RS61830B1 - Medicinsko sredstvo za lečenje hpv kožnih infekcija - Google Patents

Description

Opis

Oblast tehnike pronalaska

[0001] Ovaj se pronalazak odnosi na medicinsko sredstvo za lečenje kožnih infekcija od papiloma virusa (HPV), naročito za lečenje bradavica i povezanih bolesti.

Stanje tehnike

[0002] Humani papiloma virusi (HPV) predstavljaju male DNK viruse iz porodice papovavirusa. Iako nisu kapsulirani, HPV-ovi su veoma rezistentni virusi, prečnika od oko 55 nm. Njihov se genom sastoji od kružnog dvolančanog DNK koji sadrži oko 8000 parova nukleotidnih baza, povezanog sa histonima radi obrazovanja struktura sličnih malim hromozomskim entitetima.

[0003] Prema njihovom tropizmu, HPV-ovi se mogu klasifikovati na kožne i mukozne. Među kožnim tipovima, postoje oni koji se obično nalaze u populaciji (HPV 1, 2 i 4) i oni koji su povezani sa veruciformnom epidermodisplazijom, među kojima su najvažniji HPV 5 i HPV 8 zbog visoke sklonosti ka malignoj transformaciji. Mukozni tipovi se obično dele na visoko i niskorizične tipove. U invazivnim karcinomima skvamoznih ćelija, niskorizični tipovi (HPV 6 i 11) su gotovo uvek odsutni, dok su visokorizični tipovi uvek prisutni (HPV 16 i 18).

[0004] Benigne HPV kožne infekcije obično se klasifikuju kao bradavice, papilomi i kondilomi. Papilomi pogađaju usnu duplju, dok kondilomi pogađaju polne organe i muškaraca i žena.

[0005] Bradavica je kožna formacija izazvana humanim papiloma virusom (HPV) i predstavlja benignu manifestaciju koju čine jezgro unutrašnjeg tkiva koje hrane krvni sudovi i koju oblažu slojevi epitelnog tkiva. Virus prodire u epiderm zaražavajući ga.

[0006] Izgled bradavice varira u zavisnosti od mesta na kom se javlja i od virusnog soja koji je izaziva. Bradavice se dele na:

1. Obične bradavice: kožne lezije prouzrokovane Papiloma virusom obično imaju nepravilan oblik i često se (ali ne uvek) razvijaju na asimptomatski način.

2. Plantarne bradavice: tipično na tabanu, ove se bradavičaste lezije izazvane HPV virusom lako prenose u bazenima i teretanama.

3. Ravne bradavice: ispupčene bradavičaste lezije; Papiloma virus, inficiranje šaka, stopala, lica i nogu, može prouzrokovati ova kožna oštećenja, koja brzo nestaju.

[0007] Obične bradavice tipično imaju grubu površinu, često naboranu i nedopadljivu, a obično se pojavljuju na šakama, laktovima i kolenima.

[0008] Bradavice su prilično čest problem: procenjuje se da pogađaju oko 10% svetskog stanovništva, sa tendencijom rasta. Najpogođenija populaciona grupa uključuje decu školskog uzrasta, starije maloletnike i mlađe punoletnike. Pik dostiže u starosnim grupama između 10 i 15 godina.

[0009] Bradavice su često asimptomatske i nestaju čak i ako se ne leče, ali su vremena isceljivanja veoma duga, čak nekoliko godina. Uzevši u obzir nedopadljiv izgled takvih kožnih manifestacija, pogođene osobe često pribegavaju tretmanima za njihovo uklanjanje.

[0010] Tretmani koji se trenutno koriste uključuju:

- hirurško uklanjanje: sastoji se od potpunog uklanjanja zaražene kožne oblasti. Iako je ovaj postupak učinkovit, on je veoma invazivan i, u svakom slučaju, ne rešava problem povratka bradavica;

- krioterapija: sastoji se od zamrzavanja pogođene oblasti tečnim azotom;

- keratolitički preparati: ubrzavaju ciklus sazrevanja bradavica, čime ih izvlače na površinu i omogućavaju spontano odvajanje;

- intralezione injekcije: injekcije interferona u samu bradavicu, da bi se indukovala apoptoza ćelija zaraženih virusom;

- laserska terapija: sastoji se od spaljivanja bradavice laserom;

- primena vitamina E: lokalno nanet vitamin E, u uljanim preparatima koristi se i kao losion protiv iritacije kože, vodi uklanjanju bradavice, verovatno poboljšava sposobnost isceljenja.

[0011] Ovi su tretmani uglavnom invazivni i imaju mogućnost uspeha ne veću od 70%.

[0012] Dakle, postoji potreba za učinkovitim i minimalno invazivnim lečenjem HPV kožnih infekcija, naročito benignih kožnih infekcija kao što su bradavice i povezane manifestacije. Patentni dokument US 6 703009 B1 opisuje tečnu kompoziciju za topikalnu primenu, koja obuhvata 15% ASA, 10% propilenglikola, 2% glicerina i izopropilalkohol. Patentni dokument WO 2011/076401 A1 opisuje obezvodnjenu topikalnu kompoziciju gela koja obuhvata 5% ASA, 28% propilenglikola, hidroksipropilcelulozu i druge ekscipijense.

