RS61571B1

RS61571B1 - Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju sinovitisa kod sisara

Info

Publication number: RS61571B1
Application number: RS20210308A
Authority: RS
Inventors: Ieva Ankorina-Stark; Lise Hanne Christensen
Original assignee: Contura Int A/S
Priority date: 2016-03-31
Filing date: 2017-03-30
Publication date: 2021-04-29
Also published as: HUE053532T2; EP3435992A1; DK3435992T3; EA036712B1; CN109069452B; KR20180123718A; US20190307925A1; EA201892183A1; AU2017243297B2; AU2017243297A1; EP3435992B1; PL3435992T3; CN109069452A; JP2019515944A; PT3435992T; ES2863726T3; IL261976A; WO2017167348A1; KR102442316B1; US10772991B2

Description

Opis

Tehnička oblast pronalaska

[0001] Ovaj pronalazak odnosi se na poliakrilamidni hidrogel za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju sinovitisa kod sisara.

Pozadina pronalaska

[0002] Sinovitis je medicinski naziv za zapaljenje sinovijalne membrane. Ova membrana oblaže zglobove koji imaju šupljine, poznati kao sinovijalni zglobovi. Ovo stanje je obično bolno, posebno kada se zglob pomera. Zglob obično otiče zbog prikupljanja sinovijalne tečnosti.

[0003] U principu, promene sinovijalne membrane mogu biti zapaljenjske ili nezapaljenjske. Potonjoj grupi pripadaju neki benigni tumori, kao što su tenosinovijalni tumor džinovskih ćelija, lipom ili sinovijalna hondromatoza. Retke nezapaljenjske promene su grupa bolesti skladištenja. Zapaljenjske sinovijalne bolesti mogu se diferencirati u artropatiju indukovanu kristalima, kao što su giht i pseudogiht, granulomatozne bolesti, kao što su tuberkuloza, sarkoidoza i reakcije stranog tela i u veliku grupu negranulomatoznog sinovitisa. Ova potonja grupa do sad je najčešća i često izaziva poteškoće u dodeljivanju histopatoloških nalaza određenoj dijagnozi.

[0004] Prema tome, sinovitis može da se javi u vezi sa artritisom kao i lupusom, gihtom i drugim stanjima. Sinovitis je izraženiji kod reumatoidnog artritisa nego u drugim oblicima artritisa, i zato može da služi kao faktor za razlikovanje, iako je takođe prisutan kod mnogih zglobova zahvaćenih osteoartritisom (OA).

[0005] Viskosuplementacija je postupak ubrizgavanja supstance poput gela u zglob. Ta supstanca se smatra aditivom tečnosti zglobova, čime se podmazuje hrskavica i poboljšava fleksibilnost zglobova. Ovaj postupak lečenja, međutim, zahteva tekuće injekcije, čije su koristi samo privremene, jer supstance koje se trenutno koriste mogu da se razgrade u okviru nekoliko nedelja do nekoliko meseci. Supstance korišćene u viskosuplementaciji uključuju hijaluronsku kiselinu, ili HA (Legend®, Hylartin® i Synacid®, Synvisc, Euflexxa, Supartz itd.) i poli-sulfatovane glikozaminoglikane (PSGAGS) kao što je Adequan®.

[0006] Poliakrilamidni hidrogel (PAAG) poznat je po svojoj sposobnosti da podrži ćelijski rast in vitro i omogući rast ćelija tkiva domaćina in vivo. Ovo je dokumentovano za meka subkutana tkiva miševa, pacova, zečeva, svinja i ljudi. Integracija tkiva počinje neposredno nakon PAAG injekcije kao vrsta reakcije stranog tela na PAAG. Makrofage domaćina i džinovske ćelije tipa oko stranog tela inicijalno okružuju PAAG, a zatim ga napadaju. U tom procesu, ove ćelije se postepeno transformišu u fibroblaste i endotelijalne ćelije, koje vremenom obrazuju tanku fibroznu mrežu sa krvnim sudovima unutar PAAG. Međutim, integracija PAAG u ovim tkivima nije povezana sa bilo kojim luminalnim površinama i PAAG-sadržavajućim makrofagama i džinovskim ćelijama do 14 meseci nakon injekcije.

[0007] WO 02/16453 opisuje upotrebu poliakrilamidnog hidrogela (PAAG) za lečenje npr. artritisa. Gde se smatra da se lečenje zasniva na efektu podmazivanja i amortizacije hidrogelom. WO 2012/123385 opisuje upotrebu PAAG u lečenju i/ili prevenciji oticanja zglobova i/ili koštanog edema kod sisara koji boluju od artritisa. Ni WO 02/16453 ni WO 2012/123385 ne opisuju prevenciju i/ili lečenje sinovitisa kod sisara.

[0008] Christensen i Daugaard (J Artritis 5: 217; 16. septembar 2016.) obezbeđuju prikaz slučaja o histološkom izgledu sinovijalne membrane posle lečenja osteoartritisa kolena injekcijama poliakrilamidnog gela.

[0009] Uobičajeni simptomi za sve vrste sinotivisa kod sisara uključuju promenljive nivoe bola kod sisara. Simptomi sinovitisa mogu se lečiti anti-zapaljenjskim lekovima kao što su NSAID. Druga mogućnost je injekcija steroida direktno u oboleli zglob. Specifično lečenje zavisi od osnovnog uzroka sinovitisa.

Zajedničko za različite postojeće terapije je da sve imaju određene nedostatke, npr. kratkotrajni efekat lečenja, toksičnost i neželjena dejstva.

[0010] Stoga, postoji potreba za alternativnim ili poboljšanim načinom da se spreči i/ili leči sinovitis kod sisara. Takođe, postoji potreba za alternativnim ili poboljšanim načinom da se spreči i/ili leči bol usled sinovitisa kod sisara.

[0011] Iznenađujuće, ovi pronalazači otkrili su da je poliakrilamidni hidrogel (PAAG) koristan u prevenciji i/ili lečenju sinovitisa. Bez vezivanja za određenu teoriju, smatra se da je analgetički efekat na sinovitis izazvan stabilnim, dugotrajnim subsinovijalnim slojem PAAG prekrivenim tankim nitima vezivnog tkiva i promenama sastava sinovijalnih ćelija ili proizvodnjom citokina. Prema tome, ovaj pronalazak iznenađujuće demonstrira obrazovanje novog sinovijalnog obložnog sloja nakon integracije PAAG u zglobove sisara koji opstaje tokom najmanje 24 meseca.

Suština pronalaska

[0012] Prema tome, predmet ovog pronalaska odnosi se na prevenciju i/ili lečenje sinovitisa kod sisara. Drugi predmet ovog pronalaska je prevencija i/ili lečenje bola povezanog sa sinovitisom.

[0013] Određenije, predmet ovog pronalaska je da se obezbedi alternativni ili poboljšani način prevencije i/ili lečenja sinovitisa kod sisara koji rešava ili smanjuje gorepomenute probleme stanja tehnike koji se tiču npr. kratkotrajnog efekta lečenja, toksičnosti i neželjenih dejstava.

[0014] Prema tome, jedan aspekt ovog pronalaska odnosi se na poliakrilamidni hidrogel za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju sinovitisa kod sisara obrazovanjem novog sinovijalnog obložnog sloja.

[0015] Neki drugi aspekt ovog pronalaska odnosi se na poliakrilamidni hidrogel za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju sinovitisa kod sisara obrazovanjem subsinovijalnog sloja.

[0016] U jednom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak odnosi se na poliakrilamidni hidrogel za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju sinovitisa kod sisara obrazovanjem subsinovijalnog sloja i novog sinovijalnog obložnog sloja.

[0017] U jednom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak odnosi se na postupak za prevenciju i/ili lečenje sinovitisa kod sisara, pri čemu taj postupak obuhvata davanje poliakrilamidnog hidrogela pomenutom sisaru radi obrazovanja novog sinovijalnog obložnog sloja.

[0018] U jednom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak odnosi se na postupak za prevenciju i/ili lečenje sinovitisa kod sisara, pri čemu taj postupak obuhvata davanje poliakrilamidnog hidrogela pomenutom sisaru radi obrazovanja subsinovijalnog sloja.

[0019] U jednom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak odnosi se na postupak za prevenciju i/ili lečenje sinovitisa kod sisara, pri čemu taj postupak obuhvata davanje poliakrilamidnog hidrogela pomenutom sisaru radi obrazovanja subsinovijalnog sloja i novog sinovijalnog obložnog sloja.

[0020] U nekom drugom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak odnosi se na upotrebu poliakrilamidnog hidrogela za pripremu leka za prevenciju i/ili lečenje sinovitisa kod sisara obrazovanjem novog sinovijalnog obložnog sloja.

[0021] U nekom drugom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak odnosi se na upotrebu poliakrilamidnog hidrogela za pripremu leka za prevenciju i/ili lečenje sinovitisa kod sisara obrazovanjem subsinovijalnog sloja.

[0022] U nekom drugom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak odnosi se na upotrebu poliakrilamidnog hidrogela za pripremu leka za prevenciju i/ili lečenje sinovitisa kod sisara obrazovanjem subsinovijalnog sloja i novog sinovijalnog obložnog sloja.

[0023] Neki dalji aspekt ovog pronalaska odnosi se na poliakrilamidni hidrogel za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju bola zbog sinovitisa kod sisara obrazovanjem novog sinovijalnog obložnog sloja.

[0024] Neki dalji aspekt ovog pronalaska odnosi se na poliakrilamidni hidrogel za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju bola zbog sinovitisa kod sisara obrazovanjem subsinovijalnog sloja.

