RS62381B1 - Nanosuspenzija prirodnih materijala i postupak njene pripreme - Google Patents

Nanosuspenzija prirodnih materijala i postupak njene pripreme

Info

Publication number
RS62381B1
RS62381B1 RS20211145A RSP20211145A RS62381B1 RS 62381 B1 RS62381 B1 RS 62381B1 RS 20211145 A RS20211145 A RS 20211145A RS P20211145 A RSP20211145 A RS P20211145A RS 62381 B1 RS62381 B1 RS 62381B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
nanosuspension
phase
natural material
grinding
particle size
Prior art date
Application number
RS20211145A
Other languages
English (en)
Inventor
Werner Brand
Original Assignee
Apurano Pharmaceuticals Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Apurano Pharmaceuticals Gmbh filed Critical Apurano Pharmaceuticals Gmbh
Publication of RS62381B1 publication Critical patent/RS62381B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/03—Organic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/716—Glucans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/748—Cyanobacteria, i.e. blue-green bacteria or blue-green algae, e.g. spirulina
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/07—Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
    • A61K36/071—Agaricus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/63—Oleaceae (Olive family), e.g. jasmine, lilac or ash tree
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/141—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers
    • A61K9/145—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers with organic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/20—Ingredients acting on or related to the structure
    • A23V2200/25—Nanoparticles, nanostructures

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Opis
POZADINA OVOG PRONALASKA
Oblast ovog pronalaska
[0001] Ova prijava se odnosi na postupak za pripremu nanosuspenzije od prirodnih materijala, na nanosuspenziju koja obuhvata najmanje jedan prirodni materijal, i upotrebu takve nanosuspenzije za pripremu leka.
Pozadina ovog pronalaska
[0002] Prirodni materijali, kao što su biljke, cijanobakterije, alge ili gljivice, sadrže aktivne agense koji imaju moć da leče bolesti. Kako bi se ovi aktivni agensi izlučili iz prirodnih materijala, poznati su različiti farmaceutski preparati uključujući vodenu ili alkoholnu perkolaciju ili maceraciju, ekstrakte suvog praška u obliku tableta ili kapsula, ili injektabilne dozne formulacije. Međutim, postoji mnogo nedostataka povezanih sa ovim tipovima primene. Mnogi od ovih sastojaka se razgrađuju unutar gastrointestinalnog trakta ili su podvrgnuti metabolizmu prvog prolaza kroz jetru. Pored toga, delovi populacije imaju poteškoće prilikom gutanja tableta ili nisu u mogućnosti da podnesu čvrste materije. Dalje, mnogi aktivni agensi prirodnih materijala su slabo rastvorljivi u vodi. Moć i terapijski efekti mnogih aktivnih agenasa prirodnih materijala su samim tim ograničeni.
[0003] Američki patent br.5,858,410 se odnosi na preparate lekova koji se zovu "nanosuspenzije" koje se proizvode homogenizacijom pod visokim pritiskom. Pre upotrebe homogenizacije pod visokim pritiskom, nanosuspenzije su pripremljene postupkom mlevenjem perli, koji predstavlja postupak koji zahteva vreme u odnosu na homogenizaciju pod pritiskom. Ova tehnologija je predmet, između ostalog, američkog patenta br.5,271,944. Mnogi drugi postupci se koriste za pripremu nanosuspenzija sa različitim stepenom uspeha uključujući mešalice niske energije, turbinske mešalice, koloidalne mlinove, sonolatore, otvore, medijske mlinove, mešalice sa rotorom i statorom i sonikatore.
[0004] Kineska patentna prijava br. CN 1416847 A se odnosi na pripremu nanosuspenzije Radix Panacis Quinquefolii (American ginseng) proizvedenog homogenizacijom pod visokim pritiskom u koncentraciji od između 20 % i 11,1 % (w/w).
[0005] Evropska patentna objava br. EP 2226171 A1 se odnosi na dezintegraciju drvenog materijala (npr. Douglas fir) brusilicom tipa mlinskog kamena kako bi se dobila celulozna vlakna prosečnog prečnika vlakna od najviše 30 nm i odgovarajući kompozit izrađen od celuloznih vlakana. Vlakna imaju prosečnu minimalnu dužinu od 50 µm.
[0006] Koreanska patentna prijava KR 20110130104 A se odnosi na organsko đubrivo koje obuhvata nanočestice morskih algi, školjkasti prašak, zeolit, i druge minerale pri čemu svaka od različitih čestica može biti smrvljena dok se ne postigne veličina od 1 nm do 100 nm.
[0007] Međutim, postupcima iz stanja tehnike za pripremu nanosuspenzije nedostaje postupak za pripremu nanosuspenzije od prirodnih materijala sa velikom količinom prirodnog materijala, tj. velike koncentracije prirodnog materijala. Samim tim još uvek postoji potreba za postupcima za pripremu nanosuspenzije od prirodnih materijala, od koji se nanosuspenzija može poželjno koristiti u lečenju ili sprečavanju bolesti.
KRATAK SADRŽAJ OVOG PRONALASKA
[0008] Samim tim jedan od predmeta ovog otkrivanja je da se obezbedi postupak za pripremu nanosuspenzije od celih ili delova prirodnih materijala koji mogu da se koriste u pripremi leka.
[0009] U prvom aspektu, ovo otkrivanje obezbeđuje postupak za pripremu stabilne nenosuspenzije koja obuhvata najmanje jedan prirodni materijal, pri čemu taj postupak obuhvata faze
a. Obezbeđivanja najmanje jednog prirodnog materijala veličine čestica (D100) manje od 320 µm, osim ekstrakta;
b. Dispergovanja najmanje jednog prirodnog materijala iz faze a. u rastvaraču;
c. Usitnjavanja disperzije iz faze b. do veličine čestica (D90) ispod 1000 nm (D90< 1000 nm), pri čemu je najmanje jedan prirodni materijal dispergovan u fazi b. u koncentraciji od 0,5 do 20 % (w/w), u odnosu na ukupnu količinu rastvarača upotrebljenog u nanosuspenziji, i pri čemu faza dispergovanja b. ili faza mlevenja c. obuhvata dodavanje stabilizatora;
pri čemu je taj stabilizator izabran iz grupe koju čine fosfolipidi; polisorbati; hidroksipropil celuloza (HPC), hidroksipropil metilceluloza (HPMC) i polivinilpirolidon (PVP); nejonski tri-blok kopolimeri; kopolivinilpirolidon; Kaprilokapropil polioksil-8 gliceridi; Lauraoil polioksil-32 gliceridi; želatin; lecitin (fosfatidi); guma akacija; holesterol; tragakant; polioksietilen alkil etri; derivati polioksietilen ricinusovog ulja; polioksietilen sorbitan estri masnih kiselina; sorbitan estri masnih kiselina; polietilenglikoli; polioksietilen stearati; mono i digliceridi; koloidalni silicijumdioksid; natrijumdodecilsulfat; magnezijumaluminijum silikat; trietanolamin; stearinska kiselina; kalcijumstearat; glicerolmonostearat; cetostearil alkohol; ketomakrogol emulgujući vosak; alkoholi kratkih i srednjih lanaca; Oleoil polioksil-6 gliceridi; Plurol oleique; propan-1,2,3-triol, polivinil alkohol i dioktilnatrijumsulfosukcinat (DOSS); pri čemu je najmanje jedan prirodni materijal izabran iz grupe koju čine biljke, cijanobakterije, alge i gljivice.
[0010] U drugom aspektu, ovo otkrivanje obezbeđuje nanosuspenziju koja može da se dobije prema postupku prvog aspekta.
[0011] U drugom aspektu, ovo otkrivanje obezbeđuje nanosuspenziju prema prvom aspektu za upotrebu u pripremi leka za bukalnu, topikalnu ili oralnu primenu na životinji, poželjno čoveku, ili za upotrebu u pripremi leka za parenteralnu, intratekalnu, intravensku, transdermalnunu, ili transmukoznu primenu, poželjno bukalnu, topikalnu ili oralnu primenu, na životinji, poželjno čoveku.
[0012] U drugom aspektu, ovo otkrivanje obezbeđuje nanosuspenziju prema prvom aspektu za upotrebu u lečenju i sprečavanju kancera, zapaljenske bolesti creva (IBD), artritisa, virusa humane imunodeficijencije (HIV), drugih virusnih bolesti, dermatoloških bolesti, kao što je neurodermatitis ili psorijaza, ili autoimunih bolesti, kao što je multipla skleroza. Opet u drugom aspektu, ovo otkrivanje obezbeđuje upotrebu nanosuspenzije prema prvom aspektu za pripremu leka.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0013]
Fig.1 prikazuje šematski crtež koloidatora;
Fig.2: prikazuje veličinu čestica (D90) za nanosuspenziju listova masline pri specifičnoj energiji koja se koristi za mlevenje prema primeru 1.1;
Fig.3 prikazuje suvu masu ekstrakta i nanosuspenzije listova masline prema primeru 1.3;
Fig.4: prikazuje veličinu čestica (D90) za nanosuspenziju spiruline pri specifičnoj energiji koja se koristi za mlevenje prema primeru 2.1;
Fig.5 prikazuje suvu masu ekstrakta i nanosuspenzije spiruline prema primeru 2.3;
Fig.6 prikazuje veličinu čestica (D90) za nanosuspenziju agaricus subrufescens (ABM) pri specifičnoj energiji koja se koristi za mlevenje prema primerima 3.1 (tamna linija) i 3.2 (isprekidana linija); Fig.7 prikazuje veličinu čestica (D90) za nanosuspenziju agaricus subrufescens (ABM) pri specifičnoj energiji koja se koristi za mlevenje prema primerima 3.1 (tamna linija) i 3.3 (isprekidana linija); Fig.8 prikazuje suvu masu ekstrakta i nanosuspenzije agaricus subrufescens (ABM) prema primeru 3.5;
Fig.9: prikazuje sadržaj β-glukana nanosuspenzije i različite ekstrakte agaricus subrufescens, u vezi sa praškom agaricus subrufescens kako je pripremljeno u primeru 4.1.
Fig.10: prikazuje efekat fizičke stabilizacije u odnosu na nanosuspenziju sa silicijumom pripremljenu kao u primeru 5.1.
Fig.11: prikazuje efekat hemijske stabilizacije bez propan-1,2,3-triola u odnosu na
nanosuspenziju agaricus subrufescens pripremljenu kao u primeru 3.1.
Fig.12: prikazuje efekat hemijske stabilizacije sa 20 % (v/v) propan-1,2,3-triola u odnosu na nanosuspenziju agaricus subrufescens pripremljenu kao u primeru 3.1.
Fig.13: prikazuje efekat hemijske stabilizacije sa 50 % (v/v) propan-1,2,3-triola u odnosu na nanosuspenziju agaricus subrufescens pripremljenu kao u primeru 3.1.
Fig.14: prikazuje diferencijalnu masenu frakciju (tj., srednju molarnu masu) β-1,3/1,6-glukana 5 % (w/w) agaricus subrufescens nanosuspenzije (pripremljene kao u primeru 3.1) i 5 %
(w/w) agaricus subrufescens ekstrakta (pripremljenog kao u primeru 3.4).
Fig.15: prikazuje relativnu količinu dektin-1 pozitivnih monocita (u %) u uzorku nestimulisanih perifernih krvnih mononuklearnih ćelija (PBMC), PBMC stimulisanu 5 % (w/w) agaricus
subrufescens nanosuspenzijom (pripremljenom kao u primeru 3.1) i 5 % (w/w) agaricus subrufescens ekstraktom (pripremljenim kao u primeru 3.4).
Fig.16: prikazuje poređenje in-vitro indukcije citokina TNF-alfa uzrokovano 5 % (w/w) agaricus subrufescens nanosuspenzijom (pripremljenom kao u primeru 3.1) i 5 % (w/w) ekstraktom (pripremljenim kao u primeru 3.4).
Fig.17: prikazuje poređenje citokina IL-10 u in-vitro indukciji uzrokovanoj 5 % (w/w) agaricus subrufescens nanosuspenzijom (pripremljenom kao u primeru 3.1) i 5 % (w/w) ekstraktom (pripremljenim kao u primeru 3.4).
Fig.18: prikazuje poređenje citokina IL-6 u in-vitro indukciji uzrokovanoj 5 % (w/w) agaricus subrufescens nanosuspenzijom (pripremljenom kao u primeru 3.1) i 5 % (w/w) ekstraktom (pripremljenim kao u primeru 3.4).
Fig.19: prikazuje raspodelu čestica 5 % (w/w) agaricus subrufescens nanosuspenzijom (pripremljenom kao u primeru 3.1).
Fig.20: prikazuje raspodelu čestica 5 % (w/w) agaricus subrufescens nanosuspenzijom (pripremljenom kao u primeru 12).
Fig.21: prikazuje CD25 aktivirane T-ćelije CD3+CD25+ in-vivo indukciji uzrokovanoj uzimanjem 5 % (w/w) agaricus subrufescens nanosuspenzijom (pripremljenom kao u primeru 12).
Fig.22: prikazuje CD25 aktivirane T-ćelije CD3+CD25+ in-vivo indukciju uzrokovanu uzimanjem agaricus subrufescens praškom u kapsulama.
DETALJAN OPIS OVOG PRONALASKA
[0014] Ovaj pronalazak i njegov obim su definisani u priloženim patentnim zahtevima. Generičniji opis ovog pronalaska je obezbeđen samo u ilustrativne svrhe. Načini ostvarivanja koji ne potpadaju pod ove patentne zahteve su dati samo kao reference.