[0013] Nedavno je pronalazač ove patentne prijave predložio upotrebu acetilsalicilne kiseline za lečenje bradavica i papiloma. Međunarodna prijava br. PCT/IB2016/055300 opisuje farmaceutske kompozicije, naročito lekovite flastere ili flastere, koje sadrže ASA u čvrstom obliku ili inkorporisane u hidrofilne ili hidrofobne gelove ili u ciklodekstrine.

[0014] Acetilsalicilna kiselina (ASA) pripada klasi nesteroidnih antiinflamatornih lekova (NSAIL). ASA je derivat salicilne kiseline, koji se odlikuje prisustvom acetilne grupe na položaju 2, koja je odgovorna za antiinflamatorno dejstvo tog molekula. ASA ispoljava inflamatorno dejstvo inhibiranjem sinteze prostaglandina acetilacijom serina na aktivnom mestu enzima ciklooksigenaze (COX). Pri malim dozama (75-81 mg/dan) dejstvo ASA je selektivno na nivou trombocita, gde ona nepovratno inhibira serin 530 COX1, čime ispoljava antitrombocitni efekat. Pri većim dozama (650-4000 mg/dan), ASA inhibira COX1 i COX2, čime blokira sintezu prostaglandina i obezbeđuje antipiretički i analgetski efekat. Drugi mehanizmi delovanja tog molekula ispitivani su ili predlagani za objašnjenje mnogih njegovih farmakoloških svojstava, ali se o mogućem antivirusnom dejstvu ASA malo zna.

[0015] Iako su se formulacije opisane u međunarodnoj prijavi br. PCT/IB2016/055300, naročito lekoviti flasteri ili flasteri, pokazale kao učinkovite u lečenju bradavica, papiloma i bradavica, one ne rešavaju sve probleme povezane sa ovim tipom primene. Nedostatak naročito flastera je to što nije estetski, smeta i lako se odvaja kada deo na kom se nalazi dođe u dodir sa vodom.

[0016] Povrh toga, ASA koja se nalazi u pomenutim flasterima nije pokazala optimalnu stabilnost, što je posle nekoliko meseci skladištenja na sobnoj temperaturi dovelo do nezanemarljivog porasta procenta salicilne kiseline kao proizvoda hidrolize ASA.

[0017] Postoje razni tehnički problemi koje bi idealna formulacija trebala rešiti. Formulacije bi naročito trebale da:

• Sadrže učinkovite, ali netoksične koncentracije aktivne supstance, tj. minimalnu koncentraciju dovoljnu za učinkovito uklanjanje lezije bez oštećenja dubljih kožnih slojeva;

• Sadrže takve koncentracije aktivne supstance da one ne ulaze u krvotok i ne ispoljavaju sistemske efekte, naročito bi se ASA trebala uključiti u koncentracije sa isključivo lokalnim efektima, bez rizika od ulaska u krvotok sa posledičnim neželjenim sistemskim efektima;

• Budu poželjno vodootporne, tako da se ne odvajaju ili ispiraju tokom dnevnih higijenskih aktivnosti ili da se mogu primenjivati čak i kada subjekat posećuje bazene, plaže, itd. U potonjem bi slučaju, zapravo, formulacija pomogla da se lezija zaštiti od dalje kontaminacije patogenima i da se ograniči zaražavanje drugih subjekata jer bi ona zaustavljala oslobađanje mikroinficirane kože u okolinu;

• Maksimalizuju stabilnost ASA na hidrolizu;

• Brzo uklone leziju, čime se povećava subjektova komplijansa;

• Omoguće subjektu da ih samostalno koristi u kućnim uslovima bez obraćanja lekaru;

• Budu lake za upotrebu, pod ovim se podrazumeva lakoća primene na leziju, takođe za upotrebu kod subjekata kao što su deca, i isključivo na leziju, bez širenja na okolna zdrava tkiva; • Budu udobne i diskretne kada se primene, bez stvaranja nelagode subjektu;

• Budu otporne na trenje i trljanje, tako da medikament ne spada tokom svakodnevnih aktivnosti, kao što je trljanje od odeću, tkanine, rublje, obuću i svakodnevne predmete, s obzirom na to da ove lezije veoma često pogađaju kožu na šakama, stopalima i polnim organima;

• Budu jeftine.

Kratak sadržaj pronalaska

[0018] Dakle, ovaj se pronalazak odnosi na kompoziciju na bazi kolodijuma koja obuhvata acetilsalicilnu kiselinu, kao što je navedeno u pridruženim patentnim zahtevima 1 do 3.

[0019] Ovaj se pronalazak odnosi i na kompoziciju koja obuhvata acetilsalicilnu kiselinu i glikole, kao što je navedeno u pridruženim patentnim zahtevima 4 do 10.

[0020] Ovaj se pronalazak dalje odnosi na kompozicije na bazi kolodijuma i glikola, koje obuhvataju acetilsalicilnu kiselinu kao jedinu aktivnu supstancu ili opciono uz to sadrže supstancu sa antivaskularnim dejstvom i/ili supstancu koja pomaže tretman uklanjanja izraslina ili bradavica i/ili supstancu sa analgetskim ili anestetskim dejstvom, kao što je navedeno u pridruženim patentnim zahtevima 11 do 16.

[0021] Ovaj se pronalazak nadalje odnosi na kompozicije ovog pronalaska za upotrebu u lečenju HPV kožnih infekcija, naročito benigne infekcije kao što su bradavice, papilomi i kondilomi, kao što je navedeno u pridruženim patentnim zahtevima 17 do 18.

