RS59621B1 - Lečenje neuropatije malih vlakana - Google Patents

Lečenje neuropatije malih vlakana

Info

Publication number
RS59621B1
RS59621B1 RS20191108A RSP20191108A RS59621B1 RS 59621 B1 RS59621 B1 RS 59621B1 RS 20191108 A RS20191108 A RS 20191108A RS P20191108 A RSP20191108 A RS P20191108A RS 59621 B1 RS59621 B1 RS 59621B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
pharmaceutically acceptable
methyl
fluorophenyl
oxy
prolinamide
Prior art date
Application number
RS20191108A
Other languages
English (en)
Inventor
Valerie Morisset
Original Assignee
Convergence Pharmaceuticals
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Convergence Pharmaceuticals filed Critical Convergence Pharmaceuticals
Publication of RS59621B1 publication Critical patent/RS59621B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/401—Proline; Derivatives thereof, e.g. captopril
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/118—Prognosis of disease development
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Artificial Filaments (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Predmetni pronalazak odnosi se na lečenje neuropatije malih vlakana, koje uključuje primenu, kod subjekta kojem je to potrebno, terapijski efikasne količine 5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-prolinamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, solvata.
OSNOV PRONALASKA
[0002] Neuropatija malih vlakana je uzrokovana strukturnom abnormalnošću u malim vlaknima rezultujući u degeneraciji u nervnim završecima malih vlakana. Mala vlakna su tipa nervnog vlakna perifernog nervnog sistema sa uskim prečnikom koja mogu biti mijelinizirana (Aδ) ili nemijelinizirana (C). Simptomi neuropatije malih vlakana variraju među pacijentima, ali većina pacijenata oseća isti oblik bola koji može biti težak i onesposobljavajući i može biti okarakterisan neprekidnim neuropatskim bolom sa paroksizmalnim epizodama i autonomnim simptomima. Dijagnoza neuropatije malih vlakana može biti potvrđena demonstriranjem smanjene gustine nervnog vlakna tokom biopsije kože i/ili abnormalno kvantitativno senzorno testiranje. Postoji snažna veza sa dijabetesom i jasna veza sa mutacijama sticanja funkcije Nav1.7 kod približno 30% idiopatske neuropatije malih vlakana (Faber et al (2012) Ann Neurol 71,26-39; Dib-Hajj et al (2013) Nature Reviews Neuroscience 14, 49-62).
[0003] Prema tome, potrebno je obezbediti efikasno lečenje neuropatije malih vlakana kako bi se pomoglo pacijentima u uklanjanju simptoma.
[0004] WO 2007/042239 opisuje 5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-prolinamid koji ima sledeću formulu:
i njegove farmaceutski prihvatljive soli, solvate ili prolekove.
[0005] Themistocleous et al., (2014) Pract. Neurol. 0:1-12 opisuje da je neuropatija malih vlakana povezana sa mutacijama sticanja funkcije u voltažom-kontrolisanim natrijumovim kanalima Nav1.7 i Nav1.8.
[0006] EL-DOKLA A et al. (2012) "What's in the literature?", JOURNAL OF CLINICAL NEUROMUSCULAR DISEASE, vol. 13, no.4, p 246-252 i CATHARINA G. FABER et al. (2011) "Gain of function NaV1.7 mutations in idiopathic small fiber neuropathy", ANNALS OF NEUROLOGY , vol. 71, no. 1, p 26-39, oba sugerišu upotrebu selektivnih blokatora Nav1.7 za lečenje neuropatije malih vlakana.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0007] Prema prvom aspektu pronalaska, obezbeđen je (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat, za upotrebu u lečenju neuropatije malih vlakana.
[0008] Prema sledećem aspektu pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje za upotrebu u metodu lečenja neuropatije malih vlakana, koji uključuje primenu, kod subjekta kojem je to potrebno, terapijski efikasne količine (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili solvata.
[0009] Isto tako, objavljena je upotreba (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, solvata ili proleka za izradu medikamenta za lečenje neuropatije malih vlakana.
[0010] U jednom primeru izvođenja, subjekt koji se leči je čovek.
[0011] Upućivanje na (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid uključuje i njegove jonske forme, soli, solvate, stereohemijske izomere, tautomere i izotope; poželjno njegove soli ili tautomere ili solvate. Isto tako, objavljeni su i izomeri kao što su geometrijski izomeri, N-oksidi, estri, prolekovi i protektovane forme.
[0012] (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid može postojati u formi soli, na primer kisele adicione soli ili, u nekim slučajevima, soli organskih ili neorganskih baza kao što su karboksilatna, sulfonatna i fosfatna so. Sve takve soli obuhvaćene su ovim pronalaskom i upućivanje na (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid uključuje ova jedinjenja u formi soli.
[0013] Farmaceutski prihvatljive soli (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamida su, na primer, netoksične kisele adicione soli formirane sa neorganskim kiselinama kao što su hlorovodonična, bromovodonična, jodovodonična, sumporna i fosforna kiselina, sa karboksilnim kiselinama ili sa organosulfonskim kiselinama. Primeri uključuju HCl, HBr, HI, sulfatnu ili bisulfatnu, nitratnu, fosfatnu ili hidrogen fosfatnu, acetatnu, benzoatnu, sukcinatnu, saharatnu, fumaratnu, maleatnu, laktatnu, citratnu, tartaratnu, glukonatnu, kamsilatnu, metansulfonatnu, etansulfonatnu, benzensulfonatnu, ptoluensulfonatnu i pamoatnu so. Za pregled pogodnih farmaceutskih soli vidi Berge et al, J. Pharm. Sci., 66, 1-19, 1977; P L Gould, Int J. Pharma., 33 (1986), 201-217; i Bighley et al, Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, Marcel Dekker Inc, New York 1996, Volume 13, str.453-497.
[0014] Soli opisane u ovom tekstu mogu se sintetisati od matičnog jedinjenja koje sadrži baznu ili kiselu komponentu, konvencionalnim hemijskim metodima kao što su metodi opisani u Pharmaceutsical Salts: Properties, Selection and Use, P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, tvrd povez, 388 strana, avgust 2002. Uopšteno, takve soli se mogu pripremiti reakcijom slobodnih kiselih ili baznih formi ovih jedinjenja sa odgovarajućom bazom ili kiselinom u vodi ili organskom rastvaraču, ili u mešavini ta dva; obično se koriste nevodeni medijumi kao što su etar, etil acetat, etanol, izopropanol ili acetonitril.
[0015] Kisele adicione soli (mono- ili disoli) mogu se formirati sa velikim brojem različitih kiselina, i neorganskih i organskih. Primeri kiselih adicionih soli uključuju mono- ili disoli formirane sa kiselinom odabranom iz grupe koja se sastoji od sirćetne, 2,2-dihlorosirćetne, adipinske, alginske, askorbinske (npr.L-askorbinske), L-asparaginske, benzensulfonske, benzoeve, 4-acetamidobenzoeve, butanske, (+) kamforne, kamfor-sulfonske, (+)-(1S)-kamfor-10-sulfonske, kaprinske, kapronske, kaprilne, cinaminske, limunske, ciklaminske, dodecilsulfonske, etan-1,2-disulfonske, etansulfonske, 2-hidroksietansulfonske, mravlje, fumarne, galaktarinske, gentisinske, glukoheptonske, D-glukonske, glukuronske (npr. D-glukuronska), glutaminske (npr. L-glutaminska), α-oksoglutarne, glikolne, hipurinske, halogenovodonične kiseline (npr., bromovodonična, hlorovodonična, jodovodonična), izetionske, mlečne (npr. (+)-L-mlečna, (±)-DL-mlečna), laktobionske, maleinske malične, (-)-L-malične, malonske, (±)-DL-mandelične, metansulfonske, naftalen-2-sulfonske, naftalen-1,5-disulfonske, 1-hidroksi-2-naftoinske, nikotinske, azotne, oleinske, orotične, oksalne, palmitinske, pamoinske, fosforne, propionske, pirogrožđane, L-piroglutaminske, salicilne, 4aminosalicilne, sebacinske, stearinske, ćilibarne, sumporne, taninske, (+)-L-vinske, tiocijaninske, p-toluensulfonske, undecilenske i valerinske kiseline, kao i acilisanih aminokiselina i katjonsko-razmenjivačkih smola.
[0016] Jedna posebna grupa soli sastoji se od soli koje se formiraju od sirćetne, hlorovodonične, jodovodonične, fosforne, azotne, sumporne, limunske, mlečne, ćilibarne, maleinske, malične, izetionske, fumarne, benzensulfonske, toluensulfonske, metansulfonske (mezilatne), etansulfonske, naftalensulfonske, valerinske, sirćetne, propanske, butanske, malonske, glukuronske i laktobionske kiseline. Jedna posebna so je hidrohloridna so.
[0017] Jedinjenja pronalaska mogu postojati kao mono- ili disoli, zavisno od pKakiseline od koje se so formira.
