RS61058B1

RS61058B1 - Lečenje b-ćelijskih maligniteta sa kombinacijom inhibitora jak i pi3k

Info

Publication number: RS61058B1
Application number: RS20201374A
Authority: RS
Inventors: Peggy A Scherle; Xuesong Liu
Original assignee: Incyte Corp
Priority date: 2014-04-08
Filing date: 2015-04-07
Publication date: 2020-12-31
Also published as: MY185686A; CA3158254A1; HRP20201887T1; EA201692011A1; CN106413716B; IL295225A; DK3129021T3; EP3129021A1; JP7206314B2; JP2017510615A; KR20230044320A; KR20220066179A; US10675284B2; AU2020213313A1; JP2023040142A; EP4501409A3; SMT202000656T1; IL248198B; EP3129021B1; BR112016023322A8

Description

Opis

OBLAST TEHNIKE

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na kombinaciju inhibitora JAK1 i/ili JAK2 i inhibitora PI3Kδ za upotrebu u postupcima lečenja B-ćelijskih maligniteta.

STANJE TEHNIKE

[0002] B-ćelijski receptor (BCR) je prisutan na normalnim i većini malignih B-ćelija. Angažovanje BCR obezbeđuje važne signale za preživljavanje, i narušavanje signala BCR može da dovede do smrti B-ćelije. Ispitivanja koja su sprovedena sa siRNK za inhibiciju ekspresije BCR su pokazala da je konstitutivna signalizacija sa BCR kritična za preživljavanje i proliferaciju limfoma humanih B-ćelija. Izgleda da je primarna uloga signalizacije BCR u ovim ćelijama aktivacija tirozin kinaze u slezini (Syk) što sa druge strane dovodi do nekoliko nishodnih događaja koji promovišu preživljavanje ćelija, uključujući aktivaciju Brutonove tirozin kinaze (BTK), fosfatidilinozitol 3 kinaze (PI3K), i AKT. Pokazano je da brojni B-ćelijski maligniteti, uključujući difuzne krupnoćelijske B-limfome (DLBCL), posebno zavise od signala BCR za preživljavanje što pokazuje njihova in vitro osetljivost na genetičku i farmakološku inhibiciju signalnih komponenti BCR. Pokazano je da ćelije DLBCL angažuju PI3K, povećavajući antiapoptotsku NF-kB signalizaciju i signale za preživljavanje i da inhibicija PI3K/AKT puta sinergiše sa inhibicijom NF-kB u in vitro ubijanju ćelijskih linija DLBCL.

[0003] Aberantna aktivacija JAK-a, kroz proizvodnju citokina i faktora rasta, takođe je bila povezana sa povećanom proliferacijom i preživljavanjem malignih ćelija u brojnim tipovima tumora. JAK-e aktiviraju brojne nishodne puteve koji su uključeni u proliferaciju i preživljavanje malignih ćelija uključujući STAT-e, familiju važnih latentnih transkripcionih faktora. Utvrđeno je, što je od kliničkog značaja, da su nivoi IL-10 i IL-6 u serumu, koji prenose signale preko JAK-a, povišeni kod pacijenata sa DLBCL u poređenju sa normalnim kontrolama (Gupta et al, 2012). Dalje, utvrđeno je da pacijenti sa visokim nivoima IL-10 u serumu imaju kraće preživljavanje bez definisanih događaja (eng. event-free survival) (Gupta et al, 2012). U JAK familiji kinaza, pokazano je da JAK1 ima kooperaciju sa JAK2, JAK3, i TYK2 i da igra glavnu ulogu u posredovanju u signalizaciji brojnih inflamatornih citokina uključujući IL-6, IL-10 i interferon.

[0004] U DLBCL, aktivacija JAK puta se dešava preko oba, autokrinih i parakrinih mehanizama. U tumorskim ćelijama, signalizacija BCR dovodi po povećane proizvodnje IL-6 i IL-10 preko aktivacije NF-kB puta (Lam et al, 2008). Podtipovi DLBCL-a su karakterisani sa visokom ekspresijom STAT3, IL-6, i/ili IL-10 i pokazano je da je inhibicija JAK citotoksična u ovim ćelijskim linijama DLBCL i sinergiše sa inhibitorima NF-kB. Pored aktivacije JAK/STAT puta preko autokrinih puteva, stromalni kompartment takođe može da obezbedi izvor ovih citokina na parakrini način (Hodge et al, 2005).

[0005] Iz ovih razloga, postoji potreba za razvojem novih terapija koje mogu da se koriste za lečenje B-ćelijskih maligniteta, kao što je DLBCL. Ovaj pronalazak je usmeren prema ovoj potrebi i drugima.

OPIS NACRTA

[0006]

SL.1A prikazuje analizu „Western blot“ za ispitivanje IL6 i IL10 različitih ćelijskih linija DLBCL. SL.1B prikazuje analizu „Western blot“ za aktin i p-Stat3 za Fajferove ćelije tretirane sa IL6 ili IL10.

SL. 2A prikazuje % inhibicije u testu ćelijske proliferacije u Fajferovim ćelijama kao funkciju koncentracije Jedinjenja 28 sa nosačem (DMSO), DMSO+IL10, i DMSO+IL10+ruksolitinib.

SL. 2B prikazuje % inhibicije u testu ćelijske proliferacije u Fajferovim ćelijama kao funkciju koncentracije Jedinjenja 28 sa nosačem (DMSO), DMSO+IL10, i DMSO+IL10+Jedinjenje 7.

SL.3 prikazuje % inhibicije u testu ćelijske proliferacije u HBL-1 ćelijama kao funkciju koncentracije Jedinjenja 28 sa nosačem (DMSO), DMSO+IL10, i DMSO+IL10+ruksolitinib.

SL. 4 prikazuje analizu „Western blot“ za Fajferove ćelije posle tretmana sa nosačem (DMSO), ruskolitinibom, Jedinjenjem 28, ili Jedinjenjem 28 i ruksolitinibom sa ili bez IL10.

SL. 5 prikazuje analizu „Western blot“ za Fajferove ćelije posle tretmana sa nosačem (DMSO), Jedinjenjem 7, Jedinjenjem 28, ili Jedinjenjem 28 i Jedinjenjem 7 sa ili bez IL10.

SL. 6 prikazuje % inhibicije u testu ćelijske proliferacije u Fajferovim ćelijama kao funkciju koncentracije Jedinjenja 28 sa nosačem (DMSO), DMSO+IL10, i DMSO+IL10+Jedinjenjem 16. SL. 7 prikazuje bojenje Aneksinom-V Fajferovih ćelija koje su tretirane sa Jedinjenjem 28 /-Jedinjenjem 16, pokazujući sinergijsku indukciju apoptoze iz kombinovane terapije.

SL. 8 prikazuje analizu „Western blot“ za Fajferove ćelije posle tretmana sa Jedinjenjem 28 /-Jedinjenjem 16 koji pokazuje efekat na STAT3 i pAKT.

SUŠTINA PRONALASKA

[0007] Predmetna prijava obezbeđuje inhibitor za JAK1 i/ili JAK2, i inhibitor za PI3Kδ, za upotrebu u postupku lečenja bolesti koja je izabrana iz difuznog krupnoćelijskog B-limfoma, difuznog B-krupnoćelijskog limfoma (ABC-DLBCL) sličnog aktivisanim B-ćelijama (ABC), i difuznog krupnoćelijskog B-limfoma (GCB-DLBCL) B ćelija germinativnog centra (GCB) pacijentu kome je potrebno, pri čemu postupak obuhvata davanje pomenutom pacijentu: (a) inhibitora JAK1 i/ili JAK2; i (b) inhibitora PI3Kδ, pri čemu su inhibitor JAK1 i/ili JAK2; i inhibitor PI3Kδ definisani u patentnim zahtevima.

[0008] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je izabran između:

3-ciklopentil-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitrila;

3-[1-(6-hloropiridin-2-il)pirolidin-3-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitrila;

3-(1-[1,3]oksazolo[5,4-b]piridin-2-ilpirolidin-3-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitrila;

4-[(4-{3-cijano-2-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitrila;

4-[(4-{3-cijano-2-[3-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitrila;

{1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila;

4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamida;

[3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-(1-{[2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)azetidin-3-il]acetonitrila;

[trans-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-3-(4-{[2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperazin-1-il)ciklobutil]acetonitrila;

{trans-3-(4-{[4-[(3-hidroksiazetidin-1-il)metil]-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitrila;

{trans-3-(4-{[4-{[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il]metil}-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitrila; {trans-3-(4-{[4-{[(2R)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il]metil}-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitrila; 4-(4-{3-[(dimetilamino)metil]-5-fluorofenoksi}piperidin-1-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butannitrila;

5-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-izopropilpirazin-2-karboksamida;

4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida;

5-{3-(cijanometil)-3-[4-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-izopropilpirazin-2-karboksamida;

{1-(cis-4-{[6-(2-hidroksietil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila;

{1-(cis-4-{[4-[(etilamino)metil]-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila;

{1-(cis-4-{[4-(1-hidroksi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila;

{1-(cis-4-{[4-{[(3R)-3-hidroksipirolidin-1-il]metil}-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila;

{1-(cis-4-{[4-{[(3S)-3-hidroksipirolidin-1-il]metil}-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila;

{trans-3-(4-{[4-({[(1S)-2-hidroksi-1-metiletil]amino}metil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitrila; {trans-3-(4-{[4-({[(2R)-2-hidroksipropil]amino}metil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitrila;

{trans-3-(4-{[4-({[(2S)-2-hidroksipropil]amino}metil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitrila;

{trans-3-(4-{[4-(2-hidroksietil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitrila;

((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-hidroksietil]-1H-imidazo[4,5-d]tieno[3,2-b]piridin-1-il}tetrahidro-2H-piran-2-il)acetonitrila;

4-[3-(cijanometil)-3-(3’,5’-dimetil-1H,1’H-4,4’-bipirazol-1-il)azetidin-1-il]-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida;

i farmaceutski prihvatljivih soli bilo kog od prethodno navednog.

[0009] U nekim izvođenjima, inhibitor PI3Kδ je izabran između:

7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona;

(S)-7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona;

4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-2-{1-[(2S)-2-hidroksipropil]azetidin-3-il}-3-metoksibenzonitrila;

4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-2-[1-(2-hidroksietil)azetidin-3-il]-3-metoksibenzonitrila;

5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cijano-2-etoksi-5-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida;

4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}pirolidin-2-ona; i

N-{1-[5-hloro-8-(3-fluorofenil)cinolin-7-il]etil}-9H-purin-6-amina;

4-hloro-3’-fluoro-3-metil-6-[1-(9H-purin-6-ilamino)etil]bifenil-2-karbonitrila;

i farmaceutski prihvatljivih soli bilo kog od prethodno navednog.

[0010] Predmetna prijava takođe obezbeđuje inhibitor JAK1 i/ili JAK2 za upotrebu u kombinaciji sa PI3Kδ inhibitorom za lečenje difuznog krupnoćelijskog B-limfoma, difuznog B-krupnoćelijskog limfoma (ABC-DLBCL) sličnog aktivisanim B-ćelijama (ABC), i difuznog krupnoćelijskog B-limfoma (GCB-DLBCL) B ćelija germinativnog centra (GCB), kao što je definisano u patentnim zahtevima.

[0011] Takođe je opisana upotreba inhibitora JAK1 i/ili JAK2 i inhibitora PI3Kδ za dobijanje leka za lečenje maligniteta B-ćelija ili bilo kojih ovde predstavljenih bolesti.

DETALJNI OPIS

[0012] Predmetna prijava obezbeđuje, između ostalog, (a) inhibitor JAK1 i/ili JAK2; i (b) inhibitor PI3Kδ za upotrebu u postupku lečenja bolesti koja je odabrana od difuznog krupnoćelijskog B-limfoma, difuznog krupnoćelijskog B-limfoma (ABC-DLBCL) sličnog aktivisanim B ćelijama (ABC), i difuznog krupnoćelijskog B-limfoma (GCB-DLBCL) B ćelija germinativnog centra (GCB), kod pacijenta kome je potrebno, koji obuhvata davanje pomenutom pacijentu: (a) inhibitora JAK1 i/ili JAK2; i (b) inhibitora PI3Kδ.

[0013] U nekim izvođenjima, bolest je difuzni krupnoćelijski B-limfom.

[0014] U nekim izvođenjima, bolest je difuzni B-krupnoćelijski limfom (ABC-DLBCL) sličan aktivisanim B ćelijama (ABC), ili difuzni krupnoćelijski B-limfom (GCB-DLBCL) B ćelija germinativnog centra (GCB).

[0015] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ se daju istovremeno.

[0016] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ se daju istovremeno.