[0022] Ovaj se pronalazak još dalje odnosi na komplet koji obuhvata kompoziciju koja obuhvata acetilsalicilnu kiselinu i sredstvo za mehaničko uklanjanje lezije.

[0023] Tekst pridruženih patentnih zahteva čini sastavni deo ove specifikacije.

[0024] Dalja svojstva i prednosti postupka prema ovom pronalasku biće jasnija nakon čitanja opisa poželjnih načina ostvarivanja u nastavku, koji je dat kao neograničavajući primer.

Kratak opis crteža

[0025]

Fig.1 prikazuje snimke stereo mikroskopa tkanine tretirane kompozicijom na bazi kolodijuma ovog pronalaska naspram kontrolne tkanine;

Fig.2 prikazuje snimke za histohemijsku analizu tkanine tretirane kompozicijom na bazi kolodijuma ovog pronalaska naspram kontrolne tkanine;

Fig.3 prikazuje snimak za histohemijsku analizu zrnastog sloja, prvog rožastog sloja i umetnutih dezmosoma, na veštačkim konstruktima netretirane humane kože;

Fig.4 prikazuje snimak (2000x) za histohemijsku analizu bazalnog sloja na veštačkim konstruktima netretirane humane kože;

Fig.5 prikazuje snimak za histohemijsku analizu bazalnog sloja na veštačkim konstruktima humane kože tretirane kompozicijama na bazi ASA i kolodijuma ovog pronalaska.

Detaljan opis pronalaska

[0026] Prema prvom načinu ostvarivanja, ovaj se pronalazak odnosi na kompoziciju na bazi kolodijuma koja obuhvata acetilsalicilnu kiselinu za upotrebu u lečenju HPV kožnih infekcija, naročito benignih kožnih infekcija kao što su bradavice, i obične i plantarne ili ravne, papilomi, kondilomi i slično.

[0027] Kolodijum je rastvor piroksilina u etru/alkoholu. Piroksilin (nitroceluloza, fulminantni pamuk ili koloksilin) predstavlja mešavinu nitroetara celuloze sa prevladavanjem dinitroceluloze.

[0028] Kolodijum više nije registrovan u Zvaničnoj italijanskoj farmakopeji (FUI), ali se, prema njenom VI izdanju, priprema rastvaranjem 1 dela piroksilina u 4 dela alkohola na 96° i 12 delova etiletra. Kad se nanese na kožu, rastvarač brzo isparava ostavljajući okluzivni film koji može zaštiti male lezije, fiksirati hirurški zavoj ili održavati lekove, koji su prethodno rastvoreni u njemu, u dugotrajnom kontaktu sa epidermom.

[0029] Elastični kolodijum, koji je rezistentniji i prilagodljiviji prevojima kože, dobija se dodavanjem devičanskog ricinusovog ulja kolodijumu. FUI VI izd. ne uključuje druge supstance, dok US farmakopeja uključuje i kamfor, a Britanska farmakopeja kolofonijum (Fleksibilni kolodijum USP i BP).

[0030] Elastični kolodijum može se pripremati počevši od pokazatelja dostupnih u Austrijskoj farmakopeji ili u nemačkom NRF formularu:

97 masenih delova kolodijuma

3 masena dela ricinusovog ulja.

[0031] Kolodijum se može koristiti na 5mas.% piroksilina u mešavini alkohola/etiletra.

[0032] U poželjnim načinima ostvarivanja, kompozicija ovog pronalaska obuhvata od 10mas.% do 30mas.% acetilsalicilne kiseline i od 50mas.% do 80mas.%, poželjnije od 50mas.% do 70mas.%, kolodijuma ili elastičnog kolodijuma, dobijenog kao što je gore opisano, pri čemu preostali deo čini rastvarač. Naročito je poželjan elastični kolodijum. Rastvarač je poželjno etilalkohol ili mešavina etilalkohola i etiletra, poželjnije mešavina etilalkohola/etiletra oko 1:1 računato na masu.

[0033] U poželjnim načinima ostvarivanja, kompozicija ovog pronalaska obuhvata od 10mas.% do 25mas.% acetilsalicilne kiseline, od 50mas.% do 70mas.% kolodijuma ili elastičnog kolodijuma, dobijenog kao što je gore opisano, i od 5mas.% do 15mas.% glikola, pri čemu preostali deo čini rastvarač. Glikol je poželjno propilenglikol (1,2-propandiol). Rastvarač je poželjno 1:1 mešavina etanola/etiletra. Kolodijum je poželjno elastični kolodijum.

[0034] Naročito poželjna kompozicija ima sledeći sastav u masenim procentima:

[0035] Prema sledećem primeru mogu se pripremiti kompozicije na bazi kolodijuma ili kolodijuma i glikola.

[0036] U zatvorenu posudu stavi se čist etilalkohol (9 g), a u njega se sipa granulisana ASA (18 g), uz kontinuirano mešanje, dok se prah ne disperguje. Sa etiletrom (9 g) se dodaje kolodijum ili elastični kolodijum (54 g), a mešanje se nastavlja do potpunog rastvaranja. Zatim se dodaje glikol (propilenglikol, 10 g). Da bi se olakšalo rastvaranje, koristi se vodeno kupatilo na temperaturi od 35-40 °C. Glikol se izostavlja u preparatima koji su bazirani samo na kolodijumu. U oba slučaja može se koristiti drugačiji rastvarač.

