RS59958B1 - Upotreba derivata pirazolopirimidina za lečenje poremećaja povezanih sa pi3k - Google Patents

Description

Opis

OBLAST TEHNIKE

[0001] Predmetna prijava obezbeđuje jedinjenja za upotrebu u postupcima lečenja poremećaja koji su povezani sa PI3Kδ.

STANJE TEHNIKE

[0002] Fosfoinozitid 3-kinaze (PI3Ks) pripadaju velikoj famiiji lipidnih signalnih kinaza koje fosforiluju fosfoinozitide na D3 položaju inozitolnog prstena(Cantley, Science, 2002, 296(5573):1655-7). PI3Ks su podeljene u tri klase (klasa I, II, i III) u skladu sa njihovom strukturom, regulacijom i specifičnošću prema supstratu. PI3K-e klase I, koje uključuju PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kγ, i PI3Kδ, su familija lipidnih i proteinskih kinaza dualne specifičnosti koje katalizuju fosforilaciju fosfatidilinozito-4,5-bisfosfata (PIP2) pri čemu se dobija fosfatidilinozito-3,4,5-trisfosfat (PIP3).PIP3funkcioniše kao sekundarni glasnik koji kontroliše brojne ćelijske procese, uključujući rast, preživljavanje, adheziju i migraciju. Sve četiri klase I izoformi PI3K se nalaze u obliku heterodimera koji se sastoje iz katalitičke podjedinice (p110) i tesno povezane regulatorne podjedinice koja kontroliše njihovu ekspresiju, aktivaciju, i podćelijsku lokalizaciju. PI3Kα, PI3Kβ, i PI3Kδ se povezuju sa regulatornom podjedinicom koja je poznata kao p85 i aktivirane su faktorima rasta i citokinima preko mehanizma koji zavisi od tirozin kinaze (Jimenez, et al., J Biol Chem., 2002, 277(44):41556-62) pri čemu se PI3Kγ povezuje sa dve regulatorne podjedinice (p101 i p84) i njena aktivacija je pokrenuta aktivacijom receptora kuplovanih sa G-proteinom (Brock, et al., J Cell Biol., 2003, 160(1):89-99). PI3Kα i PI3Kβ su svuda eksprimirani. Suprotno tome, PI3Kγ i PI3Kδ su pretežno eksprimirani u leukocitima (Vanhaesebroeck, et al., Trends Biochem Sci., 2005, 30(4):194-204).

[0003] Diferencijalna distribucija u tkivu izoformi PI3K su faktori u njihovim različitim biološkim funkcijama. Genetička ablacija ili PI3Kα ili PI3Kβ za rezultat ima smrt embriona, što ukazuje da PI3Kα i PI3Kβ imaju esencijalne i ne-redundantne funkcije, bar tokom razvoja (Vanhaesebroeck, et al., 2005). Suprotno tome, miševi kojima nedostaje PI3Kγ i PI3Kδ su vijabilni, fertilni i imaju normalan životni vek iako pokazuju promene u imunskom sistemu. Deficijencija PI3Kγ dovodi do narušenog regrutovanja makrofaga i neutrofila do mesta zapaljenja kao i narušene aktivacije T ćelija (Sasaki, et al., Science, 2000, 287(5455):1040-6). PI3Kδ-mutirani miševi imaju specifične defekte u signalnim putevima B ćelija koji dovode do narušenog razvijanja B ćelija i smanjenih odgovora posredovanih antitelom posle stimulacije antigenom (Clayton, et al., J Exp Med.2002, 196(6):753-63; Jou, et al., Mol Cell Biol.2002, 22(24):8580-91; Okkenhaug, et al., Science, 2002, 297(5583):1031-4).

[0004] Fenotipovi PI3Kγ i PI3Kδ-mutiranih miševa ukazuju da ovi miševi mogu da igraju ulogu u zapaljenju i drugim imunski zasnovanim bolestima i to se potvrđuje na pretkliničkim modelima. PI3Kγmutirani miševi u velikoj meri zaštićeni od bolesti u mišjim modelima reumatoidnog artritisa (RA) i astme (Camps, et al., Nat Med.2005, 11(9):936-43; Thomas, et al., Eur J Immunol.2005, 35(4):1283-91). Pored toga, pokazano je da tretman miševa divljeg tipa sa selektivnim inhibitorom PI3Kγ smanjuje glomerulonefritis i produžava preživljavanje u MRL-lpr modelu sistemskog eritematoznog lupusa (SLE) i da suprimira zapaljenje zglobova i oštećenje u modelima RA (Barber, et al., Nat Med.2005, 11(9):9335; Camps, et al., 2005). Slično tome, pokazano je da oba PI3Kδ-mutirani miševi i miševi divljeg tipa koji su tretirani sa selektivnim inhibitorom PI3Kδ imaju atenuirano alergijsko zapaljenje disajnih puteva i hiper-reaktivnost u mišjem modelu astme (Ali, et al., Nature. 2004, 431(7011):1007-11; Lee, et al., FASEB J.2006, 20(3):455-65) i da imaju atenuiranu bolest u modelu RA (Randis, et al., Eur. J. Immunol., 2008, 38(5):1215-24).

[0005] Pokazano je da proliferacija B ćelija igra glavnu ulogu u razvoju zapaljenskih autoimunskih bolesti (Puri, Frontiers in Immunology (2012), 3(256), 1-16; Walsh, Kidney International (2007) 72, 676-682). Na primer, B ćelije podržavaju autoreaktivnost T-ćelija, važnu komponentu zapaljenskih autoimunskih bolesti. Jednom aktivirane i zrele, B ćelije mogu da putuju do mesta zapaljenja i regrutuju zapaljenske ćelije ili diferenciraju u plazmablaste. Prema tome, aktivnost B-ćelija može da bude pogođena ciljanjem B-ćelijskih stimulatornih citokina, B-ćelijskih površinskih receptora, ili preko deplecije B-ćelija. Pokazano je da rituksimab-an IgG1 κ mišje/humano himerno monoklonsko antitelo koje je usmereno prema B-ćelijskom površinskom receptoru CD20- vrši depleciju CD20+ B ćelija. Pokazano je da upotreba rituksimaba ima efikasnost u lečenju idiopatske trombocitopenijske purpure, autoimunske hemolitičke anemije, ili vaskulitisa. Na primer, lečenje sa rituksimabom dovodi do remisije bolesti kod pacijenata koji pate od anti-neutrofilnog citoplazmatskog povezanog sa antitelom (ANCA) sistemskog vaskulitisa (AASV) sa pokazanom deplecijom perifernih B-ćelija (Walsh, 2007; Lovric, Nephrol Dial Transplant (2009) 24: 179-185). Slično tome, kompletni odgovor je prijavljen kod jedne trećine do dve trećine pacijenata sa pomešanom krioglobulinemiskim vaskulitisom posle lečenja sa rituksimabom, uključujući pacijente koji su se pojavili sa teškim oblikom vaskulitisa koji je bio rezistentan ili intolerantan na druge tretmane (Cacoub, Ann Rheum Dis 2008;67:283-287). Slično tome, pokazano je da rituksimab ima efikasnost u lečenju pacijenata sa idiopatskom trombocitopenijskom purpurom (ili imunskom trombocitopenijskom purpurom) (Garvey, British Journal of Haematology, (2008) 141, 149-169; Godeau, Blood (2008), 112(4), 999-1004; Medeo, European Journal of Haematology, (2008) 81, 165-169) i autoimunskom hemolitičkom anemijom (Garvey, British Journal of Haematology, (2008) 141, 149-169).

[0006] PI3Kδ signalizacija je bila povezana sa B ćelijskim preživljavanjem, migracijom, i aktivacijom (Puri, Frontiers in Immunology, 2012, 3(256), 1-16, na stranama 1-5; and Clayton, J Exp Med, 2002, 196(6):753-63). Na primer, PI3Kδ je potreban za antigen-zavisnu B-ćelijsku aktivaciju koja je pokrenuta sa B ćelijskim receptorom. Blokiranjem adhezije B-ćelija, preživljavanja, aktivacije, i proliferacije, inhibicija PI3Kδ može da naruši sposobnost B ćelija da aktiviraju T ćelije, sprečavajući njihovu aktivaciju i redukovanje sekrecije autoantitela i pro-zapaljenskih citokina. Prema tome, njihovom sposobnosšću da inhibiraju aktivaciju B ćelija, očekivano je da PI3Kδ inhibitori leče bolesti koje su posredovane sa B ćelijama koje mogu da se leče sličnim postupcima kao što je deplecija B ćelija sa rituksimabom. Zaista, pokazano je da su PI3Kδ inhibitori korisni mišji modeli različitih autoimunskih bolesti koje takođe mogu da se leče sa rituksimabom kao što je arthritis (Puri (2012)). Dalje, B ćelije slične urođenim, koje su povezane sa autoimunošću su osetljive na aktivnost PI3Kδ, kao MZ i B-1 ćelije su skoro odsutne kod miševa kojima nedostaje p110δ gen (Puri (2012). PI3Kδ inhibitori mogu da smanje kretanje i aktivaciju MZ i B-1 ćelija, koje su umešane u autoimunske bolesti.

[0007] Pored njihove potencijalne uloge u zapaljenskim bolestima, sve četiri klase I PI3K izoformi mogu da igraju ulogu u kanceru. Gen koji kodira p110α je često mutiran kod poznatih kancera, uključujući, grudi, prostatu, debelo crevo i endometrijum (Samuels, et al., Science, 2004, 304(5670):554; Samuels, et al., Curr Opin Oncol. 2006, 18(1):77-82). Osamdeset procenata ovih mutacija su predstavljene jednom od tri supstitucija aminokiselina u heliksu ili kinaznim domenima enzima i dovode do značajne pojačane regulacije kinazne aktivnosti koja nastaje kao rezultat onkogene transformacije u ćelijskog kulturi i kod životinjskih modela (Kang, et al., Proc Natl Acad Sci USA.2005, 102(3):802-7; Bader, et al., Proc Natl Acad Sci USA. 2006, 103(5):1475-9). Takve mutacije nisu identifikovane u drugim PI3K izoformama iako postoji dokaz da mogu da doprinesu razvoju i napredovanju maligniteta. Trajna prekomerna ekspresija PI3Kδ je uočena u akutnoj mijeloblastnoj leukemiji (Sujobert, et al., Blood, 2005, 106(3):1063-6) i inhibitori PI3Kδ mogu da spreče rast ćelija leukemije (Billottet, et al., Oncogene.

2006, 25(50):6648-59). Povišena ekspresija PI3Kγ je uočena u hroničnoj mijeloidnoj leukemiji (Hickey, et al., J Biol Chem.2006, 281(5):2441-50). Promene u ekspresiji PI3Kβ, PI3Kγ i PI3Kδ su takođe. Uočene u kancerima mozga, debelog creva i bešike (Benistant, et al., Oncogene, 2000, 19(44):5083-90; Mizoguchi, et al., Brain Pathol.2004, 14(4):372-7; Knobbe, et al., Neuropathol Appl Neurobiol.2005, 31(5):486-90). Dalje, u ćelijskoj kulturi je pokazano da su sve ove izoforme onkogene (Kang, et al., 2006).

[0008] Zbog ovih razloga, postoji potreba ka razvijanju novih PI3K inhibitora koji mogu da se koriste u zapaljenskim poremećajima, autoimunskim bolestima i kanceru. Ovaj pronalazak je usmeren prema ovoj potrebi i drugim.

[0009] WO 2013/033569 A1 (objavljen 7 marta 2013 i koji je dokument prema Article 54(3) EPC za navedeni predmet za koji se traži zaštita) opisuje heterociklilaminske derivate koji moduliraju aktivnost fosfoinozitid 3-kinaza (PI3K-a) i korisni su u lečenju bolesti koje su povezane sa aktivnošću PI3K-a uključujući, na primer, zapaljenske poremećaje, imunski-zasnovane poremećaje, i kancer. SUŠTINA PRONALASKA

[0010] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja za upotrebu u postupcima lečenja idiopatske trombocitopenijske purpure, autoimunske hemolitičke anemije, Behčetove bolesti, Koganovog sindroma, arteritisa džinovskih ćelija, reumatske polimijalgije (PMR), Takajašijevog arteritisa, Buergerove bolesti (lat. thromboangiitis obliterans), vaskulitisa centralnog nervnog sistema, Kavasakijeve bolesti, poliarteritis nodoza, Čarg-Štrausov sindroma, pomešanog krioglobulinemijskog vaskulitisa (esencijalni ili indukovan hepatitis C virusom (HCV), Henoh-Šenlajnova purpure (HSP), hipersenzitivnog vaskulitisa, mikroskopskog poliangiitisa, Vegenerove granulomatoze, vaskulitisa povezanog sa anti-neutrofilnim citoplazmatskim antitelima (ANCA) sistemskog vaskulitisa (AASV), pemfigusa, membranozne nefropatije, hronične limfocitne leukemije (CLL), leukemije dlakastih ćelija, limfoma mantle ćelija, malog limfocitnog limfoma, folikularnog limfoma, limfoplazmacitnog limfoma, limfoma ekstranodalne marginalne zone, difuzni veliki B ćelijski limfom sličan aktiviranim B ćelijama (ABC), ili difuzni veliki B ćelijski limfom germinativnih B ćelija (GCB) kod pacijenta, gde je jedinjenje jedinjenje Formule IV:

2 4 5

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu G, V, R , R , R , i n su definisani u patentnim zahtevima.

[0011] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje upotrebu jedinjenja kao što je ovde opisano, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za dobijanje leka za upotrebu u bilo kom od ovde opisanih postupaka.

OPIS NACRTA

[0012]

SL.1 prikazuje kristalnu strukturu jedinjenja iz Primera 269.

SL.2 prikazuje efekat inhibicije tumora doza koje se daju dva puta dnevno iz Primera 347 na 0.3, 1, 3, ili 10 mg/kg tokom 14 dana u Pfeiffer modelu humanog ksenografta tumora limfoma difuznih velikih B-ćelija (y-osa je zapremina tumora (mm<3>± SEM); x-osa su dani posle implantacije).

DETALJNI OPIS

[0013] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje za upotrebu postupku lečenja idiopatske trombocitopenijske purpure, autoimunske hemolitičke anemije, Behčetove bolesti, Koganovog sindroma, arteritisa džinovskih ćelija, reumatske polimijalgije (PMR), Takajašijevog arteritisa, Buergerova bolest (lat. thromboangiitis obliterans), vaskulitis centralnog nervnog sistema, Kavasakijeve bolesti, poliarteritis nodoza, Čarg-Štrausov-og sindroma, pomešanog krioglobulinemijskog vaskulitisa (esencijalni ili indukovan hepatitis C virusom (HCV), Henoh-Šenlajnova purpura (HSP), hipersenzitivni vasculitis, mikroskopski poliangiitis, Vegenerove granulomatoze, vaskulitisa povezanog sa anti-neutrofilnim citoplazmatskim antitelima (ANCA) sistemskog vaskulitisa (AASV), pemfigusa, membranozne nefropatije, hronične limfocitne leukemije (CLL), leukemije dlakastih ćelija, limfoma mantle ćelija, malog limfocitnog limfoma, folikularnog limfoma, limfoplazmacitnog limfoma, limfoma ekstranodalne marginalne zone, difuznog velikog B ćelijskkog limfoma sličnog aktiviranim B ćelijama (ABC-DLBCL, ili B ćelijama germinatovnog centra (GCB) difuznog velikog B ćelijskog limfoma (GCB-DLBCL) kod pacijenta, pri čemu je jedinjenje jedinjenje Formule IV:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:

G je NH, n je 1, i V je O; ili

G je NH, n je 0, i V je CH2; ili

G je O, n je 0 i V je NH;

R<2>je C1-6alkil ili C1-6haloalkil;

R<4>je halo, OH, CN, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4alkoksi, ili C1-4haloalkoksi;

<5>R je halo, OH, CN, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4alkoksi, ili C1-4haloalkoksi.

[0014] U nekim izvođenjima, R<2>je C1-3alkil ili C1-3fluoroalkil. U nekim izvođenjima, R<2>je metil, etil, ili 2,2-difluorometil. U nekim izvođenjima, R<2>je metil. U nekim izvođenjima, R<2>je etil.

[0015] U nekim izvođenjima, R<4>je halo, CN, ili C1-3alkil. U nekim izvođenjima, R<4>je F, Cl, CN, ili metil. U nekim izvođenjima, R<4>je F. U nekim izvođenjima, R<4>je Cl. U nekim izvođenjima, R<4>je CN. U nekim izvođenjima, R<4>je metil.

<5>[0016] U nekim izvođenjima, R je halo, CN, ili C<5>

1-3alkil. U nekim izvođenjima, R je Cl, CN, ili metil. U nekim izvođenjima, R<5>je Cl. U nekim izvođenjima, R<5>je CN. U nekim izvođenjima, R<5>je metil.

[0017] U nekim izvođenjima:

R<2>je C1-3alkil ili C1-3fluoroalkil;

R<4>je halo, CN, ili C1-3alkil; i

R<5>je halo, CN, ili C1-3alkil.

[0018] U nekim izvođenjima:

R<2 je>metil, etil, ili 2,2-difluorometil;

R<4>je F, Cl, CN, ili metil; i

R<5>je Cl, CN, ili metil.

[0019] U nekim izvođenjima, jedinjenje je jedinjenje Formule IVa:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0020] U nekim izvođenjima, jedinjenje je jedinjenje Formule IVb:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0021] U nekim izvođenjima, jedinjenje je jedinjenje Formule IVc:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0022] U nekim izvođenjima, postupak je postupak za lečenje idiopatske trombocitopenijske purpure (ili idiopatske imunske trombocitopenijske purpure) (ITP). U nekim izvođenjima, ITP je ITP u relapsu. U nekim izvođenjima, ITP je refraktorni ITP.

[0023] U nekim izvođenjima, postupak je postupak za lečenje autoimunske hemolitičke anemije (AIHA).

[0024] U nekim izviđenjima, postupak je postupak za lečenje vaskulitisa, pri čemu je vaskulitis Behčetova bolest, Koganov sindrom, arteritis džinovskih ćelija, reumatska polimijalgija (PMR), Takajašijev arteritis, Buergerova bolest (lat. thromboangiitis obliterans), vaskulitis centralnog nervnog sistema, Kavasakijeva bolest, poliarteritis nodoza, Čarg-Štrausov sindrom, vaskulitis pomešana krioglobulinemija (esencijalni ili hepatitis C virusom (HCV)-indukovani), Henoh-Šenlajnova purpura (HSP), hipersenzitivni vaskulitis, mikroskopski poliangiitis, Vegenerova granulomatoza, ili sistemski vaskulitis povezan sa anti-neutrofilnim citoplazmatskim antitelom (ANCA) sistemski vaskulitis (AASV).

[0025] U nekim izvođenjima, predmetna prijava obezbeđuje jedinjenja kao što su definisana u patentnim zahtevima, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, za upotrebu u postupku lečenja agresivnog limfoma (npr., sličnog B ćeliji germinativnog centra (GCB) ili sličnog aktiviranoj B ćeliji (ABC)) kod pacijenta.

[0026] Podrazumeva se da određene karakteristike pronalaska, koje su, radi razumevanja, opisane u konterkstu odvojenih izvođenja, mogu takođe da budu obezbeđena u kombinaciji u jednom izvođenju. Suprotno tome, različite karakteristike iz pronalaska koje su, radi sažetosti, opisane u kontekstu jednog izvođenja, mogu takođe da budu obezbeđene odvojeno ili u bilo kojoj pogodnoj podkombinaciji.

[0027] Na različitim mestima u predmetnoj specifikaciji, opisani su divalentni supstituenti za spajanje. Specifično je namenjeno da svaki divalentni supstituent za povezivanje uključi i prednje i nazadne oblike supstituenata za povezivanje. Na primer, -NR(CR<’>R<">)n- uključuje oba - NR(CR<’>R<">)n- i -(CR<’>R<">)nNR-. Gde struktura jasno zahteva grupu za povezivanje, Markušove promenjive navedene za onu grupu se podrazumevaju da su grupe za povezivanje.

[0028] Termin "n-člani" gde n je ceo broj obično opisuje broj atoma koji obrazuju prsten u ostatku gde broj atoma koji obrazuju prsten je n. Na primer, piperidinil je primer 6-članog heterocikloalkilnog prstena, pirazolil je primer 5-članog heteroarilnog prstena, piridil je primer 6-članog heteroarilnog prstena, i 1,2,3,4-tetrahidro-naftalen je primer 10-člane cikloalkilne grupe.

[0029] Kao što se ovde koristi, fraza "opciono supstituisan" označava nesupstituisan ili supstituisan. Kao što se ovde koristi, termin "supstituisan" označava da je atom vodonika uklonjen i zamenjen je sa supstituentom. Treba razumeti da je supstitucija na datom atomu ograničena sa njegovom valencom.

[0030] Kroz definicije, termin "Cn-m " označava opseg koji uključuje krajnje tačke, pri čemu n i m su celi brojevi i označavaju broj ugljenikovih atoma. Primeri uključuju C1-4, C1-6, i slično.

[0031] Kao što se ovde koristi, termin "Cn-malkil", koji se koristi zasebno ili u kombinaciji sa drugim terminima, se odnosi na zasićenu grupu ugljovodonika koja može da bude pravog lanca ili razgranata, da ima n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, alkil grupa sadrži od 1 do 6 atoma ugljenika, od 1 do 4 atoma ugljenika, od 1 do 3 atoma ugljenika, ili 1 do 2 atoma ugljenika. Primeri alkil ostataka uključuju, ali nisu ograničeni na, hemijske grupe kao što su metil, etil, n-propil, izopropil, n- butil, tercbutil, izobutil, sek-butil; viši homolozi kao što su 2-metil-1-butil, n-pentil, 3-pentil, n-heksil, 1,2,2-trimetilpropil, i slično.

[0032] Kao što se ovde koristi, "Cn-malkenil" se odnosi na alkil grupu koja ima jedniu ili više dvostrukih ugljenik-ugljenik veza i ima n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, alkenyl ostatak sadrži 2 do 6, 2 do 4, ili 2 do 3 atoma ugljenika. Primer alkenil grupa uključuje, ali nisu ograničeni na, etenil, npropenil, izopropenil, n-butenil, sek-butenil, i slično.

[0033] Kao što se ovde koristi, "Cn-m alkinil" se odnosi na alkil grupu koja ima jednu ili više trostrukih ugljenik-ugljenik veza i ima n do m atoma ugljenika. Primer alkinil grupa uključuje, ali nisu ograničeni na, etinil, propin-1-il, propin-2-il, i slično. U nekim izvođenjima, alkinil ostatak sadrži 2 do 6, 2 do 4, ili 2 do 3 atoma ugljenika.

[0034] Kao što se ovde koristi, termin "alkilen", koji se koristi zasebno ili u kombinaciji sa drugim terminima, se odnosi na divalentnu alkil grupu za povezivanje. Primeri alkilen grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, etan-1,2-diil, propan-1,3-diil, propan-1,2-diil, butan-1,4-diil, butan-1,3-diil, butan-1,2-diil, 2-metil-propan-1,3-diil, i slično.

[0035] Kao što se ovde koristi, termin "Cn-malkoksi", oji se koristi zasebno ili u kombinaciji sa drugim terminima, se odnosi na grupu formule -O-alkil, pri čemu alkil grupa ima n do m atoma ugljenika. Primer alkoksi gropa uključuje metoksi, etoksi, propoksi (npr., n-propoksi i izopropoksi), t-butoksi, i slično. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0036] Kao što se ovde koristi, termin "Cn-malkilamino" se odnosi na grupu formule -NH(alkil), pri čemu alkil grupa ima n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0037] Kao što se ovde koristi, termin "Cn-malkoksikarbonil" se odnosi na grupu formule -C(O)O-alkil, pri čemu alkil grupa ima n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0038] Kao što se ovde koristi, termin "Cn-malkilkarbonil" se odnosi na grupu formule-C(O)-alkil, pri čemu alkil grupa ima do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0039] Kao što se ovde koristi, termin "Cn-malkilkarbonilamino" se odnosi na grupu formule -NHC(O)-alkil, pri čemu alkil grupa ima n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0040] Kao što se ovde koristi, termin "Cn-m alkilsulfonilamino" se odnosi na grupu formule-NHS(O)2-alkil, pri čemu alkil grupa ima n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, alikl grupa ima 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0041] Kao što se ovde koristi, termin "aminosulfonil" se odnosi na grupu formule -S(O)2NH2.

[0042] Kao što se ovde koristi, termin "Cn-malkilaminosulfonil" se odnosi na grupu formule -S(O)2NH(alkil), pri čemu alkil grupa ima n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0043] Kao što se ovde koristi, termin "di(Cn-m alkil)aminosulfonil" se odnosi na grupu formule -S(O)2N(alkil)2, pri čemu svaka alkil grupa nezavisno ima n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, svaka alkil grupa ima, nezavisno, 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0044] Kao što se ovde koristi, termin "aminosulfonilamino" se odnosi na grupu formule - NHS(O)2NH2.

[0045] Kao što se ovde koristi, termin "Cn-malkilaminosulfonilamino" se odnosi na grupu formule -NHS(O)2NH(alkil), pri čemu alkil grupa ima n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0046] Kao što se ovde koristi, termin "di(Cn-malkil)aminosulfonilamino" se odnosi na grupu formule -NHS(O)2N(alkil)2, pri čemu svaka alkil grupa nezavisno ima n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, svaka alkil grupa ima, nezavisno, 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0047] Kao što se ovde koristi, termin "aminokarbonilamino", koji se koristi zasebno ili u kombinaciji sa drugim terminima, se odnosi na grupu formule -NHC(O)NH2.

[0048] Kao što se ovde koristi, termin "Cn-m alkilaminokarbonilamino" se odnosi na grupu formule -NHC(O)NH(alkil), pri čemu alkil grupa ima n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0049] Kao što se ovde koristi, termin "di(Cn-malkil)aminokarbonilamino" se odnosi na grupu formule-NHC(O)N(alkil)2, pri čemu svaka alkil grupa nezavisno ima n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, svaka alkil grupa ima, nezavisno, 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0050] Kao što se ovde koristi, termin "Cn-malkilkarbamil" se odnosi na grupu formule -C(O)-NH(alkil), pri čemu alkil grupa ima n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0051] Kao što se ovde koristi, termin "tio" se odnosi na grupu formule -SH.

[0052] Kao što se ovde koristi, termin "Cn-malkiltio" se odnosi na grupu formule -S-alkil, pri čemu alkil grupa ima n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0053] Kao što se ovde koristi, termin "Cn-malkilsulfinil" se odnosi na grupu formule -S(O)-alkil, pri čemu alkil grupa ima n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0054] Kao što se ovde koristi, termin "Cn-malkilsulfonil" se odnosi na grupu formule -S(O)2-alkil, pri čemu alkil grupa ima n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0055] Kao što se ovde koristi, termin "amino" se odnosi na grupu formule-NH2.

[0056] Kao što se ovde koristi, termin "karbamil" na grupu formule -C(O)NH2.

[0057] Kao što se ovde koristi, termin "karbonil", koji se koristi zasebno ili u kombinaciji sa drugim terminima, se odnosi na -C(O)- grupu.

[0058] Kao što se ovde koristi, termin "cijano-C1-3alkil" se odnosi na grupu formule-(C1-3alkilen)-CN.

[0059] Kao što se ovde koristi, termin "HO-C1-3alkil" se odnosi na grupu formule-(C1-3alkilen)-OH.

[0060] Kao što se ovde koristi, termin "C1-3alkoksi-C1-3alkil" se odnosi na grupu formule-(C1-3alkilen)-O(C1-3alkil).

[0061] Kao što se ovde koristi, termin "karboksi" se odnosi na grupu formule-C(O)OH.

[0062] Kao što se ovde koristi, termin "di(Cn-m-alkil)amino" se odnosi na grupu formule -N(alkil)2, pri čemu od dve alkil grupe svaka ima, nezavisno, n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, svaka alkil grupa nezavisno ima 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0063] Kao što se ovde koristi, termin "di(Cn-m-alkil)karbamil" se odnosi na grupu formule -C(O)N(alkil)2, čemu od dve alkil grupe svaka ima, nezavisno, n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, svaka alkil grupa nezavisno ima 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0064] Kao što se ovde koristi, "halo" se odnosi na F, Cl, Br, ili I. U nekim izvođenjima, halo grupa je F ili Cl.

1

[0065] Kao što se ovde koristi, "Cn-m haloalkoksi" se odnosi na grupu formule -O-haloalkil koja ima n do m atoma ugljenika. Primer haloalkoksi grupe je OCF3. U nekim izvođenjima, haloalkoksi grupa je samo fluorovana. U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0066] Kao što se ovde koristi, termin "Cn-mhaloalkil", koji se koristi zasebno ili u kombinaciji sa drugim terminima, se odnosi na alkil grupu koja ima od jednog atoma halogena do 2s+1 atoma halogena koji mogu da budu isti ili različiti, pri čemu "s" je broj atoma ugljenika u alkil grupi, pri čemu alkil grupa ima n do m atoma ugljenika. U nekim izvođenjima, haloalkil grupa je samo fluorovana (npr., "fluoroalkil" grupa). U nekim izvođenjima, alkil grupa ima 1 do 6, 1 do 4, ili 1 do 3 atoma ugljenika.

[0067] Kao što se ovde koristi, "cikloalkil" se odnosi na ne-aromatične ciklične ugljovodonike uključujući ciklizovane alkil i/ili alkenil grupe. Cikloalkil grupe mogu da imaju 3, 4, 5, 6, ili 7 ugljenika koji obrazuju prsten (C3-7). Atomi ugljenika koji obrazuju prsten cikloalkilne grupe mogu opciono da budu supstituisani sa okso ili sulfido. Cikloalkilne grupe takođe uključuju cikloalkilidene. Primeri cikloalkilnih grupa uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklopentenil, cikloheksenil, cikloheksadienil, cikloheptatrienil, i slične. U nekim izvođenjima, cikloalkil je ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, ili cikloheksil. Takođe uključeni u definiciju cikloalkila su ostaci koji imaju jedan ili više spojenih aromatičnih prstenova (tj., koji imaju zajedničku vezu sa) cikloalkilnim prstenom, na primer, benzo ili tienil derivati ciklopentana, cikloheksana, i slično.

[0068] Kao što se ovde koristi, "heteroaril" se odnosi na monociklični aromatični heterocikl koji ima bar jedan heteroatom član prstena koji je izabran između sumpora, kiseonika, i azota. U nekim izvođenjima, heteroarilni prsten ima 1, 2, 3, ili 4 heteroatoma člana prstena nezavisno izabranih između azota, sumpora i kiseonika. U nekim izvođenjima, bilo koji N koji obrazuje prsten u heteroarilnom ostatku može da bude N-oksid. U nekim izvođenjima, heteroaril ima 5-6 atoma u prstenu i 1 ili 2 člana heteroatoma u prstenu nezavisno izabranih između azota, sumpora i kiseonika. U nekim izvođenjima, heteroaril je petočlani ili šestočlani heteroarilni prsten.

[0069] Peto-člani heteroarilni prsten je heteroaril sa prstenom koji ima pet atoma u prstenu pri čemu jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) atoma u prstenu su nezavisno izabrani između N, O, i S. Primer petočlanih prstena heteroarila su tienil, furil, pirolil, imidazolil, tiazolil, oksazolil, pirazolil, izotiazolil, izoksazolil, 1,2,3-triazolil, tetrazolil, 1,2,3-tiadiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2,4-triazolil, 1,2,4-tiadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,3,4-triazolil, 1,3,4-tiadiazolil, i 1,3,4-oksadiazolil.

[0070] Šestočlani heteroarilni prsten je heteroaril sa prstenom koji ima šest atoma u prstenu pri čemu jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) atoma u prstenu su nezavisno izabrani između N, O, i S. Primer šestočlanog prstena heteroarila su piridil, pirazinil, pirimidinil, triazinil i piridazinil.

[0071] Kao što se ovde koristi, "heterocikloalkil" se odnosi na ne-aromatične monociklične heterocikle koji imaju jedan ili više heteroatoma koji obrazuju prsten koji su izabrani između O, N, ili S. U heterocikloalkilu su uključeni monociklične 4-, 5-, 6-, i 7-člane heterocikloalkilne grupe. Primer heterocikloalkilnih grupa uključuju pirolidin-2-on, 1,3-izoksazolidin-2-on, piranil, tetrahidropuran, oksetanil, azetidinil, morfolino, tiomorfolino, piperazinil, tetrahidrofuranil, tetrahidrotienil, piperidinil, pirolidinil, izoksazolidinil, izotiazolidinil, pirazolidinil, oksazolidinil, tiazolidinil, imidazolidinil, azepanil, 3-okso-morfolin-6-il, 2-oksopirolidin-4-il, 2-okso-oksazolidin-4-il, 2-okso-oksazolidin-5-il, i slično. Atomi ugljenika koji obrazuju prsten i heteroatomi heterocikloalkilne grupe mogu opciono da budu supstituisani sa okso ili sulfido (npr., C(O), S(O), C(S), ili S(O)2, itd.). Heterocikloalkilna grupa može da bude vezana preko atoma ugljenika koji obrazuje prsten ili heteroatoma koji obrazuje prsten. U nekim izvođenjima, heterocikloalkilna grupa sadrži 0 do 3 dvostrukih veza. U nekim izvođenjima, heterocikloalkilna grupa sadrži 0 do 2 dvostruke veze. U nekim izvođenjima, heterocikloalkil ima 4-7 ili 4-6 atoma u prstenu sa 1 ili 2 heteroatoma nezavisno izabranih između azota, kiseonika ili sumpora i koji ima jedan ili više oksidovanih članova u prstenu.

[0072] Na određenim mestima, definicije ili izvođenja se odnose na specifične prstenove (npr., azetidinski prsten, piridinski prsten, itd.). Osim ukoliko nije drugačije naznačeno, ovi prstenovi mogu da budu vezani sa bilo kojim članom prstena pod uslovom da valentnost atoma nije prekoračena. Na primer, azetidinski prsten može da bude vezan na bilo kom položaju u prstenu, pri čemu prsten azetidin-3-ila je vezan na položaju 3.

[0073] Ovde opisana jedinjenja mogu da budu asimetrična (npr., koje ima jedno ili više stereocentara). Svi stereoizomeri, kao što su enantiomeri i diastereoizomeri, su namenjeni osim ukoliko nije drugačije naznačeno. Jedinjenja iz predmetnog pronalaska koja sadrže asimetrični supstituisani atom ugljenika mogu da budu izolovana u optički aktivnim ili racemskim oblicima. U oblasti tehnike su poznati postupci kako mogu da se dobiju optički aktivni oblici iz optički neaktivnih polaznih materijala, kao što je rezolucijom racemskih smeša ili stereoselektivnom sintezom. Mnogi geometrijski izomeri olefina, C=N dvostrukih veza, i slično mogu takođe da se nalaze u ovde opisanim jedinjenjima, i svi takvi stabilni izomeri su razmatrani u predmetnom pronalasku. Opisani su cis i trans geometrijski izomeri jedinjenja iz predmetnog pronalaska I mogu da budu izolovani kao smeša izomera ili kao razdvojeni izomerni oblici.

U nekim izvođenjima, jedinjenje ima (R)-konfiguraciju. U nekim izvođenjima, jedinjenje ima (S)-konfiguraciju.

[0074] Rezolucija racemskih smeša jedinjenja može da se izvede bilo kojim od brojnih postupaka koji su poznati u oblasti tehnike. Primer postupka uključuje frakcionu rekristalizaciju upotrebom kiseline za hiralno razdvajanje koja je optički aktivna, organsku kiselinu za obrazovanje soli. Pogodna sredstva za razdvajanje za postupke frakcione rekristalizacije su, na primer, optički aktivne kiseline, kao što su D i L oblici vinske kiselie, diacetilvinska kiselina, dibenzilvinska kiselina, bademova kiselina, jabučna kiselina, mlečna kiselina ili različite optički aktivne kamforsulfonske kiseline kao što su βkamforsulfonska kiselina. Druga sredstva za razdvajanje koja su pogodna za postupke frakcione kristalizacije uključuju stereoizomerno čiste oblike α-metilbenzilamina (npr., S i R oblici, ili diastereoizmerno čisti oblici), 2-fenilglicinol, norefedrin, efedrin, N-metilefedrin, cikloheksiletilamin, 1,2-diaminocikloheksan, i slično.

[0075] Rezolucija recemskih smeša može takođe da se izvede eluiranjem na koloni koja je spakovana sa optički aktivnim sredstvom za razdvajanje (npr., dinitrobenzoilfenilglicin). Pogodna kompozicija rastvarača za eluiranje može da bude određena od strane stručnjaka iz oblasti tehnike.

[0076] Ovde opisana jedinjenja takođe uključuju tautomerne oblike. Tautomerni oblici se dobijaju iz zamene jednostruke veze sa susednom dvostrukom vezom zajedno sa istovremenim prelaskom protona. Tautomerni oblici uključuju prototropne tautomere koji su izomerna stanja protonacije koji imaju istu empririjsku formulu i ukupno naelektrisanje. Primeri prototropnih tautomera uključuju keto- enolne parove, amidno - imidne kiselinske parove, laktam - laktim parove, enamin - imin parove, i prstenaste oblike u kojima proton može da zauzme dva ili više položaja u heterocikličnom sistemu, na primer, 1H- i 3H- imidazol, 1H-, 2H- i 4H- 1,2,4-triazol, 1H- i 2H-izoindol, i 1H- i 2H-pirazol. Tautomerni oblici mogu da budu u ekvilibrijumu ili sterno zaključani u jedan oblik odgovarajućom supstitucijom.

[0077] Ovde opisana jedinjenja mogu takođe da uključe sve isotope atoma koji se pojavljuje u intermedijeru ili konačnim jedinjenjima. Izotopi uključuju one atome koji imaju isti atomski broj ali različite masene brojeve. Na primer, izotopi vodonika uključuju tricijum i deuterijom.

[0078] Termin, "jedinjenje," kao što se ovde koristi je namenjen da uključi sve stereoizomere, geometrijske iozomere, tautomere, i izotope predstavljenih struktura. Ovde identifikovana jedinjenja sa imenom ili strukturom kao jedan poseban tautomerni oblik su namenjena da uključe druge tautomerne oblike osim ukoliko nije drugačije naznačeno.

[0079] Sva jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, mogu da se nađu zajedno sa drugim supstancama kao što su voda i rastvarači (npr. hidrati ili solvati) ili mogu da budu izolovani.

[0080] U nekim izvođenjima, ovde opisana jedinjenja, ili njihove soli, su u suštini izolovani. Pod "u suštini izolovani" znači da je jedinjenje bar delom ili u suštini odvojeno iz okruženja u kome je nastalo ili je detektovano. Delimično razdvajanje može da uključi, na primer, kompoziciju koja je obogaćena u ovde opisanim jedinjenjima. Suštinsko razdvajanje može da uključu kompozicije koje sadrž bar oko 50%, bar oko 60%, bar oko 70%, bar oko 80%, bar oko 90%, bar oko 95%, bar oko 97%, ili bar oko 99% u odnosu na masu ovde opisanog jedinjenja, ili njegove soli. Postupci za izolovanje soli i njihovih soli su rutina u oblasti tehnike.

[0081] Fraza "farmaceutski prihvatljiva" je ovde naznačena da se odnosi na ona jedinjenja, materijale, kompozicije, i/ili dozne oblike koji su, u okviru zdrave medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima humanih bića i životinja brz prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odogovora, ili drugog problema ili komplikacije, srazmero razumnom odnosu benefita/rizika.

[0082] Izrazi, "ambijentalna temeratura" i "sobna temperatura" ili "st" kao što se ovde koriste, su jasni u oblasti tehnike, i generalno se odnose na temperaturu, npr. temperaturu reakcije, koja je plibližna temperaturi sobe u kojoj se reakcija izvodi, npr, temperatura od oko 20 °C do oko 30 °C.

[0083] Predmetni pronalazak takođe uključuje farmaceutski prihvatljive soli ovde opisanih jedinjenja. Kao što se ovde koristi, "farmaceutski prihvatljive soli" se odnosi na derivate prikazanih jedinjenja pri čemu je roditeljski molekul modifikovan koverzijom postojećeg ostatka kiseline ili baze u njegov oblik soli. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli uključuju, ali nisu ograničeni na, mineralne ili soli organskih kiselina baznih ostataka kao što su amini; alkalne ili organske soli kiselih ostataka kao što su karboksilne kiseline; i slično. Farmaceutski prihvatljive soli predmetnog pronalaska uključuju konvencionalne ne-toksične soli obrazovanog roditeljskog jedinjenja, na primer, iz ne-toksičnih neorganskih ili organskih kiselina. Farmaceutski prihvatljive soli predmetnog pronalaska mogu da se sintetišu iz roditeljskog jedinjenja koje sadrži bazni ili kiseli ostatak konvencionalnim hemijskim postupcima. Generalno, takve soli mogu da se dobiju reagovanjem slobodnih oblika kiselina ili baza ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze ili kiseline u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u smeši ta dva; generalno, ne-vodeni medijum kao što je etar, etil acetat, alkoholi (npr., metanol, etanol, izo-propanol, ili butanol) ili acetonitril (ACN) su poželjni. Lista pogodni soli može da se nađe u Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p.1418 and Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977).

Postupci

[0084] Ovde opisana jedinjenja mogu da moduliraju aktivnost jedne ili više različitih kinaza uključujući, na primer, fosfoinozitid 3-kinaze (PI3K-e). Termin "modulirati" je namenjen da označi sposobnost da se poveća ili smanji aktivnost jednog ili više članova familije PI3K. Prema tome, ovde opisana jedinjenja mogu da se koriste u postupcima modulacije PI3K dovođenjem u kontakt PI3K sa bilo kojim ili više jedinjenja ili ovde opisanih kompozicija. U nekim izvođenjima, jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu da deluju kao inhibitori jednog ili više PI3K-a. U daljim izvođenjima, ovde opisana jedinjenja mogu da se koriste za modulaciju aktivnosti PI3K kod individue kome je potrebna modulacija receptora

1

davanjem količine ovde opisanog jedinjenja za modulaciju, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U nekim izvođenjima, modulacija je inhibiranje.

[0085] S obzirom da je rast ćelija kancera i preživljavanje pod uticajem brojnih signalnih puteva, predmetni pronalazak je koristan za lečenje stanja bolesti koja su karakterisana mutantima kinaze koji su otporni na lekove. Pored toga, različiti inhibitori kinaze, koji ispoljavaju različite preference u kinazama čije aktivnosti oni moduliraju, mogu da se koriste u kombinaciji. Ovaj pristup bi se mogao pokazati visoko efikasnim u lečenju stanja bolesti ciljanjem brojnih signalnih puteva, smanjenjem verovatnoće nastanka otpornosti prema leku u ćeliji, i smanjenjem tokičnosti tretmana za bolest.

[0086] Kinaze za koje se vezuju jedinjenja iz predmenog pronalaska i/ili moduliraju (npr., inhibiraju) uključuju bilo koji član PI3K familije. U nekim izvođenjima, PI3K je PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kγ, ili PI3Kδ. U nekim izvođenjima, PI3K je PI3Kγ ili PI3Kδ. U nekim izvođenjima, PI3K je PI3Kγ. U nekim izvođenjima, PI3K je PI3Kδ. U nekim izvođenjima, PI3K uključuje mutaciju. Mutacija može da bude zamena jedne aminokiseline drugom, ili delecija jedne ili više aminokiselina. U takvim izvođenjima, mutacija može da se nalazi u kinaznom domenu PI3K.

[0087] U nekim izvođenjima, više od jednog jedinjenja koje se ovde opisuje je korišćeno za inhibiranje aktivnosti jedne kinaze (npr., PI3Kγ ili PI3Kδ).

[0088] U nekim izvođenjima, više od jednog jedinjenja koje se ovde opisuje je korišćeno za inhibiranje više od jedne kinaze, kao što su najmanje dve kinaze (npr., PI3Kγ i PI3Kδ).

[0089] U nekim izvođenjima, jedno ili više od jednog jedinjenja je korišćeno u kombinaciji sa drugim kinaznim inhibitorom da se inhibira aktivnost jedne kinaze (npr., PI3Kγ ili PI3Kδ).

[0090] U nekim izvođenjima, ili više od jednog jedinjenja je korišćeno u kombinaciji sa drugim kinaznim inhibitorom da se inhibiraju aktivnosti više od jedne kinaze (npr., PI3Kγ ili PI3Kδ), kao što su bar dve kinaze.

[0091] Ovde opisana jedinjenja mogu da budu selektivna. Pod "selektivna" je označeno da se jedinjenje vezuju za ili inhibira kinazu sa većim afinitetom ili potencijom, redom, u poređenju sa bar jednom drugom kinazom. U nekim izvođenjima, ovde opisana jedinjenja su selektivni inhibitori PI3Kγ ili PI3Kδ u odnosu na PI3Kα i/ili PI3Kβ. U nekim izvođenjima, ovde opisnaa jedinjenja su selektivi inhibitori PI3Kδ (npr., u odnosu na PI3Kα, PI3Kβ i PI3Kγ). U nekim izvođenjima, ovde opisana jedinjenja su selektivni inhibitori PI3Kγ (npr., preko PI3Kα, PI3Kβ i PI3Kδ). U nekim izvođenjima, selektivnost može da bude bar oko 2-puta, 5-puta, 10-puta, bar oko 20-puta, bar oko 50-puta, bar oko 100-puta, bar oko 200-puta, bar oko 500-puta ili bar oko 1000-puta. Selektivnost može da se izmeri rutinskim postupcima iz oblasti tehnike. U nekim izvođenjima, može da se ispita selektivnost na KmATP koncentracije. U nekim izvođenjima, selektivnost ovde opisanih jedinjenja može da se odredi sa ćelijskim testovima koji su povezani sa određenom PI3K kinaznom aktivnosti.

[0092] Kao što se ovde koristi, termin "dovođenje u kontakt" se odnosi na dovođenje u kontakt naznačenih ostataka u in vitro sistemu ili u in vivo sistemu. Na primer, "dovođenje u kontakt" PI3K sa ovde opisanim jedinjenjem uključuje davanje jedinjenja iz predmetnog pronalaska individui ili pacijentu, kao što je čovek, koji ima PI3K, kao i, na primer, uvođenje ovde opisanog jedinjenja u uzorak koji sadrži ćelijski ili prečišćeni preparat koji sadrži PI3K.

[0093] Kao što se ovde koristi, termin "individua" ili "pacijent," se koristi naizmenično, odnosi se na bilo koju životinju, uključujući sisare, poželjno miševe, pacove, druge glodare, zečeve, pse, mačke, svinju, stoku, ovce, konje, ili primate, i najpoželjnije ljude.

[0094] Kao što se ovde koristi, fraza "terapeutski efikasna količina" se odnosi na količinu aktivnog jedinjenja ili farmaceutskog sredstva koje pokreće biološki ili medicinski odgovor koji se traži u tkivu, sistemu, životinji, individui ili čoveku od strane istraživača, veterinara, medinskog lekara ili drugog kliničara. U nekim izvođenjima, doza jedinjenja, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koja se daje pacijentu ili individui je oko 1 mg do oko 2 g, oko 1 mg do oko 1000 mg, oko 1 mg do oko 500 mg, oo 1 mg do oko 100 mg, oko 1 mg do 50 mg, ili oko 50 mg do oko 500 mg.

[0095] Kao što se ovde koristi, termin "lečenje" ili "tretman" se odnosi na jedno ili više od (1) prevencije bolesti; na primer, prevencije bolesti, stanja ili poremećaja kod individue koja može da bude predisponirana da razvije bolest, stanje ili poremećaj ali još ne prolazi kroz ili ispoljava patologiju ili simptomatologiju bolesti; (2) inhibiranje bolesti; na primer, inhibiranja bolesti, stanja ili poremećaja kod individue koja prolazi kroz ili ispoljava patologiju ili simptomatologiju bolesti, stanja ili poremećaja (tj., zaustavljanje daljeg razvoja patologije i/ili simptomatologije); i (3) ublažavanja bolesti; na primer, ublažavanja bolesti, stanja ili poremećaja kod individue koja prolazi kroz ili ispoljava patologiju ili simptomatologiju bolesti, stanja ili poremećaja (tj., reverzijom patologije i/ili simptomatologije) kao što je smanjenje težine bolesti.

