RS59720B1 - Derivati izohromena kao inhibitori fosfoinozitidnih 3-kinaza - Google Patents

Derivati izohromena kao inhibitori fosfoinozitidnih 3-kinaza

Info

Publication number
RS59720B1
RS59720B1 RS20191559A RSP20191559A RS59720B1 RS 59720 B1 RS59720 B1 RS 59720B1 RS 20191559 A RS20191559 A RS 20191559A RS P20191559 A RSP20191559 A RS P20191559A RS 59720 B1 RS59720 B1 RS 59720B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
isochromen
ethyl
pyrimidin
amino
pyrazolo
Prior art date
Application number
RS20191559A
Other languages
English (en)
Inventor
Matteo Biagetti
Anna Maria Capelli
Alessandro Accetta
Laura Carzaniga
Original Assignee
Chiesi Farm Spa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chiesi Farm Spa filed Critical Chiesi Farm Spa
Publication of RS59720B1 publication Critical patent/RS59720B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/06—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/53—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with three nitrogens as the only ring hetero atoms, e.g. chlorazanil, melamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/14—Antitussive agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/02—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6
    • C07D473/16—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 two nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/32—Nitrogen atom
    • C07D473/34—Nitrogen atom attached in position 6, e.g. adenine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/36—Sulfur atom
    • C07D473/38—Sulfur atom attached in position 6
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja koja inhibiraju Fosfoinozitidne 3-kinaze (u daljem tekstu Pl3K); naročito se pronalazak odnosi na jedinjenja koja su derivati izohromena, metode pripemanja takvih jedinjenja, farmaceutske kompozicije koje ih sadrže i njihovu terapijsku upotrebu.
[0002] Konkretnije, jedinjenja pronalaska su inhibitori aktivnosti ili funkcije Klase l Pl3K, i tačnije, oni su inhibitori aktivnosti ili funkcije Pl3Kɑ , Pl3Kβ, Pl3Kδ i/ili Pl3Ky izoformi Klase l Pl3K.
[0003] Zbog toga jedinjenja pronalaska mogu biti korisna u tretmanu mnogih poremećaja povezanih sa mehanizmima PI3K enzima, kao što su respiratorne bolesti uključujući astmu, hroničnu opstruktivnu bolest pluća (COPD) i kašalj; alergijske bolesti, uključujući alergijski rinitis i atopijski dermatitis; autoimune bolesti uključujući reumatoidni artritis i multiplu sklerozu; inflamatorne poremećaje, uključujući inflamatornu bolest creva; kardiovaskularne bolesti, uključujući trombozu i aterosklerozu; hematološke maligne bolesti; cističnu fibrozu; neurodegenerativne bolesti; pankreatitis; multiorgansko zatajenje; bolesti bubrega; agregaciju trombocita; kancer; pokretljivost sperme; transplantaciju organa, i naročito u odbacivanju transplantata; odbacivanje grafta; povrede pluća; i bol, uključujući bol povezan sa reumatoidnim artritisom ili osteoartritisom, bol u leđima, opšti inflamatorni bol, post herpetičku neuralgiju, dijabetičku neuropatiju, inflamatorni neuropatski bol, trigeminalnu neuralgiju i centralni bol.
POZADINA PRONALASKA
[0004] U biohemiji kinaza je vrsta enzima koji prenosi fosfatne grupe iz visoko-energetskih molekula donora, kao što je ATP, na specifične supstrate, proces označen kao fosforilacija. Konkretno, enzimi Pl3K su lipidni enzim kinaza koji mogu fosforilizirati Fosfoinozitide (Pls) u 3’-hidroksilnoj grupi inozitol prstena (Panayotou et al, Trends Cell Biol 2:358-60 (1992)). Poznato je da Pls, lokalizovani u plazma membranama, mogu delovati kao drugi glasnici u signalnim kaskadama, spajajući proteine koji sadrže plekstrinske homologne (PH), FYVE, PX i ostale domene koje vezuju fosfolipid (Vanhaesebroeck B et al, Annu. Rev. Biochem 70, 535-602, 2001; Katso R et al, Annu. Rev. Cell Dev. Biol.17, 615-675, 2001).
[0005] Zbog toga, Pls mogu delovati kao sekundarni glasnici u mnogim ćelijskim procesima, uključujući transdukciju signala, regulaciju prometa i transporta membrane, organizaciju citoskeleta, preživljavanje i smrt ćelije i mnoge druge funkcije.
[0006] Pli mogu biti vezani na lipidne dvoslojeve ćelijske membrane pomoću dve masne kiseline koje su spojene na citosolni inozitolni prsten preko glicerol fosfatnog veznika. Pls inozitolni prsten može biti fosforilisan sa Pl3K enzimima, dovodeći do regulacije ćelijskog rasta, preživljavanja i proliferacije. Iz tog razloga, fosforilacija Pli sa Pi3K enzimima je jedan od najrelevantnijih događaja transdukcije signala povezanih sa aktivacijom receptora ćelijske površine sisara (Cantley LC, Science 296, 1655-7, 2002; Vanhaesebroeck B et al, Annu. Rev. Biochem 70, 535-602, 2001).
[0007] Enzimi Pl3K su podeljeni u tri klase: Klasa l Pl3K, Klasa ll Pl3K i Klasa lll Pl3K, na osnovu homologije sekvenci, strukture, vezivanja partnera, načina aktivacije i prednosti supstrata (Vanhaesebroeck B et al, Exp. Cell Res. 253(1), 239-54, 1999; i Leslie NR et al, Chem. Rev. 101(8), 2365-80, 2001). Klasa l PI3K pretvara fosfoinozitid-(4,5)-difosfat(Pl(4,5)P2) u fosfoinozitd-(3,4,5)-trifosfat(Pl(3,4,5)P3), koji funkcioniše kao sekundarni glasnik. Signalizirajuća kaskada aktivirana povećanjem u intracelularnim nivoima Pl (3,4,5)P3 je negativno regulisana delovanjem 5’-specifičnih i 3’-specifičnih fosfataza (Vanhaesebroeck B et al., Trends Biochem. Sci.22(7), 267-72, 1997; Katso R et al, Annu. Rev. Cell Dev. Biol.17, 615-75, 2001; i Toker A, Cell. Mol. Life Sci.59(5), 761-79, 2002).
Enzimi klase ll Pl3K su najnovija klasa Pl3K i njihova tačna funkcija je još uvek nejasna. Enzimi klase lll PI3K se sastoje od jednog člana familije koji je strukturno povezan sa enzimima Klase l Pl3K i čini se da je važn u endocitozi i vezikularnom saobraćaju. Međutim, postoje neki dokazi koji pokazuju da Klasa lll Pl3K može biti relevanta u imunološkim ćelijskim procesima, kao što je fagocitoza i signaliziranje toličnog receptora (TLR).
[0008] Enzimi Klase l Pl3K mogu dalje biti podeljeni u klasu lA i klasu lB na osnovu njihovih mehanizama aktivacije.
[0009] Detaljnije, enzimi Klase lA Pl3K sadrže tri usko povezane izoforme: Pl3Kɑ , Pl3Kβ i Pl3Kδ, dok Klasa lB sadrži samo Pl3Ky izoformu. Ovi enzimi su heterodimeri sastavljeni od katalitičke podjedinice poznata kao p110, sa četiri tipa: alfa (ɑ ), beta (δ), delta (δ) i gama (y) izoformi, konstitutivno povezane sa regulatornom podjedinicom. Prve dve p110 izoforme (ɑ i β) su sveprisutno izražene i učestvuju u ćelijskoj diferencijaciji i proliferaciji. Posledično, enzimi Pl3Kɑ i Pl3Kβ su obimno proučavani kao ciljevi za razvoj novih hemoterapijskih agenasa.
[0010] Inače, p110δ i p110y izoforme su uglavnom eksprimirane u leukocitima i važne su u aktivaciji imunološkog odgovora, kao što je migracija leukocita, aktivacija B i T ćelija i degranulacija mastocita. Zbog toga, Pl3Kδ i Pl3Ky izoforme su veoma relevantne kod inflamatornih respiratornih bolesti.
[0011] Trenutno, derivati inhibitora enzima Pl3K poznati u tehnici, generalno mogu inhibirati navedene izoforme (alfaɑ , beta β, delta δ i gama y izoforme) i oni mogu delovati na pojedinačne uloge odigrane kod različitih bolesti sa navedenim specifičnim izoformama.
[0012] Zbog toga su studije specifičnih aktivnosti inhibitora Klase lA za jednu specifičnu Pl3Kɑ , Pl3Kβ, Pl3Kδ i Pl3Ky izoformu nad drugom opsežno razvijene u cilju prepoznavanja pogodnog profila za tretman poremećaja povezanih sa mehanizmima enzima Pl3K.Takvi poremećaji mogu, na primer, uključiti respiratorne bolesti izabrane od idiopatskog hroničnog kašlja, astme u varijanti kašlja, kašlja povezanog sa torakalnim tumorom ili kancerom pluća, virusnog ili pos-tvirusnog kašlja, sindroma kašlja gornjih disajnih puteva (UACS) ili kašlja posle nazalnog kapanja, ili kašlja povezanog sa gastroezofagealnom refluksnom bolešću sa kiselinom i bez kiseline, astme, hroničnog bronhitisa, hronične opstruktivne bolesti pluća (COPD), intersticijske bolesti pluća, idiopatske fibroze pluća (lPF), kongestivne bolesti srca, sarkoidoze, infekcije (kao što je veliki kašalj), virusne infekcije uključujući virusne infekcije respiratornog trakta i virusne egzacerbacije respiratornih bolesti; ne-virusne respiratorne infekcije, uključujući aspergilozu i lišmanijazu; alergijske bolesti uključujući alergijski rinitis i atopijski dermatitis; autoimune bolesti uključujući reumatoidni artritis i multiplu sklerozu; inflamatorne poremećaje, uključujući inflamatornu bolest creva; kardiovaskularne bolesti, uključujući trombozu i aterosklerozu; hematološke malignitete; neurodegenerativne bolesti; pankreatitis; multiorgansko zatajenje; bolesti bubrega; agregaciju trombocita; kancer; pokretljivost sperme; odbacivanje transplantacije; odbacivanje grafta; povrede pluća; i bol uključujući bol povezan sa reumatoidnim artritisom ili osteoartritisom, bol u leđima, opšti inflamatorni bol, post herpetičku neuralgiju, dijabetičku neuropatiju, inflamatorni neuropatski bol (traumu), trigeminalnu neuralgiju i centralni bol.
[0013] EP0585913 A2 otkriva derivate izohromen-1-ona koji su korisni u tretiranju bolesti disajnih puteva, astme, alergijskih bolesti, inflamacije ili bola.
[0014] Modulatori Pl3 kinaze koji nemaju izokumarinski skelet i njihova upotreba u tretmanu bolesti kao što je kancer su otkriveni u WO2013/012918 A1, dok su derivati hromen-4-ona koji su korisni kao modulatori Pl3 kinaze otkriveni u WO2012/151525 A1.
[0015] S obzirom na broj patoloških odgovora koji su posredovani sa enzimima Pl3K, postoji stalna potreba za inhibitorima enzima Pl3K koji mogu biti korisni u tretmanu mnogih poremećaja. Tako, se predmetni pronalazak odnosi na nova jedinjenja koja su inhibitori Pl3Kɑ , Pl3Kβ, Pl3Kδ i Pl3Ky izoformi enzima Pl3K Klase l koji, iz iznad navedenih razloga, često mogu imati terapijski poželjne karakteristike.
[0016] Konkretno, jedinjenja prema ovom pronalasku mogu imati mnogo veću selektivnost za δ izoformu ili za obe y i δ izoformu enzima Pl3K u odnosu na druge izoforme istog enzima.
REZIME PRONALASKA
[0017] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (l)
pri čemu su R, R1, R2, R3, R4, R5, CY, Z, m, n i p prikazani ispod u detaljnom opisu pronalaska, delujući kao inhibitori fosfoinozitdne-3-kinaze, u postupcima za njihovu pripremu, farmaceutske kompozicije obuhvaćajući ih same ili u kombinaciji sa jednim ili više aktivnim sastojkom, u smeši sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivim nosačem.
[0018] Pronalazak dalje obezbeđuje pogodan uređaj za isporuku farmaceutske kompozicije jedinjenja prema pronalasku.
[0019] U jednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje upotrebu jedinjenja prema pronalasku za proizvodnju leka.
[0020] U daljem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje upotrebu jedinjenja prema pronalasku za pripremu leka za prevenciju i/ili tretman bilo koje bolesti karakterisane prekomernom aktivnošću enzima fosfoinozitdne-3-kinaze (Pl3K) i/ili pri čemu je inhibicija aktivnosti Pl3K poželjna, i naročito kroz selektivnu inhibiciju delta ili oba, delta i gama izoformi enzima preko alfa i beta.
[0021] Štaviše, predmetni pronalazak obezbeđuje metodu za prevenciju i/ili tretman bilo koje bolesti pri čemu je poželjna inhibicija enzima Pl3K, navedeni metod uključuje primenjivanje na pacijentu kojem je potreban takav tretman terapijski efikasne količine jedinjenja prema pronalasku.
[0022] Konkretno, jedinjenja prema pronalasku sama ili kombinovana sa drugim aktivnim sastojcima mogu biti primenjivana za prevenciju i/ili tretman bolesti respiratornog trakta karakterisane inflamatornom opstrukcijom disajnih puteva, kao što su, na primer, kašalj, astma, COPD i lPF.
[0023] Stručnjacima u ovoj oblasti tehnike će biti očigledno da jedinjenja prema pronalasku mogu biti predstavljena sledećom opštom formulom (l")
pri čemu su R, R1, R2, R3, R4, R5, CY, Z, m, n i p prikazani ispod u detaljnom opisu pronalaska , veza ----- je dvostruka veza, i M ostatak je ostatak arilen-diila, posebno 1,2-fenilen-diil radikala. Alternativne vrednosti M ostatka mogu biti 3,4-, 2,3- ili 4,5-tiofen-diil, 4,5-tiazolediil; njihovi zasićeni ili delimično nezasićeni analozi.
Jedinjenja koja imaju takve alternativne vrednosti M ostatka su npr.5-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1Hpirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-7H-tieno[2,3-c]piran-7-on;6-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-7-fenil-4H-tieno[3,2-c]piran-4-on; 6-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-7-fenil-4H-pirano[3,4-d]tiazol-4-on;
Ovde ispod u opisu sintetske rute za pripremu jedinjenja prema pronalasku (šeme 1 do 9), M ostatak će biti predstavljen kao u formuli iznad (l"), pri čemu je M označen kao 1, 2-fenilen-diil radikal.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0024] Pronalazak se odnosi na klasu jedinjenja koja deluju kao inhibitori Fosfoinozitidne 3 Kinaze (Pl3K).
[0025] Navedena klasa jedinjenja inhibira aktivnost ili funkciju Klase l Pl3K, tačnije, oni su derivati inhibitora aktivnosti ili funkcije Pl3Kɑ , Pl3Kβ, Pl3Ky i/ili Pl3Kδ izoformi Klase l Pl3K.
[0026] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (l):
pri čemu:
svaki R, kada je prisutan, je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od:
- OR6;
- SR6
- S(O)q-R8
- NR10R11
- halogena
- (C1-C6) alkila;
- (C1-C6) haloalkila;
- (C3-C7) cikloalkila;
- (C5-C7) cikloalkenila;
- (C2-C6) alkenila;
- (C2-C6) alkinila;
- supstituisanog ili nesupstituisanog arila; i
- supstituisanog ili nesupstituisanog heteroarila;
R1i R2su kombinovani da formiraju okso grupu (=0);
R3i R4, isti ili različiti, u svakom slučaju su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od:
- H;
- (C1-C6) alkila; i
- (C1-C6) haloalkila;
R5je izabran iz grupe koja se sastoji od:
- (C3-C7) cikloalkila;
- aril (C1-C3) alkila;
- (C5-C7) cikloalkenila;
- supstituisanog ili nesupstituisanog (C3-C6) heterocikloalkila;
- supstituisanog ili nesupstituisanog arila; i
- supstituisanog ili nesupstituisanog heteroarila;
R6je izabran iz grupe koja se sastoji od:
- H;
- (C1-C6) alkila;
- (C1-C6) haloalkila;
- (C1-C6) hidroksialkila;
- (C1-C6) aminoalkila;
- aril(C1-C6)alkila
- (C1-C6) alkanoila
- arilkarbonila; i
- aril (C2-C4) alkanoila
Rs je izabran iz grupe koja se sastoji od:
- (C1-C6) alkila;
- (C1-C6) haloalkila;
- (C1-C6) hidroksialkila;
- (C1-C6) aminoalkila;
- supstituisanog ili nesupstituisanog arila; i
- supstituisanog ili nesupstituisanog heteroarila; i
- NR12R13
R10, R11, R12i R13, isti ili različiti, svaki put su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od H, (C1-C6) aminoalkila, (C1-C6) hidroksialkila i (C1-C6) alkila, ili uzeti zajedno sa atomom azota za koji su oni povezani, bilo R10i R11ili R12i R13mogu formirati, 5 do 6-člani heterociklični radikal;
Z, kada je prisutan, je atom ili grupa svaki put nezavisno izabrana od NH i NHC(O),;
m je 1;
n je 1 ili 2;
p je nula ili ceo broj u rasponu od 1 do 3;
q je 1 ili 2;
- Cy je heteroaril izabran iz grupe koja se sastoji od 7H-purin-7-il; 9H-purin-9-il; 9H-purin-6-il; 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il; 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-il; 2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il; 2-, 4-, 5- ili 6-pirimidinil; i 2-pirazinil, pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il, pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il, pirido[3,2-d]pirimidin-4-il, ipirido[2,3-d]pirimidin-8-il-5-on, tieno[3,2-d]pirimidin-4-il, tieno[2,3-d]pirimidin-4-il koji su svi opciono supstituisani sa jednom ili više grupa izabranih od halogena, (C1-C6)alkila, (C1-C6)haloalkila, CN, NR10R11, opciono supstituisanog arila i opciono supstituisanog heteroarila izabranog od fenila, 1H-indazol-4-il, 1H-indazol-5-il, 1H-indazol-6-il, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-piridinila, pirazol-3-il, pirazol-4-il, pirazol-5-il, pirazin-2-il, pirimidin-5-il, piridazin-4-il i 2-, 4-, 5-tiazolila;
ili, kada
m je nula;
n je 1 ili 2;
p je nula ili ceo broj u rasponu od 1 do 3;
q je 1 ili 2;
tada Cy je heteroaril izabran iz grupe koja se sastoji od 7H-purin-7-il, 9H-purin-9-il, 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il, 2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il, pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il, i pirido[2,3-d]pirimidin-8-il-5-on, koji su opciono supstituisani sa jednom ili više grupa izabranih od halogena, (C1-C6) alkila, (C1-C6) haloalkila, CN,
NR10R11, opciono supstituisanog arila i opciono supstituisanog heteroarila izabranih od fenila, 1H-indazol-4-il, 1H-indazol-5-il, 1H-indazol-6-il, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-piridinila, pirazol-3-il, pirazol-4-il, pirazol-5-il, pirazin-2-il, pirimidin-5-il, piridazin-4-il i 2-, 4-, 5-tiazolila;
ili farmaceutski prihvatljive soli od njih.
[0027] Izraz "farmaceutski prihvatljive soli", kao što se ovde koristi, se odnosi se na derivate jedinjenja formule (l) u kojima je matično jedinjenje pogodno modifikovano pretvaranjem bilo koje slobodne kisele ili bazne grupe, ako je prisutna, u odgovarajuću adicionu so sa bilo kojom bazom ili kiselinom, za koju se uobičajeno misli da je farmaceutski prihvatljiva.
[0028] Pogodni primeri navedenih soli mogu tako uključiti adicione soli mineralnih ili organskih kiselina bazičnih ostataka kao što su amino grupe, kao i adicione soli mineralnih ili organskih bazičnih kiselih ostataka kao što su karboksilne grupe.
[0029] Katjoni neorganskih baza koji mogu biti pogodno upotrebljeni za pripremu soli unutar pronalaska sadrže jone alkalnih ili zemnoalkalnih metala, kao što su kalijum, natrijum, kalcijum ili magnezijum.
[0030] Oni dobijeni reakcijom glavnog jedinjenja, koji deluje kao baza, sa neorganskom ili organskom kiselinom, da bi se formirala so, sadrže, na primer, soli hlorovodonične kiseline, bromovodonične kiseline, sumporne kiseline, fosforne kiseline, metansulfonske kiseline, kamforsulfonske kiseline, sirćetne kiseline, oksalne kiseline, maleinske kiseline, fumarne kiseline, sukcinske kiseline i limunske kiseline.
DEFINICIJE
[0031] Termin "atomi halogena" kao što se ovde koristi uključuje fluor, hlor, brom i jod, poželjno hlor ili fluor.
[0032] Termin "(C1-Cx) alkil" gde je x ceo broj veći od 1, se odnosi na pravo lančane ili razgranato lančane alkil grupe, pri čemu je broj sastavnih atoma ugljenika u rasponu od 1 do x. Naročito poželjne alkil grupe su metil, etil, n-propil, izopropil i terc-butil.
[0033] Izrazi "(C1-Cx) haloalkil" se odnose na iznad definisane "(C1-Cx) alkil" grupe pri čemu je jedan ili više atoma vodonika zamenjeno sa jednim ili više atoma halogena, koji mogu biti isti ili različiti jedan od drugog.
[0034] Primeri pomenutih (C1-Cx) haloalkil grupa mogu tako uključiti halogenirane, polihalogenirane i potpuno halogenirane alkil grupe, npr. trifluorometil ili difluoro metil grupe.
[0035] Na analogan način, termini "(C1-Cx) hidroksialkil" ili "(C1-Cx) aminoalkil" se odnose na iznad definisane "(C1-Cx) alkil" grupe pri čemu je jedan ili više atoma vodonika zamenjeno sa jednom ili više hidroksi (OH) ili amino grupa repektivno.
[0036] U ovom opisu, ako nije drugačije navedeno, definicija aminoalkila obuhvata alkil grupe supstituisane sa jednim ili više (NR10R11).
[0037] U odnosu na supstituent R10, R11, R12i R13kao što je definisano iznad, ovde je dalje objašnjeno da kada se bilo R10i R11ili R12i R13uzimaju zajedno sa atomom azota, oni su povezani da formiraju 5 do 6-člani heterociklični radikal, najmanje jedan dalji atom ugljenika u prstenu u pomenutom heterocikličnom radikalu može biti zamenjen sa najmanje jednim heteroatomom ili hetero-grupom (npr. N, NH, S ili O) ili može nositi -okso (=O) supstituentnu grupu. Navedeni heterociklični radikal može biti dodatno opciono supstituisan na raspoloživim tačkama u prstenu, naime na atomu ugljenika, ili na heteroatomu ili heterogrupi dostupnoj za supstituciju. Tako, primeri pomenutih heterocikličnih radikala su 1-pirolidinil, 1-piperidinil, 1-piperazinil, 4-morfolinil, piperazin-4-il-2-on, 4-metilpiperazin-1-il.
[0038] Termin "(C3-Cy) cikloalkil", pri čemu je y ceo broj veći od 3, se odnosi na zasićene ciklične grupe ugljovodonika koje sadrže od 3 do y atoma ugljenika u prstenu. Neograničavajući primeri uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil i cikloheptil.
[0039] Termin "aril(C1-Cx)alkil" se odnosi na prsten arila povezan na pravolančane ili razgranate alkil grupe pri čemu je broj sastavnih atoma ugljenika u rasponu od 1 do x, npr. fenilmetil, feniletil ili fenilpropil.
[0040] Izvedeni izraz "(C3-Cz)heterocikloalkil" se odnosi na zasićene ili delimično nezasićene monociklične (C3-Cz)cikloalkil grupe, pri čemu je z ceo broj veći od 3 u kojem je najmanje jedan atom ugljenika u prstenu zamenjen sa najmanje jednim heteroatomom ili hetero-grupom (npr. N, NH, S ili O). Neograničavajući primeri (C3-Cz) heterocikloalkila su predstavljeni: pirolidinil, imidazolidinil, tiazolidinil, piperazinil, piperidinil, morfolinil, tiomorfolinil, dihidro ili tetrahidro-piridinil, tetrahidropiranil, piranil, 2H- ili 4H-piranil, dihidro- ili tetrahidrofuranil, 1,3-dioksolan-2-il radikali. (C3-Cz)heterocikloalkil grupe, kao što je definisano iznad, mogu biti dalje opciono supstituisane na dostupnim tačkama u prstenu, naime na atomu ugljenika, ili na heteroatomu ili hetero-grupi dostupnoj za supstituciju. Na primer, tetrahidro-piridinil grupe, kada su dalje supstituisane, mogu biti supstituisane na -NH grupi, kao što je u sledećim primerima: 1-benzil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il, 1-(ciklopropilmetil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il, 1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il, 1-(piridin-4-ilmetil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il.
[0041] Termin "(C2-Cx) alkenil" se odnosi na prave ili razgranate, konjugovane ili nekonjugovane lance ugljenika sa jednom ili više dvostrukih veza, u cis ili trans konfiguraciji, pri čemu je broj atoma u rasponu od 2 do x.
[0042] Analogno tome, termini "(C5-Cy) cikloalkenil", pri čemu je y ceo broj veći od 5, se odnose na ciklične grupe ugljovodonika koje sadrže od 5 do y atoma ugljenika u prstenu i jednu ili dve dvostruke veze, pri čemu cikloalkenil može dalje biti opciono supstituisan sa jednom ili više grupa, npr. sa amino grupama.
[0043] Termin "(C2-Cx)alkinil" se odnosi se na prave ili razgranate lance ugljenika sa jednom ili više trostrukih veza, pri čemu je broj atoma u rasponu od 2 do x.
[0044] Analogno tome, izraz "(C2-Cx) aminoalkinil" se odnosi na iznad definisane "(C2-Cx) alkinil" grupe pri čemu je jedan ili više atoma vodonika zamenjeno sa jednom ili više amino grupa i pri čemu amino grupa može biti dalje opciono supstituisana sa jednom ili više (C1-C6) alkil grupa.
[0045] Izraz "aril" se odnosi na mono, bi- ili tri-ciklične sisteme prstena koji imaju 5 do 20, poželjno od 5 do 15 atoma u prstenu, pri čemu je najmanje jedan prsten aromatičan.
[0046] Izraz "heteroaril" se odnosi na mono-, bi- ili triciklične sisteme prstena sa 5 do 20, poželjno od 5 do 15 atoma u prstenu, u kojima je najmanje jedan prsten aromatičan i u kojem je najmanje jedan atom prstena heteroatom ili heteroaromatična grupa (npr. N, NH, S ili O).
[0047] Primeri pogodnih arilnih ili heteroarilnih monocikličnih sistema prstena uključuju, na primer, fenil, tienil (ovde se takođe naziva tiofen-il ili tiofene-il), pirolil, pirazolil, imidazolil, izoksazolil, oksazolil, izotiazolil, tiazolil, piridinil, pirimidinil, pirazinil, furanil radikale.
[0048] Primeri pogodnih arilnih ili heteroarilnih bicikličnih sistema prstena uključuju naftalenil, bifenilenil, purinil, pteridinil, pirazolopirimidinil, benzotriazolil, hinolinil, izohinolinil, indolil, izoindolil, benzotiofenil, benzodioksinil, dihidrobenzodioksinil, indenil, dihidro-indenil, dihidrobenzodioksepinil, benzooksazinil radikale.
[0049] Primeri pogodnih arilnih ili heteroarilnih tricikličnih sistema prstena uključuju fluorenil radikale kao i benzokondenzovane derivate napred pomenutih heteroarilnih bicikličnih sistema prstena.
[0050] Termin "(C1-Cx) alkanoil" se odnosi na alkilkarbonilne grupe (npr. (C1-Cx) alkil(CO) gdje je x ceo broj veći od 1) pri čemu "alkil" grupa ima iznad definisano značenje. Neograničavajući primeri uključuju acetil, propanoil, butanoil.
[0051] Izraz "arilkarbonil" se odnosi na aril-(CO)- grupe pri čemu grupa "aril" ima iznad definisano značenje. Neograničavajući primer je predstavljen benzoilom.
[0052]Termin "aril(C2-Cx)alkanoil" se odnosi na aril(C2-Cx)alkilkarbonil grupu gde je x ceo broj veći od 2, pri čemu aril i alkil imaju iznad definisano značenje. Neograničavajući primeri su predstavljeni sa fenilacetil, fenilpropanoil ili fenilbutanoil radikalima;
[0053] Na analogan način izrazi "heteroaril(C1-Cx)alkil" i "(C3-Cy)cikloalkil(C1-Cx) alkil" se odnose na "( C1-Cx) alkil" koji je respektivno supstituisan sa jednim ili više heteroarila ili (C3-Cy)cikloalkil grupama, kao što je definisano iznad.
[0054] Primeri npr. aril (C1-C6)alkila uključuju fenilmetil ovde takođe nazvan benzil. Primeri npr. heteroaril(C1-C6)alkila uključuju piridin-4-ilmetil. Primeri npr. (C3-C7)cikloalkil(C1-C6)alkila uključuju ciklopropilmetil.
[0055] Kao što se ovde koristi, izraz "sistem prstena" se odnosi na mono- ili biciklične sisteme prstena koji mogu biti zasićeni, delimično nezasićeni ili nezasićeni, kao što je aril, (C3-C7)cikloalkil, (C3-C6) heterocikloalkil ili heteroaril.
[0056] Stručnjacima će biti očigledno da jedinjenja formule (l) mogu sadržavati najmanje jedan stereogeni centar kada su R3i R4različiti, naime predstavljeni u formuli (lA) atomom ugljenika (*) sa zvezdicom, i zbog toga mogu postojati kao optički stereoizomeri.
[0057] Gde jedinjenja prema pronalasku imaju takav najmanje jedan stereogeni centar, ona mogu prema tome postojati kao enantiomeri. Gde jedinjenja prema pronalasku imaju dva ili više stereogenih centara, ona mogu dodatno postojati kao dijastereoizomeri. Treba razumeti da su svi takvi pojedinačni enantiomeri, dijastereoizomeri i smeše od njih u bilo kojoj proporciji obuhvaćeni unutar obima predmetnog pronalaska. Apsolutna konfiguracija (R) ili (S) za ugljenik (*), kada je to stereogeni centar, je dodeljena na osnovu Kan-Ingold-Prelog pravila o nomenklaturi na osnovu prioriteta grupa.
[0058] Atropizomeri su stereoizomeri koji nastaju usled ometane rotacije oko pojedinih veza, gde je sterična barijera deformacije rotacije dovoljno visoka da omogući izolaciju konformera. (Bringmann G et al, Angew. Chemie Int. Ed. 44 (34), 5384-5427, 2005. doi: 10.1002/anie.200462661).
[0059] Oki je atropizomere definisao kao konformere koji se na datoj temperaturi međusobno konvertuju sa poluvremenom raspada većim od 1000 sekundi (Oki M, Topics in Stereochemistry 14, 1-82, 1983).
[0060] Atropizomeri se razlikuju od ostalih hiralnih jedinjenja po tome što se u mnogim slučajevima mogu termički uravnotežiti, dok je u ostalim oblicima hiralnosti izomerizacija obično moguća samo hemijski.
[0061] Odvajanje atropizomera je moguće metodama hiralne rezolucije kao što je selektivna kristalizacija. U atropoenantioselektivnoj ili atroposelektivnoj sintezi jedan atropizomer je formiran na štetu drugog. Atroposelektivna sinteza može biti izvedena upotrebom hiralnih pomoćnih sredstava kao što je "Corey Bakshi Shibata (CBS)" katalizator, asimetrični katalizator izveden iz prolina ili pristupima baziranim na termodinamičkoj ravnoteži kada reakcija izomerizacije pogoduje jednom atropizomeru nad drugim.
[0062] Racemski oblici jedinjenja formule (l) kao i pojedinačni atropizomeri (suštinski bez svog odgovarajućeg enantiomera) i smeše atropizomera obogaćene stereoizomerima su uključeni u obim predmetnog pronalaska.
[0063] U poželjnom izvođenju, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (lA) kao što je iznad definisano, pri čemu n = 1, R3ima isti značaj kao iznad, osim H, R4je H i apsolutna konfiguracija hiralnog ugljenika (*) je (R).
[0064] U drugom izvođenju, poželjna konfiguracija ugljenika (*) je (S).
[0065] U poželjnom izvođenju, jedinjenja formule (l) opisana u predmetnom pronalasku su prisutna kao smeše dijastereoizomera.
[0066] Prva poželjna grupa jedinjenja je ona formule (l) pri čemu:
R1i R2su kombinovani da formiraju okso grupu (=O);
R3je izabran od H i (C1-C6) alkila;
R4je H;
R, R5, m, n, p, Z i Cy su kao što je definisano iznad.
[0067] Poželjnija grupa jedinjenja je ona formule (l) pri čemu:
p je 0 ili 1;
R nije prisutan ili je izabran iz grupe koja se sastoji od halogena i (C1-C6) alkila;
R1i R2su kombinovani da formiraju okso grupu (=O);
R3je izabran od H, metila, etila i propila;
R4je H;
R5je izabran od fenila; fenilmetila; 2-, 3- ili 4-piridinila; 5-tiazolila; 2-, 3-, 4- ili 5-tienila, 1H-pirazol-4il, 2-, 4-, 5- ili 6-pirimidinila, cikloheksenila, 1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il, 1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il, 8-azabiciklo[3.2.1]okt-2-en-3-il, i 3,6-dihidro-2H-piran-4-il, opciono supstituisanih sa jednom ili više grupa izabranih od halogena, (C1-C6)alkila, OR7, -S(O)q-R9, -C(O)NR10R11, COOR14, (C1-C6)hidroksialkila, supstituisanog ili nesupstituisanog (C1-C6)aminoalkila, (C1-C6) alkanoila, supstituisanpg ili nesupstituisanog (C3-C6)heterocikloalkila, aril(C1-C6)alkila, heteroaril(C1-C6)alkila, (C3-C7)cikloalkil(C1-C6)alkila i NR10R11;
R7i R14, isti ili različiti, svaki put su nezavisno izabrani iz iste grupe supstituenata kao što je definisano iznad za R6;
R9je izabran iz iste grupe supstituenata kao što je definisano iznad za R8; R10, R11, m, n, q, Z i Cy su kao što je definisano iznad.
[0068] Još povoljnija grupa jedinjenja je ona formule (l) pri čemu:
p je 0;
R nije prisutan;
R1i R2su kombinovani da formiraju okso grupu (=O);
R3je izabran od H, metila, etila i propila;
R4je H;
R5je izabran od fenila; fenilmetila; 2-, 3- ili 4-piridinila; 5-tiazolila, 2-, 3-, 4- ili 5-tienila, 1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il i 3,6-dihidro-2H-piran-4-il, opciono supstituisanih sa jednom ili više grupa izabranih od fluoro, bromo, metil, metoksi, amino, dimetilamino, 4-morfolinosulfonila, 4-(2-morfolinoetoksi), 4-morfolinometila i 4-piperazinometila; piperidin-1-ilmetila, 4-metilpiperazin-1-karbonila, (2-(dimetilamino)etil)-karbonila, acetila, fenilmetila, fenilmetoksi-karbonila, 4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioksolan-2-il, pirolidin-1-ilmetil, bis(2-hidroksietil)aminometila, hidroksimetila, dimetilaminometila, (dimetilamino)propila, 4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)metila, piperazin-2-on-1-ilmetila, ciklopropilmetila, hidroksikarbonila, piridin-4-ilmetila;
m, n, Z, i Cy su kao što je definisano iznad.
[0069] Druga poželjna grupa jedinjenja je ona formule (l) pri čemu:
R1i R2su kombinovani da formiraju okso grupu (=O);
R3je izabran od H, metila, etila i propila;
R4je H;
R5je izabran od aril(C1-C3)alkila; supstituisanog ili nesupstituisanog (C3-C6) heterocikloalkila; supstituisanog ili nesupstituisanog arila i supstituisanog ili nesupstituisanog heteroarila;
Z, kada je prisutan, je atom ili grupa svaki put nezavisno izabrana od NH i NHC (O),
R, R10, R11, Cy, m, n, p su kao što je definisano iznad.
[0070] Druga poželjnija grupa jedinjenja je ona formule (l) pri čemu:
R1i R2su kombinovani da formiraju okso grupu (=O);
R3je izabran od H, metila, ili etila;
R4je H;
R5je izabran od arila koji je fenil; aril(C1-C3)alkila koji je fenilmetil; heteroarila izabranog od 2-, 3- ili 4-piridinila; 5-tiazolila, 2-, 3-, 4- ili 5-tienila; (C3-C6)heterocikloalkila izabranog od 1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il i 3,6-dihidro-2H-piran-4-il i 4-cikloheksenila, koji su svi opciono supstituisani sa jednom ili više grupa izabranih od fluora, broma, metila, metoksi, dimetilamino, morfolinosulfonila, morfolinoetoksi, morfolinometila i piperazinometila; 4-metilpiperazin-1-karbonila, 4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il-metila, piperazin-2-on-1-il-metila, piridin-4-ilmetila;
Z, kada je prisutan, je atom ili grupa svaki put nezavisno izabrana od NH i NHC(O),;
m je 1;
Cy je heteroaril izabran iz grupe od 7H-purin-7-il; 9H-purin-9-il; 9H-purin-6-il; 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il; 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-il; 2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il; i 2- , 4- , 5- ili 6-pirimidinila; 2-pirazinila koji su svi opciono supstituisani sa jednom ili više grupa izabranih od Cl, Br, F, l, metila, trifluorometila, CN; NH2; NH-CH3; N(CH3)2; 3-metil-1H-indazol-5-il, 1H-indazol-4-il; 3-fluoro-5-hidroksifenila; 1-(3-fluoro-4-hidroksifenila);, 6-, 5-, 4-hidroksipiridin-3-il, 6-, 5-metoksipiridin-3-il, 5-aminopiridin-3-il, 5-fluoropiridin-3-il, 5-fluoro-6-hidroksipiridin-3-il 6-(metilsulfonil)piridin-3-il, 5-hidroksi-6-metilpiridin-3-il, 6-, 5-(hidroksimetil)piridin-3-il, 2-aminotiazol-5-il; 2-(acetamino)-(tiazol-5-il), 2-aminopirimidin-5-il, 2-metoksipirimidin-5-il, 2-hidroksipirimidin-5-il, pirazin-2-il, 6-hidroksipirazin-2-il i 3-fluoro-4-izopropoksifenila;
ili, kada
m je 0;
onda Cy je heteroaril izabran iz grupe od 7H-purin-7-il; 9H-purin-9-il; 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il; i 2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il, koji su svi opciono supstituisani sa jednom ili više grupa izabranih od Cl, Br, F, l, metila, trifluorometila, CN; NH2; NH-CH3; N(CH3)2; 3-metil-1H-indazol-5-il, 1H-indazol-4-il; 3-fluoro-5-hidroksifenila; 1-(3-fluoro-4-hidrksifenila); , 6-, 5-, 4-hidroksipiridin-3-il, 6-, 5-metoksipiridin-3-il, 5-aminopiridin-3-il, 5-fluoropiridin-3-il, 5-fluoro-6-hidroksipiridin-3-il 6-(metilsulfonil)piridin-3-il, 5-hidroksi-6-metilpiridin-3-il, 6-, 5-(hidroksimetil)piridin-3-il, 2-aminotiazol-5-il; 2-(acetamino)(tiazol-5-il), 2-aminopirimidin-5-il, 2-metoksipirimidin-5-il, 2-hidroksipirimidin-5-il, pirazin-2-il, 6-hidroksipirazin-2-il i 3-fluoro-4-izopropoksifenila;
R, n, p su kao što je definisano iznad.
[0071] Treća poželjnija grupa jedinjenja je ona formule (l) pri čemu:
R1i R2su kombinovani da formiraju okso grupu (=O);
R3je izabran od H, metila, ili etila;
R4je H;
R5je izabran od supstituisanog ili nesupstituisanog (C3-C6) heterocikloalkila, supstituisanog ili nesupstituisanog arila; i supstituisanog ili nesupstituisanog heteroarila;
Cy je 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il, opciono i nezavisno supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od: halogena; -NR12R13; (C1-C6)alkila, supstituisanog ili nesupstituisanog arila; i supstituisanog ili nesupstituisanog heteroarila;
ili farmaceutski prihvatljivih soli ili solvata od njih.
[0072] Još poželjnija grupa jedinjenja je ona formule (l) pri čemu
R1i R2su kombinovani da formiraju okso grupu (=O);
R3je izabran od H, metila, ili etila;
R4je H;
R5je izabran iz grupe od fenila; 5-tiazolila; 2-, 3-, 4- ili 5-tienila, 1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il i 1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il; opciono supstituisanih sa jednom ili više grupa izabranih od (C1-C6) alkila, -C(O)NR10R11, COOR14, supstituisanog ili nesupstituisanog (C1-C6) aminoalkila, (C1-C6) alkanoila, heteroaril(C1-C6)alkila, (C3-C7)cikloalkil(C1-C6)alkila i NR10R11;
Cy je 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il, opciono supstituisan sa jednom ili više grupa nezavisno izabranih od halogena; -NR12R13, (C1-C6) alkila, fenila i heteroarila; pomenuti fenil i heteroaril sa svoje strane, dalje opciono i nezavisno supstituisani sa jednom ili više grupa izabranih od OR7, halogena NR12R13, -C(O)NR12R13, -NR7C(O)R9, (C1-C6) alkila, (C1-C6) -haloalkila, (C1-C6) hidroksialkila, R7i R14, isti ili različiti, pri svakom pojavljivanju su nezavisno izabrani iz iste grupe supstituenata kao što je definisano iznad za R6;
R9je izabran iz iste grupe supstituenata kao što je definisano iznad za R8;
R10, R11, R12, R13, m, n, q, i jesu kao što definisano iznad
ili farmaceutski prihvatljivih soli ili solvata od njih.
[0073] Četvrta poželjnija grupa jedinjenja je ona formule (l) pri čemu
R1i R2su kombinovani da formiraju okso grupu (=O);
R3je izabran od H, metila, ili etila;
R4je H;
R5je izabran od (C5-C7) cikloalkenila, supstituisanog ili nesupstituisanog (C3-C6) heterocikloalkila; supstituisanog ili nesupstituisanog arila i supstituisanog ili nesupstituisanog heteroarila;
m je 1;
Cy je 9H-purin-6-il, opciono supstituisan sa jednom ili više grupa nezavisno izabranih od: halogena; -NR12R13; (C1-C6)alkila, supstituisanog ili nesupstituisanog arila; i supstituisanog ili nesupstituisanog heteroarila;
R12, R13 n, q, su kao što je definisano iznad;
ili farmaceutski prihvatljivih soli ili solvata od njih.
[0074] Peta poželjnija grupa jedinjenja je ona formule (l) pri čemu
R1i R2su kombinovani da formiraju okso grupu (=O);
R3je izabran od H, metila, ili etila;
R4je H;
R5je izabran od (C5-C7) cikloalkenila, supstituisanog ili nesupstituisanog (C3-C6) heterocikloalkila; supstituisanog ili nesupstituisanog arila i supstituisanog ili nesupstituisanog heteroarila;
m je 1;
Cy je pirimidin-4-il, opciono supstituisan sa jednom ili više grupa nezavisno izabranih od : halogena, -NR12R13, -CN, (C1-C6) alkila,
R10, R11, R12, R13, n, q, su kao što je definisano iznad
ili farmaceutski prihvatljivih soli ili solvati od njih.
[0075] Prema specifičnim izvođenjima, premetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja navedena ispod:
3-((6-amino-9H-purin-9-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-((6-amino-9H-purin-9-il)metil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
3-((6-amino-9H-purin-9-il)metil)-4-(2-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
3-((6-amino-9H-purin-9-il)metil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(6-amino-9H-purin-9-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(6-amino-9H-purin-9-il)etil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(6-amino-9H-purin-9-il)etil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
3-(1-(6-amino-9H-purin-9-il)etil)-4-(3-(dimetilamino)fenil)-1H-izohromen-1-on
3-(1-(6-amino-9H-purin-9-il)etil)-4-(3-(morfolinosulfonil)fenil)-1H-izohromen-1-on
3-((9H-purin-6-lltio)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-((9H-purin-6-iltio)metil)-4-(2-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
3-((9H-purin-6-iltio)metil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(9H-purin-6-iltio)etil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(9H-purin-6-iltio)etil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(6-metilpiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(morfolinosulfonil)fenil)-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(2-metilpiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-benzil-1H-izohromen-1-on
3-((9H-purin-6-ilamino)metil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)-1H-izohromen-1-on
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)propil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(4-(2-morfolinoetoksi)fenil)-1H-izohromen-1-on
4-Amino-8-(1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etil)pirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-on
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(5-(morfolinomethil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on
3-((9H-purin-6-ilamino)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-((9H-purin-6-ilamino)metil)-4-(2-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
3-((9H-purin-6-ilamino)metil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(3-(dimetilamino)fenil)-1H-izohromen-1-on
3-((4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-((4-amino-3-(1H-indazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-((4-amino-3-(3-metil-1H-indazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-((4-amino-3-(1H-indazol-6-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-((4-amino-3-(3-fluoro-4-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-3-(1H-pirazo1-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(6-amino-9H-purin-9-il)etil)-4-(6-metoksipiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on
3-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
4-amino-6-(1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etilamino)pirimidin-5-karbonitril;
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2;
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(4-(morfolinometil)fenil)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(morfolinometil)fenil)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1;
3 -(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2;
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-cikloheksenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(2-aminopirimidin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(pirazin-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(piridazin-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(piridin-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(2-metoksipirimidin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(2-hidroksipirimidin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(5-metoksipiridin-3-il)-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ;
3-(1-(4-amino-3-(piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(2-aminotiazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(6-metoksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(6-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
N-(5-(4-amino-1-(1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)tiazol-2-il)acetamid;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(piridin-4-ilmetil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidrksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(ciklopropilmetil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hodroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on enantiomer 1;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on enantiomer 2;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(piperidin-1-ilmetil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(piperidin-1-ilmetil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(piperidin-1-ilmetil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)fenil)-1H-izohromen-1-on;
3-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-N-(2-(dimetilamino)etil)benzamid;
4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-prazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on;
4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(pirolidin-1-ilmetil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((bis(2-hidroksietil)amino)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(hidroksimetil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on-pojedinačni enantiomer 2;
4-((5-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-il)metil)piperazin-2-on;
5-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-karboksilna kiselina;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-benzil-1H-izohromen-1-on;
4-(1H-pirazol-4-il)-3-(1-(tieno[3,2-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on
4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-3-(1-(tieno[3,2-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on;
4-amino-6-((1-(4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1-okso-1H-izohromen-3-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril;
4-fenil-3-(1-(pirolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on;
4-fenil-3-(1-(pirido[3,2-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(5-(hidroksimetil)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(6-(hidroksimetil)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
N-(5-(4-amino-1-(1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)piridin-3-il)-4-fluorobenzensulfonamid;
3-(1-(4-amino-3-(5-aminopiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(2-aminopirimidin-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(6-hidroksipirazin-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ;
3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(8-metil-8-azabiciklo[3.2.1]okt-2-en-3-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-4-izopropoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(5-fluoropiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ;
3-(1-(4-amino-3-(3-hloro-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ;
3-(1-(4-amino-3-(5-(metilsulfonil)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ;
3-(1-(4-amino-3-(6-(metilsulfonil)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ;
3-(1-(4-amino-3-(5-fluoro-6-hidrksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ;
3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksi-6-metilpiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(5-(trifluorometil)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ;
3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksi-3-sumporpentafluorid)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ;
5-(4-amino-1-(1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)nikotinonitril;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-aminocikloheks-1-en-1-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(trifluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fienil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ;
3-(1-(2,6-diamino-9H-purin-9-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
4-fenil-3-(1-(tieno[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on ;
4-fenil-3-(1-(tieno[3,2-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on ;
2-amino-N-(1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid ;
3-(1-(4-amino-3-(1H-pirazol-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(1H-indazol-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-amino-1H-indazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-hidroksi-5-(trifluorometoksi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(6-amino-9H-purin-9-il)etil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(6-metoksiporidin-3-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etl)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(dimetilamino)fenil)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(2-aminotiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(1H-pirazol-4-il)-1H-izohromen-1-on;
4-amino-6-((1-(1-okso-4-(1H-pirazol-4-il)-1H-izohromen-3-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril;
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(2-aminopirimidin-5-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(piperazin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(4-(piperazin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(piperazin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(morfolinometil)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-benzil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-benzil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
benzil 4-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(piperazin-1-ilmetil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((4-metilpiperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(3-(dimetilamino)propil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1 ;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(pirolidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(piperidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(piperidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-tetrahdropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(4-(dimetilamino)butanoil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(2-(dimetilamino)acetil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(1-metilpiperidin-4-karbonil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(1-izopropilpiperidin-4-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;.
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil l)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(azetidin-3-karbonil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(1-metilazetidin-3-karbonil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-hloro-5 hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-hidroksi-5-(trifluorometil)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-hloro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-hidroksi-5-(trifluorometil)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(azetidin-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(1-(ciklopropilmetil)azetidin-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksi-4-metilpiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksi-2-metilpiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksi-6-(trifluorometil)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-7-metil-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-7-hloro-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-hloro-4-fenil-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-fluoro-4-fenil-1H-izohromen-1-on
4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1
4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazo1-5-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2
3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1
3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-benzil-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-benzil-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-benzil-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2 ;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(piridin-2-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(1-metilpiperidin-4-il)-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on;
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(azetidin-3-il)-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-izopropil-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5- hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-ll)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2
i farmaceutski prihvatljive soli od njih.
[0076] Jedinjenja formule (l), uključujući sva iznad navedena jedinjenja, generalno mogu biti pripremljena prema proceduri istaknutoj u Šemama prikazanim ispod koristeći opšte poznate metode. Ostatak M je 1,2-fenilendiil radikal opciono supstituisan sa jednim ili više R (p).
[0077] Alfa-arilni ili alfa-heteroarilni-benzoat estar formule (l') pri čemu su R1i R2kombinovani da se formira okso grupa (C=O), je reagovao sa alkinom formule (ll) pod pogodnim uslovima "Sonogashira" unakrsnog-spajanja u prisustvu Paladijum katalizatora kao što je opisano u "Transition Metals for Organic Synthesis", 2nd Ed, 1, 211-229, 2004.
[0078] Alkin (ll) kao što su prop-2-in-1-ol i but-3-in-2-ol su komercijalno dostupni ili njihovi derivati kao što je terc-butil but-3-in-2-ilkarbamat mogu biti pripremljeni prema dobro poznatim metodama.
[0079] Intermedijer (lll) može biti cikliziran u odgovarajući halid formule (lV) reakcijom sa CuBr2u prisustvu odgovarajuće baze prema Li, JH et al, Synthesis 3, 400-406, 2007, ili upotrebom joda. Jedinjenje (lV) može dalje biti pretvoreno u (V) sa Suzuki spajanjem sa boronskom kiselinom ili pogodnim estrom R5B(OR)2(Vlll). Boronska kiselina i estri formule (Vlll) su komercijalno dostupni.
[0080] Jedinjenja formule (Vll), koja odgovaraju jedinjenjima formule (l) pri čemu Z=NH i m=1, mogu biti opciono pripremljena sintetskim putem ilustrovanim u Šemi 1 iz jedinjenja formule (V).
[0081] Kada grupa Y predstavlja hidroksi ostatak, jedinjenje (V) je pretvoreno u (Vl), gde grupa X predstavlja pogodnu odlazeću grupu, kao što je atom halida, reakcijom sa pogodnim agensom za halogeniranje, kao što je PBr3.
[0082] Kada grupa Y predstavlja vodonik, jedinjenje (V) je pretvoreno u (Vl), gde grupa X predstavlja pogodnu odlazeću grupu, kao što je atom halida, reakcijom sa N-bromosukcinimidom.
[0083] Jedinjenje (Vl) je konačno reagovalo sa nukleofilima na bazi azota ili sumpora (lX), kao što su 9H-purin-6-amin, 9H-purin-6-tiol hidrat, terc-butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamat, 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin da bi se dobilo jedinjenje (l).
[0084] Kada grupa Y predstavlja amino grupu zaštićenu sa pogodnom zaštitnom grupom kao što je BOC, sa jedinjenja (V) je uklonjena zaštita u kiselim uslovima i reagovalo je sa odgovarajućim derivatom halida Cy-Cl (X), da bi se dobilo jedinjenje formule (Vll).
