ES2909616T3 - Dinucleótidos cíclicos como agentes anticáncer - Google Patents

Abstract

Un compuesto de la fórmula (I) **(Ver fórmula)** en la que X es independientemente O o S; X1, X2, X3 y X4 son cada uno independientemente O o NH; R1 y R2 son independientemente **(Ver fórmula)** o **(Ver fórmula)** con la condición de que uno de R1 y R2 debe ser **(Ver fórmula)** Z1 es N o CRa; Z2 es NRb; Ra es H, halógeno, alquilo C1-6 sustituido con 0-6 R5, cicloalquilo C3-6 sustituido con 0-6 R5, CN, NO2, OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, - NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, - S(O)NRa1Ra1, -S(O)2Ra1 o S(O)2NRa1Ra1; Rb es H, alquilo C1-6 sustituido con 0-6 R5, cicloalquilo C3-6 sustituido con 0-6 R5, -C(O)Ra1, -C(O)NRa1Ra1, - S(O)2Ra1 o S(O)2NRa1Ra1; Ra1 es H, alquilo C1-3 o cicloalquilo C3-6; R3 es H, CH3, halógeno, -NRa1Ra1 o ORa1; R3a es H, CH3, halógeno, -NRa1Ra1 o ORa1; o R3 y R3a pueden tomarse juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o R3 y R3a pueden tomarse juntos para formar un sustituyente C=CH2; R5 es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO2, OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, - S(O)NRa1Ra1, - S(O)2Ra1 o S(O)2NRa1Ra1; R5a es H o alquilo C1-3; R6 es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO2, OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, - S(O)NRa1Ra1, - S(O)2Ra1 o S(O)2NRa1Ra1; R8 es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO2, OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, - S(O)NRa1Ra1, - S(O)2Ra1 o S(O)2NRa1Ra1; R9 es H, halógeno o metilo; Y es CRa o N; m es 0, 1, 2 o 3; o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

Description

DESCRIPCIÓN

Dinucleótidos cíclicos como agentes anticáncer

Campo de la invención

La invención proporciona compuestos novedosos, composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos y para uso, por ejemplo, para el tratamiento o la profilaxis de ciertos tipos de cáncer y su uso en terapia.

Antecedentes de la invención

La inmunoterapia es un área que se expande con rapidez del tratamiento médico, en la cual el sistema inmunitario del paciente se activa, suprime o modula de manera deliberada en pos de un efecto terapéutico positivo. Los agentes inmunoterapéuticos incluyen: células, antígenos, anticuerpos, ácidos nucleicos, proteínas, péptidos, ligandos naturales y moléculas preparadas de manera sintética. Las citocinas son moléculas de glucoproteínas pequeñas conocidas por su función en la generación de una respuesta inmunitaria a través de redes de señalización complejas. Las citocinas se estudiaron como agentes inmunoterapéuticos pero su administración directa se ve obstaculizada por diversos factores, que incluyen la semivida corta en la sangre, lo que solo puede compensarse mediante dosis en general altas y frecuentes. Un enfoque altamente prometedor consiste en la inducción de citocina, en donde el paciente se trata con un agente inmunomodulador que desencadena la producción de una o más citocinas terapéuticamente beneficiosas en el cuerpo.

Un agente en la producción de citocinas es la proteína adaptadora STING (STimulator of /A/terferon Genes; también se conoce como MPYS, TMEM173, MITA y ERIS). STING es un receptor intracelular ubicado en el retículo endoplásmico. La fijación a STING por parte de un agonista activa una vía de señalización que culmina en la inducción de los IFN de tipo I, que se secretan y protegen la secreción y las células cercanas. STING puede activarse por dos vías diferentes, y cada una implica un tipo distinto de agonista de dinucleótido cíclico (“CDN”). En la primera vía, el agonista es un CDN exógeno que los pátógenos bacterianos usan como mensajero secundario (Burdette et al. 2013). En la segunda vía, la enzima cíclica GMP-AMP sintasa (cGAS) detecta el ADN citosólico y, como respuesta, sintetiza un CDN que funciona como agonista de STING endógeno (Ablasser et al. 2013; Gao et al. 2013; Sun et al. 2013).

La activación de STING da como resultado la regulación ascendente de las vías de IRF3 y NF-kB, lo que produce la inducción de Interferón-p y otras citocinas. STING es fundamental para las respuestas de ADN citosólico de origen de huésped o patógeno.

Dos CDN agonistas de STING bacteriano exógenos son 3'3'-cGAMP y c-GMP. El CDN agonista de STING endógeno elaborado por cGAS es 2'3'-cGAMP. Los CDN bacterianos se caracterizan por dos puentes fosfodiéster 3'5', mientras que los CDN producidos por cGAS se caracterizan por un puente fosfodiéster 2'5' y uno 3'5'. Para abreviar, los primeros CDN se denominan CDN 3'3' y los últimos CDN 2'3'. Por motivos históricos, se hace referencia a los CDN 3'3' como la forma “canónica” y los CDN 2'3' se denominan forma “no canónica”.

También se informó que, además de proteger un organismo contra la infección patógena, la activación de STING resulta beneficiosa en el tratamiento de enfermedades inflamatorias y, en un área de particular interés en la actualidad, del cáncer. La administración de un CDN sintético en combinación con la vacuna contra el cáncer STINGVAX demostró una eficacia antitumoral mejorada en múltiples modelos terapéuticos (Fu et al. 2015). Se informó que la administración de agonistas de STING solos muestra una eficacia inmunitaria antitumoral potente en un modelo de ratón (Corrales et al. 2015a). Para análisis sobre la función de STING en infección, inflamación y/o cáncer, ver Ahn et al. 2015; Corrales et al. 2015b y 2016; y Barber 2015.

Los documentos WO 2017/027645 y WO 2017/123669 describen compuestos de dinucleótidos cíclicos como agonistas de la picadura. El documento WO 2019/023459 es un documento intermedio que se refiere a otros dinucleótidos cíclicos como agentes anticancerígenos.

Por lo tanto, la presente invención proporciona dinucleótidos cíclicos novedosos que pueden ser útiles para el tratamiento del cáncer.

Sumario de la invención

Se proporcionan compuestos de las Fórmulas (I), (II) y (III)

en donde todos los sustituyentes se definen en la presente.

En otro aspecto, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención, o una sal aceptable desde el punto de vista farmacéutico de aquel, y uno o más vehículos, diluyentes o excipientes aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

En otro aspecto, se proporciona un compuesto de acuerdo con la invención para uso en el tratamiento del cáncer. Descripción detallada de la invención

Los siguientes son los aspectos y las formas de realización de la presente invención, así como los aspectos y las formas de realización adicionales que pueden incluirse en el alcance de los que se muestran. Los aspectos de la invención no se limitan a los descritos a continuación.

En un primer aspecto, se divulga un compuesto de la Fórmula I

en donde

X es independientemente O o S;

X1, X2, X3 y X4 son, cada uno independientemente, O o NH;

R1 y R2 son independientemente

siempre que uno de R1 y R2 sea

Z¹ es N o CRa;

Z² es NRb;

Ra es H, halógeno, alquilo C1-6 sustituido con 0-6 R5, cicloalquilo C3-6 sustituido con 0-6 R5, CN, NO² , OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, - NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)²Ra1, -NRa1S(O)²NRa1Ra1, -S(O)Ra1, - S(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1; Rb es H, alquilo C1-6 sustituido con 0-6 R5, cicloalquilo C3-6 sustituido con 0-6 R5, -C(O)Ra1, -C(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

Ra1 es H, alquilo C1-3 o cicloalquilo C3-6;

R3 es H, CH³ , halógeno, -NRa1Ra1 o ORa1;

R3a es H, CH³ , halógeno, -NRa1Ra1 u ORa1; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3 o 4 miembros; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH² ;

R5 es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, - NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

R5a es H o alquilo C1-3;

R6 es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, - NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

R8 es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, - NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CRa o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

En una realización del primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de fórmula

en donde

X es S;

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

En otra realización del primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

en donde

X es O;

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

En otra realización del primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

en donde

X es S;

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula en donde

X es O;

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otro aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

continuación

Ċ

En otra realización del primer aspecto de la invención, se proporciona una sal aceptable desde el punto de vista farmacéutico de un compuesto de la fórmula

Ċ

continuación

continuación

En un segundo aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de fórmula II en donde

X es independientemente O o S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno independientemente O o NH;

R1 y R2 son cada uno independientemente

con la condición de que uno de R1 y R2 debe ser

Z¹ es N o CRa;

Z² es NRb;

Ra es H, halógeno, alquilo C1-6 sustituido con 0-6 R5, cicloalquilo C3-6 sustituido con 0-6 R5, CN, NO² , OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, - NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, - NRa1S(O)²Ra1, -NRa1S(O)²NRa1Ra1, -S(O)Ra1, - S(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1; Rb es H, alquilo C1-6 sustituido con 0-6 R5, cicloalquilo C3-6 sustituido con 0-6 R5, -C(O)Ra1, -C(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

Ra1 es H, alquilo C1-3 o cicloalquilo C3-6;

R4 es H, CH³ , halógeno, -NRa1Ra1 o ORa1;

R4a es H, CH³ , halógeno, -NRa1Ra1 o ORa1; o

R4 y R4a pueden tomarse juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R4 y R4a pueden tomarse juntos para formar un sustituyente C=CH² ;

R5 es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, - NRa1COORa1, - NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, - S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

R5a es H o alquilo C1-3;

R6 es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, - NRa1COORa1, - NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, - S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

R8 es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, - NRa1COORa1, - NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, - S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CRa o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

En otra realización del segundo aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

en donde

X es S;

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del segundo aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

en donde

X es O;

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del segundo aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del segundo aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

En otra realización del segundo aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del segundo aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

en donde

X es S;

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del segundo aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

en donde

X es O;

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del segundo aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del segundo aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del segundo aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del segundo aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del segundo aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del segundo aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otro aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

continuación

En otro aspecto de la invención, se proporciona una sal aceptable desde el punto de vista farmacéutico de un compuesto de la fórmula

continuación

En un tercer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de fórmula III

en donde

X es independientemente O o S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno independientemente O o NH;

R1 y R2 son independientemente

o

con la condición de que uno de R1 y R2 debe ser

Zi es N o CRa;

Z² es NRb;

Ra es H, halógeno, alquilo C1-6 sustituido con 0-6 R5, cicloalquilo C3-6 sustituido con 0-6 R5, CN, NO2, OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, - NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, - NRa1S(O)²Ra1, -NRa1S(O)²NRa1Ra1, -S(O)Ra1, - S(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1; Rb es H, alquilo C1-6 sustituido con 0-6 R5, cicloalquilo C3-6 sustituido con 0-6 R5, -C(O)Ra1, -C(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

Ra1 es H, alquilo C1-3 o cicloalquilo C3-6;

R5 es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, - NRa1COORa1, - NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, - S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

R5a es H o alquilo C1-3;

R6 es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, - NRa1COORa1, - NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, - S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

R8 es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, - NRa1COORa1, - NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, - S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CRa o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

En otra realización del tercer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

en donde

X es S;

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

En otra realización del tercer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

en donde

X es O;

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del tercer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del tercer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del tercer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del tercer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

en donde

X es S;

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del tercer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

en donde

X es O;

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico. En otra realización del tercer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

En otra realización del tercer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

En otro aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula

En otro aspecto de la invención, se proporciona una sal aceptable desde el punto de vista farmacéutico de un compuesto de la fórmula

En otro aspecto, se proporciona un compuesto seleccionado de los ejemplos, o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{9-hidroxi-3H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-3,12-diona, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-hidroxi-17-{9-oxo-3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.2.1.069]octadecan-3,12-diona, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-3,12diona,

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-3,18-dihidroxi-17-{9-oxo-3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}12-sulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.2.1.069]octadecan-3,12-diona, (1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-hidroxi-17-{9-oxo-3H,5H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3.12- disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.3.0.069]octadecan-3,12-diona, (1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{9-oxo-3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3.12- disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.2.1.069]octadecan-3,12-diona, (1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.2.1.069]octadecan-3,12-diona, (1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.2.1.069]octadecan-3,12-diona,

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dioxo-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.3.0.069]octadecan-8-il]piridin-2-carboxamida,

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18S)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dioxo-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.3.0.069]octadecan-8-il]piridin-2-carboxamida,

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-dioxo-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.3.0.069]octadecan-8-il]piridin-2-carboxamida,

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-12-hidroxi-3,12-dioxo-3-sulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.3.0.069]octadecan-8-il]piridin-2-carboxamida,

4-[(1S,7S,8R,10S,16R,17R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-4,13-dioxo-4,13-disulfanil-3,5,12,14-tetraoxa-4A5,13A5-difosfatricido[14.2.0.071°]octadecan-8-il]piridin-2-carboxamida,

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.3.°.°69]octadecan-3,12-diona, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.3.°.°69]octadecan-3,12-diona, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-doro-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.3.°.°69]octadecan-3,12-diona,

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-dioxo-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.3.°.°69]octadecan-8-il]piridin-2-carboxamida,

4-[(1R,6S,8R,9R,15R,17S,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-hidroxi-3,12-dioxo-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.2.1.°69]octadecan-17-il]piridin-2-carboxamida, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{5-oxo-5H,8H,9H- [1,2,4]triazolo[4,3-a]purin-8-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.3.°.°69]octadecan-3,12-diona, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-(6-oxo-6,9-dihidro-1H-purin-9-il)- 3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.3.°.°69]octadecan-3,12-diona, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{8-oxo-4H,5H,8H- [1,2,3,4]tetrazolo[1,5-a]purin-5-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.3.°.°69]octadecan-3,12-diona, o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

En otro aspecto, se proporciona un compuesto seleccionado de cualquier lista de subconjuntos de compuestos dentro del alcance de cualquiera de los aspectos anteriores.

En otro aspecto, se proporciona un compuesto de la Fórmula

continuación

Ċ

En otro aspecto, se proporciona una sal aceptable desde el punto de vista farmacéutico de un compuesto de la Fórmula

continuación

Ċ

En otro aspecto, se proporciona un compuesto de la Fórmula

continuación

continuación

En otro aspecto, se proporciona una sal aceptable desde el punto de vista farmacéutico de un compuesto de la Fórmula

continuación

continuación

OTRAS FORMAS DE REALIZACION DE LA INVENCION

En otra forma de realización, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un vehículo aceptable desde el punto de vista farmacéutico y una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos uno de los compuestos de la invención o un estereoisómero, un tautómero, una sal aceptable desde el punto de vista farmacéutico o un solvato de aquel.

En otra forma de realización, la invención proporciona un proceso para elaborar un compuesto de la invención o un estereoisómero, un tautómero, una sal aceptable desde el punto de vista farmacéutico o un solvato de aquel.

En otra forma de realización, la invención proporciona uno o más de los compuestos de la invención solos u, opcionalmente, en combinación con otro compuesto de la invención y/o al menos otro tipo de agente terapéutico para uso en el tratamiento y/o profilaxis de diversos tipos de cáncer.

En otra forma de realización, los diversos tipos de cáncer, incluyen cáncer pulmonar de células pequeñas, cáncer pulmonar de células no pequeñas, cáncer colorrectal, melanoma, carcinoma de células renales, cáncer de cabeza y cuello, linfoma de Hodgkin, cáncer de vejiga, carcinoma esofágico, carcinoma gástrico, carcinoma de ovario, carcinoma de cuello uterino, carcinoma pancreático, carcinoma de próstata, cáncer de mama, carcinoma urinario, tumores cerebrales, tales como glioblastoma, linfoma no Hodgkin, leucemia linfocítica aguda (ALL), leucemia linfática crónica (CLL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia mieloide crónica (CML), carcinoma hepatocelular, mieloma múltiple, tumores del estroma gastrointestinal, mesotelioma, y otros tumores sólidos u otros tipos de cáncer hematológicos.

En otra forma de realización, los diversos tipos de cáncer, incluyen, entre otros, cáncer pulmonar de células pequeñas, cáncer pulmonar de células no pequeñas, cáncer colorrectal, melanoma, carcinoma de células renales, cáncer de cabeza y cuello, linfoma de Hodgkin o cáncer de vejiga.

En otra forma de realización, la invención proporciona un compuesto de la presente invención para usar en el tratamiento.

En otra forma de realización, la invención proporciona una preparación combinada de un compuesto de la presente invención y agentes terapéuticos adicionales para el uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento.

APLICACIONES TERAPÉUTICAS

Los dinucleótidos cíclicos de la invención inducen interferones de tipo I y/o citocinas proinflamatorias in vitro en células humanas, células animales y sangre humana. La actividad inductora de citocinas de estos CDN necesita la presencia de STING, según se confirmó mediante experimentos in vitro en células humanas o animales.

Los CDN de la invención son agonistas del receptor STING.

El término “agonista” refiere a cualquier sustancia que activa un receptor biológico in vitro o in vivo para generar una respuesta fisiológica.

“STING” es una abreviatura de “estimulador de genes de interferón”, que también se conoce como “estimulador de interferón del retículo endoplásmico (ERIS)”, “mediador de activación de IRF3 (MITA)”, “MPYS” o “proteína transmembrana 173 (TM173)”. STING es una proteína receptora transmembrana que en humanos se codifica mediante el gen TMEM173. La activación de STING mediante dinucleótidos cíclicos (CDN) produce la activación de las vías de IRF3 y NF-kB y, en consecuencia, la inducción de los interferones de tipo I y de las citocinas proinflamatorias, respectivamente.

Otro objetivo de la presente invención son los dinucleótidos cíclicos de la Fórmula (I), para usar en un tratamiento terapéutico en humanos o animales. En particular, los compuestos de la presente invención pueden usarse para aplicaciones terapéuticas o de diagnóstico en salud humana o animal.

La expresión “agente terapéutico” hace referencia a una o más sustancias que se administran a un ser humano o un animal a fin de generar algún efecto terapéutico en ese humano o animal, que incluyen la prevención, la cura o la mitigación de los efectos de la infección o la enfermedad, y/o de otro modo mejorar la salud de ese humano o animal.

El término “monoterapia” refiere al uso de una única sustancia y/o estrategia para tratar a un humano o un animal en cualquier contexto clínico o médico, en contraposición al uso de múltiples sustancias y/o estrategias para tratar a un humano o un animal en el mismo contexto clínico o médico, independientemente de si las múltiples sustancias y/o estrategias se usan de manera secuencial en cualquier orden o de manera concurrente.

La expresión “agente quimioterapéutico” en la presente refiere a una o más sustancias químicas que se administran a un ser humano o un animal a fin de eliminar tumores, o ralentizar o detener el crecimiento tumoral, y/o ralentizar o detener la división de las células cancerosas y/o prevenir o ralentizar la metástasis. En general, los agentes quimioterapéuticos se administrar para el tratar el cáncer, pero también se indican para otras enfermedades.

El término “quimioterapia” refiere al tratamiento médico de un humano o un animal por medio de uno o más agentes quimioterapéuticos (ver la definición anterior).

La expresión “quimioinmunoterapia” hace referencia al uso combinado, ya sea de manera secuencial en cualquier orden o de manera concurrente, de sustancias y/o estrategias de quimioterapia, y sustancias y/o estrategias de inmunoterapia. En general, la quimioinmunoterapia se usa para el tratamiento del cáncer, pero también puede usarse para otras enfermedades.

La expresión “sistema inmunitario” refiere al conjunto, o a uno o más componentes cualquiera de las moléculas, sustancias (por ejemplo, fluidos corporales), estructuras anatómicas (por ejemplo, células, tejido y órganos) y procesos fisiológicos que participan en la prevención de infecciones en el cuerpo, la protección del cuerpo durante una infección o durante una enfermedad, y/o que ayudan al cuerpo a recuperarse después de una infección o enfermedad. Una definición completa de “sistema inmunitario” se encuentra más allá del alcance de la presente patente; sin embargo, la expresión es conocida por cualquier profesional del campo.

La expresión “agente inmunitario” refiere a cualquier sustancia endógena o exógena que pueda interactuar con uno o más componentes cualquiera del sistema inmunitario. La expresión “agente inmunitario” incluye anticuerpos, antígenos, vacunas y sus componentes constituyentes, ácidos nucleicos, fármacos sintéticos, compuestos orgánicos sintéticos o naturales, citocinas, células naturales o modificadas, los análogos sintéticos de estas, y/o los fragmentos de estas.

El término “antagonista” refiere a cualquier sustancia que inhibe, contrarresta, regula de manera descendente y/o desensibiliza un receptor biológico in vitro o in vivo para generar una respuesta fisiológica.

El término “inmunoterapia” refiere a cualquier tratamiento médico en el que uno o más componentes de un sistema inmunitario de un humano o de un animal se modula de deliberadamente para generar de manera directa o indirecta algún beneficio terapéutico, que incluye efectos locales y/o sistémicos, y efectos preventivos y/o curativos. La inmunoterapia puede implicar administrar uno o más agentes inmunitarios (ver definición anterior), solo o en combinación, a un sujeto humano o animal por medio de cualquier vía (por ejemplo, oral, intravenosa, dérmica, mediante inyección, mediante inhalación, etc.), ya sea de manera sistémica, local o ambas.

La “ inmunoterapia” puede implicar generar, incrementar, disminuir, detener, evitar, bloquear o de otro modo modular la producción de citocinas, y/o activar o desactivar las citocinas o células inmunitarias, y/o modular los niveles de las células inmunitarias, y/o administrar una o más sustancias terapéuticas o de diagnóstico en una ubicación en particular en el cuerpo o a un tipo de célula o tejido en particular, y/o destruir células o tejidos determinados. La inmunoterapia se puede usar para producir efectos locales, efectos sistémicos o una combinación de ambos.

El término “inmunodeprimido” describe el estado de cualquier sujeto humano o animal cuyo sistema inmunitario se disminuye, desactiva o de otra forma compromete funcionalmente, o en el que uno o más componentes inmunitarios se disminuyen, desactivan o de otra forma comprometen funcionalmente.

La “inmunodepresión” puede ser la causa, consecuencia o subproducto de una enfermedad, infección, agotamiento, desnutrición, tratamiento médico o algún otro estado fisiológico o clínico.

Las expresiones “sustancia de inmunomodulación”, “sustancia inmunomoduladora”, “agente inmunomodulador” e “inmunomodulador”, que en la presente se usan como sinónimos, hacen referencia a cualquier sustancia que, al administrarse a un humano o un animal, influye de manera directa el funcionamiento del sistema inmunitario de ese humano o animal. Los ejemplos de inmunomoduladores usuales incluyen, entre otros, antígenos, anticuerpos y fármacos de moléculas pequeñas.

El término “vacuna” hace referencia a una preparación biológica que se administra a un humano o un animal a fin de producir o mejorar una respuesta específica del sistema inmunitario y/o una protección contra uno o más antígenos en ese humano o animal.

El término “vacunación” refiere al tratamiento de un humano o un animal con una vacuna o al acto de administrar una vacuna a un humano o un animal.

El término “adyuvante” refiere a una sustancia terapéutica secundaria que se administra junto (de manera secuencial en cualquier orden o de manera concurrente) con una sustancia terapéutica primaria para generar algún efecto complementario, sinérgico o de otro modo beneficioso que no es posible lograr mediante el uso de la sustancia terapéutica primaria sola. Un adyuvante puede usarse junto con una vacuna, quimioterapia u otra sustancia terapéutica. Los adyuvantes pueden mejorar la eficacia de la sustancia terapéutica primaria, reducir la toxicidad o los efectos secundarios de la sustancia terapéutica primaria, o proporcionar algún tipo de protección al sujeto que recibe la sustancia terapéutica primaria, tal como, entre otros, funcionamiento mejorado del sistema inmunitario.

En una forma de realización, el dinucleótido cíclico de la Fórmula (I) puede administrarse como inmunoterapia a un humano o un animal para inducir la producción in vivo de una o más citocinas que son terapéuticamente beneficiosas para ese humano o animal. Este tipo de inmunoterapia puede usarse solo o en combinación con otras estrategias de tratamiento, ya sea de manera secuencial en cualquier orden o de manera concurrente. Puede usarse para prevenir, curar y/o mitigar los efectos de una infección o enfermedad en ese humano o animal, y/o para modular el sistema inmunitario de ese humano o animal para generar algún otro beneficio terapéutico.

En una forma de realización en particular, los dinucleótidos cíclicos de la presente invención pueden usarse para la inmunoterapia de inducción de citocinas en individuos inmunodeprimidos.

En este ejemplo, un dinucleótido cíclico de la Fórmula (I) se administrará a un sujeto inmunodeprimido humano o animal para inducir la producción in vivo de una o más citocinas que de manera directa o indirecta mejoran el sistema inmunitario de ese humano o animal. Los sujetos que pueden beneficiarse con tal tratamiento incluyen aquellos con trastornos autoinmuinitarios, insuficiencias o anomalías en el sistema inmunitario, infecciones microbianas o virales, enfermedades infecciosas o cáncer.

Por lo tanto, la presente invención divulga un dinucleótido cíclico de la Fórmula (I) o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico para su uso en la inducción de citoquinas en individuos inmunosuprimidos.

En otra forma de realización, los dinucleótidos cíclicos de la presente invención pueden usarse para la inmunoterapia de inducción de citocinas en combinación con quimioterapia. En este ejemplo, un dinucleótido cíclico de la Fórmula (I) puede administrarse junto con uno o más agentes quimioterapéuticos, de manera secuencial en cualquier orden o de manera concomitante, a un paciente con cáncer para detener el crecimiento de, reducir y/o destruir los tumores en dicho paciente. La quimioinmunoterapia que resulta de la combinación de la inducción de citocina, que proporcionan los compuestos de la presente invención, y la citotoxicidad, que proporcionan los agentes quimioterapéuticos, puede resultar menos tóxica para el paciente, causar menos efectos secundarios en el paciente y/o presentar mayor eficacia antitumoral en comparación con el uso de los agentes quimioterapéuticos en monoterapia.

Por lo tanto, la presente invención divulga un agente quimioterapéutico; y

un dinucleótido cíclico de la Fórmula (I) o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico para uso en el tratamiento del cáncer.

Otro objetivo de la presente invención son los dinucleótidos cíclicos de la Fórmula (I) para usar en el tratamiento de una infección bacteriana, una infección viral o en un tipo de cáncer.

Como se usa en la presente, “cáncer” refiere a la condición fisiológica en sujetos que se caracteriza por un crecimiento celular no regulado o desregulado o la muerte celular. El término “cáncer” incluye tumores sólidos y tumores de transmisión hemática, ya sean malignos o benignos.

En una forma de realización preferida, el cáncer pertenece al siguiente grupo: cáncer pulmonar de células pequeñas, cáncer pulmonar de células no pequeñas, cáncer colorrectal, melanoma, carcinoma de células renales, cáncer de cabeza y cuello, linfoma de Hodgkin o cáncer de vejiga.

Por lo tanto, la presente invención divulga un dinucleótido cíclico de la Fórmula (I) o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico para uso en el tratamiento de una infección bacteriana, una infección vírica o un cáncer.

Otro objetivo de la presente invención son los dinucleótidos cíclicos de la Fórmula (I) para usar en el tratamiento de una patología que puede aliviarse por medio de la inducción de una respuesta inmunitaria mediante la vía de STING.

Si bien es posible que, para usar en tratamientos, un compuesto de la Fórmula (I), así como las sales aceptables desde el punto de vista farmacéutico de aquel, se puede administrar como el compuesto en sí, es más frecuente que se presente como una composición farmacéutica.

Las composiciones farmacéuticas se pueden presentar en forma de dosis unitarias que contienen una cantidad predeterminada de ingrediente activo por dosis unitaria. Las composiciones de dosis unitarias preferidas son aquellas que contienen una dosis diaria o subdosis, o una fracción adecuada de aquellas, de un ingrediente activo. Por lo tanto, tales dosis unitarias se pueden administrar más de una vez al día. Las composiciones de dosis unitarias preferidas son aquellas que contienen una dosis diaria o subdosis (para administración más de una vez al día), como se indicó anteriormente en la presente, o una fracción adecuada de aquellas, de un ingrediente activo.

Algunos tipos de cáncer que se pueden tratar con los compuestos de esta invención incluyen, entre otros, cáncer cerebral, cáncer de piel, cáncer de vejiga, cáncer de ovario, cáncer de mama, cáncer gástrico, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, cáncer colorrectal, leucemias, cáncer de pulmón y cáncer de hueso. Los ejemplos de esos tipos de cáncer incluyen neuroblastoma, carcinoma de intestino, tal como carcinoma de recto, carcinoma de colon, carcinoma de poliposis adenomatosa familiar y cáncer colorrectal hereditario no polipósico, carcinoma esofágico, carcinoma de labio, carcinoma de laringe, cáncer nasofaríngeo, cáncer de la cavidad oral, carcinoma de la glándula salival, cáncer peritoneal, sarcoma de tejidos blandos, cáncer urotelial, carcinoma de las glándula sudorípara, carcinoma gástrico, adenocarcinoma, carcinoma medular tiroideo, carcinoma papilar tiroideo, carcinoma renal, carcinoma renal parenquimatoso, carcinoma de ovario, carcinoma de cuello uterino, carcinoma del cuerpo del útero, carcinoma de endometrio, carcinoma pancreático, carcinoma de próstata, carcinoma de testículo, cáncer de mama, que incluye HER2 negativo, carcinoma urinario, melanoma, tumores cerebrales, tales como glioblastoma, astrocitoma, meningioma, meduloblastoma y tumores neuroectodérmicos periféricos, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de Burkitt, leucemia linfocítica aguda (ALL), leucemia linfática crónica (CLL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia mieloide crónica (CML), leucemia/linfoma de linfocitos T en adultos, linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL), carcinoma hepatocelular, mieloma múltiple, seminoma, osteosarcoma, condrosarcoma, cáncer del conducto anal, carcinoma de la corteza suprarrenal, cordoma, cáncer de trompa de Falopio, tumores del estroma gastrointestinal, enfermedades mieloproliferativas, mesotelioma, cáncer de tracto biliar, sarcoma de Ewing y otros tipos de tumores raros.

Los compuestos de la invención son útiles para el tratamiento de ciertos tipos de cáncer por sí solos o en combinación o coadministración con otros agentes terapéuticos o radioterapia. Por lo tanto, en una forma de realización, los compuestos de la invención se coadministran con radioterapia o con un segundo agente terapéutico con actividad citostática o antineoplásica. Los compuestos quimioterapéuticos citostáticos adecuados incluyen, entre otros, (i) antimetabolitos; (ii) agentes de fragmentación del ADN; (iii) agentes de reticulación del ADN; (iv) agentes de intercalación; (v) inhibidores de la síntesis de las proteínas; (vi) venenos de topoisomerasa I, tales como camptotecina o topotecan; (vii) venenos de topoisomerasa II; (viii) agentes dirigidos al microtúbulo; (ix) inhibidores de quinasa; (x) agentes de investigación misceláneos; (xi) hormonas; y (xii) antagonistas hormonales. Se contempla que los compuestos de la invención pueden ser útiles en combinación con cualquier agente conocido que pertenezca a las 12 clases anteriores, y cualquier agente futuro que se encuentre actualmente en desarrollo. En particular, se contempla que los compuestos de la invención pueden ser útiles en combinación con los tratamientos de referencia actuales, así como con cualquiera que se desarrolle en el futuro cercano. Las dosis y los regímenes de dosificación específicos se basarían en el conocimiento de los médicos y en el estado de la técnica en general.

En la presente también se proporcionan formas de realización para el tratamiento en donde los compuestos de la invención se administran con uno o más agentes inmunooncológicos. Los agentes inmunooncológicos usados en la presente, también denominados inmunoterapias contra el cáncer, son eficaces para mejorar, estimular y/o regular en forma ascendente las respuestas inmunitarias en un sujeto. En un aspecto, la administración de un compuesto de la invención con un agente inmunooncológico tiene un efecto sinérgico para inhibir el crecimiento tumoral.

En un aspecto, los compuestos de la invención se administran de manera secuencial antes de la administración del agente inmunooncológico. En otro aspecto, los compuestos de la invención se administran de manera concurrente con el agente inmunooncológico. Aun en otro aspecto, los compuestos de la invención se administran de manera secuencial después de la administración del agente inmunooncológico.

En otro aspecto, los compuestos de la invención se pueden coformular con un agente inmunooncológico.

Los agentes inmunooncológicos incluyen, por ejemplo, un anticuerpo, un fármaco de moléculas pequeñas u otra molécula biológica. Algunos ejemplos de agentes inmunooncológicos biológicos incluyen, entre otros, vacunas, anticuerpos y citocinas contra el cáncer. En un aspecto, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. En otro aspecto, el anticuerpo monoclonal es humanizado o humano.

En un aspecto, el agente inmunooncológico es (i) un agonista de un receptor estimulador (que incluye coestimulador) o (ii) un antagonista de una señal inhibidora (que incluye coinhibidora) en linfocitos T; ambos dan como resultado la amplificación de respuestas de linfocitos T específicas de antígeno (denominadas con frecuencia reguladores de puntos de control del sistema inmunitario).

Determinadas moléculas estimuladoras e inhibidoras son miembros de la superfamilia de la inmunoglobulina (IgSF). Una familia importante de ligandos unidos a la membrana que se fijan a receptores coestimuladores o coinhibidores es la familia B7, que incluye B7-1, B7-2, B7-H1 (PD-L1), B7-DC (PD-L2), B7-H2 (ICOS-L), B7-H3, B7-H4, B7-H5 (VISTA) y B7-H6. Otra familia de ligandos unidos a la membrana que se fijan a receptores coestimuladores o coinhibidores es la familia TNF de moléculas que se fijan a miembros de la familia del receptor de TNF cognado, que incluye CD40 y CD40L, OX-40, OX-40L, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4-1BBL, CD137 (4-1BB), TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, APRIL, BCMA, LTpR, LIGHT, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, linfotoxina a/TNFp, TNFR2, TNFa, LTpR, linfotoxina a ip2, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY, NGFR.

En un aspecto, las respuestas de linfocitos T se pueden estimular mediante una combinación de un compuesto de la invención y uno o más de (i) un antagonista de una proteína que inhibe la activación de linfocitos T (por ejemplo, inhibidores del punto de control del sistema inmunitario), tales como CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, lAg -3, T iM-3, galectina 9, CEACAM-1, BTLA, CD69, galectina-1, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, 2B4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM-1 y TIM-4, y (ii) un agonista de una proteína que estimula la activación de linfocitos T, tales como B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, GITR, GITRL, CD70, CD27, CD40, DR3 y CD28H.

Otros agentes que se pueden combinar con los compuestos de la invención para el tratamiento del cáncer incluyen antagonistas de receptores inhibidores en células Nk o agonistas de receptores activadores en células NK. Por ejemplo, los compuestos de la invención se pueden combinar con antagonistas de KIR, tales como lirilumab.

Aun otros agentes para tratamientos conjuntos incluyen agentes que inhiben o disminuyen los macrófagos o monocitos, que incluyen, entre otros, antagonistas de CSF-1R, tales como anticuerpos antagonistas de CSF-1R, que incluyen RG7155 (WO11/70024, WO11/107553, WO11/131407, WO13/87699, WO13/119716, WO13/132044) o FPA-008 (WO11/140249; WO13169264; WO14/036357).

