RS63400B1 - Lipozomska formulacija za upotrebu u lečenju kancera - Google Patents

Description

Opis

STANJE TEHNIKE PRONALASKA

[0001] Pronalazak se odnosi na farmaceutsku lipozomsku kompoziciju koja sadrži 2-{[5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno [2,3-d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil) propansku kiselinu, ovde označenu kao „Jedinjenje A”, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so, negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator i stabilizator protiv želifikacije, pri čemu je stabilizator protiv želifikacije polimer izabran od PEG300 i PEG400, ili je elektrolit koji je natrijum hlorid. Pronalazak se takođe odnosi na kompoziciju organskog koncentrata koja sadrži Jedinjenje A, negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator i stabilizator protiv želifikacije, pri čemu je stabilizator protiv želifikacije polimer izabran od PEG300 i PEG400, ili je elektrolit koji je natrijum hlorid, kao i farmaceutsku kompoziciju za parenteralno davanje koja sadrži lipozome i Jedinjenje A, negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator i stabilizator protiv želifikacije, pri čemu je stabilizator protiv želifikacije polimer izabran od PEG300 i PEG400, ili je elektrolit koji je natrijum hlorid. Štaviše, pronalazak se odnosi na upotrebu takvih kompozicija za lečenje kancera. „Jedinjenje A”, kako se ovde upotrebljava, uključuje sve njegove enantiomere, dijastereoizomere i atropizomere, ili njihove smeše, i takođe opciono uključuje njihove farmaceutski prihvatljive soli.

[0002] Struktura Jedinjenja A je

2-{[5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil)propanska kiselina.

[0003] U posebnom primeru izvođenja, Jedinjenje A je:

(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil)propanska kiselina. U daljem primeru izvođenja, Jedinjenje A upotrebljeno u kompoziciji koja je ovde opisana je slobodan molekul (ne njegova so).

[0004] Priprema Jedinjenja A, njegova upotreba kao Mcl-1 inhibitora za lečenje kancera i njegove farmaceutske formulacije, opisani su u WO 2015/097123. Preparat je specifično opisan u Primeru 30 iz WO 2015/097123.

[0005] Jedinjenje A je optički aktivno i sadrži jedan hiralni centar i hiralnu osu. Ograničene je rastvorljivosti u vodi duž svih pH vrednosti, uključujući fiziološki relevantne pH. Da bi se omogućilo bezbedno i efektivno davanje Jedinjenja A, kao i da bi se izazvali potrebni terapijski efekti, neophosno je da Jedinjenje A bude solubilizovano.

[0006] Postoje različiti načini da se solubilizuju slabo rastvorljiva jedinjenja za parenteralno davanje. Uobičajeni pristupi su optimizacija pH ili upotreba ko-rastvarača (npr. PEG300, PEG400, propilen glikola ili etanola). Ukoliko ovi pristupi nisu izvodljivi iz bilo kog razloga, može se razmotriti upotreba surfaktanata (npr. Tween<®>80 ili Cremophor EL<®>). Ipak, ove vrste surfaktanata se često povezuju sa neželjenim efektima. Ustanovljeno je da su ciklodekstrini bezbedni agensi za solubilizaciju, ali i da su sa ograničenjima, pošto nisu efektivni solubilizatori za sva jedinjenja. Štaviše, jedinjenja sa visokom rastvorljivošću u prirodnim uljima (npr. Propofol) mogu biti solubilizovana u parenteralnim emulzijama masti.

[0007] Druga mogućnost za solubilizaciju slabo rastvorljivih jedinjenja je upotreba fosfolipida (van Hoogevest P., Xiangli L. i Alfred F. „Drug delivery strategies for poorly water-soluble drugs: the industrial perspective” Expert Opinion on Drug Delivery 2011, 8(11), 1481-1500). Prema tome, fosfolipidi predstavljaju jedno od dodatnih sredstava za solubilizaciju slabo rastvorljivog jedinjenja pored uobičajenih pristupa. Solubilizacija određenog slabo rastvorljivog jedinjenja u fosfolipidima se, međutim, ne može tačno predvideti.

[0008] Cilj predmetnog pronalaska je da se obezbedi kompozicija koja može biti konvencionalno upotrebljena za solubilizaciju i parenteralnu isporuku Jedinjenja A. Preciznije, postoji potreba da se obezbedi farmaceutska kompozicija za Jedinjenje A koja je bezbedna i efikasna. Dalji ciljevi su da se obezbedi kompozicija koja je stabilna u relevantnim uslovima i kontejnerima, kao i koja omogućava davanje odgovarajuće doze Jedinjenja A u razumnom vremenskom okviru. Dalji cilj pronalaska je da se kompozicija može proizvoditi pouzdanim i robusnim postupkom.

KRATAK PRIKAZ

[0009] Predmetni pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži Jedinjenja A, negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator i stabilizator protiv želifikacije, pri čemu je stabilizator protiv želifikacije polimer izabran od PEG300 i PEG400, ili je elektrolit koji je natrijum hlorid, pri čemu je kompozicija pogodna za parenteralno davanje pacijentima. Preciznije, takvo davanje je intravenskim injeciranjem ili infuzijom. Pronalazak dalje obezbeđuje dve odvojene kompozicije koje mogu biti pomešane zajedno neposredno pre davanja pacijentu, da bi se obezbedila kompozicija pogodna za davanje. Jedna kompozicija za mešanje je kompozicija organskog koncentrata koja sadrži Jedinjenje A, negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator i stabilizator protiv želifikacije, pri čemu je stabilizator protiv želifikacije polimer izabran od PEG300 i PEG400, ili je elektrolit koji je natrijum hlorid, dok je druga kompozicija za mešanje lipozomski nosač. Kada se dve odvojene kompozicije pomešaju zajedno, Jedinjenje A ispunjava lipozome unutar lipozomskog nosača, omogućavajući solubilizaciju Jedinjenja A, a rezultat je farmaceutska lipozomska kompozicija pogodna za upotrebu u klinici.

[0010] Pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži Jedinjenje A, negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator i stabilizator protiv želifikacije, pri čemu je stabilizator protiv želifikacije polimer izabran od PEG300 i PEG400, ili je elektrolit koji je natrijum hlorid, koji održava hemijsku stabilnost Jedinjenje A. Na primer, na ovaj način se ograničava obrazovanje neželjenog atropizomera i/ili proizvoda oksidacije i/ili proizvoda razgradnje.

[0011] Pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži Jedinjenje A, negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator i stabilizator protiv želifikacije, pri čemu je stabilizator protiv želifikacije polimer izabran od PEG300 i PEG400, ili je elektrolit koji je natrijum hlorid, koji ima optimalnu fizičku stabilnost, čime se, na primer, izbegava formulisanje gela i/ili se izbegava taloženje komponenti. Neočekivano, utvrđeno je da su kompozicije koje sadrže Jedinjenje A sklone želifikaciji, odnosno da kompozicija obrazuje gel. Takva želifikacija može, ali ne mora biti reverzibilna. Želifikacija komplikuje ili sprečava rad sa kompozicijom koja sadrži Jedinjenje A, a time i njenu primenu u predložene svrhe, zbog čega je istu potrebno izbegavati.

[0012] Potrebno je i da kompozicija (organski koncentrat) koja sadrži Jedinjenje A, negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator i stabilizator protiv želifikacije, pri čemu je stabilizator protiv želifikacije polimer izabran od PEG300 i PEG400, ili je elektrolit koji je natrijum hlorid, bude u stanju da efikasno i optimalno ispunjava lipozome u lipozomskom nosaču Jedinjenjem A, jednostavnim mešanjem 2 kompozicije zajedno, neposredno pre davanja pacijentu.

[0013] Pronalazak obezbeđuje farmaceutsku lipozomsku kompoziciju koja sadrži Jedinjenje A, negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator i stabilizator protiv želifikacije, pri čemu je stabilizator protiv želifikacije polimer izabran od PEG300 i PEG400, ili je elektrolit koji je natrijum hlorid koji omogućava brzo oslobađanje Jedinjenja A iz lipozoma nakon intravenskog davanja.

[0014] U celini, pronalazak koji je ovde opisan omogućava efikasno davanje Jedinjenja A pacijentima, uprkos izazovnim hemijskim karakteristikama Jedinjenja A, kao i izazovnim fizičkim karakteristikama formulacija koje sadrže Jedinjenje A.

KRATAK OPIS SLIKA NACRTA

[0015]

Slika 1 prikazuje efikasnost i toleranciju za lipozomski formulisano Jedinjenje A, nakon davanja 10 mg/kg QW ženkama golih pacova sa MV4;11 AML ksenotransplantatima.

Slika 2 prikazuje efikasnost i toleranciju za lipozomski formulisano Jedinjenje A, nakon davanja 30 mg/kg QW ženkama golih pacova sa MV4;11 AML ksenotransplantatima.

Slika 3 pokazuje šematski prikaz principa testa oslobađanja zasnovanog na MLV koji omogućava praćenje oslobađanja Jedinjenja A iz lipozoma u MLV.

Slika 4 prikazuje profil oslobađanja Jedinjenja A iz SUV do 100% ePL (fosfolipida iz jajeta) pri različitim različitim odnosima SUV:MLV (v/v).

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0016] Lipozom je sferna vezikula sa najmanje jednim lipidnim dvoslojem. Lipozom može biti upotrebljen kao nosač za davanje hranljivih materija i farmaceutskih lekova. Lipozomi se najčešće sastoje od fosfolipida, posebno fosfatidilholina, ali mogu uključivati i druge lipide, kao što je fosfatidiletanolamin iz jajeta, sve dok su oni kompatibilni sa strukturom lipidnog dvosloja.

[0017] „lipozomski nosač”, kako se ovde upotrebljava, označava tečnost koja sadrži lipozome, pri čemu navedeni lipozomi sadrže fosfolipide. Navedeni lipozomski nosač je pogodan za solubilizaciju Jedinjenja A u vodenoj sredini nakon mešanja sa Jedinjenjem A, posebno kada je Jedinjenje A obezbeđeno kao organski koncentrat koji je ovde opisan. Navedeni lipozomski nosač je pogodan za ispunjavanje Jedinjenjem A, pre davanja pacijentu.

[0018] Veličina lipozoma koji je kao što je ovde opisano, odnosi se na veličinu koja je određena fotonskom korelacionom spektroskopijom (PCS). Prosečna veličina izražena kao prosečni prečnik Z i indeks polidisperznosti određuju se upotrebom fotonske korelacione spektroskopije prema ISO 13321.

[0019] Preciznije, farmaceutska kompozicija koja je ovde opisana je farmaceutska lipozomska kompozicija. „Farmaceutska lipozomska kompozicija” označava kompoziciju koja sadrži lipozome i pogodna je za farmaceutsko davanje.

[0020] „Želifikacija” kako se ovde upotrebljava, označava obrazovanje gela. Nakon obrazovanja gela, kompozicija postaje viskoznija, manje protočnosti. Navedeno otežava ili čini nemogućim rad sa kompozicijom u predviđene svrhe.

[0021] Fosfolipid koji se ovde upotrebljava u lipozomskom nosaču obuhvata najmanje jedan fosfolipid formule

gde

● R1predstavlja C10-C24acil;

● R2predstavlja C10-C24acil, ili alternativno R2predstavlja vodonik ili C10-C20acil;

● R3predstavlja vodonik, 2-trimetilamino-1-etil, 2-amino-1-etil, C1-C4alkil, C1-Calkile supstituisane sa karboksilnom, C2-C5alkil supstituisan sa karboksi i hidroksilnom, C2-Csalkil supstituisan sa karboksi i amino grupom, inozitol grupu ili gliceril grupu;

ili so takvog jedinjenja.

[0022] Termin acil, kako se ovde upotrebljava, predstavlja sledeću grupu:

gde je<∗>tačka vezivanja R1ili R2za ostatak molekula, a na primer, R je nerazgranati alkilni lanac, koji može biti zasićen ili delimično nezasićen.

[0023] Fosfolipid može biti neutralan ili može biti naelektrisan. Može takođe biti dvolančani ili jednolančani amfipat. Primeri neutralnih fosfolipida sa dvostrukim lancima su fosfatidilholin (PC), fosfatidiletanolamin (PE) i sfingomijelin. Primeri naelektrisanih fosfolipida su fosfatidna kiselina (PA), fosfatidil inozitol (PI) i fosfatidilserin (PS) i fosfatidilglicerol (PG). Ugljovodonični lanac može biti bilo nezasićen ili zasićen. U jednom primeru izvođenja, on sadrži od 14 do 18 atoma ugljenika.

[0024] Za parenteralne formulacije, fosfolipid može biti dvostrukog lanca i može sadržavati frakciju jednolančanog amfipata koja je manja od 20%. Za parenteralne formulacije, fosfolipid može biti fosfatidilholin (PC) i može sadržavati frakciju naelektrisanog fosfolipida koja je manja od 40%.

