RS59557B1 - Tau antitela i njihova upotreba - Google Patents

Tau antitela i njihova upotreba

Info

Publication number
RS59557B1
RS59557B1 RS20191467A RSP20191467A RS59557B1 RS 59557 B1 RS59557 B1 RS 59557B1 RS 20191467 A RS20191467 A RS 20191467A RS P20191467 A RSP20191467 A RS P20191467A RS 59557 B1 RS59557 B1 RS 59557B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
tau
seq
monoclonal antibody
amino acid
acid sequence
Prior art date
Application number
RS20191467A
Other languages
English (en)
Inventor
Alberto Alvarado
David Driver
Mansuo Lu Hayashi
Jirong Lu
Original Assignee
Lilly Co Eli
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lilly Co Eli filed Critical Lilly Co Eli
Publication of RS59557B1 publication Critical patent/RS59557B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10—Organic compounds
    • A61K49/14—Peptides, e.g. proteins
    • A61K49/16—Antibodies; Immunoglobulins; Fragments thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • A01K2267/0306—Animal model for genetic diseases
    • A01K2267/0318—Animal model for neurodegenerative disease, e.g. non- Alzheimer's
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0007—Nervous system antigens; Prions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0058—Antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1018—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4711—Alzheimer's disease; Amyloid plaque core protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
    • G01N2800/2821—Alzheimer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/56—Staging of a disease; Further complications associated with the disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/80—Antibody or fragment thereof whose amino acid sequence is disclosed in whole or in part

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

Opis
[0001] Ovaj pronalazak je iz polja medicine. Preciznije, ovaj pronalazak se odnosi na antitela za tau, na kompozicije koje uključuju ova tau antitela i postupke za upotrebu ovih tau antitela za tretman neurodegenerativnih bolesti uključujući Alzheimer-ovu bolest (AD), progresivnu supranuklearnu paralizu (PSP) i Pikovu bolest (PD).
[0002] Tau je mikrotubularni vezujući protein aksona koji promoviše sklapanje i stabilnost mikrotubule. AD i PSP su neurodegenerativne bolesti koje patološki karakteriše nenormalna agregacija tau. Još preciznije, kod AD i PSP, veruje se da hiperfosforilisani tau dovodi do agregacije nerastvornog tau fibrila što za posledicu ima destabilizaciju mikrotubula i neuronalnu toksičnost. Ćelijska kultura i studije modela miševa su pokazale tau agregate rasprostranjene kroz čvorove neuronske sinapse i sekvestar monomernog (prirodan ili nenagomilan) tau, indukujući formiranje tau agregata. Neuroanatomska progresija agregacije i akumulacije tau kod neurodegenerativnih bolesti kao što su AD i PSP, ukazuje da se agregacija tau fibrila širi duž mreže neurona, što na kraju dovodi do destabilizacije mikrotubula i do lokalizovanog oštećenja neuronalne funkcije.
[0003] Gustina i neuroanatomska lokalizacija tau agregacije je u snažnoj korelaciji sa AD i PSP neurološkim simptomima i progresijom bolesti. Na primer, u AD, tau formira intraneuronsku neurofibrilarnu klubad (NFTs), koja imaju tendenciju da se razvijaju po redu od transentorinalnih, do limbičnih i neokortikalnih regiona i u korelaciji su sa teškom demencijom i stepenom gubitka neurona. Kod PSP, tau agregacija se vidi u neuronima, astrocitima i oligodendrocitima unutar subkortikalnih i kortikalnih regiona, a pokazano je da je gustina nataloženih tau u korelaciji sa ozbiljnim gubitkom neurona.
[0004] Antitela za tau su poznata. Na primer, U.S. Patent No.8,926,974, i Internacionalne publikacije broj WO2011/026031, WO2012/049570 i WO2013/050567 otkrivaju antitela za tau i upotrebu tau antitela u tretmanu neurodegenerativnih bolesti kao što je AD. WO 2014/100600 opisuje humana tau-specifična antitela i njihovu upotrebu u farmaceutskim kompozicijama za opis i dijagnostiku.
[0005] WO 2014/059442 opisuje antitela koja specifično prepoznaju oligomerne tau ali se ne vezuju za monomelni tau, fibrilarni tau ili nepromenjene oblike tau.
[0006] WO 2012/149365 opisuje antitela selektivna za patološke tau dimere i njihovu upotrebu u tretmanu, dijagnozi i praćenju taupatija.
[0007] D.L. Castillo-Carranza i saradnici, "Passive Immunization with Tau Oligomer Monoclonal Antibody Reverses Tauopathy Phenotypes without Affecting Hyperphosphorylated Neurofibrillary Tangles", Vol. 34, no.12, 19 March 2014, stranice 4260-4272 opisuju pasivnu imunizaciju sa tau oligomer monoklonalnim antitelom.
Razmatraju ulogu tau oligomera u progresiji bolesti i validaciji tau oligomera kao cilja za tretman Alzheimer-ove bolesti.
[0008] Međutim, do danas nije odobreno ni jedno antitelo koje je usmereno ka tau za terapeutsku upotrebu i trenutno nema odobrenih terapija za AD ili PSP koje modifikuju bolest. Prema tome, postoji potreba za alternativnim tau antitelima. Preciznije, postoji potreba za alternativnim tau antitelima koja specifično vezuju tau agregate i koja smanjuju napredovanje formiranja tau agregata, formiranje NFT i gubitak neurona.
Ovakva tau antitela preferirano takođe poseduju dobre fiziko-hemijske osobine koje omogućavaju razvoj, proizvodnju i/ili formulacije.
[0009] Ovaj pronalazak obezbeđuje monoklonalno antitelo koje vezuje humani tau i koji uključuje promenljivi region lakog lanca (LCVR) i promenljivi region teškog lanca (HCVR), pri čemu LCVR uključuje komplementarno određujuće regione (CDRe) LCDR1, LCDR2 i LCDR3 a HCVR uključuje CDRe HCDR1, HCDR2 i HCDR3. U skladu sa određenim ostvarenjima iz ovog pronalaska, sekvenca amino kiseline za LCDR1 je data sa SEQ ID NO.3, sekvenca amino kiseline za LCDR2 je data sa SEQ ID NO.4, sekvenca amino kiseline za LCDR3 je data sa SEQ ID NO.5, sekvenca amino kiseline za HCDR1 je data sa SEQ ID NO.6, sekvenca amino kiseline za HCDR2 je data sa SEQ ID NO.7 i sekvenca amino kiseline za HCDR3 je data sa SEQ ID NO.8.
[0010] U skladu sa prvim aspektom, ovaj pronalazak obezbeđuje monoklonalno antitelo koje vezuje humani tau, uključujući LCVR i HCVR, pri čemu je sekvenca amino kiseline za LCVR data sa SEQ ID NO.9 a sekvenca amino kiseline za HCVR je data sa SEQ ID NO. 10. U narednom ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje monoklonalno antitelo koje vezuje humani tau, uključujući laki lanac (LC) i teški lanac (HC), pri čemu je sekvenca amino kiseline za LC data sa SEQ ID NO.1 a sekvenca amino kiseline za HC je data sa SEQ ID NO.2.
[0011] Ovaj pronalazak obezbeđuje monoklonalno antitelo koje vezuje humani tau. U jednom ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje monoklonalno antitelo koje vezuje konformacijski epitop humanog tau. U posebnom ostvarenju, konformacijski epitop humanog tau uključuje ostatke amino kiselina 7-9 i 312-322 humang tau, pri čemu je sekvenca amino kiseline humanog tau data sa SEQ ID NO.13.
[0012] Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje uključuju monoklonalno antitelo iz ovog pronalaska i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili podloga. Dalje, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje AD, PSP ili PD koji uključuje primenu farmaceutske kompozicije iz ovog pronalaska na pacijentu kome je to potrebno.
[0013] Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje neurodegenerativnih bolesti. Još preciznije, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje AD, PSP ili PD koji uključuje primenu efektivne količine monoklonalnog antitela iz ovog pronalaska na pacijentu kome je to potrebno.
[0014] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje monoklonalno antitelo iz ovog pronalaska za upotrebu u terapiji. Još preciznije, ovaj pronalazak takođe obezbeđuje monoklonalno antitelo iz ovog pronalaska za upotrebu u tretmanu AD, PSP ili PD.
[0015] U jednom ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu monoklonalnog antitela iz ovog pronalaska u proizvodnji medikamenta za tretman AD, PSP ili PD.
[0016] Ovaj pronalazak se takođe odnosi na molekule nukleinskih kiselina i vektore ekspresije koji enkodiraju monoklonalno antitelo iz ovog pronalaska. U jednom ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje molekulu DNK koja uključuje sekvencu polinukleotida enkodirajući polipeptid koji ima sekvencu amino kiseline za SEQ ID NO.1, i koja uključuje sekvencu polinukleotida enkodirajući polipeptid koji ima sekvencu amino kiseline za SEQ ID NO.2. U posebnom ostvarenju, sekvenca polinukleotida koja enkodira polipeptid sa sekvencom amino kiseline za SEQ ID NO.1 je data sa SEQ ID NO.11 a sekvenca polinukleotida koja enkodira polipeptid sa sekvencom amino kiseline za SEQ ID NO.2 je data sa SEQ ID NO.12.
[0017] U skladu sa narednim aspektom ovog pronalaska, obezbeđena je ćelija sisara koja uključuje molekulu DNK iz ovog pronalaska pri čemu je ćelija sposobna za ekspresiju monoklonalnog antitela uključujući laki lanac koji ima sekvencu amino kiseline za SEQ ID NO: 1 i teški lanac koji ima sekvencu amino kiseline za SEQ ID NO: 2.
[0018] Dalje, ovaj pronalazak obezbeđuje monoklonalno antitelo izrađeno u skladu sa procesom, pri čemu taj proces uključuje kultivaciju ćelije domaćina koja uključuje sekvencu polinukleotida koja enkodira polipeptid sa sekvencom amino kiseline za SEQ ID NO.1 i sekvencu polinukleotida koja enkodira polipeptid sa sekvencom amino kiseline za SEQ ID NO.2, pod takvim uslovima da se ekspresuje monoklonalno antitelo i iz te ćelije domaćina povrati monoklonalno antitelo koje uključuje LC i HC, pri čemu je sekvenca amino kiseline za LC data sa SEQ ID NO.1 a sekvenca amino kiseline za HC je data sa SEQ ID NO.2.
[0019] U skladu sa daljim aspektom ovog pronalaska, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja uključuje monoklonalno antitelo u skladu sa ovim pronalaskom i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili podloga.