[0085] Ova šema obezbeđuje sintetski put za pripremu jedinjenja iz primera 1-35, 43-45, 47, 50, 80-84, 104-110, 115-117, 122-124, 126 i 127.
[0086] Korišćenjem sličnih metodologija kao što je opisano u Šemi 1, jedinjenje (Xll), koje odgovara jedinjenju (l) pri čemu m=0 (Z je odsutan) i Cy je opciono supstituisani 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidinil, može biti sintetizovano kao što je istaknuto u Šemi 2 iz jedinjenja (Vl) i komercijalno dostupnog 3-jodo-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-4-amina, da se dobije jedinjenje (Xl) koji se može dalje pretvoriti u jedinjenje (Xll) pomoću Suzuki spajanja. Boronska kiselina i estri formule (Vlll) su komercijalno dostupni.
[0087] Ova šema obezbeđuje sintetski put za pripremu jedinjenja iz primera 35-42, 46, 48-49, 51, 54, 58, 63, 72-73, 79, 111, 118-120, 125, 133, 161-165 i 175.
[0088] U drugom izvođenju predmetnog pronalaska, jedinjenje (Xll) može biti pripremljeno prema ŠEMI 2a bilo iz jedinjenja (Xl) pomoću Stille-ove, Suzuki reakcije unakrsnog spajanja (ŠEMA 2a, korak 3a), korišćenjem pogodnog organo kalajnog ili organo bornog reagensa (Vlll) i Paladijum katalizatora, ili iz jedinjenja (Vl) nukleofilnom supstitucijom korišćenjem nukleofila na bazi azota (lXa), kao što je opciono supstituisani 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (ŠEMA 2a, korak 4a).). Jedinjenje (Vl) gde je X pogodna odlazeća grupa (Lg), kao što je atom halida, može biti pripremljeno iz jedinjenja (lV) reakcijom unakrsnog spajanja "Suzuki", "Stille" ili "Sonogashira" (ŠEMA 2a, korak 1a), praćeno supstitucijom hidroksilnog ostatka sa pogodnim halogenirajućim agensom kao što je na primer PBr3(ŠEMA 2a, Korak 1b). Neka jedinjenja (Xll) mogu sadržavati zaštićenu hidroksilnu ili amino grupu koje su zatim uklonjene dobro poznatim postupcima (ŠEMA 2a, korak 3b i 4b).
[0089] Ova šema obezbeđuje sintetski put za pripremu jedinjenja iz primera 52-53, 56-57, 59-62, 68-71, 85-103, 112-114, 131-132, 144-149, 152-153, 159-160.
[0090] Prema ŠEMI 3, jedinjenja formule (Xla), pri čemu su R1 i R2 kombinovani da formiraju okso grupu (C=O), mogu biti pripremljena na sličan način kao u jedinjenju (Xl), gde R5 je (C3-C6) heterocikloalkil grupa koja sadrži pogodan sekundarni amin -NH. Jedinjenje (Xla) može biti pretvoreno u jedinjenje formule (Xlla), pri čemu je Rx pogodan supstituent kao što je iznad opisano pomoću sekvence dve reakcije koje se sastoje od reakcije derivatizacije amina (korak 1), pod reduktivnim uslovom aminacije sa odgovarajućim karbonilnim jedinjenjem, ili alternativno pomoću amidnog spajanja sa pogodnom karboksilnom kiselinom, praćenim Suzukijevim unakrsnim spajanjem sa odgovarajućom boronskom kiselinom (korak 2). Za pripremu nekih jedinjenja (Xlla) postupak se može obrnuti.
[0091] Ova šema obezbeđuje sintetski put za pripremu jedinjenja iz primera 65-66, 150-151, 154-157, 171-174.
[0092] U jednom izvođenju jedinjenje (Va) predmetnog pronalaska, pri čemu su R1 i R2 kombinovani da formiraju okso grupu (C=O) i Y predstavlja hidroksilnu grupu, i R5 je arilna ili heteroarilna grupa A; supstituisanu sa aldehidnim ostatkom, može biti pripremljeno iz jedinjenja (lV) slično ŠEMI 1, bilo Suzukijevim spajanjem sa pogodnom boronskom kiselinom ili estrom CHO-AB(ORz)2, ili alternativno, iz uklanjanja zaštite jedinjenja (Vb ) pod kiselim uslovima (Šema 4, korak 1). Jedinjenje formule (Vb) može biti pripremljeno iz jedinjenja (lV) Suzukijevim spajanjem sa pogodnom boronskom kiselinom ili estrom (RwO)2CH-A-B(ORz)2, koje sadrži zaštićeni aldehid. Jedinjenje (Va) može biti pretvoreno u (Xllb) reduktivnom aminacijom sa pogodnim primarnim ili sekundarnim aminom (ŠEMA 4, korak 2a) praćeno uvođenjem odgovarajuće odlazeće grupe (Lg), kao što je atom Broma (ŠEMA 4, korak 2b) i konačno reakcijom sa pogodnim nukleofilom (lX) (ŠEMA 4, Korak 2c). Jedinjenja (Xllb) mogu sadržavati zaštićenu hidroksilnu grupu koja je zatim uklonjena dobro poznatim postupcima (ŠEMA 4, Korak 2d).
[0093] Ova šema obezbeđuje sintetski put za pripremu jedinjenja iz primera 134-135, 139-142.
[0094] Alternativno, prema ŠEMI 5, jedinjenje (Vb), pri čemu su R1 i R2 kombinovani da formiraju okso grupu (C=O), i Y predstavlja hidroksilnu grupu, može biti transformisano u jedinjenje (Xllc), konverzijom Y u odgovarajuću odlazeću grupu (Lg), kao što je atom broma (korak a), praćeno nukleofilnom supstitucijom sa pogodnim nukleofilima na bazi azota (lX) (korak b), uklanjanjem zaštite karbonilnih ostataka u kiselom stanju (korak c) i konačno reduktivnom aminacijom sa pogodnim aminom u prisustvu redukujućeg agensa, kao što natrijum triacetoksiborohidrid.
[0095] Ova šema obezbeđuje sintetski put za pripremu jedinjenja iz primera 67, 73-77, 143.
[0096] U drugom izvođenju predmetnog pronalaska, jedinjenje (Va) pri čemu su R1 i R2 kombinovani da formiraju okso grupu (C=O), i Y predstavlja hidroksilnu grupu, može biti pretvoreno u jedinjenje (Vc) pomoću "Wittigove" reakcije sa pogodnim trifenilfosfonijum bromidom (ŠEMA 6, korak 1). Jedinjenje (Vc) je tada pretvoreno u jedinjenje (Xlld) srednjom konverzijom Y u pogodnu odlazeću grupu, kao što je atom broma (ŠEMA 6, korak 2a), praćeno nukleofilnom supstitucijom sa pogodnim nukleofilom na bazi azota (lX ) (ŠEMA 6, korak 2b) i konačno redukcijom dvostruke veze sa pogodnim redukujućim agensom kao što trietil silan u prisustvu Pd/C.
[0097] Ova šema obezbeđuje sintetski put za pripremu jedinjenja iz primera 137 i 138.
[0098] Prema ŠEMI 7, jedinjenje (Vd), pri čemu su R1 i R2 kombinovani da formiraju okso grupu (C=O), pri čemu R5 je A, heteroarilni odstojnik A, može biti pretvoreno u jedinjenje (Xlle) pomoću "Pinnick" oksidacije (Strategic Applications of Named Reactions in Organic Synthesis, Laszlo Kurti, Barbara Czako, Elsevier, Academic Press, 2005). Jedinjenje (Vd) može biti pripremljeno iz jedinjenja (Vb) prema koraku a, b i c iz ŠEME 5. Ova šema obezbeđuje sintetski put za pripremu jedinjenja iz primera 78.
[0099] Čista enantiomerna jedinjenja 46a/b, 49a/b, 67a/b, 68a/b, 76a/b, 137a/b, 138a/b, 166a/b, 167a/b, 168a/b, 169a/b, 176a/b mogu biti pripremljena od odgovarajućih racemata putem hiralnog odvajanja matičnih racematnih jedinjenja ili eventualno zaštićenih analoga, nakon čega sledi pogodan korak zaštite.
[0100] Jedinjena ovog pronalaska su inhibitori aktivnosti kinaze, naročito aktivnosti PI3-kinaze. Generalno govoreći, jedinjena koja su inhibitori Pl3K mogu biti korisni u tretmanu mnogih poremećaja povezanih sa Pl3K enzimskim mehanizmima.
[0101] U jednom izvođenju, poremećaji koji mogu biti tretirani jedinjenjima predmetnog pronalaska uključuju respiratorne bolesti izabrane od idiopatskog hroničnog kašlja, astme sa varijantom kašlja, kašlja povezanog sa torakalnim tumorom ili karcinomom pluća, virusnog ili post-virusnog kašlja, sindroma kašlja gornjih disajnih puteva (UACS), ili kašlja posle nazalnog kapanja, ili kašlja povezanog sa gastroezofagealnom refluksnom bolešću (oba, kiseli i ne kiseli refluks), astme, hroničnog bronhitisa, hronične opstruktivne bolesti pluća (COPD), intersticijske bolesi pluća (kao što je idiopatska plućna fibroza (IPF)), kongestivne bolesti srca, sarkoidoze, infekcije (kao što je velikoi kašalj), astme, hronične opstruktivne plućne bolesti (COPD) i idiopatske plućne fibroze (IPF)); virusnih infekcija (uključujući virusne infekcije respiratornog trakta i virusnu egzacerbaciju respiratornih bolesti; ne-virusne respiratorne infekcije, uključujući aspergilozu i lišmanijazu; alergijske bolesti, uključujući alergijski rinitis i atopijski dermatitis; autoimune bolesti, uključujući reumatoidni artritis i multiplu sklerozu; inflamatornih poremećaja, uključujući inflamatornu bolest creva; kardiovaskularnih bolesti, uključujući trombozu i aterosklerozu; hematoloških malignih bolesti; neurodegenerativnih bolesti; pankreatitisa; zatajenja organa; bolesti bubrega; agregacije trombocita; kancera; pokretljivosti sperme; odbacivanja transplantacije; odbacivanja grafta; povrede pluća; i bola uključujući bol povezanu sa reumatoidnim artritisom ili osteoartritisom, bola u leđima, opšteg inflamatornog bola, post herpetičke neuralgije, dijabetičke neuropatije, inflamatornog neuropatskog bola (traume), trigeminalne neuralgije i centralnog bola.
[0102] U drugom izvođenju, poremećaj koji može biti tretiran sa jedinjenjem predmetnog pronalaska je izabran iz grupe koja se sastoji od idiopatskog hroničnog kašlja, astme sa varijantom kašlja, kašlja povezanog sa tumorom toraksa ili karcinomom pluća, virusnog ili postvirusnog kašlja, sindroma kašlja gornjih disajnih puteva (UACS), kašlja posle nazalnog kapanja, kašlja povezanog sa gastroezofagealnom refluksnom bolešću (oba, kiseli i ne kiseli refluks), astme, hroničnog bronhitisa, hronične opstruktivne bolesti pluća (COPD), intersticijske bolesi pluća (kao što je idiopatska plućna fibroza (IPF)).
[0103] U daljem izvođenju, poremećaj je izabran iz grupe od astme, hronične opstruktivne bolesti pluća (COPD), idiopatske plućne fibroze (lPF), kašlja i hroničnog kašlja.
[0104] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu biti upotrebljena u metodama tretmana koji obuhvata primenjivanje sigurne i efikasne količine jedinjenja formule (l) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli pacijentu kojem su potrebni. Kao što se ovde koristi, "sigurna i efikasna količina" u odnosu na jedinjenje formule (l) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili drugi farmaceutski aktivni agens znači količinu jedinjenja dovoljnu za tretman pacijentovog stanja, ali dovoljno nisku da se izbegnu ozbiljne nuspojave i ipak može ih rutinski odrediti stručnjak. Jedinjenja formule (l) ili farmaceutski prihvatljive soli od njih mogu biti primenjivani jednom ili prema režimu doziranja, pri čemu se broj doza primenjuje u različitim intervalima vremena tokom određenog vremenskog perioda. Tipične dnevne doze mogu varirati u zavisnosti od izabranog puta primene.
[0105] Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije jedinjenja formule (l) u smeši sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača ili ekscipijenta, na primer onih opisanih u Remington’s Pharmaceutical Sciences Handbook, XVII Ed., Mack Pub., N.Y., U.S.A.
[0106] Primena jedinjenja predmetnog pronalaska i njihovih farmaceutskih kompozicija može biti izvršena prema potrebama pacijenta, na primer, oralno, nazalno, parenteralno (supkutano, intravenski, intramuskularno, intrasternalno i infuzijom), inhalacijom, rektalno, vaginalno, topikalno, lokalno, transdermalno i okularnom primenom.
[0107] Razlčiti čvrsti oralni dozni oblici, mogu biti upotrebljeni za primenjivanje jedinjenja iz pronalaska uključujući takve čvrste oblike kao što su tablete, gelkapsule, kapsule, kapleti, granule, pastile i praškovi za rasuti oblik. Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti primenjivana sama ili kombinovana sa različitim farmaceutski prihvatljivim nosačima, razblaživačima (kao što je saharoza, manitol, laktoza, skrobovi) i poznatim ekscipijentima, uključujući agese za suspendovanje, solubilizatore, agense za puferisanje, veziva, agense za raspadanje, konzervanse, bojila, arome, maziva. Kapsule, tablete i gelovi sa vremenskim oslobađanjem su takođe povoljni u primenjivanju jedinjenja predmetnog pronalaska.
[0108] Različiti tečni oralni dozni oblici mogu takođe biti upotrebljenii za primenjivanje jedinjenja ovog pronalaska, uključujući vodene i nevodene rastvore, emulzije, suspenzije, sirupe i eliksire. Takvi dozni oblici mogu takođe sadržavati pogodne poznate inertne razblaživače kao što je voda i pogodne poznate ekscipijente kao što su konzervansi, agensi za vlaženje, zaslađivači, arome, kao i agensi za emulgovanje i/ili suspendovanje jedinjenja iz pronalaska. Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti ubrizgana, na primer, intravenski, u obliku izotoničnog sterilnog rastvora. Drugi pripravci su takođe mogući.
[0109] Supozitorije za rektalnu primenu jedinjenja iz pronalaska mogu biti pripremljene mešanjem jedinjenja pogodnim ekscipijentom kao što su kakao puter, salicilati i polietilen glikoli.
[0110] Formulacije za vaginalnu primenu mogu biti u obliku kreme, gela, paste, pene ili formule u spreju koje sadrže, pored aktivnog sastojka, kao što su pogodni nosači, takođe su poznate.
[0111] Za topikalnu primenu, farmaceutska kompozicija može biti u obliku kreme, masti, obloga, losiona, emulzija, suspenzija, gelova, rastvora, pasti, praha, sprejeva i kapi pogodnih za primenu na koži, oku, uhu ili nosu. Topikalna primena može takođe uključiti transdermalnu primenu putem sredstava kao što su transdermalni flasteri.
[0112] Za tretman bolesti respiratornog trakta, jedinjenja prema pronalasku su poželjno primenjivana inhalacijom.
[0113] Pripravci koji se mogu inhalirati uključuju prahove za udisanje, odmerne aerosole koji sadrže propelant (potisni gas) ili inhalacione formulacije bez propelanta.
[0114] Za primenu u obliku suvog praha mogu se iskoristiti jedno ili više dozni inhalatori poznati iz stanja tehnike. U tom slučaju prah se može puniti u želatinske, plastične ili druge kapsule, patrone ili blister pakovanja ili u rezervoar.
[0115] Razblaživač ili nosač, generalno netoksičan i hemijski inertan prema jedinjenjima pronalaska, npr. laktoza ili bilo koji drugi dodatak pogodan za poboljšanje udisajne frakcije može biti dodat praškastim jedinjenjima pronalaska.
[0116] Inhalacioni aerosoli koji sadrže propelantni gas kao što su hidrofluoroalkani mogu sadržavati jedinjenja prema ovom pronalasku bilo u rastvoru ili u dispergovanom obliku. Formulacije pokrenute propelantom mogu sadržavati i druge sastojke kao što su ko-rastvarači, stabilizatori i opciono drugi ekscipijenti.
[0117] Formulacije za inhalaciju bez propelanta koje sadrže jedinjenja pronalaska mogu biti u obliku rastvora ili suspenzija u vodenom, alkoholnom ili hidroalkoholnom medijumu i mogu biti isporučene mlaznim ili ultrazvučnim nebulizatorima poznatim od ranije iz stanja tehnike ili mekih raspršivača za maglu kao što je Respimat®.
[0118] Jedinjenja pronalaska mogu biti primenjena kao jedini aktivni agens ili u kombinaciji sa drugim farmaceutskim aktivnim sastojcima, uključujući ona koja se trenutno koriste u tretmanu respiratornih poremećaja, npr. beta2-agonisti, antimuskarinski agensi, kortikosteroide inhibitore kinaza koje se aktiviraju mitogenom (P38 MAP kinaze), beta inhibitori nuklearnog faktora kappa-B kinaze beta subjedinice (lKK2), inhibitori humane neutrofilne elastaze (HNE), inhibitori fosfodiesteraze 4 (PDE4), modulatori leukotriena, ne-steroidni anti-inflamatorni agensi (NSAlDs) i regulatori sluzi.
[0119] Doze jedinjenja iz ovog pronalaska zavise od različitih faktora uključujući određenu bolest koja je tretirana, ozbiljnost simptoma, put primene, učestalost intervala doziranja, konkretno korišćeno jedinjenje, efikasnost, toksikološki profil i farmakokinetički profil jedinjenja.
[0120] Prednosno, jedinjenja formule (l) mogu biti primenjena, na primer, u dozi sastavljenoj između 0.001 i 1000 mg/dan, poželjno između 0.1 i 500 mg/dan.
[0121] Kada su jedinjenja formule (l) primenjivana inhalacionim putem, poželjno se daju u dozi sadržanoj između 0.001 i 500 mg/dan, poželjno između 0.1 i 200 mg/dan.
[0122] Sledeći primeri ilustriraju pronalazak.
PRIPREME INTERMEDIJERA I PRIMERI
[0123] Hemijska imena jedinjenja su generisana sa "Structure To Name Enterprise 10.0 Cambridge Software".
Skraćenice
[0124] Et2O = dietil etar; Et3N = trietil amin; DCE = 1,2-dihloroetan; TEA = trietil amin; DCC = N,N’-Dicikloheksilkarbodiimid; HOBt=Hidroksibenzotriazol; HATU=(Dimetilamino)-N,N-dimetil(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-iloksi) metaniminium heksafluorofosfat; HBTU=N,N,N’,N’-Tetrametil-O-(1H-benzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfat, O-(Benzotriazol-1-il)N,N,N’,N’-tetrametiluronijum heksafluorofosfat; EDC=1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) karbodiimid hidrohlorid; DMAP = 4-dimetilaminopiridin; DMF = dimetilformamid; EtOAc=Etil acetat; RT=sobna temperatura; THF=tetrahidrofuran; DCM= dihlorometan; MeOH=metil alkohol; EtOH=etil alkohol; LHMDS=Litijum bis(trimetilsilil)amid; m-CPBA=meta-Hloroperoksibenzojeva kiselina; TFA =Trifluorosirćetna kiselina; LC-MS=Tečna hromatografija/masena spektrometrija; HPLC=tečna hromatografija visokih performansi (pod visokim pritiskom); MPLC =tečna hromatografija srednjeg pritiska; SFC=Superkritična tečna hromatografija; dppf = 1,1’-Bis(difenilfosfino)ferocen; X-Fos-Pd-G2=Hloro(2-dicikloheksilfosfino-2’,4’,6’-triizopropil-1,1’-bifenil)[2-(2’-amino-1,1’-bifenil)]paladijum(ll); S-Fos-Pd-G2=Hloro(2-dicikloheksilfosfino-2’,6’-dimetoksi-1,1’-bifenil)[2-(2’-amino-1,1’-bifenil)]paladijum(ll); DIEA ili DIPEA = N,N-Diizopropiletilamin; MeCN= Acetonitril; MTBE=terc-Butil metil etar; Ac2O = anhidrid sirćetne kiseline; AcCl =acetil hlorid; HBTU=N,N,N’,N’-Tetrametil-O-(1H-benzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfat, O-(Benzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum heksafluorofofat; TBDMSCl=terc-Butil(hloro)dimetilsilan; DMSO= Dimetilsulfoksid; BoC2O = di-tert-butil dikarbonat; UPLC = Tečna hromatografija sa ultra performansama.
Opštii eksperimentalni detalji
NMR karakterizacija:
[0125]<1>H-NMR spektri su izvedeni na Varian MR-400 spektrometru koji radi na 400 MHz (protonska frekvencija), opremljenom sa: samozaštitnom z-gradijentnom zavojnicom od 5 mm 1H/nX širokopojasnom sondom za reverzno otkrivanje, deuterijskom digitalnom blokadom kanala, jedinicom za kvadraturno digitalno otkrivanje sa promenom frekvencije predajnika, ili na "Agilent VNMRS-500" ili na "Bruker Avance 400" spektrometrima. Hemijske promene su prikazane kao δ vrednosti u ppm u odnosu na trimetil silan (TMS) kao interni standard. Konstante spajanja (J vrednosti) su date u hercima (Hz), i multiplikacije su prikazane sledećom skraćenicom (s=jednostruke, d=dvostruke, t=trostruke, q =četvorostruke, m =višestruke, br=širok, nd=nije određeno).
LC / UV / MS analitičke metode
[0126] Procenjuje se da na vreme zadržavanja LC/MS utiče eksperimentalna greška od ± 0.5 min.
LC/UV/MS - Metoda 1
LC instrument: HPLC Alliance Waters (ili ekvivalent)
[0127]Kolona: Kineteks 2.6 µm C18100A 100 x 4.6 mm (Fenomeneks)
Temperatura u koloni (°C): 50.0
Mobilne faze: HCOONH40.025M pH3 (A); Acetonitril (B)
Protok (ml/min): 2.0 (podeljeno u MS 1:10)
Vreme zaustavljanja (min): 17.0
r i n
UV detekcija: kanal 1245 nm; kanal 2254 nm
Zapremina ubrizgavanja (ul): 5.00
Uzorak rastvarača: Acetonitril
MS instrument: Waters Quattro Micro APl (ili ekvivalent)
Polarnost ES
[0128]
Kapilara (kV) 3.20
Konus (V) 20.00
Ekstraktor (V) 2.00
RF objektiv (V) 0.3
Polarnost ES-
[0129] Kapilara (kV) 3.20
Konus (V) 20.00
Ekstraktor (V) 3.00
RF objektiv (V) 0.3
Izvor temperature (°C) 110
Temperatura desolvatacije (°C) 210
Protok gasa konusa (L/Hr) 150
Protok desolvativnog gasa (L/Hr) 650
Trajanje skeniranja (sekunde): 1.00
Interskan odlaganje (sekunde): 0.10
Raspon mase:125 do 1000
LC/UV/MS- Metoda 2
LC instrument: "Acquity Waters UPLC" (ili ekvivalent)
[0130] Kolona: Kineteks 1.7 µm XB-C18100A 100 x 2.1 mm (Fenomeneks)
Temperatura u koloni (°C) 50.0
Mobilne faze: HCOONH40.025M pH3 (A); Acetonitril 0.1% Mravlje kiseline (B) Protok (ml/min) 0.65 (podeliti u MS 1:3) Vreme zaustavljanja (minuti) 10.0
Gradi ent
UV detekcija: DAD
UV raspon akvizicije (nm): 210-400
Zapremina ubrizgavanja (ul) - 2.00
Uzorak rastvarača: Acetonitril
MS instrument: "Waters ZQ" (ili ekvivalent)
Polarnost ES+
[0131] Kapilara (kV) 3.00
Konus (V) 20.00
Ekstraktor (V) 3.00
RF objektiv (V) 1.0
Polarnost ES-
[0132] Kapilara (kV) 3.00
Konus (V) 20.00
Ekstraktor (V) 3.00
RF objektiv (V) 1.0
Izvor temperature (°C) 110
Temperatura desolvatacije (°C) 210
Protok gasa konusa (L/Hr) 150
Protok desolvativnog gasa (L/Hr) 650
Raspon mase: 100 do 950
Vreme skeniranja (sekunde): 0.32
LC/UV/MS- Metoda 3
LC instrument: "Acquity Waters UPLC" (ili ekvivalent)
[0133] Kolona: Kineteks 1.7µm PFP 100A 100 x 2.1 mm (Fenomeneks) Temperatura u koloni (°C) 55.0
Mobilne faze: HCOONH40.025M pH3 (A); Acetonitril (B)
Protok (ml/min) 0.45 (podeliti u MS 1:3)
Vreme zaustavljanja (minuti) 10.0
r i n
UV detekcija: DAD
UV raspon akvizicije (nm): 210-400
Zapremina ubrizgavanja (ul) - 2.00
Uzorak rastvarača: Acetonitril
MS instrument: "Waters ZQ" (ili ekvivalent)
Polarnost ES+
[0134] Kapilara (kV) 3.00
Konus (V) 20.00
Ekstraktor (V) 3.00
RF objektiv (V) 1.0
Polarnost ES-
[0135] Kapilara (kV) 3.00
Konus (V) 20.00
Ekstraktor (V) 3.00
RF objektiv (V) 1.0
Izvor temperature (°C) 110
Temperatura desolvatacije (°C) 210
Protok gasa konusa (L/Hr) 150
Protok desolvativnog gasa (L/Hr) 650
Raspon mase: 100 do 950
Vreme skeniranja (sekunde) 0.32
LC/UV/MS- Metoda 4
LC instrument: "Acquity Waters UPLC " (ili ekvivalent) spojen sa 2996 PDA detektorom
[0136] Kolona: Acquity UPLC BEH C181.7 um 50x2.1 mm
Temperatura u koloni (°C) 30.0
Mobilne faze: 95:5 H2O:ACN+(0.1% HCOOH) (A); 5:95 H2O:ACN+(0.1% HCOOH) (B) Protok (ml/min) 0.6 (podeliti u MS 1:6)
Vreme zaustavljanja (minuti) 3.5
r i n
Detekcija UV zraka: BPl detekcija (početna talasna dužina nm 210, krajnja talasna dužina nm 400, spektar brzine uzorkovanja/sekunde = 20)
Zapremina ubrizgavanja (ul) - 1.00
Uzorak rastvarača: DMSO: MeOH: ACN odnos 1:3:3
MS instrument: "Waters ZQ" (ili ekvivalent)
Polarnost ES
[0137] Kapilara ( (kV) 3.20
Konus (V) 25.00
Ekstraktor (V) 3.00
RF objektiv (V) 0.1
Polarnost ES-[0138] Kapilara (kV) 3.40
Konus (V) 24.00
Ekstraktor (V) 2.00
RF objektiv (V) 0.2
Izvor temperature (°C) 130
Temperatura desolvatacije (°C) 400
Protok gasa konusa (L/Hr) 80
Protok desolvativnog gasa (L/Hr) 800
Raspon mase: 60 do 1200
Vreme skeniranja (sekunde): 0.4
LC/UV/MS- Metoda 5
LC instrument: Acquity Waters UPLC" (ili ekvivalent) spojen sa 2996 PDA detektorom
[0139] Kolona: Acquity UPLC BEH C181.7 um 50x2.1 mm
Temperatura u koloni (°C) 30.0
Mobilne faze: 95:5 H2O:ACN+(0.1% HCOOH) (A); 5:95 H2O:ACN+(0.1% HCOOH) (B)
Protok (ml/min) 0.6 (podeliti u MS 1:6)
Vreme zaustavljanja (minuti) 3.5
Gradi ent
Otkrivanje UV zraka: BPl otkrivanje (početna talasna dužina nm 210, krajnja talasna dužina nm 400, spektar brzine uzorkovanja/sekunde = 20)
Zapremina ubrizgavanja (ul) - 1.00
Uzorak rastvarača: DMSO: MeOH: ACN odnos 1:3:3
MS instrument: "Waters ZQ" (ili ekvivalent)
Polarnost ES
[0140] Kapilara (kV) 3.20
Konus (V) 25.00
Ekstraktor (V) 3.00
RF objektiv (V) 0.1
Polarnost ES-[0141] Kapilara (kV) 3.40
Konus (V) 24.00
Ekstraktor (V) 2.00
RF objektiv (V) 0.2
Izvor temperature (°C) 130
Temperatura desolvatacije (°C) 400
Protok gasa konusa (L/Hr) 80
Protok desolvativnog gasa (L/Hr) 800
Raspon mase: 60 to 1200
Vreme skeniranja (sekunde): 0.4
LC/UV/MS - Metoda 6
[0142] LC instrument: "Acquity Waters UPLC" (ili ekvivalent) spojen sa 2996 PDA detektorom Kolona: Acquity UPLC CSH C18 1.7um 130A 50X2.1mm. Temperatura u koloni (°C) 50.0. Mobilne faze: HCOONH40.025M pH 3 (A); ACN 0.1% HCOOH (B). Protok (ml/min) 0.35 (podeliti u MS 1:3). Vreme zaustavljanja (minuti) 10
Gradi ent
Detekcija UV zraka: BPl detekcija (početna talasna dužina nm 210, krajnja talasna dužina nm 400, spektar brzine uzorkovanja/sekunde = 20) Zapremina ubrizgavanja (ul) - 2.00.Uzorak rastvarača: H2O/ACN 80/20
LC/UV/MS- Metoda 7
[0143] LC instrument: Acquity Waters UPLC" (ili ekvivalent) spojen sa 2996 PDA detektorom Kolona: Kineteks 1.7u PFP 100A 100 x 2.1 mm (Fenomeneks). Temperatura u koloni (°C) 55.0 Mobilne faze: HCOONH40.025M pH 3 (A); ACN/MeOH 50/50 (B). Protok (ml/min) 0.45 (podeliti u MS 1:3). Vreme zaustavljanja (minuti) 10
r i n
Otkrivanje UV zraka: BPl otkrivanje (početna talasna dužina nm 210, krajnja talasna dužina nm 400, spektar brzine uzorkovanja/sekunde = 20) Zapremina ubrizgavanja (ul) - 2.00.Uzorak rastvarača: ACN
LC/UV/MS- Metoda 8
[0144] LC instrument: "Acquity Waters UPLC" (ili ekvivalent) spojen sa 2996 PDA detektorom Kolona: Kineteks 1.7u PFP 100A 100 x 2.1 mm (Fenomeneks). Temperatura u koloni (°C) 55°C. Mobilne faze: HCOONH40.025M pH 3 (A); ACN/MeOH 85/15 (B). Protok (ml/min) 0.45 (podeliti u MS 1:3). Vreme zaustavljanja (minuti) 10
r i n
Otkrivanje UV zraka: BPl otkrivanje (početna talasna dužina nm 210, krajnja talasna dužina nm 400, spektar brzine uzorkovanja/sekunde = 20). Zapremina ubrizgavanja (ul) - 2.00. Uzorak rastvarača: ACN
LC/UV/MS- Metoda 9
[0145] LC instrument: "Acquity Waters UPLC" (ili ekvivalent) spojen sa 2996 PDA detektorom. Kolona: Acquity UPLC BEH C181.7 um 50x2.1 mm. Temperatura u koloni (°C) 40.0. Mobilne faze: 95:5 H2O:ACN+(0.1% HCOOH) (A); 5:95 H2O:ACN+(0.1% HCOOH) (B). Protok (ml/min) 1 mL/min. Vreme zaustavljanja (minuti) 2.
Gradi ent
Otkrivanje UV zraka: BPl otkrivanje (početna talasna dužina nm 210, krajnja talasna dužina nm 400, spektar brzine uzorkovanja/sekunde=20) Zapremina ubrizgavanja (ul) - 1.00
LC/UV/MS- Metoda 10
[0146] LC instrument: "Acquity Waters UPLC" (ili ekvivalent) spojen sa 2996 PDA detektorom Kolona: Acquity UPLC BEH C181.7 um 50x2.1 mm. Temperatura u koloni (°C) 40.0. Mobilne faze: 95:5 H2O:ACN+(0.1% HCOOH) (A); 5:95 H2O:ACN+(0.1% HCOOH) (B). Protok (ml/min) 1 mL/min. Vreme zaustavljanja (minuti) 4
Gradijent
Otkrivanje UV zraka: BPl otkrivanje (početna talasna dužina nm 210, krajnja talasna dužina nm 400, spektar brzine uzorkovanja/sekunde = 20). Zapremina ubrizgavanja (ul) - 1.00
LC/UV/MS- Metoda 11
[0147] LC instrument: "Acquity Waters UPLC" (ili ekvivalent) spojen sa 2996 PDA detektorom Kolona: Fenomeneks Kineteks 1.7 um C8 100 ∗ 2.1 mm. Temperatura u koloni (°C) 55.0. Mobilne faze: Amonijum Format 25mM pH 3(A): ACN 0.1% (B). Potok (ml/min) 0.5 mL/min. Vreme zaustavljanja (minuti) 10
Gradijent
Otkrivanje UV zraka: BPl otkrivanje (početna talasna dužina nm 210, krajnja UV detekcija: BPl detekcija (početna talasna dužina nm 210, krajnja talasna dužina nm 400, spektar brzine uzorkovanja/sekunde = 20). Zapremina ubrizgavanja (ul) - 1.00 LC/UV/MS- Metoda 12
[0148] LC instrument: UPLC/MS (ES+/ES-) AcquityTM sistem spojen zajedno sa masenim spektrometrom ZQ. Kolona : Acquity UPLC CSH C18 kolona (veličina čestica 50 mm x 2.1 mm i.d. 1.7 µm). Temperatura u koloni (°C) 40.0. Mobilne faze: 0.1% v/v rastvor HCOOH u vodi (A); 0.1% v/v rastvor HCOOH u Acetonitrilu (B). Protok (ml/min) 1. Vreme zaustavljanja (minuti) 2.0
Gradijent
Raspon otkrivanja UV zraka: 210 nm do 350 nm. Stopa akvizicije Hz = 20. Način ubrizgavanja: delimična petlja sa prepunom iglom. DAD-MS Rt pomak: 0.01 min
LC/UV/MS- Metoda 13
[0149] UPLC/MS (ES+/ES-) "AcquityTM sistem" spojen "Waters SQD" masenim spektrometrom. Kolona : Acquity UPLC CSH C18 kolona (veličina čestica 50 mm x 2.1 mm i.d. 1.7 µm). Temperatura u koloni (°C) 40.0. Mobilne faze: 0.1% v/v rastvor HCOOH u vodi (A); 0.1% v/v rastvor HCOOH u Acetonitrilu (B). Protok (ml/min) 1. Vreme zaustavljanja (minuti) 2.0
Gradijent
Raspon otkrivanja UV zraka: 210 nm do 350 nm. Stopa akvizicije Hz = 40. Način ubrizgavanja: delimična petlja sa prepunom iglom. DAD-MS Rt pomak: 0.01 min
LC/UV/MS- Metoda 14
[0150] LC instrument: UPLC/MS (ES+/ES-) "Acquity TM sistem" spojen Waters SQD2" masenim spektrometrom. Kolona : Acquity UPLC CSH C18 kolona (veličina čestica 50 mm x 2.1 mm i.d. 1.7 µm). Temperatura u koloni (°C) 40.0. Mobilne faze: 0.1% v/v rastvor HCOOH u vodi (A); 0.1% v/v rastvor HCOOH u Acetonitrilu (B). Protok (ml/min) 1. Vreme zaustavljanja (minuti) 2.0
Gradijent
Raspon otkrivanja UV zraka: 210 nm do 350 nm. Stopa akvizicije Hz = 40. Način ubrizgavanja: delimična petlja sa prepunom iglom. DAD-MS Rt pomak: 0.01 min
LC/UV/MS- Metoda 15
[0151] LC instrument: UPLC/MS (ES+/ES-) "Acquity TM sistem" spojen "Waters SQD2" masenim spektrometrom. Kolona : Acquity UPLC BEH C18 kolona (veličina čestica 50 mm x 2.1 mm i.d. 1.7 µm). Temperatura u koloni (°C) 40.0. Mobilne faze: H2O 0.1% vodeni rastvor amonijaka pH 10 (A); Acetonitril (B). Protok (ml/min) 1. Vreme zaustavljanja (minuti) 2.0
Gradijent
Raspon otkrivanja UV zraka: 210 nm do 350 nm. Stopa akvizicije Hz = 40. Način ubrizgavanja: delimična petlja sa prepunom iglom. Trajanje skeniranja: 0.10 sekindi
LC/UV/MS- Metoda 16
[0152] LC instrument: UPLC/PDA/MS "Acquity TM sistem" spojen "Waters SQD" masenim spektrometrom. Kolona : Acquity UPLC BEH C18 kolona (veličina čestica 50 mm x 2.1 mm i.d. 1.7 µm). Temperatura u koloni (°C) 40.0. Mobilne faze: 10 mM vodenog rastvora amonijum bikarbonata podešenog na pH 10 sa amonijakom (A); Acetonitril (B). Protok (ml/min) 1. Vreme zaustavljanja (minuti) 2.0
Gradijent
Raspon otkrivanja UV zraka: 210 nm do 350 nm. Stopa akvizicije Hz = 40. Način ubrizgavanja: delimična petlja sa prepunom iglom. Trajanje skeniranja: 0.10 sekindi
Hiralna analiza za hiralna jedinjenja
[0153] Enantiomerni višak hiralnih jedinjenja je određen hiralnom HPLC analizom na HPLC Agilent 1100 opremljenom sa 6 pozicionim preklopnim ventilom, DAD i CD detektorima. Korišćene su sledeće metode:
Metoda A1: Kolona: Hiralpak AD-H (25 x 0.46 cm), 5 um; Mobilna faza: n-Heksan/(2-Propanol+0.1% izopropilamin) 75/25 % v/v; Brzina protoka: 1.0 mL/min; DAD: 220 nm.
Metoda A2: : Kolona: "Whelk " O-1 (R,R) (25 x 0.46 cm), 5 um; Mobilna faza: n-Heksan/(Etanol/Metanol 1/1) 40/60 % v/v; Brzina protoka: 1.0 mL/min; DAD: 220 nm.
Metoda A3: Kolona: Hiralpak lA (25 x 0.46 cm), 5 um; Mobilna faza: n-Heksan/(2-Propanol/Metanol 1/1) 60/40 % v/v; Brzina protoka: 1.0 mL/min; DAD: 220 nm.
Metoda A4: Kolona: Hiralpak lC (25 x 0.46 cm), 5 um; Mobilna faza: n-Heksan/(2-Propanol/Metanol 1/1 0.1% izopropilamin) 90/10 % v/v; Brzina protoka: 1.0 mL/min; DAD: 220 nm.
Metoda A5: Kolona: Hiralpak AD-H (25 x 0.46 cm), 5 um; Mobilna faza: n-Heksan/(2-Propanol 0.1% izopropilamin) 80/20 % v/v; Brzina protoka: 1.0 mL/min; DAD: 220 nm; CD: 240 nm.
Metoda A6: Kolona: "Whelk " O-1 (R,R) (25 x 0.46 cm), 10 um; Mobilna faza: n-Heksan/(2-Propanol+0.1% izopropilamin) 40/60 %v/v; Brzina protoka: 1.0 mL/min; DAD: 220 nm.
Metoda A7: Kolona: "Whelk " O-1 (R,R) (25 x 0.46 cm), 10 um; Mobilna faza: n-Heksan/(Etanol/Dihlorometan 9/1 0.1% izopropilamin) 40/60 % v/v; Brzina protoka: 1.0 mL/min; DAD: 280 nm.
Metoda A8: Kolona: "Whelk " 0-1 (R,R) (25 x 0.46 cm), 5 um; Mobilna faza: n-Heksan/(Etanol/Dihlorometan 9/1 0.1% izopropilamin) 70/30 % v/v; Brzina protoka: 1.0 mL/min; DAD: 280 nm.
Metoda A9: Kolona: Hiralpak lC (25 x 0.46 cm), 5 um; Mobilna faza: n-Heksan/(Etanol 0.1% izopropilamin) 70/30 % v/v; Brzina protoka: 0.8 mL/min; DAD: 220 nm.
Metoda A10: Kolona: Hiralpak AS-H (25 x 0.46 cm), 5 um; Mobilna faza: n-Heksan/(2-Propanol/Metanol 0.1 % izopropilamin) 85/15 % v/v; Brzina protoka: 1.0 mL/min; DAD: 220 nm.
Metoda A11: Kolona: Hiralpak AD-H (25 x 0.46 cm), 5 um; Mobilna faza: n-Heksan/(Etanol/Metanol 1/1+ 0.1% izopropilamin) 80/20 % v/v; Brzina protoka: 0.8 mL/min; DAD: 220 nm.
Metoda A12: Kolona: Hiralpak AD-H (25 x 0.46 cm), 5 um; Mobilna faza: n-Heksan/(Etanol 0.1 % Izopropilamin) 75/25 % v/v; Brzina protoka: 0.8 mL/min; DAD: 220 nm.
Metoda A13: Kolona: "Whelk" O-1 (R,R) (25 x 0.46 cm), 10 um; Mobilna faza: n-Heksan / (Etanol/Metanol 1/1+0.1% izopropilamin) 75/25 % v/v; Brzina protoka: 1.0 mL/min; DAD: 220 nm.
Metoda A14: Kolona: "Whelk " O-1 (R,R) (25 x 0.46 cm), 10 um; Mobilna faza: n-Heksan/(Etanol+0.1% izopropilamin) 50/50 % v/v; Brzina protoka: 0.8 mL/min; DAD: 220 nm.
Metoda A15: Kolona: Hiralpak lC (25 x 0.46 cm), 5 um; Mobilna faza: n-Heksan/(2-Propanol/Metanol 1/1 0.1% izopropilamin) 60/40% v/v; Brzina protoka: 1.0 mL/min; DAD: 220 nm.
Metoda A16: Kolona: Hiralpak AD-H (25 x 0.46 cm), 5 um; Mobilna faza: n-Heksan/(Etanol+0.1% izopropilamin) 80/20 % v/v; Brzina protoka: 1.0 mL/min; DAD: 220 nm.
Uslovi reverzne faze preparativne HPLC
Preparativna HPLC - Metoda 1
[0154] "Waters Micromass ZQ"/ Uzorak menadžer 2767
Detektor fotodiodnog polja 2996;
Kolona: XTerra Prep MS C18 Kolona (5 mm, 19 x 150 mm, Waters)
Brzina protoka: 20 ml/min sa MS otkrivanjem
UV talasna dužina: 254 nm.
Mobilna faza: Rastvarač A (voda: MeCN: HCOOH 95:5:0.05); Rastvarač B (voda: MeCN: HCOOH 5: 95:0.05)
r i n
Preparativna HPLC - Metoda 2
[0155]Kolona : "Waters Symmetry Prep" C1817um 19x300
Protok : 20 ml/min
Mobilna faza: 90% H2O, 10% acetonitril, 0.05% TFA (A); 10% H2O, 90% acetonitril, 0.05% TFA (B)
r i n
Preparativna HPLC -Metoda 3
[0156] "Waters Micromass ZQ" /uzorak manadžer 2767
Detektor fotodiodnog polja: 2996
Kolona: KSTERA Prep MS C1810 um 19x300
Protok: 20 ml/min
Mobilne faze: H2O, 0.1% TFA (A); acetonitril, 0.1% TFA (B)
r i n
K n i i nir n
Preparativna HPLC - Metoda 4
[0157] "Waters Fractionlynx" sa ZQ MS detektorom. Kolona: XSelect CSH Prep. C185 um OBD 30 x 100 mm. Brzina protoka: 43 ml/min. UV talasna dužina: 210 nm do 350 nm. Način jonizacije:Pozitivan elektrosprej (ES+). Mobilna faza: Rastvarač A (H2O 0.1% HCOOH); Rastvarač B (acetonitril)
Gradi ent:
Hiralna preparativna HPLC za Hiralna Jedinjenja
[0158] Hiralne rezolucije su izvedene korišćenjem "Semipreparative Waters 600 sistema" ili "Semipreparative Agilent 1100 sitema". Uslovi su prikazani u Primerima.
[0159] Gde priprema početnih materijala nije opisana, oni su komercijalno dostupni, poznati u literaturi ili su dostupni stručnjacima u oblasti tehnike koristeći standardne postupke.
[0160] Fleš hromatografija je izvedena korišćenjem Isolera MPLC sistema (proizveden od Biotage), koristeći prethodno upakovani silika gel ili patrone sa reverznom fazom (isporučene od strane Biotage).
[0161] Mnoga jedinjenja opisana u sledećim Primerima su pripremljena od stereohemijski čistih polaznih materijala, na primer 95% ee.
[0162] Stereohemija jedinjenja u Primerima, gde je naznačeno, je dodeljena pod pretpostavkom da se apsolutna konfiguracija u ponovo rastvorenim stereogenim centrima polaznih materijala održava tokom svih narednih reakcionih uslova.
[0163] U postupcima koji slede, nakon svakog polaznog materijala ponekad se navodi referenca na broj jedinjenja. Ovo se pruža samo kao pomoć kvalifikovanom hemičaru. Polazni materijal možda nije nužno pripremljen iz navedene grupe.
[0164] Kada se upućuje na upotrebu "sličnog" ili "analognog" postupka, kao što će to uvideti stručnjaci u oblasti tehnike, takav postupak može uključivati male varijacije, na primer, reakcijsku temperaturu, količinu reagensa/rastvarača, vreme reakcije, uslove obrade ili uslove hromatografskog prečišćavanja.
PRIPREMA INTERMEDIJERA:
Intermedijer A1
4-Bromo-3-(hidroksimetil)-1H-izohromen-1-on
[0165]
Korak 1. Metil 2-(3-hidroksiprop-1-inil)benzoat. (Intermedijer 1.1)
[0166]
[0167] Metil 2-jodobenzoat (25 g, 95 mmol), prop-2-in-1-ol (8.02 g, 143 mmol) i TEA (26.6 ml, 191 mmol) su dodati u ogoljenu smešu Pd (PPh3)4( 0.220 g, 0.191 mmol), bakar (l) jodida (0.073 g, 0.382 mmol) u DMF (60 ml). Dobijena smeša je mešana na 90°C tokom 5 sati, a zatim preko noći na 40°C. Reakciona smeša je sipana u EtOAc (600 ml) i isprana sa fiziološkim rastvorom (600 ml). Organska faza je zatim koncentrovana i tamno ulje je isprano sa Et2O (600 ml). Smeša je filtrirana, i onda koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao tamno smeđe ulje (13.0 g). Ovo jedinjenje je upotrebljeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja i karakterizacije.
UPLC-MS: 1.53 min, [M H-18] . (Metoda 4)
Korak 2.4-Bromo-3-(hidroksimetil)-1H-izohromen-1-on
[0168] Metil 2- (3-hidroksiprop-1-inil) benzoat (intermedijar 1.1, 6 g, 31.5 mmol), bakar (ll) bromid (14.09 g, 63.1 mmol) i piridin (5.10 ml, 63.1 mmol) su reagovali u refluksirajućem acetonitrilu (100 ml) tokom 1 sata. Rastvarač je tada bio uklonjen pod vakumom, i sirova supstanca je isprana sa DCM (200 ml) i filtrirana. Dobijeni sirovi produkt je prečišćen preko 100 g SNAP silika kolone, sa gradijentom od DCM i Et2O do jedinjenja iz naslova (2.5 g, 31%).<1>H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.21 (dd, 1 H), 7.94 - 8.05 (m, 1 H), 7.77 - 7.90 (m, 1 H), 7.64 - 7.76 (m, 1 H), 5.71 (t, J=6.39 Hz, 1 H), 4.54 (d, J=6.17 Hz, 2 H). UPLC-MS: 3.16 min, [M+H]<+>. (Metoda 5).
Intermedijer A2
4-Bromo-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on
[0169]
Korak 1. Metil 2-(3-hidroksibut-1-inil)benzoat (Intermedijer 2.1).
[0170]
[0171] Pd (PPh3)4(1.9 g, 0.006 ekv.) i Cul (2,6 g, 0,05 ekv.) su suspendovani u DMF (350 ml). Dodati su metil 2-jodobenzoat (70.8 g, 1 ekv.), but-3-in-2-ol (32 ml, 1.5 ekv.), TEA (75 ml, 2 ekv.) pod atmosferom azota i smeša je mešana na 60°C tokom 6 sati i na sobnoj temperaturi preko noći. Precipitirana čvrsta supstanca je odvojena filtriranjem, matične tečnosti su razblažene sa zasićenim rastvorom NaClvodenimi ekstrahovane sa EtOAc (dva puta). Sakupljene organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao smeđkasto-gusto ulje (47.7 g).
Korak 2.4-Bromo-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on
[0172] Metil 2- (3-hidroksibut-l-inil)benzoat (intermedijar 2.1, 20.6 g, 100.98 mmol) je rastvoren u DCE (200 ml), CuBr2(45 g, 201.96 mmol) i dicikloheksilamin hidrohlorid (2.2 g, 10.1 mmol) su dodati na sobnoj temperaturi. Smeša je zagrevana pod atmosferom azota do 65°C tokom 2 sata. Smeša je tako filtrirana preko Celite® jastučića i isprana sa DCM. Matične tečnosti su koncentrovane pod vakumom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni preko silikagela (Heks/EtOAc 8:2). Čvrsti ostatak je triturisan sa Heks/Et2O (1:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bledo žuti prah (8.7 g, 32%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.20 (d, J=7.50 Hz, 1 H), 7.99 (m, 1 H), 7.85 (d, J=8.38 Hz, 1 H), 7.71 (m, 1 H), 5.66 (d, J=5.29 Hz, 1 H), 5.12 (m, 1 H), 1.38 (d, J=6.62 Hz, 3 H). UPLC-MS: 1.83 min, 267 [M+H]<+>(metoda 1).
Intermedijer A3
terc-Butil 1-(4-bromo-1-okso-1H-izohromen-3-il)etilkarbamat
Korak 1. But-3-in-2-il metansulfonat. (intermedijer 3.1)
[0174]
[0175] But-3-in-2-ol (25 ml, 317 mmol) je rastvoren u DCM (6 vol.) pod atmosferom azota. Dodat je TEA (66 ml, 475.5 mmol) i smeša je ohlađena do 5° C. Metansulfonil hlorid (29 ml, 380.4 mmol) je dodat u kapima. Reakcija je zatim ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešanje je nastavljeno preko noći. Reakciona smeša je zatim sipana u vodu i ekstrahovana sa DCM (dva puta). Sakupljene organske faze su isprane sa zasićenim rastvorom NaHCO3, osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrovane pod vakumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova u obliku gustog ulja (34 g).
Korak 2. terc-Butil but-3-in-2-ilkarbamat. (intermedijer 3.2)
[0176]
[0177] But-3-in-2-il metansulfonat (intermedijar 3.1, 34 g) je snažno mešan preko noći u sobnoj temperaturi u 28 do 30% vodenom NH4OH (31 ml). Dodat je DCM (200 ml) i faze su razdvojene. Organska faza je osušena iznad Na2SO4i filtrirana. Preostala organska faza je zagrevana na 40°C sve dok para više nije dala pozitivan alkalni test. Rastvor je dodat sa TEA (47.7 ml) i di-terc-butil dikarbonatom (50 g, 1 ekv.) i ostavljen uz mešanje tokom 20 sati. Reakcija je ugašena vodom i produkt je ekstrahovan sa DCM. Sakupljene organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi dobilo jedinjenje iz naslova (26.3 g, 68%).
Korak 3. Metil 2-(3-(terc-butoksikarbonilamino)but-1-inil)benzoat. (intermedijer 3.3)
[0178]
[0179] Pd(Ph3P)4(683 mg, 0.591 mmol), Cul (938 mg, 49.2 mmol), metil 2-jodbenzoat (25.8 g, 98.49 mmol), terc-butil but-3-in-2-ilkarbamat (intermedijer 3.2, 25 g , 147.75 mmol) u DMF (30 ml) i Et3N (27 ml) su pomešani u DMF (125 ml) i smeša je zagrevana do 60°C pod atmosferom azota tokom 12 sati. Smeša je ugašena sa vodom i produkt je ekstrahovan sa EtOAc. Sakupljene organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni preko silikagela (Heks/EtOAc 9: 1) da bi dobilo jedinjenje iz naslova (15.3 g, 51%).