[0017] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je selektivan za JAK1 i JAK1 u odnosu na JAK3 i TYK2. U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je selektivan za JAK1 u odnosu na JAK2, JAK3, i TYK2. Na primer, neka od ovde opisanih jedinjenja, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, preferencijalno inhibiraju JAK1 u odnosu na jedan ili više od JAK2, JAK3, i TYK2. U nekim izvođenjima, jedinjenja inhibiraju preferencijalno JAK1 u odnosu na JAK2 (npr., imaju odnos JAK1/JAK2 IC50>1). U nekim izvođenjima, jedinjenja ili soli su oko 10-puta selektivnije za JAK1 u odnosu na JAK2. U nekim izvođenjima, jedinjenja ili soli su oko 3-puta, oko 5-puta, oko 10-puta, oko 15-puta, ili oko 20-puta selektivnija za JAK1 u odnosu na JAK2 kao što je izračunato merenjem IC50na 1 mM ATP (npr., videti Primer A).

[0018] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je 3-ciklopentil-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitril. U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je (3R)-3-ciklopentil-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitril (ruksolitinib; takođe poznat pod INCB018424). Ruksolitinib ima IC50manji od 10 nM na 1 mM ATP (test A) na JAK1 i JAK2.3-Ciklopentil-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitril i ruksolitinib mogu da se dobiju postupkom koji se opisuje u US 7,598,257 (Primer 67), koji je podnet 12 decembra 12, 2006. U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je so (3R)-3-ciklopentil-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanenitril fosforne kiseline.

[0019] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je jedinjenje iz Tabele 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. Jedinjenja u Tabeli 1 su selektivni JAK1 inhibitori (selektivni u odnosu na JAK2, JAK3, i TYK2). Dobijene IC50postupkom iz Testa A na 1 mM ATP su prikazane u Tabeli 1.

Tabela 1

(nastavak)

1

(nastavak)

1

[0020] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0021] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrilna so adipinske kiseline.

[0022] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0023] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je izabran između (R)-3-[1-(6-hloropiridin-2-il)pirolidin-3-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitrila, (R)-3-(1-[1,3]oksazolo[5,4-b]piridin-2-ilpirolidin-3-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitrila, (R)-4-[(4-{3-cijano-2-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitrila, (R)-4-[(4-{3-cijano-2-[3-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitrila, ili (R)-4-(4-{3-[(dimetilamino)metil]-5-fluorofenoksi}piperidin-1-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butannitrila, (S)-3-[1-(6-hloropiridin-2-il)pirolidin-3-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitrila, (S)-3-(1-[1,3]oksazolo[5,4-b]piridin-2-ilpirolidin-3-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitrila, (S)-4-[(4-{3-cijano-2-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitrila, (S)-4-[(4-{3-cijano-2-[3-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitrila, (S)-4-(4{3-[(dimetilamino)metil]-5-fluorofenoksi}piperidin-1-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butannitrila; i farmaceutski prihvatljivih soli bilo kog od gore pomenutog.

[0024] U nekim izvođenjima, jedinjenja iz Tabele 1 su dobijena postupcima sinteze koji su opisani u US objavi patenta br.2010/0298334, koji je podnet 21 maja, 2010, US objavi patenta br.2011/0059951, koji je podnet 31 avgusta, 2010, US objavi patenta br.2011/0224190, koji je podnet 9 marta, 2011, US objavi patenta br. 2012/0149681, koji je podnet 18 novembra, 2011, US objavi patenta br.

2012/0149682, koji je podnet 18 novembra, 2011, US objavi patenta 2013/0018034, koji je podnet 19 juna, 2012, US objavi patenta br.2013/0045963, koji je podnet 17 avgusta, 2012, i US objavi patenta br. 2014/0005166, koji je podnet 17 maja, 2013.

[0025] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je izabran iz jedinjenja US objave patenta br.

2010/0298334, koji je podnet 21 maja, 2010, US objave patenta br.2011/0059951, koji je podnet 31 avgusta 31, 2010, US objavi patenta br.2011/0224190, koji je podnet 9 marta, 2011, US objavi patenta br. 2012/0149681, koji je podnet 18 novembra, 2011, US objavi patenta br. 2012/0149682, koji je podnet 18 novembra, 2011, US objavi patenta 2013/0018034, koji je podnet 19 juna, 2012, US objavi patenta br.2013/0045963, koji je podnet 17 avgusta 2012, i US objavi patenta br.2014/0005166, koji je podnet 17 maja, 2013.

[0026] Ovde opisani inhibitori PI3Kδ mogu da budu selektivni. Pod "selektivni" je označeno da se jedinjenje vezuje za ili inhibira kinazu sa većim afinitetom ili potencijom, redom, u poređenju sa najmanje drugom kinazom. U nekim izvođenjima, ovde opisana jedinjenja su selektivni inhibitori PI3Kδ (npr., u odnosu na PI3Kα, PI3Kβ i PI3Ky). U nekim izvođenjima, selektivnost može da bude najmanje oko 2-puta, 5-puta, 10-puta, najmanje oko 20-puta, najmanje oko 50-puta, najmanje oko 100-puta, najmanje oko 200-puta, najmanje oko 500-puta ili najmanje oko 1000-puta. Selektivnost može da se izmeri rutinskim postupcima iz oblasti tehnike. U nekim izvođenjima, selektivnost može da bude ispitana na KmATP koncentraciji svakog enzima. U nekim izvođenjima, selektivnost ovde opisanih jedinjenja može da se odredi pomoću ćelijskih testova koji su povezani sa određenom PI3K kinaznom aktivnosti.

[0027] U nekim izvođenjima, inhibitor PI3Kδ je jedinjenje koje je prikazano u Tabeli 2. Jedinjenja iz Tabele 2 su bila ispitana u Testu B i pokazano je da su inhibitori PI3Kδ sa IC50-a u Tabeli 2.

Tabela 2

1

(nastavak)

1

nastavak

1

[0028] U nekim izvođenjima, inhibitor PI3Kδ je izabran od:

(S)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona;

(R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona;

(S)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona;

(R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-ona;

N-{(1S)-1-[5-hloro-8-(3-fluorofenil)cinolin-7-il]etil}-9H-purin-6-amina;

i farmaceutski prihvatljivih soli bilo kog od gore pomenutog.

[0029] U nekim izvođenjima, inhibitor PI3Kδ je (S)-7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0030] U nekim izvođenjima, inhibitor PI3Kδ je 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-2-{1-[(2S)-2-hidroksipropil]azetidin-3-il}-3-metoksibenzonitril, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so

U nekim izvođenjima, inhibitor PI3Kδ je 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-2-[1-(2-hidroksietil)azetidin-3-il]-3-metoksibenzonitril, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so U nekim izvođenjima, inhibitor PI3Kδ je 5-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cijano-2-etoksi-5-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so U nekim izvođenjima, inhibitor PI3Kδ je izabran od:

4-[(R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-2-{1-[(2S)-2-hidroksipropil]azetidin-3-il}-3-metoksibenzonitrila;

4-[1(R)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-2-[1-(2-hidroksietil)azetidin-3-il]-3-metoksibenzonitrila;

5-{3-[1(R)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cijano-2-etoksi-5-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida;

4-[(S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-2-{1-[(2S)-2-hidroksipropil]azetidin-3-il}-3-metoksibenzonitrila;

4-[1(S)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-2-[1-(2-hidroksietil)azetidin-3-il]-3-metoksibenzonitrila;

5-{3-[1(S)-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-cijano-2-etoksi-5-metilfenil}-N,N-dimetilpiridin-2-karboksamida;

i farmaceutski prihvatljivih soli bilo kog od gore pomenutog.

[0031] U nekim izvođenjima, inhibitor PI3Kδ je jedinjenje prema US objavi patenta br. US 2011/0015212, koji je podnet 28 juna, 2010, US objavi patenta br.2013/0059835, koji je podnet 31 avgusta, 2013, US objavi patenta br.2011/0183985, koji je podnet 17 decembra, 2010, ili US objavi patenta br.2012/0157430, koji je podnet 19 decembra, 2011.

1

[0032] U nekim izvođenjima, jedinjenja iz Tabele 2 su dobijena korišćenjem postupaka koji su navedeni u US objavi patenta br. US 2011/0015212, koji je podnet 28 juna, 2010, US objavi patenta br.

2013/0059835, koji je podnet 31 avgusta, 2013, US objavi patenta br.2011/0183985, koji je podnet 17 decembra, 2010, ili US objavi patenta br.2012/0157430, koji je podnet 19 decembra, 2011.

[0033] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je (3R)-3-ciklopentil-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitril, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; i (7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0034] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; i inhibitor PI3Kδ je 7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0035] U nekim izvođenjima, inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; i inhibior PI3Kδ je 7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0036] U nekim izvođenjima, predmetna prijava obezbeđuje postupak za lečenje difuznog krupnoćelijskog B-limfoma kod pacijenta kome je potrebno, koji obuhvata davanje pomenutom pacijentu (3R)-3-ciklopentil-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitrila, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; i inhibitor PI3Kδ je (7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-on, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0037] U nekim izvođenjima, predmetna prijava obezbeđuje postupak za lečenje difuznog krupnoćelijskog B-limfoma kod pacijenta kome je potrebno, koji obuhvata davanje pomenutom pacijentu {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; i 7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0038] U nekim izvođenjima, predmetna prijava obezbeđuje postupak za lečenje difuznog krupnoćelijskog B-limfoma kod pacijenta kome je potrebno, koji obuhvata davanje pomenutom pacijentu 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; i 7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0039] Ovde opisana jedinjenja mogu da budu asimetrična (npr., da imaju jedan ili više stereocentara). Svi stereoizomeri, kao što su enantiomeri i diastereoizomeri, su namenjeni osim ukoliko nije drugačije naznačeno. Jedinjenja koja sadrže asimetrično supstituisane atome ugljenika mogu da budu izolovana u optički aktivnim ili racemskim oblicima. Postupci koji opisuju kako mogu da se dobiju optički aktivni oblici iz optički neaktivnih polaznih materijala su poznati u oblasti tehnike, kao što je razdvajanje racemskih smeša ili stereoselektivna sinteza. Mnogi geometrijski izomeri olefina, C=N dvostrukih veza, i slično takođe mogu da se nalaze u ovde opisanim jedinjenjima, i svi takvi stabilni izomeri su razmotreni u predmetnom pronalasku. Cis i trans geometrijski izomeri jedinjenja iz predmetnog pronalaska su opisani i mogu da budu izolovani kao smeša izomera ili kao razdvojeni izomerni oblici.

1

U nekim izvođenjima, jedinjenje ima (R)-konfiguraciju. U nekim izvođenjima, jedinjenje ima (S)-konfiguraciju.

[0040] Razdvajanje racemskih smeša jedinjenja može da se izvede pomoću bilo koji brojnih postupaka koji su poznati u oblasti tehnike. Primer postupka uključuje frakcionu rekristalizaciju upotrebom kiseline za hiralno razdvajanje koja je optički aktivna, organska kiselina koja obrazuje so. Pogodna sredstva za razdvajanje za postupke frakcione rekristalizacije su, na primer, optički aktivne kiseline, kao što su D i L oblici vinske kiseline, diacetilvinske kiseline, dibenzoilvinske kiseline, mandelinske kiseline, jabučne kiseline, mlečne kiseline ili različite optički aktivne kamforsulfonske kiseline kao što su β-kamforsulfonska kiselina. Druga sredstva za razdvajanje koja su pogodna za postupke frakcione rekristalizacije uključuju stereoizomerno čiste oblike α-metilbenzilamina (npr., S i R oblici, ili diastereoizomerno čisti oblici), 2-fenilglicinol, norefedrin, efedrin, N-metilefedrin, cikloheksoletilamin, 1,2-diaminocikloheksan, i slično.

[0041] Razdvajanje racemskih smeša može takođe da se izvede elucijom na koloni koja je spakovana sa optički aktivnim sredstvom za razdvajanje (npr., dinitrobenzoilfenilglicin). Pogodna kompozicija rastvarača za eluciju može da bude određena od strane stručnjaka iz oblasti tehnike.

[0042] Ovde opisana jedinjenja takođe uključuju tautomerne oblike. Tautomerni oblici nastaju iz premeštanja jednostruke veze sa susednom dvostrukom vezom zajedno sa istovremenom migracijom protona. Tautomerni oblici uključuju prototropske tautomere koji su izomerna stanja protonacije sa istom empirijskom formulom i ukupnim naelektrisanjem. Primer prototropskih tautomera uključuje keton - enol parove, amid – imidna kiselina parove, laktam - laktim parove, enamin - imin parove, i prstenaste oblike u kojima proton može da zauzme dva ili više položaja u heterocikličnom prstenu, na primer, 1H- i 3H-imidazol, 1H-, 2H- i 4H- 1,2,4-triazol, 1H- i 2H- izoindol, i 1H- i 2H-pirazol. Tautomerni oblici mogu da se nalaze u ekvilibrijumu ili sterno zaključani u jednom obliku sa odgovarajućom supstitucijom.

