RS63122B1 - Kristalni oblici inhibitora prolil hidroksilaze - Google Patents

Description

Opis

Oblasttehnike

[0001]Predmetniprikazseodnosinakristalnečvrsteoblike[(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetne kiseline, postupak za dobijanje oblika, i farmaceutske kompozicije i postupkezanjihovuupotrebu.

Stanjetehnike

[0002]Jedinjenjemožedapostojiujednomilivišekristalnihoblika.Kristalnioblicilekovitesupstance mogudaimajurazličitafizičkasvojstva,uključujućitačkutopljenja,rastvorljivost,brzinuoslobađanja, optička imehanička svojstva, pritisak pare, higroskopnost, oblik čestice, gustinu, i protočnost.Ova svojstva mogu imati direktan efekat na mogućnost obrade i/ili dobijanja jedinjenja kao lekovitog proizvoda. Kristalni oblicimogu takođeda ispoljavaju različita svojstva stabilnosti i biodostupnosti. Najstabilniji kristalni oblik proizvoda leka često se bira tokom procesa razvijanja leka na osnovu minimalnog potencijala za konverziju u drugi kristalni oblik i na osnovu njegove veće hemijske stabilnosti. Da bi se osigurao kvalitet, bezbednost, i efikasnost proizvoda leka, važno je odabrati kristalnioblikkoji jestabilan,ičijaseproizvodnjamožeponoviti, ikoji imapovoljnafizičkohemijska svojstva.

[0003][(4-Hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetnakiselina(ovdenavedeno, JedinjenjeA) jepotentni inhibitor inducibilnog faktorahipoksije (HIF) prolil hidroksilaze, kao što je opisano u U.S. Patent No. 7,323,475. Inhibitori HIF prolil hidroksilaze su korisni za povećanje stabilnostii/iliaktivnostiHIF-a,ikorisnisuza,izmeđuostalog,lečenjeiprevencijuporemećajakojisu uvezisaHIF,uključujućianemiju,ishemiju,ihipoksiju.

SUŠTINA

[0004]PredmetniprikazispunjavaoveidrugepotrebeobezbeđivanjemkristalnihoblikaJedinjenjaA, soli, i solvata. Predmetni prikaz takođe obezbeđuje amorfni oblik Jedinjenja A. Predmetni prikaz takođeobezbeđuje farmaceutskekompozicijekojesadržeamorfne ili jedan ilivišedrugihkristalnih oblika Jedinjenja A. Prikaz takođe obezbeđuje postupke za dobijanje amorfnih i kristalnih čvrstih oblika i postupke za njihovu upotrebu za lečenje, i prevenciju poremećaja povezanih sa HIF uključujućistanjakojaobuhvatajuanemiju,ishemiju,ihipoksiju.

[0005]Pronalazakobezbeđujefarmaceutskukompozicijukojasadržikristalnu[(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetnu kiselinu (Jedinjenje A Forma A) koju karakteriše rendgenskiprahdifraktogramkojisesastojiodsledećihpikova:8,5,12,8,16,2,21,6,22,9i27,4°2θ± 0,2°2θ, kada se meri korišćenjem Cu Kα zračenja, i farmaceutski prihvatljivog ekscipijenta, za upotrebu,prethodnotretiranje,tretmaniliodlaganjepočetakilinapredovanjeanemije,pričemuje najmanjeoko85%jedinjenjaAufarmaceutskojkompozicijiuoblikuA.

[0006] Takođe je otkrivena kristalna [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetna kiselina (Jedinjenje A Forma A) koju karakteriše rendgenski difraktogram praha koji sadrži sledećepikovi:8,5,16,2i27,4°2θ ± 0,2°2θ.

[0007] Takođe je otkriven kristalni hemihidrat [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetne kiseline (Jedinjenje A Forma B) koji se karakteriše rendgenskim difraktogramom prahakojisadržisledećepikove:4.2,8.3i16.6°2θ ± 0.2°2θ.

[0008]Takođe je otkrivenkristalni solvat[(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetne kiseline heksafluoropropan-2-ol (Jedinjenje A Forma C) koji se karakteriše Difraktogram rendgenskogprahakojisadržisledećepikove:4,5,13,7i16,4°2θ ± 0,2°2θ.

[0009] Takođe je otkriven kristalni [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetna kiselina DM-SO:vodeni solvat (Jedinjenje A Forma D) koji karakteriše Ks- difraktogram zraka prahakojisadržisledećepikove:8,4,8,5i16,8°2θ ± 0,2°2θ.

[0010] Takođe je otkrivena kristalna natrijumova so [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetne kiseline (jedinjenje A natrijumova so) koju karakteriše rendgenski prah difraktogramkojisadržisledećepikove:5,3,16,0i21,6°2θ ± 0,2°2θ.

[0011] Takođe je otkrivena kristalna so [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetne kiseline L-arginina (so jedinjenja A L-arginina) koju karakteriše Difraktogram rendgenskog prahakojisadržisledećepikove:20,8,21,8i25,4°2θ ± 0,2°2θ.

[0012] Takođe je otkrivena kristalna [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetna kiselinaL-lizinskaso (Jedinjenje A L-lizinskaso) koju karakteriše Ks- difraktogram zrakapraha kojisadržisledećepikove:19,8,20,7i21,2°2θ ± 0,2°2θ.

[0013] Takođe je otkrivena kristalna [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetna kiselina etanolaminska so (Jedinjenje A etanolaminska so)koju karakteriše prah rendgenskih zrakadifraktogramakojisadržisledećepikove:21,8,22,7i27,1°2θ± 0,2°2θ.

[0014] Takođe je otkrivena kristalna [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetna kiselina dietanolaminska so (jedinjenje A dietanolaminska so) koju karakteriše rendgenski prahdifraktogramkojisadržisledećepikove:16,9,23,7i25,0°2θ± 0,2°2θ.

[0015] Takođe je otkrivena kristalna so trometamina [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetne kiseline (trometamin so jedinjenja A) koju karakteriše difraktogram rendgenskogprahakojisadržisledećivrhovi:10,1,14,2i21,1°2θ± 0,2°2θ.

[0016] Takođe je otkrivena amorfna [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetnakiselina(amorfnojedinjenjeA).

[0017] Takođe je otkrivena suštinski amorfna kalijumova so [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetne kiseline(kalijumovasojedinjenjaA).

[0018] Takođe je otkrivena farmaceutska kompozicija koja sadrži Jedinjenje A Forme A, i farmaceutskiprihvatljivekscipijent.

[0019]Dodatno,otkrivanjedajeujednomaspektuJedinjenjeAFormeAzaupotrebuupostupkuza lečenje, prelečenje ili odlaganje početka ili progresije stanja posredovanog barem delimično faktorom koji izaziva hipoksiju (HIF). Postupak obuhvata davanje pacijentu kome je to potrebno terapeutskiefikasnekoličineJedinjenjaAFormeA.

[0020] Takođe je otkriveno jedinjenje A Forme A za upotrebu u postupku za lečenje, prethodno lečenje ili odlaganje početka ili progresije stanja posredovanog barem delimično eritropoetinom (EPO),kojiobuhvatadavanjeterapeutskog lekapacijentukomejetopotrebnoterapeutskiefikasne količinejedinjenjaAoblikaA.

[0021] Takođe jeotkriveno jedinjenjeA FormeA zaupotrebuupostupku za lečenje,prelečenje ili odlaganje početka ili progresije anemije, koji obuhvata davanje pacijentu kome je to potrebno, terapeutskiefikasnekoličinejedinjenjaAFormeA.

[0022]TakođejeotkrivenoJedinjenjeAFormeAzaupotrebuupostupkuinhibicijeaktivnostienzima HIFhidroksilaze,postupakkojiobuhvatadovođenjeukontaktenzimaHIFhidroksilaze i terapeutski efikasnekoličineJedinjenjaAFormeA.

KRATAKOPISSLIKA

[0023]

SL.1jeuzorakdifrakcijeX-zrakanaprahuJedinjenjaAOblikaA.

SL.2jekrivadiferencijalneskenirajućekalorimetrije(DSC)JedinjenjaAOblikaA.

SL.3 je uzorak difrakcije X-zraka na prahu Jedinjenja A Oblika B (donji) koji je predstavljen na grafikusauzorkomdifrakcijeX-zrakanaprahuJedinjenjaAOblikaA(gornji).

SL.4 je termogravimetrijskaanaliza (TGA) (gornji) i krivadiferencijalne skenirajućekalorimetrije (DSC)(donji)JedinjenjaAOblikaB.

SL.5 je uzorak difrakcije X-zraka na prahu Jedinjenja A Oblika C (donji) koji je predstavljen na grafikusauzorkomdifrakcijeX-zrakaJedinjenjaAOblikaA(gornji).

SL.6 je krivadiferencijalne skenirajućekalorimetrije (DSC) (gornji) i termogravimetrijskaanaliza (TGA)(donji)JedinjenjaAOblikaC.

SL.7jeuzorakdifrakcijeX-zrakanaprahuJedinjenjaAOblikaD.

SL.8 je termogravimetrijskaanaliza (TGA) (gornji) i krivadiferencijalne skenirajućekalorimetrije (DSC)(donji)JedinjenjaAOblikaD.

SL.9jeuzorakdifrakcijeX-zrakanaprahunatrijumovesoliJedinjenjaAkaoizolovane(donji)ina 40°C/75%RH(gornji).

SL.10jetermogravimetrijskaanaliza(TGA)(gornji)ikrivadiferencijalneskenirajućekalorimetrije (DSC)(donji)natrijumovesoliJedinjenjaA.

SL.11jeuzorakdifrakcijeX-zrakanaprahuL-argininsoliJedinjenjaAuizolovanomobliku(donji)i na40°C/75%RH(gornji).

SL.12jetermogravimetrijskaanaliza(TGA)(gornji)ikrivadiferencijalneskenirajućekalorimetrije (DSC)(donji)L-argininsoliJedinjenjaA.

SL.13 jeuzorakdifrakcijeX-zrakanaprahusoliL-lizinaJedinjenjaAkaoizolovane(donji) ina40 °C/75%RH(gornji).

SL.14jetremogravimetrijskaanaliza(TGA)(gornji)ikrivadiferencijlaneskenirajućekalorimetrije (DSC)(donji)soliL-lizinaJedinjenjaA.

SL.15jeuzorakdifrakcijeX-zrakanaprahuJedinjenjaAOblikaA(donji),uzorak1solietanolamina JedinjenjaAkaoizolovane(drugidodonjeg),uzorak3JedinjenjaAsolietanolaminana40°C/75% RH (srednji),uzorak2 solietanolamina JedinjenjaAkao izolovane (drugidogornjeg), iuzorak2 solietanolaminaJedinjenjaAna40°C/75%RH(gornji).

SL.16 je termogravimetrijska analiza (TGA) (top) i kriva diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC)(donji)solietanolaminaJedinjenjaA.

SL. 17 je uzorak difrakcije X-zraka na prahu Jedinjenja A Oblika A (donji), uzorak 1 soli dietanolaminaJedinjenjaAizacetona(drugidodonjeg),uzorak1solidietanolaminaJedinjenjaA izTHF(drugideo),isolidietanolaminaJedinjenjaAna40°C/75%RH(uzorak2,gornji).

SL.18jetermogravimetrijskaanaliza(TGA)(gornji)ikrivadiferencijalneskenirajućekalorimetrije (DSC)(donji)solidietanolaminaJedinjenjaA.

SL.19 jeuzorakdifrakcijeX-zrakanaprahuJedinjenjaAOblikaA(donji), i soli trometaminakao izolovane(srednji)JedinjenjaAina40°C/75%RH(gornji).

SL.20jetermogravimetrijskaanaliza(TGA)(gornji)ikrivadiferencijalneskenirajućekalorimetrije (DSC)(donji)solitrometaminaJedinjenjaA.

SL.21jeuzorakdifrakcijeX-zrakanaprahukalijumovesoliJedinjenjaAkaoizolovane(donji)ina 40°C/75%RH(gornji).

SL.22 je termogravimetrijska analiza (TGA) (top) i kriva diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC)(donji)kalijumovesoliJedinjenjaA.

SL.23jeuzorakdifrakcijeX-zrakanaprahuamorfnogJedinjenjaA.

SL.24jetermogravimetrijskaanaliza(TGA)JedinjenjaAOblikaA.

SL.25 je uzorak difrakcije X-zraka na prahu Jedinjenja AOblika A (donji), i hlorovodonične soli JedinjenjaAkaoizolovane(srednji)ina40°C/75%RH(gornji).

SL.26jetermogravimetrijskaanaliza(TGA)(gornji)ikrivadiferencijalneskenirajućekalorimetrije (DSC)(donji)hlorovodnoničnesoliJedinjenjaA.

SL.27jeuzorakdifrakcijeX-zrakanaprahuJedinjenjaAOblikaA(donji),isolisumpornekiseline JedinjenjaAkaoizolovane(srednje)ina40°C/75%RH(gornji).

SL.28jetermogravimetrijskaanaliza(TGA)(gornji)ikrivadiferencijalneskenirajućekalorimetrije (DSC)(donji)solisumpornekiselineJedinjenjaA.

SL. 29 je uzorak difrakcije X-zraka na prahu Jedinjenja A Oblika A (donji), uzorak 1 soli metansulfonskekiselineJedinjenjaAkaoizolovane(drugidodonjeg)ina40°C/75%RH(srednji),i uzorak2solimetansulfonskekiselineJedinjenjaAkaoizolovane(drugidogornjeg)ina40°C/75% RH(gornji).

