RS62533B1 - Farmakološki aktivni aliciklično-supstituisani derivati pirazolo[1,5-a]pirimidina - Google Patents

Description

Opis pronalaska

OBLAST TEHNIKE NA KOJU SE PRONALAZAK ODNOSI

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na nove derivate pirazolo[1,5-a]pirimidina formule (I) ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, racemate, enantiomere, dijastereomere, solvate i hidrate koji služe kao pozitivni alosterični modulatori GABABreceptora. Pronalazak se takođe odnosi na postupak za proizvodnju takvih jedinjenja. Pronalazak se dodatno odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže takva jedinjenja, opciono u kombinaciji sa dva ili više različitih terapijskih agenasa, i upotrebu takvih jedinjenja u postupcima za lečenje bolesti i stanja posredovanih i modulisanih mehanizmima pozitivne alosterične modulacije GABABreceptora. Pronalazak takođe obezbeđuje postupak za proizvodnju medikamenata korisnih u lečenju takvih poremećaja.

STANJE TEHNIKE

[0002] Gama-aminobuterna kiselina (GABA) je glavni inhibitorni neurotransmiter u centralnom nervnom sistemu i sa ključnom je ulogom u modulisanju neuronske aktivnosti. Svoje dejsvo ostvaruje preko tri receptorska sistema, srodnih jonotropnih GABAAi GABACreceptora i jasno različitih metabotropnih GABABreceptora (Hill i Bowery, Nature 1981, 290, 149-152). Poslednje navedeni GABABreceptori su široko rasprostranjeni unutar centralnog nervnog sistema sisara i sa raznim su nivoima ekspresije u različitim regionima mozga (Bovery i saradnici, Neuroscience 1987, 20, 365-385). GABABreceptori se mogu naći i pre- i postsinaptički i imaju važnu ulogu u finom podešavanju neurotransmisije. Većina GABABreceptora se grupiše oko ekscitatornih sinapsi, bilo na ivicama presinaptičkih završetaka ili na trnolikim izrašajima prisutnim nastuprot glutamatergičkim “dugmićima” (Ulrih i Bettler, Curr. Opin. Neurobiol.2007, 17, 298-303).

[0003] GABABreceptori pripadaju Familiji 3 (C) receptora kuplovanih sa G-proteinom (GPCR), zajedno sa metabotropnim glutamatnim receptorima (mGluR), receptorima koji reaguju na prisustvo kalcijuma, receptorima ukusa i brojnim receptorima “siročićima”, pokazujući najveću homologiju sa mGluR od približno 30% (Bettler i saradnici, Physiol. Rev. 2004, 84, 835-867). GABABreceptori su heterodimeri koji se sastoje od dve slične, ali ipak različite subjedinice, B1 i B2. Subjedinica B1 postoji u višestrukim varijantama nastalim alternativnom obradom RNK, sa samo dve (B1a i B1b) koje su sa jasnim fiziološkim značajem. Ovakve izoforme se razlikuju samo po svom vanćelijskom domenu koji sadrži dva Sushi motiva koji regulišu subćelijsku lokalizaciju receptora (Vigot i saradnici, Neuron 2006, 50, 589-601; Biermann i saradnici, J. Neurosci.2010, 30, 1385-1394). Subjedinica B1 vezuje endogeni neurotransmiterski ligand, GABA, kao i druge ortosterne agoniste (poput baklofena, SKF97541) i antagoniste (poput faklofena, saklofena). Subjedinica B2 je odgovorna za unutarćelijsku signalnu transdukciju posredovanu aktivacijom G-proteina i veruje se da vezuje alosterične modulatore (Binet i saradnici, J. Biol. Chem.2004, 279, 29085-29091; Dupuis i saradnici, Mol. Pharmacol.2006, 70, 2027-2036). Mesto delovanja za pozitivna alosterična modulatorna jedinjenja GABABkompanije Novartis, CGP7930 i GS39783, je heptaheliksni transmembranski domen B2 subjedinice; tačno mesto vezivanja za druge, nesrodne pozitivne alosterične modulatorne hemotipove nije poznato.

[0004] Glavni sinaptički efekti GABABreceptora su presinaptička blokada oslobađanja neurotransmitera (GABA, kao i glutamata) i postsinaptička hiperpolarizacija (Gassmann i Bettler, u Handbook of Contemporary Neuropharmacology 2007). Navedeni efekti su rezultat inhibicije presinaptičkog influksa kalcijuma i stimulacije postsinaptičkih ulaznih ispravljačkih kanala za kalijum (GIRK), tim redom. Funkcije jonskih kanala su posredovane aktivacijom βγ subjedinica Gi/Goproteina, na način koji je ograničen na membranu. Pored navedenog, signal se prenosi preko GABABreceptora i putem α subjedinice istih G-proteina, čime se inhibira adenilat ciklaza i usporava regrutovanje sinaptičkih vezikula (Chalifoux i Carter, Curr. Opin. Neurobiol. 2011, 21, 339-442). Pored ovih brzih ćelijskih događaja, GABABreceptori takođe regulišu citoplazmatske kinaze, uključujući protein kinazu koja se aktivira mitogenom, utičući time dugoročnije na sinaptičku plastičnost.

[0005] Da bi se bolje razumeo fiziološki značaj GABABreceptora na nivou ponašanja, generisani su nokaut miševi sa mutacijama selektivno prisutnim u subjedinicama B1, B1a, B1b i B2. Miševi bez B1 subjedinica su ispoljili povećanu anksioznost u situacijama nalik istraživanju prostora (testovi ponašanja u svetlo-tamnoj kutiji, penjanja uz stepenice), povećanu paniku, spontane epileptične napade, hiperalgeziju, hiperlokomociju i poremećaj u sposobnosti pamćenja (Schuler i saradnici, Neuron 2001, 31, 47-58). Miševi koji ne eksprimiraju GABAB2subjedinice se ponašaju slično kao nokaut miševi za B1 subjedinicu; ove životinje su prekomerno anksiozne, sa sponatnom epileptičkom aktivnošću, hiperalgezijom, hiperlokomocijom i poremećajem u sposobnosti pamćenja (Mombereau i saradnici, Eur. J. Pharmacol.2004, 497, 119-120; Mombereau i saradnici, Neuroreport 2005, 16, 307-310; Gassmann i saradnici, J. Neurosci.2004, 24, 6086-6097). Na osnovu prethodno navedenog, deluje da je GABABreceptorski sistem sa važnom ulogom u regulaciji neuronske ekscitabilnosti, što se ogleda u posledičnim dejstvima na razne aspekte očiglednog ponašanja.

[0006] Jedini odobren i komercijalizovan selektivni GABABreceptorski ligand je ortosterni agonista, racemski baklofen. Baklofen je odobren kao relaksans mišića sa centralnim delovanjem i upotrebljava se za smanjenje spastičnosti udružene sa cerebralnom paralizom, multiplom sklerozom i povredama kičmene moždine. Pored ovih primena, baklofen može biti od potencijalne terapijske koristi u lečenju stanja koja uključuju astmu, bol, gojaznost, prejedenje, zloupotrebu droga i alkohola, anksioznost, post-traumatski stresni poremećaj, kašalj, inflamaciju, gastroezofagusni refluks i urinarnu inkontinenciju (npr. Breslow i saradnici, Am. J. Psychiatry 1989, 146, 353-356; Drake i saradnici, Ann. Pharmacother.2003, 37, 1177-1181; Leggio i saradnici, CNS Neurol. Disord. Drug Targets 2010, 9, 33-44). Iako je baklofen sa korisnim potencijalom u brojnim terapijskim indikacijama, karakteriše ga nažalosti i niz neželjenih osobina, uključujući lošu penetraciju krvno-moždane barijere, uzak terapijski prozor, desenzitizaciju receptora, razvoj tolerancije na glavne efekte i apstinencionu krizu po završetku upotrebe (Vacher i Bettler, Curr. Drug Targets CNS Neurol. Disord.2003, 2, 248-259; Ross i saradnici, Neurocrit. Care 2011, 14, 103-108; Keegan i saradnici, Neuropharmacology 2015, 95, 492-502).

[0007] Alosterična modulacija je alternativan način selektivne stimulacije GPCR bez neželjnih osobina ortosternih liganada (Conn i saradnici, Nat Rev 2009, 8, 41-54; Wang i saradnici, J. Pharmacol. Exp. Ther.2009, 331, 340-348). Alosterični modulatori se vezuju za receptore na mestima koja se razlikuju od mesta vezivanja endogenih (ortosternih) liganada i efektivni su prevashodno ukoliko je agonsta takođe vezan za receptor. Navedno ima posledice na vremenski i prostorni obrazac efikasnosti, što zauzvrat utiče na ponašajne i adaptivne odgovore organizma na alosteričnu stimulaciju. Nasuprot ortosternom agonizmu, očekuje se da alosterična modulacija ciljnog molekula dovede do manje sporednih efekata, desenzitizacije i razvoja tolerancije. Zaista, za pozitivan alosterični modulator GABABreceptora GS39783, u pretkliničkim modelima je pokazano da ovo jedinjenje može imati povoljan profil sporednih efekata (Cryan i saradnici, J. Pharmacol. Exp. Ther.2004, 310, 952-963), da se desenzitizacija receptora može sprečiti (Gjoni i Urwyler, Neuropharmacology 2008, 55:1293-1299), kao i da se tolerancija možda neće razviti nakon hronične primene (Mombereau i saradnici, Neuropsychopharmacology 2004, 29, 1050-1062). Ovi rezultati ukazuju da pozitivni alosterični modulatori GABABreceptora mogu biti korisni novi hemijski entiteti bez neželjenih osobina koje karakterišu ortosterne liganade poput baklofena.

[0008] Nekoliko patenata i patentnih prijava opisuju pozitivne alosterične GABABmodulatore sa različitim hemijskim strukturama. Derivati pirimidina kao pozitivni alosterični modulatori GABABreceptora su opisani u WO 2005/094828 i WO 2006/136442. Derivati tieno[3,2-b]pirimidina i

[1,3]tiazolo[5,4-d]pirimidina kao pozitivni alosterični modulatori GABABreceptora su opisani u WO 2015/056771 (US 2015/0111876).

[0009] Nedavna patentna prijava autora Faghih i saradnici (US 2016/0304527 A1) opisuje pirazolopirimidine sa pozitivnom alosteričnom aktivnošću na GABABreceptore in vitro, izmerenom vezivanjem [<35>S]GTPγS.

[0010] U Faghih i saradnici je prikazano samo jedno aliciklično-supstituisano jedinjenje sa visokom mikromolarnom potencijom vezivanja (Primer 7-1), dok su druga jedinjenja navedena kao primeri supstituisana aril grupom i karakteriše ih mikro ili submikromolarna potencija vezivanja. Neočekivano, u predmetnom pronalasku smo ustanovili da jedinjenja sa cikloheksilnim ostacima ispoljavaju nano ili subnanomolarnu potenciju, što je izmereno u paradigmama sličnih testova.

Primer 7-1

EC501,08 μM

[0011] Pronalazak Faghih-a i saradnika opisuje da ugradnja linkera koji sadrže tri ili četiri atoma ugljenika (L1) povećava in vitro potenciju. Većinu prikazanih aril-supstituisanih jedinjenja, sa linkerima koji sadrže jedan ili dva atoma ugljenika, karakteriše samo mikro ili submikromolarna potencija vezivanja (Primer 1-1). Ipak, samo navedena jedinjenja koja sadrže linker sa tri ili četiri atoma ugljenika (Primer 3-1; Primer 5-1) dostižu nanomolarnu potenciju. Neočekivano, u predmetnom pronalasku smo ustanovili da jedinjenja bez bilo kakvog linkera karakteriše nano ili subnanomolarna potencija.