[0020] U skladu sa narednim aspektom ovog pronalaska, obezbeđeno je monoklonalno antitelo u skladu sa ovim pronalaskom za upotrebu u terapiji.
[0021] Prefirirano, monoklonalno antitelo iz ovog pronalaska je za upotrebu u tretmanu bolesti izabranih od Alzheimer-ove bolesti, progresivne supranuklearne paralize i Pikove bolesti.
[0022] Kako se ovde koristi, "antitelo" je molekula imunoglobulina koja uključuje 2 HCa i 2 LCa međusobno vezana disulfidnim vezama. Deo amino terminusa LC i HC uključuje promenljivi region od približno 100-120 amino kiselina primarno odgovornog za prepoznavanje antigena preko CDRs sadržane u njemu. CDRs su isprekidani sa regionima koji su više očuvani, označeni kao okvirni regioni ("FR"). Svaki LCVR i HCVR je sastavljen od 3 CDRa i 4 FRa, raspoređenih od amino-terminusa do karboksiterminusa po sledećem redu: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 3 CDRa za LC su označeni kao "LCDR1, LCDR2 i LCDR3," a 3 CDRa za HC su označeni kao "HCDR1, HCDR2 i HCDR3." CDRi sadrže najviše ostataka koji formiraju specifične interakcije sa antigenom. Funkcionalna sposobnost antitela da vezuje određeni antigen je u velikoj meri pod uticajem šest CDRa. Raspored amino kiselina za CDR domene u okviru LCVR i HCVR regiona antitela iz ovog pronalaska je zasnovan na dobro poznatoj Kabat-ovoj konvenciji numeracije (Kabat, i saradnici, Ann. NY Acad. Sci.190:382-93 (1971); Kabat i saradnici, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 (1991)) i North-ovoj konvenciji numeracije (North i saradnici, A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations, Journal of Molecular Biology, 406:228-256 (2011)).
[0023] LCi su klasifikovani kao kapa ili lambda, koji se svaki karakteriše određenim konstantnim regionom, kako je poznato u tehnici. Monoklonalna antitela iz ovog pronalaska uključuju kapa LCe. HCi su klasifikovani kao gama, mu, alfa, delta ili epsilon i definišu izotop antitela kao IgG, IgM, IgA, IgD ili IgE, tim redom. Monoklonalna antitela iz ovog pronalaska uključuju IgG HCs. IgG antitela mogu dalje da se dele u subklase, to jest, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4. U određenom ostvarenju, monoklonalna antitela iz ovog pronalaska su IgG4. Deo karboksi terminusa svakog HC određuje konstantni region primarno odgovoran za efektorsku funkciju. U posebnom ostvarenju, monoklonalna antitela iz ovog pronalaska imaju jednu ili više modifikacija u konstantnom regionu svakog HC što smanjuje efektorsku funkciju. U posebnom ostvarenju, monoklonalna antitela iz ovog pronalaska su IgG4 i imaju modifikacije u konstantnom regionu oba HCa što smanjuje efektorsku funkciju uključujući amino kiselinu alanin na oba ostatka 230 i 231 (ostatak numerisan na bazi primera HC za SEQ ID NO.2). U čak još jednom posebnom ostvarenju, monoklonalna antitela iz ovog pronalaska su IgG4 i imaju modifikacije u konstantnom regionu oba HCa što smanjuje efektorsku funkciju uključujući amino kiselinu alanin na oba ostatka 230 i 231 i dalje imaju modifikacije u konstantnom regionu oba HCa koje promovišu stabilnost, uključujući amino kiselinu prolin na ostatku 224 i odbacivanje amino kiseline lizin na ostatku 443 (ostatak numerisan na osnovu primera HC za SEQ ID NO.2).
[0024] Antitela iz ovog pronalaska su monoklonalna antitela ("mAba"). mAba iz ovog pronalaska su potpuni mAba koji sadrže 2 HCa i 2 LCa. Kako je ovde navedeno, mAba su antitela dobijena iz jedne kopije ili klona uključujući, na primer, bilo koji eukariotični, prokariotični ili fag klon a ne postupak kojim su dobijeni. Monoklonalna antitela mogu da se dobiju, na primer, tehnologijama hibridoma, rekombinantnim tehnologijama, tehnologijama prikaza faga, tehnologijama sinteze, na primer, CDR-grafting ili kombinacijama ovih ili drugih tehnologija poznatih u tehnici.
[0025] Postupci produkcije i prečišćavanja antitela su dobro poznati u tehnici i mogu da se nađu, na primer, u Harlow and Lane (1988), Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring harbor, N.Y., poglavlja 5-8 i 15, ISBN 087969-314-2. Na primer, miševi mogu da se imunizuju sa humanim tau uparenim spiralnim filamentima ("PHF") iz tkiva mozga pacijenata za koje je potvrđeno da imaju AD (Jicha i saradnici, J. Neurosci. Res., 15:48(2), 128-132 (April, 1997)) a dobijena antitela mogu da se povrate, prečiste i odrede sekvence amino kiselina pomoću uobičajenih postupaka dobro poznatih u tehnici. Monoklonalna antitela iz ovog pronalaska su izrađena tako da sadrže jedan ili više humanih okvirnih regiona koji okružuju CDRe dobijene od ne-humanog antitela. Humani okvir sekvenci klica može da se dobije od ImMunoGeneTics (INGT) preko njihove internet adrese, http://imgt.cines.fr, ili od The Immunoglobulin FactsBook by Marie-Paule Lefranc and Gerard Lefranc, Academic Press, 2001, ISBN 012441351. U skladu sa određenim ostvarenjima ovog pronalaska, dati okvir klice HC i regioni LC okvira za upotrebu u monoklonalnim antitelima iz ovog pronalaska uključuju 5-51 and A27, tim redom.
[0026] U posebnim ostvarenjima iz ovog pronalaska, antitelo ili nukleinska kiselina koja ga enkodira, je dobijeno u izolovanom obliku. Kako se ovde koristi, naziv "izolovan" se odnosi na protein, peptid ili nukleinsku kiselinu koja je oslobođena ili skoro potpuno oslobođena od drugih makromolekularnih vrsta nađenih u ćelijskom okruženju.
[0027] Monoklonalna antitela iz ovog pronalaska mogu da se izrade i prečiste poznatim postupcima. Na primer, cDNK sekvence koje enkodiraju HC (na primer sekvenca amino kiseline dobijena od SEQ ID NO.2) i LC (na primer, sekvenca amino kiseline dobijena od SEQ ID NO.1) mogu da se kloniraju i izrade u GS (glutamin sintetaza) vektoru ekspresije. Izrađeni vektor ekspresije imunoglobulina može nakon toga da se stabilno transfektuje u CHO ćelije. Kao što će stručnjak sa iskustvom u tehnici da shvati, ekspresija antitela sisara će da dovede do glikozilacije, obično na visoko očuvanim položajima N-glikozilacije u Fc regionu. Stabilni klonovi mogu da budu verifikovani za ekspresiju antitela koje se specifično vezuje za tau agregate. Pozitivni klonovi mogu da se šire u medijumu za kulturu bez seruma za produkciju antitela u bioreaktorima. Medijum, u kome se antitelo izlučuje, može da se prečisti uobičajenim tehnikama. Na primer, medijum može uobičajeno da se nanese na Protein A ili G sefaroza FF kolonu koja je uravnotežena sa kompatibilnim puferom, kao što su puferi fosfatnih soli. Kolona se ispere da se uklone nespecifične vezujuće komponente. Vezano antitelo se eluira, na primer, pomoću pH gradijenta a frakcije antitela se detektuju, na primer SDS-PAGE i nakon toga izvuku. Antitelo može da se koncentruje i/ili filtrira pod sterilnim uslovima koristeći uobičajene tehnike. Rastvorljivi agregat i multimeri mogu efikasno da se uklone uobičajenim tehnikama, uključujući razdvajanje po veličini, hidrofobnu interakciju, izmenu jona ili hromatografiju puferovane vodene suspenzije. Produkt može odmah da se zamrzne, na primer na -70°C ili može da se liofilizira.
[0028] Monoklonalna antitela iz ovog pronalaska mogu da se koriste u tretmanu pacijenata. Još preciznije, od antitela iz ovog pronalaska se očekuje da leče grupu neurodegenerativnih poremećaja nazvanih taupatije, u koje spadaju AD, PSP i PD. Mada se od monoklonalnih antitela iz ovog pronalaska očekuje da budu korisna u tretmanu AD, PSP i PD, ova antitela mogu takođe da budu korisna u tretmanu drugih taupatija, uključujući hroničnu traumatičnu encefalopatiju. Kako se ovde koriste sa istim značanjem, "tretman" i/ili "lečenje" i/ili "lečiti" treba da se odnose na sve procese u kojima mogu da uspore, ometu, blokiraju, kontrolišu, zaustave ili povrate napredovanje ovde opisanih poremećaja, ali ne mora da ukaže na potpunu eliminaciju svih simptoma poremećaja. Tretman obuhvata primenu antitela iz ovog pronalaska za lečenje bolesti ili stanja kod ljudi koji bi imali korist od smanjenja napredovanja formiranja bar jednog tau agregata, formiranja NFT i gubitka neurona i obuhvata: (a) inhibiciju dalje progresije bolesti, to jest, zaustavljanje njenog širenja; i (b) slabljenje bolesti, to jest, izazivanje regresije bolesti ili poremećaja ili ublažavanja simptoma ili njihovih komplikacija.
[0029] Kako se ovde naizmenično koristi, naziv "pacijent," "subjekt," i "pojedinac" se odnosi na ljude. U nekim ostvarenjima, pacijent se dalje karakteriše preko bolesti, poremećaja ili stanja (na primer, neurodegenerativni poremećaj) i koji bi imao koristi od redukcije u širenju formiranja najmanje jednog tau agregata, formiranja NFT i gubitka neurona. U narednom ostvarenju, pacijent se dalje karakteriše postojanjem rizika od razvoja neurodegenerativnog poremećaja, bolesti ili stanja i koji bi imao koristi od redukcije u širenju formiranja najmanje jednog tau agregata, formiranja NFT i gubitka neurona.