[0025] Jednolančani lipid je monoacilni derivat neutralnog ili naelektrisanog fosfolipida, ali može biti i monoacilni derivat(i) glikolipida i sfingolipida. Za parenteralnu upotrebu, međutim, monoacilni derivat nije poželjan. Deacilacija može biti izvršena enzimskom hidrolizom sa fosfolipazom A2 ili hemijskim putem. Ugljovodonični lanac može biti bilo nezasićen ili zasićen i može sadržavati konkretno od 14 do 18, ili 14 do 24, atoma ugljenika. Lipidi mogu biti izvedeni iz prirodnih biljnih, ili životinjskih ili mikrobioloških izvora, sintetisani ili delimično sintetisani, uključujući monoacilne fosfolipide izvedene iz polietilenglikola (PEG), npr. pegilovani monoacilni fosfatidil etanolamin.

[0026] U poželjnom primeru izvođenja, R2nije vodonik.

[0027] Preciznije, fosfolipid upotrebljen u lipozomskom nosaču koji je ovde opisan, izabran je od lecitina iz jajeta, sojinog lecitina ili sintetičkih fosfolipida. Primeri sintetičkih fosfolipida za upotrebu koja je ovde navedena su POPC (palmitoil oleoil fosfatidilholin), DOPC (1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoholin), DMPC (1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoholin) i DPPC (1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoholin), posebno sintetički fosfolipidi POPC (palmitoil oleoil fosfatidilholin), DOPC (1,2-dioleoil-snglicero-3-fosfoholin) i DMPC (1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoholin), poželjno POPC. Još preciznije, fosfolipid upotrebljen u lipozomskom nosaču je izabran od lecitina iz jajeta ili sojinog lecitina koji sadrži najmanje 75% fosfatidilholina ili najmanje 70% fosfatidilholina. U drugom primeru izvođenja, može biti upotrebljen lecitin iz jajeta sa 71,5 %m/m (± 7,5 %m/m) PC (fosfatidilholina) iz jajeta i 15 %m/m (± 3 % m/m) PE (fosfatidiletanolamina) iz jajeta. U posebnom primeru izvođenja, navedeni fosfolipid je izabran od Lipoida E 80 S i Lipoida E 80. U poželjnom primeru izvođenja, navedeni fosfolipid je Lipoid E 80 S. Kada se upotrebljava Lipoid E 80, u formulaciju može opciono biti uključen natrijum oleat, kao stabilizator koloidne stabilnosti.

[0028] U poželjnim primerima izvođenja, fosfolipidi su izabrani tako da pospešuju brže oslobađanje Jedinjenja A u krvotok.

[0029] „organski koncentrat”, kako se ovde upotrebljava, označava kompoziciju koja je rastvor koji sadrži organske rastvarače koji se mešaju sa vodom i koja sadrže Jedinjenje A, negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator i stabilizator protiv želifikacije, pri čemu je stabilizator protiv želifikacije polimer izabran od PEG300 i PEG400, ili je elektrolit koji je natrijum hlorid, koji je pogodan za mešanje sa lipozomskim nosačem da bi se omogućilo ispunjavanje lipozoma. Preciznije, navedeni organski koncentrat je pogodan za mešanje sa i za ispunjavanje lipozomskog nosača, kao što je ovde opisano. Dobijena smeša je pogodna za davanje pacijentu.

[0030] „Ispunjavanje” označava ugrađivanje ili prenošenje Jedinjenja A u lipozome iz organskog koncentrata.

[0031] „negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator” označava fosfolipid koji sadrži najmanje neke negativno naelektrisane lipide ili polarni lipid. Preciznije, negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator je izabran od soli natrijuma ili aluminijuma DMPG (1,2-dimiristoil-snglicero-3-fosfo-rac-glicerola, ili dimiristoil fosfatidilglicerola), soli natrijuma POPG (1-palmitoil-2-oleoilsn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma DOPS (1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoserina), soli natrijuma DOPG (1,2-dioleoil-sn-glicero-3 [fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma ili aluminijuma DPPG (1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma ili aluminijuma DSPG (1,2-distearoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma fosfatidne kiseline (PA) iz soje, soli natrijuma fosfatidne kiseline (PA) iz jajeta, soli natrijuma fosfatidilserina (PS) iz soje, soli natrijuma fosfatidilglicerola (PG) iz jajeta, soli natrijuma fosfatidilglicerola (PG) iz soje, soli natrijuma fosfatidil inozitola (PI), Lipoida S 75, Lipoida E 80 S i natrijum oleata. Preciznije, negativno naelektrisan ili polarni stabilizator fosfolipida je 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfo-rac-glicerol, so natrijuma ili aluminijuma, ili Lipoid E 80 S, poželjno 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfo-rac-glicerol, kao so natrijuma. Navedeni „negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator” olakšava ispunjavanje lipozoma Jedinjenjem A.

[0032] „Negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator” može takođe biti lecitin iz jajeta ili sojin lecitin.

[0033] „Agens za podešavanje toničnosti” označava farmaceutski prihvatljivo jedinjenje koje može biti dodato u formulaciju da bi se ista učinila izotoničnom sa ljudskom plazmom. Agensi za podešavanje toničnosti obuhvataju na primer dekstrozu, glukozu, manitol, saharozu, laktozu, trehalozu, glicerin i NaCl, poželjno saharozu ili glicerin, a još poželjnije saharozu. Toničnost je „efektivna osmolalnost” i jednaka je zbiru koncentracija rastvorenih materija koje imaju kapacitet da ispolje osmotsku silu preko membrane. Parenteralne formulacije bi trebale da budu izotonične sa krvnom plazmom. Agensi za podešavanje toničnosti su dobro poznati stručnjaku.

[0034] Odgovarajuće rastvarače može izabrati iskusan stručnjak za formulisanje. U organskom koncentratu koji je ovde opisan, rastvarač ili rastvarači mogu biti izabrani od propilen glikola, etanola, PEG300, Super-rafinisanog<®>PEG300, PEG400 i Super-rafinisanog<®>PEG400, a prevshodno su to propilen glikol i etanol.

[0035] Super-rafinisano<®>se odnosi na PEG300 ili PEG400 visokih stepena čistoće.

[0036] „Pufer” se upotrebljava za sprečavanje promena u pH rastvora, a pogodni primeri su dobro poznati stručnjacima za formulisanje.

[0037] „Kontejner” označava ampulu ili bočicu sa gumenim čepom i poklopcem, špric sa jednom ili dvostrukom komorom, kesu za infuziju ili bocu napravljenu od polimernih materijala ili stakla, pogodne za smeštanje kompozicija za parenteralno davanje. Uključuje takođe bilo koju posudu za držanje tečnosti.

[0038] „slobodan molekul”, kako se ovde upotrebljava, označava da se jedinjenje ne upotrebljava u obliku soli, obrazovane od spoljašnjih jona suprotnog naelektrisanja. Jedinjenje A može biti prisutno u cviterjonskom obliku, a izraz „slobodan molekul”, kako se ovde upotrebljava, uključuje cviterjonski oblik.

[0039] Kao što se ovde upotrebljava, termin „sadrži” označava „uključujući” i nije predviđeno da isključuje prisustvo bilo koje dodatne komponente, osim ukoliko kontekst ne ukazuje drugačije, na primer, kada je zajednički zbir kompnenti do 100%.

[0040] Kao što se ovde upotrebljava, termin „lečenje”, „tretiranje” ili „tretman” bilo koje bolesti ili poremećaja se odnosi na ublažavanje ili umanjenje bolesti ili poremećaja (tj. na usporavanje ili zaustavljanje ili smanjenje razvoja bolesti ili najmanje jednog od njihovih kliničkih simptoma). U drugom primeru izvođenja, „lečenje”, „tretiranje” ili „tretman” se odnose na ublažavanje ili umanjenje najmanje jednog fizičkog parametra uključujući one koje pacijent možda ne može da uoči. U još jednom primeru izvođenja, „lečenje”, „tretiranje” ili „tretman” se odnose na modulaciju bolesti ili poremećaja, bilo fizičku (npr. stabilizaciju uočljivog simptoma), fiziološku (npr. stabilizaciju fizičkog parametra) ili obe od navedenih.

[0041] „Stabilizator protiv želifikacije”, kako se ovde upotrebljava, označava stabilizator protiv želifikacije kompozicije koja sadrži Jedinjenje A koji je kao što je navedeno u patentnim zahtevima 10 ili 16. Ova definicija stabilizatora uključuje, na primer, elektrolite ili polimere. Primeri pogodnih elektrolita su natrijum hlorid, kalijum hlorid, dvo- i monobazni natrijum fosfat, amonijum sulfat i arginin, pri čemu je poželjan natrijum hlorid. Voda može biti dodavana u formulaciju po potrebi, sa elektrolitom. Primeri pogodnih polimera su PEG300 i PEG400, posebno PEG300. Stabilnost protiv želifikacije može biti ispitivana tehnikama koje su dobro poznate stručnjaku, a posebno mogu biti upotrebljene tehnike koje su ovde opisane. Ovde naveden Primer 12 obezbeđuje tehnike koje se mogu koristiti za ispitivanje želifikacija. Kada se utvrdi sklonost želifikaciji za izabranu kompoziciju, stručnjak za formulisanje može upotrebiti tu informaciju za odabir optimalnih uslova skladištenja kompozicija koje sadrže Jedinjenje A.

[0042] U jednom opcionom primeru izvođenja, PEG300 je Super-rafinisan<®>PEG300, što je PEG300 visoke čistoće.

[0043] U jednom poželjnom primeru izvođenja, izabran je stabilizator koji sprečava želifikaciju kompozicije koja sadrži Jedinjenje A, koji takođe smanjuje ili sprečava taloženje komponenti kompozicije koja sadrži Jedinjenje A. Na primer, PEG300 je od posebnog interesa u ovom pogledu. U jednom opcionom primeru izvođenja, PEG300 je Super-rafinisan<®>PEG300, a što takođe može pomoći u održavanju hemijske stabilnosti Jedinjenja A.

[0044] Mešanje „neposredno pre davanja pacijentu” označava mešanje do tri dana pre, posebno do 24 sata pre i, na primer, do 6 sati pre davanja pacijentu.

[0045] „Histidin” kako se ovde upotrebljava, označava, prevashodno „L-histidin'.

[0046] U određenim primerima izvođenja pronalaska, prednost predstavlja i činjenica da zbog veoma male veličine čestica lipozoma, formulacija deluje providno, što omogućava vizuelnu proveru kompletnosti solubilizacije Jedinjenja A pre davanja. U posebnom primeru izvođenja, kompozicija se primenjuje pacijentima intravenski.

Primeri izvođenja

[0047] U nastavku teksta su opisani primeri izvođenja pronalaska E1 do E52 za koje se ne traži patentna zaštita.

[0048] E1. Kompozicija organskog koncentrata koja sadrži Jedinjenje A, koje je 2-{[5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]fenil1-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil)propanska kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so, i negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator.

[0049] E2. Kompozicija organskog koncentrata prema primeru izvođenja E1, koja sadrži Jedinjenje A koje je (2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil) tieno[2,3-d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil)propanska kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so, i negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator.

[0050] E3. Kompozicija organskog koncentrata prema primerima izvođenja E1 ili E2, gde je Jedinjenje A slobodan molekul.

[0051] E4. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E1 do E3, gde je negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator izabran od soli natrijuma ili aluminijuma DMPG (1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfo-rac-glicerola, ili dimiristoil fosfatidilglicerola), soli natrijuma POPG (1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma DOPS (1,2-dioleoil-snglicero-3-fosfoserina), soli natrijuma DOPG (1,2-dioleoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma ili aluminijuma DPPG (1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma ili aluminijuma DSPG (1,2-distearoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma fosfatidne kiseline (PA) iz soje, soli natrijuma fosfatidne kiseline (PA) iz jajeta, soli natrijuma fosfatidilserina (PS) iz soje, soli natrijuma fosfatidilglicerola (PG) iz jajeta, soli natrijuma fosfatidilglicerola (PG) iz soje, soli natrijuma fosfatidil inozitola (PI), Lipoida E 80 S i natrijum oleata.

[0052] E5. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E1 do E4, gde je negativno naelektrisan ili polarni stabilizator fosfolipida so natrijuma dimiristoil fosfatidilglicerola (DMPG) ili Lipoid E 80 S.

[0053] E6. Kompozicija organskog koncentrata prema primeru izvođenja E5, gde je negativno naelektrisan ili polarni stabilizator fosfolipida so natrijuma 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfo-racglicerola.

[0054] E7. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E1 do E6, koja dalje sadrži jedan ili više rastvarača.

[0055] E8. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E1 do E7, koja sadrži najmanje jedan rastvarač izabran od propilen glikola, etanola, PEG300 i PEG400.

[0056] E9. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E1 do E8, koja sadrži najmanje jedan rastvarač izabran od:

● propilen glikola i etanola, ili

● propilen glikola, PEG300 i etanola.

[0057] E10. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E1 do E9, koja sadrži i propilen glikol i etanol.

[0058] E11. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E1 do E10, koja dalje sadrži stabilizator izabran od natrijum hlorida, kalijum hlorida, dvo- i monobaznog natrijum fosfata, amonijum sulfata i arginina, a poželjno je natrijum hlorid. E12. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E1 do E11, koja dalje sadrži vodu.

