RS63128B1

RS63128B1 - Ciklični dinukleoti kao agensi protiv kancera

Info

Publication number: RS63128B1
Application number: RS20220372A
Authority: RS
Inventors: Brian E Fink; Dharmpal S Dodd; Yufen Zhao; Lan-Ying Qin; Zheming Ruan; Lalgudi S Harikrishnan; Muthoni G Kamau; Steven J Walker; Libing Chen; Peter Kinam Park
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2018-02-13
Filing date: 2019-02-13
Publication date: 2022-05-31
Also published as: KR102950614B1; LT3752516T; PT3752516T; DK3752516T3; US20190248828A1; HRP20220520T1; US10519187B2; PL3752516T3; KR20200120683A; CN111902420B; CN111902420A; JP2021513562A; TW202003539A; CY1125159T1; EP3752516B1; HUE058662T2; JP7296405B2; US11339185B2; SI3752516T1; WO2019160884A1

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Pronalazak obezbeđuje nova jedinjenja, farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenja, i za upotrebu, na primer, za lečenje ili profilaksu određenih kancera i za njihovu upotrebu u terapiji.

STANJE TEHNIKE

[0002] Imunoterapija je oblast medicinskog lečenja koja se brzo razvija i u kojoj se imuni sistem pacijenta namerno aktivira, potiskuje ili na drugi način moduliše radi pozitivnog terapijskog efekta. Imunoterapijski agensi uključuju strukture kao što su ćelije, antigeni, antitela, nukleinske kiseline, proteini, peptidi, ligandi koji se pojavljuju u prirodi i sintetički pripremljeni molekuli. Citokini su mali molekuli glikoproteina poznati po svojoj ulozi u izazivanju imunološkog odgovora preko složenih signalnih mreža. Citokini su istraženi kao agensi imunoterapije ali njihovo direktno administriranje ometaju mnogi faktori uključujući njihov kratak poluživot u krvi koji se može nadoknaditi samo čestim i često visokim dozama. Jedan veoma obećavajući pristup je indukcija citokina u kojoj se pacijent leči imunomodulatornim agensom koji pokreće proizvodnju jednog ili više terapijski korisnih citokina u njegovom telu.

[0003] Jedan agens u proizvodnji citokina je adapter protein STING (STimulator Gena INterferona; takođe poznat kao MPYS, TMEM173, MITA i ERIS). STING je intracelularni receptor koji se nalazi na endoplazmatskom retikulumu. Vezivanje za STING od strane agonista aktivira signalni put koji kulminira indukcijom IFN tipa I, koji se luče i štite sekretorne i obližnje ćelije. STING se može aktivirati pomoću dve različite putanje, svaka uključuje različit tip agonista cikličnog dinukleotida ("CDN"). U prvoj putanji, agonist je egzogeni CDN koji koristi bakterijske patogene kao sekundarni glasnik (Burdette i saradnici 2013). U drugoj putanji enzim ciklična GMP-AMP sintaza (cGAS) detektuje citozolnu DNK i, kao odgovor, sintetiše CDN koja funkcioniše kao endogeni STING agonist (Ablasser i saradnici 2013; Gao i saradnici 2013; Sun i saradnici 2013).

[0004] Aktivacija STING-a dovodi do regulacije IRF3 i NF-κB putanje što dovodi do indukcije Interferona-β i drugih citokina. STING je ključan za odgovore na citozolnu DNK poreklom iz patogena ili domaćina.

[0005] Dva egzogena bakterijska STING agonista CDN su 3'3'-cGAMP i c-GMP. Endogeni STING agonist CDN napravljen od cGAS je 2'3'-cGAMP. Bakterijski CDN karakterišu dva 3'5' fosfodiestarska mosta, dok CDN proizveden od cGAS karakteriše jedan 2'5' i jedan 3'5' fosfodiestarski most. U skraćenom obliku, raniji CDN-ovi se nazivaju 3'3' CDN-ovi, a kasniji kao 2'3' CDN-ovi. Iz istorijskih razloga, 3'3' CDN-ovi se takođe nazivaju "kanonskim" oblikom i 2'3' CDN-ovi se nazivaju "nekanonskim" oblikom.

[0006] Pored zaštite organizma od infekcije patogenom, aktivacija STING-a takođe je prijavljena kao korisna u lečenju inflamatornih bolesti i, u oblasti od posebnog trenutnog interesa, kancera. Administriranje sintetičkog CDN u kombinaciji sa vakcinom protiv kancera STINGVAX pokazala je poboljšanu antitumorsku efikasnost u višestrukim terapijskim modelima (Fu i saradnici 2015). Prijavljeno je da samo administriranje STING agonista pokazuje moćnu antitumorsku imunološku efikasnost na modelu miša (Corrales i ostali 2015a). Za recenzije o ulozi STING-a u infekciji, inflamaciji, i/ili kanceru, videti Ahn i ostali 2015; Corrales i ostali 2015b i 2016; i Barber 2015.

[0007] Dokument WO 2017/027645 i WO 2017/123669 stavlja na uvid javnosti ciklična dinukleotidna jedinjenja kao sting agoniste. Dokument WO 2019/023459 je intermedijarni dokument koji se odnosi na dalje ciklične dinukleotide kao agense protiv kancera.

[0008] Predmetni pronalazak, stoga, obezbeđuje nove ciklične dinukleotide koji mogu biti korisni za lečenje kancera.

SUŠTINA PREDMETNOG PRONALASKA

[0009] Postoje jedinjenja sa formulama (I), (II) i (III)

pri čemu su svi supstituenti ovde definisani.

[0010] U drugom aspektu, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenasa.

[0011] U drugom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje u skladu sa pronalaskom za upotrebu u lečenju kancera.

DETALJAN OPIS PREDMETNOG PRONALASKA

[0012] Slede aspekti i tehnička rešenja predmetnog pronalaska, kao i dodatni aspekti i tehnička rešenja koja mogu biti u okviru onih prikazanih. Aspekti pronalaska nisu ograničeni na one opisane u nastavku.

[0013] U prvom aspektu, stavljeno je na uvid javnosti jedinjenje sa formulom I

gde

X je nezavisno O ili S;

X<1>, X<2>, X<3>i X<4>su svaki nezavisno O ili NH;

R<1>i R<2>su nezavisno

ili

sa tim da jedan od R<1>i R<2>mora biti

Z1je N ili CR<a>;

Z2je NR;

R<a>je H, halogen, C1-6alkil supstituisan sa 0-6 R<5>, C3-6cikloalkil supstituisan sa 0-6 R<5>, CN, NO2, OH, OR<a1>, SR<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -COOR<a1>, -OC(O)R<a1>, - OC(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>R<a1>, -NR<a1>C(O)R<a1>, - NR<a1>COOR<a1>, -NR<a1>C(O)NR<a1>R<a1>, - NR<a1>S(O)2R<a1>, -NR<a1>S(O)2NR<a1>R<a1>, -S(O)R<a1>, - S(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>;

Rje H, C1-6alkil supstituisan sa 0-6 R<5>, C3-6cikloalkil supstituisan sa 0-6 R<5>, -C(O)R<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>;

R<a1>je H, C1-3alkil ili C3-6cikloalkil;

R<3>je H, CH3, halogen, -NR<a1>R<a1>ili OR<a1>;

R<3a>je H, CH3, halogen, -NR<a1>R<a1>ili OR<a1>; ili

R<3>i R<3a>mogu se uzeti zajedno da formiraju 3-4 očlani karbociklus; ili

R<3>i R<3a>mogu se uzeti zajedno da formiraju C=CH2supstituent;

R<5>je H, halogen, C1-3alkil, CN, NO2, OH, OR<a1>, SR<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -COOR<a1>, -OC(O)R<a1>, -OC(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>R<a1>, -NR<a1>C(O)R<a1>, - NR<a1>COOR<a1>, -NR<a1>C(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>S(O)2R<a1>, -NR<a1>S(O)2NR<a1>R<a1>, -S(O)R<a1>, - S(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>;

R<5a>je H ili C1-3alkil;

R<6>je H, halogen, C1-3alkil, CN, NO2, OH, OR<a1>, SR<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -COOR<a1>, -OC(O)R<a1>, -OC(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>R<a1>, -NR<a1>C(O)R<a1>, - NR<a1>COOR<a1>, -NR<a1>C(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>S(O)2R<a1>, -NR<a1>S(O)2NR<a1>R<a1>, -S(O)R<a1>, - S(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>;

R<8>je H, halogen, C1-3alkil, CN, NO2, OH, OR<a1>, SR<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -COOR<a1>, -OC(O)R<a1>, -OC(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>R<a1>, -NR<a1>C(O)R<a1>, - NR<a1>COOR<a1>, -NR<a1>C(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>S(O)2R<a1>, -NR<a1>S(O)2NR<a1>R<a1>, -S(O)R<a1>, - S(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>;

R<9>je H, halogen ili metil;

Y je CR<a>ili N;

m je 0, 1, 2 ili 3;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0014] U jednom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

gde

X je S;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0015] U drugom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

gde

X je O;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0016] U drugom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0017] U drugom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0018] U drugom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0019] U drugom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

gde

X je S;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0020] U drugom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

gde

X je O;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0021] U drugom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0022] U drugom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0023] U drugom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0024] U drugom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0025] U drugom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0026] U drugom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0027] U drugom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0028] U drugom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0029] U drugom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0030] U drugom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0031] U drugom aspektu pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

[0032] U drugom tehničkom rešenju prvog aspekta pronalaska, obezbeđena je farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja sa formulom

Ċ

[0033] U drugom aspektu pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom II

gde

X je nezavisno O ili S;

X<1>, X<2>, X<3>i X<4>su svaki nezavisno O ili NH;

R<1>i R<2>su svaki nezavisno

sa tim da jedan od R<1>i R<2>mora biti

Z1je N ili CR<a>;

Z2je NR;

R<a1>je H, C1-3alkil ili C3-6cikloalkil;

R<4>je H, CH3, halogen, -NR<a1>R<a1>ili OR<a1>;

R<4a>je H, CH3, halogen, -NR<a1>R<a1>ili OR<a1>; ili

R<4>i R<4a>mogu se uzeti zajedno da formirajua 3-4 očlani karbociklus; ili

R<4>i R<4a>mogu se uzeti zajedno da formiraju C=CH2supstituent;

R<5a>je H ili C1-3alkil;

R<9>je H, halogen ili metil;

Y je CR<a>ili N;

m je 0, 1, 2 ili 3;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0034] U drugom tehničkom rešenju drugog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

gde

X je S;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0035] U drugom tehničkom rešenju drugog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

gde

X je O;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0036] U drugom tehničkom rešenju drugog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0037] U drugom tehničkom rešenju drugog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0038] U drugom tehničkom rešenju drugog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0039] U drugom tehničkom rešenju drugog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

gde

X je S;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0040] U drugom tehničkom rešenju drugog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

gde

X je O;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0041] U drugom tehničkom rešenju drugog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0042] U drugom tehničkom rešenju drugog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0043] U drugom tehničkom rešenju drugog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0044] U drugom tehničkom rešenju drugog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0045] U drugom tehničkom rešenju drugog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0046] U drugom tehničkom rešenju drugog aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0047] U drugom aspektu pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

[0048] U drugom aspektu pronalaska, obezbeđena je farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja sa formulom

Ċ

[0049] U trećem aspektu pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom III

gde

X je nezavisno O ili S;

X<1>, X<2>, X<3>i X<4>su svaki nezavisno O ili NH;

R<1>i R<2>su nezavisno

sa tim da jedan od R<1>i R<2>mora biti

Z1je N ili CR<a>;

Z2je NR;

R<a>je H, halogen, C1-6alkil supstituisan sa 0-6 R<5>, C3-6cikloalkil supstituisan sa 0-6 R<5>, CN, NO2, OH, OR<a1>, SR<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -COOR<a1>, -OC(O)R<a1>, - OC(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>R<a1>, NR<a1>C(O)R<a1>, - NR<a1>COOR<a1>, -NR<a1>C(O)NR<a1>R<a1>, - NR<a1>S(O)2R<a1>, -NR<a1>S(O)2NR<a1>R<a1>, -S(O)R<a1>, - S(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>;

R<a1>je H, C1-3alkil ili C3-6cikloalkil;

R<5a>je H ili C1-3alkil;

R<9>je H, halogen ili metil;

Y je CR<a>ili N;

m je 0, 1, 2 ili 3;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0050] U drugom tehničkom rešenju trećeg aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

gde

X je S;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0051] U drugom tehničkom rešenju trećeg aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

gde

X je O;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0052] U drugom tehničkom rešenju trećeg aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0053] U drugom tehničkom rešenju trećeg aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0054] U drugom tehničkom rešenju trećeg aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0055] U drugom tehničkom rešenju trećeg aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

gde

X je S;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0056] U drugom tehničkom rešenju trećeg aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

gde

X je O;

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0057] U drugom tehničkom rešenju trećeg aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0058] U drugom tehničkom rešenju trećeg aspekta pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0059] U drugom aspektu pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

[0060] U drugom aspektu pronalaska, obezbeđena je farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja sa formulom

[0061] U drugom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje odabrano od primera koji su dati kao primer, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{9-hidroksi-3H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion,

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-hidroksi-17-{9-okso-3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.2.1.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion,

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12dion,

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-3,18-dihidroksi-17-{9-okso-3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-12-sulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.2.1.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion,

(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-hidroksi-17-{9-okso-3H,5H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion,

(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{9-okso-3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.2.1.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion,

(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.2.1.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion,

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-diokso-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-8-il]piridin-2-karboksamid,

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18S)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-diokso-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-8-il]piridin-2-karboksamid,

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroksi-3,12-diokso-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-8-il]piridin-2-karboksamid,

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-12-hidroksi-3,12-diokso-3-sulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-8-il]piridin-2-karboksamid,

4-[(1S,7S,8R,10S,16R,17R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-4,13-diokso-4,13-disulfanil-3,5,12,14-tetraoksa-4λ<5>,13λ<5>-difosfatriciklo[14.2.0.0<7,10>]oktadekan-8-il]piridin-2-karboksamid,

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroksi-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion,

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion,

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-hloro-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion,

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-diokso-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-8-il]piridin-2-karboksamid,

4-[(1R,6S,8R,9R,15R,17S,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-hidroksi-3,12-diokso-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.2.1.0<6,9>]oktadekan-17-il]piridin-2-karboksamid,

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{5-okso-5H,8H,9H- [1,2,4]triazolo[4,3-a]purin-8-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-(6-okso-6,9-dihidro-1H-purin-9-il)-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion,

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{8-okso-4H,5H,8H- [1,2,3,4]tetrazolo[1,5-a]purin-5-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion,

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer.

[0062] U drugom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje odabrano iz bilo koje liste podskupova jedinjenja u okviru bilo kog od gornjih aspekata.

[0063] U drugom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

[0064] U drugom aspektu, obezbeđena je farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja sa formulom

Ċ

[0065] U drugom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom

Ċ

[0066] U drugom aspektu, obezbeđena je farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja sa formulom

DRUGA TEHNIČKA REŠENJA PRONALASKA

[0067] U drugom tehničkom rešenju, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač i terapijski efikasnu količinu barem jednog jedinjenja pronalaska ili stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljivu so, ili njegov solvat.

[0068] U drugom tehničkom rešenju, pronalazak obezbeđuje proces za pravljenje jedinjenja pronalaska ili stereoizomera, tautomera, farmaceutski prihvatljive soli, ili njegovog solvata.

[0069] U drugom tehničkom rešenju, pronalazak obezbeđuje jedno ili više jedinjenja, samo, ili, opciono, u kombinaciji sa drugim jedinjenjem pronalaska i/ili barem jedan drugi tip terapijskog agensa za upotrebu u lečenju i/ili profilaksi različitih tipova kancera.

[0070] U drugom tehničkom rešenju, različiti tipovi kancera, uključuju sitnoćelijski kancer pluća, nesitnoćelijski kancer pluća, kolorektalni kancer, melanom, karcinom bubrežnih ćelija, kancer glave i vrata, Hodžkinov limfom, kancer bešike, karcinom jednjaka, karcinom želuca, karcinom jajnika, karcinom grlića materice, karcinom pankreasa, karcinom prostate, kancere dojke, urinarni karcinom, , tumore mozga kao što je glioblastom, ne-Hodžkinov limfom, akutnu limfatičnu leukemiju (ALL), hroničnu limfatičnu leukemiju (CLL), akutnu mijeloičnu leukemiju (AML), hroničnu mijeloičnu leukemiju (CML), hepatocelularni karcinom, multipli mijelom, gastrointestinalne stromalne tumore, mezoteliom, i druge solidne tumore ili druge hematološke kancere

[0071] U drugom tehničkom rešenju, različiti tipovi kancera, uključuju bez ograničenja, sitnoćelijski kancer pluća, nesitnoćelijski kancer pluća, kolorektalni kancer, melanom, karcinom bubrežnih ćelija, kancer glave i vrata, Hodžkinov limfom ili kancer bešike.

[0072] U drugom tehničkom rešenju, pronalazak obezbeđuje jedinjenje predmetnog pronalaska za primenu u terapiji.

[0073] U drugom tehničkom rešenju, pronalazak obezbeđuje kombinovano pripremanje jedinjenja predmetnog pronalaska i dodatnog terapijskog agensa (agenasa) za istovremenu, odvojenu ili sekvencijalnu primenu u terapiji.

TERAPIJSKE PRIMENE

[0074] Ciklični dinukleotidi pronalaska indukuju interferone Tipa I i/ili proinflamatorne citokine in vitro u ljudskim ćelijama, životinjskim ćelijama i ljudskoj krvi. Citokin-indukujuća aktivnost ovih CDN-ova zahteva prisustvo STING-a, kao što je potvrđeno pomoću in vitro eksperimenata u ljudskim ili životinjskim ćelijama.

[0075] CDN-ovi pronalaska su agonisti receptora STING-a.

[0076] Termin "agonist" odnosi se na bilo koju supstancu koja aktivira biološki receptor in vitro ili in vivo da izazove fiziološki odgovor.

[0077] "STING" je skraćenica "stimulator gena interferona", koja je takođe poznata kao " stimulator interferona endoplazmatskog retikuluma (ERIS)", "medijator aktivacije IRF3 (MITA)", "MPYS" ili "transmembranski protein 173 (TM173)". STING je protein transmembranskog receptora koji je kod ljudi kodiran genom TMEM173. Aktivacija STING-a cikličnim dinukleotidima (CDN) vodi do aktivacije IRF3 i NF-κB putanja i posledično, do indukcije interferona Tipa I i proinflamatornih citokina, redom.

[0078] Drugi predmet predmetnog pronalaska su ciklični dinukleotidi sa formulom (I), za upotrebu u terapijskom tretmanu kod ljudi ili životinja. Posebno, jedinjenja predmetnog pronalaska mogu se upotrebiti za terapijske ili dijagnostičke primene u svrhu zdravlja ljudi ili životinja.

[0079] Termin "terapijski agens" odnosi se na jednu ili više supstanci koje su administrirane kod ljudi ili životinja da bi se postigla neka vrsta terapijskog efekta kod ljudi ili životinja, uključujući sprečavanje, lečenje, ili ublažavanje efekata, infekcije ili bolesti, i/ili da se poboljša zdravlje tog čoveka ili životinje na drugi način.

[0080] Termin "monoterapija" odnosi se na upotrebu jedne supstance i/ili strategije za lečenje čoveka ili životinje u bilo kom kliničkom ili medicinskom kontekstu za razliku od upotrebe više supstanci i/ili strategija za lečenje čoveka ili životinje u istom kliničkom ili medicinskom kontekstu, bez obzira da li su se višestruke supstance i/ili strategije koristile sekvencijalno bilo kojim redosledom ili istovremeno.

[0081] Termin "hemoterapijski agens" ovde se odnosi na jednu ili više hemijskih supstanci koje su administrirane čoveku ili životinji kako bi se uništili tumori, ili se usporio ili zaustavio rast tumora, i/ili usporila ili zaustavila podela kancerogenih ćelija i/ili sprečile ili usporile metastaze. Hemoterapijski agensi su često administrirani da bi se lečio kancer, ali su takođe namenjeni za druge bolesti.

[0082] Termin "hemoterapija" odnosi se na medicinsko lečenje čoveka ili životinje sa jednim ili sa više hemoterapijskih agenasa (videti definiciju iznad).

[0083] Termin "hemoimunoterapija" odnosi se na kombinovanu upotrebu, bilo uzastopno bilo kojim redosledom ili istovremeno, hemoterapijskih supstanci i/ili strategija, i imunoterapijskih supstanci i/ili strategija. Hemoimunoterapija se često koristi za lečenje kancera, ali se takođe može koristiti za lečenje drugih bolesti.

[0084] Termin "imuni sistem" odnosi se na sklop, ili bilo koju jednu ili više komponenti, molekula, supstanci (npr. telesne tečnosti), anatomskih struktura (npr. ćelije, tkivo i organi) i fizioloških procesa uključenih u prevenciju infekcije u telu, u zaštitu tela tokom infekcije ili tokom bolesti, i/ili u pomaganju telu da se oporavi nakon infekcije ili bolesti. Kompletna definicija "imunog sistema" je izvan obima ovog patenta; međutim, ovaj termin trebalo bi da razume svaki običan praktikant u oblasti.

[0085] Termin "imuni agens" odnosi se na bilo koju endogenu ili egzogenu supstancu koja može da stupi u interakciju sa jednom ili više komponenti imunog sistema. Termin "imuni agens" uključuje antitela, antigene, vakcine i njihove sastavne komponente, nukleinske kiseline, sintetičke lekove, prirodna ili sintetička organska jedinjenja, citokine, prirodne ili modifikovane ćelije, njihove sintetičke analoge, i/ili njihove fragmente.

[0086] Termin "antagonist" odnosi se na bilo koju supstancu koja inhibira, suprostavlja se, smanjuje, i/ili desensibilizira biološki receptor in vitro ili in vivo da bi se izazvao fiziološki odgovor.

[0087] Termin "imunoterapija" odnosi se na bilo koji medicinski tretman u kojem jedna ili više komponenti ljudskog ili životinjskog imunog sistema je namerno modulisana kako bi se postigao direktno ili indirektno terapijski benefit, uključujući sistemske i/ili lokalne efekte, i preventivne i/ili lekovite efekte. Imunoterapija može da uključi administriranje jednog ili više imunih agenasa (videti definiciju iznad), ili pojedinačno ili u bilo kojoj kombinaciji, čoveku ili životinji putem bilo koje rute (npr. oralno, intravenski, dermalno, ubrizgavanjem, inhalacijom, itd.), bilo sistemski, lokalno ili oboje.

[0088] "Imunoterapija" može uključivati izazivanje, povećanje, smanjenje, zaustavljanje, sprečavanje, blokiranje ili na drugi način modeliranje proizvodnje citokina, i/ili aktiviranje ili deaktiviranje citokina ili imunih ćelija, i/ili moduliranje nivoa imunih ćelija, i/ili isporuku jedne ili više terapijskih ili dijagnostičkih supstanci na određenu lokaciju u telu ili određenom tipu ćelija ili tkiva, i/ili uništavanje određenih ćelija ili tkiva. Imunoterapija može biti korišćena da se postignu lokalni efekti, sistemski efekti ili kombinacija oba.

[0089] Termin "imunosupresivan" opisuje stanje bilo kog ljudskog ili životinjskog subjekta čiji je imuni sistem funkcionalno oslabljen, deaktiviran ili na drugi način kompromitovan, ili kod koga je jedna ili više imunih komponenti funkcionalno smanjena, deaktivirana ili na drugi način kompromitovana.

[0090] "Imunosupresija" može biti uzrok, posledica ili nusproizvod bolesti, infekcije, iscrpljenosti, pothranjenosti, medicinskog lečenja ili nekog drugog fiziološkog ili kliničkog stanja.

[0091] Termini "imunomodulirajuća supstanca", "imunomodulatorna supstanca", "imunomodulatorni agens" i "imunomodulator", koji se ovde koriste kao sinonimi, odnose se na bilo koju supstancu koja, nakon administriranja čoveku ili životinji, direktno utiče na funkcionisanje imunog sistema tog čoveka ili životinje. Primeri uobičajenih imunomodulatora uključuju, ali nisu ograničeni na, antigene, antitela i lekove sa malim molekulima.

[0092] Termin "vakcina" odnosi se na biološki preparat administriran čoveku ili životinji u cilju izazivanja ili poboljšanja specifičnog odgovora imunog sistema i/ili zaštite od jednog ili više antigena kod tog čoveka ili životinje.

[0093] Termin "vakcinacija" odnosi se na lečenje čoveka ili životinje vakcinom ili na čin administiranja vakcine čoveku ili životinji.

[0094] Termin "ađuvans" odnosi se na sekundarnu terapijsku supstancu koja je administrirana zajedno sa (bilo uzastopno, bilo kojim redosledom, ili istovremeno) primarnom terapijskom supstancom da se postigne neka vrsta komplementarnosti, sinergije ili na drugi način blagotvorno dejstvo koje se ne može postići upotrebom same primarne terapijske supstance. Ađuvans se može koristiti zajedno sa vakcinom, hemoterapijom, ili nekom drugom terapijskom supstancom. Ađuvansi mogu poboljšati efikasnost primarne terapijske supstance, smanjiti toksičnost ili neželjene efekte primarne terapijske supstance, ili da pruže neku vrstu zaštite subjektu koji prima primarnu terapijsku supstancu, kao što je, ali nije na to ograničeno, poboljšano funkcionisanje imunološkog sistema.

[0095] U jednom tehničkom rešenju, ciklični dinukleotid sa formulom (I) može se administrirati kao imunoterapija čoveku ili životinji da bi se in vivo indukovala proizvodnja jednog ili više citokina koji su terapijski korisni za tog čoveka ili životinju. Ovaj vrsta imunoterapije može se koristiti samostalno ili u kombinaciji sa drugim strategijama, bilo uzastopno, bilo kojim redosledom, ili istovremeno. Može se koristiti za prevenciju, lečenje, i/ili ublažavanje efekata infekcije ili bolesti kod tog čoveka ili životinje, i/ili da se modulira imuni sistem tog čoveka ili životinje kako bi se postigla neka druga terapijska korist.

[0096] U jednom posebnom tehničkom rešenju, ciklični dinukleotidi predmetnog pronalaska mogu biti korišćeni za imunoterapiju indukcije citokina imunosupresivnih pojedinaca.

[0097] U ovom primeru, ciklični dinukleotid sa formulom (I) bio bi administriran imunosupresivnom ljudskom ili životinjskom subjektu da se indikuje in vivo proizvodnja jednog ili više citokina koji direktno ili indirektno poboljšavaju imuni sistem tog čoveka ili životinje. Subjekti koji bi mogli imati koristi od takvog tretmana uključuju one koji pate od autoimunih poremećaja, nedostataka ili defekata imunog sistema, mikrobnih ili virusnih infekcija, infektivnih bolesti, ili kancera.

[0098] Stoga predmetni pronalazak stavlja na uvid javnosti ciklični dinukleotid sa formulom (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u izazivanju citokina kod imunosupresivnih individua.

[0099] U drugom tehničkom rešenju, ciklični dinukleotidi predmetnog pronalaska mogu biti korišćeni za imunoterapiju indukcije citokina u kombinaciji sa hemoterapijom. U ovom primeru, ciklični dinukleotid sa formulom (I) bio bi administriran zajedno sa jednim ili više hemoterapijskih agenasa, uzastopno bilo kojim redosledom ili istovremeno, pacijentu sa kancerom da zaustavi njegov rast, da smanji/ili uništi tumore kod tog pacijenta. Hemoimunoterapija koja je rezultat kombinacije indukcije citokina, koju obezbeđuju jedinjenje (a) predmetnog pronalaska, i citotoksičnost, koju obezbeđuju hemoterapisjki agens (i), može biti manje toksičan za pacijenta, manje izazvati neželjenih efekata kod pacijenta i/ili pokazati veću antitumorsku efikasnost nego hemoterapijski agens (i) kada su korišćeni kao monoterapija.

[0100] Predmetni pronalazak stoga stavlja na uvid javnosti hemoterapijski agens; i ciklični dinukleotid sa formulom (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u lečenju kancera.

[0101] Drugi predmet ovog pronalaska su ciklični dinukleotidi sa formulom (I) za upotrebu u lečenju bakterijske infekcije, virusne infekcije ili kancera.

[0102] Kao što je ovde korišćeno, "kancer" se odnosi na fiziološko stanje kod subjekata koje karakteriše neregulisani ili disregulisani ćelijski rast ili smrt. Termin "kancer" uključuje čvrste tumore i tumore koji nastaju u krvi, bilo maligne ili benigne.

[0103] U poželjnom tehničkom rešenju, kancer je iz sledeće grupe: sitnoćelijski kancer pluća, nesitnoćelijski kancer pluća, kolorektalni kancer, melanom, karcinom bubrežnih ćelija, kancer glave i vrata, Hodžkinov limfom ili kancer bešike.

[0104] Ovaj pronalazak stoga stavlja na uvid javnosti ciklični dinukleotid sa formulom (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u lečenju bakterijske infekcije, virusne infekcije ili kancera.

[0105] Drugi cilj predmetnog pronalaska su ciklični dinukleotidi sa formulom (I) za upotrebu u lečenju patologije koja se može ublažiti indukcijom imunog odgovora preko STING puta.

[0106] Iako je moguće da se za upotrebu u terapiji, jedinjenje sa formulom (I) kao i njegove farmaceutski prihvatljive soli mogu administrirati kao samo jedinjenje, ono se češće predstavlja kao farmaceutska kompozicija.

[0107] Framaceutske kompozicije mogu biti predstavljene u oblicima jedinične doze koji sadrže unapred određenu količinu aktivnog sastojka po jediničnoj dozi. Poželjne kompozicije jedinične doze su one koje sadrže dnevnu dozu ili pod-dozu, ili njihovu odgovarajuću frakciju, aktivnog sastojka. Stoga se takve jedinične doze mogu davati više od jednom dnevno. Poželjne kompozicije jedinične doze su one koje sadrže dnevnu dozu ili pod-dozu (za administriranje više od jednom dnevno), kao što je gore navedeno, ili njihov odgovarajući deo, aktivnog sastojka.

[0108] Tipovi kancera koji mogu biti tretirani sa jedinjenjima ovog pronalaska uključuju, ali nisu ograničeni na, kancere mozga, kancere kože, kancere bešike, kancere jajnika, kancere dojke, kancere želuca, kancere pankreasa, kancere prostate, kolorektalne kancere, kancere krvi, kancere pluća i kancere kostiju. Primeri takvih tipova kancera uključuju neuroblastom, karcinom creva kao što je rektalni karcinom, karcinomi debelog creva, karcinom familijarna adenomatozna polipoza i nasledni nepolipozni kolorektalni kancer, karcinom jednjaka, labijalni karcinom, karcinom larinksa, nazofaringealni kanceri, kanceri usne duplje, karcinom pljuvačne žlezde, peritonealni kanceri, sarkom mekog tkiva, urotelijalni kanceri, karcinom znojnih žlezda, karcinom želuca, adenokarcinom, medularni karcinom tiroidne žlezde, papilarni karcinom tiroidne žlezde, renalni karcinom, karcinom parenhima bubrega, karcinom jajnika, karcinom grlića materice, karcinom tela materice, karcinom endometrijuma, karcinom pankreasa, karcinom prostate, karcinom testisa, kancere dojke uključujući HER2 negativni, urinarni karcinom, melanom, tumore mozga kao što je glioblastom, astrocitom, meningiom, meduloblastom i periferne neuroektodermalne tumore, Hodžkinov limfom, ne-Hodžkinov limfom, Burkitov limfom, akutnu limfatičnu leukemiju (ALL), hroničnu limfatičnu leukemiju (CLL), akutnu mijeloidnu leukemiju (AML), hroničnu mijeloidnu leukemiju (CML), T-ćelijski leukemijski limfom odraslih, difuzni limfom velikih B-ćelija (DLBCL), hepatocelularni karcinom, multipli mijelom, seminom, osteosarkom, hondrosarkom, kanceri analnog kanala, karcinom kore nadbubrežne žlezde, hordom, kancer jajovoda, gastrointestinalni stromalni tumori, mijeloproliferativne bolesti, mezoteliom, kanceri bilijarnog trakta, Juingov sarkom i drugi retki tipovi tumora.

[0109] Jedinjenja pronalaska su korisna za lečenje određenih tipova kancera od strane njih samih ili u kombinaciji ili ko-administriranju sa drugim terapijskim agensima ili terapijom zračenjem. Stoga, u jednom tehničkom rešenju, jedinjenja pronalaska su istovremeno administrirana sa terapijom zračenja ili sa drugim terapijskim agensom sa citostatskom ili antineoplastičnom aktivnošću. Pogodna jedinjenja za citostatsku hemoterapiju uključuju, ali nisu ograničena na (i) antimetabolite; (ii) agense za fregmentiranje DNK-a, (iii) agense za umrežavanje DNK-a, (iv) interkalirajuće agense (v) inhibitore sinteze proteina, (vi) topoizomeraza I otrove, kao što je kamptotecin ili topotekan; (vii) topoizomeraza II otrove, (viii) agense usmerene na mikrotubule, (ix) inhibitore kinaze (x) razne ispitivane agense (xi) hormone i (xii) antagoniste hormona. Smatra se da jedinjenja pronalaska mogu biti korisna u kombinaciji sa bilo kojim poznatim agensima koji spadaju u gornjih 12 klasa kao i svi budući agensi koji su trenutno u razvoju. Konkretno, smatra se da jedinjenja pronalaska mogu biti korisna u kombinaciji sa aktuelnim Standardima brige kao i sva ona koja će se razvijati u doglednoj budućnosti. Specifične doze i režimi doziranja bi se zasnivali na naprednom znanju lekara i opštoj veštini u oblasti.

[0110] Ovde su dalje data tehnička rešenja za lečenja gde se jedinjenja pronalaska administriraju sa jednim ili više imuno-onkoloških agenasa. Imuno-onkološki agensi koji se ovde koriste, takođe poznati kao imunoterapije protiv kancera, su efikasni da pojačaju, stimulišu, i/ili povećaju imune odgovore kod subjekta. U jednom aspektu, administriranje jedinjenja pronalaska sa imunoonkološkim agensom ima sinergijski efekat u inhibiciji rasta tumora.

[0111] U jednom aspektu, jedinjenje(a) pronalaska su sekvencijalno administrirana pre administriranja imunoonkološkog agensa. U drugom aspektu, jedinjenje(a) pronalaska su administrirana istovremeno sa imunološko-onkološki agens. U još jednom aspektu, jedinjenje(a) pronalaska su administrirana sekvencijalno nakon administriranja imuno-onkološkog agensa.

[0112] U drugom aspektu, jedinjenja pronalaska mogu biti zajednički formulisana sa imunoonkološkim agensom.

[0113] Imuno-onkološki agensi uključuju, na primer, lek malog molekula, antitelo, ili drugi biološki molekul. Primeri bioloških imuno-onkoloških agenasa uključuju, ali nisu ograničeni na, vakcine protiv kancera, antitela, i citokine. U jednom aspektu, antitelo je monoklonsko antitelo. U drugom aspektu, monoklonsko antitelo je humanizovano ili humano.

[0114] U jednom aspektu, imuno-onkološki agens je (i) agonist stimulativnog (uključujući kostimulativni) receptora ili (ii) antagonist inhibitornog (uključujući ko-inhibitorni) signala na T ćelijama, od kojih oba dovode do pojačavanja antigen-specifičnih T ćelijskih odgovora (često nazvani regulatorima imunoloških kontrolnih tačaka).

[0115] Neki od stimulativnih i inhibitornih molekula su članovi superfamilije imunoglobulina (IgSF). Jedna važna familija membranski vezanih liganda koji se vezuju za kostimulativne ili koinhibitorne receptore je B7 familija, koja uključuje B7-1, B7-2, B7-H1 (PD-L1), B7-DC (PD-L2), B7-H2 (ICOS-L), B7-H3, B7-H4, B7-H5 (VISTA), i B7-H6. Druga familija membranski vezanih liganda koji se vezuju za kostimulatorne ili koinhibitorne receptore je TNF familija molekula koja se vezuje za srodne članove familije TNF receptora, koja uključuje CD40 i CD40L, OX-40, OX-40L, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4-1BBL, CD137 (4-1BB), TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, APRIL, BCMA, LTβR, LIGHT, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, Limfotoksin α/TNFβ, TNFR2, TNFα, LTβR, Limfotoksin α 1β2, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY, NGFR.

[0116] U jednom aspektu, T ćelijski odgovori mogu biti stimulisani kombinacijom jedinjenja pronalaska i jednim ili više od (i) antagonista proteina koji inhibira T ćelijsku aktivaciju (npr., inhibitori imunološke kontrolne tačke) kao što je CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, TIM-3, Galektin 9, CEACAM-1, BTLA, CD69, Galektin-1, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, 2B4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM-1, i TIM-4, i (ii) agonista proteina koji stimuliše T ćelijsku aktivaciju kao što je B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, GITR, GITRL, CD70, CD27, CD40, DR3 i CD28H.