SL.30 je termoravimetrijskaanaliza (TGA) (gornji) i krivadiferencijalneskenirajućekalorimetrije (DSC)(donji)solimetansulfonskekiselineJedinjenjaA.

SL.31 jeuzorakdifrakcijeX-zračanjanaprahu JedinjenjaAOblikaA (donji), solibis trietilamina JedinjenjaAkaoizolovane(sredina)isolibistrietilaminaJedinjenjaAna40°C/75%RH(gornji).

SL.32jetermogravimetrijskaanaliza(TGA)(gornji)ikrivadiferencijalnaskenirajućekalorimetrije (DSC)(donji)solibistrietilaminaJedinjenjaA.

SL.33 jeuzorakdifrakcijeX-zrakanaprahu JedinjenjaAOblikaA (donji), ipolukalcijumovesoli JedinjenjaA(drugafrakcija)na40°C/75%RH(gornji).

SL.34jetermogravimetrijskaanaliza(TGA)(gornji)ikrivadiferencijalneskenirajućekalorimetrije (DSC)(donji)polukalcijumovesoliJedinjenjaA.

SL.35 jeuzorakdifrakcijeX-zrakanaprahu JedinjenjaAOblikaA (donji), ipolumagnezijumove soliJedinjenjaA(drugafrakcija)na40°C/75%RH(gornji).

SL.36jekrivadiferencijalneskenirajućekalorimetrije(DSC)polumagnezijumovesoliJedinjenjaA.

SL.37jemolekulskakonfiguracijaJedinjenjaAOblikaA.

DETALJANOPIS

[0024] Jedinjenje [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetna kiseline (JedinjenjeA)jepotentniinhibitorinducibilnogfaktorahipoksije(HIF)prolilhidroksilazeiimasledeću formulu:

Jedinjenje A.

[0025] Predmetni prikaz obezbeđuje kristalne oblike Jedinjenja A, soli Jedinjenja A, i solvate Jedinjenja A. Predmetni prikaz takođe obezbeđuje amorfni oblik Jedinjenja A. Predmetni prikaz takođeobezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže amorfne ili kristalneoblike JedinjenjaA. Prikaz takođe obezbeđuje postupak za dobijanje amorfnih i kristalnih čvrstih oblika i postupke njihovogkorišćenjazalečenje, isprečavanjeporemećajakojisuuvezisaHIFuključujućistanjakoja obuhvatajuanemiju,ishemiju,ihipoksiju.

[0026]Predetaljnijegrazmatranja,sledećiterminićebitidefinsani.

1.Definicije

[0027]Kaoštoseovdekoristi,sledećiterminiimajuznačenjakojaslede.

[0028] Oblici jedinjenje i slično odnose se na množinu osim ukoliko kontekst jasno ne ukazuje drugačije.Prematome,naprimer,referencana"Jedinjenje"uključujeJedinjenjeujedniniimnožinu različitihJedinjenja.

[0029]Termin"oko"kadasekoristiprenumeričkenaznake,npr.,temperature,vremena,količine, i koncentracije,uključujućiopseg,ukazujenapribližnevrednostikojemogudavarirajuza±10%,±5% ili±1%.

[0030] Termin "solvat" odnosi se na kompleks koji se obrazuje kombinovanjem Jedinjenja A i rastvarača.

[0031]Temini"uosnoviamorfni" i"uglavnomamorfni"seodnosinaamorfnoJedinjenjeAukome možedabudeprisutnamalakoličinakristalnogJedinjenjaA.Unekimizvođenjima,količinakristalnog JedinjenjaAjemanjaodoko10%,ilimanjaodoko5%,ilimanjaodoko2%,ilimanjaodoko1%,ili manjaodoko0,2%,ilimanjaodoko0,1%.

[0032]"Davanje"seodnosinauvođenjesredstvaupacijenta.Možedasedajeterapeutskakoličina, koju može odrediti lekar koji leči ili slično. Za kristalne oblike Jedinjenja A koji se ovde opisuju poželjanjeoralninačindavanja.Povezaniterminiifraze"davanje"i"primena",kadasekoristeuvezi saJedinjenjemilifarmaceutskomkompozicijom(igramatičkimekvivalentima)zajednoseodnosena direktnodavanje,kojepacijentumožedatimedicinskistručnjakilipacijentmožedatisamsebi,i/ilina indirektnodavanje,kojemožebitidejstvoprepisanogleka.Naprimer,lekarkojiupućujepacijentana lekkojipacijentsamsebidaje i/iliobezbeđujepacijentureceptza lekkoji sedajepacijentu.Ubilo komslučaju,davanjeobuhvataisporukulekapacijentu.

[0033]"Ekscipijent"kaoštoseovdekoristioznačavainertnuili inaktivnusupstancukojasekoristiu proizvodnjifarmaceutskihproizvoda,uključujćibezograničenjabilokojusupstancukojasekoristikao sredstvo za povezivanje, dezintegrant, sredstvo za oblaganje, pomoćno sredstvo za kompresiju/inkapsulaciju,kremu ili losion, lubrikant,parenteralnosrestvo, zaslađivač ili sredstvoza davanje ukusa, sredstvo za suspenziju/geliranje, ili sredstvo za vlažnu granulaciju. Sredstva za povezivanjeuključuju,npr.,karbopol,povidon,ksantangumu, itd.;sredstvazaoblaganjeuključuju, npr., acetatnu ftalat celulozu, etilcelulozu, gelan gumu, maltodekstrin, itd.; pomoćna sredstva za kompresiju/inkapsulaciju uključuju, npr., kalcijum karbonat, dekstrozu, fruktozu, med, laktozu (anhidrat ili monohidrat; opciono u kombinaciji sa aspartamom, celulozom, ili mikrokristalnom celulozom),skrob,saharozu,itd.;sredstvazadezintegracijuuključuju,npr.,natrijumkroskaramelozu, gelangumu,natrijumglikolatskrob,itd.;kremeilosioniuključuju,npr.,maltodekstrin,karagene,itd.; sredstva za podmazivanje uključuju, npr.,magnezijum stearat, stearinsku kiselinu, natrijum stearil fumarat,itd.;materijalizatabletenamenjenežvakanjuuključuju,npr.,dekstrozu,fruktozudc,laktozu (monohidrat, opciono u kombinaciji sa aspartamom ili celulozom), itd.;parenterali uključuju,npr., manitol, povidon, itd.; plastifikatori uključuju, npr., dibutil sebakat, polivinilacetatni ftalat, itd.; sredstva zasuspenziju/geliranjeuključuju,npr.,karagenan,natrijumglikolat skroba,ksantangumu, itd.; zaslađivačiuključuju,npr.,aspartam,dekstrozu, fruktozu, sorbitol, saharozu, itd.; i sredstva za vlažnugranulacijuuključuju,npr.,kalcijumkarbonat,maltodekstrin,mikrokristalnucelulozu,itd.

[0034]"Terapeutskiefikasnakoličina"ili"terapeutskakoličina"seodnosinakoličinulekailisredstva koje kada se daju pacijentu koji ima određeno stanje, ima namenjeni terapeutski efekat, npr., olakšanje, ublažavanje, prikrivanje ili eliminacije jedne ili više manifestacije stanja kod pacijenta.

Terapeutski efikasna količina će varirati u zavisnosti od subjekta i stanja koje se leči, težine i starosnogdobasubjekta,ozbiljnostisimptoma,posebnoizabranekompozicijeiliekscipijenta,doznog režimakojitrebaprimeniti,vremenadavanja,načinadavanjaislično,pričemusvakimožedaodredi stručnjak iz oblasti tehnike. Puni terapeutski efekat se neophodno ne primenjuje nakon davanja jednedoze,imožedasedogodinakondavanjaserijedoza.Prematome,terapeutskiefikasnakoličina može da se daje kroz jednu ili više primena. Na primer, i bez ograničenja, terapeutski efikasna količina sredstva, u kontekstu lečenja anemije, se odnosi na onu količinu sredstva koja olakšava, ublažava,prikriva,ilieliminišejedanilivišesimptomaanemijekodpacijenta.

[0035]"Lečenje","lečiti",i"tretman"sudefinisanikaodelovanjesasredstvomnabolest,poremećaj, ili stanje da bi se smanjio ili ublažio štetni efekat ili bilo koji drugi nepoželjni efekti bolesti, poremećaja, ili stanja i/ili njegovih simptoma. Lečenje, kao što se ovde koristi, pokriva lečenje humanog pacijenta, i obuhvata: (a) smanjenje rizika od pojavljivanja stanja kod pacijenta koji su određeni da budu predisponirani za bolest ali još nije postavljena dijagnoza samog stanja, (b) ometajurazvijanjestanja,i/ili(c)ublažavanjestanja,tj.,uzrokovanjeregresijestanjai/iliolakšavanje jednogilivišesimptomastanja.

[0036] "XRPD uzorak" je x-y grafik sa difrakcionim uglom (tj.,°2θ) na x-osi i intenzitetom na y-osi. Maksimumivrednostiuovomuzorkumogudasekoristezakarakterisanjekristalnogčvrstogoblika. Kao ibilokakvomerenjepodataka,postojerazlikeuXRPDpodacima.Podacisučestopredstavljeni difrakcionimuglommaksimalnihvrednostiprenegouključivanjemintenzitetamaksimalnihvrednosti zbogtogašto intenzitetmaksimalnihvrednostimožedabudeposebnoosetljivnapripremuuzorka (naprimer,veličinučestice,sadržajvlažnosti,sadržajrastvarača, ipoželjneorijentacioneefektekoji utičunaosetljivost),prematomeuzorciistigmaterijalakojisedobijajupodrazličitimuslovimamogu dati neštodrugačijeuzorke; ova varijabilnost je obično većauodnosuna varijabilnost difrakcionih uglova. Varijabilnost difrakcionog ugla može takođe da bude osetljiva na pripremu uzorka. Drugi izvori varijabilnosti dolaze iz intrumentalnih parametara i obrađivanja sirovih podataka X-zraka: različiti instrumenti X-zraka deluju upotrebom različitih parametara i oni mogu da vode do nešto drugačijihparametaraXRPDuzorakaizistogčvrstogoblika,isličnorazličitisoftverskipaketiobrađuju podatkeX-zrakanarazličitnačinštotakođevodidorazlika.Oviidrugiizvorivarijabilnostisupoznati stručnjaku iz oblasti tehnike u farmaceutskim oblastima tehnike. Usled takvih izvora varijabilnosti, uobičajenojedodelitivarijabilnostod±0,2°2θdifrakcionimuglovimauXRPDuzorcima.

2.ČvrstiobliciJedinjenjaA

[0037]Kaošto jegeneralnoopisanoutekstu iznad,predmetniprikazobezbeđuječvrsteoblike [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksiizohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetnekiseline(JedinjenjeA).

[0038]JedinjenjeAOblikaAjekarakterisanonjegovimdifraktogramomX-zrakanaprahukojisadrži maksimalne vrednosti na 8.5, 16.2, i 27.4 °2θ ± 0.2 °2θ. Difraktogram sadrži dodatnemaksimalne vrednosti na 12.8, 21.6, i 22.9 °2θ ± 0.2 °2θ. Oblik A je takođe karakterisan njegovim punim difraktogramomX-zrakanaprahukaoštojeuosnoviprikazanonaSlici1.

[0039] U nekim izvođenjima, Oblik A je karakterisan njegovom krivom diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) koja sadrži endoterm na oko 223 °C. Oblik A je takođe karakterisan njegovom punomDSCkrivomkaoštojeuosnoviprikazanonaSlici2.

[0040]JedinjenjeAOblikaBjekarakterisanonjegovimdifraktogramomX-zrakanaprahukojisadrži maksimalne vrednosti na 4.2, 8.3, i 16.6 °2θ ± 0.2 °2θ. Difraktogram sadrži dodatne maksimalne vrednostina12.5,14.1,i17.4°2θ±0.2°2θ.OblikBjetakođekarakterisannjegovimdifraktogramom X-zrakanaprahukaoštojeuosnoviprikazanonaSlici3.

[0041]OblikBmožedasekarakterišenjegovomkrivomdiferencijalneskenirajućekalorimetrije(DSC) kojasadržiendotermnaoko222°C.OblikBjetakođekarakterisannjegovomDSCkrivomkaoštojeu osnoviprikazanona4.

[0042]JedinjenjeAOblikaCjekarakterisanonjegovimdifraktogramomX-zrakanaprahukojisadrži maksimalne vrednosti na 4.5, 13.7, i 16.4 °2θ ± 0.2 °2θ. Difraktogram sadrži dodatnemaksimalne vrednosti na 15.4, 15.5, i 20.6 °2θ ± 0.2 °2θ. Oblik C je takođe karakterisan njegovim punim difraktogramomX-zrakanaprahukaoštojeuosnoviprikazanonaSlici5.

[0043]OblikCmožedabudekarakterisannjegovomkrivomdiferencijalneskenirajućekalorimetrije (DSC) koja sadrži endoterm na oko 222 °C. Oblik C je takođe karakterisan njegovom punom DSC krivomkaoštojeuosnoviprikazanonaSlici6.

[0044]JedinjenjeAOblikaDjekarakterisanonjegovimdifraktogramomX-zrakanaprahukojisadrži maksimalne vrednosti na 8.4, 8.5, i 16.8 °2θ ± 0.2 °2θ. Difraktogram sadrži dodatne maksimalne vrednosti na 4.2, 12.6, i 28.4 °2θ ± 0.2 °2θ. Oblik D je takođe karakterisan njegovim punim difraktogramomX-zrakanaprahukaoštojeuosnoviprikazanonaSlici7.