En otro aspecto, los compuestos de la invención se pueden usar con uno o más de los agentes agonistas que se ligan a receptores coestimuladores positivos, agentes de bloqueo que atenúan la señalización a través de receptores inhibidores, antagonistas y uno o más agentes que aumentan sistémicamente la frecuencia de linfocitos T antitumorales, agentes que superan las vías supresoras inmunitarias distintivas en el microentorno tumoral (por ejemplo, bloquean el acoplamiento de receptores inhibidores (por ejemplo, interacciones PD-L1/PD-1), disminuyen o inhiben Treg (por ejemplo, usando un anticuerpo monoclonal anti-CD25 (por ejemplo, daclizumab) o mediante la disminución de microesferas mediante anti-CD25 ex vivo), inhiben enzimas metabólicas, tales como IDO, o revierten/previenen la anergia o el agotamiento de linfocitos T) y los agentes que desencadenan la inmunoactivación innata y/o la inflamación en los sitios de los tumores.

En un aspecto, el agente inmunooncológico es un antagonista de CTLA-4, tal como un anticuerpo antagonista de CTLA-4. Los anticuerpos contra CTLA-4 adecuados incluyen, por ejemplo, YERVOY (ipilimumab) o tremelimumab.

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un antagonista de PD-1, tal como un anticuerpo antagonista de PD-1. El anticuerpo contra PD-1 puede seleccionarse de Opdivo (nivolumab), Keytruda (pembrolizumab), PDR001 (Novartis; ver WO2015/112900), MEDI-0680 (AMP-514) (AstraZeneca; ver WO2012/145493), REGN-2810 (Sanofi/Regeneron; ver WO2015/112800), JS001 (Taizhou Junshi), BGB-A317 (Beigene; ver WO2015/35606), INCSHR1210 (SHR-1210) (Incyte/Jiangsu Hengrui Medicine; ver WO2015/085847), TSR-042 (ANB001) (Tesara/AnaptysBio; ver WO2014/179664), GLS-010 (Wuxi/Harbin Gloria Pharmaceuticals), AM-0001 (Armo/Ligand) o STI-1110 (Sorrento; ver WO2014/194302). El agente inmunooncológico puede incluir también pidilizumab (CT-011), aunque se cuestionó su especificidad para la fijación a PD-1. Otro enfoque para dirigir el receptor de PD-1 es la proteína recombinante compuesta por el dominio extracelular de PD-L2 (B7-DC) fusionada con la porción Fc de IgG1, denominada AMP-224 En un aspecto,

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un antagonista de PD-L1, tal como un anticuerpo antagonista de PD-L1. El anticuerpo contra PD-L1 puede seleccionarse de Tecentriq (atezolizumab), durvalumab, avelumab, STI-1014 (Sorrento; ver WO2013/181634) o CX-072 (CytomX; ver WO2016/149201).

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un antagonista de LAG-3, tal como un anticuerpo antagonista de LAG-3. Los anticuerpos contra LAG3 adecuados incluyen, por ejemplo, BMS-986016 (WO10/19570, WO14/08218), o IMP-731 o IMP-321 (WO08/132601, WO09/44273).

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un agonista de CD137 (4-1BB), tal como un anticuerpo agonista de CD137. Los anticuerpos contra CD137 adecuados incluyen, por ejemplo, urelumab y PF-05082566 (WO12/32433).

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un agonista de GITR, tal como un anticuerpo agonista de GITR. Los anticuerpos contra GITR adecuados incluyen, por ejemplo, BMS-986153, BMS-986156, TRX-518 (WO06/105021, WO09/009116) y MK-4166 (WO11/028683).

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un antagonista de IDO. Los antagonistas de IDO incluyen, por ejemplo, INCB-024360 (WO2006/122150, WO07/75598, WO08/36653, WO08/36642), indoximod o NLG-919 (WO09/73620, WO09/1156652, WO11/56652, WO12/142237).

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un agonista de OX40, tal como un anticuerpo agonista de OX40. Los anticuerpos contra OX40 adecuados incluyen, por ejemplo, MEDI-6383 o MEDI-6469.

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un antagonista de OX40L, tal como un anticuerpo antagonista de OX40. Los antagonistas de OX40L adecuados incluyen, por ejemplo, RG-7888 (WO06/029879).

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un agonista de CD40, tal como un anticuerpo agonista de CD40. Aun en otra forma de realización, el agente inmunooncológico es un antagonista de CD40, tal como un anticuerpo antagonista de CD40. Los anticuerpos contra CD40 adecuados incluyen, por ejemplo, lucatumumab o dacetuzumab.

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un agonista de CD27, tal como un anticuerpo agonista de CD27. Los anticuerpos contra CD27 adecuados incluyen, por ejemplo, varlilumab.

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es MGA271 (contra B7H3) (WO11/109400).

El tratamiento conjunto pretende abarcar la administración de estos agentes terapéuticos de manera secuencial, es decir, cada agente terapéutico se administra en un momento diferente, así como la administración de estos agentes terapéuticos, o al menos dos de los agentes terapéuticos, de manera sustancialmente simultánea. La administración sustancialmente simultánea se puede lograr, por ejemplo, administrando al sujeto una forma de dosis única que tiene una relación fija de cada agente terapéutico, o múltiples formas de dosis únicas para cada uno de los agentes terapéuticos. La administración secuencial o sustancialmente simultánea de cada agente terapéutico se puede llevar a cabo mediante cualquier vía adecuada que incluye, entre otras, la vía oral, la vía intravenosa, la vía intratumoral, la vía intramuscular y la absorción directa a través de los tejidos de las membranas mucosas. Los agentes terapéuticos se pueden administrar por la misma vía o por vías diferentes. Por ejemplo, un primer agente terapéutico de la combinación seleccionada se puede administrar mediante inyección intravenosa, mientras que los otros agentes terapéuticos de la combinación se pueden administrar por vía oral. De manera alternativa, por ejemplo, todos los agentes terapéuticos se pueden administrar por vía oral, o todos los agentes terapéuticos se pueden administrar mediante inyección intravenosa. El tratamiento conjunto también puede abarcar la administración de los agentes terapéuticos descritos anteriormente también en combinación con otros ingredientes biológicamente activos y tratamientos no farmacológicos (por ejemplo, cirugía o radioterapia). En los casos en que el tratamiento conjunto comprende también un tratamiento no farmacológico, el tratamiento no farmacológico se puede realizar en cualquier momento adecuado, siempre que se logre un efecto beneficioso de la acción conjunta entre la combinación de los agentes terapéuticos y el tratamiento no farmacológico. Por ejemplo, cuando correspondiese, el efecto beneficioso se logra aun cuando se elimina temporalmente el tratamiento no farmacológico de la administración de los agentes terapéuticos, quizás por días o incluso semanas.

La presente invención se puede realizar en otras formas específicas sin apartarse del espíritu ni de sus atributos esenciales. La presente invención abarca todas las combinaciones de aspectos preferidos de la invención observados en la presente. Cabe destacar que todas las formas de realización de la presente invención pueden tomarse en conjunto con cualquier otra forma de realización, a fin de describir formas de realización adicionales. Además, cabe destacar que cada elemento individual de las formas de realización es su propia forma de realización independiente. Asimismo, cualquier elemento de una forma de realización tiene como fin que se lo combine con cualquier otro elemento de cualquiera de las formas de realización para describir una forma de realización adicional.

COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS Y ADMINISTRACIÓN DE LA DOSIS

La invención también proporciona composiciones aceptables desde el punto de vista farmacéutico que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más de los compuestos de la Fórmula I, formulados junto con uno o más vehículos (aditivos) y/o diluyentes aceptables desde el punto de vista farmacéutico y, opcionalmente, uno o más agentes terapéuticos adicionales descritos anteriormente. Como se describe en detalle a continuación, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden formular especialmente para la administración en forma sólida o líquida, que incluyen las que se adaptan para: (1) la administración oral, por ejemplo, pociones (soluciones o suspensiones acuosas o no acuosas), comprimidos, por ejemplo, los que sirven para la absorción bucal, sublingual y sistémica, bolos, polvos, gránulos, pastas para aplicar en la lengua; (2) la administración parenteral, por ejemplo, mediante inyección subcutánea, intramuscular, intratumoral, intravenosa o epidural, por ejemplo, una solución o suspensión estéril, o formulación de liberación sostenida; (3) la aplicación tópica, por ejemplo, en forma de crema, ungüento o atomizador o parche de liberación controlada aplicados en la piel; o de manera intratumoral.

La expresión "aceptable desde el punto de vista farmacéutico" se emplea en la presente para referirse a compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosis que, dentro del alcance del criterio médico sensato, son adecuados para usar en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin provocar excesiva toxicidad, irritación, reacción alérgica u otros problemas o complicaciones proporcionales con una relación riesgo/beneficio razonable.

Como se usa en la presente, la frase "vehículo aceptable desde el punto de vista farmacéutico" significa un material, una composición o un vehículo aceptables desde el punto de vista farmacéutico, tales como un agente de relleno líquido o sólido, diluyente, excipiente, auxiliar de fabricación (por ejemplo, lubricante, talco, magnesio, estearato de calcio o zinc, o ácido estérico) o solvente para encapsular el material, que participan en el transporte del compuesto deseado desde un órgano o parte del cuerpo hasta otro órgano o parte del cuerpo. Cada vehículo debe ser "aceptable" en el sentido de que sea compatible con los otros ingredientes de la formulación y no perjudique al paciente.

Las formulaciones de la presente invención incluyen aquellas adecuadas para la administración oral, intratumoral, nasal, tópica (incluida bucal y sublingual), rectal, vaginal y/o parenteral. Ventajosamente, las formulaciones pueden estar presentes en una forma de dosificación unitaria y se pueden preparar mediante cualquier método conocido en el estado de la técnica de la farmacia. La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con un material vehículo para producir una forma de dosis única variará según el paciente que se trate y el modo de administración particular. La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con un material vehículo para producir una forma de dosis única será, generalmente, la cantidad de compuesto que produzca un efecto terapéutico. En general, del 100 %, esta cantidad varía de alrededor de 0,1 % a alrededor de 99 % de ingrediente activo, preferentemente, de alrededor de 5 % a alrededor de 70 %, con máxima preferencia, de alrededor de 10 % a alrededor de 30 %.

En ciertas formas de realización, una formulación de la presente invención comprende un excipiente seleccionado del grupo que consiste en ciclodextrinas, celulosas, liposomas, agentes formadores de micelas, por ejemplo, ácidos biliares y vehículos poliméricos, por ejemplo, poliésteres y polianhídridos; y un compuesto de la presente invención. En ciertas formas de realización, una formulación antes mencionada produce un compuesto de la presente invención biodisponible en forma oral.

Los métodos para preparar estas formulaciones o composiciones incluyen la etapa de asociar un compuesto de la presente invención con el vehículo y, opcionalmente, uno o más ingredientes adicionales. En general, las formulaciones se preparan mezclando de manera uniforme un compuesto de la presente invención con vehículos líquidos, vehículos sólidos finamente divididos o ambos, y luego, si es necesario, dándole forma al producto.

Las formulaciones de la invención adecuadas para la administración oral pueden ser en forma de cápsulas, obleas, píldoras, comprimidos, caramelos (con una base saborizada, en general, sacarosa y acacia o tragacanto), polvos, gránulos, en forma de una solución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso, en forma de una emulsión líquida de aceite en agua o de agua en aceite, en forma de elixir o jarabe, en forma de pastillas (con una base inerte, tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y acacia) y/o en forma de enjuagues bucales y similares, cada uno de los cuales contiene una cantidad predeterminada de un compuesto de la presente invención como ingrediente activo. Un compuesto de la presente invención también se puede administrar como bolo, electuario o pasta.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención que son adecuadas para la administración parenteral comprenden uno o más compuestos de la invención en combinación con una o más soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas isotónicas estériles aceptables desde el punto de vista farmacéutico, o polvos estériles que se pueden reconstituir en soluciones o dispersiones inyectables estériles justo antes del uso, que pueden contener azúcares, alcoholes, antioxidantes, amortiguadores, bacteriostáticos y solutos que hacen que la formulación se vuelva isotónica con la sangre del receptor previsto, o agentes espesantes o de suspensión.

En algunos casos, a fin de prolongar el efecto farmacológico, es conveniente hacer más lenta la absorción del fármaco administrado mediante inyección subcutánea, intratumoral o intramuscular. Esto se puede lograr usando una suspensión líquida de material cristalino o amorfo que tiene escasa hidrosolubilidad. La velocidad de absorción del fármaco depende de su velocidad de disolución que, a su vez, puede depender del tamaño del cristal y de la forma cristalina. De manera alternativa, la absorción demorada de una forma farmacológica administrada por vía parenteral se logra mediante la disolución o suspensión del fármaco en un vehículo oleoso.

Las formas de depósitos inyectables se realizan formando matrices microencapsuladas de los compuestos en polímeros biodegradables, tales como poliláctido-poliglicólido. Según la relación entre el fármaco y el polímero, y la naturaleza del polímero particular que se use, se puede controlar la velocidad de liberación del fármaco. Algunos ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli(ortoésteres) y poli(anhídridos). Las formulaciones de depósitos inyectables también se preparan atrapando el fármaco en liposomas o en microemulsiones que son compatibles con el tejido corporal.

Cuando los compuestos de la presente invención se administran como sustancias farmacéuticas a seres humanos y animales, se pueden administrar por sí mismos o como una composición farmacéutica que contiene, por ejemplo, de 0,1 a 99 % (con mayor preferencia, de 10 a 30 %) de ingrediente activo en combinación con un vehículo aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

Independientemente de la vía de administración seleccionada, los compuestos de la presente invención, que se pueden usar en una forma hidratada adecuada, y/o las composiciones farmacéuticas de la presente invención se formulan para obtener formas de dosificación aceptables desde el punto de vista farmacéutico mediante métodos convencionales conocidos por las personas del oficio de nivel medio.

Los niveles de dosis reales de los ingredientes activos en las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden variar, a fin de obtener una cantidad de ingrediente activo que sea eficaz para lograr la respuesta terapéutica deseada para un paciente, una composición y un modo de administración particulares sin que sea tóxico para el paciente.

El nivel de dosis seleccionado dependerá de varios factores que incluyen la actividad del compuesto particular que se usa en la presente invención, o del éster, la sal o la amida de aquel, la vía de administración, el tiempo de administración, la velocidad de excreción o metabolismo del compuesto particular que se use, la velocidad y el alcance de la absorción, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales usados en combinación con el compuesto particular que se use, la edad, el sexo, el peso, la afección, la salud en general y los antecedentes médicos del paciente que está en tratamiento y factores similares conocidos en el campo de la medicina.

Un médico o veterinario con conocimiento de nivel medio puede determinar con facilidad y recetar la cantidad eficaz necesaria de la composición farmacéutica. Por ejemplo, el médico o el veterinario podrían decidir comenzar con dosis de los compuestos de la invención usados en la composición farmacéutica en niveles inferiores a los necesarios, a fin de lograr el efecto terapéutico deseado y aumentar gradualmente la dosis hasta que se obtenga el efecto deseado.

En general, una dosis diaria adecuada de un compuesto de la invención será la cantidad de compuesto que sea la dosis más baja eficaz para producir un efecto terapéutico. En general, la dosis eficaz dependerá de los factores descritos anteriormente. En general, las dosis orales, intravenosas, intracerebroventriculares y subcutáneas de los compuestos de esta invención para un paciente varían de alrededor de 0,01 a alrededor de 50 mg por kilogramo de peso corporal por día.

Si bien es posible administrar un compuesto de la presente invención solo, se prefiere administrar el compuesto como una formulación farmacéutica (composición).

Definiciones

A menos que se especifique lo contrario en la presente, las referencias realizadas en singular también pueden incluir el plural. Por ejemplo, “un” y “uno/a” se pueden referir a uno/a o más.

A menos que se indique lo contrario, se asume que cualquier heteroátomo con valencias no satisfechas tiene los suficientes átomos de hidrógeno para satisfacer las valencias.

En toda la memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas, un nombre o una fórmula química determinada abarca todos los estereoisómeros, isómeros ópticos y racematos de estos, en caso de que existan dichos isómeros. A menos que se indique lo contrario, todas las formas quirales (enantioméricas y diastereoméricas) y racémicas se encuentran dentro del alcance de la invención. Muchos isómeros geométricos de enlaces dobles C=C, enlaces dobles C=N, sistemas de anillos y similares también pueden estar presentes en los compuestos, y todos esos isómeros estables se contemplan en la presente invención. Los isómeros geométricos cis y trans (o E y Z) de los compuestos de la presente invención se describen y se pueden aislar como una mezcla de isómeros o como formas isoméricas separadas. Los presentes compuestos se pueden aislar en formas ópticamente activas o racémicas. Las formas ópticamente activas se pueden preparar mediante la resolución de formas racémicas o mediante síntesis de materiales de inicio ópticamente activos. Todos los procesos que se usan para preparar los compuestos de la presente invención y los intermediarios allí elaborados se consideran parte de la presente invención. Cuando se preparan productos enantioméricos o diastereoméricos, se pueden separar mediante métodos convencionales, por ejemplo, mediante cromatografía o cristalización fraccional. En función de las condiciones del proceso, los productos finales de la presente invención se obtienen en forma libre (neutra) o en forma de sal. Tanto la forma libre como las sales de estos productos finales se encuentran dentro del alcance de la invención. Si se desea, una forma de un compuesto puede convertirse en otra forma. Un ácido o base libre se puede convertir en una sal; una sal se puede convertir en el compuesto libre o en otra sal; una mezcla de compuestos isoméricos de la presente invención se puede separar en los isómeros individuales. Los compuestos de la presente invención, las formas libres y sus sales pueden existir en múltiples formas tautoméricas, en donde los átomos de hidrógeno se transponen a otras partes de las moléculas, y los enlaces químicos entre los átomos de las moléculas se redisponen en consecuencia. Cabe destacar que todas las formas tautoméricas, en caso de que existan, están incluidas en la invención.

Para una mayor claridad y de acuerdo con la convención estándar en el estado de la técnica, el símbolo

se usa en fórmulas y tablas para mostrar el enlace que es el punto de unión de la porción o sustituyente con el núcleo de la estructura.

Además, para una mayor claridad, en donde un sustituyente tiene un guion (-) que no se encuentra entre dos letras o símbolos, este se usa para indicar un punto de unión de un sustituyente. Por ejemplo, -CONH² se fija mediante el átomo de carbono.

Además, para una mayor claridad, cuando no se muestra ningún sustituyente al final de la línea continua, esto indica que hay un grupo metilo (CH³) conectado al enlace.

Además, el grupo fosforotioato se puede representar como

El término "contraión" se usa para representar una especie con carga negativa, tal como cloruro, bromuro, hidróxido, acetato y sulfato, o una especie con carga positiva, tal como sodio (Na+), potasio (K+), amonio (RnNHm+ en donde n=0-4 y m=0-4) y similares.

La expresión “grupo electroaceptor” (EWG) se refiere a un sustituyente que polariza un enlace, atrayendo la densidad de los electrones hacia sí mismo y alejándola de otros átomos ligados. Los ejemplos de EWG incluyen, entre otros, CF3, CF2CF3, CN, halógeno, haloalquilo, NO2, sulfona, sulfóxido, éster, sulfonamida, carboxamida, alcoxi, alcoxiéter, alquenilo, alquinilo, OH, C(O)alquilo, CO²H, fenilo, heteroarilo, -O-fenilo y -O-heteroarilo. Los ejemplos de EWG preferidos incluyen, entre otros, CF³ , CF2CF3, CN, halógeno, SO2(alquilo C1-4), CONH(alquilo C1-4), CON(alquilo C1-4)2 y heteroarilo. Los ejemplos de EWG de mayor preferencia incluyen, entre otros, CF³ y CN.

Como se usa en la presente, la expresión "grupo protector de amina" significa cualquier grupo conocido en el estado de la técnica de la síntesis orgánica para la protección de grupos amina, que es estable para un agente reductor de ésteres, una hidrazina disustituida, R4-M y R7-M, un nucleófilo, un agente reductor de hidrazinas, un activador, una base fuerte, una base de amina impedida y un agente de ciclización. Los grupos protectores de amina que cumplen estos criterios incluyen los que se enumeran en Wuts, P. G. M. and Greene, T.W. Protecting Groups in Organic Synthesis, 4.a edición, Wiley (2007) y The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 3, Academic Press, Nueva York (1981), cuya descripción se incorpora en la presente por referencia. Los ejemplos de grupos protectores de amina incluyen, entre otros, los siguientes: (¹ ) tipos de acilo, tales como formilo, trifluoroacetilo, ftalilo y p-toluensulfonilo; (² ) tipos de carbamatos aromáticos, tales como benciloxicarbonilo (Cbz) y benciloxicarbonilos sustituidos, 1-(p-bifenil)-1-metiletoxicarbonilo y 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc); (3) tipos de carbamatos alifáticos, tales como ter-butiloxicarbonilo (Boc), etoxicarbonilo, diisopropilmetoxicarbonilo y aliloxicarbonilo; (4) tipos de carbamatos de alquilo cíclicos, tales como ciclopentiloxicarbonilo y adamantiloxicarbonilo; (5) tipos de alquilo, tales como trifenilmetilo y bencilo; (⁶ ) trialquilsilano, tal como trimetilsilano; (7) tipos que contienen tiol, tales como feniltiocarbonilo y ditiasuccinoílo; y (⁸ ) tipos de alquilo, tales como trifenilmetilo, metilo y bencilo; y tipos de alquilo sustituido, tales como ² ,² ,² -tricloroetilo, ² -feniletilo y t-butilo; y tipos de trialquilsilano, tales como trimetilsilano.

Como se indica en la presente, el término "sustituido" significa que al menos un átomo de hidrógeno se reemplaza por un grupo que no es de hidrógeno, siempre que se mantengan las valencias normales y que la sustitución dé como resultado un compuesto estable. Los enlaces dobles del anillo, como se usan en la presente, son enlaces dobles que se forman entre dos átomos del anillo adyacentes (por ejemplo, C=C, C=N o N=N).

Cuando existen átomos de nitrógeno (por ejemplo, aminas) en compuestos de la presente invención, estos se pueden convertir en N-óxidos mediante el tratamiento con un agente oxidante (por ejemplo, mCPBA y/o peróxidos de hidrógeno) para obtener otros compuestos de la presente invención. Por ello, se considera que los átomos de nitrógeno indicados y reivindicados incluyen el nitrógeno indicado y su derivado de N-óxido (N^O ).

Cuando cualquier variable ocurre más de una vez en cualquier constituyente o fórmula de un compuesto, su definición en cada caso es independiente de su definición en cada uno de los otros casos. Por ello, por ejemplo, si se muestra que un grupo se sustituye con 0-3 R, dicho grupo se puede sustituir opcionalmente con hasta tres grupos R, y en cada caso, R se selecciona independientemente de la definición de R. Asimismo, se admiten las combinaciones de sustituyentes y/o variables si tales combinaciones dan como resultado compuestos estables.

Cuando se muestra que un enlace a un sustituyente cruza un enlace que conecta dos átomos en un anillo, dicho sustituyente puede unirse a cualquier átomo en el anillo. Cuando se enumera un sustituyente sin indicar el átomo en el cual el sustituyente se une al resto del compuesto de una fórmula determinada, dicho sustituyente se puede unir a través de cualquier átomo en ese sustituyente. Las combinaciones de sustituyentes y/o variables solo se permiten si las combinaciones producen compuestos estables.

Se pretende que la presente invención incluya todos los isótopos de átomos que ocurren en estos compuestos. Los isótopos incluyen los átomos que tienen el mismo número atómico, pero diferentes números másicos. A fin de brindar ejemplos generales y sin limitación, los isótopos de hidrógeno incluyen deuterio y tritio. Los isótopos de hidrógeno pueden indicarse como 1H (hidrógeno), 2H (deuterio) y 3H (tritio). También se indican, generalmente, como D para deuterio y T para tritio. En la solicitud, CD³ indica un grupo metilo en donde todos los átomos de hidrógeno son deuterio. Los isotopos de carbono incluyen 13C y 14C. Por lo general, los compuestos de la invención etiquetados de manera isotópica se pueden preparar mediante técnicas convencionales conocidas por las personas del oficio de nivel medio o mediante procesos análogos a los que se describen en la presente, usando un reactivo adecuado etiquetado de manera isotópica en lugar de un reactivo no etiquetado.

Como se usa en la presente, la expresión “sales aceptables desde el punto de vista farmacéutico” se refiere a derivados de los compuestos divulgados, en donde el compuesto de origen se modifica mediante la preparación de sales ácidas o básicas de aquel. Los ejemplos de sales aceptables desde el punto de vista farmacéutico incluyen, entre otras, sales de ácidos orgánicos o minerales de grupos básicos, tales como aminas; y sales alcalinas u orgánicas de grupos ácidos, tales como ácidos carboxílicos. Las sales aceptables desde el punto de vista farmacéutico incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales de amonio cuaternario del compuesto de origen formado, por ejemplo, de ácidos orgánicos o inorgánicos no tóxicos. Por ejemplo, las sales no tóxicas convencionales incluyen las que derivan de ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, sulfámico, fosfórico y nítrico; y las sales preparadas de ácidos orgánicos, tales como ácido acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, pamoico, maleico, hidroximaleico, fenilacético, glutámico, benzoico, salicílico, sulfanílico, ² -acetoxibenzoico, fumárico, toluensulfónico, metansulfónico, etandisulfónico, oxálico, isotónico y similares.

Las sales aceptables desde el punto de vista farmacéutico de la presente invención se pueden sintetizar del compuesto de origen que contiene una porción básica o ácida mediante métodos químicos convencionales. En general, las sales se pueden preparar haciendo reaccionar las formas básicas o ácidas libres de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o del ácido adecuados en agua, en un solvente orgánico o en una mezcla de los dos; en general, se prefieren medios no acuosos, como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo. Se pueden hallar listas de sales adecuadas en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22.a edición, Allen, L. V. Jr., Ed.; Pharmaceutical Press, Londres, Reino Unido (2012), cuya descripción se incorpora en la presente por referencia.

Además, los compuestos de la Fórmula I pueden tener formas de profármacos. Cualquier compuesto que se convertirá in vivo para proporcionar el agente bioactivo (es decir, el compuesto de la Fórmula I) es un profármaco. En el estado de la técnica, se conocen varias formas de profármacos. Para obtener ejemplos de dichos derivados de profármacos, ver:

a) Bundgaard, H., ed., Design of Prodrugs, Elsevier (1985) y Widder, K. et al., eds., Methods in Enzymology, 112:309-396, Academic Press (1985);

b) Bundgaard, H., capítulo 5, “Design and Application of Prodrugs”, A Textbook of Drug Design and Development, pp. 113-191, Krosgaard-Larsen, P. et al., eds., Harwood Academic Publishers (1991);

c) Bundgaard, H., Adv. Drug Deliv. Rev., 8:1-38 (1992);

d) Bundgaard, H. et al., J. Pharm. Sci., 77:285 (1988);

e) Kakeya, N. et al., Chem. Pharm. Bull., 32:692 (1984); y

f) Rautio, J (Editor). Prodrugs and Targeted Delivery (Methods and Principles in Medicinal Chemistry), vol. 47, Wiley-VCH, 2011.

Los compuestos que contienen un grupo carboxi pueden formar ésteres fisiológicamente hidrolizables que funcionan como profármacos que se hidrolizan en el cuerpo para obtener los compuestos de la Fórmula I por sí mismos. Preferentemente, tales profármacos se administran por vía oral, dado que la hidrólisis ocurre en muchos casos principalmente con la influencia de las enzimas digestivas. La administración parenteral se puede usar cuando el éster per se sea activo, o en los casos en los que la hidrólisis se produzca en la sangre. Los ejemplos de ésteres fisiológicamente hidrolizables de compuestos de la Fórmula I incluyen alquilo C1-6, alquil C1-6-bencilo, 4-metoxibencilo, indanilo, ftalilo, metoximetilo, alcanoiloxi C1-6 -alquilo C1-6(por ejemplo, acetoximetilo, pivaloiloximetilo o propioniloximetilo), alcoxi C1-6-carboniloxi-alquilo C1-6 (por ejemplo, metoxicarbonil-oximetilo o etoxicarboniloximetilo, glicloximetilo, fenilgliciloximetilo, (5-metil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)-metilo) y otros ésteres fisiológicamente hidrolizables conocidos que se usan, por ejemplo, en el estado de la técnica de la penicilina y la cefalosporina. Tales ésteres se pueden preparar mediante técnicas convencionales conocidas en el estado de la técnica.

La preparación de profármacos es conocida en el estado de la técnica y se describe, por ejemplo, en King, F.D., ed., Medicinal Chemistry: Principles and Practice, The Royal Society of Chemistry, Cambridge, Reino Unido (2.a edición, reproducida, 2006); Testa, B. et al., Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism. Chemistry, Biochemistry and Enzymology, VChA and Wiley-VCH, Zúrich, Suiza (2003); Wermuth, C.G., ed., The Practice of Medicinal Chemistry, 3.a edición, Academic Press, San Diego, CA (2008).

El término "solvato" significa una asociación física de un compuesto de esta invención con una o más moléculas de solvente, ya sean orgánicas o inorgánicas. Esta asociación física incluye la fijación al hidrógeno. En ciertos casos, el solvato será capaz de aislarse, por ejemplo, cuando una o más moléculas de solvente se incorporan en la red cristalina del sólido cristalino. Las moléculas de solvente en el solvato pueden estar presentes con una distribución regular y/o desordenada. El solvato puede comprender ya sea una cantidad estequiométrica o no estequiométrica de las moléculas de solvente. El "solvato" abarca tanto solvatos en fase de solución como solvatos que se pueden aislar. Los solvatos de ejemplo incluyen, entre otros, hidratos, etanolatos, metanolatos e isopropanolatos. En general, los métodos de solvatación son conocidos en el estado de la técnica.

Como se usa en la presente, el término “paciente” se refiere a organismos que deben tratarse mediante los métodos de la presente invención. Preferentemente, estos organismos incluyen, entre otros, mamíferos (por ejemplo, murinos, simios, equinos, bovinos, porcinos, caninos, felinos y similares) y se refieren, con máxima preferencia, a seres humanos.

Como se usa en la presente, la expresión "cantidad eficaz" significa que la cantidad de fármaco o agente farmacéutico, es decir, un compuesto de la invención, que provocará la respuesta biológica o médica que se desea obtener de un tejido, sistema, animal o ser humano, por ejemplo, por parte de un investigador o médico clínico. Además, la expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" significa cualquier cantidad que, en comparación con un sujeto correspondiente que no ha recibido dicha cantidad, genera un mejor tratamiento, la curación, prevención o mejora de una enfermedad, un trastorno o un efecto secundario, o una disminución en la velocidad del avance de una enfermedad o trastorno. Una cantidad eficaz se puede administrar en una o más administraciones, aplicaciones o dosis, y no pretende limitarse a una formulación o vía de administración particulares. El término también incluye dentro de su alcance cantidades eficaces para mejorar la función fisiológica normal.

Como se usa en la presente, el término “tratamiento” incluye cualquier efecto, por ejemplo, alivio, reducción, modulación, mejora o eliminación, que da como resultado una mejora de la afección, enfermedad, trastorno y similares, o la mejora de un síntoma de estos.

Como se usa en la presente, la expresión “composición farmacéutica” se refiere a la combinación de un agente activo y un vehículo, inerte o activo, que hace que la composición sea especialmente adecuada para usos terapéuticos o de diagnóstico in vivo o ex vivo.

Los ejemplos de bases incluyen, entre otras, hidróxidos de metales álcali (por ejemplo, sodio), hidróxidos de metales alcalinotérreos (por ejemplo, magnesio), amoníaco y compuestos de la Fórmula N W /, en donde W es alquilo C1-4, y similares.

Para uso terapéutico, las sales de los compuestos de la presente invención se consideran aceptables desde el punto de vista farmacéutico. Sin embargo, las sales de ácidos y bases que no son aceptables desde el punto de vista farmacéutico también pueden usarse, por ejemplo, para la preparación o purificación de un compuesto aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

MÉTODOS DE PREPARACIÓN

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse de varias maneras bien conocidas por una persona experta en la técnica de nivel medio en el campo de la síntesis orgánica. Los compuestos de la presente invención se pueden sintetizar con los métodos descritos a continuación, junto con los métodos de síntesis conocidos en el estado de la técnica de la química orgánica sintética o sus variaciones consideradas por las personas del oficio de nivel medio. Los métodos preferidos incluyen, entre otros, los que se describen a continuación. Todas las referencias aquí citadas se incorporan en la presente por referencia en su totalidad.

Los compuestos de la presente invención se pueden preparar con las reacciones y técnicas descritas en esta sección. Las reacciones se realizan en solventes adecuados para los reactivos y materiales usados, y son adecuadas para las transformaciones que se llevan a cabo. Además, en la descripción de los métodos de síntesis descritos a continuación, se debe tener en cuenta que todas las condiciones de reacción propuestas, incluso la elección del solvente, la atmósfera de reacción, la temperatura de reacción, la duración del experimento y los procedimientos de preparación, se eligen por ser condiciones estándares para esa reacción, que debe reconocer fácilmente una persona experta en la técnica de nivel medio. La persona experta en la técnica de nivel medio en el campo de la síntesis orgánica comprenderá que la funcionalidad presente en varias porciones de la molécula debe ser compatible con los reactivos y las reacciones propuestos. Las restricciones a los sustituyentes que son compatibles con las condiciones de reacción serán evidentes para las personas del oficio de nivel medio y, por ello, se deben usar métodos alternativos. En ocasiones, esto requerirá cierto criterio para modificar el orden de las etapas de síntesis o para seleccionar un cronograma particular del proceso en lugar de otro, a fin de obtener el compuesto deseado de la invención. Otra consideración importante en la planificación de cualquier vía de síntesis en esta área es la elección prudente del grupo protector que se usa para la protección de los grupos funcionales reactivos presentes en los compuestos divulgados en esta invención. Una reseña confiable que describe las diversas alternativas para el profesional capacitado es Greene and Wuts (Protective Groups In Organic Synthesis, 4.a edición, Wiley and Sons, 2007).