Kombinovane terapije

[0096] Jedan ili više dodatnih farmaceutskih sredstava kao što su, na primer, hemoterapeutici, antizapaljenska sredstva, steroidi, imunosupresanti, kao i Bcr-Abl, Flt-3, EGFR, HER2, JAK (npr., JAK1 ili JAK2), c-MET, VEGFR, PDGFR, cKit, IGF-1R, RAF, FAK,Akt mTOR, PIM, i AKT (e.g., AKT1, AKT2, ili AKT3) kinazni inhibitori kao što su, na primer, oni koji su opisani u WO 2006/056399, ili druga sredstva kao što su, terapeutska antitela mogu da se koriste u kombinaciji sa jedinjenjima iz predmetnog pronalaska za lečenje PI3K-povezanih bolesti, poremećaja ili stanja. Jedno ili više dodatnih terapeutskih sredstava mogu da se daju pacijentu istovremeno ili sekvencijalno.

[0097] Primeri antitela za upotrebu u kombinovanoj terapiji uključuju ali nisu ograničeni na Trastuzumab (npr. anti-HER2), Ranibizumab (npr. anti-VEGF-A), Bevacizumab (zaštićeno ime Avastin, npr. anti-VEGF, Panitumumab (npr. anti-EGFR), Cetuksimab (npr. anti-EGFR), Rituksan (anti-CD20) i antitela koja su usmerena prema c-MET.

[0098] Jedan ili više od sledećih sredstava mogu da se koriste u kombinaciji sa jedinjenjima iz predmetnog pronalaska i prikazani su na listi koja nije ograničavajuća: citostatsko sredstvo, cisplatin, doksorubicin, taksoter, taksol, etopozid, irinotekan, kamptostar, topotekan, paklitaksel, docetaksel, epotiloni, tamoksifen, 5-fluorouracil, metokstreksat, temozolomid, ciklofosfamid, SCH 66336, R115777, L778,123, BMS 214662, Iressa, Tarceva, antitela specifična za EGFR, Gleevec<TM>, intron, ara-C, adriamicin, citoksan, gemcitabin, Uracil iperit, hlormetin, Ifosfamid, Melfalan, hlorambucil, Pipobroman, Trietilenmelamin, Trietilentiofosforamin, Busulfan, Karmustin, Lomustin, Streptozocin, Dakarbazin, Floksuridin, Citarabin, 6-Merkaptopurin, 6-Tioguanin, Fludarabin fosfat, oksaliplatin, leukovirin, ELOXATIN<TM>, Pentostatin, Vinblastin, Vinkristin, Vindesin, Bleomicin, Daktinomicin, Daunorubicin, Doksorubicin, Epirubicin, Idarubicin, Mitramicin, Deoksikoformicin, Mitomicin-C, L-Asparaginaza, Tenipozid 17.alfa.-Etinilestradiol, Dietilstilbestrol, Testosteron, Prednizon, Fluoksimesteron, Dromostanolon propionat, Testolakton, Megestrolacetat, Metilprednizolon, Metiltestosteron, Prednizolon, Triamcinolon, hlorotrianisen, Hidroksiprogesteron, Aminoglutetimid, Estramustin, Medroksiprogesteronacetat, Leuprolid, Flutamid, Toremifen, goserelin, Cisplatin, Karboplatin, Hidroksiurea, Amsakrin, Prokarbazin, Mitotan, Mitoksantron, Levamizol, Navelben, Anastrazol, Letrazol, Kapecitabin, Reloksafin, Droloksafin, Heksametilmelamin, Avastin, herceptin, Bexxar, Velkad, Zevalin, Trisenoks, Kseloda, Vinorelbin, Porfimer, Erbituks, Lipozomal, Tiotepa, Altretamin, Melfalan, Trastuzumab, Lerozol, Fulvestrant, Eksemestan, Fulvestrant, Ifosfomid, Rituksimab, C225, Kampat, Klofarabin, Kladribin, afidikolon, rituksan, sunitinib, dazatinib, tezacitabin, Sml1, fludarabin,

1

pentostatin, triapin, didoks, trimidoks, amidoks, 3-AP, MDL-101,731, bendamustin (Treanda), ofatumumab, ili GS-1101 (takođe poznat pod imenom CAL-101).

[0099] Primer hemoterapeutika uključuje inhibitore proteazoma (npr., bortezomib), talidomid, revlimid, i sredstva koja oštećuju DNK – kao što je melfalan, doksorubicin, ciklofosfamid, vinkristin, etopozid, karmustin, i slično.

[0100] Primer steroida uključuje kortikosteroide kao što su deksametazon i prednizon.

[0101] Primer Bcr-Abl inhibitora uključuje jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, roda i vrsta koje su prikazane u U.S. Pat. No.5,521,184, WO 04/005281, i U.S. Ser. No.60/578,491.

[0102] Primeri pogodnih Flt-3 inhibitora uključuju jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je prikazano u WO 03/037347, WO 03/099771, i WO 04/046120.

[0103] Primeri pogodnih RAF inhibitora uključuju jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je prikazano u WO 00/09495 i WO 05/028444.

[0104] Primer pogodnih FAK inhibitora uključuje jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je prikazano u WO 04/080980, WO 04/056786, WO 03/024967, WO 01/064655, WO 00/053595, i WO 01/014402.

[0105] Primer pogodnih inibitora mTOR uključuje jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je prikazano u WO 2011/025889.

[0106] U nekim izvođenjima, jedinjenja iz pronalaska mogu da se koriste u kombinaciji sa jednim ili više ihibitora kinaze uključujući imatinib, posebno za lečenje pacijenata koji su otporni na imatinib ili drugim kinaznim ihibitorima.

[0107] U nekim izvođenjima, jedinjenja iz pronalaska mogu da se koriste u kombinaciji sa hemoterapeutikom kod lečenja kancera, kao što je multipli mijelom, i može da unapredi odgovor na tretman u poređenju na odgovor na samo hemoterapeutsko sredstvo, bez pogoršanja njegovih toksičnih efekata. Primeri dodatnih farmaceutskih sredstava koja se koriste u lečenju multiplog mijeloma, na primer, mogu da uključe, bez ograničenja, melfalan, melfalan plus prednizon [MP], doksorubicin, deksametazon, i Velkad (bortezomib). Dalja dodatna sredstva koja se koriste u lečenju multiplog mijeloma uključuju Bcr-Abl, Flt-3, RAF i FAK kinazne inhibitore. Aditivni ili sinergistički efekti su poželjni ishodi kombinovanja PI3K inhibitora iz predmetnog pronalaska sa dodatnim sredstvom. Osim toga, rezistentnost ćelija multiplog mijeloma na sredstva kao što su deksametazon može da bude reverzibilna nakon tretmana sa PI3K inhibitorom iz predmetnog pronalaska. Sredstva mogu da se kombinuju sa predmetnim jedinjenjem u jednom ili u kontinuiranom doznom obliku, ili sredstva mogu da se ordiniraju istovremeno ili sekvencijalno u odvojenim doznim oblicima.

[0108] U nekim izvođenjima, kortikosteroid kao što je deksametazon se daje u kombinaciji sa jedinjenjima iz pronalaska gde se deksametazon daje povremeno za razliku od kontinuiranog davanja.

[0109] U nekim daljim izvođenjima, kombinacije jedinjenja iz pronalaska sa drugim terapeutskim sredstvima mogu da se daju pacijentu pre, tokom, i/ili posle transplantacije kostne srži ili transplantacije stem ćelija.

1

Farmaceutske formulacije i dozni oblici

[0110] Kada se primenjuju kao farmaceutska sredstva, ovde opisana jedinjenja mogu da se daju u obliku farmaceutskih kompozicija. Ove kompozicije mogu da se dobiju na način koji je dobro poznat u farmaceutskoj oblasti tehnike, i mogu da se daju različitim načinima davanja, u zavisnosti da li je poželjan lokalni ili sistemski efekat i od površine koja treba da se tretira. Davanje može da bude lokalno (uključujući transdermalno, epidermalno, oftamološko i na mukoznim membranama uključujući intranazalnu, vaginalnu i rektalnu isporuku), plućnu (npr., by inhalacijom ili insuflacijom praha ili aerosoli, uključujući pomoću nebulizatora; intratrahealno ili intranazalno), oralno ili parenteralno. Parenteralno davanje uključuje intravenozno, intraarterijsko, subkutanozno, intraperitonealno intramuskularno ili davanje injekcijom ili infuzijom; ili intrakranijalno, npr., intratekalno ili intraventrikularno davanje. Parenteralno davanje može da bude u obliku jedne bolus doze, ili može da bude, na primer, kontinuiranom perfuzijskom pumpom. Farmaceutske kompozicije i formulacije za lokalno davanje mogu da uključe transdermalne flastere, masti, losione, kreme, gelove, kapi, supozitorije, sprejeve, tečnosti i praškove. Konvencionalni farmaceutski nosači, vodeni, u obliku praha ili sa uljanom bazom, sredstva za zgrudvavanje i slično mogu da budu neophodni ili poželjni.

[0111] Ovaj pronalazak takođe uključuje farmaceutske kompozicije koje sadrže, kao aktivni sastojak, ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača (ekscipijenasa). U nekim izvođenjima, kompozicija je pogodna za lokalno davanje. U dobijanju kompozicija iz pronalaska, aktivni sastojak je obično pomešan sa ekscipijensom, razblažen sa ekscipijensom ili je zatvoren unutar takvog nosača u obliku, na primer, kapsule, kesice, papira, ili drugog kontejnera. Kada ekscipijens služi kao razblaživač, može da bude čvrsti, polu-čvrsti, ili tečni materijal, koji deluje kao nosač, nosač ili medijum za aktivni sastojak. Prema tome, kompozicije mogu da budu u obliku tableta, pilula, prahova, lozengi, kesica, kapsule, eliksiri, suspezije, emulzije, rastvori, sirupi, aerosoli (kao čvrste supstance ili u tečnom medijumu), ulja koja sadrže, na primer, do 10% u odnosu na težinu aktivnog jedinjenja, meke i tvrde želatinske kapsule, supozitorije, sterilni injektabilni rastvori, i sterilni spakovani praškovi.

[0112] U dobijanju formulacije, aktivno jedinjenje može da bude samleveno da se obezbedi odgovarajuća veličina čestica pre kombinovanja sa drugim česticama. Ukoliko je aktivno jedinjenje u suštini nerastvorljivo, može da bude samleveno do veličine čestica manje od 200 meša. Ukoliko je aktivno jedinjenje u suštini nerastvorljivo u vodi, veličina čestice može da bude prilagođena mlevenjem da se obezbedi u suštini jednoobrazna distribucija u formulaciji, npr. oko 40 meša.

[0113] Ovde opisana jedinjenja mogu da budu samlena upotrebom poznatih postupaka za mlevenje kao što je vlažno mlevenje da se dobije veličina čestica koja je odgovarajuća za obrazovanje tablete i za druge tipove formulacije. Fino podeljeni (nanočestični) preparati ovde opisanih jedinjenja mogu da se dobiju postupcima poznatim iz oblasti tehnike, npr., videti Međunarodnu Prij. br. WO 2002/000196.

[0114] Neki primeri pogodnih ekscipijenasa uključuju laktozu, dekstrozu, saharozu, sorbitol, manitol, skrobove, gumu akaciju, kalcijum fosfat, alginate, tragakant, želatin, kalcijum silikat, mikrokristalnu celulozu, polivinilpirolidon, celulozu, vodu, sirup, i metil celulozu. Formulacije dodatno mogu da uključe: sredstva za vlaženje kao što su talk, magnezijum stearat, i mineralno ulje; sredstva za vlaženje; emulgovanje i sredstva za suspenziju; sredstva za suspenziju kao što su metil- i propilhidroksi-benzoati; sredstva za zaslađivanje; i sredstva za davanje ukusa. Kompozicije iz pronalaska mogu da budu formulisane tako da se obezbedi brzo, produženo ili odloženo oslobađanje aktivnog sastojka posle davanja pacijentu korišenjem postupaka koji su poznati u oblasti tehnike.

[0115] Kompozicije mogu da budu formulisane u jediničnom doznom obliku, svaka doza sadrži od oko 5 do oko 1000 mg (1 g), uobičajeno oko 100 do oko 500 mg, aktivnog sastojka. Termin "jedinični dozni

1

oblici" se odnosi na fizički diskretne jedinice koje su pogodne za jedinično doziranje za humane subjekte i druge sisare, svaka jedinica koja sadrži prethodno određenu količinu aktivnog materijala za koji je izračunato da proizvodi željeni terapeutski efekat, u vezi sa pogodnim farmaceutskim ekscipijensom.

[0116] U nekim izvođenjima, kompozicije iz pronalaska sadrže od oko 5 do oko 50 mg aktivnog sastojka. Stručnjak koji je uobičajeno verziran u stanje tehnike će razumeti da ovo obuhvata kompozicije koje sadrže od oko 5 do oko 10, oko 10 do oko 15, oko 15 do oko 20, oko 20 do oko 25, oko 25 do oko 30, oko 30 do oko 35, oko 35 do oko 40, oko 40 do oko 45, ili oko 45 do oko 50 mg aktivnog sastojka.

[0117] U nekim izvođenjima, kompozicije iz pronalaska sadrže od oko 50 do oko 500 mg aktivnog sastojka. Stručnjak sa uobičajenim znanjem iz oblasti tehnike će razumeti da ovo obuhvata kompozicije koje sadrže oko 50 do oko 100, oko 100 do oko 150, oko 150 do oko 200, oko 200 do oko 250, oko 250 do oko 300, oko 350 do oko 400, ili oko 450 do oko 500 mg aktivog sastojka.

[0118] U nekim izvođenjima, kompozicije iz pronalaska sadrže od oko 500 do oko 1000 mg aktivnog sastojka. Stručnjak sa uobičajenim znanjem iz oblasti tehnike će razumeti da ovo obuhvata kompozicije koje sadrže oko 500 do oko 550, oko 550 do oko 600, oko 600 do oko 650, oko 650 do oko 700, oko 700 do oko 750, oko 750 do oko 800, oko 800 do oko 850, oko 850 do oko 900, oko 900 do oko 950, ili oko 950 do oko 1000 mg aktivnog sastojka.

[0119] Slične doze mogu da se koriste za ovde opisana jedinjenja u postupcima i upotrebama iz pronalaska.

[0120] Aktivno jedinjenje može da bude efikasno u širokom doznom opsegu i generalno se daje u farmaceutski efikasnoj količini. Treba razumeti, međutim, da količina jedinjenja koje se ustvari daje će ustvari biti određena od strane lekara, prema relevantnim okolnostima, uključujući stanje koje se leči, izabranog načina davanja, stvarno jedinjenje koje se daje, starosna dob, težina, i odgovor kod individualnog pacijenta, težine simptoma pacijenta, i slično.

[0121] Za dobijanje čvrstih kompozicija kao što su tablete, glavni aktivni sastojak je pomešan sa farmaceutskim ekscipijensom da se obrazuje kompozicija čvrste preformulacije koja sadrži homogenu smešu jedinjenja iz predmetnog pronalaska. Kada se odnosi na ove kompozicije preformulacije kao homogene, aktivni sastojak je jednako raspršen kroz kompoziciju tako da kompozicija može brzo da bude podeljena u jednako efektivne jedinične dozne oblike kao što su tablete, pilule i kapsule. Ova čvrsta preformulacija je nakon toga podeljena u jedinične dozne oblike tipa koji se gore opisuje koji sadrži od, na primer, oko 0.1 do oko 1000 mg aktivnog sastojka iz predmetnog pronalaska.

[0122] Tablete ili pilule iz predmetnog pronalaska mogu da budu obložene ili na neki način obuhvaćena da se dobije dozni oblik koji omogućava prednost produženog dejstva. Na primer, tablet ili pilula može da obuhvati unutrašnju doznu i spoljašnju doznu komponentu, pri čemu je poslednja u obliku omotača preko prve. Dve komponente mogu da budu razdvojene gastrorezistentnim slojem koji služi da se odupre razlaganju u stomaku i omogući unutrašnjoj komponenti da intaktna prođe u duodenum ili da bude sa odloženim oslobađanjem. Mogu da se koriste različiti materijali za takva gastrorezistentne slojeve ili oblaganja, takvi materijali uključuju brojne polimerne kiseline i smeše polimernih kiselina sa takvim materijalima kao što su šelak, cetil alkohol, i celulozni acetat.

[0123] Tečni oblici u kojima jedinjenja i kompozicije iz predmetnog pronalaska mogu da budu uključena za oralno davanje ili za davanje injekcijom uključuju vodene rastvore, pogodne

1

aromatizovane sirupe, vodene ili uljane suspenzije, i aromatizovane emulzije sa jestivim uljima kao što su laneno ulje, susamovo ulje, kokosovo ulje, ili ulje kikirikija, kao i eliksiri i slični farmaceutski nosači.

[0124] Kompozicije za inhalaciju ili insuflaciju uključuju rastvore i suspenzije u farmaceutski prihvatljivim, vodenim ili organskim rastvaračima, ili njihovim smešama, i prahove. Tečne ili čvrste kompozicije mogu da sadrže pogodne farmaceutski prihvatljive ekscipijense kao što se opisuje sa supra. U nekim izvođenjima, kompozicije se daju oralnim ili nazalnim respiratornim načinom za lokalni ili sistemski efekat. Kompozicije mogu da budu nebulizovane korišćenjem inertnih gasova. Nebulizovani rastvor može da se direktno udahne iz sprave za nebulizaciju ili sprava za nebulizaciju može da bude povezana sa maskom za lice, drenom, ili mašinom za disanje sa pozitivim pritiskom sa prekidima. Rastvor, suspenzija, ili kompozicije u prahu mogu da se daju oralno ili nazalno iz sprava koje ispoljavaju formulaciju na odgovarajući način.

[0125] Formulacije za lokalno davanje mogu da sadrže jedan ili više pogodnih nosača. U nekim izvođenjima, masti mogu da sadrže vodu i jedan ili više od hidrofobnih nosača izabranih između, na primer, tečnog parafina, polioksietilen alkil etra, propilen glikola, belog vazelina, i slično. Nosači kompozicije u obliku kreme mogu da budu zasnovani na vodi u kombinaciji sa glicerolom i jednom ili više drugih komponenti, npr. glicerinmonostearatom, PEG-glicerinmonostearatom i cetil-stearil alkoholom. Gelovi mogu da budu formulisani upotrebom izopropil alkohola i vode, pogodno u kombinaciji sa drugim komponentama kao što su, na primer, glicerol, hidroksietil celuloza, i slično. U nekim izvođenjima, formulacije za lokalno davanje sadrže bar oko 0.1, bar oko 0.25, bar oko 0.5, bar oko 1, bar oko 2, ili bar oko 5 mas % jedinjenja kao što je ovde opisano. Formulacije za lokalno davanje mogu pogodno da budu spakovane u tubama od, na primer, 100 g koji su opciono povezani sa instrukcijama za lečenje odabrane indikacije, npr., psorijaze ili drugog stanja kože.

[0126] Količina jedinjenja ili kompozicije koja se daje pacijentu će se razlikovati u zavisnosti od toga šta se daje, svrhe davanja, kao što je profilaksa ili terapija, stanja pacijenta, načina davanja, i sličnog. U terapeutskim primenama, kompozicije mogu da se daju pacijentu koji već pati od bolesti u količini koja je dovoljna da se izleče ili bar delom zaustave simptomi bolesti i njene komplikacije. Efikasne doze će zavisiti od stanja bolesti koje se tretira i procenom ordinirajućeg lekara u zavisnosti od faktora kao što su težina bolesti, starosna dob, težina i generalno stanje pacijenta, i slično.

[0127] Kompozicije koje se daju pacijentu mogu da budu u obliku farmaceutskih kompozicija koje su opisane gore u tekstu. Ove kompozicije mogu da budu sterilizovane konvencionalnim postupcima za sterilizaciju, ili mogu sterilno da budu proceđene. Vodeni rastvori mogu da budu spakovani za upotrebu u stanju u kom jesu, ili liofilizovani, pri čemu se liofilizovani preparat kombinuje sa sterilnim nosačem u vodi pre davanja. pH preparata jedinjenja će obično biti između 3 i 11, poželjnije od 5 do 9 i najpoželjnije od 7 do 8. Podrazumeva se da upotreba određenih od gore navedenih ekscipijenasa, nosača, ili stabilizatora će dovesti do obrazovanja farmaceutskih soli.

[0128] Terapeutska doza jedinjenja iz predmetnog pronalaska može da se razlikuje u skladu sa, na primer, određenom upotrebom za koju je tretman napravljen, načina davanja jedinjenja, zdravlja i stanja pacijenta, i procene lekara koji propisuje lek. Proporcija ili koncentracija jedinjenja ovde opisanog u farmaceutskoj kompoziciji može da se razlikuje u zavisnosti od brojnih faktora uključujući dozu, hemijske karakteristike (npr., hidrofobnost), i načina davanja. Na primer, ovde opisana jedinjenja mogu da budu obezbeđena u rastvoru fiziološkog pufera u vodi koji sadrži oko 0.1 do oko 10% mas/v jedinjenja za parenteralno davanje. Neki tipični dozni opsezi su od oko 1 mg/kg do oko 1 g/kg telesne težine po danu. U nekim izvođenjima, dozni opseg je od oko 0.01 mg/kg do oko 100 mg/kg telesne težine po danu. Doza verovatno zavisi od takvih promenljivih kao što je tip i stepen napredovanja bolesti ili poremećaja, sveukupni zdravstveni status određenog pacijenta, relativna biološka efikasnost odabranog jedinjenja, formulacija ekscipijensa, i njegov način davanja. Efikasne

1

doze mogu da se ekstrapoliraju iz kriva doznog odgovora koje su dobijene in vitro ili sistemima za ispitivanje kod životinjskog modela.

[0129] Kompozicije iz pronalaska mogu dalje da uključe jedno ili više dodatnih farmaceutskih sredstava kao što je hemoterapeutik, steroidno, anti-zapaljensko jedinjenje, ili imunosupresant, primeri koji su ovde navedeni.

Kompleti

[0130] Predmetni pronalazak takođe uključuje farmaceutske complete koji su korisni, na primer, u lečenju ili prevenciji PI3K-povezanih bolesti ili poremećaja, kao što je kancer, koji uključuje jedan ili više kontejnera koji sadrže farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata terapeutski efikasnu količinu ovde opisanog jedinjenja. Takvi kompleti dalje mogu da uključe, po potrebi, jedno ili više konvencionalnih komponenti farmaceutkog kompleta, kao što su, na primer, kontejneri sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivim nosačima, dodatni kontejneri, itd., kao što će biti očigledno stručnjacima iz oblasti tehnike. Instrukcije, ili kao inserti ili kao obeleživači, što ukazuje na količine komponenata koje treba da se daju, smernice za davanje, i/ili uputstva za mešanje komponenti, takođe mogu da budu uključeni u kit.

Sinteza

[0131] Bilo koje jedinjenje koje nije obuhvaćeno obimom pronalaska priloženih patentnih zahteva je obezbeđeno za referentne svrhe.

[0132] Ovde opisana jedinjenja, uključujući njihove soli, mogu da se dobiju korišćenjem dobro poznatih postupaka iz organske sinteze i mogu da se sintetišu prema bilo kom od brojnih mogućih sintetičkih načina. U nekim izvođenjima, jedinjenja mogu da se dobiju kao što je opisano u US Prijavi patenta br.13/601,349, koja je podneta 31. avgusta, 2012. god.

[0133] Reakcije za dobijanje ovde opisanih jedinjenja mogu da se izvedu u pogodnim rastvaračima koje lako može da odabere stručnjak iz organske sinteze. Pogodni rastvarači u suštini mogu da budu ne-reaktivni sa polaznim materijalima (reaktantima), intermedijerima, ili proizvodi na temperaturama na kojima se reakcije izvode, npr., temperature koje mogu da variraju temperaturu zamrzavanja rastvarača do temperature ključanja rastvarača. Data reakcija, može da se izvede u jednom rastvaraču ili u smeši više od jednog rastvarača. U zavisnosti od određenog reakcionog koraka, pogodni rastvarači za određeni reakcioni korak mogu da budu odabrani od strane stručnjaka iz oblasti tehnike.

[0134] Dobijanje ovde opisanih jedinjenja može da uključi zaštitu i uklanjanje zaštite sa različitih hemijskih grupa. Potreba za zaštitom i uklanjanjem zaštite, i izbor odgovarajućih zaštitnih grupa, može brzo da se odredi od strane stručnjaka iz oblasti tehnike. Hemija zaštitnih grupa može da se nađe, na primer, u T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., Wiley & Sons, Inc., New York (1999).

[0135] Reakcije mogu da se prate prema bilo kom pogodnom postupku iz oblasti tehnike. Na primer, obrazovanje proizvoda može da se prati spektroskopskim sredstvima, kao što je spektroskopija nuklearnom magnetnom rezonancom (npr., 1H ili 13C), infracrvena spektroskopija, spektrofotometrija (npr., UV-vidljiva), masena spektrometrija, ili postupcima hromatografije kao što je tečna hromatografija visokih performansi (HPLC), tečna hromatografija-masena spektroskopija (LCMS), ili hromatografija na tankom sloju (TLC). Jedinjenja mogu da se prečiste od strane stručnjaka iz oblasti tehnike različitim postupcima, uključujući tečnu hromatografiju visokih performansi (HPLC) ("Preparative LC-MS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization" Karl F. Blom,

2

Brian Glass, Richard Sparks, Andrew P. Combs J. Combi. Chem.2004, 6(6), 874-883 i normalno fazna hromatografija na siliki.

[0136] Na primer, jedinjenja Formule I mogu da se obrazuju kao što je prikazano na Šemi I. Jedinjenje (i) može da bude halogenovano sa N-hlorosukcinamidom, N-bromosukcinamidom ili N-jodosukcinamidom da se dobije jedinjenje (ii) gde X<1>= Cl, Br, ili J. Halo grupa (ii) može da bude spojena sa Cy-M, gde M je boronska kiselina, estar boronske kiseline ili odgovarajuće supstituisani metal (npr., Cy-M je Cy-B(OH)2, Cy-Sn(Bu)4, ili Zn-Cy), pod standardnim Suzukijevim uslovima ili standardnim Stilovim uslovima (npr., u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) i baza (npr., bikarbonat ili baza karbonata) ili standardnim Negišijevim uslovima (npr., u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), da se dobije derivat formule (iii). Alternativno, Cy-M može da bude ciklični amin (gde M je H i vezan je za azot amina) gde se spajanje sa jedinjenjem (ii) izvodi zagrevanjem u bazi ili pod Bučvaldovim uslovima (npr., u prisustvu katalizatora paladijuma(0), kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) i baza (npr., baza alkoksida)) da se dobije keton (iii). Redukcijom ketona (iii) sa pogodnim reagensom, kao što je natrijum tetrahidroborat može da obezbedi alkohol (iv) koji može da bude konvertovan u derivat koji nosi odlazeću grupu (v), (npr., Lg je hlorid sa reakcijom sa cijanurinskim hloridom ili mezilatom reakcijom sa metansulfonskim anhidridom). Konačno, jedinjenje (v) može da reaguje sa 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-aminom ((vi)) pod baznim uslovima (npr., NaH ili CsCO3ili K2CO3) da se dobije jedinjenje Formule I (vii).

Šema I

Suzuki,

Redukcija

[0137] Alternativno, jedinjenja Formule I mogu takođe da se obrazuju kao što je prikazano na Šemi II. Jedinjenje ketona (i) može da bude halogenovano sa N-hlorosukcinamidom, N-bromosukcinamidom ili N-jodosukcinamidom da se dobije jedinjenje (ii) gde X<1>= Cl, Br, ili J. Keton (ii) može da bude redukovan sa pogodnim reagensom, kao što je natrijum tetrahidroborat, da se dobije alkohol (iii) koji može da bude konvertovan u derivat koji nosi odlazeću grupu, (npr., Lg je hlorid reakcijom sa cijanurinskim hloridom ili mezilatom reakcijom sa metansulfonskim anhidridom) i zatim je reagovao sa heterociklom da se dobije heterociklični derivat (iv). Enantiomeri jedinjenja (iv) mogu da budu razdvojeni hiralnom hromatografijom da se dobije jedan enantiomer heterocikličnog jedinjenja (v). Konačno, halo grupa (v) može da bude spojena sa Cy-M, gde M je boronska kiselina, estar boronske kiseline ili odgovarajuće supstituisani metal (npr., Cy-M je Cy-B(OH)2, Cy-Sn(Bu)4, ili Zn-Cy), pod standardnim Suzukijevim uslovima ili standardnim Stilovim uslovima (npr., u prisustvu katalizatora paladijuma(0), kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) i baza (npr., bikarbonat ili baza karbonata) ili standardni Negišijevi uslovi (npr., u prisustvu katalizatora paladijuma(0), kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), da se dobije derivat Formule I (vi).

Šema II

[0138] Jedinjenja Formule I takođe može da bude obrazovano kao što je prikazano na Šemi III. Fenol (i) može da bude bude alkilovan upotrebom Mitsunobijevih uslova (npr., R’OH, DEAD, Ph3P) ili standardnim alkilirajućim uslovima (R’-Lg, Lg = odlazeća grupa) da se redom dobiju derivati etra (ii). Halo grupa (ii) može da bude spojena sa Cy-M, gde je M boronska kiselina, estar boronske kiseline ili odgovarajuće supstituisani metal (npr., Cy-M je Cy-B(OH)2, Cy-Sn(Bu)4, ili Zn-Cy), pod standardnim Suzukijevim uslovima ili standardnim Stilovim uslovima (npr., u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tetrakis(trifenilfosfin) paladijum(0) i baza (npr., bikarbonat ili baza karbonata) ili standardni Negišijevi uslovi (npr., u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), da se dobije derivat formule (iii). Alternativno, Cy-M može da bude ciklični amin (gde M je H i vezan je za azot amina) sa spajanjem sa jedinjenjem (ii) koje se izvodi zagrevanjem u bazi ili pod Bučvaldovim uslovima (npr., u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)-paladijum(0) i baza (npr., alkoksidna baza)) da se dobiju jedinjenja formule (iii). Keton (iii) može da bude transformisan upotrebom sličnih postupaka kao što je prikazano na Šemi I i II da se dobiju jedinjenja Formule I (iv). Alternativno, halo-keton (ii) može da bude transformisan upotrebom sličnih postupaka kao što je prikazano na Šemi I i II da se dobije halo intermedijer (v). Suzuki, Stile, Negiši ili Bučvald kuplovanje Cy-M sa halo intermedijerom (v) sličnim postupcima koji su opisani u Šemama I i II mogu takođe da obezbede jedinjenja Formule I (vi).

1. Redu

[0139] Ketoni koji mogu da se koriste u postupcima u Šemi I, II i III, mogu da se obrazuju kao što je prikazano na Šemi IV u tekstu ispod. Karboksilna kiselina (i) može da bude aktivirana sa sredstvom za spajanje (npr. HBTU ili HATU) i nakon toga može da reaguje sa N,O-dimetilhidroksilaminom da se dobije N-metoksi-N-metilkarboksamid. Fenoli mogu da budu alkilovani upotrebom Mitsunobijevih uslova (npr., R2OH, DEAD, Ph3P) ili standardnim alkilirajućim uslovima (R2-Lg, Lg = odlazeća grupa) da se redom dobiju derivati etra (ii). Halo grupa (ii) (X<1>je halo) može da bude spojena sa Cy-M, gde M je boronska kiselina, estar boronske kiseline ili odgovarajuće sustituisani metal (npr., Cy-M je Cy-B(OH)2, Cy-Sn(Bu)4, ili Zn-Cy), pod standardnim Suzukijevim uslovima ili standardnim Stilovim uslovima (npr., u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tetrakis(trifenilfosfin) paladijum(0) i baze (npr., bikarbonat ili baza karbonata) ili standardni Negišijevi uslovi (npr., u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), da se dobije derivat formule (iii). Alternativno, Cy-M može da bude ciklični amin (gde M je H i povezan je za azot amina) sa spajanjem sa jednjenjem (ii) koje se izvodi zagrevanjem u bazi ili pod Bučvaldovim uslovima (npr., u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) i baza (npr., baza alkoksida)) da se dobiju amidi (iii). Reakcija jedinjenja (iii) da Grignjarevim reagensom formule Me-MgX<2>(X<2>= halo) može da da keton (iv). Keton (iv) može da bude transformisan korišćenjem različitih postupaka kao što je prikazano na Šemi I, II i III da se dobiju jedinjenja Formule I.

2

Šema IV

Suzuki,

[0140] Ketoni koji mogu da se koriste u postupcima u Šemi I, II ili III, mogu takođe da se obrazuju kao što je prikazano u Šemi V u tekstu ispod. Halo grupa (npr., X<1>= J) (i) može da bude spojena sa reagensom cinka Cy-Zn (npr., kao što je terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilat sa Zn u prahu) pod standardnim Knochel/Negiši uslovima (npr., u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tri-(2-furil)fosfin i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) i 1,2-dibromoetan i hlorotrimetilsilan) da se dobije derivat formule (ii). Azetidin (ii) može da ima uklonjenu zaštitu (npr., Pg = Boc, upotrebom TFA) i zatim da reaguje pod alkilirajućim, acilirajućom ili reduktivnom aminacijom (npr., R3X kao što je R3-Br, R3COCl, R3-SO2Cl, R3N=C=O ili R3CHO i redukuće sredstvo) uslovima da se dobiju derivati ketona (iii) koji mogu da budu konvertovani u jedinjenja Formule I (v) sličnim postupcima koji su prikazani u Šema ma I, II, i III). Alternativno, keton (ii) može da bude redukovan sa pogodnim reagensima (NaBH4ili Corijevim hiralnim CBS kataliztorom da se dobije pretežno jedan izomer alkohola), dobijeni alkohol može da bude konvertovan u odlazeću grupu (npr., Lg je hlorid reakcijom sa cijanurinskim hloridom ili mezilatom preko reagovanja sa metansulfonskim anhidridom) i zatim hlorid ili mezilat reaguju sa odgovarajućim heterociklom (npr., slično sa postupcima koji su prikazani u Šemama I, II i III) da se dobiju derivati formule (iv). Zaštitna grupa na aminu može da bude uklonjena pod standardnim uslovima i nakon toga da reaguje pod uslovima alkilacije, acilacije ili reduktivne aminacije (npr., R3X kao što je R<3>-Br, R<3>COCl, R<3>-SO2Cl, R<3>N=C=O ili R<3>CHO i kao sredstvo za redukciju) da se dobiju jedinjenja Formule I (v).

Šema V

1.Uklanjanje

zaštite Pg

2. R<3>X

[0141] Jedinjenje Formule I može da se sintetiše iz jedinjenja hlorida kiseline (i) kao što je ilustrovano na Šemi VI. Kondenzovanje hlorida kiseline (i) sa malononitrilom u prisustvu baze, kao što je natrijum hidrid, može da da dicijanoenolni intermedijer, koji može da bude O-metilovani sa odgvoarajućim reagensom, kao što je dimetil sulfat u prisustvu odgovarajuće baze, kao što je natrijum bikarbonat, da se dobije enol etar (ii). Reakcija enol etra (ii) sa hidrazin dihidrohloridom u prisustvu pogodne baze, kao što je trietilamin, može da da jedinjenje pirazola (iii). Jedinjenje pirazola (iii) nakon toga može da reaguje sa formamidom da se dobije pirazolopirimidin (iv). Konačno, jedinjenje (iv) može da reaguje sa odgovarajućim jedinjenjem koji nosi odlazeću grupu (v) pod baznim uslovima da se dobije jedinjenje Formule I (vi).

Šema VI

id

2

[0142] Jedinjenje Formule I može takođe da obrazuju kao što je prikazano na Šemi VII. Halo grupa, X<1>, (i) može da bude spojena sa alkenom (npr., akrilatom ili akrilamidom) pod standardnim Hekovim uslovima (npr., u prisustvu paladijum(II) katalizatora, kao što je paladijum acetat) da se dobije alken formule (ii). Reakcija alkena (ii) sa nitrometanom u prisustvu DBU može da obezbedi nitro derivat (iii) koji može da se redukuje pod standardnim uslovima (npr., NiCl2/ NaBH4) da se dobije amin u slobodnom obliku koji ciklizuje da se obrazuje laktam (iv). Laktam može da bude alkilovan pod standardnim uslovima (npr., R<3>-X<2>, gde X<2>= halo, u prisustvu baze, kao što je TEA ili NaH) da se dobije N-alkil-laktam (v). Jedinjenja formule (v), i pirolidini koji su dobijeni iz redukcije laktama (v) sa pogodnim redukujućim sredstvima, kao što je LiAlH4, mogu da budu konvertovana u jedinjenja Formule I upotrebom jedinjenja koja su opisana na Šemama I, II i III.

Šema VII

[0143] Jedinjenje Formule I takođe može da se obrazuje kao što je prikazano na Šemi VIII. Halo grupa X<1>(i) može da bude spojena sa alkenom boronske kiseline ili estrom pod standardnim Suzukijevim uslovima (npr., u prisustvu paladijum(0) katalizatora, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0)) da se dobije alken formule (ii). Epoksidacija alkena formule (ii) sa mCPBA može da omogući dobijanje epoksida (iii) koji može da reaguje sa sekundarnim ili primarnim aminom (amin = NH2R<3>) da se dobiju amino jedinjenja formule (iv). Derivati sekundarnih ili tercijarnih amina (iv) mogu dalje da reguju sa karbonildiamidazolom ili fozgenom da se obrazuje oksazolidinon (v) ili acetil halogenid (npr., hloroacetilhlorid u prisustvu baze, kao što je TEA) da se dobije N-acil derivat koji može da se konvertuje u derivat morfolinona (vi) posle tretmana sa bazom (npr., NaH). Jedinjenja formule (iv, v, i vi) mogu da budu sa uklonjenom zaštitom korišćenjem standardnih uslova (npr., jedinjenja zaštićena sa THP grupama mogu da budu tretirana sa kiselinom, kao što je TFA ili HCl) da se dobiju jedinjenja Formule I.

2

Šema VIII

[0144] Jedinjenja Formule I takođe mogu da se obrazuju kao što je prikazano u Šemi IX. Slaba aminohidroksilacija alkena formule (i) pod pogodnim uslovima (A ili B, kao što je opisano u JACS, 2001, 123(9), 1862-1871 i J. Org. Chem, 2011, 76, 358-372) može da da amino-hidroksi izomer (ii) ili (iii). Jedinjenja (ii) i (iii) mogu da reaguju sa karbonildiamidazolom ili fozgenom da se obrazuje oksazolidinon (iv), ili acetil-halogenid (npr., hloro-acetilhlorid u prisustvu baze, kao što je TEA) da se dobije N-acil derivat koji može da se konvertuje u derivat morfolinona (v) posle tretmana sa bazom (npr., NaH). Alternativni amino-hidroksi izomer (iii) može da se konvertuje u oksazolidinon i derivate morfolinona kao što je prikazano u Šemi XV.

2

Šema IX

Sharples

Aminodroksilacija

Uslovi B

[0145] Jedinjenja Formule I mogu da budu sintetisana kao što je prikazano u Šemi X. Halo grupa (npr., X<1>= Cl, Br, J) (i) mogu da budu konvertovana u boronatni estar (ii) pod standardnim uslovima (npr., pinakolo boronatni estar u prisustvu katalizatora paladijuma(0), kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0)). Boronat (ii) može da reaguje sa arilhalogenidom ili heteroarilhalogenidom (npr., R<3>-X<2>) pod Suzukijevim uslovima (npr., u prisustvu kaltalizatora paladijuma(0), kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) i baze, kao što je Na2CO3) da se dobije formula (iii). Formula (iii) može da se konvertuje u Formulu I korišćenjem reakcionih uslova opisanih u Šemama I, II ili III.

Šema X

[0146] Jedinjenja Formule I, gde R<4>= F ili CN, može da se obrazuje kao što je prikazano u Šemi XI. Jedinjenje (i) može da bude acilovano sa pogodnim sredstvom za acilovanje (npr., Me-COCl) da se obrazuje estar koji može da bude rearanžiran pod uslovima Luisove kiseline (npr., BF3/HOAc kompleks) da se dobije ketom (ii). Keton (ii) može da bude halogenovan sa N-hlorosukcinamidom, N-bromosukcinamidom ili N-jodosukcinamidom da se dobije fenol (iii), gde X<1>= Cl, Br, ili J. Jedinjenje (iii) može da bude alkilovano (npr. R<2>-X i baza, kao što je NaH ili Na2CO3; ili pod Mitsunobijevim uslovima) da se dobije etar (iv). Fluoro grupa (iv) može da bude izmeštena (npr., sa NaCN ili KCN) da se dobije

2

cijano derivat (v). Halo grupa (v) može da bude spojena sa Cy-M, gde M je boronska kiselina, boronski estar ili odgovarajuće supstituisani metal (npr., Cy-M je Cy-B(OH)2, Cy-Sn(Bu)4, ili Zn-Cy), pod standardnim Suzukijevim uslovima ili standardnim Stilovim uslovima (npr., u prisustvu katalizatora paladijuma(0), kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) i bazu (npr., bikarbonat ili baza karbonata) ili standardni Negišijevi uslovi (npr., u prisustvu katalizatora paladijuma(0), kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0)), da se dobije derivat formule (vi). Alternativno, Cy-M može da bude ciklični amin (gde M je H i vezan je za azot amina) i spojen je sa jedinjenjem (v) zagrevanjem u bazi ili pod Bučvaldovim uslovima (npr., u prisustvu katalizatora paladijuma(0), kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) i baza (npr., baza alkoksid)) da se dobije keton (vi). Redukcija ketona (vi) sa odgovarajućim reagensom, kao što je natrijum tetrahidroborat ili Corey-jev CBS reagens može da omogući alkohol koji može da se konvertuje u derivat koji nosi odlazeću grupu, (npr., Lg je hlorid reakcijom sa cijanurinskim hloridom ili mezilatom preko reakcije sa metansulfonskim anhidridom) i nakon toga su reagovali sa 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-aminom pod baznim uslovima (npr., NaH ili CsCO3ili K2CO3) da se dobije jedinjenje Formule I (viii). Alternativno, poslednja dva koraka mogu da se invertuju tako da keton (v) može da se redukuje da se dobije analkohol koji je konvertovan u odlazeću grupu i izmešten je sa heterociklom prvo zatim je izvedeno Suzuki, Stile, Negiši ili Bučvald spajanje da se dobiju jedinjenja Formule I (viii). Fluoro derivativati (iv) mogu takođe da budu konvertovani u jedinjenja Formule I eliminacijom koraka cijanizacije u Šemi XI.

Šema XI

,

[0147] Jedinjenja Formule I mogu takođe da se obrazuju kao što je prikazano na Šemi XII. Jedinjenja (i) mogu da budu acilovana sa pogodnim sredstvom za acilovanje (npe., Me-COCl) da se obrazuje estar koji može da bude rearanžiran pod uslovima Luisove kiseline (npr., AlCl3ili BF3/HOAc kompleks) da se dobije keton (ii). Halogenovanje ketona (ii) upotrebom NX<1>S (npr., NX<1>S = N-hlorosukcinamid, N-bromosukcinamid ili N-jodosukcinamid) da se dobije jedinjenje (iii), gde X<1>= Cl, Br, ili J. Fenol može da bude konvertovan u etar (iv) upotrebom standardnih uslova (npr., neorganska baza, kao što je K2CO3, i alkil halogenid, kao što je Et-J). Halo grupa iz (iv) može da bude spojena sa R<3>-M, gde M je boronska

2

kiselina, boronski estar ili odgovarajuće supstituisani metal (npr., R<3>-M je R<3>-B(OH)2, R<3>-Sn(Bu)4, ili Zn-R<3>i R<3>je supstituisani ili nesupstituisani olefin, kao što je vinil) pod standardnim Suzukijevim uslovima ili standardnim Stilovim uslovima (npr., u prisustvu katalizatora paladijuma(0), kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) i baza (npr., bikarbonat ili baza karbonta) da se dobije derivat formule (v). Alken može zatim da bude dihidroksilovan uopotrebom Sharpless-ovih uslova da se dobije diol (vi). Pojačanje jednog enantiomera sekundardnog alkohola može da se postigne upotrebom standardnih Sharpless-ovih postupaka asimetrične dihidroksilacije. Sekundarni alkohol može da se konvertuje u N-Bok zaštićeni amin preko postupka od 6 koraka (npr. zaštita sililom (npr., TBS-Cl i DIEA) primarnog alkohola, mezilacija sekundarnog alkohola, premeštanje mezilata sa NaN3, redukcija azida sa Ph3P, Bok zaštita dobijenog primarnog amina i nakon toga uklanjanje zaštite silil zaštitne grupe primarnog alkohola sa TBAF) da se dobije amino-alkohol (vii). Amino-alkohol (vii) može da bude konvertovan u oksazolidinon tretmanom sa fozgenom i nakon toga redukcijom ketona sa pogodnim reagensom, kao što je natrijum tetrahidroborat ili natrijum borohidrid može da obezbedi alkohol (viii) koji može da se konvertuje u derivat koji nosi odlazeću grupu (ix) (npr., Lg je hlorid reakcijom sa cijanurinskim hloridom ili mezilatom reakcijom sa metansulfonskim anhidridom). Konačno, jedinjenje (ix) može da reaguje sa odgovarajućim heterociklom (x) (npr., 3-metil-1H-pirazolo[ 3,4-d]pirimidin-4-aminom ili 4-aminopirido[2,3-d]pirimidin-5(8H)-onom) pod baznim uslovima (npr., NaH ili Cs2CO3ili K2CO3) da se dobije jedinjenje Formule I (xi).

Šema XII

[0148] Pronalazak će detaljnije biti opisan pomoću specifičnih primera. Primeri koji slede su ponuđeni za ilustrativne svrhe, i nisu namenjeni da ograniče pronalazak na bilo koji način. Stručnjak iz oblasti tehnike će odmah prepoznati razne ne-kritičke parametre koji mogu da budu promenjeni ili modifikovani da se u suštini dobiju isti rezultati. Pronađeno je da su jedinjenja iz primera inhibitori PI3K prema bar jednom ovde opisanom testu.

PRIMERI

[0149] Primeri jedinjenja u tekstu ispod koja sadrže jedan ili više hiralnih centara dobijena su u obliku racemata ili kao smeše izomera, osim ukoliko nije drugačije naznačeno. Stehiometrija soli koja je naznačena u bilo kom od proizvoda u tekstu ispod je namenjena samo da označi moguću stehiometriju, i ne treba tumačiti da isključuje moguće obrazovanje soli u drugim stehiometrijama. Skraćenice "h" i "min" se redom odnose na sate i minute.

Primer 1. 1-{1-[5-Hloro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin bis(trifluoroacetat)

[0150]

Korak 1.1-(5-Hloro-2-hidroksi-3-jodo-4-metilfenil)etanon

[0151] U mešani rastvor 1-(5-hloro-2-hidroksi-4-metilfenil)etanona (iz Oakwood, 50.0 g, 271 mmol) u sirćetnoj kiselini (300 mL) je dodat N-jodosukcinimid (73.1 g, 325 mmol) i dobijena smeša je mešana na grejnoj ploči između 60 ∼ 80 °C tokom 3.5 h nakon čega je ohlađena do sobne temperature i mešana je preko noći. Dodaje se voda (500 mL) u porcijama u smešu, koja uzrokuje nastanak čvrste supstance tamno braon boje. Posle mešanja 10 minuta, čvrste supstance su proceđene, isprane sa dodatnom vodom. Čvrste supstance svetle do tamno braon boje su osušene pod vakuumom 4 h zatim su osušene na vazduhu preko vikenda da se dobije 81.3 g (97%) željenog proizvoda. LCMS izračunato za C9H9ClIO2(M+H)<+>: m/z = 310.9; Nađeno: 311.0.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 13.21 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 2.65 (s, 3H), 2.63 (s, 3H) ppm.