[0043] Ovde opisana jedinjenja mogu takođe da uključe sve izotope atoma koji se pojavljuju u intermedijerima ili finalnim jedinjenjima. Izotopi uključuju one atome koji imaju isti atomski broj ali različite masene brojeve. Na primer, izotopi vodonika uključuju tricijum i deuterijum.

[0044] Izraz, "jedinjenje," kao što se ovde koristi je namenjen da uključi sve stereoizomere, geometrijske izomere, tautomere, i izotope prikazanih struktura. Ovde su jedinjenja identifikovana sa nazivom ili strukturom kako je jedan poseban tautomerni oblik namenjen da uključi druge tautomerne oblike osim ukliko nije drugačije naznačeno.

[0045] Sva jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, mogu da se nađu zajedno sa drugim supstancama kao što je voda i rastvarači (npr. hidrati i solvati) ili mogu da se izoluju.

[0046] U nekim izvođenjima, ovde opisana jedinjenja, ili njihove soli, su u suštini izolovane. Pod "u suštini izolovan" je označeno da je jedinjenje bar delom ili u suštini izdvojeno iz okruženja u kome je nastalo ili je detektovano. Parcijalno razdvajanje može da uključi, na primer, kompoziciju koja je obogaćena u jedinjenjima koja se ovde opisuju. Suštinsko razdvajanje može da uključi kompozicije koje sadrže najmanje oko 50%, najmanje oko 60%, najmanje oko 70%, najmanje oko 80%, najmanje oko 90%, najmanje oko 95%, najmanje oko 97%, ili najmanje oko 99% u odnosu na masu ovde opisanog jedinjenja, ili njegove soli. Posupci za izolovanje jedinjenja i njihovih soli su rutinski u oblasti tehnike.

[0047] Termin "farmaceutski prihvatljiv" je ovde korišćen da se odnosi na ona jedinjenja, materijale, kompozicije, i/ili dozne oblike koji su, u okviru zdrave medicinske procene, pogodni za upotrebu u

2

kontaktu sa tkivima živih bića i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora, ili drugog problema ili komplikacije, srazmerno razumnom odnosu benefita/rizika.

[0048] Izrazi, "ambijentalna temperatura" i "sobna temperatura" ili "st" kao što je ovde korišćeno, su jasni u oblasti tehnike, i generalno se odnose na temperaturu, npr. temperaturu reakcije, koja je približna sobnoj temperaturi gde se reakcija izvodi, na primer, temperatura od oko 20 °C do oko 30 °C.

[0049] Predmetni pronalazak takođe uključuje farmaceutski prihvatljive soli ovde opisanih jedinjenja. Kao što se ovde koristi, "farmaceutski prihvatljive soli" se odnosi na derivate prikazanih jedinjenja pri čemu je parentalno jedinjenje modifikovano konverzijom postojeće kiseline ili ostatka baze u njegov oblik soli. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli uključuju, ali nisu ograničeni na, soli mineralnih ili organskih kiselina baznih ostataka kao što su amini; alkalne ili organske soli kiselinskih ostataka kao što su karboksilne kiseline; i slično. Farmaceutski prihvatljive soli iz predmetnog pronalaska uključuju konvencionalne ne-toksične soli matičnog jedinjenja koje se dobijaju, na primer, iz ne-toksičnih neorganskih ili organskih kiselina. Farmaceutski prihvatljive soli iz predmetnog pronalaska mogu da se sintetišu iz matičnog jedinjenja koje sadrži bazni ili kiseli ostatak upotrebom konvencionalnih hemijskih postupaka. Generalno, takve soli mogu da se dobiju reagovanjem slobodnih oblika kiselina ili baza ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze ili kiseline u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u smeši ta dva; generalno, ne-vodeni medijum kao što je etar, etil acetat, alkoholi (npr., metanol, etanol, izo-propanol, ili butanol) ili acetonitril (ACN) su takođe poželjni. Liste pogodnih soli se mogu naći u Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p.1418 i Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977).

[0050] Kao što se ovde koristi, izraz "individua" ili "pacijent," su korišćeni naizmenično, odnose se na bilo koju životinju, uključujući sisare, poželjno miševe, pacove, druge glodare, zečeve, pse, mačke, svinje, stoku, ovce, konje, ili primate, i najpoželjnije ljude.

[0051] U nekim izvođenjima, inhibitori se daju u terapeutski efikasnoj količini. Kao što se ovde koristi, izraz "terapeutski efikasna količina" se odnosi na količinu aktivnog jedinjenja ili farmaceutskog sredstva koje pokreće biološki ili medicinski odgovor koji se traži u tkivu, sistemu, životinji, individui ili čoveku od strane istraživača, veterinara, medicinskog doktora ili drugog kliničara. U nekim izvođenjima, doza jedinjenja, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koja se daje pacijentu ili individui je oko 1 mg do oko 2 g, oko 1 mg do oko 1000 mg, oko 1 mg do oko 500 mg, oko 1 mg do oko 200 mg, oko 1 mg do oko 100 mg, oko 1 mg do 50 mg, ili oko 50 mg do oko 500 mg.

[0052] Kao što se ovde koristi, izraz "lečenje" ili "tretman" se odnosi na jedan ili više (1) inhibicije bolesti; na primer, inhibicije bolesti, stanja ili poremećaja kod individue koja prolazi kroz ili ispoljava patologiju ili simptomatologiju bolesti, stanja ili poremećaja (tj., zaustavljanja daljeg razvijanja patologije i/ili simptomatologije); i (2) ublažavanja bolesti; na primer, ublažavanja bolesti, stanja ili poremećaja kod individue koja prolazi kroz ili ispoljava patologiju ili simptomatologiju bolesti, stanja ili poremećaja (tj., reverziju patologije i/ili simptomatologije) kao što je smanjenje težine simptoma bolesti.

Kombinovane terapije

[0053] Jedno ili više dodatnih farmaceutskih sredstava kao što su, na primer, hemoterapeutici, antiinflamatorna sredstva, steroidi, imunosupresanti, kao i Bcr-Abl, Flt-3, EGFR, HER2, c-MET, VEGFR, PDGFR, cKit, IGF-1R, RAF, FAK,Akt mTOR, PIM, i AKT (npr., AKT1, AKT2, ili AKT3) kinazni inhibitori kao što su, na primer, oni koji su opisani u WO 2006/056399, ili druga sredstva kao što su, terapeutska antitela mogu da se koriste u kombinaciji sa jedinjenjima iz predmetnog pronalaska za lečenje PI3Kpovezanih bolesti, poremećaja ili stanja. Jedno ili više dodatnih farmaceutskih sredstava mogu da se daju pacijentu istovremeno ili redom.

[0054] Primer antitela za upotrebu u kombinovanoj terapiji uključuju ali nisu ograničeni na Trastuzumab (pr. anti-HER2), Ranibizumab (npr. anti-VEGF-A), Bevacizumab (trgovačko ime Avastin, npr. anti-VEGF, Panitumumab (npr. anti-EGFR), Cetuksimab (npr. anti-EGFR), Rituksan (anti-CD20) i antitela koja su usmerena prema c-MET.

[0055] Jedno ili više od sledećih sredstava mogu da se koriste u kombinaciji sa jedinjenjima iz predmetnog pronalaska i predstavljeni su u ne-ograničavajućoj listi koju čine: citostatsko sredstvo, cisplatin, doksorubicin, taxotere, taksol, etopozid, irinotekan, camptostar, topotekan, paklitaksel, docetaksel, epotiloni, tamoksifen, 5-fluorouracil, metokstreksat, temozolomid, ciklofosfamid, SCH 66336, R115777, L778,123, BMS 214662, Iressa, Tarceva, antitela specifična a EGFR, Gleevec™, intron, ara-C, adriamicin, citoksan, gemcitabin, iperit Uracila, hlormetin, Ifosfamid, Melfalan, Hlorambucil, Pipobroman, Trietilenmelamin, Trietilentiofosforamin, Busulfan, Karmustin, Lomustin, Streptozocin, Dakarbazin, Floksuridin, Citarabin, 6-Merkaptopurin, 6-Tioguanin, Fludarabin fosfat, oksaliplatin, leukovirin, ELOXATIN™, Pentostatin, Vinblastin, Vinkristin, Vindezin, Bleomicin, Daktinomicin, Daunorubicin, Doksorubicin, Epirubicin, Idarubicin, Mitramicin, Deoksikoformicin, Mitomicin-C, L-Asparaginaza, Tenipozid 17.alfa.-Etinilestradiol, Dietilstilbestrol, Testosteron, Prednizon, Fluoksimesteron, Dromostanolon propionat, Testolakton, Megestrolacetat, Metilprednizolon, Metiltestosteron, Prednizolon, Triamcinolon, Hlorotrianizen, Hidroksiprogesteron, Aminoglutetimid, Estramustin, Medroksiprogesteronacetat, Leuprolid, Flutamid, Toremifen, goserelin, Cisplatin, Karboplatin, Hidroksiurea, Amsakrin, Prokarbazin, Mitotan, Mitoksantron, Levamizol, Navelben, Anastrazol, Letrazol, Kapecitabin, Reloksafin, Droloksafin, Heksametilmelamin, Avastin, herceptin, Bexxar, Velcade, Zevalin, Trisenoks, Xeloda, Vinorelbin, Porfimer, Erbitux, Liposomal, Tiotepa, Altretamin, Melfalan, Trastuzumab, Lerozol, Fulvestrant, Eksemestan, Fulvestrant, Ifosfomid, Rituksimab, C225, Campath, Klofarabin, kladribin, afidikolon, rituksan, sunitinib, dasatinib, tezacitabin, Sml1, fludarabin, pentostatin, triapin, didoks, trimidoks, amidoks, 3-AP, MDL-101,731, bendamustin (Treanda), ofatumumab, ili GS-1101 (takođe poznat pod imenom CAL-101).

[0056] Primer hemoterapeutika uključuje inhibitore proteazoma (npr., bortezomib), talidomid, revlimid, i sredstva koja oštećuju DNK kao što su melfalan, doksorubicin, ciklofosfamid, vinkristin, etopozid, karmustin, i slično.

[0057] Primeri steroida uključuju kortikosteroide kao što su deksametazon ili prednizon.

[0058] Primer inhibitora Bcr-Abl uključuje jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, roda i vrsta koji su prikazani u U.S. objavi patenta br.5,521,184, WO 04/005281, i U.S. Ser. br.60/578,491.

[0059] Primer pogodnih inhibitora Flt-3 uključuju jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je prikazano u WO 03/037347, WO 03/099771, i WO 04/046120.

[0060] Primer pogodnih inhibitora RAF uključuje jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je prikazano u WO 00/09495 i WO 05/028444.

[0061] Primer pogodnih inhibitora FAK uključuje jedinjenja, a i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je prikazano u WO 04/080980, WO 04/056786, WO 03/024967, WO 01/064655, WO 00/053595, i WO 01/014402.

[0062] Primer pogodnih inhibitora mTOR uključuje jedinjenja, a i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je prikazano u WO 2011/025889.

[0063] U nekim izvođenjima, jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu da se koriste u kombinaciji sa jednim ili više kinaznih inhibitora uključujući imatinib, posebno za lečenje pacijenata koji su rezistentni prema imatinibu ili drugim kinaznim inhibitorima.

[0064] U nekim izvođenjima, jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu da se koriste u kombinaciji sa hemoterapeutikom u lečenju kancera, kao što je multipli mijelom, i mogu da poboljšaju odgovor tretmana u poređenju sa samim hemterapeutskim sredstvom, bez pogoršanja njegovih toksičnih efekata. Primeri dodatnih farmaceutskih sredstava koja su korišćena u lečenju multiplog mijeloma, na primer, mogu da uključe, bez ograničenja, melfalan, melfalan plus prednizon [MP], doksorubicin, deksametazon, i Velcade (bortezomib). Dalja dodatna sredstva koja su korišćena u lečenju multiplog mijeloma uključuju Bcr-Abl, Flt-3, RAF i FAK kinazne inhibitore. Aditivni ili sinergistički efekti su poželji ishodi kombinovanja PI3K inhibitora iz predmetnog pronalaska sa dodatnim sredstvom. Dalje, rezistentnost ćelija multiplog mijeloma prema sredstvima kao što su deksametazon može da bude reverzibilno nakon tretmana sa PI3K inhibitorom iz predmetnog pronalaska. Sredstva mogu da se kombinuju sa predmetnim jedinjenjem u jednom ili kontinuiranom doznom obliku, ili sredstva mogu da se daju istovremeno ili sekvencijalno kao odvojeni dozni oblici.