[0015] Ovo otkrivanje se odnosi na postupak za pripremu nanosuspenzije koja obuhvata najmanje jedan prirodni materijal, pri čemu taj postupak obuhvata faze
a. Obezbeđivanja najmanje jednog prirodnog materijala veličine čestica (D100) manje od 320 µm, osim ekstrakta;
b. Dispergovanja najmanje jednog pomenutog prirodnog materijala iz faze a. u rastvaraču; c. Mlevenja disperzije iz faze b. do veličine čestica (D90) ispod 1000 nm (D90< 1000 nm), pri čemu je najmanje jedan prirodni materijal dispergovan u fazi b. u koncentraciji od 0,5 do 20 % (w/w), u odnosu na ukupnu količinu rastvarača upotrebljenog u nanosuspenziji, i pri čemu faza dispergovanja b. ili faza mlevenja c. obuhvata dodavanje stabilizatora;
pri čemu je taj stabilizator izabran iz grupe koju čine fosfolipidi; polisorbati; hidroksipropil celuloza (HPC), hidroksipropil metilceluloza (HPMC) i polivinilpirolidon (PVP); nejonski tri-blok kopolimeri; kopolivinilpirolidon; Kaprilokapropil polioksil-8 gliceridi; Lauraoil polioksil-32 gliceridi; želatin; lecitin (fosfatidi); guma akacija; holesterol; tragakant; polioksietilen alkil etri; derivati polioksietilen ricinusovog ulja; polioksietilen sorbitan estri masnih kiselina; sorbitan estri masnih kiselina; polietilenglikoli; polioksietilen stearati; mono i digliceridi; koloidalni silicijumdioksid; natrijumdodecilsulfat; magnezijumaluminijum silikat; trietanolamin; stearinska kiselina; kalcijumstearat; glicerolmonostearat; cetostearil alkohol; ketomakrogol emulgujući vosak; alkoholi kratkih i srednjih lanaca; Oleoil polioksil-6 gliceridi; Plurol oleique; propan-1,2,3-triol, polivinil alkohol i dioktilnatrijumsulfosukcinat (DOSS); pri čemu je najmanje jedan prirodni materijal izabran iz grupe koju čine biljke, cijanobakterije, alge i gljivice.
[0016] Ovaj pronalazak koji je u nastavku predstavljen ilustrativno, može da se primenjuje u praksi na odgovarajući način bez bilo kog elementa ili elemenata, ograničenja ili više ograničenja koja nisu konkretno ovde otkrivena.
[0017] Ovaj pronalazak će biti opisan u odnosu na određene načine ostvarivanja uz pozivanje na određene brojke, ali ovaj pronalazak nije ograničen na iste, već samo na patentne zahteve. Pojmovi kako su definisani u nastavku, bi generalno trebalo da budu shvaćeni u svom uobičajenom smislu osim ako nije drugačije naznačeno.
[0018] Gde se pojam "koji obuhvata" koristi u ovom opisu i patentnim zahtevima, ne isključuje druge elemente. U svrhu ovog pronalaska, pojam "koji se sastoji od' se smatra da je poželjniji način ostvarivanja pojma "koji obuhvata". Ako je u nastavku grupa definisana tako da obuhvata najmanje određeni broj načina ostvarivanja, to bi takođe trebalo da se razume kao da se otkriva grupa, koja se poželjno sastoji samo od ovih načina ostvarivanja.
[0019] Prilikom upotrebe neodređenog ili određenog člana, kada se odnosi na imenicu u jednini, npr. "neki", "jedan" ili "taj", to takođe podrazumeva i množinu te imenice osim ukoliko nešto konkretno nije naznačeno.
[0020] Pojmovi kao "koji može da se dobije" ili "koji može da se definiše" i "dobijen" ili "definisan" se naizmenično koriste. Ovaj, npr., znači taj, osim ukoliko kontekst jasno ne nalaže drugačije, pojam "dobijen" ne znači da, npr. način ostvarivanja mora da se dobije putem npr. redosleda faza koje se podrazumevaju pod pojmom "dobijen" iako se takvo ograničeno shvatanje uvek podrazumeva pod pojmovima "dobijen" ili "definisan" kao poželjan način ostvarivanja.
[0021] "Nanosuspenzija" kako se ovde upotrebljava se odnosi na suspenziju nanočestica u rastvaraču, kao što je na primer, voda, etanol, ili njihova mešavina. Nanosuspenzija može dodatno da obuhvata sredstva za stabilizaciju, ili druga jedinjenja. Nanosuspenzija obuhvata jedinjenje slabo rastvorljivo u vodi u obliku nanočestica suspendovanih u rastvaraču. Takva nanosuspenzija se koristi da pojača "rastvorljivost" (ili disperzibilnost) jedinjenja koje je slabo rastvorljivo u rastvaraču, u masnim podloga, ili u oboje. Kao rezultat povećane "rastvorljivosti", veći nivoi plazme u krvi tog slabo rastvorljivog jedinjenja se postižu, a maksimalni nivo plazme u krvi pomenutog jedinjenja se brže postiže. Pojmovi "suspenzija" i "disperzija" se u ovom otkrivanju koriste naizmenično, budući da se odnose na čvrste čestice u rastvaraču.
[0022] "Nanočestice" kako se ovde koriste predstavljaju čestice veličine čestica ispod 1000 nm.
Nanočestice jedinjenja u rastvaraču mogu biti primarne čestice, ili aglomerisane čestice koje se sastoje od manjih čestica. Veličina čestica u nanosuspenziji može biti izmerena laserskim difrakcionim analizatorom (npr. Beckman Coulter LS 13320 ili Horiba LA-950).
[0023] Pojam "rastvorljivost" ili "granica rastvorljivosti" prirodnog materijala kako se koristi u ovom otkrivanju se odnosi na maksimalnu količinu prirodnog materijala koji može da se rastvori u rastvaraču. U svrhu ovog otkrivanja, rastvorljivost prirodnog materijala u konkretnom rastvaraču može biti određena na sledeći način: početna količina suvog prirodnog materijala veličine čestica D90< 320 µm se koristi za pripremu suspenzije pomenutog prirodnog materijala u rastvaraču, kao što je destilovana voda, u koncentraciji od 5 % ili 10 % (w/w). Za pripremu pomenute suspenzije, prirodni materijal se suspenduje 60 minuta u rastvaraču na temperaturi od 30 °C. Dobijena suspenzija se zatim centrifugira na 1500 g tokom 30 minuta, a talozi su odvojeni od supernatanta i izmereni su zbog kontrole. Supernatant je sušen na 60 °C tokom 24 h, što je za rezultat imalo prirodni materijal rastvoren u supernatantu (suva baza), i izmeren. Rastvorljivost se izračunava pomoću sledeće jednačine:
Rastvorljivost (%) = masa supernatanta (suva baza) x 100 / masa praška početnog suvog materijala (suva baza).
[0024] Pojam "faktor rastvorljivosti" kako se koristi u ovom otkrivanju se odnosi na količinu prirodnog materijala u nanosuspenziji prema ovom otkrivanju u odnosu na rastvorljivost ili granicu rastvorljivosti pomenutog prirodnog materijala u rastvaraču koji se koristi za pripremu nanosuspenzije. Faktor rastvorljivosti je količina prirodnog materijala prisutna u nanosuspenziju (u % (w/w)) podeljena rastvorljivošću pomenutog prirodnog materijala u rastvaraču koji se koristi. Drugim rečima, ukoliko je dat faktor rastvorljivosti od 1, granica rastvorljivosti prirodnog materijala je postignuta u pomenutom rastvaraču. Na faktoru rastvorljivosti ispod 1, količina prirodnog materijala u nanosuspenziji je ispod granice rastvorljivosti, a faktor rastvorljivosti iznad 1 znači da je više od količine prirodnog materijala rastvorljivog u pomenutom rastvaraču prisutno u nanosuspenziji, tj., koncentracija prirodnog materijala u nanosuspenziji je veća od njegove granice rastvorljivosti.
[0025] Pojam "celulozno vlakno" kako se koristi u ovom otkrivanju se odnosi na biljno vlakno (posebno drveno vlakno) koje se sastoji od polisaharida sa pravim lancem od nekoliko stotina do više od deset hiljada β-1,4-D-glukoznih jedinica dužine vlakna > 1µm. Celulozna vlakna se samim tim ne sastoje od β-1,3/1,6-glukana geometrijskog oblika lopte prečnika < 1µm ili elipsoida dužine poluprave < 1µm.
[0026] U poželjnom načinu ostvarivanja, najmanje jedan prirodni materijal izabran iz grupe koju čine biljke, poželjno biljke isključujući ginseng i/ili celulozna vlakna, cijanobakterije, alge i gljivice. U drugom načinu ostvarivanja, prirodni materijal ne obuhvata ginseng i/ili celulozna vlakna. Biljke kako se ovde koriste mogu da obuhvataju spermatophytina, koja može da obuhvata ginkopsidu (gingko), gnetopsidu, coniferopsidu (npr. igličasto drveće) i skrivenosemenice (cvetajuće biljke), koje dalje mogu da obuhvataju podklase kao što su magnoliidae, liliidae (npr. ananas), malpighiales (npr. kantarion, kora vrbe), rosidae (npr. kopriva), krstašice (npr. papaja), leptirnjače (npr. kozinac), lamiales (npr. drvo masilne i listove masline), dispsacales (npr. zovu). Cijanobakterije mogu da obuhvataju npr. spirulinu. Alge mogu da obuhvataju domene rhodobionta (npr. crvene alge, braon alge i dijatome), zelene alge i glaukobiontu. Gljivice mogu da obuhvataju acrasobionta, myxomycota, heterokontobionta, i mycobionta (npr. potporne gljivice kao agaricus subrufescens).
[0027] U drugom poželjnom načinu ostvarivanja prirodni materijali su gingko, ananas, kantarion, kora vrbe, kopriva, papaja, kozinac, listovi masline, zova, spirulina, hlorela alge, crvene alge, braon alge i diatomske zelene alge i glaukobionta, agaricus subrufescens, tamjan, zlatni koren, kora chincona, ipecac, gavez, bryony anil, koren anila, kurkuma, đavolja kandža, mačja kandža, cystus incanus, seme lana, sylibum marianum (mlečni čkalj), chelidonium majus (celandin), kaplan-pelargonie, echinacea, seme grožđa.
[0028] U drugom poželjnom načinu ostvarivanja, prirodni materijal ne obuhvata ginseng i/ili celulozna vlakna.
[0029] U drugom poželjnom načinu ostvarivanja, najmanje jedan prirodni materijal predstavlja deo ili ceo pomenuti materijal, poželjno ceo pomenuti prirodni materijal. Postupak ovog otkrivanja može da se koristi za bilo koji prirodni materijal kao ceo, ili njegove delove. Kao primer, samo delovi biljke mogu da se koriste, kao što su korenje, stabla, listovi, voćke, cveće, ili njima slični, u zavisnosti od vrste prirodnog materijala.
[0030] U drugom poželjnom načinu ostvarivanja, nanosuspenzija obuhvata mešavinu najmanje dva prirodna materijala. Kao takva, nanosuspenzija može biti nanosuspenzija koja sadrži pojedinačan prirodni materijal, ili mešavina više od jednog prirodnog materijala, tj., najmanje dva prirodna materijala. Nanosuspenzija takođe može da obuhvata različite delove istog prirodnog materijala, kao što su npr., delovi korena i delovi cvetova, i/ili nanosuspenzija može da obuhvata različite tipove prirodnih materijala, kao što su, npr. različite biljke ili biljka i cijanobakterije.
[0031] U drugom poželjnom načinu ostvarivanja, prirodni materijal kao što se koristi u pripremi nanosuspenzije je osušen u fazi a.1, pre faze a., poželjno osušen zamrzavanjem i/ili termalno osušen.
[0032] U drugom poželjnom načinu ostvarivanja, prirodni materijal kao što se koristi u pripremi nanosuspenzije i obezbeđen u fazi a. postupka kako je prethodno otkriveno, ima sadržaj vode w ispod 15 % (w < 15 %), poželjno ispod 12% (w < 12 %), poželjnije ispod 10 % (w < 10 %), i najpoželjnije ispod 8 % (w < 8 %).
[0033] Sadržaj vode prirodnog materijala kao što se koristi za pripremu nanosuspenzije je poželjno nizak. Pojam "sadržaj vode" ili "rezidualna vlaga" kako se koristi u ovom otkrivanju se odnosi na sadržaj vode w materijala, kao što je prirodni materijal, računato od mase vlage ili vlažnog materijala mvlažani mase suvog materijala bez vode msuvi mase materijala sa rezidualnom vlagom mresupotrebom sledeće formule: sadržaj rezidualne vlage [%] w = (mres– msuv)/(mvlažan– msuv)<∗>100 %
[0034] Tako nizak sadržaj vode može biti poželjan kada se priprema nanosuspenzija. Pored toga, može biti od pomoći kada se prirodni materijal dovodi do veličine čestica (D100) manje od 320 µm. Postoje različiti postupci poznati u tehnici za smanjenje sadržaja vode prirodnog materijala, a bilo koji od ovih postupaka može da se koristi u kombinaciji sa ovim otkrivanjem. Kao primer, prirodni materijal može biti (tj., osušen zamrzavanjem) ili termalno osušen. Može biti poželjno da se prirodni materijali očiste, ogule i/ili oljušte, u zavisnosti od vrste prirodnog materijala pre faze sušenja. U nastavku su dati primeri postupaka sušenja.
[0035] Prirodni materijali mogu biti liofilizovani liofilizatorom, npr., u postupku od četiri faze kao što sledi:
● Prirodni materijal se iseče na manje parčiće od oko 1-2 cm nožem u zavisnosti od veličine i strukture prirodnog materijala;
● Parčiči od 1-2 cm se stave u mlin sa nožem (npr. Grindomix® 200 ili 300 od Retsch GmbH, Nemačka) i usitnjavaju u skladu sa sledećim parametrima: 10 sek. na 2000 o/m nakon10 sek. na 5000 o/m i terminal 20 sek. na 10,000 o/m;
● Dobijena pulpa se zamrzava na -18 °C tokom 4 h i dalje se stavlja u liofilizator i liofilizuje se dok temperatura proizvoda ne bude 20 °C.
