na sličan način kao Međuproizvod 113:

Međuproizvod 118: (S)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0255] Suspenzija (S)-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehida (za izradu videti Međuproizvod 114, 500 mg, 1.260 mmol) i kalijum karbonata (348 mg, 2.52 mmol) u DMF (5 mL) se meša 1.15 h a zatim se doda jodometan (0.095 mL, 1.512 mmol). Reaktivna smeša se meša preko vikenda.

Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak se podeli između smeše 3:1 hloroform:izopropanol (125 mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (125 mL).

Organski sloj se izdvoji i vodena frakcija se ponovo ekstrahuje tri puta sa smešom 3:1 hloroform:izopropanol (3x125 mL). Organske frakcije se kombinuju, propuste kroz hidrofobni frit i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak se rastvori u 10% etanolu u etil acetatu i prenese na kolonu silika gela (50 g). Produkti se eluiraju sa gradijentom 0-30% etanola u etil acetatu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (121 mg) kao svetlo braon čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.75min, MH<+>= 352

Međuproizvod 119: (R)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0256] (R)-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid (za izradu videti Međuproizvod 115, 149 mg, 0.353 mmol) se rastvori u DMF (2.5 mL) i doda se kalijum karbonat (98 mg, 0.707 mmol). Reaktivna smeša se meša jedan sat a zatim se doda jodometan (0.027 mL, 0.424 mmol). Boca koja sadrži reaktivnu smešu se zatvori. Reaktivna smeša se meša u toku noći. Reaktivna smeša se razblaži sa izopropanolom i filtrira kroz celite kertridž (2.5 g) koji je prethodno pripremljen sa rastvaračem. 4 CV izopropanola se propusti kroz kolonu. Ispirci se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak se rastvori u minimalnoj količini DCM i prenese na kolonu silika gela (25 g) i eluira sa gradijentom 0-20% etanola u etil acetatu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (56 mg) kao bezbojna guma. LCMS (Sistem B): tRET= 0.75min, MH<+>= 352

Međuproizvod 120: 1-((1,4-dioksan-2-il)metil)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid (pojedinačni enantiomer nepoznate konfiguracije)

[0257] Kalijum karbonat (368 mg, 2.66 mmol) se u jednoj porciji doda u suspenziju 1-((1,4-dioksan-2-il)metil)-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehida (za izradu videti Međuproizvod 122, 470 mg, 1.330 mmol) u DMF (15 mL). Smeša se nakon toga ohladi u kupatilu voda-led i u kapima se doda jodometan (0.108 mL, 1.729 mmol). Nakon završenog dodavanja, kupatilo se ukloni i reaktivna smeša meša na rt u toku noći (18 h). Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom. Čvrsta supstanca se nakon toga podeli između NaHCO3(100 mL) i smeše DCM:iPrOH 3:1 (100 mL). Izdvojena vodena faza se ekstrahuje sa smešom DCM:iPrOH 3:1 (3 x 100 mL). Kombinovane organske faze se propuste kroz hidrofobni frit i upare da se dobije naslovljeno jedinjenje (476 mg) kao bledo žuta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.70min, MH<+>= 368.

Međuproizvod 121: 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-karbaldehid

[0258] Mangan dioksid (11 g, 108 mmol) se na rt u jednoj porciji doda u izmešani rastvor 5-(6-(hidroksimetil)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (za izradu videti Međuproizvod 94, 3.3 g, 8.98 mmol) u hloroformu (150 mL). Dobijena suspenzija se brzo meša u toku noći (18 h). Doda se nova količina mangan dioksida (2 g, 19.55 mmol) i reaktivna smeša se meša još 0.5 h.20 mL Reaktivne smeše se filtrira kroz celite i rastvarač upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (424 mg) kao bezbojno ulje. LCMS (Sistem B): tRET= 0.72 min, MH<+>= 367

Međuproizvod 122: 1-((1,4-dioksan-2-il)metil)-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid (jedinični nepoznati enantiomer)

[0259] Mangan dioksid (2232 mg, 21.82 mmol) se u jednoj porciji na rt doda u izmešanu suspenziju 5-(1-((1,4- dioksan-2-il)metil)-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-ona (za izradu videti Međuproizvod 138a, 554 mg, 1.559 mmol) u hloroformu (25 mL). Dobijena suspenzija se brzo meša 4 h i ostavi da stoji u toku noći.

Suspenzija se filtrira kroz Celite i ispere sa DCM (2 x 30 mL), MeOH (5 x 30 mL) i smešom DCM:iPr 3:1 (2 x 30 mL). Filtrat se upari pod vakuumom i ostavi 1 h u vakuumskoj pećnici da se dobije naslovljeno jedinjenje (470 mg) kao bledo žuta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.65 min, MH<+>= 354

[0260] Naredni Međuproizvodi su izrađeni na sličan način kao Međuproizvod 122:

Međuproizvod 130: (S)-terc-butil 3-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-5-formil-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat

[0261] Mangan dioksid (2.98 g, 34.3 mmol) se doda u rastvor (S)-terc-butil 3-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilata (1.6 g, 3.43 mmol) (za primer izrade videti Međuproizvod 103) u hloroformu (60 mL). Suspenzija se meša 3 h i mešanje zaustavi preko vikenda.

Suspenzija se filtrira i upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao braon čvrsta supstanca (1.299g). Ukupan prinos za reakciju je 82%. LCMS (Sistem C): tRET= 0.83 min, MH<+>= 465.

[0262] Naredni Međuproizvodi su izrađeni na sličan način kao Međuproizvod 130:

1

Međuproizvod 137: (2S,3R)-ciklopentil 2-amino-3-hidroksibutanoat, so 4-metilbenzensulfonske kiseline

[0263] U suspenziju (2S,3R)-2-amino-3-hidroksibutanoatne kiseline (20 g, 168 mmol) u cikloheksanu (200 mL) se na sobnoj temperaturi dodaju ciklopentanol (116 g, 1343 mmol) i 4-metilbenzensulfonska kiselina (37.6 g, 218 mmol). Reaktivna smeša se meša 24 h na 100 °C. Reaktivna smeša se upari pod vakuumom da se dobije sirovi produkt kao braon ulje. Braon ulje se ostavi da se ohladi i dobijeni kristali filtriraju, isperu sa EtOAc (50 mL) da se dobije (2S,3R)-ciklopentil 2-amino-3-hidroksibutanoat, so 4-metilbenzensulfonske kiseline (50.06 g, 136 mmol, 81 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR δ (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 8.20 (3H, br. s.), 7.48 (2H, d, J=8.1 Hz), 7.12 (2H, d, J=78 Hz), 5.63 (1H, d, J=4.4 Hz), 5.20 (1H, t, J=5.6 Hz), 4.18 - 4.03 (1H, m), 3.89 (1H, d, J=3.4 Hz), 2.30 (3H, s), 1.94 -1.78 (2H, m), 1.77 - 1.50 (6H, m), 1.20 (3H, d, J=6.6 Hz).

Međuproizvod 138a i 138b: 5-(1-((1,4-dioksan-2-il)metil)-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on

[0264] (Racemat)-5-(1-((1,4-dioksan-2-il)metil)-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 95, 1.2g) se izdvoji asimetričnom hromatografijom u svoja dva odgovarajuća enantiomera, pomoću 30mm x 25cm Chiralcel

1 1

OD-H kolone, eluira sa 40%EtOH/heptan pri brzni protoka 30mL/min, detektovana talasna dužina = 215nm.

[0265] Izomer 1: (Međuproizvod 138a) 563mg dobijen kao čvrsta supstanca LCMS (Sistem A): tRET= 0.44 min, MH<+>= 356

Analiziran na asimetričnu čistoću na 4.6mmid x 25cm Chiralcel OD-H kolonu, eluirano sa 40%EtOH/heptan pri brzni protoka 1.0mL/min, detektovana talasna dužina = 215nm.

[0266] Nađeno je da je asimetrična čistoća >99.5%.

[0267] Izomer 2: (Međuproizvod 138b) 598mg dobijen kao čvrsta supstanca LCMS (Sistem A): tRET= 0.41 min, MH<+>= 356

[0268] Nađeno je da je asimetrična čistoća 99.1%.

Međuproizvod 139: (S)-5-(6-(hidroksimetil)-1-(piperidin-3-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0269] 5M rastvor HCl u IPA (15 mL) se doda u (R)-terc-butil 3-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-6-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat (za izradu videti Međuproizvod 99, 850 mg, 1.82 mmol). Dobijeni rastvor se meša 3 h i upari pod vakuumom do braon čvrste supstance. Ostatak se rastvori u MeOH, prenese na 10g SCX kertridž i eluira sa MeOH, a nakon toga sa 2M metanolnim rastvorom amonijaka. Bazne frakcije se upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (617mg) kao bela pena. LCMS (Sistem C): tRET= 0.33 min, MH<+>= 367.

Međuproizvod 140: (R)-(1-((1-acetilpiperidin-3-il)metil)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil acetat

[0270] (S)-5-(6-(hidroksimetil)-1-(piperidin-3-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 139, 617 mg, 1.68 mmol) se rastvori u DCM (5 mL). Dodaju se DIPEA (0.618 mL, 3.54 mmol) i acetil hlorid (0.253 mL, 3.54 mmol) i reakcija meša 3.5 h u atmosferi azota na rt. Dodaju se 0.2 eq DIPEA (0.059 mL, 0.336 mmol) i 0.2 eq acetil hlorida (0.024 mL, 0.336 mmol) i reakcija se meša u atmosferi azota

1 2

[0271] u toku noći (16 h). Dodaju se 0.4 eq DIPEA (0.118 mL, 0.672 mmol) i 0.4 eq acetil hlorida (0.048 mL, 0.672 mmol) i reakcija se meša 1 h u atmosferi azota. Doda se 5 mL 2M vodenog rastvora NaOH i suspenzija se energično meša 30 min. Izdvojena vodena faza se ekstrahuje sa DCM (3 x 10 mL). Kombinovane organske faze se propuste kroz hidrofobni frit da se dobije naslovljeno jedinjenje (796 mg) kao žuta pasta. LCMS (Sistem A): tRET= 0.62 min, MH<+>= 451.

Međuproizvod 141: (R)-5-(1-((1-acetilpiperidin-3-il)metil)-6-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetil-piridin-2(1H)-on

[0272] (R)-(1-((1-acetilpiperidin-3-il)metil)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil acetat (za izradu videti Međuproizvod 140, 796 mg, 1.77 mmol) se rastvori u tetrahidrofuranu (2 mL) i MeOH (2 mL) i doda se 2M vodeni rastvor NaOH (0.883 mL, 1.77 mmol). Reaktivna smeša se meša 10 min na rt. Reaktivna smeša se neutrališe do pH=7 sa 2M vodenim rastvorom HCl i razblaži sa vodom (10 mL) i smešom DCM :iPrOH 3 :1 (10 mL). Izdvojena vodena faza se ekstrahuje sa smešom DCM :iPrOH 3 :1 (3 x 10 mL). Kombinovane organske faze se propuste kroz hidrofobni frit i upare da se dobije naslovljeno jedinjenje (683 mg) kao žuto ulje. LCMS (Sistem A): tRET= 0.46 min, MH<+>= 409.

Međuproizvod 142: (S)-5-(1-((1-acetilpiperidin-3-il)metil)-6-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0273] (R)-5-(6-(hidroksimetil)-1-(piperidin-3-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 170, 284 mg, 0.775 mmol) se rastvori u DCM (5 mL) i ohladi u kupatilu voda/led, doda se DIPEA (0.108 mL, 0.620 mmol) a nakon toga se u kapima doda acetil hlorid (0.044 mL, 0.620 mmol). Reaktivna smeša se meša 5 min, nakon toga se kupatilo ukloni i reaktivna smeša ostavi da se zagreje na rt i meša 2 h.

Reaktivna smeša se podeli između smeše DCM:iPrOH 3:1 (10 mL) i NaHCO3(10 mL).

Izdvojena vodena faza se ekstrahuje sa smešom DCM:iPrOH 3:1 (3 x 10 mL). Kombinovane organske frakcije se propuste kroz hidrofobni frit i upare da se dobije sirovi produkt, 300 mg. Uzorci se rastvore u 3 mL MeOH i prečiste sa MDAP (Postupak B). Rastvarač se ukloni

1

sušenjem da se dobije naslovljeno jedinjenje (230 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.64 min, MH<+>= 409.

Međuproizvod 143: (2S)-ciklopentil 4-metil-2-((4-(((4-metilmorfolin-2-il)metil)amino)-3-nitrobenzil)amino)pentanoat

[0274] (4-Metilmorfolin-2-il)metanamin (665 mg, 5.11 mmol) i DIPEA (0.892 mL, 5.11 mmol) se dodaju u rastvor (S)-ciklopentil 2-((4-fluoro-3-nitrobenzil)amino)-4-metilpentanoata (za izradu videti Međuproizvod 144, 600 mg, 1.703 mmol) u tetrahidrofuranu (12 mL).

Reaktivna smeša se zagreva ukupno 90 minuta u Biotage Initiator microwave koristeći inicijalnu visoku apsorpciju podešenu na 120°C. Dodaju se DCM (30 mL) i zasićeni rastvor natrijum hidrogen karbonata (30 mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (2x30 mL) aa organski slojevi se kombinuju, suše i upare pod sniženim pritiskom da se dobije narandžasta tečnost. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na koloni silika gela (50 g silika) uz gradijent 0-10 % dihlorometan-metanol preko 15 zapremina kolone a nakon toga zadržavanjem sa 10 % dihlorometanmetanol za 5 zapremina kolone.

Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (693.6 mg, 1.499 mmol, 88 % prinos) kao narandžasta guma. LCMS (Sistem A): tRET= 0.70 min, MH<+>= 463

Međuproizvod 144: (S)-ciklopentil 2-((4-fluoro-3-nitrobenzil)amino)-4-metilpentanoat

[0275] 4-fluoro-3-nitrobenzaldehid (2 g, 11.83 mmol) i (S)-ciklopentil 2-amino-4-metilpentanoat 4-metil-benzensulfonat (za izradu videti Međuproizvod 3, 4.83 g, 13.01 mmol) se rastvore u DCM (50 mL) i u ovo se doda sirćetna kiselina (2.031 mL, 35.5 mmol).

Reaktivna smeša se meša 1.5 sat u atmosferi azota. U porcijama se doda natrijum triacetoksiborhidrid (5.01 g, 23.65 mmol) i reaktivna smeša meša u atmosferi azota u toku noći. Polako se dodaje zasićeni vodeni rastvor natrijum hidrogen karbonata (100 mL) i reaktivna smeša se meša sve dok šištanje ne prestane. Dobijena suspenzija se ekstrahuje sa DCM (3x100 mL). Kombinovani organski slojevi se suše i upare pod sniženim pritiskom da se dobije žuto ulje. Sirovi uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa Biotage SP4 SNAP 100 g silika gela uz gradijent 0-50 % cikloheksan-etil acetat preko 10 zapremina kolone a nakon toga zadržavanjem sa 50 % cikloheksan-etil acetat preko 10 zapremina kolone.

1 4

Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.64 g, 7.48 mmol, 63.3 % prinos) kao žuto ulje.

LCMS (Sistem A): tRET= 0.97 min, MH<+>= 353.

Međuproizvod 145: (2S)-ciklopentil 2-((4-(((4-metilmorfolin-2-il)metil)amino)-3-nitrobenzil)amino)propanoat

[0276] (S)-ciklopentil 2-((4-fluoro-3-nitrobenzil)amino)propanoat (za izradu videti Međuproizvod 146, 490 mg, 1.579 mmol), (4-metilmorfolin-2-il)metanamin (617 mg, 4.74 mmol) i DIPEA (0.827 mL, 4.74 mmol) se rastvore u THF (12 mL) i reaktivna smeša se zagreva ukupno 90 minuta in Biotage Initiator microwave koristeći inicijalnu visoku apsorpciju podešenu na 120°C. Reaktivna smeša se podeli između zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (40 mL) i DCM (40 mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ispere sa DCM (3x40 mL) i kombinovani organski slojevi se suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom da se dobije narandžasto ulje. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na koloni silika gela (50 g silika) uz gradijent 0-12% dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu preko 10 zapremina kolone a nakon toga zadržavanjem sa 12% dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu za 5 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (649.8 mg, 1.545 mmol, 98 % prinos) kao narandžasto ulje. LCMS (Sistem A): tRET= 1.12 min, MH<+>= 421

Međuproizvod 146: (S)-ciklopentil 2-((4-fluoro-3-nitrobenzil)amino)-4-metilpentanoat

[0277] 4-fluoro-3-nitrobenzaldehid (500 mg, 2.96 mmol) i (S)-ciklopentil 2-aminopropanoat hidrohlorid (za izradu videti Međuproizvod 61, 630 mg, 3.25 mmol) se rastvore u dihlormetanu (DCM) (15 mL) i u ovaj rastvor se doda sirćetna kiselina (0.508 mL, 8.87 mmol). Reaktivna smeša se meša 1 sat u atmosferi azota. U reaktivnu smešu se doda natrijum triacetoksiborhidrid (1.253 g, 5.91 mmol) i smeša se meša u atmosferi azota na sobnoj temperaturi u toku noći. U rastvor se polako dodaje zasićeni rastvor natrijum hidrogen karbonata (40 mL) sve dok šištanje ne prestane. Ovaj rastvor se nakon toga ekstrahuje sa DCM (4x40 mL) i organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije žuto ulje. Uzorak se prenese u dihlormetan i

1

prečisti hromatografijom na koloni silika gela (50 g silika) uz gradijent 35-65% cikloheksanetil acetat preko 10 zapremina kolone a nakon toga zadržavanjem sa 65% cikloheksan-etil acetat za 5 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (496.5 mg, 1.600 mmol, 54.1 % prinos) kao žuto ulje. LCMS (Sistem A): tRET= 0.75 min, MH<+>= 311

Međuproizvod 147: (2S)-ciklopentil 3-metil-2-((4-(((4-metilmorfolin-2-il)metil)amino)-3-nitrobenzil)amino)butanoat

[0278] (4-metilmorfolin-2-il)metanamin (666 mg, 5.12 mmol) i DIPEA (0.893 mL, 5.12 mmol) se dodaju u rastvor (S)-ciklopentil 2-((4-fluoro-3-nitrobenzil)amino)-3-metilbutanoata (za izradu videti Međuproizvod 148, 577 mg, 1.705 mmol) u THF (12 mL) i reaktivna smeša se zagreva ukupno 90 minuta in Biotage Initiator microwave koristeći inicijalnu visoku apsorpciju podešenu na 120 °C. Reaktivna smeša se podeli između DCM (40 mL) i zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (40 mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (2x40 mL) i kombinovani organski slojevi se suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom da se dobije narandžasto ulje. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na koloni silika gela (50 g silika) uz gradijent 0-7% dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu preko 10 zapremina kolone a nakon toga zadržavanjem sa 7% dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu za 5 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (760.6 mg, 1.696 mmol, 99 % prinos) kao narandžasto ulje. LCMS (Sistem B): tRET= 1.33 min, MH<+>= 449.

Međuproizvod 148: (S)-ciklopentil 2-((4-fluoro-3-nitrobenzil)amino)-3-metilbutanoat

[0279] 4-fluoro-3-nitrobenzaldehid (500 mg, 2.96 mmol) i (S)-ciklopentil 2-amino-3-metilbutanoat 4-metil-benzensulfonat (1.163 g, 3.25 mmol, za izradu videti Međuproizvod 24) se rastvore u dihlormetanu (DCM) (20 mL) i reaktivna smeša se meša 1 sat u atmosferi azota. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (1.253 g, 5.91 mmol) i reaktivna smeša se meša 2 sata u atmosferi azota na sobnoj temperaturi. U reaktivnu smešu se u porcijama doda zasićen vodeni rastvor natrijum hidrogen karbonata (50 mL) sve dok ne prestane šištanje. Dobijena suspenzija se ekstrahuje sa DCM (4x50 mL) i organski slojevi se kombinuju, suše

1

koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom da se dobije bledo žuto ulje. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na koloni silika gela (50 g silika) uz gradijent 0-1% dihlorometanmetanol preko 10 zapremina kolone a nakon toga zadržavanjem sa 1 % dihlorometan-metanol za 5 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (581 mg, 1.717 mmol, 35.9 % prinos) kao bledo žuto ulje. LCMS (Sistem A): tRET= 0.95 min, MH<+>= 339.

Međuproizvod 149: (S)-ciklopentil 4-metil-2-((4-(((1-metilpiperidin-4-il)metil)amino)-3-nitrobenzil)amino)pentanoat

[0280] (S)-ciklopentil 2-((4-fluoro-3-nitrobenzil)amino)-4-metilpentanoat (za izradu videti Međuproizvod 144, 500 mg, 1.419 mmol), (1-metilpiperidin-4-il)metanamin (546 mg, 4.26 mmol) i DIPEA (0.743 mL, 4.26 mmol) se dodaju u tetrahidrofuran (THF) (12 mL) i reaktivna smeša se zagreva 1 sat in Biotage Initiator microwave koristeći inicijalnu visoku apsorpciju podešenu na 120°C. Reaktivna smeša se podeli između DCM (40 mL) i zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (40 mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (2x40 mL) i kombinovani organski slojevi se suše i upare pod sniženim pritiskom da se dobije žuto ulje. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na koloni silika gela (50 g silika) uz gradijent 0-10% dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu preko 10 zapremina kolone a nakon toga zadržavanjem sa 10% dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu za 5 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (595.5 mg, 1.293 mmol, 91 % prinos) kao narandžasta guma. LCMS (Sistem A): tRET= 0.69 min, MH<+>= 461.

Međuproizvod 150: 5-(5-(hidroksimetil)-1-((4-metilmorfolin-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on

[0281] Tri identične smeše (4-(((4-metilmorfolin-2-il)metil)amino)-3-nitrofenil)metanola (1 g, 3.55 mmol, za izradu videti Međuproizvod 166), 5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehida (504 mg, 3.68 mmol, za izradu videti Međuproizvod 1) i natrijum ditionita (2 g, 11.5 mmol) u etanolu (8mL) i vodi (4 mL) se zagrevaju 5 sati u Biotage Initiator microwave koristeći inicijalnu visoku apsorpciju podešenu na 100 °C. Reaktivne smeše se kombinuju i podele između zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (100 mL) i 25% propan-2-ola

1

u hloroformu (100 mL). Slojevi se razdvoje i vodeni sloj se ekstrahuje sa 25% propan-2-ola u hloroformu (4x100 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom da se dobije bela čvrsta supstanca. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa Biotage SP4 SNAP 2x100 g silika gelauz gradijent 5-15% dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu preko 15 zapremina kolone a nakon toga zadržavanjem sa 15 % dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu za 5 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje 5-(5-(hidroksimetil)-1-((4-metilmorfolin-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on (1.745 g, 4.74 mmol, 44.4 % prinos) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.58 min, MH<+>= 369.

Međuproizvod 151: 2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0282] 5-(5-(hidroksimetil)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 152, 1.67 g, 4.73 mmol) se u potpunosti rastvori u dimetil sulfoksidu (DMSO) (25 mL), doda se 2-jodoksibenzoeva kiselina (3.23 g, 5.20 mmol) i 2 sata meša u atmosferi azota. Reaktivna smeša se razblaži sa vodom (100 mL) i bela čvrsta supstanca koja se izdvoji precipitiranjem se ukloni filtriranjem i ostavi sa strane. Filtrat se ekstrahuje sa etil acetatom (3x100 mL) i nakon toga sa rastvorom 25% metana u DCM (4x100 mL). Čvrsta supstanca dobijena iz ranije filtracije se suspenduje u 25% metanola u DCM (100 mL) i doda se zasićeni rastvor natrijum hidrogen karbonata (100 mL). Slojevi se razdvoje i vodeni sloj se ekstrahuje sa rastvorom 25% metanola u DCM (4x100 mL). Svi organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom da se dobije bela čvrsta supstanca koja se nakon toga prenese kao suspenzija u smeši metanol/dihlorometan i prečisti hromatografijom na koloni silika gela (100 g silika) uz gradijent 0-10 % dihlorometan-metanol preko 10 zapremina kolone a nakon toga zadržavanjem sa 10 % dihlorometan-metanol za 10 zapremina kolone. Čiste frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.1487 g, 3.27 mmol, 69.2 % prinos) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.68 min, MH<+>= 352.

1

Međuproizvod 152: 5-(5-(hidroksimetil)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on

[0283] Četiri identične smeše (3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenil)metanola (za izradu videti Međuproizvod 77, 1.15 g, 4.3 mmol), 5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehida (592 mg, 4.3 mmol, za izradu videti međuproizvod 1) i natrijum ditionita (2.25 g, 13.0 mmol) u etanolu (8 mL) i vodi (4 mL) se zagrevaju 5 sati u Biotage Initiator microwave koristeći inicijalnu visoku apsorpciju podešenu na 100°C. Sve četiri reaktivne smeše se kombinuju i podele između zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (100 mL) i 25% propan-2-ola u DCM (100 mL). Slojevi se razdvoje i vodeni sloj se ekstrahuje sa 25% propan-2-ola u DCM (3x100 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom da se dobije bela čvrsta supstanca. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na koloni silika gela (2x100 g silika) uz gradijent 0-10 % dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu preko 15 zapremina kolone a nakon toga zadržavanjem sa 10 % dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu za 10 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.8562 g, 5.25 mmol, 30.4 % prinos) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.46 min, MH<+>= 354.

Međuproizvod 153: 1-((1-metil-5-oksopirolidin-3-il)metil)-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0284] U suspenziju 5-(5-(hidroksimetil)-1-((1-metil-5-oksopirolidin-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-ona (za izradu videti Međuproizvod 154, 372 mg, 1.015 mmol) u DCM (5 mL) se u porcijama doda 45% težinski 2-jodoksibenzoeva kiselina (695 mg, 1.117 mmol) i reaktivna smeša se meša 3 dana u atmosferi azota. Reaktivna smeša se podeli između DCM i zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (6x40 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (272 mg, 0.746 mmol, 73.5 % prinos) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.58 min, MH<+>= 365

Međuproizvod 154: 5-(5-(hidroksimetil)-1-((1-metil-5-oksopirolidin-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on

1

[0285] 4-(((4-(hidroksimetil)-2-nitrofenil)amino)metil)-1-metilpirolidin-2-on (za izradu videti međuproizvod 155, 710 mg, 2.54 mmol), 5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za izradu videti međuproizvod 1, 349 mg, 2.54 mmol) i natrijum ditionit (1328 mg, 7.63 mmol) se dodaju u etanol (8 mL) i vodu (4 mL) i reaktivna smeša se zagreva 5 sati in Biotage Initiator microwave koristeći inicijalnu visoku apsorpciju podešenu na 100°C. Reaktivna smeša se podeli između zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (30 mL) i DCM (30 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (3x30 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na koloni silika gela (50 g silika) uz gradijent 5-20% dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu preko 15 zapremina kolone a nakon toga zadržavanjem sa 20 % dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu za 5 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (378 mg, 1.032 mmol, 40.6 % prinos) kao bezbojna guma. LCMS (Sistem B): tRET= 0.51 min, MH<+>= 365.

Međuproizvod 155: 4-(((4-(hidroksimetil)-2-nitrofenil)amino)metil)-1-metilpirolidin-2-on

[0286] (4-fluoro-3-nitrofenil)metanol (500 mg, 2.92 mmol), 4-(aminometil)-1-metilpirolidin-2-on (562 mg, 4.38 mmol) i DIPEA (1.531 mL, 8.77 mmol) se dodaju u tetrahidrofuran (THF) (2 mL) i reaktivna smeša se zagreva 4 sata in Biotage Initiator microwave koristeći inicijalnu visoku apsorpciju podešenu na 120°C. Reaktivna smeša se podeli između DCM (25 mL) i zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (25 mL). Slojevi se razdvoje i vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (3x25 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na koloni silika gela (50 g silika) uz gradijent 0-10 % dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu preko 10 zapremina kolone a nakon toga zadržavanjem sa 10 % dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu za 5 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (713.7 mg, 2.56 mmol, 87 % prinos) kao narandžasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.61 min, MH<+>= 262.

11

Međuproizvod 156: 1-((1-acetilpirolidin-3-il)metil)-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0287] 5-(1-((1-acetilpirolidin-3-il)metil)-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 157, 135 mg, 0.355 mmol) se suspenduje u DCM (5 mL) i doda se 45% težinski 2-jodoksibenzojeve kiseline (243 mg, 0.390 mmol). Reaktivna smeša se meša 40 sati na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se podeli između DCM (25 mL) i zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (25 mL) i vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (4x25 mL). Kombinovani organski slojevi se suše koristeći hidrofobni frit i koncentruju pod sniženim pritiskom. Uzorak se ponovo podeli između DCM (25 mL) i zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (25 mL) i vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (8x25 mL). Kombinovani organski slojevi se suše koristeći hidrofobni frit i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (132.1 mg, 0.349 mmol, 98 % prinos) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.59 min, MH<+>= 264.

Međuproizvod 157: 5-(1-((1-acetilpirolidin-3-il)metil)-5-(hidroksimetil)-1H benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on

[0288] Rastvor 5-(5-(hidroksimetil)-1-(pirolidin-3-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-ona (za izradu videti Međuproizvod 158, 150 mg, 0.443 mmol) u DCM (5 mL) i piridinu (0.108 mL, 1.330 mmol) se ohladi na -5°C i meša 30 minuta. Doda se acetil hlorid (0.032 mL, 0.443 mmol) i reaktivna smeša se meša 3 dana na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se podeli između vode (20 mL) i DCM (20 mL) i vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (3x20 mL). Kombinovani organski slojevi se suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi materijal (181.8 mg). Materijal se suspenduje u THF (2 mL) i metanolu (2 mL) i doda se 1M vodeni rastvor litijum hidroksida (1.29 mL, 1.29 mmol) i reaktivna smeša meša 24 sata na 62°C. Reaktivna smeša se podeli između vode (30 mL) i rastvora 25% propan-2-ola u DCM (30 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa rastvorom 25% propan-2-ola u DCM (3x30 mL). Kombinovani organski slojevi se suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (136.9 mg, 0.360 mmol, 81 % prinos) kao bledo žuta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.54 min, MH<+>= 381.

Međuproizvod 158: 5-(1-((1-acetilpirolidin-3-il)metil)-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on

[0289] terc-Butil 3-((5-(hidroksimetil)-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)pirolidin-1-karboksilat (za izradu videti Međuproizvod 159, 420 mg, 0.958 mmol) se rastvori u DCM (7 mL) i doda se 4M rastvor hlorovodonične kiseline u 1,4-dioksanu (0.958 mL, 3.83 mmol). Reaktivna smeša se meša 5 sati u atmosferi azota. Isparljive komponente se uklone uparavanjem pod sniženim pritiskom i uzorak se prenese u smešu dihlorometan/metanol preko SCX 10 g kertridža. Eluacija metanolom, a nakon toga sa rastvorom 2M amonijaka u metanolu se koriste za prečišćavanje produkta. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i koncentruju do sušenja. Produkt se ponovo prečisti na SCX 10g kertridžu inicijalno ispere sa metanolom a nakon toga eluira sa 33%, 50%, 66% i 100% 2M rastvorom amonijaka u metanolu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi produkt (309 mg, 0.913 mmol, 95 % prinos) kao bledo žuta čvrsta supstanca. Uzorak se rastvori u DMSO (3x1 mL) i prečisti sa MDAP (Postupak B). Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (163 mg, 0.482 mmol, 50.3 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.48 min, MH<+>= 339.

Međuproizvod 159: terc-butil 3-((5-(hidroksimetil)-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)pirolidin-1-karboksilat

[0290] terc-Butil 3-(((4-(hidroksimetil)-2-nitrofenil)amino)metil)pirolidin-1-karboksilat (za izradu videti Međuproizvod 160, 1.0345 g, 2.94 mmol), 5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za izradu videti Međuproizvod 1, 0.404 g, 2.94 mmol) i natrijum ditionit (1.538 g, 8.83 mmol) se dodaju u etanol (8 mL) i vodu (4 mL). Reaktivna smeša se zagreva 5 sati in Biotage Initiator microwave koristeći inicijalnu visoku apsorpciju podešenu na 100°C.

Reaktivna smeša se podeli između rastvora 25% propan-2-ola u DCM (30 mL) i zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (30 mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa 25% rastvorom propan-2-ola u DCM (3x30 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa Biotage SP4 SNAP 50 g silika gel uz gradijent 2-12% dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu preko 10 zapremina kolone a nakon toga zadržavanjem sa 12 % dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu za 5 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (428.9 mg, 0.978 mmol, 33.2 % prinos) kao bezbojna guma. LCMS (Sistem B): tRET= 0.78 min, MH<+>= 439.

Međuproizvod 160: terc-butil 3-(((4-(hidroksimetil)-2-nitrofenil)amino)metil)pirolidin-1-karboksilat

[0291] (4-fluoro-3-nitrofenil)metanol (521 mg, 3.04 mmol), terc-butil 3-(aminometil)pirolidin-1-karboksilat (850 mg, 4.24 mmol) i DIPEA (1.595 mL, 9.13 mmol) se dodaju u tetrahidrofuran (THF) (3 mL) i reaktivna smeša se zagreva 3.5 sati in Biotage Initiator microwave koristeći inicijalnu visoku apsorpciju podešenu na 120 °C. Reaktivna smeša se podeli između DCM (25 mL) i zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (25 mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (4x25 mL) a kombinovani organski slojevi se suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na koloni silika gela (50 g silika) uz gradijent 0-3% dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu preko 10 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.0781 g, 3.07 mmol, 101 % prinos) kao narandžasto ulje. LCMS (Sistem B): tRET= 1.03 min, MH- = 350.

Međuproizvod 161: 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0292] Boca okruglog dna se napuni sa 5-(5-(hidroksimetil)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-onom (za izradu videti Međuproizvod 162, 360 mg, 1.019 mmol), DCM (20 mL) i Dess-Martin perjodinanom (432 mg, 1.019 mmol). Smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Smeša se razblaži sa DCM i zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata dodatim pre nego što se slojevi izmešaju i razdvoje. Organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom a zatim propuste kroz hidrofobni frit i koncentruju pod vakuumom da se dobije beličasta čvrsta supstanca. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na koloni silika gela (25g silika) uz gradijent 0-100% etil acetat-cikloheksan preko 15 CV a zatim sa 0-10% dihlorometan-metanol sa 15 CV. Odgovarajuće frakcije se

11

kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (345 mg, 0.884 mmol, 87 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.65 min, MH<+>= 352.