[0065] U nekim izvođenjima, korikosteroid kao što je deksametazon se daje pacijentu u kombinaciji sa jedinjenjima iz pronalaska gde se deksametazon daje u prekidima suprotno sa kontinuiranim davanjem.

[0066] U nekim daljim izvođenjma, kombinacije jedinjenja iz pronalaska sa drugim terapeutskim sredstvima mogu da se daju pacijetu pre, tokom, i/ili posle transplanta kosne srži ili transplanta stem ćelija.

Farmaceutske formulacije i dozni oblici

[0067] Kada se koriste kao farmaceutska sredstva, ovde opisana jedinjenja mogu da se daju u obliku farmaceutskih kompozicija. Ove kompozicije mogu da se dobiju na način koji je dobro poznat u farmaceutskoj oblasti tehnike, i mogu da se daju upotrebom različitih načina, u zavisnosti od toga da li je poželjan lokalni ili sistemski tretman i od površine koja treba da se tretira. Davanje može da bude lokalno (uključujući transdermalno, epidermalno, oftamološko i na mukoznim membranama uključujući intranazalnu, vaginalnu i rektalnu isporuku), plućno (npr., inhalacijom ili insuflacijom praškova ili aerosoli, uključujući upotrebu nebulizatora; intratrahealno ili intranazalno), oralno ili parenteralno. Parenteralno davanje uključuje intravenozno, intraarterijalno, subkutanozno, intraperitonealno intramuskularno ili injekcijom ili infuzijom; ili intrakranijalno, npr., intratekalno ili intraventrikularno, davanje. Parenteralno davanje može da bude u obliku pojedinačne bolus doze, ili može da bude, na primer, kontinualnom perfuzijskom pumpom. Farmaceutske kompozicije i formulacije za lokalno davanje mogu da uključe transdermalne flastere, ulja, losione, kreme, gelove, kapi, supozitorije, sprejeve, tečnosti i praškove. Konvencionalni farmaceutski nosači, vodene, praškaste ili uljane baze, sredstva za zgrušnjavanje i slično mogu da budu korisni ili poželjni. Ovaj pronalazak takođe uključuje farmaceutske kompozicije koje sadrže, kao aktivni sastojak, jedinjenje koje se ovde opisuje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača (ekscipijenasa). U nekim izvođenjima, kompozicija je pogodna za lokalno davanje. U dobijanju kompozicija iz pronalaska, aktivni sastojak je obično pomešan sa ekscipijensom, razblažen je sa ekscipijensom ili je obuhvaćen takvim nosačem koji je u obliku, na primer, kapsule, kesice, papira, ili drugog kontejnera. Kada ekscipijens služi kao rastvarač, može da bude u čvrstom obliku, polu-čvrstom obliku, ili tečnom materijalu, koji ima dejstvo nosača, nosača ili medijuma za aktivni sastojak. Prema tome, kompozicije mogu da budu u obliku tableta, pilula, praškova, pastila, kesica, kapsula, eliksira, suspenzija, emulzija, rastvora, sirupa, aerosoli (kao čvrsti ili

2

u tečnom medijumu), ulja koja sadrže, na primer, do 10% u odnosu na težinu aktivnog jedinjenja, meke i čvrste želatinske kapsule, supozitorije, sterilne rastvore za injekcije, i sterilne upakovane praškove.

[0068] U dobijanju formulaciju, aktivno jedinjenje može da bude samleveno da se obezbedi odgovarajuća veličina čestice pre kombinovanja sa drugim sastojcima. Ukoliko je aktivno jedinjenje u suštini nerastvorljivo, može da bude samleveno do veličine čestice manje od 200 meša. Ukoliko je aktivno jedinjenje u suštini nerastvorljivo u vodi, veličina čestice može da bude prilagođena mlevenjem da se obezbedi u suštini uniformna distribucija u formulaciji, npr. oko 40 meša.

[0069] Ovde opisana jedinjenja mogu da budu samlevena korišćenjem poznatih postupaka za mlevenje kao što je vlažno mlevenje da se dobije veličina čestice odgovarajuća za obrazovanje tablete i za druge tipove formulacije. Fino podeljeni (nanočestični) preparati ovde opisanih jedinjenja mogu da se dobiju postupcima koji su poznati iz oblasti tehnike, npr., videti Međunarodnu prijavu br. WO 2002/000196.

[0070] Neki primeri pogodnih ekscipijenasa uključuju laktozu, dekstrozu, saharozu, sorbitol, manitol, skrobove, gumu akacija, kalcijum fosfat, alginate, tragakant, želatin, kalcijum silikat, mikrokristalnu celulozu, polivinilpirolidon, celulozu, vodu, sirup, i metil celulozu. Formulacije mogu dodatno da uključe: sredstva za podmazivanje kao što je talk, magnezijum stearat, i mineralno ulje; sredstva za vlaženje; sredstva za emulgovanje i suspenziju; sredstva za konzervisanje kao što su metil- i propilhidroksi-benzoati; zaslađivači; i sredstva za aromu. Kompozicije iz pronalaska mogu da budu formulisane da obezbede brzo, suzdržano ili odloženo oslobađanje aktivnog sastojka posle davanja preparata pacijentu korišćenjem postupaka poznatih u oblasti tehnike.

[0071] Kompozicije mogu da budu formulisane u jediničnom doznom obliku, svaka doza sadrži od oko 5 do oko 1000 mg (1 g), uobičajeno oko 100 do oko 500 mg, aktivnog sastojka. Izraz "jedinični dozni oblici" se odnosi na fizički diskretne jedinice koje su pogodne kao jedinične doze za humane subjekte i druge sisare, svaka jedinica sadrži prethodno određenu količinu aktivnog materijala izračunato da proizvodi željeni terapeutski efekat, zajedno sa odgovarajućim farmaceutskim ekscipijensom.

[0072] U nekim izvođenjima, kompozicije iz pronalaska sadrže od oko 5 do oko 50 mg aktivnog sastojka. Osoba koja je uobičajeno verzirana u stanje tehnike će razumeti da ovo obuhvata kompozicije koje sadrže oko 5 do oko 10, oko 10 do oko 15, oko 15 do oko 20, oko 20 do oko 25, oko 25 do oko 30, oko 30 do oko 35, oko 35 do oko 40, oko 40 do oko 45, ili oko 45 do oko 50 mg aktivnog sastojka.

[0073] U nekim izvođenjima, kompozicije iz pronalaska sadrže od oko 50 do oko 500 mg aktivnog sastojka. Osoba koja je uobičajeno verzirana u stanje tehnike će razumeti da ovo obuhvata kompozicije koje sadrže oko 50 do oko 100, oko 100 do oko 150, oko 150 do oko 200, oko 200 do oko 250, oko 250 do oko 300, oko 350 do oko 400, ili oko 450 do oko 500 mg aktivnog sastojka.

[0074] U nekim izvođenjima, kompozicije iz pronalaska sadrže od oko 500 do oko 1000 mg aktivnog sastojka. Osoba koja je uobičajeno verzirana u stanje tehnike će razumeti da ovo obuhvata kompozicije koje sadrže oko 500 do oko 550, oko 550 do ok 600, oko 600 do oko 650, oko 650 do oko 700, oko 700 do oko 750, oko 750 do oko 800, oko 800 do oko 850, oko 850 do oko 900, oko 900 do oko 950, ili oko 950 do oko 1000 mg aktivnog sastojka.

[0075] Slične doze mogu da se koriste za ovde opisana jedinjenja u postupcima i upotrebama pronalaska.

[0076] Aktivno jedinjenje može da bude efikasno u širem doznom opsegu i generalno se daje u farmaceutski efikasnoj količini. Jasno je, međutim, da će količinu jedinjenja koja se stvarno daje obično odrediti lekar, prema relevantnim okolnostima, uključujući stanje koje treba da se leči, odabrani način davanja, jedinjenja koje se daje, starosti, težine, i odgovora individualnog pacijenta, težine simptoma pacijenta, i slično.

[0077] Za dobijanje čvrstih kompozicija kao što su tablete, glavni aktivni sastojak je pomešan sa farmaceutskim ekscipijensom da se obrazuje čvrsta preformulacija kompozicije koja sadrži homogenu smešu jedinjenja iz predmetnog pronalaska. Kada se odnosi na ove preformulacije kompozicija kao homogene, aktivni sastojak je obično dispergovan jednako kroz kompoziciju tako da kompozicija može brzo da bude podeljena u jednake efikasne jednične dozne oblike kao što su tablete, pilule i kapsule. Ova čvrsta preformulacija je nakon toga podeljena u jedinične dozne oblike tipa koji je opisan gore u tekstu koji sadrži od, na primer, oko 0.1 do oko 1000 mg aktivnog sastojka predmetnog pronalaska.

[0078] Tablete ili pilule iz predmetnog pronalaska mogu da budu obložene ili na drugi način složene da se dobije dozni oblik koji obezbeđuje prednost produženog delovanja. Na primer, tableta ili pilula mogu da sadrže unutrašnju doznu i spoljašnju doznu komponentu, pri čemu je druga u obliku omotača preko prethodne. Dve komponente mogu da budu razdvojene sa enteričkim gastrorezistentnim slojem koji služi da se odupre dezintegraciji u stomaku i omogući unutrašnjoj komponenti da prođe intaktna u duodenum ili da bude sa produženim oslobađanjem. Razni materijali mogu da se koriste za takve gastrorezistentne slojeve ili obloge, takvi materijali uključujući brojne polimerne kiseline i smeše polimernih kiselina sa materijalima kao što su šelak, cetil alkohol, celulozni acetat.

[0079] Tečni oblici u kojima jedinjenja i kompozicije iz predmetnog pronalaska mogu da budu uključene za oralno davanje ili davanje injekcijom uključuju rastvore u vodi, sirupe sa odgovarajućim ukusom, suspenzije u vodi ili ulju, i emulzije sa ukusom sa jestivim uljima kao što je ulje semena pamuka, susamovo ulje, kokosovo ulje, ili ulje kikirikija, kao i eliksiri i slični farmaceutski nosači.

[0080] Kompozicije za inhalaciju ili insuflaciju uključuju rastvore i suspenzije u farmaceutski prihvatljivim, vodenim ili organskim rastvaračima, ili njihove smeše, i praškove. Tečne ili čvste kompozicije mogu da sadrže pogodne farmaceutski prihvatljive ekscipijense kako je opisano supra. U nekim izvođenjima, kompozicije se daju oralnim ili nazalnim respiratornim načinom za lokalni ili sistemski efekat. Kompozicije mogu da budu nebulizovane korišćenjem inertnih gasova. Nebulizovani rastvori mogu da se udahnu direktno sa nebulizatora ili nebulizator može da bude veza sa maskom za lice, tent-maske za lice , ili mašinom za disanje sa isprekidanim pozitivnim pritiskom. Rastvor, suspenzija, ili kompozicije praška mogu da se daju oralno ili nazalno sa sprava koje formulaciju isporučuju na odgovarajući način.

[0081] Formulacije za lokalno davanje mogu da sadrže jedan ili više konvencionalnih nosača. U nekim izvođenjima, ulja mogu da sadrže vodu i jedan ili više hidrofobnih nosača koji su izabrani od, na primer, tečnog parafina, polioksietilen alkil etra, propilen glikola, belog vazelina, i slično. Kompozicije nosača krema mogu da budu zasnovane na vodi u kombinaciji sa glicerolom i jednom ili više drugih komponenata, npr. glicerinmonostearat, PEG-glicerinmonostearat i cetilstearil alkohol. Gelovi mogu da budu formulisani upotrebom izopropil alkohola i vode, pogodno u kombinaciji sa drugim komponentama kao što su, na primer, glicerol, hidroksietil celuloza, i slično. U nekim izvođenjima, formulacije za lokalno davanje sadrže najmanje oko 0.1, najmanje oko 0.25, najmanje oko 0.5, najmanje oko 1, najmanje oko 2, ili najmanje oko 5 mas % ovde opisanog jedinjenja. Formulacije za lokalno davanje mogu pogodno da budu spakovane u tube, na primer, 100 g koje su po potrebi povezane sa uputstvima za lečenje određene indikacije, npr., psorijaze ili drugog stanja kože.