[0037] Gore opisane kompozicije bazirane na ASA i kolodijumu ili ASA, kolodijumu i glikolu su u obliku rastvora i mogu se nanositi na mesto za lečenje (bradavica, papilom, kondilom ili slično) kapalicom ili pipetom. Budući da je širenje bradavice ili kondiloma uobičajeno između 1 mm i 10 mm, količina od oko 10 mikrolitara ovog rastvora obično je dovoljna za pokrivanje oblasti intervencije tako da se na njoj obrazuje film.

[0038] U određenim načinima ostvarivanja ovog pronalaska, kompozicija koja obuhvata acetilsalicilnu kiselinu dalje obuhvata glikol.

[0039] Glikol je poželjno odabran iz grupe koju čine propilenglikol (1,2-propandiol), 1,3-propandiol, butilenglikol, pentilenglikol ili njihove mešavine.

[0040] U poželjnim načinima ostvarivanja, kompozicija sadrži ASA između 5 i 30mas.% i glikol između 1mas.% i 30mas.%.

[0041] Kompozicija će sadržati i dalje ekscipijense u zavisnosti od tipa formulacije koju treba pripremiti.

[0042] U određenim načinima ostvarivanja, kompozicija ASA i glikola predstavlja tečni rastvor koji se treba primeniti, npr., utrljavanjem, raspršivač ili gel. Ovde je dalje opisana kompozicija koja obuhvata (sastav računat na masu):

[0043] Ovde su dalje opisane formulacije A-I, L koje ne ulaze u obim patentnih zahteva. Sledeće kompozicije su u obliku rastvora koji se može utrljati:

Formulacija A (rastvor koji se može utrljati)

[0044]

[0045] Ova se formulacija dobija mešanjem dela alkohola i polimera do potpunog rastvaranja u odgovarajućem sistemu koji je opremljen turbinom za homogenizaciju. ASA se potom, uz mešanje do potpunog rastvaranja, rastvara u preostalom delu ili alternativno u propilenglikolu, a celina se spaja sa prethodnim rastvorom. Najzad se dodaje preostala voda.

Formulacija B (rastvor koji se može utrljati)

[0046]

00

Formulacija C (rastvor koji se može utrljati)

[0047]

Formulacija D (rastvor koji se može utrljati)

[0048]

[0049] Naročito su poželjni sledeći oblici kompozicija u obliku raspršivača:

Formulacija E (raspršivač)

[0050]

Formulacija F (raspršivač aerosola)

[0051]

Formulacija G (gel)

[0052]

1

[0053] Gel se priprema hidratacijom polimera akrilnog estra u vodi, a zatim mešanjem rastvora dok se ne dobije gel. Polimeri se rastvaraju u etilalkoholu do potpunog rastvaranja u odgovarajućem sistemu koji je opremljen turbinom za homogenizaciju. ASA se potom rastvara u drugom alikvotu etilalkohola ili glikola, a celina se meša do potpunog rastvaranja i onda se dodaje prethodno pripremljenom rastvoru.

Formulacija H (vaginalni gel)

[0054]

[0055] Prema drugačijem aspektu ovog pronalaska, obezbeđene su sledeće kompozicije računate na masu.

Formulacija I (Mast)

[0056]

Formulacija L (Vaginalete)

[0057]

[0058] Sve gore opisane kompozicije mogu se pripremiti u skladu sa konvencionalnim postupcima, kao što su postupci opisani u Remington, The Science and Practice of Pharmacy, Edited by Allen, Loyd V., Jr, 22nd edition, 2012.

[0059] U poželjnim načinima ostvarivanja, doza ASA iznosi od 0,3 do 1,2 g/dan, poželjno od 0,5 do 1 g/dan.

[0060] U određenim načinima ostvarivanja, kompozicije na bazi kolodijuma ovog pronalaska, sa glikolom ili bez njega, ili kompozicije koje obuhvataju ASA u vezi sa glikolom, mogu sadržati supstancu sa antivaskularnim dejstvom i/ili supstancu koja pomaže tretman uklanjanja izraslina ili bradavica i/ili supstancu sa analgetskim ili anestetskim dejstvom. Količina takvih supstanci u kompoziciji ovog pronalaska zavisiće od prirode supstance i od efekta kog treba postići, a obično će se kretati između 0,01mas.% i 10mas.%.

[0061] Slede primeri poželjnih supstanci koje se mogu koristiti u kompoziciji ovog pronalaska:

Supstance sa antivaskularnim dejstvom

[0062]

- Dehidro-α-lapačon

- Kombretastatin

- Ekstrakti Piptadiniastrum africanum

- Ekstrakti Kigelia africana

- Ekstrakti Centella asiatica

- Ekstrakti Chaemocrista nigricans

- Ekstrakti oleuropeina/lišća masline.

