RS61479B1

RS61479B1 - Triciklično jedinjenje kao antikancerski agensi

Info

Publication number: RS61479B1
Application number: RS20210158A
Authority: RS
Inventors: Derek J Norris; George V Delucca; Ashvinikumar V Gavai; Claude A Quesnelle; Patrice Gill; Daniel O'malley; Wayne Vaccaro; Francis Y Lee; Mikkel V Debenedetto; Andrew P Degnan; Haiquan Fang; Matthew D Hill; Hong Huang; William D Schmitz; Jr John E Starrett; Wen-Ching Han; John S Tokarski; Sunil Kumar Mandal
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2013-12-24
Filing date: 2014-12-23
Publication date: 2021-03-31
Also published as: ES2857848T3; TW202028203A; PE20160844A1; AU2014369982A1; HRP20181849T1; US20160318928A1; EA201990240A1; LT3087071T; MA39211A1; EP3466949B1; TW201609725A; CA2934953C; HUE054183T2; CY1121076T1; MA39211B1; LT3466949T; CY1124061T1; HRP20210212T8; IL246359B; EP3087071B1

Description

Opis

POLJE NA KOJE SE PRONALAZAK ODNOSI

[0001] Pronalazak obezbeđuje nova triciklična jedinjenja, farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenja, i njihovu primenu u lečenju pacijenta, na primer, za lečenje određenih kancera.

STANJE TEHNIKE PRONALASKA

[0002] Genomi eukariotskih organizama su visoko organizovani unutar jedra ćelije. Dugi lanci dupleksa DNK su obavijeni oko oktamera histonskih proteina da bi se formirao nukleozom. Ova osnovna jedinica je potom dodatno komprimovana agregacijom i savijanjem nukleozoma da bi se formirala struktura vizoko kondenzovanog hromatina. Niz različitih stanja kondenzacije je moguć, i zbijenost ove strukture varira tokom ćelijskog ciklusa, pri čemu je najkompaktnija tokom procesa ćelijske deobe. Nedavno je zapaženo da hromatinski obrasci formiraju fundamentalno važan set mehanizama kontrole gena naznačen kao epigenetska regulacija. Dodelom širokog opsega specifičnih hemijskih modifikacija histonima i DNK (kao što su acetilacija, metilacija, fosforilacija, ubikvitinacija i SUMOilacija) epigenetski regulatori modulišu strukturu, funkciju i pristupačnost našeg genoma, čime se vrši ogroman uticaj u ekspresiji gena.

[0003] Acetilacija histona je najčešće povezana sa aktivacijom genske transkripcije, pošto modifikacija oslabljuje interakciju DNK i histonskog oktamera izmenom elektrostatike. Dodatno ovoj fizičkoj promeni, specifični proteini se vezuju za acetilovane ostatke lizina unutar histona da bi se pročitao epigenetski kod. Bromodomeni su mali (∼110 amino kiselina) različiti domeni unutar proteina koji se vezuju za acetilovane ostatke lizina uobičajeno ali ne isključivo u sklopu histona. Postoji familija od oko 50 proteina za koju je poznato da sadrži bromodomene, i oni imaju niz funkcija unutar ćelije. BET familija proteina koji sadrže bromodomen obuhvata 4 proteina (BRD2, BRD3, BRD4 i BRD-T) koji sadrže tandemske bromodomene koji su sposobni za vezivanje za dva acetilovana ostatka lizina u neposrednoj blizini, povećavajući specifičnost interakcije.

[0004] Prijavljeno je da se BRD2 i BRD3 vezuju sa histonima duž aktivno transkribovanih gena i mogu biti uključeni u olakšavanje elongacije transkripcije (Leroy et al., Mol. Cell.

2008 30(1):51-60), dok se čini da je BRD4 uključen u angažovanje pTEF-I3 kompleksa do inducibilnih gena, rezultujući fosforilacijom RNK polimeraze i povećanim transkripcionim učinkom (Hargreaves et al., Cell, 2009138(1): 1294145). Svi članovi familije su prijavljeni da imaju neku funkciju u aspektima kontrole ili izvršavanja ćelijskog ciklusa, i pokazano je da ostaju u kompleksu sa hromozomima tokom ćelijske deobe – nagoveštavajući ulogu u održavanju epigenetske memorije. Dodatno neki virusi koriste ove proteine da bi privezali svoje genome za hromatin ćelije domaćina, kao deo procesa virusne replikacije (You et al., Cell, 2004117(3):349-60).

[0005] Skorašnji članci koji se odnose na ovaj cilj uključuju Prinjha et al., Trends in Pharmacological Sciences, Mart 2012, tom 33, br. 3, str. 146-153; Conway, ACS Med. Chem. Lett., 2012, 3, 691-694 i Hewings et al., J. Med. Chem., 2012, 55, 9393-9413.

[0006] BET inhibitori malih molekula koji su prijavljeni da su u razvoju uključuju GSK-525762A, OTX-015, TEN-010 kao i druge sa Oksfordskog univerziteta i Constellation Pharmaceuticals Inc.

[0007] Stotine epigenetskih efektora je identifikovano, od kojih su mnogi hromatin-vezujući proteini ili hromatin-modifikujući enzimi. Ovi proteini su povezani sa raznim poremećajima kao što su neurodegenerativni poremećaji, metaboličke bolesti, inflamacija i kancer. Stoga, ova jedinjenja koja inhibiraju vezivanje bromodomena sa njihovim srodnim acetilovanim proteinima, obećavaju nove pristupe u lečenju niza autoimunih i inflamatornih bolesti ili stanja i u lečenju raznih tipova kancera.

REZIME PRONALASKA

[0008] U prvom aspektu pronalazak se odnosi na jedinjenja sa formulom

[0009] U drugom aspektu pronalazak se odnosi na farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja koja imaju strukturu

[0010] U trećem aspektu pronalazak se odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje iz prvog aspekta pronalaska ili farmaceutski prihvatljivu so istog i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenasa.

[0011] U četvrtom aspektu pronalazak se odnosi na jedinjenja prvog aspekta pronalaska za primenu u lečenju kancera kod pacijenta gde je kancer sitnoćelijski kancer pluća, nesitnoćelijski kancer pluća, kolorektalni kancer, multipli mijelom ili AML.

[0012] U petom aspektu pronalazak se odnosi na farmaceutski prihvatljive soli iz drugog aspekta pronalaska za primenu u lečenju kancera kod pacijenta gde je kancer sitnoćelijski kancer pluća, nesitnoćelijski kancer pluća, kolorektalni kancer, multipli mijelom ili AML [0013] Stavljeno je na uvid javnosti jedinjenje formule (I)

gde:

A je po izboru supstituisani heterociklo ili po izboru supstituisan heteroaril, gde supstituenti su jedan ili više R;

R je nezavisno jedan ili više vodonik, CD3, halogen, haloalkil, hidroksialkil, CN, CF3, CH2F, CHF2, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C1-C6)alkoksi, po izboru supstituisan (C3-C6)cikloalkil, po izboru supstituisan heterociklo,-OR<4>, -CONR<3>R<4>, -NR<3>R<4>, NR<3>R<4>(C1-C6)alkil-, -NR<6>OCOR<3>, -NR<6>COR<3>, NR<6>COR<3>(C1-C6)alkil-, -NR<6>CO2R<3>, NR<6>CO2R<3>(C1-C6)alkil-,-NR<6>CONR<3>R<4>, -SO2NR<3>R<4>, SO2(C1-C6)alkil-, -NR<6>SO2NR<3>R<4>, -NR<6>SO2R<4>ili NR<6>SO2R<4>(C1-C6)alkil-;

X i Y su nezavisno odabrani od vodonika, po izboru supstituisanog (C1-C6)alkila, po izboru supstituisanog (C3-C8)cikloalkila, po izboru supstituisanog arila, po izboru supstituisanog heteroarila ili po izboru supstituisanog heterociklo;

Z je vodonik, halogen, -OH, (C1-C6)alkil, (C1-C6)alkoksi, -NR<3>R<4>, -CONR<3>R<4>,-OCONR<3>R<4>, -NR<6>OCOR<3>, -NR<6>CONR<3>R<4>, -NR<6>SO2NR<3>R<4>ili -NR<6>SO2R<4>;

R<1>je, nezavisno pri svakom pojavljivanju, jedan ili više vodonik, halogen, -CN,-OR<4>, -NR<3>R<4>, -CONR<3>R<4>, -COOH, -OCONR<3>R<4>, -NR<6>OCOR<3>, -NR<6>CONR<3>R<4>,-NR<6>SO2NR<3>R<4>, -NR<6>SO2R<4>, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C2-C6)alkenil, po izboru supstituisan (C2-C6)alkinil, po izboru supstituisan (C1-C6)alkoksi, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil (C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil-CO-, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil-SO2-, po izboru supstituisan aril (C1-C6)alkoksi, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil (C1-C6)alkoksi, po izboru supstituisan heterociklil-CO-, po izboru supstituisan heterociklil, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil-SO2-, -NR<6>SO2-po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, -NR<6>SO2-po izboru supstituisani heterociklo, po izboru supstituisani (C1-C6)alkil-NR<6>SO2- ili po izboru supstituisani heterociklo-NR<6>SO2-;

R<2>je vodonik, halogen, -CN, OH, -CONR<3>R<4>, -NR<6>COOR<4>, -NR<6>CONR<3>R<4>, -NR<6>COR<4>, -NR<6>SO2R<5>, -SO2NR<3>R<4>, -NR<6>SO2NR<3>R<4>, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil, po izboru supstituisan (C1-C6) alkoksi, po izboru supstituisan aril, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil-SO2-, po izboru supstituisan aril-SO2, po izboru supstituisan heteroaril ili po izboru supstituisan heterociklo;

R<3>je vodonik, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil, po izboru supstituisan (C2-C6)alkenil, po izboru supstituisan (C2-C6)alkinil, cijano(C1-C6)alkil, hidroksi(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan aril, po izboru supstituisan aril(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan ariloksi(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil-SO2-, po izboru supstituisan heterociklil, po izboru supstituisan heterociklil(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan heteroaril ili po izboru supstituisan heteroaril(C1-C6)alkil,

R<4>je vodonik, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil ili po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil;

ili R<3>i R<4>mogu biti uzeti zajedno sa atomom azota za koji su vezani da bi formirali po izboru supstituisan (C4-C8) heteroaril ili (C4-C8) heterociklični prsten;

R<5>je vodonik, po izboru supstituisan (C1-C6)alkyl, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil, po izboru supstituisan (C2-C6)alkenil, po izboru supstituisan (C2-C6)alkinil, cijano(C1-C6)alkil, hidroksi(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan aril, po izboru supstituisan aril(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan ariloksi(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil-SO2-, po izboru supstituisan heterociklil, po izboru supstituisan heterociklil(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan heteroaril ili po izboru supstituisan heteroaril(C1-C6)alkil;

R<6>je vodonik ili po izboru supstituisan (C1-C6)alkil;

R<7>je vodonik, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, -OR<4>, CN ili halogen;

i/ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer tog jedinjenja.

[0014] U sledećem aspektu, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje pronalaska ili farmaceutski prihvatljivu so tog jedinjenja i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenasa.

[0015] U sledećem aspektu objave, obezbeđeno je jedinjenje pronalaska ili farmaceutski prihvatljiva so tog jedinjenja za primenu u lečenju. Posebno, za primenu u lečenju bolesti ili stanja za koje je inhibitor bromodomena indikovan.

[0016] U sledećem aspektu objave, obezbeđena je metoda lečenja autoimunih i inflamatornih bolesti ili stanja koja obuhvata administriranje subjektu koji ima potrebu za njim terapijski efikasne količine inhibitora bromodomena.

[0017] U sledećem aspektu objave, obezbeđena je metoda lečenja kancera koja obuhvata administriranje subjektu koji ima potrebu za njim terapijski efikasne količine inhibitora bromodomena.

[0018] U sledećem aspektu predmetne objave, obezbeđena je metoda za lečenje poremećaja posredovanog proteinom koji sadrži bromodomen kod pacijenta koji ima potrebu za njim, koja obuhvata korak administriranja jedinjenja pronalaska pomenutom pacijentu.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0019] U prvom aspektu predmetne objave, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I)

gde:

A je po izboru supstituisan heterociklo ili po izboru supstituisan heteroaril, gde su supstituenti jedno ili više R;

R<1>je, nezavisno pri svakom pojavljivanju, jedan ili više vodonik, halogen, -CN,-OR<4>, -NR<3>R<4>, -CONR<3>R<4>, -COOH, -OCONR<3>R<4>, -NR<6>OCOR<3>, -NR<6>CONR<3>R<4>,-NR<6>SO2NR<3>R<4>, -NR<6>SO2R<4>, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C2-C6)alkenil, po izboru supstituisan (C2-C6)alkinil, po izboru supstituisan (C1-C6)alkoksi, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil (C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil-CO-, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil-SO2-, po izboru supstituisan aril (C1-C6)alkoksi, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil (C1-C6)alkoksi, po izboru supstituisan heterociklil-CO-, po izboru supstituisan heterociklil, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil-SO2-, -NR<6>SO2-po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, -NR<6>SO2-po izboru supstituisan heterociklo, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil-NR<6>SO2- ili po izboru supstituisan heterociklo-NR<6>SO2-;

ili R<3>i R<4>mogu biti uzeti zajedno sa azotom za koji su vezani da formiraju po izboru supstituisan (C4-C8) heteroaril ili (C4-C8) heterociklični prsten;

R<5>je vodonik, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil, po izboru supstituisan (C2-C6)alkenil, po izboru supstituisan (C2-C6)alkinil, cijano(C1-C6)alkil, hidroksi (C1-C6)alkil, po izboru supstituisan aril, po izboru supstituisan aril(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan ariloksi(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil-SO2-, po izboru supstituisan heterociklil, po izboru supstituisan heterociklil(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan heteroaril ili po izboru supstituisan heteroaril(C1-C6)alkil;

R<6>je vodonik ili po izboru supstituisan (C1-C6)alkil;

R<7>je vodonik, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, -OR<4>, CN ili halogen;

i/ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer ovog jedinjenja.

[0020] U drugom aspektu objave, obezbeđeno je jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 sa formulom (II)

gde:

R je nezavisno jedan ili više vodonik, CD3,halogen, haloalkil, hidroksialkil, CN, CF3, CH2F, CHF2, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C1-C6)alkoksi, po izboru supstituisan (C3-C6)cikloalkil, po izboru supstituisan heterociklo,-OR<4>, -CONR<3>R<4>, -NR<3>R<4>, NR<3>R<4>(C1-C6)alkil-, -NR<6>OCOR<3>, -NR<6>COR<3>, NR<6>COR<3>(C1-C6)alkil-, -NR<6>CO2R<3>, NR<6>CO2R<3>(C1-C6)alkil-, -NR<6>CONR<3>R<4>, -SO2NR<3>R<4>, SO2(C1-C6)alkil-, -NR<6>SO2NR<3>R<4>, -NR<6>SO2R<4>ili NR<6>SO2R<4>(C1-C6)alkil-;

R<5>je vodonik, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil, po izboru supstituisan (C2-C6)alkenil, po izboru supstituisan (C2-C6)alkinil, cijano(C1-C6)alkil, hidroksi(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan aril, po izboru supstituisan aril(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan ariloksi(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil-SO2-, po izboru supstituisan heterociklil, po izboru supstituisan heterociklil(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan heteroaril ili po izboru supstituisan heteroaril(C1-C6)alkil;

R<6>je vodonik ili po izboru supstituisan (C1-C6)alkil;

R<7>je vodonik, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, -OR<4>, CN ili halogen;

i/ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer tog jedinjenja.

[0021] U trećem aspektu objave unutar obima prva dva aspekta, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (II)

gde:

R je nezavisno jedan ili više vodonik, CD3, halogen, haloalkil, hidroksialkil, CN, CF3, CH2F, CHF2, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C1-C6)alkoksi, po izboru supstituisan (C3-C6)cikloalkil, po izboru supstituisan heterociklo,-OR<4>, -CONR<3>R<4>, -NR<3>R<4>, NR<3>R<4>(C1-C6)alkil-, -NR<6>OCOR<3>, -NR<6>COR<3>,

1

NR<6>COR<3>(C1-C6)alkil-, -NR<6>CO2R<3>, NR<6>CO2R<3>(C1-C6)alkil-,-NR<6>CONR<3>R<4>, -SO2NR<3>R<4>, SO2(C1-C6)alkil-, -NR<6>SO2NR<3>R<4>, -NR<6>SO2R<4>ili NR<6>SO2R<4>(C1-C6)alkil-;

R<2>je vodonik, halogen, -CN, OH, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil, po izboru supstituisan (C1-C6) alkoksi, po izboru supstituisan aril, po izboru supstituisan heteroaril ili po izboru supstituisan heterociklo;

R<6>je vodonik ili po izboru supstituisan (C1-C6)alkil;

i/ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer tog jedinjenja.

[0022] U 4. aspektu unutar obima prethodnih aspekata, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

gde

A je

R<6>je vodonik ili po izboru supstituisan (C1-C6)alkil;

1

i/ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer tog jedinjenja.

[0023] U 5. aspektu objave unutar obima prethodnih aspekata, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

gde:

A je

R je nezavisno jedan ili više vodonik, CD3, halogen, haloalkil, hidroksialkil, CN, CF3, CH2F, CHF2, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C1-C6)alkoksi, po izboru supstituisan (C3-C6)cikloalkil, po izboru supstituisan heterociklo,-OR<4>, -CONR<3>R<4>, -NR<3>R<4>, NR<3>R<4>(C1-C6)alkil-, -NR<6>OCOR<3>, -NR<6>COR<3>, NR<6>COR<3>(C1-C6)alkil-, -NR<6>CO2R<3>, NR<6>CO2R<3>(C1-C6)alkil-, -NR<6>CONR<3>R<4>, -SO2NR<3>R<4>, SO2(C1-C6)alkil-, -NR<6>SO2NR<3>R<4>, -NR<6>SO2R<4>ili NR<6>SO2R<4>(C1-C6)alkil-;

R<6>je vodonik ili po izboru supstituisan (C1-C6)alkil;

1

i/ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer tog jedinjenja.

[0024] U 6. aspektu objave unutar obima prethodnih aspekata, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

gde:

A je

R<1>je, nezavisno pri svakom pojavljivanju, jedan ili više vodonik, halogen, -CN,-OR<4>, -NR<3>R<4>, -CONR<3>R<4>, -COOH, -OCONR<3>R<4>, -NR<6>OCOR<3>, -NR<6>CONR<3>R<4>,-NR<6>SO2NR<3>R<4>, -NR<6>SO2R<4>, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C2-C6)alkenil, po izboru supstituisan (C2-C6)alkinil, po izboru supstituisan (C1-C6)alkoksi, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil (C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil-

1

CO-, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil-SO2-, po izboru supstituisan aril (C1-C6)alkoksi, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil (C1-C6)alkoksi, po izboru supstituisan heterociklil-CO-, po izboru supstituisan heterociklil, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil-SO2-, -NR<6>SO2-po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, -NR<6>SO2-po izboru supstituisan heterociklo, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil-NR<6>SO2- ili po izboru supstituisan heterociklo-NR<6>SO2-;

R<6>je vodonik ili po izboru supstituisan (C1-C6)alkil;

i/ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer tog jedinjenja.

[0025] U 7. aspektu objave unutar obima prethodnih aspekata, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

gde:

A je

1

R<3>je vodonik, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C3-C8)cikloalkil, po izboru supstituisan (C2-C6)alkenil, po izboru supstituisan (C2-C6)alkinil, cijano(C1-C6)alkil, hidroksi(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan aril, po izboru supstituisan aril(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan ariloksi(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan (C1-C6)alkil-SO2-, po izboru supstituisan heterociklil, po izboru

1

supstituisan heterociklil(C1-C6)alkil, po izboru supstituisan heteroaril ili po izboru supstituisan heteroaril(C1-C6)alkil,

R<6>je vodonik ili po izboru supstituisan (C1-C6)alkil;

i/ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer tog jedinjenja.

[0026] U drugom aspektu objave, obezbeđeno je jedinjenje odabrano od tipičnih primera unutar obima prvog aspekta, ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer tog jedinjenja.

[0027] U drugom aspektu objave, obezbeđeno je jedinjenje odabrano od bilo koje podliste jedinjenja unutar obima bilo kojeg od gornjih aspekata.

[0028] U drugom aspektu objave, obezbeđeno je jedinjenje odabrano od sledećih

2-[3-(dimetil-1H-1,2,3-tnazol-5-il)-5-(1,1,1,7,7,7-heksafluoroheptan-4-il)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol,

2-[3-(dimetil-1,2-oksazol-4-il)-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol,

2-[3-(dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5-[(1S)-4,4,4-trifluoro-1-fenilbutil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol,

2-[3-(dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol,

2-[3-(dimetil-1,2-oksazol-4-il)-5-[(S)-(4-fluorofenil)(oksan-4-il)metil]-5H-pirido [3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol,

2-[3-(dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5-[(4-fluorofenil)(oksan-4-il)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol,

2-[3-(dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-6-fluoro-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol,

2- {3-[4-(hidroksimetil)-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

5-{7-metansulfonil-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indo1-3-il}-4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1H-1,2,3-triazol,

1

5-{5-[(S)-(4-fluorofenil)(oksan-4-il)metil]-7-metansulfonil-5H-pirido[3,2-b]indol-3-il}-4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1H-1,2,3-triazol,

2-{5-[(S)-(4-fluorofenil)(oksan-4-il)metil]-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

(1R)-1-ciklopropil-1-[3-(dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-6-fluoro-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]etan-1-ol,

2-{3-[5-(<2>H3)metil-3-metil-1,2-oksazol-4-il]-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol

2-{3-[4-(<2>H3)metoksi-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

2-[3-(4-metoksi-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol,

(1R)-1-ciklopropil-1-[3-(dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-6-fluoro-5-[(S)-(2-fluorofenil)(oksan-4-il)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]etan-1-ol,

2-{6-fluoro-5-[(S)-(2-fluorofenil)(oksan-4-il)metil]-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

(1S)-1-ciklopropil-1-{6-fluoro-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}etan-1-ol,

(1R)-1-ciklopropil-1-{6-fluoro-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}etan-1-ol,

2-{5-[(3-fluoropiridin-2-il)(oksan-4-il)metil]-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

2-{8-fluoro-5-[(S)-(2-fluorofenil)(oksan-4-il)metil]-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

2-{6-fluoro-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

2-{5-[(S)-(4,4-difluorocikloheksil)(fenil)metil]-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

2-{8-fluoro-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

(1R)-1-ciklopropil-1-{6-fluoro-5-[(S)-(2-fluorofenil)(oksan-4-il)metil]-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}etan-1-ol,

2

2-{6-fluoro-5-[(5-metil-1,2-oksazol-3-il)(oksan-4-il)metil]-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

2-{6-hloro-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

2-[(R)-(4,4-difluorocikloheksil)({9-fluoro-7-metansulfonil-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5H-pirido[3,2-b]indol-5-il})metil]-3-fluoropiridin,

(1S)-1-ciklopropil-1-{6-fluoro-5-[(S)-(2-fluorofenil)(oksan-4-il)metil]-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-5H-1,2,3-triazol-5-il]-1H-pirido[3,2-b]indol-7-il}etan-1-ol,

2-{8-fluoro-5-[(5-metil-1,2-oksazol-3-il)(oksan-4-il)metil]-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

2-{5-[(5-hloropiridin-2-il)(oksan-4-il)metil]-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

2-{5-[(3-hloropiridin-2-il)(oksan-4-il)metil]-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

2-{5-[(4-hloropiridin-2-il)(oksan-4-il)metil]-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

2-{5-[(4,4-difluorocikloheksil)(3-fluoropiridin-2-il)metil]-6-fluoro-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

2-{6-fluoro-5-[(3-fluoropiridin-2-il)(oksan-4-il)metil]-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

2-{8-fluoro-5-[(3-fluoropiridin-2-il)(oksan-4-il)metil]-3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

2-{3-[4-(<2>H3)metoksi-1-(<2>H3)metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

2-{3-[4-metoksi-1-(<2>H3)metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol,

5-{7-metansulfonil-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-3-il}-4-metoksi-1-metil-1H-1,2,3-triazol,

2-[3-(dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-6-fluoro-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-amin,

N-{2-[3-(dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-6-fluoro-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-il}acetamid,

N-{2-[3-(dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-6-fluoro-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-il}metansulfonamid,

metil N-{2-[3-(dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-6-fluoro-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-il}karbamat,

5-{6-metansulfonil-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-3-il}-1,4-dimetil-1H-1,2,3-triazol,

5-{9-fluoro-6-metansulfonil-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-3-il}-4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol,

5-{6-metansulfonil-9-metoksi-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-3-il}-1,4-dimetil-1H-1,2,3-triazol,

N-[3-(dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-6-metansulfonil-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-9-il]ciklopropansulfonamid,

5-{9-metansulfonil-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-3-il}-1,4-dimetil-1H-1,2,3-triazol,

5-{9-metansulfonil-6,7-dimetoksi-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-3-il}-4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol, i

2-{3-[4-(<2>H3)metil-1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il]-5-[(S)-oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol

i/ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer tog jedinjenja.