Primer 3-1 Primer 5-1

EC50: 8 nM EC50: 3 nM

[0012] Jedinjenja navedena u Faghih i saradnici kao primeri, koja sadrže azetidinsku karboksilnu kiselinu (Primer 8-10) ili amid nipekotinske kiseline (Primer 1-19), karakteriše samo visoka mikromolarna potencija. Neočekivano, u predmetnom pronalasku smo ustanovili da jedinjenja koja sadrže jednostavan ostatak nipekotinske kiseline karakteriše nano ili subnanomolarna potencija. Ovakva jedinjenja su metabolički stabilna, uprkos tome što poseduju kiseli ostatak nipekotinske kiseline, i neočekivano prodiru u mozak (principi prodiranja molekula lekova u mozak su sažeti u: Kerns i saradnici, Drug-like Properties: Concepts, Structure Design and Methods, poglavlje: Blood-Brain Barrier, strane 122-136 "Figure 10.12: Acids poorly penetrate the BBB (Blood Brain Barrier) (CNS-)").

[0013] Prethodno opisane in vitro prednosti su dodatno pojačane neočekivanim otkrićem da su izabrana jedinjenja pronalaska bila od velike koristi za ponašanje u modelu bolesti dobijenom prenatalnim tretmanom valproatom koji rekapitulira glavne simptome poremećaja iz autističnog spektra. Pronalazači su stoga pokazali da ovo jedinjenje ima terapijski potencijal za lečenje glavnih simptoma poremećaja iz autističnog spektra kod ljudi.

KRATKO IZLAGANJE SUŠTINE PRONALASKA

[0014] Naš pronalazak opisuje derivate nipekotinske kiseline sa cikloheksil-pirazolo-pirimidinskom osnovom. Pronašli smo da ova jedinjenja uglavnom ispoljavaju nanomolarnu potenciju, u određenim slučajevima dostižući čak i potenciju subnanomolarnog opsega. Ova jedinjenja su metabolički stabilna, uprkos tome što poseduju kiseli ostatak nipekotinkse kiseline, i neočekivano prodiru u mozak (principi prodiranja molekula lekova u mozak su sažeti u: Kerns i saradnici, Drug-like Properties: Concepts, Structure Design and Methods, poglavlje: Blood-Brain Barrier, strane 122-136). Ovakva jedinjenja, koja ne sadrže linker od ugljenika između pirazolo-pirimidinskog jezgra i pridodatog cikloheksilnog prstena, karakteriše nanomolarna potencija. Neočekivano je identifikovano da alkilni supstituent na poziciji 6 pirazolo-pirimidinske osnove (R3 u US20160304527) povećava in vitro potenciju za najmanje dva reda veličine. Naša jedinjenja u in vivo testu ispoljavaju efekte velikih veličina (dostižući 80-100%) u niskim oralnim dozama (1 mg/kg).

[0015] Identifikovali smo klasu derivata pirazolo[1,5-a]pirimidina sa visokim afinitetom za GABABreceptore, što obezbeđuje jedinstvenu ulogu u lečenju psihijatrijskih, neurorazvojnih, neuroloških i drugih poremećaja centralnog nervnog sistema, kao i perifernih stanja gde stimulacija GABABreceptor može biti od terapijske koristi.

[0016] Identifikovali smo nova jedinjenja koja prodiru u mozak. Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja koja su pozitivni alosterični modulatori GABABreceptora i na njihovu sintezu. Jedinjenja predmetnog pronalaska su korisna za lečenje psihijatrijskih, neurorazvojnih, neuroloških i drugih poremećaja centralnog nervnog sistema, kao i perifernih stanja gde stimulacija GABABreceptora može biti od terapijske koristi.

[0017] Na narednim stranicama ovog opisa, pozivanja na postupke lečenja treba tumačiti kao pozivanja na jedinjenja, farmaceutske kompozicije i medikamente predmetnog pronalaska, radi upotrebe u postupku lečenja ljudskog (ili životinjskog) organizma terapijom (ili putem dijagnoze).

[0018] Predmetni pronalazak se odnosi na derivate pirazolo[1,5-a]pirimidina formule (I)

R<1>i R<2>su nezavisno izabrani od vodonika, atoma halogena, C1-6alkil, haloC1-6alkil grupe; R<3>je vodonik, atom halogena, C1-6alkil, cijano grupa;

R<4>je C1-6alkil;

R<5>je C1-6alkil, opciono supstituisan atomom halogena ili atomima halogena, C3-5cikloalkil grupom;

C3-5cikloalkilC1-6alkil, dialkilamino, C1-6alkoksi., C1-6alkoksiC1-6alkill, C1-6alkiltio grupa, tetrahidrofuranil, tetrahidrofuranilC1-6alkil, tetrahidropiranil, tetrahidropiranilC1-6alkil; ili R4i R5zajedno obrazuju nesupstituisan ili 3- do 7-člani zasićeni prsten supstituisan sa jednom ili sa više od C1-3alkil, C1-3alkoksi, haloC1-3alkil, C1-3alkilkarbonil grupa, pri čemu su članovi prstena izabrani iz grupe koja se sastoji od ugljenika, azota, kiseonika i sumpora;

R<6>je vodonik, atom halogena ili C1-6alkil, hidroksi, C1-6alkoksi, C1-6alkoksiC1-6alkil, haloC1-6alkil ili amino grupa;

ili na njihove farmaceutski prihvatljive soli, racemate, enantiomere, dijastereomere, solvate i hidrate.

[0019] Pronalazak se takođe odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenja formule (I) ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, racemate, enantiomere, dijastereomere, solvate i hidrate.

[0020] Štaviše, predmetni pronalazak se odnosi na sintezu jedinjenja formule (I) i njihovih optičkih antipoda ili racemata i/ili soli, farmaceutskih kompozicija koje ih sadrže i hemijsku i farmaceutsku proizvodnju medikamenata koji sadrže ova jedinjenja, kao i na postupke lečenja sa ovim jedinjenjima, što označava primenu sisaru koji se leči - uključujući i čoveka - koji pati od psihijatrijskih, neurorazvojnih, neuroloških i drugih poremećaja centralnog nervnog sistema, kao i od perifernih stanja gde stimulacija GABABreceptora može ponuditi terapijsku korist, i to efektivne količine jedinjenja formule (I) i njihovih optičkih antipoda ili racemata i/ili soli predmetnog pronalaska, kao takvih ili u vidu medikamenta.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0021] Predmetni pronalazak se odnosi na derivate pirazolo[1,5-a]pirimidina formule (I)

R<1>i R<2>su nezavisno izabrani od vodonika, atoma halogena, C1-6alkil, haloC1-6alkil grupe; R<3>je vodonik, atom halogena, C1-6alkil, cijano grupa;

R<4>je C1-6alkil;

R<5>je C1-6alkil, opciono supstituisan atomom halogena ili atomima halogena, C3-5cikloalkil grupom; C3‑5cikloalkilC1-6alkil, dialkilamino, C1-6alkoksi, C1-6alkoksiC1-6alkil, C1-6alkiltio grupa, tetrahidrofuranil, tetrahidrofuranilC1-6alkil, tetrahidropiranil, tetrahidropiranilC1-6alkil; ili R4i R5zajedno obrazuju nesupstituisan ili 3- do 7-člani zasićeni prsten supstituisan sa jednom ili sa više od C1-3alkil, C1-3alkoksi, haloC1-3alkil, C1-3alkilkarbonil grupa, pri čemu su članovi prstena izabrani iz grupe koja se sastoji od ugljenika, azota, kiseonika i sumpora;

R<6>je vodonik, atom halogena ili C1-6alkil, hidroksi, C1-6alkoksi, C1-6alkoksiC1-6alkil, haloC1-6alkil, amino grupa;

ili na njihove farmaceutski prihvatljive soli, racemate, enantiomere, dijastereomere, solvate i hidrate. Termin "halogen" ili "halo", kako se ovde upotrebljava samostalno ili kao deo druge grupe, odnosi se hlor, brom, fluor i jod.

[0022] Termin „C1-C6alkil", kako se ovde upotrebljava, odnosi se na razgranate ili alkil grupe prvog lanca koje sadrže od jednog do šest atoma ugljenika, uključujući, ali ne ograničavajući se na, metil, etil, propil, normalne i izopropilne i različite butil grupe.

[0023] Termin „C3-C5cikloalkil", kako se ovde upotrebljava, odnosi se na karbociklične grupe sa od 3 do 5 ugljenika, tim redom; na primer, ciklopropil, ciklobutil i ciklopentil.

[0024] Termin „C1-C6alkoksi", kako se ovde upotrebljava, odnosi se na razgranate ili alkil grupe pravog lanca koje sadrže od jednog do četiri atoma ugljenika, koje se povezuju preko atoma kiseonika, uključujući, ali ne ograničavajući se na, metoksi, etoksi, n-propoksi, i-propoksi i t-butoksi.

[0025] Termin kako se ovde upotrebljava, odnosi se na razgranate ili alkil grupe pravog lanca koje sadrže od jednog do šest atoma ugljenika, koje se povezuju preko atoma sumpora, uključujući, ali ne ograničavajući se na, metiltio, etiltio, n-propiltio, i-propiltio i t-butiltio.

[0026] Termin "sisar", kako se ovde upotrebljava, odnosi se na sve članove klase "Sisari", uključujući, ali ne ograničavajući se na, ljude.

[0027] Termin "so" označava netoksične bazne adicione soli jedinjenja pronalaska koje se generalno pripremaju reakcijom kiseline sa pogodnom organskom ili neorganskom bazom.

[0028] U okviru obima predmetnog pronalaska su uključeni svi stereoizomeri, geometrijski izomeri i tautomerni oblici jedinjenja formule (I), uključujući jedinjenja koja karakteriše više od jedne vrste izomerizma, kao i smeše jednog ili više od navedenih.

[0029] Konvencionalne tehnike za pripremu/izolaciju pojedinačnih enantiomera uključuju hiralnu sintezu iz pogodnog optički čistog prekursora ili razdvajanje racemata (ili racemata soli ili derivata) upotrebom, na primer, hiralne tečne hromatografije pod visokim pritiskom (HPLC).

[0030] Izraz "farmaceutski prihvatljiv" opisuje sastojak koji je koristan u pripremanju farmaceutske kompozicije i u principu je bezbedan, netoksičan i nije ni biološki niti na neki drugi način nepoželjan, a uključuje one prihvatljive za upotrebu u veterini, kao i za humanu farmaceutsku upotrebu.

[0031] Termin "farmaceutska kompozicija" se odnosi na smešu jedinjenja pronalaska sa drugim hemijskim komponentama, kao što su farmaceutski prihvatljivi pomoćni materijali, npr. razblaživači ili nosači. Farmaceutska kompozicija olakšava primenu jedinjenja subjektu.

[0032] Termin "ekscipijens" definiše hemijsko jedinjenje koje olakšava ugradnju jedinjenja u ćelije ili tkiva.

[0033] Kao što se ovde upotrebljava, termin "lečenje" označava upotrebu efektivne terapije da bi se smanjili, ublažili ili eliminisali simptomi udruženi sa bolestima ili stanjima koja su posredovana ili modulisana pozitivnim alosteričnim mehanizmima putem GABABreceptora.

[0034] Kao dalji aspekt predmetnog pronalaska, obezbeđena je sinteza jedinjenja formule (I).

[0035] Jedinjenja prema predmetnom pronalasku su sintetisana u skladu sa sintetičkim putevima i šemama opisanim u nastavku teksta.