Korak 2.1-(5-Hloro-3-jodo-2-metoksi-4-metilfenil)etanon

[0152] Kalijum karbonat (72.4 g, 524 mmol) je dodat u smešu 1-(5-hloro-2-hidroksi-3-jodo-4-metilfenil) etanona (81.3 g, 262 mmol) i metil jodida (19.6 mL, 314 mmol) u N,N-dimetilformamidu (250 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 h. Dodata je voda (500 mL) uz mešanje od 15 minuta. Čvrste supstance tamne boje su proceđene i osušene u vakuumu da se dobije 42.3 g željenog proizvoda. Ostatak nakon ceđenja je ekstrahovan sa EtOAc (4x). Kombinovani ostaci nakon ceđenja su isprani sa vodom (2x) i slanim rastvorom, osušeni (MgSO4), proceđeni i koncentrovani. Čvrste supstance su osušene u vakuumu da se dobije dodatnih 37.2 g željenog proizvoda. Proizvod je korišćen bez daljeg prečišćavanja. LCMS izračunato za C10H11ClIO2(M+H)<+>: m/z = 324.9; Nađeno: 325.0.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.62 (s, 1H), 3.78 (s, 3H), 2.65 (s, 3H), 2.62 (s, 3H) ppm.

Korak 3. terc-butil 3-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-karboksilat

1

[0153] Cink (1.71 g, 26.2 mmol) je suspendovan u N,N-dimetilformamidu (45.0 mL) i dodaje se 1,2-dibromoetan (210 µL, 2.5 mmol). Smeša je zagrejana na 60 °C 10 minuta i zatim je ohlađena do sobne temperature. Hlorotrimetilsilan (330 µL, 2.6 mmol) je dodat i mešan je 60 °C 10 minuta i ohlađen je do sobne temperature. Nakon toga se dodaje rastvor terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata (iz Oakwood, 6.25 g, 22.1 mmol) u N,N-dimetilformamidu (5.0 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h.1-(5-hloro-3-jodo-2-metoksi-4-metilfenil) etanon (5.00 g, 15.4 mmol), tri-(2-furil)fosfin (358 mg, 1.54 mmol), i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (0.70 g, 0.77 mmol) su dodati kako bi se reakciona smeša zagrejala do 70 °C uz mešanje preko noći. Smeša je ohlađena do sobne temperature i podeljena je između etil acetata (EtOAc) i zas. rastvora NH4Cl. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je dalje ekstrahovan sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom i slanim rastvorom, osušeni su preko MgSO4, i koncentrovani. Ostatak je prečišćen na gelu od silike, eluiranjem sa 0-30% EtOAc u heksanima da se dobije 3.0 g (55%) željenog proizvoda kao čvrsta supstanca narandžaste boje. LCMS izračunato za C18H24ClNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 376.1; Nađeno: 376.0.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.52 (s, 1H), 4.32, (m, 2H), 4.16 (m, 3H), 3.66 (s, 3H), 2.59 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 1.45 (s, 9H) ppm.

Korak 4. terc-butil 3-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]azetidin-1-karboksilat [0154] U rastvor terc-butil 3-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)azetidin-1-karboksilata (1.3 g, 3.7 mmol) u metanolu (20 mL) koji se meša na 0 °C je dodat natrijum tetrahidroborat (0.167 g, 4.41 mmol). Smeša je mešana na 0 ∼ 5 °C 1 h. Reakcija je ugašena sa vodom i ekstrahovana je sa EtOAc (3x). Kombinovani ekstrakti su osušeni preko MgSO4, proceđeni i koncentrovani da se dobije 1.3 g (100%) željenog proizvoda. LCMS izračunato za C18H26ClNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 378.2; Nađeno: 378.1.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.37 (s, 1H), 5.10 (q, 1H), 4.30 (m, 2H), 4.14 (m, 3H), 3.63 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.48 (d, 3H), 1.44 (s, 9H) ppm.

Korak 5. terc-butil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]azetidin-1-karboksilat [0155] Cijanurinski hlorid (iz Aldrich, 1.22 g, 6.62 mmol) je izmeren u balon i N,N-dimetilformamid (0.512 mL, 6.62 mmol) je dodat. Posle mešanja nekoliko minuta dodat je rastvor terc-butil 3-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]azetidin-1-karboksilata (1.5 g, 4.2 mmol) u metilen hloridu (30 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodata je voda, i nakon toga je razblažena sa dihlormetanom. Slojevi su razdvojeni i organske supstance su isprane sa zas. rastvorom NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, osušene preko MgSO4, i koncentrovane su. Dobijeni ostatak je prečišćen na gelu od silke, eluiranjem sa 0-35% EtOAc u heksanima da se dobije željeni proizvod (1.36 g, 86%). LCMS izračunato za C13H17ClNO (M-Cl-Boc+H)<+>: m/z = 238.1; Nađeno: 238.1.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.46 (s, 1H), 5.44, (q, 1H), 4.32 (m, 2H), 4.18 - 4.10 (m, 3H), 3.67 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 1.79 (d, 3H), 1.44 (s, 9H) ppm.

Korak 6. terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil} azetidin-1-karboksilat

[0156] Na sobnoj temperaturi, natrijum hidrid (0.32 g, 8.0 mmol) je dodat u suspenziju 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (iz ChemBridge, 0.59 g, 4.0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (20 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 25 minuta tokom vremena je suspenzija postala skoro bistri rastvor. U dobijenu smešu je dodat rastvor terc-butil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]azetidin-1-karboksilata (1.35 g, 3.61 mmol, iz primera 1, korak 5) u N,N-dimetilformamidu (10 mL). Smeša je mešana na 50 °C preko noći. Posle hlađenja, smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana je sa EtOAc (2x). Kombinovani ekstrakti su isprani sa vodom i slanim rastvorom, osušeni su preko MgSO4i koncentrovani su. Dobijeni ostatak je prečišćen na gelu od silike, eluiran je sa 0-10% MeOH u dihlorometanu da se dobije 1.03 g (59%) željenog proizvoda kao guma žute boje. Racemski

2

proizvodi su naneti na Phenomenex Lux-Celuloza 2 kolonu (21.1x250 mm, veličina čestica 5 mikrona), eluiranjem sa 10% etanolom u heksanima na brzini protoka od 18 mL/min, 4 mg/injekciji, da se dobiju dva enantiomera. Vreme retencije prvog signala je bilo 8.34 min i vreme retencije drugog signala je bilo 10.92 min. Signal 1 (463 mg), LCMS izračunato za C24H32ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 487.2; Nađeno: 487.1.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.21 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 6.30, (q, 1H), 5.40 (s, 2H), 4.23 (m, 2H), 4.17 ∼ 4.00 (m, 3H), 3.57 (s, 3H), 2.58 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.76 (d, 3H), 1.37 (s, 9H) ppm.

Korak 7. 1-[1-(3-Azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorid

[0157] U rastvor terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilata (318 mg, 0.653 mmol) (sigal 1 iz gore navednog teksta) u metilen hloridu (3.2 mL) je dodat 4.0 M hlorovodonik u 1,4-dioksanu (1.6 mL, 6.5 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 75 minuta. Rastvarači su upareni i ostatak je osušen in vacuo da se dobije 0.30 g željenog proizvoda u obliku bis-HCl soli. LCMS izračunato za C19H24ClN6O (M+H)<+>: m/z = 387.2; Nađeno: 387.1.

Korak 8. 1-{1-[5-Hloro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 4-amin bis(trifluoroacetat)

[0158] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (58 mg, 0.13 mmol), acetona (18.5 µL, 0.252 mmol) i trietilamina (54.5 µL, 0.391 mmol) u metilen hloridu (1.0 mL) je dodata smola natrijum triacetoksiborohidrida (108 mg, 0.249 mmol). Dobijena smeša je mešana 3 h na sobnoj temperaturi. Smeša je proceđena i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.05% TFA, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije 50 mg (60%) željenog proizvoda u obliku TFA soli. LCMS izračunato za C22H30ClN6O (M+H)<+>: m/z = 429.2; Nađeno: 429.1. Proizvod je izolovan kao pojedinačni enantiomer.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.47 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 6.29 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 4.52 (m, 2H), 4.21 (m, 1H), 4.15 (t, J = 9.8 Hz, 1H), 4.06 (t, J = 9.7 Hz, 1H), 3.53 (s, 3H), 3.39 ∼ 3.27 (m, 1H), 2.61 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.75 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.11 (dd, J = 6.0, 3.8 Hz, 6H) ppm.

Primer 2.1-{1-[3-(1-Acetilazetidin-3-il)-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin trifluoroacetat

[0159]

Korak 1. 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amindihidrohlorid

[0160] U rastvor racemskog terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-karboksilata (146 mg, 0.300 mmol) (racemski intermedijer iz primera 1 korak 6) u metilen hloridu (1.5 mL) je dodat 4.0 M hloro vodonik u 1,4-dioksanu (0.75 mL, 3.0 mmol). Posle mešanja na st tokom 2 h, rastvarači su upareni i dobijeni ostatak je osušen u in vacuo da se dobije 138 mg željenog proizvoda kao HCl so. LCMS izračunato za C19H24ClN6O (M+H)<+>: m/z = 387.2; Nađeno: 387.1.

Korak 2. 1-{1-[3-(1-Acetilazetidin-3-il)-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin trifluoroacetat

[0161] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (20.0 mg, 0.0435 mmol, iz primera 2, korak 1) i trietilamina (30.3 µL, 0.217 mmol) u metilen hloridu (0.20 mL) je dodat acetil hlorid (6.18 µL, 0.0870 mmol). Dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarači su upareni i sirova supstanca je prečišćena upotrebom RP-HPLC (Xbridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.05% TFA, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod u obliku TFA soli. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C21H26ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 429.2; Nađeno: 429.1.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.35 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.26 (q, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.28 ∼ 4.20 (m, 2H), 4.01 (m, 1H), 3.88 (m, 1H), 3.52 (s, 3H), 2.58 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 1.75 ∼ 1.71 (m, 6H) ppm.

Primer 3. 1-{1-[5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-(1-propionilazetidin-3-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin trifluoroacetat

[0162]

[0163] Ovo jedinjenje je dobijeno upotrebom postupaka koji su analogni sa onima koji su predstavljeni za primer 2, sa propanoil hloridom umesto acetil hlorida. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C22H28ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 443.2; Nađeno: 443.2.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.30 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.25 (q, 1H), 4.49 (m, 1H), 4.27 ∼ 4.18 (m, 2H), 4.02 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.54 (s, 3H), 2.57 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.05 (q, 2H), 1.72 (d, 3H), 0.93 (t, 3H) ppm.

Primer 4. 1-(1-{5-hloro-3-[1-(ciklopropilmetil)azetidin-3-il]-2-metoksi-4-metilfenil}etil)-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin bis(trifluoroacetat)

[0164]

4

[0165] Ovo jedinjenje je dobijeno upotrebom postupaka koji su analogni sa onim koji su predstavljeni za primer 1, sa racemskim 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohloridom iz primera 2, korak 1 i ciklopropankarboksaldehidom (iz Aldrich) umesto acetona. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C23H30ClN6O (M+H)<+>: m/z = 441.2; Nađeno: 441.1.<1>H NMR (400 MHz, DMSOd6): δ 8.06 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 5.96 (q, 1H), 4.22 (m, 2H), 4.07 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.80 (m, 1H), 3.24 (s, 3H), 2.68 (t, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.80 (s, 3H), 1.45 (d, 3H), 0.64 (m, 1H), 0.24 (m, 2H), 0.01 (m, 2H) ppm.

Primer 5. 1-{1-[5-hloro-2-metoksi-4-metil-3-(1-metilazetidin-3-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0166]

[0167] Ovo jedinjenje je dobijeno upotrebom postupaka koji su analogni sa onim koji su predstavljeni za primer 1, sa racemskim 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohloridom iz primera 2, korak 1 i formaldehidom umesto acetona. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koja sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C20H26ClN6O (M+H)<+>: m/z = 401.2; Nađeno: 401.2.

Primer 6. 1-{1-[5-Hloro-3-(1-etilazetidin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0169] Ovo jedinjenje je dobijeno upotrebom postupaka koji su analogni sa onim koji su predstavljeni za primer 1, sa racemskim 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohloridom iz primera 2, korak 1 i acetaldehidom umesto acetona. Sirovi proizvod je prečišćen korišćenjem RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod. Proizvod je izlovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C21H28ClN6O (M+H)<+>: m/z = 415.2; Nađeno: 415.1

Primer 7. 1-{1-[5-Hloro-3-(1-isobutilazetidin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0170]

[0171] Ovo jedinjenje je dobijeno upotrebom postupaka koji su analogni sa onim koji su predstavljeni za primer 1, sa racemskim 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohloridom iz primera 2, korak 1 i izobutiraldehidom umesto acetona. Sirovi proizvod je prečišćen korišćenjem RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amoniju hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C23H32ClN6O (M+H)<+>: m/z = 443.2; Nađeno: 443.1.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.29 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.37 (q, 1H), 5.37 (s, 2H), 4.01 (m, 2H), 3.87 (m, 1H), 3.57 (s, 3H), 3.05 (t, 1H), 2.86 (t, 1H), 2.64 (s, 3H), 2.18 (d, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.82 (d, 3H), 1.62 (m, 1H), 0.89 (d, 6H) ppm.

Primer 8. 1-{1-[3-(1-sek-butilazetidin-3-il)-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[ 3,4-d]pirimidin-4-amin

[0173] Ovo jedinjenje je dobijeno upotrebom postupaka koji su analogni sa onim koji su predstavljeni za primer 1, sa racemskim 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohloridom iz primera 2, korak 1 i 2-butanonom umesto acetona. Sirova supstanca je prečišćena upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod. Proizvod je izolovan kao smeša diastereoizomera. LCMS izračunato za C23H32ClN6O (M+H)<+>: m/z = 443.2; Nađeno: 443.1

Primer 9. 1-(1-{5-Hloro-2-metoksi-3-[1-(2-metoksietil)azetidin-3-il]-4-metilfenil}etil)-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0174]

[0175] Ovo jedinjenje je dobijeno upotrebom postupaka koji su analogni sa onim koji su predstavljeni za primer 1, sa racemskim 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohloridom iz Primera 2, Korak 1 i metoksiacetaldehid umesto acetona. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitril/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C22H30ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 445.2; Nađeno: 445.2.

Primer 10. 3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N-metilazetidin-1-karboksamid

[0177] Ovo jedinjenje je dobijeno upotrebom postupaka koji su analogni sa onim koji su predstavljeni za primer 2, sa metil izocijanatom umesto acetil hlorida Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitril/voda koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C21H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 444.2; Nađeno: 444.2.

Primer 11. 5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0178]

Korak 1.1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanon

[0179] U mešani rastvor 1-(5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanona (5.00 g, 25.2 mmol, iz Oakwood) u sirćetnoj kiselini (100 mL) je dodat N-bromosukcinimid (4.93 g, 27.7 mmol) i dobijena smeša je zagrejana na 100 °C tokom 18 h. Posle hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, zatim je neutralizovana sa zas. natrijum karbonatom, nerastvorljivi sukcinimid je uklonjen ceđenjem. Ostatak od ceđenja je uklonjen sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom, proceđeni preko natrijum sulfata, i zatim su koncentrovani do isušivanja pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišen na gelu od silike, eluiranjem sa 0 do 50 % EtOAc u heksanima, da se dobiju željeni proizvodi (2.66 g, 38%). LCMS izračunato za C10H11BrClO2(M+H)<+>: m/z = 277.0; nađeno: 277.0.<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz): δ 7.70 (1H, s), 3.77 (3H, s), 2.57 (3H, s), 2.50 (3H, s) ppm.

Korak 2.5-(3-Acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0180] U smešu 1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanona (0.38 g, 1.4 mmol) i N,N-dimetil-5-(1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-karboksamida (iz PepTech, 0.46 g, 1.6 mmol) u 1,4-dioksanu (6 mL), dodat je kalijum karbonat (0.38 g, 2.7 mmol) u vodi (2 mL). Reakcina smeša je produvana mehurićima sa N2. Tetrakis(trifenilfosfin) paladijum(0) (0.095 g, 0.082 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana preko noći na 100 °C. Reakcija je razblažena sa vodom, ekstrahovana je sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, koncentrovani i prečišćeni na gelu od silike (eluiranjem sa 0-100% EtOAc u heksanima) da se dobije željeni proizvod. LCMS izračunato za C18H20ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 347.1; Nađeno: 347.1

Korak 3.5-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid [0181] U rastvor 5-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (106 mg, 0.306 mmol) u metanolu (2 mL) ohlađenom na 0 °C je dodat natrijum tetrahidroborat (14 mg, 0.37 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h, zatim je ugašena sa vodom, ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su osušeni preko MgSO4i koncentrovani su da se dobije sirovi alkohol. LCMS izračunato za C18H22ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 349.1; Nađeno: 349.1.

Korak 4.5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid [0182] Cijanurinski hlorid (85 mg, 0.46 mmol) je dodat u N,N-dimetilformamidu (0.036 mL, 0.46 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle obrazovanja bele čvrste supstance (10 minuta), dodat je metilen hlorid (2 mL), nakon čega se dodaje 5-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid (115 mg, 0.330 mmol, iz primera 11, korak 3). Posle dodavanja, smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodata je voda, i nakon toga je razblažena sa dihlorometanom. Organska faza je isprana sa zas. rastvorom NaHCO3, vodom i slanim rastvorom, zatim je osušen preko MgSO4, koncentrovan je. Ostatak je prečišćen na gelu od silike (eluiranjem sa 0 do 80% EtOAc u heksanima) da se dobije željeni proizvod (76 mg, 63%). LCMS izračunato za C18H21Cl2N2O2(M+H)<+>: m/z = 367.1; Nađeno: 367.0.

Korak 5. 5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0183] U rastvor 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (6.1 mg, 0.041 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0.4 mL) je dodat natrijum hidrid (60%, 2.0 mg, 0.082 mmol) na 0 °C i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 10 minuta. U nastalu smešu je dodat rastvor 5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (15.0 mg, 0.0408 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0.2 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Sirova smeša je prečišćena na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/u vodi koji sadrži 0.05% TFA, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod kao bis-TFA so. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C24H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 480.2; Nađeno: 480.1.

Primer 13. 1-{1-[5-Hloro-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin bis(trifluoroacetat)

[0184]

Korak 1.1-(5-Hloro-4-fluoro-2-hidroksifenil)etanon

[0185] U 4-hloro-3-fluorofenol (iz Aldrich, 20 g, 100 mmol) je dodat acetil hlorid (14.1 mL, 199 mmol) pod N2uz mešanje. Dobijena smeša se pretvorila u bistri rastvor brzo na sobnoj temperaturi i zagrejana je na 60 °C tokom 2 h. U dobijenu smešu je dodat aluminijum trihlorid (25.0 g, 187 mmol) u porcijama i reakciona smeša je zagrejana na 180 °C 30 minuta. Čvrste supstance su polako razblažene na visokoj temperaturi. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperatura dok se balon pažljivo vrteo da bi čvrsta supstanca obrazovala tanak sloj unutar balona i zatim polako ugasio sa 1.0 N HCl (300 mL) dok se hladi u ledenom kupatilu i meša se preko noći. Žuti precipitat je ispran sa vodom i osušen je pod vakuumom da se dobije željeni proizvod kao čvrsta supstanca žute boje (23.8 g), koja je direktno korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak 2.1-(5-Hloro-4-fluoro-2-hidroksi-3-jodofenil)etanon

[0186] Rastvor 1-(5-hloro-4-fluoro-2-hidroksifenil)etanona (23.8 g, 126 mmol) u sirćetnoj kiselini (100 mL) je tretiran sa N-jodosukcinimidom (34.1 g, 151 mmol) i mešan je na 70 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana, razblažena sa EtOAc i ugašena je sa zas. rastvorom NaHCO3do prestanka mehurića. Organski slojevi su razdvojeni, isprani sa vodom, osušeni preko MgSO4i uklonjeni su da se dobije željeni proizvod koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Korak 3.1-(5-Hloro-4-fluoro-3-jodo-2-metoksifenil)etanon

[0187] 1-(5-Hloro-4-fluoro-2-hidroksi-3-jodofenil)etanon (13 g, 41 mmol) je rastvoren u N,N-dimetilformamidu (41.3 mL). Dodat je metil jodid (3.9 mL, 62 mmol) nakon čega se dodaje kalijum karbonat (11 g, 83 mmol). Reakcija je zagrejana na 60 °C tokom 1 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature, razblažena je sa etrom. Organski slojevi su razdvojeni i kombinovani, isprani sa vodom, osušeni preko MgSO4, koncentrovani i prečišćeni na gelu od silike (eluiranjem sa 0 do 10% EtOAc u heksanima) da se dobije željeni proizvod (10 g, 70%). LCMS izračunato za C9H8ClFIO2(M+H)<+>: m/z = 328.9; Nađeno: 328.9.

Korak 4. terc-butil 3-(3-acetil-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil)azetidin-1-karboksitat

[0188] Cink (0.682 g, 10.4 mmol) je suspendovan sa 1,2-dibromoetanom (0.0598 mL, 0.694 mmol) u N,N-dimetilformamidu (12 mL). Smeša je zagrejana na 70 °C 10 minuta i zatim je ohlađena do sobne temperature. Hlorotrimetilsilan (0.088 mL, 0.69 mmol) je dodat u kapima i mešanje se nastavlja 1 h. Rastvor terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata (2.5 g, 8.7 mmol) u N,N-dimetilformamidu (10 mL) je nakon toga dodat i smeša je zagrejana na 40 °C tokom 1 h pre smeše 1-(5-hloro-4-fluoro-3-jodo-2-

4

metoksifenil)etanona (3.0 g, 9.1 mmol), tris(dibenzilideneaceton)dipaladijum(0) (0.16 g, 0.17 mmol) i tri-(2-furil)fosfina (0.081 g, 0.35 mmol) u N,N-dimetilformamidu (20 mL) je dodat. Reakciona smeša je zagrejana na 70 °C i mešana je preko noći. Smeša je nakon toga ohlađena do sobne temperature i podeljena je između etra i zas. rastvora NH4Cl. Organski slojevi su isprani sa vodom, osušeni preko MgSO4, koncentrovani i prečišćeni na gelu od silike (eluiranjem sa 0 do 25% EtOAc u heksanima) da se dobije željeni proizvod (0.8 g). LCMS izračunato za C17H21ClFNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 380.1; Nađeno: 380.1.

Korak 5. terc-butil 3-[3-hloro-2-fluoro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilat [0189] U rastvor terc-butil 3-(3-acetil-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil)azetidin-1-karboksilata (0.17 g, 0.48 mmol) u metanolu (3 mL) ohlađenom na 0 °C je dodat natrijum tetrahidroborat (0.022 g, 0.57 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h, zatim je ugašena sa vodom, ekstrahovana je sa EtOAc. Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko MgSO4i koncentrovani su da se dobije sirovi alkohol (0.19 g). LCMS izračunato za C17H23ClFNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 382.1; Nađeno: 382.0.

Korak 6. terc-Butil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-2-fluoro-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilat [0190] Cijanurinski hlorid (140 mg, 0.78 mmol) je dodat u N,N-dimetilformamid (0.059 mL, 0.77 mmol) na soboj temperaturi. Posle obrazovanja bele čvrste supstance (oko 10 minuta), dodaje se metilen hlorid (4 mL), zatim se dodaje terc-Butil 3-[3-hloro-2-fluoro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilat (197 mg, 0.547 mmol). Posle dodavanja, smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodata je voda, i zatim je razblažena sa dihlorometanom. Organske faze su isprane sa zas. rastvorom NaHCO3, vodom i slanim rastvorom, osušene preko MgSO4, i koncentrovane. Dobijeni ostatak je prečišćen na gelu od silike (eluiranjem sa 0 do 30% EtOAc u heksanima) da se dobije željeni proizvod (110 mg, 53%).

Korak 7. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil} azetidin-1-karboksilat

[0191] U rastvor 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (7.9 mg, 0.053 mmol) u N,N-dimetilformamid (0.6 mL) je dodat natrijum hidrid (60%, 2.5 mg, 0.11 mmol) na 0 °C i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 10 minuta. U smešu je dodat rastvor terc-Butil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-2-fluoro-6-metoksifenil] azetidin-1-karboksilat (20 mg, 0.053 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0.3 mL). Reakciona smeša je mešana na 35 °C preko noći, zatim je ugašena sa vodom, ekstrahovana sa etrom. Kombinovani organki slojevi su osušeni preko MgSO4i koncentrovani da se dobije željeni proizvod koji je korišćen direktno u sledećem koraku. LCMS izračunato za C23H29ClFN6O3(M+H)<+>: m/z = 491.2; Nađeno: 491.1.

Korak 8. 1-{1-[5-Hloro-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin bis(trifluoroacetat)

[0192] Smeša terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksilata (14 mg, 0.028 mmol) u metilen hloridu (0.2 mL) je tretirana sa 4.0 M hlorovodonikom u dioksanu (0.2 mL, 0.8 mmol) na soboj temperaturi 1 h i nakon toga je rastvarač uklonjen da se dobije HCl so 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-4-fluoro-2-metoksifenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina. U smešu sirove HCl soli u acetonitrilu (0.1 mL)/metanol (0.1 mL)/tetrahidrofuran (0.1 mL) je dodat N,N-diizopropiletilamin (0.1 mL, 0.6 mmol), zatim se dodaje aceton (0.050 mL, 0.68 mmol). Smeša je mešana 30 minuta pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida (0.030 g, 0.14 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, nakon čega je ugašena i prečišćena na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitril/ vodi koja sadrži 0.05% TFA, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod u obliku TFA soli. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C21H27ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 433.2; Nađeno: 433.1.

Primer 14. 5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0193]

Korak 1.1-(5-Hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etanon

[0194] 1-(5-Hloro-2-hidroksi-3-jodo-4-metilfenil)etanon (18.9 g, 60.9 mmol) (iz primera 1, korak 1) je rastvoren u N,N-dimetilformamidu (60.8 mL). Jodoetan (7.3 mL, 91 mmol) je dodat nakon čega se dodaje kalijum karbonat (17 g, 120 mmol). Reakcija je zagrejana na 60 °C tokom 1 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature, razblažena je sa etrom. Organski slojevi su kombinovani, isprani sa vodom, osušeni preko MgSO4, koncentrovani i prečišćeni na gelu od silike (eluiranjem sa 0-10% EtOAc u heksanima) da se dobije željeni proizvod (18.9 g, 91.7%). LCMS izračunato za C11H13ClIO2(M+H)<+>: m/z = 339.0; Nađeno: 339.0.

Korak 2.5-(3-Aeetil-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0195] U smešu 1-(5-hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etanona (0.69 g, 2.0 mmol) i N,N-dimetil-5-(1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-karboksamida (0.68 g, 2.4 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL), dodat je kalijum karbonat (0.56 g, 4.1 mmol) u vodi (3 mL, 200 mmol). Reakcija je prožeta mehurićima sa N2. Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (0.24 g, 0.20 mmol) i dodat i N2je bio u mehurićima. Reakcija je mešana preko noći na 95 °C. Reakcija je razblažena sa vodom, ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, koncentrovani i prečišćeni na gelu od silike (eluiranjem sa 0 do 90% EtOAc u heksanima) da se dobije željeni proizvod (0.6 g, 82%). LCMS izračunato za C19H22ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 361.1; Nađeno: 361.0.

Korak 3.5-[3-Hloro-6-etoksi-5-(1-hidroksietil)-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid [0196] U rastvor 5-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (0.60 g, 1.7 mmol) u metanolu (10 mL) ohlađenom do 0 °C je dodat natrijum tetrahidroborat (0.075 g, 2.0 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h, zatim je ugašena sa vodom, ekstrahovana sa EtOAc. Ekstrakti su osušeni preko MgSO4i koncentrovani da se dobije sirovi alkohol (0.6 g). LCMS izračunato za C19H24ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 363.1; Nađeno: 363.0.

Korak 4.5-[3-Hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid [0197] Cijanurinski hlorid (0.43 g, 2.3 mmol) je dodat u N,N-dimetilformamid (0.18 mL, 2.3 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle obrazovanja bele čvrste supstance (10 minuta), dodat je metilen hlorid (10 mL), nakon čega se dodaje 5-[3-hloro-6-etoksi-5-(1-hidroksietil)-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid (0.6 g, 2 mmol). Posle dodavanja, smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, zatim je razblažena sa dihlorometanom i isprana je sa zas. rastvorom NaHCO3. Organski slojevi su osušeni preko MgSO4, koncentrovani. Ostatak je prečišćen na gelu od silike (eluiranjem sa 0 do 50% EtOAc u heksanima) da se dobije željeni proizvod (0.58, 90%). LCMS izračunato za C19H23Cl2NO2(M+H)<+>: m/z = 381.1; Nađeno: 381.0.

Korak 5. 5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0198] U rastvor 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (47 mg, 0.31 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3 mL) je dodat natrijum hidrid (60%, 12.6 mg, 0.524 mmol) na 0 °C i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 10 minuta. U smešu je dodat rastvor 5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (100 mg, 0.3 mmol, iz primera 14, koraka 4) u N,N-dimetilformamidu (1 mL). Reakcija je mešana na 35 °C preko noći. Reakcija je ugašena i naneta je na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.05% TFA, na brzini protoka 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod kao bis-TFA so. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C25H29ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 494.2; Nađeno: 494.1.

Primer 16. 4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0199]

Korak 1.1-(3-Bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanol

[0200] Natrijum tetrahidroborat (0.31 g, 8.1 mmol) je dodat u smešu 1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanona (iz primera 11, korak 1) (1.5 g, 5.4 mmol) u metanolu (25 mL) na 0 °C i dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Rastvarač je uklonjen i dobijeni ostatak je razblažen sa etil acetatom, ispran sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, zatim je osušen preko Na2SO4, proceđen i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni od silike, eluiranjem sa 0 do 40% EtOAc u heksanima (0.30 g, 90%).

4

Korak 2.4-[3-Hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]piridin-2-karbonitrit

[0201] Smeša 1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanola (0.30 g, 1.1 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-karbonitrila (iz Combi-Blocks, 0.27 g, 1.2 mmol), natrijum karbonata (230 mg, 2.1 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleksa sa dihlorometaom (1:1) (100 mg, 0.13 mmol) u acetonitrilu (8 mL)/vodi (2 mL) je degasirana i nakon toga je ponovo napunjena sa N2. Reakcija je mešana na 95 °C 2 h, zatim je ohlađena i razblažena je sa etil acetatom, isprana sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, osušena je preko Na2SO4, proceđena i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 40% EtOAc u heksanima (0.249 g, 75%). LCMS izračunato za C16H16ClN2O2(M+H)<+>: m/z = 303.1; Nađeno: 303.0

Korak 3.4-[3-Hloro-5-(-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]piridin-2-karbonitril

[0202] Smeša cijanurinskog hlorida (170 mg, 0.94 mmol) i N,N-dimetilformamida (73 µL, 0.94 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta i posle toga je dodat restvor 4-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]piridin-2-karbonitrila (190 mg, 0.628 mmol) u metilen hloridu (4 mL) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa metilen hloridom, isprana sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, osušena je preko Na2SO4, proceđena i koncentrovana. Sirovi proizvod je korišćen direktno u sledećem koraku bez prečišćavanja (121 mg, 60%). LCMS izračunato za C16H15Cl2N2O (M+H)<+>: m/z = 321.0; Nađeno: 321.0

Korak 4. 4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karbonitril

[0203] Natrijum hidrid (20 mg, 0.50 mmol) je dodat u smešu 4-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]piridin-2-karbonitrila (90 mg, 0.28 mmol), 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (63 mg, 0.42 mmol) u N,N-dimetilformamidu (4 mL) i reakcija je mešana na 30 °C preko noći. Smeša je ohlađena, tretirana sa vodom i zatim je proceđena da se obezbedi željeni proizvod. LCMS izračunato za C22H21ClN7O (M+H)<+>: m/z = 434.1; Nađeno: 434.2

Korak 5. 4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karboksilna kiselina

[0204] Natrijum hidroksid (1.0 M) u vodi (0.70 mL, 0.70 mmol) je dodat u smešu 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karbonitrila(0.060 g, 0.14 mmol) u etanolu (1.0 mL) i dobijena smeša je zagrejana na 95 °C tokom 6 h. U ovom vremenu, konc. HCl je dodata da bi se podesila pH do ∼ 3. Rastvarač je uklonjen i ostatak je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS izračunato za C22H22ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 453.1; Nađeno: 453.2 Korak 6. 4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenit}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0205] 2.0 M Dimetilamin u THF (0.14 mL, 0.28 mmol) je dodat u rastvor 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karboksilne kiseline (9.6 mg, 0.021 mmol) u benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (10 mg, 0.03 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0.7 mL) na sobnoj temperaturi nakon čega se dodaje trietilamin (8.8 µL, 0.064 mmol). Reakcija je mešana 1 h. Sirova smeša je prečišćena upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolone, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C24H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 480.2; Nađeno: 480.2.

Primer 17. 4-(3-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N-metilpikolinamid

[0206]

[0207] Ovo jedinjenje je dobijeno upotrebom postupaka koji su analogni onim za Primer 16, Korak 6, sa 2.0 M rastvor metilamina u THF-u zamenom 2.0 M dimetilamina u THF. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C23H25ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 466.2; Nađeno: 466.2.

Primer 18. 4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N-(2-hidroksietil)piridin-2-karboksamid

[0208]

[0209] Ovo jedinjenje je dobijeno upotrebom postupaka koji su analogni onim za Primer 16, Korak 6, sa etanolaminom koji zamenjuje 2.0 M dimetilamin u THF. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C24H27ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 496.2; Nađeno: 496.2.

Primer 19. 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N-(2-hidroksietil)-N-metilpiridin-2-karboksamid

[0210]

4

[0211] Ovo jedinjenje je dobijeno upotrebom postupaka koji su analogni onim za Primer 16, Korak 6, sa 2-(metilamino) etanolom koji zamenjuje 2.0 M dimetilamin u THF. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C25H29ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 510.2; Nađeno: 510.2.

Primer 20. 2-(4-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-1H-pirazol-1-il)etanol

[0212]

Korak 1.3-Bromo-1-hloro-5-(1-hloroetil)-4-metoksi-2-metilbenzen

[0213] Smeša cijanurinskog hlorida (1.7 g, 9.2 mmol) i N,N-dimetilformamida (710 µL, 9.2 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta i zatim je dodat rastvor 1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanola (iz Primera 16, Korak 1) (1.72 g, 6.15 mmol) u metilen hloridu (34 mL) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa metilen hloridom, isprana sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, osušena je preko Na2SO4, proceđena i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 10% EtOAc u heksanima (1.01 g, 60%).

Korak 2. 1-[1-(3-Bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0214] Natrijum hidrid (36 mg, 0.91 mmol) je dodat u smešu 3-bromo-1-hloro-5-(1-hloroetil)-4-metoksi-2-metilbenzena (150 mg, 0.503 mmol), 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (110 mg, 0.76 mmol) u N,N-dimetilformamidu (8 mL) i reakcija je mešana na 30 °C preko noći. Smeša je razblažena sa metilen hloridom, isprana sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, osušena je preko

4

Na2SO4, poceđena i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 70% EtOAc u CH2Cl2(103 mg, 50%). LCMS izračunato za C16H18BrClN5O (M+H)<+>: m/z = 410.0; Nađeno: 410. Racemski proizvodi su naneti na Phenomenex Lux-Celuloza1 kolonu (21.1x250 mm, veličine čestica 5 mikrona), eluiranjem sa 5% etanolom u heksanima na brzini protoka od 18 mL/min, ∼ 1 mg/injekcija, da se dobiju dva enantiomera.

Korak 3. 1-(2-{[terc-Butil(dimetil)silil]oksi}etil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol

[0215] Kalijum terc-butoksid (1.0 M) in THF (0.60 mL, 0.60 mmol) je dodat u rastvor 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (0.1 g, 0.5 mmol) u N,N-dimetilformamidu (1.5 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 minuta, zatim je ohlađena do 0°C i tretirana je sa (2-bromoetoksi)(terc-Butil)dimetilsilanom (0.2 mL, 0.8 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, zatim je razblažena sa etil acetatom, isprana je sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, osušena je preko Na2SO4, proceđena i koncentrovana da se dobije sirovi proizvod koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa 0 do 30% EtOAc u heksanima. Izračunato za C17H34BN2O3Si (M+H)<+>: m/z = 353.2; Nađeno: 353.1.

Korak 4. 2-(4-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-1H-pirazol-1-il)etanol

[0216] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (0.026 g, 0.062 mmol) (hiralno čist, prvi signal iz Koraka 2), 1-(2-{[terc-Butil(dimetil)silil]oksi}etil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (0.024 g, 0.069 mmol), natrijum karbonata (13 mg, 0.12 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleksa sa dihlorometanom (1:1) (6.1 mg, 0.0075 mmol) u acetonitrilu (0.5 mL)/vodi (0.1 mL) je degasirana i zatim je ponovo napunjena sa N2. Reakciona smeša je mešana na 95 C tokom 2 h, nakon čega je tretirana sa konc. HCl (0.1 mL) i nakon toga je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Sirova smeša je koncentrovana korišćenjem RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod. Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer.

LCMS izračunato za C21H25ClN7O2(M+H<)+>: m/z = 442.2; Nađeno: 442.2.

Primer 21. 3’-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5’-hloro-3-fluoro-2’-metoksi-N,N,6’-trimetilbifenil-4-karboksamid trifluoroacetat

[0217]

4

Korak 1. Metil 3’-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5’-hloro-3-fluoro-2’-metoksi-6’-metilbifenil- 4-karboksilat

[0218] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (60 mg, 0.15 mmol, hiralno čist, prvi signal iz Primera 20, Korak 2), [3-fluoro-4-(metoksikarbonil)fenil]boronske kiseline (iz Combi-Blocks, 0.041 g, 0.20 mmol), natrijum karbonata (36 mg, 0.34 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino) ferocen]dihloropaladijum(II), kompleksa sa dihlorometanom (1:1) (6 mg, 0.007 mmol) u acetonitrilu (1.2 mL)/vodi (0.3 mL) je vakumirana i zatim je napunjena sa N2. Reakcija je mešana na 95 °C tokom 2 h. Zatim je rastvarač uklonjen i sirova smeša je prečišćena hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 70% EtOAc u CH2Cl2, da se dobije željeni proizvod (54 mg, 75%). LCMS izračunato za C24H24ClFN5O3(M+H)<+>: m/z = 484.2; Nađeno: 484.1 Korak 2. 3’-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5’-hloro-3-fluoro-2’-metoksi-6’-metilbifenit-4-karboksilna kiselina

[0219] Litijum hidroksid, monohidrat (13 mg, 0.31 mmol) je dodat u rastvor metil 3’-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5’-hloro-3-fluoro-2’-metoksi-6’-metilbifenil-4-karboksilata koji je dobijen gore u tekstu (0.030 g, 0.062 mmol) u metanolu (0.2 mL)/tetrahidrofuranu (0.2 mL)/vodi (0.09 mL). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1.5 h, zatim je tretirana sa konc. HCl (60 uL) da se pH podesi do 2. Rastvarač je uklonjen da se obezbedi sirovi proizvod koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS izračunato za C23H22ClFN5O3(M+H)<+>: m/z = 470.1; Nađeno: 470.2

Korak 3. 3’-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5’-hloro-3-fluoro-2’-metoksi-N,N,6’-trimetilbifenil-4-karboksamid trifluoroacetat

[0220] 2.0 M Dimetilamin u THF (0.1 mL, 0.2 mmol) je dodat u rastvor 3’-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5’-hloro-3-fluoro-2’-metoksi-6’-metilbifenil-4-karboksilne kiseline (12 mg, 0.026 mmol) koji je dobiven gore u tekstu i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (20 mg, 0.04 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0.7 mL) na sobnoj temperaturi nakon čega se dodaje trietilamin (11 µL, 0.077 mmol). Reakcija je mešana 1 h, ugašena je sa vodom. Sirova smeša je naneta na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/u vodi koji sadrži 0.05% TFA, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod u obliku TFA soli. Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C25H27ClFN6O2(M+H)+: m/z = 497.2; Nađeno: 497.2.

Primer 22. 3’-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5’-hloro-3-fluoro-2’-metoksi-N,6’-dimetilbifenil-4-karboksamid trifluoroacetat

[0221]

4

[0222] Ovo jedinjenje je dobijeno upotrebom postupaka analognim onim za Primer 21, Korak 3, sa 2.0 M metilaminom u THF koji zamenjuje 2.0 M dimetilamin u THF. Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C24H25ClFN6O2(M+H)<+>: m/z = 483.2; Nađeno: 483.2.

Primer 23. 5-(3-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N-(2-hidroksietil)pikolinamid trifluoroacetat

[0223]

Korak 1.5-[3-Hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]piridin-2-karbonitrit

[0224] Smeša 1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanola (0.15 g, 0.54 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-karbonitrila (iz Frontier, 0.14 g, 0.59 mmol), natrijum karbonata (110 mg, 1.1 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleksa sa dihlorometanom (1:1) (52 mg, 0.064 mmol) u acetonitrilu (4 mL)/vodi (1 mL) je degasirana i zatim ne ponovo napunjena sa N2. Reakcija je mešana na 95 °C tokom 2 h, ohlađena, razblažena je sa etil acetatom, isprana sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, i zatim je osušena sa Na2SO4, proceđena i koncentrovana. Sirovi proizvod je pročišćen hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 40% EtOAc u heksanima, da se dobije željeni proizvod (114 mg, 70%). LCMS izračunato za C16H16ClN2O2(M+H)<+>: m/z = 303.1; Nađeno: 303.0

Korak 2.5-[3-Hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]piridin-2-karbonitril

4

[0225] Smeša cijanurinskog hlorida (170 mg, 0.94 mmol) i N,N-dimetilformamida (73 µL, 0.94 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta i zatim se dodaje rastvor 5-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]piridin-2-karbonitrila (190 mg, 0.628 mmol) u metilen hloridu (4 mL) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa metilen hloridom, isprana je sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, osušena je preko Na2SO4, zatim je proceđena i koncentrovana. Dobijeni sirovi proizvod je direktno korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja (110 mg, 55%). LCMS izračunato za C16H15Cl2N2O (M+H)<+>: m/z = 321.0; Nađeno: 321.0 Korak 3. 5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karbonitril

[0226] Natrijum hidrid (20 mg, 0.50 mmol) je dodat u smešu 5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]piridin-2-karbonitrila (90 mg, 0.28 mmol), 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (63 mg, 0.42 mmol) u N,N-dimetilformamidu (4 mL) i reakcija je mešana na 30 °C preko noći. Smeša je tretirana sa vodom i posle toga je proceđena da se dobije željeni proizvod. LCMS izračunato za C22H21ClN7O (M+H)<+>: m/z = 434.1; Nađeno: 434.2

Korak 4. 5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karboksilna kiselina

[0227] Natrijum hidroksid (1.0 M) u vodi (0.70 mL, 0.70 mmol) je dodat u smešu 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karbonitrila(0.060 g, 0.14 mmol) u etanolu (1.0 mL). Reakcija je zagrejana na 95 °C tokom 6 h, nakon čega sledi dodavanje konc. HCl da se podesi pH to ∼ 3. Rastvarač je uklonjen i dobijeni ostatak je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS izračunato za C22H22ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 453.1; Nađeno: 453.2 Korak 5. 5-(3-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N-(2-hidroksietil)pikolinamid trifluoroacetat

[0228] Etanolamin (15 µL, 0.25 mmol) je dodat u rastvor 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karboksilne kiseline (9.6 mg, 0.021 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (10 mg, 0.03 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0.7 mL) na sobnoj temperaturi nakon čega sledi dodavanje trietilamina (8.8 µL, 0.064 mmol). Reakcija je mešana 1 h, i zatim je ugašena sa vodom. Sirova smeša je naneta na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.05% TFA, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod kao TFA so. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C24H27ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 496.2; Nađeno: 496.2.

Primer 24. 4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N-(2-hidroksietil)-N-metilpiridin-2-karboksamid trifluoroacetat

[0229]

[0230] Ovo jedinjenje je dobijeno upotrebom postupaka analognim onim za Primer 23, sa 2-(metilamino)etanolom koji zamenjuje etanolamin. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C25H29ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 510.2; Nađeno: 510.2.

Primer 40. 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-cijano-2-metoksi-6-metilfenil}-N-(2-hidroksietil)-N-metilpiridin-2-karboksamid

[0231]

[0232] Prethodno dobijanje katalizatora: Anhidrovani dimetilacetamid (DMA) je pročišćen sa blagim tokom N2u trajanju od 30 minuta pre upotrebe. 50 mM rastvor H2SO4je dobijen sa 10 mL dimetilacetamidom i 26.8 µL konc. H2SO4i nakon toga je pročišćen sa N2u trajanju od 10 minuta. U posudu zapremine 8 mL koja je opremljena sa magnetnom mešalicom i poklopcem za septum su dodati Pd(OAc)2(22.5 mg, 100 µmol) i 2-dicikloheksilfosfino-2’,4’,6’-triizopropilbifenil (95.3 mg, 200 µmol). Posuda je uklonjena i napunjena je sa N2tri puta, pročišćena je sa blagim tokom N2u trajanju od 10 minuta. H2SO4(2.0 mL, 50 mM u DMA) je dodat, i smeša katalizatora je mešana u uljanom kupatili na 80 °C u trajanju od 30 minuta da se dobije homogeni kafeno braon boje rastvor.

[0233] Gore navedeni katalizator (0.05 mL) je dodat u smešu 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N-(2-hidroksietil)-N-metilpiridin-2-karboksamida (iz primera 19) (4.0 mg, 0.0078 mmol), cinka (0.22 mg, 0.0034 mmol) i cink cijanida (0.92 mg, 0.0078 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (0.1 mL). Smeša je degasirana i reakcija je zatim zagrejana na 120 °C u trajanju od 1.5 h. Sirova smeša je naneta na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min)

1

da se dobije željeni proizvod. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C26H29N8O3(M+H)<+>: m/z = 501.2; Nađeno: 501.2

Primer 41. 5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0234]

Korak 1: N-(2,4-Dimetoksibenzil)-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-amin

[0235] Rastvor 4-hloro-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridina (330 mg, 1.9 mmol) i 1-(2,4-dimetoksifenil) metanamina (0.58 mL, 3.9 mmol) u 1-butanolu je zagrejan u mikrotalasnoj na 150 °C u trajanju od 40 minuta. Prečišćavanje pomoću preparativne LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koja sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) dalo je željeni proizvod (240 mg, 42%). LCMS za C16H19N4O2(M+H)<+>: m/z = 299.1; Nađeno: 299.2.

Korak 2: 5-[3-Hloro-5-(1-{4-[(2,4-dimetoksibenzil)amino]-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il}etil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0236] Rastvor N-(2,4-dimetoksibenzil)-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-amina (110 mg, 0.37 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2 mL) je tretiran sa natrijum hidridom (30 mg, 0.75 mmol) i mešan je na 20 °C u trajanju od 30 minuta. Reakciona smeša je tretirana sa rastvorom 5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (130 mg, 0.34 mmol) u N,N-dimetilformamidu (1 mL) i zagrejana je na 50 °C preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana je sa etil acetatom (2x). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa vodom i slanim rastvorom, osušeni su sa magnezijum sulfatom, proceđeni, i koncentrovani su do sirovog ostatka. Prečišćavanje pomoću preparativne LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) dala je željeni proizvod (110 mg, 49%). LCMS za C34H38ClN6O4(M+H)<+>: m/z = 629.3; Nađeno: 629.1.

Korak 3: S-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0237] Rastvor 5-[3-hloro-5-(1-{4-[(2,4-dimetoksibenzil)amino]-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il}etil)-6-metoksi-2-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (85 mg, 0.14 mmol) u metilen hloridu (2 mL) je tretiran sa trifluorosirćetnom kiselinom (2 mL) i mešan je na 20 °C u trajanju od 3 h i na 40 °C u trajanju od 20 minuta. Prečišćavanje pomoću preparativne LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% trifluorosirćetnu kiselinu, na brzini protoka od 60 mL/min) dalo je željeni proizvod (44 mg, 46%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS za C25H28ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 479.2; Nađeno: 479.0.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 12.8 (br

2

s, 0.5 H), 8.50 (br s, 0.5 H), 8.37 (br s, 2 H), 7.91 - 7.86 (m, 0.5 H), 7.80 - 7.75 (m, 0.5 H), 7.68 - 7.58 (m, 3 H), 7.17 (d, J= 7.3 Hz, 1 H), 6.19 (q, J = 6.9 Hz, 1 H), 3.04 (s, 3 H), 3.01 (s, 3 H), 2.94 (s, 3 H), 2.61 (s, 3 H), 2.05 (s, 3 H), 1.83 (d, J = 6.9 Hz, 3 H).