[0029] Jedno tehničko rešenje objave obezbeđuje jedinjenja pri čemu je A po izboru supstituisani heterociklo ili po izboru supstituisani heteroaril, gde su supstituenti jedno ili više R;

[0030] Drugo tehničko rešenje objave obezbeđuje jedinjenja gde je A

i R je nezavisno jedan ili više vodonik, CD3, OCD3, CF3, CHF2ili (C1-C3)alkil.

[0031] Sledeće tehničko rešenje objave obezbeđuje jedinjenja pri čemu A je

i R je nezavisno jedan ili više vodonik, CD3, OCD3, CF3, CHF2ili (C1-C3)alkil.

[0032] U sledećem tehničkom rešenju, jedinjenja pronalaska ima IC50vrednosti ≤ 250 nM.

[0033] U sledećem tehničkom rešenju, jedinjenja pronalaska ima IC50vrednosti ≤25 nM [0034] U sledećem tehničkom rešenju, jedinjenja pronalaska ima IC50vrednosti ≤ 5 nM. OSTALA TEHNIČKA REŠENJA PRONALASKA

[0035] U sledećem tehničkom rešenju, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač i terapijski efikasnu količinu najmanje jednog od jedinjenja pronalaska ili stereoizomera, tautomera, farmaceutski prihvatljive soli, ili solvata tog jedinjenja.

[0036] U sledećem tehničkom rešenju, objava obezbeđuje proces za pravljenje jedinjenja pronalaska ili stereoizomera, tautomera, farmaceutski prihvatljive soli, ili solvata tog jedinjenja.

[0037] U sledećem tehničkom rešenju, objava obezbeđuje metodu za inhibiranje aktivnosti proteina koji sadrži bromodomen kojim je posredovan poremećaj kod pacijenta koji ima potrebu za njim koja obuhvata korak administriranja pomenutom pacijentu najmanje jednog jedinjenja pronalaska.

[0038] U sledećem tehničkom rešenju, pronalazak se odnosi na jedno ili više jedinjenja pronalaska ili farmaceutske prihvatljive soli tih jedinjenja, zasebno, ili, po izboru, u kombinaciji sa drugim jedinjenjem pronalaska i/ili najmanje jednim drugačijim tipom terapijskog agensa za primenu u lečenju kancera kod pacijenta, gde je kancer sitnoćelijski kancer pluća, nesitnoćelijski kancer pluća, kolorektalni kancer, multipli mijelom ili AML, koje po izboru obuhvata administriranje pacijentu koji ima potrebu za takvim lečenjem i/ili profilaksom.

2

[0039] U sledećem tehničkom rešenju, pronalazak se odnosi na jedinjenja pronalaska ili farmaceutski prihvatljive soli tih jedinjenja za primenu u lečenju kancera kod pacijenta, gde kancer je sitnoćelijski kancer pluća, nesitnoćelijski kancer pluća, kolorektalni kancer, multipli mijelom ili AML.

[0040] U sledećem tehničkom rešenju, objava obezbeđuje jedinjenje predmetnog pronalaska za primenu u lečenju.

[0041] U sledećem tehničkom rešenju, pronalazak obezbeđuje kombinovani preparat jedinjenja predmetnog pronalaska i dodatnog terapijskog agensa(agenasa) za istovremenu, odvojenu ili sekvencijalnu primenu u terapiji.

[0042] U sledećem tehničkom rešenju, objava obezbeđuje metodu inhibiranja proteina koji sadrži bromodomen koja obuhvata stupanje u vezu pomenutog proteina sa bilo kojim jedinjenjem koje je uzeto za primer ili farmaceutski prihvatljivom soli ili njegovom kompozicijom.

TERAPIJSKE PRIMENE

[0043] Jedinjenja sa formulom (I) pronalaska su inhibitori bromodomena i imaju potencijalnu korisnost u lečenju bolesti i stanja za koje je indikovan inhibitor bromodomena.

[0044] U jednom tehničkom rešenju obezbeđena je metoda za lečenje bolesti ili stanja, za koje je indikovan inhibitor bromodomena, kod subjekta koji ima potrebu za njim koja obuhvata administriranje terapijski efikasne količine jedinjenja formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja.

[0045] U sledećem tehničkom rešenju obezbeđena je metoda za lečenje hroničnog autoimunog i/ili inflamatornog stanja, kod subjekta koji ima potrebu za njim koja obuhvata administriranje terapijski efikasne količine jednog ili više jedinjenja formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja.

[0046] U dodatnom tehničkom rešenju obezbeđena je metoda za lečenje kancera kod subjekta koji ima potrebu za njim koja obuhvata administriranje terapijski efikasne količine jednog ili više jedinjenja formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja.

[0047] U jednom tehničkom rešenju subjekt koji ima potrebu za njim je sisar, posebno čovek.

[0048] Za inhibitore bromodomena se smatra da su korisni u lečenju raznih bolesti ili stanja koja su povezana sa sistemskom ili tkivnom inflamacijom, inflamatornim odgovorima na infekciju ili hipoksiju, ćelijskom aktivacijom i proliferacijom, metabolizmom lipida, fibrozom i u sprečavanju i lečenju virusnih infekcija.

[0049] Inhibitori bromodomena mogu biti korisni u lečenju širokog spektra hroničnih autoimunih i inflamatornih stanja kao što su reumatoidni artritis, osteoartritis, akutni giht, psorijaza, sistemski lupus eritematozus, multipla skleroza, inflamatorna bolest creva (Kronova bolest i ulcerativni kolitis), astma, hronična opstruktivna bolest disajnih puteva, pneumonitis, miokarditis, perikarditis, miozitis, ekcem, dermatitis, alopecija, vitiligo, bulozne bolesti kože, nefritis, vaskulitis, ateroskleroza, Alchajmerova bolest, depresija, retinitis, uveitis, skleritis, hepatitis, pankreatitis, primarna bilijarna ciroza, sklerozantni holangitis, Adisonova bolest, hipofizitis, tiroiditis, dijabetes tipa I i akutno odbacivanje transplantiranih organa.

[0050] Inhibitori bromodomena mogu biti korisni u lečenju širokog spektra akutnih inflamatornih stanja kao što su akutni giht, arteritis džinovskih ćelija, nefritis uključujući lupus nefritis, vaskulitis sa obuhvatanjem organa kao što su glomerulonefritis, vaskulitis koji uključuje arteritis džinovskih ćelija, Wegener-ov granulomatozis, poliarteritis nodoza, Behcet-ova bolest, Kawasaki bolest, Takajasu arteritis i akutno odbacivanje transplantiranih organa.

[0051] Inhibitori bromodomena mogu biti korisni u sprečavanju ili lečenju bolesti ili stanja koja uključuju inflamatorne odgovore na infekcije sa bakterijama, virusima, gljivicama, parazitima ili njihovim toksinima, kao što su sepsa, sindrom sepse, septični šok, endotoksemija, sindrom sistemskog inflamatornog odgovora (systemic inflammatory response sindrom - SIRS), sindrom disfunkcije više organa, sindrom toksičnog šoka, akutna povreda pluća, ARDS (adult respiratory distress sindrom – respiratorni distres sindrom odraslih), akutna bubrežna insuficijencija, fulminantni hepatitis, opekotine, akutni pankreatitis, post-hirurški sindromi, sarkoidoza, Herxheimer-ove reakcije, encefalitis, mijelitis, meningitis, malarija, SIRS povezan sa virusnim infekcijama kao što su influenca, herpes zoster, herpes simpleks i koronavirus.

[0052] Inhibitori bromodomena mogu biti korisni u sprečavanju ili lečenju stanja povezanih sa ishemijsko-reperfuzionom povredom kao što su infarkt miokarda, cerebrovaskularna ishemija (moždani udar), akutni koronarni sindromi, renalna reperfuziona povreda, transplantacija organa, koronarni arterijski bajpas grafting, kardio-pulmonalne bajpas procedure i plućna, bubrežna, hepatična, gastro-intestinalna embolija ili periferna embolija ekstremiteta.

2

[0053] Inhibitori bromodomena mogu biti korisni u lečenje poremećaja metabolizma lipida putem regulacije APO-A1 kao što su hiperholesterolemija, ateroskleroza i Alchajmerova bolest.

[0054] Inhibitori bromodomena mogu biti korisni u lečenje fibroznih stanja kao što su idiopatska plućna fibroza, bubrežna fibroza, post-operativna stenoza, formiranje keloida, skleroderma i srčana fibroza.

[0055] Inhibitori bromodomena mogu biti korisni u sprečavanju i lečenju virusnih infekcija kao što su herpes virus, humani papiloma virus, adenovirus, poksvirus i ostali DNK virusi.

[0056] Inhibitori bromodomena mogu takođe biti korisni u lečenju kancera, uključujući hematološke, epitelijalne uključujući karcinome pluća, dojke i debelog creva, karcinome srednje linije, mezenhimalne, hepatične, bubrežne i neurološke tumore.

[0057] U jednom tehničkom rešenju bolest ili stanje za koje je indikovan inhibitor bromodomena je odabrano od bolesti koje su povezane sa sindromom sistemskog inflamatornog odgovora, kao što su sepsa, opekotine, pankreatitis, velika trauma, hemoragija i ishemija. U ovom tehničkom rešenju, inhibitor bromodomena bi bio administriran u trenutku dijagnoze da bi se smanjila učestalost za SIRS, početak šoka, sindroma duisfunkcije više organa, koji uključuje početak akutne povrede pluća, ARDS, akutnu bubrežnu, hepatičnu, srčanu i gastro-intestinalnu povredu i mortalitet. U sledećem tehničkom rešenju inhibitor bromodomena bi bio administriran pre hirurških ili ostalih procedura povezanih sa vizokim rizikom za sepsu, hemoragiju, teške tkivne povrede, SIRS ili MODS (sindrom disfunkcije više organa). U posebnom tehničkom rešenju bolest ili stanje za koje je indikovan inhibitor bromodomena je sepsa, sindrom sepse, septički šok i endotoksemija. U sledećem tehničkom rešenju, inhibitor bromodomena je indikovan za lečenje akutnog ili akutnog na hronični pankreatitis. U sledećem tehničkom rešenju inhibitor bromodomena je indikovan za lečenje opekotina.

[0058] U jednom tehničkom rešenju bolest ili stanje za koje je inhibitor bromodomena indikovan je odabrano od herpes simpleks infekcija i reaktivacija, čireva, herpes zoster infekcija i reaktivacija, varičela, osipa kože, humanog papiloma virusa, cervikalnih neoplazija, adenovirusnih infekcija, uključujući akutnu respiratornu bolest, i infekcije poksvirusom kao što su kravlje boginje i variola i virus afričke svinjske groznice.

[0059] Termin "bolesti ili stanja za koje je inhibitor bromodomena indikovan" treba da uključi bilo koje od ili sva od iznad pomenutih stanja bolesti.

2

[0060] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je metoda za inhibiranje bromodomena koja obuhvata uspostavljanje kontakta bromodomena sa jedinjenjem formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja.

[0061] Dok je moguće da se za primenu u lečenju, jedinjenje formule (I) kao i farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja mogu se administrirati kao samo jedinjenje, ono je češće predstavljeno kao farmaceutska kompozicija.

[0062] Farmaceutske kompozicije mogu biti predstavljene u jediničnim doznim oblicima koji sadrže prethodno određenu količinu aktivnog sastojka po jediničnoj dozi. Poželjne jedinično dozne kompozicije su one koje sadrže dnevnu dozu ili sub-dozu, ili prikladnu njihovu frakciju, aktivnog sastojka. Takve jedinične doze mogu stoga biti administrirane više od jednom dnevno. Poželjne jedinično dozne kompozicije su one koje sadrže dnevnu dozu ili sub-dozu (za administraciju više od jednom dnevno), kao što je ovde naznačeno, ili prikladnu njihovu frakciju, aktivnog sastojka.

[0063] Tipovi kancera koji mogu biti tretirani sa jedinjenjima ovog pronalaska uključuju, ali nisu na njih ograničeni, kancere mozga, kancere kože, kancere bešike, kancere jajnika, kancere dojke, kancere želuca, kancere pankreasa, kancere prostate, kancere debelog creva, kancere krvi, kancere pluća i kancere kostiju. Primeri ovakvih tipova kancera uključuju neuroblastom, karcinom creva kao što su karcinom rektuma, karcinom debelog creva, familijarni adenomatozni polipozni karcinom i nasledni ne-polipozni kolorektalni kancer, ezofagealni karcinom, labijalni karcinom, karcinom grkljana, karcinom hipofarinksa, karcinom jezika, karcinom pljuvačne žlezde, karcinom želuca, adenokarcinom, medularni tiroidni karcinom, papilarni tiroidni karcinom, renalni karcinom, karcinom bubrežnog parenhima, karcinom jajnika, karcinom grlića materice, karcinom tela materice, karcinom endometrijuma, horiokarcinom, karcinom pankreasa, karcinom prostate, karcinom testisa, karcinom dojke, urinarni karcinom, melanom, tumore mozga kao što su glioblastom, astrocitom, meningiom, meduloblastom i periferni neuroektodermalni tumori, Hodgkin-ov limfom, ne-Hodgkin-ov limfom, Burkitt-ov limfom, akutnu limfocitnu leukemiju (ALL), hroničnu limfocitnu leukemiju (CLL), akutnu mijeloidnu leukemiju (AML), hroničnu mijeloidnu leukemiju (CML), T-ćelijsku leukemiju limfom kod odraslih, difuzni limfom velikih B-ćelija (diffuse large B-cell lymphoma - DLBCL), hepatoćelijski karcinom, karcinom žučne kese, karcinom bronhija, sitnoćelijski karcinom pluća, ne-sitnoćelijski karcinom pluća, multipli mijelom, bazaliom, teratom, retinoblastom, melanom horoida,

2

seminom, rabdomiosarkom, kraniofaringiom, osteosarkom, hondrosarkom, miosarkom, liposarkom, fibrosarkom, Ewing-ov sarkom i plazmocitom.

[0064] Dodatno nedostacima apoptoze koji su pronađeni u tumorima, smatra se da nedostaci u sposobnosti da se eliminišu samo-reagujuće ćelije imunog sistema usled otpornosti apoptozi igraju ključnu ulogu u patogenezi autoimunih bolesti. Autoimune bolesti su okarakterisane time da ćelije imunog sistema proizvode antitela na svoje sopstvene organe i molekule ili direktno napadaju tkiva dovodeći do uništavanja pomenutih. Neuspeh da ove samo-reagujuće ćelije podlegnu apoptozi vodi do manifestacije bolesti. Nedostaci u regulaciji apoptozom su identifikovani u autoimunim bolestima kao što su sistemski lupus eritematozus ili reumatoidni artritis.

Stoga, u skladu sa sledećim tehničkim rešenjem, objava obezbeđuje metodu lečenja autoimune bolesti obezbeđujući pacijentu koji ima potrebu za njim jedinjenje ili kompoziciju predmetne objave. Primeri takvih autoimunih bolesti uključuju, ali nisu na njih ograničeni, bolesti kolagena kao što su reumatoidni artritis, sistemski lupus eritematozus. Sharp-ov sindrom, CREST sindrom (kalcinoza, Raynaud-ov sindrom, dismotilitet jednjaka, teleangiektazija), dermatomiozitis, vaskulitis (Morbus Wegener) i Sjogren-ov sindrom, bubrežne bolesti kao što su Goodpasture-ov sindrom, rapidno-progresivni glomerulonefritis i membrano-proliferativni glomerulonefritis tipa II, endokrine bolesti kao što su dijabetes tipa-I, autoimuna poliendokrinopatija-kandidijaza-ektodermalna distrofija (APECED), autoimuni paratiroidizam, perniciozna anemija, gonadna insuficijencija, idiopatska Addison-ova bolest, hipertireoza, Hašimotov tiroiditis i primarni miksedem, bolesti kože kao što su pemphigus vulgaris, bulozni pemfigoid, gestacioni herpes, bulozna epidermoliza i erythema multiforme major, bolesti jetre kao što su primarna bilijarna ciroza, autoimuni holangitis, autoimuni hepatitis tipa-1, autoimuni hepatitis tipa-2, primarni sklerozantni holangitis, neuronske bolesti kao što su multipla skleroza, mijastenija gravis, Lambert-Eaton mijastenijski sindrom, stečena neuromiotomija, Guillain-Barre-ov sindrom (Muller-Fischer-ov sindrom), sindrom ukočene osobe, cerebralna degeneracija, ataksija, opsoklonus, senzorna neuropatija i ahalazija, bolesti krvi kao što su autoimuna hemolitička anemija, idiopatska trombocitopenijska purpura (Morbus Werlhof), infektivne bolesti sa povezanim autoimunim reakcijama kao što su AIDS, malarija i Chagas-ova bolest.

[0065] Jedinjenja pronalaska su korisna za lečenje određenih tipova kancera samostalno ili u kombinaciji ili ko-administraciji sa ostalim terapijskim agensima ili terapijom zračenjem. Tako, u jednom tehničkom rešenju, jedinjenja pronalaska su ko-administrirana sa terapijom

2

zračenjem ili drugim terapijskim agensom sa citostatskom ili antineoplastičnom aktivnošću. Pogodna jedinjenja citostatske hemioterapije uključuju, ali nisu na njih ograničeni (i) antimetabolite; (ii) agense za fragmentiranje DNK, (iii) agense za unakrsno vezivanje DNK, (iv) agense za interkaliranje (v) inhibitore sinteze proteina, (vi) otrove topoizomeraze I, kao što su kamptotecin ili topotekan; (vii) otrove topoizomeraze II, (viii) agense usmerene na mikrotubule, (ix) inhibitore kinaze (x) razne ispitivane agense (xi) hormone i (xii) antagoniste hormona. Smatra se da jedinjenja pronalaska mogu biti korisna u kombinaciji sa bilo kojim poznatim agensima koji spadaju u 12 iznad pomenutih klasa kao i sa bilo kojim budućim agensima koji su trenutno u razvoju. Posebno, smatra se da jedinjenja pronalaska mogu biti korisna u kombinaciji sa važećim Standardima zdravstvene zaštite kao i bilo kojim koji će se razviti u doglednoj budućnosti. Specifične doze i režimi doziranja bi bili bazirani na rastućem znanju lekara i opštoj stručnosti u oblasti.

Dalje pronalazak se odnosi na jedinjenja za primenu u metodama lečenja pri čemu su jedinjenja pronalaska administrirana sa jednim ili više imuno-onkoloških agenasa. Imunoonkološki agensi koji su ovde primenjeni, takođe poznati kao imunoterapije kancera, su efikasni da se poboljšaju, stimulišu, i/ili pozitivno-regulišu imuni odgovori kod subjekta. U jednom aspektu, administracija jedinjenja pronalaska sa imuno-onkološkim agensom ima sinergistički efekat u inhibiranju rasta tumora.

[0066] U jednom aspektu, jedinjenje(a) pronalaska je sekvencijalno administrirano pre administracije imuno-onkološkog agensa. U sledećem aspektu, jedinjenje(a) pronalaska je administrirano istovremeno sa imunološko-onkološkim agensom. U još jednom aspektu, jedinjenje(a) pronalaska je sekvencijalno administrirano nakon administracije imunoonkološkog agensa.

[0067] U sledećem aspektu, jedinjenja pronalaska mogu biti ko-formulisana sa imunoonkološkim agensom.

[0068] Imuno-onkološki agensi uključuju, na primer, lek malog molekula, antitelo, ili drugi biološki ili mali molekul. Primeri bioloških imuno-onkoloških agenasa uključuju, ali nisu na njih ograničeni, vakcine za kancer, antitela, i citokine. U jednom aspektu, antitelo je monoklonsko antitelo. U sledećem aspektu, monoklonsko antitelo je humanizovano ili humano.

[0069] U jednom aspektu, imuno-onkološki agens je (i) agonist stimulacionog (uključujući ko-stimulacioni) receptora ili (ii) antagonist inhibitornog (uključujući ko-inhibitorni) signala

2

na T ćelije, od kojih oba dovode do pojačanja antigen-specifičnih T ćelijskih odgovora (često naznačeni kao regulatori kontrolnih tačaka imunog sistema).

[0070] Određeni stimulatorni i inhibitorni molekuli su članovi imunoglobulinske super familije (IgSF). Jedna važna familija liganada koji su vezani za membranu koji se vezuju za ko-stimulatorne ili ko-inhibitorne receptore je B7 familija, koja uključuje B7-1, B7-2, B7-H1 (PD-L1), B7-DC (PD-L2), B7-H2 (ICOS-L), B7-H3, B7-H4, B7-H5 (VISTA), i B7-H6. Druga familija liganada vezanih za membranu koji se vezuju za ko-stimulatorne ili koinhibitorne receptore je TNF familija molekula koji se vezuju za srodne članove familije TNF receptora, koja uključuje CD40 i CD40L, OX-40, OX-40L, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4-1BBL, CD137 (4-1BB), TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, APRIL, BCMA, LTβR, LIGHT, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, Limfotoksin α/TNFβ, TNFR2, TNFα, LTβR, Limfotoksin α 1β2, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY, NGFR.

[0071] U sledećem aspektu, imuno-onkološki agens je citokin koji inhibira aktivaciju T ćelija (npr., IL-6, IL-10, TGF-β, VEGF, i dugi imunosupresivni citokini) ili citokin koji stimuliše aktivaciju T ćelija, radi stimulisanja imunog odgovora.

[0072] U jednom aspektu, odgovori T ćelija mogu biti stimulisani kombinacijom jedinjenja pronalaska i jednog ili više od (i) antagonista proteina koji inhibira aktivaciju T ćelija (npr., inhibitori kontrolnih tačaka imunog sistema) kao što su CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, TIM-3, Galectin 9, CEACAM-1, BTLA, CD69, Galectin-1, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, 2B4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM-1, i TIM-4, i (ii) agonista proteina koji stimuliše aktivaciju T ćelija kao što su B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, GITR, GITRL, CD70, CD27, CD40, DR3 i CD28H.