2

[0082] Količina jedinjenja ili kompozicije koja se daje pacijentu razlikovaće se od toga šta se daje, svrhe davanja, kao što je profilaksa ili terapija, stanja pacijenta, načina davanja, i slično. U terapeutskim primenama, kompozicije mogu da se daju pacijentu koji već pati od bolesti u količini dovoljnoj da se izleče ili bar delom zaustave simptomi bolesti i povezane komplikaciju. Efikasne doze će zavisiti od stanja bolesti koja se leči kao i od procene nadležnog lekara zavisno od faktora kao što je ozbiljnost simptoma bolesti, starost, težina i opšte stanje pacijenta, i slično.

[0083] Kompozicije koje se daju pacijentu mogu da budu u obliku gore opisanih farmaceutskih kompozicija. Ove kompozicije mogu da budu sterilizovane uobičajenim postupcima sterilizacije, ili mogu da budu sterilno proceđene. Rastvori u vodi mogu kao takvi da budu spakovani za upotrebu, ili liofilizovani, pri čemu se liofilizovani preparat kombinuje sa sterilnim vodenim nosačem pre davanja. pH preparata jedinjenja će obično biti između 3 i 11, poželjnije od 5 do 9 i najpoželjnije od 7 do 8. Treba razumeti da će upotreba određenih od prethodno navedenih ekscipijenasa, nosača, ili stabilizatora za rezultat imati obrazovanje farmaceutskih soli.

[0084] Terapeutska doza jedinjenja iz predmetnog pronalaska može da se razlikuje u skladu sa, na primer, određenom upotrebom za koju je tretman namenjen, načina davanja jedinjenja, zdravlja i stanja pacijenta, i procene nadležnog lekara. Udeo ili koncentracija ovde opisanog jedinjenja u farmaceutskoj kompoziciji može da se razlikuje u zavisnosti od brojnih faktora uključujući dozu, hemijske karakteristike (npr., hidrofobnost), i načina davanja. Na primer, ovde opisana jedinjenja mogu da budu obezbeđena u vodenom rastvoru fiziološkog pufera koji sadrži oko 0.1 do oko 10% mas/v jedinjenja za parentalno davanje. Neki uobičajeni dozni opsezi su oko 1 µg/kg do oko 1 g/kg telesne težine po danu. U nekim izvođenjima, dozni opseg je od oko 0.01 mg/kg do oko 100 mg/kg telesne težine po danu. Doza će verovatno zavisiti od takvih promenjivih kao što je vrsta i obim napredovanja bolesti ili poremećaja, sveukupnog zdravstvenog statusa određenog pacijenta, relativne biološke efikasnosti izabranog jedinjenja, formulacije ekscipijensa, i načina njenog davanja. Efikasne doze se mogu ekstrapolirati sa kriva doza-odgovor dobijenih od in vitro ili sistemima za ispitivanje na animalnim modelima.

[0085] Kompozicije iz pronalaska mogu dalje da uključe jedan ili više dodatnih farmaceutskih sredstava kao što je hemoterapeutik, steroid, anti-inflamatorno jedinjenje, ili imunosupresant, primeri koji se ovde navode.

Kompleti

[0086] Predmetni pronalazak takođe uključuje farmaceutske komplete koji su korisni, na primer, u lečenju ili prevenciji PI3K-povezanih bolesti ili poremećaja, kao što je kancer, koji uključuje jedan ili više kontejnera koji sadrže farmaceutsku kompoziciju koja se sastoji iz terapeutski efikasne količine ovde opisanog jedinjenja. Takvi kompleti mogu dalje da uključe, ukoliko je poželjno, jedan ili više od različitih konvencionalnih komponenata farmaceutskih kompleta, kao što su, na primer, kontejneri sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivim nosačima, dodatnim kontejnerima, itd., što će biti očigledno stručnjaku iz oblasti tehnike. Instrukcije, ili kao inserti ili obeleživači, označavaju količine komponenata koje trebaju da se daju, uputstva za davanje, i/ili uputstva za mešanje komponenata, takođe mogu da budu uključeni u kompletu.

PRIMERI

Primer 1. ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-Hidroksietil]-1H-imidazo[4,5-d]tieno[3,2-b]piridin-1-il}tetrahidro-2H-piran-2-il)acetonitril

2

Korak 1. terc-butil (4S)-2,2-dimetil-4-vinil-1,3-oksazolidin-3-karboksilat

[0088] U suspenziju metil trifenilfosfonijum bromida (5.63 g, 15.8 mmol) u tetrahidrofuranu (140 mL) je dodat 2.5 M n-butillitijum u heksanu (7.35 mL, 18.4 mmol). Rastvor tamno crvene boje je mešan na 0 °C u trajanju 1 h. Zatim je u kapima dodat rastvor terc-butil (4R)-4-formil-2,2-dimetil-1,3-oksazolidin-3-karboksilata (iz Aldrich, 3.01 g, 13.1 mmol) u tetrahidrofuranu (7.3 mL) na 0 °C. Crveni rastvor je zagrevan do sobne temperature i mešan 12 h. U reakcionu smešu su dodati heksani u odnosu 4:1 (v/v). Suspenzija je proceđena kroz Celite i ostatak nakon ceđenja je koncentrovan. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (eluiranjem sa 10% etil acetatom u heksanima) da se dobije željeni proizvod kao bezbojno ulje (1.92 g, 64%).

Korak 2. terc-Butil [(1S)-1-(hidroksimetil)prop-2-en-1-il]karbamat

[0089] U rastvor terc-butil (4S)-2,2-dimetil-4-vinil-1,3-oksazolidin-3-karboksilata (1.90 g, 8.36 mmol) u metanolu (83 mL) je dodat monohidrat p-toluensulfonske kiseline (0.80 g, 4.2 mmol) na 0 °C. Smeša je polako zagrevana do sobne temperature preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa zasićenim rastvorom NaHCO3, koncentrovana, i nakon toga je razblažena sa etil acetatom. Organski sloj je ispran sa zas. NaHCO3(2x) i slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4, proceđen i koncentrovan da se dobije željeni proizvod kao bezbojno ulje (1.187 g, 76%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.81 (1H, m), 5.25 (2H, m), 4.90 (1H, m), 4.25 (1H, br s), 3.67 (2H, m), 1.45 (9H, s) ppm.

Korak 3. terc-Butil [(1S)-1-({[1-(hidroksimetil)prop-2-en-1-il]oksi}metil)prop-2-en-1-il]karbamat [0090] Balon je napunjen sa terc-butil [(1S)-1-(hidroksimetil)prop-2-en-1-il]karbamatom (0.401 g, 2.14 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (59 mg, 0.064 mmol), N,N’-(1S,2S)-cikloheksan-1,2-diilbis[2-(difenilfosfino)-1-naftamid] (150 mg, 0.19 mmol), i 4-dimetilaminopiridinom (78 mg, 0.64 mmol). Reakciona smeša je pročišćena sa N2tri puta, i nakon toga je redom dodavan metilen hlorid (21.3 mL), i 1.0 M trietilboran u THF-u (130 µL, 0.13 mmol). Posle mešanja od 10 min, dodat je 2-viniloksiran (0.150 g, 2.14 mmol) i dobijena smeša je mešana preko noći. Reakcija je razblažena sa dihlorometanom i zas. rastvorom NaHCO3. Organski sloj je razdvojen i osušen je preko Na2SO4, proceđen je i koncentrovan. Sirovi ostatak je prečišćen sa fleš hromatografijom (eluiranjem sa 0-50% etil acetatom/heksanima) da se dobije željeni proizvod (0.271 g, 49%).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 5.85 (1H, m), 5.67 (1H, m), 5.84∼5.17 (4H, m), 4.83 (1H, m), 4.30 (1H, br s), 3.83 (1H, m), 3.69 (1H, dd, J = 4.5 i 6.9 Hz), 3.54 (2H, m), 3.36 (1H, dd, J = 4.5 and 6.9 Hz), 1.45 (9H, s) ppm.

Korak 4.2-({(2S)-2-[(terc-Butoksikarbonil)amino]but-3-en-1-il}oksi)but-3-en-1-il acetat

[0091] U smešu terc-butil [(1S)-1-({[1-(hidroksimetil)prop-2-en-1-il]oksi}metil)prop-2-en-1-il]karbamata (268 mg, 1.04 mmol) u metilen hloridu (10 mL) je dodat trietilamin (435 µL, 3.12 mmol). Smeša je ohlađena do 0 °C, i u kapima je dodat acetil hlorid (150 µL, 2.1 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, nakon čega je ugašena sa vodom. Organski sloj je koncentrovan i

2

preostali ostatak je prečišćen na silika gelu (eluiranjem sa 20% etil acetatom/heksanima) da se dobije željeni proizvod (0.26 g, 85%). LCMS izračunato za C10H18NO3(M-100+H)<+>: m/z = 200.1; Nađeno: 200.1. Korak 5. {(5S)-5-[(terc-Butoksikarbonil)amino]-5,6-dihidro-2H-piran-2-il}metil acetat

[0092] U dvogrli balon zapremine 500 mL 2 sa kružnim dnom, je dodat benziliden(dihloro)(1,3-dimezitilimidazolidin-2-id-2-il)(tricikloheksilfosforanil)rutenijum (38 mg, 0.044 mmol). Nakon ispiranja sa azotom 3 puta, dodaje se dihlorometan (anhidrovani, 8 mL) zatim se dodaje 2-({(2S)-2-[(tercbutoksikarbonil)amino]but-3-en-1-il}oksi)but-3-en-1-il acetat (265 mg, 0.885 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju 15 h. Smeša je koncentrovana in vacuo. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (eluiranje sa heksanima do 25% EtOAc u heksanima) da se dobije željeni proizvod kao braon ulje (0.205 g, 85%). LCMS izračunato za C9H14NO5(M+H-Bu+H)<+>: m/z = 216.1; Nađeno: 216.1.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 5.94 (0.17H, m), 5.84 (0.83H, m), 5.69 (1H, m), 4.89 (0.13H, m), 4.70 (0.83H, m), 4.25 (1H, m), 4.05 (4H, m), 3.56 (0.13H, m), 3.38 (0.87H, m), 2.04 (2.49H, s), 2.03 (0.51H, m), 1.38 (9H, s) ppm (Proizvod je ∼5:1 smeša trans- i cis-izomera).

Korak 6. [(5S)-5-Amino-5,6-dihidro-2H-piran-2-il]metil acetat

[0093] U rastvor {(5S)-5-[(terc-butoksikarbonil)amino]-5,6-dihidro-2H-piran-2-il}metil acetata (205 mg, 0.756 mmol) u metilen hloridu (5.2 mL) je dodat 4.0 M hlorovodonik u dioksanu (1.5 mL, 6.0 mmol). Rastvor reakcije je mešan na sobnoj temperaturi u trajanju od 6 h. Rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom da se dobije željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca. LCMS izračunato za C8H14NO3(M+ H)<+>: m/z = 172.1; Nađeno: 172.1.

Korak 7. {(5S)-5-[(6-Nitrotieno[3,2-b]piridin-7-il)amino]-5,6-dihidro-2H-piran-2-il}metil acetat [0094] Smeša 7-hloro-6-nitrotieno[3,2-b]piridina (156 mg, 0.727 mmol), [(5S)-5-amino-5,6-dihidro-2H-piran-2-il]metil acetata (129 mg, 0.754 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0.26 mL, 1.5 mmol) u izopropil alkoholu (1.7 mL) je zagrevana na 90 °C u trajanju od 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena je sasa fleš hromatografijom da se dobije željeni proizvod (0.21 g 83%). LCMS izračunato za C15H16N3O5S (M+ H)<+>: m/z = 350.1; Nađeno: 350.0.

Korak 8. {(5S)-5-[(6-Aminotieno[3,2-b]piridin-7-il)amino]tetrahidro-2H-piran-2-il}metil acetat [0095] Smeša {(5S)-5-[(6-nitrotieno[3,2-b]piridin-7-il)amino]-5,6-dihidro-2H-piran-2-il}metil acetata (210 mg, 0.600 mmol) i 10% paladijuma na ugljeniku (0.21 g) u metanolu (4.0 mL) je izložena pritisku H2u balonu na sobnoj temperaturi u trajanju 2 h. Smeša je proceđena i, i ostatak nakon ceđenja je koncentrovan i proceđen sa fleš hromatografijom (eluiranjem sa 15% metanolom u dihlorometanu) da se dobije željeni proizvod (145 mg, 75%). LCMS izračunato za C15H20N3O3S (M+ H)<+>: m/z = 322.1; Nađeno: 322.0.