[0036] Shodno navedenom, jedinjenja formule (I) pronalaska mogu biti sintetisana jednim od sledećih puteva sinteze:

Put a):

Put b):

Put c):

Put d):

Put e):

Korak 1) Reagovanje derivata estra karboksilne kiseline formule (II) ili derivata hlorida karboksilne kiseline formule (III)

‑ pri čemu je značenje R<1>i R<2>opisano prethodno za jedinjenje formule (I) - sa derivatom acetonitrila formule (IV)

‑ pri čemu je značenje R<3>opisano prethodno za jedinjenje formule (I), nakon čega sledi

korak 2) tako dobijen derivat acilacetonitrila formule (V) reaguje sa

2a) hidrazin hidratom da bi se dobilo jedinjenje formule (VI)

‑ pri čemu je značenje R<1>, R<2>kao što je prethodno opisano, a R<3>je vodonik, atom halogena, C1-6alkil grupa ili

2b) trimetil ortoformatom, da bi se obezbedio malononitrilni derivat formule (XIV)

‑ pri čemu je značenje R<1>, R<2>kao što je prethodno opisano, a R<3>je cijano grupa koja reaguje sa hidrazin hidratom da bi se obezbedilo jedinjenje formule (VI)

nakon čega

korak 3) jedinjenje formule (VI), gde je značenje R<1>, R<2>, R<3>kao što je prethodno opisano za formulu (I) - dobijeno prema koracima opisanim u 2a) ili 2b), reaguje sa derivatom acilacetatnog estra formule (VII)

‑ gde je značenje R<4>i R<5>kao što je prethodno opisano za formulu (I), nakon čega sledi korak 4) tako dobijeno jedinjenje formule (VIII)

‑ pri čemu je značenje R<1>, R<2>, R<3>, R<4>i R<5>kao što je prethodno opisano za formulu (I) – i hloriše se da bi se obrazovao hloro derivat formule (IX)

‑ gde je značenje R<1>, R<2>, R<3>, R<4>i R<5>kao što je prethodno opisano za formulu (I) - i

korak 5) poslednje navedno jedinjenje reaguje bilo sa

c) derivatom nipekotinske kiseline formule (X)

‑ gde je značenje R<6>kao što je prethodno opisano za formulu (I) - a dobijeni derivat formule (I) i njegovi optički antipodi ili racemati i/ili soli, u datom slučaju, mogu biti transformisani u drugo jedinjenje formule (I) i njegove optičke antipode ili racemate i/ili soli, uvođenjem novih supstituenata i/ili modifikovanjem ili uklanjanjem postojećih, ili

5d) njegovom alkalnom soli formule (XI)

‑ gde je značenje R<6>kao što je prethodno opisano za formulu (I) - a dobijeno jedinjenje formule (I) i njegovi optički antipodi ili racemati i/ili soli, u datom slučaju, mogu biti transformisani u drugo jedinjenje formule (I) i njegove optičke antipode ili racemate i/ili soli, uvođenjem novih supstituenata i/ili modifikovanjem ili uklanjanjem postojećih, ili

5e) derivatom estra nipekotinske kiseline formule (XII)

‑ gde je značenje R<6>kao što je prethodno opisano za formulu (I) - da bi se obezbedio estarski derivat formule (XIII)

‑ gde je značenje R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>i R<6>kao što je prethodno opisano za formulu (I); konačno, poslednje navedeno jedinjenje se saponifikuje sa jakom bazom ili kiselinom - a dobijeni derivat formule (I) i njegovi optički antipodi ili racemati i/ili soli mogu opciono biti transformisani u drugo jedinjenje formule (I) i njegove optičke antipode ili racemate i/ili soli, uvođenjem novih supstituenata i/ili modifikovanjem ili uklanjanjem postojećih.

[0037] Sinteza acilacetonitrilnog derivata (V) se može izvesti na različite načine:

Put a):

[0038]

a) Reakcija derivata estra karboksilne kiseline formule (II) sa derivatom acetonitrila formule (IV) se poželjno izvodi u odgovarajućem rastvaraču, npr. tetrahidrofuranu, poželjno u prisustvu jake baze, npr. n-butillitijuma, litijum bis(trimetilsilil)amida. Reakcija se izvodi na temperaturi opsega od -78 °C do sobne temperature. Potrebno vreme reakcije je 1-16 h. Nakon reakcija sledi tankoslojna hromatografija. Reakcija se zaustavlja dodavanjem vode i hlorovodonične kiseline (∼pH 2-3) ili zasićenog rastvora amonijum hlorida. Proizvod (V) se izoluje ekstrakcijom sa pogodnim organskim rastvaračem, ili filtracijom, nakon uklanjanja organskog rastvarača.

b) Reakcija hloridnog derivata karboksilne kiseline formule (III) sa acetonitrilnim derivatom formule (IV) poželjno se izvodi u odgovarajućem rastvaraču, npr. tetrahidrofuranu, poželjno u prisustvu jake baze, npr. n-butillitijuma, litijum bis(trimetilsilil)amida. Reakcija se izvodi na temperaturi opsega od -78 °C do sobne temperature. Potrebno vreme reakcije je 1-16 h. Nakon reakcija sledi tankoslojna hromatografija. Reakcija se zaustavlja dodavanjem vode i hlorovodonične kiseline (∼pH 2-3) ili zasićenog rastvora amonijum hlorida. Proizvod (V) se izoluje ekstrakcijom sa pogodnim organskim rastvaračem, ili filtracijom, nakon uklanjanja organskog rastvarača.

[0039] Reakcija ciklokondenzacije acil nitrilnog derivata formule (V) sa hidrazin hidratom do derivata pirazola formule (VI), poželjno se izvodi u pogodnom rastvaraču, npr. etanolu. Reakcija se poželjno izvodi na tački ključanja rastvarača. Potrebno vreme reakcije je 1-6 h. Nakon reakcija sledi tankoslojna hromatografija. Dalji rad sa reakcionom smešom se može sprovesti na sledeće načine:

a) Reakciona smeša se razblažuje vodom i proizvod se izoluje filtracijom ili ekstrakcijom sa pogodnim organskim rastvaračem i, u datom slučaju, prečišćava se kristalizacijom ili hromatografijom na koloni.

b) Reakciona smeša se uparava in vacuo, a sirovi proizvod se upotrebljava u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja.

Put b):

[0040] Reakcija hloridnog derivata karboksilne kiseline formule (III) sa malononitrilom se poželjno izvodi u pogodnom rastvaraču, npr. tetrahidrofuranu, poželjno u prisustvu baze, npr. trietilamina. Reakcija se izvodi na temperaturi opsega od 0 °C do sobne temperature. Potrebno vreme reakcije je 1-16 h. Nakon reakcija sledi tankoslojna hromatografija. Reakcija se zaustavlja dodavanjem vode. Proizvod (V) se izoluje ekstrakcijom sa pogodnim organskim rastvaračem.

[0041] O-metilacija acil malononitrilnog derivata formule (V) sa trimetil ortoformatom poželjno se izvodi na tački ključanja. Potrebno vreme reakcije je 1-16 h. Nakon reakcija sledi tankoslojna hromatografija. Proizvod (XIV) se prečišćava hromatografijom na koloni.

[0042] Reakcija ciklokondenzacije O-metilovanih acil nitrilnih derivata formule (XIV) sa hidrazin hidratom do derivata pirazola formule (VI) poželjno se izvodi u pogodnom rastvaraču, npr. etanolu. Reakcija se poželjno izvodi na sobnoj temperaturi. Potrebno vreme reakcije je 1-6 h. Nakon reakcija sledi tankoslojna hromatografija. Reakciona smeša se razblažuje vodom i proizvod se izoluje ekstrakcijom sa pogodnim organskim rastvaračem.

[0043] Reakcija ciklokondenzacije 1H-pirazol-5-aminskog derivata formule (VI) sa acilacetatnim derivatom estra formule (VII) poželjno se izvodi u pogodnom rastvaraču, npr. toluenu, dodavanjem katalitičke količine p-toluensulfonske kiseline, upotrebom Din-Štarkovog separatora za vodu. Reakcija se poželjno izvodi na tački ključanja rastvarača. Potrebno vreme reakcije je 1-16 h. Nakon reakcija sledi tankoslojna hromatografija. Proizvod (VIII) se izoluje filtracijom.

[0044] Hlorisanje derivata pirazolo[1,5-a]pirimidina formule (VIII) može biti izvedeno u pogodnom rastvaraču, npr. toluenu, upotrebom odgovarajućeg sredstva za hlorisanje, npr. fosfor oksihlorida, dodavanjem trietilamina ili N,N-diizopropiletilamina. Reakcija se poželjno izvodi na tački ključanja rastvarača. Potrebno vreme reakcije je 24-48 h. Nakon reakcija sledi tankoslojna hromatografija. Reakciona smeša se zatim presipa u rastvor natrijum hidrogen karbonata i usitnjeni led. Razložena reakciona smeša se filtrira i proizvod se izoluje iz filtrata, ekstrakcijom sa pogodnim organskim rastvaračem, a u datom slučaju se i prečišćava kristalizacijom ili hromatografijom na koloni. Hromatografija na koloni se izvodi kao normalno-fazna, upotrebom Kieselgel 60 kao adsorbenta, kao i različitih sistema rastvarača, npr. kao eluenti mogu poslužiti n-heksan/etil acetat, toluen/metanol, hloroform/metanol ili toluen/aceton.

[0045] Reakcija N-arilacije derivata nipekotinske kiseline formule (X) ili (XII) sa hloro derivatom formule (IX) se izvodi u pogodnom rastvaraču, npr. dimetilformamidu, dimetilsulfoksidu, N-metilpirolidonu. Reakcija se poželjno izvodi na između 80°C i 140°C. U tako dobijeni rastvor se dodaje pogodan amin formule (X) ili (XII), u vidu baze ili u vidu soli obrazovane sa neorganskom kiselinom, u prisustvu baze, na primer, cezijum karbonata ili N,N-diizopropiletilamina potrebnih za oslobađanje amina, ili sa neorganskom bazom, na primer kalijumovom soli formule (XI). Nakon reakcija sledi tankoslojna hromatografija. Potrebno vreme reakcije je 3-20 h. U daljem radu sa reakcionom smešom se mogu upotrebiti različiti postupci.

[0046] Kada je N-arilovani proizvod derivat kiseline formule (I) i reakciona smeša je suspenzija, neorganska so se izdvaja filtriranjem, filtrat se razblažuje vodom i zakišeljava sirćetnom kiselinom. Proizvod se zatim izoluje filtracijom ili ekstrakcijom sa pogodnim organskim rastvaračem, a u datom slučaju se i prečišćava kristalizacijom ili hromatografijom na koloni. Ukoliko je reakciona smeša rastvor, ona se razblažuje vodom i zakišeljava sirćetnom kiselinom. Proizvod se konačno izoluje filtracijom ili ekstrakcijom sa pogodnim organskim rastvaračem, a u datom slučaju se i prečišćava kristalizacijom ili hromatografijom na koloni.

[0047] Kada je N-arilovani proizvod estarski derivat formule (XIII), reakciona smeša se uparava in vacuo. Proizvod se izoluje kristalizacijom ili ekstrakcijom sa pogodnim organskim rastvaračema, a u datom slučaju se i prečišćava rekristalizacijom ili hromatografijom na koloni.

[0048] Hidroliza derivata estra karboksilne kiseline formule (XIII) u derivat karboksilne kiseline formule (I) se može izvršiti sa odgovarajućom jakom neorganskom bazom, npr. litijum hidroksidom, natrijum hidroksidom ili sa odgovarajućom jakom neorganskom kiselinom, npr. hlorovodoničnom kiselinom. Reakcija se poželjno izvodi između sobne temperature i 100 °C. Nakon reakcija sledi tankoslojna hromatografija. Potrebno vreme reakcije je 1-20 h. Reakciona smeša se razblažuje vodom i zakišeljava sirćetnom kiselinom. Proizvod se izoluje filtracijom ili ekstrakcijom sa pogodnim organskim rastvaračema, a u datom slučaju se i prečišćava kristalizacijom ili hromatografijom na koloni. Strukture proizvoda se određuju NMR postupkom i masenom spektrometrijom.