[0045]OblikDmožedabudekarakterisannjegovomkrivomdiferencijalneskenirajućekalorimetrije (DSC) koja sadrži endoterm na oko 222 °C. Oblik D je takođe karakterisan njegovom punom DSC krivomkaoštojeuosnoviprikazanonaSlici8.

[0046]NatrijumovasoJedinjenjaAjekarakterisananjegovimdifraktogramomX-zrakanaprahukoji sadrži maksimalne vrednosti na 5.3, 16.0, i 21.6 °2θ ± 0.2 °2θ. Difraktogram sadrži dodatne maksimalne vrednosti na 18.7, 19.2, i 24.0 °2θ ± 0.2 °2θ. Natrijumova so Jedinjenja A je takođe karakterisananjegovimpunimdifraktogramomX-zrakanaprahukaoštojeuosnoviprikazanonaSlici 9.

[0047] Natrijumova so Jedinjenja A može da bude karakterisana njegovom krivom diferencijalne skenirajućekalorimetrije (DSC)kojasadržiendotermnaoko314°C.Natrijumovaso JedinjenjaA je takođekarakterisananjegovomDSCkrivomkaoštojeuosnoviprikazanonaSlici10.

[0048]L-argininsoJedinjenjaAjekarakterisnanjegovimdifraktogramomX-zrakanaprahukojisadrži maksimalnevrednostina20.8,21.8, i25.4 °2θ±0.2 °2θ.Difraktogramsadržidodatnemaksimalne vrednostina22.7,23.4,i26.4°2θ±0.2°2θ.L-argininsoJedinjenjaAjetakođekarakterisnanjegovim punimdifraktogramomX-zrakanaprahukaoštojeuosnoviprikazanonaSlici11.

[0049] L-arginin so Jedinjenja može da bude karakterisana njegovom krivom diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) koja sadrži endoterm na oko 210 °C. L-Arginin so Jedinjenja A je takođekarakterisananjegovomDSCkrivomkaoštojeuosnoviprikazanonaSlici12.

[0050]L-lizinsoJedinjenjaAjekarakterisananjegovimdifraktogramomX-zrakanaprahukojisadrži maksimalnevrednostina19.8,20.7, i21.2 °2θ±0.2 °2θ.Difraktogramsadržidodatnemaksimalne vrednostina10.2,16.9,i18.4°2θ±0.2°2θ.L-lizinsoJedinjenjaAjetakođekarakterisananjegovim difraktogramomX-zrakanaprahukaoštojeuosnoviprikazanonaSlici13.

[0051]L-lizinsoJedinjenjaAmožedabudekarakterisananjegovomkrivomdiferencijalneskenirajuće kalorimetrije(DSC)kojasadržiendotermnaoko237°C.L-lizinsoJedinjenjaAjetakođekarakterisana njegovompunomDSCkrivomkaoštojeuosnoviprikazanonaSlici14.

[0052]Etanolaminso JedinjenjaA jekarakterisananjegovimdifraktogramomX-zrakanaprahukoji sadrži maksimalne vrednosti na 21.8, 22.7, i 27.1 °2θ ± 0.2 °2θ. Difraktogram sadrži dodatne maksimalne vrednosti na 21.1, 26.2, i 26.6 °2θ ± 0.2 °2θ. Etanolamin so Jedinjenja A je takođe karakterisananjegovimdifraktogramomX-zrakanaprahukaoštojeuosnoviprikazanonaSlici15.

[0053] Etanolamin so Jedinjenja A može da bude karakterisana njegovom krivom diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) koja sadrži endotermna oko 171 °C. Etanolamin so Jedinjenja A je takođekarakterisananjegovomDSCkrivomkaoštojeuosnoviprikazanonaSlici16.

[0054]DietanolaminsoJedinjenjaAjekarakterisananjegovimdifraktogramomX-zrakanaprahukoji sadrži maksimalne vrednosti na 16.9, 23.7, i 25.0 °2θ ± 0.2 °2θ. Difraktogram sadrži dodatne maksimalne vrednosti na 19.6, 22.6, i 26.0 °2θ ± 0.2 °2θ. Dietanolamin so Jedinjenja A je takođe karakterisananjegovimpunimdifraktogramomX-zrakanaprahukaoštojeuosnoviprikazanonaSlici 17.

[0055]Dietanolamin so Jedinjenja A može da bude karakterisana njegovom krivom diferencijalne skenirajućekalorimetrije(DSC)kojasadržiendotermnaoko150°C.DietanolaminsoJedinjenjaAje takođekarakterisananjegovomDSCkrivomkaoštojeuosnoviprikazanonaSlici18.

[0056]TrometaminsoJedinjenjaAjekarakterisananjegovimdifraktogramomX-zrakanaprahukoji sadržimaksimalnevrednosti10.1,14.2,i21.1°2θ±0.2°2θ.Difraktogramsadržidodatnemaksimalne vrednosti 20.1, 25.7, i 28.4 °2θ ± 0.2 °2θ. Trometamin so Jedinjenja A takođe je karakterisana njegovimpunimdifraktogramomX-zrakanaprahukaoštojeusuštiniprikazanonaSlici19.

[0057] Trometamin so Jedinjenja Amože da bude karakterisana krivom diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) koja sadrži endoterm na oko 176 °C. Trometamin so Jedinjenja A je takođe karakterisananjegovompunomDSCkrivomkaoštojeusuštiniprikazanonaSlici20.

[0058] Takođe je obezbeđena amorfna [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetna kiselina (amorfno Jedinjenje A) i suštinski amorfna kalijumova so [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetnekiseline(kalijumovasoJedinjenjaA).Suštinskiamorfna kalijumovasoJedinjenjaAjekarakterisanakrivomdiferencijalneskenirajućekalorimetrije(DSC)koja sadržiendotermnaoko291°C(Slika22).

[0059]KaoštojeopisanouPrimerimaispod,OblikAjenajstabilnijikristalniOblikizmeđuOblikaB,C, iDodJedinjenjaA.

3.Farmaceutskekompozicije,FormulacijeiNačinidavanja

[0060]U jednom aspektu, predmetni prikaz je usmeren na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedan ili više kristalnih Oblika [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetne kiseline(JedinjenjeA)kojiimajusledećustrukturu:

1

edinjenje A

intranazalne,iliintraokularneinjekcije.Kristalnioblikilinjegovakompozicijamogudasedajulokalno prenego sistemski.Naprimer, kristalnioblik ili njegovakompozicijamoguda sedaju injekcijom ili sistemomciljneisporukeleka,kaoštojedepotiliformulacijasaodloženimoslobađanjem.Ujednom izvođenju,načindavanjajeoralni.

[0067] Farmaceutske kompozicije predmetnog prikaza mogu da se dobiju upotrebom bilo kojeg postupka poznatog iz oblasti tehnike, kao što je konvencionalnomešanje, rastvaranje, granulacija, pravljenjedražeja,pretvaranjeuprah,emulgovanje,inkapsulaciju,hvatanje,ilipostupkeliofilizacije. Kao što je gore navedeno, kompozicije mogu da uključe jednan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenatakojiolakšavajuobraduaktivnihmolekulaupreparatezafarmaceutskuupotrebu.

[0068]Pogodna formulacija zavisi ododabranognačinadavanja. Zadavanje injekcijom,naprimer, kompozicija može da bude formulisana u vodenim rastvorima, poželjno u fiziološki prihvatljivim puferimakaošto jeHenkovrastvor,Ringerovrastvor, ili fiziološkislanipufer.Zatransmukozalno ili nazalno davanje, sredstva za penetraciju koja odgovaraju barijeri kroz koju trebaju da prođu se koristeuformulaciji.Takvasredstvazapenetracijusuopštepoznatauoblastitehnike.Upoželjnom izvođenju predmetnog prikaza, predmetni kristalni oblici se pripremaju u formulaciji koja je namenjenazaoralnodavanje.Zaoralnodavanje,možeselakoformulisatikombinovanjemkristalnih oblika sa farmaceutskim prihvatljivim ekscipijentima dobro poznatim u oblasti tehnike. Takvi ekscipijentiomogućavajukristalnimoblicimaprikazadabuduformulisanikaotablete,pilule,dražeje, kapsule,tečnosti,gelovi,sirupi,gustesuspenzije,suspenzijeislično,zaoralnounošenjekodsubjekta. Kristalni oblici mogu takođe da budu formulisani u rektalnim kompozicijama kao supozitorije ili klizme zadržavanja,npr.,koje sadrže konvencionalneosnove supozitorija kao što je kakaoputer ili drugegliceride.

[0069] Farmaceutski preparati za oralnu upotrebu mogu da se dobiju upotrebom ekscipijenata u čvrstomobliku,opcionousitnjavanjemdobijenesmeše,iobradomsmešegranula,nakondodavanja pogodnihpomoćnihsredstava,popotrebi,dasedobijutableteilijezgradražeja.Pogodniekscipijenti su, na primer, sredstva za punjenje kao što su šećeri, uključujući laktozu, saharozu, manitol, ili sorbitol; prepatati koji sadrže celulozu,naprimer, kukuruzni skrob,pšenični skrob,pirinčani skrob, krompirov skrob, želatin, tragakant gumu, metil celulozu, hidroksipropilmetil-celulozu, natrijum karboksimetilcelulozu, mikrokristalnu celulozu i/ili polivinilpirolidon (PVP ili povidon). Po potrebi, mogudasedodajusredstvazadezintegraciju,kaoštojepolivinilpirolidonzaukrštenopovezivanje, agar, natrijum kroskaramelozu ili alginsku kiselinu ili njenu so kao što je natrijum alginat. Takođe, mogudabuduuključenasredstvazavlaženjekaoštojenatrijumdodecilsulfatililubrikantikaoštoje magnezijumstearat.

[0070]Jezgradražejasuobezbeđenasaodgovarajućimsredstvimazaoblaganje.Zaovusvrhu,mogu da se koriste koncentrovani rastvori soli, koji opcionomogu da sadrže arabik gumu, talk, polivinil pirolidon, karbopol gel, polietilen glikol, i/ili titanijum dioksid, rastvore laka, i pogodne organske rastvoreilismešerastvora.Sredstvazabojenjeilipigmentimogudasedodajuutableteilisredstva zaoblaganjedražejezaidentifikacijuilizakarakterizacijurazličitihkombinacijaaktivnihdoza.

[0071]Farmaceutskipreparatizaoralnodavanjeuključuju„push-fit“kapsulekojesunapravljenjeod želatina,kaoimeke,zatvorenekapsulenapravljeneodželatinaiplastifikatora,kaoštojeglicerol ili sorbitol.Kapsule tipa„push-fit“mogudasadržeaktivnesastojkeusmešisasredstvomzapunjenje kao što je laktoza, sredstvima za povezivanje kao što su skrobovi, i/ili lubrikanti kao što je talk ili magnezijum stearat i, opciono, stabilizatorima.Umekim kapsulama, kristalni oblicimogu da budu rastvoreni ilisuspendovaniupogodnimtečnostima,kaoštosuuljamasnihkiselina,tečniparafin, ili tečnim polietilen glikolima. Dodatno, mogu da se dodaju sredstva za stabilizaciju. Sve formulacije namenjeneoralnomdavanjutrebadabuduudozamakojesupogodnezatakvodavanje.

[0072]Ujednomizvođenju,ovdeopisanikristalnioblicimogudasedajutransdermalno,kaošto je na primer kroz flastere za kožu, ili topikalno. U jednom aspektu, transdermalne ili topikalne formulacije mogu dodatno da sadrže jedan ili više pojačivača za penetraciju ili druge efektore, uključujući sredstva koja pojačavaju migraciju jedinjenja koje se daje. Transdermalno ili topikalno davanje može da bude poželjno, na primer, u situacijama gde je neophodna ciljana isporuka na određenommestu.

[0073] Za davanje inhalacijom, kristalni oblici za upotrebu prema predmetnom pronalasku se pogodno dobijaju u obliku aerosoli raspršivanjem iz pakovanja pod pritiskom ili nebulizatora, sa upotrebom pogodnog propelanta, npr., dihlorodifluorometana, trihlorofluorometana, dihlorotetrafluoroetana,ugljendioksida,ilidrugogpogodnoggasa.Uslučajuaerosolapodpritiskom, odgovarajuća dozna jedinicamože da se odredi obezbeđivanjem ventila koji isporučuje odmerenu količinu.Kapsuleiketridži,naprimer,želatina,zaupotrebuuinhalatoruiliinsuflatorumogudabudu formulisani. Oni obično sadržemešavinu praha kristalnog oblika i pogodne baze praha kao što je laktozailiskrob.

[0074]Kompozicijekojesuformulisanezaparenteralnodavanjeinjekcijom,npr.,bolusinjekcijomili kontinualnom infuzijommogu da se predstave u jediničnom doznom obliku, npr., u ampulama ili više-doznimkontejnerima,sadodatnimkonzervansom.Kompozicijemogudaimajutakveoblikekao štosususpenzije,rastvori, iliemulzijeuuljanimilivodenimnosačima,imogudasadržesredstvaza formulacijukaoštosusredstvazasuspenziju,stabilizacijui/ilisredstvazaraspršivanje.Formulacijeza parenteralno davanje uključuju vodene rastvore ili druge kompozicije u obliku koji je rastvorljiv u vodi.