Korak 9. (1R)-1-{1-[(3S)-6-(Hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3-il]-1H-imidazo[4,5-d]tieno[3,2-b]piridin-2-il}etanol

[0096] Smeša (2R)-2-hidroksipropanamida (131 mg, 1.47 mmol) i trietiloksonijum tetrafluoroborata (263 mg, 1.38 mmol) u THF (2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 h. Rastvarač je uklonjen i ostatak je rastvoren u etanolu (0.85 mL) i dodat u suspenziju {(5S)-5-[(6-aminotieno[3,2-b]piridin-7-il)amino]tetrahidro-2H-piran-2-il}metil acetata (145 mg, 0.451 mmol) u etanolu (3.1 mL). Smeša je mešana na 80 °C u trajanju od 1 h. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i razblažena je sa vodom (1.0 mL). Dodat je litijum hidroksid (32.4 mg, 1.35 mmol), i smeša je mešana u trajanju od 2 h. Reakciona smeša je razblažena sa metanolom i prečišćena je sa prep-LCMS (XBridge C18 kolona,

2

eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (95 mg, 63%). LCMS izračunato za C16H20N3O3S (M+ H)<+>: m/z = 334.1; Nađeno: 334.0.

Korak 10: ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-Hidroksietil]-1H-imidazo[4,5-d]tieno[3,2-b]piridin-1-il)tetrahdro-2H-piran-2-il)metil-4-metilbenzensulfonat i ((2S,5S)-5-{2-[(1R)-1-hidroksietil]-1H-imidazo[4,5-d]tieno[3,2-b]piridin-1-il}tetrahidro-2H-piran-2-il)metil 4-metilbenzensulfonat

[0097] U rastvor (1R)-1-{1-[(3S)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-3-il]-1H-imidazo[4,5-d]tieno[3,2-b]piridin-2-il}etanola (100 mg, 0.300 mmol) (prethodni korak) u metilen hloridu (3.4 mL) i pirimidinu (0.146 mL, 1.80 mmol) je dodat p-toluensulfonil hlorid (57.2 mg, 0.300 mmol) i 4-dimetilaminopiridin (1.8 mg, 0.015 mmol) na 0 °C. Reakcionoj smeši je omogućeno zagrevanje do sobne temperature preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana, razblažena sa metanolom, i prečišćena je sa prep-LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobiju dva vrha. Na analitičkoj HPLC (Waters SunFire C18, 2.1 x 50 mm, 5 µM; Brzina protoka 3 mL/min; Zapremina injekcije 2 µL; Gradijent od 2 do 80% B u 3 minuta (A = voda sa 0.025% TFA, B = acetonitri)): Prvi vrh (45.3 mg, 31%) retenciono vreme 1.81 min, LCMS izračunato za C23H26N3O5S2(M+ H)<+>: m/z = 488.1; Nađeno: 488.1. Drugi vrh (8.5 mg, 5.8%) retenciono vreme 1.88 min, LCMS izračunato za C23H26N3O5S2(M+ H)<+>: m/z = 488.1; Nađeno: 488.1.

Korak 11. ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-Hidroksietil]-1H-imidazo[4,5-d]tieno[3,2-b]piridin-1-il)tetrahidro-2H-piran-2-il)acetonitril

[0098] Smeša ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-hidroksietil]-1H-imidazo[4,5-d]tieno[3,2-b]piridin-1-il}tetrahidro-2H-piran-2-il)metil 4-metilbenzensulfonata (iz 1-og signala iz prethodnog koraka, 27 mg, 0.055 mmol) i natrijum cijanid (4.5 mg, 0.092 mmol) u dimetil sulfoksidom (0.4 mL) je mešana na 50 °C tokom 4 h. Posle hlađenja, smeša je razblažena sa metanolom i prečišćena je sa prep-LCMS (XBridge C18 kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 30 mL/min) da se dobije željeni proizvod (14.5 mg, 76%). LCMS izračunato za C17H19N4O2S (M+ H)<+>: m/z = 343.1; Nađeno: 343.0.<1>H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.51 (1H, s), 8.45 (1H, d, J = 5.5 Hz), 7.97 (1H, d, J = 5..5 Hz), 5.31 (1H, m), 5.20 (1H, m), 4.31 (1H, m), 4.23 (1H, m), 4.02 (1H, m), 2.96 (1H, dd, J = 17.0 i 4.5 Hz), 2.85 (1H, dd, J = 17.0 and 4.5 Hz), 2.66 (1H, m), 2.26 (1H, m), 2.09 (1H, m), 1.73 (1H, m), 1.69 (3H, d, J = 6.5 Hz) ppm.

Primer 1a. ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-Hidroksietil]-1H-imidazo[4,5-d]tieno[3,2-b]piridin-1-il}tetrahidro-2H-piran-2-il)acetonitril hidrat

[0099]

2

[0100] ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-Hidroksietil]-1H-imidazo[4,5-d]tieno[3,2-b]piridin-1-il}tetrahidro-2H-piran-2-il)acetonitril(52 mg, 0.15 mmol) iz Primera 25 je kristalizovan iz smeše acetonitrila (8 mL) i vode (4 mL). Dobijeni bezbojni kristal prizme koji je sakupljen je bio pogodan za analizu kristalne strukture X-zracima.

[0101] Kristalni podaci pokazuju: ∼0.520 x 0.180 x 0.100mm, ortorombični, P212121, a = 6.962(3) Å, b = 11.531(4) Å, c = 20.799(7) Å, Vol = 1669.6(10) Å<3>, Z = 4, T = -100.°C, Težina formule = 359.42, Gustina = 1.430g/cm<3>, µ(Mo) = 0.22mm<-1>.

[0102] Sakupljanje podataka je izvedeno na Bruker SMART APEX-II CCD sistemu, MoKalpha zračenje, standardna fokusna cev, snaga anode = 50kV x 42mA, udaljenost kristala od ploče = 5.0cm, 512 x 512 piksela/okviru, centar zraka = (256.13,253.14), ukupni okviri = 1151, oscilacija/okviru = 0.50°, izlaganje/okviru = 10.1 sek/okviru, SAINT integracija, hkl min/max = (-9, 9, -15, 15, -27, 27), unos podataka u shelx = 17025, jedinstveni podaci = 3975, dva-teta opseg = 3.92 do 55.72°, potpunost prema dva-teta 55.72 = 99.80%, R(int-xl) = 0.0681, SADABS primenjena korekcija.

[0103] Struktura je određena upotrebom XS(Shelxtl), precizirana upotrebom softverkog paketa shelxtl, precizirana najmanjim kvadratima pune matrice na F<2>, faktori rasipanja iz Int. Tab. Vol C Tabela 4.2.6.8 i 6.1.1.4, broj podataka = 3975, broj ograničenja = 0, broj parametara = 235, odnos podatak/parameter= 16.91, uspešnost predviđanja F<2>= 1.04, R označava[I>4sigma(I)] R1 = 0.0505, wR<2>= 0.1242, R označava(sve podatke) R1 = 0.0769, wR2 = 0.1401, maksimalna razlika vrha i „hole“ = 0.724 i -0.277 e/Å<3>, prečišćen flack-ov parametar = -0.12(13), Svaki od CH vodonikovi atoma su prečišćeni korišćnjem „riding“ modela. OH vodonici su pronađeni sa mape razlika i u potpunosti su prečišćeni.

[0104] Rezultati su pokazali da asimetrična jedinica sadrži jedan molekul i jednu vodu kao što je prikazano termalnim elipsoidima koji su nacrtani sa 50% nivoom verovatnoće. Stereohemija na svakom od stereocentara (kao što je naznačeno u nazivu i strukturi jedinjenja gore u tekstu) je potvrđena. Flack-ov parametar prečišćen do 0.28(24) označava pravilno enantiomerno podešavanje.

Primer 2. 4-[3-(Cijanometil)-3-(3’,5’-dimetil-1H,1’H-4,4’-bipirazol-1-il)azetidin-1-il]-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamid

[0105]

Korak 1: 2,4,5-Trifluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamid

[0106] U rastvor 2,4,5-trifluorobenzojeve kiseline (5.00 g, 28.4 mmol) u actonitrilu (50 mL) je dodat N,N-dimetilformamid (40 µL) nakon čega sledi dodavanje oksalil hlorida (3.60 mL, 42.6 mmol). Posle 90 min, isparljive supstance su uklonjene pod redukovanim pritiskom. Ostatak je isovremeno uparen sa acetonitrileom (50 mL). Ostatak je nakon toga razblažen u metilen hloridu (50 mL). Ovaj rastvor je u kapima dodat u ohlađenu (ledeno kupatilo) smešu (2S)-1,1,1-trifluoropropan-2-amin hidrohlorida (5.52 g, 36.9 mmol) (iz Synquest, 98% ee) u toluenu (100 mL) i 0.5 M rastvor natrijum hlorida u vodi (142 mL, 71.0 mmol). Nakon dodavanja, ledeno kupatilo je uklonjeno, i reakciji je omogućeno zagrevanje do st. Reakcija je mešana preko noći. Organski sloj je razdvojen. Organski sloj je ekstrahovan sa metilen hloridom (50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa 20% rastvorom soli (75 mL) i vodom (2 x 75 mL), osušeni preko MgSO4, proceđeni i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da se dobije željeni proizvod (6.49 g, 84%) koji je direktno korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.01 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.92 - 7.50 (m, 2H), 4.76 (m, 1H), 1.31 (d, J = 7.0 Hz, 3H) ppm. LCMS izrač. za C10H8F6NO (M+1)<+>: m/z = 272.0; Nađeno: 272.0. Korak 2: 2,5-Difluoro-4-(3-hidroksiazetidin-1-il)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamid [0107] Smeša 2,4,5-trifluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida (6.39 g, 23.6 mmol), azetidin-3-ol hidrohlorida (3.19 g, 28.3 mmol) i 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-ena (8.81 mL, 58.9 mmol) u acetonitrilu (25 mL) je mešana na 80 °C u trajanju od 2 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (75 mL) i isprana je sa IN HCl (50 mL), IN NaHCO3(60 mL), 20% slanim rastvorom (50 mL) i vodom (75 mL). Vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc (100 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko MgSO4, proceđeni i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da se dobije željeni proizvod (7.59 g, 91.8%).<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.38 (dd, J = 8.9, 1.9 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 12.8, 6.5 Hz, 1H), 6.38 (dd, J = 12.3, 7.5 Hz, 1H), 5.71 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.74 (dp, J = 15.3, 7.6 Hz, 1H), 4.62 - 4.46 (m, 1H), 4.30 - 4.15 (m, 2H), 3.71 (m, 2H), 1.29 (d, J = 7.1 Hz, 3H) ppm. LCMS izrač. za C13H14F5N2O2(M+1)<+>: m/z = 325.1; Nađeno: 325.1.

Korak 3: 2,5-Difluoro-4-(3-oksoazetidin-1-il)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamid

[0108] U rastvor 2,5-difluoro-4-(3-hidrosiazetidin-1-il)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida (7.57 g, 23.3 mmol) u metilen hloridu (93 mL) je dodat jodobenzen diacetat (9.40 g, 29.2 mmol) i 2,2,6,6-tetrametil-1-piperidiniloksi slobodni radikal (1.82 g, 11.7 mmol) (TEMPO) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc (100 mL), isprana sa 0.5N NaHCO3(2x80 mL), 20% slanim rastvorom (100 mL) i vodom (100 mL). Vodeni slojevi su ekstrahovani sa etili acetatom (75 mL). Organski ekstrakti su kombinovani, osušeni preko MgSO4, proceđeni i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni od silika gela eluiranjem sa 0% do 5% etil acetatom u metilen hloridu da se dobije sirovi proizvod koji je rekristalizovan iz MTBE (50 mL) i heptana (100 mL) da se dobije željeni proizvod (5.44g, 72%) kao bezbojna čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.52 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.36 (dd, J = 12.5, 6.5 Hz, 1H), 6.63 (dd, J = 12.1, 7.6 Hz, 1H), 4.90 (d, J = 2.1 Hz, 4H), 4.86 - 4.68 (m, 1H), 1.31 (d, J = 7.1 Hz, 3H) ppm. LCMS izrač. Za C13H12F5N2O2(M+1)<+>: m/z = 323.1; Nađeno: 323.0. Korak 4: 4-[3-(Cijanometilen)azetidin-1-il]-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamid [0109] Dietil cijanometilfosfonat (1.95 mL, 11.8 mmol) je dodat u kapima u ohlađeni rastvor (ledeno kupatilo) 1.0 M kalijum terc-butoksida u THF-u (11.8 mL, 11.8 mmol) koji je razblažen sa tetrahidrofuranom (12 mL). Kupatilo je uklonjeno i reakcija je zagrevana do sobne temperature, i mešana je u trajanju od 90 min. Reakcioni rastvor je ponovo ohlađen sa ledenim kupatilom. Gore dobijeni rastvor je nakon toga dodat tokom 12 min u ohlađeni (ledeno kupatilo) rastvor 2,5-difluoro-4-(3-oksoazetidin-1-il)-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida (4.00 g, 12.4 mmol) u tetrahidrofuranu (50 mL). Reakciona smeša je mešana tokom 30 min. Ledeno kupatilo je uklonjeno, i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, zatim je ugašena dodavanjem 20% slanog rastvora (75 mL) i etil acetata (75 mL). Organski sloj je razdvojen. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, proceđeni su i kocentrovani pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni od silika gela sa etil acetatom u heksanima (0% do 30%) da se dobije željeni proizvod (2.6g).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.59 - 8.37 (m, 1H), 7.33 (dd, J = 12.5, 6.4 Hz, 1H), 6.59 (dd, J = 12.0, 7.4 Hz, 1H), 5.88 (m, 1H), 4.94 -4.75 (m, 4H), 4.76 (m, 1H), 1.31 (d, J = 7.1 Hz, 3H) ppm. LCMS izrač. za C15H13F5N3O (M+1)<+>: m/z = 346.1; Nađeno: 346.1.