[0036] Podrazumeva se da je gore pomenuti postupak sušenja zamrzavanjem dat kao primer, i da stručnjak može da prilagodi postupak, u zavisnosti od vrste prirodnog materijala. Kao primer, cijanobakterije mogu biti direktno osušene zamrzavanjem, bez prethodnog usitnjavanja ili sečenja. Slično, takođe parametri za sečenje parčića u mlinu sa nožem mogu da se podese prema potrebama.
[0037] Prirodni materijali takođe mogu da se suše na vazduhu ili u pećnici na temperaturi od, npr., 36-45 °C dok sadržaj rezidualne vlage ne padne na 8%, u zavisnosti od termalne osetljivosti jedinjenja u prirodnom materijalu.
[0038] U drugom poželjnom načinu ostvarivanja, prirodni materijal kao što se koristi u pripremi nanosuspenzije i obezbeđen u fazi a. postupka kako je prethodno otkrivenom je prethodno usitnjen pre i/ili posle sušenja u fazi a.1, poželjno u mlinu sa nožem, i opciono prosejan do veličine čestica (D100) manje od 320 µm. Takvo usitnjavanje prirodnog materijala može da se izvede sa prirodnim materijalom kao takvim, tj., bez prethodnog sečenja ili sušenja, ili prirodni materijal može biti isečen na parčiće i/ili osušen kako je prethodno opisano. Dodatno, prirodni materijal može biti prosejan kako bi se obezbedio prašak prirodnog materijala veličine čestica (D100) manje od 320 µm.
[0039] Primer postupka za prethodno usitnjavanje i prosejavanje prirodnog materijala osušenog zamrzavanjem prirodnog materijala može biti kao što sledi:
● Zamrzavanjem osušen prirodni materijal se stavi u mlin sa nožem (npr. Grindomix® 200 ili 300 od Retsch GmbH, Nemačka) i usitnjava se u skladu sa sledećim parametrima: 10 sek. na 2000 o/m nakon 10 sek. na 5000 o/m i terminal 20 sek. na 10.000 o/m;
● Prašak prirodnog materijala iz postupka mlina sa nožem se prosejava sitom promera od 320 µm; ● Čestice prirodnog materijala veće od 320 µm se ponovo stavljaju u mlin sa nožem radi daljeg usitnjavanja i nakon prosejavanja sitom od 320 µm. Ostatak nakon druge ili treće faze usitnjavanja može biti odbačen.
[0040] Slično, primer postupka za prethodno usitnjavanje i prosejavanje termalno osušenog prirodnog materijala može biti kao što sledi:
● Termalno osušen prirodni materijal je isečen nožem na manje parčiće od oko 1-2 cm;
● Parčići od 1-2 cm su stavljeni u mlin sa nožem (npr. Grindomix® 200 ili 300 od Retsch GmbH, Nemačka) i usitnjeni uz sledeće parametre: 10 sek. na 2000 o/m nakon 10 sek. na 5000 o/m i terminalno 20 sek. na 10.000 o/m;
● Prašak prirodnog materijala iz postupka sa mlinom sa nožem se prosejava sitom promera od 320 µm;
● Čestice prirodnog materijala veće od 320 µm se ponovo stave u mlin sa nožem radi daljeg usitnjavanja i nakon prosejavanja sitom od 320 µm. Ostatak druge ili treće faze usitnjavanja može biti odbačen.
[0041] Najmanje jedan prirodni materijal veličine čestica (D100) manje od 320 µm obezbeđen u fazi a. je dispergovan u rastvaraču u fazi b. prema postupku ovog otkrivanja.
[0042] U drugom poželjnom načinu ostvarivanja, rastvarač je voda, poželjno destilovana voda, ili mešavina vode i etanola.
[0043] Voda koja se koristi kao rastvarač može biti bilo koja vrsta vode, kao što je normalna voda, prečišćena voda, destilovana voda, bi- ili tri-destilovana voda, ili demineralizovana voda. Slično, etanol takođe može biti normalan etanol, ili mešavina vode i etanola. Shodno tome, dobijena nano-suspenzija može biti vodena nanosuspenzija, ili nanosuspenzija u etanolu, nano-suspenzija u odnosu na mešavinu vode i etanola, ili bilo koji rastvarač ili mešavina rastvarača. Pojam "rastvarač" kako se ovde koristi se odnosi na pojedinačan rastvarač ili mešavinu rastvarača. Poželjno, rastvarač je farmaceutski prihvatljiv rastvarač ukoliko se nanosuspenzija koristi kao lek.
[0044] U drugom poželjnom načinu ostvarivanja, nanosuspenzija je vodena nanosuspenzija ili nanosuspenzija u odnosu na mešavinu vode i etanola.
[0045] Prilikom dispergovanja prirodnog materijala u fazi b. u rastvaraču, prirodni materijal poželjno ima koncentraciju u opsegu od 0,5 do 20 % (w/w), u odnosu na ukupnu količinu rastvarača koja se koristi, poželjno od 2 do 10 % (w/w), dalje poželjno od 2 do 5 % (w/w) ili od 5 do 10 % (w/w). U drugom poželjnom načinu ostvarivanja ove prijave, prirodni materijal poželjno ima koncentraciju u opsegu od 0,5 do 70 % (w/w), u odnosu na ukupnu količinu rastvarača koja se koristi, poželjno od 40 to 70 % (w/w), ili od 10 do 40 % (w/w). Koncentracija prirodnog materijala u % (w/w) je u odnosu na ukupnu količinu rastvarača koji se koristi za pripremu nanosuspenzije. Kao primer, sa 50 g praška prirodnog materijala do 1000 g rastvarača, pripremljen je 5 % (w/w). Unutar pomenutog opsega koncentracije, dalje mlevenje suspenziju u nanosuspenziju je olakšano. Disperzija može da se pripremi mešanjem rastvarača i prirodnog materijala, npr., pomoću magnetne mešalice ili bilo kog drugog obrtnog uređaja, poželjno brzine do 1000 o/m.
[0046] S tim u vezi, u drugom poželjnom načinu ostvarivanja, najmanje jedan prirodni materijal dispergovan u fazi b. u koncentraciji od 0,5 do 20 % (w/w), u odnosu na ukupnu količinu rastvarača upotrebljenog u nanosuspenziji, poželjno od 2 do 10 % (w/w), dalje poželjno od 2 do 5 % (w/w) ili od 5 do 10 % (w/w).
[0047] U naročito poželjnom načinu ostvarivanja, najmanje jedan prirodni materijal je prisutan u nanosuspenziji u koncentraciji koja dovodi do faktora rastvorljivosti iznad 0,4, ili iznad 0,5, ili od iznad 0,8, ili iznad 1, ili čak iznad 1,1.
[0048] Poželjno je da se nanosuspenzija stabilizuje upotrebom stabilizatora. Takav stabilizator može biti izabran iz grupe koju čine fosfolipidi, polisorbati, propan-1,2,3-triol (glicerin), elektrostatički ili sterični stabilizatori i surfaktanti. Takvi stabilizatori mogu da se dodaju disperziji u fazi b., ili tokom faze mlevenja c., ili čak nakon faze mlevenja c. Neki stabilizatori su poželjno dodavani u nanosuspenziju poželjno u fazi dispergovanja b., kao što su fosfolipidi, nejonski surfaktanti i emulgatori, npr. polisorbat. Drugi stabilizatori su poželjno dodati tokom faze mlevenja c., kao nejonski triblok kopolimeri, kao što su poloksameri. Čak se i drugi stabilizatori poželjno dodaju nakon faze mlevenja c., kao što je propan-1,2,3-triol ili dioktilnatrijumsulfosukcinat (DOSS). Ukoliko se stabilizator dodaje u fazi dispergovanja b., poželjno je da se doda stabilizator u količini od 50% do 200 % (w/w), u odnosu na ukupnu količinu prirodnog materijala, naročito ako je stabilizator fosfolipid. Ukoliko je stabilizator nejonski surfaktant ili emulgator, kao polisorbat, poželjno se dodaje u količini do 1,5 % (w/w), u odnosu na količinu rastvarača. Tokom mlevenja u fazi c., kada se postigne specifična veličina čestica (D90) u opsegu od 2 do 10 µm, ili ukoliko se veličina čestica (D90) ne smanjuje dalje tokom faze mlevenja c., npr., najmanje 4 % tokom mlevenja u trajanju od jednog sata, ili ako se veličina čestica (D90) povećava tokom faze mlevenja c. za najmanje 10 % tokom mlevenja u trajanju od jednog sata, poželjno je da se doda stabilizator, kao nejonski triblok kopolimer, kao što su poloksameri.
[0049] U poželjnom načinu ostvarivanja, stabilizator je izabran iz grupe koju čine fosfolipidi; polisorbati; hidroksipropil celuloza (HPC), hidroksipropil metilceluloza (HPMC) i polivinilpirolidon (PVP); nejonski triblok kopolimeri, kao što su poloksameri (npr., Kolliphor® P407 ili poloksamer 188); kopolivinilpirolidon; Labrasol®; Gelucire®; želatin; lecitin (fosfatidi); guma akacija; holesterol; tragakant; polioksietilen alkil etri; derivati polioksietilen ricinusovog ulja; polioksietilen sorbitan estri masnih kiselina; sorbitan estri masnih kiselina; polietilenglikoli; polioksietilen stearati; mono i digliceridi; koloidalni silicijumdioksid; natrijumdodecilsulfat; magnezijumaluminijum silikat; trietanolamin; stearinska kiselina; kalcijumstearat; glicerolmonostearat; cetostearil alkohol; ketomakrogol emulgujući vosak; alkoholi kratkih i srednjih lanaca; Labrafil®; Purol-oleique®; propan-1,2,3-triol, polivinil alkohol i dioktilnatrijumsulfosukcinat (DOSS). Poželjni primeri polisorbata predstavljaju polisorbat 80 i polisorbat 20. Poželjno je da je stabilizator izabran iz grupe koju čine polisorbat 80, polisorbat 20, Kolliphor® P407 i poloksamer 188. U naročito poželjnom načinu ostvarivanja, stabilizator je Kolliphor® P407, ili polisorbat 80, kao što je Tween® 80. U drugom poželjnom načinu ostvarivanja, faza dispergovanja b. obuhvata dodavanje stabilizatora izabranog iz grupe koju čine fosfolipid i polisorbat.
[0050] U drugom poželjnom načinu ostvarivanja, faza dispergovanja b. obuhvata dodavanje polisorbata u količini od 0,5 do 2 % (w/w), u odnosu na ukupnu količinu rastvarača upotrebljenog u nanosuspenziji, i/ili pri čemu je polisorbat izabran iz grupe koju čine polisorbat 80 i polisorbat 20.
[0051] U drugom poželjnom načinu ostvarivanja, faza dispergovanja b. obuhvata dodavanja fosfolipida u količini od 100 % do 200 % (w/w), poželjno u količini od 130 % do 170 % (w/w), u odnosu na količinu prirodnog materijala, poželjno pri čemu taj fosfolipid sadrži do 95 % (masenih) fosfatidilholina i od 20 do 30 % (masenih) lizofosfatidilholina. Poželjno je da fosfolipid sadrži 20-95 % fosfatidilholina, poželjno 20-75 % fosfatidilholina, i 20-30 % lizofosfatidilholin (npr. Lipoid P100, P75, R LPC20 Lipoid GmbH, Nemačka). Takođe može biti poželjno da se doda fosfolipid u količini od 100 do 300 % (w/w), poželjnije od 50 do 200% (w/w), u odnosu na ukupnu količinu prirodnog materijala.
[0052] Kada se sterični stabilizatori koriste kao stabilizatori, sterični stabilizator je adsorbovan ili pričvršćen za površinu nanočestice i obezbeđuje veliku i gustu steričnu barijeru koja prevazilazi atraktivne Van der Waals snage, a samim tim sterični stabilizator smanjuje agregaciju, aglomeraciju ili čak fuziju čestica. Sterični stabilizatori su poželjno ekscipijensi koji su farmaceutski prihvatljivi mogu biti izabrani iz grupe koju čine hidroksipropil celuloza (HPC), hidroksipropil metilceluloza (HPMC) i polivinilpirolidon (PVP). Naročito poželjni sterični stabilizator je nejonski tri-blok kopolimer Kolliphor® P407. Kolliphor® P407 se sastoji od centralnog hidrofobnog lanca polioksipropilena (poli(propilenoksid)) flankiranog sa dva hidrofilna lanca polioksietilena (poli(etilenoksid)). Može biti poželjno da se doda sterični stabilizator tokom faze mlevenja c. Stoga je poželjno da se doda sterični stabilizator u količini od 0,5 do 2 % (w/w) tokom faze mlevenja c., dalje poželjno kada je veličina čestica (D90) manje od 5 µm.
[0053] Drugi poželjan stabilizator koji se koristi u postupku ovog otkrivanja je glicerin (propan-1,2,3-triol). Pomenuti glicerin se poželjno dodaje nakon faze mlevenja c., dalje poželjno u količini od 30 do 100 % (v/v) ili od 40 do 100 % (v/v), čak poželjnije u količini od 40 % (v/v) ili 50% (v/v), u odnosu na ukupnu zapreminu rastvarača.
[0054] Pored glicerina, ili kao njegova zamena, može da se koristi dioktilnatrijumsulfosukcinat (DOSS) kao elektrostatički stabilizator, poželjno u količini od 0,5 do 2 % (w/w), u odnosu na ukupnu količinu rastvarača, i dodaje se poželjno nakon faze mlevenja c.
[0055] Tokom faze mlevenja c., disperzija koja sadrži prirodni materijal u veličini čestica manjoj od 320 µm se melje do veličine čestica (D90) manje od 1000 nm. Ovo može da se postigne u bilo kom pogodnom mlinu.
[0056] U poželjnom načinu ostvarivanja, pomenuta faza mlevenja c. se izvodi u mlinu za mokro mlevenje sa kuglama, poželjno mlinu sa kuglama sa mešalicom za mokro mlevenje .