Primer 43. 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-[5-(metilsulfonil) pyridin-3-il]benzonitril

[0238]

Korak 1.1-(3-bromo-5-hloro-4-fluoro-2-hidroksifenil)etanon

[0239] 1-(5-Hloro-4-fluoro-2-hidroksifenil)etanon (npr., iz primera 13, Korak 1) (20.0 g, 101 mmol, 1.00 eq) i 50% sumporna kiselina u vodi (120 mL) su dodati u balon. Dobijena smeša je zagrejana na 60 °C u vodenom kupatilu uz mešanje. N-Bromosukcinimid (21.52 g, 120.9 mmol, 1.20 eq) je dodat u tri porcije [7.0 g 7.0 g 7.52 g] u 8 minutnim intervalima. Posle zagrevanja reakcione smeše na 60 °C u trajanju 3 h, reakcija je završena. Reakciona smeša je razblažena sa vodom (160 ml) i dihlorometanom (DCM) (300 ml), i smeša je mešana u trajanju od 0.5 h. Organski sloj je razdvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa dihlorometanom (100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 1 N HCl (100 ml x 2), vodom (100 ml), slanim rastvorom (60 ml), i koncentrovani su pod redukovanim pritiskom da se dobije sirovi proizvod (29.1 g) kao čvrsta supstanca žućkaste boje. Sirovi proizvod je razblažen u HOAc (100 ml) i nakon toga je rastvoren u vodi (200 ml) uz mešanje. Dobijena smeša je mešana u trajanju od 20 min na sobnoj temperaturi i proizvod je sakupljen ceđenjem i osušen je da se dobije 1-(3-bromo-5-hloro-4-fluoro-2-hidroksifenil) etanon (21.8 g, 80.9%) kao čvrsta supstanca žućkaste boje.<1>H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 13.18 (s, 1 H, -OH), 7.78 (d, J = 7.78 Hz, 1 H), 2.63 (s, 3 H).

Korak 2.4-Acetil-2-bromo-6-hloro-3-etoksibenzonitril

[0240] 1-(3-Bromo-5-hloro-4-fluoro-2-hidroksifenil)etanon (2.0 g, 7.5 mmol) je kombinovan sa kalijum cijanidom (0.58 g, 9.0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (16 mL, 210 mmol) i zagrejan je na 85 °C u uljanom kupatilu. Posle zagrevanja u trajanju od 18 h, reakciji je omogućeno da se ohladi do sobne temperature i dodati su jodoetan (0.90 mL, 11 mmol) i kalijum karbonat (2.1 g, 15 mmol). Reakcija je zagrejana na 65 °C i praćena je sa LC/MS. Posle zagrevanja u trajanju 3 h reakcija je završena i omogućeno je da se ohladi do sobne temperature, zatim je rastvorena u etil acetatu i isprana je sa vodom, slanim rastvorom, i osušena je preko magnezijum sulfata. Dobijeni rastvor je koncentrovan da se dobije sirovi proizvod kao tamno ulje. Proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa gradijentom heksan: etil acetata da se dobije 4-acetil-2-bromo-6-hloro-3-etoksibenzonitril (1.15 gm, 50%) kao čvrsti ostatak, LCMS izračunato za C11H9BrClNO2(M+H)<+>: m/z = 301.9, 303.9; nađeno: (bez jonizacije)

Korak 3.2-Bromo-6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)benzonitrit

[0241] Natrijum tetrahidroborat (38 mg, 0.99 mmol) je dodat u smešu 4-acetil-2-bromo-6-hloro-3-etoksibenzonitrila (200 mg, 0.7 mmol) u metanolu (5 mL, 100 mmol) na 0 °C. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju 1 h, koncentrovana je i podeljena je između vode i EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4, proceđeni i koncentrovani da se dobije sirovi 2-bromo-6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)benzonitril kao bistro ulje (0.15 gm, 100%), LCMS izračunato za C11H11BrClNO2(M+H)<+>: m/z = 303.9, 305.9; nađeno: 304.0, 305.9.

Korak 4.2-Bromo-6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksibenzonitril

[0242] Cijanurinski hlorid (0.11 g, 0.59 mmol) je rastvoren u N,N-dimetilformamidu (3 mL, 40 mmol). Posle mešanja od nekoliko minuta, rastvor 2-bromo-6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)benzonitrila (150 mg, 0.49 mmol) u metilen hloridu (3 mL, 50 mmol) je dodat. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temeperaturi preko noći. Reakcija je podeljena između vode i dihlorometana. Organski sloj je ispran sa zas. rastvorom NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, osušen preko MgSO4, i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen sa fleš hromatografijom na koloni, eluiranjem sa gradijentom 0-30% EtOAc/Heksanu da se dobije 2-bromo-6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksibenzonitril (0.12 gm, 75%) kao polučvrsta supstanca, LCMS izračunato za C11H10BrCl2NO (M+H)<+>: m/z = 323.9, 320.9; nađeno: (slaba jonizacija).

Korak 5. 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-bromo-6-hloro-3-etoksibenzonitril

[0243] Natrijum hidrid (16 mg, 0.41 mmol) je dodat u smešu 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (33 mg, 0.22 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3 mL, 40 mmol) i mešan je u trajanju od 10 minuta. 2-bromo-6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksibenzonitrila (60 mg, 0.2 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2 mL) je dodat i reakcija je mešana na 50 °C preko noći. Smeša je razblažena sa metilen hloridom, isprana je sa zasićenim NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, osušena je preko Na2SO4, proceđena i koncentrovana. Proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa CH2Cl2/MeOH 0-10%, da se dobije 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-bromo-6-hloro-3-etoksibenzonitril (0.05 gm, 60%) kao čvrsta supstanca, LCMS izračunato za C17H16BrClN6O (M+H)<+>: m/z = 437.0, 435.0; nađeno: 436.9, 434.7.

Korak 6. 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-[5-(metilsulfonil)piridin-3-il]benzonitril

[0244] U smešu 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-bromo-6-hloro-3-etoksibenzonitrila (20 mg, 0.04 mmol) i 3-(metilsulfonil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridina (19 mg, 0.069 mmol) u acetonitrilu (2 mL, 40 mmol) je dodat natrijum karbonat (10 mg, 0.09 mmol) u vodi (0.5 mL, 30 mmol). Reakcija je degasirana sa mehurićima azota. [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) kompleks sa dihlorometanom (1:1) (2 mg, 0.002 mmol) je dodat i još više je degasiran sa N2. Reakcija je zagrejana na 100 °C tokom 2 h. Sirovi proizvod je prečišćen na preparativnoj LC-MS (acetonitril, voda, TFA) da se dobije željeni proizvod (0.004 g, 20%) kao bela amorfna čvrsta supstanca. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C23H22ClN7O3S (M+H)<+>: m/z = 512.1; nađeno: 512.2.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 9.20 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 9.12 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 8.61 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 6.36 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 3.54 (dt, J = 14.0, 7.0 Hz, 1H), 3.37 (s, 3H), 3.36 - 3.30 (m, 1H), 2.58 (s, 3H), 1.81 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 0.92 (t, J= 6.9 Hz, 3H).

Primer 44. 5-(3-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil)-N,N-dimetilpikolinamid

4

[0246] Jedinjenje iz naslova je dobijeno na analogni način kao za Primer 43, Korak 6 ali korišćenjem N,N-dimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pikolinamida (Peptech, Cat# BE 1622) da se dobije sirovi proizvod koji je prečišćen na preparativnoj LC-MS (acetonitril, voda, TFA) da se dobije željeni proizvod (0.005 g, 22%) kao bela amorfna čvrsta supstanca. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C25H25ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 505.1; nađeno: 505.1.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.72 (dd, J = 2.1, 0.7 Hz, 1H), 8.14 - 8.12 (m, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.71 (dd, J= 8.0, 0.7 Hz, 1H), 6.35 (q, J= 7.0 Hz, 1H), 3.61 - 3.48 (m, 1H), 3.42 - 3.31 (m, 1H), 3.03 (s, 3H), 2.95 (s, 3H), 2.57 (s, 3H), 1.80 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.92 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

Primer 65. 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilnikotinamid

[0247]

[0248] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (25 mg, 0.061 mmol) (hiralno čist, prvi signal iz Primera 20, Korak 2), N,N-dimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)nikotinamida (iz PepTech) (25 mg, 0.091 mmol), natrijum karbonata (13 mg, 0.12 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum (II), kompleksa sa dihlorometanom (1:1) (9.9 mg, 0.012 mmol) u acetonitrilu (0.8 mL) / vodi (0.3 mL) je degasirana sa N2i zatim je mešana na 95 °C tokom 2 h. Smeša je proceđena i ostatak nakon ceđenja je pročišćen sa RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod. Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C24H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 480.2; Nađeno: 480.2.

<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (1H, s), 8.54 (1H, br s), 8.13 (1H, s), 7.82 (1H, m), 7.53 (1H, s), 7.42 (2H, br s), 6.28 (1H, q, J= 6.5 Hz), 3.22 (3H, s), 2.95 (6H, m), 2.58 (3H, s), 2.04 (3H, s), 1.77 (3H, d, J = 6.5 Hz) ppm.

Primer 66. 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid bis(trifluoroacetat)

[0249]

[0250] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (25 mg, 0.061 mmol) (hiralno čist, prvi signal iz Primera 20, Korak 2), N,N-dimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-karboksamida (25 mg, 0.091 mmol), natrijum karbonata (13 mg, 0.12 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]-dihloropaladijum (II), kompleks sa dihlorometanom (1:1) (9.9 mg, 0.012 mmol) u acetonitrilu (0.8 mL) / vodi (0.3 mL) je degasirana sa N2i posle toga je mešana na 95 °C tokom 2 h. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je proceđena i ostatak nakon ceđenja je prečišćen na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.05% trifluorosirćetnu kiselinu, na brzinu protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod kao bis-TFA so. Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C24H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 480.2; Nađeno: 480.2.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 8.78 (2H, br s), 8.48 (1H, m), 8.36 (1H, s), 7.86 (1H, br s), 7.65 (1H, br s), 7.58 (1H, s), 6.33 (1H, q, J= 7.0 Hz), 3.19 (3H, s), 3.03 (3H, s), 2.97 (3H, s), 2.62 (3H, s), 2.06 (3H, s), 1.81 (3H, d, J= 7.0 Hz) ppm.

Primer 67. 1-{1-[5-Hloro-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0251]

Korak 1.1-[1-(3-Azetidin-3-il-5-hloro-4-fluoro-2-metoksifenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorid

[0252] terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil} azetidin-1-karboksilat (1.6 g, 3.2 mmol, iz Primera 13, Korak 7) je tretiran sa 4.0 M hlorovodonikom u dioksanom (8.15 mL, 32.6 mmol) u metilen hloridu (17 mL) na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 h. Smeša je koncentrovana do isušivanja da se dobije željeni proizvod. LCMS izračunato za C18H21ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 391.1; Nađeno: 391.1.

Korak 2. 1-{1-[5-Hloro-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0253] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-4-fluoro-2-metoksifenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (0.90 g, 1.9 mmol, Primer 67, Korak 1), acetona (1.0 mL, 14 mmol) i trietilamina (2.5 mL, 18 mmol) u metilen hloridu (20 mL) je dodata smola natrijum triacetoksiborohidrid (2.5 g, 5.8 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, zatim je proceđena, isprana sa vodom, osušena preko MgSO4, proceđena i koncentrovana da se dobije sirovi proizvod (870 mg, 100%). LCMS izračunato za C21H27ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 433.2; Nađeno: 433.1 Korak 3. Jedan enantiomer 1-{1-[5-hloro-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0254] Enantiomeri 1-{1-[5-hloro-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (870 mg, 2.0 mmol) su razdvojeni na Phenomenex Lux Celuloza-2 koloni, eluiranjem sa 10% etanolom u heksanima, na brzini protoka od 18 mL/min, i na kolonu je naneto ∼8 mg/injekcije da se razdvoje dva enantiomera. Vreme retencije prvog signala 10.9 min; vreme retencije drugog signala 13.6 min. Frakcije 1og signala (110 mg, 13%) su koncentrovane i prečišćene upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodom koja sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod. Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C21H27ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 433.2; Nađeno: 433.1

Primer 68. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil}azetidin-1-il)propan-2-ol

[0255]

[0256] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-4-fluoro-2-metoksifenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (15 mg, 0.032 mmol, iz Primera 67, Korak 1) i trietilamina (18 µL, 0.13 mmol) u etanolu (0.53 mL) je dodat (S)-(-)-metiloksiran (6.8 µL, 0.097 mmol). Dobijena smeša je zagrejana na 90 °C tokom 3 h, nakon čega je prečišćena na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod. Enantiomeri su razdvojeni na Phenomenex Lux Celuloza C-4 koloni (5 µM, 21.2 x 250 mm), eluiranjem sa 20% etanolom u heksanima, na brzini protoka od 18 mL/min, da se dobiju dva enantiomera. Prvi signal (2.7 mg, 18%) vreme retencije 8.9 min; LCMS izračunato za C21H27ClFN6O2(M+H)<+>: m/z = 449.2; Nađeno: 449.1.<1>H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 8.11(1H, s), 7.42 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.25 (2H, br s), 6.21 (1H, q, J = 7.5 Hz), 4.28 (1H, d, J = 4.0 Hz), 3.82 (3H, m), 3.62 (3H, s), 3.55 (1H, m), 3.05 (1H, m), 2.97 (1H, m), 2.55 (3H, s), 2.28 (2H, m), 1.70 (2H, d, J = 7.5 Hz), 1.00 (3H, d, J = 6.0 Hz) ppm. Vreme retencije drugog signala 10.0 min.

Primer 71. 2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-fluoro-2-metoksifenil} azetidin-1-il)etanol

[0257]

[0258] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-4-fluoro-2-metoksifenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (19 mg, 0.041 mmol, racemskog intermedijera iz Primera 67, Korak 1) i trietilamina (28 µL, 0.20 mmol) u metanolu (0.1 mL)/acetonitrilu (0.1 mL)/tetrahidrofuranu (0.1 mL) je dodat {[terc-Butil(dimetil) silil]oksi}acetaldehid (39 µL, 0.20 mmol), nakon čega se dodaje natrijum triacetoksiborohidrid (22 mg, 0.10 mmol). Dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Smeša je tretirana sa 6.0 M hlorovodonikom u vodi (0.07 mL, 0.4 mmol) na sobnoj temperaturi tokom 10 min i zatim je prečišćena na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod (2.5 mg, 13%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C20H25ClFN6O2(M+H)<+>: m/z = 435.2; Nađeno: 435.1.

Primer 72. 1-{1-[5-Hloro-4-fluoro-2-metoksi-3-(1-oksetan-3-ilazetidin-3-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0259]

[0260] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-4-fluoro-2-metoksifenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (19 mg, 0.041 mmol racemski intermedijer iz Primera 67, Korak 1) i trietilamina (28 µL, 0.20 mmol) u metanolu (0.1 mL)/acetonitrilu (0.1 mL)/tetrahidrofuranu (0.1 mL) je dodat 37% formaldehid (15 µL, 0.20 mmol), nakon čega se dodaje natrijum triacetoksiborohidrid (22 mg, 0.10 mmol). Dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Smeša je prečišćena na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod (1.2 mg, 6.3%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C19H23ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 405.2; Nađeno: 405.1.

Primer 94. 1-{1-[5-Hloro-2-etoksi-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin bis(trifluoroacetata)

[0261]

Korak 1. Benzil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil} azetidin-1-karboksilat

[0262] Cijanurinski hlorid (200 mg, 1.1 mmol) je dodat u N,N-dimetilformamidu (0.083 mL, 1.1 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle obrazovanja bele čvrste supstance (oko 10 minuta), dodat je metilen hlorid (5 mL), nakon čega se dodaje benzil 3-[3-hloro-6-etoksi-5-(1-hidroksietil)-2-metilfenil]azetidin-1-karboksilat (310 mg, 0.77 mmol). Nakon dodavanja, dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodata je voda, i nakon toga je razblažena sa dihlorometanom. Organske faze su isprane sa zas. rastvorom NaHCO3, vodom i slanim rastvorom, osušene preko MgSO4, koncentrovane i prečišćene na gelu od silike (eluiranjem sa 0 do 40% EtOAc/heksanima) da se dobije željeni proizvod (140 mg, 43%). LCMS izračunato za C22H26Cl2NO3(M+H)<+>: m/z = 422.1; Nađeno: 422.0.

[0263] Smeša benzil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-metilfenil]azetidin-1-karboksilata (0.375 g, 0.888 mmol), 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (0.16 g, 1.1 mmol), cezijum karbonata (0.43 g, 1.3 mmol) i kalijum jodida (15 mg, 0.089 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2.8 mL) je zagrejan na 140 °C tokom 1 h. Smeša je razblažena sa etrom, i isprana je sa vodom. Organski slojevi su koncentrovani i prečišćeni na silika gelu (eluiranjem sa 0 do 100% EtOAc u heksanima) da se dobije željeni proizvod (0.24 g, 50%). LCMS izračunato za C28H32ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 535.2; Nađeno: 535.0. Enantiomeri su razdvojeni na Phenomenex Lux Celuloza C-2 koloni (5 µM, 21.2 x 250 mm), eluiranjem sa 20% etanolom u heksanima, na brzini protoka od 18 mL/min, i nanošenjem na kolonu ∼4.5 mg/injekciji da se razdvoje dva enantiomera. Vreme retencije prvog signala: 21.2 min; Vreme retencije drugog signala: 24.6 min.

Korak 2. 1-[1-(3-Azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metit-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0264] Benzil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil} azetidin-1-karboksilat (170 mg, 0.32 mmol, racemski intermedijer) i 5% paladijum (80 mg) su kombinovani u metanolu (12 mL), u koji je dodat 0.25 M hlorovodonik u vodi (3.2 mL, 0.79 mmol). Suspenzija je hidrogenizovana pod pritiskom H2u balonu na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Suspenzija je proceđena. Ostatak nakon ceđenja je neutralizovan sa zas. rastvorom NaHCO3, i ekstrahovan je sa dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4i proceđeni, koncentrovani d da se dobije željeni proizvod (117 mg, 92%). LCMS izračunato za C20H26ClN6O (M+H)<+>: m/z = 401.2; Nađeno: 401.1.

Korak 3. 1-{1-[5-Hloro-2-etoksi-3-(1-izopropilazetidin-3-il)-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 4-amin bis(trifluoroacetat)

[0265] Aceton (9.3 µL, 0.13 mmol) je dodat u 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (10.2 mg, 0.0254 mmol) u metanolu (0.1 mL)/tetrahidrofuranu (0.1 mL)/acetonitrilu (0.1 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min, pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida (16 mg, 0.076 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 4 h i posle toga je prečišćena na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koja sadrži 0.05% TFA, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod kao TFA so (2.3 mg, 22%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C23H32ClN6O (M+H)<+>: m/z = 443.2; Nađeno: 443.1.

Primer 95. 2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil} azetidin-1-il)etanol bis(trifluoroacetat)

[0266]

[0267] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (7.9 mg, 0.020 mmol, racemski intermedijer iz Primera 94, Korak 2) u tetrahidrofuranu (0.09 mL)/acetonitrilu (0.09 mL)/metanolu (0.09 mL) dodat je {[terc-Butil(dimetil)silil]oksi}acetaldehid (19 µL, 0.098 mmol) i smeša je mešana u trajanju od 10 min pre dodavanja natrijum triacetoksiborohidrida (12 mg, 0.059 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 4 h, nakon čega je tretirana sa 6.0 M hlorovodonikom u vodi (30 µL, 0.2 mmol) u trajanju od 10 min. Smeša je prečišćena na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.05% TFA, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod kao TFA so (3.2 mg, 40%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C22H30ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 445.2; Nađeno: 445.1.

Primer 96. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)propan-2-ol bis(trifluoroacetat)

[0268]

Korak 1. Benzil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil} azetidin-1-karboksilat

[0269] Enantiomeri iz Primera 94, Korak 1 su razdvojeni na Phenomenex Lux Celuloza C-2 kolonu (5 µM, 21.2 x 250 mm), eluiranjem sa 20% etanolom u heksanima, na brzini protoka od 18 mL/min, i nanošenje na kolonu ∼4.5 mg/injekciji da se razdvoje dva enantiomera. Retenciono vreme prvog signala: 21.2 min; retenciono vreme drugog signala: 24.6 min.

Korak 2.1-[1-(3-Azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3, 4-d]pirimidin-4-amin

[0270] Benzil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil} azetidin-1-karboksilat (hiralni intermedijer iz prvog signala iz prethodnog koraka) je hidrogenizovan u prisustvu 5% paladijuma kao što je opisano u Primeru 94, Korak 2 da se dobije željeni hiralni proizvod. LCMS izračunato za C20H26ClN6O (M+H)<+>: m/z = 401.2; Nađeno: 401.1.

Korak 3. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil} azetidin-1-il)propan-2-ol bis(trifluoroacetat)

[0271] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (10 mg, 0.02 mmol, hiralni intermedijer iz Koraka 2) i trietilamina (9 µL, 0.07 mmol) u izopropil alkoholu (0.05 mL) je dodat (S)-(-)-metiloksiran (4.5 µL, 0.064 mmol). Dobijena smeša je meša na 90 °C preko noći, ohlađena i prečišćena na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.05% TFA, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod kao TFA so (3.4 mg, 34%). Proizvod je izolovan kao jedan diastereoizomer. LCMS izračunato za C23H32ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 459.2; Nađeno: 459.1

Primer 99. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)-1-oksopropan-2-ol trifluoroacetat

[0272]

1

[0273] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (9.8 mg, 0.024 mmol, racemski intermedijer iz Primera 94, Korak 2), N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfata (14 mg, 0.037 mmol) i trietilamina (10 µL, 0.073 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0.15 mL) je dodta 85% (2S)-2-hidroksipropanska kiselina u vodi (3.2 µL, 0.037 mmol). Dobijena smeša je mešana 2 h na sobnoj temperaturi. Smeša je prečišćena na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.05% TFA, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod kao so trifluorosirćetna kiselina (TFA) (2.9 mg, 29%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C23H30ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 473.2; Nađeno: 473.1.

Primer 102. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)propan-2-ol

[0274]

[0275] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (21 mg, 0.046 mmol) (Primer 1, Korak 7, hiralni intermedijer iz signala 1) i trietilamina (20 µL, 0.1 mmol) u izopropil alkoholu (0.10 mL) je dodat (S)-(-)-metiloksiran (3.2 µL, 0.046 mmol). Dobijena smeša je mešana na 90 °C. Posle 90 min, dodatni (S)-(-)-metiloksiran (6.4 uL) je dodat i mešanje je nastavljeno na 90 °C preko noći. Posle hlađenja, smeša je razblažena sa metanolom i prečišćena je korišćenjem RP-HPLC (XBridge C18 kolonom, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije 6 mg (30%) proizvoda. Proizvod je izolovan kao jedan diastereomer. LCMS izračunato za C22H30ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 445.2; Nađeno: 445.2.

2

Primer 104. 2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)etanol

[0276]

[0277] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (20 mg, 0.04 mmol) (Primer 1, Korak 7, hiralni intermdeijer iz signala 1), {[terc-Butil(dimetil)silil]oksi}acetaldehida (8.3 mg, 0.048 mmol), i trietilamina (19 µL, 0.14 mmol) u metilen hloridu (0.3 mL) je dodata smola natrijum triacetoksiborohidrida (38 mg, 0.087 mmol). Dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Smeša je proceđena i koncentrovana. Sirovi proizvod je rastvoren u tetrahidrofuranu (1 mL) i ohlađen je do 0°C. 1.0 M Tetra-n-Butilamonijum fluorid u THF (0.44 mL, 0.44 mmol) se dodaje i zagreva se do sobne temperature. Posle 3 h, rastvarači su upareni. Sirova supstanca je pročišćena upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/u vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije 8.1 mg (40%) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C21H28ClN6O2(M+H)<+>: m/z = 431.2; Nađeno: 431.3.

Primer 105. (3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)acetonitril

[0278]

[0279] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-yl-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (16 mg, 0.035 mmol, hiralni intermedijer iz signala 1 iz Primera 1, Korak 7) i trietilamina (14 µL, 0.10 mmol) u acetonitrilu (0.7 mL) je dodat bromoacetonitril (2.7 µL, 0.038 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2.5 h. Smeša je razblažena sa acetonitrilom i prečišćena je korišćenjem RPHPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.05% TFA, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod kao TFA so. Čiste frakcije su parcijalno uparene i posle toga su napravljene baznim dodavanjem 1 N NaOH. Smeša u vodi je ekstrahovana sa dihlorometanom (2x). Ekstrakti su osušeni (MgSO4), proceđeni, i koncentrovani. Čvrsta supstanca je osušena in vacuo da se dobije 6.9 mg (46%) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C21H25ClN7O (M+H)<+>: m/z = 426.2; Nađeno: 426.0.

Primer 108.1-(1-{5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-[1-(2,2,2-trifluoroetil)azetidin-3-il]fenil}etil)-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0280]

[0281] Smeša 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (15 mg, 0.024 mmol, hiralni intermedijer iz prvog signala Primera 1, Korak 7), 2,2,2-trifluoroetil trifluorometansulfonata (6.8 mg, 0.029 mmol) i trietilamina (12 µL, 0.085 mmol) u metilen hloridu (0.3 mL) je mešana preko vikenda na sobnoj temperaturi. Rastvarači su upareni i sirovi proizvod je prečišćen korišćenjem RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/u vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije 4.5 mg (39%) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C21H25ClF3N6O (M+H)<+>: m/z = 469.2; Nađeno: 469.1.

Primer 110. (2R)-2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)-N-metilpropanamid trifluoroacetat

[0282]

[0283] Smeša 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (26 mg, 0.067 mmol, hiralnog intermedijera iz signala 1 iz Primera 1, Korak 7), (2R)-2-bromopropanske kiseline (7.3 µL, 0.081 mmol) i trietilamina (19 µL, 0.13 mmol) u

4

acetonitrilu (0.8 mL) je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija nije završena tako da je zagrejana do 50 °C. Posle 4 h, rastvarači su upareni. U sirovi ostatak je dodat metilamonijum hlorid (4.5 mg, 0.067 mmol), N,N-dimetilformamid (0.2 mL), trietilamin (19 µL, 0.13 mmol), i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat (45 mg, 0.10 mmol). Dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je dodata u posudu koja sadrži zas. NaHCO3i ekstrahovana je sa EtOAc (2x). Organski slojevi su osušeni (MgSO4), proceđeni, i koncentrovani. Čvrsta supstanca je prečišćena upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolone, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/u vodi koji sadrži 0.05% TFA, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije 1.4 mg (3.6%) željenog proizvoda u obliku TFA soli. Proizvod je izolovan kao jedan diastereoizomer. LCMS izračunato za C23H31ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 472.2; Nađeno: 472.2.

Primer 113. 2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil} azetidin-1-il)-3,3,3-trifluoropropan-1-ol

[0284]

[0285] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (20 mg, 0.04 mmol, hiralni intermedijer iz signala 1 iz Primera 1, Korak 7) i trietilamina (19 µL, 0.13 mmol) u acetonitrilu (0.6 mL) je dodat 2-bromo-3,3,3-trifluoropropan-1-ol (iz Synquest Labs, 9.2 mg, 0.048 mmol). N,N-dimetilformamid (0.3 mL) je dodat, što je dovelo do nastanka bistrog rastvora koji je mešan na 70 °C preko noći. Smeša je razblažena sa vodom i prečišćena je upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolone, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije 6.6 mg (30%) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao smeša diastereoizomera. LCMS izračunato za C22H27ClF3N6O2(M+H)<+>: m/z =499.2; Nađeno: 499.1.

Primer 115. (2R)-3-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)-1,1,1-trifluoropropan-2-ol

[0286]

[0287] Smeša 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (20 mg, 0.044 mmol, hiralni intermedijer iz signala 1 iz Primera 1, Korak 7), (2R)-2-(trifluorometil) oksirana (9.4 µL, 0.11 mmol), i trietilamina (18 µL, 0.13 mmol) u etanolu (0.3 mL) je zagrejana u mikrotalasnoj na 120 °C tokom 25 min. Smeša je razblažena sa MeOH i prečišćena je sa RP-HPLC (XBridge C18 kolonom, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije 6.2 mg (28%) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C22H27ClF3N6O2(M+H)<+>: m/z = 499.2; Nađeno: 499.1.

Primer 118. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6- metilfenil}azetidin-1-il)-1-oksopropan-2-ol

[0288]

[0289] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (15 mg, 0.033 mmol, hiralni intermedijer iz Primera 1, Korak 7, signal 1), smeša (2S)-2-hidroksipropanske kiseline (4.3 µL, 0.049 mmol) (L-mlečne kiseline, 85% vod.) i trietilamina (14 µL, 0.098 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0.2 mL) dodat je N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfat (19 mg, 0.049 mmol). Dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Smeša je razblažena sa MeOH i prečišćena je sa RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije 3.0 mg (20%) željenog proizvoda. Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C22H28ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 459.2; Nađeno: 459.2.

Primer 121. (2R)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)-1-oksopropan-2-ol trifluoroacetat

[0290]

[0291] Ovo jedinjenje je dobijeno upotrebom postupaka koji su analogni onima za Primer 118 (počev od hiralnog materijala iz Primera 1, Korak 7, signal 1), sa (R)-2-hidroksipropanskom kiselinom umesto (2S)-2-hidroksipropanske kiseline (4.3 µL, 0.049 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata umesto N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfata. Čvrsta supstanca je prečišćena upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolone, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/u vodi koji sadrži 0.05% TFA, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod u obliku TFA soli. Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C22H28ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 459.2; Nađeno: 459.2.

Primer 139. Enantiomeri 1-{1-[5-Hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina

[0292]

Korak 1.1-(5-Hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)etanon

[0293] Ovo jedinjenje je dobijeno prema postupku za Primer 13 Korak 3, upotrebom 1-(5-hloro-4-fluoro-2-hidroksi-3-jodofenil)etanona i jodoetana kao polaznih materijala. LCMS izračunato za C10H10ClFIO2(M+H)<+>: m/z = 342.9; Nađeno: 342.9.

Korak 2. terc-Butil 3-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)azetidin-1-karboksilat

[0294] Balon sa okruglim dnom koji je opremljen sa magnetnom mešalicom i gumenim septumom je napunjen sa litijum hloridom (3.9 g, 91 mmol). Balon je zagrejan na 140° C 10 min pod visokim valumom i ponovo je napunjen sa azotom posle hlađena do sobne temperature. Dodaje se cink (6.0 g, 91 mmol) i balon je zagrejan na 140 °C 10 min pod visokim valuumom i ponovo je napunjen sa azotom posle hlađenja do sobne temperature. Tetrahidrofuran (THF) (38 mL) i 1,2-dibromoetan (233 µL, 2.70 mmol) su dodati preko šprica. Smeša je zagrejana na 60 °C 10 min i nakon toga je ohlađena do sobne temperature. Hlorotrimetilsilan (68 µL, 0.54 mmol) i jod (69 mg, 0.27 mmol) u THF (1 mL) su dodati i dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 10 min nakon čega je ohlađena do sobne temperature. Rastvor terc-Butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata (12.17 g, 42.99 mmol) u THF (10 mL) je nakon toga dodat i smeša je mešana na 40 °C tokom 1 h i na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Drugi balon je napunjen sa 1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)etanonom (13.0 g, 38.0 mmol), paladijum acetatom (170 mg, 0.76 mmol), 2’-(dicikloheksilfosfino)-N,N,N’,N’-tetrametilbifenil-2,6-diaminom (660 mg, 1.5 mmol), i toluenom (35 mL) uklonjen je pod visokim vakuumom i ponovo je napunjen sa azotom. Smeša je ohlađena do 0 °C i reagens cinka koji je napravljen gore je dodat polako pomoću šprica. Nakon dodavanja, reakcija je zagrejana do 50 °C preko noći. Rastvor reakcije je podeljen između EtOAc i zas. rastvora NH4Cl. Slojevi su razdvojeni i vodeni je dalje ekstrahovan sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom, slanim rastvorom, i zatim su osušeni preko MgSO4, i koncentrovani su. Sirova smeša je prečišćena na koloni od silika gela da se dobije željeni proizvod u obliku ulja narandžaste boje (6.3 g, 45%). LCMS izračunato za C18H23ClFNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 394.1; Nađeno: 394.1.

Korak 3. terc-Butil 3-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(1-hidroksietil)fenil]azetidin-1-karboksilat [0295] Ovo jedinjenje je dobijeno prema postupku za Primer 13 Korak 5, upotrebom terc-Butil 3-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)azetidin-1-karboksilata i natrijum tetrahidroborata kao polaznih materijala. LCMS izračunato za C18H25ClFNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 396.1; Nađeno: 396.1.

Korak 4. terc-Butil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-fluorofenil]azetidin-1-karboksilat

[0296] Ovo jedinjenje je dobijeno prema postupku za Primer 13 Korak 6, upotrebom terc-Butil 3-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(1-hidroksietil)fenil]azetidin-1-karboksilata (racemskog) i cijanurinskog hlorida kao polaznih materijala.

Korak 5. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-karboksilat

[0297] U smešu 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (1.10 g, 7.37 mmol), cezijum karbonata (3.2 g, 10 mmol) i kalijum jodida (111 mg, 0.670 mmol) u DMF (20 mL) dodat je terc-Butil 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-fluorofenil]azetidin-1-karboksilat (2.63 g, 6.70 mmol) i smeša je mešana na 90 °C tokom 3 h. Rastvarač je uklonjen in vacuo. Ostatak je razblažen sa etil acetatom i vodom. Vodeni sloj je dva puta ekstrahovan sa etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom, slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, proceđeni i koncentrovani. Ostatak je prečišćen na koloni od silika gela (eluiranjem sa 100% etil acetatom) da se željeni proizvod dobije u obliku pene (2.15 g, 63%). LCMS izračunato za C24H31ClFN6O3(M+H)<+>: m/z = 505.2; Nađeno: 505.2.

Korak 6.1-[1-(3-Azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amine dihidrohlorid

[0298] U rastvor terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-karboksilata (275 mg, 0.544 mmol) u dihlorometanu (2.4 mL) dodat je 4.0 M hlorovodnik u dioksanu (1.1 mL, 4.4 mmol). Rastvor reakcije je mešan na sobnoj temperaturi tokom 6 h. Rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom da se dobije željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (250 mg, 96%). LCMS izračunato za C19H23ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 405.2; Nađeno: 405.1.

Korak 7. 1-{1-[5-Hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-(1-izopropilazetidin-3-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0299] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (49 mg, 0.10 mmol), acetona (8.28 µL, 0.113 mmol), i trietilamina (44.3 µL, 0.318 mmol) u dihlorometanu (0.67 mL) dodata je smola natrijum triacetoksiborohidrida (89 mg, 0.20 mmol). Dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Smeša je proceđena i koncentrovana je i nakon toga je prečišćena preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/u vodi koji sasrži 0.05% TFA, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije racemski proizvod. LCMS: nađeno m/z = 447.2 (M+H)<+>. Racemska smeša je razdvojena hiralnom HPLC (kolona IA, eluiranjem sa 5% etanolom/95% heksanima, na brzini protoka od 18 mL/min) da se dobiju dva signala (izomer 1: 9.5 mg, 21%; izomer 2: 9.2 mg, 20%).

[0300] Izomer 1 (prvi koji se eluira, vreme retencije: 4.4 min):<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.10 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 6.21 (m, 1H), 3.70 (m, 5H), 2.91 (m, 2H), 2.53 (s, 3H), 2.17 (m, 1H), 1.66 (d, 3H), 1.31 (t, 3H), 0.81 (m, 6H) ppm; LCMS izračunato zaC22H29ClFN6O (M+H)+: m/z = 447.2; Nađeno: 447.2. Izomer 2 (drugi koji se eluira, vreme retencije: 19.5 min): LCMS izračunato za C22H29ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 447.2; Nađeno: 447.2.

Primer 140. 1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil} azetidin-1-il)-2-metilpropan-2-ol

[0301]

[0302] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (20 mg, 0.042 mmol, racemskog intermedijera iz Primera 139, Korak 6) i trietilamina (18 µL, 0.12 mmol) u etanolu (1 mL) je dodat oksiran, 2,2-dimetil- (6.98 µL, 0.0837 mmol). Dobijena smeša je zagrejana na 120 °C u mikrotalasnom reaktoru na 45 min. Reakcija je razblažena sa metanolom i prečišćena je sa RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod kao čvrsta supstnaca bele boje (3.4 mg, 17%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C23H31ClFN6O2(M+H)<+>: m/z = 477.2; Nađeno: 477.3.

Primer 141.1-(1-{5-Hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-[1-(2,2,2-trifluoroetil)azetidin-3-il]fenil}etil)-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0303]

[0304] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (19 mg, 0.040 mmol, racemskog intermedijera iz Primera 139, Korak 6) i trietilamina (20 µL, 0.14 mmol) u dihlorometanu (0.5 mL) je dodat 2,2,2-trifluoroetil trifluorometansulfonat (11 mg, 0.048 mmol). Dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarači su upareni pod redukovanim pritiskom i sirovi materijal je prečišćen na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod (3.8 mg, 19%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C21H24ClF4N6O (M+H)<+>: m/z = 487.2; Nađeno: 487.1.

Primer 149. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-yl)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-il)propan-2-ol

[0305]

Korak 1. Enantiomeri terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-karboksilata

[0306] Racemska smeša je razdvojena hiralnom HPLC (kolona IA, eluiranjem sa 5% etanolom/95% heksanima, brzina protoka 18 mL/min) da se dobiju dva signala; Izomer 1 (prvi koji se eluira): Vreme retencije: 16.8 min; LCMS izračunato za C24H31ClFN6O3(M+H)<+>: m/z = 505.2; Nađeno: 505.2;

Izomer 2 (drugi koji se eluira): Vreme retencije: 19.5 min; LCMS izračunato za C24H31ClFN6O3(M+H)<+>: m/z = 505.2; Nađeno: 505.2.

Korak 2 1-[1-(3-Azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorid

[0307] Ovo jedinjenje je dobijeno korišćenjem postupaka analognih sa Primerom 139 Korak 6 sa terc-Butil 3-{3-[(1S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-karboksilatom (prvi signal hiralnog razdvajanja) kao polazni materijal. LCMS izračunato za C19H23ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 405.2; Nađeno: 405.1.

Korak 3. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}azetidin-1-il)propan-2-ol

[0308] U smešu 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (46 mg, 0.11 mmol) (iz izomera 1) i trietilamina (50 µL, 0.4 mmol) u izopropil alkoolu (0.3 mL) je dodat (S)-(-)-metiloksiran (16 µL, 0.23 mmol). Dobijena smeša je mešana na 90 °C tokom 3 h. Posle hlađenja, smeša je razblažena sa acetonitrilom i prečišćena je sa RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod (12 mg, 23%). Proizvod je izolovan kao jedan diastereoizomer.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.05 (s, 1H), 7.38 (d, 1H), 6.15 (m, 1H), 4.26 (d, 1H), 3.76-3.60 (m, 6H), 2.99 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.22 (m, 2H), 1.62 (d, 3H), 1.25 (t, 3H), 0.93 (d, 3H) ppm; LCMS izračunato za C22H29ClFN6O2(M+H)<+>: m/z = 463.2; Nađeno: 463.2.

Primer 156. (2R)-2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)propan-1-ol

[0309]

Korak 1. Metil (2S)-2-bromopropanoat

[0310] DMF (28 µL, 0.36 mmol) je dodat u smešu (2S)-2-bromopropanske kiseline (0.552 g, 3.61 mmol) i oksalil hlorida (0.61 mL, 7.2 mmol) u dihlorometanu (4.6 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvarač je uklonjen in vacuo. Otatak je rastvoren u dihlorometanu i tretiran je sa metanolom (1.5 mL, 36 mmol) i piridinom (0.44 mL, 5.4 mmol). Rastvor reakcije je mešan na sobnoj temperaturi 2 h. Rastvor reakcije je ugašen sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i ispran je sa slanim rastvorom, osušen je preko Na2SO4, proceđen i koncentrovan da se dobije željeni proizvod (0.51 g, 85%).

Korak 2. Metil (2R)-2-(3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil} azetidin-1-il)propanoat

1

[0311] U rastvor 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin hidrohlorida (20.1 mg, 0.0475 mmol, hiralnog intermedijera iz Primera 1, Korak 7) u acetonitrilu (1 mL) je dodat trietilamin (23 µL, 0.17 mmol) i metil (2S)-2-bromopropanoat (9.5 mg, 0.057 mmol). Rastvor reakcije je mešan na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Rastvrač je uklonjen da se dobije željeni proizvod (6.2 mg, 28%). LCMS izračunato za C23H30ClN6O3(M+H)<+>: m/z =473.2; Nađeno:473.3

Korak 3. (2R)-2-(3-{3-[(1S)-1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil} azetidin-1-il)propan-1-ol

[0312] Rastvor metil (2R)-2-(3-{3-[(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)propanoata (6.2 mg, 0.013 mmol) u dihlorometanu (0.5 mL) je tretiran sa 1.0 M diizobutilalumijnum hidridom u toluenu (0.1 mL, 0.1 mmol) na 0 °C tokom 3 h. Reakcija je ugašena sa metanolom i prečišena je sa preparativnom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod (0.8 mg, 14%). Proizvod je izolovan kao jedan diastereoizomer. LCMS izračunato za C22H30ClN6O2(M+H)<+>: m/z =445.2; Nađeno:445.1

Primer 158. 1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)-2-metilpropan-2-ol

[0313]

[0314] Ovo jedinjenje je dobijeno upotrebom postupaka analognim sa t Primerom 140 sa 1-[1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin hidrohloridom (hiralni intermedijer iz Primera 1, Korak 7) i oksiranom, 2,2-dimetil-kao polaznim materijalima. Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C23H32ClN6O2(M+H)+: m/z =459.2; Nađeno:459.1<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8.04 (s, 1H), 7.23 (bs, 2H), 7.16 (s, 1 H), 6.14 (m, 1H), 3.96 (s, 1H), 3.85(m, 3H), 3.45 (s, 3H), 2.94 (m, 1H), 2.80 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.14 (s, 2H), 2.00 (s, 3H), 1.63 (d, 3H), 0.98 (s, 6H) ppm.

Primer 159. (2R)-2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)-N,N-dimetilpropanamid

2

Korak 1. (2R)-2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)propanska kiselina

[0316] U rastvor metil (2R)-2-(3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)propanoata (hiralni intermedijer iz Primera 156 Korak 2) (13 mg, 0.027 mmol) u acetonitrilu (0.6 mL) i vodi (0.2 mL) je dodat litijum hidroksid (2.4 mg, 0.10 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvor reakcije je razblažen sa etil acetatom i 1 M rastvorom HCl. Organski sloj je razdvojen i osušen je preko Na2SO4, proceđen i koncentrovan da se dobije željeni proizvod (10.2 mg, 83%). LCMS izračunato za C22H28ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 459.2; Nađeno: 459.1.

Korak 2. (2R)-2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil} azetidin-1-il)-N,N-dimetilpropanamid

[0317] U rastvor (2R)-2-(3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)propanske kiseline (4 mg, 0.009 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (4 µg, 0.009 mmol) u DMF (0.3 mL) na sobnoj temperaturi je dodat trietilamin (4 mL, 0.03 mmol) i dimetilamin hidrohlorid (0.9 mg, 0.01 mmol). Reakciona smeša je mešana u trajanju od 1 h, zatim je razblažena sa metanolom i prečišena je sa preparativnom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod (2.7 mg, 63%). Proizvod je izolovan kao jedan diastereoizomer. LCMS izračunato za C24H33ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 486.2; Nađeno: 486.1.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8.09 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 6.18 (m, 1H), 3.78 (m, 3H), 3.50 (s, 3H), 3.01 (s, 3H), 3.0-2.9 (m, 3H), 2.77 (s, 3H), 2.54 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.67 (d, 3H), 0.98 (d, 3H) ppm.

Primer 161. [1-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}azetidin-1-il)ciklobutil]acetonitril

[0318]

[0319] U rastvor 1-[(1-(3-azetidin-3-il-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida (10 mg, 0.022 mmol, hiralni intermedijer iz Primera 1, Korak 7) u acetonitrilu (0.1 mL) je dodat ciklobutilidenacetonitril (4.1 mg, 0.044 mmol), nakon čega se dodaje 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en (13 µL, 0.087 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa acetonitrilom i prečišćena je sa preparativnom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod (4.3 mg, 41%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C25H31ClN7O (M+H)<+>: m/z = 480.2; Nađeno: 480.0.

Primer 163. 1-{1-[5-h1oro-2-metoksi-4-metil-3-(1-metilpiperidin-4-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0320]

Korak 1. terc-Butil 4-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)piperidin-1-karboksilat

[0321] Ovo jedinjenje je dobijeno korišćenjem postupaka koji su analogni onim za Primer 139 Korak 2 sa 1-(5-hloro-3-jodo-2-metoksi-4-metilfenil)etanonom i terc-Butil 4-jodopiperidin-1-karboksilatom kao polaznim materijalima. LCMS izračunato za C20H28ClNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 404.1; Nađeno: 404.1. Korak 2. terc-Butil 4-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]piperidin-1-karboksilat [0322] Ovo jedinjenje je dobijeno prema postupku iz Primera 13 Korak 5, upotrebom terc-Butil 4-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)piperidin-1-karboksilata i natrijum tetrahidroborata kao polaznih materijala. LCMS izračunato za C20H30ClNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 406.1; Nađeno: 406.1.

Korak 3. terc-Butil 4-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]piperidin-1-karboksilat [0323] Ovo jedinjenje je dobijeno prema postupku iz Primera 13 Korak 6, upotrebom terc-Butil 4-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]piperidin-1-karboksilata (racemski) i cijanurinskog

4

hlorida kao polaznih materijala.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.44 (s, 1H), 5.46 (m, 1H), 4.23 (bs, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.29 (bs, 1H), 2.78 (bs,2H), 2.40 (s, 3H), 2.27-2.09 (m, 2H), 1.78 (d, 3H), 1.63 (m, 2H), 1.43 (s, 9H) ppm.

Korak 4. terc-Butil 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piperidin-1-karboksilat

[0324] Ovo jedinjenje je dobijeno prema postupku iz Primera 139 Korak 5, upotrebom terc-Butil 4-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]piperidin-1-karboksilata i 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina kao polaznih materijala. LCMS izračunato za C26H36ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 515.3; Nađeno: 515.2.

Korak 5.1-[1-(5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-piperidin-4-ilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorid

[0325] Ovo jedinjenje je dobijeno prema postupku iz Primera 139 Korak 6, upotrebom terc-Butil 4- {3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piperidin-1-karboksilata kao polaznog materijala. LCMS izračunato za C21H28ClN6O (M+H)<+>: m/z = 415.2; Nađeno: 415.2.

Korak 6. 1-{1-[5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-(1-metilpiperidin-4-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0326] Ovo jedinjenje je dobijeno prema postupku iz Primera 139 Korak 7, upotrebom 1-[1-(5-hloro-2-metoksi-4-metil-3-piperidin-4-ilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohlorida i formaldehida kao polaznih materijala. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C22H30ClN6O (M+H)<+>: m/z = 429.2; Nađeno: 429.1.

Primer 164. 1-(4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil} piperidin-1-il)-2-metilpropan-2-ol

[0327]

[0328] Ovo jedinjenje je dobijeno korišćenjem postupaka koji su analogni onim za Primer 140 sa 1-[1-(5-hloro-2-metoksi-4-metil-3-piperidin-4-ilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin dihidrohloridom (racemski intermedijer iz Primera 163, Korak 5) i oksiranom, 2,2-dimetil- kao polaznim materijalima. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C25H36ClN6O2(M+H)<+>: m/z =487.3; Nađeno: 487.3.<1>H NMR (300 MHz, DMSOd6): δ 8.05 (s, 1H),, 7.24 (bs, 2H), 7.22 (s, 1H), 6.16 (m, 1H), 4.01 (bs, 1H), 3.67 (s, 3H), 2.97 (m, 3H), 2.49 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.15-2.04 (m, 6H), 1.63 (d, 3H), 1.40 (m, 2H), 1.03 (s, 6H) ppm.

