RS63085B1 - Varijabilni domeni imunoglobulina - Google Patents

Varijabilni domeni imunoglobulina

Info

Publication number
RS63085B1
RS63085B1 RS20220328A RSP20220328A RS63085B1 RS 63085 B1 RS63085 B1 RS 63085B1 RS 20220328 A RS20220328 A RS 20220328A RS P20220328 A RSP20220328 A RS P20220328A RS 63085 B1 RS63085 B1 RS 63085B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
amino acid
acid residue
seq
sequence
isvd
Prior art date
Application number
RS20220328A
Other languages
English (en)
Inventor
Marie-Ange Buyse
Carlo Boutton
Original Assignee
Ablynx Nv
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ablynx Nv filed Critical Ablynx Nv
Publication of RS63085B1 publication Critical patent/RS63085B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2875—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/42—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/42—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
    • C07K16/4283—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig
    • C07K16/4291—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig against IgE
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures
    • C40B40/04—Libraries containing only organic compounds
    • C40B40/10—Libraries containing peptides or polypeptides, or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/22—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from camelids, e.g. camel, llama or dromedary
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

Opis
[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na ISVD sa teškim lancem u kojima, aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K, pri čemu su pozicije aminokiselinskih ostataka u ISVD sa teškim lancem obeležene u skladu sa numeracijom prema Kabatu.
[0002] Pronalazak se posebno odnosi na poboljšane varijabilne domene teškog lanca imunoglobulina koji imaju izložen C-terminalni region ili kraj (kako je ovde opisano u nastavku; takođe vidite WO 12/175741) ili se koriste (ili su namenjeni za korišćenje) u primenama gde imaju izložen C-terminalni region ili kraj (ponovo kako je ovde opisano u nastavku). U pronalasku, prvi su pojedinačni varijabilni domeni imunoglobulina (ovde se pominju i kao „ISV“ ili „ISVD“), kao što su nanotela (uključujući VHH, humanizovana VHH i kamelizovana VHH, kao što su kamelizovana humana VH), antitela (sa jednim domenom) koja su VH domeni ili izvedena iz VH domena, i dAb koja su VH domeni ili izvedena iz VH domena.
[0003] Za ilustrativne svrhe, primena se takođe odnosi na proteine, polipeptide i druge konstrukte, molekule ili hemijske entitete koji sadrže ili se suštinski sastoje od (jednog ili više) poboljšanih pojedinačnih varijabilnih domena teškog lanca imunoglobulina iz pronalaska, kao što su ovde opisani; na postupke za ekspresiju/proizvodnju poboljšanih pojedinačnih varijabilnih domena teškog lanca imunoglobulina iz pronalaska i/ili za ekspresiju/proizvodnju proteina, polipeptida i drugih konstrukata, molekula ili hemijskih entiteta koji ih sadrže; na kompozicije i proizvode (kao što su farmaceutske kompozicije i proizvodi) koji sadrže poboljšane pojedinačne varijabilne domene teškog lanca imunoglobulina iz pronalaska i/ili proteine, polipeptide i druge konstrukte, molekule ili hemijske entitete koji ih sadrže; na nukleotidne sekvence i nukleinske kiseline koje kodiraju poboljšane pojedinačne varijabilne domene teškog lanca imunoglobulina iz pronalaska i/ili koje kodiraju proteine ili polipeptide koji ih sadrže; i na primene (a posebno terapeutsku, profilaktičku i dijagnostičku primenu) poboljšanih pojedinačnih varijabilnih domena teškog lanca imunoglobulina iz pronalaska i proteina, polipeptida i drugih konstrukata, molekula ili hemijskih entiteta koji ih sadrže.
[0004] U predmetnoj primeni, aminokiselinski ostaci/pozicije u varijabilnom domenu teškog lanca imunoglobulina biće navedeni uz numeraciju prema Kabatu. Radi jednostavnosti, Slika 1 daje tabelu u kojoj se navode neke pozicije aminokiselina koje će ovde biti posebno pomenute, i njihova numeracija prema nekim alternativnim sistemima numeracije (kao što su Aho i IMGT. Napomena: u predmetnom opisu i zahtevima, presudna je Kabatova numeracija; ostale numeracije su date samo kao referenca).
[0005] Takođe, u pronalasku se kaže da varijabilni domen imunoglobulina ima „izložen C-terminalni kraj ili region“ kada nije povezan sa konstantnim domenom (kao što je CH1 domen) ili za njega. Data je referenca na relevantne prethodne radove iz struke koji su ovde navedeni.
[0006] Posebno, kao što je opisano u WO 12/175741, C-terminalni region (kao što se ovaj termin takođe koristi ovde) deo je pretpostavljenog epitopa na ISV koji takođe uključuje, između drugih ostataka, aminokiselinski ostatak na poziciji 14 (i aminokiselinske ostatke pored/blizu njega u sekvenci aminokiselina, kao što su pozicije 11, 13 i 15), i takođe može da sadrži aminokiselinski ostatak na poziciji 83 (i aminokiselinske ostatke pored/blizu njega u sekvenci aminokiselina, kao što su pozicije 82, 82a, 82b i 84) i/ili aminokiselinski ostatak na poziciji 108 (i aminokiselinske ostatke pored/blizu njega u sekvenci aminokiselina, kao što su pozicije 107). Kao u WO 12/17574, ovaj pretpostavljeni epitop se ovde takođe zajednički pominje kao „C-terminalni region“, gde se podrazumeva da ovaj C-terminalni region sadrži barem C-terminalnu sekvencu VTVSS (tj. svaku od pozicija 109, 110, 111, 112 i 113) i aminokiselinski ostatak na poziciji 14, i takođe može da sadrži aminokiselinske ostatke na pozicijama 83 i 108, i možda i aminokiselinske ostatke na pozicijama 13, 15, 82b, 83, 84 i 107.
[0007] Kao rezultat istraživanja jednolančanih FV ili „ScFv“ (koji su konstrukti koji sadrže varijabilne domene imunoglobulina koji, slično kao ISVD, nisu povezani sa konstantnim domenima), u struci je opisano da C-terminus varijabilnog domena imunoglobulina sadrži hidrofobnu zakrpu koja je na klasičnom antitelu kompletne veličine sakrivena u međupovršini između varijabilnog domena i konstantnog domena, ali postaje izložena rastvaraču kada varijabilni domen nije povezan sa konstantnim domenom (vidite, na primer, Nieba i sar., Protein Engineering, 10, 435-444 (1997) i Harmsen i sar., Molecular Immunology (2000), 579-590).
[0008] Takođe je dobro poznato da epitopi koji su obično sakriveni u strukturi proteina (takođe se pominju kao „neo-epitopi“ ili „kriptični epitopi“) mogu da aktiviraju imunski sistem kada budu izloženi rastvaraču, na primer, usled degradacije, pogrešnog savijanja ili agregacije uključenog proteina. Na primer, u slučaju sakrivenih hidrofobnih delova biomolekula (takozvani „hipoi“), predloženo je da oni formiraju deo opšteg molekulskog obrasca povezanog sa oštećenjem koji dovodi do urođenog imunskog odgovora kada hipoi budu izloženi rastvaraču (vidite, na primer, Seong i Matzinger, Nature Reviews 2004, 469), i u struci su opisani razni primeri prethodno sakrivenih hidrofobnih zakrpa koje aktiviraju imunski odgovor (vidite, na primer, David i sar., JBC, 2001, 6370-6377; Matsuura i sar., International Immunology, 2000, 1183-1192; Rasheed i sar., Life Sciences 79 (2000), 2320-2328). Uopštenije, u struci je takođe poznato da su hidrofobne aminokiseline sklone tome da budu deo B-ćelijskih epitopa (vidite, na primer, WO 11/07586, strana 10; i Kolaskar, FEBS 276, 172-174 (1990)). Slično tome, opisano je da hidrofobna zakrpa na C-kraju varijabilnog domena teškog lanca (kao što su opisali Nieba i sar. i Harmsen i sar., supra) može da formira B-ćelijske epitope koji mogu da stvore antitela (u nastajanju i/ili postojeća) na lek (WO 11/07586) i/ili da stupe u interakciju sa njima. Iz tog razloga, predloženo je da se načine mutacije na nekim od aminokiselinskih ostataka koji sačinjavaju deo C-kraja varijabilnih domena da bi se smanjila hidrofobnost i/ili uklonili B-ćelijski epitopi. Na primer, Nieba i sar. predlažu da se mutiraju pozicije 11, 14, 41, 84, 87 i/ili 89 VH regiona (numeracija prema Kabatu), dok se u WO 11/07586 predlaže da se mutiraju pozicije 99, 101 i/ili 148 (AHo numeracija) VL domena, ili pozicije 12, 97, 98, 99, 103 i/ili 144 VH domena (ponovo AHo numeracija - te pozicije odgovaraju pozicijama 11, 83, 84, 85, 89 i 103 prema Kabatu). Slično tome, Harmsen i sar. predlažu da se mutiraju pozicije 12 i 101 (IMGT numeracija; to su pozicije 11 i 89 prema Kabatu) da bi se kompenzovalo odsustvo CH1 domena; i oni takođe identifikuju specifičnu subfamiliju VHH (nazvanu „VHH4“) koja sadrži aminokiseline koje su pogodni kandidati za supstitucije na tim pozicijama.
[0009] Takođe, u struci je opisano (vidite, na primer, WO 12/175741 i reference navedene u sledećim odeljcima) da biološki uzorci dobijeni od humanih ispitanika mogu da sadrže (već postojeće) proteine ili faktore koji mogu da se vežu za izloženi C-terminalni region ili kraj varijabilnog domena imunoglobulina (na primer, C-terminalni region ili kraj ISVD ili VH ili VL domena u ScFv ili dijatelu).
[0010] Na primer, u WO 2013/024059 se kaže da „u serumu nekih zdravih naivnih humanih ispitanika, prisutna su postojeća anti-VH autoantitela koja mogu da vežu i antitela sa VH domenom i VHH molekule, kao i anti-VL (npr. V kapa (VK)) autoantitela koja mogu da vežu VL molekule“, i da „već postojeća ADA koja vezuju dAb su slična anti-šarka antitelima po tome što vezuju fragmente IgG, ali ne te iste sekvence nađene in situ ili netaknuti IgG“.
[0011] Holland i sar., J. Clin. Immunol. 2013, 33(7):1192-203 opisuju da krv oko polovine normalnih zdravih ljudi sadrži različite nivoe nove klase anti-IgG autoantitela koja mogu da se vežu za sekvence okvira kompletno humanih antitela sa VHdomenom (koja Holland i sar. takođe zovu „HAVH auto-antitela“). Holland i sar. dalje pominju da su ova autoantitela verovatno većinom IgG izotipa, pokazuju relativno veliki afinitet (oko 10<-10>M) prema sekvencama VH, i slobodni C-kraj je verovatno važan za vezivanje ovih HAVH autoantitela za VHdomene.
[0012] Problemi vezani za već postojeća antitela koja su bioterapeutski reaktivna na molekule bioterapeutika i njihov regulišući uticaj takođe su generalno razmatrani od strane Xue i sar., AAPS J.2013; 15(3):852-5.
[0013] Prethodno pomenuta postojeća saznanja u struci takođe su usredsređena na načine na koje sekvenca varijabilnog domena imunoglobulina može da se modifikuje tako da se spreči ili smanji vezivanje takvih već postojećih antitela/faktora za varijabilne domene. U tom pogledu, WO 2011/07586 predlaže da se napravi jedna ili više mutacija u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog domena na nekim specifičnim pozicijama domena (a te površine su površinski izložene). WO 12/175741 opisuje da vezivanje takvih već postojećih antitela/faktora može biti smanjeno dodavanjem nekoliko aminokiselinskih ostataka (i samo jednog ostatka alanina) na C-terminalni kraj VH-domena i/ili uvođenjem jedne ili više specifičnih supstitucija ili delecija u C-terminalnom regionu varijabilnog domena, koji je opisan u WO 12/175741 da sadrži barem C-terminalnu aminokiselinsku sekvencu VTVSS i aminokiselinski ostatak na poziciji 14 (a za tu poziciju WO 12/175741 kaže da prisustvo ostatka alanina obezbeđuje smanjeno vezivanje već postojećih antitela u poređenju sa prisustvom „humanog“ aminokiselinskog ostatka prolina), a možda i aminokiselinske ostatke na pozicijama 108 i 83 i aminokiselinske ostatke blizu pomenutih pozicija (WO 2013/024059 obezbeđuje suštinski istu pouku kao WO 12/175741).
[0014] Na primer, u istraživanju koje je sproveo podnosilac zahteva/zastupnik i koje je dovelo do podnošenja WO 12/175741, nađeno je da dodavanje jednog ostatka alanina u C-terminalni region ili kraj izloženog VH domena obično sprečava/uklanja (suštinski sve) vezivanje već postojećih antitela/faktora prisutnih u uzorcima dobijenim od većine humanih ispitanika (vidite, na primer, stranu 62, redove 20-25, i stranu 57, red 30 do strane 58, red 3, WO 12/175741); i ti nalazi su potvrđeni dodatnim rezultatima koje je dobio podnosilac zahteva/zastupnik nakon podnošenja WO 12/175741 kada je supstitucija C-terminalnog alanina WO 12/175741 primenjena na druga nanotela (podaci nisu prikazani).
[0015] Takođe, u WO 12/175741, kao i u WO 12/175400 od strane podnosioca zahteva/zastupnika, C-terminalne ekstenzije opisane u WO 12/175741 su primenjene na neka nanotela koja vezuju albumin iz seruma (vidite, na primer, WO 12/175741: SEQ ID NO: 37, 51-53 i 55-64 i konstrukte prikazane u SEQ ID NO: 41, 43 i 44; i WO 12/175400: SEQ ID NO: 6 do 11).
[0016] Slika 9 u WO 12/175741 takođe opisuje dve albumin-vezujuće sekvence koje se koriste kao referentne sekvence u Eksperimentalnom delu u nastavku. To su SEQ ID NO:37 sa Slike 9 u WO 12/175741 (koja se ovde takođe pominje kao „referenca B“; njena sekvenca je ovde data kao SEQ ID NO: 45) i „SEQ ID NO:37 bez dodatih C-terminalnih aminokiselinskih ostataka“ sa Slike 9 u WO 12/175741 (koja se ovde takođe pominje kao „referenca A“; njena sekvenca je ovde data kao SEQ ID NO:44). I referenca A i referenca B su izvedene iz sekvence humanizovanog anti-albuminskog nanotela „Alb-8“ koje je dato kao SEQ ID NO:62 u WO 06/122787 (i koje se ovde takođe pominje kao „Alb-11“); ali, u poređenju sa sekvencom Alb-11, referenca A sadrži N-terminalnu His oznaku; a referenca B sadrži N-terminalnu His oznaku i C-terminalni ostatak alanina. Referenca A, referenca B i Alb-8/Alb-11 sadrže CDR-e date u SEQ ID NO: 41 do 43, tim redosledom.
[0017] Drugi primeri nanotela i drugih pojedinačnih varijabilnih domena imunoglobulina koji imaju C-terminalne ekstenzije i/ili mutacije u C-terminalnom regionu mogu, na primer, da se nađu u sledećoj stručnoj literaturi: WO 06/129843 (vidite, na primer, SEQ ID NO: 4, 6, 8 i 10); WO 03/035695 (vidite, na primer, neke od sekvenci navedenih na strani 61-64); Vu i sar., Molecular Immunology, 1121-1131, 1997 (vidite, na primer, neke od sekvenci navedenih na Slici 2); WO 11/003622 (vidite, na primer, sekvence date kao SEQ ID NO: 10 do 27); WO09/058383 (vidite, na primer, sekvencu TAR2h-10-27 pomenutu na strani 51); WO 10/042815 (vidite, na primer, sekvence SEQ ID NO: 15, 17, 27 i 30); i WO 04/044204 (vidite, na primer, sekvence SEQ ID NO: 31, 35, 37, 47 i 49).
[0018] Neke od ovde navedenih referenci takođe daju primere sekvenci ISVD u kojima je poslednja C-terminalna aminokiselina ISVD aminokiselina koja nije serin (S), na primer, zato što je serin na poziciji 113 zamenjen drugom aminokiselinom i/ili zato što je serin na poziciji 113 izbačen i dodata je C-terminalna aminokiselina (u praksi, krajnji rezultat u pogledu sekvence C-terminalne aminokiseline će biti isti).
[0019] Neke od ovde navedenih referenci takođe daju primere nanotela i drugih pojedinačnih varijabilnih domena imunoglobulina u kojima je na poziciji 112 aminokiselina koja nije serin. Na primer, WO 12/175741 opisuje nanotela u kojima je na poziciji 112 glicin (G); Vu i sar. (supra) opisuju nanotela u kojima je na poziciji 112 alanin (A) ili izoleucin (I); WO 13/024059 daje primer supstitucije S112A; a dolenavedeni WO 08/020079 daje primer supstitucije S112F i takođe uopšteno tvrdi da u njemu opisana nanotela mogu da sadrže ograničen broj aminokiselinskih ostataka dodatih na karboksi-terminalnom kraju aminokiselinske sekvence nanotela.
[0020] U istraživanju koje je dovelo do predmetnog pronalaska, nakon utvrđivanja da dodavanje C-terminalne ekstenzije (koja može biti jednostavna, kao jedan C-terminalni ostatak alanina, vidite opet WO 12/175741, Primer 3) C-terminalnom regionu ili kraju nanotela suštinski sprečava/uklanja vezivanje već postojećih antitela/faktora u većini uzoraka humanih ispitanika/pacijenata, ispitano je da li uzorci dobijeni od humanih ispitanika (zdravih dobrovoljaca i/ili ispitanika koji imaju bolest ili poremećaj) možda sadrže (druga) već postojeća antitela ili faktore koji mogu da se vežu za izloženi C-terminalni region nanotela (ili drugi VH domen) čak i kada postoji C-terminalna ekstenzija. Pri tome su predmetni pronalazači pronašli da, mada suštinski nije nađeno vezivanje takvih već postojećih antitela za C-terminalno produženi VH domen u krvi ili serumu zdravih dobrovoljaca ili u krvi ili serumu dobijenim od humanih pacijenata koji boluju od jedne od više različitih bolesti (uključujući neke inflamatorne bolesti ili autoimunske poremećaje - podaci nisu prikazani), neki uzorci krvi ili seruma koji su dobijeni od nekih (ali ne svih) humanih ispitanika koji boluju od nekih teških (auto)imunskih poremećaja (kao što je sistemski eritemski lupus; ovde se takođe koristi skraćenica „SLE“) izgleda sadrže neka već postojeća antitela/faktore koji mogu da se vežu za nanotela čak i kada pomenuta nanotela sadrže C-terminalnu ekstenziju.
[0021] Tako je, generalno, svrha predmetnog pronalaska da obezbedi poboljšane pojedinačne varijabilne domene teškog lanca imunoglobulina (poboljšane ISVDi konkretnije poboljšana nanotela) koji, kada imaju izloženi C-terminalni region ili kraj, manje su skloni da se vežu od strane već postojećih antitela/faktora, kao što su oni nađeni u uzorcima krvi ili seruma humanih ispitanika.
[0022] Konkretno, svrha predmetnog pronalaska je da obezbedi poboljšane pojedinačne varijabilne domene teškog lanca imunoglobulina koji, kada imaju izloženi C-terminalni region ili kraj, manje su skloni da se vežu od strane već postojećih antitela/faktora (ponovo, kao što su oni nađeni u uzorcima krvi ili seruma humanih ispitanika) koji još uvek mogu da se vežu za izloženi C-terminalni region ili kraj varijabilnog domena teškog lanca kada pomenuti domen sadrži C-terminalnu ekstenziju (na primer, kao što je opisano u WO 12/175741, WO 13/024059 i daljem ovde navedenom stanju tehnike).
[0023] Kao što je ovde pomenuto, predmetni pronalazači su utvrdili da su takva već postojeća antitela koja mogu da se vežu za varijabilni domen teškog lanca sa C-terminalnom ekstenzijom prisutna u uzorcima krvi ili seruma dobijenim od humanih ispitanika koji boluju od nekih (auto)imunskih bolesti ili poremećaja koji ozbiljno utiču na imunski sistem/aktiviraju ga (kao što je SLE).
[0024] Tako, konkretnije, svrha predmetnog pronalaska je da obezbedi poboljšane ISVD sa teškim lancem (i konkretnije poboljšana nanotela) koji, kada imaju izloženi C-terminalni region ili kraj, manje su skloni da se vežu od strane već postojećih antitela/faktora, kao što su oni nađeni u uzorcima krvi ili seruma dobijenih od humanih ispitanika koji boluju od nekih (auto)imunskih bolesti ili poremećaja koji ozbiljno utiču na imunski sistem/aktiviraju ga (kao što je SLE).
[0025] Još konkretnije, svrha predmetnog pronalaska je da obezbedi poboljšane ISVD sa teškim lancem i konkretnije poboljšana nanotela koji, kada imaju izloženi C-terminalni region ili kraj, manje su skloni da se vežu od strane tih već postojećih antitela/faktora nađenih u uzorcima krvi ili seruma dobijenih od humanih ispitanika koji boluju od nekih (auto)imunskih bolesti ili poremećaja i koji još uvek mogu da se vežu za izloženi C-terminalni region ili kraj VH domena kada VH domen sadrži C-terminalnu ekstenziju.
[0026] Sada je nađeno da vezivanje već postojećih antitela/faktora za varijabilni domen teškog lanca sa izloženim C-terminalnim krajem može (dodatno) biti smanjeno mutacijom serina na poziciji 112 (Kabatova numeracija) u lizin (K) ili glutamin (Q). Konkretno, nađeno je da takva S112K ili S112Q mutacija može (dodatno) da smanji ili suštinski da spreči/ukloni vezivanje već postojećih antitela/faktora koji mogu da se vežu za varijabilni domen teškog lanca koji sadrži C-terminalnu ekstenziju (ali ne mutaciju S112K ili S112Q), kao što su ona već postojeća antitela/faktori nađeni u uzorcima krvi ili seruma humanih ispitanika koji boluju od teških autoimunskih poremećaja, kao što je SLE.
[0027] Takođe, nađeno je da uvođenje ovde objavljenih specifičnih mutacija (konkretno sledećih mutacija L11V u kombinaciji sa V89L, i opciono dalje u kombinaciji sa T110K) može da poboljša, ili da doprinese (daljem) poboljšanju rastvorljivosti pojedinačnih varijabilnih domena imunoglobulina, kao što su ISVD koji su ovde generalno i specifično objavljeni (podaci nisu prikazani).
[0028] Tako, pronalazak se odnosi na varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina (VH domen), kako je definisan putem zahteva, u kome je aminokiselinski ostatak na poziciji 112 (Kabatova numeracija), ostatak lizina (K). Takav varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina takođe se ovde naziva „VH domen iz pronalaska“. VH domen iz pronalaska je pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina, i ovde će se takođe pominjati kao „ISVD iz pronalaska“. Slično tome, VH domen iz pronalaska može biti nanotelo (što je poželjno), i ovde će se takođe pominjati kao „nanotelo iz pronalaska“.
[0029] Generalno, VH domeni iz pronalaska imaju izloženi C-terminalni kraj ili region, i/ili su prisutni u proteinu, polipeptidu, jedinjenju, entitetu ili konstruktu u kome imaju izloženi C-terminalni kraj ili region, i/ili su namenjeni za upotrebu u kojoj imaju izloženi C-terminalni region (na primer, za upotrebu u proteinu, polipeptidu, jedinjenju, entitetu ili konstruktu u kome su namenjeni da formiraju C-terminalni kraj ili region).
[0030] U pronalasku, VH domen iz pronalaska je pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina, što znači varijabilni domen teškog lanca koji može da formira funkcionalno antigen vezujuće mesto bez interakcije sa VL domenom. Na primer, VH domen iz pronalaska može biti nanotelo (uključujući VHH, humanizovani VHH i/ili kamelizovane VH, kao što su kamelizovani humani VH), antitelo sa (pojedinačnim) domenom koji je VH domen ili koji je dobijen od VH domena, ili dAb koje je VH domen ili koje je izvedeno iz VH domena. VH domen iz pronalaska je poželjno nanotelo (npr., VHH domen, humanizovani VHH domen ili kamelizovani VH domen, kao što je kamelizovani humani VH domen).
[0031] Prema specifičnijem aspektu pronalaska, VH domen iz pronalaska ima C-terminalnu sekvencu (pozicije 109 do 113 prema Kabatu) koja je VTVKS (SEQ ID NO:1), ili sekvencu koja se razlikuje po jednoj aminokiselini (npr. na poziciji 109, 110, 111 ili 113) sa sekvencom VTVKS i koja i dalje ima lizin (K) na poziciji 112.
[0032] Takođe, kako je ovde dalje opisano, u jednom posebno poželjnom aspektu pronalaska, VH domen iz pronalaska takođe sadrži C-terminalnu ekstenziju (npr. kako je opisano u WO 12/175741 i/ili u WO 13/024059) na svom C-terminalnom kraju (tj. povezan je sa ostatkom serina na kraju VTVKS- ili sličnog motiva), posebno C-terminalnu ekstenziju koja je kao što je ovde dalje definisano. Međutim, kao što je ovde takođe dalje opisano, takođe je moguće da VTVKS- ili sličan motiv formira C-terminalni kraj VH domena (mada je to obično manje poželjno) ili da je VH domen iz pronalaska vezan na svom C-terminalnom kraju (opciono putem pogodnog linkera) za drugu aminokiselinsku sekvencu, funkcionalni ostatak, domen ili vezujuću jedinicu. Na primer, kada je VH domen iz pronalaska ISVD, VH domen može biti vezan na svom C-terminalnom kraju za drugi ISVD, opciono preko linkera (i pomenuti drugi ISVD onda može biti VH domen iz pronalaska).
[0033] Sve u svemu, kao što je dobro poznato za varijabilni domen imunoglobulina generalno, VH domeni iz pronalaska će sadržati 4 regiona okvira (FW1, FW2, FW3 i FW4) i 3 CDR-a (CDR1, CDR2 i CDR3). Kao kod varijabilnih domena imunoglobulina generalno, sekvenca CDR-a će zavisiti od antigena/mete(a) za koje su uzgajani VH domeni iz pronalaska i/ili su namenjeni da se vežu. Regioni okvira generalno mogu biti bilo koji pogodni regioni okvira za VH domene (iako će pozicija 112 i/ili pozicija 89 biti kao što je ovde dalje opisano). Kako je VH domen iz pronalaska ISVD, VH domen će imati sekvence okvira koje su pogodne za ISVD (opciono povezan sa jednim ili više CDR-a). Na primer, ako je VH domen iz pronalaska nanotelo, regioni okvira će generalno sadržati pogodan broj obeleženih ostataka VHH (za koje je, na primer, data referenca na WO 08/020079 i neke druge patentne prijave podnosioca zahteva/zastupnika koje su ovde navedene).
1
[0034] Tako, na primer, ako je VH domen iz pronalaska nanotelo, pomenuta nanotela iz pronalaska mogu da sadrže jedan ili više „obeleženih ostataka“ koji su karakteristični za VHH/nanotela (npr. na pozicijama 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 i/ili 108; vidite, na primer, Tabele A-3 i A-5 do A-8 iz WO 08/020079); jedan ili više drugih aminokiselinskih ostataka koji mogu biti prisutni u VHH/nanotelima (kao što je jedna ili više humanizujućih supstitucija koje su suštinski poznate za VHH i nanotela; data je, na primer, referenca na pouku iz WO 08/020079; ponovo vidite prethodno pomenute Tabele A-3 i A-5 do A-8) i/ili jedan ili više drugih pogodnih aminokiselinskih ostataka ili supstitucija za VHH/nanotela; ili bilo koju kombinaciju takvih aminokiselinskih ostataka/supstitucija.
[0035] Nanotela iz pronalaska kod kojih je na poziciji 112 K (tj. sa C-terminalnom ekstenzijom ili bez nje) poželjno sadrže aminokiselinu na poziciji 11 koja je izabrana od L (najčešći aminokiselinski ostatak koji se sreće u VHH), E, K, M, S, V,W ili Y; poželjnije od L, E, K, V ili Y, i čak još poželjnije od L, K ili V (gde je V najpoželjniji). Na primer i bez ograničenja, u poređenju sa ostatkom leucina koji se najčešće sreće u VHH, ona mogu da sadrže mutaciju L11K ili L11V. Ona takođe, bez ograničenja, mogu na primer da sadrže mutaciju Q108L (poznatu humanizujuću supstituciju za VHH/nanotela). Drugi aminokiselinski ostaci koji mogu biti prisutni (opet bez ograničenja i na primer, ostali aminokiselinski ostaci koji se u prirodi javljaju na ovoj poziciji u humanim VH ili VHH takođe mogu biti prisutni na tim pozicijama) su, na primer, jedan ili više alanina (A) na poziciji 14 (to je aminokiselinski ostatak koji se veoma često javlja na ovoj poziciji u prirodnim VHH), prolin na poziciji 14 (koji je najčešća aminokiselina na ovoj poziciji u humanim VH domenima), kao i mutacije koje su predložili Harmsen i sar. (konkretno, one koje su predložili Harmsen i sar. na osnovu sekvence VHH4 klase VHH, kao što je V89M ili V89T) i/ili (druge) mutacije na pozicijama koje predlaže Nieba (na primer, na jednoj ili više pozicija 11, 87 i/ili 89, vidite Nieba, strana 437, desna kolona). Druga pogodna mutacija je, na primer, T110K ili T110Q. Takođe: (i) pozicija 41 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 41, i može konkretno biti (ili biti izabrana od) prolina (P), serina (S), treonina (T), alanina (A) ili leucina (L), koji su neki od aminokiselinskih ostataka koji se najčešće sreću na ovoj poziciji kod ljudi ili lama, i može konkretnije biti bilo prolin (P) ili alanin (A); i/ili (ii) Takođe, pozicija 42 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 42 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) glicina (G) ili glutaminske kiseline (E); i/ili (iii) pozicija 87 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-7 iz WO 08/020079 za poziciju 87, i može konkretno biti (ili biti izabrana od) treonina (T) ili alanina (A).
[0036] Prema specifičnijem aspektu pronalaska, VH domen iz pronalaska (koji je kao što je ovde dalje opisano) ima okvir 4 (sekvenca FW4) koji je:
a) jedna od sekvenci FW4 SEQ ID NO: 3 do 5 ili 7 do 11 pomenutih u Tabeli 1 ispod Tabela 1: Sekvence FW4
ili:
b) sekvenca koja ima najviše od tri, poželjno najviše dve različite aminokiseline sa najmanje jednom od sekvenci FW4 SEQ ID NO 3 do 5 ili 7 do 11 u kojima (i) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 112 Kabatove numeracije je K; i u kojima (ii) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 103 Kabatove numeracije je poželjno W ili R, (iii) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 104 Kabatove numeracije je poželjno G; (iv) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 106 Kabatove numeracije je poželjno G; (v) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 107 Kabatove numeracije je poželjno T; (vi) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 108 Kabatove numeracije je poželjno Q ili L (i u humanizovanim nanotelima poželjno L); (vii) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 109 Kabatove numeracije je poželjno V; (viii) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 110 Kabatove numeracije je poželjno T (ili alternativno može biti K ili Q); (ix) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 111 Kabatove numeracije je poželjno V. Tabela 2 u nastavku prikazuje neke neograničavajuće primere aminokiselinskih ostataka koji mogu biti prisutni na različitim pozicijama (numerisani prema Kabatu) takvih sekvenci FW4.
Tabela 2: Primeri aminokiselinskih ostataka koji mogu biti prisutni u sekvencama FW4 VH domena iz pronalaska.
[0037] Poželjno, VH domen iz pronalaska ima okvir 4 (sekvenca FW4) koji je:
a) WGQGTQVTVKS (SEQ ID NO:3); ili
b) sekvenca koja ima najviše tri, poželjno najviše dve različite aminokiseline (kao što je samo jedna različita aminokiselina) sa SEQ ID NO:3 u kojima (i) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 112 Kabatove numeracije je K; i u kojima (ii) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 103 Kabatove numeracije je poželjno W ili R, (iii) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 104 Kabatove numeracije je poželjno
1
G; (iv) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 106 Kabatove numeracije je poželjno G; (v) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 107 Kabatove numeracije je poželjno T; (vi) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 108 Kabatove numeracije je poželjno Q ili L (i u humanizovanim nanotelima poželjno L); (vii) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 109 Kabatove numeracije je poželjno V; (viii) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 110 Kabatove numeracije je poželjno T (ili alternativno može biti K ili Q); (ix) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 111 Kabatove numeracije je poželjno V. Ponovo, Tabela 2 u nastavku prikazuje neke neograničavajuće primere aminokiselinskih ostataka koji mogu biti prisutni na različitim pozicijama (numerisani prema Kabatu) takvih sekvenci FW4.
[0038] Kao što je ovde dalje opisano, prema poželjnom aspektu pronalaska, VH domen iz pronalaska koji sadrži sekvencu FW4 kao što je opisana iznad takođe poželjno sadrži C-terminalnu ekstenziju (kao što je ovde dalje opisana). Međutim, kao što je ovde takođe dalje opisano, takođe je moguće da sekvenca FW4 formira C-terminalni kraj VH domena (mada je to obično manje poželjno) ili da je VH domen iz pronalaska vezan na svom C-terminalnom kraju (opciono putem pogodnog linkera) za drugu aminokiselinsku sekvencu, funkcionalni ostatak, domen ili vezujuću jedinicu. Na primer, kada je VH domen iz pronalaska ISVD, VH domen može biti vezan na svom C-terminalnom kraju za drugi ISVD, opciono preko linkera (i pomenuti drugi ISVD onda može biti VH domen iz pronalaska).
[0039] Kao što je ovde naznačeno, prema poželjnom ali neograničavajućem aspektu pronalaska, VH domeni iz pronalaska sadrže C-terminalnu ekstenziju koja je kao što je opisana u WO 12/175741 i/ili u WO 13/024059, i posebno kao što je opisana u WO 12/175741.
[0040] Tako, prema ovom aspektu, VH domen iz pronalaska je pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina (VH domen) u kome: (i) aminokiselinski ostatak na poziciji 112 (Kabatova numeracija) nije ostatak serina, i ostatak je lizina (K); i (ii) na svom C-terminalnom kraju (tj. vezan za aminokiselinski ostatak na poziciji koja je, ili koja odgovara poziciji 113 prema Kabatovoj numeraciji) je vezan za dodatnu aminokiselinsku sekvencu (tj. „C-terminalnu ekstenziju“) koja sadrži od 1 do 10 (poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5, i poželjno 1, 2 ili 3, i najpoželjnije samo 1 ili 2, kao što je samo 1) aminokiselinskih ostataka koji su svaki nezavisno izabrani od pogodnih aminokiselinskih ostataka, i poželjno koji je svaki nezavisno izabran od prirodnih aminokiselina, i poželjnije svaki nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I) (međutim, kao što se vidi iz podataka prikazanih u WO 12/17574, drugi aminokiselinski ostaci, kao što je serin, prolin, treonin i/ili lizin se takođe mogu koristiti kao deo C-terminalne ekstenzije).
[0041] Konkretno, prema ovom aspektu pronalaska, VH domen iz pronalaska poželjno ima C-terminalnu sekvencu koja je VTVKS(X)n(SEQ ID NO:21) (ili koja je aminokiselinska sekvenca koja, na pozicijama motiva VTVKS, ima jednu različitu aminokiselinu sa sekvencom VTVKS i koja i dalje ima lizin (K) na poziciji 112), u kojoj (i) aminokiselinski ostaci motiva VTVKS (ili motiva nalik na VTVKS) odgovaraju pozicijama 109 do 113 VH domena prema Kabatovoj numeraciji; (ii) n je 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i (iii) svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I).
[0042] Konkretnije, prema ovom aspektu pronalaska, VH domen iz pronalaska može da ima, kao svoju sekvencu FW4, jednu od sekvenci FW4 SEQ ID NO 3 do 5 ili 7 do 11 (ili amino sekvencu koja ima najviše tri, poželjno najviše dve različite aminokiseline sa najmanje jednom od sekvenci FW4 SEQ ID NO 3 do 5 ili 7 do 11, u kojima aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 112 Kabatove numeracije je K), u kojoj je pomenuta sekvenca FW4 povezana, na svom C-terminalnom kraju, sa C-terminalnom ekstenzijom (X)n, u kojoj je n 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I).
[0043] Prema tome, u ovom aspektu pronalaska, VH domen iz pronalaska može da ima, na svom C-terminalnom kraju:
a) jednu od aminokiselinskih sekvenci datih kao SEQ ID NO: 23 do 25 ili 27 do 31 u Tabeli 3;
Tabela 3: Sekvenca FW4 sa C-terminalnom ekstenzijom
1
u kojoj (i) aminokiselinski ostaci sekvenci FW4 koji prethode C-terminalnoj ekstenziji (X)nu SEQ ID NO: 23 do 40 odgovaraju aminokiselinskim pozicijama FW4 VH domena (tj. pozicijama 103 do 113 prema Kabatovoj numeraciji); (ii) n je 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i (iii) svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I); ili
b) aminokiselinsku sekvencu koja ima najviše tri, poželjno najviše dve različite aminokiseline sa najmanje jednom od aminokiselinskih sekvenci SEQ ID NO 23 do 25 ili 27 do 31 (u kojima su pomenute različite aminokiseline na pozicijama koje odgovaraju aminokiselinskim pozicijama FW4 VH domena, tj. pozicijama 103 do 113 prema Kabatovoj numeraciji, zanemarujući bilo koje različite aminokiseline u C-terminalnoi ekstenziji (X)n), u kojoj: (i) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 112 Kabatove numeracije je K; (ii) n je 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i (iii) svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I). Ponovo, nadalje prema karakteristikama (i) do (iii) kako je pomenuto u prethodnoj rečenici, u takvoj aminokiselinskoj sekvenci: (iv) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 103 Kabatove numeracije je poželjno W ili R, (v) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 104 Kabatove numeracije je poželjno
1
G; (vi) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 106 Kabatove numeracije je poželjno G; (v) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 107 Kabatove numeracije je poželjno T; (viii) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 108 Kabatove numeracije je poželjno Q ili L (i u humanizovanim nanotelima poželjno L); (ix) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 109 Kabatove numeracije je poželjno V; (x) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 110 Kabatove numeracije je poželjno T (ili alternativno može biti K ili Q); (xi) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 111 Kabatove numeracije je poželjno V; i ponovo se upućuje na Tabelu 2 za moguće aminokiselinske ostatke koji mogu biti prisutni na svakoj poziciji.
[0044] Poželjno, prema ovom aspektu pronalaska, VH domen iz pronalaska ima, na svom C-terminalnom kraju:
(a) aminokiselinsku sekvencu koja je WGQGTQVTVKS(X)n(SEQ ID NO:23), u kojoj (ii) n je 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i (iii) svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I); ili
b) aminokiselinsku sekvencu koja ima najviše tri, poželjno najviše dve različite aminokiseline sa aminokiselinskom sekvencom WGQGTQVTVKS(X)n(SEQ ID NO:23) (u kojima su pomenute različite aminokiseline na pozicijama koje odgovaraju aminokiselinskim pozicijama FW4 VH domena, tj. pozicijama 103 do 113 prema Kabatovoj numeraciji, zanemarujući bilo koje različite aminokiseline u C-terminalnoi ekstenziji (X)n), u kojoj: (i) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 112 Kabatove numeracije je K; (ii) n je 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i (iii) svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I). Ponovo, na takve aminokiselinske sekvence se poželjno takođe primenjuju karakteristike (vi) do (xi) kao što je opisano u prethodnim odeljcima.
[0045] Takođe, kao što je ovde pomenuto, VH domeni iz pronalaska takođe mogu da sadrže druge aminokiselinske ostatke ili supstitucije koji su suštinski poznati u oblasti VH domena i konkretno za ISVD (i konkretnije za nanotela) na relevantnim pozicijama. Neki neograničavajući primeri mogu biti kao što je ovde pomenuto i, na primer, uključuju jedan ili više od „obeleženih ostataka“ koji su karakteristika VHH/nanotela (uključujući, na primer,
1
leucin (L) na poziciji 11), druge aminokiselinske ostatke koji se prirodno nalaze u VHH (kao što je alanin (A) na poziciji 14), humanizujuće suštinski poznate supstitucije za VHH/nanotela (kao što je Q108L i A14P), jednu ili više mutacija koje predlaže Harmsen (kao što je V89M ili V89T) i/ili na pozicijama koje predlaže Nieba (npr.11, 87 ili 89); ili bilo koju njihovu pogodnu kombinaciju; i/ili, na primer, mutaciju T110K, T110Q ili V89L.
[0046] Kada VH domen iz pronalaska sadrži C-terminalnu ekstenziju (X)n, prema nekim poželjnim ali neograničavajućim primerima takvih ekstenzija, X i n mogu biti sledeći:
(a) n = 1 i X = Ala;
(b) n = 2 i svaki X = Ala;
(c) n = 3 i svaki X = Ala;
(d) n = 2 i najmanje jedan X = Ala (gde je preostali aminokiselinski ostatak (ili ostaci) X nezavisno izabran od bilo koje prirodne aminokiseline, ali je poželjno nezavisno izabran od Val, Leu i/ili Ile);
(e) n = 3 i najmanje jedan X = Ala (gde je preostali aminokiselinski ostatak (ili ostaci) X nezavisno izabran od bilo koje prirodne aminokiseline, ali je poželjno nezavisno izabran od Val, Leu i/ili Ile);
(f) n = 3 i najmanje dva X = Ala (gde je preostali aminokiselinski ostatak (ili ostaci) X nezavisno izabran od bilo koje prirodne aminokiseline, ali je poželjno nezavisno izabran od Val, Leu i/ili Ile);
(g) n = 1 i X = Gly;
(h) n = 2 i svaki X = Gly;
(i) n = 3 i svaki X = Gly;
(j) n = 2 i najmanje jedan X = Gly (gde je preostali aminokiselinski ostatak (ili ostaci) X nezavisno izabran od bilo koje prirodne aminokiseline, ali je poželjno nezavisno izabran od Val, Leu i/ili Ile);