Los compuestos de la Fórmula (I) se pueden preparar con referencia a los métodos ilustrados en el siguiente Esquema. Como se muestra allí, el producto final es un compuesto que tiene la misma fórmula estructural que la Fórmula (I). Se comprenderá que cualquier compuesto de la Fórmula (I) se puede producir por los esquemas mediante la selección adecuada de reactivos con sustitución adecuada. Una persona experta en la técnica de nivel medio puede seleccionar con facilidad los solventes, las temperaturas, las presiones y otras condiciones de reacción. Los materiales de inicio están disponibles en el comercio, o las personas del oficio de nivel medio pueden prepararlos con facilidad. Los constituyentes de los compuestos son como se definen en la presente o en cualquier parte en la memoria descriptiva.

squema

Un método para la preparación de los ejemplos de la presente divulgación se describe en el Esquema 1. El método comienza a partir de un cicloalquilo o ribo-nucleósido (i) adecuadamente sustituido, en donde la nucleobase (R1 o R2) se protege de manera adecuada (PG² o PG³), tal como con un grupo benzoílo, y el grupo 5'-hidroxi se protege de manera adecuada (PG¹), tal como con un éter DMTr, y la posición 3' es una funcionalidad fosforamidita. En la Etapa 1, el tratamiento con los reactivos adecuados, tales como trifluoroacetato de piridina seguido de butilamina, porporciona el H-fosfonato (ii). La posterior eliminación del grupo protector de 5'-OH en la Etapa 2, en condiciones ácidas (PG¹ = DMTr) proporciona los compuestos de la Fórmula iii. El compuesto resultante de la Fórmula iii puede hacerse reaccionar con una fosforamidita (iv) totalmente protegida en la Etapa 3, seguida de oxidación con, por ejemplo, t-butilhidroperóxido (X = O) o sulfuración con, por ejemplo DDTT (X = S), para proporcionar los compuestos la Fórmula v. La eliminación del grupo protector de v en la Etapa 4, en las condiciones adecuadas (por ejemplo, trihidrofluoruro de trietilamina cuando PG⁴ = TBS) proporciona los compuestos de la Fórmula vi. El tratamiento de los Compuestos vi con un reactivo de ciclización adecuado en la Etapa 5, tal como DMOCP seguido de oxidación con, por ejemplo, t-butilhidroperóxido (X = O) o sulfuración con, por ejemplo DDTT (X = S) en la Etapa 6 proporciona los compuestos de la Fórmula vii. Los compuestos de la Fórmula vii pueden tratarse con un reactivo adecuado para eliminar los grupos protectores restantes de la nucleobase, por ejemplo NH⁴OH/MeOH (PG² y PG³ = benzoílo) para obtener los compuestos de la Fórmula (I).

Un método adicional para la preparación de los ejemplos de la presente divulgación se describe en el Esquema 2.

Los compuestos de la Fórmula ix pueden prepararse de un compuesto adecuadamente protegido de la Fórmula viN mediante diversas formas conocidas por la persona experta en la técnica de nivel medio. Por ejemplo, el tratamiento de viii (en donde PG⁵ = tritilo y PG⁴ = Ac) con un compuesto heterocíclico en condiciones de Mitsunobu proporciona compuestos de la Fórmula ix. La eliminación selectiva de un grupo protector, por ejemplo, en donde PG⁴ = Ac, puede llevarse a cabo por medio de diversas condiciones, por ejemplo, mediante el tratamiento con amoníaco o MeMgCl, para obtener los compuestos de la Fórmula x . El acoplamiento de los compuestos de la Fórmula x con una fosforamidita (xi) adecuadamente protegida, seguido de oxidación con, por ejemplo, t-butilhidroperóxido (X = O) o sulfuración con, por ejemplo, DDTT (X = S) proporciona los compuestos de la Fórmula xii. La posterior eliminación de los grupos protectores (por ejemplo, PG⁵ = tritilo o TBS, PG¹ = DMTr) en varias condiciones conocidas por la persona experta en la técnica de nivel medio (por ejemplo, con TFA) proporciona los compuestos de la Fórmula xiii. La macrociclización de los compuestos de la Fórmula xiii puede llevarse a cabo mediante diversas formas conocidas por la persona experta en la técnica de nivel medio. Por ejemplo, el tratamiento con difenilfosfito, seguido de oxidación con, por ejemplo, t-butilhidroperóxido (X = O) o sulfuración con, por ejemplo, DDTT (X = S), proporciona los compuestos de la Fórmula xiv. La eliminación de todo grupo protector restante proporciona los compuestos de la Fórmula general xv.

Un método adicional para la preparación de los ejemplos de la presente divulgación se describe en el Esquema 3.

La reacción de los compuestos de la Fórmula x también puede llevarse a cabo con fosforamiditas de la Fórmula xvi, seguida de oxidación con, por ejemplo, t-butilhidroperóxido (X = O) o sulfuración con, por ejemplo, DDTT (X = S), para obtener los compuestos de la Fórmula general xvii. La posterior eliminación de los grupos protectores (por ejemplo, PG⁵ = tritilo o TBS, PG¹ = DMTr) en varias condiciones conocidas por la persona experta en la técnica de nivel medio (por ejemplo, con TFA) proporciona los compuestos de la Fórmula xviN. La macrociclización de los compuestos de la Fórmula xviii puede llevarse a cabo mediante diversas formas conocidas por la persona experta en la técnica de nivel medio. Por ejemplo, el tratamiento con difenilfosfito, seguido de oxidación con, por ejemplo, t-butilhidroperóxido (X = O) o sulfuración con, por ejemplo, DDTT (X = S), proporciona los compuestos de la Fórmula xix. La eliminación de todo grupo protector restante proporciona los compuestos de la Fórmula general xx.

De manera alternativa, un método adicional para la preparación de los ejemplos de la presente divulgación se describe en el Esquema 4.

squema

El método comienza a partir de un nucleósido natural o modificado adecuadamente sustituido (xxv), en donde la nucleobase (R2) se protege de manera adecuada (PG = grupo protector), tal como con un grupo benzoílo. En la Etapa 1, el tratamiento de xxv con un reactivo organofosforado (V) adecuado, por ejemplo, uno de los que se enumeran en la Tabla 1, en un solvente adecuado (tal como acetonitrilo o dimetilformamida), con una base adecuada (por ejemplo, DBU), proporciona los compuestos de la Fórmula xxvi. El tratamiento con un alcohol adecuadamente protegido (por ejemplo, xxvii) en la Etapa 2, en un solvente adecuado (por ejemplo, acetonitrilo o dimetilformamida) en presencia de una base (por ejemplo, DBU) proporciona los compuestos de la Fórmula xxviii. En la Etapa 3, uno o ambos grupos protectores (PG¹ y PG⁵) se pueden retirar en condiciones conocidas por la persona experta en la técnica de nivel medio para obtener alcohol (xxix) o un diol (xxx). Los compuestos de la Fórmula xxx pueden tratarse con un reactivo organofosforado (V) adecuado, por ejemplo, uno de los que se enumeran en la Tabla 1, en un solvente adecuado (tal como acetonitrilo o dimetilformamida), con una base adecuada (por ejemplo DBU) para obtener los compuestos de la Fórmula xxxiii. De manera alternativa, los compuestos de la Fórmula xxix se pueden tratar con un reactivo organofosforado (V), por ejemplo, uno de los que se enumeran en la Tabla 1, en un solvente adecuado (tal como acetonitrilo o dimetilformamida), con una base adecuada (por ejemplo, DBU) para obtener los compuestos de la Fórmula xxxi. En la Etapa 6, el grupo protector (R = PG⁵) se puede retirar para obtener el alcohol xxxii. El tratamiento de xxxii, en la Etapa 7, con una base adecuada (por ejemplo, DBU) proporciona los compuestos de la Fórmula xxxiii. La eliminación de los grupos protectores restantes, en caso de ser necesaria, proporciona los compuestos de la Fórmula (I).

Un método adicional para la preparación de los ejemplos de la presente divulgación se describe en el Esquema 5.

El método comienza a partir de un nucleósido natural o modificado adecuadamente sustituido (xxxiv), en donde la nucleobase (R2) se protege de manera adecuada (PG = grupo protector), tal como con un grupo benzoílo. En la Etapa 1, el tratamiento de xxxiv con un reactivo organofosforado adecuado (V), por ejemplo, uno de los que se enumeran en la Tabla 1, en un solvente adecuado (tal como acetonitrilo o dimetilformamida), con una base adecuada (por ejemplo, DBU), proporciona los compuestos de la Fórmula xxxv. El tratamiento con un alcohol adecuadamente protegido (por ejemplo, xlii) en la Etapa 2, en un solvente adecuado (por ejemplo, acetonitrilo o dimetilformamida) en presencia de una base (por ejemplo, DBU) proporciona los compuestos de la Fórmula xxxvi. En la Etapa 3, uno o ambos grupos protectores (PG¹ y PG⁵) se pueden remover en condiciones conocidas por la persona experta en la técnica de nivel medio para obtener alcohol (xxxvii) o un diol (xxxviii). Los compuestos de la Fórmula xxxviii pueden tratarse con un reactivo organofosforado (V) adecuado, por ejemplo, uno de los que se enumeran en la Tabla 1, en un solvente adecuado (tal como acetonitrilo o dimetilformamida), con una base adecuada (por ejemplo DBU) para obtener los compuestos de la Fórmula xli. De manera alternativa, los compuestos de la Fórmula xxxvii se pueden tratar con un reactivo organofosforado (V), por ejemplo, uno de los que se enumeran en la Tabla 1, en un solvente adecuado (tal como acetonitrilo o dimetilformamida), con una base adecuada (por ejemplo, DBU) para obtener los compuestos de la Fórmula xxxix. En la Etapa 6, el grupo protector (R = PG⁵) se puede remover para obtener el alcohol xl. El tratamiento de xl, en la Etapa 7, con una base adecuada (por ejemplo, DBU) proporciona los compuestos de la Fórmula xli. La eliminación de los grupos protectores restantes, en caso de ser necesaria, proporciona los compuestos de la Fórmula (I).

Un método adicional para la preparación de los ejemplos de la presente divulgación se describe en el Esquema 6.

El método comienza a partir de una fosforamidita (xliii) adecuadamente protegida elaborada a partir de métodos conocidos por la persona experta en la técnica de nivel medio. El acoplamiento de los compuestos de la Fórmula xliii con un alcohol (xliv) adecuadamente protegido, seguido de oxidación con, por ejemplo, t-butilhidroperóxido (X = O) o sulfuración con, por ejemplo, DDTT (X = S) proporciona los compuestos de la Fórmula xvl. La posterior eliminación de los grupos protectores (por ejemplo, PG⁴ = tritilo o TBDPS, PG² = DMTr) en varias condiciones conocidas por la persona experta en la técnica de nivel medio (por ejemplo, con TFA) proporciona los compuestos de la Fórmula xlvi. La macrociclización de los compuestos de la Fórmula xlvi puede llevarse a cabo mediante diversas formas conocidas por la persona experta en la técnica de nivel medio. Por ejemplo, el tratamiento con difenilfosfito, seguido de oxidación con, por ejemplo, t-butilhidroperóxido (X = O) o sulfuración con, por ejemplo, DDTT (X = S), proporciona los compuestos de la Fórmula xvlii. La eliminación de todo grupo protector restante proporciona los compuestos de la Fórmula general (111).

La invención también se define en los siguientes ejemplos. Cabe destacar que los ejemplos solo se proporcionan a modo ilustrativo. De la descripción anterior y los ejemplos, una persona experta en la técnica de nivel medio puede determinar las características principales de la invención, y puede realizar diversos cambios y modificaciones para adaptar la invención a diversos usos y condiciones. Como resultado, la invención no se limita a los ejemplos establecidos a continuación, sino que se define mediante las reivindicaciones adjuntas a esta.

Abreviaturas

Las siguientes abreviaturas se pueden usar en la sección de ejemplos a continuación y en otras secciones de la presente:

Reactivo 3

Reactivo 4

Los reactivos de fósforo (V) (Reactivos 1-4) que se usan en la preparación de los Ejemplos de la presente invención se prepararon de acuerdo con los procedimientos que se proporcionan en USSN 62/657551 que se presentó el 13 de abril de 2018, USSN 62/6568098 que se presentó el 7 de mayo de 2018, USSN 62/697896 que se presentó el 13 de julio de 2018 y USSN 62/729314 que se presentó el 10 de septiembre de 2018.

Ejemplos 1-1, 1-2, 1-3 y 1-4

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{9-hidroxi-3H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfaml-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.06,9]octadecan-3,12-diona

1-1 (Diastereómero 1)

1-2 (Diastereómero 2)

1-3 (Diastereómero 3)

1-4 (Diastereómero 4)

Preparación del Intermediario 1A:

A una suspensión que contenía 6-cloro-9H-purin-2-amina (4,24 g, 25,0 mmol) en THF (200 ml) se agregó DMAP (0,31 g, 2,50 mmol) y luego se agregó de anhídrido de BOC (17,41 ml, 75 mmol). La reacción se agitó durante la noche y luego se concentró hasta secarse. El material crudo se disolvió en acetato de etilo (200 ml) y se lavó con HCl 1 N, y solución acuosa saturada de NaCl. La capa orgánica se secó (Na²SO⁴), se filtró y se concentró. El material crudo se disolvió en MeOH (100 ml) y solución acuosa saturada de NaHCO³ y se calentó a 50 °C durante 1 h. La mezcla resultante se concentró para remover los orgánicos y la capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na²SO⁴), se filtraron y se concentraron. El residuo se volvió a disolver en THF (50 ml), se adsorbió en una pequeña cantidad de Celite (10 g) y se purificó en un sistema de cromatografía en gel de sílice Is Co (columna de gel de sílice ISCO de 120 g) con un MeOH/DCM/ (0 %-10 %) durante un gradiente de 30 min para obtener 1A (3 g, 8,11 mmol, 32,4 % de rendimiento).

Preparación del Intermediario 1B:

1B

A una solución a -78 °C de bis((1R,2S,5R)-2-isopropil-5-metilciclohexil) fumarato (5 g, 12,7 mmol) en tolueno (64 ml) se agregó cloruro de dietilaluminio (25 ml, 25 mmol) por goteo, en nitrógeno. La reacción se agitó a -78 °C durante 10 min, luego se agregó 1,1-dimetoxieteno (1,3 ml, 14 mmol) y la reacción se agitó durante 10 min adicionales. La reacción se inactivó con adición por goteo de 1 ml de metanol y 1 ml de 15 % de hidróxido de sodio acuoso. Se agregó metanol (2,5 ml) y la mezcla se agitó durante 10 min. A la mezcla se agregó 1 g de sulfato de magnesio y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. La suspensión se filtró a través de una almohadilla de Celite y el filtrado se concentró al vacío para obtener el crudo. El material crudo se purificó mediante cromatografía flash en 120 g de gel de sílice (gradiente de 20 min, con 0-10 % de acetato de etilo en hexanos) y luego se volvió a cristalizar de 95:5 metanol:agua para obtener 1B (5,6 g, 91 %) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 84,85 -4,66 (m, 2H), 3,56 -3,49 (m, 1H), 3,36 -3,28 (m, 3H), 3,16 (s, 3H), 2,61 (dd, J=11,9, 10,7 Hz, 1H), 2,22 -2,15 (m, 1H), 2,11 - 1,96 (m, 2H), 1,93 - 1,80 (m, 1H), 1,75 - 1,65 (m, 3H), 1,62 - 1,34 (m, 8H), 1,12 -0,84 (m, 18H), 0,80 - 0,75 (m, 6H).

Preparación del Intermediario 1C:

1C

A una solución a 0 °C de 1B (17 g, 35,4 mmol) en THF (88 ml) se agregó LAH (2,01 g, 53,0 mmol). La reacción se calentó lentamente a temperatura ambiente, luego se calentó a 55 °C durante 5 h, y luego se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La solución se enfrió hasta 0 °C, se inactivó con 5 ml de agua, 5 ml de 15 % de NaOH acuoso, se calentó lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 10 min. Se agregó agua (20 ml), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. A esta mezcla se agregaron 10 g de MgSO⁴, y se continuó agitando durante 10 min. Luego se filtró a través de una almohadilla de Celite y el filtrado se concentró al vacío. El material resultante se disolvió en 200 ml de hexanos y se extrajo con agua (3x150 ml). Los extractos acuosos combinados se saturaron con sulfato de amonio. La fase acuosa se extrajo (3x125 ml) con acetato de etilo, y las capas orgánicas combinadas se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y se concentraron al vacío para obtener 1C (3,74 g, 60 %) como un aceite incoloro transparente. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 83,84 -3,71 (m, 3H), 3,56 (dd, J=10,4, 8,3 Hz, 1H), 3,21 (d, J=2,2 Hz, 6H), 2,49 -2,24 (m, 2H), 2,23 - 1,95 (m, 2H), 1,72 (ddd, J=12,4, 7,6, 1,0 Hz, 2H).

Preparación del Intermediario 1D:

A una solución de 1C (24 g, 136 mmol) en tolueno (1362 ml) a temperatura ambiente se agregó acetato de vinilo (129 g, 1498 mmol). Luego, se agregó lipasa de páncreas porcino (36 g, 136 mmol) en una porción y la suspensión liviana resultante se agitó a temperatura ambiente durante 21,6 h. La mezcla luego se filtró a través de Celite y la torta de filtro se enjuagó con EtOAc. Los filtrados combinados luego se evaporaron al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en una columna usando una columna ISCO de 330 g eluyendo con 0-100 % de acetato de etilo en hexano para obtener 1D (30 g, 137 mmol, 101 % de rendimiento) como un aceite que se usó en el estado en que se encontraba en la siguiente reacción 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 84,27 - 3,99 (m, 2H), 3,88 - 3,61 (m, 2H), 3,33 -3,05 (m, 6H), 2,46 -2,32 (m, 2H), 2,32 -2,17 (m, 1H), 2,12 -2,00 (m, 3H), 1,88 - 1,73 (m, 1H).

Preparación del Intermediario 1E:

Se agregó ácido tósico (1,307 g, 6,87 mmol) en una porción a una solución de 1D (30 g, 137 mmol) en acetona (500 ml) a temperatura ambiente. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h, en cuyo momento la reacción se completó. Se agregó Et³N (1,916 ml, 13,75 mmol) y la mezcla se evaporó al vacío. El residuo luego se purificó mediante un sistema ISCO usando un gradiente de hexano/acetato de etilo, el producto se eluyó con acetato de etilo puro. Las fracciones que contenían producto luego se combinaron y se evaporaron. Durante la evaporación, no se aplicó calor y 1E (22 g, 93 %) se obtuvo como un aceite. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 84,44 - 4,22 (m, 2H), 4,02 - 3,88 (m, 1H), 3,85 - 3,69 (m, 1H), 3,41 - 3,25 (m, 1H), 3,17 - 3,02 (m, 1H), 2,97 - 2,85 (m, 1H), 2,85 - 2,66 (m, 1H), 2,20 -2,09 (m, 3H), 1,86 - 1,72 (m, 1H).

Preparación del Intermediario 1F:

1F

Una solución 1E (23,67 g, 137 mmol) en DCM anhidro (916 ml) a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno se trató con Et³N (30,7 ml, 220 mmol) seguido de DMAP (1,680 g, 13,75 mmol). Luego se agregó (dorometantriil)tribenceno (49,8 g, 179 mmol) en una porción y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante la noche. La reacción se inactivó mediante la adición de solución saturada de bicarbonato de sodio (200 ml). La capa acuosa luego se extrajo con una porción adicional de DCM (100 ml) y los orgánicos combinados luego se secaron (MgSO⁴) y se evaporaron al vacío. El aceite resultante luego se purificó en una columna ISCO de 330 g eluyendo con 0-40 % de acetato de etilo en hexano para obtener 1F (31,83 g, 77 mmol, 55,9 % de rendimiento) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 87,57 - 7,39 (m, 6H), 7,39 -7,18 (m, 9H), 4,41 - 4,21 (m, 2H), 3,57 - 3,42 (m, 1H), 3,34 - 3,24 (m, 1H), 3,24 - 3,11 (m, 2H), 2,95 - 2,78 (m, 2H), 2,07 - 1,93 (m, 3H).

Preparación del Intermediario 1G:

1G

Se agregó LS-Selectride (36,2 ml, 36,2 mmol) por goteo a través de un embudo de presión compensada a una solución agitada de 1F (12 g, 29,0 mmol) a -78 °C en una atmósfera de nitrógeno. La adición se completó en un total de 30 min. La reacción luego se agitó a -78 °C durante 40 min. La reacción se inactivó agregando lentamente solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (85 ml) y luego se removió el baño frío y se reemplazó con un baño de agua y hielo. Cuando la temperatura interna alcanzó 0 °C, se agregó peróxido de hidrógeno (59,1 ml, 579 mmol) por goteo mediante una pipeta de vidrio. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante ~4 h antes de diluirse con agua y extraerse con acetato de etilo (3x). Las capas orgánicas combinadas luego se lavaron con solución saturada de bicarbonato de sodio, se secaron (MgSO⁴) y se evaporaron al vacío. Este material crudo se purificó mediante cromatografía en una columna en un sistema ISCO eluyendo con un 0-40 % de gradiente acetato de etilo/hexano. Se recolectaron fracciones y se evaporaron para obtener 1G (7,75 g, 18,61 mmol, 64,3 % de rendimiento).

1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 87,60 -7,42 (m, 6H), 7,42 -7,18 (m, 10H), 4,61 -4,40 (m, 1H), 4,13 -4,02 (m, 2H), 3,47 -3,27 (m, 2H), 2,71 -2,65 (m, 1H), 2,65 -2,44 (m, 2H), 2,20 -2,11 (m, 2H), 2,11 -2,02 (m, 3H).

Preparación del Intermediario 1H:

1H

Una solución que contenía trifenilfosfina (732 mg, 2,79 mmol) en una mezcla de THF (12 ml)/tolueno (6 ml) se enfrió en un baño de hielo y se trató por goteo con DIAD (0,525 ml, 2,70 mmol), y dio como resultado en una suspensión color crema. A esta suspensión se agregó una solución que contenía 1G (750 mg, 1,801 mmol) y 1A (999 mg, 2,70 mmol) en THF (5 ml). El baño de hielo se retiró y la reacción se agitó a 35 °C durante 20 h. La reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se concentró hasta secarse. El producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM y se cargó en una columna de gel de sílice ISCO de 80 g y se purificó usando el sistema Teledyne ISCO, eluyendo durante un gradiente de 20 min con 0 %-100 % de EtOAc/DCM/ para obtener 1H (900 mg, 1,171 mmol, 65,1 % de rendimiento). m/z (768, M+H).

1I

A una solución de 1H (900 mg, 1,171 mmol) en DCM (10 ml) se agregó trietilsilano (1,871 ml, 11,71 mmol) y luego se agregó TFA (0,902 ml, 11,71 mmol). La reacción se agitó durante 30 min. Se agregó TFA adicional (0,45 ml) y la reacción se agitó durante 30 min adicionales. La reacción luego se diluyó con DCM adicional (50 ml) y se inactivó con hidróxido de amonio (~5 ml) y se agitó en una ampolla de decantación y la capa orgánica se aisló y la capa acuosa se extrajo con DCM adicional (2 x 10 ml). Los extractos orgánicos se combinaron, se lavaron con amortiguador de pH 7, se secaron (Na²SO⁴), se filtraron y se concentraron. El producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM y se cargó en una columna de gel de sílice ISCO de 12 g y se purificó usando el sistema Teledyne ISCO, eluyendo durante un gradiente de 10 min con 0 %-10 % de MeOH/DCM para obtener 1I (275 mg, 0,844 mmol, 72,1 % de rendimiento). m/z (326, M+H).

Preparación del Intermediario 1J:

1J

A una suspensión de 1I (275 mg, 0,844 mmol) en etanol (5 ml) se agregó amortiguador de acetato de sodio/ácido acético de pH 4,5 (4,22 ml, 4,22 mmol) y luego se agregó de una solución etanólica/agua de bromoacetaldehído (3 ml, 3,75 mmol). La reacción se calentó a 45 °C durante 22 h. La reacción luego se enfrió 0 °C en un baño de hielo y se neutralizó usando bicarbonato de amonio sólido. Los sólidos resultantes se filtraron, se lavaron con agua y se secaron. El sólido se volvió a disolver en DCM/MeOH (5 ml), se adsorbió en una pequeña cantidad de Celite (2 g) y se purificó en un sistema de cromatografía en gel de sílice ISCO usando una columna de gel de sílice ISCO de 4 g con MeOH/DCM (0 %-10 %) durante un gradiente de 10 min para obtener el 1J deseado (135 mg, 0,407 mmol, 48,3 % de rendimiento). m/z (332, M+H).

Preparación del Intermediario 1K:

1K

A una solución que contenía imidazol (216 mg, 3,17 mmol) en DMF (1 ml) se agregó TBS-Cl (199 mg, 1,320 mmol) y la mezcla se agitó durante 20 min. Una solución que contenía 1J (175 mg, 0,528 mmol) se agregó a la solución de TBSCl/imidazol y se agitó durante 20 h. Una cantidad adicional de imidazol (50 mg) y TBSCl (25 mg) se agregaron y la reacción se calentó a 50 °C durante 1 h. La reacción luego se enfrió hasta temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo (50 ml) y se lavó con agua (2 x 20 ml), solución acuosa al 10 % de LiCl (2 x 10 ml) y solución acuosa saturada de NaCl (10 ml). Los lavados acuosos se combinaron y se volvieron a extraer con acetato de etilo adicional (50 ml), luego se lavaron con solución acuosa saturada de NaCl. Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na²SO⁴), se filtraron y se concentraron. El producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM y se cargó en una columna de gel de sílice ISCO de 12 g y se purificó usando el sistema Teledyne ISCO, eluyendo durante un gradiente de 10 min con 0 %-5 % de MeOH/DCM para obtener 1K (220 mg, 0,494 mmol, 93 % de rendimiento). m/z (446, M+H).

Preparación del Intermediario 1L:

1L

A una solución a 0 °C que contenía 1K (210 mg, 0,471 mmol), 2-(4-nitrofenil)etan-1-ol (158 mg, 0,943 mmol) y trifenilfosfina (253 mg, 0,966 mmol) en dioxano (5 ml) se agregó DIAD (0,183 ml, 0,943 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 h y luego se concentró en un aceite espeso. El residuo se volvió a disolver en DCM (1 ml), se adsorbió en una pequeña cantidad de Celite (1 g) y se purificó en el sistema de cromatografía en gel de sílice ISCO usando una columna de gel de sílice ISCO de 12 g con MeOH/DCM (0 %-10 %) durante un gradiente de 10 min para obtener el 1L deseado (180 mg, 0,303 mmol, 64,2 % de rendimiento). m/z (595, M+H).

Preparación del Intermediario 1M:

1M

El Intermediario 1L (265 mg, 0,446 mmol) se disolvió en un solución metanólica de amoníaco (7 N en MeOH) (5 ml, 35,0 mmol), se selló en un vial y se calentó a 35 °C durante 2 h. Luego, la reacción se concentró y el producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM y se cargó en una columna de gel de sílice ISCO de 4 g y se purificó usando el sistema Teledyne ISCO, eluyendo durante un gradiente de 10 min con 0 %-5 % de MeOH/DCM para obtener 1M (180 mg, 0,326 mmol, 73,1 % de rendimiento), m/z (553, M+H).

reparac n e n erme aro :

Una solución que contenía tetrazol (25,10 mg, 0,358 mmol) y (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il 2-cianoetil diisopropilfosforamidita (Sigma-Aldrich, 285 mg, 0,326 mmol) en acetonitrilo (5 ml) se concentró hasta secarse en el evaporador giratorio (2 x 5 ml) y luego se volvió a suspender en acetonitrilo (5 ml) y se dejó en una atmósfera de nitrógeno. En un matraz separado se suspendió 1M (180 mg, 0,326 mmol) y se agregó acetonitrilo seco (5 ml), y esto se concentró hasta secarse en el evaporador giratorio (2 x 5 ml). Este material se volvió a suspender en acetonitrilo (2 ml) y luego se agregó a la solución agitada de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il 2-cianoetil diisopropilfosforamidita mediante una jeringa. La reacción se evacuó y se purgó con gas de nitrógeno y luego se selló. La reacción se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. Luego, la reacción se calentó a 50 °C durante 20 h, se enfrió hasta temperatura ambiente y se trató con (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (100 mg, 0,489 mmol). La reacción se agitó durante 1 h y luego se concentró. El producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM y se cargó en una columna de gel de sílice ISCO de 40 g y se purificó usando el sistema Teledyne ISCO, eluyendo durante un gradiente de 20 min con 0 %-5 % de MeOH/DCM. Las fracciones que contenían el compuesto deseado se concentraron y el material crudo se disolvió en DCM (5 ml) y se agregó trietilsilano (550 ul), y luego se agregó TFA (125 ul). La reacción se concentró hasta secarse y luego se volvió a suspender en ACN (4 ml) y se agregó trihidrofluorofluoruro de trietilamina (550 ul). La reacción se calentó a 35 °C durante 30 min. Luego, la mezcla de reacción se cargó en una columna RediSep Rf C-18 Gold ISCO de 150 g que se había equilibrado previamente con la fase móvil A: 5:95 acetonitrilo: agua (acetato de amonio 0,01 M); fase móvil B: 95:5 acetonitrilo: agua (acetato de amonio 0,01 M). El compuesto se eluyó usando un gradiente: 0 % de B para 2 volúmenes de columna a 100 % de B durante 20 columnas para obtener compuesto 1N (200 mg, 0,212 mmol, 65,1 % de rendimiento), m/z (943, M+H).

Preparación del Intermediario 1O:

1O

El Intermediario 1N (200 mg, 0,212 mmol) se disolvió en piridina (10 ml) y se concentró hasta secarse. El procedimiento se repitió una vez más con piridina (10 ml) y el residuo resultante se suspendió en piridina seca (30 ml) en una atmósfera de nitrógeno y se trató en pequeñas porciones (~0,2 ml) cada 10 min con difenil fosfito (0,081 ml, 0,424 mmol) que se disolvió en piridina (10 ml). La reacción luego se trató con DDTT (109 mg, 0,530 mmol) y se agitó durante 10 h. La reacción se concentró hasta secarse, se volvió a suspender en acetonitrilo (5 ml) y se adsorbió en Celite (2 g) y se purificó en columna C-18 Gold ISCO de fase inversa que se había equilibrado con Fase móvil A: 5:95 acetonitrilo: agua con acetato de amonio 0,01 M; Fase móvil B: 95:5 acetonitrilo: agua con acetato de amonio 0,01 M; gradiente: 0 % de B para 2 volúmenes de columna a 100 % de B durante 20 columnas para obtener 1O (150 mg, 0,147 mmol, 69,3 % de rendimiento), M+H (1021, M+H) como mezcla de 4 diaestereómeros.

Ejemplos 1-1, 1-2, 1-3 y 1-4

1-1 (Diastereómero 1)

1-2 (Diastereómero 2)

1-3 (Diastereómero 3)

1-4 (Diastereómero 4)

El Intermediario 1O (185 mg, 0,181 mmol) se suspendió en amoníaco 7 N en MeOH (5 ml, 35,0 mmol), se selló en un vial y se agitó durante la noche. La reacción luego se concentró hasta secarse. El material crudo se disolvió en piridina (1 ml) y se agregó DBU (225 pl, 1,493 mmol), y la reacción se calentó a 35 °C durante 3 h. La reacción luego se concentró y el residuo se suspendió en agua (1 ml) y se llevó a pH ~8 con amortiguador de ácido acético/acetato de amonio (pH 4,5), y se purificó en columna C-18 Gold ISCO de fase inversa que se había equilibrado con el uso de Fase móvil A: 5:95 acetonitrilo: agua con acetato de amonio 0,01 M; Fase móvil B: 95:5 acetonitrilo: agua con acetato de amonio 0,01 M; gradiente: 0 % de B para 2 volúmenes de columna a 100 % de B durante 20 columnas para obtener una mezcla de 4 diaestereómeros. Los 4 isómeros combinados se disolvieron en agua (2 ml) y se purificaron usando HPLC preparativa de fase inversa con las siguientes condiciones para obtener 4 diaestereómeros: Columna: columna Xselect CSH C18, 3,5 pm, 3,0 X 150 mm; Fase móvil A: 20 mM de acetato de trietilamonio (pH 6,5); Fase móvil B:

80:20 ACN:20 mM de acetato de trietilamonio (pH 6,5); gradiente: 10 %-12 % de B durante 9 minutos, luego 12-23 % de B durante 5 min, luego 23 %-95 % de B durante un minuto; flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga.

Ejemplo 1-1: 5 mg. Tiempo de retención: 0,39 min. (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18 1,7 pm; Fase móvil A: agua con 0,05 % de TFA; Fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego 98 % de B a 2 % de B durante 0,5 min; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm)). Masa observada:

715,2 (M+H).1H RMN (400 MHz, METANOL-d⁴) 88,98 - 8,91 (m, 1H), 8,26 - 8,19 (m, 1H), 8,17 - 8,09 (m, 1H), 7,67 -7.60 (m, 1H), 7,34 - 7,27 (m, 1H), 6,44 - 6,36 (m, 1H), 5,56 - 5,38 (m, 1H), 5,35 - 5,19 (m, 1H), 4,84 - 4,72 (m, 1H), 4.56 - 4,49 (m, 1H), 4,48 - 4,35 (m, 2H), 4,32 - 4,16 (m, 2H), 4,13 - 3,97 (m, 2H), 3,28 - 3,20 (m, 1H), 2,69 - 2,56 (m, 1H), 2,56 -2,38 (m, 2H)

Ejemplo 1-2: 5 mg. Tiempo de retención: 0,41 min. (columna: ACQUITY UPLC® BEH C18 1,7 pm; fase móvil A: agua con 0,05 % de TFA; fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego 98 % de B a 2 % de B durante 0,5 min; Flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm)). Masa observada: 715,1 (M+H). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d⁴) 88,94 - 8,90 (m, 1H), 8,20 - 8,16 (m, 1H), 8,06 - 8,01 (m, 1H), 7,56 - 7,51 (m, 1H), 7,16 (br d, J=1,5 Hz, 1H), 6,40 - 6,32 (m, 1H), 5,49 - 5,32 (m, 1H), 5,18 - 5,06 (m, 1H), 4,74 - 4,65 (m, 1H), 4.57 - 4,42 (m, 3H), 4,26 - 4,18 (m, 2H), 4,15 - 3,98 (m, 2H), 3,51 - 3,40 (m, 1H), 2,84 - 2,73 (m, 1H), 2,58 - 2,39 (m, 2H).

Ejemplo 1-3: 10 mg. Tiempo de retención: 0,42 min. (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18 1,7 pm; Fase móvil A: agua con 0,05 % de TFA; Fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego 98 % de B a 2 % de B durante 0,5 min; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm)). Masa observada:

715.0 (M+H). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d⁴) 88,61 - 8,59 (m, 1H), 8,23 - 8,21 (m, 1H), 8,09 - 8,06 (m, 1H), 7,65 -7.61 (m, 1H), 7,32 - 7,29 (m, 1H), 6,41 - 6,35 (m, 1H), 5,64 - 5,48 (m, 1H), 5,35 - 5,21 (m, 1H), 4,83 - 4,73 (m, 1H), 4.57 - 4,49 (m, 1H), 4,47 - 4,33 (m, 2H), 4,30 - 4,19 (m, 2H), 4,18 - 4,05 (m, 2H), 3,25 - 3,16 (m, 1H), 2,64 - 2,44 (m, 3H).

Ejemplo 1-4: 10 mg. Tiempo de retención: 0,46 min. (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18 1,7 pm; Fase móvil A: agua con 0,05 % de TFA; Fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego 98 % de B a 2 % de B durante 0,5 min; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm)). Masa observada:

715.1 (M+H). ). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d⁴) 88,61 -8,59 (m, 1H), 8,23 -8,21 (m, 1H), 8,09 -8,06 (m, 1H), 7,65 - 7,61 (m, 1H), 7,32 - 7,29 (m, 1H), 6,41 -6,35 (m, 1H), 5,64 - 5,48 (m, 1H), 5,35 - 5,21 (m, 1H), 4,83 -4,73 (m, 1H), 4.57 - 4,49 (m, 1H), 4,47 - 4,33 (m, 2H), 4,30 - 4,19 (m, 2H), 4,18 - 4,05 (m, 2H), 3,25 - 3,16 (m, 1H), 2,64 - 2,44 (m, 3H).