Primer 166. 3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}ciklobutanol trifluoroacetat

[0329]

Korak 1.1-(5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-vinilfenil)etanon

[0330] Smeša 1-(5-hloro-3-jodo-2-metoksi-4-metilfenil)etanona (1.0 g, 3.2 mmol, iz Primera 1, Korak 2), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioksaborolana (0.66 mL, 3.9 mmol), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferrocen]dihloropaladijum(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1) (0.26 g, 0.32 mmol) i kalijum karbonatom (1.3 g, 9.4 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) i vodi (5 mL) je degasirana sa N2i zagrevana na 80 °C preko noći. Nakon hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je razblažena sa vodom i etil acetatom. Organski sloj je ispran sa slanim rastvorom, osušen preko MgSO4, koncentrovan i prečišćan na kololoni od silika gela (eluiranjem sa 0 do 10% EtOAc u heksanima) da se dobije željeni proizvod (0.60 g, 82%). LCMS izračunato za C12H14ClO2(M+H)<+>: m/z =225.1; Nađeno:225.1

Korak 2.3-(3-Acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)ciklobutanon

[0331] U rastvor 1-(5-hloro-2-metoksi-4-metil-3-vinilfenil)etanona (530 mg, 2.4 mmol) u etru (10 mL) je dodat par cink-bakra (1.8 g, 14 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 40 °C i rastvor trihloroacetil hlorida (1.4 mL, 13 mmol) i fosforil hlorida (1.2 mL, 13 mmol) u 1,2-dimetoksietanu (3 mL) je dodat polako tokom 2 h. Posle dodavanja, reakciona smeša je mešana pod refluksom preko noći. Reakcija je ugašena sa zasićenim rastvorom NaHCO3i rablažena je sa etrom. Organski sloj je ispran sa slanim rastvorom, osušen je preko Na2SO4, proceđen i koncentrovan. Ostatak i cink (0.31 g, 4.7 mmol) u sirćetnoj kiselini (10 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h nakon čega je bio na refluksu preko noći. Dodata je druga porcija cinka i refluks u trajanju od 4 h. Smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana je sa etrom. Organska faza je redom isprana sa zasićenim rastvorom NaHCO3, vodom i slanim rastvorom, zatim je osušena preko MgSO4i koncentrovana je. Sirovi materijal je prečišćen sa fleš hromatografijom (eluiranjem sa 0 do 30% etil acetatom u heksanima) da se dobije željeni proizvod (0.17 g, 27%). LCMS izračunato za C14H16ClO3(M+H)<+>: m/z =267.1; Nađeno:267.0

Korak 3.3-[3-Hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]ciklobutanol

[0332] Ovo jedinjenje je dobijeno prema postupku iz Primera 13 Korak 5, upotrebom 3-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)ciklobutanona i natrijum tetrahidroborata kao polaznih materijala. LCMS izračunato za C14H19ClO3Na (M+Na)<+>: m/z = 293.1; Nađeno: 293.1.

Korak 4.3-[3-Hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]ciklobutanol

[0333] U rastvor3-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]ciklobutanola (170 mg, 0.628 mmol) u dimetil sulfoksidu (1 mL) je dodat cijanurinski hlorid (64 mg, 0.34 mmol). Posle prekonoćnog mešanja, reakciona smeša je razblažena sa etrom i vodom. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom jednom. Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom, osušeni su preko Na2SO4, proceđeni i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen na koloni od silika gela da se dobije željeni proizvod (39.6 mg, 22%). LCMS izračunato za C14H18ClO2(M-C1)<+>: m/z = 253.1; Nađeno: 253.2.

Korak 5. 3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-yl)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}ciklobutanoltrifluoroacetat

[0334] Ovo jedinjenje je dobijeno prema postupku iz Primera 139 Korak 5, upotrebom 3-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]ciklobutanola i 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina kao polaznih materijala. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C20H25ClN5O2(M+H)<+>: m/z = 402.2; Nađeno: 402.2.

Primer 167. 5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpicolinamide bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0335]

Korak 1.1-(3-Bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanon

[0336] U mešani rastvor 1-(5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanona (5.00 g, 25.2 mmol, iz Oakwood) u sirćetnoj kiselini (100 mL) je dodat N-bromosukcinimid (4.93 g, 27.7 mmol) i dobijena smeša je zagrejana na 100 °C tokom 18 h. Nakon hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, zatim je neutralisana sa zas. natrijum bikarbonatom, nerastvorljivi sukcinimid je uklonjen ceđenjem. Ostatak nakon ceđenja je ekstraovan sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom, osušeni preko natrijum sulfata, i zatim su koncentrovani do isušivanja pod redukovnanim pritiskom. Ostatak je prečišćen na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 50 % EtOAc u heksanima, da se dobiju željeni proizvodi (2.66 g, 38%). LCMS izračunato za C10H11BrClO2(M+H)<+>: m/z = 277.0; nađeno: 277.0.<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz): δ 7.70 (1H, s), 3.77 (3H, s), 2.57 (3H, s), 2.50 (3H, s) ppm.

Korak 2.1-(3-Bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanol

[0337] Natrijum tetrahidroborat (0.31 g, 8.1 mmol) je dodat u smešu 1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanona (1.5 g, 5.4 mmol) u metanolu (25 mL) na 0 °C i dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Rastvarač je uklonjen i dobijeni ostatak je razblažen sa etil acetatom, ispran je sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, zatim je osušen preko Na2SO4, proceđen i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 40% EtOAc u heksanima, da se dobije željeni proizvod (0.30 g, 90%).

Korak 3.3-Bromo-1-hloro-5-(1-hloroetil)-4-metoksi-2-metilbenzen

[0338] Smeša cijanurinskog hlorida (1.7 g, 9.2 mmol) i N,N-dimetilformamida (710 µL, 9.2 mmol) je mešana na soboj temperaturi 10 minuta nakon čega je dodat rastvor 1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanola (iz Primera 16, Korak 1) (1.72 g, 6.15 mmol) u metilen hloridu (34 mL) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa metilen hloridom, isprana sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, proceđena i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 10% EtOAc u heksanima, da se dobije željeni proizvod (1.01 g, 60%).

Korak 4. 1-[1-(3-Bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0339] Smeša 3-bromo-1-hloro-5-(1-hloroetil)-4-metoksi-2-metilbenzena (150 mg, 0.503 mmol), 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (110 mg, 0.76 mmol, ACES Pharma Product List, item # 47024), kalijum jodida (9.0 mg, 0.05 mmol) i cezijum karbonata (330 mg, 1.0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (4 mL) je mešana na 140 °C tokom 1 h. Smeša je razblažena sa metilen hloridom, isprana sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, proceđena i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 70% EtOAc u CH2Cl2, da se dobije željeni proizvod (103 mg, 50%). LCMS izračunato za C16H18BrClN5O (M+H)+: m/z = 410.0; Nađeno: 410.2. Racemski proizvodi su naneti na Phenomenex Lux-Celuloza 1 kolonu (21.1 x 250 mm, veličina čestice 5 mikrona), eluiranjem sa 5% etanolom u heksanima na brzini protoka od 18 mL/min, ∼ 13 mg/injekciji, da se dobiju dva enantiomera. Signal 1, retencino vreme: 12.35 min; Signal 2, retencino vreme: 14.98 min.

Korak 5. 5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N,Ndimetilpikolinamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0340] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (25 mg, 0.061 mmol) (prvi signal iz prethodnog koraka hiralnog razdvajanja), N,N-dimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-karboksamid (25 mg, 0.091 mmol, iz PepTech Corp. Enciklopedia of Amino Acid Analogs and Boronic Acids , item #BE1622-1), natrijum karbonata (13 mg, 0.12 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen] dihloropaladijum (II), kompleksa sa dihlorometanom (1:1) (9.9 mg, 0.012 mmol) u acetonitrilu (0.8 mL) / vodi (0.3 mL) je degasirana sa N2i zatim je mešana na 95 °C tokom 2 h. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je proceđena i ostatak od ceđenja je pročišćen na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.05% trifluorosirćetnu kiselinu, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod kao bis-TFA so (2.9 mg, 6.7%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C24H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 480.2; Nađeno: 480.2.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 8.78 (2H, br s), 8.48 (1H, m), 8.36 (1H, s), 7.86 (1H, br s), 7.65 (1H, br s), 7.58 (1H, s), 6.33 (1H, q, J = 7.0 Hz), 3.19 (3H, s), 3.03 (3H, s), 2.97 (3H, s), 2.62 (3H, s), 2.06 (3H, s), 1.81 (3H, d, J = 7.0 Hz) ppm.

Primer 183.1-[1-(5-Hloro-3-{1-[2-(dimetilamino)etil]-1H-pirazol-4-il}-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0341]

Korak 1.1-(2-Hloroetil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol

[0342] Smeša 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (0.39 g, 2.0 mmol), 1-bromo-2-hloroetana (0.3 mL, 3 mmol) i cezijum karbonata (1.3 g, 4.0 mmol) u acetonitrilu (6 mL) je mešana na 75 °C tokom 5 h. Smeša je razblažena sa etil acetatom, isprana je sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, proceđena i koncentrovana i proizvod (0.45g, 88%) je pročišćen hromatografijom eluiranjem sa heksanima/EtOAc (maks. EtOAc 30%). LCMS izračunato za C11H19BClN2O2(M+H)<+>: m/z = 257.1; Nađeno: 257.0

Korak 2. N,N-Dimetil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il]etanamin [0343] Smeša 1-(2-hloroetil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (0.10 g, 0.39 mmol), natrijum jodida (58 mg, 0.39 mmol) i 2.0 M dimetilamina u THF (1.0 mL, 2.0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0.5 mL) je mešana na 80 °C preko noći. Rastvarač je uklonjen da se dobije željeni proizvod koji je korišćen u sledećem koraku. LCMS izračunato za C13H25BN3O2(M+H)<+>: m/z = 266.2; Nađeno: 266.3

Korak 3. 1-[1-(5-hloro-3-{1-[2-(dimetilamino)etil]-1H-pirazol-4-il}-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0344] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (Signal 1 iz Primera 167, Korak 4, 10 mg, 0.024 mmol), N,N-dimetil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il]-etanamina (8.6 mg, 0.036 mmol), natrijum karbonata (5.2 mg, 0.049 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino) ferocen]dihloropaladijum(II), kompleksa sa dihlorometanom (1:1) (4.0 mg, 0.0049 mmol) u acetonitrilu (0.5 mL) /vodi (0.1 mL) je vakumirana i ponovo je napunjena sa N2i mešana je na 95 °C tokom 2 h. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod (3.1 mg, 28%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C23H30ClN8O (M+H)<+>: m/z = 469.2; Nađeno: 469.2.

Primer 184.2-[(5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-il)amino] etanol

Korak 1. 1-{1-[5-Hloro-3-(6-fluoropyridin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0346] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina(Signal 1 iz Primera 167, Korak 4, 25.0 mg, 0.06 mmol), 2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridina (20. mg, 0.088 mmol), natrijum karbonata (12 mg, 0.12 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleksa sa dihlorometanom (1:1) (9.5 mg, 0.012 mmol) u acetonitrilu (1 mL) /vodi (0.3 mL) je degasirana sa N2i mešana je na 95 °C tokom 2 h. Smeša je razblažena sa metilen hloridom, isprana sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, osušena je preko Na2SO4, proceđena i koncentrovana. Proizvod je prečišćen hromatografijom eluiranjem sa CH2Cl2/MeOH (maks. MeOH 5%). LCMS izračunato za C21H21ClFN6O (M+H)<+>: m/z = 427; Nađeno: 427.2. Korak 2. 2-[(5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-il)amino]etanol

[0347] Smeša 1-{1-[5-hloro-3-(6-fluoropiridin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (10 mg, 0.023 mmol) i etanolamina (0.10 mL) u 1-butanolu (1 mL) je mešana na 130 °C u trajanju od 5 h. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod(1.6 mg, 15%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C23H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 468.2; Nađeno: 468.2.

Primer 188. 2-(5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil) piridin-2-iloksi)etanol

[0348]

[0349] Natrijum hidrid (20 mg, 0.5 mmol) je dodat u 1,2-etandiol (0.5 mL, 9 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 10 min. U ovom vremenu 1-{1-[5-hloro-3-(6-fluoropiridin-3-il)-2-metoksi-4-metilfenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (10 mg, 0.023 mmol) je dodat i nakon toga je reakcija mešana preko noći na 110 °C. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod (1.8 mg, 17%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C23H26ClN6O3(M+H)+: m/z = 469.2; Nađeno: 469.1.

Primer 189. 5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-(2,2-difluoroetoksi)-6-metilfenil)-N,N-dimetilpikolinamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0350]

Korak 1. 5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-hidroksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpikolinamid

[0351] 1.0 M Boron tribromid u CH2Cl2(250 µL, 0.25 mmol) je dodat u smešu 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (Primer 167, Korak 5, (prvi Signal) 60 mg, 0.13 mmol) u metilen hloridu (1.2 mL) na -78 °C i zatim je reakcija zagrejana do sobne temperature. U ovom vremenu konc. HCl (0.1 mL) je dodat i smeša je mešana 4 h. Reakcija je ugašena sa dodavanjem zas. NaHCO3. Nakon toga smeša je ekstrahovana sa metilen hloridom. Kombinovai ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom, osušeni i koncentrovani da se dobije željeni sirovi proizvod (40 mg, 68%) koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS izračunato za C23H25ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 466.2; Nađeno: 466.2.

Korak 2.5-[3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-(2,2-difluoroetoksi)-6-metilfenil]-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid

[0352] Diizopropiil azodikarboksilat (13 µL, 0.064 mmol) je dodat u smešu 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-hidroksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida (15.0 mg, 0.0322 mmol), 2,2-difluoroetanola (7.9 mg, 0.096 mmol, iz Alfa Aesar, item # B22201) i trifenilfosfina (17 mg, 0.064 mmol) u tetrahidrofuranu (0.5 mL) na 0 °C i nakon toga je reakcija mešana na soboj temperaturi tokom 24 h. Sirovi proizvod je prečišćen na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.05% trifluorosirćetnu kiselinu, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod kao bis-TFA so (1.6 mg, 6.6%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C25H27ClF2N7O2(M+H)<+>: m/z = 530.2; Nađeno: 530.2

Primer 192. 1-[1-(5-Hloro-3-ciklopropil-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-4-amin

1

[0354] U mikrotalasnu posudu je dodat 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (15 mg, 0.037 mmol, iz Signala 1 iz Primera 167, Korak 4), kalijum ciklopropiltrifluoroborat (8 mg, 0.06 mmol, iz Frontier Scientific, item # C10298), kalijum fosfat (23 mg, 0.11 mmol), i tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (4.2 mg, 0.0036 mmol) i zatim toluen (0.3 mL)/vodi (0.1 mL). Posuda je zatvorena i degasirana je sa N2tri puta. Reakcija je zagrejana na 110 °C tokom 20 h. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RPHPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod (1.1 mg, 8%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C19H23ClN5O (M+H)<+>: m/z = 372.2; Nađeno: 372.2.

Primer 195. 5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpikolinamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0355]

Korak 1.1-(3-Bromo-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etanon

[0356] U balon sa okruglim dnom je dodat 1-(3-bromo-5-hloro-2-hidroksi-4-metilfenil)etanon (6.0 g, 23 mmol) u anhidrovanom DMF (22.8 mL). Nakon toga je dodat kalijum karbonat (6.3 g, 46 mmol) zatim se dodaje jodetan (2.73 mL, 34.2 mmol). Dobijena suspenzija je mešana na 60 °C u trajanju od 2 h. Smeša je sipana u 100 mL vode i ekstrahovana je sa 200 mL etil etra. Organski slojevi su razdvojeni, kombinovani i isprani su sa vodom i zasićenim rastvorom NaCl, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata, proceđeni, i koncentrovani do 6.0 g tamnog ulja. LCMS izračunato za C11H13BrClO2(M+H)<+>: m/z = 293.0; Nađeno: 293.0

Korak 2.1-(3-Bromo-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etanol

2

[0357] Natrijum tetrahidroborat (0.31 g, 8.1 mmol) je dodat u smešu 1-(3-bromo-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil) etanona (1.5 g, 5.4 mmol) u metanolu (25 mL) na 0 °C i dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 h. Rastvarač je uklonjen i dobijeni ostatak je razblažen sa etil acetatom, ispran sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, zatim je osušen preko Na2SO4, proceđen i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 30% EtOAc u heksanima (0.30 g, 90%).

Korak 3.3-Bromo-1-hloro-5-(1-hloroetil)-4-etoksi-2-metilbenzen

[0358] Smeša cijanurinskog hlorida (1.7 g, 9.2 mmol) i N,N-dimetilformamida (710 µL, 9.2 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju 10 minuta i zatim je dodat rastvor1-(3-bromo-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etanola (1.72 g, 6.15 mmol) u metilen hloridu (34 mL) i rekacija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa metilen hloridom, isprana sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, proceđena i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 10% EtOAc u heksanima (1.01 g, 60%).

Korak 4.1-(1-(3-Bromo-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil)-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amine [0359] Smeša 3-bromo-1-hloro-5-(1-hloroetil)-4-etoksi-2-metilbenzena (150 mg, 0.50 mmol), 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (110 mg, 0.76 mmol), kalijum jodida (9 mg, 0.05 mmol) i cezijum karbonata (330 mg, 1.0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (4 mL) je mešana na 140 °C tokom 1 h. Smeša je razblažena sa metilen hloridom, isprana sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, proceđena i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 70% EtOAc u CH2Cl2(103 mg, 50%). LCMS izračunato za C17H20BrClN5O (M+H)<+>: m/z = 423.1; Nađeno: 423.0. Racemski proizvodi su naneti na Phenomenex Lux-Celuloza 1 koloni (21.1 x 250 mm, veličina čestice 5 mikrona), eluiranjem sa 4% etanolom u heksanima na brzini protoka od 18 mL/min, ∼ 13 mg/injekciji, da se dobiju dva enantiomera. Signal 1, retenciono vreme: 8.64 min; Signal 2, retenciono vreme: 10.64 min.

Korak 5. 5-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-N,N-dimetilpikolinamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0360] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (25 mg, 0.061 mmol) (prvi Signal iz prethodnog koraka hiralnog razdvajanja), N,N-dimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-karboksamida (25 mg, 0.09 mmol), natrijum karbonata (13 mg, 0.12 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)-ferocen]dihloropaladijum (II), kompleksa dihlorometana (1:1) (9.9 mg, 0.012 mmol) u acetonitrilu (0.8 mL) / vodi (0.3 mL) je degasiran sa N2i zatim je mešan na 95 °C tokom 2 h. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je proceđena i ostatak nakon ceđenja je pročišćen na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/ vodi koji sadrži 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod kao bis-TFA so (2.3 mg, 5%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C25H29ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 494.2; Nađeno: 494.2.

Primer 200. 4-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)- N,N-dimetilpikolinamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

Korak 1. 4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karbonitril

[0362] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (Signal 1 iz Primera 167, Korak 4, 322 mg, 0.76 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-karbonitrila (210 mg, 0.91 mmol, iz Combi-Blocks Catalog , item # PN-0143), natrijum karbonata (130 mg, 1.2 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]-dihloropaladijum(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1) (99 mg, 0.12 mmol) u acetonitrilu (5 mL) / voda (2 mL) je degasirana sa N2i reakcija je mešana na 95 °C tokom 2 h. Smeša je razblažena sa metilen hloridom, isprana je sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastovorom, osušena preko Na2SO4, proceđena i koncentrovana. Proizvod (0.28 g, 85%) je prečišćen sa hromatografijom eluiranjem sa CH2Cl2/MeOH (maks. MeOH 6%). LCMS izračunato za C22H21ClN7O (M+H)<+>: m/z = 434.1; Nađeno: 434.1

Korak 2. dihidrohlorid 4-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)pikolinske kiseline

[0363] 1.0 M Natrijum hidroksid (2.9 mL, 2.9 mmol) je dodat u smešu 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karbonitrila (0.250 g, 0.576 mmol) u etanolu (4.0 mL) i dobijena smeša je zagrejana na 95 °C tokom 6 h. U ovom vremenu, konc. HCl je dodat da se pH podesi do ∼ 3. Rastvarač je uklonjen i ostatak je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS izračunato za C22H22ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 453.1; Nađeno: 453.2.

Korak 3. 4-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-N,Ndimetilpikolinamid bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0364] 2.0 M Dimetilamin u THF (2.0 mL, 4.0 mmol) je dodat u rastvor 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}piridin-2-karboksilne kiseline (250 mg, 0.552 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat (370 mg, 0.83 mmol) u N,N-dimetilformamidu (4 mL) na 0 °C zatim se dodaje trietilamin (0.23 mL, 1.6 mmol). Reakcija je mešana na 1 h. Sirova smeša je prečišćena na RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.05% trifluorosirćetnu kiselinu, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod kao bis-TFA so. Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C24H27ClN7O2(M+H)+: m/z = 480.2; Nađeno: 480.2.<1>H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 8.67 (br s, 1 H), 8.36 (s, 1 H), 7.58 (s, 1 H), 7.41 (m, 2 H), 6.32 (q, 2 H), 3.20 (s, 3 H), 3.00 (s, 3 H), 2.94 (s, 3 H), 2.62 (s, 3 H), 2.03 (s, 3 H), 1.80 (d, 3 H) ppm.

Primer 203. 2-(4-(3-(1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-1H-pirazol-1-il)acetamid

4

Korak 1. terc-Butil [4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il]acetat

[0366] 1.0 M Kalijum terc-butoksid u THF (2.4 mL, 2.4 mmol) je dodat u rastvot 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (0.39 g, 2.0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (6.0 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 5 min. Nakon hlađenja do 0 °C, u smešu je dodat t-Butil bromoacetat (0.5 mL, 3 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, zatim je razblažena sa etil acetatom, ispana je sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, proceđena i koncentrovana. Proizvod (0.5 g, 81%) je prečišćen hromatografijom eluiranjem sa heksanima/EtOAc (maks. EtOAc 30%). LCMS izračunato za C15H26BN2O4(M+H)<+>: m/z = 309.2; Nađeno: 309.1

Korak 2. terc-Butil (4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-1H-pirazol-1-il)acetat

[0367] Smeša 1-[1-(3-bromo-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (70 mg, 0.16 mmol) (prvi Signal iz Primera 195, Korak 4), terc-Butil [4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il]acetata (65 mg, 0.21 mmol), natrijum karbonata (30. mg, 0.28 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino) ferocen]dihloropaladijum(II), kompleksa sa dihlorometanom (1:1) (23 mg, 0.028 mmol) u acetonitrilu (3 mL) /vodi (0.7 mL) je degasiran sa N2i zatim je mešan na 95 °C tokom 2 h. Smeša je razblažena sa metilen hloridom, isprana sa zas. NaHCO3, vodom, slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, proceđena i koncentrovana. Proizvod (65 mg, 78%) je prečišćen hromatografijom eluiranjem sa CH2Cl2/MeOH (maks. MeOH 5%). LCMS izračunato za C26H33ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 526.2; Nađeno: 526.3.

Korak 3. bis trifluoroacetat (4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-1H-pirazol-1il)sirćetne kiseline

[0368] Trifluorosirćetna kiselina (0.5 mL) je dodata u rastvor terc-butil (4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-1H-pirazol-1-il)acetata (0.065 g, 0.12 mmol) u metilen hloridu (0.5 mL). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Rastvarač je uklonjen da se dobije sirovi proizvod koji je korišćen u sledećem koraku. LCMS izračunato za C22H25ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 470.2; Nađeno: 470.1

Korak 4. 2-(4-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil)-1H-pirazol-1-il)acetamid

[0369] Amonijum karbonat (20 mg, 0.21 mmol) je dodat u rastvor bis trifluoroacetata (4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-1H-pirazol-1-il)sirćetne kiseline (10 mg, 0.021 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (10 mg, 0.03 mmol) u N,Ndimetilformamidu (0.7 mL) na sobnoj temperaturi nakon čega se dodaje trietilamin (8.8 µL, 0.064 mmol). Reakcija je mešana tokom 1 h. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vode koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod(2.5 mg, 25%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C22H26ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 469.2; Nađeno: 469.2.

Primer 208. 6-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilnikotinamid bis(trifluoroacetat)

[0370]

Korak 1. 1-{1-[5-Hloro-2-etoksi-4-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0371] 1-[1-(3-Bromo-5-hloro-2-etoksi-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin (0.050 g, 0.12 mmol, Signal 1 iz Primera 195, Korak 4) je kombinovan u mikrotalasnoj posudi sa kalijum acetatom (0.035 g, 0.35 mmol) i 4,4,5,5,4’,4’,5’,5’-oktametil-[2,2’]bi[[1,3,2]dioksaborolanil] (0.060 g, 0.24 mmol) u dimetil sulfoksidu (0.44 mL) na sobnoj temperaturi. Degasiran je sa azotom i nakon toga je dodat [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]-dihloropaladijum( II), kompleks sa dihlorometanom (1:1) (0.01 g, 0.01 mmol). Reakcija je zagrejana u uljanom kupatilu na 105 °C preko noći. Omogućeno je hlađenje, zatim se rastvara u etil acetatu i ispira sa vodom, slanim rastvorom, osušen je preko magenzijum sulfata i koncentrovanje. Proizvod (15 mg, 20%) je prečišćen hromatografijom eluiranjem sa CH2Cl2/MeOH (maks. MeOH 10%). LCMS izračunato za C23H32BClN5O3(M+H)<+>: m/z = 472.2; Nađeno: 472.3.

Korak 2. 6-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-N,N-dimetilnikotinamidbis(trifluoroacetat)

[0372] Smeša 1-{1-[5-hloro-2-etoksi-4-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil] etil }-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (15 mg, 0.032 mmol), 6-hloro-N,N-dimetilnikotinamida (12 mg, 0.064 mmol), natrijum karbonata (9.0 mg, 0.085 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]-dihloropaladijum(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1) (6.9 mg, 0.0085 mmol) u acetonitrilu (0.9 mL) /vodi (0.2 mL) je degasirana sa N2i posle toga je mešana na 95 °C preko noći. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koja sadrži 0.05% trifluorosirćetnu kiselinu, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod kao TFA so (2 mg, 9%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C25H29ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 494.2; Nađeno: 494.2.

Primer 209. 5-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-4-metoksi-2-metil-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)benzonitril

[0374] Prethodno formirani katalizator (0.05 mL, iz Primera 40) je dodat u smešu 1-{1-[5-hloro-2-metoksi-4-metil-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)fenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (7.7 mg, 0.019 mmol), cinka (0.54 mg, 0.0082 mmol) i cink cijanida (2.2 mg, 0.019 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (0.3 mL). Smeša je degasirana sa azotom 3 puta. Reakcija je zagrejana na 120 °C tokom 1.5 h. Sirovi proizvod je prečišćen upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod (2.1 mg, 27%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C21H23N8O (M+H)<+>: m/z = 403.2; Nađeno: 403.2.

[0375] Eksperimentalni postupci i LCMS podaci masenog spektra (MS) za jedinjenja u tekstu ispod su dati pregledom u Tabeli 1.

Tabela 1

(nastavak)

Primer 212. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitril

[0376]

Korak 1.1-(5-Hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)etanon

[0377] Željeno jedinjenje je dobijeno prema postupku za Primer 13, Korak 3 da se obrazuje racemski intermedijer, upotrebom jodoetana umesto jodometana kao početnog materijala u 90% prinosu.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.68 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 3.94 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.61 (s, 3H), 1.48 (t, J = 7.0 Hz, 3H). LCMS za C10H10ClFIO2(M+H)<+>: m/z = 342.9, 344.9; Nađeno: 342.9, 344.8.

Korak 2.4-Acetil-6-hloro-3-etoksi-2-jodobenzonitril

[0378] Rastvor 1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)etanona (7.3 g, 21 mmol) u N,N-dimetilformamidu (80 mL) je tretiran sa kalijum cijanidom (2.1 g, 32 mmol) i mešan je na 40 °C tokom 5 h. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom i sipana je u zasićeni rastvor natrijum bikarbonata /vodi (1:1). Organski sloj je razdvojen, ispran sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, osušen sa magnezijum sulfatom, proceđen, i koncentrovan da se dobije sirovo braon ulje. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (0% - 30%) da se dobije željeni proizvod (6.1 g, 81%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.57 (s, 1H), 3.93 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.61 (s, 3H), 1.47 (t, J = 7.0 Hz, 3H). LCMS za C11H10ClINO2(M+H)<+>: m/z = 349.9; Nađeno: 349.9.

Korak 3. terc-Butil 3-(3-acetil-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil)azetidin-1-karboksilat

[0379] Cink (4.60 g, 70.3 mmol) i Celit osušen u peći (870 mg) je dodat u balon i balon je zagrejan sa pištoljem za grejanje dok je bio pod visokim-vak tokom 5 min i posle toga je ponovo napunjen sa azotom. N,N-Dimetilacetamid (57 mL) je dodat, nakon čega se dodaje 1,2-dibromoetan (430 µL, 5.0 mmol) i smeša je zagrejana na 70 °C tokom 10 min i posle toga je ohlađena do sobne temperature. Reakciona smeša je tretirana sa hlorotrimetilsilanom u kapima (630 µL, 5.0 mmol) i mešana je na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona smeša je tretirana sa rastvorom terc-butil-3-jodoazetidin-1-karboksilata (18 g, 62 mmol) u N,N-dimetilacetamidu u kapima (28 mL) (unutrašnja temperatura je održavana ispod 40 °C sa vodenim kupatilom) i zagrejana je na 40 °C tokom 2 h. Cink-jodo reagens (prenet pomoću kanule) je proceđen kroz filter od plastike (koji je na odgovarajući način zatvoren da se izbegne atmosfersko izlaganje) direktno u čisti, suvi balon koji je ispran sa azotom. Reakciona smeša je tretirana sa tris(dibenzilidenaceton)dipaladijumom(0) (720 mg, 0.79 mmol) i tri-(2-furil) fosfinom (370 mg, 1.6 mmol) i degasirana je sa azotom nekoliko minuta. Reakciona smeša je tretirana sa rastvorom 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-jodobenzonitrila (14 g, 41 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (130 mL) (degasirana sa azotom) brzo i zagrejana je na 70 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor amonijum hlorida i ekstrahovana je sa etil acetatom (3 x 300 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa vodom (4 x 500 mL) i slanim rastvorom (1 x 500 mL), osušeni su sa magnezijum sulfatom, proceđeni, i koncentrovani su do sirovog tamnog ulja. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (5% - 45%) da se dobije željeni proizvod (14 g, 88%).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.46 (s, 1H), 4.42 - 4.20 (m, 5H), 3.80 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.59 (s, 3H), 1.44 (s, 9H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H). LCMS za C15H16ClN2O4([M-(t-Bu)+H]+H)+: m/z = 323.1; Nađeno: 323.0.

Korak 4. terc-Butil 3-[3-hloro-2-cijano-6-etoksi-5-(1-hidroksietil)fenil]azetidin-1-karboksilat [0380] Rastvor (3aS)-1-metil-3,3-difeniltetrahidro-3H-pirolo[1,2-c][1,3,2]oksazaborola (9.7 g, 35 mmol) u tetrahidrofuranu (100 mL) je tretiran sa 1.0 M boran-THF kompleksom u tetrahirofuranu (42 mL, 42 mmol) i mešan je na 20 °C tokom 15 min. Reakciona smeša je ohlađena da -30 °C i tretirana je polako sa rastvorom terc-Butil 3-(3-acetil-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil)azetidin-1-karboksilata (13 g, 35 mmol) u tetrahidrofuranu (110 mL). Balon koji sadrži početni materijal keton je ispran sa dodatnim tetrahidrofuranom (20 mL) i dodat je u reakcionu smešu. Reakciona smeša je zagrejana do 0 °C tokom perioda od 30 min i mešana je na 0 °C u trajanju od 15 min. Reakciona smeša je ugašena sa vodom na 0 °C, sipana u zasićeni rastvor natrijum bikarbonata, i ekstrahovana je sa etil acetatom. Vodeni sloj je razdvojen i ekstrahovan je sa etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom i slanim rastvorom, osušeni su sa magnezijum sulfatom, proceđeni, i koncentrovani da se dobije sirovo tamno ulje. Sirovi materijal je pečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (0% - 70%) da se dobije željeni poizvod (10.4 g, 78%) kao žuta pena u obliku 98:2 smeše enantiomera (Retenciona vremena = 7.73 min i 9.41 min; ChiralPak AD-H kolona, 4.6 x 150 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranjem sa 5% etanolom u heksanima na 1 ml/min).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.56 (s, 1H), 5.15 - 5.07 (m, 1H), 4.41 - 4.17 (m, 5H), 3.74 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.12 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 1.49 - 1.37 (m, 15H). LCMS za C15H18ClN2O4([M-(t-Bu)+H]+H)<+>: m/z = 325.1; Nađeno: 325.1.

Korak 5. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil} azetidin-1-karboksilat

[0381] Rastvor terc-Butil 3-[3-hloro-2-cijano-6-etoksi-5-(1-hidroksietil)fenil]azetidin-1-karboksilata (98:2 smeša enantiomera iz Koraka 4) (10 g, 27 mmol) u metilen hloridu (260 mL) at 0 °C je tretiran sa trietilaminom (11 mL, 82 mmol) nakon toga sa metansulfonskim anhidridom (7.1 g, 41 mmol) i mešan je na 0 °C tokom 15 min. Reakciona smeša je razblažena sa dihlorometanom i isprana je sa vodom i slanim rastvorom, osušena sa magnezijum sulfatom, proceđena, i proceđena je da se dobije sirovi mezilat koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Rastvor sirovog intermedijera mezilata u N,N-dimetilformamidu (140 mL) je tretiran sa cezijum karbonatom (13 g, 41 mmol) i 3-metil-1Hpirazolo[3,4-d]pirimidin-4-aminom (4.7 g, 31 mmol) i zagrejan je na 60 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana je sa etil acetatom (3 x 250 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom i slanim rastvorom, osušeni sa magnezijum sulfatom, proceđeni, i koncentrovani do sirovog ulja. Sirovi materijal je prečišćen sa fleš hromatografijom na koloni (100% dihlorometan do 70% acetonitril koji sadrži 3% metanol/30% dihlorometanu) da se dobije željeni proizvod (8.7 g, 62% za 2 Koraka) kao žuta pena kao 95:5 smeša enantiomera (RT = 4.29 min i 6.00 min; Phenomenex Lux Celuloza C-1 kolona, 4.6 x 150 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranjem sa 15% etanolom u heksanima na 1 ml/min). Ovaj materijal je razdvojen hiralnom HPLC (Phenomenex Lux Celuloza C-1 kolona, 21.2 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranjem sa 15% etanolom u heksanima na 10 ml/min) da se dobije 7.0 g željenog materijala Signala 1 (retenciono vreme 8.20 min).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.24 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 6.32 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 5.48 (br s, 2H), 4.40 - 4.18 (m, 5H), 4.05 - 3.93 (m, 1H), 3.81 - 3.65 (m, 1H), 2.64 (s, 3H), 1.81 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.48 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.43 (s, 9H). LCMS za C25H31ClN7O3(M+H)+: m/z = 512.2; Nađeno: 512.3.

Korak 6. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitril

[0382] Rastvor terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-karboksilata (Signal 1 enantiomera iz Koraka 5) (2.2 g, 4.2 mmol) u metilen hloridu (11 mL) je tretiran sa trifluorosirćetnom kiselinom u kapima (11 mL) i mešan je na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakciona smeša je koncentrovana do ulja koje je rekoncentrovano iz etanola (2x) da se dobije ostatak. Ovaj materijal je rastvoren u minimalnoj količini metanola, u kapima dodat u ledeno ohlađeni zasićeni rastvor natrijum karbonata (100 ml), i nekoliko puta ekstrahovan sa 2:1 dihlorometanom/izopropanolu da se dobije željeni proizvod (1.8 g, količina) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Mala količina željenog proizvoda je prečišćena preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod. Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 6.23 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.37 -4.26 (m, 1H), 3.91 - 3.61 (m, 6H), 2.54 (s, 3H), 1.71 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.32 (t, J = 7.0 Hz, 3H). LCMS za C20H23ClN7O (M+H)<+>: m/z = 412.2; Nađeno: 412.1.

Primer 213. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(1-metilazetidin-3-il)benzonitril

[0383]

[0384] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitrila (hiralni intermedijer u Primeru 212, Korak 6) (0.30 g, 0.73 mmol) u metanolu (7.3 mL) je tretiran sa formaldehidom (37% u vodi) (0.54 mL, 7.3 mmol) i ovo je mešano na sobnoj temperaturi tokom 5 min. Reakciona smeša je tretirana sa natrijum cijanoborohidridom (0.092 g, 1.5 mmol) i mešana je na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je razblažena sa metanolom prečišćena sa preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod (0.16 g, 50%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 6.27 - 6.18 (m, 1H), 4.10 - 3.98 (m, 1H), 3.96 - 3.86 (m, 2H), 3.83 - 3.74 (m, 1H), 3.72 - 3.64 (m, 1H), 3.10 - 2.98 (m, 2H), 2.54 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.71 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.32 (t, J = 6.7 Hz, 3H). LCMS za C21H25ClN7O (M+H)<+>: m/z = 426.2; Nađeno: 426.2.

Primer 219. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-[1-(2-hidroksietil) azetidin-3-il]benzonitril

[0385]

[0386] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitrila (300 mg, 0.74 mmol, hiralni intermedijer iz Primera 212) u tetrahidrofuranu (14 mL) je tretiran sa trietilaminom (260 µL, 1.8 mmol) nakon toga sa 2-bromoetanolom (63 µL, 0.89 mmol) u kapima i mešan je na 60 °C tokom 6 h. Reakciona smeša je tretirana sa dodatnim 2-bromoetanolom (26 µL, 0.37 mmol) i mešana je na 60 °C dodatnih 6 h. Reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor natrijum karbonata i ekstrahovana je sa etil acetatom. Organski sloj je koncentrovan i prečišen je sa preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod (0.15 g, 44%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.19 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 6.36 - 6.25 (m, 1H), 4.48 (br s, 1H), 4.19 - 4.07 (m, 1H), 4.04 -3.94 (m, 2H), 3.91 - 3.82 (m, 1H), 3.81 -3.72 (m, 1H), 3.20 - 3.08 (m, 2H), 2.62 (s, 2H), 2.57 (s, 3H), 1.79 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.40 (t, J = 6.6 Hz, 3H). LCMS za C22H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 456.2; Nađeno: 456.1.

Primer 220. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-{1-[(2S)-2-hidroksipropil]azetidin-3-il}benzonitril

[0387]

1

[0388] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitril (50 mg, 0.12 mmol, hiralni intermedijer iz Primera 212) u etanolu (1.7 mL) je tretiran sa(S)-(-)-metiloksiranu (21 µL, 0.30 mmol) i zagrejan u mikrotalasnoj 125 °C tokom 15 min. Reakciona smeša je razblažena sa metanolom i prečišćena je preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod (27 mg, 47%). Proizvod je izolovan kao jedan diastereoizomer.

<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 6.23 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 4.35 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.13 - 3.99 (m, 1H), 3.97 - 3.88 (m, 2H), 3.85 - 3.63 (m, 2H), 3.61 - 3.51 (m, 1H), 3.15 - 2.99 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.28 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 1.71 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.32 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 1.00 (d, J = 6.2 Hz, 3H). LCMS za C23H29ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 470.2; Nađeno: 470.2.

Primer 236. terc-Butil 2-(3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-il)-2-metilpropanoat

[0389]

[0390] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitrila (0.38 g, 0.92 mmol, hiralni intermedijer iz Primera 212) u N,N-dimetilformamidu (4.6 mL) je tretiran sa kalijum karbonatom (0.51 g, 3.7 mmol) zatim sa terc-Butil 2-bromo-2-metilpropanoatom (0.86 mL, 4.6 mmol) i zagrejan je na 60 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana je sa etil acetatom. Organski sloj je razdvojen osušen je sa magenzijum sulfatom, proceđen, i koncentrovan do sirovog ulja. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom metanola u dihlorometanu (0% - 10%) da se dobije željeni proizvod (0.43 g, 83%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.10 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 6.22 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 4.12 - 3.97 (m, 1H), 3.88 - 3.70 (m, 4H), 3.62 - 3.48 (m, 2H), 2.54 (s, 3H), 1.70 (d, J = 7.0

2

Hz, 3H), 1.33 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 1.17 (s, 9H), 1.05 (s, 6H). LCMS za C28H37ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 554.3; Nađeno: 554.3.

Primer 237. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-[1-(2-hidroksi-1,1-dimetiletil)azetidin-3-li]benzonitril

[0391]

Korak 1. 2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-il)-2-metilpropanska kiselina bis(trifluoroacetat)

[0392] terc-Butil 2-(3- {3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-il)-2-metilpropanoat (0.36 g, 0.65 mmol, hiralni intermedijer iz Primera 236) je ratvoren u prethodnoj smeši rastvora trifluorosirćetne kiseline (3.2 mL)/vodi (0.065 mL) i mešan je na sobnoj temperaturi tokom 3 h i na 50 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je koncentrovana rekoncetrovana iz acetonitrila (2x) da se željeni proizvod dobije kao guma. Ova guma je tretirana sa malom količinom metil-terc-butiletra koja se vrtela do obrazovanja čvrste supstance. Metil-tercbutiletar je odliven i ostatak je koncentrovan da se dobije željeni proizvod (0.51 g, 109%) koji je korišćen bez daljeg prečišavanja. LCMS za C24H29ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 498.2; Nađeno: 498.3.

Korak 2. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-[1-(2-hidroksi-1,1-dimetiletil)azetidin-3-il]benzonitrit

[0393] Rastvor 2-(3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-il)-2- metilpropanske kiseline bis(trifluoroacetata) (0.10 g, 0.16 mmol) u tetrahidrofuranu (0.9 mL) je ohlađen do -25 °C, tretiran je sa 4-metilmorfolinom (0.072 mL, 0.65 mmol) i izobutil hloroformatom (0.085 mL, 0.65 mmol), i mešan je na -15 °C u trajanju od 15 min. Reakciona smeša je proceđena kroz jednokratni filter uložak u odvojeni balon sa okruglim dnom. Ovaj rastvor je nakon toga ohlađen do -20 °C i u kapima je dodat rastvor natrijum tetrahidroborata (0.031 g, 0.82 mmol) u minimalnoj količini vode. Reakciona smeša je mešana na -15 °C tokom 30 min, sipana je u vodu, i ekstrahovana je sa etil acetatom. Organski sloj je razdvojen, koncentrovan, razblažen sa metanolom, i prečišćen preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodom koja sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod (3.5 mg, 4%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.35 (br s, 2H), 6.23 (q, J = 6.7 Hz, 1H), 4.44 - 4.35 (m, 1H), 4.04 - 3.88 (m, 1H), 3.86 - 3.73 (m, 1H), 3.72 - 3.57 (m, 3H), 3.12 (d, J = 4.7 Hz, 2H), 2.54 (s, 3H), 1.71 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.31 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 0.80 (s, 6H). LCMS za C24H31ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 484.2; Nađeno: 484.2.

Primer 239. 2-(3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil} azetidin-1-il)-2-metilpropanamid

[0394]

[0395] Rastvor 2-(3- {3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-il)-2-metilpropanske kiseline bis(trifluoroacetata) (0.05 g, 0.069 mmol, hiralni intermedijer iz Primera 237, Korak 1) i 2.0 M amonijum u etanolu (0.17 mL, 0.34 mmol) u N,N-dimetilformamidu (1 mL) je tretiran sa trietilaminom (0.048 mL, 0.35 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfatom (0.046 g, 0.10 mmol) i mešan je na soboj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je ugašena sa nekoliko kapi vode, razblažena sa metanolom, i prečišćena je sa preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod (25 mg, 73%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.23 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.09 - 3.96 (m, 1H), 3.84 - 3.61 (m, 4H), 3.39 - 3.34 (m, 1H), 3.32 - 3.28 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 1.71 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.31 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 1.02 (s, 6H). LCMS za C24H30ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 497.2; Nađeno: 497.3.

Primer 247. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-[1-(2-hidroksi-2-metilpropanoil)azetidin-3-il]benzonitril

[0396]

[0397] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitrila (0.04 g, 0.097 mmol, hiralni intermedijer iz Primera 212) i propanske kiseline, 2-hidroksi-2-metil- (0.012 g, 0.12 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0.54 mL) je tretiran sa trietilaminom (0.034 mL, 0.24 mmol) zatim sa O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum

4

heksafluorofosfatom (0.048 g, 0.13 mmol) i mešan je na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakciona smeša je razblažena sa metanolom i acetonitrilom i prečišćena je sa preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom metanola/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod (7 mg, 14%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.54 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.25 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 5.08 (s, 1H), 4.88 - 4.77 (m, 1H), 4.73 - 4.60 (m, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 1H), 4.29 - 4.09 (m, 2H), 3.85 - 3.73 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 1.73 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.37 (t, J = 6.3 Hz, 3H), 1.26 (s, 3H), 1.22 (s, 3H). LCMS za C24H29ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 498.2; Nađeno: 498.2.

Primer 261. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitril

[0398]

Korak 1.4-Acetil-6-hloro-2-jodo-3-metoksibenzonitril

[0399] Rastvor 1-(5-hloro-4-fluoro-3-jodo-2-metoksifenil)etanona (intermedijer iz Primera 13, Korak 3) (18 g, 54 mmol) u N,N-dimetilformamidu (200 mL) je tretiran sa kalijum cijanidom (5.2 g, 81 mmol) i mešan je na 40 °C 6 h. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom i sipana je u zasićeni rastvor natrijum bikarbonata /vodi (1:1). Organski sloj je razdvojen, ispran je sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, osušen sa magezijum sulfatom, proceđen, i koncentrovan da se dobije sirovo braon ulje. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (0% -30%) da se dobije željeni proizvod (11 g, 61%) kao žuto ulje.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.60 (s, 1H), 3.81 (s, 3H), 2.62 (s, 3H). LCMS za C10H8ClINO2(M+H)+: m/z = 335.9; Nađeno: 335.9.

Korak 2. terc-Butil 3-(3-acetil-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil)azetidin-1-karboksilat

[0400] Cink (5.0 g, 77 mmol) i Celite osušen u peći (520 mg) je dodat u balon i balon je zagrejan sa pištoljm za zagrevanje dok je održavan sa visokim-vac tokom 5 min i zatim je ponovo napunjen sa azotom. N, N-dimetilacetamid (53 mL) je dodat, nakon čega se dodaje 1,2-dibromoetan (400 µL, 4.6 mmol) i smeša je zagrejana na 70 °C tokom 15 min i nakon toga je ohlađena do sobne temperature. Reakciona smeša je tretirana sa hlorotrimetilsilanom (580 µL, 4.6 mmol) u kapima i mešana je na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je tretirana u kapima sa rastvorom terc-Butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata (16 g, 58 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (26 mL) (unutrašnja temperatura je držana ispod 40 °C sa vodenim kupatilom) i zagrejana je na 40 °C tokom 2 h. Cink-jodo reagens (koji je prenet pomoću kanule) je proceđen kroz plastični filter (koji je na odgovarajući način zatvoren da se izbegne atomosfersko izlaganje) direktno u čisti, suvi balon koji je ispran sa azotom. Reakciona smeša je tretirana sa tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (670 mg, 0.73 mmol) i tri-(2-furil) fosfinom (340 mg, 1.5 mmol) i nekoliko minuta je degasirana sa azotom. Reakciona smeša je tretirana sa rastvorom 4-acetil-6-hloro-2-jodo-3-metoksibenzonitrila (13 g, 39 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (120 mL) (degasirana sa azotom) brzo i zagrejana je na 70 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor amonijum hlorida i ekstrahovana je sa etil acetatom (3 x 300 mL). Kiombinovani organski ekstrakti su isprani sa vodom (4 x 500 mL) i slanim rastvorom (1 x 500 mL), osušeni su sa magnezijum sulfatom, proceđeni, i koncentrovani do sirovog tamnog ulja. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (5% - 40%) da se dobije željeni proizvod (12 g, 85%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.79 (s, 1H), 4.39 - 4.29 (m, 1H), 4.28 - 4.11 (m, 4H), 3.68 (s, 3H), 2.58 (s, 3H), 1.38 (s, 9H).