(k) n = 3 i najmanje jedan X = Gly (gde je preostali aminokiselinski ostatak (ili ostaci) X nezavisno izabran od bilo koje prirodne aminokiseline, ali je poželjno nezavisno izabran od Val, Leu i/ili Ile);
(l) n = 3 i najmanje dva X = Gly (gde je preostali aminokiselinski ostatak (ili ostaci) X nezavisno izabran od bilo koje prirodne aminokiseline, ali je poželjno nezavisno izabran od Val, Leu i/ili Ile);
(m) n = 2 i svaki X = Ala ili Gly;
(n) n = 3 i svaki X = Ala ili Gly;
1
(o) n = 3 i najmanje jedan X = Ala ili Gly (gde je preostali aminokiselinski ostatak (ili ostaci) X nezavisno izabran od bilo koje prirodne aminokiseline, ali je poželjno nezavisno izabran od Val, Leu i/ili Ile); ili
(p) n = 3 i najmanje dva X = Ala ili Gly (gde je preostali aminokiselinski ostatak (ili ostaci) X nezavisno izabran od bilo koje prirodne aminokiseline, ali je poželjno nezavisno izabran od Val, Leu i/ili Ile);
gde su aspekti (a), (b), (c), (g), (h), (i), (m) i (n) posebno poželjni, aspekti u kojima je n =1 ili 2 su poželjni i aspekti u kojima je n =1 su posebno poželjni.
[0047] Treba takođe napomenuti da, poželjno, nijedna C-terminalna ekstenzija prisutna u VH domenu iz pronalaska ne sadrži (slobodan) ostatak cisteina (osim ako pomenuti ostatak cisteina nije upotrebljen ili nameravan za dalju funkcionalizaciju, na primer, za pegilovanje).
[0048] Takođe, poželjnosti navedene na stranama 35 do 41 WO 12/175741 za C-terminalne ekstenzije upotrebljenu prema WO 12/175741 (koje su takođe poželjne C-terminalne ekstenzije koje se koriste u VH domenu prema predmetnom pronalasku) takođe se primenjuju na C-terminalne ekstenzije koje se koriste u VH domenima pronalazaka.
[0049] Poželjno, kada VH domen iz pronalaska sadrži C-terminalnu ekstenziju (X)n, n = 1, 2 ili 3, i svaki X je Ala ili Gly. Poželjnije, svaki X je Ala, i n = 1 ili 2, i poželjno 1.
[0050] Kada VH domeni iz pronalaska sadrže C-terminalnu ekstenziju, oni će obično biti prisutni na C-terminalnom kraju (i često ga formiraju) proteina, polipeptida, jedinjenja, konstrukta ili drugog hemijskog entiteta u kome je prisutan. Ponovo, takav protein, polipeptid, jedinjenje, konstrukt ili drugi hemijski entitet može da sadrži jedan ili više drugih VH domena iz pronalaska (tj. ne na C-terminalnom kraju); u takvom slučaju, pomenuti drugi VH domeni iz pronalaska sadrže lizin (K) na poziciji 112 (i da budu kao što je ovde opisano), ali neće sadržati C-terminalnu ekstenziju (umesto toga, mogu biti povezani (opciono preko jednog ili više pogodnih linkera) na svom C-terminusu sa jednom ili više drugih aminokiselinskih sekvenci, funkcionalnih ostataka, vezujućih domena ili vezujućih jedinica prisutnih u proteinu, polipeptidu, jedinjenju, konstruktu ili drugom hemijskom entitetu, kao što je VH domen iz pronalaska sa C-terminalnom ekstenzijom koja je prisutna na C-terminalnom kraju).
1
[0051] Pošto su VH domeni iz pronalaska (i proteini, polipeptidi, jedinjenja, konstrukti i drugi hemijski entiteti koji ga sadrže, kako je ovde dalje opisano) posebno korisni (i namenjeni) za farmaceutske primene (kao što je prevencija, lečenje i/ili dijagnoza bolesti i poremećaja kod humanih ispitanika kojima je to potrebno), oni poželjno imaju veliki stepen homologije sekvenci u svojim regionima okvira sa sekvencama okvira humanih VH domena. Konkretno, VH domeni iz pronalaska poželjno imaju ukupni stepen identičnosti sekvence (određen kao što je ovde dalje opisano, i uzimajući u obzir samo regione okvira a ne CDR-e, i takođe ne uzimajući u obzir supstituciju na poziciji 112 i bilo koju C-terminalnu ekstenziju ako postoji) sa najmanje jednom humanom sekvencom germinativne linije (kao što je DP-47, DP-51 ili DP-29) od najmanje 80%, poželjno najmanje 85%, kao što je 90% ili više. Konkretnije, VH domeni iz pronalaska poželjno imaju ukupni stepen identičnosti sekvence (određen kao što je ovde dalje opisano, i uzimajući u obzir samo regione okvira a ne CDR-e, i takođe ne uzimajući u obzir supstituciju na poziciji 112 i bilo koju C-terminalnu ekstenziju ako postoji) od najmanje 80%, poželjno najmanje 85%, kao što je 90% ili više, sa najmanje jednom od sledećih sekvenci germinativne linije: DP-47, DP-51 i/ili DP-29.
[0052] VH domen iz pronalaska je pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina ili „ISVD“, što znači varijabilni domen teškog lanca koji može da formira funkcionalno antigen vezujuće mesto bez interakcije sa VL domenom. Na primer, VH domen iz pronalaska može biti nanotelo (uključujući VHH, humanizovani VHH i/ili kamelizovane VH, kao što su kamelizovani humani VH), antitelo (sa pojedinačnim domenom) koje je VH domen ili dobijeno od VH domena, ili dAb koje je VH domen ili koje je izvedeno iz VH domena. VH domen iz pronalaska je poželjno nanotelo (i poželjnije, VHH domen, humanizovani VHH domen ili kamelizovani VH domen, kao što je kamelizovani humani VH domen).
[0053] U predmetnoj specifikaciji:
termin „nanotelo“ je kao što je definisano u WO 08/020079 ili WO 09/138519, i tako u specifičnom aspektu generalno označava VHH, humanizovani VHH ili kamelizovani VH (kao što su kamelizovani humani VH) ili generalno VHH sa optimizovanom sekvencom (kao što je, npr., optimizovana hemijska stabilnost i/ili rastvorljivost, maksimalno preklapanje sa poznatim humanim regionima okvira i maksimalna ekspresija). Napominje se da su termini nanotelo ili nanotela registrovani zaštitni znaci kompanije Ablynx N.V. i zato se takođe mogu pominjati kao Nanobody® i/ili Nanobodies®);
2
termin „ISVD“(ili „ISV“) kao što se ovde koristi u svom najširem smislu takođe uključuje „biološke agense na bazi ISVD“, i kada je ISVD nanotelo, „biološke agense na bazi nanotela“. „Biološki agens na bazi ISVD“ je ovde definisan kao protein, polipeptid ili drugi biološki lek koji sadrži ili se suštinski sastoji od najmanje jednog (kao što je jedan, dva ili tri) ISVD. Slično tome, „biološki agens na bazi nanotela“ je ovde definisan kao protein, polipeptid ili drugi biološki lek koji sadrži ili se suštinski sastoji od najmanje jednog (kao što je jedan, dva ili tri) nanotela. Kao kod termina „ISVD“, kad god se koristi termin „biološki agens na bazi ISVD“, treba shvatiti da je takav biološki agens na bazi ISVD poželjno biološki agens na bazi nanotela. U okviru konteksta predmetnog pronalaska, „biološki agens na bazi ISVD“ i „biološki agens na bazi nanotela“ može, na primer, biti jednovalentan, dvovalentan (ili polivalentan), bispecifičan (ili multispecifičan) ili biparatopan (ili poliparatopan) konstrukt ISVD, odnosno konstrukt nanotela. Takođe, svi biološki agensi na bazi ISVD i biološki agensi na bazi nanotela mogu, na primer, pored jednog ili više (kao što je jedan, dva ili tri) ISVD ili nanotela, mogu opciono dalje da sadrže jedan ili više (kao što je jedan ili dva) drugih ostalih terapeutskih funkcionalnih ostataka i/ili jedan ili više (kao što je jedan ili dva) drugih funkcionalnih ostataka koji utiču na farmakokinetička ili farmakodinamička svojstva bioloških agenasa na bazi ISVD ili na bazi nanotela (kao što je njegov poluživot). Pogodni primeri za takve ostale terapeutske ili druge funkcionalne ostatke biće jasni stručnjaku, i, na primer, generalno mogu da uključuju svaki terapeutski aktivan protein, polipeptid ili drugi vezujući domen ili vezujuću jedinicu, kao i, na primer, modifikacije kao što su one opisane na stranama 149 do 152 u WO 09/138159. Biološki agensi na bazi ISVD i biološki agens na bazi nanotela je poželjno terapeutsko sredstvo ili je namenjen za upotrebu kao terapeutsko sredstvo (što uključuje profilaksu i dijagnozu) i u tu svrhu poželjno sadrži najmanje jedan ISVD za terapeutski relevantnu metu (kao što je, na primer, RANK-L, vWF, IgE, RSV, CXCR4, IL-23 ili drugi interleukini, itd.). Za neke specifične ali neograničavajuće primere za takve biološke agense na bazi ISVD ili biološke agense na bazi nanotela, upućuje se na primere 8 do 18, i takođe, na primer, na različite primene od strane kompanije Ablynx N.V. (kao što je, na primer i bez ograničenja, WO 2004/062551, WO 2006/122825, WO 2008/020079 i WO 2009/068627), kao na primer (i bez ograničenja) na primene kao što je WO 06/038027, WO 06/059108, WO 07/063308, WO 07/063311, WO 07/066016 i WO 07/085814. Takođe, kao što je ovde dalje opisano, ISVD ili nanotelo kao što je ovde opisano može biti usmereno na protein iz (humanog) seruma kao što je albumin iz (humanog) seruma, i takav ISVD ili nanotelo može takođe naći terapeutsku primenu, konkretno u i/ili za produženje poluživota terapeutskih funkcionalnih ostataka (kao u ovde opisanim biološkim agensima na bazi ISV ili za njih). Na primer, upućuje se na WO 2004/041865, WO 2006/122787 i WO 2012/175400, koji generalno opisuju upotrebu nanotela koja vezuju albumin iz seruma radi produžetka poluživota. Takođe, u predmetnoj specifikaciji, osim ako ovde izričito nije rečeno drugačije, svi ovde pomenuti termini imaju značenje dato u WO 09/138519 (ili u prethodnom stanju tehnike navedeno u WO 09/138519) ili WO 08/020079 (ili u prethodnom stanju tehnike navedeno u WO 08/020079). Takođe, kada postupak ili tehnika nisu ovde posebno opisani, mogu se izvesti kao što je opisano u WO 09/138519 (ili u prethodnom stanju tehnike navedeno u WO 09/138519) ili WO 08/020079 (ili u prethodnom stanju tehnike navedeno u WO 08/020079).
[0054] Takođe, kada se koriste u predmetnoj specifikaciji ili zahtevima, sledeći termini imaju isto značenje kao što je dato na stranama 62-75 u WO 09/138519, i/ili gde je primenljivo mogu da se odrede na način koji je tu opisan: „agonist“, „antagonist“, „inverzni agonist“, „nepolarni, nenaelektrisani aminokiselinski ostatak“, „polarni, nenaelektrisani aminokiselinski ostatak“, „polarni, naelektrisani aminokiselinski ostatak“, „identičnost sekvence“, „potpuno isti“ i „različita aminokiselina“ (kada se govori o poređenju sekvenci dve aminokiselinske sekvence), „(u) suštinski izolovan(om obliku)“, „domen“, „vezujući domen“, „antigenska determinanta“, „epitop“, „na“ ili „usmeren na (antigen) “, „specifičnost“ i „poluživot“. Pored toga, termini „modulišući“ i „modulisati“, „mesto interakcije“, „specifično za“, „unakrsna blokada“, „unakrsno blokiran“ i „unakrsno blokiranje“ i „suštinski nezavisno od pH“ su kao što je definisano (i/ili može da se odredi kao što je opisano) na stranama 74-79 u WO 10/130832 podnosioca prijave. Takođe, kada se odnosi na konstrukt, jedinjenje, protein ili polipeptid iz pronalaska, termini kao „jednovalentni“, „dvovalentni“ (ili „polivalentni“), „bispecifični“ (ili „multispecifični“) i „biparatopni“ (ili „multiparatopni“) mogu imati značenje dato u WO 09/138.519, WO 10/130832 ili WO 08/020079.
[0055] Termin „poluživot“ kao što se ovde koristi u odnosu na ISVD, nanotelo, biološki agens na bazi ISVD i biološki agens na bazi nanotela ili bilo koja druga aminokiselinska sekvenca, jedinjenje ili polipeptid na koje se ovde upućuje može generalno biti definisano kao što je opisano u paragrafu o) na strani 57 WO 08/020079 i kao što je ovde opisano odnosi se na vreme potrebno da koncentracija u serumu aminokiselinske sekvence, jedinjenja ili polipeptida bude smanjena za 50% in vivo, na primer, usled degradacije sekvence ili jedinjenja i/ili klirensa ili sekvestracije sekvence ili jedinjenja prirodnim mehanizmima. Poluživot aminokiselinske sekvence, jedinjenja ili polipeptida iz pronalaska in vivo može biti određen na bilo koji suštinski poznat način, kao što je farmakokinetička analiza. Pogodne tehnike će biti jasne stručnoj osobi, i mogu, na primer, generalno biti kao što je opisano u odeljku o) na strani 57 WO 08/020079. Kao što je takođe opisano u odeljku o) na strani 57 WO 08/020079, poluživot može biti izražen koristeći parametre kao što je t1/2-alfa, t1/2-beta i površina ispod krive (AUC). U ovom pogledu treba napomenuti da se termin „poluživot“ kao što se ovde koristi posebno odnosi na t1/2-beta ili terminalni poluživot (u kome se t1/2-alfa i/ili AUC ili oba mogu izostaviti iz razmatranja). Na primer, upućuje se na Eksperimentalni deo u nastavku, kao i na standardne priručnike, kao što je Kenneth, A i sar: Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists, i Peters i sar, Pharmacokinete analysis: A Practical Approach (1996). Takođe, upućuje se na „Pharmacokinetics“, M Gibaldi i D Perron, izdavač Marcel Dekker, 2. prer. izdanje (1982). Slično, termini „produženje poluživota“ i „produženi poluživot“ su takođe kao što je definisano u odeljku o) na strani 57 WO 08/020079, i posebno se odnose na povećanje t1/2-beta, sa povećanjem ili bez povećanja t1/2-alfa i/ili AUC ili oba.
[0056] Kada termin ovde nije specifični definisan, on ima svoje uobičajeno značenje u struci, koje će biti jasno stručnjaku. Na primer, upućuje se na standardne priručnike, kao što je Sambrook i sar, „Molecular Cloning: A Laboratory Manual“ (2. izd.), vol. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989); F. Ausubel i sar, izd., „Current protocols in molecular biology“, Green Publishing i Wiley Interscience, New York (1987); Lewin, „Genes II“, John Wiley & Sons, New York, N.Y., (1985); Old i sar., „Principles of Gene Manipulation: An Introduction to Genetic Engineering“, 2. izdanje, University of California Press, Berkeley, CA (1981); Roitt i sar., „Immunology“ (6. izd.) Mosby/Elsevier, Edinburgh (2001); Roitt i sar., Roitt's Essential Immunology, 10. izd. Blackwell Publishing, UK (2001); i Janeway i sar., „Immunobiology“ (6. izd.), Garland Science Publishing/Churchill Livingstone, New York (2005), kao i opšte osnove koje su u njima navedene.
[0057] Takođe, kao što je ovde već napomenuto, aminokiselinski ostaci nanotela su nabrojani prema opštoj numeraciji za VH domene koju su dali Kabat i sar. („Sequence of proteins of immunological interest“, US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publication No.91), kao što je primenjeno na VHH domene kamelida u članku Riechmann i Muyldermans, J. Immunol. Methods 2000 Jun 23; 240 (1-2): 185-195; ili je ovde pomenuto. Prema ovoj numeraciji, FR1 nanotela sadrži aminokiselinske ostatke na pozicijama 1-30, CDR1 nanotela sadrži aminokiselinske ostatke na pozicijama 31-35, FR2 nanotela sadrži aminokiselinske ostatke na pozicijama 36-49, CDR2 nanotela sadrži aminokiselinske ostatke na pozicijama 50-65, FR3 nanotela sadrži aminokiselinske ostatke na pozicijama 66-94, CDR3 nanotela sadrži
2
aminokiselinske ostatke na pozicijama 95-102, i FR4 nanotela sadrži aminokiselinske ostatke na pozicijama 103-113. [U ovom pogledu, treba napomenuti da, kao što je dobro poznato u struci za VH domene i VHH domene, ukupan broj aminokiselinskih ostataka u svakom CDR može da varira i može da se ne poklapa sa ukupnim brojem aminokiselinskih ostataka naznačenih Kabatovom numeracijom (to jest, može da se desi da jedna ili više pozicija prema Kabatovoj numeraciji nije popunjena u stvarnoj sekvenci, ili stvarna sekvenca može da sadrži više aminokiselinskih ostataka od broja dozvoljenog prema Kabatovoj numeraciji). To znači da, generalno, numeracija prema Kabatu može, ali ne mora da odgovara stvarnoj numeraciji aminokiselinskih ostataka u stvarnoj sekvenci. Međutim, generalno se može reći da, prema Kabatovoj numeraciji i nezavisno od broja aminokiselinskih ostataka u CDR-ima, pozicija 1 prema Kabatovoj numeraciji odgovara početku FR1 i obrnuto, pozicija 36 prema Kabatovoj numeraciji odgovara početku FR2 i obrnuto, pozicija 66 prema Kabatovoj numeraciji odgovara početku FR3 i obrnuto, i pozicija 103 prema Kabatovoj numeraciji odgovara početku FR4 i obrnuto.].
[0058] Alternativni postupci za numeraciju aminokiselinskih ostataka VH domena, koji se takođe mogu primeniti na analogan način na VHH domene kamelida i na nanotela, su postupak koji su opisali Chothia i sar. (Nature 342, 877-883 (1989)), takozvana „AbM definicija“, i takozvana „kontaktna definicija“. Međutim, u predmetnom opisu, aspektima i slikama, biće korišćena numeracija prema Kabatu kao što su je na VHH domene primenili Riechmann i Muyldermans, ako nije drugačije naznačeno.
[0059] Takođe treba napomenuti da su slike, sve liste sekvenci i Eksperimentalni deo/Primeri dati samo kao dodatna ilustracija pronalaska, i ne treba ih interpretirati ili tumačiti kao da ograničavaju obim pronalaska i/ili priključenih zahteva ni na koji način, osim ako ovde izričito nije drugačije naznačeno.
[0060] VH domeni iz pronalaska mogu biti usmereni na bilo koji pogodan ili željeni antigen ili metu, uključujući svaku farmaceutski i/ili terapeutski relevantnu metu, kao što je ovde opisana.
[0061] Prema jednom specifičnom aspektu pronalaska, VH domeni iz pronalaska su usmereni na protein iz seruma, i konkretno protein iz humanog seruma. Prema poželjnom aspektu, kada je VH domen iz pronalaska usmeren na protein iz seruma, on je usmeren na albumin iz seruma, i posebno albumin iz humanog seruma. Tako, pronalazak se takođe odnosi na VH domen iz pronalaska (kao što je ovde definisan, uključujući poželjnosti definisane za VH domene iz pronalaska) koji mogu specifično da se vežu za protein iz seruma, konkretno protein iz humanog seruma, i koji može poželjno specifično da se veže za albumin iz seruma, i poželjnije albumin iz humanog seruma. Takođe, takav VH domen je ISVD sa teškim lancem (kao što je ovde opisan) i poželjnije nanotelo.
[0062] Na primer, VH domen iz pronalaska na albumin iz seruma može biti jedno od nanotela na albumin iz (humanog) seruma koja su opisana u WO 2004/041865, i posebno u WO 2006/122787 i WO 2012/175400 (sve su prijave podnosioca zahteva/zastupnika) u kome je aminokiselina na poziciji 112 supstituisana sa K, i koje opciono ima C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisana (i takođe, na primer, može takođe da sadrži jedan ili više drugih ovde pomenutih specifičnih aminokiselinskih ostataka/supstitucija, kao što je 11L, L11V, L11K, 14A, P14A, 14P, A14P, 89T, V89T, 89L, V89L, 108L, Q108L, 110Q, T110Q, 110K i/ili T110K; mada obično prisustvo dodatne supstitucije na poziciji 110 često neće biti potrebno kada je na poziciji 112 K, kada je pozicija 110 poželjno T). Nadalje, predviđeno je da predmetni pronalazak takođe može da se primeni na druge ISVD sa teškim lancem koji vezuju albumin iz seruma, kao što su ona opisana u WO 03/035694, WO 04/003019, WO 05/118642, WO 06/059106, WO 08/096158, WO 09/121804WO 10/108937 ili US 2013/0129727, tj. pogodnim uvođenjem supstitucija definisanih zahtevima (tj. najmanje S112K, i opciono jedne ili više drugih ovde opisanih aminokiselinskih ostataka/supstitucija, kao što je L11V) i opciono (i obično poželjno, kao što je ovde naznačeno) dodavanje C-terminalne ekstenzije (kao što je ovde dalje opisano).
[0063] Neki poželjni ali neograničavajući primeri takvih nanotela koja vezuju albumin iz seruma iz pronalaska su humanizovane varijante aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 52 iz WO 2006/122787 (nazvana „Alb-1“ u WO 2006/122787), u kojima je aminokiselina na poziciji 112 supstituisana od strane K (i koja opciono ima C-terminalnu ekstenziju, kao što je ovde opisana), kao što su humanizovane varijante Alb-1 koje su date u SEQ ID NO: 57 do 64 u WO 2006/122787 (u svakom slučaju, sa supstitucijom S112K, i opciono sa C-terminalnom ekstenzijom) ili humanizovane varijante Alb-1 koje su date u SEQ ID NO 3 do 11 u WO 2012/175400 (opet, u svakom slučaju, sa supstitucijom S112K), od kojih SEQ ID NO 3, 4 i 5 mogu opciono da sadrže C-terminalnu ekstenziju, i SEQ ID NO 6 do 11 već sadrže C-terminalnu ekstenziju (i opet takve varijante mogu da sadrže jedan ili više drugih ovde pomenutih specifičnih aminokiselinskih ostataka/supstitucija, kao što je 11L, L11V, L11K, 14A, P14A, 14P, A14P, 89T, V89T, 89L, V89L, 108L, Q108L, 110Q, T110Q, 110K i/ili
2
T110K; mada obično prisustvo dodatne supstitucije na poziciji 110 često neće biti potrebno kada je na poziciji 112 K, u kom slučaju je pozicija 110 poželjno T). Takođe: (i) pozicija 41 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 41, i može konkretno biti (ili biti izabrana od) prolina (P), serina (S), treonina (T), alanina (A) ili leucina (L), koji su neki od aminokiselinskih ostataka koji se najčešće sreću na ovoj poziciji kod ljudi ili lama, i može konkretnije biti bilo prolin (P) ili alanin (A); i/ili (ii) pozicija 42 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 42 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) glicina (G) ili glutaminske kiseline (E); i/ili (iii) pozicija 87 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-7 iz WO 08/020079 za poziciju 87, i može konkretno biti (ili biti izabrana od) treonina (T) ili alanina (A).
[0064] Tako, u daljem aspektu, pronalazak se odnosi na nanotelo iz pronalaska (kao što je definisano zahtevima) koje može da se veže (i posebno da se specifično veže) za albumin iz seruma (i posebno albumin iz humanog seruma) u kome:
CDR1 je aminokiselinska sekvenca SFGMS (SEQ ID NO:41);
CDR2 je aminokiselinska sekvenca SISGSGSDTLYADSVKG (SEQ ID NO:42);
CDR3 je aminokiselinska sekvenca GGSLSR (SEQ ID NO:43);
aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
i koje opciono sadrži na svom na C-terminalnom kraju C-terminalnu ekstenziju (X)nu kojoj je n 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I) (ponovo, takva C-terminalna ekstenzija je poželjno kao što je ovde opisana u nastavku, i ponovo takvo nanotelo može takođe, na primer, takođe da sadrži jedan ili više drugih ovde pomenutih specifičnih aminokiselinskih ostataka/supstitucija, kao što je 11L, L11V. L11K, 14A, P14A, 14P, A14P, 89T, V89T, 89L, V89L, 108L, Q108L, 110Q, T110Q, 110K i/ili T110K; mada obično prisustvo dodatne supstitucije na poziciji 110 često neće biti potrebno kada je na poziciji 112 K, u kom slučaju je pozicija 110 poželjno T). Takođe: (i) pozicija 41 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 41, i može konkretno biti (ili biti izabrana od) prolina (P), serina (S), treonina (T), alanina (A) ili leucina (L), koji su neki
2
od aminokiselinskih ostataka koji se najčešće sreću na ovoj poziciji kod ljudi ili lama, i može konkretnije biti bilo prolin (P) ili alanin (A); i/ili (ii) pozicija 42 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 42 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) glicina (G) ili glutaminske kiseline (E); i/ili (iii) pozicija 87 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-7 iz WO 08/020079 za poziciju 87, i može konkretno biti (ili biti izabrana od) treonina (T) ili alanina (A).
[0065] U konkretnom aspektu, pronalazak se odnosi na nanotelo iz pronalaska (kao što je definisano zahtevima) koje može da se veže (i posebno da se specifično veže) za albumin iz seruma (i posebno albumin iz humanog seruma) koje je humanizovana varijanta SEQ ID NO: 52 iz WO 2006/122787 u kome:
CDR1 je aminokiselinska sekvenca SFGMS (SEQ ID NO:41);
CDR2 je aminokiselinska sekvenca SISGSGSDTLYADSVKG (SEQ ID NO:42);
CDR3 je aminokiselinska sekvenca GGSLSR (SEQ ID NO:43);
aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K i koje opciono sadrži na svom C-terminalnom kraju C-terminalnu ekstenziju (X)nu kojoj je n 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I) (ponovo, takva C-terminalna ekstenzija je poželjno kao što je ovde opisana u nastavku, i ponovo takvo nanotelo može takođe, na primer, takođe da sadrži jedan ili više drugih ovde pomenutih specifičnih aminokiselinskih ostataka/supstitucija, kao što je 11L, L11V, L11K, 14A, P14A, 14P, A14P, 89T, V89T, 89L, V89L, 108L, Q108L, 110Q, T110Q, 110K i/ili T110K; mada obično prisustvo dodatne supstitucije na poziciji 110 često neće biti potrebno kada je na poziciji 112 K, u kom slučaju je pozicija 110 poželjno T). Takođe: (i) pozicija 41 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 41, i može konkretno biti (ili biti izabrana od) prolina (P), serina (S), treonina (T), alanina (A) ili leucina (L), koji su neki od aminokiselinskih ostataka koji se najčešće sreću na ovoj poziciji kod ljudi ili lama, i može konkretnije biti bilo prolin (P) ili alanin (A); i/ili (ii) pozicija 42 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 42 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) glicina (G) ili glutaminske
2
kiseline (E); i/ili (iii) pozicija 87 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-7 iz WO 08/020079 za poziciju 87, i može konkretno biti (ili biti izabrana od) treonina (T) ili alanina (A).
[0066] U konkretnom aspektu, pronalazak se odnosi na nanotelo iz pronalaska (kao što je definisano putem zahteva) koje može da se veže (i posebno da se specifično veže) za albumin iz seruma (i posebno albumin iz humanog seruma) koji ima najmanje 80%, poželjno najmanje 85%, poželjnije najmanje 90%, recimo najmanje 95% identičnosti sekvence sa najmanje jednim od Alb-1 (SEQ ID NO: 52 iz WO 2006/122787), Alb-8 (ovde SEQ ID NO: 46) i/ili Alb-23 (ovde SEQ ID NO:61) (kada se posmatraju i sekvence okvira i CDR-i, ali ne i C-terminalna ekstenzija), u kojem je aminokiselinski ostatak na poziciji 112 K, i koje opciono sadrži na svom C-terminalnom kraju C-terminalnu ekstenziju (X)n gde je n 1 do 10, poželjno 1 do 5, recimo 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, recimo 1); i svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, a poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I) (ponovo, takva C-terminalna ekstenzija je poželjno kao što je ovde opisana u nastavku, i ponovo takvo nanotelo može takođe, na primer, takođe da sadrži jedan ili više drugih ovde pomenutih specifičnih aminokiselinskih ostataka/supstitucija, kao što je 11L, L11V, L11K, 14A, P14A, 14P, A14P, 89T, V89T, 89L, V89L, 108L, Q108L, 110Q, T110Q, 110K i/ili T110K; mada obično prisustvo jedne dodatne supstitucije na poziciji 110 često neće biti potrebno kada je na poziciji 112 K, u kom slučaju je pozicija 110 poželjno T). Takođe: (i) pozicija 41 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 41, i može konkretno biti (ili biti izabrana od) prolina (P), serina (S), treonina (T), alanina (A) ili leucina (L), koji su neki od aminokiselinskih ostataka koji se najčešće sreću na ovoj poziciji kod ljudi ili lama, i može konkretnije biti bilo prolin (P) ili alanin (A); i/ili (ii) pozicija 42 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 42 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) glicina (G) ili glutaminske kiseline (E); i/ili (iii) pozicija 87 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-7 iz WO 08/020079 za poziciju 87, i može konkretno biti (ili biti izabrana od) treonina (T) ili alanina (A).
2
[0067] Takvo nanotelo iz pronalaska ponovo je poželjno humanizovana varijanta Alb-1 (ali sa S112K supstitucijom), a poželjnije ima najmanje jedan, konkretno bilo koja dva i više, posebno sva tri CDR1, CDR2 i/ili CDR3 data u SEQ ID NO 41 do 43.
[0068] Prema jednom specifičnom aspektu, svako nanotelo iz pronalaska koje se veže za albumin iz seruma takođe može imati aminokiselinske ostatke koji su karakteristični za Alb-23 i njegove varijante kako je opisano u WO 12/175400 (tj. aminokiselinski motiv GP na pozicijama 44 i 45, aminokiselinski motiv SKN na pozicijama 74 do 76 i poželjno G na poziciji 16 i opciono i R na poziciji 83).
[0069] Neki poželjni, ali neograničavajući primeri nanotela koja su usmerena na albumin iz humanog seruma su dati u tabeli 4 i primeru 20.
2
a.
ru seg ano
hu izin u alb na niere
us skala ona priz aen
do
V
eri i pri uć jvaičaran geo
4:N a
abel T
[0070] U drugom aspektu, pronalazak se odnosi na ISVD, i konkretnije na nanotelo, koje ima: a) sekvencu FW4 koja je jedna od sledećih sekvenci FW4 SEQ ID NO 99 ili 103:
Tabela 5: Sekvence FW4
u kojoj (i) aminokiselinski ostaci sekvenci FW4 koji prethode C-terminalnoj ekstenziji (X)nu SEQ ID NO: 103 do 106 odgovaraju aminokiselinskim pozicijama FW4 VH domena (tj. pozicijama 103 do 113 prema Kabatovoj numeraciji); (ii) n je 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i (iii) svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I); ili
c) aminokiselinsku sekvencu koja ima najviše tri, poželjno najviše dve, različite aminokiseline sa najmanje jednom aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 99 ili 103 (u kojima su pomenute različite aminokiseline na pozicijama koje odgovaraju aminokiselinskim pozicijama FW4 VH domena, tj. pozicijama 103 do 113 prema Kabatovoj numeraciji, zanemarujući bilo koje različite aminokiseline u C-terminalnoj ekstenziji (X)n) u kojoj: (i) kada je aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 112 Kabatove numeracije K, pomenute različite aminokiseline su na aminokiselinskoj poziciji koja nije 112, i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 VH domena je poželjno izabran od V, T ili L (i najpoželjnije je V); (ii) n je 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i (iii) svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I). Ponovo, nadalje prema karakteristikama (i) do (iii) kako je pomenuto u prethodnoj rečenici, u takvoj aminokiselinskoj sekvenci: (iv) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 103 Kabatove numeracije je poželjno S; (v) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 104 Kabatove numeracije je poželjno S; (vi) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 106 Kabatove numeracije je poželjno G; (vii) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 107 Kabatove numeracije je poželjno T; (viii) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 108 Kabatove numeracije je poželjno Q ili L (i u humanizovanim nanotelima poželjno L); (ix) aminokiselinski ostatak na poziciji koja odgovara poziciji 109 Kabatove numeracije je poželjno V; i ponovo se upućuje na Tabelu 2 za moguće aminokiselinske ostatke koji mogu biti prisutni na svakoj poziciji.
[0071] Ponovo, u takvim VH domenima iz pronalaska: (a) aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je jedan od L, V ili K (i poželjno V); aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno jedan od A ili P. Takođe, takav VH domen iz pronalaska je ISVD, i poželjnije nanotelo; i ponovo može biti usmeren na albumin iz humanog seruma (u tom slučaju, on poželjno ima CDR1, CDR2, odnosno CDR3, koji odgovaraju sekvencama SEQ ID NO 41, 42, odnosno 43). Takođe, kada su pomenuti VH domeni ISVD ili nanotela na albumin iz humanog seruma, oni dalje mogu biti kao što su ovde opisani za nanotela iz pronalaska koja su usmerena na albumin iz humanog seruma.
[0072] VH domeni iz pronalaska koji su usmereni na albumin iz seruma mogu se koristiti da se produži poluživot terapeutski aktivnih jedinjenja, (poli)peptida, proteina, vezujućih domena, vezujućih jedinica ili drugih terapeutski aktivnih entiteta ili funkcionalnih ostataka, suštinski na način opisan u WO 2004/041865, WO 2006/122787 i/ili WO 2012/175400 za upotrebu nanotela koja vezuju albumin iz seruma koja su opisana u pomenutim referencama (tj. pogodnim povezivanjem ISVD koji vezuju albumin iz seruma sa proteinom, polipeptidom, jedinjenjem ili drugim entitetima opciono putem pogodnog linkera. Na primer, WO 12/175400 na stranama 12 i 13 navodi neke primere načina na koji mogu biti konstruisani pogodni fuzioni proteini).
[0073] U daljem aspektu, pronalazak se odnosi na VH domen koji je ISVD, i konkretnije VH domen koji je nanotelo, u kome:
• aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je V; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je jedan od A ili P; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je jedan od A ili P; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je L; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je jedan od Q ili L; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je jedan od K;
i u kome pomenuti VH domen opciono sadrži C-terminalnu ekstenziju (X)n, u kojoj je n 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I) (ta C-terminalna ekstenzija je poželjno kao što je ovde opisana u nastavku). Takođe: (i) pozicija 42 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 42, i može konkretno biti (ili biti izabrana od) glicina (G) ili glutaminske kiseline (E); i/ili (ii) pozicija 87 može, na primer biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-7 u WO 08/020079 za poziciju 87 i može konkretno biti (ili biti izabrana od)
treonina (T) ili alanina (A). Ponovo, kao i kod drugih VH domena koji su ovde opisani takav VH domen može biti usmeren na bilo koji pogodni cilj (i konkretno na terapeutski relevantan cilj). Prema jednom specifičnom aspektu, takav VH domen je usmeren na albumin iz seruma.
[0074] U daljem aspektu, pronalazak se odnosi na VH domen koji je ISVD, i konkretnije na VH domen koji je nanotelo, u kome:
• aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je jedan od L, V ili K; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je jedan od A ili P; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je jedan od A ili P; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je jedan od T, V ili L; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je jedan od Q ili L; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
u kome (i) aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je T; i/ili (ii) aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je L i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od K ili Q; i (iii) u svakom od slučajeva (i) do (ii), aminokiselina na poziciji 11 je poželjno V; i pri čemu pomenuti VH domen opciono sadrži C-terminalnu ekstenziju (X)n
u kojoj je n 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I) (ta C-terminalna ekstenzija je poželjno kao što je ovde opisana u nastavku). Takođe: (i) pozicija 42 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 42 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) glicina (G) ili glutaminske kiseline (E); i/ili (iii) pozicija 87 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-7 iz WO 08/020079 za poziciju 87, i može konkretno biti (ili biti izabrana od) treonina (T) ili alanina (A).
[0075] U daljem aspektu, pronalazak se odnosi na VH domen koji je ISVD, i konkretnije VH domen koji je nanotelo, u kome:
• aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je jedan od L, V ili K; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je jedan od A ili P; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je jedan od A ili P; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je jedan od T, V ili L; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je jedan od Q ili L; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q; i
• aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
u kome (i) aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K, aminokiselina na poziciji 89 je jedna od T, V ili L (i poželjno je V), i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q (i poželjno je T); i/ili (ii) aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je T, i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K, i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q (i poželjno je T); i/ili (iii) aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je L i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od K ili Q, i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K; i (iv) u svakom od slučajeva (i) do (iii), aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno V; i u kome VH domen opciono sadrži C-terminalnu ekstenziju (X)nu kojoj je n 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I) (ta C-terminalna ekstenzija je poželjno kao što je ovde opisana u nastavku). Takođe: (i) pozicija 42 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 42 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) glicina (G) ili glutaminske kiseline (E); i/ili (ii) pozicija 87 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-7 iz WO 08/020079 za poziciju 87 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) treonina (T) ili alanina (A).
[0076] U daljem aspektu, pronalazak se odnosi na VH domen koji je ISVD, i konkretnije VH domen koji je nanotelo, u kome:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je jedan od L, V ili K; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je jedan od A ili P; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je jedan od A ili P; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je jedan od T, V ili L; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je jedan od Q ili L; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
u kome (i) aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K, aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je jedan od T, V ili L (i poželjno je V), i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q (i poželjno je T); ili (ii) aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je T, i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K, i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q (i poželjno je T); ili (iii) aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je L, i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od K ili Q i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K; i (iv) u svakom od slučajeva (i) do (iii), aminokiselina na poziciji 11 je poželjno V; i
u kome pomenuti VH domen opciono sadrži C-terminalnu ekstenziju (X)n, u kojoj je n 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I) (ta C-terminalna ekstenzija je poželjno kao što je ovde opisana u nastavku). Takođe: (i) pozicija 42 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 42 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) glicina (G) ili glutaminske kiseline (E); i/ili (ii) pozicija 87 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-7 iz WO 08/020079 za poziciju 87 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) treonina (T) ili alanina (A).
[0077] U daljem aspektu, pronalazak se odnosi na VH domen koji je ISVD, i konkretnije VH domen koji je nanotelo, u kome:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je jedan od L, V ili K; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je jedan od A ili P; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je jedan od A ili P; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je jedan od T, V ili L; i
4
aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je jedan od Q ili L; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
u kome aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K, aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je V, i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je T; i aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno V; i u kome pomenuti VH domen opciono sadrži C-terminalnu ekstenziju (X)n, u kojoj je n 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I) (ta C-terminalna ekstenzija je poželjno kao što je ovde opisana u nastavku). Takođe: (i) pozicija 42 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 42 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) glicina (G) ili glutaminske kiseline (E); i/ili (ii) pozicija 87 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-7 iz WO 08/020079 za poziciju 87 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) treonina (T) ili alanina (A).