[0057] U daljem poželjnom načinu ostvarivanja, pomenuta faza mlevenja c. obuhvata prvu fazu mlevenja c.1 u mlinu za mokro mlevenje sa kuglama, poželjno mlinu sa kuglama sa mešalicom za mokro mlevenje, prečnika kugli za usitnjavanje od 0,5 do 1,5 mm, a druga faza mlevenja c.22 u mlinu za mokro mlevenje sa kuglama, poželjno mlinu sa kuglama sa mešalicom za mokro mlevenje, prečnika kugli za usitnjavanje od 0,3 do 0,4 mm, i treću fazu mlevenja c.2 u mlinu za mokro mlevenje sa kuglama, poželjno mlinu sa kuglama sa mešalicom za mokro mlevenje, prečnika kugli za usitnjavanje od 0,05 do 0,2 mm. Poželjno je da se druga faza mlevenja c.2 koristi dok veličina čestica (D90) ne bude oko 3 do 6 µm, a treća faza mlevenja c.3 se koristi dok veličina čestica ne bude (D90) od oko 80 do 500 nm, poželjno 80 do 300 nm. U drugom poželjnom načinu ostvarivanja sa početnom veličinom čestica (D100) praška prirodnog materijala ispod 320 µm, pomenuta faza mlevenja c. obuhvata prvu fazu mlevenja c.1 u mlinu za mokro mlevenje sa kuglama, poželjno mlinu sa kuglama sa mešalicom za mokro mlevenje, prečnika kugli za usitnjavanje od 0,4 do 0,5 mm, a druga faza mlevenja c.22 u mlinu za mokro mlevenje sa kuglama, poželjno mlinu sa kuglama sa mešalicom za mokro mlevenje, prečnika kugli za usitnjavanje od 0,05 do 0,2 mm. Poželjno je da se prva faza mlevenja c.1 koristi dok veličina čestica (D90) ne bude oko 2 do 6 µm, a druga faza mlevenja c.2 se koristi dok veličina čestica (D90) ne bude oko 80 do 500 nm, poželjno 80 do 300 nm. Dalje je poželjno da temperatura u komori mlina bude od 25 do 36 °C, a brzina ivice 10 do 14 m/s, poželjno 11 do 14 m/s.
[0058] Shodno tome, u poželjnom načinu ostvarivanja, disperzija iz faze b. se melje u fazi c. do veličine čestica (D90) ispod 500 nm (D90< 500 nm), poželjno ispod 300 nm (D90< 300 nm), dalje poželjno ispod 250 nm (D90< 250 nm), i najpoželjnije ispod 200 nm (D90< 200 nm), mereno dinamičkim rasipanjem svetlosti ili laserskim difrakcionim analizatorom.
[0059] Dobijena nanosuspenzija može tako imati veličinu čestica (D90) ispod 500 nm (D90< 500 nm), poželjno ispod 300 nm (D90< 300 nm), dalje poželjno ispod 250 nm (D90< 250 nm), i najpoželjnije ispod 200 nm (D90< 200 nm), mereno dinamičkim rasipanjem svetlosti ili laserskim difrakcionim analizatorom, i veličinu čestica iznad 40 nm (D90> 40 nm).
[0060] Dobijena nanosuspenzija dalje može biti okarakterisana za najbolje rezultate stabilizacije kao monomodalna suspenzija, pri čemu pojedinačni način rada ima prosečnu vrednost manju od 300 nm, poželjno ispod 200 nm. Takva monomodalna suspenzija može da se postigne filtriranjem suspenzije. Filter može da smanji veličinu čestica do veličine čestica (D90) do ispod 450 nm, poželjno ispod 300 nm, dalje poželjno ispod 220 nm. Kao uređaj za filtriranje može da se koristi bilo koji uređaj iz stanja tehnike, kao što je Sartorius Stedim Biotech filter. Ukoliko se nanosuspenzija filtrira do 450 nm, takvo filtriranje čak više sužava standardnu devijaciju za veličinu čestica, što može da doprinese stabilizaciji. Kao zamena, monomodalna suspenzija takođe može da se postigne sredstvima za obradu. Primera radi, suspenzija iz primera 12 predstavlja monomodalnu suspenziju bez filtriranja.
[0061] Tokom faze mlevenja c., na nanosuspenziju se primenjuje određena specifična energija.
Specifična energija je definisana kao neto energija (ukupna energija minus snaga pogona u praznom hodu) mlina sa kuglama sa mešalicom za mokro mlevenje u [kW] puta vreme mlevenja u [h] podeljeno ukupnom količinom nanosuspenzije u [t] što predstavlja količinu rastvarača, praška prirodnog materijala i svih stabilizatora u [t].
[0062] Kao zamena za hemijsku stabilizaciju pomoću stabilizatora kako je prethodno otkriveno, nanosuspenzija takođe može biti fizički stabilizovana pomoću koloidatora (npr. modifikovana vrsta Kamena od Levigata GmbH, Nemačka), kako je takođe prikazano na Fig.1. Tokom ovog postupka, nanosuspenzija je vođena unutar kontejnera (1) rotacijom rotora (4) i nosećeg rotora (5) u konkavnom cilindru (3) na njegovom gornjem kraju preko otklonskih ploča gotovo bez turbulencija. U unutrašnjem konkavnom cilindru (3), opadajući tok nanosuspenzije (7) udara o brojač koji obrće nanosuspenziju na gore, pobuđena rotorima (4,5) na izlazu na nižem kraju konkavnog cilindra. Pri koliziji opadaujćeg toka nanosuspenzije i antipodalnog obrtnog toka nanosuspenzije, nanočestice su statički napunjene frikcijom. Ovo statičko opterećenje ili naelektrisanje čestica može da uzrokuje razdvajanje nanočestica i samim tim fizičku stabilizaciju. Nakon toga, nanosuspenzija se diže (6) na spoljašnjosti hiperboličkog cilindra u suprotnom smeru. Nanosuspenzija se ovim postavlja u pokret poravnan na gore i na dole. Uzrokovana termalna energija je sprovedena hladnjakom za vodu koji je integrisan u dvostrukom zidu (2) kontejnera (1), pri čemu je medijum za hlađenje dovodi do i odvodi od dvostrukog zida (8a, 8b 9a, 9b).
[0063] Stoga, u poželjnom načinu ostvarivanja, nanosuspenzija je dalje podvrgnuta fazi koloidacije d. u koloidatoru posle faze mlevenja c., poželjno uz dodavanje kiseonika. Takva koloidacija dalje može da zameni upotrebu stabilizatora, a u daljem poželjnom načinu ostvarivanja, nanosuspenzija ne sadrži bilo koje stabilizatore, određenije ne sadrži bilo koji propan-1,2,3-triol.
[0064] Kako je prethodno detaljno opisano, nanosuspenzija ovog otkrivanja može biti hemijski ili fizički stabilizovana.
[0065] Nanosuspenzija ovog otkrivanja može dodatno da sadrži kiseonik (O2). Za ovo otkrivanje, ukoliko je voda obogaćena kiseonikom, kiseonik može biti rastvoren u vodi, kao što je fizički ili hemijski rastvoren u vodi, ili prijanja na bilo koju od nanočestica. Da bi se obogatila nanosuspenzija dodatnom količinom kiseonika, može da se koristi gore opisani koloidator. U primeru postupka ovog otkrivanja, oko jednog minuta posle početka postupka koloidacije, kiseonik može da se doda dok u suspenziji ne bude sadržano 20 do 30 mg/litar kiseonika. Ovom vrstom postupka, kiseonik se dodaje u nanosuspenziju takozvanim postupkom usisavanja nasuprot postupka pritiska, pri čemu se kiseonik stavlja u rastvor preko pritiska. Kao uređaj za obogaćivanje kiseonikom, ali bez nužnog ograničavanja na isti, može da se koristi ultra koloidator Levigata Ltd.
[0066] U poželjnom načinu ostvarivanja ovog otkrivanja, nanosuspenzija ima koncentraciju kiseonika od 20 do 30 mg/l.
[0067] Pored najmanje jednog prirodnog materijala i opciono kiseonika, nanosuspenzija ovog otkrivanja takođe može da obuhvata najmanje jedno jedinjenje izabrano iz grupe koju čine arome, konzervansi, surfaktanti i pojačivači propusnosti, kao što je riboflavin ili askorbinska kiselina.
[0068] Nanosuspenzija može opciono da bude filtrirana u fazi filtriranja posle faze c. a opciono pre faze d. Uz takvo filtriranje, veličina nanočestica u nanosuspenziji može dalje da se podešava prema potrebi. Kao primer, može da se pomene sterilno filtriranje nanosuspenzije. Takav sterilni filter može da smanji veličinu čestica do veličine čestica (D90) do ispod 450 nm, poželjno ispod 220 nm. Kao uređaj za filtriranje, može da se koristi bilo koji uređaj iz stanja tehnike, kao što je standardni Milipore filter. Ukoliko je nanosuspenzija filtrirana do 220 nm, takvo filtriranje još više sužava standardnu devijaciju veličine čestica, što može da doprinese stabilizaciji.
[0069] U poželjnom načinu ostvarivanja ovog otkrivanja, nanosuspenzija je filtrirana posle faze c., a opciono pre ili posle faze d., poželjno sterilnim filterom, dalje poželjno do veličine čestica ispod 450 nm, a poželjnije ispod 220 nm.
[0070] Pre upotrebe nanosuspenzije, koncentracija nanosuspenzije može da se podesi prema potrebama. Sa druge strane, nanosuspenzija može biti razblažena dodavanjem dodatnog rastvarača. Sa druge strane, koncentracija nanosuspenzije može biti povećana u daljoj fazi e. povećanje koncentracije može da se postigne uparavanjem rastvarača, poželjno u komori za sušenje, dalje poželjno na temperaturi koja ne prelazi 40 °C, i opciono pri smanjenom pritisku. Konačna nanosuspenzija zatim poželjno ima koncentraciju prirodnog materijala u opsegu od 10 do 40 % (w/w), poželjno od 10 do 20 % (w/w), u odnosu na ukupnu količinu rastvarača prisutnu u nanosuspenziju.
[0071] Stoga, u poželjnom načinu ostvarivanja, koncentracija nanosuspenzije je povećana u narednoj fazi e. uparavanjem rastvarača, poželjno u komori za sušenje, do koncentracije prirodnog materijala od 10 do 40 % (w/w), poželjno od 10 do 20 % (w/w), u odnosu na ukupnu količinu rastvarača prisutnu u nanosuspenziji.
[0072] Zaključujući iz gore navedenog postupka pripreme i iz primera u eksperimentalnom odeljku, nanosuspenzija prirodnih materijala se razlikuje od ekstrakta po sledećim faktorima:
Koncentracija aktivnih komponenti
[0073] Budući da nanosuspenzija sadrži ceo ili delove prirodnog materijala u svom prirodnom sastavu u obliku nanočestica, a ne samo ekstrahovane delove, kao što su jedinjenja rastvorljiva u vodi, koncentracija hidrofilnih kao i hidrofobnih jedinjenja je veća u nanosuspenziji u odnosu na ekstrakt. U ekstraktu, samo hidrofilna ili hidrofobna jedinjenja su u rastvoru zbog svoje rastvorljivosti u odgovarajućem rastvaraču.
Količina suve mase
[0074] Usled prirode nanosuspenzije, suva masa je obično ista ili gotovo ista kao količina jedinjenja dodata u fazi b. kako bi se formirala nanosuspenzija. Nasuprot tome, suva masa ekstrakta je uvek manja od količine jedinjenja koje se stavlja u rastvarač, budući da je rastvorljivost svih jedinjenja značajno manja od 100%.
Oksidacija
[0075] Budući da su nanočestice obično dispergovane u nanosuspenzijama sa ograničenom rastvorljivošću, mogućnost hemijskih reakcija nije suštinska kao kod formulacija baziranih na rastvoru. Prema tome hemijska stabilnost nanosuspenzija je generalno superiornija u odnosu na istu kod rastvora. Stabilnost oksidacije nanosuspenzije se pripisuje mehanizmu koji je sličan oksidovanom sloju na površini aluminijuma. Jednoslojna degradacija na površini nanočestice se stvara onog trenutka kada su izložene vodi i kiseoniku. Ovaj jedan sloj može da štiti unutrašnji deo nanočestica od dalje razgradnje, i samim tim pojačava stabilnost oksidacije nanosuspenzija.
Hemijska stabilizacija
[0076] Jedinstvena struktura nanoskale nanočestica obezbeđuje značajne poraste u oblasti površine do zapreminskog odnosa koji dovodi do značajno različitog ponašanja, i in-vitro i in-vivo, u odnosu na tradicionalne mikro čestice. Uprkos prednostima nanokristala leka, oni imaju i različite nedostatke uključujući kompleksne probleme vezano za proizvodnju i stabilnost. Stabilnost predstavlja jedan od kritičkih aspekata u obezbeđivanju bezbednosti i efikasnosti lekova. Kod intravenski primenjenih nanosuspenzija, na primer, stvaranje većih čestica (> 5 µm) bi moglo da dovede do kapilarne blokade i embolije, i samim tim postoji potreba da se veličina čestica i raspodela veličine detaljno prate tokom čuvanja. Tako velike čestice su isključene ovom nanosuspenzijom.
Fizička stabilizacija
[0077] Naelektrisanje čestica je jedan od faktora koji određuju fizičku stabilnost nanosuspenzija. Što su više čestice jednako naelektrisane, to je veće elektrostatičko odbijanje između čestica i to je veća fizička stabilnost. Obično je naelektrisanje čestica kvantifikovano kao takozvani zeta potencijal, koji je meren npr. elektroforetičnom mobilnošću čestica u električnom polju.
[0078] Gore opisani postupak za pripremu nanosuspenzije dovodi do nanosuspenzije. Shodno tome, ovo otkrivanje se takođe odnosi na nanosuspenziju koja može da se dobije prema bilo kom od ovde opisanih postupaka.
[0079] Dalje, nanosuspenzija ovog otkrivanja može da se koristi u pripremi leka ili suplementa, kao što je dodatak ishrani. Nanosuspenzija ovog otkrivanja poželjno može da se koristi u pripremi leka za bukalnu, topikalnu i/ili oralnu primenu na životinji, poželjno čoveku.