Korak 3. terc-Butil 3-[3-hloro-2-cijano-5-(1-hidroksietil)-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilat [0401] Rastvor (3aS)-1-metil-3,3-difeniltetrahidro-3H-pirolo[1,2-c][1,3,2]oksazaborola (4.3 g, 16 mmol) u tetrahidrofuranu (46 mL) je tretiran sa 1.0 M boran-THF kompleksom u tetrahirofuranu (19 mL, 19 mmol) i mešan je na 20 °C tokom 15 min. Reakciona smeša je ohlađena do -30 °C i polako je tretirana sa rastvorom terc-Butil 3-(3-acetil-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil)azetidin-1-karboksilata (5.7 g, 16 mmol) u tetrahidrofuranu (49 mL). Balon koji sadrži polazni materijal ketona je ispran sa dodatnim tetrahidrofuranom (9 mL) i dodat je u reakcionu smešu. Temperatura reakcije je bila - 20 °C nakon što je završeno dodavanje. Reakciona smeša je zagrejana do -5 °C tokom perioda od 30 min. Reakciona smeša je ugašena sa vodom na 0 °C, sipana je u zasićeni rastvor natrijum bikarbonata, i ekstrahovana je sa etil acetatom. Vodeni sloj je razdvojen i ekstrahovan je sa etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom i slanim rastvorom, osušeni su sa magnezijum sulfatom, proceđeni, i proceđeni da se dobije sirovo ulje tamne boje. Sirovi materijal je prečišćen fleš romatografijom na koloni korišćenjem etil acetata u heksanima (0% - 100%) da se dobije željeni proizvod (5.5 g, 97%) u obliku pene bež boje kao 97:3 smeša enantiomera (Vremena retencije = 12.19 min i 13.18 min; Phenomenex Lux Celuloza C-2 kolona, 4.6 x 150 mm, veličina čestice 5 mikrona, eluiranje sa 8% etanolom u heksanima na 1 ml/min).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.62 (s, 1H), 5.48 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.00 - 4.90 (m, 1H), 4.43 - 4.31 (m, 1H), 4.30 - 4.10 (m, 4H), 3.66 (s, 3H), 1.38 (s, 9H), 1.29 (d, J = 6.4 Hz, 3H). LCMS za C14H16ClN2O4([M-(t-Bu)+H]+H)<+>: m/z = 311.1; Nađeno: 311.1.

Korak 4. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil} azetidin-1-karboksilat

[0402] Rastvor terc-Butil 3-[3-hloro-2-cijano-5-(1-hidroksietil)-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilata (8.6 g, 23 mmol) (97:3 smeša enantiomera iz koraka 3) u metilen hloridu (220 mL) na 0 °C je tretirana sa trietilaminom (8.2 mL, 59 mmol) nakon čega se tretira sa metansulfonskim anhidridom (6.1 g, 35 mmol) i mešan je na 0 °C tokom 15 min. Reakciona smeša je razblažena sa dihlorometanom i isprana je sa vodom i slanim rastvorom, osušena je sa magenzijum sulfatom, proceđena, i koncentrovana je da se dobije sirovi mezilat koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Rastvor intermedijera sirovog mezilata u N,N-dimetilformamidu (82 mL) je ohlađen do 0 °C, tretiran je sa natrijum hidridom (1.2 g, 30 mmol) (60% u mineralnom ulju), i mešan je na 0 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je tretirana sa rastvorom terc-Butil 3-(3-hloro-2-cijano-6-metoksi-5-{1-[(metilsulfonil)oksi]etil}fenil)azetidin-1-karboksilata (11 g, 24 mmol) u N,N-dimetilformamidu (170 mL) u kapima tokom perioda od 10 min i mešana je na 0 °C tokom 30 min i zagrejana je na 50 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je razblažen sa vodom i zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana je sa etil acetatom (3 x 200mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa vodom (4 x 150 mL) i slanim rastvorom, osušeni su sa magnezijum sulfatom, proceđeni, i proceđeni do sirovog ulja. Sirovi materijal je prečišen fleš hromatografijom na koloni (2% metanol/ 98% dihlorometanu do 7% metanola/93% dihlorometanu [dihlorometan sadrži 0.5% trietilamin]) da se dobije željeni proizvod (9.1 g, 77% za 2 koraka) kao 9:1 smeša enantiomera. Ovaj materijal je razdvojen sa hiralnom HPLC (vremena retencije = 5.81 min i 8.94 min; Chiracel AD-H kolona, 20 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranje sa 10% etanolom u heksanima na 18 ml/min, 10 mg/inj) da se dobije 6.9 g materijala iz željenog signala 1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 6.25 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.45 - 4.33 (m, 1H), 4.27 - 4.13 (m, 4H), 3.70 (s, 3H), 2.55 (s, 3H), 1.73 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.37 (s, 9H). LCMS za C20H21ClN7O3([M-(t-Bu)+H]+H)<+>: m/z = 442.1; Nađeno: 442.1.

Korak 5. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitril

[0403] Rastvor terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksilat (1.7 g, 3.3 mmol) u metilen hloridu (30 mL) je tretiran sa trifluorosirćetnom kiselinom (20 mL) i mešan je na sobnoj temperaturi 20 min. Reakciona smeša je koncentrovana da se dobije ostatak koji je razblažen sa metanolom (50 mL) i zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (50 mL). Ovaj vodeni rastvor je razblažen sa slanim rastvorom (50mL) i ekstrahovan je sa 5:1 smešom dihlorometana/izopropanolu (5 x 100mL). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovani da se dobije željeni proizvod (1.4 g, 97%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.34 (br s, 2H), 6.24 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 4.40 - 4.26 (m, 1H), 3.90 - 3.68 (m, 4H), 3.63 (s, 3H), 2.55 (s, 3H), 1.72 (d, J = 7.1 Hz, 3H). LCMS za C19H21ClN7O (M+H)<+>: m/z = 398.1; Nađeno: 398.1.

Primer 262. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-metoksi-2-(1-metilazetidin-3-il) benzonitril

[0404]

[0405] Rastvor 4-[1-(amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (hiralni intermedijer iz primera 261) (50 mg, 0.13 mmol) u metanolu (3 mL) je tretiran sa natrijum cijanoborohidridom (20 mg, 0.31 mmol) nakon čega je tretiran sa formaldehidom (37% u vodu) (37 µL, 0.50 mmol) i mešan je na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Reakciona smeša je ugašena sa sirćetnom kiselinom (170 µL, 2.9 mmol), razblažena je sa metanolom, i prečišćena je sa preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/u vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod (30 mg, 58%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.37 (br s, 2H), 6.23 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.10 - 3.96 (m, 1H), 3.95 - 3.85 (m, 2H), 3.63 (s, 3H), 3.05 - 2.94 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 1.72 (d, J = 7.1 Hz, 3H). LCMS za C20H23ClN7O (M+H)<+>: m/z = 412.2; Nađeno: 412.1.

Primer 268.4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-2-[1-(2-hidroksietil) azetidin-3-il]-3-metoksibenzonitril

[0406]

[0407] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (hiralni intermedijer iz primera 261) (400 mg, 1.0 mmol) u tetrahidrofuranu (14 mL) je tretiran sa trietilaminom (350 µL, 2.5 mmol) i 2-bromoetanolom (85 µL, 1.2 mmol) i mešan je na 60 °C preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana, razblažena sa metanolom, i prečišćena je sa preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod (0.14 g, 31%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 6.24 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 4.41 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.12 - 4.03 (m, 1H), 3.97 - 3.88 (m, 2H), 3.64 (s, 3H), 3.38 - 3.34 (m, 2H), 3.09 - 3.01 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.41 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 1.72 (d, J = 7.0 Hz, 3H). LCMS za C21H25ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 442.2; Nađeno: 442.2.

[0408] Jedinjenja iz primera 268 i 269 su sintetisana iz istog hiralnog intermedijera u primeru 261. Prema određivanju kristalne strukture u Primeru 269, stereohemija na položaju 1-ugljenika etan-1,1-diil grupe je S. Zbog toga što je jedinjenje iz Primera 268 sitetisano iz istog hiralnog intermedijera kao Primer 269, stručnjak iz oblasti tehnike će očekivati da ugljenik na položaju 1 etan-1,1-diil grupe iz Primera 268 bude takođe u S-konfiguraciji. Prema tome, veruje se da je jedinjenje i Primera 268 (S)-4-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-hloro-2-(1-(2-hidroksietil)azetidin-3-il)-3-metoksibenzonitril.

Primer 269. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-2-{1-[(2S)-2-hidroksipropil] azetidin-3-il}-3-metoksibenzonitril

[0409]

[0410] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (hiralni intermedijer iz primera 261) (2.5 g, 6.3 mmol) u etanolu (130 mL) je tretiran sa (S)-(-)-metiloksiranom (1.1 mL, 16 mmol) i zagrejan je u mikrotalasnoj na 120 °C tokom 25 min. Reakciona smeša je koncntrovana da se dobije ostatak koji je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom metanola u dihlorometanu (0% - 10%; metanol koji sadrži 0.5% trietilamin) i preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/u vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod (0.76 g, 26%). Proizvod je izolovan kao jedan diastereoizomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.34 (br s, 2H), 6.23 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.35 (br s, 1H), 4.14 - 3.99 (m, 1H), 3.98 - 3.87 (m, 2H), 3.64 (s, 3H), 3.60 - 3.52 (m, 1H), 3.13 - 2.99 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.28 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 1.75 - 1.69 (m, 3H), 1.00 (d, J = 6.2 Hz, 3H). LCMS za C22H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 456.2; Nađeno: 456.2.

Određivanje kristalne strukture za jedinjenje iz Primera 269

[0411] C22,H26,N7,O2,CL1+H2O

CRISTALNI PODACI: C22 H28 Cl F0N7 O3, iz ACN/voda, bezbojna, igla, ∼0.500 x 0.070 x 0.050 mm, monoklinični, C2, a = 25.941(7) Å, b = 4.9767(13) Å, c = 17.787(5) Å, beta = 101.967(4)°, Vol = 2246.3(10) Å<3>, Z = 4, T = -100.°C,

Masa formule = 473.96, Gustina = 1.401g/cm<3>, µ(Mo) = 0.21 mm<-1>

[0412] SAKUPLJANJE PODATAKA: Bruker SMART APEX-II CCD sistem, MoKalfa zračenje, standardna cev za fokus, anodna struje = 50kV x 42 mA, udaljenost kristala od ploče = 5.0 cm, 512 x 512 pikseli/okviru, centar zraka = (256.13, 253.14), ukupni okviri = 704, oscilacija/okvir = 0.50°, izlaganje/okvir = 120.1 sek/okvir, SAINT integracija, hkl min/max = (-27, 34 , -6, 6 , -23, 11), unos podataka u shelx = 7578 , jedinstveni podaci = 5186, dva-teta opseg = 3.20 do 56.74°, upotpunjenost do dva teta 56.74 = 99.70%, R(int-xl) = 0.0331, SADABS primenjena korekcija.

[0413] RASTVOR I PREČIŠĆAVANJE: Određivanje strukture upotrebom XS(Shelxtl), prečišćeno upotrebom shelxtl softverskog paketa, pročišćavanje sa punom matricom najmanjih kvadrata F<2>, faktori raspršivanja Int. Tab. Vol C Tabela 4.2.6.8 i 6.1.1.4, broj podataka = 5186 , broj ograničenja = 2, broj parametara = 313 , odnos podatka/parametra = 16.57, procena slaganja modela sa podacima (engl.„goodness-of-fit“) na F<2>= 1.02, R prikazuje[I>4sigma(I)] R1 = 0.0524, wR2 = 0.1033, R prikazuje (sve podatke) R1 = 0.0826, wR2 = 0.1162, makismalna razlika Signal i ’hole’ = 0.294 i -0.221 e/Å<3>, prečišćen flakov parametar = 0.05(8), Svi atomi vodonika izuzev NH2i vodonici vode su idealizovani korišćenjem modela „riding“.

[0414] REZULTATI: Asimetrična jedinica sadrži jedan molekul i jedan molekul vode kao što je prikazano na slici 1 sa termalim elipsoidima povučenim na nivo verovatnoće 50%. Predviđena struktura je potvrđena. Apsolutna konfiguracija je određena na osnovu poznate S konfiguracije na C21. Konfiguracija na C7 je određena da bude S. Flakov parametar takođe potvrđuje tačnu konfiguraciju. Na osnovu kristalne strukture, veruje se da je jedinjenje iz Primera 2694-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-hloro-2-(1-((S)-2-hidroksipropil)azetidin-3-il)-3-metoksibenzonitril. Kristalna struktura je prikazana na SL.1.

Primeri 272 i 273. Diastereoizomeri od 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-2-[1-(2-hidroksi-1-metiletil)azetidin-3-il]-3-metoksibenzonitril

[0415]

[0416] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (40 mg, 0.10 mmol) u metanolu (2 mL) je tretiran sa natrijum cijanoborohidridom (16 mg, 0.25 mmol) nakon čega je tretiran sa acetolom (28 mL, 0.40 mmol) i mešan je na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je ugašena sa sirćetnom kiselinom (100 µL, 1.8 mmol), razblažena sa metanolom, i prečišćena je sa preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobiju željeni proizvodi kao smeša diastereoizomera. Ova smeša diastereoizomera je razdvojena hiralnom HPLC (RT = 3.70 min i 6.58 min; Phenomenex Lux Celuloza C-4 kolona, 21.2 x 250 mm, veličina čestice 5 mikrona, eluiranjem sa 20% etanolom u heksanima na 18 ml/min, 5 mg/inj) da se dobije željeni Signal 1 izomera (jedinjenje 272) (19 mg, 41%) i Signal 2 izomera (jedinjenje 273) (23 mg, 50%) Signal 1:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.34 (br s, 2H), 6.24 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 4.43 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.07 - 3.82 (m, 3H), 3.64 (s, 3H), 3.31 - 3.24 (m, 1H), 3.17 - 3.06 (m, 2H), 3.06 - 2.97 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.21 - 2.11 (m, 1H), 1.72 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.81 (d, J = 6.3 Hz, 3H). LCMS za C22H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 456.2; Nađeno: 456.2. Signal 2:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.35 (br s, 2H), 6.24 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.43 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.06 - 3.91 (m, 2H), 3.89 - 3.79 (m, 1H), 3.64 (s, 3H), 3.30 - 3.24 (m, 1H), 3.15 - 3.00 (m, 3H), 2.55 (s, 3H), 2.21 - 2.10 (m, 1H), 1.72 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.82 (d, J = 6.2 Hz, 3H). LCMS za C22H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 456.2; Nađeno: 456.2.

Primer 281. 2-(1-Acetilazetidin-3-il)-4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-metoksibenzonitril

1

[0418] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (hiralni intermedijer iz Primera 261) (60 mg, 0.15 mmol) u tetrahidrofuranu (2 mL) na 0 °C je tretiran sa trietilaminom (53 µL, 0.38 mmol) nakon čega je tretiran sa acetil hloridom (13 µL, 0.18 mmol) i mešan je na 20 °C preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa metanolom i prečišćena je preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod (39 mg, 59%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.52 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.36 (br s, 2H), 6.26 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.57 - 4.36 (m, 3H), 4.30 - 4.21 (m, 1H), 4.18 - 4.08 (m, 1H), 3.71 (d, J = 3.1 Hz, 3H), 2.55 (s, 3H), 1.78 - 1.71 (m, 6H). LCMS za C21H23ClN7O2(M+H)+: m/z = 440.2; Nađeno: 440.1.

Primer 285. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-metoksi-2-[1-(metilsulfonil) azetidin-3-il]benzonitril

[0419]

[0420] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitril (hiralni intermedijer iz Primera 261) (40 mg, 0.10 mmol) u dihlorometanu (1 mL) je tretiran sa trietilaminom(35 µL, 0.25 mmol), ohlađen je do 0 °C, tretiran sa metansulfonil hloridom (9.3 µL, 0.12 mmol) i mešan je na 0 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je rablažena sa metanolom i prečišćena je prepartivnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod (20 mg, 42%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.35 (br s, 2H), 6.25 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.54 - 4.40 (m, 1H), 4.27 - 4.12 (m, 4H), 3.68 (s, 3H), 3.01 (s, 3H), 2.55 (s, 3H), 1.74 (d, J = 7.1 Hz, 3H). LCMS za C20H23ClN7O3S (M+H)+: m/z = 476.1; Nađeno: 476.1.

1 1

Primer 289. Metil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksilat

[0421]

[0422] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (hiralni intermedijer iz Primera 261) (20 mg, 0.05 mmol) u dihlorometanu (1 mL) je tretiran sa trietilaminom (20 µL, 0.14 mmol) nakon čega je tretiran sa metil hloroformijatom (4.7 µL, 0.06 mmol) i mešan je na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 h. Reakciona smeša je razblažena sa metanolom i prečišćena je sa preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod (12 mg, 52%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.34 (br s, 2H), 6.25 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.53 - 4.38 (m, 1H), 4.36 - 4.17 (m, 4H), 3.71 (s, 3H), 3.55 (s, 3H), 2.55 (s, 3H), 1.73 (d, J = 7.1 Hz, 3H). LCMS za C21H23ClN7O3(M+H)+: m/z = 456.2; Nađeno: 456.1.

Primer 292. 3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-yl)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil}-N-(terc-Butil)azetidin-1-karboksamid

[0423]

1 2

[0424] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (hiralni intermedijer iz Primera 261) (20 mg, 0.05 mmol) u N,N-dimetilformamidu (1 mL) je tretiran sa trietilaminom (20 µL, 0.14 mmol) nakon čega je tretiran sa 2-izocijanato-2-metilpropanom (7.2 µL, 0.063 mmol) i mešan je na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažen sa metanolom i prečišćena je sa preparativnom LCMS (Xbridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod(16 mg, 64%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS za C24H30ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 497.2; Nađeno: 497.2.

Primer 293. 3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksamid

[0425]

[0426] Rastvor 3- {3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil}-N-(terc-butil)azetidin-1-karboksamida (hiralni intermedijer iz Primera 292) (16 mg, 0.032 mmol) u trifluorosirćetnoj kiselini (2 mL) je zagrejan u mikrotalasnoj na 120 °C tokom 10 min. Reakciona smeša je razblažena sa metanolom i prečišćena je sa preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod (7 mg, 50%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.35 (br s, 2H), 6.28 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 5.70 (br s, 1H), 4.62 - 4.49 (m, 1H), 4.34 - 4.20 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.78 - 3.49 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 1.73 (d, J = 7.0 Hz, 3H). LCMS za C20H22ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 441.2; Nađeno: 441.1.

Primer 296. 3-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-metoksifenil}-N,N-dimetilazetidin-1-karboksamid

[0427]

[0428] Rastvor 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-metoksibenzonitrila (hiralni intermedijer iz Primera 261) (40 mg, 0.10 mmol) u N,N-dimetilformamidu

1

(2 mL) je tretiran sa trietilaminom (40 µL, 0.29 mmol) zatim je tretiran sa p-nitrofenil hloroformijatom (23 µL, 0.13 mmol) i mešan je na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je razblažena sa metanolom i prečišćena je sa preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod koji je trenutno korišćen. Rastvor intermedijera p-nitrofenil karbamata u tetrahidrofuranu (1 mL) je tretiran sa trietilaminom (15 µL, 0.11 mmol) nakon čega je tretiran sa rastvorom 1.0 M dimetilamina u tetrahidrofuranu (150 µL, 0.15 mmol) i zagrejan je u zatvorenoj tubi na 60 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana, razblažena je sa metanolom i prečišćena je sa preprativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod (13 mg, 28%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.36 (br s, 2H), 6.25 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.44 - 4.23 (m, 3H), 4.22 - 4.10 (m, 2H), 3.69 (s, 3H), 2.76 (s, 6H), 2.55 (s, 3H), 1.73 (d, J = 7.1 Hz, 3H). LCMS za C22H26ClN8O2(M+H)<+>: m/z = 469.2; Nađeno: 469.1. Primer 298.1-{1-[4,5-Dihloro-3-(1-etilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0429]

Korak 1.1-(4,5-Dihloro-2-hidroksifenil)etanon

[0430] Rastvor 3,4-dihlorofenola [AK Scientific] (30 g, 18 mmol) u acetil hloridu (19 mL, 270 mmol) je mešan na 60°C 2 h. Reakciona smeša je ohlađena do 20 °C, tretirana je sa alumiijum trihloridom (37 g, 280 mmol) u porcijama, i zagrejana je na 180 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je ohlađena do 20 °C i rastvor je stvrdnut u čvrsti blok koji ne može lako da se rastavi. Ovaj materijal je ohlađen do 0 °C i polako je ugašen sa 1 M HCl u porcijama. Čvrsti blok materijala se polako razdvaja sa dovoljno HCl i ova heterogena smeša je mešan 20 °C preko noći da se osigura jednoobraznost. Čvrsta supstanca je proceđena, isprana sa velikom količinom vode, i osušena je pod vakuumom da se dobije željeni proizvod (38 g, količine) kao tamna čvrsta supstanca.

Korak 2.1-(4,5-Dihloro-2-hidroksi-3-jodofenil)etanon

[0431] Rastvor 1-(4,5-dihloro-2-hidroksifenil)etanona (12 g, 59 mmol) u sirćetnoj kiselini (70 mL) je tretiran sa N-jodosukcinimidom (16 g, 71 mmol) i mešan je na 90 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je tretirana sa dodatnim N-jodosukcinimidom (8 g, 36 mmol) i mešana je na 90 °C tokom 4 h. Reakciona smeša je koncentrovana, razblažena je sa etil acetatom, i ugašena je sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata sve do prestanka stvaranja mehurića. Organski sloj je razdvojen i vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani su da se dobije čvrsta supstanca braon boje. Ovaj materijal je rekristalizovan iz metanola da se dobije željeni proizvod

1 4

(9.0 g, 46%) kao tamna čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 13.36 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 2.65 (s, 3H). LCMS za C8H6Cl2IO2(M+H)<+>: m/z = 330.9, 332.9; Nađeno: 330.8,332.9.

Korak 3.1-(4,5-Dihloro-3-jodo-2-metoksifenil)etanon

[0432] Rastvor 1-(4,5-dihloro-2-hidroksi-3-jodofenil)etanona (16 g, 47 mmol) i kalijum karbonata (17 g, 120 mmol) u N,N-dimetilformamidu (40 mL) je tretiran sa metil jodidom (6.4 mL, 100 mmol) i mešan je na 60 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana je sa etil acetatom (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni sa magnezijum sulfatom, proceđeni, i koncentrovani su da se dobije sirova čvrsta supstanca. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (5% - 30%) da se dobije željeni proizvod (14 g, 84%) kao čvrsta supstanca narandžaste boje.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.69 (s, 1H), 3.79 (s, 3H), 2.60 (s, 3H). LCMS za C9H8Cl2IO2(M+H)<+>: m/z = 344.9, 346.9; Nađeno: 344.8, 346.9.

Korak 4. terc-Butil 3-(3-acetil-5,6-dihloro-2-metoksifenil)azetidin-1-karboksilat

[0433] Cink (4.5 g, 69 mmol) je suspendovan sa 1,2-dibromoetanom (420 µL, 4.9 mmol) u N, N-dimetilformamidu (54 mL). Smeša je zagrejana na 70 °C tokom 10 min i nakon toga je olađena do sobne temperature. Hlorotrimetilsilan (620 µL, 4.9 mmol) je dodat u kapima i mešanje je nastavljeno 1 h. Rastvor terc-Butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata (17 g, 61 mmol) u N,N-dimetilformamidu (30 mL) je nakon toga dodat i smeša je zagrejana na 40 °C tokom 1 h pre brzog dodavanja smeše 1-(4,5-dihloro-3-jodo-2-metoksifenil)etanona (14 g, 41 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (710 mg, 0.77 mmol) i tri-(2-furil)fosfina (360 mg, 1.6 mmol) u N,N-dimetilformamidu (120 mL). Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je nakon toga podeljena između etil acetata i zasićenog rastvora amonijum hlorida. Organski sloj je ispran sa vodom, osušen je sa magnezijum sulfatom, proceđen, i proceđen je da se dobije sirovi ostatak koji je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (0% - 25%) da se dobije željeni proizvod(12 g, 77%). LCMS za C17H21Cl2NO4Na (M+Na)<+>: m/z = 396.1; Nađeno: 396.0.

Korak 5. terc-Butil 3-[2,3-dihloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilat

[0434] Rastvor terc-Butil 3-(3-acetil-5,6-dihloro-2-metoksifenil)azetidin-1-karboksilata (9.6 g, 26 mmol) u metanolu (240 mL) na 0 °C je tretiran sa natrijum tetrahidroboratom (1.9 g, 51 mmol) u porcijama tokom 5 min i mešan je na 0 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je ugašena sa sirćetnom kiselinom (7.3 mL, 130 mmol) na 0 °C i tretirana je sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (∼50mL). Reakciona smeša je koncentrovana da se ukloni većina metanola (to ∼60 mL), sipana je u zasićeni rastvor natrijum bikarbonata (150 ml), i ekstrahovana je sa etil acetatom (2 x 200 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa vodom i slanim rastvorom, osušeni su preko natrijum sulfata, proceđeni, ai koncentrovani su da se dobije željeni proizvod (9.6 g, kvantitativno) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. LCMS za C13H16Cl2NO4([M-(t-Bu)+H]+H)<+>: m/z = 320.0; Nađeno: 320.0.

Korak 6. terc-Butil 3-[2,3-dihloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilat

[0435] N,N-Dimetilformamid (0.92 mL, 12 mmol) je dodat u čvrsti cijanurinski hlorid (2.2 g, 12 mmol) na sobnoj temperaturi (DMF je apsorbovan od strane čvrste supstance). Smeši je omogućeno da odstoji 10 min, tretirana je sa metilen hloridom (60 mL), i mešana je pet minuta da se razbije čvrsta supstanca. Reakciona smeša je tretirana sa rastvorom terc-Butil-3-[2,3-dihloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilata (3.0 g, 8.0 mmol) u metilen hloridu (30 mL) i mešana je na 35 - 40 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je tretirana sa dodatnim N,N-dimetilformamidom (1 mL) i mešana je na 35 - 40 °C tokom 4 h. Reakcija ahteva drugi tretman sa N,N-dimetilformamidom (1 mL) sa mešanjem

1

na 35 - 40 °C preko noći da se dovede do kraja. Reakciona smeša je razblažena sa vodom i dihlorometanom. Organska faza je razdvojena i isprana sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, vodom i slanim rastvorom, osušena je preko magnezijum sulfata, proceđena, i koncentrovana je da se dobije sirovi ostatak. Sirovi materijal je prečišćen fleš romatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (5% - 40%) da se dobije željeni proizvod (2.8 g, 90%). LCMS za C13H15Cl3NO3([M-(t-Bu)+H]+H)<+>: m/z = 338.0, 340.0; Nađeno: 337.9, 339.9.

Korak 7. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il)etil]-5,6-dihloro-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksilat

[0436] Rastvor terc-Butil 3-[2,3-dihloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksifenil]azetidin-1-karboksilata (1.0 g, 2.5 mmol) i 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (0.43 g, 2.9 mmol) u N,N-dimetilformamidu (23 mL) je tretiran sa cezijum karbonatom (1.2 g, 3.8 mmol) i kalijum jodidom (42 mg, 0.25 mmol) i zagrejan je na 100 °C tokom 10 h. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom (75 mL) i vodom (75 mL). Vodeni sloj je razdvojen i ponovo je ekstrahovan sa etil acetatom (2 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom, zasićeim rastvorom natrijum bikarbonata, i slanim rastvorom, osušeni su preko magnezijum sulfata, proceđeni, i koncentrovani su do sirovog ostatka. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom metanola u dihlorometanu (0% -10%) da se dobije željeni proizvod (0.97 g, 75%). LCMS za C23H29Cl2N6O3(M+H)<+>: m/z = 507.2, 509.2; Nađeno: 507.0, 509.0.

Korak 8. 1-[1-(3-Azetidin-3-il-4,5-dihloro-2-metoksifenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0437] Rastvor terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il)etil]-5,6-dihloro-2-metoksifenil}azetidin-1-karboksilata (0.97 g, 1.9 mmol) u metilen hloridu (20 mL) je tretiran sa trifluorosirćetnom kiselinom (10 mL) i mešan je na 20 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je koncentrovana i ostatak je razblažen sa metanolom (∼20 mL) i tretiran je sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (to pH∼8). Reakciona smeša je koncentrovana da se ukloni metanol. Ulje koje je suspendovano u vodenom sloju je ekstrahovano u 5:1 smeši dihlorometana/izopropanola, koje je osušeno preko magnezijum sulfata, proceđeno, i koncentrovano je da se dobije željeni proizvod (0.77 g, 99%) koji je korišćen u ledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS za C18H21Cl2N6O (M+H)<+>: m/z = 407.1, 409.1; Nađeno: 407.0, 409.0.

Korak 9. 1-{1-[4,5-Dihloro-3-(1-etilazetidin-3-il)-2-metoksifenil]etil}-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

[0438] Rastvor 1-[1-(3-azetidin-3il-4,5-dihloro-2-metoksifenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (40 mg, 0.098 mmol) u metanolu (2.6 mL) je tretiran sa natrijum cijanoborohidridom (15 mg, 0.25 mmol) nakon čega je tretiran sa acetaldehidom (22 µL, 0.39 mmol) i mešan je na 20 °C tokom 20 min. Reakciona smeša je ugašena sa sirćetnom kiselinom (130 µL, 2.3 mmol), razblažena sa etanolom, i prečišćena je sa preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod kao smeša enantiomera. Ova racemska smeša je razdvojena hiralnom HPLC (RT = 18.6 min i 22.0 min; Phenomenex Lux Celuloza C-4 kolona, 21.2 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranjem sa 5% etanolom u heksanima 18 ml/min, 2.5 mg/inj) da se dobije signal 1 željenog izomera (11 mg, 26%).<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.33 (br s, 2H), 6.21 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 3.98 - 3.77 (m, 3H), 3.57 (s, 3H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.79 - 2.72 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.35 - 2.22 (m, 2H), 1.70 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.86 (t, J = 7.1 Hz, 3H). LCMS za C20H25Cl2N6O (M+H)<+>: m/z = 435.1; Nađeno: 435.0.

1

Primer 307. 4-[1-(4-Amino-5-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(1-isopropilazetidin-3-il)benzonitril

[0439]

Korak 1. terc-Butil 3-{3-[1-(4-amino-5-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-karboksilat

[0440] Željeno jedinjenje je dobijeno prema postupku iz primera 212, Korak 5 (hiralni intermedijer), upotrebom 5-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-amina [ACES Pharma] umesto 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina kao polaznog materijala u 18% prinosu.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.13 (s, 1H), 6.93 (br s, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.17 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.40 - 4.27 (m, 4H), 4.27 - 4.18 (m, 1H), 4.03 - 3.92 (m, 1H), 3.80 - 3.70 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 1.74 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.43 (s, 9H), 1.40 (t, J = 7.0 Hz, 3H). LCMS za C26H32ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 511.2;

Nađeno: 511.2.

Korak 2. 4-[1-(4-Amino-5-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitril

[0441] Željeno jedinjenje je dobijeno prema postupku iz primera 212, Korak 6, upotrebom terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-5-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil}azetidin-1-karboksilata umesto terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil} azetidin-1-karboksilata kao polaznog materijala u 99% prinosu. LCMS za C21H24ClN6O (M+H)<+>: m/z = 411.2; Nađeno: 411.1.

Korak 3. 4-[1-(4-Amino-5-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(1-izopropilazetidin-3-il)benzonitrit

[0442] Željeno jedinjenje je dobijeno prema postupku iz primera 213 upotrebom 4-[1-(4-amino-5-metil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitrila umesto 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-6-hloro-3-etoksibenzonitrila i acetona umesto formaldehida kao polaznih materijala u 65% prinosu. Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer.<1>H NMR (300 MHz, dmso) δ 7.95 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 7.16 - 7.13 (m, 1H), 6.58 (s, 2H), 6.11 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 4.04 - 3.67 (m, 5H), 3.04 - 2.92 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.27 - 2.12 (m, 1H), 1.69 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.30 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 0.85 (dd, J = 6.1, 1.8 Hz, 6H). LCMS za C24H30ClN6O (M+H)<+>: m/z = 453.2; Nađeno: 453.3.

Primer 315. 4-[-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-{1-[(2S)-2-hidroksipropil]azetidin-3-il}-3-metoksi-6-metilbenzonitril

1

[0444] 1-(4-bromo-2-hidroksi-5-metilfenil)etanon (8.5 g, 37 mmol, Alfa Aesar catalog# H29125) je kombinovan sa cink cijanidom (8.7 g, 74 mmol) u N,N-dimetilformamidu (75 mL) degasiran je sa azotom i tris(dibenzilidenaceton) dipaladijumom (0) (1.0 g, 1.1 mmol) i dodati su (9,9-dimetil-9H-ksanten-4,5-diil)bis(difenilfosfin) (1.5 g, 2.6 mmol). Reakcija je ponovo degasirana sa azotom i zagrejana je do 120 °C i prati se sa LC/MS. Posle zagrevanja 18 h, reakcija je kompletna, reakciji je omogućeno da se ohladi na sobnoj temperaturi, uzima se u etil acetatu i isprana je sa vodom (2X), slanim rastvorom, osušena je preko magenzijum sulfata i koncentrovana da se dobije sirovi proizvod kao tamno amber ulje. Proizvod je prečišćn sa FCC na gelu od silike eluiranjem sa gradijentom heksan: etil acetat da se dobije 4-acetil-5-hidroksi-2-metilbenzonitril kao čvrsta supstanca (6.3 g, 98%). LCMS izračunato za C10H10NO2(M+H)<+>: m/z = 176.1; nađeno: 176.2.

Korak 2: 4-Acetil-3-hidroksi-2-jodo-6-metilbenzonitril

[0445] 4-acetil-5-hidroksi-2-metilbenzonitril (6.7 g, 38 mmol) je rastvoren u sirćetnoj kiselini (80 mL) i dodat je N-jodosukcinimid (10. g, 46 mmol). Reakcija je zagrejana do 80 °C u uljanom kupatilu i prati se sa LC/MS. Posle zagrevanja od 4 h reakcija je kompletirana. Ovo je omogućilo hlađenje i koncentrovana je u vakuumu da se dobije tamo ulje. Ulje je uzeto u etil acetatu i isprano je sa vodom, natrijum bikarbonatom (3x, dok nije ostalno blago bazno), slanim rastvorom, osušeno j preko magnezijum sulfata i koncentrovano da se dobije sirovi proizvod kao tamno ulje. Proizvod je prečišćen sa FCC na silika gelu eluiranjem sa gradijentom heksan: etil acetat da se dobije 4-acetil-3-hidroksi-2-jodo-6-metilbenzonitril kao bledo žuta čvrsta supstanca (7.2 g, 62 %). LCMS izračunato za C10H9INO2(M+H)<+>: m/z = 301.9; nađeno: 301.9.

Korak 3: 4-Acetil-2-jodo-3-metoksi-6-metilbenzonitril

[0446] 4-acetil-3-hidroksi-2-jodo-6-metilbenzonitril (5.0 g, 17 mmol) je rastvoren u N,N-dimetilformamidu (50 mL) i dodati su kalijum karbonat (4.6 g, 33 mmol) i metil jodod (2.1 mL, 33 mmol).Raekcija je zagrejana do 60 °C i praćena je sa LC/MS. Posle zagrevanja 2 h reakcija je završena. Omogućeno je da se ohladi, razblaži sa etil acetatom (300 mL) i procedi da bi se uklonio višak čvrstih supstanci. Organski sloj je ispran sa vodom (3X), slanim rastvorom, osušen je preko magnezijum sulfata i koncentrovan je da se dobije sirovi proizvod kao čvrsta supstanca tamne boje. Proizvod je prečišćen sa FCC na gelu od silike eluiranjem sa heksan: etil acetatnim gradijentom da se dobije 4-acetil-3-metoksi-2-jodo-6-metilbenzonitril kao bledo žuta kristalna čvrsta supstanca (5.0 g, 96%). LCMS izračunato za C11H11INO2(M+H)<+>: m/z = 315.9; nađeno: 316.0.

1

Korak 4: terc-Butil 3-(3-acetil-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil)azetidin-1-karboksilat

[0447] Cink (1.70 g, 26.0 mmol) i celit (osušen u peći, 500 mg) su samleveni zajedno u balonu dok čvrste supstance nisu izgledale homogeno, balon je zagrevan sa pištoljem za zagrevanje pod visokimvak 5 minuta i zatim je ponovo napunjen sa azotom. Čvrste supstance su supendovane u N,N-dimetilacetamidu (4.2 mL) i dodat je 1,2-dibromoetan (0.13 mL, 1.5 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 70 °C 30 min i nakon toga je ohlađena do sobne temperature. U kapima se dodaje hlorotrimetilsilan (0.16 mL, 1.3 mmol) i mešanje se nastavlja 2 h na sobnoj temperaturi. Nakon toga je polako dodat rastvor terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata (2.70 g, 9.52 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (4.35 mL) i dobijena smeša je zagrejana na 50 °C tokom 2 h. Cink-jodo reagensu je omogućeno hlađenje do sobne temperature i nakon toga se uzima u špric i proceđen je kroz PTFE filter (podešen sa iglom) direktno na suspenziju tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (0.111 g, 0.121 mmol) i tri-(2-furil)fosfina (0.056 g, 0.24 mmol) i 4-acetil-2-jodo-3-metoksi-6-metilbenzonitrila (2.0 g, 6.3 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (19.6 mL) pre-degasiranja stvaranjem mehurića sa N2. Reakciona smeša je degasirana ponovo sa azotom i zagrejana je do 70 °C. Posle zagrevanja 30 minuta reakcija je kompletirana sa LC/MS. Ovo je omogućilo da se ohladi, uzme u etil acetatu i ispere sa vodom, slanim rastvorom, osuši preko magnezijum sulfata i koncentruje da se dobije sirovi proizvod kao ulje. Proizvod je prečišćen sa FCC na silika gelu eluiranjem sa heksaneom; etil acetatom da se dobije terc-butil 3-(3-acetil-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil)azetidin-1-karboksilat kao bistro ulje. (1.8 g, 82%). LCMS izračunato za C15H17N2O4(M+H)<+>: m/z = 289.1; nađeno: 289.1.

Korak 5: terc-butil 3-[2-cijano-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-3-metilfenil]azetidin-1-karboksilat [0448] Terc-butil 3-(3-acetil-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil)azetidin-1-karboksilat (2.2 g, 6.4 mmol) je rastvoren u u metanolu (20 mL) i ohlađen je u ledenom kupatilu. Natrijum tetrahidroborat (0.26 g, 7.0 mmol) je dodat u kapima i reakcija je praćena sa LC/MS. Posle mešanja 1 h reakcija je kompletna. Ovo je razblaženo sa etil acetatom i vodom. Kombinovani organski sloj je ispran sa vodom, zasićenim natrijum bikarbonatom, slanim rastvorom, osušen je preko magnezijum sulfata i koncentrovan je da se dobije sirovi terc-butil 3-[2-cijano-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-3-metilfenil]azetidin-1-karboksilat kao žuta pena (2.1 g, 99%). LCMS izračunato za C15H19N2O4(M+H)<+>: m/z = 291.1; nađeno: 291.1. Korak 6: terc-Butil 3-[3-(1-hloroetil)-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil]azetidin-1-karboksilat [0449] Terc-butil 3-[2-cijano-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-3-metilfenil]azetidin-1-karboksilat (2.1 g, 6.4 mmol) je uzet u metilen hloridu (50.0 mL) i N,N-dimetilformamid (0.59 mL), ohlađen u ledenom kupatilu i polako se dodaje tionil hlorid (0.56 mL, 7.7 mmol). Posle mešanja 2 h reakcija je kompletirana sa LC/MS i podeljena je između etil acetata i vode. Kombinovani organski sloj je ispran sa vodom zasićenim rastvorom natrium bikarbonata, slanim rastvorom, osušen je preko magnezijum sulfata i koncentrovan je da se dobije sirovi terc-butil 3-[3-(1-hloroetil)-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil]azetidin-1-karboksilat u obliku ulja (2.2 g, 100%). LCMS izračunato za C15H18ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 309.1; nađeno: 309.1.

Korak 7: terc-Butil 3-{3-[-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil}azetidin-1-karboksilat

[0450] Terc-butil 3-[3-(1-hloroetil)-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil]azetidin-1-karboksilat (2.3 g, 6.3 mmol) je rastvoren u N,N-dimetilformamid (68 mL) sa cezijum karbonatom (4.1 g, 13 mmol) i 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-aminom (1.4 g, 9.4 mmol) i zagrejan je u uljanom kupatilu na 80 °C. Reakcija je mešana 18 h i omogućeno je hlađenje do sobne temperature. Reakciona smeša je dodata u etil acetat, proceđena, isprana je sa vodom, slanim rastvorom, osušena preko magnezijum sulfata i koncenrovana je da se dobije sirovi proizvod. Proizvod je prečišćen sa FCC na gelu od silike eluiranjem

1

sa (heksan: 10% etanol etilacetat) gradientom da se dobije terc-butil 3-{3-[-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil}azetidin-1-karboksilat kao polučvrsti (1.5 g, 50%). LCMS izračunato za C25H32N7O3(M+H)<+>: m/z = 478.2; nađeno: 478.2. Enantiomeri su razdvojeni sa Chiral kolonom HPLC upotrebom: Phenomenex LUX Celuloza kolone, 21.1 x 250 mm, 5 mikrona, 15% etanol u heksanu, 18 mL/min ∼ 5 mg/injekciji da se dobije: Vreme retencije prvog signala: 2.1 minuta, terc-butil 3-{3-[-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil}azetidin-1-karboksilat; Vreme retencije drugog signala: 3.9 minuta, terc-butil 3-{3-[-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil} azetidin-1-karboksilat.

Korak 8: 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-3-metoksi-6-metilbenzonitril bis(trifluoroacetat)

[0451] Terc-butil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cijano-2-metoksi-5-metilfenil} azetidin-1-karboksilat (0.35 g, 0.73 mmol) (Korak 7, signal 1) je rastvoren u metilen hloridu (3.0 mL) i trifluorosirćetnoj kiselini (1.0 mL) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja 1 h reakcija je završena sa LC/MS. Reakcija je koncentrovana u vakuumu da se dobije 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-3-metoksi-6-metilbenzonitril (bis(trifluoroacetat) kao viskozno amber ulje (0.50 g, 100%). LCMS izračunato za C20H24N7O (M+H)<+>: m/z = 378.2; nađeno: 378.2. Korak 9: 4-[-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-{1-[(2S)-2-hidroksipropil]azetidin-3-il}-3-metoksi-6-metilbenzonitrit

[0452] 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-3-metoksi-6-metilbenzonitril bis(trifluoroacetat) (0.074 g, 0.10 mmol) je rastvoren u etanolu (3.0 mL) i dodati su DIPEA (0.071 mL, 0.41 mmol) i (S)-(-)-metiloksiran (0.0071 g, 0.12 mmol).Reakcija je zagrejana u zatvorenoj tubi na 90 °C i praćena je sa LC/MS. Nakon zagrevanja dodatih 6 h reakcija je prečišćena bez obrade sa prep HPLC na C-18 koloni eluiranjem sa vodom: acetonitrilnim gradijentom koji je puferovan do pH 10 da se dobije jedinjenje iz naslova kao bela amorfna čvrsta supstanca (0.018 g, 40%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C23H30N7O2(M+H)<+>: m/z = 436.2; nađeno: 436.3.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.09 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.22 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.09 - 3.83 (m, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.58 - 3.51 (m, 1H), 3.12 - 2.95 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.27 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 1.71 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.00 (d, J = 6.2 Hz, 3H).

Primer 316. 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-[6-(1-hidroksi-1-metiletil)piridin-3-il]benzonitril

[0453]

11

Korak 1.5-bromo-N-metoksi-N-metilpiridin-2-karboksamid

[0454] N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorid (500 mg, 5 mmol) je dodat u smešu N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfata (1400 mg, 3.7 mmol), N,N-diizopropiletilamina (1000 µL, 7 mmol) i 5-bromopiridin-2-karboksilne kiseline (500 mg, 2 mmol, Frontier Scientific catalog# B1704) u N,N-dimetilformamidu (10 mL). Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi i završena je saLC/MS. Reakcija je podeljena između vode i EtOAc. Kombinovani organski sloj je ispran sa slanim rastvorom, osušen je preko MgSO4, proceđen i koncentrovan da se dobije sirovi proizvod. Proizvod je prečišćen sa FCC na silika gelu eluiranjem heksan: EtOAc (0-30%) gradijentom da se dobije 5-bromo-N-metoksi-N-metilpiridin-2-karboksamid kao bistro ulje (0.50 g, 60%). LCMS izračunato za C8H10BrN2O2(M+H)<+>: m/z = 244.9, 246.9; nađeno: 244.9, 246.9.

Korak 2.1-(5-bromopiridin-2-il)etanon

[0455] Metilmagnezijum hlorid 3.0 M u THF (0.5 mL) je dodat u kapima u smešu 5-bromo-N-metoksi-N-metilpiridin-2-karboksamida (200 mg, 0.8 mmol) u tetrahidrofuranu (10 mL) na 0 °C. Posle mešanja 1 h na sobnoj temperaturi, reakcija je ugašena sa 1 N NH4Cl i ekstrahovana je sa EtOAc. Kombinovani organski sloj je ispran sa slanim rastvorom i osušen je preko MgSO4, kioncentrovan je da se dobije sirovi proizvod 1-(5-bromopiridin-2-il)etanona (0.15 g, 90%). LCMS izračunato za C7H7BrNO (M+H)<+>: m/z = 199.9, 201.9; nađeno: 199.9, 201.9.

Korak 3.2-(5-bromopiridin-2-il)propan-2-ol

[0456] Metilmagnezijum hlorid 3.0 M u THF (0.3 mL) je dodat u kapima u smešu 1-(5-bromopiridin-2-il)etanona (100 mg, 0.5 mmol) u tetrahidrofuranu (10 mL) at 0 °C. Posle mešanja od 1 h na sobnoj temperaturi, reakcija je ugašena sa 1 N NH4Cl i ekstrahovana je sa EtOAc. Kombinovani organski sloj je ispran sa slanim rastvorom i osušen je preko MgSO4, koncentrovan je da se dobije sirovi 2-(5-bromopiridin-2-il)propan-2-ol (0.1 g, 100%). LCMS izračunato za C8H11BrNO (M+H)<+>: m/z = 215.9, 217.9; nađeno: 215.8, 217.8.

Korak 4. [6-(1-hidroksi-1-metiletil)piridin-3-il]boronska kiselina

[0457] Smeša 2-(5-bromopiridin-2-il)propan-2-ola (70 mg, 0.3 mmol), 4,4,5,5,4’,4’,5’,5’-oktametil-[2,2’]bi[[1,3,2]dioksaborolanil] (90 mg, 0.36 mmol), [1,1’-bis(difenilphosphino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleksa sa dihlorometanom (1:1) (10 mg, 0.01 mmol), i kalijum acetatom (100 mg, 1 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) je zagrejana na 120 °C preko noći. Reakcija je završena sa LC/MS, koncentrovana je u vakuumu da se dobije sirova [6-(1-hidroksi-1-metiletil)piridin-3-il]boronska kiselna. LCMS izračunato za C8H13BNO3(M+H)<+>: m/z = 182.1; nađeno: 182.1.