[0078] U daljem aspektu, pronalazak se odnosi na VH domen koji je ISVD, i konkretnije VH domen koji je nanotelo, u kome:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je jedan od L, V ili K; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je jedan od A ili P; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je jedan od A ili P; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je jedan od T, V ili L; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je jedan od Q ili L; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
u kome (i) aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je T; i/ili (ii) aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je L, i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od K ili Q, i (iii) u svakom od slučajeva (i) do (ii), aminokiselina na poziciji 11 je poželjno V; i
u kome pomenuti VH domen sadrži C-terminalnu ekstenziju (X)n, u kojoj je n 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I) (ta C-terminalna ekstenzija je poželjno kao što je ovde opisana u nastavku). Takođe: (i) pozicija 42 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 42 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) glicina (G) ili glutaminske kiseline (E); i/ili (ii) pozicija 87 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-7 iz WO 08/020079 za poziciju 87 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) treonina (T) ili alanina (A).
[0079] U daljem aspektu, pronalazak se odnosi na VH domen koji je ISVD, i konkretnije VH domen koji je nanotelo, u kome:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je jedan od L, V ili K; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je jedan od A ili P; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je jedan od A ili P; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je jedan od T, V ili L; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je jedan od Q ili L; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
u kome (i) aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K, aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je jedan od T, V ili L (i poželjno je V), i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q (i poželjno je T); i/ili (ii) aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je T, i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K, i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q (i poželjno je T); i/ili (iii) aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je L i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od K ili Q, i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K; i (iv) u svakom od slučajeva (i) do (iii), aminokiselina na poziciji 11 je poželjno V; i
u kome pomenuti VH domen sadrži C-terminalnu ekstenziju (X)n, u kojoj je n 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I) (ta C-terminalna ekstenzija je poželjno kao što je ovde opisana u nastavku). Takođe: (i) pozicija 42 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 42 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) glicina (G) ili glutaminske kiseline (E); i/ili (ii) pozicija 87 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-7 iz WO 08/020079 za poziciju 87 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) treonina (T) ili alanina (A).
[0080] U daljem aspektu, pronalazak se odnosi na VH domen koji je ISVD, i konkretnije VH domen koji je nanotelo, u kome:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je jedan od L, V ili K; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je jedan od A ili P; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je jedan od A ili P; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je jedan od T, V ili L; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je jedan od Q ili L; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
u kome (i) aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K, aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je jedan od T, V ili L (i poželjno je V), i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q (i poželjno je T); ili (ii) aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je T, i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K, i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q (i poželjno je T); ili (iii) aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je L, i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od K ili Q, i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K; i (iv) u svakom od slučajeva (i) do (iii), aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno V; i u kome pomenuti VH domen opciono sadrži C-terminalnu ekstenziju (X)n, u kojoj je n 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I) (ta C-terminalna ekstenzija je poželjno kao što je ovde opisana u nastavku). Takođe: (i) pozicija 42 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 42 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) glicina (G) ili glutaminske kiseline (E); i/ili (ii) pozicija 87 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-7 iz WO 08/020079 za poziciju 87 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) treonina (T) ili alanina (A).
[0081] U daljem aspektu, pronalazak se odnosi na VH domen koji je ISVD, i konkretnije VH domen koji je nanotelo, u kome:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je jedan od L, V ili K; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je jedan od A ili P; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je jedan od A ili P; i
4
aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je jedan od T, V ili L; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je jedan od Q ili L; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
u kome (i) aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K, aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je V, i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je T; i aminokiselina na poziciji 11 je poželjno V; i
u kome pomenuti VH domen sadrži C-terminalnu ekstenziju (X)n, u kojoj je n 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I) (ta C-terminalna ekstenzija je poželjno kao što je ovde opisana u nastavku). Takođe: (i) pozicija 42 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 42 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) glicina (G) ili glutaminske kiseline (E); i/ili (ii) pozicija 87 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-7 iz WO 08/020079 za poziciju 87 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) treonina (T) ili alanina (A).
[0082] Ponovo, VH domeni iz pronalaska kao što su definisani putem zahteva, aminokiselinski ostaci koji ovde nisu izričito definisani mogu biti bilo koji aminokiselinski ostatak koji je pogodan na takvoj poziciji za VH domene, i posebno za ISVD, i konkretnije za nanotela (uključujući humanizovane VHH domene). Ponovo se navodi ovde citirano stanje tehnike, kao što su, na primer, Tabele A-3 i A-5 do A-8 iz WO 08/020079. Poželjno, u svakom slučaju, aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je L ili V, i poželjnije je V. Takođe: (i) pozicija 41 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 41, i može konkretno biti (ili biti izabrana od) prolina (P), serina (S), treonina (T), alanina (A) ili leucina (L), koji su neki od aminokiselinskih ostataka koji se najčešće sreću na ovoj poziciji kod ljudi ili lama, i može konkretnije biti bilo prolin (P) ili alanin (A); i/ili (ii) pozicija 42 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-6 iz WO 08/020079 za poziciju 42 i može konkretno biti (ili biti izabrana od) glicina (G) ili glutaminske kiseline (E); i/ili (iii) pozicija 87 može, na primer, biti jedan od aminokiselinskih ostataka (tj. humani VH3 ostaci i/ili kamelidni VHH ostaci) pomenutih u Tabeli A-7 iz WO 08/020079 za poziciju 87, i može konkretno biti (ili biti izabrana od) treonina (T) ili alanina (A).
[0083] Takođe, pomenuti VH domen iz pronalaska može biti usmeren na bilo koju pogodnu metu, i posebno na terapeutsku metu. U jednom aspektu, usmereni su na protein iz humanog seruma, kao što je albumin iz humanog seruma.
[0084] Primena se takođe odnosi na proteine, polipeptide, konstrukte, jedinjenja ili druge hemijske entitete koji sadrže najmanje jedan VH domen iz pronalaska.
[0085] Kao što je ovde dalje opisano, prema jednom specifičnom aspektu, u jedinjenju, VH domen iz pronalaska je prisutan u njemu/formira njegov C-terminalni kraj. U takvom slučaju, VH domen iz pronalaska koji formira/prisutan je na C-terminalnom kraju jedinjenja poželjno ima C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisana.
[0086] Međutim, VH domeni iz pronalaska su ISVD, i jedinjenja koja su ovde opisana su proteini, polipeptidi, konstrukti, jedinjenja ili drugi hemijski entiteti koji sadrže ili se suštinski sastoje od najmanje jednog ISVD iz jedinjenja i opciono jednu ili više dodatnih aminokiselinskih sekvenci, funkcionalnih ostataka, vezujućih domena ili vezujućih jedinica (pogodno povezanih jedni sa drugima, opciono putem jednog ili više linkera). Konkretno, takva jedinjenja mogu da sadrže ili se suštinski sastoje od jednog ili više ISVD, od kojih je najmanje jedan ISVD iz pronalaska. Takvo jedinjenje može konkretno da ima ISVD iz pronalaska na svom C-terminalnom kraju, i u tom slučaju ISVD iz pronalaska takođe poželjno ima C-terminalne ekstenzije kao što su ovde opisane. Takođe, ako takvo jedinjenje sadrži dva ili više ISVD, dva ili više ili suštinski sva prisutna ISVD mogu biti ISVD iz pronalaska (tj. svako ima najmanje jedan od sledećih aminokiselinskih ostataka/supstituciju: 112K, i opciono jednu ili više dodatnih supstitucija koje su ovde pomenute za ISVD iz pronalaska, kao što je L11V). Takođe, u takvom jedinjenju, ISVD iz pronalaska je poželjno nanotelo iz pronalaska, i sva ili suštinski sva prisutna ISVD mogu biti (i poželjno su) nanotela (i posebno nanotela iz pronalaska, tj. svako ima najmanje sledeće aminokiselinske ostatke/supstituciju: 112K; i opciono jednu ili više dodatnih supstitucija koje su ovde pomenute za nanotela iz pronalaska, kao što je L11V). Primer za takva jedinjenja će biti jasan stručnjaku na osnovu daljeg otkrića koje je ovde izneto.
4
[0087] Neki neograničavajući primeri proteina, polipeptida, konstrukata, jedinjenja ili drugih hemijskih entiteta koji sadrže jedan ili više ISVD (uključujući najmanje jedan ISVD iz pronalaska) su polivalentni, multispecifični (kao što su bispecifični) ili multiparatopni (kao što su biparatopni) konstrukti koji sadrže dva ili više ISVD povezanih direktno ili preko jednog ili više pogodnih linkera. Ponovo, ISVD su poželjno antitela. Neke neograničavajuće primere takvih kostrukata i opštu pouku o tome kako mogu da se naprave konstrukti (posebno na bazi nanotela) možete potražiti npr. u Conrath i sar., JBC 276, 10(9), 7346 (2001), kao i u revijalnom članku koji je objavio Muyldermans. Reviews in Mol. Biotechnol., 74: 27 (2001).
[0088] Na primer, takvo jedinjenje koje sadrži dva ili više ISVD (od kojih je najmanje jedno ISVD iz pronalaska) može biti dvovalentni, trovalentni, četvorovalentni ili petovalentni konstrukt i/ili može biti monospecifični, bispecifični, trispecifični konstrukt i/ili može biti biparatopni ili triparatopni konstrukt. Ponovo upućujemo na stanje tehnike vezano za biološke agense na bazi ISVD i nanotela koja se ovde pominju. Takođe, takvo jedinjenje može da ima produžen poluživot putem funkcionalizacije i/ili uključivanja u konstrukt funkcionalnog ostatka ili vezujuće jedinice koja produžava poluživot konstrukta. Primeri za takvu funkcionalizaciju, funkcionalne ostatke ili vezujuće jedinice biće jasni stručnjaku, i mogu, na primer, da budu kao što su ovde opisani, i, na primer, mogu da uključuju pegilovanje, fuziju sa albuminom iz seruma ili fuziju sa peptidom ili vezujućom jedinicom koja može da se veže za protein iz seruma, kao što je albumin iz seruma. Takav peptid koji vezuje albumin iz seruma ili vezujući domen, može biti bilo koji pogodan peptid koji vezuje albumin iz seruma ili vezujući domen koji može da poveća poluživot konstrukta (u poređenju sa istim konstruktom bez peptida koji vezuje albumin iz seruma ili vezujućeg domena), i mogu konkretno biti peptidi koji vezuju albumin iz seruma, kao što je opisano u WO 2008/068280 podnosioca zahteva (i posebno WO 2009/127691), ili ISV koji vezuje albumin iz seruma (kao što je nanotelo koji vezuje albumin iz seruma; na primer, Alb-1 ili humanizovana verzija Alb-1, kao što je Alb-8, koje se, na primer, pominje u WO 06/122787), ili ISVD iz pronalaska usmereno na protein iz (humanog) seruma kao što je albumin iz (humanog) seruma (kao što je ovde opisan u nastavku). Generalno, svako jedinjenje iz pronalaska sa produženim poluživotom će poželjno imati poluživot (kao što je ovde definisan) kod humanih ispitanika koji iznosi najmanje 1 dan, poželjno najmanje 3 dana, poželjnije najmanje 7 dana, kao što je najmanje 10 dana.
[0089] Kada jedinjenje sadrži najmanje jedan (i poželjno jedan) ISVD iz pronalaska (i posebno nanotelo iz pronalaska) koji je usmeren na protein iz (humanog) seruma, a posebno albumin iz
4
(humanog) seruma, jedinjenje će obično dalje sadržati jednu ili više terapeutski aminokiselinskih sekvenci, funkcionalnih ostataka, vezujućih domena ili vezujućih jedinica (tj. usmerenih na terapeutski bitan cilj, put ili mehanizam), i ISVD iz pronalaska će funkcionisati tako da produži njihov poluživot (kao i celog jedinjenja). Ponovo, pomenuti jedan ili više funkcionalnih ostataka su poželjno ISVD (i poželjnije nanotela), i mogu takođe biti ISVD iz pronalaska (i poželjnije nanotela iz pronalaska). U takvim jedinjenjima, ISVD iz pronalaska usmeren na albumin iz humanog seruma ponovo može biti prisutan/formirati C-terminalni kraj jedinjenja, i u tom slučaju može da sadrži (i poželjno će sadržati) C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisana. Kada jedinjenje sadrži ISVD iz pronalaska koji je usmeren na albumin iz (humanog) seruma, pomenuto jedinjenje poželjno ima poluživot (kao što je ovde definisan) od najmanje 1 dan, poželjno najmanje 3 dana, poželjnije najmanje 7 dana, kao što je najmanje 10 dana kod humanog ispitanika na kome se primenjuje ili je primenjen. Neki neograničavajući primeri ISVD iz pronalaska na albumin iz humanog seruma koji mogu da se koriste za ovu svrhu dalje su ovde opisani.
[0090] U jednom aspektu, svi ISVD ili nanotela prisutna u pomenutom jedinjenju si ISVD iz pronalaska (što znači da imaju aminokiselinske ostatke/supstitucije koje su karakteristične za VH domene iz pronalaska kao što su definisani u zahtevima, tj. barem 112K). Kada su svi ISVD u jedinjenju ISVD kao što je ovde opisano, oni mogu da imaju iste supstitucije (na primer, svi imaju supstituciju S112K) ili različite supstitucije (na primer, jedan može da ima supstituciju S112K, a drugi može da ima V89L mutaciju u kombinaciji sa T110K ili T110Q). Takođe, obično će samo ISVD na C-terminalnom kraju jedinjenja imati C-terminalnu ekstenziju (jer će drugi verovatno biti povezani na svom C-terminalnom kraju sa drugim ISVD prisutnim u jedinjenju).
[0091] Tako, u daljem aspektu, primena se odnosi na protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili molekul koji sadrži ili se suštinski sastoji od ISVD iz pronalaska (kao što je definisan zahtevima).
[0092] Primena se dalje odnosi na protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili molekul koji sadrži najmanje jedan ISVD iz pronalaska i najmanje jedan drugi terapeutski ostatak ili entitet (povezan direktno ili putem pogodnog linkera).
4
[0093] Primena se dalje odnosi na protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili molekul koji sadrži najmanje jedan ISVD iz pronalaska koji je usmeren na protein iz (humanog) seruma (a poželjno albumin iz humanog seruma) i najmanje jedan drugi terapeutski ostatak ili entitet (povezan direktno ili putem pogodnog linkera).
[0094] Primena se dalje odnosi na protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili molekul koji sadrži najmanje dva (kao što je dva, tri ili četiri) pojedinačna varijabilna domena imunoglobulina (povezana direktno ili putem pogodnog linkera), od kojih je najmanje jedan ISVD iz pronalaska. U ovom aspektu: (i) prisutni ISVD mogu biti isti ili različiti; i kada su različiti, mogu biti usmereni na istu metu (na primer, mogu imati različite sekvence i/ili biti usmereni na različite epitope na istoj meti) ili na dve ili više različitih drugih meta (tj. tako da je rezultujući protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili molekul bi- ili multispecifični konstrukt); i/ili (ii) ISDV prisutan na C-terminalnom kraju proteina, polipeptida ili drugog jedinjenja ili molekula može ili ne mora biti ISVD iz pronalaska (ali poželjno jeste); i/ili (iii) kada je ISVD iz pronalaska prisutan na C-terminalnom kraju proteina, polipeptida ili drugog jedinjenja ili molekula, on poželjno ima C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisana; i/ili (iv) suštinski svi ISVD prisutni u proteinu, polipeptidu ili drugom jedinjenju ili molekulu mogu biti ISVD iz pronalaska. Takođe, kada su ISVD usmereni na različite mete (od kojih je najmanje jedna terapeutski agens), prema jednom daljem aspektu najmanje jedan od prisutnih ISVD mora biti usmeren na protein iz (humanog) seruma, kao što je albumin iz humanog seruma (i taj ISVD može ili ne mora biti ISVD iz pronalaska; i kada jeste ISVD iz pronalaska, poželjno je nanotelo na albumin iz humanog seruma koje je kao što je ovde dalje opisano).
[0095] Primena se dalje odnosi na takav protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili molekul koji sadrži ili se suštinski sastoji od dva pojedinačna varijabilna domena imunoglobulina (povezana direktno ili putem pogodnog linkera).
[0096] Primena se dalje odnosi na takav protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili molekul koji sadrži ili se suštinski sastoji od tri pojedinačna varijabilna domena imunoglobulina (povezana direktno ili putem pogodnog linkera).
[0097] Primena se dalje odnosi na takav protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili molekul koji sadrži ili se suštinski sastoji od četiri pojedinačna varijabilna domena imunoglobulina (povezana direktno ili putem pogodnog linkera).
4
[0098] Primena se dalje odnosi na takav protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili molekul koji dalje sadrži najmanje jedan funkcionalni ostatak, vezujući domen ili vezujuću jedinicu koja dodeljuje produžen poluživot takvom proteinu, polipeptidu ili drugom jedinjenju ili molekulu (tj. u poređenju sa odgovarajućim proteinom, polipeptidom ili drugim jedinjenjem ili molekulom bez pomenutog funkcionalnog ostatka, vezujućeg domena ili vezujuće jedinice). Prema specifičnijem aspektu, pomenuti najmanje jedan funkcionalni ostatak, vezujući domen ili vezujuća jedinica koja dodeljuje produžen poluživot takvom proteinu, polipeptidu ili drugom jedinjenju ili molekulu je pojedinačni varijabilni domen imunoglobulina, konkretnije pojedinačni varijabilni domen imunoglobulina koji je usmeren na protein iz seruma (kao što je albumin iz seruma), i konkretno na protein iz humanog seruma (kao što je albumin iz humanog seruma); i kao što je ovde opisano može konkretno biti ISVD iz pronalaska. Pomenuti ISVD na protein iz seruma može biti na N-terminalnom kraju proteina, polipeptida ili drugog jedinjenja ili molekula, i (ako protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili molekul sadrži više od dva ISVD) u sredini molekula.
[0099] Primena se dalje odnosi na takav protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili molekul koji sadrži ili se suštinski sastoji od:
dva pojedinačna varijabilna domena imunoglobulina (povezana direktno ili putem pogodnog linkera), tj. (pomenuti) jedan pojedinačni varijabilni domen imunoglobulina (kao što je nanotelo) koji dodeljuje produženi poluživot i jedan drugi pojedinačni varijabilni domen imunoglobulina (kao što je nanotelo) koji konkretno može biti usmeren na terapeutski agens; tri pojedinačna varijabilna domena imunoglobulina (povezana direktno ili putem pogodnog linkera), tj. (pomenuti) jedan pojedinačni varijabilni domen imunoglobulina (kao što je nanotelo) koji dodeljuje produženi poluživot i dva druga pojedinačna varijabilna domena imunoglobulina (kao što su dva druga nanotela) koji konkretno može biti usmeren na terapeutski agens (u kome pomenuta dva druga pojedinačna varijabilna domena imunoglobulina mogu biti usmereni na istu metu, na dve različite mete ili na dva različita epitopa na istoj meti); ili
četiri pojedinačna varijabilna domena imunoglobulina (povezana direktno ili putem pogodnog linkera), tj. (pomenuti) jedan pojedinačni varijabilni domen imunoglobulina (kao što je nanotelo) koji dodeljuje produženi poluživot i dva druga pojedinačna varijabilna domena imunoglobulina (kao što su dva druga nanotela) koji konkretno mogu biti usmereni na terapeutski agens (u kome pomenuta tri druga pojedinačna varijabilna domena imunoglobulina
4
mogu biti usmereni na istu metu, na dve ii tri različite mete i/ili na dva ili tri različita epitopa na istoj meti).
[0100] Ponovo, u takvom proteinu, polipeptidu ili drugom jedinjenju ili molekulu: (i) prisutni ISVD mogu biti isti ili različiti; i kada su različiti, mogu biti usmereni na istu metu (na primer, mogu imati različite sekvence i/ili biti usmereni na različite epitope na istoj meti) ili na dve ili više različitih drugih meta (tj. tako da je rezultujući protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili molekul bi- ili multispecifični konstrukt); i/ili (ii) ISDV prisutan na C-terminalnom kraju proteina, polipeptida ili drugog jedinjenja ili molekula može ili ne mora biti ISVD iz pronalaska (ali poželjno jeste); i/ili (iii) kada je ISVD iz pronalaska prisutan na C-terminalnom kraju proteina, polipeptida ili drugog jedinjenja ili molekula, on poželjno ima C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisana; i/ili (iv) suštinski svi ISVD prisutni u proteinu, polipeptidu ili drugom jedinjenju ili molekulu mogu biti ISVD iz pronalaska.
[0101] Samo za ilustrativne svrhe, primena se dalje odnosi na postupke za ekspresiju/proizvodnju/izradu VH domena iz pronalaska i jedinjenja koja su ovde opisana (kao što su ovde dalje opisani). Na primer, VH domen iz pronalaska može biti eksprimiran/proizveden pogodnom ekspresijom nukleinske kiseline koja ga kodira u pogodnom organizmu domaćinu. Pogledajte, na primer, WO 08/020079 (kao i neke od drugih patentnih prijava podnosioca zahteva/zastupnika koje su tu navedene), koje generalno opisuje pogodne postupke i tehnike za ekspresiju/proizvodnju nanotela, i ti postupci takođe mogu pogodno da se koriste za ekspresiju/proizvodnju nanotela iz pronalaska. Postupci za ekspresiju VH domena iz pronalaska koji nisu nanotela će takođe biti jasan stručnjaku na osnovu otkrića i stanja tehnike koje je tu navedeno. Jedinjenja mogu pogodno da budu izrađena/proizvedena pogodnim povezivanjem (obično putem kovalentne veze) jednog ili više VH domena iz pronalaska za jedan ili više dodatnih aminokiselinskih ostataka (i/ili drugih grupa ili funkcionalnih ostataka) koji će biti prisutni u finalnom jedinjenju, opciono preko jednog ili više linkera ili spejsera. Alternativno, kada je jedinjenje protein ili polipeptid, ono može da bude izrađeno/proizvedeno pogodnom ekspresijom nukleinske kiseline koja ga kodira u pogodnom organizmu domaćinu. Ponovo se navode, na primer, opšti postupci opisani u WO 08/020079 i u nekim drugim patentnim prijavama podnosioca zahteva/zastupnika koje su tu navedene.
[0102] Za ilustrativne svrhe, primena se takođe odnosi na nukleotidnu sekvencu i/ili nukleinsku kiselinu koja kodira VH domen iz pronalaska ili jedinjenje koje je ovde opisano. Takva nukleinska kiselina može biti DNK ili RNK, i poželjno je RNK, i može biti u obliku plazmida ili vektora. Ponovo se navodi, na primer, WO 08/020079 i neke druge patentne prijave podnosioca zahteva/zastupnika koje su tu navedene.
[0103] Za ilustrativne svrhe, primena se takođe odnosi na jedinjenje koje sadrži najmanje jedan VH domen iz pronalaska, jedinjenje koje je ovde opisano ili nukleinsku kiselinu koja ih kodira.
[0104] Za ilustrativne svrhe, primena se dalje odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži ISV (i poželjno terapeutski ISV) ili protein ili polipeptid koji sadrži najmanje jedan ISV (i poželjno najmanje jedan terapeutski ISV), pri čemu pomenuti ISV, protein ili polipeptid kao što je ovde dalje opisan (tj. ISV, protein ili polipeptid prema jednom ili više aspekata koji su ovde opisani, i posebno prema jednom ili više aspekata koji su opisani na prethodnim stranama; i konkretnije ISV, protein ili polipeptid koji ima C-terminalni kraj/sekvencu koji je prema jednom ili više ovde opisanih aspekata), i najmanje jedan pogodan nosač, razblaživač ili ekscipijens (tj. pogodan za farmaceutsku primenu), i opciono jednu ili više drugih aktivnih supstanci. Takve kompozicije, nosači, razblaživači ili ekscipijensi mogu, na primer, biti kao što je opisano u WO 08/020079 za farmaceutske kompozicije koje sadrže nanotelo ili protein ili polipeptid koji sadrži najmanje jedno nanotelo (i, kao što je već pomenuto, prema predmetnom pronalasku, ISV je takođe poželjno nanotelo).
[0105] Za ilustrativne svrhe, primena se dalje odnosi na ISV ili protein ili polipeptid koji sadrži najmanje jedan ISV za primenu u lečenju bolesti kod čoveka (tj. pacijenta kome je takva terapija potrebna), pri čemu pomenuti ISV, protein ili polipeptid kao što je ovde dalje opisan (tj. ISV, protein ili polipeptid prema jednom ili više aspekata koji su ovde opisani, i posebno prema jednom ili više aspekata koji su opisani na prethodnim stranama; i konkretnije ISV, protein ili polipeptid koji ima C-terminalni kraj/sekvencu koji je prema jednom ili više ovde opisanih aspekata).
[0106] Za ilustrativne svrhe, primena se dalje odnosi na primenu ISV ili proteina ili polipeptida koji sadrži najmanje jedan ISV u pripremi farmaceutske kompozicije, pri čemu pomenuti ISV, protein ili polipeptid kao što je ovde dalje opisan (tj. ISV, protein ili polipeptid prema jednom ili više aspekata koji su ovde opisani, i posebno prema jednom ili više aspekata koji su opisani
1
na prethodnim stranama; i konkretnije ISV, protein ili polipeptid koji ima C-terminalni kraj/sekvencu koji je prema jednom ili više ovde opisanih aspekata).
[0107] Za ilustrativne svrhe, primena se dalje odnosi na postupak lečenja koji obuhvata primenu na humanom ispitaniku (npr. pacijentu kome je takvo lečenje potrebno) ISV ili proteina ili polipeptida koji sadrži najmanje jedan ISV u pripremi farmaceutske kompozicije, pri čemu pomenuti ISV, protein ili polipeptid kao što je ovde dalje opisan (tj. ISV, protein ili polipeptid prema jednom ili više aspekata koji su ovde opisani, i posebno prema jednom ili više aspekata koji su opisani na prethodnim stranama; i konkretnije ISV, protein ili polipeptid koji ima C-terminalni kraj/sekvencu koji je prema jednom ili više ovde opisanih aspekata), ili farmaceutsku kompoziciju (kao što je gore opisana) koji sadrža najmanje jedan ISV, protein ili polipeptid.
[0108] S obzirom na gorepomenuto, biće jasno da je terapeutska primena ovde opisanih ISV, proteina i polipeptida veoma značajan ilustrativni aspekt pronalaska, jer takva terapeutska primena (ili klinički razvoj takvih ISV, proteina i polipeptida za takvu terapeutsku primenu) može da uključi upotrebu ADA testa da se odredi da li je pomenuti ISV, protein ili polipeptid imunogen (tj. može da stvori ADA kada se daje humanom ispitaniku). U vezi sa tim, takođe će biti jasno da pitanja o mogućoj imunogenosti moraju posebno da budu rešena kada se terapeutski agens koristi u dužim periodima (u trajanju od više nedelja, meseci ili godina), i/ili ima poluživot (poželjno izražen kao t1/2-beta) kod humanog ispitanika od najmanje 3 dana, kao što je najmanje jednu nedelju, i do 10 dana ili više.
[0109] Tako, prema jednom specifičnom ilustrativnom aspektu, primena se odnosi na ISV, protein, polipeptid, jedinjenje ili molekul kao što je ovde opisan (ili njegovu farmaceutsku kompoziciju) koja je namenjena za lečenje hronične bolesti kod čoveka, i/ili je takav ISV, protein, polipeptid kao što je ovde opisan namenjen da bude prisutan u krvotoku ispitanika (tj. na farmaceutski aktivnom nivou) kome se daje (tj. u terapeutski aktivnoj dozi) najmanje tokom jedne nedelje, poželjno najmanje dve nedelje, kao što je najmanje mesec dana; i/ili je takav ISV, protein, polipeptid kao što je ovde opisan takav da ima poluživot (poželjno izražen kao t1/2-beta) kod humanog ispitanika od najmanje 3 dana, kao što je najmanje nedelju dana, i do 10 dana ili više; i/ili je takav ISV, protein, polipeptid, ili farmaceutska kompozicija kao što je ovde opisano namenjen za primenu na čoveku kao dve ili više doza koje se daju u periodu od najmanje 3 dana, kao što je najmanje jedna nedelja, na primer najmanje dve nedelje ili najmanje
2
jedan mesec, ili duže (npr. najmanje 3 meseca, najmanje 6 meseci ili najmanje jednu godinu), ili se čak primenjuje hronično.
[0110] Takođe, kao što će biti jasno stručnjaku na osnovu ovog otkrića, ovde opisani poboljšani VH domeni će naći posebnu primenu kod proteina, polipeptida ili drugih jedinjenja ili molekula koji su namenjeni za primenu na humanim ispitanicima (a posebno pacijentima) čija krv/serum sadrže (ili se sumnja da sadrže) već postojeća antitela takve vrste koja, prema predmetnom pronalasku, nađena u uzorcima dobijenim od pacijenata koji imaju SLE, tj. već postojeća antitela koja mogu da se vežu za C-terminalni region VH domena čak u prisustvu C-terminalne ekstenzije kao što je ovde opisano. Konkretno, ovde opisana poboljšanja VH domena i rezultujući poboljšani VH domeni će naći posebnu primenu kod proteina, polipeptida ili drugih jedinjenja ili molekula koji su namenjenu za lečenje ili sprečavanje bolesti ili poremećaja kod takvih pacijenata. To može biti bilo koja bolest ili poremećaj, ali može posebno biti bolest ili poremećaj koja ima za rezultat i/ili je povezana sa prisustvom ili nastajanjem takvih već postojećih antitela (jedan primer je SLE, ali je očekivano da drugi ozbiljni (auto)imunski poremećaji takođe mogu dovesti do već postojećih antitela. To može lako da se utvrdi ispitivanjem uzoraka dobijenih od relevantne populacije ispitanika na prisustvo takvih već postojećih antitela, suštinski na način analogan testovima obavljenim na uzorcima pacijenata sa SLE u Eksperimentalnom delu ispod).
[0111] Tako, prema jednom specifičnom ilustrativnom aspektu, primena se odnosi na ISV iz pronalaska, protein, polipeptid, jedinjenje ili molekul kako je ovde opisan (ili na njegovu farmaceutsku kompoziciju), koji je namenjen za primenu na humanom ispitaniku čija krv sadrži već postojeća antitela koja mogu da se vežu za izloženi C-terminalni region VH domena čak i kada pomenuti VH domen sadrži C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisana (ili gde je C-terminalni kraj VH domena povezan sa drugim proteinom ili polipeptidom, kao što je drugi ISV, opciono putem pogodnog linkera).
[0112] Konkretno, za ilustrativne svrhe, primena se odnosi na ISV, protein, polipeptid, jedinjenje ili molekul kao što je ovde opisan (ili njegovu farmaceutsku kompoziciju) koji je namenjen za primenu u lečenju bolesti ili poremećaja kod humanog ispitanika čija krv sadrži već postojeća antitela koja mogu da se vežu za izloženi C-terminalni region VH domena čak i kada pomenuti VH domen sadrži C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisana (ili gde je C-terminalni kraj VH domena povezan sa drugim proteinom ili polipeptidom, kao što je drugi ISV, opciono putem pogodnog linkera). Pomenuta bolest ili poremećaj može biti bilo koja bolest ili poremećaj, ali može posebno biti bolest ili poremećaj koji dovodi do, ili je na drugi način povezan sa prisustvom takvih već postojećih antitela u krvi takvog pacijenta, kao što je SLE ili druga (ozbiljna) autoimunska bolest.
[0113] Tako, za ilustrativne svrhe, primena se odnosi na ISV, protein, polipeptid, jedinjenje ili molekul kao što je ovde opisan (ili njegovu farmaceutsku kompoziciju) za primenu u lečenju bolesti ili poremećaja kod humanog ispitanika/pacijenta, pri čemu je pomenuta bolest ili poremećaj, bolest ili poremećaj koji dovodi do, ili je na drugi način povezan sa prisustvom takvih već postojećih antitela u krvi takvog ispitanika/pacijenta koja mogu da se vežu za izloženi C-terminalni region VH domena čak i kada pomenuti VH domen sadrži C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisana (ili gde je C-terminalni kraj VH domena povezan sa drugim proteinom ili polipeptidom, kao što je drugi ISV, opciono putem pogodnog linkera). Na primer, takav ISV, protein, polipeptid, jedinjenje ili molekul kao što je ovde opisan (ili njegova farmaceutska kompozicija) za primenu u lečenju SLE ili druge (ozbiljne) autoimunske bolesti kod humanog ispitanika/pacijenta.
[0114] Kao što će biti jasno stručnjaku, kada je protein, polipeptid, jedinjenje ili molekul namenjen za prevenciju ili lečenje takve bolesti ili poremećaja, sadržaće najmanje jedan (kao što je jedan, dva, tri ili četiri) domen, vezujuću jedinicu ili funkcionalni ostatak ili entitet koji je terapeutski aktivan protiv relevantne bolesti ili poremećaja (npr. usmeren na cilj ili put koji je terapeutski relevantan za odgovarajuću bolest ili poremećaj). Ponovo, takvi vezujući domeni ili vezujuće jedinice mogu, na primer, biti (drugi) ISVD, i prema jednom aspektu mogu posebno biti VH domeni ili ISVD iz pronalaska. Drugi opšti primer takvog proteina, polipeptida, jedinjenja ili molekula je protein, polipeptid, jedinjenje ili molekul u kome pomenuti jedan ili više terapeutskih domena, vezujućih jedinica ili funkcionalnih ostataka ili entiteta ne moraju biti ISDV (ali su, na primer, izvedeni iz druge strukture), ali koji sadrži VH domen iz pronalaska radi produženja njegovog poluživota (kao što je vezivač albumina iz seruma kao što je ovde opisan).
[0115] U daljem aspektu, ISVD iz pronalaska ili jedinjenja (kao što su ovde opisana) usmerena su prema jonskom kanalu Kv1.3. Neki poželjni, ali neograničavajući primeri takvih ISVD ili jedinjenja su dati u Primeru 7. i VH domeni prema Kv1.3. opisani u takvom primeru čine dalji aspekt predmetnog pronalaska, sve dok je aminokiselinski ostatak na poziciji 112 K.
4
[0116] Na primer i bez ograničenja, jedinjenje koje je usmereno prema Kv1.3 može da sadrži ili se suštinski sastoji od jednog pojedinačnog VH domena, i poželjno nanotela, iz pronalaska koje je usmereno na Kv1.3 ili može da sadrži ili se suštinski sastoji od najmanje dva (kao što su dva ili tri) VH domena, i poželjno nanotela, iz pronalaska usmerena na Kv1.3. Kada takav polipeptid sadrži dva ili više VH domena iz pronalaska usmerena na Kv1.3, ti ISVD mogu biti isti ili različiti, i kada su različiti, mogu da budu usmereni na isti epitop na Kv1.3 ili podjedinici na Kv1.3 ili na različite epitope ili jedinice.
[0117] Ponovo, kao što je ovde uopšteno opisano za jedinjenja, takva jedinjenja mogu pogodno da sadrže jedan ili više linkera, mogu da sadrže C-terminalnu ekstenziju (tj. kao što je ovde dalje opisana) i takođe mogu da sadrže jednu ili više dodatnih vezujućih jedinica ili vezujućih domena (ili druge aminokiselinske sekvence ili funkcionalne ostatke), kao što je dodatni ISVD usmeren na metu različitu od one za Kv1.3. Na primer i bez ograničenja, jedinjenje može (takođe) da sadrži vezujući domen ili vezujuću jedinicu koja obezbeđuje produženi poluživot, kao što je ISVD na protein iz seruma kao što je albumin iz seruma (na primer, nanotelo na albumin iz humanog seruma, kao što je nanotelo iz pronalaska na albumin iz humanog seruma).
[0118] U daljim aspektima, pronalazak se odnosi na (sintetičke) biblioteke sekvenci varijabilnih domena imunoglobulina koje su kao što je definisano zahtevima (tj. sadrže aminokiselinske ostatke/mutacije/supstitucije kao što su ovde opisane). Takve biblioteke obično sadrže najmanje 100 različitih sekvenci, kao što je najmanje 1000 različitih sekvenci, konkretno više od 10<5>različitih sekvenci, konkretnije više od 10<6>, kao što je 10<8>do 10<10>ili više različitih sekvenci (značenje u najširem smislu, sa najmanje jednom različitom aminokiselinom između sekvenci), obično sve sa (suštinski) istim sekvencama okvira (pri čemu pomenute sekvence okvira sadrže ovde navedene aminokiselinske ostatke/mutacije) i različitim CDR (što znači da svaka sekvenca u biblioteci ima najmanje „jednu različitu aminokiselinu“ u najmanje jednom od svojih CDR-a u poređenju sa drugim sekvencama u biblioteci).
[0119] Sintetičke biblioteke sekvenci pojedinačnih varijabilnih domena imunoglobulina (na primer, na bazi humanih VH sekvenci ili VHH sekvenci izvedenih od kamelida) i postupci za njihovo stvaranje/konstruisanje (uključujući biblioteke na bazi prethodno određenih struktura i/ili koji sadrže jedan ili više specifičnih aminokiselinskih ostataka/mutacija u regionima okvira) poznate su u struci. Reference su, na primer, Tanha i sar., J. Biol. Chem., Vol.276, str.2477424780, 2001; Bond i sar., J. Mol. Biol. (2003) 332, 643-655; Mandrup i sar., PLOS One, October 2013, Volume 8, Issue 10, e76834; Goldman i sar., Anal. Chem., 2006, 78, 8245-8255; Hussak i sar., Protein Engineering, Design & Selection vol.25 br.6 str.313-318, 2012; i Chen i sar., Methods Mol. Biol., 2009, 525, 81. Tehnike koje su u njima opisane (i slične poznate tehnike) mogu pogodno da se koriste ili prilagode za stvaranje biblioteka pojedinačnih varijabilnih domena imunoglobulina prema pronalasku.
[0120] ISVD koji se nalaze u takvim bibliotekama mogu pogodno da sadrže svaki pogodni CDR iz svakog pogodnog izvora, kao što su CDR-i dobijeni/stvoreni polazeći od imunskog repertoara od „naivnog“ sisara (kao što je vrsta kamelida ili humane sekvence), CDR-i dobijeni/stvoreni polazeći od imunskog repertoara životinje (kao što je vrsta kamelida) koja je pogodno imunizovana antigenom; kompletno sintetički repertoar CDR; ili repertoar koji je dobijen tehnikama kao što je mutageneza (na primer, nasumična mutageneza ili mutageneza specifična za mesto). Takva biblioteka može, na primer, takođe biti biblioteka koja je stvorena tokom poznatih postupaka afinitetnog sazrevanja.
[0121] Regioni okvira u ISVD prisutnim u takvim bibliotekama mogu se pogodno izvesti iz svake pogodne polazne sekvence/strukture, na primer, na bazi strukture koji je izveden polazeći od VH sekvence (kao što je humana VH sekvenca) ili polazeći od sekvence nanotela (kao što je VHH sekvenca ili humanizovane VH sekvence). Takođe je moguće da biblioteka sadrži ISVD koji su dobijeni iz dva ili više različitih izvora ili su na bazi dva ili više različitih struktura (na primer, jer je biblioteka dobijena kombinovanjem dve ili više biblioteka dobijenih iz različitih izvora ili na bazi različitih struktura).
