RS60360B1 - Uređaj za disgregaciju biološkog materijala i odgovarajući postupak proizvodnje i postupak za pripremu ćelijskih suspenzija i tkivnih mikrograftova - Google Patents

Description

Opis

Oblast pronalaska

[0001] Predmetni pronalazak se uopšteno odnosi na tehnički sektor sistema i uređaja za disgregaciju i drobljenje biološkog materijala za različite svrhe i primene, i naročito njegov cilj je uređaj za disgregaciju biološkog materijala za pripremu i obrazovanje ćelijskih suspenzija i tkivnih mikrograftova koji se mogu pogodno upotrebljavati u različite svrhe i u mnoštvu primena, na primer kao uzorci za direktne analize u laboratoriji, bez pomoći hemijskih reagenasa, ili kao deo specifičnih terapija.

[0002] Pronalazak se takođe odnosi na odgovarajući postupak za proizvodnju uređaja za disgregaciju biološkog materijala i naročito odgovarajuće mreže za separaciju koju karakteriše mnoštvo oštrih mikrootvora kroz koje prolazi biološki materijal kako bi bio podvrgnut disgregaciji.

Osnov pronalaska i stanje tehnike

[0003] Disgregacija biološkog tkiva ili materijala, kao što su humana, životinjska, biljna tkiva, je poznata po različitim svrhama i kao deo različitih primena.

[0004] Na primer, biološki materijal može biti podvrgnut disgregaciji radi obavljanja medicinskih pregleda, kao što je biopsija, ili uopšte u cilju dobijanja uzoraka i primeraka koji se ispituju i nakon toga analiziraju u laboratoriji kako bi se dobili podaci i informacije koje se tiču tog materijala koji se upotrebljava isključivo u svrhu istraživanja ili za uspostavljanje dijagnoze kao deo specifičnih medicinskih terapija.

[0005] U stanju tehnike biološki materijal takođe može biti podvrgnut disgregaciji u svrhu izolacije ćelija prisutnih u istom biološkom materijalu, ili obrazovanja fragmenata tkiva ili mikrograftova, koji se na primer upotrebljavaju u kliničkim i regenerativnim terapijama, razumevajući da je mikrograft skup ćelija, u vanćelijskom matriksu, subkliničke veličine i zbog toga nije vidljiv golim okom već samo uz pomoć mikroskopa.

[0006] Zarad potpunosti informacija, Sl. 5 šematski ilustruje tipični biološki materijal, označen uopšteno sa MB i na primer sačinjen od biološkog tkiva, u svom integralnom obliku, to jest pre nego što je podvrgnut operaciji disgregacije.

[0007] Kao što se može videti sa ove Sl.5, biološko tkivo ili materijal MB, u svom intaktnom i obliku koji još uvek nije podvrgnut disgregaciji, uobičajeno ima mnoštvo ćelija, označenih sa CEL, svaka sa svojim nukleusom NU i citoplazmom CT, koje se nalaze u vanćelijskom matriksu MAT, koji je šematizovan mnoštvom paralelnih linija.

[0008] Biološki materijal MB sadrži osim toga, u respektivnom vanćelijskom matriksu MAT, dodatne supstance i komponente, koje su povezane sa ćelijama CEL i koje su na primer sačinjene pomoću faktora rasta, vanćelijskih proteina i neorganskih komponenti, označeno sa FC na Sl.5.

[0009] Posebno ovi faktori rasta i supstance FC ukazuju na vijabilnost ćelija, tj. na njihovu sposobnost da se razviju i reaguju na spoljne uslove, i takođe su neophodni za omogućavanje ćelijama CEL da u potpunosti manifestuju svoja svojstva i funkcije.

[0010] Stanje tehnike već nudi neke sisteme i uređaje koje operator može upotrebljavati za disgregaciju biološkog materijala u cilju dobijanja uzoraka tog biološkog materijala koji se upotrebljava u različite svrhe i kao deo različitih primena, kako je gore navedeno, na primer da bi se obavila biopsija ili analiza ćelijskih jedinjenja.

[0011] Među tim poznatim uređajima posebno se pominje triturator biološkog materijala, opisan patentom US 5,731,199, koji sadrži cilindrični spremnik koji definiše gornju komoru obezbeđen da primi biološki materijal koji će biti triturisan; fiksni deo za sečenje postavljen poprečno u ovoj komori i sačinjen od perforirane ploče; i rotor, montiran rotirajuće u komori, koji ima trituracioni element u obliku spiralnog sečiva.

[0012] Fiksna perforirana ploča uključena u ovaj mehanički triturator ima više mikrootvora, sa po mogućnosti kvadratnim ili šestougaonim profilom, koji imaju prečnik ili veličinu koja je sadržana između 20 i 100 μm, pri čemu ivice svakog mikrootvora određuju trituraciona sečiva.

[0013] Pri upotrebi ovog trituratora, trituracioni element, koji rotira, sarađuje sa delom za sečenje, tj. perforiranom pločom, tako da napaja i dovodi biološki materijal, koji se nalazi u gornjoj komori, u kontakt sa sečivima mikrootvora dela za sečenje i stoga prouzrokuje trituraciju biološkog materijala čineći da prolazi kroz ove mikrootvore.

[0014] Međutim, ovaj uređaj za trituraciju nije bez ograničenja i nedostataka, koji bi bili prikladni da se saniraju, posebno kako bi se napravili uzorci koje se dobijaju iz disgregacije izvornog biološkog materijala koji je pogodan da bude povoljno upotrebljen u širem broju primena i situacija, u odnosu na ono što je sada moguće, kako u oblasti laboratorijskih analiza tako i terapija.

[0015] U stvari, kao što je bilo moguće eksperimentalno primetiti, mehanički disgregator poznat iz ovog patenta US 5,731,199, kao i drugi slični uređaji, proizvodi uzorak biološkog materijala podvrgnutog disgregaciji u kojem su ćelija ili ćelije odvojene od svoje biološke niše ili "staništa", tako da ćelija ili ćelije prisutne u biološkom uzorku, proizvedenom na ovaj način, mogu imati oblik, funkcije i vijabilnost koje su na neki način modifikovane i izmenjene u odnosu na izvorni biološki materijal.

[0016] Zarad pojašnjenja, Sl. 6 šematski pokazuje ćeliju dobijenu disgregacijom izvornog biološkog materijala konvencionalnim uređajem za disgregaciju, drugim rečima u skladu sa stanjem tehnike.

[0017] Kao što se može videti sa ove Sl. 6, ćelija ili ćelije prisutne u materijalu dobijenim disgregacijom uređajem za disgregaciju konvencionalnog tipa, kao i odvojene i ne više povezane sa svojom biološkom nišom koja ih okružuje u izvornom biološkom materijalu, imaju suštinski modifikovan oblik u odnosu na početni.

[0018] Kao rezultat toga, u stanju tehnike, iz razloga što se to može dogoditi i u svakom slučaju postoji stvarni rizik da se uzorak na neki način menja i podvrgava promenama tokom faze disgregacije u odnosu na izvorni biološki materijal, često se pristupa upotrebi hemijskih reagenasa ili uopšte dodatnih supstanci za pripremu, od biološkog materijala podvrgnutog trituriaciji, primeraka i uzoraka koji se analiziraju, ili za obrazovanje ćelijskih suspenzija i mikrograftova predviđenih različitim kliničkim terapijama i tretmanima.

[0019] Štaviše, sa obzirom na to da su struktura, funkcije i vijabilnost ćelija mogle biti modifikovane i izmenjene tokom faze disgregacije izvedene konvencionalnim tehnikama, uvek postoji neizvesnost da podaci i informacije dobijeni analizom uzoraka, dobijenih na ovaj način, ne odgovaraju tačno i nisu indikativni za izvorni i biološki materijal koji još nije podvrgnut disgregaciji.

Sažetak pronalaska

[0020] Prvi cilj predmetnog pronalaska je stoga da predloži i napravi novi uređaj za disgregaciju biološkog materijala koji nudi poboljšane performanse u poređenju s poznatim disgregatorima i naročito omogućava dobijanje bioloških uzoraka, postignuto kroz disgregaciju izvornog biološkog materijala, u kojima ćelije održavaju svoj oblik i svoju nišu i biološko stanište i samim tim svoju funkcionalnu vijabilnost sa kojom su bile povezane u izvornom biološkom materijalu, kako bi se omogućilo dobijanje tačnijih podataka iz analiza dobijenih uzoraka, kao i poboljšana i povoljnija primena ovih uzoraka kao deo laboratorijske analize i dijagnoze i medicinske terapije.

[0021] Drugi cilj predmetnog pronalaska, koji se štaviše odnosi na prvi, jeste predlog i izrada novog uređaja za disgregaciju biološkog materijala koji je značajna inovacija u odnosu na mehanički triturator poznat iz patenta US 5,731,199, koji je prethodno naveden, i posebno u ove svrhe, sadrži fiksnu perforiranu ploču sa mnoštvom mikrootvora, za disgregaciju biološkog materijala, koji ima optimizovanu konfiguraciju i štaviše je napravljen inovativnim proizvodnim postupkom, tako da uključuje performanse znatno bolje od onih koje mogu biti dobijene mehaničkim trituratorom predloženim patentom US 5,731,199 i posebno omogućava obrazovanje tkivnih mikrograftova i pripremu ćelijskih suspenzija, okarakterisanih visokom vijabilnošću respektivnih ćelija, koje se mogu upotrebljavati u različitim medicinskim i nemedicinskim primenama.

[0022] Treći cilj predmetnog pronalaska, ponovo koji se odnosi na prethodne, takođe je predlog i izrada novog uređaja za disgregaciju biološkog materijala koji omogućava obrazovanje tkivnih mikrograftova i pripremu ćelijskih suspenzija, koje se mogu upotrebljavati u različite svrhe na primer za laboratorijske testove i kliničke terapije, bez pomoći i upotrebe hemijskih reagensa za pravljenje istih tkivnih mikrograftova i ćelijskih suspenzija.

[0023] Gore navedeni ciljevi mogu se smatrati postignutim u potpunosti uređajem za disgregaciju biološkog materijala za pripremu ćelijskih suspenzija i tkivnih mikrograftova, koji imaju osobine definisane nezavisnim patentnim zahtevom 1 i postupkom za proizvodnju uređaja za disgregaciju biološkog materijala, koji ima osobine definisane nezavisnim patentnim zahtevom 10.