[0025] Neki dalji način ostvarivanja ovog pronalaska odnosi se na poliakrilamidni hidrogel za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju bola zbog sinovitisa kod sisara obrazovanjem subsinovijalnog sloja i novog sinovijalnog obložnog sloja.

[0026] Jedan način ostvarivanja ovog aspekta pronalaska odnosi se na postupak za prevenciju i/ili lečenje bola zbog sinovitisa kod sisara, pri čemu taj postupak obuhvata davanje poliakrilamidnog hidrogela pomenutom sisaru radi obrazovanja novog sinovijalnog obložnog sloja.

[0027] Jedan način ostvarivanja ovog aspekta pronalaska odnosi se na postupak za prevenciju i/ili lečenje bola zbog sinovitisa kod sisara, pri čemu taj postupak obuhvata davanje poliakrilamidnog hidrogela pomenutom sisaru radi obrazovanja subsinovijalnog sloja.

[0028] Jedan način ostvarivanja ovog aspekta pronalaska odnosi se na postupak za prevenciju i/ili lečenje bola zbog sinovitisa kod sisara, pri čemu taj postupak obuhvata davanje poliakrilamidnog hidrogela pomenutom sisaru radi obrazovanja subsinovijalnog sloja i novog sinovijalnog obložnog sloja.

[0029] Neki drugi način ostvarivanja odnosi se na upotrebu poliakrilamidnog hidrogela za pripremu leka za prevenciju i/ili lečenje bola zbog sinovitisa kod sisara obrazovanjem novog sinovijalnog obložnog sloja.

[0030] Neki drugi način ostvarivanja odnosi se na upotrebu poliakrilamidnog hidrogela za pripremu leka za prevenciju i/ili lečenje bola zbog sinovitisa kod sisara obrazovanjem subsinovijalnog sloja.

[0031] Neki drugi način ostvarivanja odnosi se na upotrebu poliakrilamidnog hidrogela za pripremu leka za prevenciju i/ili lečenje bola zbog sinovitisa kod sisara obrazovanjem subsinovijalnog sloja i novog sinovijalnog obložnog sloja.

Kratak opis nacrta

[0032]

Fig.1 prikazuje normalni zglob kolena zeca, u koji je ubrizgan PAAG, nakon 10 dana (a, b), nakon 90 dana (c) i nakon 180 dana (d).10. dana, PAAG je i dalje bio prisutan u šupljini neposredno ispod sinovijalnog omotača (a, strelica) i dominirale su proliferišuće sinovijalne ćelije (b, strelica).

90. i 180. dana, sinovijalni omotač bio je netaknut (c, d, strelice), a integrisani PAAG obuhvatao je samo rasejane hronične zapaljenjske ćelije pomešane sa fibroznom mrežom (d, zaokruženo). HE x60 (a), HE x400 (b), HE x 100 (c), HE x300 (d).

Fig.2 prikazuje kičični zglob konja tretiran sa PAAG zbog OA posle 3 i 8 meseci (a, b) i posle 24 meseca (c, d). Sinovijalni površinski omotač označen je strelicama.

[0033] Fina fibrozna mreža unutar PAAG nakon 24 meseca je zaokružena na d. HE x200 (a), HE x100 (b), HE x60 (c), i van Gieson/Alcian plavo x150 (d).

Detaljan opis pronalaska

[0034] PAAG je pripremljen kao što je opisano u WO 02/16453, i dalje u WO 2012/123385. PAAG može da obuhvata bilo koji način ostvarivanja hidrogela kao što je opisano u WO 02/16453 i WO 2012/123385.

[0035] Kao što je opisano gore, jedan aspekt ovog pronalaska odnosi se na poliakrilamidni hidrogel za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju sinovitisa kod sisara obrazovanjem subsinovijalnog sloja i/ili obrazovanjem novog sinovijalnog obložnog sloja. U povezanom aspektu, ovaj pronalazak odnosi se na poliakrilamidni hidrogel za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju bola zbog sinovitisa kod sisara obrazovanjem subsinovijalnog sloja i/ili obrazovanjem novog sinovijalnog obložnog sloja.

[0036] U nekom načinu ostvarivanja, subsinovijalni sloj i/ili novi sinovijalni obložni sloj je prisutan/opstaje do 1 meseca (M) ili više, kao što je 2 M, kao što je 3 M, kao što je 4 M, kao što je 5 M, kao što je 6 M, kao što je 7 M, kao što je 8 M, kao što je 9 M, kao što je 10 M, kao što je 11 M, kao što je 12 M, kao što je 13 M, kao što je 14 M, kao što je 15 M, kao što je 16 M, kao što je 17 M, kao što je 18 M, kao što je 19 M, kao što je 20 M, kao što je 21, kao što je 22 M, kao što je 23 M, kao što je 24 M, kao što je 24 M, kao što je 25 M, kao što je 26 M, kao što je 27 M, kao što je 28 M, kao što je 29 M, kao što je 30 M, kao što je 30-35 M, kao što je 35-40 M, kao što je 40-45 M, kao što je 45-50 M, kao što je 50-55 M, kao što je 55-60 M ili više od 60 M.

[0037] Prema ovom pronalasku, obrazovanje subsinovijalnog sloja i obrazovanje novog sinovijalnog obložnog sloja znači da u zglobovima, nakon injekcije poliakrilamidnog hidrogela ovog pronalaska u šupljinu zgloba, telo dodaje/obrazuje novi subsinovijalni sloj na površini originalne sinovijalne membrane. Drugim rečima, dodatni sloj je obrazovan na sinovijalnoj membrani. Na površini novog subsinovijalnog sloja koji je okrenut ka šupljini zgloba, novi sinovijalni obložni sloj je obrazovan/dodat. Iznenađujuće, dodatni novi subsinovijalni sloj u sinovijalnoj membrani i novi sinovijalni obložni sloj su stabilni, i otporni tokom veoma dugog perioda.

[0038] Prema ovom pronalasku, bol je ocenjen pomoću indeksa artritisa Western Ontario i McMaster univerziteta (WOMAC). To je zaštićeni set standardizovanih upitnika korišćenih od strane zdravstvenih radnika da bi se ocenilo stanje pacijenata sa osteoartritisom kolena i kuka, uključujući bol, ukočenost i fizičko funkcionisanje zglobova. Stoga, WOMAC se koristi za ocenu bola u kolenu, kuku, laktu, metakarpofalangealnim i interfalangealnim zglobovima u šakama i stopalima, sezamoidnom zglobu i/ili temporomandibularnom zglobu kod ljudi. Bol kod sisara kao što su konji ili psi procenjuje se subjektivno od strane veterinara.

[0039] Poželjno, prema ovom pronalasku, poliakrilamidni hidrogel daje se injekcijom u sterilnim uslovima. U jednom načinu ostvarivanja, poliakrilamidni hidrogel daje se intraartikularnom injekcijom.

[0040] Injekcija PAAG se može dati pod lokalnom anestezijom, ali lokalna anestezija nije nužno potrebna. Međutim, procedura se poželjno izvodi u sterilnim uslovima. Bilo kakva dlaka koja prekriva oblast gde se daje injekcije obrije se i koža se temeljno ispira npr. hlorheksidinom i etanolom (npr.3 puta naizmenično). Zatim se kanila umeće u šupljinu zgloba i aspiracijom se proverava da li je pravilno postavljena intraartikularno. Uopšteno, zglob se prazni za najmanje neku količinu tečnosti za koju je odlučeno da se ubrizga i željena količina PAAG se zatim ubrizgava. Antibiotik može biti uključen u PAAG da bi se sprečila jatrogena infekcija zgloba.

[0041] U jednom načinu ostvarivanja ovog pronalaska, 0,1-20 ml poliakrilamidnog hidrogela daje se injekcijom u intraartikularnu šupljinu.

[0042] U nekom drugom načinu ostvarivanja, 0,1-20 ml poliakrilamidnog hidrogela daje se injekcijom u intraartikularnu šupljinu najmanje jednom, kao što je dvaput, kao što je tri puta, kao što je četiri puta, kao što je 5 puta, kao što je 6 puta, kao što je 7 puta, kao što je 8 puta, kao što je 9 puta, kao što je 10 puta u intraartikularnu šupljinu. U nekom daljem načinu ostvarivanja 0,1-20 ml poliakrilamidnog hidrogela daje se najmanje 1-2 puta ukupno, kao što je 1-5 puta ukupno, kao što je 1-10 puta ukupno, kao što je 1-15 puta ukupno, kao što je 1-20 puta ukupno, kao što je 1-30 puta ukupno, kao što je 1-40 puta ukupno, kao što je čak više od 40 puta ukupno. Davanje se može izvesti tokom perioda od nekoliko godina, kao što je tokom perioda od 1 godine, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 godina.

[0043] U još nekom drugom načinu ostvarivanja, 0,1-20 ml poliakrilamidnog hidrogela daje se injekcijom u intraartikularnu šupljinu u pravilnim intervalima, na primer jednom svake 2 nedelje, kao što je svake 4 nedelje, kao što je svakih 6 nedelja, kao što je svakih 8 nedelja, kao što je svakih 10 nedelja, kao što je svakih 12 nedelja, kao što je svakih 14 nedelja, kao što je svakih 16 nedelja ili čak duže u intraartikularnu šupljinu.