[0049] Većina derivata nipekotinske kiseline formule (X) i (XII) je ili komercijalno dostupna ili se može sintetisati različitim poznatim postupcima. Sinteze pojedinih novih derivata nipekotinske kiseline formule (XII) su opisane u odeljku “Intermedijeri”.

[0050] Jedinjenja predmetnog pronalaska i njihovi optički antipodi ili racemati i/ili soli mogu biti upotrebljeni kao takvi ili je pogodno da budu u obliku farmaceutskih kompozicija.

[0051] Pronalazak se takođe odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenja formule (I), ili njihove optičke antipode ili racemate i/ili soli, kao aktivan sastojak za lečenje određenih poremećaja povezanih sa pozitivnom alosteričnom modulatornom aktivnošću GABABreptora.

[0052] Predmetna jedinjenja mogu biti istovremeno primenjena subjektu u kombinaciji sa dva ili sa više različitih terapijskih agenasa (npr. najpoželjnije je da su to antipsihotici i psihostimulansi; a poželjno su to antidepresivi, anksiolitici, antihipertenzivi, antikonvulzanti, sedativi i narkotici).

[0053] Pogodni putevi primene mogu, na primer, uključivati oralnu, rektalnu, transmukoznu, transdermalnu ili intestinalnu primenu; parenteralnu isporuku, uključujući intramuskularno, subkutano, intravensko, intramedularno injeciranje, kao i intraartikularne, intratekalne, direktne intraventrikularne, intraperitonealne, intranazalne ili intraokularne injekcije i kapi za oči.

[0054] Alternativno, jedinjenje može biti primenjeno radije lokalno, nego na sistemski način, na primer, putem injeciranja jedinjenja direktno u oblast bubrega ili srca, često u vidu depo ili formulacije sa produženim oslobađanjem. Dodatno, lek može biti primenjen u okviru sistema za ciljanu isporuku lekova, na primer, u lipozomu obloženom antitelom specifičnim za tkivo. Lipozomi će ciljano delovati na ili biti selektivno preuzeti od strane organa.

[0055] Farmaceutske kompozicije mogu biti primenjene raznim putevima primene ili u raznim doznim oblicima. Jedinjenje pronalaska može biti primenjeno bilo samostalno ili u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačima i bilo u vidu jednokratne ili višestrukih doza. Doziranje potrebno za postizanje terapijskog efekta može varirati unutar širokih granica i može biti prilagođeno shodno individualnim zahtevima u svakom konkretnom slučaju, u zavisnosti od stadijuma bolesti, stanja i telesne težine pacijenta koji se leči, kao i od osetljivosti pacijenta na aktivan sastojak, načina primene i broja dnevnih tretmana.

[0056] Radi jednostavne primene, pogodno je da farmaceutske kompozicije sadrže dozne jedinice koje sadrže količinu aktivnog sastojka koja se primenjuje odjednom, ili u nekoliko višestrukih delova, ili u vidu polovine, trećine ili četvrtine doze. Takve dozne jedinice su npr. tablete, koje mogu biti uprašene, sa žlebovima koji olakšavaju deljenje tablete na pola ili na četvrtinu, da bi se tačno primenila potrebna količina aktivnog sastojka.

[0057] Farmaceutske kompozicije koje sadrže aktivni sastojak prema predmetnom pronalasku, obično sadrže 0,01 do 500 mg aktivnog sastojka u jednoj jediničnoj dozi. Naravno, moguće je da količina aktivnog sastojka u pojedinim kompozicijama prelazi prethodno definisanu gornju ili donju granicu.

[0058] Kao dalji aspekt pronalaska, obezbeđena je farmaceutska proizvodnja medikamenata koji sadrže jedinjenja formule (I) ili njihove optičke antipode ili racemate i/ili soli.

[0059] Farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti formulisane u vidu različitih farmaceutskih doznih oblika, kao što su, ali ne ograničavajući se na, čvrsti oralni dozni oblici kao što su tablete (npr. bukalne, sublingvalne, šumeće, za žvakanje, oralno disperzibilne, sušene zamrzavanjem), kapsule, lozenge, pastile, pilule, oralni disperzibilni filmovi, granule, praškovi; tečni oralni dozni oblici kao što su rastvori, emulzije, suspenzije, sirupi, eliksiri, oralne kapi; parenteralni dozni oblici kao što su intravenske injekcije, intramuskularne injekcije, subkutane injekcije; drugi dozni oblici kao što su kapi za oči, polučvrsti preparati za oči, transdermalni dozni oblici, supozitorije, rektalne kapsule, rektalni rastvori, emulzije i suspenzije itd.

[0060] U jednom primeru izvođenja, pronalazak se odnosi na farmaceutske dozne oblike specifično namenjene za pedijatrijsku upotrebu, kao što su, ali ne ograničavajući se na, rastvori, sirupi, eliksiri, suspenzije, praškovi za rekonstituisanje ili resuspendovanje, disperzibilne ili šumeće tablete, tablete za žvakanje, tablete koje se raspadaju u ustima, tablete ili obložene tablete, šumeći oralni prah ili granule, kapsule.

[0061] Farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti proizvedene na način koji je poznat sam po sebi, npr. putem konvencionalnog mešanja, rastvaranja, emulgovanja, resuspendovanja, vezivanja za podlogu, sušenja zamrzavanjem, ekstruzije, laminiranja, izlivanja filma, granulacije, mlevenja, procesa inkapsuliranja, pravljenja dražeja ili tabletiranja.

[0062] Farmaceutske kompozicije za upotrebu u skladu sa predmetnim pronalaskom stoga mogu biti formulisane na konvencionalan način, upotrebom jednog ili više fiziološki prihvatljivih nosača koji sadrže ekscipijense i pomoćne supstance za olakšavanje prerade aktivnih jedinjenja u preparate koji dalje mogu biti farmaceutski upotrebljeni. Odgovarajuća formulacija zavisi od izabranog načina primene. Bilo koji od dobro poznatih tehnika, nosača i ekscipijenasa mogu biti upotrebljeni kao pogodni, a kao što se to podrazumeva u oblasti tehnike.

[0063] Pogodni ekscipijensi za pripremu doznih oblika mogu biti izabrani iz sledećih kategorija, kao što su, ali ne ograničavajući se na, agensi za ispunjavanje tableta i kapsula, agensi za povezivanje tableta i kapsula, agensi za modifikovano oslobađanje, dezintegratori, glidansi, lubrikanti, zaslađivači, agensi koji maskiraju ukus, arome, agensi za oblaganje, surfaktanti, antioksidansi, puferski agensi, agensi za obrazovanje kompleksa, emulgujući agensi, pomoćna sredstva za liofilizaciju, agensi za mikroinkapsuliranje, osnove masti, pojačivači penetracije, agensi za rastvaranje, rastvarači, osnove supozitorija, agensi za resuspendovanje.

[0064] U jednom primeru izvođenja, pronalazak se odnosi na upotrebu specifičnih ekscipijenasa koji su u stanju da poboljšaju rastvorljivost, rastvaranje, penetraciju, adsorpciju ili biodostupnost aktivnog(ih) sastojka(sastojaka), kao što su, ali ne ograničavajući se na, hidrofilni polimeri, ekscipijensi za ekstruziju vrućim topljenjem, surfaktanti, puferski agensi, agensi za obrazovanje kompleksa, emulgujući agensi, pomoćna sredstva za liofilizaciju, superdezintegratori, agensi za mikroinkapsuliranje, pojačivači penetracije, solubilizujući agensi, ko-rastvarači, agensi za resuspendovanje.

[0065] Prethodno opisani sastojci i različiti načini proizvodnje su samo reprezentativni. Mogu biti upotrebljeni i drugi materijali, kao i tehnike obrade i slično, koji su dobro poznati u oblasti tehnike.

[0066] Jedinjenja su efektivna u lečenju psihijatrijskih, neurorazvojnih, neuroloških i drugih poremećaja centralnog nervnog sistema, kao i perifernih stanja gde stimulacija GABABreceptora može ponuditi terapijsku korist

BIOLOŠKA AKTIVNOST

In vitro test vezivanja [<35>S]GTPγS u kortikalnim membranama pacova

[0067] Korteksi sveže izolovanih mozgova pacova su disekovani na ledeno hladnoj površini i homogenizovani su odmah, staklenim Dounce-ovim homogenizerom, u ledeno hladnom puferu koji je sadržavao 50 mM Tris, 5 mM MgCl2i 1 mM EDTA (pH=7,6). Homogenati tkiva su zatim centrifugirani na 40000 g tokom 15 minuta, na 4°C. Membanski talozi su resuspendovani u istom puferu, nakon čega su membrane inkubirane tokom 10 minuta na 30°C, u vodenom kupatilu sa platformom za treskanje, da bi se eliminisala endogena GABA. Homogenati su zatim ponovo centrifugirani pod istim uslovima. Finalni talog je resuspendovan u ledeno hladnom puferu (pH=7,6) koji je sadržavao 50 mM Tris, 100 mM NaCl, 7 mM MgCl2, 1 mM EDTA i 1 mM ditiotreitola (DTT), da bi se dobila koncentracija od 20 mg težine tkiva/ml, nakon čega je homogenat zamrznuti i čuvan do upotrebe na -70°C. Test je urađen u puferu koji je sadržavao 50 mM Tris (pH=7,4), 100 mM NaCl, 7 mM MgCl2, 1 mM EDTA i 1 mM DTT.

Svaka epruveta za analizu je sadržavala 150 µL GDP-a (u finalnoj koncentraciji od 50 µM), 100 µL liganda i 125 µL membranske suspenzije (250 µg tkiva/epruveti). Epruvete za analizu su prethodno inkubirane tokom 10 minuta na 30°C, da bi se obezbedio ekvilibrijum. Nespecifično vezivanje je određivano u prisustvu 10 µM GTPyS; bazalno vezivanje je određivano u prisustvu samo pufera. Nakon dodavanja 50 pM [<35>S]GTPγS u epruvete, u zapremini od 25 µL, membrane su inkubirane tokom dodatnih 60 min na 30°C. Test je prekidan brzom filtracijom kroz UniFilter GF/B kompanije Packard, upotrebom Packard-ovog harvestera i ispranjem sa 1 ml ledeno hladnog pufera četiri puta. Nakon sušenja filtera na 40°C tokom 1 h, na filtere je nanošeno 40 µL Microscint pufera (Packard), pa je radioaktivnost filtera određivana upotrebom TopCount NXT instrumenta (PerkinElmer, Waltham, MA; Alper i Nelson, Eur. J. Pharmacol.1998, 343, 303-312; Rinken i saradnici, Biochem. Pharmacol.1999, 57, 155-162). Tako prikupljeni podaci su upotrebljeni za određivanje PAM EC50vrednosti za svako jedinjenje, kao primarne in vitro krajnje tačke aktivnosti.

[0068] U Tabeli 1 su navedena jedinjenja ovog pronalaska merena u testu vezivanja [<35>S]GTPγS.