[0075]Suspenzijekristalnihoblikamogutakođedasepripremekaoodgovarajućeuljanesuspenzije za injekciju. Pogodni lipofilni rastvarači ili nosači uključuju masna ulja kao što je susamovo ulje i sintetičkeestremasnihkiselina,kaoštojeetiloleat ilitrigliceridi, ili lipozomi.Vodenesuspenzijeza injekciju mogu da sadrže supstance koje povećavaju viskozitet suspenzije, kao što je natrijum karboksimetil celuloza, sorbitol, ili dekstran. Opciono, suspenzija može takođe da sadrži pogodne stabilizatoreilisredstvakojapovećavajurastvorljivostkristalnihoblikadabiseomogućilodobijanje visoko koncentrovanih oblika. Alternativno, aktivni sastojak može da bude u obliku praha za konstitucijusapogodnimnosačem,npr.,sterilnavodabezpirogena,preupotrebe.

[0076] Kao što je pomenutu gore u tekstu, kompozicije predmetnog pronalaska mogu takođe da buduformulisaneuoblikudepotpreparata.Takveformulacijesadužimdelovanjemmogudasedaju implantacijom (na primer, subkutano ili intramuskularno) ili intramuskularnom injekcijom. Prema tome, na primer, predmetni kristalni oblicimogu da budu formulisani sa pogodnim polimernim ili hidrofobnimmaterijalimailihidrofobnimmaterijalima(naprimerkaoemulzijauprihvatljivomulju)ili jonsko-izmenjivačkimsmolama,ilislabrastvorljivimderivatima,naprimer,kaoslaborastvorljivaso.

[0077] Za bilo koju kompoziciju koja se koristi u različitim tretmanima koja je ovde predstavljena izvođenjem, terapeutski efikasna doza može početno da bude procenjena upotrebom različitih

1

postupakakojisupoznati izoblastitehnike.Naprimer,utestućelijskekulture,dozamožedabude formulisana u životinjskimmodelima za postizanje cirkulišućeg opsega koncentracija koji uključuje IC50kakojedefinisanoućelijskojkulturi.Dozniopsezikojiodgovarajuhumanimsubjektimamoguda seodrede,naprimer,upotrebompodatakadobijenihiztestovaćelijskekultureiispitivanjimananehumanimživotinjama.Ujednomizvođenju,dozamožedabudeod0.05mg/kgdooko700mg/kgsa periodičnimdavanjem.Dozamožedasedajejednomdnevno,svakidrugidan,jednom,dvailitriputa nedeljno,iliudrugimpogodnimintervalimaštolakomogudaodredenadležnilekari.Običnosedoza daje2ili3putanedeljno.Obično,dozamožedabudeodoko0.1mg/kgdooko500mg/kg;odoko 0.5mg/kgdooko250mg/kg;odoko1mg/kgdooko100mg/kg;odoko1mg/kgdooko10mg/kg; odoko1mg/kgdooko5mg/kg;iliodoko1mg/kgdooko2mg/kg.Naprimer,dozamožedabude oko1.0mg/kg;oko1.2mg/kg;oko1.5mg/kg;oko2.0mg/kg;ilioko2.5mg/kg.

[0078] Terapeutski efikasna doza jedinjenja se odnosi na količinu jedinjenja koja dovodi do ublažavanja simptoma ili produžavanja preživljavanja subjekta. Toksičnost i terapeutska efikasnost takvih molekula može da se odredi upotrebom standardnih terapeutskih postupaka u ćelijskim kulturamailieksperimentalnimživotinjama,npr.,određivanjemLD50(dozeletalneza50%populacije) i ED50(doze terapeutski efikasne kod 50% populacije). Dozni odnos toksičnih prema terapeutskim efektimajeterapeutskiindeks,kojimožedabudeizraženodnosomLD50/ED50.Poželjnasujedinjenja kojaispoljavajuvisoketerapeutskeindekse.

[0079]DozeseobičnonalazeuopsegucirkulišućihkoncentracijakojiuključujeED50samalo ilibez toksičnosti.Dozemogudavarirajuuokviruovogopsegauzavisnostiodkorišćenogdoznogoblika i korišćenog načina davanja. Tačna formulacija, način davanja, i doza treba da se izaberu, prema postupcimapoznatimizoblastitehnike,upogleduspecifičnostistanjasubjekta.

[0080]Doznakoličinaiintervalmoguindividualnodabudupodešenidabiseobezbedilinivoiaktivnih grupa u plazmi koji su dovoljni za modulaciju željenog parametra, npr., nivoa endogenog eritropoetina u plazmi, tj. minimalne efektivne koncentracije (MEC). MEC će varirati za svako jedinjenje alimože da se proceni od, na primer, in vitropodataka. Doze neophodne za postizanje MECzavisićeodindividualnihkarakteristikainačinadavanja.Jedinjenjailinjihovekompozicijetreba dasedajuupotrebomrežimakojiodržavanivoeuplazmi iznadMECzaoko10-90%tokomtrajanja tretmana, poželjno oko 30-90% tokom trajanja tretmana, i najpoželjnije između 50-90%. U slučajevimalokalnogdavanjailiselektivnogpreuzimanja,efikasnalokalnakoncentracijalekanemora da bude u vezi sa koncentracijom u plazmi. Alternativno, modulacija željenog parametra, npr., stimulacija endogenog eritropoetina,može da se postigne pomoću 1) davanja inicijalne veće doze zatimdavanjadozezaodržavanje,2)davanjainduktivnedozezabrzopostizanježeljenogparametra, npr., nivoa eritropoetina, u okviru ciljanog opsega, zatim davanje nižih doza za održavanje, npr., hematokrita,uokviruželjenogciljanogopsega,ili3)ponovljenimnaizmeničnimdoziranjem.

[0081] Količina jedinjenja ili kompozicije koji se daju će, naravno, zavisiti od različitih faktora, uključujući pol, starosnu dob, i težinu subjekta koji se leči, ozbiljnosti stanja, načina davanja, i procenelekarakojipropisujelek.

[0082]Predmetnekompozicijemogu,popotrebi,dabudupredstavljeneupakovanju iliuređajuza doziranje koji sadrži jedan ili više jediničnih doznih oblika koji sadrže aktivno sredstvo. Takvo pakovanje ili sprava može, na primer, da sadrži metalnu ili plastičnu foliju, kao što je blister pakovanje.Pakovanjeiliuređajzadoziranjemogudaimajuuputstvazanačinprimene.Kompozcijie koje sadrže kristalni oblik prikaza koji je formulisan u kompatibilnom farmaceutskom ekscipijentu mogutakođedasedobiju,postaveuodgovarajućikontejner,iobeležezalečenjenaznačenogstanja. Pogodni uslovi koji si navedeni na oznacimogu da uključe lečenje stanja, poremećaja, ili bolesti u kojimajeanemijaglavnaindikacija.

4.Postupakupotrebe

[0083] Jedan aspekt pronalaska obezbeđuje [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetnu kiselinu (jedinjenje A) formeA, ili kompoziciju koja sadrži jedinjenje A formuA za proizvodnjulekazaupotrebuulečenjurazličitihstanjailiporemećajakakojeovdeopisano.Takođe obezbeđujekristalnioblik, ilinjegovukompoziciju ili lek,za lečenje,prethodno lečenje iliodlaganje progresijeilipočetkarazličitihstanjailiporemećajakaoštojeovdeopisano.

[0084] U jednom izvođenju, najmanje oko 85% Jedinjenja korišćenog u postupku je Jedinjenje A OblikaA.U jednom izvođenju,najmanjeoko90% Jedinjenjakorišćenogupostupku je JedinjenjeA OblikaA.U jednom izvođenju,najmanjeoko95% Jedinjenjakorišćenogupostupku je JedinjenjeA OblikaA.U jednom izvođenju,najmanjeoko99% Jedinjenjakorišćenogupostupku je JedinjenjeA OblikaA.Ujednomizvođenju,najmanjeoko99.5%JedinjenjakorišćenogupostupkujeJedinjenjeA OblikaA.Ujednomizvođenju,najmanjeoko99.9%JedinjenjakorišćenogupostupkujeJedinjenjeA OblikaA.Ujednomizvođenju,najmanjeoko99.99%JedinjenjakorišćenogupostupkujeJedinjenjeA OblikaA.

[0085]Lekoviilikompozicijemogudasekoristezamodulacijustabilnostii/iliaktivnostiHIF-ainataj način aktiviraju ekspresiju gena regulisanu HIF-om. Kristalno jedinjenje A forme A, ili njegova kompozicija ili lek, može se koristiti u postupcima za lečenje, prethodno lečenje ili odlaganje progresijeilipočetkastanjapovezanihsaHIFuključujući,alibezograničenja,anemična,ishemijskai hipoksična stanja. Kristalno jedinjenje A formeA, ili njegova kompozicija ili lek,može se primeniti odmah nakon stanja koje izaziva akutnu ishemiju, na primer, infarkt miokarda, plućna embolija, infarkt creva, ishemijski moždani udar i bubrežna ishemijsko-reperfuziona povreda. Kristalno jedinjenjeAoblikaA, ili njegova kompozicija ili lek,može sedavatipacijentu sa dijagnostikovanim stanjempovezanimsarazvojemhroničneishemije,naprimer,srčanaciroza,makularnadegeneracija, plućna embolija, akutna respiratorna insuficijencija, neonatalni respiratorni distres sindrom i kongestivnasrčanainsuficijencija.KristalnojedinjenjeAoblikaA,ilinjegovakompozicijaililek,može seprimenitiodmahnakontraumeilipovrede.KristalnojedinjenjeAoblikaA,ilinjegovakompozicija ililek,možesedavatisubjektunaosnovupredisponirajućihstanja,naprimer,hipertenzija,dijabetes, okluzivna arterijska bolest, hronična venska insuficijencija, Rainaudova bolest, hronični čir na koži, ciroza, kongestivna srčana insuficijencija i sistemska skleroza. Kristalno jedinjenje A forme A, ili njegova kompozicija ili lek, može se primeniti za prethodno lečenje subjekta da bi se smanjio ili sprečiorazvojoštećenjatkivapovezanogsaishemijomilihipoksijom.

[0086]KristalnoJedinjenjeAOblikaA, ilikompozicije ilinjeovi lekovi,mogutakođedasekoristeza povećavanjeendogenogeritropoetina(EPO).KristalnoJedinjenjeAOblikaA,ilikompozicijeilinjegovi lekovi,mogudasedajuzaprevenciju,neposrednopredlečenje,ililečenjestanjakojasupovezanasa EPO,uključujući,npr.,stanjakojasuuvezisaanemijomineurološkimpormećajima.Stanjakojasu povezanasaanemijomuključujuporemećajekaoštojeakutnailihroničnabolestbubrega,dijabetes, kancer,ulceri,infekcijasavirusom,npr.,HIV,bakterijom,iliparazitima;zapaljenje,itd.Stanjaanemije daljemogudauključujuonastanjakojasupovezanasapostupcimailitretmanimauključujući,npr.,

1

terapiju zračenjem, hemioterapiju, dijalizu, i operaciju. Poremećaji koji su povezni sa anemijom dodatno uključuju abnormalni hemoglobin i/ili eritrocite, kao što se mogu naći u poremećajima poputmikrocitičneanemije,hipohromičneanemije,aplastičneanemije,itd.

[0087]Prikaz je takođeusmerennakristalno jedinjenjeAoblikaA, ili kompoziciju ilinjegov lek, za upotrebu u postupku lečenja, predlečenja, ili odlaganja početka stanja koje je povezano sa poremećajem iz grupe koja obuhvata anemijske poremećaje; neurološke pormećaje i/ili povrede uključujući slučajeve šloga, traume, epilepsije, i neurodegenerativne bolesti; srčane ishemije uključujući, ali bezograničenja, infarktmiokarda i kongestivnu srčanu insuficijenciju; ishemiju jetre uključujući, ali bez ograničenja, srčanu cirozu; bubrežnu ishemiju uključujući, ali bez ograničenja, akutnububrežnuinsuficijencijuihroničnububrežnuinsuficijenciju;perifernevaskularneporemećaje, ulcere,opekotine,ihroničnerane;plučnuemboliju;iishemijske-reperfuzionepovrede.

[0088] Prikaz je takođe usmeren na postupak inhibiranja aktivnosti najmanje jednog enzima hidroksilaze koji modifikuje alfa subjedinicu inducibilnog faktora hipoksije. Enzim HIF hidroksilaza možedabudeprolilhidroksilazauključujući,alibezograničenjana,grupukojasesastojiodEGLN1, EGLN2, i EGLN3 (takođe poznato pod imenom redom PHD2, PHD1 i PHD3), opisano od Taylor (2001,Gene 275:125-132), i karakterisano od Aravind and Koonin (2001, Genome Biol 2:RESEARCH0007), Epstein et al. (2001, Cell 107:43-54), and Bruick and McKnight (2001, Science 294:1337-1340).Postupaksadržikontaktenzimasainhibirajućomefikasnomkoličinomjednogiliviše kristalnogiliamorfnogoblikaJedinjenjaA.Unekimizvođenjima,enzimHIFhidroksilazajeasparaginil hidroksilaza ili prolilhidroksilaza.Udrugim izvođenjima, enzimHIFhidroksilaza je faktor inhibiranja HIF,humanogEGLN1,EGLN2,iliEGLN3.