Korak 4. terc-Butl 1-(4-bromo-1-okso-1H-izohromen-3-il)etilkarbamat.
[0180]
[0181] Metil 2-(3-(terc-butoksikarbonilamino)but-1-inil)benzoat (intermedijer 3.3, 5.6 g, 18.48 mmol) je rastvoren u DCE (110 ml) pod atmosferom N2; Dodati su dicikloheksilamin hidrohlorid (401 mg, 1.85 mmol) i CuBr2(8.3 g, 37 mmol). Smeša je mešana na 70°C tokom 3 sata i na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je filtrirana na Celite® jastučiću, isprana sa DCM, i matične tečnosti su koncentrovane pod vakumom. Sirovi ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na koloni preko silikagela (DCM/EtOAc 8:2) i postignuti čvrsti ostatak je trituriran sa Heksanom (4 vol.) i Et2O (nekoliko kapi) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.3 g, 34%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.19 (d, J=7.72 Hz, 1 H), 7.92 - 8.06 (m, 1 H), 7.83 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 7.65 - 7.75 (m, 1 H), 7.58 (d, J=5.73 Hz, 1 H), 4.76 - 5.13 (m, 1 H), 1.12 - 1.49 (m, 12 H). UPLC-MS (metoda 1).
Intermedijer A4
4-bromo-3-(1-hidroksietil)-7-metil-1H-izohromen-1-on
[0182]
[0183] Prateći postupak korišćen za sintezu Intermedijera A2, iz metil 2-jodo-5-metil-benzoata (2.0 g, 7.2 mmola) i but-3-in-2-ola (0.850 ml, 10.87 mmol) dobijeno je jedinjenje iz naslova (1.04 g, 3.67 mmol, 53%).
UPLC-MS: 0.96 min, 283.1-285.1 [M+H]<+>, metoda 13.
Intermedijer A5
4-bromo-7-hloro-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on
[0184]
Korak 1. metil 5-hloro-2-jodobenzoat (Intermedijer A5.1)
[0185]
[0186] Rastvor 5-hloro-2-jodbenzojeve kiseline (3.0 g, 10.62 mmol), SOCl2(12 ml) i DMF (0.6 ml) je lagano zagrevan sa toplotnim pištoljem dok smeša nije postala homogena (15 min). Rastvor je održavan na 23°C tokom dodatnih 30 min, i zatim je rastvor koncentrovan. MeOH (24 ml) je dodat sirovom ostatku i rastvor je održavan na 23°C tokom 30 minuta. Rastvor je koncentrovan i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na Biotage silikagela ulošku (cikloheksan prema cikloheksanu: EtOAc = 85: 15) da se dobije metil 5-hloro-2-jodobenzoat (3.02 g, 10.20 mmol, 96%).
UPLC-MS: 1.17 min, 296.6 [M+H]+, metoda 12.
Korak 2.
[0187] Prateći postupak korišćen za za sintezu Intermedijara A2 iz metil 5-hloro-2-jodobenzoata (intermedijer A5.1, 3.02 g, 10.18 mmol) i but-3-in-2-ol (1.2 ml, 15.28 mmol), dobijeno je jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (1.4 g, 4.61 mmol).
UPLC-MS: 0.97 min, 302.7-304.7 [M+H]+, metoda 12.
Intermedijer A6
4-bromo-6-hloro-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on
[0188]
Korak 1. metil 4-hloro-2-jodobenzoat (Intermedijer A6.1)
[0190] Prateći postupak korišćen za za sintezu Intermedijara A5.1 iz 4-hloro-2-jodbenzojeve kiseline (2.00 g, 7.08 mmol), dobijeno je jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (2.07 g, 6.98 mmol, 99%).
UPLC-MS: 1.20 min, 297.0 [M+H]+, metoda 13.
Korak 2.
[0191] Prateći postupak korišćen za za sintezu Intermedijara A2 iz metil 4-hloro-2-jodobenzoata (intermedijar A6.1, 2.07 g, 6.98 mmol) i but-3-in-2-ol (0.821 ml, 10.47 mmol), dobijeno je jedinjenje iz naslova kao bež čvrsta supstanca (1.388 g, 4.58 mmol)
UPLC-MS: 1.00 min, 303.0-305.0 [M+H]+, metoda 13.
Intermedijer A7
4-bromo-6-fluoro-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on
[0192]
Korak 1. metil 4-fluoro-2-iodobenzoat (Intermedijer A7.1)
[0193]
[0194] Prateći postupak korišćen za za sintezu Intermedijara A5.1 iz 4-fluoro-2-jodobenzojeve kiseline, dobijen je metil 4-fluoro-2-jodobenzoat (Intermedijer A7.1, 1.153 g, 4.11 mmol, 99%).
UPLC-MS: 1.09 min, 281.0 [M+H]+, metoda 13.
Korak 2.
[0195] Prateći postupak korišćen za za sintezu Intermedijara A2 iz metil 4-fluoro-2-jodobenzoata (intermedijer A7.1, 1.153 g, 4.11 mmol) i but-3-in-2-ol (0.484 ml, 6.176 mmol) dobijeno je jedinjenje iz naslova (1 g, 3.48 mmol).
UPLC-MS: 0.89 min, 287.0-289.0 [M+H]+, metoda 13.
Intermedijer A8
4-bromo-3-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-1H-izohromen-1-on
[0196]
[0197] 4-Bromo-3-(1-hidroksietil-1H-izohromen-1-on (intermedijer A2, 5 g, 18.658 mmol) je rastvoren u DCM (50 ml); imidazol (254 g, 37.3 mmol) i terc-butil(hloro)dimetilsilan (5.624 g, 37.3 mmol) su dodati i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Smeša je isprana sa fiziološim rastvorom, organska faza je osušena preko natrijum sulfata i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi produkt koji je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu Biotage koloni (cikloheksan: EtOAc = 95: 5 do 60: 40) dajući jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (6.5 g, 16.97 mmol, 91%).
UPLC-MS: 1.58 min, 383.3-385.3 [M H] , metoda 13.
Intermedijer B1
3-(1-Hidroksietil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0198]
[0199] 4-Bromo-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A2, 0.77 g, 2.88 mmol), fenilboronska kiselina (0.63 g, 5.18 mmol), Pd(PPh3)4(0.199 g, 0.173 mmol) i Cs2CO3(1.49 g, 4.6 mmol) su rastvoreni u DMF (10.7 ml) i zagrevani pod mikrotalasnim zračenjem na 120°C tokom 20 minuta. Reakciona smeša je zatim razblažena sa AcOEt (100 ml) i filtratom. Organska faza je isprana dva puta sa 0.5 M HClvodenom, dva puta sa vodom, zasićenim NaHCO3i jednom sa zasićenim NaClvodenim. Dobijena organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Sirovi produkt je konačno prečišćen na Biotage Si 50 g Ultra sa gradijentom Heksana i EtOAc. Jedinjenje iz naslova je obnovljeno kao tamno ružičasta čvrsta supstanca (0.53 g, 1.99 mmol, 69.3%).
UPLC-MS: 1.83 min, 267 [M+H]+, metoda 1.
Intermedijer B2
3-(Hidroksimetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0200]
[0201] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer B1, počevši od 4-bromo-3-(hidroksimetil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A1, 0.8 g, 3.14 mmol), fenilboronske kiseline (0.467 g, 3.83 mmol), Pd(PPh3)4(0.181 g, 0.379 mmol) i Cs2CO3(3.29 g, 10.11 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (210 mg, 36 %).
UPLC-MS: 1.80 min, 271 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer B3
4-(3-Fluorohenl)-3-(hidroksimetil)-1H-izohromen-1-on
[0202]
[0203] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer B2 počevši od 4-bromo-3-(hidroksimetil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A1, 0.5 g, 1.960 mmol), 3-fluorofenilboronske kiseline (0.4 g, 2.86 mmol), Pd(PPh3)4(0.136 g, 0.118 mmol) i Cs2CO3(0.96 g, 2.94 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.21 g, 40 %).
UPLC-MS: 1.80 min, 271 [M+H]+, metoda 4.
Intermediijer B4
4-(2-Fluorofenil)-3-(hidroksimetil)-1H-izohromen-1-on
[0205] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer B2 korišćenjem 4-bromo-3-(hidroksimetil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A1, 0.6 g, 2.352 mmol), 2-fluorofenilboronske kiseline (0.494 g, 3.53 mmol), Pd(PPh3)4(0.136 g, 0.118 mmol) i Cs2CO3(0.77 g, 2.35 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.21 g, 33 %).
UPLC-MS: 1.80 min, 271 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer B5
3-(Hidroksimetil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
[0206]
[0207] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer B2 korišćenjem 4-bromo-3-(hidroksimetil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A1, 0.5 g, 1.96 mmol), m-tolilboronske kiseline (0.400 g, 2.94 mmol), Pd(PPh3)4(0.113 g, 0.098 mmol) i Cs2CO3(0.64 g, 1.96 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.21 g, 40 %).
UPLC-MS: 1.89 min, 267 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer B6
3-(1-Hidroksietil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
[0208]
[0209] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer B1 korišćenjem 4-bromo-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A2, 0.52 g, 1.93 mmol), m-tolilboronske kiseline (0.45 g, 3.28 mmol), Pd(PPh3)4(0.11 g, 0.096 mmol) i Cs2CO3(0.81 g, 2.5 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.3 g, 55 %).
UPLC-MS: 5.18 min, 281 [M+H]+, metoda 5
Intermedijer B7
4-(3-Fluorofenil)-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on
[0210]
[0211] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer B1 korišćenjem 4-bromo-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A2, 0.8 g, 2.97 mmol), 3-fluorofenilboronske kiseline (0.62 g, 4.46 mmol), Pd(PPh3)4(0.17g, 0.149 mmol) i Cs2CO3(0.97 g, 2.9 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.39 g, 46 %).
UPLC-MS: 1.85 min, 285 [M+H]+, metoda 5.
Intermedijer B8
4-(3-(Dimetilamino)fenil)-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on
[0212]
[0213] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer B1 korišćenjem 4-bromo-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A2, 0.5 g, 1.86 mmol), 3-(dimetilamino)fenilboronske kiseline (0.46 g, 2.79 mmol), Pd(PPh3)4(0.11 g, 0.093 mmol) i Cs2CO3(0.78 g, 2.41 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.2 g, 35 %).
UPLC-MS: 1.87 min, 350 [M+H+ACN]+, metoda 4.
Intermedijer B9
3-(1-Hidroksietil)-4-(3-(morfolinosulfonil)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0215] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer B1 korišćenjem 4-bromo-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A2, 0.3 g, 1.11 mmol), 3-(4-morfolinosulfonil)fenilboronske kiseline (0.45 g, 1.67 mmol), Pd(PPh3)4(0.064 g, 0.056 mmol) i Cs2CO3(0.47 g, 1.45 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.163 g, 35 %).
UPLC-MS: 1.70 min, 416 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer B10
3-(1-Hidroksietil)-4-(6-metilpiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on
[0216]
[0217] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer B1 korišćenjem 4-bromo-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A2, 0.55 g, 2.04 mmol), 6-metilpiridin-3-ilboronske kiseline (0.550 g, 2.0 mmol), Pd(PPh3)4(0.118 g, 0.102 mmol) i Cs2CO3(1.06 g, 3.27 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.163 g, 28 %)
UPLC-MS: 1.25 min, 282 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer B11
3-(1-Hidroksietil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on
[0218]
[0219] 4-Bromo-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A2, 0.1 g, 0.372 mmol), 6-metil-2-(tiazol-5-il)-1,3,6,2-dioksazaborokan-4,8-dion (0.134 g, 0.56 mmol), Pd(PPh3)4(0.021 g, 0.019 mmol) i Cs2CO3(0.182 g, 0.56 mmol) u DMF (1 mL) su zagrevani pod mikrotalasnim zračenjem na 120°C tokom 1 sata i 15 min. Onda, dalji 6-metil-2-(tiazol-5-il)-1,3,6,2-dioksazaborokan-4,8-dion (0.134 g, 0.56 mmol), Pd(PPh3)4(0.021 g, 0.019 mmol) i Cs2CO3(0.182 g, 0.56
mmol) su dodati, i zatim je dobijena smeša reagovala tokom 5 sati na 100°C. Sirovi produkt je prečišćen hromatografijom sa reverznom fazom sa Biotage C1830 g SNAP kolonom (Faza A, voda 95%, CAN 4.9%, mravlja kiselina 0.1%; faza B ACN 99,9%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (102 mg).
UPLC-MS: 1.48 min, 274 [M+H]+, metoda 4
Intermedijer B12
terc-Butil 4-(3-(1-hidroksietil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-5,6 dihidropiridin-1(2H)-karboksilat
[0220]
[0221] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer B1 korišćenjem 4-bromo-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer A2, 0.55 g, 2.04 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (0.79 g, 2.55 mmol), Pd(PPh3)4(118 mg, 0.102 mmol) i Cs2CO3(1.0 g, 3.27 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.135 g, 18 %) kao žućkasto ulje.
UPLC-MS: 1.91 min, 371 [M+H]+, metoda 4
Intermedijer B13
3-(1-Hidroksietil)-4-(2-metilpiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on
[0222]
[0223] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer B1 korišćenjem 4-bromo-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A2, 0.5 g, 1.86 mmol), 2-metilpiridin-4-ilboronske kiseline (0.38 g, 2.79 mmol), Pd(PPh3)4(0.107 g, 0.093 mmol) i Cs2CO3(0.78 g, 2.41 mmol). Sirovi produkt je prečišćen hromatografijom sa reverznom fazom sa Biotage C18 SNAP 30 g kolona (Faza A, voda 95%, ACN 4.9%, mravlja kiselina 0.1%; Faza B ACN 99.9%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.25 g, 48 %).
UPLC-MS: 1.20 min, 282 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer B14
4-Benzil-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on
[0224]
[0225] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer B1 korišćenjem 3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A2, 0.6 g, 2.23 mmol), 2-benzil-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0.730 g, 3.3 mmol), Pd(PPh3)4(0.129 g, 0.111 mmol) i Cs2CO3(1.07 g, 3.12 mmol) da bi se dobilo sirovo jedinjenje iz naslova (0.62 g) koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja.
UPLC-MS: 1.82 min, 281 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer B15
3-(1-Hidroksietil)-4-(4-(2-morfolinoetoksi)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0226]
[0227] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer B1, korišćenjem 4-bromo-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A2, 0.36 g, 1.35 mmol), 4-(2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)etil)-morfolina (0.45 g, 1.35 mmol), Pd(PPh3)4(0.078 g, 0.068 mmol) i Cs2CO3(0.53 g, 1.6 mmol). Sirovi produkt je filtriran, razblažen sa 1M HClvodene(3 ml) i prečišćen hromatografijom sa reverznom fazom sa Biotage C18 SNAP 120 g kolonom (Faza A, voda 95%, ACN 4.9%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 99.9%, mravlja kiselina 0.1%), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.179 g, 33%).
UPLC-MS: 1.36 min, 396 [M+H]+, metoda 4
Intermedijer B16
3-(1-Hidroksietil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on
[0228]
[0229] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer B1, korišćenjem 4-bromo-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A2, 0.4 g, 1.49 mmol), 4-((5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)tiofen-2-il)metil)morfolina (0.598 g, 1.93 mmol), Pd(PPh3)4(0.086 g, 0.074 mmol) i Cs2CO3(0.678 g, 2.1 mmol). Sirovi produkt je prečišćen hromatografijom sa reverznom fazom sa Biotage C18 SNAP 60 g kolona (Faza A, voda 95%, ACN 4.9%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 99.9%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.26 g, 48 %).
UPLC-MS: 1.21 min, 372 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer B17
3-(1-Hidroksietil)-4-(6-metoksipiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on
[0230]
[0231] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer B1, korišćenjem 4-bromo-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A2, 0.6 g, 2.23 mmol), 6-metoksipiridin-3-ilboronske kiseline (0.443 g, 2.90 mmol), Pd(PPh3)4(0.206 g, 0.178 mmol) i Cs2CO3(1.02 g, 3.1 mmol). Sirovi produkt je prečišćen hromatografijom sa reverznom fazom na Biotage 30 g C18 SNAP koloni (Faza A, voda 95%, acetonitril 4.9%, mravlja kiselina 0.1%; Faza B acetonitril 99.9%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.25 g, 38 %).
UPLC-MS: 1.69 min, 298 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer B18
4-(3,6-Dihidro-2H-piran-4-il)-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on
[0232]
[0233] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer B1 korišćenjem 4-bromo-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer A2, 0.50 g, 1.86 mmol), 2-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0.51 g, 2.42 mmol), Pd(PPh3)4(0.11 g, 0.093 mmol) i Cs2CO3(0.30 mg, 0.93 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.13 g, 26 %) kao narandžasto ulje.
UPLC-MS: 1.52 min, 273 [M+H]+, metoda 4
[0234] Intermedijer B19-23, 32-33 nađen u tabeli ispod može biti pripremljen počevši od intermedijera A2 i pogodnog reagensa prikazanog isod prateći slične postupke kao za jedinjenja B1.
(nastavak)
Intermedijer B24
3-(1-hidroksietil)-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioksolan-2-il)fenil)-1H-izohromen-1-on [0235]
[0236] 4-bromo-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A2, 4.05 g, 15.05 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioksolan-2-il)fenil)-1,3,2-dioksaborolan (Intermedijer G2, 5 g, 15.05 mmol), X-Fos-Pd-G2 (1.184 g, 1.505 mmol) i K3PO4· H2O (9.81 g, 30.1 mmol) su dispergovani u THF (42 ml) i deoksigenirani pod argonom, zatim je dodata voda (42 ml) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je razblažena sa AcOEt (250 ml) i isprana sa 0.2 M HClvodene(250 ml), jednom sa zasićenim NaClvodenim, osušena preko Na2SO4i rastvarač uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen fleš hromatografijom na silikagelu korišćenjem Biotage 100G 50G SNAP sa gradijentom heksana i AcOEt da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5.4 g, 91%) kao tamno ulje.
UPLC-MS: 1.19 min, 377.2 [(M - H2O) H]+, metoda 9
[0237] Intermedijari B25-30, 35, 36, 43, 50, 51 i 57 koji se nalaze u tabeli ispod mogu biti pripremljeni počevši od intermedijara A2 i pogodnog reagensa, prikazanog u nastavku, prema sličnim postupcima kao za jedinjenje B24.
(nastavak)
(nastavak)
Intermedijer B31
terc-butil (5-(3-(1-bromoetil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiazol-2-il)karbamat
[0238]
[0239] U rastvor 4-bromo-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer A2, 500 mg, 1.858 mmol), Pd-bis(difenilfosfin) hlorida (130 mg, 0,186 mmol), cezijium fluorida (847 mg, 5,57 mmol) u 1,4-dioksanu (5 ml), komercijalno dostupan terc-butil (5-(tributilstanil)tiazol-2-il)karbamt (1.182 g, 2,42 mmol) je dodat i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata i na 80 stepeni tokom 1 sata. Reakcija je podeljena između NH4Cl (100 ml) i AcOEt (30 ml), organska faza je isprana visoko koncentrovanim rastvorom soli u vodi, osušena i evaporisana u vakumu. Sirovi produkt je prečišćen hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 SNAP 30 g kolone (Faza A, voda 95%, ACN 4.9%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (255 mg, 35.3%)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.24 - 8.35 (m, 1 H), 7.82 - 7.93 (m, 1 H), 7.53 - 7.76 (m, 8 H), 7.38 - 7.47 (m, 1 H), 7.10 -7.23 (m, 1 H), 6.82 - 6.99 (m, 1 H), 5.46 - 5.70 (m, 1 H), 4.12 - 4.33 (m, 1 H), 1.48 (s, 4 H), 1.26 - 1.39 (m, 11 H)
Intermedijer B37
5-(3-(1-hidroksietil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-karbaldehid
[0240]
[0241] 3-(1-hidroksietil)-4-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioksolan-2-il)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B29, 940 mg, 2.347 mmol) je rastvoren u 20 ml MeCN i 20 ml HCl 1M su dodati. Bistro žuti rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Smeša je razblažena sa 50 ml vode i 200 ml EtOAc su dodati, zatim mešani tokom 20 min. Faze su razdvojene i jedna organska je ponovo isprana sa 100 ml NaHCO3zas.rastvorom. Faze su ponovo razdvojene ijedna organska je osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana do suvoće da ostane 5-(3-(1-hidroksietil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-karbaldehid (700 mg, 2.331 mmol, 99 % prinos) kao žuta pahuljasta čvrsta supstanca UPLC-MS: 0.83 min, 300.98 [M+H]+, metoda 9.
Intermedijer B38
benzil 4-((5-(3-(1-hidroksietil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-il)metil)piperazin-1-karboksilat
[0242]
[0243] U 250 ml laboratorijsku bocu sa okruglim dnom 5-(3-(1-hidroksietil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-karbaldehid (Intermedijer B37) (780 mg, 2.60 mmol) je rastvoren u 30 ml DCM zatim sirćetna kiselina (0.446 ml, 7.79 mmol) i benzil piperazin-1-karboksilat (1.503 ml, 7.79 mmol) su dodati. Nakon nekoliko minuta dodat je natrijum TRIACETOKSIHIDROBORAT (2.75 g, 12.99 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Smeša je sipana u 100 ml DCM i 100 NaHCO3. zas. rast. zatim su faze razdvojene, i jedna organska je koncentrovana do suvoće da bi ostalo smeđe ulje koje je odmah prečišćeno hromatografijom eluiranjem sa smešama heksana/EtOAc da bi ostalo jedinjenje iz naslova (903 mg, 1.790 mmol, prinos 68.9%) kao žuto ulje.
UPLC-MS: 0.79 min, 505.12 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer B39
3-(1-hidroksietil)-4-(5-((4-metilpiperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on
[0244]
[0245] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno na sličan način kao za intermedijar B38, iz 5-(3-(1-hidroksietil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-karbaldehida (Intermedijer B37) (800 mg, 2.66 mmol), 1-METILPIPERAZINA (913 ml, 7.99 mmol), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (412 mg, 1.072 mmol, prinos 40.2%) kao žuto ulje.
UPLC-MS: 0.56 min, 385.13 [M+H]+, metoda 9.
Intermedijer B40
4-(5-(3-(dimetilamino)prop-1-en-1-il)tiofen-2-il)-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on
[0246]
[0247] U 100 ml 3-grloj laboratorijskoj boci sa okruglim dnom (2- (dimetilamino)etil) trifenilfosfonijum bromid (1569 mg, 3.79 mmol) je napunjen i suspendovan pod Argonom u 15 ml Dioksana. Kalijum bis(trimetilsilil)amidni rastvor 0.5 M u toluenu (6.0 ml, 3.03 mmol) je dodat u kapima i pojavila se žuto\narandžasta boja. Smeša je dalje mešana tokom 20 min, zatim je dodat 5-(3-(1-hidroksietil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-karbaldehid (Intermedijer B37, 455 mg, 1,515 mmol) rastvoren u 5 ml dioksana. Smeša je dalje mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata, zatim je sipana u 100 ml zasićenog rastvora NH4Cl i 200 ml EtOAc. Faze su razdvojene i jedna organska je osušena preko natrijum sulfata. Rastvarači su uklonjeni, i sirovi produkt je prečišćen hromatografijom eluiranjem sa DCM\20% MeOH u DCM smešama da ostane 4-(5-(3-(dimetilamino)prop-1-en-1-il)tiofen-2-il)-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (220 mg, 0,619 mmol, 40,9 %prinos) kao žuto ulje.
UPLC-MS: 0.62 min, 356.15 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer B41
5 3-(3-(1-hidroksietil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)benzaldehid
[0248]
[0249] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično intermedijaru B37, iz 3-(1-hidroksietil)-4-(3-(4,4,5,5-tetrameil-1,3-dioksolan-2-il)fenil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B24, 1.268 mmol, 500 mg) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (400 mg, 1.359 mmol, 107 %) kao žuto ulje.
UPLC-MS: 0.86 min, [M+H]+, metoda 10.
Intermedijer B42
4-(3-(3-(dimetilamino)prop-1-en-1-il)fenil)-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on
[0250]
[0251] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično jedinjenju intermedijera B40, iz 3-(3-(1-hidroksietil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)benzaldehida (Intermedijer B41, 373 mg, mmol) i (2- (dimetilamino)etil)trifenilfosfonijum bromida (3.17 mmol, 1.313 mg) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (280 mg, 0.801 mmol, 63.2 % prinos) kao žuto ulje
UPLC-MS: 1.09 min, 350.20 [M+H]+, metoda 10.
Intermedijer 44
4-(3-(1-hidroksietil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)benzaldehid
[0252]
[0253] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično jedinjenju intermedijera B37, iz 3-(1-hidroksietil)-4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioksolan-2-il)fenil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer B43, 1.83 g, 4.64 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.12 g, 3.81 mmol, 82% prinos)kao žuto ulje.
UPLC-MS: 1.42 min, 277.17 [M+H-H2O]+, metoda 10.
Intermedijer B45
4-(4-(3-(dimetilamino)prop-1-en-1-il)fenil)-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on
[0254]
[0255] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično jedinjenju intermedijera B40, iz 4-(3-(1-hidroksietil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)benzaldehida (Intermedijer B44, 480 mg, 1.63 mmol) i (2-(dimetilamino)etil)trifenilfofonijum bromida (4.08 mmol, 1.69 mg), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (210 mg, 0.601 mmol, 36.8 % prinos) kao žuto ulje.
UPLC-MS: 0.49 min, 350.21 [M+H]+, metoda 9.
Intermedijer B46
3-(1-hidroksietil)-4-(4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0256]
[0257] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično jedinjenju intermedijera B38, iz 4-(3-(1-hidroksietil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)benzaldehida (Intermedijer B44, 320 mg, 1.087 mmol), i 1-METILPIPERAZINA (373 µl, 3.26 mmol), da se dobije željeni produkt 3-(1-hidroksietil)-4-(4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on (428 mg, 1.131 mmol, 104 % prinos) kao žuto ulje.
UPLC-MS: 0.52 min, 379.33 [M+H]+, metoda 9.
Intermedijer B47
3-(1-hidroksietil)-4-(4-(pirolidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0258]
[0259] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično primeru B37, iz 4-(3-(1-hidroksietil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)benzaldehida (Intermedijer B44, 320 mg, 1.087 mmol), i pirolidina (232 mg, 3.26 mmol), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (353 mg, 1.010 mmol, 93 % prinos) kao žuto ulje.
UPLC-MS: 0.55 min, 350.25 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer B48
3-(1-hidroksietil)-4-(4-(piperidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0260]
[0261] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično jedinjenju Intermedijera B37, iz 4-(3-(1-hidroksietil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)benzaldehida (Intermedijer B44, 650 mg, 2.209 mmol) i piperidina (654 µl, 6.63 mmol), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (720 mg, 1.981 mmol, 90 % prinos) kao žuto ulje.
UPLC-MS: 0.58 min, 364.25 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer B49
3-(1-hidroksietil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0262]
[0263] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično jedinjenju Intermedijera B37, iz 3-(3-(1-hidroksietil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)benzaldehida (Intermedijer B42, 530 mg, 1.801 mmol), i 1-METILPIPERAZINA (617 µl, 5.40 mmol), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (341 mg, 0.900 mmol, 50 % prinos) kao žuto ulje.
UPLC-MS: 0.57 min, 379.28 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer B53
3-(1-hidroksietil)-7-metil-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0264]
[0265] U rastvor 4-bromo-3-(1-hidroksietil)-7-metil-1H-izohromen-1-on (intermedijer A4, 1.04 g, 3.67 mmol) u Dioksanu/H2O (5:1) (60 ml), fenilboronska kiselina (0.67 g, 5.51 mmol) i Na2CO3(0.779 g, 7.34 mmol) su dodati praćeni Pd(dppf)Cl2(0.269 g, 0.367 mmol) i dobijena smeša je zagrevana na 90°C tokom 2 sata. Dodata je 1N HCl (pH ≈2) i smeša je podeljena između EtOAc i vode. Organska faza je isprana dva puta sa visoko koncentrovanim rastvorom soli u vodi i osušena preko natrijum sulfata. Rastvarač je uklonjen pod vakumom, a sirovi produkt je prečišćen hromatografijom na koloni na Biotage ulošku silikagela (cikloheksan : EtOAc= 95 : 5 to 40 : 60) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuto ulje (0.835 g, 2.98 mmol, 81%).
UPLC-MS: 1.12 min, 281.2 [M+H]+, metoda 13
Intermedijer B54
7-hloro-3-(1-hidroksietil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0266]
[0267] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao Intermedijer B53 iz 4-bromo-7-hloro-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer A5, 1.4 g, 4.61 mmol) i fenilboronske kiseline (0.844 g, 6.92 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta pena (0.540 g) koje je korišćeno bez bilo kojeg dodatnog prečišćavanja.
UPLC-MS: 1.11 min, 300.8 [M+H]+, metoda 12
Intermedijer B55
6-hloro-3-(1-hidroksietil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0268]
[0269] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao Intermedijer B53 iz 4-bromo-6-hloro-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer A6, 0.973 g, 3.205 mmol) i fenilboronske kiseline (0.586 g, 4.808 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela pena (0.430 g, 1.43 mmol, 45%).
UPLC-MS: 1.12 min, 301.1 [M+H]+, metoda 13
Intermedijer B56
6-fluoro-3-(1-hidroksietil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0270]
[0271] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao Intermedijer B53 iz 4-bromo-6-fluoro-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer A7, 0.95 g, 3.31 mmol) i fenilboronske kiseline (0.605 g, 4.96 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.736 g) koje je korišćeno bez bilo kojeg dodatnog prečišćavanja.
UPLC-MS: 1.04 min, 285.2 [M+H]+, metoda 13
Intermedijer B58
3-(1-hidroksietil)-4-(piridin-2-il)-1H-izohromen-1-on
[0272]
Korak 1.3-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-4-(piridin-2-il)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B58.1)
[0273]
[0274] U degazirani rastvor 4-bromo-3-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer A8, 2 g, 5.22 mmol) u toluenu (30 ml) PdCl2(PPh3)2(0.183 g, 0.261 mmol) je dodat praćen 2-(tributilstanil)piridinom (4.55 ml, 10.44 mmol) i dobijena smeša je zagrevana do refluksa preko noći. Smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature i zatim filtrirana kroz celitni jastučić. Rastvarač je uklonjen u vakumu, sirovi produkt je rastvoren u AcOEt i zasićeni vodeni rastvor KF je dodat i smeša je mešana tokom 2 sata. Organska faza je razdvojena, osušena preko natrijum sulfata i evaporisana do suvoće. Sirovi produkt je prečišćen fleš hromatografijom na silikagelu Biotage uloška (cikloheksan prema cikloheksanu: EtOAc = 20:80) da bi se dobio 3-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-4-(piridin-2-il)-1H-izohromen-1-on kao bledo žuto ulje (Intermedijer B58.1, 0.508 g, 1.33 mmol).
UPLC-MS: 1.42 min, 382.4 [M+H]+, metoda 13
Korak 2.
[0275] 1.0 M TBAF u THF (1.43 mL, 1.43 mmol) je dodat u kapima u rastvor 3-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-4-(piridin-2-il)-1H-izohromen-1-on (intermedijer B58.1, 0.394 g, 1.3 mmol) u THF (15 ml). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Smeša je razblažena sa DCM i dodata je voda. Smeša je ekstrahovana dva puta sa DCM, i kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i evaporisani do suvoće.
[0276] Sirovi produkt je prečišćen fleš hromatografijom na silikagelu Biotage uloška (cikloheksan prema cikloheksanu: EtOAc=10:90) da se dobije jedinjenje iz naslova (0.284 g, 1.06 mmol)
UPLC-MS: 0.67 min, 268.2 [M+H]+, metoda 13
Intermedijer B59
3-(1-hidroksietil)-4-(morfolinometil)-1H-izohromen-1-on
[0277]
Korak 1.3-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-4-vinil-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B59.1)
[0278]
[0279] U degazirani rastvor 4-bromo-3-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer A8, 6 g, 15.7 mmol) u toluenu (120 ml), PdCl2(PPh3)2(0.6 g, 079 mmol) je dodat praćen sa tributil(1-etoksivinil)tin (5 ml, 17.2 mmol) i dobijena smeša je zagrevana do refluksa preko noći. Dodatni PdCl2(PPh3)2(0.6 g) je dodat na sobnoj temperaturi, i smeša je refluksirana tokom 30 minuta. Smeša je ohlađena do sobne temperature, zatim filtrirana kroz celitni jastučić. Filtrat je evaporisan do suvoće i sirovi produkt je prečišćen fleš hromatografijom na Biotage silikagel ulošcima (cikloheksan prema cikloheksanu: EtOAc=80:20) da se dobije 3-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-4-vinil-1H-izohromen-1-on kao bledo žuto ulje (Intermedijer B59.1, 5.8 g).
UPLC-MS: 1.51 min, 331.1 [M+H]+, metoda 12.
Korak.2 3-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-karbaldehid (intermedijer B59.2)
[0280]
[0281] Sporo strujanje O3u O2je propušteno kroz -78°C ohlađeni rastvor 3-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-4-vinil-1H-izohromen-1-on (intermedijer B59.1, 2.967 g sirovog produkta) u DCM (100 ml) tokom 1.5 sata. Višak O3je prečišćen mehirićima N2, zatim je dodat rastvor PPh3(2.316 g, 8.83 mmol) u DCM (20 ml). Rastvor je ostavljen da dostigne 25°C i mešan je preko noći. Rastvarač je uklonjen u vakumu, a sirovi materijal je prečišćen fleš
hromatografijom na Biotage ulošku silikagela (cikloheksan prema cikloheksanu: EtOAc=90:10) da se dobije 3-(1-((tercbutildimetilsilil)oksi)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-karbaldehid (Intermedijer B59.2, 1.453 g, 4.38 mmol).
UPLC-MS: 1.43 min, 333.1 [M+H]+, metoda 12.
Korak 3.3-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-4-(morfolinometil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B59.3)
[0282]
[0283] U rastvor 3-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-karbaldehida (Intermedijer B59.2, 0.5 g, 1.5 mmol) i morfolina (0.12 ml, 1.35 mmol) u DCM (20 ml), suvi Na2SO4je dodat i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Natrijum triacetoksiborohidrid (0.286 g, 2.25 mmol) i sirćetna kiselina (0.09 ml, 1.5 mmol) su dodati i reakciona smeša je mešana tokom 24 sata nasobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena dodatkom 2M HCl (3 ml), heterogena smeša je filtrirana i filtrat je prečišćen fleš hromatografijom na silika NH ulošku (cikloheksan : EtOAc = 90 : 10 do 80 : 20) dajući 3-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-4-(morfolinometil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B59.3, 0.183g, 0.45 mmol, 30 %).
UPLC-MS: 1.27 min, 404.5 [M+H]+, metoda 14.
Korak 4
[0284] 3-(1-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-4-(morfolinometil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B59.3, 0.203 g, 0.503 mmol) je rastvoren u THF (7 mL); TBAF (1.0 M rastvor u THF, 0.33 ml, 0.33 mmola) je dodat u kapima i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Dodata je voda (10 ml) i smeša je ekstrahovana dva puta sa DCM; kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i evaporisani do suvoće. Sirovi produkt je prečišćen reverznom fazom fleš kromatografije na C18 Biotage ulošku ((H2O:CH3CN = 95: 5 do 80:20, sa 0.1% HCOOH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.145 g). Produkt je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
UPLC-MS: 0.41 min, 290.4 [M+H]+, metoda 14.
Intermedijer C1
3-(Bromometil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0285]
[0286] Trifenilfosfin (250 mg, 0.953 mmol) je dodat u rastvor 3-(hidroksimetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer B2, 185 mg, 0.733 mmol) i perbromometan (316 mg, 0.953 mmol) u DCM (3.7 ml, 57.5 mmol), i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 dana, dodajući reagense nekoliko puta da bi se postigao završetak ukupno 4 ekvivalenta). Reakcija je preuzeta sa MeOH i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen preko Biotage Silika 50 g SNAP uloška sa gradijentom heksana i EtOAc da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.11 g, 47.6 %).
UPLC-MS: 2.21 min, 358 [M+H+ACN]+, metoda 4.
Intermedijer C2
3-(Bromometil)-4-(2-fluorofenil-1H-izohromen-1-on
[0287]
[0288] Trifenilfosfin (0.127 g, 0.488 mmol)) je dodat u rastvor 4-(2-fluorofenil)-3-(hidroksimetil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer B4, 40 mg, 0.148 mmol) i perbromometana (0.161 g, 0.488 mmol) u DCM (0.7 ml, 57.5 mmol), i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 sata. Reakcija je preuzeta sa MeOH zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen preko Biotage Silika 10 g SNAP uloška sa gradijentom heksana i EtOAc da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (37 mg, 75 %).
UPLC-MS: 2.21 min, 358 [M+H+ACN]+, metoda 4.
Intermedijer C3
3-(Bromometil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
[0289]
[0290] Trifenilfosfin (270 mg, 1.030 mmol) i perbromometan (342 mg, 1.030 mmol) su dodati u rastvor 3-(hidroksimetil)-4-mtolil-1H-izohromen-1-on (intermedijer B5, 211 mg, 0.792 mmol) u DMF (2 ml), i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim prečišćena putem hromatografije reverzne faze sa Biotage C1830 g SNAP kolonom (Faza A, voda 95%, ACN 4.5%, mravlja kiselina 0.5%; Faza B ACN 99.5%, mravlja kiselina 0.5%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (192 mg, 73.6 %).
UPLC-MS: 2.32 min, 372 [M+H+ACN]+, metoda 4
Intermedijer C4
3-(Bromometil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
[0291]
[0292] Trifenilfosfin (265 mg, 1.01 mmol) i perbromometan (335 mg, 1.010 mmol) su dodati u rastvor 4-(3-fluorofenil)-3-(hidroksimetil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer B3, 210 mg, 0.777 mmol) u DCM (6.5 ml) i smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Zatim su dodati trifenilfosfin (265 mg, 1.010 mmol) i perbromometan (335 mg, 1.01 mmol) i ostavljeni uz mešanje na sobnoj temperaturi tokom 6 sati. Reakcija je zatim razblažena sa MeOH (1 ml) i direktno prečišćena na 50 g Biotage silika ulošku eluiranjem sa gradijentom Heksana i EtOAc da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (154 mg, 59.5 %) kao žuta čvrsta supstanca
UPLC-MS: 2.20 min, 334.6 [M+H]+, metoda 4
Intermedijer C5
3-(1-Bromoetil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
[0294] Trifenilfosfin (365 mg, 1.39 mmol) i perbromometan (461 mg, 1.39 mmol) su dodati u rastvor 3-(1-hidroksietil)-4-mtolil-1H-izohromen-1-on (intermedijer B6, 300 mg, 1.07 mmol) u DCM (2.2 ml), i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Produkt reakcije je zatim prečišćen na silikagelu Biotage SNAP 50 g, eluiranjem sa gradijentom heksana i EtOAc da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (67 mg, 18.3%).
UPLC-MS: 2.39 min, 386 [M+H+ACN]+, metoda 4.
Intermedijer C6
3-(1-Bromoetil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
[0295]
[0296] 1 M PBr3u DCM (2.3 ml, 2.332 mmol) je dodat u rastvor 4-(3-fluorofenil)-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer B7, 390 mg, 1.372 mmol) u DCM (7.8 ml) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Reakciona smeša je tada evaporisana pod sniženim pritiskom i prečišćena na silikagelu Biotage SNAP 100 g, eluiranjem sa gradijentom heksana i EtOAc da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (227 mg, 47.7 %).
UPLC-MS: 2.27 min, 348 [M+H]+, metoda 4
Intermedijer C7
3-(1-Bromoetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0297]
[0298] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer C6, korišćenjem 3-(1-hidroksietil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B1, 2.6 g, 9.76 mmol), 1M PBr3u DCM (17.5 ml, 17.5 mmol) (30 ml) na sobnoj temperaturi. Sirovi produkt je prečišćen sa Biotage Silica SNAP 100 g sa gradijentom heksana i AcOEt da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.64 g, 51 %). UPLC-MS: 2.28 min, 331 [M+H+ACN]+, metoda 4
Intermedijer C8
3-(1-Bromoetil)-4-(3-(dimetilamino)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0299]
[0300] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer C6, korišćenjem 4-(3-(dimetilamino)fenil)-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer B8, 200 mg, 0.64 mmol), 1M PBr3(1.1 ml, 1.1 mmol) u DCM (2 ml) na sobnoj temperaturi. Sirovi produkt je prečišćen sa Biotage Silica SNAP 50 g sa gradijentom DCM i MeOH da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (300 mg).
UPLC-MS: 6.9 min, 292 [M-Br]+, metoda 2.
Intermedijer C9
3-(1-Bromoetil)-4-(3-(morfolinosulfonil)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0301]
[0302] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer C6, korišćenjem 3-(1-hidroksietil)-4-(3-(morfolinosulfonil)fenil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer B9, 163 mg, 0.392 mmol), 1M PBr3(0.68 ml, 0.667 mmol) u DCM (3.2 ml) na sobnoj temperaturi. Sirovi produkt je trituriran sa DMF da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (93 mg, 49%). Rastvor je prečišćen putem hromatografije reverzne faze sa Biotage C18 SNAP 30 g kolone (Faza A, voda 95%, ACN 4.9%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 99.9%, mravlja kiselina 0.1%), da bi se dobilo dalje jedinjenje (68 mg, 36.2%).
UPLC-MS: 5.75 min, 479 [M+H]+, a 5.
Intermedijer C10
3-(1-Bromoetil)-4-(6-metilpiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on hidrobromid
[0303]
[0304] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer C6, korišćenjem 3-(1-hidroksietil)-4-(6-metilpiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on intermedijer B10 (163 mg, 0.579 mmol), 1M PBr3(0.87 mL, 0.87 mmol) u smeši DCM (2 ml) i DMF (3 ml) na sobnoj temperaturi. Sirovi produkt je prečišćen putem hromatografije reverzne faze sa Biotage C18 SNAP 60 g kolone (Faza A, voda 95%, ACN 4.9%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 99.9%, mravlja kiselina 0.1%). Dodate su vodene frakcije 50% HBrvodenogi koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (320 mg).
UPLC-MS: 1.73 min, 344 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer C11
terc-Butil 4-(3-(1-bromoetil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat
[0305]
[0306] 1M PBr3(0.36 ml, 0.363 mmol) u DCM je dodat u kapima u rastvor terc-butil 4-(3-(1-hidroksietil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (intermedijer B12, 135 mg, 0.363 mmol) u DCM (5 ml). Reakciona smeša je tada osušena pod sniženim pritiskom i rastvorena u DCM (5 ml). Di-terc-butil-dikarbonat (0.34 ml, 1.445 mmol) i DMAP (89 mg, 0.727 mmol) su dodati istovremeno i smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je direktno prečišćena na Biotage SNAP 50g silika ulošku sa gradijentom heksana i EtOAc, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (100 mg, 63.3%) kao žućkasto ulje.
UPLC-MS: 2.30 min, 435 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer C12
3-(1-Bromoetil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on
[0307]
[0308] 1M PBr3(0.5 ml, 0.50 mmol) u DCM je dodat u kapima u 3-(1-hidroksietil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B11, 102 mg, 0.372 mmol) u DCM (4 ml) i ACN (2 ml) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je onda koncentrovana pod sniženim pritiskom i direktno prečišćena na Biotage Silika SNAP 12g ulošku sa gradijentom heksana i EtOAc, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (56 mg, 45 %).
UPLC-MS: 1.90 min, 337 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer C13
4-Benzil-3-(1-bromoetil)-1H-izohromen-1-on
[0309]
[0310] 1 M PBr3in DCM (0.105 mL, 1.105 mmol) je dodat u 4-benzil-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B14, 625 mg, 2.230 mmol) u DCM (2 ml) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je direktno prečišćena na Biotage SNAP 25g silika ulošku sa gradijentom heksana i EtOAc, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (22 mg, 2.9 %).
UPLC-MS: 2.19 min, 345 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer C14
3-(1-Bromoetil)-4-(2-metilpiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on
[0311]
[0312] 1 M PBr3u DCM (846 mL, 0.846 mmol) je dodat u 3-(1-hidroksietil)-4-(2-metilpiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on (intermedijer B13, 140 mg, 0.498 mmol) u DCM na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i direktno prečišćena putem reverzne faze hromatografije sa Biotage C18 SNAP 60 g kolone (Faza A, voda 95%, ACN 4.5%, mravlja kiselina 0.5%); Faza B ACN 99.5%, mravlja kiselina 0.5%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (80 mg, 45%). UPLC-MS: 1.60 min, 345 [M+H+ACN]+, metoda 4.
Intermedijer C15
3-(1-Bromoetil)-4-(4-(2-morfolinoetoksi)fenil)-1H-izohromen-1-on hidrobromid
[0313]
[0314] 1 M PBr3u DCM (1.82 mL, 1.82 mmol) je dodat u 3-(1-hidroksietil)-4-(4-(2-morfolinoetoksi)fenil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B15, 180 mg, 0.455 mmol) u DCM (2 ml) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je onda razblažena sa Et2O i filtrirana. Ostatak se dalje ispran sa Et2O i konačno osušen da bi se dobilo jedinjenje je iz naslova (150 mg, 61 %) kao ružičasto-crvena čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 1.58 min, 457 [M+H+ACN]+, metoda 4.
Intermedijer C16
3-(1-Bromoetil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on hidrobromid
[0315]
[0316] 1M PBr3u DCM (1.82 mL, 1.82 mmol) je dodat u 3-(1-hidroksietil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on (intermedijer B16, 258 mg, 0.695 mmol) u DCM (2.6 ml) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i sirovi produkt je kristalizovan iz ključanja DCM/MeOH 4/1 (5 ml) da bi se dobilo jedinjenje je iz naslova kao bezbojna čvrsta supstanca (138 mg, 38.6%)
UPLC-MS: 3.60 min, 354 [M-Br]+, metoda 5.
Intermedijer C17
3-(1-Bromoetil)-4-(6-metoksipiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on
[0318] 1M PBr3u DCM (1.80 mL, 1.80 mmol) je dodat 3-(1-hidroksietil)-4-(6-metoksipiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on (intermedijer B17, 225 mg, 0.76 mmol) u DCM (9 ml) na sobnoj tempraturi. Reakciona smeša je direktno prečišćena na Biotage SNAP 25g silika ulošku sa gradijentom heksana i EtOAc, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (105 mg, 38.5 %).
UPLC-MS: 2.12 min, 361 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer C18
3-(1-Hloroetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0319]
[0320] 3-(1-Hidroksietil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer B1, 300 mg, 1.27 mmol), Metan sulfonil hlorid (516 mg, 4.51 mmol), TEA (0.62 mmol, 4.5 ml)
su reagovali u DCM (10 ml) na sobnoj temperaturi. Rastvarač je onda uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (180 mg). Ovo je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
UPLC-MS: 2.25 min, 285 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer C19
3-(1-bromoetil)-4-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)-1H-izohromen-1-on
[0321]
[0322] 1 M PBr3u DCM (1.43 mL, 1.43 mmol) je dodat u 4-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer B18, 130 mg, 0.477 mmol) u DCM (2 mL) i mešan tokom 2 sata na sobnoj temperaturi, zatim je reakciona smeša apsorbovana na silika jastučiću i direktno prečišćena na Biotage silika ulošku eluiranjem sa gradijentom heksana i AcOEt, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (94 mg, 58.7%) kao beličasta čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 1.98 min, 377 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer C20
3-(1-Bromopropil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0323]
Korak 1. Metil 2-(pent-1-inil)benzoat (intermedijer C20.1)
[0324] Pent-1-in (5.6 mL, 57.2 mmol) je dodat u metil 2-jodobenzoat (5.6 mL, 38.2 mmol), bakar (l) jodid (1.0 g, 5.72 mmol) i Pd(PPh3)4(1.3 g, 1.14 mmol) u DMF (5 mL) i Et3N (1 mL) na sobnoj temperaturi tokom 3 sata.
[0325] Reakcija je podeljena između Et2O i 0.1 M HClvodene. Dobijena organska faza je isprana sa 0.1M HClvodenom, NaHCO3vodenimi visoko koncentrovanim rastvorom soli u vodi. Organska faza je zatim osušena preko Na2SO4i osušena pod sniženim pritiskom da se dobije metil 2-(pent-1-inil)benzoat (7.8 g) kao tamno ulje. Sirovi produkt je korišćen u sedećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
UPLC-MS: 2.14 min, 202 [M+H]+, metoda 4.
Korak 2.4-Jodo-3-propil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C20.2)
[0326] Metil 2-(pent-1-inil)benzoat (intermedijer C20.1, 3 g, 14.83 mmol), jod (11.29 g, 44.5 mmol) i natrijum bikarbonat (3.74 g, 44.5 mmol) su reagovali u Acetonitrilu (50 mL) tokom 20 minuta na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je razblažena sa Et2O i isprana sa 20% Na2S2O3vodenimi visoko koncentrovanim rastvorom soli u vodi. Organska faza je onda osušena preko Na2SO4i koncentrovna pod sniženim pritiskom. Sirovi prodikt je rastvoren u Et2O i prečišćen na silika jastučiću, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.54 g, 76%) kao smeđe ulje.
UPLC-MS: 2.27 min, 315 [M+H]+, metoda 4.
Korak 3.4-Fenil-3-propil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C20.3)
[0327] 4-jodo-3-propil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C20.2, 0.80 g, 2.55 mmol), fenilboronska kiselina (0.39 g, 3.18 mmol), Pd(PPh3)4(0.15 g, 0.127 mmol) i Cs2CO3(1.16 g, 3.57 mmol) su reagovali u DMF (10 ml) na 80°C tokom 3 sata. Reakcija je podeljena između AcOEt ai 1 M HClvodene, isprana sa 1 M HClvodene, visoko koncentrovanim rastvorom soli u vodi, osušena preko Na2SO4i koncentrovna pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi produkt je prečišćen na silika 50G Biotage ulošku eluiranjem sa gradijentom Heksana i AcOEt da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 0.11 g, 15.9 %) kao žućkasto ulje.
UPLC-MS: 2.35 min, 265 [M+H]+, metoda 4.
Korak 4.3-(1-Bromopropil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on.
[0328] 4-Fenil-3-propil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C20.3, 107 mg, 0.405 mmol), N-bromosukcinimid (86 mg, 0.486 mmol), benzoil peroksid (25 mg, 0.1 mmol) su reagovali u CCl4(2 mL) na 100°C tokom 2 sata. Reakciona smeša je zatim prečišćena na Biotage 50 g silika gel ulošku sa sa gradijentom Heksana i AcOEt da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (101 mg, 72.7 %) kao žućkasto ulje.
UPLC-MS: 2.37 min, 344 [M+H]+, metoda 4.
[0329] Intermedijeri C21-48 pronađeni u tabeli ispod mogu biti pripremljeni počevši od pogodnog intermedijera (lnt.), prikazanog ispod, prateći slične procedure kao za jedinjenje C6.
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
Intermedijer i jedinjenje D1
3-((4-Amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0330]
[0331] Komercijalno dostupan 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (124 mg, 0.476 mmol) je dodat u rastvor 3-(bromometil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C1, 100 mg, 0.317 mmol) u DMF (1 mL). K2CO3(65.8 mg, 0.476 mmol) se dodat i dobijena smeša je mešana na 50°C tokom 2 sata. Dobijena sirova supstanca je direktno prečišćena putem hromatografije reverzne faze sa Biotage C18 SNAP 30g kolone (Faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.01%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.01%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (138 mg, 88 %).
UPLC-MS: 1.92 min, 496 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer D2a i D2b
3-(1-(4-Amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on i 3-(1-(4-amino-3-jodo-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0332]
[0333] Komercijalno dostupan 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (270 mg, 1.033 mmol) i 3-(1-bromoetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C7, 500 mg, 1.519 mmol) su rastvoreni u DMF (4 mL). K2CO3(315 mg, 2.278 mmol)
je dodat i dobijena smeša je mešana na 80°C tokom 1 sata. Smeša je sipana u vodu (50 ml) i ekstrahovana sa AcOEt (10 ml X 3). Organske faze su osušene i evaporisane pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 SNAP 60 g kolonom (Faza A, voda 95%, ACN 4.9%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da se dibije 3-(1-(4-Amino-3-jodo-1H-pirazolo[ 3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer D2a , 78 mg, 10%) i 3-(1-(4-amino-3-jodo-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer D2b , 20mg, 2.6 %).