[0018] Podrazumeva se da bi, za upotrebu u medicinske svrhe, soli jedinjenja trebalo da budu farmaceutski prihvatljive. Stručnjak u oblasti lako će uočiti pogodne farmaceutski prihvatljive soli. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju one koje su opisane u Berge, Bighley and Monkhouse, J. Pharm. Sci. (1977) 66, pp. 1-19. Takve farmaceutski prihvatljive soli uključuju kisele adicione soli formirane sa neorganskim kiselinama npr., hlorovodoničnom, bromovodoničnom, sumpornom, azotnom ili fosfornom kiselinom i organskim kiselinama npr., ćilibarnom, maleinskom, sirćetnom fumarnom, limunskom, vinskom, benzoevom, ptoluensulfonskom, metansulfonskom ili naftalensulfonskom kiselinom. Druge soli, npr. oksalati ili formati, mogu se koristiti, na primer, u izolaciji jedinjenja opisanih u ovom tekstu, i obuhvaćene su okvirom ovog pronalaska. Međutim, soli koje nisu farmaceutski prihvatljive takođe se mogu pripremiti kao intermedijarne forme koje se zatim mogu konvertovati u farmaceutski prihvatljive soli. Takve farmaceutski neprihvatljive forme soli, koje mogu biti korisne na primer u prečišćavanju ili razdvajanju jedinjenja pronalaska, takođe čine deo pronalaska.
[0019] U jednom primeru izvođenja, (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat, biraju se između (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid hidrohlorida ili (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid metansulfonata. U sledećem primeru izvođenja, (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat je (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid hidrohlorid.
[0020] Određena jedinjenja opisana u ovom tekstu mogu formirati kisele adicione soli sa jednim ili više ekvivalenata kiseline. Predmetni pronalazak obuhvata sve moguće stehiometrijske i nestehiometrijske forme.
[0021] Stručnjaci u oblasti organske hemije razumeće da mnoga organska jedinjenja mogu formirati komplekse sa rastvaračima u kojima su reagovala ili u kojima su precipitirala ili se kristalisala. Ovi kompleksi poznati su kao "solvati". Na primer, kompleks sa vodom poznat je kao "hidrat". Farmaceutski prihvatljivi solvati jedinjenja pronalaska obuhvaćeni su okvirom ovog pronalaska. U jednom primeru izvođenja, farmaceutski prihvatljivi solvati jedinjenja pronalaska uključuju njihove hidrate.
[0022] Stručnjaci u oblasti će razumeti da određeni protektovani derivati (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamida, koji mogu da se naprave pre finalnog stupnja deprotektovanja, kao takvi ne moraju posedovati farmakološku aktivnost, ali se mogu u određenim slučajevima primeniti oralnim ili parenteralnim putem i potom metabolisati u telu kako bi formirali jedinjenja pronalaska koja su farmakološki aktivna. Takvi derivati mogu se, prema tome, opisati kao "prolekovi". Primeri pogodnih prolekova za jedinjenja predmetnog pronalaska opisani su u Drugs of Today, volumen 19, broj 9, 1983, pp 499-538 i u Topics in Chemistry, poglavlje 31, pp 306-316 i u "Design of Prodrugs", Bundgaard, Elsevier, 1985, poglavlje 1. Stručnjaci u oblasti će razumeti da određene komponente, poznate stručnjacima u oblasti kao "prokomponente", na primer kako je opisao H. Bundgaard u "Design of Prodrugs" mogu da se postave na određene funkcionalne grupe kada su takve funkcionalne grupe prisutne u jedinjenjima.
[0023] Stručnjaci u oblasti organske hemije razumeće da mnoga organska jedinjenja mogu formirati komplekse sa rastvaračima u kojima su reagovala ili u kojima su precipitirala ili se kristalisala. Ovi kompleksi poznati su kao "solvati". Na primer, kompleks sa vodom poznat je kao "hidrat". Farmaceutski prihvatljivi solvati jedinjenja pronalaska obuhvaćeni su okvirom pronalaska.
[0024] Kako se koristi u ovom tekstu, ukoliko nije drugačije navedeno, izraz "neuropatija malih vlakana" (poznata i kao „periferna neuropatija malih vlakana“ ili „SFN“), označiće svaki poremećaj u kojem pacijent pati od bola, naročito u šakama i/ili stopalima, zbog degeneracije nervnih završetaka malih vlakana.
[0025] Neuropatija malih vlakana može biti primarna neuropatija malih vlakana (t., sam po sebi poremećaj) ili sekundarna neuropatija malih vlakana (tj., simptom drugog stanja).
Primarna neuropatija malih vlakana je povezana sa mutacijama sticanja funkcije u voltažomkontrolisanim natrijumovim kanalima Nav1.7 i Nav1.8. Postoje mnogi potencijalni uzroci sekundarne neuropatije malih vlakana koji obuhvataju: metaboličke poremećaje, kao što su dijabetes melitus, smanjena tolerancija glukoze, brza glikemijska kontrola, deficijencija vitamina B12, dislipidemija, hipotiroidizam ili hronična bolest bubrega; infekcije, kao što su HIV, hepatitis C, influenca; toksičnost lekova, kao što su anti-retrovirusni lekovi, antibiotici (na primer, metronidazol, nitrofurantoin, linezolid), hemoterapija (na primer, bortezomib), flecainid, statin, alkohol, vitamin B6; poremećaji povezani sa imunitetom, kao što su Celijačna bolest, sarkoidoza, Sjogren-ov sindrom, reumatoidni artritis, SLE, vaskulitis, inflamatorna bolest creva, paraneoplastični, monoklonska gamopatija/amiloid. Kod mnogih pacijenata, nije identifikovan specifičan uzrok i sindrom je označen terminom“idiopatski.”
[0026] U jednom primeru izvođenja, poremećaj se bira između primarne neuropatije malih vlakana ili sekundarne neuropatije malih vlakana. U sledećem primeru izvođenja, poremećaj je primarna neuropatija malih vlakana. U alternativnom primeru izvođenja, poremećaj je sekundarna neuropatija malih vlakana.
[0027] Izraz "subjekt", kako se koristi u ovom tekstu, odnosi se na životinju, poželjno sisara, najpoželjnije odraslog čoveka, dete ili malo dete, koji su predmet lečenja, posmatranja ili eksperimenta. U jednom primeru izvođenja, subjekat je pacijent sa dijabetes melitusom ili smanjenom tolerancijom glukoze, naročito dijabetes melitusom.
[0028] Razume se da se, u ovom tekstu, upućivanje na "lečenje" proširuje na profilaksu, prevenciju ili povlačenje i suzbijanje ili poboljšanje simptoma (bilo da su blagi, srednji ili jaki) kao i lečenje već uspostavljenog stanja.
[0029] Izraz "terapijski efikasna količina", kada se koristi u ovom tekstu, označava količinu aktivnog jedinjenja ili farmaceutskog sredstva koja pobuđuje biološki ili medicinski odgovor u tkivnom sistemu životinje ili čoveka, koji traže istraživač, veterinar, lekar ili drugi kliničar, koji uključuje ublažavanje jednog ili više simptoma bolesti ili poremećaja koji se leče i/ili smanjenje jačine jednog ili više simptoma bolesti ili poremećaja koji se leče.
[0030] (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat mogu se koristiti i u kombinaciji sa drugim terapijskim sredstvima. Pronalazak, prema tome, obezbeđuje, u sledećem aspektu, kombinaciju koja uključuje (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat zajedno sa dodatnim terapijskim sredstvom, za upotrebu u lečenju neuropatije malih vlakana. (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat mogu se koristiti u kombinaciji sa drugim medikamentima koji su označeni kao korisni za lečenje ili profilaksu bola (tj. analgetici). Takva terapijska sredstva uključuju na primer inhibitore COX-2 (ciklooksigenaza-2) kao što su celekoksib, derakoksib, rofekoksib, valdekoksib, parekoksib, COX-189 ili 2-(4-etoksi-fenil)-3-(4-metansulfonilfenil)pirazolo[1,5-b]piridazin (WO 99/012930); inhibitore 5-lipooksigenaze; NSAID (nonsteroid anti-inflammatory drugs, nesteroidni antiinflamatorni lekovi), kao što su diklofenak, indometacin, nabumeton ili ibuprofen; bisfosfonate, antagoniste receptora za leukotrijen; DMARD (disease modifying anti-rheumatic drugs, antireumatski lekovi koji modifikuju bolest) kao što je metotreksat; agoniste adenozinskog A1 receptora; blokatore natrijumskih kanala, kao što je lamotrigin; modulatore receptora za NMDA (N-metil-D-aspartat) kao što su antagonisti glicinskih receptora ili memantin; ligande za α2δ-subjedinicu voltažno-zavisnih kalcijumskih kanala. kao što su gabapentin, pregabalin i solzira; triciklične antidepresive kao što je amitriptilin; neuron-stabilišuće antiepileptičke lekove; inhibitore holinesteraze kao što je galantamin; inhibitore preuzimanja monoamina kao što je ventafaksin; opioidne analgetike; lokalne anestetike; 5HT1 agoniste, kao što su triptani, na primer sumatriptan, naratriptan, zolmitriptan, eletriptan, frovatriptan, almotriptan ili rizatriptan; modulatore nikotinskih acetilholinskih (nicotinic acetyl choline, nACh) receptora; modulatore glutamatnih receptora, na primer modulatore NR2B podtipa; ligande EP4receptora; ligande EP2receptora; ligande EP3receptora; EP4agoniste i EP2agoniste; EP4antagoniste; EP2antagoniste i EP3antagoniste; ligande kanabinoidnih receptora; ligande bradikininskih receptora; ligande vaniloidnih receptora ili ligande za prolazni receptorski potencijal-kanale (transient receptor potential, TRP), i ligande purinergičkih receptora, uključujući antagoniste P2X3, P2X2/3, P2X4, P2X7 ili P2X4/7; otvarače KCNQ/Kv7 kanala kao što je retigabin; dodatni COX-2 inhibitori objavljeni su u US patentima br. 5,474,995,US 5,633,272; US 5,466,823; US 6,310,099 i US 6,291,523; i u WO 96/25405; WO 97/38986, WO 98/03484, WO 97/14691, WO 99/12930, WO 00/26216, WO 00/52008, WO 00/38311, WO 01/58881 i WO 02/18374.