1

Korak 5: 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il)-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamid

[0110] Smeša 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (1.00 g, 5.15 mmol), 4-[3-(cijanometilen)azetidin-1-il]-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida (1.78 g, 5.15 mmol) i 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-ena (0.31 mL, 2.1 mmol) u acetonitrilu (20.2 mL) je zagrejana na 50 °C preko noći. Nakon hlađenja, rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom. Ostatak je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS izrač. za C24H28BF5N5O3(M+1)<+>: m/z = 540.2; Nađeno: 540.1.

Korak 6: 4-[3-(Cijanometil)-3-(3,5’-dimetil-1H,1’H-4,4’-bipirazol-1-il)azetidin-1-il]-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamid

[0111] Smeša 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida (329 mg, 0.610 mmol), 4-bromo-3,5-dimetil-1H-pirazola (206 mg, 1.18 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (110 mg, 0.098 mmol) i natrijum karbonata (320 mg, 3.0 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL)/vodi (5 mL) je ipsrana sa azotom i mešana na 110 °C u trajanju od 1 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc, isprana je sa vodom i slanim rastvorom, koncentrovana. Ostatak je prvo prečišćen sa silika gelom (eluiranjem sa 0-100% EtOAc/heksanima zatim sa 10% metanolom/dihlorometanu), i zatim sa prep-LCMS (XBridge C18 kolonom, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.1% amonijum hidroksid, na brzini protoka od 60 mL/min) da se dobije željeni proizvod (30 mg, 9.7%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.17 (1H, s), 8.45 (1H, d, J = 8.0 Hz), 8.10 (1H, s), 7.70 (1H, s), 7.34 (1H, m), 6.61 (1H, s), 4.77 (1H, m), 4.62 (2H, d, J = 9.0 Hz), 4.39 (1H, d, J = 9.0 Hz), 3.64 (2H, s), 2.22 (6H, s), 1.31 (6H, d, J = 7.0 Hz) ppm. LCMS izračunato za C23H23F5N7O (M+H)<+>: m/z = 508.2; Nađeno: 508.0.

Primer A: In vitro JAK kinazni test

[0112] Ovde opisana jedinjenja su ispitana za inhibitornu aktivnost JAK meta u skladu sa in vitro testom koji je opisanu Park et al., Analytical Biochemistry 1999, 269, 94-104. Katalitički domeni humane JAK1 (a.a.837-1142), JAK2 (a.a.828-1132) i JAK3 (a.a.781-1124) su eksprimirani korišćenjem baculovirus-a u ćelijama insekata i prečišćeni su. Katalitička aktivnost JAK1, JAK2 ili JAK3 je testirana merenjem fosforilacije biotinilovanog peptida. Fosforilovani peptid je detektovan homogenom fluorescencijom koja se razvija u vremenu (HTRF). IC50-i jedinjenja za svaku kinazu u 40 µL reakcijama koje sadrže enzim, ATP i 500 nM peptid u 50 mM Tris (pH 7.8) pufer sa 100 mM NaCl, 5 mM DTT, i 0.1 mg/mL (0.01%) BSA. Za 1 mM IC50merenja, koncentracija ATP u reakcijama je bila 1 mM. Reakcije su izvedene na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 h i nakon čega su zaustavljene sa 20 µL 45 mM EDTA, 300 nM SA-APC, 6 nM Eu-Py20 u test puferu (Perkin Elmer, Boston, MA). Vezivanje sa Europium obeleženim antitelom se dešavalo 40 minuta i HTRF signal je izmeren na PHERA star čitaču ploča (BMG, Cary, NC). Podaci za JAK1 i/ili JAK2 inhibitore su dobijeni ispitivanjem jedinjenja u Primeru A testa na 1 mM ATP.

Primer B: PI3Kδ „scintillation proximity“ test

Materijali

[0113] [γ-<33>P]ATP (10mCi/mL) je kupljen od Perkin-Elmer (Waltham, MA). Lipidno kinazni supstrat, D-mio-fosfatidilinozitol 4,5-bisfosfat (PtdIns(4,5)P2)D (+)-sn-1,2-di-O-oktanoilgliceril, 3-O-fosfo vezani (PIP2), CAS 204858-53-7, je kupljen od Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT). PI3Kδ (p110δ/p85α) je kupljen od Millipore (Bedford, MA). ATP, MgCl2, DTT, EDTA, MOPS i CHAPS su kupljeni od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Aglutinin klica pšenice (WGA) YSi SPA Scintilacione kuglice je kupljen od GE healthcare life sciences (Piscataway, NJ).

2

[0114] Kinazna reakcija je sprovedena u matrici bele ploče od polistirena sa 384 bunarića od Thermo Fisher Scientific u finalnoj zapremini 25 µL. Inhibitori su prvo serijski razblaženi u DMSO i dodati su u bunariće na ploči pre dodavanja drugih komponenata reakcije. Finalna koncentracija DMSO u testu je bila 0.5%. PI3K testovi su izvedeni na sobnoj temperaturi u 20 mM MOPS, pH 6.7, 10 mM MgCl2, 5 mM DTT i CHAPS 0.03%. Reakcije su inicirane dodavanjem ATP, finalna reakciona smeša se sastojala iz 20 µM PIP2, 20 µM ATP, 0.2 µCi [γ-<33>P] ATP, 4 nM PI3Kδ. Reakcije su inkubirane 210 min i prekinute su dodavanjem 40 µL SPA kuglica suspendovanih u puferu za gašenje: 150mM kalijum fosfata pH 8.0, 20% glicerol. 25 mM EDTA, 400 µM ATP. Finalna koncentracija SPA kuglica je bila 1.0mg/mL. Posle zasejavanja na ploču, ploče su mešane na ploči na sobnoj temperaturi i centrifugirane na 1800 oum u trajanju od 10 minuta, radioaktivnost proizvoda je određena scintilacionim brojanjem u Topcount (Perkin-Elmer). Određivanje IC50je sprovedeno podešavanjem krive procenta aktivnosti kontrole prema log koncentracije inhibitora upotrebom GraphPad Prism 3.0 softvera. Podaci za PI3Kδ inhibitore su dobijeni ispitivanjem jedinjenja u Primeru B testa.

Primer C: Fajferov model limfoma

Postupci:

[0115] Ženski SCID miševi, (5 do 8 nedelja stari, Charles River Laboratories, Wilmington, MA) su inokulisani sa 1 X 107 tumorskih ćelija (Pfeiffer, ATCC #CRL-2632, Manassas, VA) i matrigelom (BD Biosciences #354234) u 0.2 mL sterilnom slanom rastvoru. Inokulacija je sprovedena subuktanozno na boku. Fragmenti tumorskog tkiva (približno 3 mm X 3 mm) su sakupljeni 3 do 6 nedelja nakon inokulacije kultivisanih ćelija i implantirani subkutanozno u mestu ćelijske inokulacije. Tkivni fragmenti su implantirani kao čvrsti delovi korišćenjem pincete sa tupim vrhom. Tretman miševa koji imaju tumor je počeo 15 do 25 dana posle inokulacije tumora, u zavisnosti od veličine tumora. Životinje su bile raspoređene da se dobiju približno ekvivalentne srednje vrednosti zapremine tumora u svakoj grui. Minimalna srednja vrednost zapremine tumora u svim grupama je bila 150 mm<3>u prvom danu tretmana i grupe su imale 7 životinja. Eksperimentalno terapeutsko sredstvo, Primer 347, je davano miševima oralnim putem (PO). Učestalost tretmana je bila 2 puta dnevno minimalno 14 dana za postizanje efikasnosti. Veličina subkutanoznih tumora je merena 2 do 3 puta nedeljno digitalnim šublerom. Zapremnina tumora je izračunata merenjem tumora u 2 dimenzije i korišćenjem jednačine: Zapremina = [Dužina X (Širina2)]/2; gde je veći droj dužina, i manji broj širina. Ukolko je obrazovano više tumora, finalna zapremina je bila zbir individualnih tumora subjekta prema istoj jednačini: npr, 2 tumora; Zapremina = {[L13 (W1)2]/2} {[L2 x (W2)2]/2}. Efekti na tumorski rast su prijavljeni kao procenat inhibicije tumorskog rasta (%TGI). ProcenatTGI je izračunat sa jednačinom: (1- (Tx zap. / kontrolna zap.))∗100, gde je zapremina kontrole nosač ili netretirana zapremina tumora u datom danu, i Tx zapremina je zapremina tumora bilo koje grupe koja je primila tretman u istom danu. Statističke razlike između tretmana i kontrole nosača su ispitane upotreno ANOVA: test jednog faktora.

Rezultati:

[0116] Jedinjenje 32c (Tabela 2 supra) je ispitano kao jedno sredstvo u Fajferovom modelu ksenografta humanog tumora difuznog krupnoćelijskog B-limfoma, podtipa NHL. Pokazano je da su Fajferove ćelije kancera senzitivne na anti-proliferativne efekte Primera 347in vitro. Prema tome, modelu tumora je uspostavljen na osnovu subkutanozne inokulacije tumorskih ćelija u imuno kompromitovane SCID miševe i miševi koji imaju tumor su primili dva puta dnevno oralne doze nosača ili Jedinjenja 32c na 0.3, 1, 3, ili 10 mg/kg u trajanju od 14 dana. Tretman jedinjenjem 32c je inhibirao tumorski rast za 22%, 24%, 36%, i 58% (procenat inhibicije tumorskog rasta) sa rastućom dozom.

Primer D. analiza „Western-Blot“

[0117] Sledeći materijali i postupci su korišćeni u Western blot analizi infra. Ćelije(5 miliona) su lizirane u zapremini 300 µl pufera za lizu. Rastvorljive frakcije su sakupljene centrifugom.25 µl ćelijskog lizata je naneto na Tris-Glicin poliakrilamidne gelove i podvrgnuto je elektroforezi. Proteini su preneti na nitroceluloznu membranu i testirani su antitelima iz Cell Signaling Technology za sledeće proteine : fosfo-Stat3 Y705, fosfo-Akt S473, pim1, pim2, pim3, c-myc, fosfo-p70S6K, fofo-S6, fosfo-Bad S112 i aktin.

Primer E. Nivoi IL6 i IL10 u ćelijskim linijama

[0118] Visoki nivoi IL6 i IL10 su uočeni u različitim DLBCL ćelijskim linijama (SL.1A). Takođe je pokazano da IL6 i IL10 aktiviraju signalizaciju JAK/STAT sa IL10 kao jačim aktivatorom signalizacije JAK/STAT od IL6 kroz panel DLBCL ćelijskih linija (SL.1B). Visoki nivoi IL6 i IL10 se nalaze u serumu pacijenata koji imaju i u korelaciji su sa kraćim događajem slobodnog preživljavanja i većim bodovanjem međunarodnog prognostičkog indeksa.

Primer F. IL10 čini Fajferove ćelije rezistentnim na inhibiciju PI3Kδ i može da se preobrati blokadom JAK1/2 ili JAK1

Test ćelijske proliferacije

[0119] Ćelije difuznog krupnoćelijskog B-limfoma su zasejane na 2000 ćelija/bunariću u pločama za kulture sa 96 bunarića u odsustvu ili prisustvu 10 ng/ml IL10. Jedinjenja su dodata u ove ćelije nakon razblaženja prvo u DMSO, zatim razblaženja u medijumu kulture (4x koncentracija). Ćelije su kultivisane u inkubatoru 3 dana sa 5% CO2. Proliferacija ćelija je ispitana korišćenjem Cell titer-glow testa (Promega, Madison, WI). Test ćelijske proliferacije je izveden prvo u Fajferovim ćelijama (podtip difuzni krupnoćelijski B-limfom (GCB-DLBCL) B ćelija germinativnog centra (GCB) i HBL-1 difuzni krupnoćelijski B-limfom (ABC-DLBCL) sličnan aktivisanim B ćelijama (ABC)).