[0024] Posebni primeri izvođenja predmetnog pronalaska su štaviše definisani zavisnim patentnim zahtevima.

[0025] Postoje brojne prednosti, koje su delimično već ranije implicitno objavljene, u odnosu na uređaje i sisteme za disgregaciju koji su trenutno poznati i u upotrebi, koji su povezani sa uređajem za disgregaciju biološkog materijala, za pripremu i obrazovanje ćelijskih suspenzija i tkivnih mikrograftova, u skladu sa predmetnim pronalaskom, kao što je ovde navedeno ispod, samo putem primera:

- sposobnost uređaja za pripremu mikrograftova i ćelijskih suspenzija koje održavaju intaktne i neizmenjene osobine početnog izvornog biološkog materijala, koji još nije podvrgnut disgregaciji, i stoga se izbegava upotreba hemijskih reagensa za pripremu ovih tkivnih mikrograftova i ćelijskih suspenzija;

- upotreba tkivnih mikrograftova i ćelijskih suspenzija pripremljenih pomoću uređaja za disgregaciju u novim i inovativnim medicinskim, veterinarskim i kozmetičkim tretmanima;

- mogućnost izvođenja tačnijih i pouzdanijih analiza upotrebom tkivnih mikrograftova i ćelijskih suspenzija pripremljenih pomoću uređaja za disgregaciju, kao primeraka i uzoraka za analizu;

- mogućnost insertovanja uređaja za disgregaciju u terapijski lanac, koji uključuje upotrebu biološkog materijala podvrgnutog disgregaciji koji se insertuje i implantira u pacijenta koji se leči u operacionoj sali, pri čemu se terapijski lanac izvodi u potpunosti u istoj operacionoj sali, to jest bez potrebe da se iznosi biološki materijal iz iste, da bi bio podvrgnut disgregaciji, koji je uzet od pacijenta koji se leči u operacionoj sali.

Kratak opis crteža

[0026] Ovi i drugi ciljevi, osobine i prednosti predmetnog pronalaska postaće jasniji i očigledni sledećim opisom jednog od njegovih poželjnih primera izvođenja, datog kao neograničavajući primer, sa pozivanjem na prateće crteže, na kojima:

Sl. 1 je aksonometrijski prikaz uređaja za disgregaciju biološkog materijala za pripremu ćelijskih suspenzija i obrazovanje tkivnih mikrograftova u skladu sa predmetnim pronalaskom;

Sl. 2 je aksonometrijski prikaz, u raščlanjenom obliku, koji pokazuje delove uređaja za disgregaciju biološkog materijala sa Sl.1;

Sl. 2A je prikaz iz perspektive, u uvećanom obimu, rotora sa sečivom i mreže za disgregaciju uređaja za disgregaciju sa Sl.1 i 2:

Sl. 2B, podeljena na delove (a), (b) i (c), je prikaz koji pokazuje nacrt i u uvećanom obimu, uz pomoć nekih fotografskih slika, jedan mikrootvor i grupu mikrootvora mreže za disgregaciju sa Sl.2A.

Sl. 2C, podeljena na delove (a), (b) i (c), pokazuje respektivno, na delu (a) dijagram namenjen da ilustruje različite faze postupka proizvodnje, oblikovanjem, mikrootvora na mreži za disgregaciju koja je uključena u uređaj za disgregaciju biološkog materijala koji nije u skladu sa pronalaskom; na delu (b) konični probijač koji se upotrebljava u postupku proizvodnje, oblikovanjem, šematski prikazanim na delu (a); i, na delu (c), fotografsku sliku mreže za disgregaciju koja je dobijena ovim postupkom proizvodnje, oblikovanjem;

Sl. 2D, podeljena na delove (a), (b) i (c), pokazuje respektivno, na delu (a) dijagram namenjen da ilustruje različite faze primera izvođenja postupka proizvodnje, oblikovanjem, mikrootvora na mreži za disgregaciju koja je uključena u uređaj za disgregaciju biološkog materijala pronalaska; na delu (b) poligonalni probijač koji se upotrebljava u postupku proizvodnje, oblikovanjem, šematski prikazanim na delu (a); i, na delu (c), fotografsku sliku mreže za digregaciju koja je dobijena ovim postupkom proizvodnje, oblikovanjem;

Sl. 2E, podeljena na delove (a), (b) i (c), pokazuje respektivno, na delu (a) dijagram namenjen da ilustruje različite faze postupka koji nije u skladu sa pronalaskom, uključujući fazu bušenja pomoću izvora lasera, postupka proizvodnje, oblikovanjem, mikrootvora na mreži za disgregaciju uređaja za disgregaciju biološkog materijala koji nije u skladu sa pronalaskom; i na delovima (b) i (c) prva i druga fotografska slika koje pokazuju mrežu za disgregaciju i respektivne mikrootvore, izrađene pomoću izvora lasera, koja je dobijena postupkom proizvodnje, šematski prikazanim na delu (a), u skladu sa ovim trećim primerom izvođenja;

Sl. 3A, podeljena na delove (a), (b), (c), je ortogonalni prikaz koji pokazuje nacrt i bočno uređaj za disgregaciju biološkog materijala sa Sl.1 i 2:

Sl. 3B, podeljena na delove (a), (b), (c), pokazuje u uvećanom obimu i na preseku, respektivno duž linija I-I, II-II i III-III dela (a) sa Sl. 3A, uređaj za disgregaciju biološkog materijala pronalaska;

Sl. 3C, podeljena na delove (a) i (b), pokazuje nacrt i na preseku neke poboljšane varijante uređaja za disgregaciju pronalaska koji sadrži magnetni element koji ima funkciju kontrole pritiska primenjenog rotorom sa sečivom na mrežu za disgregaciju radi disgregacije biološkog materijala;

Sl. 3D, podeljena na delove (a), (b), (c), (d), pokazuje u trodimenzionalnom grafičkom obliku, u uzdužnom prikazu, i preseku u krajnjim zonama, adapter pogodan da bude spojen sa uređajem za disgregaciju pronalaska kako bi ga povezali sa hirurškim štapom (surgical wand) u uobičajenoj instrumentalnoj opremi operacione sale;

Sl. 4A-4F su blok dijagrami koji ilustruju neke moguće primere primene uređaja za disgregaciju biološkog materijala pronalaska i respektivnih ćelijskih suspenzija i tkivnih mikrograftova dobijenih upotrebom ovog uređaja za disgregaciju;

Sl. 5 je dijagram koji ilustruje uobičajenu strukturu biološkog tkiva pre nego što se podvrgne disgregaciji;

Sl. 5A je dijagram koji ilustruje ćelijsku suspenziju dobijenu uređajem za disgregaciju pronalaska sa Sl.1 i 2:

Sl. 6 šematski ilustruje jednu izolovanu ćeliju dobijenu konvencionalnim uređajem za disgregaciju u skladu sa stanjem tehnike;

Sl. 7A-7F su primeri pločica analize ćelijskih suspenzija i tkivnih mikrograftova dobijenih upotrebom uređaja za disgregaciju biološkog materijala pronalaska; i Sl. 8 je kvalitativni dijagram koji pokazuje procenat vijabilnih ćelija u ćelijskoj suspenziji, dobijen pomoću uređaja za disgregaciju pronalaska, kao funkciju dimenzija mikrootvora mreže za disgregaciju uključene u isti uređaj.

Opis nekih poželjnih primera izvođenja uređaja za disgregaciju biološkog materijala u skladu sa pronalaskom

[0027] Pozivajući se na crteže, a posebno na Sl. 1-3 uređaj za disgregaciju biološkog materijala MB, kao što je na primer biološko tkivo ilustrovano šematski na Sl. 5, načinjen u skladu sa predmetnim pronalaskom, se označava u celini sa 10.

[0028] Kao što je ovde dodatno objašnjeno, uređaj za disgregaciju 10 je posebno pogodan i povoljan za pripremu ćelijskih suspenzija i obrazovanje tkivnih mikrograftova, razumevajući da je tkivni mikrograft, u skladu sa onim što je već ranije objašnjeno, ćelijska suspenzija ili skup ćelija, u vanćelijskom matriksu, subkliničke veličine i zbog toga nije vidljiv golim okom već samo uz pomoć mikroskopa.

[0029] Detaljno uređaj za disgregaciju 10 biološkog materijala MB sastavljen je od sledećih delova:

- šupljeg spoljašnjeg tela, označeno sa 11, u osnovi cilindričnog oblika, koje definiše unutrašnju komoru 12;

- fiksne mreže ili ploče za disgregaciju 13, koja ima mnoštvo mikrootvora 13a, od kojih je svaki obezbeđen oštrim ivicama, koja je smeštena poprečno u unutrašnjoj komori 12 definisanoj spoljnim telom 11, tako da zauzvrat definiše gornju komoru za punjenje i prijem, označenu sa 12a, pogodnu da primi i da se napuni biološkim materijalom koji će biti podvrgnut disgregaciji MB, i donju komoru za sakupljanje, označenu sa 12b, pogodnu za sakupljanje biološkog materijala, pošto je podvrgnut disgregaciji, označen sa MB';

- rotora sa sečivom 14, koji rotira u unutrašnjoj komori 12 i pogodan da sarađuje, rotirajući, sa fiksnom mrežom za disgregaciju 13, tako da napaja i dovodi biološki materijal MB, sadržan u gornjoj komori za punjenje 12a, u kontakt sa mikrootvorima 13a, sa oštrim ivicama, formiranim u mreži za disgregaciju 13, i stoga prouzrokuje disgregaciju biološkog materijala MB čineći da prolazi kroz ove mikrootvore 13a; i - poklopca 15 za prekrivanje gornje komore za punjenje 12a.