[0031] U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak se odnosi na koterapiju, dopunsku terapiju ili kombinacionu terapiju, koje uključuju primenu (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili solvata i jednog ili više analgetika (npr., tramadola ili amitriptilina), antikonvulzantnih lekova (npr. gabapentina, neurontina ili pregabalina (tj. Lyrica)) ili lekova protiv depresije (npr. duloksetin (tj. Cymbalta) ili venlafaksina).
[0032] U ovom primeru izvođenja, terapijski efikasna količina će označavati količinu kombinacije sredstava uzetih zajedno, tako da kombinovani efekat pobudi željeni biološki ili medicinski odgovor. Na primer, terapijski efikasna količina koterapije koja uključuje primenu (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili solvata i najmanje jednog pogodnog analgetskog, antikonvulzivnog ili antidepresivnog leka biće količina (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili solvata i količina pogodnog analgetskog, antikonvulzivnog ili antidepresivnog leka koja, kada se uzimaju zajedno ili sekvencijalno, ima kombinovani efekat koji je terapijski efikasan. Pored toga, stručnjak u oblasti će prepoznati da u slučaju koterapije terapijski efikasnom količinom, količina (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili solvata i količina pogodnog analgetskog, antikonvulzivnog ili antidepresivnog leka, posmatrane pojedinačno mogu, ali ne moraju biti terapijski efikasne.
[0033] Kako se koriste u ovom tekstu, izrazi "koterapija", "dopunska terapija" i "kombinaciona terapija" označiće lečenje subjekta kojem je takvo lečenje potrebno, primenom jednog ili više analgetskih, antikonvulzantnih ili antidepresivnih sredstava i (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili solvata, pri čemu se (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat i analgetsko, antikonvulzantno ili antidepresivno sredstavo/sredstva primenjuju bilo kojim pogodnim načinom, istovremeno, sekvencijalno, odvojeno ili u jednoj istoj farmaceutskoj formulaciji.
[0034] Kada je primena sekvencijalna, prvo se može primeniti ili jedinjenje pronalaska ili drugo terapijsko sredstvo. Kada je primena istovremena, kombinacija može da se primeni u istoj ili u različitim farmaceutskim kompozicijama.
[0035] Kada se kombinuju u istoj formulaciji, podrazumeva se da dva jedinjenja moraju biti stabilna i kompatibilna, međusobno i sa drugim komponentama formulacije. Kada se formulišu zasebno, mogu se obezbediti u bilo kojoj pogodnoj formulaciji, koja se u struci smatra pogodnom za takva jedinjenja.
[0036] Kada se (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat i analgetsko, antikonvulzantno ili antidepresivno sredstavo/sredstva primenjuju u zasebnim doznim formama, broj dnevno primenjenih doza svakog od jedinjenja može biti isti ili različit. (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-Lprolinamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat i analgetsko, antikonvulz ivno ili antidepresivno sredstavo/sredstva mogu se primeniti istim ili različitim putevima primene. Primeri pogodnih metoda primene uključuju oralni, intravenski (iv), intramuskularni (im), subkutani (sc), intranazalni, transdermalni i rektalni. Jedinjenja mogu da se primene i direktno na nervni sistem, što uključuje intracerebralni, intraventrikularni, intracerebroventrikularni, intratekalni, intracisternalni, intraspinalni i/ili perispinalni put primene, dostavom intrakranijalnom ili intravertebralnom iglom i/ili kateterom sa ili bez pumpice. (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat i analgetsko, antikonvulzivno ili antidepresivno sredstavo/sredstva mogu se primenjivati po istovremenom ili po alternirajućem režimu, u isto vreme, ili u različito vreme tokom terapije, istovremeno u vidu podeljenih ili pojedinačnih formi.
[0037] Pogodno, (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat mogu se primeniti u jednoj dnevnoj dozi, ili ukupna dnevna doza može da se primeni u vidu podeljenih doza, dva, tri, ili četiri puta na dan.
[0038] Objavljeni su i metodi lečenja neuropatije malih vlakana, koji uključuju primenu, kod subjekta kojem je to potrebno, terapijski efikasne količine (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili solvata ili proleka, kako je opisano u ovom tekstu.
[0039] (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat mogu se primeniti u vidu sirovog hemijskog sredstva, ali aktivni sastojak je poželjno predstavljen kao farmaceutska kompozicija.
[0040] Kako se koristi u ovom tekstu, izraz "kompozicija" treba da obuhvati proizvod koji uključuje specifikovane sastojke u specifikovanim količinama, kao i svaki drugi proizvod koji rezultuje, direktno ili indirektno, iz kombinacije specifikovanih sastojaka u specifikovanim količinama.
[0041] S obzirom na to da su jedinjenja opisana u ovom tekstu namenjena upotrebi u farmaceutskim kompozicijama, lako je razumeti da je savko od njih poželjno dato u suštinski čistoj formi, na primer, čistoća svakog od njih iznosi najmanje 60%, pogodnije najmanje 75%, i poželjno najmanje 85%, posebno najmanje 98% (% su dati na bazi težine). Nečisti preparati jedinjenja mogu se koristiti za pripremanje čistijih formi koje se koriste u farmaceutskim kompozicijama.
1
[0042] Prema sledećem aspektu pronalaska, obezbeđena je farmaceutskla kompozicija koja sadrži (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat za upotrebu u lečenju neuropatije malih vlakana.
[0043] U jednom primeru izvođenja, farmaceutska kompozicija uključuje jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača, i/ili ekscipijenata. Nosač, razblaživač i/ili ekscipijent moraju biti "prihvatljivi" u smislu da su kompatibilni sa drugim sastojcima kompozicije i da nisu štetni za pacijenta.
[0044] Farmaceutske kompozicije koje sadrže (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat kao aktivni sastojak mogu se pripremiti bliskim mešanjem jedinjenja sa farmaceutskim nosačem, u skladu sa konvencionalnim farmaceutskim tehnikama spravljanja jedinjenja. Ovi postupci mogu uključivati mešanje, granulisanje i komprimovanje ili rastvaranje sastojaka, kako je pogodno za željeni preparat.
[0045] Jedinjenja pronalaska mogu se primeniti u uobičajenim doznim formama pripremljenim kombinovanjem jedinjenja pronalaska sa standardnim farmaceutskim nosačima ili razblaživačima, u skladu sa konvencionalnim postupcima dobro poznatim u struci. Ovi postupci mogu uključivati mešanje, granulisanje i komprimovanje ili rastvaranje sastojaka, kako je pogodno za željeni preparat.
[0046] Jedinjenja ili njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu se primeniti bilo kojim pogodnim metodom, npr. oralnim, parenteralnim, bukalnim sublingvalnim, nazalnim, rektalnim ili trandermalnim putem primene, i farmaceutske kompozicije su prilagođene primeni kod sisara uključujući čoveka.
[0047] Jedinjenja ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, koji su aktivni kada se daju oralnim putem, mogu se formulisati u vidu tečnosi ili čvrstih supstanci, npr., kao sirupi, suspenzije, emulzije, tablete, kapsule ili lozenge.
[0048] Površinske formulacije predmetnog pronalaska mogu biti predstavljene na primer, mastima, kremovima ili losionima, mastima za oči i kapima za oči ili uši, impregniranim oblogama i aerosolima i mogu sadržati odgovarajuće, konvencionalne aditive kao što su prezervansi, rastvarači za pomaganje pri penetraciji leka i emolijenti u mastima i kremovima.
[0049] Formulacije mogu sadržati i kompatibilne konvencionalne nosače, kao što su baze krema ili masti i etanol ili oleil alkohol za losione. Takvi nosači mogu biti prisutni u formulaciji u količini od oko 1% do oko 98%. Uobičajenije, činiće do oko 80% formulacije.
[0050] Tečna formulacija će se obično sastojati od suspenzije ili rastvora aktivnog sastojka u pogodnom tečnom nosaču/nosačima, npr. u vodenim rastvaračima kao što su voda, etanol ili glicerin ili nevodenim rastvaračima kao što su polietilen glikol ili ulje. Formulacija može sadržati i suspendujuće sredstvo, prezervans, sredstvo za poboljšanje ukusa i/ili sredstvo za davanje boje.
[0051] Tablete i kapsule za oralnu primenu mogu postojati u jediničnoj doznoj formi i mogu sadržati konvencionalne ekscipijente kao što su sredstva za povezivanje, na primer sirup, akacija, želatin, sorbitol, tragant, ili polivinilpirolidon, potporne supstance, na primer laktoza, šećer, kukuruzni skrob, kalcijum fosfat, alkohol ili glicin, tabletirajuće lubrikanse, na primer magnezijum stearat, talk, polietilen glikol ili silicijum, dezintegrante, na primer krompirov skrob ili prihvatljiva sredstva za vlaženje kao što je natrijum lauril sulfat. Tablete mogu biti obložene u skladu sa metodima dobro poznatim u normalnoj farmaceutskoj praksi. Oralni tečni preparati mogu biti u formi, na primer, vodenih ili uljanih suspenzija, rastvora, emulzija, sirupa ili eliksira, ili mogu biti predstavljeni u vidu suvog proizvoda koji se pre upotrebe rekonstituiše vodom ili drugim pogodnim prenosnikom. Takvi tečni preparati mogu sadržati konvencionalne aditive kao što su suspendujuća sredstva, na primer sorbitol, metil celuloza, glukozni sirup, želatin, hidroksietil celuloza, karboksimetil celuloza, aluminijum stearatni gel ili hidrogenisane jestive masti, emulgujuća sredstva, na primer lecitin, sorbitan monooleat ili akacija, nevodene prenosnike (koji mogu uključivati jestiva ulja), na primer bademovo ulje, uljane estre kao što su glicerin, propilen glikol ili etil alkohol, prezervanse, na primer metil ili propil p hidroksibenzoat ili sorbinska kiselina i, po želji, uobičajena sredstva za poboljšanje ukusa ili davanje boje.