Korak 5. 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-[6-(1-hidroksi-1-metiletil) piridin-3-il]benzonitrit bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0458] Natrijum karbonat (10 mg, 0.09 mmol) u vodi (0.5 mL) je dodat u smešu 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-bromo-6-hloro-3-etoksibenzonitrila (20 mg, 0.04 mmol, racemski intermedijer iz Primera 43, Korak 5) i [6-(1-hidroksi-1-metiletil)piridin-3-il]boronske kiseline (12 mg, 0.069 mmol, Primer 306, Korak 4) u acetonitrilu (1 mL). Reakciona smeša je degasirana sa N2i dodat je [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen] dihloropaladijum(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1) (2 mg, 0.002 mmol). Reakcija je ponovo degasirana sa N2i zagrejana je do 100 °C tokom 1 h. Reakciji je dozvoljeno da se ohladi do sobne temperature i prečišćena je bez obrade sa prep HPLC na C-18 koloni eluiranjem sa vodom; acetonitrilnim gradijentom puferovanim sa TFA da se dobije jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta amorfna supstanca. Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C25H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 492.1; nađeno: 492.1.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.60 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.96 (dd, J = 8.2, 2.3 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 6.36 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 3.52 - 3.40 (m, 1H), 3.40 - 3.30 (m, 1H), 2.59 (s, 3H), 1.80 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.48 (d, J = 2.3 Hz, 6H), 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

Primer 318.4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-pirolidin-1-ilbenzonitril

[0459]

Korak 1.4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-jodobenzonitril

[0460] 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-jodobenzonitril je dobijen analognim postupcima koji su opisani u Primeru 43, Koraku 1 i Koraku 2, ali upotrebom N-jodosukcinimida. LCMS izračunato za C11H10ClINO2(M+H)<+>: m/z = 349.9; nađeno: 350.0

Korak 2.4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-pirolidin-1-ilbenzonitrit

[0461] 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-jodobenzonitril (0.20 g, 0.57 mmol) je kombinovan sa pirolidinom (0.052 mL, 0.63 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2.0 mL) sa cezijum karbonatom (0.19 g, 0.57 mmol) i zagrejan je do 120 °C u zatvorenoj tubi. Posle zagrevanja tokom 18 h reakciji je dozvoljeno da se ohladi, razblažena je u etil acetatu, isprana je sa vodom, slanim rastvorom, osušena je preko magnezijum sulfata koncentrovana je da se dobije sirovi proizvod kao tamno ulje. Proizvod je prečišćen sa FCC na silika gelu eluiranjem sa gradijentom heksan: etil acetata da se dobije 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-pirolidin-1-ilbenzonitril kao ulje (0.045 g, 27%). LCMS izračunato za C15H18ClN2O2(M+H)<+>: m/z = 293.1; nađeno 293.1.

Korak 3.6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-pirolidin-1-ilbenzonitrit

[0462] 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-pirolidin-1-ilbenzonitril (0.045 g, 0.15 mmol) je rastvoren u metanolu (3 mL) i ohlađen je na ledenom kupatilu. Natrijum tetrahidroborat (0.0058 g, 0.15 mmol) je dodat i reakcija je praćena sa LC/MS. Posle mešanja tokom 1 h, reakcija je razblažena u etil acetatu i isprana je sa vodom, natrijum bikarbonatom, slanim rastvorom i osušena je preko magnezijum sulfata da se dobije sirovi 6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-pirolidin-1-ilbenzonitril kao bistro ulje (0.045 g, 100%). LCMS izračunato za C15H20ClN2O2(M+H)<+>: m/z = 295.1; nađeno 295.1.

Korak 4.6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-pirolidin-1-ilbenzonitril

[0463] 6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-pirolidin-1-ilbenzonitril (0.045 g, 0.15 mmol) je rastvoren u metilen hloridu (3.0 mL) i N,N-dimetilformamidu (0.002 mL, 0.03 mmol) i ohlađen je na ledenom kupatilu. Dodaje se tionil hlorid (0.017 mL, 0.23 mmol) i rekacija je praćena sa LC/MS. Posle mešanja 2 h reakcija je završena. Reakcija je posle toga razblažena u etil acetatu, isprana je sa natrijum bikarbonatu, slanom rastvoru, osušena je preko magnezijum sulfata i koncentrovana je da se dobije sirovi 6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-pirolidin-1-ilbenzonitril kao žuto ulje (0.048 g, 100%). LCMS izračunato za C15H19Cl2N2O (M+H)<+>: m/z = 313.1; nađeno 313.1.

Korak 5. 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-pirolidin-1-ilbenzonitril

[0464] 6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-pirolidin-1-ilbenzonitril (0.048 g, 0.15 mmol, racemska smeša) je kombinovan sa 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-aminom (0.034 g, 0.23 mmol) i cezijum karbonat (0.10 g, 0.31 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3.0 mL) i zagrejana je na uljanom kupatilu do 85 °C. Nakon zagrevanja 18 h reakcija je završena. Sirova reakcija je prečišćena bez obrade sa HPLC na C-18 koloni eluiranjem sa gradijentom voda: acetonitril koji je puferovan do pH 10 da se dobije jedinjenje iz naslova kao bela amorfna čvrsta supstanca (0.012 g, 18%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C21H25ClN7O (M+H)<+>: m/z = 426.1; nađeno 426.1.<1>H NMR (300 MHz, DMSOd6) δ 8.11 (s, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.25 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 3.71 (dp, J = 15.7, 8.1, 7.2 Hz, 4H), 3.49 - 3.35 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.00 - 1.76 (m, 4H), 1.70 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.34 (t, J = 7.0 Hz, 3H). Primer 319. 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitril

[0465]

Korak 1.4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitrit

[0466] U smešu 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-jodobenzonitrila (50 mg, 0.1 mmol, Primer 318, Korak 1), 3-metoksiazetidin hidrochloride (21 mg, 0.17 mmol Chem-Impex catalog# 20140) i cezijum karbonata (70. mg, 0.21 mmol) u 1,4-dioksanu (4 mL) je dodat (9,9-dimetil-9H-ksanten-4,5-diil)bis(difenilfosfin) (40 mg, 0.07 mmol) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum (0) (60 mg, 0.07 mmol). Reakciona smeša je degasirana sa N2. Ova reakcija je zagrejana na 80 °C tokom 2 h i praćena je sa LC/MS. Reakciji je omogućeno da se ohladi do sobne temperature, razblažena je sa vodom i ekstrahovana je sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4, proceđeni i koncentrovani da se dobije sirovi proizvod. Proizvod je prečišćen sa FCC na silika gelu eluiranjem sa gradijentom (heksani: EtOAc 0-70%) da se dobije 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitril kao bistro ulje (0.030 g, 70%). LCMS izračunato za C15H18ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 309.1; nađeno: 309.1.

Korak 2.6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitrit

11

[0467] 4-Acetil-6-hloro-3-etoksi-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitril (30 mg, 0.1 mmol je rastvoren u metanolu (5 mL) ohlađen je do 0 °C i dodat je natrijum tetrahidroborat (5.5 mg, 0.14 mmol). Reakcija je mešana na 1 h na 0 °C. Reakcija je podeljena između EtOAc i vode. Kombinovani organski sloj je ispran sa vodom i zasićenim rastvorom NaHCO3, slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4, proceđen i koncentrovan da se dobije sirov 6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitril (0.030 g, 100%). LCMS izračunato za C15H20ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 311.1; nađeno: 311.1. Korak 3.6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitril

[0468] 6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitril (30 mg, 0.1 mmol) (racemska smeša) je rastvoren u metilen hloridu (5 mL) i N,N-dimetilformamidu (100 µL, 1 mmol). Tionil hlorid je dodat u kapima (18 µL, 0.24 mmol) na sobnoj temperaturi i reakcija je mešana 2 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc, isprana je sa vodom i zasićenim NaHCO3, slanim rastvorom,osušena je preko Na2SO4, proceđena i koncentrovana da se dobije sirovi 6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitril (0.030 g, 100%). LCMS izračunato za C15H19Cl2N2O3(M+H)<+>: m/z = 329.1; nađeno: 329.1.

Korak 4. 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitrit

[0469] Cezijum karbonat (50 mg, 0.2 mmol) je dodat u smešu 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (16 mg, 0.10 mmol) i 6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-(3-metoksiazetidin-1-il)benzonitrila (30 mg, 0.09 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3 mL, 40 mmol) i reakcija je mešana na 80 °C preko noći. Smeša je rablažena sa EtOAc, isprana je sa vodom, slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, proceđena i sirovi proizvod je koncentrovan. Proizvod je prečišćen sa prep HPLC na C-18 koloni elucijom gradijentom voda: acetonitril puferovan do pH 10 da se dobije jedinjenje iz naslova kao amorfna bela čvrsta supstanca (0.007 g, 20%). Proizvod je izolovan kao recemska smeša. LCMS izračunato za C21H25ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 442.1; nađeno: 442.1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.18 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 4.58 - 4.44 (m, 2H), 4.18 (m, 1H), 4.13 - 4.01 (m, 2H), 3.81 - 3.62 (m, 2H), 3.23 (s, 3H), 2.55 (s, 3H), 1.69 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.35 (t, J = 7.0 Hz, 3H).

Primer 320. 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-3-etoksi-2-(1-isopropilazetidin-3-il)-6-metilbenzonitril

[0470]

Korak 1: 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-3-etoksi-6-metilbenzonitrilbis(trifluoroacetat)

[0471] Upotrebom postupaka opisanih u Primeru 315 ali korišćenjem etil jodida u koraku 3, umesto metil jodida, dobijen je intermedijer 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-3-etoksi-6-metilbenzonitril bis(trifluoroacetat). LCMS izračunato za C21H26N7O (M+H)<+>: m/z = 392.2; nađeno: 392.2.

Korak 2. 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-3-etoksi-2-(1-izopropilazetidin-3-il)-6-metilbenzonitrit

[0472] U smešu 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-3-etoksi-6-metilbenzonitrila (70 mg, 0.2 mmol) u metanolu (50 mL) je dodat aceton (0.1 mL, 2 mmol) i natrijum cijanobor hidrid (17 mg, 0.27 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 h, i završena je pomoću LC/MS. Reakcija je ugašena sa vodom i ekstrahovana je sa EtOAc. Kombinovani organski sloj je ispran sa slanim rastvorom, osušen preko MgSO4, proceđen i koncentrovan je da se dobije sirovi proizvod. Proizvod je prečišćen sa prep HPLC na C-18 koloni eluiranjem sa gradijentom voda: acetonitril puferovanim pH 10 da se dobije jedinjenje iz naslova kao bela amorfna čvrsta supstanca (0.030 g, 40%). Proizvod je izolovan kao racemska smeša. LCMS izračunato za C24H32N7O (M+H)<+>: m/z = 434.2; nađeno: 434.3.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.17 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.37 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 4.17 - 3.98 (m, 4H), 3.90 - 3.71 (m, 3H), 2.65 (s, 3H), 2.46 (s, 4H), 1.84 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.42 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.03 (dd, J = 6.2, 1.4 Hz, 6H).

Primer 321. 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-3-etoksi-2-[1-(2-hidroksi-2-metilpropil)azetidin-3-il]-6-metilbenzonitril

[0473]

[0474] 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-3-etoksi-6-metilbenzonitril (0.055 g, 0.14 mmol, hiralni intermedijer Primera 320, Korak 1) je kombinovan sa tetrahidrofuranom (22 mL), DIPEA (0.049 mL, 0.28 mmol) i oksiranom, 2,2-dimetil- (0.018 mL, 0.21 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakcija je zagrejana do 95 °C i omogućeno je mešanje preko noći. Reakciji je omogućeno da se ohladi do sobne temperature i prečišćen je bez obrade prep HPLC na C-18 koloni eluiranjem gradijentom sa vodom: acetonitrilom koji je puferovan do pH 10 da se dobije jedinjenje iz naslova kao bela amorfna čvrsta supstanca (0.035 g, 50%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C25H34N7O2(M+H)<+>: m/z = 464.3; nađeno: 464.3.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.09 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 6.21 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 4.00 (m, 4H), 3.81 - 3.54 (m, 2H), 3.15 (m, 2H), 2.53 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.27 (bs, 2H), 1.70 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.30 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 1.04 (s, 6H).

Primer 322. 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-3-etoksi-2-[1-(2-hidroksi-2-metilpropanoil)azetidin-3-il]-6-metilbenzonitril

11

[0476] 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-2-azetidin-3-il-3-etoksi-6-metilbenzonitril (0.075 g, 0.10 mmol, hiralni intermedijer iz Primera 320, Korak 1) je rastvoren u N,N-dimetilformamidu (3.0 mL) i DIPEA (0.089 mL, 0.51 mmol) i dodati su propanska kiselina, 2-hidroksi-2-metil- (0.013 g, 0.12 mmol) i N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfat (0.058 g, 0.15 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 18 h i završena je sa LC/MS. Proizvod je prečiše bez obrade sa prep HPLC na C-18 koloni eluiranjem sa gradijentom voda: acetonitril puferovanim do pH 10 da se dobije jedinjenje iz naslova kao bela amorfna čvrsta supstanca (0.025 g, 51%). Proizvod je izolovan kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C25H32N7O3(M+H)<+>: m/z = 478.2; nađeno: 478.2.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.10 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.24 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 5.07 (s, 1H), 4.90 - 4.75 (m, 1H), 4.73 - 4.58 (m, 1H), 4.39 (p, J = 8.5 Hz, 1H), 4.30 - 4.05 (m, 2H), 3.75 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 2.54 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 1.72 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.35 (t, J = 6.1 Hz, 3H), 1.26 (s, 3H), 1.23 (s, 3H).

Primeri 310 i 311. Diastereoizomeri 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}pirolidin-2-on

[0477]

Korak 1.1-(5-Hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etanola

[0478] Željeno jedinjenje je dobijeno prema postupku iz primera 212, korak 4 (racemska smeša), upotrebom 1-(5-hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etanona umesto terc-butil-3-(3-acetil-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil)azetidin-1-karboksilata kao polaznog materijala u 94% prinosu kao 96:4 smeša enantiomera (RT = 3.56 min i 4.28 min; Chiral Technologies ChiralPak AD-H kolona, 20 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranjem sa 5% etanolom u heksanima na 1 ml/min). LCMS za C11H13ClIO (M-(OH))<+>: m/z = 323.0; Nađeno: 322.9.

Korak 2.1-[1-(5-Hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amin

11

[0479] Željeno jedinjenje je dobijeno prema postupku iz Primera 212, Korak 5, upotrebom 1-(5-Hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etanola (96:4 smeša iz Koraka 1) umesto terc-butil 3-[3-hloro-2-cijano-6-etoksi-5-(1-hidroksietil)fenil]azetidin-1-karboksilata kao polaznog materijala u 32% prinosu kao jedan enantiomer (signal 1 poželjan, vreme retencije = 3.39 min; ChiralPak IA kolona, 20 x 250 mm, veličina čestice 5 mikrona, eluiranje sa 3% etanolom u heksanima na 18 ml/min). LCMS za C17H20ClIN5O (M+H)<+>: m/z = 472.0; Nađeno: 472.0.

Korak 3. Metil (2E)-3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil} akrilat

[0480] Suspenzija 1-[1-(5-hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etil]-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (signal 1 jedan izomer iz koraka 2) (0.61 g, 1.3 mmol) u acetonitrilu (7.4 mL) u zatvorenoj cevi je degasiran sa azotom i tretiran sa trifenilfosfinom (0.048 g, 0.18 mmol), metil akrilatom (0.41 mL, 4.5 mmol), i paladijum acetatom (0.029 g, 0.13 mmol) zatim sa trietilaminom (0.54 mL, 3.9 mmol) i zagrejan je na 100 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, proceđena, i čvrste supstance su isprane sa acetonitrilom. Filtat je koncentrovan do ostatka. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata (koji sadrži 3% metanol) u heksanima (0% - 100%) da se dobije željeni proizvod (0.40 g, 72%). LCMS za C21H25ClN5O3(M+H)<+>: m/z = 430.2; Nađeno: 430.2.

Korak 4. Diastereoizomeri metil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-4-nitrobutanoata

[0481] Rastvor metil (2E)-3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}akrilata (0.40 g, 0.93 mmol) u nitrometanu (6.3 mL) je tretiran sa 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en (0.14 mL, 0.93 mmol) u mešanje na 90 °C tokom 22 h. Reakciona smeša je koncentrovana, razblažena je sa metanolom, i prečišćena preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila u vodi sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom, na brzini protoka od 60 mL/min). Frakcije LCMS su koncentrovane da se ukloni acetonitril, tretirano sa čvrstim natrijum bikarbonatom, i ekstrahovane sa etil acetatom. Etil acetat je koncentrovan da se dobije željeni proizvod (0.22 g, 48%) kao smeša diastereoizomera. LCMS za C22H28ClN6O5(M+H)<+>: m/z = 491.2; Nađeno: 491.2.

Korak 5. Diastereoisomers of 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-yl)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}pyrrolidin-2-on

[0482] Rastvor metil 3-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-metilfenil}-4-nitrobutanoata (0.089 g, 0.18 mmol) u metanolu (1.3 mL) je tretiran sa nikl hlorid heksahidratom (0.087 g, 0.36 mmol) i mešan je 5 min. Reakciona smeša je ohlađena do 0 °C, tretirana sa natrijum tetrahidroboratom (0.073 g, 1.9 mmol) u četiri porcije, i mešana je na sobnoj tempraturi 30 min. Reakciona smeša je zagrejana na 60 °C 1.5 h, ohlađena do sobne temperature, razblažena sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (10 mL) i dihlorometana (25 mL), i proceđena je kroz Celit. Celit je ispran sa dihlorometanom i ostatak od ceđenja je prenet u levak za odvajanje. Organski sloj je razdvojen, ispran sa slanim rastvorom, osšen je preko natrijum sulfata, proceđen, i koncentrovan je do ostatka. Sirovi ostatak je razblažen sa metanolom i prečišćen je preparativnim LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni signal 1 diastereoizomera (16 mg, 21%) i signal 2 diastereoizomera (19 mg, 24%). Signal 1 (jedinjenje 310):<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.10 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.21 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 4.38 - 4.22 (m, 1H), 3.93 - 3.80 (m, 1H), 3.79 - 3.67 (m, 1H), 3.65 - 3.55 (m, 1H), 3.28 - 3.20 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.29 (dd, J = 17.5, 8.3 Hz, 1H), 2.21 (s, 3H), 1.70 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.40 (t, J = 6.9 Hz, 3H). LCMS za C21H26ClN6O2(M+H)+: m/z = 429.2; Nađeno:

11

429.2. Signal 2 (jedinjenje 311):<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.20 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 4.38 - 4.22 (m, 1H), 3.90 - 3.68 (m, 2H), 3.65 - 3.56 (m, 1H), 3.28 - 3.17 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.32 (dd, J = 17.3, 8.5 Hz, 1H), 2.21 (s, 3H), 1.69 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.39 (t, J = 6.9 Hz, 3H). LCMS za C21H26ClN6O2 (M+H)<+>: m/z = 429.2; Nađeno: 429.2.

Primer 323. 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(2-okso-1,3-oksazolidin-5-il)benzonitril

[0483]

Korak

[0484] Smeša 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-jodobenzonitrila (1.3 g, 3.6 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioksaborolana (740 µL, 4.3 mmol), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleksa sa dihlorometanom (1:1) (100 mg, 0.20 mmol) i kalijum karbonatom (1.5 g, 11 mmol) u 1,4-dioksanu (20 mL) i vodi (10 mL) je zagrejana na 80 °C preko noći. Smeša je ohlađena do sobne temperature i ekstrahovana je sa etil acetatom. Ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom, osušeni su preko natrijum sulfata, proceđeni i koncentrovani. Prečišavanje na gelu od silike korišćenjem etil acetata u heksanima (0-20%) dalo je željeno jedinjenje, 780 mg, 87%. LCMS izračunato za C13H13ClNO2(M+H)<+>: m/z = 250.1; nađeno: 250.1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.78 (s, 1 H), 6.83 (m, 1 H), 6.10 (m, 1 H), 5.83 (m, 1 H), 3.84 (m, 2 H), 2.58 (s, 3 H), 1.22 (m, 3 H).

Korak 2. terc-butil [2-(3-acetil-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil)-2-hidroksietil]karbamat

[0485] 0.2 M Osmijum tetraoksid u vodi (0.5 mL) je dodat u rastvor terc-butil [(4-hlorobenzoil)oksi]karbamata (Ref. Lawrence Harris, J. Org.Chem, 2011, 76, 358-372). (0.91 g, 3.3 mmol) u acetonitrilu (10 mL) i mešan je 10 minuta.4-Acetil-6-hloro-3-etoksi-2-vinilbenzonitril (0.56 g, 2.2 mmol) kao rastvor u acetonitrilu (10 mL) je dodat u rastvor karbamata nakon čega se dodaje voda (2 mL) i reakcija je mešana 3 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena sa zasićenim 10 M dikalijum disulfitom u vodi (12 mL) i mešana je 5 minuta. Dodata je voda i reakciona smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Ekstrakti su isprani sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, slanim rastvorom i osušeni su preko natrijum sulfata, proceđeni i upareni. Prečišćavanje na gelu od silike korišćenjem etila acetata u heksanu (0-100%) dalo je željeno jedinjenje kao racemsku smešu, 610 mg, 72%. LCMS izračunato za C18H24ClN2O5(M+H)<+>: m/z = 383.1; nađeno: 383.1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.62 (s, 1 H), 7.03 (br s, 1 H), 5.68 (br s, 1 H), 3.96 (m, 1 H), 3.69 (m, 1 H), 3.31 (m, 1 H), 3.19 (m, 1 H), 2.60 (s, 3 H), 1.30 (m, 12 H).

Korak 3.4-Acetil-6-hloro-3-etoksi-2-(2-okso-1,3-oksazolidin-5-il)benzonitril

11

[0486] terc-butil [2-(3-acetil-5-hloro-6-cijano-2-etoksifenil)-2-hidroksietil]karbamat (290 mg, 0.76 mmol) (racemska smeša iz Koraka 2) je tretiran sa 4.0 M hlorovodonikom u 1,4-dioksanu (6.1 mL) 15 minuta i smeša je uparena. Ostatak je razblažen u tetrahidrofuranu (2.3 mL) i dodati su N,N-diizopropiletilamin (0.66 mL, 3.8 mmol). N,N-karbonildiimidazol (250 mg, 1.5 mmol) i reakciona smeša je mešana na refluksu na 70 °C preko noći. Reakciona smeša je uparena. Prečišćavanje na gelu od silike korišćenjem etil acetata u heksanu (0-100%) dalo je željeno jedinjenje kao racemsku smešu, 110 mg, 47%. LCMS izračunato za C14H14ClN2O4(M+H)<+>: m/z = 309.1; nađeno: 309.1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.00 (br s, 1 H), 7.93 (s, 1 H), 5.99 (m, 1 H), 3.89 (m, 1 H), 3.81 (m, 2 H), 3.52 (m, 1 H), 2.58 (s, 3 H), 1.23 (m, 3 H).

Korak 4.6-Hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-(2-okso-1,3-oksazolidin-5-il)benzonitril

[0487] Natrijum tetrahidroborat (19 mg, 0.50 mmol) je dodat u smešu 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-(2-okso-1,3-oksazolidin-5-il)benzonitrila (100 mg, 0.34 mmol) (racemska smeša iz Koraka 3) u metanolu (1.6 mL, 38 mmol) na 0 °C i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 10 minuta zatim je uparena. Ostatak je razblažen sa etil acetatom, ispran sa 1 N HCl, slanim rastvorom, osušen je preko natrijum sulfata, proceđen i koncentrovan da se dobije željeno jedinjenje kao smeša četiri diastereoizomera, 58 mg, 55%. LCMS izračunato za C14H16ClN2O4(M+H)<+>: m/z = 311.1; nađeno: 311.1. Korak 5.6-Hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-(2-okso-1,3-oksazolidin-5-il)benzonitril

[0488] U smešu 6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-(2-okso-1,3-oksazolidin-5-il)benzonitrila (58 mg, 0.19 mmol) (smeša četiri diastereoizomera iz koraka 4), dodat je N,N-dimetilformamid (36 µL) u metilen hloridu (1 mL), tionil hloridu (40. µL, 0.56 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 20 minuta Smeša je razblažena sa metilen hloridom, isprana je sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, vodom, slanim rastvorom, osušena je preko natrijum sulfata, proceđena je i koncentrovana da se dobije željeno jedinjenje kao smeša četiri diastereoizomera, 55 mg, 91%. LCMS izračunato za C14H15Cl2N2O3(M+H)<+>: m/z = 329.0; nađeno: 329.1.

Korak 6. 4-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(2-okso-1,3-oksazolidin-5-il)benzonitril

[0489] Cezijum karbonat (0.11 g, 0.34 mmol) je dodat u smešu 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.20 mmol) (smeša četiri diastereoizomera iz koraka 5) u N,N-dimetilformamidu (0.91 mL) i mešana je 10 minuta. U smešu je dodat 6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-(2-okso-1,3-oksazolidin-5-il)benzonitril (56 mg, 0.17 mmol) u N,N-dimetilformamidu (1.0 mL) i reakcija je mešana na 90 °C tokom 1 h. Prečišćavanje preparativnom LCMS (pH 10) upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) dalo je željena jedinjenja kao signal 1 (racemska smeša dva diastereoizomera) LCMS izračunato za C20H21ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 442.1; nađeno: 442.1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.17 (s, 1 H), 8.00 (br s, 1 H), 7.79 (s, 1 H), 6.25 (m, 1 H), 5.92 (m, 1 H), 3.90 (m, 3 H), 3.57 (m, 1 H), 2.58 (s, 3 H), 1.75 (m, 3 H), 1.40 (m, 3 H); Signal 2 (racemska smeša 2 diastereoizomera): LCMS izračunato za C20H21ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 442.1; nađeno: 442.1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.12 (s, 1 H), 8.00 (br s, 1 H), 7.71 (s, 1 H), 6.23 (m, 1 H), 5.96 (m, 1 H), 3.85 (m, 3 H), 3.58 (m, 1 H), 2.58 (s, 3 H), 1.75 (m, 3 H), 1.40 (m, 3 H).

[0490] Hiralno prečišćavanje Signala 2 (racemska smeša dva diastereoizomera) na Phenomenex Lux Celuloza-1, 21.2 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona na 18 mL/min upotrebom 20% etanola u heksanima je dalo Signal 3 i Signal 4. Signal 3, vreme retencije = 12.22 minuta (jedan enantiomer): LCMS izračunato za C20H21ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 442.1; nađeno: 442.1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.12 (s, 1 H), 7.98 (br s, 1 H), 7.71 (s, 1 H), 6.23 (m, 1 H), 5.96 (m, 1 H), 3.85 (m, 3 H), 3.58 (m, 1 H),

11

2.58 (s, 3 H), 1.75 (m, 3 H), 1.40 (m, 3 H). Signal 4, vreme retencije = 16.25 minuta (jedan enantiomer). LCMS izračunato za C20H21ClN7O3(M+H)<+>: m/z = 442.1; nađeno: 442.1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.12 (s, 1 H), 7.98 (br s, 1 H), 7.71 (s, 1 H), 6.23 (m, 1 H), 5.96 (m, 1 H), 3.85 (m, 3 H), 3.58 (m, 1 H), 2.58 (s, 3 H), 1.75 (m, 3 H), 1.40 (m, 3 H).

Primer 324. 6-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}morfolin-3-on

[0491]

Korak 1.1-(5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-vinilfenil)etanon

[0492] Smeša 1-(3-bromo-5-hloro-2-metoksi-4-metilfenil)etanon (2.6 g, 9.5 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioksaborolana (1.9 mL, 11 mmol), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladium(II), kompleks sa dihlorometanom (1:1) (400 mg, 0.5 mmol) i kalijum karbonatom (4.0 g, 29 mmol) u 1,4-dioksanu (60 mL), i vodi (30 mL). Dobijena smeša je zagrejana na 80 °C tokom 3 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature i ekstrahovana je sa etil acetatom. Prečišćavanje na gelu od silike korišćenjem etil acetata u heksanima (0-20%) dalo je željeno jedinjenje, 2.0 g, 94%. LCMS izračunato za C12H14ClO2(M+H)<+>: m/z = 225.1; nađeno: 225.1.

Korak 2. terc-butil [2-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-2-hidroksietil]karbamat

[0493] 0.2 M Osmijum tetraoksid u vodi (1 mL) je dodat u rastvor terc-butil [(4-hlorobenzoil)oksi]karbamata (2.0 g, 7.2 mmol) (Ref. Lawrence Harris, J. Org.Chem, 2011, 76, 358-372) u acetonitrilu (22 mL) i mešan je 10 minuta. 1-(5-Hloro-2-metoksi-4-metil-3-vinilfenil)etanon (1.1 g, 4.8 mmol) kao rastvor u acetonitrilu (22 mL) je dodat u rastvor karbamata zatim sledi dodavanje vode (5 mL). Reakcija je mešana 3 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena sa zasićenim 10 M dikalijum disulfitom u vodi (25 mL) i mešana je 5 minuta. U reakciju je dodata voda i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Organski ekstrakti su isprani sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, slanim rastvorom, osušeni su preko natrijum sulfata i upareni su pod redukovanim pritiskom. Prečišćavanje na gelu od silike upotrebom etil acetata u heksanu (0-100%) dalo je željeno jedinjenje kao racemsku smešu, 1.2 g, 69%. LCMS izračunato za C17H24ClNO5Na (M+Na)<+>: m/z = 380.1; nađeno: 380.1.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.48 (s, 1 H), 6.80 (m, 1 H), 5.50 (br s, 1 H), 5.20 (br s, 1 H), 3.83 (s, 3 H), 3.32 (m, 1 H), 3.22 (m, 1 H), 2.59 (s, 3 H), 2.55 (s, 3 H), 1.32 (s, 9 H).

Hiralno prečišćavanje na ChiralPak AD-H, 20 x 250 mm (Chiral Technologies), veličina čestica 5 mikrona, na brzini protoka od 18 mL/min upotrebom 8% etanola u heksanima je dalo Signal 1 (jedan enantiomer) (vreme retencije = 9.86 minuta) i Signal 2 (jedan enantiomer) (vreme retencije = 11.47 minuta).

Korak 3. N-[2-(3-Acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-2-hidroksietil]-2-hloroacetamid

12

[0494] terc-butil [2-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-2-hidroksietil]karbamat (170 mg, 0.47 mmol) (signal 1 iz koraka 2) je tretiran sa 4.0 M hlorovodonikom u 1,4-dioksanu (12 mL) 15 minuta. Rastvarači su upareni, dodaju se metilen hlorid (6 mL) i trietilamin (200 µL, 1.4 mmol) i smeša je ohlađena do 0 °C. Hloroacetil hlorid (45 µL, 0.56 mmol) je dodat polako i mešan je 10 minuta na 0 °C. Rastvarači su upareni do isušivanja. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Kombinovani ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom, osušeni su preko natrijum sulfata, i koncentrovani su da se dobije sirovi ostatak kao jedan enantiomer. LCMS izračunato za C14H17Cl2NO4Na (M+Na)<+>: m/z = 356.1; nađeno: 356.1.

Korak 4.6-(3-Acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)morfolin-3-on

[0495] U rastvor N-[2-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-2-hidroksietil]-2-hloroacetamida (170 mg, 0.50 mmol) (jedan enantiomer iz koraka 3) u tetrahidrofuranu (4 mL) ohlađenom na 0 °C, dodata je smeša natrijum hidrida (60% disperzija u mineralnom ulju; 39 mg, 1.0 mmol) i mešana je 1 h. Reakcija je ugašena sa vodom i ekstrahovana je sa etil acetatom. Kombinovani ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom, osušeni su preko natrijum sulfata, i koncentrovani su da se dobije sirovi ostatak kao jedan enantiomer, 61 mg, 41%. LCMS izračunato za C14H17ClNO4(M+H)+: m/z = 298.1; nađeno: 298.1. Korak 5.6-[3-Hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]morfolin-3-on

[0496] U rastvor 6-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)morfolin-3-ona (27 mg, 0.090 mmol) (jedan enantiomer iz koraka 4) u metanolu (2 mL) je dodat natrijum tetrahidroborat (6.8 mg, 0.18 mmol) na 0 °C uz mešanje 1 h. Prečišćavanje preparativnom LCMS (pH 10) je dalo željeno jedinjenje kao racemsku smešu dva diastereoizomera, 20 mg, 76%. LCMS izračunato za C14H17ClNO3(M-OH)+: m/z = 282.1; nađeno: 282.1.

Korak 6.6-[3-Hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]morfolin-3-on

[0497] Smeša tionil hlorida (15 µL, 0.21 mmol) i N,N-dimetilformamida (10.0 µL) je mešana na sobnoj temperaturi 10 minuta. Rastvor 6-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]morfolin-3-ona (19.0 mg, 0.0634 mmol) (racemska smeša dva diastereoizomera iz koraka 5) u metilen hloridu (1.0 mL) je dodata i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa metilen hloridom, isprana je sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, vodom, slanim rastvorom, i osušena je preko natrijum sulfata, proceđena i koncentrovana da se dobije željeni proizvod kao racemska smeša dva diastereoizomera, 19 mg, 94%. LCMS izračunato za C14H17ClNO3(M-Cl)<+>: m/z = 282.1; nađeno: 282.1.

Korak 7. 6-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}morfolin-3-on

[0498] Smeša 6-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]morfolin-3-ona (19.0 mg, 0.0597 mmol) (racemska smeša dva diastereoizomera iz koraka 6) 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (11 mg, 0.072 mmol), cezijum karbonata (29 mg, 0.090 mmol) i kalijum jodida (0.99 mg, 0.006 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0.19 mL) je zagrejana na 140 °C tokom 1 h. Smeša je razblažena sa etrom, isprana sa vodom, koncentrovana i prečišćena preparativnom LCMS (pH 10) upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije 2.5 mg, 10% signala 1 (jedan enantiomer, vreme retencije 10.15 min): LCMS izračunato za C20H24ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 431.2; nađeno: 431.1, i 2.7 mg, 10% signala 2 (jedan enantiomer, vreme retencije 10.76 min): LCMS izračunato za C20H24ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 431.2; nađeno: 431.1.

Primer 325. 5-{3-[1-(4-Amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-1,3-oksazolidin-2-on

[0499]

Korak 1.5-(3-Acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-1,3-oksazolidin-2-on

[0500] U rastvor terc-butil [2-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-2-hidroksietil]karbamata (140 mg, 0.40 mmol) (Signal 1, jedan enantiomer iz koraka 2, primer 324) u tetrahidrofuranu (2.5 mL), N,N-diizopropiletilaminu (0.35 mL, 2.0 mmol) i N,N-karbonildiimidazolu (130 mg, 0.80 mmol). Reakcija je bila na refluksu na 70 °C 10 minuta. Reakcija je uparena do isušivanja. Prečišćavanje na gelu od silike upotrebom (0-50%) etil acetata u heksanima je dalo 78 mg željenog jedinjenja kao jedan enantiomer, 69%. LCMS izračunato za C13H15ClNO4(M+H)<+>: m/z = 284.1; nađeno: 284.1.

Korak 2.5-[3-Hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]-1,3-oksazolidin-2-on

[0501] U rastvor 5-(3-acetil-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil)-1,3-oksazolidin-2-ona (21 mg, 0.072 mmol) (jedan enantiomer iz Koraka 1) u metanolu (1 mL) je dodat natrijum tetrahidroborat (5.5 mg, 0.14 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h. Razblažena je sa metanolom i prečišćena je sa preparativnom LCMS upotrebom pH 10 pufera da se dobije željeno jedinjenje kao racemska smeša dva stereoizomera, 17 mg, 83%. LCMS izračunato za C13H15ClNO3(M-OH)<+>: m/z = 268.1; nađeno: 268.1. Korak 3.5-[3-Hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]-1,3-oksazolidin-2-on

[0502] Smeša cijanurinskog hlorida (16 mg, 0.084 mmol) i N,N-dimetilformamida (15 µL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta. Rastvor 5-[3-hloro-5-(1-hidroksietil)-6-metoksi-2-metilfenil]-1,3-oksazolidin-2-ona (16 mg, 0.056 mmol) (racemska smeša dva diastereoizomera iz Koraka 2) u metilen hloridu (0.3 mL) je dodata i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodat je tionil hlorid (12 µL, 0.17 mmol) i mešanje je nastavljeno 10 min. Smeša je razblažena sa metilen hloridom, isprana je sa zasićenim natrijum bikarbonatom, vodom, slanim rastvorom, osušena je preko natrijum sulfata, proceđena i koncentrovana da se dobije željeno jedinjenje kao racemska smeša dva diastereoizomera, 17 mg, 100%. LCMS izračunato za C13H16Cl2NO3(M+H)<+>: m/z = 304.0; nađeno: 304.1. Korak 4. 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-metoksi-6-metilfenil}-1,3-oksazolidin-2-on

[0503] Smeša 5-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-metoksi-2-metilfenil]-1,3-oksazolidin-2-ona (17 mg, 0.056 mmol) (racemska smeša dva diastereoizomera iz Koraka 3) 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (10 mg, 0.067 mmol), cezijum karbonata (27 mg, 0.084 mmol) i kalijum jodida (0.93 mg, 0.0056 mmol) u N,N-dimetilformamidu (0.18 mL) je zagrejana na 140 °C tokom 1 h. Smeša je razblažena sa etrom, isprana je sa vodom, koncentrovana i prečišćena sa preparativnom LCMS (pH 10) da se dobije željeno jedinjenje kao racemska smeša dva diastereoizomera, 2.2 mg, 9%; LCMS izračunato za C19H22ClN6O3(M+H)<+>: m/z = 417.1; nađeno: 417.1.

Primeri 345-348. Diastereoizomeri 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}pirolidin-2-ona

[0504]

Korak 1.1-(5-Hloro-2-etoksi-3-jodo-4-metilfenil)etanol

[0505]

[0506] Rastvor 1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)etanona (20.0 g, 58.4 mmol; Primer 212, Korak 1) i 1,2-etandiola (6.5 mL, 120 mmol) u toluenu (190 mL) je tretiran sa monohidratom ptoluenesulfonskom kiselinom (1.1 g, 5.8 mmol). Balon je opremljen sa Dean-Stark zamkom koja je bila ispunjena sa sitima, i 3 h je bio na refluksu. Reakciona smeša je ohlađena i dodata je u zasićeni rastvor natrijum bikarbonata koji je ohlađen na ledu (250 mL) i ekstrahovana je sa etil acetom. Organski sloj je ispran sa slanim rastvorom, osušen je preko natrijum sulfata, proceđen, i koncentrovan je do sirovog narandžastog ulja. Sirovi materijal je prečišćen sa fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (0% - 20%) da se dobije željeni proizvod (22 g, 99%). LCMS za C12H14ClFIO3(M+H)<+>: m/z = 387.0; Nađeno: 386.9.

Korak 2. Etil (2E)-3-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)fenil]akrilat

[0507]

12

[0508] Smeša 2-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)-2-metil-1,3-dioksolana (22 g, 58 mmol) (iz Koraka 1), etil (2E)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)akrilata (16 mL, 70 mmol), i kalijum karbonata (24 g, 170 mmol) u 1,4-dioksanu (230 mL) i vodi (110 mL) je degasirana sa azotom tokom 10 min. Reakciona smeša je tretirana sa [1,1’-bis (difenilfosfino\)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleksom sa dihlorometanom (1:1) (2.4 g, 2.9 mmol), degasirana je sa azotom dodatnih 10 min, i zagrejana je na 80 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je proceđena kroz Celite i isprana je sa etil acetatom (300 mL). Ostatak nakon ceđenja je sipan u vodu (400 mL). Vodeni sloj je razdvojen i ekstrahovan je sa dodatnim etil acetatom (300 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom, osušeni preko natrijum sulfata, proceđeni, i koncentrovani do čvrste supstance braon boje. Sirovi materijal je prečišćen sa fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (0% -30%) da se dobije željeni proizvod (20 g, 96%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.74 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.70 (dd, J = 16.5, 0.9 Hz, 1H), 4.26 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.10 - 3.99 (m, 2H), 3.91 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.87 - 3.76 (m, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.44 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.33 (t, J = 7.1 Hz, 3H). LCMS za C17H21ClFO5(M+H)<+>: m/z = 359.1; Nađeno: 359.1.

Korak 3. Etil 3-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)fenil]-4-nitrobutanoat [0509]

[0510] Rastvor etil (2E)-3-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il\)fenil]akrilata (10 g, 28 mmol) (iz Koraka 2) u nitrometanu (100 mL) je tretiran sa 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en (4.6 mL, 31 mmol) i mešana je na 60 °C tokom 15 h. Reakciona smeša je sipana u vodu (400 mL) i ekstrahovana je sa etil acetatom (2 x 300 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom, osušeni preko natrijum sulfata, proceđeni, i koncentrovani do sirovog narandžastog ulja. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etil acetata u heksanima (0% -30%) da se dobije željeni proizvod kao smeša enantiomera (10.4 g, 89%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.52 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.82 (ddd, J = 12.5, 7.6, 1.4 Hz, 1H), 4.68 (dd, J = 12.5, 7.2 Hz, 1H), 4.54 - 4.40 (m, 1H), 4.15 - 3.90 (m, 6H), 3.89 - 3.75 (m, 2H), 2.85 (ddd, J = 16.0, 8.6, 1.4 Hz, 1H), 2.73 (dd, J = 16.1, 6.2 Hz, 1H), 1.70 (s, 3H), 1.47 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.21 (t, J = 7.1 Hz, 3H). LCMS za C18H24ClFNO7(M+H)+: m/z = 420.1; Nađeno: 420.1.

Korak 4. Enantiomeri 4-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)fenil]pirolidin-2-on [0511]

[0512] Suspenzija etil 3-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)fenil]-4-nitrobutanoata (1.0 g, 2.4 mmol) (iz Koraka 3) u etanolu (16 mL) je zagrejana da bi se rastvorila čvrsta supstanca. Rastvor je ponovo ohlađen do sobne temperature, degasiran je sa azotom, i tretiran je sa smešom 2800 Raney Nickel u vodi (1.5 mL). Reakciona smeša je ponovo degasirana sa azotom i hidrogenizovana je sa balonom vodonika tokom 3 h. Reakciona smeša je proceđena kroz Celite i koncenrtovana je da se dobije intermedijer amino estra (0.93 g, 100%). Intermedijer amino estra je rastvoren u toluenu (12 mL) i zagrejan je na 110 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, do tačke kada se čvrsta supstanca istaložila iz rastvora. Ova smeša je ohlađena do 0 °C, mešana je tokom 30 min, proceđena, isprana je sa hladnim toluenom, i osušena da se dobije željeni proizvod kao smeša enantiomera (0.61 g, 75%). LCMS za C16H20ClFNO4(M+H)<+>: m/z = 344.1; Nađeno: 344.1. Smeša enantiomera je razdvojena hiralnom HPLC da se dobiju individualni enantiomeri kao Signal 1 i Signal 2 (RT = 5.39 min i 7.01 min, redom; Phenomenex Lux Celuloza C-1, 21.2 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranjem sa 20% etanolom u heksanima na 18 mL/min).

Korak 5. Enantiomeri 4-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona

[0513]

[0514] Razdvojeni enantiomeri iz Koraka 4 su svaki individualno obrađeni do krajnjih jedinjenja. Rastvor 4-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)fenil]pirolidin-2-ona (1.7 g, 5.0 mmol) (iz Koraka 4) u metanolu (17 mL) je tretiran u kapima sa 6.0 M hlorovodonikom u vodi (11 mL, 69 mmol) i mešan je na 20 °C tokom 30 min. Reakciona smeša se u kapima dodaje u zasićeni rastvor natrijum karbonata koji je ohlađen na ledu (75 ml) i ekstrahovan je sa etil acetatom (2 x 100 ml). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom, osušeni preko natrijum sulfata, proceđeni, i koncentrovani da se dobiju željeni proizvodi [iz signala 1 (1.5 g, 99%); iz signala 2 (1.5 g, 99%)] koji su korišćeni bez daljeg prečišćavanja. Iz signala 1:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.84 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.16 - 3.99 (m, 1H), 3.83 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.65 - 3.54 (m, 1H), 3.30 - 3.23 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.33 (dd, J = 16.8, 8.4 Hz, 1H), 1.30 (t, J = 7.0 Hz, 3H). LCMS za C14H16ClFNO3(M+H)<+>: m/z = 300.1; Nađeno: 300.0. Iz signala 2:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.84 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.13 - 4.00 (m, 1H), 3.87 - 3.77 (m, 2H), 3.65 - 3.55 (m, 1H), 3.31 - 3.23 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.32 (ddd, J = 16.9, 8.4, 1.6 Hz, 1H), 1.30 (t, J = 7.0 Hz, 3H). LCMS za C14H16ClFNO3(M+H)<+>: m/z = 300.1; Nađeno: 300.1.

Korak 6. Diastereoizomeri 4-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(1-hidroksietil)fenil]pirolidin-2-ona

12

[0516] Enantiomeri iz Koraka 5 su svaki individualno obrađeni do krajnjih jedinjenja. Rastvor 4-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona (0.402 g, 1.34 mmol) (iz Koraka 5) u anhidrovanom metanolu (6.7 mL) pod atmosferom azota na 0 °C je tretiran sa natrijum tetrahidroboratom (0.10 g, 2.7 mmol) i mešan je na 0° C tokom 30 min. Rekciona smeša je ugašena sa vodom na 0 °C i sipana je u vodu (50 mL)/etil acetatu (100 mL) dok traje mešanje. Smeša je zagrejana do sobne temperature i vodeni sloj je razdvojen i ekstrahovan je sa dodatnim etil acetatom (50 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom, osušeni su preko natrijum sulfata, proceđeni, i koncentrovani su da se dobiju bele pene. Sirovi materijali su prečišćeni fleš hromatografijom na koloni upotrebom acetonitrila (koji sadrži 7% metanol) u dihlorometanu (0% - 100%) da se dobiju željeni proizvodi kao smeše dijastereoizomera [iz signala 1 (0.40 g, 99%); iz signala 2 (0.40 g, 99%)]. Iz signala 1: LCMS za C14H18ClFNO3(M+H)<+>: m/z = 302.1; Nađeno: 302.0. Iz signala 2: LCMS za C14H18ClFNO3(M+H)<+>: m/z = 302.1; Nađeno: 302.1.

Korak 7. Diastereoizomeri 4-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-fluorofenil]pirolidin-2-ona

[0517]

[0518] Smeša diastereoizomera iz Koraka 6 su svaki individualno obrađeni do konačnih proizvoda. Rastvor 4-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(1-hidroksietil)fenil]pirolidin-2-ona (0.41 g, 1.4 mmol) (iz Koraka 6) u metilen hlorid (12 mL) je tretiran sa N,N-dimetilformamidom (0.011 mL, 0.14 mmol) nakon čega je tretirana u kapima sa tionil hloridom (0.21 mL, 2.9 mmol) i mešana je na 20 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je dodata u kapima u zasićeni rastvor natrijum karbonata koji je ohlađen na ledu i ekstrahovana je sa dihlorometanom. Organski sloj je razdvojen i ispran je sa slanim rastvorom, osušen je preko natrijum sulfata, proceđen, i koncentrovan je da se dobiju željeni proizvodi [iz signala 1 (0.38 g, 87%); iz signala 2 (0.39 g, 89%)] zajedno za 17-18% stirenom koji se obrazuje iz eliminacije hlorida. Ove smeše su korišćene bez daljeg prečišćavanja. Iz signala 1: LCMS za C14H17Cl2FNO2(M+H)<+>: m/z = 320.1; Nađeno: 320.0. Iz signala 2: LCMS za C14H17Cl2FNO2(M+H)<+>: m/z = 320.1; Nađeno: 320.0.