[0122] Takođe, biblioteke (ISVD prisutni u) mogu biti u obliku proteina ili u obliku DNK ili RNK koje kodiraju relevantni ISVD. Na primer, biblioteke mogu biti u obliku ekspresione biblioteke pogodne za pretraživanje i/ili tehnike selekcije, i mogu u tu svrhu, na primer, biti u obliku koji može biti prikazan koristeći pogodne tehnike prikaza kao što je biblioteka prikaza faga, biblioteka prikaza kvasaca ili biblioteka prikaza ribozoma.
[0123] Tako, uopšteno, pronalazak se takođe odnosi na biblioteke (kao što su ovde opisane) koje sadrže VH domene iz pronalaska (kao što su dalje opisani). Poželjno, prema jednom specifičnom aspektu takve biblioteke, prisutni VH domeni svi imaju iste (ili suštinski iste) sekvence okvira, ali različite sekvence CDR (ponovo, kao što je pomenuto, to znači da svaki od pomenutih VH domena u biblioteci ima najmanje jednu različitu aminokiselinu u najmanje jednom CDR-u u poređenju sa drugim VH domenima u biblioteci).
[0124] U jednom aspektu, takva biblioteka iz pronalaska je biblioteka ISVD iz pronalaska (kao što je definisano putem zahteva, uključujući biblioteku pogodnih nukleinskih kiselina koje kodiraju pomenute ISVD) u kome:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je jedan od L, V ili K; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je jedan od A ili P; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je jedan od A ili P; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je jedan od T, V ili L; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je jedan od Q ili L; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
u kome (i) aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je T; i/ili (ii) aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je L i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od K ili Q; i (iii) u svim slučajevima (i) do (ii), aminokiselina na poziciji 11 je poželjno V. Opciono, ISVD prisutni u takvoj biblioteci takođe mogu da sadrže C-terminalnu ekstenziju (kao što je ovde dalje opisana za VH domene iz pronalaska) i/ili pogodno sadrži pogodnu oznaku (kao što je histidinska oznaka).
[0125] U drugom aspektu, takva biblioteka iz pronalaska je biblioteka ISVD iz pronalaska (kao što je definisano putem zahteva, uključujući biblioteku pogodnih nukleinkih kiselina koje kodiraju pomenute ISVD) u kome:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je V; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je jedan od A ili P; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je jedan od A ili P; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je jedan od L; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je jedan od Q ili L; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q; i
aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K.
[0126] Opciono, ISVD prisutni u takvoj biblioteci takođe mogu da sadrže C-terminalnu ekstenziju (kao što je ovde dalje opisana za VH domene iz pronalaska) i/ili pogodno sadrže pogodnu oznaku (kao što je histidinska oznaka).
[0127] Biblioteke iz pronalaska mogu da se koriste za svaku pogodnu/nameravanu svrhu koja je poznata. Na primer, one mogu, na primer, da se koriste za pretraživanje i/ili selekciju (ili kao deo postupka pretraživanja i/ili selekcije), da se koriste za/kao deo afinitetnog sazrevanja ili druge postupke nameravane da daju poboljšane VH domene, ili, na primer, skeniranje alanina. U praksi, obično, veličina, dizajn i druge karakteristike biblioteke će biti prilagođene njenoj nameravanoj upotrebi, što stručnjak može da izvede.
[0128] Pronalazak će sada biti dalje opisan pomoću sledećih neograničavajućih poželjnih aspekata, primera i slika. ISVD sa teškim lancem opisani u primerima i slikama, u kojima je aminokiselinski ostatak na poziciji 112 prema Kabatu K su ISVD sa teškim lancem iz pronalaska. ISVD koji nemaju K na poziciji 112 prema Kabatu su prisutni samo za svrhe ilustracije.
Slika 1 je tabela u kojoj se navode neke pozicije aminokiselina koje će ovde biti posebno pomenute, i njihova numeracija prema nekim alternativnim sistemima numeracije (kao što su Aho i IMGT);
Slika 2 navodi sekvence koje se ovde pominju;
Slika 3 je dijagram koji prikazuje tačke sa podacima dobijene u Primeru 4 kada je 96 uzoraka seruma testirano na vezivanje reprezentativnog nanotela sa mutacijom S112K (referenca A S 112K C-terminalni alanin, naznačen kao (2) na Slici 3), u poređenju sa referentnim nanotelom bez mutacije S112K (referenca A, SEQ ID NO: 44, naznačeno kao (1) na Slici 3); Slika 4 je dijagram koji prikazuje tačke sa podacima dobijene u Primeru 4 kada je 129 uzoraka seruma testirano na vezivanje reprezentativnog nanotela sa mutacijom V89T (referenca A L11V V89T C-terminalni alanin, naznačen kao (2) na Slici 4), u poređenju sa referentnim nanotelom bez mutacije V89T (referenca A, SEQ ID NO: 44, naznačeno kao (1) na Slici 4); Slika 5 je dijagram koji prikazuje tačke sa podacima dobijene u Primeru 5 kada je 100 uzoraka seruma testirano na vezivanje reprezentativnog nanotela sa mutacijom V89L, T110K i/ili T110Q (referenca A L11V V89L C-terminalni alanin, naznačen kao (2) na Slici 5; referenca A L11V V89L T110K C-terminalni Ala, naznačen kao (3) na Slici 5; referenca A L11V V89L T110Q C-terminalni Ala, naznačen kao (4) na Slici (5) i referenca A L11V T87A V89L C-terminalni Ala, naznačen kao (5) na Slici 5), u poređenju sa referentnim nanotelom bez ijedne od ovih mutacija (referenca A, SEQ ID NO: 44, naznačeno kao (1) na Slici 5).
Slika 6 je dijagram koji prikazuje tačke sa podacima dobijene u Primeru 6 kada je 98 uzoraka seruma dobijenog od zdravih dobrovoljaca testirano na vezivanje konstrukata reprezentativnog trovalentnog nanotela. Svaka tačka predstavlja podatak prikupljen testiranjem naznačenih konstrukata u odnosu na jedan od 98 uzoraka seruma. Legenda: (1) = referenca X (nanotelo A-35GS-nanotelo A-35GS-nanotelo B); (2) = referenca X C-terminalni Ala; (3) = referenca X L11V V89L C-terminalni Ala; (4) = referenca X L11V T87A V89L C-terminalni Ala; (5) = referenca X L11V V89L T110K C-terminalni Ala; (6) = referenca X L11V V89L T110Q C-terminalni Ala.
Slika 7 je dijagram koji prikazuje tačke sa podacima dobijene u Primeru 6 kada je 30 uzoraka seruma dobijenog od zdravih dobrovoljaca (uzorci izabrani zbog visokog titra već postojećih antitela ili prisustva već postojećih antitela sa visokim stepenom vezivanja čak i u prisustvu ekstenzije C-terminalnog alanina) testirano na vezivanje konstrukata reprezentativnog trovalentnog nanotela. Svaka tačka predstavlja podatak prikupljen testiranjem naznačenih konstrukata u odnosu na jedan od 30 uzoraka seruma. Legenda: (1) = referenca X C-terminalni Ala; (2) = referenca X L11V V89L C-terminalni Ala; (3) = referenca X L11V T87A V89L C-terminalni Ala; (4) = referenca X L11V V89L T110K C-terminalni Ala.
Slika 8 je dijagram koji prikazuje tačke sa podacima dobijene u Primeru 6 kada je 98 uzoraka seruma dobijenog od zdravih dobrovoljaca testirano na vezivanje konstrukata reprezentativnog dvovalentnog nanotela. Svaka tačka predstavlja podatak prikupljen testiranjem naznačenih konstrukata u odnosu na jedan od 30 uzoraka seruma. Legenda: (1) = referenca Y (nanotelo A-35GS-nanotelo B); (2) = referenca Y C-terminalni Ala; (3) = referenca Y L11V V89L C-terminalni Ala; (4) = referenca Y L11V T87A V89L C-terminalni Ala; (5) = referenca Y L11V V89L T110K C-terminalni Ala; (6) = referenca Y L11V V89L T110Q C-terminalni Ala;
Slike 9A i 9B prikazuju neograničavajuće primere jednovalentnih nanotela (Slika 9A) i trovalentnih bispecifičnih jedinjenja sa produženim poluživotom (Slika 9B) prema jonskom kanalu Kv1.3; i Slika 9C navodi neke poželjne CDR-e (klasifikacija prema Kabatu, odnosno Abm), za ISVD prema Kv1.3.
Slika 10 je dijagram koji prikazuje tačke sa podacima dobijene u Primeru 7 kada je 47 uzoraka seruma dobijenog od dijabetičnih humanih ispitanika testirano na vezivanje reprezentativnih trovalentnih bispecifičnih jedinjenja sa produženim poluživotom prema Kv1.3. Svaka tačka predstavlja podatak prikupljen testiranjem naznačenih konstrukata u odnosu na jedan od 47 uzoraka seruma. SEQ ID NO se odnose na relevantne sekvence navedene na Slici 9; Slika 11 je dijagram koji prikazuje tačke sa podacima dobijene u Primeru 7 kada je 90 uzoraka seruma dobijenog od zdravih dobrovoljaca testirano na vezivanje reprezentativnih trovalentnih bispecifičnih jedinjenja sa produženim poluživotom prema Kv1.3. Svaka tačka predstavlja podatak prikupljen testiranjem naznačenih konstrukata u odnosu na jedan od 47 uzoraka seruma. SEQ ID NO se odnose na relevantne sekvence navedene na Slici 9.
Slike 12A i 12B navode CDR-e i aminokiselinske sekvence nekih neograničavajućih primera nanotela na IL-23 koji su na bazi naznačenih referentnih sekvenci. Vidite i Primer 8;
Slike 13 navodi CDR-e i aminokiselinske sekvence nekih neograničavajućih primera nanotela na OX40-L koji su na bazi naznačene referentne sekvence. Vidite i Primer 9;
Slike 14 navodi CDR-e i aminokiselinske sekvence nekih neograničavajućih primera nanotela na IgE koji su na bazi naznačene referentne sekvence. Vidite i Primer 10;
Slike 15A i 15B navode CDR-e i aminokiselinske sekvence nekih neograničavajućih primera nanotela na CXCR-4 koji su na bazi naznačenih referentnih sekvenci. Vidite i Primer 11; Slike 16A i 16B navode CDR-e i aminokiselinske sekvence nekih neograničavajućih primera nanotela na HER-3 koji su na bazi naznačenih referentnih sekvenci. Vidite i Primer 12;
Slike 17A i 17B navode CDR-e i aminokiselinske sekvence nekih neograničavajućih primera nanotela na TNF koji su na bazi naznačenih referentnih sekvenci. Vidite i Primere 13 i 14; Slike 18A i 18B navode CDR-e i aminokiselinske sekvence neograničavajućih primera nanotela na c-Met koji su na bazi naznačenih referentnih sekvenci. Vidite i Primer 15;
Slika 19 navodi CDR-e i aminokiselinske sekvence neograničavajućih primera nanotela na RANK-L koji su na bazi naznačene referentne sekvence. Vidite i Primer 16;
Slike 20A do 20C navode CDR-e i aminokiselinske sekvence nekih neograničavajućih primera nanotela na CXCR-7 koji su na bazi naznačenih referentnih sekvenci. Vidite i Primer 17; Slike 21A i 21B navode CDR-e i aminokiselinske sekvence nekih neograničavajućih primera nanotela na A-beta koji su na bazi naznačenih referentnih sekvenci. Vidite i Primer 18;
Slika 22 daje aminokiselinske sekvence nekih neograničavajućih primera jedinjenja na IL-23; Slika 23 daje aminokiselinske sekvence nekih neograničavajućih primera jedinjenja na OX40-L;
Slika 24 daje aminokiselinske sekvence nekih neograničavajućih primera jedinjenja iz pronalaska na IgE;
Slika 25 daje aminokiselinske sekvence nekih neograničavajućih primera jedinjenja na CXCR-4;
Slika 26 daje aminokiselinske sekvence nekih neograničavajućih primera jedinjenja na HER-3;
Slika 27 daje aminokiselinske sekvence nekih neograničavajućih primera jedinjenja na TNF; Slike 28A i 28B daju aminokiselinske sekvence nekih neograničavajućih primera jedinjenja na c-Met;
Slika 29 daje aminokiselinske sekvence nekih neograničavajućih primera jedinjenja na RANK-L;
Slika 30 daje aminokiselinske sekvence nekih neograničavajućih primera jedinjenja na A-beta; Slika 31A je dijagram koji prikazuje tačke sa podacima dobijene u Primeru 19 kada je 92 uzorka seruma dobijenog od zdravih dobrovoljaca testirano na vezivanje reprezentativnih trovalentnih bispecifičnih jedinjenja sa produženim poluživotom na A-beta. Svaka tačka predstavlja podatak prikupljen testiranjem naznačenih konstrukata u odnosu na jedan od 92 uzoraka seruma. Referentni brojevi su kao što je prikazano u Tabeli CC-1. Slično tome, Slika 31B je dijagram koji prikazuje tačke sa podacima dobijene u Primeru 19 kada je 92 uzorka seruma dobijenog od zdravih dobrovoljaca testirano na vezivanje (jednovalentnih) C-terminalnih nanotela koja su prisutna u konstruktima ispitanim na Slici 31A. Svaka tačka predstavlja podatak prikupljen testiranjem naznačenih konstrukata u odnosu na jedan od 92 uzoraka seruma. Referentni brojevi su kao što je prikazano u Tabeli CC-2.
Eksperimentalni deo
[0129] Humani uzorci upotrebljeni u Eksperimentalnom delu u nastavku dobijeni su iz komercijalnih izvora ili od humanih dobrovoljaca (nakon dobijanja svih potrebnih saglasnosti i odobrenja) i korišćeni su u skladu sa važeći zakonskim i regulatornim zahtevima (uključujući, bez ograničenja, one koji se odnose na lekarsku tajnu i privatnost pacijenta).
[0130] U primerima u nastavku, vezivanje već postojećih antitela koja su prisutna u upotrebljenim uzorcima (tj. od zdravih dobrovoljaca, pacijenata sa reumatoidnim artritisom (RA) i pacijentima sa SLE) za testirana nanotela određeno je pomoću sistema ProteOn na sledeći način: Vezivanje već postojećih antitela za nanotela uhvaćena na albuminu iz humanog seruma (HSA) određeno je pomoću ProteOn XPR36 (Bio-Rad Laboratories, Inc.). PBS/Tween (fiziološki rastvor sa fosfatnim puferom, pH 7,4, 0,005% Tween20) korišćen je kao radni pufer, i eksperimenti su obavljeni na 25°C. Trake liganda na GLC senzorskom čipu ProteOn aktivirane su pomoću (protok 30µl/min) i HSA je injektovan pri 10µg/ml i ProteOn acetatnom puferu pH 4,5 (protok 100 µl/min) da bi se dobio nivo imobilizacije od oko 3200 RU. Nakon imobilizacije, površine su deaktivirane pomoću etanolamin HCl (protok 30 µl/min). Nanotela su injektovana tokom 2 minuta na 45 µl/min preko površine HSA da se dobije nivo hvatanja
1
nanotela od oko 200 RU. Uzorci koji sadrže već postojeća antitela su centrifugirani tokom 2 minuta na 14.000 o/min i supernatant je razblažen 1:10 u PBS-Tween20 (0,005%) pre nego što je injektovan tokom 2 minuta pri 45 µl/min, nakon čega je sledio korak disocijacije od 400 sekundi. Nakon svakog ciklusa (tj. pre hvatanja novog nanotela i koraka injektovanja uzorka krvi) površine HSA su regenerisane pomoću 2 minuta injektovanja HCl (100mM) pri 45 µl/min. Obrada senzorgrama i analiza podataka je izvedena pomoću uređaja ProteOn Manager 3.1.0 (Bio-Rad Laboratories, Inc.). Senzorgrami koji pokazuju vezivanje već postojećih antitela su dobijeni nakon dvostruke korekcije oduzimanjem 1) disocijacije nanotela-HSA i 2) nespecifičnog vezivanja za traku referentnog liganda. Nivoi vezivanja već postojećih antitela su određeni postavljanjem tački za izveštavanje na 125 sekundi (5 sekundi po završetku asocijacije). Procenat smanjenja vezivanja već postojećih antitela je izračunat u odnosu na nivoe vezivanja na 125 sekundi za referentno antitelo.
Primer 1: Mutacija S112K inhibira vezivanje već postojećih antitela
[0131] Uticaj supstitucije na poziciji 112 na vezivanje već postojećih antitela u humanim uzorcima za nanotela određen je i upoređen sa uticajem C-terminalne ekstenzije alanina, kao što je opisano u WO 12/175741.
[0132] Dva referentna jedinjenja (referenca A bez C-terminalne ekstenzije alanina i referenca B sa C-terminalnom ekstenzijom alanina) i varijante tih referentnih jedinjenja sa različiti mutacijama na poziciji 112 ispitana su na serumima šest različitih pacijenata sa RA i osam seruma dobijenih od različitih zdravih humanih ispitanika. Vezivanje već postojećih antitela u uzorcima za ispitana nanotela izmereno je na sistemu ProteOn prema opštom protokolu koji je gore prikazan. Rezultati su prikazani u Tabeli A ispod.
[0133] Kao što se vidi, od mutacija na poziciji 112 koje su ispitane, mutacija S112K je dala smanjenje vezivanja već postojećih antitela koja su bila prisutna u testiranim serumima koje je bilo uporedivo sa onim kod C-terminalne ekstenzije alanina (čak i bez C-terminalne ekstenzije alanina prisutne u varijanti S112K). Slični rezultati su dobijeni sa tri uzorka humane plazme (podaci nisu prikazani).
2
Tabela A: poređenje mutacija na poziciji 112 sa C-terminalnom ekstenzijom alanina na vezivanje već postojećih antitela prisutnih u serumu pacijenata sa RA i humanim dobrovoljcima
Primer 2: Uticaj mutacije S112K na vezivanje već postojećih antitela prisutnih u uzorcima ljudi sa SLE
[0134] Iste varijante nanotela kao što su korišćene u Primeru 1 testirane su na vezivanje već postojećih antitela iz 7 uzoraka seruma dobijenih od pacijenata koji su potvrđeno pozitivni na sistemski eritemski lupus (SLE). Radi poređenja, uključeni su uzorci plazme dva zdrava dobrovoljca.
[0135] Vezivanje već postojećih antitela u uzorcima za ispitana nanotela izmereno je na sistemu ProteOn prema opštom protokolu koji je gore prikazan. Rezultati su prikazani u Tabeli B ispod.
[0136] Kao što se vidi na osnovu poređenja podataka vezivanja za referencu A i referencu B, uzorci dobijeni od nekih pacijenata sa SLE sadrže neka već postojeća antitela koja još uvek mogu da se vežu za nanotela čak i u prisustvu C-terminalnog ostatka alanina (C-terminalni ostatak alanina je suštinski sprečio/otklonio (delimično ili suštinski u potpunosti) svako vezivanje već postojećih antitela prisutnih u uzorcima plazme zdravih dobrovoljaca).
[0137] Dalje se može videti da vezivanje tih već postojećih antitela iz uzoraka sa SLE može biti mnogo smanjeno mutacijama na poziciji 11 i 112 (a u slučaju pozicije 112, posebno S112K).
Tabela B: poređenje mutacija na poziciji 11 i 112 sa C-terminalnom ekstenzijom alanina na vezivanje već postojećih antitela prisutnih u serumu pacijenata sa SLE
Primer 3: Uticaj kombinovanih mutacija okvira i C-terminalnih ekstenzija na vezivanje već postojećih antitela prisutnih u uzorcima ljudi sa SLE
[0138] Četiri različita nanotela (sa specifičnim mutacijama okvira i sa C-terminalnim ekstenzijama alanina ili bez njih) testirana su na vezivanje već postojećih antitela iz 5 uzoraka seruma dobijenih od pacijenata koji su potvrđeno pozitivni na sistemski eritemski lupus (SLE). Radi poređenja, uključen je jedan uzorak plazme zdravog humanog dobrovoljca.
4
[0139] Vezivanje već postojećih antitela u uzorcima za ispitana nanotela izmereno je na sistemu ProteOn prema opštom protokolu koji je gore prikazan. Rezultati su prikazani u Tabeli C i D ispod.
[0140] Kao što se vidi na osnovu poređenja podataka vezivanja za referencu A i referencu B, uzorci dobijeni od pacijenata sa SLE sadrže neka već postojeća antitela koja još uvek mogu da se vežu za nanotela čak i u prisustvu C-terminalnog ostatka alanina (C-terminalni ostatak alanina je suštinski sprečio/otklonio svako vezivanje već postojećih antitela prisutnih u uzorcima plazme zdravog dobrovoljca).
[0141] Dalje se može videti da vezivanje tih već postojećih antitela iz uzoraka sa SLE može biti mnogo smanjeno mutacijama na poziciji 11 i 112 (a u slučaju pozicije 112, posebno S112K).
Primer 4: uticaj mutacije V89T na vezivanje već postojećih antitela u uzorcima pacijenata sa SLE.
[0142] Kao što je ovde opisano, uzorci dobijeni od nekih pacijenata sa SLE sadrže već postojeća antitela koja mogu da se vežu za izloženi C-terminalni kraj VH domena, čak i kada je prisutna C-terminalna ekstenzija. Ispitivano je da li mutacija V89T može da smanji ili spreči/otkloni takvo vezivanje, u prisustvu ili bez prisustva C-terminalne ekstenzije. Rezultati su takođe prikazani u Tabeli C i E ispod.
[0143] Kao što se vidi, mutacija V89T suštinski može da smanji ili spreči/otkloni vezivanje već postojećih antitela prisutnih u uzorcima dobijenim od pacijenata sa SLE, u sličnoj meri kao mutacija S112K. Međutim, kao što se vidi iz poređenja podataka datih u Tabeli C i E za nanotela sa mutacijom V89T bez C-terminalne ekstenzije sa sličnim nanotelima sa mutacijom S112K i bez C-terminalne ekstenzije, mutacija na poziciji 112 u nanotelu bez C-terminalne ekstenzije generalno smanjuje vezivanje već postojećih antitela prisutnih u uzorcima dobijenim od zdravog dobrovoljca u većoj meri nego mutacija V89T (tj. 100%, 85% i 64% S112K nanotela u odnosu na 9%, 11% i 16% za V89T nanotela, tim redosledom). Iz tog razloga, upotreba mutacije na poziciji 112 (i posebno S112K ili S112K) često će biti poželjnije od upotrebe mutacije na poziciji 89 (kao što je V89T).
[0144] Međutim, kao što se takođe može videti iz podataka u Tabeli C i D, dodavanje C-terminalnog alanina na V89T nanotelo u potpunosti sprečava/otklanja vezivanje već postojećih antitela prisutnih u uzorcima dobijenim od zdravog dobrovoljca, i iz tog razloga će obično biti poželjna kombinacija mutacije V89T i C-terminalne ekstenzije kao što je ovde opisana (tj. u odnosu na upotrebu V89T bez C-terminalne ekstenzije) ako V89T nanotelo ili VH domen ima, ili je nameravano da ima, izložen C-terminalni region u proteinu ili polipeptidu u kome će biti prisutan (na primer, jer formira njegov C-terminalni kraj).
skih
ud
lj
i
E SL
sa
ta
ena
cij
pa
od
nim
ije
dob
a
m
rci
uzo
u
a
tel
anti
h
ći
je
o
st
po
već
je
an
veziv
na acijuta m hiti zličra j ica ut:ca Clja al voro abe
b T do
Tabela D: uticaj različitih mutacija na vezivanje od strane već postojećih antitela u uzorcima dobijenim od pacijenata sa SLE i ljudskih dobrovoljaca
Tabela E: uticaj različitih mutacija na vezivanje od strane već postojećih antitela u uzorcima dobijenim od pacijenata sa SLE i ljudskih dobrovoljaca
[0145] Da bi se potvrdilo da su rezultati/nalazi iz gornje tabele široko primenljivi, reprezentativna nanotela sa mutacijama S112K i/ili V89T su ispitana u odnosu na test panel sa 96 (S112K) i 129 (V89T) uzoraka humanog seruma. Vezivanje je određeno na sistemu ProteOn prema protokolu naznačenom iznad.
[0146] Rezultati su sažeti na Slici 3 i u Tabeli F (reprezentativno nanotelo sa mutacijom S 112K) i na Slici 4 i u Tabeli G (reprezentativno nanotelo sa mutacijom V89T).
[0147] Na Slici 3, nanotelo sa mutacijom S 112K (referenca A S 112K C-terminalni alanin - vidi Tabelu C iznad) upoređeno je sa referentnim nanotelom (referenca A; SEQ ID NO:44). Nanotelo sa mutacijom S112K i referenca A su ispitani u odnosu na svaki od uzoraka seruma, i određen je nivo vezivanja na 125 sekundi (RU). Podaci su zatim prikazani na Slici 3, gde svaka tačka predstavlja vezivanje izmereno u jednom uzorku za referencu A (naznačena kao (1) na Slici 3) ili za mutant S112K (naznačen kao (2) na Slici 3). Tačkasta linija označava izmereni nivo vezivanja od 20 RU.
[0148] Isti podaci su takođe prikazani numerički u Tabeli F, u kojoj se pominje za referencu A, odnosno mutant S112K, ukupan broj ispitanih uzoraka koji daje nivo vezivanja na 125 sekundi od više od 20 RU, manje od 20 RU (tj. od 0 do 20 RU) i manje od 10 RU.
[0149] Kao što se vidi iz podataka predstavljenih na Slici 3 i prikazanih u Tabeli F, za referencu A, više od polovine od 96 ispitanih uzoraka dali su nivo vezivanja od više od 20 RU (u nekim slučajevima, čak 150-200 RU), što ukazuje da se već postojeća antitela prisutna u uzorku vezuju za referencu A. Poređenja radi, kod mutanta S112K, nijedan uzorak nije dao nivo vezivanja veći od 20 RU (a većina manje od 10 RU), što ukazuje da mutacija S122K suštinski može da smanji/spreči vezivanje već postojećih antitela kod svih 96 testiranih uzoraka.
[0150] Sličan prikaz i slični podaci su prikazani na Slici 4, odnosno u Tabeli G, za reprezentativno nanotelo sa mutacijom V89T (referenca A L11V V89T C-terminalni alanin; vidi Tabelu E iznad), ispitano u odnosu na 129 uzoraka seruma i ponovo upoređeno sa referencom A (označena kao (1) na Slici 4; mutant V89T je označen kao (2) na Slici 4). Ponovo, iz prikaza na Slici 4 i podataka u Tabeli G, vidi se da je, uz nekoliko izuzetaka (tj. manje od 10% ispitanih uzoraka, od kojih je onda svaki dao apsolutnu vrednost vezivanja nakon 125 sekundi od oko 100 RU ili manje), mutacija V89T mogla da smanji/spreči vezivanje već postojećih antitela u većini od 129 ispitanih uzoraka, pri čemu je referenca bez mutacija V89T vezana od strane već postojećih antitela u većini ispitanih uzoraka.
Tabela F: ispitivanje reprezentativnog nanotela sa mutacijom S112K u odnosu na 96 uzoraka iz seruma.
Tabela G: ispitivanje mutantnih nanotela sa mutacijom V89T u odnosu na 129 uzoraka iz seruma.
Primer 5: uticaj mutacije V89L kombinovane sa mutacijom T110K ili T110Q na vezivanje već postojećih antitela u uzorcima pacijenata sa SLE.
[0151] Kao što je ovde opisano, uzorci dobijeni od nekih pacijenata sa SLE sadrže već postojeća antitela koja mogu da se vežu za izloženi C-terminalni kraj VH domena, čak i kada je prisutna C-terminalna ekstenzija. Ispitivano je da li mutacija V89L i/ili T110Q ili T110K (ili njihova kombinacija) može da smanji ili spreči/otkloni takvo vezivanje, u prisustvu ili bez prisustva C-terminalne ekstenzije. Rezultati su takođe prikazani u Tabelama H i I, koje predstavljaju podatke dva odvojena eksperimenta (Tabela D iznad takođe prikazuje podatke za mutaciju S112Q kombinovanu sa mutacijom V89L). Nanotela korišćena u Tabeli I su takođe korišćena za generisanje podataka prikazanih na Slici 5 i Tabeli J.
Tabela H: uticaj različitih mutacija na vezivanje od strane već postojećih antitela u uzorcima dobijenim od pacijenata sa SLE i ljudskih dobrovoljaca
1
Tabela I: uticaj različitih mutacija na vezivanje od strane već postojećih antitela u uzorcima dobijenim od pacijenata sa SLE i ljudskih dobrovoljaca.
[0152] Da bi se potvrdilo da su rezultati/nalazi iz gornje tabele široko primenljivi, reprezentativna nanotela sa mutacijama V89L, T110K i/ili T110Q ponovo su ispitana u odnosu na test panel sa 99 uzoraka humanog seruma. Podaci vezivanja su ponovo dobijeni i prikazani kao što je naznačeno u Primeru 4 za rezultate i podatke prikazane na Slici 3 i 4 i Tabeli F i G.
2
[0153] Ispitana nanotela su bila (brojevi odgovaraju numeraciji korišćenoj na Slici 5): (1) Referenca A; (2) Referenca A L11V V89L C-terminalni Ala; (3) Referenca A L11V V89L T110K C-terminalni Ala; (4) Referenca A L11V V89L T110Q C-terminalni Ala; (5) Referenca A L11V T87A V89L C-terminalni Ala. Rezultati su prikazani na Slici 5 i u Tabeli I.
[0154] Kao što se može videti, uvođenje ispitivanih mutacija je ponovo jako smanjilo broj uzoraka u kojima su već postojeća antitela mogla da vežu ispitivana nanotela. Takođe se vidi da, kod nanotela (2) na Slici 5 (referenca A L11V V89L C-terminalni Ala), neki uzorci još uvek pokazuju vezivanje već postojećih antitela nakon 125 sekundi na nivou većem od 20 RU (ali već mnogo manjem od 100 RU). Međutim, kada je mutacija V89L kombinovana sa mutacijom T110K (nanotelo (3)) ili mutacijom T100Q (nanotelo (4)), onda je suštinski svih 99 uzoraka pokazalo nivo vezivanja manji od 20 RU (i zapravo, manji od 10 RU, vidi Tabelu J).
Tabela J: ispitivanje reprezentativnih nanotela sa mutacijom V89L, T110K i/ili T110Q u odnosu na 99 uzoraka iz seruma.
Primer 6: ispitivanje polivalentnih konstrukata za vezivanje već postojećih antitela Napravljeni su polivalentni konstrukti na bazi sledećih nanotela:
[0155]
Nanotelo A (usmereno na terapeutski cilj):
Nanotelo B (usmereno na albumin iz seruma):
Nanotelo C (usmereno na terapeutski cilj):
[0156] Napravljeni konstrukti su navedeni u Tabeli K ispod (u svakom slučaju, uvedena supstitucija (supstitucije) u relevantnom nanotelu (ako postoji) pomenuta je u zagradi. „HIS6“ označava N-terminalnu his oznaku 6 ostataka histidina, a „-Ala“ označava C-terminalnu ekstenziju 1 ostatka alanina).
Tabela K: ispitivani polivalentni konstrukti
4
[0157] Reprezentativni polivalentni konstrukti su ispitani na vezivanje od strane već postojećih antitela koja su prisutna u uzorcima krvi ili seruma dobijenim od pacijenata sa SLE i zdravih dobrovoljaca. U oba slučaja je za određivanje korišćen ProteOn, suštinski kako je gore opisano.
[0158] Ispitivani reprezentativni polivalentni konstrukti su navedeni u Tabeli L (trovalentni konstrukti) i M (dvovalentni konstrukti), i rezultati su prikazani na Slikama 6-8 i u Tabelama N-Q. Ispitivani trovalentni konstrukti su dobijeni od referentnog konstrukta Nanotelo A-35GS-Nanotelo A-35GS-Nanotelo B („referenca X“) a dvovalentni konstrukti su dobijeni od referentnog konstrukta Nanotelo A-35GS- Nanotelo B („referenca Y“). Svi konstrukti (osim referentnih konstrukata) su imali, naznačeno je, C-terminalni ostatak alanina kao i, u svakom gradivnom elementu od „Nanotela A“ i „Nanotela B“, naznačene mutacije.
Tabela N: rezultati ispitivanja trovalentnih konstrukata za vezivanje od strane već postojećih antitela prisutnih u 98 uzoraka seruma dobijenih od zdravih humanih dobrovoljaca. Rezultati su takođe prikazani na Slici 6 kao prikaz u kome svaka tačka predstavlja tačku sa podacima prikupljenim ispitivanjem navedenih konstrukata u odnosu na jedan od 98 uzoraka seruma.
Tabela O: rezultati ispitivanja trovalentnih konstrukata za vezivanje od strane već postojećih antitela prisutnih u 30 odabranih uzoraka seruma dobijenih od zdravih humanih dobrovoljaca. 30 upotrebljenih uzoraka je prvo odabrano na osnovu toga što dokazano imaju visok titar već postojećih antitela, ili zato što je poznato da već postojeća antitela prisutna u uzorku još uvek imaju visok stepen vezivanja čak i ako je prisutan C-terminalni ostatak alanina. Rezultati su takođe prikazani na Slici 7 kao prikaz u kome svaka tačka predstavlja tačku sa podacima prikupljenim ispitivanjem navedenih konstrukata u odnosu na jedan od odabranih 30 uzoraka seruma.
Tabela P: rezultati ispitivanja dvovalentnih konstrukata za vezivanje od strane već postojećih antitela prisutnih u 98 uzoraka seruma dobijenih od zdravih humanih dobrovoljaca. Rezultati su takođe prikazani na Slici 8 kao prikaz u kome svaka tačka predstavlja tačku sa podacima prikupljenim ispitivanjem navedenih konstrukata u odnosu na jedan od 98 uzoraka seruma.
[0159] Tri reprezentativna trovalentna konstrukta su takođe ispitana u odnosu na uzorke seruma dobijene od pacijenata sa SLE. Rezultati su prikazani u Tabeli Q.
.
E L
H
sa atajen paci od eijen dob arumse e
uzork
nasu no od uta ukastrkonih ntn ale trovih vntatizenre rep njeivait
:isp
Q
a abel
T
Primer 7: Nanotela i konstrukti nanotela usmerena na jonski kanal Kv1.3.
[0160] U jednom specifičnom aspektu, ISVD iz pronalaska i konkretnije, nanotela iz pronalaska i jedinjenja mogu biti usmerena na jonski kanal Kv.1.3.
[0161] Privremena zavisna prijava u SAD USSN 62/014,023 (naslov: "Kv1.3 binding immunoglobulins"; podnosilac prijave: Ablynx N.V.; datum ponošenja: 18. jun 2014.) kao i nakon toga podneta privremena prijava u SAD istog naslova podneta 16. marta 2015. (podnosilac prijave: Ablynx N.V.) između ostalog opisuje pojedinačne varijabilne domene imunoglobulina (a posebno nanotela) koji su usmereni na jonski kanal Kvl.3 selektivan prema kalijumu, gejtovan naponom, kao i proteine, polipeptide i druge konstrukte na bazi nanotela koji sadrže najmanje jedno takvo nanotelo usmereno na Kv1.3.
[0162] Mutacija opisana u predmetnoj aplikaciji (opciono pogodno kombinovana sa C-terminalnom ekstenzijom kao što je ovde opisana i/ili u WO 12/175741) takođe mogu pogodno biti primenjeni na nanotela, proteine, polipeptide i druge konstrukte na bazi nanotela usmerene na Kv1.3 koji su opisani u ove dve patentne prijave za SAD.
[0163] Tako, u jednom aspektu, pronalazak se odnosi na VH domen koji je usmeren na Kv1.3 i koji je ovde dalje opisan za ISVD iz pronalaska (tj. sadrži aminokiselinske ostatke/mutacije kao što su definisani zahtevima).
[0164] Ponovo, kao kod drugih aspekata i otelotvorenja pronalaska koja su ovde opisana, kada se kaže da je specifični ISVD (kao što je ISVD usmeren na Kv1.3 sa K na poziciji 112 opisan u ovom primeru) „prema pronalasku“ ili „kao što je ovde dalje opisan“, poželjni aspektu/otelotvorenja i preferencije koji su ovde generalno opisani za ISVD iz pronalaska takođe se specifično primenjuju na pomenute specifične ISVD, ako nije izričito drugačije rečeno ili ako specifični tehnički kontekst zahteva drugačije.
[0165] U konkretnom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na ISVD sa teškim lancem koji je usmeren na Kv1.3, u kome (i) pozicija 112 je K.Posebno, u takvim ISVD na Kv1.3: aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
● aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i
2
● aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv).
[0166] VH domeni na Kv1.3 pomenuti u ovom primeru mogu konkretno da imaju CDR-e koji su kao što je opisano na stranama 5-10 USSN 62/014,023 (uključujući sve poželjne aspekte/otelotvorenja takvih CDR-a) ili njihove verzije sa optimizovanim sekvencama, kao što je opisano u drugim patentnim prijavama pomenutim iznad.
[0167] Posebno, VH domeni na Kv 1.3 koji se pominju u ovom primeru mogu posebno da imaju kombinaciju CDR1, CDR2 i CDR3 koja je odabrana od jedne od kombinacija CDR 1, CDR2 i CDR3 navedenih kao poželjni aspekti na spisku na stranama 9 i 10 USSN 62/014,023.
[0168] U nekim poželjnim, ali neograničavajućim aspektima pronalazaka:
u ISVD iz pronalaska: (i) CDR1 (prema Kabatu) je sekvenca SED ID NO:166 ili aminokiselinska sekvenca koja ima jednu ili dve različite aminokiseline u odnosu na sekvencu SEQ ID NO:166; (ii) CDR2 (prema Kabatu) je sekvenca SED ID NO:167 ili aminokiselinska sekvenca koja ima jednu ili dve različite aminokiseline u odnosu na sekvencu SEQ ID NO:167; i (iii) CDR3 (prema Kabatu) je sekvenca SED ID NO:168 ili aminokiselinska sekvenca koja ima jednu ili dve različite aminokiseline u odnosu na sekvencu SEQ ID NO:168; i čak poželjnije: (i) CDR1 (prema Kabatu) je sekvenca SED ID NO:166; (ii) CDR2 (prema Kabatu) je sekvenca SED ID NO:167; i (iii) CDR3 (prema Kabatu) je sekvenca SED ID NO:168; i/ili u ISVD iz pronalaska: (i) CDR1 (prema Abm-u) je sekvenca SED ID NO:169 ili aminokiselinska sekvenca koja ima jednu ili dve različite aminokiseline u odnosu na sekvencu SEQ ID NO:169; (ii) CDR2 (prema Abm-u) je sekvenca SED ID NO:170 ili aminokiselinska sekvenca koja ima jednu ili dve različite aminokiseline u odnosu na sekvencu SEQ ID NO:170; i (iii) CDR3 (prema Abm-u) je sekvenca SED ID NO:171 ili aminokiselinska sekvenca koja ima jednu ili dve različite aminokiseline u odnosu na sekvencu SEQ ID NO:171; i čak poželjnije: (i) CDR1 (prema Abm-u) je sekvenca SED ID NO:169; (ii) CDR2 (prema Abm-u) je sekvenca SED ID NO:170; i (iii) CDR3 (prema Kabatu) je sekvenca SED ID NO:178.
[0169] VH domeni iz pronalaska usmereni na Kv1.3 su ISVD (i konkretnije nanotelo) kao što je definisano zahtevima usmeren na Kv1.3. Ovde je opisan protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt koji sadrži najmanje jedan takav ISVD. Takav protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt može takođe da bude kao što je ovde dalje opisano, i može, na primer, da ima produženi poluživot (tj. kao što je ovde opisano, npr. poluživot izražen kao t1/2 beta, kod humanih ispitanika ili kod humanih ispitanika za najmanje 1 dan, poželjno najmanje 3 dana, poželjnije najmanje 7 dana, kao što je najmanje 10 dana), i u tu svrhu može, na primer, da sadrži nanotelo koje vezuje albumin iz seruma, koje takođe može biti nanotelo iz pronalaska koje vezuje albumin iz seruma (ponovo, kao što je definisano zahtevima).
[0170] Takođe, takav ISVD može pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju (kao što je dalje opisano ovde i u WO 12/175741), posebno kada pomenuti ISVD formira C-terminalni kraj proteina, polipeptida ili drugog jedinjenja ili konstrukta koji ga sadrži (ponovo, kao što je ovde dalje opisano).
[0171] Na primer, i bez ograničenja, ISVD iz pronalaska usmereni na Kv1.3 može biti jedna od sekvenci navedenih u Tabeli A-1 USSN 62/014,023 (SEQ ID NO: 1 do 123 u USSN 62/014,023) ili jedna od sekvenci navedenih u Tabeli A-1 US privremene patentne prijave pod nazivom „Kv1.3 binding immunoglobulins“ (podnosilac prijave: Ablynx N.V.; datum ponošenja: 16. mart 2015.) (SEQ ID NO: 1 do 123, 495, 498 do 513 ili 523 do 540 u pomenutoj US privremenoj prijavi; i posebno sekvenca SEQ ID NO: 495), ali pogodno sa S112K kao u zahtevu, i opciono takođe sa C-terminalnom ekstenzijom.
[0172] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na Kv1.3 je varijanta nanotela iz SEQ ID NO:137 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO:137), u kome:
● aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
● aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i
4
● aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv).
[0173] Neki ilustrativni primeri nanotela iz otkrića usmerenih na Kv1.3 i jedinjenja koja ih sadrže navedeni su na Slici 9A (jednovalentna nanotela: SEQ ID NO: 138 do 155) i Slici 9B (trovalentni bispecifični konstrukti sa produženim poluživotom: SEQ ID NO: 156 do 164). Jedinjenja koja sadrže ili se suštinski sastoje od najmanje jednog (kao što su jedno, dva ili tri) anti-Kv1.3 nanotela izabranog od anti-Kv1.3 nanotela SEQ ID NO: 138 do 155 čine dalji aspekt otkrića. Takođe, svako od jedinjenja SEQ ID NO: 156 do 164 čini dalji ilustrativni aspekt otkrića. U jednom specifičnom ilustrativnom aspektu, takva jedinjenja sadrže dva takva nanotela usmerena na Kv1.3 i jedno nanotelo usmereno na albumin iz humanog seruma. Takođe, ponovo, takav konstrukt može da sadrži pogodne linkere i C-terminalnu ekstenziju.
[0174] Jednovalentna anti-Kv1.3 nanotela SEQ ID NO: 138 do 155 stvorena su uvođenjem mutacija L11V i V89L u početnu sekvencu SEQ ID NO: 137 (referenca). Pored toga, uvedene su različite kombinacije humanizujućih mutacija (ili drugih mutacija za optimizaciju sekvence), poput E1D, A14P, G19R, M53A ili M53Q ili M53Y, T62S, A74S, K83R, S94G i/ili T97E). Specifične mutacije uvedene u svaku od sekvenci SEQ ID NO: 138 do 155 date su na Slici 9A.
[0175] Neka od jednovalentnih anti-Kv1.3 nanotela sa Slike 9A takođe su formatirana kao trovalentni bispecifični konstrukti koji sadrže dva nanotela usmerena na Kv1.3 i jedno nanotelo koje produžava poluživot usmereno na albumin iz humanog seruma (SEQ ID NO:109, naziva se i „ALB-82“ na Slici 9B). Korišćeni su 35GS linkeri i svi konstrukti imaju C-terminalnu ekstenziju (jedan C-terminalni ostatak alanina). Sekvence dobijenih konstrukata su date u SEQ ID NO 156 do 164. Od toga, tri konstrukta (SEQ ID NO: 156, 157 i 160) su testirana za vezivanje od strane već postojećih antitela u uzorcima dobijenim od 47 ljudskih ispitanika sa dijabetesom i 90 zdravih ljudskih ispitanika, koristeći opšti protokol koji je ovde opisan. Vezivanje od strane već postojećih antitela iz ova dva skupa upoređeno je sa referentnim konstruktom SEQ ID NO:165, koji je odgovarajući trovalentni bispecifični konstrukt na bazi gradivnog elementa referentnog anti-KV1.3 vezivnog bloka SEQ ID NO:137 i vezivača albumina iz seruma Alb-8 (SEQ ID NO:46), ponovo u kombinaciji sa C-terminalnom ekstenzijom alanina. Rezultati su prikazani na Slici 10 (uzorci od 47 pacijenata sa dijabetesom) i Slici 11 (uzorci od 90 zdravih volontera). U svakom slučaju, konstrukti sa mutacijama L11V i V89L pokazali su smanjeno vezivanje od strane već postojećih antitela u poređenju sa referentnim konstruktom.
Primer 8: VH domeni (a naročito nanotela) usmereni na IL-23, i jedinjenja koja ih sadrže.
[0176] U jednom specifičnom aspektu, ISVD iz pronalaska i konkretnije, nanotela iz pronalaska), i jedinjenja koja ih sadrže biti usmerena na IL-23.