[0052] Tipične parenteralne kompozicije sastoje se od rastvora ili suspenzije aktivnog sastojka u sterilnom prenosniku, poželjna je voda, ili parenteralno prihvatljivom ulju, npr. polietilen glikol, polivinil pirolidon, lecitin, ulje kikirikija ili susamovo ulje. Alternativno, rastvor može biti liofilizovan i zatim rekonstituisan sa pogodnim rastvaračem neposredno pre primene. U zavisnosti od prenosnika i upotrebljene koncentracije, jedinjenje može biti suspendovano ili rastvoreno u prenosniku. U pripremanju rastvora, jedinjenje može da se rastvori u vodi za injekciju i steriliše filtriranjem, pre nego što se stavi u pogodnu fiolu ili ampulu, koja se zatim hermetički zatvara.
[0053] Pogodno, sredstva kao što su lokalni anestetici, prezervansi i puferišuća sredstva, mogu se rastvoriti u prenosniku. Za povećanje stabilnosti, kompozicija može da se zamrzne posle stavljanja u fiolu i voda može da se ukloni pod vakuumom. Suvi liofilizovani prah se zatim hermetički zatvori u fiolu i pridružena fiola sa vodom za injekciju može da se obezbedi za rekonstituisanje tečnosti pre upotrebe. Parenteralne suspenzije pripremaju se suštinski na isti način, osim što se jedinjenje suspenduje u prenosniku umesto da se rastvori, a sterilizacija ne može da se obavi filtracijom. Jedinjenje može da se steriliše izlaganjem etilen oksidu pre nego što se suspenduje u sterilnom prenosniku. Pogodno, surfaktant ili sredstvo za vlaženje uključeni su u kompoziciju da bi se olakšala ujednačena distribucija jedinjenja.
[0054] Kompozicije za nazalnu primenu mogu pogodno da se formulišu kao aerosoli, kapi, gelovi i praškovi. Aerosolne formulacije tipično sadrže rastvor ili finu suspenziju aktivnog sastojka u farmaceutski prihvatljivom vodenom ili nevodenom rastvaraču i obično su predstavljene pojedinačnim ili višedoznim količinama u sterilnoj formi u hermetički zatvorenom kontejneru koji može biti u formi kertridža ili punjenja za upotrebu sa gore pomenutim uređajem. Alternativno, hermetički zatvoreni kontejner može biti dispenzioni uređaj za jednokratnu upotrebu, kao što je jednodozni nazalni inhalator ili aerosolni dispenzer, povezan sa ventilom za odmeravanje. Kada dozna forma uključuje aerosolni dispenzer, sadržaće propelant koji može biti komprimovani gas, npr. vazduh ili organski propelant kao fluoro-hloro-hidro-ugljenik ili hidrofluorougljenik. Aerosolne dozne forme mogu biti i u vidu pumpice-atomizera.
[0055] Kompozicije pogodne za bukalnu ili sublingvalnu primenu uključuju tablete, lozenge i pastile u kojima je aktivni sastojak formulisan sa nosačem kao što je šećer i akacija, tragant ili želatin i glicerin. Kompozicije za rektalnu primenu pogodno su u vidu supozitorija koje sadrže konvencionalnu bazu za supozitorije kao što je kakao buter. Kompozicije pogodne za transdermalnu primenu uključuju masti, gelove i flastere.
[0056] U jednom primeru izvođenja, kompozicija je u jediničnoj doznoj formi kao što je tableta, kapsula ili ampula.
[0057] Doza jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, upotrebljena za lečenje gore pomenutih poremećaja ili bolesti, variraće na uobičaje način u zavisnosti od određenog poremećaja, ili bolesti koji se leče, težine subjekta i drugih sličnih faktora. Međutim, kao opšte pravilo, pogodne jedinične doze mogu sadržati od 0.1% do 100% po težini, na primer od 10 do 60% po težini, aktivnog materijala, zavisno od metoda primene. Kompozicija može
1
sadržati od 0% do 99% po težini, na primer od 40% do 90% po težini, nosača, zavisno od metoda primene. Kompozicija može sadržati od 0.05 mg do 1000 mg, na primer od 1.0 mg do 500 mg aktivnog materijala, zavisno od metoda primene. Kompozicija može sadržati od 50 mg do 1000 mg, na primer od 100 mg do 400 mg nosača, zavisno od metoda primene. Doza jedinjenja upotrebljenog za lečenje gore pomenutih poremećaja variraće na uobičajen način u zavisnosti od ozbiljnosti poremećaja, težine bolesnika i drugih sličnih faktora. Međutim, kao opšte uputstvo, pogodne jedinične doze mogu biti u opsegu od 50 mg do 1500 mg na dan, na primer 120 mg do 1000 mg na dan. Takvo lečenje može trajati više nedelja ili meseci.
[0058] Stručnjak u oblasti će prepoznati da će optimalna količina i razmak između pojedinačnih doza (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili solvata biti određeni prirodom i obimom stanja koje se leči, kao i da taj optimum može da se odredi konvencionalnim tehnikama. Pored toga, faktori u vezi sa određenim pacijentom koji se leči, uključujući starost pacijenta, težinu, način ishrane i vreme primene, rezultovaće potrebom za prilagođavanjem lečenja. Stručnjak u oblasti će takođe prepoznati da optimalni tok lečenja tj. broj dnevno datih doza jedinjenja pronalaska, tokom definisanog broja dana, može da se odredi korišćenjem uobičajenih testova za praćenje toka lečenja.
Dijagnostikovanje
[0059] Objavljen je i metod dijagnostikovanja neuropatije malih vlakana kod humanog subjekta, pri čemu pomenuti metod uključuje detektovanje prisustva jedne ili više genetičkih varijacija u CACNA1A genu i/ili CACNA1B genu, kod pomenutog subjekta.
[0060] U ovom tekstu, upućivanje na "CACNA1A gen" odnosi se na gen za alfa 1A subjedinicu voltažno zavisnog kalcijumskog kanala, P/Q tipa (poznat i kao Cav.2.1). CACNA1A gen pripada familiji gena koji kodiraju alfa subjedinice kalcijumskih kanala, koje formiraju poru. Ovi kanali koji transportuju pozitivno naelektrisane kalcijumove atome (kalcijumove jone) kroz ćelijsku membranu, imaju ključnu ulogu u sposobnosti ćelije d a stvara i prenosi električne signale. Kalcijumovi joni uključeni su u mnoge različite ćelijske funkcije, uključujući komunikaciju između ćelija, zatezanje mišićnih vlakana (mišićna kontrakcija) i regulaciju određenih gena.
[0061] CACNA1A gen obezbeđuje uputstva za pravljenje jednog dela (alfa-1 subjedinice) kalcijumskog kanala pod imenom Cav2.1. Ova subjedinica formira otvor (poru) kroz koji mogu prolaziti joni kalcijuma. Cav2.1 kanali imaju esencijalnu ulogu u komunikaciji između nervnih ćelija (neurona) u mozgu i kičmenoj moždini. Ovi kanali pomažu u kontroli oslobađanja neurotransmitera, hemijskih supstanci koje prenose signale sa jednog neurona na drugi. Veruje se da su Cav2.1 uključeni i u preživljavanje neurona i sposobnost ovih ćelija da se menjaju i prilagođavaju tokom vremena (plastičnost).
[0062] U blizini jednog kraja CACNA1A gena, segment od tri DNK gradivna bloka (nukleotida) ponavlja se više puta. Ova sekvenca, koja se piše kao CAG, naziva se tripletni ili trinukleotidni ponovak. Kod većine ljudi broj CAG ponovaka u genu iznosi 4 do 18.
[0063] CACNA1A gen nalazi se nalazi se na kratkoj (p) ručici hromozoma 19, na poziciji 13 (19p13). Tačnije, molekularna lokacija CACNA1A gena je na baznim parovima hromozoma 19: 13.206.441 do 13.506.459.
[0064] CACNA1A je ranije bio povezivan sa epizodičnom ataksijom, familijarnom hemiplegijskom migrenom, spinocerebelarnom ataksijom tipa 6 i sporadičnom hemiplegijskom migrenom.
[0065] U ovom tekstu, upućivanje na "CACNA1B gen" odnosi se na gen za alfa 1B subjedinicu voltažno zavisnog kalcijumskog kanala, N tipa (poznat i kao Cav.2.2). Protein kodiran ovim genom predstavlja subjedinicu koja formira poru kalcijumskog voltažno zavisnog kanala N-tipa, koji kontroliše oslobađanje neurotransmitera iz neurona. Kodirani protein formira kompleks sa alfa-2 beta i delta subjedinicama, obrazujući kanal aktiviran visokom voltažom. Ovaj kanal je osetljiv na omega-konotoksin-GVIA i omega-agatoksin-IIIA, ali nije osetljiv na dihidropiridine. Nađene su dve transkripcione varijante ovog gena, koje kodiraju različite izoforme.
[0066] CACNA1B gen nalazi se nalazi se na dugoj (q) ručici hromozoma 9, na poziciji 34 (9q34). Tačnije, molekularna lokacija CACNA1B gena je na baznim parovima hromozoma 9: 140.772.241 do 141.019.076.