Supstance sa svojstvima koja pomažu lečenje izraslina i bradavica

[0063] Ekstrakti Agoseris glauca, Apocynum cannabinum, Argemone mexicana, Asclepias eriocarpa, Asclepias hallii, Asclepias lanceolata, Asclepias purpurascens, Asclepias quadrifolia, Asclepias rubra, Asclepias speciosa, Asclepias syriaca, Calendula arvensis, Calendula officinalis, Caltha leptosepala, Caltha natans, Caltha palustris, Chelidonium majus, Cichorium intybus, Coix lacryma-jobi, Delphinium staphisagria, Diospyros virginiana, Dipsacus fullonum, Dipsacus sativus, Drosera rotundifolia, Euphorbia hirta, Euphorbia lathyris, Euphorbia serpyllifolia, Ficus carica, Ficus palmata, Impatiens aurella, Impatiens balsamina, Impatiens capensis, Impatiens ecalcarata, Impatiens occidentalis, Impatiens parviflora, Juniperus sabina, Lactuca canadensis, Mercurialis annua, Mercurialis perennis, Monotropa uniflora, Ocimum minimum, Opuntia compressa, Paulownia tomentosa, Podophyllum peltatum, Ranunculus acris, Rhus diversiloba, Rhus typhina, Salvia lyrata, Sempervivum tectorum, Sonchus oleraceus, Symphoricarpos albus laevigatus, Taraxacum officinale, Zea mays.

Supstance sa analgetskim/anestetskim dejstvom

[0064] Ekstrakti Aconitum carmichaelii, Aconitum ferox, Aconitum fischeri, Aconitum kusnezoffii, Aconitum lycoctonum, Aconitum uncinatum, Aconitum volubile, Arisaema thunbergii, Asarum heterotropoides, Asarum sieboldii, Capsicum frutescens, Coptis chinensis, Coptis teeta, Datura metel, Fritillaria sewerzowii, Gleditsia macracantha, Gleditsia triacanthos, Mentha arvensis, Mentha arvensis piperascens, Monarda menthifolia, Rhododendron molle, Salix pulchra, Tagetes lucida, Zanthoxylum bungeanum, Zanthoxylum schinifolium.

EKSPERIMENTALNA SEKCIJA

Ispitivanje keratolitičkih efekata kompozicija ovog pronalaska na svinjskoj koži analizom grubosti kože

1

[0065] Svinjska koža je histološki slična humanoj koži [Gray and Yardley, 1975; Wester et al., 1998]. Čak je i prosečna gustina folikula dlake slična: 20/cm2 za kožu uha svinje u poređenju sa 14-32/cm2 za humanu kožu čela [Jacobi et al., 2007]. Prema tome, svinjska koža predstavlja prikladan supstrat za izvođenje ispitivanja keratolitičke efikasnosti.

[0066] Svinjska koža za izvođenje ovde opisanih ogleda dobijena je iz lokalne klanice (San Đulijano Terme, Piza, Italija). Koža je isprana vodom, a vidljive čekinje su isečene u korenu.

[0067] Ovom je ogledu, uz negativnu kontrolu koja se sastoji od svinjske kože bez ikakvog tretmana, podvrgnuta i gore opisana kompozicija na bazi elastičnog kolodijuma sa 20% ASA.

[0068] Kompozicija se nanosi na svinjsku kožu tako da pokriva kružnu površinu od 6 mm, u triplikatu i održava se u kontaktu sa svinjskom kožom tokom 14 sati. Nakon toga se izvodi merenje grubosti kože pomoću Intelligent Skin Analysis System (GBS-1800) digitalnog dermatoskopa kog proizvodi Maikong Industry. Svako ispitivanje se izvodi tako da ima CV (koeficijent varijacije merenja) manji od 15%.

[0069] Rezultati su dati u sledećoj tabeli kao srednja vrednost /-SD. Efekti različitih tretmana naspram kontrola ocenjuju se t-testom.

Ispitivanje keratolitičkih efekata kompozicija ovog pronalaska na rekonstruisanim humanim tkivima

[0070] Tkiva se tretiraju uzorcima tokom 14 sati. Na kraju ovog perioda, uklanjaju se iz podloge, ispiraju u PBS-u, a zatim fiksiraju u 4% rastvoru paraformaldehida.

[0071] Fiksirana tkiva se prvo podvrgavaju makroskopskoj analizi kako bi se istaklo prisustvo bilo kakvih vidljivih lezija u keratinocitima površinskog sloja, a onda se podvrgavaju histohemijskoj analizi. U tu se svrhu tkiva prvo dehidriraju po rastućoj skali alkohola (70°-85°-90°-100°) tokom 60-100 minuta u svakoj fazi, čiste ksilenom i prebacuju u parafin istopljen u peći, na 51 °C tokom 2 sata, pa na 60 °C tokom 1 sata i ostavljaju da očvrsnu na sobnoj temperaturi.

[0072] Za bojenje hematoksilinom/eozinom, isečci postavljeni na pločice oslobađaju se parafina u ksilenu tokom 15 minuta i ponovo se hidriraju prema opadajućoj skali alkohola do vode. Pločice se potom uranjaju u Majerov Hemalum (Hematoksilin) tokom 3 minuta, ispiraju mlazom vode sa česme, a zatim uranjaju u 1% rastvor Eozina G tokom 3 minuta. Na kraju bojenja, isečci se dehidriraju prema rastućoj skali alkohola i postavljaju sa DPX-om.

[0073] Na osnovu makroskopskog ispitivanja (snimaka napravljenih stereomikroskopom), kao što je prikazano na Fig.1, primećena je promena sloja najbližeg površini u tretiranim tkivima. Oštećenje je naročito očigledno u tkivima tretiranim kompozicijom na bazi kolodijuma.