Tabela 1

Ultrazvučna vokalizacija (USV) indukovana primenom elektrošoka na stopalo kod odraslih pacova

[0069] Pod stresnim uslovima, odrasli pacovi emituju ultrazvuk od 22 kHz koji može biti smanjen raznim farmakološkim tretmanima (De Vry i saradnici, Eur. J. Pharmacol 1993, 249, 331-339; Sanchez, Eur. J. Pharmacol. 2003, 463, 133-143). Prethodni, neobjavljeni eksperimenti su ukazali da GABABreceptorski ligandi mogu takođe inhibirati vokalizatone koji se indukuju primenom elektrošokova na stopalo, kao stresorom. Prema tome, za procenu efikasnosti GABABreceptorskih liganada centralnog delovanja je upotrebljavana paradigma vokalizacije izazvana elektrošokom stopala kod odraslih pacova. Merenja ponašanja su vršena na mužjacima Wistar pacova (200-250 g, Toxicoop, Mađarska). Pacovi su gajeni u grupama od po četiri, u plastičnim kavezima sa žičanom rešetkom na vrhu, u jedinici za laboratorijsku negu životinja sa kontrolisanom temperaturom i konstantnim svetlosnim režimom (22 ± 2 oC, 12-časovni ciklus svetlo/mrak, svetla uključivana u 6:00 ujutru) sa ad libitum pristupom komercijalnoj briketiranoj hrani za pacove i vodi iz slavine. Ispitivanja su bila odobrena od strane Lokalnog etičkog komiteta kompanije Gedeon Richter Plc. i sprovedena su uz striktno poštovanje Evropske direktive 2010/63/EU o nezi i korišćenju laboratorijskih životinja za eksperimentalne postupke, a uloženi su i svi napori da se broj životinja, kao i njihova patnja, svedu na minimum. Da bi se izazvala emisija ultrazvuka, životinje su izlagane elektrošoku koji je primenjivan na stopala nakon perioda habituacije od 30 s (6 šokova, 1 s, 0,8 mA svaki, interval između šokova 10 s) u zvučno prigušenoj šok komori (Experimetria, 40x40x80 cm). Ispitivana jedinjenja su primenjivana u dozi od 1 mg/kg, u čvrstoj disperzionoj formulaciji u destilovanoj vodi, 1 h pre primene elektrošoka, per os. Vokalizacije su merene odmah nakon poslednjeg elektrošoka primenjenog na stopalo, tokom 10 minuta, upotrebom Sonotrack sistema kompanije Metris, a registrovano je ukupno vreme vokalizacija.

Vokalizacija životinja paralelno tretiranih sa nosačem je uzimana kao kontrolna vrednosti i za svako jedinjenje je izračunavan procenat inhibicije. Približno 75 minuta nakon tretmana i merenja ponašanja, prikupljani su i uzorci krvi i mozga, da bi se utvrdila izloženost povezana sa in vivo aktivnošću.

[0070] U Tabeli 2 su u vidu liste navedena jedinjenja ovog pronalaska merena u USV testu. U Tabeli 3 su u vidu liste navedeni nivoi jedinjenja ovog pronalaska u plazmi i mozgu.

Tabela 2

Tabela 3

Prenatalni valproatni model poremećaja iz autističnog spektra (ASD)

[0071] Prenatalni valproatni model je sa odličnom konstruktivnom i validnošću "očiglednosti", tako da je široko prihvaćen kao ASD model bolesti (Christensen i saradnici, JAMA 2013, 309, 1696-1703; Roullet i saradnici, Neurotox. Teratol. 2013, 36, 45-56). U ovom postupku, ženkama Wistar pacova (Harlan UK) koje su istovremeno parene sa mužjacima, 12,5. gestacionog dana je primenjivana jednokratna doza valproinske kiseline (VPA, 600 mg/kg, i.p.). Muški potomci su gajeni u skladu sa standardnim laboratorijskim uslovima do vremena testiranja, 59. postnatalnog dana. Životinje su gajene u grupama od po 4, u konvencionalnim kavezima, i čuvane su na 22-24°C uz standardan svelosni režim svetlo/mrak od 12 sati (07:30-19:30), sa hranom i vodom dostupnima ad libitum. Nakon tretmana ispitivanim lekovima, 59. postnatalnog dana je ispitivano ponašanje potomaka u testu socijalne preferencije. Test socijalne preferencije je široko prihvaćen test za procenu autističnog ponašanja kod glodara (Nadler i saradnici, Genes Brain Behav. 2007, 3, 303-314; Bambini-Junior i saradnici, Brain Res. 2011, 1408, 8-16). Ukratko, u ovom testu se ispitivanoj životinji dopušta da istražuje srodnu životinju koja je odvojena perforiranim pregradnim zidom ili sličnom površinom, pri čemu srodna životinja nije ciljano odabrana. Autistična životinja (kao što je pacov koji je prenatalno izložen valproatu) tokom sesije testa provodi malo vremena u socijalnom istraživanju.

[0072] Pronalazači su neočekivano otkrili da su izabrana jedinjenja pronalaska u opsegu oralnih doza od 0,01 - 3 mg/kg bila od velike koristi u ponašanju životinja u navedenom prekliničkom modelu bolesti koji rekapitulira glavne simptome ASD-a. Pronalazači su stoga pokazali da ova jedinjenja mogu imati terapijski potencijal za lečenje glavnih simptoma ASD kod ljudi.

PRIMERI

[0073] Pronalazak je dodatno definisan u Primerima koji slede.

[0074] U principu, jedinjenja formule (I) mogu biti pripremljena u skladu sa opštim znanjem stručnjaka iz oblasti tehnike i/ili upotrebom postupaka koji su navedeni u poglavljima “Primeri” i/ili “Intermedijeri” koji slede. Rastvarači, temperature, pritisci i drugi reakcioni uslovi mogu lako biti izabrani od strane prosečno iskusnog stručnjaka iz oblasti tehnike. Polazni materijali su komercijalno dostupni i/ili mogu biti lako pripremljeni od strane stručnjaka iz oblasti tehnike.

[0075] Naša patentna prijava podneta uporedo sa ovom, pod naslovom „Proces za razdvajanje optičkih izomera racemskih etil estara 3-alkilpiperidin-karboksilne kiseline“, opisuje pripremu određenih polaznih materijala.

[0076] Predmetni pronalazak će sada biti ilustrovan neograničavajućim primerima koji slede.

Intermedijer 1

[0077]

Etil 3-metilpiperidin-3-karboksilat

a) 1-Terc-butil 3-etil 3-metilpiperidin-1,3-dikarboksilat

[0078] Pod azotom, u rastvor 22,96 g (89 mmol) 1-terc-butil 3-etil piperidin-1,3-dikarboksilata u 300 mL suvog tetrahidrofurana, na (-78) °C -(-65) °C je u kapima dodato 100 mL 1M litijum bis(trimetilsilil)amida u rastvoru tetrahidrofurana (100 mmol). Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78°C tokom 20 min, pa je u kapima dodato i 6,6 mL (106 mmol) jodometana. Tako dobijena smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature, nakon čega je smeša mešana na ovoj temperaturi tokom 18 h. Reakcija je zaustavljena dodavanjem 200 mL zasićenog rastvora amonijum hlorida (pH ∼8) i 300 mL vode. Reakciona smeša je zatim ekstrahovana etil acetatom, pa su organski slojevi spojeni, isprani vodom, osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na silika gelu uz eluciju sa etilacetatom i cikloheksanom (1:4), da bi se dobilo 24,2 g (95%) jedinjenja iz naslova u vidu ulja.

b) Etil 3-metilpiperidin-3-karboksilat

[0079] U 50 ml 2,5 M rastvora hlorovodonične kiseline u etil acetatu, dodato je 24,2 g (84,8 mmol) 1-terc-butil 3-etil 3-metilpiperidin-1,3-dikarboksilata. Reakciona smeša je zatim mešana 3 h na 20 °C, nakon čega je dodato i 100 mL dietil etra. Precipitirani kristali su izdvojeni filtriranjem i isprani su dietil etrom da bi se dobilo 16,28 g (97 %) jedinjenja iz naslova.

Intermedijer 2

[0080]

Etil 3-etilpiperidin-3-karboksilat

a) 1-terc-Butil 3-etil 3-etilpiperidin-1,3-dikarboksilat

[0081] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno od 1-terc-butil 3-etil piperidin-1,3-dikarboksilata i jodoetana, prema postupku opisanom za Intermedijer 1a.

b) Etil 3-etilpiperidin-3-karboksilat hidrohlorid

[0082] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno od 1-terc-butil 3-etil 3-etilpiperidin-1,3-dikarboksilata prema postupku opisanom za Intermedijer 1b.

Intermedijer 3

[0083]

Etil 3-(propan-2-il)piperidin-3-karboksilat hidrohlorid

a) 1-terc-Butil 3-etil 3-(propan-2-il)piperidin-1,3-dikarboksilat

[0084] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno od 1-terc-butil 3-etil piperidin-1,3-dikarboksilata i 2-jodo propana prema postupku opisanom za Intermedijer 1a.

b) Etil 3-(propan-2-il)piperidin-3-karboksilat

[0085] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno od 1-terc-butil 3-etil 3-(propan-2-il)piperidin-1,3-dikarboksilata prema postupku opisanom za Intermedijer 1b.

Intermedijer 4

[0086]

Etil 3-propilpiperidin-3-karboksilat hidrohlorid

a) 1-Terc-butil 3-etil 3-propilpiperidin-1,3-dikarboksilat

[0087] Pod azotom, u rastvor 10 g (38,86 mmol) 1-terc-butil 3-etil piperidin-1,3-dikarboksilata, u 120 mL suvog tetrahidrofurana, u kapima je dodato 42 mL 1 M litijum bis(trimetilsilil)amida u rastvoru tetrahidrofurana (42 mmol), na (-78) °C -(-65) °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78°C tokom 20 min, nakon čega je u kapima dodato 3,9 mL (39,7 mmol) 1-jodopropana. Tako dobijena smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana je na ovoj temperaturi tokom 18 h. Reakcija je zaustavljena dodavanjem 200 mL zasićenog rastvora amonijum hlorida (pH ~8) i 300 mL vode. Reakciona smeša je zatim ekstrahovana etil acetatom, a organski slojevi su spojeni, isprani vodom, osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na silika gelu, uz eluiranje sa etilacetatom i cikloheksanom (1:4), da bi se dobilo jedinjenje iz naslova u vidu ulja. Sirovi proizvod je upotrebljen u sledećem koraku.

b) Etil 3-propilpiperidin-3-karboksilat hidrohlorid

[0088] U prethodno dobijen 1-terc-butil 3-etil 3-propilpiperidin-1,3-dikarboksilat je dodato 20 ml 2,5 M hlorovodonične kiseline u etil acetatu. Reakciona smeša je zatim mešana tokom 3 h na 20 °C, nakon čega je koncentrovana in vacuo, da bi se dobilo 11,85 g jedinjenja iz naslova u vidu ulja.

Intermedijer 5

[0089]

Etil 3-(fluorometil)piperidin-3-karboksilat hidrohlorid

a) 1-terc-Butil 3-etil 3-(hidroksimetil)piperidin-1,3-dikarboksilat

[0090] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno od 1-terc-butil 3-etil piperidin-1,3-dikarboksilata i paraformaldehida, prema postupku opisanom za Intermedijer 1a.

b) 1-terc-Butil 3-etil 3-{[(1,1,2-trifluoroetansulfonil)oksi]metil}piperidin-1,3-dikarboksilat

[0091] Pod azotom, u mešani rastvor 0,296 g (1,03 mmol) etil 3-(hidroksimetil)piperidin-3-karboksilata i 0,120 ml (1,48 mmol) piridina u 5 ml dihlorometana, u kapima je dodato 0,230 ml (1,48 mmol) trifluorometansulfonskog anhidrida, na (-78) °C - (-65) °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78°C tokom 5 min, nakon čega je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana je na ovoj temperaturi tokom 18 h. Reakcija je zaustavljena dodavanjem 1M rastvora hlorovodonične kiseline. Reakciona smeša je zatim ekstrahovana dihlorometanom, a organski slojevi su spojeni, isprani vodom, osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani in vacuo, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova u vidu ulja. Sirovi proizvod je upotrebljen u sledećem koraku.

c) 1-terc-Butil 3-etil 3-(fluorometil)piperidin-1,3-dikarboksilat

[0092] Prethodno dobijen 1-terc-butil 3-etil 3-([(1,1,2-trifluoroetansulfonil)oksi] metil}piperidin-1,3-dikarboksilat je rastvoren u 4 ml tetrahidrofurana, nakon čega je dodat 1,25 ml (1,25 mmol) 1M tetrabutilamonijum fluorida u tetrahidrofuranu. Reakciona smeša je zatim mešana 1 h na sobnoj temperaturi, pa je razblažena vodom i ekstrahovana etilacetatom. Organski slojevi su zatim spojeni, isprani vodom, osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na silika gelu, uz eluiranje sa etilacetatom i cikloheksanom (1:2), da bi se dobilo 0,121 g (40%) jedinjenja iz naslova.

d) Etil 3-(fluorometil)piperidin-3-karboksilat hidrohlorid

[0093] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno od 1-terc-butil 3-etil 3-(fluorometil)piperidin-1,3-dikarboksilata prema postupku opisanom za Intermedijer 1b.