[0067] Bolesti udružene sa CACNA1B uključuju Krukenbergov karcinom i Morvanovu fibrilarnu horeu, a među super-putevima u vezi sa njim su putevi sinaptičkih vezikula i cirkadijalna usklađenost.
[0068] U ovom tekstu, upućivanje na "genetičku varijaciju" odnosi se na razliku ili varijaciju u genetičkom kodu ili sekvenci humanog subjekta kada se poredi sa divljim tipom ili nativnim genetičkim kodom ili sekvencom. Razume se da genetičke varijac ije uključuju svaku varijaciju u divljem tipu ili nativnom genetičkom kodu genoma iz pomenutog humanog
1
subjekta koji se analizira. Primeri takvih genetičkih varijacija uključuju mutacije (npr. tačkaste mutacije), insercije, supstitucije delecije, pomeranja rama, polimorfizme pojedinačnih nukleotida (single nucleotide polymorphism, SNP), haplotipove, hromozomske abnormalnosti, varijaciju broja kopija (copy number variation, CNV), epigenetiku i DNK inverzije. U jednom primeru izvođenja, genetičke varijacije se biraju između supstitucija, insercija, delecija i pomeranja rama.
[0069] U ovom tekstu, upućivanje na "polimorfizam pojedinačnih nukleotida (SNP)" treba da se odnosi na varijaciju DNK sekvence, koja se sreće kada se jedan nukleotid u genomu (ili drugoj zajedničkoj sekvenci) razlikuje između članova vrste il i između istih hromozoma jedinke.
[0070] U ovom tekstu, upućivanje na "haplotip" treba da se odnosi na set genetičkih markera koji se nasleđuju zajedno, što je posledica njihove hromozomske kolokalizacije. Haplotip može da se odnosi na samo dve genetičke varijante ili na čitav hromozom, zavisno od broja rekombinacionih događaja koji su se desili između datog seta varijanti.
[0071] U jednom primeru izvođenja, genetičke varijacije se detektuju unutar CACNA1A gena. U još jednom primeru izvođenja, genetičke varijacije su unutar CACNA1A gena i nalaze se između 13.300.000 bp i 13.450.000 bp na hromozomu 19, na primer između 13.318.000 bp i 13.412.000 na hromozomu 19.
[0072] Dijagnostički metodi mogu se koristiti za detektovanje genetičkih varijacija korišćenjem biološkog uzorka dobijenog od humanog subjekta. Prema tome, u jednom primeru izvođenja, metod inicijalno uključuje korak dobijanja biološkog uzorka od humanog subjekta.
[0073] Nukleinska kiselina može da se izoluje iz uzorka u skladu sa bilo kojim metodom poznatim stručnjacima u oblasti. Primeri uključuju uzorke tkiva ili bilo kojeg biomaterijala koji sadrži ćelije ili ćelijskog biomaterijala (tj. uzorak telesne tečnosti ili dlaka). Biološki uzorci se mogu dobiti standardnim postupcima i mogu se upotrebiti odmah ili se mogu čuvati, pod uslovima pogodnim za tip biološkog uzorka, da bi se kasnije upotrebili.
[0074] Metodi dobijanja bioloških uzoraka dobro su poznati stručnjacima u oblasti i uključuju, ali se ne ograničavaju na aspiracije, isečke tkiva, uzimanje krvi ili druge tečnosti, hiruršku biopsiju ili biopsiju iglom, i slično. Primeri pogodnih bioloških uzoraka uključuju celu krv, krvni serum, plazmu, urin, salivu, ili drugu telesnu tečnost (stolicu, suze, sinovijalnu
1
tečnost, sputum), dlaku, cerebrospinalnu tečnost (cerebrospinal fluid, CSF) ili ekstrakt ili prećišćeni uzorak istog, ili razblaženje istog. Biološki uzorci mogu uključivati i homogenate tkiva, isečke tkiva i uzorke dobijene biopsijom, iz živog subjekta. Uzorci se mogu pripremiti na primer, kada je to pogodno, razblaženi ili koncentrovani, i mogu se uskladištiti na uobičajen način. U jednom primeru izvođenja, biološki uzorak je krv ili serum. U sledećem primeru izvođenja, biološki uzorak je krv.
[0075] Ako je neophodno, uzorak može da se sakupi ili koncentruje centrifugiranjem i slično. Ćelije iz uzorka mogu da se liziraju, na primer tako što će se tretirati enzimima, toplotom, surfaktantima, ultrazvukom ili njihovom kombinacijom. Tretman lizom se izvodi da bi se korišćenjem lančane reakcije polimerazom dobila dovoljna količina nukleinske kiseline iz ćelija humanog subjekta.
[0076] Metodi pripremanja plazme i seruma dobro su poznati u struci. Mogu se koristiri "sveža" krvna plazma ili serum ili zamrznuta (uskladištena) i zatim otopljena plazma ili serum. Zamrznuta (uskladištena) plazma ili serum će se optimalno držati u uslovima skladištenja od -20 do -70ºC do otapanja i korišćenja. "Sveža" plazma ili serum trebalo bi da se do korišćenja drže u frižideru ili na ledu i da se ekstrakcija nukleinskih kiselina (npr., RNK, DNK ili ukupne nukleinske kiseline) obavi što je moguće pre. Primeri metoda opisani su u nastavku.
[0077] Krv može da se uzima standardnim metodima, u epruvetu za sakupljanje krvi, tipično od silikonizovanog stakla, bez antikoagulanata za pripremanje seruma, ili sa EDTA, natrijum citratom, heparinom ili sličnim antikoagulantima za pripremanje plazme. Ako se plazma ili serum pripremaju za skladištenje, iako nije apsolutno neophodno, plazma ili serum se pre zamrzavanja najpre frakcionišu iz cele krvi. Ovo smanjuje opterećenje irelevantnom unutarćelijskom RNK koja se oslobodi lizom zamrznutih i otopljenih ćelija, koja može smanjiti osetljivost amplifikacionog testa ili interferirati sa testom amplifikacije preko oslobađanja inhibitora PCR, kao što su porfirini i hematin. "Sveža" plazma ili serum mogu se frakcionisati iz cele krvi centrifugiranjem, uz korišćenje blagog centrifugiranja na 300-800 puta gravitacija, u trajanju od pet do deset minuta, ili se mogu frakcionisati drugim standardnim metodima. Visoka brzina centrifugiranja koja može da izfrakcioniše apoptotska tela, treba da se izbegava.
[0078] Razume se da će korak detektovanja jedne ili više genetičkih varijacija u regionima definisanim u ovom tekstu uključivati bilo koju pogodnu tehniku genetičke analize.
1
[0079] Zapremina plazme ili seruma, koja se koristi u ekstrakciji može varirati, ali obično su dovoljne zapremine od 1 do 100 ml plazme ili seruma.
[0080] Različiti metodi ekstrahovanja pogodni su za izolovanje nukleinske kiseline. Pogodni metodi uključuju ekstrakciju fenolom i hloroformom. Vidi Maniatis et al. Molecular Cloning. A Laboratory Manual. 2d. Cold Spring Harbor Laboratory Press, str, 16.54 (1989).
[0081] Brojni komercijalni kitovi takođe daju pogodnu DNK i RNK uključujući, ali ne ograničavajući se na QIAamp™ mini krvni kit, Agencourt Genfind™, Roche Cobas® Roche MagNA Pure® ili fenol: hloroform ekstrakcija uz korišćenje Eppendorf Phase Lock Gels® i NuclSens ekstrakcionog kita (Biomerieux, Marcy l'Etoile, Francuska). U drugim metodima, mRNK može da se ekstrahuje iz uzoraka krvi/kostne srži uz korišćenje Mag NA Pure LC mRNA HS kita i MagNA Pure LC instrumenta (Roche Diagnostics Corporation, Roche Applied Science, Indianapolis, IN).
[0082] Nukleinska kiselina ekstrahovana iz tkiva, ćelija, plazme, seruma ili dlake može se amplifikovati korišćenjem tehnika amplifikacije nukleinskih kiselina koje su dobro pozante u struci. Mnogi od ovih metoda amplifikacije mogu da se koriste i za detekciju prisustva genetičkih varijacija jednostavnim dizajniranjem oligonukleotidnih prajmera ili proba, koji će interagovati ili se hibridizovati sa određenom ciljnom sekvencom na specifičan način. Kao primer, ali ne u ograničavajućem smislu, ove tehnike mogu uključivati lančanu reakciju polimeraze (polymerase chain reaction, PCR), lančanu reakciju polimeraze kojoj prethodi reverzna transkripcija (RT-PCR), PCR u dva stupnja (nested PCR), lančanu reakciju ligaze. Vidi Abravaya, K., et al, Nucleic Acids Research, 23:675-682, (1995), pojačavanje signala tehnologijom razgranate DNK, Urdea, M. S., et al. AIDS, 7 (suppl 2):S11-S14, (1993), amplifikabilne RNK reportere, Q-beta replikaciju, amplifikaciju baziranu na transkriociji, bumerang-DNK amplifikaciju, aktivaciju izmeštanja lanca, tehnologiju ciklirajuće probe, izotermalnu amplifikaciju sekvenci nukleinskih kiselina (isothermal nucleic acid sequence based amplification, NASBA). Vidi Kievits, T., et al., J Virological Methods, 35:273-286, (1991), Invader Technology, ili druge testove replikacije sekvenci ili testove amplifikacije signala. Svaki od ovih metoda amplifikacije opisan je ukratko u nastavklu i dobro je poznat u struci.