[0177] VH domen iz pronalaska usmeren na IL-23 uopšteno će sadržati: (i) odgovarajuće sekvence okvira koje pogodno sadrže aminokiselinske ostatke/mutacije iz pronalaska kako su definisane zahtevima; kao i (ii) sekvence CDR koje omogućavaju VH domenu iz pronalaska da se specifično vezuje za IL-23. Pored toga, takav VH domen iz pronalaska usmeren na IL-23 može takođe pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisana, naročito kada je navedeni VH domen jednovalentan ili gradi C-terminalni kraj jedinjenja iz pronalaska u kome je prisutan navedeni VH domen (ponovo, kao što je ovde dalje opisano). Takvi VH domeni iz pronalaska usmereni na IL-23 su ISVD.
[0178] Ponovo, kao kod drugih aspekata i otelotvorenja pronalaska koja su ovde opisana, kada se kaže da je specifični ISVD (kao što je ISVD usmeren na IL-23 sa K na poziciji 112 opisan u ovom primeru) „prema pronalasku“ ili „kao što je ovde dalje opisan“, poželjni aspekti/otelotvorenja i preferencije koji su ovde generalno opisani za ISVD iz pronalaska takođe se specifično primenjuju na pomenute specifične ISVD, ako nije izričito drugačije rečeno ili ako specifični tehnički kontekst ne zahteva drugačije.
[0179] Tako, u konkretnom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na ISVD sa teškim lancem koji je usmeren na IL-23, u kome (i) pozicija 112 je K. Posebno, u takvim ISVD usmerenim na IL-23:
● aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
● aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv).
[0180] ISVD iz pronalaska usmeren na IL-23 je ISVD kao što je definisano zahtevima (i konkretnije nanotelo) usmeren na IL-23. Ovde je u ilustrativne svrhe opisan protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt koji sadrži najmanje jedan takav ISVD. Takav protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt može takođe da bude kao što je ovde dalje opisano, i može, na primer, da ima produženi poluživot (tj. kao što je ovde opisano, npr. poluživot izražen kao t1/2 beta, kod humanih ispitanika ili kod humanih ispitanika za najmanje 1 dan, poželjno najmanje 3 dana, poželjnije najmanje 7 dana, kao što je najmanje 10 dana), i u tu svrhu može, na primer, da sadrži nanotelo koje vezuje albumin iz seruma, koje takođe može biti nanotelo iz pronalaska koje vezuje albumin iz seruma (ponovo, kao što je definisano zahtevima).
[0181] Takođe, takav ISVD može pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju (kao što je dalje opisano ovde i u WO 12/175741), posebno kada pomenuti ISVD formira C-terminalni kraj proteina, polipeptida ili drugog jedinjenja ili konstrukta koji ga sadrži (ponovo, kao što je ovde dalje opisano).
[0182] U jednom poželjnom aspektu, ISVD iz pronalaska usmeren na IL-23 sadrže (i) sekvencu CDR1 koja je sekvenca SEQ ID NO: 173 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu različitu aminokiselinu od sekvence SEQ ID NO: 173; (ii) sekvencu CDR2 koja je sekvenca SEQ ID NO: 174 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 174; i (iii) sekvencu CDR3 koja je sekvenca SEQ ID NO: 175 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 175.
[0183] Poželjnije, u ISVD iz pronalaska koji je usmeren na IL-23 prema ovom aspektu: (i) CDR1 je SEQ ID NO:173; (ii) CDR2 je SEQ ID NO: 174; i (iii) CDR3 je SEQ ID NO: 175.
[0184] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na IL-23 je varijanta nanotela iz SEQ ID NO:172 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence, sa SEQ ID NO:172), u kome:
● aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
● aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv). CDR takvog ISV su poželjno kako je definisano u prethodna dva paragrafa.
[0185] U drugom poželjnom aspektu, ISVD iz pronalaska usmereni na IL-23 sadrže (i) sekvencu CDR1 koja je sekvenca SEQ ID NO: 191 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu različitu aminokiselinu od sekvence SEQ ID NO: 191; (ii) sekvencu CDR2 koja je sekvenca SEQ ID NO: 192 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 192; i (iii) sekvencu CDR3 koja je sekvenca SEQ ID NO: 193 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 193.
[0186] Poželjnije, u ISVD iz pronalaska koji je usmeren na IL-23 prema ovom aspektu: (i) CDR1 je SEQ ID NO: 191; (ii) CDR2 je SEQ ID NO: 192; i (iii) CDR3 je SEQ ID NO: 193.
[0187] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na IL-23 je varijanta nanotela iz SEQ ID NO:172 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence, sa SEQ ID NO:190), u kome:
● aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
● aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv). Ponovo, CDR takvog ISV su poželjno kako je definisano u prethodna dva paragrafa.
[0188] Neki specifično poželjni, ali neograničavajući primeri takvih nanotela iz pronalaska usmerenih na IL-23 navedeni su na Slici 12A kao SEQ ID NO: 180, 188, 198 i 206, odnosno Slici 12B kao SEQ ID NO: 216 i 224; i svako od ovih nanotela čini dalji aspekt pronalaska.
[0189] U ilustrativne svrhe, primena se takođe odnosi na jedinjenje usmereno na IL-23 koje sadrži najmanje jedno (kao što je jedno, dva ili tri) od nanotela iz pronalaska SEQ ID NO: 180, 188, 198 i 206 i/ili 216 i 224. Takva jedinjenja usmerena na IL-23 mogu ponovo da budu kao što je ovde dalje opisano, i tako, na primer, mogu da sadrže pogodne linkere, mogu da sadrže C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisana, i mogu da imaju produženi poluživot (na primer, zato što sadrže nanotelo usmereno na albumin iz humanog seruma, kao što je (poželjno) nanotelo iz pronalaska usmereno na albumin iz humanog seruma). Upućuje se na podatke prikazane u Tabeli R ispod.
[0190] Kao što je opisano, na primer, u WO 2009/068627, WO 2010/142534 i WO2011/135026, jedna posebno poželjna klasa jedinjenja zasnovanih na nanotelima koja su usmerena na IL-23 su biparatopna jedinjenja. Tako, u jednom ilustrativnom aspektu otkrića, jedinjenje usmereno na IL-23 je biparatopni konstrukt koji sadrži jedan ISV koji je SEQ ID NO: 172 ili (poželjno) ISV koji je dobijen od SEQ ID NO:172 (kao što je opisano u ovom Primeru 8) i jedan ISV koji je SEQ ID NO: 190 ili (poželjno) ISV koji je dobijen od SEQ ID NO: 190 (kao što je opisano u ovom Primeru 8). Takvi biparatopni konstrukti takođe mogu imati produženi poluživot (tj. putem ISV koji vezuje albumin iz seruma). Neki specifični primeri takvih biparatopnih konstrukata dati su u SEQ ID NO: 514 do 549.
[0191] Primeri jedinjenja usmerenih na IL-23 dati su na Slici 22 kao SEQ ID NO: 514 do 549e. Tako, u drugom aspektu, otkriće se odnosi na polipeptid koji je usmeren na IL-23 i koji ima aminokiselinsku sekvencu koja je izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 514 do 549. Uopštenije, jedinjenja usmerena na IL-23 mogu da budu kao što je opisano u WO 2009/068627, WO 2010/142534 i WO2011/135026, ali sadrže ISVD iz pronalaska. Ona takođe mogu da se koriste za namene koje su opisane u WO 2009/068627, WO 2010/142534 i WO2011/135026.
Tabela R: Primeri jedinjenja usmerenih na IL-23.
1
2
4
Primer 9: VH domeni (a naročito nanotela) usmereni na OX40-L, i jedinjenja koja ih sadrže.
[0192] U jednom specifičnom aspektu, ISVD iz pronalaska i konkretnije, nanotela iz pronalaska, i jedinjenja koja ih sadrže mogu biti usmerena na OX40-L.
[0193] ISVD iz pronalaska usmeren na OX40-L uopšteno će sadržati: (i) pogodne sekvence okvira koje pogodno sadrže aminokiselinske ostatke/mutacije iz pronalaska kako je definisano zahtevima; kao i (ii) sekvence CDR koje omogućavaju VH domenu iz pronalaska da se specifično vezuje za OX40-L. Pored toga, takav VH domen iz pronalaska usmeren na OX40L može takođe pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano, naročito kada je navedeni VH domen jednovalentan ili formira C-terminalni kraj jedinjenja iz pronalaska u kome je pomenuti VH domen prisutan (ponovo, kao što je ovde dalje opisano). Takvi VH domeni iz pronalaska usmereni na OX40-L su ISVD.
[0194] Ponovo, kao kod drugih aspekata i otelotvorenja pronalaska koja su ovde opisana, kada se kaže da je specifični ISVD (kao što je ISVD usmeren na OX40-L sa K na poziciji 112 opisan u ovom primeru) „prema pronalasku“ ili „kao što je ovde dalje opisan“, poželjni aspekti/otelotvorenja i preferencije koji su ovde generalno opisani za ISVD iz pronalaska takođe se specifično primenjuju na pomenute specifične ISVD, ako nije izričito drugačije rečeno ili ako specifični tehnički kontekst ne zahteva drugačije.
[0195] Tako, u konkretnom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na ISVD koji je usmeren na OX40-L, u kome (i) pozicija 112 je K. Posebno, u takvim ISVD usmerenim na OX40-L:
● aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
● aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv).
[0196] ISVD iz pronalaska usmeren na OX40-L je ISVD kao što je definisano zahtevima (a konkretnije antitelo) usmeren na OX40-L. Ovde je u ilustrativne svrhe opisan protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt koji sadrži najmanje jedan takav ISVD. Takav protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt može takođe da bude kao što je ovde dalje opisano, i može, na primer, da ima produženi poluživot (tj. kao što je ovde opisano, npr. poluživot izražen kao t1/2 beta, kod humanih ispitanika ili kod humanih ispitanika za najmanje 1 dan, poželjno najmanje 3 dana, poželjnije najmanje 7 dana, kao što je najmanje 10 dana), i u tu svrhu može, na primer, da sadrži nanotelo koje vezuje albumin iz seruma, koje takođe može biti nanotelo iz pronalaska koje vezuje albumin iz seruma (ponovo, kao što je definisano zahtevima).
[0197] Takođe, takav ISVD može pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju (kao što je dalje opisano ovde i u WO 12/175741), posebno kada pomenuti ISVD formira C-terminalni kraj proteina, polipeptida ili drugog jedinjenja ili konstrukta koji ga sadrži (ponovo, kao što je ovde dalje opisano).
[0198] U jednom poželjnom aspektu, ISVD iz pronalaska usmereni na OX40-L sadrže (i) sekvencu CDR1 koja je sekvenca SEQ ID NO: 209 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu različitu aminokiselinu od sekvence SEQ ID NO: 209; (ii) sekvencu CDR2 koja je sekvenca SEQ ID NO: 210 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 210; i (iii) sekvencu CDR3 koja je sekvenca SEQ ID NO: 211 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 211.
[0199] Poželjnije, u ISVD iz pronalaska koji je usmeren na OX40-L prema ovom aspektu: (i) CDR1 je SEQ ID NO:209; (ii) CDR2 je SEQ ID NO: 210; i (iii) CDR3 je SEQ ID NO: 211.
[0200] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na OX40-L je varijanta nanotela iz SEQ ID NO:208 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence, sa SEQ ID NO:208), u kome:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv). CDR takvog ISV su poželjno kako je definisano u prethodna dva paragrafa.
[0201] Neki specifično poželjni, ali neograničavajući primeri nanotela iz pronalaska usmerenih na OX40-L nabrojani su na Slici 13 kao SEQ ID NO: 216 i 224; i svako od ovih nanotela čini dalji aspekt pronalaska.
[0202] Pronalazak se takođe odnosi na jedinjenje usmereno na OX40-L koje sadrži najmanje jedno (kao što je jedno, dva ili tri) od nanotela iz pronalaska SEQ ID NO: 216 i 224. Takva jedinjenja usmerena na OX40-L mogu ponovo da budu kao što je ovde dalje opisano, i tako na primer mogu da sadrže pogodne linkere, mogu da sadrže C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano i mogu da imaju produženi poluživot (na primer zato što sadrže nanotelo usmereno na albumin iz humanog seruma, kao što je (poželjno) nanotelo iz pronalaska usmereno na albumin iz humanog seruma). Upućuje se na podatke prikazane u Tabeli S ispod.
[0203] Primeri jedinjenja iz otkrića usmerenih na OX40-L dati su na Slici 23 kao SEQ ID NO: 550 do 585. Tako, u drugom ilustrativnom aspektu, otkriće se odnosi na polipeptid koji je usmeren na OX40-L i koji ima aminokiselinsku sekvencu koja je izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 550 do 585. Uopštenije, jedinjenja usmerena na OX40-L mogu da budu kao što je opisano u WO 2011/073180, ali sadrže ISVD iz pronalaska. Ona takođe mogu da se koriste za namene koje su opisane u WO 2011/073180.
Tabela S: Primeri jedinjenja usmerenih na OX40-L.
1
11
12
Napomene:
(<1>) U ovoj Tabeli:
-„Jednovalentan“ se uopšteno odnosi na polipeptide/konstrukte koji sadrže jedan ISV usmeren na OX40-L. Oni mogu dalje da sadrže ISV koji produžava poluživot (kao što je ISV usmeren na albumin iz seruma).
1
Napomene:
-„Dvovalentan“ se uopšteno odnosi na polipeptide/konstrukte koji sadrže dva ISV usmerena na OX40-L (koji mogu biti isti ili različiti). Oni mogu ponovo dalje da sadrže ISV koji produžavaju poluživot (kao što je ISV usmeren na albumin iz seruma).
-„Bispecifičan“ se uopšteno odnosi na polipeptide/konstrukte koji sadrže najmanje jedan (kao što je 1 ili 2) ISV usmeren na OX40-L i najmanje jedan (kao što je 1 ili 2) drugi ISV usmeren na terapeutski cilj. Oni mogu dalje da sadrže ISV koji produžavaju poluživot (kao što je ISV usmeren na albumin iz seruma).
-U polipeptidima/konstruktima koji su opisani u ovoj tabeli, najmanje jedan od prisutnih ISV usmerenih na OX40-L je ISV iz pronalaska, a poželjno su svi prisutni ISV usmereni na OX40-L u takvom polipeptidu/konstruktu ISV iz pronalaska. Takođe, kada je ISV koji produžava poluživot i/ili ISV usmeren na drugi terapeutski cilj prisutan u takvom polipeptidu/konstruktu, svaki od njih (a poželjno svi) može takođe biti (i poželjno jeste) ISV iz pronalaska
(<2>): Svi „dvovalentni“ konstrukti u ovoj Tabeli mogu takođe biti biparatopni, što znači da sadrže najmanje dva (kao što je dva) ISV usmerena na OX40-L koji su usmereni na različite epitope na OX40-L.
(<3>): Kao što će biti jasno stručnjaku, drugi/dalji bispecifični konstrukti osim navedenih mogu se napraviti korišćenjem pomenutih gradivnih elemenata i linkera.
(<4>) Poželjno, svaki prisutni [OX40-L] je nezavisno izabran od SEQ ID NO: 464 do 477 i/ili 482 do 495. Takođe, prisutni [OX40-L] mogu biti isti ili različiti; u biparatopnom polipeptidu/konstruktu biće usmereni na različite epitope na OX40-L.
(<5>) Svaki od polipeptida/konstrukata koji su pomenuti u ovoj koloni putem upućivanja na SEQ ID čini pojedinačan poseban aspekt pronalaska.
Primer 10: VH domeni (a naročito nanotela) usmereni na IgE, i jedinjenja koja ih sadrže.
[0204] U jednom specifičnom aspektu, ISVD iz pronalaska i konkretnije, nanotela iz pronalaska, i jedinjenja koja ih sadrže mogu biti usmerena na IgE.
[0205] ISVD iz pronalaska usmeren na IgE uopšteno će sadržati: (i) odgovarajuće sekvence okvira koje pogodno sadrže aminokiselinske ostatke/mutacije iz pronalaska kako su definisane
1 4
zahtevima; kao i (ii) sekvence CDR koje omogućavaju VH domenu iz pronalaska da se specifično vezuje za IgE. Pored toga, takav VH domen iz pronalaska usmeren na IgE može takođe pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano, naročito kada je navedeni VH domen jednovalentan ili gradi C-terminalni kraj jedinjenja iz pronalaska u kojem je prisutan navedeni VH domen (ponovo, kao što je ovde dalje opisano). Takvi VH domeni iz pronalaska usmereni na IgE su ISVD.
[0206] Ponovo, kao kod drugih aspekata i otelotvorenja pronalaska koja su ovde opisana, kada se kaže da je specifični ISVD (kao što je ISVD usmeren na IgE sa K na poziciji 112 opisan u ovom primeru) „prema pronalasku“ ili „kao što je ovde dalje opisan“, poželjni aspekti/otelotvorenja i preferencije koji su ovde generalno opisani za ISVD iz pronalaska takođe se specifično primenjuju na pomenute specifične ISVD, ako nije izričito drugačije rečeno ili ako specifični tehnički kontekst ne zahteva drugačije.
[0207] Tako, u konkretnom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na ISVD koji je usmeren na IgE, u kome (i) pozicija 112 je K. Posebno, u takvim ISVD usmerenim na IgE:
● aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
● aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv).
[0208] ISVD iz pronalaska usmeren na IgE je ISVD kao što je definisano zahtevima (i konkretnije nanotelo) usmeren na IgE. Ovde je u svrhe ilustracije opisan protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt koji sadrži najmanje jedan takav ISVD. Takav protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt može takođe da bude kao što je ovde dalje opisano, i može, na primer, da ima produženi poluživot (tj. kao što je ovde opisano, npr. poluživot izražen kao t1/2
1
beta, kod humanih ispitanika ili kod humanih ispitanika za najmanje 1 dan, poželjno najmanje 3 dana, poželjnije najmanje 7 dana, kao što je najmanje 10 dana), i u tu svrhu može, na primer, da sadrži nanotelo koje vezuje albumin iz seruma, koje takođe može biti nanotelo iz pronalaska koje vezuje albumin iz seruma (ponovo, kao što je definisano zahtevima).
[0209] Takođe, takav ISVD može pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju (kao što je dalje opisano ovde i u WO 12/175741), posebno kada pomenuti ISVD formira C-terminalni kraj proteina, polipeptida ili drugog jedinjenja ili konstrukta koji ga sadrži (ponovo, kao što je ovde dalje opisano).
[0210] U jednom poželjnom aspektu, ISVD iz pronalaska usmereni na IgE sadrže (i) sekvencu CDR1 koja je sekvenca SEQ ID NO: 227 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu različitu aminokiselinu od sekvence SEQ ID NO: 227; (ii) sekvencu CDR2 koja je sekvenca SEQ ID NO: 228 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 228; i (iii) sekvencu CDR3 koja je sekvenca SEQ ID NO: 229 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 229.
[0211] Poželjnije, u ISVD iz pronalaska koji je usmeren na IgE prema ovom aspektu: (i) CDR1 je SEQ ID NO: 227; (ii) CDR2 je SEQ ID NO: 228; i (iii) CDR3 je SEQ ID NO: 229.
[0212] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na IgE je varijanta nanotela SEQ ID NO: 226 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO: 226), u kojoj:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna
1
kombinacija od (i) do (iv). CDR takvog ISV su poželjno kako je definisano u prethodna dva paragrafa.
[0213] Neki specifično poželjni, ali neograničavajući primeri nanotela iz pronalaska usmerenih na IgE nabrojani su na Slici 14 kao SEQ ID NO: 234 i 242; i svako od ovih nanotela čini dalji aspekt pronalaska.
[0214] Pronalazak se takođe odnosi na jedinjenje usmereno na IgE koje sadrži najmanje jedno (kao što je jedno, dva ili tri) od nanotela iz pronalaska SEQ ID NO: 234 i 242. Takva jedinjenja usmerena na IgE mogu ponovo da budu kao što je ovde dalje opisano, i tako na primer mogu da sadrže pogodne linkere, mogu da sadrže C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano i mogu da imaju produženi poluživot (na primer zato što sadrže nanotelo usmereno na albumin iz humanog seruma, kao što je (poželjno) nanotelo iz pronalaska usmereno na albumin iz humanog seruma). Upućuje se na podatke prikazane u Tabeli T ispod.
[0215] Primeri jedinjenja usmerenih na IgE dati su na Slici 24 kao SEQ ID NO: 586 do 594. Tako, u drugom ilustrativnom aspektu, otkriće se odnosi na polipeptid koji je usmeren na IgE i koji ima aminokiselinsku sekvencu koja je izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 586 do 594.
[0216] Uopštenije, jedinjenja usmerena na IgE mogu da budu kao što je opisano u WO 2012/175740 i relevantnim delovima WO2012/175400, ali sadrže ISVD iz pronalaska. Ona takođe mogu da se koriste za namene koje su opisane u WO 2012/175740.
Tabela T: Primeri jedinjenja usmerenih na IgE.
1
1
1
11
Napomene:
(<1>) U ovoj Tabeli:
-„Jednovalentan“ se uopšteno odnosi na polipeptide/konstrukte koji sadrže jedan ISV usmeren na IgE. Oni mogu dalje da sadrže ISV koji produžavaju poluživot (kao što je ISV usmeren na albumin iz seruma).
-„Dvovalentan“ se uopšteno odnosi na polipeptide/konstrukte koji sadrže dva ISV usmerena na IgE (koji mogu biti isti ili različiti). Oni mogu ponovo dalje da sadrže ISV koji produžavaju poluživot (kao što je ISV usmeren na albumin iz seruma).
Napomene:
-„Bispecifičan“ se uopšteno odnosi na polipeptide/konstrukte koji sadrže najmanje jedan (kao što je 1 ili 2) ISV usmeren na IgE i najmanje jedan (kao što je 1 ili 2) drugi ISV usmeren na terapeutski cilj. Oni mogu dalje da sadrže ISV koji produžavaju poluživot (kao što je ISV usmeren na albumin iz seruma).
-U polipeptidima/konstruktima koji su opisani u ovoj tabeli, najmanje jedan od prisutnih ISV usmerenih na IgE je ISV iz pronalaska, a poželjno su svi prisutni ISV usmereni na IgE u takvom polipeptidu/konstruktu ISV iz pronalaska. Takođe, kada je ISV koji produžava poluživot i/ili ISV usmeren na drugi terapeutski cilj prisutan u takvom polipeptidu/konstruktu, svaki od njih (a poželjno svi) može takođe biti (i poželjno jeste) ISV iz pronalaska
(<2>): Svi „dvovalentni“ konstrukti u ovoj Tabeli mogu takođe biti biparatopni, što znači da sadrže najmanje dva (kao što je dva) ISV usmerena na IgE koji su usmereni na različite epitope na IgE.
(<3>): Kao što će biti jasno stručnjaku, drugi/dalji bispecifični konstrukti osim navedenih mogu se napraviti korišćenjem pomenutih gradivnih elemenata i linkera.
(<4>) Poželjno, svaki prisutni [IgE] je nezavisno izabran od SEQ ID NO: 464 do 477 i/ili 482 do 495. Takođe, prisutni [IgE] mogu biti isti ili različiti; u biparatopnom polipeptidu/konstruktu biće usmereni na različite epitope na IgE.
(<5>) Svaki od polipeptida/konstrukata koji su pomenuti u ovoj koloni putem upućivanja na SEQ ID čini pojedinačan poseban aspekt pronalaska.
Primer 11: VH domeni (a naročito nanotela) usmereni na CXCR4, i jedinjenja koja ih sadrže.
[0217] U jednom specifičnom aspektu, ISVD iz pronalaska i konkretnije, nanotela iz pronalaska, i jedinjenja koja ih sadrže mogu biti usmerena na CXCR4.
[0218] ISVD iz pronalaska usmeren na CXCR4 uopšteno će sadržati: (i) odgovarajuće sekvence okvira koje pogodno sadrže aminokiselinske ostatke/mutacije iz pronalaska kako su definisane zahtevima; kao i (ii) sekvence CDR koje omogućavaju VH domenu iz pronalaska da se specifično vezuje za CXCR4. Pored toga, takav VH domen iz pronalaska usmeren na CXCR4 može takođe pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano, naročito kada je navedeni VH domen jednovalentan ili gradi C-terminalni kraj jedinjenja iz pronalaska u kome je prisutan navedeni VH domen (ponovo, kao što je ovde dalje opisano). Takvi VH domeni iz pronalaska usmereni na CXCR4 su ISVD.
[0219] Ponovo, kao kod drugih aspekata i otelotvorenja pronalaska koja su ovde opisana, kada se kaže da je specifični ISVD (kao što je ISVD usmeren na CXCR4 sa K na poziciji 112 opisan u ovom primeru) „prema pronalasku“ ili „kao što je ovde dalje opisan“, poželjni aspekti/otelotvorenja i preferencije koji su ovde generalno opisani za ISVD iz pronalaska takođe se specifično primenjuju na pomenute specifične ISVD, ako nije izričito drugačije rečeno ili ako specifični tehnički kontekst ne zahteva drugačije.
[0220] Tako, u konkretnom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na ISVD koji je usmeren na CXCR4, u kome (i) pozicija 112 je K. Posebno, u takvim ISVD usmerenim na CXCR4: aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv).
[0221] ISVD iz pronalaska usmeren na CXCR4 može biti ISVD kao što je definisano zahtevima (i konkretnije nanotelo) usmeren na CXCR4. Ovde je u ilustrativne svrhe opisan protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt koji sadrži najmanje jedan takav ISVD. Takav protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt može takođe da bude kao što je ovde dalje opisano, i može, na primer, da ima produženi poluživot (tj. kao što je ovde opisano, npr. poluživot izražen kao t1/2 beta, kod humanih ispitanika ili kod humanih ispitanika za najmanje 1 dan, poželjno najmanje 3 dana, poželjnije najmanje 7 dana, kao što je najmanje 10 dana), i u tu svrhu može, na primer, da sadrži nanotelo koje vezuje albumin iz seruma, koje takođe može
11
biti nanotelo iz pronalaska koje vezuje albumin iz seruma (ponovo, kao što je definisano zahtevima).
[0222] Takođe, takav ISVD može pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju (kao što je dalje opisano ovde i u WO 12/175741), posebno kada pomenuti ISVD formira C-terminalni kraj proteina, polipeptida ili drugog jedinjenja ili konstrukta koji ga sadrži (ponovo, kao što je ovde dalje opisano).
[0223] U jednom poželjnom aspektu, ISVD iz pronalaska usmereni na CXCR4 sadrže (i) sekvencu CDR1 koja je sekvenca SEQ ID NO: 245 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu različitu aminokiselinu od sekvence SEQ ID NO: 245; (ii) sekvencu CDR2 koja je sekvenca SEQ ID NO: 246 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 246; i (iii) sekvencu CDR3 koja je sekvenca SEQ ID NO: 247 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 247.
[0224] Poželjnije, u ISVD iz pronalaska koji je usmeren na CXCR4 prema ovom aspektu: (i) CDR1 je SEQ ID NO: 245; (ii) CDR2 je SEQ ID NO: 246; i (iii) CDR3 je SEQ ID NO: 247.
[0225] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na CXCR4 je varijanta nanotela SEQ ID NO: 244 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO: 244), u kojoj:
● aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
● aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i ● aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv). CDR takvog ISV su poželjno kako je definisano u prethodna dva paragrafa.
[0226] U drugom poželjnom aspektu, ISVD iz pronalaska usmereni na CXCR4 sadrže (i) sekvencu CDR1 koja je sekvenca SEQ ID NO: 263 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu različitu aminokiselinu od sekvence SEQ ID NO: 263; (ii) sekvencu CDR2 koja je sekvenca SEQ ID NO: 264 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 264; i (iii) sekvencu CDR3 koja je sekvenca SEQ ID NO: 265 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 265.
[0227] Poželjnije, u ISVD iz pronalaska koji je usmeren na CXCR-4 prema ovom aspektu: (i) CDR1 je SEQ ID NO: 263; (ii) CDR2 je SEQ ID NO: 264; i (iii) CDR3 je SEQ ID NO: 265.
[0228] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na IL-23 je varijanta nanotela SEQ ID NO: 262 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO: 262), u kojoj:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv). Ponovo, CDR takvog ISV su poželjno kako je definisano u prethodna dva paragrafa.
[0229] Neki specifično poželjni, ali neograničavajući primeri nanotela iz pronalaska usmerenih na CXCR4 nabrojani su na Slici 15A kao SEQ ID NO: 252 i 260, i Slici 15B kao SEQ ID NO: 270 i 278; i svako od ovih nanotela čini dalji aspekt pronalaska.
11
[0230] Pronalazak se takođe odnosi na jedinjenje usmereno na CXCR4 koje sadrži najmanje jedno (kao što je jedno, dva ili tri) od nanotela iz pronalaska SEQ ID NO: 252 i 260 i/ili 270 i 278. Takva jedinjenja usmerena na CXCR4 mogu ponovo da budu kao što je ovde dalje opisano, i tako na primer mogu da sadrže pogodne linkere, mogu da sadrže C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano i mogu da imaju produženi poluživot (na primer zato što sadrže nanotelo usmereno na albumin iz humanog seruma, kao što je (poželjno) nanotelo iz pronalaska usmereno na albumin iz humanog seruma). Upućuje se na podatke prikazane u Tabeli U ispod.
[0231] Kao što je opisano u, na primer WO 2009/138519, WO 2011/042398 i WO 2011/161266, jedna posebno poželjna klasa jedinjenja zasnovanih na nanotelima koja su usmerena na CXCR4 su biparatopna jedinjenja. Tako, u jednom ilustrativnom aspektu, jedinjenje usmereno na CXCR4 je biparatopni konstrukt koji sadrži jedan ISV koji je SEQ ID NO: 244 ili (poželjno) ISV koji je dobijen od SEQ ID NO: 244 (kao što je opisano u ovom Primeru 11) i jedan ISV koji je SEQ ID NO: 262 ili (poželjno) ISV koji je dobijen od SEQ ID NO: 262 (kao što je opisano u ovom Primeru 11). Takvi biparatopni konstrukti takođe mogu imati produženi poluživot (tj. putem ISV koji vezuje albumin iz seruma). Neki specifični primeri takvih biparatopnih konstrukata dati su u SEQ ID NO: 595 do 603.
[0232] Primeri jedinjenja usmerenih na CXCR-4 dati su na Slici 25 kao SEQ ID NO: 595 do 603. Tako, u drugom ilustrativnom aspektu, otkriće se odnosi na polipeptid koji je usmeren na CXCR-4 i koji ima aminokiselinsku sekvencu koja je izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 595 do 603. Uopštenije, jedinjenja usmerena na CXCR-4 mogu da budu kao što je opisano u WO 2009/138519, WO 2011/042398 i WO 2011/161266WO 2011/144749, ali sadrže ISVD iz pronalaska. Ona takođe mogu da se koriste za namene koje su opisane u WO 2009/138519, WO 2011/042398 i WO 2011/161266.
Tabela U: Primeri jedinjenja usmerenih na CXCR-4.
11
11
11
11
12
Primer 12: VH domeni (a naročito nanotela) usmereni na HER-3, i jedinjenja koja ih sadrže.
[0233] U jednom specifičnom aspektu, ISVD iz pronalaska i konkretnije, nanotela iz pronalaska, i jedinjenja koja ih sadrže mogu biti usmerena na HER-3.
[0234] ISVD iz pronalaska usmeren na HER-3 uopšteno će sadržati: (i) odgovarajuće sekvence okvira koje pogodno sadrže aminokiselinske ostatke/mutacije iz pronalaska kako su definisane zahtevima; kao i (ii) sekvence CDR koje omogućavaju VH domenu iz pronalaska da se specifično vezuje za HER-3. Pored toga, takav VH domen iz pronalaska usmeren na HER-3 može takođe pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano, naročito kada je navedeni VH domen jednovalentan ili gradi C-terminalni kraj jedinjenja iz pronalaska u kojem je prisutan navedeni VH domen (ponovo, kao što je ovde dalje opisano). Takvi VH domeni iz pronalaska usmereni na HER-3 su ISVD.
[0235] Ponovo, kao kod drugih aspekata i otelotvorenja pronalaska koja su ovde opisana, kada se kaže da je specifični ISVD (kao što je ISVD usmeren na HER-3 sa K na poziciji 112 opisan u ovom primeru) „prema pronalasku“ ili „kao što je ovde dalje opisan“, poželjni aspekti/otelotvorenja i preferencije koji su ovde generalno opisani za ISVD iz pronalaska takođe se specifično primenjuju na pomenute specifične ISVD, ako nije izričito drugačije rečeno ili ako specifični tehnički kontekst ne zahteva drugačije.
[0236] Tako, u konkretnom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na ISVD koji je usmeren na HER-3, u kome (i) pozicija 112 je K. Posebno, u takvim ISVD usmerenim na HER-3: aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv).
[0237] ISVD iz pronalaska usmeren na HER-3 je ISVD kao što je definisano zahtevima (i konkretnije nanotelo) usmeren na HER-3. Ovde je u ilustrativne svrhe opisan protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt koji sadrži najmanje jedan takav ISVD. Takav protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt može takođe da bude kao što je ovde dalje
12
opisano, i može, na primer, da ima produženi poluživot (tj. kao što je ovde opisano, npr. poluživot izražen kao t1/2 beta, kod humanih ispitanika ili kod humanih ispitanika za najmanje 1 dan, poželjno najmanje 3 dana, poželjnije najmanje 7 dana, kao što je najmanje 10 dana), i u tu svrhu može, na primer, da sadrži nanotelo koje vezuje albumin iz seruma, koje takođe može biti nanotelo iz pronalaska koje vezuje albumin iz seruma (ponovo, kao što je definisano zahtevima).
[0238] Takođe, takav ISVD može pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju (kao što je dalje opisano ovde i u WO 12/175741), posebno kada pomenuti ISVD formira C-terminalni kraj proteina, polipeptida ili drugog jedinjenja ili konstrukta koji ga sadrži (ponovo, kao što je ovde dalje opisano).
[0239] U jednom poželjnom aspektu, ISVD iz pronalaska usmereni na HER-3 sadrže (i) sekvencu CDR1 koja je sekvenca SEQ ID NO: 281 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu različitu aminokiselinu od sekvence SEQ ID NO: 281; (ii) sekvencu CDR2 koja je sekvenca SEQ ID NO: 282 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 282; i (iii) sekvencu CDR3 koja je sekvenca SEQ ID NO: 283 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 283.
[0240] Poželjnije, u ISVD iz pronalaska koji je usmeren na HER-3 prema ovom aspektu: (i) CDR1 je SEQ ID NO: 281; (ii) CDR2 je SEQ ID NO: 282; i (iii) CDR3 je SEQ ID NO: 283.
[0241] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na HER-3 je varijanta nanotela SEQ ID NO: 280 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO: 280), u kojoj:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv). CDR takvog ISV su poželjno kako je definisano u prethodna dva paragrafa.
[0242] U drugom poželjnom aspektu, ISVD iz pronalaska usmereni na HER-3 sadrže (i) sekvencu CDR1 koja je sekvenca SEQ ID NO: 299 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu različitu aminokiselinu od sekvence SEQ ID NO: 299; (ii) sekvencu CDR2 koja je sekvenca SEQ ID NO: 300 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 300; i (iii) sekvencu CDR3 koja je sekvenca SEQ ID NO: 301 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 301.
[0243] Poželjnije, u ISVD iz pronalaska koji je usmeren na HER-3 prema ovom aspektu: (i) CDR1 je SEQ ID NO: 299; (ii) CDR2 je SEQ ID NO: 300; i (iii) CDR3 je SEQ ID NO: 301.
[0244] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na HER-3 je varijanta nanotela SEQ ID NO: 298 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO: 298), u kojoj:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv). Ponovo, CDR takvog ISV su poželjno kako je definisano u prethodna dva paragrafa.
12
[0245] Neki specifično poželjni, ali neograničavajući primeri nanotela iz pronalaska usmerenih na HER-3 nabrojani su na Slici 16A kao SEQ ID NO: 288 i 296, odnosno Slici 16B kao SEQ ID NO: 306 i 314; i svako od ovih nanotela čini dalji aspekt pronalaska.
[0246] Pronalazak se takođe odnosi na jedinjenje usmereno na HER-3 koje sadrži najmanje jedno (kao što je jedno, dva ili tri) od nanotela iz pronalaska SEQ ID NO: 288 i 296 i/ili 306 i 314. Takva jedinjenja usmerena na HER-3 mogu ponovo da budu kao što je ovde dalje opisano, i tako na primer mogu da sadrže pogodne linkere, mogu da sadrže C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano i mogu da imaju produženi poluživot (na primer zato što sadrže nanotelo usmereno na albumin iz humanog seruma, kao što je (poželjno) nanotelo iz pronalaska usmereno na albumin iz humanog seruma). Upućuje se na podatke prikazane u Tabeli V ispod.
[0247] Kao što je opisano u, na primer WO 2011/144749, jedna posebno poželjna klasa jedinjenja zasnovanih na nanotelima koja su usmerena na HER-3 su biparatopna jedinjenja. Tako, u jednom ilustrativnom aspektu, jedinjenje usmereno na HER-3 je biparatopni konstrukt koji sadrži jedan ISV koji je SEQ ID NO: 280 ili (poželjno) ISV koji je dobijen od SEQ ID NO: 280 (kao što je opisano u ovom Primeru 12) i jedan ISV koji je SEQ ID NO: 298 ili (poželjno) ISV koji je dobijen od SEQ ID NO: 298 (kao što je opisano u ovom Primeru 12). Takvi biparatopni konstrukti takođe mogu imati produženi poluživot (tj. putem ISV koji vezuje albumin iz seruma). Neki specifični primeri takvih biparatopnih konstrukata dati su u SEQ ID NO: 604 do 639.
[0248] Primeri jedinjenja usmerenih na HER-3 dati su na Slici 26 kao SEQ ID NO: 604 do 639. Tako, u drugom ilustrativnom aspektu, otkriće se odnosi na polipeptid koji je usmeren na HER-3 i koji ima aminokiselinsku sekvencu koja je izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 604 do 639. Uopštenije, jedinjenja usmerena na HER-3 mogu da budu kao što je opisano u WO 2011/144749, ali sadrže ISVD iz pronalaska. Ona takođe mogu da se koriste za namene koje su opisane u WO 2011/144749.
Tabela V: Primeri jedinjenja usmerenih na HER-3.
12
12
12
12
1
11
Primer 13: VH domeni (a naročito nanotela) usmereni na TNF, i jedinjenja koja ih sadrže.
[0249] U jednom specifičnom aspektu, ISVD iz pronalaska i konkretnije, nanotela iz pronalaska, i jedinjenja koja ih sadrže mogu biti usmerena na TNF
[0250] ISVD iz pronalaska usmeren na TNF uopšteno će sadržati: (i) odgovarajuće sekvence okvira koje pogodno sadrže aminokiselinske ostatke/mutacije iz pronalaska kako su definisane zahtevima; kao i (ii) sekvence CDR koje omogućavaju VH domenu iz pronalaska da se specifično vezuje za TNF. Pored toga, takav VH domen iz pronalaska usmeren na TNF može takođe pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano, naročito kada je navedeni VH domen jednovalentan ili gradi C-terminalni kraj jedinjenja iz pronalaska u kojem je prisutan navedeni VH domen (ponovo, kao što je ovde dalje opisano).Takvi VH domeni iz pronalaska usmereni na TNF su ISVD.
[0251] Ponovo, kao kod drugih aspekata i otelotvorenja pronalaska koja su ovde opisana, kada se kaže da je specifični ISVD (kao što je ISVD usmeren na TNF sa K na poziciji 112 opisan u ovom primeru) „prema pronalasku“ ili „kao što je ovde dalje opisan“, poželjni aspekti/otelotvorenja i preferencije koji su ovde generalno opisani za ISVD iz pronalaska takođe se specifično primenjuju na pomenute specifične ISVD, ako nije izričito drugačije rečeno ili ako specifični tehnički kontekst ne zahteva drugačije.
[0252] Tako, u konkretnom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na ISVD koji je usmeren na TNF, u kome (i) pozicija 112 je K. Posebno, u takvim ISVD usmerenim na TNF: aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i
1 2
aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv).
[0253] ISVD iz pronalaska usmeren na TNF je ISVD kao što je definisano zahtevima (i konkretnije nanotelo) usmeren na TNF. Ovde je u ilustrativne svrhe opisan protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt koji sadrži najmanje jedan takav ISVD. Takav protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt može takođe da bude kao što je ovde dalje opisano, i može, na primer, da ima produženi poluživot (tj. kao što je ovde opisano, npr. poluživot izražen kao t1/2 beta, kod humanih ispitanika ili kod humanih ispitanika za najmanje 1 dan, poželjno najmanje 3 dana, poželjnije najmanje 7 dana, kao što je najmanje 10 dana), i u tu svrhu može, na primer, da sadrži nanotelo koje vezuje albumin iz seruma, koje takođe može biti nanotelo iz pronalaska koje vezuje albumin iz seruma (ponovo, kao što je definisano zahtevima).
[0254] Takođe, takav ISVD može pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju (kao što je dalje opisano ovde i u WO 12/175741), posebno kada pomenuti ISVD formira C-terminalni kraj proteina, polipeptida ili drugog jedinjenja ili konstrukta koji ga sadrži (ponovo, kao što je ovde dalje opisano).
[0255] U jednom poželjnom aspektu, ISVD iz pronalaska usmereni na TNF sadrže (i) sekvencu CDR1 koja je sekvenca SEQ ID NO: 317 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu različitu aminokiselinu od sekvence SEQ ID NO: 317; (ii) sekvencu CDR2 koja je sekvenca SEQ ID NO: 318 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 318; i (iii) sekvencu CDR3 koja je sekvenca SEQ ID NO: 319 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 319.
1
[0256] Poželjnije, u ISVD iz pronalaska koji je usmeren na TNF prema ovom aspektu: (i) CDR1 je SEQ ID NO: 317; (ii) CDR2 je SEQ ID NO: 318; i (iii) CDR3 je SEQ ID NO: 319.
[0257] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na TNF je varijanta nanotela SEQ ID NO: 316 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO: 316), u kojoj:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv). CDR takvog ISV su poželjno kako je definisano u prethodna dva paragrafa.