[0030] Kako se ovde koristi, naziv "veza (ili veze)" tau se odnosi na interakciju antitela sa epitopom humanog tau agregata. Još preciznije, epitop je konformacijski epitop humanog tau. U jednom određenom ostvarenju, naziv "veza (ili veze)" tau se odnosi na interakciju sa konformacijskim epitopom uključujući ostatke amino kiseline 7-9 i 312-322 humanog tau agregata (označavanje ostatka na bazi primera humanog tau iz SEQ ID NO.13). Treba da se razume da su poznate varijacije humanog tau proteina, na primer koje su rezultat spajanja varijanti. Ovakve poznate varijacije, međutim, poseduju konformacioni epitop uključujući ostatke amino kiseline 7-9 i 312-322 za SEQ ID NO.13. Međutim, poznate varijante mogu da rezultiraju u izmenjenom označavanju ostatka amino kiseline 7-9 i 312-322 za SEQ ID NO.13. Mada označavanje ostatka može da bude izmenjeno u nekim varijantama, amino kiseline koje uključuju epitop ostaju iste. Naziv "epitop" kako se ovde koristi, odnosi se na izolovana trodimenzionalna mesta antigena koja monoklonalna antitela iz ovog pronalaska prepoznaju.
[0031] Monoklonalno antitelo iz ovog pronalaska može da se inkorporira u farmaceutsku kompoziciju koja se izrađuje postupcima dobro poznatim u tehnici i koja uključuje monoklonalno antitelo iz ovog pronalaska i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača i/ili razblaživača. (na primer, Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, Loyd V., Ed., Pharmaceutical Press, 2012, koji obezbeđuje sažetak tehnika formulisanja koje su generalno poznate u praksi). Pogodni nosači za farmaceutske kompozicije uključuju bilo koji materijal koji, kada se kombinuje sa monoklonalnim antitelom iz ovog pronalaska, zadržava aktivnost molekula i ne utiče na imuni sistem pacijenta.
[0032] Farmaceutska kompozicija koja uključuje monoklonalno antitelo iz ovog pronalaska može da se primeni parenteralnim načinom (na primer, subukutano, intravenozno, intraperitonealno, intramuskularno ili transdermalno) na pacijentu kod koga postoji rizik ili kod koga su ispoljene bolesti ili poremećaji kako je ovde opisano. Farmaceutska kompozicija iz ovog pronalaska sadrži "efektivnu" ili "terapeutski efektivnu" količinu, kako se ovde naizmenično koriste, monoklonalnog antitela iz ovog pronalaska. Efektivna količina se odnosi na količinu neophodnu (u dozama i za vremenski period i za način primene) da se postigne traženi terapeutski rezultat.
Efektivna količina monoklonalnog antitela može da varira u zavisnosti od faktora kao što su stanje bolesti, godine, pol i težina pojedinca i sposobnosti monoklonalnog antitela da izazove željeni odgovor kod pojedinca. Efektivna količna je takođe ona kod koje su bilo koji toksični ili ograničavajući efekti za monoklonalno antitelo iz ovog pronalaska manji od terapeutski korisnih efekata.
Projektovanje tau antitela
[0033] Pri konstrukciji monoklonalnog antitela iz ovog pronalaska su se pojavili značajni problemi povezani sa hemijskom i fizičkom stabilnošću. Ispoljeni problemi obuhvataju nizak afinitet vezivanja, imunogeničnost, agregaciju, HC dimerizaciju, kao i deamidaciju, oksidaciju, izomerizaciju i pogrešno presavijanje promenljivog regiona.
[0034] Na primer, mišje IgG1 antitelo MC-1 ("MC-1") (Albert Einstein College of Medicine, Jicha i saradnici, 1997), koje prepoznaje konformacioni epitop tau proteina na ostacima amino kiselina 7-9 i 312-322 (numeracija ostatka na osnovu primera humanog tau proteina koji ima sekvencu amino kiselina za SEQ ID NO.13), je inicijalno humanizovano izradom tri MC-1 mišjih HC CDRa u višestrukim humanim HC okviru čitanja gena germitivne ćelije i tri MC- 1 mišjih LC CDRa u višestrukom humanom LC okviru čitanja germitivnih gena. Humanizovane konstrukcije MC-1 koriste 96 različitih kombinacija okvira čitanja teškog i lakog lanca, predstavljajući svaki od dvanaest HC okvira čitanja familija germitivnih ćelija (specifični humani HC okviri čitanja: 1-24, 1-46, 1-69, 2-05, 3-15, 3-23, 3-53, 3-72, 4-04, 4-39, 5-51 i 6-01) i svaki od osam LC familija germitivnih ćelija (specifični humani HC okviri čitanja: A-26, A-27, B-2, B-3, L-2, L-12, O11 i O-2). Odgovarajući okviri čitanja gena germitivnih ćelija su klonirani u teškom i lakom lancu vektora ekspresije humanog IgG4 i transfektovani u HEK293 ćelije za ekspresiju i analizu vezivanja pomoću ELISA testa. Mada višestruki okviri čitanja parova pokazuju određeni stepen vezivanja za humani tau u ELISA, dobijene kontrukcije antitela pokazuju mnogo problema, uključujući slab afinitet vezivanja, agregaciju, HC dimerizaciju i probleme hemijske stabilnosti kao što su deamidacija, oksidacija i izomerizacija varijabilnih regiona.
[0035] Zbog toga su projektovane modifikacije za razvoj tau antitela koja poseduju poboljšan afinitet vezivanja, eliminišu ili redukuju HC dimerizaciju, redukuju imunogeničnost i poboljšavaju hemijsku i fizičku stabilnost. Modifikacije amino kiselina (u odnosu na MC-1, Jicha i saradnici, 1997) su projektovane u HCDR2 i HCDR3 i LCDR1, LCDR2 i LCDR3. Modifikovano mišje antitelo je humanizovano projektovanjem tri HC CDRa u višestrukom humanom HC okviru čitanja gena germitivnih ćelija i tri LC CDRa u višestrukom humanom LC okviru čitanja gena germitivnih ćelija potpuno kako je prethodno opisano. Dalje, izvedene su opsežne studije stabilnosti proteina a projektovana monoklonalna antitela su proveravana na ekspresiju i osobine termostabilnosti kao i na osobine afiniteta vezivanja. Monoklonalno antitelo koje sadrži sedam CDR mutacija (položaj amino kiselina je zasnovan na numerisanju linearnog ostatka amino kiselina navedenog anititela iz ovog pronalaska datog u Tabeli 1: HCDR2 za N61E i E62K; HCDR3 za P103V i Y105D; LCDR1 za G34Q; LCDR2 za S57D; i LCDR3 za H98L) je identifikovano da poboljšava afinitet vezivanja, hemijsku i fizičku stabilnost i imunogeničnost za monoklonalna antitela iz ovog pronalaska (u odnosu na MC-1, Jicha i saradnici, 1997). Ni jedna od gore navedenih modifikacija nije identifikovana u karakterizaciji MC-1 konstrukcijama humanizovanog MC-1 antitela.
[0036] Primer konstruisanog tau monoklonalnog antitela iz ovog pronalaska je prikazan u Tabeli 1. Primer konstruisanog monoklonalnog anititela uključuje humani HC okvir čitanja 5-51 i humani LC okvir čitanja A27. Odnos različitih regiona primera konstruisanog tau monoklonalnog antitela je kako sledi (numerisanje amino kiselina se odnosi na linearno numerisanje; razvrstavanje amino kiselina za varijabilne domene je zasnovano na International Immunogenetics Information System® raspoloživ na adresi www.imgt.org; dodeljivanje amino kiselina za CDR domene je zasnovano na dobro poznatoj North konvenciji numeracije, izuzev za HCDR2 koji se zasniva na dobro poznatoj Kabat konvenciji numeracije):
Tabela 1: regioni amino kiselina primera konstruisanog tau monoklonalnog antitela iz ovog pronalaska.
[0037] Niže dati primeri i ispitivanja pokazuju da su monoklonalna antitela iz ovog pronalaska korisna u lečenju neurodegenerativnih poremećaja povezanih sa širenjem tau agregata kao što su AD, PSP ili PD. Međutim, treba razumeti da su niže dati Primeri samo ilustracija a ne ograničenje i da stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici može da izradi brojne modifikacije.
Primeri
Ekspresija projektovanog tau antitela
[0038] Projektovana tau monoklonalna antitela iz ovog pronalaska mogu da se ekspresuju i prečiste u potpunosti kako sledi. Vektor ekspresije glutamin sintetaze (GS) koji sadrži DNK sekvencu SEQ ID NO.11 (enkodira sekvencu LC amino kiseline SEQ ID NO.1) i DNK sekvencu SEQ ID NO.12 (enkodira sekvencu HC amino kiseline SEQ ID NO.2) se koristi za transfekciju ćelijske linije ovarijuma kineskog hrčka (CHO) elektroporacijom. Vektor ekspresije enkodira SV Early (Simian Virus 40E) promotor i gen za GS.
Ekspresija GS dozvoljava biohemijske sinteze glutamina, tražene amino kiseline od strane CHO ćeija. Nakon transfekcije, ćelije se podvrgavaju selekciji najvećeg dela sa 50µM L-metionin sulfoksiimina (MSX). Inhibicija GS sa MSX se koristi za pojačanje uverljivosti izbora. Ćelije sa integracijom vektora ekspresije cDNK u transkripcionim aktivnim regionima genoma ćelije domaćina mogu da se selektuju prema CHO ćelijama izvornog tipa, u kojima se ekspresuje endogeni nivo GS. Transfektovane količine se nanesu u maloj gustini da se omogući skoro pa klonalni izdanak stabilnih ćelija ekspresije. Neklonalne ćelijske populacije se proveravaju na ekspresiju antitela a nakon toga se uvećavaju u suspenziji kultura bez seruma zbog korišćenja za produkciju.
Izbistreni medijum, u kome je izlučeno antitelo, se nanese na Protein A kolonu afiniteta koja je uravnotežena sa kompatibilnim puferom, kao što je pufer fosfatnih soli (pH 7.4). kolona se ispere sa 1M NaCl da se uklone nespecifične vezujuće komponente. Vezano tau monoklonalno antitelo se eluira, na primer, sa natrijum citratom pri pH (priblićžno) 3.5 a frakcije se neutrališu sa 1M Tris puferom. Frakcije tau monoklonalnog antitela se detektuju, na primer pomoću SDS-PAGE ili analitičkim razdvajanjem po veličini a nakon toga se sakupe. Rastvorljivi agregat i multimeri mogu efikasno da se uklone uobičajenim tehnikama, uključujući razdvajanje po veličini, hidrofobnu interakciju, izmenu jona ili hidroksiapatitnu hromatografiju. Tau monoklonalno antitelo iz ovog pronalaska se koncentruje i/ili filtrira pod sterilnim uslovima koristeći uobičajene tehnike. Čistoća tau monoklonalnog antitela nakon ovih faza hromatografije je veća od 95%. Tau monoklonalno antitelo iz ovog pronalaska može trenutno da se zamrzne na -70°C ili čuva na 4°C nekoliko meseci.