Međuproizvod 162: 5-(5-(hidroksimetil)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0293] Boca okruglog dna se napuni sa 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehidom (za izradu videti Međuproizvod 2, 574 mg, 3.23 mmol), natrijum hidrosulfitom (1.8 g, 10.34 mmol), vodom (10 mL) i rastvorom (3-nitro-4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)fenil)metanola (za izradu videti međuproizvod 163, 740 mg, 2.93 mmol) u etanolu (20 mL). Na posudu se stavi kondenzator za vazduh i žitka masa zagreva na 100°C u toku noći. Smeša se razblaži sa vodom i EtOAc, slojevi izmešaju i razdvoje a zatim se organski sloj propusti kroz hidrofobni frit i koncentruje pod vakuumom da se dobije žuto ulje. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na koloni silika gela (25g silika) uz gradijent 0-100% etil acetat-cikloheksan preko 15 CV a zatim sa 0-10% 2M rastvora amonijaka u smeši metanol-dihlorometan sa 15CV. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (360 mg, 1.019 mmol, 34.7 % prinos) kao bezbojno ulje. LCMS (Sistem A): tRET= 0.47 min, MH<+>= 354.

Međuproizvod 163: (3-nitro-4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)fenil)metanol

[0294] Boca okruglog dna se napuni sa (4-fluoro-3-nitrofenil)metanolom (1 g, 5.84 mmol), tetrahidro-2H-piran-4-amin, hidrohloridom (0.9 g, 6.54 mmol, J&W PharmLab), DMF (10 mL) i DIPEA (4.1 mL, 23.48 mmol). Stavi se kondenzator za vazduh i žitka masa zagreva na 70°C u toku noći. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, razblaži sa EtOAc i organski slojevi isperu sa 1M rastvorom HCl, nakon toga sa slanim rastvorom a zatim propuste kroz hidrofobni frit. Filtrat se koncentruje pod vakuumom da se dobije narandžasto ulje. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na koloni silika gela (50g silika) uz gradijent 0-100% etil acetat-cikloheksan preko 15 CV. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije narandžasto ulje. Uzorak se rastvori u EtOAc a nakon toga ispere sa 10% rastvorom LiCl. Organski slojevi se propuste kroz hidrofobni frit a zatim koncentruju pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (740 mg, 2.93 mmol, 50.2 % prinos) kao narandžasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.71 min, MH<+>= 253.

Međuproizvod 164: 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((4-metilmorfolin-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0295] 5-(5-(hidroksimetil)-1-((4-metilmorfolin-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 165, 506 mg, 1.323 mmol) se rastvori u dihlormetanu (DCM) (5 mL) i doda se Dess-Martin perjodinan (561 mg, 1.323 mmol). Ova smeša se meša 18h u atmosferi azota. Smeša se nakon toga podeli između etil acetata (100mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (100mL) i faze razdvoje. Vodena faza se nakon toga dva puta ekstrahuje sa etil acetatom (100mL x2) i organske faze kombinuju.

Organski slojevi se nakon toga isperu sa slanim rastvorom (100mL) i suše koristeći hidrofobni frit. Rastvarač se nakon toga ukloni pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (457 mg, 1.201 mmol, 91 % prinos) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.68 min, MH<+>= 381.

Međuproizvod 165: 5-(5-(hidroksimetil)-1-((4-metilmorfolin-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0296] (4-(((4-metilmorfolin-2-il)metil)amino)-3-nitrofenil)metanol (za izradu videti Međuproizvod 166, 1.6 g, 5.69 mmol), 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za izradu videti Međuproizvod 2, 0.860 g, 5.69 mmol) i natrijum ditionit (2.97 g, 17.06 mmol) se dodaju u mikrotalasnu bočicu zajedno sa etanolom (8 mL) i vodom (8 mL) i zagrevaju 5h na 100°C. Uzorak se nakon toga podeli između etil acetata (75mL) i zasićenog rastvora natrijum karbonata (75mL) i faze razdvoje. Organske faze se zadrže i vodena faza dva puta ekstrahuje sa etil acetatom (75mLx2). Organske faze se nakon toga kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit a rastvarači se zatim uklone pod vakuumom. Dobija se bledo žuta čvrsta supstanca. Supstanca se rastvori u dihlorometanu. Uzorak se prenese na Biotage SNAP 100g Silica kertridž i eluira uz gradijent 0%-10% metanolni amonijak/DCM a nakon toga sa 10%-15% metanolni amonijak/DCM. Odgovarajuće frakcije se nakon toga kombinuju da se dobije naslovljeno jedinjenje (506 mg, 1.323 mmol, 23.26 % prinos) kao žuto ulje. LCMS (Sistem B): tRET= 0.61 min, MH<+>= 383.

Međuproizvod 166: (4-(((4-metilmorfolin-2-il)metil)amino)-3-nitrofenil)metanol

11

[0297] (4-fluoro-3-nitrofenil)metanol (1.041 g, 6.08 mmol) i (4-metilmorfolin-2-il)metanamin (2.376 g, 18.25 mmol) se rastvore u THF (5 mL) i tretiraju sa N,N-diizopropiletilaminom (3.19 mL, 18.25 mmol). Ova smeša se zagreva 1h u mikrotalasnom reaktoru na 120°C.

Tamno narandžasta smeša se nakon toga podeli između etil acetata (75mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (75mL). Faze se nakon toga razdvoje i vodena faza dva puta ekstrahuje sa etil acetatom (75mL x2). Organske faze se nakon toga kombinuju i suše koristeći hidrofobni frit i rastvarači se uklone pod vakuumom. Ovako se dobija naslovljeno jedinjenje (1.6 g, 5.69 mmol, 93 % prinos) kao narandžasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.69 min, MH<+>= 282.

Međuproizvod 167: 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((4-metilmorfolin-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0298] 5-(5-(hidroksimetil)-1-((4-metilmorfolin-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 168, 473 mg, 1.237 mmol) se rastvori u DCM i doda se Dess-Martin perjodinan (525 mg, 1.237 mmol). Ova smeša se meša 20h na sobnoj temperaturi. Nakon toga se doda zasićeni rastvor natrijum bikarbonata (100mL) i smeša meša 15min. U smešu se doda etil acetat (100mL) i faze razdvoje. Vodena faza se nakon toga dva puta ekstrahuje sa etil acetatom (100mL x2). Organske faze se nakon toga kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i rastvarač se ukloni pod vakuumom da se dobije sirovo naslovljeno jedinjenje (450 mg, 1.18 mmol, 96 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca koja se koristi bez naknadnog prečišćavanja. LCMS (Sistem B): tRET= 0.65 min, MH<+>= 381.

Međuproizvod 168: 5-(5-(hidroksimetil)-1-((4-metilmorfolin-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0299] (4-(((4-metilmorfolin-3-il)metil)amino)-3-nitrofenil)metanol (za izradu videti Međuproizvod 169, 2.83 g, 10.06 mmol) i 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za izradu videti Međuproizvod 2, 1.977 g, 13.08 mmol) se rastvore u etanolu (16 mL) zajedno sa natrijum ditionitom (5.25 g, 30.2 mmol) i vodom (16 mL). Smeše se zagrevaju 5h u mikrotalasnom reaktoru na 120°C. Žuta smeša se nakon toga podeli između etil acetata (150mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (150mL) i faze razdvoje.

Vodena faza se dva puta ekstrahuje sa etil acetatom (150mL x 2) i organske faze se

11

kombinuju. Organske faze se nakon toga suše koristeći hidrofobni frit. Rastvarač se nakon toga ukloni pod vakuumom da se dobije žuto ulje. Žuto ulje se rastvori u dihlorometanu i prenese na biotage SNAP 100g silika kolonu i eluira uz gradijent 0%-15% 2M metanolni amonijak/DCM. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i rastvarači se uklone pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (473 mg, 1.24 mmol, 12.3 % prinos) kao žuto ulje. LCMS (Sistem B): tRET= 0.58 min, MH<+>= 383.

Međuproizvod 169: (4-(((4-metilmorfolin-3-il)metil)amino)-3-nitrofenil)metanol

[0300] (4-fluoro-3-nitrofenil)metanol (1.77 g, 10.34 mmol, Aldrich) i (4-metilmorfolin-3-il)metanamin (4.14 mL, 31.0 mmol, Chess Fine Organski slojevi) se rastvore u tetrahidrofuranu (THF) (5 mL) i tretiraju sa N,N-diizopropiletilaminom (5.42 mL, 31.0 mmol). Ova smeša se zagreva 1h u mikrotalasnom reaktoru na 120°C. Tamno narandžasta smeša se nakon toga podeli između etil acetata (150mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (150mL). Faze se nakon toga razdvoje i vodena faza dva puta ekstrahuje sa etil acetatom (150mL x2). Organske faze se nakon toga kombinuju i suše koristeći hidrofobni frit i rastvarači se uklone pod vakuumom. Ovim se dobija naslovljeno jedinjenje (4-(((4-metilmorfolin-3-il)metil)amino)-3-nitrofenil)metanol (2.83 g, 10.06 mmol, 97 % prinos) kao tamno crveno ulje. LCMS (Sistem B): tRET= 0.70 min, MH<+>= 282.

Međuproizvod 170: (R)-5-(6-(hidroksimetil)-1-(piperidin-3-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin- 2(1H)-on

[0301] 5 M rastvor HCl u IPA (9 ml, 45.0 mmol) se doda u (S)-terc-butil 3-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-6-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat

[0302] (525 mg, 0.979 mmol, za izradu videti Međuproizvod 100) i dobijeni rastvor se meša 2 h na rt. Nakon ovog vremena, rastvor se upari pod sniženim pritiskom da se dobije bledo ružičasto bela čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se rastvori u MeOH i prenese na SCX-2 kertridž (20 g). Kertridž se ispere sa MeOH (3 x CV), nakon toga sa 2 M rastvorom amonijaka u MeOH (3 x CV). Bazne frakcije se kombinuju da se dobije naslovljeno jedinjenje N31482-98-1, 287 mg, 80% prinosa kao bledo žuto ulje. LCMS (Sistem B): tRET= 0.59 min, MH<+>= 367.

Međuproizvod 171: (3-((ciklopropilmetil)amino)-4-nitrofenil)metanol

11

[0303] (3-fluoro-4-nitrofenil)metanol (1g, 5.84mmol) se rastvori u 2-metil tetrahidrofuranu (10mL) i dodaju se DIPEA (3.06mL, 17.52mmol) i ciklopropilmetilamin (0.76mL, 8.76mmol). Dobijena smeša se meša na 80°C u toku noći.

[0304] Reaktivna smeša se podeli između DCM i zasićenog vodenog rastvora natrijum hidrogen karbonata. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM. Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogen karbonata, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod vakuumom da se dobije narandžasto ulje koje stajanjem očvrsne (1.65g). Sirovi produkt se prečisti hromatografijom na silika gelu (100g) koristeći 0-50% etil acetat/cikloheksan gradijent. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.28g) kao svetlo narandžasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.98min; MH<+>= 223.

Međuproizvod 172: 5-(1-(ciklopropilmetil)-6-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin- 2(1H)-on

[0305] (3-((ciklopropilmetil)amino)-4-nitrofenil)metanol (za izradu videti Međuproizvod 171, 1.28g, 5.76mmol,) i 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za izradu videti Međuproizvod 2 N31961-84-1, 1.13g, 7.49mmol) se rastvore u etanolu (20mL) i vodi (10mL). Doda se natrijum ditionat (3.56g, 17.28mmol) i reakcija se zagreva 2 sata na 80°C. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata. Organski sloj se ispere sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, suši koristeći hidrofobni frit i upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.39g) bež čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.49min; MH<+>= 324.

Međuproizvod 173: 1-(ciklopropilmetil)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-6-karbaldehid

[0306] 5-(1-(ciklopropilmetil)-6-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 172, 1.38g, 4.27mmol) se rastvori u hloroformu (50mL) i doda se mangan dioksid (3.71g, 42.7mmol). Dobijena suspenzija se meša na sobnoj temperaturi u atmosferi azota u toku noći. Reaktivna smeša se filtrira kroz

11

celite i upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.38g) kao bledo žuto ulje, koje stajanjem očvrsne. LCMS (Sistem A): tRET= 0.76min; MH<+>= 322.

Međuproizvod 174: (4-nitro-3-(((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)amino)fenil)metanol

[0307] U smešu (3-fluoro-4-nitrofenil)metanola (1g, 5.84mmol, Apollo) i DIPEA (4.08mL, 23.36mmol) u 2-metil tetrahidrofuranu (10mL) se doda (tetrahidro-2H-piran-3-il)metanamin hidrohlorid (1.33g, 8.77mmol, Enamin). Dobijena smeša se meša na 80°C u toku noći.

Reaktivna smeša se podeli između DCM i zasićenog vodenog rastvora natrijum hidrogen karbonata. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM. Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogen karbonata, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod vakuumom da se dobije narandžasto ulje (1.74g). Sirovi produkt se prečisti hromatografijom na silika gelu (100g) koristeći gradijent 0-100% etil acetat/cikloheksan. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.35g) kao narandžasto ulje. LCMS (Sistem A): tRET= 0.88min; MH<+>= 267.

Međuproizvodi 175 i 176: 5-(6-(hidroksimetil)-1-((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0308] (4-nitro-3-(((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)amino)fenil)metanol (za izradu videti Međuproizvod 174, 134g, 5.03mmol) i 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za izradu videti Međuproizvod 2, 0.99g, 6.54mmol) se rastvore u etanolu (20mL) i vodi (10mL). Doda se natrijum ditionat (3.11, 15.09mmol) i reakcija se zagreva 2 sata na 80°C. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata. Organski sloj se ispere sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, suši koristeći hidrofobni frit i upari da se dobije bež čvrsta supstanca (1.01g). Sirovi produkt se prečisti hromatografijom na silika gelu (100g) koristeći gradijent 0-50% (20% metanolni aminijak u dihlormetanu)/dihlorometan. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare da se dobije bezbojno ulje (0.99g) koje stajanjem očvrsne. LCMS (Sistem A): tRET= 0.47min; MH<+>= 328. Ovaj materijal se razdvoji u svoje dve enantiomerne komponente preparativnom asimetričnom HPLC. Racemat se rastvori u etanolu i prečisti asimetričnom hromatografijom (stacionarna faza: Chiralpak AD-H (250x30mm, 5 mikrona), mobilna faza: heksan/etanol (+ 0.2% v/v izopropilamin)). Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare da se dobiju dva

11

enantiomera: Međuproizvod 175: 426mg, žuta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.47mins; MH<+>= 368. Međuproizvod 176: 488mg, žuta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.47mins; MH<+>= 368. Apsolutna stereohemija nije dodeljena.

Međuproizvod 177a: 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-karbaldehid (izomer 1)

[0309] 5-(6-(hidroksimetil)-1-((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 175 [izomer 1], 423 mg, 1.151 mmol) se rastvori u hloroformu (10 mL) i doda se mangan dioksid (1 g, 11.50 mmol).

Dobijena suspenzija se meša 6 sati na sobnoj temperaturi u atmosferi azota. Reaktivna smeša se filtrira kroz celite i upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (400mg) kao bledo žuta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.73mins; MH<+>= 366.

Međuproizvod 177b: 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-karbaldehid (izomer 2)

[0310] 5-(6-(hidroksimetil)-1-((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin- 2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 176, [izomer 2], 484 mg, 1.317 mmol) se rastvori u hloroformu (10 mL) i doda se mangan dioksid (1.14 g, 13.11 mmol). Dobijena suspenzija se meša na sobnoj temperaturi u atmosferi azota u toku noći. LCMS pokazuje da je preostalo ~15% početnog materijala. Doda se nova porcija mangan dioksida (0.6 g, 6.90 mmol) i reakcija se meša 5 sati na sobnoj temperaturi, u atmosferi azota.

Reaktivna smeša se filtrira kroz celite i upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (422mg) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.73mins; MH<+>= 366.

Međuproizvod 178: 1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etanamin, hidrohlorid

[0311] Crna suspenzija N-(4-metoksibenzil)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etanamina (za izradu videti Međuproizvod 179, 4.95 g, 18.86 mmol) i 10% m/m paladijum na ugljeniku (0.401 g, 1.886 mmol) u etanolu (100 mL) se meša 2 dana u atmosferi vodonika. Reaktivna smeša se propusti kroz celite kolonu, ispere sa EtOH i doda se 2M vodeni rastvor HCl (10 mL).

Dobijeni rastvor se meša 20 min i upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje

12

kao bela čvrsta supstanca. Ukupan prinos iz reakcije je 80%.8.13 (br.s, 8.13, 3H), 3.88 (dd, J = 3.5, 11.0 Hz, 2H), 3.24 (tdd, 2.0, 4.0, 12.0 Hz, 2H), 3.06 - 2.92 (m, 1H), 1.79 - 1.66 (m, 1H), 1.66 - 1.52 (m, 2H), 1.34 - 1.19 (m, 2H), 1.16 (d, J= 6.5 Hz, 3H).

Međuproizvod 179: N-(4-metoksibenzil)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etanamin

[0312] U izmešani rastvor 1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etanona (3.2 g, 24.97 mmol) u DCM (50 mL) se doda (4-metoksifenil)metanamin (6.87 g, 50.1 mmol). Dobijeni žuti rastvor se meša 4.5 h i doda se natrijum triacetoksiborhidrid (10 g, 48.6 mmol). Bela suspenzija se meša. Reaktivna smeša se podeli između DCM i zasićenog vodenog rastvora NaHCO3. Organski sloj se ukloni i vodeni sloj 3 puta ekstrahuje sa DCM. Kombinovane organske faze se propuste kroz hidrofobni frit i koncentruju pod vakuumom da se dobije žuto ulje. Ulje se rastvori u DCM, prečisti hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa smešom EtOAc:EtOH (7.5 - 25%) i upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao žuto ulje. Ukupan prinos iz reakcije je 80%. LCMS (Sistem A): tRET= 1.27 min, MH<+>= 366.

Međuproizvod 180: 3-((1,3-dimetoksipropan-2-il)amino)-4-nitrofenil)metanol

[0313] U smešu (3-fluoro-4-nitrofenil)metanola (4.1g, 24 mmol) i DIPEA (9.18 mL, 52.6 mmol) u THF (30 mL) se doda (1,4-dioksan-2-il)metanamin (3.08 g, 26.3 mmol). Dobijena smeša se meša na 80 °C u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između DCM (100mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (100mL) i slojevi se razdvoje.

Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (3x100 mL) i kombinovani organski slojevi se propuste kroz separator faze i upare pod vakuumom da se dobije ~10g sirove smeše naslovljenog jedinjenja. Jedinjenje ove čistoće se koristi u narednoj fazi. LCMS (Sistem A): tRET= 0.88 min, MH<+>= 271.

Međuproizvod 181: (S)-ciklopentil 4-metil-2-((4((1-metilpiperidin-4-il)amino)-3-nitrobenzil)amino)pentanoat

[0314] U rastvor (S)-ciklopentil 2-((4-fluoro-3-nitrobenzil)amino)-4-metilpentanoata (za izradu videti Međuproizvod 144, 500 mg, 1.419 mmol) u THF (9 mL) se dodaju 1-metilpiperidin-4-amin (486 mg, 4.26 mmol) i DIPEA (0.743 mL, 4.26 mmol) i reaktivna smeša zagreva mikrotalasima ukupno 90 minuta na 120 °C. Doda se još 1-metilpiperidin-4-amina (486 mg, 4.26 mmol) i reaktivna smeša zagreva dodatnih 30 minuta na 120 °C.

Reaktivna smeša se podeli između DCM (2 x 100 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (100 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na koloni silika gela uz gradijent 0-5 % DCM-2M rastvor amonijaka u metanolu preko 10 zapremina kolone, nakon toga sa zadržavanjem sa 5 % DCM-2M rastvor amonijaka u metanolu za 5 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (456 mg) kao narandžasta guma. LCMS (Sistem A): tRET= 0.70 min, MH<+>= 447.

[0315] Naredni Međuproizvodi su izrađeni na sličan način kao Međuproizvod 181 koristeći odgovarajući amin raspoloživ na tržištu i odgovarajući fluorofenil međuproizvod kako je pokazano u niže datoj tabeli:

Međuproizvod 188: (S)-Terc-butil 2-((4-fluoro-3-nitrobenzil)amino)-4-metilpentanoat

[0316] U rastvor 4-fluoro-3-nitrobenzaldehida (1 g, 5.91 mmol) i (S)-terc-butil 2-amino-4-metilpentanoat hidrohlorida (1.46 g, 6.50 mmol) u DCM (25 mL) se doda sirćetna kiselina (1.016 mL, 17.74 mmol) i reaktivna smeša meša 1 sat u atmosferi azota. U porcijama se doda natrijum triacetoksiborhidrid (2.507 g, 11.83 mmol) i reaktivna smeša meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Polako se dodaje zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (50 mL) i mešanje nastavi sve dok šištanje ne prestane. Dobijena suspenzija se ekstrahuje sa DCM (3 x 50 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u DCM i prečisti sa SPE (silika, 100 g) uz gradijent 0 -50 % EtOAc u cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.66 g, 4.88 mmol) kao žuta guma. LCMS (Sistem A): tRET= 0.95 min, MH<+>= 341.

Međuproizvod 189: (S)-terc-Butil 4-metil-2-((4-((1-metilpiperidin-4-il)amino)-3-nitrobenzil)amino)pentanoat

[0317] U rastvor (S)-terc-butil 2-((4-fluoro-3-nitrobenzil)amino)-4-metilpentanoata (za primer izrade videti Međuproizvod 188, 250 mg, 0.734 mmol) u THF (3.5 mL) se dodaju 1-metilpiperidin-4-amin (252 mg, 2.203 mmol) i DIPEA (0.385 mL, 2.203 mmol) i reaktivna smeša zagreva 30 min zračenjem mikrotalasima na 120 °C. Reaktivna smeša se podeli između DCM (2 x 20 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (20 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i oduvaju u struji azota. Uzorak se prenese u DCM i prečisti sa SPE (silika, 25 g) uz gradijent 0 - 10 % (2 M rastvor amonijaka u MeOH) u DCM. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (127 mg, 0.292 mmol). LCMS (Sistem B): tRET= 1.09 min, MH<+>= 435.

Međuproizvod 190: (S)-ciklopentil 4-metil-2-((4-nitro-3-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)benzil)amino)pentanoat

[0318] Rastvor 3-fluoro-4-nitrobenzaldehida (500 mg, 2.96 mmol) i (S)-ciklopentil 2-amino-4-metilpentanoat 4-metilbenzensulfonata (za primer izrade videti Međuproizvod 3, 1208 mg, 3.25 mmol) u DCM (20 mL) se meša 1.5 sat u atmosferi azota. U porcijama se doda natrijum triacetoksiborhidrid (1253 mg, 5.91 mmol) i reaktivna smeša meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Polako se dodaje zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (50 mL) i mešanje reakcije nastavi sve dok šištanje ne prestane. Dobijena suspenzija se ekstrahuje sa DCM (3 x 50 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa SPE (silika, 50 g) uz gradijent 0-50 % EtOAc u cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i oduvaju u struji azota da se

12

dobije žuta guma. U ovaj materijal u THF (4 mL) se dodaju (tetrahidro-2H-piran-4-il)metanamin (260 mg, 2.257 mmol) i DIPEA (0.395 mL, 2.259 mmol) i reaktivna smeša zagreva 30 min zračenjem mikrotalasima na 120 °C. Reaktivna smeša se podeli između dihlormetana (3 x 50 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (50 mL).

Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i oduvaju u struji azota. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa SPE (silika, 50 g) uz gradijent 0-5 % (2 M rastvor amonijaka u MeOH) u DCM. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i oduvaju u struji azota da se dobije sirovi produkt. Sirovi produkt se ponovo podeli između dihlormetana (3 x 50 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (50 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i oduvaju u struji azota da se dobije naslovljeno jedinjenje (522 mg, 1.166 mmol). LCMS (Sistem B): tRET= 1.49 min, MH<+>= 448

Međuproizvod 191: (S)-Neopentil 2-(((benziloksi)karbonil)amino)-3-hidroksipropanoat

[0319] U rastvor (S)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-3-hidroksipropanoatne kiseline (2.27 g, 9.49 mmol), EDC (2.18 g, 11.39 mmol) i HOBT (1.74 g, 11.39 mmol) u DMF (20 mL) se dodaju DIPEA (3.31 mL, 18.98 mmol) i 2,2-dimetilpropan-1-ol (8.36 g, 95 mmol) i reaktivna smeša meša u atmosferi azota na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (50 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (50 mL). Organski sloj se nakon toga ispere sa 1 M rastvorom hlorovodonične kiseline (50 mL), vodom (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL). Organski sloj se nakon toga suši koristeći hidrofobni frit i oduva u struji azota. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa SPE (silika, 100 g) uz gradijent 0-50 % EtOAc u cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (951 mg, 3.07 mmol) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 1.06 min, MH<+>= 310.

Međuproizvod 192: (S)-Neopentil 2-amino-3-metoksipropanoat

[0320] U smešu (S)-neopentil 2-(((benziloksi)karbonil)amino)-3-hidroksipropanoata (za primer izrade videti Međuproizvod 191, 947 mg, 3.06 mmol) i srebro oksida (1064 mg, 4.59 mmol) u bezvodnom acetonitrilu (20 mL) se doda metil jodid (1.914 mL, 30.6 mmol) i reaktivna smeša zagreva dve noći na 90 °C u atmosferi azota. Reaktivna smeša se ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu i čvrsta supstanca se ukloni filtriranjem. Dobijeni rastvor se upari pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa SPE (silika, 50 g) uz gradijent 0-25 % EtOAc u cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom. Rastvor ovog materijala (347 mg) u etanolu (10 mL) se hidrogenizuje koristeći H-kocku (podešavanje: 20 °C, 1 bar, 1mL/min brzina protoka) i 10 % Pd/C CatCart 30 kao katalizator. Reaktivna smeša se oduva u struji azota i suši u vakuumskoj pećnici da se dobije naslovljeno jedinjenje (199 mg, 1.052 mmol). LCMS (Sistem B): tRET= 0.81 min, MH+ = 190 bez UV hromofore.

Međuproizvod 193: (3-Nitro-4-((oksetan-3-ilmetil)amino)fenil)metanol

[0321] Boca okruglog dna se napuni sa (4-fluoro-3-nitrofenil)metanolom (770 mg, 4.50 mmol), oksetan-3-il-metanamin hidrohloridom (753 mg, 6.09 mmol), THF (10 mL) i DIPEA (2.3 mL, 13.17 mmol). Stavi se kondenzator vazduha i žitka masa zagreva na 62 °C u toku noći. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu a zatim se doda DMF (2 mL). Smeša se zagreva 4 dana na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, razblaži sa EtOAc i organski slojevi isperu sa vodom, nakon toga sa slanim rastvorom a zatim propuste kroz hidrofobni frit. Filtrat se koncentruje pod vakuumom da se dobije narandžasto ulje. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa SPE (silika, 25 g) uz gradijent 0-100% EtOAc u cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (584 mg, 2.451 mmol) kao narandžasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.61 min, MH<+>= 239.

Međuproizvod 194: 5-(5-(Hidroksimetil)-1-(oksetan-3-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on

[0322] Mikrotalasna posuda se napuni sa 5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehidom (za primer izrade videti Međuproizvod 1, 504 mg, 3.68 mmol), natrijum hidrosulfitom (1.5 g, 8.62 mmol), vodom (5.00 mL) i rastvorom (3-nitro-4-((oksetan-3-ilmetil)amino)fenil)metanola (za primer izrade videti Međuproizvod 193, 584 mg,

2.451 mmol) u etanolu (10 mL). Posuda se zatvori i žitka masa zrači 5 sati na 100 °C. Smeša se razblaži sa vodom i smešom hloroform / IPA (3:1), slojevi izmešaju i razdvoje a zatim se organski sloj propusti kroz hidrofobni frit i koncentruje pod vakuumom da se dobije žuto ulje. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa SPE (silika, 25 g) uz gradijent 0-100% EtOAc u

12

cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (178 mg, 0.547 mmol) kao bezbojno ulje koje očvrsne. LCMS (Sistem A): tRET= 0.40 min, MH<+>= 326.

Međuproizvod 195: 2-(5-Metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksetan-3-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0323] U rastvor 5-(5-(hidroksimetil)-1-(oksetan-3-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-ona (za primer izrade videti Međuproizvod 194, 180 mg, 0.553 mmol) u DCM (15 mL) se u porcijama doda 45% jodoksibenzoeva kiselina (stabilizovana sa benzoevom kiselinom i izoftalnom kiselinom) (379 mg, 0.609 mmol). Reaktivna smeša se meša 4 noći na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se podeli između 10% izopropanola u dihlormetanu (100 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (3 x 100 mL). Organski sloj se propusti kroz hidrofobni frit i oduva u struji azota da se dobije naslovljeno jedinjenje (152 mg, 0.470 mmol) kao bledo žuta guma. LCMS (Sistem B): tRET= 0.60 min, MH<+>= 324.

Međuproizvod 196: (S)-ciklopentil 2-amino-3-metoksipropanoat

[0324] (S)-2-amino-3-metoksipropanoatna kiselina hidrohlorid (3.3131 g, 21.30 mmol) se doda u ciklopentanol (30 mL) i suspenzija se ohladi na -5 °C koristeći kupatilo suvi led/aceton. Nakon deset minuta mešanja na ovoj temperaturi, u kapima se doda tionil hlorid (3.57 mL, 49.0 mmol). Suspenzija se ostavi uz mešanje da se zagreje na sobnu temperaturu. Reaktivna smeša se zagreje na 60 °C i meša 24 sata na ovoj temperaturi. Isparljive komponente se uklone iz reaktivne smeše pod sniženim pritiskom. Doda se vruć EtOAc sa ciljem da se izazove rekristalizacija. Materijal se nije rastvorio pa se suspenzija izdvoji filtriranjem, ispere preko filtera i suši u vakuumskoj pećnici da se dobije naslovljeno jedinjenje (4.49 g, 0.24 mmol) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (d6-DMSO, 293 K): δ 1.51 - 1.76 (m, 6 H) 1.76 - 1.92 (m, 2 H) 3.29 (s, 3 H) 3.75 (d, J= 3.4 Hz, 2 H) 4.21 (t, J= 3.4 Hz, 1 H) 5.17 - 5.21 (m, 1 H) 8.64 (br.s., 3 H).

Međuproizvod 197: 5-(1-Etil-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1.3-dimetilpiridin-2(1H)-on

12

[0325] U smešu 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehida (za primer izrade videti Međuproizvod 2, 1 g, 6.62 mmol) i natrijum hidrosulfita (3.46 g, 19.85 mmol) se doda rastvor (4-(etilamino)-3-nitrofenil)metanola (za primer izrade videti Međuproizvod 70, 1.298 g, 6.62 mmol) u etanolu (30 mL), a nakon toga voda (15 mL). Reaktivna smeša se zagreva na 80 °C u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između zasićenog vodenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (150 mL) i smeše 3:1 hloroform:izopropanol (3 x 150 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa SPE (silika, 100 g) silika gel uz gradijent 0-12% (2 M rastvor amonijaka u metanolu) u DCM. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.05 g, 3.53 mmol) kao beličasta pena. LCMS (Sistem B): tRET= 0.64 min, MH<+>= 298

Međuproizvod 198: 2-(1,5-Dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-etil-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0326] U rastvor 5-(1-etil-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]midazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (za primer izrade videti Međuproizvod 197, 1.05 g, 3.53 mmol) u DCM (50 mL) se u porcijama doda 45% jodoksibenzoeva kiselina (stabilizovana sa benzoevom kiselinom i izoftalnom kiselinom) (2.417 g, 3.88 mmol). Reaktivna smeša se meša 4 noći na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se podeli između 10 % rastvora izopropanola u dihlormetanu (250 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (3 x 200 mL). Organski sloj se suši koristeći hidrofobni frit i oduva u struji azota da se dobije naslovljeno jedinjenje (856 mg, 2.90 mmol) kao bledo žuta čvrsta supstanca.

LCMS (Sistem B): tRET= 0.72 min, MH<+>= 296.

Međuproizvod 199: (4-((2-Metoksietil)amino)-3-nitrofenil)metanol

[0327] Boca okruglog dna se napuni sa (4-fluoro-3-nitrofenil)metanolom (3.2 g, 18.70 mmol), 2-metoksietanaminom (2.107 g, 28.0 mmol), THF (30 mL) i DIPEA (9.80 mL, 56.1 mmol). Stavi se kondenzator vazduha i žitka masa zagreva na 62 °C u toku noći. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu i razblaži sa EtOAc. Organski slojevi se isperu sa vodom a zatim propuste kroz hidrofobni frit i koncentruju pod vakuumom da se dobije narandžasto ulje.

12

Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa SPE (silika, 100 g) uz gradijent 0-80% EtOAc u cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.48 g, 15.38 mmol) kao narandžasto ulje koje očvrsne. LCMS (Sistem A): tRET= 0.70 min, MH<+>= 227.

Međuproizvod 200: 5-(5-(Hidroksimetil)-1-(2-metoksietil)-1H-benzo[imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on

[0328] Boca okruglog dna se napuni sa 5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehidom (za primer izrade videti Međuproizvod 1, 2.53 g, 18.46 mmol), natrijum hidrosulfitom (9.37 g, 53.8 mmol), vodom (25.00 mL) i rastvorom (4-((2-metoksietil)amino)-3-nitrofenil)metanola (za primer izrade videti Međuproizvod 199, 3.48 g, 15.38 mmol) u etanolu (50 mL). Posuda se opremi sa vazdušnim kompresorom i zagreva na 100 °C u toku noći. Smeša se razblaži sa vodom i smešom hloroform / IPA (3:1), slojevi izmešaju i razdvoje pre nego što se organski sloj propusti kroz hidrofobni frit i koncentruje pod vakuumom da se dobije bela čvrsta supstanca. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa SPE (silika, 25 g) uz gradijent 0-100% EtOAc u cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.58 g, 11.42 mmol) kao bezbojno ulje koje očvrsne. LCMS (Sistem A): tRET= 0.44 min, MH<+>= 314.

Međuproizvod 201: 1-(2-Metoksietil)-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0329] U rastvor 5-(5-(hidroksimetil)-1-(2-metoksietil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-ona (za primer izrade videti Međuproizvod 200, 3.38 g, 10.79 mmol) u DCM (150 mL) se u porcijama doda 45% jodoksibenzoeva kiselina (stabilizovana sa benzoevom kiselinom i izoftalnom kiselinom) (7.38 g, 11.87 mmol). Reaktivna smeša se meša 4 noći na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se podeli između DCM (200 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (200 mL). Vodeni sloj sadrži veliku količinu čvrste supstance, pa se dalje ekstrahuje sa 10% izopropanolom u dihlormetanu (2 x 200 mL). Organski slojevi se kombinuju, isperu sa vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (2 x 200 mL), suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom da se dobije

12

naslovljeno jedinjenje (2.7 g, 8.67 mmol) kao bledo braon čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.66 min, MH<+>= 312.