[0334] Intermedijer D2a. UPLC-MS: 1.85 min, 510 [M+H]+, metoda 4.
[0335] Intermedijer D2b. UPLC-MS: 1.95 min, 510 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer i jedinjenje D3
3-(1-(4-Amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
[0336]
[0337] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno slično kao intermedijer D2, iz komercijalno dostupnog 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (125 mg, 0.481 mmol) i K2CO3(66.4 mg, 0.481 mmol) i rastvora 3-(1-bromoetil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C5, 110 mg, 0.320 mmol) u DMF (1.1 mL) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (120 mg, 71.5 %).
UPLC-MS: 5.87 min, 523 [M+H]+, metoda 5.
[0338] Intermedijer D4-D22, D29-34 koji se nalazi u donjoj tabeli može biti pripremljen počevši od pogodnog intermedijara (Int.) koji je prikazan ispod i 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina prateći slične postupke kao za jedinjenje D2.
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
nastavak
Intermedijer D23
3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0339]
[0340] Terc-butil 4-(3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat (Intermedijer D14, 1.5 g, 2.441 mmol) je suspendovan u 1,4-Dioksanu (5 ml) i 4 M HCl u dioksanu (15.26 ml, 61.0 mmol) je dodato. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h, zatim su isparljive materije uklonjene pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.56 g) kao svetlo ružičasti prah.
UPLC-MS: 0.47 min, 515 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer D24
3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(1-izopropilpiperidin-4-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on format
[0341]
[0342] Smeša 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorida (Intermedijer D23, 0.1 g, 0.182 mmol), 1-izopropilpiperidin-4-on (0.064 ml, 0.438 mmol), DIPEA (0.032 ml, 0.182 mmol) i lopatica natrijum sulfata u DCM (3 ml) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Zatim je dodata sirćetna kiselina (0.061 mL, 1.09 mmol), praćena natrijum triacetoksiborohidridom (154 mg, 0.726 mmol). Dobijena suspenzija je mešana tokom 3 sata na sobnoj temperaturi, zatim je reakcija ugašena dodatkom 2 N HCl. Heterogena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje RP-fleš hromatografijom (Biotage 30 g C18 kolona, gradijentna elucija od 100:0 do 60:40 A/B u 15 CV; A: voda/MeCN 95/5 0.01% HCOOH, B: voda/MeCN 5/95 0.01% HCOOH) je dalo jedinjenje iz naslova (99.8 mg, 0.146 mmol, prinos 80%) kao svetlo žuti prah.
UPLC-MS: 0.71 min, 640 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer D25
3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(4-(dimetilamino)butanoil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on format
[0343]
[0344] DIPEA (0.253 ml, 1.452 mmol) je dodat na 0°C u mešanu suspenziju 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorida (Intermedijer D23, 0.200 g, 0.363 mmol), HATU (0.166 g, 0.436 mmol) i 4-dimetilaminobuterne kiseline hidrohlorida (0.073 g, 0.436 mmol) u THF/DMF 5:1 (6 mL). Smeša je mešana na 0°C tiokom 15 minuta, zatim na sobnoj temperaturi tokom daljih 45 minuta. Reakciona smeša je sipana u zasićeni vodeni natrijum bikarbonat i ekstrahovana sa DCM. Sakupljene organske faze su koncentrovane pod sniženim pritiskom, i sirovi produkt je prečišćen RP-fleš hromatografijom (Biotage 30 g C18 kolona, gradijentna elucija od 1000 do 70:30 A/B u 15 CV; A: voda/MeCN 95/5 0.01% HCOOH, B: voda/MeCN 5/95+ 0.01% HCOOH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.153 g, 0.227 mmol, 62.6 % prinos) kao beli prah.
UPLC-MS: 0.67 min, 628 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer D26
3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(2-(dimetilamino)acetil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on format
[0345]
[0346] Prateći postupak korišćen za sintezu Intermedijera D25, od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorida (Intermedijer D23, 0.200 g, 0.363 mmol) i 2-(dimetilamino) sirćetne kiseline (0.045 g, 0.436 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.127 g, 0.197 mmol, 54.2 % prinos) kao beli prah.
UPLC-MS: 0.64 min, 600 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer D27
3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(1-metilpiperidin-4-karbonil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on format
[0347]
[0348] Prateći postupak korišćen za sintezu Intermedijera D25, od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4- il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorida (Intermedijer D23, 0.200 g, 0.363 mmol), i 1-metilpiperidin-4-karboksilne kiseline (0.062 g, 0.436 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (99.4 mg, 0.145 mmol, 39.9 % prinos) kao beli prah.
UPLC-MS: 0.65 min, 640 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer D28
terc-butil 3-(4-(3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-1,2,3,6-tetrahdropiridin-1-karbonil)azetidin-1-karboksilat
[0349]
[0350] Prateći postupak korišćen za sintezu Intermedijera D25, od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorida (Intermedijer D23, 0.200g, 0.363 mmol), i Bocazetidin-3-karboksilne kiseline (0.088 g, 0.436 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.252 g, 0.361 mmol, 99 % prinos). UPLC-MS: 1.04 min, 698 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer E1
terc-butil 1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etilkarbamat
[0351]
[0352] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na način sličan onom za intermedijer B1 od terc-butil 1-(4-bromo-1-okso-1H-izohromen-3-il)etilkarbamata (Intermedijer A3, 500 mg, 1.358 mmol), fenilboronske kiseline (215 mg, 1.765 mmol), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (112 mg, 22.6 %) kao žućkasto ulje.
UPLC-MS: 2.24 min, 731.0 [2M+H]+, metoda 4.
Intermedijer E2
3-(1-aminoetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0353]
[0354] terc-butil 1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etilkarbamat (Intermedijer E1, 112 mg, 0.306 mmol) je rastvoren u DCM (3 ml), zatim rastvor 4M HCl u dioksanu (3 ml, 12.00 mmol) je dodat i smeša i mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata. Reakcija je ugašena dodatkom Et2O (50 mL) i smeša osušena pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova. UPLC-MS: 1.43 min, 265.8 [M+H]+, metoda 4.
Intermedijer E3
3-(1-aminoetil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on dihidrohlorid
[0355]
[0356] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na način sličan onom za intermedijer
B1 od terc-butil (1-(4-bromo-1-okso-1H-izohromen-3-il)etil)karbamat (Intermedijer A3, 1 g, 2.72 mmol), 4-((5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)tiofen-2-il)metil)morfolina (0.840 g, 2.72 mmol), da se dobije (pre sušenja je dodata mala količina 1M HClvodene) jedinjenja iz naslova (587 mg, 71.2%) kao žućkasta čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 0.39 min, 354.1 [(M+H)-NH3)]+, metoda 9
Intermedijer E4
3-(1-aminoetil)-4-(1H-pirazol-4-il)-1H-izohromen-1-on dihidrohlorid
[0357]
[0358] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na način sličan onom za intermedijer
B1 od terc-butil 1-(4-bromo-1-okso-1H-izohromen-3-il)etilkarbamata (intermedijer A3, 500 mg, 1.358 mmol), 1H-pirazol-4-ilboronske kiseline (198 mg, 1.765 mmol). Posle prečišćavanja, sakupljene frakcije su dodate sa 37% HClvodenom(1 ml) i koncentrovane, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (158 mg, 35.5% prinos).
UPLC-MS: 1.44 min, 256, 511 [M+H]+, metoda 3.
Intermedijer F1
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4 d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioksolan-2-il)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0359]
[0360] 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioksolan-2-il)fenil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer D8, 1.14 g, 1.788 mmol), (3-fluoro-5-hidroksifenil)boronske kiseline (0.558 g, 3.58 mmol), K2CO3(0.494 g, 3.58 mmol) i PdCl2(dppf) (0.196 g, 0.268 mmol) su reagovali u dioksanu (30 ml) preko noći na 120°C. Reakcija je razblažena sa DCM (100 ml), filtrirana da bi se uklonile čvrste materije, filtrat je evaporisan pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu upotrebom Biotage 100G SNAP sa gradijentom DCM i MeOH da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (819 mg, 73.7%) u obliku bledo smeđe čvrste supstance.
UPLC-MS: 1.23 min, 622.2 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer F2
3-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)benzaldehid
[0361]
[0362] 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioksolan-2-il)fenil)-1H-zsohromen-1-on (Intermedijer F1, 819 mg, 1.317 mmol) je rastvoren u MeCN (10 mL) i 2M HClvodene(30 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Reakcija je razblažena sa DCM (300 mL) i isprana sa vodom (200 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan dva puta sa DCM, kombinovane organske frakcije su osušene kroz fazni separator, i rastvarač evaporisan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (598 mg, 87% prinos).
UPLC-MS: 0.97 min, 522.1 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer F3 i primer
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4 d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioksolan-2-il)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on
[0363]
[0364] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan načn intermedijeru F1, od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(4,4,5,5- tetrametil-1,3-dioksolan-2-il)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer D13, 385 mg, 0.598 mmol), (3-fluoro-5-hidroksifenil)boronske kiseline (187 mg, 1.197 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (254 mg, 67.6 %) kao žućkasta čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 5.13 min, 627.9 [M+H]+, metoda 6
Intermedijer F4
5-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-karbaldehid
[0365]
[0366] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan načn intermedijer F2, od 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-irazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioksolan-2-il)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer F3, 254 mg, 0.405 mmol) u MeCN (4 mL)/2M HClvodene(4 mL) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (201 mg, 94 %) kao žućkasta čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 1.73 min, 528.1 [M+H]+, metoda 9.
Intermedijer F5
3-(1-(4-amino-3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioksolan-2-il)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0367]
[0368] U 100 ml laboratorijsku bocu sa okruglim dnom 3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (Intermedijer G18, 400 mg, 1.194 mmol) je rastvoren u 7 ml suvog DMF zatim je dodat K2CO3(254 mg, 1.837 mmol). Posle mešanja tokom 5 min rastvor 3-(1-bromoetil)-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioksolan-2-il)fenil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer C26, 420 mg, 0.918 mmol) u 7 ml suvom DMF je dodat i bistra smeđa smeša je zagrevana na 60°C tokom 30 min. Smeša je ohlađena do sobne temperature, zatim su dodati 30 ml HCl 0.5 M i 50 ml EtOAc i mešani tokom 15 minuta. Faze su razdvojene i sirovi materijal je prečišćen hromatografijom eluiranjem sa DCM\ MeOH (80/20) u DCM da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (820 mg) kao braon ulje. Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
UPLC-MS: 1.48 min, 712.28 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer F6
3-(3-(1-(4-amino-3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)benzaldehid
[0369]
3-(1-(4-amino-3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioksolan-2-il)fenil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer F5, 654 mg, 0.919 mmol) je rastvoren u MeCN, zatim je dodato 2M
HCl i smeša je mešana preko noći. Dodati su DCM (25 ml) i voda (25 ml), zatim su faze razdvojene i vodena faza je isprana ponovo sa 10 ml DCM. Sakupljene organske faze su koncentrovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (490 mg, 0.801 mmola, 87% prinos) kao smeđe ulje.
UPLC-MS: 1.28 min, 612.15 [M+H]+, metoda 9
Intermediajer G1
3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-prazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin
[0370]
[0371] 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (1.52 g, 5.82 mmol), 3-fluoro-5-metoksifenilboronska kiselina (1.4 g, 8.24 mmol), Pd(dppf)Cl2(0.18 g, 0.246 mmol) i 8.7 mL od 1M NaOHvodenog(8.73 mmol) su reagovali u DMF (13 mL) pod Ar na 120°C tokom 48 sati. Reakcija je ugašena dodatkom 1M HClvodene(10 mL), osušena pod sniženim pritiskom i tamno sirovo ulje prečišćeno fleš hromatografijom na silikagelu korišćenjem Biotage 100G SNAP sa gradijentom DCM i iPrOH da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (275 mg, 18.2%) kao žućkasta čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 0.54 min, 260.0 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer G2
4,4,5,5-tetrametil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioksolan-2-il)fenil)-1,3,2-dioksaborolan
[0372]
[0373] (3-formilfenil)boronska kiselina (5 g, 33.3 mmol), 2,3-dimetilbutan-2,3-diol (19.70 g, 167 mmol) i p-toluensulfonska kiselina monohidrat (0.317 g, 1.667 mmol) su rastvoeni u toluenu (278 mL) i refluksirani sa tzv. "Dean-Stark" opremom tokom 3 sata do završetka reakcije. Smeša je osušena pod sniženim pritiskom, i ostatak razblažen sa AcOEt (250 mL) i ispran tri puta sa obilnom vodom, jednom sa zasićenim NaClvodenim(250 mL), osušen preko Na2SO4i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu korišćenjem Biotage 100G 50G SNAP sa gradijentom heksana i AcOEt da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (8.5 g, 77%) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.72 (s, 1 H), 7.63 (d, J=7.06 Hz, 1 H), 7.55 (d, J=7.50 Hz, 1 H), 7.31 - 7.44 (m, 1 H), 5.91 (s, 1 H), 1.24 - 1.37 (s, 18 H), 1.18 (s, 6 H).
Intermedijer G3
4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin hidrohlorid
[0374]
[0375] terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat (2 g, 6.47 mmol) je suspendovan u MTBE (8.1 mL) i 2M HCl u Et2O (24 mL). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, formiran je beo precipitat sakupljen filtracijom i ispran sa Et2O da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.434 g, 90 %).
UPLC-MS: 0.51 min, 210.3 [M+H]+, metoda 9.
Intermedijer G4
1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-il)etanon
[0376]
[0377] 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin hidrohlorid (Intermedijer G3, 1.4 g, 5.70 mmol) je bio suspenovan u DCM (15 mL) na 0°C, zatim TEA (2.384 ml, 17.10 mmol) i AcCl (0.405 ml, 5.70 mmol) su dodati. Reakcija je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana daljih 30 min, zatim je reakciona zapremina smanjen na 1/3 početne zapremine, i ostatak razblažen sa AcOEt (150 ml). Organska faza je isprana dva puta sa vodom, jedanom sa 0.2 M HClvodenomi jednom sa zasićenim NaClvodenim, osušena preko Na2SO4i rastvarač uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.24 g, 87% prinos) kao žućkasta čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 0.83 min, 252.3 [M+H]+, metoda 9.
Intermedijer G5
4,4,5,5-tetrametil-2-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioksolan-2-yl)tiofen-2-il)-1,3,2-dioksaborolan
[0378]
[0379] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno jedinjenju ntermedijera G2, od (5-formiltiofen-2-il)boronske kiseline (2.5 g, 16.03 mmol) da bi se dobio željeni produkt (3.93 g, 72.5 %) kao beličasta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.38 (d, J=3.53 Hz, 1 H), 7.22 (s, 1 H), 6.11 (s, 1 H), 0.98 - 1.52 (m, 24 H).
Intermedijer G6
N-(5-bromopiridin-3-il)-4-fluorobenzensulfonamid
[0380]
[0381] U rastvor 5-bromopiridin-3-amina (3 g, 17.34 mmol) u apsolutnom EtOH (15 ml), 4-fluorobenzen-1-sulfonil hlorid (0.989 g, 5.08 mmol) je dodat i reakcija je mešana preko noći. Etanol je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je razblažen sa DCM (40 ml) i ispran jednom sa zas. NaHCO3. Organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Produkt je direktno prečišćen hromatografijom reverzne faze sa Biotage C1830g kolonom (Faza A, voda 95%,
ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (158 mg, prinos 24.4%) kao bledo žuta čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 0.96 min, 331 [M+H]+, metoda 9.
Intermedijer G7
terc-butil 5-bromopiridin-3-ilkarbamat
[0382]
[0383] U rastvor 5-bromopiridin-3-amina (3 g, 17.34 mmol) u suvom DCM (25 ml), di-terc-butil dikarbonat (3.78 g, 17.34 mmol) je dodat uz mešanje. Dobijeni rastvor je ohlađen na 0°C i rastvor natrijum bis (trimetilsilil)amida 1 M u THF (17.34 ml, 17.34 mmol) je dodat u kapima preko 20 minuta. Rastvor je mešan preko noći. Zatim, rastvor je razblažen sa DCM (40 ml) i ispran jednom sa zas. NaHCO3. Organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Sirovi produkt je konačno prečišćen na Biotage Si 50 g sa gradijentom heksana i EtOAc. Jeinjenje iz naslova je obnovljeno (2.60 g, 54.9% prinos) kao bela čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 1.07 min, 273 [M+H]+, metoda 9.
Intermedijer G8
4-Hloro-2-amino(biskarbamat)-pirimidin
[0384]
[0385] U rastvor 4-hloropirimidin-2-amina (1.0 g, 7.72 mmol) u suvom DCM (30 ml), su dodati N,N-dimetilpridin-4-amin (0.094 g, 0.772 mmol) i N-etil-N,N-izopropilpropan-2-amin (2.494 g, 19.30 mmol). Posle 10 min, di-terc-butil dikarbonat (1.685 g, 7.72 mmol) je dodat i dobijeni rastvor je mešan preko noći. Reakcija je razblažena sa DCM (40 mL) i isprana jednom sa zas. NaHCO3. Dobijena organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Sirovi produkt je konačno prečišćen na Biotage Si 50 g sa gradijentom heksana i EtOAc. Jedinjenje iz naslova je dobijeno-oporavljeno (0.53 g, 69.3%) kao bela čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 1.24 min, 330 [M+H]+, metoda 9.
Intermedijer G9
4-fluoro-N-(5-(trimetilstanil)piridin-3-il)benzensulfonamid
[0386]
[0387] U rastvor N-(5-bromopiridin-3-il)-4-fluorobenzensulfonamida (intermedijer G6, 158 mg, 0.477 mmol) u suvom dioksanu (6 ml), 1,1,1,2,2,2-heksametildistanan (0.340 ml, 1.637 mmol) i Pd(PPh3)4(105 mg, 0.091 mmol) su dodati. Rastvor je zagrevan na 100°C i mešan preko noći. Rastvarač je uklonjen pod vakumom, i sirovi produkt je konačno prečišćen na Biotage Si 10 g sa gradijentom heksana i EtOAc. Jedinjenje iz naslova je obnovljeno (165 mg, 83% prinos) kao bela čvrsta supstanca. UPLC-MS: 0.99 min, 417 [M+H]+, metoda 9.
Intermedijer G10
terc-butil (5-(trimetilstanil)piridin-3-il)karbamat
[0388]
[0389] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao Intermedijer G9
korišćenjem terc-butil(5-bromopiridin-3-il)karbamata (Intermedijer G7, 600 mg, 2.197 mmol), 1,1,1,2,2,2-heksametildistanana (0.820 ml, 3.95 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (165 mg, 0.398 mmol, 83 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 0.82 min, 359 [M+H]+, metoda 9.
Intermedijer G11
4-trimetilstanil-2-amino-(biskarbamat)-pirimidin
[0390]
[0391] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao intermedijer G9 korišćenjem 4-Hloro-2-amino(biskarbamat)-pirimidina (Intermedijer G8, 400 mg, 1.21 mmol), 1,1,1,2,2,2-heksametildistanana (0.503 ml, 2.43 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (398 mg, 69.8%) kao bela čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 1.42 min, 460 [M+H-Boc]+, metoda 9.
Intermedijer G12
4-(((benziloksi)karbonil)amino)cikloheks-1-en-1-il trifluorometansulfonat
[0392]
[0393] U rastvor natrijum bis(trimetilsilil)amida 1M u THF (22.24 ml, 22.24 mmol) u suvom THF (25 mL), prethodno ohlađenog na -78°C, rastvor benzil (4-oksocikloheksil)karbamata (2.5 g, 10.11 mmol) u suvom THF (25 mL) je bio polako dodat. Rastvor je bio mešan tokom 30 min na -78°C, i zatim je rastvor 1,1,1 -trifluoro-N-fenil-N-(trifluorometilsulfonil)metansulfonamida (7.58 g, 21.23 mmol) u suvom THF-u (25 ml) bio dodat. Reakcija je mešana na -78°C tokom 10 minuta i zatim j ostavljena da dostigne sobnu temperaturu. Reakcija je razblažena sa dietil-etrom (200 mL) i organski sloj je ispran sa 1M vodenim rastvorom NaOH (100 mL). Organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Produkt je prečišćen sa Biotage Si 50 g sa gradijentom heptana i EtOAc, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.43 g, 3.77 mmol, 37.3% prinos) kao bela čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 1.25 min, 380 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer G13
benzil (4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-3-en-1-il)karbamat
[0394]
[0395] U rastvor 4-(((benziloksi)karbonil)amino)cikloheks-1-en-1-il trifluorometansulfonat (1.4 g, 3.69 mmol) u suvom DMF, 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-oktametil-2,2’-bi(1,3,2-dioksaborolan) (intermedijer G12, 0.984 g, 3.88 mmol), Pd(dppf)Cl2· CH2Cl2(0.904 g, 1.107 mmol) i kalijum acetat (1.07 g, 11.07 mmol) su dodati i reakcija je mešana preko noći na 80°C. DMF je uklonjen i ostatak je razblažen u etil acetatu (200 mL). Organska faza je isprana sa visoko koncentrovanim rastvorom soli u vodi (100 mL), zatim osušena preko Na2SO4, filtrirana i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Produkt je prečišćen sa Biotage Si 50 g sa gradijentom heptana i EtOAc, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.984 g, 15%) kao žuto ulje.
UPLC-MS: 1.28 min, 358 [M+H]+, metoda 9.
Intermediijer G14
3-jodo-N,1-bis(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin
[0396]
U rastvor 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (1 g, 3.83 mmol) u suvom DMF (15 mL), 3,4-dihidro-2H-Piran (1.103 ml, 11.49 mmol) i 4-metilbenzensulfonska kiselina monohidrat (0.208 ml, 0.958 mmol) su dodati. Rastvor je mešan tokom 5 dana na 90°C. Rastvarač je uklonjen i produkt je prečišćen sa Biotage Si 25 g sa gradijentom heptana i etil acetata, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (320 mg, 19.5% prinos).
UPLC-MS:0.68 min, 430 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer G15
N,1-bis(tetrahidro-2H-piran-2-il)-3-(trifluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin
[0397]
[0398] U rastvor 3-jodo-N,1-bis(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (Intermedijer G14, 322 mg, 0.75 mmol, 31.6 % prinos) u suvom DMF 6 (mL), bakar (l) jodid (429 mg, 2.250 mmol) i metil 2,2-difluoro-2-(fluorosulfonil)acetat (0.096 ml, 0.750 mmol) su dodati i rastvor je mešan tokom 18 sati na 80°C. DMF je uklonjen pod sniženim pritiskom i produkt je prečišćen sa Biotage Si 25 g sa gradijentom heptana i EtOAc da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (88 mg, 31.6% prinos).
UPLC-MS: (smeša dijastereoizomera) 1.16 i 1.18 min, 372 [M+H]+, metoda 9.
Intermedijer G16
3-(trifluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin
[0399]
[0400] U rastvor N,1-bis(tetrahidro-2H-piran-2-il)-3-(trifluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (intermedijer G15, 88 mg, 0.237 mmol) u EtOH (5 mL), voda (0.5 mL) je dodata. Zatim je dodata 2,2,2-trifluorosirćetna kiselina (0.3 ml, 0.237 mmol) i smeša je mešana na 80°C preko noći. Rastvarač je uklonjen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (45 mg, 93%) kao žuta čvrsta supstanca.
UPLC-MS:0.47 min, 204 [M+H]+, metoda 9.
Intermedijer G17
3-Metoksifenilsumpor pentafluorid-5-boronska kiselina
[0401]
Korak 1.2-(3-metoksi-5-(pentafluoro-16-sulfanil)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (intermedijer G17.1) [0402]
[0403] U rastvor 3-Metoksifenilsumpor pentafluorida (0.5 g, 2.135 mmol) u suvom THF (10 mL), 4,4’-di-tercbutil-2,2’-bipiridin (0.115 g, 0.427 mmol), 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-oktametil-2,2’-bi(1,3,2-dioksaborolan) (0.488 g, 1.922 mmol) i lr2(COD)2OMe2(0.142 g, 0.214 mmol) su dodati i rastvor je mešan preko noći na 80°C. Rastvarač je uklonjen, i produkt je prečišćen sa Biotage Si 25 g sa gradijentom heptana i EtOAc da bi se dobio 2-(3-metoksi-5-(pentafluoro-16-sulfanil)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (intermedijer G17.1, 621 mg, 81 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca.
Korak 2
[0404] U rastvor 2-(3-metoksi-5-(pentafluoro-16-sulfanil)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana (Intermedijer G17.1, 621 mg, 1.724 mmol) u THF (6 ml), 6 N vodene HCl je dodato i rastvor mešan tokom 3 sata. Rastvarač je uklonjen i produkt je direktno prečišćen hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 SNAP kolone (Faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); (Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (245 mg, 51.1% prinos) kao bela čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 0.71 min, 279 [M+H]+, metoda 9.
Intermedijer G18
3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin
[0405]
[0406] 3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (6.10 mmol 1.591 g), (3-(benziloksi)-5-fluorofenil)boronska kiselina (4.06 mmol 1.0 g), dppf (0.610 mmol, 338 mg), Kalijum fosfat anhidrovani (10.16 mmol, 2.157 g) su suspendovani u dioksanu i smeša je zagrevana na 180°C tokom 25 min u Mw reaktoru, a zatim je sipana u 100 ml vode. Smeša je mešana preko noći, zatim filtrirana na Bihnerovom levku ispiranjem sa 30 ml vode. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom eluiranjem sa DCM\MeOH (80/20) u DCM da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (450 mg, 1.342 mmol, prinos 33%) kao bež čvrsta supstanca. UPLC-MS: 1.42 min, 336.15 [M+H]+, metoda 10
Intermedijer G19
4-(trimetilstanil)-1H-indazol
[0407]
[0408] U rastvor 4-jodo-1H-indazol (500 mg, 2.049 mmol) u 1.4-dioksanu (500 ml) 1,1,1,2,2,2-heksametildistanan (1.0 g, 3.07 mmol), i Pd(Ph3P)4(237 mg, 0.250 mmol) su dodati i smeša je mešana na 80°C tokom 18 sati. Sirovi produkt je prečišćen hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 60 g SNAP kolone (Faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje (576 mg, 66%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.82 - 13.13 (bs, 1 H), 7.99 (s, 1 H), 7.45 - 7.52 (m, 1 H), 7.24 - 7.32 (m, 1 H), 7.20 (s, 1 H), 0.11 - 0.58 (m, 9 H).
Intermedijer G20
4-fenil-1H-izohromen-3-karbaldehid
[0409]
Korak 1.4-hloro-1H-izohromen-3-karbaldehid (Intermedijer G20.1)
[0411] Komercijalno dostupnom izohroman-4-on (900 mg, 6.07 mmol) u DCM (18 ml), DMF (0.706 ml) i POCl3(1.699 ml, 18.23 mmol) su dodati u sekvenci pod azotom na sobnoj temperaturi. Smeša je refluksirana tokom 6h i držana na sobnoj temperaturi preko noći.
[0412] Reakciona smeša je razblažena sa DCM (15 ml), isprana sa vodom i zas. NaCl, zatim osušena preko Na2SO4i evaporisana u vakumu. Dobijeni sirovi produkt je prečišćen hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 SNAP 30 g kolone (faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobio 4-hloro-1H-izohromen-3-karbaldehid (Intermedijer G20.1, 716 mg, 60.6 % prinos).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.02 (s, 1 H), 7.61 - 7.81 (m, 1 H), 7.42 - 7.58 (m, 2 H), 7.20 - 7.40 (m, 1 H),5.21 (s, 2 H). UPLC-MS: 0.94 min, 195 [M+H]+, metoda 9
Korak 2
[0413] X-fos Pd G2 (116 mg, 0.147 mmol) i fenilboronska kiselina (538 mg, 4.41 mmol) su hermetički zatvorene u zatvorenoj posudi opremljenoj sa magnetnom šipkom i kiseonik je uklonjen sa Ar/vakum ciklusom. Degazirani rastvor 4-hloro-1 H-izohromen-3-karbaldehid (lntermedijar G20.1, 716 mg, 3.68 mmol) u THF (8 ml) je dodat, praćen sa degaziranim rastvorom K3PO4H2O (1.795 ml, 7.36 mmol) u vodi (8 ml) i dobijena smeša mešana je na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je podeljena između 1M HCl (15 ml) i iste količine AcOEt. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, evaporisan u vakumu i prečišćen hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 SNAP 120g kolonom (Faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (821 mg, prinos 94%).
UPLC-MS: 1.12 min, 237 [M+H]+, metoda 9.
Intermedijer G21
benzil 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-8-azabiciklo[3.2.1]okt-2-en-8-karboksilat
[0414]
Korak a. (1R,5S)-terc-butil 3-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-8-azabiciklo[3.2.1]okt-2-en-8-karboksilat (Intermedijer G21.1)
[0415]
[0416] U rastvor NATRIJUM BIS(TRIMETILSILIL)AMIDA 1M U THF (12.43 ml, 12.43 mmol) u suvom THF (10 ml), prethodno ohlađen do-78°C, rastvor (1R, 5S)-terc-butil 3-okso-8-azabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (2 g, 8.88 mmol) u suvom THF (10 ml) je polako dodat i dobijeni rastvor je mešan tokiom 1 sata na -78°C. Zatim, rastvor 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-(trifluorometilsulfonil)metansulfonamid (3.49 g, 9.77 mmol) u suvom THF (10 ml) je polako dodat i reakcija je mešana 30 min na -78°C i 1 sat na sobnoj temperaturi. Dodat je etil acetat (100 mL) i organska faza je isprana sa 1M vodenog rastvora NaOH.
Organska faza je sakupljena, osušena, filtrirana i rastvarač uklonjen pod sniženim pritiskom. Produkt je prečišćen sa Biotage Si 50g sa gradijentom heptana i EtOAc dajući (1R,5S)-terc-butil3-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-8-azabiciklo[3.2.1]okt-2-en-8-karboksilat (2.93 g, 8.20 mmol, prinos 92 %) kao belu amorfnu čvrstu supstancu.
UPLC-MS: 1.30 min, 258 [M+H-Boc]+, metoda 9
Korak b. (1R,5S)-terc-butil3-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-8-azabiciklo[3.2.1]okt-2-en-8-karboksilat (Intermedijer G21.2)
[0417]
[0418] U rastvor (1R,5S)-terc-butil 3-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-8-azabiciklo[3.2.1]okt-2-en-8-karboksilata (Intermedijer G21.1, 2.93 g, 8.20 mmol) u suvom DMF (29 ml), 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-oktametil-2,2’-bi(1,3,2-dioksaborolan) (2.290 g, 9.02 mmol), kalijum acetat (2.414 g, 24.60 mmol) i Pd(dppf)Cl2· CH2Cl2(2.009 g, 2.460 mmol) su dodati, i reakcija je zagrevana do 80°C preko noći. Rastvarač je uklonjen, a ciljno jedinjenje je prečišćeno fleš hromatografijom na silikagelu (Snap 50 g heptana:etil acetat od 100:0 do 7:3) dajući (1R,5S)-terc-butil 3-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-8-azabiciklo[3.2.1]okt-2-en-8-karboksilat (Intermedijer G21.2, 1.93 g, 5.76 mmol, 70.2% prinos) kao bela čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 1.34 min, 280 [M+H-tBu]+, metoda 9
Korak c.
[0419] U rastvor terc-butil 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-8-azabiciklo[3.2.1]okt-2-en-8-karboksilat (Intermedijer G21.2, 1.93 g, 5.76 mmol) u suvom Dioksanu (20 ml), 4 M hlorovodonik 1.4 dioksan (5.76 ml, 23.03 mmol) je dodat i rastvor je mešan tokom 1 sata. Zatim, rastvarač je uklonjen. Sirovi produkt je rastvoren u suvom DCM (20.00 ml), N-(benziloksikarboniloksi)sukcinimid (1.964 ml, 6.91 mmol) i trietilamin (3.14 ml, 23.03 mmol) su dodati i suspenzija je mešana tokom 1 sata. Zatim, rastvarač je uklonjen i produkt je prečišćen sa Biotage Si 25 g sa gradijentom heptana i EtOAc dajući jedinjenje iz naslova (810 mg, 2.194 mmol, prinos 38.1%) kao belu čvrstu supstancu.
UPLC-MS: 1.30 min, 258 [M+H-Boc]+, metoda 9
Intermedijer G23
5-metoksi-4-metilpiridin-3-il)boronska kiselina
[0420]
[0421] U rastvor 3-bromo-5-metoksi-4-metilpiridina (0.5 g, 2.475 mmol) u suvom 1,4-Dioksanu (5ml), 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-oktametil-2,2’-bi(1,3,2-dioksaborolan) (0.691 g, 2.72 mmol), Pd(dppf)Cl2· CH2Cl2(0.606 g, 0.742 mmol) i kalijum acetat (0.729 g, 7.42 mmol) su dodati i rastvor je zagrevan do 80°C. Reakcija je mešana preko noći. Zatim, rastvarač je uklonjen i ostatak je rastvoren u THF-u (5.00 ml) i 12 N vodeni hlorovodonik (4.12 ml, 49.5 mmol) je dodat i mešan tokom 3 sata. Zatim, rastvarač je uklonjen i produkt je prečišćen sa C-18 fleš hromatografijom (eluent ((H2O/ACN)) 95: 5 0.1% HCOOH}: {(ACN/H2O) 95: 5 HCOOH 0.1%} od 95 : 5 do 0: 100 dajući jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (350 mg, 2.096 mmol, 85%)
UPLC-MS: 0.14 min, 168 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer G24
(5-metoksi-2-metilpiridin-3-il)boronska kiselina
[0422]
[0423] U rastvor 3-bromo-5-metoksi-2-metilpiridina (500 mg, 2.475 mmol) u suvom 1,4-Dioksanu (5ml), 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-oktametil-2,2’-bi(1,3,2-dioksaborolan) (691 mg, 2.72 mmol), Pd(dppf)Cl2· CH2Cl2(606 mg, 0.742 mmol) i kalijum acetat (729 mg, 7.42 mmol) su dodati i rastvor je zagrevan do 80°C. Reakcija je mešana preko noći. Zatim, rastvarač je uklonjen i ostatak rastvoren u THF (5.00 ml) i dodat je 12 N vodeni hlorovodonik (4.12 ml, 49.5 mmol) i mešan tokom 3 sata. Zatim, rastvarač je uklonjen i produkt je prečišćen sa C-18 fleš hromatografijom (eluent ((H2O/ACN)) 95:5 0.1% HCOOH}: {(ACN /H2O) 95:5 HCOOH 0.1%} od 95:5 do 0:100 dajući jedinjenje iz naslova (350 mg, 2.096 mmol, 85% prinos) kao bela čvrsta supstanca. UPLC-MS: 0.13 min, 168 [M+H]+, metoda 9
Intermedijer G25
(5-(benziloksi)-6-(trifluorometil)piridin-3-il)boronska kiselina
[0424]
Korak a. 3-(benziloksi)-5-bromo-2-jodopiridin (Intermedijer G25.1)
[0425]
[0426] U rastvor 5-bromo-2-jodopiridin-3-ol (0.700 g, 2.334 mmol, pripremljen prema Bioorg. Med. Chem. Lett. 2013, 2, 6784) u suvom THF (10 ml), prethodno ohlađenom na 0°C, benzil alkohol (0.728 ml, 7.00 mmol), TRIFENILFOSFIN (PPh3) (2.095 ml, 7.00 mmol) i DIIZOPROPIL AZODIKARBOKSILAT (1.287 ml, 6.54 mmol) su dodati. Reakcija je mešana tokom 4 sata na sobnoj temperaturi. Rastvarač je uklonjen i produkt je prečišćen sa Biotage Si 50 g sa gradijentom heptana i EtOAc 3-(benziloksi)-5-bromo-2-jodopiridin (Intermedijer G25.1, 835 mg, 2.141 mmol, prinos 92%) kao bela pena.
UPLC-MS: min, [M+H]+, metoda 9
Korak b.3-(benziloksi)-5-bromo-2-(trifluorometil)piridin (Intermedijer G25.2)
[0427]
[0428] U rastvor 3-(benziloksi)-5-bromo-2-jodopiridina (Intermedijer G25.1, 800 mg, 2.051 mmol) u suvom DMF (10 ml), bakar (l) jodid (2344 mg, 12.31 mmol) i metil 2,2-difluoro-2-(fluorosulfonil)acetat (0.522 ml, 4.10 mmol) su dodati i suspenzija je mešana preko noći na 80°C. Zatim, čvrsti produkt je odstranjen filtracijom preko celitnog jastučića i rastvarač je uklonjen. Produkt je prečišćen sa Biotage Si 25g sa gradijentom heptana i EtOAc dajući 3- (benziloksi)-5-bromo-2-(trifluorometil)piridin (Intermedijar G25.2, 320 mg, 0.964 mmol, prinos 47.0%) kao belu čvrstu supstancu.
UPLC-MS: 1.30 min, 330 [M+H]+, metoda 9
Korak c.
[0429]U rastvor 3-(benziloksi)-5-bromo-2-(trifluorometil)piridina (Intermedijer G25.2, 521 mg, 1.569 mmol) u suvom 1.4 dioksanu (10 ml), 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-oktametil-2,2’-bi(1,3,2-dioksaborolan) (438 mg, 1.726 mmol), [1,1’-Bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(ll) (344 mg, 0.471 mmol) i kalijum acetat (462 mg, 4.71 mmol) su dodati i suspenzija je mešana na 90°C preko noći. Zatim, je dodata HCl 4 N (10 mL) i rastvor je mešan preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i sirovi produkt je prečišćen sa C18 fleš hromatografijom Snap 30 g eluent((H2O/ACN)) 95:5+0.1% HCOOH}:{(ACN/H2O) 95:5 HCOOH 0.1 %} od 95:5 do 0:100 dajući jedinjenje iz naslova (400 mg, 1.347 mmol, prinos 86 %) kao belu čvrstu supstancu.
UPLC-MS: 0.97 min, 298 [M+H]+, metoda 9.
PRIPREMA JEDINJENJA
Primer 1
3-((6-Amino-9H-purin-9-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0430]
[0431] 3-(Bromometil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (Intermedijer C1, 35 mg, 0.111 mmol), komercijalno dostupan 9H-purin-6-amin (30.0 mg, 0.222 mmol) i K2CO3(30.7 mg, 0.222 mmol) su rastvoreni u DMF (1 ml) i mešani tokom 5 minuta na sobnoj temperaturi i zatim 10 minuta na 50°C. 2M HClvodene(0.5 ml) je zatim dodato i dobijena smeša je direktno prečišćena hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 SNAP kolonom (Faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (19 mg, 46.3 %) kao bezbojna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.16 - 8.27 (m, 1 H), 8.09 (s, 2 H), 7.74 - 7.86 (m, 1 H), 7.47 - 7.70 (m, 6 H), 7.14- 7.30 (m, 2 H), 6.94 - 7.06 (m, 1 H), 5.09 (s, 2 H). UPLC-MS: 2.01 min, 370.3 [M+H]+, metoda 2.
Primer 2
3-((6-Amino-9H-purin-9-il)metil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
[0432]
[0433] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 1, koristeći 3-(bromometil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C4, 50 mg, 0.150 mmol), komercijalno dostupan 9H-purin-6-amin (40.6 mg, 0.300 mmol) i K2CO3(41.5 mg, 0.300 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (36.4 mg, 62.6 %) kao bezbojna čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.14 - 8.22 (m, 1 H) 8.07 (d, J=9.70 Hz, 2 H) 7.74 - 7.84 (m, 1 H) 7.51 - 7.70 (m, 2 H) 7.37 -7.46 (m, 1 H) 7.27 - 7.36 (m, 2 H) 7.11 (bs, 2 H) 6.89 - 7.04 (m, 1 H) 5.07 (s, 2 H). UPLC-MS: 2.09 min, 388.3
[M+H]+, metod 2.
Primer 3
3-((6-Amino-9H-purin-9-il)metil)-4-(2-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
[0434]
[0435] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 1, koristeći 3-(bromometil)-4-(2-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C2, 60 mg, 0.180 mmol), 9H-purin-6-amin (48.7 mg, 0.360 mmol) i K2CO3(49.8 mg, 0.360 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 45 mg, 64.5 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.15-8.24 (m, 1H), 7.97-8.08 (m, 2H), 7.75-7.84 (m, 1H), 7.51-7.72 (m, 3H), 7.34-7.47 (m, 2H), 6.86-7.28 (m, 3H), 4.34 (s, 2H). UPLC-MS: 1.92 min, 384.4 [M+H]+, Metoda 2.
Primer 4
3-((6-Amino-9H-purin-9-il)metil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
[0436]
[0437] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 1, koristeći 3-(bromometil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on (Intermedijer C3, 64 mg, 0.190 mmol), 9H-purin-6-amin (52.5 mg, 0.39 mmol) i K2CO3(53.7 mg, 0.39 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (35 mg, 47%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.17 - 8.27 (m, 1 H), 8.00 - 8.14 (m, 2 H), 7.75 - 7.86 (m, 1 H), 7.57 - 7.71 (m, 1 H), 7.40 -7.50 (m, 1 H), 7.27 - 7.38 (m, 3 H), 7.11 - 7.25 (s, 2 H), 6.96 - 7.09 (m, 1 H), 4.95 (s, 2 H), 2.37 (s, 3 H). UPLC-MS: 2.37 min, 384.3 [M+H]+, metoda 2.
Primer 5
3-(1-(6-Amino-9H-purin-9-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0438]
[0439] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 1, koristeći 3-(1-bromoetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C7, 70 mg, 0.213 mmol), 9H-purin-6-amin (57.5 mg, 0.425 mmol) i K2CO3(58.8 mg, 0.425 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (31 mg, 38 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.40 (s, 1 H), 8.14 - 8.27 (m, 1 H), 8.10 (s, 1 H), 7.37 - 7.85 (m, 7 H), 7.17 - 7.24 (bs, 2 H), 6.88 - 6.98 (m, 1 H), 5.33 - 5.49 (m, 1 H), 4.03 - 4.20 (m, 1 H), 1.75 - 1.91 (d, 3 H). UPLC-MS: 2.35 min, 384.4 [M+H]+, metoda 2.
Primer 6
3-(1-(6-Amino-9H-purin-9-il)etil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
[0440]
[0441] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 1, koristeći 3-(1-bromoetil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C5, 80 mg, 0.23 mmol), 9H-purin-6-amin (63 mg, 0.46 mmol) i K2CO3(64.4 mg, 0.46 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50 mg, 54 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.27 - 8.38 (m, 1 H), 8.16 - 8.25 (m, 1 H), 8.00 - 8.09 (m, 1 H), 7.72 - 7.83 (m, 1 H), 7.57 -7.67 (m, 1 H), 7.36 - 7.51 (m, 1 H), 7.28 - 7.36 (m, 1 H), 7.11 - 7.26 (m, 4 H), 6.88 - 7.01 (m, 1 H), 5.35 - 5.52 (m, 1 H), 2.32 (s, 3 H), 1.71 - 1.92 (m, 3 H). UPLC-MS: 3.32 min, 398 [M+H]+, metoda 2.
Primer 7
3-(1-(6-Amino-9H-purin-9-il)etil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
[0442]
[0443] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 1, koristeći 3-(1-bromoetil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C6, 70 mg, 0.202 mmol), 9H-purin-6-amin (54.5 mg, 0.403 mmol) i K2CO3(55.7 mg, 0.403 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, 37.1 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.20-8.10 (m, 3H), 7.95 (s, 1H), 7.80-7.74 (m, 2H), 7.65-7.60 (m, 2H), 7.37-7.20 (m, 3H), 6.95-6.85 (m, 1H), 5.50-5.40 (m, 1H), 1.85-.1.82 (m, 3H). UPLC-MS: 2.89 min, 402 [M+H]+, metoda 2.
Primer 8
3-(1-(6-Amino-9H-purin-9-il)etil)-4-(3-(dimetilamino)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0444]
[0445] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 1, koristeći 3-(1-bromoetil)-4-(3-(dimetilamino)fenil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C8, 86 mg, 0.231 mmol), 9H-purin-6-amin (46.8 mg, 0.347 mmol) i K2CO3(47.9 mg, 0.347 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (36 mg, 37 %). Dobijena smeša je direktno prečišćena hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 SNAP kolonom (Faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%). Dobijeni produkt je dalje prečišćen Preparativnom HPLC (metoda 1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (12 mg, 12 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.38 (s, 1 H), 8.12 - 8.24 (m, 1 H), 8.03 (s, 1 H), 7.73 - 7.84 (m, 1 H), 7.54 - 7.67 (m, 1 H), 7.27 - 7.42 (m, 1 H), 7.14 - 7.25 (bs, 2 H), 6.97 - 7.07 (m, 1 H), 6.87 - 6.91 (m, 1 H), 6.79 - 6.86 (m, 1 H), 6.62 - 6.71 (m, 1 H), 5.42 - 5.62 (m, 1 H), 2.86 and 2.98 (2 s, 6 H, 3 H each), 1.75 - 1.90 (m, 3 H). UPLC-MS: 4.68 min, 427 [M+H]+, metoda 1.
Primer 9
3-(1-(6-Amino-9H-purin-9-il)etil)-4-(3-(morfolinosulfonil)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0446]
[0447] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 1, koristeći 3-(1-bromoetil)-4-(3-(morfolinosulfonil)fenil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C9, 68 mg, 0.142 mmol), 9H-purin-6-amin (57.6 mg, 0.426 mmol) i K2CO3(29.5 mg, 0.213 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, 37.1 %).
[0448] Dobijena smeša je direktno prečišćena hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 SNAP kolonom (Faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%). Dobijeni produkt je dalje prečišćen Preparativnom HPLC (metoda 2), da bi se dobilo hemijski čisto jedinjenje (10 mg, 13%) i serija niže čistoće (9 mg, 12%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.45-8.35 (m, 1H), 8.30-8.20 (m, 1H), 8.05-7.65 (m, 6H), 7.45 (br s, 2H), 6.90 (t, 1H), 5.30-5.45 (m, 1H), 3.60-2.6 (m, 8H), 1.80-1.55 (m, 1H). UPLC-MS: 3.59 min, 533 [M+H]+, metoda 1
Primer 10
3-((9H-Purin-6-iltio)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0449]
[0450] 3-(Bromometil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (Intermedijer C1, 35 mg, 0.111 mmol), 9H-purin-6-tiol hidrat (18.9 mg, 0.111 mmol) i K2CO3(15.35 mg, 0.111 mmol) su rastvoreni u DMF (1 ml) i mešani na sobnoj temperaturi tokom 1 sata i 30 min. Reakciona smeša je zatim razblažena sa vodom (10 ml) i 0.1 N HClvodenom(1 ml). Smeša je ekstrahovana sa EtOAc i sakupljene organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen Preparativnom HPLC (metoda 2) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (24 mg, 56%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.51 (s, 1 H), 8.33 - 8.44 (m, 1 H), 8.19 - 8.30 (m, 1 H), 7.73 - 7.85 (m, 1 H), 7.59- 7.68 (m, 1 H), 7.48 - 7.60 (m, 3 H), 7.35 - 7.43 (m, 2 H), 6.91 - 7.05 (m, 1 H), 4.46 (s, 2 H). UPLC-MS: 2.80 min, 387.3 [M+H]+, metoda 2.
Primer 11
3-((9H-Purin-6-iltio)metil)-4-(2-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
[0451]
[0452] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 10, 3-(bromometil)-4-(2-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C2, 37 mg, 0.111 mmol), 9H-purin-6-tiol hidrat (18.90 mg, 0.111 mmol) i K2CO3(15.35 mg, 0.111 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (33 mg, 73.5 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.41 (m, 2 H) 8.19 - 8.24 (m, 1 H) 7.71 - 7.83 (m, 1 H) 7.51 - 7.66 (m, 2 H) 7.25 - 7.51 (m, 3 H) 6.81 - 7.02 (m, 1 H) 4.27 - 4.66 (s, 2 H). UPLC-MS: 2.68 min, 405.3 [M+H]+, metoda 2.
Primer 12
3-((9H-Purin-6-iltio)metil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
[0453]
[0454] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 10, 3-(bromometil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C3, 64 mg, 0.194 mmol), 9H-purin-6-tiol hidrat (33 mg, 0.194 mmol) i K2CO3(27 mg, 0.111 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (64 mg, 82 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.01-13.77 (bs, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.15-8.22 (m, 1H), 7.71-7.79 (m, 1H), 7.55-7.62 (m, 1H), 7.35-7.42 (m, 1H), 7.24-7.29 (m, 1H), 7.10-7.17 (m, 2H), 6.93-6.99 (m, 1H), 4.11-4.56 (m, 2H), 2.28 (s, 3H). UPLC-MS: 3.15 min, 401.3 [M+H]+, metoda 2.
Primer 13
3-(1-(9H-Purin-6-iltio)etil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
[0455]
[0456] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 10, 3-(1-bromoetil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C5, 67 mg, 0.195 mmol), 9H-purin-6-tiol hidrat (33.2 mg, 0.195 mmol)) i K2CO3(27 mg, 0.111 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (70 mg, 87 %)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.5 (bs, 1H), 8.45-8.39 (m, 2H), 8.26-8.219m, 1H), 7.80-7.75 (m, 1H), 7.65-7.60 (m, 1H), 7.50-7.20 (m, 3H), 7.10-6.95 (m, 2H), 5.40-5.30 (m, 1H), 2.45 (s, 1.5 H), 2.20 (2, 1.5 H), 1.72-1.67 (m, 3H). UPLC-MS:3.32 min, 415.4 [M+H]+, metoda 2.
Primer 14
3-(1-(9H-Purin-6-iltio)etil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
[0457]
[0458] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 10, 3-(1-bromoetil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C6, 70 mg, 0.202 mmol), 9H-purin-6-tiol hidrat (34.3 mg, 0.202 mmol) i K2CO3(27.9 mg, 0.202 mmol).
[0459] Dobijena smeša je direktno prečišćena hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 SNAP kolonom (Faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (53 mg, 63%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.24 - 13.73 (bs, 1 H), 8.34 - 8.46 (m, 2 H), 8.25 (d, 1 H), 7.72 - 7.86 (m, 1 H), 7.65 (d, 2 H), 7.33 (d, 3 H), 7.06 (m, 1 H), 6.98 (m, 1 H), 5.33 (m, 1 H), 1.72 (t, , 3 H). UPLC-MS: 3.04 min, 419.4 [M+H]+, metoda 2. Primer 15
3-(1-(4-Amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(6-metilpiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on
[0460]
[0461] 3-(1-Bromoetil)-4-(6-metilpiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on hidrobromid (intermedijer C10, 120 mg, 0.282 mmol), 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (76 mg, 0.565 mmol), i K2CO3(117 mg, 0.847 mmol) su mešani u DMF (1.5 ml) na 50°C tokom 2.5 sata. Reakciona smeša je razblažena sa 1M HClvodenom(2 ml) i prečišćena hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 SNAP kolonom (Faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bezbojna čvrsta supstanca (16.7 mg, 15%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.49 (br s, 0.5 H), 8.23-8.20 (m, 1H), 8.12 (br s, 0.5 H), 8.09 (br s, 1H), 8.01 (br s, 1H), 7.80-7.62 (m, 4H), 7.42-7.38 (m, 1.5H), 7.25-7.23 (m, 0.5 H) 6.90-6.88 (d, 1H), 5.65-5.55 (m, 1H), 2.54 (m, 3H),
1.81 (t, 3H). UPLC-MS: 1.04 min, 399.4 [M+H]+, metoda 2.
Primer 16
3-(1-(4-Amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(morfolinosulfonil)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0462]
[0463] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 15, 3-(1-bromoetil)-4-(3-(morfolinosulfonil)fenil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C9, 90 mg, 0.188 mmol), 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (50.8 mg, 0.376 mmol) i K2CO3(52 mg, 0.376 mmol) u DMF (1 ml) na 80°C tokom 2 sata da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (54 mg, 54%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.20-8.16 (m, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.98 (s, 0.5 H), 7.89 (s, 0.5 H), 7.82-7.69 (m, 4 H), 7.61-7.57 (m, 1H), 7.50-7.46 (m, 1H), 6.81-6.7 (m, 1H), 5.70-5.60 (q, 0.5 H), 5.50-5.40 (q, 0.5H), 3.64-3.46 (m, 4H), 3.04-2.74 (m, 4H), 1.80 (d, 0.5 H), 1.71 (d, 0.5 H). UPLC-MS: 1.98 min, 533.4 [M+H]+, metoda 2.