Kinetike i afinitet vezivanja
[0039] Analiza površinske plazmonske rezonance (SPR), mereno sa BIACORE® 2000 instrumentom (pripremljenim sa HBS- EP+ puferom protoka (GE Healthcare, 10 mM Hepes pH7.4 150 mM NaCl 3 mM EDTA 0.05% surfaktant P20) na 25°C), se koristi za merenje vezivanja primera tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 i za humani monomerni (na primer, nativni ili nespojeni) tau i za humane tau agregate (od kojih oba imaju sekvencu amino kiseline kako je podešeno u SEQ ID NO:13). Vezivanje sklopa humanizovanog MC-1 antitela (koje ima kombinaciju radnog okvira: 5-51 teški lanac, A27 laki lanac) za humani monomerni tau i agregat humanog tau se meri na isti način.
[0040] Osim kako je dato, svi reagensi i materijali su nabavljeni od BIACORE® AB (Upsala, Sweden). CM5 čip koji sadrži imobilizovani protein A (generisan pomoću standardnog NHS-EDC udvajanja amina) na sve četiri protočne citometrije (FC) se koristi da se primeni metodologija vezivanja. Uzorci antitela su pripremljeni u količini od 0.5µg/mL razblaživanjem u pokretačkom puferu. Monomerni tau i fibrilni tau su pripremljeni u koncentracijama od 2000, 1000, 500, 250, 125, 62.5, 31.25, 15.63, 7.82, 3.91, 1.95 i 0 (blank) nM razblaživanjem u pokretačkom puferu. Svaki ciklus analiza se sastoji od: (1) uzoraka antitela za vezivanje za posebnu protočnu citometriju (FC2, FC3 i FC4); (2) injektovanja 250µL (300 sec) ili monomernog tau ili agregata tau fibrila preko respektivne FC pri brzini od 50 µL/min; (3) povratka na protok pufera u toku 20 minuta za praćenje faze disocijacije; (4) regeneracije površine čipa sa 25 µL (30 sec) injekcije glicina, pH1.5; (5) uravnoteženja površina čipa sa 50 µL (60 sec) injekcije HBS-EP+.
[0041] Rezultat vezivanja za tau agregat je dobijen standardnim analizama pogodnim za 1:1 model vezivanja korišćenjem Biacore 2000 Evaluation softvera, verzija 4.1, za
-1
s<->određivanje brzine asocijacije (kon, M<1>jedinica), brzine disocijacije (koff, s<-1>jedinica) i Rmax(RU jedinica). Konstanta ravnoteže disocijacije (KD) se izračunava iz odnosa KD= koff/koni izražava u molarnim jedinicama. Rezultat vezivanja za monomerni tau ne može precizno da se odredi sa SPR kako je prethodno opisano zbog velike brzine on- i off-. Prema tome, KDvezivanja za monomerni tau je dobijena korišćenjem postojanog stanja pogodnog modela vezivanja nanošenjem koncentracije antigena u odnosu na jedinicu odgovora. Dobijen rezultat vezivanja je dat u Tabeli 2.
Tabela 2: rezultat SPR vezivanja za humani monomerni tau i tau agregat.
[0042] Rezultati dobijeni u Tabeli 2 pokazuju da tau monoklonalno antitelo iz Primera 1 ne poseduje merljivo vezivanje za monomerni tau tako da vrednost afiniteta ne može precizno da se odredi Biacore analizama (zbog velikih on- i off- brzina). Nasuprot tome, rezultati dobijeni u Tabeli 2 pokazuju da tau monoklonalno antitelo iz Primera 1 poseduje poboljšan afinitet za tau agregat u poređenju sa sklopom humanizovanog MC-1 antitela.
[0043] Enzimo imuni test (ELISA) se koristi za određivanje relativnog afiniteta vezivanja primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 za agregat tau fibrila iz homogenata AD mozga. Homogenati AD mozga su izrađeni od približno 80g korteksa mozga pacijenata sa AD. Ukratko, pufer (TBS/1mM PMSF/1X Complete® proteaza inhibitor koktel (Roche, p/n. 11 697 498 001) i inhibitor fosfataze (ThermoFischer, p/n. 78428)) se doda u tkivo AD mozga u količini od približno 10ml/1g (tkiva). Tkivo se homogenizuje koristeći ručni Kinematica Polytron pri brzini od 6-7. Tkovo se nakon toga dalje homogenizuje koristeći Parr Bomb (Parr Instrument, p/n. 4653) 30 minuta pod pritiskom azota od 1500 psi. Homogenat se centrifugira 30 minuta pri 28,000g (J14 Beckman rotor) na 4°C. Supernatant se sakupi, odvoji i prenese u 4 cm visoku zaštitnu kolonu Sepharose 400 Superflow da se uklone veće nečistoće, nakon toga se prenese u 25 ml C1-Affigel 10 kolonu pri brzini protoka od 50 - 60 ml po satu, da se prečiste MC1-vezani tau fibrili. Za maksimalno prečišćavanje, supernatanti se recikliraju 18-20 sati kroz MC-1 kolonu na 4°C. Zaštitna kolona se ukloni a MC1 kolona ispere sa TBS sa najmanje 40 zapremina kolone. Vezani tau agregati se nakon toga eluiraju sa 3M KSCN u količini od 2 zapremine kolone i sakupe u frakcijama od približno 1 ml. Koncentracija proteina u svakoj eluiranoj frakciji se proveri Bradford analizom u mikrotitarnoj ploči. Frakcije koje sadrže pozitivne vrednosti proteina se izvuku, koncentruju na približno 2ml pomoću Centricon (Millipore Ultracel-30K) na 4°C i dijaliziraju koristeći Slide-A-Lyzer kasete (10K MWCO 3-12ml, Pierce) u toku noći sa 1 litar TBS. Koncentracija tau u okviru tau fibrila prečišćenih od homogenata AD mozga se meri sendvič ELISA testom korišćenjem DA-9 vezano antitelo i CP27 antitelo za detekciju.
[0044] Prečišćeni tau fibrili (50µl) u PBS se nanesu na zidove ploča sa 96 udubljenja (Coastar, p/n. 3690) u koncentraciji koja odgovara 0.7 µg/ml ukupnog tau. Ploče se inkubiraju u toku noći na 4°C, nakon toga isperu tri puta sa 150µl PBST (PBS koji sadrži 0.05% Tween-20), blokiraju u 100ml BB3 (ImmunoChemistry Technology, p/n. 643) na sobnoj temperaturi u toku najmanje 1 h (obično 2h)) Nakon blokiranja, pufer za blokiranje se ukloni iz udubljenja. Primerno tau monoklonalno antitelo iz Primera 1 i sklop humanizovanog MC-1 antitela (koje ima kombinaciju radnog okvira: 5-51 teški lanac, A27 laki lanac) se razblaži u 0.25% kazein puferu do osnovnog rastvora koncentracije od 1000nM, nakon toga serijski razblaži 23 puta uz dvostruka razblaženja.
50µl osnovnog rastvora i serijski razblaženog antitela (ili primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 ili sklopa humanizovanog MC-1 antitela) se dodaju u odvojena udubljenja i inkubiraju 2 sata na sobnoj temperaturi, nakon čega se ploče isperu četiri puta sa 200µl PBST po udubljenju. 50 µl anti-humanih IgG-HRP antitela (razblaženih do 1:4000 u 0.25% kazein puferu) se doda i inkubira 1 sat na sobnoj temperaturi, nakon čega se ploča ispere četiri puta sa 200µl PBST po udubljenju. Doda se 50µl TMB/H2O2i inkubira približno 10 minuta na sobnoj temperaturi. Reakcija se zaustavlja dodavanjem 50µl rastvora za zaustavljanje (2N H2SO4) i kolorimetrijski signal se meri na 450nm. Rezultat se unese u Prism 6 (GraphPad) program a EC50vrednosti su generisane pomoću nelinearne krive regresije i sigmoidalnog odgovora na dozu. Rezultati su pokazani u Tabeli 3.
Tabela 3. poređenje EC50vezivanja za prečišćene AD tau fibrile
[0045] Kako je pokazano u Tabeli 3, primerno tau monoklonalno antitelo iz ovog pronalaska ispoljava 60 puta povećani afinitet (mereno pomoću EC50) za prečišćene tau fibrile u odnosu na sklop humanizovanog MC-1 antitela.
[0046] Selektivnost tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 za tau agregate u odnosu na tau monomer se određuje direktnim ELISA testom. Nakon ELISA procedure tačno kako je prethodno dato, rekombinantni tau (rTau) se nanese na ploče sa 96 udubljenja u koncentraciji koja odgovara ili "visokoj" koncentraciji (1µg/mL) ili "niskoj" koncentraciji (15ng/mL). Visoka koncentracija rTau, kada je naneta na ploče sa mikro udubljenjima, stvara agregate simulirajući vezivanje za nagomilane tau. Niska koncentracija rTau, kada se nanese na ploče sa mikro udubljenjima, simulira vezivanje za tau monomer. Ploče u kojima se nalaze rTau visokih ili niskih koncentracija, tim redom, se ispituju na primerno tau monoklonalno antitelo iz Primera 1, a vezivanje primernog tau monoklonalnog anitela za određene koncentracije rTau se meri isto kako je prethodno opisano u ELISA testu. Rezultati su dati u Tabeli 4.
Tabela 4. poređenje EC50vezivanja za "visoke" prema "niskoj" koncentraciji rTau
[0047] Kako je pokazano u Tabeli 4, primerno tau monoklonalno antitelo iz Primera 1 ispoljava 120 puta veći afinitet (mereno sa EC50) za tau agregat u odnosu na tau monomer.
Ex Vivo studije angažovanih ciljeva
[0048] Vezivanje primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 za nataloženi tau dobijen iz humanih mozgova je određeno imunohistohemijskim bojenjem delova mozga fiksiranih formalinom i umetnutih u parafin (FFPE) dobijenih od: "normalnih" pojedinaca (ispoljavaju minimalnu tau agregaciju); AD pacijenta (ispoljava ozbiljnu tau agregaciju i formiranje NFT, kao i patologiju amiloidnog plaka); PD pacijenta (ispoljava ozbiljnu tau agregaciju). Bojenje se takođe vrši na delovima mozga dobijenih od "kontrolnih" nativnih miševa koji ne poseduju humani tau da se odredi pozadina vrednosti ne-specifičnog bojenja.