[0080] Nanosuspenzije prirodnih materijala nude razne prednosti uključujući mogućnost da se primenjuju transmukozalnim putem. Nanosuspenzije prirodnih materijala sadrže veće koncentracije aktivnih agenasa po jedinici zapremine, manje čestice aktivnih agenasa koji nisu rastvorljivi u vodi i samim tim obezbeđuju nove mogućnosti za imunomodulatorne lekove, pri čemu imunomodulatorne aktivne agense uzimaju imune ćelije, koje zahtevaju manju veličinu čestica imunomodulatornih aktivnih agenasa.
[0081] Za primenu u usnoj duplju, lek bi poželjno trebalo da bude tečnost i da je efikasan u malim dozama budući da je kapacitet uzimanja za supstance putem usne duplje je ograničen. Dalje čestice leka koji se daje putem usne duplje bi trebalo da budu u nanometarskom opsegu, npr., manje od približno 300 nm, inače je prolaz kroz usnu duplju ograničen. Budući da nanosuspenzija ovog otkrivanja može biti obezbeđena sa veličinom čestica D90ispod 300 nm, nanosuspenzija poželjno može da se koristi za davanje putem usne duplje.
[0082] Unutar usne duplje, postoje dva generalno priznata načina primene biološki aktivnog agensa. Sublingvalna isporuka se postiže putem sluzokoža koje oblažu pod usta. Usled visoke propusnosti i bogatog dotoka u krv, prenos sublingvalnim putem dovodi do brzog početka delovanja, čime se obezbeđuje put isporuke koji je prigodan za izuzetno propusne aktivne agense uz zahteve za kratke periode isporuke i režim učestalog doziranja. Drugi opšte priznati put je putem bukalne mukoze. Ova oblast obuhvata sluzokože unutrašnjosti obraza. Ova oblast takođe ima bogat dovod krvi, robusna je, i obezbeđuje kratko vreme celularnog oporavka nakon stresa ili oštećenja. Iako je bukalna sluzokoža manje propusna od sublingvalne oblasti, širina glatke i relativno nepokretne sluzokože obezbeđuje izuzetno poželjan put apsorpcije za isporuku odloženim i kontrolisanim oslobađanjem biološki aktivnih agenasa. Kao i kod svih transmukoznih puteva primene, dve osnovne prednosti uključuju izbegavanje metabolizma prvog prolaza kroz jetru i presistemske eliminacije unutar gastrointestinalnog trakta.
[0083] Pored toga, bilo koji poznati pojačivač propusnosti može da poveća prolaz nanosuspenzije prema ovom otkrivanju.
[0084] Pored oralne primene, nanosuspenzije ovog otkrivanja mogu takođe da se koriste za parenteralnu, intratekalnu, intravensku, transdermalnu, ili transmukozalnu primenu na životinji, poželjno čoveku. Shodno tome, poželjan način ostvarivanja ovog otkrivanja se odnosi na upotrebu nanosuspenzije u pripremi leka za parenteralnu, intratekalnu, intravensku, transdermalnu, ili transmukozalnu primenu, poželjno bukalnu, topikalnu ili oralnu primenu, na životinji, poželjno čoveku.
[0085] Ovo otkrivanje obezbeđuje stabilnu nanosuspenziju prirodnih materijala, postupke pripreme pomenutih suspenzija i upotrebu pomenutih nanosuspenzija, koje omogućavaju pojačanu isporuku biološki aktivnih agenasa u krvotok subjekta. Nakon kontakta takve nanosuspenzije sa telom, npr. sa površinom usne duplje uključujući bukalnu sluzokožu, to jedinjenje se apsorbuje u krvotok u količini dovoljnoj da izvuče željeni biološki odgovor. Shodno tome, nanosuspenzije mogu biti isporučene normalnim ili mikrofluidizovanim sprejem, u obliku aerosola ili tečnosti. Isporuka može da se postigne parenteralnim, intratekalnim, intravenskim, transdermalnim, transmukozalnim, i bilo kojim ili svim uobičajenom priznatim postupcima isporuke leka.
[0086] Najznačajniji diferencijalni faktori za nanosuspenziju pripremljenu prema ovde otkrivenim postupcima u poređenju sa, npr., ekstraktom su (i) srednja molarna masa glavnih aktivnih komponenti prirodnog materijala – što je niža srednja molarna masa, to je viša bioraspoloživost, (ii) stepen prepoznavanja glavnih aktivnih komponenti prirodnog materijala u ljudskom telu od strane konkretnih ljudskih receptora (takozvanih receptora za prepoznavanje patogena ili toličnih receptora TLR; samo ukoliko je stepen detekcije od strane TLR visok, pojačani imunostimulišući efekat može biti iniciran sledećom signalnom kaskadom), i (iii) dobijeni efekat glavnih aktivnih komponenti prirodnog materijala u ljudskom organizmu. Za prirodni materijal agaricus subrufescens ovi diferencijalni faktori su prikazani u primerima 7 do 9 u nastavku pomoću β-1,3/1,6-glukana kao glavna aktivna komponenta agaricus subrufescens, koja nije rastvorljiva u vodi.
[0087] Nanosuspenzije ovog otkrivanja mogu biti korišćene u lečenju ili sprečavanju kancera, zapaljenske bolesti creva (IBD), artritisa, humanog imunodeficijentnog virusa (HIV), drugih virusnih bolesti, dermatoloških bolesti, kao što je neurodermatitis ili psorijaza, ili auto-imunih bolesti, kao što je multipla skleroza, vaskulitis, reumatoidni artritis ili dermatomiozitis.
[0088] Nanosuspenzije ovog otkrivanja su efektivne u obezbeđivanju većih koncentracija aktivnih agenasa prirodnih materijala u krvotoku tokom dužeg vremenskog perioda u poređenju sa npr. ekstraktima pripremljenim od prirodnih materijala. Ovo se posebno primenjuje na hidrofobna jedinjenja sadržana u takvim prirodnim materijalima. Dalje, nanosuspenzije koje sadrže imunomodulatorna jedinjenja od prirodnih materijala stimulišu imuni sistem na širi i jači način, budući da sadrže čestice koje više stimulišu imuni sistem u nanometarskom opsegu i većoj količini, koje bolje prihvata ili prepoznaje odgovarajuća imuna subpopulacija u poređenju sa, npr., ekstraktima.
EKSPERIMENTALNI ODELJAK
[0089] U nastavku, ovaj pronalazak je ilustrovana detaljnije. Međutim, podrazumeva se da je obim zaštite određuju priloženi patentni zahtevi, koji nisu ograničeni ni na jedan od sledećih primera. Sledeći primeri su definisani kao pomoć pri razumevanju pronalaska i ne bi ih trebalo tumačiti u smislu da konkretno ograničavaju opisani pronalazak koji se štiti.
Primer 1:
Primer 1.1: Stabilna formulacija nanosuspenzije lista masline
[0090] 200 g praška suvog lista masline (veličina čestica D90: < 320 µm, rezidualna vlaga < 5 %) je dodato u 4000 g bidestilovane vode, što je za rezultat imalo 5 % (w/w) disperzije praška lista masline u vodi. Rastvorljivost praška lista masline veličine čestica D90< 320 µm je 1,44 % (w/w). Na osnovu toga, koncentracija nanosuspenzije od 5 % (w/w) predstavlja faktor od 3,5 (faktor rastvorljivosti) iznad granice rastvorljivosti praška lista masline. Disperzija je samlevena do veličine čestica (D90) ispod 400 nm u mlinu sa kuglama sa mešalicom za mokro mlevenje (tip XI, Buehler AG, Švajcarska) pomoću cirkonijum kuglica stabilizovanih itrijumom veličine 0,4 do 0,5 mm dok veličina čestica (D90) ne bude oko 380 nm, a zatim pomoću cirkonijum kuglica stabilizovanih itrijumom veličine 0,1 mm dok se ne postigne konačna veličina čestica (D90) od 272 nm. Pri veličini čestica (D90) od 380 nm, dodato je 14,5 g (0,4 % (w/w)) Tween® 80. Ovo je smanjilo veličinu čestica do 340 nm. Dalje dodavanje 29 g (0,7 % (w/w)) Kolliphor® P407 pri veličini čestica (D90) od oko 340 nm je značajno smanjilo veličinu čestica (D90) do 272 nm (videti Fig.2). Količina specifične energije [kWh/t] koja se koristi za mlevenje može da se vidi sa Fig.2.
Primer 1.2: Ekstrakcija lista masline (komparativna)
[0091] Ista količina praška masline (200 g, veličina čestica D90: < 320 µm) je ekstrahovana u 4000 g bidestilovane vode tokom 2 sata na temperaturi od 22 °C.
Primer 1.3: Poređenje suve mase
[0092] Količina suve mase ekstrakta (primer 1.2) i nanosuspenzije (primer 1.1) kao što je prethodno pripremljena je određena filtriranjem ekstrakta i nanosuspenzije, redom, filterom od 0,45 µm (Millipore, membrana celuloznog estra). Filtrirane čvrste materije su osušene i određena je suva masa filtriranih čestica. Kao što se takođe može videti na Fig.3, količina suve mase nanosuspenzije je 4,5 % (w/w) u poređenju sa 0,3 % (w/w) ekstrakta sa istom koncentracijom praška lista masline (5 % (w/w)).
Primer 2:
Primer 2.1: Stabilna formulacija spiruline nanosuspenzija
[0093] 300 g praška spiruline (10 % (w/w), veličina čestica D90: < 150 µm, rezidualna vlaga < 5 %) i 60 g Kolliphor® P407 je dodato u 3000 g bidestilovane vode, što je za rezultat imalo disperziju spiruline u vodi. Rastvorljivost praška spiruline veličine čestica od D90< 150 µm predstavlja 0,52 % (w/w). Na osnovu toga, koncentracija nanosuspenzije od 10 % (w/w) predstavlja faktor od 19,2 (faktor rastvorljivosti) iznad granice rastvorljivosti praška spiruline. Disperzija je samlevena do veličine čestica (D90) od oko 80 nm u mlinu sa kuglama sa mešalicom za mokro mlevenje (tip XI, Buehler AG, Švajcarska) pomoću cirkonijum kuglica stabilizovanih itrijumom veličine 0,4 do 0,5 mm dok je veličina čestica (D90) oko 120 nm, a zatim pomoću cirkonijum kuglica stabilizovanih itrijumom veličine 0,1 mm dok konačna veličina čestica ne bude (D90) 80 nm. Količina specifične energije [kWh/t] koja se koristi za mlevenje može da se vidi sa Fig. 4.
Primer 2.2: Ekstrakcija spiruline (komparativna)
[0094] Ista količina praška spiruline (300 g, veličina čestica D90: < 150 µm) je ekstrahovana u 3000 g bidestilovane vode tokom 2 sata na temperaturi od 22 °C.
Primer 2.3: Poređenje suve mase
[0095] Količina suve mase ekstrakta (primer 2.2) i nanosuspenzija (Primer 2.1) kao što je prethodno pripremljena je određena filtriranjem ekstrakta i nanosuspenzije, redom, sa filterom od 0,45 µm (Millipore, membrana celuloznog estra). Filtrirane čvrste materije su osušene i određena je suva masa filtriranih čestica. Kao što se takođe može videti sa Fig.5, količina suve mase nanosuspenzije je 9,4 % (w/w) u poređenju sa 3,3 % (w/w) ekstrakta sa istom koncentracijom praška spiruline (10 % (w/w)).
Primer 3:
Primer 3.1: Stabilna formulacija nanosuspenzije gljive agaricus subrufescens sa 5 % P100,
0,5 % Tween® 80 i 1 % Kolliphor P407
[0096] 150 g praška agaricus subrufescens (veličina čestica D90: < 320 µm, rezidualna vlaga < 5 %), 150 g Lipoid P100 (5 % (w/w)) i 15 g polisorbata Tween® 80 (0,5 % (w/w)) su dodati u 3000 g bidestilovane vode, što je za za rezultat imalo 5 % (w/w) disperziju agaricus subrufescens praška u vodi. Rastvorljivost agaricus subrufescens praška veličine česticaD90< 320 µm je 3,2 % (w/w). Na osnovu toga, koncentracija nanosuspenzije od 5 % (w/w) predstavlja faktor od 1,6 (faktor rastvorljivosti) iznad granice rastvorljivosti praška agaricus subrufescens. Disperzija je samlevena u mlinu sa kuglama sa mešalicom za mokro mlevenje (tip XI, Buehler AG, Švajcarska) pomoću cirkonijum kuglica stabilizovanih itrijumom veličine 0,4 do 0,5 mm dok je veličina čestica (D90) oko 6.3 µm, a zatim pomoću cirkonijum kuglica stabilizovanih itrijumom veličine 0,1 mm dok se ne postigne konačna veličina čestica (D90) od 240. Količina specifične energije [kWh/t] koja se koristi za mlevenje može da se vidi sa Fig.6 (tamna linija). Pri veličini čestica (D90) od oko 6,3 µm, dodato je 30 g (1 % (w/w)) Kolliphor® P407. Konačna veličina čestica (D90) nanosuspenzije je bila 240 nm (videti takođe Fig.6 - tamna linija).
Primer 3.2: Stabilna formulacija nanosuspenzije gljive agaricus subrufescens 10 % P100, 0,5 % Tween® 80 i 1 % Kolliphor P407
[0097] 150 g praška agaricus subrufescens (veličina čestica D90: < 320 µm), 300 g Lipoid P100 (10 % (w/w)) i 15 g polisorbata Tween® 80 (0,5 % (w/w)) je dodato u 3000 g bidestilovane vode, što je za rezultat imalo 5 % (w/w) disperziju agaricus subrufescens praška u vodi. Disperzija je samlevena u mlinu sa kuglama sa mešalicom za mokro mlevenje (tip XI, Buehler AG, Švajcarska) pomoću cirkonijum kuglica stabilizovanih itrijumom veličine 0,4 do 0,5 mm dok je veličina čestica (D90) oko 6,3 µm, a zatim pomoću cirkonijum kuglica stabilizovanih itrijumom veličine 0,1 mm dok se ne postigne konačna veličina čestica (D90) od 368 nm. Količina specifične energije [kWh/t] koja se koristi za mlevenje može da se vidi sa Fig.6 (isprekidana linija). Pri veličini čestica (D90) od oko 2,6 µm, dodato je 30 g (1 % (w/w)) Kolliphor® P407. Konačna veličina čestica (D90) nanosuspenzije je bila 368 nm (videti takođe Fig.6 - isprekidana linija).