Ejemplos 2-1, 2-2, y 2-3

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-hidroxi-17-{9-oxo-3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfanN-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.2.1.069]octadecan-3,12-diona

2-1 (Diastereómero 1)

2-2 (Diastereómero 2)

2-3 (Diastereómero 3)

Preparación del Intermediario 2A:

2A

A una solución que contenía (2R,3R,4S,5R)-2-(2-amino-6-doro-9H-purin-9-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3,4-diol (10 g, 33,1 mmol) en amortiguador de AcOH/NH⁴ OAc (pH 4,5) (100 ml) y EtOH (100 ml) se agregó 2-bromoacetaldehído (80 ml, 104 mmol). La reacción se calentó durante 48 h a 37 °C. Luego, el filtrado luego se neutralizó a pH ~7 con bicarbonato de amonio sólido y el sólido resultante se recolectó mediante filtración y el sólido se enjuagó con acetonitrilo. El filtrado se concentró a ~1/2 de volumen en un evaporador giratorio y luego se trató con acetonitrilo ^{( ~ 1 0 0} ml) y se recolectó un segundo cultivo del producto y se enjuagó con acetonitrilo adicional para obtener 2A (5 g, 16,27 mmol, 49,1 % de rendimiento), m/z (308, M+H). 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) ⁸ 8,15 (m, 1H), 7,63 (m, 1H), 7,42 (d, J=2,5 Hz, 1H), 5,83 (d, J=5,8 Hz, 1H), 5,42 (br d, J=5,8 Hz, 1H), 5,21 - 5,07 (m, 2H), 4,50 (q, J=5,3 Hz, 1H), 4,14 (br d, J=3,9 Hz, 1H), 3,92 (q, J=3,8 Hz, 1H), 3,73 - 3,62 (m, 1H), 3,60 -3,49 (m, 1H).

Preparación del Intermediario 2B:

2B

Una solución que contenía 2A (4,5 g, 14,65 mmol) se disolvió en piridina (50 ml) y la suspensión se azeotropó en el evaporador giratorio hasta secarse y luego se volvió a disolver en piridina (50 ml) y se trató por goteo con anhídrido acético (13,82 ml, 146 mmol). La reacción se agitó durante 20 h y luego se trató con MeOH (10 ml) y se concentró. El material se absorbió en DCM (100 ml) y se lavó con solución acuosa de K²HPO⁴1,5 N (1 x 50 ml), se secó (Na²SO⁴), se filtró y se concentró. El producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM y se cargó en una columna de gel de sílice ISCO de 40 g y se purificó usando un sistema Teledyne ISCO, eluyendo durante un gradiente de 15 min con 1 %-10 % de DCM (0,1 % de TEA)/MeOH para obtener 2B (3,1 g, 7,15 mmol, 48,8 % de rendimiento), m/z (434, M+H). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶) ⁸ 12,58 - 12,53 (m, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,65 (t, J=2,2 Hz, 1H), 7,47 (t, J=2,5 Hz, 1H), 6,14 (d, J=5,9 Hz, 1H), 5,92 (t, J=6,0 Hz, 1H), 5,54 (dd, J=5,9, 4,4 Hz, 1H), 4,46 -4,26 (m, 3H), 2,16 -2,11 (m, 3H), 2,04 (d, J=2,4 Hz, 6H)

Preparación del Intermediario 2C:

2C

A una solución que contenía 2B (2,5 g, 5,77 mmol), 2-(4-nitrofenil)etan-1-ol (1,543 g, 9,23 mmol) y trifenilfosfina (2,270 g, 8,65 mmol) en THF (50 ml) se agregó por goteo DIAD (1,682 ml, 8,65 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 h y luego se concentró al vacío. El producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM y se cargó en una columna de gel de sílice ISCO de 80 g y se purificó usando un sistema Teledyne ISCO, eluyendo durante un gradiente de 30 min con 5 %-100 % de DCM/EtOAc para obtener diacetato de (2R,3R,4R,5r )-2-(acetoximetil)-5-(5-(4-nitrofenetil)-9-oxo-5,9-dihidro-3H-imidazo[1,2-a]purin-3-il)tetrahidrofuran-3,4-diilo, m/z (583, M+H). El diacetato crudo de (2R,3R,4R,5R)-2-(acetoximetil)-5-(5-(4-nitrofenetil)-9-oxo-5,9-dihidro-3H-imidazo[1,2-a]purin-3-il)tetrahidrofuran-3,4-diilo se volvió a disolver en amoníaco 7 N en MeOH (50 ml) y se agitó durante 20 h. La reacción luego se concentró a ~1/2 de volumen y se trató con ~50 ml de dietiléter. El sólido resultante se recolectó mediante filtración y se enjuagó con dietiléter y se secó para obtener 2C (2,5 g, 5,48 mmol, 95 % de rendimiento), m/z (457, M+H). 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 88,16-8,10 (m, 3H), 7,66 - 7,63 (m, 1H), 7,53 - 7,48 (m, 1H), 7,46 - 7,43 (m, 1H), 5,86 - 5,82 (m, 1H), 5,44 - 5,39 (m, 1H), 5,24 - 5,20 (m, 1H), 5,06 - 5,01 (m, 1H), 4,63 - 4,56 (m, 1H), 4,45 -4,39 (m, 2H), 4,22 -4,17 (m, 1H), 3,98 -3,93 (m, 1H), 3,72 -3,65 (m, 1H), 3,63 -3,55 (m, 1H), 3,33 -3,27 (m, 2H)

Preparación del Intermediario 2D:

Una solución que contenía 2C (2,5 g, 5,48 mmol) en piridina (40 ml) se concentró en un aceite espeso. El aceite se azeotropó por segunda vez con piridina adicional (40 ml). El aceite viscoso resultante se volvió a disolver en piridina (30 ml) en una atmósfera de nitrógeno y 4,4'-(cloro(fenil)metilen)bis(metoxibenceno) (2,227 g, 6,57 mmol) se agregó en pequeñas porciones. La reacción se agitó durante 20 h, y luego se concentró en el evaporador giratorio. El residuo resultante se diluyó con DCM (100 ml) y se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO³ (25 ml) y solución acuosa saturada de NaCl, luego se secó (Na²SO⁴), se filtró y se concentró. El producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM y se cargó en una columna de gel de sílice ISCO de 40 g y se purificó usando un sistema Teledyne ISCO, eluyendo durante un gradiente de 20 min con 5 %-100 % de EtOAc/DCM (DCM que contenía 0,25 % de TEA) para obtener 2D (1,95 g, 2,57 mmol, 46,9 % de rendimiento), m/z (759, M+H). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 88,13 -8,06 (m, 3H), 7,68 - 7,62 (m, 1H), 7,45 - 7,39 (m, 3H), 7,35 - 7,29 (m, 2H), 7,21 - 7,12 (m, 7H), 6,72 (dd, J=16,5, 8,9 Hz, 4H), 5,92 (d, J=4,3 Hz, 1H), 5,55 (d, J=5,6 Hz, 1H), 5,23 (d, J=6,1 Hz, 1H), 4,68 (q, J=5,2 Hz, 1H), 4,40 (q, J=5,6 Hz, 1H), 4,33 -4,14 (m, 2H), 4,10 -4,04 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,68 -3,66 (m, 3H), 3,32 -3,26 (m, 1H), 3,22 -3,13 (m, 3H).

Preparaci n del Intermediario 2E:

El Intermediario 2D (3,75 g, 4,94 mmol) e imidazol (0,841 g, 12,36 mmol) se disolvieron en DMF (25 ml), y se agregó TBS-Cl (0,782 g, 5,19 mmol). La reacción se agitó en una atmósfera de nitrógeno durante 18 h. La mezcla de reacción luego se vertió en una ampolla de decantación que contenía EtOAc/ solución acuosa al 10 % de LiCl (200 ml/50 ml) y se agitó. La capa acuosa se decantó y la capa orgánica se lavó con solución acuosa al 10 % de LiCl adicional (50 ml) y solución acuosa saturada de NaCl, luego se secó (Na²SO⁴), se filtró y se concentró. El producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM y se cargó en una columna de gel de sílice ISCO de 220 g y se purificó usando el sistema Teledyne ISCO, eluyendo durante un gradiente de 30 min con 0 %-50 % de EtOAc/DCM (0,25 % de TEA) para obtener 2E que se eluyó más lento (900 mg, 1,03 mmol, 21 % de rendimiento). Tiempo de retención: 1,18 min. (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18 1,7 |jm; Fase móvil A: agua con 0,05 % de TFA; Fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 98 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm)). Masa observada 873,5 (M+H). 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 8 8,24 - 8,09 (m, 2H), 8,00 - 7,86 (m, 1H), 7,74 - 7,56 (m, 1H), 7,44 (d, J=7,0 Hz, 2H), 7,36 - 7,34 (m, 2H), 7,34 - 7,31 (m, 3H), 7,31 - 7,29 (m, 1H), 7,27 - 7,22 (m, 3H), 6,93 - 6,77 (m, 4H), 6,73 - 6,64 (m, 1H), 6,09 - 5,95 (m, 1H), 4,53 -4,48 (m, 1H), 4,47 -4,42 (m, 1H), 4,38 -4,29 (m, 2H), 4,24 -4,16 (m, 1H), 3,80 (d, J=0,8 Hz, 6H), 3,56 -3,46 (m, 1H), 3,37 -3,29 (m, 1H), 3,27 -3,19 (m, 2H), 3,18 -3,11 (m, 1H), 0,92 (s, 9H), 0,02 (s, 6H).

Preparación del Intermediario 2F:

A una solución que contenía 2E (900 mg, 1,031 mmol) en DCM (10 ml) se agregó 1H-imidazol-4,5-dicarbonitrilo (146 mg, 1,237 mmol) y luego se agregó de 3-((bis(diisopropilamino)fosfanil)oxi)propanonitrilo (0,680 ml, 2,062 mmol). La mezcla se agitó durante 20 h y luego se diluyó con DCM adicional (50 ml) y se inactivó con solución acuosa al 10 % de NaHCO³ (25 ml). La capa orgánica se aisló, se secó (Na²SO⁴), se filtró y se concentró. El producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM y se cargó en una columna de gel de sílice ISCO de 12 g y se purificó usando el sistema Teledyne ISCO, eluyendo durante un gradiente de 15 min con 0 %-100 % de EtOAc/DCM (0,25 % de TEA) para obtener 2f (1,1 g, 1,025 mmol, 99 % de rendimiento). Tiempo de retención: 1,15 min, (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18 1,7 jm ; Fase móvil A: agua con 0,05 % de TfA; Fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 98 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm)).

Preparación del Intermediario 2G:

2G

A una solución a 0 °C de Ph³P (1,071 g, 4,08 mmol) en THF (20ml)/tolueno (4 ml) se agregó DIAD (0,700 ml, 3,60 mmol). La reacción se agitó a 0 °C durante 30 min. A la reacción se agregó 6-cloro-9H-purina (0,557 g, 3,60 mmol) y 1G (1,0 g, 2,4 mmol). La reacción se agitó a 50 °C durante 16 h y luego se concentró al vacío. El material crudo se purificó mediante cromatografía flash en 40 g de gel de sílice (gradiente de 15 min, con 0-100 % de acetato de etilo en hexanos) para obtener 2G (1,0 g, 1,8 mmol, 75 % de rendimiento) como una espuma blanca. [M+H]+ = 553,2. Preparación del Intermediario 2H:

2H

A una solución a 0 °C de 2G (1,74 g, 3,15 mmol) en THF (16 ml) se agregó cloruro de metilmagnesio (3 M en THF) (2,1 ml, 6,3 mmol). La mezcla se calentó a temperatura ambiente y la reacción se agitó durante 2 h. La reacción luego se inactivó con cloruro de amonio acuoso saturado y se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. La mezcla luego se dividió en EtOAc y agua, la capa orgánica se separó, y la fase acuosa se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron (sulfato de sodio) y se concentraron al vacío. El material crudo se purificó mediante cromatografía flash en 80 g de gel de sílice (gradiente de 15 min, con 0-100 % de EtOAcDCM) para obtener 2H (1,16 g, 2,27 mmol, 72 % de rendimiento) como un sólido blanco. LCMS, [M+H]+ = 511,3.

Preparación del Intermediario 2I:

2I

Una solución que contenía 1H-tetrazol (212 mg, 3,03 mmol) y 2H (310 mg, 0,607 mmol) en MeCN (3 ml) se azeotropó en el evaporador giratorio (2 x 3 ml) y luego se volvió a suspender en MeCN (3 ml) y se agregó MS 4Á activado (150 mg) y la mezcla se dejó en una atmósfera de nitrógeno. En un vial separado se suspendió 2F (846 mg, 0,789 mmol) en acetonitrilo seco (4 ml) y esto se azeotropó en el evaporador giratorio (3 x 1 ml) y luego se volvió a suspender en acetonitrilo (4 ml). Esta mezcla se agregó a la anterior solución agitada de alcohol-tetrazol mediante jeringa. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción luego se trató con (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (249 mg, 1,213 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción luego se concentró, se disolvió en EtOAc, se lavó con NaHCܳ saturado, y luego salmuera. La fase de capa orgánica se secó con Na²SO⁴ y luego se concentró y se secó al vacío. Luego, el material crudo se suspendió en DCM (30 ml) y se agregaron ácido 2,2-dicloroacético (2,444 ml, 4,25 mmol) y luego trietilsilano (0,678 ml, 4,25 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La reacción luego se diluyó con DCM y se neutralizó con NaHCO³ acuoso. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na²SO⁴ y se concentró al vacío. La mezcla cruda se purificó en C18, columna Gold ISCO de fase inversa de 120 g y se eluyó con solvente A: 95 % de agua, 5 % de acetonitrilo, acetato de amonio 0,01 M; solvente B: 95 % de acetonitrilo, 5 % de agua, acetato de amonio 0,01 M mantenido a 20 % de B durante 5 min, luego 20-100 % de B durante 20 min, el pico del producto se eluyó a 70-80 % de gradiente para obtener 2I (340 mg, 0,350 mmol, 57,8 % de rendimiento). m/z (970,3, M+H).

Preparación del Intermediario 2J:

2J

El Intermediario 2I (0,34 g, 0,350 mmol) se disolvió en piridina seca (5 ml). La solución se azeotropó en el evaporador giratorio. Este azeótropo con piridina se repitió (2 x 3 ml). El residuo luego se volvió a disolver en piridina seca (70,1 ml) en una atmósfera de nitrógeno y se trató por goteo durante 30 min con una solución de difenil fosfito (0,136 ml, 0,701 mmol) en 1 ml de piridina. Luego de 20 min, se agregó (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (0,288 g, 1,401 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción luego se concentró hasta secarse. El residuo se suspendió en EtOAc y se lavó con NaHCO³ acuoso. La fase orgánica se recolectó y se lavó con salmuera, y luego se secó con Na²SO⁴ , se filtró y se concentró hasta secarse. El material crudo luego se azeotropó unas pocas veces con MeCN, se suspendió en MeCN y se filtró. El filtrado se concentró, se suspendió en MeOH y se filtró de nuevo. El filtrado luego se purificó en C18, columna Gold ISCO de fase inversa de 150 g y se eluyó con solvente A: 95 % de agua, 5 % de acetonitrilo, acetato de amonio 0,01 M; solvente B: 95 % de acetonitrilo, 5 % de agua, acetato de amonio 0,01 M, mantenido a 10 % de B durante 3 min, luego 10-65 % de B durante 15 min, luego mantenido a 65 % de B durante 2 min y 65 %-100 % de B durante 12 min, 3 picos de producto superpuestos se eluyeron a 55-65 % de gradiente para obtener 2J (28 %, 104 mg). m/z (1048,3, M+H).

Preparación del Intermediario 2K:

A un vial que contenía 2J (83 mg, 0,079 mmol) se agregó 30 % de hidróxido de amonio (5 ml, 34,7 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 30 °C durante la noche. La mezcla de reacción se concentró en un flujo de nitrógeno y luego se azeotropó con tolueno (3 x 3ml) para retirar agua. El residuo luego se azeotropó con acetonitrilo (3 x 3 ml), y luego se azeotropó con piridina (3 x 3 ml). El producto crudo se trató con una mezcla de piridina (1,583 ml), DBU (0,119 ml, 0,792 mmol) y nitrometano (0,064 ml, 1,187 mmol), y se calentó a 30 °C durante la noche. Se agregaron 200 ul de piridina seca adicionales, DBU (0,060 ml, 0,396 mmol) y nitrometano (0,021 ml, 0,396 mmol) a la mezcla de reacción, y se agitó a 30 °C durante 4 h más. La mezcla de reacción se diluyó con MeCN y se trató con ácido acético (0,091 ml, 1,583 mmol) y luego se concentró. El material crudo se purificó en C18, columna Gold ISCO de fase inversa de 50 g y se eluyó con solvente A: 95 % de agua, 5 % de acetonitrilo, acetato de amonio 0,01 M; solvente B: 95 % de acetonitrilo, 5 % de agua, acetato de amonio 0,01 M, 0-40 % de B durante 15 min, luego 40-100 % de B durante 5 min para obtener 2K-1 como un diastereómero simple y 2K-2 como una mezcla de dos diaestereómeros.

2K-1: (26 mg). LCMS: m/z 827,2 (M+H), tiempo de retención: 0,71 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrómetros; solvente A = 100 % de agua con 0,05 % de TFA; solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 98 % de B; velocidad de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm):

2K-2: (14 mg). LCMS: m/z 827,2 (M+H), tiempo de retención: 0,65 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrómetros; solvente A = 100 % de agua con 0,05 % de TFA; solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 98 % de B; velocidad de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm).

Ejemplos 2-1, 2-2, y 2-3

2-1 (Diastereómero 1)

2-2 (Diastereómero 2)

2-3 (Diastereómero 3)

A una solución de 2K-1 (25 mg, 0,030 mmol) en piridina (1 ml) se agregó trihidrofluoruro de trietilamina (0,074 ml, 0,454 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 37 °C durante la noche. La mezcla de reacción luego se evaporó en un flujo suave de nitrógeno y luego se azeotropó con MeCN. El material crudo se purificó en una columna Gold ISCO de fase inversa de 15,5 g y se eluyó con solvente A: 95 % de agua, 5 % de acetonitrilo, acetato de amonio 0,01 M; solvente B: 95 % de acetonitrilo, 5 % de agua, acetato de amonio 0,01 M: Mantenimiento a 0 % de B durante 1,5 min, 0-20 % de B durante ⁶ min, mantenimiento a 20 % de B durante 1,5 min y luego 20-100 % de B durante 7 min, para obtener el Ejemplo 2-1 (9,5 mg) como un diastereómero simple: LCMS: m/z 713,0 (M+H), tiempo de retención: 0,42 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrómetros; solvente A = 100 % de agua con 0,05 % de TFA; solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 98 % de B; velocidad de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm).

El Intermediario 2K-2 se trató de forma similar a 2K-1 para obtener una mezcla de dos diastereómeros, Ejemplo 2-2 y Ejemplo 2-3. LCMS: m/z 713,0 (M+H), tiempo de retención: 0,41 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrómetros; solvente A = 100 % de agua con 0,05 % de TFA; solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 98 % de B; velocidad de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm).

De manera alternativa, el Ejemplo 2-1 se puede preparar como se describe a continuación.

Preparación del Intermediario 2L:

2L

A una solución de Intermediario 2E (1,01 g, 1,16 mmol) y Reactivo 4 (1,03 g, 2,31 mmol) en acetonitrilo (15 ml), se agregó DBU (0,35 ml, 2,31 mmol). Después de 20 minutos, la mezcla de reacción se neutralizó con ácido acético (0,21 g, 3,47 mmol), y luego se concentró, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna flash de gel de sílice (40 g, que se eluyó con 0-100 % de EtOAc/DCM para obtener el Intermediario 2L (1,20 g, 1,07 mmol, 93 % de rendimiento). LCMS: m/z 1119,8 (M+H), tiempo de retención: 1,32 min (condiciones de la columna: Waters Acquity SDS; columna: BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrómetros; solvente A = agua con 0,05 % de TFA; solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 98 % de B; velocidad de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm)).

Preparación del Intermediario 2M:

2M

A una bomba de acero se agregó Intermediario 2E (1,94 g, 3,51 mmol) y dioxano (10 ml). A la solución incolora resultante se agregó 30 % de hidróxido de amonio acuoso (20 ml, 154 mmol). La mezcla de reacción turbia resultante se calentó a 70 °C durante 2 d. Luego, la mezcla de reacción se concentró hasta secarse. El producto crudo se adsorbió en Celite y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice usando una columna de 80 g y eluyendo con 0-20 % de MeOH en d Cm para obtener el Intermediario 2M (1,59 g, 3,23 mmol) como un sólido blanco. LCMS: m/z 492,5 (M+H), tR: 0,82 min. (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 pm; fase móvil A: H²O:ACN (95:5) con 10 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: H²O:ACN (5:95) con 10 mM de NH⁴OAc; gradiente: 5 % de B a 95 % de B en 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 95 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm)). 1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) ⁸ 8,32 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,42 -7,33 (m, ⁶ H), 7,31 -7,18 (m, 9H), 5,61 (br s, 2H), 4,61 (q, J=^{8 , 6} Hz, 1H), 3,81 - 3,66 (m, 2H), 3,39 (dd, J=9,9, 5,5 Hz, 1H), 3,30 (dd, J=10,0, 6,5 Hz, 1H), 3,23 (br s, 1H), 3,08 -2,98 (m, 1H), 2,63 -2,48 (m, 2H), 2,36 -2,25 (m, 1H).

Preparación del Intermediario 2N:

2N

El Intermediario 2M (0,791 g, 1,608 mmol) se azeotropó con ACN (5 ml). Luego, se agregó Intermediario 2L (1,2 g, 1,072 mmol), y la mezcla se azeotropó de nuevo con ACN (5 ml). El residuo resultante se disolvió en THF (20 ml), y se agregó DBU (0,65 ml, 4,3 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 20 min, se agregó ácido acético (0,248 ml, 4,29 mmol), y luego la mezcla se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (80 g, que se eluyó con 0-10 % de MeOH/DCM en 35 min) para obtener el Intermediario 2N (0,71 g, 0,49 mmol, 46 % de rendimiento). LCMS: m/z 1442,5 (M+H); tiempo de retención: 1,19 min (condiciones de la columna: Waters Acquity SDS; columna: BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrómetros; solvente A = agua con 0,05 % de TFA; solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 98 % de B; velocidad de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm).

Preparación del Intermediario 2O:

2O

A una solución de Intermediario 2N (710 mg, 0,49 mmol) en DCM (5 ml) se agregaron trietilsilano (0,39 ml, 2,46 mmol) y ácido 2,2-dicloroacético (0,12 ml, 1,48 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Luego, se agregó piridina (311 mg, 3,94 mmol), y la mezcla de reacción se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (40g, que se eluyó con 0-29 % de MeOH/DCM) para obtener el Intermediario 2O (408 mg, 0,36 mmol, 73 % de rendimiento). LCMS: m/z 1140,6 (M+H); tiempo de retención: 1,03 min (condiciones de la columna: Waters Acquity SDS; columna: BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrómetros; solvente A = agua con 0,05 % de TFA; solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 98 % de B; velocidad de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm).

Preparación del Intermediario

El Intermediario 2O (408 mg, 0,36 mmol) se azeotropó con ACN (5 ml). Luego, se agregó el Reactivo 3 (320 mg, 0,72 mmol), seguido de THF seco (10 ml) y DBU (0,22 ml, 1,43 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 7 minutos. Luego, la reacción se trató con ácido acético (130 mg, 2,15 mmol), y luego se concentró. El residuo se purificó mediante una columna ISCO Gold de gel de sílice (24 g, que se eluyó con 0-20 % de MeOH/DCM) para obtener el Intermediario 2O (0,5 g, 0,24 mmol, ^{6 6} % de rendimiento). Lc MS: m/z 1386,4 (M+H); tiempo de retención: 1,18 min (condiciones de la columna: Waters Acquity SDS; columna: BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrómetros; solvente A = agua con 0,05 % de TFA; solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 98 % de B; velocidad de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a ^{2 2 0} nm).

Preparación del Intermediario 2Q:

A una solución de Intermediario 2P (500 mg, 0,24 mmol) en DCM (5 ml), se agregaron trietilsilano (0,45 ml, 2,8 mmol) y ácido 2,2-dicloroacético (0,20 ml, 2,36 mmol). Después de 30 minutos, la mezcla de reacción se agregó por goteo a un matraz que contenía DBU (1,07 ml, 7,1 mmol) y THF (5 ml). La mezcla resultante se agitó durante 10 min más, y luego se concentró. El residuo se volvió a disolver en ACN (1 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Luego, la mezcla se agitó a 40 °C durante 4 h. Luego, la mezcla de reacción se concentró, y el residuo se trituró con dietiléter (10 ml x 5). El sólido resultante se disolvió en MeOH (10 ml), se mezcló con 5 g de Celite, y luego se concentró hasta secarse. El sólido se purificó en C18, columna Gold ISCO de fase inversa de 100 g (que se eluyó con solvente A: 95 % de agua, 5 % de acetonitrilo, acetato de amonio 0,01 M; solvente B: 95 % de acetonitrilo, 5 % de agua, acetato de amonio 0,01 M; mantenimiento a 100 % de A durante 10 min, luego 0-35 % de B durante 15 min, luego mantenimiento a 35 % de B durante 2 min y 35 %-100 % de B durante 12 min) para obtener el Intermediario 2Q (132 mg, 67,7 %). LCMS: m/z 827,1 (M+H); tiempo de retención: 0,57 min. (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 pm; fase móvil A: H²O:ACN (95:5) con 10 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: H²O:ACN (5:95) con 10 mM de NH⁴OAc; gradiente: 5 % de B a 95 % de B en 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 95 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm))

Ejemplo 2-1

El Intermediario 2Q (132 mg, 0,078 mmol) se disolvió en trihidrofluoruro de trietilamina (3 ml, 18,4 mmol) y se agitó a 37 °C durante 3h. Luego, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, y se agregó trietilamina (5,1 ml, 36,6 mmol), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. Luego se agregó isopropoxitrimetilsilano (8,0g, 60,5 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 1 h, la mezcla de reacción se concentró y el residuo sólido se purificó mediante LC/MS preparativa (condiciones de LC/MS preparativa: Columna: columna Xselect RP Prep C18 OBD de 5 pm, 10 x 250 mm; fase móvil A: agua con 100 mM de N ^O Ac; fase móvil B: MeOH; gradiente: 5 % de B-21,5 % de B, 0-14 minutos, 21,5 % de B-95 % de B durante 0,5 min, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 95 % de B; flujo: 20 ml/min. Condiciones de LCMS analítica: Agilent 1290 HPLC/MS, columna: columna Xselect CSH C18 de 3,5 pm, 2,1 x 150 mm; fase móvil A: agua con 20 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: MeOH; temperatura: 50 °C; gradiente: 5 % de B-45 % de B durante 15 min, 45 % de B-95 % de B durante 2 min; flujo: 0,35 ml/min; detección: MS y UV (260 nm)) para obtener el Ejemplo 2-1 (34 mg). LCMS: m/z 713,2 (M+H), tiempo de retención: 6,42 min. 1H RMN (700 MHz, METANOL-d⁴) ⁸ 8,39 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,59 (d, J=2,7 Hz, 1H), 7,17 (d, J=2,5 Hz, 1H), 6,13 (d, J=8,1 Hz, 1H), 5,56 (br d, J=3,9 Hz, 1H), 4,80 -4,76 (m, 2H), 4,38 -4,32 (m, 1H), 4,32 -4,29 (m, 1H), 4,28 - 4,22 (m, 1H), 4,20 (dt, J=11,0, 5,7 Hz, 2H), 4,14 -4,08 (m, 1H), 3,94 -3,87 (m, 1H), 3,26 -3,18 (m, 1H), 2,57 -2,51 (m, 1H), 2,46 (br d, J=8,5 Hz, 1H), 2,37 (q, J=9,8 Hz, 1H).

Ejemplos 3-1, 3-2, 3-3 y 3-4

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.3.0.06,9]octadecan-3,12diona

Diastereómero 1 (3-1)

Diastereómero 2 (3-2)

Diastereómero 3 (3-3)

Diastereómero 4 (3-4)

Preparación del Intermediario 3A:

3A

Una mezcla de 2H (0,35 g, 0,685 mmol) e hidróxido de amonio (6,7 ml, 171 mmol) en dioxano (2 ml) se agitó a 50 °C durante 16 h. El solvente se retiró al vacío. El material resultante se dividió en DCM y agua, y la capa orgánica se separó. 2 x 10 ml de la fase acuosa se extrajeron con DCM, 2 x 10 ml con 2-Me-THF, y las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO⁴) y se concentraron al vacío hasta obtener 3A (0,337 g, 0,686 mmol, 100 % de rendimiento) como un sólido. [M+H]+ = 492,3

Preparación del Intermediario 3B:

3B

Una mezcla de 3A (0,326 g, 0,663 mmol) y 2-bromoacetaldehído (4,9 ml, ^{6 , 6} mmol) en amortiguador de NaOAc/AcOH de pH 4,5 (4 ml) se agitó a 80 °C durante 2 h, y luego, a temperatura ambiente durante 16 h. Luego, la reacción se agitó a 80 °C durante 2 h y luego el solvente orgánico se retiró al vacío. Se agregó lentamente carbonato de amonio sólido hasta que cesó la evolución de gas. 2x15 ml de la capa acuosa se extrajeron con EtOAc, y las capas orgánicas combinadas se secaron (sulfato de sodio) y se concentraron al vacío. El material crudo se purificó mediante cromatografía flash en 24 g de gel de sílice (gradiente de 15 min, con 0-20 % de MeOH en DCM) para obtener 3B (0,236 g, 0,46 mmol, 69 % de rendimiento) como una espuma blanca. LCMS, [M+H]+ = 516,4>

Preparación de los Intermediarios 3C y 3D:

3D

Una mezcla de 3B (0,236 g, 0,458 mmol) y IH-tetrazol (0,038 g, 0,549 mmol) se azeotropó con 3 ml de ACN seco. El residuo luego se disolvió en 3 ml de ACN seco. Una mezcla separada de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il (2-cianoetil) diisopropilfosforamidita (Sigma-Aldrich, 0,601 g, 0,687 mmol) se azeotropó con 3 ml de ACN seco. Este material luego se disolvió en 1,5 ml de ACN y se agregó por goteo a la mezcla agitada de 3B anterior a temperatura ambiente. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. A la reacción se agregó (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (0,141 g, 0,687 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla luego se dividió en DCM y agua, y la capa orgánica se separó. La fase acuosa se extrajo con DCM, y las capas orgánicas combinadas se secaron (sulfato de sodio) y se concentraron al vacío. El material crudo se purificó mediante cromatografía flash en 40 g de gel de sílice (gradiente de 15 min, con 0-20 % de MeOH en DCM) para obtener 3C (0,245 g, 0,185 mmol, 40,5 % de rendimiento) como un aceite. LCMS: [M+H]+ = 1322,6 y 3D (0,150 g, 0,147 mmol, 32,1 % de rendimiento) como un sólido.

Preparación del Intermediario 3E:

3E

A una solución de 3C (0,245 g, 0,185 mmol), 3D (0,150 g, 0,147 mmol) y trietilsilano (0,296 ml, 1,853 mmol) en diclorometano (2 ml) se agregó TFA (0,043 ml, 0,56 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La reacción se inactivó con 50 % de bicarbonato de sodio acuoso. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con 10 ml de DCM, seguido de 2 x 10 ml de 2-MeTHF. Las capas orgánicas combinadas se secaron (sulfato de sodio) y se concentraron al vacío. El material se trituró con dietiléter y el sólido se recolectó mediante filtración al vacío para obtener 3E (0,245 g, 0,315 mmol, 95 % de rendimiento) como un sólido blancuzco. LCMS, [M+H]+ = 778,3.

Preparación del Intermediario 3F:

3F

A una solución a 0 °C de 3E (0,243 g, 0,312 mmol) en piridina (11 ml) se agregó una solución de difenilfosfonato (0,121 ml, 0,625 mmol) en piridina (1 ml) por goteo durante un 1 h. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Luego, se agregó (E)-N,N-dimetil-N-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (0,160 g, 0,781 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h, luego se concentró al vacío. El material crudo se purificó mediante ISCO de fase inversa en 50 g de C18 con 0-100 %, gradiente de 15 min, (ACN/agua/acetato de amonio 95/5/0,5) en (agua/ACN/acetato de amonio 95/5/0,5) para obtener una mezcla de 4 diastereómeros de 3F (0,267 g, 0,312 mmol, 100 % de rendimiento) como un sólido. LCMS, [M+H]+ = 856,8.

Ejemplos 3-1, 3-2, 3-3 y 3-4

Diastereómero 1 (3-1)

Diastereómero 2 (3-2)

Diastereómero 3 (3-3)

Diastereómero 4 (3-4)

Una mezcla de 3F (4 diaestereómeros) (0,267 g, 0,312 mmol) y amoníaco (7 N en MeOH) (6,69 ml, 46,8 mmol) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La reacción luego se calentó a 50 °C durante 3 h. El solvente se retiró al vacío y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía de fase inversa ISCO en 50 g de C18 con un 0-100 %, gradiente de 15 min, (ACN/agua/acetato de amonio 95/5/0,5) en (agua/ACN/acetato de amonio 95/5/0,5) para obtener una mezcla de 4 diaestereómeros. Luego, el material crudo se purificó mediante LC/MS preparativa en las siguientes condiciones: Columna: Agilent Bonus RP 21,2 x 100 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: acetonitrilo; gradiente: 0 % de mantenimiento de B 0-6 minutos. 0 %-25 % de B durante 16 minutos, luego un mantenimiento de 4 minutos a 100 % de B; flujo: 20 ml/min, para obtener dos diaestereómeros individuales (3-1 y 3-2) y una mezcla de dos diaestereómeros (3-3 y 3-4).

Ejemplo 3-1.2,4 mg. Tiempo de retención: 2,34 min. (Columna: Agilent Bonus RP, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,8 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: acetonitrilo. Temperatura: 50 °C; gradiente: 0 % de mantenimiento de B 1 min, luego 0 % de B a 100 % de B durante 4 min, luego un mantenimiento de 0,75 min a 100 % de B; flujo: 1 ml/min; detección: MS y UV (220 nm). LCMS, [M+H]+ = 698,9.

Ejemplo 3-2. 2 mg. Tiempo de retención 2,47 min. (Columna: Agilent Bonus RP, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,8 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: acetonitrilo. Temperatura: 50 °C; gradiente: 0 % de mantenimiento de B 1 min, luego 0 % de B a 100 % de B durante 4 min, luego un mantenimiento de 0,75 min a 100 % de B; flujo: 1 ml/min; detección: MS y UV (220 nm). LCMS, [M+H]+ = 698,9.