Međuproizvod 202: 5-(5-(Hidroksimetil)-1-(2-metoksietil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1.3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0330] U smešu 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehida (za primer izrade videti Međuproizvod 2, 1 g, 6.62 mmol) i natrijum hidrosulfita (3.46 g, 19.85 mmol) se doda rastvor (4-((2-metoksietil)amino)-3-nitrofenil)metanola (za primer izrade videti Međuproizvod 199, 1.497 g, 6.62 mmol) u etanolu (30 mL), a nakon toga voda (15 mL). Reaktivna smeša se zagreva na 80 °C u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između zasićenog vodenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (150 mL) i smeše 3:1 hloroform:izopropanol (3 x 150 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa SPE (silika, 100 g) uz gradijent 0-12% (2 M rastvor amonijaka u metanolu) u DCM. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.0 g, 6.11 mmol) kao beličasta pena. LCMS (Sistem B): tRET= 0.62 min, MH<+>= 328.

Međuproizvod 203: 2-(1,5-Dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(2-metoksietil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0331] U rastvor 5-(5-(hidroksimetil)-1-(2-metoksietil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (za primer izrade videti Međuproizvod 202, 2.0 g, 6.11 mmol) u DCM (50 mL) se u porcijama doda 45% jodoksibenzoeva kiselina (stabilizovana sa benzoevom kiselinom i izoftalnom kiselinom) (4.18 g, 6.72 mmol). Reaktivna smeša se meša 2 noći na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se podeli između 10% izopropanola u dihlorometanu (200 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (3 x 200 mL). Organski sloj se suši koristeći hidrofobni frit i upari pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (975 mg, 3.00 mmol) kao bledo žuta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.71 min, MH<+>= 326.

Međuproizvod 204: (4-((2-(Dimetilamino)etil)amino)-3-nitrofenil)metanol

12

[0332] Smeša (4-fluoro-3-nitrofenil)metanola (2.5 g, 14.61 mmol), N1,N1-dimetiletan-1,2-diamina (3.19 mL, 29.2 mmol) i DIPEA (7.65 mL, 43.8 mmol) u THF (20 mL) u dve podjednake porcije se zrači 30 min mikrotalasima (podešena inicijalna visoka apsorpcija) na 120 °C. Reaktivna smeša se podeli između dihlormetana (3 x 150 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (150 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa SPE (silika, 100 g). Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.32 g, 13.88 mmol) kao tamno narandžasta guma. LCMS (Sistem B): tRET= 0.73 min, MH<+>= 240.

Međuproizvod 205: 5-(1-(2-(Dimetilamino)etil)-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on

[0333] U smešu 5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehida (za primer izrade videti Međuproizvod 1, 3.3 g, 24.06 mmol) i natrijum hidrosulfita (7.20 g, 41.4 mmol) se doda rastvor (4-((2-(dimetilamino)etil)amino)-3-nitrofenil)metanola (za primer izrade videti Međuproizvod 204, 3.3 g, 13.79 mmol) u etanolu (26 mL), a nakon toga voda (13 mL).

Reaktivna smeša se zagreva u dve jednake porcije, zračenjem mikrotalasima (podešena inicijalna visoka apsorpcija) 5 sati na 100 °C. Reaktivna smeša se podeli između zasićenog vodenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (100 mL) i dihlorometana (2 x 100 mL), nakon toga se vodeni sloj dalje ekstrahuje sa smešom 3:1 hloroform:izopropanol (3 x 100 mL). Organski slojevi se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u smešu metanol/dihlorometan (a kolona suši u vakuumskoj pećnici) i prečisti sa SPE (silika, 100 g) uz gradijent 0-50% (2 M rastvor amonijaka u metanolu) u DCM. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se suši u vakuumskoj pećnici da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.75 g, 5.36 mmol). LCMS (Sistem B): tRET= 0.58 min, MH<+>= 327.

Međuproizvod 206: 1-(2-(Dimetilamino)etil)-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0334] U rastvor 5-(1-(2-(dimetilamino)etil)-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-ona (za primer izrade videti Međuproizvod 205, 1.31 g, 4.01 mmol) u DCM (50 mL) se u porcijama doda 45% jodoksibenzoeva kiselina (stabilizovana sa

1

benzoevom kiselinom i izoftalnom kiselinom) (2.75 g, 4.41 mmol). Reaktivna smeša se meša 5 noći na sobnoj temperaturi. Doda se još 45% jodoksibenzoeve kiseline (stabilizovana sa benzoevom kiselinom i izoftalnom kiselinom) (1.38 g, 2.21 mmol), nakon toga DMSO (10 mL). Reaktivna smeša se meša na sobnoj temperaturi još 7 noći. Reaktivna smeša se podeli između 10% izopropanola u dihlormetanu (150 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (3 x 150 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i oduvaju u struji azota da se dobije naslovljeno jedinjenje (758 mg, 2.337 mmol) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.66 min, MH<+>= 325.

Međuproizvod 207: 5-(5-(Hidroksimetil)-1-metil-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on

[0335] (4-(Metilamino)-3-nitrofenil)metanol (za primer izrade videti Međuproizvod 1, 5.32 g, 29.2 mmol), 5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za primer izrade videti Međuproizvod 71, 4.00 g, 29.2 mmol) i natrijum ditionit (15.25 g, 88 mmol) se rastvore u etanolu (75 mL), vodi (37.5 mL) i refluksuju 14 h. Nakon toga se smeša podeli dodavanjem 200 mL zasićenog rastvora natrijum bikarbonata i 200 mL etil acetata. Organska faza se izdvoji i vodena faza dva puta ekstrahuje sa 200 mL etil acetata. Organski slojevi se kombinuju, suše preko magnezijum sulfata, a rastvarač se ukloni. Ostatak se triturira sa dietil etrom i filtrira da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.519 g, 5.64 mmol) kao bledo žuta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.39 min, MH<+>= 270.

Međuproizvod 208: 1-Metil-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0336] U rastvor 5-(5-(hidroksimetil)-1-metil-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-ona (za primer izrade videti Međuproizvod 207, 1.88 g, 6.98 mmol) u DCM (50 mL) se u porcijama doda 45% jodoksibenzoeva kiselina (stabilizovana sa benzoevom kiselinom i izoftalnom kiselinom) (4.78 g, 7.68 mmol). Reaktivna smeša se meša 4 noći na sobnoj temperaturi. Doda se DMSO (10 mL) i reaktivna smeša meša na sobnoj temperaturi još 1 noć. Reaktivna smeša se podeli između dihlormetana (100 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (3 x 100 mL). Organski sloj se suši koristeći hidrofobni frit i upari pod

1 1

sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (655 mg, 2.451 mmol) kao tamno braon čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.61 min, MH<+>= 268.

Međuproizvod 209: (3-Nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)amino)fenil)metanol

[0337] Rastvor (tetrahidro-2H-piran-3-il)metanamina (4.11 mL, 32.1 mmol), (4-fluoro-3-nitrofenil)metanola (2200 mg, 12.86 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (11.23 mL, 64.3 mmol) u THF (30 mL) se degasira i zagreva u atmosferi azota na 60 °C u toku noći. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i ostatak podeli između etil acetata (150 mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (150 mL). Organske frakcije se izdvoje i vodeni sloj se ponovo dva puta ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 150 mL). Organske frakcije se kombinuju, propuste kroz hidrofobni frit i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak se rastvori u minimalnoj količini dihlorometana, prečisti sa SPE (silika gel, 2 x 100 g) i eluira sa gradijentom 0-70% EtOAc u cikloheksanu. Frakcije koje sadrže produkt se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (2731 mg) kao narandžasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.82 min, MH<+>= 267.

Međuproizvod 210: 5-(5-(Hidroksimetil)-1-((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on

[0338] Rastvor (3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)amino)fenil)metanola (za primer izrade videti Međuproizvod 1, 2600 mg, 9.76 mmol), 5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehida (za primer izrade videti Međuproizvod 209, 1339 mg, 9.76 mmol) i natrijum ditionita (5100 mg, 29.3 mmol) u etanolu (30 mL) i vodi (15 mL) se degasira. Reaktivna smeša se zagreva u atmosferi azota na 80°C u toku noći. Reaktivna smeša se ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu i nakon toga podeli između smeše 3:1 hloroform:izopropanol (150 mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (150 mL). Organske frakcije se izdvoje i vodeni sloj se ponovo dva puta ekstrahuje sa smešom 3:1 hloroform:izopropanol (2 x 150 mL). Organske frakcije se kombinuju, propuste kroz hidrofobni frit i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak se rastvori u minimalnoj količini 10% metanola u etil acetatu. Rastvor se prenese na dve SPE kolone (100 g, silika) i rastvarači u koje se produkt prenese na kolone se upari. Produkt se nakon toga eluira sa gradijentom 0-30% EtOH u EtOAc. Frakcije koje sadrže produkt se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije

1 2

naslovljeno jedinjenje (1500 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.63 min, MH<+>= 354.

Međuproizvod 211: 2-(5-Metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0339] Suspenzija 45% 2-jodoksibenzojeve kiseline (stabilizovana benzoevom i izonaftalenskom kiselinom) (6603 mg, 10.61 mmol) i 5-(5-(hidroksimetil)-1-((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-ona (za primer izrade videti Međuproizvod 210, 1500 mg, 4.24 mmol) se meša 3 dana na sobnoj temperaturi u atmosferi azota. Reaktivna smeša se podeli između smeše 3:1 hloroform:izopropanol (75 mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (75 mL). Organski sloj se izdvoji i vodena frakcija se ponovo dva puta ekstrahuje sa smešom 3:1 hloroform:izopropanol (2 x 75 mL). Organske frakcije se kombinuju, propuste kroz hidrofobni frit i koncentruju pod sniženim pritiskom. Materijal se podeli između smeše 3:1 hloroform:izopropanol (75 mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (75 mL). Organski sloj se izdvoji i vodena frakcija se ponovo dva puta ekstrahuje sa smešom 3:1 hloroform:izopropanol (2 x 75 mL). Organske frakcije se kombinuju, propuste kroz hidrofobni frit, koncentruju pod sniženim pritiskom i suše pod vakuumom 7 dana da se dobije naslovljeno jedinjenje (1487 mg) kao svetlo ružičasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.70 min, MH<+>= 352.

Međuproizvod 212: 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0340] Rastvor 2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehida (za primer izrade videti Međuproizvod 211, 700 mg, 1.992 mmol) u DMF (10 mL) se tretira sa kalijum karbonatom (551 mg, 3.98 mmol) i reaktivna smeša se meša 2 sata. Doda se jodometan (0.149 mL, 2.390 mmol) i smeša se meša u toku noći. Rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom i ostatak se podeli između smeše 3:1 hloroform:izopropanol (75 mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (75 mL). Organski sloj se izdvoji i vodena frakcija se ponovo dva puta ekstrahuje sa smešom 3:1 hloroform:izopropanol (2 x 75 mL). Organske frakcije se kombinuju, propuste kroz hidrofobni frit i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijena guma se rastvori u minimalnoj

1

količini 10% metanola u EtOAc i prenese na SPE kolonu (50 g, silika). Produkt se eluira sa gradijentom 0-30% EtOH u EtOAc. Frakcije koje sadrže produkt se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (451 mg) kao braon čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.73 min, MH<+>= 366.

Međuproizvod 213: (S)-(4-((1-Metoksipropan-2-il)amino)-3-nitrofenil)metanol

[0341] U rastvor (4-fluoro-3-nitrofenil)metanola (2 g, 11.69 mmol) u THF (10 mL) se dodaju (S)-1-metoksipropan-2-amin (1.851 mL, 17.53 mmol) i DIPEA (6.12 mL, 35.1 mmol) i reaktivna smeša se zagreva 30 min zračenjem mikrotalasima (podešena inicijalna visoka apsorpcija) na 120 °C. Reaktivna smeša se podeli između dihlormetana (3 x 150 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (150 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa SPE (silika, 100 g) uz gradijent 0-25 % EtOAc u cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.4 g, 5.83 mmol) kao narandžasta guma. LCMS (Sistem B): tRET= 0.82 min, MH<+>= 241.

Međuproizvod 214: (S)-5-(5-(Hidroksimetil)-1-(1-metoksipropan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0342] U smešu 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehida (za primer izrade videti Međuproizvod 2, 0.881 g, 5.83 mmol) i natrijum hidrosulfita (3.04 g, 17.48 mmol) se doda rastvor (S)-(4-((1-metoksipropan-2-il)amino)-3-nitrofenil)metanola (za primer izrade videti Međuproizvod 213, 1.4 g, 5.83 mmol) u etanolu (30 mL), a nakon toga voda (15 mL).

Reaktivna smeša se zagreva na 80°C u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između zasićenog vodenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (150 mL) i etil acetata (3 x 150 mL), a nakon toga sa smešom 3:1 hloroform:izopropanol (3 x 150 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa SPE (silika, 100 g) uz gradijent 0-25% EtOAc u cikloheksanu.

Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (580 mg, 1.699 mmol) kao beličasta pena. LCMS (Sistem B): tRET= 0.67 min, MH<+>= 342

1 4

Međuproizvod 215: (S)-2-(1,5-Dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metoksipropan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0343] U rastvor (S)-5-(5-(hidroksimetil)-1-(1-metoksipropan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (za primer izrade videti Međuproizvod 214, 577 mg, 1.690 mmol) u DCM (25 mL) se u porcijama doda 45% jodoksibenzoeva kiselina (stabilizovana sa benzoevom kiselinom i izoftalnom kiselinom) (1157 mg, 1.859 mmol). Reaktivna smeša se meša 3 noći na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se podeli između 10% izopropanola u dihlormetanu (200 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (3 x 200 mL). Organski sloj se suši koristeći hidrofobni frit i upari pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (630 mg, 1.856 mmol) kao beličasta pena. LCMS (Sistem B): tRET= 0.76 min, MH<+>= 340.

Međuproizvod 216: (R)-(4-((1-Metoksipropan-2-il)amino)-3-nitrofenil)metanol

[0344] U rastvor (4-fluoro-3-nitrofenil)metanola (5 g, 29.2 mmol) u THF (40 mL) dodaju se (R)-1-metoksi- propan-2-amin hidrohlorid (5.50 g, 43.8 mmol) i DIPEA (22.96 mL, 131 mmol) i reaktivna smeša zagreva na 60 °C u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između dihlormetana (3 x 250 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (150 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa SPE (silika, 2 x 100 g), uz gradijent 0-25 % EtOAc u cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.7 g, 7.08 mmol) kao narandžasta guma. LCMS (Sistem B): tRET= 0.81 min, MH<+>= 241.

Međuproizvod 217: (R)-5-(5-(Hidroksimetil)-1-(1-metoksipropan-2-il)-1H benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0345] U smešu 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehida (za primer izrade videti Međuproizvod 2, 0.629 g, 4.16 mmol) i natrijum hidrosulfita (2.174 g, 12.49 mmol) doda se rastvor (R)-(4-((1-metoksipropan-2-il)amino)-3-nitrofenil)metanola (za primer izrade videti Međuproizvod 216, 1 g, 4.16 mmol) u etanolu (30 mL), a nakon toga voda (15 mL).

Reaktivna smeša se zagreva 6 sati na 90 °C. Reaktivna smeša se podeli između zasićenog

1

vodenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (150 mL) i etil acetata (3 x 150 mL), a nakon toga sa smešom 3:1 hloroform:izopropanol (3 x 150 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa SPE (silika, 100 g) uz gradijent 0-100% EtOAc u cikloheksanu, a zatim sa gradijentom 0-100% (25% EtOH u EtOAc) u cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (393 mg, 1.151 mmol) kao beličasta pena. LCMS (Sistem B): tRET= 0.67 min, MH<+>= 342.

Međuproizvod 218: (R)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metoksipropan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0346] U rastvor (R)-5-(5-(hidroksimetil)-1-(1-metoksipropan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (za primer izrade videti Međuproizvod 217, 390 mg, 1.142 mmol) u DCM (25 mL) se u porcijama doda 45% jodoksibenzoeva kiselina (stabilizovana sa benzoevom kiselinom i izoftalnom kiselinom) (782 mg, 1.257 mmol). Reaktivna smeša se meša 3 noći na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se podeli između smeše 3:1 hloroform:IPA (200 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (3 x 200 mL). Organski sloj se suši koristeći hidrofobni frit i upari pod sniženim pritiskom. Uzorak se rastvori u smeši 3:1 hloroform:IPA (200 mL) i ispere sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (3 x 200 mL). Organski sloj se suši koristeći hidrofobni frit i upari pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (554 mg, 1.632 mmol, 143 % prinos), u pribižno 70% čistoće. LCMS (Sistem B): tRET= 0.76 min, MH<+>= 340.

Međuproizvod 219: (3-Nitro-4-(((tetrahidrofuran-3-il)metil)amino)fenil)metanol

[0347] (Tetrahidrofuran-3-il)metanamin (1.711 mL, 16.36 mmol) se rastvori u THF (5 mL) i dodaju se DIPEA (5.00 mL, 28.6 mmol) i (4-fluoro-3-nitrofenil)metanol (1400 mg, 8.18 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 2.5 h zračenjem mikrotalasima na 125 °C. Reaktivna smeša se podeli između zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (100 mL) i etil acetata (100 mL). Organski sloj se izdvoji i vodena frakcija se dva puta ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 100 mL). Organske frakcije se kombinuju, propuste kroz hidrofobni frit i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak se rastvori u minimalnoj količini DCM i prečisti sa SPE (silika, 100 g), eluira sa gradijentom 0-65% EtOAc u cikloheksanu. Najčistije frakcije se kombinuju i

1

koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1719 mg) kao narandžasta guma. LCMS (Sistem B): tRET= 0.78 min, MH<+>= 253.

Međuproizvod 220: 5-(5-(Hidroksimetil)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0348] (3-Nitro-4-(((tetrahidrofuran-3-il)metil)amino)fenil)metanol (za primer izrade videti međuproizvod 219, 1719 mg, 6.81 mmol) se rastvori u etanolu (16.00 mL) i vodi (8 mL) i doda se 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za primer izrade videti Međuproizvod 2, 1145 mg, 6.81 mmol). Reaktivna smeša se zagreva u atmosferi azota sve dok ne dostigne temperaturu reakcije (80 °C) i doda se natrijum ditionit (3559 mg, 20.44 mmol). Reaktivna smeša se meša 4 sata u atmosferi azota. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak se podeli između 10% IPA/DCM (100 mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (100 mL). Organski sloj se izdvoji i vodena frakcija se ekstrahuje sa 10% IPA/DCM (2 x 100 mL). Organske frakcije se kombinuju, propuste kroz hidrofobni frit i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak se rastvori u minimalnoj količini DCM i prečisti sa SPE (100 g, silika), eluira sa gradijentom 0-25% EtOH u EtOAc.

Odgovarajuće frakcije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1189 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.65 min, MH<+>= 354.

Međuproizvod 221: 2-(1,5-Dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0349] 5-(5-(Hidroksimetil)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (za primer izrade videti Međuproizvod 220, 1189 mg, 3.36 mmol) se rastvori u DCM (20 mL). Doda se IBX (45 mt%, stabilizovano benzoevom i naftalnom kiselinom) (5234 mg, 8.41 mmol) i reaktivna smeša se meša 3 dana. Reaktivna smeša se podeli između 10% IPA/DCM (50 mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (50 mL). Organski sloj se izdvoji i vodena frakcija se dva puta ekstrahuje sa 10% IPA/DCM (2 x 50 mL). Organske frakcije se kombinuju i isperu sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (75 mL). Organski sloj se izdvoji, propusti kroz hidrofobni frit i koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se stavi u vakuumsku pečnicu 30 minuta da se dobije naslovljeno

1

jedinjenje (1271 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.73 min, MH<+>= 352.

Međuproizvod 222: (4-((1,3-Dimetoksipropan-2-il)amino)-3-nitrofenil)metanol

[0350] U rastvor (4-fluoro-3-nitrofenil)metanola (16 g, 93 mmol) u THF (80 mL) se dodaju 1,3-dimetoksi-propan-2-amin (10 g, 84 mmol) i DIPEA (15 mL, 86 mmol). Smeša se podeli u sedam porcija i zagreva zračenjem mikrotalasima 7 sati na 100 °C. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (3 x 500 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (750 mL). Organski slojevi se kombinuju, isperu sa zasićenim slanim rastvorom (500 mL) i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa SPE (silika, 100 g) uz gradijent 0-80% EtOAc u cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (12.0 g, 44.4 mmol). LCMS (Sistem B): tRET= 0.85 min, MH<+>= 271. Manje čiste frakcije se kombinuju i upare. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa SPE (silika, 100 g) uz gradijent 0-50 % EtOAc u cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.7 g, 13.69 mmol). LCMS (Sistem J): tRET= 0.85 min, MH<+>= 271.

Međuproizvod 223: 5-(1-(1,3-Dimetoksipropan-2-il)-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0351] U rastvor (4-((1,3-dimetoksipropan-2-il)amino)-3-nitrofenil)metanola (za primer izrade videti Međuproizvod 222, 12 g, 44.4 mmol) u etanolu (160 mL) se dodaju natrijum hidrosulfit (27.5 g, 133 mmol) i 1,5- dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za primer izrade videti Međuproizvod 2, 8.39 g, 55.5 mmol), a nakon toga voda. Reaktivna smeša se zagreva dva sata na 70 °C. Reaktivna smeša se koncentruje do približno polovine zapremine pod sniženim pritiskom i dobijena tečnost podeli između smeše 3:1 hloroform:izopropanol (3 x 300 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (300 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal iz slične reakcije (dodatnih 40% povećanja) se doda u ovoj fazi. Uzorak se prenese u DCM i prečisti sa SPE (silika, 3 x 340 g) uz gradijent 0-100 % (25% EtOH u EtOAc) u cikloheksanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim

1

pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (7.5 g, 20.19 mmol) kao beličasta pena. LCMS (Sistem J): tRET= 0.70 min, MH<+>= 372.

Međuproizvod 224: 1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0352] U rastvor 5-(1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (za primer izrade videti Međuproizvod 223, 7.5 g, 20.19 mmol) u DCM (400 mL) doda se 45% jodoksibenzoeva kiselina (stabilizovana sa benzoevom kiselinom i izoftalnom kiselinom) (13.82 g, 22.21 mmol) i reaktivna smeša meša na sobnoj temperaturi 3 noći. Polako se dodaje zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (400 mL) i smeša meša sve dok izdvajanje mehurića ne prestane. Organski sloj se ukloni i vodeni sloj reekstrahuje sa smešom 3:1 hloroform:izopropanol (2 x 400 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (7.3 g, 19.76 mmol). LCMS (Sistem J): tRET= 0.81 min, MH<+>= 370.

Međuproizvod 225: 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0353] 5-(5-(hidroksimetil)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 226) (600 mg, 1.633 mmol) i Dess-Martin perjodinan (693 mg, 1.633 mmol) se rastvore u DCM (5 mL) i mešaju 2h u atmosferi azota. Nakon toga se doda Dess-Martin perjodinan (291mg, 0.544mmol) i smeša meša narednih 30min. Nakon toga se doda zasićeni rastvor natrijum bikarbonata (25mL) i smeša meša 25 minuta a zatim ostavi da stoji u toku noći. U smešu se doda dihlorometan (25mL) i faze razdvoje. Vodena faza se nakon toga ekstrahuje sa dihlormetanom (25mLx2) i organske faze kombinuju. Organska faza se nakon toga ispere sa slanim rastvorom (30mL x2) i organske faze kombinuju i suše preko hidrofobnog frita. Rastvarači se nakon toga uklone pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (550 mg, 1.505 mmol, 92 % prinos) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.87 min; MH<+>366.

Međuproizvod 226: 5-(5-(hidroksimetil)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetil-piridin-2(1H)-on

1

[0354] (3-Nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)amino)fenil)metanol (za izradu videti Međuproizvod 227, 2.9 g, 10.89 mmol), 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za izradu videti Međuproizvod 2, 2.469 g, 16.34 mmol) i natrijum ditionit (5.69 g, 32.7 mmol) se dodaju u bocu zajedno sa etanolom (35 mL). Ova smeša se zagreva na 90°C i meša 15 minuta. Nakon toga se doda voda (35 mL) i smeša meša 20 sati u atmosferi azota. Smeša se ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu. Smeša se nakon toga podeli između smeše 3:1 dihlormetan:izopropil alkohol (100mL) i vode (100mL) i faze razdvoje. Vodena faza se ekstrahuje sa smešom 3:1 dihlorometan:izopropil alkohol (100mL x2) i organske faze kombinuju. Organska faza se nakon toga suši koristeći hidrofobni frit i rastvarači se uklone pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.99 g, 5.42 mmol, 49.7 % prinos) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.77 min; MH<+>368.

Međuproizvod 227: (3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)amino)fenil)metanol

[0355] (4-fluoro-3-nitrofenil)metanol (1.985 g, 11.60 mmol) i (tetrahidro-2H-piran-2-il)metanamin (4.44 mL, 34.7 mmol) se rastvore u THF (10 mL) i doda se N,N-diizopropiletilamin (6.08 mL, 34.8 mmol). Smeša se zagreva 1h u mikrotalasnom reaktoru na 120°C. Narandžasta smeša se nakon toga podeli između etil acetata (100mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (100mL). Faze se razdvoje i vodeni sloj ekstrahuje dva puta sa etil acetatom (100mL). Organske faze se nakon toga kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i rastvarači se uklone pod vakuumom. Ovim se dobija naslovljeno jedinjenje kao sjajna narandžasta čvrsta supstanca. Prekomerno visok prinos je verovatno zbog pogrešno izmerenog početnog materijala. LCMS (Sistem B): tRET= 0.92 min; MH<+>267.

Međuproizvod 228: 2-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-etil-1H benzo[d]imidazol-5-il)oksi)acetaldehid

[0356] Dess-Martin perjodinan (143 mg, 0.34 mmol) se u porcijama doda u izmešani rastvor 5-(1-etil-5-(2-hidroksietoksi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (za izradu videti Međuproizvod 229, 100 mg, 0.31 mmol) u dihlormetanu (10 mL). Reaktivna smeša se meša 4 sata na sobnoj temperaturi u atmosferi azota. U porcijama se doda nova porcija Dess-Martin perjodinana (143 mg, 0.34 mmol) i reaktivna smeša meša na sobnoj

14

temperaturi u toku noći. Doda se 10% rastvor natrijum tiosulfata (20 mL). Organska faza se izdvoji i vodena faza ekstrahuje sa dihlormetanom (2x10 mL). Kombinovani ekstrakti se isperu sa zasićenim rastvorom NaHCO3, suše i upare. Preostalo naslovljeno jedinjenje (99 mg, 0.305 mmol, 100 % prinos) se koristi u narednim fazama bez naknadnog prečišćavanja.100% pretpostavljen prinos. LCMS (Sistem B): tRET= 0.67 min; M+18+ 344.

Međuproizvod 229: 5-(1-etil-5-(2-hidroksietoksi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0357] Smeša 5-(1-etil-5-hidroksi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (za izradu videti Međuproizvod 230, 600 mg, 2.12 mmol), 2-bromoetanola (291 mg, 165 mL, 2.33 mmol) i kalijum karbonata (878 mg, 6.35 mmol) u DMF (3 mL) se zagreva 3 dana na 80°C. Reaktivna smeša se ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu i podeli između etil acetata (25 mL) i vode (15 mL). Organska faza se izdvoji, suši i upari. Ostatak se prečisti hromatografijom [0-10% etanol/etil acetat] da se dobije naslovljeno jedinjenje (105 mg, 0.321 mmol, 15.15 % prinos), kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.66 min; MH<+>328.

Međuproizvod 230: 5-(1-etil-5-hidroksi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0358] Natrijum ditionit (2.72 g, 15.64 mmol) se doda u smešu 4-(etilamino)-3-nitrofenola (za izradu videti Međuproizvod 231, 950 mg, 5.21 mmol) i 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehida (za izradu videti Međuproizvod 2, 985 mg, 6.52 mmol) u etanolu (20 mL) i vodi (10 mL). Reaktivna smeša se meša na 80°C u toku noći. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu i etanol se upari. U ostatak se dodaju etil acetat (100 mL) i zasićeni rastvor NaHCO3(50 mL). Formira se čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se izdvoji filtriranjem i suši da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.2 g, 4.24 mmol, 81 % prinos), kao bezbojna čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.46 min; MH<+>284.

Međuproizvod 231: 4-(etilamino)-3-nitrofenol i Međuproizvod 232: 3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenol

[0359] Smeša 4-amino-3-nitrofenola (5.06 g, 32.9 mmol), tetrahidro-2H-piran-4-karbaldehida (3.0 g, 26.3 mmol) i sirćetne kiseline (1.97 g, 1.88 mL, 32.9 mmol) u dihlormetanu (100 mL) se meša 1 sat na sobnoj temperaturi. Dodaje se natrijum triacetoksiborhidrid (16.71 g, 79 mmol) u toku 5 minuta. Po završenom dodavanju, reaktivna smeša se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Pažljivo se dodaje zasićeni rastvor NaHCO3(100 mL) (razvija se gas) i smeša meša 30 minuta na sobnoj temperaturi. Organska faza se izdvoji. Vodena faza se ekstrahuje sa dihlormetanom (3x50 mL). Kombinovani organski slojevi se suše i upare. Ostatak se prečisti hromatografijom [0-15 % etanol/ etil acetat] da se dobije; 4-(etilamino)-3-nitrofenol (950 mg, 5.21 mmol, 19.84 % prinos), kao narandžasta čvrsta supstanca (neočekivani produkt iz redukcije acetanilida formiran reakcijom triacetoksiborhidrida sa početnim materijalom). LCMS (Sistem A): tRET= 0.87 min; MH<+>183. Plus N31507-32-A3, 3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenol (450 mg, 1.784 mmol, 6.79 % prinos), kao narandžasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.85 min; MH<+>253.

Međuproizvod 233: (R)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-hidroksipropan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0360] U (R)-5-(5-(hidroksimetil)-1-(1-hidroksipropan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin- 2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 234, 500 mg, 1.527 mmol) i Dess-Martin perjodinan (648 mg, 1.527 mmol) se doda dihlorometan (DCM) (20 mL). Smeša se meša 20h u atmosferi azota; LCMS pokazuje da ima još početnog materijala pa se doda Dess-Martin perjodinan (65mg, 0.157mmol) i smeša meša 3 h. U smešu se doda zasićeni natrijum bikarbonat (100mL) i meša 30 min. Nakon toga se doda dihlorometan (80mL) i faze razdvoje. Vodena faza se nakon toga ekstrahuje sa dihlormetanom (100mLx2). Kombinovani organski slojevi se nakon toga isperu sa slanim rastvorom (100mL) a zatim suše koristeći hidrofobni frit. Rastvarači se zatim uklone pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (460mg, 1.414 mmol, 93%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.65 min; MH<+>326.

Međuproizvod 234: (R)-5-(5-(hidroksimetil)-1-(1-hidroksipropan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0361] (R)-2-((4-(hidroksimetil)-2-nitrofenil)amino)propan-1-ol (za izradu videti Međuproizvod 235, 1.902 g, 8.41 mmol) i 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za izradu videti Međuproizvod 2, 1.906 g, 12.61 mmol) se rastvore u etanolu (30 mL) i vodi (15 mL) i zagrevaju 15 minuta na 90°C. Nakon toga se doda natrijum ditionit (4.39 g, 25.2 mmol) i smeša meša 20 sati u atmosferi azota. Smeša se nakon toga ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu. Smeša se nakon toga podeli između smeše 2:1 dihlorometan:izopropanol (75mL) i vode (70mL). Faze se razdvoje i vodena faza ekstrahuje sa smešom 2:1 dihlorometan:izopropanol (75mL x 2). Organske faze se nakon toga suše preko hidrofobnog frita i rastvarači se uklone pod vakuumom. Ovim se dobija žuto ulje koje se rastvori u dihlormetanu i prenese na SNAP 100g Silica kolonu. Ulje se eluira propuštanjem gradijenta 0%-30% etanol/etil acetat. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i rastvarači se uklone pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.139 g, 3.48 mmol, 41.4 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.58 min; MH<+>328.

Međuproizvod 235: (R)-2-((4-(hidroksimetil)-2-nitrofenil)amino)propan-1-ol

[0362] (4-fluoro-3-nitrofenil)metanol (1.5 g, 8.77 mmol) i (R)-2-aminopropan-1-ol (2.047 mL, 26.3 mmol) se rastvore u tetrahidrofuranu (THF) (5 mL) i doda se N,N-diizopropiletilamin (4.59 mL, 26.3 mmol). Smeša se nakon toga zagreva 1 h u mikrotalasnom reaktoru na 120°C. Narandžasta smeša se nakon toga podeli između etil acetata (80mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (80mL) i faze razdvoje. Vodena faza se nakon toga ekstrahuje sa etil acetatom (80mL x2) a organske faze kombinuju. Organska faza se nakon toga suši koristeći hidrofobni frit a rastvarači se uklone pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.904 g, 8.41 mmol, 96 % prinos) kao narandžasta/crvena čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.63 min; MH<+>227.

Međuproizvod 236: (S)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-hidroksipropan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0363] (S)-5-(5-(hidroksimetil)-1-(1-hidroksipropan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 237, 808 mg, 2.468 mmol) i Dess-Martin perjodinan (1047 mg, 2.468 mmol) se rastvore u DCM (30 mL) i smeša meša 3 sata. Doda se Dess-Martin perjodinan (104.7 mg, 0.247 mmol). Smeša se nakon toga meša u toku

14

noći a zatim se dodaju rastvor natrijum hidroksida (2M, 5mL) i zasićeni rastvor natrijum bikarbonata (20mL) i smeša meša 3h. Nakon toga se u smešu dodaju dihlormetan (60mL) i voda (60mL) i faze razdvoje. Vodena faza se nakon toga ekstrahuje tri puta sa dihlormetanom (60mL) a organske faze se kombinuju. Kombinovane organske faze se nakon toga suše koristeći hidrofobni frit, a rastvarači se uklone pod vakuumom. Ovim se dobija naslovljeno jedinjenje (592 mg, 1.82 mmol, 74%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.64 min; MH<+>326.

Međuproizvod 237: (S)-5-(5-(hidroksimetil)-1-(1-hidroksipropan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0364] (S)-2-((4-(hidroksimetil)-2-nitrofenil)amino)propan-1-ol (za izradu videti Međuproizvod 238, 1.8 g, 7.96 mmol), 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za izradu videti Međuproizvod 2, 1.323 g, 8.75 mmol) i natrijum ditionit (4.16 g, 23.87 mmol) se rastvore u etanolu (30 mL) i vodi (15 mL) i smeša zagreva 20 sati na 90°C. Smeša se nakon toga podeli između smeše dihlorometan:izopropanol (2:1; 100mL) i vode (100mL) i faze razdvoje. Vodena faza se nakon toga dva puta ekstrahuje sa smešom dihlorometan:izopropanol (2:1; 100mL) i organske faze kombinuju i suše. Rastvarači se nakon toga uklone pod vakuumom. Ostatak se zatim rastvori u dihlormetanu i prenese na Biotage SNAP 100g Silica kolonu i eluira sa gradijentom 0%- 25% etanol/etil acetat.

Odgovarajuće frakcije se nakon toga kombinuju i rastvarači se uklone pod vakuumom. Ovim se dobija naslovljeno jedinjenje (808 mg, 2.468 mmol, 31.0 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.40 min; MH<+>328.