[0073] Ostali agensi koji mogu biti kombinovani sa jedinjenjima pronalaska za lečenje kancera uključuju antagoniste inhibitornih receptora na NK ćelijama ili agoniste aktivirajućih receptora na NK ćelijama. Na primer, jedinjenja pronalaska mogu biti kombinovana sa KIR antagonistima, kao što je lirilumab.

[0074] Drugi agensi za kombinovane terapije uključuju agense koji inhibiraju ili iscrpljuju makrofage ili monocite, uključujući ali nisu ograničeni na CSF-1R antagoniste kao što su CSF-1R antagonistička antitela uključujući RG7155 (WO11/70024, WO11/107553, WO11/131407, WO13/87699, WO13/119716, WO13/132044) ili FPA-008 (WO11/140249; WO13169264; WO14/036357).

[0075] U sledećem aspektu, jedinjenja pronalaska mogu biti primenjena sa jednim ili više agonističkih agenasa koji vezuju pozitivne kostimulatorne receptore, blokirajućih agenasa koji oslabljuju signalizaciju kroz inhibitorne receptore, antagonista, i jednim ili više agenasa koji sistemski povećavaju učestalost anti-tumorskih T ćelija, agenasa koji prevazilaze različite imunološke supresivne puteve unutar tumorske mikrosredine (npr., blokiraju inhibitorno angažovanje receptora (npr., PD-L1/PD-1 interakcije), oslabljuju ili inhibiraju Treg ćelije (npr., primena anti-CD25 monoklonskog antitela (npr., daklizumab) ili pomoću ex vivo potrošnje anti-CD25 mikrogranula), inhibiraju metaboličke enzime kao što su IDO, ili preokreću/sprečavaju T ćelijsku anergiju ili istrošenost) i agenasa koji pokreću urođenu imunološku aktivaciju i/ili inflamaciju na mestima tumora.

[0076] U jednom aspektu, imuno-onkološki agens je CTLA-4 antagonist, kao što je antagonističko CTLA-4 antitelo. Pogodna CTLA-4 antitela uključuju, na primer, YERVOY (ipilimumab) ili tremelimumab.

[0077] U sledećem aspektu, imuno-onkološki agens je PD-1 antagonist, kao što je antagonističko PD-1 antitelo. Pogodna PD-1 antitela uključuju, na primer, OPDIVO (nivolumab), KEYTRUDA (pembrolizumab), ili MEDI-0680 (AMP-514; WO2012/145493). Imuno-onkološki agens može takođe uključiti pidilizumab (CT-011), iako je njegova specifičnost za PD-1 vezivanje sporna. Drugi pristup da se nacilja PD-1 receptor je rekombinantni protein sačinjen od vanćelijskog domena od PD-L2 (B7-DC) koji je fuzionisan za Fc deo od IgG1, zvan AMP-224

[0078] U sledećem aspektu, imuno-onkološki agens je PD-L1 antagonist, kao što je antagonističko PD-L1 antitelo. Pogodna PD-L1 antitela uključuju, na primer, MPDL3280A (RG7446; WO2010/077634), durvalumab (MEDI4736), BMS-936559 (WO2007/005874), i MSB0010718C (WO2013/79174).

[0079] U sledećem aspektu, imuno-onkološki agens je LAG-3 antagonist, kao što je antagonističko LAG-3 antitelo. Pogodna LAG3 antitela uključuju, na primer, BMS-986016 (WO10/19570, WO14/08218), ili IMP-731 ili IMP-321 (WO08/132601, WO09/44273).

[0080] U sledećem aspektu, imuno-onkološki agens je CD137 (4-1BB) agonist, kao što je agonističko CD137 antitelo. Pogodna CD137 antitela uključuju, na primer, urelumab i PF-05082566 (WO12/32433).

[0081] U sledećem aspektu, imuno-onkološki agens je GITR agonist, kao što je agonističko GITR antitelo. Pogodna GITR antitela uključuju, na primer, BMS-986153, BMS-986156, TRX-518 (WO06/105021, WO09/009116) i MK-4166 (WO11/028683).

1

[0082] U sledećem aspektu, imuno-onkološki agens je IDO antagonist. Pogodni IDO antagonisti uključuju, na primer, INCB-024360 (WO2006/122150, WO07/75598, WO08/36653, WO08/36642), indoksimod, ili NLG-919 (WO09/73620, WO09/1156652, WO11/56652, WO12/142237).

[0083] U sledećem aspektu, imuno-onkološki agens je OX40 agonist, kao što je agonističko OX40 antitelo. Pogodna OX40 antitela uključuju, na primer, MEDI-6383 ili MEDI-6469.

[0084] U sledećem aspektu, imuno-onkološki agens je OX40L antagonist, kao što je antagonističko OX40 antitelo. Pogodni OX40L antagonisti uključuju, na primer, RG-7888 (WO06/029879).

[0085] U sledećem aspektu, imuno-onkološki agens je CD40 agonist, kao što je agonističko CD40 antitelo. U još jednom tehničkom rešenju, imuno-onkološki agens je CD40 antagonist, kao što je antagonističko CD40 antitelo. Pogodna CD40 antitela uključuju, na primer, lukatumumab ili dacetuzumab.

[0086] U sledećem aspektu, imuno-onkološki agens je CD27 agonist, kao što je agonističko CD27 antitelo. Pogodna CD27 antitela uključuju, na primer, varlilumab.

[0087] U sledećem aspektu, imuno-onkološki agens je MGA271 (na B7H3) (WO11/109400).

[0088] Kombinovana terapija je predviđeno da obuhvati administraciju ovih terapijskih agenasa na sekvencijalni način, to jest, pri čemu je svaki terapijski agens administriran u različito vreme, kao i administracija ovih terapijskih agenasa, ili najmanje dva od terapijskih agenasa, na suštinski istovremen način. Suštinski istovremena administracija može biti postignuta, na primer, administracijom subjektu pojedinačnog doznog oblika koji ima nepromenljiv odnos svakog terapijskog agensa ili u višestrukim, pojedinačnim doznim oblicima za svaki od terapijskih agenasa. Sekvencijalna ili suštinski istovremena administracija svakog terapijskog agensa može se ostvariti bilo kojim pogodnim putem uključujući, ali nije ograničen na, oralne puteva, intravenske puteve, intramuskularne puteve, i direktnu apsorbciju kroz tkiva sa mukoznim membranama. Terapijski agensi mogu biti administrirani istim putem ili različitim putevima. Na primer, prvi terapijski agens odabrane kombinacije može biti administriran pomoću intravenske injekcije dok drugi terapijski agensi kombinacije mogu biti administrirani oralno. Alternativno, na primer, svi terapijski agensi mogu biti administrirani oralno ili svi terapijski agensi mogu biti administrirani pomoću intravenske injekcije. Kombinovana terapija takođe može obuhvatiti administraciju terapijskih agenasa kao što je iznad opisano u daljoj kombinaciji sa drugim biološki aktivnim sastojcima i terapijama bez lekova (npr., operacijom ili tretmanom zračenjem.) Gde

2

kombinovana terapija dodatno sadrži lečenje bez lekova, lečenje bez lekova može biti sprovedeno u bilo koje pogodno vreme sve dok se koristan efekat iz zajedničkog dejstva kombinacije terapijskih agenasa i lečenja bez lekova ne postigne. Na primer, u odgovarajućim slučajevima, koristan efekat se i dalje postiže kada se lečenje bez lekova privremeno ukloni iz administracije terapijskih agenasa, možda danima ili čak nedeljama.

[0089] Ovaj pronalazak obuhvata sve kombinacije poželjnih aspekata pronalaska naznačenih ovde. Razume se se da bilo koje i sva tehnička rešenja predmetnog pronalaska mogu biti uzeta u vezi sa bilo kojim drugim tehničkim rešenjem ili tehničkim rešenjima da bi se opisala dodatna tehnička rešenja. Takođe se shvata da svaki posebni element tehničkih rešenja je svoje nezavisno tehničko rešenje. Pored toga, bilo koji element tehničkog rešenja je namenjen da se kombinuje sa bilo kojim i svim drugim elementima iz bilo kog tehničkog rešenja da bi se opisalo dodatno tehničko rešenje.

FARMACEUTSKE KOMPOZICIJE I DOZIRANJE

[0090] Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutski prihvatljive kompozicije koje sadrže terapijski efikasnu količinu jedinjenja iz primera 1 ili farmaceutski prihvatljive soli tog jedinjenja, formulisanih zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača (aditiva) i/ili razblaživača, i po izboru, jednim ili više dodatnih terapijskih agenasa koji su iznad opisani. Kao što je detaljno ispod opisano, farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti specijalno formulisane za administraciju u čvrstom ili tečnom obliku, uključujući one koje su prilagođene za sledeće: (1) oralnu administraciju, na primer, napitci (vodeni ili ne-vodeni rastvori ili suspenzije), tablete, npr., one namenjene za bukalnu, sublingvalnu, i sistemsku apsorbciju, bolusi, praškovi, granule, paste za primenu na jezik; (2) parenteralnu administraciju, na primer, pomoću subkutane, intramuskularne, intravenske ili epiduralne injekcije kao, na primer, sterilni rastvor ili suspenzija, ili formulacija sa kontinuiranim oslobađanjem; (3) topikalnu primenu, na primer, kao krem, mast, ili flaster sa kontrolisanim oslobađanjem ili sprej koji se primenjuje na kožu; (4) intravaginalno ili intrarektalno, na primer, kao pesar, krema ili pena; (5) sublingvalno; (6) okularno; (7) transdermalno; ili (8) nazalno.

[0091] Fraza "farmaceutski prihvatljiv" je ovde upotrebljena da uputi na ona jedinjenja, materijale, kompozicije, i/ili dozne oblike koji su, u okviru zdravorazumne procene lekara, pogodni za primenu u kontaktu sa tkivima ljudskih bića i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora, ili drugog problema ili komplikacije, proporcionalno sa razumnim odnosom korist/rizik.

[0092] Fraza "farmaceutski prihvatljiv nosač" kao što je ovde primenjeno označava farmaceutski prihvatljiv materijal, kompoziciju ili transporter, kao što je tečno ili čvrsto sredstvo za punjenje, razblaživač, ekscipijens, pomoćno sredstvo za proizvodnju (npr., lubrikant, talk magnezijum, kalcijum ili cink stearat, ili stearinska kiselina), ili materijal koji inkapsulira rastvarač, uključen u prenošenje ili transportovanje predmetnog jedinjenja iz jednog organa, ili dela tela, u drugi organ, ili deo tela. Svaki nosač mora biti "prihvatljiv" u smislu da je kompatibilan sa ostalim sastojcima formulacije i da nije štetan po pacijenta. Neki primeri materijala koji mogu služiti kao farmaceutski-prihvatljivi nosači uključuju: (1) šećere, kao što su laktoza, glukoza i saharoza; (2) skrobove, kao što su kukuruzni skrob i krompirov skrob; (3) celulozu, i njene derivate, kao što su natrijum karboksimetil celuloza, etil celuloza i celuloza acetat; (4) tragakant u prahu; (5) slad; (6) želatin; (7) talk; (8) ekscipijense, kao što su kakao buter i voskovi za supozitorije; (9) ulja, kao što su ulje od kikirikija, ulje semena pamuka, suncokretovo ulje, susamovo ulje, maslinovo ulje, kukuruzno ulje i sojino ulje; (10) glikole, kao što je propilen glikol; (11) poliole, kao što su glicerin, sorbitol, manitol i polietilen glikol; (12) estre, kao što su etil oleat i etil laurat; (13) agar; (14) agense za puferovanje, kao što su magnezijum hidroksid i aluminijum hidroksid; (15) alginsku kiselinu; (16) vodu bez pirogena; (17) izotoničan fiziološki rastvor; (18) Ringer-ov rastvor; (19) etil alkohol; (20) pH puferovane rastvore; (21) poliestre, polikarbonate i/ili polianhidride; i (22) ostale netoksične kompatibilne supstance koje su upotrebljene u farmaceutskim formulacijama.

[0093] Agensi za kvašenje, emulgatori i lubrikanti, kao što su natrijum lauril sulfat i magnezijum stearat, kao i boje, agensi za oslobađanje, agensi za oblaganje, zaslađivači, agensi za korekciju ukusa i parfemi, konzarvansi i antioksidansi mogu takođe biti prisutni u kompozicijama.

[0094] Primeri farmaceutski-prihvatljivih antioksidanasa uključuju: (1) u vodi rastvorne antioksidanse, kao što su askorbinska kiselina, cistein hidrohlorid, natrijum bisulfat, natrijum metabisulfit, natrijum sulfit i slično; (2) u ulju rastvorne antioksidanse, kao što su askorbil palmitat, butilovani hidroksianizol (BHA), butilovani hidroksitoluen (BHT), lecitin, propil galat, alfa-tokoferol, i slično; i (3) agense za heliranje metala, kao što su limunska kiselina, etilendiamin tetrasirćetna kiselina (EDTA), sorbitol, vinska kiselina, fosforna kiselina, i slično.

[0095] Formulacije predmetnog pronalaska uključuju one pogodne za oralnu, nazalnu, topikalnu (uključujući bukalnu i sublingvalnu), rektalnu, vaginalnu i/ili parenteralnu

4

administraciju. Formulacije mogu pogodno biti prisutne u jediničnom doznom obliku i mogu biti pripremljene pomoću bilo kojih metoda koje su dobro poznate u oblasti farmacije. Količina aktivnog sastojka koji se može kombinovati sa materijalom nosača da bi se proizveo pojedinačni dozni oblik će varirati zavisno od pacijenta koji se leči i posebnog načina administracije. Količina aktivnog sastojka koji se može kombinovati sa materijalom nosača da bi se proizveo pojedinačni dozni oblik će uopšteno biti ona količina jedinjenja koja proizvodi terapijski efekat. Uopšteno, od sto posto procenata, ova količina će se kretati u opsegu od oko 0.1 procenat do oko devedeset devet procenata aktivnog sastojka, poželjno od oko 5 procenata do oko 70 procenata, najpoželjnije od oko 10 procenata do oko 30 procenata.

[0096] U određenim tehničkim rešenjima, formulacija predmetnog pronalaska sadrži ekscipijens odabran iz grupe koja se sastoji od ciklodekstrina, celuloza, lipozoma, agenasa koji formiraju micele, npr., žučnih kiselina, i polimernih nosača, npr., poliestara i polianhidrida; i jedinjenja predmetnog pronalaska. U određenim tehničkim rešenjima, iznad pomenuta formulacija obezbeđuje oralno bioraspoloživo jedinjenje predmetnog pronalaska.

[0097] Metode pripremanja ovih formulacija ili kompozicija uključuju korak dovođenja u vezu jedinjenja predmetnog pronalaska sa nosačem i, po izboru, jednim ili više pomoćnih sastojaka. Uopšteno, formulacije su pripremljene ravnomernim i bliskim dovođenjem u vezu jedinjenja predmetnog pronalaska sa tečnim nosačima, ili fino podeljenim čvrstim nosačima, ili oba, i zatim, ako je potrebno, oblikovanjem proizvoda.

[0098] Formulacije pronalaska pogodne za oralnu administraciju mogu biti u obliku kapsula, kesica, pilula, tableta, lozenga (primenom osnove sa korigovanim ukusom, uobičajeno saharoze i akacije ili tragakante), praškova, granula, ili kao rastvor ili suspenzija u vodenoj ili ne-vodenoj tečnosti, ili kao ulje-u-vodi ili voda-u-ulju tečna emulzija, ili kao eliksir ili sirup, ili kao pastile (primenom inertne baze, kao što su želatin i glicerin, ili saharoza i akacija) i/ili kao sredstva za ispiranje usta i slično, pri čemu svaka sadrži prethodno određenu količinu jedinjenja predmetnog pronalaska kao aktivni sastojak. Jedinjenje predmetnog pronalaska može takođe biti administrirano kao bolus, elektuarijum ili pasta.

[0099] U čvrstim doznim oblicima pronalaska za oralnu administraciju (kapsule, tableta, pilule, dražeje, praškovi, granule, pastile i slično), aktivni sastojak je pomešan sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, kao što su natrijum citrat ili dikalcijum fosfat, i/ili bilo kojim od sledećih: (1) sredstvima za punjenje ili ekstenderima, kao što su skrobovi, laktoza, saharoza, glukoza, manitol, i/ili silicijumska kiselina; (2) sredstvima za vezivanje, kao što su, na primer, karboksimetilceluloza, alginati, želatin, polivinil pirolidon, saharoza i/ili akacija; (3) humektansima, kao što je glicerol; (4) agensima za raspadanje, kao što su agar-agar, kalcijum karbonat, krompirov ili tapioka skrob, alginska kiselina, određeni silikati, i natrijum karbonat; (5) agenasima za usporavanje rastvora, kao što je parafin; (6) sredstvima za ubrzavanje apsorbcije, kao što su kvaternerna amonijum jedinjenja i surfaktanti, kao što su poloksamer i natrijum lauril sulfat; (7) agensima za vlaženje, kao što su, na primer, cetil alkohol, glicerol monostearat, i nejonski surfaktanti; (8) apsorbentima, kao što su kaolin i bentonit glina; (9) lubrikansima, kao što su talk, kalcijum stearat, magnezijum stearat, čvrsti polietilen glikoli, natrijum lauril sulfat, cink stearat, natrijum stearat, stearinska kiselina, i njihove smeše; (10) bojama; i (11) agensima za kontrolu oslobađanja kao što su krospovidon ili etil celuloza. U slučaju kapsula, tableta i pilula, farmaceutske kompozicije mogu takođe sadržati agense za puferovanje. Čvrste kompozicije sličnog tipa mogu takođe biti upotrebljene kao sredstva za punjenje u želatinskim kapsulama sa mekim i tvrdim omotačem primenjujući takve ekscipijense kao što su laktoza ili mlečni šećeri, kao i polietilen glikoli vizoke molekularne mase i slično.

[0100] Tableta može biti napravljena komprimovanjem ili oblikovanjem, po izboru sa jednim ili više pomoćnih sastojaka. Komprimovane tablete mogu biti pripremljene primenom vezujućeg sredstva (na primer, želatina ili hidroksipropilmetil celuloze), lubrikanta, inertnog razblaživača, konzervansa, sredstva za raspadanje (na primer, natrijum skrob glikolata ili unakrsno vezane natrijum karboksimetil celuloze), površinski aktivnog ili dispergujućeg agensa. Oblikovane tablete mogu biti napravljene oblikovanjem u pogodnoj mašini smeše jedinjenja u prahu koje je navlaženo sa inertnim tečnim razblaživačem.

[0101] Tablete, i ostali čvrsti dozni oblici farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska, kao što su dražeje, kapsule, pilule i granule, mogu po izboru biti sa razdelnom linijom ili pripremljene sa premazima i omotačima, kao što su enterički premazi i ostali premazi koji su dobro poznati u oblasti farmaceutskog formulisanja. One mogu takođe biti formulisane tako da obezbede sporo ili kontrolisano oslobađanje aktivnog sastojka u njima primenom, na primer, hidroksipropilmetil celuloze u raličitim razmerama da bi se obezbedio željeni profil oslobađanja, drugih polimernih matrica, lipozoma i/ili mikrosfera. One mogu biti formulisane za brzo oslobađanje, npr., osušene zamrzavanjem. One mogu biti sterilisane pomoću, na primer, filtracije kroz filter za zadržavanje bakterija, ili inkorporiranjem sterilišućih agenasa u obliku sterilnih čvrstih kompozicija koje mogu biti rastvorene u sterilnoj vodi, ili nekom drugom sterilnom injektabilnom medijumu neposredno pre primene. Ove kompozicije mogu takođe po izboru sadržati agense za zamućivanje i mogu biti takve kompozicije da one oslobađaju aktivni sastojak(sastojke) jedino, ili preferencijalno, u određeni deo gastrointestinalnog trakta, po izboru, odloženo. Primeri kompozicija za ugradnju koje mogu biti primenjene uključuju polimerne supstance i voskove. Aktivni sastojak može takođe biti u mikro-inkapsuliranom obliku, po potrebi, sa jednim ili više iznad opisanih ekscipijenasa.

[0102] Tečni dozni oblici za oralnu administraciju jedinjenja pronalaska uključuju farmaceutski prihvatljive emulzije, mikroemulzije, rastvore, suspenzije, sirupe i eliksire. Pored aktivnog sastojka, tečni dozni oblici mogu sadržati inertne razblaživače koji se uobičajeno primenjuju u oblasti, kao što su, na primer, voda ili drugi rastvarači, solubilizujući agensi i emulgatori, kao što su etil alkohol, izopropil alkohol, etil karbonat, etil acetat, benzil alkohol, benzil benzoat, propilen glikol, 1,3-butilen glikol, ulja (posebno, semena pamuka, kikirikija, kukuruza, klice, masline, ricinusa i ulje susama), glicerol, tetrahidrofuril alkohol, polietilen glikoli i estri masnih kiselina i sorbitana, i njihove smeše.

[0103] Pored inertnih razblaživača, oralne kompozicije mogu takođe da uključe adjuvanse kao što su agensi za vlaženje, emulgujući i suspendujući agensi, agensi za zaslađivanje, korekciju ukusa, bojenje, korekciju mirisa i konzerviranje.

[0104] Suspenzije, pored aktivnih jedinjenja, mogu sadržati suspendujuće agense kao, na primer, etoksilovane izostearil alkohole, polioksietilen sorbitol i sorbitan estre, mikrokristalnu celulozu, aluminijum metahidroksid, bentonit, agar-agar i tragakant, i njihove smeše.

[0105] Formulacije farmaceutskih kompozicija pronalaska za rektalnu ili vaginalnu administraciju mogu biti predstavljene kao supozitorija, koja može biti pripremljena mešanjem jednog ili više jedinjenja pronalaska sa jednim ili više pogodnih neiritirajućih ekscipijenasa ili nosača koji sadrže, na primer, kakao buter, polietilen glikol, vosak za supozitorije ili salicilat, i koja je čvrsta na sobnoj temperaturi, ali tečna na temperaturi tela i, stoga, će se otopiti u rektumu ili vaginalnoj šupljini i osloboditi aktivno jedinjenje.

[0106] Formulacije predmetnog pronalaska koje su pogodne za vaginalnu administraciju takođe uključuju pesarije, tampone, kreme, gelove, paste, pene ili sprej formulacije koje sadrže takve nosače koji su u oblasti poznati kao pogodni.

[0107] Dozni oblici za topikalnu ili transdermalnu administraciju jedinjenja ovog pronalaska uključuju praškove, sprejeve, masti, paste, kreme, losione, gelove, rastvore, flastere i inhalante. Aktivno jedinjenje može biti pomešano pod sterilnim uslovima sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, i sa bilo kojim konzervansima, puferima, ili propelentima koji mogu biti neophodni.

[0108] Masti, paste, kreme i gelovi mogu sadržati, pored aktivnog jedinjenja ovog pronalaska, ekscipijense, kao što su životinjske i biljne masti, ulja, voskovi, parafini, skrob, tragakant, derivate celuloze, polietilen glikole, silikone, bentonite, silicijumsku kiselinu, talk i cink oksid, ili njihove smeše.