[0258] Neki specifično poželjni, ali neograničavajući primeri nanotela iz pronalaska usmerenih na TNF nabrojani su na Slici 17A kao SEQ ID NO: 324 i 332; i svako od ovih nanotela čini dalji aspekt pronalaska.
[0259] Pronalazak se takođe odnosi na jedinjenje usmereno na TNF koje sadrži najmanje jedno (kao što je jedno, dva ili tri) od nanotela iz pronalaska SEQ ID NO: 324 i 332. Takva jedinjenja usmerena na TNF mogu ponovo da budu kao što je ovde dalje opisano, i tako na primer mogu da sadrže pogodne linkere, mogu da sadrže C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano i mogu da imaju produženi poluživot (na primer zato što sadrže nanotelo usmereno na albumin iz humanog seruma, kao što je (poželjno) nanotelo iz pronalaska usmereno na albumin iz humanog seruma). Upućuje se na podatke prikazane u Tabeli W ispod. Uopšteno, pošto je TNF polivalentan cilj, poželjna su jedinjenja iz pronalaska koja sadrže dva ili tri anti-TNF ISV (i linkere odgovarajuće dužine, vidite WO 06/122786).
1 4
[0260] Primeri jedinjenja usmerenih na TNF dati su na Slici 27 kao SEQ ID NO: 640 do 675. Tako, u drugom ilustrativnom aspektu, otkriće se odnosi na polipeptid koji je usmeren na TNF i koji ima aminokiselinsku sekvencu koja je izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 640 do 675. Uopštenije, jedinjenja usmerena na TNF mogu da budu kao što je opisano u WO 2006/122786, ali sadrže ISVD iz pronalaska. Ona takođe mogu da se koriste za namene koje su opisane u WO 2006/122786.
Tabela W: Primeri jedinjenja usmerenih na TNF.
1
1
1
1
1
Primer 14: Dalji VH domeni (a naročito nanotela) usmereni na TNF, i jedinjenja koja ih sadrže.
[0261] U jednom specifičnom aspektu, ISVD iz pronalaska i konkretnije, nanotela iz pronalaska, i jedinjenja koja ih sadrže mogu biti usmerena na TNF.
[0262] ISVD iz pronalaska usmeren na TNF uopšteno će sadržati: (i) odgovarajuće sekvence okvira koje pogodno sadrže aminokiselinske ostatke/mutacije iz pronalaska kako su definisane zahtevima; kao i (ii) sekvence CDR koje omogućavaju VH domenu iz pronalaska da se specifično vezuje za TNF. Pored toga, takav VH domen iz pronalaska usmeren na TNF može takođe pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano, naročito kada je navedeni VH domen jednovalentan ili gradi C-terminalni kraj jedinjenja iz pronalaska u kojem je prisutan navedeni VH domen (ponovo, kao što je ovde dalje opisano). Takvi VH domeni iz pronalaska usmereni na TNF su ISVD.
[0263] Ponovo, kao kod drugih aspekata i otelotvorenja pronalaska koja su ovde opisana, kada se kaže da je specifični ISVD (kao što je ISVD usmeren na TNF sa K na poziciji 112 opisan u ovom primeru) „prema pronalasku“ ili „kao što je ovde dalje opisan“, poželjni aspekti/otelotvorenja i preferencije koji su ovde generalno opisani za ISVD iz pronalaska
14
takođe se specifično primenjuju na pomenute specifične ISVD, ako nije izričito drugačije rečeno ili ako specifični tehnički kontekst ne zahteva drugačije.
[0264] Tako, u konkretnom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na ISVD koji je usmeren na TNF, u kome (i) pozicija 112 je K. Posebno, u takvim ISVD usmerenim na TNF: aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv).
[0265] ISVD iz pronalaska usmeren na TNF je ISVD kao što je definisano zahtevima (i konkretnije nanotelo) usmeren na TNF. Ovde je u ilustrativne svrhe opisan protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt koji sadrži najmanje jedan takav ISVD. Takav protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt može takođe da bude kao što je ovde dalje opisano, i može, na primer, da ima produženi poluživot (tj. kao što je ovde opisano, npr. poluživot izražen kao t1/2 beta, kod humanih ispitanika ili kod humanih ispitanika za najmanje 1 dan, poželjno najmanje 3 dana, poželjnije najmanje 7 dana, kao što je najmanje 10 dana), i u tu svrhu može, na primer, da sadrži nanotelo koje vezuje albumin iz seruma, koje takođe može biti nanotelo iz pronalaska koje vezuje albumin iz seruma (ponovo, kao što je definisano zahtevima).
[0266] Takođe, takav ISVD može pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju (kao što je dalje opisano ovde i u WO 12/175741), posebno kada pomenuti ISVD formira C-terminalni kraj proteina, polipeptida ili drugog jedinjenja ili konstrukta koji ga sadrži (ponovo, kao što je ovde dalje opisano).
[0267] U jednom poželjnom aspektu, ISVD iz pronalaska usmereni na TNF sadrže (i) sekvencu CDR1 koja je sekvenca SEQ ID NO: 335 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu različitu aminokiselinu od sekvence SEQ ID NO: 335; (ii) sekvencu CDR2 koja je sekvenca SEQ ID NO: 336 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 336; i (iii) sekvencu CDR3 koja je sekvenca SEQ ID NO: 337 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 337.
[0268] Poželjnije, u ISVD iz pronalaska koji je usmeren na TNF prema ovom aspektu: (i) CDR1 je SEQ ID NO: 335; (ii) CDR2 je SEQ ID NO: 336; i (iii) CDR3 je SEQ ID NO: 337.
[0269] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na TNF je varijanta nanotela SEQ ID NO: 334 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO: 334), u kojoj:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv). CDR takvog ISV su poželjno kako je definisano u prethodna dva paragrafa.
[0270] Neki specifično poželjni, ali neograničavajući primeri nanotela iz pronalaska usmerenih na TNF nabrojani su na Slici 17B kao SEQ ID NO: 342 i 350; i svako od ovih nanotela čini dalji aspekt pronalaska.
[0271] Pronalazak se takođe odnosi na jedinjenje usmereno na TNF koje sadrži najmanje jedno (kao što je jedno, dva ili tri) od nanotela iz pronalaska SEQ ID NO: 342 i 350. Takva jedinjenja usmerena na TNF mogu ponovo da budu kao što je ovde dalje opisano, i tako na primer mogu da sadrže pogodne linkere, mogu da sadrže C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano i mogu da imaju produženi poluživot (na primer zato što sadrže nanotelo usmereno na albumin iz humanog seruma, kao što je (poželjno) nanotelo iz pronalaska usmereno na albumin iz humanog seruma). Upućuje se na podatke prikazane u Tabeli X ispod. Uopšteno, pošto je TNF polivalentan cilj, poželjna su jedinjenja sadrže dva ili tri anti-TNF ISVD.
Tabela X: Primeri jedinjenja usmerenih na TNF.
14
14
14
14
Primer 15: VH domeni (a naročito nanotela) usmereni na c-Met, i jedinjenja koja ih sadrže.
[0272] U jednom specifičnom aspektu, ISVD iz pronalaska i konkretnije, nanotela iz pronalaska, i jedinjenja koja ih sadrže mogu biti usmerena na c-Met.
[0273] ISVD iz pronalaska usmeren na c-Met uopšteno će sadržati: (i) odgovarajuće sekvence okvira koje pogodno sadrže aminokiselinske ostatke/mutacije iz pronalaska kako su definisane zahtevima; kao i (ii) sekvence CDR koje omogućavaju VH domenu iz pronalaska da se specifično vezuje za c-Met. Pored toga, takav VH domen iz pronalaska usmeren na c-Met može takođe pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano, naročito kada je navedeni VH domen jednovalentan ili gradi C-terminalni kraj jedinjenja iz pronalaska u kojem je prisutan navedeni VH domen (ponovo, kao što je ovde dalje opisano). Takvi VH domeni iz pronalaska usmereni na c-Met su ISVD.
[0274] Ponovo, kao kod drugih aspekata i otelotvorenja pronalaska koja su ovde opisana, kada se kaže da je specifični ISVD (kao što je ISVD usmeren na c-Met opisan u ovom primeru) „prema pronalasku“ ili „kao što je ovde dalje opisan“, poželjni aspekti/otelotvorenja i preferencije koji su ovde generalno opisani za ISVD iz pronalaska takođe se specifično primenjuju na pomenute specifične ISVD, ako nije izričito drugačije rečeno ili ako specifični tehnički kontekst ne zahteva drugačije.
14
[0275] Tako, u konkretnom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na ISVD koji je usmeren na c-Met, u kome (i) pozicija 112 je K. Posebno, u takvim ISVD usmerenim na c-Met: aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv).
[0276] ISVD iz pronalaska usmeren na c-Met je ISVD kao što je definisano zahtevima (i konkretnije nanotelo) usmeren na c-Met. Ovde je u ilustrativne svrhe opisan protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt koji sadrži najmanje jedan takav ISVD. Takav protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt može takođe da bude kao što je ovde dalje opisano, i može, na primer, da ima produženi poluživot (tj. kao što je ovde opisano, npr. poluživot izražen kao t1/2 beta, kod humanih ispitanika ili kod humanih ispitanika za najmanje 1 dan, poželjno najmanje 3 dana, poželjnije najmanje 7 dana, kao što je najmanje 10 dana), i u tu svrhu može, na primer, da sadrži nanotelo koje vezuje albumin iz seruma, koje takođe može biti nanotelo iz pronalaska koje vezuje albumin iz seruma (ponovo, kao što je definisano zahtevima).
[0277] Takođe, takav ISVD može pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju (kao što je dalje opisano ovde i u WO 12/175741), posebno kada pomenuti ISVD formira C-terminalni kraj proteina, polipeptida ili drugog jedinjenja ili konstrukta koji ga sadrži (ponovo, kao što je ovde dalje opisano).
[0278] U jednom poželjnom aspektu, ISVD iz pronalaska usmereni na c-Met sadrže (i) sekvencu CDR1 koja je sekvenca SEQ ID NO: 353 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu različitu aminokiselinu od sekvence SEQ ID NO: 353; (ii)
14
sekvencu CDR2 koja je sekvenca SEQ ID NO: 354 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 354; i (iii) sekvencu CDR3 koja je sekvenca SEQ ID NO: 355 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 355.
[0279] Poželjnije, u ISVD iz pronalaska koji je usmeren na c-Met prema ovom aspektu: (i) CDR1 je SEQ ID NO: 353; (ii) CDR2 je SEQ ID NO: 354; i (iii) CDR3 je SEQ ID NO: 355.
[0280] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na c-Met je varijanta nanotela SEQ ID NO: 352 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO: 352), u kojoj:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv). CDR takvog ISV su poželjno kako je definisano u prethodna dva paragrafa.
[0281] U drugom poželjnom aspektu, ISVD iz pronalaska usmereni na c-Met sadrže (i) sekvencu CDR1 koja je sekvenca SEQ ID NO: 371 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu različitu aminokiselinu od sekvence SEQ ID NO: 371; (ii) sekvencu CDR2 koja je sekvenca SEQ ID NO: 372 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 372; i (iii) sekvencu CDR3 koja je sekvenca SEQ ID NO: 373 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 373.
[0282] Poželjnije, u takvom ISVD iz pronalaska koji je usmeren na c-Met prema ovom aspektu: (i) CDR1 je SEQ ID NO: 371; (ii) CDR2 je SEQ ID NO: 372; i (iii) CDR3 je SEQ ID NO: 373.
1
[0283] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na c-Met je varijanta nanotela SEQ ID NO: 370 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO: 370), u kojoj:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv). Ponovo, CDR takvog ISV su poželjno kako je definisano u prethodna dva paragrafa.
[0284] Neki specifično poželjni, ali neograničavajući primeri nanotela iz pronalaska usmerenih na c-Met nabrojani su na Slici 18A kao SEQ ID NO: 360 i 368, i Slici 18B kao SEQ ID NO: 378 i 386; i svako od ovih nanotela čini dalji aspekt pronalaska.
[0285] Pronalazak se takođe odnosi na jedinjenje usmereno na c-Met koje sadrži najmanje jedno (kao što je jedno, dva ili tri) od nanotela iz pronalaska SEQ ID NO: 360 i 368 i/ili 378 i 386. Takva jedinjenja usmerena na c-Met mogu ponovo da budu kao što je ovde dalje opisano, i tako na primer mogu da sadrže pogodne linkere, mogu da sadrže C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano i mogu da imaju produženi poluživot (na primer zato što sadrže nanotelo usmereno na albumin iz humanog seruma, kao što je (poželjno) nanotelo iz pronalaska usmereno na albumin iz humanog seruma). Upućuje se na podatke prikazane u Tabeli Y ispod.
[0286] Kao što je opisano u, na primer WO 2013/045707, jedna posebno poželjna klasa jedinjenja zasnovanih na nanotelima koja su usmerena na c-Met su biparatopna jedinjenja. Tako, u jednom ilustrativnom aspektu otkrića, jedinjenje usmereno na c-Met je biparatopni konstrukt koji sadrži jedan ISV koji je SEQ ID NO: 352 ili (poželjno) ISV koji je dobijen od SEQ ID NO: 352 (kao što je opisano u ovom Primeru 15) i jedan ISV koji je SEQ ID NO: 370
1 1
ili (poželjno) ISV koji je dobijen od SEQ ID NO: 370 (kao što je opisano u ovom Primeru 15). Takvi biparatopni konstrukti takođe mogu imati produženi poluživot (tj. putem ISV koji vezuje albumin iz seruma). Neki specifični primeri takvih biparatopnih konstrukata dati su u SEQ ID NO: 676 do 693. Takođe, bispecifični konstrukti usmereni na c-Met mogu takođe da sadrže ISV usmeren na VEGF ili EGFR. Ponovo se upućuje na podatke prikazane u WO 2014/341309.
[0287] Primeri jedinjenja usmerenih na c-Met dati su na Slikama 28A i 28B kao SEQ ID NO: 676 do 694. Tako, u drugom ilustrativnom aspektu, otkriće se odnosi na polipeptid koji je usmeren na c-Met i koji ima aminokiselinsku sekvencu koja je izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 676 do 694. Uopštenije, jedinjenja usmerena na c-Met mogu da budu kao što je opisano u WO 2013/045707, ali sadrže ISVD iz pronalaska. Ona takođe mogu da se koriste za namene koje su opisane u WO 2013/045707.
Tabela Y: Primeri jedinjenja usmerenih na c-Met.
1 2
1
14
1
(
1
Primer 16: VH domeni (a naročito nanotela) usmereni na RANK-L, i jedinjenja iz pronalaska koja ih sadrže.
[0288] U jednom specifičnom aspektu, ISVD iz pronalaska i konkretnije, nanotela iz pronalaska, i jedinjenja koja ih sadrže mogu biti usmerena na RANK-L.
1
[0289] ISVD iz pronalaska usmeren na RANK-L uopšteno će sadržati: (i) pogodne sekvence okvira koja pogodno sadrže aminokiselinske ostatke/mutacije iz pronalaska kako je definisano zahtevima; kao i (ii) sekvence CDR koje omogućavaju VH domenu iz pronalaska da se specifično vezuje za RANK-L. Pored toga, takav VH domen iz pronalaska usmeren na RANK-L može takođe pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano, naročito kada je navedeni VH domen jednovalentan ili formira C-terminalni kraj jedinjenja iz pronalaska u kojem je pomenuti VH domen prisutan (ponovo, kao što je ovde dalje opisano). Takvi VH domeni iz pronalaska usmereni na RANK-L su ISVD.
[0290] Ponovo, kao kod drugih aspekata i otelotvorenja pronalaska koja su ovde opisana, kada se kaže da je specifični ISVD (kao što je ISVD usmeren na RANK-L sa K na poziciji 112 opisan u ovom primeru) „prema pronalasku“ ili „kao što je ovde dalje opisan“, poželjni aspekti/otelotvorenja i preferencije koji su ovde generalno opisani za ISVD iz pronalaska takođe se specifično primenjuju na pomenute specifične ISVD, ako nije izričito drugačije rečeno ili ako specifični tehnički kontekst ne zahteva drugačije.
[0291] Tako, u konkretnom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na ISVD koji je usmeren na RANK-L, u kome (i) pozicija 112 je K. Posebno, u takvim ISVD usmerenim na RANK-L: aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv).
[0292] ISVD iz pronalaska usmeren na RANK-L je ISVD kao što je definisano zahtevima (a konkretnije nanotelo) usmeren na RANK-L. Ovde je u ilustrativne svrhe opisan protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt koji sadrži najmanje jedan takav ISVD. Takav
1
protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt može takođe da bude kao što je ovde dalje opisano, i može, na primer, da ima produženi poluživot (tj. kao što je ovde opisano, npr. poluživot izražen kao t1/2 beta, kod humanih ispitanika ili kod humanih ispitanika za najmanje 1 dan, poželjno najmanje 3 dana, poželjnije najmanje 7 dana, kao što je najmanje 10 dana), i u tu svrhu može, na primer, da sadrži nanotelo koje vezuje albumin iz seruma, koje takođe može biti nanotelo iz pronalaska koje vezuje albumin iz seruma (ponovo, kao što je definisano zahtevima).
[0293] Takođe, takav ISVD može pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju (kao što je dalje opisano ovde i u WO 12/175741), posebno kada pomenuti ISVD formira C-terminalni kraj proteina, polipeptida ili drugog jedinjenja ili konstrukta koji ga sadrži (ponovo, kao što je ovde dalje opisano).
[0294] U jednom poželjnom aspektu, ISVD iz pronalaska usmereni na RANK-L sadrže (i) sekvencu CDR1 koja je sekvenca SEQ ID NO: 389 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu različitu aminokiselinu od sekvence SEQ ID NO: 389; (ii) sekvencu CDR2 koja je sekvenca SEQ ID NO: 390 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 390; i (iii) sekvencu CDR3 koja je sekvenca SEQ ID NO: 391 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 391.
[0295] Poželjnije, u ISVD iz pronalaska koji je usmeren na RANK-L prema ovom aspektu: (i) CDR1 je SEQ ID NO: 389; (ii) CDR2 je SEQ ID NO: 390; i (iii) CDR3 je SEQ ID NO: 391.
[0296] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na RANK-L je varijanta nanotela SEQ ID NO: 388 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO: 388), u kojoj:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i
1
aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv). CDR takvog ISV su poželjno kako je definisano u prethodna dva paragrafa.
[0297] Neki specifično poželjni, ali neograničavajući primeri nanotela iz pronalaska usmerenih na RANK-L nabrojani su na Slici 19 kao SEQ ID NO: 396 i 404; i svako od ovih nanotela čini dalji aspekt pronalaska.
[0298] Pronalazak se takođe odnosi na jedinjenje usmereno na RANK-L koje sadrži najmanje jedno (kao što je jedno, dva ili tri) od nanotela iz pronalaska SEQ ID NO: 396 i 404. Takva jedinjenja usmerena na RANK-L mogu ponovo da budu kao što je ovde dalje opisano, i tako na primer mogu da sadrže pogodne linkere, mogu da sadrže C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano i mogu da imaju produženi poluživot (na primer zato što sadrže nanotelo usmereno na albumin iz humanog seruma, kao što je (poželjno) nanotelo iz pronalaska usmereno na albumin iz humanog seruma). Upućuje se na podatke prikazane u Tabeli Z ispod.
[0299] Primeri jedinjenja usmerenih na RANK-L dati su na Slici 29 kao SEQ ID NO: 694 do 729. Tako, u drugom ilustrativnom aspektu, otkriće se odnosi na polipeptid koji je usmeren na RANK-L i koji ima aminokiselinsku sekvencu koja je izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 694 do 729.
[0300] Uopštenije, jedinjenja usmerena na RANK-L mogu da budu kao što je opisano u WO 2008/142164, ali sadrže ISVD iz pronalaska. Ona takođe mogu da se koriste za namene koje su opisane u WO 2008/142164.
Tabela Z: Primeri jedinjenja iz otkrića usmerenih na RANK-L.
1
11
12
1
14
Napomene:
(<1>) U ovoj Tabeli:
-„Jednovalentan“ se uopšteno odnosi na polipeptide/konstrukte koji sadrže jedan ISV usmeren na RANK-L. Oni mogu dalje da sadrže ISV koji produžava poluživot (kao što je ISV usmeren na albumin iz seruma).
-„Dvovalentan“ se uopšteno odnosi na polipeptide/konstrukte koji sadrže dva ISV usmerena na RANK-L (koji mogu biti isti ili različiti). Oni mogu ponovo dalje da sadrže ISV koji produžavaju poluživot (kao što je ISV usmeren na albumin iz seruma).
-„Bispecifičan“ se uopšteno odnosi na polipeptide/konstrukte koji sadrže najmanje jedan (kao što je 1 ili 2) ISV usmeren na RANK-L i najmanje jedan (kao što je 1 ili 2) drugi ISV usmeren na terapeutski cilj. Oni mogu dalje da sadrže ISV koji produžavaju poluživot (kao što je ISV usmeren na albumin iz seruma).
-U polipeptidima/konstruktima koji su opisani u ovoj tabeli, najmanje jedan od prisutnih ISV usmerenih na RANK-L je ISV iz pronalaska, a poželjno su svi prisutni ISV usmereni na RANK-L u takvom polipeptidu/konstruktu ISV iz pronalaska. Takođe, kada je ISV koji produžava poluživot i/ili ISV usmeren na drugi terapeutski cilj prisutan u takvom
1
Primer 17: VH domeni (a naročito nanotela) usmereni na CXCR-7, i jedinjenja koja ih sadrže.
[0301] U jednom specifičnom aspektu, ISVD iz pronalaska i konkretnije, nanotela iz pronalaska, i jedinjenja koja ih sadrže mogu biti usmerena na CXCR-7.
[0302] ISVD iz pronalaska usmeren na CXCR-7 uopšteno će sadržati: (i) odgovarajuće sekvence okvira koje pogodno sadrže aminokiselinske ostatke/mutacije iz pronalaska kako su definisane zahtevima; kao i (ii) sekvence CDR koje omogućavaju VH domenu iz pronalaska da se specifično vezuje za CXCR-7. Pored toga, takav VH domen iz pronalaska usmeren na CXCR-7 može takođe pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano, naročito kada je navedeni VH domen jednovalentan ili gradi C-terminalni kraj jedinjenja iz pronalaska u kojem je prisutan navedeni VH domen (ponovo, kao što je ovde dalje opisano). Takvi VH domeni iz pronalaska usmereni na CXCR-7 su ISVD.
[0303] Ponovo, kao kod drugih aspekata i otelotvorenja pronalaska koja su ovde opisana, kada se kaže da je specifični ISVD (kao što je ISVD usmeren na CXCR-7 sa K na poziciji 112 opisan u ovom primeru) „prema pronalasku“ ili „kao što je ovde dalje opisan“, poželjni aspekti/otelotvorenja i preferencije koji su ovde generalno opisani za ISVD iz pronalaska
1
takođe se specifično primenjuju na pomenute specifične ISVD, ako nije izričito drugačije rečeno ili ako specifični tehnički kontekst ne zahteva drugačije.
[0304] Tako, u konkretnom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na ISVD koji je usmeren na CXCR-7, u kome (i) pozicija 112 je K. Posebno, u takvim ISVD usmerenim na CXCR-7: aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv).
[0305] ISVD iz pronalaska usmeren na CXCR-7 je ISVD kao što je definisano zahtevima (i konkretnije nanotelo) usmeren na CXCR-7. Ovde je u ilustrativne svrhe opisan protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt koji sadrži najmanje jedan takav ISVD. Takav protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt može takođe da bude kao što je ovde dalje opisano, i može, na primer, da ima produženi poluživot (tj. kao što je ovde opisano, npr. poluživot izražen kao t1/2 beta, kod humanih ispitanika ili kod humanih ispitanika za najmanje 1 dan, poželjno najmanje 3 dana, poželjnije najmanje 7 dana, kao što je najmanje 10 dana), i u tu svrhu može, na primer, da sadrži nanotelo koje vezuje albumin iz seruma, koje takođe može biti nanotelo iz pronalaska koje vezuje albumin iz seruma (ponovo, kao što je definisano zahtevima).
[0306] Takođe, takav ISVD može pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju (kao što je dalje opisano ovde i u WO 12/175741), posebno kada pomenuti ISVD formira C-terminalni kraj proteina, polipeptida ili drugog jedinjenja ili konstrukta koji ga sadrži (ponovo, kao što je ovde dalje opisano).
1
[0307] U jednom poželjnom aspektu, ISVD iz pronalaska usmereni na CXCR-7 sadrže (i) sekvencu CDR1 koja je sekvenca SEQ ID NO: 407 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu različitu aminokiselinu od sekvence SEQ ID NO: 407; (ii) sekvencu CDR2 koja je sekvenca SEQ ID NO: 408 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 408; i (iii) sekvencu CDR3 koja je sekvenca SEQ ID NO: 409 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 409.
[0308] Poželjnije, u ISVD iz pronalaska koji je usmeren na CXCR-7 prema ovom aspektu: (i) CDR1 je SEQ ID NO: 407; (ii) CDR2 je SEQ ID NO: 408; i (iii) CDR3 je SEQ ID NO: 409.
[0309] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na CXCR-7 je varijanta nanotela SEQ ID NO: 406 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO: 406), u kojoj:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv). CDR takvog ISV su poželjno kako je definisano u prethodna dva paragrafa.
[0310] U drugom poželjnom aspektu, ISVD iz pronalaska usmereni na CXCR-7 sadrže (i) sekvencu CDR1 koja je sekvenca SEQ ID NO: 425 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu različitu aminokiselinu od sekvence SEQ ID NO: 425; (ii) sekvencu CDR2 koja je sekvenca SEQ ID NO: 426 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 426; i (iii) sekvencu CDR3 koja je sekvenca SEQ ID NO: 427 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 427.
1
[0311] Poželjnije, u ISVD iz pronalaska koji je usmeren na CXCR-7 prema ovom aspektu: (i) CDR1 je SEQ ID NO: 425; (ii) CDR2 je SEQ ID NO: 426; i (iii) CDR3 je SEQ ID NO: 427.
[0312] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na CXCR-7 je varijanta nanotela SEQ ID NO: 424 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO: 424), u kojoj:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv). Ponovo, CDR takvog ISV su poželjno kako je definisano u prethodna dva paragrafa.
[0313] Neki specifično poželjni, ali neograničavajući primeri nanotela iz pronalaska usmerenih na CXCR-7 nabrojani su na Slici 20A kao SEQ ID NO: 414 i 422, i Slici 20B kao SEQ ID NO: 450 i 458; i svako od ovih nanotela čini dalji aspekt pronalaska.
[0314] Pronalazak se takođe odnosi na jedinjenje usmereno na CXCR-7 koje sadrži najmanje jedno (kao što je jedno, dva ili tri) od nanotela iz pronalaska SEQ ID NO: 414 i 422, 432 i 440 i/ili 450 i 458. Takva jedinjenja usmerena na CXCR-7 mogu ponovo da budu kao što je ovde dalje opisano, i tako na primer mogu da sadrže pogodne linkere, mogu da sadrže C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano i mogu da imaju produženi poluživot (na primer zato što sadrže nanotelo usmereno na albumin iz humanog seruma, kao što je (poželjno) nanotelo iz pronalaska usmereno na albumin iz humanog seruma). Upućuje se na podatke prikazane u Tabeli AA ispod.
1
[0315] Kao što je opisano u, na primer WO2012/130874, jedna posebno poželjna klasa jedinjenja zasnovanih na nanotelima koja su usmerena na CXCR7 su biparatopna jedinjenja. Tako, u jednom ilustrativnom aspektu otkrića, jedinjenje usmereno na CXCR-7 je biparatopni konstrukt koji sadrži jedan ISV koji je SEQ ID NO: 406 ili (poželjno) ISV koji je dobijen od SEQ ID NO: 406 (kao što je opisano u ovom Primeru 17) i jedan ISV koji je SEQ ID NO: 424 ili (poželjno) ISV koji je dobijen od SEQ ID NO: 424 (kao što je opisano u ovom Primeru 17). Takvi biparatopni konstrukti takođe mogu imati produženi poluživot (tj. putem ISV koji vezuje albumin iz seruma).
[0316] Uopštenije, jedinjenja usmerena na CXCR-7 mogu da budu kao što je opisano u WO2012/130874, ali sadrže ISVD iz pronalaska. Ona takođe mogu da se koriste za namene koje su opisane u WO2012/130874.
Tabela AA: Primeri jedinjenja usmerenih na CXCR-7.
1
11
12
1
14
1 Primer 18: VH domeni (a naročito nanotela) usmereni na A-beta, i jedinjenja koja ih sadrže.
[0317] U jednom specifičnom aspektu, ISVD iz pronalaska i konkretnije, nanotela iz pronalaska, i jedinjenja koja ih sadrže mogu biti usmerena na A-beta.
[0318] ISVD iz pronalaska usmeren na A-beta uopšteno će sadržati: (i) odgovarajuće sekvence okvira koje pogodno sadrže aminokiselinske ostatke/mutacije iz pronalaska kako su definisane zahtevima; kao i (ii) sekvence CDR koje omogućavaju VH domenu iz pronalaska da se specifično vezuje za A-beta. Pored toga, takav VH domen iz pronalaska usmeren na A-beta može takođe pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano, naročito kada je navedeni VH domen jednovalentan ili gradi C-terminalni kraj jedinjenja iz pronalaska u kojem je prisutan navedeni VH domen (ponovo, kao što je ovde dalje opisano). Takvi VH domeni iz pronalaska usmereni na A-beta su ISVD.
[0319] Ponovo, kao kod drugih aspekata i otelotvorenja pronalaska koja su ovde opisana, kada se kaže da je specifični ISVD (kao što je ISVD usmeren na A-beta sa K na poziciji 112 opisan u ovom primeru) „prema pronalasku“ ili „kao što je ovde dalje opisan“, poželjni aspekti/otelotvorenja i preferencije koji su ovde generalno opisani za ISVD iz pronalaska takođe se specifično primenjuju na pomenute specifične ISVD, ako nije izričito drugačije rečeno ili ako specifični tehnički kontekst ne zahteva drugačije.
[0320] Tako, u konkretnom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na ISVD koji je usmeren na A-beta, u kome (i) pozicija 112 je K. Posebno, u takvim ISVD usmerenim na A-beta: aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv).
1
[0321] ISVD iz pronalaska usmeren na A-beta je ISVD kao što je definisano zahtevima (i konkretnije nanotelo) usmeren na A-beta. Ovde je u ilustrativne svrhe opisan protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt koji sadrži najmanje jedan takav ISVD. Takav protein, polipeptid ili drugo jedinjenje ili konstrukt može takođe da bude kao što je ovde dalje opisano, i može, na primer, da ima produženi poluživot (tj. kao što je ovde opisano, npr. poluživot izražen kao t1/2 beta, kod humanih ispitanika ili kod humanih ispitanika za najmanje 1 dan, poželjno najmanje 3 dana, poželjnije najmanje 7 dana, kao što je najmanje 10 dana), i u tu svrhu može, na primer, da sadrži nanotelo koje vezuje albumin iz seruma, koje takođe može biti nanotelo iz pronalaska koje vezuje albumin iz seruma (ponovo, kao što je definisano zahtevima).
[0322] Takođe, takav ISVD može pogodno da ima C-terminalnu ekstenziju (kao što je dalje opisano ovde i u WO 12/175741), posebno kada pomenuti ISVD formira C-terminalni kraj proteina, polipeptida ili drugog jedinjenja ili konstrukta koji ga sadrži (ponovo, kao što je ovde dalje opisano).
[0323] U jednom poželjnom aspektu, ISVD iz pronalaska usmereni na A-beta sadrže (i) sekvencu CDR1 koja je sekvenca SEQ ID NO: 461 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu različitu aminokiselinu od sekvence SEQ ID NO: 461; (ii) sekvencu CDR2 koja je sekvenca SEQ ID NO: 462 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 462; i (iii) sekvencu CDR3 koja je sekvenca SEQ ID NO: 463 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 463.
[0324] Poželjnije, u ISVD iz pronalaska koji je usmeren na A-beta prema ovom aspektu: (i) CDR1 je SEQ ID NO: 461; (ii) CDR2 je SEQ ID NO: 462; i (iii) CDR3 je SEQ ID NO: 463.
[0325] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na A-beta je varijanta nanotela SEQ ID NO: 460 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO: 460), u kojoj:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i
1
aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna kombinacija od (i) do (iv). CDR takvog ISV su poželjno kako je definisano u prethodna dva paragrafa.
[0326] U drugom poželjnom aspektu, ISVD iz pronalaska usmereni na A-beta sadrže (i) sekvencu CDR1 koja je sekvenca SEQ ID NO: 479 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu različitu aminokiselinu od sekvence SEQ ID NO: 479; (ii) sekvencu CDR2 koja je sekvenca SEQ ID NO: 480 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 480; i (iii) sekvencu CDR3 koja je sekvenca SEQ ID NO: 481 (što je poželjno) ili je aminokiselinska sekvenca koja ima samo jednu ili dve različite aminokiseline od sekvence SEQ ID NO: 481.
[0327] Poželjnije, u ISVD iz pronalaska koji je usmeren na A-beta prema ovom aspektu: (i) CDR1 je SEQ ID NO: 479; (ii) CDR2 je SEQ ID NO: 480; i (iii) CDR3 je SEQ ID NO: 481.
[0328] U jednom specifičnom aspektu, nanotelo iz pronalaska usmereno na A-beta je varijanta nanotela SEQ ID NO: 478 (sa najmanje 90% identičnosti sekvence, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO: 478), u kojoj:
aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je poželjno odabran od L, V ili K (i najpoželjnije je V); i
aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je poželjno pogodno odabran od A ili P; i aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je poželjno pogodno odabran od T, V ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je poželjno pogodno odabran od Q ili L; i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je poželjno pogodno odabran od T, K ili Q; i aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K;
tako da (i) pozicija 110 je K ili Q i pozicija 11 je V; ili (ii) pozicija 89 je T; ili (iii) pozicija 89 je L i pozicija 110 je K ili Q; ili (iv) pozicija 11 je V i pozicija 89 je L; ili bilo koja pogodna
1
kombinacija od (i) do (iv). Ponovo, CDR takvog ISV su poželjno kako je definisano u prethodna dva paragrafa.
[0329] Neki specifično poželjni, ali neograničavajući primeri nanotela iz pronalaska usmerenih na A-beta nabrojani su na Slici 21A kao SEQ ID NO: 468 i 176, i Slici 21B kao SEQ ID NO: 486 i 494; i svako od ovih antitela čini dalji aspekt pronalaska.
[0330] U ilustrativne svrhe, otkriće se takođe odnosi na jedinjenje usmereno na A-beta koje sadrži najmanje jedno (kao što je jedno, dva ili tri) od nanotela iz pronalaska SEQ ID NO: 468 i 476 i/ili 486 i 494. Takva jedinjenja usmerena na A-beta mogu ponovo da budu kao što je ovde dalje opisano, i tako na primer mogu da sadrže pogodne linkere, mogu da sadrže C-terminalnu ekstenziju kao što je ovde opisano i mogu da imaju produženi poluživot (na primer zato što sadrže nanotelo usmereno na albumin iz humanog seruma, kao što je (poželjno) nanotelo iz pronalaska usmereno na albumin iz humanog seruma). Upućuje se na podatke prikazane u Tabeli BB ispod.
[0331] Kao što je opisano u, na primer WO 2006/040153 i naročito kao što je opisano u EP2542579, jedna posebno poželjna klasa jedinjenja zasnovanih na nanotelima koja su usmerena na A-beta su biparatopna jedinjenja. Tako, u jednom ilustrativnom aspektu otkrića, jedinjenje usmereno na A-beta je biparatopni konstrukt koji sadrži jedan ISV koji je SEQ ID NO: 460 ili (poželjno) ISV koji je dobijen od SEQ ID NO: 460 (kao što je opisano u ovom Primeru 17) i jedan ISV koji je SEQ ID NO: 478 ili (poželjno) ISV koji je dobijen od SEQ ID NO: 478 (kao što je opisano u ovom Primeru 17). Takvi biparatopni konstrukti takođe mogu imati produženi poluživot (tj. putem ISV koji vezuje albumin iz seruma). Neki specifični primeri takvih biparatopnih konstrukata dati su u SEQ ID NO: 730 do 766.
[0332] Primeri jedinjenja usmerenih na A-beta dati su na Slici 30 kao SEQ ID NO: 730 do 766. Tako, u drugom ilustrativnom aspektu, otkriće se odnosi na polipeptid koji je usmeren na A-beta i koji ima aminokiselinsku sekvencu koja je izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 730 do 766. Uopštenije, jedinjenja usmerena na A-beta mogu da budu kao što je opisano u WO 2006/040153 i naročito kao što je opisano u EP2542579, ali sadrže ISVD iz pronalaska. Ona takođe mogu da se koriste za namene koje su opisane u WO 2006/040153 i naročito u EP2542579.
1
Tabela BB: Primeri jedinjenja usmerenih na A-beta.
1
11
12
1
(
14
Napomene:
-„Jednovalentan“ se uopšteno odnosi na polipeptide/konstrukte koji sadrže jedan ISV usmeren na A-beta. Oni mogu dalje da sadrže ISV koji produžavaju poluživot (kao što je ISV usmeren na albumin iz seruma).
-„Dvovalentan“ se uopšteno odnosi na polipeptide/konstrukte koji sadrže dva ISV usmerena na A-beta (koji mogu biti isti ili različiti). Oni mogu ponovo dalje da sadrže ISV koji produžavaju poluživot (kao što je ISV usmeren na albumin iz seruma).
-„Bispecifičan“ se uopšteno odnosi na polipeptide/konstrukte koji sadrže najmanje jedan (kao što je 1 ili 2) ISV usmeren na A-beta i najmanje jedan (kao što je 1 ili 2) drugi ISV usmeren na terapeutski cilj. Oni mogu dalje da sadrže ISV koji produžavaju poluživot (kao što je ISV usmeren na albumin iz seruma).
-U polipeptidima/konstruktima koji su opisani u ovoj tabeli, najmanje jedan od prisutnih ISV usmerenih na A-beta je ISV iz pronalaska, a poželjno su svi prisutni ISV usmereni na A-beta u takvom polipeptidu/konstruktu ISV iz pronalaska. Takođe, kada je ISV koji produžava poluživot i/ili ISV usmeren na drugi terapeutski cilj prisutan u takvom polipeptidu/konstruktu, svaki od njih (a poželjno svi) može takođe biti (i poželjno jeste) ISV iz pronalaska
(<2>): Svi „dvovalentni“ konstrukti u ovoj Tabeli mogu takođe biti biparatopni, što znači da sadrže najmanje dva (kao što je dva) ISV usmerena na A-beta koji su usmereni na različite epitope na A-beta.
(<3>): Kao što će biti jasno stručnjaku, drugi/dalji bispecifični konstrukti osim navedenih mogu se napraviti korišćenjem pomenutih gradivnih elemenata i linkera.
(<4>) Poželjno, svaki prisutni [A-beta] je nezavisno izabran od SEQ ID NO: 464 do 477 i/ili 482 do 495. Takođe, prisutni [A-beta] mogu biti isti ili različiti; u biparatopnom polipeptidu/konstruktu biće usmereni na različite epitope na A-beta.
(<5>) Svaki od polipeptida/konstrukata koji su pomenuti u ovoj koloni putem upućivanja na SEQ ID čini pojedinačan poseban aspekt pronalaska.
Primer 19: Testiranje anti-A-beta konstrukata za vezivanje od strane već postojećih antitela.
1
[0333] Tri anti-A-beta konstrukta sa produženim poluživotom (sa opštom formulom [A-beta-1]-9GS-ALB8-9GS-[A-beta-2]-A) testirana su i upoređena prema vezivanju od strane već postojećih antitela, koristeći opšti protokol koji je ovde opisan. Dva konstrukta su imala navedene mutacije u sva tri gradivna elementa (tj. u dva anti-A-beta nanotela i u nanotelu koje vezuje albumin iz seruma). Referentni konstrukt (SEQ ID NO:766) nije imao mutacije u bilo kom od gradivnih elemenata. Svi testirani konstrukti su imali C-terminalni alanin. Rezultati su dati u Tabeli CC-1 i na Slici 31A.
Tabela CC-1: testiranje anti-A-beta konstrukata na vezivanje od strane već postojećih antitela
[0334] Anti-A-beta nanotela koja su prisutna na C-terminalnom kraju konstrukata takođe su odvojeno testirana kao jednovalentni konstrukti (sa C-terminalnim alaninom). Rezultati su dati u Tabeli CC-2 i na Slici 31A.
1
Tabela CC-2: testiranje jednovalentnih anti-A-beta nanotela na vezivanje od strane već postojećih antitela
Primer 20: Pregled vezivača albumina iz seruma iz pronalaska
[0335] Tabele DD i EE u nastavku daju neke poželjne, ali neograničavajuće primere nanotela koja vezuju albumin iz seruma, zasnovanih na Alb-8 (Tabela DD), odnosno Alb-23 (Tabela EE).
[0336] Kao što je pomenuto, u ilustrativne svrhe, primena se takođe odnosi na polipeptid, protein, jedinjenje ili konstrukt (i naročito na jedinjenje) koji sadrži jedno od nanotela koja vezuju albumin iz seruma, navedenih u Tabeli DD ili EE u nastavku. Takav polipeptid, protein, jedinjenje ili konstrukt (i naročito jedinjenje) može dalje da sadrži najmanje jedan (kao što je jedan, dva ili tri) vezujući domen ili vezujuću jedinicu (kao što je ISVD, i naročito ISV iz pronalaska) koji je usmeren na najmanje jedan terapeutski cilj. Takav polipeptid, protein, jedinjenje ili konstrukt može ponovo pogodno biti monospecifičan, bispecifičan ili trispecifičan u odnosu na terapeutski cilj (ciljeve), i može biti dvovalentan, trovalentan, četvorovalentan ili više valence. Uobičajeno će takođe sadržati pogodne linkere, i može da sadrži C-terminalnu ekstenziju kao što je opisano ovde.
1
[0337] Naročito, takav polipeptid, protein, jedinjenje ili konstrukt može biti jedinjenje i/ili može biti kao što je ovde dalje opisano za jedinjenja. Shodno tome, jedinjenja koja sadrže jedno od nanotela koja vezuju albumin iz seruma navedenih u Tabeli DD ili EE takođe su ovde opisana.
Tabela DD: Alb-8 (referenca) i varijante Alb-8
Tabela DD (nastavak):
1
Tabela EE: Alb-23 (referenca) i varijante Alb-23
1 Tabela EE (nastavak):
1