[0030] Rotor sa sečivom 14, koji rotira, uključen u uređaj za disgregaciju 10, sačinjen je od:

- osovine 14a, orijentisane u vertikalnom smeru, sa gornjim delom koji doseže do otvora 15a koji je formiran u poklopcu 15 i projektuje se na gore iz potonjeg;

- distributivnog sečiva ili lopatice 14b, koja je povezana sa donjim krajem vertikalne osovine 14a i koja ima zakrivljen spiralni oblik; i

- donjeg strugača 14c, koji je takođe povezan sa donjim krajem vertikalne osovine 14a,

pri čemu je fiksna perforirana mreža za disgregaciju 13 umetnuta između spiralnog sečiva 14b i donjeg strugača 14c koji su povezani sa donjim krajem osovine 14a, pri čemu je rotor sa sečivom 14 pogodan da sarađuje, rotirajući, putem svog spiralnog sečiva 14b i svog donjeg strugača 14c, respektivno sa gornjom stranom, mreže za disgregaciju 13, okrenutom ka gornjoj komori za punjenje 12a, kako bi doveo biološki materijal MB koji će biti podvrgnut disgregaciji u kontakt sa mikrootvorima 13a mreže za disgregaciju 13, i sa donjom stranom, mreže za disgregaciju 13, okrenutom ka donjoj komori za sakupljanje 12b, kako bi sastrugao biološki materijal podvrgnut disgregaciji MB' koji izlazi iz mikrootvora 13a mreže za disgregaciju 13 i ispustio ga u donju komoru za sakupljanje 12b kao što je ovde dodatno opisano ispod.

[0031] Cilindrično spoljašnje telo 11, uključeno u uređaj za disgregaciju 10 pronalaska, je zauzvrat povezano sa sekundarnim unutrašnjim telom 16, koje definiše gornju komoru za punjenje 12a, i sačinjeno je od gornjeg dela 11a koji definiše ležište 11' u kome je smešteno ovo sekundarno unutrašnje telo 16 i donjeg dela 11b koji definiše donju komoru za sakupljanje 12b, pri čemu je perforirana mreža za disgregaciju 13 umetnuta između ovog sekundarnog unutrašnjeg tela 16, smeštenog u odgovarajućem ležištu 11' koje je definisano gornjim delom 11a spoljašnjeg tela 11, i donjeg dela 11b, koji definiše donju komoru za sakupljanje 12b, spoljašnjeg tela 11.

[0032] Štaviše, spoljašnje telo 11 uređaja za disgregaciju 10 definiše prolazni otvor 11c koji se pruža vertikalnim pravcem u spoljašnjem cilindričnom zidu istog spoljašnjeg tela 11, između gornje ivice gornjeg dela 11a i baze donje komore za sakupljanje 12b, što odgovara donjem delu 11b, tako da ukršta ova dva dela 11a i 11b spoljašnjeg tela 11.

[0033] Stoga je ovaj vertikalni otvor 11c pogodan za stavljanje u komunikaciju spoljašnjosti uređaja za disgregaciju 10 sa donjom komorom za sakupljanje 12b, kako bi se omogućila ekstrakcija iz iste donje komore za sakupljanje 12b biološkog materijala koji je podvrgnut disgregaciji MB', kao što je detaljnije opisano ovde ispod.

[0034] Sekundarno unutrašnje telo 16, povezano sa spoljašnjim telom 11, zauzvrat ima deo 16a koji definiše otvor 16b u koji je smeštena rotirajuća osovina 14 rotora sa sečivom 14, i osim toga je pričvršćeno na gornji deo dela 11a spoljašnjeg tela 11 tako da ne rotira i na taj način se izbegava bilo kakva rotacija perforirane mreže za disgregaciju 13, umetnute između istog sekundarnog unutrašnjeg tela 16 i donjeg dela 11b, koji definiše donju komoru za sakupljanje 12b, spoljašnjeg tela 11, kada rotor sa sečivom 14 rotira u unutrašnjoj komori 12 kako bi prouzrokovao disgregaciju biološkog materijala MB, što je jasnije ilustrovano ovde ispod kada se opisuje rad uređaja za disgregaciju 10.

[0035] Spoljašnje telo 11, poklopac 15, sekundarno unutrašnje telo 16 i osovina 14a rotora sa sečivom 14 su od biokompatibilnog plastičnog materijala, dok su perforirana mreža za disgregaciju 13 i distributivno sečivo 14b rotora sa sečivom 14 od nerđajućeg čelika, pogodnog tipa za proizvodnju instrumenata za hiruršku upotrebu.

[0036] Kao što se može videti iz crteža svi različiti sastavni delovi uređaja za disgregaciju 10 su sastavljeni pritiskom bez pomoći sredstava za vezivanje i/ili alata, i zbog toga se mogu demontirati.

[0037] S obzirom na veliki značaj, u sferi predmetnog pronalaska, kao što će biti dalje pojašnjeno u tekstu opisa, mikrootvora 13a, koji karakterišu i formiraju se u mreži za disgregaciju 13, posebno u odnosu na svoje specifične dimenzije i konfiguraciju, ovi mikrootvori 13a će sada biti opisani na detaljan način, takođe u pogledu odgovarajućeg postupka proizvodnje.

Mikrootvori mreže za disgregaciju uređaja za disgregaciju pronalaska i povezani postupak proizvodnje

1

[0038] U skladu sa osobinom predmetnog pronalaska mikrootvori 13a perforirane mreže ili ploče za disgregaciju 13 imaju veličinu ili prečnik, označen sa D na Sl. 2B, koji je sadržan između 70 i 80 μm, i poželjnije imaju veličinu ili prečnik D od oko 75 μm.

[0039] Zahvaljujući ovoj osobini, kao što je proizašlo iz temeljnih testova i eksperimenta, moguće je pomoću uređaja 10 pronalaska obrazovanje tkivnih mikrograftova i priprema ćelijskih suspenzija, upotrebljivih za različite svrhe i primene, na primer kao primerci i uzorci da se jednostavno analiziraju u svrhe istraživanja ili upotrebljivi u dijagnostici i terapiji određenih patologija, koje održavaju integralne i neizmenjene osobine, funkcije i ćelijsku vijabilnost izvornog biološkog materijala MB, na taj način izbegavajući upotrebu hemijskih reagenasa za pripremu ovih tkivnih mikrograftova i ćelijskih suspenzija, što je s druge strane često neophodno u stanju tehnike.

[0040] U skladu sa dodatnom osobinom predmetnog pronalaska, takođe pogodnim da omogući značajne i povoljne performanse uređaja za disgregaciju 10 pronalaska, kao što je ilustrovano iznad, mikrootvori 13a mreže ili ploče za disgregaciju 13 formirani su pomoću posebnog postupka oblikovanja i formiranja, pomoću kalupa S tipa probijač-matrica (diepunch type), table ili lista ili metalne trake, posebno napravljene od trake AISI 316L nerđajućeg čelika.

[0041] Sl. 2C šematski pokazuje, u respektivnom delu (a), različite korake postupka proizvodnje i formiranja oblikovanjem mikrootvora 13a mreže za disgregaciju 13 koja je uključena u uređaj za disgregaciju 10 koji nije u skladu sa pronalaskom.

[0042] Detaljno postupak proizvodnje oblikovanjem mikrootvora 13a, u skladu sa ovim postupkom, sadrži sledeće korake 01-05 ilustrovane na Sl.2C - deo (a) uz pomoć strelica:

01 pozicioniranje trake ili lista N od AISI 316L nerđajućeg čelika između probijača, označenog sa P, i matrice, označene sa M, kalupa S;

02 spuštanje probijača P sa gornje mrtve tačke i posledično formiranje trake ili lista N od AISI 316L nerđajućeg čelika;

03 zaustavljanje probijača P, na kraju njegovog takta spuštanja, prema matrici M, sa konačnim formiranjem i posledičnim lomljenjem materijala metalnog lista N u središtu probijača P;

04 povratak probijača P do respektivne gornje mrtve tačke;

05 ekstrakcija, iz matrice M, lista N formiranog i perforiranog.

[0043] Probijač P upotrebljen u ovom prvom primeru izvođenja postupka proizvodnje i formiranja mikrootvora 13a ima koničnu i šiljastu konfiguraciju, kao što je jasno pokazano na Sl. 2C - deo (b).

[0044] Štaviše, zarad potpunosti informacija, Sl.2C - deo (c) pokazuje fotografsku sliku dela mreže za disgregaciju 13, dobijene postupkom proizvodnje oblikovanjem koji je šematizovan u delu (a) iste Sl. 2C, pri čemu ova fotografska slika jasno ističe konfiguraciju mikrootvora 13a i posebno kako svaki od njih ima prolaz sa oštrom ivicom B, kao efekat kidanja ili loma, prouzrokovan postupkom proizvodnje oblikovanjem, materijala originalne trake N.

[0045] Naročito je istaknuto da prolaz koja se stvara putem kidanja ili loma materijala trake N, na vrhu respektivnog izvučenog područja, dejstvom koničnog probijača P u saradnji sa matricom M, nije pravilan već ima oštro nazubljeno ivicu, što je postignuto efektom loma materijala trake N.

[0046] U praksi, dimenzioniranjem na odgovarajući način matrice M i probijača P moguće je, u ovom prvom primeru izvođenja ilustrovanom na Sl. 2C postupka proizvodnje mreže 13, dobiti prolaze mikrootvora 13a pomoću efekta loma materijala koji sačinjava traku N, pri čemu prolaz svakog mikrootvora 13a ima nepravilan oblik i ivicu, oštru, kao što je pokazano na fotografskoj slici sa Sl.2C - deo (c).

[0047] Prosečna veličina ili prosečni prečnik mikrootvora 13a nastalih na ovaj način lomom materijala trake N mogu varirati od minimalno 50 mikrona do maksimalno 200 mikrona.

[0048] Sl. 2D zauzvrat šematski pokazuje, u respektivnom delu (a) različite korake primera izvođenja postupka proizvodnje i formiranja oblikovanjem mikrootvora 13a mreže za disgregaciju 13 uključene u uređaj za disgregaciju 10 biološkog materijala pronalaska.

[0049] Postupak proizvodnje oblikovanjem mikrootvora 13a, u skladu sa ovim primerom izvođenja, razlikuje se od postupka koji nije u skladu sa pronalaskom, prethodno opisanog sa pozivanjem na Sl.2C, po tome što probijač P ima poligonalnu konfiguraciju, kao što je jasno pokazano na Sl.2D - deo (b), umesto konične.