[0117] Drugi agensi koji mogu biti kombinovani sa jedinjenjima pronalaska za lečenje kancera uključuju antagoniste inhibitornih receptora na NK ćelijama ili agoniste aktivacionih receptora na NK ćelijama. Na primer, jedinjenja pronalaska mogu biti kombinovana sa antagonistima KIR-a, kao što je lirilumab.

[0118] Ipak drugi agensi za kombinovane terapije uključuju agense koji inhibiraju ili iscrpljuju makrofage ili monocite, uključujući ali ne ograničavajući se na CSF-1R antagoniste kao što su CSF-1R antagonistička antitela uključujući RG7155 (WO11/70024, WO11/107553, WO11/131407, WO13/87699, WO13/119716, WO13/132044) ili FPA-008 (WO11/140249; WO13169264; WO14/036357).

[0119] U drugom aspektu, jedinjenja pronalaska mogu biti korišćena sa jednim ili sa više agonističkih agenasa koji vezuju pozitivne kostimulatorne receptore, blokirajućih agenasa koji prigušuju signalizaciju preko inhibitornih receptora, antagonista, i jednim ili više agenasa koji sistemski povećavaju učestalost antitumorskih T ćelija, agenasa koji prevazilaze različite imune supresivne puteve unutar tumorskog mikrookruženja (npr., blokiraju inhibitorno angažovanje receptora (npr., PD-L1/PD-1 interakcije), iscrpljuju ili inhibiraju Treg (npr., korišćenjem anti-CD25 monoklonskog antitela (npr., daklizumaba) ili pomoću ex vivo iscrpljivanja anti-CD25 zrnaca), inhibiraju metaboličke enzime kao što je IDO, ili preokreću/sprečavaju T ćelijsku anergiju ili iscpljenost) i agenasa koji pokreću urođenu imunološku aktivaciju i/ili inflamaciju na tumorskim mestima.

[0120] U jednom aspektu, imuno-onkološki agens je CTLA-4 antagonist, kao što je antagonističko CTLA-4 antitelo. Pogodna CTLA-4 antitela uključuju, na primer, YERVOY (ipilimumab) ili tremelimumab.

[0121] U drugom aspektu, imuno-onkološki agens je PD-1 antagonist, kao što je antagonističko PD-1 antitelo. PD-1 antitelo može biti odabrano od Opdivo (nivolumab), Keytruda (pembrolizumab), PDR001 (Novartis; videti WO2015/112900), MEDI-0680 (AMP-514) (AstraZeneca; videti WO2012/145493), REGN-2810 (Sanofi/Regeneron; videti WO2015/112800), JS001 (Taizhou Junshi), BGB-A317 (Beigene; videti WO2015/35606), INCSHR1210 (SHR-1210) (Incyte/Jiangsu Hengrui Medicine; videti WO2015/085847), TSR-042 (ANB001) (Tesara/AnaptysBio; videti WO2014/179664), GLS-010 (Wuxi/Harbin Gloria Pharmaceuticals), AM-0001 (Armo/Ligand), ili STI-1110 (Sorrento; videti WO2014/194302). Imuno-onkološki agens može takođe da uključi pidilizumab (CT-011), iako je njegova specifičnost za vezivanje PD-1 dovedena u pitanje. Drugi pristup za ciljanje PD-1 receptora je rekombinanti protein sastavljen od ekstracelularnog domena PD-L2 (B7-DC) spojenog sa Fc delom IgG1, nazvan AMP-224 u jednom aspektu,

[0122] U drugom aspektu, imuno-onkološki agens je PD-L1 antagonist, kao što je antagonističko PD-L1 antitelo. PD-L1 antitelo može biti odabrano od Tecentriq (atezolizumab), durvalumab, avelumab, STI-1014 (Sorrento; videti WO2013/181634), ili CX-072 (CytomX; videti WO2016/149201)..

[0123] U drugom aspektu, imuno-onkološki agens je LAG-3 antagonist, kao što je antagonističko LAG-3 antitelo. Pogodna LAG3 antitela, na primer, BMS-986016 (WO10/19570, WO14/08218), ili IMP-731 ili IMP-321 (WO08/132601, WO09/44273).

[0124] U drugom aspektu, imuno-onkološki agens je CD137 (4-1BB) agonist, kao što je agonističko CD137 antitelo. Pogodna CD137 antitela uključuju, na primer, urelumab i PF-05082566 (WO12/32433).

[0125] U drugom aspektu, imuno-onkološki agens je GITR agonist, kao što je agonističko GITR antitelo. Pogodna GITR antitela uključuju, na primer, BMS-986153, BMS-986156, TRX-518 (WO06/105021, WO09/009116) i MK-4166 (WO11/028683).

[0126] U drugom aspektu, imuno-onkološki agens je IDO antagonist. Pogodni IDO antagonisti uključuju, na primer, INCB-024360

(WO2006/122150, WO07/75598, WO08/36653, WO08/36642), indoksimod, ili NLG-919 (WO09/73620, WO09/1156652, WO11/56652, WO12/142237).

[0127] U drugom aspektu, imuno-onkološki agens je OX40 agonist, kao što je agonističko OX40 antitelo. Pogodna OX40 antitela uključuju, na primer, MEDI-6383 ili MEDI-6469.

[0128] U drugom aspektu, imuno-onkološki agens je OX40L antagonist, kao što je antagonističko OX40 antitelo. Pogodni OX40L antagonisti uključuju, na primer, RG-7888 (WO06/029879).

[0129] U drugom aspektu, imuno-onkološki agens je CD40 agonist, kao što je agonističko CD40 antitelo. U još jednom tehničkom rešenju, imuno-onkološki agens je CD40 antagonist, kao što je antagonističko CD40 antitelo. Pogodna CD40 antitela uključuju, na primer, lukatumumab ili dacetuzumab.

[0130] U drugom aspektu, imuno-onkološki agens je CD27 agonist, kao što je agonističko CD27 antitelo. Odgovarajuća CD27 antitela uključuju, na primer, varlilumab.

[0131] U drugom aspektu, imuno-onkološki agens je MGA271 (do B7H3) (WO11/109400).

[0132] Kombinovana terapija je namenjena da obuhvati administriranje ovih terapijskih agenasa na sekvencijalni način, odnosno, pri čemu se svaki terapijski agens administrira u različito vreme, kao i administriranje ovih terapijskih agenasa, ili barem dva terapijska agensa, na suštinski simultani način. Suštinski istovremeno administriranje se može postići, na primer, administriranjem subjektu jednog doznog oblika koji ima fiksni odnos svakog terapijskog agensa ili u višestrukim, pojedinačnim doznim oblicima za svaki od terapijskih agenasa. Sekvencijalna ili suštinski istovremena administracija svakog terapijskog agensa može se izvršiti bilo kojom odgovarajućom rutom, ali nije ograničena na, oralne rute, intravenske rute, intratumoralne rute, intramuskularne rute, i direktnu apsorpciju kroz tkiva sluzokože. Terapijski agensi mogu biti administrirani istom rutom ili različitim rutama. Na primer, prvi terapijski agens odabrane kombinacije može biti administriran intravenskim ubrizgavanjem dok drugi terapijski agensi kombinacije mogu biti administrirani oralno. Alternativno, na primer, svi terapijski agensi mogu biti administrirani oralno ili svi terapijski agensi mogu biti administrirani intravenskim ubrizgavanjem. Kombinovana terapija takođe može da obuhvati administriranje terapijskih agenasa kao što je opisano iznad u daljoj kombinaciji sa drugim biološkim aktivnim sastojcima i terapijama bez lekova (npr., operacija ili tretman zračenjem.) Gde kombinovana terapija dalje obuhvata tretman bez lekova, tretman bez lekova se može sprovoditi u bilo koje pogodno vreme pod uslovom da se postiže blagotvorno dejstvo od zajedničkog dejstva kombinacije terapijskih agenasa i tretmanom bez lekova. Na primer, u odgovarajućim slučajevima, blagotvorno dejstvo se i dalje postiže kada se tretman bez lekova privremeno ukloni iz administriranja terapijskih agenasa, možda danima ili čak nedeljama.

[0133] Predmetni pronalazak može da bude napravljen u drugim specifičnim oblicima. Ovaj pronalazak obuhvata sve kombinacije poželjnih aspekata pronalaska koji su ovde navedeni. Podrazumeva se da se bilo koje i sva tehnička rešenja ovog pronalaska mogu uzeti zajedno sa bilo kojim drugim tehničkim rešenjem ili tehničkim rešenjima da se opišu dodatna tehnička rešenja. Takođe se podrazumeva da je svaki pojedinačni element tehničkog rešenja njegovo sopstveno nezavisno tehničko rešenje. Štaviše, bilo koji element tehničkog rešenja treba da se kombinuje sa bilo kojim i svim ostalim elementima iz bilo kog tehničkog rešenja da bi se opisalo dodatno tehničko rešenje.

FARMACEUTSKE KOMPOZICIJE I DOZIRANJE

[0134] Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutski prihvatljive kompozicije koje sadrže terapijski efikasnu količinu jednog ili više jedinjenja sa formulom I, formulisanih zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača (aditiva) i/ili razblaživača, i opciono, jedan ili više dodatnih terapijskih agenasa opisanih iznad. Kao što je opisano u detaljima ispod, farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti specijalno formulisane za administriranje u čvrstom ili tečnom obliku, uključujući one prilagođene za sledeće: (1) oralno administriranje, na primer, drenčevi (vodeni ili nevodeni rastvori ili suspenzije), tablete, npr., one namenjene za bukalnu, sublingvalnu, i sistemsku apsorpciju, bolusi, praškovi, granule, paste za primenu na jezik; (2) parenteralno administriranje, na primer, subkutanom, intramuskularnom, intratumoralnom, intravenskom ili epiduralnom injekcijom kao, na primer, sterilni rastvor ili suspenzija, ili formulacija sa produženim oslobađanjem; (3) topikalnu primenu, na primer, kao krema, mast, ili flaster sa kontrolisanim oslobađanjem ili sprej nanet na kožu; ili intratumoralno.

[0135] Izraz "farmaceutski prihvatljiv" se ovde koristi da se odnosi na ona jedinjenja, materijale, kompozicije, i/ili dozne oblike koji su, unutar obima zdrave medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora, ili drugog problema ili komplikacije, srazmerno razumnom odnosu koristi/rizika.

[0136] Izraz "farmaceutski prihvatljiv nosač" kao što je ovde korišćeno odnosi se na farmaceutski prihvatljiv materijal, kompoziciju ili nosač, kao što su tečna ili čvrsta sredstva za punjenje, razblaživač, ekscipijens, pomoćna sredstva za proizvodnju (npr., lubrikant, talk magnezijum, kalcijum ili cink stearat, ili sterična kiselina), ili materijal za kapsuliranje rastvarača, uključen u prenošenje ili transport predmetnog jedinjenja od jednog organa, ili dela tela, do drugog organa, ili dela tela. Svaki nosač mora biti "prihvatljiv" u smislu da je kompatibilan sa ostalim sastojcima formulacije i da nije štetan za pacijenta.

[0137] Formulacije ovog pronalaska uključuju one pogodne za oralno, intratumoralno, intratumoralo, nazalno, topikalno (uključujući bukalno i sublingvalno), rektalno, vaginalno i/ili parenteralno administriranje. Formulacije se mogu prikladno predstaviti u obliku jedinične doze i mogu se pripremiti bilo kojim postupcima dobro poznatim u farmaciji. Količina aktivnog sastojka koja može biti kombinovana sa materijalom nosača za proizvodnju jednog doznog oblika variraće u zavisnosti od pacijenta koji se leči i posebnog načina administriranja. Količina aktivnog sastojka koja se može kombinovati sa materijalom nosača za proizvodnju jednog doznog oblika generalno će biti ona količina jedinjenja koja proizvodi terapijski efekat. Generalno, od sto posto, ova količina će se kretati od oko 0.1 procenata do oko devedesetdevet procenata aktivnog sastojka, poželjno od oko 5 procenata do oko 70 procenata, najpoželjnije od oko 10 procenata do oko 30 percenta.

[0138] U određenom tehničkom rešenju, formulacija predmetnog pronalaska sadrži ekscipijens odabran iz grupe koja se sastoji od ciklodekstrina, celuloze, lipozoma, miceloformirajućih agenasa, npr., žučne kiseline, i polimerni nosači, npr., poliestri i polianhidridi; i jedinjenje predmetnog pronalaska. U određenim tehničkim rešenjima, gorepomenuta formulacija čini oralno biodostupnim jedinjenje iz ovog pronalaska.

[0139] Postupci pripremanja ovih formulacija ili kompozicija uključuju korak dovođenja u vezu jedinjenja iz predmetnog pronalaska sa nosačem i, opciono, sa jednim ili više pomoćnih sastojaka. Generalno, formulacije se pripremaju ujednačenim i bliskim dovođenjem u vezu jedinjenja predmetnog pronalaska sa tečnim nosačima, ili fino usitnjenim čvrstim nosačima, ili sa oba, i zatim, ako je potrebno, oblikovanjem proizvoda.

[0140] Formulacije pronalaska pogodne za oralno administriranje mogu biti u obliku kapsula, kesica, pilula, tableta, lozenga (koristeći aromatizovane osnove, obično saharozu i akaciju ili tragakant), praškova, granula, ili kao rastvor ili suspenzija u vodenoj ili nevodenoj tečnosti, ili kao tečna emulzija ulje u vodi ili voda u ulju, ili kao eliksir ili sirup, ili pastile (koristeći inertnu bazu, kao što su želatin i glicerin, ili saharoza i akacija) i/ili kao sredstvo za ispiranje usta i slično, od kojih svaki sadrži unapred određenu količinu jedinjenja iz ovog pronalaska kao aktivni sastojak. Jedinjenje predmetnog pronalaska može se takođe administrirati kao bolus, elektuar ili pasta.

[0141] Farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska pogodne za parenteralno administriranje sadrže jedno ili više jedinjenja pronalaska u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski pihvatljivih sterilnih izotoničnih vodenih ili nevodenih rastvora, disperzija, suspenzija ili emulzija, ili sterilnih praškova koji se mogu rekonstituisati u sterilne rastvore za injekcije ili disperzije neposredno pre upotrebe, a koji mogu sadržati šećere, alkohole, antioksidanse, pufere, bakteriostatike, rastvorene materije koje čine formulaciju izotoničnom sa krvlju namenjenog primaoca ili agense za suspendovanje ili zgušnjavanje.

[0142] U nekim slučajevima, da bi se produžio efekat leka, poželjno je usporiti apsorpciju leka iz subkutane, intratumoralne ili intramuskularne injekcije. Ovo se može postići upotrebom tečne suspenzije kristalnog ili amorfnog materijala koji ima slabu rastvorljivost u vodi. Brzina apsorpcije leka tada zavisi od njegove brzine rastvaranja koja, zauzvrat, može zavisiti od veličine kristala i kristalnog oblika. Alternativno, odložena apsorpcija parenteralno administriranog oblika leka postiže se rastvaranjem ili suspendovanjem leka u uljanom nosaču.

[0143] Depo injekcioni oblici napravljeni su formiranjem mikrokapsuliranih matrica predmetnih jedinjenja u biorazgradivim polimerima kao što je polilaktid-poliglikolid. U zavisnosti od odnosa leka prema polimeru, i prirode određenog polimera koji se koristi, brzina oslobađanja leka se može kontrolisati. Primeri drugih biorazgradivih polimera uključuju poli(ortoestre) i poli(anhidride). Depo injektabilne formulacije su takođe pripremljene hvatanjem leka u lipozome ili mikroemulzije koje su kompatibilne sa telesnim tkivom.

[0144] Kada su jedinjenja predmetnog pronalaska administrirana kao farmaceutski proizvodi, ljudima i životinjama, mogu se davati per se ili kao farmaceutska kompozicija koja sadrži, na primer, 0.1 do 99% (poželjnije, 10 do 30%) aktivnog sastojka u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.

[0145] Bez obzira na odabranu rutu administriranja, jedinjenja predmetnog pronalaska, koja se mogu koristiti u pogodnom hidratisanom obliku, i/ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska, formulisani su u farmaceutski prihvatljive dozne oblike pomoću konvencionalnih postupaka koji su poznati stručnjacima u ovoj oblasti.

[0146] Stvarni nivoi doze aktivnih sastojaka u farmaceutskim kompozicijama ovog pronalaska mogu varirati tako da se dobije količina aktivnog sastojka koja je efikasna za postizanje željenog terapijskog odgovora za određenog pacijenta, kompozicija, i način administriranja, a da nije toksičan za pacijenta.

[0147] Odabrani nivo doze zavisiće od niza faktora uključujući aktivnost određenog jedinjenja iz ovog pronalaska koje se koristi, ili estra, soli ili njegovog amida, rutu administriranja, vreme administriranja, brzinu izlučivanja ili metabolizam određenog jedinjenja koje se koristi, brzinu i obim apsorpcije, trajanje tretmana, druge lekove, jedinjenja i/ili materijale korišćene u kombinaciji sa određenim upotrebljenim jedinjenjem, starost, pol, težinu, stanje, opšte zdravlje i prethodnu medicinsku istoriju pacijenta koji se leči, i slične faktore koji su poznati u medicinskim naukama.

[0148] Lekar ili veterinar koji ima uobičajene veštine u ovoj oblasti može lako da odredi i prepiše efikasnu količinu potrebne farmaceutske kompozicije. Na primer, lekar ili veterinar bi mogli da započnu sa dozama jedinjenja pronalaska koja se koriste u farmaceutskoj kompoziciji na nivoima nižim od potrebnih za postizanje željenog terapijskog efekta i postepeno povećati dozu dok se ne postigne željeni efekat.

[0149] Generalno, pogodna dnevna doza jedinjenja pronalaska biće ona količina jedinjenja koja je najniža doza efikasna da proizvede terapijski efekat. Takva efikasna doza će generalno zavisiti od gore opisanih faktora. Generalno, oralne, intravenske, intracerebroventrikularne i subkutane doze jedinjenja ovog pronalaska za pacijenta će se kretati od oko 0.01 do oko 50 mg po kilogramu telesne težine dnevno.

[0150] Iako je moguće da se jedinjenje iz ovog pronalaska daje samostalno, poželjno je da se jedinjenje daje kao farmaceutska formulacija (kompozicija).

DEFINICIJE

[0151] Osim ako nije drugačije navedeno ovde, reference u jednini mogu takođe uključivati množinu. Na primer, u originalnom tekstu engleski članovi "a" i "an" mogu da se odnose ili na jedan, ili na jedan ili više.

[0152] Ukoliko nije drugačije naznačeno, bilo koji heteroatom sa nepopunjenim valencama pretpostavlja se da ima atome vodonika dovoljne da popune valence.

[0153] U celoj specifikaciji i priloženim patentnim zahtevima, data hemijska formula ili naziv obuhvatiće sve stereo i optičke izomere i njihove racemate tamo gde takvi izomeri postoje. Sve dok nije drugačije naznačeno, svi hiralni (enantiomerni i Dijastereoizomerni) i racemski oblici su u okviru pronalaska. Mnogi geometrijski izomeri C=C dvostrukih veza, C=N dvostrukih veza, sistema prstenova, i slično mogu takođe biti prisutni u jedinjenjima, i svi takvi stabilni izomeri su razmatrani u ovom pronalasku. Cis- i trans- (ili E- i Z-) geometrijski izomeri jedinjenja predmetnog pronalaska su opisani i mogu biti izolovani kao smeša izomera ili kao odvojeni izomerni oblici. Ova jedinjenja mogu biti izolovanana u optički aktivnim ili racemskim oblicima. Optički aktivni oblici mogu biti pripremljeni razdvajanjem racemskih oblika ili sintezom iz optički aktivnih početnih materijala. Svi procesi koji se koriste za dobijanje jedinjenja ovog pronalaska i intermedijera koji su u njemu napravljeni smatraju se delom ovog pronalaska. Kada se pripremaju enantiomerni ili dijastereoizomerni proizvodi, oni se mogu razdvojiti konvencionalnim postupcima, na primer, hromatografijom ili frakcionom kristalizacijom. U zavisnosti od uslova procesa krajnji proizvodi ovog pronalaska dobijeni su ili u slobodnom (neutralnom) ili u obliku soli. I slobodni oblik i soli ovih krajnjih proizvoda su u okviru pronalaska. Ako se tako želi, jedan oblik jedinjenja može biti pretvoren u drugi oblik. Slobodna baza ili kiselina mogu se pretvoriti u so; so se može pretvoriti u slobodno jedinjenje ili drugu so; smeša izomernih jedinjenja ovog pronalaska može se razdvojiti na pojedinačne izomere. Jedinjenja predmetnog pronalaska, slobodni oblik i njihove soli, mogu postojati u više tautomernih oblika, u kojima su atomi vodonika transponovani u druge delove molekula i hemijske veze između atoma su posledično preuređene. Trebalo bi razumeti da su svi tautomerni oblici, u meri u kojoj mogu da postoje, uključeni u pronalazak.

[0154] Radi preglednosti i u skladu sa standardnom konvencijom u stanju tehnike, simbol

je korišćen u formulama i tabelama da se prikaže veza koja je tačka vezivanja dela ili supstituenta za jezgro/nukleus strukture.

[0155] Dodatno, radi preglednosti, gde supstituent ima crticu (-) koja nije između dva slova ili simbola; ovo se koristi za označavanje tačke vezivanja za supstituent. Na primer, -CONH2je vezan preko atoma ugljenika.

[0156] Dodatno, radi preglednosti, kada supstituent nije prikazan na kraju pune linije, to ukazuje da postoji metil (CH3) grupa vezana za vezu.

[0157] Dodatno, fosforotioat grupa može se nacrtati kao

[0158] Termin "kontra jon" koristi se za predstavljanje negativno naelektrisanih vrsta kao što su hlorid, bromid, hidroksid, acetat i sulfat ili pozitivno naelektrisane vrste kao što su natrijum (Na+), kalijum (K+), amonijum (RnNHm+ gde n=0-4 i m=0-4) i slično.

[0159] Termin "grupa za povlačenje elektrona" (EWG) odnosi se na supstituent koji polarizuje vezu, privlačeći elektronsku gustinu prema sebi i dalje od drugih vezanih atoma. Primeri EWG uključuju, ali nisu ograničeni na, CF3, CF2CF3, CN, halogen, haloalkil, NO2, sulfon, sulfoksid, estar, sulfonamid, karboksamid, alkoksi, alkoksietar, alkenil, alkinil, OH, C(O)alkil, CO2H, fenil, heteroaril, -O-fenil, i -O-heteroaril. Poželjni primeri EWG uključuju, ali nisu ograničeni na, CF3, CF2CF3, CN, halogen, SO2(C1-4alkil), CONH(C1-4alkil), CON(C1-4alkil)2, i heteroaril. Poželjniji primeri EWG uključuju, ali nisu ograničeni na, CF3i CN.

[0160] Kao što je ovde korišćeno, termin "zaštitna grupa za amin" označava bilo koju grupu poznatu u stanju tehnike organske sinteze za zaštitu aminskih grupa koja je stabilna na estarsko redukciono sredstvo, disupstituisani hidrazin, R4-M i R7-M, nukleofil, agens za redukciju hidrazina, aktivator, jaku bazu, zaklonjenu amin bazu i agens za ciklizaciju. Takve zaštitne grupe za amin koje odgovaraju ovim kriterijumima uključuju one navedene u Wuts, P. G. M. i Greene, T.W. Protecting Groups in Organic Synthesis, 4. izdanje, Wiley (2007) i The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, tom 3, Academic Press, Njujork (1981), čije je stvaljanje na uvid javnosti ovim uključeno kao referenca. Primeri zaštitnih grupa amina uključuju, ali nisu ograničeni na, sledeće: (1) acil tipovi kao što su formil, trifluoroacetil, ftalil, i p-toluensulfonil; (2) aromatične vrste karbamata kao što je benziloksikarbonil (Cbz) i supstituisani benziloksikarbonili, 1-(p-bifenil)-1-metiletoksikarbonil, i 9-fluorenilmetiloksikarbonil (Fmoc); (3) alifatične vrste karbamata kao što je terc-butiloksikarbonil (Boc), etoksikarbonil, diizopropilmetoksikarbonil, i aliloksikarbonil; (4) ciklične vrste alkil karbamata kao što su ciklopentiloksikarbonil i adamantiloksikarbonil; (5) alkil tipovi kao što su trifenilmetil i benzil; (6) trialkilsilan kao što je trimetilsilan; (7) tipovi koji sadrže tiol kao što su feniltiokarbonil i ditiasukcinoil; i (8) alkil tipovi kao što su trifenilmetil, metil, i benzil; i supstituisani alkil tipovi kao što su 2,2,2-trihloroetil, 2-feniletil, i t-butil; i trialkilsilan tipovi kao što je trimetilsilan.

[0161] Kao što je ovde navedeno, termin "supstituisan" označava da je barem jedan atom vodonika zamenjen sa nevodoničnom grupom, pod uslovom da su održane normalne valence i da supstituicija rezultira stabilnim jedinjenjem. Dvostruke veze u prstenu, kao što je ovde korišćeno, su dvostruke veze koje su formirane između dva susedna atoma u prstenu (npr., C=C, C=N, ili N=N).

[0162] U slučajevima gde postoje atomi azota (npr., amini) na jedinjenjima predmetnog pronalaska, oni mogu biti pretvoreni u N-okside tretiranjem sa oksidacionim agensom (npr., mCPBA i/ili vodonik peroksid) da se dobiju druga jedinjena ovog pronalaska. Stoga, atomi azota koji su prikazani i za koje se traži zaštita smatra se da pokrivaju i prikazani azot i njegov N-oksid (N→O) derivat.

[0163] Kada se bilo koja promenljiva pojavljuje više puta u bilo kom konstituentu ili formuli za jedinjenje, njena definicija pri svakom pojavljivanju je nezavisna od njene definicije pri svakom drugom pojavljivanju. Stoga, na primer, ako se pokaže da je grupa supstituisana sa 0-3 R, onda navedena grupa može opciono da bude supstituisana sa do tri R grupe, i pri svakom pojavljivanju R je odabrano nezavisno od definicije R. Takođe, kombinacije supstituenata i/ili varijabli su dozvoljene samo ako takve kombinacije dovode do stabilnih jedinjenja.

[0164] Kada se pokaže da veza sa supstituentom prelazi vezu koja pokazuje dva atoma u prstenu, onda takav supstitent može biti vezan za bilo koji atom na prstenu. Kada je supstitent naveden bez navođenja atoma u kome je takav supstituent vezan za ostatak jedinjenja date formule, onda takav supstituent može biti vezan preko bilo kog atoma u takvom supstituentu. Kombinacije supstituenata i/ili varijabli su dozvoljene samo ako takve kombinacije rezultiraju stabilnim jedinjenjima.

[0165] Predviđeno je da ovaj predmetni pronalazak obuhvati sve izotope atoma koji se javljaju u ovim jedinjenjima. Izotopi uključuju one atome koji imaju isti atomski broj ali različite masene brojeve. Kao opšti primer i bez ograničenja, izotopi vodonika uključuju deuterijum i tricijum. Izotopi vodonika se mogu označiti kao<1>H (vodonik),<2>H (deuterijum) i<3>H (tricijum). Takođe se obično označavaju kao D za deuterijum i T za tricijum. U prijavi, CD3označava metil grupu u kojoj su svi atomi vodonika deuterijum. Izotopi ugljenika uključuju<13>C i<14>C. Izotopom obeležena jedinjenja pronalaska se generalno mogu pripremiti konvencionalnim tehnikama koje su poznate stručnjacima iz oblasti ili pomoću procesa koji su analogni onima koji su ovde opisani, korišćenjem odgovarajućeg izotopom-obeleženog reagensa umesto drugačije korišćenog neobeleženog reagensa.

[0166] Kao što je ovde korišćeno, "farmaceutski prihvatljive soli" odnosi se na derivate jedinjenja koja su stavljena na uvid javnosti pri čemu je osnovno jedinjenje modifikovano pravljenjem njihovih kiselih ili baznih soli. Primeri farmaceutski prihvatljive soli uključuju, ali nisu ograničeni na, soli mineralnih ili organskih kiselina sa baznim grupama kao što su amini; i alkalne ili organske soli kiselih grupa kao što su karboksilne kiseline. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju konvencionalne netoksične soli ili formirane kvaternerne amonijumove soli osnovnog jedinjenja, na primer, od netoksičnih neorganskih ili organskih kiselina. Na primer, takve konvencionalne netoksične soli uključuju one izvedene iz neorganskih kiselina kao što su hlorovodonična, bromovodonična, sumporna, sulfaminska, fosforna, i azotna; i soli pripremljene od organskih kiselina kao što su sirćetna, propionska, sukcinska, glikolna, stearinska, mlečna, jabučna, vinska, limunska, askorbinska, pamoična kiselina, maleinska, hidroksimaleinska, fenilsirćetna, glutaminska, benzoeva, salicilna, sulfanilina, 2-acetoksibenzoeva, fumarna, toluensulfonska, metansulfonska, etan disulfonska, oksalna, i izetionska, i slično.

[0167] Farmaceutski prihvatljive soli predmetnog pronalaska mogu biti sintetisane konvencionalnim hemijskim postupcima od osnovnog jedinjenja koje sadrži bazni ili kiseli deo. Generalno, takve soli se mogu pripremiti reakcijom slobodnih kiselinskih ili baznih oblika ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze ili kiseline u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u smeši to dvoje; generalno, nevodeni mediji poput etra, etil acetata, etanola, izopropanola, ili acetonitrila su poželjni. Lista odgovarajućih soli je pronađena u Remington-u: The Science and Practice of Pharmacy, 22. izdanje, Allen, L. V. Jr., Ed.; Pharmaceutical Press, London, UK (2012), čije stavljanje na uvidu javnosti je ovim inkorporirano referencom.

[0168] Dodatno, jedinjenja sa formulom I mogu imati oblike prolekova. Bilo koje jedinjenje koje će biti pretvoreno in vivo da se dobije bioaktivni agens (tj., jedinjenje sa formulom I) je prolek. Različiti oblici prolekova su veoma dobro poznati u stanju tehnike. Za primere takvih derivata prolekova, videti:

a) Bundgaard, H., izd., Design of Prodrugs, Elsevier (1985), i Widder, K. i saradnici, izd., Methods in Enzymology, 112:309-396, Academic Press (1985);

b) Bundgaard, H., poglavlje 5, "Design and Application of Prodrugs," A Textbook of Drug Design and Development, str. 113-191, Krosgaard-Larsen, P. i saradnici, izd., Harwood Academic Publishers (1991);

c) Bundgaard, H., Adv. Drug Deliv. Rev., 8:1-38 (1992);

d) Bundgaard, H. i saradnici, J. Pharm. Sci., 77:285 (1988);

e) Kakeya, N. i saradnici, Chem. Pharm. Bull., 32:692 (1984); i

f) Rautio, J (Editor). Prodrugs and Targeted Delivery (Methods and Principles in Medicinal Chemistry), tom 47, Wiley-VCH, 2011.

[0169] Jedinjenja koja sadrže karboksi grupu mogu da formiraju estre koji se mogu fiziološki hidrolizovati koji služe kao prolekovi tako što se hidrolizuju da se dobiju jedinjenja formula I per se. Takvi prolekovi su poželjno administrirani oralno budući da se hidroliza u mnogim slučajevima dešava uglavnom pod uticajem digestivnih enzima. Parenteralno administriranje se može koristiti tamo gde je estar sam po sebi aktivan per se, ili u onim slučajevima kada se u krvi javlja hidroliza. Primeri estara jedinjenja sa formulom I koji se mogu fiziološki hidrolizovati uključuju C1-6alkil, C1-6alkilbenzil, 4-metoksibenzil, indanil, ftalil, metoksimetil, C1-6alkanoiloksi-C1-6alkil (npr., acetoksimetil, pivaloiloksimetil ili propioniloksimetil), C1-6alkoksikarboniloksi-C1-6alkil (npr., metoksikarbonil-oksimetil ili etoksikarboniloksimetil, gliciloksimetil, fenilgliciloksimetil, (5-metil-2-okso-1,3-dioksolen-4-il)-metil), i drugi dobro poznati fiziološki hidrolizabilni estri koji se koriste, na primer, u oblasti penicilina i cefalosporina. Takvi estri mogu biti pripremljeni konvencionalnim tehnikama koje su poznate u stanju tehnike.

[0170] Pripremanje prolekova je dobro poznato u stanju tehnike i opisano u, na primer, King, F.D., izd., Medicinal Chemistry: Principles and Practice, The Royal Society of Chemistry, Kembridž, UK (2. izdanje, reprodukovano, 2006); Testa, B. i saradnici, Hidrolysis in Drug and Prodrug Metabolism. Chemistry, Biochemistry and Enzymology, VCHA and Wiley-VCH, Cirih, Švajcarska (2003); Wermuth, C.G., izd., The Practice of Medicinal Chemistry, 3. izdanje, Academic Press, San Dijego, CA (2008).

[0171] Termin "solvat" označava fizičku povezanost jedinjenja ovog pronalaska sa jednim ili više molekula rastvarača, bilo organskog ili neorganskog. Ova fizička povezanost uključuje vodoničnu vezu. U određenim slučajevima, solvat će biti sposoban za izolaciju, na primer kada jedan ili više molekula rastvarača inkorporirano u kristalnu rešetku kristalne čvrste supstance. Molekuli rastvarača u solvatu mogu biti prisutni u regularnom rasporedu i/ili neuređenom rasporedu. Solvat može da sadrži ili stehiometrijsku ili nestehiometrijsku količinu molekula rastvarača. "Solvat" obuhvata i solvate u fazi rastvora i izolovane solvate. Primeri solvata uključuju, ali nisu ograničeni na, hidrate, etanolate, metanolate, i izopropanolate. Postupci solvatacije su generalno poznati u stanju tehnike.

[0172] Kao što je ovde korišćeno, termin "pacijent" odnosi se na organizme koji se tretiraju postupcima ovog pronalaska. Takvi organizmi poželjno uključuju, ali nisu ograničeni na, sisare (npr., murine, majmune, kopitare, goveda, svinje, pse, mačke, i slično), i najpoželjnije se odnosi na ljude.

[0173] Kao što je ovde korišćeno, termin "efikasna količina" označava onu količinu leka ili farmaceutskog agensa, tj., jedinjenja pronalaska, koja će izazvati biološki ili medicinski odgovor tkiva, sistema, životinje ili čoveka koji se traži, na primer, od strane istraživača ili kliničara. Štaviše, termin "terapijski efikasna količina" označava bilo koju količinu koja, u poređenju sa odgovarajućim subjektom koji nije primio takvu količinu, rezultira u poboljšanom lečenju, iscelenju, prevenciji, ili poboljšanju bolesti, poremećaja, ili neželjenog efekta, ili smanjenju stope napredovanja bolesti ili poremećaja. Efikasna količina može biti administrirana u jednoj ili više administracija, primena ili doza i nije predviđeno da bude ograničena na određenu formulaciju ili put administriranja. Termin takođe uključuje u okviru svog delokruga količine efikasne za poboljšanje normalne fiziološke funkcije

[0174] Kao što je ovde korišćeno, termin "tretiranje" uključuje bilo koji efekat, npr., ublažavanje, smanjenje, moduliranje, poboljšanje ili eliminisanje, što dovodi do poboljšanja stanja, bolesti, poremećaja, i slično, ili ublažavanja njihovog simptoma.

[0175] Kao što je ovde korišćeno, termin "farmaceutska kompozicija" odnosi se na kombinaciju aktivnog agensa sa nosačem, inertnim ili aktivnim, čineći kompoziciju posebno pogodnom za dijagnostičku ili terapijsku primenu in vivo ili ex vivo.

[0176] Primeri baza uključuju, ali nisu ograničeni na, hidrokside alkalnih metala (npr., natrijuma), zemnoalkalnih metala (npr., magnezijuma), hidrokside, amonijak, i jedinjenja sa formulom NW4<+>, gde W je C1-4alkil, i slično.

[0177] Za terapijsku upotrebu, soli jedinjenja predmetnog pronalaska smatraju se farmaceutski prihvatljivim. Međutim, soli kiselina i baza koje nisu farmaceutski prihvatljive mogu takođe da nađu primenu, na primer, u pripremanju ili prečišćavanje farmaceutski prihvatljivih jedinjenja.

POSTUPCI PRIPREMANJA

[0178] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti pripremljena na više načina koji su dobro poznati stručnjaku iz oblasti organske sinteze. Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti sintetisana korišćenjem postupaka opisanih ispod, zajedno sa sintetičkim postupcima poznatim u stanju tehnike sintetičke organske hemije, ili njegove varijacije kao što je procenjeno od strane stručnjaka iz oblasti. Poželjni postupci uključuju, ali nisu ograničeni na, one koji su opisane ispod. Sve ovde citirane reference su ovde uključene kao referenca u celosti.