[0059] E13. Lipozomski nosač koji sadrži fosfolipid i agens za podešavanje toničnosti.

[0060] E14. Lipozomski nosač prema primeru izvođenja E13, koji sadrži od 5%m/m do 20%m/m fosfolipida, posebno od 7%m/m do 13%m/m fosfolipida.

[0061] E15. Lipozomski nosač prema primeru izvođenja E13 ili E14, gde je fosfolipid izabran od:

gde

● R1predstavlja C10-C24acil;

● R2predstavlja C10-C24acil, ili alternativno R2predstavlja vodonik ili C10-C20acil;

● R3predstavlja vodonik, 2-trimetilamino-1-etil, 2-amino-1-etil, C1-C4alkil, C1-C5alkil supstituisan sa karboksilnom, C2-C5alkil supstituisan sa karboksi i hidroksilnom grupom,

[0062] C2-C5alkil supstituisan sa karboksi i amino grupom, inozitol grupu ili gliceril grupu; ili so takvog jedinjenja.

[0063] E16. Lipozomski nosač prema primeru izvođenja E13 ili E14, gde je fosfolipid izabran od lecitina iz jajeta, sojinog lecitina ili sintetičkih fosfolipida.

[0064] E17. Lipozomski nosač prema bilo kom od primera izvođenja E13 do E16, gde je fosfolipid izabran od lecitina iz jajeta, sojinog lecitina, POPC (palmitoil oleoil fosfatidilholina), DOPC (1,2-dioleoilsn-glicero-3-fosfoholina) i DMPC (1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoholina), posebno POPC (palmitoil oleoil fosfatidilholina), DOPC (1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoholina) i DMPC (1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoholina), a poželjno je POPC.

[0065] E18. Lipozomski nosač prema bilo kom od primera izvođenja E13, E14, E16 ili E17, gde je fosfolipid izabran od lecitina iz jajeta ili sojinog lecitina koji sadrži najmanje 75% fosfatidilholina ili najmanje 70% fosfatidilholina.

[0066] E19. Lipozomski nosač prema bilo kom od primera izvođenja E13, E14, E16, E17 ili E18, gde je fosfolipid Lipoid E 80 S.

[0067] E20. Lipozomski nosač prema bilo kom od primera izvođenja E13 do E19, gde je agens za podešavanje toničnosti izabran od dekstroze, glukoze, manitola, saharoze, laktoze, trehaloze, glicerina i NaCl.

[0068] E21. Lipozomski nosač prema primeru izvođenja E20, gde je agens za podešavanje toničnosti saharoza ili glicerin, prevashodno saharoza.

[0069] E22. Lipozomski nosač prema bilo kom od primera izvođenja E13 do E21, koji dalje sadrži pufer.

[0070] E23. Lipozomski nosač prema primeru izvođenja E22, gde je pufer histidin.

[0071] E24. Lipozomski nosač prema bilo kom od primera izvođenja E13 do E23, koji dalje sadrži vodu.

[0072] E25. Lipozomski nosač prema bilo kom od primera izvođenja E13 do E24, gde su lipozomi prisutni u lipozomskom nosaču prosečne veličine od 20 nm do 300 nm, poželjno od 20 nm do 100 nm.

[0073] E26. Lipozomski nosač prema primeru izvođenja E25, gde su lipozomi prosečne veličine od 20 nm do 80 nm, poželjno od 40 nm do 70 nm.

[0074] E27. Farmaceutska kompozicija koja sadrži fosfolipid i Jedinjenje A koje je 2-{[5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil)propanska kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so.

[0075] E28. Farmaceutska lipozomska kompozicija koja sadrži:

a. fosfolipid, koji je kao što je opisano u bilo kom od primera izvođenja E15 do E19, i

b. Jedinjenje A koje je 2-{[5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il) etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3 -d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil) propanska kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so.

[0076] E29. Farmaceutska kompozicija prema primeru izvođenja E27, gde je Jedinjenje A (2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il) etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil)propanska kiselina, ili njena so, poželjno slobodan molekul.

[0077] E30. Farmaceutska lipozomska kompozicija prema primeru izvođenja E28, gde je Jedinjenje A (2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il) etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil) propanska kiselina ili njena so, poželjno slobodan molekul.

[0078] E31. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvođenja E27 do E30, za infuziju ili intravensko injeciranje.

[0079] E32. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvođenja E27 do E31, koja sadrži od 5%m/m do 20%m/m fosfolipida, posebno od 7%m/m do 13%m/m fosfolipida.

[0080] E33. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvođenja E27 do E32, gde je fosfolipid izabran od onih koji su opisani u primerima izvođenja E15 do E19, posebno E18 ili E19.

[0081] E34. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvođenja E27 do E33, koja dalje sadrži negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator.

[0082] E35. Farmaceutska kompozicija prema primeru izvođenja E34, gde je negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator izabran od soli natrijuma ili aluminijuma DMPG (1,2-dimiristoil-snglicero-3-fosfo-rac-glicerola, ili dimiristoil fosfatidilglicerola), soli natrijuma POPG (1-palmitoil-2-oleoilsn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma DOPS (1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoserina), soli natrijuma DOPG (1,2-dioleoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma ili aluminijuma DPPG (1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma ili aluminijuma DSPG (1,2-distearoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma fosfatidne kiseline (PA) iz soje, soli natrijuma fosfatidne kiseline (PA) iz jajeta, soli natrijuma fosfatidilserina (PS) iz soje, soli natrijuma fosfatidilglicerola (PG) iz jajeta, soli natrijuma fosfatidilglicerola (PG) iz soje, soli natrijuma fosfatidil inozitola (PI), Lipoida E 80 S i natrijum oleata, posebno natrijumove soli dimiristoil fosfatiliglicerola (DMPG), soli natrijuma 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfo-rac-glicerola i Lipoida E 80 S.

[0083] E36. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvođenja E27 do E35, koja dalje sadrži jedan ili više rastvarača, posebno one rastvarače koji su opisani u bilo kom od primera izvođenja E8, E9 ili E10.

[0084] E37. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvođenja E27 do E36, koja dalje sadrži stabilizator izabran od natrijum hlorida, kalijum hlorida, dvo- i monobaznog natrijum fosfata, amonijum sulfata i arginina, a poželjno je natrijum hlorid.

[0085] E38. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvođenja E27 do E37, koja dalje sadrži agens za podešavanje toničnosti.

[0086] E39. Farmaceutska kompozicija prema primeru izvođenja E38, gde je agens za podešavanje toničnosti izabran od dekstroze, glukoze, manitola, saharoze, laktoze, trehaloze, glicerina i NaCl, a poželjno je saharoza i/ili glicerin, još poželjnije je saharoza.

[0087] E40. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvođenja E27 do E39, koja dalje sadrži pufer, posebno histidin.

[0088] E41. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvođenja E27 do E40, koja sadrži lipozome.

[0089] E42. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvođenja E27 do E41, gde je odnos fosfolipida (iz lipozomskog nosača) prema Jedinjenju A kao slobodnom molekulu, od 100:1 do 4,5:1 težinskih delova.

[0090] E43. Farmaceutska kompozicija prema primeru izvođenja E42, gde je odnos fosfolipida iz lipozomskog nosača prema Jedinjenju A kao slobodnom molekulu, od 50:1 do 6:1 težinskih delova, posebno od 20:1 do 9:1 težinskih delova.

[0091] E44. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvođenja E27 do E43, pri čemu su ispunjeni lipozomi prosečne veličine od 20 nm do 100 nm, poželjno od 50 nm do 90 nm, još poželjnije od 50 nm do 80 nm.

[0092] E45. Farmaceutska kompozicija za infuziju ili intravensko injeciranje, koja sadrži mešavinu lipozomskog nosača prema bilo kom od primera izvođenja E13 do E26, i kompoziciju organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E1 do E12.

[0093] E46. Farmaceutska kompozicija za infuziju prema primeru izvođenja E45, koja dalje sadrži glukozu za infuziju.

[0094] E47. Kompozicija organskog koncentrata koja sadrži:

a. Jedinjenje A koje je (2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il] oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil)propanska kiselina,

b. negativno naelektrisan ili polarni stabilizator fosfolipida, i

c. najmanje jedan rastvarač izabran od propilen glikola, etanola, PEG300 i PEG400.

[0095] E48. Kompozicija organskog koncentrata prema primeru izvođenja E47, koja sadrži propilen glikol, etanol i PEG300, poželjno i propilen glikol i etanol.

[0096] E49. Kompozicija organskog koncentrata prema primeru izvođenja E47 ili E48, koja dalje sadrži stabilizator izabran od natrijum hlorida, kalijum hlorida, dvo- i monobaznog natrijum fosfata, amonijum sulfata i arginina, a poželjno je natrijum hlorid.

[0097] E50. Farmaceutska kompozicija za infuziju ili intravensko injeciranje koja sadrži:

a. fosfolipid izabran od onih koji su opisani u bilo kom od primera izvođenja E15 do E19, b. Jedinjenje A koje je (2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il] oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil)propanska kiselina, i

c. negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator izabran od onih opisanih u bilo kom od primera izvođenja E4 do E6.

[0098] E51. Farmaceutska kompozicija prema primeru izvođenja E50, koja dalje sadrži stabilizator izabran od natrijum hlorida, kalijum hlorida, dvo- i monobaznog natrijum fosfata, amonijum sulfata i arginina, a poželjno je natrijum hlorid.

[0099] E52. Farmaceutska kompozicija prema primeru izvođenja E50 ili E51, koja dalje sadrži i propilen glikol i etanol.

[0100] U nastavku teksta su opisane realizacije E53 do E79 pronalaska za koje se ne traži patentna zaštita.

[0101] E53. Komplet koji sadrži:

a. lipozomski nosač i

b. kompoziciju organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E55 do E64, ili E78.

[0102] E54. Komplet prema primeru izvođenja E53, gde je predviđeno da a. i b. budu pomešani jedan sa drugim neposredno pre davanja pacijentu.

[0103] E55. Kompozicija organskog koncentrata koja sadrži:

a. Jedinjenje A koje je 2-{[5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il) etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3 -d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil)propanska kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so,

b. negativno naelektrisan ili polarni stabilizator fosfolipida, i

c. stabilizator protiv želifikacije, pri čemu je stabilizator protiv želifikacije polimer izabran od PEG300 i PEG400, ili je elektrolit koji je natrijum hlorid.

[0104] E56. Kompozicija organskog koncentrata prema primeru izvođenja E55, koja sadrži Jedinjenje A koje je (2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil)propanska kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so.

[0105] E57. Kompozicija organskog koncentrata prema primeru izvođenja E55 ili E56, gde je Jedinjenje A slobodan molekul.

[0106] E58. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E55 do E57, gde je negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator izabran od soli natrijuma ili aluminijuma DMPG (1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfo-rac-glicerola, ili dimiristoil fosfatidilglicerola), soli natrijuma POPG (1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma DOPS (1,2-dioleoil-snglicero-3-fosfoserina), soli natrijuma DOPG (1,2-dioleoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma ili aluminijuma DPPG (1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma ili aluminijuma DSPG (1,2-distearoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma fosfatidne kiseline (PA) iz soje, soli natrijuma fosfatidne kiseline (PA) iz jajeta, soli natrijuma fosfatidilserina (PS) iz soje, soli natrijuma fosfatidilglicerola (PG) iz jajeta, soli natrijuma fosfatidilglicerola (PG) iz soje, soli natrijuma fosfatidil inozitola (PI), lecitina iz jajeta (na primer, Lipoida E 80 S), sojinog lecitina (na primer, Lipoida S 75) i natrijum oleata, a poželjno je so natrijuma DMPG.

[0107] E59. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E55 do E58, gde je negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfo-racglicerol, so natrijuma ili aluminijuma, lecitin iz jajeta (na primer, Lipoid E 80 S), sojin lecitin (na primer, Lipoid S 75) ili, poželjno, 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfo-rac-glicerol, so natrijuma.

[0108] E60. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E55 do E59, gde je stabilizator protiv želifikacije natrijum hlorid.

[0109] E61. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E55 do E59, gde je stabilizator protiv želifikacije PEG300.

[0110] E62. Kompozicija organskog koncentrata prema primeru izvođenja E61, gde je PEG300 prisutan sa od 5 %m/m do 30 %m/m kompozicije koncentrata, poželjno od 15 %m/m do 20 %m/m, još poželjnije 15 %m/m.

[0111] E63. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E55 do E62, koja dalje sadrži rastvarač.

[0112] E64. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E55 do E63, koja dalje sadrži rastvarač izabran od propilen glikola i etanola, a poželjnije sadrži i propilen glikol i etanol.

[0113] E65. Farmaceutska kompozicija koja je rezultat mešanja kompozicije organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E55 do E64, i lipozomskog nosača, pri čemu navedeni lipozomski nosač sadrži fosfolipid i agens za podešavanje toničnosti, posebno pri čemu je navedeni agens za podešavanje toničnosti izabran od dekstroze, glukoze, manitola, saharoze, laktoze, trehaloze, glicerina i NaCl.