[0074] Na osnovu histohemijske analize (Fig.2), primećeno je odsustvo površinskog rožastog sloja u tkivima tretiranim kolodijumom, koji je i dalje prisutan u kontrolnim tkivima.

Eksperimenti koji porede različite kompozicije koje sadrže ASA na ultrastrukturi veštačkih konstrukata humane kože (SkinEthic)

[0075] Sledeće kompozicije koje su ispitivane u odnosu na Kompozicije 1 i 2 ulaze u obim patentnih zahteva.

Kompozicija 1 - Rastvor sa elastičnim kolodijumom

[0076] Kompozicija, pripremljena kao što je prethodno opisano, koja sadrži (maseni procenti):

Kompozicija 2 - Rastvor sa elastičnim kolodijumom propilenglikolom

[0077] Kompozicija, pripremljena kao što je prethodno opisano, koja sadrži (maseni procenti):

1

Kompozicija 3 - Rastvor sa propilenglikolom

[0078] Kompozicija 3 koja sadrži isključivo propilenglikol, čistoće veće od 99%.

Kompozicija 4 - Hidrofilni gel

[0079] Kompozicija koja sadrži (maseni procenti):

Priprema:

[0080] Rastvoriti ASA u etanolu do savršeno bistrog rastvora, pa ga polako i u delovima inkorporisati unutar gela.

[0081] Za gel: prvo dispergovati ksantan gumu i karagen u glicerinu propilenglikolu, pa dodati vodu, dovesti mešavinu do 55-60 °C i homogenizovati lopaticama i turbinom, u vakuumu.

[0082] Ohladiti gel do sobne temperature i dodati fenoksietanol, pa dodati alkoholni ASA rastvor.

Kompozicija 5 - ASA mast na bazi vazelina

[0083] Kompozicija koja sadrži (maseni procenti):

1

Priprema:

[0084] Mešati ASA u delovima u vazelinskom gelu do homogenosti; potom dodati tečni parafin. Da bi se preparat dalje rafinisao, koriste se mikronizovana ASA i rafiner masti kako bi se dobio proizvod bez kristala koji bi se mogli osetiti na dodir i povećala kontaktna površina aktivne supstance, a samim tim i njena efektivnost.

Kompozicija 6 - Hidrofilna emulzija

[0085] Kompozicija koja sadrži (maseni procenti):

Priprema:

[0086] Rastvoriti ASA u etanolu do savršeno bistrog rastvora, pa ga polako i u delovima inkorporisati unutar amfifilne baze, sa preciznim i kontinuiranim mešanjem pomoću lopatica. Izvesti u vakuumu u konvencionalnom uređaju.

[0087] Sastav baze: voda q.s. do 100%; 25,5% vazelina; 10% propilenglikola; 7,5% kaprilnog/kaprinskog triglicerida; 7% PEG-8 stearata; 6% cetearilalkohola; 4% glicerilstearata; 0,5% fenoksietanola; 0,4% natrijumbenzoata; 0,3% kalijumsorbata; limunska kiselina do pH.

Kompozicija 7 - Flaster

[0088] Kompozicija koja sadrži (maseni procenti):

ASA 5%.

1

Priprema:

[0089] Pojedinačne sirovine se mere: konvencionalni polimerni lepak u preparatu flastera koristi se za pripremu neke zapremine lepka, kome se dodaje ASA.

[0090] Tako dobijena zapremina lepka razmazuje se na poliestarsku podlogu. Razmaz se suši unutar peći za sušenje; zatim se polugotov proizvod koji izlazi iz peći spaja sa poliuretanskim filmom, a potom se umotava u „matičniˮ kalem.

[0091] „Matičniˮ kalem se seče na druge manje kaleme. Isečeni kalemi se podvrgavaju automatskom sečenju matricom kako bi se dobile prevlake 10 okruglih flastera prečnika od 12 mm. Dobijeni okrugli flasteri se pakuju.

[0092] Količine ASA korišćene u raznim kompozicijama utvrđene su počevši od raznih testova i biranja među količinama koje daju makroskopski stabilnu kompoziciju, tj. na kojima se ASA nije odvajala kao čvrsta supstanca od kompozicije.

Veštački konstrukti humane kože

[0093] Korišćeni su SkinEthicTM RHE/S/17 uzorci rekonstituisanog humanog epiderma. To je in vitro rekonstituisani humani epiderm od normalnih humanih keratinocita odgajenih na polikarbonatnom filteru na razdelnoj površini vazduh-tečnost.

[0094] Uzorci tkiva se uklanjaju iz zaštitne agaroze i inkubiraju u ploči sa 6 bazenčića sa 1 ml medijuma za održavanje po bazenčiću. Posle otprilike 27 sati inkubacije, uzorci se tretiraju na sledeći način:

- Pomoću mikropipete se, iznad odgovarajućih epidermalnih slojeva, fiksiraju 100 µl rastvora kompozicija 1, 2, 3 i čista voda (kontrola);

- Velika količina mešavine kompozicija 4 (hidrofilni gel), 5 (mast) i 6 (hidrofilna emulzija) razmazuje se preko odgovarajućih epidermalnih slojeva pomoću štapića za uši;

- Mali deo flastera (kompozicija 7) lepi se na epidermalni sloj.