PRIMERI

[0089]Osimukolikonijedrugačijenaznačeno,sledećeskraćenicesekoristekrozspecifikaciju imaju sledećedefinicije:

1

1 DifrakcijaX-zrakanaprahu(XRPD)

[0090] Uzorci difrakcije X-zraka na prahu su sakupljeni na Bruker AXS C2 GADDS difraktometru upotrebom Cu Kα zračenja (40 kV, 40mA), automatska XYZ faza, laserski videomikroskop za auto pozicioniranjeuzorka iHiStar2-dimenzionalnidetektorprostora.OptikaX-zrakasesastoji iz jednog Gobelmultislojnog ogledala spojenog sa kolimatorom koji ima otvor od 0.3mm.Nedeljni pregled učinkaseizvodiupotrebomsertifikovanogstandardaNIST1976Corundum(ravnaploča).

[0091] Divergencija zraka, tj. efektivna veličina snopa X-zraka na uzorku, je bila približno 4 mm. Kontinuirani θ-θ način skeniranja je korišćen sa distancom uzorka - detektora od 20 cm što daje efektivni2θopsegod3.2°-29.7°.ObičnojeuzorakizložensnopuX-zrakautrajanjuod120sekundi. Softever koji se koristio za sakupljanje podataka je GADDS zaWNT 4.1.16 i podaci su analizirani i predstavljeniupotrebomDiffracPlusEVAv11.0.0.2iliv13.0.0.2.

[0092] Alternativno, uzorci difrakcije X-zraka na prahu su sakupljeni na Bruker D8 difraktometru upotrebomCuKαzračenja(40kV,40mA),θ-2θgoniometra,idivergencijeodV4iprijemnihproreza, Ge monohromatorom i Lynxeye detektorom. Učinak instrumenta je proveren upotrebom sertifikovanog Corundum standarda (NIST 1976). Softver upotrebljen za sakupljanje podataka je DiffracPlusXRDCommanderv2.5.0ipodacisuanaliziraniipredstavljeniupotrebomDiffracPlusEVA v11.0.0.2iliv13.0.0.2.

[0093]Uzorcisupokrenutinaambijentalnimuslovimakaouzorciravnepločeupotrebomprahakako seprima.Uzoraksenežnopakujeušupljinuisečenunapoliranom,nula-pozadinskom(510)supstratu od silicijuma Tokom analize uzorak je rotiran na sopstvenoj ravni. Detalji sakupljanja podataka su premasledećem:

•Ugaoniraspon:2do42°2θ

•Veličinakoraka:0,05°2θ

•Vremesakupljanja:0,5s/koraku

•Trajanjeanalize:7minuta

Diferencijalnaskenirajućakalorimetrija(DSC)

[0094]DSC je sakupljen na TA InstrumentimaQ2000 koji je opremljen sa 50 položaja autouzorka. Kalibracijazatermalnikapacitetseizvodiupotrebomsafiraikalibracijazaenergijuitemperaturuse izvodiupotrebomsertifikovanogindijuma.Obično0,5-3mgsvakoguzorka,ualuminijumskomsudu saotvorom, jezagrejanona10°C/minod25°Cdo300°C. Ispuštanjesuvogazotana50ml/minse održavaprekouzorka.ModulisanatemperaturaDSCseizvodiupotrebomosnovnebrzinezagrevanja od 2 °C/min i parametrima modulacije temperature od ±0.318 °C (amplituda) svakih 60 sekundi (period).SoftverzakontroluinstrumentajeAdvantageforQSeriesv2.8.0.392iThermalAdvantage v4.8.3ipodacisuanaliziraniupotrebomUniversalAnalysisv4.4A.

[0095]Alternativno,DSCpodacisusakupljeninaMettlerDSC823ekoji jeopremljensa34položaja autouzorka. Instrument je kalibrisan za energiju i temepraturu upotrebom setifikovanog indijuma. Obično0,5-3mgsvakoguzorka,ualuminijumskomsudusaotvorom,jezagrejanona10°C/minod25

1

°Cdo300 °C ili 25 °Cdo320 °C. Ispuštanjeazotana50ml/min seodržavaprekouzorka.Kontrola instrumentaisoftverskeanalizepodatakajebilaSTARev9.20.

Termo-gravimetrijskaanaliza(TGA)

[0096] TGA podaci su sakupljeni na Mettler TGNSDT A 851e koji je opremljen sa 34 položaja autouzorka.Instrumentjekalibrisanzatemperaturiupotrebomsetifikovanogindijuma.Obično,1-30 mgsvakoguzorkasedodajenaprethodnoizmerenaluminijumskisudzatopljenjeizagrevasena10 °C/min iz ambijentalne temperature do 350 °C. Ispuštanje azota na 50 ml/min se održava preko uzorka.KontrolainstrumentaisoftverskeanalizepodatakajebilaSTARev9.20.

Primer1.DobijanjeJedinjenjaAOblikaA

Postupci

[0097] Kristalna [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetna kiselina (JedinjenjeAOblikaA)jedobijenapremasledećimpostupcima.

PostupakI

[0098]KristalnoJedinjenjeAOblikaA(videtiPrimer1,PostupakI)jekorišćenouovompostupku.15 mgkristalnogmaterijala jekoriščenosasvakimrastvaračemkojisepovećanododajesvedoksene dobijebistrirastvorilidoksenedodado50zapremina(750µL)rastvarača.Uzorcisusonifikovani5 sekundinakondodavanjasvakograstvarača.Kadasunerastvorljive,čvrstesuspenzijesumešanena 500oumuciklusimaizmeđu25°Ci50°C(4hnasvakojtemperaturi)uperioduod16časovadošest dana.Bilokojimdobijenimrastvorimajezatimomogućenoisparavanjenasobnojtemperaturi.Čvrste supstancedobijeneuovomeksperimentuseanalizirajuupotrebomXRPD.

[0099]SvakiodsledećihrastvaračakojisekoristeugoreopisanomPostupkuIobezbeđujuOblikA: sirćetna kiselina, aceton, acetofenon, benzonitril, benzil alkohol, butironitril, hlorobenzen, cikloheksanon, 1,2-dihlorobenzen, 1,2-dihloroetan, dimetoksietan, dimetilacetamid, DMSO, 1,4-dioksan, etilen glikol, EtOAc, formamid, heksafluorobenzen, heksan, IPA, IPA:10% voda, iPrOAc, MeCN,MEK,MIBK,nitrometan,perfluoroheksan,propionitril, sulfolan, t-butilmetiletar, t-butanol, tetralin,THF,itoluen.

[0100]UpotrebomPostupkaI,heksafluoropropan-2-ol,metanolietanolnisuobezbediliOblikA.

PostupakII

[0101]KristalnoJedinjenjeAOblikaA(videtiPrimer1,PostupakVIII)jekorišćenouovompostupku.

15mgkristalnogmaterijala jekorišćenosa30zapremina (450µL) rastvaračasa izuzetkomDMSO i DMAgdejekorišćeno5zapremina.Čvrstesuspenzijesusonifikovane5sekundi.Čvrstesuspenzijese mešajuna500oumna5 °Cuperioduod šest dana. Bilo koji dobijenim rastvorima je omogućeno isparavanjenasobnojtemperaturi.DobijenečvrstesupstancesuanaliziranesaXRPD.

[0102]SvakiodsledećihrastvaračakojisekoristeugoreopisanomPostupkuIIobezbeđujuOblikA: benzonitril,sulfolan,formamid,tetralin,acetofenon,benzilalkohol,etilenglikol,1,2-dihlorobenzen, chlorobenzen, cikloheksanon, butironitril, sirćetna kiselina, nitrometan, propionitril, dimetoksietan, 1,2-dihloroetan,heksafluorobenzen,t-butanol,heksan,iperfluoroheksan.

1

[0103]UpotrebomPostupkaII,heksafluoropropan-2-olnijeobezbedioOblikA.

PostupakIII

[0104]KristalnoJedinjenjeAOblikaA(videtiPrimer1,PostupakVIII) jekorišćenouovompostupku. PostupakIIIjeusuštiniopisanuPostupkuII,utekstuiznad,izuzevmešanjačvrstihsuspenzijana500 oumna50°Cuperioduodšestdana.DobijenečvrstesuspstancesuanaliziranesaXRPD.

[0105]SvakiodsledećihrastvaračakojisekoristeugoreopisanomPostupkuIIIobezbeđujuOblikA: benzonitril,sulfolan,formamid,tetralin,acetofenon,benzilalkohol,etilenglikol,1,2-dihlorobenzen, hlorobenzen, cikloheksanon, butironitril, sirćetna kiselina, nitrometan, propionitril, dimetoksietan, 1,2-dihloroetan,heksafluorobenzen,t-butanol,heksan,iperfluoroheksan.

[0106] Upotrebom Postupka III, dimetilacetamid, t-butil metil etar, i heksafluoropropan-2-ol nisu obezbediliOblikA.

PostupakIV

[0107] Kristalno Jedinjenje A Oblika B (videti Primer 2) je korišćeno u ovom postupku.15 mg kristalnogmaterijalajekorišćenosa30zapremina(450µL)rastvaračasaizuzetkomDMSOiDMAgde jekorišćeno5zapremina.Čvrstesuspenzijesusonifikovane5sekundi.Čvrstesuspenzijesemešajuna 500oum,uciklusima između25°C i50°C (4hnasvakoj temperaturi) šestdana.Bilokojidobijeni rastvori se zatim ostavljaju do brzog isparavanja na sobnoj temperaturi. Čvrste supstance se analizirajuupotrebomXRPD.

[0108]SvakiodsledećihrastvaračakojisekoristeugoreopisanomPostupkuIVobezbeđujuOblikA: benzonitril,sulfolan,formamid,tetralin,acetofenon,benzilalkohol,etilenglikol,1,2-dihlorobenzen, hlorobenzen,cikloheksanon,butironitril,sirćetnakiselina,t-butilmetiletar,nitrometan,propionitril, dimetoksietan, 1,2-dihloroetan, heksafluorobenzen, t-butanol, heksan, perfluoroheksan, i heksafluoropropan-2-ol.

PostupakV

[0109]KristalnoJedinjenjeAOblikaA(videtiPrimer1,PostupakVIII)jekorišćenouovompostupku.

20mg kristalnogmaterijala je rastvoreno u THF-u (410 µL) pre dodavanja 10 zapremina (200 µL) rastvaračasaizuzetkomDMSOiDMAgdejekoriščeno5zapremina.Čvrstesuspenzijesemešajuna 500oumuciklusimaizmeđu25°Ci50°C(4hnasvakojtemperaturi)48sati.Bilokojimrastvorima kojisudobijeninakonciklusazagrevanja/hlađenjaomogućenojeisparavanjenasobnojtemperaturi. DobijenečvrstesupstancesuanaliziraneupotrebomXRPD.

[0110]SvakiodsledećihrastvaračakojisekoristeugoreopisanomPostupkuVsuobezbediliOblikA. Benzonitril, sulfolan, formamid, tetralin, acetofenon, benzil alkohol, etilen glikol, DMSO, 1,2-dihlorobenzen, hlorobenzen, cikloheksanon, butironitril, sirćetna kiselina, t-butil metil etar, propionitril,dimetoksietan,1,2-dihloroetan,heksafluorobenzen,t-butanol,iheksan.

[0111]KorišćenjePostupkaV,nitrometan,heksafluoropropan-2-ol,iperfluoroheksannisuobezbedili OblikA.

2

PostupakVI

[0112]KristalnoJedinjenjeAOblikaA(30mg,videtiPrimer1,PostupakVIII) jerastvorenou10mL acetona.Ovajrastvorjepodvrgnutbrzomisparavanjurastvaračanarotacionomuparivaču(40°C,35-50Torr).12,85mgdobijenogmaterijalasekoristiza10zapremina(128,5µL)rastvaračasaizuzetkom DMSOiDMAgdesekoristi5zapremina.Čvrstesuspenzijesesonifikuju5sekundi.Čvrstesuspenzije semešajuna500oumizmeđu25°Ci50°C(8hciklusi)uperioduodšestdana.Bilokojidobijenim rastvorima je zatim omogućeno isparavanje na sobnoj temperaturi. Dobijene čvrste supstance su analiziranesaXRPD.

[0113]SvakiodsledećihrastvaračakojisukorišćeniugoreopsianomPostupkuVIsuobezbediliOblik A: benzonitril, sulfolan, formamid, tetralin, acetfenon, benzil alkohol, etilen glikol, DMSO, 1,2-dihlorobenzen,hlorobenzen,butironitril,sirćetnakiselina,t-butilmetileter,nitrometan,propionitril, dimetoksietan,1,2-dihloroetan,heksafluorobenzen,t-butanol,iheksan.

[0114] Upotrebom Postupka VI, cikloheksanon, heksafluoropropan-2-ol, i perfluoroheksan nisu obezbediliOblikA.

PostupakVII

[0115]KristalnoJedinjenjeAOblikaA(videtiPrimer1,PostupakVIII)sekoristiuovompostupku.30 mg je suspendovano u 7 zapremina rastvarača (10% vodeni). Čvrste suspenzije se sonifikuju 5 sekundi. Čvrste suspenzije sumešanena 500oumu ciklusima između25 °C i 50 °C (8 h ciklusi) u perioduodčetiridana.DobijenečvrstesupstancesuanaliziranesaXRPD.

[0116] Svaki od sledećih rastvarača se koristi u gore opisanom Postupku VII obezbeđuju Oblik A: aceton,acetonitril,etanol,metanol,2-metil-THF,iIPA.

PostupakVIII

[0117]VodenirastvornatrijumhidroksidasepolakododajeumešanususpenzijuJedinjenjaAuvodi utemperaturnomopsegu(10°Cdo90°C).Rastvorsirćetnekiselineuvodisezatimpolakododajeu temperaturnomopsegu(10°Cdo90°C)irastvorsemeša.Čvrstasupstancasecedi,ispirasavodom,i sušipodvakuumomdokonstantnetežine.JedinjenjeAOblikaAjedobijenokaobeladosvetložuta kristalnasupstanca.