Intermedijer 6

[0094]

Etil 3-(metoksimetil)piperidin-3-karboksilat hidrohlorid

a) 1-terc-Butil 3-etil 3-(metoksimetil)piperidin-1,3-dikarboksilat

[0095] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno od 1-terc-butil 3-etil piperidin-1,3-dikarboksilata i hlorometil metil etra prema postupku opisanom za Intermedijer 1a.

b) Etil 3-(metoksimetil)piperidin-3-karboksilat hidrohlorid

[0096] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno od 1-terc-butil 3-etil 3-(metoksimetil)piperidin-1,3-dikarboksilata prema postupku opisanom za Intermedijer 1b.

Intermedijer 7

[0097]

3-[trans-4-(Trifluorometil)cikloheksil-1H-pirazol-5-amin

a) Metil trans-4-(trifluorometil)cikloheksan-1-karboksilat

[0098] U rastvor 10 g (51 mmol) trans 4-(trifluorometil)cikloheksan-1-karboksilne kiseline u 150 ml metanola, na -10 °C je u kapima dodato 10 ml (137 mmol) tionil hlorida. Nakon dodavanja, smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature, nakon čega je mešana na ovoj temperaturi tokom 16 h, pa koncentrovana in vacuo. Ostatak je preraspodeljen između etil acetata i vode. Organski slojevi su spojeni, isprani rastvorom natrijum hidrogen karbonata i vodom, osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, pa profiltrirani i koncentrovani in vacuo. Suvi cikloheksan je uparavan iz ostatka nekoliko puta, da bi se dobilo 8,96 g jedinjenja iz naslova u vidu bezbojnog ulja.

b) 3-Oxo-3-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]propan nitril

[0099] Pod azotom, u smešu 9,1 ml (174 mmol) acetonitrila u 260 ml suvog tetrahidrofurana, u kapima je dodat 51 ml 2,5 M n-butil litijuma u rastvoru n-heksana (127 mmol), na (-78) °C - (- 65) °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78°C tokom 1 h, nakon čega je u kapima dodato i 8,96 g (42,6 mmol) metil trans-4-(trifluorometil)cikloheksan-1-karboksilata. Tako dobijena smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature, nakon čega je mešana na ovoj temperaturi tokom 1 h. Reakcija je zaustavljena dodavanjem 150 mL zasićenog rastvora amonijum hlorida. Tetrahidrofuran je zatim uparen i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Organski slojevi su spojeni, isprani vodom, osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, pa profiltrirani i koncentrovani in vacuo. Sirovi proizvod je upotrebljen u sledećem koraku.

c) 3-[trans-4-(Trifluorometil)cikloheksil]-1H-pirazol-5-amin

[0100] Prethodno dobijeni 3-okso-3-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]propan nitril je rastvoren u 187 ml etanola i dodato je 4,4 ml (167 mmol) hidrazin monohidrata. Pod atmosferom inertnog gasa, reakciona smeša je grejana na temperaturi refluksa tokom 16 h. Rastvarač je uklonjen in vacuo, a suvi toluen je uparavan iz ostatka nekoliko puta, da bi se dobilo 11,15 g jedinjenja iz naslova u vidu žutog ulja. LC-MS (ESI) m/z 234,2 [MH<+>]

Intermedijer 8

[0101]

3-(4,4-Difluorocikloheksil)-1H-pirazol-5-amin

a) 3-(4,4-Difluorocikloheksil)-3-oksopropan nitril

[0102] Pod azotom, u smešu 5 mL (95,7 mmol) acetonitrila u 150 ml suvog tetrahidrofurana, u kapima je dodato 29 ml 2,5 M n-butillitijuma u rastvoru n-heksana (72,5 mmol), na (-78) °C -(- 65) °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78°C tokom 1 h, pa je u kapima dodato i 4,2 ml (24 mmol) etil 4,4-difluorocikloheksan-1-karboksilata. Tako dobijena smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature, nakon čega je mešana na ovoj temperaturi tokom 2 h. Reakcija je zaustavljena dodavanjem 150 mL zasićenog rastvora amonijum hlorida i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Organski slojevi su spojeni, isprani vodom, osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani in vacuo. Sirovi proizvod je upotrebljen u sledećem koraku.

b) 3-(4,4-Difluorocikloheksil)-1H-pirazol-5-amin

[0103] Prethodno dobijen 3-okso-3-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]propan nitril je rastvoren u 100 ml etanola, nakon čega je dodato 4 ml (128,4 mmol) hidrazin monohidrata. Pod atmosferom inertnog gasa, reakciona smeša je grejana na temperaturi refluksa tokom 16 h. Rastvarač je uklonjen in vacuo. Ostatak je zatim preraspodeljen između etil acetata i vode. Organski slojevi su spojeni, isprani vodom, osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, pa profiltrirani i koncentrovani in vacuo, da bi se dobilo 6,43 g jedinjenja iz naslova u vidu žutog ulja. LC-MS (ESI) m/z 202,2 [MH<+>]

Intermedijer 9

[0104]

3-(4,4-Difluorocikloheksil)-4-fluoro-1H-pirazol-5-amin

[0105] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno od 4,4-difluorocikloheksan-1-karboksilne kiseline i fluoroacetonitrila prema postupku opisanom za Intermedijer 7.

Intermedijer 10

[0106]

4-fluoro-3-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-1H-pirazol-5-amin

a) trans-4-(Trifluorometil)cikloheksan-1-karbonil hlorid

[0107] Smeša 5 g (25,5 mmol) trans 4-(trifluorometil)cikloheksan-1-karboksilne kiseline, 100 ml dihlorometana, 5 ml (68,5 mmol) tionil hlorida i 0,1 ml dimetilformamida je grejana na temperaturi refluksa tokom 6 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana in vacuo, a suvi tetrahidrofuran je uparavan iz ostatka nekoliko puta. Sirovi proizvod je upotrebljen u sledećem koraku.

b) 2-Fluoro-3-okso-3-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]propan nitril

[0108] Pod atmosferom inertnog gasa, u rastvor prethodno dobijenog trans-4-(trifluorometil) cikloheksan-1-karbonil hlorida i 1,5 ml (26,96 mmol) fluoroacetonitrila u 50 mL aps. tetrahidrofurana, u kapima je dodato 50 mL (50 mmol) 1M litijum bis(trimetilsilil)amida, na -78 °C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h, nakon čega je smeša ostavljena da se zagreje do sobne temperature, pa je presuta u 200 ml vode. pH smeše je podešen na 2, dodavanjem 1M hlorovodonične kiseline. Smeša je zatim ekstrahovana etil acetatom, a organski slojevi su spojeni, isprani vodom, osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani in vacuo. Sirovi proizvod je upotrebljen u sledećem koraku.

c) 4-Fluoro-3-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-1H-pirazol-5-amin

[0109] Prethodno dobijen 2-fluoro-3-okso-3-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]propan nitril je rastvoren u 65 ml etanola i dodato je 4,4 ml (77 mmol) hidrazin monohidrata. Pod atmosferom inertnog gasa, reakciona smeša je grejana na temperaturi refluksa tokom 16 h. Rastvarač je uklonjen in vacuo, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova u vidu ulja. LC-MS (ESI) m/z 252,2 [MH<+>] Intermedijer 11

[0110]

5-amino-3-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-1H-pirazol-4-karbonitril

a) 2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksankarbonil]propandinitril

[0111] U smešu 2,7 g (12,58 mmol) trans-4-(trifluorometil) cikloheksan-1-karbonil hlorida (Intermedijera 10a) i 1,26 g (19,0 mmol) malononitrila u 15 mL aps. tetrahidrofurana, u kapima je na 0 °C dodato 1,77 mL (50 mmol) trietilamina. Nakon dodavanja, smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h, pa je smeša ostavljena da se zagreje do sobne temperature i presuta je u 200 mL vode. Smeša je zatim ekstrahovana etil acetatom, a organski slojevi su spojeni, isprani vodom, osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani in vacuo. Sirovi proizvod je upotrebljen u sledećem koraku.

b) 2-{metoksi[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]metiliden}propandinitril

[0112] U prethodno dobijeni 2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksankarbonil]propandinitril je dodato 10 ml trimetil ortoformata. Reakciona smeša je zatim grejana na temperaturi refluksa tokom 16 h. Reakciona smeša je dalje koncentrovana in vacuo, a ostatak je podvrgnut hromatografiji na silika gelu uz eluiranje sa etilacetatom i cikloheksanom (1:1), da bi se dobilo 1,495 g (46,0 %) jedinjenja iz naslova u vidu ulja. LC-MS (ESI) m/z 259,1 [MH<+>]

c) 5-amino-3-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-1H-pirazol-4-karbonitril

[0113] Prethodno dobijeni 2-{metoksi[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]metiliden} propandinitril je rastvoren u 17 ml etanola i dodato je 1,4 ml (24,5 mmol) hidrazin monohidrata. Reakciona smeša je zatim mešana 0,5 h na sobnoj temperaturi, nakon čega je razblažena vodom i ekstrahovana etilacetatom. Organski slojevi su spojeni, isprani vodom, osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani in vacuo, da bi se dobilo 1,04 g (69,5%) jedinjenja iz naslova. LC-MS (ESI) m/z 259,2 [MH<+>]

Intermedijer 12

[0114]

7-Hloro-5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil] pirazolo [1,5-a]pirimidin

a) 5-Metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ol

[0115] Smeša 11,156 g (47,8 mmol) 3-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-1H-pirazol-5-amina (Intermedijera 7), 8 ml (44,6 mmol) etil 2-acetil-3-metilbutanoata i 0,32 g (1,6 mmol) monohidrata ptoluensulfonske kiseline u 340 mL toluena, grejana je na temperaturi refluksa tokom 20 h, nakon čega je ohlađena do sobne temperature. Reakciona smeša je zatim koncentrovana in vacuo i ostatak je podvrgnut hromatografiji na silika gelu, uz eluiranje sa dihlorometanom i metanolom (20:1), da bi se dobilo 12,4 g (76%) jedinjenja iz naslova. LC-MS (ESI) m/z 342,2 [MH<+>]

b) 7-Hloro-5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-_ pirazolo[1,5-a]pirimidin

[0116] Smeša 12,4 g (36,35 mmol) 5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ola, 16,7 ml (179 mmol) fosfor oksihlorida, 12,7 ml (72,9 mmol) N,N-diizopropiletilamina i 733 ml toluena je grejana na temperaturi refluksa tokom 20 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do 20 °C, nakon čega je presuta u smešu rastvora natrijum hidrogen karbonata i leda i mešana tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim profiltrirana i filtrat je ekstrahovan sa etil acetatom, a organski slojevi su spojeni, isprani vodom, osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani in vacuo, da bi se dobilo 12,05 g (92%) jedinjenja iz naslova. LC-MS (ESI) m/z 360,2 [MH<+>]

[0117] Jedinjenja iz Tabele 4 su pripremljena od odgovarajućeg acetoacetatnog estra i 1H-pirazol-5-amina, prema postupku opisanom za Intermedijer 12.