[0179] Jedinjenja ovog pronalaska mogu biti pripremljena korišćenjem reakcija i tehnika koje su opisane u ovom odeljku. Reakcije su izvedene u rastvaračima koji odgovaraju upotrebljenim reagensima i materijalima i pogodni su za transformacije koje se vrše. Takođe, u opisu sintetičkih postupaka koji su opisani ispod, treba razumeti da svi predloženi uslovi reakcije, uključujući izbor rastvarača, atmosferu reakcije, temperaturu reakcije, trajanje eksperimenta i procedure dorade, su izabrani da budu uslovi standardni za tu reakciju, koje bi lako trebalo da prepozna stručnjak iz oblasti. Stručnjak iz oblasti organske sinteze razume da funkcionalnost prisutna na različitim delovima molekula mora da bude kompatibilna sa predloženim reagensima i reakcijama. Takva ograničenja na supstituente koji su kompatibilni sa uslovima reakcije biće lako očigledni stručnjaku iz oblasti i alternativni postupci moraju onda biti korišćeni. Ovo će ponekad zahtevati procenu da se modifikuje red sintetičkih koraka ili da se izabere jedna određena shema procesa preko druge da bi se dobilo željeno jedinjenje pronalaska. Takođe će biti prepoznato da je još jedan važan faktor u planiranju bilo koje sintetičke rute u ovom polju razuman izbor zaštitne grupe koja se koristi za zaštitu reaktivnih funkcionalnih grupa prisutnih u jedinjenjima opisanim u ovom pronalasku. Autoritativni prikaz koji opisuje mnoge alternative obučenim praktičarima je Greene and Wuts (Protective Groups In Organic Synthesis, četvrto izdanje, Wiley and Sons, 2007).

[0180] Jedinjenja sa formulom (I) mogu biti pripremljena pozivanjem na postupke koji su ilustrovani u sledećoj Shemi. Kao što je tamo prikazano, krajnji proizvod je jedinjenje koje ima istu strukturnu formulu kao Formula (I). Razumeće se da bilo koje jedinjenje sa Formulom (I) može biti proizvedeno pomoću Shema odgovarajućim odabirom reagenasa sa odgovarajućom supstitucijom. Rastvarači, temperature, pritisci, i drugi rekacioni uslovi lako mogu biti odabrani od strane stručnjaka iz date oblasti. Početni materijali su komercijalno dostupni ili se mogu lako pripremiti od strane stručnjaka iz oblasti. Sastojci jedinjenja su kao što je definisano ovde ili negde drugde u specifikaciji.

[0181] Jedan postupak za pripremanje primera predmetnog otkrića je opisan u Shemi 1. Postupak počinje od odgovarajuće supstituisanog cikloalkila ili ribonukleozida (i), pri čemu je nukleobaza (R<1>ili R<2>) na odgovarajući način zaštićena (PG2ili PG3), kao što je sa benzoil grupom, 5'-hidroksi grupa je odgovarajuće zaštićena (PGi), kao što je sa DMTr etrom, i 3'-pozicija je fosforamiditna funkcionalnost. U koraku 1, tretman sa odgovarajućim reagensima, kao što je piridin trifluoroacetat što je praćeno butilaminom, daje H-fosfonat (ii). Naknadno uklanjanje 5'-OH zaštitne grupe u koraku 2, pod kiselim uslovima (PGi = DMTr) daje jedinjenja sa formulom iii. Dobijeno jedinjenje sa formulom iii može reagovati sa potpuno zaštićenim fosforamiditom (iv) u koraku 3 što je praćeno oksidacijom sa, na primer, t-butilhidroperoksidom (X = O) ili sulfurizacija sa, na primer DDTT (X = S), da se dobiju jedinjenja sa formulom v. Uklanjanje zaštitne grupe sa v u koraku 4, u odgovarajućim uslovima (na primer trietilamin trihidrofluorid kada PG4= TBS) obezbeđuje jedinjenja sa formulom vi. Tretiranje jedinjenja vi sa odgovarajućim reagensom za ciklizaciju u koraku 5, kao što je DMOCP što je praćeno oksidacijom sa, na primer, t-butilhidroperoksidom (X = O) ili sulfurizacijom sa, na primer DDTT (X = S) u koraku 6 obezbeđuje jedinjenja sa formulom vii. Jedinjenja sa formulom vii mogu biti tretirana sa odgovarajućim reagensom da se uklone preostale zaštitne grupe nukleobaze, na primer NH4OH/MeOH (PG2i PG3= benzoil) da se dobiju jedinjenja sa formulom (I).

[0182] Dodatni postupak za pripremanje primera predmetne objave je opisan u Shemi 2.

[0183] Jedinjenja sa formulom ix mogu biti pripremljena od odgovarajuće zaštićenog sa formulom viii na više načina koji su poznati stručnjacima u oblasti. Na primer, tretiranje viii (gde PG5= Tritil i PG4= Ac) sa odgovarajućim heterocikličnim jedinjenjem pod Mitsunobu uslovima obezbeđuje jedinjenja sa formulom ix. Selektivno uklanjanje jedne zaštitne grupe, na primer gde PG4= Ac, može se postići pod brojnim uslovima, na primer tretiranjem sa amonijakom ili MeMgCl, da se dobiju jedinjenja sa formulom x. Kuplovanje jedinjenja sa formulom x sa odgovarajuće zaštićenim fosforamiditom (xi) što je praćeno oksidacijom sa, na primer, t-butilhidroperoksidom (X = O) ili sulfurizacijom sa, na primer DDTT (X = S) obezbeđuje jedinjenja sa formulom xii. Naknadno uklanjanje zaštitnih grupa (na primer PG5= Tritil ili TBS, PG1= DMTr) pod različitim uslovima poznatim stručnjaku iz oblasti (na primer sa TFA) obezbeđuje jedinjenja sa formulom xiii. Makrociklizacija jedinjenja sa formulom xiii može se postići na više načina poznatih stručnjacima u oblasti. Na primer, tretiranje sa difenil fosfitom, što je praćeno oksidacijom sa, na primer, t-butilhidroperoksidom (X = O) ili sulfurizacijom sa, na primer DDTT (X = S) obezbeđuje jedinjenja sa formulom xiv. Uklanjanje svih preostalih zaštitinih grupa obezbeđuje jedinjenja sa opštom formulom xv.

[0184] Dodatni postupak za pripremanje primera predmetne objave je opisan u Shemi 3.

[0185] Reakcija jedinjenja sa formulom x može takođe biti izvedena sa fosforamiditima sa formulom xvi, što je praćeno oksidacijom sa, na primer, t-butilhidroperoksidom (X = O) ili sulfurizacijom sa, na primer DDTT (X = S) da se dobiju jedinjenja opšte formule xvii. Naknadno uklanjanje zaštitnih grupa (na primer PG5= Tritil ili TBS, PG1= DMTr) pod različitim uslovima poznatim stručnjaku iz oblasti (na primer sa TFA) obezbeđuje jedinjenja sa formulom xviii. Makrociklizacija jedinjenja sa formulom xviii može se postići na više načina poznatih stručnjacima u ovoj oblasti. Na primer, tretiranje difenil fosfitom, što je praćeno oksidacijom sa, na primer, t-butilhidroperoksidom (X = O) ili sulfurizacijom sa, na primer DDTT (X = S) obezbeđuje jedinjenja sa formulom xix. Uklanjanje svih preostalih zaštitnih grupa obezbeđuje jedinjenja sa opštom formulom xx.

[0186] Alternativno, dodatni postupak za pripremanje primera predmetne objave je opisano u Shemi 4.

[0187] Postupak počinje od odgovarajuće supstituisanog prirodnog ili modifikovanog nukleozida (xxv), pri čemu je nukleobaza (R<2>) odgovarajuće zaštićena (PG= zaštitna grupa), kao što je sa benzoil grupom. U koraku 1, tretiranje xxv sa odgovarajućim organofosfor (V) reagensom, na primer jedan od onih navedenih u tabeli 1, u odgovarajućem rastvaraču (kao što je acetonitril ili dimetilformamid), sa odgovarajućom bazom (na primer DBU) obezbeđuje jedinjenja sa formulom xxvi. Tretiranje sa odgovarajuće zaštićenim alkoholom (na primer xxvii) u koraku 2, u odgovarajućem rastvaraču (na primer acetonitril ili dimetilformamid) u prisustvu baze (na primer DBU) obezbeđuje jedinjenja sa formulom xxviii. U koraku 3, jedna ili obe zaštitne grupe (PGi i PGs) mogu biti uklonjene pod uslovima poznatim stručnjaku iz oblasti da se dobije alkohol (xxix) ili diol (xxx). Jedinjenja sa formulom xxx mogu biti tretirana sa odgovarajućim organofosfor (V) reagensom, na primer jedan od navedenih u tabeli 1, u odgovarajućem rastvaraču (kao što je acetonitril ili dimetilformamid), sa odgovarajućom bazom (na primer DBU) da se dobiju jedinjenja sa formulom xxxiii. Alternativno, mogu se tretirati jedinjenja sa formulom xxix sa odgovarajućim organofosfor (V) reagensom, na primer jedan od navedenih u tabeli 1, u odgovarajućem rastvaraču (kao što je acetonitril dimetilformamid), sa odgovarajućom bazom (na primer DBU) da se dobiju jedinjenja sa formulom xxxi. U koraku 6, zaštitna grupa (R = PGs) može biti uklonjena da se dobije alkohol xxxii. Tretiranje xxxii, u koraku 7, sa odgovarajućom bazom (na primer DBU) obezbeđuje jedinjenja sa formulom xxxiii. Uklanjanje preostalih zaštitnih grupa, ako je potrebno, obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I).

[0188] Dodatni postupak za pripremanje primera predmetne objave je opisan u Shemi 5.

[0189] Postupak počinje od odgovarajućeg supstituisanog prirodnog ili modifikovanog nukleozida (xxxiv), pri čemu je nukleobaza (R<2>) na odgovarajući način zaštićena (PG= zaštitna grupa), kao što je sa benzoil grupom. U koraku 1, tretiranje xxxiv sa odgovarajućim organofosfor (V) reagensom, na primer sa jednim od onih navedenih u tabeli 1, u odgovarajućem rastvaraču (kao što je acetonitril ili dimetilformamid), sa odgovarajućom bazom (na primer DBU) obezbeđuje jedinjenja sa formulom xxxv. Tretiranje sa odgovarajuće odabranim alkoholom (na primer xlii) u koraku 2, u odgovarajućem rastvaraču (na primer acetonitril ili dimetilformamid) u prisustvu baze (na primer DBU) obezbeđuje jedinjenja sa formulom xxxvi. U koraku 3, jedna ili obe zaštitne grupe (PGi i PGs) mogu biti uklonjene pod uslovima poznatim stručnjaku iz oblasti da se dobije alkohol (xxxvii) ili diol (xxxviii). Jedinjenja sa formulom xxxviii mogu biti tretirana sa odgovarajućim organofosfor (V) reagensom, na primer sa jednim od navedenih u tabeli 1, u odgovarajućem rastvaraču (kao što je acetonitril ili dimetilformamid), sa odgovarajućim bazom (na primer DBU) da se dobiju jedinjenja sa formulom xli. Alternativno, mogu se tretirati jedinjenja sa formulom xxxvii sa odgovarajućim organofosfor (V) reagensom, na primer jedan od navedenih u tabeli 1, u odgovarajućem rastvaraču (kao što je acetonitril dimetilformamida), sa odgovarajućom bazom (na primer DBU) da se dobiju jedinjenja sa formulom xxxix. U koraku 6, zaštitna grupa (R = PGs) može biti uklonjena da se dobije alkohol xl. Tretiranje xl, u koraku 7, sa odgovarajućom bazom (na primer DBU) obezbeđuje jedinjenja sa formulom xli. Uklanjanje preostalih zaštitnih grupa, ako je potrebno, obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I).

[0190] Dodatni postupak za pripremanje primera predmetne objave je opisan u Shemi 6.

[0191] Postupak počinje od odgovarajuće zaštićenog fosforamidita (xliii) koji je pripremljen postupcima poznatim stručnjacima u oblasti. Kuplovanje jedinjenja sa formulom xliii sa odgovarajuće zaštićenim alkoholom (xliv) što je praćeno oksidacijom sa, na primer, tbutilhidroperoksidom (X = O) ili sulfurizacijom sa, na primer DDTT (X = S) obezbeđuje jedinjenja sa formulom xvl. Naknadno uklanjanje zaštitnih grupa (na primer PG4= Tritil ili TBDPS, PG2= DMTr) pod različitim uslovima poznatim stručnjaku iz oblasti (na primer sa TFA) obezbeđuje jedinjenja sa formulom xlvi. Makrociklizacija jedinjenja sa formulom xlvi može se postići na više načina koji su poznati stručnjacima iz oblasti. Na primer, tretman sa difenil fosfitom, što je praćeno oksidacijom sa, na primer, t-butilhidroperoksidom (X = O) ili sulfurizacijom sa, na primer DDTT (X = S) obezbeđuje jedinjenja sa formulom xvlii. Uklanjanje svih preostalih zaštitnih grupa obezbeđuje jedinjenja sa opštom formulom (III).

Tabela 1. Organofosfor reagensi i odgovarajuće -P(V) grupe

[0192]

PRIMERI

[0193] Pronalazak je dalje definisan u sledećim primerima. Treba razumeti da su primeri dati samo kao ilustracija. Iz gornje diskusije i primera, stručnjak iz oblasti može da utvrdi suštinske karakteristike pronalaska, i može da izvrši različite izmene i modifikacije kako bi se pronalazak prilagodio različitim upotrebama i uslovima. Kao rezultat, pronalazak nije ograničen dole navedenim ilustrativnim primerima, već je pre definisan patentnim zahtevima koji su priloženi ovde.

Skraćenice

[0194] Sledeće skraćenice mogu biti korišćene u odeljku sa primerima ispod i na drugim mestima u tekstu:

Pripremanje fosfor (V) reagenasa [0195]

[0196] Fosfor (V) reagensi (Reagensi 1-4) upotrebljeni u pripremanju primera ovog pronalaska su pripremljeni u skladu sa procedurama prikazanim u USSN 62/657551 koji je podnet 13. aprila 2018, USSN 62/6568098 podnetom 7. maja 2018, USSN 62/697896 podnetom 13. jula 2018 i USSN 62/729314 podnetom 10. septembra 2018.

Primeri 1-1,1-2,1-3 i 1-4

(lR,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{9-hidroksi-3H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion

[0197]

1-1 (Dijastereoizomer 1)

1-2 (Dijastereoizomer 2)

1-3 (Dijastereoizomer 3)

1-4 (Dijastereoizomer 4)

Pripremanje intermedijera 1A:

[0198]

[0199] U kašu koja sadrži 6-hloro-9H-purin-2-amin (4.24 g, 25.0 mmol) u THF-u (200 mL) dodat je DMAP (0.31 g, 2.50 mmol) što je praćeno dodavanjem BOCanhidrida (17.41 mL, 75 mmol). Reakcija je mešana preko noći i zatim je koncentrovana do suva. Sirovi materijal je rastvoren u etilacetatu (200 mL) i opran sa 1 N HCl, i zas. vod. NaCl rastvorom. Organski sloj je osušen (Na2SO4), filtriran i koncentrovan. Sirovi materijal je rastvoren u MeOH (100 mL) i zas. vod. NaHCO3i zagrevan je na 50 °C tokom 1 h. Dobjena smeša je koncentrovana da se uklone organske supstance i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (3 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni (Na2SO4), filtrirani i koncentrovani. Ostatak je ponovo rastvoren u THF-u (50 mL), apsorbovan na maloj količini celita (10 g) i prečišćen na ISCO hromatografskom sistemu sa silika gelom (ISCO kolona sa silika gelom od 120 g) sa MeOH/DCM/ (0%-10%) tokom 30 min gradijenta da se dobije 1A (3 g, 8.11 mmol, 32.4 % prinos).

Pripremanje intermedijera 1B:

[0200]

[0201] Na -78 °C u rastvor bis((1R,2S,5R)-2-izopropil-5-metilcikloheksil) fumarata (5 g, 12.7 mmol) u toluenu (64 mL) je dodat dietilaluminijum hlorid (25 mL, 25 mmoL) u kapima, pod azotom. Reakcija je mešana na -78 °C tokom 10 min, zatim je dodat 1,1-dimetoksieten (1.3 mL, 14 mmol) i reakcija je mešana tokom dodatnih 10 min. Reakcija je kvenčovana dodavanjem u kapima 1 mL metanola i 1 mL 15% vodenog natrijum hidroksida. Metanol (2.5 mL) je dodat i smeša je mešana tokom 10 min. Smeši je dodato 1 g magnezijum sulfata i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Suspenzija je filtrirana kroz Celite jastuče i filtrat je koncentrovan in vacuo da se dobije sirova materija. Sirovi materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije preko 120 g silika gela (20 min gradijent, sa 0-10% etil acetata u heksanima) i zatim je rekristalizovan iz 95:5 metanol: voda da se dobije 1B (5.6 g, 91%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 4.85 - 4.66 (m, 2H), 3.56 - 3.49 (m, 1H), 3.36 - 3.28 (m, 3H), 3.16 (s, 3H), 2.61 (dd, J=11.9, 10.7 Hz, 1H), 2.22 - 2.15 (m, 1H), 2.11 - 1.96 (m, 2H), 1.93 - 1.80 (m, 1H), 1.75 - 1.65 (m, 3H), 1.62 - 1.34 (m, 8H), 1.12 - 0.84 (m, 18H), 0.80 -0.75 (m, 6H).

Pripremanje intermedijera 1C:

[0202]

[0203] Na 0 °C u rastvor 1B (17 g, 35.4 mmol) u THF-u (88 mL) je dodat LAH (2.01 g, 53.0 mmol). Reakcija je polako zagrejana do sobne temperature, zatim je zagrevana na 55 °C tokom 5h, što je praćeno mešanjem na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Rastvor je ohlađen do 0 °C, kvenčovan sa 5 mL vode, 5 mL 15% vod NaOH, polako je zagrevan do sobne temperature i mešan tokom 10 min. Voda (20 mL) je dodata, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Ovoj smeši je dodato 10 g MgSO4, i mešanje je nastavljeno tokom 10 min. Zatim je filtrirano kroz Celite jastuče i filtrat je koncentrovan in vacuo. Dobijeni materijal je rastvoren u 200 mL heksana i ekstrahovan vodom (3×150 mL). Kombinovani vodeni ekstrakti su bili zasićeni amonijum sulfatom. Vodena faza je ekstrahovana (3x125 mL) etil acetatom, i kombinovani organski slojevi su osušeni (natrijum sulfat), filtrirani i koncentrovani in vacuo da se dobije 1C (3.74 g, 60%) kao čisto, bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 3.84 - 3.71 (m, 3H), 3.56 (dd, J=10.4, 8.3 Hz, 1H), 3.21 (d, J=2.2 Hz, 6H), 2.49 - 2.24 (m, 2H), 2.23 - 1.95 (m, 2H), 1.72 (ddd, J=12.4, 7.6, 1.0 Hz, 2H).

Pripremanje intermedijera 1D:

[0204]

[0205] U rastvor 1C (24 g, 136 mmol) u toluenu (1362 ml) na sobnoj temperaturi je dodat vinil acetat (129 g, 1498 mmol). Zatim, lipaza iz svinjskog pankreasa (36 g, 136 mmol) je dodata u jednoj porciji i dobijena lagana suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 21.6 h. Smeša je zatim filtrirana kroz Celite i filter kolač je zatim ispran EtOAc-om. Kombinovani filrati su zatim evaporisani in vacuo i ostatak je prečišćen pomoću kolonske hromatografije korišćenjem ISCO kolone od 330 g eluiranjem sa 0-100% etil acetata u heksanu da se dobije 1D (30 g, 137 mmol, 101 % prinos) kao ulje koje je korišćeno takvo kakvo je u sledećoj reakciji<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 4.27 - 3.99 (m, 2H), 3.88 - 3.61 (m, 2H), 3.33 - 3.05 (m, 6H), 2.46 - 2.32 (m, 2H), 2.32 - 2.17 (m, 1H), 2.12 - 2.00 (m, 3H), 1.88 - 1.73 (m, 1H).

Pripremanje intermedijera 1E:

[0206]

[0207] Toluensulfonska kiselina (1.307 g, 6.87 mmol) je dodata u jednoj porciji u rastvor 1D (30 g, 137 mmol) u acetonu (500 mL) na sobnoj temperaturi. Reakciji je dozvoljeno da se meša na sobnoj temperaturi tokom 3 sata kada se reakcija i završila. Et3N (1.916 ml, 13.75 mmol) je dodat i smeša je evaporisana in vacuo. Ostatak je zatim prečišćen na ISCO sistemu korišćenjem gradijenta heksan/etil acetat – proizvod eluiran čistim etil acetatom. Frakcije koje sadrže proizvod su zatim kombinovane i evaporisane. Tokom evaporacije, nije primenjeno zagrevanje i 1E (22 g, 93%) je dobijen kao ulje.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 4.44 - 4.22 (m, 2H), 4.02 -3.88 (m, 1H), 3.85 - 3.69 (m, 1H), 3.41 - 3.25 (m, 1H), 3.17 - 3.02 (m, 1H), 2.97 - 2.85 (m, 1H), 2.85 - 2.66 (m, 1H), 2.20 - 2.09 (m, 3H), 1.86 - 1.72 (m, 1H).

Pripremanje intermedijera 1F:

[0208]

Rastvor 1E (23.67 g, 137 mmol) u anhidrovanom DCM-u (916 mL) na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota je tretiran sa Et3N (30.7 mL, 220 mmol) što je praćeno sa DMAP (1.680 g, 13.75 mmol). (Hlorometantriil)tribenzen (49.8 g, 179 mmol) je zatim dodat u jednoj porciji i dobijenoj smeši je dozvoljeno da bude mešana na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota preko noći. Reakcija je kvenčovana dodavanjem zasićenog rastvora natrijum bikarbonata (200 mL). Vodeni sloj je zatim ekstrahovan dodatnom porcijom DCM-a (100 mL) i kombinovane organske supstance su zatim osušene (MgSO4) i evaporisane in vacuo. Dobijeno ulje je zatim prečišćeno na ISCO koloni od 330 g eluiranjem sa 0-40% etil acetata u heksanu da se dobije 1F (31.83 g, 77 mmol, 55.9 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.57 - 7.39 (m, 6H), 7.39 - 7.18 (m, 9H), 4.41 - 4.21 (m, 2H), 3.57 - 3.42 (m, 1H), 3.34 - 3.24 (m, 1H), 3.24 -3.11 (m, 2H), 2.95 - 2.78 (m, 2H), 2.07 - 1.93 (m, 3H).

Pripremanje intermedijera 1G:

[0209]

[0210] LS-Selektrid (36.2 mL, 36.2 mmol) je dodat u kapima pomoću levka za izjednačavanje pritiska u mešani rastvora 1F (12 g, 29.0 mmol) na -78 °C pod atmosferom azota. Dodavanje je trajalo ukupno 30 minuta. Reakcija je zatim ostavljena da se meša na -78 °C tokom 40 min. Reakcija je kvenčovana sporim dodavanjem zas. vod. rastvora natrijum bikarbonata (85 mL) i hladna kupka je zatim uklonjena i zamenjena ledenom vodom. Kada je unutrašnja temp. dostigla 0 °C, vodonik peroksid (59.1 mL, 579 mmol) je dodat u kapima putem staklene pipete. Dobijena smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi tokom ~4 h pre razblažavanja vodom i ekstrahovanja etil acetatom (3x). Kombinovani organski slojevi su zatim oprani zas. rastvorom natrijum bikarbonata, osušeni (MgSO4) i evaporisani in vacuo. Ovaj sirovi materijal je prečišćen kolonskom hromatografijom na ISCO sistemu eluiranjem sa 0-40% gradijentom etil acetat/heksan. Frakcije su sakupljene i evaporisane da daju 1G (7.75 g, 18.61 mmol, 64.3 % prinos).<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.60 - 7.42 (m, 6H), 7.42 - 7.18 (m, 10H), 4.61 - 4.40 (m, 1H), 4.13 - 4.02 (m, 2H), 3.47 - 3.27 (m, 2H), 2.71 - 2.65 (m, 1H), 2.65 - 2.44 (m, 2H), 2.20 - 2.11 (m, 2H), 2.11 - 2.02 (m, 3H).

Pripremanje intermedijera 1H:

[0211]

[0212] Rastvor koji sadrži trifenilfosfin (732 mg, 2.79 mmol) u smeši THF (12 mL)/toluen (6 mL) je ohlađen u ledenoj kupki i tretiran u kapima sa DIAD (0.525 mL, 2.70 mmol), što rezultira kremastom kašom. Ovoj kaši je dodat rastvor koji sadrži 1G (750 mg, 1.801 mmol) i 1A (999 mg, 2.70 mmol) u THF (5 mL). Ledena kupka je uklonjena i reakcija je mešana na 35 °C tokom 20 h. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana do suva. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini DCM-a i nanešen na ISCO kolonu sa silika gelom od 80 g i prečišćen korišćenjem Teledyne ISCO sistema, eluiranjem tokom 20 min gradijenta sa 0%-100% EtOAc/DCM/ da se dobije 1H (900 mg, 1.171 mmol, 65.1 % prinos). m/z (768, M+H).

Pripremanje Intermedijera 1I:

[0213]

[0214] U rastvor 1H (900 mg, 1.171 mmol) u DCM (10 mL) dodat je trietilsilan (1.871 mL, 11.71 mmol) što je praćeno dodavanjem TFA (0.902 mL, 11.71 mmol). Reakcija je mešana tokom 30 min. Dodatni TFA (0.45 mL) je dodat i reakcija je ostavljena da se meša tokom dodatnih 30 min. Reakcija je zatim razblažena sa dodatnim DCM (50 mL) i kvenčovana sa amonijum hidroksidom (~5 mL) i promućkana u levku za odvajanje i organski sloj je izolovan i vodeni sloj je ekstrahovan dodatnim DCM-om (2 × 10 mL). Organski ekstraksti su kombinovani, oprani puferom sa pH 7, osušeni (Na2SO4), filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini DCM-a i nanešen na ISCO kolonu od 12 g sa silika gelom i prečišćen korišćenjem Teledyne ISCO sistema, eluiranjem tokom 10 minutnog gradijenta sa 0%-10% MeOH/DCM da se dobije 1I (275 mg, 0.844 mmol, 72.1 % prinos). m/z (326, M+H).

Pripremanje intermedijera 1J:

[0215]

[0216] U suspenziju 1I (275 mg, 0.844 mmol) u etanolu (5 mL) je dodat natrijum acetat/sirćetna kiselina pufer od pH 4.5 (4.22 mL, 4.22 mmol) što je praćeno dodavanjem smeše etanol/vodeni rastvor bromoacetaldehida (3 mL, 3.75 mmol). Reakcija je zagrevana na 45 °C tokom 22 h. Reakcija je zatim ohlađena na 0 °C u ledenoj kupki i neutralisana korišćenjem čvrstog amonijum bikarbonata. Dobijene čvrste supstance su filtrirane, isprane sa vodom i osušene. Čvrsta supstanca je ponovo rastvorena u DCM/MeOH (5 mL), apsorbovana na malu količinu Celite (2 g) i prečišćena na ISCO hromatografskom sistemu sa silika gelom korišćenjem ISCO kolone sa silika gelom od 4 g sa MeOH/DCM (0%-10%) tokom 10 minutnog gradijent da se dobije željeno 1J (135 mg, 0.407 mmol, 48.3 % prinos). m/z (332, M+H).

Pripremanje intermedijera 1K:

[0218] U rastvor koji sadrži imidazol (216 mg, 3.17 mmol) u DMF-u (1 mL) dodat je TBS-Cl (199 mg, 1.320 mmol) i smeša je mešana tokom 20 min. Rastvor koji sadrži 1J (175 mg, 0.528 mmol) dodat je rastvoru TBSCl/imidazol i ostavljen je da se meša 20 h. Dodatna količina imidazola (50 mg) i TBSCl (25 mg) su dodati i reakcija je zagrevana na 50 °C tokom 1 h. Reakcija je zatim ohlađena do sobne temperature, razblažena etilacetatom (50 mL) i oprana sa vodom (2 × 20 mL), vodenim 10% rastvorom LiCl (2 × 10 mL) i zas. vod. NaCl rastvorom (10 mL). Rezultati ispiranja vodom su kombinovani i nazad ekstrahovani dodatnim etil acetatom (50 mL), zatim oprani zas. vod. NaCl rastvorom. Organski slojevi su kombinovani, osušeni (Na2SO4), filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini DCM-a i nanešen na ISCO silika gel kolonu od 12 g i prečišćen korišćenjem Teledyne ISCO sistema, eluiranjem tokom 10 minutnog gradijenta sa 0%-5% MeOH/DCM da se dobije 1K (220 mg, 0.494 mmol, 93 % prinos). m/z (446, M+H).

Pripremanje intermedijera 1L:

[0219]

[0220] U rastvor na 0 °C koji sadrži 1K (210 mg, 0.471 mmol), 2-(4-nitrofenil)etan-1-ol (158 mg, 0.943 mmol) i trifenilfosfin (253 mg, 0.966 mmol) u dioksanu (5 mL) dodat je DIAD (0.183 mL, 0.943 mmol) Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 h i zatim je koncentrovana do gustog ulja. Ostatak je ponovo rastvoren u DCM-u (1 mL), apsorbovan na malu količinu Celite (1 g) i prečišćen na ISCO hromatografskom sistemu sa silika gelom korišćenjem ISCO kolone sa silika gelom od 12 g sa MeOH/DCM (0%-10%) tokom 10 minutnog gradijenta da se dobije željeni 1L (180 mg, 0.303 mmol, 64.2 % prinos). m/z (595, M+H).

Pripremanje intermedijera 1M:

[0221]

[0222] Intermedijer 1L (265 mg, 0.446 mmol) je rastvoren u metanolnom rastvoru amonijaka (7 N u MeOH) (5 mL, 35.0 mmol), zatvoren u bočicu i zagrevan na 35 °C tokom 2 h. Reakcija je zatim koncentrovana i sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini DCM-a i nanešen na ISCO kolonu sa silika gelom od 4 g i prečišćen korišćenjem Teledyne ISCO sistema, eluiranjem tokom 10 minutnog gradijenta sa 0%-5% MeOH/DCM da se dobije 1M (180 mg, 0.326 mmol, 73.1 % prinos), m/z (553, M+H).

Pripremanje intermedijera 1N:

[0223]

[0224] Rastvor koji sadrži tetrazol (25.10 mg, 0.358 mmol) i (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il 2-cijanoetil diizopropilfosforamidit (Sigma-Aldrich, 285 mg, 0.326 mmol) u acetonitrilu (5 mL) je koncentrovan do suva na rotacionom isparivaču (2 × 5 mL) i zatim je ponovo suspendovan u acetonitrilu (5 mL) i ostavljen pod atmosferom azota. U odvojenoj posudi je suspendovan 1M (180 mg, 0.326 mmol) i suvi acetonitril (5 mL) je dodat i ovo je koncentrovano do suva na rotacionom isparivaču (2 × 5 mL). Ovaj materijal je bio ponovo suspendovan u acetonitrilu (2 mL) i zatim je dodat u rastvor koji se meša (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((bis(4-metoksifenil)(fenil) metoksi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il 2-cijanoetil diizopropilfosforamidita putem šprica. Reakcija je uklonjena i pročišćena azotnim gasom i zatim zatvorena. Reakcija je ostavljena da se meša tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim zagrejana na 50 °C tokom 20 h, ohlađena do sobne temperature i tretirana (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tiokso-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamidom (100 mg, 0.489 mmol). Reakcija je mešana tokom 1 h i zatim koncentrovana. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini DCM-a i nanešen na ISCO kolonu sa silika gelom od 40 g i prečišćen korišćenjem Teledyne ISCO sistema, eluiranjem tokom 20 minutnog gradijenta sa 0%-5% MeOH/DCM. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane i sirovi materijal je rastvoren u DCM-u (5 mL) i trietilsilan (550 uL) je dodat što je praćeno dodavanjem TFA (125 uL). Reakcija je koncentrovana do suva i zatim ponovo suspendovana u ACN (4 mL) i trietilamin trihidrofluorofluorid je dodat (550 uL). Reakcija je zagrevana na 35 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je zatim nanešena na ISCO Gold C-18 RediSep Rf kolonu od 150 g koja je bila pre-uravnotežena mobilnom fazom A: 5:95 acetonitril: voda (0.01 M amonijum acetat); Mobilnom fazom B: 95:5 acetonitril: voda (0.01 M amonijum acetat); Jedinjenje je eluirano korišćenjem gradijenta: 0% B tokom 2 zapremine kolone do 100% B tokom 20 kolona da se dobije jedinjenje 1N (200 mg, 0.212 mmol, 65.1 % prinos), m/z (943, M+H).

Pripremanje intermedijera 1O:

[0225]

[0226] Intermedijer 1N (200 mg, 0.212 mmol) je rastvoren u piridinu (10 mL) i koncentrovan do suva. Procedura je ponovljena još jedanput sa piridinom (10 mL) i dobijeni ostatak je suspendovan u suvom piridinu (30 mL) pod atmosferom azota i tretiran u malim porcijama (~02 mL) svakih 10 min sa difenil fosfitom (0.081 mL, 0.424 mmol) koji je rastvoren u piridinu (10 mL). Reakcija je zatim tretirana sa DDTT (109 mg, 0.530 mmol) i mešana tokom 10 h. Reakcija je koncentrovana do suva, ponovo suspendovana u acetonitrilu (5 mL) i adsorbovana na Celite (2 g) i prečišćena na ISCO C-18 Gold koloni sa reverznim fazama koja je bila uravnotežena sa mobilnom fazom A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.01 M amonijum acetata; Mobilnom fazom B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.01 M amonijum acetata; Gradijent: 0% B tokom 2 zapremine kolone do 100% B tokom 20 kolona da se dobije 1O (150 mg, 0.147 mmol, 69.3 % prinos), M+H (1021, M+H) kao smeša četiri Dijastereoizomera.

Primeri 1-1, 1-2, 1-3 i 1-4

[0227]

1-1 (Dijastereoizomer 1)

1-2 (Dijastereoizomer 2)

1-3 (Dijastereoizomer 3)

1-4 (Dijastereoizomer 4)

[0228] Intermedijer 1O (185 mg, 0.181 mmol) je suspendovan u 7 N amonijaku u MeOH (5 mL, 35.0 mmol), zatvoren u bočici i mešan preko noći. Reakcija je zatim koncentrovana do suva. Sirovi materijal je rastvoren u piridinu (1 mL) i DBU (225 µL, 1.493 mmol) je dodat i reakcija je zagrevana na 35 °C tokom 3 h. Reakcija je zatim koncentrovana i ostatak je suspendovan u vodi (1 mL) i doveden do pH ~8 sa puferom amonijum acetat/sirćetna kiselina (pH 4.5) i prečišćena na ISCO C-18 Gold koloni reverznih faza koja je bila uravnotežena sa korišćenjem mobilne faze A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.01 M amonijum acetata; Mobilne faze B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.01 M amonijum acetata; Gradijent: 0% B tokom 2 zapremine kolone do 100% B tokom 20 kolona da se dobije smeša četiri Dijastereoizomera. Kombinovana četiri izomera su rastvorena u vodi (2 mL) i prečišćena korišćenjem preparativne reverzne faze HPLC sa sledećim uslovima da se dobiju četiri Dijastereoizomera: Kolona: Xselect CSH C18 Kolona, 3.5µm, 3.0 X150mm; Mobilna faza A: 20 mM trietil amonijum acetat (pH 6.5); Mobilna faza B: 80:20 ACN:20mM trietil amonijum acetat (pH 6.5); Gradijent: 10%-12% B tokom 9 minuta, zatim 12-23% B tokom 5 min, zatim 23%-95% B tokom 1 minuta; protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalnog isparavanja.