Primer 3.3: Stabilna formulacija nanosuspenzije gljive agaricus subrufescens 5 % P100, 0.75 % Tween® 80
[0098] 150 g praška agaricus subrufescens (veličina čestica D90: < 320 µm), 150 g Lipoid P100 (5 % (w/w)) i 15 g polisorbata Tween® 80 (0,5 % (w/w)) su dodati u 3000 g bidestilovane vode, što je za rezultat imalo 5 % (w/w) disperziju agaricus subrufescens praška u vodi. Disperzija je samlevena u mlinu sa kuglama sa mešalicom za mokro mlevenje (tip XI, Buehler AG, Švajcarska) pomoću cirkonijum kuglica stabilizovanih itrijumom veličine 0,4 do 0,5 mm. Količina specifične energije [kWh/t] koja se koristi za mlevenje može da se vidi sa Fig.7 (isprekidana linija). Veličina čestica (D90) nanosuspenzije je bila smanjena na 343 nm pri specifičnoj energiji od 15170 kWh/t (videti takođe Fig.7 - isprekidana linija). Posle nastavljenog mlevenja pri povišenoj specifičnoj energiji, veličina čestica se iznenada povećala, verovatno usled visoke površine čestice, koja može biti uzrok aglomeracije. Čak dodavanje dodatnih 7,5 g polisorbata Tween® 80 (što je za rezultat imalo ukupno 0,75 % (w/w)) nije značajno smanjilo veličinu čestica. Poređenja radi, ista nanosuspenzija ali sa dodatnih 1 % Kolliphor® P407 (primer 3.2 iznad) i 0,5 % polisorbata Tween® 80 prikazuje dalje smanjenje veličine čestica i takođe stabilizaciju (videti Fig.7 -tamna linija).
Primer 3.4: Ekstrakcija gljive agaricus subrufescens (komparativna)
[0099] Ista količina praška agaricus subrufescens (150 g, veličina čestica D90: < 320 µm) je ekstrahovana u 3000 g bidestilovane vode tokom 2 sata na temperaturi od 22 °C.
Primer 3.5: Poređenje suve mase
[0100] Količina suve mase ekstrakta (primer 3.4) i nanosuspenzija (primer 3.1) kao što je prethodno pripremljena je određena filtriranjem ekstrakta i nanosuspenzije, redom, sa filterom od 0,45 µm (Millipore, membrana celuloznog estra). Filtrirane čvrste materije su osušene i određena je suva masa filtriranih čestica. Kao što se takođe može videti sa Fig.8, količina suve mase nanosuspenzije je 4,4 % (w/w) u poređenju sa 0 % (w/w) ekstrakta sa istom koncentracijom praška agaricus subrufescens (5 % (w/w)).
Primer 4:
Primer 4.1: Koncentracija aktivnih komponenti
[0101] Vodeći aktivni agens agaricus subrufescens je β-1,3/1,6-glukan, i ovaj glukan samim tim može da se koristi kao referentni materijal da bi se poredila koncentracija različitih ekstrakata agaricus subrufescens i nanosuspenzije agaricus subrufescens. Pored 5 % (w/w) nanosuspenzije iz primera 3.1 i 5 % (w/w) ekstrakta agaricus subrufescens iz primera 3.4, dalji ekstrakti su pripremljeni na analogan način kao u primeru 3.4. Ostale vrste ekstrakata sa Fig.9 su sve urađene sa istim parametrima (150 g agaricus subrufescens prašak u 3000 g rastvarača, vreme ekstrakcije tokom 2h) sa različitim rastvaračima (bidestilovana voda i 60 % (v/v) etanol (EtOH)) i različite temperature (sobna temperatura 22 °C i 80 °C), kako je označeno na Fig.9.
[0102] Fig.9 prikazuje poređenje sadržaja β-1,3/1,6-glukana za različite ekstrakte praška agaricus subrufescens, i nanosuspenziju iz primera 3.1, u odnosu na čist prašak agaricus subrufescens koji se koristi za pripremu ekstrakata i nanosuspenzije. U nanosuspenziji, 98% sadržaja β-1,3/1,6-glukana praška je inkorporirano, u poređenju sa samo 2% ekstrakta etanola na sobnoj temperaturi i do 46% na 80 °C u bidestilovanoj vodi. Ovo pokazuje da se u nanosuspenziji zadržava gotovo sav β-1,3/1,6-glukan iz praška.
Primer 5:
Primer 5.1: Stabilna formulacija nanosuspenzije silicijumdioksida
[0103] 100 g praška silicijumdioksida (veličina čestica D90: < 25 nm) je dodato u 2000 g bidestilovane vode, što je za rezultat imalo 5 % (w/w) disperziju praška silicijumdioksida u vodi. Nanosuspenzija silicijumdioksida je stabilizovana fizičkom stabilizacijom koja je prethodno detaljno opisana. Zeta potencijal, izmeren laserskim difrakcionim analizatorom Zetasizer (Malvern Instruments, UK) je uzet kao fizički parametar da bi se ocenila fizička stabilizacija. Shodno tome, zeta potencijal je izmeren pre i posle fizičke stabilizacije sa koloidatorom. Usled fizičke stabilizacije u koloidatoru tokom 3 minuta na 3000 min<-1>zeta potencijal je smanjen sa -0,84 mV na -10,4 mV. Ovo je značajno smanjenje u poređenju sa vrednošću bez fizičke stabilizacije (videti Fig.10).
Primer 6:
[0104] U primeru 6, ispitane su različite suspenzije na dugoročnu stabilnost. Ispitivanje ubrzane stabilnosti je urađeno sa analitičkom centrifugom (Lumifuge of LUM GmbH, Nemačka) kako bi se klasifikovali i kvantifikovali fenomeni nenamernog razdvajanja sastojaka, kao sedimentacija, flotacija ili konsolidacija, nanosuspenzije. Ovo ispitivanje je korišćeno da bi se odredila stabilnost nanosuspenzije. Nanosuspenzija se smatra dugoročno stabilnom ukoliko nema ili ima samo nešto sedimentacije, flotacije ili konsolidacije nanočestica.
[0105] Kod ispitivanja stabilnosti u uslovima ubrzanog starenja, nanosuspenzija je ubrzana u centrifugi sa 2000 g (g = konstanta sile gravitacije = 9,81 m/s<2>). Uz pomoć Lumifuge prostorno i vremenski rešenog gašenja, dobijeni su profili duž čitavog uzorka. Paralelno svetlo (I0) osvetljava celu ćeliju uzorka a preneseno svetlo i se detektuje hiljadama senzora raspoređenih linearno preko celog uzorka od vrha do dna sa rezolucijom mikroskale. Prenos se pretvara u gašenje putem lg (I/I0), i može da se izračuna koncentracija čestica.
[0106] Da bi se postigla dugoročna stabilna suspenzija, propan-1,2,3-triol može da se doda kako bi se povećala viskoznost nanosuspenzije i sprečila sedimentacija nanočestica u nanosuspenziji. Sledeći primeri pokazuju efekat dodavanja propan-1,2,3-triola.
Primer 6.1: Dugoročna stabilna formulacija nanosuspenzije gljive agaricus subrufescens sa 0 % propan-1,2,3-triolom
[0107] Nanosuspenzija pripremljena kao u primeru 3.1 je uzeta i mešana je oko 30 minuta magnetnom mešalicom, bez dodavanja propan-1,2,3-triola. Zatim, ispitivanje stabilnosti u uslovima ubrzanog starenja analitičkom centrifugom (Lumifuge of LUM GmbH, Nemačka) da bi se klasifikovali i kvantifikovali fenomeni nenamernog razdvajanja sastojaka, kao što je sedimentacija, flotacija ili konsolidacija, nanosuspenzije, kako je prethodno opisano.
[0108] Fig.11 prikazuje krivu prenosa svetlosti nanosuspenzije sa 0 % propan-1,2,3-triola. Kao što može da se vidi, sediment većih čestica ispod polja od 2000 g u prvom obrtaju (svetlo sive linije između 40 % i oko 25 % prenosa), zatim slede dalje veće čestice u sledećim obrtajima dok se nakon 20 minuta ne formira sediment na dnu kivete. Brzina prenosa opada sa 44% na početku do 10 % (sediment na dnu kivete), čime se ilustruje postupak sedimentacije ispod polja od 2000 g. Ovo pokazuje dugoročnu stabilnost nanosuspenzije.
Primer 6.2: Dugoročna stabilna formulacija nanosuspenzije gljive agaricus subrufescens sa 20% propan-1,2,3-triolom
[0109] 500 ml nanosuspenzije pripremljene kao u primeru 3.1 je uzeto i dodato je 20 % (v/v) propan-1,2,3-triola. Dobijena mešavina je mešana oko 30 minuta magnetnom mešalicom. Zatim je urađeno gore opisano ispitivanje u uslovima ubrzanog starenja.
[0110] Fig.12 prikazuje krivu prenosa svetlosti nanosuspenzije sa 20 % propan-1,2,3-triola. Kao što se može videti, količina većih čestica (svetlo sive linije između 50 % i 40 % prenosa) u tom sedimentu ispod polja od 2000g je dosta manja u prvim obrtajima, dok se nakon 20 minuta ne formira sediment na dnu kivete. Brzina prenosa opada sa 58 % sa početka do 10 % (sediment na dnu kivete), čime se ilustruje sedimentacija ispod polja od 2000 g. To pokazuje da se dodavanjem 20 % (v/v) propan-1,2,3-triola, stabilnost nanosuspenzije može povećati.
Primer 6.3: Dugoročna stabilna formulacija nanosuspenzije gljive agaricus subrufescens sa 50% propan-1,2,3-triolom
[0111] 500 ml nanosuspenzije pripremljene kao u primeru 3.1 je uzeto i dodato je 50 % (v/v) propan-1,2,3-triola. Dobijena mešavina je mešana oko 30 minuta magnetnom mešalicom. Zatim je urađeno gore opisano ispitivanje u uslovima ubrzanog starenja.
[0112] Fig.13 prikazuje krivu prenosa svetlosti nanosuspenzije sa 50 % propan-1,2,3-triol. Kao što se može videti, ne postoji sedimentacija tokom 20 minuta ispod polja od 2000 g (svetlo sive linije između 50 % i oko 53 % prenosa). Nema sedimenta na dnu kivete. To pokazuje da se dodavanjem 50 % (v/v) propan-1,2,3-triola, stabilnost suspenzije dalje povećava.
Primer 7: Srednja molarna masa β-1,3/1,6-glukana nanosuspenzije gljive agaricus subrufescens i ekstrakta sa 5 % (w/w) koncentracije
[0113] Fig.14 prikazuje diferencijalnu masenu frakciju (tj., srednju molarnu masu) β-1,3/1,6-glukana nanosuspenzije agaricus subrufescens pripremljene kao u primeru 3.1 i ekstrakta pripremljenog kao u primeru 3.4 (nanosuspenzija 1: 20 µl ubrizgana zapremina u detektor; nanosuspenzija 2: 10 µl ubrizgana zapremina u detektor, ekstrakt: 10 µl ubrizgana zapremina u detektor). Molarna masa agaricus subrufescens nanosuspenzije je izmerena sa dve ubrizgane zapremine kako bi se pokazala pouzdanost analitičkog postupka, za koji se pokazalo da je stabilan. Srednja molarna masa aktivne supstance β-1,3/1,6-glukana nanosuspenzije agaricus subrufescens je između 15 i 16 kDa a od ekstrakta je 135 kDa. Ovo pokazuje da postupak pripreme nanosuspenzije od ovde opisanih prirodnih materijala značajno smanjuje molarnu masu glavne aktivne supstance β-1,3/1,6-glukan. Ovo dovodi do veće apsorpcije β-1,3/1,6-glukana prisutnog u nanosuspenziji prilikom primene.
Primer 8: Detekcija β-1,3/1,6-glukana nanosuspenzije gljive agaricus subrufescens i ekstrakta oboje sa 5 % (w/w) koncentracije
[0114] Dektin-1 je glavni receptor na imunim ćelijama koji detektuje β-1,3/1,6-glukan u ljudskom organizmu. Fig.15 prikazuje relativnu količinu dektin-1 pozitivnih monocita (u %) u uzorku nestimulisanih perifernih krvnih mononuklearnih ćelija (PBMC), PBMC stimulisan sa 5 % (w/w) agaricus subrufescens nanosuspenzije (pripremljene kao u primeru 3.1) i 5 % (w/w) agaricus
subrufescens ekstrakta (pripremljenog kao u primeru 3.4), redom. Broj PBMC se povećava za 409 % kada je stimulisan sa 5 % (w/w) agaricus subrufescens nanosuspenzije u odnosu na nestimulisani uzorak, u poređenju sa porastom od 122 % pri stimulaciji sa 5 % (w/w) ekstrakta agaricus subrufescens.
Primer 9: Indukcija citokina TNF-alfa nanosuspenzijom gljive agaricus subrufescens i ekstraktom oboje sa 5 % (w/w) koncentracijom
[0115] TNF-alfa je jedan od glavnih citokina u razvoju bolesti. Fig.16 prikazuje poređenje in-vitro indukcije citokina TNF-alfa uzrokovanog garicus subrufescens nanosuspenzijom (pripremljenom kao u primeru 3.1) i ekstraktom (pripremljenim kao u primeru 3.4). Indukcija TNF-alfa agaricus subrufescens nanosuspenzijom je faktorom 60 koji je veći u poređenju sa ekstraktom.