Podaci

[0118]XRPDuzorak za JedinjenjeAOblikaA jeprikazannaSlici 1 imaksimalnevrednosti i njihovi povezaniintenzitetiuXRPDuzorkusuprikazaniutekstuispoduTabeli1.

Tabela1.MaksimalnevrednostiuXRPDuzorkuzaJedinjenjeAOblikaA

[0119] Rezultati diferencijalne skenirajuće kalorimetrije i termogravimetrijske analize Jedinjenja A Oblika A su predstavljeni redom na Slici 2 i 24. Termogravimetrijska analiza pokazuje neznatan gubitakumasiodpribližno0,4%između25°Ci225°C,zatimsledistalnigubitaktežineiznad225°C, što ukazuje na sublimaciju ili dekompozicijumaterijala na ovim temperaturama (Slika 24). Analiza diferencijalne skenirajuće kalorimetrije Jedinjenja A Oblika A pokazuje veoma plitak egzoterm u opsegu od oko 80-190 °C, zatim sledi oštar endoterm na oko 224.3 °C (maksimum signala). Oštar endotermodgovaratopljenjumaterijala,kaoštojeodređeno„hotstage“mikroskopijom.

[0120] Mikroskopija sa vrućim postoljem (engl.„Hotstage“) mikroskopija Jedinjenja A Oblika A pokazuje male promene materijala ispod njegove tačke topljenja. Neke promene u dvostukom prelamanju svetlosti su zabeležene u opsegu od oko 150-200 °C. Uzorak koji je otopljen u temperaturnomopseguodoko218.5-222.4°C.

[0121]Podaci o sorpciji vlage za Jedinjenje AOblika A pokazuju neznatan porast umasi, približno 0,2%stečenoizmeđu5%do95%relativnevlažosti,kojajeizgubljenanadesorpciji.Malopreuzimanje vlageodJedinjenjaAOblikaAjeindikatorkinetičkine-higroskopnogmaterijala.

Primer2.DobijanjeJedinjenjaAOblikaB

Postupak

[0122]KristalnoJedinjenjeAOblikaBjeobezbeđenoliofilizacijomOblikaAusmeši1,4-dioksan:voda (2:1). 20 mg kristalnog Jedinjenja A Oblika B je rastvoreno u 20 zapremina 1,4-dioksana pre dodavanja 20 zapremina korastvarača. Sistemi rastvarača su ostavljeni da ispare na sobnoj temperaturi, pod kapelom. Čvrste supstance koje su dobijene iz ovog eksperimenta su analizirane upotrebomXRPD.

[0123]SvakiodsledećihkorastvaračakojisekoristeugoreopisanompostupkuobezbeđujuOblikB.

1,4-Dioksan:voda (1:1), 1,4-dioksan:voda (1:1), 1,4-dioksan:metanol (1:1), 1,4-dioksan: etanol, 1,4-dioksan:aceton(1:1),1,4-dioksan:THF(1:1),i1,4-dioksan:heptan(1:1).

Podaci

[0124]XRPDuzorak za JedinjenjeAOblikaB jeprikazanna Slici 3 imaksimalne vrednosti i njihovi povezaniintenziteti(nastavljeni)XRPDuzorkasuprikazaniutekstuispoduTabeli2.Kristalniuzorak jepromenjennakonštojeuzorkskladištenna25°C/96%RHzadvanaestdana,pričemusevrationa OblikA.

2

Tabela2.MaksimalnevrednostiuXRPDuzorkuzaJedinjenjeAOblikaB

[0125]Nijeuočenostatak rastvarača,osimvode.Masenigubitakod2,8%mas/mas izmeđusobne temperature i 90 °C TGA termogramu sugerisao je prisustvo 0,5 ekvivalenta vode (teorijski 2,5% mas/mas) (Slika 4). DSC termogram je pokazao endotermni događaj koji je povezan sa masenim gubitkom(Slika4).Oštarendotermnidogađajsepojaviona222.3°C(-127.8J/g),kojisepoklopiosa topljenjemoblikaA.

[0126] Podaci XRPD visoke rezolucije su sakupljani tokom meseca. Nakon punog meseca na ambijentalnojtemperaturi(32dana),uzorak(OblikB)segotovoupotpunostivrationaanhidrovani OblikA.

Primer3.DobijanjeJedinjenjaAOblikaC

Postupak

[0127] Kristalni solvat heksafluoropropan-2-ola [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetne kiseline (Jedinjenje A Oblika C) se priprema prema proceduri koja je opsiana u PostupcimaI,II,IIIiVIizPrimera1upotrebomheksafluoropropan-2-olakaorastvarača.

Podaci

[0128]XRPDuzorak za JedinjenjeAOblikaC jeprikazanna Slici 5 imaksimalnevrednosti i njihovi povezaniintenzitetiuXRPDuzorkusuprikazaniutekstuispoduTabeli3.

Tabela3.MaksimalnevrednostiuXRPDuzorkuzaJedinjenjeAOblikaC

2

[0129] Ostatak rastvarača je uočen protonskom NMR i dodeljen je heksafluoropropan-2-olu. Na ovomuzorkujetakođeizvedenatermalnaanaliza(Slika6).Masenigubitakod7,8%mas/masizmeđu sobne temperature i 130 °C u TGA termogramu sugerisao je prisustvo 1/6 ekvivalenta heksafluoropropan-2-ola (teorijski7,36%mas/mas)uuzorku.DSCtermogrampokazujeendotermni događajkojijepovezansamasenimgubitkomnakončegasledimaliegzotermnidogađaj(ca.130°C) (Slika6).Oštriendotermnidogađajsepojavljujena222.2°C(-17.9J/g),kojisepoklapasatopljenjem OblikaA.Uzaključku,materijalkojijeizolovanizheksafluoropropan-2-olajemetastabilnisolvatpod ambijentalnimuslovimaikonvertujesedoOblikaA.

Primer4.DobijanjeJedinjenjaAOblikaD

Postupak

[0130] Kristalni solvat [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetne kiselina DMSO:vode(JedinjenjeAOblikaD)sedobijaizsporogisparavanjaizTHF/DMSO(20zapreminaTHF/5 zapreminaDMSO)odbilokoguglavnomamorfnogJedinjenjaAiliOblikaA.

Podaci

[0131]XRPDuzorakzaJedinjenjeAOblikaDjeprikazanonaSlici8 imaksimalnevrednosti injihovi povezani intenziteti u XRPD uzorku su prikazani u tekstu ispod u Tabeli 4. Uzorak (Oblik D) se konvertujedoOblikaAkadaseostavidaseosušinasobnojtemperaturi.

Tabela4.MaksimalnevrednostiuXRPDuzorkuzaJedinjenjeAOblikaD

2

[0132]Ostatak rastvarača je uočen protonskom NMR i dodeljen je DMSO. TGA termogram i DSC termogram su prikazani na Slici 8. TGA pokazuje prvi gubitak umasi između 40-150 °C od 18.5% (kombinacija vode i DMSO) i drugi gubitak umasi između 170-220 °C (mogući DMSO). Dva široka endotermana37.6°Ci90.4°CsumogućazboggubitkavodeiDMSO.Maliendotermna222.0°Cje uočenzbogtopljenjaOblikaA.

Primer5.DobijanjesoliJedinjenjaA

Postupak

[0133]KristalnoJedinjenjeAOblikaAsekoristizapripremanjesledećihsoli.JedinjenjeAOblikaA(50 mgpoeksperimentu)jerastvorenouacetonuiliTHF-u(50vol,2,1ml)na50°C.Rastvorisutretirani sa 1,1 mol ekv. odgovarajućim suprotnim jonom (na primer, 1,0 M vodeni rastvor natrijum hidroksida,kalijumhidroksidailihlorovodoničnekiseline).Temperaturajeodržavanana50°C20min zatim je ohlađena do 0 °C na 0.1 °C/min uz mešanje. Nakon 20 h na 0°C, čvrste supstance su proceđene,osušenenavazduhu10minizatimsuanaliziraneodgovarajućimpostupcima.

Podaci

NatrijumovasoJedinjenjaA

[0134]XRPD uzorak za natrijumovu so Jedinjenja A je prikazan na Slici 9 imaksimalne vrednosti i njihovipovezaniintenzitetiuXRPDuzorkusuprikazaniutekstuispoduTabeli5.

Tabela5.MaksimalnevrednostiuXRPDuzorkuzanatrijumovusoJedinjenjaA

[0135] Stehiometrija (joni Jedinjenja A : suprotni jon) je određeno da je oko 1:1 upotrebom 1:1 jonske hromatografije (Metrohm 761 Compact IC, IC Net softver v2.3). TGA termogram i DSC termogram su prikazani na Slici 10. TGA termogram pokazujemaseni gubitak između 40-90 °C od 11.5%.DSCtermogrampokazuješirokiendotermna64.1°C,zatimslededvaegzotermana150.5°Ci 190.3°Cioštrotopljenjena313.6°C.Čistoćajeodređenadabudeoko99.6%.

KalijumovasoJedinjenjaA

[0136]Stehiometrija (joni JedinjenjaA : suprotni jon) jeodređenoda je1:1upotrebom1:1 jonske hromatografije (Metrohm 761 Compact IC, IC Net softver v2.3). XRPD uzorak za kalijumovu so

2

JedinjenjaAjeprikazannaSlici21.KaoštosemoževidetinaSlici,kalijumovasojeusuštiniamorfna. Termalna analiza pokazujemogući gubitak vode nakon čega sledi događaj rekristalizacije da bi se proizveone-solvatizovan,kristalniobliksatačkomtopljenjana291°C(Slika22).

L-argininsoJedinjenjaA

[0137]XRPD uzorak za L-arginin so Jedinjenja A je prikazana na Slicic 11 imaksimalne vrednosti i njihovipovezaniintenzitetiuXRPDuzorkusuprikazaniutekstuispoduTabeli6.

Tabela6.MaksimalnevrednostiuXRPDuzorkuzaL-argininsoJedinjenjaA

[0138]Stehiometrija (joni JedinjenjaA : suprotni jon) jeodređenoda jeoko1:1upotrebomNMR. TGAtermogram iDSCtermogramsuprikazaninaSlici12.TGAtermogrampokazujemasenigubitak između 40-100 °C od 4.5%.DSC termogrampokazuje dva široka endotermana 79.6 °C i 143.3 °C, egzotermna172.5°C,zatimslediendotermna210.1°C.Čistoćajeodređenadabudeoko99.5%.

L-lizinsoJedinjenjaA

[0139]XRPDuzorakzaL-lizinsoJedinjenjaAjeprikazananaslici13imaksimalnevrednostiinjihovi povezaniintenzitetiuXRPDuzorkusuprikazaniutekstuispoduTabeli7.

2

Tabela7.MaksimalnevrednostiXRPDuzorkazaL-argininsoJedinjenjaA

[0140]Stehiometrija (joni JedinjenjaA : suprotni jon) jeodređenoda jeoko1:1upotrebomNMR. TGAtermogramiDSCtermogramsuprikazaninaSlici14.TGAtermogrampokazujemasenigubitak između235-270°Cod12,1%.DSCtermogrampokazujeoštrotopljenjena230.7°Ciširokiendoterma na237.1°C.Čistoćajeodređenadabudeoko99.6%.

EtanolaminsoJedinjenjaA

[0141]XRPDuzorci za etanolamin so JedinjenjaA suprikazani na Slici 15 imaksimalne vrednosti i njihovipovezaniintenzitetiuXRPDuzorcimasuprikazaniutekstuispoduTabelama8,9i10.Uzorak 1jeuočenizacetona,uzorak2jeuočenizTHF-a,iUzorak3jeuočenna40°C/75%RH.

2

Tabela8.MaksimalnevrednostiuXRPDuzorkuzaetanolaminsoJedinjenjaA(Uzorak1)

Tabela9.MaksimalnevrednostiuXRPDuzorkuzaetanolaminsoJedinjenjaA(Uzorak2)

Tabela10.MaksimalnevrednostiuXRPDuzorkuzaetanolaminsoJedinjenjaA(Uzorak3)

[0142]ZaobaTHFiaceton,stehiometrija(joniJedinjenjaA:suprotnijon)jeodređenodajeoko1:1 upotrebom NMR.TGA termogram i DSC termogram etanolamin soli Jedinjenja A iz acetona je prikazan na Slici 16. TGA termogram pokazuje maseni gubitak između 155-250 °C od 10,1% (0,8 ekvivalenataetanolamina).DSCtermogrampokazujeoštrotopljenjena171.4°Ciširokiendotermna 186.0 °C. Čistoća je određena da bude oko 99.0%. Za etanolamin so Jedinjenja A iz THF-a, TGA termogramjepokazaomasenigubitakizmeđu155-250°Cod10,1%(0,8ekvivalenataetanolamina),i DSC termogram pokazuje oštro topljenje na 172.4 °C i široki endoterm na 185.5 °C. Čistoća je određenadabudeoko99.1%.

DietanolaminsoJedinjenjaA

[0143]XRPDuzorci dietanolamin soli JedinjenjaA suprikazani na Slici 17 imaksimalne vrednosti i njihovipovezaniintenzitetiuXRPDuzorcimasuprikazaniuTabelama11i12utekstuispod.Uzorak1 jeuočenizacetonaiUzorak2jeuočenna40°C/75%RH.