[0229] Primer 1-1: 5 mg. Vreme retencije: 0.39 min. (Kolona: ACQUITY UPLC<®>BEH C181.7 µm; Mobilna faza A: voda sa 0.05% TFA; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05% TFA; Gradijent: 2 %B do 98%B tokom 1 min, zatim 98%B do 2%B tokom 0.5 min; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm)). Uočena masa: 715.2 (M+H).<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ 8.98 -8.91 (m, 1H), 8.26 - 8.19 (m, 1H), 8.17 - 8.09 (m, 1H), 7.67 - 7.60 (m, 1H), 7.34 - 7.27 (m, 1H), 6.44 - 6.36 (m, 1H), 5.56 - 5.38 (m, 1H), 5.35 - 5.19 (m, 1H), 4.84 - 4.72 (m, 1H), 4.56 - 4.49 (m, 1H), 4.48 - 4.35 (m, 2H), 4.32 - 4.16 (m, 2H), 4.13 - 3.97 (m, 2H), 3.28 - 3.20 (m, 1H), 2.69 - 2.56 (m, 1H), 2.56 - 2.38 (m, 2H)

[0230] Primer 1-2 : 5 mg. Vreme retencije: 0.41 min. (Kolona: ACQUITY UPLC<®>BEH C181.7 µm; Mobilna faza A: voda sa 0.05% TFA; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05% TFA, Gradijent: 2 %B do 98% B tokom 1 min, zatim 98% B do 2% B tokom 0.5 min; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm)). Uočena masa: 715.1 (M+H).<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ 8.94 - 8.90 (m, 1H), 8.20 - 8.16 (m, 1H), 8.06 - 8.01 (m, 1H), 7.56 - 7.51 (m, 1H), 7.16 (br d, J=1.5 Hz, 1H), 6.40 - 6.32 (m, 1H), 5.49 - 5.32 (m, 1H), 5.18 - 5.06 (m, 1H), 4.74 - 4.65 (m, 1H), 4.57 - 4.42 (m, 3H), 4.26 - 4.18 (m, 2H), 4.15 - 3.98 (m, 2H), 3.51 - 3.40 (m, 1H), 2.84 - 2.73 (m, 1H), 2.58 - 2.39 (m, 2H). Primer 1-3 : 10 mg. Vreme retencije: 0.42 min. (Kolona: ACQUITY UPLC<®>BEH C181.7 µm; Mobilna faza A: voda sa 0.05% TFA; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05% TFA; Gradijent: 2 %B do 98% B tokom 1 min, zatim 98% B do 2% B tokom 0.5 min; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm)). Uočena masa: 715.0 (M+H<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ 8.61 - 8.59 (m, 1H), 8.23 - 8.21 (m, 1H), 8.09 - 8.06 (m, 1H), 7.65 - 7.61 (m, 1H), 7.32 - 7.29 (m, 1H), 6.41 - 6.35 (m, 1H), 5.64 - 5.48 (m, 1H), 5.35 - 5.21 (m, 1H), 4.83 -4.73 (m, 1H), 4.57 - 4.49 (m, 1H), 4.47 - 4.33 (m, 2H), 4.30 - 4.19 (m, 2H), 4.18 - 4.05 (m, 2H), 3.25 - 3.16 (m, 1H), 2.64 - 2.44 (m, 3H). Primer 1-4: 10 mg. Vreme retencije: 0.46 min. (Kolona: ACQUITY UPLC<®>BEH C18 1.7µm; Mobilna faza A: voda sa 0.05% TFA; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05% TFA; Gradijent: 2 %B do 98% B tokom 1 min, zatim 98% B do 2% B tokom 0.5 min; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm)). Uočena masa: 715.1(M+H). ).<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ 8.61 - 8.59 (m, 1H), 8.23 - 8.21 (m, 1H), 8.09 - 8.06 (m, 1H), 7.65 - 7.61 (m, 1H), 7.32 - 7.29 (m, 1H), 6.41 - 6.35 (m, 1H), 5.64 - 5.48 (m, 1H), 5.35 - 5.21 (m, 1H), 4.83 - 4.73 (m, 1H), 4.57 - 4.49 (m, 1H), 4.47 - 4.33 (m, 2H), 4.30 - 4.19 (m, 2H), 4.18 - 4.05 (m, 2H), 3.25 - 3.16 (m, 1H), 2.64 - 2.44 (m, 3H).

Primer 2-1, 2-2, i 2-3

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-hidroksi-17-{9-okso-3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>difosfatriciklo[13.2.1.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion

2-1 (Dijastereoizomer 1)

2-2 (Dijastereoizomer 2)

2-3 (Dijastereoizomer 3)

Pripremanje intermedijera 2A:

[0232]

[0233] U rastvor koji sadrži (2R,3R,4S,5R)-2-(2-amino-6-hloro-9H-purin-9-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3,4-diol (10 g, 33.1 mmol) u AcOH/NH4OAc puferu (pH 4.5) (100 mL) i EtOH (100 mL) je dodat 2-bromoacetaldehid (80 mL, 104 mmol). Reakcija je zagrevana tokom 48 h na 37 °C. Filtrat je zatim neutralisan do pH ~7 čvrstim amonijum bikarbonatom i dobijena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i čvrste supstance su sakupljene filtracijom i čvrsta supstanca je isprana acetonitrilom. Filtrat je koncentrovan do ~1/2 zapremine na rotacionom evaporatoru i zatim je tretiran acetonitrilom (~100 mL) i drugi prinos proizvoda je sakupljen i ispran dodatnim acetonitrilom da se dobije 2A (5 g, 16.27 mmol, 49.1 % prinos), m/z ( 308, M+H).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.15 (m, 1H), 7.63 (m, 1H), 7.42 (d, J=2.5 Hz, 1H), 5.83 (d, J=5.8 Hz, 1H), 5.42 (br d, J=5.8 Hz, 1H), 5.21 - 5.07 (m, 2H), 4.50 (q, J=5.3 Hz, 1H), 4.14 (br d, J=3.9 Hz, 1H), 3.92 (q, J=3.8 Hz, 1H), 3.73 - 3.62 (m, 1H), 3.60 - 3.49 (m, 1H).

Pripremanje intermedijera 2B:

[0234]

[0235] Rastvor koji sadrži 2A (4.5 g, 14.65 mmol) je rastvoren u piridinu (50 mL) i kaša je podvrgnuta azeotropiji na rotacionom isparivaču do suva i zatim je ponovo rastvoren u piridinu (50 mL) i tretiran u kapima sirćetnim anhidridom (13.82 mL, 146 mmol). Reakcija je mešana tokom 20 h i zatim tretirana sa MeOH (10 mL) i koncentrovana. Materijal je potopljen u DCM (100 mL) i opran sa 1.5 N K2HPO4vod. rastvora (1 × 50 mL), osušen (Na2SO4), filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini DCM-a i nanešen na ISCO kolonu od 40 g sa silika gelom i prečišćen korišćenjem Teledyne ISCO sistema, eluiranjem tokom 15 minutnog gradijenta sa 1%-10% DCM (0.1% TEA)/MeOH da se dobije 2B (3.1 g, 7.15 mmol, 48.8 % prinos), m/z (434, M+H).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.58 - 12.53 (m, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.65 (t, J=2.2 Hz, 1H), 7.47 (t, J=2.5 Hz, 1H), 6.14 (d, J=5.9 Hz, 1H), 5.92 (t, J=6.0 Hz, 1H), 5.54 (dd, J=5.9, 4.4 Hz, 1H), 4.46 - 4.26 (m, 3H), 2.16 - 2.11 (m, 3H), 2.04 (d, J=2.4 Hz, 6H)

Pripremanje intermedijera 2C:

[0236]

[0237] U rastvor koji sadrži 2B (2.5 g, 5.77 mmol), 2-(4-nitrofenil)etan-1-ol (1.543 g, 9.23 mmol) i trifenilfosfin (2.270 g, 8.65 mmol) u THF-u (50 mL) je dodat u kapima, DIAD (1.682 mL, 8.65 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 h i zatim koncentrovana in vacuo. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini DCM-a i nanešen na ISCO kolonu sa silika gelom od 80 g i prečišćen korišćenjem Teledyne ISCO sistema, eluiranjem tokom 30 min gradijenta sa 5%-100% DCM/EtOAc da se dobije (2R,3R,4R,5R)-2-(acetoksimetil)-5-(5-(4-nitrofenetil)-9-okso-5,9-dihidro-3H-imidazo[1,2-a]purin-3-il)tetrahidrofuran-3,4-diil diacetat, m/z (583, M+H). Sirovi (2R,3R,4R,5R)-2-(acetoksimetil)-5-(5-(4-nitrofenetil)-9-okso-5,9-dihidro-3H-imidazo[1,2-a]purin-3-il)tetrahidrofuran-3,4-diil diacetat je ponovo rastvoren u 7 N amonijaka u MeOH (50 mL) i mešan tokom 20 h. Reakcija je zatim koncentrovana do ~1/2 zapremine i tretirana sa dietiletrom ~50 mL. Dobijena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i isprana sa dietiletrom i osušena da se dobije 2C (2.5 g, 5.48 mmol, 95 % prinos), m/z (457, M+H).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.16-8.10 (m, 3H), 7.66 - 7.63 (m, 1H), 7.53 - 7.48 (m, 1H), 7.46 - 7.43 (m, 1H), 5.86 - 5.82 (m, 1H), 5.44 - 5.39 (m, 1H), 5.24 - 5.20 (m, 1H), 5.06 - 5.01 (m, 1H), 4.63 - 4.56 (m, 1H), 4.45 - 4.39 (m, 2H), 4.22 - 4.17 (m, 1H), 3.98 - 3.93 (m, 1H), 3.72 -3.65 (m, 1H), 3.63 - 3.55 (m, 1H), 3.33 - 3.27 (m, 2H)

Pripremanje intermedijera 2D:

[0238]

[0239] Rastvor koji sadrži 2C (2.5 g, 5.48 mmol) u piridinu (40 mL) je koncentrovan do gustog ulja. Ulje je podvrgnuto azeotropiji drugi put sa dodatnim piridinom (40 mL). Dobijeno viskozno ulje je ponovo rastvoreno u piridinu (30 mL) u atmosferi azota i 4,4'-(hloro(fenil)metilen)bis(metoksibenzen) (2.227 g, 6.57 mmol) je dodat u malim porcijama. Reakcija je mešana tokom 20 h, i zatim je koncentrovana na rotacionom isparivaču. Dobijeni ostatak je razblažen sa DCM (100 mL) i opran zas. vod. NaHCO3rastvorom (25 mL) i zas. vod. NaCl rastvorom, zatim osušen (Na2SO4), filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini DCM-a i nanešen na ISCO kolonu sa silika gelom od 40 g i prečišćen korišćenjem Teledyne ISCO sistema, eluiranjem tokom 20 min gradijenta sa 5%-100% EtOAc/DCM (DCM koji sadrži 0.25% TEA) da se dobije 2D (1.95 g, 2.57 mmol, 46.9 % prinos), m/z (759, M+H).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.13 - 8.06 (m, 3H), 7.68 - 7.62 (m, 1H), 7.45 - 7.39 (m, 3H), 7.35 - 7.29 (m, 2H), 7.21 - 7.12 (m, 7H), 6.72 (dd, J=16.5, 8.9 Hz, 4H), 5.92 (d, J=4.3 Hz, 1H), 5.55 (d, J=5.6 Hz, 1H), 5.23 (d, J=6.1 Hz, 1H), 4.68 (q, J=5.2 Hz, 1H), 4.40 (q, J=5.6 Hz, 1H), 4.33 -4.14 (m, 2H), 4.10 - 4.04 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.68 - 3.66 (m, 3H), 3.32 - 3.26 (m, 1H), 3.22 -3.13 (m, 3H).

Pripremanje intermedijera 2E:

[0240]

[0241] Intermedijer 2D (3.75 g, 4.94 mmol) i imidazol (0.841 g, 12.36 mmol) rastvoreni su u DMF (25 mL) i TBS-Cl (0.782 g, 5.19 mmol) je dodat. Reakcija je mešana u atmosferi azota tokom 18 h. Reakciona smeša je potom ulivena u levak za odvajanje koji sadrži EtOAc/ vod. 10% LiCl rastvor 200 mL/50 mL) i promućkana. Vodeni sloj je dekantovan i organski sloj je opran dodatnim vod. 10% LiCl rastvorom (50 mL) i zas. vod. NaCl rastvorom, zatim osušen (Na2SO4), filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini DCM-a i nanešen na ISCO kolonu sa silika gelom od 220 g i prečišćen korišćenjem Teledyne ISCO sistema, eluiranjem tokom 30 min gradijenta sa 0%-50% EtOAc/DCM (0.25% TEA) da se dobije sporije eluiranje 2E (900 mg, 1.03 mmol, 21 % prinos). Vreme retencije: 1.18 min. (Kolona: ACQUITY UPLC<®>BEH C181.7 µm; Mobilna faza A: voda sa 0.05% TFA; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05% TFA; Gradijent: 2 %B do 98 %B tokom 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm)). Uočena masa 873.5 (M+H).<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.24 - 8.09 (m, 2H), 8.00 - 7.86 (m, 1H), 7.74 - 7.56 (m, 1H), 7.44 (d, J=7.0 Hz, 2H), 7.36 - 7.34 (m, 2H), 7.34 - 7.31 (m, 3H), 7.31 - 7.29 (m, 1H), 7.27 - 7.22 (m, 3H), 6.93 - 6.77 (m, 4H), 6.73 - 6.64 (m, 1H), 6.09 - 5.95 (m, 1H), 4.53 - 4.48 (m, 1H), 4.47 - 4.42 (m, 1H), 4.38 - 4.29 (m, 2H), 4.24 - 4.16 (m, 1H), 3.80 (d, J=0.8 Hz, 6H), 3.56 - 3.46 (m, 1H), 3.37 - 3.29 (m, 1H), 3.27 - 3.19 (m, 2H), 3.18 - 3.11 (m, 1H), 0.92 (s, 9H), 0.02 (s, 6H).

Pripremanje intermedijera 2F:

[0242]

[0243] U rastvor koji sadrži 2E (900 mg, 1.031 mmol) u DCM (10 mL) dodat je 1H-imidazol-4,5-dikarbonitril (146 mg, 1.237 mmol) što je praćeno dodavanjem 3-((bis(diizopropilamino)fosfanil)oksi)propannitrila (0.680 mL, 2.062 mmol). Smeša je mešana tokom 20 h i zatim razblažena dodatnim DCM-om (50 mL) i kvenčovana sa dodatnim 10% NaHCO3rastvorom (25 mL). Organski sloj je izolovan, osušen (Na2SO4), filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini DCM-a i nanešen na ISCO kolonu sa silika gelom od 12 g i prečišćen korišćenjem Teledyne ISCO sistema, eluiranjem tokom 15 min gradijenta sa 0%-100% EtOAc/DCM (0.25% TEA) da se dobije 2F (1.1 g, 1.025 mmol, 99 % prinos). Vreme retencije: 1.15 min, (Kolona ACQUITY UPLC<®>BEH C181.7µm; Mobilna faza A: voda sa 0.05% TFA; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05% TFA; Gradijent: 2 %B do 98 %B tokom 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm)).

Pripremanje intermedijera 2G:

[0244]

[0245] Na 0 °C u rastvor Ph3P (1.071 g, 4.08 mmol) u THF (20mL)/toluen (4 mL) dodat je DIAD (0.700 ml, 3.60 mmol). Reakcija je mešana na 0 °C tokom 30 min. Reakciji je dodat 6-hloro-9H-purin (0.557 g, 3.60 mmol) i 1G (1.0 g, 2.4 mmol). Reakcija je mešana na 50 °C tokom 16 h i zatim koncentrovana in vacuo. Sirovi materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije preko 40 g silika gela (15 min gradijent, sa 0-100% etil acetata u heksanima) da se dobije 2G (1.0 g, 1.8 mmol, 75 % prinos) kao bela pena. [M+H]+ = 553.2.

Pripremanje intermedijera 2H:

[0246]

[0247] Na 0 °C rastvoru 2G (1.74 g, 3.15 mmol) u THF (16 mL) dodat je metilmagnezijum hlorid (3 M u THF) (2.1 mL, 6.3 mmol). Smeša je zagrejana do sobne temperature i reakcija je mešana tokom 2 h. Reakcija je zatim kvenčovana zasićenim vodenim amonijum hloridom i mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Smeša je zatim podeljena između EtOAc i vode, organski sloj je odvojen, i vodena faza je ekstrahovana EtOAc-om. Kombinovani organski slojevi su osušeni (natrijum sulfat) i koncentrovani in vacuo. Sirovi materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije preko 80 g silika gela (15 minuta gradijent, sa 0-100% EtOAcDCM) da se dobije 2H (1.16 g, 2.27 mmol, 72% prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS, [M+H]+ = 511.3.

Pripremanje intermedijera 2I:

[0248]

[0249] Rastvor koji sadrži 1H-tetrazol (212 mg, 3.03 mmol) i 2H (310 mg, 0.607 mmol) u MeCN (3 mL) je podvrgnut azotropiji na rotacionom isparivaču (2 × 3 mL) i zatim je ponovo suspendovan u MeCN (3 mL) i aktivirani MS 4Å (150 mg) je dodat i smeša je ostavljena u atmosferi azota. U odvojenoj bočici je bio suspendovan 2F (846 mg, 0.789 mmol) u suvom acetonitrilu (4 mL) i ovo je bilo podvrgnuto azeotropiji na rotacionom isparivaču (3 × 1 mL) i zatim je ponovo suspendovano u acetonitrilu (4 mL). Ova smeša je dodata u gornji rastvor koji se meša alkoholtetrazol putem šprica. Reakciji je dozvoljeno da se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zatim tretirana (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tiokso-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamidom (249 mg, 1.213 mmol) i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zatim koncentrovana, rastvorena u EtOAc, oprana zas. NaHCO3i zatim slanim rastvorom. Faza organskog sloja je osušena sa Na2SO4i zatim koncentrovana i osušena pod vakuumom. Sirovi materijal je zatim suspendovan u DCM (30 mL) i 2,2-dihlorosirćetna kiselina (2.444 mL, 4.25 mmol) praćena trietilsilanom (0.678 mL, 4.25 mmol) su dodati. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1h. Reakcija je zatim razblažena sa DCM i neutralisana sa vod. NaHCO3. Organska baza je oprana sa slanim rastvorom, osušena sa Na2SO4i koncentrovana in vacuo. Sirova smeša je prečišćena na C18, reverzno-faznoj ISCO gold koloni od 120 g i eluirana sa rastvaračem A: 95% voda, 5% acetonitril, 0.01 M amonijum acetat; Rastvarač B: 95% acetonitril, 5% voda, 0.01 M amonijum acetat zadržavanje na 20% B tokom 5 min, zatim 20-100% B tokom 20 min, pik proizvoda eluiran pri 70-80% gradijenta da se dobije 2I (340 mg, 0.350 mmol, 57.8 % prinos). m/z (970.3, M+H).

Pripremanje intermedijera 2J:

[0251] Intermedijer 2I (0.34 g, 0.350 mmol) je rastvoren u suvom piridinu (5 mL). Rastvor je podvrgnut azeotropiji na rotacionom isparivaču. Ovaj azeotrop sa piridinom je ponovljen (2 × 3 mL). Ostatak je zatim ponovo rastvoren u suvom piridinu (70.1 mL) u atmosferi azota i tretiran u kapima tokom 30 min rastvorom difenil fosfita (0.136 mL, 0.701 mmol) u 1mL piridina. Nakon 20 min, (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tiokso-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamid (0.288 g, 1.401 mmol) je dodat i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je tada bila koncentrovana do suva. Ostatak je suspendovan u EtOAc-u i opran sa vod. NaHCO3. Organska faza je sakupljena i oprana slanim rastvorom, i zatim osušena sa Na2SO4, filtrirana i koncentrovana do suva. Sirovi materijal je zatim podvrgnut azeotropiji nekoliko puta sa MeCN, suspendovan u MeCN i filtriran. Filtrat je koncentrovan, suspendovan u MeOH i filtriran ponovo. Filtrat je zatim prečišćen na C18, reverzno-faznoj ISCO gold koloni od 150 g i eluiran rastvaračem A: 95% voda, 5% acetonitril, 0.01 M amonijum acetat; Rastvaračem B: 95% acetonitril, 5% voda, 0.01 M amonijum acetat, zadržavanje na 10% B tokom 3 min, zatim 10-65% B tokom 15 min, zatim zadržavanje na 65% B tokom 2 min i 65%-100% B tokom 12 min, tri preklapajuća pika proizvoda eluirana pri 55-65% gradijenta da se dobije 2J (28%, 104 mg). m/z (1048.3, M+H).

Pripremanje intermedijera 2K:

[0252]

[0253] U bocu koja sadrži 2J (83 mg, 0.079 mmol) dodat je 30% amonijum hidroksid (5 mL, 34.7 mmol) i reakciona smeša je mešana na 30 °C preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana pod azotnom strujom i zaim je podvrgnuta azeotropiji sa toluenom (3 × 3mL) da se ukloni voda. Ostatak je zatim podvrgnut azeotropiji sa acetonitrilom (3 × 3mL), i zatim podvrgnut azeotropiji sa piridinom (3 × 3mL). Sirovi proizvod je tretiran sa smešom piridina (1.583 mL), DBU (0.119 mL, 0.792 mmol) i nitrometanom (0.064 mL, 1.187 mmol) i zagrejan je na 30 °C preko noći. Dodatnih 200 uL suvog piridina, DBU (0.060 mL, 0.396 mmol) i nitrometan (0.021 mL, 0.396 mmol) su dodati u reakcionu smešu i mešano je na 30 °C tokom dodatnih 4h. Reakciona smeša je razblažena sa MeCN i tretirana sirćetnom kiselinom (0.091 mL, 1.583 mmol) i zatim koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen na C18, reverzno- faznoj ISCO gold koloni od 50 g i eluiran sa rastvaračem A: 95% voda, 5% acetonitril, 0.01 M amonijum acetat; Rastvaračem B: 95% acetonitril, 5% voda, 0.01 M amonijum acetat, 0-40% B tokom 15 min, zatim 40-100% B tokom 5 min da se dobije 2K-1 kao pojedinačni Dijastereoizomer i 2K-2 kao smeša dva Dijastereoizomera.

2K-1: (26 mg). LCMS: m/z 827.2 (M+H), vreme retencije: 0.71 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2.1 × 50 mm), 1.7 mikrona; Rastvarač A = 100% voda sa 0.05% TFA; Rastvarač B = 100% acetonitril sa 0.05% TFA; Gradijent = 2-98% B tokom 1 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 98% B; Brzina protoka: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm):

2K-2: (14 mg). LCMS: m/z 827.2 (M+H), vreme retencije: 0.65 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2.1 × 50 mm), 1.7 mikrona; Rastvarač A = 100% voda sa 0.05% TFA; Rastvarač B = 100% acetonitril sa 0.05% TFA; Gradijent = 2-98% B tokom 1 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 98% B; Brzina protoka: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm).

Primer 2-1, 2-2, i 2-3

[0254]

2-1 (Dijastereoizomer 1)

2-2 (Dijastereoizomer 2)

2-3 (Dijastereoizomer 3)

[0255] U rastvor 2K-1 (25 mg, 0.030 mmol) u piridinu (1 mL) dodat je trietil amin trihidrofluorid (0.074 mL, 0.454 mmol) i reakciona smeša je mešana na 37 °C preko noći. Reakciona smeša je zatim evaporisana pod blagim mlazom azota i zatim je podvrgnuta azeotropiji sa MeCN. Sirovi materijal je prečišćen na reverzno- faznoj ISCO gold koloni od 15.5 g i eluiran sa rastvaračem A: 95% voda, 5% acetonitril, 0.01 M amonijum acetat; Rastvaračem B: 95% acetonitril, 5% voda, 0.01 M amonijum acetat: Zadržavanje na 0% B tokom 1.5 min, 0-20% B tokom 6 min, zadržavanje na 20% B tokom 1.5 min i zatim 20-100% B tokom 7 min. da se dobije Primer 2-1 (9.5 mg) kao jedan Dijastereoizomer : LCMS: m/z 713.0 (M+H), vreme retencije: 0.42 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2.1 × 50 mm), 1.7 mikrona; Rastvarač A = 100% voda sa 0.05% TFA; Rastvarač B = 100% acetonitril sa 0.05% TFA; Gradijent = 2-98% B tokom 1 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 98% B; Brzina protoka: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm).

[0256] Intermedijer 2K-2 je tretiran na sličan način kao 2K-1 da se dobije smeša dva Dijastereoizomera, Primer 2-2 i Primer 2-3. LCMS: m/z 713.0 (M+H), vreme retencije: 0.41 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2.1 × 50 mm), 1.7 mikrona; Rastvarač A = 100% voda sa 0.05% TFA; Rastvarač B = 100% acetonitril sa 0.05% TFA; Gradijent = 2-98% B tokom 1 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 98% B; Brzina protoka: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm).

[0257] Alternativno, Primer 2-1 može biti pripremljen kao što je opisano ispod.

Pripremanje intermedijera 2L:

[0258]

[0259] U rastvor Intermedijera 2E (1.01 g, 1.16 mmol) i Reagensa 4 (1.03 g, 2.31 mmol) u acetonitrilu (15 mL) je dodat DBU (0.35 mL, 2.31 mmol). Nakon 20 minuta, reakciona smeša je neutralisana sirćetnom kiselinom (0.21 g, 3.47 mmol), i zatim je koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš kolonskom hromatografijom sa silika gelom (40 g, eluiranjem se 0-100% EtOAc/DCM da se dobije Intermedijer 2L (1.20 g, 1.07 mmol, 93 % prinos). LCMS: m/z 1119.8 (M+H); Vreme retencije: 1.32 min (Uslovi za kolonu: Waters Acquity SDS; kolona: BEH C18 (2.1 × 50 mm), 1.7 mikrona; Rastvarač A = voda sa/0.05% TFA; Rastvarač B = acetonitril sa/ 0.05% TFA; Gradijent = 2-98% B tokom 1 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 98% B; Brzina protoka: 0.8 mL/min; Detekcija: UV od 220 nm)).

Pripremanje intermedijera 2M:

[0260]

[0261] U čeličnu bombu je dodat intermedijer 2E (1.94 g, 3.51 mmol) i dioksan (10 mL). U dobijeni bezbojni rastvor je dodato 30% vodenog amonijum hidroksida (20 mL, 154 mmol). Dobijena zamućena reakciona smeša je bila zagrevana na 70 °C tokom 2 d. Reakciona smeša je zatim koncentrovana do suva. Sirovi proizvod je adsorbovan na Celite i prečišćen je hromatografijom sa silika gelom korišćenjem kolone od 80 g i eluiranjem sa 0-20% MeOH u DCM da se dobije Intermedijer 2M (1.59 g, 3.23 mmol) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: m/z 492.5 (M+H), tR: 0.82 min. (Kolona: ACQUITY UPLC<®>BEH C18, 2.1x50mm, 1.7µm; Mobilna faza A: H2O:ACN (95:5) sa 10 mM NH4OAc; Mobilna faza B: H2O:ACN (5:95) sa 10 mM NH4OAc; Gradijent: 5 %B do 95 %B u 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 95 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm)).<1>H NMR (499 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.32 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.42 - 7.33 (m, 6H), 7.31 - 7.18 (m, 9H), 5.61 (br s, 2H), 4.61 (q, J=8.6 Hz, 1H), 3.81 - 3.66 (m, 2H), 3.39 (dd, J=9.9, 5.5 Hz, 1H), 3.30 (dd, J=10.0, 6.5 Hz, 1H), 3.23 (br s, 1H), 3.08 - 2.98 (m, 1H), 2.63 - 2.48 (m, 2H), 2.36 - 2.25 (m, 1H).

Pripremanje intermedijera 2N:

[0262]

[0263] Intermedijer 2M (0.791 g, 1.608 mmol) je podvrgnut azeotropiji sa ACN (5 mL). Zatim je dodat intermedijer 2L (1.2 g, 1.072 mmol) i smeša je podvrgnuta azeotropiji ponovo sa ACN (5 mL). Dobijeni ostatak je rastvoren u THF (20 mL) i DBU (0.65 mL, 4.3 mmol) je dodat. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 20 min, sirćetna kiselina (0.248 mL, 4.29 mmol) je dodata, i onda je smeša koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom sa silika gelom (80 g, eluiranjem sa 0-10% MeOH/DCM u 35 min) da se dobije Intermedijer 2N (0.71 g, 0.49 mmol, 46 % prinos). LCMS: m/z 1442.5 (M+H); Vreme retencije: 1.19 min (Uslovi kolone: Waters Acquity SDS; kolona BEH C18 (2.1 × 50 mm), 1.7 mikrona; Rastvarač A = voda sa/0.05% TFA; Rastvarač B = acetonitril sa/ 0.05% TFA; Gradijent = 2-98% B tokom 1 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 98% B; Brzina protoka: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm).

Pripremanje intermedijera 2O:

[0264]

[0265] U rastvor Intermedijera 2N (710 mg, 0.49 mmol) u DCM (5 mL) dodat je trietilsilan (0.39 mL, 2.46 mmol) i 2,2-dihlorosirćetna kiselina (0.12 mL, 1.48 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Piridin (311 mg, 3.94 mmol) je zatim dodat i reakciona smeša je koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom sa silika gelom (40g, eluiranjem sa 0-29% MeOH/DCM) da se dobije Intermedijer 2O (408 mg, 0.36 mmol, 73 % prinos). LCMS: m/z 1140.6 (M+H); Vreme retencije: 1.03 min (Uslovi kolone: Waters Acquity SDS; kolona: BEH C18 (2.1 × 50 mm), 1.7 mikrona; Rastvarač A = voda sa/0.05% TFA; Rastvarač B = acetonitril sa/ 0.05% TFA; Gradijent = 2-98% B tokom 1 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 98% B; Brzina protoka: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm).

Pripremanje intermedijera 2P

[0266]

[0267] Intermedijer 2O (408mg, 0.36 mmol) je podvrgnut azeotropiji sa ACN (5 mL). Zatim je dodat Reagens 3 (320 mg, 0.72 mmol), što je praćeno suvim THF (10 mL) i DBU (0.22 mL, 1.43 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom sedam minuta. Reakcija je zatim tretirana sirćetnom kiselinom (130 mg, 2.15 mmol), i zatim je bila koncentrovana. Ostatak je prečišćen na ISCO gold koloni sa silika gelom (24g, eluiranjem sa 0-20% MeOH/DCM) da se dobije Intermedijer 2O (0.5 g, 0.24 mmol, 66% prinos). LCMS: m/z 1386.4 (M+H); Vreme retencije: 1.18 min (Uslovi kolone: Waters Acquity SDS; kolona: BEH C18 (2.1 × 50 mm), 1.7 mikrona; Rastvarač A = voda sa/0.05% TFA; Rastvarač B = acetonitril sa/ 0.05% TFA; Gradijent = 2-98% B tokom 1 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 98% B; Brzina protoka: 0.8 mL/min; Detekcija: UV od 220 nm).

Pripremanje intermedijera 2Q:

[0268]

[0269] Rastvoru Intermedijera 2P (500 mg, 0.24 mmol) u DCM-u (5 mL) dodat je trietilsilan (0.45 mL, 2.8 mmol) i 2,2-dihlorosirćetna kiselina (0.20 mL, 2.36 mmol). Nakon 30 minuta, reakciona smeša je dodata u kapima u posudu koja sadrži DBU (1.07 mL, 7.1 mmol) i THF (5 mL). Dobijena smeša je mešana dodatnih 10 min, i zatim je koncentrovana. Ostatak je ponovo rastvoren u ACN (1 mL) i mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi 40 °C tokom 4h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i ostatak je triturisan dietil etrom (10 mL × 5). Dobijena čvrsta supstanca je rastvorena u MeOH (10 mL), pomešana sa 5 g celite, i zatim je koncentrovana do suva. Čvrsta supstanca je prečišćena na C18, reverzno-faznoj ISCO gold koloni od 100 g (eluiranjem sa rastvaračem A: 95% voda, 5% acetonitril, 0.01 M amonijum acetat; Rastvaračem B: 95% acetonitril, 5% voda, 0.01 M amonijum acetat; zadržavanje na 100% A tokom 10 min, zatim 0-35% B tokom 15 min, zatim zadržavanje na 35% B tokom 2 min i 35%-100% B tokom 12 min) da se dobije intermedijer 2Q (132 mg, 67.7%). LCMS: m/z 827.1 (M+H); Vreme retencije: 0.57 min. (Kolona: ACQUITY UPLC<®>BEH C18, 2.1x50mm, 1.7µm; Mobilna faza A: H2O:ACN (95:5) sa 10 mM NH4OAc; Mobilna faza B: H2O:ACN (5:95) sa 10 mM NH4OAc; Gradijent: 5 %B do 95 %B u 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 95 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm))

Primer 2-1

[0270]

[0271] Intermedijer 2Q (132 mg, 0.078 mmol) je rastvoren u trietilamin trihidrofluoridu (3 mL, 18.4 mmol) i mešan na 37 °C tokom 3h. Zatim je smeša ohlađena do sobne temperature, i trietilamin (5.1 mL, 36.6 mmol) je dodat i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Zatim izopropoksitrimetilsilan (8.0g, 60.5 mmol) je dodat na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja tokom 1 h, reakciona smeša je koncentrovana i čvrsti ostatak je prečišćen putem preparativne LC/MS (Preparativna LC/MS uslovi: Kolona: Xselect RP Prep C18 OBD Kolona 5µm, 10 × 250m m; Mobilna faza A: voda sa 100 mM NH4OAc; Mobilna faza B: MeOH; Gradijent: 5% B-21.5% B 0-14 minuta, 21.5% B-95% B tokom 0.5 min, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 95% B; Protok: 20 mL/min. Analitički LCMS uslovi: Agilent 1290 HPLC/MS, kolona: Xselect CSH C18 kolona 3.5µm, 2.1 × 150mm; Mobilna faza A: voda sa 20 mM NH4OAc; Mobilna faza B: MeOH ; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 5% B-45% B tokom 15 min, 45% B-95% B tokom 2 min; Protok: 0.35 mL/min; Detekcija: MS i UV (260 nm)) da se dobije Primer 2-1 (34 mg). LCMS: m/z 713.2 (M+H), vreme retencije: 6.42 min.<1>H NMR (700 MHz, METANOL-d4) δ 8.39 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.59 (d, J=2.7 Hz, 1H), 7.17 (d, J=25 Hz, 1H), 6.13 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.56 (br d, J=3.9 Hz, 1H), 4.80 - 4.76 (m, 2H), 4.38 - 4.32 (m, 1H), 4.32 - 4.29 (m, 1H), 4.28 - 4.22 (m, 1H), 4.20 (dt, J=11.0, 5.7 Hz, 2H), 4.14 - 4.08 (m, 1H), 3.94 - 3.87 (m, 1H), 3.26 - 3.18 (m, 1H), 2.57 - 2.51 (m, 1H), 2.46 (br d, J=8.5 Hz, 1H), 2.37 (q, J=9.8 Hz, 1H).

Primeri 3-1, 3-2, 3-3 i 3-4

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ,12λ<5>-difosfatriciklo [13.3.0.0<6,9>] oktadekan-3,12dion

[0272]

Dijastereoizomer 1 (3-1)

Dijastereoizomer 2 (3-2)

Dijastereoizomer 3 (3-3)

Dijastereoizomer 4 (3-4)

Pripremanje intermedijera 3A:

[0273]

[0274] Smeša 2H (0.35 g, 0.685 mmol) i amonijum hidroksida (6.7 mL, 171 mmol) u dioksanu (2 mL) je mešana na 50 °C tokom 16 h. Rastvarač je uklonjen in vacuo. Dobijeni materijal je podeljen između DCM i vode, i organski sloj je odvojen. Vodena faza je ekstrahovana 2 × 10 mL sa DCM, 2 × 10mL sa 2-Me-THF, i kombinovani organski slojevi su osušeni (MgSO4) i koncentrovani in vacuo do 3A (0.337 g, 0.686 mmol, 100 % prinos) kao čvrsta supstanca. [M+H]+ = 492.3

Pripremanje intermedijera 3B:

[0275]

[0276] Smeša 3A (0.326 g, 0.663 mmol) i 2-bromoacetaldehida (4.9 mL, 6.6 mmol) u AcOH/NaOAc puferu (4 mL) sa pH 4.5 je mešana na 80 °C tokom 2 h što je praćeno sobnom temperaturom tokom 16 h. Reakcija je zatim mešana na 80 °C tokom 2 h i zatim je organski rastvarač uklonjen in vacuo. Čvrsti amonijum karbonat je polako dodat dok ne prestane evolucija gasa. Vodeni sloj je ekstrahovan 2x15 mL sa EtOAc, i kombinovani organski slojevi su osušeni (natrijum sulfat) i koncentrovani in vacuo. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom preko 24 g silika gela (15 min gradijent, sa 0-20% MeOH u DCM) da se dobije 3B (0.236 g, 0.46 mmol, 69% prinos) kao bela pena. LCMS, [M+H]+ = 516.4>

Pripremanje intermedijera 3C i 3D:

[0277]

[0278] Smeša 3B (0.236 g, 0.458 mmol) i 1H-tetrazola (0.038 g, 0.549 mmol) je podvrgnuta azeotropiji sa 3 mL suvog ACN. Ostatak je zatim rastvoren u 3 mL suvog ACN. Odvojena smeša (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il (2-cijanoetil) diizopropilfosforamidita (Sigma-Aldrich, 0.601 g, 0.687 mmol) je podvrgnuta azeotropiji sa 3 mL suvog ACN. Ovaj materijal je zatim rastvoren u 1.5 mL ACN-a i dodat u kapima mešanoj smeši 3B odozgo na sobnoj temperaturi. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Reakciji je zatim dodat (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tiokso-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamid (0.141 g, 0.687 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Smeša je zatim podeljena između DCM i vode, i organski sloj je odvojen. Vodena faza je ekstrahovana sa DCM, i kombinovani organski slojevi su osušeni (natrijum sulfat) I koncentrovani in vacuo. Sirovi materijal je prečišćen pomoću fleš hromatografije preko 40 g silika gela (15 min gradijent, sa 0-20% MeOH u DCM) da se dobije 3C (0.245 g, 0.185 mmol, 40.5 % prinos) kao ulje LCMS: [M+H]+ = 1322.6 i 3D (0.150 g, 0.147 mmol, 32.1 % prinos) kao čvrsta supstanca.