[0095] Nakon oko 14 sati inkubacije sa goreopisanim kompozicijama, umeci epiderma se seku i fiksiraju u 500 mikrolitara fiksativa (2,5% glutaraldehida, 2% paraformaldehida u kakodilatnom puferu 0,1 M na pH 7,4) tokom 2 sata na sobnoj temperaturi.

[0096] Po isecanju malih pravougaonika tkanine, uzorci se ubacuju u epoksidnu smolu. Dobijaju se ultratanki isečci i postavljaju na bakarna sita, pa se boje uranilacetatom i olovocitratom.

[0097] TEM elektronsko mikroskopsko posmatranje netretiranog epidermalnog tkiva (kontrolnog uzorka tretiranog samo vodom) pokazalo je zrnasti sloj spojen brojnim dezmosomima sa prvim od 24-25 slojeva

1

korneocita (Fig.3).

[0098] Nakon tretmana, sveukupni izgled bazalnog, spinoznog i granularnog sloja bio je očuvan i sličan kontroli u uzorcima tretiranim kompozicijama 3, 7 i 5 (Fig.4). U uzorcima tretiranim kompozicijama 1, 2 i 4, svi ćelijski slojevi imali su nekrotičan izgled (Fig.5), što je pokazatelj veoma visoke citotoksičnosti. U uzorcima tretiranim kompozicijom 6, prisutna je opšta ćelijska pogođenost u spinoznom sloju sa nekim nekrotičnim ćelijama i nekim piknotičkim nukleusima što ukazuje na indukciju apoptoznih procesa.

[0099] Dakle, utvrđen je broj korneocitnih slojeva koji su ostali na uzorku nakon tretmana, važan parametar za procenu učinkovitosti tretmana jer predstavlja indikator rezidualne debljine rožastog sloja.

[0100] Tabela 1 u nastavku prikazuje rezultate tog utvrđivanja.

Tabela 1 – Broj korneocitnih slojeva preostalih nakon tretmana kompozicijama 1 do 7

[0101] Podaci izloženi u tabeli prikazuju suštinsku neefikasnost kompozicija 5 (mast) i 6 (hidrofilna emulzija); slabu efikasnost kompozicije 3 (kompozicija na bazi propilenglikola); srednju efikasnost kompozicija 4 (hidrofilni gel) i 7 (flaster); značajniju efikasnost kompozicije 1 (kompozicija na bazi kolodijuma); ekstremno visoku efikasnost kompozicije 2 (kompozicija na bazi propilenglikola kolodijuma).

[0102] Dakle, potonji podaci pokazuju primetan sinergetički efekat kombinacije ASA, kolodijuma i propilenglikola, pošto se rezultat kompozicije 2 ne može smatrati aditivnim efektom rezultata prijavljenih za kompozicije 1 i 3.

[0103] Može se zapaziti i da količina ASA u kompoziciji nije diskriminanta između aktivne ili neaktivne kompozicije, jer su, na primer, kompozicije 4 (2% ASA) i 7 (5% ASA) aktivnije od kompozicije 5 (20% ASA).

1

Stabilnost kompozicija

[0104] Utvrđena je količina salicilne kiseline (SA) u nekim kompozicijama ovog pronalaska nakon skladištenja na sobnoj temperaturi tokom perioda od oko 5 meseci. To je ispitivanje izvedeno pomoću HPLC/UV postupka odobrenog prema EUEP i USP farmakopejama. Rezultati su sledeći:

kompozicija 7 (flaster) 75,86mas.% SA

kompozicija 1 (kolodijum) 15,57mas.% SA

kompozicija 2

(kolodijum prop. glikol) oko 7mas.% SA.

[0105] Specifični primeri kompozicija: formulacije AH ne ulaze u obim patentnih zahteva, formulacije I, L ulaze u obim patentnih zahteva.

Formulacija A (rastvor koji se može utrljati)

[0106]

Formulacija B (rastvor koji se može utrljati)

[0107]

2

Formulacija C (rastvor koji se može utrljati)

[0108]

Formulacija D (rastvor koji se može utrljati)

[0109]

Formulacija E (raspršivač)

[0110]

Formulacija F (raspršivač aerosola)

[0111]

Formulacija G (gel)

[0112]

Polimer akrilnog estra 5%

Formulacija H (vaginalni gel)

[0113]

Formulacija I (rastvor)

[0114]

Formulacija L (rastvor)

[0115]

ASA 18%

2

Claims (12)