1

Tabela11.MaksimalnevrednostiuXRPDuzorkuzadietanolaminsoJedinjenjaA(Uzorak1)

Tabela12.MaksimalnevrednostiuXRPDuzorkuzadietanolaminsoJedinjenjaA(Uzorak2)

[0144]Stehiometrija (joni JedinjenjaA : suprotni jon) jeodređenoda jeoko1:1upotrebomNMR. TGAtermogramiDSCtermogramsuprikazaninaSlici18.TGAtermogrampokazujegubitakumasi između155-250°Cod12,6%.DSCtermogrampokazujeoštrotopljenjena150.2°Ciširokiendoterm na172.2°C.Čistoćajeodređenadabudeoko99.7%.

TrometaminskasoJedinjenjaA

[0145]XRPDuzoraktrometaminskesoliJedinjenjaAjeprikazannaSlici19imaksimalnevrednosti i njihovipovezaniintenzitetiuXRPDuzorkusuprikazaniuTabeli13ispod.

2

Tabela13.MaksimalnevrednostiuXRPDuzorkuzatrometaminskusoJedinjenjaA

[0146]Stehiometrija(joni JedinjenjaA : suprotni jon) je određenoda je 1:1 upotrebomNMR. TGA termogramiDSCtermogramsuprikazaninaSlici20.TGAtermogrampokazujegubitakmaseizmeđu 180-260°Cod11.0%.DSCtermogrampokazujeoštrotopljenjena176.5°Ciširokiendotermna182.6 °C.Čistoćajeodređenadabudeoko99.7%.

JedinjenjeAsolihlorovodoničnekiseline

[0147] XRPD uzorak Jedinjenja A soli hlorovodonične kiseline je prikazan na Slici 25 i maksimalne vrednostiinjihovipovezaniintenzitetiuXRPDuzorkusuprikazaniuTabeli14ispod.

Tabela14.MaksimalnevrednostiuXRPDuzorkuzasohlorovodoničnekiselineJedinjenjaA

[0148]Stehiometrija (joni JedinjenjaA : suprotni jon) je jonskomhromatografijomodređenada je oko1:1.TGAtermogramiDSCtermogramsuprikazaninaSlici26.TGAtermogrampokazujegubitak umasiizmeđu100-170°Cod6,5%idrugigubitakumasiizmeđu185-210°Cod3,4%.DSCtermogram pokazujedvamalaendotermana154,3i201,6°C,ioštrotopljenjena223.0°C.Čistoćajeodređena dabudeoko99.1%.

SosumpornekiselineJedinjenjaA

[0149]XRPDuzoraksolisumpornekiselineJedinjenjaAjeprikazannaSlici27kaosmešasoliiOblika A.MaksimalnevrednostiinjihovipovezaniintenzitetiuXRPDuzorkusuprikazaniuTabeli15utekstu ispod.

Tabela15.MaksimalnevrednostiuXRPDuzorkusolisumpornekiselineJedinjenjaA

[0150]TGAtermogramiDSCtermogramsuprikazaninaSlici28.TGAtermogrampokazujegubitak maseizmeđu10-110°Cod6,5%idrugigubitakmaseizmeđu180-280°Cod27,4%.DSCtermogram pokazujetrimalaendotermana31.8,55.7i91.0kojasupovezanasaprvimgubitkommase,iveliki, širokiendotermna201,4°Ckojinastajeusledrazlaganja.

SometansulfonskekiselineJedinjenjaA

[0151]XRPDuzorcizasometansulfonskekiselineJedinjenjaAsuprikazaninaSlici29 imaksimalne vrednosti i njihovi povezani intenziteti u XRPD uzorcima su prikazani u Tabelama 16 i 17 u tekstu ispod.Uzorak1jeuočenizacetona,iuzorak2jeuočenizTHF-a.Uzorak1sevrationaOblikAna40 °C/75%RHiuzorak2sevrationasmešuOblikaAiUzorka1na40°C/75%RH.

Tabela16.MaksimalnevrednostiXRPDuzorkazasometansulfonskekiselineJedinjenjaA

(Uzorak1)

4

Tabela17.MaksimalnevrednostiuXRPDUzorkuzasometansulfonskekiselineJedinjenjaA

(Uzorak2)

[0152]Zaoba,THFiaceton,stoihiometrija(jonJedinjenjaA:suprotnijon)jeodređenodajebila1:1 upotrebomNMR.TGAtermogramiDSCtermogramsolimetansulfonskekiselineJedinjenjaAizTHF je prikazan na Slici 30. TGA termogram pokazuje gubitak mase između 40-100 °C od 2,1%. DSC termogramprikazujemaliendotermna153,5°Cioštriendotermna166,9°C.Čistoćajeodređenada bude oko 99.3%. Za so metansulfonske kiseline Jedinjenja A iz acetona, TGA termogram ne pokazujeubitakmasesvedorazlaganjauzorkanaoko180°C, iDSCtermogrampokazujeendoterm na144.5°Czbogtopljenjauzorka.Čistoćajeodređenadabudeoko98.9%.

Primer6.DobijanjeamorfnogJedinjenjaA

[0153]AmorfnoJedinjenjeAjedobijenopremasledećem.KristalnoJedinjenjeAOblikaA(500mg)je rastvoreno u THF (1,5 mL) na sobnoj temperaturi. Rastvor je proceđen da bi se uklonio bilo koji ostatak kristalnog materijala. Rastvarač je uklonjen brzim ispravanjem u rotacionom uparivaču. Alikvota dobijene čvrste supstance je ispitana sa XRPD. Alternativno, amorfno Jedinjenje A je dobijeno liofilizacijomJedinjenjaAOblikaA iz smeše1,4-dioksana:vodom(2:1v/v) ilipakovanjem i zatvaranjemJedinjenjaAukapilarnutubu,topljenjemuzorkanaKoflerovomvrućempostoljunaoko 240°Cutrajanjuodjednogminutaihlađenjadotemperatureokoline.XRPDamorfnogJedinjenjaA jeprikazanonaSlici23.

Primer7.DobijanjebisTEAsoliJedinjenjaA

Postupak

[0154]Kristalno JedinjenjeAOblikaA (50mg) je rastvorenouacetonu (50vol)na50°C.Rastvor je tretiran sa 2.1 mol ekv. trietilamina (TEA). Temperatura je održavana na 50 °C 20 min zatim je ohlađena do 0 °C na 0.1 °C/min uz mešanje. Nakon 72 na 0 °C, čvrste supstance su proceđene, osušenenavazduhu5minianaliziranesaXRPD.Rastvorisupodešenizasporoisparavanjenasobnim uslovima.

Podaci

[0155]XRPDuzorakbisTEAsoli JedinjenjaA jeprikazannaSlici31 imaksimalnevrednosti injihovi povezaniintenzitetiuXRPDuzorkusuprikazaniuTabeli18utekstuispod.

Tabela18.PikoviuXSRDuzorkuzasotrietilaminajedinjenjaAb

[0156]TGAtermogramiDSCtermogramsuprikazaninaSlici32.TEAjeizolovankaobisso,međutim sojepočeladaserazdvajadoOblikaAnakonjednenedeljeskladištenjana40°C/75%RH.

Primer8.Dobijanjepolukalcijumovihimagnezijumovihsoli

Postupak

[0157]KalcijumoveimagnezijumovesoliJedinjenjaAsudobijenejonskomizmenomiznatrijumovih soli.JedinjenjeA(450mg)jerastvorenouacetonuna50°C(50v,22.5ml).Rastvorjetretiransa1,1 molekv.Natrijumhidroksida(1Mrastvoruvodi).Nakondodavanjajeobrazovanasuspenzijaizatim jeohlađenado0 °Cna0,1 °C/min.Nakon48hna0°C, čvrsta supstanca jeproceđena,osušenana vazduhu10minianaliziranasaXRPD.Natrijumovaso(50mg)jerastvorenauMeOH(20vol,1ml)na sobnoj temperaturi. Rastvor je zagrejan do 50 °C i zatim je tretiran sa odgovarajućim suprotnim jonom(1MrastvoriuMeOH).Smešesuohlađenedo0°Cna0,1°C/min.Nakon24hna0°C,čvrste supstancesuproceđene,osušenenavazduhu5minianaliziranesaXRPD(prvafrakcija).Tečnostisu držane i podešene na sporo isparavanje na sobnim uslovima da bi se obezbedio druga frakcija. Materijali su izolovani iz eksperimenata kristalizacije Ca<+2>i Mg<+2>polu soli nakon inkubacije jedne nedeljena40°C/75%RH.

Podaci

[0158]XRPDuzorcipolukalcijumovihimagnezijumovihsoliJedinjenjaAsuredomprikazaninaSlici 33 i Slici 3. Maksimalne vrednosti i njihovi relativni intenziteti u XRPD uzorcima su prikazani u Tabelama19i20utekstuispod.

Tabela19.MaksimalnevrednostiuXRPDuzorkuzapolu-kalcijumovusoJedinjenjaA

Tabela20.MaksimalnevrednostiuXRPDuzorkuzapolu-magnezijumovusoJedinjenjaA

[0159]DSCtermogramipolukalcijumovihimagnezijumovihsoliJedinjenjaAsuredomprikazanina Slici34iSlici36.

Primer9.JedankristalJedinjenjaAOblikaA

[0160]Pojedinačnikristalisedobijaju izacetonasadoboljnimkvalitetomzastrukturnoodređivanje sadifrakcijomX-zrakanajednomkristalu.

[0161]Strukturni rastvor jedobijendirektnimpostupcima,prečišćavanjempunematricenajmanjih kvadrata na F<2>sa odmeravanjem w<-1>= σ2(Fo<2>) (0.0697P)<2>+ (0.3149P), gde P = (Fo<2>+2Fc<2>)/3, anizotropskiparametripremeštanja,korekcijomemprijskeapsorpcijeupotrebomsfernihharmonika, implementiranih u SCALE3 ABSPACK algoritam skaliranja. Konačni wR<2>={Σ[w(Fo<2>-2Fc<2>)2]/Σ[w(Fo<2>)<2>]<1/2>}=0.1376zasvepodatke,konvencionalnaR1=0.0467naFvrednostimaod2496 reflekcija sa Fo >4σ(Fo), S = 1.045 za sve podatke i 248 parametara. Konačni Δ/σ(max) 0.000, Δ/σ(srednje),0.000.Konačnamaparazlikeizmeđu+0.211i-0.318eÅ<-3>.

[0162]Slika37pokazujepregledmolekulaAOblikaA izkristalnestrukturekojaprikazujekorišćenu šemunumerisanja.Elipsoidianizotropskogpremeštanjaatomakojinisuvodoniksuprikazanina50% nivouverovatnoće.Atomivodonikasuprikazanisaproizvoljnomalimprečnikom.

Tabela21.UzorcipodnetizaispitivanjedirakcijeX-zrakanajednomkristalu

Primer10.DobijanjeJedinjenjaA

a)5-Fenoksiftalid

[0163]

[0164]Reaktor je napunjen sa DMF (68 Kg), i inicirano jemešanje. Reaktor je zatim napunjen sa fenolom (51 Kg), acetilacetonom (8 Kg), 5-bromoftalidom (85 Kg), bakar bromidom (9 Kg), i kalijumkarbonatom (77Kg). Smeša je zagrejana iznad85 °C iodržavana svedo završetka reakcije i zatim je ohlađena. Dodaje se voda. Čvrsta supstanca je proceđena i isprana sa vodom. Čvrsta supstanca je rastvorenaudihlorometanu, i isprana sa vodenimHCl i zatim sa vodom.Rastvarač je uklonjenpodpritiskomizatimsedodajemetanol.Smešasezatimmeša icedi.Čvrstasupstancase ispirasametanolomisušiupećnicipričemusedobija5-fenoksiftalid(Prinos:72%,HPLC:99.6%).

b)metilestat2-hlorometil-4-fenoksibenzoevekiseline

[0165]

[0166]Reaktorjenapunjensatoluenom(24Kg),izapočetojemešanje.Reaktorjezatimnapunjensa 5-fenoksiftalidom(56Kg),tionilhloridom(41Kg),trimetilboratom(1Kg),dihlorotrifenilfosforanom (2.5 Kg), i kalijum karbonatom (77 Kg). Smeša je zagrevana do refluksa sve do završetka reakcije i rastvaračjeuklonjenpričemuostaje2-hlorometil-4-fenoksibenzoilhlorid.Dodajesemetanolismeša jezagrejanaiznad50°Cdozavršetkareakcije.RastvaračjeuklonjenizamenjensaDMF.Ovajrastvor proizvoda metil estra metil 2-hlorometil-4-fenoksibenzeve kiseline u DMF je korišćen direktno u sledećemkoraku(HPLC:85%).

c)metilestar4-Hidroksi-7-fenoksiizohinolin-3-karboksilnekiseline(1a)

[0167]

d)Metil1-((dimetilamino)metil)-4-hidroksi-7-fenoksiisohinolon-3-karboksilat(1b)

[0169]

[0170] Balon je napunjen sa 1a (29.5 g) i sirćetnom kiselinom (44.3 g ± 5%), i zatim se pristupa mešanju.Polakosedodajebis-dimetilaminometan(12.8g±2%).Smeša jezagrejanado55±5°C i održavasedozavršetkareakcije.ProizvodreakcijejeprocenjensaMS,HPLCi<1>HNMR.<1>HNMR(200 MHz,DMSO-d6)δ11.7(s,1H),8.38(d,J=9.0Hz,1H),7.61(dd,J=9.0,2.7Hz,1H),7.49(m,3H), 7.21(m,3H),5.34(s,2H),3.97(s,3H),1.98(s,3H);MS-(+)-jonM+1=368.12.

e)Metil1-((acetoksi)metil)-4-hidroksi-7-fenoksiizohinolin-3-karboksilat(1c)

[0171]

[0172]Rastvor1biza)gorejeohlađendoispod25°C,kadasedodajeanhidridsirćetnekiseline(28.6 g±3.5%)dabisetemperaturaodržalaispod50°C.Dobijenasmešajezagrejanado100±5°Csvedo završetkareakcije.