Pripremanje intermedijera 3E:

[0279]

[0280] Rastvoru 3C (0.245 g, 0.185 mmol) 3D (0.150 g, 0.147 mmol) i trietilsilana (0.296 ml, 1.853 mmol) u dihlorometanu (2 mL) dodat je TFA (0.043 mL, 0.56 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3h. Reakcija je kvenčovana sa 50% vodenog natrijum bikarbonata. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa 10 mL DCM, što je praćeno sa 2 × 10mL 2-MeTHF. Kombinovani organski slojevi su osušeni (natrijum sulfat) i koncentrovani in vacuo. Materijal je trituirsan dietil etrom i čvrste supstance su sakupljene vakuumskom filtracijom da se dobije 3E (0.245 g, 0.315 mmol, 95 % prinos) kao prljavo bela čvrsta supstanca. LCMS, [M+H]+ = 778.3.

Pripremanje intermedijera 3F:

[0281]

[0282] Na 0 °C u rastvor 3E (0.243 g, 0.312 mmol) u piridinu (11 mL) je dodat rastvor difenil fosfonata (0.121 mL, 0.625 mmol) u piridinu (1 mL) u kapima tokom perioda od 1 h. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tiokso-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamid (0.160 g, 0.781 mmol) je zatim dodat i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h, zatim koncentrovana in vacuo. Sirovi materijal je prečišćen pomoću reverzno-fazne ISCO preko 50 g C18 sa 0-100%, 15 min gradijenta, (ACN/voda/amonijum acetat 95/5/0.5) u (voda/ACN/amonijum acetat 95/5/0.5) da se dobije smeša četiri dijasteromera 3F (0.267 g, 0.312 mmol, 100 % prinos) kao čvrsta supstanca. LCMS, [M+H]+ = 856.8.

Primeri 3-1, 3-2, 3-3 i 3-4

[0283]

Dijastereoizomer 1 (3-1)

Dijastereoizomer 2 (3-2)

Dijastereoizomer 3 (3-3)

Dijastereoizomer 4 (3-4)

[0284] Smeša 3F (četiri Dijastereoizomera) (0.267 g, 0.312 mmol) i amonijaka (7 N in MeOH) (6.69 mL, 46.8 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakcija je zatim zagrejana do 50 °C tokom 3 h. Rastvarač je uklonjen in vacuo i dobijeni ostatak je prečišćen reverzno-faznom ISCO hromatografijom preko 50g C18 sa 0-100%, 15 min gradijenta, (ACN/voda/amonijum acetat 95/5/0.5) u (voda/ACN/amonijum acetat 95/5/0.5) da se dobije smeša četiri Dijastereoizomera. Sirovi materijal je zatim prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Agilent Bonus RP 21.2 × 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 20 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 0% B zadržavanje 0-6 minuta. 0%-25% B tokom 16 minuta, zatim 4-minuta zadržavanje na 100% B; Protok: 20 mL/min. da se dobiju dva pojedinačna Dijastereoizomera (3-1 i 3-2) i smeša dva Dijastereoizomera (3-3 i 3-4).

[0285] Primer 3-1.2.4 mg. Vreme retencije: 2.34 min. (Kolona: Agilent Bonus RP, 2.1 mm × 50 mm, 1.8 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 20 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: acetonitril. Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B zadržavanje 1 min, zatim 0% B do 100 %B tokom 4 min, zatim 0.75 min zadržavanje na 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). LCMS, [M+H]+ = 698.9.

[0286] Primer 3-2 . 2 mg. Vreme retencije 2.47 min. (Kolona: Agilent Bonus RP, 2.1 mm × 50 mm, 1.8 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 20 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: acetonitril. Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B zadržavanje 1 min, zatim 0% B do 100 %B tokom 4 min, zatim 0.75 min zadržavanje na 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). LCMS, [M+H]+ = 698.9.

Primeri 4-1 i 4-2

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-3,18-dihidroksi-17-{9-okso3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-12-sulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>difosfatriciklo [13.2.1.0<6,9>] oktadekan-3,12-dion

[0287]

Dijastereoizomer 1 (4-1)

Dijastereoizomer 2 (4-2)

Pripremanje intermedijera 4A:

[0288]

[0289] Rastvor koji sadrži 1H-tetrazol (104 mg, 1.491 mmol) i 2H (152 mg, 0.298 mmol) u MeCN (3 mL) je podvrgnut azeotropiji na rotacionom isparivaču (2 x 3 mL) i zatim je ponovo suspendovan u MeCN (3 mL) i aktivirani MS 4Å (150mg) su dodati i reakciona smeša je ostavljena u atmosferi azota. U odvojenoj bočici je uzet 2F (320 mg, 0.298 mmol) i suvi acetonitril (4 mL) je dodat i ovo je bilo podvrgnuto azeotropiji na rotacionom isparivaču (3 x 1 mL) i zatim je ponovo suspendovano u acetonitrilu (4 mL). Ova smeša je zatim dodata rastvoru alkohol-tetrazol iznad koji se meša putem šprica. Reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcionoj smeši je dodat terc-butil hidroperoksid (0.072 mL, 0.745 mmol) u kapima i mešan je dodatnih 30 min. Reakciona smeša je zatim koncentrovana do suva i zatim razblažena EtOAc-om. Dobijena suspenzija je oprana sa zas. NaHCO3, zatim slanim rastvorom i organska faza je osušena sa Na2SO4, filtrirana i koncentrovana do suva. Dobijeni sirovi materijal je suspendovan u DCM (30 mL) i dihlorosirćetna kiselina (1.201 mL, 2.087 mmol) praćeno trietilsilanom (0.476 mL, 2.98 mmol) su dodati. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakcija je zatim razblažena sa DCM i neutralisana sa vod. NaHCO3. Organska faza je odvojena i oprana slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4i koncentrovana in vacuo. Sirovi materijal je prečišćen na C18, reverzno- faznoj ISCO gold koloni od 50 g koristeći preporučene brzine protoka proizvođača sa sledećim uslovima: Rastvarač A: 95% voda, 5% acetonitril, 0.01 M amonijum acetat; Rastvarač B: 95% acetonitril, 5% voda, 0.01 M amonijum acetat; Gradijent: Gradijent: Zadržavanje na 20% B tokom 2 min, 20-60% B tokom 6 min, zadržavanje na 60% B tokom 3 min, 60-100% B tokom 2 min i zadržavanje na 100% B tokom 3 min da se dobije 4A (115 mg, 0.120 mmol, 40.4 % prinos): LCMS: m/z 954.2 (M+H), vreme retencije: 0.93 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2.1 x 50 mm), 1.7 mikrona; Rastvarač A = 100% voda sa 0.05% TFA; Rastvarač B = 100% acetonitril sa 0.05% TFA; Gradijent = 2-98% B tokom 1 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 98% B; Brzina protoka: 0.8 mL/min; Detekcija: UV od 220 nm).

Pripremanje intermedijera 4B:

[0290]

[0291] Rastvor 4A (0.088 g, 0.092 mmol) u suvom piridinu (18.44 ml) je bio podvrgnut azeotropiji na rotacionom isparivaču. Azeotrop sa piridinom je ponovljen (2 x 3 mL). Ostatak je ponovo rastvoren u suvom piridinu (18.44 mL) u atmosferi azota i tretiran tokom 30 min rastvorom u kapima difenil fosfita (0.036 ml, 0.184 mmol) u 1 mL piridina. Nakon 20 min (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tiokso-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamid (0.057 g, 0.277 mmol) je dodat i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zatim koncentrovana do suva. Dobijeni ostatak je suspendovan u EtOAc i opran sa vod. NaHCO3. Organska faza je oprana slanim rastvorom i osušena preko Na2SO4i zatim koncentrovana. Sirovi materijal je podvrgnut azeotropiji nekoliko puta sa MeCN, suspendovan u MeCN i filtriran. Filtrat je koncentrovan i zatim je suspendovan u MeOH i filtriran ponovo. Filtrat je koncentrovan i sirovi proizvod je prečišćen na C18, reverzno-faznoj ISCO gold koloni od 50 g upotrebom rastvarača A (95% voda, 5% acetonitril, 0.01 M amonijum acetat)/Rastvarača B (95% acetonitril, 5% voda, 0.01 M amonijum acetat) sa sledećim gradijentom: zadržavanje na 10% B tokom 2 min, 10-40% B tokom 8 min, pri 40% B za 6 min, 40-100% B tokom 3 min i zadržavanje na 100% B za 3 min, da se dobije 4B kao smeša Dijastereoizomera: m/z 1032.2 (M+H), vreme retencije: 0.90 i 0.95 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2.1 x 50 mm), 1.7 mikrona; Rastvarač A = 100% voda sa 0.05% TFA; Rastvarač B = 100% acetonitril sa 0.05% TFA; Gradijent = 2-98% B tokom 1 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 98% B; Brzina protoka: 0.8 mL/min; Detekcija: UV od 220 nm).

Pripremanje intermedijera 4C i 4D:

[0292]

Dijastereoizomer 1 (4C)

Dijastereoizomer 2 (4D)

[0293] U bočici koja sadrži smešu Dijastereoizomera 4B je dodato 30% amonijum hidroksida (4 mL, 34.7 mmol) i reakcija je mešana na 40 °C tokom 2 h. Rastvarač je uklonjen strujom azota i zatim je ostatak podvrgnut azeotropiji sa toluenom (3 x 3 mL) da se ukloni preostala voda. Ovaj sirovi materijal je tretiran sa smešom piridina (1.240 mL), DBU (0.140 mL, 0.930 mmol) i nitrometana (0.050 mL, 0.930 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 30 °C preko noći i zatim je koncentrovana do suva. Reakciona smeša je zatim razblažena acetonitrilom i sirćetna kiselina (0.160 mL, 2.79 mmol) je dodata. Smeša je zatim koncentrovana i podvrgnuta azeotropiji sa acetonitrilom nekoliko puta. Sirovi proizvod je prečišćen na C18, reverzno-faznoj ISCO koloni od 50 g eluiranjem sa rastvaračem A (95% voda, 5% acetonitril, 0.01 M amonijum acetat)/ Rastvaračem B (95% acetonitril, 5% voda, 0.01 M amonijum acetat) korišćenjem sledećeg gradijenta: zadržavanje na 0% B tokom 6 min, 0-30% B tokom 8 min, pri 30% B tokom 6 min, 30-100% B 3 min, da se dobiju dva odvojena Dijastereoizomera kao 4C: LCMS: m/z 811.11 (M+H), vreme retencije: 0.62 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2.1 x 50 mm), 1.7 mikrona; Rastvarač A = 100% voda sa 0.05% TFA; Rastvarač B = 100% acetonitril sa 0.05% TFA; Gradijent = 2-98% B tokom 1 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 98% B; Brzina protoka: 0.8 mL/min; Detekcija: UV od 220 nm) i 4D: LCMS: m/z 811.1 (M+H), vreme retencije: 0.67 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2.1 x 50 mm), 1.7 mikrona; Rastvarač A = 100% voda sa 0.05% TFA; Rastvarač B = 100% acetonitril sa 0.05% TFA; Gradijent = 2-98% B tokom 1 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 98% B; Brzina protoka: 0.8 mL/min; Detekcija: UV od 220 nm).

Primeri 4-1 i 4-2

[0294]

Dijastereoizomer 1 (4-1)

Dijastereoizomer 2 (4-2)

[0295] Intermedijer 4C (11 mg, 0.014 mmol) je tretiran sa trietilamin trihidrofluoridom (200 µL, 1.228 mmol) i mešan je na 40 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim kvenčovana sa vod. NH4OAc i prečišćena na ISCO reverzno faznoj gold koloni od 15.5.g i eluiran sa rastvaračem A: 95% voda, 5% acetonitril, 0.01 M amonijum acetat; Rastvaračem B: 95% acetonitril, 5% voda, 0.01 M amonijum acetat korišćenjem 0-20% B gradijenta. Željeni proizvod je eluiran sa frontom rastvarača. Frakcije koje sadrže željeni materijal su koncentrovane i prečišćene pomoću preparativne-HPLC (Xselect RP Prep C18 OBD Kolona, 5 µm, 19 x 150 mm, Mobilna faza A: 100mM NH4OAc (pH 6.5); Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 0-7.5% B tokom 15 minuta, 7.5-95% B tokom 1 minuta, zatim 1-minutno zadržavanje na 95% B; Protok: 20 mL/min. da se dobije Primer 4-1: (3.3 mg, 33% prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: m/z 697.1 (M+H), vreme retencije: 0.51 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2.1 x 50 mm), 1.7 mikrona; Rastvarač A = 100% voda sa 0.05% TFA; Rastvarač B = 100% acetonitril sa 0.05% TFA; Gradijent = 2-98% B tokom 1 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 98% B; Brzina protoka: 0.8 mL/min; Detekcija: UV od 220 nm).

[0296] Intermedijer 4D (14 mg, 0.017 mmol) je tretiran sa trietilamin trihidrofluoridom (250 µl, 1.535 mmol) i mešan na 40 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je kvenčovana sa vod. NH4OAc i prečišćena na C18Aq, reverzno-faznoj ISCO gold koloni visokih performansi od 50 g i eluirana sa rastvaračem A: 95% voda, 5% acetonitril, 0.01 M amonijum acetat/Rastvaračem B: 95% acetonitril, 5% voda, 0.01 M amonijum acetat korišćenjem sledećeg gradijenta: zadržavanje 0% B za 2 min, 0-10% B tokom 6 min. da se dobije Primer 4-2: (7.3 mg, 9.9 µmol, 58% prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: m/z 697.1 (M+H), vreme retencije: 0.37 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2.1 x 50 mm), 1.7 mikrona; Rastvarač A = 100% voda sa 0.05% TFA; Rastvarač B = 100% acetonitril sa 0.05% TFA; Gradijent = 2-98% B tokom 1 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 98% B; Brzina protoka: 0.8 mL/min; Detekcija: UV od 220 nm).

Primeri 5-1, 5-2, 5-3 i 5-4

(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-hidroksi-17-{9-okso-3H,5H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion

[0297]

Dijastereoizomer 1 (5-1)

Dijastereoizomer 2 (5-2)

Dijastereoizomer 3 (5-3)

Dijastereoizomer 4 (5-4)

Pripremanje intermedijera 5A:

[0298]

[0299] U rastvor intermedijera 2D (3.75g, 4.94 mmol) u DMF-u (25 mL) dodat je imidazol (0.84 g, 12.4 mmol), što je praćeno dodavanjem TBS-Cl (0.78 g, 5.2 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h, i zatim je bila razblažena sa etil acetatom (200 mL), oprana sa vodom (1 x 50 mL), vod.10% LiCl rastvorom (2 x 50 mL) i finalno zas. vod. NaCl rastvorom (50 mL). Organski sloj je osušen (Na2SO4), filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini DCM-a i nanešen na ISCO kolonu sa silika gelom od 220 g koja je bila ekvilibrisana sa DCM (sa/0.25% TEA). Sirovi materijal je prečišćen korišćenjem Teledyne ISCO sistema, eluiranjem sa 0%-50% etil acetat/DCM (sa/0.25% TEA) da se dobije Intermedijer 5A (950 mg, 1.0 mmol, 21% prinos). Uočena masa: 873.5 (M+H).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.36 - 8.32 (m, 1H), 8.17 - 8.13 (m, 2H), 8.06 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.67 - 7.60 (m, 2H), 7.50 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.17 - 7.05 (m, 5H), 7.05 - 6.97 (m, 4H), 6.70 (br d, J=8.9 Hz, 2H), 6.69 - 6.65 (m, 2H), 6.31 (d, J=2.7 Hz, 1H), 5.75 - 5.74 (m, 1H), 5.30 (d, J=7.0 Hz, 1H), 4.93 - 4.89 (m, 1H), 4.82 - 4.69 (m, 2H), 4.35 (br d, J=4.8 Hz, 1H), 4.22 - 4.17 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.32 - 3.24 (m, 2H), 3.00 (dd, J=10.8, 3.8 Hz, 1H), 0.81 (s, 9H), 0.06 (s, 3H), 0.01 (s, 3H).

Pripremanje intermedijera 5B:

[0300]

[0301] Rastvoru Intermedijera 5A (950 mg, 1.0 mmol) u DCM (12 mL) dodat je 2-cijanoetil N,N,N',N'-tetraizopropilfosforodiamidit (0.717 mL, 2.176 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 20 h, reakciona smeša je razblažena sa dodatnim DCM (20 mL), oprana sa zas. vod. NaHC03 rastvorom (10 mL), i zatim zas. vod. NaCl rastvorom (10 mL). Organski sloj je osušen (Na2SO4), filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini DCM-a i nanešen na silika kolonu od 40 g koja je bila uravnotežena sa DCM (sa/0.25% TEA) i prečišćen korišćenjem Teledyne ISCO sistema, eluiranjem sa 0%-50% EtOAc/DCM (0.25% TEA) da se dobije intermedijer 5B (950 mg, 0.89 mmol, 81 % prinos) kao smeša dva Dijastereoizomera. Uočena masa: 1073.3; Vreme retencije: 1.46 min, LCMS: (Kolona: ACQUITY UPLC@ BEH C18, 2.1x50mm, 1.7(im; Mobilna faza A: H2O:ACN (95:5) sa 10 mM NH40Ac; Mobilna faza B: H2O:ACN (5:95) sa 10 mM NH4OAC; Gradijent: 5 %B do 95 %B in 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 95 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm)).

Pripremanje intermedijera 5C:

[0302]

[0303] Intermedijer 5B (630 mg, 0.59 mmol) je koevaporisan sa ACN (2 mL) tri puta, i zatim je dodato 100 mg molekularnih sita (4A), što je praćeno sa ACN (2 mL). Ovaj rastvor je zatvoren i ostavljen po strani. U odvojenoj posudi, intermedijer 2H (250 mg, 0.50 mmol) i 1H-tetrazol (69 mg, 0.98 mmol) su bili koevaporisani sa ACN (10 mL) dva puta. Dobijeni ostatak je bio ponovo stavljen u acetonitril (10 mL) i koncentrisan do zapremine od približno 4 mL. Pripremljeni rastvor intermedijera 5B dodat je smeši intermedijera 2H preko kanile. Dobijena smeša je sonifikovana i mešana oko 16 h, zatim (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tiokso-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamid (110 mg, 0.54 mmol) je dodat i mešanje je nastavljeno tokom 30 min. Smeša je zatim koncentrovana, i zatim je tretirana sa MeOH. Dobijene čvrste supstance su uklonjene filtracijom, i filtrat je koncentrovan i prečišćen pomoću hromatografije sa silika gelom (40 g, eluiranjem sa 0-100% EtOAc/heksani) da se dobije intermedijer 5C (574 mg, 0.38 mmol, 77% prinos). Uočena masa: 1514.7; Vreme retencije 1.41 min. (Kolona: ACQUITY UPLC@ BEH C18, 2.1x50mm, 1.7(im; Mobilna faza A: H2O:ACN (95:5) sa 10 mM NH4OAc; Mobilna faza B: H2O:ACN (5:95) sa 10 mM NH4OAc; Gradijent: 5 %B do 95 %B u 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 95 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm)).

Pripremanje intermedijera 5D:

[0304]

[0305] Rastvor intermedijera 5C (574 mg, 0.38 mmol) u DCM-u (20 mL) je tretiran sa trietilsilanom (610 µl, 3.8 mmol) i 2,2-dihlorosirćetnom kiselinom (310 µl, 3.8 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h, i zatim je razblažena sa 20 mL DCM i oprana sa vod. NaHCO3. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (20 mL x 2). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani, koncentrovani i prečišćeni pomoću hromatografije sa silika gelom (12 g, 0-10% MeOH/DCM) da se dobije intermedijer 5D (160 mg, 0.16 mmol, 43 % prinos). Uočena masa: 970.3; Vreme retencije: 0.94 min. (Kolona: ACQUITY UPLC@ BEH C18, 2.1 x 50mm, 1.7µm; Mobilna faza A: H2O:ACN (95:5) sa 10 mM NH40Ac; Mobilna faza B: H2O:ACN (5:95) sa 10 mM NH40Ac; Gradijent: 5 %B do 95 %B u 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 95 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm))

Pripremanje intermedijera 5E:

[0306]

[0307] Intermedijer 5D (160 mg, 0.16 mmol) je podvrgnut azeotropiji sa piridinom (2 mL), i zatim ponovo rastvoren u piridinu (12 mL). Ovom rastvoru piridina u atmosferi azota, dodat je u kapima rastvor difenil fosfita (0.063 mL, 0.324 mmol) u piridinu (1mL). Nakon mešanja tokom 20 min, (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tiokso-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamid (100 mg, 0.49 mmol) je dodat i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zatim koncentrovana do suva. Ostatak je suspendovan u EtOAc (50 mL) i opran sa vod. NaHC03 (30 mL). Organska faza je sakupljena i oprana slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i zatim koncentrovana do suva. Ostatak je tretiran sa MeOH (10 mL) tokom 10 minuta i dobijene čvrste supstance su uklonjene filtracijom. Filtrat je koncentrovan i zatim prečiščen na C18, reverznofaznoj na ISCO gold koloni od 150 g (eluiranjem sa rastvaračem A: 95% voda, 5% acetonitril, 0.01 M amonijum acetat; Rastvaračem B: 95% acetonitril, 5% voda, 0.01 M amonijum acetat, zadržavanje na 10% B tokom 3 min, zatim 10-65% B tokom 15 min, zatim zadržavanje na 65% B tokom 2 min i 65%-100% B tokom 12 min) da se dobije 5E kao smeša 4 Dijastereoizomera (99 mg, 0.094 mmol, 58 % prinos). Uočena masa: 1048.0; Vreme retencije: 0.89-0.96 min. (Kolona: ACQUITY UPLC@ BEH C18, 2.1x50mm, 1.7µm; Mobilna faza A: H2O:ACN (95:5) sa 10 mM NH40Ac; Mobilna faza B: H2O:ACN (5:95) sa 10 mM NH40Ac; Gradijent: 5 % B do 95 % B u 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 95 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm)).

Pripremanje intermedijera 5F

[0308]

[0309] Intermedijer 5E (99 mg, 0.094 mmol) u 2 mL 28% amonijak hidroksida je zagrejan do 40 °C tokom 4h. Smeša je zatim koncentrovana pod strujom azota. Ostatak je ponovo rastvoren u 3 mL piridina i DBU (113 jj.1, 0.76 mmol) je dodat. Smeša je mešana na 40 °C tokom 8 h, i zatim koncentrovana. Ostatak je zatim triturisan sa 5 mL dietil etra tri puta, rastvoren u 10 mL MeOH i pomešan sa 2 g celite i koncentrovan. Sirova celite smeša je prečišćena na C18, 100 g reverzna faza ISCO gold kolona (eluiranjem sa rastvaračem A: 95% voda, 5% acetonitril, 0.01 M amonijum acetat; Rastvaračem B: 95% acetonitril, 5% voda, 0.01 M amonijum acetat, zadržavanje na 100% A tokom 10 min, zatim 0-35% B tokom 15 min, zatim zadržavanje na 35% B tokom 2 min i 35%-100% B tokom 12 min) da se dobije Intermedijer 5F kao smeša 4 Dijastereoizomera (58 mg, 0.070 mmol, 74% prinos). Uočena masa: 827.0; Vreme retencije: 0.51-0.52 min. (Kolona: ACQUITY UPLC@ BEH C18, 2.1x50mm, 1.7µm; Mobilna faza A: H2O:ACN (95:5) sa 10 mM NH40Ac; Mobilna faza B: H2O:ACN (5:95) sa 10 mM NH4OAc; Gradijent: 5 % B do 95 % B u 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 95 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm))

Primer 5-1, 5-2, 5-3 i 5-4

[0310]

Dijastereoizomer 1 (5-1)

Dijastereoizomer 2 (5-2)

Dijastereoizomer 3 (5-3)

Dijastereoizomer 4 (5-4)

[0311] Intermedijer 5F (58 mg, 0.070 mmol) je rastvoren u 0.5 mL trietilamin trihidrofluorida i mešan na 37 °C tokom 2 h. Zatim je reakcija kvenčovana sa 2 mL 2M NH4OAC i prečišćena putem preparativne LC/MS da se dobiju 4 individualna Dijastereoizomera, Primer 5-1, 5-2, 5-3 i 5-4. Preparativna LC/MS uslovi: Kolona: Xselect RP Prep C18 OBD Kolona, 19 X150mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 20 mM TEA; Mobilna faza B: acetonitril:voda (80:20) sa 20 mM TEA; Gradijent: 8% B-18% B 0-21 minuta, 18%-95% tokom 2 min, zatim 2-minuta zadržavanja na 95% B; Protok: 20 mL/min. Analitički LCMS uslovi: Agilent 1290 HPLC/MS, kolona: Xselect CSH C18 Kolona, 3.5µm, 3.0 X150mm; Mobilna faza A: voda sa 20 mM TEA; Mobilna faza B: acetonitril:voda (80:20) sa 20 mM TEA. Temperatura: 50 °C; Gradijent: 5% B - 35% B tokom 25 min, zatim 35% B-95% B tokom 2 min; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0312] Primer 5-1.4.2 mg. Vreme retencije: 8.29 min. LCMS, [M+H]+ = 713.0.

[0313] Primer 5-2.3.1 mg. Vreme retencije: 9.43 min. LCMS, [M+H]+ = 713.0.

[0314] Primer 5-3.6.8 mg. Vreme retencije: 10.04 min. LCMS, [M+H]+ = 713.0.

[0315] Primer 5-4.5.6 mg. Vreme retencije: 12.56 min. LCMS, [M+H]+ = 713.0.

Primeri 6-1, 6-2, 6-3 i 6-4

(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{9-okso-3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.2.1.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion

[0316]

Dijastereoizomer 1 (6-1)

Dijastereoizomer 2 (6-2)

Dijastereoizomer 3 (6-3)

Dijastereoizomer 4 (6-4)

Pripremanje intermedijera 6A:

[0317]

[0318] 6-hloro-7H-purin-2-amin (Oakwood, 3.4 g, 19.9 mmol) je rastvoren u anhidrovanom acetonitrilu (50 mL) i trimetilsilil N-(trimetilsilil)acetimidat (9.72 mL, 39.8 mmol) je dodat. Rastvor je refluksovan tokom 2 h i zatim je ostavljen da se ohladi na sobnoj temperaturi. Rastvor ((2R,3R,4S)-5-acetoksi-4-(benzoiloksi)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)metil benzoata (Bioorg. Med. Chem Lett., 2003, 13, 817; 4.0 g, 9.94 mmol) u anhidrovanom acetonitrilu (50 mL) je dodat, što je praćeno trimetilsilil trifluorometansulfonatom (7.20 mL, 39.8 mmol). Dobijena smeša je refluksovana ponovo tokom 4 h i zatim ohlađena do sobne temperature, razblažena EtOAc-om (200 mL), oprana zasićenim vodenim NaHCO3, osušena preko MgS04, filtrirana, i koncentrovana in vacuo. Sirovi materijal je hromatografisan na silika gelu (40g, EtOAc/DCM, 0-100%) da se dobije intermedijer 6A (3.99 g, 7.79 mmol, 78 % prinos). Uočena masa: 512.2;<1>H NMR (499 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.13 - 8.04 (m, 4H), 7.87 (s, 1H), 7.69 - 7.58 (m, 2H), 7.56 - 7.43 (m, 4H), 6.38 - 6.21 (m, 2H), 5.84 - 5.61 (m, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.91 (dd, J=11.9, 4.4 Hz, 1H), 4.87 -4.77 (m, 1H), 4.71 - 4.55 (m, 1H).

Pripremanje intermedijera 6B:

[0319]

Rastvoru intermedijera 6A (3.2 g, 6.25 mmol) u EtOH (70 mL) je dodat NH4OAc/AcOH pufer (4.5 pH, 150 mL) i 2-bromoacetaldehid (14.4 mL, 18.8 mmol). Smeša je zagrevana tokom 6 dana na 37 °C. Veći deo rastvarača je uklonjen in vacuo i reakcija je razblažena sa 200 mL EtOAc da se formira emulzija. Dobijena smeša je napravljena baznom sa vod. NaHC03. Organska faza je odvojena i oprana vodom, zatim slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana da se dobije prljavo bela čvrsta supstanca koja je oprana sa Et2O (10 mL x 2), zatim osušena na vakuumu da se dobije sirovi proizvod 6B. Uočena masa: 518.2;<1>H NMR (499 MHz, DMSO-de) δ 8.13 (s, 1H), 8.02 (dd, J=8.3, 1.2 Hz, 2H), 7.94 (dd, J=8.4, 1.3 Hz, 2H), 7.75 - 7.69 (m, 1H), 7.66 - 7.62 (m, 2H), 7.59 - 7.54 (m, 3H), 7.48 - 7.42 (m, 3H), 6.43 (d, J=5.0 Hz, 1H), 6.33 - 6.22 (m, 1H), 6.09 - 5.90 (m, 1H), 4.85 - 4.72 (m, 2H), 4.70 - 4.60 (m, 1H).

Pripremanje intermedijera 6C:

[0320]

[0321] Rastvoru intermedijera 6B (3.5 g, 6.76 mmol), 2-(4-nitrofenil)etan-l-ola (1.7g, 10.15 mmol) i trifenilfosfina (5.32 g, 20.30 mmol) u THF (30 mL) na 0 °C pod azotom, dodat je diizopropil (E)-diazen-1,2-dikarboksilat (1.97 ml, 10.15 mmol) u kapima. Reakcija je ostavljena da se polako zagreje do sobne temperature i onda je mešana 60 min. Rastvarač je uklonjen in vacuo. Dobijeno gusto ulje je triturisano sa dietil etrom (5 mL x 4), zatim prečišćeno sa hromatografijom na slika gelu (80 g, 0-60% EtOAC/heks) da se dobije 6C (2.4 g, 3.60 mmol, 53 % prinos). Uočena masa: 667.4;<1>H NMR (499 MHz, METANOL-d4) δ 8.12 - 8.03 (m, 5H), 7.87 (dd, J=8.4, 1.3 Hz, 2H), 7.70 - 7.63 (m, 1H), 7.59 (d, J=2.7 Hz, 1H), 7.58 - 7.53 (m, 1H), 7.52 -7.47 (m, 2H), 7.40 (d, J=8.7 Hz, 2H), 7.35 (t, J=7.9 Hz, 2H), 7.27 (d, J=2.6 Hz, 1H), 6.53 (dt, J=14.9, 5.2 Hz, 1H), 6.45 (d, J=4.9 Hz, 1H), 5.97 - 5.78 (m, 1H), 4.96 - 4.81 (m, 2H), 4.78 -4.65 (m, 1H), 4.53 - 4.38 (m, 1H), 4.33 (dt, J= 14.0, 6.9 Hz, 1H), 3.31 - 3.15 (m, 2H).

Pripremanje intermedijera Q2D

[0322]

[0323] Rastvor intermedijera 6C (2.4 g, 3.60 mmol) u 20 mL 7N NH3/MeOH je mešan na sobnoj temperaturi tokom 5h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i dobijena čvrsta supstanca je oprana sa MeOH (1 mL x 3), zatim osušena pod vakuumom. Čvrsta supstanca je zatim podvrgnuta azeotropiji sa piridinom (5 mL), zatim rastvorena u 10 mL piridina, i 4,4'-(hloro(fenil)metilen)bis(metoksibenzen) (1.220 g, 3.60 mmol) je dodat i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16h. Zatim reakciona smeša je tretirana sa 2 mL MeOH i mešana na sobnoj temperaturi tokom10 min. Smeša je zatim koncentrovana i ostatak je rastvoren u 50 mL DCM, opran sa vod. NaHCO3, praćen slanim rastvorom i zatim koncentrovan. Sirovi materijal je prečišćen na silici (40 g, 0-100% EtOAc/DCM (sa/ 0.25% TEA)) da se dobije Intermedijer 6D (1.9 g, 2.5 mmol, 69% prinos). Uočena masa: 761.5;<1>H NMR (499 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.17 (d, J=8.7 Hz, 2H), 7.88 (s, 1H), 7.64 (d, J=2.7 Hz, 1H), 7.37 - 7.32 (m, 2H), 7.30 (br d, J=8.7 Hz, 2H), 7.28 - 7.19 (m, 7H), 6.80 (d, J=8.9 Hz, 4H), 6.67 (d, J=2.6 Hz, 1H), 5.99 (d, J=7.4 Hz, 1H), 5.15 (m, 1H), 4.99 - 4.80 (m, 1H), 4.65 (br d, J=5.1 Hz, 1H), 4.61 - 4.47 (m, 1H), 4.30 (t, J=7.0 Hz, 2H), 3.79 (s, 6H), 3.49 (dd, J=10.7, 3.5 Hz, 1H), 3.39 (dd, J= 10. 6, 3.5 Hz, 1H), 3.22 (td, J=6.9, 2.7 Hz, 2H).

Pripremanje intermedijera 6E:

[0324]

[0325] Rastvoru 6D (0.5 g, 0.657 mmol) u DCM (5 mL) dodat je 1H-imidazol-4,5-dikarbonitril (0.66 ml, 0.66 mmol) (1M u ACN), što je praćeno dodavanjem 3-((bis(diizopropilamino)fosfaneil)oksi)propannitril (0.40 g, 1.31 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i zatim je razblažena sa DCM (30 mL) i oprana sa 10% vod NaHC03. Vodeni sloj je ekstrahovan dodatnim DCM (20 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni (Na2SO4), filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen na siliki (40 g kolona, 0-100% EtOAc/DCM (sa/0.25%TEA)) da se dobije 6E kao par Dijastereoizomera (0.60 g, 0.624 mmol, 95% prinos). Uočena masa: 961.1. Vreme retencije: 1.19 min i 1.25 min. (Kolona ACQUITY UPLC@ BEH C18, 2.1 x 50mm, 1.7µm; Mobilna faza A: H2O:ACN (95:5) sa 10 mM NH40Ac; Mobilna faza B: H2O:ACN (5:95) sa 10 mM NH40Ac; Gradijent: 5 %B do 95 %B u 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 95 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm)).

Pripremanje intermedijera 6F

[0327] Intermedijer 6E (635 mg, 0.66 mmol) je podvrgnut azeotropiji sa 2 mL acetonitrila 3 puta. Zatim 100 mg 4Å molekularnih sita je dodato, što je praćeno sa 2 mL ACN. Ovaj rastvor je zatvoren i ostavljen sa strane. U odvojenoj posudi, intermedijer 2H (270 mg, 0.53 mmol) i 5-(etiltio)-1H-tetrazol (138 mg, 1.057 mmol) bili su koevaporisani sa ACN (10 mL x 2). Ostatak je ponovo stavljen u acetonitril (10 mL) i koncentrovan do približno 4 mL. Pripremljeni rastvor Intermedijera 6E je dodat smeši Intermedijera 2H preko kanile. Dobijena smeša je sonifikovana i mešana oko 16 h, zatim (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tiokso-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamid (119 mg, 0.58 mmol) je dodat i mešano je 30 min. Smeša je koncentrovana i onda tretirana MeOH-om. Čvrste supstance su uklonjene filtracijom, i filtrat je koncentrovan, zatim je prečišćen na siliki (40 g, eluiranjem sa 0-100% EtOAc/heksani (sa/0.5% TEA)) da se dobije intermedijer 6F (600 mg, 0.40 mmol, 76% prinos). Uočena masa 1349.1; Vreme retencije: 1.14 min. (Kolona: ACQUITY UPLC@ BEH C18, 2.1x50mm, 1.7µm; Mobilna faza A: H2O:ACN (95:5) sa 10 mM NH4OAc; Mobilna faza B: H2O:ACN (5:95) sa 10 mM NH40Ac; Gradijent: 5 %B do 95 %B u 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 95 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm)).