Primer 17
3-(1-(4-Amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0464]
[0465] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 15, 3-(1-bromoetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C7, 70 mg, 0.213 mmol), 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (40.2 mg, 0.298 mmol) i K2CO3(41.1 mg, 0.298 mmol) u DMF (1 ml) na 80°C tokom 4 sata da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (28 mg, 34%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.22 (d, 1 H), 8.14 (s, 1 H), 8.10 (s, 1 H), 8.02 (s, 1 H), 7.72 - 7.81 (m, 1 H), 7.50 - 7.66 (m, 3 H), 7.41 - 7.49 (m, 2 H), 7.34 - 7.40 (m, 1 H), 7.11 (d, 1 H), 6.90 (d, 1 H), 5.60 (d, 1 H), 1.79 (d, 3 H). UPLC-MS: 4.77 min, 384.2 [M+H]+, metoda 3.
Primer 18
3-(1-(4-Amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on
[0466]
[0467] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 15, 3-(1-bromoetil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C12, 56 mg, 0.17 mmol), 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (45 mg, 0.33 mmol) i K2CO3(46 mg, 0.33 mmol) u DMF (1 ml) na 80°C tokom 3 sata da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (35 mg, 54%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.30 (s, 1 H), 8.22 (d, 1 H), 8.14 (s, 1 H), 8.10 (s, 1 H), 8.04 (s, 1 H), 7.83 (s, 2 H), 7.63 -7.69 (m, 2 H), 7.05 (d, 1 H), 5.75 (d, 1 H), 1.81 (d, 3 H). UPLC-MS: 3.09 min, 391.2 [M+H]+, metoda 3.
Primer 19
3-(1-(4-Amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(2-metilpiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on
[0468]
[0469] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 15, 3-(1-bromoetil)-4-(2-metilpiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C14, 98 mg, 0.285 mmol), 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (57.7 mg, 0.43 mmol) i K2CO3(59 mg, 0.42 mmol) u DMF (2 ml) na 50°C tokom 6 sati da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.4 mg, 3%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.57 (d, 0.5 H), 8.38 (d, 0.5H), 8.25-8.22 (m, 1H), 8.11 (s, 0.5H), 8.05 (s, 0.5H), 8.01 (d, 1H), 7.80-7.62 (m, 4H), 7.27-7.25 (m, 1H), 6.90-6.87 (m, 1.5H), 6.68 (br s, 0.5H), 5.70-5.60 (m, 1H), 3.15-3.05 (m, 1H) 1.81-1.75 (m, 3 H), 1.18 (t, 3H). UPLC-MS: 3.02 min, 399.3 [M+H]+, metoda 3.
Primer 20
3-(1-(4-Amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-benzil-1H-izohromen-1-on
[0470]
[0471] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 15, 4-benzil-3-(1-bromoetil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C13, 22 mg, 0.064 mmol), 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (12.99 mg, 0.096 mmol), i K2CO3(13.29 mg, 0.096 mmol) u DMF (1 ml) na 55°C tokom 2 sata da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (9 mg, 35%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.15 - 8.23 (m, 1 H), 8.08 - 8.13 (m, 2 H), 7.70 - 8.22 (m, 4 H), 6.97 - 7.24 (m, 6 H), 6.20 -6.31 (m, 1 H), 4.18 - 4.44 (m, 2 H), 1.78 - 1.89 (m, 3 H). UPLC-MS: 4.55 min, 398.1 [M+H]+, metoda 3.
Primer 21
3-((9H-Purin-6-ilamino)metil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
[0472]
[0473] Terc-butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamat (93 mg, 0.195 mmol) i 50% disperzija u mineralnom ulju NaH (9.4 mg, 0.195 mmol) su rastvoreni u DMF (0.2 ml) na 0°C. Zatim je dodat rastvor 3-(bromometil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on (intermedijar C4, 50 mg, 0.150 mmol) u DMF (0.6 mL). Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 5 min i na sobnoj temperaturi tokom 15 min. Reakciona smeša je zatim razblažena sa EtOAc (20 mL) i isprana sa 0.2M HClvodene, zasićenim NaClvodenimosušena preko Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo sirovo žuto ulje.
[0474] Sirova supstanca je reagovala sa TFA (1.5 ml) u DCM (2 ml) tokom 1 sata. Zatim je razblažena sa DCM i osušena pod sniženim pritiskom da bi se dobilo žuto ulje. Ovo je prečišćeno hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 30g SNAP kolonom (faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (20 mg, 34.4%) kao bezbojna čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.08-8.23 (m, 4 H), 7.72-7.81 (m, 1H), 7.51-7.63 (m, 2H), 7.25-7.38 (m, 3H), 6.97 (d, 1 H), 3.35-3.43 (m, 2H). UPLC-MS: 2.25 min, 388.3 [M+H]+, metoda 2.
Primer 22
3-(1-(9H-Purin-6-ilamino)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0475]
[0476] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 21, iz terc-butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamata (139 mg, 0.292 mmol), 3-(1-bromoetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C7, 80 mg, 0.243 mmol) i 50% disperzije u mineralnom ulju NaH (16.3 mg, 0.340 mmol) u DMF da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (16 mg, 17.2 %) kao žućkasta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.08 (s, 1 H), 8.10 (m, 3 H), 7.85 - 7.95 (m, 1 H), 7.72 - 7.81 (m, 1 H), 7.46 - 7.64 (m, 5 H), 7.30 - 7.43 (m, 1 H), 6.85 - 6.99 (m, 1 H), 4.78 - 5.22 (m, 1 H), 1.51 (d, 3 H). UPLC-MS: 2.52 min, 384.5 [M+H]+, metoda 2.
Primer 22a (enantiomer 1) i Primer 22b (enantiomer 2): 3-(1-(9H-Purin-6-ilamino)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on jedan enantiomer
[0477] Racemat 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (primer 22, 0.145 g, 0.378 mmol) je rastvoren u Etanol/Metanol 1/1 (34 mL) i podvrgnut hiralnoj rezoluciji sa Hiralnom preparativnom hromatografijom. Uslovi: Kolona: Hiralpak AD-H (25 x 2.0 cm), 5 m; Mobilna faza: n-Heksan/(2-Propanol+0.1% izopropilamin) 75/25 % v/v; Brzina protoka: 19 ml/min; DAD otkrivanje: 220 nm; Injekcija: 19 mg (svaka injekcija).
[0478] Frakcije koje sadrže prvi eluirani enantiomer su evaporisane da bi se dobilo jedinjenje 22a (prvi eluirani enantiomer, 0.052 g, 0.135 mmol). Hiralna HPLC (Metod Al): Rt = 6.0 min, ee> 99%;
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.92 (br. s., 1 H), 8.06 - 8.27 (m, 3 H), 7.86 - 7.94 (m, 1 H), 7.73 - 7.81 (m, 1 H), 7.48 -7.64 (m, 5 H), 7.37 - 7.43 (m, 1 H), 6.95 (d, 1 H), 5.06 (br. s., 1 H), 1.53 (d, 3 H). UPLC-MS: 0.85 min, 384.2 [M+H]+, metoda 13.
[0479] Frakcije koje sadrže drugi eluirani enantiomer su evaporisane da bi se dobilo jedinjenje 22b (drugi eluirani enantiomer, 0.032 g, 0.083 mmol), Hiralna HPLC (Metod A1): Rt = 13.0 min, ee > 99%;
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.78 (br. s., 1 H), 8.09 - 8.24 (m, 3 H), 7.82 - 7.90 (m, 1 H), 7.74 - 7.81 (m, 1 H), 7.49 -7.64 (m, 5 H), 7.38 - 7.44 (m, 1 H), 6.95 (d, 1 H), 5.06 (br. s., 1 H), 1.53 (d, 3 H). UPLC-MS: 0.83 min, 384.2 [M+H]+, metoda 13.
Primer 23
3-(1-(9H-Purin-6-ilamino)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0480]
[0481] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 21, iz terc-butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamata (71 mg, 0.149 mmol) i terc-butil 4-(3-(1-bromoetil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (intermedijer C11, 54 mg, 0.124 mmol) i 50% disperzije u mineralnom ulju NaH (18 mg, 0.34 mmol) u DMF.
[0482] Ovo je prečišćeno hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 SNAP kolonom (faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%). Frakcije koje sadrže traženi produkt su sakupljene, dodat je 1M HClvodene(5 ml) i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (24 mg, 45%) kao bezbojna čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.3-9.0 (m, 2 H), 8.5-8.3 (m, 1 H), 8.20-8.14 (m, 1H), 7.89-7.85 (m, 1H), 7.7-760 (m, 2 H), 6.05-5.92 (m, 1H), 5.60-5.40 (m, 1 H), 3.79-3.25 (m, 6 H), 1.61-1.59 (m, 3 H). UPLC-MS: 2.29 min, 389.5 [M+H]+, metoda 3.
Primer 24
3-(1-(9H-Purin-6-ilamino)etil)-4-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)-1H-izohromen-1-on
[0483]
[0484] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 21, iz terc-butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamata (214 mg, 0.449 mmol) i 3-(1-bromoetil)-4-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C19, 94 mg, 0.280 mmol) i 50% disperzije u mineralnom oulju NaH (18 mg, 0.34 mmol) u DMF. Ovo je prečišćeno hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 SNAP kolonom (faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%). Frakcije koje sadrže traženi produkt su sakupljene, dodat je 1M HClvodene(5 ml) i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (6.3 mg, 5.8 %) kao bezbojna čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.94 (s, 0.8 H), 12.08 (s, 0.2 H), 8.20-8.12 (m, 3 H), 7.89-7.84 (m, 2 H), 7.63-7.45 (m, 3 H), 5.98-5.94 (m, 1 H), 5.75-5.50 (m, 1 H). 4.30-4.21 (m, 2H), 3.96-3.90 (m, 2 H), 2.23-2.26 (m, 2 H), 1.59-1.55 (m, 3 H). UPLC-MS: 3.29 min, 390 [M+H]+, metoda 3.
Primer 25
3-(1-(9H-Purin-6-ilamino)propil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0485]
[0486] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 21, od terc-butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamata (167 mg, 0.350 mmol), 3-(1-bromopropil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C20, 100 mg, 0.291 mmol) i 50% disperzije u mineralnom ulju NaH (21 mg, 0.870 mmol) u DMF na 55°C.
[0487] Sirovi produkt je prečišćen hromatografijom reverzne faze sa kolonom slažući dve Biotage C1830g SNAP kolone (Faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) i dalje prečišćen Preparativnom HPLC (metoda 1) da bi dobilo jedinjenje iz naslova (2.8 mg, 2.4%) kao bezbojna čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.64 - 13.09 (bs, 1 H), 8.05 - 8.26 (m, 3 H), 7.70 - 7.88 (m, 2 H), 7.46 - 7.63 (m, 5 H), 7.36 (d, 1 H), 6.92 (d, 1 H), 4.66 - 5.08 (m, 1 H), 1.83 - 2.03 (m, 2 H), 0.84 (t, 3 H). UPLC-MS: 5.04 min, 398.5
[M+H]+, metoda 3.
Primer 26
3-(1-(9H-Purin-6-ilamino)etil)-4-(4-(2-morfolinoetoksi)fenil)-1H-izohromen-1-on format
[0488]
[0489] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 21, iz terc-butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamata (140 mg, 0.29 mmol), 3-(1-bromoetil)-4-(4-(2-morfolinoetoksi)fenil)-1H-izohromen-1-on hidrobromida (intermedijer C15, 100 mg, 0.185 mmol) i 50% disperzije u mineralnom ulju NaH (27 mg, 0.550 mmol) u DMF na 65°C da bi dobilo jedinjenje iz naslova (16.9 mg, 16.3 %) kao bezbojna čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.77 - 13.04 (bs, 1 H), 8.15 (m, 4 H), 7.82 - 7.92 (m, 1 H), 7.71 - 7.81 (m, 1 H), 7.52 -7.62 (m, 1 H), 7.34 - 7.52 (m, 1 H), 7.22 - 7.35 (m, 1 H), 7.11 (m, 2 H), 6.80 - 7.02 (m, 1 H), 4.80 - 5.28 (m, 1 H),
4.17 (m, 2 H), 3.51 - 3.76 (m, 4 H), 2.75 (m, 2 H), 2.51 - 2.60 (m, 4 H), 1.50 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 3.94 min, 513.1 [M+H]+, metoda 3.
Primer 27
4-Amino-8-(1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etil)pirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-on
[0490]
[0491] 3-(1-Bromoetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C7, 50 mg, 0.15 mmol), 4-aminopirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-on (37 mg, 0.23 mmol), kalijum karbonat (31.5 mg, 0.23 mmol) su reagovali u DMF (0.5 ml) na 80°C. Sirovi produkt je prečišćen hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 30g SNAP kolonom (Faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da bi dobilo jedinjenje iz naslova (32 mg, 51 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.48 - 9.56 (m, 1 H), 8.16 - 8.27 (m, 1 H), 8.06 - 8.13 (m, 2 H), 7.98 - 8.04 (m, 1 H), 7.72 -7.81 (m, 1 H), 7.58 - 7.66 (m, 1 H), 7.46 - 7.57 (m, 1 H), 7.33 - 7.44 (m, 3 H), 7.07 - 7.16 (m, 1 H), 6.85 - 6.94 (m, 1 H), 6.13 -6.20 (m, 2 H), 1.51 - 1.81 (m, 3 H). UPLC-MS: 4.7 min, 411.1 [M+H]+, metoda 5.
Primer 28
3-(1-(9H-Purin-6-ilamino)etil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on
[0492]
[0493] terc-Butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamat (102 mg, 0.213 mmol) je dodat u rastvor 50% disperzije u mineralnom ulju NaH (5.12 mg, 0.213 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0.5 ml) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta.
[0494] 3-(1-Bromoetil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on hidrobromid (intermedijer C16, 100 mg, 0.194 mmol) je suspendovan u DMF (0.5 ml, 0.194 mmol) i reagovao sa 50% disperzijom u mineralnom ulju NaH (5.1 mg, 0.213 mmol) na sobnoj temperaturi tokom 15 min. Dobijeni rastvor je dodat u prethodno pripremljenu smešu i ostavljen uz mešanje na 60°C tokom 1 sata, na sobnoj temperaturi tokom 3 sata, i zatim na 80°C tokom 3 sata. Reakciona smeša je sipana u visoko koncentrovani rastvor soli u vodi i ekstrahovana sa EtOAc. Sakupljene organske faze su osušene i koncentrovane. Dobijeni sirovi materijal je bio prečišćen pod hromatografijom reverzne faze korišćenjem Biotage C18 60g SNAP uložak. Sakupljene frakcije su dodate sa 37% HClvodenoe(1 ml) i koncentrovane. Dobijeni materijal je dalje prečišćen pod reverznom fazom hromatografije korišćenjem Biotage C18 30g SNAP uložak. Dobijeni materijal je konačno prečišćen na silikagelu sa gradijentom DCM i 2-propanola, modifikovan sa 0.5% TEA, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (9 mg, 9.5%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.64 - 13.05 (bs, 1 H), 8.36 - 8.44 (m, 1 H), 8.11 - 8.19 (m, 1 H), 8.01 - 8.10 (m, 2 H), 7.86 - 7.99 (m, 1 H), 7.74 - 7.83 (m, 1 H), 7.47 - 7.63 (m, 1 H), 7.12 - 7.22 (m, 1 H), 6.98 - 7.11 (m, 2 H), 5.11 -5.34 (m, 1 H), 3.35 - 3.79 (m, 6 H), 2.33 - 2.42 (m, 4 H), 1.41 - 1.57 (m, 3 H). UPLC-MS: 3.43 min, 489.1 [M+H]+, metoda 3.
Primer 29
3-((9H-Purin-6-ilamino)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0495]
Korak 1. terc-Butil (1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)metil(9-tritil-9H-purin-6-il)karbamat
[0496]
[0497] terc-Butyl 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamat (63.6 mg, 0.133 mmol) u DMF (0.1 ml) je dodat u suspenziju 50% disperzije u mineralnom ulju NaH (5.33 mg, 0.133 mmol) u DMF (0.1 ml) na 0°C. 3-(bromometil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C1, 35 mg, 0.111 mmol) u DMF (0.2 ml) je dodat i dobijena smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature. Reakcina smeša je zatim sipana u vodu i ekstrahovana sa EtOAc. Sakupljene organske faze su osušene i koncentrovane pod sniženim pritiskom, i dobijena sirova supstanca (80 mg) je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja i karakterizacije.
Korak 2
[0498] terc-Butil (1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)metil(9-tritil-9H-purin-6-il)karbamat (80 mg, 0.112 mmol) je bio rastvoren u DCM (0.7 ml) i TFA (1 mL) na sobnoj temperaturi tokom 45 min. Rastvarač je zatim uklonjen, i sirovi materijal je direktno prečišćen Preparativnom HPLC (metoda 1) do jedinjenja iz naslova (17 mg, 40.9 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.51-13.14 (bs, 1 H), 8.15-8.25 (m, 1 H), 8.04-8.13 (m, 2 H), 7.92-8.04 (bs, 1 H), 7.68-7.77 (m, 1 H), 7.54-7.61 (m, 1 H), 7.38-7.54 (m, 5 H), 6.91-7.00 (m, 1 H), 4.54 (s, 2 H). UPLC-MS: 2.17 min, 370.3
[M+H]+, metoda 2.
Primer 30
3-((9H-Purin-6-ilamino)metil)-4-(2-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
[0499]
[0500] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 29, od terc-butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamata (60 mg, 0.180 mmol), 3-(bromometil)-4-(2-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C2, 99 mg, 0.207 mmol) da bi se dobilo 35 mg, 50 %.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.78-12.99 (bs, 1 H), 7.93-8.23 (m, 4 H), 7.68-7.84 (m, 1 H), 7.27-7.63 (m, 5 H), 6.88-7.00 (m, 1 H), 4.44 (s, 2 H). UPLC-MS: 2.08 min, 388.3 [M+H]+, metoda 2.
Primer 31
3-((9H-Purin-6-ilamino)metil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
[0501]
[0502] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 29, od terc-butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamata (102 mg, 0.214 mmol), 3-(bromometil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C3, 64 mg, 0.194 mmol) da bi se dobilo 33 mg, 39%.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.91 (bs, 1 H) 7.91 - 8.27 (m, 4 H) 7.74 (t, 1 H) 7.57 (t, 1 H) 7.33 - 7.42 (m, 1 H) 7.13 -7.30 (m, 3 H) 6.97 (d, 1 H) 4.39 (s, 2 H) 2.36 (s, 3 H). UPLC-MS: 2.51 min, 384.3 [M+H]+, metoda 2.
Primer 32
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on
[0503]
[0504] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 29, od terc-butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamata (132 mg, 0.276 mmol), 3-(1-bromoetil)-4-(3 -fluorofenil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C6, 87 mg, 0.251 mmol) da bi se dobilo 23 mg, 28 %.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.82 - 13.02 (bs, 1 H), 8.02 - 8.27 (m, 3 H), 7.86 - 8.01 (m, 1 H), 7.73 - 7.83 (m, 1 H), 7.52 - 7.66 (m, 2 H), 7.15 - 7.45 (m, 3 H), 6.88 - 7.00 (m, 1 H), 4.89 - 5.18 (m, 1 H), 1.56 (m, 3 H). UPLC-MS: 2.59 min, 402.4 [M+H]+, metoda 2.
Primer 33
3-(1-(9H-Purin-6-ilamino)etil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on
[0505]
[0506] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 29, od terc-butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamata (138 mg, 0.28 mmol), 3-(1-bromoetil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C5, 90 mg, 0.26 mmol) da bi se dobilo 36 mg, 35 %.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.79 - 13.01 (m, 1 H), 8.05 - 8.31 (m, 3 H), 7.81 - 7.98 (m, 1 H), 7.68 - 7.80 (m, 1 H), 7.50 - 7.66 (m, 1 H), 7.25 - 7.48 (m, 3 H), 7.11 - 7.21 (m, 1 H), 6.88 - 7.00 (m, 1 H), 4.95 - 5.21 (m, 1 H), 2.35 (m, 3 H), 1.44 - 1.58 (m, 3 H). UPLC-MS: 3.49 min, 398.1 [M+H]+, metoda 2.
Primer 34
3-(1-(9H-Purin-6-ilamino)etil)-4-(3-(dimetilamino)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0507]
[0508] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 28, od terc-butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamata (127 mg, 0.26 mmol), 3-(1-bromoetil)-4-(3-(dimetilamino)fenil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C8, 90 mg, 0.242 mmol) da bi se dobilo 6 mg, 6%.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.61 - 13.18 (bs, 1 H), 8.53 (s, 1 H), 8.13 (m, 3 H), 7.75 (m, 1 H), 7.60 (m, 1 H), 7.28 -7.39 (m, 1 H), 6.97 - 7.10 (m, 1 H), 6.72 - 6.88 (m, 2 H), 6.57 - 6.71 (m, 1 H), 4.91 - 5.28 (m, 1 H), 2.78 (s, 3 H),2.97 (s, 3 H), 1.43 - 1.58 (m, 3 H). UPLC-MS: 4.75 min, 427 [M+H]+, metoda 1.
Primer 35
3-((4-Amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0509]
[0510] 3-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer D1, 50 mg, 0.101 mmol), 3-fluoro-5-hidroksifenilboronska kiselina (32 mg, 0.201 mmol), Cs2CO3(69 mg, 0.202 mmol), Pd(PPh3)4(9.3 mg, 8.0 umol), su ragovali u DMF (0.5 mL) na 110°C pod mw zračenjem. Dobijena sirova supstanca je direktno prečišćena hromatografijom reverzne faze korišćenjem Biotage C18 30g SNAP sa gradijentom vode i acetonitrila da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (6 mg, 12%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.5 (br s, 1 H), 8.54 (s, 1H), 8.24 (s, 1 H), 8.22-8.20 (m, 1 H), 7.83-7.79 (m, 1 H), 7.66-7.62 (m, 1 H), 7.55-7.47 (m, 6 H), 7.04-7.02 (m, 1 H), 6.89 (br s, 1 H), 6.84-6.82 (m, 1 H), 6.66-6.64 (m, 1 H),
5.26 (s, 2 H). UPLC-MS: 5.56 min, 479.9 [M+H]+, metoda 1.
[0511] Primeri 36-42, 46, 48-49, 63, 111, 118-120 i 125 pronađeni u tabeli ispod mogu biti pripremljeni počevši od pogodnih reagenasa prikazanih ispod prateći slične postupke kao za jedinjenje 35.
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
Primer 43
3-(1-(1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0512]
[0513] 3-(1-aminoetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on hidrohlorid (Intermedijer E1, 141mg, 0.136 mmol), 4-hloro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin (42.0 mg, 0.272 mmol) i DIEA (95 µL, 0.543 mmol) su mešani na 80°C tokom 3sata u terc-butanolu (800 µL). Reakcija je ugašena dodatkom 1mL od 1M HClvodene, i dobijeni sirovi produkt je direktno prečišćen hromatografijom reverzne faze pomoću Biotage C1830g SNAP sa gradijentom vode i acetonitrila da se dobije jedinjenje iz naslova (29 mg, 56%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.10 - 13.60 (bs, 1 H), 8.46 - 8.70 (m, 1 H), 8.15 - 8.30 (m, 2 H), 8.05 - 8.13 (m, 1 H), 7.68 - 7.85 (m, 1 H), 7.47 - 7.65 (m, 5 H), 7.32 - 7.43 (m, 1 H), 6.85 - 7.06 (m, 1 H), 4.92 - 5.13 (m, 1 H), 1.42 -1.63 (m, 3 H). UPLC-MS: 4.69 min, 384.1 [M+H]+, metoda 3.
Primer 44
4-amino-6-(1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etilamino)pirimidin-5-karbonitril
[0514]
[0515] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 43, od (Intermedijera E1, 52 mg, 0.172 mmol) i 4-amino-6-hloropirimidin-5-karbonitrila (53.3 mg, 0.345 mmol), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, 19.8 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.17 - 8.25 (m, 1 H), 7.89 (s, 1 H), 7.72 - 7.79 (m, 1 H), 7.57 - 7.63 (m, 1 H), 7.40 - 7.56 (m, 5 H), 7.31 - 7.38 (m, 1 H), 7.15 - 7.27 (m, 2 H), 6.86 - 6.94 (m, 1 H), 4.79 - 5.00 (m, 1 H), 1.43 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 4.88 min, 384.1 [M+H]+, metoda 3.
Primer 45
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0516]
[0517] 3-(1-bromoetil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrobromid (C21, 100 mg, 0.233 mmol), terc-butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamat (120 mg, 0.251 mmol) i NaH (33.6 mg, 0.699 mmol) su reagovali pod azotom na 65°C tokom 2 sata. Reakcija je razblažena sa 15 ml EtOAc, isprana tri puta sa 10 mL 0.1M HClvodene, jednom sa zasićenim NaClvodenim, i rastvarač je evaporisan da bi se dobilo ulje. Sirovi produkt je rastvoren u TFA/DCM (3mL+3mL) i mešan tokom 3 sata na sobnoj temperaturi i ugašen dodatkom 1M HClvodene(1 ml). Dobijena smeša je direktno prečišćena hromatografijom reverzne faze korišćenjem Biotage C18 30g SNAP sa gradijentom vode i acetonitrila. Kombinovane frakcije iz fleš hromatografije su dodate sa 1M HClvodenom(5 mL ) i osušene pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (13.6 mg, 13.3% prinos).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.77 (br. s., 1 H), 8.31 - 8.55 (m, 2 H), 8.08 - 8.26 (m, 1 H), 7.72 - 8.02 (m, 2 H), 7.42 -7.72 (m, 2 H), 5.86 - 6.06 (m, 1 H), 5.53 (br. s., 1 H), 4.00 -4.40 (m, 4), 2.48 - 2.98 (m, 5 H), 1.61 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 3.89 min, 403.1 [M+H]+, metoda 7.
Primer 46a (enantiomer 1) i Primer 46b (enantiomer 2): 3-1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
pojedinačni enantiomer
[0518] Racemat 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorida (primer 46, 0.250 g, 0.456 mmol) je bio rastvoren u Etanolu/Metanolu 1/1 (18 ml) i podvrgnut hiralnoj rezoluciji Hiralnom preparativnom hromatografijom: identifikovane su dve metode za dobijanje svakog enantiomera respektivno, i primenjene su obe metode. Uslovi prve metode:Kolona: Hiralpak lA (25 x 2.0 cm), 5 µm; Mobilna faza: n-Heksan/(2-Propanol/Metanol 1/1) 60/40% v/v; Brzina protoka: 18 ml/min; DAD otkrivanje: 220 nm; Petlja: 750 µl; Injekcija: 10 mg/injekcija. Uslovi druge metode: Kolona: Whelk 0-1 (25 x2.0 cm), 10 µm; Mobilna faza: n-Heksan/(2-Propanol/Metanol 1/1) 65/35% v/v; Brzina protoka: 18 ml/min; DAD otkrivanje: 220 nm; Petlja: 750 µl; Injekcija: 10 mg/injekcija.
[0519] Frakcije koje sadrže prvi eluirani enantiomer dobijen sa prvom metodom (drugi eluiran sa drugom metodom) su evaporisane, dodato je 1.25M HCl u MeOH i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje 46a (49 mg, 0.089 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A3): Rt = 6.1 min, ee = 93%;
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.10 - 11.00 (m, 2 H), 8.23 - 8.45 (m, 1 H), 8.10 - 8.23 (m, 1 H), 7.79 - 8.01 (m, 2 H), 7.45 - 7.72 (m, 1 H), 7.02 - 8.78 (m, 2 H), 6.82 - 7.01 (m, 2 H), 6.65 - 6.76 (m, 1 H), 5.43 - 6.35 (m, 2 H), 2.91 -3.04 (m, 3 H), 2.54 - 4.22 (m, 6 H), 1.82 - 2.04 (m, 3 H). UPLC-MS: 0.58 min, 513.3 [M+H]+, metoda 13
[0520] Frakcije koje sadrže drugi eluirani enantiomer dobijen sa prvom metodom (prvi eluirani sa drugom metodom) su evaporisane,1.25M HCl u MeOH je dodato i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje 46b (45 mg, 0.082 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A3): Rt = 7.7 min, ee > 99%;
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.08 - 11.44 (m, 2 H), 8.32 - 8.56 (m, 1 H), 8.13 - 8.23 (m, 1 H), 7.80 - 8.03 (m, 2 H), 7.48 - 7.74 (m, 1 H), 7.02 - 8.78 (m, 2 H), 6.84 - 7.01 (m, 2 H), 6.69 - 6.79 (m, 1 H), 5.47 - 6.42 (m, 2 H), 2.90 -3.03 (m, 3 H), 2.55 - 4.29 (m, 6 H), 1.85 - 2.04 (m, 3 H). UPLC-MS: 0.58 min, 513.3 [M+H]+, metoda 13.
Primer 47
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(4-(morfolinometil)fenil)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0521]
[0522] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 21, od 3-(1-bromoetil)-4-(4-(morfolinometil)fenil)-1H-izohromen-1-on hidrobromida (C22, 100 mg, 0.196 mmol), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5.8 mg, 5.7 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.43 - 11.09 (m, 1 H), 8.22 (d, J=7.94 Hz, 3 H), 7.27 - 7.93 (m, 7 H), 6.95 (d, J=8.38 Hz, 1 H), 4.80 - 5.18 (m, 1 H), 4.44 (br. s., 2 H), 3.67 - 4.15 (m, 6 H), 3.18 (m, 2 H), 1.56 (d, J=7.06 Hz, 3 H).
UPLC-MS: 5.69 min, 483.1 [M+H]+, metoda 7.
Primer 49a (enantiomer 1) i Primer 49b (enantiomer 2) 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid pojedinačni enantiomer
[0523] Racemat 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on-hidrohlorid (primer 49, 0.137 g, 0.21 mmol) je rastvoren u Etanolu (7 ml) i podvrgnut hiralnoj rezoluciji Hiralnom preparativnom hromatografijom. Uslovi: Kolona: Whelk O-1 (R, R) (25 x 2.0 cm), 10 µm; Mobilna faza: n-Heksan/ (Etanol/Metanol 1/1) 40/60% v/v; Brzina protoka: 18 ml/min; DAD otkrivanje: 220 nm; Petlja: 750 µl; Injekcija: 15 mg (svaka injekcija).
[0524] Prvi eluirani enantiomer dalje je prečišćen Preparativnom HPLC-Metoda 4; ostatak je tretiran sa 1.25M HCl u MeOH, i isparljive supstance su uklonjene pod vakumom da bi se dobilo jedinjenje 49a (prvi eluirai enantiomer, 27.8 mg, 0.044 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A2): Rt = 8.2 min, ee = 96.8%;
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.10 (br. s., 1 H), 10.29 (br. s., 1 H), 8.17 - 8.27 (m, 2 H), 7.79 - 7.90 (m, 1 H), 7.65 - 7.71 (m, 1 H), 7.41 - 7.49 (m, 1 H), 6.96 - 7.22 (m, 2 H), 6.90 - 6.94 (m, 1 H), 6.83 - 6.88 (m, 1 H), 6.74 - 8.17 (m,
2 H), 6.71 (dt, 1 H), 5.91 - 5.98 (m, 1 H), 4.62 (br. s., 2 H), 3.60 - 4.14 (m, 4 H), 3.25 - 3.43 (m, 2 H), 3.02 - 3.20 (m, 2 H), 1.87 (d, 3 H). UPLC-MS: 0.63 min, 599.2 [M+H]+, metoda 13
Frakcije koje sadrže drugi eluirani enantiomer su bile evaporisane, dodato je 1.25M HCl u MeOH i isparljive supstance su uklonjene pod vakumom da bi se dobilo jedinjenje 49b (drugi eluirani enantiomer, 33 mg, 0.052 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A2): Rt = 9.5 min, ee = 98.2%;
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.28 (br. s., 1 H), 10.30 (br. s., 1 H), 8.20 - 8.26 (m, 2 H), 7.79 - 7.90 (m, 1 H), 7.65 - 7.71 (m, 1 H), 7.42 - 7.50 (m, 1 H), 6.96 - 7.22 (m, 2 H), 6.90 - 6.94 (m, 1 H), 6.83 - 6.88 (m, 1 H), 6.74 - 8.17 (m,
2 H), 6.71 (dt, 1 H), 5.90 - 5.98 (m, 1 H), 4.61 (br. s., 2 H), 3.41 - 4.10 (m, 4 H), 3.24 - 3.42 (m, 2 H), 3.01 - 3.20 (m, 2 H), 1.87 (d, 3 H). UPLC-MS: 0.65 min, 599.1 [M+H]+, metoda 12.
Primer 50
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-cikloheksenil-1H-izohromen-1-on
[0525]
[0526] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 21, od 3-(1-bromoetil)-4-cikoheksenil-1H-izohromen-1-on (Intermedijer C24, 88 mg, 0.264 mmol), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.7 mg, 4.6 %) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.71 - 13.16 (bs, 1 H), 8.02 - 8.29 (m, 3 H), 7.75 - 7.94 (m, 2 H), 7.31 - 7.66 (m, 2 H), 5.37 - 5.93 (m, 2 H), 1.88 - 2.29 (m, 4 H), 1.64 - 1.87 (m, 4 H), 1.43 - 1.61 (m, 3 H). UPLC-MS: 6.34 min, 388.2
[M+H]+, metoda 7.
Primer 51
3-(1-(4-amino-3-(2-aminopirimidin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0527]
[0528] 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (Intermedijer D2a, 60mg, 0.118 mmol), K2CO3(32.6 mg, 0.236 mmol), 2-aminopirimidin-5-ilboronska kiselina (32.7 mg, 0.236 mmol) i Pd(dppf)Cl2(4.31 mg, 5.89 µmol) su reagovali u 2 ml dioksana, prečišćeni sa argonom i zagrevani preko noći na 120°C. Reakcija je ugašena sa dodatkom 1M HClvodene(2 ml), i dobijena smeša je direktno prečišćena hromatografijom reverzne faze korišćenjem Biotage C18 30 g SNAP sa gradijentom vode i acetonitrila (pre sušenja dodato je 2 ml 1M HClvodene) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (16.2 mg, 28.9%) kao žuta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.47 (s, 2 H), 8.22 (s, 2 H), 7.86 - 8.05 (m, 1 H), 7.77 (m, 1 H), 7.63 (m, 1 H), 7.53 (m, 1 H), 7.42 (m, 3 H), 7.20 - 7.33 (m, 1 H), 7.06 - 7.18 (m, 1 H), 6.89 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 5.74 (d, J=7.06 Hz, 1 H),
1.85 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 4.56 min, 477.1 [M+H]+, metoda 7.
Primer 52
3-(1-(4-amino-3-(pirazin-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0529]
[0530] 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (Intermedijer D2a, 60mg, 0.118 mmol), 2-(tributilstanil)pirazin (0.072 mL, 0.236 mmol), Pd(PPh3)4, (13.61 mg, 0.012 mmol) i LiCl (4.99 mg, 0.118 mmol) su reagovali u dioksanu (1.2 ml), prečišćeni pod argonom i zagrevani preko noći na 120°C. Reakcija je ugašena dodatkom 1M HClvodene(2 ml), i čvrste supstance su prikupljene filtracijom. Čvrsta sirova supstanca je direktno prečišćena hromatografijom reverzne faze upotrebom Biotage C1830g SNAP sa gradijentom vode i acetonitrila (pre sušenja dodato je 5 ml 2M HClvodene). Dobijena bela čvrsta supstanca je triturirana u Et2O da bi se dobilo (13.5 mg, 24.8 %) jedinjenje iz naslova.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.27 - 9.50 (m, 1 H), 9.00 - 9.13 (m, 1 H), 8.75 - 8.83 (m, 1 H), 8.66 - 8.75 (m, 1 H), 8.40 -8.61 (m, 1 H), 8.18 - 8.30 (m, 1 H), 7.97 - 8.15 (m, 2 H), 7.73 - 7.85 (m, 1 H), 7.35 - 7.69 (m, 5 H), 7.17 - 7.31 (m, 1 H), 6.78 -6.97 (m, 1 H), 5.66 - 5.84 (m, 1 H), 1.73 - 2.00 (m, 3 H). UPLCMS: 6.04 min, 462.1 [M+H]+, metoda 7.
Primer 53
3-(1-(4-amino-3-(piridazin-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0531]
[0532] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 52, od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (Intermedijer D2a, 60mg, 0.118 mmol) i 4-(tributilstanil)piridazina (87 mg, 0.236 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (34.5 mg, 63.5%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.46 (dd, J=2.21, 1.32 Hz, 1 H), 9.38 (dd, J=5.51, 1.10 Hz, 1 H), 8.15 - 8.29 (m, 2 H), 7.91 (dd, J=5.29, 2.65 Hz, 1 H), 7.77 (m, 2 H), 7.63 (m, 1 H), 7.48 - 7.57 (m, 1 H), 7.35 - 7.47 (m, 3 H), 7.17 (d,
J=7.50 Hz, 1 H), 6.89 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 5.80 (d, J=7.06 Hz, 1 H), 1.88 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 4.80 min, 462.1 [M+H] , metoda 7.
Primer 54
3-(1-(4-amino-3-(piridin-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0533]
[0534] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 51, od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (Intermedijer D2a, 60 mg, 0.118 mmol), piridin-4-ilboronske kiseline (29.0 mg, 0.236 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (10 mg, 18.4 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.89 (d, J=6.17 Hz, 2 H), 8.21 (s, 2 H), 7.98 (d, J=5.29 Hz, 2 H), 7.70 - 7.82 (m, 1 H), 7.58 -7.66 (m, 1 H), 7.48 - 7.58 (m, 1 H), 7.34 - 7.47 (m, 4 H), 7.16 (d, J=7.06 Hz, 1 H), 6.89 (d, J=8.38 Hz, 1 H),
5.70 - 5.91 (m, 1 H), 1.87 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 5.34 min, 461.1 [M+H]+, metoda 7.
Primer 55
3-(1-(4-amino-3-(2-metoksipirimidin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0535]
[0536] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 51, od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (Intermedijer D2a, 60 mg, 0.118 mmol), 2-metoksipirimidin-5-ilboronske kiseline (36.3 mg, 0.236 mmol), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (36 mg, 62.2 %) kao žućkasta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.74 (s, 2 H), 8.17 - 8.27 (m, 1 H), 8.12 (s, 1 H), 7.71 - 7.83 (m, 1 H), 7.58 - 7.66 (m, 1 H), 7.49 - 7.57 (m, 1 H), 7.32 - 7.48 (m, 3 H), 7.11 - 7.28 (m, 2 H), 6.74 - 6.96 (m, 1 H), 5.63 - 5.82 (m, 1 H), 4.00 (s, 3 H), 1.85 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 6.20 min, 492.2 [M+H]+, metoda 7.
Primer 56
3-(1-(4-amino-3-(2-hidroksipirimidin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0537]
[0538] 3-(1-(4-amino-3-(2-metoksipirimidin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (Primer 55, 23.3 mg, 0.047 mmol) je bio rastvoren u HBr 33% u CH3COOH (1 ml, 0.047 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Reakcija je zatim razblažena sa vodom (3 mL), i dobijena smeša prečišćena hromatografijom reverzne faze korišćenjem Biotage C1830 g SNAP sa gradijentom vode i acetonitrila da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (20 mg, 88%) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.29 - 8.54 (m, 2 H), 8.17 - 8.26 (m, 1 H), 7.98 - 8.11 (m, 1 H), 7.72 - 7.81 (m, 1 H), 7.58 -7.66 (m, 1 H), 7.49 - 7.57 (m, 1 H), 7.33 - 7.47 (m, 3 H), 7.11 - 7.23 (m, 3 H), 6.79 - 6.94 (m, 1 H), 5.27 - 5.79 (m, 1 H), 1.71 -1.87 (m, 3 H). UPLC-MS: 4.67 min (40%) and 4.71 min (60%), 478.2 [M+H]+, metoda 7.
Primer 57
3-(1-(4-amino-3-(5-metoksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0539]
[0540] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 52, od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (Intermedijer D2a, 60mg, 0.118 mmol) i 3-metoksi-5-(tributilstanil) piridina (94 mg, 0.236 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (31.3 mg, 54.2%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.32 - 8.47 (m, 2 H), 8.18 - 8.25 (m, 1 H), 8.05 - 8.16 (m, 1 H), 7.72 - 7.82 (m, 1 H), 7.32 -7.67 (m, 6 H), 7.15 - 7.23 (m, 1 H), 6.96 - 7.11 (m, 1 H), 6.81 - 6.93 (m, 1 H), 5.59 - 5.83 (m, 1 H), 3.95 (s, 3
H), 1.76 - 1.92 (m, 3 H). UPLC-MS: 6.29 min, 491.3 [M+H]+, metoda 7.
Primer 58
3-(1-(4-amino-3-(piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0541]
[0542] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 51, od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (Intermediajer D2a, 60 mg, 0.118 mmol), piridin-3-ilboronske kiseline (29.0 mg, 0.236 mmol), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (42.7 mg, 79 %) kao žućkasta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.94 (s, 1 H), 8.83 (d, J=3.97 Hz, 1 H), 8.17 - 8.36 (m, 3 H), 7.78 (m, 3 H), 7.63 (t, 1 H), 7.50 - 7.57 (m, 1 H), 7.35 - 7.48 (m, 3 H), 7.29 (s, 2 H), 7.04 (m, 1 H), 6.90 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 5.80 (d, J=7.06
Hz, 1 H), 1.78 - 1.95 (m, 3 H). UPLC-MS: 6.06 min, 461.3 [M+H]+, metoda 7.
Primer 59
3-(1-(4-amino-3-(2-aminotiazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0544] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 52, od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (Intermedijer D2a, 47.7 mg, 0.094 mmol) i 4-(tributilstanil)tiazol-2-ilkarbamata (92 mg, 0.187 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (24 mg, 49.5%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.78 - 9.18 (m, 1 H), 8.13 - 8.27 (m, 2 H), 7.71 - 8.04 (m, 2 H), 7.59 - 7.69 (m, 1H), 7.50 -7.58 (m, 2 H), 7.36 - 7.49 (m, 3 H), 7.15 (d, J=7.50 Hz, 1 H), 6.90 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 5.70 (d, J=7.06 Hz, 1 H), 1.82 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 5.84 min, 482.1 [M+H]+, metoda 7.
Primer 60
3-(1-(4-amino-3-(6-metoksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0545]
[0546] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 52, od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (Intermedijer D2a, 60mg, 0.118 mmol) i 2-metoksi-5-(tributilstanil)piridina (94 mg, 0.236 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (35.1 mg, 60.7 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.30 - 8.44 (m, 1 H), 8.07 - 8.24 (m, 2 H), 7.85 - 7.99 (m, 1 H), 7.71 - 7.82 (m, 1 H), 7.51 -7.66 (m, 3 H), 7.28 - 7.48 (m, 4 H), 7.09 - 7.23 (m, 1 H), 6.80 - 7.05 (m, 2 H), 5.47 - 5.80 (m, 1 H), 3.93 (s, 3
H), 1.85 (d, J=7.50 Hz, 3 H). UPLC-MS: 6.44 min, 491.2 [M+H]+, metoda 7.
Primer 61
3-(1-(4-amino-3-(6-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0547]
[0548] 3-(1-(4-amino-3-(6-metoksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (Primer 60, 28 mg, 0.057 mmol) je bio rastvoren u HBr 33% u CH3COOH (2 ml, 36.8 mmol) i mešan na 60°C tokom 4 sata. Reakcija je zatim razblažena sa 3 ml vode, i dobijena smeša je prečišćena hromatografijom reverzne faze korišćenjem Biotage C1830g SNAP sa gradijentom vode i acetonitrila da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (6.9 mg, 254 %) kao žućkasta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.11 - 8.30 (m, 2 H), 7.77 (t, J=7.06 Hz, 2 H), 7.32 - 7.68 (m, 8 H), 7.14 (d, J=7.50 Hz, 1 H), 6.89 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 6.48 (d, J=9.70 Hz, 1 H), 5.72 (d, J=7.06 Hz, 1 H), 1.84 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS:5.18 min, 477.2 [M+H]+, metoda 7.
Primer 62
N-(5-(4-amino-1-(1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)tiazol-2-il)acetamid
[0549]
[0550] 3-(1-(4-amino-3-(2-aminotiazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on hidrohlorid (Primer 59, 23 mg, 0.044 mmol) je rastvoren u TEA (124 µL, 0.888 mmol)/Ac2O (419 µL, 4.44 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Reakciona smeša je ugašena dodatkom 1M HCl (1 ml) i prečišćena hromatografijom reverzne faze korišćenjem Biotage C1830g SNAP sa gradijentom vode i acetonitrila da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.3 mg, 9.9%) kao žućkasta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.16 - 8.20 (d, 1 H, J = 8.0 Hz), 8.04 (s, 1 H), 7.73 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 7.73 (d,1H, J = 8.0 Hz), 7.54-7.58 (m, 2H), 7.33-7.44 (m, 5H), 6.83-6.89 (m, 1H), 5.65 (q, 1H, J = 8.0 Hz), 2.14 (s, 3H), 1.79 (d,
3H, J = 8.0 Hz). UPLC-MS: 3.81 min, 524.1 [M+H]+, metoda 6.
Primer 64
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0551]
Korak 1.4-(3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat
[0552]
[0553] Terc-butil 4-(3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat (Intermedijer D14, 120 mg, 0.195 mmol), 3-fluoro-5-hidroksifenilboronska kiselina (67.0 mg, 0.430 mmol), Pd(dppf)Cl2(21.44 mg, 0.029 mmol) i K2CO3(59.4 mg, 0.430 mmol) su reagovali u 3.2 mL dioksana pod argonom na 120°C preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa AcOEt (100 mL) i isprana sa 0.5M HClvodene(100 ml), isprana sa zasićenim NaClvodenim, osušena preko Na2SO4i evaporisana do suvoće. Sirova supstanca je bila prečišćena fleš hromatografijom na silikagelu korišćenjem Biotage 25G SNAP sa gradijentom heptana i AcOEt da bi se dobio 4-(3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H izohromen-4-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat (83 mg, 71 %) kao čvrsta supstanca. UPLC-MS: 1.19 min, 599.0 [M+H]+, metoda 9
Korak 2.
[0554] Rastvor 4-(3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat (150 mg, 0.244 mmol) u dioksanu (2.4 ml) i 4M HCl u dioksanu (2.4 ml) su reagovali na sobnoj temperaturi tokom 3 h, zatim je dodat Et2O i žućkasti precipitat je sakupljen filtracijom da bi se dobilo jedinjenje iz nasova (135 mg, 99 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.13 - 10.36 (bs, 1 H), 8.96 - 9.35 (bs, 2 H), 8.38 (s, 1 H), 8.29 (s, 1 H), 8.08 - 8.21 (m, 1 H), 7.83 - 7.96 (m, 1 H), 7.66 (m, 2 H), 6.95 (m, 2 H), 6.62 - 6.75 (m, 1 H), 6.18 (m, 1 H), 6.01 - 6.09 (m, 1
H), 3.66 - 3.83 (m, 2 H), 2.96 - 3.38 (m, 2 H), 2.56 - 2.74 (m, 2 H), 1.79 - 2.00 (d, 3 H). UPLC-MS: 2.17 min, 499.0 [M+H]+, metoda 6
Primer 65
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(piridin-4-ilmetil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0555]
[0556] 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid (primer 64, 37 mg, 0.064 mmol), izonikotinaldehid (8.89 mg, 0.083 mmol) i DIEA (11.15 µl, 0.064 mmol) su rastvoreni u DCM (1.23 ml) praćen vrhom spatule anhidrovanog Na2SO4i smeša je mešana tokom 10 minuta pre dodavanja AcOH (10.97 µl, 0.192 mmol) i NaBH(OAc)3(27.1 mg, 0.128 mmol). Dobijena smeša je mešana tokom 1 sata na sobnoj temperaturi, zatim ugašena sa 2M HClvodene(1 ml), filtrirana da se uklone nerastvorljivi materijali, i filtrat je prečišćen hromatografijom reverzne faze korišćenjem Biotage C1860 g SNAP sa gradijentom vode i acetonitrila kako bi se dobilo ( pre sušenja dodata je mala količina 1M HClvodene) jedinjenje iz naslova (10.6 mg, 26.5%) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.56-11.67 (m, br 1H), 10.20-10.34 (m, br 1H), 8.78-8.82 (m, 2H), 8.10-8.30 (m, 2H), 7.74-8.00 (m, 3H), 7.48-7.68 (m, 2H), 6.82-6.97 (m, 2H), 6.67-7.73 (m, 1H), 6.15-7.73 (m, 1H), 6.15-6.35 (m, 1H), 5.97-6.10 (m, 1H), 4.50-4.68 (m, 2H), 3.90-3.97 (m, 3H), 3.35-3.50 (m, 2H), 3.04-3.27 (m, 1H), 2.52-2.68 (m, 1H), 1.81-1.99 (m, 3H). UPLC-MS: 2.34 min, 590.0 [M+H]+, metoda 6.
Primer 66
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(ciklopropilmetil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0557]
[0558] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 65, od 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorida (primer 64, 50 mg, 0.086 mmol) i ciklopropankarbaldehida (7.26 mg, 0.104 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 28 mg, 55.1 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.09-10.51 (m, 2H br), 8.27-8.43 (m, 1H), 8.12-8.26 (m, 1H)7.80-7.95 (m, 1H), 7.61-7.70 (m, 1H), 6.82-6.98 (m, 2H), 6.64-6.73 (m, 1H), 6.04-6.30 (m, 2H), 3.85-4.17 (m, 3H), 3.71-3.82 (m, 1H), 3.23-3.33 (m, 1H), 3.08-3.22 (m, 2H), 2.71-2.96 (m, 2H), 2.52-2.65 (m, 1H), 1.82-2.04 (m, 3H), 1.17-1.27 (m, 1H), 0.67-0.76 (m, 2H), 0.44-0.53 (m, 2H). UPLC-MS: 2.56 min, 533.0 [M+H]+, metoda 6.
Primer 67
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)
fenil)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0560] 3-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)benzaldehid (Intermedijer F2, 598 mg, 1.147 mmol), AcOH (131 µl, 2.293 mmol) i 2M dimetilamin (1.15 ml) rastvor u THF su rastvoreni u DCM (23 ml) praćeni spatulom anhidrovanog Na2SO4i smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 minuta pre dodavanja NaB(OAc)3H (1215 mg, 5.73 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi do potpune konverzije, zatim ugašena sa 1M HClvodene(5 ml), filtrirana da se uklone nerastvorljivi materijali, i filtrat prečišćen hromatografijom reverzne faze korišćenjem Biotage C1860g SNAP sa gradijentom vode i acetonitrila da bi se dobilo (pre sušenja dodata je mala količina 1M HCl vodene) jedinjenje iz naslova (460 mg, 68.3% prinos) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.74 (br. s., 1 H), 10.59 (br. s., 1 H), 10.31 (br. s., 2 H), 8.33 (s, 1 H), 8.19 - 8.29 (m, 3 H), 7.48 - 7.85 (m, 11 H), 7.41 (t, J=7.50 Hz, 1 H), 7.04 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 6.78 - 6.97 (m, 6 H), 6.66 - 6.77 (m, 2 H), 5.85 (q, J=7.06 Hz, 1 H), 5.60 - 5.75 (m, 1 H), 4.07 - 4.44 (m, 4 H), 2.78 (t, J=4.41 Hz, 6 H), 2.72 (d, J=4.85 Hz, 3 H), 2.65 (d, J=4.85 Hz, 3 H), 1.77 - 1.94 (m, 6 H). UPLC-MS: 2.52 min, 551.1 [M+H]+, metoda 6.
Primer 67a (enantiomer 1) i Primer 67b (enantiomer 2) 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0561] Racemat 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid (primer 67, 0.558 g, 0.95 mmol) je rastvoren u 10 ml Etanola i podvrgnut hiralnoj rezoluciji Hiralnom preparativnom hromatografijom. Uslovi:Kolona: Hiralpak ADH (25 x 3 cm), 5 um; Mobilna faza: n-Heksan/(Etanol 0.1% izopropilamin) 75/25% v / v; Brzina protoka: 32 ml/min; DAD otkrivanje: 220 nm; Petlja: 540 µl; Injekcija: 30 mg (svaka injekcija).