Primer 10: Indukcija citokina IL-10 nanosuspenzijom gljive agaricus subrufescens i ekstraktom oboje sa 5 % (w/w) koncentracijom
[0116] Fig.17 prikazuje poređenje citokina IIL- 10, kao jednog od glavnih proinflamatornih citokina, u invitro indukciji uzrokovanoj garicus subrufescens nanosuspenzijom (pripremljenom kao u primeru 3.1) i ekstraktom (pripremljenim kao u primeru 3.4). Indukcija IL-10 by agaricus subrufescens nanosuspenzije je faktorom od 26.5 koji je veći u poređenju sa ekstraktom.
Primer 11: Indukcija citokin IL-6 nanosuspenzijom gljive agaricus subrufescens i ekstraktom oboje sa 5 % (w/w) koncentracijom kao dobijenim efektom u ljudskom organizmu
[0117] Fig.18 prikazuje poređenje citokina IL-6, kao jednog od glavnih pro-inflamatornih citokina, u invitro indukciji uzrokovanoj garicus subrufescens nanosuspenzijom (pripremljenoj kao u primeru 3.1) i ekstraktom (pripremljenim kao u primeru 3.4). Indukcija IL-10 agaricus subrufescens nanosuspenzijom je faktorom 6.7 koji je veći u poređenju sa ekstraktom.
Primer 12: Poboljšanje raspodele čestica nansosuspenzije gljive agaricus sa 5 % (wlw) koncentracijom i 7,5 % mašću
[0118] 150 g prašak agaricus subrufescens (veličina čestica D90: < 320 µm), 225 g Lipoid P100 (7.5 % (w/w)) 15 g polisorbata Tween® 80 (0,5 % (w/w)) su dodati u 3000 g bidestilovane vode, što je za rezultat imalo 5 % (w/w) disperziju agaricus subrufescens praška u vodi. Disperzija je samlevena u mlinu sa kuglama sa mešalicom za mokro mlevenje (tip XI, Buehler AG, Švajcarska) pomoću cirkonijum kuglica stabilizovanih itrijumom veličine 0,4 do 0,5 mm dok je veličina čestica (D90) oko 15 µm, a zatim pomoću cirkonijum kuglica stabilizovanih itrijumom veličine 0,1 mm dok se ne postigne konačna veličina čestica (D100) od 375 nm. Pri veličini čestica (D90) od oko 4 µm, 30 g (1 % (w/w)) dodat je Kolliphor® P407.
Konačna veličina čestica (D100) nanosuspenzije je bila 375 nm. Filtracija dobijene nanosuspenzije nije bila neophodna.
[0119] Dodavanjem dodatnih 2,5% (w/w) Lipoid P100 u poređenju sa primerom 3.1, postignuta su dva glavna poboljšanja. Prvo, konačna veličina čestica (D100) od 375 nm (videti fig.20) kako je postignuta, u poređenju sa veličinom čestica (D100) od 10 µm (videti fig.19) u primeru 3.1. Drugo, dobijena je monomodalna raspodela čestica, u poređenju sa bimodalnom raspodelom čestica u primeru 3.1 (videti fig.19 i 20, redom). Kako bi se nanosuspenzija održavala stabilnom, poželjno je da se ima monomodalna raspodela čestica kako bi se izbeglo ili smanjilo Ostvaldovo sazrevanje koje može da se javi kao rezultat nestabilne nanosuspenzije. Razlika je takođe jasna iz detaljnije raspodele čestica iz dva primera. U primeru 3.1, D10veličina čestica je 0,108 µm,D50veličina čestica je 0,159 µm, D90veličina čestica je 0,240 µm, a D100veličina čestica je 10 µm (videti Fig.19). Nasuprot tome, detaljna raspodela čestica iz primera 12 je D10veličina čestica od 0,065 µm, D50veličina čestica od 0,104 µm, D90veličina čestica od 0,178 µm, i D100veličina čestica od 0,375 µm (videti Fig.20).
Primer 13: Indukcija CD25 aktiviranih T-ćelija nanosuspenzijom gljive agaricus subrufescens iz primera 12 kao dobijeni efekat u ljudskom telu
[0120] CD25 aktivirane T-ćelije predstavljaju jednu važnu subpoppulaciju T-ćelija za koje se smatra da izazivaju pomeranje odgovora sa T-pomoćnih ćelija 2 (Th2) na T-pomoćne ćelije 1 (Th1). Pomeranje u Th1/Th2 ravnoteži prema Th1 odgovoru je odgovorno za porast kapaciteta imunog sistema odbrane od

Claims (13)

  1. virusa. U sledećem primeru, porast CD25 aktivirnaih T-ćelija je ispitan kod ljudi sa nanosuspenzijom prema primeru 12 koja sadrži agaricus subrufescens, u poređenju sa praškom agaricus subrufescens kakav je dostupan na tržištu.
    [0121] Nanosuspenzija pripremljena kao u primeru 12 je pomešana sa propan-1,2,3-triolom (glicerin) da bi se dobila mešavina koja sadrži 40 % glicerina. Ova mešavina je bila data prvoj grupi od osam ljudi u dozi od 3,78 ml/dnevno aktivatorom spreja u pumpi. Ova doza odgovara 105 mg agaricus subrufescens (sadržaja suve čvrste materije). U pomenutoj prvoj grupi, CD25 aktivirane T-ćelije su se povećale za 33 % tokom 4 nedelje nakon početka (videti Fig.21). Poređenja radi, druga grupa od osam ljudi je primala agaricus subrufescens prašak u kapsulama (veličina čestica od oko 220 µm) u dnevnoj preporučenoj dozi od 2520 mg. U pomenutoj drugoj grupi, CD25 aktivirane T-ćelije su se povećale za 11,5 % tokom 4 nedelje nakon početka (videti Fig.22).
    [0122] Kao što se može videti iz prethodnih podataka, nanosuspenzija iz primera 12 dovodi do gotovo trostrukog povećanja CD25 aktiviranih T-ćelija, u poređenju sa praškom. Drugim rečima, nanosuspenzija iz primera 12 je oko tri puta potentnija od konvencionalnog praška. Ovo je čak i više iznenađujuće budući da je doza bila niža po faktoru od 24, u poređenju sa praškom.
    Patentni zahtevi
    1. Postupak za pripremu stabilne nenosuspenzije koja obuhvata najmanje jedan prirodni materijal, pri čemu taj postupak obuhvata faze
    a. Obezbeđivanja najmanje jednog prirodnog materijala veličine čestica (D100) manje od 320 µm, osim ekstrakta;
    b. Dispergovanje najmanje jednog pomenutog prirodnog materijala iz faze a. u rastvaraču;
    c. Mlevenje disperzije iz faze b. do veličine čestica (D90) ispod 1000 nm (D90< 1000 nm),
    pri čemu je najmanje jedan prirodni materijal dispergovan u fazi b. u koncentraciji od 0,5 do 20 % (w/w), u odnosu na ukupnu količinu rastvarača upotrebljenog u nanosuspenziji, i pri čemu faza dispergovanja b. ili faza mlevenja c. obuhvata dodavanje stabilizatora;
    pri čemu je taj stabilizator izabran iz grupe koju čine fosfolipidi; polisorbati; hidroksipropil celuloza (HPC), hidroksipropil metilceluloza (HPMC) i polivinilpirolidon (PVP); nejonski tri-blok kopolimeri; kopolivinilpirolidon; kaprilokapropil polioksil-8 gliceridi;
    Lauraoil polioksil-32 gliceridi; želatin; lecitin (fosfatidi); guma akacija; holesterol; tragakant; polioksietilen alkil etri; derivati polioksietilen ricinusovog ulja; polioksietilen sorbitan estri masnih kiselina; sorbitan estri masnih kiselina; polietilenglikoli; polioksietilen stearati; mono i digliceridi; koloidalni silicijumdioksid; natrijumdodecilsulfat; magnezijumaluminijum silikat; trietanolamin; stearinska kiselina; kalcijumstearat; glicerolmonostearat; cetostearil alkohol; ketomakrogol emulgujući vosak; alkoholi kratkih i srednjih lanaca;
    Oleoil polioksil-6 gliceridi; Plurol oleique; propan-1,2,3-triol, polivinil alkohol i dioktilnatrijumsulfosukcinat (DOSS);
    pri čemu je najmanje jedan prirodni materijal izabran iz grupe koju čine biljke, cijanobakterije, alge i gljivice.
  2. 2. Postupak prema zahtevu 1, pri čemu najmanje jedan prirodni materijal predstavlja deo ili ceo pomenuti prirodni materijal, poželjno ceo pomenuti prirodni materijal.
  3. 3. Postupak prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu je taj prirodni materijal osušen u fazi a.1, pre faze a., poželjno liofilizovan i/ili termalno osušen, i/ili
    pri čemu taj prirodni materijal obezbeđen u fazi a. ima sadržaj vode w ispod 15 % (w < 15 %), poželjno ispod 12% (w < 12 %), poželjnije ispod 10 % (w < 10 %), i najpoželjnije ispod 8 % (w < 8 %).
  4. 4. Postupak prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu je taj prirodni materijal prethodno usitnjen pre i/ili posle sušenja u fazi a.1, poželjno u mlinu sa nožem, i opciono prosejan do veličine čestica (D100) manje od 320 µm.
  5. 5. Postupak prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu je najmanje jedan prirodni materijal dispergovan u fazi b. u koncentraciji od 2 do 10 % (w/w), u odnosu na ukupnu količinu rastvarača upotrebljenog u nanosuspenziji, poželjno od 2 do 5 % (w/w) ili od 5 do 10 % (w/w).
  6. 6. Postupak prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu faza dispergovanja b. obuhvata dodavanje stabilizatora, poželjno pri čemu faza dispergovanja b. obuhvata dodavanja fosfolipida i/ili polisorbata, poželjno
    a. pri čemu faza dispergovanja b. obuhvata dodavanje polisorbata u količini od 0,5 do 2 % (w/w), i/ili pri čemu je taj polisorbat izabran iz grupe koju čine polisorbat 80 i polisorbat 20, ili
    b. pri čemu faza dispergovanja b. obuhvata dodavanje fosfolipida u količini od 50 do 200 % (w/w), u odnosu na ukupnu količinu prirodnog materijala, poželjno pri čemu taj fosfolipid sadrži do 95 % (masenih) fosfatidilholina i/ili od 20 do 30 % (masenih) lizofosfatidilholina; ili
    c. pri čemu stabilizator predstavlja polimer izabran iz grupe koju čine hidroksipropil celuloza (HPC), hidroksipropil metilceluloza (HPMC) i polivinilpirolidon (PVP); ili pri čemu je stabilizator izabran iz grupe koju čine polisorbat 80, polisorbat 20, poloksamer 407 i poloksamer 188.
  7. 7. Postupak prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu se faza mlevenja c. izvodi u mlinu za mokro mlevenje sa kuglama sa mešalicom, poželjno
    a. pri čemu faza mlevenja c. obuhvata prvu fazu mlevenja c.1 u mlinu za mokro mlevenje sa kuglama, poželjno mlinu za mokro mlevenje sa kuglama sa mešalicom, prečnika kugli za usitnjavanje od 0,5 do 1,5 mm, i drugu fazu mlevenja c.2 u mlinu za mokro mlevenje sa kuglama, poželjno mlinu za mokro mlevenje sa kuglama sa mešalicom, prečnika kugli za usitnjavanje od 0,3 do 0,4 mm, i treću fazu mlevenja c.2 u mlinu za mokro mlevenje sa kuglama , poželjno mlinu za mokro mlevenje sa kuglama sa mešalicom, prečnika kugli za usitnjavanje od 0,05 do 0,2 mm, ili
    b. pri čemu faza mlevenja c. obuhvata prvu fazu mlevenja c.1 u mlinu za mokro mlevenje sa kuglama, poželjno mlinu za mokro mlevenje sa kuglama sa mešalicom, prečnika kugli za usitnjavanje od 0,4 do 0,5 mm, i drugu fazu mlevenja c.2 u mlinu za mokro mlevenje sa kuglama, poželjno mlinu za mokro mlevenje sa kuglama sa mešalicom, prečnika kugli za usitnjavanje od 0,05 do 0,2 mm.
  8. 8. Postupak prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu faza mlevenja c. obuhvata dodavanje stabilizatora, poželjno pri čemu taj stabilizator predstavlja elektrostatički i/ili sterični stabilizator, veličine čestica D90< 9 µm poželjno D90< 3 µm, poželjnije D90< 800 nm a najpoželjnije D90< 300 nm, poželjno pri čemu je stabilizator izabran iz grupe koju čine fosfolipidi; polisorbati; hidroksipropil celuloza (HPC), hidroksipropil metilceluloza (HPMC); polivinilpirolidon (PVP); nejonski tri-blok kopolimeri, kao što su poloksameri (npr., poloksamer 407 ili poloksamer 188); kopolivinilpirolidon; Kaprilokapropil polioksil-8 gliceridi; Lauraoil polioksil-32 gliceridi; želatin; lecitin (fosfatidi); guma akacija; holesterol; tragakant; polioksietilen alkil etri; derivati polioksietilen ricinusovog ulja; polioksietilen sorbitan estri masnih kiselina; sorbitan estri masnih kiselina; polietilenglikoli; polioksietilen stearati; mono i digliceridi; koloidalni silicijumdioksid; natrijumdodecilsulfat; magnezijumaluminijum silikat; trietanolamin; stearinska kiselina; kalcijumstearat; glicerolmonostearat; cetostearil alkohol; ketomakrogol emulgujući vosak; alkoholi kratkih i srednjih lanaca; Oleoil polioksil-6 gliceridi; Plurol oleique; propan-1,2,3-triol, polivinil alkohol i dioktilnatrijumsulfosukcinat (DOSS), poželjno pri čemu je stabilizator izabran iz grupe koju čine polisorbat 80, polisorbat 20, poloksamer 407 i poloksamer 188.