Pripremanje intermedijera 6G:

[0328]

[0329] Rastvoru intermedijera 6F (601 mg, 0.401 mmol) u 20 mL DCM dodat je trietilsilan (710 jj.1, 4.5 mmol) i 2,2-dihlorosirćetna kiselina (370 µl, 4.5 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3h, zatim razblažena sa 20 mL DCM i oprana sa vod. NaHCO3. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (20 mL x 2). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi materijal je prečišćen na silika gelu (12 g, 0-15% MeOH/DCM) da se dobije intermedijer 6G (360 mg, 0.40 mmol, 100 % prinos). Uočena masa: 805.2; Vreme retencije: 0.80 min. (Kolona: ACQUITY UPLC@ BEH C18, 2.1 x 50mm, 1.7µm; Mobilna faza A: H2O:ACN (95:5) sa 10 mM NH40Ac; Mobilna faza B: H2O:ACN (5:95) sa 10 mM NH4OAc; Gradijent: 5 %B do 95 %B u 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 95 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm)).

Pripremanje intermedijera 6H:

[0330]

[0331] Intermedijer 6G (360 mg, 0.45 mmol) je podvrgnut azeotropiji sa 2 mL piridina, i zatim je ponovo rastvoren u 12 mL piridina. Ovom rastvoru, u atmosferi azota, je dodat u kapima rastvor difenil fosfit (0.17 mL, 0.89 mmol) u 2 mL piridina. Nakon mešanja tokom 20 min, (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tiokso-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamid (274 mg, 1.33 mmol) je dodat i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Zatim je reakciona smeša kvenčovana sa 0.1 mL vode i koncentrovana do suva. Ostatak je zatim tretiran sa 4 mL MeOH za 10 min i dobijene čvrste supstance su uklonjene pomoću filtracije. Filtrat je koncentrovan i zatim je prečišćen na C18, reverzno-faznoj ISCO gold koloni od 150 g (eluiranjem sa rastvaračem A: 95% voda, 5% acetonitril, 0.01 M amonijum acetat; Rastvaračem B: 95% acetonitril, 5% voda, 0.01 M amonijum acetat, zadržavanje na 10% B za 5 min, zatim 10-65% B tokom 25 min, zatim zadržavanje na 65% B za 2 min i 65%-100% B tokom 12 min) da se dobije Intermedijer 6H kao smeša 4 Dijastereoizomera (120 mg, 0.136 mmol, 31% prinos). Uočena masa 883.1; Vreme retencije: 0.48-0.54 min. (Kolona: ACQUITY UPLC@ BEH C18, 2.1x50mm, 1.7µm; Mobilna faza A: H2O:ACN (95:5) sa 10 mM NH40Ac; Mobilna faza B: H2O:ACN (5:95) sa 10 mM NH40Ac; Gradijent: 5 %B do 95 %B u 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 95 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm)).

Primeri 6-1, 6-2, 6-3 i 6-4

[0332]

Dijastereoizomer 1 (6-1)

Dijastereoizomer 2 (6-2)

Dijastereoizomer 3 (6-3)

Dijastereoizomer 4 (6-4)

[0333] Intermedijer 6H (120 mg, 0.136 mmol) u 2 mL 30% rastvora amonijak hidroksida je zagrevan na 50 °C tokom 3h. Zatim, reakcija je koncentrovana i ostatak je rastvoren u 2 mL ACN, i DBU (164 µl, 1.087 mmol) je dodat. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 40h i zatim je koncentrovana i triturisana sa dietil etrom (5 mL x 3). Dobijena čvrsta supstanca je prečišćena na C18, reverzno-faznoj ISCO gold koloni od 100 g (eluiranjem sa rastvaračem A: 95% voda, 5% acetonitril, 0.01 M amonijum acetat; Rastvaračem B: 95% acetonitril, 5% voda, 0.01 M amonijum acetat, zadržavanje na 100% A tokom 10 min, zatim 0-35% B tokom 15 min, zatim zadržavanje na 35% B tokom 2 min i 35%-100% B tokom 12 min) da se dobiju dve frakcije sa željenom masom. Obe frakcije su dalje prečišćene putem preparativne LC/MS. Frakcija 1 daje 3 individualna Dijastereoizomera (6-1, 6-2 and 6-3) i frakcija 2 daje jedan Dijastereoizomer (6-4). Uslovi preparativne LC/MS: Kolona: Xselect RP Prep C18 OBD Kolona, 19 X150mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 20 mM NH4OAc; Mobilna faza B: MeOH; Gradijent: 10% B-22% B 0-15 minuta, 22% B-95% B tokom 0.5 min, zatim zadržavanje na 95% B tokom 0.5 min; Protok: 20 mL/min. Analitički LCMS uslovi: Agilent 1290 HPLC/MS, kolona: Xselect CSH C18 Kolona, 3.

5µm, 3.0 X150mm; Mobilna faza A: voda sa 20 mM NH4OAc; Mobilna faza B: MeOH; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 5% B -100% B tokom 15 min; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0334] Primer 6-.2.4 mg. Vreme retencije: 10.26 min. LCMS, [M+H]+ = 715.2

[0335] Primer 6-2.0.8 mg. Vreme retencije: 10.94 min. LCMS, [M+H]+ = 715.2

[0336] Primer 6-3.1.6 mg. Vreme retencije: 11.88 min. LCMS, [M+H]+ = 715.2

[0337] Primer 6-4.3.4 mg. Vreme retencije: 9.10 min. LCMS, [M+H]+ = 715.2

[0338] Alternativno, primer 6-2 može biti pripremljen u skladu sa procedurama koje date ispod.

Primer 6-2

[0339]

Pripremanje intermedijera 61:

[0340]

[0341] Rastvoru Intermedijera 6D (500 mg, 0.66 mmol) i reagensa 4 (590 mg, 1.31 mmol) u acetonitrilu (12 mL) dodat je DBU (0.20 mL, 1.31 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 minuta i zatim je reakcija kvenčovana sa sirćetnom kiselinom (120 mg, 1.97 mmol), i zatim koncentrovana. Ostatak je prečićen pomoću hromatografije na silika gelu (12g, MeOH/DCM=0-10%) da se dobije Intermedijer 61 (600 mg, 0.59 mmol, 90% prinos). LCMS: m/z 1007.8 (M+H); Vreme retencije: 1.22 min, (Uslovi kolone: Waters Acquity SDS; kolona: BEH C18 (2.1 x 50 mm), 1.7 mikrona; Rastvarač A = voda sa/0.05% TFA; Rastvarač B = acetonitril sa/ 0.05% TFA; Gradijent = 2-98% B tokom 1 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 98% B; Brzina protoka: 0.8 mL/min; Detekcija: UV od 220 nm).

Pripremanje intermedijera 6J:

[0343] Intermedijer 2M (270 mg, 0.55 mmol) je podvrgnut azeotropiji sa ACN (2 mL x 2). Zatim je dodat intermedijer 6J (553 mg, 0.55 mmol) i smeša je podvrgnuta azeotropiji sa ACN (2 mL). Smeši je zatim dodat THF (10 mL), što je praćeno sa DBU (0.33 mL, 2.2 mmol) u jednoj porciji. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min, i zatim je kvenčovana sa sirćetnom kiselinom (0.13 mL, 2.2 mmol) i koncentrovana. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu (12 g, MeOH/DCM=0-15%) da se dobije Intermedijer 6J (620 mg, 0.47 mmol, 85% prinos). LCMS: m/z 1331.1 (M+H);

[0344] Vreme retencije: 1.05 min (Uslovi kolone: Waters Acquity SDS; kolona: BEH C18 (2.1 x 50 mm), 1.7 mikrona; Rastvarač A = voda sa/0.05% TFA; Rastvarač B = acetonitril sa/ 0.05% TFA; Gradijent = 2-98% B tokom 1 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 98% B; Brzina protoka: 0.8 mL/min; Detekcija: UV od 220 nm).

Pripremanje intermedijera 6K:

[0345]

[0346] Rastvor intermedijera 6J (0.62 g, 0.466 mmol) u 10 mL DCM je tretiran sa trietilsilanom (0.37 mL, 2.33 mmol), što je praćeno sa 2,2-dihlorosirćetnom kiselinom (0.12 mL, 1.4 mmol). Reakcija je mešana na 25 °C tokom 1 h. Nakon završetka, dodat je piridin (0.18 g, 2.33 mmol) i reakciona smeša je koncentrovana. Dobijeni ostatak je prečišćen na silika gelu (12 g, 0-20% MeOH/DCM) da se dobije intermedijer 6K (420 mg, 0.41 mmol, 88% prinos). LCMS: m/z 1028.5 (M+H); Vreme retencije: 0.80 min. (Kolona ACQUITY UPLC<®>BEH C18, 2.1x50mm, 1. 711m; Mobilna faza A: H2O:ACN (95:5) sa 10 mM NH40Ac; Mobilna faza B: H2O:ACN (5:95) sa 10 mM NH40Ac; Gradijent: 5 %B do 95 %B u 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 95 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm))

Pripremanje intermedijera 6L:

[0347]

[0348] Rastvoru Intermedijera 6K (422 mg, 0.41 mmol) i reagensa 3 (370 mg, 0.82 mmol) u THF-u (8 mL), dodat je DBU (0.37 mL, 2.46 mmol) uz snažno mešanje. Nakon 10 min, reakcija je kvenčovana sa sirćetnom kiselinom (150 mg, 2.46 mmol), i zatim koncentrovana. Ostatak je prečišćen na ISCO gold koloni sa silika gelom (12g, eluiranje sa 0-15% MeOH/DCM) da se dobije intermedijer 6L (460 mg, 0.36 mmol, 88% prinos). LCMS: m/z 1274.9 (M+H), vreme retencije: 1.03 min (Uslovi kolone: Waters Acquity SDS; kolona: BEH C18 (2.1 x 50 mm), 1.7 mikrona; Rastvarač A = voda sa/0.05% TFA; Rastvarač B = acetonitril sa/ 0.05% TFA; Gradijent = 2-98% B tokom 1 minuta, zatim 0.5-minutno zadržavanje na 98% B; Brzina protoka: 0.8 mL/min; Detekcija: UV od 220 nm)).

Primer 6-2

[0349]

[0350] Rastvoru Intermedijera 6L (460 mg, 0.36 mmol) u 10 mL DCM dodat je trietilsilan (0.69 mL, 4.3 mmol), što je praćeno sa 2,2-dihlorosirćetna kiselina (0.30 mL, 3.6 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 40 min, i zatim, uz snažno mešanje, reakciona smeša je dodata u kapima u posudu koja sadrži THF (10 mL) i DBU (1.63 mL, 10.8 mmol). Dobijena smeša je mešana dodatnih 5 min. Reakciona smeša je tada bila koncentrovana i ostatak je ponovo rastvoren u 0.5 mL ACN i mešana tokom 16h na 40 °C da se potpuno ukloni nitrofenetil grupa. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i ostatak je opran dietil etrom (10 mL x 3), i zatim je ponovo rastvorena u 10 mL MeOH. Ovom rastvoru, 3 g celita je dodato i dobijena smeša je koncentrovana do suva. Sirova smeša je prečišćena na C18, reverzno-faznoj ISCO gold koloni od 100 g (eluiranjem sa rastvaračem A: 95% voda, 5% acetonitril, 0.01 M amonijum acetat; Rastvaračem B: 95% acetonitril, 5% voda, 0.01 M amonijum acetat, zadržavanje na 100% A tokom 10 min, zatim 0-35% B tokom 15 min, zatim zadržavanje na 35% B tokom 2 min i 35%-100% B tokom 12 min) da se dobije sirovi Primer 6-2. LCMS: m/z 715.2 (M+H); Vreme retencije: 0.26 min. (Kolona: ACQUITY UPLC@ BEH C18, 2.1x50mm, 1. 7µm; Mobilna faza A: H2O:ACN (95:5) sa 10 mM NH40Ac; Mobilna faza B: H2O:ACN (5:95) sa 10 mM NH40Ac; Gradijent: 5 %B do 95 %B u 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 95 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm)) kao bela čvrsta supstanca i 17 mg sirovog Primera 7. LCMS: m/z 699.2 (M+H); Vreme retencije: 0.19 min. (Kolona: ACQUITY UPLC<®>BEH C18, 2.1x50mm, 1.7(im; Mobilna faza A: H2O:ACN (95:5) sa 10 mM NH40Ac; Mobilna faza B: H2O:ACN (5:95) sa 10 mM NH4OAc; Gradijent: 5 %B do 95 %B u 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 95 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm)) sirovi Primer 6-2 (167 mg) je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS [Preparativna LC/MS uslovi: Kolona: Agilent infinitylab Eclipse Plus C18 Kolona 5µm, 21.2 x 250mm; Mobilna faza A: voda sa 100 mM NH4OAc; Mobilna faza B: ACN; Gradijent: 5% B-17% B 0-11 minuta, 17% B-100% B tokom 1 min, zatim 1-minutno zadržavanje na 100% B; Protok: 25 mL/min. Analitički LCMS uslovi: Agilent 1200 HPLC/MS, kolona: Agilent Eclipse Plus C18 Kolona 3.5µm, 3 x 150mm; Mobilna faza A: voda sa 20 mM NH4OAc; Mobilna faza B: ACN ; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 5% B -100% B tokom 15 min; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: MS i UV (260 nm)] da se dobije finalni Primer 6-2 (45 mg). LCMS, [M+H]+ = 715.0;<1>H NMR (700 MHz, D2O) δ 8.21 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.54 (d, J=2.54 Hz, 1H), 6.98 (d, J=2.54 Hz, 1H), 6.23 (d, J=7.78 Hz, 1H), 5.63 (m, 1H), 5.61 (m, 1H), 4.80 (m, 1H), 4.75 (m, 1H), 4.32 (m, 2H), 4.26 (t, J=7.41, 7.41 Hz, 2H), 4.06 (dt, J=10.28, 3.98, 3.98 Hz, 1H), 3.88 (dt, J=10.21, 4.99, 4.99 Hz, 1H), 3.01(m, 1H), 2.64 (dt, J=11.33, 8.55, 8.55 Hz, 1H), 2.50 (m, 1H), 2.31 (m, 1H).

Primer 7

3-[(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroksi-12-okso-3-sulfaniliden-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.2.1.0<6,9>]oktadekan-17-il]- 3H,5H,9H-imidazo[l,2-a]purin-9-on

[0351]

[0352] Sirovi Primer 7 koji se nalazi iznad (17 mg) je dalje prečišćen putem preparativne LC/MS [Preparativna LC/MS uslovi: Kolona: Agilent infinitylab Eclipse Plus C18 Kolona 5µm, 21.2 x 250mm; Mobilna faza A: voda sa 100 mM NH40Ac; Mobilna faza B: ACN; Gradijent: 0% B13.5% B 0-13 minuta, 13.5% B-100% B tokom 1 min, zatim 1-minutno zadržavanje na 100% B; Protok: 25 mL/min. Analitički LCMS uslovi: Agilent 1200 HPLC/MS, kolona: Agilent Eclipse Plus C18 Kolona 3.5µm, 3 x 150mm; Mobilna faza A: voda sa 20 mM NH4OAc; Mobilna faza B: ACN ; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 5% B -100% B tokom 15 min; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: MS i UV (265 nm)] da se dobije Primer 7 (3.4 mg), LCMS, [M+H]+ = 699.0;<1>H NMR (499 MHz, METANOL-da) δ 8.48 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.62 (d, J=2.6 Hz, 1H), 7.22 (d, J=2.6 Hz, 1H), 6.12 (d, J=8.0 Hz, 1H), 6.08 - 5.94 (m, 1H), 5.70 - 5.40 (m, 1H), 4.82 - 4.75 (m, 1H), 4.61 - 4.44 (m, 2H), 4.33 - 4.25 (m, 1H), 4.16 (ddd, J=10.5, 6.7, 3.3 Hz, 1H), 4.09 - 3.95 (m, 3H), 3.70 - 3.64 (m, 1H), 3.57 - 3.51 (m, 1H), 3.50 - 3.44 (m, 1H), 3.26 - 3.18 (m, 1H).

Primeri 8-1, 8-2, 8-3 i 8-4

(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f] purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.2.1.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion

[0353]

Dijastereoizomer 1 (8-1)

Dijastereoizomer 2 (8-2)

Dijastereoizomer 3 (8-3) Dijastereoizomer 4 (8-4)

Pripremanje intermedijera 8A:

[0354]

[0355] Rastvoru ((2R,3R,4S,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-(benzoiloksi)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)metil benzoata [Carbohydrate Research 278, (1995), 71-89] (2.0 g, 3.44 mmol) u MeOH (4 mL) dodat je amonijak (7M in MeOH) (3.72 mL, 172 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 50 °C tokom 16h, i zatim je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeni ostatak je triturisan sa Et2O, čvrsta supstanca je sakupljena pomoću filtracije i osušena da se dobije intermedijer 8A (0.8 g, 86 % prinos) HPLC: Vreme retencije = 0.39 min (H2O/ACN sa 0.05% TFA, Waters Acquity HPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-µm čestice, gradijent = 2 min, talasna dužina = 220 nm); MS (ES): m/z = 270 [M+H]<+>.

Pripremanje intermedijera 8B:

[0356]

[0357] Intermedijer 8A (3.5 g, 13.0 mmol) je rastvoren u NaOAc/AcOH puferu (pH=4.5) (100 ml) i 50% 2-hloroacetaldehida (30 mL) u vodi je dodato i smeša je mešana na 35 °C preko noći. Dobjena smeša je koncentrovana i ostatak je stavljen na celite i prečišćen pomoću hromatografije na koloni sa silika gelom (80 g kolona, MeOH/DCM=5-20%) da se dobije intermedijer 8B (3.21g, 84%). HPLC: Vreme retencije = 0.40 min (H2O/ACN sa 0.05% TFA, Waters Acquity HPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-µm čestice, gradijent = 2 min, talasna dužina = 220 nm); MS (ES): m/z = 294 [M+H]<+>.

[0358] Pripremanje intermedijera 8C:

[0359] Intermedijer 8B (3.2 g, 11.0 mmol) je podvrgnut azeotropiji sa piridinom dva puta, i dobijeni ostatak je rastvoren u piridinu (100 mL). Ovom rastvoru je dodata katalitička količina DMAP i 4,4'-(hloro(fenil)metilen)bis(metoksibenzen) (4.1 g, 12.0 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, i zatim je dodat MeOH (5 mL), i mešanje je nastavljeno tokom 30 min. Reakciona smeša je zatim koncentrovana do suva. Ostatak je rastvoren u DCM, opran sa zas. vod. NaHCO3, i organski sloj je koncentrovan. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni sa silika gelom (80 g kolona, eluirana sa EtOAC/DCM 0-100% 25 min, zatim 0-10% MeOH/DCM, 25 min) da se dobije Intermedijer 8C (5.17 g, 79 % prinos). ). HPLC: vreme retencije = 0.85 min (H2O/ACN sa 0.05% TFA, Waters Acquity HPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1. 7-µm čestice, gradijent = 2 min, talasna dužina = 220 nm); MS (ES): m/z = 596 [M+H]<+>.

Pripremanje intermedijera 8D:

[0360]

[0361] Rastvoru Intermedijera 8C (2.0 g, 3.36 mmol) u DCM-u (10 mL) dodat je 1.0 M 1H-imidazol-4,5-dikarbonitril (2.35 mL, 2.35 mmol) u ACN, što je praćeno sa 3-((bis(diizopropilamino)fosfaneil)oksi)propanenitrilom (1.62 g, 5.37 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zatim razblažena sa DCM, oprana sa zas. NaHCO3, osušena sa MgS04, filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečiščen pomoću hromatografije na koloni sa silika gelom (kolona je prethodno tretirana sa 1% Et3N u DCM) (40 g, EtOAc/Heksan=0-100%) da se dobije Intermedijer 8D (2.13 g, 80 % prinos). HPLC: vreme retencije = 1.16 i 1.22 min (H2O/ACN sa 10 mMNH40Ac, Waters Acquity HPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-µm čestice, gradijent = 2 min, talasna dužina = 220 nm); MS (ES): m/z = 796 [M+H]+.

Pripremanje intermedijera 8E:

[0362]

[0363] Rastvor intermedijera 2H (250 mg, 0.489 mmol) i 1H-tetrazola (171 mg, 2.45 mmol) u MeCN (10 mL) je podvrgnut azeotropiji tri puta, pri čemu je konačni azeotrop ostavio oko 6 mL CH3CN. Rastvor je osušen dodavanjem aktiviranih 4Å (180 mg) molekularnih sita i ostavljen je da se meša u atmosferi N2. U odvojenoj posudi, intermedijer 8D (580 mg, 0.73 mmol) je podvrgnut azeotropiji sa MeCN tri puta, sa konačnim azeotropom koji je ostavio oko 6 mL CH3CN. Aktivirana 4Å (180 mg) molekularna sita su dodata. Ovaj rastvor je zatim prebačen u rastvor Intermedijera 2H kanulama, i posuda je isprana sa suvim MeCN (2 x 2 mL). Reakciji je dozvoljeno da se meša na sobnoj temperaturi tokom 3h, i zatim (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tiokso-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamid (201 mg, 0.978 mmol) je dodat i mešanje je nastavljeno tokom 30 min. Reakcioni smeši je zatim dozvoljeno da ostane preko noći. Dobijena smeša je zatim filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je rastvoren u DCM, opran sa zas. vod. NaHC03 i koncentrovan. Ostatak je zatim prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom (12 g, MeOH/DCM = 0-10%) da se dobije intermedijer 8E. HPLC: vreme retencije = 1.08 i 1.10 min (H2O/ACN sa 0.05% TFA, Waters Acquity HPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-µm čestice, gradijent = 2 min, talasna dužina = 220 nm); MS (ES): m/z = 1037 [M+H]<+>.

Pripremanje intermedijera 8F:

[0364]

[0365] Rastvoru Intermedijera 8E (770 mg, 0.62 mmol) u DCM (6 mL) dodat je MeOH (0.25 mL, 6.2 mmol) i 2,2-dihlorosirćetna kiselina (0.77 mL, 9.3 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1.5h. Reakcija je zatim tretirana sa piridinom (3 mL), koncentrovana i podvrgnuta azeotropiji sa toluenom dva puta. Dobijeni ostatak je nanet na celite i prečišćen na reverzno faznoj C18 koloni (C18 100g GOLD, H2O/ACN=0-95% sa 0.01 M NH40Ac) da se dobije 8F (170 mg, 39% prinos). HPLC: vreme retencije = 0.62 min (H2O/ACN with 0.05% TFA, Waters Acquity HPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-µm čestice, gradijent = 2 min, talasna dužina = 220 nm); MS (ES): m/z = 693.4 [M+H]<+>.

Primeri 8-1, 8-2, 8-3, i 8-4

[0366]

[0367] Intermedijer 8F (170 mg, 0.25 mmol) je podvrgnut azeotropiji sa piridinom (15 mL), zatim je rastvoren u piridinu (50 mL) i koncentrovan do zapremine od oko 30 mL. Rastvor je ohlađen do 0 °C i rastvor difenil fosfonata (0.093 mL, 0.49 mmol) u piridinu (2 mL) je dodavan vrlo sporo tokom perioda od 1.5h. Smeša je mešana tokom 1h nakon što je završeno dodavanje, i zatim (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tiokso-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamid (150 mg, 0.74 mmol) je dodat u jednoj porciji, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zatim kvenčovana sa vodom (0.2 mL) i koncentrovana do suva. Ostatak je rastvoren u DCM/MeOH, suv je nanet na celite, i prečišćen na C18 reverzno faznoj koloni (50 G ISCO Gold, H2O/ACN=0-70% sa 0.01M NH4OAcin 20 min) da se dobije ciklizovani intermedijer. Intermedijer je zatim tretiran sa amonijum hidroksidom (6 mL) i zagrevan na 40 °C u zatvorenoj bočici od 20 mL tokom 2h, zatim je koncentrovan. Sirovi materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Agilent infinitylab Eclipse Plus C18 Kolona 21.2 x 250mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 100-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: MeOH; Gradijent: 16-32% B tokom 20 minuta. 32%-95% B tokom 0.5 minuta, zatim 0.5 minuta zadržavanja na 95% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željene proizvode su koncentrovane da se dobiju četiri željena izomera.

[0368] Primer 8-1 HPLC: Vreme retencije = 5.93 min (Agilent Eclipse Plus C18 Kolona 3.5µm, 3 x 150 mm, 3.511m čestice; Mobilna faza A: voda sa 20 mM amonijum acetat; Mobilna faza B: metanol. Gradijent: 0%B do 50 %B tokom 15 min, zatim 50%B do 95%B tokom 2 min; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: MS i UV (260 nm)) MS (ES): m/z = 699 [M+H]<+>.

[0369] Primer 8-2. HPLC: Vreme retencije = 6.18 min (Agilent Eclipse Plus C 18 Kolona 3.5µm, 3 x 150 mm, 3.511m čestice; Mobilna faza A: voda sa 20 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: metanol. Gradijent: 0% B do 50% B tokom 15 min, zatim 50% B do 95% B tokom 2 min; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: MS i UV (260 nm)) MS (ES): m/z = 699 [M+H]<+>.

[0370] Primer 8-3 HPLC: Vreme retencije = 6.81 min (Agilent Eclipse Plus C18 Kolona 3.5µm, 3 x 150 mm, 3.511m čestice; Mobilna faza A: voda sa 20 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: metanol. Gradijent: 0% B do 50% B tokom 15 min, zatim 50% B do 95% B tokom 2 min; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: MS i UV (260 nm)) MS (ES): m/z = 699 [M+H]<+>.

[0371] Primer 8-4. HPLC: Vreme retencije = 7.88 min (Agilent Eclipse Plus C18 Kolona 3.5µm, 3 x 150 mm, 3.5 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 20 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: metanol. Gradijent: 0% B do 50% B tokom 15 min, zatim 50% B do 95% B tokom 2 min; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: MS i UV (260 nm)) MS (ES): m/z = 699 [M+H]<+>.

Primer 9

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-diokso-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-8-il]piridin-2-karboksamid

Dijastereoizomer 1

[0372]

9 (Dijastereoizomer 1)

Pripremanje intermedijera 9A:

[0373]

[0374] Metansulfonil hlorid (1.09 mL, 14.1 mmol) dodat je rastvoru intermedijera 1G (4.5g, 10.8 mmol) i trietilamina (4.53 mL, 32.5 mmol) u DCM-u (20 mL) na 0 °C. Smeša je mešana tokom 2 sata. Reakciona smeša je zatim oprana zasićenim natrijum bikarbonatom, vodom, i slanim rastvorom, zatim je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata. Zatim je filtrirana i koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen na ISCO sistemu (0-100% EtOAc/Heks, 40 g kolona, 30 min) da se dobije Intermedijer 9A (5.42g, 10.96 mmol, 100 % prinos).<1>H NMR (499 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.42-7.48 (m, 6H), 7.25-7.35 (m, 9H), 5.21 (dt, J=5.30, 7.00 Hz, 1H), 4.09-4.12 (m, 2H), 3.41 (dd, J=6.97, 9.60 Hz, 1H), 3.32 (dd, J=6.85, 9.60 Hz, 1H), 2.85 (s, 3H), 2.71-2.79 (m, 1H), 2.58 (td, J=5.96, 10.01 Hz, 1H), 2.41-2.50 (m, 1H), 2.25-2.32 (m, 1H), 2.06-2.07 (m, 3H).<13>C NMR (126 MHz, HLOROFORM-d) δ 171.0, 143.9, 128.7, 127.9, 127.1, 86.9, 74.3, 66.2, 61.2, 43.4, 38.1, 32.5, 31.3, 20.9.

Pripremanje intermedijera 9B i 9C:

[0375]

[0376] U rastvor 9A (5.36 g, 10.8 mmol) u acetonu (43 mL) dodat je natrijum jodid (6.50 g, 43.0 mmol) i dobijena smeša je zagrejana do refluksa jednu nedelju pod atmosferom argona. Reakciona smeša je zatim razblažena sa Et2O (12 mL) i dobijene čvrste supstance su filtrirane, i filtrat je koncentrovan. Sirovi materijal je prečišćen na ISCO sistemu (12g kolona, 0-60% EtOAc/Heks, 30 min @ 20 mL/min) da se dobije intermedijer 9B (3.27g, 6.21 mmol, 57% prinos). LCMS, [M+H]<+>= 549.08 i 9C (1g, 3.52 mmol, 32.5 % prinos)

Pripremanje intermedijera 9D:

[0377]

[0378] Rastvoru Intermedijera 9B (3.4g, 6.46 mmol) u DCM (30 mL) dodat je trietilsilan (10.32 mL, 64.6 mmol) a zatim 2,2-dihlorosirćetna kiselina (3.16 mL, 38.8 mmol). Smeša je mešana tokom 2 sata i zatim je uklonjen rastvarač. Ostatak je rastvoren u MeOH i filtriran. Sirovi proizvod je prečišćen na ISCO sistemu (80g, 0-100% EtOAc/Heks, 40 min.) da se dobije 9D (1.28g, 4.51 mmol, 70% prinos).

Pripremanje intermedijera 9E

[0379]

[0380] Rastvoru Intermedijera 9D (1190 mg, 4.18 mmol) u piridinu (1.7 mL) dodat je imidazol (854 mg, 12.6 mmol) i zatim TBDPS-Cl (2.3 g, 8.4 mmol). Smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Piridin je uklonjen i zatim je ostatak tretiran sa DCM (20 mL) i filtriran. Filtrat je koncentrovan do suva i zatim prečišćen na ISCO sistemu (24g, 0-50% EtOAc/Heks, 30 min) da se dobije 9E (2.17g, 4.15 mmol, 99 % prinos).<1>H NMR (499 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.65-7.71 (m, 4H), 7.40-7.48 (m, 6H), 7.28 (s, 1H), 4.37-4.43 (m, 1H), 4.06 (d, J=5.13 Hz, 2H), 3.68 (dd, J=3.16, 11.15 Hz, 1H), 3.55 (dd, J=3.22, 11.21 Hz, 1H), 2.66-2.75 (m, 3H), 2.28 (br dd, J=2.15, 9.42 Hz, 1H), 2.03-2.04 (m, 3H), 1.29 (br s, 1H), 1.07-1.13 (m, 9H).

Pripremanje intermedijera 9F:

[0381]

[0382] Metil 4-bromopikolinat (1.22 g, 5.63 mmol), intermedijer 9E (2.10g, 4.02 mmol), tris (trimetilsilil)silan (1.86 mL, 6.03 mmol), Ir(dF(CF3)ppy)2(dtbbpy)PF6(0.090 g, 0.080 mmol), i Na2C03(1.278 g, 12.06 mmol) stavljeni su u bočicu sa teflonskim poklopcem sa štapićem za mešanje. DME (35 mL) je dodat i suspenzija je degasirana azotom 5 minuta. U odvojenoj bočici je dodat nikl(II) hlorid etilen glikol dimetil etarski kompleks (0.088 g, 0.40 mmol) i 4,4'-di-tercbutil-2,2'bipiridin (0.13 g, 0.48 mmol), koji je prebačen i napunjen azotom, što je praćeno dodavanjem 10 mL DME. Ovaj rastvor je zatim degasiran sa azotom tokom 10 minuta. Dobijeni rastvor je dodat prvoj bočici i zatim je dalje degasiran sa azotom dodatnih 10 minuta. Dobijena suspenzija je postavljena otprilike 8 cm od 34 W Blue LED, sa LED koja sija direktno na strani bočice. Reakcija je zatim mešana tokom 15 sati. Reakciona smeša je zatim filtrirana i ulivena u smešu etil acetata i vode (100 mL) i DCM (100 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan 2 puta sa DCM i onda su kombinovani organski slojevi oprani sa slanim rastvorom, osušeni sa Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen na ISCO sistemu (40 g kolona, 0-100% EtOAc/Heks, 30 min) da se dobije intermedijer 9F (1.53g, 2.88 mmol, 71.6 % prinos). m/z 532.5 (M+H).

Pripremanje intermedijera 9G:

[0383]

[0384] Intermedijeru 9F (1530 mg, 2.88 mmol) dodat je trietilamin trihidrofluorid (3000 µl, 18.42 mmol) i smeša je mešana na 37 °C u atmosferi azota tokom 2 sata. Reakciona smeša je zatim razblažena sa CH3CN (6 mL) i kvenčovana sa Et3N (3850 µl, 27.6 mmol) i zatim izopropoksitrimetilsilanom (9810 µl, 55.2 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min, i zatim koncentrovana in vacuo. Ostatak je prečiščen hromatografijom na koloni korišćenjem ISCO kolone od 40 g eluiranjem sa 0-60% etil acetata u heksanu (20 min) i zatim 10% MeOH/DCM (10 min) da se dobije intermedijer 9G (700 mg, 2.39 mmol, 83% prinos).<1>H NMR (499 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.66 (d, J=5.01 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.37 (dd, J=1.73, 4.95 Hz, 1H), 7.28 (s, 1H), 4.21 (dd, J=4.71, 11.27 Hz, 1H), 4.10 (dd, J=6.02, 11.38 Hz, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.73-3.83 (m, 2H), 3.27-3.37 (m, 1H), 2.43-2.57 (m, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.93 (dd, J=1.49, 9.95 Hz, 1H), 1.72 (t, J=5.07 Hz, 1H). m/z 294.3 (M+H).

Pripremanje intermedijera 9H:

[0385]

[0386] Ohlađenom rastvoru na (0 °C) N-(9-((2R,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoksifenil) (fenil)metoksi)metil)-3-fluoro-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il)-9H-purin-6-il)benzamida (Astatech, 500 mg, 0.740 mmol) i imidazola (151 mg, 2.20 mmol) u DMF (3.7 mL) dodat je tercbutildifenilhlorosilan (285 jj.1, 1.11 mmol) u kapima putem šprica. Kupka od ledene vode je zatim uklonejna i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi u atmosferi azota. Nakon 22 sata, druga porcija imidazola (50.4 mg, 0.740 mmol) i terc-butildifenilhlorosilana (95Ill, 0.370 mmol) je dodata reakciji. Nakon 3 dodatna sata, treća porcija imidazola (50.4 mg, 0.740 mmol) i tercbutildifenilhlorosilana (95 µl, 0.370 mmol) je dodata reakciji i smeša je mešana tokom 24 sata. Reakcija je zatim kvenčovana sa metanolom (748 µL, 18.50 mmol), mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min, i zatim koncentrovana in vacuo. Preostale isparljive supstance su uklonjene pod mlazom azota. Ostatak je podeljen između EtOAc (20 mL) i vode (20 mL), i slojevi su odvojeni. Vodena faza je ekstrahovana EtOAc-om (1 x 20 mL), i kombinovani organski slojevi su oprani vodom (4 x 10 mL), slanim rastvorom (10 mL), i osušeni (Na2SO4), filtrirani, i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Sirovi intermedijer 9H prenet je u sledeć korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS, [M+H]<+>= 914.

Pripremanje intermedijera 91

[0387]

[0388] Rastvoru intermedijera 9H (680 mg, 0.74 mmol) i trietilsilana (295 µL, 1.85 mmol) u CH2Cl2(3.7 mL) dodata je trifluorosirćetna kiselina (114 µL, 1.480 mmol) u kapima pomoću šprica, što rezultira crvenkastom bojom. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi u atmosferi azota. Nakon 1.5 sati, reakcija je tretirana MeOH-om (4 mL) i mešana tokom 10 min. Smeša je zatim koncentrovana pod smanjenim pritiskom i podvrgnuta azeotropiji dva puta sa MeOH (4 mL). Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini CH2CI2, apsorbovan na čep od Si02, i prečišćen pomoću fleš hromatografije (SiO2, 40 g kolona, 0-50% aceton/heksani, 14.4 min gradijent zatim 14.4 min zadržavanje, 40 mL/min) da se dobije intermedijer 91 (384 mg, 85 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS, [M+H]<+>= 612.<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.71 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.05 - 7.99 (m, 2H), 7.74 - 7.66 (m, 4H), 7.65 - 7.59 (m, 1H), 7.56 - 7.51 (m, 2H), 7.50 - 7.37 (m, 6H), 6.27 (dd, J= 11.3, 6.8 Hz, 1H), 5.62 (ddd, J=51.8, 6.7, 4.8 Hz, 1H), 4.70 -4.62 (m, 1H), 4.13 (br s, 1H), 3.68 (d, J=13.1 Hz, 1H), 3.10 (dd, J=13.1, 1.6 Hz, 1H), 1.17 (s, 9H).