Korak 8. Diastereoizomeri 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}pirolidin-2-ona

12

[0520] Smeša diastereoizomera iz Koraka 7 su svaki individualno obrađeni do konačnih proizvoda. Smeša 4-[3-hloro-5-(1-hloroetil)-6-etoksi-2-fluorofenil]pirolidin-2-ona (0.36 g, 1.1 mmol) (from Korak 7), 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (0.19 g, 1.3 mmol), cezijum karbonata (0.54 g, 1.7 mmol) i kalijum jodida (18 mg, 0.11 mmol) u N,N-dimetilformamidu (7.4 mL) je zagrejana na 100 °C tokom 4.5 h. Reakciona smeša je sipana u vodu (30 ml) i ekstrahovana je sa etil acetatom (3 x 50 mL) da se dobije smeša diastereoizomera ((S)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona; (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona; (S)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona; i (R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil) pirolidin-2-ona). Smeša diastereoizomera je prečišćena sa preparativnom LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koja sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobiju željeni proizvodi [iz signala 1 su izolovani signal A (jedinjenje 345) (0.13 g, 54%) i signal B (jedinjenje 346) (0.11 g, 46%); iz signala 2 su izolovani signal A (jedinjenje 347) (0.15 g, 63%) i signal B (jedinjenje 348) (0.14 g, 55%)]. Jedinjenje 346:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.52 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.30 (br s, 1H), 6.23 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.05 - 3.90 (m, 1H), 3.88 - 3.78 (m, 2H), 3.63 - 3.53 (m, 1H), 3.29 - 3.20 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.38 - 2.21 (m, 1H), 1.70 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.39 (t, J = 6.9 Hz, 3H). LCMS za C20H23ClFN6O2(M+H)<+>: m/z = 433.2; Nađeno: 433.1. Jedinjenje 347:<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.53 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.26 (br s, 2H), 6.24 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.04 - 3.94 (m, 1H), 3.93 - 3.85 (m, 1H), 3.84 - 3.77 (m, 1H), 3.61 - 3.53 (m, 1H), 3.27 -3.22 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.30 (dd, J = 18.1, 8.6 Hz, 1H), 1.71 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.40 (t, J = 6.9 Hz, 3H). LCMS za C20H23ClFN6O2(M+H)<+>: m/z = 433.2; Nađeno: 433.1.

Primeri 349-352. Diastereoizomeri 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(5-oksopirolidin-3-il)benzonitrila

[0521]

12

Korak 1. Enantiomeri 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-(5-oksopirolidin-3-il)benzonitrila

[0522]

[0523] Racemska smeša 4-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona (0.20 g, 0.67 mmol) (iz Primera 345, Korak 5) i natrijum cijanida (0.057 g, 1.2 mmol) u dimetil sulfoksidu (1.5 mL) je mešana na 80 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je sipana u vodu (35 mL) i ekstrahovana je sa etil acetatom (2 x 50 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom, osušeni su preko natrijum sulfata, proceđeni, i koncentrovani su da se dobije sirovi ostatak. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni upotrebom etra (koji sadrži 10% metanom) u heksanima (0% - 100%) da se dobije željeni proizvod (0.15 g, 71%) kao smeša enantiomera. LCMS za C15H16ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 307.1; Nađeno: 307.0. Smeša enantiomera je razdvojena hiralnom HPLC da se dobiju individualni enantiomeri kao signal 1 i signal 2 (RT = 5.00 min i 10.4 min; Phenomenex Lux Celuloza C-2, 21.2 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranjem sa 60% etanolom u heksanima na 18 mL/min).

Korak 2. Diastereoizomeri 6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-(5-oksopirolidin-3-il)benzonitrila [0524]

[0525] Enantiomeri iz Koraka 1 su svaki individualno obrađeni do konačnih proizvoda. Rastvor 4-acetil-6-hloro-3-etoksi-2-(5-oksopirolidin-3-il)benzonitrila (iz signala 1: 0.83 g, 2.7 mmol; iz signala 2: 0.86 g, 2.8 mmol) u anhidovanom metanolu (14 mL) pod atmosferom koja sadrži azot na 0 °C je tretiran sa natrijum tetrahidroboratom (0.20 g, 5.4 mmol) i mešan je na 0° C tokom 30 min. Reakciona smeša je ugašena sa vodom na 0 °C i sipana je u vodu (50 mL)/etil acetat (100 mL) dok se nastavlja sa mešanjem. Smeša je zagrejana do sobne temperature i vodeni sloj je razdvojen i ekstrahovan je sa dodatnim etil acetatom (50 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom, osušeni su preko natrijum sulfata, proceđeni, i koncentrovani su da se dobiju željeni proizvodi kao smeša diastereoizomera [iz signala 1 (0.83 g, 99%); iz signala 2 (0.87 g, 99%)]. Iz signala 1: LCMS za C15H18ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 309.1; Nađeno: 309.1. Iz signala 2: LCMS za C15H18ClN2O3(M+H)<+>: m/z = 309.1; Nađeno: 309.1.

Korak 3. Diastereoizomeri 6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-(5-oksopirolidin-3-il)benzonitrila

12

[0527] Smeša diastereoizomera iz Koraka 2 su svaki individualno obrađeni do konačnih proizvoda. Rastvor 6-hloro-3-etoksi-4-(1-hidroksietil)-2-(5-oksopirolidin-3-il)benzonitrila (iz signala 1: 0.83 g, 2.7 mmol; iz signala 2: 0.87 g, 2.8 mmol) u metilen hloridu (23 mL) je tretiran sa N,N-dimetilformamidom (0.021 mL, 0.27 mmol) nakon čega je u kapima tretiran sa tionil hloridom (0.490 mL, 6.72 mmol) i mešan je na 20 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je u kapima dodata u zasićeni rastvor natrijum karbonata koji je ohlađen na ledu i ekstrahovan je sa dihlorometanom. Organski sloj je razdvojen i ispran je sa slanim rastvorom, osušen je preko natrijum sulfata, proceđen, i koncentrovan je da se dobiju željeni proizvodi kao smeše dijastereoizomera [iz signala 1 (0.85 g, 97%); iz signala 2 (0.90 g, 98%)]. Ove smeše su korišćene bez daljeg prečišćavanja. Iz signala 1: LCMS za C15H17Cl2N2O2(M+H)<+>: m/z = 327.1; Nađeno: 327.1. Iz signala 2: LCMS za C15H17Cl2N2O2(M+H)<+>: m/z = 327.1; Nađeno: 327.1. Korak 4. Diastereoizomeri 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(5-oksopirolidin-3-il)benzonitrila

[0528]

[0529] Smeša diastereoizomera iz koraka 3 su svaki individualno obrađeni. Smeša 6-hloro-4-(1-hloroetil)-3-etoksi-2-(5-oksopirolidin-3-il)benzonitrila (iz signala 1: 0.85 g, 2.6 mmol; iz signala 2: 0.89 g, 2.7 mmol), 3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (0.46 g, 3.1 mmol), cezijum karbonata (1.3 g, 3.9 mmol) i kalijum jodida (43 mg, 0.26 mmol) u N,N-dimetilformamidu (17 mL, 220 mmol) je zagrejana na 90 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je sipana u vodu (100 mL)/etil acetat (100 mL) i proceđena je kroz Celite da se uklone tamne čvrste supstance. Vodeni sloj je razdvojen i ekstrahovan je sa etil acetatom (2 x 100 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom, osušeni su preko natrijum sulfata, proceđeni, i koncentrovani su da se dobiju bele pene. Sirovi materijali su prečišćeni fleš hromatografijom na koloni upotrebom metanola u dihlorometanu (0% -20%) da se dobiju željeni proizvodi kao smeše diastereoizomera [iz signala 1 (0.49 g, 43%); iz signala 2 (0.53 g, 44%)]. Analitička hiralna HPLC analiza diastereoizomera iz signala 1 je otkrila smešu četiri signala umesto željena dva zbog epimerizacije. Analiza diastereoizomera iz signala 2 takođe je otkrila četiri signala. Oba seta smeša su kombinovani i prečišćeni pomoću hiralne HPLC da se dobiju četiri individualna signala (RT = 6.41 min, 8.13 min, 9.93 min, 14.4 min; Phenomenex Lux Celuloza C-2, 21.2 x 250 mm, veličina čestica 5 mikrona, eluiranjem sa 60% etanolom u heksanima na 18 mL/min).

12

Jedinjenja iz signala 1 (jedinjenje 351), signala 2 (jedinjenje 349), signala 3 (jedinjenje 352), i signala 4 (jedinjenje 350) su posle toga ispitani u testovima Primera A3 i B2. Jedinjenje 349:<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.30 (br s, 2H), 6.26 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.32 - 4.20 (m, 1H), 4.00 - 3.91 (m, 1H), 3.90 - 3.81 (m, 1H), 3.65 - 3.59 (m, 1H), 3.49 - 3.42 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 1.74 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.43 (t, J = 6.9 Hz, 3H). LCMS za C21H23ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 440.2; Nađeno: 440.2. Jedinjenje 352:<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.30 (br s, 2H), 6.26 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.32 - 4.19 (m, 1H), 3.97 - 3.82 (m, 2H), 3.67 - 3.59 (m, 1H), 3.49 - 3.40 (m, 1H), 2.59 - 2.52 (m, 3H), 1.73 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.42 (t, J = 6.9 Hz, 3H). LCMS za C21H23ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 440.2; Nađeno: 440.2.

Primeri 353 i 354. Diastereoizomeri 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-ona

[0530]

Korak 1: 1-(5-Hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-vinilfenil)etanon

[0531]

[0532] Smeša 1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-jodofenil)etanona (13.3 g, 38.8 mmol) (iz Primera 139, Korak 1), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioksaborolana (7.9 mL, 46 mmol), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), kompleksa sa dihlorometanom (1:1) (1.0 g, 1.0 mmol) i kalijum karbonatom (16 g, 120 mmol) u 1,4-dioksanu (200 mL) i vodi (100 mL) je zagrejana na 80 °C tokom 2 h. Smeša je ohlađena do st i ekstrahovana je sa etil acetatom. Ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom, osušeni su preko magnezijum sulfata, proceđeni i koncentrovani. Prečišćavanje na silika gelu upotrebom etil acetata u heksanima (0-30%) dalo je željeno jedinjenje, 7.0 g, 74%. LCMS izračunato za C12H13ClFO2(M+H)<+>: m/z = 243.0; nađeno: 243.1.

Korak 2: 1-[5-Hloro-3-(1,2-dihidroksietil)-2-etoksi-4-fluorofenil]etanon

1

[0534] AD-mix-alpha (5.8 g, 7.3 mmol) (Aldrich #392758) je mešan u terc-butil alkohol (21 mL) sa vodom (21 mL) tokom 15 minuta.1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-vinilfenil)etanon (1.0 g, 4.1 mmol) (iz Koraka 1) je dodat i suspenzija je mešana tokom 16 h. Dodat je natrijum sulfit (6.2 g, 49 mmol) i suspenzija je mešana tokom 15 minuta. Reakciona smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom i osušeni su preko natrijum sulfata, proceđeni i upareni. Prečišćavanje na silika gelu upotrebom etil acetata u heksanima (0-80%) dalo je željeno jedinjenje kao racemsku smešu, 900 mg, 80%. Hiralno prečišćavanje na Phenomenex Lux Celuloza C-2, 21.2 x 250 mm (Chiral Technologies), veličina čestica 5 mikrona, na brzini protoka od 18 mL/min upotrebom 20% etanola u heksanima dalo je signal 1 (jedan enantiomer) (retenciono vreme = 7.88 minuta) i signal 2 (jedan enantiomer) (retenciono vreme = 11 minuta); željeni enantiomer je bio signal 2. LCMS izračunato za C12H13ClFO3(M-OH)<+>: m/z = 259.1; nađeno: 259.1.

Korak 3: 1-[3-(2-{[terc-Butil(dimetil)silil]oksi}-1-hidroksietil)-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil]etanon [0535]

[0536] 1-[5-Hloro-3-(1,2-dihidroksietil)-2-etoksi-4-fluorofenil]etanon (700 mg, 2 mmol) (iz Koraka 2, Signal 2) je mešan u 1,2-dihloroetanu (6 mL) sa N,N-diizopropiletilaminom (4.0 mL, 23 mmol) i 1.0 M rastvor terc-Butildimetilsilil hlorida u 1,2-dihloroetanu (7.6 mL) je dodat. Smeša je zagrejana do 80 °C tokom 3 h i ohlađena je do st. Uparavanje i prečišćavanje na silika gelu upotrebom etil acetata u heksanima (0-50%) dalo je željeno jedinjenje 800 mg, 80%. LCMS izračunato za C18H28ClFO4SiNa (M+Na)<+>: m/z = 413.1; nađeno: 413.1.

Korak 4: 1-(3-Acetil-S-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-2-{[terc-Butil(dimetil)silil]oksi}etil metansulfonat [0537]

1 1

[0538] 1-[3-(2-{[terc-Butil(dimetil)silil]oksi}-1-hidroksietil)-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil]etanon (700 mg, 2.0 mmol) (iz Koraka 3) je mešan u 1,2-dihloroetanu (15 mL) sa trietilaminom (2.0 mL, 14 mmol) i metansulfonskim anhidridom (670 mg, 3.8 mmol) na st tokom 1.5 h. Smeša je sipana u slani rastvor i ekstrahovana je sa dihlorometanom. Ekstrakti su osušeni preko natrijum sulfata, proceđeni i upareni da se dobije željeno jedinjenje 830 mg, 100%. LCMS izračunato za C18H27ClFO3Si (M-OMs)<+>: m/z = 373.1; nađeno: 373.1.

Korak 5: 1-[3-(1-Azido-2-{[terc-Butil(dimetil)silil]oksi}etil)-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil]etanon [0539]

[0540] 1-(3-Acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-2-{[terc-Butil(dimetil)silil]oksi}etil metansulfonat (0.83 g, 1.77 mmol) (iz Koraka 4) je mešan u dimetil sulfoksidu (10 mL) i dodat je natrijum azid (0.12 g, 1.8 mmol). Smeša je zagrejana do 50 °C tokom 1 h i ohlađena je do st. Smeša je sipana u slani rastvor i ekstrahovana je sa etil acetatom. Ekstrakti su osušeni preko natrijum sulfata, proceđeni i upareni da se dobije željeno jedinjenje 736 mg, 100%. LCMS izračunato za C18H27ClFN3O3SiNa (M+Na)<+>: m/z = 438.1; nađeno: 438.1.

Korak 6: 1-[3-(1-Amino-2-{[terc-Butil(dimetil)silil]oksi}etil)-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil]etanon [0541]

[0542] 1-[3-(1-Azido-2-{[terc-Butil(dimetil)silil]oksi}etil)-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil]etanon (750 mg, 1.8 mmol) (iz Koraka 5) je mešan u tetrahidrofuranu (10 mL) sa vodom (0.33 mL) i dodat je trifenilfosfin. Smeša je zagrejana do 60 °C tokom 2 h i ohlađena je do st. Dodat je slani rastvor i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Ekstrakti su osušeni preko natrijum sulfata, proceđeni i upareni da se dobije željeno jedinjenje 700 mg, 100 %. LCMS izračunato za C18H30ClFNO3Si (M+H)<+>: m/z = 390.2; nađeno: 390.2.

Korak 7: terc-Butil(1-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-2-{[terc-Butil(dimetil)silil]oksi}etil)karbamat

1 2

[0544] 1-[3-(1-Amino-2-{[terc-Butil(dimetil)silil]oksi}etil)-5-hloro-2-etoksi-4-fluorofenil]etanon (700 mg, 2.0 mmol) (iz Koraka 6) je mešan u tetrahidrofuranu (30 mL) sa di-terc-butildikarbonatom (780 mg, 3.6 mmol) i dodat je N,N-diizopropiletilamin (0.94 mL, 5.4 mmol). Smeša je mešana na st tokom 30 minuta. Dodat je slani rastovor i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Ekstrakti su osušeni preko natrijum sulfata, proceđeni i upareni. Prečišćavanje na silika gelu upotrebom etil acetata u heksanima (0-30%) dalo je željeno jedinjenje 550 mg, 60 %. LCMS izračunato za C23H37ClFNO5SiNa(M+Na)+: m/z = 512.2; nađeno: 512.2.

Korak 8: terc-Butil [1-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-2-hidroksietil]karbamat

[0545]

[0546] Terc-Butil (1-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-2-{[terc-Butil(dimetil)silil]oksi}etil)karbamat (500 mg, 1.0 mmol) (iz Koraka 7) je mešan u tetrahidrofuranu (10 mL) i dodat je 1.0 M rastvor tetra-n-Butilamonijum fluorida u tetrahidrofuranu (1.5 mL). Smeša je mešana na st tokom 30 minuta i uparena je. Prečišćavanje na silika gelu upotrebom etil acetata u heksanima (0-50%) dalo je željeni proizvod 238 mg, 60 %. LCMS izračunato za C17H23ClFNO5Na(M+Na)<+>: m/z = 398.1; nađeno: 398.1.

Korak 9: 4-(3-Acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-1,3-oksazolidin-2-on

[0547]

[0548] terc-Butil [1-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-2-hidroksietil]karbamat (234 mg, 0.62 mmol) (iz Koraka 8) je rastvoren u 1,2-dihloroetanu (12 mL) i dodat je rastvor 2.0 M fozgena u toluenu (0.93 mL). Smeša je zagrejana do 80 °C tokom 1.5 h. Uparavanje i prečišćavanje na silika gelu

1

upotrebom etil acetata u heksanima (0-85%) dalo je željeni proizvod, 175 mg, 93%. LCMS izračunato za C13H14ClFNO4(M+H)<+>: m/z = 302.1; nađeno: 302.1.

Korak 10: 4-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(1-hidroksietil)fenil]-1,3-oksazolidin-2-on

[0549]

[0550] 4-(3-Acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-1,3-oksazolidin-2-on (175 mg, 0.58 mmol) je mešan u metanolu (10 mL) na 0 °C i dodat je natrijum tetrahidroborat (33 mg, 0.87 mmol). Smeša je mešana na st tokom 1 h i uparena je. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom, osušeni su preko natrijum sulfata, proceđeni i upareni da se dobije približna 1:1 smeša diastereoizomera, 175 mg, 99%. LCMS izračunato za C13H15ClFNO4Na (M+Na)<+>: m/z = 326.1; nađeno: 326.1.

Korak 11: 4-[3-hloro-5-(hloroetil)-6-etoksi-2-fluorofenil]-1,3-oksazolidin-2-on

[0551]

[0552] 4-[3-hloro-6-etoksi-2-fluoro-5-(1-hidroksietil)fenil]-1,3-oksazolidin-2-on (150 mg, 0.49 mmol) (from Korak 10) je mešan u dihlorometanu (4 mL) sa N,N-dimetilformamidom (96 mL) i dodat je tionil hlorid (110 µL, 1.5 mmol). Smeša je uparena. Dodata je voda i smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom, osušeni su preko natrijum sulfata, proceđeni i upareni da se dobije željeno jedinjenje, 159 mg, 100%.

Korak 12: 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-1,3-oksazolidin-2-on

[0553]

1 4

[0554] 4-[3-hloro-5-(hloroetil)-6-etoksi-2-fluorofenil]-1,3-oksazolidin-2-on (160 mg, 0.50 mmol) (from Korak 11) je mešan u N,N-dimetilformamidu (21 mL) sa cezijum karbonatom (324 mg, 0.99 mmol) i dodat je 3-metil-1H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-4-amin (89 mg, 0.60 mmol). Smeša je zagrejana do 80 °C tokom 1.5 h i ohlađena je do st. Smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana je sa etil acetatom. Ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom, osušeni su preko natrijum sulfata, proceđeni i upareni. Prečišćavanje preparativnom LCMS (pH 10) upotrebom RP-HPLC (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) razdvojilo je dva diastereoizomera (Signal 1 [jedinjenje 353] Rt = 4.9 min. i signal 2 [jedinjenje 354] Rt = 5.6 min.); obezbeđujući jedinjenje 354 kao poželjni jedan enantiomer, 28 mg, 13%. signal 2: LCMS izračunato za C19H21ClFN6O3(M+H)<+>: m/z = 435.1; nađeno: 435.1.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 8.15 (s, 1 H), 7.62 (m, 1 H), 6.31 (m, 1 H), 5.39 (m, 1 H), 4.79 (m, 1 H), 4.40 (m, 1 H), 3.95 (m, 1 H), 3.80 (m, 1 H), 2.60 (s, 3 H), 1.80 (m, 3 H), 1.40 (m, 3 H).

Primeri 355-358. Diastereoizomeri 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-on

[0555]

Korak 1: terc-Butil [2-(3-acetil-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)-2-hidroksietil]karbamat

[0556]

1

[0557] 0.2 M Osmijum tetraoksid u vodi (10 mL) je dodat u rastvor terc-Butil[(4-hlorobenzoil)oksi]karbamata (Lawrence Harris, J. Org.Chem, 2011, 76, 358-372). (19 g, 70 mmol) u acetonitrilu (210 mL) i mešanje je nastavljeno tokom 10 minuta. 1-(5-hloro-2-etoksi-4-fluoro-3-vinilfenil)etanon (11.2 g, 46 mmol) (iz Primera 353, Korak 1) kao rastvor u acetonitrilu (210 mL) je dodat u rastvor karbamata nakon čega sledi dodavanje vode (50 mL) i reakcija je mešana 3 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena sa zasićenim 10 M dikalijum disulfitom u vodi (240 mL) i mešana je 5 minuta. Dodata je voda i rekaciona smeša je ekstrahovana sa etil acetatom. Ekstrakti su isprani sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, slanim rastvorom i osušeni su preko natrijum sulfata, proceđeni i upareni. Prečišćavanje na silika gelu upotrebom etil acetata u heksanima (0-100%) dalo je željeno jedinjenje kao racemsku smešu, 16.6 g, 95%. LCMS izračunato za C17H23ClFNO5Na (M+Na)+: m/z = 398.1; nađeno: 398.0.

Korak 2: 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-on

[0558]

[0559] Željeni jedan enantiomer (Signal 3) je dobijen upotrebom istog postupka kao za Primer 353 (Koraci 8-12), izuzev intermedijera iz Koraka 1 u ovom Primeru koji je bio racemski i prema tome konačno razdvajanje četiri diastereoizomera se dogodilo u Koraku 12. Hiralno prečišćavanje na Phenomenex Lux Celuloza C-4, 21 x 250 mm (Chiral Technologies), veličina čestica 5 mikrona, na brzini protoka od 18 mL/min upotrebom 30% etanola u heksanima dalo je signal 1: jedinjenje 355 (jedan enantiomer) (retenciono vreme = 12.7 minuta), signal 2: jedinjenje 356 (jedan enantiomer) (retenciono vreme = 14.2 minuta), signal 3: jedinjenje 357 (jedan enantiomer) (retenciono vreme = 20.3 minuta), i signal 4: jedinjenje 358 (jedan enantiomer) (retenciono vreme = 28.9 minutes); najaktivniji enantiomer je bio signal 3. LCMS izračunato za C19H21ClFN6O3(M+H)<+>: m/z = 435.1; nađeno: 435.1.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.15 (s, 1 H), 7.81 (s, 1 H), 7.71 (d, 1 H), 7.26 (bs, 1 H), 6.23 (m, 1 H), 5.84 (t, 1 H), 3.92 (m, 1 H), 3.83 (m, 1 H), 2.52 (s, 3 H), 1.75 (d, 3 H), 1.40 (m, 3 H).

Primeri 361-363. Diastereoizomeri 4-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-hloro-2-(1-(2-hidroksipropil)azetidin-3-il)-3-metoksibenzonitrila

[0560] Na osnovu stereohemje iz Primera 269, veruje se da je stereohemija svakog od diastereoizomera 4-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-hloro-2-(1-((S)-2-hidroksipropil)azetidin-3-il)-3-metoksibenzonitril (Primer 361), 4-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-hloro-2-(1-((R)-2-hidroksipropil)azetidin-3-il)-3-metoksibenzonitril (Primer 362), i 4-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-6-hloro-2-(1-((R)-2-hidroksipropil)azetidin-3-il)-3-metoksibenzonitril (Primer 363) (strukture prikazane u tekstu ispod)

1

Sinteza primera 361:

[0561] U (R)-4-(1-(pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-2-(azetidin-3-il)-6-hloro-3-metoksibenzonitril (6.00 g, 14.3 mmol) je dodat metanol (72 mL). U dobijenu suspenziju je dodat (S)-(-)-metiloksiran (2.01 mL, 28.6 mmol) na sobnoj temperaturi i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 19 h. Dodatni (S)-(-)-metiloksiran (0.50 mL, 7.2 mmol) je dodat i mešanje je nastavljeno dodatnih sat vremena. U reakcionu smešu je dodata voda (280 mL) i nastavljeno je mešanje zamućenog rastvora. Smeša je ekstrahovana sa metilen hloridom (300 mL x 4). Organski sloj je kombinovan i ispran je sa slanim rastovorom (50 mL) i koncentrovan je. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni od silike eluiranjem sa MeOH (koji sadrži oko 0.5% amonijum hidroksida) u metilen hloridu. Frakcije koje sadrže proizvod su sakupljene i uparene do isušivanja. Ovaj ostatak je dalje prečišćen preparativnom HPLC da se dobije jedinjenje iz naslova. Uzorak jedinjenja iz naslova je analiziran sa NMR spektroskopijom i masenom spektrometrijom i dobijeni su sledeći podaci.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.11 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.30 (br s, 2H), 6.24 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.32 (br s, 1H), 4.07 (m, 1H), 3.94 (m, 2H), 3.65 (s, 3H), 3.59 (m, 1H), 3.08 (m, 2H), 2.56 (s, 3H), 2.38 - 2.19 (m, 2H), 1.73 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.00 (d, J = 6.2 Hz, 3H) ppm. LCMS za C22H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 456.2; nađeno: 456.2.

Sinteza primera 362:

[0562] U (S)-4-(1-(pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-2-(azetidin-3-il)-6-hloro-3-metoksibenzonitril (293.0 mg, 0.73 mmol) je dodat metanol (3.7 mL). U dobijenu suspenziju je dodat (R)-(+)-metiloksiran 103 µL, 1.46 mmol) na sobnoj temperaturi i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 19 h. Dodatni (R)-(+)-metiloksiran (51.3 µL, 0.73 mmol) je dodat i mešanje je nastavljeno dodatnih 2.5 h. U reakcionu smešu je dodata voda (14 mL) i nastavljeno je sa mešanjem zamućenog rastvora. Smeša je ekstrahovana sa metilen hloridom (4 x 16 mL). Organski sloj je kombinovan i ispran je sa slanim rastvorom (50 mL) i koncentrovan je. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni od silike, eluiran je sa MeOH (koji sadrži oko 0.5% amonijum hidroksida) u metilen hloridu. Frakcije koje sadrže proizvod su sakupljene i uparene su do isušivanja. Ovaj ostatak je dalje prečišćen preparativnom HPLC da se dobije jedinjenje iz naslova. Uzorak jedinjenja iz naslova je analiziran NMR spektroskopijom i masenom spektrometrijom i dobijeni su sledeći podaci.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.11 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.30 (br s, 2H), 6.24 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.37 (br s, 1H), 4.09 (m, 2H), 3.93 (m, 2H), 3.65 (s, 3H), 3.59 (m, 1H), 3.12 (m, 2H), 2.56 (s, 3H), 2.39 - 2.26 (m, 2H), 1.73 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.00 (d, J = 6.2 Hz, 3H) ppm. LCMS za C22H27ClN7O2(M+H)<+>: m/z = 456.2; nađeno: 456.2.

Sinteza Primera 363:.

1

[0563] U (R)-4-(1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-2-(azetidin-3-il)-6-hloro-3-metoksibenzonitrilu (6.0 g, 14.3 mmol) je dodat metanol (72 mL). U dobijenu suspenziju je dodat (R)-(+)-metiloksiran (2.01 mL, 28.6 mmol) na sobnoj temperaturi i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. U reakcionu smešu je dodata voda (280 mL) i nastavljeno je sa mešanjem zamućenog rastvora. Smeša je ekstrahovana sa metilen hloridom (300 mL x 4). Organski sloj je kombinovan i ispran je sa slanim rastvorom (50 mL) i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni od silike, eluiranjem sa MeOH (koja sadrži oko 0.5% amonijum hidroksida) u metilen hloridu. Frakcije koje sadrže proizvode su sakupljene i uparene su do isušivanja. Ovaj ostatak je dalje prečišćen preparativnom HPLC da se dobije jedinjenje iz naslova. Uzorak jedinjenja iz naslova je analiziran NMR spektroskopijom i masenom spektrometrijom i dobijeni su sledeći podaci.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.11 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.29 (br s, 2H), 6.24 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.31 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 4.11 - 4.00 (m, 1H), 3.98 - 3.90 (m, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.61 - 3.53 (m, 2H), 3.07 (m, 2H), 2.56 (s, 3H), 2.28 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 1.73 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.00 (d, J = 6.2 Hz, 3H) ppm.

[0564] Tri HPLC postupla su razvijeni da bi se razdvojili stereoizomeri iz jedinjenja iz Primera 269. Postpak A je razvijen da bi se razdvojio diastereoizomer Primera 361 iz Primera 269. Retencion vremena Primera 361 od Primera 269 su 15.7 min i 11.5 min redom. Hromatografski uslovi su opisani u Tabeli B1.

Tabela B1

[0565] Postupak B je razvijen da se razdvoji diastereoizomer Primera 362 od Primera 269. Retenciona vremena Primera 362 od Primera 269 su 26.4 min i 21.7 min redom. Hromatografski uslovi su opisani u Tabeli B2.

Tabela B2

[0566] Postupak C je razvijen da se razdvoje tri stereoizomera Primer 361, Primer 362 i Primer 363 od Primera 269. Stereoizomeri Primer 361, Primer 362 i Primer 363 eluiraju na retencionom vremenu 12.9 min kao široka traka dok Primer 269 eluira na retencionom vremenu 14.3 min. Procena nivoa enantiomera, Primera 363 može da se napravi kombinovanjem podataka iz Postupaka A, B, i C. Hromatografski uslovi su opisani u Tabeli B3.

1

Tabela B3

Primer A1: Enzimski PI3K test

[0567] PI3-Kinazni luminescentni test komplet uključujući supstrat lipidne kinaze, D-miofosfatidilinozitol 4,5-bisfosfat (PtdIns(4,5)P2)D (+)-sn-1,2-di-O-oktanoilgliceril, 3-O-fosfo vezani (PIP2), biotinilovani I(1,3,4,5)P4, PI(3,4,5)P3 Detektorski Protein je kupljen od Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT). AlphaScreen™ GST Detekcioni Kit uključujui donorske i akceptorske kuglice je kupljen od PerkinElmer Life Sciences (Waltham, MA). PI3Kδ (p110δ /p85α) je kupljen od Millipore (Bedford, MA). ATP, MgCl2, DTT, EDTA, HEPES i CHAPS su kupljeni od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO).

AlphaScreen™ test za PI3Kδ

[0568] Kinazna reakcija je sprovedena na REMP ploči sa 384-bunarića od Thermo Fisher Scientific u finalnoj zapremini od 40 µL. Inhibitori su serijski razblaženi u DMSO i dodati u na ploču u bunariće pre dodavanja drugih komponenata reakcije. Konačna koncentracija DMSO u testu je 2%. PI3K testovi su izvedeni na sobnoj temperaturi u 50 mM HEPES, pH 7.4, 5mM MgCl2, 50 mM NaCl, 5mM DTT i CHAPS 0.04%. Reakcije su inicirane dodavanjem ATP, konačna reakciona smeša je obuhvatala 20 µM PIP2, 20 µM ATP, 1.2nM PI3Kδ su inkubirani 20 minuta.10 µL reakcione smeše je posle toga preneto u 5 µL 50nM biotinilovanog I(1,3,4,5)P4 u puferu za gašenje: 50 mM HEPES pH 7.4, 150 mM NaCl, 10 mM EDTA, 5 mM DTT, 0.1% Tween-20, zatim sledi dodavanje 10 µL AlphaScreen ™ donorskih i akceptorskih kuglica suspendovanih u puferu za gašenje koji sadrži 25nM PI(3,4,5)P3 detektorskog proteina. Finalna koncentracija i donorskih i akceptorskih kuglica je 20 mg/ml. Nakon zasejavanja ploče, ploče su inkubirane na tamnom mestu na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Aktivnost proizvoda je određena na Fusion-alpha čitaču mikroploča (Perkin-Elmer). Određivanje IC50je izvedeno podešavanjem krive procenta kontrolne aktivnosti u odnosu na log koncentracije inhibitora upotrebom GraphPad Prism 3.0 softvera.

Primer A2: Enzimski PI3K test

[0569] Materijali: supstrat lipidne kinaze, fosfoinozitol-4,5-bisfosfat (PIP2), su kupljeni od Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT). PI3K izoforme α, β, δ i γ su kupljene od Millipore (Bedford, MA). ATP, MgCl2, DTT, EDTA, MOPS i CHAPS su kupljeni od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO).

[0570] Kinazne reakcije su izvedene u ploči sa bistrim dnom koja sadrži 96-bunarića od Thermo Fisher Scientific u finalnoj zapremini od 24 µL. Inhibitori su prvo serijski razblaženi u DMSO i dodati su na ploču u bunariće pre dodavanja drugih komponenti reakcije. Konačna koncentracija DMSO u testu je 0.5%. PI3K testovi su izvedeni na sobnoj temperaturi u 20 mM MOPS, pH 6.7, 10 mM MgCl2, 5 mM DTT i CHAPS 0.03%. Dobijena je reakciona smeša koja sadrži 50 µM PIP2, kinazu i različite koncentracije inhibitora. Reakcije su inicirane dodavanjem ATP koji sadrži 2.2 µCi [<γ>-33P]ATP do finalne koncentracije od 1000 µM. Finalna koncentracija PI3K izoformi α, β, δ i γ u testu su bile 1.3, 9.4, 2.9 i 10.8 nM, redom. Reakcije su inkubirane 180 minuta i prekinute su dodavanjem 100 µL 1 M kalijum fosfata pH 8.0, 30

1

mM EDTA pufera za gašenje. Alikovote 100 µL rastvora reakcije su nakon toga prenete u PVDF filter Millipore MultiScreen IP 0.45 µm ploču sa 96 bunarića (Filter ploča je prethodo ovlažena sa 200 µL 100% etanola, destilovanom vodom, i 1 M kalijum fosfatom pH 8.0, redom). Filter ploča je aspirirana na Millipore Manifold pod vakuumom i isprana je sa 18 X 200 µL pufera za ispiranje koji sadrži 1 M kalijum fosfat pH 8.0 i 1 mM ATP. Nakon sušena aspiracijom i blotovanja, ploča je osušena na vazduhu u inkubatoru na 37 °C preko noći. Packard TopCount adapter (Millipore) je zatim vezan za ploču nakon čega se dodaje 120 µL Microscint 20 scintilacionog koktela (Perkin Elmer) u svakom bunariću. Nakon zatvaranja ploče, radioaktivnost proizvoda je određena scitilacionim brojačem na Topcount (Perkin-Elmer). Određivanje IC50je izvedeno podešavanjem krive procenta kontrolne aktivnosti u odnosu na log koncentracije inhibitora upotrebom GraphPad Prism 3.0 softvera.

Primer A3: PI3Kδ scintilacioni test blizine

Materijali

[0571] [<γ>-33P]ATP (10mCi/mL) je kupljen od Perkin-Elmer (Waltham, MA). Supstrat lipidne kinaze, D-mio-fosfatidilinozitol 4,5-bisfofat (PtdIns(4,5)P2)D (+)-sn-1,2-di-O-oktanoilgliceril, 3-O-fosfo vezani (PIP2), CAS 204858-53-7, je kupljen od Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT). PI3Kδ (p110δ /p85α) je kupljen od Millipore (Bedford, MA). ATP, MgCl2, DTT, EDTA, MOPS i CHAPS su kupljeni od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Wheat Germ Agglutinin (WGA) YSi SPA Scintilacione kuglice su kupljene od GE healthcare life sciences (Piscataway, NJ).

[0572] Kinazna reakcija je izvedena u polistirenskoj matrici bele ploče sa 384-bunarića od Thermo Fisher Scientific u finalnoj zapremini od 25 µL. Inhibitori su prvo serijski razblaženi u DMSO i dodati su na ploču u bunariće pre dodavanja drugih komponenti reakcije. Konačna koncentracija DMSO u testu je 0.5%. PI3K testovi su izvedeni na sobnoj temperaturi u 20 mM MOPS, pH 6.7, 10 mM MgCl2, 5 mM DTT i CHAPS 0.03%. Reakcije su inicirane dodavanjem ATP, finalna reakciona smeša se sastoji iz 20 µM PIP2, 20 µM ATP, 0.2 µCi [<γ>-33P] ATP, 4 nM PI3Kδ. Reakcije su inkubirane 210 min i prekinute su dodavanjem 40 µL SPA kuglica suspendovanih u puferu za gašenje: 150mM kalijum fosfat pH 8.0, 20% glicerol. 25 mM EDTA, 400 µM ATP. Finalna koncetracija SPA kuglica je 1.0mg/mL. Posle zatvaranja ploče, ploče su mućkane preko noći na sobnoj temperaturi i centrifugirane na 1800 oum tokom 10 minuta, radioaktivnost proizvoda je određena scitilacionim brojačem na Topcount (Perkin-Elmer). Određivanje IC50je izvedeno podešavanjem krive procenta kontrolne aktivnosti u odnosu na log koncentracije inhibitora upotrebom GraphPad Prism 3.0 softvera. IC50podaci za Primere su predstavljeni na Tabeli 2 kako je određeno Testom A3. IC50podaci za Primere 361 i 363 su pokazani na Tabeli 3 kako je određeno Testom A2.

Tabela 2

14

nastavak

nastavak

14

Tabela 3

Primer B1: B ćelijski test proliferacije

[0573] Da bi se dobile B ćelije, humane PBMC su izolovane iz periferne krvi normalnih, donora koji ne uzimaju lekove standarndnom centrifugom na Ficoll-Hypague gradijentu gustine (GE Healthcare, Piscataway, NJ) i inkubirane su sa anti-CD 19 microkuglicama (Miltenyi Biotech, Auburn, CA).B ćelije su nakon toga prečišćene pozitivnim imunosortiranjem upotrebom autoMacs (Miltenyi Biotech) prema uputstvima proizvođača.

[0574] Prečišćene B ćelije (2X10<5>/bunariću/200 µL) su gajene u kulturi na pločama sa ultraniskim vezivanjem sa 96-bunarića (Corning, Corning, NY) u RPMI1640, 10% FBS i kozjim F(ab’)2 anti-humanim IgM (10 µg/ml) (Invitrogen, Carlsbad, CA) u prisustvu različite količine jedinjenja koje se ispituje tri dana. [<3>H]-timidin (1 µCi/bunariću) (PerkinElmer, Boston, MA) u PBS je zatim dodat u kulturu B ćelija dodatnih 12 h pre inkorporiranja radioaktivnosti razdvojen je ceđenjem sa vodom preko GF/B filtera (Packard Bioscience, Meriden, CT) i merena je tečnim scintilacionim brojačem sa Top-Count (Packard Bioscience).

Primer B2: Test proliferacije Pfeiffer-ove ćelije

[0575] Pfeiffer-ove ćelijske linije (difuzni veliki B ćelijski limfom) su kupljene od ATCC (Manassas, VA) i održavane su u kulturi u preporučenom medijumu (RPMI i 10% FBS). Da bi se izmerila antiproliferaciona akivnost jedinjenja, Pfeiffer-ove ćelije su zasejane sa medijumom kulture (2x10<3>ćelija /bunariću/ po 200 µl) na pločama sa ultraniskim vezivanjem sa 96-bunarića (Corning, Corning, NY), u prisustvu ili odsustvu koncentracionog opsega ispitivanih jedinjenja. Nakon 3-4 dana, [<3>H]-timidin (1 µCi/bunariću) (PerkinElmer, Boston, MA) u PBS je nakon toga dodat u ćelijsku kulturu dodatnih 12 h pre inkorporiranja radioaktivnosti razdvojen je ceđenjem sa vodom preko GF/B filtere (Packard Bioscience, Meridenj, CT) i merena je tečnim scintilacionim brojačem sa TopCount (Packard Bioscience). IC50podaci za izabrana jedinjenja su prezentovani u Tabeli 4.

Tabela 4

nastavak

Primer C: Test Akt fosforilacije

[0576] Ramos-ove ćelije (B limfociti iz Burkitovih limfoma) su dobijeni od ATCC (Manassas, VA) i održavani su u RPMI1640 i 10% FBS. Ćelije (3X10<7>ćelija /tubi/3 mL in RPMI) su inkubirane sa različitim količinama ispitivanih jedinjenja 2 h na 37 °C i nakon toga su stimulisani sa kozjim F(ab’)2 anti-human IgM (5 µg/mL) (Invitrogen) 17 minuta na 37 °C u vodenom kupatilu. Stimulisane ćelije su oborene na 4 °C sa centrifugom i ekstrakti punih ćelija su dobijeni upotrebom 300 µL pufera za lizu (Cell Signaling Technology, Danvers, MA). Dobijeni lizati su izloženi ultrazvučnim talasima i supernatanti su sakupljeni. Nivo fosforilacije Akt u supernatantima su analizirani upotrebom PathScan phospho-Aktl (Ser473) sendvič ELISA kitova (Cell Signaling Technology) prema uputstvima proizvođača.

14

Primer D: Pfeiffer-ov Model limfoma

Postupci:

[0577] Ženke SCID miševa, (5 do 8 nedjelja starosti, Charles River Laboratories, Wilmington, MA) su inokulisane sa 1 x 107 tumorskim ćelijama (Pfeiffer, ATCC #CRL-2632, Manassas, VA) i matrigelom (BD Biosciences #354234) u 0.2 mL sterilnog slanog rastvora. Inokulacija je sprovedena subkutanozno na boku. Fragmenti tumorskog tkiva (približno 3 mm X 3 mm) su sakupljeni 3 do 6 nedelja nakon inokulacije ćelija gajenih u kulturi i subkutanozno su implantirani u mestu ćelijske inokulacije. Tkivni fragmenti su implantirano kao čvrsto delovi upotrebom klešta sa tupim vrhom. Tretman miševa koji nose tumor je počeo 15 do 25 dana nakon inokulacije tumora, u zavisnosti od veličine tumora. Životinje su sortirane da se dobije da se dobiju grubo ekvivalentne srednje zapremine tumora u svakoj grupi. Minimalna srednja zapremina tumora u svim grupama je bila 150 mm<3>u prvom danu tretmana i grupe su obuhvatale 7 životinja. Eksperimentalno terapeutsko sredstvo, Primer 347, je dat miševima oralno (PO). Učestalost tretmana je bila 2 puta dnevno za minimum 14 dana efikasnosti. Veličina subkutanoznih tumora je merena 2 do 3 puta nedeljeno upotrebom digitalnog šublera. Zapremina tumora je izračunata merenjem tumora u 2 dimenzije i korišćenjem jednačine: Zapremina = [Dužina X (Širina2)]/2; pri čemu je veći broj bio dužina, i manji broj širina. Ukoliko su obrazovani višestruki tumori, finalna zapremina je zbir individualnih tumora subjekta sa istom jednačinom: npr, 2 tumora; Zapremina = {[L13 (W1)2]/2} {[L2 x (W2)2]/2}. Efekti na tumorski rast su prijavljeni kao procenat inhibicije tumorskog rasta (%TGI). Procenat TGI je izračunat sa jednačinom: (1- (Tx zap. / kontrolnom zap.))∗100, gde je zapremina kontrole nosač ili zapremina netretiranog tumora u datom danu, i Tx zapremina je bilo koja zapremina tumora grupe koja prima tretman tog istog dana. Statističke razlike između tretmana i kontrola nosača su procenjene upotrebom ANOVA: Testa jednog faktora.

Rezultati:

[0578] Primer 347 je ispitan kao jedno sredstvo u Pfeiffer-ovom humanom modelu ksenografta tumora difuznog velikog B ćelijskog limfoma, podtipa NHL. Takođe je pokazano da su Pfeiffer-ove ćelije kancera senzitivne na anti-proliferativne efekte Primera 347 in vitro. Prema tome, tumorski model koji je uspostavljen na osnovu subkutanozne inokulacije tumorskih ćelija u imuno kompromitovane SCID miševe i miševe koji imaju tumor su primili dva puta dnevno oralne doze nosača ili Primera 347 u 0.3, 1, 3, u 10 mg/kg tokom 14 dana. Tretman sa Primerom 347 je inhibirao tumorski rast za 22%, 24%, 36%, i 58% (procent inhibicije tumorskog rasta) sa dozom koja se povećava (SL.2).

14

Claims (19)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje za upotrebu u postupku lečenja idiopatske trombocitopenijske purpure (ITP), autoimunske hemolitičke anemije, Behčetove bolesti, Koganovog sindroma, arteritisa džinovskih ćelija, reumatske polimijalgije (PMR), Takajašijevog arteritisa, Buergerove bolesti (lat. thromboangiitis obliterans), vaskulitisa centralnog nervnog sistema, Kavasakijeve bolesti, poliarteritis nodoze, Čarg-Štrausovog sindroma, vaskulitisa pomešane krioglobulinemije (esencijalne ili indukovane virusom hepatitisa C (HCV)), Henoh-Šonlejnove purpure (HSP), hipersenzitivnog vaskulitisa, mikroskopskog poliangiitisa, Vegenerove granulomatoze, anti-neutrofilnih citoplazmatskih anititela povezanih sa (ANCA) sistemskim vaskulitisom (AASV), pemfigusa, membranozne nefropatije, hronične limfocitne leukemije (CLL), leukemije dlakastih ćelija, limfoma mantle ćelija, malog limfocitnog limfoma, folikularnog limfoma, limfoplazmacitnog limfoma, limfoma ekstranodalne marginalne zone, difuznog velikog B ćelijskog limfoma sličnog aktiviranoj B ćeliji (ABC), ili difuznog velikog B ćelijskog limfoma B ćelije germinalnog centra (GCB) kod pacijenta, gde je jedinjenje Formule IV:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde: G je NH, n je 1, i V je O; ili G je NH, n je 0, i V je CH2; ili G je O, n je 0 i V je NH; R<2>je C1-6alkil ili C1-6haloalkil; R<4>je halo, OH, CN, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4alkoksi, ili C1-4haloalkoksi; R<5>je halo, OH, CN, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4alkoksi, ili C1-4haloalkoksi.
2. 2. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1, gde: a) R<2>je C1-3alkil ili C1-3fluoroalkil; ili b) R<2>je metil, etil, ili 2,2-difluorometil; ili c) R<2>je metil; ili d) R<2>je etil.
3. 3. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1 ili 2, gde: a) R<4>je halo, CN, ili C1-3alkil; ili b) R<4>je F, Cl, CN, ili metil; ili c) R<4>je F; ili d) R<4>je Cl; ili e) R<4>je CN; ili f) R<4>je metil.
4. 4. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1 do 3, gde: a) R<5>je halo, CN, ili C1-3alkil; ili b) R<5>je Cl, CN, ili metil; ili c) R<5>je Cl; ili d) R<5>je CN; ili e) R5je metil.
5. 5. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1, gde: R<2>je C1-3alkil ili C1-3fluoroalkil; R<4>je halo, CN, ili C1-3alkil; i R<5>je halo, CN, ili C1-3alkil.
6. 6. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1, gde: R<2>je metil, etil, ili 2,2-difluorometil; R<4>je F, Cl, CN, ili metil; i R<5>je Cl, CN, ili metil;
7. 7. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1 do 6, gde: a) jedinjenje je jedinjenje Formule IVa:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; ili b) jedinjenje je jedinjenje Formule IVb:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; ili 14 c) jedinjenje je jedinjenje Formule IVc:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
8. 8. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1, gde je jedinjenje izabrano od: 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil} pirolidin-2-ona; 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-3-etoksi-2-(5-oksopirolidin-3-il)benzonitrila; i 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}-1,3-oksazolidin-2-ona; ili farmaceutski prihvatljive soli bilo kog od gore pomenutog.
9. 9. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1, gde je postupak postupak za lečenje idiopatske trombocitopenijske purpure (ITP) izabrane od ITP u relapsu i refraktorne ITP.
10. 10. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1, gde je postupak postupak za lečenje pemfigusa.
11. 11. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1, gde je postupak postupak za lečenje autoimunske hemolitičke anemije.
12. 12. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1, gde je postupak postupak za lečenje limfoma mantle ćelija.
13. 13. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1, gde je postupak postupak za lečenje folikularnog limfoma.
14. 14. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1, gde je postupak postupak za lečenje limfoma ekstranodalne marginalne zone.
15. 15. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1 do 14, gde je jedinjenje 4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}pirolidin-2-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
16. 16. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 15, gde je jedinjenje (R)-4-{3-[(R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}pirolidin-2-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
17. 17. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 15, gde je jedinjenje (R)-4-{3-[(S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}pirolidin-2-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 14
18. 18. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 15, gde je jedinjenje (S)-4-{3-[(R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}pirolidin-2-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
19. 19. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 15, gde je jedinjenje (S)-4-{3-[(S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}pirolidin-2-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 1