[0114] E66. Farmaceutska kompozicija prema primeru izvođenja E65, gde je fosfolipid izabran od lecitina iz jajeta, sojinog lecitina ili sintetičkih fosfolipida.

[0115] E67. Farmaceutska kompozicija prema primeru izvođenja E65 ili E66, gde je fosfolipid formule

gde

● R1 predstavlja C10-C24acil;

● R2 predstavlja C10-C24acil, ili alternativno, R2 predstavlja vodonik ili C10-C20acil;

● R3 predstavlja vodonik, 2-trimetilamino-1-etil, 2-amino-1-etil, C1-C4alkil, C1-C5alkil supstituisan sa karboksilnom, C2-C5alkil supstituisan sa karboksi i hidroksilnom grupom,

C2-C5alkil supstituisan sa karboksi i amino grupom, inozitol grupa ili gliceril grupa; ili so takvog jedinjenja.

[0116] E68. Farmaceutska kompozicija prema primerima izvođenja E65 do E67, gde je fosfolipid izabran od lecitina iz jajeta, sojinog lecitina, POPC (palmitoil oleoil fosfatidilholina), DOPC (1,2-dioleoilsn-glicero-3-fosfo-holina), DMPC (1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoholina) i DPPC (1,2-dipalmitoil-snglicero-3-fosfoholina), a poželjno je POPC (palmitoil oleoil fosfatidilholin), DOPC (1,2-dioleoil-snglicero-3-fosfoholin) i DMPC (1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoholin), posebno POPC.

[0117] E69. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvođenja E65, E66 ili E68, gde je fosfolipid izabran od lecitina iz jajeta ili sojinog lecitina koji sadrži najmanje 70% fosfatidilholina, a poželjno je izabran od Lipoida E 80 S.

[0118] E70. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvođenja E65 do E69, gde je agens za podešavanje toničnosti izabran od saharoze ili glicerina.

[0119] E71. Lipozomska farmaceutska kompozicija koja sadrži, kao dodatak lipozomima:

a. Jedinjenje A koje je 2-{[5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil)propanska kiselina, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so; i

b. stabilizator protiv želifikacije, pri čemu je stabilizator protiv želifikacije polimer izabran od PEG300 i PEG400, ili je elektrolit koji je natrijum hlorid; i c. negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator.

[0120] E72. Lipozomska farmaceutska kompozicija prema primeru izvođenja E71, koja sadrži:

a. Jedinjenje A kao što je opisano u bilo kom od primera izvođenja E56 do E57, i

b. stabilizator protiv želifikacije, kao što je opisano u bilo kom od primera izvođenja E60 do E61

[0121] E73. Lipozomska farmaceutska kompozicija prema primeru izvođenja E71, gde je navedeni negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator kao što je opisano u E58 ili E59.

[0122] E74. Lipozomska farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvođenja E71 do E73, koja dalje sadrži rastvarač.

[0123] E75. Lipozomska farmaceutska kompozicija prema primeru izvođenja E74, gde je navedeni rastvarač izabran od propilen glikola i etanola, ili poželjno sadrži i propilen glikol i etanol.

[0124] E76. Lipozomska farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvođenja E71 do E75, koja sadrži fosfolipid koji je kao što je opisano u bilo kom od primera izvođenja E66 do E69.

[0125] E77. Lipozomska farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvođenja E71 do E76, koja dalje sadrži agens za podešavanje toničnosti, izabran od dekstroze, glukoze, manitola, saharoze, laktoze, trehaloze, glicerina i NaCl.

[0126] E78. Kompozicija organskog koncentrata koja sadrži:

a. Jedinjenje A koje je (2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil)propanska kiselina,

b. negativno naelektrisan ili polarni stabilizator fosfolipida, na primer izabran od soli natrijuma ili aluminijuma DMPG (1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfo-rac-glicerola, ili dimiristoil fosfatidilglicerola), soli natrijuma POPG (1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma DOPS (1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoserina), soli natrijuma DOPG (1,2-dioleoil-snglicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma ili aluminijuma DPPG (1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma ili aluminijuma DSPG (1,2-distearoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma fosfatidne kiseline (PA) iz soje, soli natrijuma fosfatidne kiseline (PA) iz jajeta, soli natrijuma fosfatidilserina (PS) iz soje, soli natrijuma fosfatidilglicerola (PG) iz jajeta, soli natrijuma fosfatidilglicerola (PG) iz soje, soli natrijuma fosfatidil inozitola (PI), lecitina iz jajeta (na primer, Lipoida E 80 S), sojinog lecitina (na primer, Lipoida E75) i natrijum oleata, a poželjno je DMPG natrijum; i

c. stabilizator protiv želifikacije, na primer izabran od

● polimera, pri čemu je navedeni polimer PEG300 ili PEG400, i

● elektrolita, pri čemu je navedeni elektrolit natrijum hlorid

[0127] E79. Farmaceutska kompozicija koja sadrži:

a. fosfolipid izabran od lecitina iz jajeta, sojinog lecitina, POPC (palmitoil oleoil fosfatidilholina), DOPC (1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoholina), DMPC (1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoholina) i DPPC (1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoholina), poželjno od POPC (palmitoil oleoil fosfatidilholin), DOPC (1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoholin) i DMPC (1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoholin), a još poželjnije je POPC,

ili gde je fosfolipid izabran od lecitina iz jajeta ili sojinog lecitina koji sadrži najmanje 70% fosfatidilholina;

b. Jedinjenje A koje je (2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil)propanska kiselina ili njena so, poželjno slobodan molekul,

c. negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator, na primer, so natrijuma ili aluminijuma DMPG (1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfo-rac-glicerola, ili dimiristoil fosfatidilglicerola), so natrijuma POPG (1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), so natrijuma DOPS (1,2-dioleoilsn-glicero-3-fosfoserina), so natrijuma DOPG (1,2-dioleoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), so natrijuma ili aluminijuma DPPG (1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerol)]), so natrijuma ili aluminijuma DSPG (1,2-distearoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), so natrijuma fosfatidne kiseline (PA) iz soje, so natrijuma fosfatidne kiseline (PA) iz jajeta, so natrijuma fosfatidilserina (PS) iz soje, so natrijuma fosfatidilglicerola (PG) iz jajeta, so natrijuma fosfatidilglicerola (PG) iz soje, so natrijuma fosfatidil inozitola (PI), Lipoid E 80 S i natrijum oleat, a poželjno je 1,2-dimiristoil-sn-3-gliceri-3-fosfo-rac-glicerol, so natrijuma ili aluminijuma, lecitin iz jajeta ili Lipoid E 80 S, još poželjnije 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfo-rac-glicerol, so natrijuma ; i

d. stabilizator protiv želifikacije, na primer izabran od

● polimera, pri čemu je navedeni polimer PEG300 ili PEG400, i

● elektrolita, pri čemu je navedeni elektrolit natrijum hlorid.

[0128] U nastavku teksta su opisani primeri izvođenja E80 do E88 pronalaska za koje se ne traži patentna zaštita.

[0129] E80. Postupak za solubilizaciju Jedinjenja A, koje je kao što je opisano u bilo kom od primera izvođenja E1, E2 ili E3, u vodenom okruženju, koji obuhvata mešanje:

a. lipozomskog nosača prema bilo kom od primera izvođenja E13 do E26, i

b. kompozicije organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E1 do E12, ili E47 do E49, ili E55 do E64, ili E78.

[0130] E81. Postupak za pripremu kompozicije Jedinjenja A pogodne za parenteralnu davanje, koji obuhvata mešanje:

a. lipozomskog nosača prema bilo kom od primera izvođenja E13 do E26, i

b. kompozicije organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E1 do E12 ili E47 do E49, ili E55 do E64, ili E78.

[0131] E82. Postupak prema primeru izvođenja E80 ili E81, gde se mešanje odvija neposredno pre davanja pacijentu.

[0132] E83. Postupak prema bilo kom od primera izvođenja E80, E81 ili E82, gde se mešanje i ispunjavanje lipozoma vrši ponovljanjem okretanja kontejnera, posebno okretanjem sa snažnim protresanjem.

[0133] E84. Postupak prema bilo kom od primera izvođenja E80 do E83, gde se mešanje i ispunjavanje lipozoma obavljaju okretanjem kontejntera koji sadrži i a. i b, a poželjno ponovljenim ili okretanjem uz snažno protresanje, sve dok smeša ne bude bez vidljivih čestica.

[0134] E85. Postupak modulacije aktivnosti Mcl-1 receptora kod subjekta, pri čemu postupak obuhvata davanje subjektu terapijski efektivne količine kompozicije prema bilo kom od primera izvođenja E27 do E46, ili E50 do E52, ili E65 do E77, ili E79.

[0135] E86. Postupak za lečenje kancera, koji obuhvata davanje subjektu terapijski efektivne količine kompozicije prema bilo kom od primera izvođenja E27 do E46, ili E50 do E52, ili E65 do E77, ili E79.

[0136] E87. Postupak prema primeru izvođenja E86, pri čemu je kancer izabran od kancera bešike, mozga, dojke i materice, hroničnih limfoidnih leukemija, kancera debelog creva, jednjaka i jetre, limfoblasnih leukemija, akutne mijeloidne leukemije, limfoma, na primer ne-Hočkinovog B-ćelijskog limfoma i difuznog B-krupnoćelijskog limfoma, melanoma, malignih hemopatija, na primer mijelodisplastičnog sindroma, mijeloma, na primer multiplog mijeloma, kancera jajnika, nesitnoćelijskog kancera pluća, kancera prostate, kancera pankreasa i sitnoćelijskog kancera pluća.

[0137] E88. Postupak prema primeru izvođenja E87, gde je kancer izabran od ne-Hočkinovog B-ćelijskog limfoma, difuznog B-krupnoćelijskog limfoma, multiplog mijeloma, mijelodisplastičnog sindroma, hroničnih limfoidnih leukemija i akutne mijeloidne leukemije.

[0138] U nastavku teksta su opisani primeri izvođenja E89 do E95 pronalaska za koje se ne traži patentna zaštita.

[0139] E89. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvođenja E65 do E77, ili E79, za upotrebu u vidu medikamenta.

[0140] E90. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema primeru izvođenja E89, pri čemu je navedena upotreba u lečenju kancera, posebno pri čemu je kancer izabran od kancera bešike, mozga, dojke i materice, hroničnih limfoidnih leukemija, kancera debelog creva, jednjaka i jetre, limfoblasnih leukemija, akutne mijeloidne leukemije, limfoma, na primer ne-Hočkinovog B-ćelijskog limfoma i difuznog B-krupnoćelijskog limfoma, melanoma, malignih hemopatija, na primer mijelodisplastičnog sindroma, mijeloma, na primer multiplog mijeloma, kancera jajnika, nesitnoćelijskog kancera pluća, kancera prostate, kancera pankreasa i sitnoćelijskog kancera pluća.

[0141] E91. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema primeru izvođenja E90, pri čemu je navedeni kancer izabran od ne-Hočkinovog B-ćelijskog limfoma, difuznog B-krupnoćelijskog limfoma, multiplog mijeloma, mijelodisplastičnog sindroma, hroničnih limfoidnih leukemija i akutne mijeloidne leukemije.

[0142] E92. Upotreba kompozicije organskog koncentrata prema bilo kom od primera izvođenja E55 do E64, ili E78, za pripremu medikamenta za lečenje kancera.

[0143] E93. Upotreba prema primeru izvođenja E92, za pripremu lipozomskog medikamenta za lečenje kancera.

[0144] E94. Upotreba prema primeru izvođenja E92 ili E93, pri čemu je kancer izabran od kancera bešike, mozga, dojke i materice, hroničnih limfoidnih leukemija, kancera debelog creva, jednjaka i jetre, limfoblasnih leukemija, akutne mijeloidne leukemije, limfoma, na primer ne-Hočkinovog B-ćelijskog limfoma i difuznog B-krupnoćelijskog limfoma, melanoma, malignih hemopatija, na primer mijelodisplastičnog sindroma, mijeloma, na primer multiplog mijeloma, kancera jajnika, nesitnoćelijskog kancera pluća, kancera prostate, kancera pankreasa i sitnoćelijskog kancera pluća, a poželjno je ne-Hočkinov B-ćelijski limfom, difuzni B-krupnoćelijski limfom, multipli mijelom, mijelodisplastični sindrom, hronične limfoidne leukemije i akutna mijeloidna leukemija.

[0145] E95. Kombinacija koja se sastoji od:

<●>farmaceutske kompozicije prema bilo kom od primera izvođenja E65 do E79, ili E79, i

<●>jednog ili više terapijski aktivnih agenasa, za istovremenu, uzastopnu ili razdvojenu upotrebu.

[0146] U nastavku teksta je opisan primer izvođenja pronalaska za koga se ne traži patentna zaštita.

[0147] E96. Kompozicija koja sadrži Jedinjenje A, koje je kao što je definisano u E1, E2 ili E3, i stabilizator protiv želifikacije.