Pripremanje intermedijera 9J:

[0389]

[0390] Smeša intermedijera 91 (1.0 g, 1.64 mmol) i reagensa 3 (1.1 g, 2.45 mmol) u MeCN (15 mL) je ohlađena na unutrašnjoj temperaturi od 0 °C. DBU (0.4 mL, 2.45 mmol) je dodat u jednoj prociji i smeša je mešana na 0 °C tokom 30 min. Reakcionoj smeši je dodata sirćetna kiselina (281 µL, 4.90 mmol) na 0 °C, i zatim je dodat silika gel i smeša je koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću ISCO hromatografije sa silika gelom (80 g, 0-10% gradijent MeOH/DCM). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su koncentrovane do bele pene koja je bila koevaporisana sa heptanom (3 x 50 mL) da se dobije intermedijer 9J (1.22 g, 87 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS, [M+H]+ = 858.8:<1>H NMR (499 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.95 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.99-8.04 (m, 2H), 7.69-7.74 (m, 4H), 7.61-7.66 (m, 1H), 7.38-7.57 (m, 9H), 7.28 (s, 2H), 6.32 (d, J=2.03 Hz, 1H), 6.28-6.38 (m, 1H), 4.95 (dd, J=2.09, 4.23 Hz, 1H), 4.85 (dd, J=2.15, 4.29 Hz, 1H), 4.81-4.98 (m, 1H), 4.62-4.71 (m, 2H), 4.58-4.61 (m, 1H), 4.43 (br s, 1H), 4.25-4.37 (m, 2H), 4.15 (ddd, J=4.23, 9.33, 11.59 Hz, 1H), 2.51 (br s, 1H), 2.20-2.26 (m, 1H), 1.99-2.06 (m, 5H), 1.81-1.91 (m, 3H), 1.65-1.75 (m, 5H), 1.23-1.32 (m, 1H), 1.16 (s, 9H).

Pripremanje intermedijera 9K:

[0391]

[0392] Rastvoru intermedijera 9G (200 mg, 0.682 mmol) i intermedijera 9J (1170 mg, 1.364 mmol) u acetonitrilu (14 mL) dodat je DBU (308 µl, 2.05 mmol) u kapima da se dobije bledo žuti rastvor. Nakon 10 min, reakciona smeša je razblažena sa DCM (5 mL) i tretirana sirćetnom kiselinom (195 µL, 3.40 mmol). Dobijena smeša je koevaporisana sa silika gelom i onda prečišćena hromatografijom preko 40 g silika gela, eluiranje sa 0-15% MeOH/DCM da se dobije Intermedijer 9K (595 mg, 81% prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS, [M+H]<+>= 983.08.<31>P NMR (162 MHz, HLOROFORM-d) δ 57.9 (s, IP).

[0393] Pripremanje intermedijera 9L:

[0394] Intermedijeru 9K, (600 mg, 0.61 mmol) dodat je amonijak u MeOH (8 mL, 56.0 mmol, 7N). Smeša je zagrejana do 53 °C tokom 14 sati. NH3/MeOH je uklonjen i zatim je trietilamin trihidrofluorid (2.5 mL, 15.4 mmol) dodat i smeša je zagrejana do 37 °C tokom 5 sati. Reakciona smeša je razblažena sa CH3CN (4 mL) i tretirana sa Et3N (1927 µl, 13.83 mmol) i izopropoksitrimetilsilanom (4910 µl, 27.7 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. i zatim koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini MeOH, adsorbovan na čepu od Celite i zatim prečišćen na ISCO sistemu (Si02, 50 g RediSep Rf Gold kolona, 0-35% voda/acetonitril koji sadrži 10 mM amonijum acetata, 5 min gradijent, (0%) 0-35 %, 30 min, 30 mL/min) da se dobije 9L (284 mg, 0.49 mmol, 80% prinos). LCMS, [M+H]<+>= 584.5.

Primer 9

[0395]

9 (Dijastereoizomer 1)

[0396] Anhidrovanom rastvoru 9L (183 mg, 0.314 mmol) u piridinu (30 mL) dodat je DBU (710 µl, 4.70 mmol). Smeša je mešana tokom 10 min i zatim je reagens 4 (210 mg, 0.470 mmol) u 2 mL MeCN dodat u kapima tokom 30 min. Smeša je zatim mešana tokom sledećih 30 min. Piridin je uklonjen i ostatak je opran hladnim etrom. Sirovi proizvod je zatim prečišćen pomoću preparativne HPLC hromatografije: Instrument: Waters Autopure; Kolona:Xselect RP Prep C18 OBD Kolona, 5µm, 10 x 250mm; Brzina protoka: 25.0 mL/min; Mobilna faza: A: 0.1% FA u vodi; B: 0.1% FA u ACN (%A=100-%B): gradijent 5-35% B tokom 10 min, 35-100% B tokom 1 min, da se dobije Primer 9 (48 mg, 0.069 mmol, 21.98 % prinos). LCMS, [M+H]<+>= 662.08.<1>H NMR (499 MHz, DEUTERIJUM OKSID) δ 8.59 (d, J=5.60 Hz, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.84 (d, J=5.64 Hz, 1H), 6.44-6.52 (m, 1H), 5.53-5.66 (m, 1H), 5.06-5.16 (m, 1H), 4.35-4.50 (m, 2H), 4.08-4.22 (m, 2H), 3.87-4.04 (m, 3H), 3.48 (q, J=9.18 Hz, 1H), 2.66-2.73 (m, 1H), 2.56-2.64 (m, 1H), 2.41-2.49 (m, 1H), 1.99-2.09 (m, 1H).<31p>NMR (202 MHz, DEUTERIUM OKSID) δ 55.25 (s, IP), 55.12 (s, IP), 55.10 (s, IP), 55.07 (s, IP).

Primer 10

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-diokso-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo [13.3 .0.0<6,9>] oktadekan-8-il] piridin-2-karboksamid

Dijastereoizomer 2

[0397]

10 (Dijastereoizomer 2)

[0398] Primer 10 je pripremljen od 9L, u skladu sa procedurama analognim onima koje su navedene u Primeru 9 iznad korišćenjem reagensa 3 u finalnom koraku. LCMS, [M+H]<+>= 662.3.<1>H NMR (499 MHz, METANOL-d4) δ 8.61-8.66 (m, 1H), 8.46-8.54 (m, 1H), 8.21 (s, 1H), , 7.99-8.05 (m, 1H), 7.46-7.55 (m, 1H), 6.30-6.42 (m, 1H), 5.48-5.66 (m, 1H), 5.18-5.30 (m, 1H), 4.50-4.59 (m, 1H), 4.39-4.48 (m, 1H), 4.23-4.32 (m, 2H), 3.92-4.10 (m, 2H), 3.52-3.63 (m, 2H), 2.55-2.72 (m, 2H), 2.35-2.53 (m, 2H).<31p>NMR (202 MHz, METANOL-d4) δ 58.0 (s, 1P), 56.0 (s, 1P).

Primer 11

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18S)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-diokso-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-8-il]piridin-2-karboksamid

11 (Dijastereoizomer 1)

[0400] Primer 11, prikazan iznad, je pripremljen u skladu sa procedurama analognim onima koje su navedene u Primeru 9, počevši od intermedijera 9G i N-(9-((2R,3S,4R,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-3-fluoro-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il)-9H-purin-6-il)benzamida (CAS 226415-08-3, BLDPHARM), korišćenjem reagensa 3 za prvi korak kuplovanja i reagens 4 za korak ciklizacije. LCMS, [M+H]<+>= 662.1.<1>H NMR (499 MHz, METANOL-d4) δ 8.56 (d, J=4.9 Hz, 1H), 8.43 (d, J=2.6 Hz, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.08 - 8.03 (m, 1H), 7.71 (dd, J=5.0, 1.2 Hz, 1H), 6.70 - 6.55 (m, 1H), 5.70 - 5.69 (m, 1H), 5.58 - 5.40 (m, 1H), 5.25 -5.05 (m, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 2H), 4.21 - 4.09 (m, 3H), 4.06 - 3.95 (m, 2H), 3.37 - 3.35 (m, 1H), 3.31 - 3.29 (m, 1H), 2.94 - 2.85 (m, 1H), 2.62 - 2.53 (m, 1H).<31p>NMR (202 MHz, METANOL-d4) δ 59.2 (s, 1P), 56.3 (s, IP).<19>F NMR (470 MHz, METANOL-d4) δ -197.97 (s, IF).

Primer 12

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroksi-3,12-diokso-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo [13.3 .0.0<6,9>] oktadekan-8-il] piridin-2-karboksamid

[0401]

[0402] Pripremanje intermedijera 12A:

[0403] Rastvoru intermedijera 91 (725 mg, 1.19 mmol) u DCM-u (12 mL) dodat je rastvor IH-imidazol-4,5-dikarbonitrila (0.95 mL, 0.95 mmol, 1M) u ACN-u. Zatim, rastvor 3-((bis(diizopropilamino)fosfanil)oksi) propanenitrila (714 mg, 2.37 mmol) u DCM-u (1 mL) dodat je reakcionoj smeši u kapima. Reakciona smeša je mešana tokom 3 sata na sobnoj temperaturi i zatim kvenčovana sa MeOH (2 mL). Smeša je zatim razblažena zasićenim vod. natrijum bikarbonatom (50 mL) i razblažena sa DCM (50 mL). Organski sloj je osušen (Na2SO4), filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini DCM-a, nanešen na ISCO kolonu sa silika gelom od 40 g i prečišćen korišćenjem Teledyne ISCO sistema, eluirajući tokom 10 minuta, 0-50% gradijent; Rastvarač A: DCM sa 0.25% TEA; Rastvarač B: EtOAc da se dobije intermedijer 12A (820 mg, 1.02 mmol, 85% prinos) kao smeša Dijastereoizomera. LCMS, [M+H]<+>= 813.8.

Pripremanje intermedijera 12B:

[0404]

[0405] Smeša intermedijera 9G (200 mg, 0.68 mmol) i 1H-tetrazola (143 mg, 2.05 mmol) u suvom ACN-u (6 mL) je koncentrovana do suva (ponovljena dva puta). Intermedijer 12A (690 mg, 0.85 mmol) je rastvoren u ACN-u (5 mL) i koncentrovan do suva (ponovljen dva puta). Zatim, 3Å molekularna sita (0.5 g) i acetonitril (5 mL) dodati su intermedijeru 12A, i ovaj rastvor je zatim dodat intermedijeru 9G u suvom ACN-u (6 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 90 minuta i zatim je dodat 2-butanon peroksid (0.55 mL, 2.7 mmol). Reakcija je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim filtrirana kroz celite i koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini DCM-a, nanešen na ISCO kolonu sa silika gelom od 40 g i prečišćen korišćenjem Teledyne ISCO sistema, eluiranjem tokom 35 minuta, 0-10% gradijent; Rastvarač A: DCM; Rastvarač B: EtOAc da se dobije Intermedijer 12B (612 mg, 0.6 mmol, 88% prinos), m/z 1020.8 (M+H).

Pripremanje intermedijera 12C i 12D:

[0406]

[0407] Rastvoru Intermedijera 12B (0.610 g, 0.60 mmol) u anhidrovanom MeOH-u (12 mL) dodat je kalijum karbonat (0.250 g, 1.8 mmol). Dobijena smeša je mešana na 0 °C pod atmosferom azota preko noći. Reakciona smeša je zatim neutralisana do pH =7 sirćetnom kiselinom (0.14 mL, 2.4 mmol) i onda je rastvarač evaporisan. Sirovom materijalu je dodat trietilamin trihidrofluorid (3 mL, 18 mmol) i smeša je mešana na 37 °C u atmosferi azota tokom 4 sata. Reakciona smeša je zatim razblažena sa ACN (4 mL) i tretirana sa trietilaminom (7.70 mL, 55.3 mmol) i izopropoksitrimetilsilanom (4.79 mL, 27.0 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta i zatim koncentrovana in vacuo. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini MeOH, adsorbovan na čepu od Celite prečišćen tečnom hromatografijom sa hidrofilnom interakcijom (Si02, 50 g RediSep Rf Gold kolona, 0-35% voda/acetonitril koja sadrži 10 mM amonijum acetata, 5 min gradijent,(0%) 0-35 %, 30 min, 30 mL/mim) da se dobiju dva proizvoda: intermedijer 12C (250 mg, 30.3% prinos). m/z 687.6 (M+H) i intermedijer 12D (175 mg, 25% prinos). m/z 583.6 (M+H).<1>H NMR (499 MHz, METANOL-d4) δ 8.72 (br s, 2H), 8.57 (d, J=5.01 Hz, 1H), 8.45 (d, J=4.77 Hz, 1H), 8.09 (br d, J=6.91 Hz, 2H), 7.97 (s, 1H), 7.63-7.71 (m, 1H), 7.50-7.63 (m, 3H), 6.45 (br d, J=16.09 Hz, 1H), 5.52 (br s, 1H), 5.37-5.57 (m, 1H), 5.41 (br s, 1H), 4.57-4.78 (m, 1H), 4.19-4.32 (m, 2H), 4.10-4.19 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.69 (d, J=5.60 Hz, 1H), 3.46-3.63 (m, 2H), 3.34-3.39 (m, 1H), 3.19-3.32 (m, 1H), 2.31-2.53 (m, 3H), 2.04 (s, 1H), 1.83-2.00 (m, 3H).

Pripremanje intermedijera 12E:

[0408]

[0409] Na sobnoj temperaturi rastvoru intermedijera 12C (200 mg, 0.29 mmol) u piridinu (26 mL) dodat je rastvor difenil fosfonata (0.11 mL, 0.38 mmol) u DCM-u (1 mL) u kapima tokom 20 minuta. Ovoj reakcionoj smeši je dodat rastvor joda u THF/H2O (305 mg, 0.04 M) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen na reverzno-faznoj ISCO Gold C18 koloni od 50 g (Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.01M amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.01M amonijum acetata; Gradijent: 0% 7 min, 0-40% B gradijent tokom 23 min) da se dobije Intermedijer 12E (70 mg, 0.094 mmol, 32% prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS, [M+H]<+>= 749.5.

Primer 12

[0410]

[0411] Intermedijer 12E (70 mg, 0.094 mmol) je tretiran amonijakom (5 mL, 35.0 mmol, 7N) i reakciona smeša je mešana tokom 1.5 h na 55 °C. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC (Hromatografski uslovi: Instrument: Waters Autopure; Kolona: Luna Omega Polar C18 Kolona, 5(im, 21.2 x 250mm; Brzina protoka: 20.0 mL/min; Mobilna faza: A: 100 mM NH4OAc (pH:6.5) u H2O; B: MeOH (%A=100-%B): gradijent 0-31% B tokom 10.5 min, 31-95% B tokom 0.5 min, 95%B zadržavanje tokom 1 min i 95-0%B tokom 0.5 min) da se dobije Primer 12 (32 mg, 0.05 mmol, 49% prinos). LCMS, [M+H]<+>= 630.5.<1>H NMR (499 MHz, METANOL-d4) δ 8.59 (s, 1H), 8.51 (d, J=5.01 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.52 (br d, J=4.77 Hz, 1H), 6.37 (d, J=16.09 Hz, 1H), 5.51 (d, J=3.93 Hz, 1H), 5.41 (d, J=3.93 Hz, 1H), 5.37-5.55 (m, 1H), 4.92-5.03 (m, 1H), 4.49 (br d, J=11.92 Hz, 1H), 4.39 (br d, J=8.46 Hz, 1H), 4.19-4.31 (m, 1H), 4.06-4.17 (m, 1H), 3.87-4.01 (m, 2H), 3.34-3.47 (m, 1H), 2.62-2.75 (m, 2H), 2.38 (td, J=8.23, 10.25 Hz, 1H).<31p>NMR (202 MHz, METANOL-d4) δ -0.12 (s, 1P), -0.78 (s, 1P).

Primer 13

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-12-hidroksi-3,12-diokso-3-sulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-8-il]piridin-2-karboksamid

[0412]

13 (Dijastereoizomer 1)

[0413] Anhidrovanom rastvoru intermedijera 12D (88 mg, 0.15 mmol)) u piridinu (15 mL) dodat je DBU (342Ill, 2.27 mmol). Smeša je mešana tokom 10 min i zatim reagens 4 (110 mg, 0.24 mmol) u 2 mL DCM je dodat u kapima tokom 30 min. Smeša je zatim mešana za narednih 30 min. na sobnoj temperaturi. Piridin je uklonjen pod smanjenim pritiskom i ostatak je opran sa hladnim etrom. Sirovi proizvod je zatim zagrejan sa 4 mL 7N NH3u MeOH-u na 55 °C tokom 5 sati. Rastvarač je evaporisan i sirovi materijal je prečišćen preparativnom HPLC (Hromatografski uslovi: Instrument: Waters Autopure; Kolona: Zorbax Eclipse C18 plus Kolona, 5(im, 21.2 x 250mm; Brzina protoka: 20.0 mL/min; Mobilna faza: A: 100 mM NH4OAc (pH:6.5); B: ACN (%A=100-%B): gradijent 5-40% B tokom 14 min, 40-95% B tokom 0.5 min.) da se dobije Primer 13 (47 mg, 43% prinos). LCMS, [M+H]<+>= 646.45.<1>H NMR (499 MHz, METANOL-d4) δ 8.62 (s, 1H), 8.51 (d, J=5.01 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.53 (br d, J=4.89 Hz, 1H), 6.35-6.41 (m, 1H), 5.37-5.53 (m, 1H), 5.05-5.16

[0414] (m, 1H), 4.40-4.49 (m, 2H), 4.14-4.32 (m, 3H), 3.91-4.07 (m, 2H), 3.34-3.50 (m, 1H), 2.69 (br s, 2H), 2.32-2.43 (m, 1H), 1.94-1.98 (m, 1H).<31p>NMR (202 MHz, METANOL-d4) δ 56.95 (s, IP), -0.02 (s, IP).

Primer 14

[0415]

14 (Dijastereoizomer 2)

[0416] Primer 14, prikazan iznad, je pripremljen od intermedijera 12D, u skladu sa procedurama analognim onima koje su navedene u Primeru 13 iznad korišćenjem reagensa 3 za korak ciklizacije. LCMS, [M+H]<+>= 646.45.<1>H NMR (499 MHz, METANOL-d4) δ 8.64 (s, 1H), 8.52 (d, J=5.01 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.52 (d, J=5.02 Hz, 1H), 6.34-6.43 (m, 1H), 5.42-5.59 (m, 1H), 5.25-5.37 (m, 1H), 4.39-4.49 (m, 1H), 4.25-4.37 (m, 2H), 4.05-4.14 (m, 1H), 3.98-4.04 (m, 1H), 3.92 (td, J=3.67, 11.03 Hz, 1H), 3.39-3.49 (m, 1H), 3.34-3.38 (m, 1H), 2.67-2.80 (m, 1H), 2.53-2.67 (m, 1H), 2.37 (td, J=8.11, 10.01 Hz, 1H), 1.72-1.89 (m, 1H).<31p>NMR (202 MHz, METANOL-d4) δ 58.36 (s, IP), -0.09 (s, IP).

Primeri 15-1 i 15-2

4-[(1S,7S,8R,10S,16R,17R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-4,13-diokso-4,13-disulfanil-3,5,12,14-tetraoksa-4λ<5>,13λ<5>-difosfatriciklo[14.2.0.0<7,10>]oktadekan-8-il]piridin-2-karboksamid

[0417]

Dijastereoizomer 1 (15-1)

Dijastereoizomer 2 (15-2)

Pripremanje intermedijera 15A:

[0418]

[0419] Suspenzija intermedijera 2M (250 mg, 0.51 mmol) i reagensa 3 (295 mg, 0.661 mmol) u THF (5 mL) je ohlađena na unutrašnju temperaturu od 0 °C. DBU (0.1 mL, 0.66 mmol) je dodat u kapima, i smeša je mešana na 0 °C tokom 10 min. Reakcionoj smeši dodata je sirćetna kiselina (116 µL, 2.0 mmol) na 0 °C, i onda je dodat silika gel i smeša je koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen ISCO hromatografijom sa silika gelom (24 g, 0-10% gradijent MeOH/DCM). Frakcije koje sadrže željeni proizvod su koncentrovane u belu penu koja je koevaporisana sa heptanom (3 x 50 mL) da se dobije 15A (320 mg, 85% prinos). LCMS, [M+H]<+>= 738.6.

Pripremanje intermedijera 15B:

[0420]

[0421] Rastvoru intermedijera 9G (103 mg, 0.351 mmol) i intermedijera 15A (402 mg, 0.544 mmol) u acetonitrilu (7 mL) dodat je DBU (159 µl, 1.05 mmol) u kapima da se dobije bledo žuti rastvor. Nakon 10 min, reakciona smeša je razblažena sa DCM (4 mL) i tretirana sirćetnom kiselinom (100 µL, 1.76 mmol). Dobijena smeša je koevaporisana sa silika gelom, i onda je prečišćena sa fleš hromatografijom preko 24 g silika gela, eluiranje sa 0-15% MeOH/DCM da se dobije intermedijer 15B (300 mg, 99% prinos) kao bela čvrsta supstanca.

Pripremanje intermedijera 15C:

[0422]

[0423] Intermedijeru 15B (302 mg, 0.35 mmol) dodat je amonijak u MeOH-u (5 mL, 35.0 mmol, 7N). Smeša je zagrevana do 55 °C tokom 3 sata i zatim je mešana na sobnoj temperaturi tokom 14 sati. NH3/MeOH je uklonjen pod strujom azota. Ostatku je dodat DCM (5 mL) i trietilsilan (0.56 ml, 3.5 mmol) i zatim je dodata 2,2-dihlorosirćetna kiselina (0.20 mL, 2.45 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 2 sata i zatim koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini MeOH, adsorbovan na čepu od Celite prečišćen pomoću tečne hromatografija sa hidrofilnom interakcijom (SiO2, RediSep Rf Gold kolona od 50 g, 0-40% voda/acetonitril koji sadrži 10 mM amonijum acetata, 5 min gradijent,(0%) 0-35 %, 30 min, 30 mL/min) da se dobije intermedijer 15C (72 mg, 0.13 mmol, 36% prinos) LCMS, [M+H]<+>= 564.5.<1>H NMR (499 MHz, METANOL-d4) δ 8.48 (d, J=5.40 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.54 (d, J=4.65 Hz, 1H), 4.70-4.77 (m, 1H), 4.00-4.13 (m, 4H), 3.67-3.76 (m, 2H), 3.55-3.65 (m, 3H), 3.39-3.48 (m, 1H), 2.91-3.03 (m, 1H), 2.51-2.63 (m, 2H), 2.34-2.50 (m, 4H), 1.71-1.84 (m, 1H).

Primeri 15-1 i 15-2

[0424]

Dijastereoizomer 1 (15-1)

Dijastereoizomer 2 (15-2)

[0425] Anhidrovanom rastvoru intermedijera 15C (68 mg, 0.12 mmol) u piridinu (12 mL) je dodat DBU (270Ill, 1.8 mmol). Smeša je mešana tokom 10 min i zatim reagens 4 (210 mg, 0.47 mmol) u 2 mL MeCN je dodavan u kapima tokom 30 min. Smeša je zatim mešana narednih 30 min. na sobnoj temperaturi. Piridin je uklonjen i ostatak je opran hladnim etrom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC (Hromatografski uslovi: Instrument: Waters Autopure; Kolona:Zorbax Eclipse C18 plus Kolona, 5(im, 21.2 x 250mm; Brzina protoka: 20.0 mL/min; Mobilna faza: A: 100 mMNH40Ac (pH:6.5); B: ACN (%A=100-%B): gradijent 5-50% B tokom 20 min, 50-95% B tokom 1 min, 95%B zadržavanje tokom 1 min) da se dobije Primer 15-1 (14 mg, 0.02 mmol, 17% prinos) i Primer 15-2 (26 mg, 0.04 mmol, 30% prinos).

[0426] Primer 15-1: tR: 7.53 min; M+l obs = 642.5 (Agilent 1290 HPLC/MS; Kolona: Eclipse C18 plus 1.8um 2.1x150mm Kolona; Brzina protoka: 0.3 mL/min; Mobilna faza: A: 20mM NH4OAc (pH 6.5); B: MeOH (%A=100-%B); Gradijent: 5-100% B u 15 min)<1>H NMR (499 MHz, METANOL-d4) δ 8.49 (d, J=5.01 Hz, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.55-7.65 (m, 1H), 4.79-4.84 (m, 1H), 4.22 (ddd, J=3.93, 6.59, 10.46 Hz, 1H), 3.96-4.18 (m, 7H), 3.35-3.26 (m, 2H), 2.45-2.69 (m, 6H), 1.86-1.98 (m, 1H).<31>P NMR (202 MHz, METANOL-d4) δ 56.94 (s, 2P).

[0427] Primer 15-2: tR: 7.98 min; M+1 obs = 642.5; (Agilent 1290 HPLC/MS; Kolona: Eclipse C18 plus 1.8um 2.1x150mm Kolona; Brzina protoka: 0.3 mL/min; Mobilna faza: A: 20mM NH4OAc (pH 6.5); B: MeOH (%A=100-%B); Gradijent: 5-100% B u 15 min);<1>H NMR (499 MHz, METANOL-d4) δ 8.47 (d, J=5.01 Hz, 1H), 8.40 (d, J=4.41 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.99 (br s, 1H), 7.60 (br s, 1H), 4.76-4.82 (m, 1H), 4.15-4.25 (m, 3H), 3.98-4.15 (m, 4H), 3.87 (td, J=5.53, 10.76 Hz, 1H), 3.34-3.42 (m, 1H), 3.26-3.31 (m, 1H), 2.74-2.81 (m, 1H), 2.52-2.69 (m, 2H), 2.40-2.52 (m, 3H), 2.00-2.06 (m, 1H).<31>P NMR (202 MHz, METANOL-d4) δ 57.11 (s, 2P).

[0428] Sledeći primeri, prikazani u tabeli 2 ispod, pripremljeni su u skladu sa procedurama analognim onima koji su navedeni u primerima opisanim iznad korišćenjem odgovarajućeg nukleozidnih monomera koji su opisani kao preparati ili dobijeni iz komercijalnih izvora.

Tabela 2

Primer Struktura Naziv Masa Vreme

Primeri 21-1 i 21-2 (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{5-okso-5H,8H,9H-[1,2,4]triazolo[4,3-a]purin-8-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion

[0429]

Dijastereoizomer 1 (21-1)

Dijastereoizomer 2 (21-2)

Pripremanje intermedijera 21A:

[0430]

Rastvoru intermedijera 1G (479 mg, 1.15 mmol), 2,6-dihloro-9H-purina (326 mg, 1.73 mmol), i 2,6-dihloro-9H-purina (326 mg, 1.73 mmol) u THF-u (11.5 mL) dodat je DIAD (0.350 mL, 1.80 mmol) putem šprica. Dobijena smeša je mešana na 50 °C. Nakon 18 sati, reakcija je ostavljena da se ohladi do sobne temperature i zatim koncentrovana in vacuo. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini CH2Cl2, adsorbovan na čepu SiO2, i prečišćen dva puta pomoću fleš hromatografije (SiO2, RediSep Rf Gold kolona od 40 g, 0% do 100% EtOAc/heksani zatim 0% do 20% MeOH/DCM) da se dobije Intermedijer 21A (437 mg, 0.744 mmol, 65% prinos) kao bela pena.<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.14 (s, 1H), 7.34 - 7.27 (m, 9H), 7.25 - 7.20 (m, 6H), 4.77 (vidljivo q, J=8.7 Hz, 1H), 4.16 (d, J=4.8 Hz, 2H), 3.34 (dd, J=10.1, 4.4 Hz, 1H), 3.26 (dd, J=10.1, 6.4 Hz, 1H), 2.96 - 2.87 (m, 1H), 2.74 - 2.64 (m, 1H), 2.48 - 2.38 (m, 2H), 2.05 (s, 3H). LCMS: vreme retencije = 1.16 min. [M+H]<+>= 587. Kolona Waters BEH C182.1 × 50mm 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 2 %B do 98 %B tokom 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV od 220 nm.

Pripremanje intermedijera 21B:

[0431]

[0432] Intermedijer 21A (437 mg, 0.744 mmol) je rastvoren u maloj količini 1,4-dioksana i dodat je u kapima uz mešanje u ključali rastvor 1,4-dioksana (3 mL) i 1.0 M vodenog natrijum hidroksida (3.00 mL, 3 mmol). Nakon 30 min reakcija je ostavljena da se ohladi do sobne temperature, razblažena je vodom (10 mL) zatim kvenčovana polako sirćetnom kiselinom do pH~7. Smeša je ekstrahovana EtOAc-om (3 × 10 mL) i kombinovani organski slojevi su osušeni (Na2SO4), filtrirani i koncentrovani in vacuo. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću reverzno-fazne -HPLC da se dobije intermedijer 21B (179 mg, 0.340 mmol, 46% prinos). LCMS: vreme retencije = 0.91 min. [M+H]<+>= 527. Kolona Waters BEH C182.1 × 50mm 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 2 %B do 98 %B tokom 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 254 nm.

Pripremanje intermedijera 21C:

[0433]

[0434] Intermedijer 21B (179 mg, 0.340 mmol) i hidrazin hidrat (1 mL, 31.9 mmol) u piridinu (1.5 mL) je refluksovan tokom 6 sati i evaporisan do suva. Ostatak je opran sa 3% vodenog kalijum karbonata i ekstrahovan sa DCM. Kombinovani organski slojevi su koncentrovani da se dobije bela čvrsta supstanca koja je preneta u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. Suspenzija sirovog hidrazin intermedijera (50 mg, ~0.096 mmol) u trietil ortoformatu (1 mL) je mešana na 60 °C tokom 4 sata. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na sobnoj temperaturi zatim je koncentovana. Sirovi materijal (koji sadrži dva regioizomerna proizvoda) je stavljen u MeOH i prečišćen pomoću reverzne faze-HPLC da se dobije intermedijer 21C (glavni regioizomer) (27 mg, 0.051 mmol, 53% prinos u dva koraka).<1>H NMR (500 MHz, METANOL-d4) δ 8.89 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.30 - 7.21 (m, 15H), 4.76 (vidljivo q, J=8.6 Hz, 1H), 3.75 - 3.68 (m, 4H), 2.98 - 2.88 (m, 1H), 2.65 - 2.58 (m, 1H), 2.44 - 2.36 (m, 1H), 2.30 - 2.21 (m, 1H). LCMS: vreme retencije = 0.85 min. [M+H]<+>= 533. Kolona: Waters BEH C182.1 × 50mm 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 2 %B do 98 %B tokom 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 254 nm.

Pripremanje intermedijera 21D:

[0435]

[0436] Rastvoru Intermedijera 21C (125 mg, 0.235 mmol) u DMF-u (2 mL) dodat je imidazol (80 mg, 1.17 mmol) i terc-butildifenilhlorosilan (0.181 mL, 0.704 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. Reakcija je kvenčovana metanolom (0.4 mL), zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Isparljive supstance su uklonjene pod strujom azota. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini CH2Cl2, adsorbovan na čepu SiO2, i prečišćen pomoću fleš hromatografije (SiO2, RediSep Rf Gold kolona od 40 g, 0% MeOH/EtOAc do 100% MeOH/EtOAc) da se dobije Intermedijer 21D (131 mg, 0.170 mmol, 72% prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: vreme retencije = 1.23 min. [M+H]<+>= 771.7. Kolona: Waters BEH C182.1 × 50mm 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 2 %B do 98 %B tokom 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 254 nm.

Pripremanje intermedijera 21E:

[0437]

[0438] Rastvoru intermedijera 21D (107 mg, 0.139 mmol) i trietilsilana (0.0746 mL, 0.467 mmol) u CH2Cl2(1.4 mL) dodata je trifluorosirćetna kiselina (0.021 mL, 0.278 mmol) u kapima. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota tokom 2 sata. Reakcija je razblažena sa MeOH-om (0.6 mL) i mešana tokom 10 min. Smeša je zatim koncentrovana in vacuo i podvrgnuta azeotropiji još dva puta sa MeOH-om (2 × 3 mL). Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini DCM-a, adsorbovan na čepu silike, i prečišćen pomoću fleš hromatografije (SiO2, 40 g kolona, 0% MeOH/EtOAc do 100% MeOH/EtOAc) da se dobije intermedijer 21E (45 mg, 0.085 mmol, 61% prinos). LCMS: vreme retencije = 0.98 min. [M+H]<+>= 529. Kolona: Waters BEH C182.1 × 50mm 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 2 %B do 98 %B tokom 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 254 nm.

Pripremanje intermedijera 21F:

[0439]

[0440] U rastvor koji sadrži intermedijer 21E i intermedijer 9J (73.0 mg, 0.085 mmol) (podvrgnut azeotropiji zajedno 3x sa CH3CN i osušen pod visokim vakuumom tokom 1 sata) u CH3CN-u (3 mL) dodat je DBU (0.0257 mL, 0.170 mmol) u kapima putem šprica. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Nakon 18 sati, reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Sirovi materijal je rastvoren u maloj količini DCM i prečišćen pomoću fleš hromatografije (SiO2, RediSep Rf Gold kolona od 24 g, 0% do 100% MeOH u DCM-u) da se dobije intermedijer 21F (77 mg, 0.063 mmol, 74% prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: vreme retencije = 1.23 min. [M+H]<+>= 1218.5. Kolona: Waters BEH C182.1 × 50mm 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 2 %B do 98 %B tokom 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 254 nm.

Pripremanje intermedijera 21G:

[0441]

[0442] Suspenzija intermedijera 21F (77 mg, 0.063 mmol) u čistom trietilamin trihidrofluoridu (0.50 mL, 3.07 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 22 sata, reakciona smeša je razblažena sa CH3CN (1 mL) i kvenčovana trietilaminom (0.86 mL, 6.14 mmol) (2 ekv, u odnosu na Et3N•3HF) i izopropoksitrimetilsilanom (1.6 mL, 9.21 mmol) (3 ekv, u odnosu na Et3N•3HF). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min, zatim koncentrovana in vacuo. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću reverzno fazne HPLC (Sunfire C18, 5-mikron, 19 × 150 mm, 18-90% acetonitril/voda koja sadrži 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom, 20 mL/min, 9 min gradijent, praćen na 254 nm) da se dobije intermedijer 21G (37 mg, 0.050 mmol, 79 % prinos). LCMS: vreme retencije = 0.53 min. [M+H]<+>= 742. Kolona: Waters BEH C182.1 × 50mm 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 2 %B do 98 %B tokom 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 254 nm.

Pripremanje primera 21-1:

[0443]

Dijastereoizomer 1 (21-1)

[0444] Rastvoru intermedijera 21G (19 mg, 0.026 mmol) i DBU (0.058 mL, 0.384 mmol) u DMF-u (3 mL) dodat je rastvor reagensa 4 (17.2 mg, 0.038 mmol) u DMF-u (1 mL) u kapima putem šprica tokom 10 min. Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata, zatim je kvenčovana sa metanolom (3 mL) i sirćetnom kiselinom (0.044 mL). Isparljive supstance su zatim uklonjene pod strujom azota. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću reverzno-fazne HPLC da se dobije ciklizovani proizvod (7.1 mg, 8.66 µmol, 33% prinos). LCMS: vreme retencije = 0.53 min. [M+H]<+>= 820. Kolona: Waters BEH C18 2.1 × 50mm 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 2 %B do 98 %B tokom 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 254 nm. Rastvor delimično zaštićenog makrociklusa (7.1 mg, 8.66 µmol) u MeOH-u (0.5 mL) i konc. NH4OH-u (0.5 mL) je zagrevan u zatvorenoj posudi pod pritiskom na 35 °C preko noći. Reakcioni sud je ohlađen u ledenoj kupki tokom 10 min pre otvaranja. Reakciona smeša je prebačena u posudu sa okruglim dnom i koncentrovana in vacuo. Sirovi materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters Xselect RP Prep C18 OBD Kolona, 19 mm × 150 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 100 mM NH4OAc u vodi (pH 6.5); Mobilna faza B: MeOH; Gradijent: 15-24% B tokom 25 minuta; Brzina protoka: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene da se dobije Primer 21-1 (2.9 mg). LCMS: vreme retencije = 15.7 min. [M+H]<+>= 716. Kolona: Waters XSelect CSH C183.0 × 150 mm 3.5 µm čestice; Mobilna faza A: 20 mM NH4OAc u vodi (pH 6.5) sa 5% MeOH; Mobilna faza B: MeOH; Gradijent: 0 %B do 50 %B tokom 15 min, zatim do 95% u 17min i zadržavanje tokom 3 min na 95 %B; Temperatura kolone: 45 °C; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: UV na 260 nm.