[0109] Praškovi i sprejevi mogu sadržati, pored jedinjenja ovog pronalaska, ekscipijense kao što su laktoza, talk, silicijumska kiselina, aluminijum hidroksid, kalcijum silikati i poliamid prašak, ili smeše ovih supstanci. Sprejevi mogu dodatno sadržati uobičajene propelente, kao što su hlorofluorougljovodonici i isparljivi nesupstituisani ugljovodonici, kao što su butan i propan.

[0110] Transdermalni flasteri imaju dodatnu prednost obezbeđivanja kontrolisane isporuke jedinjenja predmetnog pronalaska u telo. Takvi dozni oblici mogu biti napravljeni rastvaranjem ili dispergovanjem jedinjenja u odgovarajućem medijumu. Pojačivači apsorbcije mogu takođe biti primenjeni da povećaju tok jedinjenja preko kože. Brzina ovakvog toka može biti kontrolisana bilo obezbeđivanjem membrane za kontrolu brzine ili dispergovanjem jedinjenja u polimernom matriksu ili gelu.

[0111] Oftalmičke formulacije, očne masti, praškovi, rastvori i slično, su takođe razmatrani kao da su unutar obima ovog pronalaska.

[0112] Farmaceutske kompozicije ovog pronalaska koje su pogodne za parenteralnu administraciju sadrže jedno ili više jedinjenja pronalaska u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih sterilnih izotoničnih vodenih ili nevodenih rastvora, disperzija, suspenzija ili emulzija, ili sterilnih praškova koji mogu biti rekonstituisani u sterilne injektabilne rastvore ili disperzije neposredno pre nego što će se primeniti, koji mogu sadržati šećere, alkohole, antioksidanse, pufere, bakteriostatike, supstance koje se rastvaraju koje čine formulaciju izotoničnom sa krvlju nameravanog primaoca ili agense za suspendovanje ili zgušnjavanje.

[0113] Primeri pogodnih vodenih i nevodenih nosača koji mogu biti upotrebljeni u farmaceutskim kompozicijama pronalaska uključuju vodu, etanol, poliole (kao što su glicerol, propilen glikol, polietilen glikol, i slično), i njihove pogodne smeše, biljna ulja, kao što je maslinovo ulje, i injektabilne organske estre, kao što je etil oleat. Pogodna fluidnost može biti održana, na primer, primenom materijala za oblaganje, kao što je lecitin, održavanjem zahtevane veličine čestice u slučaju disperzija, i primenom surfaktanata.

[0114] Ove kompozicije mogu takođe sadržati adjuvanse kao što su konzervansi, agensi za vlaženje, emulgatori i agensi za dispergovanje. Sprečavanje dejstva mikroorganizama na predmetna jedinjenja može biti osigurano inkluzijom raznih antibakterijskih i antigljivičnih agenasa, na primer, parabena, hlorobutanola, fenol sorbinske kiseline, i slično. Može biti takođe poželjno da se u kompozicije uključe izotonični agensi, kao što su šećeri, natrijum hlorid, i slično. Dodatno, produžena apsorbcija injektabilnog farmaceutskog oblika može biti ostvarena inkluzijom agenasa koji odlažu apsorpciju kao što su aluminijum monostearat i želatin.

[0115] U nekim slučajevima, da bi se produžio efekat leka, poželjno je da se uspori apsorpcija leka iz subkutane ili intramuskularne injekcije. Ovo može biti postignuto primenom tečne suspenzije kristalnog ili amorfnog materijala koji ima slabu rastvorljivost u vodi. Brzina apsorbcije leka potom zavisi od njegove brzine rastvaranja koja, zatim, može zavisiti od veličine kristala i kristalnog oblika. Alternativno, odložena apsorbcija parenteralno administriranog oblika leka je postignuta rastvaranjem ili suspendovanjem leka u uljanom transporteru.

[0116] Injektabilni depo oblici su napravljeni formiranjem mikroinkapsuliranih matrica predmetnih jedinjenja u biorezgardljivim polimerima kao što je polilaktid-poliglikolid. Zavisno od odnosa leka prema polimeru, i prirode posebnog polimera koji je upotrebljen, brzina oslobađanja leka može biti kontrolisana. Primeri drugih biorazgradljivih polimera uključuju poli(ortoestre) i poli(anhidride). Depo injektabilne formulacije su takođe pripremljene hvatanjem leka u lipozome ili mikroemulzije koje su kompatibilne sa tkivom tela.

[0117] Kada se jedinjenja predmetnog pronalaska administriraju kao farmaceutski proizvodi, ljudima i životinjama, ona mogu biti data kakva jesu ili kao farmaceutska kompozicija koja sadrži, na primer, 0.1 do 99% (poželjnije, 10 do 30%) aktivnog sastojka u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.

[0118] Bez obzira na odabrani put administracije, jedinjenja predmetnog pronalaska, koja mogu biti primenjena u pogodnom hidratisanom obliku, i/ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska, su formulisani unutar farmaceutski prihvatljivih doznih oblika pomoću konvencionalnih metoda koje su poznate obučenim poznavaocima oblasti.

[0119] Stvarni dozni nivoi aktivnih sastojaka u farmaceutskim kompozicijama ovog pronalaska mogu se menjati tako da se dobije količina aktivnog sastojka koja je efikasna da se postigne željeni terapijski odgovor za posebnog pacijenta, kompozicija, i način administracije, bez toksičnosti po pacijenta.

[0120] Odabrani dozni nivo će zavisiti od raznolikosti faktora uključujući aktivnost posebnog jedinjenja predmetnog pronalaska koje je upotrebljeno, ili estra, soli ili amida tog jedinjenja, put administracije, vreme administracije, brzinu izlučivanja ili metabolizam posebnog jedinjenja koje je upotrebljeno, brzinu i stepen apsorbcije, trajanje lečenja, ostale lekove, jedinjenja i/ili materijale koji su primenjeni u kombinaciji sa posebnim jedinjenjem koje je upotrebljeno, starost, pol, masu, stanje, opšte zdravlje i prethodnu medicinsku istoriju pacijenta koji se leči, i slične faktore koji su dobro poznati u oblastima medicine.

[0121] Lekar ili veterinar sa prosečnim znanjem iz oblasti može lako da odredi i propiše efikasnu količinu farmaceutske kompozicije koja je potrebna. Na primer, lekar ili veterinar može započeti sa dozama jedinjenja pronalaska koja su upotrebljena u farmaceutskoj kompoziciji na nivoima nižim od onih koji su potrebni da bi se postigao željeni terapijski efekat i postepeno povećavati dozu dok se ne postigne željeni efekat.

[0122] Uopšteno, pogodna dnevna doza jedinjenja pronalaska će biti ona količina jedinjenja koja je najniža doza efikasna da proizvede terapijski efekat. Ovakva efikasna doza će uopšteno zavisiti od faktora koji su opisani iznad. Uopšteno, oralne, intravenske, intracerebroventrikularne i subkutane doze jedinjenja ovog pronalaska za pacijenta će se kretati u opsegu od oko 0.01 do oko 50 mg po kilogramu telesne mase na dan.

[0123] Ukoliko je poželjno, efikasna dnevna doza aktivnog jedinjenja može biti administrirana kao dve, tri, četiri, pet, šest ili više pod-doza administriranih odvojeno u odgovarajućim intervalima tokom dana, po izboru, u jediničnim doznim oblicima. U određenim aspektima pronalaska, doziranje je jedna administracija na dan.

[0124] Dok je moguće da se jedinjenje predmetnog pronalaska administrira zasebno, poželjno je da se jedinjenje administrira kao farmaceutska formulacija (kompozicija).

DEFINICIJE

[0125] Ukoliko nije posebno naznačeno drugačije ovde, reference u jednini mogu takođe da uključe množinu. Na primer, u engleskom jeziku članovi "a" i "an" mogu da se odnose bilo na jedno, bilo jedno ili više.

[0126] Ukoliko nije drugačije naznačeno, pretpostavlja se da bilo koji heteroatom sa nepopunjenim valentnim nivoima ima dovoljno atoma vodonika da se popune valentni nivoi.

[0127] Kroz specifikaciju i pridodate patentne zahteve, data hemijska formula ili naziv će obuhvatiti sve stereo i optičke izomere i njihove racemate gde takvi izomeri postoje. Ukoliko nije drugačije naznačeno, svi hiralni (enantiomerni i dijastereomerni) i racemski oblici su u okviru obima pronalaska. Mnogi geometrijski izomeri C=C dvostrukih veza, C=N dvostrukih

4

veza, prstenastih sistema, i slično mogu takođe biti prisutni u jedinjenjima, i svi tako stabilni izomeri su razmatrani u predmetnom pronalasku. Cis- i trans- (ili E- i Z-) geometrijski izomeri jedinjenja predmetnog pronalaska su opisani i mogu biti izolovani kao smeša izomera ili kao odvojeni izomerni oblici. Predmetna jedinjenja mogu biti izolovana u optički aktivnim ili racemskim oblicima. Optički aktivni oblici mogu biti pripremljeni razdvajanjem racemskih oblika ili sintezom iz optički aktivnih polaznih materijala. Svi procesi koji su primenjeni za pripremanje jedinjenja predmetnog pronalaska i intermedijeri koji su napravljeni u njima se smatraju delom predmetne objave. Kada su enantiomerni ili dijastereomerni proizvodi pripremljeni, oni mogu biti razdvojeni pomoću konvencionalnih metoda, na primer, pomoću hromatografije ili frakcione kristalizacije. Zavisno od uslova procesa krajnji proizvodi predmetnog pronalaska se dobijaju bilo u slobodnom (neutralnom) ili obliku soli. I slobodan oblik i soli ovih krajnjih proizvoda su u okviru obima pronalaska. Ukoliko je poželjno, jedan oblik jedinjenja može biti konvertovan u drugi oblik. Slobodna baza ili kiselina može biti konvertovana u so; so može biti konvertovana u slobodno jedinjenje ili drugu so; smeša izomernih jedinjenja predmetnog pronalaska može biti razdvojena u pojedinačne izomere. Jedinjenja predmetnog pronalaska, slobodni oblik i njihove soli, mogu postojati u više tautomernih oblika, u kojima su atomi vodonika premešteni na druge delove molekula i hemijske veze između atoma molekula su posledično preuređene. Treba razumeti da su svi tautomerni oblici, u meri u kojoj mogu postojati, uključeni u pronalazak.

[0128] Kada je supstituent naznačen kao "po izboru supstituisan", supstituenti su odabrani od, na primer, supstituenata kao što su alkil, cikloalkil, aril, heterociklo, halo, hidroksi, alkoksi, okso, alkanoil, ariloksi, alkanoiloksi, amino, alkilamino, arilamino, arilalkilamino, disupstituisani amini u kojima su 2 amino supstituenta odabrana od alkil, aril ili arilalkil; alkanoilamino, aroilamino, aralkanoilamino, supstituisani alkanoilamino, supstituisani arilamino, supstituisani aralkanoilamino, tiol, alkiltio, ariltio, arilalkiltio, alkiltiono, ariltiono, arilalkiltiono, alkilsulfonil, arilsulfonil, arilalkilsulfonil, sulfonamido, npr. -SO2NH2, supstituisani sulfonamido, nitro, cijano, karboksi, karbamil, npr. -CONH2, supstituisani karbamil npr. -CONHalkil,-CONHaril, -CONHarilalkil ili slučajevi kada su dva supstituenta na azotu odabrana od alkil, aril ili arilalkil; alkoksikarbonil, aril, supstituisani aril, guanidino, heterociklil, npr., indolil, imidazolil, furil, tienil, tiazolil, pirolidil, piridil, pirimidil, pirolidinil, piperidinil, morfolinil, piperazinil, homopiperazinil i slično, i supstituisani heterociklil, ukoliko nije drugačije definisano.

[0129] Radi jasnoće i u skladu sa standardnom konvencijom u oblasti, simbol

je primenjen u formulama i tabelama da prikaže vezu koja je mesto vezivanja grupe ili supstituenta za središte/jezgro strukture.

[0130] Dodatno, radi jasnoće, gde supstituent ima crticu (-) koja nije između dva slova ili simbola; ovo se primenjuje da se naznači mesto vezivanja za supstituent. Na primer, -CONH2je povezan preko atoma ugljenika.

[0131] Dodatno, radi jasnoće, kada nije prikazan supstituent na kraju pune linije, ovo ukazuje da je tamo metil (CH3) grupa koja je povezana za vezu.

[0132] Kao što je ovde primenjeno, termin "alkil" ili "alkilen" treba da uključi i razgranate i ravno-lančane zasićene alifatične ugljovodonične grupe koje imaju naznačen broj atoma ugljenika. Na primer, "C1-C6alkil" označava alkil koji ima 1 do 6 atoma ugljenika. Alkil grupe uzete kao primer uključuju, ali nisu na njih ograničene, metil (Me), etil (Et), propil (npr., n-propil i izopropil), butil (npr., n-butil, izobutil, t-butil), i pentil (npr., n-pentil, izopentil, neopentil).

[0133] Termin "alkenil" označava ravno- ili razgranato-lančani ugljovodonični radikal koji sadrži jednu ili više dvostrukih veza i tipično od 2 do 20 atoma ugljenika u dužini. Na primer, "C2-C8alkenil" sadrži od dva do osam atoma ugljenika. Alkenil grupe uključuju, ali nisu na njih ograničene, na primer, etenil, propenil, butenil, 1-metil-2-buten-1-il, heptenil, oktenil i slično.

[0134] Termin "alkinil" označava ravno- ili razgranato-lančani ugljovodonični radikal koji sadrži jednu ili više trostrukih veza i tipično od 2 do 20 atoma ugljenika u dužini. Na primer, "C2-C8alkenil" sadrži od dva do osam atoma ugljenika. Reprezentativne alkinil grupe uključuju, ali nisu na njih ograničene, na primer, etinil, 1-propinil, 1-butinil, heptinil, oktinil i slično.

[0135] Termin "alkoksi" ili "alkiloksi" se odnosi na -O-alkil grupu. "C1-6alkoksi" (ili alkiloksi), treba da uključi C1, C2, C3, C4, C5, i C6alkoksi grupe. Alkoksi grupe uzete kao primer uključuju, ali nisu na njih ograničene, metoksi, etoksi, propoksi (npr., n-propoksi i izopropoksi), i t-butoksi. Slično, "alkiltio" ili "tioalkoksi" predstavlja alkil grupu kao što je iznad definisano sa naznačenim brojem atoma ugljenika povezanu preko sumpornog mosta; na primer metil-S- i etil-S-.

[0136] Termin "aril", bilo sam ili kao deo veće grupe kao što su "aralkil", "aralkoksi", ili ariloksialkil", se odnosi na monociklične, biciklične i triciklične prstenaste sisteme koji imaju ukupno pet do 15 članova prstena, pri čemu je najmanje jedan prsten u sistemu aromatičan i pri čemu svaki prsten u sistemu sadrži tri do sedam članova prstena. U određenim tehničkim rešenjima pronalaska, "aril" se odnosi na aromatični prstenasti sistem koji uključuje, ali nije ograničen na fenil, bifenil, indanil, 1-naftil, 2-naftil i terahidronaftil. Termin "aralkil" ili "arilalkil" se odnosi na alkil ostatak koji je povezan za aril prsten. Neograničavajući primeri uključuju benzil, fenetil i slično. Fuzionisani arili mogu biti povezani sa drugom grupom bilo na pogodnoj poziciji na cikloalkil prstenu ili aromatičnom prstenu. Na primer:

[0137] Strelice koje su nacrtane da su usmerene od prstenastog sistema ukazuje da veza može biti povezana za bilo koji od pogodnih atoma prstena.

[0138] Termin "cikloalkil" se odnosi na ciklizovane alkil grupe. C3-6cikloalkil treba da uključi C3, C4, C5, i C6cikloalkil grupe. Cikloalkil grupe koje su uzete kao primer uključuju, ali nisu na njih ograničene, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, i norbornil. Razgranate cikloalkil grupe kao što su 1-metilciklopropil i 2-metilciklopropil su uključene u definiciju "cikloalkil". Termin "cikloalkenil" se odnosi na ciklizovane alkenil grupe. C4-6cikloalkenil treba da uključi C4, C5, i C6cikloalkenil grupe. Cikloalkenil grupe koje su uzete kao primer uključuju, ali nisu na njih ograničene, ciklobutenil, ciklopentenil, i cikloheksenil.

[0139] Termin "cikloalkilalkil"se odnosi na cikloalkil ili supstituisani cikloalkil vezan za alkil grupu koja je povezana za karbazolsko jezgro jedinjenja.

[0140] "Halo" ili "halogen" uključuje fluoro, hloro, bromo, i jodo. "Haloalkil" treba da uključi i razgranate i ravnolančane zasićene alifatične ugljovodonične grupe koje imaju naznačen broj atoma ugljenika, supstituisanih sa 1 ili više halogena. Primeri haloalkila uključuju, ali nisu na njih ograničeni, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, trihlorometil, pentafluoroetil, pentahloroetil, 2,2,2-trifluoroetil, heptafluoropropil, i heptahloropropil. Primeri haloalkila takođe uključuju "fluoroalkil" koji treba da uključi i razgranate i ravnolančane zasićene alifatične ugljovodonične grupe koje imaju naznačen broj atoma ugljenika, supstituisanih sa 1 ili više atoma fluora.

[0141] "Haloalkoksi" ili "haloalkiloksi" predstavlja haloalkil grupu kao što je iznad definisano sa naznačenim brojem atoma ugljenika koja je povezana preko kiseonikovog

4

mosta. Na primer, "C1-6haloalkoksi", treba da uključi C1, C2, C3, C4, C5, i C6haloalkoksi grupe. Primeri haloalkoksi uključuju, ali nisu na njih ograničeni, trifluorometoksi, 2,2,2-trifluoroetoksi, i pentafluorotoksi. Slično, "haloalkiltio" ili "tiohaloalkoksi" predstavlja haloalkil grupu kao što je definisano iznad sa naznačenim brojem atoma ugljenika koja je povezana preko sumpornog mosta; na primer trifluorometil-S-, i pentafluoroetil-S-.

[0142] Termin "benzil," kao što je ovde primenjeno, se odnosi na metil grupu na kojoj je jedan od atoma vodonika zamenje fenil grupom.

[0143] Kao što je ovde primenjeno, termin "heterociklus," "heterociklil," ili "heterociklična grupa" treba da označi stabilan 3-, 4-, 5-, 6-, ili 7-očlani monociklični ili biciklični ili 7-, 8-, 9-, 10-, 11-, 12-, 13-, ili 14-očlani policiklični heterociklični prsten koji je zasićen, delimično nezasićen, ili potpuno nezasićen, i koji sadrži atome ugljenika i 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma nezavisno odabrana iz grupe koja se sastoji od N, O i S; i koji uključuje bilo koju policikličnu grupu u kojoj je bilo koji od iznad-definisanih heterocikličnih prstenova fuzionisan za benzenov prsten. Heteroatomi azota i sumpora mogu po izboru biti oksidovani (tj., N→O i S(O)p, pri čemu p je 0, 1 ili 2). Atom azota može biti supstituisan ili nesupstituisan (tj., N ili NR pri čemu R je H ili drugi supstituent, ako je definisano). Heterociklični prsten može biti povezan sa svojom bočnom grupom na bilo kom heteroatomu ili ugljenikovom atomu što rezultuje stabilnom strukturom. Heterociklični prstenovi koji su opisani ovde mogu biti supstituisani na ugljenikovom ili azotovom atomu ukoliko je dobijeno jedinjenje stabilno. Azot u heterociklusu može po izboru biti kvaternizovan. Poželjno je da kada ukupan broj S i O atoma u heterociklusu prelazi 1, tada ovi heteroatomi nisu susedni jedan drugom. Poželjno je da ukupan broj S i O atoma u heterociklusu nije veći od 1. Kada se termin "heterociklus" primenjuje, on treba da uključi heteroaril.

[0144] Primeri heterociklusa uključuju, ali nisu na njih ograničeni, akridinil, azetidinil, azocinil, benzimidazolil, benzofuranil, benzotiofuranil, benzotiofenil, benzoksazolil, benzoksazolinil, benztiazolil, benztriazolil, benztetrazolil, benzizoksazolil, benzizotiazolil, benzimidazolinil, karbazolil, 4aH-karbazolil, karbolinil, hromanil, hromenil, cinolinil, dekahidrohinolinil, 2H,6H-1,5,2-ditiazinil, dihidrofuro[2,3-b]tetrahidrofuran, furanil, furazanil, imidazolidinil, imidazolinil, imidazolil, 1H-indazolil, imidazolopiridinil, indolnil, indolinil, indolizinil, indolil, 3H-indolil, izatinoil, izobenzofuranil, izohromanil, izoindazolil, izoindolinil, izoindolil, izohinolinil, izotiazolil, izotiazolopiridinil, izoksazolil, izoksazolopiridinil, metilendioksifenil, morfolinil, naftiridinil, oktahidroizohinolinil, oksadiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,2,5-oksadiazolil, 1,3,4-oksadiazolil, oksazolidinil, oksazolil, oksazolopiridinil, oksazolidinilperimidinil, oksindolil, pirimidinil, fenantridinil, fenantrolinil, fenazinil, fenotiazinil, fenoksatiinil, fenoksazinil, ftalazinil, piperazinil, piperidinil, piperidonil, 4-piperidonil, piperonil, pteridinil, purinil, piranil, pirazinil, pirazolidinil, pirazolinil, pirazolopiridinil, pirazolil, piridazinil, piridooksazolil, piridoimidazolil, piridotiazolil, piridinil, pirimidinil, pirolidinil, pirolinil, 2-pirolidonil, 2H-pirolil, pirolil, hinazolinil, hinolinil, 4H-hinolizinil, hinoksalinil, hinuklidinil, tetrazolil, tetrahidrofuranil, tetrahidroizohinolinil, tetrahidrohinolinil, 6H-1,2,5-tiadiazinil, 1,2,3-tiadiazolil, 1,2,4-tiadiazolil, 1,2,5-tiadiazolil, 1,3,4-tiadiazolil, tiantrenil, tiazolil, tienil, tiazolopiridinil, tienotiazolil, tienooksazolil, tienoimidazolil, tiofenil, triazinil, 1,2,3-triazolil, 1,2,4-triazolil, 1,2,5-triazolil, 1,3,4-triazolil, i ksantenil. Takođe uključeni su fuzionisana prstenasta i spiro jedinjenja koja sadrže, na primer, iznad pomenute heterocikluse.

[0145] Kao što je ovde primenjeno, termin "biciklični heterociklus" ili "biciklična heterociklična grupa" treba da označi stabilni 9- ili 10-očlani heterociklični prstenasti sistem koji sadrži dva fuzionisana prstena i sastoji se od atoma ugljenika i 1, 2, 3, ili 4 heteroatoma nezavisno odabrana iz grupe koja se sastoji od N, O i S. Od dva fuzionisana prstena, jedan prsten je 5- ili 6-očlani monociklični aromatični prsten koji sadrži 5-očlani heteroaril prsten, 6-očlani heteroaril prsten ili benzo prsten, svaki fuzionisan za drugi prsten. Drugi prsten je 5-ili 6-očlani monociklični prsten koji je zasićen, delimično nezasićen, ili nezasićen, i sadrži 5-očlani heterociklus, 6-očlani heterociklus ili karbociklus (pod uslovom da prvi prsten nije benzo kada je drugi prsten karbociklus).