Ejemplos 4-1 y 4-2

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-3,18-dihidroxi-17-{9-oxo-3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-M}-12-sulfaml-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.2.1.06,9]octadecan-3,12-diona

Diastereómero 1 (4-1)

Diastereómero 2 (4-2)

Preparación del Intermediario 4A:

4A

Una solución que contenía 1H-tetrazol (104 mg, 1,491 mmol) y 2H (152 mg, 0,298 mmol) en MeCN (3 ml) se azeotropó en el evaporador giratorio (2 x 3 ml) y luego se volvió a suspender en MeCN (3 ml) y se agregó MS 4Á activado (150 mg) y la mezcla de reacción se dejó en una atmósfera de nitrógeno. En un vial separado se tomó 2F (320 mg, 0,298 mmol) y se agregó acetonitrilo seco (4 ml) y esto se azeotropó en el evaporador giratorio (3 x 1 ml) y luego se volvió a suspender en acetonitrilo (4 ml). Luego, esta mezcla se agregó a la anterior solución agitada de alcohol-tetrazol mediante jeringa. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. A la mezcla de reacción se agregó hidroperóxido de ter-butilo (0,072 ml, 0,745 mmol) por goteo y se agitó durante 30 min adicionales. La mezcla de reacción luego se concentró hasta secarse y luego se diluyó con EtOAc. La suspensión resultante se lavó con NaHCO³ saturado, luego salmuera y la fase orgánica se secó con Na²SO⁴, se filtró y se concentró hasta secarse. El material crudo resultante se suspendió en DCM (30 ml) y se agregaron ácido dicloroacético (1,201 ml, 2,087 mmol) seguido de trietilsilano (0,476 ml, 2,98 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La reacción se diluyó con DCM y se neutralizó con NaHCO³ acuoso. La fase orgánica se separó y se lavó con salmuera, se secó en Na²SO⁴ y se concentró al vacío. El material crudo se purificó en C18, columna Gold ISCO de fase inversa de 50 g usando velocidades de flujo recomendadas por el fabricante con las siguientes condiciones: Solvente A: 95 % de agua, 5 % de acetonitrilo, acetato de amonio 0,01 M; solvente B: 95 % de acetonitrilo, 5 % de agua, acetato de amonio 0,01 M; gradiente: gradiente: Mantenimiento a 20 % de B durante 2 min, 20-60 % de B durante ⁶ min, mantenimiento a 60 % de B durante 3 min, 60-100 % de B durante 2 min y mantenimiento a 100 % de B durante 3 min para obtener 4A (115 mg, 0,120 mmol, 40,4 % de rendimiento): LCMS: m/z 954,2 (M+H), tiempo de retención: 0,93 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrómetros; solvente A = 100 % de agua con 0,05 % de TFA; solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 98 % de B; velocidad de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm).

Preparación del Intermediario 4B:

4B

Una solución de 4A (0,088 g, 0,092 mmol) en piridina seca (18,44 ml) se azeotropó en el evaporador giratorio. El azeótropo con piridina se repitió (2 x 3 ml). El residuo se volvió a disolver en piridina seca (18,44 ml) en una atmósfera de nitrógeno y se trató por goteo durante 30 min con una solución de difenil fosfito (0,036 ml, 0,184 mmol) en 1 ml de piridina. Luego de 20 min, se agregó (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (0,057 g, 0,277 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción luego se concentró hasta secarse. El residuo resultante se suspendió en EtOAc y se lavó con NaHCO³ acuoso. La fase orgánica se lavó con salmuera y luego se secó en Na²SO⁴ y luego se concentró. El material crudo se azeotropó unas pocas veces con MeCN, se suspendió en MeCN y se filtró. El filtrado se concentró y luego se suspendió en MeOH y se filtró de nuevo. El filtrado se concentró y el producto crudo se purificó en C18, columna Gold ISCO de fase inversa de 50 g, usando solvente A (95 % de agua, 5 % de acetonitrilo, acetato de amonio 0,01 M)/solvente B (95 % de acetonitrilo, 5 % de agua, acetato de amonio 0,01 M) con el siguiente gradiente: mantenimiento a 10 % de B durante 2 min, 10-40 % de B durante ⁸ min, a 40 % de B durante ⁶ min, 40-100 % de B durante 3 min y mantenimiento a 100 % de B durante 3 min, para obtener 4B como una mezcla de diaestereómeros: m/z 1032,2 (M+H), tiempo de retención: 0,90 y 0,95 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrómetros; solvente A = 100 % de agua con 0,05 % de TFA; solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 98 % de B; velocidad de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm).

Preparación de los Intermediarios 4C y 4D:

Diastereómero 1 (4C)

Diastereómero 2 (4D)

En un vial que contenía una mezcla de diaestereómeros 4B se agregó 30 % de hidróxido de amonio (4 ml, 34,7 mmol) y la reacción se agitó a 40 °C durante 2 h. El solvente se retiró con un flujo de nitrógeno y luego el residuo se azeotropó con tolueno (3 x 3 ml) para retirar el agua restante. Este material crudo se trató con una mezcla de piridina (1,240 ml), DBU (0,140 ml, 0,930 mmol) y nitrometano (0,050 ml, 0,930 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 30 °C durante la noche y luego se concentró hasta secarse. Luego, la mezcla de reacción se diluyó con acetonitrilo y se agregó ácido acético (0,160 ml, 2,79 mmol). La mezcla luego se concentró y se azeotropó con acetonitrilo varias veces. El producto crudo se purificó en C18, columna Gold ISCO de fase inversa de 50 g, eluyendo con solvente A (95 % de agua, 5 % de acetonitrilo, acetato de amonio 0,01 M)/ solvente B (95 % de acetonitrilo, 5 % de agua, acetato de amonio 0,01 M) usando el siguiente gradiente: mantenimiento a 0 % de B durante ⁶ min, 0-30 % de B durante ⁸ min, a 30 % de B durante ⁶ min, 30-100 % de B 3 min, para obtener dos diaestereómeros separados como 4C: LCMS: m/z 811,11 (M+H), tiempo de retención: 0,62 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrómetros; solvente A = 100 % de agua con 0,05 % de TFA; solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 98 % de B; velocidad de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm) y 4D: LCMS: m/z 811,1 (M+H), tiempo de retención: 0,67 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrómetros; solvente A = 100 % de agua con 0,05 % de TFA; solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 98 % de B; velocidad de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm).

Ejemplos 4-1 y 4-2

Diastereómero 1 (4-1)

Diastereómero 2 (4-2)

El Intermediario 4C (11 mg, 0,014 mmol) se trató con trihidrofluoruro de trietilamina (200 pl, 1,228 mmol) y se agitó a 40 °C durante 2 h. Luego, la mezcla de reacción se inactivó con NH⁴OAc acuoso y se purificó en una columna Gold ISCO de fase inversa de 15,5 g y se eluyó con solvente A: 95 % de agua, 5 % de acetonitrilo, acetato de amonio 0,01 M; solvente B: 95 % de acetonitrilo, 5 % de agua, acetato de amonio 0,01 M usando un gradiente de 0-20 % de B. El producto deseado se eluyó con frente de solvente. Las fracciones que contenían el material deseado se concentraron y se purificaron mediante HPLC preparativa (Columna Xselect RP Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm, Fase móvil A: 100 mM de NH⁴OAc (pH 6,5); Fase móvil B: acetonitrilo; gradiente: 0-7,5 % de B durante 15 minutos, 7,5-95 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 1 minuto a 95 % de B; flujo: 20 ml/min, para obtener el Ejemplo 4-1: (3,3 mg, 33 % de rendimiento) como un sólido blanco. LCMS: m/z 697,1 (M+H), tiempo de retención: 0,51 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrómetros; solvente A = 100 % de agua con 0,05 % de TFA; solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 98 % de B; velocidad de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm).

El Intermediario 4D (14 mg, 0,017 mmol) se trató con trihidrofluoruro de trietilamina (250 pl, 1,535 mmol) y se agitó a 40°C durante 2 h. La mezcla de reacción se inactivó con NH⁴OAc acuoso y se purificó en un C18Aq, columna de alto rendimiento Gold ISCO de fase inversa de 50 g y se eluyó con solvente A: 95 % de agua, 5 % de acetonitrilo, acetato de amonio 0,01 M/ solvente B: 95 % de acetonitrilo, 5 % de agua, acetato de amonio 0,01 M usando el siguiente gradiente: mantenimiento de 0 % de B durante 2 min, 0-10 % de B durante ⁶ min, para obtener el Ejemplo 4-2: (7,3 mg, 9,9 pmol, 58% de rendimiento) como un sólido blanco. LCMS: m/z 697,1 (M+H), tiempo de retención: 0,37 min (Waters Acquity UPLC BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrómetros; solvente A = 100 % de agua con 0,05 % de TFA; solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 98 % de B; velocidad de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm).

Ejemplos 5-1, 5-2, 5-3 y 5-4

(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-hidroxi-17-{9-oxo-3H,5H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfaml-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.06,9]octadecan-3,12-diona

Diastereómero 1 (5-1)

Diastereómero 2 (5-2)

Diastereómero 3 (5-3)

Diastereómero 4 (5-4)

Preparación del Intermediario 5A:

5A

A una solución de Intermediario 2D (3,75 g, 4,94 mmol) en DMF (25 ml), se agregó imidazol (0,84 g, 12,4 mmol), y luego se agregó TBS-Cl (0,78 g, 5,2 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h, y luego se diluyó con acetato de etilo (200 ml), se lavó con agua (1 x 50 ml), solución acuosa al 10 % de LiCl (2 x 50 ml) y, finalmente, con solución acuosa saturada de NaCl (50 ml). La capa orgánica se secó (Na²SO⁴), se filtró y se concentró. El producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM y se cargó en una columna de gel de sílice ISCO de 220 g que se había equilibrado con DCM (con 0,25 % de TEA). El material crudo se purificó usando un sistema Teledyne ISCO, que se eluyó con 0 %-50 % de acetato de etilo/DCM (con 0,25 % de TEA) para obtener el Intermediario 5a (950 mg, 1,0 mmol, 21 % de rendimiento). Masa observada: 873,5 (M+H). 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) ⁸ 8,36 - 8,32 (m, 1H), 8,17 - 8,13 (m, 2H), 8,06 (d, J=1,6 Hz, 1H), 7,67 - 7,60 (m, 2H), 7,50 (d, J=1,6 Hz, 1H), 7,17 - 7,05 (m, 5H), 7,05 -6,97 (m, 4H), 6,70 (br d, J=8,9 Hz, 2H), 6,69 -6,65 (m, 2H), 6,31 (d, J=2,7 Hz, 1H), 5,75 - 5,74 (m, 1H), 5,30 (d, J=7,0 Hz, 1H), 4,93 -4,89 (m, 1H), 4,82 -4,69 (m, 2H), 4,35 (br d, J=4,8 Hz, 1H), 4,22 -4,17 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,69 (s, 3H), 3,32 - 3,24 (m, 2H), 3,00 (dd, J=10,8, 3,8 Hz, 1H), 0,81 (s, 9H), 0,06 (s, 3H), 0,01 (s, 3H).

Preparación del Intermediario 5B:

5B

A una solución de Intermediario 5A (950 mg, 1,0 mmol) en DCM (12 ml), se agregó 2-cianoetil N,N,N',N'-tetraisopropilfosforodiamidita (0,717 ml, 2,176 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 20 h, la mezcla de reacción se diluyó con DCM adicional (20 ml), se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO³ (10 ml), y luego, solución acuosa saturada de NaCl (10 ml). La capa orgánica se secó (Na²SO⁴), se filtró y se concentró. El producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM y se cargó en una columna de sílice de 40 g que se había equilibrado con DCM (con 0,25 % de TEA) y se purificó usando un sistema Teledyne ISCO, que se eluyó con 0 %-50 % de EtOAc/DCM (0,25 % de TEA) para obtener el Intermediario 5B (950 mg, 0,89 mmol, 81 % de rendimiento) como una mezcla de dos diastereómeros. Masa observada: 1073,3; tiempo de retención: 1,46 min, LCMS: (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 |jm; fase móvil A: H²O:ACN (95:5) con 10 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: H²O:ACN (5:95) con 10 mM de NH⁴OAc; gradiente: 5 % de B a 95 % de B en 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 95 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm)).

Preparación del Intermediario 5C:

El Intermediario 5B (630 mg, 0,59 mmol) se coevaporó con ACN (2 ml) tres veces, y luego se agregaron 100 mg de tamices moleculares (4Á), y luego, ACN (2 ml). Esta solución se cubrió y se reservó. En un matraz separado, el Intermediario 2H (250 mg, 0,50 mmol) y IH-tetrazol (69 mg, 0,98 mmol) se coevaporaron con ACN (10 ml) dos veces. El residuo resultante se volvió a absorber en acetonitrilo (10 ml) y se concentró hasta un volumen de aproximadamente 4 ml. La solución preparada de Intermediario 5B se agregó a la mezcla de Intermediario 2H mediante una cánula. La mezcla resultante se sometió a ultrasonido y se agitó durante alrededor de 16 h, luego se agregó (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (110 mg, 0,54 mmol), y la agitación continuó durante 30 min. La mezcla luego se concentró y se trató con MeOH. Los sólidos resultantes se retiraron mediante filtración, y el filtrado se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (40 g, que se eluyó con 0-100 % de EtOAc/hexanos) para obtener el Intermediario 5C (574 mg, 0,38 mmol, 77 % de rendimiento). Masa observada: 1514,7; tiempo de retención 1,41 min.(Columna: A c Qu ITY UPLC® BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 pm; fase móvil A: H²O:ACN (95:5) con 10 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: H²O:ACN (5:95) con 10 mM de NH⁴OAc; gradiente: 5 % de B a 95 % de B en 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 95 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm)).

Preparación del Intermediario 5D:

5D

Una solución de Intermediario 5C (574 mg, 0,38 mmol) en DCM (20 ml) se trató con trietilsilano (610 pl, 3,8 mmol) y ácido 2,2-dicloroacético (310 pl, 3,8 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h y luego se diluyó con 20 ml de DCM y se lavó con NaHCO³ acuoso. La capa acuosa se extrajo con DCM (20 ml x 2). La capas orgánicas combinadas se secaron en Na²SO⁴ , se filtraron, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (12 g, 0-10 % de MeOH/DCM) para obtener el Intermediario 5D (160 mg, 0,16 mmol, 43 % de rendimiento). Masa observada: 970,3; tiempo de retención: 0,94 min. (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 pm; fase móvil A: H²O:ACN (95:5) con 10 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: H²O:ACN (5:95) con 10 mM de NH⁴OAc; gradiente: 5 % de B a 95 % de B en 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 95 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm))Preparación del Intermediario 5E:

5E

El Intermediario 5D (160 mg, 0,16 mmol) se azeotropó con piridina (2 ml) y luego se volvió a disolver en piridina (12 ml). A esta solución de piridina en una atmósfera de nitrógeno, se agregó por goteo una solución de fosfito de difenilo (0,063 ml, 0,324 mmol) en piridina (1 ml). Luego de agitar durante 20 min, se agregó (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (100 mg, 0,49 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción luego se concentró hasta secarse. El residuo se suspendió en EtOAc (50 ml) y se lavó con NaHCO³ acuoso (30 ml). La fase orgánica se recolectó y se lavó con salmuera, se secó en Na²SO⁴, se filtró y luego se concentró hasta secarse. El residuo se trató con MeOH (10 ml) durante 10 minutos, y los sólidos resultantes se retiraron mediante filtración. El filtrado se concentró y luego se purificó en C18, columna Gold ISCO de fase inversa de 150 g (se eluyó con solvente A: 95 % de agua, 5 % de acetonitrilo, acetato de amonio 0,01 M; solvente B: 95 % de acetonitrilo, 5 % de agua, acetato de amonio 0,01 M, mantenimiento a 10 % de B durante 3 min, luego 10-65 % de B durante 15 min, luego mantenimiento a 65 % de B durante 2 min y 65 %-100 % de B durante 12 min) para obtener 5E como una mezcla de 4 diastereómeros (99 mg, 0,094 mmol, 58 % de rendimiento). Masa observada: 1048,0; tiempo de retención: 0,89-0,96 min. (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 pm; fase móvil A: H^{2 0} :a Cn (95:5) con 10 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: H²O:ACN (5:95) con 10 mM de NH⁴OAc; gradiente: 5 % de B a 95 % de B en 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 95 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm)).

Preparación del Intermediario 5F

El Intermediario 5E (99 mg, 0,094 mmol) en 2 ml de 28 % de hidróxido de amoníaco se calentó hasta 40 oC durante 4 h. La mezcla luego se concentró en un flujo de nitrógeno. El residuo se volvió a disolver en 3 ml de piridina, y se agregó DBU (113 |jl, 0,76 mmol). La mezcla se agitó a 40 °C durante ⁸ h y luego se concentró. El residuo luego se trituró con 5 ml de dietiléter tres veces, se disolvió en 10 ml de MeOH y se mezcló con 2 g de Celite y se concentró. La mezcla de Celite cruda se purificó en C18, columna Gold ISCO de fase inversa de 100 g (se eluyó con solvente A: 95 % de agua, 5 % de acetonitrilo, acetato de amonio 0,01 M; solvente B: 95 % de acetonitrilo, 5 % de agua, acetato de amonio 0,01 M, mantenimiento a 100 % de A durante 10 min, luego 0-35 % de B durante 15 min, luego mantenimiento a 35 % de B durante 2 min y 35 %-100 % de B durante 12 min) para obtener el Intermediario 5F como una mezcla de 4 diastereómeros (58 mg, 0,070 mmol, 74 % de rendimiento). Masa observada: 827,0; tiempo de retención: 0,51-0,52 min. (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 pm; fase móvil A: H²O:ACN (95:5) con 10 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: H²O:ACN (5:95) con 10 mM de NH⁴OAc; gradiente: 5 % de B a 95 % de B en 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 95 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm))

- , - , - -

Diastereómero 1 (5-1)

Diastereómero 2 (5-2)

Diastereómero 3 (5-3)

Diastereómero 4 (5-4)

El Intermediario 5F (58 mg, 0,070 mmol) se disolvió en 0,5 ml de trihidrofluoruro de trietilamina y se agitó a 37 oC durante 2 h. Luego, la reacción se inactivó con 2 ml de NH⁴OAC 2 M y se purificó mediante LC/MS preparativa para obtener 4 diastereómeros individuales, Ejemplos 5-1, 5-2, 5-3 y 5-4. Condiciones de LC/MS preparativa: Columna: columna Xselect RP Prep C18 OBD, 19 x 150 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de TEA; fase móvil B: acetonitrilo:agua (80:20) con 20 mM de TEA; gradiente: ⁸ % de B-18 % de B 0-21 minutos, 18 %-95 % durante 2 min, luego un mantenimiento de 2 minutos a 95 % de B; flujo: 20 ml/min. Condiciones de LCMS analítica: Agilent 1290 HPLC/MS, columna: columna Xselect CSH C18, 3,5 pm, 3,0 x 150 mm; fase móvil A: agua con 20 mM de TEA; fase móvil B: acetonitrilo:agua (80:20) con 20 mM de TEA. Temperatura: 50 °C; gradiente: 5 % de B -35 % de B durante 25 min, luego 35 % de B-95 % de B durante 2 min; flujo: 0,5 ml/min; detección: MS y UV (220 nm).

Ejemplo 5-1. 4,2 mg. Tiempo de retención: 8,29 min. LCMS, [M+H]+ = 713,0.

Ejemplo 5-2. 3,1 mg. Tiempo de retención: 9,43 min. LCMS, [M+H]+ = 713,0.

Ejemplo 5-3. ^{6 , 8} mg. Tiempo de retención: 10,04 min. LCMS, [M+H]+ = 713,0.

Ejemplo 5-4. 5,6 mg. Tiempo de retención: 12,56 min. LCMS, [M+H]+ = 713,0.

Ejemplos 6-1, 6-2, 6-3 y 6-4

(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-hidroxi-17-{9-oxo-3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfaml-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,2,1,069]octadecan-3,12-diona

Diastereómero 1 (6-1)

Diastereómero 2 (6-2)

Diastereómero 3 (6-3)

Diastereómero 4 (6-4)

Preparación del Intermediario 6A:

6-cloro-7H-purin-2-amina (Oakwood, 3,4 g, 19,9 mmol) se disolvió en acetonitrilo anhidro (50 ml), y se agregó trimetilsilil N-(trimetilsilil)acetimidato (9,72 ml, 39,8 mmol). La solución se sometió a reflujo durante 2 h y luego se enfrió hasta temperatura ambiente. Se agregó una solución de ((2R,3R,4S)-5-acetoxi-4-(benzoiloxi)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)metil benzoato (Bioorg. Med. Chem Lett., 2003, 13, 817; 4,0 g, 9,94 mmol) en acetonitrilo anhidro (50 ml), y luego, trimetilsilil trifluorometansulfonato (7,20 ml, 39,8 mmol). La mezcla resultante se volvió a someter a reflujo durante 4 h y luego se enfrió hasta temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc (200 ml), se lavó con NaHCO³ acuoso saturado, se secó en MgSO⁴ , se filtró y se concentró al vacío. El material crudo se sometió a cromatografía en gel de sílice (40 g, EtOAc/DCM, 0-100 %) para obtener el Intermediario 6A (3,99 g, 7,79 mmol, 78 % de rendimiento). Masa observada: 512,2; 1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) ⁸ 8,13 - 8,04 (m, 4H), 7,87 (s, 1H), 7,69 - 7,58 (m, 2H), 7,56 - 7,43 (m, 4H), 6,38 - 6,21 (m, 2H), 5,84 - 5,61 (m, 1H), 5,06 (s, 2H), 4,91 (dd, J=11,9, 4,4 Hz, 1H), 4,87 - 4,77 (m, 1H), 4,71 -4,55 (m, 1H).

Preparación del Intermediario 6B:

A una solución de Intermediario 6A (3,2 g, 6,25 mmol) en EtOH (70 ml), se agregó amortiguador de NH⁴OAc/AcOH (4,5 pH, 150 ml) y 2-bromoacetaldehído (14,4 ml, 18,8 mmol). La mezcla se calentó durante ⁶ días a 37 °C. Luego, la mayor parte del solvente se retiró al vacío, y la reacción se diluyó con 200 ml de EtOAc para formar una emulsión. La mezcla resultante se basificó con NaHCO³ acuoso. La fase orgánica se separó y se lavó con agua, luego salmuera, se secó en Na²SO⁴ , se filtró y se concentró para obtener un sólido blancuzco que se lavó con Et²O ^{( 10} ml x ² ), luego se secó al vacío para obtener el producto crudo 6B. Masa observada: 518,2; 1H RMN (499 MHz, DMSO-d⁶) ⁸ 8,13 (s, 1H), 8,02 (dd, J=8,3, 1,2 Hz, 2H), 7,94 (dd, J=8,4, 1,3 Hz, 2H), 7,75 - 7,69 (m, 1H), 7,66 - 7,62 (m, 2H), 7,59 - 7,54 (m, 3H), 7,48 - 7,42 (m, 3H), 6,43 (d, J=5,0 Hz, 1H), 6,33 - 6,22 (m, 1H), 6,09 - 5,90 (m, 1H), 4,85 - 4,72 (m, 2H), 4,70 -4,60 (m, 1H).

Preparación del Intermediario 6C:

6C

A una solución de Intermediario 6B (3,5 g, 6,76 mmol), 2-(4-nitrofenil)etan-1-ol (1,7g, 10,15 mmol) y trifenilfosfina (5,32 g, 20,30 mmol) en THF (30 ml) a 0 oC en nitrógeno, se agregó por goteo diisopropil (E)-diazen-1,2-dicarboxilato (1,97 ml, 10,15 mmol). La reacción se calentó lentamente hasta temperatura ambiente y luego se agitó durante 60 min. El solvente se retiró al vacío. El aceite espeso resultante se trituró con dietiléter (5 ml x 4), luego se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (80 g, 0-60 % de EtOAC/hex) para obtener 6C (2,4 g, 3,60 mmol, 53 % de rendimiento). Masa observada: 667,4; 1H RMN (499 MHz, METANOL-d⁴) ⁸ 8,12 - 8,03 (m, 5H), 7,87 (dd, J=8,4, 1,3 Hz, 2H), 7,70 -7,63 (m, 1H), 7,59 (d, J=2,7 Hz, 1H), 7,58 - 7,53 (m, 1H), 7,52 - 7,47 (m, 2H), 7,40 (d, J=8,7 Hz, 2H), 7,35 (t, J=7,9 Hz, 2H), 7,27 (d, J=2,6 Hz, 1H), 6,53 (dt, J=14,9, 5,2 Hz, 1H), 6,45 (d, J=4,9 Hz, 1H), 5,97 - 5,78 (m, 1H), 4,96 - 4,81 (m, 2H), 4,78 -4,65 (m, 1H), 4,53 -4,38 (m, 1H), 4,33 (dt, J=14,0, 6,9 Hz, 1H), 3,31 -3,15 (m, 2H).

Preparación del Intermediario Q2D

Una solución de Intermediario 6C (2,4 g, 3,60 mmol) en 20 ml de NH³ 7N/MeOH se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. La mezcla de reacción luego se concentró, y el sólido resultante se lavó con MeOH (1 ml x 3), luego se secó al vacío. El sólido luego se azeotropó con piridina (5 ml), se disolvió en 10 ml de piridina, y se agregó 4,4'-(cloro(fenil)metilen)bis(metoxibenceno) (1,220 g, 3,60 mmol), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Luego, la mezcla de reacción se trató con 2 ml de MeOH y se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. La mezcla luego se concentró, y el residuo se disolvió en 50 ml de DCM, se lavó con NaHCO³ acuoso, y luego con salmuera, y se concentró. El material crudo se purificó en sílice (40 g, 0-100 % de EtOAc/DCM (con 0,25 % de TEA)) para obtener el Intermediario 6D (1,9 g, 2,5 mmol, 69 % de rendimiento). Masa observada: 761,5; 1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) ⁸ 8,17 (d, J=8,7 Hz, 2H), 7,88 (s, 1H), 7,64 (d, J=2,7 Hz, 1H), 7,37 -7,32 (m, 2H), 7,30 (br d, J=8,7 Hz, 2H), 7,28 - 7,19 (m, 7H), 6,80 (d, J=8,9 Hz, 4H), 6,67 (d, J=2,6 Hz, 1H), 5,99 (d, J=7,4 Hz, 1H), 5,15 (m, 1H), 4,99 -4,80 (m, 1H), 4,65 (br d, J=5,1 Hz, 1H), 4,61 -4,47 (m, 1H), 4,30 (t, J=7,0 Hz, 2H), 3,79 (s, ⁶ H), 3,49 (dd, J=10,7, 3,5 Hz, 1H), 3,39 (dd, J=10,6, 3,5 Hz, 1H), 3,22 (td, J=6,9, 2,7 Hz, 2H).

Preparación del Intermediario 6E:

6E

A una solución de 6D (0,5 g, 0,657 mmol) en DCM (5 ml) se agregó 1H-imidazol-4,5-dicarbonitrilo (0,66 ml, 0,66 mmol) (1M en ACN), y luego se agregó 3-((bis(diisopropilamino)fosfanil)oxi)propanonitrilo (0,40 g, 1,31 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche y luego se diluyó con DCM (30 ml) y se lavó con 10 % de NaHCO³ acuoso. La capa acuosa se extrajo con DCM adicional (20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na²SO⁴), se filtraron y se concentraron. El producto crudo se purificó en sílice (columna de 40 g, 0-100 % de EtOAc/DCM (con 0,25 % de TEA)) para obtener 6E como un par de diastereómeros (0,60 g, 0,624 mmol, 95 % de rendimiento). Masa observada: 961,1. Tiempo de retención: 1,19 min y 1,25 min. (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 |jm; fase móvil A: H²O:ACN (95:5) con 10 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: H²O:ACN (5:95) con 10 mM de NH⁴OAc; gradiente: 5 % de B a 95 % de B en 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 95 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm)).

Preparación del Intermediario 6F

6F

El Intermediario 6E (635 mg, 0,66 mmol) se azeotropó con 2 ml de acetonitrilo 3 veces. Luego, se agregaron 100 mg de tamices moleculares 4Á, y luego, 2 ml de ACN. Esta solución se cubrió y se reservó. En un matraz separado, el Intermediario 2H (270 mg, 0,53 mmol) y 5-(etiltio)-1H-tetrazol (138 mg, 1,057 mmol) se coevaporaron con ACN (10 ml x 2). El residuo se volvió a absorber en acetonitrilo (10 ml) y se concentró hasta aproximadamente 4 ml. La solución preparada de Intermediario 6E se agregó a la mezcla de Intermediario 2H mediante una cánula. La mezcla resultante se sometió a ultrasonido y se agitó durante alrededor de 16 h, luego se agregó (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (119 mg, 0,58 mmol), y la agitación continuó durante 30 min. La mezcla se concentró y se trató con MeOH. Los sólidos se retiraron mediante filtración, y el filtrado se concentró, luego se purificó en sílice (40 g, que se eluyó con 0-100 % de EtOAc/hexanos (con 0,5 % de TEA)) para obtener el Intermediario 6F (600 mg, 0,40 mmol, 76 % de rendimiento). Masa observada 1349,1; tiempo de retención: 1,14 min. (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 |jm; fase móvil A: H²O:ACN (95:5) con 10 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: H²O:ACN (5:95) con 10 mM de NH⁴OAc; gradiente: 5 % de B a 95 % de B en 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 95 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm)).

Preparación del Intermediario 6G:

6G

A una solución de Intermediario 6F (601 mg, 0,401 mmol) en 20 ml de DCM, se agregaron trietilsilano (710 pl, 4,5 mmol) y ácido 2,2-dicloroacético (370 pl, 4,5 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3h, luego se diluyó con 20 ml de DCM y se lavó con NaHCO³ acuoso. La capa acuosa se extrajo con DCM (20 ml x 2). Las capas orgánicas combinadas se secaron en Na²SO⁴, se filtraron y se concentraron. El material crudo se purificó en gel de sílice (12 g, 0-15 % de MeOH/DCM) para obtener el Intermediario 6G (360 mg, 0,40 mmol, 100 % de rendimiento). Masa observada: 805,2; tiempo de retención: 0,80 min. (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 jm ; fase móvil A: H²O:ACN (95:5) con 10 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: H²O:ACN (5:95) con 10 mM de NH⁴OAc; gradiente: 5 % de B a 95 % de B en 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 95 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm)).

6H

El Intermediario 6G (360 mg, 0,45 mmol) se azeotropó con 2 ml de piridina y luego se volvió a disolver en 12 ml de piridina. A esta solución en una atmósfera de nitrógeno, se agregó por goteo una solución de fosfito de difenilo (0,17 ml, 0,89 mmol) en 2 ml de piridina. Luego de agitar durante 20 min, se agregó (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (274 mg, 1,33 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Luego, la mezcla de reacción se inactivó con 0,1 ml de agua y se concentró hasta secarse. El residuo luego se trató con 4 ml de MeOH durante 10 min, y los sólidos resultantes se retiraron mediante filtración. El filtrado se concentró y luego se purificó en C18, columna Gold ISCO de fase inversa de 150 g (se eluyó con solvente A: 95 % de agua, 5 % de acetonitrilo, acetato de amonio 0,01 M; solvente B: 95 % de acetonitrilo, 5 % de agua, acetato de amonio 0,01 M, mantenimiento a 10 % de B durante 5 min, luego 10-65 % de B durante 25 min, luego mantenimiento a 65 % de B durante 2 min y 65 %-100 % de B durante 12 min) para obtener el Intermediario 6H como una mezcla de 4 diastereómeros (120 mg, 0,136 mmol, 31% de rendimiento). Masa observada 883,1; tiempo de retención: 0,48-0,54 min. (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 pm; fase móvil A: H²O:AcN (95:5) con 10 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: H²O:ACN (5:95) con 10 mM de NH⁴OAc; gradiente: 5 % de B a 95 % de B en 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 95 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm)).

Ejemplos 6-1, 6-2, 6-3 y 6-4

Diastereómero 1 (6-1)

Diastereómero 2 (6-2)

Diastereómero 3 (6-3)

Diastereómero 4 (6-4)

El Intermediario 6H (120 mg, 0,136 mmol) en 2 ml de solución al 30 % de hidróxido de amoníaco se calentó a 50 °C durante 3 h. Luego, la reacción se concentró, y el residuo se disolvió en 2 ml de ACN, y se agregó DBU (164 pl, 1,087 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 40 h y luego se concentró y se trituró con dietiléter (5 ml x 3). El sólido resultante se purificó en C18, columna Gold ISCO de fase inversa de 100 g (que se eluyó con solvente A: 95 % de agua, 5 % de acetonitrilo, acetato de amonio 0,01 M; solvente B: 95 % de acetonitrilo, 5 % de agua, acetato de amonio 0,01 M, mantenimiento a 100 % de A durante 10 min, luego 0-35 % de B durante 15 min, luego mantenimiento a 35 % de B durante 2 min y 35 %-100 % de B durante 12 min) para obtener dos fracciones con la masa deseada. Ambas fracciones se volvieron a purificar mediante LC/MS preparativa. La fracción 1 produjo 3 diastereómeros individuales (6-1, 6-2 y 6-3), y la fracción 2 produjo un diastereómero simple (6-4). Condiciones de LC/MS preparativa: Columna: columna Xselect RP Prep C18 OBD, 19 x 150 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de NH4OAc; fase móvil B: MeOH; gradiente: 10 % de B-22 % de B 0-15 minutos, 22 % de B-95 % de B durante 0,5 min, luego un mantenimiento a 95 % de B durante 0,5 min; flujo: 20 ml/min. Condiciones de LCMS analítica: Agilent 1290 HPLC/MS, columna: columna Xselect CSH C18, 3,5 pm, 3,0 x 150 mm; fase móvil A: agua con 20 mM de NH4OAc; fase móvil B: MeOH; temperatura: 50 °C; gradiente: 5 % de B -100 % de B durante 15 min; flujo: 0,5 ml/min; detección: MS y UV (220 nm).

Ejemplo 6-1. 2,4 mg. Tiempo de retención: 10,26 min. LCMS, [M+H]+ = 715,2

Ejemplo 6-2. 0,8 mg. Tiempo de retención: 10,94 min. LCMS, [M+H]+ = 715,2

Ejemplo 6-3. 1,6 mg. Tiempo de retención: 11,88 min. LCMS, [M+H]+ = 715,2

Ejemplo 6-4. 3,4 mg. Tiempo de retención: 9,10 min. LCMS, [M+H]+ = 715,2

De manera alternativa, el Ejemplo 6-2 se puede preparar de acuerdo con los procedimientos que se proporcionan a continuación.

Ejemplo 6-2

Preparación del Intermediario 6I:

6I

A una solución de Intermediario 6D (500 mg, 0,66 mmol) y reactivo 4 (590 mg, 1,31 mmol) en acetonitrilo (12 ml), se agregó DBU (0,20 ml, 1,31 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos, y luego la reacción se inactivó con ácido acético (120 mg, 1,97 mmol) y luego se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (12 g, MeOH/DCM=0-10 %) para obtener el Intermediario 6I (600 mg, 0,59 mmol, 90 % de rendimiento). LCMS: m/z 1007,8 (M+H); tiempo de retención: 1,22 min, (condiciones de columna: Waters Acquity SDS; columna: b Eh C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrómetros; solvente A = agua con 0,05 % de TFA; solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 98 % de B; velocidad de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm).