Pripremanje Primera 21-2:

Dijastereoizomer 2 (21-2)

[0446] Rastvoru 21G (19 mg, 0.026 mmol) i DBU (0.058 mL, 0.384 mmol) u DMF-u (3 mL) je dodat rastvor reagensa 3 (17.2 mg, 0.038 mmol) u DMF-u (1 mL) u kapima putem šprica tokom 10 min. Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata, zatim je kvenčovana sa metanolom (3 mL) i sirćetnom kiselinom (0.044 mL). Isparljive supstance su zatim uklonjene pod strujom azota. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću reverzno-fazne HPLC da se dobije ciklizovani proizvod (7.3 mg, 8.91 µmol, 35% prinos). LCMS: vreme retencije = 0.53 min. [M+H]<+>= 820. Kolona: Waters BEH C18 2.1 × 50mm 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 2 %B do 98 %B tokom 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 254 nm. Rastvor delimično zaštićenog makrociklusa (7.3 mg, 8.91 µmol) u MeOH-u (0.5 mL) i konc. NH4OH-u (0.5 mL) je zagrejan u zatvorenoj posudi pod pritiskom na 35 °C preko noći. Reakciona posuda je ohlađena u ledenoj kupki tokom 10 min pre otvaranja. Reakciona smeša je prebačena u posudu sa okruglim dnom i koncentrovana in vacuo. Sirovi materijal je prečišćen putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters Xselect RP Prep C18 OBD Kolona, 19 mm × 150 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 100 mM NH4OAc u vodi (pH 6.5); Mobilna faza B: MeOH; Gradijent: 15-24% B tokom 25 minuta; Brzina protoka: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene da se dobije Primer 21-2 (3.9 mg). LCMS: vreme retencije = 17.5 min. [M+H]<+>= 716. Kolona: Waters XSelect CSH C183.0 × 150 mm 3.5 µm čestice; Mobilna faza A: 20 mM NH4OAc u vodi (pH 6.5) sa 5% MeOH; Mobilna faza B: MeOH; Gradijent: 0 %B do 50 %B tokom 15 min, zatim do 95% na 17min i zadržavanje tokom 3 min pri 95 %B; Temperatura kolone: 45 °C; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: UV na 260 nm.

Primeri 22-1, 22-2, 22-3, i 22-4

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-(6-okso-6,9-dihidro-1H-purin-9-il)-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion

[0447]

Dijastereoizomer 1 (22-1)

Dijastereoizomer 2 (22-2)

Dijastereoizomer 3 (22-3)

Dijastereoizomer 4 (22-4)

Pripremanje intermedijera 22A:

[0448]

[0449] Rastvoru intermedijera 2G (0.6 g, 1.085 mmol) u dioksanu (9 mL) je dodat natrijum hidroksid (0.121 g, 3.04 mmol). Reakcija je mešana tokom 16 h. LCMS analiza prikazuje većinom početni materijal. Vodeni IN rastvor LiOH (3.25 mL, 3.25 mmol) dodat je reakciji i smeša je mešana na 60 °C dodatnih 16 h. Reakcija je koncentrovana in vacuo i tretirana sa fosfatnim puferom (~10 mL) sa pH 4.5 i ekstrahovana sa EtOAc-om, i kombinovani organski slojevi su osušeni (MgSO4) i koncentrovani in vacuo. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini DCM-a i nanešen na ISCO kolonu sa silika gelom od 40 g i prečišćen korišćenjem Teledyne ISCO sistema, eluiranjem tokom 15 min gradijenta sa 1%-10% DCM/MeOH da se dobije da se dobije intermedijer 22A (0.5 g, 1.015 mmol, 94 % prinos), m/z (493, M+H), kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 8.21 - 8.17 (m, 1H), 8.00 - 7.96 (m, 1H), 7.41 - 7.18 (m, 15H), 4.72 - 4.63 (m, 1H), 3.79 - 3.69 (m, 2H), 3.40 - 3.29 (m, 2H), 3.01 - 2.91 (m, 1H), 2.62 -2.53 (m, 1H), 2.48 - 2.38 (m, 1H), 2.34 - 2.24 (m, 1H).

Pripremanje intermedijera 22B:

[0450]

[0451] Smeša koja sadrži intermedijer 22A (0.38 g, 0.771 mmol) i 1H-tetrazol (0.065 g, 0.926 mmol) u suvom acetonitrilu je koncentrovana do suva na rotacionom isparivaču (2 × 5 mL) i zatim ponovo suspendovana u acetonitrilu (5 mL) i ostavljena u atmosferi azota. U odvojenoj posudi sa okruglim dnom, (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il (2-cijanoetil) diizopropilfosforamidit (Sigma-Aldrich, 0.845 g, 0.964 mmol) u acetonitrilu (5 mL) je koncentrovan do suva na rotacionom isparivaču. Azeotropna procedura ponovljena je sa dodatnim acetonitrilom (5 mL) i zatim ponovo suspendovana u acetonitrilu (2.5 mL) i ovaj rastvor je ukapavan mešanoj smeši 22A na sobnoj temperaturi. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Reakciji je dodat (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tiokso-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamid (0.190 g, 0.926 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Rastvarač je uklonjen in vacuo. Ostatak je rastvoren u minimalnoj količini MeOH-a i nanešen na reverzno-faznu ISCO C18 Redisep Rf, Gold kolonu visokih performansi od 50 g i prečišćen na Teledyne ISCO sistemu korišćenjem gradijenta 0-100%(ACN/voda/amonijum acetat 95/5/0.5) u (voda/ACN/amonijum acetat 95/5/0.5) tokom 15 min gradijenta da se dobije intermedijer 22B (0.604 g, 0.465 mmol, 100 % prinos), m.z (1300, M+H), kao bela pena što je praćeno koncentracijom in vacuo azeotropijom sa 3×10 mL acetonitrila

[0452] Pripremanje intermedijera 22C:

[0453] Rastvoru intermedijera 22B (1.0 g, 0.770 mmol) i trietilsilana (0.615 ml, 3.85 mmol) u dihlorometanu (15 mL) dodat je TFA (0.178 ml, 2.309 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1h. Voda je dodata (5 mL) što je praćeno dodavanjem zasićenog vodenog NaHCO3rastvora (~5 mL). Smeša je prebačena u levak za odvajanje i ekstrahovana sa DCM (2 × 10 mL) i Me-THF (2 × 10 mL). Ekstrakti su kombinovani, osušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrovani. Koncentrat je suspendovan u dietil etru (~20 mL) i mešan tokom 1h. Fini prah koji se formirao je sakupljen vakuum filtracijom i opran smešom heksana i dietil etra (1/1). Materijal je podeljen između heksana i metanola. Sloj metanola je izolovan i koncentrovan in vacuo da se dobije Intermedijer 22C (0.49 g, 0.649 mmol, 84 % prinos), m/z (755, M+H), kao bledo žuta čvrsta supstanca.

Pripremanje intermedijera 22D:

[0455] Na 0 °C rastvoru intermedijera 22C (0.44 g, 0.583 mmol) u piridinu (21.20 ml) je dodat rastvor difenil fosfonata (0.135 ml, 0.700 mmol) u piridinu (2.120 ml) u kapima tokom perioda od 1 h. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Čvrst (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tiokso-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamid (0.180 g, 0.875 mmol) je dodat i reakcija je mešana dodatnih 3h na sobnoj temperaturi. Reakcija je koncentrovana in vacuo. Ostatak je rastvoren u minimalnoj količini MeOH i nanešen na reverzno-faznu ISCO C18 Redisep Rf, Gold kolonu visokih performansi od 50 g i prečišćen na Teledyne ISCO sistemu korišćenjem gradijenta 0-100%(ACN/voda/amonijum acetat 95/5/0.5) u (voda/ACN/amonijum acetat 95/5/0.5) tokom 15 min gradijenta da se dobije intermedijer 22D (0.081 g, 0.097 mmol, 16.68 % prinos), m/z (833, M+H) kao smeša dijasteromera.

Primeri 22-1, 22-2, 22-3, i 22-4

[0456]

[0457] Smeša intermedijera 22D (0.081 g, 0.097 mmol) i amonijaka (7N in MeOH) (6.95 mL, 48.6 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1h i zagrevana u zatvorenoj bočici na 50 °C tokom 3h. Rastvarač je uklonjen in vacuo. Ostatak je rastvoren u minimalnoj količini MeOH-a i nanešen na ISCO C18 Redisep Rf, Gold kolonu visokih performansi od 50 g koja je bila uravnotežena sa mobilnom fazom A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.01 M amonijum acetat; Mobilnom fazom B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.01 M amonijum acetata i i prečišćen korišćenjem Teledyne ISCO sistema sa gradijentom: 0% B tokom zapremine 2 kolone do 100% B tokom 20 kolona da se dobije sirova smeša proizvoda. Individualni dijasteromeri su izolovani putem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Agilent Bonus RP 21.2 × 100 mm, 5-µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 20-mM amonijum acetata; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 0% B zadržavanje 0-6 minuta. 0%-25%B tokom 16 minuta, zatim 4-minuta zadržavanje na 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene putem centrifugalne evaporacije. Analitička LC/MS korišćena je da odredi finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja: Kolona: Agilent Bonus RP, 2.1 mm × 50 mm, 1.8 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 20 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: acetonitril. Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B zadržavanje 1 min, zatim 0% B do 100 %B tokom 4 min, zatim 0.75 min zadržavanje na100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0458] Primer 22-1: Prinos proizvoda je bio 3.5 mg, vreme retencije: 2.0 min; Uočena masa: m/z (676.0, M+H)

[0459] Primer 22-2: Prinos proizvoda je bio 3.0 mg, vreme retencije: 2.05 min; Uočena masa: m/z (676.0, M+H)

[0460] Primer 22-3: Prinos proizvoda je bio 3.5 mg, vreme retencije: 2.14 min; Uočena masa: m/z (676.0, M+H)

[0461] Primer 22-4: Prinos proizvoda je bio 3.1 mg, vreme retencije: 2.29 min; Uočena masa: m/z (676.0, M+H)

Primer 23

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{8-okso-4H,5H,8H-[1,2,3,4]tetrazolo[1,5-a]purin-5-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion

Dijastereoizomer 1 (23)

Pripremanje intermedijera 23A:

[0463]

[0464] Rastvoru Intermedijera 21B (31.3 mg, 0.059 mmol) u DMF-u (0.60 mL) dodat je natrijum azid (4.63 mg, 0.071 mmol). Dobijena smeša je mešana na 70 °C tokom 3 sata. Imidazol (12.1 mg, 178 µmol) i terc-butildifenilhlorosilan (22.9 µL, 89 µmol) su zatim dodati, i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 16 sati, dodatni imidazol (24.2 mg, 356 µmol) i tercbutildifenilhlorosilan (46 µL, 178 µmol) su dodati. U 23 časa, reakcija je kvenčovana metanolom (0.11 mL), zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Isparljive supstance su uklonjene pod strujom azota. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini CH2Cl2, adsorbovan na čepu SiO2, i prečišćen pomoću fleš hromatografije (SiO2, RediSep Rf Gold kolona od 4 g, 0% MeOH/EtOAc do 10% MeOH/EtOAc, 10 min gradijent zatim 5 min zadržavanje, 10% MeOH/EtOAc do 100% MeOH/EtOAc, 5 min gradijent zatim 5 min zadržavanje, 18 mL/min) do 23A (33.3 mg) kontaminiran sa imidazolom.<1>H NMR (500 MHz, METANOL-d4) δ 8.08 (s, 1H), 7.65 - 7.57 (m, 4H), 7.45 - 7.29 (m, 6H), 7.22 - 7.10 (m, 15H), 4.78 (td, J=9.3, 8.1 Hz, 1H), 3.78 - 3.69 (m, 2H), 3.43 (dd, J=9.6, 4.7 Hz, 1H), 3.16 (t, J=8.9 Hz, 1H), 2.99 - 2.91 (m, 1H), 2.55 - 2.46 (m, 1H), 2.20 (q, J=10.0 Hz, 1H), 2.16 - 2.05 (m, 1H), 0.99 (s, 9H). LCMS: RT = 1.24 min. [M+H]<+>= 772. Kolona: Waters BEH C18 2.1 × 50mm 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 2 %B do 98 %B tokom 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 254 nm.

Pripremanje intermedijera 23B:

[0465]

[0466] U rastvor delimično prečišćenog 23A (33.3 mg) i trietilsilana (29 µL, 178 µmol) u CH2Cl2(0.6 mL) dodata je trifluorosirćetna kiselina (9 µL, 119 µmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Nakon 3 sata, dodatni trietilsilan (57 µL, 356 µmol) i trifluorosirćetna kiselina (18 µL, 238 µmol) su dodati. U 5 sati, reakcija je razblažena sa MeOH (0.6 mL) i mešana tokom 10 min. Smeša je zatim koncentrovana in vacuo i podvrgnuta azeotropiji još dva puta sa MeOH (2 × 1 mL). Ostatak je rastvoren u metanolu (800 µL), zatim natrijum metoksid (0.5 M u MeOH) (200 µL, 100 µmol) je dodat u kapima putem šprica (da cepa TFA estar koji je nastao tokom uklanjanja zaštite). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min, zatim je kvenčovana sa sirćetnom kiselinom (12 µL, 200 µmol) i koncentrovana in vacuo. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini EtOAc (+MeOH), adsorbovan na čepu silike, i prečišćen pomoću fleš hromatografije (SiO2, 4 g kolona, 0% MeOH/EtOAc do 100% MeOH/EtOAc, 20 min gradijent, 18 mL/min) da se dobije 23B (35.1 mg) kontaminiran sa imidazolom iz prethodnog koraka.<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ 8.02 (s, 1H), 7.73 - 7.66 (m, 4H), 7.50 - 7.37 (m, 6H), 4.67 (q, J=8.6 Hz, 1H), 3.87 - 3.77 (m, 2H), 3.77 - 3.66 (m, 2H), 2.94 - 2.83 (m, 1H), 2.65 - 2.53 (m, 1H), 2.46 - 2.35 (m, 1H), 2.35 - 2.23 (m, 1H), 1.08 (s, 9H). LCMS: RT = 0.98 min. [M+H]<+>= 530. Kolona: Waters BEH C18 2.1 × 50mm 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 2 %B do 98 %B tokom 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV od 220 nm.

Pripremanje intermedijera 23C:

[0467]

[0468] U rastvor koji sadrži delimično prečišćen 23B (35.1 mg) i intermedijer 9J (54.4 mg, 63.4 µmol) (podvrgnut azeotropiji zajedno 3x sa CH3CN i osušen pod visokim vakuumom tokom 30 min) u CH3CN-u (0.6 mL) dodat je DBU (10 µL, 63.4 µmol) u kapima putem šprica. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota. Reakcija se nije nastavila dok višak DBU (40 µL, 254 µmol) i intermedijer 9J (109 mg, 127 µmol) nisu dodati. Nakon što je uočeno formiranje proizvoda pomoću LCMS, reakcija je kvenčovana dodavanjem MeOH (2 mL). Smeša je zatim koncentrovana in vacuo. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini MeOH, adsorbovan na čepu od Celite, i prečišćen pomoću reverzno-fazne MPLC (C18, RediSep Rf Gold kolona od 15.5 g, 5-95% acetonitril/voda koja sadrži 10 mM amonijum acetata, 8.6 min gradijent, 30 mL/min) da se dobije 23C (10 mg) kontaminiran adenozin monotiofosfatom. LCMS: RT = 1.06 min. [M+H]<+>= 1219. Kolona: Waters BEH C182.1 × 50mm 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetat; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 5 %B do 95 %B tokom 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 95 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV od 220 nm.

Pripremanje intermedijera 23D:

[0469]

[0470] Delimično prečišćena suspenzija 23C (10 mg) u čistom trietilamin trihidrofluoridu (0.50 mL, 3.07 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 22 sata, reakciona smeša je razblažena sa CH3CN (0.86 mL) i kvenčovana sa trietilaminom (0.86 mL, 6.14 mmol) (2 ekv, u odnosu na Et3N•3HF) i izopropoksitrimetilsilanom (1.6 mL, 9.21 mmol) (3 ekv, u odnosu na Et3N•3HF). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min, zatim koncentrovana in vacuo. Sirovi proizvod je rastvoren u maloj količini 10% acetonitril/voda koji sadrži 10 mM amonijum acetata, adsorbovan na čepu od Celite, i prečišćen pomoću reverzno-fazne MPLC (C18, RediSep Rf Gold kolona od 15.5 g, 14% acetonitril/voda koja sadrži 10 mM amonijum acetata, izokratski, 30 mL/min) da se dobije 23D (5.6 mg) kontaminiran adenozin monotiofosfatom iz prethodnog koraka. LCMS: RT = 0.50 min. [M+H]<+>= 743. Kolona: Waters BEH C182.1 × 50mm 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: voda sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: acetonitril sa 0.05 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 2 %B do 98 %B tokom 1 min, zatim 0.5 min zadržavanje na 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV od 220 nm.

Pripremanje primera 23:

[0471]

Dijastereoizomer 1 (23)

[0472] U blago zamućeni rastvor delimično prečišćenog 23D (2.4 mg) (podvrgnut azeotropiji 3x sa CH3CN) i DBU (7 µL, 0.048 mmol) u DMF-u (0.24 mL) dodat je rastvor reagensa 3 (2.2 mg, 4.85 µmol) u DMF-u (80 µL) u kapima putem šprica tokom 15 min. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 30 min druga porcija reagensa 3 (2.2 mg, 4.85 µmol) u DMF-u (80 µl) je dodata u kapima putem šprica. U 60 min reakcija je kvenčovana sa metanolom (0.40 mL) i sirćetnom kiselinom (6 µL). Isparljive supstance su zatim uklonjene pod strujom azota da se dobije sirovi ciklizovani proizvod kao 85:15 smeša Dijastereoizomera. Ovaj materijal je prenet u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS: RT = 13.7 min (glavni izomer), 14.2 min (minorni izomer).

[M+H]<+>= 821. Kolona: Waters XSelect CSH C183.0 × 150 mm 3.5 µm čestice; Mobilna faza A: 10 mM TEAA u vodi (pH 6.5); Mobilna faza B: 80:20 acetonitril/10 mM TEAA u vodi (pH 6.5); Gradijent: 5 %B do 50 %B tokom 15 min; Temperatura kolone: 25 °C; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: UV od 285 nm. Suspenzija sirovog makrociklusa u amonijaku (7 N) u MeOH (1.0 mL, 7.0 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 24 časa, reakcija je koncentrovana in vacuo. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću reverzne faze HPLC (XSelect CSH C18 OBD, 5-mikron, 19 × 150 mm, Rastvarač A: 100 mM amonijum acetat (pH 6.5), Rastvarač B: čist acetonitril, 15-24% B, 20 mL/min, 25 min gradijent, praćen na 260 nm). Proizvod (glavni izomer, vreme retencije = 10.7 min) je izolovan i liofilizovan do suva da se dobije Primer 23 (1.6 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: RT = 14.6 min. [M+H]<+>= 717. Kolona: Waters XSelect CSH C18 3.0 × 150 mm 3.5 µm čestice; Mobilna faza A: 20 mM NH4OAc u vodi (pH 6.5); Mobilna faza B: 20 mM NH4OAc u acetonitrilu; Gradijent: 0 %B do 13 %B tokom 25 min; Temperatura kolone: 55 °C; Protok: 0.5 mL/min; Detekcija: UV od 260 nm.

EVALUACIJA BIOLOŠKE AKTIVNOSTI

STING THP1 protokol reporterskog testa

[0473] THP1-Dual™ ćelije su izvedene iz humane THP-1 monocitne ćelijske linije stabilnom integracijom dva inducibilna reporterska konstrukta. U tu svrhu, THP1-Dual™ ćelije omogućavaju simultano proučavanje NF-κB puta, praćenjem aktivnosti SEAP, i IRF puta procenom aktivnosti izlučene luciferaze (Lucia). Oba reporterska proteina lako se mogu izmeriti u supernatantu ćelijske kulture kada se koristi QUANTI-Blue™, SEAP detekcioni reagens, i QUANTI-Luc™, reagens za detekciju luciferaze.

[0474] THP1-Dual™ ćelije indukuju aktivaciju NF-κB kao odgovor na STING agoniste. Oni takođe pokreću IRF put nakon stimulacije sa STING agonistima, kao što je cGAMP. Ovde su, THP-1-Dual ćelije korišćene za procenu funkcije STING vezivnih sredstava na ćelijskom nivou.

[0475] Serijska razblaženja jedinjenja u DMSO-u dodata su u ploče sa 384 bunarčića male zapremine pri 100nl/bunarčić korišćenjem ECHO akustičnog dispenzera (Labcyte, model 550) da se postigne konačna početna koncentracija od 100 µM u ćelijskoj suspenziji. THP-1 Dual™ STING reporterske ćelije (Invivogen, Dual ćelije kat. br. THPD-nfis) dodate su u ploče sa jedinjenjima pri 15,000 ćelija u 10 µL po bunarčiću u RPMI medijumu (Gibco, kat.br.11875) koji sadrži 10% ljudske plazme u ploči male zapremine za kulturu tkiva sa 384 bunarčića sa crnim zidom čistog dna (Corning, kat.br. 3542) za SEAP test i čvrstoj beloj ploči male zapremine (Coming, kat.br.

3826) za test luciferaze. Jedna kolona ploče je rezervisana za tretman sa cGAMP na 100 µM za 100 % izračunavanje aktivacije i jedna kolona je bez tretmana (DMSO samo) za aktivaciju osnovnog stanja. Ploče su zatim inkubirane u inkubatoru na 37 °C pri 5% CO2tokom 20 sati.

[0476] U SEAP testu, 5µl 2x QuantiBlue (Invivogen, kat.br. Rep-qb2) je dodato u crne ploče sa 384 bunarčića zasejanih sa THP1 ćelijama i inkubirano na 37 °C tokom 2 sata. Ploče su očitane na Envision (Perkin Elmer) na 620 nm talasne dužine (OD620). U testu luciferaze, 5 µl Quantiluc (Invivogen, Rep-qlc2) je dodato u bele ploče sa 384 bunarčića zasejanih sa THP1 ćelijama i očitane su na 5 minuta na Envision (Perkin Elmer) korišćenjem protokola luminescencije (RLU). Za obe ćelijske linije, 100% aktivacija je određena vrednošću (RLU) THP-1 Dual STING ćelija stimulisanih sa 100 µM cGAMP (Iivogen, kat.br. TLRL-NACGA23-5).

STING HTRF TESTOVI VEZIVANJA

[0477] Vremenski razložen test vezivanja konkurencije zasnovan na FRET-u korišćen je za procenu vezivanja ispitivanog artikla za STING WT i STING AQ. Sa His označeni STING citoplazmatski domen (WT ili AQ) u koncentraciji od 20 nM je inkubiran sa 2.5 nM Tbobeleženim anti-His antitelom, ispitnim jedinjenjem, i fluoresceinom obeleženom cGAMP analognom probom (BioLog kat.br. C195) pri koncentraciji od 200 nM (STING WT) ili 40 nM (STING AQ) u PBS-u koji sadrži 0.005% Tween-20 i 0.1% BSA tokom jednog sata.

Fluorescencija na 495 nm i 520 nm je merena korišćenjem EnVision čitača mikroploče da bi se kvantifikovao FRET između Tb-om obeleženog antitela na His i probe obeležene fluoresceinom. Pozadina je definisana kao signal dobijen u odsustvu STING proteina, i za pozadinu umanjeni FRET odnosi su normalizovani na maksimalni signal koji je dobijen u odsustvu testiranog jedinjenja. Ove vrednosti su pretvorene u procenat inhibicije. Procenat inhibicije je određen za testirana jedinjenja pri 11 koncentracija. IC50, definisan kao koncentracija konkurentnog test jedinjenja potrebnog da se smanji specifično vezivanje probe za 50%, izračunato je korišćenjem logističke jednačine sa 4 parametra da bi se uklopilo u podatke

[0478] STING WT: His-TVMV-S-hSTING(155-341)-H232R

Primer br. THP1 Reporter testovi HTRF Bin IC50 ding testovi EC50 (µM) (µM)

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje sa formulom (I)

gde X je nezavisno O ili S; X<1>, X<2>, X<3>i X<4>su svaki nezavisno O ili NH; R<1>i R<2>su nezavisno

ili

sa tim da jedan od R<1>i R<2>mora biti

Z1je N ili CR<a>; Z2je NR; R<a>je H, halogen, C1-6alkil supstituisan sa 0-6 R<5>, C3-6cikloalkil supstituisan sa 0-6 R<5>, CN, NO2, OH, OR<a1>, SR<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -COOR<a1>, -OC(O)R<a1>, - OC(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>R<a1>, -NR<a1>C(O)R<a1>, - NR<a1>COOR<a1>, -NR<a1>C(O)NR<a1>R<a1>, - NR<a1>S(O)2R<a1>, -NR<a1>S(O)2NR<a1>R<a1>, -S(O)R<a1>, - S(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1> Rje H, C1-6alkil supstituisan sa 0-6 R<5>, C3-6cikloalkil supstituisan sa 0-6 R<5>, -C(O)R<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>; R<a1>je H, C1-3alkil ili C3-6cikloalkil; R<3>je H, CH3, halogen, -NR<a1>R<a1>ili OR<a1>; R<3a>je H, CH3, halogen, -NR<a1>R<a1>ili OR<a1>; ili R<3>i R<3a>mogu se uzeti zajedno da formiraju 3-4 člani karbociklus; ili R<3>i R<3a>mogu se uzeti zajedno da formiraju C=CH2supstituent; R<5>je H, halogen, C1-3alkil, CN, NO2, OH, OR<a1>, SR<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -COOR<a1>, -OC(O)R<a1>, -OC(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>R<a1>, -NR<a1>C(O)R<a1>, - NR<a1>COOR<a1>, -NR<a1>C(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>S(O)2R<a1>, -NR<a1>S(O)2NR<a1>R<a1>, -S(O)R<a1>, - S(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>; R<5a>je H ili C1-3alkil; R<6>je H, halogen, C1-3alkil, CN, NO2, OH, OR<a1>, SR<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -COOR<a1>, -OC(O)R<a1>, -OC(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>R<a1>, -NR<a1>C(O)R<a1>, - NR<a1>COOR<a1>, -NR<a1>C(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>S(O)2R<a1>, -NR<a1>S(O)2NR<a1>R<a1>, -S(O)R<a1>, - S(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>; R<8>je H, halogen, C1-3alkil, CN, NO2, OH, OR<a1>, SR<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -COOR<a1>, -OC(O)R<a1>, -OC(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>R<a1>, -NR<a1>C(O)R<a1>, - NR<a1>COOR<a1>, -NR<a1>C(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>S(O)2R<a1>, -NR<a1>S(O)2NR<a1>R<a1>, -S(O)R<a1>, - S(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>; R<9>je H, halogen ili metil; Y je CR<a>ili N; m je 0, 1, 2 ili 3; ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
2. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 gde X je S; ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
3. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 gde X je O; ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
4. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 sa formulom

ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
5. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 sa formulom

ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
6. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 5 gde X je S; ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
7. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 5 gde X je O; ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
8. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 sa formulom

ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
9. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 sa formulom

ili tautomer ili stereoizomer ili farmaceutski prihvatljiva so istog.
10. Jedinjenje sa formulom (II)

gde X je nezavisno O ili S; X<1>, X<2>, X<3>i X<4>su svaki nezavisno O ili NH; R<1>i R<2>su svaki nezavisno

ili sa tim da jedan od R<1>i R<2>mora da bude

Z1je N ili CR<a>; Z2je NR; R<a>je H, halogen, C1-6alkil supstituisan sa 0-6 R<5>, C3-6cikloalkil supstituisan sa 0-6 R<5>, CN, NO2, OH, OR<a1>, SR<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -COOR<a1>, -OC(O)R<a1>, - OC(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>R<a1>, -NR<a1>C(O)R<a1>, - NR<a1>COOR<a1>, -NR<a1>C(O)NR<a1>R<a1>, - NR<a1>S(O)2R<a1>, -NR<a1>S(O)2NR<a1>R<a1>, -S(O)R<a1>, - S(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>; Rje H, C1-6alkil supstituisan sa 0-6 R<5>, C3-6cikloalkil supstituisan sa 0-6 R<5>, -C(O)R<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>; R<a1>je H, C1-3alkil ili C3-6cikloalkil; R<4>je H, CH3, halogen, -NR<a1>R<a1>ili OR<a1>; R<4a>je H, CH3, halogen, -NR<a1>R<a1>ili OR<a1>; ili R<4>i R<4a>mogu se uzeti zajedno da formiraju 3-4 člani karbociklus; ili R<4>i R<4a>mogu se uzeti zajedno da formiraju C=CH2supstituent; R<5>je H, halogen, C1-3alkil, CN, NO2, OH, OR<a1>, SR<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -COOR<a1>, -OC(O)R<a1>, -OC(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>R<a1>, -NR<a1>C(O)R<a1>, - NR<a1>COOR<a1>, -NR<a1>C(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>S(O)2R<a1>, -NR<a1>S(O)2NR<a1>R<a1>, -S(O)R<a1>, - S(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>; R<5a>je H ili C1-3alkil; R<6>je H, halogen, C1-3alkil, CN, NO2, OH, OR<a1>, SR<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -COOR<a1>, -OC(O)R<a1>, -OC(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>R<a1>, -NR<a1>C(O)R<a1>, - NR<a1>COOR<a1>, -NR<a1>C(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>S(O)2R<a1>, -NR<a1>S(O)2NR<a1>R<a1>, -S(O)R<a1>, - S(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>; R<8>je H, halogen, C1-3alkil, CN, NO2, OH, OR<a1>, SR<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -COOR<a1>, -OC(O)R<a1>, -OC(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>R<a1>, -NR<a1>C(O)R<a1>, - NR<a1>COOR<a1>, NR<a1>C(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>S(O)2R<a1>, -NR<a1>S(O)2NR<a1>R<a1>, -S(O)R<a1>, - S(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>; R<9>je H, halogen ili metil; Y je CR<a>ili N; m je 0, 1, 2 ili 3; ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
11. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 10 gde X je S; ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
12. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 10 gde X je O; ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
13. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 10 sa formulom

ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
14. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 10 ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
15. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 14 gde X je S; ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
16. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 14 gde X je O; ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
17. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 10 sa formulom

ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
18. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 10 sa formulom

ili tautomer ili stereoizomer ili farmaceutski prihvatljiva so istog.
19. Jedinjenje sa formulom (III)

gde X je nezavisno O ili S; R<1>i R<2>su svaki nezavisno

ili

sa tim da jedan od R<1>i R<2>mora biti

Z1je N ili CR<a>; Z2je NR; R<a>je H, halogen, C1-6alkil supstituisan sa 0-6 R<5>, C3-6cikloalkil supstituisan sa 0-6 R<5>, CN, NO2, OH, OR<a1>, SR<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -COOR<a1>, -OC(O)R<a1>, - OC(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>R<a1>, -NR<a1>C(O)R<a1>, - NR<a1>COOR<a1>, -NR<al1>C(O)NR<a1>R<a1>, - NR<a1>S(O)2R<a1>, -NR<a1>S(O)2NR<a1>R<a1>, -S(O)R<a1>, - S(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>; Ris H, C1-6alkil supstituisan sa 0-6 R<5>, C3-6cikloalkil supstituisan sa 0-6 R<5>, -C(O)R<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>; R<a1>je H, C1-3alkil ili C3-6cikloalkil; R<5>je H, halogen, C1-3alkil, CN, NO2, OH, OR<a1>, SR<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -COOR<a1>, -OC(O)R<a1>, -OC(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>R<a1>, -NR<a1>C(O)R<a1>, - NR<a1>COOR<a1>, -NR<a1>C(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>S(O)2R<a1>, -NR<a1>S(O)2NR<a1>R<a1>, -S(O)R<a1>, - S(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>; R<5a>je H ili C1-3alkil; R<6>je H, halogen, C1-3alkil, CN, NO2, OH, OR<a1>, SR<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -COOR<a1>, -OC(O)R<a1>, -OC(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>R<a1>, -NR<a1>C(O)R<a1>, - NR<a1>COOR<a1>, -NR<a1>C(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>S(O)2R<a1>, -NR<a1>S(O)2NR<a1>R<a1>, -S(O)R<a1>, - S(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>; R<8>je H, halogen, C1-3alkil, CN, NO2, OH, OR<a1>, SR<a1>, -C(O)NR<a1>R<a1>, -COOR<a1>, -OC(O)R<a1>, -OC(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>R<a1>, -NR<a1>C(O)R<a1>, - NR<a1>COOR<a1>, -NR<a1>C(O)NR<a1>R<a1>, -NR<a1>S(O)2R<a1>, -NR<a1>S(O)2NR<a1>R<a1>, -S(O)R<a1>, - S(O)NR<a1>R<a1>, -S(O)2R<a1>ili S(O)2NR<a1>R<a1>; R<9>je H, halogen ili metil; Y je CR<a>ili N; m je 0, 1, 2 ili 3; ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
20. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 19 sa formulom

ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
21. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, 10 ili 19 sa formulom

Ċ

ili tautomer ili stereoizomer ili farmaceutski prihvatljiva so istog.
22. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevima 1, 10 ili 19 sa formulom

Ċ

ili tautomer ili stereoizomer ili farmaceutski prihvatljiva so istog.
23. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, 10 ili 19 koje je (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{9-hidroksi-3H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-hidroksi-17-{9-okso-3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.2.1.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12dion, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-3,18-dihidroksi-17-{9-okso-3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-12-sulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.2.1.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion, (1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-hidroksi-17- {9-okso-3H,5H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion, (1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{9-okso-3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.2.1.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion, (1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.2.1.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion, (1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.2.1.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion, 4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-diokso-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-8-il]piridin-2-karboksamid, 4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18S)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-diokso-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-8-il]piridin-2-karboksamid, 4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroksi-3,12-diokso-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-8-il]piridin-2-karboksamid, 4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-12-hidroksi-3,12-diokso-3-sulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-8-il]piridin-2-karboksamid, 4-[(1S,7S,8R,10S,16R,17R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-4,13-diokso-4,13-disulfanil-3,5,12,14-tetraoksa-4λ<5>,13λ<5>-difosfatriciklo[14.2.0.0<7,10>]oktadekan-8-il]piridin-2-karboksamid, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroksi-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-hloro-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion, 4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-diokso-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-8-il]piridin-2-karboksamid, 4-[(1R,6S,8R,9R,15R,17S,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-hidroksi-3,12-diokso-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.2.1.0<6,9>]oktadekan-17-il]piridin-2-karboksamid, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{5-okso-5H,8H,9H- [1,2,4]triazolo[4,3-a]purin-8-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-(6-okso-6,9-dihidro-1H-purin-9-il)-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{8-okso-4H,5H,8H-[1,2,3,4]tetrazolo[1,5-a]purin-5-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoksa-3λ<5>,12λ<5>-difosfatriciklo[13.3.0.0<6,9>]oktadekan-3,12-dion ili farmaceutski prihvatljiva so, tautomer ili stereoizomer istog.
24. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, 10 ili 19 ili farmaceutski prihvatljivu so istog i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili ekscipijenasa.
25. Kombinovani farmaceutski proizvod koji sadrži jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, 10 ili 19 ili farmaceutski prihvatljivu so istog zajedno sa jednim ili više drugih terapijski aktivnih agenasa.
26. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, 10 ili 19 ili farmaceutski prihvatljiva so istog za primenu u terapiji.
27. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, 10 ili 19 ili farmaceutski prihvatljiva so istog za primenu u lečenju bolesti ili stanja koji se mogu ublažiti indukcijom imunološkog odgovora pomoću STING putanje, pri čemu je bolest ili stanje kancer.
28. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so istog, za primenu u skladu sa patentnim zahtevom 27 gde je kancer sitnoćelijski kancer pluća, nesitnoćelijski kancer pluća, kolorektalni kancer, melanom, karcinom bubrežnih ćelija, kancer glave i vrata, Hodžkinov limfom, kancer bešike, karcinom jednjaka, karcinom želuca, karcinom jajnika, karcinom grlića materice, karcinom pankreasa, karcinom prostate, kanceri dojke, urinarni karcinom, tumori mozga kao što je glioblastom, ne-Hodžkinov limfom, akutna limfatična leukemija (ALL), hronična limfatična leukemija (CLL), akutna mijeloidna leukemija (AML), hronična mijeloidna leukemija (CML), hepatocelularni karcinom, multipli mijelom, gastrointestinalni stromalni tumori, mezoteliom, i drugi solidni tumori ili drugi hematološki kanceri.
29. Jedinjenje, u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1, 10 ili 19 ili farmaceutski prihvatljiva so istog, za primenu u lečenju kancera kod subjekta kojem je to potrebno, u kombinaciji sa administriranjem terapijski efikasne količine jednog ili više imunoonkoloških agenasa.
30. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so istog, za primenu u skladu sa patentnim zahtevom 29 pri čemu je imuno-onkološki agens ipilimumab ili PD-L1 antagonist.
31. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1, 10 ili 19, ili farmaceutski prihvatljiva so istog i agens protiv kancera koji je antitelo ili njegov deo koji veže antigen koji se specifično veže za receptor progamirane smrti-1 (PD-1) i inhibira PD-1 aktivnost, za lečenje subjekta koji boluje od kancera.
32. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so istog i agens protiv kancera, za primenu u skladu sa patentnim zahtevom 31, pri čemu anti-PD-1 antitelo je nivolumab ili pembrolizumab. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5