[0146] Biciklična heterociklična grupa može biti povezana za svoju bočnu grupu na bilo kom heteroatomu ili atomu ugljenika što daje stabilnu strukturu. Biciklična heterociklična grupa koja je ovde opisana može biti supstituisana na atomu ugljenika ili azota ukoliko je rezultujuće jedinjenje stabilno. Poželjno je da kada ukupni broj S i O atoma u heterociklucu prelazi 1, tada ovi heteroatomi nisu susedni jedan drugom. Poželjno je da ukupni broj S i O atoma u heterociklusu nije veći od 1.

[0147] Primeri biciklične heterociklične grupe su, ali nisu ograničeni na, hinolinil, izohinolinil, ftalazinil, hinazolinil, indolil, izoindolil, indolinil, 1H-indazolil, benzimidazolil, 1,2,3,4-tetrahidrohinolinil, 1,2,3,4-tetrahidroizohinolinil, 5,6,7,8-tetrahidro-hinolinil, 2,3-dihidro-benzofuranil, hromanil, 1,2,3,4-tetrahidro-hinoksalinil i 1,2,3,4-tetrahidro-hinazolinil.

[0148] Kao što je ovde primenjeno, termin "aromatična heterociklična grupa" ili "heteroaril" treba da označi stabilne monociklične i policiklični aromatične ugljovodonike koji uključuju najmanje jedan heteroatomski član prstena kao što su sumpor, kiseonik, ili azot. Heteroaril

4

grupe uključuju, bez ograničenja, piridil, pirimidinil, pirazinil, piridazinil, triazinil, furil, hinolil, izohinolil, tienil, imidazolil, tiazolil, indolil, piroil, oksazolil, benzofuril, benzotienil, benztiazolil, izoksazolil, pirazolil, triazolil, tetrazolil, indazolil, 1,2,4-tiadiazolil, izotiazolil, purinil, karbazolil, benzimidazolil, indolinil, benzodioksolanil i benzodioksan. Heteroaril grupe su supstituisane ili nesupstituisane. Atom azota je supstituisan ili nesupstituisan (tj., N ili NR pri čemu R je H ili drugi supstituent, ukoliko je definisano). Heteroatomi azota i sumpora mogu po izboru biti oksidovani (tj., N→O i S(O)p, pri čemu p je 0, 1 ili 2).

[0149] Premošćeni prstenovi su takođe uključeni u definiciju heterociklusa. Premošćeni prsten se javlja kada jedan ili više, poželjno jedan do tri, atoma (tj., C, O, N, ili S) povezuju dva nesusedna atoma ugljenika ili azota. Primeri premošćenih prstenova uključuju, ali nisu na njih ograničeni, jedan atom ugljenika, dva atoma ugljenika, jedan atom azota, dva atoma azota, i ugljenik-azot grupu. Zabeleženo je da most uvek konvertuje monociklični prsten u triciklični prsten. Kada je prsten premošćen, supstituenti vezani za prsten mogu takođe biti prisutni na mostu.

[0150] Termin "heterociklilalkil"se odnosi na heterociklil ili supstituisan heterociklil koji je vezan za alkil grupu koja je povezana za karbazolno jezgro jedinjenja.

[0151] Termin "kontra jon" se primenjuje da predstavi negativno naelektrisane vrste kao što su hlorid, bromid, hidroksid, acetat, i sulfat ili pozitivno naelektrisane vrste kao što su natrijum (Na+), kalijum (K+), amonijum (RnNHm+ gde n=0-4 i m=0-4) i slično.

[0152] Termin "elektron privlačna grupa" (electron withdrawing group - EWG) se odnosi na supstituent koji polarizuje vezu, povlačeći elektronsku gustinu prema sebi i od drugih vezanih atoma. Primeri EWG uključuju, ali nisu na njih ograničeni, CF3, CF2CF3, CN, halogen, haloalkil, NO2, sulfon, sulfoksid, estar, sulfonamid, karboksamid, alkoksi, alkoksietar, alkenil, alkinil, OH, C(O)alkil, CO2H, fenil, heteroaril, -O-fenil, i -O-heteroaril. Poželjni primeri EWG-a uključuju, ali nisu na njih ograničeni, CF3, CF2CF3, CN, halogen, SO2(C1-4alkil), CONH(C1-4alkil), CON(C1-4alkil)2, i heteroaril. Poželjniji primeri EWG uključuju, ali nisu na njih ograničeni, CF3i CN.

[0153] Kao što je ovde primenjeno, termin "amin zaštitna grupa" označava bilo koju grupu koja je poznata u oblasti organske sinteze za zaštitu amin grupa koja je stabilna na estar redukujući agens, disupstituisani hidrazin, R4-M i R7-M, nukleofil, hidrazin redukujući agens, aktivator, jaku bazu, zaklonjenu aminsku bazu i agens za ciklizaciju. Takve amin zaštitne grupe koje odgovaraju ovim kriterijumima uključuju one navedene u Wuts, P. G. M. i Greene, T.W. Protecting Groups in Organic Synthesis, 4. izdanje, Wiley (2007) i The

4

Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, tom 3, Academic Press, Njujork (1981. Primeri amin zaštitnih grupa uključuju, ali nisu na njih ograničeni, sledeće: (1) acil tipove kao što su formil, trifluoroacetil, ftalil, i p-toluensulfonil; (2) aromatične karbamat tipove kao što su benziloksikarbonil (Cbz) i supstituisani benziloksikarbonili, 1-(p-bifenil)-1-metiletoksikarbonil, i 9-fluorenilmetiloksikarbonil (Fmoc); (3) alifatične karbamat tipove kao što su terc-butiloksikarbonil (Boc), etoksikarbonil, diizopropilmetoksikarbonil, i aliloksikarbonil; (4) ciklične alkil karbamat tipove kao što su ciklopentiloksikarbonil i adamantiloksikarbonil; (5) alkil tipove kao što su trifenilmetil i benzil; (6) trialkilsilan kao što je trimetilsilan; (7) tipove koji sadrže tiol kao što su feniltiokarbonil i ditiasukcinoil; i (8) alkil tipove kao što su trifenilmetil, metil, i benzil; i supstituisane alkil tipove kao što su 2,2,2-trihloroetil, 2-feniletil, i t-butil; i trialkilsilan tipove kao što je trimetilsilan.

[0154] Kao što je ovde pomenuto, termin "supstituisan" znači da je najmanje jedan atom vodonika zamenje sa nevodoničnom grupom, pod uslovom da su održane normalne valence i da supstitucija daje stabilno jedinjenje. Dvostruke veze prstena, kao što je ovde primenjeno, su dvostruke veze koje su formirane između dva susedna atoma u prstenu (npr., C=C, C=N, ili N=N).

[0155] U slučajevima gde postoje atomi azota (npr., amini) na jedinjenjima predmetnog pronalaska, ovi mogu biti konvertovani u N-okside tretmanom sa oksidujućim agensom (npr., mCPBA i/ili hidrogen peroksidima) da bi se dobila druga jedinjenja ovog pronalaska. Stoga, smatra se da prikazani i atomi azota za koje se traži zaštita obuhvataju i prikazan azot i njegov N-oksid (N→O) derivat.

[0156] Kada se bilo koja promenljiva pojavljuje više od jednom u bilo kojoj komponenti ili formuli za jedinjenje, njena definicija pri svakom pojavljivanju je nezavisna od njene definicije pri svakom drugom pojavljivanju. Stoga, na primer, ukoliko je grupa prikazana da je supstituisana sa 0-3 R, tada navedena grupa može po izboru biti supstituisana sa do tri R grupe, i pri svakom pojavljivanju R je odabrano nezavisno od definicije za R. Takođe, kombinacije supstituenata i/ili promenljivih su dozvoljene samo ako takve kombinacije daju stabilna jedinjenja.

[0157] Kada je veza sa supstituentom prikazana da se ukršta sa vezom koja povezuje dva atoma u prstenu, tada takav supstituent može biti vezan za bilo koji atom na prstenu. Kada je supstituent naveden bez ukazivanja atoma kojim je takav supstituent vezan za ostatak jedinjenja date formule, tada takav supstituent može biti vezan preko bilo kog atoma u

4

takvom supstituenta. Kombinacije supstituenata i/ili promenljivih su dozvoljene samo ako takve kombinacije daju stabilna jedinjenja.

[0158] Predmetni pronalazak treba da uključi sve izotope atoma koji se pojavljuju u predmetnom jedinjenju. Izotopi uključuju one atome koji imaju isti atomski broj ali različite masene brojeve. Kao uopšteni primer i bez ograničenja, izotopi vodonika uključuju deuterijum i tricijum. Izotopi vodonika mogu biti označeni kao<1>H (vodonik),<2>H (deuterijum) i<3>H (tricijum). Oni su takođe uobičajeno naznačeni kao D za deuterijum i T za tricijum. U prijavi, CD3označava metil grupu pri čemu svi od atoma vodonika su deuterijum. Izotopi ugljenika uključuju<13>C i<14>C. Izotopski-obeležena jedinjenja pronalaska mogu uopšteno biti pripremljena pomoću konvencionalnih tehnika koje su poznate obučenim poznavaocima oblasti ili pomoću procesa koji su analogni onima koji su ovde opisani, primenom pogodnog izotopski-obeleženog reagensa umesto neobeleženog reagensa koji se inače upotrebljava.

[0159] Kao što je ovde primenjeno, "farmaceutski prihvatljive soli" se odnose na derivate jedinjenja koja su stavljena na uvid javnosti pri čemu je osnovno jedinjenje modifikovano pravljenjem kisele ili bazne soli tog jedinjenja. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli uključuju, ali nisu na njih ograničeni, soli mineralnih ili organskih kiselina sa baznim grupama kao što su amini; i alkalne ili organske soli kiselih grupa kao što su karboksilne kiseline. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju konvencionalne netoksične soli ili kvaternerne amonijum soli formirane od osnovnog jedinjenja, na primer, od netoksičnih neorganskih ili organskih kiselina. Na primer, takve konvencionalne netoksične soli uključuju one izvedene iz neorganskih kiselina kao što su hlorovodonična, bromovodonična, sumporna, sulfamska, fosforna, i azotna; i soli pripremljene od organskih kiselina kao što su sirćetna, propionska, sukcinična, glikolna, stearinska, mlečna, jabučna, vinska, limunska, askorbinska, pamoinska, maleinska, hidroksimaleinska, fenilsirćetna, glutaminska, benzoeva, salicilna, sulfanilna, 2-acetoksibenzoeva, fumarna, toluensulfonska, metansulfonska, etan disulfonska, oksalna, i izetionska, i slično.

[0160] Farmaceutski prihvatljive soli predmetnog pronalaska mogu biti sintetisane iz osnovnog jedinjenja koje sadrži baznu ili kiselu grupu pomoću konvencionalnih hemijskih metoda. Uopšteno, takve soli mogu biti pripremljene reagovanjem slobodnih kiselih ili baznih oblika ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom pogodne baze ili kiseline u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u smeši ova dva; uopšteno, nevodeni medijum kao etar, etil acetat, etanol, izopropanol, ili acetonitril su poželjni. Liste pogodnih soli su pronađene u

4

Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22. izdanje, Allen, L. V. Jr., Ed.; Pharmaceutical Press, London, UK (2012).

[0161] Dodatno, jedinjenja sa formulom I mogu imati prolek oblike. Bilo koje jedinjenje koje će biti konvertovano in vivo da bi se obezbedio bioaktivni agens (tj., jedinjenje sa formulom I) je prolek. Razni oblici prolekova su dobro poznati u oblasti. Za primere ovakvih prolek derivata, videti:

a) Bundgaard, H., ed., Design of Prodrugs, Elsevier (1985), i Widder, K. et al., eds., Methods in Enzymology, 112:309-396, Academic Press (1985);

b) Bundgaard, H., poglavlje 5, "Design and Application of Prodrugs," A Textbook of Drug Design and Development, str. 113-191, Krosgaard-Larsen, P. et al., eds., Harwood Academic Publishers (1991);

c) Bundgaard, H., Adv. Drug Deliv. Rev., 8:1-38 (1992);

d) Bundgaard, H. et al., J. Pharm. Sci., 77:285 (1988);

e) Kakeya, N. et al., Chem. Pharm. Bull., 32:692 (1984); i

f) Rautio, J (Editor). Prodrugs and Targeted Delivery (Methods and Principles in Medicinal Chemistry), tom 47, Wiley-VCH, 2011.

[0162] Jedinjenja koja sadrže karboksi grupu mogu da formiraju fiziološki hidrolizujuće estre koji služe kao prolekovi tako što se hidrolizuju u telu da se dobiju jedinjenja sa formulom I sama po sebi. Takvi prolekovi se poželjno administriraju oralno jer se hidroliza u mnogim slučajevima javlja uglavnom pod uticajem digestivnih enzima. Parenteralna administracija može biti primenjena gde je estar sam po sebi aktivan, ili u onim slučajevima gde se hidroliza javlja u krvi. Primeri fiziološki hidrolizujućih estara jedinjenja sa formulom I uključuju C1-

6alkil, C1-6alkilbenzil, 4-metoksibenzil, indanil, ftalil, metoksimetil, C1-6alkanoiloksi-C1-6alkil (npr., acetoksimetil, pivaloiloksimetil ili propioniloksimetil), C1-6alkoksikarboniloksi-C1-

6alkil (npr., metoksikarbonil-oksimetil ili etoksikarboniloksimetil, gliciloksimetil, fenilgliciloksimetil, (5-metil-2-okso-1,3-dioksolen-4-il)-metil), i druge dobro poznate fiziološki hidrolizujuće estre koji se primenjuju, na primer, u oblastima penicilina i cefalosporina. Takvi estri mogu biti pripremljeni pomoću konvencionalnih tehnika poznatih u oblasti. Priprema prolekova je dobro poznata u oblasti i opisana je u, na primer, King, F.D., ed., Medicinal Chemistry: Principles and Practice, The Royal Society of Chemistry, Kembridž, UK (2. izdanje, reprodukovano, 2006); Testa, B. et al., Hidrolysis in Drug and Prodrug Metabolism. Chemistry, Biochemistry and Enzymology, VCHA and Wiley-VCH,

4

Cirih, Švajcarska (2003); Wermuth, C.G., ed., The Practice of Medicinal Chemistry, 3. izdanje, Academic Press, San Dijego, KA (2008).

[0163] Termin "solvat" označava fizičku povezanost jedinjenja ovog pronalaska sa jednim ili više molekula rastvarača, bilo organskog ili neorganskog. Ova fizička povezanost uključuje vodonično vezivanje. U određenim slučajevima solvat će biti sposoban za izolaciju, na primer kada je jedan ili više molekula rastvarača ugrađeno u kristalnu rešetku kristalne čvrste supstance. Molekuli rastvarača u solvatu mogu biti prisutni u pravilnom rasporedu i/ili neuređenom rasporedu. Solvat može sadržati bilo stehiometrijsku ili nestehiometrijsku količinu molekula rastvarača. "Solvat" obuhvata i fazu-rastvora i solvate koji se mogu izolovati. Solvati koji su uzeti kao primer uključuju, ali nisu na njih ograničeni, hidrate, etanolate, metanolate, i izopropanolate. Metode solvatacije su uopšteno poznate u oblasti.

[0164] Kao što je ovde primenjeno, termin "pacijent" se odnosi na organizme koji treba da se leče pomoću metoda predmetne objave. Takvi organizmi poželjno uključuju, ali nisu na njih ograničeni, sisare (npr., miševe, majmune, konje, goveda, svinje, pse, mačke, i slično), i najpoželjnije se odnosi na ljude.

[0165] Kao što je ovde primenjeno, termin "efikasna količina" označava količinu leka ili farmaceutskog agensa, tj., jedinjenja pronalaska, koja će izazvati biološki ili medicinski odgovor tkiva, sistema, životinje ili čoveka koji se traži, na primer, od strane istraživača ili kliničara. Pored toga, termin "terapijski efikasna količina" označava bilo koju količinu koja, kada se poredi sa odgovarajućim ispitanikom koji nije primio takvu količinu, dovodi do poboljšanog tretmana, lečenja, sprečavanja, ili ublažavanja bolesti, poremećaja, ili propratnog efekta, ili smanjenja brzine napredovanja bolesti ili poremećaja. Efikasna količina može biti administrirana u jednoj ili više administracija, primena ili doza i ne treba da bude ograničena na posebnu formulaciju ili put administracije. Termin takođe uključuje unutar svog obima količine efikasne za poboljšanje normalne fiziološke funkcije

[0166] Kao što je ovde primenjeno, termin "lečenje" uključuje bilo koji efekat, npr., ublažavanje, smanjenje, modulisanje, poboljšavanje ili uklanjanje, što dovodi do poboljšanja stanja, bolesti, poremećaja, i slično, ili ublažavanja njihovih simptoma.

[0167] Kao što je ovde primenjeno, termin "farmaceutska kompozicija" se odnosi na kombinaciju aktivnog agensa sa nosačem, inertnim ili aktivnim, koja čini kompoziciju posebno pogodnom za dijagnostičku ili terapijsku primenu in vivo ili ex vivo.

[0168] Primeri baza uključuju, ali nisu na njih ograničeni, hidrokside alkalnih metala (npr., natrijuma), zemno-alkalne metale (npr., magnezijum), hidrokside, amonijak, i jedinjenja sa formulom NW4<+>, pri čemu W je C1-4alkil, i slično.

[0169] Za terapijsku primenu, soli jedinjenja predmetnog pronalaska su razmatrane kao da su farmaceutski prihvatljive. Ipak, soli kiselina i baza koje nisu farmaceutski prihvatljive mogu takođe naći primenu, na primer, u pripremi ili prečišćavanju farmaceutski prihvatljivog jedinjenja.

METODE PRIPREME

[0170] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti pripremljena na mnogo načina koji su dobro poznati obučenom poznavaocu oblasti organske sinteze. Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti sintetisana primenom metoda koje su ispod opisane, zajedno sa sintetskim metodama koje su poznate u oblasti sintetske organske hemije, ili njihovim varijacijama kao što razumeju oni koji su obučeni u oblasti. Poželjne metode uključuju, ali nisu na njih ograničene, one koje su ispod opisane.

[0171] Jedinjenja ovog pronalaska mogu biti pripremljena primenom reakcija i tehnika koje su opisane u ovom delu. Reakcije su izvedene u rastvaračima pogodnim za reagense i materijale koji su upotrebljeni i pogodni su za transformacije koje su izvršene. Takođe, u opisu sintetskih metoda koje su ispod definisane, treba shvatiti da svi predloženi reakcioni uslovi, uključujući izbor rastvarača, reakcionu sredini, reakcionu temperaturu, trajanje eksperimenta i procedure obrade, su izabrani da budu standardni uslovi za tu reakciju, što bi trebalo da bude lako prepoznato od strane obučenog poznavaoca oblasti. Obučeni poznavalac oblasti organske sinteze razume da funkcionalnost prisutna na raznim delovima molekula mora biti kompatibilna sa predloženim reagensima i reakcijama. Takve restrikcije za supstituente koji su kompatibilni sa uslovima reakcije će biti lako razumljive obučenom poznavaocu oblasti i alternativne metode moraju onda biti primenjene. Ovo će nekada zahtevati odluku da se modifikuje redosleda koraka sinteze ili da se odabere jedna posebna shema procesa u odnosu na drugu kako bi se dobilo željeno jedinjenje pronalaska. Takođe će biti prepoznato da je druga glavna okolnost u planiranju bilo kog puta sinteze u ovoj oblasti razuman izbor zaštitne grupe koja je primenjena za zaštitu reaktivne funkcionalne grupe prisutne u jedinjenjima koja su opisana u ovom pronalasku. Merodavan prikaz koji opisuje mnoge alternative obučenom stručnjaku je Greene i Wuts (Protective Groups In Organic Synthesis, treće izdanje, Wiley and Sons, 1999).

1

[0172] Jedinjenja sa formulom (I) mogu biti pripremljena upućivanjem na metode koje su ilustrovane u sledećim Shemama. Kao što je u njima prikazano krajnji proizvod je jedinjenje koje ima istu strukturnu formulu kao Formula (I). Biće razumljivo da bilo koje jedinjenje sa formulom (I) može biti proizvedeno pomoću shema pogodnim odabirom reagenasa sa odgovarajućom supstitucijom. Rastvarači, temperatura, pritisci, i drugi reakcioni uslovi mogu lako biti odabrani od strane obučenog poznavaoca oblasti. Polazni materijali su komercijalno dostupni ili lako pripremljeni od strane obučenog poznavaoca oblasti. Komponente jedinjenja su kao što je ovde definisano ili na drugom mestu u specifikaciji.

Shema 1

[0173] Opšti putevi do jedinjenja koja su opisana u pronalasku su ilustrovani u Shemama 1-13, gde R<1>, R<2>, X, Y, Z i A supstituenti su definisani prethodno u tekstu ili funkcionalna grupa koja može biti konvertovana u željeni finalni supstituent. Supstituent Hal je halid. L je odlazeća grupa kao što je halid ili OH koja može biti lako konvertovana u odlazeću grupu kao što je triflat. Kao što je prikazano u Shemi 1, opšta procedura za pripremanje jedinjenja pronalaska uključuje započinjanje sa supstituisanim aminopiridinom 1. Kuplovanje 1 sa aromatičnim heterociklusom A (2, gde M je pogodan partner za kuplovanje, kao što su boronska kiselina, boronski estar ili stanan) primenom pogodnog katalizatora može dati funkcionalizovane aminopiridine 3. Na primer, 3 može nastati iz reakcije Suzuki kuplovanja između 5-bromo-2-hloropiridin-3-amina i heteroaromatične boronske kiseline primenom Pd(dppf)Cl2kao katalizatora. Naknadno kuplovanje da bi se dobio funkcionalizovan anilin 6 može biti postignuto primenom različitih uslova poznatih u literaturi. Na primer, aminopiridin 3 se može podvrgnuti kuplovanju koje je posredovano bakrom sa pogodnim supstituisanim arenom 4 (gde M je boronska kiselina, boronski estar ili stanan) da bi dao anilin 6. Alternativno, 6 može nastati iz reakcije Buchwald N-arilacije 3 sa aromatičnim

2

halidom 5 (gde Hal je halid). Zatvaranje prstena da bi se stvorio karbolin 7 može biti postignuto primenom Pd katalizatora u prisustvu baze, kao što je natrijum acetat. U finalnom koraku, karbolinski azot može biti supstituisan pod Mitsunobu uslovima primenom trifenilfosfina i diizopropil azodikarboksilata (DIAD) sa alkilirajućim agensom 8 (gde X je OH). Alternativno, funkcionalizovan karbolin 10 može biti stvoren iz reakcije zamene između karbolina 7 i alkilirajućeg agensa 9, gde L je odlazeća grupa kao što su halid, mesilat ili triflat, u prisustvu baze, kao što je kalijum karbonat. U slučajevima gde je 10 racemat, hiralno razdvajanje može obezbediti enantiomerno čiste proizvode. Dalja derivatizacija R<1>može obezbediti dodatna jedinjenja pronalaska. Na primer, kada je R<1>estar, dodatak Grignard-ovog reagensa ili alkil litijuma može stvoriti tercijerne alkohole. Isti R<1>estar može biti umesto toga hidrolizovan primenom, na primer, natrijum hidroksida da bi dao karboksilnu kiselinu (R<1>= CO2H) kao finalni supstituent.