[0049] FFPE delovi se de-parafiniziraju i rehidriraju. Nakon toga se na delovima vrši ekstrakcija antigena (upotrebom sistema Lab Vision PT modula, Thermo Scientific) što uključuje zagrevanje delova u citratnom puferu (Thermo Scientific, p/n. TA-250-PM1X) 20 minuta na 100°C a nakon toga hlađenje delova u dH2O. Nakon toga se delovi izlažu narednim sedam faza inkubacije (na sobnoj temperaturi): (1) 10 minuta u 0.03% H2O2; (2) 30 minuta u 1:20 razblaženom normalnom kozjem serumu (Vector Labs., p/n. S-1000) razblaženom u PBST; (3) 60 minuta ili u primernom tau monoklonalnom antitelu iz Primera 1 ili sklopu humanizovanog MC-1 antitelu (koji ima kombinaciju radnog okvira: 5-51 teški lanac, A27 laki lanac) (i primerno tau monoklonalno antitelo i sklop humanizovanog MC-1 antitela su normalizovani do 1mg/ml, a nakon toga razblaženi u PBST do razblaženja od 1:4000 pre inkubacije sa delovima); (4) 30 minuta u zečjem antihumanom IgG4 (podignut nasuprot Fc regiona primernog antitela) u koncentraciji od 1.1 µg/ml PBST; (5) 30 minuta u razblaženu 1:200 biotiniliranog kozjeg anti-zečjeg IgG (Vector Labs., p/n. BA-1000) razblaženog u PBST: (6) 30 minuta u rastvoru kompleksa avidin-biotin (Vector Labs., p/n. PK-7100); (7) 5 minuta u 3,3’-diaminobenzidinu (Vector Labs., p/n. SK-4105). Delovi se isperu između svake od prethodno navedenih sedam faza koristeći PBST. Nakon prethodno datih sedam faza inkubacije, delovi za brojanje se boje sa hematoksilinom, dehidriraju i prekriju ljuspicom. Za delove "kontrolnog" tkiva miša, prethodno dati protokol je modifikovan u fazi (3) inkubacije upotrebom razblaženja 1:8000 (za razliku od razblaženja 1:4000) i za primerno tau monoklonalno antitelo i za sklop humanizovanog MC-1 antitela; i zamenom faza inkubacije (4) i (5) sa 1:200 razblaženjem biotiniliranog kozjeg anti-humanog IgG (Vector Labs. p/n. BA-3000) uPBST u toku 30 minuta.
[0050] Po procedurama potpuno istim kako je prethodno opisano, izvode se analize vezivanja primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 za tau dobijen iz humanih mozgova. Rezultati su dati u Tabeli 5.
Tabela 5. Polu-kvantitativne analize vezivanja za nataložene tau u FFPE AD delovima mozga.
[0051] Rezultati dati u Tabeli 5 pokazuju da primerno tau monoklonalno antitelo iz Primera 1 pokazuje znatno veće vrednosti bojenja za nataloženi tau, i kod AD i kod PD pacijenata, u hipokampalnim delovima mozga u poređenju sa sklopom humanizovanog MC-1 antitela. Rezultati dati u Tabeli 5 takođe pokazuju da primerno tau monoklonalno antitelo iz Primera 1 ne pokazuje veće ne-specifično vezivanje od sklopa humanizovanog MC-1 antitela (primerno tau monoklonalno tau antitelo pokazuje vezivanje za minimalnu količinu nataloženog tau u delovima normalne humane kontrole). Dalje, zato što se AD i PD karakterišu jasno vidljivim varijantama spajanja gena koji enkodiraju tau, ovi rezultati podržavaju zaključak da primerno tau monoklonalno antitelo iz Primera 1 specifično vezuje konformacioni epitop koji uključuje ostatke amino kiselina 7-9 i 312-322 humanog tau (numeracija ostatka na bazi primernog humanog tau za SEQ ID NO.13) zajedničko za tau agregate i AD i PD.
In Vitro neutralisanje širenja tau agregata
[0052] Poznato je da homogenat mozga izrađen od približno 5 meseci starih P301S miševa, uz prisustvo nativnog ne-nagomilanog tau, indukuje nagomilavanje nativnog tau i da pokazuje efekat tau nagomilavanja sličnog širenju. Sarkosil-nerastvorljivi homogenati izrađeni od tkiva mozga 4.5 do 5 meseci starih P301S miševa se soniciraju i razblaže sa OPTI-MEM (GIBCO by Life Tech., p/n.31985-062) da se odmereni tau (po izradi) dovede do finalne koncentracije od 0.77 µg/ml. Svaki preparat se inkubira 30 minuta na sobnoj temperaturi sa jednim od primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 (u koncentracijama: 21.00, 7.00, 2.33, 0.78, 0.26, 0.09, 0.03 i 0.01µg/ml) ili sklopa humanizovanog MC-1 antitela (u koncentracijama: 50.00, 16.67, 5.56, 1.85, 0.62, 0.21, 0.07, 0.02 i 0.01µg/ml).
[0053] HEK293 ćelije (ćelijska linija bubrega humanog embriona) se elektroporacijom transfektuju za inducibilnu ekspresiju mutant oblika humanog tau (1N4L, koji ima serin supstituisan sa prolinom na ostatku 301 (P301S) (numerisanje ostatka zasnovana na primernom humanom tau SEQ ID NO.13)). (Falcon B., i saradnici, J. Biol. Chem.
290:1049-1065, 2015). Stabilno transfektovane HEK293 ćelije se u koncentraciji 1x10<4>ćelija/otvor nanesu u udubljenja ploče sa 96 udubljenja u potpunom medijumu (D-MEM medium (Invitrogen, p/n. 11965-092), 10% seruma fetusa govečeta (Invitrogen, p/n. 16000), 1x pen. strep (Invitrogen, p/n. 15140-122), 5µg/ml Blasticin (Invitrogen, p/n. R210-01), 200µg/ml Zeocin (Invitrogen, p/n. R250-01)). Ploče se inkubiraju tri dana na 37°C. Nakon inkubacije, doda se 1 mg/ml tetraciklina u razblaženju od 1:1000 po udubljenju (do finalne koncentracije od 1 µg tetraciklina/ml medijuma) da se indukuje ekspresija mutant tau. Ploče se nakon toga inkubiraju 24 sata na 37°C. Nakon inkubacije, medijum za kulturu se ukloni i doda se 50µl homogenata izrađenog sa jednom od odgovarajućih koncentracija jednog od primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 ili sklopa humanizovanog MC-1 antitela (izrađenog kako je prethodno opisano). Ploče se inkubiraju tri sata, nakon čega se izrađeni homogenat ukloni i u svako odgovarajuće udubljenje se doda 100µl kompletnog medijuma sa 1µg/ml tetraciklina i ista odgovarajuća koncentracija ili primernog tau monoklonalnog antitela ili sklopa humanizovanog MC-1 antitela. Ploče se inkubiraju 24 sata na 37°C, nakon čega se medijum ukloni i u odgovarajuća udubljenja se doda 100µl kompletnog medijuma i ista odgovarajuća koncentracija ili primernog tau monoklonalnog antitela ili sklopa humanizovanog MC-1 antitela. Ploče se inkubiraju 48 sati na 37°C. Nakon inkubacije, ćelije se isperu sa 200µl DPBS i suše.
[0054] Ćelije se resuspenduju u 50 µl H pufera (TBS pH 7.4 koji sadrži 2 mM EGTA, 5 mM EDTA i inhibitor proteaze i fosfataze (Thermo Scientific, p/n. 784420)) po udubljenju i sonicira 10 minuta u kupatilu. Koncentracija ukupnih proteina se meri sa BCA™ Protein Assay (Thermo Scientific, p/n. PI-23227). Nivoi tau agregata se određuju sendvič ELISA testom. Ploče sa 96 udubljenja se oblože sa 50 µl 2µg/ml AT8 antitela na 4°C, u toku noći. Ploče se isperu tri puta sa PBST, nakon toga blokiraju sa 100 µl BB3 u toku 1 sat na sobnoj temperaturi. Izradi se standardna kriva koristeći ukupni ekstrakt mozga AD serijskim razblaženjem u 0.25% kazein puferu pomoću dvostrukog razblaženja od početne koncentracije od 40 µg/ml do finalne kncentracije od 0.3125 µg/ml. Lizati ćelija se razblaže u 0.25% kazein puferu do ukupne koncentracije proteina od približno 0.1 mg/ml. 50 ul svakog razblaženja standardnog uzorka ili razblaženog uzorka ćelija se nakon toga doda u odvojena udubljenja blokiranih ploča i inkubira na 4°C u toku noći, nakon čega se ploče isperu četiri puta sa PBST. Biotinilirano CP27 antitelo se razblaži 1:2000 u 0.25% kazein puferu i nakon toga se doda 50 µl u udubljenja koja sadrže uzorke. Ploče se inkubiraju 2 sata na sobnoj temperaturi nakon čega se ploče isperu četiri puta sa PBST. Strepavidin-HRP (Invitrogen, p/n. SNN2004) se razblaži 1:5000 u 0.25% kazein puferu i nakon toga se u svako udubljenje doda 50 µl i ploče se inkubiraju 1 sat na sobnoj temperaturi. Nakon inkubacije, ploče se isperu 4 puta sa PBST i doda se 50 µl 1:1 smeše H2O2i TMB (Thermo Scientific, p/n. 34021). Ploče se inkubiraju 10 minuta na sobnoj temperaturi i reakcija se zaustavlja dodavanjem 50ml H2SO4. Kolorimetrijski signal se meri na 450nm ili 650nm. AT8-pozitivne tau vrednosti se normalizuju prema vrednostima ukupnih proteina u svakom uzorku. Normalizovane vrednosti za svaki uzorak se dalje normalizuju prema AT8-pozitivnim tau vrednostima u kontrolnim uzorcima (ne tretiranim sa antitelom). Procenat inhibicije širenja agregata u svakom uzorku se određuje oduzimanjem dalje normalizovanih vrednosti od 100 a procenat vrednosti inhibcije za svaki uzorak se unosi u Prism 6 program softvera (GraphPad) nanošenjem ekstrapolacije nelinearne krive regresije i sigmoidalnog odgovora na dozu da se generišu EC50vrednosti. Rezultati su dati u Tabeli 6.
Tabela 6. reprezentativne EC50vrednosti inhibicije širenja tau agregata.
[0055] Rezultati dati u Tabeli 6 pokazuju da primerno tau monoklonalno antitelo iz Primera 1 pokazuje približno 30 puta poboljšanje u inhibiciji indukovanog širenja tau agregata.
In Vivo neutralisanje širenja tau agregata
[0056] Poznato je da homogenat baznog mozga izrađen od približno 5 meseci starih P301S miševa, nakon injekcije u hipokampus normalnih 10 nedelja starih ženki P301S miševa, indukuje nagomilavanje nativnog, ne-nagomilanog tau, pokazujući efekat nagomilavanja tau sličan širenju. Homogenat izrađen od tkiva baznog mozga od 4.5 do 5 meseci starih P301S miševa je u osnovi izrađen kako je prethodno opisano.