Preparación del Intermediario 6J:

6J

El Intermediario 2M (270 mg, 0,55 mmol) se azeotropó con ACN (2 ml x 2). Luego se agregó el Intermediario 6J (553 mg, 0,55 mmol), y la mezcla se azeotropó con ACN (2 ml). A la mezcla se agregó THF (10 ml), y luego, DBU (0,33 ml, 2,2 mmol) en una porción. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min y luego se inactivó con ácido acético (0,13 ml, 2,2 mmol) y se concentró. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (12 g, MeOH/DCM=0-15 %) para obtener el Intermediario 6J (620 mg, 0,47 mmol, 85 % de rendimiento). LCMS: m/z 1331,1 (M+H); tiempo de retención: 1,05 min (condiciones de columna: Waters Acquity SDS; columna: BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrómetros; solvente A = agua con 0,05 % de TFA; solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 98 % de B; velocidad de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm).

Preparación del Intermediario 6K:

6K

Una solución de Intermediario 6J (0,62 g, 0,466 mmol) en 10 ml de DCM se trató con trietilsilano (0,37 ml, 2,33 mmol), y luego, ácido 2,2-dicloroacético (0,12 ml, 1,4 mmol). La reacción se agitó a 25 °C durante 1 h. Después de completarse, se agregó piridina (0,18 g, 2,33 mmol), y la mezcla de reacción se concentró. El residuo resultante se purificó en gel de sílice (12 g, 0-20 % de MeOH/DCM) para obtener el Intermediario 6K (420 mg, 0,41 mmol, ^{8 8} % de rendimiento). LCMS: m/z 1028,5 (M+H); tiempo de retención: 0,80 min. (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 pm; fase móvil A: H^{2 0} :Ac N (95:5) con 10 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: H²O:ACN (5:95) con 10 mM de NH⁴OAc; gradiente: 5 % de B a 95 % de B en 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 95 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm))

Preparación del Intermediario 6L:

6L

A una solución de Intermediario 6K (422 mg, 0,41 mmol) y reactivo 3 (370 mg, 0,82 mmol) en THF ^{( 8} ml), se agregó DBU (0,37 ml, 2,46 mmol) con agitación vigorosa. Después de 10 min, la reacción se inactivó con ácido acético (150 mg, 2,46 mmol) y luego se concentró. El residuo se purificó en una columna Gold ISCO en gel de sílice (12 g, que se eluyó con 0-15 % de MeOH/DCM) para obtener el Intermediario 6L (460 mg, 0,36 mmol, ⁸⁸ % de rendimiento). LCMS: m/z 1274,9 (M+H), tiempo de retención: 1,03 min (condiciones de columna: Waters Acquity SDS; columna: BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrómetros; solvente A = agua con 0,05 % de TFA; solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de TFA; gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 98 % de B; velocidad de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm)).

Ejemplo 6-2

A una solución de Intermediario 6L (460 mg, 0,36 mmol) en 10 ml de DCM, se agregó trietilsilano (0,69 ml, 4,3 mmol), y luego, ácido 2,2-dicloroacético (0,30 ml, 3,6 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 40 min, y luego, con agitación vigorosa, la mezcla de reacción se agregó por goteo a un matraz que contenía THF (10 ml) y DBU (1,63 ml, 10,8 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 5 min más. La mezcla de reacción luego se concentró, y el residuo se volvió a disolver en 0,5 ml de ACN y se agitó durante 16 h a 40 oC para retirar completamente el grupo nitrofenetilo. Luego, la mezcla de reacción se concentró, y el residuo se lavó con dietiléter (10 ml x 3) y luego se volvió a disolver en 10 ml de MeOH. A esta solución, se agregaron 3 g de Celite, y la mezcla resultante se concentró hasta secarse. La mezcla cruda se purificó en C18, columna Gold ISCO de fase inversa de 100 g (que se eluyó con solvente A: 95 % de agua, 5 % de acetonitrilo, acetato de amonio 0,01 M; solvente B: 95 % de acetonitrilo, 5 % de agua, acetato de amonio 0,01 M, mantenimiento a 100 % de A durante 10 min, luego 0-35 % de B durante 15 min, luego mantenimiento a 35 % de B durante 2 min y 35 %-100 % de B durante 12 min) para obtener el Ejemplo 6-2 crudo. LCMS: m/z 715,2 (M+H); tiempo de retención: 0,26 min. (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 |jm; fase móvil A: H²O:ACN (95:5) con 10 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: H²O:ACN (5:95) con 10 mM de NH⁴OAc; gradiente: 5 % de B a 95 % de B en 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 95 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm)) como un sólido blanco y 17 mg de Ejemplo 7 crudo. LCMS: m/z 699,2 (M+H); tiempo de retención: 0,19 min. (Columna: ACQUITY UPLC® BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 jm ; fase móvil A: H²O:ACN (95:5) con 10 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: H²O:ACN (5:95) con 10 mM de NH⁴OAc; gradiente: 5 % de B a 95 % de B en 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 95 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: MS y UV (220 nm)). El Ejemplo 6-2 crudo (167 mg) se volvió a purificar mediante LC/MS preparativa [condiciones de LC/MS preparativa: Columna: columna Agilent infinitylab Eclipse Plus C18 de 5 jm , 21,2 x 250 mm; fase móvil A: agua con 100 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: ACN; gradiente: 5 % de B-17 % de B 0-11 minutos, 17 % de B-100 % de B durante 1 min, luego un mantenimiento de 1 minuto a 100 % de B; flujo: 25 ml/min. Condiciones de LCMS analítica: Agilent 1200 HPLC/MS, columna: columna Agilent Eclipse Plus C18 3,5jm, 3 x 150 mm; fase móvil A: agua con 20 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: ACN; temperatura: 50 °C; gradiente: 5 % de B -100 % de B durante 15 min; flujo: 0,5 ml/min; detección: MS y UV (260 nm)] para obtener el Ejemplo 6-2 final (45 mg). LCMS, [M+H]+ = 715,0; 1H RMN (700 MHz, D²O) ⁸ 8,21 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,54 (d, J=2,54 Hz, 1H), 6,98 (d, J=2,54 Hz, 1H), 6,23 (d, J=7,78 Hz, 1H), 5,63 (m, 1H), 5,61 (m, 1H), 4,80 (m, 1H), 4,75 (m, 1H), 4,32 (m, 2H), 4,26 (t, J=7,41, 7,41 Hz, 2H), 4,06 (dt, J=10,28, 3,98, 3,98 Hz, 1H), 3,88 (dt, J=10,21, 4,99, 4,99 Hz, 1H), 3,01(m, 1H), 2,64 (dt, J=11,33, 8,55, 8,55 Hz, 1H), 2,50 (m, 1H), 2,31 (m, 1H).

Ejemplo 7

3-[(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-12-oxo-3-sulfaniliden-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[l3,2,1,06'9]octadecan-17-il]- 3H,5H,9H-imidazo[1,2-a]purin-9-ona

El Ejemplo 7 crudo anterior (17 mg) se volvió a purificar mediante LC/MS preparativa [condiciones de LC/MS preparativa: Columna: columna Agilent infinitylab Eclipse Plus C18 de 5 jm , 21,2 x 250 mm; fase móvil A: agua con 100 mM de NH⁴OAc; fase móvil B: ACN; gradiente: 0 % de B-13,5 % de B 0-13 minutos, 13,5 % de B-100 % de B durante 1 min, luego un mantenimiento de 1 minuto a 100 % de B; flujo: 25 ml/min. Condiciones de LCMS analítica: Agilent 1200 HPLC/MS, columna: columna Agilent Eclipse Plus C183,5 jm , 3 x 150 mm; fase móvil A: agua con 20 mM de NH4OAc; fase móvil B: ACN; temperatura: 50 °C; gradiente: 5 % de B -100 % de B durante 15 min; flujo: 0,5 ml/min; detección: MS y UV (265 nm)] para obtener el Ejemplo 7 (3,4 mg), LCMS, [M+H]+ = 699,0; 1H RMN (499 MHz, METANOL-d⁴) ⁸ 8,48 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,62 (d, J=2,6 Hz, 1H), 7,22 (d, J=2,6 Hz, 1H), 6,12 (d, J=8,0 Hz, 1H), 6,08 - 5,94 (m, 1H), 5,70 - 5,40 (m, 1H), 4,82 - 4,75 (m, 1H), 4,61 - 4,44 (m, 2H), 4,33 - 4,25 (m, 1H), 4,16 (ddd, J=10,5, 6,7, 3,3 Hz, 1H), 4,09 - 3,95 (m, 3H), 3,70 - 3,64 (m, 1H), 3,57 - 3,51 (m, 1H), 3,50 - 3,44 (m, 1H), 3,26 -3,18 (m, 1H).

Ejemplos 8-1, 8-2, 8-3 y 8-4

(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purm-9-M)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purm-3-N}-3,12-disulfanN-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.2.1.06,9]octadecan-3,12-diona

Diastereómero 1 (8-1)

Diastereómero 2 (8-2)

Diastereómero 3 (8-3)Diastereómero 4 (8-4)

Preparación del Intermediario 8A:

8A

A una solución de ((2R,3R,4S,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-(benzoiloxi)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)metil benzoato [Carbohydrate Research 278, (1995), 71-89] (2,0 g, 3,44 mmol) en MeOH (4 ml), se agregó amoníaco (7 M en MeOH) (3,72 ml, 172 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 50 oC durante 16 h y luego se enfrió hasta temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se trituró con Et²O, el sólido se recolectó mediante filtración y se secó para obtener el Intermediario 8A (0,8 g, ⁸⁶ % de rendimiento) HPLC: tiempo de retención = 0,39 min (H²O/ACN con 0,05 % de TFA, Waters Acquity HPlC BEH C18, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm, gradiente = 2 min, longitud de onda = 220 nm); MS (ES): m/z = 270 [M+H]+.

Preparación del Intermediario 8B:

8B

El Intermediario 8A (3,5 g, 13,0 mmol) se disolvió en amortiguador de NaOAc/AcOH (pH=4,5) (100 ml) y 50 % de 2-cloroacetaldehído (30 ml) en agua, y la mezcla se agitó a 35 oC durante la noche. La mezcla resultante se concentró, y el residuo se cargó en Celite y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (columna de 80 g, MeOH/DCM=5-20 %) para obtener el Intermediario 8B (3,21 g, 84 %). HPLC: tiempo de retención = 0,40 min (H²O/ACN con 0,05 % de TFA, Waters Acquity HPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm, gradiente = 2 min, longitud de onda = 220 nm); MS (ES): m/z = 294 [M+H]+.

Preparación del Intermediario 8C:

8C

El Intermediario 8B (3,2 g, 11,0 mmol) se azeotropó con piridina dos veces, y el residuo resultante se disolvió en piridina (100 ml). A esta solución se agregó una cantidad catalítica de DMAP y 4,4'-(doro(fenil)metilen)bis(metoxibenceno) (4,1 g, 12,0 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche, y luego se agregó MeOH (5 ml), y la agitación continuó durante 30 min. La mezcla de reacción luego se concentró hasta secarse. El residuo se disolvió en DCM, se lavó con NaHCO³ acuoso saturado, y la capa orgánica se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (columna de 80 g, que se eluyó con EtOAC/DCM 0-100 % 25 min, luego 0-10 % de MeOH/DCM, 25 min) para obtener el Intermediario 8C (5,17 g, 79 % de rendimiento). ). HPLC: tiempo de retención = 0,85 min (H²O/ACN con 0,05 % de TFA, Waters Acquity HPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm, gradiente = 2 min, longitud de onda = 220 nm); MS (ES): m/z = 596 [M+H]+.

Preparación del Intermediario 8D:

A una solución de Intermediario 8C (2,0 g, 3,36 mmol) en DCM (10 ml), se agregó 1H-imidazol-4,5-dicarbonitrilo 1,0 M (2,35 ml, 2,35 mmol) en ACN, y luego, 3-((bis(diisopropilamino)fosfanil)oxi)propanonitrilo (1,62 g, 5,37 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción luego se diluyó con DCM, se lavó con NaHCO³ saturado, se secó en MgSO⁴, se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (la columna se trató previamente con 1 % de Et³N en DCM) (40 g, EtOAc/hexano=0-100 %) para obtener el Intermediario 8D (2,13 g, ⁸⁰ % de rendimiento). HPLC: tiempo de retención = 1,16 y 1,22 min (H²O/ACN con 10 mM de NH⁴OAc, Waters Acquity HPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm, gradiente = 2 min, longitud de onda = 220 nm); MS (ES): m/z = 796 [M+H]+.

P reparación del Intermediario 8E:

Una solución de Intermediario 2H (250 mg, 0,489 mmol) y IH-tetrazol (171 mg, 2,45 mmol) en MeCN (10 ml) se azeotropó tres veces, en donde el azeótropo final dejó alrededor de ⁶ ml de CH³CN. La solución se secó mediante adición de tamices moleculares 4Á activados (180 mg) y se agitó en una atmósfera de N². En un matraz separado, el Intermediario 8D (580 mg, 0,73 mmol) se azeotropó con MeCN tres veces, en donde el azeótropo final dejó alrededor de ⁶ ml de CH³CN. Luego se agregaron tamices moleculares 4Á activados (180 mg). Esta solución luego se transfirió a la solución de Intermediario 2H mediante cánula, y el matraz se enjuagó con MeCN seco (2 x 2 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h, y luego se agregó (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (201 mg, 0,978 mmol), y la agitación continuó durante 30 min. La mezcla de reacción luego se dejó reposar durante la noche. A continuación, la mezcla resultante se filtró, y el filtrado se concentró. El residuo se disolvió en DCM, se lavó con NaHCO³ y se concentró. El residuo luego se purificó mediante cromatografía flash en gel de sílice (12 g, MeOH/DCM = 0-10 %) para obtener el Intermediario 8E. HPLC: tiempo de retención = 1,08 y 1,10 min (H²O/ACN con 0,05 % de TFA, Waters Acquity HPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm, gradiente = 2 min, longitud de onda = 220 nm); MS (ES): m/z = 1037 [M+H]+.

Preparación del Intermediario 8F:

A una solución de Intermediario 8E (770 mg, 0,62 mmol) en DCM ^{( 6} ml), se agregaron MeOH (0,25 ml, 6,2 mmol) y ácido 2,2-dicloroacético (0,77 ml, 9,3 mmol), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h. Luego, la reacción se trató con piridina (3 ml), se concentró y se azeotropó con tolueno dos veces. El residuo resultante se cargó en Celite y se purificó en una columna C18 de fase inversa (c 18 GOLD de 100 g, H²O/ACN=^{0 - 95} % con NH⁴OAc 0,01 M) para obtener 8F (170 mg, 39 % de rendimiento). HPLC: tiempo de retención = 0,62 min (H²O/ACN con 0,05 % de t FA, Waters Acquity HPLC BEH C18, ^{2 , 1} x 50 mm, partículas de 1,7 pm, gradiente = ² min, longitud de onda = ^{2 2 0} nm); MS (ES): m/z = 693,4 [M+H]+.

Ejemplos 8-1, 8-2, 8-3 y 8-4

El Intermediario 8F (170 mg, 0,25 mmol) se azeotropó con piridina (15 ml), luego se disolvió en piridina (50 ml) y se concentró hasta un volumen de alrededor de 30 ml. La solución se enfrió hasta 0 oC, y se agregó muy lentamente una solución de fosfonato de difenilo (0,093 ml, 0,49 mmol) en piridina (2 ml) durante un período de 1,5 h. La mezcla se agitó durante 1 h una vez que se completó la adición, y luego se agregó (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (150 mg, 0,74 mmol) en una porción, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Luego, la mezcla de reacción se inactivó con agua (0,2 ml) y se concentró hasta secarse. El residuo se disolvió en DCM/MeOH, se cargó en seco en Celite y se purificó en una columna C18 de fase inversa (ISCO Gold de 50 g, H2O/ACN=0-70 % con NH⁴OAc 0,01 M durante 20 min) para obtener el intermediario ciclado. El intermediario luego se trató con hidróxido de amonio ^{( 6} ml) y se calentó a 40 °C en un tubo sellado de 20 ml durante 2 h, luego se concentró. El material crudo se purificó mediante LC/MS preparativa en las siguientes condiciones: Columna: columna Agilent infinitylab Eclipse Plus C18, 21,2 x 250 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: agua con 100 mM de acetato de amonio; fase móvil B: MeOH; gradiente: 16-32 % de B durante 20 minutos. 32 %-95 % de B durante 0,5 minutos, luego un mantenimiento de 0,5 minutos a 95 % de B; flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían los productos deseados se concentraron para obtener cuatro isómeros deseados.

Ejemplo 8-1. HPLC: tiempo de retención = 5,93 min (columna Agilent Eclipse Plus C183,5 pm, 3 x 150 mm, partículas de 3,5 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: metanol. gradiente: 0 % de B a 50 % de B durante 15 min, luego 50 % de B a 95 % de B durante 2 min; flujo: 0,5 ml/min; detección: MS y UV (260 nm)) MS (ES): m/z = 699 [M+H]+.

Ejemplo 8-2. HPLC: tiempo de retención = 6,18 min (columna Agilent Eclipse Plus C183,5 pm, 3 x 150 mm, partículas de 3,5 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: metanol. gradiente: 0 % de B a 50 % de B durante 15 min, luego 50 % de B a 95 % de B durante 2 min; flujo: 0,5 ml/min; detección: MS y UV (260 nm)) MS (ES): m/z = 699 [M+H]+.

Ejemplo 8-3. HPLC: tiempo de retención = 6,81 min (columna Agilent Eclipse Plus C183,5 pm, 3 x 150 mm, partículas de 3,5 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: metanol. gradiente: 0 % de B a 50 % de B durante 15 min, luego 50 % de B a 95 % de B durante 2 min; flujo: 0,5 ml/min; detección: MS y UV (260 nm)) MS (ES): m/z = 699 [M+H]+.

Ejemplo 8-4. HPLC: tiempo de retención = 7,88 min (columna Agilent Eclipse Plus C183,5 pm, 3 x 150 mm, partículas de 3,5 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: metanol. gradiente: 0 % de B a 50 % de B durante 15 min, luego 50 % de B a 95 % de B durante 2 min; flujo: 0,5 ml/min; detección: MS y UV (260 nm)) MS (ES): m/z = 699 [M+H]+.

Ejemplo 9

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dioxo-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.06,9]octadecan-8-N]pmdm-2-carboxamida

Diastereómero 1

9 (Diastereómero 1)

Preparación del Intermediario 9A:

fKco'^-^y

'OMs

9A

Cloruro de metansulfonilo (1,09 ml, 14,1 mmol) se agregó a una solución del Intermediario 1G (4,5 g, 10,8 mmol) y trietilamina (4,53 ml, 32,5 mmol) en DCM (20 ml) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 2 horas. La mezcla de reacción luego se lavó con bicarbonato de sodio saturado, agua, y salmuera, luego se secó en sulfato de sodio anhidro. Luego se filtró y se concentró. El material crudo se purificó en un sistema ISCO (0-100 % de EtOAc/Hex, columna de 40 g, 30 min) para proporcionar Intermediario 9A (5,42 g, 10,96 mmol, 100 % de rendimiento). 1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) ⁸ 7,42-7,48 (m, ⁶ H), 7,25-7,35 (m, 9H), 5,21 (dt, J=5,30, 7,00 Hz, 1H), 4,09-4,12 (m, 2H), 3,41 (dd, J=6,97, 9,60 Hz, 1H), 3,32 (dd, J=6,85, 9,60 Hz, 1H), 2,85 (s, 3H), 2,71-2,79 (m, 1H), 2,58 (td, J=5,96, 10,01 Hz, 1H), 2,41-2,50 (m, 1H), 2,25-2,32 (m, 1H), 2,06-2,07 (m, 3H). 13C RMN (126 MHz, CLOROFORMO-d) ⁸ 171,0, 143,9, 128,7, 127,9, 127,1, 86,9, 74,3, 66,2, 61,2, 43,4, 38,1, 32,5, 31,3, 20,9.

Preparación de los Intermediarios 9B y 9C:

9B

y

Acó

H

9C

A una solución de 9A (5,36 g, 10,8 mmol) en acetona (43 ml) se agregó yoduro de sodio (6,50 g, 43,0 mmol) y la mezcla resultante se calentó a reflujo durante una semana en una atmósfera de argón. La mezcla de reacción luego se diluyó con Et²O (12 ml) y los sólidos resultantes se filtraron, y el filtrado se concentró. El material crudo se purificó en un sistema ISCO (columna de 12 g, 0-60 % de EtOAc/Hex, 30 min a 20 ml/min) para proporcionar el Intermediario 9B (3,27g, 6,21 mmol, 57 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 549,08 y 9C (1 g, 3,52 mmol, 32,5 % de rendimiento)

Preparación del Intermediario 9D:

9C

A una solución del Intermediario 9B (3,4 g, 6,46 mmol) en DCM (30 ml) se agregó trietilsilano (10,32 ml, 64,6 mmol) y luego ácido 2,2-dicloroacético (3,16 ml, 38,8 mmol). La mezcla se agitó durante 2 horas y luego el solvente se retiró. El residuo se disolvió en MeOH y se filtró. El producto crudo se purificó en un sistema ISCO (80 g, 0-100 % de EtOAc/Hex, 40 min) para proporcionar 9D (1,28 g, 4,51 mmol, 70 % de rendimiento).

Preparación del Intermediario 9E

A una solución del Intermediario 9D (1190 mg, 4,18 mmol) en piridina (1,7 ml) se agregó imidazol (854 mg, 12,6 mmol) y luego TBDPS-Cl (2,3 g, 8,4 mmol). La mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. La piridina se retiró y luego el residuo se trató con DCM (20 ml) y se filtró. El filtrado se concentró hasta secarse y luego se purificó en un sistema ISCO (24 g, 0-50 % de EtOAc/Hex, 30 min) para proporcionar un 9E (2,17 g, 4,15 mmol, 99 % de rendimiento).

1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) ⁸ 7,65-7,71 (m, 4H), 7,40-7,48 (m, ⁶ H), 7,28 (s, 1H), 4,37-4,43 (m, 1H), 4,06 (d, J=5,13 Hz, 2H), 3,68 (dd, J=3,16, 11,15 Hz, 1H), 3,55 (dd, J=3,22, 11,21 Hz, 1H), 2,66-2,75 (m, 3H), 2,28 (br dd, J=2,15, 9,42 Hz, 1H), 2,03-2,04 (m, 3H), 1,29 (br s, 1H), 1,07-1,13 (m, 9H).

Preparación del Intermediario 9F:

9F

Se colocaron 4-bromopicolinato de metilo (1,22 g, 5,63 mmol), Intermediario 9E (2,10 g, 4,02 mmol), tris(trimetilsilil)silano (^{1 , 86} ml, 6,03 mmol), Ir(dF(CF³)ppy)²(dtbbpy)PF⁶ (0,090 g, 0,080 mmol), y Na²CO³ (1,278 g, 12,06 mmol) en un vial con tapa a rosca de teflón con una barra agitadora. DME (35 ml) se agregó y la suspensión se desgasificó con nitrógeno durante 5 minutos. A un vial separado se agregó complejo de cloruro de níquel(II) etilenglicol dimetil éter (0,088 g, 0,40 mmol) y 4,4'-di-ter-butil-2,2'bipiridina (0,13 g, 0,48 mmol), que se evacuó y se rellenó con nitrógeno, seguido de adición de 10 ml de DME. Esta solución luego se desgasificó con nitrógeno durante 10 minutos. La solución resultante se agregó al primer vial y luego se desgasificó adicionalmente con nitrógeno durante 10 minutos más. La suspensión resultante se colocó aproximadamente a ⁸ cm de un LED azul de 34 W, en donde el LED brillaba directamente al costado del vial. La reacción luego se agitó durante 15 horas. La mezcla de reacción luego se filtró y se vertió en una mezcla de acetato de etilo y agua (100 ml) y DCM (100 ml). La capa de agua se extrajo 2 veces con DCM y luego las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na²SO⁴, se filtraron y se concentraron. El producto crudo se purificó en un sistema ISCO (columna de 40 g, 0-100 % de EtOAc/Hex, 30 min) para proporcionar el Intermediario 9F (1,53g, 2,88 mmol, 71,6 % de rendimiento). m/z 532,5 (M+H).

Preparación del Intermediario 9G:

9G

Al Intermediario 9F (1530 mg, 2,88 mmol) se agregó trihidrofluoruro de trietilamina (3000 pl, 18,42 mmol) y la mezcla se agitó a 37 °C en una atmósfera de nitrógeno durante 2 horas. La mezcla de reacción luego se diluyó con CH³CN ^{( 6} ml) y se inactivó con Et³N (3850 pl, 27,6 mmol) y luego isopropoxitrimetilsilano (9810 pl, 55,2 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 min y luego se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna usando una columna ISCO de 40 g eluyendo con 0-60 % de acetato de etilo en hexano (20 min) y luego 10 % de MeOH/DCM (10 min) para proporcionar el Intermediario 9G (700 mg, 2,39 mmol, 83 % de rendimiento). ¹H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) ^{8 8 , 6 6} (d, J=5,01 Hz, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,37 (dd, J=1,73, 4,95 Hz, 1H), 7,28 (s, 1H), 4,21 (dd, J=4,71, 11,27 Hz, 1H), 4,10 (dd, J=6,02, 11,38 Hz, 1H), 4,03 (s, 3H), 3,73-3,83 (m, 2H), 3,27-3,37 (m, 1H), 2,43-2,57 (m, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,93 (dd, J=1,49, 9,95 Hz, 1H), 1,72 (t, J=5,07 Hz, 1H). m/z 294,3 (M+H).

Preparación del Intermediario 9H:

A una solución enfriada (0 °C) de N-(9-((2R,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoxifenil) (fenil)metoxi)metil)-3-fluoro-4-hidroxitetrahidrofuran-2-il)-9H-purin-6-il)benzamida (Astatech, 500 mg, 0,740 mmol) e imidazol (151 mg, 2,20 mmol) en DMF (3,7 ml) se agregó por goteo ter-butildifenilclorosilano (285 pl, 1,11 mmol) mediante jeringa. El baño de agua y hielo luego se retiró y la reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno. Luego de 22 horas, una segunda porción de imidazol (50,4 mg, 0,740 mmol) y ter-butildifenilclorosilano (95 pl, 0,370 mmol) se agregó a la reacción. Luego de 3 horas adicionales, una tercera porción de imidazol (50,4 mg, 0,740 mmol) y terbutildifenilclorosilano (95 pl, 0,370 mmol) se agregó a la reacción y la mezcla se agitó durante 24 horas. La reacción luego se inactivó con metanol (748 pl, 18,50 mmol), se agitó a temperatura ambiente durante 30 min, y luego se concentró al vacío. Los volátiles restantes se retiraron en un flujo de nitrógeno. El residuo se dividió en EtOAc (20 ml) y agua (20 ml), y las capas se separaron. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (1 x 20 ml), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (4 x 10 ml), salmuera (10 ml), y se secaron (Na²SO⁴), se filtraron, y se concentraron a presión reducida. El Intermediario crudo 9H se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS, [M+H]+ = 914.

Preparación del Intermediario 9I

9I

A una solución del Intermediario 9H (680 mg, 0,74 mmol) y trietilsilano (295 pl, 1,85 mmol) en CH²Ch (3,7 ml) se agregó por goteo ácido trifluoroacético (114 pl, 1,480 mmol) mediante jeringa, lo que dio como resultado un color rojizo. La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno. Luego de 1,5 horas, la reacción se trató con MeOH (4 ml) y se agitó durante 10 min. La mezcla luego se concentró a presión reducida y se azeotropó dos veces con MeOH (4 ml). El producto crudo se disolvió en una cantidad pequeña de CH²Ch, se adsorbió en un tapón de SiO², y se purificó mediante cromatografía flash (SiO², columna de 40 g, 0-50 % de acetona/hexanos, gradiente de 14,4 min luego un mantenimiento de 14,4 min, 40 ml/min) para obtener el Intermediario 9I (384 mg, 85 % de rendimiento) como un sólido blanco. LCMS, [M+H]+ = 612. 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) ⁸ 8,71 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 8,05 - 7,99 (m, 2H), 7,74 - 7,66 (m, 4H), 7,65 - 7,59 (m, 1H), 7,56 - 7,51 (m, 2H), 7,50 - 7,37 (m, ⁶ H), 6,27 (dd, J=11,3, ^{6 , 8} Hz, 1H), 5,62 (ddd, J=51,8, 6,7, 4,8 Hz, 1H), 4,70 -4,62 (m, 1H), 4,13 (br s, 1H), 3,68 (d, J=13,1 Hz, 1H), 3,10 (dd, J=13,1, 1,6 Hz, 1H), 1,17 (s, 9H).

Preparación del Intermediario 9J:

Una mezcla del Intermediario 9I (1,0 g, 1,64 mmol) y el Reactivo 3 (1,1 g, 2,45 mmol) en MeCN (15 ml) se enfrió hasta una temperatura interna de 0 °C. Se agregó DBU (0,4 ml, 2,45 mmol) en una porción y la mezcla se agitó a 0 °C durante 30 min. A la mezcla de reacción se agregó ácido acético (281 pl, 4,90 mmol) a 0 °C, y luego se agregó gel de sílice y la mezcla se concentró. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice ISCO (80 g, 0­ 10 % de gradiente de MeOH/DCM). Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron a una espuma blanca que se coevaporó con heptano (3 x 50 ml) para obtener el Intermediario 9J (1,22 g, 87 % de rendimiento) como un sólido blanco. LCMS, [M+H]+ = 858,8: 1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) ⁸ 8,95 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,99-8,04 (m, 2H), 7,69-7,74 (m, 4H), 7,61-7,66 (m, 1H), 7,38-7,57 (m, 9H), 7,28 (s, 2H), 6,32 (d, J=2,03 Hz, 1H), 6,28-6,38 (m, 1H), 4,95 (dd, J=2,09, 4,23 Hz, 1H), 4,85 (dd, J=2,15, 4,29 Hz, 1H), 4,81-4,98 (m, 1H), 4,62-4,71 (m, 2H), 4,58-4,61 (m, 1H), 4,43 (br s, 1H), 4,25-4,37 (m, 2H), 4,15 (ddd, J=4,23, 9,33, 11,59 Hz, 1H), 2,51 (br s, 1H), 2,20­ 2,26 (m, 1H), 1,99-2,06 (m, 5H), 1,81-1,91 (m, 3H), 1,65-1,75 (m, 5H), 1,23-1,32 (m, 1H), 1,16 (s, 9H).

Preparación del Intermediario 9K:

A una solución del Intermediario 9G (200 mg, 0,682 mmol) y el Intermediario 9J (1170 mg, 1,364 mmol) en acetonitrilo (14 ml) se agregó DBU (308 pl, 2,05 mmol) por goteo para obtener una solución amarillo pálido. Luego de 10 min, la mezcla de reacción se diluyó con DCM (5 ml) y se trató con ácido acético (195 pl, 3,40 mmol). La mezcla resultante se coevaporó con gel de sílice y luego se purificó mediante cromatografía flash en 40 g de gel de sílice, eluyendo con 0-15 % de MeOH/DCM para obtener el Intermediario 9K (595 mg, 81 % de rendimiento) como un sólido blanco. LCMS, [M+H]+ = 983,08. 31P RMN (162 MHz, CLOROFORMO-d) ⁸ 57,9 (s, 1P).

Preparación del Intermediario 9L:

Al Intermediario 9K, (600 mg, 0,61 mmol) se agregó amoníaco en MeOH ^{( 8} ml, 56,0 mmol, 7N). La mezcla se calentó a 53 °C durante 14 horas. El NH³/MeOH se retiró y luego trihidrofluoruro de trietilamina (2,5 ml, 15,4 mmol) se agregó y la mezcla se calentó a 37 °C durante 5 h. La mezcla de reacción luego se diluyó con CH³CN (4 ml) y se trató con Et³N (1927 pl, 13,83 mmol) e isopropoxitrimetilsilano (4910 pl, 27,7 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante ¹⁰ min y luego se concentró a presión reducida. El producto crudo se disolvió en una cantidad pequeña de MeOH, se adsorbió en un tapón de Celite y luego se purificó en un sistema ISCO (SiO², columna RediSep Rf Gold de 50 g, 0-35 % de agua/acetonitrilo que contenía 10 mM de acetato de amonio, gradiente de 5 min, (0 %) 0-35 %, 30 min, 30 ml/min) para obtener 9L ^{( 2 84} mg, 0,49 mmol, 80 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 584,5.

Ejemplo 9

9 (Diastereómero 1)

A una solución anhidra de 9L (183 mg, 0,314 mmol) en piridina (30 ml) se agregó DBU (710 pl, 4,70 mmol). La mezcla se agitó durante 10 min y luego el Reactivo 4 (210 mg, 0,470 mmol) en 2 ml de MeCN se agregó por goteo durante 30 min. La mezcla luego se agitó durante otros 30 min. La piridina se retiró y el residuo se lavó con éter frío. El producto crudo luego se purificó mediante cromatografía HPLC preparativa: Instrumento: Waters Autopure; columna: columna Xselect RP Prep C18 OBD, 5 pm, 10 x 250 mm; velocidad de flujo: 25,0 ml/min; fase móvil: A: 0,1 % de FA en agua; B: 0,1 % de FA en ACN (% de A=100-% de B): gradiente 5-35 % de B en 10 min, 35-100 % de B en 1 min, para obtener el Ejemplo 9 (48 mg, 0,069 mmol, 21,98 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 662,08.1H RMN (499 MHz, ÓXIDO DE DEUTERIO) ⁸ 8,59 (d, J=5,60 Hz, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,84 (d, J=5,64 Hz, 1H), 6,44-6,52 (m, 1H), 5,53-5,66 (m, 1H), 5,06-5,16 (m, 1H), 4,35-4,50 (m, 2H), 4,08-4,22 (m, 2H), 3,87-4,04 (m, 3H), 3,48 (q, J=9,18 Hz, 1H), 2,66-2,73 (m, 1H), 2,56-2,64 (m, 1H), 2,41-2,49 (m, 1H), 1,99-2,09 (m, 1H).31P RMN (202 MHz, ÓXIDO DE DEUTERIO) ⁸ 55,25 (s, 1P), 55,12 (s, 1P), 55,10 (s, 1P), 55,07 (s, 1P).

Ejemplo 10

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dioxo-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.06,9]octadecan-8-N]piridm-2-carboxamida

Diastereómero 2

10 (Diastereómero 2)

El Ejemplo 10 se preparó de 9L, de acuerdo con procedimientos análogos a aquellos detallados en el Ejemplo 9 anterior usando el Reactivo 3 en la etapa final. LCMS, [M+H]+ = 662,3. 1H RMN (499 MHz, METANOL-d⁴) ⁸ 8,61-8,66 (m, 1H), 8,46-8,54 (m, 1H), 8,21 (s, 1H), , 7,99-8,05 (m, 1H), 7,46-7,55 (m, 1H), 6,30-6,42 (m, 1H), 5,48-5,66 (m, 1H), 5,18-5,30 (m, 1H), 4,50-4,59 (m, 1H), 4,39-4,48 (m, 1H), 4,23-4,32 (m, 2H), 3,92-4,10 (m, 2H), 3,52-3,63 (m, 2H), 2,55­ 2,72 (m, 2H), 2,35-2,53 (m, 2H). 31P RMN (202 MHz, METANOL-d⁴) ⁸ 58,0 (s, 1P), 56,0 (s, 1P).