Međuproizvod 238: (S)-2-((4-(hidroksimetil)-2-nitrofenil)amino)propan-1-ol

[0365] 4-fluoro-3-(nitrofenil)metanol (2 g, 11.69 mmol) se rastvori u tetrahidrofuranu (5 mL) i DIPEA (6.12 mL, 35.1 mmol) i doda se (S)-2-aminopropan-1-ol (2.73 mL, 35.1 mmol). Ova smeša se zagreva 1 sat na 120 °C u mikrotalasnom reaktoru. Narandžasta smeša se nakon toga podeli između etil acetata (80mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (80mL). Faze se nakon toga razdvoje i vodena faza se nakon toga dva puta ekstrahuje sa etil acetatom (80mL). Organski slojevi se nakon toga kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i rastvarači se uklone pod vakuumom. U ulje se doda cikloheksan i smeša ostavi da stoji 16h. Smeša se nakon toga meša 2.5h pa se rastvarač dekantuje. Smeša se zatim rastvori u smeši dihlorometan/metanol i rastvarači se uklone pod vakuumom. Ovim se dobija naslovljeno jedinjenje (1.8 g, 7.96 mmol, 68.1 % prinos) kao crveno/narandžasto ulje. LCMS (Sistem B): tRET= 0.63 min; MH<+>328.

Međuproizvod 239: 2-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)oksi)acetaldehid

[0366] Dess-Martin perjodinan (1.12 g, 2.64 mmol) se u porcijama doda u izmešani rastvor 5-(6-(2-hidroksietoksi)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (za izradu videti Međuproizvod 240, 700 mg, 1.76 mmol) u dihlormetanu (25 mL). Po završenom dodavanju, reaktivna smeša se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Doda se 10% vodeni rastvor natrijum tiosulata (25 mL) i smeša meša 15 minuta. Organska faza se izdvoji. Vodena faza se ekstrahuje sa dihlormetanom (2x20 mL).

Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim rastvorom NaHCO3(20 mL). Organska faza se suši i upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (696 mg, 1.761 mmol, 100 % prinos), kao svetlo braon ulje. LCMS (Sistem B): tRET= 0.57 min; M+18<+>414.

Međuproizvod 240: 5-(6-(2-hidroksietoksi)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0367] Smeša 5-(6-hidroksi-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin- 2(1H)-ona (za izradu videti Međuproizvod 241, 2.0 g, 5.66 mmol), 2-bromoetanola (778 mg, 442 µL, 6.22 mmol) i kalijum karbonata (2.346 g, 16.98 mmol) u bezvodnom DMF (15 mL) se meša 24 sata na 110°C. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu, a nakon toga podeli između etil acetata (50 mL) i vode (50 mL). Organska faza se izdvoji i vodena faza ekstrahuje sa etil acetatom (3x25 mL). Kombinovani organski slojevi se suše i upare. Ostatak se prečisti hromatografijom [5-25% etanol/etil acetat] da se dobije naslovljeno jedinjenje (720 mg, 1.811 mmol, 32.0 % prinos), kao bezbojna čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.63 min; MH<+>398.

Međuproizvod 241: 5-(6-hidroksi-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

14

[0368] Natrijum ditionit (7.04 g, 40.4 mmol) se u porcijama doda u izmešanu smeša 4-nitro-3-(((tetrahidro-2H- piran-4-il)metil)amino)fenola (za izradu videti Međuproizvod 242, 3.4 g.

13.48 mmol) i 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehida (za izradu videti Međuproizvod 2, 2.45 g, 16.21 mmol) u etanolu (50 mL) i vodi (25 mL). Po završenom dodavanju, reaktivna smeša se refluksuje 4 sata. Reaktivna smeša se ohladi i etanol se upari. Ostatak se podeli između etil acetata (50 mL) i vode (50 mL). Organska faza se izdvoji i vodena faza ekstrahuje sa etil acetatom (3x25 mL). Kombinovani organski slojevi se suše i upare. Ostatak se prečisti hromatografijom [5-20% etanol/etil acetat] da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.77 g, 10.67 mmol, 79 % prinos), kao bezbojna čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.61 min; MH<+>354.

Međuproizvod 242: 4-nitro-3-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenol

[0369] Smeša 3-fluoro-4-nitrofenola (3.0 g, 19.1 mmol), (tetrahidro-2H-piran-4-il)metanamina (3.30 g, 28.6 mmol) i diizopropiletilamina (3.70 g, 5.0 mL, 28.6 mmol) u dioksanu (50 mL) se refluksuje 3 sata. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu i rastvarač se upari. Ostatak se prečisti hromatografijom [50-75% etil acetat/cikloheksan] da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.42 g, 13.56 mmol, 71.0 % prinos), kao narandžasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.86 min; MH<+>253.

Međuproizvod 243: 5-(1-(2-hidroksietil)-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0370] 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za izradu videti Međuproizvod 2, 1.726 g, 11.42 mmol), 2-((4-(hidroksimetil)-2-nitrofenil)amino)etanol (za izradu videti Međuproizvod 244, 2.203g, 10.38 mmol) i natrijum ditionit (5.42 g, 31.1 mmol) se rastvore u etanolu (30 mL) i vodi (15 mL) i mešaju 48 sati na 90°C. Smeša se nakon toga ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu i doda se smeša 3:1 DCM/izopropanol (100mL) i voda (100mL). Faze se razdvoje i vodena faza dva puta ekstrahuje sa smešom 3:1 DCM/izopropanol (100mL). Organske faze se kombinuju a nakon toga suše koristeći hidrofobni frit i rastvarači se uklone pod vakuumom. Dobijeni žuti ostatak se nakon toga prenese na Biotage SNAP 100g kolonu silika gela, nakon toga eluira sa 0%-25% etanol/etil acetat. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i rastvarači se uklone pod vakuumom. Ovim se dobija naslovljeno jedinjenje (975

14

mg, 3.11 mmol, 30.0 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.57 min; MH<+>314.

Međuproizvod 244: 2-((4-(hidroksimetil)-2-nitrofenil)amino)etanol

[0371] (4-fluoro-3-nitrofenil)metanol (2 g, 11.69 mmol) se rastvori u tetrahidrofuranu (5 mL) i dodaju se 2-aminoetanol (2.120 mL, 35.1 mmol) i N,N-diizopropiletilamin (6.12 mL, 35.1 mmol). Ova smeša se zagreva 1 sat u mikrotalasnom reaktoru na 120°C. LCMS analiza pokazuje prisustvo početnog materijala i uzorak se zagreva 30min u mikrotalasnom reaktoru na 120°C. Smeša se nakon toga podeli između etil acetata (75mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonat (75mL) i faze razdvoje. Vodena faza se nakon toga dva puta ekstrahuje sa etil acetatom (75mL) i organske faze kombinuju i sačuvaju. Vodena faza se nakon toga ekstrahuje sa 1:1 smešom izopropanol/dihlorometan (75mL) a organska faza kombinuje sa prethodnim organskim fazama. Organski slojevi se suše preko hidrofobnog frita i rastvarači se uklone pod vakuumom. Ovim se dobija naslovljeno jedinjenje (2.203g, 10.38 mmol, 89 % prinos) kao narandžasta/crvena čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.57 min; MH<+>213.

Međuproizvod 245: 2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0372] U 5-(5-(hidroksimetil)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin- 2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 246, 1046 mg, 2.96 mmol) i Dess-Martin perjodinan (1255 mg, 2.96 mmol) se doda dihlorometan (20 mL) i smeša meša 20 sati. LCMS analiza braon smeše pokazuje prisustvo početnog materijala pa se doda Dess-Martin perjodinan (126 mg, 0.296mmol) i smeša meša 3 sata. U smešu se dodaju zasićeni rastvor natrijum bikarbonata (100mL) i dihlorometan (80mL) i faze razdvoje. Organske faze se nakon toga dva puta ekstrahuju sa dihlormetanom (100mL) i organske faze kombinuju. Organski slojevi se nakon toga isperu sa slanim rastvorom (100mL) a nakon toga suše koristeći hidrofobni frit. Rastvarači se uklone pod vakuumom da se dobije sirovo naslovljeno jedinjenje (1.2 g, 3.41 mmol, 115 % prinos) kao beličasta čvrsta supstanca sa nekim dokazima preostalog Dess-Martin perjodinan ostatka. Nije bilo pokušaja prečišćavanja jer je produkt

14

međuproizvod. Jedinjenje izgleda kao bledo braon čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.76 min; MH<+>352.

Međuproizvod 246: 5-(5-(hidroksimetil)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on

[0373] (3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)amino)fenil)metanol (za izradu videti Međuproizvod 227, 2.7 g, 10.14 mmol) i 5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za izradu videti Međuproizvod 1, 1.808 g, 13.18 mmol) se rastvore u etanolu (35 mL) i vodi (35.0 mL) i zagrevaju na 90°C. Nakon toga se doda natrijum ditionit (5.30 g, 30.4 mmol) i smeša meša 20 sati. Smeša se ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu a nakon toga podeli između smeše 3:1 dihlorometan:izopropanol (160mL) i natrijum bikarbonata (160mL) i faze razdvoje. Organska faza se nakon toga dva puta ekstrahuje sa smešom 3:1 dihlorometan:izopropanol (160mL). Organske faze se nakon toga kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i rastvarači se uklone pod vakuumom. Ovim se dobija žuti ostatak koje očvrsne stajanjem pošto se ostavi da stoji na vazduhu. Učinjen je pokušaj da se uzorak rastvori u smeši 25% etanol/etil acetat, međutim, čvrsta supstanca je bila potpuno nerastvorna. Smeša se stoga filtrira pod gravitacijom i ostatak ispere sa smešom 25% etanol/etil acetat. Čvrsta supstanca se suši na vazduhu a nakon toga dalje suši u vakuumskoj pećnici 1 sat na 40°C da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.05 g, 2.97 mmol, 29.3 % prinos) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.52 min; MH<+>354.

Međuproizvod 247: (S)-2-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metoksipropan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)oksi)acetaldehid

[0374] Dess-Martin perjodinan (320 mg, 0.75 mmol) se u porcijama doda u izmešani rastvor (S)-5-(5-(2-hidroksietoksi)-1-(1-metoksipropan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (za izradu videti Međuproizvod 248, 140 mg, 0.38 mmol) u dihlormetanu (10 mL). Reaktivna smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Doda se 10% rastvor natrijum tiosulata (20 mL) i smeša meša 15 minuta. Organska faza se izdvoji. Vodena faza se ekstrahuje sa dihlormetanom (2x10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim rastvorom NaHCO3(10 mL), suše i upare da se dobije naslovljeno jedinjenje (139 mg, 0.377 mmol, 100 % prinos), kao bezbojna guma. Pretpostavljeni

14

kvantitativni prinos se koristi u narednim fazama bez naknadnog prečišćavanja. LCMS (Sistem B): tRET= 0.66 min; M+18<+>388.

Međuproizvod 248: (S)-5-(5-(2-hidroksietoksi)-1-(1-metoksipropan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin- 2(1H)-on

[0375] Smeša (S)-5-(5-hidroksi-1-(1-metoksipropan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (za izradu videti Međuproizvod 249, 1.25 g, 3.82 mmol), 2-bromoetanola (525 mg, 298 ·L, 4.2 mmol) i kalijum karbonata (1.58 g, 11.45 mmol) u DMF (50 mL) se meša 48 sati na 130°C. Reaktivna smeša se ohladi i rastvarač se upari. Ostatak se suspenduje u etil acetatu (50 mL) i filtrira kroz celite. Rastvarač se upari iz filtrata. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni silika gela [10-25% etanol/etil acetat] da se dobije naslovljeno jedinjenje (140 mg, 0.377 mmol, 9.87 % prinos), kao žuta guma. LCMS (Sistem B): tRET= 0.75 min; MH<+>372.

Međuproizvod 249: (S)-5-(5-hidroksi-1-(1-metoksipropan-2-il)-1H-benzor[d]imidazol-2il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0376] Rastvor (S)-4-((1-metoksipropan-2-il)amino)-3-nitrofenola (za izradu videti Međuproizvod 250, 1.3 g, 5.75 mmol) i 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehida (za izradu videti Međuproizvod 2, N-Me piridon aldehid, 1.04 g, 6.90 mmol) u etanolu (30 mL) i vodi (15 mL) se tretira sa natrijum ditionitom (3.00 g, 17.24 mmol) koji se dodaje u porcijama u toku 5 minuta. Po završenom dodavanju, reaktivna smeša se refluksuje 4 sata. Reaktivna smeša se ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu. Etanol se upari. Ostatak se podeli između etil acetata (50 mL) i vode (25 mL). Organska faza se izdvoji. Vodena faza se ekstrahuje sa etil acetatom (2x25 mL). Kombinovani organski slojevi se suše i upare. Ostatak se prečisti hromatografijom [5-20% etanol/etil acetat] da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.27 g, 3.88 mmol, 67.5 % prinos), kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.46 min; MH<+>328.

Međuproizvod 250: (S)-4-((1-metoksipropan-2-il)amino)3-nitrofenol

14

[0377] Smeša 4-fluoro-3-nitrofenola (1.0 g, 6.37 mmol), (S)-1-metoksipropan-2-amina (1.13 g, 1.35 mL, 12.73 mmol) i diizopropiletilamina (1.65 g, 2.22 mL, 12.73 mmol) u dioksanu (10 mL) se refluksuje 2 sata. Rastvarač se upari, a ostatak se rastvori u N-metil-2-pirolidonu (10 mL). Smeša se zagreva 4 sata mikrotalasima na 180°C. Ohlađena reaktivna smeša se podeli između etil acetata (50 mL) i vode (25 mL). Organska faza se izdvoji, ispere sa vodom (2x25 mL), suši i upari. Ostatak se prečisti hromatografijom [10-40% etil acetat/cikloheksan] da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.31 g, 5.79 mmol, 91 % prinos), kao narandžasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.89 min; MH<+>227.

Međuproizvod 251: 2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid (Enantiomer 1, pojedinačni enantiomer, nepoznate konfiguracije)

[0378] Dess-Martin perjodinan (625 mg, 1.47 mmol) se u porcijama doda u izmešani rastvor 5-(5-(hidroksimetil)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(H)-ona (Enantiomer 1, za izradu videti Međuproizvod 252, 250 mg, 0.74 mmol) u dihlormetanu (10 mL). Reaktivna smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Doda se 10% rastvor natrijum tiosulata (20 mL) i smeša meša 15 minuta. Organska faza se izdvoji. Vodena faza se ekstrahuje sa dihlormetanom (2x10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim rastvorom NaHCO3(10 mL), suše i upare da se dobije naslovljeno jedinjenje (249 mg, 0.737 mmol, 100 % prinos), kao bezbojna guma. Kvantitativni pretpostavljeni prinos. LCMS (Sistem B): tRET= 0.67 min; MH<+>338.

Međuproizvod 252: 5-(5-(hidroksimetil)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin- 2(1H)-on (Enantiomer 1) i Međuproizvod 253: 5-(5-(hidroksimetil)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-on (Enantiomer 2)

Asimetrično razdvajanje Međuproizvoda 254:

[0379] Analitički postupak: približno 0.5mg se rastvori u 50% EtOH/heptan (1mL) 20ul injektovano na kolonu ( 40% EtOH/heptan, f=1.0mL/min, talasna dužina 215nm,4. Ref 550,100, Kolona 4.6mmid x 25cm Chiralpak IA) Postupak izrade: približno 2.25g rastvoreno

1

u 12mL EtOH zagrevanje. Injektovanje: 2mL rastvora se injektuje na kolonu (40% EtOH/heptan, f=30mL/min, talasna dužina 215nm,4. Ref 550,100, Kolona 30mm x 25cm Chiralpak IA) Međuproizvod 252 (Enantiomer 1) Rt = 11.5 min. >99% ee sa UV.

Međuproizvod 253 (Enantiomer 2) Rt = 16.5 min. >99% ee sa UV.

Međuproizvod 254: 5-(5-(hidroksimetil)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin- 2(1H)-on

[0380] Natrijum ditionit (7.66 g, 44.0 mmol) se u 3pojedinačne porcije doda u suspenziju (3-nitro-4-(((tetrahidrofuran-3-il)metil)amino)fenil)metanola (za izradu videti Međuproizvod 219, 3.7 g, 14.67 mmol) i 5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehida (za izradu videti Međuproizvod 1, 2.51 g, 15.56 mmol) u etanolu (60 mL) i vodi (30 mL). Reaktivna smeša se meša na 80 °C u toku noći. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu i etanol se upari. Smeša se podeli između DCM:iPrOH 3:1 (150 mL) i NaHCO3(100 mL). Izdvojena vodena faza se ekstrahuje sa DCM:iPrOH 3:1 (3 x 150 mL). Kombinovane organske faze se propuste kroz hidrofobni frit i upare da se dobije bledo žuto ulje. Uzorak se prenese u 20 % MeOH/DCM i prečisti hromatografijom (Biotage SP4) na SNAP 100g kolonu silika gela koristeći 10-20% MeOH / DCM gradijent. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i osuše da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.37 g, 6.98 mmol, 48%) kao bledo žuto ulje. LCMS (Sistem C): tRET= 0.42 min; MH<+>340.

Međuproizvod 255: 2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid (Enantiomer 2)

[0381] Dess-Martin perjodinan (625 mg, 1.47 mmol) se u porcijama doda u izmešani rastvor 5-(5-(hidroksimetil)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-ona (Enantiomer 2, za izradu videti Međuproizvod 253, 250 mg, 0.74 mmol) u dihlormetanu (10 mL). Reaktivna smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Doda se 10% rastvor natrijum tiosulata (20 mL) i smeša meša 15 minuta. Organska faza se izdvoji. Vodena faza se ekstrahuje sa dihlormetanom (2x10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim rastvorom NaHCO3(10 mL), suše i upare da se dobije naslovljeno jedinjenje (249 mg, 0.737 mmol, 100 % prinos) kao bezbojna guma. Kvantitativni

1 1

pretpostavljeni prinos. Koristi se bez naknadnog prečišćavanja u narednim fazama. LCMS (Sistem B): tRET= 0.67 min; MH<+>338.

Međuproizvod 256: 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(2-metoksipropil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0382] 5-(5-(hidroksimetil)-1-(2-metoksipropil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 257, 2.153 g, 6.31 mmol) se rastvori u dihlormetanu (15 mL) a zatim se doda Dess-Martin perjodinan (2.67 g, 6.31 mmol). Smeša se meša 1 sat u atmosferi azota. U smešu se dodaju natrijum bikarbonat (200mL) i dihlorometan (200mL). Ova smeša se meša 1.5 sat a nakon toga se pokuša razdvajanje faza. Zadrže se organske supstance iz razdvajanja. Doda se 2M rastvor HCl (100mL). Organska faza se izdvoji i suši koristeći hidrofobni frit a rastvarači se uklone pod vakuumom. Ovim se dobija braon ostatak, sirovo naslovljeno jedinjenje. LC-MS čistoća je ~45%. LCMS (Sistem A): tRET= 0.73 min; MH<+>340.

Međuproizvod 257: 5-(5-(hidroksimetil)-1-(2-metoksipropil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0383] (4-((2-metoksipropil)amino)-3-nitrofenil)metanol (za izradu videti Međuproizvod 258, 2.8152 g, 11.72 mmol) i 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za izradu videti Međuproizvod 2, 1.948 g, 12.89 mmol) se rastvore u etanolu (50 mL) i vodi (25 mL) i zagrevaju 1 sat na 90°C u atmosferi azota. Nakon toga se doda natrijum ditionit (8.16 g, 46.9 mmol) i smeša meša 1.5 sat u atmosferi azota na 90°C. Smeša se nakon toga podeli između zasićenog natrijum bikarbonata (100mL) i smeše 3:1 dihlorometan:izopropanol (100mL) i faze razdvoje. Vodena faza se nakon toga dva puta ekstrahuje sa smešom 3:1 dihlorometan:izopropanol (100mL), organske faze se kombinuju a nakon toga suše preko hidrofobnog frita. Rastvarači se nakon toga uklone pod vakuumom ostavljajući žuti ostatak. Ostatak se rastvori u dihlorometanu, podeli u dve porcije i prenese na dve Biotage SNAP 100g Silica kolone. Svaka kolona se eluira propuštanjem gradijenta 0%-25% etanol/etil acetat. Odgovarajuće frakcije se nakon toga kombinuju i rastvarači se uklone pod vakuumom. Ovim se dobija naslovljeno jedinjenje (2.1253 g, 6.23 mmol, 53.1 % prinos) kao braon čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.48 min; MH<+>342.

1 2

Međuproizvod 258: (4-((2-metoksipropil)amino)-3-nitrofenil)metanol

[0384] (4-fluoro-3-nitrofenil)metanol (2.72 g, 15.89 mmol), 2-metoksipropan-1-amin, hidrohlorid (2.99 g, 23.84 mmol) i diizopropiletilamin (13.88 mL, 79 mmol) se dodaju u tetrahidrofuran (10 mL) i podele u dve jednake porcije. Svaka porcija se stavi u mikrotalasnu posudu zapremine 20mL i zagreva 1 sat na 120°C u mikrotalasnom reaktoru. Početni materijal je još uvek prisutan pa se uzorak zagreva u mikrotalasnom reaktoru 30 minuta na 120°C. Smeše se kombinuju i podele između etil acetata (150mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (150mL). Vodena faza se nakon toga dva puta ekstrahuje sa etil acetatom (150mL), a organske faze kombinuju i suše koristeći hidrofobni frit. Rastvarači se nakon toga uklone pod vakuumom da se dobije crveno ulje. Ulje se rastvori u dihlormetanu i prenese na dve Biotage SNAP 100g Silica kolone. Svaka kolona se eluira sa gradijentom 10%-50% etil acetat/cikloheksan. Odgovarajuće frakcije se kombinuju da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.8152 g, 11.72 mmol, 73.7 % prinos) kao narandžasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.82 min; MH<+>241.

Međuproizvod 259: 5-(5-hidroksi-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0385] 3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenol (za izradu videti Međuproizvod 232, 3.68 g, 14.59 mmol), 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za izradu videti Međuproizvod 1, 2.205 g,14.59 mmol) i natrijum hidrosulfit (7.62 g, 43.8 mmol) se izmešaju u etanolu (64.8 mL) u atmosferi azota. Doda se voda (32.4 mL) i reaktivna smeša meša na 90°C u atmosferi azota u toku noći. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu i koncentruju pod sniženim pritiskom do 1/3 svoje zapremine. Ostatak se prenese u DCM i ispere sa vodom. Organski slojevi se suši preko separatora faze i koncentruju pod sniženim pritiskom. Crvena čvrsta supstanca se prečisti hromatografijom na koloni silika gela, eluira sa 0-25% EtOH u etil acetatu. Frakcije se koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.48g). LCMS (Sistem B): tRET= 0.67 min, MH<+>= 354.

1

Međuproizvod 260: 5-(5-(2-hidroksietoksi)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0386] 5-(5-hidroksi-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 259, 0.75 g, 2.122 mmol), 2-bromoetanol (0.318 g, 2.55 mmol) i K2CO3(0.880 g, 6.37 mmol) u bezvodnom DMF (7.07 mL) se izmešaju na 120°C u atmosferi azota. Nakon 18 h, doda se 2-bromoetanol (0.318 g, 2.55 mmol) i reaktivna smeša meša 7h na 120°C. Smeša se ostavi da se ohladi na sobnu temperaturu. Dodaju se voda i etil acetat i slojevi se razdvoje. Organski slojevi se isperu sa vodom, suše preko hidrofobnog frita i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti fleš hromatografijom na koloni i eluira sa 5-25% etanola u etil acetatu da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (0.18 g). LCMS (Sistem B): tRET= 0.70 min, MH<+>= 398.

Međuproizvod 261: 2-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)oksi)acetaldehid

[0387] 5-(5-(2-hidroksietoksi)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 260, 0.18g, 0.453 mmol) se rastvori u DCM (8 mL) u atmosferi azota. Doda se Dess-martin perjodinan (0.288 g, 0.679 mmol). Reaktivna smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Doda se zasićeni rastvor natrijum tiosulfata (20 mL) i smeša meša 15 min na sobnoj temperaturi. Smeša se razblaži sa DCM i slojevi razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM. Organski slojevi se kombinuju i isperu sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, suše preko separatora faze i koncentruju da se dobije naslovljeno jedinjenje kao žuta čvrsta supstanca. Naredni eksperimenti se izvode na sirovom materijalu. LCMS (Sistem B): tRET= 0.65 min, MH<+>= 396.

Međuproizvod 262: (2S,3R)-izopropil 2-(2-(4-fluoro-3-nitrofenil)acetamido)-3-hidroksibutanoat

[0388] 2-(4-fluoro-3-nitrofenil)sirćetna kiselina (2 g, 10.04 mmol), (2S,3R)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat, so 4-metilbenzensulfonske kiseline (za izradu videti Međuproizvod 31, 4.02 g, 12.05 mmol), piridin (2.437 mL, 30.1 mmol) i anhidrid n-

1 4

propilfosforne kiseline, ciklični trimer (8.88 mL, 15.07 mmol) u etil acetatu (45 mL) se mešaju na sobnoj temperaturi u toku noći. Doda se piridin (2.437 mL, 30.1 mmol) i reaktivna smeša se meša narednih 18h na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se razblaži sa vodom. Slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuju sa etil acetatom. Organski sloj se ispere sa slanim rastvorom i nakon toga sa vodom, suši preko separatora faze i koncentruje. Ostatak se prečisti fleš hromatografijom na koloni i eluira sa 0-10% etanola u etil acetatu. Frakcije se koncentruju da se dobije naslovljeno jedinjenje (31 % prinos). LCMS (Sistem B): tRET= 0.90 min, MH<+>= 343.

[0389] Naredni Međuproizvod je izrađen na sličan način kao Međuproizvod 262:

Međuproizvod 264: (2S,3R)-izopropil 3-hidroksi-2-(2-(3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenil)acetamido)butanoat

[0390] (2S,3R)-izopropil 2-(2-(4-fluoro-3-nitrofenil)acetamido)-3-hidroksibutanoat (za izradu videti Međuproizvod 262, 1.51 g, 4.41 mmol), DIPEA (2.311 mL, 13.23 mmol) i (tetrahidro-2H-piran-4-il)metanamin (0.762 g, 6.62 mmol) u THF (40 mL) se izmešaju u atmosferi azota na 60°C u toku noći. Dodaju se DIPEA (2.311 mL, 13.23 mmol) i (tetrahidro-2H-piran-4-il)metanamin (0.2mL) i reaktivna smeša se zagreva dva sata na 60°C. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se prenese u DCM i ispere sa vodom. Organski slojevi se suše preko separatora faze i koncentruju da se dobije narandžasto ulje. Ulje se prečisti fleš hromatografijom na koloni uz eluiranje sa 25-100% etil acetata u cikloheksanu. Frakcije se koncentruju da se dobije naslovljeno jedinjenje (58 % prinos).

LCMS (Sistem B): tRET= 0.95 min, MH<+>= 438.

[0391] Naredni Međuproizvod je izrađen na sličan način sa Međuproizvodom 264:

1

Međuproizvod 266: 1,3-dimetil-5-(5-(oksiran-2-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)piridin-2(1H)-on

[0392] 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid (za izradu videti Međuproizvod 116, 0.100 g, 0.274 mmol), trimetilsulfonijum jodid (0.057 g, 0.279 mmol) i kalijum hidroksid (0.092 g, 1.642 mmol) se izmešaju u acetonitrilu (2.72 mL) i vodi (0.014 mL) u atmosferi azota na 65 °C u toku 4 sata. Reakcija se ohladi na sobnu temperaturu, razblaži sa etil acetatom i vodom. Organski slojevi se isperu sa natrijum bikarbonatom. Organski slojevi se nakon toga suše preko separatora faze i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (49 % prinos). LCMS (Sistem B): tRET= 0.79 min, MH<+>= 389.

Međuproizvod 267: (R)-terc-butil 3-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-6-((((2S,3R)-3-hidroksi-1-izopropoksi-1-oksobutan-2-il)amino)metil)-1H-benzor[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat

[0393] Natrijum triacetoksiborhidrid (68 mg, 0.33 mmol) se doda u izmešani rastvor (R)-tercbutil 3-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-6-formil-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilata (za izradu videti Međuproizvod 126, 100 mg, 0.22 mmol) i (2S,3R)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat 4-metilbenzensulfonata (za izradu videti Međuproizvod 31, 86 mg, 0.26 mmol). Dobijena suspenzija se meša u toku noći. Dodaju se nove količine (2S,3R)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat 4-metilbenzensulfonata (86 mg, 0.26 mmol) i natrijum triacetoksiborhidrida (68 mg, 0.33 mmol) i suspenzija meša 2 h.

Reaktivna smeša se solubilizira sa MeOH i prenese na 5 g SCX kertridž. Kertridž se eluira sa MeOH, nakon toga sa 2M metanolnim amonijakom. Bazne frakcije se upare pod vakuumom da se dobije bezbojna guma i prečiste sa MDAP (Postupak B). Frakcije koje sadrže produkt se upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (29mg) kao bela pena. LCMS (Sistem C): tRET= 0.66 min, MH<+>= 610.

Međuproizvod 268: (R)-terc-butil 3-((6-((((2S,3R)-1-(terc-butoksi)-3-hidroksi-1-oksobutan-2-il)amino)metil)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat

1

[0394] Natrijum triacetoksiborhidrid (46 mg, 0.22 mmol) se doda u izmešani rastvor (R)-tercbutil 3-((2-(1,5- dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-6-formil-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilata (za izradu videti Međuproizvod 126, 50 mg, 0.11 mmol) i (2S,3R)-terc-butil 2-amino-3-hidroksibutanoata.HCl (28 mg, 0.13 mmol). Reaktivna smeša se meša u toku noći. Doda se (2S,3R)-terc-butil 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorid (28 mg, 0.13 mmol), dobijena suspenzija meša 2 h i doda se natrijum triacetoksiborhidrid (46 mg, 0.22 mmol). Dobijena suspenzija se meša 1 h. Suspenzija se solubilizira sa MeOH i prenese na 5 g SCX kertridž. Kertridž se eluira sa MeOH, nakon toga sa 2M metanolnim amonijakom. Bazne frakcije se upare pod vakuumom da se dobije bezbojna guma i prečiste sa MDAP (Postupak B). Frakcije koje sadrže produkt se upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (20mg) kao bela pena.

LCMS (Sistem C): tRET= 0.69 min, MH<+>= 624.

Međuproizvod 269: (S)-terc-butil 3-((2-1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-6((((S)-1-izopropoksi-3-metil-1-oksobutan-2-il)amino)metil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat

[0395] (S)-terc-butil 3-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-6-formil-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat (za izradu videti Međuproizvod 128, 70 mg, 0.151 mmol) se rastvori u DCM (3 mL) i doda se (S)-izopropil 2-amino-3-metilbutanoat 4-metilbenzensulfonat (za izradu videti Međuproizvod 65, N31501-74-A2, 100 mg, 0.301 mmol). Suspenzija se meša u atmosferi azota 1 h. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (63.9 mg, 0.301 mmol) i reaktivna smeša meša 23 h na rt. Doda se (S)-izopropil 2-amino-3-metilbutanoat 4-metilbenzensulfonat (49.9 mg, 0.151 mmol) i meša 30 min pre dodavanja natrijum triacetoksiborhidrida (31.9 mg, 0.151 mmol). Smeša se meša 3.5 h na rt. Reaktivna smeša se razblaži sa DCM (20 mL) i doda se NaHCO3(20 mL). Izdvojena vodena faza se ekstrahuje sa DCM (3 x 20 mL). Kombinovane organske faze se propuste kroz hidrofobni frit i upare da se dobije sirovi produkt (124 mg) kao žuta čvrsta supstanca. Uzorak se rastvori u 2 mL MeOH i prečisti sa MDAP (Postupak B). Rastvarač se osuši da se dobije naslovljeno jedinjenje (65 mg) kao žuto-narandžasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 1.30 min, MH<+>= 608.

1

Međuproizvod 270: (S)-terc-butil 3-((5-((1-(ciklopentiloksi)-4-metil-1-oksopentan-2-il)amino)metil)-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)azetidin-1-karboksilat

[0396] Mikrotalasna posuda se napuni sa (S)-terc-butil 3-(((4-(((1-(ciklopentiloksi)-4-metil-1-oksopentan-2-il)amino)metil)-2-nitrofenil)amino)metil)azetidin-1-karboksilatom (za izradu videti Međuproizvod 271, 355 mg, 0.684 mmol), THF (12 mL), 5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehidom (za izradu videti Međuproizvod 1, 94 mg, 0.684 mmol) i rastvorom natrijum hidrosulfita (417 mg, 2.396 mmol) u vodi (3 mL). Bočica se zatvori i smeša zagreva mikrotalasima 5 sati koristeći početno podešavanje na 100°C. Organski rastvarač se ukloni pod vakuumom i zameni sa etanolom (12 mL). Bočica se zatvori i smeša zagreva mikrotalasima ukupno 5 sati na 100°C. Smeša se razblaži sa EtOAc i vodom, slojevi izmešaju i razdvoje pre nego što se organski slojevi propuste kroz hidrofobni frit i koncentruju pod vakuumom da se dobije žuto ulje. Ulje se prenese u dihlormetan i prečisti sa Biotage SP4 SNAP 25g silika gela sa gradijentom 0-100% etil acetat-cikloheksan preko 15 CV a nakon toga sa 0-20% MeOH-DCM preko 15 CV. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (60 mg, 0.099 mmol, 14.47 % prinos) kao žuto ulje. LCMS (Sistem A): tRET= 0.88 min; MH<+>606.

Međuproizvod 271: (S)-terc-butil 3-(C(4-(((1-(ciklopentiloksi)-4-metil-1-oksopentan-2-il)amino)metil)-2-nitrofenil)amino)metil)azetidin-1-karboksilat

[0397] Boca okruglog dna se napuni sa (S)-ciklopentil 2-((4-fluoro-3-nitrobenzil)amino)-4-metilpentanoatom (za izradu videti Međuproizvod 137, 230 mg, 0.653 mmol), acetonitrilom (10 mL), kalijum karbonatom (180 mg, 1.305 mmol) i terc-butil 3-(aminometil)azetidin-1-karboksilatom (146 mg, 0.783 mmol). Stavi se kondenzator vazduha i smeša zagreva 1 nedelju na 80°C u atmosferi azota. Smeša se razblaži sa vodom i etil acetatom, slojevi izmešaju i razdvoje a zatim se organski slojevi isperu sa slanim rastvorom. Organski slojevi se propuste kroz hidrofobni frit i koncentruju pod vakuumom da se dobije narandžasto ulje. Ulje se prenese u dihlormetan i prečisti sa Biotage SP4 SNAP 25g silika (Si) sa gradijentom 0-40% etil acetat-cikloheksan preko 15 CV. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (355 mg, 0.684 mmol, 105 % prinos) kao narandžasto ulje. LCMS (Sistem A): tRET= 1.07 min; MH<+>519.