[0174] Alternativna sinteza karbolina 7 i 10 počinje od nitropiridina 11 kao što je prikazano u Shemama 2 do 4. Suzuki reakcija između, na primer, 2,5-dibromo-3-nitropiridina i odgovarajuće supstituisanog arena (12, gde M je pogodan partner za kuplovanje, kao što su boronska kiselina ili boronski estar) može dati funkcionalizovan piridin 13. Reduktivna ciklizacija koja je posredovana fosfin reagensom, kao što je 1,2-bis(difenilfosfino)etan (dppe), može obezbediti karbolin 14. Spajanje 14 sa aromatičnim heterociklusom A (2, gde M je pogodan partner za kuplovanje, kao što su boronska kiselina, boronski estar ili stanan) primenom pogodnog katalizatora potom stvara karbolin 7 kao što je prikazano u Shemi 3.

[0175] Alternativno, karbolinski azot intermedijera 14 može biti prvi supstituisan pod Mitsunobu uslovima sa alkilirajućim agensom 8 (gde X je OH) ili sa alkilirajućim agensom 9, gde L je odlazeća grupa kao što je halid, mesilat ili triflat, u prisustvu baze, kao što je kalijum karbonat kao što je prethodno opisano u Shemi 1 da bi se dobio intermedijer 15. Potom kuplovanje 15 sa aromatičnim heterociklusom A (2, gde M je pogodan partner za kuplovanje, kao što je boronska kiselina, boronski estar ili stanan) primenom pogodnog katalizatora potom stvara finalni karbolin 10 kao što je prikazano u Shemi 4.

[0176] Alternativna sinteza karbolina 10 može biti postignuta kao što je navedeno u Shemi 5. Odlazeća grupa, L, od 15 (pripremljenog kao u Shemi 4) može biti konvertovana u pogodan partner za kuplovanje, M (poželjno boronski estar ili boronsku kiselinu) dejstvom paladijum katalizatora, dajući 16. Spajanje 16 sa aromatičnim heterociklusom A (17, gde L je pogodna odlazeća grupa, kao što su halogen ili triflat) primenom pogodnog katalizatora može dati karbo line 10.

[0177] Derivati hidroksimetil pirazola kao što su 20 mogu biti postignuti u skladu sa Shemom 6. Intermedijer 16 (gde je M pogodan partner za kuplovanje kao što su boronska kiselina ili boronski estar; pripremljni kao u Shemi 5) može biti kuplovan za odgovarajući zaštićeni triazol 18 dejstvom pogodnog katalizatora. Triazol 18 je dostupan u jednom koraku iz reakcije cikloadicije-posredovane bakrom, (azidometil)trimetilsilana sa zaštićenim propargil alkoholom. Sa intermedijera 19 može potom biti uklonjena zaštita primenom različitih uslova. Na primer, kad je PG terc-butildimetilsilil, tretiranje sa tetrabutilamonijum fluoridom može dati finalno jedinjenje 20. Dalja derivatizacija hidroksilne grupe (na primer: alkilacija, konverzija u odlazeću grupu i premeštanje, oksidacija u bilo aldehid bilo karboksilnu kiselinu i naknadna obrada) može obezbediti dodatna jedinjenja pronalaska primenom metoda koje će očigledne poznavaocu oblasti.

4

[0178] Alternativno, intermedijer 15 (pripremlje kao u Shemi 4) može biti direktno kuplovan sa pogodnim aromatičnim heterociklusom, 21, putem paladijumom posredovane C-H aktivacije da bi se dobilo jedinjenje 10. Ovo je ilustrovano u Shemi 7.

[0179] Alternativno, aromatični heterociklus 21 može biti deprotonovan sa jakom bazom kao što je n-BuLi i podvrgnut transmetalaciji u cink, kalaj ili bor da bi se dobila jedinjenja 2.

Jedinjenja 2 mogu potom biti kuplovana u Negishi, Stille, ili Suzuki kuplovanju za intermedijer 15 (pripremlje kao u Shemi 4) dejstvom pogodnog paladijum katalizatora da bi se dobila jedinjenja 10. Ovo je ilustrovano u Shemi 8.

[0180] Alternativna sinteza karbolina 14 može biti postignuta kao što je prikazano u Shemi 9. Anilin 22 može biti kuplovan za piridin 23, gde L i L' su dve odlazeće grupe kao što su halid ili triflat, primenom reakcije Buchwald N-arilacije da bi se dobio intermedijer 24. Na primer, 24 može nastati iz reakcije Buchwald N-arilacije između 3,5-dibromopiridina i pogodnog anilina. Oksidativno zatvaranje prstena, primenom prikladnog katalizatora kao što je Pd(OAc)2u kiselom medijumu kao što je trifluorosirćetna kiselina, može dati karboline 14.

Ovo je ilustrovano u Shemi 9.

[0181] Piridini 23 (gde L i L' su pogodne odlazeće grupe kao što su halidi ili triflati) mogu takođe biti kuplovani za aromatične heterocikluse 2 (gde M je pogodan partner za kuplovanje kao što su boronski estar, boronska kiselina, ili stanan) ili 21 pomoću metoda koje su analogne onima koje su ilustrovane u Shemama 1, 3, 4, 7, i 8. Piridini 25 mogu biti kuplovani za aniline 22, primenom reakcije Buchwald N-arilacije da bi dali intermedijer 26.

Oksidativno zatvaranje prstena, primenom prikladnog katalizatora kao što je Pd(OAc)2u kiselom medijumu kao što je trifluorosirćetna kiselina, može dati karboline 7. Ovo je ilustrovano u Shemi 10.

[0182] Alkoksi-supstituisani triazoli 32 mogu biti pripremljeni kao što je ilustrovano u Shemi 11. Aldehid 27 može biti konvertovan u acetal 29 tretiranjem sa alkoholom 28 (gde Alk je C1-C6alkil ili C3-C6cikloalkil po izboru supstituisan sa deuterijumom) u prisustvu kiseline ili dehidratacionog agensa kao što je CaCl2. Acetal 29 može biti konvertovan u alkoksisupstituisane alkine 30 tretiranjem sa jakom bazom kao što su litijum dietilamid ili natrijum amid. Jedinjenja 30 mogu biti konvertovana u triazole 32 preko bakrom-katalizovane 3+2 reakcije cikloadicije sa azidom 31. Triazoli 32 mogu biti direktno kuplovani za karboline kao što je ilustrovano u Shemi 7. U većini slučajeva, navedeno kuplovanje dovodi do gubitka trimetilsilil grupe. U slučajevima gde trimetilsilil grupa nije izgubljena, ona može biti uklonjena tretiranjem sa tetrabutilamonijum fluoridom.

[0183] Alkil-supstituisani triazoli 39 mogu biti pripremljeni kao što je ilustrovano u Shemi 12. Acetilen 33 može biti alkilovan sa 34 (gde Alk je C1-C6alkil ili C3-C6cikloalkil po izboru supstituisan sa deuterijumom i gde L je prikladna odlazeća grupa kao što su jodid, bromid, hlorid, ili sulfonat) dejstvom jake baze kao što je n-BuLi. Alkin 35 može biti konvertovan u triazole 36 preko bakrom-katalizovane 3+2 reakcije cikloadicije sa 31. Triazoli 36 mogu biti direktno kuplovani za karboline kao što je ilustrovano u Shemi 7. Alternativno, trimetilsilil grupa od 36 može biti uklonjena direktno dejstvom tetrabutil amonijum fluorida da bi se dobio N-metil-triazol 37. Deprotonovanje 37 sa jakom bazom kao što je n-BuLi, što je praćeno reakcijom sa prikladnim elektrofilom 38 (gde L je odlazeća grupa kao što je halid ili alkoksid i M je prikladna grupa za olakšavanje metalom-posredovanih kuplovanja kao što je tributilkalaj ili boronski estar; npr. M-L = Bu3SnCl ili B(OMe)3) može dati triazole 39 koji odmah mogu biti kuplovani kao što je ilustrovano u Shemama 1, 3, 4, 8, i 10.

[0184] Mogu se razlikovati supstituenti triazola kao što je prikazano u Shemi 13. Odlazeća grupa od 34 (gde Alk je C1-C6alkil ili C3-C6cikloalkil po izboru supstituisan sa deuterijumom i gde L je prikladna odlazeća grupa kao što su jodid, bromid, hlorid, ili sulfonat) može biti istisnuta tretmanom sa natrijum azidom da bi se dobilo 40. Alkini 41 ili 42 mogu biti kuplovani za azide 40 da bi se dobili triazoli 43 preko bakrom-katalizovane 3+2 reakcije cikloadicije. Triazoli 43 mogu biti direktno kuplovani za karboline kao što je ilustrovano u Shemi 7. Alternativno, deprotonovanje 43 sa jakom bazom kao što je n-BuLi, praćeno reakcijom sa prikladnim elektrofilom 38 (gde L je odlazeća grupa kao što su halid ili alkoksid i M je prikladna grupa za olakšavanje metalom posredovanih kuplovanja kao što je tributiltin ili boronski estar; npr. M-L = Bu3SnCl ili B(OMe)3) može dati triazole 44 koji mogu lako biti kuplovani kao što je ilustrovano u Shemama 1, 3, 4, 8, i 10.

PRIMERI

[0185] Pronalazak je dalje definisan u sledećim Primerima. Treba razumeti da su Primeri dati samo kao ilustracija. Iz diskusije iznad u tekstu i Primera, obučeni poznavalac oblasti može konstatovati suštinske karakteristike pronalaska, i bez udaljavanja od smisla i njegovog obima, može činiti razne promene i modifikacije da bi prilagodio pronalazak raznim primenama i uslovima.

SKRAĆENICE

[0186]

t

[0187] Sledeći HPLC uslovi mogu biti primenjeni gde je naznačeno:

Analitička HPLC Metoda 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.05% TFA; Mobilna faza B: Acetonitril 0.05% TFA; Gradijent: 2-98% B tokom 1 min, potom 0.5-min zadržavanje na 98% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 254 nm.

Analitička HPLC Metoda 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-100% B tokom 3 min, potom 0.7-min zadržavanje na 100% B; Protok: 1.11 mL/min; Detekcija: UV na 254 nm.

LC/MS Metoda 1: Kolona: Phenomenex-Luna 2.0 X 30 mm, 3 um čestice; Mobilna faza A: 10/90 metanol:voda, 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90/10 metanol:voda, 0.1% TFA; Temperatura 40 °C; Gradijent 0% -100% B tokom 2 min; Protok 1 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

LC/MS Metoda 2: Kolona: Waters Acquity SDS; Mobilna faza A: 100% Voda, 0.1% TFA; Mobilna faza B: 100% Acetonitril, 0.1% TFA; Temperatura 50 °C; Gradijent 2% -98 % B tokom 2.2 min; Protok 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

LC/MS Metoda 3: Waters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 min, potom 0.5-min zadržavanje na 100% B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

LC/MS Metoda 4: Waters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 metanol:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%-100% B tokom 3 min, potom 0.5-min zadržavanje na 100% B; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

Preparativna HPLC Metoda 1: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Gradijent: 30-70% B tokom 20 min, potom 5-minutno zadržavanje na 100% B; Protok: 20 mL/min.

Preparativna HPLC Metoda 2: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 metanol: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Gradijent: 35-75% B tokom 20 min, potom 5-minutno zadržavanje na 100% B; Protok: 20 mL/min.

Preparativna HPLC Metoda 3: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: 15-55% B tokom 20 min, potom 5-minutno zadržavanje na 100% B; Protok: 20 mL/min.

Referentni primeri 1 & 2

1

2-[3-(Dimetil-1,2-oksazol-4-il)-5-[oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol

[0188]

Korak 1: 2-Hloro-5-(3,5-dimetilizoksazol-4-il)piridin-3-amin

[0189] U posudu od 500 mL sa okruglim dnom koja sadrži 5-bromo-2-hloropiridin-3-amin (Matrix, 4.0 g, 19.3 mmol) i (3,5-dimetilizoksazol-4-il)boronsku kiselinu (AOBChem, 3.26 g, 23.1 mmol) u THF-u (150 mL) je dodat trikalijum fosfat (2M aq., 28.9 mL, 57.8 mmol) da bi se dobila žuta suspenzija. Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(1.58 g, 1.93 mmol) je zatim dodat i N2je u mehurićima uvođen u smešu tokom 4 min. Dobijena reakciona smeša je zagrevana na 80 °C tokom 1 h, koncentrovana i potom razblažena sa 10% LiCl rastvorom i ekstrahovana sa CH2Cl2-om. Organski sloj je koncentrovan i filtriran kroz Celite®. Matični rastvor je prečišćen primenom ISCO silika gel hromatografije (kolona od 220 g, gradijent od 0% do 50% EtOAc/CH2Cl2). Trituracija sa hladnim Et2O-om je dala jedinjenje iz naslova (3.14 g, 73%) kao bledo narandžastu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.71 (d, J=2.1 Hz, 1H), 6.92 (d, J=2.1 Hz, 1H), 4.20 (br. s., 2H), 2.42 (s, 3H), 2.27 (s, 3H); LCMS (M+H) = 224.1. HPLC RT = 1.39 min (Kolona: Chromolith ODS S54.6 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:90 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 4 min; Protok: 4 mL/min).

Korak 2: Metil 3-((2-hloro-5-(3,5-dimetilizoksazol-4-il)piridin-3-il)amino)benzoat [0190] U posudu od 250 mL sa okruglim dnom koja sadrži 2-hloro-5-(3,5-dimetilizoksazol-4-il)piridin-3-amin (2.0 g, 8.9 mmol), (3-(metoksikarbonil)fenil)boronsku kiselinu (Aldrich, 3.22 g, 17.9 mmol), Cu(OAc)2(2.43 g, 13.4 mmol) i 4Å molekularna sita (7.0 g) u prahu, je dodat CHCl3(50 mL) i piridin (1.45 mL, 17.9 mL). Vazduh je zamenjen sa O2, i reakcija je mešana pod O2balonom tokom 6 h. Dodatni (3-(metoksikarbonil)fenil)boronska kiselina (3.22 g, 17.9 mmol), piridin (1.45 mL, 17.9 mmol) i 4Å molekularna sita (1.7 g) su dodati. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Dodatni (3-(metoksikarbonil)fenil)boronska kiselina (3.22 g, 17.9 mmol), piridin (1.45 mL, 17.9 mmol) i Cu(OAc)2(400 mg) su dodati u reakciju. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 7 h,

2

reakciona smeša je filtrirana kroz Celite® ispirajući sa CHCl3-om. Filtrat je razblažen sa vodom i amonijum hidroksid (18.6 mL, 143 mmol) je dodat. Vodeni sloj je ekstrahovan sa CHCl3-om i kombinovani organski slojevi su oprani sa 10% LiCl-om. Organski sloj je koncentrovan i prečišćen pomoću silika gel hromatografije (Kolona od 220 g, gradijent od 0% do 50%EtOAc/CH2Cl2). Frakcije su koncentrovane u vakuumu dok se ne formira beli talog koji je prikupljen putem filtracije i ispran sa EtOAc-om da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.33 g, 57%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.94 (t, J=1.8 Hz, 1H), 7.85 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.82 (dt, J=7.7, 1.3 Hz, 1H), 7.48 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.40 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.36 (ddd, J=8.0, 2.3, 1.0 Hz, 1H), 6.32 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.29 (s, 3H); LCMS (M+H) = 358.2; HPLC RT = 2.70 min (Kolona: Chromolith ODS S54.6 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:90 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 4 min; Protok: 4 mL/min).

Korak 3: Metil 3-(3,5-dimetilizoksazol-4-il)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat [0191] U bočicu od 40 mL koja sadrži metil 3-((2-hloro-5-(3,5-dimetilizoksazol-4-il)piridin-3-il)amino)benzoat (515 mg, 1.44 mmol) i natrijum acetat trihidrat (480 mg, 3.52 mmol) u DMA-u (5.0 mL) je dodat bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorid (81 mg, 0.12 mmol). N2je u mehurićima propušten kroz reakcionu smešu tokom 1 min. Bočica je zatvorena i zagrevana na 180 °C tokom 15-30 min. Reakciona smeša je potom koncentrovana i prečišćena direktno primenom ISCO silika gel hromatografije (Kolona od 40 g, gradijent od 0% do 100% EtOAc/CH2Cl2). Dobijeno narandžasto ulje je rastvoreno u EtOAc-u (7 mL) i mešano na sobnoj temperaturi tokom noći. Dobijen žuti talog je prikupljen putem filtracije i opran sa EtOAc-om. Matični rastvor je koncentrovan i ponovo prečišćen primenom ISCO silika gel hromatografije (Kolona od 40 g, gradijent od 0% do 50% EtOAc/CH2Cl2). Nakon trituracije sa hladnim EtOAc-om, čvrste supstance su kombinovane da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (301 mg, 65%). HPLC RT = 2.01 min (Kolona: Chromolith ODS S54.6 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:90 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 4 min; Protok: 4 mL/min).

Korak 4: Metil 3-(3,5-dimetilizoksazol-4-il)-5-(fenil(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat

[0192] U bočicu od 5 mL koja sadrži metil 3-(3,5-dimetilizoksazol-4-il)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat (87 mg, 0.27 mmol) i fenil(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanol (104 mg, 0.54 mmol) [Orjales, A. et al. J. Med. Chem. 2003, 46, 5512-5532] u THF-u (2.0 mL) je dodat Ph3P (141 mg, 0.54 mmol) i DIAD (0.11 mL, 0.54 mmol). Dobijena suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći i zatim koncentrovana. Ostatak je prečišćen primenom ISCO silika gel hromatografije (Kolona od 40 g, Gradijent od 0% do 50% EtOAc/CH2Cl2) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (139 mg) kao nečista smeša koja je preneta u naredni korak bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (M+H) = 496.2; HPLC RT = 3.06 min (Kolona: Chromolith ODS S54.6 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:90 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 4 min; Protok: 4 mL/min).

Korak 5: 2-[3-(Dimetil-1,2-oksazol-4-il)-5-[oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol

[0193] Posuda od 250 mL sa okruglim dnom koja sadrži metil 3-(3,5-dimetilizoksazol-4-il)-5-(fenil(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat (1.58 g, 3.19 mmol) u CH2Cl2-u (50 mL) je ohlađena u ledenom/MeOH kupatilu. MeMgBr, (3M u Et2O-u, 17.0 mL, 51.0 mmol) je dodavan polako tokom 2 min. Dobijena suspenzija je mešana tokom 2.5 h i zatim kvenčovana pažljivo sa zas. NH4Cl-om. Led je dodat u reakcionu smešu praćeno 10% LiCl rastvorom. Vodeni sloj je ekstrahovan sa CH2Cl2-om (2x). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan da se dobije racemski 2-[3-(dimetil-1,2-oksazol-4-il)-5-[oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol, koji je razdvojen primenom hiralne prep SFC (Kolona: Chiral OD-H 25 x 3 cm, 5 µm; Mobilna faza: 70/30 CO2/MeOH; Protok: 85 mL/min). Pik koji se brže eluira je koncentrovan na malu zapreminu. Voda je dodata da bi se formirao beli talog koji je prikupljen putem filtracije, ispirajući sa vodom, da bi se dobila bela čvrsta supstanca koja je označena kao Enantiomer A (0.59 g, 36%). Pik koji se sporije eluira je tretiran na identični način i naznačen kao Enantiomer B (0.51 g, 31%). Enantiomer A:<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.40 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.33 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.53 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.46 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.42 (dd, J=8.2, 1.4 Hz, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 2H), 7.30 - 7.28 (m, 1H), 5.56 (d, J=10.5 Hz, 1H), 4.06 (d, J=8.9 Hz, 1H), 3.89 - 3.83 (m, 1H), 3.55 (td, J=11.9, 2.1 Hz, 1H), 3.35 (td, J=11.9, 2.1 Hz, 1H), 3.10 (q, J=10.8 Hz, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.03 (d, J=14.2 Hz, 1H), 1.89 (s, 1H), 1.74 (s, 6H), 1.68 - 1.59 (m, 1H), 1.46 - 1.36 (m, 1H), 1.12 (d, J=12.2 Hz, 1H); LCMS (M+H) = 496.4; HPLC RT = 2.46 min (Kolona: Chromolith ODS S54.6 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:90 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 4 min; Protok: 4 mL/min); SFC RT = 5.36 min (Kolona: Chiralcel OD-H 250 x 4.6 mm, 5 µm; Mobilna faza: 70/30 CO2/MeOH; Protok:

4

2 mL/min). Enantiomer B:<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.40 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.33 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.53 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.46 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.42 (dd, J=8.2, 1.4 Hz, 1H), 7.36 - 7.31 (m, 2H), 7.30 - 7.28 (m, 1H), 5.56 (d, J=10.7 Hz, 1H), 4.06 (dd, J=11.7, 2.5 Hz, 1H), 3.86 (dd, J=11.5, 2.8 Hz, 1H), 3.55 (td, J=11.9, 2.1 Hz, 1H), 3.35 (td, J=11.9, 2.0 Hz, 1H), 3.15 - 3.05 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.03 (d, J=13.6 Hz, 1H), 1.90 (s, 1H), 1.74 (s, 6H), 1.68 - 1.58 (m, 1H), 1.46 - 1.36 (m, 1H), 1.12 (d, J=12.4 Hz, 1H); LCMS (M+H) = 496.4; HPLC RT = 2.46 min (Kolona: Chromolith ODS S54.6 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:90 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 4 min; Protok: 4 mL/min); SFC RT = 14.95 min (Kolona: Chiralcel OD-H 250 x 4.6 mm, 5 µm; Mobilna faza: 70/30 CO2/MeOH; Protok: 2 mL/min).