[0044] U još nekom drugom načinu ostvarivanja, 0,1-20 ml poliakrilamidnog hidrogela daje se injekcijom u intraartikularnu šupljinu u intervalima od npr. jednom svake 2 nedelje, kao što je svake 4 nedelje, kao što je svakih 6 nedelja, kao što je svakih 8 nedelja, kao što je svakih 10 nedelja, kao što je svakih 12 nedelja, kao što je svakih 14 nedelja, kao što je svakih 16 nedelja ili kao što je još duže za ukupno npr.2 injekcije, kao što je 3, kao što je 4, kao što je 5, kao što je 6, kao što je 7, kao što je 8, kao što je 9, kao što je 10 injekcija ukupno.

[0045] 0,1-20 ml poliakrilamidnog hidrogela može takođe da se daje injekcijom u intraartikularnu šupljinu jednom godišnje ili više, kao što je dvaput, 3 puta, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12 puta svake godine tokom jedne godine ili duže, npr.2, ili 3, ili 4, ili 5, ili 6, ili 7, ili 8, ili 9 ili 10 godina.

[0046] Odgovarajuća količina poliakrilamidnog hidrogela biće u opsegu od 0,1 ml do 20 ml, kao što je 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 ili 19 ml.

Međutim, nije preporučljivo da se ubrizga toliko hidrogela da se zglob proširi. Tačna količina biće određena od strane lekara ili veterinara na osnovu veličine zgloba i ozbiljnosti sinovitisa.

[0047] Poželjno, daje se količina 1-2 ml ili više, kao što je 1-3, kao što je 1-4, kao što je 1-5, kao što je 1-6, kao što je 1-7, kao što je 1-8, kao što je 1-9, kao što je 1-10, kao što je 1-11, kao što je 1-12, kao što je 1-13, kao što je 1-14, kao što je 1-15, kao što je 1-16, kao što je 1-17, kao što je 1-18, kao što je 1-19 ml.

[0048] U nekom načinu ostvarivanja ovog pronalaska, sisar je čovek, trkačka životinja ili kućni ljubimac. Najrelevantniji sisari su ljudi, trkačke životinje kao što su konji i kamile, i kućni ljubimci kao što su mačke i psi ali takođe drugi sisari kojima je potrebno lečenje kao što su slonovi, žirafe, tigrovi itd. U jednom poželjnom načinu ostvarivanja, životinja je čovek, konj ili pas. U još poželjnijem načinu ostvarivanja, sisar je čovek.

[0049] Bilo koji zglob zahvaćen sinovitisom može da se leči. Neograničavajući primeri su koleno, kuk, lakat, metakarpofalangealni i interfalangealni zglobovi u šakama i stopalima ljudi, kičični, kopitni, krunski, kolenski zglob i zglob kolena zadnjih nogu konja, i lakat, koleno i kuk mačaka i pasa. Takođe može biti relevantno lečenje drugih zglobova kao što su sezamoidni i temperomandibularni zglobovi.

[0050] U nekom drugom poželjnom načinu ostvarivanja ovog pronalaska, sisar koji se leči je čovek, a zglob ili zglobovi koji se leči/leče je/su zglob kolena, kuka, lakta, metakarpofalangealni i interfalangealni zglobovi u šakama i stopalima, sezamoidni zglob i/ili temperomandibularni zglob.

[0051] U još nekom drugom načinu ostvarivanja ovog pronalaska, sisar koji se leči je konj, a zglob ili zglobovi koji se leči/leče je/su kičični, kopitni, krunski, kolenski zglob i/ili zglob kolena zadnjih nogu.

[0052] U još daljem načinu ostvarivanja ovog pronalaska, sisar koji se leči je pas, a zglob ili zglobovi koji se leči/leče je/su lakat prednje noge ili zglob kolena ili kuka zadnjih nogu.

[0053] U još nekom daljem načinu ostvarivanja ovog pronalaska sisar boluje od sinovitisa.

[0054] U nekom načinu ostvarivanja ovog pronalaska, sisar boluje od artritisa, kao što je osteoartritis ili reumatoidni artritis, lupus ili giht.

[0055] Artritis je grupa stanja koja uključuje oštećenje telesnih zglobova. Postoji preko 100 različitih oblika artritisa. Najčešći oblik, osteoartritis (degenerativna bolest zglobova) je rezultat traume zgloba, infekcije zgloba ili starosti. Ostali oblici artritisa su reumatoidni artritis, psorijazni artritis i povezane autoimune bolesti. Septični artritis izazvan je infekcijom zgloba.

[0056] Osteoartritis (OA) je bolna, iscrpljujuća bolest zgloba bez poznatog leka. Karakteriše se toplotom, bolom, oticanjem, krepitusom (pucketajući, hrskavi ili škripav osećaj ili zvuk pod kožom), i smanjenim spektrom pokreta u obolelim zglobovima. Kod ljudi napada šake, kolena, kukove, kičmu i ostale zglobove. Konji boluju od osteoartritisa zglobova a pre svega kopitni, krunski, kičični, karpalni i kolenski zglobovi, a učestalost zavisi od starosti, mase i rase.

[0057] Reumatoidni artritis (RA) je dugotrajni autoimuni poremećaj koji pre svega napada zglobove.

[0058] Lupus ili eritemski lupus je naziv dat skupu autoimunih bolesti u kojima humani imunološki sistem postaje hiperaktivan i napada normalna, zdrava tkiva, kao što su zglobovi.

[0059] Giht (takođe poznat kao podagra kada uključuje zglob u osnovi palca) obično se karakteriše ponovljenim napadima zapaljenjskog artritisa - crveni, mek, topao i otečen zglob.

[0060] Zavisno od tipa artritisa, uobičajeni simptomi za sve poremećaje artritisa uključuju različite nivoe bola, oticanje, ukočenost zgloba i ponekad neprekidan bol oko zgloba(ova). Pojedinci koji imaju artritis najviše se žale na bol u zglobovima. Bol je obično neprekidan i može biti lokalizovan na oboleli zglob. Bol zbog artritisa javlja se zbog zapaljenja koje se javlja oko zgloba, oštećenja zgloba usled bolesti, svakodnevnog trošenja zgloba, naprezanja mišića izazvanih snažnim pokretima protiv ukočenih, bolnih zglobova i zbog zamora.

[0061] U nekom drugom načinu ostvarivanja ovog pronalaska sisar boluje od osteoartritisa ili reumatoidnog artritisa.

[0062] U nekom daljem načinu ostvarivanja ovog pronalaska, sisar boluje od osteoartritisa.

[0063] U još nekom daljem načinu ostvarivanja ovog pronalaska, sisar boluje od reumatoidnog artritisa.

Pripremanje poliakrilamidnog hidrogela (PAAG)

[0064] Hidrogel može biti pripremljen kao što je opisano u WO 02/16453. U nastavku, poliakrilamidni hidrogel može biti skraćenica PAAG.

[0065] Hidrogel može da obuhvata bilo koji način ostvarivanja hidrogela kao što je opisano u WO 02/16453 i WO 2012/123385. Poželjno, hidrogel obuhvata 0,5 do 25mas.% poliakrilamida, računato na ukupnu masu hidrogela. Hidrogel obično dalje obuhvata najmanje 75mas.% vode bez pirogena ili slani rastvor, poželjno voda bez pirogena.

[0066] Hidrogel se može dobiti kombinovanjem akrilamida i monomera za umrežavanje, iniciranjem polimerizacije uvođenjem radikala; i ispiranjem vodom bez pirogena ili slanim rastvorom, pri čemu je kombinovanje u količinama i ispiranje takvo da se daje oko 0,5 do 25mas.% poliakrilamida, na osnovu ukupne mase hidrogela. Hidrogel, na taj način dobijen, je i biostabilan i biokompatibilan, i ne resorbuje ga telo.

[0067] Obično, hidrogel je dobijen kombinovanjem akrilamida i agensa za umrežavanje, kao što je N,N'-metilen bis-akrilamid, u molarnom odnosu od 150:1 do 1000:1. Agens za umrežavanje, kao što je N,N'-metilen bis-akrilamid, služi da obezbedi umrežavanje između polimernih lanaca, a molarni odnos može biti variran da se obezbede različite gustine umrežavanja hidrogela. Uslovi za dobijanje hidrogela mogu biti modifikovani prema, na primer, prirodi zgloba u koji treba da se ubrizga hidrogel. Željena reološka svojstva, kao što je elastičnost, mogu biti kontrolisana najmanje delimično masenim sadržajem čvrste supstance hidrogela. Hidrogel ovog pronalaska obuhvata oko 0,5 do 25mas.% poliakrilamida, računato na ukupnu masu hidrogela. U odgovarajućim načinima ostvarivanja ovog pronalaska, hidrogel obuhvata manje od 15mas.% poliakrilamida, računato na ukupnu masu hidrogela, poželjno manje od 10mas.%, poželjnije manje od 7,5mas.%, još poželjnije manje od 5%, najpoželjnije manje od 3,5mas.% poliakrilamida, računato na ukupnu masu hidrogela.

[0068] Kombinovanje uključuje kombinovanje sastavnih reagenasa akrilamida i agensa za umrežavanje, kao što je N,N'-metilen bis-akrilamid, obično degazirani i obično na način da se minimizira kontakt rukovaoca. Komponente reagensa mogu opciono da se kombinuju pre obrazovanja inertne mešavine. Inertna mešavina je ona u kojoj ne dolazi do hemijske reakcije između sastavnih reagenasa.