[0050] Detaljno postupak proizvodnje oblikovanjem mikrootvora 13a, u skladu sa ovim primerom izvođenja, sadrži sledeće korake 01-05 ilustrovane na Sl. 2D - deo (a) uz pomoć strelica:

01 pozicioniranje trake ili table ili lista N od AISI 316L nerđajućeg čelika između probijača, označenog sa P, i matrice, označene sa M, kalupa S;

02 početno spuštanje probijača P sa gornje mrtve tačke sa posledičnim deformisanjem i formiranjem materijala trake ili table N od AISI 316L nerđajućeg čelika;

03 zaustavljanje probijača P, na kraju njegovog takta spuštanja, prema matrici M, sa konačnim formiranjem i lomljenjem materijala table N u središtu probijača P;

04 povratak probijača P do gornje mrtve tačke;

05 ekstrakcija, iz matrice M, lista N formiranog i perforiranog.

[0051] Štaviše, zarad potpunosti informacija, Sl.2D - deo (c) pokazuje fotografsku sliku dela mreže za disgregaciju 13, dobijene postupkom proizvodnje oblikovanjem koji je šematizovan u delu (a) iste Sl.2D i u skladu sa primerom izvođenja, pri čemu ova fotografska slika jasno ističe konfiguraciju mikrootvora 13a i posebno kako prolaz, definisan svakom od njih, ima oštru ivicu B, kao efekat kidanja ili loma, prouzrokovan postupkom proizvodnje oblikovanjem, materijala originalne trake N.

[0052] U praksi, dimenzioniranjem na odgovarajući način matrice M i probijača P moguće je, u ovom drugom primeru izvođenja ilustrovanom na Sl. 2C postupka proizvodnje mreže 13 i slično prvom primeru izvođenja ilustrovanom na Sl. 2C, dobiti prolaze mikrootvora 13a putem efekta loma materijala koji sačinjava tablu N, pri čemu prolaz svakog mikrootvora 13a ima nepravilan oblik i ivicu, oštru, kao što je pokazano na fotografskoj slici sa Sl. 2D - deo (c).

[0053] Štaviše istaknuto je da upotreba probijača P, sa poligonalnom konfiguracijom, u ovom primeru izvođenja postupka proizvodnje mikrootvora 13a, povoljno omogućava formiranje mikrootvora 13a, od kojih svaki ima oštru ivicu koju karakteriše nekoliko oštrih vrhova, koji zauzvrat odgovaraju po broju broju strana poligonalne konfiguracije probijača P.

[0054] U tom pogledu takođe je istaknuto, što su utvrdili brojni i temeljni eksperimentalni testovi, da su odlični rezultati dobijeni sa uređajem za disgregaciju 10 koji ima mrežu za disgregaciju 13, koju karakterišu mikrootvori 13a, od kojih svaki ima šestougaonu konfiguraciju, sa šest oštrih vrhova, koji su zauzvrat dobijeni upotrebom šestougaonog probijača u ovom postupku oblikovanja ilustrovanog na Sl.2D.

[0055] Sumirano mikrootvori 13a mreže za disgregaciju 13, koji sačinjavaju, zajedno sa distributivnim sečivom 14b, radnu strukturu uređaja za disgregaciju 10, dobijeni su postupkom oblikovanja tipa probijač-matrica koji prouzrokuje lom materijala table od nerđajućeg čelika, tako da putem efekta ovog loma svaki mikrootvor 13a ima odgovarajuću nepravilnu ivicu koja ima oštre osobine, posebno definišući mnoštvo mikrosečiva.

[0056] Na primer, kao prednost, što je prethodno navedeno, mikrootvori 13a mogu imati šestougaoni oblik kao što je pokazano na Sl. 2B, posebno dobijene upotrebom šestougaonog probijača u postupku proizvodnje ilustrovanom na Sl.2D.

1

[0057] Prirodno drugi oblici i konfiguracije su moguće, na primer kvadratni ili uopšte poligonalni, pri čemu mikrosečiva svakog mikrootvora 13a odgovaraju stranicama respektivnog poligona.

[0058] Posebno, zarad veće jasnoće, Sl. 2B pokazuje detaljno, uz pomoć nekih fotografskih slika dobijenih iz prototipa uređaja za disgregaciju 10 pronalaska, i pojedinačni otvor 13a i grupu otvora 13a koje su formirane u mreži za disgregaciju 13, pri čemu su mikrosečiva koja su povezane sa stranicama svakog šestougaonog otvora 13a označene sa 13a'.

[0059] Na kraju Sl. 2E šematski pokazuje, u respektivnom delu (a), različite faze postupka proizvodnje i formiranja oblikovanjem mikrootvora 13a mreže za disgregaciju 13 koja je uključena u uređaj za disgregaciju 10 biološkog materijala koji nije u skladu sa pronalaskom.

[0060] Postupak proizvodnje oblikovanjem mikrootvora 13a, u skladu sa ovim postupkom koji nije u skladu sa pronalaskom, razlikuje se od onih prvog postupka koji nije u skladu sa pronalaskom i primera izvođenja prema pronalasku, prethodno opisanih sa pozivanjem na Sl.

2C i 2D, u tome što probijač P, koji se upotrebljava u postupku, ima na vrhu zaobljenu a ne šiljastu konfiguraciju, tako da je probijač P konfigurisan tako da deformiše i izvlači samo materijal trake N, ali bez prouzrokovanja kidanja i njegovog lomljenja, i štaviše zbog toga što je prolaz krajnjeg mikrootvora 13a dobijen, umesto kidanjem i lomljenjem materijala trake N, pomoću izvora lasera (pojačavanje svetlosti stimulisanom emisijom zračenja).

[0061] Detaljno postupak proizvodnje mikrootvora 13a, u skladu sa ovim postupkom koji nije u skladu sa pronalaskom, sadrži sledeće korake 01-05 ilustrovane na Sl. 2E - deo (a) uz pomoć strelicae:

01 pozicioniranje trake ili table N od AISI 316L nerđajućeg čelika između probijača P i matrice M, kalupa S;

02 početna faza spuštanja probijača P sa gornje mrtve tačke i posledično formiranje materijala trake ili table N od AISI 316L nerđajućeg čelika;

03 zaustavljanje probijača P, na kraju njegovog takta spuštanja, prema matrici M, sa formiranjem i izvlačenjem trake N, a da pritom ne prouzrokuje kidanje i lomljenje materijala koji sačinjava ovu traku N;

04 povratak probijača M do gornje mrtve tačke i njegovo uklanjanje iz zone trake N; 05 izvođenje bušenja, ili perforacije materijala trake N koje formira vrh izvučene zone, pomoću izvora lasera, posebno tipa koji ima multifokalnu glavu;

[0062] Zarad potpunosti informacija, Sl. 2E - delovi (b) i (c) pokazuju dve fotografske slike dela mreže za disgregaciju 13 koja je dobijena postupkom proizvodnje, šematizovanim u delu (a) iste Sl. 2E, u skladu sa ovim postupkom i upotrebom izvora laserske svetlosti, pri čemu ove fotografske slike ističu i detaljno pokazuju aperture ili prolaze formirane pomoću izvora laserske svetlosti.

[0063] Istaknuto je da je prolaz stvoren i dobijen na ovaj način laserom, u unutrašnjosti i u centralnom regionu zone izvučene pomoću probijača P, posebno precizan, i da ova laserska tehnika omogućava izradu prolaza dimenzija koje su potrebne, posebno u opsegu od 50 - 70 μm (mikrona) sa tolerancijom od ±5 μm (mikrona).

[0064] Štaviše rez, napravljen na ovaj način laserom, koji je zauzvrat odgovarajuće kalibrisan za vrstu reza neophodnu da bi se formirao prolaz, ima posebno oštre ivice.

[0065] Ponovo pomoću lasera mogu se dobiti posebno složene rezane figure, kao na primer romboidni rez, kao što su oni koji se poželjno upotrebljavaju, ovalni, poprečni ili jednostavni okrugli otvor.

Rad uređaja za disgregaciju 10 pronalaska

[0066] Kao što je prethodno navedeno, uređaj za disgregaciju 10 pronalaska je specifično dizajniran da se fino drobi i vrši disgregaciju biološkog materijala da bi se od njega dobila ćelijska suspenzija ili tkivni mikrograft i njime se može rukovati na sledeći način.

[0067] Inicijalno, nakon otvaranja i potpunog uklanjanja poklopca 15 sa cilindričnog spoljašnjeg tela 11, unapred utvrđena količina fiziološkog rastvora uvodi se u gornju komoru za punjenje 12a koja će se akumulirati u bazi ove komore za punjenje 12a.

[0068] Ovaj fiziološki rastvor ima funkciju obavljanja aktivnosti podmazivanja tokom celog postupka disgregacije biološkog materijala i, takođe i pre svega, deluje kao sredstvo za izdvajanje biološkog materijala koji je podvrgnut disgregaciji dobijenog na kraju postupka disgregacije.

[0069] Potom se uzorak, tj. biološki materijal MB koji treba da se podvrgne disgregaciji, utovaruje u gornju komoru za punjenje 12a, zauzvrat u takvim dimenzijama koje omogućavaju distributivnom sečivu 14b da savlada ovaj biološki materijal MB u početnoj fazi postupka disgregacije.

[0070] Zatim, nakon što se uređaj za disgregaciju 10 ponovo zatvori gornjim poklopcem 15, osigurava se da je uređaj za disgregaciju 10 u vertikalnom i stabilnom položaju tako da ne može rotirati tokom naredne faze disgregacije.

1

[0071] U ovom trenutku deo osovine 14a, rotora sa sečivom 14, koja viri iz poklopca 15, je spojen sa odgovarajućim motornim sredstvom, na primer koje sačinjava električni motor, obezbeđen da pokreće rotaciju rotora sa sečivom 14.

[0072] Posebno, u ovoj fazi, može biti korisno i prednost je upotrebljavati odgovarajući adapter, opisan ovde ispod na tačniji i detaljniji način, za spajanje dela koji viri osovine 14a sa električnim motorom.

[0073] Nakon toga se motor aktivira tako da pokrene rotaciju rotora 14, kako je navedeno strelicama f1 na Sl.3B, na unapred određeno vreme, tj. do završetka ciklusa disgregacije.

[0074] Detaljno, tokom ove faze disgregacije, distributivno sečivo 14b rotora sa sečivom 14, koje rotira, distribuira i dovodi biološki materijal MB utovaren u gornju komoru za punjenje 12a u kontakt sa mikrootvorima 13a formiranim u mreži za disgregaciju 13, terajući ga da prođe kroz njih, tako da se biološki materijal MB, prolazeći kroz ove mikrootvore 13a i sarađujući sa respektivnim mikrosečivima, na odgovarajući način podvrgne disgregaciji.