[0057] Normalnim 10 nedelja starim ženkama P301S miševa se u levu hemisferu hipokampusa injektuje 5 µl izrađenog homogenata mozga i ili: 7.5µg primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 (N=12); ili 7.5µg kontrolnog humanog IgG4 antitela (N=11). Četiri nedelje nakon injekcije, miševi se žrtvuju, uzmu se leve i desne hemisfere, umetnu u parafin i serijski delovi od po 6µm se stave na staklene pločice. Pločice koje sadrže bregmu (A-P = -2.30) se oslobode od parafina, umetnuto tkivo se rehidrira i povraćaj antigena se vrši zagrevanjem pločice na 100°C u toku 20 minuta u citratnom puferu. Pločice se ohlade u dH2O i inkubiraju na sobnoj temperaturi po sledećim fazama: (a) 10 minuta u (0.03%) H2O2; (b) 30 minuta u 1:20 razblaženju normalnog kozjeg seruma; (c) 60 minuta u 1:8000 razblaženju PG-5 antitela (razblaženo u PBST)(PG-5 antitelo dobijeno iz laboratorije Dr. Peter Davies, Albert Einstein College of Medicine of Yeshiva University; PG-5 antitelo specifično vezuje serin na ostatku 409 tau kada je fosforilisano, numeracija ostatka zasnovana na primernom humanom SEQ ID NO.13); (d) 30 minuta u 1:200 razblaženju biotiniliranog kozjeg anti-mišjeg IgG antitela (razblaženo u PBST); (e) 30 minuta u rastvoru kompleksa avidin-biotin; i (f) 5 minuta u 3,3’-diaminobenzidinu. PBST se koristi za ispiranje između odgovarajućih faza. Nakon 5 minuta inkubacije u 3,3’-diaminobenzidinu, delovi za brojanje se boje sa hematoksilinom, nakon toga rehidriraju i prekriju ljuspicom. Signal bojenja se meri pomoću Scanscope AT Slide Scanner (Aperio) sa uvećanjem 20x. Imunoreaktivnost PG-5 se kvantifikuje i izražava kao procenat koristeći pozitivni piksel algoritam Imagescope softvera (v. 11.1.2.780, Aperio). Rezultati su dati u Tabeli 7.
Tabela 7. Srednji % PG-5 imunoreaktivnosti u levom i desnom hipokampusu, tim redom.
Rezultati dati u Tabeli 7 pokazuju da primerno tau monoklonalno antitelo iz Primera 1 smanjuje nivo tau agregacije i u levom i u desnom hipokampusu u poređenju sa kontrolnim IgG4 antitelom. Kako je pokazano, primerno tau monoklonalno antitelo produkuje 60.5% veće smanjenje u nagomilavanju tau u levom hipokampusu i 66.5% veće smanjenje u nagomilavanju tau u desnom hipokampusu, tim redom, u poređenju sa kontrolnim IgG4 antitelom. Ovi rezultati pokazuju da primerno tau monoklonalno antitelo poseduje aktivnost neutralizacije prema širenju nagomilavanja tau.
In Vivo analiza efikasnosti na Tg4510 modelu miša
[0058] Transgenični Tg4510 miševi ekspresuju mutant oblik humanog tau (4R0N, koji ima leucin supstituisan sa prolinom na ostatku 301 (P301L), Ramsden M., i saradnici, J. Neuroscience., 25: 10637-10647 (2005) i Santacruz K., i saradnici, Science (2005); ostatku čija se numeracija zasniva na primernom humanog tau SEQ ID NO.13). Tg4510 miševi ispoljavaju visoke vrednosti ekspresije P301L mutanta humanog tau u hipokampusu i neokorteks regionima, što pokazuje progresiju nagomilavanja tau u zavisnosti od godina.
[0059] Tau antitela iz ovog pronalaska mogu da indukuju imunogenični odgovor kod Tg4510 miševa. Prema tome, kako bi se ispitao terapeutski potencijal tau monoklonalnih antitela iz ovog pronalaska za trajnu primenu u modelu glodara, surogat mišje tau antitelo je sklopljeno ciljajući isti konformacioni epitop i odražavajući slične nivoe poboljšanog afiniteta u odnosu na primerno tau monoklonalno antitelo iz Primera 1. Surogat tau antitela ima afinitet (EC50) za prečišćena AD tau vlakna od 13.1 pM, mereno ELISA testom kako je prethodno opisano (za primerno tau monoklonalno antitelo iz Primera 1).
[0060] Osam nedelja stare ženke Tg4510 miševa su grupisane u 3 odvojene grupe. Prvoj grupi (N=15) je davana injekcija kontrolnog mišjeg IgG1 antitela (15mg/kg) dva puta nedeljno u toku 9 nedelja. Drugoj grupi (N=15) je dva puta nedeljno u toku 9 nedelja davana injekcija rekombinantnog MC-1 antitela (15mg/kg) dobijenog od mišjih ascita ubrizganih sa MC-1 hibridomom. Trećoj grupi (N=15) je davana injekcija sa surogatom mišjeg tau antitela (15mg/kg) dva puta nedeljno u toku 9 nedelja. Nakon finalne primene, miševi su žrtvovani i uzeti su im mozgovi. Delovi korteksa i delovi hipokampusa su uzeti, utisnuti u parafin i delovi veličine 6µm su serijski naneti na staklene pločice za imunohistohemijsku upotrebu.
[0061] Preostali regioni korteksa sakupljenih mozgova su homogenizovani pulsnom sonikacijom u zapremini H pufera 10 puta većoj od zapremine korteksa, centrifugirani 20 minuta pri 21,000g na 4°C i alikvot supernatanta od svakog korteksa je sakupljen i određene su vrednosti ukupnihi proteina pomoću BCA™ Protein Assay (Thermo Scientific, p/n. PI-23227) u skladu sa protokolom proizvođača. Preostali deo supernatanta se centrifugira 1 sat pri 100,000g na 4°C, supernatant odbaci a dobijene nerastvorne pelete se resuspenduju u H puferu (u zapremini 1/2 zapremine odbačenog supernatanta). Resuspendovana peleta se sonikuje i odrede se vrednosti AT8-pozitivnog tau agregata u svakoj peleti pomoću ELISA testa korišćenjem AT8 vezanog antitela i CP27 detektovanog antitela, u osnovi isto kako je prethodno opisano. Vrednosti AT8-pozitivnih agregata su normalizovane u odnosu na vrednosti ukupnih proteina.
[0062] Na sličan način, preostali hipokampusi iz sakupljenih mozgova su homogenizovani pulsnom sonikacijom u zapremini H pufera 10 puta većoj od zapremine hipokampusa, centrifugirani 20 minuta na 21,000g na 4°C i supernatant za svaki hipokampus je sakupljen i određene su vrednosti ukupnih proteina. Vrednosti AT8-pozitivnog tau agregata u supernatantu su određene ELISA tesom korišćenjem AT8 vezanog antitela i CP27 detektovanog antitela u osnovi isto kako je prethodno opisano. Vrednosti AT8-pozitivnog tau agregata su normalizovane u odnosu na vrednosti ukupnog proteina. Rezultati su dati u Tabeli 8.
Tabela 8. Vrednosti AT8-pozitivnog tau agregata u homogenatu korteksa i hipokampusa mozga mereno ELISA testom
[0063] Rezultati prikazani u Tabeli 8 pokazuju da surogat mišjeg tau antitela smanjuje vrednosti tau agregata i u korteksu i u hipokampusu za 24% i 35%, tim redom, u odnosu na miševe tretirane kontrolnim mIgG1. Rezultati dalje pokazuju da miševi tretirani sa rekombinantnim mišjim MC-1 antitelom ne pokazuju poboljšano smanjenje u vrednostima tau agregata u odnosu na miševe tretirane kontrolnim mIgG1.
[0064] Vrednosti nagomilavanja tau u korteksu i hipokampusu delova umetnutih u parafin a dobijenih od sakupljenih mozgova su takođe imunohistohemijski merene korišćenjem PG-5 u osnovi isto kako je prethodno opisano. Rezultat je normalizovan konverzijom u log10vrednosti i rezultati su sumirani u Tabeli 9.
Tabela 9. Prosečna log10vrednost za % PG-5 imunonoreaktivnost u korteksu i
hipokampusu
[0065] Rezultati dati u Tabeli 9 pokazuju da surogat mišjeg tau antitela smanjuje vrednost tau agregata i u korteksu (za 18%) i u hipokampusu (za 43%) u odnosu na kontrolno mIgG1 antitelo, dok rekombinantno mišje MC-1 antitelo ne pokazuje primetno smanjenje u vrednosti tau agregata ni u korteksu ni u hipokampusu u odnosu na kontrolno mIgG1 antitelo.
Fiziko-hemijske osobine projektovanog tau monoklonalnog antitela
[0066] Primerno tau monoklonalno antitelo iz Primera 1 ispoljava dobru rastvorljivost, hemijsku stabilnost i fizičku stabilnost.
Rastvorljivost:
[0067] Potrebna je dovoljno velika rastvorljivost da omogući adekvatno doziranje. Na primer, 1 mg/kg doze primenjene u 1.0 mL injekcije na pacijentu teškom 100 kg će da zahteva rastvorljivost od 100mg/ml. Pored toga, takođe je poželjno održavanje antitela u monomernom stanju bez agregacije u velike molekulske težine (HMW) pri visokoj koncentraciji. Rastvorljivost primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 se analizira pri koncentraciji 15mg primernog antitela sa prekidnim filterom molekulske težine 10 K (Amicon U.C. filters, Millipore, katalog # UFC903024) do zapremine manje od 100ml. Finalna koncentracija uzorka se meri apsorpcijom UV na A280 koristeći Nanodrop 2000 (Thermo Scientific).
[0068] Po procedurama u osnovi istim kako je prethodno opisano, primerno tau monoklonalno antitelo iz Primera 1 pokazuje rastvorljivost veću od: 140 mg/ml (pri pH 6 u 10 mM citratnom puferu); 177 mg/ml (pri pH 6 u 10 mM citratnom puferu sa 150 mM NaCl); i 170 mg/ml (pri pH 7.4 u PBS puferu). Pored toga, pri visokim koncentracijama su prisutne samo male vrednosti HMW (od~3 do ~5.4%) a nije uočeno razdvajanje faza.