Kombinovanje uključuje kombinovanje akrilamida, agensa za umrežavanje, kao što je N,N'-metilen-bisakrilamid, i komponenta radikalskog inicijatora za iniciranje polimerizacije. U pogodnom načinu ostvarivanja, inertna predmešavina akrilamida, agensa za umrežavanje, kao što je N,N'-metilen-bisakrilamida i N,N,N',N'-tetrametilen-etilen-diamina (TEMED) kombinovana je sa rastvorom inicijatora amonijum persulfata (AMPS). Međutim, komponente se mogu kombinovati kao pojedinačne ili kao alternativne pluralne predmešavine.

[0069] Akrilamid i agens za umrežavanje, kao što je N,N'-metilen-bis-akrilamid, pogodno se kombinuju u molarnom odnosu od oko 150:1 do 1000:1, obično oko 150:1 do 900:1, poželjno oko 175:1 do 800:1, poželjnije oko 200:1 do 600:1, najpoželjnije od 250:1 do 600:1. Kao što je prikazano u Tabelama 2 i 3, hidrogelovi različitog masenog sadržaja čvrste supstance i reoloških svojstava mogu biti pripremljeni u kontrolisanim uslovima. Hidrogel koji ima željene reološke karakteristike dobija se kombinovanjem akrilamida i N,N'-metilen-bis-akrilamida u odnosu od oko 250:1, oko 260:1, oko 270:1, oko 280:1, oko 290:1, oko oko 300:1, oko 310:1, oko 320:1, oko 330:1, oko 340:1, oko 350:1, oko 360:1, oko 370:1, oko 380:1, oko 390:1, oko 400:1, oko 410:1, oko 420:1, oko 430:1, oko 440:1, oko 450:1, oko 460:1, oko 470:1, oko 480:1, oko 490:1 i oko 500:1.

[0070] Posebno u načinu ostvarivanja u kom se hidrogel ubrizgava u zglob, elastičnost hidrogela je od velikog značaja. U nekom poželjnom načinu ostvarivanja, hidrogel ovog pronalaska ima modul elastičnosti od oko 1 do 200 Pa, kao što je oko 2 do 175 Pa, obično oko 5 do 150 Pa, kao što je 10 do 100 Pa. Stručnjaci u tehnici znaće kako da dobiju hidrogel odgovarajuće elastičnosti za namenjenu upotrebu. Vidi takođe primere u nastavku, koji opisuju pripremu hidrogelova male, srednje i velike elastičnosti.

[0071] Hidrogel obuhvata najmanje 75mas.% vode bez pirogena ili slanog rastvora, poželjno voda bez pirogena. U nekom pogodnom načinu ostvarivanja ovog pronalaska, hidrogel obuhvata najmanje 80mas.% vode bez pirogena ili slanog rastvora, poželjno najmanje 85 %, poželjnije najmanje 90%, još poželjnije najmanje 95mas.% vode bez pirogena ili slanog rastvora.

[0072] Pogodni slani rastvor ima osmolarnost sličnu onoj intersticijalne tečnosti. Pogodni slani rastvori uključuju, ali bez ograničenja, grupu koja obuhvata 0,25-1% vodenog natrijumhlorida, Ringer-Lockart-ov rastvor, Earle-ov rastvor, Hanks-ov rastvor, Eagle-ovu podlogu, 0,25 - 1% rastvora glukoze, rastvor kalijumhlorida i rastvor kalcijumhlorida. U nekom poželjnom načinu ostvarivanja, slani rastvor je 0,8-1 % vodeni rastvor natrijumhlorida, kao što je 0,8, 0,9 ili 1 % vodeni rastvor natrijumhlorida, najpoželjnije oko 0,9 % vodeni natrijumhlorid.

[0073] Kao što će biti očigledno stručnjaku u tehnici, u načinu ostvarivanja u kom se slani rastvor koristi ili za pripremu PAAG i/ili za ispiranje PAAG, maseni sadržaj čvrste supstance iz PAAG biće veći od doprinosa poliakrilamida, ali obično ne veći od dodatnih 1%.

[0074] U posebno pogodnom načinu ostvarivanja ovog pronalaska, hidrogel obuhvata oko 2,5 mas.% poliakrilamida, računato na ukupnu masu hidrogela i oko 97,5 % vode bez pirogena.

[0075] Voda bez pirogena ili slani rastvor koristi se za ispiranje hidrogela u postupku ispiranja. Postupak ispiranja služi, delimično, za uklanjanje svih količina monomera akrilamida i agensa za umrežavanje, osim u tragovima, kao što je N,N'-metilen-bis-akrilamid. Ovi monomeri su toksični za pacijenta, a i štetni su za stabilnost hidrogela. Postupak ispiranja je poželjno takav da su koncentracije preostalih monomera akrilamida i agensa za umrežavanje, kao što je N,N'-metilen-bis-akrilamid, ispod 50 ppm, poželjnije ispod 40 ppm, kao što je ispod 30 ppm, najpoželjnije ispod 20 ppm, obično ispod 10 ppm, posebno poželjno ispod 5 ppm.

Agensi za umrežavanje

1

[0076] Hidrogel prema ovom pronalasku može da sadrži neki agens za umrežavanje odabran iz grupe koju čine N, N'-metilen-bis-akrilamid, N, N'-etilen-bis-akrilamid, etilen-bis (oksietilen nitril)-tetracetatni oksid, etilen-bis-(oksietilen nitril) tetracetatna kiselina i njihove mešavine. U jednom načinu ostvarivanja, pomenuti agens za umrežavanje odabran je iz grupe koju čine N,N'-metilen-bis-akrilamid, N,N'-etilenbis-akrilamid i njihove mešavine. U nekom daljem načinu ostvarivanja, pomenuti agens za umrežavanje je N,N'-metilen-bis-akrilamid.

[0077] Treba napomenuti da se načini ostvarivanja i karakteristike opisane u kontekstu jednog od aspekata ovog pronalaska takođe primenjuju na ostale aspekte ovog pronalaska.

[0078] Ovaj pronalazak u nastavku će biti detaljnije opisan u primerima koji slede.

Primeri

Primer 1 - Pripremanje hidrogela

Pripremanje hidrogela:

[0079] PAAG je poliakrilamidni gel proizveden polimerizacijom monomera akrilamida (AM) i N,N'-metilen-bis-akrilamida (bisAM). Gotov proizvod može imati različite module elastičnosti.

[0080] Hidrogel obično sadrži približno 95% vode. Pokazalo se da je koncentracija monomera akrilamida i N,N'-metilen-bis-akrilamida manja od 10 ppm i odgovarajuća je za željenu stabilnost gotovog proizvoda, često manja od 5 ppm.

[0081] Gotov proizvod mora biti usklađen u odnosu na pH, odsustvo teških metala, indeks refrakcije, stabilnost, odsustvo pirogena, i mora biti sterilan, praktično inertan i suštinski bez monomera.

Pripremanje 1.1

[0082] Sintetičko pripremanje pogodno uključuje sledeće faze:

1. Dve mešavine, A1 i A2, se pripremaju. A1 obuhvata vodu, akrilamid, N,N'-metilen-bisakrilamid, N,N,N',N'-tetrametilen-etilen-diamin (TEMED). A2 obuhvata vodu i amonijum persulfat;

2. Dve mešavine kombinuju se u sledećem odnosu: 1990 mL A1 i 10 mL A2 i drže se na 45 °C i degaziraju azotom tokom 20 sekundi;

3. Reakciona mešavina izliva se u nekoliko bikera od 100 mL;

4. Omogućeno je da se polimerizacija odvija tokom 0,5 do 1,5 sati;

5. Gel je odvojen;

6. Preostali monomeri se ekstrahuju i uravnotežuju u WFI vodi tokom 92 sata, sa izmenom vode nekoliko puta, obično 8 puta tokom ta 92 sata;

7. Prečišćeni gelovi se homogenizuju mlevenjem vertikalno oscilirajućom mrežom;

8. Špric se napuni homogenizovanim gel materijalom;

9. Autoklaviranje šprica

[0083] Uobičajen postupak za pripremu hidrogela može biti sumiran kao:

Pripremanje 1.2

Kratak pregled postupka

[0084] Gel je pripremljen umešavanjem vodenog rastvora monomera akrilamida (AM) i N,N'-metilenbis-akrilamida (bisAM) kao agensa za umrežavanje sa N,N,N',N'-tetrametilen etilen diaminom (TEMED) kao ko-inicijatorom i amonijum persulfatom (AMPS) kao inicijatorom slobodnih radikala (redoks-sistem). Degaziranjem cele mase rastvora azotom, započinje polimerizacija. Nakon završetka polimerizacije, gel se prenosi u rezervoar za ispiranje sa mrežastim policama na koje se smešta gel. Tokom ispiranja vodom, gel bubri, a ostaci monomera se ekstrahuju. Nabubreo gel se uvodi i evakuiše u jedinici za punjenje u kojoj se gel puni u špric, koji se autoklavira. Pripremaju se dve rezervne formulacije, formulacija manje i veće krajnje elastičnosti.

Tabela 1

[0085] Gore su tipični preparati hidrogela i mogu se podeseti unutar određenih opsega.

Pripremanje 1.3

Formulacije poliakrilamida iz postupka rednog umrežavanja

[0086] Posebno interesantan postupak pripreme hidrogelova ovog pronalaska uključuje postupak rednog umrežavanja. Dva zasebna i eventualno degazirana toka, pri čemu je jedan predmešavina akrilamida, N,N'-metilen-bis-akrilamida (agens za umrežavanje) i TEMED, a drugi je rastvor AMPS inicijatora, upumpavaju se u statički mikser radi mešanja, hemijske inicijacije i naknadnog istiskivanja nizvodno u cevni reaktor izrađen od Teflona ili čelika u kom se odvija polimerizacija. Ispiranje gela pojednostavljeno je zbog velike površinske oblasti gela iz reaktora.