1

Međuproizvod 272: (S)-terc-butil 3-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-5-((((S)-1-izopropoksi-3-metil-1-oksobutan-2-il)amino)metil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat

[0398] (S)-terc-butil 3-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-5-formil-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat (za primer izrade videti međuproizvod 130, 500 mg, 1.076 mmol) se doda u rastvor (S)-izopropil 2-amino-3-metilbutanoata, soli fenilmetan sulfonske kiseline (za izradu videti Međuproizvod 65, 713 mg, 2.153 mmol) u dihlormetanu (DCM) (10 mL). Dobijeni rastvor se meša u toku noći i doda se natrijum triacetoksiborhidrid (684 mg, 3.23 mmol). Dobijena suspenzija se meša 1 h. Doda se MeOH (10 mL) i dobijeni rastvor prenese na 10 g SCX kertridž. Kertridž se eluira sa MeOH (50 mL), nakon toga sa 2 M metanolnim amonijakom (50 mL). Bazne frakcije se upare pod vakuumom da se dobije braon guma. Guma se rastvori u DCM i prečisti hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa DCM:2M metanolni amonijak (0 - 5%). Frakcije koje sadrže produkt se upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje. Ukupan prinos iz reakcije je 28%. LCMS (Sistem C): tRET= 0.75 min, MH<+>= 608.

Međuproizvod 273: 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-metil-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0399] 5-(5-(hidroksimetil)-1-metil-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 90, 931 mg, 3.29 mmol) se rastvori u dihlormetanu (DCM) (52 mL). U izmešani rastvor se doda 2-jodoksibenzoeva kiselina (2249 mg, 3.61 mmol).

Smeša se meša 2.5 h u atmosferi azota na sobnoj temperaturi a nakon toga se u izmešani rastvor u porcijama doda 1,1,1-triacetoksi-1,1-dihidro-1,2-benzjodoksol-3(1H)-on (1394 mg, 3.29 mmol). Smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Rastvor se nakon toga podeli između zasićenog natrijum bikarbonata (200 mL) i dihlorometana (100 mL), faze razdvoje i vodena faza dva puta ekstrahuje sa dihlormetanom (100 mL x 2). Organski slojevi se nakon toga kombinuju i suše koristeći hidrofobni frit a rastvarač se ukloni pod vakuumom. U ostatak se doda nekoliko mL dihlorometana, nakon toga nekoliko mL 2M rastvora NaOH i rastvor se meša 15 min. Smeša se nakon toga podeli između dihlormetana (50mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (50 mL) i faze razdvoje vodeći računa da se ne dozvoli da bilo koja precipitirana čvrsta supstanca pređe u organsku fazu. Vodena faza se nakon toga ispere dva

1

puta sa dihlormetanom (2 x 50mL) i organske faze se kombinuju. Rastvor se nakon toga suši preko hidrofobnog frita i rastvarač se ukloni pod vakuumom da se dobije 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-metil-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid (438 mg, 1.557 mmol, 47.4 % prinos) kao bledo žuta čvrsta supstanca. Precipitirana čvrsta supstanca se izdvoji filtriranjem i suši pod sukcijom da se dobije dodatna serija 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidro- piridin-3-il)-1-metil-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehida (200 mg, 0.710 mmol, 21.6% prinos) kao svetlo braon čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.66 min, MH<+>= 282.

Međuproizvod 274:1-etil-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0400] 5-(5-(hidroksimetil)-1-izopropil-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 91, 722 mg, 2.319 mmol) se rastvori u dihlormetanu (DCM) (5 mL) i nakon toga tretira sa 1,1,1-triacetoksi-1,1-dihidro-1,2-benzjodoksol-3(1H)-onom (983 mg, 2.319 mmol). Rastvor se meša 1 h u atmosferi azota, nakon toga se doda 2M rastvor NaOH (15 mL) i rastvor meša dok smeša ne postane bistra (15 min). Smeša se nakon toga podeli između dihlormetana (150 mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (150mL) i faze razdvoje. Vodeni sloj se nakon toga dva puta ekstrahuje sa zasićenim natrijum bikarbonatom (150 mL x 2) i organske faze se kombinuju. Organski sloj se nakon toga suši koristeći hidrofobni frit i rastvarač se ukloni pod vakuumom. Ostatak se nakon toga prečisti koristeći automatsku hromatografiju po sledećem postupku: 100% etil acetat za 2 zapremine kolone, 0%-25% etanol u etil acetatu preko 15 zapremina kolone nakon toga 25% etanol u etil acetatu preko 2 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se nakon toga kombinuju i rastvarač se ukloni pod vakuumom da se dobije 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-izopropil-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid (718.7 mg, 2.323 mmol, 100 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.70 min, MH<+>= 310.

Međuproizvod 275 : 2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((4-metilmorfolin-2-il)metil)-1H-benzor[d]imidazol-5-karbaldehid

[0401] Rastvor oksalil hlorida (0.124 ml, 1.411 mmol) u dihlormetanu (2 mL) se ohladi na -78°C u kupatilu aceton/suvi led. U ovo se doda rastvor DMSO (0.213 ml, 3.01 mmol) u

1

dihlormetanu (3 mL) i smeša se meša 10 minuta na -78°C. Doda se suspenzija 5-(5-(hidroksimetil)-1-((4-metilmorfolin-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-3-metilpiridin-2(1H)-ona (400 mg, 1.086 mmol, za izradu videti međuproizvod 150) u dihlormetanu (5 mL) i reaktivna smeša se meša 2 sata na -78°C. Nakon toga se doda trietilamin (1.059 ml, 7.60 mmol) i reaktivna smeša se zagreje na sobnu temperaturu. Smeša se meša u atmosferi azota na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (40 mL) i DCM (40 mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (3x40 mL) i nakon toga sa 25% metanola u DCM (2x40 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom da se dobije bezbojna guma. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa Biotage SP4 SNAP 25 g silika gela sa gradijentom 0-20% dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu preko 20 zapremina kolone, nakon toga sa zadržavanjem sa 20 % dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu za 5 zapremina kolone. Čiste frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije bezbojna guma. Manje čiste frakcije koje sadrže produkt se posebno kombinuju i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom. Ovaj nečist sirov uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa Biotage SP4 SNAP 25 g silika gela sa gradijentom 4-16% dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu preko 20 zapremina kolone, nakon toga sa zadržavanjem na 16% dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu za 5 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom. Ove frakcije se kombinuje sa čistim uzorkom iz prethodne faze da se dobije sirovi produkt 2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((4-metilmorfolin-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid [0402] (137.8 mg, 0.376 mmol, 34.6 % prinos) kao bledo žuta čvrsta supstanca. Uzorak se prenese u smešu dihlorometan/metanol i prečisti sa Biotage SP4 SNAP 25 g silika sa gradijentom 10-25% metanol-hloroform preko 20 zapremina kolone, nakon toga sa zadržavanjem na 25% metanol-hloroform za 5 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (53.6 mg, 0.146 mmol, 13.47 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.65 min, MH<+>= 367.

Međuproizvod 276: (S)-ciklopentil 2-amino-3-hidroksipropanoat, so 4-metilbenzensulfonske kiseline

[0403] U suspenziju (S)-2-amino-3-hidroksipropanoatne kiseline (15 g, 143 mmol) u

1 1

cikloheksanu (150 mL), se na sobnoj temperaturi dodaju ciklopentanol (98 g, 1142 mmol) i 4-metilbenzensulfonska kiselina (32.0 g, 186 mmol). Reaktivna smeša se meša 24 h na 100 °C. Reaktivna smeša se upari pod vakuumom da se dobije sirovi produkt kao braon ulje. Braon ulje se ostavi da se ohladi i dobijeni kristali filtriraju, isperu sa EtOAc (50 mL) da se dobije (S)-ciklopentil 2-amino-3-hidroksipropanoat, so 4-metilbenzensulfonske kiseline (38 g, 110 mmol, 77 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR δ (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 8.28 (3H, br. s.), 7.47 (2H, d, J=8.1 Hz), 7.11 (2H, d, J=7.8 Hz), 5.55 (1H, br. s.), 5.19 (1H, t, J=5.7 Hz), 3.81 (1H, dd, J=11.4, 3.8 Hz), 3.73 (1H, dd, J=11.4, 2.8 Hz), 2.29 (3H, s), 1.93 -1.78 (2H, m), 1.67 (4H, d, J=5.6 Hz), 1.63 - 1.50 (2H, m).

Međuproizvod 277: (S)-ciklopentil 2-aminopropanoat, so 4-metilbenzensulfonske kiseline

[0404] Boca okruglog dna se napuni sa (S)-2-aminopropanoatnom kiselinom (20 g, 224 mmol), cikloheksanom (101 mL), p-toluensulfonskom kiselinom monohidrat (55.5 g, 292 mmol) i ciklopentanolom (166 ml, 1836 mmol). Stavi se Dean-Stark kondenzator i smeša se meša 48 h na 110 °C. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu i nakon toga se rastvarač upari pod vakuumom da se dobije sirovi produkt kao braon tečnost. Sirovi produkt se rastvori u minimalnoj zapremini toplog EtOAc (20mL). Rastvor se ostavi da se ohladi i dobijeni kristali filtriraju, isperu sa malom količinom EtOAc (10mLx3) i suše u uljanom vakuumu da se dobije (S)-ciklopentil 2-aminopropanoat, so 4-metilbenzensulfonske kiseline (58 g, 174 mmol, 78 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR δ (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 8.23 (3H, br. s.), 7.47 (2H, d, J=8.1 Hz), 7.12 (2H, d, J=7.8 Hz), 5.18 (1H, t, J=5.9 Hz), 4.05 (1H, q, J=6.7 Hz), 2.29 (3H, s), 1.92 - 1.79 (2H, m), 1.72 - 1.53 (6H, m), 1.36 (3H, d, J=7.3 Hz).

Međuproizvod 278: 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(2-hidroksietil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0405] U 5-(1-(2-hidroksietil)-5-(hidroksimetil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvod 243, 975 mg, 3.11 mmol) i Dess-Martin perjodinan (660 mg, 1.556 mmol) se doda dihlorometan (40 mL). Smeša se meša 1.5 sat i nakon toga se doda Dess-Martin perjodinan (660 mg, 1.556 mmol). Smeša se meša dodatnih 18 sati. Doda se Dess-Martin perjodinan (66 mg, 0.156 mmol) i meša 2 sata. Doda

1 2

se Dess-Martin perjodinan (66 mg, 0.156 mmol) i meša 2 sata. Nakon toga se doda Dess-Martin perjodinan (75 mg, 0.38 mmol) i smeša meša 2 sata. U smešu se doda 2M vodeni rastvor natrijum hidroksida (20 mL) i smeša meša 10 minuta sve dok smeša ne postane bistra. Nakon toga se dodaju voda (20 mL) i dihlorometan (60 mL) i faze se razdvoje. Vodena faza se nakon toga ekstrahuje sa dihlormetanom (100 mL x 2) i organske faze kombinuju i suše koristeći hidrofobni frit. Rastvarači se nakon toga uklone pod vakuumom. Ovim se dobija beličasta čvrsta supstanca 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(2-hidroksietil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid (675 mg, 2.168 mmol, 69.7 % prinos). LCMS (Sistem A): tRET= 0.53 min; MH<+>312.

Međuproizvod 279: (S)-(R)-1-metoksipropan-2-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoat

[0406] Smeša (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoatne kiseline (1.0 g, 4.60 mmol), diizopropiletil-amina (1.19 g, 1.608 mL, 9.21 mmol), 1-hidroksibenzotriazol hidrata (HOBt) (846 mg, 5.52 mmol), EDC (1.06 g, 5.53 mmol) i (R)-1-metoksipropan-2-ola (1.037 g, 1.127 mL, 11.5 mmol) u DMF (5 mL) se meša na sobnoj temperaturi u toku noći.

Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (15 mL) i zasićenog rastvora NaHCO3(15 mL). Organska faza se ispere sa 1M rastvorom hlorovodonične kiseline (15 mL), vodom (15 mL) i slanim rastvorom (15 mL). Organska faza se suši i upari pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje (1.2 g, 90% prinos).<1>H NMR (CDCl3): δ 0.89 (m, 3 H), 0.96 (m, 3 H), 1.24 (d, J = 6.6 Hz, 3 H), 1.45 (s, 9H), 2.16 (m, 1H), 3.36 (s, 3H), 3.44 (m, 2H), 4.23 (m, 1H), 5.05 (m, 1H), 5.13 (m, 1H).

Međuproizvod 280: (S)-(R)-1-metoksipropan-2-il 2-amino-3-metilbutanoat, hidrohlorid

[0407] (S)-(R)-1-metoksipropan-2-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoat (za izradu videti Međuproizvod 279, 1.15 g, 3.97 mmol) se rastvori u etil acetatu (2 mL). Rastvor se tretira sa 4M rastvorom vodonik hlorida u dioksanu (2 mL). Reaktivna smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Rastvarač se upari da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojna guma (425 mg, 47.4 % prinos).<1>H NMR (CDCl3): δ 1.15 (m, 6 H), 1.29 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 2.47 (m, 1 H), 3.35 (s, 3 H), 3.47 (m, 2 H), 3.95(m, 1 H), 5.18 (m, 1 H), 8.79 (m, 3H).

1

Međuproizvod 281: (S)-ciklopentil 2-aminopentanoat hidrohlorid

[0408] (S)-2-aminopentanoatna kiselina (2.5 g, 21.34 mmol) se doda u ciklopentanol (30 mL) i suspenzija se ohladi na -5 °C koristeći kupatilo suvi led/aceton. Nakon deset minuta mešanja na ovoj temperaturi, u kapima se doda tionil hlorid (3.58 mL, 49.1 mmol). Suspenzija se ostavi uz mešanje da se zagreje na sobnu temperaturu. Suspenzija se nakon toga meša 18 sati na ovoj temperaturi. Reaktivna smeša se zagreje na 60 °C i meša 24 sata na ovoj temperaturi. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom. Produkt se rekristališe iz etil acetata, filtrira, ispere i suši da se dobije naslovljeni produkt (2.62 g, 86 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (d6-DMSO): δ 0.89 (t, J = 7.3 Hz, 3 H), 1.31 (m, 1 H), 1.42 (m, 1 H), 1.67 (m, 8 H), 1.86 (m, 2 H), 3.91(m, 1 H), 5.19 (m, 1 H), 8.49 (m, 3H).

Međuproizvod 282: (S)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoat

[0409] Smeša (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoatne kiseline (2.5 g, 11.51 mmol), diizopropiletilamina (2.97 g, 4.02 mL, 23.01 mmol), 1-hidroksibenzotriazol hidrata (2.12g, 13.84 mmol), EDC (2.65 g, 13.81 mmol) i (S)-tetrahidrofuran-3-ola (5.07 g, 3.91 mL, 57.5 mmol) u DMF (20 mL) se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (50 mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (50 mL).

Organska faza se ispere sa 1 M rastvorom hlorovodonične kiseline (50 mL), vodom (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL). Organska faza se suši i upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.73 g, 9.50 mmol, 83 % prinos), kao bezbojno ulje.<1>H NMR (CDCl3): δ 0.90 (d, J = 7.1 Hz, 3 H) 0.97 (d, J = 6.9 Hz, 3 H) 1.45 (s, 9 H) 2.01 - 2.09 (m, 1 H) 2.10 - 2.24 (m, 2 H) 3.80 (d, J = 10.8 Hz, 1 H) 3.83 - 3.97 (m, 3 H) 5.04 (d, J = 8.8 Hz, 1 H) 5.27 - 5.43 (m, 1 H).

Međuproizvod 283: (S)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-amino-3-metilbutanoat hidrohlorid

[0410] Rastvor (S)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanoata (za primer izrade videti Međuproizvod 282, 2.73 g, 9.50 mmol) u etil acetatu (5 mL) se tretira sa 4 M rastvorom vodonik hlorida u dioksanu (5 mL). Reaktivna smeša se meša 24 sata na sobnoj temperaturi. Rastvarač se upari. Pokušajem trituracije sa dietil etrom se ne dobija

1 4

čvrsta supstanca. Rastvarač se upari da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.98 g, 8.85 mmol, 93 % prinos) kao bezbojno ulje. Uzorak očvršćava stajanjem nekoliko dana na sobnoj temperaturi.<1>H NMR (d6-DMSO): δ 0.95 (d, J = 6.9 Hz, 2 H) 1.00 (d, J = 6.9 Hz, 3 H) 1.94 -2.02 (m, 1 H) 2.13 - 2.25 (m, 2 H) 3.71 - 3.84 (m, 5 H) 5.33 - 5.37 (m, 1 H) 8.70 (br.s., 3 H).

Međuproizvod 284: (S)-3-(1-(terc-butoksikarbonil)-1H-imidazol-4-il)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)propanoatna kiselina

[0411] Čvrsta (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-(1H-imidazol-4-il)propanoatna kiselina (48.27 g, 189 mmol) se rastvori u rastvoru natrijum bikarbonata (15.89 g, 189 mmol), vodi (200 mL) i 1,4-dioksanu (500 mL) i doda se di-terc-butil dikarbonat (43.9 mL, 189 mmol) na 0 °C. Reaktivna smeša se meša na 25 °C u toku noći. Reaktivna smeša se upari i ostatak podeli između vode (500 mL) i etra (500 mL). Nakon toga se u vodeni sloj doda zasićeni rastvor KHSO4da se podesi pH=4, ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 500 mL) i zasićenim slanim rastvorom (500 mL), suši preko natrijum sulfata i upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (40 g, 113 mmol, 60 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (CDCl3): δ 1.38, 1.60 (2 x s, ukupno 18 H) 3.16, 3.25 (2 x m, ukupno 2 H) 4.48 (m, 1 H) 5.54 (m, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 8.17 (s, 1 H).

Međuproizvod 285: (S)-terc-butil 4-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-(ciklopentiloksi)-3-oksopropil)-1H-imidazol-1-karboksilat

[0412] U rastvor (S)-3-(1-(terc-butoksikarbonil)-1H-imidazol-4-il)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)propanoatne kiseline (za primer izrade videti Međuproizvod 284, 40 g, 1126 mmol) i ciklopentanola (97 g, 1126 mmol) u DCM (200 mL) se dodaju DCC (232 g, 1126 mmol) i DMAP (13.75 g, 113 mmol). Reaktivna smeša se meša na 25°C u toku noći. Reakcija se filtrira kroz levak za razdvajanje faza, ispere sa dihlorometanom (DCM) (200 mL) i filtrat sakupi. Filtrat se ispere sa vodom (200 mL), zasićenim slanim rastvorom (200 mL), suši preko natrijum sulfata i upari pod vakuumom da se dobije sirovi produkt. Sirovi produkt se doda na kolonu silika gela i eluira sa smešom Hex/EtOAc=4:1. Sakupljene frakcije: naslovljeno jedinjenje (36 g, 851 mmol, 75.6 % prinos) kao braon ulje.<1>H NMR (CDCl3): δ 1.45 (s, 9 H) 1.59 - 1.71 (m, 11 H), 1.8 (m, 6 H) 3.05 (d, 2 H) 4.52 (m, 1 H) 5.21 (m, 1 H) 5.70 (d, 1 H) 7.16 (s, 1 H) 8.03 (s, 1 H).

1

Međuproizvod 286: (S)-ciklopentil 2-amino-3-(1H-imidazol-4-il)propanoat dihidrohlorid

[0413] U čvrsti (S)-terc-butil 4-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-(ciklopentiloksi)-3-oksopropil)-1H-imidazol-1-karboksilat (za primer izrade videti Međuproizvod 285, 36 g, 52.7 mmol), se doda 4 M rastvor hlorovodonične kiseline u etil acetatu (400 ml, 1600 mmol). Reaktivna smeša se meša 24 h na 25 °C. Doda se nova količina hlorovodonične kiseline u dioksanu (400 mL) i reaktivna smeša se meša 24 h na 25 °C. Reaktivna smeša se filtrira, dobijena čvrsta supstanca se filtrira kroz levak za razdvajanje faza, ispere sa etil acetatom (25 mL) i sakupi kao bela čvrsta supstanca, naslovljeno jedinjenje (14.3 g) za koje se pretpostavlja da je dvostruka HCl so. Filtrat se upari pod vakuumom da se dobije sirovi produkt. Sirovi produkt se triturira sa etil acetatom (50 mL). Dobijena čvrsta supstanca se filtrira kroz levak za razdvajanje faza, ispere sa etil acetatom (25 mL) i naslovljeno jedinjenje sakupi (7.7 g) kao narandžasta čvrsta supstanca, za koju se pretpostavlja da je bis hidrohloridna so.<1>H NMR (MeOD): δ 1.61 - 1.78 (m, 6 H) 1.95 - 1.95 (m, 2 H) 3.37 (m, 2 H) 4.43 (m, 1 H) 5.30 - 5.33 (m, 1 H) 7.56 (s, 1 H) 9.00 (s, 1 H).

Međuproizvod 287: (2R,3S)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorid

[0414] Acetil hlorid (17.91 mL, 252 mmol) se u kapima doda u propan-2-ol (120 mL, 1557mmol) uz hlađenje u ledenom kupatilu, nakon toga se smeša meša 30 min na sobnoj temperaturi. Nakon toga se u reaktivnu smešu doda (2R,3S)-2-amino-3-hidroksibutanoatna kiselina (10 g, 84 mmol) a nakon toga se reaktivna smeša zagreva 16h na 80°C. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se azeotropira sa toluenom (2 x 50 mL), a zatim triturira sa etrom (50mL) i suši da se dobije naslovljeno jedinjenje (2R,3S)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorid (8g, 48.2% prinos) kao bela polu čvrsta supstanca. LCMS (Sistem G): tRET= 1.37 min; MH<+>162

Međuproizvod 288: (2S,3S)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorid

[0415] Acetil hlorid (4.48 mL, 63.0 mmol) se u kapima doda u iPrOH (30.0 mL, 389 mmol) uz hlađenje u ledenom kupatilu, smeša se nakon toga meša 30 minuta na sobnoj temperaturi a zatim se doda (2S,3S)-2-amino-3-hidroksibutanoatna kiselina (2.5 g, 20.99 mmol). Smeša se

1

nakon toga zagreva na 80 °C da se dobije gusta bela suspenzija, koja se daljim zagrevanjem izbistri do bistrog bezgojnog rastvora. Rastvor se zagreva u toku noći. Reaktivna smeša se ohladi i upari pod vakuumom da se dobije bela čvrsta supstanca, a ostatak se azeotropira sa toluenom (20mL), zatim triturira sa etrom (20mL), da se dobije sirovo naslovljeno jedinjenje (2S,3S)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorid (2.69 g, 65% prinos) kao bela čvrsta supstanca. Sirovi produkt se koristi direktno u narednoj fazi bez naknadnog prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ 5.27-5.46 (m, 1H), 4.38-4.59 (m, 2H), 4.19-4.27 (m, 1H), 1.29-1.60 (m, 13H (9H od željenog jedinjenja, plus preklapajuća nečistoća izopropanola)). Ukupna čistoća je 66% pomoću NMR.

Međuproizvod 289: (2R,3R)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorid

[0416] Acetil hlorid (448 µL, 6.30 mmol) se u kapima doda u iPrOH (2999 µL, 38.9 mmol) uz hlađenje u ledenom kupatilu i smeša se nakon toga meša 30 minuta na sobnoj temperaturi a zatim se doda (2R,3R)-2-amino-3-hidroksibutanoatna kiselina (250 mg, 2.099 mmol). Smeša se nakon toga zagreva na 80 °C da se dobije gusta bela suspenzija, koja se daljim zagrevanjem izbistri do bistrog bezgojnog rastvora. Rastvor se zagreva preko vikenda. Reaktivna smeša se ohladi i upari pod vakuumom da se dobije bela čvrsta supstanca, ostatak se azeotropira sa toluenom (20mL), a zatim triturira sa etrom (20mL), da se dobije naslovljeno jedinjenje (2R,3R)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorid (169.9 mg, 33%) kao bela čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) · 8.35 (br. s., 3H), 5.18 (td, J=6.24, 12.47 Hz, 1H), 4.48-4.65 (m, 1H), 4.31 (m, 1H), 1.38 (d, J=6.60 Hz, 3H), 1.33 (d, J=6.36 Hz, 6H).

Međuproizvod 290: izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorid

[0417] Acetil hlorid (35.8 ml, 504 mmol) se u kapima doda u propan-2-ol (240 ml, 3115 mmol) uz hlađenje u ledenom kupatilu a nakon toga se smeša meša 30 min na sobnoj temperaturi. Nakon toga se u reaktivnu smešu doda 2-amino-3-hidroksibutanoatna kiselina (20 g, 168 mmol) a nakon toga se reaktivna smeša zagreva 16h na 80°C. Reaktivna smeša se koncentruju pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se azeotropira sa toluenom (2 x 100 mL), a zatim triturira sa etrom (100mL) i suši da se dobije naslovljeno jedinjenje izopropil 2-

1

amino-3-hidroksibutanoat, hidrohlorid (24g, 121 mmol, 72.3 % prinos) kao bela polu čvrsta supstanca. LCMS (Sistem G): tRET= 1.39 min; MH<+>162.

Međuproizvod 291: 5-(1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-5-(oksiran-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0418] 1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid (za primer izrade videti Međuproizvod 224, 2.0 g, 5.41 mmol), trimetil sulfonijum jodid (1.127 g, 5.52 mmol) i kalijum hidroksid (1.823 g, 32.5 mmol) u acetonitrilu (20 mL)/voda (0.5 mL) se izmešaju u atmosferi azota na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se nakon toga meša 2 h na 65 °C. Reakcija se nakon toga neutrališe sa vodom (20 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (50mL X 2), kombinovani organski sloj se ispere sa slanim rastvorom, suši (Na2SO4), filtrira i koncentruje da se dobije naslovljeni produkt 5-(1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-5-(oksiran-2-il)-1H-benzo[d]imidazol- 2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (2.0g, prinos 92%). Sirovi produkt se koristi dalje u sledećoj fazi bez naknadnog prečišćavanja. LCMS (Sistem H): tRET= 4.31 min; MH<+>384.

Međuproizvod 292: 1,3-dimetil-5-(5-(oksiran-2-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)piridin-2(1H)-on

[0419] U rastvor 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehida (za izradu videti Međuproizvod 116, 1g, 2.62 mmol), trimetilsulfonijum jodida (0.536 g, 2.62 mmol) u acetonitril (15 mL) i vodi (0.075 mL) koji je izmešan u atmosferi azota na sobnoj temperaturi se doda čist kalijum hidroksid (0.884 g, 15.75 mmol) odjedanput, na rt. Reaktivna smeša se meša 3 h na 65 °C. Reakcija se razblaži sa EtOAc (50mL) i reaktivna smeša se propusti kroz hidrofobni frit i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi ostatak. Sirovi ostatak se razblaži sa zasićenim rstvorom natrijum bikarbonata (50 mL) i EtOAc (100mL). Vodeni sloj se izdvoji i reekstrahuje sa EtOAc (2X200mL). Kombinovane organske faze se isperu sa vodom (50mL) i slanim rastvorom (50mL). Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira i filtrat se koncentruje da se dobije sirovo naslovljeno jedinjenje 1,3-dimetil-5-(5-(oksiran-2-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)piridin-2(1H)-on (900 mg, 62.3 % prinos) kao

1

svetlo žuta čvrsta supstanca. Sirovi produkt se dalje koristi u sledećoj fazi bez naknadnog prečišćavanja. LCMS (Sistem H): tRET= 3.28 min; MH<+>380.

Međuproizvod 77: (3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenil)metanol

[0420] Rastvor (tetrahidro-2H-piran-4-il)metanamina (5.23 mL, 40.9 mmol), (4-fluoro-3-nitrofenil)metanola (3.5 g, 20.45 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (17.86 mL, 102 mmol) u tetrahidrofuranu (THF) (10 mL) se degasira i zagreva u atmosferi azota 5 sati na 60°C. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata (150 mL) i zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (150 mL). Organski sloj se izdvoji i vodena frakcija se ponovo dva puta ekstrahuje sa etil acetatom (2x150 mL). Organske frakcije se kombinuju, propuste kroz hidrofobni frit i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak se rastvori u minimalnoj količini etil acetata i prenese na kolonu silika gela (100 g, SPE). Produkt se eluira sa gradijentom 0-60% etil acetat u cikloheksanu. Frakcije koje sadrže produkt se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (4957 mg, 91% prinos) kao narandžasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.79 min; MH<+>267.

Međuproizvod 96: 5-(5-(hidroksimetil)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on

[0421] U rastvor (3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenil)metanola (za primer izrade videti Međuproizvod 77, 2.05 g, 7.70 mmol,) u etanolu (60 mL) se dodaju 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za primer izrade videti Međuproizvod 2, 1.455 g, 7.70 mmol) i natrijum hidrosulfit (4.76 g, 23.09 mmol) a nakon toga voda. Reaktivna smeša se zagreva 2 dana na 90 °C. Reaktivna smeša se koncentruje do približno polovine zapremine pod sniženim pritiskom i dobijena tečnost podeli između 3:1 hloroform:izopropanol (3 x 150 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (150 mL). Organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti sa Biotage SP4 SNAP 100 g silika gela sa gradijentom 0-25 % cikloheksan-(25% etanol u etil acetatu) preko 10 zapremina kolone, a nakon toga sa zadržavanjem na 25 % cikloheksan-(25% etanol u etil acetatu) za 5 zapremina kolone, a zatim sa gradijentom 0-100% cikloheksan-(25% etanol u etil acetatu) preko 10 zapremina kolone, nakon toga sa 25% etanolom u etil acetatu preko 10 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije

1

se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije traženi produkt 5-(5-(hidroksimetil)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (1.22 g, 3.32 mmol, 43.1 % prinos) kao beličasta pena. LCMS (Sistem B): tRET= 0.63 min: MH<+>368.

Međuproizvod 116: 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0422] 5-(5-(hidroksimetil)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-on (za primer izrade videti Međuproizvod 96, 7g, 19.05 mmol) se rastvori u dihlormetanu (DCM) (200mL) i doda se mangan dioksid (6.62 g, 76 mmol), a smeša se zagreva pod refluksom 2h nakon čega se smeša filtrira i čvrsta supstanca ispere sa DCM. Filtrat se upari pod vakuumom da se dobije 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid (6.6g, 18.06 mmol, 95 % prinos) kao bledo žuta pena. LCMS (Sistem J): tRET= 0.75 min; MH<+>366.

Izrada primera

Primer 1: (S)-ciklopentil 4-metil-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)pentanoat

[0423]

[0424] Boca okruglog dna se napuni sa 5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehidom (za primer izrade videti Međuproizvod 1, 203 mg, 1.482 mmol), natrijum hidrosulfitom (821 mg, 4.72 mmol), vodom (10 mL) i rastvorom (S)-ciklopentil-4-metil-2-((3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)benzil)amino)pentanoata (za primer izrade, videti

1

Međuproizvod 182, 603 mg, 1.347 mmol) u etanolu (20 mL). Stavi se kondenzator i žitka masa refluksuje na 100°C u toku noći. Smeša se razblaži sa vodom i EtOAc, slojevi izmešaju i razdvoje pre nego što se organski sloj propusti kroz hidrofobni frit i koncentruje pod vakuumom da se dobije žuto ulje. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na koloni silika gela sa gradijentom 0-100% etil acetat-cikloheksan preko 15 zapremina kolone a zatim sa 0-10% 2M rastvorom amonijaka u metanolu-dihlorometan preko 15 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (140 mg) kao bezbojno ulje koje očvrsne pod visokim vakuumom. LCMS (Sistem A): tRET= 0.78 min; MH<+>= 535.

[0425] Naredni Primeri su izrađeni na sličan način kao u Primeru 1:

(U tabeli, korišćeni detalji za LCMS sistem, vreme zadržavanja (tRET), MH<+>, prinos reakcije i % prinosa su dati za svaki primer Primer).

1 1

n l

12 n l

Primer 7a i 7b: (S)-ciklopentil 4-metil-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(((R)-4-metilmorfolin-2-il-metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metilamino)pentanoat i (S)-ciklopentil 4-metil-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(((S)-4-metilmorfolin-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)pentanoat

[0426]

[0427] Primer 7 (95mg) se rastvori u etanolu (2mL) i prečisti asimetričnom hromatografijom (stacionarna faza: Chiralpak AD-H 5µm čestice, mobilna faza: heptan / etanol) (N20771-72). Kombinovane frakcije koje sadrže čist izomer 1 se koncentruju pod vakuumom i čvrsti ostatak se prenese u odmerenu bocu koristeći smešu metanola i dihlorometana, koja se ukloni pod vakuumom. Materijal se suši 4 sata u vakuumskoj pećnici na 45°C i 24 sata na temperaturi sredine da se dobije čist izomer 1 (Primer 7a) kao bezbojna čvrsta supstanca (39.8mg).

HPLC-UV: RT 16.73 minuta, ca.99.7% izomerne čistoće u oblasti HPLC @ 280nM. LCMS (Sistem B): tRET= 1.11 min, MH<+>= 550. Kombinovane frakcije koje sadrže čist izomer 2 se koncentruju pod vakuumom i čvrsti ostatak se prenese u odmerenu bocu koristeći smešu metanola i dihlorometana, koja se ukloni pod vakuumom. Materijal se suši u vakuumskoj pećnici 4 sata na 45°C i 24 sata na temperaturi sredine da se dobije čist izomer 2 (Primer 7b) benzimidazol kao bezbojna čvrsta supstanca (41.2mg). HPLC-UV: RT 21.09 minuta, ca. 99.4% izomerne čistoće u oblasti HPLC @ 280nM. LCMS (Sistem B): tRET= 1.12 min, MH<+>= 550.

1

Primer 13: (2S)-ciklopentil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((4-metilmorfolin-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-4-metilpentanoat

[0428]

[0429] 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (za primer izrade videti Međuproizvod 2, 196 mg, 1.297 mmol) i natrijum ditionit (677 mg, 3.89 mmol) se dodaju u rastvor (2S)-ciklopentil 4-metil- 2-((4-(((4-metilmorfolin-2-il)metil)amino)-3-nitrobenzil)amino)pentanoata (za izradu videti Međuproizvod 143, 600 mg, 1.297 mmol) u etanolu (10 mL) i vodi (5 mL) i reaktivna smeša zagreva 5 sati zračenjem mikrotalasima na 100°C. Reaktivna smeša se podeli između DCM (40 mL) i zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (40 mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (3x40 mL) i kombinovani organski slojevi se suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Sirovi uzorak se prečisti hromatografijom na koloni silika gela sa gradijentom 0-10 % dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu preko 10 zapremina kolone, nakon toga sa 10 % dihlorometan-2M rastvor amonijaka u metanolu preko 5 zapremina kolone.

Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom. Ovaj sirovi uzorak se prečisti dva puta sa MDAP (Postupak B), odgovarajuće frakcije se kombinuju i rastvarač se upari pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (202 mg) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 1.16 min; MH<+>= 564.