Hemijska i fizička stabilnost:
[0069] Hemijska stabilnost omogućava razvoj formulacija leka sa dovoljnim rokom trajanja. Hemijska stabilnost primernog tau monoklonalno antitela iz Primera 1 je procenjena formulisanjem primernog tau antitela u koncentraciji od 1 mg/ml u 10mM rastvoru citrata i puferovanom na pH 4, 5, 6 ili 7. Formulisani uzorci su inkubirani četiri nedelje na 4°C, 25°C ili 40°C u studiji ubrzane razgradnje. Promene u profilu šarže antitela, koje odražavaju hemijske promene, su procenjene kapilarnim izoelektričnim fokusiranjem (cIEF) u skladu sa standardnim procedurama.
[0070] Po procedurama u osnovi istim kako je prethodno opisano, primerno tau monoklonalno antitelo iz Primera 1 ispoljava hemijsku stabilnost čiji su rezultati dati u Tabeli 10.
Tabela 10. Rezime promene u % glavnog pika nakon četiri nedelje, u odnosu na uzorke inkubirane na 4°C, mereno sa cIEF i % HMW agregata mereno sa SEC.
[0071] Rezultati dati u Tabeli 10 pokazuju da nakon 4 nedelje čuvanja na 40°C, primerno tau antitelo iz Primera 1 ima procenat smanjenja glavnog pika od samo u 1.1 procentu tačaka kada je formulisan na pH 5 a smanjenje od samo 0.3 procenta tačaka kada je formulisan na pH 6 (najčešći pH korišćen za formulaciju antitela). Pored toga, masene spektrometrijske analize pokazuju samo minimalnu razgradnju uočenu nakon 4 nedelje čuvanja na 40°C (~1.5% LCDR1 deaminacije sa manje od 5% razgradnje u svim CDR sekvencama), što ukazuje da primerno tau monoklonalno antitelo iz Primera 1 ima dovoljnu hemijsku stabilnost da omogući razvoj formulacija u obliku rastvora sa adekvatnim rokom trajanja.
[0072] U svrhu poređenja, hemijska i fizička stabilnost sklopa humanizovanog MC-1 antitela (koji ima kombinacijiju radnog okvira: 5-51 teški lanac, A27 laki lanac) je izvršena inkubacijom antitela u toku 2 nedelje na 40°C pri pH8. Sklop humanizovanog MC-1 antitela pokazuje značajnu hemijsku razgradnju, uključujući 12% deaminacije LCDR1, 5% deamidacije i 10% izomerizacije u HCDR3 i 3% oksidacije u HC radnom okviru.
[0073] Afinitet vezivanja, nakon studije ubrzane razgradnje od četiri nedelje primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 je procenje formulisanjem primernog monoklonalnog antitela u koncentraciji od 1 mg/ml u 10mM rastvoru citrata i puferovanom na pH 4 ili 6. Formulisani uzorci su inkubirani četiri nedelje na 4°C ili 40°C u studiji ubrzane razgradnje. Nakon inkubacije, afinitet vezivanja primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 za rTau (15 ng/ml) nanetog na ploče sa 96 udubljenja je određen direktnim ELISA testom a nakon toga ELISA procedurom u osnovi isto kako je prethodno opisano. Rezultati prethodno opisane studije afiniteta vezivanja, izvedene u duplikatu, su dati u Tabeli 11.
Tabela 11. Poređenje EC50nakon studije ubrzane razgradnje.
[0074] Tabela 11 pokazuje da afinitet vezivanja primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 za niske koncentracije rTau ostaje sličan za uzorke nakon četiri nedelje ubrzane degradacije, u poređenju sa kontrolnim uzorcima inkubiranim na 4°C.
Sequences
[0075]
SEQ ID NO: 1 - LC primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1
SEQ ID NO: 2 - HC primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1
SEQ ID NO: 3 - LCDR1 primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 RSSQSLVHSNQNTYLH
SEQ ID NO: 4 - LCDR2 primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 YKVDNRFS
SEQ ID NO: 5 - LCDR3 primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 SQSTLVPLT
SEQ ID NO: 6 - HCDR1 primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 KGSGYTFSNYWIE
SEQ ID NO: 7 - HCDR2 primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 EILPGSDSIKYEKNFKG
SEQ ID NO: 8 - HCDR3 primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 ARRGNYVDD
SEQ ID NO: 9 - LCVR primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1
SEQ ID NO: 10 - HCVR primernog tau monoklonalnog antitela iz Primera 1 SEQ ID NO: 11 – Sekvenca nukleotida koja enkodira primerni LC (SEQ ID NO:1)
SEQ ID NO: 13 – Sekvenca humane amino kiseline, cela dužina Tau

Claims (9)

Patentni zahtevi
1. Monoklonalno antitelo, naznačeno time što vezuje humani tau koji uključuje promenljivi region lakog lanca (LCVR) i promenljivi region teškog lanca (HCVR), pri čemu je sekvenca amino kiseine za LCVR data sa SEQ ID NO: 9 a sekvenca amino kiseline za HCVR je data sa SEQ ID NO: 10.
2. Monoklonalno antitelo u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što uključuje laki lanac (LC) i teški lanac (HC), pri čemu je sekvenca amino kiseline za LC data sa SEQ ID NO: 1 a sekvenca amino kiseline za HC je data sa SEQ ID NO: 2.
3. DNK molekula, naznačena time što uključuje sekvencu polinukleotida koja enkodira polipeptid sa sekvencom amino kiseline za SEQ ID NO: 1 i koja uključuje sekvencu polinukleotida koja enkodira polipeptid sa sekvencom amino kiseline za SEQ ID NO: 2.
4. DNK molekula u skladu sa patentnim zahtevom 3, naznačena time što je sekvenca polinukleotida koja enkodira polipeptid sa sekvencom amino kiseline za SEQ ID NO: 1 data sa SEQ ID NO: 11 a sekvenca polinukleotida koja enkodira polipeptid sa sekvencom amino kiseline za SEQ ID NO: 2 je data sa SEQ ID NO: 12.
5. Ćelija sisara koja uključuje DNK molekulu u skladu sa patentnim zahtevom 3 ili patentnim zahtevom 4, naznačena time što je ćelija sposobna da ekspresuje monoklonalno antitelo koje uključuje laki lanac sa sekvencom amino kiseline za SEQ ID NO: 1 i teški lanac sa sekvencom amino kiseline za SEQ ID NO: 2.
6. Proces za produkciju monoklonalnog antitela koje uključuje laki lanac sa sekvenom amino kiseline za SEQ ID NO: 1 i teški lanac sa sekvencom amino kiseline za SEQ ID NO: 2, naznačen time što proces uključuje kultivaciju ćelija sisara u skladu sa patentnim zahtevom 5 pod takvim uslovima da se ekspresuje monoklonalno antitelo i da se ekspresovano monoklonalno antitelo povrati.
7. Farmaceutska kompozicija, naznačena time što uključuje monoklonalno antitelo u skladu sa bilo kojim od patentnog zahteva 1 ili patentnog zahteva 2 i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili podloga.
8. Monoklonalno antitelo u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili patentnim zahtevom 2, naznačeno time što je za upotrebu u terapiji.
9. Monoklonalno antitelo u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili patentnim zahtevom 2, naznačeno time što je za upotrebu u tretmanu bolesti izabrane od Alzheimer-ove bolesti, progresivne supranuklearne paralize i Pikove bolesti.
Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20191467A 2015-02-26 2016-02-18 Tau antitela i njihova upotreba RS59557B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562121116P 2015-02-26 2015-02-26
EP16706741.2A EP3261720B1 (en) 2015-02-26 2016-02-18 Antibodies to tau and uses thereof
PCT/US2016/018419 WO2016137811A1 (en) 2015-02-26 2016-02-18 Antibodies to tau and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS59557B1 true RS59557B1 (sr) 2019-12-31

Family

ID=55442901

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20191467A RS59557B1 (sr) 2015-02-26 2016-02-18 Tau antitela i njihova upotreba

Country Status (41)

Country Link
US (3) US9527909B2 (sr)
EP (2) EP3581245B1 (sr)
JP (1) JP6431615B2 (sr)
KR (1) KR102003144B1 (sr)
CN (1) CN107207588B (sr)
AR (1) AR103713A1 (sr)
AU (1) AU2016223095B2 (sr)
CA (1) CA2975542C (sr)
CL (1) CL2017002106A1 (sr)
CO (1) CO2017008455A2 (sr)
CR (1) CR20170344A (sr)
CY (1) CY1122265T1 (sr)
DK (1) DK3261720T3 (sr)
DO (1) DOP2017000197A (sr)
EA (1) EA033433B1 (sr)
EC (1) ECSP17056415A (sr)
ES (2) ES2756649T3 (sr)
GT (1) GT201700188A (sr)
HR (1) HRP20192059T1 (sr)
HU (1) HUE047381T2 (sr)
IL (1) IL253168B (sr)
JO (1) JO3576B1 (sr)
LT (1) LT3261720T (sr)
MA (1) MA41596B1 (sr)
MD (1) MD3261720T2 (sr)
ME (1) ME03582B (sr)
MX (1) MX375119B (sr)
NZ (1) NZ733462A (sr)
PE (1) PE20171336A1 (sr)
PH (1) PH12017501522B1 (sr)
PL (1) PL3261720T3 (sr)
PT (1) PT3261720T (sr)
RS (1) RS59557B1 (sr)
SG (1) SG11201705637TA (sr)
SI (1) SI3261720T1 (sr)
SV (1) SV2017005486A (sr)
TN (1) TN2017000352A1 (sr)
TW (1) TWI669314B (sr)
UA (1) UA123202C2 (sr)
WO (1) WO2016137811A1 (sr)
ZA (1) ZA201704943B (sr)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI669314B (zh) * 2015-02-26 2019-08-21 美國禮來大藥廠 針對ｔａｕ之抗體及其用途
NZ775762A (en) 2015-06-05 2025-02-28 Genentech Inc Anti-tau antibodies and methods of use
US10344081B2 (en) 2015-07-06 2019-07-09 Ucb Biopharma Sprl Tau-binding antibodies
CA3032692A1 (en) * 2016-08-09 2018-02-15 Eli Lilly And Company Combination antibody therapy for the treatment of neurodegenerative diseases
UA128383C2 (uk) 2016-12-07 2024-07-03 Дженентек, Інк. Антитіло до тау-білка та спосіб його застосування
MX2019006330A (es) 2016-12-07 2019-09-26 Genentech Inc Anticuerpos anti-tau y metodos de uso.