Claims (20)

Patentni zahtevi
1. Pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina, u kome: (i) aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K; i taj pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina sadrži C-terminalnu ekstenziju (X)nu kojoj je n 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I), pri čemu, pozicije aminokiselinskog ostatka/ u pojedinačnom varijabilnom domenu teškog lanca imunoglobulina su naznačene Kabatovom numeracijom.
2. Pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina prema zahtevu 1, pri čemu (ii) aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je T; ili (iii) aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je L i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od K ili Q; i (iv) u svakom od slučajeva (i) do (iii) aminokiselina na poziciji 11 je poželjno V.
3. Pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina u kome aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K, pri čemu su pozicije aminokiselinskog ostatka u pojedinačnom varijabilnom domenu teškog lanca imunoglobulina naznačene numeracijom prema Kabatu.
4. Pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina prema zahtevu 3 koji sadrži C-terminalnu ekstenziju (X)n, u kojoj je n 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I).
5. Pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina, u kome:
- aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je jedan od L, V ili K; i
- aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je jedan od A ili P; i
- aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je jedan od A ili P; i
- aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je jedan od T, V ili L; i
- aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je jedan od Q ili L; i
- aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od T, K ili Q; i
- aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K, pri čemu, pozicije aminokiselinskog ostatka/ u pojedinačnom varijabilnom domenu teškog lanca imunoglobulina su naznačene Kabatovom numeracijom.
6. Pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina prema zahtevu 5, u kome, aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je T.
7. Pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina prema zahtevu 5, u kome, aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je L i aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je V.
8. Pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina prema zahtevu 5, u kome, aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je L i aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od K ili Q.
9. Pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina prema bilo kom od zahteva 5 do 8, u kome, pomenuti pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina sadrži C-terminalnu ekstenziju (X)nu kojoj je n 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I).
10. Pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina, u kome:
-aminokiselinski ostatak na poziciji 11 je L; i
-aminokiselinski ostatak na poziciji 14 je jedan od A ili P; i
-aminokiselinski ostatak na poziciji 41 je jedan od A ili P; i
-aminokiselinski ostatak na poziciji 89 je jedan od T, V ili L; i
-aminokiselinski ostatak na poziciji 108 je jedan od Q ili L; i
-aminokiselinski ostatak na poziciji 110 je jedan od K ili Q; i
-aminokiselinski ostatak na poziciji 112 je K,
pri čemu, pozicije aminokiselinskog ostatka u pojedinačnom varijabilnom domenu teškog lanca imunoglobulina su naznačene Kabatovom numeracijom.
11. Pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina prema zahtevu 10, u kome, pomenuti pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina sadrži C-terminalnu ekstenziju (X)n, u kojoj je n 1 do 10, poželjno 1 do 5, kao što je 1, 2, 3, 4 ili 5 (i poželjno 1 ili 2, kao što je 1); i svaki X je (poželjno prirodni) aminokiselinski ostatak koji je nezavisno izabran, i poželjno nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ili izoleucina (I).
12. Pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina prema bilo kom od prethodnih zahteva, koji je VHH domen ili kamelizovani pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina.
13. Pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina prema bilo kom od prethodnih zahteva, koji može specifično da se veže za albumin iz humanog seruma.
14. Pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina prema zahtevu 13, koji ima najmanje 80%, poželjno najmanje 85%, poželjnije najmanje 90%, kao što je najmanje 95% identičnosti sekvence sa najmanje jednim Alb-1 (SEQ ID NO: 52 iz WO 2006/122787), Alb-8 (SEQ ID NO: 46) i/ili Alb-23 (SEQ ID NO:61).
15. Pojedinačni varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina prema zahtevu 13 ili 14, u kome:
- CDR1 je aminokiselinska sekvenca SFGMS (SEQ ID NO:41);
- CDR2 je aminokiselinska sekvenca SISGSGSDTLYADSVKG (SEQ ID NO:42);
- CDR3 je aminokiselinska sekvenca GGSLSR (SEQ ID NO:43).
16. Biblioteka pojedinačnih varijabilnih domena teškog lanca imunoglobulina prema bilo kom od zahteva 1 do 12.
17. Biblioteka ostataka nukleinske kiseline koji kodiraju pojedinačne varijabilne domene teškog lanca imunoglobulina prema bilo kom od zahteva 1 do 12.
18. Biblioteka prema zahtevu 17, koja je ekspresiona biblioteka.
19. Biblioteka prema bilo kom od zahteva 16 do 18 koja je sintetička biblioteka.
1
20. Biblioteka prema bilo kom od zahteva 16 do 19, koja sadrži najmanje 100 različitih sekvenci, kao što je najmanje 1000 različitih sekvenci, konkretno više od 10<5>različitih sekvenci, konkretnije više od 10<6>različitih sekvenci, kao što je 10<8>do 10<10>različitih sekvenci.
RS20220328A 2014-05-16 2015-05-13 Varijabilni domeni imunoglobulina RS63085B1 (sr)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461994552P 2014-05-16 2014-05-16
US201462014015P 2014-06-18 2014-06-18
US201461014015P 2014-06-18 2014-06-18
US201462040167P 2014-08-21 2014-08-21
US201462047560P 2014-09-08 2014-09-08
US201562133600P 2015-03-16 2015-03-16
EP17178990.2A EP3248986B1 (en) 2014-05-16 2015-05-13 Immunoglobulin variable domains