[0148] U jednom primeru izvođenja, pacijenti se biraju, na primer, prema sledećim kriterijumima:

Glavni kriterijumi za uključivanje:

[0149]

<●>Starost ≥ 18 godina

[0150] Za pacijente sa multiplim mijelomom:

<●>Histološki potvrđen limfom ili potvrđen multipli mijelom. U posebnom primeru izvođenja za pacijente sa multiplim mijelomom, multipli mijelom je u relapsu i/ili je refraktoran na standardni režim lečenja

<●>Okarakterisana je hromozomska aberacija

<●>Merljiva bolest:

- Serumski M-protein ≥ 0,5 g/dl

- M-protein u urinu ≥ 200 mg/24 sata ili

- Nivo lakog lanca van seruma (FLC) ≥ 100 mg/L od uključenog FLC.

[0151] Za pacijente sa histološki potvrđenim DLBCL:

<●>Dokumentovana pozitivnost na MYC, definisana fluorescentnom in situ hibridizacijom (FISH) ili imunohistohemijom (IHC)

<●>Merljiva bolest (prema Preporukama za početnu procenu, stadijume i procenu odgovora kod Hočkinovog i ne-Hočkinovog limfoma)

Glavni kriterijumi za isključivanje

[0152]

1. Poznata istorija hronične bolesti jetre uključujući

<●>aktivnu infekciju hepatitisom B ili C

<●>primarnu bilijarnu cirozu

<●>cirozu jetre, ili

<●>portnu hipertenziju

2. Istorija hroničnog pankreatitisa

3. Pacijenti sa visokim rizikom od sindroma lize tumora (TLS)

4. Istorija ili dijagnoza pneumonitisa, intersticijske bolesti pluća ili inflamatorne bolesti creva. 5. Oštećenje srčane funkcije ili klinički značajna srčana oboljenja, uključujući bilo koja od sledećih:<●>Frakcija izbacivanja iz leve komore (LVEF) < 50%, što je utvrđeno skeniranjem sa višestrukim pragom (MUGA) ili ehokardiogramom (ECHO)

<●>QT sa upotrebom Fredericia korekcije (QTcF) > 450 ms (muški pacijenti), >460 ms (ženski pacijenti)

6. Teška i/ili nekontrolisana medicinska stanja koja po mišljenju istraživača mogu uticati na bezbednost pojedinca ili narušiti procenu rezultata studije.

7. Prethodni tretman sa inhibitorom za Mcl-1.

8. Prethodni tretman sa inhibitorom za Bcl-2 (kod pacijenata koji su uključeni u studije sa ekspanzijom doze).

9. Pacijenti sa primarnim tumorom CNS-a ili pacijenti kod kojih je prisutan tumor CNS-a.

[0153] Lipozomski nosač koji je ovde opisan, može biti proizveden bilo kojim postupkom proizvodnje čiji je rezultat dobijanje lipozoma sa prosečnom veličinom čestica do 1000 nm, poželjno do 300 nm, još poželjnije do 100 nm. Veličina lipozoma, koja je kao što je ovde opisano, odnosi se na prosečan prečnik Z, dobijen upotrebom fotonske korelacione spektroskopije prema ISO 13321, a koji opisuje rezultujuću prosečnu veličinu čestica i indeks polidisperznosti. Uobičajen proizvodni postupak uključuje dispergovanje, mešanje uz visoku silu smicanja i naknadnu homogenizaciju pod visokim pritiskom, pri čemu su takvi postupci dobro poznati stručnjacima.

[0154] Organski koncentrat se obrazuje mešanjem komponenti dok se ne dobije homogeni rastvor u kome je Jedinjenje A rastvoreno.

[0155] Da bi se obrazovala kompozicija za davanje, koncentrat se dodaje lipozomskom nosaču, nakon čega se odmah vrši mešanje, na primer, ponovljanjem obrtanja ili snažnim mućkanjem kontejnera. Alternativno, koncentrat može biti dodat u nosač za vreme vrtloženja.

[0156] U jednom primeru izvođenja pronalaska za koji se ne traži patentna zaštita, obezbeđen je lipozomski nosač koji može biti pomešan sa Jedinjenjem A neposredno pre davanja, da bi se dobila transparentna kompozicija. Preciznije, ovo se postiže mešanjem lipozomskog nosača sa organskim koncentratom koji sadrži Jedinjenje A koje je kao što je ovde opisano. Transparentnost je poželjna, da bi se proverilo da li je Jedinjenje A solubilizovano pre davanja. Može biti procenjena vizuelnom proverom ili se bistroća utvrđuje na najprikladnijoj talasnoj dužini u zavisnosti od koncentracije lipida, na primer, na 660 nm ili upotrebom transmisione ćelije ili kivete od 1 cm. Prema aspektu pronalaska za koji se ne potrežuje pravo patentne zaštite, farmaceutska kompozicija za davanje (lipozomi ispunjeni Jedinjenjem A) ne bi trebala da smanji prenos u poređenju sa lipozomskim nosačem za više od 30%, poželjno za ne više od 20%, najpoželjnije za ne više od 10 %.

[0157] U jednom primeru izvođenja pronalaska za koji se ne traži patentna zaštita, lipozomski nosač, kada se pomeša sa Jedinjenjem A, omogućava maksimalno ispunjavanje lipozoma Jedinjenjem A, posebno kada je Jedinjenje A prisutno kao organski koncentrat koji je ovde opisan.

[0158] U Primerima koji su ovde navedeni, „Jedinjenje A” označava (2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil)propansku kiselinu (ne so).

PRIMER 1: Organski koncentrat koji sadrži Jedinjenje A i natrijum hlorid

[0159]

Priprema mase rastvarača:

[0160] Voda za injekcije, a zatim i anhidrovani etanol, pa DMPG-Na, sipani su u posudu i mešani da bi se navlažio prah DMPG-Na. Dodata je zatim približno četvrtina propilen glikola, nakon čega je smeša mešana i grejana. Mešanje je nastavljeno i temperature je održavana tokom 90 minuta ili do potpunog rastvaranja DMPG-Na. Nakon potpunog rastvaranja, smeša je ohlađena do sobne temperature, dodat je ostatak propilen glikola i smeša je mešana dok nije delovala homogeno. Dodat je zatim natrijum hlorid i smeša je grejana tokom 90 minuta ili do potpunog rastvaranja natrijum hlorida. Dobijeni rastvor je ohlađen do sobne temperature.

Priprema koncentrata organskog leka:

[0161] Masa rastvarača, koja je pripremljena kao što je prethodno opisano, presuta je u posudu, nakon čega je dodato Jedinjenje A i smeša je mešana da bi se prah Jedinjenja A navlažio. Mešanje je nastavljeno tokom 60 minuta ili do potpunog rastvaranja Jedinjenja A. Koncentrat je profiltriran kroz sterilnu Pall Fluorodyne<®>IIDFL membranou od 0,2 µm, u Kleenpak<™>kapsulama KA3DFLP1G ili KA3DFLP1. Nakon filtriranja, dobijeni koncentrat organskog leka (61,75 mg/ml) je prenet u sterilne, depirogenizovane bočice.

PRIMER 2: Lipozomski nosač za razblaživanje

[0162]

Priprema lipozomskog nosača za razblaživanje

[0163] Pošto je lecitin (ePL) sklon oksidaciji, kiseonik se uklanja gde god je to tehnički moguće, a materijale je poželjno zaštititi i slojem azota.

[0164] Voda za injekcije, a zatim L-histidin, sipani su u posudu i mešani dok se L-histidin nije potpuno rastvorio. Sipana je zatim saharoza i smeša je mešana dok se saharoza nije u potpunosti rastvorila. Proveren je pH i podešen je do 6,5 ± 0,2 dodavanjem IN hlorovodonične kiseline ili IN rastvora natrijum hidroksida, nakon čega je rastvor mešan dok nije postao homogen. U posudu je dalje dodat Lipoid E 80 S. Smeša je zatim mešana dok nije dobijena homogena disperzija.

Linijsko mešanje

[0165] Prethodno dobijena disperzija je mešana i prebačena u drugu posudu, upotrebom linijskog homogenizera (Kinematica MEGATRON MT-SV 1-45 M), regulisanog na protok od 2-5 L/min. Linijsko mešanje je nastavljeno dok polazna posuda nije ispražnjena.

Homogenizacija pod visokim pritiskom

[0166] Posuda koja je sadržavala prethodno dobijenu disperziju lecitina, povezana sa homogenizerom visokog pritiska (Avestin Emulsiflex C160) u recirkulacionu petlju, nakon čega je disperzija ohlađena do 2-8 °C uz mešanje od 300 o/min. Nakon postizanja pritiska u posudi od 0,5 bara, pumpa je postavljena na maksimalnu brzinu i homogenizer visokog pritiska je prajmovan sa otvorenim ventilom da bi se uklonio vazduh iz sistema. Pumpa homogenizera visokog pritiska je zatim podešena na 60 Hz, protok na 130-140 L/h i pritisak na 950 do 1050 bara, a homogenizacija pod visokim pritiskom je izvođena tokom 19 prolaza (oko 7,5-8 sati), nakon čega je, pri 20. prolasku, sadržaj posude prebačen u drugu posudu putem homogenizera visokog pritiska.

[0167] Predfiltracija je izvršena upotrebom PVDF filtera (poliviniliden difluoridne membrane) od 0,2 µm, a profiltriran rastvor je čuvan na sobnoj temperaturi. Rastvor je zatim i sterilno profiltriran kroz PVDF filter za sterilizaciju, pa je prebačen u sterilne bočice koje su bile depirogenizovane toplotom, suvim tretmanom.

[0168] Ovakva vodena formulacija može biti injecirana ili data infuzijom kao takva ili može biti razblaživana sa rastvorima za infuziju (npr. sa 5% glukozom) pre infuzije.

PRIMER 3A: Formulacija za infuziju

[0169] Organski koncentrat iz Primera 1 je pomešan sa lipozomskim nosačem iz Primera 2 na sledeći način. Lipozomski nosač iz Primera 2 je ostavljen da se zagreje do sobne temperature (tj. od 20 do 25°C), vađenjem iz frižidera najmanje 30 minuta pre mešanja. Ukupna zapremina aktivnog lipozomskog nosača koji će biti primenjena pacijentu može biti utvrđena kao što je naznačeno ispod, u Tabeli 3A.1. Lipozomski nosač sadrži male lipozome i upotrebljava se kao nosač za solubilizaciju, koji je u stanju da rastvori Jedinjenje A u vodenoj sredini, nakon mešanja sa organskim koncentratom koji sadrži Jedinjenje A.

Potrebna Broj bočica Ukupna zapremina Veličina šprica / Koncentracija doza potrebnih za aktivnog skaliranje Jedinjenja A u kesi Jedinjenja proizvod u vidu leka lipozomskog nosača od 250 mL,

A (koncentrat (koncentracija spremnoj za Jedinjenja A za Jedinjenja A 7,5 infuziju infuziju) i lipozomski mg/ml) koju je (Napomena: nosač za potrebno preneti u prepuna kesa se ne razblaživanje (LV) kesu sa glukozom uzima u obzir) mg # ml mg/ml

1080 6 144,0 30 mL / 0,5 mL 4,32

1260 7 168,0 30 mL / 0,5 mL 5,04

1400 8 186,7 30 mL / 0,5 mL 5,60

X [mg] Odrediti na osnovu = X [mg] / 7,5 mg/ml Pogledati prethodno. = X [mg]/250 ml doze koju je Izaberati veličinu

potrebno primeniti i šprica / skalu najbliže

nominalnog sadržaja vrednosti ukupne

Jedinjenja A od 180 zapremine aktivnog

mg/bočici proizvoda lipozomskog nosača

u vodu leka koja je data u tabeli

(koncentrat

Jedinjenja A za

infuziju)

[0170] Jedna bočica organskog koncentrata Jedinjenja A (185,25 mg [uključujući višak] Jedinjenja A u 3 mL) je spojena sa jednom bočicom lipozomskog nosača (2,1 gram Lipoida E 80 S u 21 mL), da bi se dobila zapremina od 24 mL aktivnog lipozomskog nosača koji sadrži Jedinjenje A i koja se može biti izvući, a koja sadrži ukupno 180 mg Jedinjenja A). Za jednog pacijenta može biti potrebno pripremiti više bočica. Mora se stoga pripremiti adekvatan broj bočica aktivnog lipozomskog nosača koji je dovoljan za primenu odgovarajuće doze pacijentu.

[0171] Organski koncentrat Jedinjenja A (3 mL) se aseptično i tačno izvlači i brzo injecira u jednu bočicu lipozomskog nosača, koja se odmah meša izvrtanjem bočice ≥ 40 puta. Početna zamućenost će nestati. Rezultujuća aktivna formulacija lipozomskog nosača će biti nešto mutnija u poređenju sa lipozomskim nosačem za razblaživanje. Nakon mešanja, formulacija mora biti bez vidljivih čestica. Ukoliko je pacijentu potrebno dati više od 180 mg Jedinjenja A, korak dodavanja i mešanja se ponavlja po potrebi.