SG11201907422RA (en) 2017-02-17 2019-09-27 Denali Therapeutics Inc Anti-tau antibodies and methods of use thereof
KR102784294B1 (ko) 2017-05-02 2025-03-19 프로테나 바이오사이언시즈 리미티드 타우 인식 항체
CN111201030B (zh) 2017-07-25 2024-11-01 真和制药有限公司 通过阻断tim-3和其配体的相互作用治疗癌症
AU2018352308B2 (en) 2017-10-16 2025-06-05 Eisai R&D Management Co., Ltd. Anti-tau antibodies and uses thereof
US12398201B2 (en) 2018-02-19 2025-08-26 New York University Tau single domain antibodies
CA3107788A1 (en) 2018-07-31 2020-02-06 Eli Lilly And Company Combination of anti-tau antibody and oga inhibitor for treatment of diseases characterized by aberrant tau aggregation
EP3894438A1 (en) * 2018-12-13 2021-10-20 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) New anti tau svqivykpv epitope single domain antibody
WO2020160156A2 (en) 2019-01-30 2020-08-06 Immutics, Inc. Anti-gal3 antibodies and uses thereof
JP2022534406A (ja) * 2019-05-27 2022-07-29 ザ ユニヴァーシティ オブ ブリティッシュ コロンビア タウの立体配座特異的エピトープ、それらに対する抗体、およびそれらに関連する方法
EP4001305A4 (en) * 2019-07-15 2022-10-12 Adel Inc. ANTI-TAU ANTIBODIES AND ITS USE
CN114555792A (zh) 2019-10-15 2022-05-27 伊莱利利公司 重组改造的、脂肪酶/酯酶缺陷型哺乳动物细胞系
EP4157338A4 (en) 2020-05-26 2024-11-13 TrueBinding, Inc. METHOD FOR TREATING INFLAMMATORY DISEASES BY GALECTIN-3 BLOCKING

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5811310A (en) 1986-09-30 1998-09-22 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva Univ. The Alz-50 monoclonal antibody and diagnostic assay for alzheimer's disease
JPS63132355U (sr) 1987-02-20 1988-08-30
AT500379B8 (de) 2001-02-02 2009-08-15 Axon Neuroscience Tau-proteine
US7161060B1 (en) 2002-07-16 2007-01-09 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Transgenic mice comprising a genomic human tau transgene
JP4393382B2 (ja) 2002-08-14 2010-01-06 三菱化学株式会社 中枢性タウ蛋白質特異的抗体
US7238788B2 (en) 2004-02-18 2007-07-03 University Of Iowa Foundation Antibodies to phosphorylated tau, methods of making and methods of use
US20070218491A1 (en) 2006-02-08 2007-09-20 Oligomerix, Inc. Oligomerization of amyloid proteins
US8012936B2 (en) 2006-03-29 2011-09-06 New York University Tau fragments for immunotherapy
WO2008140639A2 (en) 2007-02-08 2008-11-20 Oligomerix, Inc. Biomarkers and assays for alzheimer's disease
UA107571C2 (xx) 2009-04-03 2015-01-26 Фармацевтична композиція
DE102009016515A1 (de) 2009-04-08 2010-10-14 Voith Patent Gmbh Dynamoelektrische Maschine
US8609097B2 (en) 2009-06-10 2013-12-17 Hoffmann-La Roche Inc. Use of an anti-Tau pS422 antibody for the treatment of brain diseases
CN106390107B (zh) 2009-06-10 2019-12-31 纽约大学 病理tau蛋白的免疫靶向
AU2010286501B2 (en) 2009-08-28 2015-06-11 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Antibodies that bind Tau oligomers
US10266585B2 (en) 2009-08-28 2019-04-23 The Board Of Regents Of The Univerity Of Texas System Methods of treating brain injury
WO2011056561A1 (en) 2009-10-27 2011-05-12 Beth Israel Deaconess Medical Center Methods and compositions for the generation and use of conformation-specific antibodies
WO2011109112A2 (en) 2010-03-05 2011-09-09 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Method of detecting tau protein and tau fragments in serum
MY164376A (en) 2010-10-07 2017-12-15 Univ Leuven Kath Phosphospecific antibodies recognizing tau
CA2813493C (en) * 2010-10-11 2019-07-09 University Of Zurich Human anti-tau antibodies
US20120244174A1 (en) 2011-01-31 2012-09-27 Intellect Neurosciences Inc. Treatment of tauopathies
EP2701743A4 (en) 2011-04-27 2015-08-19 Univ Northwestern FOR PATHOLOGICAL TAU-DIMERE AND PREAFIBRILLARY PATHOLOGICAL TAU-OLIGOMER SELECTIVE ANTIBODIES AND THEIR USES IN THE APPLICATION, DIAGNOSIS AND MONITORING OF TAUOPATHIES
GB201112056D0 (en) 2011-07-14 2011-08-31 Univ Leuven Kath Antibodies
ME03008B (me) * 2011-09-19 2018-10-20 Axon Neuroscience Se Terapija na osnovu proteina i dijagnoza patologije u којој posreduje tau u alcнajмerovoj bolesti
KR101981351B1 (ko) 2011-10-07 2019-09-02 에이씨 이뮨 에스.에이. 타우를 인식하는 포스포특이적 항체
US9738709B2 (en) 2011-10-21 2017-08-22 Ohio State Innovation Foundation Methylated peptides derived from tau protein and their antibodies for diagnosis and therapy of alzheimer's disease
MX350311B (es) 2011-12-20 2017-09-01 Janssen Biotech Inc Anticuerpos anti-phf-tau y sus usos.
RU2644242C2 (ru) 2012-04-05 2018-02-08 Ац Иммуне С.А. Гуманизированное тау-антитело
SG10201708959WA (en) 2012-07-03 2017-11-29 Univ Washington Antibodies to tau
WO2014016737A1 (en) 2012-07-24 2014-01-30 Pfizer Inc. Novel chicken monoclonal antibodies against human phosphorylated tau and uses thereof
NZ630542A (en) 2012-08-16 2017-06-30 Ipierian Inc Methods of treating a tauopathy
EP2887955B1 (en) 2012-08-21 2020-08-19 Institute for Molecular Medicine, Inc. Compositions and methods related to diseases associated with deposits of amyloid, tau, and alpha-synuclein
US20140056901A1 (en) 2012-08-21 2014-02-27 The Institute For Molecular Medicine Anti-tau antibodies and compositions for and methods of making and using in treatment, diagnosis and monitoring of tauopathies
EP2906596B1 (en) * 2012-10-12 2023-12-27 Arizona Board of Regents on behalf of Arizona State University Antibody based reagents that specifically recognize toxic oligomeric forms of tau
WO2014096321A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies specific to tau phosphorylated at serine 422 and uses for the treatment and diagnosis of tauopathies
CA2896066C (en) * 2012-12-21 2022-07-12 Biogen Ma Inc. Human anti-tau antibodies
US8980270B2 (en) 2013-01-18 2015-03-17 Ipierian, Inc. Methods of treating a tauopathy
US10501531B2 (en) 2013-03-13 2019-12-10 Prothena Biosciences Limited Tau immunotherapy
EP2968548B1 (en) * 2013-03-15 2020-09-09 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Methods and compositions for the generation and use of conformation-specific antibodies
BR112015030356A2 (pt) 2013-06-10 2017-12-05 Ipierian Inc métodos de tratamento de uma taupatia
TWI669314B (zh) * 2015-02-26 2019-08-21 美國禮來大藥廠 針對ｔａｕ之抗體及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
CR20170344A (es) 2017-10-18
CY1122265T1 (el) 2020-11-25
EA033433B1 (ru) 2019-10-31
ZA201704943B (en) 2019-01-30
BR112017015259A2 (pt) 2018-01-16
SG11201705637TA (en) 2017-08-30
IL253168B (en) 2021-10-31
EA201791590A1 (ru) 2018-01-31
US10011653B2 (en) 2018-07-03
JP2018508210A (ja) 2018-03-29
AU2016223095B2 (en) 2018-06-28
TWI669314B (zh) 2019-08-21
DK3261720T3 (da) 2019-11-25
NZ733462A (en) 2018-11-30
PE20171336A1 (es) 2017-09-13
IL253168A0 (en) 2017-08-31
TN2017000352A1 (en) 2019-01-16
US20160251420A1 (en) 2016-09-01
SI3261720T1 (sl) 2019-11-29
SV2017005486A (es) 2019-04-04
CN107207588A (zh) 2017-09-26
AU2016223095A1 (en) 2017-07-20
WO2016137811A1 (en) 2016-09-01
CO2017008455A2 (es) 2017-11-10
EP3261720B1 (en) 2019-09-18
ES2756649T3 (es) 2020-04-27
PH12017501522A1 (en) 2018-02-05
CA2975542A1 (en) 2016-09-01
MX375119B (es) 2025-03-06
MA41596B1 (fr) 2020-02-28
US20170107278A1 (en) 2017-04-20
PL3261720T3 (pl) 2020-02-28
LT3261720T (lt) 2019-11-25
CN107207588B (zh) 2020-10-16
US20180265577A1 (en) 2018-09-20
US9527909B2 (en) 2016-12-27
HRP20192059T1 (hr) 2020-02-21
KR102003144B1 (ko) 2019-07-23
JO3576B1 (ar) 2020-07-05
GT201700188A (es) 2018-11-23
JP6431615B2 (ja) 2018-11-28
EP3581245A1 (en) 2019-12-18
HUE047381T2 (hu) 2020-04-28
KR20170106458A (ko) 2017-09-20
DOP2017000197A (es) 2017-09-15
ES2973065T3 (es) 2024-06-18
MA41596A (fr) 2018-01-03
PH12017501522B1 (en) 2018-02-05
CA2975542C (en) 2019-06-18
PT3261720T (pt) 2019-12-02
UA123202C2 (uk) 2021-03-03
ME03582B (me) 2020-07-20
US10808027B2 (en) 2020-10-20
ECSP17056415A (es) 2017-11-30
AR103713A1 (es) 2017-05-31
MX2017010864A (es) 2017-12-07
MD3261720T2 (ro) 2019-12-31
EP3581245B1 (en) 2023-12-27
TW201643197A (zh) 2016-12-16
CL2017002106A1 (es) 2018-04-13
EP3261720A1 (en) 2018-01-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RS59557B1 (sr) Tau antitela i njihova upotreba
JP7780158B2 (ja) ＲＧＭａ結合タンパク質及びその使用
TWI705975B (zh) 抗－N3pGlu類澱粉β肽抗體及其用途
KR101991681B1 (ko) 항-phf-타우 항체 및 그의 용도
CA3007000A1 (en) Anti-n3pglu amyloid beta peptide antibodies and uses thereof
BR112017015259B1 (pt) Anticorpos monoclonais anti-tau, composição farmacêutica e uso dos mesmos
HK1240526B (en) Antibodies to tau and uses thereof
HK1240526A1 (en) Antibodies to tau and uses thereof