[0087] Odabirom monomera, agensa za umrežavanje i koncentracija inicijatora i njihovih relativnih molarnih odnosa, i regulisanjem dva protoka i temperatura polimerizacije, moguće je proizvesti gelove koji variraju u stepenu umrežavanja i u sadržaju čvrstih supstanci.

Pripremanje 1.4

[0088] Reagensi su kombinovani u odnosima opisanim u Tabelama 2, 3 i 4, i isprani kao što je opisano u Tabelama (vodom bez pirogena osim ukoliko je drugačije naznačeno) da bi se dobile formulacije male, srednje i velike elastičnosti. Pripremljeni su hidrogelovi sa masenim sadržajima čvrstih supstanci između 0,5 i 25% poliakrilamida.

Tabela 2: Procesni parametri i karakteristike dobijenog gela: formulacije male elastičnosti

1

Tabela 3: Procesni parametri i karakteristike dobijenog gela: formulacije srednje elastičnosti

Tabela 4: Procesni parametri i karakteristike dobijenog gela: formulacije velike elastičnosti

Primer 2 – ispitivanje integrisanja PAAG (poliakrilamidnog hidrogela) u zglobove životinja

[0089] Cilj ovog histopatološkog ispitivanja bio je da se istraži da li se, i ako je tako gde se, intraartikularna injekcija PAAG integriše u normalne i OA zglobove životinja, i da li se ovo integrisanje održava tokom vremena.

Postupci

[0090] Dve vrste zglobova životinja su ispitivane. Prvo je sprovedeno prospektivno, dugotrajno, kontrolisano ispitivanje na normalnim zglobovima kolena kod zečeva, a kao drugo, post mortem ispitivanje izvedeno je na OA konjskim zglobovima koji su tretirani sa PAAG u različito vreme pre smrti. PAAG korišćen u svim ovim slučajevima bio je Aquamid Reconstruction@ (Contura International A/S, Soeborg, Danska). Etičko odobrenje dobijeno od Danish Animal Welfare Organization (dyreforsøgstilsynet, reference J.nr.2010/561-1774).

Prospektivno komparativno ispitivanje u normalnim zglobovima zečeva

[0091] Korišćeno je ukupno 10 dvogodišnjih belih zečeva sa Novog Zelanda. Prva 4 primila su injekcije u desno koleno sa 2,5 % PAAG i u levo koleno slani rastvor kao kontrolu. Preostalih 6 zečeva takođe su

1

primili PAAG injekcije u desno koleno, a u levo koleno primili su nabavljeni hijaluronan (HA, Durolane 20 mg/ml,Galderma, Švajcarska) kao kontrolu. Zapremina PAAG, slanog rastvora ili HA koji su ubrizgani iznosila je 0,3 ml po kolenu. Ovo je dato nakon uklanjanja nekoliko kapi tečnosti iz zgloba. Zečevi su praćeni svakodnevno da li su dobro i merena im je masa jednom nedeljno, a držani su u standardnim uslovima u parovima. Prva 4 zeca (kontrolna grupa sa slanim rastvorom) žrtvovana su nakon 10 dana. Preostalih 6 zečeva žrtvovano je, 2 u isto vreme, posle 3, 6 i 12 meseci. Za svih 10 zečeva zglobovi oba kolena su uklonjeni i posmatrani pod mikroskopom. Svo sinovijalno tkivo, hrskavica, tetiva i masno tkivo zgloba uklonjeni su i obrađeni za histopatološko ispitivanje pomoću bojenja H&E i van Gieson/Alcian plavim kao markeri tkiva.

Ispitivanje osteoartritičnih zglobova kod konja

[0092] Ovo ispitivanje uključivalo je 7 konja (starosti 5-13 godina, srednja vrednost 10 godina) što predstavlja ukupno 13 zglobova sa dijagnostikovanim OA od strane veterinara, koji su tretirani sa PAAG. Pet zglobova bez OA služila su kao kontrole. Konji su bili deo velikog prospektivnog kliničkog ispitivanja izvedenog u 3 različita centra za konje, gde je 1-4 (sredina 2) ml PAAG ubrizgano po zglobu i gde je efekat lečenja praćen postoperativno do 2 godine. Histopatološko ispitivanje je izvedeno na zglobovima nogu konja koji su umrli tokom tog perioda. Tretiranje sa PAAG prethodno je izvedeno od 7 dana do 2 godine. Svi konji su bili eutanazirani iz razloga koji nisu povezani sa PAAG terapijom. Nakon seciranja i posmatranja zglobova pod mikroskopom, svo sinovijalno tkivo koje predstavlja unutrašnju kapsulu je rutinski fiksirano, potopljeno u parafin i obojeno radi svetlosne mikroskopije. Uzorci iz hrskavice takođe su ispitani (2 iz svakog zgloba).

Rezultati – Ispitivanje na zečevima

[0093] Zečevi sa normalnim zglobovima bili su svi zdravi pri injekciji i ostali su takvi tokom ispitivanja bez promena u pokretima zglobova (npr. ograničenje aktivnosti ili šepanje) u bilo koje vreme. Prilikom velikog ispitivanja nije bilo razlike osim u 2 slučaja slabog krvarenja u kapsulu na mestu injekcije. Nakon otvaranja šupljine zgloba, i sinovijalna tečnost i unutrašnji sinovijalni omotač izgledali su blago zadebljali na mestu tretiranja sa PAAG u poređenju sa mestom tretiranja slanim rastvorom 10. dana. Ne mogu se uočiti makroskopske razlike između zglobova tretiranih sa PAAG i HA u bilo kom trenutku.

[0094] Svetlosna mikroskopija na mestu tretiranom sa PAAG 10. dana pokazala je novi sinovijalni obložni sloj koji je bio 5-10-puta deblji od onog na mestu gde je ubrizgan slani rastvor (Fig.1a), zbog PAAG koji sadrži proliferišuće sinovijalne ćelije (Fig.1b).

Na dan 90, 180 i 360, sinovijalni sloj bio je i dalje do 10-puta deblji na mestu tretiranom sa PAAG (Fig. 1c), a sinovijalni omotač bio je prisutan na površini PAAG koja je okrenuta ka šupljini. Do tada samo su se

1

videle rasejane sinovijalne ćelije unutar PAAG pomešanog sa finom fibroznom mrežom (Fig.1d, i nije otkriven PAAG unutar šupljine zgloba (Fig.1c i 1d).

Rezultati – Ispitivanje na konjima

[0095] Mikroskopska otkrića: Kopitni, kičični i zglobovi kolena tretirani su sa PAAG. Tri netretirana kopitna zgloba i 2 kičična zgloba služili su kao kontrole. Nakon otvaranja šupljine zgloba, razni stepeni obrazovanja osteofita i/ili defekta(ata) hrskavice mogli su se videti u 3 od 5 tretiranih kičičnih zglobova. PAAG je izgledao kao debela, glatka, blistava, žuta supstanca ili u kopitnom zglobu kao male jasne naslage duž unutrašnjeg dela prednje uzdužne tetive koja je okrenuta ka šupljini. Slobodan PAAG untar šupljine nije mogao da se razazna od tečnosti zgloba ispitivanjem golim okom.

[0096] Otkrića svetlosnom mikroskopijom: U kratkom periodu, 1 i 2 nedelje nakon tretiranja, PAAG je izgledao kao unutrašnji sloj unutar sinovijalnog omotača pomešan sa proliferišućim sinovijalnim ćelijama, slično histologiji viđenoj u zečjem modelu.1. meseca su se sinovijalne ćelije očigledno premestile ka površini, a 3. meseca obrazovao se poseban sloj sinovijalnih ćelija na površini integrisanog PAAG (Fig.2a). Isti obrazac otkriven je 8. meseca (Fig.2b) i 24. meseca (Fig.2c i 2d). Uopšteno, nije bilo smanjenja debljine membrane integrisanog PAAG, i pri većem uvećanju, može se videti da je PAAG materijalizovao sebe kao debelu integrisanu zonu sa prvim rasejanim zapaljenjskim ćelijama, moguće sinovijalnim ćelijama (Fig.2a), a kasnije sa finom fibroznom mrežom i nekoliko zapaljenjskih ćelija (Fig. 2d).

Kratak pregled rezultata

[0097] Integrisanje ubrizganog PAAG bilo je očigledno 10. dana kod zeca, a 14. dana kod konja, sa proliferacijom i invazijom sinovijalnih ćelija u PAAG. Do 90. dana u zglobovima zeca i 30. dana u zglobovima konja, PAAG je obrazovao subsinovijalni sloj, koji je prekriven tankim vlaknima vezivnog tkiva sa krvnim sudovima i prekriven novim sinovijalnim omotačem koji je okrenut ka šupljini zgloba. Ovaj histološki izgled opstao je do 2 godine nakon injekcije u konjske zglobove.

Zaključak

[0098] Intraartikularna injekcija PAAG rezultuje stablnim, dugotrajnim subsinovijalnim slojem PAAG prekrivenim tankim vlaknima vezivnog tkiva. Dalje, ubrizgani PAAG nije sadržao makrofage i džinovske ćelije. Džinovske ćelije mogu nastati kao odgovor na infekciju i njihovo prisustvo u ovom kontekstu može, prema tome, biti znak zapaljenja ili nestabilne integracije PAAG. Tako je to ispitivanje iznenađujuće i jedinstveno pokazalo obrazovanje analgetskog, netoksičnog, dugotrajnog i stabilnog novog sinovijalnog obložnog sloja nakon integrisanja PAAG, koji ne sadrži džinovske ćelije u bilo kom trenutku (Fig.1 (a, c, d) i Fig.2 (a-d)).