[0173]Rastvor1c i1dodgore jeohlađendomanjeod65±5°C.Polakosedodajevoda(250mL). Smešajezatimohlađenadoispod20±5°Ciproceđena.Vlažnikolačjetriputaispransavodom(3x 50mL)idodajeseunovibalon.Dihlorometan(90mL)ivoda(30mL)sedodaju,idobijenasmešase meša.SlojdihlormetanaserazdvajaiprocenjujesaHPLC.

[0174]Organskislojsedodajeubaloniohlađenjedo5±5°C.Dodajesemorfolinismešasemeša do završetka reakcije. Rastvarač se zamenjuje sa smešom acetona u/metanolu. Nakon hlađenja,

4

istaloženoJedinjenje1csecedi,ispiraisušiupećnici(Prinos:81%,HPLC:>99.7%).<1>HNMR(200MHz, DMSO-d6)δ11.6(S,1H),8.31(d,J=9.0Hz,1H),7.87(d,J=2.3Hz,1H),7.49(m,3H),7.24(m,3H), 3.95(s,3H),3.68(s,2H),2.08(s,6H);MS-(+)-jonM+1=357.17.

f)Metil4-hidroksi-1-metil-7-fenoksiizohinolin-3-karbosilat(1e)

[0175]

[0176]Reaktorjenapunjensa1c(16.0g),Pd/C(2,08g),anhidrovanimNa2CO3(2.56g)ietilacetatom (120mL).Balon jeuvakuumuprečišćensaazotom(3X) iuvakuumuprečišćensavodonikom(3X). Balonjezatimdovedenpodpritisaksavodonikomuzmešanjena60°Cdozavršetkareakcije.Balon jeohlađendo20-25°C,zatimjepritisakoslobođenuokolinu,glavauprostorujeprečišćenaazotom tri puta i smeša je proceđena. Ostatak nakon ceđenja je konentrovan. Zatim se dodaje metanol. Smeša semeša i zatim se hladi. Proizvod je nakupljen i proceđen i osušen u pećnici (Prinos: 90%, HPLC:99.7%).

g)[(4-Hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetnakiselina(JedinjenjeA)

[0177]

[0178]Balon pod pritiskom je napunjen sa1e (30,92 g), glicinom (22,52 g),metanolom (155mL), rastvorom natrijum metoksida (64,81 g) i zatvoren (kao alternativa, natrijum glicinat se koristi umesto glicina i natrijum metoskida). Reakcija se zagreva na oko 110 °C dok reakcija ne bude kompletna. Smeša je ohlađena, proceđena, isprana sa metanolom, osušena pod vakuumom, rastvorenauvodiiispranasaetilacetatom.Etilacetatjeuklonjeniudobijenivodenisloj,dodajese (18.0g)rastvorasirćetnekiseline.Suspenzijasemešanasobnojtemperaturi,cedi,ičvrstasupstanca seispirasavodom(3x30mL),hladnimacetonom(5-10°C,2x20mL),isušipodvakuumomdase dobijeJedinjenjeA(Prinos:86.1%,HPLC:99.8%).

Primer11.Biološkotestiranje

[0179]Ovde obezbeđeni čvrsti oblicimogu da se korsite za inhibiranje aktivnosti HIF hidroksilaze, prema tome povećanja stabilnosti i/ili aktivnosti inducibilnog faktora hipoksije (HIF), imože da se korsitizalečenjeiprevencijustanjakojasuuvezisaHIFiporemećajima(videti,npr.,U.S.PatentNo.

7,323,475, U.S. Prijava patenta Objava Br. 2007/0004627, U.S. Prijava patenta Objava Br.

2006/0276477,iU.S.PrijavapatentaObjavaBr.2007/0259960).

[0180]Biološkaaktivnostovdeobezbeđenihčvrstihoblikamožedaseproceniupotrebombilokojeg konvencijalnog poznatog postupka. U posebnim izvođenjima, ćelije dobijene iz životinjskih tkiva, poželjno humanih tkiva, koje mogu da eksprimiraju eritropoetin kada su stimulisana jedinjenjima pronalaska, gaje se u kulturi za na primer in vitro proizvodnju endogenih proteina. Ćelije koje se razmatrajuzaupotrebuutakvimpostupcimaobuhvataju,alibezograničenja,ćelijekojesedobijajuiz hepatičnih,hematopojetskih,bubrežnih,inervnihtkiva.

[0181]Tehnikećelijskekulturesugeneralnodostupneuoblastitehnikeiuključujubilokojipostupak kojiodržavaćelijskuvijabilnost iolakšavaeksprimiranjeendogenihproteina.Ćelijeseobičnogajeu kulturiumedijumuzarastćelijakojijeoptimizovanzaćelijskirast,vijabilnost,iproizvodnjuproteina. Ćelijemogu da budu u suspenziji ili vezane za supstrat, imedijummože serijski da se dodaje ili u režimima kontinualnog toka. Jedinjenja pronalaska se dodaju umedijumu kulture na nivoima koji stimulišu proizvodnju eritropoetina bez ugrožavanje ćelijske vijaibilnosti. Eritropoetin koji ćelije proizvodesesekretujeumedijumuukulturi.Medijumsezatimsakupljaieritropoetinseprečišćava upotrebompostupakakoji supoznati stručnjacima izoblasti tehnike. (Videti, npr., Lai et al. (1987) U.S.Pat.No.4,667,016;andEgrie(1985)U.S.Pat.No.4,558,006.)

[0182]Pogodnipostupcitestasudobropoznatiuoblastitehnike.Sledećisupredstavljenisamokao primeriinisunamenjenidabuduograničavajući.

TeststabilizacijeHIFαzasnovannaćelijama

[0183] Humane ćelije (npr., Hep3B ćelije iz hepatocelularnog tkiva) dobijene iz različitih tkiva su zasebnozasejaneuposudamazakulturu35mm,iuzgajajuna37°C,20%O2,5%CO2ustandardnom medijumukulture,npr.,DMEM(DulbekvoumodifikacijuofEaglovogmedijuma),10%FBS (seruma fetusa govečeta). Kada ćelijski slojevi dotignu konfluentnost,medijum se zamenjuje sa OPTI-MEM medijumom (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad CA), i ćelijski slojevi se inkubiraju približno 24 časovau20%O2,5%CO2na37°C.JedinjenjeAili0,013%DMSO(dimetilsulfoksid)sezatimdodaje upostojećimedijumiinkubacijasenastavljaprekonoći.

[0184]Nakoninkubacije,medijumseuklanja,centrifugira,iskladištizaanalizu(videtiVEGFzasnovan naćelijamaiEPOtestoveispod).Ćelijesudvaputaispraneuhladnomfosfatnompuferu(PBS)izatim suliziraneu1mL10mMTris(pH7,4),1mMEDTA,150mMNaCl,0,5%IGEPAL(Sigma-Aldrich,St. LouisMO), imiksu inhibitora proteaze (RocheMolecular Biochemicals) 15minuta na ledu. Ćelijski lizatisucentrifugiranina3,000xg5minutana4°C,isakupljenesufrakcijecitoplazme(supernatant). Nukleusi (pelet) su resuspendovani i liziraniu100µL20mMHEPES (pH7,2),400mMNaCl,1mM EDTA, 1 mM ditiotreitolu, i proteaznom miksu (Roche Molecular Biochemicals), centrifugirani na 13,000xg5minutana4°C,isakupljenesufrakcijenuklearnogproteina(supernatant).

[0185] Sakupljene frakcije nuklearnih proteina su analizirane za HIF-1α upotrebom QUANTIKINE imunotesta(R&DSystems,Inc.,MinneapolisMN)premauputstvimaproizvođača.

EPOtestzasnovannaćelijama

[0186] Hep3B ćelije (ćelije humanog hepatocelularnog karcinoma iz ATCC, cat # HB-8064) su zasađeneukoncentracijiod25,000pobunarićunapločikojasadrži96bunarića.Sledećidan,ćelijesu jednomispranesaDMEM(Cellgro,cat#10-013-CM)+0,5%serumomfetusagovečeta(Cellgro,cat# 35-010-CV) i inkubirane su sa različitim koncentracijama jedinjenja ili kontrolom nosača (0,15% DMSO)uDMEM+0,5%serumfetusagovečetautrajanjuod72časova.Supenatantikulturebezćelija se dobijaju transferom u ploču sa 96 bunarića sa koničnim dnom i centrifugiraju 5 minuta na 2000oum.SupernatantsekvantifikujezaEPOkorišćenjemhumanogEPOELISAkita(R&DSistemi,cat #DEP00).

[0187] EPO vrednosti ovde prijavljenih jedinjenja (npr., Tabela 22) su izmerene vrednosti za ćelije plus jedinjenje minus vrednost kontrole nosača za isti ćelijski preparat. EPO vrednosti za kontolu nosačazaćelijskepreparatesuvariraleod0-12,5mIU/mL.

HIF-PHtest

[0188]Natrijumova soKetoglutarne kiseline α-[1-14C], natrijumova so alfa-ketoglutarne kiseline, i peptid pročišćen sa HPLC su dobijeni iz komercijalnih izvora, redom npr., Perkin-Elmer (Wellesley MA),Sigma-Aldrich,iSynPepCorp.(DublinCA).PeptidizaupotrebuutestusubilifragmentiHIFαkao štojeopsianoutekstu iznadilikaošto jeobjavljenouMeđunarodnojprijaviWO2005/118836.Na primer, HIF peptid za upotrebu u HIF-PH testu je [metoksikumarin]-DLDLEALAPYIPADDDFQL-amid. HIF-PH, npr., HIF-PH2 (takođe poznato pod EGLN1 ili PHD2), je eksprimiran u, npr., Hi5 ćelijama insekta,idelomprečišćeni,npr.,krozSPkolonujonoizmenjivačkehromatografije.Enzimskaaktivnost je određena hvatanjem<14>CO2upotrebom testa kojeg su opisali Kivirikko iMyllyla (1982,Methods Enzymol.82:245-304).Reakcijeu testusadrže50mMHEPES (pH7,4),100mMnatrijumovesoliαketoglutarnekiseline,0,30mCi/mLnatrijumovesoliα-ketoglutarnekiselineα-[1-14C],40mMFeSO4, 1 mM askorbata, 1541,8 jedinica/mL Katalaze, sa ili bez 50 mM peptidnog supstrata i različitih koncentracijajedinjenjapronalaska.ReakcijesuiniciranedodavanjemHIF-PHenzima.

[0189] Peptidno-zavisni procenat prometa je računat oduzimanjem procenta prometa u odsustvu peptida iz procenta prometa u prisustvu supstrata peptida. Procenat inhbicije i IC50su računati upotrebom procenta peptidno-zavisnog prometa na datim koncentracijama inhibitora. Računanje IC<50>vrednosti za svaki inhibitor je izvedeno upotrebom GraFit softvera (Erithacus Software Ltd., SurreyUK).RezultatisusažetiuTabeli22.

[0190]Tabela22 ispod jenamenjenadaprikaže farmaceutskukorist JedinjenjaA. InhibiranjemHIF prolil hidroksilaza enzima (na primer PHD2, takođe poznat pod imenom EGLN1), Jedinjenje A stabilizujeHIFα,kojisezatimkombinujesaHIFβdabiseobrazovaoaktivnitranskripcionifaktorkoji povećavaekspresijubrojnihgenauključenihuodgovorunahipoksičnaiishemijskastanja,uključujući eritropoetin(EPO).PrematomeJedinjenjeAmožedasekoristizaprevenciju,pretretman,ililečenje stanjakojasuuvezisaHIFiiliEPOuključujućianemiju,ishemijskaihipoksičnastanja.

Tabela22

4

Claims (5)

Patentnizahtevi

1. Farmaceutska kompozicija koja sadrži kristalnu [(4-hidroksi-1-metil-7-fenoksi-izohinolin-3-karbonil)-amino]-sirćetnu kiselinu (Jedinjenje A Forma A) naznačeno time da difraktogram rendgenskogprahakojisadržisledećepikove:8,5,12,8,16,2,21,6,22,9i27,4°2θ±0,2°2θ,kadase merekorišćenjemCuKαzračenja, i farmaceutskiprihvatljivogekscipijenta,zaupotrebuupostupku lečenja, prethodnog tretmana ili odlaganja napredovanja anemije, pri čemu je najmanje oko 85% JedinjenjaAufarmaceutskojkompozicijiuFormiA.

2. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je difraktogram JedinjenjaAFormeAusuštinikaoštojeprikazanonaslici1.

3. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je Jedinjenje A FormeAdaljenaznačenokrivomdiferencijalneskenirajućekalorimetrije(DSC)kojasadržiendoterm naoko223°C.

4. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 3, pri čemu je DSC kriva JedinjenjaAFormeAusuštinikaoštojeprikazanonaslici2.

5.Farmaceutskakompozicijazaupotrebupremapatentnomzahtevu1,pričemunajmanjeoko90%, najmanjeoko95%,najmanjeoko99%,najmanjeoko99,5%,najmanjeoko99,9%,ilinajmanjeoko 99,99%JedinjenjaAufarmaceutskojkompozicijijeJedinjenjeAFormaA.

4