Tabela 4

Put c)

Primer 1

[0118]

(3S)-1-[5-Metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]piperidin-3- karboksilna kiselina

[0119] Smeša 0,8 g (2,22 mmol) 7-hloro-5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidina (Intermedijera 12), 0,5 g (3,87 mmol) S-nipekotinske kiseline i 0,7 ml (4 mmol) N,N-diizopropiletilamina u 20 mL N-metil-pirolidona, grejana je na 130 °C tokom 20 h, nakon čega je ohlađena i razblažena vodom. Reakciona smeša je zatim ekstrahovana etilacetatom, a organski slojevi su spojeni, isprani vodom, osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na silika gelu, uz eluiranje etilacetatom i cikloheksanom (1:2), da bi se dobilo 0,422 g (42,0 %) jedinjenja iz naslova. LC-MS (ESI) m/z 453,2 [MH<+>]

Put d)

Primer 2

[0120]

(3S)-1-[5-Metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]-3-(propan-2-il)piperidin-3-karboksilna kiselina

[0121] Smeša 0,66 g (2,79 mmol) etil (3S)-3-(propan-2-il)piperidin-3-karboksilat hidrohlorida, 0,66 g (5,88 mmol) kalijum terc-butoksida u 15 mL dimetil sulfoksida, grejana je na 100 °C tokom 16 h. U smešu je zatim dodat 1,0 g (2,77 mmol) 7-hloro-5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidina (Intermedijera 12) i smeša je grejana na 120 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je dalje ohlađena i zakišeljena sirćetnom kiselinom. Precipitirani kristali su zatim izdvojeni filtriranjem i isprani vodom. Sirovi proizvod je podvrgnut hromatografiji na silika gelu, uz eluiranje sa etilacetatom i cikloheksanom (1:2), da bi se dobilo 0,506 g (36,8 %) jedinjenja iz naslova. LC-MS (ESI) m/z 495,3 [MH<+>]

Put e)

Primer 3

[0122]

(3R)-3-metil-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il ]piperidin-3-karboksilna kiselina

a) Etil (3R)-3-metil-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil) cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7- il]piperidin-3-karboksilat

[0123] Smeša 1,0 g (3,06 mmol) 7-hloro-5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidina (Intermedijera 12), 0,76 g (4,43 mmol) etil (3R)-3metilpiperidin-3-karboksilata i 0,8 mL (4,592 mmol) N,N-diizopropiletilamina, u 20 mL N-metilpirolidona, grejana je na 130 °C tokom 20 h, nakon čega je ohlađena i razblažena vodom. Reakciona smeša je zatim ekstrahovana etilacetatom, pa su organski slojevi spojeni, isprani vodom, osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na silika gelu, uz eluiranje sa toluenom i acetonom (10:1), da bi se dobilo 1,44 g (95,3 %) jedinjenja iz naslova. LC-MS (ESI) m/z 495,3 [MH<+>]

b) (3R)-3-metil-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil] pirazolo [1,5-a]pirimidin-7-il]piperidin-3-karboksilna kiselina

[0124] Smeša 1,443 g (2,91 mmol) etil (3R)-3-metil-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]piperidin-3-karboksilata i 5 mL 20% rastvora natrijum hidroksida u 40 mL etanola je grejana na temperaturi refluksa tokom 5 h, nakon čega je ohlađena i zakišeljena sirćetnom kiselinom. Reakciona smeša je zatim ekstrahovana dihlorometanom, pa su organski slojevi spojeni, isprani vodom, osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata, profiltrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na silika gelu, uz eluiranje etilacetatom i cikloheksanom (1:2), da bi se dobilo 0,934 g (68,6 %) jedinjenja iz naslova. LC-MS (ESI) m/z 467,3 [MH<+>]

Primer 4 i Primer 5

[0125]

Enantiomeri A i B

(3R)-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]-3-propilpiperidin-3-karboksilna kiselina i

(3S)-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]-3-propilpiperidin-3-karboksilna kiselina

[0126] Racemski oblik jedinjenja iz naslova je pripremljen od 7-hloro-5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidina (Intermedijera 12) i racemata etil 3-propipiperidin-3-karboksilat hidrohlorida (Intermedijera 4b) prema postupcima opisanim u Primerima 2a i 2b. LC-MS (ESI) m/z 495,3 [MH<+>]. Enantiomeri A i B su razdvojeni upotrebom hiralnog preparativnog HPLC postupka (Kromasil Cellucoat RP 5µm 150x4,6mm; F=1ml/min; eluenti:A: H2O+30mM AmAc B:80ACN+30mM AmAc; izokratski70%B t=25°C) čime su dobijeni enantiomer A (Tr10,464; Primer 4), i enantiomer B (Tr11,584; Primer 5). Njihova apsolutna konfiguracija nije utvrđena.

Primer 6 i Primer 7

[0127]

Enantiomeri A i B

(3R)-3-(Fluorometil)-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)ckloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]piperidin-3-karboksilna kiselina i

(3S)-3-(Fluorometil)-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]piperidin-3-karboksilna kiselina

[0128] Racemski oblik jedinjenja iz naslova je pripremljen od 7-hloro-5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidina (Intermedijera 12) i racemata etil 3-(fluorometil)piperidin-3-karboksilat hidrohlorida (Intermedijera 5), prema postupcima opisanim u Primerima 2a i 2b. LC-MS (ESI) m/z 485,3 [MH+]. Enantiomeri A i B su razdvojeni upotrebom hiralnog preparativnog HPLC postupka (Lux amiloza-15µm 250×21,1 mm; F=21ml/min; eluenti: n-heptan: EtOH 80 : 20 0,1% TFA t= 40°C) čime su dobijeni enantiomer A (Tr 5,9; Primer 6) i enantiomer B (Tr 6,7; Primer 7). Njihova apsolutna konfiguracija nije utvrđena.

Primer 8 i Primer 9

[0129]

Dijastereomer A i B

(3R)-3-metil-1-[(8S)-8-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-5H,6H,7H,8H-pirazolo[3,2-b]hinazolin-9-il]piperidin-3-karboksilna kiselina i

(3R)-3-metil-1-[(8R)-8-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-5H,6H,7H,8H-pirazolo[3,2-b]hinazolin-9-il]piperidin-3-karboksilna kiselina

a) Etil (3R)-3-metil-1-[(8S)-8-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-5H,6H,7H,8H-pirazolo[3,2-b]hinazolin-9-il]piperidin-3-karboksilat i

Etil (3R)-3-metil-1-[(8R)-8-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-5H,6H,7H,8H-pirazolo[3,2-b]hinazolin-9-il]pipendin-3-karboksilat

[0130] Racemski oblik jedinjenja iz naslova je pripremljen od racemata 9-hloro-8-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-5H,6H,7H,8H-pirazolo[3,2-b]hinazolina (Intermedijera 24) i etil (3R)-3-metilpiperidin-3-karboksilat hidrohlorida, prema postupcima opisanim u Primeru 2a. Dijastereomeri estra A i B su razdvojeni upotrebom hromatografije na kolini sa silika gelom, uz eluiranje sa dihlorometan-diizopropil etrom 10-1, čime su dobijeni dijastereomer A estra (TLC u istom sistemu rf = 0,5) i dijastereomer B estra (TLC u istom sistemu rf = 0,45).

b) (3R)-3-Metil-1-[(8S)-8-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-5H,6H,7H,8H-pirazolo[3,2-b]hinazolin-9-il]piperidin-3-karboksilna kiselina i

(3R)-3-Metil-1-[(8R)-8-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-5H,6H,7H,8H-pirazolo[3,2-b]hinazolin-9-il]piperidin-3-karboksilna kiselina

[0131] Jedinjenja iz naslova su pripremljena od prethodno navedenih dijastereomera A estra (Primer 8, LC-MS (ESI) m/z 479,2 [MH<+>]) i dijastereomer B estra (Primer 9, LC-MS (ESI) m/z 479,2 [MH<+>]) prema postupcima opisanim u Primeru 2b. Njihova apsolutna konfiguracija nije utvrđena.

[0132] Primeri 10 - 42 su pripremljeni upotrebom postupaka analognih onima iz Primera koji su prethodno opisani i prikazani su u vidu primera ispod, u Tabeli 5.

Tabela 5

Priprema farmaceutskih kompozicija

[0133] Primeri formulacija koji slede ilustruju reprezentativne farmaceutske kompozicije ovog pronalaska. Predmetni pronalazak, međutim, nije ograničen na sledeće farmaceutske kompozicije.

A) Čvrsti oralni dozni oblici

I., Tablete

[0134]

Aktivan sastojak/Aktivni sastojci 0,01 - 90%

Ispunjivač 1 - 99,9%

Povezujući agens 0 - 20%

Dezintegrator 0 - 20%

Lubricant 0 - 10%

Drugi specifični ekscipijensi 0 - 50%

II., Oralni disperzibilni filmovi

[0135]

Aktivan sastojak/Aktivni sastojci 0,01 - 90%

Agens za obrazovanje filma 1 - 99,9%

Plastifikator 0 - 40%

Drugi specifični ekscipijens(i) 0 - 50%

B) Tečni oralni dozni oblici

III., Oralne suspenzije

[0136]

Aktivan sastojak/Aktivni sastojci 0,01 - 50%

Tečni nosač 10 - 99,9%

Agens za vlaženje 0 - 50%

Zgušnjivač 0 - 50%

Puferski agens q.s.

Osmotski agens 0 - 50%

Konzervansi q.s.

IV., Sirupi

[0137]

Aktivan sastojak/Aktivni sastojci 0,01 - 50%

Rastvarač 10 - 99,9%

Komponenta šećera 1 - 20% Aroma 0 - 10%

C) Parenteralni dozni oblici

V., Intravenske injekcije

[0138]

Aktivan sastojak/Aktivni sastojci 0,01 - 50% Rastvarač 10 - 99,9% Ko-rastvarač 0 - 99,9% Osmotski agens 0 - 50% Puferski agens q.s.

D) Ostali dozni oblici

VI., Supozitorije

[0139]

Aktivan sastojak/Aktivni sastojci 0,01 - 50% Baza za supozitorije 1 - 99,9% Površinski aktivni agensi 0 - 20%

Lubrikanti 0 - 20% Konzervansi q.s.

VII., Kapi za oči

[0140]

Aktivan sastojak/Aktivni sastojci 0,01 - 50% Voda 0 - 99,9% Rastvarač 0 - 99,9% Osmotski agens 0 - 20% Pojačivač viskoziteta 0 - 20% Puferski agens q.s. Konzervansi q.s.