[0120] SL. 2A prikazuje % inhibicije u testu ćelijske proliferacije u Fajferovim ćelijama kao funkciju koncentracije Jedinjenja 28 (inhibitor PI3Kδ) sa nosačem (DMSO), DMSO+IL10, i DMSO+IL10+ruksolitinib (JAK1/JAK2 inhibitor). SL.2B prikazuju % inhibicije u testu ćelijske proliferacije u Fajferovim ćelijama kao funkciju koncentracije Jedinjenja 28 (inhibitor PI3Kδ) sa nosačem (DMSO), DMSO+IL10, i DMSO+IL10+Jedinjenje 7 (selektivni JAK1 inhibitor). Rezultati pokazuju da IL10 čini Fajferove ćelije rezistentnim na inhibiciju PI3Kδ, ali da ova rezistencija može da se povrati blokiranjem signalizacije JAK1 i/ili JAK2. Prema tome, sinergistički efekat na proliferaciju Fajferovih ćelija kada su PI3Kδ inhibitor i JAK1 and/JAK2 inhibitor korišćeni u kombinaciji. Sinergija se takođe uočava bez IL10. Indukcija apoptoze je takođe uočena sa ovom kombinacijom.

[0121] Slični rezultati su uočeni u HBL-1 ćelijama sa ruksolitinibom. Prema tome, SL. 3 prikazuje % inhibicije u testu ćelijske proliferacije u HBL-1 ćelijama kao funkciji koncentracije Jedinjenja 28 (inhibitor PI3Kδ) sa nosačem (DMSO), DMSO+IL10, i DMSO+IL10+ruksolitinib (JAK1/JAK2 inhibitor).

Primer G. IL10-indukovana ekspresija Pim2 je blokirana sa JAK1/2 inhibitorom

[0122] Fajferove ćelije su tretirane u trajanju 24 h sa nosačem (DMSO), ruksolitinib (18424), Jedinjenjem 28, ili Jedinjenjem 28 i ruksolitinibom (18424) sa ili bez IL10 i nakon toga su izloženi „Western blot“ analizi da bi se ispitali sledeći proteini: fosfo-Stat3 Y705, fosfo-Akt S473, Pim2, c-Myc, fosfo-p70S6K, fosho-S6, fosfo-Bad S112 i aktin. SL.4 pokazuje da je ekspresija Pim2 indukovana sa IL10 blokirana sa ruksolitinibom (JAK1/JAK2 inhibitior). IL6 i IL10 promovišu ćelijsko preživljavanje kroz

4

ekspresiju Pim2, koja zavisi od aktivnosti JAK1. SL.4 takođe pokazuje sinergističko smanjenje c-Myc P-S6 u prisustvu kombinovanog tretmana sa Jedinjenjem 28 i ruksolitinibom. Smanjenje c-Myc proteina može da bude odgovorno za kombinovani tretman.

Primer H. IL10-indukovana ekspresija Pim2 je blokirana sa selektivnim JAK1 inhibitorom [0123] Fajferove ćelije su tretirane u trajanju od 24 h sa nosačem (DMSO), Jedinjenjem 7, Jedinjenjem 28, ili Jedinjenjem 28 i Jedinjenjem 7 sa ili bez IL10 i nakon toga su podvrgnute analizi „Western blot“ da bi se ispitale za sledeće proteine: fosfo-Stat3 Y705, fosfo-Akt S473, Pim2, c-Myc, fosfo-p70S6K, fosho-S6, fosfo-Bad S112 i aktin. SL. 5 pokazuje da je IL10-indukovana ekspresija Pim2 blokirana selektivnim JAK1 inhibitorom (Jedinjenje 7).

Primer I. Povećanje u potenciji PI3Kδ inhibitora selektivnim JAK1 inhibitorom

[0124] Da bi se ispitali efekti IL-10 na ćelijski rast i osetljivost prema inhibiciji BCR puta, korišćena je linija Fajferovih ćelija kao model sistem DLBCL. Fajferove ćelije je podtip B-ćelija germinalnog centra (GCB) DLBCL, za koje je pokazano da eksprimiraju PI3Kδ, da su osetljive na inhibiciju PI3Kδ, i aktiviraju JAK/STAT put u odgovoru na brojne citokine kao što je opisano gore u tekstu. Fajferove ćelije su tretirane tokom 3 dana sa različitim koncentracijama Jedinjenja 28 u prisustvu ili odsustvu IL-10 i 1 µM Jedinjenja 16, i ćelijski rast je meren očitavanjem ATP (vidi tabelu ispod). Kao što je prikazano na SL.6, prisustvo IL-10 je pomerilo potenciju Jedinjenja 28 za ∼10-puta (IC50=0.67 µM, - IL-10; IC50=6.36 µM, IL-10). Dodavanje JAK1 inhibitora, Jedinjenja 16, preokrenulo je ovaj efekat tako da je kombinacija ∼50-puta potentnija. U ovom sistemu, sam JAK1 inhibitor nije imao efekta (IC50> 1 mM). Dalje, kao što je prikazano u SL.7 (koja prikazuje Aneksin-V bojenje Fajferovih ćelija tretiranih 3 dana u 10% FBS IL10; Jedinjenje 16 je ispitano u 1 µM), inhibicija PI3Kδ zajedno sa JAK1 signalizacijom je dovela do povećene apoptoze dok nijedno sredstvo samo nije imalo značajnog efekta.

Primer J. Efekat kombinovanog JAK1 i PI3Kδ tretmana na fosforilaciju STAT3 i inhibiciju pAKT [0125] Da bi se ispitali efekti na nishodne signalne puteve, Fajferove ćelije su tretirane sa Jedinjenjem 28 /- Jedinjenjem 16 u trajanju od 4 h i nakon toga su stimulisane sa IL-10 u trajanju od 15 minuta. Ekstrakti su analizirani sa „Western blot“ za pAKT i pSTAT3. Kao što je prikazano na SL.8, AKT put je konstitutivno aktiviran u Fajferovim ćelijama. Blokada signalizacije PI3Kδ je dovela do potpune inhibicije pAKT pri čemu tretman sa JAK1 inhibitorom nije imao efekta. Suprotno tome, Jedinjenje 16 je dovelo do inhibicije fosforilacije STAT3 a pri čemu PI3Kδ inhibitor nije. Kombinacija oba jedinjenja je bila neophodna za blokiranje oba puta.

Claims

Patentni zahtevi

1. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ, za upotrebu u postupku lečenja bolesti koja je izabrana od difuznog krupnoćelijskog B-limfoma, difuznog krupnoćelijskog B-limfoma (ABC-DLBCL) sličnog aktivisanim B-ćelijama (ABC), difuznog krupnoćelijskog B-limfoma (GCB-DLBCL) B ćelija germinativnog centra (GCB) kod pacijenta kome je potrebno, pri čemu postupak obuhvata davanje pomenutom pacijentu:

(a) inhibitora JAK1 i/ili JAK2; i (b) inhibitora PI3Kδ; gde:

(a) pomenuti inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je izabran od:

{1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila;

4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metil etil]benzamida;

{1-(cis-4-{[4-[(etilamino)metil]-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il} acetonitrila;

{1-(cis-4-{[4-(1-hidroksi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il} acetonitrila;

{1-(cis-4-{[4-{[(3R)-3-hidroksipirolidin-1-il]metil}-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il} acetonitrila;

4-[3-(cijanometil)-3-(3’,5’-dimetil-1H,1H-4,4’-bipirazol-1-il)azetidin-1-il]-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida;

i farmaceutski prihvatljivih soli bilo kog od prethodno pomenutog; i

(b) pomenuti inhibitor PI3Kδ je izabran od:

(S)-7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona; 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-2-{1-[(2S)-2-hidroksipropil]azetidin-3-il}-3-metoksibenzonitrila;

N-{1-[5-hloro-8-(3-fluorofenil)cinolin-7-il]etil}-9H-purin-6-amina;

i farmaceutski prihvatljivih soli bilo kog od pethodno pomenutog.

2. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ za upotrebu prema zahtevu 1 gde pomenuti inhibitor JAK1 je {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; i pomenuti inhibitor PI3Kδ je 7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

3. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, pri čemu pomenuti inhibitor JAK1 je {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrilna so adipinske kiseline.

4. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ za upotrebu prema zahtevu 1, pri čemu pomenuti inhibitor JAK1 je 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

5. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ za upotrebu prema zahtevu 1, gde je pomenuti inhibitor PI3Kδ izabran od:

(N-{(1S)-1-[5-hloro-8-(3-fluorofenil)cinolin-7-il]etil}-9H-purin-6-amina;

i farmaceutski prihvatljivih soli bilo kog od prethodno pomenutog.

6. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, pri čemu pomenuti inhibitor PI3Kδ je (S)-7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

7. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, pri čemu je bolest difuzni krupnoćelijski B-limfom.

8. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, pri čemu je pomenuta bolest difuzni krupnoćelijski B-limfom (ABC-DLBCL) sličan aktivisanim B-ćelijama (ABC) ili difuzni krupnoćelijski B-limfom (GCB-DLBCL) B ćelija germinativnog centra (GCB).

9. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, pri čemu pomenuti inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i pomenuti inhibitor PI3Kδ se daju istovremeno.

10. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ za upotrebu prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, pri čemu pomenuti inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i pomenuti inhibitor PI3Kδ se daju jedan za drugim.

11. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ za upotrebu u postupku lečenja difuznog krupnoćelijskog B-limfoma prema zahtevu 1, pri čemu postupak obuhvata davanje pomenutom pacijentu {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; i (S)-7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

12. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ za upotrebu u postupku lečenja difuznog krupnoćelijskog B-limfoma prema zahtevu 1, koji obuhvata davanje pomenutom pacijentu 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; i 7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

13. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ za upotrebu prema zahtevu 1, pri čemu pomenuti inhibitor JAK1 je ((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-hidroksietil]-1H-imidazo[4,5-d]tieno[3,2-b]piridin-1-il}tetrahidro-2H-piran-2-il)acetonitril, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

14. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 inhibitor PI3Kδ za upotrebu prema zahtevu 1, pri čemu pomenuti inhibitor JAK1 je 4-[3-(cijanometil)-3-(3’,5’-dimetil-1H,1’H-4,4’-bipirazol-1-il)azetidin-1-il]-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

15. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ za upotrebu prema zahtevu 1, pri čemu pomenuti inhibitor PI3Kδ je (S)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil) pirolidin-2-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

16. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ za upotrebu prema zahtevu 1, pri čemu pomenuti inhibitor PI3Kδ je (R)-4-(3-((S)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

17. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ za upotrebu prema zahtevu 1, pri čemu pomenuti inhibitor PI3Kδ je (S)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

18. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ za upotrebu prema zahtevu 1, pri čemu pomenuti inhibitor PI3Kδ je (R)-4-(3-((R)-1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil)pirolidin-2-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

19. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2 i inhibitor PI3Kδ za upotrebu prema zahtevu 18, pri čemu pomenuti inhibitor PI3Kδ je (S)-7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-on, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

20. Inhibitor JAK1 i/ili JAK2, za upotrebu u kombinaciji sa inhibitorom PI3Kδ u postupku lečenja bolesti koja je izabrana od difuznog krupnoćelijskog B-limfoma, difuznog krupnoćelijskog B-limfoma (ABC-DLBCL) sličnog aktivisanim B-ćelijama (ABC), i difuznog krupnoćelijskog B limfoma (GCB-DLBCL) B ćelija germinativnog centra (GCB) kod pacijenta kome je potrebno, pri čemu postupak obuhvata davanje pomenutom pacijentu: (a) inhibitora JAK1 i/ili JAK2; i (b) inhibitor PI3Kδ; pri čemu:

(a) pomenuti inhibitor JAK1 i/ili JAK2 je izabran od:

{1-(cis-4-{[6-(2-hidroksietil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il} acetonitrila;

((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-hidroksietil]-1H-imidazo[4,5-d]tieno[3,2-b]piridin-1-il}tetrahidro-2H-piran-2-il)acetonitrila; i

i farmacautski prihvatljive soli bilo kog od prethodno pomenutog; i

(b) pomenuti inhibitor PI3Kδ je izabran od:

7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-thiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona;

(S)-7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-thiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona; 4-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-6-hloro-2-1-[(2S)-2-hidroksipropil]azetidin-3-il}1-3-metoksibenzonitrila;

4-{3-[1-(4-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil]-5-hloro-2-etoksi-6-fluorofenil}pirolidin-2-ona;

N-{1-[5-hloro-8-(3-fluorofenil)cinolin-7-il]etil}-9H-purin-6-amina; i

4

i farmaceutski prihvatljivih soli bilo kog od prethodno pomenutih.

Ċ