Referentni primeri 3&4

[0194]

Korak 1: (4-Fluorofenil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanol

[0195] U bočicu od 40 mL koja sadrži magnezijum (0.39 g, 16.1 mmol) u THF-u (15 mL) je polako dodat 4-bromotetrahidro-2H-piran (PharmaBlock, 1.8 mL, 16.1 mmol) hladeći u vodenom kupatilu ako je potrebno. Dobijena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1.5 h i zatim ohlađena u vodenom kupatilu. 4-Fluorobenzaldehid (Aldrich, 1.2 mL, 10.7 mmol) je dodat polako. Dobijena narandžasta reakciona smeša je uklonjena iz vodenog kupatila i kvenčovana sa zas. NH4Cl-om nakon 10 min.10% LiCl rastvor je dodat i smeša je ekstrahovana sa Et2O-om (2x). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen primenom ISCO silika gel hromatografije (Kolona od 80 g, Gradijent od 0% do 50% EtOAc/heksani) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.12 g, 33%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.31 - 7.27 (m, 2H), 7.08 - 7.02 (m, 2H), 4.37 (dd, J=7.7, 2.4 Hz, 1H), 4.06 - 3.99 (m, 1H), 3.94 - 3.87 (m, 1H), 3.37 (td, J=11.9, 2.2 Hz, 1H), 3.29 (td, J=11.8, 2.3 Hz, 1H), 1.94 - 1.87 (m, 2H), 1.81 (tdt, J=11.6, 7.7, 3.8 Hz, 1H), 1.45 (qd, J=12.3, 4.7 Hz, 1H), 1.36 - 1.27 (m, 1H), 1.16 (ddq, J=13.2, 3.9, 2.0 Hz, 1H); LCMS (M+H-H2O) = 193.1; HPLC RT = 1.65 min (Kolona: Chromolith ODS S5 4.6 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:90 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 4 min; Protok: 4 mL/min). Korak 2: 2-[3-(Dimetil-1,2-oksazol-4-il)-5-[oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol

[0196] Prateći procedure analogne onima koje su opisane u Koracima 4 i 5 referentnog primera 1, metil 3-(3,5-dimetilizoksazol-4-il)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat (100 mg, 0.31 mmol) i (4-fluorofenil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanol (131 mg, 0.62 mmol) su konvertovani u racemski 2-[3-(dimetil-1,2-oksazol-4-il)-5-[oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol, koji je razdvojen hiralnom prep SFC da se dobiju Enantiomer A (18 mg, 11%) i Enantiomer B (22 mg, 12%). Enantiomer A:<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.41 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.33 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.50 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.46 - 7.37 (m, 3H), 7.06 - 6.99 (m, 2H), 5.53 (d, J=10.5 Hz, 1H), 4.07 (dd, J=11.7, 2.5 Hz, 1H), 3.87 (dd, J=11.8, 3.0 Hz, 1H), 3.54 (td, J=11.9, 2.1 Hz, 1H), 3.34 (td, J=11.9, 2.1 Hz, 1H), 3.11 - 3.01 (m, 1H), 2.41 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.98 (d, J=13.4 Hz, 1H), 1.89 (s, 1H), 1.73 (s, 6H), 1.66 - 1.59 (m, 1H), 1.46 - 1.36 (m, 1H), 1.13 (d, J=13.3 Hz, 1H); LCMS (M+H) = 514.4; HPLC RT = 2.55 min (Kolona: Chromolith ODS S5 4.6 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:90 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 4 min; Protok: 4 mL/min); SFC RT = 6.56 min (Kolona: Chiralcel OD-H 250 x 4.6 mm, 5 µm; Mobilna faza: 75/25 CO2/MeOH; Protok: 2 mL/min). Enantiomer B:<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.41 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.33 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.50 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.46 - 7.37 (m, 3H), 7.06 - 6.99 (m, 2H), 5.53 (d, J=10.5 Hz, 1H), 4.07 (dd, J=11.7, 2.5 Hz, 1H), 3.87 (dd, J=11.8, 3.0 Hz, 1H), 3.54 (td, J=11.9, 2.1 Hz, 1H), 3.34 (td, J=11.9, 2.1 Hz, 1H), 3.11 - 3.01 (m, 1H), 2.41 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.98 (d, J=13.4 Hz, 1H), 1.89 (s, 1H), 1.73 (s, 6H), 1.66 - 1.59 (m, 1H), 1.46 - 1.36 (m, 1H), 1.13 (d, J=13.3 Hz, 1H); LCMS (M+H) = 514.4; HPLC RT = 2.55 min (Kolona: Chromolith ODS S5 4.6 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:90 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 4 min; Protok: 4 mL/min); SFC RT = 8.58 min (Kolona: Chiralcel OD-H 250 x 4.6 mm, 5 µm; Mobilna faza: 75/25 CO2/MeOH; Protok: 2 mL/min); [α]D<20>= 89.91, (c = 0.14, CHCl3).

Referentni Primeri 5 & 6

2-{5-[(4-Fluorofenil)(oksan-4-il)metil]-3-(5-metil-1,2-oksazol-4-il)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol

[0197]

Korak 1: Metil 4-(5-bromo-3-nitropiridin-2-il)benzoat

[0198] U smešu 2,5-dibromo-3-nitropiridina (2.00 g, 7.09 mmol), (4-(metoksikarbonil)fenil)boronske kiseline (1.28 g, 7.09 mmol) Pd(dppf)Cl2(0.36 g, 0.50 mmol) u THF-u (30 mL) je dodat trikalijum fosfat (3M u vodi) (7.09 mL, 21.3 mmol). Reakciona smeša je pročišćena sa N2(3x) i zatim mešana na 80 °C tokom 3 h. Vodeni sloj je izdvojen. Organski sloj osušen sa Na2SO4-om, filtriran kroz mali čep Celite® ispiranjem sa EtOAc-om i koncentrovan. Sirovi ostatak je prečišćen primenom ISCO silika gel hromatografije (Kolona od 120 g, Gradijent od 0% do 50% EtOAc/CH2Cl2) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.64 g, 69%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.15 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.88 (d, J=2.2 Hz, 1H), 8.17 - 8.02 (m, 2H), 7.78 - 7.63 (m, 2H), 3.90 (s, 3H).

Korak 2: Metil 3-bromo-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat

[0199] Smeša metil 4-(5-bromo-3-nitropiridin-2-il)benzoata (1.64 g, 4.86 mmol) i 1,2-bis(difenilfosfino)etana (2.42 g, 6.08 mmol) u 1,2-dihlorobenzenu (30 mL) je pročišćena sa N2(3x) i zatim zagrejana do refluksa. Nakon 4 h, smeša je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana. Ostatak je suspendovan u CHCl3-u, sonikovan i zatim filtriran. Čvrsta supstanca je oprana sa CHCl3-om i osušena da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.84 g, 57%) kao bež čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.85 (s, 1H), 8.60 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.29 (dd, J=5.1, 3.1 Hz, 2H), 8.22 (s, 1H), 7.88 (dd, J=8.3, 1.4 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H); LCMS (M+H) = 305.1.

Korak 3: Metil 3-bromo-5-((4-fluorofenil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat

[0200] Prateći proceduru analognu onoj koja je opisana u Koraku 4 referentni primer 1, metil 3-bromo-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat (840 mg, 2.75 mmol) i (4-fluorofenil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanol (Korak 1 referentnog primera 3, 868 mg, 4.13 mmol) su konvertovani u jedinjenje iz naslova kao racemat (1.26 g, 92%), koje je primenjeno bez dodatnog prečišćavanja u narednom koraku. LCMS (M+H) = 497.2.

Korak 4: Metil 5-((4-fluorofenil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat

[0201] U smešu metil 3-bromo-5-((4-fluorofenil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilata (500 mg, 1.01 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolana) (306 mg, 1.21 mmol), Pd(dppf)Cl2(37 mg, 0.050 mmol) i KOAc (197 mg, 2.01 mmol) u bočici sa poklopcem na zavrtanje je dodat dioksan (10 mL). Bočica je opremljena sa teflonskim septum poklopcem i pročišćena sa N2(3x). Reakciona smeša je zagrevana na 90 °C tokom 16 h, potom ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je prečišćen primenom ISCO silika gel hromatografije (Kolona od 40 g, Gradijent od 0% do 90% EtOAc/CH2Cl2) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (254 mg, 46%). LCMS (M+H) = 463.4.

Korak 5: Metil 5-((4-fluorofenil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-3-(5-metilizoksazol-4-il)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat

[0202] U bočicu sa navojem je dodat metil 5-((4-fluorofenil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat (125 mg, 0.23 mmol), 4-jodo-5-metilizoksazol (48 mg, 0.23 mmol), Pd(dppf)Cl2(8 mg, 0.011 mmol) i fosforna kiselina, kalijum so (0.23 mL, 0.69 mmol) praćeno THF-om (1.5 mL). Dobijena suspenzija je zagrevana na 80 °C tokom 45 min, potom ohlađena na sobnu temperaturu, razblažena sa EtOAc-om i kvenčovana sa vodom. Organski sloj je opran sa vodom, zas. NaCl-om, osušen i koncentrovan u vakuumu. Sirov proizvod je prečišćen primenom ISCO silika gel hromatografije (Kolona od 24 g, Gradijent od 0% do 100% EtOAc/CH2Cl2) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (83 mg, 72%). LCMS (M+H) = 500.1; HPLC RT = 3.68 min (Kolona: Waters Sunfire C18 5 µm, 2.1 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:90 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Gradijent 0-100% B tokom 4 min; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm).

Korak 6: 2-{5-[(4-Fluorofenil)(oksan-4-il)metil]-3-(5-metil-1,2-oksazol-4-il)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan-2-ol

[0203] Prateći proceduru analognu onoj koja je opisana u Koraku 5 referentni primer 1, metil 5-((4-fluorofenil)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-3-(5-metilizoksazol-4-il)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat (105 mg, 0.21 mmol) je konvertovan u racemski 2-{5-[(4-fluorofenil)(oksan-4-il)metil]-3-(5-metil-1,2-oksazol-4-il)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il}propan2-ol, (60 mg, 57%) koji je razdvojen pomoću hiralne prep SFC da se dobiju Enantiomeri A i B. Enantiomer A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.75 (s, 1H), 8.52 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.34 -8.13 (m, 2H), 8.05 (s, 1H), 7.79 - 7.62 (m, 2H), 7.46 (dd, J=8.4, 1.3 Hz, 1H), 7.10 (t, J=8.8 Hz, 2H), 5.76 (d, J=11.0 Hz, 1H), 4.19 - 3.75 (m, 3H), 3.68 - 3.54 (m, 1H), 3.50 - 3.35 (m, 2H), 2.64 (s, 2H), 2.08 - 1.86 (m, 1H), 1.86 - 1.74 (m, 1H), 1.74 - 1.53 (m, 6H), 1.53 - 0.99 (m, 4H); LCMS (M+H) = 500.5; SFC RT = 7.68 (Kolona: Chiralcel OD-H 250 x 4.6 mm, 5 µm; Mobilna faza: 75/25 CO2/MeOH; Protok: 2 mL/min); [α]D<20>= -79.08 (c = 0.11, MeOH). Enantiomer B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.75 (s, 1H), 8.52 (d, J=1.5 Hz, 1H), 8.26 (s, 2H), 8.12 - 7.90 (m, 1H), 7.81 - 7.60 (m, 2H), 7.58 - 7.34 (m, 1H), 7.10 (s, 2H), 5.88 - 5.64 (m, 1H), 4.15 - 3.74 (m, 3H), 3.72 - 3.55 (m, 1H), 3.37 (s, 2H), 2.64 (s, 2H), 2.10 - 1.90 (m, 1H), 1.68 (d, J=3.7 Hz, 6H), 1.51 - 1.26 (m, 2H), 1.25 - 1.01 (m, 2H); LCMS (M+H) = 500.5; SFC RT = 10.51 (Kolona: Chiralcel OD-H 250 x 4.6 mm, 5 µm; Mobilna faza: 75/25 CO2/MeOH; Protok: 2 mL/min).

Primer 1 & Referentni primer 7

2-[3-(Dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5-[oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol

[0204]

Korak 1: 2-Hloro-5-(1,4-dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)piridin-3-amin

[0205] U posudu od 100 mL sa okruglim dnom koja sadrži 5-bromo-2-hloropiridin-3-amin (2.90 g, 14.0 mmol), 1,4-dimetil-5-(tributilstanil)-1H-1,2,3-triazol (2.70 g, 6.99 mmol) [Seefeld, M.A. et al. PCT Int. Appl., 2008, WO2008098104] i Pd(PPh3)4(0.61 g, 0.52 mmol) u DMF-u (20 mL) je dodat bakarni jodid (0.20 g, 1.05 mmol) i Et3N (1.9 mL, 14.0 mmol). Reakciona smeša je pročišćena sa N2tokom 3 min i zatim zagrevana na 100 °C tokom 1 h. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je razblažena sa 10% LiCl rastvorom i ekstrahovana sa EtOAc-om (2x). Kombinovane organske supstance su oprane sa zas. NaClom, osušene preko MgSO4, filtrirane i koncentrovane. CH2Cl2je dodat, i dobijeni talog je prikupljen filtracijom. Matični rastvor je koncentrovan i prečišćen primenom ISCO silika gel hromatografije (Kolona od 40 g, Gradijent od 0% do 100% EtOAc/CH2Cl2). Dobijena čvrsta supstanca je kombinovana sa talogom i triturisana sa hladnim EtOAc-om da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (740 mg, 47%) kao svetlo smeđa čvrsta supstanca. LCMS (M+H) = 224.1; HPLC RT = 1.03 min (Kolona: Chromolith ODS S54.6 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:90 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 4 min; Protok: 4 mL/min).

Korak 2: Metil 3-((2-hloro-5-(1,4-dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)piridin-3-il)amino)benzoat

[0206] Prateći proceduru analognu onoj koja je opisana u Koraku 2 referentnog Primera 1,2-hloro-5-(1,4-dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)piridin-3-amin (740 mg, 3.31 mmol) je konvertovan u jedinjenje iz naslova (644 mg, 54%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.94 (t, J=1.9 Hz, 1H), 7.88 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.83 (dt, J=7.8, 1.3 Hz, 1H), 7.49 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.40 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.36 (ddd, J=8.0, 2.3, 0.9 Hz, 1H), 6.38 (s, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 2.34 (s, 3H); LCMS (M+H) = 358.2; HPLC RT = 2.34 min (Kolona: Chromolith ODS S5 4.6 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:900 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 4 min; Protok: 4 mL/min).

Korak 3: Metil 3-(1,4-dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat [0207] Prateći proceduru analognu onoj koja je opisana u Koraku 3 referentnog Primera 1, metil 3-((2-hloro-5-(1,4-dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)piridin-3-il)amino)benzoat (2.82 g, 7.88 mmol) je konvertovan u jedinjenje iz naslova (1.58 g, 62%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.93 (s, 1H), 8.62 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.36 (dd, J=8.2, 0.6 Hz, 1H), 8.29 - 8.22 (m, 1H), 8.16 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.91 (dd, J=8.2, 1.4 Hz, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.94 (s, 3H), 2.31 (s, 3H); LCMS (M+H) = 322.3; HPLC RT = 1.98 min (Kolona: Chromolith ODS S54.6 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:90 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 4 min; Protok: 4 mL/min). Alternativna sinteza metil 3-(1,4-dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilata

[0208] Smeša metil 3-bromo-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilata (Korak 2 Referentnog Primera 5, 3.000 g, 9.83 mmol), 1,4-dimetil-5-(tributilstanil)-1H-1,2,3-triazola (4.18 g, 10.82 mmol), bakar (I) jodida (0.281 g, 1.475 mmol), Pd(Ph3P)4(0.738 g, 0.639 mmol) i trietilamina (2.74 mL, 19.66 mmol) u DMF-u (25 mL) je pročišćena pod strujom azota i zatim zagrevana u bloku za zagrevanje na 95 °C tokom 2 sata. Nakon hlađenja do sobne temperature reakciona smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana u etil acetatu. Oprana sa vodom, NH4OH-om, slanim rastvorom i koncentrovana. Ostatak je triturisan sa 100 mL CHCl3, izfiltrirana čvrsta supstanca i isprana sa CHCl3-om da se dobije 1.6 g proizvoda. Filtrat je nanet na ISCO kolonu (Kolona od 330 g, A: DCM; B: 10%MeOH/DCM, 0 do 100% Gradijent) i podvrgnut hromatografiji da se dobije dodatnih 0.7 g. metil 3-(1,4-dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilata (2.30 g ukupno, 7.16 mmol, 72.8 % prinos).

Korak 4: Metil 3-(1,4-dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5-(fenil(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat

[0209] Prateći proceduru analognu onoj koja je opisana u Koraku 4 Referentnog Primera 1, metil 3-(1,4-dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat (80 mg, 0.25 mmol) je konvertovan u jedinjenje iz naslova (65 mg, 53%) Nakon prečišćavanja pomoću prep HPLC (Kolona: Phen Luna C18, 30 x 100 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 10-100% B tokom 14 min, potom 2-min zadržavanje na 100% B; Protok: 40 mL/min).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.51 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.47 (d, J=8.1 Hz, 1H), 8.10 (dd, J=8.1, 1.1 Hz, 1H), 7.63 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.46 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.40 - 7.30 (m, 3H), 5.62 (d, J=10.6 Hz, 1H), 4.11 - 4.03 (m, 4H), 3.92 - 3.83 (m, 4H), 3.56 (td, J=11.9, 1.8 Hz, 1H), 3.35 (td, J=11.9, 1.9 Hz, 1H), 3.18 - 3.05 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.04 (d, J=13.0 Hz, 1H), 1.71 - 1.58 (m, 1H), 1.50 - 1.37 (m, 1H), 1.09 (d, J=12.8 Hz, 1H); LCMS (M+H) = 496.3; HPLC RT = 2.93 min (Kolona: Chromolith ODS S54.6 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:90 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 4 min; Protok: 4 mL/min).

Korak 5: 2-[3-(Dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5-[oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol,

[0210] Prateći proceduru analognu onoj koja je opisana u Koraku 5 Referentnog Primera 1, metil 3-(1,4-dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5-(fenil(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat (65 mg, 0.13 mmol) je konvertovan u racemski 2-[3-(dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5-[oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol, koji je razdvojen hiralnom prep SFC (Kolona: Chiralpak IB 25 x 2 cm, 5 µm; Mobilna faza: 70/30 CO2/MeOH; Protok: 50 mL/min);da se dobiju Enantiomer A (24 mg, 36%) i Enantiomer B (26 mg, 38%). Enantiomer A:<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.44 (d, J=1.8

1

Hz, 1H), 8.36 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.56 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.47 - 7.41 (m, 3H), 7.37 - 7.32 (m, 2H), 7.31 - 7.28 (m, 1H), 5.59 (d, J=10.5 Hz, 1H), 4.06 (dd, J=11.8, 2.8 Hz, 1H), 3.90 - 3.84 (m, 4H), 3.55 (td, J=11.9, 2.0 Hz, 1H), 3.35 (td, J=11.9, 2.0 Hz, 1H), 3.15 -3.04 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.04 (d, J=13.6 Hz, 1H), 1.92 (s, 1H), 1.75 (s, 6H), 1.69 - 1.58 (m, 1H), 1.47 - 1.38 (m, 1H), 1.12 (d, J=13.4 Hz, 1H); LCMS (M+H) = 496.4; HPLC RT = 2.46 min (Kolona: Chromolith ODS S54.6 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:90 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 4 min; Protok: 4 mL/min). SFC RT = 5.50 min (Kolona: Chiralpak IB 250 x 4.6 mm, 5 µm; Mobilna faza: 70/30 CO2/MeOH; Protok: 2 mL/min); SFC RT = 1.06 min (Kolona: Chiralcel OD-H 250 x 4.6 mm, 5 µm; Mobilna faza: 50/50 CO2/(1:1 MeOH/CH3CN); Protok: 2 mL/min); [α]D<20>= -117.23 (c = 0.08, CHCl3). Enantiomer B:<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.44 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.36 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.56 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.47 - 7.41 (m, 3H), 7.37 - 7.32 (m, 2H), 7.31 - 7.28 (m, 1H), 5.59 (d, J=10.5 Hz, 1H), 4.06 (dd, J=11.8, 2.8 Hz, 1H), 3.90 - 3.84 (m, 4H), 3.55 (td, J=11.9, 2.0 Hz, 1H), 3.35 (td, J=11.9, 20 Hz, 1H), 3.15 - 3.04 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.04 (d, J=13.6 Hz, 1H), 1.92 (s, 1H), 1.75 (s, 6H), 1.69 - 1.58 (m, 1H), 1.47 - 1.38 (m, 1H), 1.12 (d, J=13.4 Hz, 1H); LCMS (M+H) = 496.4; HPLC RT = 2.46 min (Kolona: Chromolith ODS S54.6 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:90 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 4 min; Protok: 4 mL/min). SFC RT = 8.30 min (Kolona: Chiralpak IB 250 x 4.6 mm, 5 µm; Mobilna faza: 70/30 CO2/MeOH; Protok: 2 mL/min); SFC RT = 2.83 min (Kolona: Chiralcel OD-H 250 x 4.6 mm, 5 µm; Mobilna faza: 50/50 CO2/(1:1 MeOH/CH3CN); Protok: 2 mL/min); [α]D<20>= 88.78 (c = 0.10, CHCl3).

Alternativna sinteza primera 1

2-(3-(Dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5-[oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol.

[0211]

2

Korak 1: (S)-metil 3-(1,4-dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5-(fenil(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat

[0212] Enantiomeri fenil(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanola (2.0 g, 10.4 mmol) [Orjales, A. et al. J. Med. Chem. 2003, 46, 5512-5532], su razdvojeni na preparativnoj SFC. (Kolona: Chiralpak AD 5 x 25 cm, 5 µm; Mobilna faza: 74/26 CO2/MeOH; Protok: 270 mL/min; Temperatura 30°C). Razdvojeni pikovi su koncentrovani i osušeni pod vakuumom da se dobiju bele čvrste supstance. Enantiomer A: (S)-fenil(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanol: (0.91 g, 45.5%) SFC RT = 2.32 min (Kolona: Chiralpac AD 250 x 4.6 mm, 5 µm; Mobilna faza: 70/30 CO2/MeOH; Protok: 3 mL/min); Temperatura 40°C. Enantiomer B: (R)-fenil(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanol. (0.92 g, 46%) SFC RT = 3.09 min (Kolona: Chiralpac AD 250 x 4.6 mm, 5 µm; Mobilna faza: 70/30 CO2/MeOH; Protok: 3 mL/min); Temperatura 40°C.

[0213] Prateći proceduru analognu onoj koja je opisana u Koraku 4 Referentnog Primera 1 izuzev primene toluena (120mL) kao rastvarača, metil 3-(1,4-dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat (4 g, 12.45 mmol) i (R)-fenil(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanol (Enantiomer B iznad, 5.86 g, 30.5 mmol) je konvertovan u jedinjenje iz naslova (5.0 g, 81%). HPLC RT = 2.91 min (Kolona: Chromolith ODS S54.6 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:90 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 4 min; Protok: 4 mL/min).

Korak 2. (S)-2-[3-(Dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5-[oksan-4-il(fenil)metil]-5H-pirido[3,2-b]indol-7-il]propan-2-ol

[0214] Posuda od 500 mL sa okruglim dnom koja sadrži (S)-metil 3-(1,4-dimetil-1H-1,2,3-triazol-5-il)-5-(fenil(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-5H-pirido[3,2-b]indol-7-karboksilat (5.0 g, 10.09 mmol) u THF-u (150 mL) je ohlađena u led/MeOH kupatilu. MeMgBr, (3M u Et2O-u, 17.0 mL, 51.0 mmol) je dodavan polako tokom 4 min. Dobijeni rastvor je mešan tokom 2 h i zatim kvenčovan pažljivo sa zas. NH4Cl-om. Reakciona smeša je razblažena sa 10% LiCl rastvorom ekstrahovan sa EtOAc-om. Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan. Sirov materijal je prečišćen primenom ISCO silika gel hromatografije (Kolona od 120 g, Gradijent od 0% do 6% MeOH/CH2Cl2). Proizvod je prikupljen i koncentrovan zatim rastvoren u vrućem MeOH-u(35mL). U smešu je dodato 15mL vode i smeša je ohlađena na sobnu temperaturu. Dobijen beli talog je prikupljen filtracijom sa ispiranjem smešom 2:1 MeOH/voda potom osušen pod vakuumom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.2 g, 62%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.40 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.33 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.53 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.46 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.42 (dd, J=8.2, 1.4 Hz, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 2H), 7.30 - 7.28 (m, 1H), 5.56 (d, J=10.5 Hz, 1H), 4.06 (d, J=8.9 Hz, 1H), 3.89 - 3.83 (m, 1H), 3.55 (td, J=I1.9, 2.1 Hz, 1H), 3.35 (td, J=I1.9, 2.1 Hz, 1H), 3.10 (q, J=10.8 Hz, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.03 (d, J=14.2 Hz, 1H), 1.89 (s, 1H), 1.74 (s, 6H), 1.68 - 1.59 (m, 1H), 1.46 - 1.36 (m, 1H), 1.12 (d, J=12.2 Hz, 1H); LCMS (M+H) = 496.3; HPLC RT = 2.44 min (Kolona: Chromolith ODS S54.6 x 50 mm; Mobilna faza A: 10:90 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 MeOH:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 4 min; Protok: 4 mL/min); SFC RT = 2.01 min (Kolona: Chiralcel OD-H 250 x 4.6 mm, 5 µm; Mobilna faza: 60/40 CO2/(1:1 MeOH/CH3CN); Protok: 2 mL/min). SFC RT = 1.06 min (Kolona: Chiralcel OD-H 250 x 4.6 mm, 5 µm; Mobilna faza: 50/50 CO2/(1:1 MeOH/CH3CN); Protok: 2 mL/min).