[0172] Izračunava se zatim ukupna zapremina rastvora glukoze koju je potrebno ukloniti iz kese za infuziju (na primer, upotrebom Ecobag kese sa 5 % glukozom ili Ecoflac kese sa 5 % glukozom). Ova zapremina je ista kao zapremina aktivnog lipozomskog nosača, kao što je dato u Tabeli 3A.1. Izračunata zapremina rastvora glukoze se aseptično i tačno izvlači iz kese za infuziju (i odbacuje).

[0173] Izračunata zapremina aktivnog lipozomskog nosača (koji sadrži Jedinjenje A) se aseptično i tačno izvlači iz jedne ili više bočica i injecira u prethodno pripremljenu kesu glukoze, nakon čega se sve dobro meša okretanjem kese najmanje 10 puta. Ukoliko je potrebno manje od višestruke zapremine Jedinjenja A od 180 mg, ostatak u bočicama je potrebno odbaciti.

[0174] Pripremljena kesa za infuziju koja je spremna, mora biti vizuelno pregledana u pogledu prisustva čestica. Sadržaj kese može delovati opalescentno ili blago zamućeno, u zavisnosti od koncentracije Jedinjenja A. Ukoliko su čestice vidljive, kesa se odbacuje i priprema se sveža kesa za infuziju.

[0175] Jedinjenje A je blago osetljivo na svetlost, tako da se kesa za infuziju postavlja u foliju za zaštitu od svetlosti.

[0176] Jedan primer procedure je sledeći. Sveže pripremljene kese za infuziju se čuvaju do 5 sati na sobnoj temperaturi (tj.20 do 25°C), kao i do 8 sati u uslovima frižidera (2 do 8°C), što uključuje stvarno vreme infuzije. Ukoliko se čuva na sobnoj temperaturi od 20 do 25°C, razblaženi rastvor za infuziju u kesi za infuziju može biti pripremljen i sa infuzijom se može započeti unutar dva sata nakon pripreme, pri čemu se davanje odvija na kontrolisanoj sobnoj temperaturi.

[0177] Ukoliko se intravenski rastvor ne daje odmah, rastvor može biti čuvan u frižideru na 2 do 8 °C tokom manje od 8 sati. Ukoliko se pripremljeni rastvor drži u frižideru pre davanja, kesa može biti zagrejana do sobne temperature pre davanja. Formulacija za infuziju koja sadrži potrebnu koncentraciju proizvoda u vidu leka Jedinjenja A, može biti data infuzijom kroz infuzionu liniju i linijski filter od 1,2 µm nakon kese za infuziju, koji se nalazi što je moguće bliže kateteru.

PRIMER 3B: Formulacija za infuziju

[0178] Upotrebom istog postupka kao u Primeru 3A, lipozomski nosač iz Primera 2 je pomešan sa organskim rastvorom sledećeg sastava:

[0179] Mogu biti upotrebljeni sledeći odnosi mešanja:

Potrebna koncentracija Potrebna zapremina Zapremina Zapremina Jedinjenja A (mg/mL) aktivne lipozomske organskog rastvora lipozomskog nosača formulacije (mL) (mL) (mL)

0,00 80 0,00 80,00

0,30 65 0,20 64,80

0,60 83,5 0,50 83,00

0,75 80 0,60 79,40

1,50 80 1,20 78,80

2,50 80 2,00 78,00

3,00 80 2,40 77,60

Potrebna koncentracija Potrebna zapremina Zapremina Zapremina Jedinjenja A (mg/mL) aktivne lipozomske organskog rastvora lipozomskog nosača formulacije (mL) (mL) (mL)

3,75 80 3,00 77,00

5,00 80 4,00 76,00

7,50 80 6,00 74,00

PRIMER 4: Efikasnost lipozomske formulacije Jedinjenja A u modelu MV4;11 ksenotransplantata akutne mijeloidne leukemije kod golih pacova upotrebom režima tipa intravenskog davanja jednom nedeljno

Postupci

[0180]

Tabela 4.1: Kompozicija organskog rastvarača upotrebljena za pripremu rastvora za primenu doze grupi koja prima nosač:

Tabela 4.2: Kompozicija lipidnog nosača upotrebljena za pripremu rastvora za primenu doze grupi koja prima nosač:

[0181] Lipozomski nosač je dobijen upotrebom komponenti iz Tabele 4.2 i postupaka koji su ovde opisani u Primeru 2. Organski rastvor (Tabela 4.1) je pomešan sa lipozomskim nosačem u odnosu 1:32,33 (v/v) i upotrebljen je za pripremu doze za grupu koja je primala samo nosač od 10 mL/kg.

[0182] Ova studija je procenila antitumorsku aktivnost i toleranciju za Jedinjenja A u formulaciji zasnovanoj na lipozomima nakon i.v. infuzije, u golim pacovima sa MV4;11 tumorima. Eksperimenti su izvođeni na ženkama Crl:NIH-Foxnlrnu golih pacova (Charles River).

[0183] Ćelijska linija MV4;11 luc humane akutne mijeloidne leukemije (AML) je uspostavljena iz parentalnih MV4;11 ćelija koje su bile izvedene iz pacijenta. Parentalne MV4;11 ćelije su dobijene iz DSMZ banke ćelija. MV4;11 luc ćelije su upotrebljavane za sve in vivo studije i kultivisane su u RPMI-1640 medijumu (BioConcept Ltd. Amimed, # 1-41FOI-1) u koji je bilo dodato 10% FCS (GE Health care life sciences, #H30071.03), 4 mM L-glutamina (BioConcept Ltd. Amimed, # 5-10K00-H), 0,6 mg/ml geneticina (Life Technologies, # 10131-027), na 37 °C u atmosferi sa 5% CO2u vazduhu. Ćelije su gajene u gustini od 0,2 i 1,1 × 10<6>ćelija/mL. Za uspostavljanje MV4;11 luc ksenografta, ćelije su prikupljane i resuspendovane u HBSS-u (Gibco, # 14175), nakon čega su mešane sa Matrigelom (BD Bioscience, #354234) (1:1 v/v) pre injeciranja 200 µL koji su sadržavali 1 × 10<7>ćelija, subkutano u desne bokove životinja koje su bile anestezirane izofluranom. Dvadeset četiri sata pre inokulacije ćelija, sve životinje su zračene sa 5 Gy tokom 2 minuta, upotrebom γ-ozračivača.

[0184] Rast tumora je redovno praćen nakon inokulacije ćelija i životinje su nasumično raspodeljene u grupe za tretman kada su njihovi tumori dostigli odgovarajuću zapreminu. Veličina tumora, u mm<3>, izračunavana je prema: (L × W2 × π/6) gde je W = širina i L = dužina tumora.

[0185] Životinje sa tumorom su uključene u grupe za lečenje (n = 5) kada je prosečna zapremina tumora iznosila oko 450 mm<3>. Životinje su zatim tretirane nosačem ili formulacijom Jedinjenja A u dozi od 10 i 30 mg/kg.

[0186] Jedinjenje A je formulisano u formulaciju zasnovanu na lipozomima, upotrebom koncentrata organskog leka (opisanog u Primeru 1) i nosača (opisanog ovde u Primeru 2). Rastvori za primenu doza su obrazovani mešanjem proizvoda iz Primera 1 i 2 u odnosu od 1:7,236 (v/v), a dalje i razblaživanjem ove smeše, dodavanjem 5% glukoze u odnosu od 1:6,50 (v/v) za dozu od 10 mg/kg i 1:1,50 (v/v) za dozu od 30 mg/kg.

[0187] Nosač i Jedinjenje A su davani jednom nedeljno (QW) putem i.v. infuzije tokom 15 minuta, u lateralnu repnu venu, u dozi od 10 mL/kg. Da bi se izvršila infuzija, životinje su bile anestezirane izofluranom/O2tokom oko 20 minuta. Zapremine tumora su merene kaliperom 2-3 puta nedeljno. Životinje su merene 2-3 puta nedeljno i često su pregledane da bi se utvrdili očigledni znaci bilo kakvih neželjenih efekata.

[0188] Podaci o promenama tumora i telesne težine su statistički analizirani upotrebom GraphPad Prism 7.00 (GraphPad Software). Ukoliko su varijanse u podacima bile normalno raspoređene, podaci su analizirani upotrebom jednofaktorske ANOVA sa Dunett-ovim post hoc testom radi poređenja tretmana sa kontrolnom grupom. Za poređenje unutar grupe korišćen je Tukijev post hoc test. Inače, korišćen je Kruskal-Wallis-ov rangirani test sa Dunett-ovim post hoc testom. Kada je bilo primenljivo, rezultati su predstavljani kao srednja vrednost ± SEM.

[0189] Kao mera efikasnosti, na kraju eksperimenta je izračunavana %T/C vrednost prema:

( Δ zapremine tumora<tretiranih>/ Δ zapremine tumora<kontrola>) *100 ;;[0190] Regresija tumora je izračunavana prema: ;;-( Δ zapremine tumora<tretiranih>/ Δ zapremine tumora<tretman na početku>) *100

gde Δ zapremine tumora predstavljaju srednju vrednost zapremine tumora na dan evaluacije, umanjenu za srednju vrednost zapremine tumora na početku eksperimenta.

Rezultati: Efikasnost i tolerancija

[0191] Formulacija Jedinjenja A zasnovana na lipozomima je nakon davanja infuzije ispoljila značajnu efikasnost u zavisnosti od doze. Doza za infuziju od 10 mg/kg QW je izazvala maksimalan antitumorski odgovor nakon prve doze (regresija od 61%, 3. dana nakon početka lečenja), ali je odgovor je bio oslabljen pri svakoj sledećoj dozi, što je dovelo do postepenog povećanja zapremine tumora tokom vremena. Regresija je 24. dana (poslednjeg dana merenja zapremine tumora u grupi koja je primala nosač) iznosila 6 % nakon doze od 10 mg/kg QW (p < 0,05 u poređenju sa grupom koja je primala nosač). Nakon infuzije 30 mg/kg lipozomske formulacije sa Jedinjenjem A QW tokom 2 nedelje, potpuna regresija (CR) je postignuta u svim MV4;11 ksenograftima 13. dana nakon početka lečenja. Potpuna regresija je održana kod svih životinja do 21. dana, nakon čega je uočen ponovni rast tumora kod 3 životinje, dok 2 životinje nisu ispoljile rast tumora još 60 dana nakon postizanja CR. Srednja zapremina tumora je ukazala na regresiju od 92 % (p < 0,05 u poređenju sa grupom koja je primala nosač) 25. dana nakon početka lečenja sa 30 mg/kg. Na osnovu promena telesne težine, utvrđeno je da su oba dozna režima lipozomske formulacije bila dobro tolerisana. Rezultati su prikazani na Slikama 1 i 2.

PRIMER 5: Podaci o stabilnosti za kompoziciju iz Primera 1

[0192] Stabilnost kompozicije iz Primera 1, sa Jedinjenjem A u dozi od 185,25 mg/3,0 mL, analizirana je ispitivanjem tokom perioda skladištenja do 3 meseca, kao i fotostabilnosti.

5.1. Ispitivanje na 5 °C/RV (relativnoj vlažnosti) okoline

[0193] Tokom 3 meseca skladištenja u bočicama pod uslovima od 5 °C/RV okoline, kompozicija iz Primera 1, sa Jedinjenjem A u dozi od 185,25 mg/3,0 mL, bila je fizički i hemijski stabilna. Nisu uočene značajne promene u hemijskim ili fizičkim osobinama.

5.2. Ispitivanje na 25 °C/RV od 60 %

[0194] Tokom 3 meseca skladištenja u bočicama pod uslovima 25 °C/RV od 60 %, uočeno je da je kompozicija iz Primera 1, sa Jedinjenjem A u dozi od 185,25 mg/3,0 mL, fizički stabilna. Tokom 3 meseca nisu uočene značajne promene. Uočeni su povećani nivoi neželjenog atropizomera. Svi rezultati su ostali u granicama specifikacije.

5.3. Ispitivanje na 40 °C/RV od 75 %

[0195] Tokom 3 meseca skladištenja u bočicama pod uslovima 40 °C/RV od 75 %, uočeno je da je kompozicija iz Primera 1, sa Jedinjenjem A u dozi od 185,25 mg/3,0 mL, fizički stabilna. Tokom 3 meseca nisu uočene nikakve značajne promene, osim povećanja nivoa neželjenog atropizomera tokom vremena. Svi rezultati su bili u granicama specifikacije nakon 1,5 meseca.

5.4. Fotostabilnost

[0196] Tokom testa fotostabilnosti u bočicama, uočeno je da kompozicija iz Primera 1, sa Jedinjenjem A u dozi od 185,25 mg/3,0 mL, nije ni hemijski ni fizički stabilna. Svi rezultati za uzorak zaštićen od izlaganja svetlosti su bili uočeni kao oni u granicama specifikacije.

Zaključci

[0197] Zadovoljavajući podaci o stabilnosti su postignuti tokom 3 meseca na 5 °C/RV okoline i na 25 °C/RV od 60 %, kao i tokom 1,5 meseca na 40 °C/RV od 75 %. Dostupni podaci o stabilnosti ukazuju na zadovoljavajuću stabilnost kompozicija iz Primera 1 sa Jedinjenjem A u dozi od 185,25 mg/3,0 mL. Zaštita od svetlosti će biti neophodna.