[0083] U nekim metodima koristi se reverzna transkripcija RNK u cDNK. Mogu se koristiti različite reverzne transkriptaze, uključujući, ali ne ograničavajući se na MMLV RT, RNaza H mutante MMLV RT kao Superscript i Superscript II (Life Technologies, GIBCO BRL,
1
Gaithersburg, Md), AMV RT i termostabilnu reverznu transkriptazu iz Thermus thermophilus. Na primer, jedan, ali ne i jedini metod koji može da se koristi za konvertovanje RNK izolovane iz plazme ili seruma u cDNK je prilagođeni protokol Superscript II Preamplification sistema (Life Technologies, GIBCO BRL, Gaithersburg, Md.; kataloški br.
18089-011), kako su opisali Rashtchian, A., PCR Methods Applic, 4:S83-S91, (1994).
[0084] Različiti amplifikacioni enzimi dobro su poznati u struci i uključuju, na primer, DNK polimerazu, RNK polimerazu, reverznu transkriptazu, Q-beta replikazu, termostabilne DNK i RNK polimeraze. Zbog toga što su ove i druge reakcije amplifikacije katalisane enzimima, u jednostepenom testu reagensi za oslobađanje nukleinskih kiselina i reagensi za detektovanje ne bi trebalo da budu potencijalni inhibitori amplifikacionih enzima ako se konačna detekcija zasniva na amplifikaciji. Metodi amplifikacije pogodni za upotrebu sa predmetnim metodima uključuju, na primer, amplifikaciju sa izmeštanjem lanca, amplifikaciju po tipu kotrljajućeg obruča, preamplifikaciju produženjem prajmera ili PCR uz korišćenje oligonukleotida sa delimično degenerisnaom sekvencom (degenerate oligonucleotide PCR, DOP).
[0085] U jednom primeru izvođenja, PCR se koristi za amplifikovanje ciljne ili markerske sekvence od interesa. Stručnjak u oblasti sposoban je da dizajnira i pripremi prajmere koji su pogodni za amplifikovanje ciljne sekvence. Dužina amplifikacionih prajmera zavisi od nekoliko faktora uključujući identičnost nukleotidne sekvence i temperaturu na kojoj se ove nukleinske kiseline hibridizuju ili koriste tokom in vitro amplifikacije nukleinske kiseline. Stručnjaku u oblasti dobro je poznato šta je potrebno razmotriti da bi se odredila poželjna dužina amplifikacionog prajmera za određenu identičnost sekvenci. Na primer, dužina kratke nukleinske kiseline ili oligonukleotida može biti u vezi sa njihovom hibridizacionom specifičnošću ili selektivnošću.
[0086] Za analiziranje SNP i drugih varijanti nukleinskih kiselina, može biti pogodno korišćenje oligonukleotida specifičnih za alternativne alele. Takvi oligonukleotidi koji detektuju varijacije jednog nukleotida u ciljnim sekvencama mogu se označiti izrazima "alelspecifične probe", ili "alel-specifični prajmeri". Dizajniranje i upotreba alel-specifičnih proba za analizu polimorfizama opisani su npr., u Mutation Detection A Practical Approach, ed. Cotton et al. Oxford University Press, 1998; Saiki et al, Nature, 324, 163-166 (1986); Dattagupta, EP235,726; i Saiki, WO 89/11548. U jednom primeru izvođenja, proba ili prajmer mogu se dizajnirati tako da se hibridizuju sa segmentom ciljne DNK tako da se SNP poravna sa krajnjim 5' krajem i/ili krajnjim 3' krajem probe ili prajmera.
1
[0087] U nekim primerima izvođenja, amplifikacija može uključivati obeleženi prajmer, čime se omogućava detekcija amplifikacionog proizvoda tog prajmera. U posebnom primeru izvođenja, amplifikacija može uključivati veći broj obeleženih prajmera; tipično, takvi prajmeri su obeleženi tako da se mogu razlikovati, što omogućava istovremenu detekciju više proizvoda amplifikacije.
[0088] U jednom tipu testa baziranog na PCR, alel-specifični prajmer hibridizuje se sa regionom na molekulu ciljne nukleinske kiseline koji prekriva poziciju SNP i pokreće amplifikaciju samo alelne forme sa kojom prajmer pokazuje savršenu komplementarnost (Gibbs, 1989, Nucleic Acid Res., 17:2427-2448). Tipično, krajnji 3'-nukleotid prajmera poravnava se i komplementaran je sa SNP pozicijom molekula ciljne nukleinske kiseline. Ovaj prajmer se koristi zajedno sa drugim prajmerom koji se hibridizuje na distalnom mestu. Amplifikacija napreduje od dva prajmera, proizvodeći detektabilni proizvod koji ukazuje na to koja je alelska forma prisutna u testnom uzorku. Kontrola se obično obavlja sa drugim parom prajmera od kojih jedan pokazuje nepoklapanje jedne baze na polimorfnom mestu, a drugi pokazuje savršenu komplementarnost sa distalnim mestom. Nepoklapanje jedne baze sprečava amplifikaciju ili bitno smanjuje efikasnost amplifikacije, tako da se detektabilni proizvod ne formira ili se formira u manjim količinama, ili sporijim tempom. Metod je obično najefikasniji kada je nepoklapanje na krajnjoj 3'-poziciji oligonukleotida (tj. krajnja 3'-pozicija oligonukleotida poravnava se sa ciljnom SNP pozicijom) zbog toga što je ta pozicija u najvećoj meri destabilišuća za elongaciju od prajmera (vidi, npr., WO 93/22456).
[0089] U specifičnom primeru izvođenja, prajmer sadrži sekvencu koja je suštinski komplementarna sa segmentom ciljnog SNP-sadržavajućeg molekula nukleinske kiseline osim što prajmer ima nepoklapajući nukleotid na jednoj od tri nukleotidne pozicije na krajnjem 3'-kraju prajmera, tako da nepoklapajući nukleotid nije bazni par određenog alela na SNP mestu. U jednom primeru izvođenja, nepoklapajući nukleotid u prajmeru je drugi od poslednjeg nukleotida na krajnjoj 3'-poziciji prjamera. U sledećem primeru izvođenja, nepoklapajući nukleotid u prajmeru je poslednji nukleotid na najdaljoj 3'-poziciji prajmera.
[0090] U jednom primeru izvođenja, prajmer ili proba obeleženi su fluorogenom reporterskom bojom koja emituje detektabilni signal. Iako je pogodna reporterska boja fluorescentna boja, za upotrebu u pronalasku pogodna je bilo koja reporterska boja koja može da se prikači za detekcioni reagens kao što je oligonukleotidna proba ili prajmer. Takve boje uključuju, ali se ne ograničavaju na akridin, AMCA, BODIPY, kaskada plavo, Cy2, Cy3,
2
Cy5, Cy7, Dabcyl, Edans, eozin, eritrozin, fluorescein, 6-Fam, Tet, Joe, Hex, Oregon zeleno, rodamin, rodol zeleno, Tamra, Rox i Texas crveno.
[0091] Objavljeni su i reagensi koji ne sadrže (ili koji su komplementarni sa) SNP nukleotid identifikovan u ovom tekstu, ali se koriste za testiranje jednog ili više SNP objavljenih u ovom tekstu. Na primer, prajmeri koji su bočno, ali se ne hibridizuju direktno sa ciljnom SNP pozicijom, datom ovde, korisni su u reakcijama ekstenzije prajmera u kojima se prajmeri hibridizuju sa regionom koji je susedan sa ciljnom SNP pozicijom (tj., udaljenim jedan ili više nukleotida od ciljnog SNP mesta). Tokom reakcije ekstenzije prajmera, prajmer tipično ne može da se produži preko ciljnog SNP mesta ako je određeni nukleotid (alel) prisutan na tom ciljnom SNP mestu, i proizvod ekstenzije prajmera može lako da se detektuje kako bi se odredilo koji SNP alel je prisutan na ciljnom SNP mestu. Na primer, određeni ddNTP se tipično koriste u reakcijama ekstenzije prajmera da prekinu ekstenziju p rajmera kada se ddNTP ugradi u proizvod ekstenzije. Prema tome, objavljeni su i reagensi koji se vezuju za molekul nukleinske kiseline u regionu susednom SNP mestu, čak i ako vezane sekvence ne moraju obavezno uključivati SNP mesto kao takvo.
[0092] Različite nukleinske kiseline mogu da se amplifikuju pre detektovanja, ili mogu da se detektuju direktno tokom koraka amplifikacije (tj., metodima "u realnom vremenu"). U nekim primerima izvođenja, ciljna sekvenca se amplifikuje i dobijeni amplikon se detektuje elektroforezom. U nekim primerima izvođenja, specifična mutacija ili varijanta detektuje se sekvenciranjem amplifikovane nukleinske kiseline. U nekim primerima izvođenja, ciljna sekvenca se amplifikuje korišćenjem obeleženog prajmera tako da dobijeni amplikon bude detektabilno obeležen. U nekim primerima izvođenja, prajmer je fluorescentno obeležen.
[0093] U jednom primeru izvođenja, detekcija varijante nukleinske kiseline, kao što je SNP, obavlja se korišćenjem TaqMan® testa koji je poznat i kao test 5' nukleaze (U.S. pat. br.
5,210,015 i 5,538,848) ili Molecular Bicon probe ("molekulski svetionik") (U.S. pat . br.