[0430] Naredni Primeri su izrađeni na sličan način kao u Primeru 13:

1 4

Primer 16: (S)-ciklopentil 3-metil-2-((((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)butanoat

[0431]

[0432] Suspenzija 2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehida (200 mg, 0.569 mmol, Međuproizvod 151) i (S)-ciklopentil 2-amino-3-metilbutanoat 4-metilbenzensulfonata (407 mg, 1.138 mmol, Međuproizvod 24) u DCM (10 mL) se meša u atmosferi azota na sobnoj temperaturi. Nakon 15 minuta, postiže se delimično rastvaranje i u ovo se doda natrijum triacetoksiborhidrid (241 mg, 1.138 mmol). Reaktivna smeša se meša 2 sata u atmosferi azota na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se podeli između DCM (30 mL) i zasićenog rastvora natrijum hidrogen karbonata (30 mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (3x30 mL) i organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom da se dobije bela čvrsta supstanca. Sirovi uzorak se rastvori u DMSO (3x1 mL) i prečisti sa MDAP (Postupak B). Rastvarač se upari pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (196.1 mg, 0.377 mmol, 66.2 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 1.11 min, MH<+>= 521.

1

Primer 17: (S)-4-metil-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)pentanoatna kiselina, hidrohlorid

[0433]

[0434] U rastvor (S)-ciklopentil 4-metil-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)pentanoata (za izradu videti Primer 12, 35 mg, 0.065 mmol) u metanolu (2 mL) i THF (2 mL) se doda 1 M vodeni rastvor litijum hidroksida (0.196 mL, 0.196 mmol) i reaktivna smeša zagreva na 50 °C u toku noći. Reaktivna smeša se oduva u struji azota. Uzorak se rastvori u 2 M vodenom rastvoru hlorovodonične kiseline (0.1 mL) i metanolu (0.9 mL) i prečisti sa MDAP (Postupak B). Rastvarač se oduva u struji azota da se dobije bela guma. Uzorak se suspenduje u tetrahidrofuranu (1 mL) i doda se 2 M vodeni rastvor hlorovodonične kiseline (0.5 mL) da se dobije bistar rastvor. Smeša se oduva u struji azota da se dobije naslovljeno jedinjenje (22 mg) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.55 min; MH<+>467.

[0435] Naredni Primeri su izrađeni na sličan način kao u Primeru 17:

1

n l

1 n l

1 (nastavlja se)

11 (nastavlja se)

12 (nastavlja se)

1 (nastavlja se)

14 (nastavlja se)

1 (nastavlja se)

Primer 71: (S)-3,3-dimetil-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)butanoatna kiselina

[0436]

[0437] 1M vodeni rastvor litijum hidroksida (1.0 mL) se doda u rastvor (2S)-tetrahidrofuran-3-il 3,3-dimetil-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)butanoata (za izradu videti Primer 239, 50 mg, 0.093 mmol) u metanolu (0.5 mL) i THF (0.5 mL). Reaktivna smeša se meša 48 sati na 60°C. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu. Rastvarač se upari i ostatak prečisti sa MDAP (Postupak B) da se dobije naslovljeno jedinjenje (26 mg), kao bezbojna čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.57 min; MH<+>467

[0438] Naredni Primeri su izrađeni na sličan način kao u Primeru 71:

1

1 n l

Primer 86: (2S,3S)-2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatna kiselina

[0439]

[0440] U izmešani rastvor (2S,3S)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoata (50.0 mg, 0.093 mmol) (za primer izrade videti Primer 306) u etanolu (3 mL) se doda 1 M rastvor litijum hidroksida (0.464 mL, 0.464 mmol).

Dobijeni rastvor se meša u toku noći na 40 °C. U reaktivnu smešu se doda 2 M rastvor HCl (0.300 mL, 0.600 mmol) i meša 30 min. Reaktivna smeša se prenese na SCX ketrdidž, eluira sa MeOH (15 CV) i nakon toga sa 2 M rastvorom NH3u MeOH (15 CV). Bazna frakcija se koncentruje i upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca. Ukupan prinos iz reakcije je 100%. LCMS (Sistem C): tRET= 0.40 min, MH<+>= 469.

[0441] Naredni Primeri su izrađeni na sličan način kao u Primeru 86:

1

Primer 90: (S)-4-metil-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)pentanoatna kiselina, natrijumova so

[0442]

[0443] Boca okruglog dna se napuni sa (S)-ciklopentil 4-metil-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)pentanoatom (136 mg, 0.254 mmol, Primer 1), tetrahidrofuranom (THF) (2 mL), metanolom (2 mL), vodom (1 mL) i litijum hidroksidom (15 mg, 0.626 mmol). Stavi se kondenzator vazduha i smeša zagreva na 50°C u toku noći. Doda se litijum hidroksid (15 mg,

1

0.626 mmol) i smeša zagreva na 50°C u toku noći. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu a zatim se koncentruje pod vakuumom da se dobije bela čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se rastvori u smeši 1:1 MeOH:DMSO 2 x 1 mL i prečisti sa MDAP (Postupak A). Relevantne frakcije se kombinuju i rastvarač se upari pod vakuumom do bele čvrste supstance (86 mg, 0.184 mmol). Čvrsta supstanca se prevede u žitku masu u DCM / MeOH / THF rastvor (9 mL 1:1:1) pre dodavanja natrijum hidroksida (93 mL, 0.186 mmol). Dobijeni rastvor se meša 5 minuta nakon čega se uklone isparljive komponente pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (96 mg, 0.19 mmol, 77 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem A): tRET= 0.49 min; MH<+>467.

Primer 91: (2S,3R)-2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatna kiselina -diastereomer 1, hidrohlorid

[0444]

[0445] U izmešani rastvor (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoata - diastereomer 1 (174a) (31.5 mg, 0.062 mmol) u etanolu (2 mL) se doda 1M rastvor litijum hidroksida (0.308 mL, 0.308 mmol). Dobijena reaktivna smeša se meša 2 dana na 40 °C. Reaktivna smeša se prenese na Biotage SCX kertridž, eluira sa MeOH (15 CV) i 2M metanolnim amonijakom (15 CV). Bazna frakcija se upari pod vakuumom da se dobije bela čvrsta supstanca. U suspenziju ostatka u Et2O (0.5 mL) se doda 0.5M rastvor HCl u Et2O (0.1 mL). Suspenzija se meša 2 h i upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca. Ukupan prinos iz reakcije je 72%. LCMS (Sistem I): tRET= 0.46 min, MH<+>= 469.

1 1

Primer 92: (2S,3R)-terc-butil 2-(((1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat

[0446]

i

Primer 93: (2S,3R)-2-(((1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidrobutanoatna kiselina

[0447]

[0448] (2S,3R)-terc-butil 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorid (115 mg, 0.541 mmol) se dodaje u izmešani rastvor 1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-6-karbaldehida (134) (100 mg, 0.271 mmol) u DCM (5 mL) u atmosferi azota u toku 22 h. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (172 mg, 0.812 mmol) i dobijena suspenzija meša 1 h. Doda se MeOH (5 mL), rastvor meša 5 min i prenese na 5 g SCX kertridž. Kertridž se eluira sa MeOH (25 mL), nakon toga sa 2M metanolnim amonijakom (25 mL). Bazne frakcije se upare pod vakuumom do braon ulja i prečiste sa MDAP (postupak B). Doda se 2 M vodeni rastvor HCl (0.5 mL) i frakcije koje sadrže produkt se upare pod vakuumom, azeotropiraju sa EtOH da se dobije bela čvrsta supstanca. Ostatak se rastvori u smeši DMSO:MeOH (1:1, 0.9 mL) i prečisti sa MDAP.

Frakcije koje sadrže produkt se upare do sušenja, azeotropiraju sa EtOH i PhMe da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca. Ukupan prinos Primera 92 je 25%. LCMS (Sistem C): tRET= 0.57 min, MH<+>= 529. Ukupan prinos Primera 93 je 5%. LCMS (Sistem C): tRET= 0.40 min, MH<+>= 473.

1 2

Primer 94a: (2S,3R)-2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatna kiselina hidrohlorid - Diastereomer 1

[0449]

[0450] (2S,3R)-terc-butil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (182a) (12.5 mg, 0.023 mmol) se rastvori u 2M vodenom rastvoru HCl (2 mL, 4.00 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 4 dana na 40 °C. Reaktivna smeša se upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca. Ukupan prinos reakcije je 58%. LCMS (Sistem C): tRET= 0.40 min, MH<+>= 483.

Primer 94b: (2S,3R)-2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatna kiselina hidrohlorid - Diastereomer 2

[0451]

[0452] (2S,3R)-terc-butil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil) u 2M vodenom rastvoru (2 mL, 4.00

1

mmol). Reaktivna smeša se zagreva 4 dana na 40 °C. Reaktivna smeša se upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca. Ukupan prinos reakcije je 80%. LCMS (Sistem C): tRET= 0.40 min, MH<+>= 483.

Primer 95: (2S,3R)-ciklopentil 2-(((1-etil-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat

[0453]

[0454] U smešu 1-etil-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehida (za izradu, videti Međuproizvod 198, 134 mg, 0.476 mmol) u DCM (5 mL) se dodaju (2S,3R)-ciklopentil 2-amino-3-hidroksibutanoat 4-metilbenzensulfonat (za izradu videti Međuproizvod 31, N27467-41-1, 342 mg, 0.953 mmol) i trietilamin (0.166 mL, 1.191 mmol) i reaktivna smeša meša 15 minuta na sobnoj temperaturi. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (202 mg, 0.953 mmol) i reaktivna smeša meša 2.5 sata na sobnoj temperaturi. Doda se zasićeni rastvor natrijum bikarbonata (10 mL) i organski sloj se izdvoji. Vodeni sloj se ekstrahuje sa novom količinom dihlorometana (10 mL) i organski slojevi se kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i oduvaju u struji azota. Uzorak se rastvori u DMSO (2 x 1 mL) i prečisti dva puta sa MDAP (Postupak B). Rastvarač se oduva u struji azota da se dobije naslovljeno jedinjenje (126 mg) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.89 min; MH<+>453

[0455] Naredni primeri su izrađeni na sličan način kao u Primeru 95:

1 4

1 n l

1

1 n l

1 (nastavlja se)

2 (nastavlja se)

21 (nastavlja se)

22 (nastavlja se)

2 (nastavlja se)

24 (nastavlja se)

2 (nastavlja se)

21 (nastavlja se)

(nastavlja se)

21 (nastavlja se)

(nastavlja se)

21 (nastavlja se)

22 (nastavlja se)

(nastavlja se)

22 (nastavlja se)

(nastavlja se)

22 (nastavlja se)

Primer 108a i Primer 108b: (2S,3R)-izopropil 3-hidroksi-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((-tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)butanoat (izomer 1) i (2S,3R)-izopropil 3-hidroksi-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((-tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)butanoat (izomer 2)

[0456]

22

Izomer 1Izomer 2

[0457] Racemat (2S,3R)-izopropil 3-hidroksi-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((-tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)butanoata (za izradu videti Primer 108, 120 mg) se izdvoji asimetričnom HPLC. HPLC prečišćavanje se izvodi na Chiralcel OD-H koloni (Lot. No. ODH11158-01, 250 x 30 mm). Prečišćavanje se izvodi koristeći 30% EtOH u heptanu, sa brzinom protoka 30 mL/min. UV detekcija je bila na 215 nm. Prvi eluirani enantiomer se sakupi i frakcije upare pod sniženim pritiskom, da se dobije naslovljeno jedinjenje "izomer 1", Primer 108a (41 mg). Drugi eluirani enantiomer se sakupi i frakcije upare pod sniženim pritiskom, da se dobije naslovljeno jedinjenje "izomer 2", Primer 108b (38 mg). izomer 1: LCMS (Sistem J): tRET= 0.85 min; MH<+>497. izomer 2:

LCMS (Sistem J): tRET= 0.85 min; MH<+>497.

Primer 130a: (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metoksibutan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (Pojedinačni diastereomer nepoznate konfiguracije na označenom centru. Izomer 1)

[0458]

22

Primer 130b: (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metoksibutan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (Pojedinačni diastereomer nepoznate konfiguracije na označenom centru. Izomer 2)

[0459]

[0460] Uzorak (rac)-(2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metoksibutan-2-il)-1H-benzo[d]Jimidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoata (za izradu videti Primer 130, 290mg) se izdvoji asimetričnom hromatografijom koristeći 30mm x 25cm Chiralcel OD-H kolonu, eluira sa 60%EtOH/heptan pri brzni protoka 30 mL/min.

Odgovarajuće frakcije za svaki izomer se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobiju naslovljena jedinjenja Primer 130a: izomer 1 (107mg)

[0461] LCMS (Sistem I): tRET= 0.59 min; MH<+>499. Asimetrična analiza se izvodi na 4.6mmid x 25cm Chiralcel OD-H koloni, eluira sa 60%EtOH/heptan pri brzni protoka 1 mL/min, asimetrična čistoća >99.5%.

Primer 130b: izomer 2 (96mg)

[0462] LCMS (Sistem I): tRET= 0.59 min; MH<+>499. Asimetrična analiza se izvodi na 4.6mmid x 25cm Chiralcel OD-H koloni, eluira sa 60%EtOH/heptan pri brzni protoka 1 mL/min, asimetrična čistoća = 98.5%.

Primer 131a: (2S,3R)-ciklobutil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metoksibutan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (Pojedinačni diastereomer nepoznate konfiguracije na označenom centru. Izomer 1)

2

i

Primer 131b: (2S,3R)-ciklobutil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metoksibutan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (Pojedinačni diastereomer nepoznate konfiguracije na označenom centru. Izomer 2)

[0464]

[0465] Uzorak (rac)-(2S,3R)-ciklobutil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metoksibutan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoata (za izradu videti Primer 131, 300mg) se izdvoji asimetričnom hromatografijom koristeći 30mm x 25cm Chiralcel OD-H kolonu, eluira sa 10%EtOH/heptan pri brzni protoka 30 mL/min.

Odgovarajuće frakcije za svaki izomer se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobiju naslovljena jedinjenja

Primer 131a: izomer 1 (58mg)

[0466] LCMS (Sistem I): tRET= 0.61 min; MH<+>511. Asimetrična analiza se izvodi na 4.6mmid x 25cm Chiralcel OD-H koloni, eluira sa 10%EtOH/heptan pri brzni protoka 1 mL/min, asimetrična čistoća =97.3%%.

2 1

Primer 131b: izomer 2 (92mg)

[0467] LCMS (Sistem I): tRET= 0.61 min; MH<+>511. Asimetrična analiza se izvodi na 4.6mmid x 25cm Chiralcel OD-H koloni, eluira sa 10%EtOH/heptan pri brzni protoka 1 mL/min, asimetrična čistoća >99.5%.

Primer 132a: (2S,3R)-terc-butil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metoksibutan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (Pojedinačni diastereomer nepoznate konfiguracije na označenom centru. Izomer 1)

[0468]

i

Primer 132b : (2S,3R)-terc-butil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metoksibutan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (Pojedinačni diastereomer nepoznate konfiguracije na označenom centru. Izomer 2)

[0469]

2 2

[0470] Uzorak (rac)-(2S,3R)-terc-butil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metoksibutan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoata (za izradu videti Primer 132, 50mg) se izdvoji asimetričnom hromatografijom koristeći 30mm x 25cm Chiralcel OD-H kolonu, eluira sa 70%EtOH/heptan pri brzni protoka 30 mL/min.

Primer 132a: izomer 1(18mg)

[0471] LCMS (Sistem I): tRET= 0.62 min; MH<+>513. Asimetrična analiza se izvodi na 4.6mmid x 25cm Chiralcel OD-H koloni, eluira sa 70%EtOH/heptan pri brzni protoka 1 mL/min, asimetrična čistoća = 97.3%.

Primer 132b: izomer 2 (14mg)

[0472] LCMS (Sistem I): tRET= 0.62 min; MH<+>513. Asimetrična analiza se izvodi na 4.6mmid x 25cm Chiralcel OD-H koloni, eluira sa 10%EtOH/heptan pri brzni protoka 1 mL/min, asimetrična čistoća >99.5%.

Primer 133a: (2S,3R),izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (Pojedinačni diastereomer nepoznate konfiguracije na označenom centru. Izomer 1)

[0473]

i

2

Primer 133b: (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (Pojedinačni diastereomer nepoznate konfiguracije na označenom centru. Izomer 2)

[0474]

[0475] Uzorak (rac)-(2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoata (za izradu videti Primer 133, 285mg) se izdvoji asimetričnom hromatografijom koristeći 30mm x 25cm Chiralcel OD-H kolonu, eluira sa 50% EtOH/heptan pri brzni protoka 25 mL/min. Odgovarajuće frakcije za svaki izomer se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobiju naslovljena jedinjenja

Primer 133a: izomer 1 (159mg)

[0476] LCMS (Sistem J): tRET= 0.84 min; MH<+>497. Asimetrična analiza se izvodi na 4.6mmid x 25cm Chiralcel OD-H koloni, eluira sa 70%EtOH/heptan pri brzni protoka 1 mL/min, asimetrična čistoća >99.5%.

Primer 133b: izomer 2 (145mg)

[0477] LCMS (Sistem J): tRET= 0.84 min; MH<+>497. Asimetrična analiza se izvodi na 4.6mmid x 25cm Chiralcel OD-H koloni, eluira sa 70% EtOH/heptan pri brzni protoka 1 mL/min, asimetrična čistoća = 99.2%.

2 4

Primer 134a: (2S,3R)-terc-butil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (Pojedinačni diastereomer nepoznate konfiguracije na označenom centru. Izomer 1)

[0478]

Primer 134b: (2S.3R)-terc-butil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (Pojedinačni diastereomer nepoznate konfiguracije na označenom centru. Izomer 2)

[0479]

[0480] Uzorak (rac)-(2S,3R)-terc-butil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoata (za izradu videti Primer 134, 200mg) se izdvoji asimetričnom hromatografijom koristeći 30mm x 25cm Chiralcel OD-H kolonu, eluira sa 50% EtOH/heptan pri brzni protoka 25 mL/min. Odgovarajuće frakcije za svaki izomer se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobiju naslovljena jedinjenja.

Primer 134a: izomer 1 (100mg)

2

[0481] LCMS (Sistem J): tRET= 0.84 min; MH<+>511. Asimetrična analiza se izvodi na 4.6mmid x 25cm Chiralcel OD-H koloni, eluira sa 70%EtOH/heptan pri brzni protoka 1 mL/min, asimetrična čistoća >99.5%.

Primer 134b: izomer 2 (85mg)

[0482] LCMS (Sistem J): tRET= 0.91 min; MH<+>511. Asimetrična analiza se izvodi na 4.6mmid x 25cm Chiralcel OD-H koloni, eluira sa 70%EtOH/heptan pri brzni protoka 1 mL/min, asimetrična čistoća =99.5%.

Primer 139a i 139b: (S)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 4-metil-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzor[d]imidazol-5-il)metil)amino)pentanoat i (S)-(R)-tetrahidrofuran-3-il 4-metil-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)pentanoat

[0483]

[0484] Primer 139 (85mg) se rastvori usmeši etanol / heptan (1:1, 1mL) i prečisti asimetričnom hromatografijom (stacionarna faza: Chiralpak IA, mobilna faza: heptan / etanol) (N28112-60). Kombinovane frakcije koje sadrže čist izomer 1 (Primer 139a) se koncentruju pod vakuumom da se dobije čist izomer 1 kao bezbojna čvrsta supstanca (25mg). LCMS (Sistem B): tRET= 0.92 min, MH<+>= 537. Kombinovane frakcije koje sadrže čist izomer 2 (Primer 139b) se koncentruju pod vakuumom da se dobije čist izomer 2 kao bezbojna čvrsta supstanca (45mg). LCMS (Sistem B): tRET= 0.93 min, MH<+>= 537.

2

Primer 162a i 162b: (2S,3R)-izobutil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(((R)-4-metilmorfolin-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat i (2S,3R)-izobutil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(((S)-4-metilmorfolin-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat

[0485]

[0486] Primer 162 (26mg) se rastvori u etanolu (1mL) i prečisti asimetričnom hromatografijom (stacionarna faza: Chiralcel OD-H, mobilna faza: 60% heptan / 40% etanol) (N31661-32). Kombinovane frakcije koje sadrže čist izomer 1 se koncentruju pod vakuumom da se dobije čist izomer 1 (Primer 162a) kao bezbojna čvrsta supstanca (11mg). LCMS (Sistem B): tRET= 0.88 min, MH<+>= 540. Kombinovane frakcije koje sadrže čist izomer 2 se koncentruju pod vakuumom da se dobije čist izomer 2 (Primer 162b) kao bezbojna čvrsta supstanca (11mg). LCMS (Sistem B): tRET= 0.87 min, MH<+>= 540.

Primer 174a: (2S,3R),izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat -diastereomer 1 i Primer 174b:

(2S,3R)-izopropil-2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat-diastereomer 2

[0487]

2

[0488] Primer 174 (203 mg) se rastvori u EtOH (2 mL) i prečisti asimetričnom hromatografijom (stacionarna faza Chiralpak AD-H, mobilna faza 40%EtOH/heptan).

[0489] Kombinovane frakcije se upare pod vakuumom da se dobije čist diastereomer 1 (Primer 174a) kao bezbojna čvrsta supstanca (81 mg). HPLC-UV: RT ~8.2 minuta, > 99.5% izomerne čistoće u oblasti HPLC @ 215 nm. LCMS (Sistem I): tRET= 0.57 min, MH<+>= 511. Kombinovane frakcije se upare pod vakuumom da se dobije čist diastereomer 2 (Primer 174b) kao bezbojna čvrsta supstanca (99 mg). HPLC-UV: RT ~15.0 minuta, 99.3% izomerne čistoće u oblasti HPLC @ 215 nm. LCMS (Sistem I): tRET= 0.58 min, MH<+>= 511.

Primer 175: (2S,3R)-izobutil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat-Diastereoizomer 2 i Primer 175: (2S,3R)-izobutil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat - Diastereoizomer 1

[0490]

[0491] Primer 175 (220 mg) se rastvori u EtOH (2 mL) i prečisti asimetričnom hromatografijom (stacionarna faza: Chiralpak AD-H, mobilna faza: 40%EtOH/heptan).

[0492] Kombinovane frakcije koje sadrže čist diastereomer 1 se koncentruju pod vakuumom da se dobije čist diastereomer 1 (Primer 175a) kao bezbojna čvrsta supstanca (91 mg). HPLC-UV: RT ~8.3 minuta, > 95% izomerne čistoće u oblasti HPLC @ 215 nm. LCMS (Sistem I): tRET= 0.63 min, MH<+>= 525. Kombinovane frakcije koje sadrže čist diastereomer 2 se koncentruju pod vakuumom da se dobije čist diastereomer 2 (Primer 175b) kao bezbojna

2

čvrsta supstanca (89 mg). HPLC-UV: RT ~12.4 minuta, > 95 % izomerne čistoće u oblasti HPLC @ 215 nm. LCMS (Sistem I): tRET= 0.63 min, MH<+>= 525.

Primer 178a: (2S,3R)-terc-butil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatdiastereoizomer 1 i Primer 178b: (2S,3R)-terc-butil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat - diastereoizomer 2

[0493]

[0494] Primer 178 (100 mg) se rastvori u EtOH (2 mL) i prečisti asimetričnom hromatografijom (stacionarna faza: Chiralpak AD-H, mobilna faza: 40%EtOH/heptan). Kombinovane frakcije koje sadrže čist diastereomer 1 se koncentruju pod vakuumom da se dobije čist diastereomer 1 kao bezbojna čvrsta supstanca (50 mg). HPLC-UV: RT ~8.1 minuta, > 99.5% izomerne čistoće u oblasti HPLC @ 215 nm. LCMS (Sistem I): tRET= 0.61 min, MH<+>= 525. Kombinovane frakcije koje sadrže čist diastereomer 2 se koncentruju pod vakuumom da se dobije čist diastereomer 2 kao bezbojna čvrsta supstanca (41 mg). HPLC-UV: RT ~17.7 minuta, ca. > 99.5% izomerne čistoće u oblasti HPLC @ 215 nm. LCMS (Sistem I): tRET= 0.61 min, MH<+>= 525.

Primer 180a: (2S,3R)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat - Diastereomer 1 i Primer 180b: (2S,3R)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)3-hidroksibutanoat - Diastereomer 2

[0495]

2

[0496] Primer 180 (140 mg) se rastvori u EtOH (2 mL) i prečisti asimetričnom hromatografijom (stacionarna faza: Chiralcel OD-H, mobilna faza: 30%EtOH/heptan).

Kombinovane frakcije koje sadrže čist diastereomer 1 (Primer 180a) se koncentruju pod vakuumom da se dobije čist diastereomer 1 kao bezbojna čvrsta supstanca (64 mg). HPLC-UV: RT ~6.2 minuta, > 99.5% izomerne čistoće u oblasti HPLC @ 215 nm. LCMS (Sistem I): tRET= 0.52 min, MH<+>= 539. Kombinovane frakcije koje sadrže čist diastereomer 2 (Primer 180b) se koncentruju pod vakuumom da se dobije čist diastereomer 2 kao bezbojna čvrsta supstanca (64 mg). HPLC-UV: RT ~9.8 minuta, ca. > 99.5% izomerne čistoće u oblasti HPLC @ 215 nm. LCMS (Sistem I): tRET= 0.52 min, MH<+>= 539.

Primer 181a: (2S,3R)-izopropil2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat-Diastereomer 1 i

Primer 181b: (2S,3R)-izopropil2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat -Diastereomer 2

[0497]

[0498] Primer 181 (107 mg) se rastvori u EtOH (2 mL) i prečisti asimetričnom hromatografijom (stacionarna faza: Chiralpak AD-H, mobilna faza: EtOH).

24

[0499] Kombinovane frakcije koje sadrže čist izomer 1 se koncentruju pod vakuumom da se dobije čist izomer 1 kao bezbojna čvrsta supstanca (48 mg). HPLC-UV: RT ~8.4 minuta, > 99.5% izomerne čistoće u oblasti HPLC @ 215 nm. LCMS (Sistem J): tRET= 0.55 min, MH<+>= 525. Kombinovane frakcije koje sadrže čist izomer 2 se koncentruju pod vakuumom da se dobije čist izomer 2 kao bezbojna čvrsta supstanca (36 mg). HPLC-UV: RT ~11.4 minuta, ca.

99.1% izomerne čistoće u oblasti HPLC @ 215 nm. LCMS (Sistem J): tRET= 0.56 min, MH<+>= 525.

Primer 182a: (2S,3R)-terc-butil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)1-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat-Diastereomer 1 i Primer 182b: (2S,3R)-terc- butil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat - Diastereomer 2

[0500]

[0501] Primer 182 (ca. 56 mg) se rastvori u EtOH (2 mL) i prečisti asimetričnom hromatografijom (stacionarna faza: Chiralpak IC, mobilna faza: EtOH).

[0502] Kombinovane frakcije koje sadrže čist izomer 1 se koncentruju pod vakuumom da se dobije čist izomer 1 kao bezbojna čvrsta supstanca (27 mg). HPLC-UV: RT ~19.5 minuta, > 99.5% izomerne čistoće u oblasti HPLC @ 215 nm. LCMS (Sistem J): tRET= 0.59 min, MH<+>= 539. Kombinovane frakcije koje sadrže čist izomer 2 se koncentruju pod vakuumom da se dobije čist izomer 2 kao bezbojna čvrsta supstanca (29 mg). HPLC-UV: RT ~25.5 minuta, > 99.5% izomerne čistoće u oblasti HPLC @ 215 nm. LCMS (Sistem J): tRET= 0.56 min, MH<+>= 539.

Primer 213a (2S,3R)-izobutil2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(((R)-tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat i 213b: (2S,3R)-izobutil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(((S)-tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat

[0503]

Primer 213aPrimer 213b

[0504] Uzorak (2S,3R)-izobutil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoata (za izradu videti Primer 213, 125mg) se prečisti asimetričnom hromatografijom na Chiralpak IA (250 x 430mm, 5mikrona) koloni, brzina protoka: 40mL/min, detekcija: UV DAD (250nm (talasna dužina 80nm, referenca 375nm (talasna dužina 50nm)). Eluira sa 50:50 smešom acetonitrila koji sadrži 0.2% v/v izopropilamin i propan-2-ola koji sadrži 0.2% v/v izopropilamina. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare u struji azota da se dobije naslovljeno jedinjenje.

Izomer 1, Primer 213a: (52ma)

[0505] Asimetrična analiza se izvodi na Chiralpak IA (250 x 4.6mm, 5mikrona) koloni, brzina protoka: 1mL/min, detekcija: UV DAD (250nm (talasna dužina 40nm, referenca 375nm (talasna dužina 50nm)). Eluira sa 50:50 smešom acetonitrila koji sadrži 0.2% v/v izopropilamina i Propan-2-ola koji sadrži 0.2% v/v izopropilamina. Asimetrična čistoća je >99.5%. LCMS (Sistem J): tRET= 0.99 min; MH<+>525

Izomer 2, Primer 213b: (53ma)

[0506] Asimetrična analiza se izvodi na Chiralpak IA (250 x 4.6mm, 5mikrona) koloni, brzina protoka: 1mL/min, detekcija: UV DAD (250nm (talasna dužina 40nm, referenca 375nm (talasna dužina 50nm)). Eluira sa 50:50 smešom acetonitrila koji sadrži 0.2% v/v izopropilamina i propan-2-ola koji sadrži 0.2% v/v izopropilamina. Asimetrična čistoća je 99.7%. LCMS (Sistem J): tRET= 0.99 min; MH<+>525.

Primer 225a i Primer 225b: (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(((R)-tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat "R-DIASTEREOIZOMER" i (2S,3R-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(((S)-tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H- benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat "S-DIASTEREOIZOMER"

[0507]

[0508] Racemat (2R,3S)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (za izradu videti Primer 225, 2.1 g) se izdvoji asimetričnom HPLC. HPLC prečišćavanje se izvodi na Chiralpak ID koloni (Lot. No. ID12179-01, 250 x 30 mm). Prečišćavanje se izvodi koristeći 80% EtOH u cikloheksanu uz dodavanje 0.2% IPA, sa brzinom protoka 30 mL/min. UV detekcija je na 215 nm. Prvi eluirani enantiomer se sakupi i frakcija upari pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje "R-DIASTEREOIZOMER" Primer 225a (858 mg). Drugi eluirani enantiomer se sakupi i frakcija upari pod sniženim pritiskom, da se dobije naslovljeno jedinjenje "S-DIASTEREOI- SOMER", Primer 225b (836 mg).

DIASTEREOIZOMER 1: LCMS (Sistem J): tRET= 0.91 min; MH<+>511.

DIASTEREOIZOMER 2: LCMS (Sistem J): tRET= 0.90 min; MH<+>511.

24

Primer 228a i Primer 228b: (2S,3R)-ciklobutil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-furan-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat DIASTEREOMER 1 i (2S,3R)-ciklobutil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat DIASTEREOMER 2

[0509]

Diastereoizomer 1Diastereoizomer 2

Racemat (2S,3R)-ciklobutil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (za izradu videti Primer 228, 250 mg) se izdvoji asimetričnom HPLC. HPLC prečišćavanje se izvodi na Chiralpak AD-H koloni (Lot. No. ADH12143-01, 250 x 30 mm). Prečišćavanje se izvodi koristeći 100% EtOH, sa brzinom protoka 25 mL/min. UV detekcija je na 215 nm. Prvi eluirani enantiomer se sakupi i frakcije upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prečisti sa MDAP (Postupak B). Frakcije se kombinuju, upare pod sniženim pritiskom i suše u vakuumskoj pećnici u toku noći da se dobije naslovljeno jedinjenje "DIASTEREOIZOMER 1" (98 mg). Drugi eluirani enantiomer se sakupi i frakcije upare pod sniženim pritiskom, da se dobije naslovljeno jedinjenje "DIASTEREOIZOMER 2" (90 mg). DIASTEREOIZOMER 1: LCMS (Sistem J): tRET= 0.52 min; MH<+>509. DIASTEREOIZOMER 2: LCMS (Sistem J): tRET= 0.52 min; MH<+>509.

Primer 229a i Primer 229b: (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro- furan-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat DIASTEREOIZOMER 1 i

(2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat DIASTEREOIZOMER 2

[0510]

Diastereoizomer 1Diastereoizomer 2

[0511] Racemat (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (za izradu videti Primer 229, 200 mg) se izdvoji asimetričnom HPLC. HPLC prečišćavanje se izvodi na Chiralpak AD-H koloni (Lot. No. ADH12143-01, 250 x 30 mm). Prečišćavanje se izvodi koristeći 100% EtOH, sa brzinom protoka 25 mL/min. UV detekcija je na 215 nm. Prvi eluirani enantiomer se sakupi i frakcije upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje "DIASTEREOIZOMER 1", Primer 229a (21 mg). Drugi eluirani enantiomer se sakupi i frakcije upare pod sniženim pritiskom, da se dobije naslovljeno jedinjenje "DIASTEREOIZOMER 2", Primer 229b (20 mg). DIASTEREOIZOMER 1: LCMS (Sistem J): tRET= 0.86 min; MH<+>497. DIASTEREOIZOMER 2: LCMS (Sistem J): tRET= 0.86 min; MH<+>497.

Primer 232a i Primer 232b: (2S,3R)-terc-butil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat DIASTEREOIZOMER 1 i (2S,3R)-terc-butil 2-(((2-(1.5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat DIASTEREOIZOMER 2

[0512]

24

Diastereoizomer 1Diastereoizomer 2

[0513] Racemat (2S,3R)-terc-butil2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidrofuran-3-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (za izradu videti Primer 232, 80 mg) se izdvoji asimetričnom HPLC. HPLC prečišćavanje se izvodi na Chiralpak AD-H koloni (Lot. No. ADH12143-01, 250 x 30 mm). Prečišćavanje se izvodi koristeći 100% EtOH, sa brzinom protoka 25 mL/min. UV detekcija je na 215 nm. Prvi eluirani enantiomer se sakupi i frakcije upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje "DIASTEREOIZOMER 1", Primer 232a (21 mg). Drugi eluirani enantiomer se sakupi i frakcije upare pod sniženim pritiskom, da se dobije naslovljeno jedinjenje "DIASTEREOIZOMER 2", Primer 232b (20 mg). DIASTEREOMER 1: LCMS (Sistem J): tRET= 0.92 min; MH<+>511. DIASTEREOMER 2: LCMS (Sistem J): tRET= 0.92 min; MH+ 511.

Primer 248a: (2S,3R)-izobutil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (enantiomer 1) i Primer 248b: (2S,3R)-izobutil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (enantiomer 2)

[0514]

24

[0515] Enantiomeri se dobijaju asimetričnim razdvajanjem Primera 248.

Analitički postupak: Približno 0.5mg se rastvori u 50%EtOH/heptan (1mL) 20uL se injektuje na koloni.