PRIMER 6: Podaci o stabilnosti za kompoziciju iz Primera 2

[0198] Stabilnost kompozicije nosača iz Primera 2 (21,7 mL) je analizirana ispitivanjem tokom perioda skladištenja do 3 meseca, kao i fotostabilnosti.

6.1. Ispitivanje na 5 °C/RV okoline

[0199] Nisu uočene promene u izgledu kontejnera, izgledu sadržaja i kvantifikaciji fosfolipida nakon čuvanja na 5°C do 3 meseca, u poređenju sa početnim rezultatima. Nisu uočene značajne promene ni za pH niti veličinu čestica.

6.2. Ispitivanje na 25 °C/RV od 60 %

[0200] Nisu uočene promene u izgledu kontejnera i izgledu sadržaja nakon skladištenja na 25°C do 3 meseca, u poređenju sa početnim rezultatima. Početni pH od 6,6 se tokom 3 meseca smanjio na pH 6,3, tim redom. Nisu uočene značajne promene veličine čestica foton korelacionom spektroskopijom, kao ni kvantifikacijom fosfolipida do 3 meseca. Nevidljive čestice su se povećale, ali su vrednosti ostale u granicama prihvatljivosti.

6.3. Ispitivanje na 40 °C/ RV od 75 %

[0201] Nisu uočene promene u izgledu kontejnera i izgledu sadržaja do 3 meseca skladištenja na 40°C u poređenju sa početnim rezultatima. Zapažene su blage promene za pH, koji je bio blago smanjen sa pH 6,6 na početku, na 6,3 nakon 3 meseca skladištenja na 40 °C. Nisu uočene značajne promene veličine čestica upotrebom foton korelacione spektroskopije i kvantifikacijom fosfolipida do 3 meseca skladištenja na 40 °C. Uočene su značajne razlike u ispitivanju sub-vidljivih čestica. Ipak, ovi uslovi se smatraju uslovima stresa u poređenju sa dugotrajnim skladištenjem na 5°C.

6.4. Fotostabilnost

[0202] Testiranje fotostabilnosti je vršeno sa proizvodom u staklenoj bočici i poređenjem rezultata dobijenih za bočice koje su bile zaštićene od svetlosti u kartonskoj kutiji. U studiji fotostabilnosti nisu uočene značajne promene u parametrima izgleda kontejnera, izgledu sadržaja, pH rastvora, vidljivim česticama i kvantifikaciji fosfolipida nakon skladištenja.

Zaključci

[0203] Pokazani su zadovoljavajući podaci o stabilnosti za dugotrajne uslove skladištenja na 5 °C i ubrzane uslove na 25 °C/RV od 60 % do 3 meseca. Zadovoljavajući podaci o stabilnosti su prikazani i za ubrzane uslove skladištenja na 40 °C/RV od 75 % do 1,5 meseci, ali su isti bili ograničeni rezultatima sub-vidljivih čestica. Za izgled kontejnera, izgled sadržaja i veličinu čestica nisu uočene promene za sve uslove skladištenja do 3 meseca. Za sve uslove skladištenja, pH vrednosti su bile stabilne i u opsegu specifikacije. Zadovoljavajući podaci o stabilnosti su pokazani pri dugotrajnim uslovima skladištenja na 5 °C/RV okoline. Nosač se smatra fotostabilnim.

PRIMER 7: In vitro test oslobađanja, Jedinjenje A: oslobađanje Jedinjenja A iz malih lipozoma u akceptor koji sadrži višak lipida prisutnih u vidu velikih multilamelarnih vezikula (MLV)

[0204] Cilj ovog eksperimenta je bio da se ispita brzina oslobađanja Jedinjenja A iz malih jednolamelarnih vezikula (SUV; upotrebljenih ovde kao sistem nosača leka, pogledati Primer 3A) u velike multilamelarne vezikule (MLV) koje su se sastojale od fosfolipida iz jajeta, a koje se upotrebljavaju kao lipofilni akceptor za oslobođeni lek (pogledati Shabbits J.A., Chiu G.N. i Mayer L.D. "Development of an in vitro drug release assay that accurately predicts in vivo drug retention for lipozome-based delivery systems" Journal of Controlled Release 2002, 84(3), 161-170).

Priprema i izvođenje studije oslobađanja upotrebom Multilamelarnih vezikula kao akceptora

Priprema i karakterizacija MLV

[0205] Multilamelarne vezikule su pripremane postupkom tipa film-hidratacija. Ukratko, fosfolipidi iz jajeta (Lipoid E 80 S) su izmereni i potpuno rastvoreni u organskom rastvaraču (EtOH/DCM u odnosu 4:1 v/v) da bi se osigurala homogena smeša svih komponenti.

[0206] Organski rastvarač je zatim uklonjen upotrebom rotacionog uparavanja (prvi korak: 200 mbar, 50 °C, 2 sata; drugi korak: 30 mbar, 50 °C, 45 minuta) da bi se dobio homogeni lipidni film. Da bi se osiguralo potpuno uklanjanje organskog rastvarača, boca je produvavana azotom. Film je dalje rehidratisan upotrebom fiziološkog rastvora puferisanog fosfatom (PBS-om, pH 7,4) da bi se dobile MLV, a nakon potpune rehidratacije MLV su bile izlagane sonikaciji tokom 15 minuta.

[0207] Da bi se MLV resuspendovale u istom sistemu pufera kao i SUV, suspenzija je centrifugirana tokom 10 minuta na 14.000 g, nakon čega je supernatant (PBS) uklonjen i zamenjen saharoznohistidinskim puferom. Na kraju, smeša je temeljno promešana da bi se osigurala potpuna redisperzija MLV u novom medijumu pre početka eksperimenta oslobađanja.

[0208] MLV formulacije su okarakterisane na osnovu njihove veličine putem laserske difrakcije, upotrebom HELOS KR (SympaTec) sistema, nakon razblaživanja od 1:5000 upotrebom PBS-a, čime su dobijene x10, x50i x90vrednosti.

[0209] x10= dimenzija čestica koja odgovara kumulativnoj distribuciji ispod određene veličine od 10%, xso = srednja dimenzija čestica (tj.50% čestica je manje, a 50% čestica veće) i x90= dimenzija čestice koja odgovara kumulativnoj distribuciji ispod određene veličine od 90 %.

Studija oslobađaja upotrebom MLV

[0210] Za studiju oslobađanja upotrebom MLV, upotrebljena je sledeća postavka za sve eksperimente:

SUV (donori) su pomešani sa MLV (akceptori) u erlenmajer flasku od 25 ml sa čepom, uz mešanje (500 o/min) u različitim odnosima (1:40, 1:100, 1:200, 1:500; SUV:MLV v/v). Uzorci od 1 ml su uzimani u različitim vremenskim tačkama i odmah centrifugirani (14000 o/min, 10 minuta) da bi se MLV odvojili od SUV radi dalje obrade. Slika 3 koja je ovde pokazana je šematski prikaz principa testa oslobađanja koji se zasniva na MLV.

[0211] Deo MLV je zatim uklonjen putem sukcije i po 50 µl SUV dela je pomešano sa 450 µl ACN:H2O radi pripreme HPLC uzoraka. Uzorak je zatim centrifugiran (14000 o/min, 10 minuta), nakon čega je supernatant profiltriran upotrebom filtera od 0,22 µm i injeciran u HPLC radi analize.

Postupak tečne hromatografije visokih performansi za Jedinjenje A

[0212] Korišćen je sistem tečne hromatografije visokih performansi (HPLC) sa UV detekcijom koji je uključivao sledeća podešavanja opreme i sisteme rastvarača:

Instrument Shimadzu LC2010C HT

Kolona Waters Symmetry Shield, RP18, 3,5 µm, 3 × 150 mm

Stanje kolone 45 °C

Mobilna faza A) ACN:H2O:FA:NH4OH (20:80:1:0,4)

B) ACN:H2O:FA:NH4OH (80:20:1:0,4)

Gradijent rastvarača Višestepeni gradijent

Protok rastvarača 1,0 ml/min

Pritisak Maksimalno 270 bara

Automatski uzorak Uzorci su injecirani upotrebom automatskog sistema

za nanošenje

UV-detekcija HPLC-UV detektor podešen na 210 nm i 245 nm

Gradijent rastvarača za HPLC

[0213]

Test oslobađanja Jedinjenja A upotrebom MLV

[0214] Oslobađanje Jedinjenja A je mereno upotrebom MLV kao akceptorskog odeljka. Ovde su SUV-ovi ispunjeni Jedinjenjem A (7,5 mg/ml) dodavani ovim MLV u različitim odnosima (v/v). Slika 4 prikazuje profil oslobađanja Jedinjenja A iz SUV do 100 % ePL pri različitim različitim odnosima SUV:MLV (v/v).

[0215] Napomena: Za sve eksperimente oslobađanja iz MLV, maksimalna koncentracija (maxC = 100%) je dobijena razblaživanjem 7,5 mg/ml ispunjenih SUV-ova u odnosima od 1 do 40, 1 do 100, 1 do 200 ili 1 do 500 (v/v), u saharoza-histidinskom puferu umesto MLV.

[0216] Upotrebom ove vrste eksperimentalne postavke, uočeno je veoma brzo oslobađanje Jedinjenja A iz SUV u akceptorske MLV. Ovde, za razblaženje od 1 do 40, samo oko 44% početne količine primenjenog Jedinjenja A je bilo moguće detektovati u SUV delu uzorka nakon samo 2 minuta. Prema tome, -60% je već u ovom trenutku bilo oslobođeno ili prebačeno u akceptorski MLV deo. Štaviše, povećanje faktora razblaženja (1:100, 1:200, 1:500 SUV:MLV v/v) samo je ubrzalo i povećalo oslobađanje leka, pošto je u t = 2 minuta razblaženje od 1 do 100 pokazalo oslobađanje od ~70%, razblaženje od 1 do 200 od ~80 %, a razblaženje od 1 do 500 skoro 90 % od ukupne količine leka koja se više nije mogla detektovati u SUV u t = 2 minuta i stoga je bilo oslobođeno u akceptorski odeljak.

Zaključak

[0217] Pokazan je profil brzog oslobađanja Jedinjenja A sa do 90% lekovite supstance koje je bila oslobođena nakon samo 2 minuta. Podaci pokazuju da lipozomi ne zadržavaju fizički Jedinjenje A inkapsulirano u prisustvu viška lipida, ali i da postoji brza redistribucija Jedinjenja A duž svih prisutnih lipida tokom inkubacije. Očekuje se i uporedivo ponašanje in vivo. Formulacija obezbeđuje posebno povoljan balans efektivne solubilizacije Jedinjenja A, sa poželjnim profilom brzog oslobađanja Jedinjenja A.

PRIMER 8: Kompozicija organskog koncentrata koja sadrži Jedinjenje A i PEG300, varijanta 1

[0218]

[0219] Kompozicija može biti pripremljena upotrebom postupka sličnog postupku iz Primera 1 ili upotrebom postupaka koji su dobro poznati stručnjaku.

PRIMER 9: Kompozicija organskog koncentrata koja sadrži Jedinjenje A i PEG300, varijanta 2

[0220]

[0221] Kompozicija može biti pripremljena upotrebom postupka sličnog postupku iz Primera 1 ili upotrebom postupaka koji su dobro poznati stručnjaku.

PRIMER 10: Kompozicija organskog koncentrata koja sadrži Jedinjenje A i PEG300, varijanta 3

[0222]

[0223] Kompozicija može biti pripremljena upotrebom postupka sličnog postupku iz Primera 1 ili upotrebom postupaka koji su dobro poznati stručnjaku.

Referentni PRIMER 11: Organski koncentrat koji sadrži Jedinjenje A, bez stabilizatora protiv želifikacije

[0224]

[0225] Kompozicija može biti pripremljena upotrebom postupka sličnog postupku iz Primera 1 ili upotrebom postupaka koji su dobro poznati stručnjaku.

PRIMER 12: Ispitivanje fizičke stabilnosti organskih koncentrata iz Primera 1, 8 do 10

[0226] Ispitivanje fizičke stabilnosti je procenjivano upotrebom dva odvojena postupka: a) otpornosti na zasejavanje i b) eksploratorne stabilnosti uz kontinuirano mešanje od 250 o/min na 2 °C.

a. Eksperiment zasejavanja je izvođen dodavanjem ~ 1 µL želatinizovane formulacije (Jedinjenje A: 60 mg/ml, DMPG: 4,0 mg/ml, propilen glikol 851 mg/ml, etanol: 94 mg/ml: ovaj rastvor je želatinizovao kada je bio skladišten uz mešanje na 2°C) u bistre koncentrate iz Primera 1, 8 i 9. Uzorci su mešani na vorteksu tokom10 sekundi, nakon čega su čuvani u frižideru preko noći na 2-8°C. Primeri 1, 8 i 9 nisu doveli do želifikacija Jedinjenja A nakon zasejavanja.

b. Eksperimenti eksploratorne stabilnosti uz kontinuirano mešanje su izvođeni postavljanjem 2 ml svakog organskog koncentrata u staklenu epruvetu i homogenim mešanjem od 250 o/min na 2 °C. Kao što je prikazano u Tabeli ispod, u formulacijama opisanim u Primerima 1, 8 do 10 nije došlo do želifikacija tokom 10 dana. Nakon 13 dana kompozicija iz Primera 1 je postala želatinizovana, dok su formulacije opisane u Primerima 8 do 10 ostale stabilne, tj. bistri rastvori.