1

[0099] Bez vezivanja za teoriju, otkriveno je da promene sastava sinovijalnih ćelija ili proizvodnje citokina obezbeđuju prevenciju i/ili lečenje bolnog sinovitisa kod sisara. Stoga, intraartikularni PAAG prisutan je u sinovijumu zgloba i opstaje tokom vremena.

Primer 3 – Kliničko ispitivanje skora bola kod čoveka u zglobovima zahvaćenim osteoartritisom

Kratak pregled kliničkog ispitivanja

Naziv probe:

[0100] Retrospektivno i prospektivno opservaciono ispitivanje Aquamid Reconstruction@ kod pacijenata sa osteoartritisom kolena.

Probni period:

[0101] Pacijenti su tretirani između marta 2010. i januara 2015. i praćeni tokom najmanje 12 nedelja nakon lečenja.

Ciljevi:

[0102] Primarni cilj bio je da se oceni ishod od osnovne linije u WOMAC podskorovima bola najmanje 12 nedelja nakon tretiranja sa Aquamid Reconstruction®.

[0103] Sekundarni cilj bio je 1) da se oceni ishod od osnovne linije u ukupnom WOMAC skoru i podskorovima za ukočenost i funkcionalnost; 2) Da bi se procenilo subjektivno opažanje pacijenata o efektivnosti lečenja najmanje 12 nedelja nakon injekcije Aquamid Reconstruction®.

Metodologija:

[0104] Ovo je bilo neinterventno naknadno ispitivanje pacijenata koji su tretirani sa neodobrenim Aquamid Reconstruction zbog osteoartritisa kolena.

[0105] Ispitivanje se sastojalo od retrospektivnog dela u kom su demografske karakteristike i karakteristike osnovne linije preuzete iz medicinskih evidencija pacijenata i prospektivnog dela praćenja u kom su pacijenti sa WOMAC podskorom bola osnovne linije mogli da učestvuju u ispitivanju. Za prospektivni deo veći deo podataka prikupljen je iz obrazaca izveštaja o slučajevima. Pacijenti su praćeni nakon najmanje 12 nedelja posle tretiranja sa Aquamid Reconstruction®.

Broj pacijenata:

[0106] 24 pacijenta je uključeno sa ukupno tretirana 32 zgloba kolena.

1

Dijagnoza i kriterijumi za učestvovanje:

[0107] Da bi ispunili uslove za ovo ispitivanje, pacijenti su morali:

1) da budu tretirani sa Aquamid Reconstruction@ zbog osteoartritisa kolena, sa subjektivnim simptomima kao što su bol, oticanje, višak tečnosti i ograničenje pomeranja zglobova i klasifikovani da imaju umereni do teški osteoartritis prema kriterijumima određenim od strane American College of Rheumatology, a kod kojih su prethodne, ostale terapije bile bezuspešne.

2) da potpišu obrazac informisane saglasnosti.

Kriterijumi za procenu:

[0108] Efikasnost: Primarna krajnja tačka efektivnosti je promena u WOMAC podskoru bola od osnovne linije do najmanje 12 nedelja praćenja.

[0109] Sekundarne krajnje tačke efektivnosti su promene u ukupnom WOMAC skoru, i podskorovima ukočenosti i funkcionalnosti, od osnovne linije do najmanje 12 nedelja kao i subjektivno opažanje pacijenata o efektivnosti lečenja.

Rezultati:

[0110] Efikasnost: Postojalo je statistički značajno poboljšanje u promeni srednje vrednosti u WOMAC podskoru bola (P=0,0002) i u svakoj od tri sekundarne krajnje tačke efikasnosti (ukupan WOMAC skor, i podskorovi ukočenosti i fizičke funkcije) od osnovne linije do poslednje posete tokom praćenja, (P=0,0012), (P=0,0008) i (P=0,0048), tim redom.

[0111] Bezbednost: Nisu prijavljena nikakva ozbiljna neželjena dejstva. Blaga i prolazna neželjena dejstva nastala zbog injekcije, kao što su otok i nelagodnost, primećeni su kod nekoliko pacijenata peroperativno i postoperativno, ali nisu zabeležene veće komplikacije kao što su infekcije. Nijedan pacijent nije prijavio bilo kakvu nelagodnost/neželjena dejstva u periodu praćenja.

Zaključak:

[0112] Aquamid Reconstruction® je efektivna i bezbedna terapija za pacijente sa osteoartritisom zgloba kolena sa održivim dejstvom.

Detalji kliničkog ispitivanja

[0113] Aquamid Reconstruction® (AR) je poliakrilamidni hidrogel (PAAG).

1

1. Pozadina

[0114] Između marta 2010. i januara 2015., 24 pacijenta sa OA kolena na osnovu kriterijuma propisanih od strane American College of Rheumatology primilo je injekciju AR. Ukupno 32 zgloba kolena primilo je terapiju AR. Pre injekcije, dijagnoza OA određena je pomoću rendgena i ozbiljnost OA je ocenjena prema Kellgren i Lawrence koji se sastoji od 5 skorova (0, nema; 1, sumnjivo; 2, minimalna; 3, umerena; 4, teška).

[0115] Krajnje tačke efektivnosti su promene u WOMAC podskorovima i ukupni skor i subjektivno opažanje pacijenata o ishodu tretiranja najmanje 12 nedelja nakon inicijalnog tretiranja.

[0116] Tretiranje sa Aquamid Reconstruction® pacijenata sa OA u zglobovima kolena izvedeno je njegovom neodobrenom primenom kod pacijenata koji nisu imali odgovarajući odgovor na druge terapije (nefarmakološke i farmakološke), a koji su izrazili želju za terapijom kojom bi mogli da odlože ili moguće potpuno izbegnu totalnu zamenu kolena.

1.1 Uređaj za ispitivanje

[0117] AR sadrži 2,5% poliakrilamida i 97,5% vode bez pirogena. AR je biokompatibilan, nije biorazgradiv, stabilan je i sterilan.

[0118] Gel je obezbeđen u sterilnom, prethodno napunjenom zapečaćenom špricu od 1 ml. Gel je ubrizgan intraartikularno sterilnom iglom od 21G x 2 inča (0,8 x 50 mm).

[0119] Gel treba da se čuva u suvoj sredini na normalnoj sobnoj temperaturi (na 30°C).

[0120] Namenjena je samo za jednu upotrebu. Pre injekcije, treba proveriti da li je pakovanje neoštećeno i da nema nikakvih vidljivih promena.

1.2 Postupak davanja

[0121] Sledeći pristup korišćen je za sve pacijente kojima je ubrizgan AR:

Procedura je izvedena u aseptičnim uslovima. Pre injekcije, mesto za injekciju je pređeno u poluprečniku od najmanje 5 cm oko mesta za injekciju hlorheksidinom sa alkoholom tri puta sa intervalom od jednog minuta. Injekcija je data u prostor zgloba. Ako je došlo do izlivanja iz zgloba, ovo je uklonjeno pre ubrizgavanja, pomoću iste igle. Korišćena je igla od 21 G x 2" (0,8 x 50 mm). Injekcija hidrogela je izvedena pod lokalnom anestezijom (i unutar zgloba i direktno na mesto injekcije).

[0122] Injekcije su izveden pomoću ultrazvuka u bočnom proksimalnom udubljenju. Pacijenti su ili ležali ili sedeli sa savijenim kolenom između 80°-90°.

[0123] Špric, igla i bilo koji neiskorišćeni materijal odloženi su nakon sesije lečenja.

1.3 Doziranje

2

[0124] Inicijalno je ubrizgano 1-5 ml. Ako nije postignuta dovoljna efektivnost, drugih 1-6 ml je ubrizgano nakon najmanje dve nedelje. Neki pacijenti primili su do 3 injekcije. Vidi Tabelu 6.

1.4 Dizajn probe

[0125] Ovo neintervenciono ispitivanje sastojalo se od retrospektivnog dela gde su dobijeni istorijski podaci iz medicinskih evidencija pacijenata i dela praćenja gde su prikupljani podaci prospektivno pri posetama tokom praćenja. AR injekcije i povezani podaci prikupljeni su kao deo rutinskog kliničkog rada, što je razlog zašto nisu planirani određeni intervali praćenja niti je sledio strog raspored procenjivanja.

[0126] Pacijenti koji su imali WOMAC skor osnovne linije i koji su praćeni najmanje 12 nedelja nakon inicijalne AR injekcije su uključeni. Sledeći podaci, zabeleženi pre i/ili posle tretiranja, dobijeni su iz medicinskih evidencija pacijenata i CFR:

● Datum(i) tretiranja

● Demografske karakteristike (starost, pol, visina, masa)

● Ozbiljnost osteoartritisa kolena (Kellgren Lawrence ocenjivanje)

● Ostali tretmani/intervencije pre AR tretmana

● Detalji oko tretiranja (ubrizgana zapremina)

● WOMAC skorovi

● Subjektivno opažanje o ishodu tretiranja

● Komplikacije/neželjena dejstva

[0127] Pacijenti su ili došli na kliniku ili pozvani telefonom da bi popunili WOMAC upitnik i dali svoje subjektivno opažanje o efektivnosti lečenja, kao i da bi dali informaciju o bilo kakvim komplikacijama/medicinskim problemima koje su možda imali posle lečenja sa AR.