[0562] Frakcije koje sadrže prvi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće da bi se dobilo jedinjenje 67a (0.214 g, 0.39 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A12): Rt = 7.1 min, ee> 99%.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.19 (s, 1 H), 8.18 - 8.29 (m, 1 H), 8.03 - 8.12 (m, 1 H), 7.72 - 7.83 (m, 1 H), 7.57 - 7.68 (m, 1 H), 7.22 - 7.52 (m, 4 H), 6.75 -7.01 (m, 5 H), 6.66 (d, 1 H), 5.64 - 5.80 (m, 1 H), 3.06 - 3.57 (m, 2 H),
1.93 - 2.28 (m, 6 H), 1.81 (d, 3 H). UPLC-MS: 0.63-.065 min, 551.4 [M+H]+, metoda 13.
[0563] Frakcije koje sadrže drugi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće da bi se dobilo jedinjenje 67b (drugi eluirani enantiomer, 0.200 g, 0.37 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A12): Rt = 11.0 min, ee = 98.4%.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.19 (s, 1 H), 8.18 - 8.29 (m, 1 H), 8.03 - 8.12 (m, 1 H), 7.72 - 7.83 (m, 1 H), 7.57 - 7.68 (m, 1 H), 7.22 - 7.52 (m, 4 H), 6.75 -7.01 (m, 5 H), 6.66 (d, 1 H), 5.64 - 5.80 (m, 1 H), 3.06 - 3.57 (m, 2 H), 1.93 - 2.28 (m, 6 H), 1.81 (d, 3 H). UPLC-MS: 0.62-0.65 min, 551.4 [M+H]+, metoda 13.
Primer 68
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(piperidin-1-ilmetil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0564]
[0565] 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(piperidin-1-ilmetil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid (Intermedijer D9, 100 mg, 0.154 mmol), 3-fluoro-5-hidroksifenilboronska kiselina (48.1 mg, 0.308 mmol), S-Fos-Pd-G2 (11.10 mg, 0.015 mmol) i K3PO4(151 mg, 0.462 mmol) su reagovali u THF (1.2 ml) i vodi (0.3 ml) pod argonom na 80°C pod mw zračenjem tokom 30 min. Reakcija je ugašena dodatkom 1M HClvodene(2 ml) i smeša prečišćena hromatografijom reverzne faze korišćenjem Biotage C1860 g SNAP sa gradijentom vode i acetonitrila da bi se dobilo (pre sušenja dodata je mala količina 1M HCl vodene) jedinjenje iz naslova (70 mg, 71.7% prinos) kao žućkasta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.11 - 10.46 (bs, 2 H), 8.15 - 8.31 (m, 2 H), 7.77 - 8.03 (m, 1 H), 7.67 (t, J=7.50 Hz, 1 H), 7.43 (br. s., 1 H), 7.18 (d, J=7.94 Hz, 2 H), 6.92 (s, 1 H), 6.85 (d, J=8.82 Hz, 1 H), 6.70 (d, J=11.03 Hz, 1 H), 5.94 (d, J=7.06 Hz, 1 H), 4.53 (d, J=3.53 Hz, 2 H), 3.38 (m, H), 2.87 (d, J=11.47 Hz, 2 H), 1.61 - 1.99 (m, 8 H), 1.37 (d, J=11.91 Hz, 1 H). UPLC-MS: 2.82 min, 597.0 [M+H]+, metoda 6.
Primer 68a (enantiomer 1) i Primer 68b (enantiomer 2): 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(piperidin-1-ilmetil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid pojedinačni enantiomeri
[0566] Racemat 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(piperidin-1-ilmetil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid (primer 68, 0.053 g, 0.0837 mmol) je rastvoren u 3.5 ml Etanola i podvrgnut hiralnoj rezoluciji Hiralnom preparativnom hromatografijom. Uslovi:Kolona: Whelk O-1 (R, R) (25 x 2 cm), 10 um; Mobilna faza: n-Heksan/(Etanol 0.1% izopropilamin) 55/45% v/v; Brzina protoka: 14 ml/min; DAD otkrivanje: 220 nm; Petlja: 500 µl; Injekcija: 7.5 mg (svaka injekcija).
[0567] Frakcije koje sadrže prvi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće, dodata je 1M HCl i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom reverzne faze na C18 ulošku (H2O: CH3CN = 95:5 do 50:50, sa 0.1% HCOOH); pre sušenja dodato je 2 mL 1N HCl i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje 68a kao bela čvrsta supstanca (prvi eluirani enantiomer, 0.0149 g, 0.0235 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A14): Rt = 8.4 min, ee = 99%.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.21 - 10.48 (m, 2 H), 8.20 - 8.29 (m, 2 H), 7.82 - 7.90 (m, 1 H), 7.65 - 7.72 (m, 1 H), 7.41 - 7.48 (m, 1 H), 7.00 - 7.33 (m, 2 H), 6.90 - 6.95 (m, 1 H), 6.83 - 6.89 (m, 1 H), 6.71 (dt, 1 H), 6.65 - 8.50 (m, 2 H), 5.91 -5.99 (m, 1 H), 4.49 - 4.61 (m, 2 H), 3.26 - 3.88 (m, 2 H), 2.80 - 2.96 (m, 2 H), 1.66 - 1.93 (m, 8 H), 1.30 - 1.47 (m, 1 H). UPLC-MS: 0.68 min, 597.5 [M+H]+, metoda 13.
[0568] ] Frakcije koje sadrže drugi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće, dodata je 1M HCl i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom reverzne faze na C18 ulošku (H2O: CH3CN = 95:5 do 50:50, sa 0.1% HCOOH); pre sušenja dodato je 2 mL 1N HCl i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje 68b kao bela čvrsta supstanca (drugi eluirani enantiomer, 0.013 g, 0.02 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A14): Rt = 10.1 min, ee = 97.8%.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.21 - 10.62 (m, 2 H), 8.20 - 8.30 (m, 2 H), 7.82 - 7.90 (m, 1 H), 7.65 - 7.72 (m, 1 H), 7.40 - 7.50 (m, 1 H), 7.00 - 7.33 (m, 2 H), 6.90 - 6.95 (m, 1 H), 6.83 - 6.89 (m, 1 H), 6.71 (dt, 1 H), 6.65 - 8.50 (m, 2 H), 5.91 -5.99 (m, 1 H), 4.48 - 4.61 (m, 2 H), 3.24 - 4.00 (m, 2 H), 2.80 - 2.96 (m, 2 H), 1.66 - 1.94 (m, 8 H), 1.30 - 1.47 (m, 1 H). UPLC-MS: 0.67 min, 597.5 [M+H]+, metoda 13.
[0569] Primeri 69-71, 85-86, 93-102, 113-114, 121, 131-132, 146-149, 152-153, 159-160 nađeni u tabeli ispod mogu biti pripremljeni počevši od pogodnih reagenasa prikazanih ispod, prateći slične postupke kao za jedinjenje 68.
[0570] Postupci za Primere 99, 101, 159 i 160 su zahtevali dalji korak uklanjanja zaštite sastojeći se od reakcije u suvom dihlorometanu (5 ml) sa molarnim viškom od 1 M boron tribromida u DCM na sobnoj temperaturi, praćenom gašenjem sa EtOH na 0°C i konačno pogodnim korakom hromatografskog prečišćavanja.
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
Primer 72
4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on
[0571]
[0572] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 51 od 4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer D12, 1.08 g, 1.941 mmol), (3-fluoro-5-hidroksifenil)boronske kiseline (0.605 g, 3.88 mmol), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (456 mg, 43.5 %) kao bledo siva čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.02 - 10.36 (s, 1 H), 8.12 - 8.33 (m, 2 H), 7.81 - 7.99 (m, 1 H), 7.57 - 7.70 (m, 1 H), 7.37 - 7.50 (m, 1 H), 6.80 - 6.96 (m, 2 H), 6.54 - 6.71 (m, 1 H), 6.18 - 6.31 (m, 1 H), 5.97 - 6.12 (m, 1 H), 5.16 -5.33 (m, 1 H), 4.17 - 4.30 (m, 1 H), 4.04 - 4.15 (m, 1 H), 3.86 - 4.04 (m, 1 H), 3.48 - 3.82 (m, 2 H), 3.20 (s, 3 H), 2.01 - 2.05 (d, 3 H), 1.75 - 1.95 (m, 2 H). UPLC-MS: 3.13 min, 540.9 [M+H]+, metoda 6.
Primer 73
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(pirolidin-1-ilmetil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0574] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 67 od 5-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenl)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-karbaldehida (Intermedijer F4, 57mg, 0.108 mmol) i pirolidina (18.04 µl, 0.216 mmol), da bi se dobilo (pre sušenja mala količina 1M HCl vodene je dodata) jedinjenje iz naslova (37.8 mg, 56.5%) kao beličasta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.49 (br. s., 1 H), 10.25 (br. s., 1 H), 8.10 - 8.43 (m, 2 H), 7.79 - 7.90 (m, 1 H), 7.61 - 7.75 (m, 1 H), 7.41 (d, J=3.09 Hz, 1 H), 7.15 (d, J=7.94 Hz, 2 H), 6.91 (s, 1 H), 6.80 - 6.88 (m, 1 H), 6.69 (dt, J=11.03, 2.21 Hz, 1 H), 5.92 (d, J=7.06 Hz, 1 H), 4.61 (br. s., 2 H), 3.44 (m, 2 H), 3.10 (br. s., 2 H), 2.04 (m, 2 H), 1.70 - 1.95 (m, 7 H). UPLC-MS: 2.62 min, 582.9 [M+H]+, metoda 6.
Primer 74
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((bis(2-hidroksietil)amino)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on, Format
[0575]
[0576] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 67 od 5-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso 1H-izohromen-4-il)tiofen-2-karbaldehida (Intermedijer F4, 60 mg, 0.114 mmol) i 2,2’-azandiildietanola (23.92 mg, 0.227 mmol), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3 mg, 3.98 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.22 (s, 1 H), 9.68 - 10.01 (m, 1 H), 8.22 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 8.14 (s, 1 H), 7.77 - 7.92 (m, 1 H), 7.66 (t, J=7.50 Hz, 1H), 7.46 (br. s., 1 H), 7.16 (d, J=7.94 Hz, 2 H), 6.91 (s, 1 H), 6.83 (d, J=8.82 Hz, 1
H), 6.67 (d, J=11.03 Hz, 1 H), 5.93 (d, J=7.06 Hz, 1 H), 5.38 (br. s., 2 H), 4.70 (br. s., 2 H), 3.82 (br. s., 4 H), 3.32 (s, 2 H), 1.85 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 2.40 min, 616.9 [M+H]+, metoda 6.
Primer 75
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(hidroksimetil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on
[0577]
[0578] Jedinjenje iz naslova je izolovano tokom eksperimenta za proizvodnju primera 74, naročito obnovljenog tokom konačnog koraka fleš prečišćavanja kao drugog eluiranog jedinjenja (8.5 mg, 14.1%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.19 (s, 1 H), 8.14 (m, 2 H), 7.76 - 7.94 (m, 1 H), 7.47 - 7.71 (m, 1 H), 7.12 - 7.26 (m, 1 H), 7.00 (m, 2 H), 6.89 - 6.93 (m, 1 H), 6.79 - 6.87 (m, 1 H), 6.56 - 6.76 (m, 1 H), 5.76 - 6.09 (m, 1 H), 5.34 - 5.65 (m, 1 H), 4.52 - 4.78 (m, 2 H), 1.88 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 3.43 min, 529.9 [M+H]+, metoda 6.
Primer 76
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((4-(2-hidroksietil) piperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0579]
[0580] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 67, od 5-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-karbaldehida (Intermedijer F4, 60 mg, 0.114 mmol) i 2-(piperazin-1-il)etanol (29.6 mg, 0.227 mmol) da bi se dobio željeni produkt (48.6 mg, 63.0 %) kao beličasta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.85 - 10.43 (m, 1 H), 8.09 - 8.32 (m, 2 H), 7.78 - 7.91 (m, 1 H), 7.66 (t, J=7.50 Hz, 1 H), 7.20 (d, J=7.94 Hz, 2 H), 6.96 - 7.11 (m, 1 H), 6.81 - 6.96 (m, 2 H), 6.61 - 6.76 (m, 1 H), 5.85 - 6.04 (m, 1 H),
3.45 - 3.83 (m, 10 H), 3.21 (br. s., 4 H), 1.87 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 2.66 min, 642.0 [M+H]+, metoda 6.
Primer 76a (enantiomer 1) i Primer 76b (enantiomer 2) 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0581]
[0582] 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid (primer 76, 0.040 g) je rastvoren u Etanol/Metanol 1/1 (4 ml) i podvrgnut hiralnoj rezoluciji Hiralnom preparativnom hromatografijom. Uslovi: Kolona: Hiralpak AD-H (25 x 2.0 cm), 5um; Mobilna faza: n-heksan/(Etanol 0.1% izopropilamin) 80/20% v/v; Brzina protoka: 17 ml/min; DAD otkrivanje: 220 nm; Petlja: 300 µl; Injekcija: 3 mg (svaka injekcija).
[0583] Frakcije koje sadrže prvi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće i prečišćene fleš hromatografijom reverzne faze na C18 ulošku (H2O 0.1% HCOOH: CH3CN 0.1% HCOOH = 95:5 do 50:50); ostatak je tretiran sa 1.25M HCl u MeOH i evaporisan do suvoće da bi se dobio primer 76a (prvi eluirani enantiomer, 12 mg, 0.0168 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A16): Rt=12.1 min, ee> 99%.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.27 (br. s., 1 H), 8.25 (s, 1 H), 8.21 (d, 1 H), 7.81 - 7.86 (m, 1 H), 7.66 (t, 1 H), 6.94 -7.52 (m, 5 H), 6.91 (s, 1 H), 6.85 (d, 1 H), 6.67 - 6.74 (m, 1 H), 5.96 (q, 1 H), 4.75 - 5.50 (m, 1 H), 3.56 - 4.22 (m, 10 H), 3.06 - 3.37 (m, 4 H), 1.87 (d, 3 H). UPLC-MS: 0.65 min, 642.2 [M+H]+, metoda 13.
[0584] Frakcije koje sadrže drugi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće
i prečišćene fleš hromatografijom reverzne faze na C18 ulošku (H2O 0.1% HCOOH: CH3CN 0.1% HCOOH = 95:5 do 50:50); ostatak je tretiran sa 1.25M HCl u MeOH i evaporisan do suvoće da bi se dobio primer 76b (drugi eluirani enantiomer, 0.014 g, 0.0196 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A16): Rt = 14.6 min min, ee> 99%.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.26 (br. s., 1 H), 8.19 - 8.26 (m, 2 H), 7.81 - 7.86 (m, 1 H), 7.63 - 7.69 (m, 1 H), 6.94 -7.52 (m, 5 H), 6.89 - 6.93 (m, 1 H), 6.82 - 6.88 (m, 1 H), 6.67 - 6.73 (m, 1 H), 5.96 (q, 1 H), 4.75 - 5.55 (m, 1 H), 3.48 - 4.30 (m, 10 H), 3.07 - 3.36 (m, 4 H), 1.87 (d, 3 H). UPLC-MS: 0.65 min, 642.2 [M+H]+, metoda 13.
Primer 77
4-((5-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-il)metil)piperazin-2-on hidrohlorid
[0585]
[0586] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 67, od 5-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-karbaldehida (Intermedijer F4, 60 mg, 0.114 mmol) i piperazin-2-on (22.77 mg, 0.227 mmol) da bi se dobio produkt (29.8 mg, 40.4 %) kao beličasta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.27 (br. s., 1 H), 8.15 - 8.59 (m, 3 H), 7.57 - 7.98 (m, 2 H), 7.41 (br. s., 1 H), 6.79 - 7.30 (m, 4 H), 6.54 - 6.75 (m, 1 H), 5.96 (q, J=7.06 Hz, 1 H), 4.59 (br. s., 2 H), 3.46 (br. s., 6 H), 1.87 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 3.11 min, 612.0 [M+H]+, metoda 6.
Primer 78
5-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-karboksilna kiselina
[0587]
[0588] 5-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-karbaldehid (Intermedijer F4, 19 mg, 0.036 mmol) je rastvoren u 2-metil-2-butenu (300 µl, 2.83 mmol) i t-Butanolu (0.5 ml), zatim je dodat rastvor NaClO2(32.6 mg, 0.360 mmola) i K2H2PO4(49.0 mg, 0.360 mmol) u 0.5 mL vode i smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena dodatkom 2M HClvodene(1ml) i sirovi produkt je prečišćen hromatografijom reverzne faze korišćenjem Biotage C18 30 g SNAP sa gradijentom vode i acetonitrila da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (8 mg, 40.9%) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.87 - 13.46 (bs, 1 H), 9.96 - 10.54 (bs, 1 H), 8.17 - 8.27 (m, 1 H), 8.12 (s, 1 H), 7.77 -7.87 (m, 1 H), 7.59 - 7.72 (m, 2 H), 7.13 (m, 4 H), 6.91 (s, 1 H), 6.79 - 6.86 (m, 1 H), 6.59 - 6.71 (m, 1 H), 5.75 -6.06 (m, 1 H), 1.87 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 3.52 min, 543.9 [M+H]+, metoda 6.
Primer 79
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-benzil-1H-izohromen-1-on
[0589]
[0590] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 51 od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-benzil-1H-izohromen-1-on (Intermedijer D15, 45 mg, 0.086 mmol), (3-fluoro-5-hidroksifenil)boronske kiseline (26.8 mg, 0.172 mmol), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (13 mg, 19.8 %) kao svetlo smeđa čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.06 (s, 1 H), 8.14 - 8.27 (m, 2 H), 7.70 - 7.81 (m, 1 H), 7.38 - 7.63 (m, 2 H), 7.02 - 7.12 (m, 3 H), 6.89 - 6.98 (m, 2 H), 6.84 - 6.89 (m, 1 H), 6.75 - 6.82 (m, 1 H), 6.59 - 6.69 (m, 1 H), 6.21 - 6.45 (m, 1 H), 4.12 - 4.43 (m, 2 H), 1.68 - 1.96 (d, 3 H). UPLC-MS: 4.22 min, 507.9 [M+H]+, metoda 6.
Primer 80
4-(1H-pirazol-4-il)-3-(1-(tieno[3,2-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0591]
[0592] 3-(1-aminoetil)-4-(1H-pirazol-4-il)-1H-izohromen-1-on dihidrohlorid (Intermedijer E4, 62 mg, 0.189 mmol), 4-hlorotieno[3,2-d]pirimidin (45.1 mg, 0.264 mmol), TEA (0.092 ml, 0.661 mmol) su reagovali u t-BuOH (1.1 ml) na 85°C tokom 2 sata i 90°C tokom 4 sata. Reakcija je ugašena dodatkom 1M HClvodene(2 ml) i prečišćena hromatografijom reverzne faze korišćenjem Biotage C1860 g SNAP sa gradijentom vode i acetonitrila da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (24 mg, 29.8%) kao žućkasta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.08 (br. s., 1 H), 8.81 (s, 1 H), 8.46 (d, J=5.29 Hz, 1 H), 8.19 (d, J=7.50 Hz, 1 H), 7.82 (m, 3 H), 7.62 (t, J=7.50 Hz, 1 H), 7.48 (m, 1 H), 7.22 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 5.32 (t, J=6.84 Hz, 1 H), 1.60 (d, 3
H). UPLC-MS: 0.63 min, 390.0 [M+H]+, metoda 9
Primer 81
4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-3-(1-(tieno[3,2-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0593]
[0594] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 80, od 3-(1-aminoetil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on dihidrohlorida (Intermedijer E3, 80 mg, 0.180 mmol) i 4-hlorotieno[3,2-d]pirimidina (43.1 mg, 0.253 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (52 mg, 53.3 %) kao žućkasta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.12 - 11.64 (bs, 1 H), 9.50 - 9.92 (bs, 1 H), 8.79 (br. s., 1 H), 8.38 (d, J=4.85 Hz, 1 H), 8.20 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 7.84 (m, 1 H), 7.57 - 7.72 (m, 1 H), 7.39 - 7.56 (m, 2 H), 7.33 (m 1 H), 7.22 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 5.27 (t, 1 H), 4.65 (br. s., 2 H), 3.68 - 4.13 (m, 4 H), 3.15 (m, 4 H), 1.62 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 6.38 min, 504.9 [M+H]+, metoda 8.
Primer 82
4-amino-6-((1-(4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1-okso-1H-izohromen-3-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril hidrohlorid
[0595]
[0596] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 80, od 3-(1-aminoetil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on dihidrohlorida (Intermedijer E3, 60 mg, 0.135 mmol) i 4-amino-6-hloropirimidin-5-karbonitrila (29.3 mg, 0.189 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4 mg, 5.6 %) kao žućkasta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.24 (br. s., 1 H), 8.22 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 8.14 (br. s., 1 H), 8.08 (s, 1 H), 7.83 (t, J=7.72 Hz, 1 H), 7.64 (t, J=7.50 Hz, 3 H), 7.49 (d, J=3.09 Hz, 1 H), 7.24 (d, J=3.53 Hz, 1 H), 7.17 (d, J=8.38 Hz, 1 H), 5.11 (t, J=6.84 Hz, 1 H), 4.63 (br. s., 2 H), 4.00 (d, J=11.91 Hz, 2 H), 3.78 (d, J=7.50 Hz, 2 H), 3.32 (d, J=11.91 Hz, 2 H), 3.12 (br. s., 2 H), 1.49 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 1.87 min, 488.9 [M+H]+, metoda 6
Primer 83
4-fenil-3-(1-(pirolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on
[0597]
[0598] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 80, od 3-(1-aminoetil)-4-fenil-1H-izohromen- 1-on hidrohlorida (Intermedijer E2, 50 mg, 0.166 mmol) i 4-hloropirolo[2,1-f][1,2,4]triazina (35.6 mg, 0.232 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50.3 mg, 79 %) kao beličasta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.53 (d, J=6.62 Hz, 1 H), 8.20 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 7.72 - 7.87 (m, 2 H), 7.45 - 7.66 (m, 6 H), 7.39 (d, J=7.06 Hz, 1 H), 7.04 (d, J=3.97 Hz, 1 H), 6.93 (d, J=8.38 Hz, 1 H), 6.47 - 6.69 (m, 1 H), 5.01 (t,
J=7.06 Hz, 1 H), 1.52 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 5.15 min, 383.0 [M+H]+, metoda 6.
Primer 84
4-fenil-3-(1-(pirido[3,2-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on
[0599]
[0600] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 80, od 3-(1-aminoetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on hidrohlorida (Intermedijer E2, 50 mg, 0.166 mmol) i 4-hloropirido[3,2-d]pirimidina (38.4 mg, 0.232 mmol) da bi se dobio željeni produkt (2.2 mg, 3.4 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.81 - 9.08 (m, 2 H), 8.54 (s, 1 H), 8.10 - 8.24 (m, 2 H), 7.91 (dd, J=8.38, 3.97 Hz, 1 H), 7.71 - 7.80 (m, 1 H), 7.45 - 7.64 (m, 5 H), 7.41 (d, J=7.50 Hz, 1 H), 6.93 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 5.11 (t, J=7.06 Hz, 1 H), 1.60 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 4.13 min, 395.0 [M+H]+, metoda 6.
Primer 87
N-(5-(4-amino-1-(1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)piridin-3-il)-4-fluorobenzensulfonamid
[0601]
[0602] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 52 od 4-fluoro-N-(5-(trimetilstanil)piridin-3-l)benzensulfonamida (Intermedijer G9, 98 mg, 0.236 mmol) i 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer D2a, 60 mg, 0.118 mmol) dajući jedinjenje iz naslova (13 mg, 0.021 mmol, 17.4 % prinos) kao belu čvrstu supstancu.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.94 (br. s., 1 H), 8.50 (d, J=1.76 Hz, 1 H), 8.43 (d, J=2.21 Hz, 1 H), 8.17 - 8.27 (m, 2 H), 7.81 - 7.96 (m, 3 H), 7.73 - 7.80 (m, 3 H), 7.63 (m, 1 H), 7.48 - 7.58 (m, 1 H), 7.33 - 7.47 (m, 5 H), 7.12 (d,
J=7.06 Hz, 1 H), 6.89 (d, J=8.38 Hz, 1 H), 5.77 (q, J=7.06 Hz, 1 H), 1.85 (d, J=7.06 Hz, 4 H). UPLC-MS: 1.13 min, 634 [M+H]+, metoda 9.
Primer 88
3-(1-(4-amino-3-(5-aminopiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0603]
[0604] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 52, od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer D2a, 80 mg, 0.157 mmol) i terc-butil 5-(trimetilstanil)piridin-3-ilkarbamata (Intermedijer G10, 112 mg, 0.314 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (14 mg, 0.029 mmol, 18.74 % prinos) kao beli prah.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.01 - 8.28 (m, 4 H), 7.76 (d, J=14.11 Hz, 2 H), 7.63 (m, 1 H), 7.53 (m, 1 H), 7.32 - 7.47 (m, 3 H), 7.14 (m, 1 H), 6.90 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 6.47 - 6.80 (m, 1 H), 5.78 (d, J=7.06 Hz, 1 H), 1.85 (d, J=7.06
Hz, 3 H). UPLC-MS: 0.80 min, 476 [M+H]+, metoda 9.
Primer 89
3-(1-(4-amino-3-(2-aminopirimidin-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0605]
[0606] U rastvor trifenilfosfina (16.48 mg, 0.063 mmol) u suvom dioksanu (6 mL), 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (4-trimetilstanil-2-amino-bis(tercbutilkarbamat)-pirimidin intermedijer D2a, 80 mg, 0.157 mmol), bakar (l) jodid (5.98 mg, 0.031 mmol), (Intermedijer G11, 144 mg, 0.314 mmol), Bis(dibenzilidenaceton)paladijum(0) (18.06 mg, 0.031 mmol) i litijum hlorid (19.98 mg, 0.471 mmol) su dodati. Azot je pušten u mehurićima u rastvor tokom 10 minuta, rastvor je zagrevan do 80°C i mešan preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i produkt je prečišćen sa Biotage Si 10 g eluentom sa gradijentom DCM i etanolom dajući žutu čvrstu supstancu. Ovo jedinjenje je rastvoreno u 4M HCl u 1.4 dioksanu i mešano tokom 8 sati na sobnoj temperaturi. Rastvarač je uklonjen i produkt je direktno prečišćen hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 10 g kolonom (Faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); (Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (6.6 mg, 7.5%) kao beli prah.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.51 - 8.71 (bs, 1 H), 8.39 - 8.49 (m, 1 H), 8.33 (s, 1 H), 8.22 (d, J=7.50 Hz, 1 H), 7.72 -7.87 (m, 1 H), 7.59 - 7.70 (m, 2 H), 7.51 - 7.58 (m, 1 H), 7.31 - 7.50 (m, 4 H), 7.19 (d, J=7.06 Hz, 1 H), 6.91 (d,
J=7.94 Hz, 1 H), 5.68 - 5.85 (m, 1 H), 4.27 - 4.39 (m, 1 H), 1.89 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 3.91 min, 477 [M+H]+, metoda 6.
Primer 90
3-(1-(4-amino-3-(6-hidroksipirazin-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0607]
[0608] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 89 od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer D2a, 120 mg, 0.236 mmol) i 2-metoksi-6-(tributilstanil)pirazina (188 mg, 0.471 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (25 mg, 36.8%) kao beli prah.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.85 (s, 1 H), 8.11 - 8.23 (m, 3 H), 7.86 - 7.96 (m, 1 H), 7.68 - 7.80 (m, 1 H), 7.56- 7.63 (m, 1 H), 7.48 - 7.55 (m, 1 H), 7.33 - 7.46 (m, 3 H), 7.12 - 7.24 (m, 1 H), 6.80 - 6.91 (m, 1 H), 5.65 - 5.80 (m, 1 H), 1.78 - 1.97 (m, 3 H). UPLC-MS: 4.08 min, 478 [M+H]+, metoda 6.
Primer 91
3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0609]
[0610] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 89 od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer D2a, 804 mg, 1.579 mmol) i 3-metoksi-5-(tributilstanil)piridina (1257 mg, 3.16 mmol) na 120°C preko noći. Rastvarač je uklonjen, i produkt je prečišćen sa Biotage Si 25 g sa gradijentom DCM i EtOH dajući bledo žutu čvrstu supstancu (500 mg).
[0611] Ovaj materijal je rastvoren u suvom DCM (10 mL), dodat je 1M BBr3u DCM (24 ml) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 48 sati. Zatim, rastvor je ohlađen do 0°C i dodat je suvi etanol (10 ml). Rastvarač je evaporisan i produkt je direktno prečišćen hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 SNAP kolonom (faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); (Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) dajući jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu. Zatim, produkt je rastvoren u smešii DCM (100 ml) i EtOH (5 ml), i rastvor je ispran sa zasićenim rastvorom vodenog NaHCO3. Vodena faza je ekstrahovana sa DCM (5 x 50 ml). Organske faze su sakupljene, osušene i rastvarač je evaporisan do suvoće dajući željeni produkt koji daje jedinjenje iz naslova (331 mg, 0.695 mmol, 68.4% prinos) kao belu čvrstu supstancu.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.21 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 8.07 (s, 1 H), 7.75 (t, J=7.50 Hz, 2 H), 7.61 (t, J=7.50 Hz, 2 H), 7.51 (d, J=7.50 Hz, 1 H), 7.42 (m, 3 H), 7.12 (d, J=7.50 Hz, 1 H), 6.88 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 6.67 - 6.83 (bs, 1H), 5.69 (d, J=7.06 Hz, 1 H), 1.83 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 3.40 min, 477 [M+H]+, metoda 6
Primer 92
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(8-metil-8-azabiciklo[3.2.1]okt-2-en-3-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0612]
Korak a. Benzil 3-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-8-azabiciklo[3.2.1]okt-2-en-8-karboksilat
[0613]
[0614] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prateći postupak opisan za sintezu Intermedijera D1, od 3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (Intermedijer G1, 52.4 mg, 0.202 mmol) i benzil 3-(3-(1-bromoetil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-8-azabiciklo[3.2.1]okt-2-en-8-karboksilata (Intermedijer C40, 100 mg, 0.202 mmol) da bi se dobio Benzil 3-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-8-azabiciklo[3.2.1]okt-2-en-8-karboksilat (125 mg, 0.186 mmol, 92 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 1.28 min, 673 [M+H]+, metoda 9
Korak b.
[0615] U rastvor 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(8-azabiciklo[3.2.1]okt-2-en-3-il)-1H-izohromen-1-on (80 mg, 0.149 mmol) u lPrOH (10 ml) i N vodene HCl (1 ml), Pd/C 5% vlažan (10 mg, 0.149 mmol) je dodat. Dobijena suspenzija je uklonjena pod sniženim pritiskom i laboratorijska boca sa okriglim dnom je napunjena sa vodonikom (1 atm) tokom 10 minuta. Zatim, katalizator je odstranjen filtracijom, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovo jedinjenje je rastvoreno u suvom DCM (5 ml), dodati su N-izopropil-N-metilpropan-2-amin (0.023 ml, 0.149 mmol), TRIOKSAN (0.031 ml, 0.297 mmol) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi. Nakon 30 minuta dodati su natrijum triacetoksiborohidrid (94 mg, 0.446 mmol) i sirćetna kiselina (0.026 ml, 0.446 mmol) i reakcija je mešana još 1 sat. Zatim, rastvarač je uklonjen, i sirovi produkt je prečišćen hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 SNAP kolonom (faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); (Faza B CAN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) dajući 40 mg belog praha.
[0616] Ovaj materijal je rastvoren u DCM (3 ml) i 1 M BBr3u DCM (1.448 ml) je dodat i rastvor je mešan tokom 4 sata. Zatim, reakcija je ohlađena na 0°C i dodat je EtOH (1 ml). Rastvarač je uklonjen i produkt je prečišćen fleš hromatografijom C18 H2O/ACN)) 95:5 0.1% HCOOH}:{(ACN/H2O) 95:5 HCOOH 0.1 %} od 100:0 do 0:100 dajući jedinjenje iz naslova (13 mg, 0.037 mmol, 31.2 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.06 - 10.65 (bs, 2 H), 6.61 - 8.42 (m, 11 H), 6.23 - 6.45 (m, 1 H), 5.85 - 6.12 (m, 1 H), 4.03 - 4.53 (m, 2 H), 1.79 - 3.31 (m, 9 H). UPLC-MS: 2.46 min, 539.1 [M+H]+, metoda 6.
Primer 103
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-aminocikloheks-1-en-1-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0617]
[0618] U rastvor 3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (lntermedijer G1, 81 mg, 0.311 mmol) u suvom DMF (4 ml), dodat je kalijum karbonat (86 mg, 0.622 mmol) i suspenzija je mešana tokom 10 min na sobnoj temperaturi. Zatim, benzil (4-(3-(1-bromoetil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)cikloheks-3-en-1-il)karbamat (intermedijer C32, 150 mg, 0.311 mmol) je dodat i rastvor je mešan na 60°C tokom 2 sata. Zatim, DMF je uklonjen i produkt je prečišćen sa Biotage Si 10 g sa gradijentom DCM i EtOH. Obnovljeni materijal (37 mg) je reagovao sa 1M boron tribromidom u DCM (0.280 ml) u suvom DCM (4 ml) tokom 18 sati. Rastvarač je uklonjen i produkt je direktno prečišćen hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 SNAP kolonom (Faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); (Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (10 mg, 34.8% prinos) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.21 (m, 1 H), 6.55 - 8.44 (m, 13 H), 6.00 - 6.42 (m, 1 H), 5.94 (br s, 1 H), 1.66 - 2.84 (m, 10 H). UPLC-MS: 2.29 min, 513.0 [M+H]+, metoda 6.
Primer 104
3-(1-(4-amino-3-(trifluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0619]
[0620] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 1 korišćenjem 3-(trifluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amine Ilntermedijer G16, 45 mg, 0.222 mmol) 3-(1-bromoetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C7, 72.9 mg, 0.222 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (15 mg, 0.033 mmol, 15.0 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.03 - 8.29 (m, 2 H), 7.77 (s, 1 H), 7.63 (s, 1 H), 7.48 - 7.55 (m, 1 H), 7.36 - 7.48 (m, 3 H), 7.14 - 7.21 (m, 1 H), 6.89 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 5.59 - 5.88 (m, 1 H), 1.82 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 4.79
min, 452.03 [M+H]+, metoda 6.
Primer 105
3-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0621]
[0622] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 1, korišćenjem 3-(1-bromoetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C7, 100 mg, 0.304 mmol) i 3-metil-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-amina (45.3 mg, 0.304 mmol) dajući jedinjenje iz naslova (20 mg, 16.6% prinos) kao beli prah.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.22 (m, 3 H), 8.15 (s, 1 H), 7.72 - 7.82 (m, 1 H), 7.63 (m, 1 H), 7.52 - 7.58 (m, 1 H), 7.32 -7.50 (m, 3 H), 7.06 - 7.13 (m, 1 H), 6.89 (d, J=8.38 Hz, 1 H), 5.48 - 5.71 (m, 1 H), 2.56 (s, 3 H), 1.78 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 3.42 min, 398 [M+H]+, metoda 6
Primer 106
3-(1-(4-amino-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0624] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 1 korišćenjem 3-(1-bromoetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C7, 50 mg, 0.15 mmol), 7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (30.6 mg, 0.23 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (16 mg, 28 %).
<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8.30 (dd, J=7.94, 0.88 Hz, 1 H), 8.26 (s, 1 H), 7.93 (s, 1 H), 7.66 - 7.73 (m, 1 H), 7.57 (d, J=7.94 Hz, 2 H), 7.45 (d, J=3.53 Hz, 2 H), 7.37 (m, 2 H), 7.01 (dd, J=14.11, 7.94 Hz, 2 H), 6.64 (d, J=3.97 Hz, 1 H), 5.80 (q, J=7.06 Hz, 1 H), 1.78 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 1.66 min, 383 [M+H]+, metoda 4.
Primer 107
3-(1-(2,6-diamino-9H-purin-9-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0625]
[0626] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 1 od 3-(1-bromoetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer C7, 50 mg, 0.15 mmol) i 9H-purin-2,6-diamina (34 mg, 0.23 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (19 mg, 31 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.21 (d, J=7.50 Hz, 1 H), 7.94 (s, 1 H), 7.73 - 7.85 (m, 1 H), 7.49 - 7.70 (m, 5 H), 7.42 (d, J=7.06 Hz, 1 H), 6.94 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 6.65 (br. s., 2 H), 5.57 (s, 2 H), 5.20 (q, J=7.35 Hz, 1 H), 1.74 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 4.61 min, 399 [M+H]+, metoda 3.
Primer 108
4-fenil-3-(1-(tieno[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on
[0627]
[0628] 3-(1-aminoetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on hidrohlorid (intermedijer E2 50 mg, 0.166 mmol), 4-hlorotieno[2,3-d]pirimidin (36.8 mg, 0.215 mmol), trietilamin (0.046 ml, 0.331 mmol) su reagovali u 2-metilpropan-2-ol (1 ml) na 80°C tokom 6 sati i na 50°C tokom 60 sati. 4-Hlorotieno[2,3-d]pirimidin (5.7 mg, 0.033 mmol), trietilamin (0.09 ml, 0.066 mmol) su dodati i smeša je reagovala na 90°C tokom 4 sata. Sirovi produkt je prečišćen hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 30 g SNAP kolonom (Faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (31 mg, 47%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.17 - 8.31 (m, 3 H), 7.73 - 7.82 (m, 2 H), 7.47 - 7.63 (m, 6 H), 7.39 (d, J=6.62 Hz, 1 H), 6.94 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 5.02 (t, J=7.06 Hz, 1 H), 1.54 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 5.10 min, 400 [M+H]+, metoda 6.
Primer 109
4-fenil-3-(1-(tieno[3,2-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on
[0629]
[0630] 3-(1-aminoetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on hidrohlorid (intermedijer E2, 50 mg, 0.166 mmol), 4-hlorotieno[3,2-d]pirimidin (36.8 mg, 0.215 mmol), trietilamin (0.046 ml, 0.331 mmol) su reagovali u 2-metilpropan-2-ol (1 ml) na 50°C tokom 24 sata i na 80°C tokom 27 sata. 4-Hlorotieno[2,3-d]pirimidin (5.7 mg, 0.033 mmol), trietilamin (0.09 ml, 0.066 mmol) su dodati i smeša je reagovala na 90°C tokom 4 sata. Sirovi produkt je prečišćen hromatografijom reverzne faze sa Biotage C1830 g SNAP kolonom (Faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (33 mg, 50%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.27 - 8.37 (m, 2 H), 8.17 - 8.24 (m, 1 H), 8.06 - 8.15 (m, 1 H), 7.68 - 7.83 (m, 1 H), 7.49 -7.65 (m, 5 H), 7.28 - 7.45 (m, 2 H), 6.85 - 7.01 (m, 1 H), 4.84 - 5.09 (m, 1 H), 1.40 - 1.58 (m, 3 H). UPLC-MS:
3.84 min, 400 [M+H]+, metoda 6.
Primer 110
2-amino-N-(1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid
[0631]
[0632] 3-(1-aminoetil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on hidrohlorid (intermedijer E2, 50 mg, 0.166 mmol), 2-aminopirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksilna kiselina (32.5 mg, 0.182 mmol), HOBt (30.4 mg, 0.199 mmol), HBTU (17.25 mg, 0.033 mmol) i DIPEA (61.0 µl, 0.349 mmol) su reagovali u DCM (1 ml) na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Sirovi produkt je prečišćen hromatografijom reverzne faze sa Biotage C1830g SNAP kolonom (Faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (20 mg, 28 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.86 - 8.97 (m, 1 H), 8.48 - 8.62 (m, 1 H), 8.19 - 8.31 (m, 1 H), 7.97 - 8.12 (m, 1 H), 7.72 - 7.83 (m, 1 H), 7.46 - 7.66 (m, 5 H), 7.34 - 7.45 (m, 1 H), 6.98 - 7.09 (m, 1 H), 6.85 - 6.96 (m, 1 H), 6.36 (s, 2 H),
4.70 - 5.02 (m, 1 H), 1.32 - 1.57 (d, 3 H). UPLC-MS: 4.29 min, 426 [M+H]+, metoda 6
Primer 112
3-(1-(4-amino-3-(1H-indazol-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0633]
[0634] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 52 od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer D2a, 50 mg, 0.098 mmol), i 4-(trimetilstanil)-1H-indazola (Intermedijer G19, 41.4 mg, 0.147 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (19 mg, 39 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.30 (s, 1 H), 8.13 - 8.27 (m, 2 H), 8.04 - 8.12 (m, 1 H), 7.70 - 7.79 (m, 1 H), 7.35 - 7.68 (m, 7 H), 7.25 - 7.34 (m, 1 H), 7.12 - 7.24 (m, 1 H), 6.82 - 6.96 (m, 1 H), 5.67 - 5.82 (m, 1 H), 1.68 - 1.97 (m, 3H). UPLC-MS: 3.92 min, 500 [M+H]+, metoda 6
Primer 115
3-(1-(6-amino-9H-purin-9-il)etil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on
[0635]
[0636] 3-(1-Bromoetil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on hidrobromid (intermedijer C16, 52 mg, 0.113 mmol), N6,N6-bis(terc-Butoksikarbonil)-adenin (74.1 mg, 0.221 mmol), K2CO3(30.5 mg, 0.221 mmol) su reagovali u DMF (0.5ml) na 80°C. Sirovi produkt je prečišćen hromatografijom reverzne faze sa Biotage C1830 g SNAP kolonom (Faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) i obnovljen materijal je zatim tretiran sa HCl 37% pre evaporacije da bi se dobio sirovi produkt koji je dalje prečišćen hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 12 g SNAP kolonom (faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (25 mg, 69%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.07 - 11.37 (bs, 1 H), 8.65 (s, 1 H), 8.31 (s, 2 H), 8.21 (d, J=7.50 Hz, 1 H), 7.95 (m, 1 H), 7.80 - 7.87 (m, 1 H), 7.62 - 7.72 (m, 1 H), 7.52 (d, J=2.65 Hz, 1 H), 7.29 (d, J=3.09 Hz, 1 H), 7.22 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 5.68 (d, J=7.06 Hz, 1 H), 4.65 (s, 2 H), 4.01 (m, 4 H), 3.81 (m, 4 H), 3.28 - 3.40 (m, 4 H), 3.15 (m, 4 H), 1.92 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 3.49 min, 489 [M+H]+, metoda 3.
Primer 116
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(6-metoksipiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on
[0638] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 21, od terc-Butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamata (82 mg, 0.172 mmol) i 3-(1-bromoetil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C17, 100 mg, 0.194 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (45 mg, 45.9 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.00 - 9.40 (bs, 1 H), 8.46 (br. s., 2 H), 8.14 - 8.35 (m, 2 H), 7.72 - 7.96 (m, 2 H), 7.63 (m, 1 H), 7.00 (m, 2 H), 5.08 (m, 1 H), 3.95 (s, 3 H), 1.42 - 1.73 (m, 3 H). UPLC-MS: 3.757 min, 415 [M+H]+, metoda 3 Primer 117
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on
[0639]
[0640] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 21 od terc-Butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamata (169 mg, 0.353 mmol) i 3-(1-bromoetil)-4-(6-metoksipridin-3-il)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C12, 108 mg, 0.321 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (12 mg, 17.7 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.55 (br. s., 1 H), 9.40 (s, 1 H), 8.45 - 8.64 (m, 2 H), 8.21 (d, J=7.50 Hz, 1 H), 8.11 (s, 1 H), 7.84 (t, J=7.72 Hz, 1 H), 7.65 (t, J=7.50 Hz, 1 H), 7.09 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 5.16 (m, 1 H), 1.62 (d, J=7.06 Hz,
3 H). UPLC-MS: 4.14 min, 391 [M+H]+, metoda 7.
Primer 122
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(1H-pirazol-4-il)-1H-izohromen-1-on
[0641]
[0642] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 43, od 3-(1-aminoetil)-4-(1H-pirazo1-4-il)-1H-izohromen-1-on dihidrohlorida (intermedijer E4, 50 mg, 0.152 mmol) 6-hloro-9H-purina (35.3 mg, 0.229 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (19 mg, 30.4 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.13 - 9.44 (bs, 1 H), 8.52 (d, J=12.79 Hz, 2 H), 8.16 (d, J=7.50 Hz, 1 H), 7.73 - 7.88 (m, 3 H), 7.58 (m, 1 H), 7.19 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 5.07 - 5.40 (m, 1 H), 1.54 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 3.60
min, 374 [M+H]+, metoda 7.
Primer 123
4-amino-6-((1-(1-okso-4-(1H-pirazol-4-il)-1H-izohromen-3-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril hidrohlorid
[0643]
[0644] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 43, od 3-(1-aminoetil)-4-(1H-pirazol-4-il)-1H-izohromen-1-on dihidrohlorida (intermedijer E4, 50 mg, 0.152 mmol) 4-amino-6-bromopirimidin-5-karbonitrila (39.4 mg, 0.198 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (19 mg, 30.4 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.19 (d, J=7.06 Hz, 1 H), 8.01 (s, 1 H), 7.77 (m, 4 H), 7.60 (t, J=7.72 Hz, 1 H), 7.41 (br. s., 2 H), 7.20 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 5.12 (t, J=6.84 Hz, 1 H), 1.44 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 3.84 min, 374
[M+H]+, metoda 7.
Primer 124
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(2-aminopirimidin-5-il)-1H-izohromen-1-on
[0645]
[0646] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 21 od terc-butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamata (25.8 mg, 0.054 mmol) 4-(2-aminopirimidin-5-il)-3-(1-bromoetil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer C34, 17 mg, 0.094 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (7 mg, 35.6 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.18 - 9.44 (bs, 1 H), 8.29 - 8.55 (m, 4 H), 8.19 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 7.81 (m, 1 H), 7.62 (m, 1 H), 6.81 - 7.43 (m, 3 H), 4.95 - 5.24 (m, 1 H), 1.60 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 3.28 min, 401 [M+H]+, metoda 7.
Primer 126
3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(4-(piperazin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on dihidrohlorid
[0647]
[0648] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 21 od terc-butil 9-tritil-9H-purin-6-ilkarbamata (130 mg, 0.273 mmol) tertc-butil 4-(4-(3-(1-bromoetil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)benzil)piperazin-1-karboksilata (intermedijer
C35, 17 mg, 0.094 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (22.8 mg, 17.7 %).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.98 - 9.32 (m, 1 H), 8.33 (br. s., 1 H), 8.22 (d, J=7.50 Hz, 1 H), 7.51 - 7.85 (m, 5 H), 7.45 (d, J=6.17 Hz, 1 H), 6.95 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 4.86 - 5.25 (m, 1 H), 2.84 - 3.24 (m, 10 H), 1.56 (d, J=7.06 Hz,
3 H). UPLC-MS: 4.48 min, 482 [M+H]+, metoda 7.
Primer 127
3-(1-(4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(piperazin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0649]
[0650] terc-butil 4-(4-(3-(1-bromoetil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)benzil)piperazin-1-karboksilat (intermedijer C35, 60 mg, 0.114 mmol), 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (30.7 mg, 0.228 mmol), i K2CO3(31.4 mg, 0.228
mmol) su mešani u DMF (0.7 ml) na 80°C tokom 3 sata. Reakcina smeša je razblažena sa 1M HClvodenom(1 ml) i prečišćena hromatografijom reverzne faze sa Biotage C18 SNAP 60 g kolonom (faza A, voda 95%, ACN 5%, mravlja kiselina 0.1%); Faza B ACN 95%, voda 5%, mravlja kiselina 0.1%). Skupljene frakcije su dodate sa 37% HClvodene(1ml) i koncentrovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (26 mg, 44%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.49 (br s, 0.5 H), 8.23-8.20 (m, 1H), 8.12 (br s, 0.5 H), 8.09 (br s, 1H), 8.01 (br s, 1H), 7.80-7.62 (m, 4H), 7.42-7.38 (m, 1.5H), 7.25-7.23 (m, 0.5 H) 6.90-6.88 (d, 1H), 5.65-5.55 (m, 1H), 2.54 (m, 3H),
1.81 (t, 3H). UPLC-MS: 3.78 min, 482 [M+H]+, metoda 3.
Primer 133
benzil 4-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat
[0651]
[0652] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 51, od benzil 4-(3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (Intermedijer D22, 334 mg, 0.515 mmol) i (3-fluoro-5-hidroksifenil)boronske kiseline (161 mg, 1.030 mmol da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (190 mg, 58.3%) kao žućkasta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.23 (br. s., 1 H), 8.02 - 8.50 (m, 3 H), 7.56 - 7.92 (m, 3 H), 7.38 (br. s., 1 H), 6.75 - 7.26 (m, 4 H), 6.57 - 6.73 (m, 1 H), 5.93 (q, J=7.06 Hz, 1 H), 4.56 (br. s., 2 H), 3.43 (br. s., 7 H), 1.84 (d, J=7.06 Hz, 3 H). UPLC-MS: 4.87 min, 633.0 [M+H]+, metoda 6
Primer 134
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(piperazin-1-ilmetil)
tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on dihidrohlorid
[0653]
Korak a. benzil 4-((5-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-il)metil)piperazin-1-karboksilat
[0654]
[0655] benzil 4-((5-(3-(1-hidroksietil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-il)metil)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer B38, 903 mg, 1.790 mmol) je rastvoren u 20 ml suvog, zatim je dodat polako tribromofosfin 1M u DCM (2684 ul, 2.68 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena dodatkom 60 ml NaHCO3zas. rast. i ekstrahovana sa DCM (100 ml). Faze su razdvojene da bi se dobila mlečna organska faza. 30 ml CAN su dodati i rastvor je postao bistar. Smeša je koncentrovana do suvoće da bi ostala beličasta čvrsta supstanca. U zasebnoj bočici od 30ml, 3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (Intermedijer G1, 510 mg, 1.969 mmol) i kalijum karbonat (742 mg, 5.37 mmol) su suspendovani u 10 ml DMF i smeša je zagrevana na 60°C tokom 15 minuta pre dodatka bromida rastvorenog u 5 ml suvog DMF-a. Reakcija je mešana tokom sledećeg sata na sobnoj temperaturi. Zatim je reakcija ugašena sa NaHCO3vod. (40 ml) i ekstrahovana sa DCM (80 ml), zatim koncentrovana da bi ostala smeđa čvrsta supstanca koja je prečišćena hromatografijom eluiranjem sa DCM:MeOH da se dobije benzil 4-((5-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-il)metil)piperazin-1-karboksilat (460 mg, 0.617 mmol, 34.5 % prinos) kao smeđa čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 1.99 min, 746.09 [M+H]+, metoda 10
Korak b.
[0656] U 250 ml laboratorijsku bocu sa okruglim dnom opremljenu magnetnom mešalicom benzil 4-((5-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksiufenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-il)metil)piperazin-1-karboksilat (460 mg, 0.617 mmol) je suspendovan u 20 ml suvom dihlorometanu zatim 1M tribromoboran u DCM (5 ml) je dodat i smeša je mešana tokom noći na sobnoj temperaturi. MeOH (15 ml) i 1M HCl (5 ml) su dodati i smeša je mešana tokom 30 min, zatim su organski rastvarači evaporisani, i sirova supstanca je prečišćena hromatografijom reverzne faze eluiranjem sa H2O/MeCN/HCOOH 95:5:0.1% i MeCN/H2O/HCOOH 95:5:0.1%, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (254 mg, 0.379 mmol, prinos 61.4%) kao beličasta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.16 - 8.29 (m, 2 H), 8.11 (s, 1 H), 7.75 - 7.91 (m, 1 H), 7.52 - 7.69 (m, 1 H), 7.15 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 6.76 - 7.05 (m, 4 H), 6.66 (d, J=10.85 Hz, 1 H), 5.97 (q, J=7.13 Hz, 1 H), 3.67 (br. s., 2 H), 2.80 (br. s., 4 H), 2.41 (br. s., 4 H), 1.84 (d, J=7.23 Hz, 3 H). UPLC-MS: 1.32 min, 597.99 [M+H]+, metoda 10
Intermedijer 135
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((4-metilpiperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on, dihidrohlorid
[0657]
Korak a, 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((4-metilpiperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on
[0658]
[0659] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 134, koraka a, od 3-(1-hidroksietil)-4-(5-((4-metilpiperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B39, 411 mg, 1.069 mmol), i 3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (intermedijer G1, 305 mg, 1.176 mmol) da bi se dobio 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((4-metilpiperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on (420 mg, 0.671 mmol, 62.8 % prinos) kao smeđa čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 1.52 min, 626.17 [M+H]+, metoda 10
Korak b.