[0227] Posebna pogodnost je činjenica da su formulacije koje sadrže PEG300 bile otporne na želifikaciju u prethodno opisanom eksperimentu uz mešanje, zajedno sa otpornošću na zasejavanje. Želifikacija iz Primera 1 može biti kontrolisana izborom odgovarajuće temperature skladištenja, na primer skladištenjem na sobnoj temperaturi.

PRIMER 13: Ispunjavanje lipozoma upotrebom koncentrata kompozicija iz Primera 1, 8 do 10

[0228] Ispunjavanje lipozoma je ispitivano na skali od 23,7 mL, upotrebom istog postupka koji je opisan u Primeru 3A.

[0229] Organski koncentrat iz Primera 8 do 10 je ispoljio uporedive karakteristike ispunjavanja lipozoma sa istima iz Primera 1. Rezultat za Primere 8 do 10 su bile lipozomske formulacije koje su bile upotrebive zamućanosti kao one koje su dobijene za koncentrat iz Primera 1.

[0230] Da bi se olakšalo ispunjavanje lipozoma iz Primera 8 i Primera 9, ispitano je ispunjavanje sa iglama od 19 G i upoređeno je sa istim sa iglom od 21 G. Upotreba igle od 19 G rezultirala je nešto manjom veličinom čestica i nešto manjom zamućenošću u poređenju sa injeciranjem iglom od 21 G.

PRIMER 14: Fizička stabilnost placebo formulacije organskog koncentrata

[0231] Placebo formulacije (bez Jedinjenja A) su ispitivane na -20 °C; što su ekstremni uslovi koji mogu ubrzati moguću precipitaciju komponenti formulacije. Fizička stabilnost placebo organskih koncentrata opisanih u nastavku je ispitivana do 17 dana.

[0232] Taloženje je primećeno u placebo kompoziciji iz Primera 1. Placebo kompozicija iz Primera 8 i 10 je ostala bistra i tokom eksperimenta nije uočeno taloženje.

PRIMER 15: Hemijska stabilnost aktivnih organskih koncentrata iz Primera 1, 8 i 9

[0233] Ispitivana je i hemijska stabilnost aktivnog jedinjenja unutar formulacija iz Primera 1, 8 i 9, prevashodno sa ciljem da se ispitaju nivoi nečistoća koje su rezultat oksidativne razgradnje i obrazovanja nepoželjnog atropizomera.

Identitet, analiza i proizvodi razgradnje upotrebom HPLC postupka

[0234]

Glavni reagensi RP HPLC postupak sa jonskim uparivanjem i UV detekcijom Acetonitril Gradijentni stepen čistoće, npr. Merck LiChrosolv br.100030

Etanol LC stepen čistoće, npr. Merck 1.00983

Mravlja kiselina LC stepen čistoće, npr. Prolabo br.84865.260

Amonijum hidroksid 25% Analitički stepen čistoće, npr. Sigma br.09860

H2O230 % Analitički stepen čistoće, npr. Sigma br.95313

Voda MilliQ ili HPLC stepena čistoće

Razblaženi amonijum U volumetrijski balon od 50,0 mL je uvedeno 2,5 mL 25% amonijum hidroksid hidroksida i dopunjeno je do finalne zapremine sa prečišćenom vodom. Razblaživač Etanol

Materijali

Stakleno posuđe Potrebno je koristiti zatamljeno stakleno posuđe

Oprema

Aparat HPLC sistem sa gradijent-elucijom i UV detektorom, npr. Agilent 1290 sa UV detektorom ili ekvivalentan

Kolona Acquity BEH C18

Dužina: 100 mm, unutrašnji prečnik: 2,1 mm

Veličina čestica: 1,7 µm

Dodatna oprema Ultrazvučno kupatilo, analitička vaga, mikrovaga

Hromatografski uslovi

Režim razdvajanja Gradijent

Mobilna faza A Voda acetonitril mravlja kiselina, 95 5 0,02 (v/v/v) vodena frakcija pH = 4,9, podešeno sa amonijum hidroksidom.

Dodati 200 µL mravlje kiseline u 950 mL vode. Podesiti pH na 4,9 upotrebom razblaženog amonijum hidroksida. Dodati 50 mL acetonitrila. Mobilna faza B Voda acetonitril mravlja kiselina, 5 95 0,02 (v/v/v), pH vodene frakcije = 4,9, podešeno sa amonijum hidroksidom.

Dodati 200 µL mravlje kiseline u 50 mL vode. Podesiti pH na 4,9 upotrebom razblaženog amonijum hidroksida. Dodati 950 mL acetonitrila.

Mogu biti upotrebljene različite zapremine sve dok odnos zapremine ostaje isti.

Tabela gradijenta

[0235]

Stopa protoka 0.6 mL/min

Detekcija UV 210 nm

Temperatura kolone 40 °C

Temperatura sistema za 2-8 °C

automatsko nanošenje uzoraka

Injekcioni rastvarač za pranje

Zapremina injeciranja Etanol, upotrebom otvora za ispiranje sa najmanje 10 sekundi 5 µl ispitivanog i referentnog rastvora, što je ekvivalentno oko 1,0 µg naziva lekovite supstance u referentnom rastvoru

.

[0236] Proizvodi oksidativne razgradnje su bili niski u svim prethodno navedenim varijantama formulacije. Detektovano povećanje neželjenog atropizomera je bilo povezano sa temperaturom i vremenskim parametrima, ali nije bilo izmenjeno varijantama formulacija koje su prethodno ispitivane.

[0237] Vizuelna provera nije ukazala na promenu boje koncentrata ni u jednoj od prethodno ispitivanih formulacija.

Claims (27)

1. Patentni zahtevi 1. Kompozicija organskog koncentrata koja sadrži: a. Jedinjenje A koje je 2-{[5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil)propanska kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so, b. negativno naelektrisan ili polarni stabilizator fosfolipida, i c. stabilizator protiv želifikacije, pri čemu je stabilizator protiv želifikacije polimer izabran od PEG300 i PEG400, ili je elektrolit koji je natrijum hlorid.
2. 2. Kompozicija organskog koncentrata prema patentnom zahtevu 1, koja sadrži Jedinjenje A koje je (2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil)propanska kiselina ili njena farmaceutski prihvatljiva so.
3. 3. Kompozicija organskog koncentrata prema patentnim zahtevima 1 ili 2, gde je Jedinjenje A slobodan molekul.
4. 4. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, gde je negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator izabran od soli natrijuma ili aluminijuma DMPG (1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfo-rac-glicerola, ili dimiristoil fosfatidilglicerola), soli natrijuma POPG (1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma DOPS (1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoserina), soli natrijuma DOPG (1,2-dioleoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma ili aluminijuma DPPG (1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma ili aluminijuma DSPG (1,2-distearoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerola)]), soli natrijuma fosfatidne kiseline (PA) iz soje, soli natrijuma fosfatidne kiseline (PA) iz jajeta, soli natrijuma fosfatidilserina (PS) iz soje, soli natrijuma fosfatidilglicerola (PG) iz jajeta, soli natrijuma fosfatidilglicerola (PG) iz soje, soli natrijuma fosfatidil inozitola (PI), lecitina iz jajeta (na primer, Lipoida E 80 S), sojinog lecitina (na primer, Lipoida S 75) i natrijum oleata.
5. 5. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, gde je negativno naelektrisan ili polarni stabilizator fosfolipida 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfo-rac-glicerol, so natrijuma ili aluminijuma, lecitin iz jajeta (na primer, Lipoid E 80 S), sojin lecitin (na primer, Lipoid S 75), a poželjno je 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfo-rac-glicerol, so natrijuma.
6. 6. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5, gde je stabilizator protiv želifikacije natrijum hlorid.
7. 7. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5, gde je stabilizator protiv želifikacije PEG300.
8. 8. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7, koja dalje sadrži rastvarač.
9. 9. Kompozicija organskog koncentrata prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, koja dalje sadrži rastvarač izabran od propilen glikola i etanola ili poželjno sadrži i propilen glikol i etanol.
10. 10. Farmaceutska kompozicija dobijena iz mešavine kompozicije organskog koncentrata prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 9 i lipozomskog nosača, pri čemu je navedeni lipozomski nosač sadrži fosfolipid i agens za podešavanje toničnosti izabran od dekstroze, glukoze, manitola, saharoze, laktoze, trehaloze, glicerina i NaCl.
11. 11. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 10, gde je fosfolipid izabran od lecitina iz jajeta, sojinog lecitina ili sintetičkih fosfolipida.
12. 12. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 10 ili 11, gde je fosfolipid formule

    gde • R1predstavlja C10-C24acil; • R2predstavlja C10-C24acil; • R3predstavlja vodonik, 2-trimetilamino-1-etil, 2-amino-1-etil, C1-C4alkil, C1-C5alkil supstituisan karboksilnom, C2-C5alkil supstituisan karboksilnom i hidroksilnom, C2-C5alkil supstituisan sa karboksilnom i amino grupom, inozitol grupu ili gliceril grupu; ili so takvog jedinjenja.
13. 13. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 10 do 12, gde je fosfolipid izabran od lecitina iz jajeta, sojinog lecitina, POPC (palmitoil oleoil fosfatidilholina), DOPC (1,2-dioleoil-snglicero-3-fosfoholina) i DMPC (1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoholina), a poželjno je POPC (palmitoil oleoil fosfatidilholin), DOPC (1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoholin) i DMPC (1,2-dimiristoilsn-glicero-3-fosfoholin), još poželjnije je POPC.
14. 14. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 10, 11 ili 13, gde je fosfolipid izabran od lecitina iz jajeta ili sojinog lecitina koji sadrži najmanje 70% fosfatidilholina, a poželjno je izabran od Lipoida E 80 S.
15. 15. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 10 do 14, gde je agens za podešavanje toničnosti izabran od saharoze ili glicerina.
16. 16. Lipozomska farmaceutska kompozicija koja sadrži, pored lipozoma: a. Jedinjenje A koje je 2-{[5-{3-hloro-2-metil-4-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi]fenil}-6-(4-fluorofenil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il]oksi}-3-(2-{[2-(2-metoksifenil)pirimidin-4-il]metoksi}fenil)propanska kiselina ili njena farmaceutski prihvatljiva so; b. stabilizator protiv želifikacije, pri čemu je stabilizator protiv želifikacije polimer izabran od PEG300 i PEG400, ili je elektrolit koji je natrijum hlorid; i c. negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator.
17. 17. Lipozomska farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 16, koja sadrži: a. Jedinjenje A koje je kao što je opisano u patentnim zahtevima 2 ili 3, i b. stabilizator protiv želifikacije koji je kao što je opisano u bilo kom od patentnih zahteva 6 ili 7.
18. 18. Lipozomska farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 16, gde je navedeni negativno naelektrisan ili polarni fosfolipidni stabilizator kao što je opisano u patentnim zahtevima 4 ili 5.
19. 19. Lipozomska farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 16 do 18, koja dalje sadrži rastvarač.
20. 20. Lipozomska farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 19, gde je navedeni rastvarač izabran od propilen glikola i etanola ili poželjno sadrži i propilen glikol i etanol.
21. 21. Lipozomska farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 16 do 20, koja sadrži fosfolipid koji je kao što opisano u bilo kom od patentnih zahteva 11 do 14.
22. 22. Lipozomska farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 16 do 21, koja dalje sadrži agens za podešavanje toničnosti izabran od dekstroze, glukoze, manitola, saharoze, laktoze, trehaloze, glicerina i NaCl.
23. 23. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 10 do 22, za upotrebu u vidu medikamenta.
24. 24. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 23, pri čemu je navedena upotreba u lečenju kancera i pri čemu je kancer izabran od kancera bešike, mozga, dojke i materice, hroničnih limfoidnih leukemija, kancera debelog creva, jednjaka i jetre, limfoblasnih leukemija, akutne mijeloidne leukemije, limfoma, na primer ne-Hočkinovog B-ćelijskog limfoma i difuznog B-krupnoćelijskog limfoma, melanoma, malignih hemopatija, na primer mijelodisplastičnog sindroma, mijeloma, na primer multiplog mijeloma, kancera jajnika, nesitnoćelijskog kancera pluća, kancera prostate, kancera pankreasa i sitnoćelijskog kancera pluća.
25. 25. Upotreba kompozicije organskog koncentrata prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 9, za pripremu medikamenta za lečenje kancera.
26. 26. Kombinacija koja sadrži: a. farmaceutsku kompoziciju prema bilo kom od patentnih zahteva 10 do 22, i b. jedan ili više terapijski aktivnih agenasa, za istovremenu, uzastopnu ili razdvojenu upotrebu.
27. 27. Komplet koji sadrži: a. lipozomski nosač i b. kompoziciju organskog koncentrata prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 9.