[0075] Pored toga strugač 14c, koji rotira integralno sa distributivnim sečivom 14b, potpomaže odvajanje biološkog materijala podvrgnutog disgregaciji MB', nakon što je prošao kroz mikrootvore 13a, sa donje strane mreže za disgregaciju 13, i njegovo sakupljanje u bazi komore za sakupljanje 12b, kako je šematizovano tačkastom i isprekidanom linijom i označeno strelicama f2 na Sl.3B.

[0076] U ovoj fazi, čisto putem primera i stoga ne želeći ni na koji način da ograniči raspon upotrebe i primene uređaja za disgregaciju 10 pronalaska, rotor sa sečivom 14 može biti napravljen da rotira brzinom od oko 80 obrtaja u minuti (rpm), primenjujući dalje pri tome odgovarajući obrtni moment, na primer 25 Nw*cm, da bi se prevazišli uobičajeni mehanički otpori koji se suprotstavljaju ovoj rotaciji, i zbog toga prouzrokuje prolazak biološkog materijala kroz mrežu 14 i njegovu posledičnu disgregaciju. ;[0077] Konačno, na kraju faze disgregacije, nakon što je isključen električni motor sa osovine 14a rotora sa sečivom 14, ubačen je špric, vrsta bez igle, unutar otvora 11c koji se vertikalno pruža u zidu cilindričnog spoljašnjeg tela 11, i ćelijska suspenzija ili biološki materijal podvrgnut disgregaciji MB', dobijen na ovaj način, aspirira se iz donje komore za sakupljanje 12b, kao što je šematski prikazano strelicama f3 na Sl.3B. ;;Tehnike drobljenja/disgregacije biološkog materijala u osnovi uređaja pronalaska ;;;1 ;[0078] Stoga je jasno iz onoga što je do sada opisano, kako u pogledu strukture, tako i rada uređaja za disgregaciju 10, da predmetni pronalazak takođe podrazumeva novu i inovativnu tehniku drobljenja/disgregacije biološkog materijala MB. ;[0079] Posebno, na osnovu ove inovativne tehnike, zahvaljujući rotaciji rotora sa sečivom 14, biološki materijal MB se inicijalno pokreće i dovodi u kontakt sa mrežom za disgregaciju 13 pomoću distributivnog sečiva 14b koje savladava biološki materijal MB unutar komore za punjenje 12a. ;[0080] Stoga je u ovoj početnoj fazi fiziološki rastvor, koji se već nalazi u komori za punjenje 12a, obogaćen ćelijama. ;[0081] Štaviše, rotor sa sečivom 14, dok rotira, vrši dvostruku funkciju rotacije biološkog materijala i pomeranja fiziološkog rastvora tako da ih pomeša. ;[0082] Ponovo distributivno sečivo 14b rotora sa sečivom 14, koje je pravilno oblikovano duž spiralnog profila, osigurava da, tokom faze disgregacije biološkog materijala MB, fiziološki rastvor, sadržan u komori za punjenje 12a, kontinuirano ispira površinu mreže za disgregaciju 13. ;[0083] Ova neprekidna distribucija fiziološkog rastvora u kontaktu sa perforiranom mrežom za disgregaciju 13 zauzvrat je takva da neprekidno čisti respektivne otvore 13a i tako omogućava slobodan prolaz ćelija kroz njih, kako bi se izbeglo pregrevanje i/ili nagorevanje tkiva i ćelija ili drugi nedostaci koji bi mogli izmeniti osobine izvornog biološkog materijala MB, tokom klizanja distributivnog sečiva 14b po mreži za disgregaciju 13. ;[0084] Konačno klizanje i lagani pritisak distributivnog sečiva 14b, dok rotira, na biološki materijal MB koji treba izdrobiti, znači da su ćelije ili aglomerati ćelija, koji imaju maksimalni prečnik manji od 75 mikrona, prisiljene da prođu kroz otvore 13a, odgovarajuće kalibrisane, mreže za disgregaciju 13, tako da sa suprotne strane perforirane mreže 13 izlaze samo ćelije ili aglomerati ćelija, uključene u biološki materijal MB, koji imaju maksimalni prečnik manji od 75 mikrona. ;[0085] Posebno je podvučeno i ponovo potvrđeno da je tačna i precizna veličina od 75 μm prolaznih otvora 13a formiranih u mreži za disgregaciju 13 od suštinskog značaja za dobijanje, na kraju postupka disgregacije, ćelijske suspenzije koja je sačuvala intaktne osobine, funkcije i vijabilnost izvornog biološkog materijala, nepodvrgnutog disgregaciji. ;[0086] Zarad veće jasnoće, Sl. 5A šematski pokazuje ćelijsku suspenziju dobijenu disgregacijom izvornog biološkog materijala MB, kao što je pokazano na Sl. 5, upotrebom uređaja za disgregaciju 10 pronalaska. ;;;1 ;[0087] Kao što se može videti sa ove Sl. 5A, u ćelijskoj suspenziji dobijenoj na ovaj način biološki materijal podvrgnut disgregaciji, označen sa MB', zadržava svoje intaktne osobine i funkcije, i posebno ćelije CEL održavaju svoj izvorni oblik, baš kao što i fragmenti matriksa MAT i faktori rasta FC, koji ukazuju na vijabilnost ćelija CEL, ne pokazuju izmene i modifikacije na štetu vijabilnosti i kapaciteta za razvoj i reagovanje na spoljašnje uslove, prikazano strelicama na Sl.5A, istih ćelija CEL. ;[0088] Na ovaj način svaka pojedinačna ćelija CEL zadržava intaktne sve one organske i neorganske faktore koji je obuhvataju i sačinjavaju njenu biološku nišu i samim tim određuju njenu funkciju i kapacitete, posebno one razvojne. ;[0089] Nasuprot tome, vrlo drugačije, kao što je već ranije podvučeno i šematizovano na Sl. ;6, u ćelijskim suspenzijama koje su dobijene putem disgregacije upotrebom tehnika koje su trenutno poznate i dostupne, ćelije imaju modifikovan oblik u odnosu na onaj koji su imale u izvornom biološkom materijalu, koji još nije podvrgnut disgregaciji. ;[0090] Štaviše, zbog disgregacije izvedene konvencionalnim tehnikama, ćelijski matriks je takođe podložan izmenama i modifikacijama, tako da je u finalnoj ćelijskoj suspenziji dobijenoj disgregacijom izvornog biološkog materijala, utvrđeno da su pojedinačne ćelije bez svih onih organskih i neorganskih faktora koji ih obuhvataju, u njihovoj biološkoj niši, i određuju njihovu funkciju i kapacitete. ;;Primeri primene uređaja za disgregaciju pronalaska ;;[0091] Kao što je predviđeno uređaj za disgregaciju 10 pronalaska je posebno pogodan i povoljan za pripremu tkivnih mikrograftova i ćelijskih suspenzija za upotrebu u različite svrhe i u više primena, i tipično medicinskim i ne, na primer za jednostavnu analizu u laboratoriji uzoraka ili za dijagnostiku ili u terapijske ili kozmetičke svrhe ili drugo, ponovo kako je utvrđeno detaljnim i opsežnim testovima i eksperimentima. ;[0092] Stoga, ovde ispod će, pozivajući se na blok dijagrame sa Sl. 4A-4D, neki specifični i poželjni primeri upotrebe i primene biti ilustrovani, u različitim oblastima i u različite svrhe, uređaja za disgregaciju 10 pronalaska i respektivne ćelijske suspenzije i tkivni mikrograftovi koji se dobijaju, sa ovim uređajem, iz disgregacije biološkog materijala. ;;PRIMER 1 (čirevi, gubici supstance, dehiscencije, teške rane) ;;;1 ;[0093] U ovom prvom primeru 1, koji odgovara blok dijagramu sa Sl. 4A, dovoljna količina derma za lečenje se prvobitno uzima sa neoštećenog područja tela čoveka i zatim se vrši njegova disgregacija putem uređaja za disgregaciju 10, predloženog pronalaskom. ;[0094] Zatim, nakon što je dobijena ćelijska suspenzija, impregnira se kolagenim biomaterijalom. ;[0095] U ovom trenutku se priprema mesto za graft, tj. pušta se krv sa lezije ili rane koja se leči. ;[0096] Zatim se prethodno dobijen biokompleks graftuje u mesto, sastavljen od ćelijske suspenzije i biomaterijala, a zatim se izvodi uobičajena medikacija. ;[0097] Nakon toga se sprovodi serija periodičnih pregleda. ;[0098] Takođe je moguće izvesti dodatne tretmane u slučaju veoma opsežnih lezija. ;;PRIMER 2 (estetska primena) ;;[0099] U ovom primeru 2, koji odgovara blok dijagramu sa Sl. 4B, dovoljna količina derma za izvođenje tretmana se prvobitno uzima sa neoštećenog područja tela čoveka. ;[0100] Zatim se ta količina derma podvrgava disgregaciji pomoću predloženog uređaja. ;[0101] Jednom kada se dobije ćelijska suspenzija, ubrizgava se ispod lezije koja se tretira ili defekta koji se uklanja, što mogu biti bore, psorijaza, skleroderma, vitiligo, čir, keloid, minus, itd, iglom odgovarajuće veličine. ;[0102] Zatim se sprovode uobičajeni rutinski pregledi. ;[0103] Moguće je izvesti dodatne tretmane u slučaju veoma opsežnih lezija. ;;PRIMER 3 (ortopedske - stomatološke - maksilofacijalne primene) ;;[0104] Pozivajući se na blok dijagram sa Sl. 4C, takođe u skladu sa ovim primerom 3 prvobitno se uzima dovoljna količina biološkog materijala (kost, periosteum ili zubna pulpa) bez izvlačenja krvi i bez njegovog pregrevanja, a zatim se fragmentiše i obrađuje putem predloženog uređaja za disgregaciju 10, kako bi se dobila i pripremila odgovarajuća ćelijska suspenzija. ;[0105] Zatim se obezbeđuje faza impregnacije biomaterijala, tj. ćelijske suspenzije, u protezi/ploči koja će biti primenjena, tako da se dobije biokompleks. ;[0106] Nakon toga priprema se mesto prijema (defekt kosti različite prirode, prelom, mesto prijema proteza kao što je na primer proteza kuka, kolena, zubnih implantata itd.) što se ;;;1 ;izvodi hirurškim pristupom, i nakon što je pripremljeno, već spreman biokompleks se graftuje u mesto prijema. ;;PRIMER 4 (primena u regeneraciji periodontalnih defekata) ;;[0107] U ovom primeru 4, koji odgovara blok dijagramu sa Sl. 4D, nakon što se prvobitno uzima dovoljna količina biološkog materijala (kost, periosteum ili zubna pulpa) bez izvlačenja krvi i bez njegovog pregrevanja, fragmentiše se i obrađuje putem predloženog uređaja za disgregaciju 10. ;[0108] Zatim se vrši impregnacija biomaterijala dobijenog za disgregaciju, čime se priprema biokompleks. ;[0109] Zatim se priprema mesto prijema. ;[0110] Posebno u ovoj fazi hirurški pristup je napravljen u zoni mesta sa zareznim zaklopkama pogodnim za periodontalnu regenerativnu terapiju i takođe se vrši debridement, tj. uklanjanje unutarkoštanog defekta konvencionalnim tehnikama. ;[0111] Nakon toga, pošto je pripremljeno mesto prijema, dobijeni biokompleks se graftuje. ;[0112] Konačno šivenje mesta vrši se na kontenitivan način i pacijent se upućuje na naknadne preglede. ;;PRIMER 5 (veterinarske primene) ;;[0113] U ovom primeru primene 5, u polju veterine, koji odgovara blok dijagramu sa Sl.4E, biološki materijal, nakon što se prvobitno uzima u dovoljnoj količini iz zdrave zone tela životinje (kost, periosteum, koža, mišić) bez izvlačenja krvi i bez njegovog pregrevanja, fragmentiše se i obrađuje pomoću uređaja za disgregaciju 10, koji je predložen. ;[0114] Zatim se vrši impregnacija biomaterijala dobijenog za disgregaciju, čime se priprema biokompleks. ;[0115] Zatim se priprema mesto prijema. ;[0116] Posebno u ovoj fazi hirurški pristup je napravljen u zoni mesta sa zareznim zaklopkama pogodnim za regenerativnu terapiju i takođe se vrši debridement konvencionalnim tehnikama. ;[0117] Nakon toga, pošto je pripremljeno mesto prijema, prethodno