[0660] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 134, koraka b, od 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((4-metilpiperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on (410 mg, 0.655 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (100 mg, 0.146 mmol, 22.29 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.17 (br. s., 1 H), 8.21 (dd, J=7.89, 0.66 Hz, 1 H), 8.13 (s, 1 H), 8.11 (s, 1 H), 7.78 - 7.87 (m, 1 H), 7.58 - 7.70 (m, 1 H), 7.15 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 6.85 - 7.02 (m, 3 H), 6.83 (dd, J=8.88, 1.64 Hz, 1 H), 6.66 (dt, J=10.85, 2.30 Hz, 1 H), 5.96 (d, J=6.91 Hz, 1 H), 3.71 (br. s., 2 H), 3.29 (s, 3 H), 2.54 - 2.77 (m, 4 H), 2.39 (br. s., 4 H), 1.84 (d, J=6.91 Hz, 3 H). UPLC-MS: 1.29 min, 611.71 [M+H]+, metoda 10
Primer 136
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(3-(dimetilamino)propil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on, Format
[0661]
Korak a. 3-(1-(4-amino-3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(3-(dimetilamino) prop-1-en-1-il)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on.
[0662]
[0663] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 134, koraka a, od 4-(5-(3-(dimetilamino)prop-1-en-1-il)tiofen-2-il)-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B40, 220 mg, 0.619 mmol), i 3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (Intermedijer G18, 125 mg, 0.37 mmol) da bi se dobio 3-(1-(4-amino-3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(3-(dimetilamino)prop-1-en-1-il)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on (180 mg, 0.268 mmol, 43.2 % prinos) kao smeđe ulje.
UPLC-MS: 1.86 min, 673.3 [M+H]+, metoda 10.
Korak b.
[0664] 3-(1-(4-amino-3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(3-(dimetilamino)prop-1-en-1-il)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on (180 mg, 0.268 mmol) je rastvoren u 15 ml EtOH zatim je dodat paladijum na ugljeniku 5% (28.5 mg, 0.268 mmol), zatim pod atmosferom Ar trietilsilan (2 ml, 12.52 mmol). Smeša je filtrirana, zatim je sirova supstanca koncentrovana i prečišćena hromatografijom reverzne faze C1830g+12g eluiranjem sa H2O/MeCN/HCOOH 95:5:0.1% i MeCN/H2O/HCOOH 95:5:0.1% da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (20 mg, 0.032 mmol, 11.85 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.17 - 8.29 (m, 3 H), 8.12 (s, 1 H), 7.71 - 7.87 (m, 2 H), 7.56 - 7.69 (m, 1 H), 7.37 - 7.56 (m, 1 H), 7.15 (d, J=8.38 Hz, 1 H), 6.76 - 6.94 (m, 4 H), 6.66 (d, J=10.58 Hz, 1 H), 5.96 (d, J=7.06 Hz, 1 H), 2.78 (t, J=7.28 Hz, 2 H), 2.28 (t, J=6.84 Hz, 2 H), 2.16 (s, 6 H), 1.84 (d, J=7.06 Hz, 3 H), 1.70 (t, 2 H). UPLC-MS: 0.81 min, 585.25 [M+H]+, metoda 9.
Primer 137
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on,
[0665]
Korak a. 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((4-metilpiperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on.
[0666]
[0667] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 134, koraka a, od 4-(3-(3-(dimetilamino)prop-1-en-1-il)fenil)-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B42, 280 mg, 0.801 mmol), i 3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (Intermedijer G18, 0.417 mmol, 140 mg) da bi se dobio 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((4-metilpiperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on (120 mg, 0.18 mmol, 43 % prinos) kao žuto ulje.
UPLC-MS: 1.91 min, 667.27 [M+H]+, metoda 10
Korak b
[0668] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 136, koraka b, od 3-(1-(4-amino-3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(3-(dimetilamino)prop-1-en-1-il)fenil)-1H-izohromen-1-on da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (120 mg, 0.18 mmol, 43.1 % prinos ) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.46 - 1.63 (m, 1 H), 1.70 - 1.88 (m, 4 H), 2.08 (br. s., 3 H), 2.14 - 2.25 (m, 4 H), 2.30 -2.37 (m, 1 H), 2.40 - 2.48 (m, 1 H), 2.60 - 2.72 (m, 1 H), 5.74 (sxt, J=6.98 Hz, 1 H), 6.55 - 6.99 (m, 6 H), 7.13 -7.86 (m, 6 H), 8.02 - 8.30 (m, 3 H). UPLC-MS: 1.37 min, 579.3 [M+H]+, metoda 10.
Primeri 137a (enantiomer 1) i 137b (enantiomer 2): 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomeri.
[0669] Racemat 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on format (primer 137, 0.020 g, 0.860 mmol) je rastvoren u 2 ml Etanola i podvrgnut hiralnoj rezoluciji Hiralnom preparativnom hromatografijom. Uslovi: Kolona: Hiralpak lC (25 x 2 cm), 5 um; Mobilna faza: n-Heksan/(2-Propanol/Metanol 1/1 0.1% izopropilamina) 65/35v/v; Brzina protoka: 16 ml/min; DAD otkrivanje: 220 nm; Petlja: 500 µl; Injekcija: 5 mg (svaka injekcija).
[0670] Frakcije koje sadrže prvi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće da bi se dobilo jedinjenje 137a (prvi eluirani enantiomer, 6.8 mg, 0.0117 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A15): Rt = 7.4 min, ee > 99%.
<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8.29 - 8.33 (m, 1 H), 8.05 - 8.08 (m, 1 H), 7.64 - 7.71 (m, 1 H), 7.55 - 7.61 (m, 1 H), 7.10 - 7.43 (m, 3 H), 6.87 - 6.97 (m, 2 H), 6.81 - 6.87 (m, 1 H), 6.60 - 6.70 (m, 2 H), 5.85 - 5.97 (m, 1 H), 2.24 - 2.73 (m, 10 H), 1.86 - 1.96 (m, 4 H), 1.61 - 1.71 (m, 1 H). UPLC-MS: 0.69 min, 579.4 [M+H]+, metoda 14.
[0671] Frakcije koje sadrže drugi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće da bi se dobilo jedinjenje 137b (drugi eluirani enantiomer , 6.3 mg, 0.0109 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A15): Rt = 8.4 min, ee = 96.4%.
<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8.28 - 8.33 (m, 1 H), 8.04 - 8.08 (m, 1 H), 7.63 - 7.71 (m, 1 H), 7.55 - 7.61(m, 1 H), 7.10 - 7.42 (m, 3 H), 6.86 - 6.96 (m, 2 H), 6.79 - 6.86 (m, 1 H), 6.59 - 6.70 (m, 2 H), 5.85 - 5.97 (m, 1 H), 2.24
- 2.72 (m, 7 H), 2.17 (s, 3 H), 1.82 - 1.94 (m, 4 H), 1.57 - 1.67 (m, 1 H). UPLC-MS: 0.69 min, 579.4 [M+H]+, metoda 14.
Primer 138
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on, format
[0672]
Korak a. 3-(1-(4-amino-3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(3-(dimetilamino) prop-1-en-1-il)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0673]
[0674] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 134, koraka a, od 4-(4-(3-(dimetilamino)prop-1-en-1-il)fenil)-3-(1-hidroksietil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer B45, 220 mg, 0.630 mmol) i 3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (Intermedijer G18, 0.63 mmol, 211 mg) da bi se dobio 3-(1-(4-amino-3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(3-(dimetilamino)prop-1-en-1-il)fenil)-1H-izohromen-1-on (120 mg, 0.18 mmol, 43.1 % prinos) kao žuto ulje.
UPLC-MS: 2.01 min, 667.21 [M+H]+, metoda 10
Korak b.
[0675] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 136, koraka b, od 3-(1-(4-amino-3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(3-(dimetilamino)prop-1-en-1-il)fenil)-1H-izohromen-1-on (162 mg, 0.243 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (17 mg, 0.027 mmol, 11.20 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.03 - 10.35 (bs, 1 H), 8.22 (dd, J=7.89, 0.92 Hz, 1 H), 8.17 (s, 1 H), 8.07 (s, 1H), 7.76 (t, 1 H), 7.62 (t, 1 H), 7.32 (dd, J=19.81, 1.83 Hz, 2 H), 7.12 - 7.20 (m, 1 H), 6.97 (m, 1 H), 6.86 - 6.92 (m, 2 H), 6.78 - 6.85 (m, 1 H), 6.61 - 6.68 (m, 1 H), 5.75 (d, J=6.97 Hz, 1 H), 2.61 (d, J=7.70 Hz, 2 H), 2.32 (m, 2 H), 2.20 (s, 6 H, 3 H each), 1.82 (d, J=6.97 Hz, 3 H), 1.68 - 1.78 (m, 2 H). UPLC-MS: 1.35 min, 579.2 [M+H]+, metoda 10
Primeri 138a (enantiomer 1) i 138b (enantiomer 2): 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomeri
[0677] Racemat 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on format (primer 138, 0.010g, 0.016 mmol) je rastvoren u Etanol/Metanol 1/1 (3 ml) i podvrgnut hiralnoj rezoluciji Hiralnom preparativnom hromatografijom. Uslovi:Kolona: Hiralpak lC (25 x 2.0 cm), 5 µ; Mobilna faza: n-heksan/(2-Propanol/Metanol 1/1 0.1% izopropilamin) 60/40% v/v; Brzina protoka: 16 ml/min; DAD otkrivanje: 220 nm; Petlja: 1000 µ1; Injekcija: 3.3 mg (svaka injekcija).
[0678] Frakcije koje sadrže prvi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće da bi se dobilo jedinjenje 138a (prvi eluirani enantiomer, 3.1 mg, 0.005 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A15): Rt = 7.3 min, ee> 99%.
<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8.27 - 8.32 (m, 1 H), 8.06 (s, 1 H), 7.63 - 7.69 (m, 1 H), 7.53 - 7.60 (m, 1 H), 7.28 -7.33 (m, 1 H), 7.20 - 7.26 (m, 1 H), 7.04 - 7.09 (m, 1 H), 6.93 (d, 1 H), 6.88 - 6.90 (m, 1 H), 6.81 - 6.86 (m, 1 H), 6.74 - 6.78 (m, 1 H), 6.63 (dt, 1 H), 5.93 (q, 1 H), 2.57 - 2.68 (m, 4 H), 2.44 (s, 6 H), 1.81 - 1.94 (m, 5 H). UPLC-MS: 0.69 min, 579.5 [M+H]+, metoda 13.
[0679] Frakcije koje sadrže drugi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće da bi se dobilo jedinjenje 138b (drugi eluirani enantiomer, 3.0 mg, 0.005 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A15): Rt = 8.0 min, ee = 93.2%.
<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8.26 - 8.32 (m, 1 H), 8.06 (s, 1 H), 7.63 - 7.69 (m, 1 H), 7.53 - 7.60 (m, 1 H), 7.27 -7.34 (m, 1 H), 7.20 - 7.26 (m, 1 H), 7.03 - 7.09 (m, 1 H), 6.93 (d, 1 H), 6.88 - 6.90 (m, 1 H), 6.81 - 6.86 (m, 1 H), 6.73 - 6.78 (m, 1 H), 6.63 (dt, 1 H), 5.92 (q, 1 H), 2.52 - 2.69 (m, 4 H), 2.41 (s, 6 H), 1.79 - 1.94 (m, 5 H). UPLC-MS:0.69 min, 579.5 [M+H]+, metoda 13.
Primer 139
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on, dihidrohlorid
[0680]
Korak a. 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on.
[0681]
[0682] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao u primeru 134, koraka a, od 3-(1-hidroksietil)-4-(4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B46, 750 mg, 1.982 mmol) i 3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (Intermedijer G1, 565 mg, 2.18 mmol) da bi se dobio 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on (98 mg, 0.158 mmol, 7.98 % prinos) kao smeđa čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 1.53 min, 620.20 [M+H]+, metoda 10.
Korak b
[0683] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 134, koraka b, od 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on (98 mg, 0.158 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (48 mg, 0.071 mmol, 44.7 % prinos ) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.09 - 10.24 (bs, 1 H), 8.22 (dd, J=8.06, 0.82 Hz, 1 H), 8.04 (s, 1 H), 7.72 - 7.80 (m, 1 H), 7.59 - 7.66 (m, 1 H), 7.30 - 7.44 (m, 2 H), 7.22 (dd, J=7.89, 1.32 Hz, 1 H), 6.89 (d, J=1.97 Hz, 4 H), 6.62 - 6.70 (m, 1 H), 5.76 (d, J=7.23 Hz, 1 H), 3.29 (m, 4 H), 2.38 - 2.45 (m, 4 H), 1.81 (d, J=7.23 Hz, 3 H). UPLC-MS: 1.27 min, metoda 10.
Primer 140
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(pirolidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on, hidrohlorid
[0684]
Korak a. 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(pirolidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0685]
[0686] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao u primeru 134, koraka a, od 3-(1-hidroksietil)-4-(4-(pirolidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B47, 380 mg, 1.088 mmol) i 3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (Intermedijer G1, 310 mg, 1.197 mmol) da bi se dobio 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(pirolidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on (170 mg, 0.288 mmol, 26.5 % prinos) kao smeđa čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 0.80 min, 591.25 [M+H]+, metoda 9
Korak b.
[0687] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao u primeru 134, koraka b, od 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(pirolidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on (170 mg, 0.288 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (126 mg, 0.206 mmol, 71.4 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.
[0688]<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.21 (br. s., 2 H), 8.24 (dd, J=7.89, 0.99 Hz, 1 H), 8.03 - 8.17 (m, 2 H), 7.44 - 7.85 (m, 5 H), 7.22 (dd, J=7.73, 1.81 Hz, 1 H), 6.80 - 6.96 (m, 3 H), 6.68 (dt, J=10.85, 2.30 Hz, 1 H), 5.73 (q, J=7.13 Hz, 1 H), 4.40 (d, J=5.59 Hz, 2 H), 3. 30 (m, 2 H), 3.10 (dd, J=10.69, 7.07 Hz, 2 H), 2.07 (br. s., 2 H), 1.88 - 2.00 (m, 2 H), 1.83 (d, J=6.91 Hz, 3 H). UPLC-MS: 1.23 min, 577.27 [M+H]+, metoda 10.
Primer 141
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(piperidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on, hidrohlorid
[0689]
Korak a. 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(piperidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0690]
[0691] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao u primeru 134, koraka a, od 3-(1-hidroksietil)-4-(4-(piperidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B48, 720 mg, 1.981 mmol) i 3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (Intermedijer G1, 565 mg, 2.17 mmol) da bi se dobio 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(piperidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on (850 mg, 1.40 mmol, 71.0 % prinos) kao smeđa čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 1.53 min, 605.23 [M+H]+, metoda 10
Korak b.
[0692] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao u primeru 134, koraka b, od 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(piperidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on (850 mg, 1.406 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (420 mg, 0.67 mmol, 47.6 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.10 - 10.23 (m, 1 H), 8.24 (dd, J=7.89, 0.99 Hz, 1 H), 8.05 (s, 1 H), 7.77 (t, 1 H), 7.64 (t, 1 H), 7.31 - 7.60 (m, 3 H), 7.02 - 7.16 (m, 1 H), 6.86 - 6.94 (m, 2 H), 6.77 - 6.84 (m, 1 H), 6.66 (d, J=10.85 Hz, 1 H), 5.75 (d, J=6.91 Hz, 1 H), 3.72 - 4.21 (m, 2 H), 2.62 - 3.16 (m, 4 H), 1.82 (m, 9 H). UPLC-MS: 1.34 min, 591.17
[M+H]+, metoda 10.
Primer 142
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0693]
Korak a. 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0694]
[0695] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao u primeru 134, koraka a, od 3-(1-hidroksietil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on (Intermedijer B49, 350 mg, 0.925 mmol) i 3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (Intermedijer G1, 264 mg, 1.017 mmol) da bi se dobio 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H- izohromen-1-on (196 mg, 0.316 mmol, 34.2 % prinos) kao smeđa čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 0.82 min, 620.33 [M+H]+, metoda 9.
Korak b.
[0696] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao u primeru 134, koraka b, od 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on (196 mg, 0.316 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (137 mg, 0.202 mmol, 63.8 % prinos ) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.20 (d, J=10.85 Hz, 1 H), 8.23 (ddd, J=7.89, 3.29, 0.99 Hz, 1 H), 8.15 (s, 1 H), 8.11 (s, 1 H), 7.73 - 7.82 (m, 1 H), 7.60 - 7.69 (m, 1 H), 7.23 - 7.57 (m, 4 H), 7.03 (d, J=6.91 Hz, 1 H), 6.86 - 6.94 (m, 2 H), 6.78 - 6.86 (m, 1 H), 6.68 (ddt, J=10.89, 6.54, 2.30, 2.30 Hz, 1 H), 5.61 - 5.87 (m, 1 H), 3.34 (br. s., 4 H), 2.52 - 3.20 (m, 9 H), 1.76 -1.90 (m, 3 H). UPLC-MS: 2.78 min, 606.1 [M+H]+, metoda 9.
Primer 143
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(piperidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on, Format
[0697]
Korak a. 3-(1-(4-amino-3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(piperidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on
[0698]
[0699] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno jedinjenju intermedijera B37, od 3-(3-(1-(4-amino-3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)benzaldehda (Intermedijer F6, 150 mg, 0.245 mmol), i PIPERIDINA (0.486 ml, 4.90 mmol) da bi se dobio 3-(1-(4-amino-3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(piperidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on (103 mg, 0.151 mmol, 61.7 % prinos) kao beličasta čvrsta supstanca.
UPLC-MS: 2.08 min, 667.32 [M+H]+, metoda 10
Korak b.
[0700] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 136, koraka b, od 3-(1-(4-amino-3-(3-(benziloksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(piperidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on (103 mg, 0.151 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (13 mg, 13.5 %) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.15 - 8.35 (m, 3 H), 8.06 (d, J=4.41 Hz, 1 H), 7.76 (d, J=7.50 Hz, 1 H), 7.57 - 7.66 (m, 1 H), 7.39 - 7.51 (m, 1 H), 7.19 - 7.37 (m, 3 H), 6.74 - 7.06 (m, 5 H), 6.66 (d, J=11.03 Hz, 1 H), 5.56 - 5.83 (m,
1 H), 2.37 (m, 2 H), 2.18 (d, 3 H), 1.71 - 1.88 (m, 2 H), 1.18 - 1.65 (m, 8 H). UPLC-MS: 1.38 min, 591.30[M+H]+, metoda 10 Primer 144
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0701]
Korak a. 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0702]
[0703] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prateći postupak prikazan za jedinjenje D1, 3-(1-bromoetil)-4-(2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrobromid (Intermedijer C39, 267 mg, 0.567 mmol) i Intermedijer G1 (147 mg, 0.567 mmol) da bi se dobio 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid (230 mg, 0.380 mmol, 67.1 % prinos) kao svetlo žuti prah.
UPLC-MS: 0.93 min, 568.7 [M+H]+, metoda 9
Korak b.
[0704] 1M Bor tribromid u DCM (2.1 ml, 2.100 mmol) je dodat u rastvor 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-metoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4 (2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorida (226 mg, 0.373 mmol) u DCM (12 ml) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. Suspenzija je polako dodata na 0°C u EtOH. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje RP-fleš hromatografijom (Biotage 30 g C18 kolona, gradijentna elucija od 100:0 do 60:40 A/B u 15 CV; A: voda/MeCN 95/5 0.01% HCOOH, B: voda/MeCN 5/95 0.01% HCOOH) je dalo jedinjenje iz naslova (168 mg, 0.284 mmol, 76% prinos) kao bliedožuti prah.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.07 - 10.45 (bs, 1 H), 9.11 - 9.49 (m, 1 H), 8.43 (d, J=2.30 Hz, 1 H), 8.07 - 8.25 (m, 1 H), 7.55 - 8.01 (m, 3 H), 6.95 (dt, J=19.07, 1.64 Hz, 1 H), 6.66 - 6.90 (m, 2 H), 5.94 - 6.18 (m, 1 H), 2.94 (d, J=18.09 Hz, 1 H), 2.89 (m, 1 H), 1.87 - 2.06 (d, 3 H), 1.48 - 1.72 (m, 12 H). UPLC-MS: 2.69 min, 555.1 [M+H]+, metoda 6
Primer 145
3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(2,2,6,6-tetrametil-l,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on dihidrohlorid
[0705]
Korak a. 3-(1-(4-amino-3-(5-metoksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0706]
[0707] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao u intemedijeru D1, od 3-(1-bromoetil)-4-(2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrobromida (Intermedijer C39, 0.100 g, 0.212 mmol) i 3-(5-metoksipridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (0.051 g, 0.212 mmol) da bi se dobio 3-(1-(4-amino-3-(5-metoksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on-hidrohlorid (56.0 mg, 0.095 mmol, 44.9 % prinos) kao beli prah.
UPLC-MS: 0.87 min, 551.8 [M+H]+, metoda 9.
Step b.
[0708] Jedinjenje je pripremljeno prateći postupak prikazan za jedinjenje Primera 144, od 3-(1-(4-amino-3-(5-metoksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorida (53.7 mg, 0.091 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (17.6 mg, 0.029 mmol, 31.6 % prinos) kao beli prah.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.98 - 10.30 (bs, 1 H), 6.89 - 8.32 (m, 10 H), 5.88 - 6.13 (m, 2 H), 3.45 (m, 1 H), 2.96 (m, 1 H), 1.98 (d, J=7.23 Hz, 3 H), 0.98 - 1.60 (m, 12 H). UPLC-MS: 1.65 min, 538.1 [M+H]+, metoda 6.
Primer 150
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4 d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(azetidin-3-karbonil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on format
[0709]
Korak a. terc-butil 3-(4-(3-(l-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-karbonil)azetidin-1-karboksilat
[0710]
[0711] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prateći postupak prikazan za Primer
68, od terc-butil 3-(4-(3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-karbonil)azetidin-1-karboksilat (Intermedijer D28, 0.251 g, 0.360 mmol), i 3-fluoro-5-hidroksifenil boronske kiseline (0.112 g, 0.720 mmol) da bi se dobio terc-butil 3-(4-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-karbonil)azetidin-1-karboksilat (0.155 g, 0.227 mmol, 63.2 % prinos).
UPLC-MS: 1.03 min, 682.4 [M+H]+, metoda 9
Korak b.
[0712] 4 M HCl u 1,4-dioksanu (2 ml, 8.00 mmol) je dodato u mešani rastvor od terc-butil 3-(4-(3-(l-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-karbonil)azetidin-1-karboksilata (0.153 g, 0.224 mmol) u 1.4-dioksanu (1 ml). Nakon 1 sata mešanja na sobnoj temperaturi isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje sa RP fleš hromatografijom (Biotage Isolera, 30 g C18 kolona, gradijent elucije od 100:0 do 80:20 A/B u 15 CV; A: voda/MeCN 95/5 0.01% HCOOH, B: voda/MeCN 5/95 0.01% HCOOH) je dalo jedinjenje iz naslova (92.2 mg, 0.147 mmol, 65.5% prinos) kao beli prah.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.65 - 8.34 (m, 11 H), 6.23 (m, 2 H), 3.30 - 4.29 (m, 11 H), 1.82 (d, 3 H). UPLC-MS: 2.36 min, 582.0 [M+H]+, metoda 6.
Primer 151
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(1-metilazetidin-3-karbonil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on format
[0713]
[0714] Smeša 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(azetidin-3-karbonil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H izohromen-1-on formata (Primer 150, 71.0 mg, 0.113 mmol), DIPEA (0.020 ml, 0.113 mmol), paraformaldehida (69.3 mg, 2.30 mmol) i spatula Na2SO4u DCM (2 ml) je mešana tokom 10 minuta na sobnoj temperaturi. Zatim je dodata sirćetna kiselina (0.033 ml, 0.589 mmol), praćena natrijum triacetoksihidroboratom (82.2 mg, 0.387 mmol). Nakon 6 sati mešanja na sobnoj temperaturi, isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u DCM/EtOH 95:5 (10 ml) i ispran sa zasićenim natrijum bikarbonatom, zatim filtriran na faznom separatoru i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u DCM/MeOH 10:1 (1 ml), zatim su dodati formaldehid (0.016 ml, 0.170 mmol) i AcOH (0.014 ml, 0.250 mmol). Nakon 5 min mešanja, dodat je NaBH(OAc)3(25 mg, 0.118 mmol). Dobijena smeša je mešana tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi, zatim je koncentrovna pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje RP fleš hromatografijom (Biotage Isolera, 12 g C18 kolona, gradijentna elucija od 100:0 do 60:40 A/B u 15 CV; A: voda/MeCN 95/5 0.01% HCOOH, B: voda / MeCN 5 / 95 0.01% HCOOH) je dalo jedinjenje iz naslova (59.8 mg, 0.093 mmol, prinos 82%) kao belu čvrstu supstancu.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.90 (m, 3 H), 2.52 (t, J=5.59 Hz, 2 H), 2.75 - 4.56 (m, 12 H), 5.94 - 6.35 (m, 1H), 6.62 -6.74 (m, 1 H), 6.76 - 6.89 (m, 1 H), 6.89 - 7.01 (m, 1 H), 7.36 - 7.54 (m, 1 H), 7.57 - 7.69 (m, 1 H), 7.78 - 7.91 (m, 1 H), 8.04 -8.84 (m, 2 H), 10.04 - 10.49 (m, 1 H). UPLC-MS: 2.41 min, 596.1 [M+H]+, metoda 6.
Primer 154
3-(1-(4-amino-3-(3-hloro-5-hidroksfenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on format
[0715]
[0716] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prateći postupak prikazan za Primer 151, od 3-(1-(4-amino-3-(3-hloro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on format (Primer 152, 200 mg, 0.357 mmol), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (92.5 mg, 0.161 mmol, 45.1 % pinos) kao beli prah.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.81 - 8.40 (m, 11 H), 6.04 - 6.20 (m, 1 H), 5.96 (br. s., 1 H), 2.24 - 3.26 (m, 9 H), 1.79 -1.95 (d, 3 H) UPLC-MS: 2.60 min, 529.0 [M+H]+, metoda 6
Primer 155
3-(1-(4-amino-3-(3-hidroksi-5-(trifluorometil)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on format
[0717]
[0718] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano prateći postupak opisan za pripremu Primera 151, od 3-(1-(4-amino-3-(3-hidroksi-5-(trifluorometil)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen 1-on formata (Primer 153, 215 mg, 0.362 mmol), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (115 mg, 0.189 mmol, 52.3 % prinos) kao beli prah.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.12 - 8.28 (m, 11 H), 6.58 - 7.09 (m, 1 H), 5.97 (br. s., 1 H), 2.30 - 3.31 (m, 9 H), 1.79 -1.98 (d, 3 H). UPLC-MS: 2.85 min, 563.1 [M+H]+, metoda 6
Primer 156
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(azetidin-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on dihidrohlorid
[0719]
Korak a. 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on format
[0720]
[0721] N2je uveden u mehurićima tokom 5 min kroz suspenziju tertc-butil 4-(3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H izohromen-4-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (Intermedijer D14, 735 mg, 1.197 mmol), 3-fluoro-5-hidroksifenilboronske kiseline (0.28 g, 1.795 mmol), S-Fos-Pd-G2 (0.130 g, 0.179 mmol) i kalijum fosfata (572 mg, 2.695 mmol) u THF/voda 3:1 (8 ml). Smeša je zagrevana na 85°C tokom 1 sata MW zračenjem. Drugi zahvat je izveden u istim uslovima na smeši reagenasa u potpuno istim količinama. Dve reakcione smeše su kombinovane i konc. HCl (20 ml) je polako dodata uz mešanje. Mešanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi tokom 3 sata, zatim su isparljive supstance uklonjene pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje RP fleš hromatografijom (Biotage Isolera, 60 g C18 kolona, gradijentna elucija od 100:0 do 70:30 A/B u 15 CV; A: voda/MeCN 95/5 0.01% HCOOH, B: voda/MeCN 5/95 0.01% HCOOH) je dalo 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on format (0.990 g, 1.818 mmol, 76 % prinos) kao svetlo žuti prah.
UPLC-MS: 0.67 min, 499.2 [M+H]+, metoda 2 min
Korak b. terc-butil 3-(4-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-il)azetidin-1-karboksilat format
[0722]
[0723] Jedinjenje je pripremljeno prateći postupak opisan za sintezu Intermedijera D24, od 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on formata (300 mg, 0.551 mmol) i terc-butil 3-oksoazetidin-1-karboksilata (236 mg, 1.379 mmol), da se dobije terc-butil 3-(4-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-il)azetidin-1-karboksilat format (74.4 mg, 0.106 mmol, 19.30 % prinos).
UPLC-MS: 0.85 min, 654.3 [M+H]+, metoda 9
Korak c.
[0724] 4.0 M HCl u 1,4-dioksanu (0.5 ml, 2.000 mmol) je dodato u rastvor od terc-butil 3-(4-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-il)azetidin-1-karboksilat formata (70 mg, 0.100 mmol) u 1,4-dioksan-metanolu 3:1 (4 ml). Smeša je mešana tokom 6 sati na sobnoj temperaturi, zatim su isparljive supstance uklonjene pod sniženim pritiskom. Prečišćavanje RP-fleš hromatografijom (Biotage 30 g C18 kolona, gradijentna elucija od 100:0 do 60:40 A/B u 15 CV; A: voda/MeCN 95/5 0.01% HCOOH, B: voda/MeCN 5/95 0.01% HCOOH) je dalo jedinjenje iz naslova (57 mg, 0.091 mmol, prinos 91%) kao beli prah.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.70 - 13.40 (br. s., 1 H), 10.32 (br. s., 1 H), 9.73 (br. s., 1 H), 9.22 (br. s., 1 H), 6.71 -8.58 (m, 10 H), 5.95 - 6.37 (m, 2 H), 2.51 - 4.79 (m, 11 H), 1.76 - 2.04 (d, 3 H). UPLC-MS: 2.32 min, 554.1 [M+H]
+, metoda 6
Primer 157
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(1-(ciklopropilmetil)azetidin-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on dihidrohlorid
[0725]
[0726] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prateći postupak opisan za sintezu Intermedijara D24, od 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(azetidin-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on dihidrohlorida (Primer 156, 35 mg, 0.059 mmol) i ciklopropankarbaldehida (10.19 µl, 0.136 mmol) da bi se dobilo jedinjenje (33.8 mg, 0.050 mmol, 84 % prinos) kao beli prah.
<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.42 (br s, 2 H), 0.60 (br d, J=4.93 Hz, 2 H), 0.94 - 1.09 (m, 1 H), 1.95 (m, 3 H), 2.35 -4.59 (m, 11 H), 4.62 - 4.96 (m, 2 H), 6.01 - 8.79 (m, 12 H), 10.08 - 10.63 (br, 1 H), 11.18 - 11.66 (br, 1 H), 12.98
- 13.61 (br, 1 H). UPLC-MS: 2.68 min, 608.2 [M+H]+, metoda 6
Primer 161
3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksi-6-(trifluorometil)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0727]
[0728] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao u primeru 68, korišćenjem 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer D2a, 100 mg, 0.196 mmol) i (5-(benziloksi)-6-(trifluorometil)piridin-3-il)boronske kiseline (Intermedijer G25, 87 mg, 0.295 mmol). Dobijeni sirovi materijal je reagovao u 2-Propanolu (10 ml) sa 1 N vodenom HCl (1 ml), paladijumom na ugljeniku 5% vlažnom (0.071 mmol) i vodonikom (1 atm). Zatim, katalizator je odstranjen filtracijom preko celitnog jastučića i rastvarač je uklonjen. Ciljani produkt je prečišćenom C18 fleš hromatografijom (Snap 30 g hromatografija ((H2O/ACN)) 95:5 0.1% HCOOH}: {(ACN/H2O) 95:5 HCOOH 0.1%} od 100:0 do 0:100 dajući jedinjenje iz naslova (20 mg, 0.037 mmol, 51.8% prinos) kao belu čvrstu supstancu.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.47 (br. s., 1 H), 6.52 - 8.35 (m, 14 H), 5.82 (d, J=7.06 Hz, 1 H), 1.83 - 1.99 (d, 3 H). UPLC-MS: 3.30 min, 545.1 [M+H]+, metoda 6.
Primer 162
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-7-metil-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0729]
[0730] 3-(1-(4-Amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-7-metil-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer D29, 0.100 g, 0.19 mmol), (3-fluoro-5-hidroksifenil)boronska kiselina (0.036 g, 0.229 mmol) i PPh3(0.030 g, 0.114 mmol) su rastvoreni u smeši DMF (10 ml), EtOH (4 ml) i vode (4 ml); Na2CO3(0.101 g, 0.95 mmol) je dodat i smeša je degazirana pod azotom. Dodat je Pd(OAc)2(0.009 g, 0.038 mmol) i reakcija je zagrevana na 80°C tokom 15 min. Dodata je 1M HCl (pH ≈2) i smeša je podeljena između EtOAc i vode. Organska faza je ekstrahovana sa EtOAc i kombinovani organski slojevi su isprani nekoliko puta sa koncentrovanim rastvorom soli i osušeni preko natrijum sulfata. Rastvarač je uklonjen, i sirovi produkt je prečišćen fleš hromatografijom na Biotage silika gel ulošku (DCM do DCM: MeOH = 97: 3) da se dobije jedinjenje iz naslova (0.023 g, 0.045 mmol, 24%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.19 (s, 1 H), 8.09 (s, 1 H), 8.03 (br. s, 1 H), 7.47 - 7.69 (m, 2 H), 7.30 - 7.47 (m, 3 H), 7.09 - 7.14 (m, 1 H), 6.89 - 6.92 (m, 1 H), 6.77 - 6.86 (m, 2 H), 6.66 (dt, 1 H), 6.00 - 8.00 (m, 2 H), 5.68 - 5.76 (m, 1 H), 2.42 (s, 3 H), 1.82 (d, 3 H). UPLC-MS: 1.10 min, 508.2 [M+H]+, metoda 13.
Primer 163
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-7-hloro-4-fenil-1H-izohromen-1-on
[0731]
[0732] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno analogno primeru 162, od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-7-hloro-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer D30, 0.100 g, 0.184 mmol) i (3-fluoro-5- hidroksifenil) boronske kiseline (0.034 g, 0.22 mmol) da se dobije jedinjenje iz naslova (0.05 g, 0.094 mmol, 51%).
<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.21 (s, 1 H), 8.18 (d, 1 H), 8.10 (s, 1 H), 7.83 (dd, 1 H), 7.51 - 7.57 (m, 1 H), 7.37 - 7.49 (m, 3 H), 7.13 - 7.17 (m, 1 H), 6.86 - 6.95 (m, 2 H), 6.81 - 6.87 (m, 1 H), 6.67 (dt, 1 H), 6.00 - 8.50 (m, 2 H),
5.70 - 5.77 (m, 1 H), 1.83 (d, 3 H). UPLC-MS: 1.15 min, 527.9 [M+H]+, metoda 12.
Primer 164
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-hloro-4-fenil-1H-izohromen-1-on [0733]
[0734] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao u primeru 162, od 3-(1-(4-Amino-3-iodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-hloro-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer D31, 0.100 g, 0.184 mmol) i (3-fluoro-5-hidroksifenil)boronske kiseline (0.034 g, 0.221 mmol) da se dobije jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (0.023 g, 0.0463 mmol, 24%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.25 (br. s., 1 H), 8.22 (d, 1 H), 8.09 (s, 1 H), 7.68 (dd, 1 H), 7.51 - 7.58 (m, 1 H), 7.36 -7.49 (m, 3 H), 7.13 - 7.18 (m, 1 H), 6.88 - 6.92 (m, 1 H), 6.80 - 6.85 (m, 1 H), 6.76 (d, 1 H), 6.63 - 6.69 (m, 1 H), 6.00 - 8.00 (m, 2 H), 5.68 - 5.76 (m, 1 H), 1.82 (d, 3 H). UPLC-MS: 1.17 min, 528.3 [M+H]+, metoda 14.
Primer 165
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-fluoro-4-fenil-1H-izohromen-1-on [0735]
[0736] U hermetički zatvorenoj bočici, smeša 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-fluoro-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer D32, 0.240 g, 0.455 mmol), (3-fluoro-5-hidroksifenil)boronske kiseline (0.156 g, 1mmol) i K2CO3(0.138 g, 1 mmol) u dioksanu/H2O 4:1 (10 ml) je degazirana; Pd(dppf)Cl2(0.04 g, 0.054 mmol) je dodat i reakcija je zagrevana na 120°C tokom 4 sata. Dodata je 1M HCl (pH ≈1) i smeša je podeljena između EtOAc i vode. Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc i kombinovani organski slojevi su isprani sa koncentrovanim rastvorom soli i osušeni preko natrijum sulfata. Rastvarač je uklonjen, i sirovi produkt je prečišćen fleš hromatografijom na Biotage silika gel ulošku (cikloheksan: EtOAc = 95:5 do = 20:80) i zatim trituriran sa ACN da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (0.08 g, 0.16 mmol).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.19 (s, 1 H), 8.27 - 8.33 (m, 1 H), 8.09 (s, 1 H), 7.36 - 7.57 (m, 5 H), 7.13 - 7.18 (m, 1 H), 6.86 - 6.94 (m, 1 H), 6.80 - 6.86 (m, 1 H), 6.66 (dt, 1 H), 6.49 (dd, 1H), 6.00 - 7.80 (m, 2 H), 5.66 - 5.78 (m, 1 H), 1.83 (d, 3 H). UPLC-MS: 1.08 min, 512.2 [M+H]+, metoda 13.
Primeri 166a (Enantiomer 1) i 166b (Enantiomer 2): 4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomeri
Korak 1.4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer T.1)
[0738]
[0739] 4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(3- fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on (Primer 72, 726 mg, 1.343 mmol) je rastvoren u N,N-Dimetilformamidu (7.5 ml), praćeno dodatkom TBDMSC1 (405 mg, 2.69 mmol) i imidazola (366 mg, 5.37 mmol). Smeša je mešana tokom 3 sata na sobnoj temperaturi, zatim još 0.3 ekv. TBDMSC1 i imidazola su dodati da bi se postigao potpuni završetak reakcije. Reakcija je razblažena sa DCM (100 ml) i isprana dva puta sa 0.5M HClvodenom(50 ml), filtrirana kroz fazni separator i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu korišćenjem Biotage 100G SNAP sa gradijentom DCM i EtOH, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (635 mg, 72.2%) kao ružičasta pena.
UPLC-MS: 1.40 min, 655.0 [M+H]+, metoda 9
Korak 2. 4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomeri (T.2 i T3)
[0740]
[0741] Racemat 4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on (intermedijer T.1, 0.759 g, 1.16 mmol) je rastvoren u 14 ml Etanol/Metanol 1/1+ 6 ml n-Heksana i podvrgnut hiralnoj rezoluciji Hiralnom preparativnom hromatografijom. Uslovi: Kolona: Hiralpak AS-H (25 x 2.0 cm), 5µ; Mobilna faza: n-Heksan/(2-Propanol/Metanol 1/1+ 0.1% izopropilamina) 85/15% v/v; Brzina protoka: 17 ml/min; DAD otkrivanje: 220 nm; Petlja: 700 µ1; Injekcija: 26.6 mg/injekciji.
[0742] Frakcije koje sadrže prvi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće da se dobije intermedijar T.2 (prvi eluirani enantiomer, 0.350 g, 0.535 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A10): Rt = 13.6 min, ee> 99%. UPLC-MS: 1.32 min, 655.5 [M H] , metoda 13.
[0743] Frakcije koje sadrže drugi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće da se dobije intermedijar T.3 (drugi eluirani enantiomer, 0.365 g, 0.557 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A10): Rt = 20.6 min, ee => 99%. UPLC-MS: 1.33 min, 655.5 [M H]+, metoda 13.
Korak 3. Primeri 166a (Enantiomer 1): 4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)- 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohhromen-1-on pojedinačni enantiomer
[0744] 4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer (intermedijer T.2, prvi eluirani enantiomer pod uslovima opisanim iznad, 0.350 g, 0.535 mmol) je rastvoren u rastvoru 1M HCl u EtOH (1.7 ml) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gel ulošku (DCM do DCM: MeOH = 95: 5) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (0.270 g, 0.500 mmol, 93%). Ovo jedinjenje se pokazalo kao drugi eluirani enantiomer pod Hiralnim HPLC uslovima Metode A11: Rt = 15.8 min, ee = 99.4%.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.28 (br. s., 1 H), 8.27 - 8.54 (m, 1 H), 8.06 - 8.25 (m, 1 H), 7.80 - 7.96 (m, 1 H), 7.56 -7.72 (m, 1 H), 7.37 - 7.52 (m, 1 H), 6.79 - 6.98 (m, 2 H), 6.65 - 6.75 (m, 1 H), 6.49 - 8.83 (m, 2 H), 6.07 - 6.35 (m, 1 H), 5.27 -6.07 (m, 1 H), 3.53 - 4.33 (m, 4 H), 1.96 - 2.44 (m, 5 H), 1.62 - 1.94 (m, 3 H). UPLC-MS: 0.83 min, 541.3 [M+H]+, metoda 13.
Korak 4. Primeri 166b (Enantiomer 2) 4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)- 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer
[0745] 4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer (intermedijer T.3, drugi eluirani enantiomer pod uslovima opisanim iznad, 0.365 g, 0.557 mmol) je rastvoren u rastvoru 1M HCl u EtOH (1.78 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gel ulošku (DCM prema DCM: MeOH = 95:5) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (0.260 g, 0.481 mmol, 86%). Ovo jedinjenje se pokazalo kao prvi eluirani enantiomer pod Hiralnim HPLC uslovima Metode A11: Rt = 13.6 min, ee = 99.6%.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.28 (br. s., 1 H), 8.30 - 8.55 (m, 1 H), 8.12 - 8.24 (m, 1 H), 7.82 - 7.94 (m, 1 H), 7.57 -7.71 (m, 1 H), 7.40 - 7.51 (m, 1 H), 6.80 - 6.97 (m, 2 H), 6.63 - 6.76 (m, 1 H), 6.49 - 8.83 (m, 2 H), 6.07 - 6.32 (m, 1 H), 5.26 -6.06 (m, 1 H), 3.59 - 4.30 (m, 4 H), 1.94 - 2.48 (m, 5 H), 1.77 - 1.94 (m, 3 H). UPLC-MS: 0.83 min, 541.3 [M+H]+, metoda 13.
Primeri 167a (Enantiomer 1) i 167b (Enantiomer 2)
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen
1-on pojedinačni enantiomeri
[0746]
Korak 1.3-(1-(4-amino-3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on (intermedijer R.1)
[0747]
[0748] U rastvor 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on (260 mg, 0.519 mmol) u suvom DMF (10 ml), IMIDAZOL (0.137 ml, 2.078 mmol) i TBDMSC1(0.270 ml, 1.558 mmol) su dodati i rastvor je mešan preko noći. DMF je uklonjen i ostatak je rastvoren u DCM (50 mL) ispran sa 0.5 N vodenim rastvorom HCl. Organska faza je osušena i rastvarač je uklonjen. Sirovi produkt je prečišćen fleš hromatografijom na silikagelu (SNAP 25 g DCM: EtOH od 100: 0 do 95:5) dajući 3-(1-(4-amino-3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on (210 mg, 0.342 mmol, 65.8 % prinos) kao bledo žutu čvrstu supstancu.
UPLC-MS: 1.44 min, 615 [M+H]+, metoda 9.
Korak 2.3-(1-(4-amino-3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomeri (Intermedijer R.2 i R.3)
[0749]
[0750] Racemat 3-(1-(4-amino-3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on (intermedijer R.1, 0.210 g, 0.34 mmol) je rastvoren u EtOH (8 ml) i podvrgnut hiralnoj rezoluciji Hiralnom preparativnom hromatografijom. Uslovi: Kolona: Whelk O-1 (R, R) (25 x 2 cm), 10 um; Mobilna faza: n-Heksan/(2-Propanol 0.1% izopropilamin) 40/60% v/v; Brzina protoka: 18 ml/min; DAD otkrivanje: 220 nm; Petlja: 1000 µ1; Injekcija: 26 mg (svaka injekcija).
[0751] Frakcije koje sadrže prvi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće da se dobije intermedijar R.2 (prvi eluirani enantiomer, 0.084 g, 0.13 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A6): Rt = 14.2 min, ee> 99%.
UPLC-MS: 1.40 min, 615.4 [M+H]+, metoda 13
[0752] Frakcije koje sadrže drugi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće da se dobije intermedijar R.3 (drugi eluirani enantiomer, 0.089 g, 0.14 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A6): Rt = 18.8 min, ee = 98.6%.
UPLC-MS: 1.41 min, 615.4 [M+H]+, metoda 13
Korak 3. Primer 167a: 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer
[0753] 3-(1-(4-amino-3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer (intermedijer R2, prvi eluirani enantiomer pod uslovima opisanim iznad, 0.084 g, 0.13 mmol) je rastvoren u rastvoru 1M HCl u EtOH (0.416 ml) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Isparljive supstnce su uklonjene pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gel ulošku (DCM prema DCM: MeOH = 95:5) da se dobije jedinjenje iz naslova kao svetlo plava čvrsta supstanca (0.043 g, 0.086 mmol, 66%). Ovo jedinjenje se pokazalo kao prvi eluirani enantiomer pod uslovima Hiralne HPLC Metode A7: Rt = 16.0 min, ee > 99%.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.20 (s, 1 H), 9.29 (s, 1 H), 8.19 - 8.25 (m, 1 H), 8.14 (s, 1 H), 7.92 (br. s., 1 H), 7.80 -7.86 (m, 1 H), 7.63 - 7.70 (m, 1 H), 7.04 (d, 1 H), 6.89 - 6.92 (m, 1 H), 6.81 - 6.86 (m, 1 H), 6.64 - 6.70 (m, 1 H), 5.86 (q, 1 H), 5.75 - 8.50 (m, 2 H), 1.86 (d, 3 H). UPLC-MS: 0.87 min, 501.3 [M+H]+, metoda 13
Korak 4. Primer 167b: 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer
[0754] 3-(1-(4-amino-3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer (intermedijer R.3, drugi eluirani enantiomer pod uslovima opisanim iznad, 0.089 g, 0.14 mmol) je rastvoren u rastvoru od 1M HCl u EtOH (0.5 i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Isparljive supstnce su uklonjene pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gel ulošku (DCM prema DCM:MeOH = 95:5) da se dobije jedinjenje iz naslova kao svetlo plava čvrsta supstanca (0.048 g, 0.096 mmol, 74%). Ovo jedinjenje se pokazalo kao drugi eluirani enantiomer pod uslovima Hiralne HPLC Metode A7: Rt = 20.1 min, ee = 98.4%.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.21 (s, 1 H), 9.29 (s, 1 H), 8.20 - 8.24 (m, 1 H), 8.15 (s, 1 H), 7.92 (br. s., 1 H), 7.79 -7.86 (m, 1 H), 7.63 - 7.69 (m, 1 H), 7.04 (d, 1 H), 6.89 - 6.92 (m, 1 H), 6.80 - 6.86 (m, 1 H), 6.63 - 6.70 (m, 1 H), 5.87 (q, 1 H), 5.75 - 8.50 (m, 2 H), 1.86 (d, 3 H). UPLC-MS: 0.90 min, 501.2 [M+H]+, metoda 14
Primeri 168a (Enantiomer 1) i 178b (Enantiomer 2): 3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on hidrohlorid pojedinačni enantiomeri
Korak 1.3-(1-(4-amino-3-(5-((terc-butildimetilsilil)oksi)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer S.1)
[0756]
[0757] U mešanu smešu 3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (primer 91, 0.260 g, 0.546 mmol) i imidazola (0.093 g, 1.36 mmol) u DMF (5.0 ml) TBDMSC1 (0.206 g, 1.36 mmol) je dodato na sobnoj temperaturi i smeša je mešana tokom 2 sata. Smeša je podeljena između vode i DCM, vodena faza je ekstrahovana sa DCM i kombinovani organski slojevi su isprani sa koncentrovanim rastvorom soli i osušeni preko natrijum sulfata. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silikagel ulošku (DCM: MeOH = 95: 5 do 90:10), da se se dobije 3-(1-(4-amino-3-(5-((tercbutildimetilsilil) oksi)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on kao bela čvrsta supstanca (Intermedijer S1, 0.178 g, 0.301 mmol, 55%).
UPLC-MS: 1.41 min, 591.4 [M+H]+, metoda 13
Korak 2.3-(1-(4-amino-3-(5-((terc-butildimetilsilil)oksi)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomeri (Intermedijer S.2 i S.3)
[0758]
[0759] Racemat 3-(1-(4-amino-3-(5-((terc-butildimetilsilil)oksi)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer S. 1, 0.178 g, 0.301 mmol) je rastvoren u Etanol/DCM 1/1 (7 ml) i podvrgnut hiralnoj rezoluciji Hiralnom preparativnom hromatografijom. Uslovii: Kolona: Whelk O1 (R, R) (25 x 2.11 cm), 10 µ; Mobilna faza: n-Heksan/ (etanol+0.1% izopropilamin+10% DCM) 70/30% v/v; Brzina protoka: 17 ml/min; DAD otkrivanje: 220 nm; Petlja: 500 µ1; Injekcija: 13.5 mg/injekcija.
[0760] Frakcije koje sadrže prvi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće da se dobije intermedijar S.2 (prvi eluirani enantiomer, 0.070 g, 0.118 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A8): Rt = 18.9 min, ee > 99%. UPLC-MS: 1.43 min, 591.3 [M+H]+, metoda 16.
[0761] Frakcije koje sadrže drugi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće da se dobije intermedijar S.3 (drugi eluirani enantiomer, 0.077 g, 0.130 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A8): Rt = 21.9 min, ee = > 99%. UPLC-MS: 1.43 min, 591.3 [M+H]+, metoda 16.
Korak 3. Primer 168a (Enantiomer 1): 3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on hidrohlorid pojedinačni enantiomer
[0762] 3-(1-(4-amino-3-(5-((terc-butildimetilsilil)oksi)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer (intermedijer S.2, prvi eluirani enantiomer pod uslovima opisanim iznad, 0.070 g, 0.118 mmol) je rastvoren u rastvoru od 1M HCl u EtOH (0.38 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 sati. Isparljive supstnce su uklonjene pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gel ulošku (DCM do DCM: MeOH = 95:5) da se dobije jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (0.059 g, 0.115 mmol, 97%). Ovo jedinjenje se pokazalo kao drugi eluirani enantiomer pod uslovima Hiralne HPLC Metode A9: Rt = 15.4 min, ee > 99%.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.36 (br. s., 1 H), 8.39 - 8.48 (m, 2 H), 8.20 - 8.29 (m, 2 H), 7.95 (br. s., 2 H), 7.74 - 7.86 (m, 2 H), 7.60 - 7.66 (m, 1 H), 7.50 - 7.57 (m, 1 H), 7.37 - 7.49 (m, 3 H), 7.11 - 7.18 (m, 1 H), 6.90 (d, 1 H), 5.79
(q, 1 H), 1.87 (d, 3 H). UPLC-MS: 0.82 min, 477.3 [M+H]+, metoda 13.
Korak 4. Primer 168b (Enantiomer 2): 3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on hidrohlorid pojedinačni enantiomer
[0763] 3-(1-(4-amino-3-(5-((terc-butildimetilsilil)oksi)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer (intermedijer S.3, drugi eluirani enantiomer pod uslovima opisanim iznad, 0.077g, 0.130mmol) je rastvoren u rastvoru od HCl 1M u EtOH (0.417ml)
i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 sati. Isparljive supstnce su uklonjene pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gel ulošku (DCM prema DCM:MeOH = 95:5) da se dobije jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (0.034 g, 0.066 mmol, 51% prinos). Ovo jedinjenje se pokazalo kao prvi eluirani enantiomer pod uslovima Hiralne HPLC Metode A9: Rt =13.2 min, ee = 95.6%.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.47 (br. s., 1 H), 8.43 - 8.48 (m, 2 H), 8.28 (s, 1 H), 8.20 - 8.25 (m, 1 H), 8.04 (br. s., 2 H), 7.81 - 7.86 (m, 1 H), 7.74 - 7.81 (m, 1 H), 7.60 - 7.66 (m, 1 H), 7.50 - 7.57 (m, 1 H), 7.37 - 7.48 (m, 3 H), 7.11 -7.18 (m, 1 H), 6.89 (d, 1 H), 5.80 (q, 1 H), 1.87 (d, 3 H). UPLC-MS: 0.82 min, 477.3 [M+H]+, metoda 13.