40%EtOH/heptan, f=1.0mL/min, talasna dužina 215nm,4. Ref 550,100 Kolona 4.6mmid x 25cm Chiralcel OD-H

Lot No.ODH0CE-PD027

Postupak izrade: Približno 110mg se rastvori u 1.5mL EtOH.

Injektovanje: 1.5mL rastvora se injektuje na koloni.

40%EtOH/heptan, f=30mL/min, talasna dužina 215nm,4. Ref 550,100

Kolona 30mm x 25cm Chiralcel OD-H

Lot No.ODH11158-01

Enantiomer 1 Rt = 5.0 min. >99% ee sa UV.

Enantiomer 2 Rt = 12.0 min. >99% ee sa UV.

Primer 266a: (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (enantiomer 1) i Primer 266b: (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metilamino)-3-hidroksibutanoat (enantiomer 2)

[0516]

[0517] Enantiomeri se dobijaju asimetričnim razdvajanjem Primera 266.

24

Količina: Približno 70mg.

30%EtOH/heptan, f=1.0mL/min, talasna dužina 215nm,4. Ref 550,100

Kolona 4.6mmid x 25cm Chiralcel OD-H

Lot No.ODH0CE-PD027

Postupak izrade: Približno 70mg se rastvori u 1mL EtOH.

Injektovanje: 1mL rastvora se injektuje na koloni.

30%EtOH/heptan, f=30mL/min, talasna dužina, 215nm,4. Ref 550,100

Kolona 30mm x 25cm Chiralcel OD-H

Lot No ODH11158-01

Enantiomer 1 Rt = 6.0 min. >99% ee sa UV.

Enantiomer 2 Rt = 11.5 min. >99% ee sa UV.

Primer 267a: (2S,3R)-izopropil 3-hidroksi-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)butanoat (enantiomer 1) i Primer 267b: (2S,3R)-izopropil 3-hidroksi-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)butanoat (enantiomer 2)

[0518]

[0519] Enantiomeri se dobijaju asimetričnim razdvajanjem Primera 267

24

Količina: Približno 120mg.

20%EtOH/heptan, f=1.0mL/min, talasna dužina 215nm,4. Ref 550,100

Kolona 4.6mmid x 25cm Chiralcel OD-H

Lot No.ODH0CE-PD027

Postupak izrade: Približno 120mg se rastvori u 1mL EtOH.

Injektovanje: 1mL rastvora se injektuje na koloni.

20%EtOH/heptan, f=30mL/min, talasna dužina, 215nm,4. Ref 550,100

Kolona 30mm x 25cm Chiralcel OD-H

Lot No ODH11158-01

Enantiomer 1 Rt = 8.5 min. >99% ee sa UV.

Enantiomer 2 Rt = 12.2 min. >99% ee sa UV.

Primer 270a: (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(2-metoksipropil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (enantiomer 1) i Primer 270b: (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(2-metoksipropil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (enantiomer 2)

[0520]

[0521] Enantiomeri se dobijaju asimetričnim razdvajanjem Primera 270.

24

Količina: Približno 150mg.

30%EtOH/heptan, f=1.0mL/min, talasna dužina 215nm,4. Ref 550,100

Kolona 4.6mmid x 25cm Chiralcel OD-H

Lot No.ODH0CE-PD027

Postupak izrade: Približno 150mg se rastvori u 2mL EtOH.

Injektovanje: 1mL rastvora se injektuje na koloni.

30%EtOH/heptan, f=30mL/min, talasna dužina, 215nm,4. Ref 550,100

Kolona 30mm x 25cm Chiralcel OD-H

Lot No ODH11158-01

Enantiomer 1 Rt = 6.0 min. >99% ee sa UV.

Enantiomer 2 Rt = 11.5 min. >99% ee sa UV.

Primer 271a: (2S,3R)-neopentil2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(2-metoksipropil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (Pojedinačni diastereomer nepoznate konfiguracije na označenom centru, izomer 1) i Primer 271b: (2S,3R-neopentil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(2-metoksipropil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (Pojedinačni diastereomer nepoznate konfiguracije na označenom centru, izomer 2)

[0522]

Primer 271a: izomer 1

2

Primer 271b: izomer 2

[0523] Uzorak (rac)-(2S,3R)-neopentil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(2-metoksipropil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoata (za izradu videti Primer 271, 280mg) se izdvoji asimetričnom hromatografijom na koloni koristeći 30mm x 25cm Chiralcel OD-H kolonu, eluira sa 50%EtOH/heptan pri brzni protoka 30 mL/min. Odgovarajuće frakcije za svaki izomer se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje.

Primer 271a: izomer 1 (140mg)

[0524] LCMS (Sistem I): tRET= 0.66 min; MH<+>513

Asimetrična analiza se izvodi na 4.6mmid x 25cm Chiralcel OD-H koloni, eluira sa 50%EtOH/heptan pri brzni protoka 1 mL/min, asimetrična čistoća >99.5%

Primer 271b: izomer 2 (140mg)

[0525] LCMS (Sistem I): tRET= 0.65 min; MH<+>513

Primer 272a: (2S,3R)-terc-butil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(2-metoksipropil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (Pojedinačni diastereomer nepoznate konfiguracije na označenom centru, izomer 1) i Primer 272b: (2S,3R)-terc-butil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(2-metoksipropil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (Pojedinačni diastereomer nepoznate konfiguracije na označenom centru, izomer 2)

2 1

Primer 272b: izomer 2

[0527] Uzorak (rac)-(2S,3R)-terc-butil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(2-metoksipropil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoata (za izradu videti Primer 272, 300mg) se izdvoji asimetričnom hromatografijom koristeći 30mm x 25cm Chiralcel OD-H kolonu, eluira sa 30%EtOH/heptan pri brzni protoka 30 mL/min.

Odgovarajuće frakcije za svaki izomer se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje

Primer 272a: izomer 1 (120mg)

[0528] LCMS (Sistem I): tRET= 0.58 min; MH<+>499

Asimetrična analiza se izvodi na 4.6mmid x 25cm Chiralcel OD-H koloni, eluira sa 40%EtOH/heptan pri brzni protoka 1 mL/min, asimetrična čistoća >99.5%

Primer 272b: izomer 2 (120mg)

[0529] LCMS (Sistem I): tRET= 0.57 min; MH<+>499

2 2

Primer 273a: (2S,3R)-ciklobutil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(2-metoksipropil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (Pojedinačni diastereomer nepoznate konfiguracije na označenom centru, izomer 1) i Primer 273b: (2S,3R)-ciklobutil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(2-metoksipropil-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (Pojedinačni diastereomer nepoznate konfiguracije na označenom centru, izomer 2)

[0530]

Primer 273b: izomer 2

[0531] Uzorak (rac)-(2S,3R)-ciklobutil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(2-metoksipropil)-1H-benzo[d|imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoata (za izradu videti Primer 273, 290mg) se izdvoji asimetričnom hromatografijom koristeći 30mm x 25cm Chiralcel OD-H kolonu, eluira sa 40%EtOH/heptan pri brzni protoka 30 mL/min.

Primer 273a: izomer 1 (120mg)

2

[0532] LCMS (Sistem I): tRET= 0.56 min; MH<+>497

Primer 273b: izomer 2 (120mg)

[0533] LCMS (Sistem I): tRET= 0.57 min; MH<+>497

Primer 277: (S)-ciklopentil 2-((2-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)oksi)etil)amino)-3-metoksipropanoat hidrohlorid

[0534]

[0535] Smeša 2-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)oksi)acetaldehida (međuproizvod 239, 116 mg, 0.229 mmol), (S)-ciklopentil 2-amino-3-metoksipropanoat hidrohlorida (međuproizvod 196, 131 mg, 0.587 mmol) i trietilamina (89 mg, 123 µL, 0.88 mmol) u dihlormetan (5 mL) se meša 30 minuta na sobnoj temperaturi. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (187 mg, 0.88 mmol) i reaktivna smeša meša 18 sati na sobnoj temperaturi. Doda se zasićeni rastvor NaHCO3(15 mL) i smeša meša 15 minuta. Organska faza se izdvoji i vodena faza ekstrahuje sa dihlormetanom (2x10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom, suše i upare. Ostatak se prečisti pomoću MDAP (postupak B). Produkt se rastvori u etil acetatu (5 mL) i tretira sa 1.0M rastvorom vodonik hlorida u dietil etru (1.0 mL). Rastvarač se ukloni da

2 4

se dobije naslovljeno jedinjenje (53 mg, 0.088 mmol, 30.0 % prinos), kao bezbojna čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.97 min; MH<+>567.

[0536] Naredni Primeri su izrađeni na sličan način kao u Primeru 277:

2

n l

2 n l

Primer 288: 2S,3R)-izobutil2-((2-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)oksi)etil)amino)-3-hidroksibutanoat, hidrohlorid

[0537]

Faza i)

[0538] Smeša 2-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-pyra n-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)oksi)acetaldehida (Međuproizvod 239) (116 mg, 0.293 mmol), (2S,3R)-izobutil 2-amino-3-hidroksibutanoatna so 4-metilbenzensulfonske kiseline (Međuproizvod 11) (204 mg, 0.587 mmol) i trietilamina (89 mg, 123 mL, 0.88 mmol) u dihlormetanu (5 mL) se meša 30 minuta na sobnoj temperaturi. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (187 mg, 0.88 mmol) i reaktivna smeša meša 18 sati na sobnoj temperaturi. Doda se zasićen rastvor NaHCO3(15 mL) i smeša meša 15 minuta. Organska

2

faza se izdvoji i vodena faza se ekstrahuje sa dihlormetanom (2x10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom, suše i upare da se dobije faza i) produkta. Uočeni LCMS maseni jon [M-2] u odnosu na očekivani. Sugeriše da je formiran enamin.

Faza ii)

[0539] Produkt iz faze i) se rastvori u izopropanolu (10 mL). Rastvor se tretira sa amonijum formatom (92 mg, 1.47 mmol) i 10% paladijumom na ugljeniku, 50% pasta sa vodom (23 mg, 20maseni %). Reaktivna smeša se refluksuje 4 sata. Ohlađena reaktivna smeša se filtrira kroz celite. Rastvarač se upari iz filtrata i ostatak prečisti sa MDAP visokog pH (Postupak B). N ije dovoljno čist, ponovo se prečisti sa MDAP sa mravlja kiselina (Postupak A). Produkt se rastvore u etil acetatu (5 mL) i tretira sa 1.0M rastvorom vodonik hlorida u dietil etru (1 mL). Rastvarač se ukloni da se dobije naslovljeno jedinjenje (2 mg, 3.38 mmol, 1.153 % prinos), kao bezbojna čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.92 min; MH<+>555.

[0540] Naredni Primer je izrađen na sličan način kao Primer 288:

Primer 290: (2S,3R)-izopropil 2-((2-(2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)amino)-3-hidroksibutanoat

[0541]

2

[0542] 1,3-dimetil-5-(5-(oksiran-2-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)piridin-2(1H)-on (za izradu videti Međuproizvoda 266, 0.1 g, 0.264 mmol) se rastvori u THF (3 mL) u atmosferi azota. Rastvor se ohladi na 0 °C i doda se BF3. OEt2(0.017 mL, 0.132 mmol). Smeša se meša 5 min na 0 °C, a nakon toga se dodaju (2S,3R)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorid (Međuproizvod 31a, 0.057 g, 0.290 mmol), trietilamin (0.110 mL, 0.791 mmol) i p-toluensulfonska kiselina monohidrat (0.050 g, 0.264 mmol). Reaktivna smeša se meša 1h u atmosferi azota na sobnoj temperaturi. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (0.223 g, 1.054 mmol). Reaktivna smeša se meša u atmosferi azota 2 sata. Reaktivna smeša se meša 10 min sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, a nakon toga razblaži sa etil acetatom. Slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom. Organski slojevi se kombinuju i suše preko separatora faze i koncentruju. Ulje se prečisti fleš hromatografijom na koloni uz eluiranje sa 0-10% MeOH u DCM. Frakcije se koncentruju do sušenja. Ostatak se prečisti sa MDAP (postupak B). Rastvarač se upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (40 % prinos) . LCMS (Sistem J): tRET= 0.91 min; MH<+>525.

[0543] Naredni Primer je izrađen na sličan način kao Primer 290:

Primer 292: (2S,3R),izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorid

[0544]

2

[0545] (2S,3R-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (Primer 303, 400 mg, 0.788 mmol) se rastvori u etil acetatu (3 mL) i tretira sa 1.0M rastvorom vodonik hlorida u dietil etru (1 mL). Doda se dietil etar (20 mL), čvrsta supstanca se izdvoji filtriranjem, ispere sa dietil etrom i suši da se dobije naslovljeno jedinjenje (409 mg, 0.748 mmol), kao bezbojna čvrsta supstanca. LCMS (Sistem I): tRET= 0.51 min; MH<+>511.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) . ppm 9.78 (br s, 2H), 8.44 (s, 1H), 8.02-8.10 (m, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.67 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.88-4.97 (m, 1H), 4.38-4.49 (m, 4H), 4.08-4.14 (m, 1H), 3.70-3.77 (m, 2H), 3.61-3.67 (m, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.07-3.16 (m, 2H), 2.13 (s, 3H), 1.93-2.06 (m, 1H), 1.15-1.32 (m, 13H).

Primer 293: (2S,3R)-2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatna kiselina, hidrohlorid

[0546]

[0547] (2S,3R)-2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatna kiselina (Primer 82, 8 mg, 0.017 mmol) se triturira sa 1M rastvorom vodonik hlorida u dietil etru (17 mL, 0.017 mmol) i meša 5 sati u atmosferi azota. Rastvarači se nakon toga uklone pod vakuumom,

2

dobijena bela čvrsta supstanca se suši 24 sata u vakuumskoj pećnici na 40°C da se dobije naslovljeno jedinjenje (5.6 mg, 0.011 mmol, 64.9 % prinos) koja izgleda kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem I): tRET= 0.51 min; MH<+>469.

Primer 294: (2S,3R)-ciklobutil 2-(((1-(((S)-1-acetilpiperidin-3-il)metil)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat hidrohlorid

[0548]

[0549] (2S,3R)-ciklobutil 2-amino-3-hidroksibutanoat, so 4-metilbenzensulfonske kiseline (za izradu videti međuproizvod 32, 170 mg, 0.492 mmol) se doda u rastvor (S)-1-((1-acetilpiperidin-3-il)metil)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehida (Međuproizvod 135) (100 mg, 0.246 mmol) u DCM (5 mL) i dobijeni rastvor meša u toku noći u atmosferi N2. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (156 mg, 0.738 mmol) i dobijene suspenzije mešaju 3 h. Reaktivna smeša se solubilizira sa MeOH i prenese na 10 g SCX kertridž. Kertridž se eluira sa MeOH, nakon toga sa 2M metanolnim amonijakom. Bazne frakcije se upare pod vakuumom do sušenja i ostaci prečiste sa MDAP (HPH postupak B). Frakcije koje sadrže produkt se upare pod vakuumom, azeotropiraju sa EtOH da se dobije bezbojno ulje. Ostaci se rastvore u DCM (1 mL) i uz mešanje se doda 1 M rastvor HCl u dietil etru. Dobijena suspenzija se upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca. Ukupan prinos iz reakcije je 53%. LCMS (Sistem C): tRET= 0.52 min, MH<+>= 564

[0550] Naredni Primeri su izrađeni na sličan način kao u Primeru 294:

2 1

Primer 300: (S)-ciklopentil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-metil-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-metoksipropanoat, hidrohlorid

2 2

[0552] 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-metil-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid (102 mg, 0.363 mmol, Međuproizvod 273) se rastvori u DCM (5 mL) i tretira sa (S)-ciklopentil 2-amino-3-metoksipropanoat, hidrohloridom (162 mg, 0.725 mmol, Međuproizvod 196) i trietilaminom (0.151 mL, 1.088 mmol). U izmešani rastvor se doda natrijum triacetoksiborhidrid (384 mg, 1.813 mmol). Smeša se nakon toga meša 18 h u atmosferi azota. U smešu se nakon toga doda zasićeni natrijum bikarbonat (15 mL) i meša 15 min. Slojevi se nakon toga razdvoje, vodeni sloj dva puta ekstrahuje sa dihlormetanom (10 mL x 2) a organske faze kombinuju i suše koristeći hidrofobni frit. Rastvarač se nakon toga ukloni pod vakuumom. Ostatak se rastvori u minimalnoj količini dihlorometana i prenese na 10g silika kertridž i eluira koristeći naredni postupak: 0% etil acetat za 2 zapremina kolone, 0-25% etanol/etil acetat za 10 zapremina kolone a nakon toga 25% etanol/etil acetat za 5 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i rastvarač se ukloni pod vakuumom da se dobije (S)-ciklopentil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-metil-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-metoksipropanoat kao bezbojno ulje. Uzorak se rastvori u minimalnoj količini dietil etra i nakon toga tretira sa nekoliko kapi 1M rastvora hlorovodonične kiseline u dietil etru i rastvarač i HCl se uklone pod vakuumom. Ovim se dobija naslovljeno jedinjenje (68 mg, 0.139 mmol, 38.4 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.94 min, MH<+>= 453.

Primer 301: (S)-ciklopentil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-metil-1H-benzo[d]limidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksi-3-metilbutanoat, hidrohlorid

[0553]

2

[0554] 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-metil-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid (100mg, 0.355 mmol, Međuproizvod 273) se rastvori u DCM (5 mL) i tretira sa (S)-ciklopentil 2-amino-3-hidroksi-3-metilbutanoat, hidrohloridom (110 mg, 0.463 mmol, Međuproizvod 51) i trietilaminom (0.148 mL, 1.066 mmol) i meša 2 h. Nakon toga se doda natrijum triacetoksiborhidrid (377 mg, 1.777 mmol) i reakcija meša u toku noći. Nakon ovog vremena, dodaju se još 3 ekvivalenta natrijum triacetoksiborhidrida (377 mg, 1.777 mmol) i smeša meša 2h. U smešu se doda natrijum bikarbonat (25 mL) i reakcija meša 15 min. Faze se nakon toga razdvoje i vodeni sloj dva puta ekstrahuje sa dihlormetanom (2 x 10 mL) a organske faze kombinuju i suše koristeći hidrofobni frit. Rastvarač se nakon toga ukloni pod vakuumom i ostatak rastvori u minimumu dihlorometana. Rastvor se nakon toga prenese na Biotage SNAP 10g kertridž i primeni se automatska hromatografija koristeći sledeći postupak: 0% etil acetat za 2 zapremine kolone, 0-25% etanol u etil acetatu preko 10 zapremina kolone, 25% etanol za 5 zapremina kolone. Odgovarajuće frakcije se nakon toga kombinuju i rastvarač se ukloni pod vakuumom. Ostatak se zatim rastvori u minimumu dihlorometana i nakon toga prenese na Biotage SNAP 10g kertridž i primeni se automatska hromatografija koristeći sledeći postupak: 15% etanol u etil acetatu za 2 zapremine kolone, 15-40% etanol u etil acetatu za 10 zapremina kolone, 40% etanol u etil acetatu za 5 zapremina kolone. Ostatak se zatim rastvori u dimetil sulfoksidu (0.4mL) i dihlorometanu (0.4mL) i prečisti sa maseno usmerenim autoprečišćavanjem visokog pH. Odgovarajuće frakcije se nakon toga kombinuju i rastvarač se ukloni pod vakuumom. Ovim se dobija (S)-ciklopentil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-metil-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksi-3-metilbutanoat (26.5 mg, 0.057 mmol, 15.98 % prinos) kao žuto ulje. Ulje se zatim rastvori u dietil etru i doda se nekoliko kapi 1M rastvora HCl u dietil etru i rastvarač se ukloni pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (26.5 mg, 0.053 mmol, 14.82 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem B): tRET= 0.95 min, MH<+>= 467.

Primer 302: (S)-4-metil-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metilpiperidin-4-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)pentanoatna kiselina, hidrohlorid

[0555]

2 4

[0556] U rastvor (S)-ciklopentil 4-metil-2-(((2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(1-metilpiperidin-4-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)pentanoata (za izradu videti Primer 2, 17 mg, 0.032 mmol) u metanolu (1 mL) i THF (1 mL) doda se 1 M vodeni rastvor litijum hidroksida (0.032 mL, 0.032 mmol) i reaktivna smeša meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Mešanje se nastavi tri dana na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se zagreva na 50 °C dva dana. Doda se još 1 M vodeni rastvor litijum hidroksida (0.16 mL, 0.16 mmol) i reaktivna smeša zagreva na 50 °C u toku noći. Uzorak se upari pod sniženim pritiskom i ostatak rastvori u vodi (5 mL) i prenese na izolut 103 kertridž. Kertridž se ispere sa vodom i nakon toga eluira sa metanolom. Metanolne frakcije se kombinuju i oduvaju u struji azota da se dobije naslovljeno jedinjenje (13 mg). LCMS (Sistem B): tRET= 0.57 min; MH<+>466.

Primer 303: (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo-[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat

[0557]

[0558] Smeša 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehida (za primer izrade videti Međuproizvoda 116, 10.0 g, 27.4 mmol), (2S,3R)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorida (za primer izrade videti Međuproizvoda 31a, 10.82 g, 54.7 mmol) i trietilamina (6.92 g, 9.54 mL, 68.4

2

mmol) u DCM (100 mL) se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (17.4 g, 82 mmol) i reaktivna smeša meša 4 sata na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se razblaži sa DCM (100 mL) i sipa na zasićeni natrijum bikarbonat (300 mL). Smeša se meša 30 minuta na sobnoj temperaturi, organska faza se izdvoji i vodena faza ekstrahuje sa DCM (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi se suše i upare. Ostatak se prečisti hromatografijom sa gradijentom 2.5-10% MeOH u DCM da se dobije naslovljeno jedinjenje (11.57 g, 22.66 mmol, 83 % prinos), kao bezbojna pena. LCMS (Sistem J): tRET= 0.87 min; MH<+>511.<1>H NMR (d6-DMSO): δ 1.06 - 1.26 (m, 13 H), 1.90 - 2.02 (m, 1 H), 2.11 (s, 3 H), 2.20 - 2.41 (m, 1 H), 3.00 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 3.05 - 3.16 (m, 2 H), 3.56 (s, 3 H), 3.66 (d, J = 1.32 Hz, 1 H), 3.76 - 3.86 (m, 1 H), 3.90 (d, J = 13.2 Hz, 1 H), 4.26 (d, J = 7.3 Hz, 2 H), 4.67 (d, J = 5.4 Hz, 1 H), 4.93 (sept, J = 6.2 Hz, 1 H), 7.22 (dd, J = 8.3, 1.2 Hz, 1 H), 7.53 (s, 1 H), 7.61 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.73 (dd, J = 2.3, 1.1 Hz, 1 H), 8.12 (d, J = 2.2 Hz, 1 H).

Alternativni postupak za izradu Primera 303: (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat

[0559]

(3-Nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenil)metanol

[0560] (4-fluoro-3-nitrofenil)metanol (2.4 g, 14.02 mmol) i (tetrahidro-2H-piran-4-il)metanamin (2.423 g, 21.04 mmol) se suspenduju u vodi (30ml) i doda se kalijum karbonat (2.52 g, 18.23 mmol), a nakon toga se smeša meša 24h na 80°C, zatim ostavi da se ohladi uz mešanje. Dobijena smeša se ekstrahuje sa EtOAc (50ml) i organski sloj ispere sa vodom (50ml), suši i upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.60g, 13.52 mmol,

2

96 % prinos) kao tamno žuta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem D): tRET= 0.82 min; MH<+>267. Naslovljeno jedinjenje se koristi u narednoj fazi bez prečišćavanja.

(3-Amino-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenil)metanol

[0561] (3-Nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenil)metanol (48g, 180 mmol) se rastvori u etanolu (400ml) i hidrogenizuje preko Pd/C 5% težinski (3g, 28.2 mmol) 18h pod atmosferskim pritiskom, nakon toga se smeša filtrira kroz Celite u atmosferi azota i filtrat upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (50g, 212 mmol, 117 % prinos) kao tamno braon ulje. LCMS (Sistem D): tRET= 0.62 min; MH<+>237. Produkt se koristi u narednoj fazi bez naknadnog prečišćavanja.

5-(5-(Hidroksimetil)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin-2-(1H)-on

[0562] (3-Amino-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenil)metanol (50g, 190 mmol) se suspenduje u vodi (500ml) i dodaju se 1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-karbaldehid (31.7 g, 209 mmol) i cetilpiridinijum bromid (14.64 g, 38.1 mmol), a zatim se smeša energično meša u toku noći. Smeša se ekstrahuje sa DCM (3 x 300ml) i kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (500ml), a nakon toga suše i upare da se dobije tamno braon čvrsta supstanca. Supstanca se suspenduje u EtOAc (500ml) i zagreva pod refluksom 2h, nakon toga ohladi i produkt sakupi filtriranjem. Sirovi produkt se resuspenduje u EtOAc (500ml) i ponovo zagreva pod refluksom, nakon toga ohladi u ledenom kupatilu i produkt sakupi filtriranjem i ispere sa etrom (300ml) da se dobije braon čvrsta supstanca (64g). LCMS pokazuje čist produkt, ali NMR spektar pokazuje prisustvo 0.2 eq cetilpiridinijum soli preostale u produktu. Produkt se dalje koristi u narednoj fazi bez prečišćavanja. Naslovljeno jedinjenje je 90% mt čistoće. LCMS (Sistem D): tRET= 0.66 min; MH<+>368.

(2S,3R)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat, hidrohlorid

[0563] AcCl (96 ml, 1343 mmol) se u kapima doda u 2-propanol (500 ml, 6490 mmol) i smeša se nakon toga meša 20 min pre dodavanja (2S,3R)-2-amino-3-hidroksibutanoatne

2

kiseline (40g, 336 mmol). Dobijena suspenzija se zagreva na reflux u toku noći, nakon toga ohladi i upari pod vakuumom da se dobije bezbojno ulje. Ulje se triturira sa etrom (300ml) i produkt sakupi filtriranjem da se dobije (2S,3R)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat kao bezbojna čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.49 (br. s., 3H), 5.66 (br. s., 1H), 4.99 (td, J=6.24, 12.47 Hz, 1H), 4.09 (br. s., 1H), 3.80 (d, J=4.16 Hz, 1H), 1.17-1.29 (m, 9H)

2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid

[0564] 5-(5-(Hidroksimetil)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin- 2(1H)-on (64g, 122 mmol) se rastvori u DCM (600 ml) i doda se mangan dioksid (42.4 g, 488 mmol), nakon toga se smeša zagreva pod refluksom 18h. LCMS pokazuje da je konverzija završena i smeša se filtrira a čvrsta supstanca ispere sa DCM. Filtrat se upari pod vakuumom da se dobije braon guma, koja se rastvori u DCM (100ml) i prenese na 340g silika kolona, nakon toga eluira sa 0-50% EtOH/EtOAc i frakcije koje sadrže produkt se upare pod vakuumom da se dobije braon čvrsta supstanca. Supstanca se triturira sa etrom (200ml) i čvrsta supstanca sakupi filtriranjem, nakon toga suspenduje u EtOAc (300ml) i zagreva pod refluksom 1h, nakon toga ohladi u ledenom kupatilu i produkt sakupi filtriranjem da se dobije 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid (42.5g, 116 mmol, 95 % prinos) kao čvrsta supstanca boje peska. LCMS (Sistem D): tRET= 0.74 min; MH<+>366. Filtrat se upari pod vakuumom i ostatak triturira u EtOAc (50ml) 30 min pod refluksom, nakon toga ohladi i filtrira da se dobije dodatni deo produkta (3g) kao bež čvrsta supstanca, NMR konzistentan sa traženim aldehidom. Naslovljeno jedinjenje je 80% mt čiustoće.

(2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat

[0565] 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehid (42g, 115 mmol) i (2S,3R)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorid (34.1 g, 172 mmol) se rastvore u DCM (500 ml), doda se Et3N (48.1 ml, 345 mmol), nakon toga natrijum triacetoksiborhidrid (73.1 g, 345 mmol) i smeša se

2

meša 24h na sobnoj temperaturi. Smeša se doda u 1.5 litara zasićenog rastvora natrijum bikarbonata u koničnoj boci zapremine 5 litara i energično meša 1h, nakon toga se organski sloj izdvoji, a vodeni sloj ekstrahuje sa DCM (500ml) i kombinovani organski slojevi isperu sa vodom (500ml) i slanim rastvorom (500ml), suše preko natrijum sulfata i upare pod vakuumom da se dobije braon pena. Sirovi produkt se rastvori u DCM (200ml) i prenese na 750g silika kolonu, nakon toga eluira sa 0-30% EtOH/EtOAc i frakcije koje sadrže čist produkt se upare pod vakuumom da se dobije (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (51g, 100 mmol, 87 % prinos) kao bež pena. LCMS (Sistem D): tRET= 0.86 min; MH<+>511.<1>H NMR (d6-DMSO): δ 1.06 - 1.26 (m, 13 H), 1.90 -2.02 (m, 1 H), 2.11 (s, 3 H), 2.20 - 2.41 (m, 1 H), 3.00 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 3.05 - 3.16 (m, 2 H), 3.56 (s, 3 H), 3.66 (d, J = 1.32 Hz, 1 H), 3.76 - 3.86 (m, 1 H), 3.90 (d, J = 13.2 Hz, 1 H), 4.26 (d, J = 7.3 Hz, 2 H), 4.67 (d, J = 5.4 Hz, 1 H), 4.93 (sept, J = 6.2 Hz, 1 H), 7.22 (dd, J = 8.3, 1.2 Hz, 1 H), 7.53 (s, 1 H), 7.61 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.73 (dd, J = 2.3, 1.1 Hz, 1 H), 8.12 (d, J = 2.2 Hz, 1 H).

Izrada edisilatne soli Primera 303 (bez zasejavanja): (2S-3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-1-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat, so 1,2-etandisulfonske kiseline.

[0566] U okruglu kivetu se dodaju (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (za izradu videti Primer 303, 100 mg, 0.196 mmol) i izopropanol (1.35 mL). Izmešana smeša se zagreva na 40 °C i doda se rastvor etan-1,2-disulfonske kiseline (44.7 mg, 0.235 mmol) u izopropanolu (557 µL). Smeša se meša 15 h na 40 °C. Nakon tog vremena, formira se čvrsta supstanca. Reakcija se ukloni iz kivete, ohladi direktno na 24 °C i meša 6 h. Nakon tog vremena, suspenzija se filtrira i suši pod vakuumom 5 min. Čvrsta supstanca, preneta u posudu se dalje dalje suši u vakuumskoj pećnici 3 dana na 40 °C da se dobije (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat, so 1,2-etandisulfonske kiseline (91 mg, 66.3 % prinos) kao bela kristalna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ ppm 9.61 (1H, br. s.), 9.29 (1H, br. s.), 8.35 (1H, br. s.), 8.02 (1H, d, J=8.6 Hz), 7.92 (1H, s), 7.82 - 7.75 (1H, m), 7.58 (1H, d, J=8.6 Hz), 4.94 (1H, spt,

2

J=6.2 Hz), 4.46 - 4.34 (4H, m), 4.05 (1H, quin, J=6.4 Hz), 3.77 - 3.69 (2H, m), 3.66 (1H, br. s.), 3.59 (3H, s), 3.17 - 3.08 (2H, m), 2.66 (4H, s), 2.13 (3H, s), 2.06 - 1.93 (1H, m), 1.31 -1.16 (13H, m). LCMS (Sistem D): tRET= 0.88 min; MH<+>511.

Izrada edisilatne soli Primera 303 (sa zasejavanjem): (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihy- dropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]limidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat, so 1,2-etandisulfonske kiseline.

[0567] U EasyMax reaktor zapremine 400 mL se dodaju (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (za primer izrade videti Primer 303 (alternativni postupak))(10 g, 19.58 mmol) i izopropanol (135 mL). U posebnoj boci se izradi rastvor etan-1,2-disulfonske kiseline (4.47 g, 23.50 mmol) u izopropanolu (28 mL) zagrejan na 40 °C i filtrira. U rastvor (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoata (za primer izrade videti Primer 303 (alternativni postupak), izmešan na 250 rpm se doda 40% rastvor etan-1,2-disulfonske kiseline (11.2 mL). Dodaju se kristali (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoata (za primer izrade videti gore datu izradu edisilatne soli Primera 303 (bez zasejavanja)’)) (131 mg) i smeša se meša 1.5 h na 40 °C. Nakon tog vremena, u kapima se u toku 6 h dodaje preostalih 60% rastvora etan-1,2-disulfonske kiseline (16.8 mL) 6 h. po završenom dodavanju rastvora etan-1,2-disulfonske kiseline smeša se polako ohladi na 20 °C u toku 3.5 h i meša narednih 11 h na RT. Dobijena suspenzija se filtrira sa filter šoljom i filter papirom, pri čemu je filtrat bistar. Filter pogača se ispere sa IPA (2 x 20 mL i 10 mL) i dalje suši pod vakuumom da se dobije vlažna filter pogača (24.06 g). Čvrsti produkti se sakupe i suše u vakuumskoj pećnici (44°C) 22 h da se dobije naslovljeno jedinjenje (11.337 g, 16.02 mmol, 82 % prinos) kao bela kristalna čvrsta supstanca. LCMS (Sistem D): tRET= 0.88 min; MH<+>511.