  9. 9. Postupak prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu taj postupak obuhvata dodavanje propan-1,2,3-triol (glicerina) posle završetka faze mlevenja c., poželjno
    pri čemu je taj stabilizator glicerin u količini od 30 do 100 % (v/v), poželjno u količini od 40 % (v/v) ili 50% (v/v), u odnosu na ukupnu zapreminu rastvarača.
  10. 10. Postupak prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu je nanosuspenzija dalje podvrgnuta fazi koloidacije d. u koloidatoru posle faze mlevenja c., poželjno uz dodavanje kiseonika, pri čemu nanosuspenzija nužno ne sadrži propan-1,2,3-triol.
  11. 11. Postupak prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu je nanosuspenzija filtrirana posle faze c. a opciono pre ili posle faze d., poželjno sterilnim filterom, dalje poželjno do veličine čestica ispod 450 nm, a poželjnije ispod 220 nm, i/ili
    pri čemu nanosuspenzija dodatno obuhvata najmanje jedno jedinjenje izabrano iz grupe koju čine arome, konzervansi, surfaktanti i pojačivači propusnosti.
  12. 12. Postupak prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu se disperzija iz faze b. melje do veličine čestica (D90) ispod 500 nm (D90< 500 nm), poželjno ispod 300 nm (D90< 300 nm), dalje poželjno ispod 250 nm (D90< 250 nm), i najpoželjnije ispod 200 nm (D90< 200 nm), kako je mereno dinamičkim rasipanjem svetlosti ili laserskim difrakcionim analizatorom.
  13. 13. Postupak prema bilo kom od prethodnih zahteva, pri čemu je koncentracija nanosuspenzije povećana u narednoj fazi e. uparavanjem rastvarača, poželjno u komori za sušenje, do koncentracije prirodnog materijala od 10 do 40 % (w/w), poželjno od 10 do 20 % (w/w), u odnosu na ukupnu zapreminu nanosuspenzije, i/ili
    pri čemu je najmanje jedan prirodni materijal prisutan u nanosuspenziji u koncentraciji koja dovodi do faktora rastvorljivosti od više od 0,4, ili više od 0,5, ili više od 0,8, ili više od 1, ili čak više od 1,1.
RS20211145A 2014-02-03 2015-02-03 Nanosuspenzija prirodnih materijala i postupak njene pripreme RS62381B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14153705 2014-02-03
EP2014064449 2014-07-07
EP15702278.1A EP3102185B1 (en) 2014-02-03 2015-02-03 Nanosuspension of natural materials and preparation method thereof
PCT/EP2015/052202 WO2015114164A1 (en) 2014-02-03 2015-02-03 Nanosuspension of natural materials and preparation method thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS62381B1 true RS62381B1 (sr) 2021-10-29

Family

ID=52444306

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20211145A RS62381B1 (sr) 2014-02-03 2015-02-03 Nanosuspenzija prirodnih materijala i postupak njene pripreme

Country Status (22)

Country Link
US (1) US10213382B2 (sr)
EP (1) EP3102185B1 (sr)
JP (2) JP6751672B2 (sr)
KR (1) KR20160118317A (sr)
CN (1) CN106102719A (sr)
AU (1) AU2015212726B2 (sr)
CA (1) CA2938552C (sr)
CY (1) CY1124656T1 (sr)
DK (1) DK3102185T3 (sr)
ES (1) ES2891151T3 (sr)
HR (1) HRP20211513T1 (sr)
HU (1) HUE056398T2 (sr)
LT (1) LT3102185T (sr)
MX (1) MX375742B (sr)
NZ (1) NZ723631A (sr)
PL (1) PL3102185T3 (sr)
RS (1) RS62381B1 (sr)
RU (1) RU2695325C1 (sr)
SA (1) SA516371597B1 (sr)
SI (1) SI3102185T1 (sr)
WO (1) WO2015114164A1 (sr)
ZA (1) ZA201604743B (sr)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20160118317A (ko) * 2014-02-03 2016-10-11 아푸라노 파마수티컬스 게엠베하 천연 재료의 나노현탁액 및 그의 제조 방법
JP6875397B2 (ja) * 2015-08-04 2021-05-26 アプラノ ライフ サイエンシズ ゲーエムベーハー 天然材料の粒子および抽出物を含むナノ懸濁液
EP3744181A4 (en) * 2018-03-27 2021-04-28 Mizkan Holdings Co., Ltd. SOLID FAT COMPOSITION CONTAINING A PLANT, ASSOCIATED PRODUCTION PROCESS AND APPEARANCE AND TASTE IMPROVEMENT PROCESS
WO2020018325A1 (en) * 2018-07-10 2020-01-23 Applied Lifesciences And Systems Poultry, Inc. Method of preparing and delivering oocyst solutions
CN109432018A (zh) * 2018-12-25 2019-03-08 中国人民解放军第四军医大学 难溶性药物的纳米混悬液及其制备方法和应用
KR102116022B1 (ko) * 2019-07-16 2020-05-27 (주)코이즈 고농도의 산소를 함유하는 미세소구체가 포함된 화장료 조성물 및 이의 제조방법
IL294452B2 (en) 2020-01-06 2025-11-01 Cannaxan Gmbh Preparation and use of cannabis nano-formulation
CN115998703B (zh) * 2022-12-14 2024-09-06 迪沙药业集团有限公司 一种地榆组合物及其制备方法
US11832614B1 (en) 2023-04-28 2023-12-05 King Faisal University Method of inhibiting mycotoxin growth using Arthrospira platensis nanoparticles
DE102025101736B3 (de) * 2025-01-19 2026-02-19 Elke Münch Mechanochemische Reaktoren mit einem selbstregulierenden Wärmemanagementsystem auf der Basis von Wärmerohren

Family Cites Families (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3502153A1 (de) 1985-01-23 1986-07-24 Röben Kolloid Entwicklung GmbH & Co KG, 2932 Zetel Kolloidator zum kolloidieren von fliessfaehigen materialien
DE4137540A1 (de) 1991-11-14 1993-05-19 Steigerwald Arzneimittelwerk Verwendung von praeparaten der curcuma-pflanzen
JPH05221852A (ja) 1992-02-18 1993-08-31 L T T Kenkyusho:Kk 制ガン剤の新規製剤調製方法
ZA9711731B (en) 1996-12-31 1998-07-01 Monsanto Co Aqueous glycerol formulations of somatotropin
US20050107582A1 (en) 2003-07-30 2005-05-19 Alfred Wong Method for the preparation of phytosterols from tall oil pitch
US20120042886A1 (en) * 1998-03-11 2012-02-23 Hanna Piskorz Method of producing a nicotine medicament and a medicament made by the method
DE19832304A1 (de) * 1998-07-17 2000-01-20 Reiner Weichert Verfahren und Vorrichtung zur Ultrafein-Mahlung von festen Materialien
US6375986B1 (en) * 2000-09-21 2002-04-23 Elan Pharma International Ltd. Solid dose nanoparticulate compositions comprising a synergistic combination of a polymeric surface stabilizer and dioctyl sodium sulfosuccinate
MXPA02000053A (es) 1999-07-05 2003-07-21 Idea Ag Un metodo para mejorar el tratamiento a traves de barreras adaptables semipermeables.
JP4752233B2 (ja) 2001-04-27 2011-08-17 味の素株式会社 免疫賦活剤
CN100391439C (zh) 2001-04-27 2008-06-04 味之素株式会社 免疫增强剂
WO2003029269A1 (en) * 2001-09-28 2003-04-10 Glycomed Sciences Limited Solvent extraction process
CN1416847A (zh) 2001-11-07 2003-05-14 焦柏忠 纳米级西洋参制品及其制作方法
IL146737A (en) 2001-11-26 2010-02-17 Lycored Natural Prod Ind Ltd Method for protecting lycopene dispersed in tomato fibers
US20060233845A1 (en) * 2002-02-28 2006-10-19 Gerold Lukowski Micro/nanoparticle obtained from lipid-containing marine organisms for use in pharmaceutics and cosmetics
AU2003241478A1 (en) * 2002-06-10 2003-12-22 Elan Pharma International, Ltd. Nanoparticulate sterol formulations and sterol combinations
US20120156309A1 (en) 2007-09-19 2012-06-21 Eckert C Edward Using Aqueous Oxygenation to Improve Animal Health & Wellness
US20060062926A1 (en) * 2004-05-17 2006-03-23 Richardson H W Use of sub-micron copper salt particles in wood preservation
BRPI0608173A2 (pt) 2005-02-24 2010-11-09 Elan Pharma Int Ltd composição, uso da mesma, e, método de produzir uma composição de docetaxel nanoparticulada ou análogo do mesmo
DE102005011786A1 (de) * 2005-03-11 2006-09-14 Pharmasol Gmbh Verfahren zur Herstellung ultrafeiner Submicron-Suspensionen
CN100341785C (zh) * 2005-07-27 2007-10-10 湖州吴兴恒联碳酸钙厂 亚微米级重质碳酸钙的制备方法
JP5374869B2 (ja) 2007-12-25 2013-12-25 三菱化学株式会社 セルロース繊維複合体
US8012573B2 (en) 2007-12-21 2011-09-06 Mitsubishi Chemical Corporation Fiber composite
JP5562229B2 (ja) 2008-03-17 2014-07-30 サントリー食品インターナショナル株式会社 呈味改善剤及びこれを含む茶飲料
JP5448511B2 (ja) 2008-03-31 2014-03-19 三栄源エフ・エフ・アイ株式会社 ウコン色素組成物及びその調製方法
JP2010083839A (ja) 2008-10-02 2010-04-15 Sanei Gen Ffi Inc ミルクカルシウムの分散安定化方法並びにその製剤
KR101160801B1 (ko) * 2010-05-27 2012-06-29 서용일 고형 보조 첨가제
AU2011262840B2 (en) * 2010-06-08 2015-02-05 Asahi Group Holdings, Ltd. Lipid metabolism-improving agent
TWI425914B (zh) * 2011-03-21 2014-02-11 Food Industry Res & Dev Inst 含高濃度奈米／次微米疏水性機能化合物之水相分散液之製備方法
WO2013168437A1 (ja) 2012-05-11 2013-11-14 株式会社アクティバスファーマ 有機化合物ナノ粉体、その製造方法ならびに懸濁液
KR20160118317A (ko) * 2014-02-03 2016-10-11 아푸라노 파마수티컬스 게엠베하 천연 재료의 나노현탁액 및 그의 제조 방법
EP3129024A4 (en) * 2014-04-08 2017-11-22 Sansa Corporation (Barbados) Inc. Nicotine formulations and methods of making the same

Also Published As

Publication number Publication date
LT3102185T (lt) 2022-01-10
EP3102185A1 (en) 2016-12-14
HUE056398T2 (hu) 2022-02-28
US10213382B2 (en) 2019-02-26
PL3102185T3 (pl) 2021-12-27
MX375742B (es) 2025-03-06
WO2015114164A1 (en) 2015-08-06
HRP20211513T1 (hr) 2021-12-24
ES2891151T3 (es) 2022-01-26
DK3102185T3 (da) 2021-10-04
JP2017505814A (ja) 2017-02-23
JP6751672B2 (ja) 2020-09-09
CA2938552C (en) 2021-07-13
US20160346201A1 (en) 2016-12-01
RU2695325C1 (ru) 2019-07-23
CA2938552A1 (en) 2015-08-06
SI3102185T1 (sl) 2022-01-31
EP3102185B1 (en) 2021-07-14
NZ723631A (en) 2017-08-25
AU2015212726A1 (en) 2016-09-15
ZA201604743B (en) 2017-09-27
KR20160118317A (ko) 2016-10-11
AU2015212726B2 (en) 2018-02-01
CN106102719A (zh) 2016-11-09
SA516371597B1 (ar) 2020-04-29
JP2018172394A (ja) 2018-11-08
MX2016010037A (es) 2017-10-26
CY1124656T1 (el) 2022-07-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3102185B1 (en) Nanosuspension of natural materials and preparation method thereof
Lai et al. Nanocrystals as effective delivery systems of poorly water-soluble natural molecules
JP7671693B2 (ja) 非クルクミノイドの水溶性粒子とクルクミノイドの水溶性粒子から構成される製剤
Su et al. Development and characterization of docetaxel-loaded lecithin-stabilized micellar drug delivery system (LsbMDDs) for improving the therapeutic efficacy and reducing systemic toxicity
CN102228430A (zh) 水飞蓟宾磷脂复合物的纳米混悬剂及其制备方法
JP2020121974A (ja) 天然材料の粒子および抽出物を含むナノ懸濁液
CN119733060A (zh) 负载大麻二酚的no释放型靶向仿生纳米复合材料及其应用
Pradana et al. Spray drying of asiatic acid-palm oil in maltodextrin: improving the nanoemulsion characteristics
Nimtrakul et al. Amphotericin B loaded nanostructured lipid carriers for parenteral delivery: characterization, antifungal and in vitro toxicity assessment
KR20230116674A (ko) 안정화된 테트라하이드로커큐민을 함유하는 아토피 피부염 개선용 식품조성물
CN110123751A (zh) 一种水飞蓟类药物纳米乳粉剂组合物及其制备方法
Bidegain et al. Formulation and evaluation of a Lingzhi or Reishi medicinal mushroom, Ganoderma lucidum (Agaricomycetes), nutraceutical hydroalcoholic suspension
Farooq et al. Formulation and evaluation of vitamin D3 (Cholecalciferol) self-nanoemulsifying drug delivery systems for enhancing solubility
CN116139089A (zh) 一种壳聚糖与纳米中药配伍的纳米制剂及其制备方法与应用
Pylypenko et al. Nanobiotechnological obtaining of liposomal forms of antioxidant preparations based on bioflavonoids
ES2994027B2 (es) Particulas de polen como vehiculos para administracion pulmonar
EP4436547A1 (en) Fisetin nanoparticles
Shi et al. Enhanced Oral Bioavailability of Ginkgolides by Solid Self-Emulsifying Drug Delivery System (S-Sedds)