Primer 169
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-benzil-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0765] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao u primeru 162, od 3-(1-(4-Amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-benzil-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorida (intermedijer D33, 1.828 g, 2.86 mmol), i (3-fluoro-5-hidroksifenil)boronske kiseline (0.890 g, 5.71 mmol) da bi se obezbedilo jedinjenje iz naslova (1.3 g, 2.1 mmol, 71%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.11 - 11.75 (m, 2 H), 8.09 - 8.41 (m, 2 H), 7.57 - 8.06 (m, 5 H), 7.37 - 7.56 (m, 3 H), 7.03 - 8.55 (m, 2 H), 6.81 - 7.03 (m, 2 H), 6.63 - 6.76 (m, 1 H), 5.46 - 6.34 (m, 2 H), 4.32 - 4.68 (m, 2 H), 2.07 -4.20 (m, 6 H), 1.78 - 1.98 (m, 3 H). UPLC-MS: 0.69 min, 589.5 [M+H]+, metoda 13
Primer 169a (enantiomer 1) i Primer 169b (enantiomer 2): 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-benzil-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid pojedinačni enantiomeri
[0766] Racemat 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-benzil-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid (primer 169, 0.25 g, 0.4 mmol) je rastvoren u Etanolu (5 ml) i podvrgnut hiralnoj rezoluciji Hiralnom preparativnom hromatografijom. Uslovi :Kolona: Whelk 0-1 (R,R) (25 x 2 cm), 10 um; Mobilna faza: n-Heksan/(Etanol/Metanol 1/1 0.1% izopropilamin) 75/25 % v/v; Brzina protoka: 18 ml/min; DAD otkrivanje: 220 nm; Petlja: 500 µ1; Injekcija: 25 mg (svaka injekcija).
[0767] Frakcije koje sadrže prvi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće 1.25M HCl u MeOH je dodata i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom reverze fazne na C18 ulošku (H2O: CH3CN = 95:5 do 50:50, sa 0.1% HCOOH); pre sušenja 2 IN HC1 (2 ml) su dodati i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom da se dobije jedinjenje 169a kao bela čvrsta supstanca (prvi eluirani enantiomer, 0.077 g, 0.0123 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A13): Rt = 16.1 min, ee> 99%.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.12 - 12.00 (m, 2 H), 8.06 - 8.46 (m, 2 H), 7.58 - 8.03 (m, 5 H), 7.37 - 7.52 (m, 3 H), 7.00 - 8.55 (m, 2 H), 6.81 - 7.00 (m, 2 H), 6.66 - 6.76 (m, 1 H), 5.49 - 6.42 (m, 2 H), 4.32 - 4.68 (m, 2 H), 2.07 -4.20 (m, 6 H), 1.80 - 1.98 (m, 3 H). UPLC-MS: 0.70 min, 589.5 [M+H]+, metoda 13.
[0768] Frakcije koje sadrže drugi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće
1.25M HCl u MeOH je dodata i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom reverze fazne na C18 ulošku (H2O : CH3CN = 95:5 do 50:50, sa 0.1% HCOOH); pre sušenja IN HCl (2 ml) su dodati i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom da se dobije jedinnjenje 169b kao bela čvrsta supstanca (drugi eluirani enantiomer, 0.072 g, 0.115 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A13): Rt = 19.0 min, ee = 98.2%.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.13 - 12.15 (m, 2 H), 8.06 - 8.48 (m, 2 H), 7.58 - 8.06 (m, 5 H), 7.37 - 7.51 (m, 3 H), 7.00 - 8.55 (m, 2 H), 6.81 - 7.00 (m, 2 H), 6.66 - 6.77 (m, 1 H), 5.50 - 6.45 (m, 2 H), 4.32 - 4.68 (m, 2 H), 2.09 -4.23 (m, 6 H), 1.80 - 1.98 (m, 3 H). UPLC-MS: 0.66 min, 589.3 [M+H]+, metoda 14.
Primer 170
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(piridin-2-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0769]
[0770] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao u primeru 162, od 3-(1-(4-Amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(piridin-2-il)-1H-izohromen-1-on (intermedijer D34), i (3-fluoro-5-hidroksifenil)boronske kiseline da se obezbedi jedinjenje iz naslova.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.29 (br. s., 1 H), 8.70 (br. s., 1 H), 8.19 - 8.29 (m, 2 H), 7.97 (br. s., 1 H), 7.74 - 7.84 (m, 1 H), 7.62 - 7.70 (m, 1 H), 7.43 - 7.60 (m, 2 H), 6.94 (d, 1 H), 6.89 (s, 1 H), 6.83 (d, 1 H), 6.71 (dt, 1 H), 6.50 - 8.60 (m, 2 H), 5.81 - 5.91 (m, 1 H), 1.87 (d, 3 H). UPLC-MS: 0.80 min, 495.0 [M+H]+, metoda 12.
Primer 171
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on format
[0771]
[0772] 3-(1-(4-Amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-benzil-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid (primer 169, 0.5 g, 0.799 mmol), je rastvoren u DCM (3 ml) na 0°C; DIPEA (0.395 ml, 2.262 mmol) i 1-hloroetil karbonohloridat (0.651 ml, 6.03 mmol) su dodati na 0°C pod jakim mešanjem i reakcija je mešana tokom 5 min na 0°C i tokom 2 sata na 60°C. Reakcija je ostavljena da se ohladi do sobne temperature i ugašena sa 5 ml MeOH; smeša je mešana dodatna 2.5 sata na 60°C i evaporisana pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi produkt koji je pečišćen fleš hromatografijom reverzne faze na C-18 ulošku (H2O:CH3CN = 95:5 do 50: 50, sa 0.1% HCOOH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.068 g, 0.125 mmol, 16%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.18 - 10.30 (m, 1 H), 9.04 - 9.65 (m, 2 H), 8.25 - 8.31 (m, 1 H), 8.11 - 8.22 (m, 2 H), 7.83 - 7.94 (m, 1 H), 7.70 - 7.82 (m, 1 H), 7.60 - 7.70 (m, 1 H), 6.81 - 6.99 (m, 2 H), 6.62 - 6.75 (m, 1 H), 6.13 -8.50 (m, 2 H), 5.55 - 6.29 (m, 2 H), 2.35 - 4.18 (m, 6 H), 1.80 - 1.95 (m, 3 H). UPLC-MS: 0.60 min, 499.4 [M+H]+, metoda 13
Primer 172
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(1-metilpiperidin-4-il)-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on dihidrohlorid
[0773]
[0774] U rastvor 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on formata (primer 171, 0.03 g, 0.055 mmol), 1-metilpiperidin-4-on (0.08 ml, 0.066 mmol) i DIPEA (0.009 ml, 0.055 mmol) u DCM (2 ml) suvom Na2SO4je dodat i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. AcOH (0.009 ml, 0.165 mmol) i natrijum triacetoksiborohidrid (0.023 g, 0.11 mmol) su dodati u ovom redosledu i reakciona smeša je mešana tokom 3 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena dodatkom 2M HCl (2 ml), smeša je filtrirana i filtrat je prečišćen fleš hromatografijom reverzne faze na Biotage C18 ulošku (voda/MeCN 90/10 0.1% HCOOH u vodu/MeCN 5/95 0.01% HCOOH). Pre sušenja 2M HCl (2 ml) je dodato i smeša je osušena pod sniženim pritiskom da se dobije jedinjenje iz naslova (0.025 g, 0.037 mmol, 68%).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.58 - 10.68 (m, 2 H), 8.08 - 8.40 (m, 2 H), 7.81 - 7.99 (m, 1 H), 7.59 - 7.74 (m, 1H), 7.43 -7.55 (m, 1 H), 6.78 - 6.97 (m, 2 H), 6.56 - 6.73 (m, 1 H), 6.45 - 7.75 (m, 2 H), 6.09 - 6.29 (m, 1 H), 5.26 - 6.08
(m, 1 H), 2.54 - 3.29 (m, 13 H), 1.40 - 2.45 (m, 8 H). UPLC-MS: 0.89 min, 596.5 [M+H]+, metoda 15
Primer 173
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(azetidin-3-il)-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on dihidrohlorid
[0775]
[0776] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao u primeru 172 od 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on formata (primer 171, 0.03 g, 0.055 mmol) i terc-butil 3-oksoazetidin-1-karboksilata (0.019 g, 0.110 mmol) da se dobije jedinjenje iz naslova (0.019 g, 0.030 mmol, 55 %).
<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8.43 - 8.56 (m, 1 H), 8.16 - 8.30 (m, 1 H), 7.82 - 7.95 (m, 1 H), 7.75 - 8.01 (m, 2 H), 7.52 - 7.72 (m, 1 H), 6.87 - 7.06 (m, 2 H), 6.64 - 6.80 (m, 1 H), 5.90 - 6.58 (m, 2 H), 3.30 - 4.90 (m, 9 H), 2.41 - 3.04 (m, 2 H), 1.92 - 2.22 (m, 3 H). UPLC-MS: 0.78 min, 554.4 [M+H]+, metoda 15
Primer 174
3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-izopropil-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0778] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao u primeru 172 od 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on formata (primer 171, 0.061 g, 0.122 mmol) i acetona (0.010 mL, 0.134 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2 mg, 0.003 mmol, 3%).
<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8.13 - 8.53 (m, 2 H), 7.47 - 8.01 (m, 3 H), 6.85 - 7.04 (m, 2 H), 6.62 - 6.78 (m, 1 H), 5.72 - 6.48 (m, 2 H), 3.38 - 4.47 (m, 5 H), 2.36 - 3.09 (m, 2 H), 1.91 - 2.26 (m, 3 H), 1.38 - 1.69 (m, 6 H). UPLCMS: 0.63 min, 541.5 [M+H]+, metoda 13
Primer 175
3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H -pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid
[0779]
[0780] Jedinjenje iz naslova je napravljeno na sličan način kao u primeru 162, od 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on soli mravlje kiseline (intermedijer D4, 0.050 g), i 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-3-ol (0.023 g, 0.104 mmol) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.014 g, 0.026 mmol).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.03 - 11.70 (m, 2 H), 8.30 - 8.59 (m, 3 H), 8.10 - 8.24 (m, 1 H), 7.76 - 8.04 (m, 3 H), 7.72 - 8.29 (m, 2 H), 7.48 - 7.70 (m, 1 H), 5.44 - 6.47 (m, 2 H), 2.87 - 2.99 (m, 3 H), 2.44 - 4.08 (m, 6 H), 1.81 -2.05 (m, 3 H). UPLC-MS: 0.42 min, 496.4 [M+H]+, metoda 13
Primeri 176a (Enantiomer 1) i 176b (Enantiomer 2): 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomeri
[0781]
Korak 1.3-(1-(4-amino-3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer Q.1)
[0782]
[0783] U mešanu smešu 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (primer 40, 0.20 mmol) i imidazola (40.8 mg, 0.60 mmol) u DMF (1 ml) TBDMSC1 (45.2 mg, 0.30 mmol) je dodat na sobnoj temperaturi i smeša je mešana tokom 2 sata. Dodati su dodatni imidazol (16 mg) i TBDMSC1 (36 mg) i smeša je mešana na istoj temperaturi naredna 2 sata. Dodati su dodatni imidazol (27 mg) i TBDMSC1 (121 mg) i mešanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa DCM i isprana sa 0.5M HCl. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen filtracijom na silikagel ulošku (DCM do DCM: MeOH = 95:5) da bi se dobio 3-(1-(4-amino-3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen- 1-on (intermedijer Q.1, 112 mg, 0.184 mmol, 92%).
UPLC-MS: 1.57 min, 608.4 [M+H]+, metoda 13
Korak 2.3-(1-(4-amino-3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomeri (Intermedijer Q.2 i Q.3)
[0785] Racemat 3-(1-(4-amino-3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on (intermedijer Q.1, 0.124 g, 0.204 mmol) je rastvoren u smeši DCM (5 ml) i Etanol/Metanol 1/1 (6 ml) podvrgnut hiralnoj rezoluciji Hiralnom preparativnom hromatografijom. Uslovi :Kolona: Hiralpak lC (25 x 2.0 cm), 5 µm; Mobilna faza: n n-Heksan/(2-Propanol/Metanol 1/1+0.1% izopropilamin) 90/10 % v/v; Brzina protoka: 17 ml/min; DAD otkrivanje: 220 nm; Petlja: 500 µ1; Injekcija: 5 mg/injekciji.
[0786] Frakcije koje sadrže prvi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće, da se dobije intermedijer Q.2 (prvi eluirani enantiomer, 40 mg, 0.066 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A4): Rt = 15.7 min, ee > 99%. UPLC-MS: 1.57 min, 608.4
[M+H]+, metoda 13
[0787] Frakcije koje sadrže drugi eluirani enantiomer su evaporisane do suvoće,
da se dobije intermedijer Q.3 (drugi eluirani enantiomer, 38 mg, 0.063 mmol). Hiralna HPLC (Metoda A4): Rt = 17.8 min, ee > 99%. UPLC-MS: 1.57 min, 608.4
[M+H]+, metoda 13
Korak 3. Primer 176a, 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer
[0788] 3-(1-(4-amino-3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer (intermedijer Q.2, prvi eluirani enantiomer pod uslovima opisanim iznad, 40 mg, 0.065 mmol) je rastvoren u rastvoru 1M HCl u EtOH (0.2 ml) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 5 sati. Isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silikagel ulošku (DCM do DCM: MeOH = 97:3) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (28 mg, 0.056 mmol, 87%). Ovo jedinjenje se pokazalo kao drugi eluirani enantiomer pod uslovima Hiralne HPLC Metode A5: Rt = 12.0 min, ee = 98.6%.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.28 (br. s., 1 H), 8.19 - 8.26 (m, 2 H), 7.75 - 7.80 (m, 1 H), 7.61 - 7.66 (m, 1 H), 7.51 -7.57 (m, 1 H), 7.37 - 7.48 (m, 3 H), 7.11 - 7.16 (m, 1 H), 6.87 - 6.92 (m, 2 H), 6.82 - 6.87 (m, 1H), 6.70 (dt, 1H), 6.0 - 8.5 (m, 2 H), 5.76 (q, 1 H), 1.85 (d, 3 H). UPLC-MS: 1.04 min, 494.3 [M+H]+, metoda 13.
Korak 4. Primer 176b, 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer
[0789] 3-(1-(4-amino-3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer (intermedijer Q.3, drugi eluirani enantiomer pod uslovima opisanim
iznad, 0.038 g, 0.063 mmol) je rastvoren u rastvoru 1M HCl u EtOH (0.2 mL) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 5 sati. Isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silikagel ulošku (DCM do DCM: MeOH = 97:3), da se dobije jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (0.025 g, 0.05 mmol, 80%). Ovo jedinjenje se pokazalo kao prvi eluirani enantiomer pod uslovima Hiralne HPLC Metode A5:Rt = 7.3 min, ee > 99%.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.24 (br. s., 1 H), 8.20 - 8.25 (m, 1 H), 8.16 (s, 1 H), 7.74 - 7.81 (m, 1 H), 7.60 -7.66 (m, 1 H), 7.50 - 7.57 (m, 1 H), 7.35 - 7.48 (m, 3 H), 7.12 - 7.18 (m, 1 H), 6.87 - 6.93 (m, 2 H), 6.81 - 6.86 (m, 1 H), 6.68 (dt, 1 H), 6.00 - 8.50 (m, 2 H), 5.70 - 5.78 (m, 1 H), 1.84 (d, 3 H). UPLC-MS: 1.04 min, 494.3 [M+H]+, metoda 13.
FARMAKOLOŠKA AKTIVNOST JEDINJENJA PRONALASKA
In vitro određivanje inhibitorne aktivnosti enzima PI3K u testu bez ćelije
[0790] Humani rekombinantni proteini PI3Kɑ , PI3Kβ, PI3Ky i PI3Kδ su nabavljeni od Millipore Ltd (Billerica, MA). Jedinjenja su rastvorena u 0.5mM u DMSO i testirana u različitim koncentracijama na njihovu aktivnost u odnosu na PI3Ks, korišćenjem ADP-Glo™ Test Kinaze (Promega, Madison Wl) prema uputstvima proizvođača.
[0791] Ukratko, reakcije kinaze su izvedene u belim pločama sa 384 jažice (Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen). Svaka jažica je napunjena sa 0.1 µl test jedinjenja i 2.5 µl 2x reakcionog pufera (40mM Tris pH7.5, 0.5mM EGTA, 0.5mM Na3VO4, 5mM β-glicerofosfata, 0.1mg/ml BSA, 1mM DTT), sadržavajući 50µM Pl i PS supstrata (L-ɑ -fosfatidilinozitol natrijumova so i L-ɑ -pfosfatidil-L-serin, Sigma-Aldrich, St. Louis MO) i Pl3K recombinantne proteine (Pl3Ky 0.25ng/µl, Pl3Kδ 1ng/µl, Pl3K ɑ 0.125ng/µl, Pi3Kβ 1ng/µl).
[0792] Reakcije su započete dodavanjem 2.5 µl rastvora 2x ATP u svaku jažicu (konačne koncentracije: Pl3Ky ATP 30µM; Pl3Kδ ATP 80µM; Pl3Kɑ ATP 50µM; Pl3Kβ ATP 100µM) i inkubirane tokom 60 minuta na sobnoj temperaturi. Naknadno, svaka reakcija kinaze je inkubirana tokom 40 minuta sa 5µl ADP-Glo™ Reagensa, omogućavajući trošenje neiskorišćenog ATP-a. Zatim, u svaku jažicu je dodat Reagens za otkrivanje kinaze (10 µl) za pretvaranje ADP u ATP i da se omogući merenje novo sintetizovanog ATP korišćenjem reakcije luciferaze/luciferin. Prateći 60 min inkubaciju, meren je signal luminiscencije korišćenjem Wallac EnVision® čitača više oznaka (PerkinElmer, Waltham MA).
[0793] Prilagođavanje krive i izračunavanje lC50 su izvedeni korišćenjem četveroparametarskog logističkog modela u XLfit (lDBS, Guilford, UK) za "Microsoft Excel" (Microsoft, Redmont, WA).
[0794] Rezultati su prikazani u tabeli 1 ispod.
Tabela 1: Rezultati in vitro određivanja inhibitorne aktivnosti PI3K enzima u testu bez ćelije
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
pri čemu su jedinjenja klasifikovana po jačini u odnosu na njihovu inhibitornu aktivnost na Pl3K-alfa, -beta, -gama i -delta prema sledećem:
++ : lC50 < 10 nM
+ : lC50 u rasponu 10-1000 nM
: lC50 > 1000 nM
In vitro određivanje inhibitorne aktivnosti enzima Pl3K u testu PBMCs
[0795] Mononuklearne ćelije humane periferne krvi (PBMCs) su sakupljene od strane Lonza (Basel, CH), isprane i ponovo suspendovane u RPMl 1640 medijumu (w/o fenol crveno) dopunjenog sa 10% FBS, 2 mM glutamina, 100 U/ml penicilina i 100 µg/ml streptomicina (Life Technologies, Carlsbad CA). PBMCs su zasađene na gustoći od 10<5>ćelija/jažici u pločama sa 96 jažica obloženih sa 6 µg/ml anti-humanog CD3 antitela (Biolegend, San Diego, CA).
[0796] Ćelije su tretirane u RPMl (w/o fenol crveno) dopunjene sa 10% FBS sa različitim koncentracijama inhibitora Pl3K (10<-12>M-10<-5>M, konačna koncentracija DMSO 0.2%), ko-stimulisane sa 3 µg/ml anti-humanog CD28 antitela (BD Biosciences, San Jose CA) i inkubirane tokom 72 sata u atmosferi od 95% vazduha i 5% CO2na 37°C. Humani lL-6 i lL-17 su izmereni u supernatantima korišćenjem uparenog antitela kvantitativnog ELIZA kompleta (od Life Technologies, Carlsbad CA i R&D Systems, Minneapolis MN respektivno), prema uputstvima proizvođača.
[0797] lC50 vrednosti su određene iz kriva koncentracija-odgovor nelinearnom regresijskom analizom korišćenjem "Graph Pad Prism v.6 "(GraphPad Software, La Jolla CA).
[0798] Jedinjenja koja su reprezentativna prema ovom pronalasku su pokazala lC50 niži od 1 µM u odnosu na podjedinicu Pl3K-delta.

Claims (14)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I):
    pri čemu: svaki R, kada je prisutan, je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od: - OR6; - SR6 - S(O)q-R8 - NR10R11 - halogena - (C1-C6) alkila; - (C1-C6) haloalkila; - (C3-C7) cikloalkila; - (C5-C7) cikloalkenila; - (C2-C6) alkenila; - (C2-C6) alkinila; - supstituisanog ili nesupstituisanog arila; i - supstituisanog ili nesupstituisanog heteroarila; R1i R2su kombinovani da formiraju okso grupu (= O); R3i R4, su isti ili različiti, u svakom slučaju su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od: - H; - (C1-C6) alkila; i - (C1-C6) haloalkila; R5je izabran iz grupe koja se sastoji od: - (C3-C7) cikloalkila; - aril (C1-C3) alkila; - (C5-C7) cikloalkenila; - supstituisanog ili nesupstituisanog (C3-C6) heterocikloalkila - supstituisanog ili nesupstituisanog arila; i - supstituisanog ili nesupstituisanog heteroarila; R6je izabran iz grupe koja se sastoji od: - H; - (C1-C6) alkila; - (C1-C6) haloalkila; - (C1-C6) hidroksialkla; - (C1-C6) aminoalkila; - aril(C1-C6)alkila - (C1-C6) alkanoila - arilkarbonila; i - aril (C2-C4) alkanoila R8je izabran iz grupe koja se sastoji od: - (C1-C6) alkila; - (C1-C6) haloalkila; - (C1-C6) hidroksialkila; - (C1-C6) aminoalkila; - supstituisanog ili nesupstituisanog arila; - supstituisanog ili nesupstituisanog heteroarila; i - NR12R13 R10, R11, R12i R13, isti ili različiti, svaki put su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od H, (C1-C6) aminoalkila, (C1-C6) hidroksialkila i (C1-C6) alkila, ili uzeti zajedno sa atomom azota na koji su oni povezani, ili R10i R11ili R12i R13mogu formirati, 5 do 6-člani heterociklični radikal, pri čemu najmanje jedan dalji atom ugljenika u prstenu u pomenutom heterocikličnom radikalu može biti zamenjen sa N, NH, S ili O ili može da nosi-okso supstituentnu grupu, i pomenuti heterociklični radikal može biti dalje opciono supstituisan; Z, kada je prisutan, je atom ili grupa svaki put nezavisno izabrana od NH i NHC (O); m je 1; n je 1 ili 2; p je nula ili ceo broj u rasponu od 1 do 3; q je 1 ili 2; Cy je heteroaril izabran iz grupe koja se sastoji od 7H-purin-7-il; 9H-purin-9-il; 9H-purin-6-il; 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il; 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-il; 2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il; 2- , 4- , 5- ili 6-pirimidinila; i 2-pirazinila, pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il, pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il, pirido[3,2-d]pirimidin-4-il, pirido[2,3-d]pirimidin-8-il-5-on, tieno[3,2-d]pirimidin-4-il, tieno[2,3-d]pirimidin-4-il koji su svi opciono supstituisani sa jednom ili više grupa izabranih od halogena, (C1-C6)alkila, (C1-C6)haloalkila, CN, NR10R11, opciono supstituisanog arila i opciono supstituisanog heteroarila izabranog od fenila, 1H-indazol-4-il, 1H-indazol-5-il, 1H-indazol-6-il, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-piridinila, pirazol-3-il, pirazol-4-il, pirazol-5-il, pirazin-2il, pirimidin-5-il, piridazin-4-il i 2-, 4-, 5-tiazolila; ili, kada m je nula; n je 1 ili 2; p je nula ili ceo broj u rasponu od 1 do 3; q je 1 ili 2; potom, Cy je heteroaril izabran iz grupe koja se sastoji od 7H-purin-7-il, 9H-purin-9-il, 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il, 2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il, pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il, i pirido[2,3-d]pirimidin-8-il-5-on, koji su svi opciono supstituisani sa jednom ili više grupa izabranih od halogena, (C1-C6)alkila, (C1-C6)haloalkila, CN, NR10R11, opciono supstituisanog arila i opciono supstituisanog heteroarila izabranog od fenila, 1H-indazol-4-il, 1H-indazol-5il, 1H-indazol-6-il, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-piridinila, pirazol-3-il, pirazol-4-il, pirazol-5-il, pirazin-2il, pirimidin-5-il, piridazin-4-il i 2-, 4-, 5-tiazolila; ili farmaceutski prihvatljivih soli od njih.
  2. 2. Jedinjenje formule (IA) prema patentnom zahtevu 1
    pri čemu n=1, R3ima isti značaj kao iznad, osim H, R4je H i apsolutna konfiguracija hiralnog ugljenika (*) je (R).
  3. 3. Jedinjenje formule (IA) prema patentnom zahtevu 1 ;pri čemu n=1, R3ima isti značaj kao iznad, osim H, R4je H i apsolutna konfiguracija hiralnog ugljenika (*) je (S).
  4. 4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, prisutno kao smeša dijastereoizomera.
  5. 5. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 4, pri čemu: R1i R2su kombinovani da formiraju okso grupu (= O); R3je izabran od H i (C1-C6) alkila; R4je H; R, R5, m, n, p, Z i Cy su kao što je definisano iznad i farmaceutski prihvatljiva so od njih.
  6. 6. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 4, pri čemu: p je 0 ili 1; R nije prisutan ili je izabran iz grupe koja se sastoji od halogena i (C1-C6)alkila; R1i R2su kombinovani da formiraju okso grupu (=O); R3je izabran od H, metila, etila i propila; R4je H; R5je izabran od fenila; fenilmetila; 2-, 3- ili 4-piridinila; 5-tiazolila; 2-, 3-, 4- ili 5-tienila, 1H-pirazol-4il, 2-, 4-, 5- ili 6- pirimidinila, cikloheksenila, 1,2,3,6 tetrahidropiridin-4-il, 1,2,5,6-tetrahdropiridin-3-il, 8-azabiciklo[3.2.1]okt-2-en-3-il, i 3,6-dihidro-2H-piran-4-il, opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih od halogena, (C1-C6)alkila, OR7, -S(O)q-R9, -C(O)NR10R11, COOR14, (C1-C6) hidroksialkila, supstituisanog ili nesupstituisanog (C1-C6)aminoalkila, (C1-C6) alkanoila, supstituisanog ili nesupstituisanog (C3-C6)heterocikloalkila, aril(C1-C6)alkila, heteroaril(C1-C6)alkila, (C3-C7)cikloalkila(C1-C6)alkila i NR10R11; R7i R14, isti ili različiti, svaki put su nezavisno izabrani iz iste grupe supstituenta kao što je iznad definisano za R6; R9je izabran iz iste grupe supstituenata kao što je iznad definisano za R8; R10, R11, m, n, q, Z i Cy su kao što je iznad definisano; i farmaceutski prihvatljiva so od njih.
  7. 7. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 4, pri čemu: p je 0; R nije prisutan; R1i R2su kombinovani da formiraju okso grupu (=O); R3je izabran od H, metila, etila i propila; R4je H; R5je izabran od fenila; fenilmetila; 2-, 3- ili 4-piridinila; 5-tiazolila, 2-, 3-, 4- ili 5-tienila, 1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il i 3,6-dihidro-2H-piran-4-il, opciono substituisan sa jednom ili više grupa izabranih od fluoro, bromo, metila, metoksi, amino, dimetilamino, 4-morfolinosulfonila, 4-(2-morfolinoetoksi), 4-morfolinometila i 4-piperazinometila; piperidin-1-ilmetila, 4-metilpiperazin-1-karbonila, (2-(dimetilamino)etil)-karbonila, acetila, fenilmetila, fenilmetoksi-karbonila, 4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioksolan-2-il, pirolidin-1-ilmetila, bis(2-hidroksietil)aminometila, hidroksimetila, dimetilaminometila, (dimetilamino)propila, 4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)metila piperazin-2-on-1-ilmetila, ciklopropilmetila, hidroksikarbonila, piridin-4-ilmetila; m, n, Z, i Cy su kao što je definisano iznad; i farmaceutski prihvatljiva so od njih.
  8. 8. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 4, pri čemu: R1i R2su kombinovani da formiraju okso grupu (=O); R3je izabran od H, metila, etila i propila; R4je H; R5je izabran od aril(C1-C3) alkila; supstituisanog ili nesupstituisanog (C3-C6) heterocikloalkila; supstituisanog ili nesupstituisanog arila i supstituisanog ili nesupstituisanog heteroarila; R, R10, R11, Cy, Z, m, n, p su kao što je definisano iznad; i farmaceutski prihvatljiva so od njih.
  9. 9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 pri čemu: R1i R2su kombinovani da formiraju okso grupu (=O); R3je izabran od H, metila ili etila; R4je H; R5je izabran od arila koji je fenil; aril(C1-C3)alkila koji je fenilmetil; heteroarila izabranog od 2-, 3- ili 4-piridinila; 5-tiazolila, 2-, 3-, 4- ili 5-tienila; (C3-C6)heterocikloalkila izabranog od 1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il i 3,6-dihidro-2H-piran-4-il i 4-cikloheksenila, koji su svi opciono supstituisani sa jednom ili više grupa izabranih od fluoro, bromo, metila, metoksi, dimetilamino, morfolinosulfonila, morfolinoetoksi, morfolinometila i piperazinometila; 4-metilpiperazin-1-karbonila, 4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il-metila, piperazin-2-on-1-il -metila, piridin-4-ilmetila; Z, kada je prisutan, je atom ili grupa svaki put nezavisno izabrana od NH i NH-C (O); m je 1; Cy je heteroaril izabran iz grupe 7H-purin-7-il; 9H-purin-9-il; 9H-purin-6-il; 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il; 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-il; 2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il; i 2- , 4- , 5- ili 6-pirimidinila; 2-pirazinila koji su svi opciono supstituisani sa jednom ili više grupa izabranih od Cl, Br, F, l, metila, trifluorometila, CN; NH2; NH-CH3; N(CH3)2; 3-metil-1H-indazol-5-il, 1H-indazol-4-il; 3-fluoro-5-hidroksifenila; 1-(3-fluoro-4-hidroksifenila); , 6-, 5-, 4-hidroksipiridin-3-il, 6-, 5-metoksipiridin-3-il, 5-aminopiridin-3-il, 5-fluoropiridin-3-il, 5-fluoro-6-hidroksipiridin-3-il 6-(metilsulfonil)piridin-3-il, 5-hidroksi-6-metilpiridin-3-il, 6-, 5-(hidroksimetil)piridin-3-il, 2-aminotiazol-5-il; 2-(acetamino)-(tiazol-5-il), 2-aminopirimidin-5-il, 2-metoksiprimidin-5-il, 2-hidroksipirimidin-5-il, pirazin-2-il, 6-hidroksipirazin-2-il i 3-fluoro-4-izopropoksifenila; ili, kada m je nula; zatim, Cy je heteroaril izabran iz grupe 7H-purin-7-il; 9H-purin-9-il; 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidm-1-il; i 2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il, koji su svi opciono supstituisani sa jednom ili više grupa izabranih od Cl, Br, F, l, metila, trifluorometila, CN; NH2; NH-CH3; N(CH3)2; 3-metil-1H-indazol-5-il, 1H-indazol-4- il; 3-fluoro-5-hidroksifenila; 1-(3-fluoro-4-hidroksifenila);, 6-, 5-, 4-hidroksipiridin-3-il, 6-, 5-metoksipiridin- 3-il, 5-aminopiridin-3-il, 5-fluoropiridin-3-il, 5-fluoro-6-hidroksipiridin-3-il 6-(metilsulfonil)piridin-3-il, 5- hidroksi-6-metilpiridin-3-il, 6-, 5-(hidroksimetil)piridin-3-il, 2-aminotiazol-5-il; 2-(acetamino)-(tiiazol-5-il), 2-aminopirimidin-5-il, 2-metoksipirimidin-5-il, 2-hidroksipirimidin-5-il, pirazin-2-il, 6-hidroksipirazin-2-il i 3-fluoro-4-izopropoksifenila; R, n, p su kao što je definisano iznad; i farmaceutski prihvatljiva so od njih.
  10. 10. Jedinjenje prema Patentnom zahtevu 1, izabrano od: 3-((6-amino-9H-purin-9-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-((6-amino-9H-purin-9-il)metil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on 3-((6-amino-9H-purin-9-il)metil)-4-(2-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on 3-((6-amino-9H-purin-9-il)metil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(6-amino-9H-purin-9-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(6-amino-9H-purin-9-il)etil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(6-amino-9H-purin-9-il)etil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on 3-(1-(6-amino-9H-purin-9-il)etil)-4-(3-(dimetilamino)fenil)-1H-izohromen-1-on 3-(1-(6-amino-9H-purin-9-il)etil)-4-(3-(morfolinosulfonil)fenil)-1H-izohromen-1-on 3-((9H-purin-6-iltio)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-((9H-purin-6-iltio)metil)-4-(2-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on 3-((9H-purin-6-iltio)metil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(9H-purin-6-iltio)etil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(9H-purin-6-iltio)etil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(6-metilpiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(morfolinosulfonil)fenil)-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(2-metilpiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-benzil-1H-izohromen-1-on 3-((9H-purin-6-ilamino)metil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)-1H-izohromen-1-on 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)propil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(4-(2-morfolinoetoksi)fenil)-1H-izohromen-1-on 4-Amino-8-(1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etil)pirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-on 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on 3-((9H-purin-6-ilamino)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-((9H-purin-6-ilamino)metil)-4-(2-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on 3-((9H-purin-6-ilamino)metil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(3-fluorofenil)-1H-izohromen-1-on 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(3-(dimetilamino)fenil)-1H-izohromen-1-on 3-((4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-((4-amino-3-(1H-indazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-((4-amino-3-(3-metil-1H-indazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-((4-amino-3-(1H-indazol-6-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-((4-amino-3-(3-fluoro-4-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-3-(1H-pirazo1-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(6-amino-9H-purin-9-il)etil)-4-(6-metoksipiridin-3-i)-1H-izohromen-1-on 3-((4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-3-jodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-m-tolil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 4-amino-6-(1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etilamino)pirimidin-5-karbonitril; 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2; 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(4-(morfolinometil)fenil)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(morfolinometil)fenil)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2; 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-cikloheksenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(2-aminopirimidin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(pirazin-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(piridazin-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(piridin-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(2-metoksipirimidin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(2-hidroksipirimidin-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(5-metoksipiridin-3-il)-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ; 3-(1-(4-amino-3-(piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(2-aminotiazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(6-metoksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(6-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; N-(5-(4-amino-1-(1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)tiazol-2-il)acetamid; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(piridin-4-ilmetil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(ciklopropilmetil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on enantiomer 1; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((dimetilamino)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on enantiomer 2; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(piperidin-1-ilmetil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(piperidin-1-ilmetil) tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(piperidin-1-ilmetil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(4-metilpiperazin-1-karbonil)fenil)-1H-izohromen-1-on; 3-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-N-(2-(dimetilamino)etil)benzamid; 4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on; 4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(pirolidin-1-ilmetil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((bis(2-hidroksietil)amino)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(hidroksimetil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2; 4-((5-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-il)metil)piperazin-2-on; 5-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)tiofen-2-karboksilna kiselina; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-benzil-1H-izohromen-1-on; 4-(1H-pirazol-4-il)-3-(1-(tieno[3,2-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on 4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-3-(1-(tieno[3,2-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on; 4-amino-6-((1-(4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1-okso-1H-izohromen-3-il)etil)amino)pirimidine-5-karbonitril; 4-fenil-3-(1-(pirolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on; 4-fenil-3-(1-(pirido[3,2-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(5-(hidroksimetil)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(6-(hidroksimetil)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; N-(5-(4-amino-1-(1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)piridin-3-il)-4-fluorobenzensulfonamid; 3-(1-(4-amino-3-(5-aminopiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(2-aminopirimidin-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(6-hidroksipirazin-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(8-metil-8-azabiciklo[3.2.1]okt-2-en-3-il)-1H-izohromen-1-on hidrohlorid; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-4-izopropoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(5-fluoropiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ; 3-(1-(4-amino-3-(3-hloro-5-fluorofenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ; 3-(1-(4-amino-3-(5-(metilsulfonil)piridin-3-il)-1H-piorazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izo hromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(6-(metilsulfonil)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ; 3-(1-(4-amino-3-(5-fluoro-6-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ; 3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksi-6-metilpiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ; 3-(1-(4-amino-3-(5-(trifluorometil)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ; 3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksi-3-sumpor pentafluorid)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ; 5-(4-amino-1-(1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)nikotinonitril; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-aminocikloheks-1-en-1-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(trifluorometil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-one ; 3-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on ; 3-(1-(2,6-diamino-9H-purin-9-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 4-fenil-3-(1-(tieno[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on; 4-fenil-3-(1-(tieno[3,2-d]pirimidin-4-ilamino)etil)-1H-izohromen-1-on; 2-amino-N-(1-(1-okso-4-fenil-1H-izohromen-3-il)etil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karboksamid; 3-(1-(4-amino-3-(1H-pirazol-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(1H-indazol-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-amino-1H-indazol-5-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-hidroksi-5-(trifluorometoksi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(6-amino-9H-purin-9-il)etil)-4-(5-(morfolinometil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(6-metoksipiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-2H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-2-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(dimetilamino)fenil)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(2-aminotiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(1H-pirazol-4-il)-1H-izohromen-1-on; 4-amino-6-((1-(1-okso-4-(1H-pirazol-4-il)-1H-izohromen-3-il)etil)amino)primidin-5-karbonitril; 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(2-aminopirimidin-5-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(piperazin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-4-(4-(piperazin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(piperazin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(morfolinometil)-1H-izohromen-1-on ; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-benzil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-benzil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; benzil 4-(3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1-okso-1H-izohromen-4-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(piperazin-1-ilmetil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-((4-metilpiperazin-1-il)metil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(5-(3-(dimetilamino)propil)tiofen-2-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3 -fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1. ; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(3-(dimetilamino)propil)fenil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(pirolidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(4-(piperidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(3-(piperidin-1-ilmetil)fenil)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(4-(dimetilamino)butanoil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(2-(dimetilamino)acetil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1 -on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(1-metilpiperidin-4-karbonil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(1-izopropilpiperidin-4-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on;. 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(azetidin-3-karbonil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(1-metilazetidin-3-karbonil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1 -on; 3-(1-(4-amino-3-(3-hloro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-hidroksi-5-(trifluorometil)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-hloro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-hidroksi-5-(trifluorometil)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(azetidin-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(1-(ciklopropilmetil)azetidin-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksi-4-metilpiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksi-2-metilpiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksi-6-(trifluorometil)piridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-7-metil-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-7-hloro-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-hloro-4-fenil-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-fluoro-4-fenil-1H-izohromen-1-on 4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1 4-(1-acetil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(tiazol-5-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2 3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1 3-(1-(4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-benzil-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-benzil-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-benzil-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2 ; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(piridin-2-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(1-metilpiperidin-4-il)-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on; 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-(azetidin-3-il)-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-izopropil-1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il)-1H-izohromen-1-on 3-(1-( 4-amino-3-(5-hidroksipiridin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H-izohromen-1-on 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 1 3-(1-(4-amino-3-(3-fluoro-5-hidroksifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-4-fenil-1H-izohromen-1-on pojedinačni enantiomer 2 i farmaceutski prihvatljivih soli od njih.
  11. 11. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje kao što je definisano u bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 10, ili farmaceutski prihvatljivu so od njih, bilo samu ili u kombinaciji sa jednim ili više aktivnih sastojaka, u smeši sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivim nosačem ili ekscipijentom.
  12. 12. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 10, za upotrebu kao lek.
  13. 13. Jedinjenje kao što je definisano u bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 10, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u tretmanu poremećaja povezanog sa mehanizmima PI3K enzima, pri čemu je pomenuti poremećaj izabran iz grupe koja se sastoji od respiratornih bolesti, idiopatskog hroničnog kašlja, varijante astme sa kašljem, kašlja povezanog sa torakalnim tumorom ili kancerom pluća, virusnog ili postvirusnog kašlja, UACS sindroma kašlja gornjih disajnih puteva, ili kašlja usled post nazalnog kapanja, ili kašlja povezanog sa gastroezofagealnom refluksnom bolešću sa kiselinom i bez kiseline, hroničnog bronhitisa, hronične opstruktivne bolesti pluća COPD, intersticijske bolesti pluća, idiopatske fibroze pluća IPF, kongestivne bolesti srca, sarkoidoze ili infekcije, velikog kašlja, astme, hronične opstruktivne bolesti pluća COPD i idiopatske plućne fibroze, virusnih infekcija, virusnih infekcija respiratornog trakta i virusne egzacerbacije respiratornih bolesti, astme, ne-virusnih respiratornih infekcija, aspergiloze i lišmanijaze; alergijskih bolesti, alergijskog rinitisa i atopijskog dermatitisa; autoimunih bolesti, reumatoidnog artritisa i multiple skleroze; inflamatornih poremećaja, inflamatorne bolesti creva; kardiovaskularnih bolesti, tromboze i ateroskleroze; hematoloških maligniteta; neurodegenerativnih bolesti; pankreatitisa; multiorganske disfunkcije; bolesti bubrega; agregacije trombocita; kancera; pokretljivosti sperme; odbacivanja transplantacije; odbacivanja grafta; povrede pluća; i bola, bola povezanog sa reumatoidnim artritisom ili osteoartritisom, bola u leđima, opšteg inflamatornog bola, post herpetičke neuralgije, dijabetičke neuropatije, inflamatornog neuropatskog bola (traume), trigeminalne neuralgije i centralnog bola.
  14. 14. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 13, pri čemu je poremećaj povezan sa mehanizmima PI3K enzima astma, hronična opstruktivna bolest pluća COPD i idiopatska plućna fibroza IPF. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20191559A 2013-12-18 2014-12-17 Derivati izohromena kao inhibitori fosfoinozitidnih 3-kinaza RS59720B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP13197986 2013-12-18
EP14823973.4A EP3083617B1 (en) 2013-12-18 2014-12-17 Isochromene derivatives as phosphoinositide 3-kinases inhibitors
PCT/EP2014/078288 WO2015091685A1 (en) 2013-12-18 2014-12-17 Isochromene derivatives as phosphoinositide 3-kinases inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS59720B1 true RS59720B1 (sr) 2020-01-31

Family

ID=49841547

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20191559A RS59720B1 (sr) 2013-12-18 2014-12-17 Derivati izohromena kao inhibitori fosfoinozitidnih 3-kinaza

Country Status (35)

Country Link
US (1) US9321776B2 (sr)
EP (1) EP3083617B1 (sr)
JP (1) JP6617973B2 (sr)
KR (1) KR102371570B1 (sr)
CN (1) CN105829308B (sr)
AR (1) AR098776A1 (sr)
AU (1) AU2014368725B2 (sr)
CA (1) CA2934135C (sr)
CL (1) CL2016001543A1 (sr)
CY (1) CY1122098T1 (sr)
DK (1) DK3083617T3 (sr)
EA (1) EA035173B1 (sr)
ES (1) ES2755355T3 (sr)
GE (1) GEP20196954B (sr)
HR (1) HRP20192151T1 (sr)
HU (1) HUE046470T2 (sr)
IL (1) IL246263B (sr)
LT (1) LT3083617T (sr)
MA (1) MA47356B1 (sr)
MX (1) MX370900B (sr)
MY (1) MY181602A (sr)
PE (1) PE20160689A1 (sr)
PH (1) PH12016501160A1 (sr)
PL (1) PL3083617T3 (sr)
PT (1) PT3083617T (sr)
RS (1) RS59720B1 (sr)
SA (1) SA516371350B1 (sr)
SG (1) SG11201604908UA (sr)
SI (1) SI3083617T1 (sr)
SM (1) SMT201900726T1 (sr)
TN (1) TN2016000245A1 (sr)
TW (1) TWI672297B (sr)
UA (1) UA120751C2 (sr)
WO (1) WO2015091685A1 (sr)
ZA (1) ZA201604084B (sr)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT3052485T (pt) 2013-10-04 2021-10-22 Infinity Pharmaceuticals Inc Compostos heterocíclicos e suas utilizações
US9751888B2 (en) 2013-10-04 2017-09-05 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
MX382033B (es) 2014-03-19 2025-03-13 Infinity Pharmaceuticals Inc Compuestos heterocíclicos para utilizarlos en el tratamiento de trastornos mediados por pi3k-gamma.
WO2016054491A1 (en) 2014-10-03 2016-04-07 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
US9968604B2 (en) 2015-04-16 2018-05-15 Chiesi Farmaceutici S.P.A. Chromene derivatives as phoshoinositide 3-kinases inhibitors
WO2017048702A1 (en) 2015-09-14 2017-03-23 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Solid forms of isoquinolinone derivatives, process of making, compositions comprising, and methods of using the same
WO2017134053A1 (en) 2016-02-04 2017-08-10 Chiesi Farmaceutici S.P.A. Pyrazole derivatives as phosphoinositide 3-kinases inhibitors
WO2017161116A1 (en) 2016-03-17 2017-09-21 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Isotopologues of isoquinolinone and quinazolinone compounds and uses thereof as pi3k kinase inhibitors
WO2017214269A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
CN108623573A (zh) * 2017-03-16 2018-10-09 河北农业大学 一种异香豆素衍生物及其合成方法
GB201706102D0 (en) * 2017-04-18 2017-05-31 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Chemical compounds
KR102778714B1 (ko) 2018-10-30 2025-03-10 치에시 파마슈티시 에스.피.아. 기계 호흡중인 환자에게 약물을 투여하는 장치
WO2020200918A1 (en) 2019-04-04 2020-10-08 Chiesi Farmaceutici S.P.A. Isochromene derivatives as phosphoinositide 3-kinases inhibitors
CA3150240A1 (en) 2019-09-24 2021-04-01 Tomaso GUIDI Dry powder formulation for a dry powder inhaler, with a combination of spheronised particles and coarse particles, and a dry powder inhaler comprising the formulation
CN114195818B (zh) * 2021-12-24 2023-11-24 盐城工学院 一种4-芳硫基香豆素类化合物及其制备方法

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0597841A (ja) * 1991-10-04 1993-04-20 Mercian Corp イソクマリン誘導体
EP0585913B1 (en) * 1992-09-04 1997-12-29 Takeda Chemical Industries, Ltd. Condensed heterocyclic compounds, their production and use
JP3724818B2 (ja) * 1992-09-04 2005-12-07 武田薬品工業株式会社 縮合複素環化合物、その製造法および剤
US6667300B2 (en) * 2000-04-25 2003-12-23 Icos Corporation Inhibitors of human phosphatidylinositol 3-kinase delta
JP2002161091A (ja) * 2000-11-28 2002-06-04 Mercian Corp 気管支拡張剤
TW200424188A (en) * 2002-10-01 2004-11-16 Mitsubishi Pharma Corp Isoquinoline compound and pharmaceutical use thereof
MX2010007419A (es) * 2008-01-04 2010-11-12 Intellikine Inc Ciertas entidades quimicas, composiciones y metodos.
NZ599830A (en) * 2009-11-05 2014-08-29 Rhizen Pharmaceuticals Sa Novel kinase modulators
PH12013502240B1 (en) * 2011-05-04 2018-06-27 Rhizen Pharmaceuticals Sa Novel compounds as modulators of protein kinase
HK1198443A1 (en) * 2011-07-19 2015-04-24 无限药品股份有限公司 Heterocyclic compounds and uses thereof
AR088218A1 (es) * 2011-07-19 2014-05-21 Infinity Pharmaceuticals Inc Compuestos heterociclicos utiles como inhibidores de pi3k
WO2016166329A1 (en) * 2015-04-17 2016-10-20 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Flow cytometry-based assay to measure adhesion of upec to bladder epithelial cells

Also Published As

Publication number Publication date
ES2755355T3 (es) 2020-04-22
CA2934135A1 (en) 2015-06-25
CA2934135C (en) 2023-06-13
EP3083617B1 (en) 2019-09-11
PE20160689A1 (es) 2016-07-28
DK3083617T3 (da) 2019-10-28
HUE046470T2 (hu) 2020-03-30
AU2014368725A1 (en) 2016-07-07
AU2014368725B2 (en) 2019-03-07
IL246263A0 (en) 2016-08-02
GEP20196954B (en) 2019-03-11
NZ721242A (en) 2021-04-30
MX370900B (es) 2020-01-09
CL2016001543A1 (es) 2017-01-13
MY181602A (en) 2020-12-29
IL246263B (en) 2018-05-31
HRP20192151T1 (hr) 2020-02-21
CN105829308B (zh) 2019-03-08
TWI672297B (zh) 2019-09-21
EP3083617A1 (en) 2016-10-26
PT3083617T (pt) 2019-11-20
US20150166549A1 (en) 2015-06-18
KR102371570B1 (ko) 2022-03-07
AR098776A1 (es) 2016-06-15
EA035173B1 (ru) 2020-05-12
GEAP201814179A (en) 2018-11-12
JP6617973B2 (ja) 2019-12-11
KR20160098420A (ko) 2016-08-18
UA120751C2 (uk) 2020-02-10
JP2017501146A (ja) 2017-01-12
ZA201604084B (en) 2018-07-25
SA516371350B1 (ar) 2019-08-07
EA201691032A1 (ru) 2016-11-30
MA47356B1 (fr) 2021-03-31
LT3083617T (lt) 2019-11-25
CN105829308A (zh) 2016-08-03
SG11201604908UA (en) 2016-07-28
MX2016007410A (es) 2016-09-08
CY1122098T1 (el) 2020-11-25
TN2016000245A1 (en) 2017-10-06
MA47356A1 (fr) 2020-10-28
WO2015091685A1 (en) 2015-06-25
SI3083617T1 (sl) 2019-11-29
US9321776B2 (en) 2016-04-26
SMT201900726T1 (it) 2020-01-14
TW201609714A (zh) 2016-03-16
PH12016501160A1 (en) 2016-08-15
PL3083617T3 (pl) 2020-02-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6617973B2 (ja) ホスホイノシチド３−キナーゼ阻害剤としてのイソクロメン誘導体
ES2911948T3 (es) Inhibidores de la replicación del virus de la inmunodeficiencia humana
JP5766820B2 (ja) Ｐｉ３キナーゼ阻害剤としての複素環化合物
JP6378785B2 (ja) Ｔａｎｋ結合キナーゼインヒビター化合物
AU2009257712B2 (en) Pyrrolo [2, 3-c] pyridine derivatives as p38 kinase inhibiting agents
IL274938B1 (en) New compounds and their pharmaceutical preparations for the treatment of diseases
IL289878B1 (en) Heterobicyclic amides as inhibitors of CD38
CA2796311A1 (en) Fused derivatives as pi3k.delta. inhibitors
TW201404779A (zh) 新的雜芳基和雜環化合物、其組合物及方法
TWI707855B (zh) 咪唑并嗒類化合物及其用途
EP3283481B1 (en) Chromene derivatives as phoshoinositide 3-kinases inhibitors
ES3036245T3 (en) Substituted pyrazine-2-carboxamides as hpk1 inhibitors for the treatment of cancer
CA3134174A1 (en) Jak1 selective kinase inhibitor
AU2023363750A1 (en) Triazole-substituted imidazo[1,2-a]pyrimidines as cgas inhibitors
KR20210149077A (ko) 포스포이노시타이드 3-키나아제 억제제로서 아이소크로멘 유도체
CN112209934B (zh) 含有氮杂螺庚烷的btk抑制剂
BR112016013154B1 (pt) Compostos derivados de isocromeno como inibidores da fosfoinositídeo 3-quinases, composição farmacêutica e uso compreendendo os mesmos
NZ721242B2 (en) Isochromene derivatives as phosphoinositide 3-kinases inhibitors
HK1226719B (zh) 作为磷酸肌醇酯3-激酶抑制剂的异色烯衍生物
HK1226719A1 (en) Isochromene derivatives as phosphoinositide 3-kinases inhibitors
HK1232524B (zh) 新的咪唑并哒嗪类化合物及其用途