1.5 Kriterijumi podobnosti

[0128] Da bi primili terapiju AR, pacijent je morao da ispuni sledeće kriterijume:

1. OA kolena na osnovu kriterijuma propisanih od strane American College of Rheumatology

2. Potpisani obrazac informisane saglasnosti

2. Efikasnost

2.1 Indeks osteoartritisa Western Ontario i McMaster univerziteta (WOMAC)

[0129] Indeks osteoartritisa Western Ontario i McMaster univerziteta (WOMAC) je specifičan upitnik bolesti dizajniran da bi ga ispunili pacijenti sa osteoartritisom kukova i/ili kolena da bi se ocenili bol, ukočenost i fizička funkcija. WOMAC upitnik dostupan je u Likertovom tipu skale sa 5 tačaka i formatu vizuelno analogne skale od 100 mm (VAS). Odgovori VAS i Likertove skale su u visokoj korelaciji, međutim, smatra se da je Likertovu skalu jednostavnije primeniti jer pacijenti bolje razumeju polja za potvrdu povezana sa rečju ili izrazom nego označavanje X na neprekidnoj liniji. Verzija Likertove skale, koja je korišćena za sve pacijente, koristi sledeće deskriptore za sve stavke: nema, blag, umereni, teški i ekstremni. Ovi odgovori odgovaraju rednoj skali od 0-4.

[0130] Skorovi su sumirani za stavke u svakoj podskali, sa mogućim opsezima kao što sledi: bol= 0-20, ukočenost= 0-8, fizička funkcija= 0-68. Ukupan WOMAC skor kreiran je sabiranjem stavki za sve tri podskale. Viši WOMAC skorovi ukazuju na jači bol, ukočenost i funkcionalna ograničenja. Najveći mogući ukupni skor je 96.

[0131] WOMAC indeks osteoartritisa sastoji se od 24 stavke podeljene u 3 podskale:

● Bol (5 stavki): tokom hodanja, korišćenjem stepenica, u krevetu, sedenje ili ležanje, i stajanje ● Ukočenost (2 stavke): posle prvog buđenja i kasnije u toku dana

● Fizička funkcija (17 stavki): korišćenje stepenica, ustajanje iz sedećeg položaja, stajanje, savijanje, hodanje, ulazak u/izlazak iz auta, kupovina, obuvanje/izuvanje čarapa, ustajanje iz kreveta, ležanje u krevetu, ulazak u/izlazak iz kade, sedenje, sedanje na/ustajanje sa WC šolje, teški kućni poslovi, laki kućni poslovi.

[0132] Upitnik, koji može biti komplikovan osobi, preko telefona, ili putem računara, prvenstveno se završava na klinici kada pacijenti dolaze u posete tokom praćenja, ali se neki popunjavaju preko telefona.

2.2 Subjektivno opažanje pacijenata

[0133] Pacijenti su upitani da izraze svoje opažanje o ishodu tretiranja odabirom jedne od četiri alternative da opišu svoje stanje: bez bola (izlečeni), poboljšano, nema promena, pogoršano.

[0134] Pored toga, upitani su da li su podvrgnuti totalnoj zameni kolena.

2.3 Bezbednost

[0135] Pri svakoj poseti tokom praćenja, pacijenti su upitani o pojavi ND/medicinskih problema od AR injekcije. Bilo kakve komplikacije ili medicinski problemi zabeleženi su u CRF. Peroperativne i postoperativne komplikacije/ND, ako je bilo nekih, zabeleženi su u medicinske evidencije.

3. Statistička metodologija

3.1 Razmatranje veličine uzoraka

[0136] Broj pacijenata određen je na osnovu dostupnih podataka. Stoga, niti procenjivanje veličine uzorka niti izračunavanje snage nisu izvedeni.

3.2 Opšti pristup za prikaz rezultata

[0137] Prikupljeni podaci sumirani su pomoću opisne statistike. Opisne statistike za kontinuirane parametre uključuju kao primenljiv broj opažanja (n), broj opažanja koja nedostaju (nmiss), srednja vrednost, standardna devijacija (SD), sredina, minimalne (min) i maksimalne (max) vrednosti, dok kategorični parametri uključuju učestalost i procenat.

[0138] Procene su predstavljene sa intervalima pouzdanosti od 95%, gde je to moguće. Neće se primeniti korekcija za višestrukost. Neće se izvesti formalno testiranje hipoteze.

3.3 Analiza i izveštavanje o krajnjoj tački efektivnosti

[0139] Primarna krajnja tačka efektivnosti je promena u WOMAC podskoru bola od osnovne linije do 12-nedeljnog praćenja. Vrednost osnovne linije definisana je kao poslednji WOMAC podskor bola ocenjen pre ili na dan davanja.12-nedeljno praćenje je definisano kao prvi WOMAC podskor bola ocenjen na ili posle 12-nedelja (definisan kao relativan dan za ocenjivanje veći ili jednak 12 nedelja puta 7 dana, pri čemu 1. dan predstavlja dan davanja).

[0140] Opisne statistike koje uključuju srednju vrednost i standardno odstupanje za primarnu krajnju tačku biće predstavljene. Po potrebi, predstaviće se interval pouzdanosti od 95% za srednju vrednost pod pretpostavkom normalne distribucije krajnje tačke. Pretpostavke za upotrebu normalne distribucije ispitaće se grafički predstavljanjem distribucije krajnje tačke. Ako se smatra da pretpostavke nisu ispunjene, koristiće se drugi pristupi za analizu, kao što su transformisanje krajnje tačke ili upotreba neparametrijskih metoda. Po potrebi, promena će se korigovati za vrednost osnovne linije.

[0141] Za svrhu istraživačke analize, mogu se uvesti dalje definicije respondera, kao što je definisanje odgovora kao najmanje 20% poboljšanje od osnovne linije.

3.4 Izveštavanje o krajnjoj tački bezbednosti

[0142] Broj komplikacija i neželjenih dejstava biće opisno sumiran i predstavljen kao ukupan broj i za vreme (pre davanja i nakon davanja, i pojava najmanje 12 nedelja nakon davanja) i, po potrebi, za redni broj injekcije.

Tabela 5 Demografske karakteristike i karakteristike osnovne linije

2

3.5 Informacija o tretiranju i praćenju

[0143] Dvadesetčetiri pacijenta sa 32 kolena primilo je AR terapiju. Od 32 tretirana kolena, 26 kolena (81,3%) ponovo su dobila injekcije; 23 kolena primila su dve injekcije, a tri kolena primila su tri injekcije.

[0144] Srednja ukupna zapremina ubrizgana u svaki zglob bila je 6,50 ml (opseg 2,0-11,0). Za detalje, vidi Tabelu 6. Najveći broj pacijenata primio je drugu injekciju između 2-14 nedelje nakon inicijalne injekcije; međutim, tri pacijenta primila su drugu terapiju 26, 32 i 212 nedelja posle prve injekcije.

Tabela 6: Informacija o tretiranju

2

[0145] Pre tretiranja i pri posetama tokom praćenja, pacijenti su završili popunjavanje WOMAC upitnika. Pri posetama tokom praćenja, pacijenti su takođe upitani o njihovom opažanju o ishodu tretiranja i da li su podvrgnuti totalnoj zameni kolena. Srednja vrednost ± SD (sredina) vremena praćenja od prvog AR tretiranja bila je 428 ± 522 (210) dana (opseg 104-1744).

4. Podaci o proceni efikasnosti (podaci nisu prikazani, već sumirani dole).

4.1 Subjektivno opažanje pacijenata o ishodu tretiranja

[0146] Subjektivno ocenjivanje pacijenata o ishodu tretiranja pokazalo je da je 20 kolena (62,6%) klasifikovano ili kao "izlečeni/bez bola" (6,3%) ili "poboljšani" (56,3%). Za osam kolena (25,0%) prijavljeno je da "nema promene", a za 3 kolena (9,4%) navedeno je "pogoršana". Jedan pacijent imao je totalnu zamenu kolena i to levog kolena tokom ispitivanja ("uklonjeno").

[0147] Subjektivno opažanje pacijenata o ishodu tretiranja obezbeđeno je u Tabeli 7

Tabela 7: Subjektivno opažanje pacijenata o ishodu tretiranja

2

[0148] Pacijenti koji su prijavili da nisu osećali bol (izlečeni) ili da su imali poboljšanje takođe su demonstrirali najveću promenu u WOMAC podskoru bola, (-10,0) i (-4,9), tim redom. Slični odnos viđen je za ukupan WOMAC skor i dva podskora (ukočenost i fizička funkcija). Za WOMAC skorove povezane sa ishodom tretiranja prijavljenim od strane pacijenta, rezultati su prikazani u Tabeli 8.

Tabela 8: WOMAC podskor bola za ishod tretiranja prijavljen od strane pacijenta

5. Procena bezbednosti

5.1. Neželjena dejstva

[0149] Nisu prijavljena ozbiljna neželjena dejstva. Blaga i prolazna neželjena dejstva nastala zbog injekcije, kao što su otok i nelagodnost, primećena su kod nekoliko pacijenata peroperativno i postoperativno, ali nisu zabeležene nikakve ozbiljne komplikacije kao što su infekcije.

[0150] Nijedan pacijent nije prijavio bilo kakvu nelagodnost/neželjena dejstva tokom praćenja.

[0151] Ograničen je broj tretiranih pacijenata što se može objasniti nedostatkom komplikacija.

Međutim, PAAG je demonstrirao dobar profil bezbednosti sa nekoliko komplikacija u ostalim indikacijama.