spremljen biokompleks se graftuje. ;;;2 ;[0118] Konačno šivenje mesta vrši se na kontenitivan način i životinja se upućuje na naknadne preglede. ;;PRIMER 6 (primena u regeneraciji mišićnih i miokardijalnih defekata) ;;[0119] U ovom primeru 6, koji odgovara blok dijagramu sa Sl. 4F, prvobitno se uzima dovoljna količina skeletnog ili miokardijalnog mišića bez izvlačenja krvi i sa mini-invazivnim pristupom, i zatim se fragmentiše i obrađuje pomoću predloženog uređaja za disgregaciju 10. ;[0120] Zatim se vrši impregnacija biomaterijala dobijenog za disgregaciju, da bi se pripremio biokompleks. ;[0121] Zatim se priprema mesto prijema. ;[0122] Posebno u ovoj fazi vrši se hirurška intervencija u zoni mesta sa mini-invazivnim pristupom i graftuje se biokompleks koji je bio pripremljen. ;[0123] Pacijent se zatim upućuje na naknadne preglede. ;;Rezultati eksperimenta i testovi ;;[0124] Uređaj za disgregaciju 10 i zavisni proizvodi, tj. ćelijske suspenzije i uzorci dobijeni ovim uređajem za disgregaciju izvornog biološkog materijala, bili su predmet brojnih i opširnih eksperimentalnih kontrola i testova sa ciljem sakupljanja korisnih podataka i potvrđivanja inovativnih osobina i prednosti ovog pronalaska. ;[0125] Zarad potpunosti, slike sa Sl.7A-7F pokazuju nekoliko primera pločica i uzoraka koji su analizirani i ispitani kao deo ovih testova i stoga se mogu jasno razumeti i tumačiti od strane stručnih osoba, pri čemu su ovi uzorci koji su predmet analize i studije, dobijeni iz tkiva podvrgnutog disgregaciji pomoću uređaja za disgregaciju 10 pronalaska biološkog materijala. ;[0126] Detaljne laboratorijske analize izvršene na ovim uzorcima su pokazale da su se prve kolonije pojavile posle otprilike 15-20 dana i mesec posle zasejavanja. ;[0127] Ove dve kolonije su zatim odvojene od posude i ponovo zasejane, fotografisane i analizirane citofluorimetrijski. ;[0128] Sada, kao što se može videti sa slika sa Sl. 7A-7F, analizirani uzorci, izvedeni iz izvornog tkiva podvrgnutog disgregaciji, jasno imaju dve različite populacije ćelija, tj. prvu populaciju izduženog oblika i drugu, veću populaciju romboidnog oblika. ;[0129] U vezi sa ovim ističe se da kako bi se ove dve populacije ćelija fotografisale respektivni nukleusi su obojeni plavo fluorescentnom organskom bojom (DAPI), dok je za citofluorimetrijsku analizu upotrebljen panel antitela koja se uobičajeno upotrebljavaju za karakterizaciju mezenhimskih ćelija, plus anti-CD11b antitelo. ;[0130] Sumirano, ove analize su dale sledeće rezultate: ;;- vijabilnost: 92% ;- CD90+ ćelije: 52% ;- CD105+ ćelije: 82% ;- CD11b+ ćelije: 45% ;- CD11b-dim ćelije: 43% ;- CD73+ ćelije: 82% ;- CD146+ ćelije: 36% ;- CD146-dim ćelije: 49% ;- CD31+ ćelije: 2% ;- CD80+ ćelije: 3% ;- CD45+, CD14+, CD34, CD133 ćelije: 0% ;;[0131] Štaviše iz ovih testova je proizašlo da je ustanovljeno da ćelije pripadaju mezenhimskoj liniji i, kako se očekivalo, negativne su na markere hematopoetske linije. ;[0132] Štaviše ustanovljeno je da je vijabilnost ćelija odlična. ;[0133] Naročito kvalitativni dijagram sa Sl.8, koji sumira i ujedinjuje brojne testove izvedene kako bi se utvrdile osobine i prednosti predmetnog pronalaska, jasno pokazuje da, u ćelijskoj suspenziji dobijenoj pomoću uređaja za disgregaciju 10 pronalaska, procenat vijabilnih izolovanih ćelija i respektivnih faktora rasta dostižu svoju maksimalnu i optimalnu vrednost kada otvori 13a mreže za disgregaciju 13 imaju veličinu ili prečnik od oko 75 mikrona. ;[0134] Nasuprot tome, za vrednosti veličine otvora 13a ispod 75 mikrona, ovaj procenat vijabilnih izolovanih ćelija je znatno niži od maksimalne vrednosti, kao što je pokazano delom A sa neprekidnom linijom dijagrama sa Sl.8. ;[0135] Deo B, sa istačkanom i isprekidanom linijom, dijagrama sa Sl. 8 zauzvrat treba da uputi na prisustvo, u ćelijskoj suspenziji dobijenoj pomoću uređaja za disgregaciju 10 pronalaska, kako izolovanih ćelija tako i aglomerata ćelija. ;[0136] Stoga su ovi testovi, kao i drugi koji ovde nisu dati iz razloga sažetosti, jasno pokazali da uređaj za disgregaciju 10, predložen predmetnim pronalaskom, omogućava pripremu i dobijanje uzoraka biološkog tkiva i uopšte biološkog materijala, dobijenih disgregacijom tkiva koje je od izvornog biološkog materijala, pri čemu je povoljno da dobijeni uzorci i posebno respektivne ćelije zadržavaju intaktne i neizmenjene osobine, funkcije i ćelijsku vijabilnost tkiva i izvornog biološkog materijala i stoga nisu izmenjeni fazom disgregacije kojoj su bili podvrgnuti, uz dalju prednost da su dobijeni uzorci, intaktni i sa zadržanom svojom izvornom ćelijskom vijabilnošću, pogodni da budu analizirani direktno bez pribegavanja pomoći hemijskih reagensa. ;[0137] U ovom pogledu će sigurno biti cenjeno da uređaj za disgregaciju 10 predmetnog pronalaska predstavlja značajno poboljšanje i važnu inovaciju u odnosu na stanje tehnike, posebno predstavljeno uređajem za drobljenje koji je opisan u patentu US 5,731,199, i u postupku proizvodnje delova koji su neophodni za rad uređaja za disgregaciju i u pogledu njegove upotrebe i potencijalnih primena, i posebno pošto omogućava značajno širenje polja primene uređaja za disgregaciju u odnosu na ono što omogućava uređaj poznat iz patenta US 5,731,199. ;;Varijante i poboljšanja ;;[0138] Bez da se naškodi osnovnim konceptima predmetnog pronalaska takođe je jasno da se promene i dodatna poboljšanja mogu izvršiti na uređaju za disgregaciju biološkog materijala, opisanom do sada, za pripremu ćelijskih suspenzija i tkivnih mikrograftova, a bez odstupanja od obima istog pronalaska. ;[0139] Na primer može biti više od jednog sečiva rotora sa sečivom 14, tj. može biti četiri ili šest postavljenih simetrično oko vrha osovine 14a. ;[0140] Ponovo, u skladu sa poboljšanjem koje odgovara primerima izvođenja pokazanim na Sl. 3C, uređaj za disgregaciju 10 pronalaska može biti povezan sa magnetnim elementom koji ima funkciju odgovarajuće kontrole pritiska pomoću kog rotor sa sečivom 14 i mreža za disgregaciju 13 sarađuju jedno sa drugim u cilju disgregacije biološkog materijala. ;[0141] Detaljno, u prvom primeru izvođenja koji je označen sa 10-1 i pokazan u delu (a) na Sl. 3C, uređaj za disgregaciju 10 je obezbeđen magnetnim elementom, označenim sa MAG i posebno je sačinjen od stalnog neodimijumskog magneta, koji je zalepljen za bazu podmetača ili donje komore za sakupljanje 12b uređaja za disgregaciju 10. ;[0142] Nasuprot tome, u drugom primeru izvođenja koji je označen sa 10-2 i pokazan u delu (b) na Sl. 3C, uređaj za disgregaciju 10 je obezbeđen u kombinaciji sa dodatnom potpornom bazom BA i magnetni element MAG je pričvršćen na bazu ležišta S koje je formirano u ovoj ;;;2 ;dodatnoj potpornoj bazi BA i ima funkciju da ga primi i stabilno smesti tokom upotrebe uređaja za disgregaciju 10. ;[0143] Ovaj magnet MAG vrši, u oba primera izvođenja 10-1 i 10-2, privlačenje spiralnog sečiva 14b rotora sa sečivom 14 unapred utvrđenom jačinom, tako da kontroliše pritisak koji vrši isti rotor sa sečivom 14b na mrežu za disgregaciju 13 i posebno da se izbegne prevelika vrednost ovog pritiska. ;[0144] U tu svrhu, dva dela koja u uređaju za disgregaciju 19 sarađuju u kontaktu i u odnosu pritiska jednog na drugi kako bi se izvršila disgregacija biološkog materijala, tj. spiralno sečivo 14b rotora sa sečivom 14 i mreža za disgregaciju 13 napravljeni su od čelika koji imaju različite alotropne faze, austenitne ili martenzitne, tako da je mreža za disgregaciju 13, izrađena na primer od 316L nerđajućeg čelika dakle austenitnog čelika, amagnetična je i samim tim neosetljiva na magnetno polje generisano magnetom MAG, dok je nasuprot tome spiralno sečivo 14b, izrađeno od martenzitnog čelika, osetljivo je na magnetno polje koje generiše magnet MAG i zbog toga pritiska kontrolisanim pritiskom ili silom mrežu za disgregaciju 13. ;[0145] Očigledno je da je stalni magnet MAG dimenzioniran i izabran u pogledu snage i kapaciteta privlačenja na takav način da je pritisak koji vrši spiralno sečivo 14b na mrežu za disgregaciju 13 adekvatan za dobijanje ispravne disgregacije biološkog materijala. ;[0146] Dakle, sumirano, ove varijante 10-1 i 10-2 uređaja za disgregaciju pronalaska imaju prednost efikasnog držanja pod kontrolom pritiska koji se primenjuje od strane spiralnog sečiva ili rotora 14b na mrežu za disgregaciju 13, kako bi se dobila optimalna disgregacija biološkog materijala i na taj način sprečili i otklonili neki nedostaci do kojih može doći u poznatim uređajima za disgregaciju, kao što je na primer onaj opisan patentom US 5,731,199, u kome nedostaje ova kontrola. ;;Upotreba uređaja za disgregaciju biološkog materjala pronalaska u operacionoj sali, sa uređajem za disgregaciju povezanim pomoću adaptera sa hirurškim štapom uključenim u instrumenatalnu opremu operacione sale ;;[0147] Konačno, u skladu sa dodatnim aspektom predmetnog pronalaska, uređaj za disgregaciju 10 biološkog materijala, ilustrovan ranije, može biti povoljno povezan, pomoću odgovarajućeg adaptera, sa uobičajenim hirurškim štapom ili električnim motorom, sterilnim, već prisutnim u operacionoj sali, kako bi se omogućila upotreba uređaja za disgregaciju 10 pronalaska direktno u operacionoj sali. ;[0148] Sl. 3D pokazuje ovaj adapter, uopšteno označen sa 20, koji u stvari omogućava povezivanje uređaja za disgregaciju 10 pronalaska sa uobičajenim hirurškim motorom ili manipulatorom, uključenim u opremu sterilnih uređaja i instrumenata uobičajeno prisutnih u operacionoj sali. ;[0149] Detaljno, adapter 20 ima izduženu konfiguraciju sa prvim krajem 20a pogodnim da poveže adapter 20, sa jedne strane, sa osovinom 14a, koja viri iz uređaja za disgregaciju 10, i drugim suprotnim krajem 20b, odgovarajućeg oblika, pogodnim da poveže adapter 20, sa druge strane, sa hirurškim štapom, koji je već prisutan u operacionoj sali. ;[0150] Za efikasnu upotrebu ovaj adapter 20 je spojen, u operacionoj sali, sa jedne strane na deo osovine 14a koja viri iz uređaja za disgregaciju 10 i sa druge strane na hirurški štap. ;[0151] Hirurški štap se zatim aktivira tako da rotira odgovarajućom brzinom, posebno 80 o/min, i primenom odgovarajućeg obrtnog momenta, na primer 25/Nw*cm, kao što je već prethodno navedeno, rotor sa sečivom 14 uređaja za disgregaciju 10 i posledično prouzrokuje disgregaciju biološkog materijala, koji je već uzet od pacijenta koji se leči u operacionoj sali i prethodno uveden u uređaj za disgregaciju 10.