Claims (9)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I), gde:

   R<1>i R<2>su nezavisno izabrani od vodonika, atoma halogena, C1-6alkil, haloC1-6alkil grupe; R<3>je vodonik, atom halogena, C1-6alkil, cijano grupa; R<4>je C1-6alkil; R<5>je C1-6alkil, opciono supstituisan atomom halogena ili atomima halogena, C3-5cikloalkil grupom; C3-5cikloalkilC1-6alkil, dialkilamino, C1-6alkoksi, C1-6alkoksiC1-6alkil, C1-6alkiltio grupa, tetrahidrofuranil, tetrahidrofuranilC1-6alkil, tetrahidropiranil, tetrahidropiranilC1-6alkil; ili R4i R5zajedno obrazuju nesupstituisan ili 3- do 7-člani zasićeni prsten supstituisan sa jednom ili sa više od C1-3alkil, C1-3alkoksi, haloC1-3alkil, C1-3alkilkarbonil grupa, pri čemu su članovi prstena izabrani iz grupe koja se sastoji do ugljenika, azota, kiseonika i sumpora; R<6>je vodonik, atom halogena ili C1-6alkil, hidroksi, C1-6alkoksi, C1-6alkoksiC1-6alkil, haloC1-6alkil, amino grupa; ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, enantiomeri, dijastereomeri, solvati i hidrati.
2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde R<1>i R<2>su nezavisno izabrani od vodonika, atoma halogena, C1-6alkil, haloC1-6alkil grupe; R<3>je vodonik, atom halogena, C1-6alkil, cijano grupa; R<4>je C1-6alkil; R<5>je C1-6alkil, opciono supstituisan atomom halogena ili atomima halogena, C3-5cikloalkil grupom; C3-5cikloalkilC1-6alkil, dialkilamino, C1-6alkoksi, C1-6alkoksiC1-6alkil, C1-6alkiltio grupa, tetrahidrofuranil, tetrahidrofuranilC1-6alkil, tetrahidropiranil, tetrahidropiranilC1-6alkil; R<6>je vodonik, atom halogena ili C1-6alkil, hidroksi, C1-6alkoksi, C1-6alkoksiC1-6alkil, haloC1-6alkil, amino grupa; ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, enantiomeri, dijastereomeri, solvati i hidrati.
3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde R<1>i R<2>su nezavisno izabrani od vodonika, atoma halogena, C1-6alkil, haloC1-6alkil grupe; R<3>je vodonik, atom halogena, C1-6alkil, cijano grupa; R4i R5zajedno obrazuju nesupstituisan ili 3- do 7-člani zasićeni prsten supstituisan sa jednom ili sa više od C1-3alkil, C1-3alkoksi, haloC1-3alkil, C1-3alkilkarbonil grupa, pri čemu su članovi prstena izabrani iz grupe koja se sastoji od ugljenika, azota, kiseonika i sumpora; R<6>je vodonik, atom halogena ili C1-6alkil, hidroksi, C1-6alkoksi, C1-6alkoksiC1-6alkil, haloC1-6alkil, amino grupa ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, enantiomeri, dijastereomeri, solvati i hidrati.
4. 4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je R<4>metil; a R<5>je izopropil ili C1-6alkoksiC1-6alkil.
5. 5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, izabrano iz grupe koju čine (3S)-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]piperidin-3- karboksilna kiselina (3S)-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]-3-(propan-2-il)plperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-3-metil-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo [1,5-a]pirimidin-7-il]piperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]-3-propilpiperidin-3-karboksilna kiselina (3S)-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]-3-propilpiperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-3-(fluorometil)-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7- il]piperidin-3-karboksilna kiselina (3S)-3-(fluorometil)-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7- il]piperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-3-metil-1-[(8S)-8-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-5H,6H,7H,8H-pirazolo[3,2-b]hinazolin-9-il]piperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-3-metil-1-[(8R)-8-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-5H,6H,7H,8H-pirazolo[3,2-b]hinazolin-9-il]piperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]piperidin-3- karboksilna kiselina (3S)-3-metil-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo [1,5-a]pirimidin-7-il]piperidin-3-karboksilna kiselina (3S)-3-etil-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]piperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-3-etil-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo [1,5-a]pirimidin-7-il]piperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-1-[5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]-3-(propan-2-il)piperidin-3-karboksilna kiselina (3S)-1-[3-fluoro-5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo [1,5-a]pirimidin-7-il]-3-metilpiperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-1-[3-fluoro-5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo [1,5-a]pirimidin-7-il]-3-metilpiperidin-3-karboksilna kiselina (3S)-3-etil-1-[3-fluoro-5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil] pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]piperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-3-etil-1-[3-fluoro-5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil] pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]piperidin-3-karboksilna kiselina (3S)-1-{3-fiuoro-6-metoksi-5-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il}-3-metilpiperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-1-{3-fluoro-6-metoksi-5-metil-2-[trans-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il}-3-metilpiperidin-3-karboksilna kiselina (3S)-3-etil-1-{6-metoksi-5-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il}piperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-3-etil-1-{6-metoksi-5-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il}piperidin-3-karboksilna kiselina (3S)-1-{3-fluoro-6-metoksi-5-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il}-3-metilpiperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-1-{3-fluoro-6-metoksi-5-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-ajpirimidin-7-il}-3-metilpiperidin-3-karboksilna kiselina (3S)-3-etil-1-{3-fluoro-6-metoksi-5-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil] pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il}piperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-3-etil-1-{3-fluoro-6-metoksi-5-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil] pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il}piperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-1-{6-etil-5-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il}-3-metilpiperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-3-etil-1-{6-etil-5-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7}piperidin-3-karboksilna kiselina (3S)-1-[2-(4,4-difluorocikloheksil)-5-metil-6-(propan-2-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]-3-metilpiperidin-3- karboksilna kiselina (3R)-1-[2-(4,4-difluorocikloheksil)-5-metil-6-(propan-2-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]-3-metilpiperidin-3- karboksilna kiselina (3S)-1-[2-(4,4-difluorocikloheksil)-5-metil-6-(propan-2-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]-3-etilpiperidin-3- karboksilna kiselina (3R)-1-[2-(4,4-difluorocikloheksil)-5-metil-6-(propan-2-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]-3-etilpiperidin-3- karboksilna kiselina (3R)-1-[2-(4,4-difluorocikloheksil)-5,6-dietilpirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]-3-metilpiperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-3-metil-1-{2-[trans-4-(triauorometil)cikloheksil]-5H,6H,7H,8H-pirazolo[3,2-b]hinazolin-9-il}piperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-3-metil-1-{5-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-2,6,7-triazatriciklo[7.5.0.0<3,7>]tetradeka-1,3,5,8-tetraen-8-il}piperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-3-metil-1-{5-[trans)-4-(trifluorometil)cikloheksil]-11-oksa-2,6,7-triazatriciklo[7.4.0.0<3,7>] trideka-1,3,5,8-tetraen-8-il}piperidin-3-karboksilna kiselina (3S)-3-metil-1-{5-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]-12-oksa-2,6,7-triazatriciklo[7.4.0.0<3,7>] trideka-1,3,5,8-tetraen-8-il}piperidin-3-karboksilna kiselina (3S)-1-[3-cijano-5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo [1,5-a] pirimidin-7-il]-3-metilpiperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-1-[3-cijano-5-metil-6-(propan-2-il)-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo [1,5-a] pirimidin-7-il]-3-metilpiperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-1-[2-(4,4-difluorocikloheksil)-3-fluoro-5-metil-6-(propan-2-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]-3-metilpiperidin-3-karboksilna kiselina (3R)-1-[6-(2-metoksietil)-5-metil-2-[trans-4-(trifluorometil)cikloheksil]pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-il]-3-metilpiperidin-3-karboksilna kiselina
6. 6. Postupak za pripremu jedinjenja formule (I) prema patentnom zahtevu 1, naznačen time korak 1) reagovanje derivata estra karboksilne kiseline formule (II) ili derivata hlorida karboksilne kiseline formule (III)

   - pri čemu je značenje R<1>i R<2>prethodno opisano za jedinjenje formule (I), sa derivatom acetonitrila formule (IV)

   - pri čemu je značenje R<3>prethodno opisano za jedinjenje formule (I), zatim korak 2) tako dobijeni acilacetonitrilni derivat formule (V) reaguje

   2a) sa hidrazin hidratom, da bi se obezbedilo jedinjenje formule (VI)

   - pri čemu je značenje R<1>, R<2>kao što je prethodno opisano, a R3 je vodonik, atom halogena, C1-6alkil grupa ili 2b) sa trimetil ortoformatom, da bi se obezbedio derivat malononitrila formule (XIV)

   - gde je značenje R1, R2 kao što je prethodno opisano, a R3 je cijano grupa koja reaguje sa hidrazin hidratom, da bi se dobilo jedinjenje formule (VI)

   nakon čega korak 3) jedinjenje formule (VI) gde je značenje R1, R2, R3 kao što je prethodno opisano za formulu (I) - dobijeno prema koracima opisanim u 2a) ili 2b), reaguje sa derivatom acilacetatnog estra formule (VII)

   - gde je značenje R4 i R5 kao što je prethodno opisano za formulu (I), a zatim korak 4) tako dobijeno jedinjenje formule (VIII)

   - gde je značenje R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, i R<5>kao što je prethodno opisano za formulu (I) - hloriše se da bi se dobio hloro derivat formule (IX)

   - gde je značenje R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, i R<5>kao što je prethodno opisano za formulu (I) - i korak 5) poslednje navedeno jedinjenje reaguje sa bilo kojim od 5c) derivata nipekotinske kiseline formule (X)

   - gde je značenje R<6>kao što je prethodno opisano za formulu (I) - a dobijeni derivat formule (I) i njegovi optički antipodi ili racemati i/ili soli u datom slučaju mogu biti transformisani u drugo jedinjenje formule (I) i njegove optičke antipode ili racemate i/ili soli, uvođenjem novih supstituenata i/ili modifikovanjem ili uklanjanjem postojećih, ili 5d) njegovom alkalnom soli formule (XI)

   - gde je značenje R<6>kao što je prethodno opisano za formulu (I) - a dobijeno jedinjenje formule (I) i njegovi optički antipodi ili racemati i/ili soli opciono mogu biti transformisani u drugo jedinjenje formule (I) i njegove optičke antipode ili racemate i/ili soli, uvođenjem novih supstituenata i/ili modifikovanjem ili uklanjanjem postojećih, ili 5e) derivatom estra nipekotinske kiseline formule (XII)

   - gde je značenje R<6>kao što je prethodno opisano za formulu (I) - da bi se dobio estarski derivat formule (XIII)

   gde je značenje R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>i R<6>kao što je prethodno opisano za formulu (I); konačno, poslednje navedeno jedinjenje se saponifikuje jakom bazom ili kiselinom - a dobijeni derivat formule (I) i njegovi optički antipodi ili racemati i/ili soli mogu opciono biti transformisani u drugo jedinjenje formule (I) i njegove optičke antipode ili racemate i/ili soli, uvođenjem novih supstituenata i/ili modifikovanjem ili uklanjanjem postojećih.
7. 7. Farmaceutska kompozicija koja sadrži terapijski efektivnu količinu jedinjenja formule (I), ili njegovih farmaceutski prihvatljivih soli, racemata, enantiomera, dijastereomera, solvata i hidrata prema patentnom zahtevu 1, kao aktivnog sastojka, i farmaceutski prihvatljiv nosač.
8. 8. Kombinacija koja sadrži terapijski efektivnu količinu jedinjenja formule (I), ili njegovih farmaceutski prihvatljivih soli, racemata, enantiomera, dijastereomera, solvata i hidrata prema patentnom zahtevu 1, i jedan ili više terapijski aktivnih koagensa.
9. 9. Jedinjenje formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, racemati, enantiomeri, dijastereomeri, solvati i hidrati prema patentnom zahtevu 1, za upotrebu u lečenju ili prevenciji poremećaja izabranog iz grupe psihijatrijskih poremećaja (kao što je anksioznost, panični poremećaj, post-traumatski poremećaj, depresija, šizofrenija), neurorazvojni poremećaji (kao što je poremećaj iz autističnog spektra, opsesivno-kompulzivni poremećaj, fragilni X sindrom), kognitivni poremećaji, epilepsija, spastičnost, rigidnost skeletnih mišića, povreda kičmene moždine, multipla skleroza, amiotrofična lateralna skleroza, cerebralna paraliza, esencijalni tremor, bol (neuropatski, visceralni, osteoartritični), zloupotreba supstanci (kokaina, nikotina, alkohola), gojaznost, prejedanje, astma, kašalj, urinarna inkontinencija, gastroezofagealna refluksna bolest, prolazno opuštanje donjeg sfinktera jednjaka, iritabilni sindrom creva. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5