Ejemplo 11

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18S)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dioxo-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.06,9]octadecan-8-N]piridm-2-carboxamida

11 (Diastereómero 1)

El Ejemplo 11, mostrado anteriormente, se preparó de acuerdo con procedimientos análogos a aquellos detallados en el Ejemplo 9 , comenzando desde el Intermediario 9G y N-(9-((2R,3S,4R,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3-fluoro-4-hidroxitetrahidrofuran-2-il)-9H-purin-6-il)benzamida (CAS 226415-08-3, BLDPHARM), usando el Reactivo 3 para la primera etapa de acoplamiento y el Reactivo 4 para la etapa de ciclización.

LCMS, [M+H]+ = 662,1. 1H RMN (499 MHz, METANOL-d⁴) 5 8,56 (d, J=4,9 Hz, 1H), 8,43 (d, J=2,6 Hz, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,08 - 8,03 (m, 1H), 7,71 (dd, J=5,0, 1,2 Hz, 1H), 6,70 - 6,55 (m, 1H), 5,70 - 5,69 (m, 1H), 5,58 - 5,40 (m, 1H), 5,25 - 5,05 (m, 1H), 4,50 - 4,35 (m, 2H), 4,21 - 4,09 (m, 3H), 4,06 - 3,95 (m, 2H), 3,37 - 3,35 (m, 1H), 3,31 - 3,29 (m, 1H), 2,94 -2,85 (m, 1H), 2,62 -2,53 (m, 1H). 31P RMN (202 MHz, METANOL-d⁴) 559,2 (s, 1P), 56,3 (s, 1P). 19F RMN (470 MHz, METANOL-d⁴) 5 -197,97 (s, 1F).

Ejemplo 12

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-dioxo-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.3.0.06,9]octadecan-8-N]pmdm-2-carboxamida

Preparación del Intermediario 12A:

A una solución del Intermediario 9I (725 mg, 1,19 mmol) en DCM (12 ml) se agregó una solución de 1H-imidazol-4,5-dicarbonitrilo (0,95 ml, 0,95 mmol, 1M) en ACN. Luego, una solución de 3-((bis(diisopropilamino)fosfanil)oxi) propanonitrilo (714 mg, 2,37 mmol) en DCM (1 ml) se agregó a la mezcla de reacción por goteo. La mezcla de reacción se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente y luego se inactivó con MeOH (2 ml). La mezcla luego se diluyó con bicarbonato de sodio acuoso saturado (50 ml) y se diluyó con DCM (50 ml). La capa orgánica se secó (Na²SO⁴), se filtró y se concentró. El producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM y se cargó en una columna de gel de sílice ISCO de 40 g y se purificó usando un sistema Teledyne ISCO, eluyendo durante un gradiente de 10 minutos, 0-50 % de gradiente; solvente A: DCM con 0,25 % de TEA; solvente B: EtOAc para obtener el Intermediario 12A (820 mg, 1,02 mmol, 85 % de rendimiento) como una mezcla de diastereómeros. lCm S, [M+H]+ = 813,8.

Preparación del Intermediario 12B:

Una mezcla del Intermediario 9G (200 mg, 0,68 mmol) y 1H-tetrazol (143 mg, 2,05 mmol) en ACN seco ^{( 6} ml) se concentró hasta secarse (se repitió dos veces). El Intermediario 12A (690 mg, 0,85 mmol) se disolvió en ACN (5 ml) y se concentró hasta secarse (se repitió dos veces). Luego, tamices moleculares de 3Á (0,5 g) y acetonitrilo (5 ml) se agregaron al Intermediario 12A, y esta solución luego se agregó al Intermediario 9G en ACN seco ^{( 6} ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 90 minutos y luego se agregó peróxido de 2-butanona (0,55 ml, 2,7 mmol). La reacción se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. La reacción luego se filtró a través de Celite y se concentró a presión reducida. El producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM, se cargó en una columna de gel de sílice ISCO de 40 g y se purificó usando un sistema Teledyne ISCO, eluyendo durante 35 min, 010 % de gradiente; solvente A: DCM; solvente B: EtOAc para obtener el Intermediario 12B (612 mg, 0,6 mmol, ⁸⁸ % de rendimiento), m/z 1020,8 (M+H).

Preparación de los Intermediarios 12C y 12D:

12D

A una solución del Intermediario 12B (0,610 g, 0,60 mmol) en MeOH anhidro (12 ml) se agregó carbonato de potasio (0,250 g, 1,8 mmol). La mezcla resultante se agitó a 0 °C en una atmósfera de nitrógeno durante la noche. La mezcla de reacción luego se neutralizó a pH =7 con ácido acético (0,14 ml, 2,4 mmol) y luego el solvente se evaporó. Al material crudo se agregó trihidrofluoruro de trietilamina (3 ml, 18 mmol) y la mezcla se agitó a 37 °C en una atmósfera de nitrógeno durante 4 horas. La mezcla de reacción luego se diluyó con ACN (4 ml) y se trató con trietilamina (7,70 ml, 55,3 mmol) e isopropoxitrimetilsilano (4,79 ml, 27,0 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos y luego se concentró al vacío. El producto crudo se disolvió en una cantidad pequeña de MeOH, se adsorbió en un tapón de Celite, se purificó mediante cromatografía líquida de interacción hidrófila (SiO², columna RediSep Rf Gold de 50 g, 0-35 % de agua/acetonitrilo que contenía 10 mM de acetato de amonio, gradiente de 5 min,(0 %) 0-35 %, 30 min, 30 ml/min) para obtener dos productos: el Intermediario 12C (250 mg, 30,3 % de rendimiento). m/z 687,6 (M+H) y el Intermediario 12D (175 mg, 25 % de rendimiento). m/z 583,6 (M+H). ¹H RMN (499 MHz, METANOL-d⁴) ⁸ 8,72 (br s, 2H), 8,57 (d, J=5,01 Hz, 1H), 8,45 (d, J=4,77 Hz, 1H), 8,09 (br d, J=6,91 Hz, 2H), 7,97 (s, 1H), 7,63-7,71 (m, 1H), 7,50-7,63 (m, 3H), 6,45 (br d, J=16,09 Hz, 1H), 5,52 (br s, 1H), 5,37-5,57 (m, 1H), 5,41 (br s, 1H), 4,57-4,78 (m, 1H), 4,19-4,32 (m, 2H), 4,10-4,19 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,69 (d, J=5,60 Hz, 1H), 3,46-3,63 (m, 2H), 3,34-3,39 (m, 1H), 3,19-3,32 (m, 1H), 2,31-2,53 (m, 3H), 2,04 (s, 1H), 1,83-2,00 (m, 3H).

Preparación del Intermediario 12E:

A una solución a temperatura ambiente del Intermediario 12C (200 mg, 0,29 mmol) en piridina (26 ml) se agregó una solución de difenilfosfonato (0,11 ml, 0,38 mmol) en DCM (1 ml) por goteo durante 20 minutos. A esta mezcla de reacción se agregó una solución de yodo en THF/H²O (305 mg, 0,04 M) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 min. La mezcla de reacción luego se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó en una columna Gold C18 ISCO de 50 g de fase inversa (fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con acetato de amonio 0,01 M; Fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con acetato de amonio 0,01 M; gradiente: 0 % de 7 min, 0-40 % de B gradiente en 23 min) para obtener el Intermediario 12E (70 mg, 0,094 mmol, 32 % de rendimiento) como un sólido blanco. LCMS, [M+H]+ = 749,5.

Ejemplo 12

El Intermediario 12E (70 mg, 0,094 mmol) se trató con amoníaco (5 ml, 35,0 mmol, 7N) y la mezcla de reacción se agitó durante 1,5 h a 55 °C. La mezcla de reacción luego se concentró y el producto crudo se purificó mediante HPLC preparativa (Condiciones de cromatografía: Instrumento: Waters Autopure; columna: Columna Luna Omega Polar C18, 5 |jm, 21,2 x 250 mm; velocidad de flujo: 20,0 ml/min; fase móvil: A: 100 mM de NH⁴OAc (pH:6,5) en H²O; B: MeOH (% de A=100-% de B): gradiente de 0-31 % de B durante 10,5 min, 31-95 % de B durante 0,5 min, mantenimiento a 95 % de B durante 1 min y 95-0 % de B durante 0,5 min) para obtener el Ejemplo 12 (32 mg, 0,05 mmol, 49 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 630,5. 1H RMN (499 MHz, METANOL-d⁴) ⁸ 8,59 (s, 1H), 8,51 (d, J=5,01 Hz, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,52 (br d, J=4,77 Hz, 1H), 6,37 (d, J=16,09 Hz, 1H), 5,51 (d, J=3,93 Hz, 1H), 5,41 (d, J=3,93 Hz, 1H), 5,37-5,55 (m, 1H), 4,92-5,03 (m, 1H), 4,49 (br d, J=11,92 Hz, 1H), 4,39 (br d, J=8,46 Hz, 1H), 4,19-4,31 (m, 1H), 4,06-4,17 (m, 1H), 3,87-4,01 (m, 2H), 3,34-3,47 (m, 1H), 2,62-2,75 (m, 2H), 2,38 (td, J=8,23, 10,25 Hz, 1H). 31P RMN (202 MHz, METANOL-d⁴) 8-0,12 (s, 1P), -0,78 (s, 1P).

Ejemplo 13

4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-12-hidroxi-3,12-dioxo-3-sulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatnciclo[13.3.0.06,9]octadecan-8-N]pmdm-2-carboxamida

13 (Diastereómero 1)

A una solución anhidra del Intermediario 12D ^{( 8 8} mg, 0,15 mmol) en piridina (15 ml) se agregó DBU (342 jl, 2,27 mmol). La mezcla se agitó durante 10 min y luego el Reactivo 4 (110 mg, 0,24 mmol) en 2 ml de DCM se agregó por goteo durante 30 min. La mezcla luego se agitó durante otros 30 min a temperatura ambiente. La piridina se retiró a presión reducida y el residuo se lavó con éter frío. El producto crudo luego se calentó con 4 ml de NH³7 N en MeOH a 55 °C durante 5 horas. El solvente se evaporó y el material crudo se purificó mediante HPLC preparativa (Condiciones de cromatografía: Instrumento: Waters Autopure; columna: Columna Zorbax Eclipse C18 plus, 5 jm , 21,2 x 250 mm; velocidad de flujo: 20,0 ml/min; fase móvil: A: 100 mM de NH⁴OAc (pH:6,5); B: Ac N (% de A=100-% de B): gradiente de 5-40 % de B durante 14 min, 40-95 % de B durante 0,5 min) para obtener el Ejemplo 13 (47 mg, 43 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 646,45. 1H RMN (499 MHz, METANOL-d⁴) ⁸ 8,62 (s, 1H), 8,51 (d, J=5,01 Hz, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,53 (br d, J=4,89 Hz, 1H), 6,35-6,41 (m, 1H), 5,37-5,53 (m, 1H), 5,05-5,16 (m, 1H), 4,40-4,49 (m, 2H), 4,14-4,32 (m, 3H), 3,91-4,07 (m, 2H), 3,34-3,50 (m, 1H), 2,69 (br s, 2H), 2,32-2,43 (m, 1H), 1,94­ 1,98 (m, 1H). 31P RMN (202 MHz, METANOL-d⁴) ⁸ 56,95 (s, 1P), -0,02 (s, 1P).

-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-12-hidroxi-3,12-dioxo-3-sulfanil-,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriddo[13.3.0.06,9]octadecan-8-M]piridm-2-carboxamida

14 (Diastereómero 2)

El Ejemplo 14, mostrado anteriormente, se preparó del Intermediario 12D, de acuerdo con procedimientos análogos a aquellos detallados en el Ejemplo 13 anterior usando el Reactivo 3 para la etapa de ciclización. LCMS, [M+H]+ = 646,45. 1H RMN (499 MHz, METANOL-d⁴) ⁸ 8,64 (s, 1H), 8,52 (d, J=5,01 Hz, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,52 (d, J=5,02 Hz, 1H), 6,34-6,43 (m, 1H), 5,42-5,59 (m, 1H), 5,25-5,37 (m, 1H), 4,39-4,49 (m, 1H), 4,25-4,37 (m, 2H), 4,05­ 4,14 (m, 1H), 3,98-4,04 (m, 1H), 3,92 (td, J=3,67, 11,03 Hz, 1H), 3,39-3,49 (m, 1H), 3,34-3,38 (m, 1H), 2,67-2,80 (m, 1H), 2,53-2,67 (m, 1H), 2,37 (td, J=8,11, 10,01 Hz, 1H), 1,72-1,89 (m, 1H). 31P RMN (202 MHz, METANOL-d⁴) ⁸ 58,36 (s, 1P), -0,09 (s, 1P).

Ejemplos 15-1 y 15-2

4-[(1S,7S,8R,10S,16R,17R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-4,13-dioxo-4,13-disulfanil-3,5,12,14-tetraoxa-4A5,13A5-difosfatriddo[14.2.0.07,10]odadecan-8-N]piridm-2-carboxamida

Diastereómero 1 (15-1)

Diastereómero 2 (15-2)Preparación del Intermediario 15A:

Una suspensión del Intermediario 2M (250 mg, 0,51 mmol) y el Reactivo 3 (295 mg, 0,661 mmol) en THF (5 ml) se enfrió hasta una temperatura interna de 0 °C. Se agregó DBU (0,1 ml, 0,66 mmol) por goteo, y la mezcla se agitó a 0 °C durante 10 min. A la mezcla de reacción se agregó ácido acético (116 pl, 2,0 mmol) a 0 °C, y luego se agregó gel de sílice y la mezcla se concentró. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice ISCO (24 g, 0-10 % de gradiente de MeOH/DCM). Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron a una espuma blanca que se coevaporó con heptano (3 x 50 ml) para obtener 15a (320 mg, 85 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 738,6.

15B

A una solución del Intermediario 9G (103 mg, 0,351 mmol) y el Intermediario 15A (402 mg, 0,544 mmol) en acetonitrilo (7 ml) se agregó DBU (159 pl, 1,05 mmol) por goteo para obtener una solución amarillo pálido. Luego de 10 min, la mezcla de reacción se diluyó con DCM (4 ml) y se trató con ácido acético (100 pl, 1,76 mmol). La mezcla resultante se coevaporó con gel de sílice, y luego se purificó mediante cromatografía flash en 24 g de gel de sílice, eluyendo con 0-15 % de MeOH/DCM para obtener el Intermediario 15B (300 mg, 99 % de rendimiento) como un sólido blanco.

Preparación del Intermediario 15C:

15C

Al Intermediario 15B (302 mg, 0,35 mmol) se agregó amoníaco en MeOH (5 ml, 35,0 mmol, 7N). La mezcla se calentó a 55 °C durante 3 horas y luego se agitó a temperatura ambiente durante 14 horas. El NH³/MeOH se retiró en un flujo de nitrógeno. Al residuo se agregó DCM (5 ml) y trietilsilano (0,56 ml, 3,5 mmol) y luego ácido 2,2-dicloroacético (0,20 ml, 2,45 mmol) se agregó. La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas y luego se concentró a presión reducida. El producto crudo se disolvió en una cantidad pequeña de MeOH, se adsorbió en un tapón de Celite, se purificó mediante cromatografía líquida de interacción hidrófila (SiO² , columna RediSep Rf Gold de 50 g, 0-40% de agua/acetonitrilo que contenía 10 mM de acetato de amonio, gradiente de 5 min, (0 %) 0-35 %, 30 min, 30 ml/min) para obtener el Intermediario 15C (72 mg, 0,13 mmol, 36 % de rendimiento) LCMS, [M+H]+ = 564,5. ¹H RMN (499 MHz, METANOL-d⁴) ⁸ 8,48 (d, J=5,40 Hz, 1H), 8,39 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,54 (d, J=4,65 Hz, 1H), 4,70­ 4,77 (m, 1H), 4,00-4,13 (m, 4H), 3,67-3,76 (m, 2H), 3,55-3,65 (m, 3H), 3,39-3,48 (m, 1H), 2,91-3,03 (m, 1H), 2,51-2,63 (m, 2H), 2,34-2,50 (m, 4H), 1,71-1,84 (m, 1H).

Ejemplos 15-1 y 15-2

Diastereómero 1 (15-1)

Diastereómero 2 (15-2)

A una solución anhidra del Intermediario 15C (68 mg, 0,12 mmol) en piridina (12 ml) se agregó DBU (270 pl, 1,8 mmol). La mezcla se agitó durante 10 min y luego el Reactivo 4 (210 mg, 0,47 mmol) en 2 ml de MeCN se agregó por goteo durante 30 min. La mezcla luego se agitó durante otros 30 min a temperatura ambiente. La piridina se retiró y el residuo se lavó con éter frío. El producto crudo se purificó mediante HPLC preparativa (Condiciones de cromatografía: Instrumento: Waters Autopure; columna: Columna Zorbax Eclipse C18 plus, 5 pm, 21,2 x 250 mm; velocidad de flujo: 20,0 ml/min; fase móvil: A: 100 mM de NH ⁴ OAc (pH:6,5); B: Ac N (% de A=100-% de B): gradiente de 5-50 % de B durante 20 min, 50-95 % de B durante 1 min, mantenimiento a 95 % de B durante 1 min) para obtener el Ejemplo 15­ 1 (14 mg, 0,02 mmol, 17 % de rendimiento) y el Ejemplo 15-2 (26 mg, 0,04 mmol, 30 % de rendimiento) .

Ejemplo 15-1: tR 7,53 min; M+1 obs = 642,5 (Agilent 1290 HPLC/MS; columna: Columna Eclipse C18 plus 1,8 um 2,1x150 mm; velocidad de flujo: 0,3 ml/min; fase móvil: A: 20 mM de NH ⁴ OAc (pH 6,5); B: MeOH (% de A=100-% de B); gradiente: 5-100 % de B durante 15 min) ¹ H RMN (499 MHz, METANOL-d ⁴ ) 88,49 (d, J=5,01 Hz, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,55-7,65 (m, 1H), 4,79-4,84 (m, 1H), 4,22 (ddd, J=3,93, 6,59, 10,46 Hz, 1H), 3,96-4,18 (m, 7H), 3,35-3,26 (m, 2H), 2,45-2,69 (m, 6H), 1,86-1,98 (m, 1H). ³¹ P RMN (202 MHz, METANOL-d ⁴ ) 856,94 (s, 2P).

Ejemplo 15-2: tR 7,98 min; M+1 obs = 642,5; (Agilent 1290 HPLC/MS; columna: Columna Eclipse C18 plus 1,8 um 2,1x150 mm; velocidad de flujo: 0,3 ml/min; fase móvil: A: 20 mM de NH ⁴ OAc (pH 6,5); B: MeoH (% de A=100-% de B); gradiente: 5-100 % de B durante 15 min). ¹ H RMN (499 MHz, METANOL-d ⁴ ) 88,47 (d, J=5,01 Hz, 1H), 8,40 (d, J=4,41 Hz, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,99 (br s, 1H), 7,60 (br s, 1H), 4,76-4,82 (m, 1H), 4,15-4,25 (m, 3H), 3,98-4,15 (m, 4H), 3,87 (td, J=5,53, 10,76 Hz, 1H), 3,34-3,42 (m, 1H), 3,26-3,31 (m, 1H), 2,74-2,81 (m, 1H), 2,52-2,69 (m, 2H), 2,40-2,52 (m, 3H), 2,00-2,06 (m, 1H). ³¹ P RMN (202 MHz, METANOL-d ⁴ ) 857,11 (s, 2P).

Los siguientes Ejemplos, mostrados en la Tabla 2 a continuación, se prepararon de acuerdo con procedimientos análogos a aquellos detallados en Ejemplos descritos anteriormente usando los monómeros nucleósidos adecuados descritos como preparaciones u obtenidos de fuentes comerciales.

Tabla 2

continuación

continuación

Ejemplos 21-1 y 21-2

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{5-oxo-5H,8H,9H- [1,2,4]triazolo[4,3-a]purin--il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-3,12-diona Diastereómero 1 (21-1)

Diastereómero 2 (21-2)

Preparación del Intermediario 21A:

21A

A una solución del Intermediario 1G (479 mg, 1,15 mmol), 2,6-dicloro-9H-purina (326 mg, 1,73 mmol), y 2,6-dicloro-9H-purina (326 mg, 1,73 mmol) en THF (11,5 ml) se agregó DIAD (0,350 ml, 1,80 mmol) mediante jeringa. La mezcla resultante se agitó a 50 °C. Luego de 18 horas, la reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y luego se concentró al vacío. El producto crudo se disolvió en una cantidad pequeña de CH²Ch, se adsorbió en un tapón de SO ², y se purificó dos veces mediante cromatografía flash (SO ², columna RediSep Rf Gold de 40 g, 0 % a 100 % de EtOAc/hexanos, luego 0 % a 20 % de MeOH/DCM) para obtener el Intermediario 21A (437 mg, 0,744 mmol, 65 % de rendimiento) como una espuma blanca. ¹H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) ⁸ 8,14 (s, 1H), 7,34 - 7,27 (m, 9H), 7,25 - 7,20 (m, ⁶ H), 4,77 (q aparente, J=8,7 Hz, 1H), 4,16 (d, J=4,8 Hz, 2H), 3,34 (dd, J=10,1, 4,4 Hz, 1H), 3,26 (dd, J=10,1, 6,4 Hz, 1H), 2,96 - 2,87 (m, 1H), 2,74 - 2,64 (m, 1H), 2,48 - 2,38 (m, 2H), 2,05 (s, 3H). LCMS: tiempo de retención = 1,16 min. [M+H]+ = 587. Columna: Waters BEH C¹⁸ 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: agua con 0,05 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de ácido trifluoroacético; temperatura: 50 °C; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 98 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm.

Preparación del Intermediario 21B:

21B

El Intermediario 21A (437 mg, 0,744 mmol) se disolvió en una cantidad pequeña de 1,4-dioxano y se agregó por goteo con agitación a una solución en ebullición de 1,4-dioxano (3 ml) e hidróxido de sodio acuoso 1,0 M (3,00 ml, 3 mmol). Luego de 30 min, la reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, se diluyó con agua (10 ml), luego se inactivó lentamente con ácido acético a pH~7. La mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 10 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron (Na²SO⁴), se filtraron y se concentraron al vacío. El producto crudo se purificó mediante HPLC de fase inversa para obtener el Intermediario 21B (179 mg, 0,340 mmol, 46 % de rendimiento). LCMS: tiempo de retención = 0,91 min. [M+H]+ = 527. Columna: Waters BEH C182,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: agua con 0,05 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de ácido trifluoroacético; temperatura: 50 °C; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 98 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 254 nm.

Preparación del Intermediario 21C:

Una mezcla del Intermediario 21B (179 mg, 0,340 mmol) e hidrato de hidrazina (1 ml, 31,9 mmol) en piridina (1,5 ml) se sometió a reflujo durante ⁶ horas y se evaporó hasta secarse. El residuo se lavó con 3 % de carbonato de potasio acuoso y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se concentraron para obtener un sólido blanco que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Una suspensión del intermediario de hidrazina crudo (50 mg, ~0,096 mmol) en ortoformiato de trietilo (1 ml) se agitó a 60 °C durante 4 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, luego se concentró. El material crudo (que contenía dos productos regioisoméricos) se absorbió en MeOH y se purificó mediante HPLC de fase inversa para obtener el Intermediario 21C (regioisómero mayor) (27 mg, 0,051 mmol, 53 % de rendimiento en dos etapas). 1H RMN (500 MHz, METANOL-d⁴) ⁸ 8,89 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,30 - 7,21 (m, 15H), 4,76 (q aparente, J=^{8 , 6} Hz, 1H), 3,75 - 3,68 (m, 4H), 2,98 - 2,88 (m, 1H), 2,65 - 2,58 (m, 1H), 2,44 - 2,36 (m, 1H), 2,30 - 2,21 (m, 1H). LCMS: tiempo de retención = 0,85 min. [M+H]+ = 533. Columna: Waters BEH C18 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: agua con 0,05 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de ácido trifluoroacético; temperatura: 50 °C; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 98 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 254 nm.

Preparación del Intermediario 21D:

A una solución del Intermediario 21C (125 mg, 0,235 mmol) en DMF (2 ml) se agregó imidazol (80 mg, 1,17 mmol) y fer-butildifenilclorosilano (0,181 ml, 0,704 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se inactivó con metanol (0,4 ml), luego se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Los volátiles se retiraron en un flujo de nitrógeno. El producto crudo se disolvió en una cantidad pequeña de CH²Ch, se adsorbió en un tapón de SiO², y se purificó mediante cromatografía flash (SO ², columna RediSep Rf Gold de 40 g, 0 % de MeOH/EtoAc a 100 % de MeOH/EtOAc) para obtener el Intermediario 21D (131 mg, 0,170 mmol, 72 % de rendimiento) como un sólido blanco. LCMS: tiempo de retención = 1,23 min. [M+H]+ = 771,7. Columna: Waters BEH C18 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: agua con 0,05 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de ácido trifluoroacético; temperatura: 50 °C; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 98 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 254 nm.

Preparación del Intermediario 21E:

A una solución del Intermediario 21D (107 mg, 0,139 mmol) y trietilsilano (0,0746 ml, 0,467 mmol) en CH²CI² (1,4 ml) se agregó ácido trifluoroacético (0,021 ml, 0,278 mmol) por goteo. La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 2 horas. La reacción se diluyó con MeOH (0,6 ml) y se agitó durante 10 min. La mezcla luego se concentró al vacío y se azeotropó dos veces más con MeOH (2 x 3 ml). El producto crudo se disolvió en una cantidad pequeña de DCM, se adsorbió en un tapón de sílice, y se purificó mediante cromatografía flash (SiO² , columna de 40 g, 0 % de MeOH/EtOAc a 100 % de MeOH/EtOAc) para obtener el Intermediario 21E (45 mg, 0,085 mmol, 61 % de rendimiento). LCMS: tiempo de retención = 0,98 min. [M+H]+ = 529. Columna: Waters BEH C182,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: agua con 0,05 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de ácido trifluoroacético; temperatura: 50 °C; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 98 % de B; flujo: ^{0 , 8} ml/min; detección: UV a 254 nm.

Preparación del Intermediario 21F:

21F

A una solución que contenía el Intermediario 21E y el Intermediario 9J (73,0 mg, 0,085 pmol) (azeotropado 3x con CH³CN y secado a alto vacío durante 1 hora) en CH³CN (3 ml) se agregó por goteo DBU (0,0257 ml, 0,170 mmol) mediante jeringa. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno. Luego de 18 horas, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El crudo se disolvió en una cantidad pequeña de DCM y se purificó mediante cromatografía flash (SO ², columna Gold RediSep Rf de 24 g, 0 % a 100 % de MeOH en DCM) para obtener el Intermediario 21F (77 mg, 0,063 mmol, 74 % de rendimiento) como un sólido blanco. LCMS: tiempo de retención = 1,23 min. [M+H]+ = 1218,5. Columna: Waters BEH C182,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: agua con 0,05 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de ácido trifluoroacético; temperatura: 50 °C; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 98 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 254 nm.

Preparación del Intermediario 21G:

Una suspensión de Intermediario 21F (77 mg, 0,063 mmol) en trihidrofluoruro de trietilamina puro (0,50 ml, 3,07 mmol) se agitó a temperatura ambiente. Luego de 22 horas, la mezcla de reacción se diluyó con CH³CN (1 ml) y se inactivó con trietilamina (0,86 ml, 6,14 mmol) (2 equiv, con respecto a Et³N^³ HF) e isopropoxitrimetilsilano (1,6 ml, 9,21 mmol) (3 equiv, con respecto a EtaN^3HF). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min, luego se concentró al vacío. El producto crudo se purificó mediante HPLC de fase inversa (Sunfire C18, 5 micrómetros, 19 x 150 mm, 18­ 90 % de acetonitrilo/agua que contenía 0,1 % de ácido trifluoroacético, 20 ml/min, gradiente de 9 min, se controló a 254 nm) para obtener el Intermediario 21G (37 mg, 0,050 mmol, 79 % de rendimiento). LCMS: tiempo de retención = 0,53 min. [M+H]+ = 742. Columna: Waters Be H C182,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: agua con 0,05 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de ácido trifluoroacético; temperatura: 50 °C; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 98 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 254 nm.

Preparación del Ejemplo 21-1:

Diastereómero 1 (21-1)

A una solución de Intermediario 21G (19 mg, 0,026 mmol) y DBU (0,058 ml, 0,384 mmol) en DMF (3 ml) se agregó por goteo una solución de Reactivo 4 (17,2 mg, 0,038 mmol) en DMF (1 ml) mediante jeringa durante 10 min. La mezcla resultante se agitó durante 2 horas, luego se inactivó con metanol (3 ml) y ácido acético (0,044 ml). Luego, los volátiles se retiraron en un flujo de nitrógeno. El producto crudo se purificó mediante HPLC de fase inversa para obtener el producto ciclizado (7,1 mg, ^{8 , 66} pmol, 33 % de rendimiento). LCMS: tiempo de retención = 0,53 min. [M+H]+ = 820. Columna: Waters BEH C18 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: agua con 0,05 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de ácido trifluoroacético; temperatura: 50 °C; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 98 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 254 nm. Una solución del macrociclo parcialmente protegido (7,1 mg, ^{8 , 66} pmol) en MeOH (0,5 ml) y NH⁴OH conc. (0,5 ml) se calentó en un recipiente sellado a presión a 35 °C durante la noche. El recipiente de reacción se enfrió en un baño de agua y hielo durante 10 min antes de abrirse. La mezcla de reacción se transfirió a un matraz de fondo redondo y se concentró al vacío. El material crudo se purificó mediante LC/MS preparativa en las siguientes condiciones: Columna: columna Waters Xselect RP Prep C18 OBD, 19 mm x 150 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 100 mM de NH⁴OAc en agua (pH 6,5); fase móvil B: MeOH; gradiente: 15-24 % de B durante 25 minutos; velocidad de flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron para obtener el Ejemplo 21-1 (2,9 mg). LCMS: tiempo de retención = 15,7 min. [M+H]+ = 716. Columna: Waters XSelect CSH C183,0 x 150 mm, partículas de 3,5 pm; fase móvil A: 20 mM de NH⁴OAc en agua (pH 6,5) con 5 % de MeOH; fase móvil B: MeOH; gradiente: 0 % de B a 50 % de B durante 15 min, luego a 95 % a 17 min y mantenimiento durante 3 min a 95 % de B; temperatura de columna: 45 °C; flujo: 0,5 ml/min; detección: UV a 260 nm.

Preparación del Ejemplo 21-2:

Diastereómero 2 (21-2)

A una solución de 21G (19 mg, 0,026 mmol) y DBU (0,058 ml, 0,384 mmol) en DMF (3 ml) se agregó por goteo una solución de Reactivo 3 (17,2 mg, 0,038 mmol) en DMF (1 ml) mediante jeringa durante 10 min. La mezcla resultante se agitó durante 2 horas, luego se inactivó con metanol (3 ml) y ácido acético (0,044 ml). Luego, los volátiles se retiraron en un flujo de nitrógeno. El producto crudo se purificó mediante HPLC de fase inversa para obtener el producto ciclizado (7,3 mg, 8,91 pmol, 35% de rendimiento). LCMS: tiempo de retención = 0,53 min. [M+H]+ = 820. Columna: Waters BEH C18 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: agua con 0,05 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de ácido trifluoroacético; temperatura: 50 °C; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 98 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 254 nm. Una solución del macrociclo parcialmente protegido (7,3 mg, 8,91 jm ol) en MeOH (0,5 ml) y NH⁴OH conc. (0,5 ml) se calentó en un recipiente sellado a presión a 35 °C durante la noche. El recipiente de reacción se enfrió en un baño de agua y hielo durante 10 min antes de abrirse. La mezcla de reacción se transfirió a un matraz de fondo redondo y se concentró al vacío. El material crudo se purificó mediante LC/MS preparativa en las siguientes condiciones: Columna: columna Waters Xselect RP Prep C l⁸ OBD, 19 mm x 150 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 100 mM de NH⁴OAc en agua (pH 6,5); fase móvil B: MeOH; gradiente: 15-24 % de B durante 25 minutos; velocidad de flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron para obtener el Ejemplo 21-2 (3,9 mg). LCMS: tiempo de retención = 17,5 min. [M+H]+ = 716. Columna: Waters XSelect CSH C183,0 x 150 mm, partículas de 3,5 |jm; fase móvil A: 20 mM de N ^O A c en agua (pH 6,5) con 5 % de MeOH; fase móvil B: MeOH; gradiente: 0 % de B a 50 % de B durante 15 min, luego a 95 % a 17 min y mantenimiento durante 3 min a 95 % de B; temperatura de columna: 45 °C; flujo: 0,5 ml/min; detección: UV a 260 nm.

Ejemplos 22-1, 22-2, 22-3 y 22-4

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-(6-oxo-6,9-dihidro-1H-purin-9-il)- 3,12-disulfaml-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.3.0.06,9]octadecan-3,12-diona

Diastereómero 1 (22-1)

Diastereómero 2 (22-2)

Diastereómero 3 (22-3)

Diastereómero 4 (22-4)

Preparación del Intermediario 22A:

22A

A una solución de Intermediario 2G (0,6 g, 1,085 mmol) en dioxano (9 ml) se agregó hidróxido de sodio (0,121 g, 3,04 mmol). La reacción se agitó durante 16 h. El análisis de LCMS muestra principalmente material de inicio. Una solución acuosa 1 N de LiOH (3,25 ml, 3,25 mmol) se agregó a la reacción y la mezcla se agitó a 60 °C durante 16 h más. La reacción se concentró al vacío y se trató con amortiguador de fosfato a pH 4,5 (~10 ml) y se extrajo con EtOAc, y las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO⁴) y se concentraron al vacío. El producto crudo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM y se cargó en una columna de gel de sílice ISCO de 40 g y se purificó usando un sistema Teledyne ISCO, eluyendo durante un gradiente de 15 min con 1 %-10 % de DCM/MeOH para obtener el Intermediario 22A (0,5 g, 1,015 mmol, 94 % de rendimiento), m/z (493, M+H), como un sólido. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ⁸ 8,21 -8,17 (m, 1H), 8,00 -7,96 (m, 1H), 7,41 -7,18 (m, 15H), 4,72 -4,63 (m, 1H), 3,79 -3,69 (m, 2H), 3,40 -3,29 (m, 2H), 3,01 -2,91 (m, 1H), 2,62 -2,53 (m, 1H), 2,48 -2,38 (m, 1H), 2,34 -2,24 (m, 1H).