[0152] Na ovaj način, tj. bez iznošenja biološkog materijala uzetog od pacijenta iz operacionog prostora, moguće je pripremiti podvrgavanjem disgregaciji biološkog materijala, na primer u obliku tkivnog mikrografta, da bi se ponovo ubacio u telo pacijenta koji se leči u operacionoj sali.

[0153] Stoga uređaj za disgregaciju 10 pronalaska, zahvaljujući prethodno opisanom adapteru 20, omogućava inovativne performanse i rezultate koji idu daleko izvan onih koje stanje tehnike dozvoljava, na primer uređajem za drobljenje biološkog materijala koju je opisan patentom US 5,731,199 i već nekoliko puta ranije citiran, tako da predstavlja valjanu alternativu poznatim sistemima trenutno u upotrebi.

[0154] Posebno uređaj za disgregaciju 10 pronalaska, koji se upotrebljava u kombinaciji sa ovim adapterom 20 koji omogućava njegovo povezivanje sa sterilnim hirurškim štapom, koji je već prisutan u operacionoj sali, više nije konfigurisan kao jednostavan uređaj za disgregaciju biološkog materijala, kakav je onaj opisan patentom US 5,731,199, već postaje i može se uporediti, barem funkcionalno, sa hirurškim instrumentom koji se može direktno upotrebljavati u operacionoj sali, tj. sa sterilnim mikroskalpelom za jednokratnu upotrebu, koji je sačinjen od mnoštva mikrosečiva, na primer 600, pretpostavljajući da mreža za disgregaciju 13 uređaja 10 ima 100 mikrootvora ili šestougaonih pora, tj.100 mikrootvora od kojih svaki definiše 6 mikrosečiva, dakle ukupno 600 mikrosečiva, pri čemu se ovaj mikroskalpel može upotrebljavati za rezanje i disgregaciju tkiva u nekoliko minuta kako bi se

2

dobili, direktno u operacionoj sali i bez dodatnih postupaka, fragmenti tkiva kalibrisanih dimenzija koji su potrebni pacijentima koji se leče u operacionoj sali.

[0155] Posledično, makar unutar sfere ove inovativne upotrebe, uređaj za disgregaciju 10 pronalaska se takođe može definisati kao mikroskalpel za mini-invazivnu mikrohirurgiju.

[0156] U vezi sa ovim podvlači se da do danas stanje tehnike nije omogućavalo ove performanse i rezultate u operacionoj sali, koji se nasuprot tome dobijaju uređajem za disgregaciju 10 povezujući ga, kao što je pomenuto, putem adaptera 20 na uobičajen hirurški štap već prisutan u operacionoj sali.

[0157] U stvari, u stanju tehnike, time takođe uključujući uređaj za drobljenje opisan patentom US 5,731,199, bilo je neophodno, da bi se dobili mikrofragmenti tkiva koji će se upotrebiti u operacionoj sali za lečenje pacijenta, preneti tkiva, jednom uzeta od pacijenta, iz operacione sale, u laboratoriju opremljenu posebnom mašinom koja ima funkciju aktiviranja ili rotiranja uređaja, kako bi se dobili mikrofragmenti tkiva, koji će zatim biti odneti u operacionu salu kako bi se graftovali u pacijenta.

[0158] Ovo iznošenje iz operacione sale i sa time povezane radnje su međutim podrazumevale manipulacije koje zakonom nisu bile dozvoljene u sferi medicinske terapije.

[0159] Nasuprot tome, kao što je prethodno opisano, povezivanjem putem adaptera 20 uređaja za disgregaciju 10 pronalaska sa hirurškim manipulatorom uključenim u opremu instrumenata i uređaja, sterilnih, već prisutnih u operacionoj sali, moguće je učiniti dostupnim i upotrebiti uređaj 10 direktno u operacionoj sali, zadržavajući sterilnost i efikasnost sistema i istovremeno poštujući zakon.

[0160] Stoga, na ovaj način uređaj za disgregaciju pronalaska takođe postaje suštinski deo inovativnog instrumentalnog kliničkog i hirurškog postupka, za regeneraciju tkiva u operacionoj sali, pogodan da posmatra uslove sterilnosti, postupka koji nasuprot tome nije bilo moguće izvoditi ranije instrumentima koje je pružalo stanje tehnike, posebno sa uređajem opisanim patentom US 5,731,199.

[0161] Štaviše uz već navedene prednosti i performanse, koje su same po sebi važne, u vezi sa upotrebom uređaja 10 pronalaska direktno u operacionoj sali, treba uzeti u obzir da se isti uređaj 10 karakteriše, kako je ranije detaljno ilustrovano, inovativnom tehnologijom i postupkom za formiranje mikrootvora 13a respektivne mreže za disgregaciju 10.

[0162] Posledično, kao što je već prethodno podvučeno, uređaj za disgregaciju 10 je konfigurisan u stvari i može se s pravom uporediti sa hirurškim mlinom ili miniskalpelom obezbeđenim sa mnoštvom mikrosečiva, na primer u broju od 600, kako bi se iseklo i fragmentisalo tkivo pacijenta koji se leči u operacionoj sali.