5,118,801 i 5,312,728), ili drugih linearnih ili "svetionik"-proba bez peteljke (Livak et al, 1995, PCR Method AppL, 4:357-362; Tyagi et al, 1996, Nature Biotechnology, 14:303-308; Nazarenko et al, 1997, Nucl. Acids Res., 25:2516-2521; U.S pat. br. 5,866,336 i 6,117,635). TaqMan® test detektuje akumulaciju specifičnog amplifikovanog proizvoda tokom PCR. TaqMan® test koristi oligonukleotidnu probu obeleženu fluorescentnom reporterskom bojom i "quencher"-bojom (gasilac, gaseća boja). Reporterska boja se ekscitira ozračivanjem pogodnom talasnom dužinom, prenosi energiju gasiocu u istoj probi, procesom koji se naziva fluorescentno-rezonantni energetski transfer (fluorescence resonance energy transfer, FRET).
Kada je prikačena za probu, ekscitirana reporterska boja ne emituje signal. Blizina gaseće boje u odnosu na reportersku boju u intaktnoj probi održava smanjenu fluorescenciju reportera. Reporterska boja i gaseća boja mogu biti na krajnjem 5' odnosno 3' kraju, ili obrnuto. Alternativno, reporterska boja se može nalaziti na krajnjem 5' ili 3' kraju, dok je gaseća boja prikačena za unutrašnji nukleotid, ili obrnuto. U još jednom primeru izvođenja, i reporter i gasilac mogu biti prikačeni za unutrašnje nukleotide, na međusobnom rastojanju tako da fluorescencija reportera bude smanjena.
[0094] Tokom PCR, 5'-nukleazna aktivnost DNK polimeraze odseca probu čime razdvaja reportersku boju i gaseću boju što za rezultat ima pojačanu fluorescenciju reportera. Akumulacija PCR proizvoda određuje se direktno praćenjem porasta fluorescencije reporterske boje. DNK polimeraza seče probu između reporterske boje i gaseće boje samo ako se proba hibridizuje sa ciljnim SNP-sadržavajućim templatom koji se amplifikuje tokom PCR, i proba je dizajnirana da se hibridizuje sa ciljnim SNP mestom samo ako je prisutan određeni SNP alel.
[0095] Sekvence TaqMan® prajmera i probe mogu se lako odrediti korišćenjem informacija o sekvenci varijante i pridružene nukleinske kiseline, obezbeđenih u ovom tekstu. Brojni kompjuterski programi, kao što je Primer Express (Applied Biosystems, Foster City, Calif.) mogu se koristiti za brzo dobijanje optimalnih setova prajmera/proba. Stručnjak u oblasti će prepoznati da su takvi prajmeri i probe za detektovanje genetičkih varijacija korisni u dijagnostici neuropatije malih vlakana i mogu se lako inkorporisati u format kita. Metod dijagnostikovanja uključuje i modifikacije TaqMan® testa, dobro poznate u struci, kao što su upotreba molekularnih svetionika kao proba (U. S. pat. br. 5,118,801 i 5,312, 728) i druge varijane formata (U. S. pat. br.5,866,336 i 6,117,635).
[0096] Drugi metodi hibridizacije proba koje se detektuju u realnom vremenu mogu se koristiti za detektovanje amplifikacije ciljne ili merkerske sekvence koja se nalazi uz region tandem ponovka. Na primer, mogu se koristiti komercijalno dostupne MGB Eclipse™ probe (Epoch Biosciences), koje ne počivaju na degradaciji probe. MGB Eclipse™ probe rade tako što koriste mehanizam hibridizacijom podstaknute fluorescencije. MGB Eclipse™ probe imaju Eclipse™ Dark Quencher (tamni gasilac) i MGB pozicionirane na 5'-kraju probe. Fluorofora je locirana na 3'-kraju probe. Kada je proba u rastvoru i nije hibridizovana, trodimenzionalna konformacija dovodi gasioca u blizinu fluorofore i fluorescencija je ugašena. Međutim, kada je proba hibridizovana sa ciljnom ili markerskom sekvencom, proba se razvije, gasilac se udalji od fluorofore i moguće je detektovati rezultujuću fluorescenciju.
[0097] Mogu se dizajnirati oligonukleotidne probe koje su duge između oko 10 i oko 100 nukleotida i hibridizuju se sa amplifikovanim regionom. Oligonukleotidne probe su poželjno duge 12 do 70 nukleotida, poželjnije duge su 15 do 60 nukleotida i najpoželjnije duge su 15-25 nukleotida. Probe mogu biti obeležene. Amplifikovani fragmenti mogu da se detektuju korišćenjem standardnih metoda gel-elektroforeze. Na primer, u poželjnim primerima izvođenja, amplifikovane frakcije razdvajaju se na agaroznom gelu i boje etidijum bromidom, po metodima poznatim u struci za detektovanje amplifikovanih fragmenata..
[0098] Druga pogodna metodologija detektovanja uključuje dizajniranje i korišćenje bipartitnih kombinacija prajmera/proba, kao što su Scorpion™ probe. Ove probe izvode sekvenciono specifično prajmovanje, a detektovanje PCR produkta se postiže korišćenjem jednog molekula. Scorpion™ probe sadrže 3' prajmer sa 5' produženim repom probe, koji sadrži strukturu ukosnice koja poseduje par fluorofora/gasilac. Rep probe zaštićen je od replikacije u 5' ka 3' smeru uključivanjem heksetilen glikola (hexethylene glycol, HEG) koji blokira polimerazu da replicira probu. Fluorofora je prikačena za 5' kraj i ugašena je komponentom kuplovanom za 3' kraj. Posle izduživanja Scorpion™ prajmera, specifična sekvenca probe može da se veže za svoj komplement u izduženom amplikonu čime se otvara petlja ukosnice. Ovo sprečava gašenje fluorescencije i zapaža se signal. Specifični cilj je amplifikovan reverznim prajmerom i prajmerskim delom Scorpion™, što za rezultat ima ekstenziju proizvoda. Fluorescentni signal se generiše usled razdvajanja fluorofore i gasioca što je rezultat vezivanja elementa-probe Scorpion™ za proizvod ekstenzije. Ovakve probe opisane su u Whitcombe et al, Nature Biotech 17: 804-807 (1999).
[0099] Isto tako, objavljen je i kit za dijagnostikovanje neuropatije malih vlakana, koji uključuje uputstva za upotrebu pomenutog kita u skladu sa metodima definisanim u ovom tekstu.
[0100] Kitovi mogu biti pripremljeni za izvođenje metoda opisanih u ovom tekstu. Tipično, kitovi uključuju najmanje jednu komponentu ili pakovanu kombinaciju komponenti.
[0101] Tipično, kitovi uključuju najmanje jednu probu specifičnu za jedan ili više regiona definisanih u ovom tekstu, u najmanje jednom kontejneru. Ove komponente mogu uključivati, između ostalog, nukleinsko-kiselinske probe, nukleinko-kiselinske prajmere za amplifikaciju jednog ili više regiona definisanih u ovom tekstu, pufere, uputstva za upotrebu i slično.
2
[0102] Kada se utvrdi da osoba verovatno boluje ili da boluje od neuropatije malih vlakana, razume se da će se pomenutoj osobi prepisati odgovarajuće lečenje, kao što je (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat.
[0103] Prema tome, prema sledećem aspektu pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje za upotrebu u metodu lečenja neuropatije malih vlakana kod humanog subjekta, gde pomenuti metod uključuje:
(a) detektovanje prisustva jedne ili više genetičkih varijacija u CACNA1A genu i/ili CACNA1B genu pomenutog subjekta; i
(b) primenu (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili solvata, kod pomenutog pacijenta za kojeg je identifikovano da ima pomenutu jednu ili više genetičkih varijacija.
[0104] Kako je razmatrano ranije u ovom tekstu, sadašnji način lečenja neuropatije malih vlakana udružen je sa lošom tolerabilnošću i rezultuje suboptimalnom kontrolom bola. Postoji, dakle, velika potreba za identifikovanjem individua koje će najverovatnije odgovoriti na tu terapiju.
[0105] Objavljen je i metod predviđanja da li će oboleli od neuropatije malih vlakana odgovoriti na lečenje (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamidom ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, solvatom ili prolekom, pri čemu pomenuti metod uključuje korake:
(a) dobijanje biološkog uzorka od pacijenta; i
(b) detektovanje prisustva jedne ili više genetičkih varijacija u CACNA1A genu i/ili CACNA1B genu pomenutog subjekta;
tako da prisustvo pomenute jedne ili više genetičkih varijacija ukaže da će pacijent oboleo od neuropatije malih vlakana odgovoriti na lečenje (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamidom ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, solvatom ili prolekom.
[0106] Kada se identifikuje da pacijent odgovara na lečenje, razume se da će mu tada pogodno biti dat (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, solvat ili prolek.
[0107] Tako, u jednom primeru izvođenja, metod dodatno uključuje:
(c) primenu (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, solvata ili proleka kod pomenutog pacijenta sa neuropatijom malih vlakana za kojeg je identifikovano da ima jednu ili više pomenutih genetičkih varijacija.
[0108] Prema sledećem aspektu pronalaska, obezbeđen je (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat za upotrebu u lečenju neuropatije malih vlakana kod pacijenta, koje se karakteriše time što je pomenuti pacijent odabran po tome što ima jednu ili više genetičkih varijacija u CACNA1A genu i/ili CACNA1B genu.
[0109] Prema sledećem aspektu pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje za upotrebu u metodu lečenja neuropatije malih vlakana kod pacijenta, pri čemu pomenuti metod uključuje korake selektovanja pacijenta koji ima jednu ili više genetičkih varijacija u CACNA1A genu i/ili CACNA1B genu, što je praćeno primenom terapijski efikasne količine (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili solvata, kod pomenutog pacijenta.