Preparación del Intermediario 22B:

Una mezcla que contenía Intermediario 22A (0,38 g, 0,771 mmol) y IH-tetrazol (0,065 g, 0,926 mmol) en acetonitrilo seco se concentró hasta secarse en el evaporador giratorio (2 x 5 ml) y luego se volvió a suspender en acetonitrilo (5 ml) y se dejó en una atmósfera de nitrógeno. En un matraz de fondo redondo separado, (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il (2-cianoetil) diisopropilfosforamidita (Sigma-Aldrich, 0,845 g, 0,964 mmol) en acetonitrilo (5 ml) se concentró hasta secarse en un evaporador giratorio. El proceso de destilación azeotrópica se repitió con acetonitrilo adicional (5 ml) y luego se volvió a suspender en acetonitrilo (2,5 ml) y esta solución se agregó por goteo a la mezcla agitada de 22A a temperatura ambiente. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. A la reacción se agregó (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (0,190 g, 0,926 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. El solvente se retiró al vacío. El residuo se disolvió en una cantidad mínima de MeOH y se cargó en una columna Gold de alto rendimiento, C18 Redisep Rf de 50 g ISCO de fase inversa y se purificó en un sistema Teledyne ISCO usando un gradiente de 0-100 % (ACN/agua/acetato de amonio 95/5/0,5) en (agua/ACN/acetato de amonio 95/5/0,5) durante un gradiente de 15 min para obtener el Intermediario 22B (0,604 g, 0,465 mmol, 100 % de rendimiento), m.z (1300, M+H), como una espuma blanca, y luego concentración al vacío mediante destilación azeotrópica con 3x10 ml de acetonitrilo.

Preparación del Intermediario 22C:

22C

A una solución de Intermediario 22B (1,0 g, 0,770 mmol) y trietilsilano (0,615 ml, 3,85 mmol) en diclorometano (15 ml) se agregó TFA (0,178 ml, 2,309 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se agregó agua (5 ml), y luego se agregó solución acuosa saturada de NaHCO³ (~5 ml). La mezcla se transfirió a una ampolla de decantación y se extrajo con DCM (2 x 10 ml) y Me-THF (2 x 10 ml). Los extractos se combinaron, se secaron (MgSO⁴), se filtraron y se concentraron. El concentrado se suspendió en dietiléter (~20 ml) y se agitó durante 1h. El polvo fino que se había formado se recolectó mediante filtración al vacío y se lavó con una mezcla de hexanos y dietiléter (1/1). El material se dividió en hexanos y metanol. La capa de metanol se aisló y se concentró al vacío para obtener el Intermediario 22C (0,49 g, 0,649 mmol, 84 % de rendimiento), m/z (755, M+H), como un sólido amarillo pálido.

reparac n e n erme aro :

A una solución a 0 °C de Intermediario 22C (0,44 g, 0,583 mmol) en piridina (21,20 ml) se agregó una solución de difenilfosfonato (0,135 ml, 0,700 mmol) en piridina (2,120 ml) por goteo durante un período de 1 h. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Se agregó (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (0,180 g, 0,875 mmol) sólida y la reacción se agitó durante 3 h más a temperatura ambiente. La reacción se concentró al vacío. El residuo se disolvió en una cantidad mínima de MeOH y se cargó en una columna Gold de alto rendimiento, C18 Redisep Rf de 50 g ISCO de fase inversa y se purificó en un sistema Teledyne ISCO usando un gradiente de 0­ 100 % (ACN/agua/acetato de amonio 95/5/0,5) en (agua/ACN/acetato de amonio 95/5/0,5) durante un gradiente de 15 min para obtener el Intermediario 22D (0,081 g, 0,097 mmol, 16,68 % de rendimiento), m/z (833, M+H), como una mezcla de diastereómeros.

Ejemplos 22-1, 22-2, 22-3 y 22-4

Una mezcla de Intermediario 22D (0,081 g, 0,097 mmol) y amoníaco (7 N en MeOH) (6,95 ml, 48,6 mmol) se agitó a temperatura ambiente durante 1h y se calentó en un vial sellado a 50 °C durante 3 h. El solvente se retiró al vacío. El residuo se disolvió en una cantidad mínima de MeOH y se cargó en una columna Gold de alto rendimiento Redisep Rf C18 de 50 g ISCO que se había equilibrado con una fase móvil A: 5:95 acetonitrilo: agua con acetato de amonio 0,01 M; Fase móvil B: 95:5 acetonitrilo: agua con 0,01 M acetato de amonio y se purificó usando un sistema Teledyne ISCO con un gradiente: 0 % de B para 2 volúmenes de columna a 100 % de B durante 20 columnas para obtener una mezcla cruda de productos. Los diastereómeros individuales se aislaron mediante LC/MS preparativa en las siguientes condiciones: Columna: Agilent Bonus RP 21,2 x 100 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: acetonitrilo; gradiente: 0 % de mantenimiento de B 0-6 minutos. 0 %-25 % de B durante 16 minutos, luego un mantenimiento de 4 minutos a 100 % de B; flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se secaron mediante evaporación centrífuga. La LC/MS analítica se usó para determinar la pureza final. Condiciones de inyección: Columna: Agilent Bonus RP, 2,1 x 50 mm, partículas de 1,8 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: acetonitrilo. Temperatura: 50 °C; gradiente: 0 % de mantenimiento de B 1 min, luego 0 % de B a 100 % de B durante 4 min, luego un mantenimiento de 0,75 min a 100 % de B; flujo: 1 ml/min; detección: MS y UV (220 nm).

Ejemplo 22-1: El rendimiento del producto fue 3,5 mg, tiempo de retención: 2,0 min; masa observada: m/z (676,0, M+H)

Ejemplo 22-2: El rendimiento del producto fue 3,0 mg, tiempo de retención: 2,05 min; masa observada: m/z (676,0, M+H)

Ejemplo 22-3: El rendimiento del producto fue 3,5 mg, tiempo de retención: 2,14 min; masa observada: m/z (676,0, M+H)

Ejemplo 22-4: El rendimiento del producto fue 3,1 mg, tiempo de retención: 2,29 min; masa observada: m/z (676,0, M+H)

Ejemplo 23

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{8-oxo-4H,5H,8H- [1,2,3,4]tetrazolo[1,5-a]purm-5-M}-3,12-disulfaml-2,4,1l,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13.3.0.06,9]octadecan-3,12-diona

Diastereómero 1 (23)

Preparación del Intermediario 23A:

A una solución del Intermediario 21B (31,3 mg, 0,059 mmol) en DMF (0,60 ml) se agregó azida de sodio (4,63 mg, 0,071 mmol). La mezcla resultante se agitó a 70 °C durante 3 horas. Luego, se agregaron imidazol (12,1 mg, 178 |jmol) y fer-butildifenilclorosilano (22,9 jl, 89 jmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente. Luego de 16 horas, se agregaron imidazol (24,2 mg, 356 jm ol) y fer-butildifenilclorosilano (46 jl, 178 jm ol) adicionales. A las 23 horas, la reacción se inactivó con metanol (0,11 ml), luego se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Los volátiles se retiraron en un flujo de nitrógeno. El producto crudo se disolvió en una cantidad pequeña de CH²Ch, se adsorbió en un tapón de SiO², y se purificó mediante cromatografía flash (SO ², columna Gold RediSep Rf de 4 g, 0 % de MeoH/EtOAc a 10 % de MeOH/EtOAc, gradiente de 10 min, luego mantenimiento de 5 min, 10 % de MeOH/EtOAc a 100 % de MeOH/EtOAc, gradiente de 5 min, luego mantenimiento de 5 min, 18 ml/min) para obtener 23A (33,3 mg) contaminado con imidazol. ¹H RMN (500 MHz, METANOL-d⁴) ⁸ 8,08 (s, 1H), 7,65 - 7,57 (m, 4H), 7,45 - 7,29 (m, ⁶ H), 7,22 - 7,10 (m, 15H), 4,78 (td, J=9,3, 8,1 Hz, 1H), 3,78 - 3,69 (m, 2H), 3,43 (dd, J=9,6, 4,7 Hz, 1H), 3,16 (t, J=8,9 Hz, 1H), 2,99 - 2,91 (m, 1H), 2,55 -2,46 (m, 1H), 2,20 (q, J=10,0 Hz, 1H), 2,16 - 2,05 (m, 1H), 0,99 (s, 9H). LCMS: RT = 1,24 min. [M+H]+ = 772. Columna: Waters BEH C182,1 x 50 mm, partículas de 1,7 jm ; fase móvil A: agua con 0,05 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de ácido trifluoroacético; temperatura: 50 °C; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 98 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 254 nm.

Preparación del Intermediario 23B:

23B

A una solución de 23A parcialmente purificado (33,3 mg) y trietilsilano (29 jl, 178 |jmol) en CH²CI² (0,6 ml) se agregó ácido trifluoroacético (9 jl, 119 jmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno. Luego de 3 horas, se agregaron trietilsilano (57 jl, 356 jm ol) y ácido trifluoroacético (18 j l , 238 jm ol) adicionales. A las 5 horas, la reacción se diluyó con MeOH (^{0 , 6} ml) y se agitó durante 10 min. La mezcla luego se concentró al vacío y se azeotropó dos veces más con MeOH (2 x 1 ml). El residuo se disolvió en metanol (800 jl), luego se agregó por goteo metóxido de sodio (0,5 M en MeOH) (200 jl, 100 jm ol) mediante jeringa (para escindir el éster de TFA que se formó durante la desprotección). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min, luego se inactivó con ácido acético (12 jl, 200 jm ol) y se concentró al vacío. El producto crudo se disolvió en una cantidad pequeña de EtOAc (+MeOH), se adsorbió en un tapón de sílice, y se purificó mediante cromatografía flash (SiO², columna de 4 g, 0 % de MeOH/EtOAc a 100 % de MeOH/EtOAc, gradiente de 20 min, 18 ml/min) para obtener 23B (35,1 mg) contaminado con imidazol de la etapa anterior. ¹H RMN (400 MHz, METANOL-d⁴) 88,02 (s, 1H), 7,73 - 7,66 (m, 4H), 7,50 - 7,37 (m, 6H), 4,67 (q, J=8,6 Hz, 1H), 3,87 - 3,77 (m, 2H), 3,77 - 3,66 (m, 2H), 2,94 - 2,83 (m, 1H), 2,65 - 2,53 (m, 1H), 2,46 - 2,35 (m, 1H), 2,35 - 2,23 (m, 1H), 1,08 (s, 9H). LCMS: RT = 0,98 min. [M+H]+ = 530. Columna: Waters BEH C18 2,1 x 50 mm, partículas de 1,7 jm ; fase móvil A: agua con 0,05 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de ácido trifluoroacético; temperatura: 50 °C; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 98 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm.

Preparación del Intermediario 23C:

23C

A una solución que contenía 23B parcialmente purificado (35,1 mg) e Intermediario 9J (54,4 mg, 63,4 jmol) (azeotropado 3x con CH³CN y secado a alto vacío durante 30 min) en CH³CN (0,6 ml) se agregó por goteo DBU (10 jl, 63,4 jmol) mediante jeringa. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno. La reacción no procedió hasta que se agregaron exceso de DBU (40 jl, 254 jm ol) e Intermediario 9J (109 mg, 127 jmol). Después de que la formación del producto se observó mediante LCMS, la reacción se inactivó por medio de la adición de MeOH (2 ml). La mezcla luego se concentró al vacío. El producto crudo se disolvió en una cantidad pequeña de MeOH, se adsorbió en un tapón de Celite, y se purificó mediante MPLC de fase inversa (columna Gold RediSep Rf de 15,5 g C18, 5-95 % de acetonitrilo/agua que contenía 10 mM acetato de amonio, gradiente de 8,6 min, 30 ml/min) para obtener 23C (10 mg) contaminado con adenosin monotiofosfato. LCMS: RT = 1,06 min. [M+H]+ = 1219. Columna: Waters BEH C182,1 x 50mm, partículas de 1,7 jm ; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo: agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo: agua con 10 mM de acetato de amonio; temperatura: 50 °C; gradiente: 5 % de B a 95 % de B durante 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 95 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm.

Preparación del Intermediario 23D:

Una suspensión de 23C parcialmente purificado (10 mg) en trihidrofluoruro de trietilamina puro (0,50 ml, 3,07 mmol) se agitó a temperatura ambiente. Luego de 22 horas, la mezcla de reacción se diluyó con CH³CN (0,86 ml) y se inactivó con trietilamina (0,86 ml, 6,14 mmol) (2 equiv, con respecto a Et³N^3HF) e isopropoxitrimetilsilano (1,6 ml, 9,21 mmol) (3 equiv, con respecto a Et³N^3HF). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min, luego se concentró al vacío. El producto crudo se disolvió en una cantidad pequeña de 10 % de acetonitrilo/agua que contenía 10 mM de acetato de amonio, se adsorbió en un tapón de Celite, y se purificó mediante MPLC de fase inversa (columna Gold RediSep Rf de 15,5 g C18, 14 % de acetonitrilo/agua que contenía 10 mM de acetato de amonio, isocrático, 30 ml/min) para obtener 23D (5,6 mg) contaminado con adenosin monotiofosfato de la etapa anterior. LCMS: RT = 0,50 min.

[m H]+ = 743. Columna: Waters BEH C182,1 x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: agua con 0,05 % de ácido trifluoroacético; fase móvil B: acetonitrilo con 0,05 % de ácido trifluoroacético; temperatura: 50 °C; gradiente: 2 % de B a 98 % de B durante 1 min, luego un mantenimiento de 0,5 min a 98 % de B; flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm.

Preparación del Ejemplo 23:

Diastereómero 1 (23)

A una solución levemente turbia de 23D parcialmente purificado (2,4 mg) (azeotropado 3x con CH³CN) y DBU (7 pl, 0,048 mmol) en DMF (0,24 ml) se agregó por goteo una solución de Reactivo 3 (2,2 mg, 4,85 pmol) en DMF (80 pl) mediante jeringa durante 15 min. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente. Luego de 30 min una segunda porción de Reactivo 3 (2,2 mg, 4,85 pmol) en DMF (80 pl) se agregó por goteo mediante jeringa. A los 60 min la reacción se inactivó con metanol (0,40 ml) y ácido acético ^{( 6} pl). Luego, los volátiles se retiraron en un flujo de nitrógeno para obtener el producto crudo ciclizado como una mezcla de diaestereómeros 85:15. Este material se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS: RT = 13,7 min (isómero mayor), 14,2 min (isómero menor). [M+H]+ = 821. Columna: Waters XSelect CSH C183,0 x 150 mm, partículas de 3,5 pm; fase móvil A: 10 mM de TeAa en agua (pH 6,5); fase móvil B: 80:20 acetonitrilo/10 mM de TEAA en agua (pH 6,5); gradiente: 5 % de B a 50 % de B durante 15 min; temperatura de columna: 25 °C; flujo: 0,5 ml/min; detección: UV a 285 nm. Una suspensión de macrociclo crudo en amoníaco (7 N) en MeOH (1,0 ml, 7,0 mmol) se agitó a temperatura ambiente. Luego de 24 horas, la reacción se concentró al vacío. El producto crudo se purificó mediante HPLC de fase inversa (XSelect CSH C18 OBD, 5 micrones, 19 x 150 mm, solvente A: 100 mM de acetato de amonio (pH 6,5), solvente B: acetonitrilo puro, 15-24 % de B, 20 ml/min, gradiente de 25 min, se controló a 260 nm). El producto (isómero mayor, tiempo de retención = 10,7 min) se aisló y se liofilizó hasta secarse para obtener el Ejemplo 23 (1,6 mg) como un sólido blanco. LCMS: RT = 14,6 min.

[M+H]+ = 717. Columna: Waters XSelect CSH C¹⁸ 3,0 x 150 mm, partículas de 3,5 pm; fase móvil A: 20 mM de NH⁴OAc en agua (pH 6,5); fase móvil B: 20 mM de NH⁴OAc en acetonitrilo; gradiente: 0 % de B a 13 % de B durante 25 min; temperatura de columna: 55 °C; flujo: 0,5 ml/min; detección: UV a 260 nm.

EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD BIOLÓGICA

EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD BIOLÓGICA

Protocolo de ensayos indicadores de STING THP1

Las células THP1-Dual™ se derivaron de la línea celular de monocitos THP-1 humanos mediante la integración estable de dos constructos indicadores inducibles. Para este propósito, las células THP1-Dual™ permiten el estudio simultáneo de la vía de NF-kB, mediante el monitoreo de la actividad de SEAP, y la vía de IRF mediante la evaluación de la actividad de una luciferasa secretada (Lucia). Ambas proteínas indicadoras se miden fácilmente en el sobrenadante del cultivo de células cuando se usa QUANTI-Blue™, un reactivo de detección de SEAP, y QUANTI-Luc™, un reactivo de detección de luciferasa.

Las células THP1-Dual™ inducen la activación de NF-kB en respuesta a agonistas de STING. También desencadenan la vía de IRF cuando se estimula con agonistas de STING, tales como cGAMP. En este caso, las células THP-1-Dual se usaron para evaluar la función a nivel celular de aglutinantes de STING.

Se agregaron diluciones en serie de compuestos en DMSO a placas de 384 cavidades de bajo volumen a 100 nl/cavidad usando un dispensador acústico ECHO (Labcyte, modelo 550) para alcanzar la concentración inicial final de 100 pM en suspensión celular. Las células indicadoras de STING t HP-1 Dual™ (Invivogen, células Dual cat #THPD-nfis) se agregaron a las placas con compuestos de 15.000 células en 10 pl por cavidad en medio RPMI (Gibco, cat #11875) que contenía 10 % de plasma humano en una placa de cultivo tisular con fondo transparente y laterales negros de 384 cavidades de bajo volumen (Corning, cat #3542) para ensayo de SEAP y placa sólida blanca de bajo volumen (Corning, cat # 3826) para ensayo de luciferasa. Una columna de la placa se reservó para el tratamiento con cGAMP a 100 |jM para el cálculo de activación al 100 % y una columna para no hacer tratamiento (solo DMSO) para la activación inicial. Las placas se incubaron en una incubadora a 37 °C a 5 % de CO² durante 20 horas.

En el ensayo de SEAP, 5 j l de 2x QuantiBlue (Invivogen, cat # Rep-qb2) se agregaron a placas negras de 384 cavidades sembradas con células THP1 y se incubaron a 37 °C durante 2 horas. Las placas se leyeron en el Envision (Perkin Elmer) a 620 nm de longitud de onda (OD620). En el ensayo de luciferasa, 5 j l de Quantiluc (Invivogen, Repqlc2) se agregaron a placas blancas de 384 cavidades sembradas con células THP1 y se leyeron a los 5 minutos en el Envision (Perkin Elmer) usando un protocolo de luminiscencia (RLU). Para ambas líneas celulares, una activación al 100 % se determinó mediante el valor (RLU) de células THP-1 Dual STING estimuladas con 100 jM de cGAMP (Invivogen, cat # TLRL-NACGA23-5).

ENSAYOS DE FIJACIÓN HTRF DE STING

Un ensayo de fijación competitiva con base en FRET de resolución temporal se usó para evaluar la fijación del artículo de prueba a STING WT y STING AQ. El dominio citoplásmico STING etiquetado con His (Wt o AQ), a una concentración de 20 nM, se incubó con 2,5 nM de anticuerpo anti-His etiquetado con Tb, el compuesto de prueba y una sonda análoga de cGAMP etiquetada con fluoresceína (BioLog cat. N.° C195) a una concentración de 200 nM (STING WT) o 40 nM (STING AQ) en PBS que contenía 0,005 % de Tween-20 y 0,1 % de BSA durante 1 hora. La fluorescencia a 495 nm y 520 nm se midió usando un lector de microplacas EnVision para cuantificar FRET entre la sonda anti-His etiquetada con Tb y la sonda etiquetada con fluoresceína. El fondo se definió como la señal obtenida en ausencia de la proteína STING, y las relaciones de FRET con sustracción del fondo se normalizaron a la máxima señal obtenida en ausencia del compuesto de prueba. Estos valores se convirtieron en un porcentaje de inhibición. El porcentaje de inhibición se determinó para los compuestos de prueba a ¹¹ concentraciones. El IC⁵⁰ , que se define como la concentración de los compuestos de prueba competitivos necesaria para reducir 50 % la fijación específica de la sonda, se calculó usando la ecuación logística de 4 parámetros para ajustar los datos.

STING WT: His-TVMV-S-hSTING(155-341)-H232R

MGSSHHHHHHSSGETVRFQGHMSVAHGLAWSYYIGYLRLILPELQARIRTYNQHYNNLLRGAVSQRLYILLPLDC

GVPDNLSMADPNIRFLDKLPQQTGDRAGIKDRVYSNSIYELLENGQRAGTCVLEYATPLQTLFAMSQYSQAGFSR

EDRLEQAKLFCRTLEDILADAPESQNNCRLIAYQEPADDSSFSLSQEVLRHLRQEEKEEV (SEQ ID NO: 1)

STING AQ: His-TVMV-S-hSTING(155-341)-G230A-R293Q

MGSSHHHHHHSSGETVRFQGHMSVAHGLAWSYYIGYLRLILPELQARIRTYNQHYNNLLRGAVSQRLYILLPLDC

GVPDNLSMADPNIRFLDKLPQQTADRAGIKDRVYSNSIYELLENGQRAGTCVLEYATPLQTLFAMSQYSQAGFSR

EDRLEQAKLFCQTLEDILADAPESQNNCRLIAYQEPADDSSFSLSQEVLRHLRQEEKEEV (SEQ ID NO: 2)

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto de la fórmula (I)

   

   en la que

   X es independientemente O o S;

   X1, X2, X³ y X⁴ son cada uno independientemente O o NH;

   R¹ y R² son independientemente

   

   con la condición de que uno de R¹ y R² debe ser

   

   Z¹ es N o CRa;

   Z² es NRb;

   Ra es H, halógeno, alquilo C1-6 sustituido con 0-6 R⁵, cicloalquilo C3-6 sustituido con 0-6 R⁵ , CN, NO² , OH, OR^a1, SR^a1, -C(O)NR^a1R^a1, -COOR^a1, -OC(O)R^a1, -OC(O)NR^a1R^a1, -NR^a1R^a1, -NR^a1 C(O)R^a1, -NR^a1COOR^a1, -NR^a1C(O)NR^a1R^a1, -NR^a1S(O)²R^a1, -NR^a1S(O)²NR^a1R^a1, -S(O)R^a1, - S(O)NR^a1R^a1, -S(O)²R^a1 o S(O)²NR^a1R^a1; Rb es H, alquilo C1-6 sustituido con 0-6 R⁵ , cicloalquilo C3-6 sustituido con 0-6 R⁵, -C(O)R^a1, -C(O)NR^a1R^a1, -S(O)²R^a1 o S(O)²NR^a1R^a1;

   R^a1 es H, alquilo C1-3 o cicloalquilo C3-6;

   R³ es H, CH³ , halógeno, -NR^a1R^a1 o OR^a1;

   R3a es H, CH³ , halógeno, -NR^a1R^a1 o OR^a1; o

   R³ y R3a pueden tomarse juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

   R³ y R3a pueden tomarse juntos para formar un sustituyente C=CH² ;

   R⁵ es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, OR^a1, SR^a1, -C(O)NR^a1R^a1, -COOR^a1, -OC(O)R^a1, -OC(O)NR^a1R^a1, -NR^a1R^a1, -NR^a1 C(O)R^a1, -NR^a1COOR^a1, -NR^a1C(O)NR^a1R^a1, -NR^a1S(O)²R^a1, -NR^a1S(O)²NR^a1R^a1, -S(O)R^a1, -S(O)NR^a1R^a1, - S(O)²R^a1 o S(O)²NR^a1R^a1;

   R5a es H o alquilo C1-3;

   R⁶ es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, OR^a1, SR^a1, -C(O)NR^a1R^a1, -COOR^a1, -OC(O)R^a1, -OC(O)NR^a1R^a1, -NR^a1R^a1, -NR^a1 C(O)R^a1, -NR^a1COOR^a1, -NR^a1C(O)NR^a1R^a1, -NR^a1S(O)²R^a1, -NR^a1S(O)²NR^a1R^a1, -S(O)R^a1, -S(O)NR^a1R^a1, - S(O)²R^a1 o S(O)²NR^a1R^a1;

   R⁸ es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, OR^a1, SR^a1, -C(O)NR^a1R^a1, -COOR^a1, -OC(O)R^a1, -OC(O)NR^a1R^a1, -NR^a1R^a1, -NR^a1 C(O)R^a1, -NR^a1COOR^a1, -NR^a1C(O)NR^a1R^a1, -NR^a1S(O)²R^a1, -NR^a1S(O)²NR^a1R^a1, -S(O)R^a1, -S(O)NR^a1R^a1, - S(O)²R^a1 o S(O)²NR^a1R^a1;

   R⁹ es H, halógeno o metilo;

   Y es CRa o N;

   m es 0, 1, 2 o 3;

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en donde

   X es S;

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en donde

   X es O;

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 de la fórmula

   

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   5. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 de la fórmula

   

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   ⁶. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 5 en donde X es S;

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   7. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 5 en donde X es O;

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   ⁸. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 de la fórmula

   

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   9. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 de la fórmula

   

   

   Ċ

   

   o un tautómero o un estereoisómero o una sal de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   10. Un compuesto de la fórmula (II)

   

   en la que

   X es independientemente O o S;

   X1, X2, X³ y X⁴ son cada uno independientemente O o NH;

   R¹ y R² son cada uno independientemente

   

   con la condición de que uno de R¹ y R² debe ser

   

   Z¹ es N o CRa;

   Z² es NRb;

   Ra es H, halógeno, alquilo C1-6 sustituido con 0-6 R⁵, cicloalquilo C3-6 sustituido con 0-6 R⁵ , CN, NO² , OH, OR^a1, SR^a1, -C(O)NR^a1R^a1, -COOR^a1, -OC(O)R^a1, -OC(O)NR^a1R^a1, -NR^a1R^a1, -NR^a1 C(O)R^a1, -NR^a1COOR^a1, -NR^a1C(O)NR^a1R^a1, -NR^a1S(O)²R^a1, -NR^a1S(O)²NR^a1R^a1, -S(O)R^a1, - S(O)NR^a1R^a1, -S(O)²R^a1 o S(O)²NR^a1R^a1; Rb es H, alquilo C1-6 sustituido con 0-6 R⁵ , cicloalquilo C3-6 sustituido con 0-6 R⁵, -C(O)R^a1, -C(O)NR^a1R^a1, -S(O)²R^a1 o S(O)²NR^a1R^a1;

   R^a1 es H, alquilo C1-3 o cicloalquilo C3-6;

   R⁴ es H, CH³ , halógeno, -NR^a1R^a1 o OR^a1;

   R4a es H, CH³ , halógeno, -NR^a1R^a1 o OR^a1; o

   R⁴ y R4a pueden tomarse juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

   R⁴ y R4a pueden tomarse juntos para formar un sustituyente C=CH² ;

   R⁵ es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, OR^a1, SR^a1, -C(O)NR^a1R^a1, -COOR^a1, -OC(O)R^a1, -OC(O)NR^a1R^a1, -NR^a1R^a1, -NR^a1 C(O)R^a1, -NR^a1COOR^a1, -NR^a1C(O)NR^a1R^a1, -NR^a1S(O)²R^a1, -NR^a1S(O)²NR^a1R^a1, -S(O)R^a1, -S(O)NR^a1R^a1, - S(O)²R^a1 o S(O)²NR^a1R^a1;

   R5a es H o alquilo C1-3;

   R⁶ es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, OR^a1, SR^a1, -C(O)NR^a1R^a1, -COOR^a1, -OC(O)R^a1, -OC(O)NR^a1R^a1, -NR^a1R^a1, -NR^a1 C(O)R^a1, -NR^a1COOR^a1, -NR^a1C(O)NR^a1R^a1, -NR^a1S(O)²R^a1, -NR^a1S(O)²NR^a1R^a1, -S(O)R^a1, -S(O)NR^a1R^a1, - S(O)²R^a1 o S(O)²NR^a1R^a1;

   R⁸ es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, OR^a1, SR^a1, -C(O)NR^a1R^a1, -COOR^a1, -OC(O)R^a1, -OC(O)NR^a1R^a1, -NR^a1R^a1, -NR^a1 C(O)R^a1, -NR^a1COOR^a1, -NR^a1C(O)NR^a1R^a1, -NR^a1S(O)²R^a1, -NR^a1S(O)²NR^a1R^a1, -S(O)R^a1, -S(O)NR^a1R^a1, - S(O)²R^a1 o S(O)²NR^a1R^a1;

   R⁹ es H, halógeno o metilo;

   Y es CRa o N;

   m es 0, 1, 2 o 3;

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   11. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 10 en donde

   X es S;

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   12. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 10 en donde

   X es O;

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   13. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 10 de la fórmula

   

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   14. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 10

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   15. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 14

   en donde

   X es S;

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   16. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 14

   en donde

   X es O;

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   17. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 10 de la fórmula

   

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   18. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 10 de la fórmula

   

   

   o un tautómero o un estereoisómero o una sal de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   19. Un compuesto de la fórmula (III)

   

   en la que

   X es independientemente O o S;

   R¹ y R² son cada uno independientemente

   

   con la condición de que uno de R¹ y R² debe ser

   

   Zi es N o CRa;

   Z² es NRb;

   Ra es H, halógeno, alquilo C1-6 sustituido con 0-6 R5, cicloalquilo C3-6 sustituido con 0-6 R5, CN, NO² , OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)² Ra1, -NRa1S(O)² NRa1Ra1, -S(O)Ra1, - S(O)NRa1Ra1, -S(O)² Ra1 o S(O)² NRa1Ra1; Rb es H, alquilo C1-6 sustituido con 0-6 R5, cicloalquilo C3-6 sustituido con 0-6 R5, -C(O)Ra1, -C(O)NRa1Ra1, -S(O)² Ra1 o S(O)² NRa1Ra1;

   Ra1 es H, alquilo C1-3 o cicloalquilo C3-6;

   R5 es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, - S(O)² Ra1 o S(O)² NRa1Ra1;

   R5a es H o alquilo C1-3;

   R6 es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, - S(O)² Ra1 o S(O)² NRa1Ra1;

   R8 es H, halógeno, alquilo C1-3, CN, NO² , OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, - S(O)² Ra1 o S(O)² NRa1Ra1;

   R9 es H, halógeno o metilo;

   Y es CRa o N;

   m es 0, 1,2 o 3;

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   20. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 19 de la fórmula

   

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   21. Un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1, 10 o 19 de la fórmula

   

   continuación

   

   continuación

   

   Ċ

   

   

   l de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   

   continuación

   

   continuación

   

   o un tautómero, un estereoisómero o una sal de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéuticos.

   23. El compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1, 10 o 19 que es

   (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{9-hidroxi-3H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-3,12-diona (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-hidroxi-17-{9-oxo-3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3.12- disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.2.1.069]octadecan-3,12-diona, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-3,12diona, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-3,18-dihidroxi-17-{9-oxo-3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-N}-12-sulfanN-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.2.1.069]octadecan-3,12-diona, (1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-hidroxi-17-{9-oxo-3H,5H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3.12- disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-3,12-diona, (1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{9-oxo-3H,4H,9H-imidazo[1,2-a]purin-3-il}-3.12- disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.2.1.069]octadecan-3,12-diona, (1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.2.1.069]octadecan-3,12-diona, (1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.2.1.069]octadecan-3,12-diona,

   4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dioxo-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-8-il]piridin-2-carboxamida,

   4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18S)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dioxo-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-8-il]piridin-2-carboxamida,

   4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-dioxo-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-8-il]piridin-2-carboxamida,

   4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-12-hidroxi-3,12-dioxo-3-sulfanil-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-8-il]pindin-2-carboxaiTiida,

   4-[(1S,7S,8R,10S,16R,17R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-4,13-dioxo-4,13-disulfanil-3,5,12,14-tetraoxa-4A5,13A5-difosfatriciclo[14.2.0.0710]octadecan-8-il]piridin-2-carboxamida,

   (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-3,12-diona, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-3,12-diona, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-cloro-9H-purin-9-il)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-disulfanil-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-3,12-diona,

   4-[(1R,6S,8R,9S,15R,17R,18R)-18-fluoro-17-{3H-imidazo[2,1-f]purin-3-il}-3,12-dioxo-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.06,9]octadecan-8-il]piridin-2-carboxamida,

   4-[(1R,6S,8R,9R,15R,17S,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-hidroxi-3,12-dioxo-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.2.1.06,9]octadecan-17-il]piridin-2-carboxamida, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{5-oxo-5H,8H,9H- [1,2,4]triazolo[4,3-a]purin-8-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-3,12-diona, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-(6-oxo-6,9-dihidro-1H-purin-9-il)-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-3,12-diona, (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-8-{8-oxo-4H,5H,8H- [1,2,3,4]tetrazolo[1,5-a]purin-5-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatridclo[13.3.0.069]octadecan-3,12-diona

   o una sal, un tautómero o un estereoisómero de aquel aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   24. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1, 10 o 19 o una sal farmacéuticamente aceptable de aquel y uno o más vehículos, diluyentes o excipientes aceptables desde el punto de vista farmacéutico.

   25. Un producto farmacéutico combinado que comprende un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1, 10 o 19 o una sal de aquel aceptable desde el punto de vista farmacéutico, junto con uno o más agentes terapéuticamente activos.

   26. Un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1, 10 o 19 o una sal de aquel aceptable desde el punto de vista farmacéutico para uso en terapia.

   27. Un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1, 10 o 19 o una sal de aquel aceptable desde el punto de vista farmacéutico para uso en el tratamiento de enfermedades o afecciones que pueden aliviarse mediante la inducción de una respuesta inmune a través de la vía STING, en donde la enfermedad o la afección son cáncer.

   28. El compuesto o la sal de aquel aceptable desde el punto de vista farmacéutico, para uso de acuerdo con la reivindicación 27 en donde el cáncer es cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer colorrectal, melanoma, carcinoma de células renales, cáncer de cabeza y cuello, linfoma de Hodgkin, cáncer de vejiga , carcinoma esofágico, carcinoma gástrico, carcinoma de ovario, carcinoma cervical, carcinoma pancreático, carcinoma de próstata, cáncer de mama, carcinoma urinario, tumores cerebrales tales como glioblastoma, linfoma no Hodgkin, leucemia linfática aguda (ALL), leucemia linfática crónica (CLL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia mieloide crónica (CML), carcinoma hepatocelular, mieloma múltiple, tumores del estroma gastrointestinal, mesotelioma, y otros tumores sólidos u otros cánceres hematológicos.

   29. Un compuesto, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1, 10 o 19 o una sal de aquel aceptable desde el punto de vista farmacéutico, para usar en el tratamiento del cáncer en un sujeto que lo necesite, en combinación con la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más agentes inmunooncológicos.

   30. El compuesto o sal de aquel aceptable desde el punto de vista farmacéutico, para uso de acuerdo con la reivindicación 29 en donde el agente inmunooncológico es ipilimumab o un antagonista de PD-L1.

   31. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1, 10 o 19, o una sal de aquel aceptable desde el punto de vista farmacéutico y un agente anticancerígeno que es un anticuerpo o una porción del mismo que se une al antígeno que se une específicamente a un receptor de Muerte Programada-1 (PD-1) e inhibe la actividad de PD-1, para el tratamiento de un sujeto aquejado de cáncer.

   32. El compuesto o sal de aquel aceptable desde el punto de vista farmacéutico y agente anticancerígeno, para uso de acuerdo con la reivindicación 31, en donde el anticuerpo anti-PD-1 es nivolumab o pembrolizumab.