1. [0116] Ovaj se pronalazak dalje odnosi na komplet koji obuhvata određenu količinu kompozicije ovog pronalaska za jednokratnu ili višekratnu primenu i sredstvo za mehaničko uklanjanje lezije. [0117] Korisna sredstva sa abrazivnim mehaničkim svojstvima mogu, na primer, biti turpija za višekratnu upotrebu, niz turpija za jednokratnu upotrebu, plavci ili slično. Abrazivni materijal mora imati takvu granulometriju da uklanja samo tkivo pogođeno lezijom, bez krvarenja. Prednost treba dati nizu turpija za jednokratnu upotrebu kako bi se izbeglo da mikrokoličine zaražene kože uklonjene sa turpije ne ostanu u okolini i ne prouzrokuju zaražavanje. Patentni zahtevi 1. Kompozicija na bazi kolodijuma koja obuhvata acetilsalicilnu kiselinu.
2. 2. Kompozicija prema zahtevu 1, u kojoj pomenuti kolodijum predstavlja elastični kolodijum koji obuhvata mešavinu kolodijuma i ricinusovog ulja.
3. 3. Kompozicija prema zahtevu 2, koja obuhvata 10mas.% do 30mas.% acetilsalicilne kiseline i 50mas.% do 80mas.% ili 50mas.% do 70mas.% kolodijuma ili elastičnog kolodijuma i opciono neki rastvarač.
4. 4. Kompozicija prema bilo kom od zahteva 1 do 3, koja obuhvata 10mas.% do 25mas.% acetilsalicilne kiseline, 50mas.% do 70mas.% kolodijuma ili elastičnog kolodijuma i 5mas.% do 15mas.% glikola, pri čemu preostali deo čini rastvarač.
5. 5. Kompozicija prema zahtevu 4, u kojoj: - glikol predstavlja propilenglikol, i/ili - rastvarač predstavlja 1:1 mešavinu etanola/etiletra, i/ili - kolodijum predstavlja elastični kolodijum.
6. 6. Kompozicija prema zahtevu 4 ili 5, sa sledećim sastavom u masenim procentima:
7. 7. Kompozicija prema bilo kom od zahteva 1 do 6, koja dalje obuhvata supstancu sa antivaskularnim dejstvom i/ili supstancu koja pomaže tretman uklanjanja izraslina ili bradavica i/ili supstancu sa analgetskim ili anestetskim dejstvom.
8. 8. Kompozicija prema zahtevu 7, pri čemu je: - pomenuta supstanca sa antivaskularnim dejstvom odabrana iz grupe koju čine Dehidro-αlapačon, Kombretastatin, Ekstrakti Piptadiniastrum africanum, Ekstrakti Kigelia africana, Ekstrakti Centella asiatica, Ekstrakti Chaemocrista nigricans, Ekstrakti oleuropeina/lišća masline ili njihove mešavine; - pomenuta supstanca koja pomaže tretman uklanjanja izraslina ili bradavica odabrana iz grupe koju čine ekstrakti Agoseris glauca, Apocynum cannabinum, Argemone mexicana, Asclepias eriocarpa, Asclepias hallii, Asclepias lanceolata, Asclepias purpurascens, Asclepias quadrifolia, Asclepias rubra, Asclepias speciosa, Asclepias syriaca, Calendula arvensis, Calendula officinalis, Caltha leptosepala, Caltha natans, Caltha palustris, Chelidonium majus, Cichorium intybus, Coix lacryma-jobi, Delphinium staphisagria, Diospyros virginiana, Dipsacus fullonum, Dipsacus sativus, Drosera rotundifolia, Euphorbia hirta, Euphorbia lathyris, Euphorbia serpyllifolia, Ficus carica, Ficus palmata, Impatiens aurella, Impatiens balsamina, Impatiens capensis, Impatiens ecalcarata, Impatiens occidentalis, Impatiens parviflora, Juniperus sabina, Lactuca canadensis, Mercurialis annua, Mercurialis perennis, Monotropa uniflora, Ocimum minimum, Opuntia compressa, Paulownia tomentosa, Podophyllum peltatum, Ranunculus acris, Rhus diversiloba, Rhus typhina, Salvia lyrata, Sempervivum tectorum, Sonchus oleraceus, Symphoricarpos albus laevigatus, Taraxacum officinale, Zea mays ili njihove mešavine; - pomenuta supstanca sa analgetskim ili anestetskim dejstvom odabrana iz grupe koju čine ekstrakti Aconitum carmichaelii, Aconitum ferox, Aconitum fischeri, Aconitum kusnezoffii, Aconitum lycoctonum, Aconitum uncinatum, Aconitum volubile, Arisaema thunbergii, Asarum heterotropoides, Asarum sieboldii, Capsicum frutescens, Coptis chinensis, Coptis teeta, Datura metel, Fritillaria sewerzowii, Gleditsia macracantha, Gleditsia triacanthos, Mentha arvensis, Mentha arvensis piperascens, Monarda menthifolia, Rhododendron molle, Salix pulchra, Tagetes lucida, Zanthoxylum bungeanum, Zanthoxylum schinifolium ili njihove mešavine.
9. 9. Kompozicija prema zahtevu 7 ili 8, pri čemu ta kompozicija sadrži pomenute supstance sa antivaskularnim dejstvom i/ili koje pomažu tretman uklanjanja izraslina ili bradavica i/ili sa analgetskim ili anestetskim dejstvom u masenim procentima između 0,01mas.% i 10mas.%.
10. 10. Kompozicija prema bilo kom od zahteva 1 do 9, za upotrebu u lečenju HPV kožnih infekcija.
11. 11. Kompozicija za upotrebu prema zahtevu 10, pri čemu pomenuta HPV kožna infekcija predstavlja benignu kožnu infekciju, običnu, plantarnu ili ravnu bradavicu, papilom, kondilom ili slično.
12. 12. Komplet koji obuhvata određenu količinu kompozicije prema bilo kom od zahteva 1 do 9 za jednokratnu ili višekratnu primenu i sredstvo za mehaničko uklanjanje lezije sa abrazivnim mehaničkim svojstvima, poželjno turpiju za višekratnu upotrebu, niz turpija za jednokratnu upotrebu, plavac ili slično. 2