PRIMERI
[0110] Predmetni pronalazak ilustrovan je Primerima opisanim u nastavku.
Primer 1: (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid (E1)
[0111]
[0112] Jedinjenje iz Primera 1 može se pripremiti kako je opisano u Primeru 1, Postupci 1 i 2, WO 2007/042239.
Primer 2: (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid hidrohlorid (E2)
[0113]
2
[0114] Jedinjenje iz Primera 2 može se pripremiti kako je opisano u Primeru 2, Postupci 1 do 5, WO 2007/042239.
Primer 3: (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid metansulfonat (E3)
[0115]
[0116] Jedinjenje iz Primera 3 može se pripremiti kako je opisano u Primeru 6, WO 2007/042239.
2

Claims (7)

PATENTNI ZAHTEVI
1. (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju neuropatije malih vlakana.
2. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što je (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid hidrohlorid.
3. Farmaceutska kompozicija, naznačena time, što uključuje (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u lečenju neuropatije malih vlakana.
4. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 3 ili farmaceutski prihvatljiva so istog, naznačene time, što dodatno uključuju jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača i/ili ekscipijenata.
5. (5R)-5-(4-{[(2-fluorofenil)metil]oksi}fenil)-L-prolinamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju neuropatije malih vlakana kod pacijenta, naznačene time, što se pomenuti pacijent bira po tome što ima jednu ili više genetičkih varijacija u CACNA1A genu i/ili CACNA1B genu.
6. Jedinjenje ili kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 5, naznačeni time, što je pomenuta neuropatija malih vlakana primarna neuropatija malih vlakana.
7. Jedinjenje ili kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 5, naznačeni time, što je pomenuta neuropatija malih vlakana sekundarna neuropatija malih vlakana.
Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
2
RS20191108A 2014-10-03 2015-10-02 Lečenje neuropatije malih vlakana RS59621B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1417499.9A GB201417499D0 (en) 2014-10-03 2014-10-03 Novel use
PCT/GB2015/052886 WO2016051195A1 (en) 2014-10-03 2015-10-02 Small fibre neuropathy treatment
EP15790623.1A EP3200784B1 (en) 2014-10-03 2015-10-02 Small fibre neuropathy treatment

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS59621B1 true RS59621B1 (sr) 2020-01-31

Family

ID=51946796

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20191108A RS59621B1 (sr) 2014-10-03 2015-10-02 Lečenje neuropatije malih vlakana

Country Status (15)

Country Link
US (1) US20170290802A1 (sr)
EP (1) EP3200784B1 (sr)
CY (1) CY1122769T1 (sr)
DK (1) DK3200784T3 (sr)
ES (1) ES2750355T3 (sr)
GB (1) GB201417499D0 (sr)
HR (1) HRP20191480T1 (sr)
HU (1) HUE045907T2 (sr)
LT (1) LT3200784T (sr)
PL (1) PL3200784T3 (sr)
PT (1) PT3200784T (sr)
RS (1) RS59621B1 (sr)
SI (1) SI3200784T1 (sr)
SM (1) SMT201900711T1 (sr)
WO (1) WO2016051195A1 (sr)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2017353841A1 (en) * 2016-11-02 2019-05-30 Biogen Ma Inc. Novel dosage regimen

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NO870613L (no) 1986-03-05 1987-09-07 Molecular Diagnostics Inc Deteksjon av mikroorganismer i en prŸve inneholdende nukleinsyre.
JP2897959B2 (ja) 1988-05-20 1999-05-31 エフ．ホフマン―ラ ロシュ アクチェンゲゼルシャフト 固定化された配列特異的プローブ
US5118801A (en) 1988-09-30 1992-06-02 The Public Health Research Institute Nucleic acid process containing improved molecular switch
US5210015A (en) 1990-08-06 1993-05-11 Hoffman-La Roche Inc. Homogeneous assay system using the nuclease activity of a nucleic acid polymerase
ATE198358T1 (de) 1992-04-27 2001-01-15 Dartmouth College Detektion von gensequenzen in biologischen flüssigkeiten
US5474995A (en) 1993-06-24 1995-12-12 Merck Frosst Canada, Inc. Phenyl heterocycles as cox-2 inhibitors
US5538848A (en) 1994-11-16 1996-07-23 Applied Biosystems Division, Perkin-Elmer Corp. Method for detecting nucleic acid amplification using self-quenching fluorescence probe
US5466823A (en) 1993-11-30 1995-11-14 G.D. Searle & Co. Substituted pyrazolyl benzenesulfonamides
US5633272A (en) 1995-02-13 1997-05-27 Talley; John J. Substituted isoxazoles for the treatment of inflammation
BR9607035A (pt) 1995-02-13 1997-11-04 Searle & Co Isoxazois substituidos para o tratamento de inflamação
UA57002C2 (uk) 1995-10-13 2003-06-16 Мерк Фросст Кенада Енд Ко./Мерк Фросст Кенада Енд Сі. Похідне (метилсульфоніл)феніл-2-(5н)-фуранону, фармацевтична композиція та спосіб лікування
ATE233743T1 (de) 1996-04-12 2003-03-15 Searle & Co N-((4-(5-methyl-3-phenylisoxazol-4- yl)phenyl)sulphonylpropylamid und sein natriumsalz als pro-pharmakon von cox-2 inhibitoren
US6117635A (en) 1996-07-16 2000-09-12 Intergen Company Nucleic acid amplification oligonucleotides with molecular energy transfer labels and methods based thereon
US5866336A (en) 1996-07-16 1999-02-02 Oncor, Inc. Nucleic acid amplification oligonucleotides with molecular energy transfer labels and methods based thereon
IL127441A (en) 1996-07-18 2003-02-12 Merck Frosst Canada Inc Substituted pyridines, pharmaceutical compositions comprising them and their use in the preparation of anti-inflammatory medicaments or as selective cyclooxygenase-2 inhibitors
CO4960662A1 (es) 1997-08-28 2000-09-25 Novartis Ag Ciertos acidos 5-alquil-2-arilaminofenilaceticos y sus derivados
DK1032575T3 (da) 1997-09-05 2003-10-20 Glaxo Group Ltd 2,3-diaryl-pyrazol(1,5-b)pyridazinderivater, deres fremstilling og anvendelse som cyclooxygenase 2 (COX-2) inhibitor
US7223772B1 (en) 1998-11-03 2007-05-29 Smithkline Beecham Corporation Pyrazolopyridine derivatives as selective cox-2 inhibitors
US6025683A (en) 1998-12-23 2000-02-15 Stryker Corporation Motor control circuit for regulating a D.C. motor
ATE261444T1 (de) 1999-02-27 2004-03-15 Glaxo Group Ltd Pyrazolopyridine
GB0003224D0 (en) 2000-02-11 2000-04-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0021494D0 (en) 2000-09-01 2000-10-18 Glaxo Group Ltd Chemical comkpounds
TW200730494A (en) 2005-10-10 2007-08-16 Glaxo Group Ltd Novel compounds

Also Published As

Publication number Publication date
WO2016051195A1 (en) 2016-04-07
CY1122769T1 (el) 2021-05-05
PT3200784T (pt) 2019-09-10
EP3200784A1 (en) 2017-08-09
HUE045907T2 (hu) 2020-02-28
HRP20191480T1 (hr) 2020-06-12
ES2750355T3 (es) 2020-03-25
SI3200784T1 (sl) 2020-03-31
DK3200784T3 (da) 2019-08-12
GB201417499D0 (en) 2014-11-19
EP3200784B1 (en) 2019-07-31
PL3200784T3 (pl) 2020-03-31
LT3200784T (lt) 2019-09-10
US20170290802A1 (en) 2017-10-12
SMT201900711T1 (it) 2020-03-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2021116295A (ja) ＳＡＲＳ−ＣｏＶ−２感染の治療における置換アミノプロピオン酸化合物の使用
JP6450323B2 (ja) デオキシウリジントリホスファターゼ阻害剤
US20240392379A1 (en) Methods of treating cancers having a biallelic loss of function or gene overexpression mutation
ES2989209T3 (es) Métodos para evaluar riesgo de desarrollar una enfermedad viral usando una prueba genética
US20190388391A1 (en) Novel erythromelalgia treatment
CA3199442A1 (en) Novel rna transcript
US20170007578A1 (en) Genotype Specific Methods for Treating Human Subjects Using 4-Methylpyrazole
AU2016240212B2 (en) Genetic predictors of a response to treatment with CRHR1 antagonists
EP3200784B1 (en) Small fibre neuropathy treatment
ES2754281T3 (es) Procedimiento de diagnóstico de la neuralgia del trigémino
EP3200785B1 (en) Paroxysmal extreme pain disorder treatment
WO2008115706A1 (en) Methods and compositions for treatment of drug addiction
US20070289889A1 (en) Biomarkers For The Prediction Of Drug-In Duced Diarrhea
EP3236966B1 (en) Combination of raf inhibitors and taxanes
WO2018181102A1 (ja) ヌクレオシド誘導体又はその塩、及びそれを含む医薬組成物
US8716250B2 (en) Diazoxide for the treatment of Friedreich's ataxia
WO2016178591A2 (en) Genetic markers and treatment of male obesity
KR20210137442A (ko) 심부전을 치료 또는 예방하고 심부전의 위험을 감소시키는 방법
JP2009249294A (ja) 関節リウマチの処置剤
HK1168993A (en) Genotype specific methods for treating human subjects using 4-methylpyrazole
HK1168993B (en) Genotype specific methods for treating human subjects using 4-methylpyrazole