2

Claims (12)

Patentni zahtevi

1. Uređaj za disgregaciju (10) za disgregaciju biološkog materijala, posebno za pripremu ćelijskih suspenzija ili tkivnih mikrograftova ili mikrofragmenata tkiva, koji sadrži:

- šuplje spoljašnje telo (11), koje definiše unutrašnju komoru (12);

- perforiranu ploču ili mrežu za disgregaciju (13), koja je fiksna, koja ima mnoštvo mikrootvora (13a) obezbeđenih oštrim ivicama, navedena mreža za disgregaciju je smeštena poprečno u navedenoj unutrašnjoj komori (12) tako da definiše gornju komoru za punjenje (12a) pogodnu da se napuni biološkim materijalom koji se podvrgava disgregaciji (MB) i donju komoru za sakupljanje (12b) pogodnu da sakuplja biološki materijal, pošto je podvrgnut disgregaciji (MB'); i

- rotor sa sečivom (14), koji rotira u navedenoj unutrašnjoj komori (12), navedeni rotor sa sečivom (14) sposoban je da sarađuje, rotirajući, sa navedenom mrežom za disgregaciju (13), koja je fiksna, tako da napaja i dovodi biološki materijal (MB), sadržan u gornjoj komori za punjenje (12a), u kontakt i da sarađuje sa mikrootvorima (13a), sa oštrim ivicama, navedene mreže za disgregaciju (13), i stoga prouzrokuje disgregaciju biološkog materijala (MB) dok prolazi kroz navedene mikrootvore (13a);

naznačen time što mikrootvori (13a) navedene perforirane mreže za disgregaciju (13) imaju dimenzije ili prečnik (D) između 70 i 80 μm, i poželjnije imaju dimenzije ili prečnik (D) oko 75 μm,

time što su mikrootvori (13a) navedene mreže za disgregaciju (13) formirani postupkom proizvodnje oblikovanjem tipa matrica/probijač (M, P), upotrebom tipa probijača za oblikovanje (P) piramidalnog oblika sa poligonalnom osnovom,

time što su navedeni probijač za oblikovanje (P) i odgovarajuća matrica (M) konfigurisani na takav način da se svaki od navedenih mikrootvora (13a) dobija putem loma i kidanja materijala metalne table (N) i ima nepravilnu oštru ivicu (B), putem efekta ovog loma ili kidanja, definišući mnoštvo oštrih vrhova, i

time što navedeno spoljašnje telo (11) definiše prolazni otvor (11c), suštinski vertikalan, koji se pruža između gornje ivice navedenog spoljašnjeg tela (11) i baze

2

navedene komore za sakupljanje (12b), pri čemu navedeni prolazni otvor (11c) ima funkciju omogućavanja ekstrakcije biološkog materijala podvrgnutog disgregaciji (MB'), akumuliranog u navedenoj komori za sakupljanje (12b), pri čemu je navedeni uređaj za disgregaciju (10) pogodan za pripremu ćelijskih suspenzija i obrazovanje tkivnih mikrograftova koji zadržavaju intaktne karakteristike i ćelijsku vijabilnost izvornog biološkog materijala, nepodvrgnutog disgregaciji, čime se izbegava upotreba hemijskih reagenasa u pripremi ovih ćelijskih suspenzija i u obrazovanju ovih tkivnih mikrograftova.

2. Uređaj za disgregaciju (10) u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačen time što je navedeni rotor sa sečivom (14) sačinjen od:

- osovine (14a), postavljene u vertikalnom smeru;

- distributivnog sečiva (14b), koje je povezano sa donjim krajem navedene vertikalne osovine (14a) i koje ima zakrivljen spiralni oblik; i

- donjeg strugača (14c), koji je takođe povezan sa donjim krajem navedene vertikalne osovine (14a),

pri čemu je mreža za disgregaciju (13), koja je fiksna, umetnuta između navedenog spiralnog distributivnog sečiva (14b) i navedenog donjeg strugača (14c), koji su oba povezani sa donjim krajem navedene vertikalne osovine (14a), pri čemu je navedeni rotor sa sečivom (14) pogodan da sarađuje, rotirajući, putem svog spiralnog distributivnog sečiva (14b) i svog donjeg strugača (14c), respektivno sa gornjom stranom navedene mreže za disgregaciju (13), okrenutom ka navedenoj gornjoj komori za punjenje (12a), kako bi distribuirao i doveo biološki materijal (MB) koji se podvrgava disgregaciji u kontakt sa mikrootvorima (13a) mreže za disgregaciju (13), i sa donjom stranom, navedene mreže za disgregaciju (13), okrenutom ka navedenoj komori za sakupljanje (12b), kako bi sastrugao biološki materijal podvrgnut disgregaciji (MB') koji izlazi iz mikrootvora (13a) navedene mreže za disgregaciju (13) i ispustio ga (f2) u navedenu komoru za sakupljanje (12b).

3. Uređaj za disgregaciju (10) u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva, naznačen time što je navedeno spoljašnje telo (11) povezano sa sekundarnim unutrašnjim telom (16), koje definiše navedenu gornju komoru za punjenje (12a), i sačinjeno je od gornjeg dela (11a) koji definiše ležište (11') u kome je smešteno navedeno sekundarno unutrašnje telo (16) i donjeg dela (11b) koji definiše navedenu donju komoru za sakupljanje (12b),

pri čemu je navedena mreža za disgregaciju (13) umetnuta između navedenog sekundarnog unutrašnjeg tela (16), smeštenog u navedenom ležištu (11') koje je definisano gornjim delom (11a) navedenog spoljašnjeg tela (11), i donjeg dela (11b), koji definiše navedenu donju komoru za sakupljanje (12b), navedenog spoljašnjeg tela (11), i

pri čemu navedeno sekundarno unutrašnje telo (16) formira potporno ležište za rotirajuću potporu navedenog rotora sa sečivom (14), i posebno respektivnu osovinu (14a), i spojeno je sa gornjim delom (11a) navedenog spoljašnjeg tela (11) tako da ne rotira i na taj način se izbegava bilo kakva rotacija mreže za disgregaciju (13), umetnute između navedenog sekundarnog unutrašnjeg tela (16) i donjeg dela (11b) navedenog spoljašnjeg tela (11), kada navedeni rotor sa sečivom (14) rotira u navedenoj unutrašnjoj komori (12) kako bi prouzrokovao disgregaciju biološkog materijala (MB).

4. Uređaj za disgregaciju (10) u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva, naznačen time što je svaki mikrootvor (13a) navedene mreže za disgregaciju (13) nadvišen mnoštvom sečiva, i pokazuje, posebno, šestougaoni oblik, sa šest sečiva od kojih je svako povezano sa respektivnom stranom šestougaonika.

5. Uređaj za disgregaciju (10) u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva, dodatno sadrži poklopac (15), koji se može ukloniti, za pokrivanje navedene gornje komore za punjenje (12a), naznačen time što se rotor sa sečivom (14) pruža kroz otvor (15a) formiran u navedenom poklopcu (15), pri čemu navedeni rotor sa sečivom delimično viri na respektivnom gornjem kraju navedenog poklopca (15) tako da omogućava spajanje navedenog rotora sa sečivom (14) sa prikladnim motorom koji je pogodan da kontroliše njegovo rotiranje u navedenoj unutrašnjoj komori (12).

6. Uređaj za disgregaciju (10) u skladu sa patentnim zahtevom 2, naznačen time što je navedeni strugač (14c) formiran mnoštvom sečiva, u formi klina, posebno dva, jedan nasuprot drugom, koji se pružaju radijalno sa donjeg kraja osovine (14a) navedenog rotora sa sečivom (14).

2

7. Uređaj za disgregaciju (10, 10-1; 10-2) u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 6, naznačen time što uređaj za disgregaciju (10) sadrži magnetni element (MAG), sačinjen posebno od stalnog magneta, pogodan da privuče unapred utvrđenom jačinom spiralno sečivo (14b) rotora sa sečivom (14), na takav način da kontroliše, tokom upotrebe uređaja za disgregaciju (10), pritisak koji vrši isti rotor sa sečivom (14b) na mrežu za disgregaciju (13).

8. Uređaj za disgregaciju (10, 10-1; 10-2) u skladu sa patentnim zahtevom 7, naznačen time što je magnetni element (MAG) prikačen za bazu podmetača ili donje komore za sakupljanje (12b) uređaja za disgregaciju (10).

9. Uređaj za disgregaciju (10, 10-1; 10-2) u skladu sa patentnim zahtevom 8, naznačen time što je magnetni element (MAG) prikačen na bazu ležišta (S) koje je formirano u dodatnoj potpornoj bazi (BA) i ima funkciju da ga primi i smesti tokom upotrebe uređaja za disgregaciju (10).

10. Postupak za proizvodnju uređaja za disgregaciju (10) za disgregaciju biološkog materijala, tipa koji uključuje najmanje jednu perforiranu ploču ili mrežu za disgregaciju (13) koja ima mnoštvo oštrih mikrootvora (13a) kroz koje se biološki materijal proteruje kako bi bio podvrgnut disgregaciji,

naznačen time što postupak sadrži korak oblikovanja kako bi se oblikovao, pomoću kalupa (S) tipa matrica-probijač, metalni list ili traka (N), originalna, posebno od 316L nerđajućeg čelika, kako bi se formirali u navedenom metalnom listu (N) mikrootvori (13a) mreže za disgregaciju (13);

pri čemu su matrica (M) i probijač (P) kalupa (S) konfigurisani na takav način da izvlače i kidaju, tokom navedene faze oblikovanja, metalni list (N), tako da se dobiju mikrootvori (13a) navedene mreže za disgregaciju (13) putem kidanja i loma navedenog metalnog lista (N);

pri čemu probijač (P) kalupa (S) ima konfiguraciju piramidalnog oblika sa poligonalnom osnovom, na primer sa šest strana, tako da mikrootvori (13a) navedene mreže za disgregaciju (13), dobijeni putem kidanja i loma originalne metalne trake (N), svaki ima nazubljenu oštru ivicu sa nekoliko vrhova, na primer šest, što odgovara po broju stranicama poligonalnog probijača; i

pri čemu mikrootvori (13a) mreže za disgregaciju (13), dobijeni putem kidanja originalne metalne trake (N), imaju dimenzije ili prečnik (D) koji je sadržan između 70 i 80 μm, i poželjnije imaju dimenzije ili prečnik (D) oko 75 μm.

11. Kombinacija uređaja za disgregaciju (10) u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 6, za pripremu mikrofragmenata tkiva i adaptera (20) pogodnog da poveže isti uređaj (10) sa uobičajenim hirurškim manipulatorom uključenim u opremu instrumenata i uređaja, sterilnim, normalno prisutnim u operacionoj sali.

12. Kombinacija u skladu sa patentnim zahtevom 11, naznačena time što adapter (20) ima izdužen oblik sa jednim krajem (20a) pogodnim da se poveže sa osovinom koja viri (14a) navedenog rotora sa sečivom (14) i suprotnim krajem (20b) pogodnim da se poveže sa hirurškim manipulatorom.

1