Primer 304: (2S,3R)-2-(((2-(1,5-Dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(((S)-tetrahidrofuran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatna kiselina

2

[0569] (2S,3R)-(S)-tetrahidrofuran-3-il-2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(((S)-tetrahidrofuran-2-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat (za izradu videti Primer 224, 190 mg, 0.362 mmol) se rastvori u THF (3 mL) i metanolu (3 mL). Litijum hidroksid (26.0 mg, 1.087 mmol) se rastvori u vodi (1 mL) i doda se u rastvor. Reaktivna smeša se meša 5 sati na 40 °C. Doda se 2M rastvor hlorovodonične kiseline (0.543 mL, 1.087 mmol) i rastvarači se uklone pod sniženim pritiskom. Ostatak se rastvori u vodi (1 mL) i DMSO (0.8 mL), rastvor se filtrira i prečisti sa MDAP (Postupak B). Odgovarajuće frakcije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak se suspenduje u THF (3 mL) i doda se 2 M rastvor HCl (0.2 mL). Rastvarači se uklone u struji azota. Uzorak se rastvori u vodi (0.7 mL) i DMSO (0.7 mL) i prečisti sa MDAP (Postupak B). Odgovarajuće frakcije se oduvaju u struji azota i dobijeni ostaci se tretiraju sa THF (4 mL) i 2 M rastvorom natrijum hidroksida (0.04 mL). Rastvarači se oduvaju u struji azota. Uzorak se rastvori u etil acetatu, filtrira i čvrsta supstanca koja se izdvoji u tokuk filtriranja se rastvori u vodi i koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se rastvori u vodi (0.8 mL) i prečisti sa MDAP (Postupak B). Odgovarajuće frakcije se oduvaju u struji azota da se dobije naslovljeno jedinjenje (16 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem J): tRET= 0.54 min; MH<+>455. Primer 305: (2S,3R)-izopropil 2-(((1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzor[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat

[0570]

2 1

[0571] U smešu 1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehida (za primer izrade videti Međuproizvoda 224, 6.3 g, 17.05 mmol) i (2S,3R)-izopropil 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorida (za primer izrade videti Međuproizvoda 31a, 6.74 g, 34.1 mmol) u dihlormetanu (DCM) (200 mL) se doda trietilamin (5.94 mL, 42.6 mmol) i reaktivna smeša meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (10.84 g, 51.2 mmol) i reaktivna smeša meša četiri sata na sobnoj temperaturi. Doda se zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (200 mL) i organski sloj izdvoji. Vodeni sloj se ponovo ekstrahuje sa dihlormetanom (2 x 100 mL) i organski slojevi kombinuju, suše koristeći hidrofobni frit i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prenese u dihlormetan i prečisti hromatografijom na koloni (silika) sa gradijentom 0-5 % metanol u dihlormetanu. Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod sniženim pritiskom. Uzorak se prečisti sa HPLC (Xselect CSH C18koloni, eluira koristeći gradijentvoda/acetonitril sa modifikatorom 0.1% mravljom kiselinom) i frakcije upare pod sniženim pritiskom da se dobije izdvojeni materijal (5.7 g).2.1 g materijala se ukloni za narednu reakciju. Preostali materijal (3.6 g), bezbojna guma, se suši u vakuumskoj pećnici 3 noći nakon čega postaje izbrazdano staklo. Što je moguće više materijala se ukloni iz boce i vrati u vakuumsku pećnicu naredne 2 noći da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.2 g, 6.22 mmol). LCMS (Sistem J): tRET= 0.92 min; MH<+>515.<1>H NMR (d6-DMSO): δ 1.11 (d, J = 6.4 Hz, 3 H), 1.19 (d, J = 6.1 Hz, 6 H), 2.09 (s, 3 H), 3.00 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 3.16 (d, J = 1.5 Hz, 6 H), 3.54 (s, 3 H), 3.65 (d, J = 13.2 Hz, 1 H), 3.70 - 3.86 (m, 3 H), 3.91 (d, J = 13.0 Hz, 1 H), 3.96 - 4.07 (m, 2 H), 4.70 (d, J = 5.4 Hz, 1 H), 4.78 - 4.86 (m, 1 H), 4.94 (sept, J = 6.2 Hz, 1 H), 7.18 (dd, J = 8.4, 1.3 Hz, 1 H), 7.55 (s, 1 H), 7.67 - 7.70 (s, 1 H), 7.72 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 8.05 (d, J = 2.2 Hz, 1 H).

2 2

Primer 306: (2S,3S)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat

[0572]

[0573] U izmešani rastvor 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-karbaldehida (0.438 mmol, 160 mg) (za primer izrade videti Međuproizvoda 116) i ((2,S,3,S)-(S)-tetrahidrofuran-3-il 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorida (98.8 mg, 0.525 mmol) (za primer izrade videti Međuproizvod 40) u DCM (5 mL) se doda trietilamin (0.182 mL). Dobijena smeša se meša 1 h i doda se natrijum triacetoksiborhidrid (278 mg, 1.374 mmol). Reaktivna smeša se meša 30 min i ostavi da stoji u toku noći. Reaktivna smeša se podeli između DCM i zasićenog vodenog rastvora NaHCO3. Organski sloj se ukloni a vodeni sloj dva puta ekstrahuje sa DCM. Organske faze se kombinuju i koncentruju pod vakuumom da se dobije braon ulje. Ulje se rastvori u DCM i prečisti hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa EtOAc:EtOH (3 - 25%). Odgovarajuće frakcije se kombinuju i upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje. Ukupan prinos iz reakcije je 46%. LCMS (Sistem C): tRET= 0.45 min, MH<+>= 539.

Primer 307: (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((S)-piperidin-3-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat

[0574]

2

[0575] 5-6N rastvor HCl u izopropanolu (0.2 mL) se doda u rastvor (R)-terc-butil 3-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-6-((((2S,3R)-3-hidroksi-1-izopropoksi-1-oksobutan-2-il)amino)metil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilata (za izradu videti Međuproizvoda 267, 31.4mg, 51.5mmol), u izopropanolu (1 mL). Dobijena smeša se meša na r.t. u toku noći (17 h). U reaktivnu smešu se doda 5-6N rastvor HCl u izopropanolu (0.8 mL) i dobijeni rastvor se meša 5 sati. Isparljive komponente se uklone u struji azota i smeša se prečisti sa MDAP (Postupak B). Frakcije se kombinuju, isparljive komponente se ukloni pod sniženim pritiskom a sirovi materijal se prenese na prethodno uravnoteženi SCX kertridž od 2g, eluira sa 3CV metanola i 3CV 2M rastvora amonijaka u metanolu. Bazne frakcije se kombinuju i isparljive komponente se uklone pod sniženim pritiskom da se dobije žuto ulje. Ulje se prečisti sa MDAP (Postupak B). Relevantne frakcije se kombinuju i isparljive komponente se uklone pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (15.5mg) kao prozračna/bela čvrsta supstanca.

LCMS (Sistem J): tRET= 0.79 min; MH<+>510

Primer 308: (2S,3R)-terc-butil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((S)-piperidin-3-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat

[0576]

2 4

[0577] 5-6N Rastvor HCl u izopropanolu (0.2 mL) se doda u rastvor (R)-terc-butil 3-((6-((((2S,3R)-1-(terc-butoksi)-3-hidroksi-1-oksobutan-2-il)amino)metil)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilata (za izradu videti Međuproizvoda 268, 21mg, 33.7mmol) u izopropanolu (1 mL). Dobijena smeša se meša na r.t. u toku noći (17 h). U reaktivnu smešu se doda 5-6N rastvor HCl u izopropanolu (0.8 mL) i dobijeni rastvor se meša 5 sati. Isparljive komponente se uklone koristeći jedinicu za oduvavanje i smeša se prečisti sa MDAP (Postupak B). Frakcije se kombinuju, isparljive komponente se ukloni pod sniženim pritiskom i sirovi materijal se prenese na prethodno uravnoteženi SCX kertridž od 2 g, eluira sa 3CV metanola i 3CV 2M rastvora amonijaka u metanolu. Bazne frakcije se kombinuju i isparljive komponente se uklone pod sniženim pritiskom da se dobije žuto ulje. Ovo ulje se prečisti sa MDAP (Postupak B). Relevantne frakcije se kombinuju i isparljive komponente se uklone pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (13.5mg) kao prozračna/bela čvrsta supstanca. LCMS (Sistem J): tRET= 0.85 min; MH<+>524.

Primer 309: (S)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((R)-piperidin-3-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-6-il)metil)amino)-3-metilbutanoat dihidrohlorid

[0578]

[0579] 5M Rastvor HCl u IPA (1 mL, 5.00 mmol) se doda u (S)-terc-butil 3-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-6-((((S)-1-izopropoksi-3-metil-1-oksobutan-2-il)amino)metil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat (za izradu videti Međuproizvoda 269, 56 mg, 0.092 mmol) i dobijeni rastvor se meša 21 h na rt. Rastvor se upari pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi produkt (51.5 mg) kao žuta čvrsta supstanca. Uzorak se rastvori u 1 mL MeOH i prečisti sa MDAP (postupak B). Rastvarač se osuši da se dobije 37 mg žutog ulja. Ulje se suši u vakuumskoj pećnici u toku noći. Čvrsta supstanca (28 mg) se nakon toga

2

suspenduje u 2 mL smeše EtOH:ACN 1:1 i sipa se 80 µL 1 M rastvora HCl u Et2O. Isparljive komponente se uklone pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (35 mg) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (Sistem J): tRET= 1.02 min; MH<+>508.

Primer 310: (S)-ciklopentil 2-(((1-(azetidin-3-ilmetil)-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-4-metilpentanoat

[0580]

[0581] Boca okruglog dna se napuni sa (S)-terc-butil 3-((5-(((1-(ciklopentiloksi)-4-metil-1-oksopentan-2-il)amino)metil)-2-(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)azetidin-1-karboksilatom (Međuproizvod 270, 60 mg, 0.099 mmol), 1,4-dioksanom (10 mL) i TFA (0.5 mL, 6.49 mmol). Posuda se zatvori i meša 2 dana na sobnoj temperaturi. Isparljive komponente se uklone pod vakuumom da se dobije žuto ulje. Ulje se rastvori u DMSO (1 mL) i prečisti sa MDAP (Postupak B). Rastvarač se upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (34 mg, 0.067 mmol, 67.9 % prinos). LCMS (Sistem B): tRET= 0.93 min; MH<+>506.

Primer 311: (S)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((R)-piperidin-3-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-metilbutanoat

[0582]

2

[0583] 5M Rastvor HCl u IPA (10 mL, 50.0 mmol) se doda u (S)-terc-butil 3-((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-5-((((S)-1-izopropoksi-3-metil-1-oksobutan-2-il)amino)metil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat (180 mg, 0.296 mmol) (za primer izrade videti Međuproizvoda 272) i dobijeni rastvor meša 1 h i mešanje zaustavi preko vikenda. Reaktivna smeša se upari pod vakuumom da se dobije braon guma, koja se rastvori u MeOH i prenese na 5 g SCX kertridž. Kertridž se eluira sa MeOH (50 mL)a nakon toga sa 2 M metanolnim amonijakom (25 mL). Bazne frakcije se upare pod vakuumom do sušenja i prečiste sa MDAP (N31339-85-1, postupak A sa mravljom kiselinom). U čiste frakcije koje sadrže produkt se doda 2 M vodeni rastvor HCl (5 mL) i upare pod vakuumom do bele čvrste supstance. N31339-85-A1 se rastvori u MeOH i prenese na 5 g SCX kertridž. Kertridž se eluira sa MeOH (20 mL), nakon toga sa 2M metanolnim amonijakom (15 mL). Bazne frakcije se upare pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca. Ukupan prinos iz reakcije je 67%. LCMS (Sistem C): tRET= 0.48 min, MH<+>= 508.

Primer 312: (S)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((R)-piperidin-3-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-metilbutanoat, dihidrohlorid

[0584]

[0585] (S)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((R)-piperidin-3-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-metilbutanoat (videti for preparation Primer 311) (96 mg, 0.189 mmol) se rastvori u DCM (2 mL) i doda se 1M rastvor HCl u dietil etru (0.5 mL, 0.500 mmol) uz mešanje. Dobijena suspenzija se upari pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca. Ukupan prinos iz reakcije je 97%. LCMS (Sistem C): tRET= 0.48 min, MH<+>= 508.

2

[0586] Naredni Primer je izrađen na sličan način kao Primer 17:

[0587] Naredni Primeri su izrađeni na sličan način kao u Primeru 95:

2

n l

Primer 320: (2S,3R)-terc-butil 2-((2-(1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)amino)-3-hidroksibutanoat

[0588]

[0589] U rastvor 5-(1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)-5-(oksiran-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-1,3-dimetilpiridin- 2(1H)-ona (za izradu videti Međuproizvoda 291, 500 mg, 1.304 mmol) u THF (13 mL) se na 0°C doda BF3.OEt2(0.165 mL, 1.304 mmol) i rastvor se meša 15 min. U reaktivnu smešu se doda trietilamin (0.545 mL, 3.91 mmol) a nakon toga (2S,3R)-terc-butil 2-amino-3-hidroksibutanoat hidrohlorid (304 mg, 1.434 mmol) i TsOH (248mg, 1.304 mmol) i reaktivna smeša se meša u toku noći na sobnoj temperaturi. Nakon toga se doda natrijum triacetoksiborhidrid (276 mg, 1.304 mmol) i mešanje nastavi još 12 sati. Sat. U reaktivnu smešu se doda zasićeni rastvor NaHCO3(20 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (30mLX2). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (20 mL) suše (Na2SO4), filtriraju i koncentruju da se dobije sirovi produkt. Sirovi produkt se prečisti preparativnom HPLC

2

koristeći kinetexc8 (150×30)mm 5µ kolona, eluira sa 5 Mm amonijum bikarbonata(Aq)/ acetonitril. Odgovarajuće frakcije se liofiliziraju da se dobije naslovljeno jedinjenje (2S,3R)-terc-butil 2-((2-(1-(1,3-dimetoksipropan-2-il)- 2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)amino)-3-hidroksibutanoat (67 mg, 9.4 % prinos). LCMS (Sistem E): tRET= 1.46 min; MH<+>543.

[0590] fNaredni Primeri su izrađeni na sličan način kao u Primeru 320:

[0591] Naredni Primeri su izrađeni na sličan način kao u Primeru 71:

2

BIOLOŠKI REZULTATI

Ispitivanje vremenski razloženog fluorescentnog rezonantnog energetskog transfera (TR-FRET)

[0592] Vezivanje se procenjuje ispitivanjem vremenski razloženog fluorescentnog rezonantnog energetskog transfera. Koristi se prečišćeni 6 His repić na N-terminusu proteina kao epitop za anti-6 His antitelo obeleženo sa Europium helatom (PerkinElmer AD0111) koji omogućava vezivanje Europiuma za proteine koji deluju kao donori fluorofora. Mala molekula, sa visokim afinitetom vezivanja bromodomena BRD2, BRD3, BRD4 i BRDT je obeležena sa Alexa Fluor647 (Referentno jedinjenje X) i ovo deluje kao akceptor u FRET paru.

Referentno jedinjenje X: 4-((Z)-3-(6-((5-(2-((4S)-6-(4-hlorofenil)-8-metoksi-1-metil-4H-benzo[f][1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]diazepin-4-il)acetamido)pentil)amino)-6-oksoheksil)-2-((2E,4E)-5-(3,3-dimetil-5-sulfo-1-(4-sulfobutil)-3H-indol-1-ium-2-il)penta-2,4-dien-1-iliden)-3-metil-5-sulfoindolin-1-il)butan-1-sulfonat)

[0593]

[0594] U rastvor N-(5-aminopentil)-2-((4S)-6-(4-hlorofenil)-8-metoksi-1-metil-4H-benzo[f][1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]diazepin-4-il)acetamida (za izradu videti referentno jedinjenje J, WO2011/054848A1, 1.7 mg, 3.53 mmol) u DMF (40µl) se doda rastvor AlexaFluor647-ONSu (2.16 mg, 1.966 µmol) takođe u DMF (100µl). Smeša se zaalkališe sa DIPEA (1 µl, 5.73 µmol) i meša u toku noći na vortex mikseru. Reaktivna smeša se upari do sušenja. Čvrsta supstanca se rastvori u smeši acetonitril/voda/sirćetna kiselina (5/4/1, <1mL)

2 1

filtrira i nanese na Phenomenex Jupiter C18preparativnu kolonu i eluira sa sledećim gradijentom (A = 0.1% trifluorosirćetne kiseline u vodi, B= 0.1% TFA/90% acetonitril/10% voda): Brzina protoka = 10ml/min., AU = 20/10 (214nm): 5-35%, t=0min: B = 5%; t=10min: B = 5%; t=100min: B = 35%; t=115min: B = 100% (stepen razdvajanja: 0.33%/min)

[0595] Glavna komponenta se eluira u opsegu 26-28%B i čini se da se sastoji od dva pika. Srednja frakcija (F1.26) koja treba da sadrži "obe" komponente se analizira analitičkom HPLC (Spherizorb ODS2, 1 do 35% u toku 60min): pojedinačna komponenta se eluira sa 28%B. Frakcije F1.25/26 i 27 se kombinuju i upare do sušenja. Prenesu sa DMF, upare do sušenja, trituriraju sa bezvodnim etrom a plava čvrsta supstanca se suši u toku noći na <0.2mbar: 1.54mg.

[0596] Analitička HPLC (Sphersizorb ODS2, 1 do 35%B u toku 60min): MSM10520-1: [M+H]<+>(obs): 661.8/- što odgovara M-29. Ovo je jednako sa [(M+2H)/2]<+>za izračunatu masu od 1320.984 što je M-29. Ovo je standardni postupak sa Alexa Fluor 647 bojom i predstavlja teoretski gubitak dve metilen grupe pod uslovima masenog spektrometra. Princip analize: U odsustvu jedinjenja za poređenje, ekxcitacija Europijuma izaziva donora da emituje na λ618nm što ekscitira Alexa obeleženi bromodomen koji vezuje jedinjenje dovodeći do povećanja transfera energije merljivog na λ 647nM. U prisustvu dovoljne koncentracije jedinjenja koje može da veže ove proteine, interakcija se prekida dovodeći do merljivog pada fluorescentnog rezonantnog energetskog transfera.

[0597] Vezivanje jedinjenja iz pronalaska za bromodomene BRD2, BRD3, BRD4 i BRDT se procenjuje pomoću mutiranih proteina koristeći mutirane proteine za detekciju različitih vezivanja ili za vezivanje domena 1 (BD1) ili vezivanje domena 2 (BD2) na bromodomenu. Ove pojedinačne mutacije ostatka u acetil lizin položaju vezivanja značajno smanjuju afinitet fluoro-liganda (Referentno jedinjenje X) za mutirani domen (>1000 puta selektivan za nemutirani domen). Prema tome, u uslovima finalne analize, vezivanje fluoroliganda za mutirani domen ne može da se detektuje i potrebno je dodatno ispitivanje za određivanje vezivanja jedinjenja za pojedinačni ne-mutirani bromodomen.

[0598] Produkcija proteina: rekombinantni humani bromodomeni [(BRD2 (1-473) (Y113A) i (Y386A), BRD3 (1-435) (Y73A) i (Y348A) BRD4 (1-477) (Y97A) i (Y390A) i BRDT (1-397) (Y66A) i (Y309A)] se ekspresuju u ćelijama E. coli (u pET15b vektoru za BRD2/3/4 i u pET28a vektoru za BRDT) sa 6-His repićem na N-terminusu. Peleta His-obeleženog bromodomena se resuspenduje u 50mM HEPES (pH7.5), 300mM NaCl, 10mM imidazola i 1µl/ml koktela inhibitora proteaze i ekstrahuje iz ćelija E. coli sonikacijom a proteini

2 2

prečišćeni visoko efikasnom nikl sefaroza kolonom se isperu a nakon toga eluiraju sa linearnim gradijentom od 0-500mM imidazola sa puferom 50mM HEPES (pH7.5), 150mM NaCl, 500mM imidazola, preko 20 zapremina kolone. Finalno prečišćavanje se završi na Superdex 200 preparativnoj koloni sa razdvajanjem po veličini. Prečišćeni protein se čuva na -80°C u 20mM HEPES pH 7.5 i 100mM NaCl. Identitet proteina se potvrđuje masenim otiskom peptida a predviđena molekulska težina potvrđuje masenom spektrometrijom.

[0599] Protokol za analizu bromodomena BRD2, 3, 4 i T, BD1 BD2 mutanta: sve ispitivane komponente se rastvore u puferu koji se sastoji od 50 mM HEPES pH7.4, 50mM NaCl, 5% glicerola, 1mM DTT i 1mM CHAPS. Finalna koncentracija proteina bromodomena je 10nM a Alexa Fluor647 ligand je na Kd. Ove komponente se izmešaju i po 5µl ove reaktivne smeše se doda u sva udubljenja koja sadrže 50nl različitih koncentracija test jedinjenja ili DMSO vehikulum (0.5% DMSO finalno) u Greiner mikrotitarnim pločama sa 384 crna udubljenja male zapremine i inkubiraju 30 minuta bez svetlosti na rt. U sva udubljenja se doda po 5µl smeše za detekciju koja sadrži 1.5nM finalne koncentracije anti-6His Europium helata i ponovo ostavi najmanje 30 minuta da se inkubira bez svetlosti. Ploče se nakon toga očitaju na Envision čitaču ploča, (·ex = 317nm, donor ·em = 615nm; akceptor ·em = 665nm; Dichroic LANCE dual). Merenje vremena razdvajanja intenziteta fluorescencije se vrši na obe talasne dužine emisije a odnos akceptor/donor se izračuna i koristi za rezultate analize. Svi rezultati se usklađuju na prosek od 16 visokih (kontrola inhibitora - Primer 11 WO 2011/054846A1) i 16 niskih (DMSO) kontrolnih udubljenja na svakoj ploči. Nakon toga se nanese četiri parametarska kriva sledećeg oblika:

gde je ’a’ minimum, ’b’ je vrh nagiba, ’c’ je pIC50i ’d’ je maksimum.

[0600] Rezultati: svi Primeri, izuzev Primera 82, 92, 93, 271, 286 i 304, su testirani prethodnom analizom BRD4 i nađeno je da imaju prosečnu pIC50u rasponu od 4.5 do 8.0 u analizi BRD4 BD1 a prosečnu pIC50u rasponu od 4.4 do 7.2 u analizi BRD4 BD2, iziuzev Primera 21, 24, 48, 60 i 302 koji imaju pIC50<4.3 u analizi BRD4 BD2. Nađeno je da Primer 303 ima prosečnu pIC50od 7.3 u analizi BRD4 BD1 a prosečnu pIC50od 6.8 u analizi BRD4 BD2. Nađeno je da Primer 68 ima prosečnu pIC50od 6.6 u analizi BRD4 BD1 a prosečnu pIC50od 6.2 u analizi BRD4 BD2. Nađeno je da Primer 305 ima prosečnu pIC50od 7.3 u analizi BRD4 BD1 a prosečnu pIC50od 6.4 u analizi BRD4 BD2. Nađeno je da Primer 66 ima prosečnu pIC50od 6.7 u analizi BRD4 BD1 a prosečnu pIC50od 5.9 u analizi BRD4 BD2.

2

Nađeno je da edisilatna so Primera 303 ima prosečnu pIC50od 7.3 u analizi BRD4 BD1 a prosečnu pIC50od 6.6 u analizi BRD4 BD2.

Merenje LPS-om indukovane produkcije MCP-1 iz ukupne ljudske krvi

[0601] Aktivacija monocitnih ćelija agonistima receptora sličnih tolu, kao što je bakterijski lipopolisaharid (LPS), rezultira produkcijom ključnih inflamatornih medijatora uključujući MCP-1. Široko je rasprostranjeno mišljenje da su ovi putevi ključni za patofiziologiju brojnih auto-imunih i inflamatornih poremećaja. Krv se sakuplja u epruvete koje sadrže natrijum heparin (Leo Pharmaceuticals) (10 jedinica heparina/ml krvi). Pripreme se ploče sa 96 udubljenja koje sadrže 1 mL test uzorka u 100% DMSO (dva ponavljanja zbog promenljivosti donora). 130 µL ukupne krvi se prenese u svako udubljenje ploča za jedinjenje sa 96 udubljenja i inkubira 30 minuta na 37°C, uz 5% CO2.10 µL lipopolisaharida (od Salmonella typhosa; L6386) pripremljenog u PBS (200 ng/mL finalna koncentracija analize) se doda u svako udubljenje ploča sa jedinjenjem. Proče se nakon toga prenesu u inkubator primarnih ćelija sa regulisanom vlagom, na 37°C, u toku 18-24 sata sa 5% CO2.140 µL PBS se doda u svako udubljenje ploča za jedinjenje koje sadrže krv. Ploče se nakon toga zatvore i centrifugiraju 10 minuta na 2500 opm.25 µL supernatanta ćelija se prenese u MSD ploču sa 96 udubljenja prethodno prevučenih sa humanim MCP-1 vezujućeg antitela. Ploče se zatvore i stave 1 sat (rt) na šejker pri 600 opm.25 µL anti-humanog MCP-1 antitela obeleženog sa MSD SULFO-TAG™ reagensom se doda u svako udubljenje MSD ploče (osnovni rastvor 50X se razblaži 1:50 sa Diluent 100, finalna koncentracija analize je 1 µg/mL). Ploče se nakon toga ponovo zatvore i mućkaju naredni sat a zatim isperu sa PBS. 150 µL 2X MSD Read Buffer T (osnovni rastvor 4X MSD Read Buffer T se razblaži 50:50 sa dejonizovanom vodom) se nakon toga doda u svako udubljenje i ploče očitavaju na MSD Sector Imager 6000. Krive odgovora na koncentraciju za svako jedinjenje su generisane iz rezultata a pIC50vrednost se izračunava.

[0602] Rezultati: svi Primeri (izuzev Primera 2-11, 13, 15-36, 38-62, 65, 67, 69-79, 81-88, 90, 91, 93-94a, 95-99, 137-143, 145, 147, 150-156, 184-190, 192-210, 234-247, 271, 285-286, 288, 293, 301-302, 304, 310, 313 i 324) su testirani prethodnom analizom i nađeno je da imaju prosečnu pIC50u rasponu od 4.6 do 8.8. Primer 303 ima prosečnu pIC50od 7.6. Primer 68 ima prosečnu pIC50od 5.4. Primer 305 ima prosečnu pIC50od 8.0.

Primer 66 ima prosečnu pIC50od 6.0. Edisilatna so Primera 303 ima prosečnu pIC50od 7.5.

2 4

[0603] Ovi rezultati pokazuju da inhibitori bromodomena testirani u prethodnoj analizi ukupne krvi inhibiraju produkciju ključnog inflamatornog medijatora MCP-1.

Hidroliza sa hCES-1

[0604] Hidroliza BET inhibitora koji sadrži ESM sa karboksilesterazom 1 (CES1) je jedan aspekt oslobađanja ciljane molekule. Brzina hidrolize nekih jedinjenja iz pronalaska sa rekombinantnom humanom CES1 se određuje HPLC analizom. Rekombinantna humana CES1 (Gly18-Glu563, koja ima polihistidin repić na C-terminusu) ekspresovana u humanim ćelijama i prečišćena do monogenosti je dobijena od Novoprotein-a, Summit, New Jersey, USA (kataloški broj C450). Reakcije se izvode u pločama sa 384 udubljenja, na 20°C u puferu sa 50 mM natrijum fosfata pH 7.5 / 100 mM NaCl. U analizi se koristi fiksna koncentracija test jedinjenja (50 µM) i CES1 (50 nM) a vreme trajanja reakcije je dobijeno zaustavljanjem uzoraka dodavanjem mravlje kiseline više puta zbog snižavanja pH.

Zaustavljeni uzorci se zatim analiziraju sa HPLC da se odvoji produkt kiseline od nehidrolizovanog estra, pomoću 50 x 2 mm C185 µM reverzno-fazne kolone (Phenomenex Gemini) pri brzini protoka od 1 ml/min sa gradijentom acetonitril u vodi, koji sadrži 0.1% mravlje kiseline. Hromatografija se prati apsorpcijom na talasnoj dužini od 300 nm. % formiranog produkta se određuje pomoću oblasti integrisanog pika i koristi za određivanje inicijalne brzine reakcije. Specifična aktivnost CES1 na svako test jedinjenje pod ovim uslovima (u jedinicama od µM / min / µM) je dobijena deljenjem inicijalne brzine reakcije sa koncentracijom CES1. Rezultati: Primeri 1, 5, 13, 14, 98, 100, 102, 104, 109a, 110, 112, 116, 119, 120, 124, 125, 127, 128, 136, 139, 139a/b, 140, 141, 143, 146, 147, 155, 157, 159, 160, 168, 173, 181a, 184, 187, 189, 211, 219-222, 225a/b, 228, 228a/b, 229a/b, 230, 250, 258-259, 263, 268, 287, 289, 303 i 305 imaju brzinu hidrolize od 0.05 do 30.92 (µM test jedinjenja hidrolizovano po minutu po µM CES1) u prethodnoj analizi. Primer 303 ima prosečnu brzinu hidrolize 0.21 (n = 2) u prethodnoj analizi. Primer 305 ima prosečnu brzinu hidrolize 0.31 (n = 2) (µM test jedinjenje hidrolizovano po minutu po mM CES1) u prethodnoj analizi. Primeri 16, 138, 156, 212, 214, 216 i 162a su testirani, ali nije mogao da se odredi nivo hidrolize u ovoj analizi.

2

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenja formule (I) ili njegova so:

naznačeno time što R1i R2su svaki nezavisno vodonik ili metil grupa pod uslovom da je najmanje jedan od R1i R2metil grupa; R3je C1-6alkil, C1-6alkoksi, cikloalkil, heterocikloalkil ili -CHR5(CH2)aR6grupa; R4je vezan na položaju 5 ili 6 benzimidazola i predstavljen je kao

R5je vodonik, C1-3alkil, C1-3alkoksi ili -(CH2)dOR9grupa; R6je vodonik, C1-3alkil, C1-3alkoksi, -(CH2)eOR10, hidroksi, -NR11R12, halo, cikloalkil, heterocikloalkil, aril ili heteroaril grupa, gde navedena C1-3alkil, C1-3alkoksi, -(CH2)eOR10, cikloalkil, heterocikloalkil, aril ili heteroaril grupa može da bude opciono supstituisana sa jedan ili dva supstituenta nezavisno izabrana iz grupe koja sadrži C1-3alkil, C1-3alkoksi, halo, -CH2OH, -COOH i -COCH3grupu; R7je vodonik, C1-6alkil, -(CH2)gcikloalkil, -(CH2)hheterocikloalkil ili -CR13R14R15grupa; R8je vodonik, C1-6alkil, cikloalkil, heterocikloalkil ili -CHR16R17pri čemu je navedena C1- 2 6alkil grupa opciono supstituisana sa C1-3alkoksi grupom a pri čemu je R16vodonik ili C1- 3alkil grupa i R17je cikloalkil ili heterocikloalkil grupa; R9, R10, R11, R12, R14, R15i R18su svaki nezavisno vodonik ili C1-3alkil grupa; R13je vodonik, hidroksi, -CH2OR18, halo, -COOH, -CONH2, 1H-imidazol-4-il, -SH, -SeH, C1- 3alkil, C1-3alkoksi, fenil ili 4-hidroksifenil grupa, pri čemu navedena C1-3alkil ili C1-3alkoksi grupa može da bude opciono supstituisana sa halo, hidroksi, -NHC(=NH2)NH2, -NH2, -COOH, -CONH2ili -SCH3grupom; a je 0, 1, 2 ili 3; b je 0 ili 1; c je 1, 2 ili 3 uz uslov da kada je b 1, c je 2 ili 3; d i e su svaki nezavisno 1 ili 2; i g i h su svaki nezavisno 0, 1 ili 2.
2. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što su svaki R1i R2metil grupa.
3. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili patentnim zahtevom 2, naznačeno time što R3predstavlja 5 ili 6 članu heterocikloalkil ili -CHR5R6grupu pri čemu R5predstavlja vodonik ili C1-3alkil grupu a R6predstavlja 5 ili 6 članu heterocikloalkil grupu, gde navedena heterocikloalkil grupa može da bude opciono supstituisana sa C1-3alkil ili -COCH3grupom.
4. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 3, naznačeno time što je R6:
5. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 3 ili 4, naznačeno time što je R5vodonik.
6. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili 2, naznačeno time što je R3CHR5(CH2)aR6grupa, R5je -(CH2)dOR9grupa, a je 0 i R6je -(CH2)eOR10grupa.
7. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 6, naznačeno time što je b 0 a c je 1.
8. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 7, naznačeno time što R4predstavlja:
9. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 8, naznačeno time što je R7vodonik, metil, izopropil, sec-butil, izobutil, -CH2-fenil, -CH2-4-hidroksifenil, -CH2OH, -CH(CH3)OH, -CH2SH, -CH2SeH, -(CH2)2SCH3, -CH2COOH, -(CH2)2COOH, -CH2CONH2, -(CH2)2CONH2, -(CH2)4NH2, -(CH2)3NHC(=NH2)NH2ili -CH2-1H-imidazol-4-il grupa.
10. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 9, naznačeno time što je R7-CH(CH3)OH grupa.
11. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 8, naznačeno time što je R8izopropil, izobutil ili ciklopentil grupa.
12. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je izabrano iz grupe koja sadrži: terc-butil (2S,3R)-2-{[(1-{[(3R)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-6-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat; terc-butil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol- 6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat; 2-metilpropil (2S)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]oksi}etil)amino]-3-hidroksibutanoat; 2-metilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3S)-oksan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat; 2 terc-butil (2S,3R)-2-{[(1-{[(3R)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat; propan-2-il (2S,3R)-2-{[(1-{[(3R)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat; 2-metilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-3-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat; ciklopentil (2S)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]oksi}etil)amino]propanoat; propan-2-il (2S)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]oksi}etil)amino]-3-hidroksibutanoat; propan-2-il (2S,3R)-2-{[(1-{[(3R)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-6-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat; propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3R)-oksan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat; ciklobutil (2S,3R)-2-{[(1-{[(3R)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat; propan-2-il (2S)-2-{[(1-{[(3R)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-5-il)metil]amino}-3-metilbutanoat; ciklopentil (2S)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]oksi}etil)amino]-3-metoksipropanoat; 2,2-dimetilpropil (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat; propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3R)-oksan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat; ciklobutil (2S,3R)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]oksi}etil)amino]-3-hidroksibutanoat; ciklopentil (2S)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-6-il]oksi}etil)amino]propanoat; propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-3-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat; propan-2-il (2S,3R)-2-{[(1-{[(3S)-1-acetilpiperidin-3-il]metil}-2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1H-1,3-benzodiazol-6-il)metil]amino}-3-hidroksibutanoat; 2 propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3R)-oksan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat; propan-2-il (2S,3R)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3R)-oksan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-5-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat; ciklobutil (2R,3S)-2-({[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-[(3R)-oksan-3-ilmetil]-1H-1,3-benzodiazol-6-il]metil}amino)-3-hidroksibutanoat; i (3S)-oksolan-3-il (2S,3R)-2-[(2-{[2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-(oksan-4-ilmetil)-1H-1,3-benzodiazol-5-il]oksi}etil)amino]-3-hidroksibutanoat, ili njihovu so.
13. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoat, formule:

ili njegova so.
14. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to (2S,3R)-2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatna kiselina, formule:

2 ili njegova so.
15. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 14, naznačeno time što je jedinjenje u obliku farmaceutski prihvatljive soli.
16. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to (2S,3R)-izopropil 2-(((2-(1,5-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)amino)-3-hidroksibutanoatna so 1,2-etandisulfonske kiseline formule:
17. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 16, naznačeno time što je jedinjenje u suštini u kristalnom obliku i karakteriše se time što ima značajne pikove difrakcije X-zraka praška (XRPD) za 2θ vrednosti, ± 0.1° 2θ eksperimentalne greške, od 5.4, 8.8, 9.9, 11.6, 13.8, 16.9, 18.0, 16.6, 19.1, 19.4, 19.8, 20.4, 20.9, 21.3, 22.0, 22.4, 22.9, 23.4, 24.9 i 25.1 stepeni.
18. Farmaceutska kompozicija naznačena time što uključuje jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 17 i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata.
19. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 17, naznačeno time što je za upotrebu u terapiji.
20. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 17, naznačeno time što je za upotrebu u tretmanu reumatoidnog artritisa. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 2 1