6. Zaključak

[0152] Smanjenje WOMAC skorova koje je viđeno u ovom ispitivanju 32 kolena praćena tokom srednje vrednosti od 7 meseci posle PAAG tretiranja bilo je statistički značajno za ukupan WOMAC skor kao i sve podskorove. Placebo efekat je poznato da traje do 6 meseci za trenutne neinvazivne tretmane. Posle tog vremena, simptomi su se ponovili bez ponovnih injekcija.

2

[0153] Primarna krajna tačka ispitivanja - promena u WOMAC podskoru bola - smanjena je značajno (P=0,0002) za približno 40% za sve grupe sa teškim OA. Grupe 1 i 2 sa teškim OA demonstrirale su brojčano veće dejstvo na skor bola (srednja promena -5,5) nego grupe 3 i 4 sa teškim OA (srednja promena -2,0).

<1>Pacijent ID 54 primio je injekciju u levo koleno sa inicijalno dobrim odgovorom na lečenje koji se smanjio posle dva meseca, pri čemu se taj pacijent vratio i primio drugu injekciju u levo koleno. U istoj tački vremena, u desno koleno takođe je ubrizgan AR. I levo i desno koleno pokazalo je dobro poboljšanje i pacijent je vozio bicikl 40 km dnevno. Ovo poboljšanje je trajalo tokom oko 6 meseci i zatim je usledio smanjenje efekta u levom kolenu, pa je pacijentu zakazana totalna zamena kolena. WOMAC pre tretiranja za desno koleno nije dobijen, ali ovo koleno bilo je u odličnom stanju tokom 42 meseca posle injekcije. WOMAC nakon tretiranja uzet je 3,5 meseca posle AR injekcije.

[0154] Interesantno, promena u WOMAC podskoru bola bila je značajna (P=0,0107) za skor OA ozbiljnosti 3 i 4.

[0155] Iznenađujuće, pronalazači su otkrili da je poliakrilamidni hidrogel (PAAG) koristan u prevenciji i/ili lečenju bola kod ljudi koji boluju od osteoartritisa (OA).

[0156] Sinovitis je prisutan u mnogim zglobovima pogođenih osteoartritisom (OA). Stoga, bez vezivanja za teoriju, smatra se da je analgetički efekat primećen u ovom ispitivanju na ljudima koji boluju od osteoartritisa izazvan prisustvom novog sinovijalnog obložnog sloja i/ili novog subsinovijalnog sloja nakon integrisanja PAAG u humane zglobove, a zbog čega je smanjen sinovijalni bol.

Primer 4 – Ispitivanja tkiva kolena humanih pacijenata

Klinička pozadina

[0157] U zglobove kolena dva pacijenta koji boluju od osteoartritisa ubrizgan je PAAG (Aquamid), koji je svojom pasivnom integracijom i efektom punila na sinovijalnu membranu obezbedio smanjenje ili potpuno otklanjanje bola. Zavisno od ozbiljnosti osteoartritisa, ovo olakšanje bola trajalo je do 2 godine i 5 meseci. Nakon toga, TKA (totalna aloplastika kolena, tj. zamena kolena) je izvedena.

Patološka otkrića od TKA

[0158] Kost, hrskavica i meko tkivo od standardnih TKA operacija dobijeni su nakon uklanjanja približno iste količine tkiva u svakoj operaciji, što odgovara desetini zgloba kolena. Meka tkiva i kost prekrivena hrskavicom isečeni su na male delove i obrađeni radi histološkog ispitivanja. Svo tkivo, osim tri četvrtine kosti, je ispitano. Količina mekog tkiva blago je varirala od kolena do kolena.

2

[0159] Samo desetina tkiva zgloba kolena uklonjena je tokom TKA operacije, i primećen nedostatak integrisanog Aquamid je najverovatnije posledica različitih resorpcija Aquamid u različitim delovima zgloba.

Pacijent 1

[0160] Klinika: 77-godišnjoj ženi sa bilateralnim teškim osteoartritisom kolena data je injekcija sa 5 ml Aquamid u oba kolena 7. avgusta i 28. avgusta 2014. (ukupno 10 ml po kolenu). Gel je pomogao u prve 2 od približno 21⁄2 godine, ali 12. septembra 2016. izvedena je TKA na levoj strani zbog teškog OA u završnoj fazi.

[0161] Obilje potpuno integrisanog gela videlo se unutar celog mekog tkiva koje je pregledano. Oblasti perivaskularnog zapaljenja, pruge vlakana vezivnog tkiva i žarišta jasnih ćelijskih makrofaga takođe su se videle unutar sinovijalnog mekog tkiva. Duboko smeštena naslaga gela koja sadrži džinovske ćelije davala je utisak direktne injekcije gela u meka tkiva, a ne, kao što je očekivano, samo u šupljinu. Ni u jednom trenutku nije bilo gela u hrskavici ili kosti. Gel je ubrizgan 2 godine i 5 meseci ranije.

Pacijent 2

[0162] Klinika: 69-godišnjoj ženi sa umerenim osteoartritisom kolena ubrizgano je ukupno 3 ml Aquamid 17. marta 2014. Aquamid injekcija pomogla je inicijalno, ali dve godine kasnije, bol zbog osteoartritisa se vratio i TKA je izvedena.

[0163] Dobro integrisan Aquamid gel video se u jednoj trećini biopsija. Gel je u potpunosti integrisan sa zrelom mrežom i rasejanim zapaljenjskim i fibroblastičnim ćelijama. Nije bilo džinovskih ćelija i nikakvih oblasti koje daju utisak injekcija duboko smeštenog gela direktno u meka tkiva. Ni u jednom trenutku nije bilo gela u hrskavici ili kosti. Gel je ubrizgan 2 godine ranije.

Zaključak

[0164] Aquamid gel biva integrisan u sinovijalnoj membrani kombinacijom premeštanja sinovijalnog omotača i urastanjem okolnih ćelija domaćina tj. obrazovanjem subsinovijalnog sloja i/ili novog sinovijalnog obložnog sloja. Celularnost unutar gela je manja od one unutar normalnog sinovijalnog tkiva, i deo dejstva Aquamid injekcija na smanjenje bola verovatno je izazvan malobrojnošću ćelija, krvnih sudova i povezanih nerava.

2

Claims

Patentni zahtevi

1. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju sinovitisa kod sisara obrazovanjem novog sinovijalnog obložnog sloja.

2. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu prema zahtevu 1, u prevenciji i/ili lečenju sinovitisa kod sisara obrazovanjem subsinovijalnog sloja i novog sinovijalnog obložnog sloja.

3. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-2, pri čemu je subsinovijalni sloj i/ili novi sinovijalni obložni sloj prisutan/opstaje do 15 meseci kao što je 18 meseci, kao što je 24 meseca.

4. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-3, pri čemu se poliakrilamidni hidrogel daje injekcijom u sterilnim uslovima.

5. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-4, pri čemu se poliakrilamidni hidrogel daje intraartikularnom injekcijom.

6. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-5, pri čemu se 0,1-20 ml poliakrilamidnog hidrogela daje injekcijom u intraartikularnu šupljinu.

7. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu prema zahtevu 6, pri čemu se 0,1-20 ml poliakrilamidnog hidrogela daje injekcijom u intraartikularnu šupljinu najmanje jednom, kao što je dvaput, kao što je tri puta, kao što je četiri puta, kao što je 5 puta, kao što je 6 puta, kao što je 7 puta, kao što je 8 puta, kao što je 9 puta, kao što je 10 puta u intraartikularnu šupljinu.

8. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu prema zahtevu 6, pri čemu se 0,1-20 ml poliakrilamidnog hidrogela daje injekcijom u intraartikularnu šupljinu u pravilnim intervalima kao što je jednom svake 2 nedelje, kao što je svake 4 nedelje, kao što je svakih 6 nedelja, kao što je svakih 8 nedelja, kao što je svakih 10 nedelja, kao što je svakih 12 nedelja, kao što je svakih 14 nedelja, kao što je svakih 16 nedelja ili kao što je još duže u intraartikularnu šupljinu.

9. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-8, pri čemu sisar predstavlja čoveka, trkačku životinju ili kućnog ljubimca.

10. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-9, pri čemu sisar koji se leči predstavlja čoveka, a zglob ili zglobovi u koji/koje će se ubrizgati je/su koleno, kuk, lakat, metakarpofalangealni i interfalangealni zglobovi u šakama i stopalima, sezamoidni zglob i/ili temporomandibularni zglob.

11. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-9, pri čemu sisar koji se leči predstavlja konja, a zglob ili zglobovi u koji/koje će se ubrizgati je/su kičični, kopitni, krunski, kolenski i/ili zglob kolena zadnjih nogu.

12. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-9, pri čemu sisar koji se leči predstavlja psa, a zglob ili zglobovi u koji/koje će se ubrizgati je/su lakat prednje noge ili zglob kolena ili kuka zadnjih nogu.

13. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-12, pri čemu sisar boluje od sinovitisa.

14. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-13, pri čemu sisar boluje od artritisa, kao što je osteoartritis ili reumatoidni artritis, lupusa ili gihta.

15. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu prema zahtevu 14, pri čemu sisar boluje od osteoartritisa ili reumatoidnog artritisa.

16. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju bola zbog sinovitisa kod sisara obrazovanjem novog sinovijalnog obložnog sloja.

17. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu prema zahtevu 16 u prevenciji i/ili lečenju bola zbog sinovitisa kod sisara obrazovanjem subsinovijalnog sloja i novog sinovijalnog obložnog sloja.

18. Poliakrilamidni hidrogel za upotrebu prema zahtevu 16 ili 17, pri čemu je upotreba kao što je definisana u bilo kom od zahteva 2-15.

1