PROCENA BIOLOŠKE AKTIVNOSTI

[0215] Jedinjenja koja služe kao primeri su testirana na inhibiciju BRD2, BRD3, BRD4 i BRDT aktivnosti. Eksperimentalne procedure i rezultati su dati ispod.

Kloniranje, ekspresija i prečišćavanje humanih bromodomena za testove termalnog pomeranja (Thermal Shift Assays - TSA)

[0216] Klonovi rekombinantne DNK koji kodiraju bromodomene humanih proteina su optimizovani za ekspresiju E. Coli, hemijski sintetisani (GenScript, Piskatavej, Nju Džersi), i insertovani u modifikovani pET28 ekspresioni vektor da se kontruišu N-terminalne heksahistidinske fuzije koje se mogu cepati proteazom virusa šarenila nerava duvana (Virus šarenila nerava duvana – TVMV). Ne-nativne aminokiseline (MGSSHHHHHHSSGETVRFQSM) (SEK ID BR: 1) su odmah praćene proteinima bromodomena sa sekvencama aminokisenskih ostataka (praćeno pristupima citiranim iz i numerisanim u skladu sa Uniprot Knowledge bazom; Uniprot Konzorcijum; www.uniprot.org) kao što sledi:

CECR2(420-543), Q9BXF3-1; FALZ(2917-3037), Q12830-1; GCN5(731-837), Q92830-1; PCAF(715-831), Q92831-1; BRD2(24-472), P25440-1; BRD3(1-434), Q15059-1; BRD4(44-168), BRD4(333-460), BRD4(44-460), 060885-1; BRDT(1-383), Q58F21-1; BAZ1B(1340-1457), Q9UIG0-1; CREBBP(1081-1197), Q92793-1; EP300(1040-1161), Q09472-1; WDR9(1310-1430), Q9NSI6-1; ATAD2(981-1108), Q6PL18-1; BRD1(556-688), O95696-1; BRD7(129-236), Q9NPI1-1; BRD9(134-239), Q9H8M2-1; BRPF1(626-740), P55201-2; ATAD2B(952-1086), Q9ULI0-1; BAZ2B(2054-2168), Q9UIF8-1; SP140L(400-580), Q9H930-4; SP140(687-862), Q13342-1; TIF1(896-1014), O15164-1; TRIM28(619-805),

4

Q13263-1; BRWD3(1295-1443), Q6RI45-1; TAF1(1377-1503), TAF1(1501-1635), P21675-1; TAF1L(1402-1522), TAF1L(1523-1654), Q8IZX4-1; ASH1L(2433-2564), Q9NR48-1; PB1(43-156), PB1(178-291), PB1(388-494), PB1(645-766), PB1(773-917), Q86U86-1; SMARCA2(1367-1511), P51531-1; SMARCA2-2(1367-1493), P51531-2.

[0217] Rekombinantni vektori su transformisani u E. coli BL21(DE3). Transformisane ćelije su kultivisane u 1L bujona „terrific broth“ u Thomson Ultra Yield sudovima za šejkiranje od 2.5L na 37°C, 230 rpm i, pri ćelijskoj gustini od OD600nm = 1.0, su indukovani sa 0.5 mM IPTG i inkubirani u šejkeru na 20°C tokom 16-18 sati. Ćelijski peleti su sakupljeni sedimentacijom i lizirani pomoću sonifikacije u puferu koji sadrži 0.1 mg/ml lizozima. Svaki uzorak je izbistren sedimentacijom, i supernatant je nanet na HisTrap afinitetnu kolonu (GE Healthcare Life Sciences). Kolona je oprana i zatim eluirana sa gradijentom imidazola. Frakcije sa maksimumom proteina koje sadrže protein bromodomen su udružene, koncentrovane, i protein je prečišćen dalje po veličini eksluzionom hromatografijom na Superdex 200 koloni (GE Healthcare Life Sciences) ekvilibrisanoj sa puferom za finalno čuvanje (20 mM Tris-HCl pH 8.0, 200 mM NaCl, 5% glicerol, 2 mM DTT). SEC maksimalne frakcije koje sadrže prečišćen protein u 2-5 mg/ml su udružene, i grupa je podeljena u alikvote, naglo zamrznute u tečnom azotu, i sačuvane na -80°C.

Kloniranje, ekspresija, i prečišćavanje biotinilovanih humanih bromodomena za TR-FRET testove

[0218] Klonovi rekombinantne DNK koji kodiraju bromodomene humanog BRD2, BRD3, BRD4 i BRDT su optimizovani za E. coli ekspresiju, hemijski sintetisani (GenScript, Piskatavej, Nju Džersi), i insertovani u modifikovani pET28 ekspresioni vektor da se kontruišu N-terminalne heksahistidinske fuzije koje se mogu cepati proteazom virusa šarenila nerava duvana (TVMV) praćeno motivom za mesto-specifičnu biotinilaciju prepoznato pomoću E. Coli biotin ligaze (BirA). Ne-nativne aminokiseline (MGSSHHHHHHSSGETVRFQGLNDIFEAQKIEWHEDTGHM) (SEK ID BR: 2) su odmah praćene bromodomenskim konstruktima od BRD4 sa sekvencama aminokisenskih ostataka (praćeno BRD4 pristupom citiranim iz i numerisanim u skladu sa Uniprot Knowledge bazom; Uniprot Konzorcijum; www.uniprot.org) kao što sledi: BRD4(44-168), BRD4(333-460), BRD4(44-460), BRD4(1-477), 060885-1.

[0219] Svaki od rekombinantnih vektora su ko-transformisani u E. coli BL21 STAR (DE3) zajedno sa plazmidom koji kodira BirA pod hloramfenikolskom selekcijom. Transformisane ćelije su kultivisane na 37°C u Thomson Ultra Yield sudovima za šejkiranje od 2.5 L koji sadrže 1L M9-CAS medijuma (Teknova) obogaćenog sa 40 µg/ml kanamicina, 35 µg/ml hloramfenikola, i 100 µM biotina. Pri ćelijskoj gustini koja odgovara OD600nm = 0.6, kulture su indukovane sa 0.5 mM IPTG i inkubirane u šejkeru tokom dodatnih 20 sati na 20°C. Ćelijski peleti su sakupljeni sedimentacijom i lizirani pomoću sonifikacije u puferu koji sadrži 0.1 mg/ml lizozima. Svaki uzorak je izbistren sedimentacijom, i supernatant je nanet na HisTrap afinitetnu kolonu. Kolona je oprana i zatim eluirana sa gradijentom imidazola. Frakcije sa maksimumom proteina koje sadrže bromodomenski protein su udružene i inkubirane tokom 18 sati na 4°C sa prečišćenom His-TVMV proteazom (1:15 maseni odnos za TVMV:BRD4 protein). Uzorak je promenjen u pufer sa niskom koncentracijom imidazola i propušten kroz HisTrap kolonu da se uhvati iscepana His-oznaka i His-TVMV enzim. Protein koji protiče kroz HisTrap kolonu je dalje prečišćen i promenjen u pufer za finalno čuvanje (PBS pH 7.0, 5% Glicerol, 1 mM DTT) pomoću eksluzione hromatografije po veličini na Superdex 200 koloni. Da bi se poboljšala čistoća, BRD4(1-477) i BRD4(44-460) proteini su podvrgnuti dodatnom koraku prečišćavanja katjonizmenjivačkom hromatografijom pre ekskluzione hromatografije po veličini. Esencijalna kvantitativna mono-biotinilacija (+226 Da) svakog proteina je potvrđena pomoću analize masenom spektrometrijom sa elektrosprej jonizacijom na finalnom uzorku. Prečišćeni uzorci su podeljeni u alikvote, naglo smrznuti u tečnom azotu, i sačuvani na -80°C.

Test vremenski razlučenog fluorescentnog rezonantnog energetskog transfera (time resolved fluorescence resonance energy transfer - TR-FRET)

[0220] Vezivanje jedinjenja za BRD4 (44-168), BRD4 (333-460), i BRD4 bromodomena (1-477 ili 44-460) je procenjeno primenom testa vezivanja vremenski razlučenog fluorescentnog rezonantnog energetskog transfera (1), koji meri vezivanje molekula fluorescentno obeležene probe za bromodomenski protein. Bromodomenski protein, molekul fluorescentne probe (ili biotinilovani histonski peptid ili fluorescentno obeleženi mali molekul), i test jedinjenje koje je odgovorilo na dozu su inkubirani zajedno da bi se dostigla termodinamička ravnoteža. U odsustvu test jedinjenja, bromodomen i mali molekul su vezani, dovodeći do visoko fluorescentnog signala. U prisustvu dovoljne koncentracije inhibitora, ova interakcija je prekinuta dovodeći do gubitka fluorescentnog rezonantnog energetskog transfera.

[0221] Sve komponente testa su rastvorene u puferskom sastavu 20 mM Hepes pH 7.5, 150 mM NaCl, 5 mM DTT, 0.005% Tween 20, i 100 ug/ml BSA za BRD4 (1-477 i 44-460). Finalne koncentracije bromodomenskih proteina su 1.6 nM BRD4(44-168), 1 nM BRD4(333-460), i 1 nM BRD4(1-477 ili 44-460), i molekula fluorescentne probe je 100 nM, 50 nM, i 7.5 nM redom. Svi proteini su biotinilovani. Streptavidin obeležen sa terbijum kriptatom (Cisbio SA-Tb) j ekorišćen kao detekcija, i unapred izmešan sa bromodomenskim proteinom u finalnoj koncentraciji od 0.2 nM. U nekim slučajevima za BRD4 (44-460), anti-His terbijum kriptat je korišćen kao detekcija. 7.5 nl test jedinjenja sa odgovorom na dozu ili dmso nosača (0.0375 %) je prethodno naneto u crnu Corning ploču sa 384 bunarića i 10 ul svakog od reagensa za bromodomen/detekciju i rastvora fluorescentnog malog molekula su dodati u ploču, i reakcija je inkubirana tokom 60 min na sobnoj temperaturi. Ploče su zatim očitane na EnVision čitaču ploča, (λex =340 nm, λEm akceptora =520 nm, i λEm donora = 615 nm, LANCE D400 ogledalo). Merenja intenziteta fluorescencije razlučene u vremenu su načinjena u obe emisije, i odnos akceptor/ donor je izračunat i korišćen za analizu podataka. Svi podaci su normalizovani na 16 „visokih“ bunarića sa nosačem i 8 „niskih“ referentnih kontrolnih bunarića, i potom je primenjeno podešavanje četvoro-parametarske krive:

Gde 'a' je minimum, 'b' je Hill-ov nagib, 'c' je IC50, i 'd' je maksimum. Histon peptid: Kupljen od GenScript

H4K5K8K12K16

Biotin-AHA-SGRGK(Ac)GGK(Ac)GLGK(Ac)GGAK(Ac)RHRKV (SEK ID BR: 3) [0222] Fluorescentno obeleženi mali molekul je korišćen kao BRD4 inhibitor poznat u oblasti 1. F.Degorce, A.Card, S.Soh, E. Trinquet, G. P. Knapik and B. Xie, HTRF: A technology tailored for drug discovery - a review of theoretical aspects and recent applications. Current Chemical Genomics (2009) 3, 22-32

Test termalnog pomeranja

[0223] Efekat vezivanja jedinjenja na termalnu stabilnost bromodomena je izmeren primenom BioRad CFX instrumenta za PCR u realnom vremenu pomoću praćenja povećanja fluorescence eksterne probe (SYPRO narandžasto) kako se ono vezuje preferencijalno za odmotani protein. Reakcije odmotavanja su izvedene u ploči sa 384 bunarića u zapremini od 4uL sa 2-8uM bromodomenskog proteina, 1-2% (v/v) DMSO u puferu koji sadrži 10 mM Hepes, pH 7.4, 500 mM NaCl. SYPRO narandžasta boja je dodata u razblaženju od 1:500. Koncentracije jedinjenja su bile u opsegu od 1.6-100uM. Reakcije odmotavanja su praćene prvo ekvilibrisanjem instrumenta na 25 °C tokom 2.4 sekundi, praćeno podizanjem temperature u uvećanjima od 0.5 °C od 25 do 95 °C sa ekvilibrisanjem od 60 s pre očitavanja na svakoj temperaturi. Filteri za ekscitaciju i emisiju za SYPRO narandžastu boju su podešeni za FRET sa opsegom ekscitacije od 450-490 nm i opsegom emisije od 560-580 nm. Srednja temperatura je određena izračunavanjem tačke infleksije pomoću drugog derivata. Opažena temperaturna pomeranja su zabeležena kao razlika između srednje tačke između referentnog bunarića koji sadrži protein sa dmso ali bez liganda i bunarića koji sadrži protein sa jedinjenjem.

[0224] Test termalnog pomeranja je biofizička tehnika koja poredi promenu u tranzicionoj temperaturi odvijanja proteina dobijenu u prisustvu i odsustvu liganda (1). Tipično, fluorescentna boja je korišćena da bi se pratilo odvijanje proteina kako se protein zagreva. Tokom procesa odvijanja, hidrofobni regioni proteina su izloženi, dovodeći do povećanja u vezivanju boje i povećanja u intenzitetu fluorescencije. Srednja tačka tranzicije odvijanja proteina je definisana kao Tm. Ligand koji se vezuje za protein uzrokuje povećanje u termalnoj stabilnosti proteina, tako povećavajući Tm, proporcionalno i koncentraciji liganda i njegovom afinitetu vezivanja.

1. M.W. Pantoliano, E.C. Petrella, J.D. Kwasnoski, V.S. Lobanov, J. Myslik, NPRraf, T. Carver, E. Asel, B.A. Springer, P. Lane, F.R. Salemme, High-density miniaturized thermal shift assays kao general strategy for drug discovery. J. Biomol. Screen 6(2001) 429-440.

2. M.D. Cummings, M. A. Famum, M. I. Nelen, Universal screening Methods and application of ThermoFluor. J. Biomol. Screen 11 (2006) 854-863

MYC HCS Test

[0225] Tumorske ćelije u kompletnom RPMI medijumu za rast (Gibco, 11875-085) obogaćenom sa 10% FBS su sakupljene i nanete na crne PDL ploče za ćelijske kulture sa providnim dnom sa 384 bunarića u 30ul medijuma sa 10,000 ćelija po bunariću. Nakon tretmana sa jedinjenjem na 37C tokom 4 sata, ćelije su fiksirane u 4% Formaldehidu na sobnoj temperaturi tokom 30 min i zatim permeabilizovane. Nakon ispiranja i blokiranja, ploče su zatim inkubirane sa anti-myc primarnim antitelom 1:1000 (Cell Signaling Technology, 5605) na sobnoj temperaturi tokom noći. Sledećeg dana, ćelije su oprane i blokirane pre dodavanja sekundarnog antitela Alexa 488 kozjeg anti-zečjeg 1:2000 (Invitrogen, A11034) na sobnoj temperaturi u mraku tokom 1 sata. Ćelije su zatim oprane i skenirane na Cellomics ArrayScan skeneru sa sočivom objektiva 10x.

MTS test ćelijske proliferacije

[0226] Tumorske ćelije su nanete u određenim gustinama za sađenje u crne Matrix ploče sa 384 bunarića u 40ul po bunariću i inkubirane tokom noći na37°C u 5% CO2pre testiranja. Sledećeg dana, jedna grupa ploča (T0 ploče) je korišćena da se odredi ćelijska gustina pri nultom vremenu, i 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-karboksimetoksifenil)-2-(4-sulfofenil)-2Htetrazolijum iz neradioaktivnog kompleta za ćelijsku proliferaciju „CellTiter 96 Aqueous Non-Radioactive Cell proliferation Kit“ (Promega, G5440) je dodat pri 4 µl/bunariću u T0 ploče praćeno incubaciojom na 37°C u 5% CO2tokom tri sata. Apsorbanca na 490 nm je izmerena na Envision čitaču (Perkin Elmer, Boston, Masačusets). Istog dana, preostale ploče sa ćelijama (T72 ploče) su tretirane sa jedinjenjima na 37°C u 5% CO2. Nakon 72 sata, 4ul MTS reagenasa je potom dodato na ove ploče sa ćelijama. Ploče su dalje inkubirane na 37°C u 5% CO2tokom tri sata i vrednosti apsorbance na A490 su izmerene na Envision čitaču. Modeli humanih tumorskih ksenografta kod miševa

[0227] Svi glodari su dobijeni od Jackson Laboratory. (Bar Harbor, Mejn), i održavani u sredini bez amonijaka u definisanoj i teritoriji bez patogena. Svi miševi su držani u karantinu oko 1 nedelju pre njihove upotrebe za testiranje propagacije tumora i efikasnosti leka. Miševi su hranjeni hranom i vodom po želji. Program brige o životinjama Bristol-Myers Squibb farmaceutskog istraživačkog instituta je kompletno akreditovan od strane Američke asocijacije za akreditaciju brige o laboratorijskim životinjama (American Association for Accreditation of Laboratory Animal Care - AAALAC). Svi eksperimenti su izvedeni u skladu sa Bristol-Myers Squibb (BMS) metodama i uputstvima za testiranje životinja.

[0228] Tumorski ksenografti su gajeni i održavani subkutano (SK) u NSG (nokaut za NOD scid gama lanac receptora za IL2) miševima (Jackson Lab). Tumori su rašireni kao subkutani transplanti primenom tumorskih fragmenata dobijenih od miševa donora.

Preklinička ispitivanja hemioterapije

[0229] Potrebni brojevi životinja koje su neophodne da bi se detektovao značajan odgovor su udruženi na početku eksperimenta i svakoj su dati bilateralni subkutani implanti dva tumorska fragmenta (∼ 20 mg) sa trokarom veličine 13 „gauge“. Tumorima je dozvoljeno da porastu do unapred određenih parametara veličine (tumori izvan opsega su isključeni) i životinje su jednako raspodeljene u razne grupe koje se tretiraju i kontrolne grupe. Tipično je bilo 6-8 miševa po grupama koje se tretiraju i kontrolnim grupama, koje su se sastojale od 10-12 tumora. Tretman svake životinje je baziran na individualnoj telesnoj masi. Tretirane životinje su proveravane svakodnevno na toksičnost/mortalitet povezanu sa tretmanom. Svaka grupa životinja je izmerena pre započinjanja lečenja (Wt1) i potom ponovo nakon poslednje doze tretmana (Wt2). Razlika u telesnoj masi (Wt2-Wt1) dala je meru toksičnosti koja je vezana za tretman.

[0230] Tumorski odgovor je određen merenjem tumora sa kaliperom dva puta nedeljno, dok tumori nisu dostigli unapred određenu "ciljnu" veličinu od 0.5 gm ili 1 gm u zavisnosti od tipa tumora. Mase tumora (mg) su procenjene iz formule:

[0231] Kriterijumi za tumorski odgovor su izraženi kao inhibicija tumorskog rasta (growth inhibition - %TGI). Usporavanje rasta tumora je definisano kao razlika u vremenu (dani) potrebna da bi tretirani tumori (T) dostigli unapred određenu ciljnu veličinu u poređenju sa onima od kontrolne grupe (C). U ovu svrhu, masa tumora grupe je eksprimirana kao srednja masa tumora (medium tumor weight - MTW).

[0232] Inhibicija rasta tumora je izračunata kao što sledi:

gde,

Ct= Srednja kontrolna veličina tumora na kraju tretmana

C0= Srednja kontrolna veličina tumora pri započinjanju tretmana

Tt= Srednja veličina tumora tretirane grupe na kraju tretmana

T0= Srednja veličina tumora tretirane grupe pri započinjanju tretmana

[0233] Aktivnost je definisana kao postizanje trajne inhibicije rasta tumora od 50% ili više (tj. TGI ≥ 50%) za period jednak najmanje 1 vremenu potrebnom za udvostručavanje zapremine tumora i tretman lekom mora biti tokom perioda jednak najmanje kao 2 vremena potrebna za udvostručavanje zapremine tumora.

[0234] Tumorski odgovor je takođe izražen kao usporavanje rasta tumora i izražen je kao logaritamsko ubijanje ćelija (log cell kill value - LCK vrednost), definisano kao razlika u vremenu (dani) potrebnom da tretirani tumor (T) dostigne unapred određenu ciljnu veličinu u poređenju sa onima od kontrolne grupe (C).

[0235] Kad god je moguće, antitumorska aktivnost je određena u opsegu doznih nivoa do maksimalno tolerisane doze (MTD) koja je definisana kao nivo doze odmah ispod kog je došlo do prekomerne toksičnosti (tj. više od jedne smrti). Kada se desila smrt, zabeležen je dan smrti. Smatra se da su tretirani miševi koji umiru pre nego što njihovi tumori dostignu ciljnu veličinu umrli od toksičnosti leka. Kontrolni miševi koji su nosili tumore manje od ciljne veličine nisu umirali. Smatra se da grupe koje se tretiraju koje imaju više od jedne smrti izazvane toksičnošću leka imaju prekomerno toksično lečenje i njihovi podaci nisu uključeni u procenu antitumorske efikasnosti jedinjenja.

[0236] Potencijalna interakcija toksičnosti lekova koja utiče na toleranciju lečenja je značajno razmatranje u ispitivanjima kombinovane hemioterapije. Interpretacija rezultata kombinovanih lekova mora biti zasnovana na poređenju antitumorske aktivnosti najboljeg mogućeg odgovora za pojedinačne agense naspram kombinacije pri uporedivo tolerisanim dozama. Stoga, terapijski sinergizam je definisan kao terapijski efekat postignut sa tolerisanim režimom kombinovanih agenasa koji su prekoračili optimalni efekat postignut pri bilo kojoj tolerisanoj dozi monoterapije. Statističke procene podataka su izvedene primenom Gehanovog generalizovanog Vilkokson testa. Statistička značajnost je proglašena pri P < 0.05.

Administracija leka

[0237] Za administraciju BET inhibitora glodarima, jedinjenja su rastvorena u 90% PEG300/10% TPGS/10% Etanol. BET inhibitori su tipično administrirani oralno po rasporedu od QDx7 ili QDx10 (5 dana-administracija-2 dana-bez administracije), iako su i drugi rasporedi procenjeni i pokazani kao efikasni.

Rezultati:

[0238] Sledeća Tabela prikazuje rezultate određenih jedinjenja na ćelijskoj liniji H187 humanog sitnoćelijskog karcinoma i JJN3R multiplog mijeloma.

K

[0239] Podaci koji se odnose na aktivnost prikazani ispod su zasnovani na primeni jednog od opisanih FRET testova. Jedinjenja sa ICSOmanjim od 1500 nM su prikazani sa (+), jedinjenja sa ICSOmanjim od 25 nM su prikazani sa (++) i oni sa ICSOmanjim od 5 nM su prikazani sa (+++).

1

2

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje sa formulom
2. Farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja koje ima strukturu
3. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili farmaceutski prihvatljivu so tog jedinjenja i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenasa.
4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 za primenu u lečenju kancera kod pacijenta gde je kancer sitnoćelijski kancer pluća, nesitnoćelijski kancer pluća, kolorektalni kancer, multipli mijelom ili AML.
5. Farmaceutski prihvatljiva so prema patentnom zahtevu 2 za primenu u lečenju kancera kod pacijenta gde je kancer sitnoćelijski kancer pluća, nesitnoćelijski kancer pluća, kolorektalni kancer, multipli mijelom ili AML. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5