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS63085B1 true RS63085B1 (sr) 2022-04-29

Family

ID=91193230

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20201034A RS60717B1 (sr) 2014-05-16 2015-05-13 Varijabilni domeni imunoglobulina
RS20220328A RS63085B1 (sr) 2014-05-16 2015-05-13 Varijabilni domeni imunoglobulina

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20201034A RS60717B1 (sr) 2014-05-16 2015-05-13 Varijabilni domeni imunoglobulina

Country Status (24)

Country Link
US (10) US12180268B2 (sr)
EP (5) EP3702369A1 (sr)
JP (6) JP7325928B2 (sr)
KR (5) KR102769509B1 (sr)
CN (3) CN113717280A (sr)
AU (6) AU2015261536B2 (sr)
BR (2) BR122018009619B1 (sr)
CA (2) CA3175002A1 (sr)
DK (2) DK3248986T3 (sr)
ES (2) ES2912069T3 (sr)
HR (2) HRP20200966T1 (sr)
HU (2) HUE050007T2 (sr)
IL (6) IL311293B2 (sr)
LT (2) LT3143042T (sr)
MX (4) MX383560B (sr)
PH (1) PH12016502282B1 (sr)
PL (2) PL3248986T3 (sr)
PT (2) PT3248986T (sr)
RS (2) RS60717B1 (sr)
RU (1) RU2746738C2 (sr)
SG (3) SG10201810124PA (sr)
SI (2) SI3143042T1 (sr)
WO (1) WO2015173325A2 (sr)
ZA (5) ZA201607587B (sr)

Families Citing this family (100)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11644471B2 (en) 2010-09-30 2023-05-09 Ablynx N.V. Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains
DK2723769T4 (da) * 2011-06-23 2022-09-05 Ablynx Nv Teknikker til at forudsige, påvise og reducere uspecifik proteininterferens i assays, som involverer variable immunglobulin-enkeltdomæner
PL3248986T3 (pl) 2014-05-16 2022-05-16 Ablynx Nv Domeny zmienne immunoglobuliny
KR20250099289A (ko) 2014-05-16 2025-07-01 아블린쓰 엔.브이. 개선된 면역글로불린 가변 도메인
JP7001474B2 (ja) 2015-01-21 2022-01-19 インヒブルクス，インコーポレイティド 非免疫原性単一ドメイン抗体
NO2768984T3 (sr) * 2015-11-12 2018-06-09
WO2017081265A1 (en) * 2015-11-12 2017-05-18 Ablynx Nv Improved p2x7 receptor binders and polypeptides comprising the same
CN115925919A (zh) 2015-11-13 2023-04-07 埃博灵克斯股份有限公司 改进的血清白蛋白结合免疫球蛋白可变结构域
MA43260A (fr) 2015-11-18 2018-09-26 Merck Sharp & Dohme Liants pd1 et/ou lag3
US10544222B2 (en) 2015-11-18 2020-01-28 Merck Sharp & Dohme Corp. PD1/CTLA4 binders
CN120535622A (zh) * 2015-11-18 2025-08-26 埃博灵克斯股份有限公司 改进的血清白蛋白结合剂
CR20180279A (es) 2015-11-18 2018-08-24 Merck Sharp & Dohme Enlazadores de ctla4
JP7540877B2 (ja) 2016-02-12 2024-08-27 アブリンクス エン．ヴェー． 免疫グロブリン単一可変ドメインの生成方法
CN107400166A (zh) * 2016-05-19 2017-11-28 苏州康宁杰瑞生物科技有限公司 针对ctla4的单域抗体及其衍生蛋白
MX2018016413A (es) 2016-06-23 2019-05-09 Ablynx Nv Ensayos farmacocineticos mejorados para dominios variables unicos de inmunoglobulina.
CA3043515A1 (en) 2016-11-16 2018-05-24 Ablynx Nv T cell recruiting polypeptides capable of binding cd123 and tcr alpha/beta
RU2022101604A (ru) 2016-12-07 2022-03-29 Аблинкс Нв Улучшенные отдельные вариабельные домены иммуноглобулина, связывающиеся с сывороточным альбумином
HRP20241501T1 (hr) 2017-01-17 2025-01-03 Ablynx Nv Poboljšana veziva albumina u serumu
SG10202108972RA (en) 2017-01-17 2021-09-29 Ablynx Nv Improved serum albumin binders
IL270908B1 (en) 2017-06-02 2026-04-01 Merck Patent Gmbh ADAMTS-binding immunoglobulins
KR102625929B1 (ko) 2017-07-19 2024-01-16 브이아이비 브이지더블유 혈청 알부민 결합제
CA3076791A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Vib Vzw Novel antigen-binding chimeric proteins and methods and uses thereof
CN113710229B (zh) 2019-02-25 2026-01-06 芝加哥大学 用与抗炎剂连接的ecm亲和肽治疗炎症性和自身免疫性病症的方法和组合物
US20220289837A1 (en) 2019-04-30 2022-09-15 Vib Vzw Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Stabilizing Agents
EP4065603A1 (en) 2019-11-27 2022-10-05 Vib Vzw Positive allosteric modulators of the calcium-sensing receptor
JP7657797B2 (ja) 2019-12-06 2025-04-07 アブリンクス エン．ヴェー． ＴＮＦαおよびＩＬ－２３を標的化する免疫グロブリン単一可変ドメインを含むポリペプチド
PH12022551231A1 (en) 2019-12-06 2023-07-31 Ablynx Nv Polypeptides comprising immunoglobulin single variable domains targeting tnfa and ox40l
WO2021116182A1 (en) 2019-12-09 2021-06-17 Ablynx Nv Polypeptides comprising immunoglobulin single variable domains targeting il-13 and tslp
AR120698A1 (es) 2019-12-09 2022-03-09 Ablynx Nv Polipéptidos que comprenden dominios variables únicos de inmunoglobulina que se dirigen a il-13 y tslp
US20240027467A1 (en) 2019-12-20 2024-01-25 Vib Vzw Nanobody Exchange Chromatography
WO2021156490A2 (en) 2020-02-06 2021-08-12 Vib Vzw Corona virus binders
KR20230012464A (ko) 2020-02-25 2023-01-26 브이아이비 브이지더블유 류신-풍부 반복 키나제 2 알로스테릭 조절제
IL296767A (en) 2020-03-30 2022-11-01 Ablynx Nv A method for the production and purification of single variable multivalent immunoglobulin sites
WO2022003156A1 (en) 2020-07-02 2022-01-06 Oncurious Nv Ccr8 non-blocking binders
US20230272094A1 (en) * 2020-08-05 2023-08-31 Synthekine, Inc. Il2rb/il2rg synthetic cytokines
MX2023003522A (es) 2020-09-25 2023-04-19 Ablynx Nv Polipeptidos que comprenden dominios variables unicos de inmunoglobulina que se dirigen a il-13 y ox40l.
WO2022117572A2 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Oncurious Nv An ltbr agonist in combination therapy against cancer
WO2022117569A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Oncurious Nv A ccr8 antagonist antibody in combination with a lymphotoxin beta receptor agonist antibody in therapy against cancer
PH12023500013A1 (en) 2020-12-04 2024-03-11 Tidal Therapeutics Inc Ionizable cationic lipids and lipi nanoparticles, and methods of synthesis and use thereof
KR20230123495A (ko) 2020-12-18 2023-08-23 아블린쓰 엔.브이. 글리피칸-3 및 t세포 수용체를 표적으로 하는 면역글로불린단일 가변 도메인을 포함하는 폴리펩티드
KR20230123497A (ko) * 2020-12-18 2023-08-23 아블린쓰 엔.브이. IL-6 및 TNF-α를 표적화하는 면역글로불린 단일 가변도메인을 포함하는 폴리펩티드
KR20230122084A (ko) 2020-12-18 2023-08-22 아블린쓰 엔.브이. Tcr 알파/베타 반응성에 기초한 t 세포 동원 폴리펩타이드
GB202020502D0 (en) 2020-12-23 2021-02-03 Vib Vzw Antibody composistion for treatment of corona virus infection
IL304929A (en) 2021-02-05 2023-10-01 Vib Vzw [Be/Be Sarbevirus binders
CN117794566A (zh) 2021-02-05 2024-03-29 Vib研究所 沙贝病毒结合剂
US20250263490A1 (en) 2021-02-19 2025-08-21 Vib Vzw Cation-Independent Mannose-6-Phosphate Receptor Binders
WO2022206900A1 (zh) * 2021-04-01 2022-10-06 江苏先声药业有限公司 抗人血清白蛋白(hsa)的纳米抗体及其应用
CA3228014A1 (en) 2021-07-30 2023-02-16 Vib Vzm Cation-independent mannose-6-phosphate receptor binders for targeted protein degradation
TW202330596A (zh) * 2021-11-29 2023-08-01 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 經修飾的蛋白或多肽
AU2022409733A1 (en) 2021-12-17 2024-08-01 Ablynx Nv POLYPEPTIDES COMPRISING IMMUNOGLOBULIN SINGLE VARIABLE DOMAINS TARGETING TCRαβ, CD33 AND CD123
WO2023135198A1 (en) 2022-01-12 2023-07-20 Vib Vzw Human ntcp binders for therapeutic use and liver-specific targeted delivery
WO2023198848A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Vib Vzw An ltbr agonist in combination therapy against cancer
WO2023214047A1 (en) 2022-05-06 2023-11-09 Numab Therapeutics AG Antibody variable domains and antibodies having decreased immunogenicity
EP4273162A1 (en) * 2022-05-06 2023-11-08 Numab Therapeutics AG Antibody variable domains and antibodies having decreased immunogenicity
US20250313611A1 (en) 2022-05-18 2025-10-09 Vib Vzw Sarbecovirus spike s2 subunit binders
WO2023240156A1 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Tidal Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles, and methods of synthesis and use thereof
KR20250023503A (ko) 2022-06-14 2025-02-18 아블린쓰 T 세포 수용체를 표적화하는 면역글로불린 단일 가변 도메인
MA71603A (fr) 2022-07-27 2025-05-30 Ablynx Nv Polypeptides se liant à un épitope spécifique du récepteur fc néonatal
WO2024068744A1 (en) 2022-09-27 2024-04-04 Vib Vzw Antivirals against human parainfluenza virus
EP4605077A1 (en) 2022-10-18 2025-08-27 Confo Therapeutics N.V. Amino acid sequences directed against the melanocortin 4 receptor and polypeptides comprising the same for the treatment of mc4r-related diseases and disorders
JP2026501281A (ja) 2022-12-21 2026-01-14 ジェンザイム・コーポレーション 抗ｐｄ－１×４－１ｂｂ結合タンパク質
AR131494A1 (es) 2022-12-23 2025-03-26 Ablynx Nv Vehículos de conjugación a base de proteína
CN120529914A (zh) 2023-01-09 2025-08-22 奥德赛治疗股份有限公司 抗tnfr2抗原结合蛋白及其用途
CN121426967A (zh) 2023-02-10 2026-01-30 阿穆尼克斯制药公司 靶向前列腺特异性膜抗原（psma）的组合物及其制备和使用方法
JP2026506075A (ja) 2023-02-17 2026-02-20 アブリンクス エン．ヴェー． 新生児型ｆｃ受容体に結合するポリペプチド
WO2024175787A1 (en) 2023-02-24 2024-08-29 Vrije Universiteit Brussel Anti-inflammatory pannexin 1 channel inhibitors
WO2024192065A1 (en) 2023-03-14 2024-09-19 Odyssey Therapeutics, Inc. Anti-cd25 antigen-binding proteins and uses thereof
WO2024208816A1 (en) 2023-04-03 2024-10-10 Vib Vzw Blood-brain barrier crossing antibodies
AU2024267410A1 (en) 2023-05-08 2026-01-08 Sanofi Glycosylation of immunoglobulin single variable domains
CN121511255A (zh) 2023-05-17 2026-02-10 奥德赛治疗股份有限公司 经修饰的单结构域抗体
KR20260028051A (ko) 2023-06-22 2026-03-03 아블린쓰 엔.브이. 사이토카인의 수용체-활성을 조절하기 위한 키메라 단백질
IL325291A (en) 2023-06-29 2026-02-01 Odyssey Therapeutics Inc Anti-TRAILR2 antigen-binding proteins and their uses
AR133188A1 (es) 2023-07-05 2025-09-03 Ablynx Nv ANTAGONISTAS DE FcRn MEJORADOS PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES Y TRASTORNOS RELACIONADOS CON IgG
WO2025051767A1 (en) 2023-09-04 2025-03-13 Sanofi Polypeptides for use in the treatment of glypican-3-expressing tumours
US20250129145A1 (en) 2023-09-22 2025-04-24 Ablynx N.V. Bi- and multivalent albumin binders
WO2025080751A2 (en) 2023-10-13 2025-04-17 Odyssey Therapeutics, Inc. Anti-cdh17 antigen-binding proteins and uses thereof
AR134267A1 (es) 2023-11-08 2025-12-17 Sanofi Sa Degradador lisosómico basado en cd25 y usos del mismo
WO2025109176A1 (en) 2023-11-22 2025-05-30 Exevir Bio Bv Optimized sarbecovirus spike s2 subunit binders and compositions comprising the same
TW202540188A (zh) 2023-12-01 2025-10-16 比利時商艾伯霖克斯公司 精準活化的多肽
WO2025125577A1 (en) 2023-12-14 2025-06-19 Vib Vzw Antibodies against influenza b virus
US20250236673A1 (en) 2023-12-22 2025-07-24 Ablynx N.V. Protein-based carriers for site-specific amine conjugation
TW202543670A (zh) 2023-12-22 2025-11-16 比利時商艾伯霖克斯公司 用於核內投予之基於蛋白質的接合載劑
TW202543581A (zh) 2024-02-12 2025-11-16 美商艾伊拉醫療公司 遞送組成物
WO2025181155A1 (en) 2024-02-26 2025-09-04 Vib Vzw Human beta-glucocerebrosidase binders and uses thereof
WO2025217240A1 (en) 2024-04-10 2025-10-16 Odyssey Therapeutics, Inc. Anti-tnfr2 antigen-binding proteins and uses thereof
US12459994B2 (en) 2024-04-12 2025-11-04 Paragon Therapeutics, Inc. Albumin binding proteins and methods of use
WO2025219231A1 (en) 2024-04-15 2025-10-23 Vib Vzw Computer-implemented means and methods for the de novo design of antibodies targeting a specific epitope
WO2025255558A2 (en) 2024-06-07 2025-12-11 Odyssey Therapeutics, Inc. Anti-thymic stromal lymphopoietin (tslp) antigen-binding proteins and uses thereof
WO2025255435A2 (en) 2024-06-07 2025-12-11 Odyssey Therapeutics, Inc. Antigen-binding proteins against serum albumin and uses thereof
US20260007757A1 (en) 2024-06-18 2026-01-08 Ablynx Nv Antibody-recruiting molecules
WO2026006708A2 (en) 2024-06-27 2026-01-02 Odyssey Therapeutics, Inc. Anti-cd25 antigen-binding proteins and uses thereof
WO2026006809A1 (en) 2024-06-27 2026-01-02 Odyssey Therapeutics, Inc. Multispecific molecules binding tnfr2 and cd25 and uses thereof
WO2026008664A1 (en) 2024-07-01 2026-01-08 Vib Vzw Allosteric modulators of inhibitory immune receptor complexes
WO2026024863A2 (en) 2024-07-24 2026-01-29 Amunix Pharmaceuticals, Inc. Compositions targeting prostate-specific membrane antigen (psma) in combination with androgen receptor antagonists
WO2026030375A2 (en) 2024-07-30 2026-02-05 Genzyme Corporation Lipid nanoparticles and methods of manufacture and use thereof
WO2026052756A1 (en) 2024-09-05 2026-03-12 Ablynx Nv Her2 binding immunoglobulin single variable domains, constructs comprising the same and uses thereof
WO2026062214A1 (en) 2024-09-19 2026-03-26 Sanofi Formulations comprising lunsekimig
WO2026072557A2 (en) 2024-09-24 2026-04-02 Genzyme Corporation Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles, and methods of synthesis and use thereof
WO2026078159A1 (en) 2024-10-10 2026-04-16 Ablynx Nv Immune cell engagers and methods comprising the same
EP4730342A1 (en) 2024-10-18 2026-04-22 Sanofi Method, system and apparatus for estimating titer for immunoglobulin single variable domain molecules

Family Cites Families (96)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1545106C3 (de) * 1963-07-16 1979-05-31 Union Carbide Corp., New York, N.Y. (V.St.A.) Verfahren zur Herstellung von linearen Polyarylenpolyäthern
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
KR0162654B1 (ko) 1989-12-11 1998-11-16 알렌 제이. 시니스갤리 N-(피롤로[2,3-d]피리미딘-3-일아크릴)-글루타민산 유도체
US5248775A (en) 1989-12-11 1993-09-28 The Trustees Of Princeton University Pyrrolo(2,3-d)pyrimidines
US4996206A (en) 1989-12-11 1991-02-26 The Trustees Of Princeton University N-(pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-3-ylacyl)-glutamic acid derivatives
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
AU701578B2 (en) 1992-08-21 1999-02-04 Vrije Universiteit Brussel Immunoglobulins devoid of light chains
AU3295299A (en) 1998-02-19 1999-09-06 Xcyte Therapies, Inc. Compositions and methods for regulating lymphocyte activation
HU230769B1 (hu) 1999-01-15 2018-03-28 Genentech Inc. Módosított effektor-funkciójú polipeptid-változatok
US7943129B2 (en) * 2000-05-26 2011-05-17 National Research Council Of Canada Single-domain brain-targeting antibody fragments derived from llama antibodies
US7829084B2 (en) 2001-01-17 2010-11-09 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding constructs and methods for use thereof
US20100081792A1 (en) 2001-06-28 2010-04-01 Smithkline Beecham Corporation Ligand
WO2003035695A2 (en) 2001-07-26 2003-05-01 Tanox, Inc. Agents that activate or inhibit toll-like receptor 9
JP2005289809A (ja) 2001-10-24 2005-10-20 Vlaams Interuniversitair Inst Voor Biotechnologie Vzw (Vib Vzw) 突然変異重鎖抗体
US9321832B2 (en) 2002-06-28 2016-04-26 Domantis Limited Ligand
US20060002935A1 (en) 2002-06-28 2006-01-05 Domantis Limited Tumor Necrosis Factor Receptor 1 antagonists and methods of use therefor
ES2263984T3 (es) 2002-06-28 2006-12-16 Domantis Limited Ligandos doble-especificos con una vida media serica aumentada.
FR2846667B1 (fr) 2002-11-06 2004-12-31 Pasteur Institut Fragments variables d'anticorps de camelides a chaine unique diriges contre le peptide beta-amyloide 1-42 et leurs applications pour le diagnostic et le traitement des maladies neuroagregatives
CA2505316C (en) 2002-11-08 2014-08-05 Ablynx N.V. Single domain antibodies directed against tumour necrosis factor-alpha and uses therefor
WO2004041867A2 (en) 2002-11-08 2004-05-21 Ablynx N.V. Camelidae antibodies against imminoglobulin e and use thereof for the treatment of allergic disorders
GB0230203D0 (en) 2002-12-27 2003-02-05 Domantis Ltd Fc fusion
EP1587838B1 (en) 2003-01-10 2015-04-15 Ablynx N.V. Therapeutic polypeptides, homologues thereof, fragments thereof and their use in modulating platelet-mediated aggregation
EP1737890A2 (en) 2004-03-24 2007-01-03 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
EA012622B1 (ru) 2004-06-01 2009-10-30 Домэнтис Лимитед Биспецифичные гибридные антитела с увеличенным периодом полувыведения из сыворотки
WO2006040153A2 (en) 2004-10-13 2006-04-20 Ablynx N.V. Single domain camelide anti -amyloid beta antibodies and polypeptides comprising the same for the treatment and diagnosis of degenarative neural diseases such as alzheimer's disease
CA2589800A1 (en) 2004-12-02 2006-06-08 Domantis Limited Bispecific domain antibodies targeting serum albumin and glp-1 or pyy
CA2588892A1 (en) 2004-12-02 2006-06-08 Dormantis Limited Anti-il-1r1 single domain antibodies and therapeutic uses
WO2006122787A1 (en) * 2005-05-18 2006-11-23 Ablynx Nv Serum albumin binding proteins
ES2852423T3 (es) 2005-05-20 2021-09-13 Ablynx Nv NanobodiesTM mejorados para el tratamiento de trastornos mediados por agregación
US7989219B2 (en) 2005-05-31 2011-08-02 Canon Kabushiki Kaisha Bispecific capturing molecule
PE20071101A1 (es) * 2005-08-31 2007-12-21 Amgen Inc Polipeptidos y anticuerpos
CA2632866A1 (en) 2005-12-01 2007-06-07 Domantis Limited Noncompetitive domain antibody formats that bind interleukin 1 receptor type 1
EA200801166A1 (ru) 2005-12-01 2008-12-30 Домантис Лимитед Форматы конкурентного доменного антитела, которые связываются с рецептором интерлейкина 1 первого типа
FR2894741B1 (fr) 2005-12-08 2009-12-04 Centre Nat Etd Spatiales Chaine de reception par satellite
WO2007085814A1 (en) 2006-01-24 2007-08-02 Domantis Limited Fusion proteins that contain natural junctions
EP2057191A1 (en) 2006-08-18 2009-05-13 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of deseases and disorders associated with il-6-mediated signalling
CA2671581A1 (en) 2006-12-05 2008-06-12 Ablynx N.V. Peptides capable of binding to serum proteins
EP2102241A2 (en) 2006-12-15 2009-09-23 Ablynx N.V. Amino acid sequences that modulate the interaction between cells of the immune system
CN101796072B (zh) 2007-05-24 2014-09-24 埃博灵克斯股份有限公司 用于治疗骨疾病和病症的针对rank-l的氨基酸序列以及包括其的多肽
US20090074780A1 (en) 2007-06-25 2009-03-19 David Urech Methods of modifying antibodies, and modified antibodies with improved functional properties
EP2220120A2 (en) 2007-11-27 2010-08-25 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against heterodimeric cytokines and/or their receptors and polypeptides comprising the same
KR20100132535A (ko) 2008-03-31 2010-12-17 글락소 그룹 리미티드 약물 융합체 및 컨주게이트
EP2268668A1 (en) 2008-04-17 2011-01-05 Ablynx N.V. Peptides capable of binding to serum proteins and compounds, constructs and polypeptides comprising the same
WO2009138494A2 (en) * 2008-05-15 2009-11-19 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against toll-like receptors and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases related to toll-like receptors
DE102008023620A1 (de) 2008-05-15 2009-11-19 Mettler-Toledo (Albstadt) Gmbh Funktionseinheit mit einer aufrufbaren Funktion und Verfahren zu deren Aufruf
NZ589036A (en) 2008-05-16 2012-07-27 Ablynx Nv AMINO ACID SEQUENCES DIRECTED AGAINST CXCR4 AND OTHER GPCRs AND COMPOUNDS COMPRISING THE SAME
EP2143735A1 (en) * 2008-07-10 2010-01-13 Institut Pasteur Variable domains of camelid heavy-chain antibodies directed against glial fibrillary acidic proteins
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
WO2010042815A2 (en) 2008-10-09 2010-04-15 Duke University Vhh antibody fragments for use in the detection and treatment of cancer
EP2411054A2 (en) 2009-03-27 2012-02-01 Glaxo Group Limited Drug fusions and conjugates
ES2551854T3 (es) 2009-04-30 2015-11-24 Ablynx N.V. Procedimiento para la producción de anticuerpos de dominio
WO2010130832A2 (en) 2009-05-15 2010-11-18 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against dickkopf-1 and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders associated with bone loss and/or osteolytic lesions
EP2435480A1 (en) 2009-05-27 2012-04-04 Ablynx N.V. Biparatopic protein constructs directed against il-23
KR20140014405A (ko) 2009-05-28 2014-02-06 글락소 그룹 리미티드 안구 질병을 치료하거나 예방하는데 사용되는 ｔｎｆ-알파 길항제 및 ｖｅｇｆ 길항제의 조합물
HUE051430T2 (hu) 2009-07-10 2021-03-01 Ablynx Nv Eljárás variábilis domének elõállítására
US8306355B2 (en) 2009-07-13 2012-11-06 Sharp Laboratories Of America, Inc. Methods and systems for reducing compression artifacts
WO2011042398A1 (en) 2009-10-09 2011-04-14 Ablynx Nv Immunoglobulin single variable domain directed against human cxcr4 and other cell associated proteins and methods to generate them
EP2513145B1 (en) * 2009-12-14 2018-01-24 Ablynx N.V. Single variable domain antibodies against ox40l, constructs and therapeutic use
CA2777527C (en) * 2009-12-23 2020-06-23 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Method for decreasing immunogenicity
UY33253A (es) 2010-03-03 2011-09-30 Boehringer Ingelheim Int Polipéptidos de unión a a-beta
US8937164B2 (en) 2010-03-26 2015-01-20 Ablynx N.V. Biological materials related to CXCR7
EP2563814A1 (en) 2010-04-30 2013-03-06 Ablynx N.V. Amino acid sequences of nanobodies directed against p19 subunit of the heterodimeric cytokine il-23
CN102906118B (zh) 2010-05-20 2017-07-28 埃博灵克斯股份有限公司 与her3相关的生物材料
WO2011161266A1 (en) 2010-06-25 2011-12-29 Ablynx Nv Improved immunoglobulin single variable domains and constructs thereof directed against cxcr4
JP2013145769A (ja) 2010-08-04 2013-07-25 Kri Inc 異方性希土類ボンド磁石とその製造方法
EP2621953B1 (en) 2010-09-30 2017-04-05 Ablynx N.V. Biological materials related to c-met
US20130310281A1 (en) * 2011-02-02 2013-11-21 Glaxo Group Limited Novel antigen binding proteins
CN103917560B (zh) 2011-03-28 2017-05-24 埃博灵克斯股份有限公司 双特异性抗‑cxcr7免疫球蛋白单可变结构域
UA117218C2 (uk) 2011-05-05 2018-07-10 Мерк Патент Гмбх Поліпептид, спрямований проти il-17a, il-17f та/або il17-a/f
CN106046168A (zh) * 2011-06-23 2016-10-26 埃博灵克斯股份有限公司 结合血清白蛋白的蛋白
DK2723769T4 (da) * 2011-06-23 2022-09-05 Ablynx Nv Teknikker til at forudsige, påvise og reducere uspecifik proteininterferens i assays, som involverer variable immunglobulin-enkeltdomæner
IN2014CN00437A (sr) 2011-06-23 2015-04-03 Ablynx Nv
US20130019175A1 (en) 2011-07-14 2013-01-17 Microsoft Corporation Submenus for context based menu system
SG2014010482A (en) * 2011-08-17 2014-04-28 Glaxo Group Ltd Modified proteins and peptides
CN103889451B (zh) 2011-09-30 2016-06-29 埃博灵克斯股份有限公司 与C-Met相关的生物物质
KR20160098514A (ko) 2011-10-17 2016-08-18 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 제한된 면역글로불린 중쇄 마우스
US20130129727A1 (en) 2011-11-17 2013-05-23 Nanjingjinsirui Science & Technology Biology Corporation Methods and systems for increasing protein stability
EP3453723B1 (en) * 2012-01-31 2021-08-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-asic1 antibodies and uses thereof
AU2013269606B2 (en) 2012-06-01 2018-05-17 Ablynx N.V. P2X7 receptor antagonists and agonists
TWI641619B (zh) * 2012-06-25 2018-11-21 美商再生元醫藥公司 抗－ｅｇｆｒ抗體及其用途
JP2015531350A (ja) 2012-09-13 2015-11-02 ノバルティス アーゲー 末端修飾を有する抗原結合分子
US9667316B2 (en) 2013-05-17 2017-05-30 The Boeing Company Aircraft data transmission using phase separation
PL3248986T3 (pl) 2014-05-16 2022-05-16 Ablynx Nv Domeny zmienne immunoglobuliny
RU2018119732A (ru) 2015-10-30 2019-12-03 Аблинкс Нв Полипептиды против il-23
WO2017081265A1 (en) 2015-11-12 2017-05-18 Ablynx Nv Improved p2x7 receptor binders and polypeptides comprising the same
NO2768984T3 (sr) 2015-11-12 2018-06-09
CN115925919A (zh) 2015-11-13 2023-04-07 埃博灵克斯股份有限公司 改进的血清白蛋白结合免疫球蛋白可变结构域
CN120535622A (zh) 2015-11-18 2025-08-26 埃博灵克斯股份有限公司 改进的血清白蛋白结合剂
MA43260A (fr) 2015-11-18 2018-09-26 Merck Sharp & Dohme Liants pd1 et/ou lag3
US10544222B2 (en) 2015-11-18 2020-01-28 Merck Sharp & Dohme Corp. PD1/CTLA4 binders
CR20180279A (es) 2015-11-18 2018-08-24 Merck Sharp & Dohme Enlazadores de ctla4
HRP20241501T1 (hr) 2017-01-17 2025-01-03 Ablynx Nv Poboljšana veziva albumina u serumu
JP7657797B2 (ja) 2019-12-06 2025-04-07 アブリンクス エン．ヴェー． ＴＮＦαおよびＩＬ－２３を標的化する免疫グロブリン単一可変ドメインを含むポリペプチド
AR120698A1 (es) 2019-12-09 2022-03-09 Ablynx Nv Polipéptidos que comprenden dominios variables únicos de inmunoglobulina que se dirigen a il-13 y tslp
KR20230123497A (ko) 2020-12-18 2023-08-23 아블린쓰 엔.브이. IL-6 및 TNF-α를 표적화하는 면역글로불린 단일 가변도메인을 포함하는 폴리펩티드

Also Published As

Publication number Publication date
EP3248986A2 (en) 2017-11-29
US20170121399A1 (en) 2017-05-04
HRP20200966T1 (hr) 2020-10-16
KR20230054503A (ko) 2023-04-24
JP2021130681A (ja) 2021-09-09
EP3143042A2 (en) 2017-03-22
JP7454525B2 (ja) 2024-03-22
MX2021007020A (es) 2021-08-05
EP3248986A3 (en) 2017-12-20
ZA202100742B (en) 2022-09-28
KR20180091115A (ko) 2018-08-14
AU2022279374A1 (en) 2023-01-19
US20210261653A1 (en) 2021-08-26
US11708404B2 (en) 2023-07-25
JP7471987B2 (ja) 2024-04-22
US20200231662A1 (en) 2020-07-23
RU2018120744A3 (sr) 2022-01-28
EP3143042B1 (en) 2020-06-10
PL3248986T3 (pl) 2022-05-16
US11485777B2 (en) 2022-11-01
PH12016502282A1 (en) 2017-02-13
SI3143042T1 (sl) 2020-08-31
AU2020202570A1 (en) 2020-05-07
CN106661100A (zh) 2017-05-10
WO2015173325A3 (en) 2016-02-18
IL299282B2 (en) 2024-09-01
IL248636A0 (en) 2017-01-31
RU2018120744A (ru) 2018-11-15
US20210269515A1 (en) 2021-09-02
AU2022279374B2 (en) 2026-01-15
JP7098439B2 (ja) 2022-07-11
RS60717B1 (sr) 2020-09-30
RU2016149463A (ru) 2018-06-19
MX2018007581A (es) 2020-11-12
ZA202004758B (en) 2022-08-31
WO2015173325A2 (en) 2015-11-19
IL311293B1 (en) 2025-03-01
US11220539B2 (en) 2022-01-11
EP3702369A1 (en) 2020-09-02
IL311293B2 (en) 2025-07-01
IL311293A (en) 2024-05-01
IL295534B2 (en) 2025-03-01
US20220135657A9 (en) 2022-05-05
DK3143042T3 (da) 2020-08-31
MX2016014926A (es) 2017-05-09
PH12016502282B1 (en) 2024-05-22
JP7325928B2 (ja) 2023-08-15
IL259972B (en) 2021-04-29
IL281755A (en) 2021-05-31
MX383560B (es) 2025-03-14
US20210087261A1 (en) 2021-03-25
ZA202004757B (en) 2022-08-31
IL281755B2 (en) 2023-05-01
EP4707303A2 (en) 2026-03-11
CA3175002A1 (en) 2015-11-19
IL295534A (en) 2022-10-01
WO2015173325A8 (en) 2016-12-29
ES2912069T3 (es) 2022-05-24
IL299282B1 (en) 2024-05-01
MX2023010731A (es) 2023-09-20
IL299282A (en) 2023-02-01
US20210269514A1 (en) 2021-09-02
NZ726448A (en) 2023-02-24
RU2021107470A (ru) 2021-05-17
CN113717280A (zh) 2021-11-30
US20220251183A1 (en) 2022-08-11
KR102827683B1 (ko) 2025-06-30
AU2020202570B2 (en) 2022-12-08
KR20230053002A (ko) 2023-04-20
DK3248986T3 (da) 2022-04-04
EP4707303A9 (en) 2026-04-29
LT3248986T (lt) 2022-03-25
KR102769509B1 (ko) 2025-02-17
PT3143042T (pt) 2020-09-01
PT3248986T (pt) 2022-04-05
US11312765B2 (en) 2022-04-26
JP2024041939A (ja) 2024-03-27
US20220332806A1 (en) 2022-10-20
HRP20220400T1 (hr) 2022-05-27
US12180268B2 (en) 2024-12-31
ZA202004759B (en) 2022-08-31
HUE058008T2 (hu) 2022-06-28
US11312764B2 (en) 2022-04-26
KR20170002645A (ko) 2017-01-06
ES2815572T3 (es) 2021-03-30
AU2015261536A1 (en) 2016-11-17
IL295534B1 (en) 2024-11-01
HUE050007T2 (hu) 2020-11-30
AU2020202855A1 (en) 2020-05-21
BR122018009619B1 (pt) 2024-01-02
IL259972A (en) 2018-07-31
CA2948076A1 (en) 2015-11-19
AU2018204226A1 (en) 2018-07-05
SG10201810124PA (en) 2018-12-28
ZA201607587B (en) 2022-05-25
EP3693386A1 (en) 2020-08-12
BR112016026773A2 (pt) 2017-12-12
JP2017518072A (ja) 2017-07-06
US20220332807A1 (en) 2022-10-20
KR20230145503A (ko) 2023-10-17
IL248636B (en) 2022-12-01
JP2018162297A (ja) 2018-10-18
SG10201805288QA (en) 2018-07-30
CN109053885A (zh) 2018-12-21
IL281755B1 (en) 2023-01-01
LT3143042T (lt) 2020-07-27
SI3248986T1 (sl) 2022-04-29
AU2020202855B2 (en) 2022-12-08
IL248636B2 (en) 2023-04-01
EP3248986B1 (en) 2022-01-26
US11319364B2 (en) 2022-05-03
AU2015261536B2 (en) 2020-05-07
AU2022279373A1 (en) 2023-01-19
PL3143042T3 (pl) 2020-11-16
US11485778B2 (en) 2022-11-01
JP2024069377A (ja) 2024-05-21
JP2021006563A (ja) 2021-01-21
RU2746738C2 (ru) 2021-04-20
SG11201609162SA (en) 2016-12-29
RU2016149463A3 (sr) 2018-07-04
US20220119512A1 (en) 2022-04-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7454525B2 (ja) 改善された免疫グロブリン可変ドメイン
USRE50682E1 (en) Immunoglobulin variable domains
RU2845084C2 (ru) Улучшенные вариабельные домены иммуноглобулина
RU2809788C2 (ru) Улучшенные вариабельные домены иммуноглобулина
HK40035363A (en) Immunoglobulin variable domains